(57)【要約】【課題】優れた動脈硬化予防剤を提供すること。【解決手段】松樹皮抽出物を含有する動脈硬化予防剤であって、該松樹皮抽出物がプロアントシアニジンを乾燥重量換算で９５重量％未満の割合で含む、動脈硬化予防剤。該動脈硬化予防剤中の松樹皮抽出物は、熱水抽出により得ることが好ましく、さらにＯＰＣを乾燥重量換算で２０重量％以上、そしてカテキン類を乾燥重量換算で５重量％以上の割合で含有することが好ましい。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
松樹皮抽出物を含有する動脈硬化予防剤であって、
該松樹皮抽出物がプロアントシアニジンを乾燥重量換算で９５重量％未満の割合で含む、動脈硬化予防剤。
【請求項２】
前記松樹皮抽出物が、松樹皮を熱水抽出することによって得られる、請求項１に記載の予防剤。
【請求項３】
前記松樹皮抽出物が、オリゴメリック・プロアントシアニジンを乾燥重量換算で２０重量％以上の割合で含有する、請求項１または２に記載の予防剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、動脈硬化予防剤に関し、より詳しくは、動脈の酸化脂質を低減する作用を有する動脈硬化予防剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、生活習慣病と呼ばれる、脳卒中、心臓病、高血圧等の血管に関連した成人病疾患が増加し、社会問題となっている。これらの疾患は、主として高カロリー食の過剰摂取や、社会的ストレスにより引き起こされている。
【０００３】
高カロリーな食材としては、例えば、卵や畜肉が挙げられ、このような食材には、コレステロール、脂肪酸、中性脂肪などの脂質成分が特に多く含有される。近年では、加工食品などにも酸化コレステロールが多量に含有される。このように、食材中の脂質成分、特にコレステロールは、近年の食生活の変化から過剰に摂取されがちである。
【０００４】
コレステロールは、血中において、特異的なタンパク質と結合した低密度のリポタンパク質（ＬＤＬ）の形で末梢組織に運搬される。他方、コレステロールの排出は、高密度のリポタンパク質（ＨＤＬ）により末梢から肝臓に運搬され、肝臓で行われる。ＬＤＬが血中に多く存在すると、高コレステロール血症の原因となる。さらに、ＬＤＬが酸化されると血管に付着するため、マクロファージがこれを消化しようと集積する結果、ＬＤＬ付着部分にマクロファージの死骸が吸着し、動脈硬化が引き起こされる。
【０００５】
ＬＤＬの酸化を防止する動脈硬化予防食品として、植物界に広く存在するポリフェノール類を含む食品が提案されている。ポリフェノール類の中でも、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上の縮重合体からなる化合物群であるプロアントシアニジンは、抗酸化作用などの種々の活性を有することが知られており、このプロアントシアニジンを含むリンゴまたはブドウの抽出物がＬＤＬの酸化を抑制することが知られている（例えば、特許文献１および２、非特許文献１）。しかし、上記の抽出物では、ＬＤＬの酸化防止効果および動脈硬化の予防効果は十分とはいえない。
【０００６】
【特許文献１】
特許第１６４３１０１号公報
【特許文献２】
特開平１０−３３０２７８号公報
【非特許文献１】
Ｙａｍａｋｏｓｈｉら、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（１４２）１３９−１４９頁、１９９９年
【非特許文献２】
Ｒ．Ｂ．Ｂｒｏａｄｈｕｒｓｔら、Ｊ．Ｓｃｉ．Ｆｄ．Ａｇｒｉｃ．、１９７８年、２９巻、７８８〜７９４頁
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、優れた動脈硬化予防剤を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、プロアントシアニジンを含有する植物の動脈硬化予防作用について鋭意検討を行ったところ、松樹皮抽出物が、他の植物由来の抽出物に比べて、血管における高い脂質の酸化抑制効果を有することを見出して本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明は、松樹皮抽出物を含有する動脈硬化予防剤を提供し、該松樹皮抽出物は、プロアントシアニジンを乾燥重量換算で９５重量％未満の割合で含む。
【００１０】
好ましい実施態様においては、上記松樹皮抽出物は、松樹皮を熱水抽出することによって得られる。
