(57)【要約】【課題】フラボノイドＣ−グリコサイドを有効成分とする新規な抗マラリア組成物の提供。【解決手段】一般式（１）：【化１】2005206501.tif 000029（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を：また、Ｘ及びＹは、水素原子または下式（２）：【化２】2005206501.tif 000030 [式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を、●は一般式（１）で示されるフラボノイド骨格との結合部位を示す]で示される単糖を示す。但し、Ｘが単糖（２）のときＹは水素原子であるか、またはＸが水素原子であるときＹは単糖（２）である。）で示されるフラボノイドＣ−グリコサイドまたはその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗マラリア組成物。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）：
【化１】
2005206501.tif 000023
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を：また、Ｘ及びＹは、水素原子または下式（２）：
【化２】
2005206501.tif 000024
[式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を、●は一般式（１）で示されるフラボノイド骨格との結合部位を示す]
で示される単糖を示す。但し、Ｘが単糖（２）のときＹは水素原子であるか、またはＸが水素原子であるときＹは単糖（２）である。）
で示されるフラボノイドＣ−グリコサイドまたはその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗マラリア組成物。
【請求項２】
フラボノイドＣ−グリコサイドが、下式（３）：
【化３】
2005206501.tif 000025
で示されるイソオリエンチン（isoorientin）、または下式（４）：
【化４】
2005206501.tif 000026
で示されるオリエンチン（orientin）である、請求項１に記載する抗マラリア組成物。
【請求項３】
一般式（１）：
【化５】
2005206501.tif 000027
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を：また、Ｘ及びＹは、水素原子または下式（２）：
【化６】
2005206501.tif 000028
[式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を、●は一般式（１）で示されるフラボノイド骨格との結合部位を示す]
で示される単糖を示す。但し、Ｘが単糖（２）のときＹは水素原子であるか、またはＸが水素原子であるときＹは単糖（２）である。）
で示されるフラボノイドＣ−グリコサイドまたはその薬学的に許容される塩に、薬学的に許容される担体または添加剤を配合する工程を有する抗マラリア組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗マラリア組成物（医薬組成物）に関する。より詳細には、本発明はフラボノイドＣ−グリコサイドを有効成分とする抗マラリア組成物（医薬組成物）に関する。
【背景技術】
【０００２】
マラリアは、現在、世界中で約３億人の人が感染し、年間200万人もの人が死亡する人類最大の寄生原虫感染症であり、ＷＨＯは、2010年には患者数、死亡者数とも倍増すると推計している。しかも、多剤耐性原虫が広範囲に渡って伝播していることやワクチンの開発が困難を極めていること等から、マラリアは、エイズとともに地球規模で最も脅威になっている疾病と位置づけられている。このため、現在、マラリアの新規化学療法剤の開発は人類にとって緊急を要する重要な課題であると考えられる。
【０００３】
従来よりマラリアの治療に用いられている薬物は、１)南米起源のキナ樹皮由来のキニーネをシーズ化合物として開発されたクロロキンに代表される一連のアミノキノリン系化合物、２)中国起源の漢薬 "青蒿" から開発されたアルテミニシン（artemisinin）などのパーオキサイド化合物、及び３）ジヒドロ葉酸還元酵素を標的とする葉酸代謝拮抗薬、の３種類に大別される。しかしながら、現在、これら３種の抗マラリア薬のすべてに対して耐性な原虫が患者から確認されている感染地域も出現しており、また、マラリアの感染を媒介するハマダラ蚊も多種の殺虫剤に対して耐性を獲得していることから、耐性原虫の伝播を制御する有効な手段がない現状況において、多剤耐性原虫が全感染地域に拡散するのも時間の問題であると警鐘が鳴らされている。
【０００４】
特に、上記の既存抗マラリア薬のなかで、アミノキノリン系化合物および葉酸代謝拮抗薬は、ほとんどの感染地域で耐性が確認されており、これらの薬物を用いて、マラリアを治療することは今ではほぼ困難とされている。また、アルテミシニンは、血流中のマラリア原虫が完全に消失してから数週間後に新たに血流中に原虫が出現する、「再燃」という現象が観測される。これが、アルテミシニンの最大の問題点である。このため、アルテミシニンは、現在、主として治療初期に体内のマラリア原虫濃度を低下させるために利用されるに留まり、マラリアを根治する療法として、注射薬としてのみ効果を示すキニーネの静注が実施されている。
【０００５】
このように、上記従来の抗マラリア薬とは異なる構造を有する新規な抗マラリア活性成分の発見、並びに新規抗マラリア治療剤の開発が急務とされている。
【０００６】
こうした目的から、従来より、多くの薬用植物の中から抗マラリア活性成分を探索する試みが広く行われている。例えば、特許文献１にはアノーナ・セネガレンシスから得られるタンニン及びキニンを含有する抽出物がマラリアの治療に有効であること、特許文献２には天然または合成によって得られるアクリジン誘導体が抗マラリア剤の有効成分として有効であること、特許文献３には桂皮、地黄、芍薬、川きゅう、当帰、人参、及び甘草などの混合生薬やその抽出物が抗マラリア剤として有効であること、特許文献４にはAncistrocladus属の植物から得られるコルペンサミン及びコルペンサミン誘導体が抗マラリア活性成分として有効であること、特許文献５にはペシーラ属の植物のアルカロイド成分であるボーカミンに優れた抗マラリア活性があること、非特許文献１にはケニアで抗マラリア用に使用されている薬用植物Ajuga remotaに含まれるajugarin-1及びergosterol-5,8-endoperoxideに抗マラリア活性（in vitro）があること、並びに非特許文献２には、薬用植物Cassia occidentalis、Morinda morindoides、及びPhyllanthus niruriに抗マラリア活性があることが記載されている。更に、非特許文献３〜５には、薬用植物に含まれるフラボノイドまたはフラボノイド配糖体に抗マラリア活性があることが記載されている。また、非特許文献６にはアフリカの薬用植物であるHymenocardia acida（葉）のメタノール粗抽出物及び塩化メチレン粗抽出物に抗マラリア活性があることが記載されている。
【特許文献１】特開昭６０−５４３２３号公報
【特許文献２】特開平０２−１０１０１５号公報
【特許文献３】特開平０７−８２１６５号公報
【特許文献４】特表平１０−５０１５１８号公報
【特許文献５】特表２００２−５０７５７０号公報
【非特許文献１】Kimani A. M. Kuria et al., "The Antiplasmodial Activity of Isolates from Ajuga remota", Journal of Natural Products, 2002, Vol.65, No.5, pp.789-793
【非特許文献２】Tona L et al., "In-vivo antimalarial activity of Cassia occidentalis, Morinda morindoides and Phyllanthus niruri" ANNALS OF TROPICAL MEDICINE AND PARASITOLOGY, 95(1), 47-57 (2001).
