(57)【要約】【目的】細胞結合効果の高いコラーゲンペプチドを含有することを特徴とした老化防止剤を提供する。【構成】本発明は細胞結合効果の高いコラーゲンペプチドを含有することを特徴とする老化防止剤である。特に、平均分子量５００以上２０００以下のコラーゲンペプチドに線維芽細胞および腸管上皮細胞などの細胞に対して高い結合効果が認められた。また、皮膚に対して優れた皮膚保持効果が認められた。さらに、これらコラーゲンペプチドを含有することを特徴とした老化防止剤は、安全で、シワの予防・改善に優れた皮膚の老化防止効果を示した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞結合効果の高い平均分子量が５００以上２０００以下のコラーゲンペプチド。
【請求項２】
皮膚に対して保持効果に優れた平均分子量が５００以上２０００以下のコラーゲンペプチド。
【請求項３】
老化防止用である、請求項１又は２記載のコラーゲンペプチド。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項記載のコラーゲンペプチドを含有する老化防止剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗老化またはシワ抑制に関する技術分野の発明であり、特に皮膚老徴のひとつであるシワの形成防止・改善にその有効性を発揮する老化防止剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
老化にともなう皮膚変化のひとつであるシワは、コラーゲン、エラスチン、酸性ムコ多糖類等の真皮細胞外マトリックス成分の減少および変性による皮膚弾力性の低下が原因となって発生する。特に、シワの形成には、真皮層の細胞外マトリックスの主成分であるコラーゲンの線維束構造の崩壊が大きく関与しており、老化や紫外線などの要因により促進される（非特許文献１、２参照）。したがって、シワの形成を抑制する手段としては、従来、コラーゲン等の細胞外マトリックス成分を皮膚に塗布し補充する方法や経口摂取により生体内に吸収させてコラーゲン産生を高める方法が主流であった（特許文献１、２参照）。しかし、これらは皮膚浸透性や消化吸収性が極めて低く、十分な効果を有するものではなかった。
【０００３】
【非特許文献１】Ｎｉｓｈｉｍｏｒｉ，Ｙ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，２００１，１１７，１４５８−１４６３
【非特許文献２】桜岡  浩一、日皮会誌、１９９２、１０２（４）、４２５−４３１
【特許文献１】特開平１０−１６５１３８号
【特許文献２】特開２００３−１３７８０７号
【０００４】
近年、コラーゲンの皮膚浸透性および消化吸収性を向上させる技術として、コラーゲンを酵素などで分解し低分子量化したコラーゲンペプチドが注目されている（非特許文献３参照）。さらに、現在では低分子量化したコラーゲンペプチドを配合した老化防止剤およびコラーゲン産生促進剤が提供されている（特許文献３、４、５参照）。しかし、その効果は一時的なもので必ずしも満足のいくものではなく、より効率的で持続的な効果の改善が望まれていた。
【０００５】
【非特許文献３】酒井  康夫、ＦＲＡＧＲＡＮＣＥ  ＪＯＵＲＮＡＬ、２００１、２、７３−７７
【特許文献３】特開平１１−３１５４６１号
【特許文献４】特開２０００−３０９５２１号
【特許文献５】特開２００３−１３７８０７号
【０００６】
皮膚において障壁機能である角質層を透過した物質は真皮層に到達する。真皮層は毛細血管に富むため、表皮を透過し真皮に到達した物質は容易に体循環へ吸収される（非特許文献４、５参照）。コラーゲンペプチドを皮膚に補給する場合、その効果を十分に発揮させるためには、体循環への吸収を避け、より持続的に真皮層に保持させる必要がある。また、経口摂取後の消化吸収による補給に関しても、腸管上皮細胞からの効率的な吸収が課題となる。
【０００７】
【非特許文献４】東條  角治、Ｐｈａｒｍ  Ｔｅｃｈ  Ｊａｐａｎ、１９９１、７（１）、１０２−１１１
【非特許文献５】杉林  堅次、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、２０００、１５（６）、４９２−４９８
【０００８】
コラーゲンは細胞と結合し、相互的な作用により細胞の賦活化および真皮の構造を維持することが示唆されている（非特許文献６参照）。したがって、低分子量化したコラーゲンペプチドと線維芽細胞、腸管上皮細胞との相互作用、すなわち結合性を高めることで、体循環への吸収を抑制し、皮膚保持効果の向上と消化吸収性の効率化につながると考えた。しかし、線維芽細胞、腸管上皮細胞に対して優れた細胞結合性を示すコラーゲンペプチドに関しては報告されていなかった。
【０００９】
【非特許文献６】Ｊｏｒｄｉ  Ｂｅｌｌａ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２０００，８（６），Ｒ１２１−Ｒ１２６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
かかる状況に鑑み、本発明は、上記のような従来技術における問題点を解決し、安全でかつ、線維芽細胞、腸管上皮細胞などに対して優れた結合性を示すコラーゲンペプチドを開発することで、より効率的で持続的なコラーゲンの生体への補給を行い、シワの形成防止・改善に特にその有効性を発揮する老化防止剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
この様な事情により、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、平均分子量が５００以上２０００以下のコラーゲンペプチドに線維芽細胞、腸管上皮細胞などに対して極めて高い細胞結合性を有することを見出し、より効率的で持続的な加齢変化の予防・改善効果を確認し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち、本発明は、線維芽細胞、腸管上皮細胞などに対して優れた細胞結合性を示す平均分子量が５００以上２０００以下のコラーゲンペプチドを含有することを特徴とする老化防止剤である。
【００１３】
本発明に係るコラーゲンペプチドの出発原料であるコラーゲン成分またはゼラチン成分は、牛、豚、鳥などの骨、皮、腱またはヒラメ、カレイ、鮭、鯛、鮪、鮫などの骨、皮、腱、鱗、浮き袋等を用いることが可能である。これらの原料からのコラーゲン成分またはゼラチン成分の抽出・精製は、通常公知の方法を用いて行うことができる。
【００１４】
