(57)【要約】【課題】              マウスＢＡＧ５ドメインの立体構造を正確に特定し、当該ドメインの立体構造を決定してその構造と機能との関係を明らかにする。【解決手段】          マウスＢＡＧ５ドメインを形成する特定のアミノ酸配列からなるポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、当該ポリペプチドの製造方法、及び当該ポリペプチドと相互作用する物質のスクリーニング方法等を提供する。【選択図】            なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２、４及び６の何れか一つに示したアミノ酸配列からなることを特徴とするポリペプチド又はその塩。
【請求項２】
配列番号４に示したアミノ酸配列からなるポリペプチドにおいて、当該ポリペプチドのＮ末端から１〜５個の任意のアミノ酸残基が欠失したことを特徴とするポリペプチド又はその塩。
【請求項３】
配列番号２に示したアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、前記アミノ酸配列領域が３重へリックスバンドルを形成することを特徴とするポリペプチド又はその塩。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか一項に記載のポリペプチドのアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、又は付加されたアミノ酸配列からなり、マウスＢＡＧ５ドメインと実質的に同一のアポトーシス抑制機能、又は細胞増殖阻害機能を有するポリペプチド又はその塩。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項６】
配列番号１、３及び５の何れか一つに示した塩基配列からなる請求項５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
宿主細胞に導入したときに、当該宿主細胞内で請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチドを産生し得る発現ベクターであって、該発現ベクターは、前記宿主細胞内における発現制御配列に機能的に結合された、請求項５又は６に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項８】
請求項７に記載の発現ベクターを含んでなる形質転換細胞。
【請求項９】
請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチドに対する抗体。
【請求項１０】
請求項８に記載の形質転換細胞を培養し、ポリペプチドを発現させる工程を含む、請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチド又はそれらの塩の製造方法。
【請求項１１】
無細胞タンパク質合成系を用いることを特徴とする、請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチド又はそれらの塩の製造方法。
【請求項１２】
宿主細胞内においてＢＡＧ５ドメインを発現させる工程を含み、当該ＢＡＧ５ドメインが当該細胞の増殖を抑制することを特徴とする細胞増殖抑制方法。
【請求項１３】
前記ＢＡＧ５ドメインが請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチドである請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチドの立体構造に関する情報を用いて、配列番号２に示したアミノ酸配列と３０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなる構造未知のポリペプチドのホモロジーモデリングを行い、前記構造未知のポリペプチドの立体構造を推定する方法。
【請求項１５】
前記構造未知のポリペプチドがヒトＢＡＧ５ドメインである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＢＡＧ５ドメインポリペプチドの立体構造に関する情報を用いて、前記ポリペプチドのリガンド結合部位を決定する工程と、当該結合部位と相互作用する化合物をコンピュータ上で特定する工程とを含むことを特徴とする、ＢＡＧ５ドメインと相互作用する化合物のスクリーニング方法。