【００１１】
さらに好ましい実施態様においては、上記松樹皮抽出物は、オリゴメリック・プロアントシアニジンを乾燥重量換算で２０重量％以上の割合で含有する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の動脈硬化予防剤は、松樹皮抽出物を含有し、該松樹皮抽出物は、プロアントシアニジンを含む。この動脈硬化予防剤は、さらに必要に応じて、その他の成分を含有し得る。以下、各成分および本発明の動脈硬化予防剤について説明する。なお、以下に説明する構成は、本発明を限定するものでなく、本発明の趣旨の範囲内で種々改変することができる。
【００１３】
松樹皮抽出物の原料となる松樹皮としては、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ  Ｍａｒｔｉｍａ）、カラマツ、クロマツ、アカマツ、ヒメコマツ、ゴヨウマツ、チョウセンマツ、ハイマツ、リュウキュウマツ、ウツクシマツ、ダイオウマツ、シロマツ、カナダのケベック地方のアネダ等の樹皮が好ましく用いられる。中でも、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ  Ｍａｒｔｉｍａ）の樹皮が好ましく用いられる。
【００１４】
フランス海岸松は、南仏の大西洋沿岸の一部に生育している海洋性松をいう。このフランス海岸松の樹皮は、プロアントシアニジン、有機酸、ならびにその他の生理活性成分などを含有する。プロアントシアニジンとは、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上の縮重合体からなる化合物群をいう。この主要成分であるプロアントシアニジンには、活性酸素を除去する強い抗酸化作用があることが知られている。
【００１５】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、上記の松の樹皮を水または有機溶媒で抽出して得られる。水を用いる場合には、温水または熱水が用いられる。有機溶媒を用いる場合には、食品あるいは薬剤の製造に許容される溶媒が用いられ、このうような有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール、メチルエチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、および１，１，２−トリクロロエテンが挙げられる。これらの水および有機溶媒は単独で用いてもよいし、組合わせて用いてもよい。水、熱水、エタノール、含水エタノール、および含水プロピレングリコールが好ましく用いられる。食品または医薬品に用いる場合の安全性の観点から、水、熱水、エタノール、および含水エタノールがより好ましく、熱水がさらに好ましく用いられる。
【００１６】
抽出において、水または有機溶媒の量に特に制限はないが、好ましくは、松樹皮（乾燥重量）１００重量部に対して、１〜１００重量部である。さらに、熱水を用いる場合の温度は、５０〜１２０℃、好ましくは７０〜１００℃に設定することが好ましい。松樹皮を熱水抽出することによって得られた松樹皮抽出物は、他の抽出方法で得られた松樹皮抽出物に比べて、水に対する溶解性が高く、かつ優れた生理活性（動脈硬化予防効果）を発揮する。
【００１７】
松樹皮からの抽出方法に特に制限はないが、例えば、加温抽出法、超臨界流体抽出法などが用いられる。
【００１８】
超臨界流体抽出法は、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて抽出を行う方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）などが用いられ、二酸化炭素が好ましく用いられる。
【００１９】
超臨界流体抽出法では、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程および目的成分と超臨界流体とを分離する分離工程とを行う。分離工程では、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、または吸着剤・吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
【００２０】
