(57)【要約】【目的】マンネンタケの溶媒抽出物を含有することを特徴とするエラスターゼ阻害剤を提供する。【構成】本発明はマンネンタケ（マンネンタケ科、学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）の溶媒抽出物を含有することを特徴とするエラスターゼ阻害剤である。本発明のマンネンタケの溶媒抽出物は優れたエラスターゼ阻害効果を示し、また、マンネンタケの溶媒抽出物を含有する化粧品、医薬部外品、医薬品または食品は老化防止効果を示した。マンネンタケとしては、生薬「霊芝」に用いられる黒霊芝、霊芝（赤芝）、紫芝等が挙げられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
マンネンタケの溶媒抽出物を含有することを特徴とするエラスターゼ阻害剤。
【請求項２】
マンネンタケが黒霊芝であることを特徴とする請求項１記載のエラスターゼ阻害剤。
【請求項３】
黒霊芝及び霊芝（赤芝）の溶媒抽出物を含有することを特徴とするエラスターゼ阻害剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項記載のエラスターゼ阻害剤を含有し、老化防止を目的とした化粧品、医薬部外品、医薬品または食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、マンネンタケの溶媒抽出物を有効成分として含有したエラスターゼ阻害剤に関し、更に、内用や外用により、細胞の老化を予防することが可能となる。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚は、表皮、真皮、皮下組織からなるが、中でも真皮は皮膚の構造維持に極めて重要であり、エラスチン、コラーゲンといった線維などから形成される真皮結合組織によって皮膚のはりが保たれている。この結合組織が収縮力を失い、更に弾力性を失う結果として皮膚のタルミやシワが発生すると考えられている。
【０００３】
紫外線を浴びた皮膚の特徴として、真皮細胞外マトリックスである弾力線維エラスチンの分解による網目構造の消失などが明らかとされている。また、エラスチンの過度の分解は動脈硬化、肺気腫、リウマチ関節炎等の原因になるとも考えられている。
【０００４】
エラスチンが分解する原因のひとつとして、エラスターゼによる分解が考えられ、その分解を阻害することによって皮膚のタルミやシワ、動脈硬化等を防止又は改善することができると思われる。近年、この皮膚のタルミやシワ、動脈硬化等を防止又は改善する多くの皮膚外用剤および内用剤が知られ、皮膚外用剤の有効成分としてレチノイン酸、α−ヒドロキシ酸、レチノール等（例えば、特許文献１及び非特許文献１参照）が、内用剤の有効成分としてイソフラボノイド、セイヨウニワトコ抽出物（例えば、特許文献２及び特許文献３参照）等が報告されている。しかしながら、これらの有効成分の中には皮膚刺激性や安定性に問題があるものや、効果が十分でないものもあった。また、マンネンタケの溶媒抽出物を配合した化粧料は特許文献４に記載されているが、マンネンタケの溶媒抽出物がエラスターゼ阻害効果をもつことは報告されていなかった。
【０００５】
【特許文献１】
特開平５−１１２４２２号
【特許文献２】
特表２００２−５１１８６０号
【特許文献３】
特開平１１−１４７８３２号
【特許文献４】
特開昭５８−１１３１１８号
【非特許文献１】
日本香粧品科学会誌，１６（３），１７２−１７４，１９９２
【０００６】
以上のことから、安全で安定性に優れた、皮膚のタルミやシワ、動脈硬化等の細胞の老化の予防又は改善に効果的な皮膚外用剤及び内用剤が望まれている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
従って本発明は、皮膚のタルミやシワ、動脈硬化といった老化を防止又は改善する効果を有する、エラスターゼ阻害剤を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題の解決に向けて鋭意検討を行った結果、マンネンタケの溶媒抽出物が優れたエラスターゼ阻害効果を有していることを見い出した。また、マンネンタケの中でも黒霊芝の溶媒抽出物がこの効果に優れており、更に、黒霊芝の溶媒抽出物と霊芝（赤芝）の溶媒抽出物とを併用することで、相乗的にエラスターゼを阻害することを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、マンネンタケの溶媒抽出物を有効成分とすることを特徴とするエラスターゼ阻害剤である。
【００１０】
以下、本発明の構成について、詳細に説明する。本発明に用いられるマンネンタケは、生薬「霊芝」に用いられる担子菌であり、マンネンタケ科（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）、マンネンタケ属（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属し、霊芝（赤芝）、黒霊芝（黒芝）、紫芝等が含まれる。その学名は、文献［Ａｃｔａ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ  １９（３），２６５−２７９，１９７９］によると、霊芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ）、黒霊芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍ）、紫芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｓｉｎｅｎｓｅ）に分類されているが、それに限定されるものではない。本発明に用いられるマンネンタケは、広く中国や日本市場等で流通しているものを用いることができる。
また、マンネンタケの中でも、黒霊芝が好ましく、更に黒霊芝と霊芝（赤芝）とを組み合わせて使用するのが最も好ましい。
【００１１】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコールが良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は１種でも２種以上を混合して用いても良い。
【００１２】
マンネンタケの溶媒抽出物は，抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、稀釈、濾過等の処理、活性炭等による脱色、脱臭処理をして用いても良い。更には、抽出した溶液に濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１３】
本発明のエラスターゼ阻害剤には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、また、抽出物の効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品等に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料、酸味料等の成分を配合することもできる。
【００１４】
本発明のエラスターゼ阻害剤は、老化を予防又は改善することを目的とした化粧品、医薬部外品、医薬品または食品等に配合することができ、その配合量は０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１〜１０重量％である。０．０００１重量％未満であると本発明の効果が十分に発揮されにくく、１０重量％以上配合しても効果の増強はみられにくく不経済である。また、黒霊芝と霊芝（赤芝）とを組み合わせて使用する場合のそれぞれの配合比は、重量比で５０：１〜１：５０、好ましくは１０：１〜１：１０である。一方の配合量が他方の２重量％未満の場合には併用効果がみられにくい。
【００１５】
本発明の剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、錠菓、飲料等が挙げられる。
【００１６】
【実施例】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を示す。
【００１７】
