(57)【要約】【課題】  ハナビラタケ由来のセラミドを含有したセラミド含有組成物を提供する。【解決手段】  ハナビラタケの子実体または菌糸体に含有されるセラミドを有効成分とすることを特徴とするセラミド含有組成物であり、好ましくは、ハナビラタケの子実体または菌糸体から少なくとも1種類以上の有機溶媒で抽出されるセラミド画分を有効成分とするものであり、さらに好ましくは、ハナビラタケの子実体または菌糸体からアルコールを用いて抽出されるセラミド画分を有効成分とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハナビラタケの子実体または菌糸体が含有するセラミドを有効成分とすることを特徴とするハナビラタケ由来のセラミド含有組成物。
【請求項２】
ハナビラタケの子実体または菌糸体から少なくとも1種類以上の有機溶媒で抽出される画分を有効成分とするハナビラタケ由来のセラミド含有組成物。
【請求項３】
有機溶媒が、アルコールである請求項２記載のハナビラタケ由来のセラミド含有組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載のハナビラタケ由来のセラミド含有組成物を含む外用治療剤。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載のハナビラタケ由来のセラミド含有組成物を含む化粧品。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれかに記載のハナビラタケ由来のセラミド含有組成物を含む経口投与剤。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれかに記載のハナビラタケ由来のセラミド含有組成物を含む健康食品。
【請求項８】
天然物由来のセラミドを含有する組成物であって、セラミドのうち糖セラミド（セレブロシド）の分子構造の長鎖塩基部分がHOCH2CH(NH2)CH(OH)CH(OH)C20H41で表されるセラミド含有組成物。
【請求項９】
天然物由来のセラミドを含有する組成物であって、セラミドのうち糖セラミド（セレブロシド）の分子構造が糖残基としてグルコース、脂肪酸残基は炭素数が１４〜１８の２ヒドロキシ酸を含み、長鎖塩基がHOCH2CH(NH2)CH(OH)CH(OH)C20H41で表されるセラミド含有組成物。
【請求項１０】
天然物が、ハナビラタケである請求項８又は９記載のセラミド含有組成物。
【請求項１１】
糖残基がグルコースであり、脂肪酸残基は炭素数が１４〜１８の２ヒドロキシ酸を含み、長鎖塩基がHOCH2CH(NH2)CH(OH)CH(OH)C20H41で表される糖セラミド。
【請求項１２】
脂肪酸残基は炭素数が１４〜１８の２ヒドロキシ酸を含み、長鎖塩基がHOCH2CH(NH2)CH(OH)CH(OH)C20H41で表されるセラミド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハナビラタケ由来のセラミドを含有するセラミド含有組成物並びにそれを含む外用治療剤、化粧品、経口投与剤および健康食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
セラミドはヒトの皮膚に含まれる複合脂質であり、肌のみずみずしさと張りを保つ効果（例えば、非特許文献１参照）やメラニン色素の生成を抑制する効果があるとされている。皮膚の最外層である角質層、顆粒層は細胞間脂質で構成されているが、その40〜60％はセラミドからなっている。セラミドは皮膚最外層で水分透過バリヤー機能、すなわち保湿機能（例えば、非特許文献２参照）およびアレルゲンなどの外部刺激物の侵入を防ぐ機能を担っていると考えられている。セラミドは加齢にともなって減少すること、マウスにおいては経口投与によって小腸消化管から吸収され、毛細血管を介して角質層に補充されることが確認されている（例えば、非特許文献３および４参照）。また、アトピー性皮膚炎の患者では皮膚の角質細胞間脂質が大幅に減少していることが知られており（例えば、非特許文献５参照）、セラミドはアトピー性皮膚炎の治療にも大きな効果がある（例えば、非特許文献６参照）。
【０００３】
このようなセラミドは保湿化粧品や外用治療薬には以前から使われており、外用でセラミドが保湿効果を向上させている例は数多く存在する。が、その場合には塗布した部分にしか効果がない。食品として摂取・吸収できれば、全身の表皮にセラミドを補充することが可能で、ドライスキン、しわ、肌荒れを防ぐことができる。