また、エントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。この方法は、超臨界流体に、例えば、エタノール、プロパノール、ｎ−ヘキサン、アセトン、トルエン、その他の脂肪族低級アルコール類、脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、またはケトン類を２〜２０Ｗ／Ｖ％程度添加し、この流体で超臨界流体抽出を行うことによって、プロアントシアニジン、カテキン類などの目的とする抽出物の抽出溶媒に対する溶解度を飛躍的に上昇させる、あるいは分離の選択性を増強させる方法であり、効率的な松樹皮抽出物を得る方法である。
【００２１】
超臨界流体抽出法は、比較的低い温度で操作できるため、高温で変質・分解する物質にも適用できるという利点；抽出流体が残留しないという利点；および溶媒の循環利用が可能であり、脱溶媒工程などが省略でき、工程がシンプルになるという利点がある。
【００２２】
また、松樹皮からの抽出は、上記の方法以外に、液体二酸化炭素回分法、液体二酸化炭素還流法、超臨界二酸化炭素還流法などにより行ってもよい。
【００２３】
松樹皮からの抽出は、複数の抽出方法を組み合わせてもよい。複数の抽出方法を組み合わせることにより、種々の組成の松樹皮抽出物を得ることが可能となる。
【００２４】
上記抽出により得られた松樹皮抽出物は、プロアントシアニジン含有量を増加させる目的で精製してもよい。精製には、通常、酢酸エチルなどの溶媒が用いられるが、安全性などの面から、溶媒を使用しない方法、例えば、限外濾過、あるいはダイヤイオンＨＰ−２０、Ｓｅｐｈａｄｅｘ−ＬＨ２０、キチンなどの吸着性担体を用いたカラム法またはバッチ法により精製することが好ましい。
【００２５】
本発明の動脈硬化予防剤に用いられる松樹皮抽出物は、具体的には、以下のような方法により調製されるが、これは例示であり、この方法に限定されない。
【００２６】
フランス海岸松の樹皮１ｋｇを、塩化ナトリウムの飽和水溶液３Ｌに入れ、１００℃にて３０分間抽出し、抽出液を得る（抽出工程）。その後、抽出液を濾過し、得られる不溶物を塩化ナトリウムの飽和溶液５００ｍＬで洗浄し、洗浄液を得る（洗浄工程）。この抽出液と洗浄液を合わせて、松樹皮の粗抽出液を得る。
【００２７】
次いで、この粗抽出液に酢酸エチル２５０ｍＬを添加して分液し、酢酸エチル層を回収する工程を５回行う。回収した酢酸エチル溶液を合わせて、無水硫酸ナトリウム２００ｇに直接添加して脱水する。その後、この酢酸エチル溶液を濾過し、濾液を元の５分の１量になるまで減圧濃縮する。濃縮された酢酸エチル溶液を２Ｌのクロロホルムに注ぎ、攪拌して得られる沈殿物を濾過して回収する。その後、この沈殿物を酢酸エチル１００ｍＬに溶解した後、再度１Ｌのクロロホルムに添加して沈殿させる操作を２回繰り返す洗浄工程を行う。この方法により、例えば、重合度が２〜４のプロアントシアニジンを２０重量％以上含み、かつカテキン類を５重量％以上含有する、約５ｇの松樹皮抽出物が得られる。
【００２８】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、プロアントシアニジンを含有する。このプロアントシアニジンを含有する松樹皮抽出物を摂取した場合に、優れた動脈硬化予防効果が得られる。さらに、プロアントシアニジンの中でも、重合度が低い縮重合体を含むものが好ましく用いられる。重合度が２〜３０の縮合重合体（２〜３０量体）を含むものが好ましく、重合度が２〜１０の縮合重合体（２〜１０量体）を含むものがより好ましく、重合度が２〜４の縮合重合体（２〜４量体）を含むものがさらに好ましく用いられる。ＯＰＣ含有量が高い松樹皮抽出物を用いると、重合度の高いプロアントシアニジン（ＯＰＣ含有量が少ないもの）を用いた場合と対比して、優れた動脈硬化予防効果が得られる。
【００２９】
本明細書では、上記の重合度が２〜４の重合体を、オリゴメリック・プロアントシアニジン（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ、以下「ＯＰＣ」という）という。ＯＰＣは、ポリフェノールの一種で、植物が作り出す強力な抗酸化物質であり、植物の葉、樹皮、果物の皮や種の部分に集中的に含まれている。
【００３０】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、プロアントシアニジンを抽出物中に乾燥重量換算で９５重量％未満、好ましくは４０重量％以上９５重量％未満、より好ましくは４０重量％以上９０重量％未満、さらに好ましくは４０重量％以上７５重量％未満、最も好ましくは４０重量％以上６０重量％未満の割合で含有する。そしてＯＰＣを抽出物中に乾燥重量換算で好ましくは２０重量％以上、より好ましくは３０重量％以上の割合で含有する。松樹皮抽出物中に含まれるプロアントシアニジンが９５重量％以上になると、松樹皮抽出物中のプロアントシアニジン以外の成分含有量が減少するため、水への溶解性が悪くなったり、抽出物の持つ生理活性が低下するなどの問題が生ずる場合がある。