【非特許文献３】Gerhard Bringmann et al., "6-Hydroxyluteolin-7-O-(1"-α-rhamnoside) from Vriesea sanguinolenta Cogn. and Marchal (Bromeliaceae)", Phytochemstry 53 (2000) pp.965-969
【非特許文献４】Mohamed S. Ahmed et al., "A weakly antimalarial biflavanone from Rhus retinorrhoea", Phytochemstry 58 (2001) pp.599-602.
【非特許文献５】Nobutoshi Murakami et al., "New Anti-Malarial Flavonol Glycoside from Hydrangeae Dulcis Folium", Bioorganic & Medicinal Chemistry Letter 11 (2001) pp.2445-2447.
【非特許文献６】Catherine Vonthron-Senecheau et al., "In vitro antiplasmodial activity and cytotoxicity of ethnobotanically selected Ivorian plants", Journal of Ethnopharmacology 87 (2003) pp.221-225.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、フラボノイド配糖体（モノグリコサイド）、特にフラボノイドＣ−グリコサイドを有効成分とする新規な抗マラリア組成物を提供することを目的とする。さらに本発明は、上記フラボノイド配糖体の調製方法、並びに当該化合物を有効成分とする抗マラリア組成物の調製方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記目的を達成するために日夜鋭意検討していたところ、薬用植物Hymenocardia acidaから単離されたフラボノイド配糖体（フラボノイドＣ−グリコサイド）に抗マラリア活性があることを新たに見いだし、当該フラボノイド配糖体が、新規抗マラリア組成物（医薬組成物）の有効成分として有用であることを確信した。本発明は、かかる知見に基づいて、完成したものである。
【０００９】
すなわち、本発明は下記に関するものである。
項１．  一般式（１）：
【００１０】
【化１】
2005206501.tif 000002
【００１１】
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を：また、Ｘ及びＹは、水素原子または下式（２）：
【００１２】
【化２】
2005206501.tif 000003
【００１３】
[式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を、●は一般式（１）で示されるフラボノイド骨格との結合部位を示す]
で示される単糖を示す。但し、Ｘが単糖（２）のときＹは水素原子であるか、またはＸが水素原子であるときＹは単糖（２）である。）
で示されるフラボノイドＣ−グリコサイドまたはその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗マラリア組成物。
項２．  フラボノイドＣ−グリコサイドが、下式（３）：
【００１４】
【化３】
2005206501.tif 000004
【００１５】
で示されるイソオリエンチン（isoorientin）、または下式（４）：
【００１６】
【化４】
2005206501.tif 000005
【００１７】
で示されるオリエンチン（orientin）である、項１に記載する抗マラリア組成物。
項３．  一般式（１）：
【００１８】
【化５】
2005206501.tif 000006
【００１９】
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を：また、Ｘ及びＹは、水素原子または下式（２）：
【００２０】
【化６】
2005206501.tif 000007
【００２１】
[式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を、●は一般式（１）で示されるフラボノイド骨格との結合部位を示す]
で示される単糖を示す。但し、Ｘが単糖（２）のときＹは水素原子であるか、またはＸが水素原子であるときＹは単糖（２）である。）
で示されるフラボノイドＣ−グリコサイドまたはその薬学的に許容される塩に、薬学的に許容される担体または添加剤を配合する工程を有する抗マラリア組成物の調製方法。
項３-1．フラボノイドＣ−グリコサイドが、イソオリエンチンまたはオリエンチンである項３に記載する抗マラリア組成物の調製方法。
項４．  Hymenocardia acidaの溶媒抽出物を吸着処理する工程を含む、一般式（１）：
【００２２】
【化７】
2005206501.tif 000008
【００２３】
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を：また、Ｘ及びＹは、水素原子または下式（２）：
【００２４】
【化８】
2005206501.tif 000009
【００２５】
[式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を、●は一般式（１）で示されるフラボノイド骨格との結合部位を示す]
で示される単糖を示す。但し、Ｘが単糖（２）のときＹは水素原子であるか、またはＸが水素原子であるときＹは単糖（２）である。）
で示されるフラボノイドＣ−グリコサイドまたはその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗マラリア組成物の調製方法。
項５．  下記の工程(1)〜(4)：
(1) Hymenocardia acidaの全草を低級アルコールで抽出する工程、
(2) (1)で得られる低級アルコール抽出物を酢酸エチルと水の混合溶媒で抽出し、層分離する工程、
(3) (2)で得られる酢酸エチル抽出画分を吸着処理に供する工程
を有する、項４に記載する抗マラリア組成物の調製方法。
項６．フラボノイドＣ−グリコサイドが、イソオリエンチンまたはオリエンチンである項４または５に記載する抗マラリア組成物の調製方法。
項７．  一般式（１）：
【００２６】
【化９】
2005206501.tif 000010
【００２７】
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を：また、Ｘ及びＹは、水素原子または下式（２）：