【請求項１７】
前記リガンドが、Ｈｓｃ７０、Ｈｓｐ７０、Ｒａｆ１又はそれらのホモログである請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＢＡＧ５ドメインポリペプチドが、請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチド、請求項１５に記載の方法により推定されたヒトＢＡＧ５ドメイン又はそれらの一部である請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法により特定された化合物を候補化合物として用意し、請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチドと前記候補化合物とを接触させる工程と、前記ポリペプチドと候補化合物とが相互作用するかどうかを確認する工程とを含むことを特徴とするＢＡＧ５ドメインと相互作用する化合物のスクリーニング方法。
【請求項２０】
アポトーシス活性を調節する化合物をスクリーニングする方法であって、当該方法が、
請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法により特定された化合物を候補化合物として用意し、請求項１〜４の何れか一項に記載のポリペプチドと、Ｈｓｃ７０と、前記候補化合物とを接触させる工程と、
前記候補化合物が、前記ポリペプチドとＨｓｃ７０との結合を阻害するか否かを検出する工程とを含み、
前記ポリペプチドとＨｓｃ７０との結合を阻害する物質がアポトーシス活性を調節することを特徴とするスクリーニング方法。
【請求項２１】
細胞増殖活性を調節する化合物をスクリーニングする方法であって、当該方法が、
前記細胞増殖活性の測定に適した条件において候補化合物の存在又は非存在下で請求項８に記載の形質転換細胞を培養し、
前記形質転換細胞の増殖活性を測定することを含む方法。
【請求項２２】
前記候補化合物が、請求項１６〜１９の何れか一項に記載の方法により得られた化合物である請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＢＡＧタンパク質ファミリーの機能ドメインを形成するポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、及びそれらを用いた化合物のスクリーニング方法等に関する。より詳しくは、マウスＢＡＧ５タンパク質が有する保存されたモチーフであるＢＡＧドメインポリペプチド及びその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシスは生物の体内で起こる非常に重要なメカニズムである。生物の発生過程では多くの細胞が細胞死することによって、個体の複雑な形態が作られていくが、このような細胞死は遺伝的に決められた発生スケジュールに従って起こるものであり、「プログラム細胞死」と呼ばれる。一方、外的ストレスや癌細胞、感染細胞に対する生体防御の目的でもアポトーシスが起こる。何らかの要因でこの機構が正常に働かなくなると、様々な疾患が引き起こされる。アポトーシスが起こらなくなることによる疾患としては、ＤＮＡ損傷を引き金とした癌化や、自己反応性のリンパ球除去システムが不完全となることで起こる自己免疫疾患等が挙げられる。また、過剰にアポトーシスが起こることによって発症するものとしては、神経細胞の過剰なアポトーシスに起因する神経変性疾患等が挙げられる。今後アポトーシスによる様々な疾患の原因解明や治療法の開発にアポトーシスの分子機構解明が必要である。またアポトーシスの調整を行うことで様々な疾患の治療が可能となる。
【０００３】
アポトーシスは、アポトーシス機構に関与する様々な遺伝子産物によって生ずる多様なシグナルにより制御されている。これらの遺伝子産物の機能を刺激するものとしては、細胞外及び細胞内シグナルの両方を含む。アポトーシスを抑制する生理的な刺激は、例えば、種々の成長因子、細胞外マトリクス、ＣＤ４０リガンド、ウイルス遺伝子産物、中性アミノ酸、エストロゲン及びアンドロゲン等が挙げられる。一方、アポトーシスを促進する刺激としては、例えば、ＴＮＦ、Ｆａｓ、ＴＧＦ−β、神経伝達因子、成長因子の除去細胞外マトリクスの消失細胞内カルシウム及びグルココルチコイド等が挙げられる。これらの多様な刺激は細胞内タンパク質の複雑な相互作用を通じ、最終的にはカスパーゼと呼ばれるタンパク質分解酵素の活性化とＤＮＡの断片化を伴う共通したメカニズムによって細胞死の経路に導かれる。