【００３１】
上記松樹皮抽出物には、さらにカテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）類が含有され得、このカテキン類は、好ましくは５重量％以上、より好ましくは１０重量％以上の割合で含有される。カテキン類は、上記抽出方法によって、プロアントシアニジン（ＯＰＣ）とともに抽出され得る。カテキン類とは、ポリヒドロキシフラバン−３−オールの総称である。カテキン類としては、（＋）−カテキン（狭義のカテキンといわれる）、（−）−エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、アフゼレキンなどが知られている。上記松樹皮抽出物からは、上記の（＋）−カテキンの他、ガロカテキン、アフゼレキン、ならびに（＋）−カテキンまたはガロカテキンの３−ガロイル誘導体が単離されている。カテキン類には、発癌抑制作用、動脈硬化予防作用、脂肪代謝異常の抑制作用、血圧上昇の抑制作用、血小板凝集抑制作用、抗アレルギー作用、抗ウイルス作用などがあることが知られている。カテキン類は、ＯＰＣの存在下で水溶性が増すと同時に、ＯＰＣを活性化する性質を有し、ＯＰＣとともに摂取することで効果的に作用する。
【００３２】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、ＯＰＣを２０重量％以上の割合で含有し、かつ、カテキン類を５重量％以上の割合で含有することが最も好ましい。カテキン類が上記の含有量を満たさない場合は、カテキン類を５重量％以上の割合で含有するように添加することが好ましい。
【００３３】
本発明の動脈硬化予防剤は、さらに必要に応じて、通常食品、医薬などに用いられる種々の成分を含む。このような成分としては、栄養補助剤、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、調味料、食品添加物などが挙げられる。
【００３４】
本発明の動脈硬化予防剤は、松樹皮抽出物を任意の割合で含有する。好ましくは該予防剤中に乾燥重量換算で０．００１重量％〜７０重量％、より好ましくは０．００２重量％〜５０重量％の割合で含有することが好ましい。
【００３５】
本発明の動脈硬化予防剤は、松樹皮抽出物を一日の摂取量が、好ましくは５ｍｇ〜１０００ｍｇ、より好ましくは１０ｍｇ〜５００ｍｇとなるように含有することが好ましい。
【００３６】
本発明によれば、このように、プロアントシアニジンを含む松樹皮抽出物を含有する動脈硬化予防剤が得られる。この予防剤を摂取することによって、動脈の酸化脂質を低減する作用が発揮されるため、優れた動脈硬化予防効果が得られる。特に、松樹皮の熱水抽出物を含有する予防剤が、より優れた動脈硬化予防効果を発揮する点で好ましい。本発明の予防剤は、食品および医薬品として利用され得る。
【００３７】
【実施例】
以下に、本発明を実施例に基づいて更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３８】
（調製例１：松樹皮の熱水抽出物１の調製）
松樹皮９００ｇに精製水７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱抽出した。次いで、直ちに濾過して濾液を得た。濾過後の残渣を精製水１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて９Ｌの松樹皮の熱水粗抽出液を得た。この抽出液１ｍＬを凍結乾燥したところ、乾燥重量は８ｍｇであった。
【００３９】
上記粗抽出液１Ｌ（粉末乾燥重量８ｇ）を２５℃まで放冷し、塩化ナトリウムを１００％飽和濃度となるまで添加してよく攪拌した後、４℃で２４時間静置した。静置後、この溶液を濾過し、９１０ｍＬの濾液を得た。この濾液を以下に示す工程によりさらに精製した。まず、水で膨潤させた芳香族系合成樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０：三菱化学株式会社製）を１００ｍＬ充填した３０×３００ｍｍのカラムに上記濾液を通液し、さらに１Ｌの精製水で洗浄した。次いで、カラムから１５％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒で溶出し、２００ｍＬの松樹皮の熱水抽出精製物を得た（以下、松樹皮の熱水抽出物１とする）。得られた精製物を凍結乾燥して粉末化した。本操作を繰り返して、９Ｌの松樹皮の熱水抽出液から松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末７．５１ｇを得た。