【００２８】
【化１０】
2005206501.tif 000011
【００２９】
[式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基、低級アルコキシカルボニル基または低級アルキルカルバモイル基を、●は一般式（１）で示されるフラボノイド骨格との結合部位を示す]
で示される単糖を示す。但し、Ｘが単糖（２）のときＹは水素原子であるか、またはＸが水素原子であるときＹは単糖（２）である。）
で示されるフラボノイドＣ−グリコサイドまたはその薬学的に許容される塩を含むHymenocardia acidaの溶媒抽出処理画分を有効成分とする抗マラリア組成物。
項８．  上記Hymenocardia acidaの溶媒抽出処理画分が、
(1) Hymenocardia acida の全草を低級アルコールで抽出する工程、及び
(2) (1)で得られる低級アルコール抽出物を酢酸エチルと水の混合溶媒で抽出し、層分離する工程、
(3) (2)で得られる酢酸エチル抽出画分を吸着処理に供する工程
を経て得られる画分である、項７に記載する抗マラリア組成物。
項９．フラボノイドモノグリコサイドが、イソオリエンチン、またはオリエンチンである項７または８に記載する抗マラリア組成物。
【００３０】
以下、本発明を説明する。
（１）抗マラリア組成物
本発明は、下記の一般式（１）：
【００３１】
【化１１】
2005206501.tif 000012
【００３２】
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基[−ＣＯＲ9、Ｒ9は低級アルキル基、以下同じ]、低級アルコキシカルボニル基[−ＣＯＯＲ9]または低級アルキルカルバモイル基[−ＣＯＮＨＲ9]を：また、Ｘ及びＹは、水素原子または下式（２）：
【００３３】
【化１２】
2005206501.tif 000013
【００３４】
[式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、同一または異なって、水素原子、低級アルキル基、アシル基[−ＣＯＲ10、Ｒ10は低級アルキル基、以下同じ]、低級アルコキシカルボニル基[−ＣＯＯＲ10]または低級アルキルカルバモイル基[−ＣＯＮＨＲ10]を、●は一般式（１）で示されるフラボノイド骨格との結合部位を示す]
で示される単糖を示す。但し、Ｘが単糖（２）のときＹは水素原子であるか、またはＸが水素原子であるときＹは単糖（２）である。）
で示されるフラボノイドＣ−グリコサイドまたはその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗マラリア組成物に関する。
【００３５】
上記式（１）において、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8で示される低級アルキル基は、炭素数１〜６の直鎖状または分枝状のアルキル基を意味する。具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、sec−ブチル基、第三級ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、及びｎ−ヘキシル基を挙げることができる。好ましくは、メチル基、及びエチル基である。
【００３６】
Ｒ1〜Ｒ8または示されるアシル基、低級アルコキシカルボニル基及び低級アルキルカルバモイル基において用いられる低級アルキル基（Ｒ9またはＲ10）としても上記のものを挙げることができる。
【００３７】
アシル基（−ＣＯＲ9または−ＣＯＲ10）としては、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、及びヘキサノイル基を挙げることができる。好ましくは、アセチル基及びプロピオニル基を挙げることができる。
【００３８】
低級アルコキシカルボニル基（−ＣＯＯＲ9または−ＣＯＯＲ10）として、具体的にはメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ−プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ｎ−ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、sec−ブトキシカルボニル基、ｎ−ペントキシカルボニル基、イソペントキシカルボニル基、及びｎ−ヘキソシキカルボニル基を挙げることができる。好ましくはメトキシカルボニル基、及びエトキシカルボニル基である。
【００３９】
低級アルキルカルバモイル基（−ＣＯＮＨＲ9または−ＣＯＮＨＲ10）としては、具体的にはメチルカルバモイル基、エチルカルバモイル基、ｎ−プロピルカルバモイル基、イソプロピルカルバモイル基、ｎ−ブチルカルバモイル基、イソブチルカルバモイル基、sec−ブチルカルバモイル基、ｎ−ペンチルカルバモイル基、イソペンチルカルバモイル基、及びｎ−ヘキシルカルバモイル基を挙げることができる。好ましくはメチルカルバモイル基、及びエチルカルバモイル基である。
【００４０】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は好ましくは、同一または異なって、水素原子、低級アルコキシカルボニル基であり、より好ましくは水素原子である。また単糖残基（Ｘ、Ｙ）の構成基であるＲ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は好ましくは、同一または異なって、水素原子、低級アルコキシカルボニル基であり、より好ましくは水素原子である。
【００４１】
ここで本発明のフラボノイドＣ−グリコサイドは、ＸとＹはいずれか一方が一般式（２）で示される糖残基であることを要し、Ｘが糖残基である場合Ｙは水素原子であり、またＸが水素原子である場合Ｙは糖残基である。
【００４２】
なお、本発明の抗マラリア組成物の有効成分として用いられるフラボノイドＣ−グリコサイドには、前述する一般式（１）に包括的に含まれる構造異性体も含まれる。
【００４３】
上記フラボノイドＣ−グリコサイド（１）の中でも好適なものとしては、一般式（１）中、Ｒ1〜Ｒ4のいずれもが水素原子、且つＸが水素原子、及びＹが糖残基（２）であって、当該糖残基中のＲ5〜Ｒ8のいずれもが水素原子である場合の下式（３）で示されるイソオリエンチン（isoorientin）：
【００４４】
【化１３】
2005206501.tif 000014
【００４５】
また、一般式（１）中、Ｒ1〜Ｒ4のいずれもが水素原子、且つＹが水素原子、及びＸが糖残基（２）であって、当該糖残基中のＲ5〜Ｒ8のいずれもが水素原子である場合の下式（４）で示されるオリエンチン（orientin）：