製造例１  黒霊芝の熱水抽出物
黒霊芝の乾燥物２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝の熱水抽出物を１．４ｇ得た。
【００１８】
製造例２  黒霊芝のエタノール抽出物
黒霊芝の乾燥物１００ｇにエタノール９００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、黒霊芝のエタノール抽出物を１．５ｇ得た。
【００１９】
製造例３  黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
黒霊芝の乾燥物１００ｇに精製水１．０ｋｇ及び１，３−ブチレングリコール１．０ｋｇを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００２０】
製造例４  霊芝（赤芝）の熱水抽出物
霊芝（赤芝）の乾燥物２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝（赤芝）の熱水抽出物を２．０ｇ得た。
【００２１】
製造例５  霊芝（赤芝）のエタノール抽出物
霊芝（赤芝）の乾燥物１００ｇにエタノール９００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、霊芝（赤芝）のエタノール抽出物を２．５ｇ得た。
【００２２】
製造例６  霊芝（赤芝）の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
霊芝（赤芝）の乾燥物１００ｇに精製水１．０ｋｇ及び１，３−ブチレングリコール１．０ｋｇを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、霊芝（赤芝）の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００２３】
実施例１  クリーム１
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）                        ０．５部
２．  スクワラン                                            ５．５
３．  オリーブ油                                            ３．０
４．  ステアリン酸                                          ２．０
５．  ミツロウ                                              ２．０
６．  ミリスチン酸オクチルドデシル                          ３．５
７．  ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）      ３．０
８．  ベヘニルアルコール                                    １．５
９．  モノステアリン酸グリセリン                            ２．５
１０．  香料                                                  ０．１
１１．  １，３−ブチレングリコール                            ８．５
１２．  パラオキシ安息香酸エチル                              ０．０５
１３．  パラオキシ安息香酸メチル                              ０．２
１４．  精製水                                              ６７．６５
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２４】
実施例２  クリーム２
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物を霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例４）に置き換えたものをクリーム２とした。
【００２５】
実施例３  クリーム３
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物を黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）０．２５部と霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例４）０．２５部に置き換えたものをクリーム３とした。
【００２６】
比較例１  従来のクリーム
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物を精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００２７】
実施例４  化粧水
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物      １０．０部
（製造例３）
２．  １，３−ブチレングリコール                            ８．０
３．  グリセリン                                            ２．０
４．  キサンタンガム                                        ０．０２
５．  クエン酸                                              ０．０１
６．  クエン酸ナトリウム                                    ０．１
７．  エタノール                                            ５．０
８．  パラオキシ安息香酸メチル                              ０．１
９．  ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）        ０．１
１０．  香料                                                  ０．１
１１．  精製水                                              ７４．５７
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００２８】
実施例５  乳液１
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝のエタノール抽出物（製造例２）                  ０．５部
２．  スクワラン                                            ５．０
３．  オリーブ油                                            ５．０
４．  ホホバ油                                              ５．０
５．  セタノール                                            １．５
６．  モノステアリン酸グリセリン                            ２．０
７．  ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）      ３．０
８．  ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート            ２．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
９．  香料                                                  ０．１
１０．  プロピレングリコール                                  １．０