コラーゲンペプチドを得るための、これらの加水分解は、タンパク分解酵素のような酵素を使用して行うことができる。加水分解物の調製に用いる酵素としては、トリプシン、キモトリプシン、ズブチリシン、エラスターゼ、プロリン特異性プロテアーゼ、ストレプトコッカス属の微生物が産生するプロテアーゼ、アスペルギルス属の微生物が産生するプロテアーゼ、ストレプトミセス属の微生物が産生するプロテアーゼ、リゾープス属の微生物が産生するプロテアーゼ、バチラス属の微生物が産生するプロテアーゼ、乳酸菌が産生するプロテアーゼ、パパイン、ブロメライン、ククミシン、ペプシン、サーモリシン等が利用できる。また、クロストリジューム属、ストレプトミセス属などの細菌、放線菌あるいは真菌由来のコラゲナーゼも利用可能である。また、遺伝子組み換え技術により他の菌体に産生させたプロテアーゼであっても問題なく、これらの微生物により発酵させることも可能である。さらに、複数の酵素を混合して使用しても良い。中でも、プロクターゼ、プロメライン、パパイン、コラゲナーゼ、ペプシンなどがよい。
【００１５】
加水分解に使用する酵素量は、原料に対して重量比０．０１％〜１０％程度、好ましくは１％程度が良く、温度条件は室温〜９０℃、好ましくは３７℃〜５５℃、反応時間は１〜２４時間、好ましくは１〜８時間処理する。またｐＨ条件は酵素添加前に最適ｐＨに調整する。加水分解終了後、加熱して酵素を失活させ、冷却後必要に応じてろ過、脱色、脱臭、脱塩、濃縮、乾燥を行うと良い。
【００１６】
本発明のコラーゲンペプチドは、酵素の種類、濃度、反応時間等、反応条件を調整することで得ることができる。コラーゲンペプチドの平均分子量は５００〜２０００が好ましく、特に平均分子量８００〜１０００が好ましい。酵素による加水分解物は、ゲルろ過クロマトグラフィー等の公知の方法を用いて特定の分子量の分画物を得ることができる。
【００１７】
本発明の老化防止剤には、上記コラーゲンペプチドをそのまま使用しても良く、効果を損なわない範囲内で、必要に応じて油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、安定剤、保存剤、結合剤、崩壊剤、デキストリン、乳糖、コーンスターチ、乳化剤、防腐剤、賦形剤、増量剤、甘味剤、香味剤等の成分を配合することもできる。
【００１８】
本発明に用いる老化防止剤は、化粧品、食品、医薬部外品および医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、液剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤等が挙げられる。
【００１９】
本発明に用いるコラーゲンペプチドの配合量は特に限定されないが、本発明の老化防止剤全量に対し、乾燥物に換算して０．０００１〜７５重量％の範囲が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜３０重量％である。この配合量が、０．０００１重量％以下ではシワの形成予防・改善効果が低く、また７５重量％を超えても効果に大きな増強はみられにくく、効率的でない。また、添加の方法については、予め加えておいても製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【発明の効果】
【００２０】
本発明のコラーゲンペプチドは、線維芽細胞および腸管上皮細胞などの細胞に対して極めて高い結合効果を示した。特に、この効果は、平均分子量５００以上２０００以下のコラーゲンペプチドで優れていた。このコラーゲンペプチドを含有することを特徴とする老化防止剤は安全で優れた老化防止効果を示した。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例および実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量は重量％を示す。
【実施例１】
【００２２】
製造例１  ペプシン加水分解によるコラーゲンペプチド１
コラーゲンタンパクとして、ヒラメ皮より調製したゼラチン３０ｇを蒸留水３００ｍＬに加温溶解した。ペプシン（日本バイオコン社製）３００ｍｇを加え、酸にてｐＨ３．５に調製した後５０℃で１時間放置した。反応終了後、反応液を中和し、１００℃で１５分間加熱して酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量５０００コラーゲンペプチドを得た。
【００２３】
製造例２  ペプシン加水分解によるコラーゲンペプチド２
製造例１における活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ社製）によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量が２８０、５００、１０００の画分を凍結乾燥した。
【００２４】
製造例３  パパイン加水分解によるコラーゲンペプチド３
コラーゲンタンパクとして、鮭皮より調製したゼラチン３０ｇを蒸留水３００ｍＬに加温溶解した。パパイン（天野エンザイム社製）３００ｍｇを加え、アンモニア水にてｐＨ７．０に調製した後５０℃で１時間放置した。反応終了後、反応液を１００℃で１５分間加熱し、酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量１００００コラーゲンペプチドを得た。
【００２５】
製造例４  パパイン加水分解によるコラーゲンペプチド４
製造例３の活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ社製）によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量が５００、２０００の画分を凍結乾燥した。
【００２６】
製造例５  コラゲナーゼ加水分解によるコラーゲンペプチド５
コラーゲンタンパクとして、鯛鱗より調製したゼラチン３０ｇを蒸留水３００ｍＬに加温溶解した。コラゲナーゼタイプＩ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ製）３００ｍｇを加え、アンモニア水にてｐＨ７．５に調製した後３７℃で１時間放置した。反応終了後、反応液を１００℃で１５分間加熱し、酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量１０００のコラーゲンペプチドを得た。
【００２７】
製造例６  コラゲナーゼ加水分解によるコラーゲンペプチド６
製造例５の活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ社製）によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量４００の画分を凍結乾燥した。
【００２８】
製造例７  パパインおよびバチラス属の微生物が産生するプロテアーゼ加水分解によるコラーゲンペプチド７