【０００４】
このようなアポトーシス機構に関与するシグナル伝達系の１つのタンパク質として、ＢＡＧタンパク質ファミリーが知られている。ＢＡＧ１タンパク質は、当初はＨｓｐ７０結合タンパク質ファミリーの１つとして見出されたものであり、「ＢＡＧドメイン」と呼ばれる保存されたＣ末端領域を有するタンパク質である（例えば、特許文献１及び非特許文献１参照。）ＢＡＧ１タンパク質の有する様々な機能については今までに多くの研究がなされているが、主に細胞増殖と抗アポトーシス活性が挙げられる。ＢＡＧ１タンパク質にはＨｓｃ７０とＲａｆ１が競合しながら結合しており、Ｒａｆ１がＢＡＧ１と解離してＨｓｃ７０が結合するとＤＮＡ合成や細胞増殖が阻害されることから、Ｒａｆ１又はＨｓｃ７０の結合がそれぞれ細胞増殖又はストレス時における増殖休止の切り替えを行っているものと考えられる。一方、Ｈｓｐ７０／ＢＡＧ１ヘテロ複合体がＢｃｌ−２のコンフォメーション変化を誘導して抗アポトーシス活性を促進していることが報告されている（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００５】
上記ＢＡＧドメインを有するＢＡＧタンパク質ファミリーについての研究の進展によって、ヒトのＢＡＧタンパク質ファミリーには６つのファミリーが存在することが明らかになった。これらのＣ末端側には共通のドメイン（ＢＡＧドメイン）が存在しており（ＢＡＧ５タンパク質にはＮ末端側にも存在している）、このドメインについてはＨｓｃ７０との結合が報告されている（例えば、非特許文献１参照。）。ＢＡＧ５タンパク質については、その生理的機能のみならず、Ｎ末端側、Ｃ末端側それぞれのドメインの役割も不明である。
【０００６】
ところで、アポトーシスや細胞増殖のような極めて複雑なメカニズムにおいて、ＢＡＧタンパク質ファミリーの役割を解明し、ＢＡＧタンパク質ファミリーによるシグナル伝達系を調節しうるような医薬品の開発を行うためには、上記ＢＡＧドメインの立体構造を明らかにして、相互作用するタンパク質との結合様式やこれらの結合を阻害する化合物を見出すことが必要である。すなわちＢＡＧタンパク質ファミリーのように、共通のドメイン（ＢＡＧドメイン）が存在する場合には、それぞれのタンパク質による特徴的な機能を理解するために、それぞれのＢＡＧドメインによる立体構造の微妙な違いを明らかにし、これらの構造と機能との関係を明確にすることが重要である。
【０００７】
しかしながら、構造解析に適したドメインを発現させるためには、ドメイン境界の位置に関する情報が必要である。一般に、このドメイン境界はアミノ酸配列の相同性等を手がかりとして予測されるが、予測されたドメイン領域のアミノ酸配列に基づいてポリペプチドの発現を行っても実際に構造をとる（フォールドする）ドメインを形成する確率は非常に低く、このことがタンパク質立体構造解析の障害の一つとなっている。現在のところＢＡＧタンパク質ファミリーの中で立体構造が明らかにされたＢＡＧドメインはＢＡＧ１（ＰＤＢ  ＩＤ  １１６Ｚ）及びＢＡＧ４（ＰＤＢ  ＩＤ  ＩＭ６２）のみであり、ＢＡＧ５タンパク質のＢＡＧドメインについては未だ知られていない。
【０００８】
【特許文献１】米国特許出願公開第2003/0175958号明細書
【非特許文献１】Takayama and Reed, Nature Cell Biology 3, 237-241 (2001)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は上記のような技術的背景においてなされたものであって、マウスＢＡＧ５ドメインの立体構造を正確に特定し、当該ドメインの立体構造を決定してその構造と機能との関係を明らかにすることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
即ち、本発明は以下のようなＢＡＧ５ドメインを形成するポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、当該ポリペプチドの製造方法、及び当該ポリペプチドと相互作用する物質のスクリーニング方法等を提供する。
【００１１】
（１）配列番号２、４及び６の何れか一つに示したアミノ酸配列からなることを特徴とするポリペプチド又はその塩。