１１．  グリセリン                                            ２．０
１２．  パラオキシ安息香酸メチル                              ０．２
１３．  精製水                                              ７２．７
［製造方法］成分１〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２９】
実施例６  乳液２
実施例５において、黒霊芝のエタノール抽出物を黒霊芝のエタノール抽出物（製造例２）０．２５部と霊芝（赤芝）のエタノール抽出物（製造例５）０．２５部に置き換えたものを乳液２とした。
【００３０】
実施例７  ゲル剤
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物        ０．１部
（製造例３）
２．  エタノール                                            ５．０
３．  パラオキシ安息香酸メチル                              ０．１
４．  ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）        ０．１
５．  香料                                                  ０．１
６．  １，３−ブチレングリコール                            ５．０
７．  グリセリン                                            ５．０
８．  キサンタンガム                                        ０．１
９．  カルボキシビニルポリマー                              ０．２
１０．  水酸化カリウム                                        ０．２
１１．  精製水                                              ８４．１
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００３１】
実施例８  パック
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物        ０．１部
（製造例３）
２．  霊芝（赤芝）の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物  ０．１
（製造例６）
３．  ポリビニルアルコール                                １２．０
４．  エタノール                                            ５．０
５．  １，３−ブチレングリコール                            ８．０
６．  パラオキシ安息香酸メチル                              ０．２
７．  ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）        ０．５
８．  クエン酸                                              ０．１
９．  クエン酸ナトリウム                                    ０．３
１０．  香料                                                  ０．１
１１．  精製水                                              ７３．６
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００３２】
実施例９  ファンデーション
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物        １．０部
（製造例３）
２．  ステアリン酸                                          ２．４
３．  ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート          １．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
４．  ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）      ２．０
５．  セタノール                                            １．０
６．  液状ラノリン                                          ２．０
７．  流動パラフィン                                        ３．０
８．  ミリスチン酸イソプロピル                              ６．５
９．  パラオキシ安息香酸ブチル                              ０．１
１０．  カルボキシメチルセルロースナトリウム                  ０．１
１１．  ベントナイト                                          ０．５
１２．  プロピレングリコール                                  ４．０
１３．  トリエタノールアミン                                  １．１
１４．  パラオキシ安息香酸メチル                              ０．２
１５．  二酸化チタン                                          ８．０
１６．  タルク                                                ４．０
１７．  ベンガラ                                              １．０
１８．  黄酸化鉄                                              ２．０
１９．  香料                                                  ０．１
２０．  精製水                                              ６０．０
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３３】
実施例１０  浴用剤
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）                        １．０部
２．  炭酸水素ナトリウム                                  ５０．０
３．  黄色２０２号（１）                                    ０．１
４．  香料                                                  ０．１
５．  無水硫酸ナトリウム                                  ４８．８
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００３４】
実施例１１  軟膏
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）                        １．０部
２．  ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）      ２．０
３．  モノステアリン酸グリセリン                          １０．０