【００４０】
上記乾燥粉末中のプロアントシアニジンおよびＯＰＣの含有量を以下のようにして測定した。
【００４１】
プロアントシアニジンの含有量は、プロシアニジンＢ−２を標品として、Ｒ．Ｂ．Ｂｒｏａｄｈｕｒｓｔらの方法（非特許文献２）にしたがって測定した。その結果、プロアントシアニジンは、上記乾燥粉末中に４０重量％含有されていた。
【００４２】
ＯＰＣの含有量は、以下のようにして測定した。まず、水で膨潤させたセファデックスＬＨ−２０（アマシャムバイオサイエンス株式会社製）１００ｍＬを３０×３００ｍｍのカラムに充填し、５０ｍＬのエタノールで洗浄した。次いで、４００ｍｇの上記松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末を８ｍＬのエタノールに溶解し、この溶液をカラムに通液し、プロアントシアニジンを吸着させた。その後、１００〜８０％（Ｖ／Ｖ）エタノール−水混合溶媒でグラジエント溶出し、１０ｍＬずつ分取した。分取すると同時に、２、３、および４量体のＯＰＣの標品（２量体：プロアントシアニジンＢ−２（Ｒｆ値：０．６）、３量体：プロアントシアニジンＣ−１（Ｒｆ値：０．４）、および４量体：シンナムタンニンＡ２（Ｒｆ値：０．２））を各々指標として、各画分中のＯＰＣをＴＬＣにより検出した。ＴＬＣの条件は下記のとおりである：
ＴＬＣ：シリカゲルプレート（Ｍｅｒｃｋ  ＆  ＣＯ．，  Ｉｎｃ．製）
展開溶媒：ベンゼン／蟻酸エチル／蟻酸（２／７／１）
検出試薬：硫酸およびアニスアルデヒド硫酸
サンプル量：各１０μＬ
【００４３】
ＴＬＣにより２〜４量体が検出されなくなった時点で、溶出溶媒を５０％（Ｖ／Ｖ）水−アセトン混合溶媒に変更し、この混合溶媒１２００ｍＬを通液し、カラムに吸着した残りのプロアントシアニジンを溶出させた。得られた２〜４量体が検出された画分をＯＰＣ含有画分とし、該ＯＰＣ含有画分以降の画分をＯＰＣ非含有プロアントシアニジン含有画分とした。ＯＰＣ含有画分を凍結乾燥し、ＯＰＣの乾燥粉末を得た。得られた乾燥粉末の重量から松樹皮の熱水抽出物１中のＯＰＣの含有量を算出したところ、乾燥重量換算で２０重量％であった。
【００４４】
（調製例２：松樹皮の熱水抽出物２の調製）
調製例１の操作と同様にして、松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末７．５１ｇを得た。さらにプロアントシアニジン含有量を高めるために、調製例１のＯＰＣの測定方法に準じて、この抽出物１からプロアントシアニジンを含有する画分（ＯＰＣ含有画分およびＯＰＣ非含有プロアントシアニジン含有画分）を得、この画分を松樹皮の熱水抽出精製画分（以下、松樹皮の熱水抽出物２という）とした。この松樹皮の熱水抽出物２を凍結乾燥し、抽出物１の乾燥粉末７．５１ｇから松樹皮の熱水抽出物２の乾燥粉末２．９３ｇを得た。この抽出物２のプロアントシアニジン含有量は、９５．７重量％であった。
【００４５】
（調製例３：松樹皮のエタノール抽出物の調製）
調製例１の精製水を用いて抽出する代わりにエタノールを用いて抽出したこと以外は、調製例１と同様に操作して、松樹皮のエタノール抽出物（プロアントシアニジン４１重量％含有）を得た。
【００４６】
（実施例１：飼料１の調製）
調製例１で得られた松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末（プロアントシアニジン４０重量％（ＯＰＣとして２０重量％）含有）が０．１重量％およびコレステロールが１重量％となるように基本飼料（ＣＲ−１：日本クレア株式会社）中に混合して、飼料を調製した（飼料１とする）。
【００４７】
（実施例２：飼料２の調製）
調製例１で得られた松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末（プロアントシアニジン４０重量％含有）と調製例２で得られた松樹皮の熱水抽出物２の乾燥粉末（プロアントシアニジン９５．７重量％含有）とを重量比で４：６で混合してプロアントシアニジンを７３．４重量％含有する松樹皮の熱水抽出物３の乾燥粉末を調製した。松樹皮の熱水抽出物１の代わりに、この抽出物３の乾燥粉末を用いた以外は、実施例１と同様にして飼料を調製した（飼料２とする）。