【００４６】
【化１４】
2005206501.tif 000015
【００４７】
を挙げることができる。
【００４８】
上記式（３）及び（４）で示されるフラボノイドＣ−グリコサイドは、化学的に合成することもできるが、植物、具体的にはHymenocardia acida を原料として、それから抽出単離することによって調製することもできる。
【００４９】
Hymenocardia acidaは、中央アフリカで古くから、眠り病、皮膚疾患、糖尿病、咳、細菌感染性創傷、尿路感染症、虫歯などの多くの疾患の治療に使用されている薬用植物である。また、そのメタノール抽出物には抗癌作用、殺菌作用、及び鎮痙作用があること、エタノール抽出物には抗トリマノソーマ作用や抗炎症作用があることも知られている。当該Hymenocardia acidaは、特にナイジェリアでは、古くから抗マラリア薬として伝承的に使用されており、最近になってその葉のメタノール粗抽出物及び塩化メチレン粗抽出物に抗マラリア活性があることも報告されている（非特許文献６参照）。しかしながら、Hymenocardia acida 中の含まれるどの成分が抗マラリア活性を示すかどうか、その有効成分については一切知られていない。
【００５０】
Hymenocardia acidaから上記イソオリエンチン（３）、及びオリエンチン（４）（以下、これらを総称してオリエンチン類という）を単離調製する場合、原料として使用するHymenocardia acidaは、全草であってもまたその一部であってもよい。好ましくは葉または葉を含む部分である。
【００５１】
これらのオリエンチン類（[３]〜[４]）の調製は、制限はされないが、例えば、(1) Hymenocardia acida の全草またはその一部（好ましくは葉または葉を含む部分）を、有機溶媒を含む溶媒で抽出処理する工程、及び(2)当該工程で得られる抽出画分を吸着処理する工程を経て行うことができる。
【００５２】
Hymenocardia acidaの抽出処理は、抽出溶媒中に、生または乾燥処理したHymenocardia acidaの全草またはその一部（好ましくは葉）の粗末又は細切物を、低温、加温または煮沸条件下で浸漬する方法；低温、加温または煮沸条件下で攪拌しながら抽出を行う方法；またはパーコレーション法等によって行うことができる。かかる抽出に用いられる抽出溶媒としては、特に制限されないが、水、低級アルコール、またはこれらの混合物を挙げることができる。好ましくは低級アルコールである。ここで低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール、及びブタノール等の炭素数１〜４の低級アルコールを例示することができる。好ましくはメタノールまたはエタノールである。
【００５３】
なお、抽出処理は、上記方法によって得られた抽出物について、さらに同一または異なる抽出溶媒を用いて、１回若しくは複数回繰り返し行うこともできる。例えば、上記の抽出処理で得られた抽出画分を、さらに水と非極性有機溶媒との混合液を抽出溶媒として用いて、抽出処理する方法を挙げることができる。ここで非極性有機溶媒としては、ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、ベンゼン、ジクロロメタン等を挙げることができる。
【００５４】
より具体的な抽出方法としては、実施例で示すように、(a) Hymenocardia acidaの全草またはその一部（好ましくは葉）を、低級アルコールで抽出し、(b) 得られたアルコール抽出物を水と酢酸エチルの混合溶媒で抽出して、酢酸エチル抽出画分を分取する方法を挙げることができる。
【００５５】
得られた抽出画分は、必要に応じて濾過、共沈または遠心分離によって固形物を除去した後、そのまま若しくは濃縮して、次の処理工程に供することができる。
【００５６】
吸着処理は、当業界における常法に従って行うことができる。例えば活性炭、シリカゲルまたは多孔質セラミックなどによる吸着処理；スチレン系のデュオライトS-861（商標「Duolite」, U.S.A.ダイヤモンド・シャムロック社製、以下同じ）、デュオライトS-862、デュオライトS-863又はデュオライトS-866；芳香族系のセパビーズSP70（商標「セパビーズ」、三菱化学（株）製、以下同じ）、セパビーズSP700、セパビーズSP825；ダイアイオンHP10（商標「ダイアイオン」、三菱化学（株）製、以下同じ）、ダイアイオンHP20、ダイアイオンHP21、ダイアイオンHP40、及びダイアイオンHP50；あるいはアンバーライトXAD-4（商標「アンバーライト」、オルガノ製、以下同じ）、アンバーライトXAD-7、アンバーライトXAD-2000などの合成吸着樹脂を用いた吸着樹脂処理を挙げることができる。
【００５７】
かかる吸着処理において、Hymenocardia acida の抽出物またはその処理物を吸着担体（吸着剤）に供して、夾雑物を当該担体に吸着させて、オリエンチン類（[３]〜[４]）を含む画分を溶出取得するか、またはオリエンチン類（[３]〜[４]）を担体に吸着させた後に、担体を洗浄して夾雑物を除去し、次いで適当な溶出液でオリエンチン類（[３]〜[４]）を担体から脱離溶出させる方法を採用することができる。なお、吸着処理は、上記いずれかの方法によって得られた処理物について、さらに同一または異なる吸着担体（吸着剤）を用いて、１回若しくは複数回繰り返して行うこともできる。
【００５８】
さらに、実施例に詳述するように、逆相カラムを装着したＨＰＬＣ等を用いてオリエンチン類（[３]〜[４]）のピーク画分を取得する方法も採用できる。また、必要に応じてイオン交換処理や晶析処理などを行うこともできる。なお、オリエンチン類（[３]〜[４]）の調製方法の詳細は、後述する実施例の記載を例示として参照することができる。
【００５９】
斯くして得られる、オリエンチン類（[３]〜[４]）は、後述する実施例で示すように、抗マラリア活性を有すため、抗マラリア医薬組成物の有効成分として有効に利用することができる。なお、本発明のオリエンチン類（[３]〜[４]）には、上記構造式で包括的に示される構造異性体のいずれもが包含される。
【００６０】
なお、一般式（１）で示される、上記イソオリエンチン（３）、及びオリエンチン（４）以外のフラボノイドＣ−グリコサイドは、イソオリエンチン（３）またはオリエンチン（４）、を出発原料として、当業界の技術常識に従って調製することができる。
【００６１】
一例として、オリエンチン（４）を出発原料として、Ｒ1，Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8として各種の官能基を含む一般式（１）のフラボノイドＣ−グリコサイドを合成する方法を、下記反応式に例示する。なお、一般式（１）に含まれるその他のフラボノイドモノグリコサイドも、イソオリエンチン（３）を出発原料として、これに準じて同様に合成することができる。