【０００４】
従来、セラミドを補充する方法としては、牛脳由来のセラミドが化粧品用途に使用されてきたが、1986年に発生した狂牛病問題から動物由来のセラミドに対する安全性が疑問視され、植物由来のセラミドが注目されるようになった。植物由来のセラミドは安全性が高いとされ、小麦（例えば、非特許文献７参照）、米、大豆、こんにゃく又はこんにゃくトビ粉（例えば、特許文献１参照）などからセラミドが抽出され食品および化粧品用素材などとして利用されている。
【０００５】
一方、きのこ類は古くから食用として利用されているが、最近その成分の生理活性が明らかにされ、種々のきのこが健康食品素材として利用されている。また、マイタケから抽出、精製したセラミドが日本製粉から発売されている。また、免疫賦活作用を持つアガリクス茸と小麦抽出セラミドを配合した製品（特許文献２参照）が健康食品として（株）ビーボコーポレーションから発売されている。
【０００６】
きのこ類の一種であるハナビラタケは、カラマツに生えるきのこであって、非常に僅少なきのこである。歯ごたえがよく、その純白の色合いと葉牡丹のような形態が特徴である食用きのこである。これまで、このハナビラタケは成長が遅く人工栽培は非常に困難であるとされてきたが、最近になって、比較的短期間で栽培可能な新しい栽培法が確立され、商業規模での供給が可能となってきている。
【０００７】
このハナビラタケについて溶媒でβ‐グルカンを抽出する方法が提案され、その抽出物について医薬品分野での用途が提案されている（例えば、特許文献３、４参照）。
【０００８】
ハナビラタケについてセラミドを高濃度に含有することはこれまで知られていない。
【０００９】
植物由来のセラミドに構造については、一部明らかにされており、こんにゃく、米糠、小麦（例えば、非特許文献８参照）、エリンギ（例えば、非特許文献９参照）、マイタケ、シイタケ、ヒラタケ、タモギタケ、エノキタケ、ナメコ、ツクリタケ（例えば、非特許文献１０参照）ついて報告されている。
【非特許文献１】Eva-Maria Schmels et al.著,Journal of Investigatibve Dermatology,BlackwellPublishing, 96(3), 189 (1986)
【非特許文献２】赤崎秀一ら、日本皮膚科学会雑誌、（社）日本皮膚科学会、98、41 (1988)
【非特許文献３】A. H. Merrill, Jr et al., The FASEB Journal,FJ Express 3, A469 (1989)
【非特許文献４】E-M Schmels et al., The Journal of Nutrition,American Society for Nutritional Sciences, 124, 702 (1994）
【非特許文献５】五十嵐靖之、蛋白質 核酸 酵素、共立出版、44、112 (1999)
【非特許文献６】堀川達弥ら、皮膚、（社）日本皮膚科学会  大阪地方会、40 (4)、415 (1998)
【非特許文献７】太田明一ら、「食品機能素材II」、シーエムシー（東京）、（2001）
【特許文献１】特開２００２−３８１８３号公報
【特許文献２】特開２００２−２７２４１８号公報
【特許文献３】特開２０００−２１７５４３号公報
【特許文献４】特開２００２−１２５４６０号公報
【非特許文献８】Katsuyuki Mukai, Bio Industry, 19(8), pp16-26 (2002)
【非特許文献９】卯田昌代、山脇沙帆、青木一弘、糸乗前、杉田睦海、第４２回日本油化学会年会講演要旨集、pp１９０（２００２）
【非特許文献１０】Takakuwa, M. Tanji, Y. Oda and M. Ohnishi, J. Oleo Sci., 51(11), pp741-747 (2002)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ハナビラタケの含有するセラミドを主成分としたセラミド含有組成物並びにそれを含む外用治療剤、化粧品、経口投与剤および健康食品を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、このような理由から、ハナビラタケに着目したところ、セラミドが含有されていることを発見し、本発明に到達した。
【００１２】