コラーゲンタンパクとして、カレイ皮より調製したゼラチン３０ｇを蒸留水３００ｍＬに加温溶解した。パパイン（天野エンザイム社製）、バチラス属の微生物が産生するプロテアーゼ（天野エンザイム社製）を各３００ｍｇ加え、アンモニア水にてｐＨ７．５に調製した後５０℃で３時間放置した。反応終了後、反応液を１００℃で１５分間加熱し、酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量３０００のコラーゲンペプチドを得た。
【００２９】
製造例８  パパインおよびバチラス属の微生物が産生するプロテアーゼ加水分解によるコラーゲンペプチド８
製造例７の活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ社製）によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量８００の画分を凍結乾燥した。
【実施例２】
【００３０】
処方例１  乳液
処方                                                配合量（重量％）
１．コラーゲンペプチド（平均分子量５００、製造例４）  １．０
２．スクワラン                                        ５．０
３．オリーブ油                                        ５．０
４．ホホバ油                                          ５．０
５．セタノール                                        １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                        ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）  ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート        ２．０
９．香料                                              ０．１
１０．プロピレングリコール                              １．０
１１．グリセリン                                        ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１３．精製水                                          ７２．２
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００３１】
比較例１  従来の乳液１
処方例１において、コラーゲンペプチド（平均分子量５００、製造例４）をコラーゲンペプチド（平均分子量１００００、製造例３）に置き換えたものを従来の乳液とした。
【００３２】
比較例２  従来の乳液２
処方例１において、コラーゲンペプチド（平均分子量５００、製造例４）を精製水に置き換えたものを従来の乳液とした。
【００３３】
処方例２  クリーム
処方                                                配合量（重量％）
１．コラーゲンペプチド（平均分子量５００、製造例４）  ０．１
２．スクワラン                                        ５．５
３．オリーブ油                                        ３．０
４．ステアリン酸                                      ２．０
５．ミツロウ                                          ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                      ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）  ３．０
８．ベヘニルアルコール                                １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                        ２．５
１０．香料                                              ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール                        ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル                          ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１４．精製水                                          ６８．０５
［製造方法］成分２〜９を加熱して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００３４】
処方例３  化粧水
処方                                                配合量（重量％）
１．コラーゲンペプチド（平均分子量８００、製造例８）  ０．０１
２．１，３−ブチレングリコール                        ８．０
３．グリセリン                                        ２．０
４．キサンタンガム                                    ０．０２
５．クエン酸                                          ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                ０．１
７．エタノール                                        ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）    ０．１
１０．香料                                              ０．１
１１．精製水                                          ８４．５６