【００６２】
【化１５】
2005206501.tif 000016
【００６３】
（式中、Ｒは低級アルキル基を意味する。）
ここで、Ｘが糖残基（Ｒ5〜Ｒ8は水素原子）でＹが水素原子である、オリエンチン（４）を出発原料として、下記の反応（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）を行うことにより、一般式（１）中、Ｒ1〜Ｒ4が低級アルコキシカルボニル基（−ＣＯＯＲ[Ｒは低級アルキル基]）、Ｙが水素原子、及びＸが糖残基（Ｒ5〜Ｒ8は低級アルコキシカルボニル基（−ＣＯＯＲ[Ｒは低級アルキル基]）であるフラボノイドＣ−グルコサイド（５）；Ｒ1〜Ｒ4が低級アルキル基で、Ｙが水素原子、及びＸが糖残基（Ｒ5〜Ｒ8は低級アルキル基であるフラボノイドＣ−グルコサイド（６）；Ｒ1〜Ｒ4がアシル基（−ＣＯＲ[Ｒは低級アルキル基]）、Ｙが水素原子、及びＸが糖残基（Ｒ5〜Ｒ8はアシル基（−ＣＯＲ[Ｒは低級アルキル基]））であるフラボノイドＣ−グルコサイド（７）；及びＲ1〜Ｒ4が低級アルキルカルバモイル基（−ＣＯＮＨＲ[Ｒは低級アルキル基]）、Ｙが水素原子、及びＸが糖残基（Ｒ5〜Ｒ8は低級アルキルカルバモイル基（−ＣＯＮＨＲ[Ｒは低級アルキル基]）であるフラボノイドＣ−グルコサイド（８）をそれぞれ合成することができる。
【００６４】
（ａ）オリエンチン（４）をピリジンに溶解し、ＲＯＣＯＣｌ（Ｒは低級アルキル基）を加えて室温で３０分間攪拌する。次いで、反応液から抽出操作により、フラボノイドＣ−グリコサイド（５）を得る。
（ｂ）オリエンチン（４）をテトラヒドロフランに溶解し、ＮａＨを加えて、０℃で３０分間攪拌した後、ＲＢｒ（Ｒは低級アルキル基）を加えて室温で１時間攪拌する。次いで、反応液から抽出操作により、フラボノイドＣ−グリコサイド（６）を得る。
（ｃ）オリエンチン（４）とカルボン酸（ＲＣＯＯＨ、Ｒは低級アルキル基）をテトラヒドロフランに溶解し、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）及びＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）を加えて、室温で３時間攪拌する。次いで、反応液から抽出操作により、フラボノイドＣ−グリコサイド（７）を得る。
（ｄ）オリエンチン（４）をピリジンに溶解し、イソチオシアネート（Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、Ｒは低級アルキル基）を加えて室温で３０分間攪拌する。次いで、反応液から抽出操作により、フラボノイドＣ−グリコサイド（８）を得る。
【００６５】
なお、一般式（１）に含まれるその他のフラボノイドＣ−グリコサイドも、上記方法に準じて合成することができる。
【００６６】
本発明の抗マラリア組成物は、上記一般式（１）で示される一連のフラボノイドＣ−グリコサイド、特にイソオリエンチン（３）及びオリエンチン（４）の他、これらの薬学的に許容される塩を有効成分とすることもできる。ここで薬学的に許容される塩としては、特に制限されないが、ナトリウム塩やカリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩やマグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、４級アンモニウム塩などのように、フラボン核のフェノール性水酸基との塩を挙げることができる。
【００６７】
なお、本発明の抗マラリア組成物は、本発明の効果を損なわない限り、配合する有効成分の精製度を特に問うものではない。従って、上記一般式（１）で示される一連のフラボノイドＣ−グリコサイド、特にイソオリエンチン（３）及びオリエンチン（４）、またはこれらの薬学的に許容される塩を粗精製物として含むものであってもよい。かかる粗精製物としては、前述するEuphorbia hirtaの全草またはその一部（好ましくは葉または葉を含む部分）から調製される、イソオリエンチン（３）またはオリエンチン（４）を含む溶媒抽出処理画分を挙げることができる。
【００６８】
また、本発明の抗マラリア組成物には、本発明の効果を損なわない限り、他の公知または将来開発される抗マラリア薬を組み合わせて配合することも特に制限されない。
【００６９】
本発明の抗マラリア組成物は、上記有効成分に加えて、薬学的に許容される担体または添加剤が配合されていてもよく、上記有効成分をそのまま又は上記担体若しくは添加剤とともに、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、エマルジョンまたはシロップ剤等の経口剤の形態；注射剤、点滴剤、坐剤などの非経口剤の形態に調製することができる。かかる経口剤は、通常、有効成分に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤等を適宜組み合わせて配合した後、常法に従って、上記各種形態に調製することができる。
【００７０】
また、注射剤や点滴剤などを調製する場合は、有効成分に必要に応じて、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤などを添加して、必要ならば凍結乾燥を行って、常法により皮下、筋肉、静脈内・腹腔内用注射剤、点滴剤として調製することができる。
【００７１】
さらに、これらの製剤には、上記成分の他に香料、界面活性剤、無痛化剤、安定剤などの成分を配合することもできる。
【００７２】
本発明の抗マラリア組成物の投与量は、症状の程度や患者の体重や年齢などによっても異なるが、例えば経口用製剤として人に投与する場合、フラボノイドＣ−グリコサイドの量として２０〜３０mg／kgを１日１回〜数回にわけて投与することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００７３】
以下に、本発明の構成ならびに効果をより明確にするために、製造例、実施例、比較例及び実験例を記載する。但し、本発明は、これらの実施例等に何ら影響されるものではない。
【００７４】
実施例１
Ａ．検体の調製
（１）メタノール抽出
乾燥したHymenocardia acidaの葉の粉砕物290ｇにメタノール２Lを加えて、室温で３時間抽出した。その後、これを濾過して濾液を回収した。一方、得られた残査にメタノール２Lを加え加熱還流下で２時間抽出し、その後濾過して濾液を採取した。この加熱還流抽出を、ここで得られた残渣に対して再度行い、回収した全ての濾液を集めて濃縮して41.1gの固形物（以下「メタノール抽出物」と呼ぶ）を得た。