すなわち、本発明は、ハナビラタケの子実体または菌糸体のセラミドを含有するセラミド含有組成物を要旨とするものであり、好ましくは、ハナビラタケの子実体または菌糸体から少なくとも1種類以上の有機溶媒で抽出されるセラミド含有画分を有効成分とするものであり、さらに好ましくは、ハナビラタケの子実体または菌糸体からアルコールを用いて得られたセラミド含有画分を有効成分とするものである。
【００１３】
また、本発明は前記のハナビラタケ由来のセラミド含有組成物を含む化粧品、経口投与剤、健康食品を要旨とするものである。
【００１４】
また、本発明は、天然物由来のセラミドを含有する組成物であって、セラミドのうち糖セラミド（セレブロシド）の分子構造の長鎖塩基部分がHOCH2CH(NH2)CH(OH)CH(OH)C20H41で表されるセラミド含有組成物を要旨とするものであり、また、本発明は、天然物由来のセラミドを含有する組成物であって、セラミドのうち糖セラミド（セレブロシド）の分子構造が糖残基としてグルコース、脂肪酸残基は炭素数が１４〜１８の２ヒドロキシ酸を含み、長鎖塩基がHOCH2CH(NH2)CH(OH)CH(OH)C20H41で表されるセラミド含有組成物を要旨とするものであり、好ましくはハナビラタケ由来もものである。
【００１５】
また、本発明は、糖残基がグルコースであり、脂肪酸残基は炭素数が１４〜１８の２ヒドロキシ酸を含み、長鎖塩基がHOCH2CH(NH2)CH(OH)CH(OH)C20H41で表される糖セラミドを要旨とするものである。
【００１６】
また、本発明は、脂肪酸残基は炭素数が１４〜１８の２ヒドロキシ酸を含み、長鎖塩基がHOCH2CH(NH2)CH(OH)CH(OH)C20H41で表されるセラミドを要旨とするものである。
【００１７】
なお、本発明でいうセラミドには、スフィンゴ脂質に属するセラミド以外にも、スフィンゴ糖脂質に属する糖セラミド（グリコシルセラミド）も含まれる。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のセラミド含有組成物は食用きのこであるハナビラタケ由来のものであり、外用治療薬や化粧品としてだけでなく、経口投与剤として用いることも、また食事に含ませることも可能であり、目的に応じた投与方法を選択することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２０】
ハナビラタケは、標高1千メートル以上のカラマツ等の針葉樹に特異的に発生するキノコで、発見することが難しいために「幻のきのこ」と言われてきた。これまで、その栽培は難しく、一般にはあまり知られていなかったが、近年、人工栽培方法を確立し、量産するに至った。
【００２１】
本発明で用いられるハナビラタケ子実体は、天然のものでも人工栽培されたものでもよい。人工栽培の方法としては、人工栽培用の菌床を作成することにより行うことができる（例えば、特開平１１−５６０９８号公報、特開２００２−３６９６２１号公報、特開２００２−１２５４６０号公報参照）。
【００２２】
また、本発明においては、ハナビラタケの菌糸体も用いることができる。菌糸体は液体培養法によって得ることができる。培地に使用する炭素源としては、グルコースなどの単糖の他、デキストリン、グリセロールなど通常用いられる炭素源が使用できる。また、窒素源としては無機または有機窒素源が使用できるが、生育速度の観点からは有機窒素源を用いるほうが好ましい。また、必要に応じて微量元素やビタミン等の生育因子を添加することは通常の培養と何ら変わりはない。培養温度は１５℃〜３０℃、好ましくは１８℃〜２８℃、２０℃〜２５℃が最も好ましい。pHは２．５〜８．０、好ましくは３．０〜７．０、３．５〜５．０が最も好ましい。培地成分には不溶成分を添加することが均一に生育させることができることから好ましい。培養期間は菌株により、数日から数週間程度に設定されうる。
【００２３】
このようにして得られたハナビラタケは、そのままで用いたり、さらに加工して用いることができる。
【００２４】
