(57)【要約】【課題】  ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートを溶解する適当な溶媒を見つけ、光散乱法を用いることにより、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの絶対分子量と分子量分布分析法を提供する。【解決手段】  ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートをフタル酸緩衝液で溶解したものを試料溶液とし、フタル酸緩衝液を移動相として、光散乱法によるゲルパーミエーションクロマトグラフ（ＧＰＣ−ＭＡＬＬＳ）に付して分析することを特徴とするヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの絶対分子量および分子量分布測定方法を提供する。試料溶液は、好ましくは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートをアルカリ水溶液に溶解し、これにフタル酸塩水溶液を加えて得られる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートをフタル酸緩衝液で溶解したものを試料溶液とし、フタル酸緩衝液を移動相として、光散乱法によるゲルパーミエーションクロマトグラフに付して分析することを特徴とするヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの絶対分子量および分子量分布測定方法。    
【請求項２】
上記試料溶液が、上記ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートをアルカリ水溶液に溶解し、これにフタル酸塩水溶液を加えて得られる請求項１に記載のヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの絶対分子量及び分子量分布測定法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの分析法に関する。さらに詳しくは、光散乱法によるゲルパーミエーションクロマトグラフ（以下、ＧＰＣ―ＭＡＬＬＳという）を用いた、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの品質管理、性能評価に好適な分析法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートは、医薬品添加物のセルロース誘導体であり、ｐＨ依存溶解性を示すことから主に薬物放出性の制御のコーティング剤として用いられる、アニオン性の高分子である。
【０００３】
したがって、かかる材料に使用するためにも、その品質管理、性能評価等が必要で、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの絶対分子量と分子量分布を測定することが望まれている。
【０００４】
これまで、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの分子量を光散乱法によるゲルパーミエーションクロマトグラフを用いて測定することができなかった。これは、適当な溶媒がなかったため、カラムとの相互作用によって、分子量分布に基づくクロマトグラフが得られず、正確な絶対分子量及び分子量分布測定ができなかったことによる。一方、光散乱法による高分子の分子量分布測定法は非特許文献１に例示されている。
【０００５】
【非特許文献１】Ｋ．Ｊｕｍｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２９（１９９６）１０５−１０９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートを溶解する適当な溶媒を見つけ、光散乱法を用いることにより、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの絶対分子量と分子量分布分析法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意検討した結果、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートがフタル酸の緩衝液に完全に溶解する事を見出し、本発明をなすに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートをフタル酸緩衝液で溶解したものを試料溶液とし、フタル酸緩衝液を移動相として、光散乱法によるゲルパーミエーションクロマトグラフ（ＧＰＣ−ＭＡＬＬＳ）に付して分析することを特徴とするヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの絶対分子量および分子量分布測定方法を提供する。
試料溶液は、好ましくは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートをアルカリ水溶液に溶解し、これにフタル酸塩水溶液を加えて得られる。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの絶対分子量と分子量分布の測定を効率よく正確に行うことができ、得られた結果によりヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの品質管理、性能評価が簡単に行えるという効果を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明に用いるヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートは、置換基にアセチル基とサクシニル基とメトキシル基とヒドロキシプロポキシル基を持つセルロースであり、それぞれの好ましい置換度は、アセチル基が５〜１４重量％とサクシニル基が４〜１８重量％、メトキシル基が２０〜２６重量％、ヒドロキシプロポキシル基が５〜１０重量％である。
【００１１】
本発明によれば、フタル酸緩衝液は、溶解用及び移動相用として用いられる。
本発明に用いるフタル酸緩衝液は、好ましくはアルカリ水溶液とフタル酸塩の組み合わせである。
アルカリ水溶液は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水溶液であり、好ましくは水酸化ナトリウム水溶液である。
フタル酸塩は、フタル酸水素ナトリウム、フタル酸水素カリウム等であり、好ましくはフタル酸水素カリウムである。フタル酸塩は、フタル酸塩水溶液としてアルカリ水溶液に加えることが好ましい。
特に、水酸化ナトリウム水溶液とフタル酸水素カリウムの組み合わせであるフタル酸緩衝液が好ましい。
アルカリ水溶液の濃度は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートが完全に溶解する程度の濃度である必要があるが、あまり高濃度の水酸化ナトリウム水溶液に溶解すると、結合が切れてしまい、正確な分子量・分子量分布測定が行えない可能性があるので、希薄な濃度がよく、好ましくは、０．０１〜０．１規定、より好ましくは０．０３〜０．０５規定程度が望ましい。
フタル酸塩の添加量は、試料溶液・移動相溶液共に、緩衝液のｐＨが、好ましくは４．５〜５．０、より好ましくは４．８程度となる量である。これより低い、または高いｐＨ領域では、カラムとの相互作用により分子量分布に基づく適正なクロマトグラフが得られない場合がある。
【００１２】
試料溶液を作成するには、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートは腸溶性基材のため、通常酸性の水溶液には溶解しないため、初めにアルカリ溶液に溶解後、酸溶液を加えて、ｐＨを調製する事が望ましい。