【００７５】
（２）酢酸エチル／Ｈ2Ｏ処理
（１）で得られたメタノール抽出物のうち39.6 gを、酢酸エチル／Ｈ2Ｏの800 mL／800 mL混合液（1600mL）に加え、良く攪拌し、両層に分配溶解させた。次いで層分離により、水層と酢酸エチル層とに分別回収した。回収した酢酸エチル層を完全乾固して17.3gの固形物（以下「酢酸エチル抽出物」と呼ぶ）を得た。
【００７６】
（３）n-ブタノールによる抽出
上記（２）の層分離で回収取得した水層に、n-ブタノール650 mLを加えよく振盪した後、層分離を行い、水層とn-ブタノール層とに分別回収した。回収した水層側に、更にn-ブタノール650 mLを加えよく振盪した後、層分離を行った。得られたn-ブタノール層を回収し、先に回収しておいたn-ブタノール層と一緒にして、絶乾し、7.98 gの固形物（以下「n-ブタノール抽出物」と呼ぶ）を得た。また、水層も同様に、先に回収しておいた水層と一緒にして絶乾して、13.1 gの固形物（以下「水抽出物」と呼ぶ）を得た。
【００７７】
Ｂ．各検体の抗マラリア活性の測定
（１）〜（３）で調製した各抽出物（検体）の抗マラリア活性を評価するために、熱帯熱マラリア原虫（P. falciparum）FCR3株〔Department of Microbiology、Dartmouth Medical School、Lebanon, NH03756, USAから入手〕を用いて、マラリア原虫の生育阻害率を測定した。
【００７８】
培地は、RPMI1640（GIBCOBRL）粉末10.4ｇを蒸留水1Lに溶解し、炭酸水素ナトリウム2ｇを加え、２〜３時間攪拌後、ｐＨを7.4に調整し、吸引濾過後、HEPES緩衝液25mL及び10mg/ml濃度のゲンタマイシン溶液1mLを加え、更に無菌ヒトＡ型血清100mLを加えて作成した。液体窒素より取り出したマラリア原虫はDiggsら（Diggs，C.L. et al., Am. J. Trop.Med. Hyg., 24, 760-766 (1975)）の方法に従って回収し、10％ヒトＡ型血清添加RPMI1640 5mLでヘマトクリット3％となるように、新鮮赤血球添加後、シャーレ（5mL）中で培養した。培養条件は、酸素5％、二酸化炭素5％、及び窒素90％の雰囲気下、37℃のインキュベーター内で培養した。
【００７９】
マラリア原虫の生育阻害率を測定する前に、マラリア原虫をring期に同調させるために、LambrosとVandenbergらの方法（Lambros,C., Vandenberg,J.P., J. Parasitol., 65,418-420 (1979)）に従って、上記マラリア原虫を細胞ペレット容積の5倍容積の5％ソルビトールに10分間暴露した。その後、RPMI1640で洗浄し、上記培地を用いて再培養した。このマラリア原虫の培養液を50μL 96穴のプレートに注入した。この培養液のヘマトクリット値は2％であり、感染率は0.5％である。
【００８０】
マラリア原虫の生育阻害率の測定は、具体的には下記のようにして行った。
各検体（上記抽出物）を濃縮乾固後、ジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解し、上記培地を用いて適切な濃度に希釈して被験試料とした（DMSO最終濃度1％）。この被験試料50 μLを、先にマラリア原虫の培養液（50 μL）を添加しておいた96穴プレートに添加した（合計100 μL）。混合液中のDMSOの終濃度は1％である。これを37℃で、72時間培養した。その後、スライドグラス上でスメアフィルムを作成し、これをGiemsa染色液で染色して、顕微鏡下で10000個の赤血球のうち感染した赤血球数を求めた。上記被験試料に代えてDMSOと培地で調整した溶液（50 μL、DMSO最終濃度1％）を添加して同様に試験した場合のマラリア原虫の感染率（対照感染率）と、検体存在下でのマラリア原虫の感染率（検体存在下での感染率）から、下式に従ってマラリア原虫の生育阻害率を算出した。なお、陽性対照薬としてはキニーネを使用した。なお、被験試料は最終濃度として5μg/mL、0.5μg/mLとなるように希釈して使用した。
【００８１】
マラリア原虫の生育阻害率（％）
＝（対照感染率 − 検体存在下での感染率）／対照感染率 × 100。
【００８２】
Ｃ．各検体（各溶出画分）の毒性評価
上記Ａで調製した各検体（各抽出物）について、細胞毒性を評価するために、MTT法（M.C.Alley,et al.,"Feasibility of Drug Screening with Panels of Human Tumor Cell Lines Using a Microculture Tetrazolium Assay", Cancer Res., 48, 589 (1988))に従って、ヒトのガン細胞KB3-1の生育阻害率％を測定した。
【００８３】
まず、上記検体（上記溶出画分）を濃縮乾固後、DMSOに溶解し、培地（10% fetal bovine serum含有RPMI1640培地）を用いて適切な濃度（5μg/mL、50μg/mL）に希釈して被験試料とした（DMSO最終濃度1％）。この被験試料100 μLを、KB3-1細胞の浮遊液100 μL (2 x 104個/mL)に添加して、5％CO2下、37℃の条件下で培養した。
【００８４】
培養72時間後、MTT試薬（3-(4,5)-dimethylthiazo-2,5-dimethyltetrazolium bromide）25μLを添加し、さらに3時間培養した。次いで、培地のみを吸引除去し、DMSO 200μLを加えて、生成したMTT folmazanを抽出し、その色素量を比色定量法(540 nm)によって定量した。生成した色素量から生存細胞数を算出した。被験試料（100 μL）に代えてDMSOと培地から調製した溶液（100 μL、DMSO最終濃度1％）を添加して試験した場合の生成色素量（対照色素生成量）と、検体存在下での生成色素量（検体存在下色素量）から、下式に従って被験試料存在下での生育阻害率％を求めて、各検体（抽出物）の細胞毒性を評価した。なお、陽性対照としてコルヒチンを用いた。
【００８５】
生育阻害率（％）＝（対照色素量−検体存在下色素量）／対照色素量 × 100。
【００８６】
各抽出物について抗マラリア活性と毒性を調べた結果を表１に示す。
【００８７】
【表１】
2005206501.tif 000017
【００８８】
この結果、特に各抽出物のマラリア原虫の生育阻害率(%)の結果から、酢酸エチル抽出物に比較的高い抗マラリア活性があることがわかった。
【００８９】
