(57)【要約】【課題】  センキュウに含まれる成分を有効成分とする新規な殺マツノザイセンチュウ剤を提供すること。【解決手段】  ３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドを有効成分とすることを特徴とする。【化１】2005206550.tif 000005【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドを有効成分とすることを特徴とする殺マツノザイセンチュウ剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な殺マツノザイセンチュウ剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
マツノマダラカミキリを媒介昆虫として松に寄生するマツノザイセンチュウは、菌食性の線虫であり、松の材組織内に侵入繁殖して松を枯死させることが知られている。従って、古くからマツノザイセンチュウに対して殺線虫効果を有する化合物の探索が行われており、これまでに種々の化合物が殺マツノザイセンチュウ剤の有効成分として提案されているが（例えば特許文献１参照）、さらなる化合物の発見が待ち望まれている。
【０００３】
ところで、センキュウ（Ligustici Rhizoma）は、中国で重宝されている伝統的な生薬であり、婦人薬や強壮薬としての効能が知られている。センキュウの植物に対する生理活性作用に関しては、例えば、特許文献２に、センキュウに含まれるフタリド誘導体が植物成長調整用水性薬液の有効成分となることが記載されており、特許文献３に、センキュウを煮煎し、その煎液を松柏の根元に与えると、当該松柏の樹勢が回復するという経験則が庭師業界に存在することが記載されている。しかしながら、センキュウに含まれる成分のマツノザイセンチュウに対する殺線虫効果はいまだ検討されておらず、それに関する報告はない。
【特許文献１】特開平１１−３４９４１４号公報
【特許文献２】特開平８−９９８１３号公報
【特許文献３】特開平７−２６１６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで本発明は、センキュウに含まれる成分を有効成分とする新規な殺マツノザイセンチュウ剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、上記の点に鑑みて種々の検討を行った結果、センキュウに含まれる成分として知られているフタリド誘導体の中でも、下記の平面構造式で表される３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドがマツノザイセンチュウに対して優れた殺線虫効果を有することを見出した。
【０００６】
【化１】
2005206550.tif 000002
【０００７】
上記の知見に基づいてなされた本発明の殺マツノザイセンチュウ剤は、請求項１記載の通り、３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドを有効成分とすることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、新規な殺マツノザイセンチュウ剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の殺マツノザイセンチュウ剤の有効成分である３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドは、センキュウに含まれるフタリド誘導体の１つとして公知の化合物である（内藤崇ら、Natural Medicines 49(3), 288-292 (1995)）。３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドは、センキュウから単離取得したものを用いてもよいし（その単離取得方法は後述する実施例を参照のこと）、化学合成したものを用いてもよい。３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドをセンキュウから単離取得して用いる場合、３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドの精製の程度は必ずしも高度なものである必要はなく、精製途中における３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドを含む画分を有効成分として用いてもよい。なお、３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドには不斉炭素原子が複数あるので各種の異性体が存在するが、殺マツノザイセンチュウ剤の有効成分としては、個々の異性体を単独で用いてもよいし、それらの混合物を用いてもよい。
【００１０】