本発明におけるセラミド成分はハナビラタケに含まれており、生のままのハナビラタケをそのまま用いてもよい。また、乾燥したハナビラタケを用いてもよい。また、ハナビラタケからセラミド含有成分を抽出し、セラミド成分を濃縮して用いることができる。抽出には有機溶剤または水溶液を用いることができる。有機溶媒としては、原料およびセラミドと抽出中に反応し、本発明の効果を損なうものでなければいかなるものでも使用できる。また、一種類の溶媒を単独で用いても複数の溶媒を混合して用いても良い。かかる有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等のエーテル類、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、ヘキサン、ペンタン、石油エーテル等の脂肪族炭化水素類、トルエン等の芳香族炭化水素類、ポリエチレングリコール等のポリエーテル類、ピリジン類などが挙げられる。水溶液としては、純水、酸水溶液、アルカリ水溶液、塩溶液などがあげられる。
【００２５】
これらの中で好ましい例としては、食品に使用することからエタノール、アセトン、ヘキサンが挙げられ、特に好ましい例としてはエタノール、ヘキサンが挙げられる。また、これらの有機溶媒で抽出する際には抽出効率をあげるために例えば水、界面活性剤などの添加物を本発明の効果をそこなわない範囲で加えることができる。
【００２６】
抽出に用いる溶剤の量に特に制限はないが、ハナビラタケ重量に対して２〜２０倍量を用いることが好ましい。２倍量以下では操作性が、２０倍量以上では作業効率が悪い。また、抽出は１種または複数種の溶剤を用いて、複数回行うこともできる。複数回行う場合は、ハナビラタケからの抽出でもよいし、ハナビラタケから得られた抽出画分をさらに抽出してもよい。また、それらを組み合わせて行うことができる。
【００２７】
抽出操作の際の温度は特に制限はないが１０〜６０℃が好ましい。１０℃以下では抽出効率が悪く、６０℃以上ではハナビラタケが変色し、抽出物に色が付くなどする。抽出時間にも特に制限はないが、１時間〜３日間程度が好ましい。１時間以下では抽出量が少なく、３日間以上では作業効率が低い。また、抽出は静置のまま行うこともできるが、撹拌または振盪することによって抽出効率を高めることができる。
【００２８】
このようにして得られた抽出画分にハナビラタケのセラミド成分が含まれている。セラミド成分を高濃度で用いたい場合には、さらにセラミド成分を抽出、濃縮すればよい。セラミド成分の濃縮は、単に乾燥することによっても達成されるが、さらに有機溶媒を用いて抽出するなどの方法を用いてもよい。
【００２９】
この有効成分をそのまま、または使用しやすい形態に加工して本発明のハナビラタケ由来のセラミド含有組成物を調製することができる。
【００３０】
ハナビラタケは食用キノコであり本発明の組成物は、外用治療薬や化粧品ばかりでなく、経口投与剤として用いることも、また食事に含ませることも可能である。したがって、本発明の外用治療薬、化粧品、経口投与剤および健康食品は、上記したハナビラタケ由来のセラミド含有組成物を含むものである。また、その製法においてはハナビラタケ由来のセラミド含有組成物を含ませる以外はそれぞれ常法によることができる。
【実施例】
【００３１】
次に、実施例により、本発明を具体的に説明する。
なお、実施例中でのハナビラタケ試料中のセラミド含有量は以下のようにして調べた。
【００３２】
セラミドの定量方法
セラミドの定量には高速液体クロマトグラフィー（HPLC）を用いた。装置には島津製作所製CLASS-VPを用い、カラムはジーエルサイエンス（GL Sciences）社製Inertsil SIL 100Aを用いた。溶媒はクロロホルム：メタノール＝９：１（容量比）を用い、流速1.0ml／分でカラム温度３７℃で測定した。検出には光散乱検出器（ALLTECH社製 ELSD2000）を用いた。
【００３３】
セラミド標準試料はこんにゃくセラミド（粉末タイプ、ユニチカ(株)社製）の製品（グルコシルセラミド含有率３％以上）から、Minoru Kashima et al.,Journal of Oleo Science,Japan Oil Chemists’Society Vol.51, No.5, (2002) P.347-354に従い精製した高純度セラミドを用いた。
【００３４】
実施例１
人工栽培により収穫されたハナビラタケ５ｋｇから、エタノール２０Ｌで、室温、２４時間、成分抽出を行った。この操作を３回繰り返した。得られたエタノール溶液は減圧下に濃縮した。濃縮して得られた乾固物は９６０ｇであった。この乾固物２５０ｍｇを量り取り、水、メタノール、クロロホルムをそれぞれ５０ｍｌ加えて、分液ロートにいれ、振とうした。クロロホルム層を回収して溶媒を留去した。残渣にクロロホルム／メタノール（=9／1）を加えて溶解し、20ml容メスフラスコを用いて20mlとし、セラミド含有量測定用試料とした。結果を表1および図１に示した。