なお、陽性対照試験として行ったキニーネのマラリア原虫に対する生育阻害率(%)は、0.1μg/mLで75.4％、0.033μg/mLで35.5％であった。陽性対照試験として行ったコルヒチンのKB3-1細胞に対する生育阻害率(%)は、5ng/mLで62.2％であった。
【００９０】
実施例２
（１）精製画分の取得
実施例１で得られたHymenocardia acida（葉）の酢酸エチル抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分別精製した。具体的には、酢酸エチル抽出物の濃縮乾固物17.3gを、n-hexane:EtOAc=5:1に溶解し、これをSiO2 (500g)を充填して予め溶媒（n-hexane:EtOAc=5:1）で平衡化しておいたガラスカラム（内径30mm、長さ10cm）に通液して吸着させた。次いで、溶出溶媒として、まずn-hexaneと酢酸エチルとの混合液（n-hexane:EtOAc=5:1）を2000 ｍL通導し、画分Ａ（濃縮乾固後6.5g）を取得した。次いで、順次溶出溶媒を変えて、画分Ｂ（溶出溶媒：n-hexane:EtOAc=1:1 2000 mL、濃縮乾固物重量2.1g）、画分Ｃ（溶出溶媒：EtOAc 2000 mL、濃縮乾固物重量2.1g）、及び画分Ｄ（溶出溶媒：MeOH 2000 mL、濃縮乾固物重量6.0g）を採取回収した。
【００９１】
（２）溶出画分の抗マラリア活性と毒性
上記各溶出画分Ａ〜Ｄの抗マラリア活性と毒性を、実施例１と同様の方法に従って、マラリア原虫の生育阻害率(％)及びKB3-1細胞の生育阻害率(％)に基づいて評価した。結果を表２に示す。
【００９２】
【表２】
2005206501.tif 000018
【００９３】
その結果、各溶出画分のマラリア原虫の生育阻害率(%)の結果から、画分Ｄ（MeOH溶出画分）に最も高い抗マラリア活性があることがわかった。なお、陽性対照試験として行ったキニーネのマラリア原虫に対する生育阻害率(%)は、0.1μg/mLで80.7％、0.033μg/mLで53.5％であった。陽性対照試験として行ったコルヒチンのKB3-1細胞に対する生育阻害率(%)は、5ng/mLで68.9％であった。
【００９４】
実施例３    画分Ｄ
（１）画分Ｄの精製
実施例２で得られた画分Ｄを、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いてさらに精製を行った。具体的には、画分Ｄ(濃縮乾固物重量411 mg)を混合溶媒（CHCl3：MeOH：H2O=30:3:1）に溶解し、これをSiO2 (15g)を充填して予め溶媒（CHCl3：MeOH：H2O=30:3:1）で平衡化しておいたガラスカラム（内径20mm、長さ5cm）に通液して吸着させた。
【００９５】
次いで、溶出溶媒（移動相）として、混合溶媒（CHCl3：MeOH：H2O=30:3:1）300 mLを通導して、画分Ｄ１（濃縮乾固後の重量18.6mg）を得た。更に、順次溶出溶媒を変えて、画分Ｄ２（溶出溶媒：CHCl3：MeOH：H2O=10:3:1 200 mL、濃縮乾固後の重量88.4mg）、画分Ｄ３（溶出溶媒：CHCl3：MeOH：H2O=65:35:10 200 mL、濃縮乾固後の重量65.2mg）、画分Ｄ４（溶出溶媒：CHCl3：MeOH：H2O=6:4:1 300 mL、濃縮乾固後の重量171.6mg）、及び画分Ｄ５（溶出溶媒： MeOH 200 mL、濃縮乾固後の重量54.3mg）を採取回収した。
【００９６】
（２）溶出画分Ｄ１〜Ｄ５の抗マラリア活性と毒性
上記各溶出画分Ｄ１〜Ｄ５の抗マラリア活性と毒性を、実施例１と同様の方法に従って、マラリア原虫の生育阻害率(％)及びKB3-1細胞の生育阻害率(％)に基づいて評価した。結果を表３に示す。
【００９７】
【表３】
2005206501.tif 000019
【００９８】
その結果、各溶出画分のマラリア原虫の生育阻害率(%)の結果から、画分Ｄ４とＤ５に高い抗マラリア活性があることがわかった。なお、陽性対照試験として行ったキニーネのマラリア原虫に対する生育阻害率(%)は、0.1μg/mLで68.4％、0.033μg/mLで28.0％であった。陽性対照試験として行ったコルヒチンのKB3-1細胞に対する生育阻害率(%)は、5ng/mLで75.1％であった。
【００９９】
実施例５    画分Ｄ４及びＤ５
（１）画分Ｄ４及びＤ５の精製
実施例４で得られた画分Ｄ４とＤ５を合わせ、得られた混合試料を逆相ＨＰＬＣ（ODS HPLC）を用いてさらに精製した。具体的には、画分Ｄ４(濃縮乾固後の重量171.6 mg)及び画分Ｄ５(濃縮乾固後の重量54.3 mg)をそれぞれ混合溶媒（MeOH:H2O=35:65）に溶解した後、混合して、うち、試料124.1mg分を下記の条件のＨＰＬＣに供した。
【０１００】
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム：cosmosil 5C18  AR-II 10 mm i.d. x 250 mm（ナカライテスク社製）
移動相：MeOH:H2O=35:65
流速：3.0 mL/min
検出器：UV 230 nm。
【０１０１】
その結果、１つのピークが検出された。そのピーク画分E1を分取して、更に画分E1(濃縮乾固後の重量30.7 mg)について、さらに下記条件の逆相ＨＰＬＣ（ODS HPLC）に供した。
【０１０２】
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム：cosmosil 5C18  AR-II 10 mm i.d. x 250 mm（ナカライテスク社製）
移動相：CH3CN:H2O=15:85
流速：3.0 mL/min
検出器：UV 230 nm。
【０１０３】
その結果、２つのピークが検出された。各ピーク画分を順番に画分HA-1 (濃縮乾固後の重量12.8mg）、及び画分HA-2 (濃縮乾固後の重量9.4mg）として取得した。
【０１０４】
（２）画分HA-1、及びHA-2の同定
上記で得られた画分HA-1及び画分HA-2について、1H-NMR、13C-NMRおよびFAB-MSの測定を行い、化合物を同定した。
(2-1) 画分HA-1
画分HA-1について得られた1H-NMR、13C-NMRおよびFAB-MSのデータ結果を下記に示す。
1H-NMR δ(500 MHz, DMSO-d6): 13.55 (1H, s), 7.40 (1H, brd, J= 7.9 Hz), 7.39 (1H, brs), 6.87 (1H, d, J= 7.9 Hz), 6.65 (1H, s), 6.46 (1H, s), 4.57 (1H, d, J=9.8 Hz), 4.03 (1H, dd like, J= 9.2, 8.5 Hz), 3.67 (1H, d, J=11.6 Hz), 3.33-3.41 (4H, m).