［製造方法］成分１〜６および１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００３５】
処方例４  軟膏
処方                                                配合量（重量％）
１．コラーゲンペプチド（平均分子量１０００、製造例５）１．０
２．酢酸レチノール                                    １．０
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）  ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン                      １０．０
５．流動パラフィン                                    ５．０
６．セタノール                                        ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
８．プロピレングリコール                            １０．０
９．精製水                                          ６４．９
［製造方法］成分２〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３６】
処方例５  ファンデーション
処方                                                配合量（重量％）
１．コラーゲンペプチド（平均分子量１０００、製造例２）１．０
２．ステアリン酸                                      ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート      １．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）  ２．０
５．セタノール                                        １．０
６．液状ラノリン                                      ２．０
７．流動パラフィン                                    ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                          ６．５
９．パラオキシ安息香酸ブチル                          ０．１
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム              ０．１
１１．ベントナイト                                      ０．５
１２．プロピレングリコール                              ４．０
１３．トリエタノールアミン                              １．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１５．二酸化チタン                                      ８．０
１６．タルク                                            ４．０
１７．ベンガラ                                          １．０
１８．黄酸化鉄                                          ２．０
１９．香料                                              ０．１
２０．精製水                                          ６０．０
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１および１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３７】
処方例６  浴用剤
処方                                                配合量（重量％）
１．コラーゲンペプチド（平均分子量１０００、製造例５）１．０
２．ビタミンＡ油                                      １．０
３．炭酸水素ナトリウム                              ５０．０
４．黄色２０２号（１）                                ０．０５
５．香料                                              ０．２５
６．無水硫酸ナトリウム                              ４７．７
［製造方法］成分１〜６を均一に混合し製品とする。
【００３８】
処方例７  液剤
処方                                                配合量（重量％）
１．コラーゲンペプチド（平均分子量８００、製造例８）１０．０
２．クエン酸                                          ０．７
３．果糖ブドウ糖                                      ６．０
４．香料                                              適  量
５．精製水にて全量を１００とする。 
［製造方法］５に１〜４を加え、攪拌溶解してろ過し、加熱殺菌後、３０ｍｌガラス瓶に充填する。
【００３９】
比較例３  従来の液剤
処方例７において、コラーゲンペプチド（平均分子量８００、製造例８）を精製水に置き換えたものを従来の液剤とした。
【００４０】
処方例８  錠剤
処方                                                配合量（重量％）
１．コラーゲンペプチド（平均分子量５００、製造例４    ５．０
２．クエン酸                                          ０．７
３．粉糖                                            ５０．０
４．乳糖にて全量を１００とする。
５．色素                                              適  量
６．香料                                              適  量