（２）配列番号４に示したアミノ酸配列からなるポリペプチドにおいて、当該ポリペプチドのＮ末端から１〜５個の任意のアミノ酸残基が欠失したことを特徴とするポリペプチド又はその塩。
（３）配列番号２に示したアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、前記アミノ酸配列領域が３重へリックスバンドルを形成することを特徴とするポリペプチド又はその塩。
（４）（１）、（２）又は（３）に記載のポリペプチドのアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、又は付加されたアミノ酸配列からなり、マウスＢＡＧ５ドメインと実質的に同一のアポトーシス抑制機能、又は細胞増殖阻害機能を有するポリペプチド又はその塩。
（５）（１）〜（４）に記載されたポリペプチドのいずれか１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
（６）配列番号１、３及び５の何れか一つに示した塩基配列からなる（５）に記載のポリヌクレオチド。
（７）宿主細胞に導入したときに、当該宿主細胞内で（１）〜（４）の何れか一つに記載のポリペプチドを産生し得る発現ベクターであって、該発現ベクターは、前記宿主細胞内における発現制御配列に機能的に結合された、（５）又は（６）に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（８）（７）に記載の発現ベクターを含んでなる形質転換細胞。
（９）（１）〜（４）の何れか一つに記載のポリペプチドに対する抗体。
（１０）（８）に記載の形質転換細胞を培養し、ポリペプチドを発現させる工程を含む、（１）〜（４）の何れか一つに記載のポリペプチド又はそれらの塩の製造方法。
（１１）無細胞タンパク質合成系を用いることを特徴とする、（１）〜（４）の何れか一つに記載のポリペプチド又はそれらの塩の製造方法。
（１２）宿主細胞内においてＢＡＧ５ドメインを発現させる工程を含み、当該ＢＡＧ５ドメインが当該細胞の増殖を抑制することを特徴とする細胞増殖抑制方法。
（１３）前記ＢＡＧドメインが（１）〜（５）の何れか一つに記載のポリペプチドである（１２）に記載の方法。
（１４）（１）〜（４）の何れか一つに記載のポリペプチドの立体構造に関する情報を用いて、配列番号２に示したアミノ酸配列と３０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなる構造未知のポリペプチドのホモロジーモデリングを行い、前記構造未知のポリペプチドの立体構造を推定する方法。
（１５）前記構造未知のポリペプチドがヒトＢＡＧ５ドメインである（１４）に記載の方法。
（１６）ＢＡＧ５ドメインポリペプチドの立体構造に関する情報を用いて、前記ポリペプチドのリガンド結合部位を決定する工程と、当該結合部位と相互作用する化合物をコンピュータ上で特定する工程とを含むことを特徴とする、ＢＡＧ５ドメインと相互作用する化合物のスクリーニング方法。
（１７）前記リガンドが、Ｈｓｃ７０、Ｈｓｐ７０、Ｒａｆ１又はそれらのホモログである（１６）に記載の方法。
（１８）前記ＢＡＧ５ドメインポリペプチドが（１）〜（４）の何れか一項に記載のポリペプチド、（１５）に記載の方法により推定されたヒトＢＡＧ５ドメイン、又はそれらの一部である（１６）又は（１７）に記載の方法。
（１９）（１６）、（１７）又は（１８）に記載の方法により特定された化合物を候補化合物として用意し、（１）〜（４）の何れか一つに記載のポリペプチドと前記候補化合物とを接触させる工程と、前記ポリペプチドと候補化合物とが相互作用するかどうかを確認する工程とを含むことを特徴とするＢＡＧ５ドメインと相互作用する化合物のスクリーニング方法。
（２０）アポトーシス活性を調節する化合物をスクリーニングする方法であって、当該方法が、（１６）、（１７）又は（１８）に記載の方法により特定された化合物を候補化合物として用意し、（１）〜（４）の何れか一つに記載のポリペプチドと、Ｈｓｃ７０と、前記候補化合物とを接触させる工程と、前記候補化合物が、前記ポリペプチドとＨｓｃ７０との結合を阻害するか否かを検出する工程とを含み、前記ポリペプチドとＨｓｃ７０との結合を阻害する物質がアポトーシス活性を調節することを特徴とするスクリーニング方法。