【００４８】
（実施例３：飼料３の調製）
松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末の代わりに、調製例３で得られた松樹皮のエタノール抽出物の乾燥粉末を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、飼料を調製した（飼料３とする）。
【００４９】
（比較例１：飼料４の調製）
松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末の代わりに、調製例２で得られた松樹皮の熱水抽出物２の乾燥粉末（プロアントシアニジン９５．７重量％含有）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、飼料を調製した（飼料４とする）。
【００５０】
（比較例２：飼料５の調製）
松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末の代わりに、ブドウ種子抽出物（プロアントシアニジン３８重量％含有：キッコーマン株式会社）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、飼料を調製した（飼料５とする）。
【００５１】
（比較例３：飼料６の調製）
松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末の代わりに、リンゴポリフェノール（プロアントシアニジン４０重量％含有：ニッカウヰスキー株式会社）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、飼料を調製した（飼料６とする）。
【００５２】
（比較例４：飼料７の調製）
松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末を用いなかったこと以外は、実施例１と同様にして、飼料を調製した（飼料７とする）。
【００５３】
（実施例５：動脈脂質酸化抑制効果の検討）
実施例１〜３の飼料１〜３および比較例１〜４の飼料４〜７を用いて、動脈脂質酸化抑制効果を調べた。まず、平均体重が２．１±０．２ｋｇである３５匹のウサギ（チャールズリバー）を一群５匹に分けた。１群のウサギに飼料１を一日当たり１００ｇ、４週間摂取させた。摂取期間終了後、ウサギを解剖して、大動脈弓および胸大動脈を摘出した。これらの摘出部位をそれぞれ０．１ＭのＰＢＳ（−）で３回洗浄した後、各摘出部位の湿重量に対して１０倍量の０．１ＭのＰＢＳ（−）を添加し、ホモジェネートして、各摘出部位の抽出液を調製した。この抽出液の過酸化脂質量を、過酸化脂質測定キット（ＬＰＯ−５８６、ＯＸＩＳインターナショナル社）を用いて、マロニルジアルデヒド（ＭＤＡ）を標品としてタンパク質１ｍｇ当たりのＭＤＡ量を測定した。飼料２〜７についても上記と同様にして行い、ＭＤＡ量を測定した。結果を表１に示す。なお、ＭＤＡ量が多いほど、動脈に結合した過酸化脂質量が多いことを示す。
【００５４】
【表１】
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【００５５】
表１の結果から、実施例のプロアントシアニジンを９５重量％未満の割合で含む松樹皮抽出物の乾燥粉末を含有する飼料（実施例１〜３）を摂取した群は、比較例のプロアントシアニジンを９５．７重量％含む松樹皮抽出物を含有する飼料（比較例１）あるいは松樹皮抽出物を含有していない飼料を摂取した群（比較例２〜４）に比べて、大動脈弓および肺動脈のＭＤＡ量が減少しており、動脈における過酸化脂質に起因する動脈硬化を効果的に予防できることが分かる。さらに、実施例１および３の比較から、松樹皮の熱水抽出物がエタノール抽出物に比べて、より高い動脈硬化予防効果を有することがわかる。実施例１および３と比較例２および３とを比較すると、この松樹皮抽出物は、同量のプロアントシアニジンを含有するブドウ種子抽出物またはリンゴポリフェノールに比べて、ＭＤＡ量を減少させることから、松樹皮抽出物が他の植物抽出物に比べて優れた動脈硬化予防効果を発揮することがわかる。
【００５６】
【発明の効果】
本発明の動脈硬化予防剤を摂取すると、優れた動脈硬化予防効果が得られる。本発明の予防剤に含有される松樹皮抽出物は、同量のプロアントシアニジンを含有する他の植物抽出物に比べて、優れた動脈硬化予防効果を発揮する。このような松樹皮抽出物は、熱水抽出により得ることが好ましい。