13C-NMR δ(125 MHz, DMSO-d6): 181.9, 163.8, 163,7, 160.7, 156.3, 150.0, 145.9, 121.4, 119.0, 116.1, 113.4, 109.0, 103.3, 102.8, 93.6, 81.7, 79.0, 73.2, 70.7, 70.3, 61.6.
・FAB-MS:447 (M-H)- 。
【０１０５】
この結果を文献報告値（Chem. Pharm. Bull. 1990, 38, 2277-2280)と比較して、画分HA-1は次の構造を有する化合物イソオリエンチン（isoorientin)であると判定した。
【０１０６】
【化１６】
2005206501.tif 000020
【０１０７】
(2-2) 画分HA-2
画分HA-2について得られた1H-NMR、13C-NMRおよびFAB-MSのデータ結果を下記に示す。
1H-NMR δ(500 MHz, DMSO-d6): 13.16 (1H, s), 7.50 (1H, brd, J= 8.5 Hz), 7.46 (1H, brs), 6.86 (1H, brd, J=  8.5 Hz), 6.62 (1H, s), 6.25 (1H, s), 4.67 (1H, d, J=8.6 Hz), 3.81 (1H, dd , J= 10.3, 9.2 Hz), 3.67 (1H, d, J=11.0 Hz), 3.34-3.53 (4H, m).
13C-NMR δ(125 MHz, DMSO-d6): 181.7, 163.8, 162,8, 160.2, 155.8, 149.7, 145.5, 121.7, 119.2, 115.5, 113.8, 104.3, 103.7, 102.1, 98.0, 81.8, 78.6, 73.2, 70.6, 70.6 61.4.
・FAB-MS:447 (M-H)- 。
【０１０８】
この結果と文献報告値（Chem. Pharm. Bull. 1990, 38, 2277-2280）とを比較して、画分HA-2は次の構造を有する化合物オリエンチン（orientin)であると判定した。
【０１０９】
【化１７】
2005206501.tif 000021
【０１１０】
（３）化合物HA-1、及びHA-2の抗マラリア活性
上記各化合物HA-1及びHA-2の抗マラリア活性と毒性を、実施例１と同様の方法でマラリア原虫の生育阻害率(％)及びKB3-1細胞の生育阻害率(％)に基づいて評価した。具体的には、抗マラリア活性は、上記で単離取得したHA-1及びHA-2のそれぞれについて各種濃度の試料を作成し、実施例１に記載する方法に従って熱帯熱マラリア原虫（P. falciparum）CDC3株の生育阻害率を測定し、マラリア原虫の50％が致死する試料濃度をIC50として求めた。
【０１１１】
毒性は、上記で単離取得したHA-1及びHA-2をそれぞれ150μＭ濃度に調整し、実施例１に記載する方法（MTT法）に従って、当該試料のヒトガン細胞KB3-1の生育阻害率％を測定し、ヒトガン細胞KB3-1の50％が致死する試料濃度をIC50として求めた。さらに、ヒトガン細胞KB3-1に対する50％致死量（IC50[KB3-1]）とマラリア原虫に対する50％致死量（IC50[P. falciparum]）との比（IC50[KB3-1]/IC50[P. falciparum])から、選択毒性を評価した。結果を表４に示す。
【０１１２】
【表４】
2005206501.tif 000022
【０１１３】
なお、陽性対照試験として行ったキニーネのマラリア原虫に対する生育阻害率 (%)は、0.1μg/mLで81.9％、0.033μg/mLで51.0％であった。陽性対照試験として行ったコルヒチンのKB3-1細胞に対する生育阻害率 (%)は、5 ng/mLで61.0％であった。
【０１１４】
前述するように、一般式（１）中、Ｙで示される置換基がグルコースＳであるイソオリエンチン（３）は0.24μMという低濃度でマラリア原虫の増殖を５０％抑制した。一方、グルコースの結合位置の異なる異性体オリエンチン（４）は、マラリア原虫増殖抑制効果が著しく低下した。このことから、本発明が対象とするフラボノイドＣ−グリコサイドの中でも、一般式（１）のＹの位置にグルコースが結合してなるフラボノイドＣ−グリコサイドがより好適な抗マラリア組成物の有効成分であると考察できる。また、イソオリエンチン（３）は、ヒトのモデル細胞であるKB3-1細胞に対する毒性も極めて小さいことから、副作用の発現の可能性も極めて低い、好ましい抗マラリア組成物の有効成分であると推測される。
【０１１５】
製剤例１
化合物HA-1（イソオリエンチン）200mg、乳糖3g、とうもろこし澱粉1.28g、ヒドロキシプロピルセルロース200mg、ステアリン酸マグネシウム20mgを、よく混合して造粒した後、打錠して、１錠あたり100mgの錠剤形態の、抗マラリア組成物とする。
【０１１６】
製剤例２
製剤例１の化合物HA-1に代えて、化合物HA-2（オリエンチンを用いて、製剤例１と同様に、各成分をよく混合して造粒した後、打錠して、１錠あたり100mgの錠剤形態の、抗マラリア組成物とする。
【０１１７】
製剤例３
実施例２で調製したシリカゲルＨＰＬＣにおけるＤ４及びＤ５溶出画分の混合物1000 mg、乳糖2.5g、馬鈴薯澱粉1.75g、結晶セルロース240mg、及びステアリン酸マグネシウム10mgをよく混合し、この混合物をカプセルに充填し、１カプセル中に上記溶出画分を1000 mgの割合で含む錠剤形態の、抗マラリア組成物とする。
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明は、オリエンチン及びイソオリエンチンを始めとするフラボノイド配糖体（フラボノイドC-グリコサイド）を有効成分とした新規な抗マラリア組成物を提供することができる。