（２１）細胞増殖活性を調節する化合物をスクリーニングする方法であって、当該方法が、前記細胞増殖活性の測定に適した条件において候補化合物の存在又は非存在下で（８）に記載の形質転換細胞を培養し、前記形質転換細胞の増殖活性を測定することを含む方法。
（２２）前記候補化合物が、（１６）〜（１９）の何れか一つに記載の方法により得られた化合物である（２１）に記載の方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明はマウスＢＡＧ５ドメインの構造を初めて明らかにしたものであり、特に、ＢＡＧ５ドメインの立体構造を決定することにより、そのドメイン構造と機能との関係を明らかにし、ＢＡＧ５タンパク質による細胞内シグナル伝達機能の解明に新たな知見を与え、医薬品等の開発（例えば、ラショナルドラッグデザインやバーチャルスクリーニングによる開発）に寄与するものである。また、本発明のスクリーニング方法により得られたＢＡＧ５ドメインと相互作用する化合物は、細胞のアポトーシス活性を調節する薬剤や、ガン細胞の増殖阻害剤として、種々の疾患の予防や治療に用いられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
（本発明のポリペプチド）
本発明のポリペプチドは、立体構造をもったドメインを形成するポリペプチドである。本発明は、より具体的には、配列番号２、４及び６の何れか一つに記載されるポリペプチド、又は配列番号４に示したアミノ酸配列のＮ末端から１〜５個の任意のアミノ酸残基が欠失したポリペプチド（これらを「マウスＢＡＧ５ドメインポリペプチド」と称する場合もある。）に関する。また、本発明は、配列番号２に示したアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、前記アミノ酸配列領域が３重へリックスバンドルを形成することを特徴とするポリペプチド、さらに上記各ポリペプチドにおいて、１若しくは数個（１〜９個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜２個）のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなり、マウスＢＡＧ５ドメインと実質的に同一のアポトーシス抑制機能、又は細胞増殖阻害機能を有するポリペプチドに関する。本明細書においては、上記各ポリペプチドを総称して「本発明のポリペプチド」と称する。
以下、本発明のポリペプチドの構造や機能などについて説明する。
【００１４】
本発明において、「ＢＡＧドメイン」とは、ＢＡＧタンパク質に共通して存在する相同性の高い約８０〜１００アミノ酸残基からなるポリペプチドをいう。ＢＡＧタンパク質は真核生物においてよく保存されており、脊椎動物、昆虫、線虫、酵母及び植物で相同性を有する。ヒトのＢＡＧタンパク質ファミリーは、ＢＡＧ１、ＢＡＧ２、ＢＡＧ３（Ｂｉｓ）、ＢＡＧ４（ＳＯＤＤ）、ＢＡＧ５及びＢＡＧ６を含む。ＢＡＧタンパク質は多様なＮ末端領域を有するが、Ｃ末端側には共通のドメイン（ＢＡＧドメイン）を含み、これらのＢＡＧドメインはＨｓｐ７０／Ｈｓｃ７０のＡＴＰａｓｅドメインと結合してこれらの分子シャペロンの働きを調節している。これらの保存されたＢＡＧドメインはＨｓｐ７０／Ｈｓｃ７０と結合するために必要であるが、ＢＡＧタンパク質ファミリーによってその大きさはかなり異なり、例えば、ＢＡＧ１タンパク質のＢＡＧドメインに比べてＢＡＧ４タンパク質のそれはかなり小さいことが報告されている。
【００１５】
また、本発明において「３重へリックスバンドル」とは、３本のα‐へリックスが反平行に束ねられ、２つのループを介して連結された立体構造のことである。図１（ａ）には、本発明により明らかとなったマウスＢＡＧ５ドメイン主鎖の立体構造がリボン図により模式的に示される。３本のヘリックスはすべて同じ長さではなく、特に２番目のヘリックスの長さがＣ末端側で短く、３番目のヘリックスとの間は伸びたループで連結されている。この領域はタンパク質間相互作用に重要な残基が保存されており、上記ＢＡＧドメインに共通して認められる構造である。しかしながら、それぞれのへリックスを構成するアミノ酸残基の長さは各ＢＡＧタンパク質によって異なり、本発明のポリペプチドはマウスＢＡＧ１ドメインに比べて第一ヘリックスのＣ末端側と第二ヘリックスのＮ末端側で短くなっている。また、それぞれのＢＡＧドメインを構成する側鎖のアミノ酸残基の種類により、Ｈｓｃ７０等のリガンドとの結合部位の構造も異なると考えられる。
【００１６】