本発明の殺マツノザイセンチュウ剤は、有効成分である３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドを任意の量で含有し、公知の担体や添加剤を用いて粉剤や液剤などの各種の剤型に製剤化されて実用に供される。担体としては、液体担体と固体担体のいずれもがその使用目的に応じて用いることができる。液体担体としては水、アルコール類、ケトン類、エーテル類などが挙げられる。固体担体としては鉱物性粉末、アルミナ、硫黄粉末、活性炭などが挙げられる。添加剤としては、乳化剤、懸濁剤、安定剤、展着剤、浸透剤、分散剤などが挙げられる。その使用量は、その剤型や適用対象の松の樹齢、被害度や適用方法、適用場所などに応じて適宜決定することができる。施用法としては、松の樹幹に注射するなり、穴をあけた後、本剤を埋め込んだり、注入したりする方法を採用することができる。なお、本発明の殺マツノザイセンチュウ剤は、３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドに加え、マツノザイセンチュウに対して殺線虫効果を有する他の化合物を含有していてもよい。
【実施例】
【００１１】
以下、本発明を実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定して解釈されるものではない。
【００１２】
実施例：
（Ａ）３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドのセンキュウからの単離取得
工程１：
センキュウの乾燥粉末（市販品）１０００ｇにメタノール１０００ｍＬを加え、室温にて、時々振り混ぜながら１週間浸漬した。その後ろ過し、抽出液と残渣に分離した。残渣について同様に再度メタノール抽出し、得られた抽出液を１回目の抽出液と合わせた。このメタノール抽出液からメタノールを留去し得られた水層を２Ｎ塩酸を用いてｐＨ２に調整し、これに酢酸エチルを加えて分配抽出を行った。酢酸エチル層を分取し、酢酸エチル層の半分量（体積）の飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加え、分配抽出した。酢酸エチル層を分取し、もう一度同様に飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えて分配抽出し、分取した酢酸エチル層を濃縮し、これを中性画分とした（１８．１ｇ）。
工程２：
この中性画分をＷａｋｏｇｅｌ  Ｃ−２００（和光純薬社製、内径５ｃｍ、長さ４４ｃｍ）を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶媒はヘキサン−酢酸エチルを用い、これらの混合比（体積）を１００：０〜０：１００の間で１０ずつ変え、各混合比溶媒３０００ｍＬずつを流し、溶出液を３０００ｍＬずつ分取した。ヘキサン−酢酸エチル（９０：１０）のフラクションを分取し減圧濃縮した（５８７２．０ｍｇ）。
工程３：
濃縮されたヘキサン−酢酸エチル（９０：１０）のフラクションをＷａｋｏｇｅｌ  Ｃ−２００（和光純薬社製、内径３．８ｃｍ、長さ５２ｃｍ）を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶媒はヘキサン−酢酸エチルを用い、これらの混合比を１００：０〜８０：２０の間で５ずつ変え、各混合比溶媒２０００ｍＬずつを流し、溶出液を２０００ｍＬずつ分取した。ヘキサン−酢酸エチル（９５：５）のフラクションを分取し減圧濃縮した（３９３９．５ｍｇ）。
工程４：
濃縮されたヘキサン−酢酸エチル（９５：５）のフラクションをＷａｋｏｇｅｌ  Ｃ−２００（和光純薬社製、内径３．８ｃｍ、長さ３６ｃｍ）を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶媒はトルエン−酢酸エチルを用い、これらの混合比（体積）を１００：０〜９０：１０の間で２ずつ変え、各混合比溶媒１５００ｍＬずつを流し、溶出液を１５００ｍＬずつ分取した。トルエン−酢酸エチル（９８：２）のフラクションを分取し減圧濃縮した（１０９４．０ｍｇ）。
工程５：
濃縮されたトルエン−酢酸エチル（９８：２）のフラクションをセファデックスＬＨ−２０（アマシャム・ファルマシア社製）を用いたゲルろ過カラムクロマトグラフィーに供し、メタノール５００ｍＬを用いて溶出させた。溶出液を濃縮し、シリカゲル（Kieselgel  60  GF254  メルク社製）を用いた薄層クロマトグラフィーに供した。展開溶媒はヘキサン−酢酸エチル（８８：１２）を用いた。ＲＦ値＝０．３付近のスポットを掻きとり、水飽和酢酸エチルにて溶出させた後溶媒を留去し、下記の立体構造式で表され、慣用名ネオクニジライド（neocnidilide）で知られる（必要であれば前掲の文献を参照のこと）、３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドを得た（４７５．２ｍｇ）。なお、こうして単離取得した化合物が３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドであることは、各種機器分析（ＮＭＲ，ＵＶ，ＩＲ，ＭＳなど）のデータにより確認した。