【００３５】
実施例２
人工栽培したハナビラタケを６０℃で６時間熱風乾燥して得た乾燥粉末３ｇにメタノール４００ｍｌを加えて、メタノールを沸騰、還流させながら８時間抽出を行った。ろ別してメタノール溶液を回収し、溶媒を留去した。残渣に水、メタノール、クロロホルムをそれぞれ５０ｍｌ加えて、分液ロートにいれ、振とうした。クロロホルム層を回収して溶媒を留去した。残渣にクロロホルム／メタノール（=9／1）を加えて溶解し、20ml容メスフラスコを用いて20mlとし、セラミド含有量測定用試料とした。結果を表1に示した。
【００３６】
実施例３
人工栽培したハナビラタケを凍結乾燥して得た乾燥粉末３ｇにエタノール４００ｍｌを加えて、メタノールを沸騰、還流させながら８時間抽出を行った。ろ別してエタノール溶液を回収し、溶媒を留去した。残渣に水、メタノール、クロロホルムをそれぞれ５０ｍｌ加えて、分液ロートにいれ、振とうした。クロロホルム層を回収して溶媒を留去した。残渣にクロロホルム／メタノール（=9／1）を加えて溶解し、20ml容メスフラスコを用いて20mlとし、セラミド含有量測定用試料とした。結果を表1に示した。
【００３７】
【表１】
2005206576.tif 000002
以上の結果から、ハナビラタケにセラミドが含有されていることが明らかとなった。
【００３８】
実施例４（セレブロシドの精製）
ハナビラタケ凍結乾燥粉末２００ｇにメタノール１．４Lを添加し、沸騰させながら8時間抽出した。抽出液をろ過した後、ろ液を乾固し、残渣２５ｇを得た。得られた残渣に０．４N KOHメタノール水溶液（メタノール:水＝９：１）を添加して、室温で2時間、攪拌しながらアルカリ加水分解反応を行った。反応液に水クロロホルムを加えて分液操作を行い、クロロホルム層を回収した。溶媒を留去し、残渣４ｇを回収した。
【００３９】
残渣をさらに、セルロファインHP（生化学工業製）充填カラム（内径45ｍｍ、長さ300ｍｍ）にアプライし、展開溶媒はメタノールを用いて分画した。溶離液はフラクションコレクターにて各フラクション1分50秒ずつ回収した。TLCにて確認したところ、No.14〜17のフラクションにセレブロシドが確認された。また、No.17以降では不純物のスポットが確認されたため、フラクションのNo.14〜16までを回収し、エバポレーターで溶媒を留去し、黄色の残渣290ｍｇを得た。さらに回収した残渣をシリカゲルカラム（内径20ｍｍ、長さ300ｍｍ）にて分取した。溶離液は酢酸エチル／メタノール（95／5）をフラクションNo.20まで流し、そこで酢酸エチル／メタノール（90／10）に切り替えた。回収したフラクションはTLCで確認し、セレブロシド画分No.35〜42までを回収し、乳白色の残渣90ｍｇを得た。TLCで確認したところ、こんにゃくとび粉のセレブロシド（ユニチカ社製）に相当する位置のスポットのみが観測された。
【００４０】
精製試料をHPLC-ELSDにて測定したところ、セレブロシドに相当するピーク（こんにゃくとび粉のセレブロシドとの比較）のみが観測された。
【００４１】
〔TLC分析条件〕
回収した残渣は少量をクロロホルム、メタノールの混合溶媒に溶解し、TLC（分析用シリカゲル６０アルミプレート、Merck社製）を用いて展開し、硫酸発色によってスポットを確認した。展開溶媒はクロロホルム：メタノール:水＝８５：１５：２を、比較標準試料としてこんにゃくとび粉由来のセレブロシド（ユニチカ社製）を用いた。
【００４２】
〔ＨＰＬＣ測定条件〕
装置：CLASS-VP（島津製作所製）、カラム： Inertsil SIL 100A（ジーエルサイエンス（GL Sciences）社製）、溶媒：クロロホルム／メタノール＝９／１（容量比）、流速：1.0ml／分、カラム温度：３７℃、検出：光散乱検出器（ALLTECH社製 ELSD2000）
比較標準試料としてこんにゃくとび粉由来のセレブロシド（ユニチカ社製）を用いた。
【００４３】
実施例５
実施例４で得られたハナビラタケの精製セレブロシドについて構造解析を行った。
I．脂肪酸および長鎖塩基の分析
ＧＣ／ＭＳ分析
精製セレブロシド試料１mgに１N水性メタノール塩酸１mlを加え、７０℃で１７時間分解反応を行った。放冷後、ヘキサン各１mlで２回抽出を行い、ヘキサン層は乾固後、残渣をクロロホルム１mlに溶解してＧＣ／ＭＳ分析を行った（脂肪酸分析）。メタノール層は乾固後、シリル化試薬TMS-HT（東京化成工業社製）１００μlを加えてトリメチルシリル化し、ＧＣ／ＭＳ分析を行った（長鎖塩基分析）。