なお、本発明のポリペプチドの機能としては、例えば、アポトーシス抑制機能、及び細胞増殖阻害機能を挙げることができる。ＢＡＧタンパク質ファミリーの有する保存されたＣ末端領域（ＢＡＧドメイン）はＨｓｃ７０／Ｈｓｐ７０のＡＴＰａｓｅドメインと結合し、そのシャペロン活性を調節することが知られている。ＢＡＧタンパク質の他のドメインは他のタンパク質との相互作用に関与する。例えば、ＢＡＧ１はＢｃｌ２やレチノイン酸受容体と相互作用し、これらをＨｓｃ７０／Ｈｓｐ７０と相互作用させることによってコンフォメーションの変化を誘導して機能を調節する。一方、ＢＡＧ４タンパク質はＨｓｃ７０を腫瘍壊死因子受容体１やデスレセプター３と相互作用させると推測されている。従って、ＢＡＧタンパク質の種類によって様々な細胞内のシグナル伝達機能を担っていることが示唆される。
【００１７】
本明細書の実施例に示したように、本発明のポリペプチドについても細胞内で発現させるとアポトーシスを抑制することから、ＢＡＧ１タンパク質と同様にアポトーシス調節機能を有することが理解される。また、ＢＡＧ５ドメインを種々の細胞内で発現させることによって細胞増殖活性がどのような影響を受けるか調べた結果、細胞増殖機能を有意に抑制することが見出された。従って、本発明のポリペプチドは、アポトーシス調節機能及び細胞増殖抑制機能を有することから、細胞内でのシグナル伝達機構を調整する重要な役割を果たしており、少なくともこれらの機能を調節する薬物のスクリーニングへの利用や、立体構造情報を利用しての薬物の最適化、及び細胞の分化誘導や細胞増殖機能を阻害する抗がん剤として有効に用いられ得る。
【００１８】
（本発明のポリペプチドの配列）
本発明のポリペプチドの配列決定に関しては、ｉ）公知のタンパク質配列情報に基づき、対象とする機能を有するドメイン領域を推定した後、ii)その推定ドメイン領域のアミノ酸配列を基本パターンとするドメイン候補配列パターンを用意し、iii)各配列パターン毎にポリペプチド発現を行い、得られたドメインを形成するポリペプチドの構造安定性評価により、良好な結果を示すものを目的ドメインとし、この目的ドメインのアミノ酸配列により各ポリペプチドを定義する。即ち、本発明のポリペプチドは、全長タンパク質中のある一部分（目的とする機能を有する）を断片化してドメインを形成するポリペプチドとして発現させた時に、安定な構造を有するものを経験的に選別したものであり、ドメイン領域予測の段階では数100のオーダーで存在するドメイン候補が、種々の要因により絞り込まれて実際は10〜数10のオーダーまで厳選される。従って、このように選別されたポリペプチドを、立体構造解析に用いることにより、高精度で且つ信頼性に優れた構造解析を行うことが可能となる。
【００１９】
（ドメイン領域の推定）
全長タンパク質中のドメイン領域を推定する手法としては、バイオインフォーマティクスなどの情報科学的な手法や計算科学的な手法（特願2001‐309434号明細書参照）、deleted ＤＮＡライブラリーとＧＦＰの組み合わせ（特開2002-262873号公報参照）、プロテアーゼによる限定分解などの実験的な手法等、いずれも利用可能であり、特に限定されるものではなく、より精度の高い手法を用いることにより、ドメイン候補群から目的ドメインを選び出す作業効率が向上する。
【００２０】
（ドメイン候補配列パターンの作製）
上記ドメイン候補配列パターンは、上述のように推定されたドメイン領域を基準にしてドメイン境界の位置をＮ末端側又はＣ末端側に伸ばしたり縮めたりすることにより作製される。
【００２１】
例えば、推定ドメイン領域のＮ末端側のドメイン境界におけるアミノ酸残基の位置より、Ｎ末端側に数から数十残基分伸長させた、又はＣ末端側に数から数十残基分短縮したおよそ数十種類の境界を新たに設け、それらの境界をＮ末端とするドメイン候補配列パターンが用意される。同様に、推定ドメイン領域のＣ末端側のドメイン境界においても数種類のドメイン境界を選定し、各境界をＣ末端とするドメイン候補配列パターンが作製される。
【００２２】
（ドメイン境界の伸縮）
上記推定ドメイン領域のドメイン境界を伸縮させる方法としては、例えば上記ドメイン候補配列パターンに対応したｃＤＮＡを作成できるＰＣＲプライマーを個々に合成して、ＰＣＲにより作成する方法が挙げられ、特に特開2003-9880号公報に示される２段階ＰＣＲ法が好適である。
【００２３】
（ドメイン候補配列パターンからの目的ドメインの抽出）