【００１３】
【化２】
2005206550.tif 000003
【００１４】
（Ｂ）３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドのマツノザイセンチュウに対する殺線虫効果
３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリド１０ｍｇにできるだけ少量のアセトンを加えてこれを全て溶解し、さらに精製水を用いて希釈して１００００ｐｐｍとして試験溶液の原液とした。この原液を試験濃度の２倍濃度に調製し、２４穴マイクロプレートの各ウェルに１００μＬずつ入れ、さらにマツノザイセンチュウの蒸留水懸濁液（約４００〜１０００頭／ｍＬ）１００μＬを加え、２５℃、暗所にて１週間放置した後、各ウェル内のマツノザイセンチュウの生存数と死亡数とを顕微鏡観察により数え、その死亡率（％）［（死亡数）／（生存数＋死亡数）×１００］を調べた。その結果、試験濃度が１００ｐｐｍ以下では死亡率が０％であったが、試験濃度が３００ｐｐｍでは死亡率が４０％、試験濃度が１０００ｐｐｍでは死亡率が７８％であり、３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドは、マツノザイセンチュウに対して優れた殺線虫効果を有することがわかった。
なお、上記と同様の試験を、３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドとともにセンキュウに含まれるフタリド誘導体の１つとして公知の化合物である、下記の立体構造式で表され、慣用名センキュウノライドＩ（senkyunolide I）で知られる（必要であれば前掲の文献を参照のこと）、３−ブチリデン−４，５，６，７−テトラヒドロ−６，７−ジヒドロキシフタリド（単離取得方法は後述）について行ったところ、試験濃度が１０００ｐｐｍでも死亡率が０％であり、この化合物は、マツノザイセンチュウに対する殺線虫効果を有していないことがわかった。また、両化合物について、ダイコンなどの根菜類に寄生するキタネグサレセンチュウに対する殺線虫効果を上記と同様の方法で調べたところ、両化合物とも試験濃度が１０００ｐｐｍでも死亡率が０％であり、殺線虫効果を有していなかった。このことから、同じようにセンキュウに含まれるフタリド誘導体であっても、マツノザイセンチュウに対する殺線虫効果は、僅かな二重結合の位置と置換基の違いに基づいて大きく異なること、３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリドの殺線虫効果は、線虫の種類によって大きく異なることがわかった。
【００１５】
【化３】
2005206550.tif 000004
【００１６】
（Ｃ）３−ブチリデン−４，５，６，７−テトラヒドロ−６，７−ジヒドロキシフタリドのセンキュウからの単離取得
（Ａ）の工程２で得られたヘキサン−酢酸エチル（４０：６０）のフラクションを分取し減圧濃縮し（１０８２．９ｍｇ）、Ｗａｋｏｇｅｌ  Ｃ−２００（和光純薬社製、内径２．１ｃｍ、長さ３３ｃｍ）を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶媒はヘキサン−酢酸エチルを用い、これらの混合比を１００：０〜６０：４０の間では１０ずつ、６０：４０〜４５：５５の間では５ずつ変え、各混合比溶媒５００ｍＬずつを流し、溶出液を５００ｍＬずつ分取した。混合比５５：４５〜４５：５５の３フラクションを合わせて減圧濃縮した（７８４．９ｍｇ）。得られた濃縮物を先に用いたカラムと同じカラムを用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶媒はヘキサン−酢酸エチルを用い、これらの混合比を１００：０〜０：１００の間で１０ずつ変え、各混合比溶媒１００ｍＬずつを流し、溶出液を１００ｍＬずつ分取した。ヘキサン−酢酸エチル（５０：５０）の画分を分取し減圧濃縮した（１４３．９ｍｇ）。得られた濃縮物をシリカゲル（Kieselgel  60  GF254  メルク社製）を用いた薄層クロマトグラフィーに供した。展開溶媒はヘキサン−酢酸エチル（３：７）を用いた。ＲＦ値＝０．３付近のスポットを掻きとり、水飽和酢酸エチルにて溶出させた後溶媒を留去し、目的とする３−ブチリデン−４，５，６，７−テトラヒドロ−６，７−ジヒドロキシフタリドを得た（９８．２ｍｇ）。なお、こうして単離取得した化合物が３−ブチリデン−４，５，６，７−テトラヒドロ−６，７−ジヒドロキシフタリドであることは、各種機器分析（ＮＭＲ，ＵＶ，ＩＲ，ＭＳなど）のデータにより確認した。
【００１７】
製剤例：
３−ブチル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロフタリド１重量％水溶液（アセトンを用いて溶解）を調製し、殺マツノザイセンチュウ剤（液剤）とした。
【産業上の利用可能性】
【００１８】
本発明は、新規な殺マツノザイセンチュウ剤を提供することができる点において、産業上の利用可能性を有する。