ＧＣ／ＭＳ分析条件
（ＧＣ部）
装置：Agilent社製
（１）脂肪酸分析
カラム：Spelcowax-10 30m×0.25mm 膜圧0.25μm、キャリアガス：He、カラム温度：100℃→300℃（10℃／min）、注入口温度：300℃、注入量：1μl(splitless)
（２）長鎖塩基分析
カラム：SPB-1 30m×0.25mm 膜圧0.25μm、キャリアガス：He、カラム温度：50℃→170℃（20℃／min）→270℃（5℃min）、注入口温度：250℃、注入量：1μl(splitless)
（ＭＳ部）
装置：DX-303（日本電子社製）
イオン化法：EI法、電子加圧電圧：70V、イオン化電流：300μA、イオン加圧電圧：3.0KV、走査速度：1sec／scan（m／z＝35〜500）または2sec／scan（m／z＝35〜800）
脂肪酸分析のＧＣスペクトルを図２に示した。
【００４４】
また、検出されたピークのうち炭素数が１４の２ヒドロキシ酸のＭＳスペクトルを図３に示した。
【００４５】
各ＧＣピークのＭＳスペクトルではいずれも２−ヒドロキシカルボン酸に特徴的なm／z＝90および103が検出された。また、分子イオンピークの分子量および標準スペクトルとの比較からハナビラタケ由来セレブロシドの構成脂肪酸を決定した。ハナビラタケ由来セレブロシドの構成脂肪酸はCnH2n+1CH(OH)COOH (n=12〜16)であった。
【００４６】
長鎖塩基分析のＧＣスペクトルを図４に示した。
また、検出された長鎖塩基のＭＳスペクトルを図５に示した。
ＭＳスペクトルでは１，３，４−トリヒドロキシ長鎖塩基に特徴的なm／z＝204が検出された。また、分子イオンピークの分子量からハナビラタケ由来セレブロシドの構成長鎖塩基を決定した。
ハナビラタケ由来セレブロシドの構成長鎖塩基はHOCH2CH(NH2)CH(OH)CH(OH)C20H41であった。
【００４７】
II．糖分析
精製セレブロシド試料２mgに２Nトリフルオロ酢酸200μlを添加し、100℃、６時間分解反応を行った。減圧乾固後、精製水500μlに残渣を溶解してヘキサン各700μlで３回洗浄した後、５０倍に希釈してHPLC分析を行った。
ＨＰＬＣ分析条件
装置：LC-9A、検出器：分光蛍光光度計RF-10AXL（島津製作所製）
カラム：TSK-gel Suger AXG 15cm×4.6mm I.D.（東ソー社製）、カラム温度：70℃、移動相：０．５Ｍホウ酸カリウム緩衝液pH8.7、流速4.7ml／min、ポストカラム標識：（反応試薬）１％アルギニン／３％ホウ酸、（流速）0.5ml／min、（反応温度）150℃、検出波長：励起波長（320nm）、検出波長（430nm）
比較用標準試料として、リボース、マンノース、フルクトース、フコース、ガラクトース、キシロース、グルコースを用いた。測定結果を表２に示した。この結果よりハナビラタケ由来セレブロシドの構成糖はグルコースであると決定した。
【００４８】
【表２】
2005206576.tif 000003
以上の測定結果をまとめ、他の天然物由来のセレブロシド（糖セラミド）（上記した非特許文献１〜３参照）と比較し、表３に示した。
【００４９】
【表３】
2005206576.tif 000004
表３に明らかなように今回、同定したセレブロシド（糖セラミド）はこれまでにない構造を有していることがわかった。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】実施例１で得られたハナビラタケ抽出試料とセラミド標準試料の高速液体クロマトグラフィーのチャートを示す図である。
【図２】脂肪酸分析のＧＣスペクトルを示す図である。
【図３】炭素数が１４の２ヒドロキシ酸もＭＳスペクトルを示す図である。
【図４】長鎖塩基のＧＣスペクトルを示す図である。
【図５】長鎖塩基のＭＳスペクトルを示す図である。
【図１】
2005206576.tif 000005
【図２】
2005206576.tif 000006
【図３】
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【図４】
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【図５】
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