このようなドメイン候補配列パターンから実際に安定な立体構造を有する目的ドメインを選び出すためには、まず上述のようにして作製されたドメイン候補配列パターンのｃＤＮＡを用いてそれぞれタンパク質合成を行う。
【００２４】
このドメイン候補配列パターンの発現系としては、特に限定されず、従来より公知の発現系がいずれも使用可能である。
【００２５】
次に、得られたポリペプチドが実際に安定な立体構造をとっているかどうかを判定し、立体構造を有することが確認できたものを本発明におけるポリペプチドとして採用する。
【００２６】
このポリペプチドの立体構造の安定性の指標としては、例えば合成されたドメインポリペプチドが可溶性ポリペプチドとしてＳＤＳゲル電気泳動等により検出され、かつ適当な分子量相当な均一なバンドとして検出されるかという生化学的指標や、Ｃ末端側に融合させたＧＦＰの蛍光強度、ＮＭＲスペクトル、ＣＤスペクトルなどの分光学的手法等が挙げられる。
【００２７】
従来のポリペプチドの配列決定の過程では、例えば[１]上記ポリペプチド合成で、目的とするドメインを形成するポリペプチドが発現しない、或いは[２]発現はしたものの、凝集を起こす、溶解度が低い等の問題があった。本発明者らは、このような問題点を克服し、本発明を完成させるに至った。
【００２８】
（安定な立体構造を有することの確認）
上記ＮＭＲスペクトルにおいてドメインを形成するポリペプチドのフォールディングの判定を以下に示す。
【００２９】
１Ｄスペクトルにおいて、ドメインを形成するポリペプチドがフォールドしていない場合はVal、Leu、Ileなどのメチル基プロトンに由来するシグナルが0.8ppm付近に観測される。しかしフォールドしている場合はメチル基プロトンの環境が変化し、シグナルが高磁場側（0.7ppmから−0.5ppm付近）にシフトする。
【００３０】
1Ｈ-15ＮＨＳＱＣにおける判定は、クロスピーク収束度合いとシグナル強度の均一性の評価を目視により行うことが挙げられる。すなわち、クロスピークが密集した場合は、立体構造を形成していない状態とし、逆に分散した場合は安定な立体構造を形成している状態として立体構造の安定性の評価を行う。
【００３１】
（本発明のポリヌクレオチド）
また、本発明は、上記本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。「ポリヌクレオチド」とは、一般に、ポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドの両方をいい、それらは修飾されていてもよい。例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡ、未プロセッシングＲＮＡ及びそれらの断片などが挙げられ、それらの長さは特に限定されない。「本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」とは、本発明のポリペプチドをコードし得る限り、遺伝暗号の縮退に基づく任意の塩基配列を選択することができ、このようなポリヌクレオチドとしては、二本鎖であっても一本鎖であってもよい。ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドも含まれる。一旦ポリヌクレオチドの塩基配列が確定すると、その後は化学合成によってこのポリヌクレオチドを得ることができる。これらのポリヌクレオチドは当業者において公知の種々の方法で化学合成される。または当該ポリヌクレオチドが由来する遺伝子の５’及び３’末端の塩基配列をプライマーとして、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡの全部又は一部を鋳型としたＰＣＲによって特定の遺伝子に由来するポリヌクレオチドを得ることができる。
【００３２】
（ベクター）
本発明の（組換え）ベクターは、適当なベクターに本発明の遺伝子を連結(挿入)することにより得ることができる。本発明の遺伝子を挿入するためのベクターは、宿主中で複製可能なものであれば特に限定されず、例えば、プラスミド ＤＮＡ、ファージ ＤＮＡ等が挙げられる。
【００３３】