４．  流動パラフィン                                        ５．０
５．  セタノール                                            ６．０
６．  パラオキシ安息香酸メチル                              ０．１
７．  プロピレングリコール                                １０．０
８．  精製水                                              ６５．９
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３５】
実施例１２  散剤１
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）                        １．０部
２．  霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例４）                  １．０
３．  乾燥コーンスターチ                                  ３８．０
４．  微結晶セルロース                                    ６０．０
［製造方法］成分１〜４を混合し、散剤とする。
【００３６】
実施例１３  散剤２
実施例１２において、黒霊芝の熱水抽出物を黒霊芝のエタノール抽出物（製造例２）に、また、霊芝（赤芝）の熱水抽出物を霊芝（赤芝）のエタノール抽出物（製造例５）に置き換えたものを散剤２とした。
【００３７】
実施例１４  錠剤
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝のエタノール抽出物（製造例２）                  ２．５部
２．  霊芝（赤芝）のエタノール抽出物（製造例５）            ２．５
３．  乾燥コーンスターチ                                  ２５．０
４．  カルボキシメチルセルロースカルシウム                ２０．０
５．  微結晶セルロース                                    ４０．０
６．  ポリビニルピロリドン                                  ７．０
７．  タルク                                                ３．０
［製造方法］成分１〜５を混合し、次いで成分６の水溶液を結合剤として加えて顆粒成型する。成型した顆粒に成分７を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【００３８】
実施例１５  錠菓
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）                        １．０部
２．  霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例４）                  １．０
３．  乾燥コーンスターチ                                  ４９．８
４．  エリスリトール                                      ４０．０
５．  クエン酸                                              ５．０
６．  ショ糖脂肪酸エステル                                  ３．０
７．  香料                                                  ０．１
８．  精製水                                                ０．１
［製造方法］  成分１〜５及び８を混合し、顆粒成型する。成型した顆粒に成分６及び７を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００３９】
実施例１６  飲料
処方                                                          配合量
１．  黒霊芝の熱水抽出物（製造例１）                        ２．５部
２．  霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例４）                  ２．５
３．  ステビア                                              ０．０５
４．  リンゴ酸                                              ５．０
５．  香料                                                  ０．１
６．  精製水                                              ８９．８５
［製造方法］  成分３及び４を少量の水に溶解する。次いで、成分１、２、５及び６を加えて混合する。
【００４０】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００４１】
実験例１  エラスターゼ阻害効果
製造例１、２の黒霊芝抽出物、製造例４、５の霊芝（赤芝）抽出物を用いてエラスターゼ阻害効果を求めた。試料のエタノール溶液５０μＬに酵素溶液［エラスターゼタイプＩＩＩ（シグマ社製）に０．２Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）を加え、２０ｐｐｍとなるように調製したもの］５０μＬを添加した。基質（１ｍＭ  Ｎ−Ｓｕｃｃｉｎｙｌ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−Ｎｉｔｒｏａｍｉｄｅ水溶液）１００μＬを加えて２５℃で５０分反応させた後、４１５ｎｍの吸光度を測定した。また、各試料の阻害効果は、次の式から求められる阻害率で算出した。なお、対照には試料の代わりに精製水を用い、ブランクとしてエラスターゼの代わりに精製水を用いた。
阻害率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
Ａ：対照の４１５ｎｍにおける吸光度（Ｏ．Ｄ．４１５）
Ｂ：対照ブランクのＯ．Ｄ．４１５
Ｃ：試料のＯ．Ｄ．４１５
Ｄ：試料ブランクのＯ．Ｄ．４１５
【００４２】
これらの結果を表１に示した。その結果、製造例１、２の黒霊芝抽出物及び製造例４、５の霊芝（赤芝）抽出物は優れたエラスターゼ阻害効果を示した。更に、黒霊芝と霊芝（赤芝）の抽出物の１：１混合物はそれぞれの効果よりも高い阻害効果を示し、これらの相乗効果を示した。
【００４３】
【表１】
2005023021.tif 000002
【００４４】
実験例２    モニターテスト
実施例１〜３及び比較例１で得られる各クリームを用いて、各々女性３０人（３０〜４５歳）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後、肌のシワ、タルミの改善効果をアンケートにより測定した。
【００４５】
これらの試験結果を表２に示した。その結果、実施例１〜３のクリームは優れたシワ、タルミの改善効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。また、処方成分の劣化についても問題なかった。
【００４６】
【表２】
2005023021.tif 000003
【００４７】
実施例４〜１１についても使用試験を行ったところ、安全で優れた肌のシワ、タルミの改善効果を示した。また、実施例１２〜１６については１ヶ月間内服させた結果、老化防止効果が認められた。
【００４８】
【発明の効果】
以上のことから、本発明のマンネンタケの溶媒抽出物は優れたエラスターゼ阻害効果を示し、また、マンネンタケの溶媒抽出物を含有する化粧品、医薬部外品、医薬品または食品は老化防止効果を示した。