７．ショ糖脂肪酸エステル                              ３．０
［製造方法］１〜５の混合物に８０％エタノールを適量加えて造粒を行った後、乾燥する。それに６および７を加えて打錠成型し、３００ｍｇの錠剤を得る。
【実施例３】
【００４１】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００４２】
実験例１  コラーゲンペプチドと線維芽細胞の結合性評価
コラーゲンペプチドと線維芽細胞の結合性を下記の条件にて測定した。
【００４３】
正常ヒト皮膚線維芽細胞を血清を含むＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭ培地にて培養し、トリプシン処理により剥離した。その後、血球計算盤にて細胞数を計測して５００００個／ｍＬの細胞懸濁液を調整した。この細胞懸濁液１ｍＬを、コラーゲンペプチドでコートした３．５ｃｍディッシュに播種し、２時間培養した。培地を除いた後、ＰＢＳ（−）にて２回洗浄することでディッシュに結合していない細胞を除いた。その後、トリプシン処理により細胞を剥離し、血球計算盤にてその細胞数を求めた。コラーゲンペプチドでコートしていないディッシュをコントロールとしてコートしたディッシュにおける細胞数の増加率を指標に、コラーゲンペプチドと線維芽細胞の結合性を評価した。
【００４４】
これらの試験結果を表１に示した。その結果、平均分子量５００から２０００のコラーゲンペプチドに高い線維芽細胞結合効果が認められた。
【００４５】
【表１】
2005314265.tif 000002
【００４６】
実験例２  コラーゲンペプチドと腸管上皮細胞の結合性評価
コラーゲンペプチドと腸管上皮細胞の結合性を下記の条件にて測定した。
【００４７】
ヒト腸管上皮細胞株を血清を含むＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭ培地にて培養し、トリプシン処理により剥離した。その後、血球計算盤にて細胞数を計測して５００００個／ｍＬの細胞懸濁液を調整した。この細胞懸濁液１ｍＬを、コラーゲンペプチドでコートした３．５ｃｍディッシュに播種し、２時間培養した。培地を除いた後、ＰＢＳ（−）にて２回洗浄することでディッシュに結合していない細胞を除いた。その後、トリプシン処理により細胞を剥離し、血球計算盤にてその細胞数を求めた。コラーゲンペプチドでコートしていないディッシュをコントロールとしてコートしたディッシュにおける細胞数の増加率を指標に、コラーゲンペプチドと腸管上皮細胞の結合性を評価した。
【００４８】
これらの試験結果を表２に示した。その結果、平均分子量５００から２０００のコラーゲンペプチドに高い腸管上皮細胞結合効果が認められた。
【００４９】
【表２】
2005314265.tif 000003
【００５０】
実験例３  コラーゲンペプチドの皮膚保持効果の評価
コラーゲンペプチドの皮膚保持効果について下記の条件にて測定した。
【００５１】
皮膚浸透性評価の代表的な方法であるＦｒａｎｚ型拡散セル法を利用して、コラーゲンペプチドの皮膚保持効果について評価した。すなわち、Ｙｕｃａｔａｎ  Ｍｉｃｒｏｐｉｇ皮膚をＦｒａｎｚ型拡散セルに装着し、５００μＬのコラーゲンペプチド３％水溶液をドナー相に加え、パラフィルムにて密封した。レシーバー相には、１００Ｕ／ｍＬペニシリンＧ、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを添加した生理食塩水を加え、３７℃で撹拌し、コラーゲンペプチドを皮膚に１２時間浸透させた。その後、ドナー相のコラーゲンペプチド水溶液を生理食塩水に置換し、さらに２４時間撹拌を行った。１２時間撹拌により浸透したコラーゲンペプチドの量と除去２４時間後の皮膚に保持されているコラーゲンペプチドの量を比較して皮膚保持率を算出した。
【００５２】
これらの試験結果を表３に示した。その結果、平均分子量５００から２０００のコラーゲンペプチドに優れた皮膚保持効果が認められた。
【００５３】
【表３】
2005314265.tif 000004
【００５４】
実験例４  使用試験
処方例１の乳液、比較例１および比較例２の従来の乳液を用いて、各々女性３０人（３０〜４５才）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後および使用後３日後の、しわ、たるみについてのアンケート調査を行って、老化防止効果を判定した。アンケートの評価基準は、有効なものを「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。
【００５５】
使用後の結果を表４、使用後３日後の結果を表５に示した。処方例１のコラーゲンペプチドを含有することを特徴とする乳液は優れた老化防止効果を示した。また、使用後３日後もその効果は持続していた。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００５６】
【表４】
2005314265.tif 000005
【００５７】
【表５】
2005314265.tif 000006
【００５８】
処方例２のクリーム、処方例３の化粧水、処方例４の軟膏、処方例５のファンデーション、処方例６の浴用剤について同様に使用試験を行ったところ、いずれも安全で優れた老化防止効果を示した。
【００５９】
実験例５  使用試験
処方例７の液剤および比較例３の従来の液剤を用いて、各々女性３０人（３０〜４５才）を対象に２ヶ月間の使用試験（飲用）を行った。使用後、しわ、たるみについてのアンケート調査を行って、老化防止効果を判定した。アンケートの評価基準は、有効なものを「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。
【００６０】
これらの結果を表６に示した。処方例７のコラーゲンペプチドを含有することを特徴とする液剤は優れた老化防止効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００６１】
【表６】
2005314265.tif 000007
【００６２】
処方例８の錠剤について同様に使用試験を行ったところ、いずれも安全で優れた老化防止効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明の活用例として、化粧品、食品、医薬部外品および医薬品のいずれにも用いることができる。その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、液剤、錠剤などがあげられ、外用あるいは服用することにより、安全で、皮膚老徴のひとつであるシワの形成防止・改善にその有効性を発揮する老化防止剤が期待される。