溶解に必要なアルカリ水溶液、フタル酸塩の量は、試料量に左右されるのは勿論であるが、溶解されるヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの試料溶液中の濃度は、好ましくは０．０１〜０．５重量％、より好ましくは０．０５〜０．２重量％程度である。
なお、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートは、測定する前に、メンブランフィルター等を用いてろ過し、溶液中の不純物を除いておくとよい。
【００１３】
ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートを水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、フタル酸水素カリウム水溶液を加えると、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートが溶解し、それをＧＰＣ−ＭＡＬＬＳに付す。ＧＰＣ−ＭＡＬＬＳに付すには公知の試料導入装置を使用でき、これにより、所定量の溶液をＧＰＣ−ＭＡＬＬＳに注入できる。
【００１４】
ＧＰＣ−ＭＡＬＬＳに注入された溶液は、フタル酸緩衝液を移動相として分離カラムに付される。ここで、ＧＰＣ−ＭＡＬＬＳの移動相と溶解用の溶液とは塩濃度・水溶液のｐＨが同一であることが、装置の操作上好ましい。
【００１５】
ＧＰＣ−ＭＡＬＬＳでもちいる分離カラムとしては、汎用の高分子ゲルを充填したものが使用可能であり、例えば、ポリヒドロキシメタクリレート系ゲルの充填カラムが好適な例として挙げられる。
【００１６】
また、ＧＰＣ−ＭＡＬＬＳの検出手段としては、例えば、多角度光散乱検出器と示差屈折率検出器を併用する。その他に、低角度光散乱検出器と示差屈折率検出器を組み合わせたＧＰＣ−ＬＡＬＬＳ法も測定に使用できる。これは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートは紫外部に吸収を持たないからである。また、これらを併用することにより、測定試料のカラムへの吸着状態や、分子鎖の切断状態を知ることができ、絶対分子量の測定が可能になる。
【００１７】
本発明によれば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの溶解液についてのＧＰＣ−ＭＡＬＬＳからの分離液を分画して捕集することにより、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの絶対分子量と分子量分布を得られる。
本発明の絶対分子量は、好ましくは重量平均絶対分子量であり、異なる物質を標準として求められる相対的なものではなく、光散乱法における理論式から求められる絶対的な値の重量分率による平均値である。
本発明の分子量分布は、重量平均分子量を数平均分子量で割った値である。
【実施例】
【００１８】
本発明の方法を実施する装置構成例を図面に基づいて説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
図１は、本発明の方法を実施する装置の一例で、１は移動相貯流漕、２はオンラインデガッサー、３は送液ポンプ、４はマニュアルインジェクター、５はカラム、６はカラムオーブン、７は多角度光散乱検出器、８は示差屈折率検出器、９はデータ処理装置である。
【００１９】
分析に際しては、移動相貯流漕１からポンプ３によりあらかじめ移動相を流し、定常状態を作る。次に、マニュアルインジェクター４から試料を注入する。注入された試料は、移動相によりカラムオーブン６の中のカラム５に送られ、多角度光散乱検出器７と、示差屈折率検出器８により、絶対分子量および分子量分布が検出される。このデータをデータ処理装置９で処理し、分子量の計算を行う。
【００２０】
以上の装置を用いて、次の分析条件で分析を行った。
試料の前処理
ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＡＳ−ＬＧ：信越化学工業社製）１０ｍｇを５ｍｌの０．０３規定水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、さらに０．１規定のフタル酸水素カリウム溶液を加える。この溶液をメンブランフィルター（孔径  ０．４５μｍ  ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）で濾過した。
【００２１】
移動相溶液の調製
１．３２ｇの水酸化ナトリウムを蒸留水１リットルに溶解し、０．０３３規定の水酸化ナトリウム溶液とした。また２０．４２ｇのフタル酸水素カリウム（和光純薬製）を蒸留水に溶解して、０．１規定のフタル酸水素カリウム水溶液を調製した。この２つの溶液を１：１（Ｖ／Ｖ）で混合し、フタル酸緩衝液を調製した（ｐＨ４．８）。この溶液を孔径  ０．４５μｍのミリカップ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社製）でろ過し移動相とした。
【００２２】
屈折率の濃度変化の比例係数（以下ｄｎ／ｄｃ）
ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＡＳ−ＬＧ：信越化学工業社製）を、上記の様に溶解して、濃度の異なる（０．０５Ｗ／Ｖ％〜０．３Ｗ／Ｖ％）５種類の溶液を作成する。これを高感度示差屈折率系（ＤＲＭ−１０２１：大塚電子社製）を用いて、静的光散乱法によりｄｎ／ｄｃを測定した。
【００２３】
分析条件
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  ＯＨｐａｋ  ＳＢ−８０６ＭＨＱ（昭和電工社製）
移動相：フタル酸緩衝液（ｐＨ４．８）
デガッサー：ＥＲＣ−３１１５（ＥＲＣ  Ｉｎｃ．社製）
流  量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
温  度：４０℃
インジェクター：モデル７１２５（レオダイン社製）
多角度光散乱検出器：ＤＡＷＮ  ＤＳＰ（Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）
示差屈折率検出器：ＲＩ−７１（昭和電工社製）
ｄｎ／ｄｃ：０．１２８ｍＬ／ｇ
【００２４】
分析結果
上記分析条件で分析した結果、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの重量平均分子量は１８，２４０ｇ／ｍｏｌで、分子量分布（重量平均分子量を数平均分子量で割った値）は１．４３であった。
測定したヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの重合度が、原料であるヒドロキシプロピルメチルセルロースの重合度よりも低くなったことから、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートの重合度が正しく測定されたと推測される。
また、その結果を図２に示す。図２のピークはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートのピークで、本発明によれば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートが感度良く分析できることが分かる。なお、図２において、縦軸は光散乱強度と屈折率の信号強度、横軸は保持時間を表わす。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本発明の構成を実施するための装置を示す図である。
【図２】本発明の方法により分析した結果を示す図である。
【符号の説明】
【００２６】
１  移動相貯流漕
２  オンラインデガッサー
３  送液ポンプ
４  マニュアルインジェクター
５  カラム
６  カラムオーブン
７  多角度光散乱検出器
８  示差屈折率検出器
９  データ処理装置
【図１】
2005077166.tif 000002
【図２】
2005077166.tif 000003