プラスミド ＤＮＡとしては、大腸菌由来のプラスミド（例えばｐＲＳＥＴ、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＵＣ１１８、ｐＵＣ１１９、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９等）、枯草菌由来のプラスミド（例えばｐＵＢ１１０、ｐＴＰ５等）、酵母由来のプラスミド（例えばＹＥｐ１３、ＹＥｐ２４、ＹＣｐ５０等）などが挙げられ、ファージＤＮＡとしてはλファージ（Ｃｈａｒｏｎ４Ａ、Ｃｈａｒｏｎ２１Ａ、ＥＭＢＬ３、ＥＭＢＬ４、λｇｔ１０、λｇｔ１１、λＺＡＰ等）が挙げられる。さらに、レトロウイルス又はワクシニアウイルスなどの動物ウイルス、バキュロウイルスなどの昆虫ウイルスベクターを用いることもできる。
【００３４】
ベクターに本発明の遺伝子を挿入するには、まず、精製されたＤＮＡを適当な制限酵素で切断し、適当なベクター ＤＮＡの制限酵素部位又はマルチクローニングサイトに挿入してベクターに連結する方法などが採用される。
【００３５】
本発明の遺伝子は、その遺伝子の機能が発揮されるようにベクターに組み込まれることが必要である。そこで、本発明のベクターには、プロモーター、本発明の遺伝子のほか、所望によりエンハンサーなどのシスエレメント、スプライシングシグナル、ポリA付加シグナル、選択マーカー、リボソーム結合配列（SD配列）などを含有するものを連結することができる。なお、選択マーカーとしては、例えばジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子等が挙げられる。
【００３６】
（形質転換細胞）
本発明の形質転換細胞は、本発明のポリヌクレオチドを、目的遺伝子が発現し得るように宿主中に導入することにより得ることができる。簡便で効率が良いことから多くの場合、ベクターを用いて形質転換が行われる。ここで、宿主としては、本発明のＤＮＡを発現できるものであれば特に限定されるものではない。例えば、エッシェリヒア・コリ(Escherichia coli)等のエッシェリヒア属、バチルス・ズブチリス(Bacillus subtilis)等のバチルス属、シュードモナス・プチダ(Pseudomonas putida)等のシュードモナス属、リゾビウム・メリロティ(Rhizobium meliloti)等のリゾビウム属に属する細菌が挙げられる。また、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、シゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)等の酵母、さらにＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞等の動物細胞が挙げられる。あるいはＳｆ９、Ｓｆ２１等の昆虫細胞を用いることもできる。
【００３７】
大腸菌等の細菌を宿主とする場合は、本発明のポリヌクレオチドを導入した組換えベクターが該細菌中で自律複製可能であると同時に、プロモーター、リボゾーム結合配列、本発明の遺伝子、転写終結配列により構成されていることが好ましい。また、プロモーターを制御する遺伝子が含まれていてもよい。
【００３８】
大腸菌としては、例えばエッシェリヒア・コリ(Escherichia coli)K12、DH1などが挙げられ、枯草菌としては、例えばバチルス・ズブチリス(Bacillus subtilis)などが挙げられる。プロモーターとしては、大腸菌等の宿主中で発現できるものであればいずれを用いてもよい。例えばtrpプロモーター、lacプロモーター、PLプロモーター、PRプロモーターなどの、大腸菌やファージに由来するプロモーターが用いられる。tacプロモーターなどのように、人為的に設計改変されたプロモーターを用いてもよい。細菌への組換えベクターの導入方法としては、細菌にＤＮＡを導入する方法であれば特に限定されるものではない。例えばカルシウムイオンを用いる方法(Cohen, S.N. et al. (1972) Proc. Natl. Acad. Sci., USA 69, 2110-2114)、エレクトロポレーション法等が挙げられる。
【００３９】
酵母を宿主とする場合は、例えばサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、シゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)などが用いられる。この場合、プロモーターとしては酵母中で発現できるものであれば特に限定されず、例えばgal1プロモーター、gal10プロモーター、ヒートショックタンパク質プロモーター、MFα1プロモーター、PHO5プロモーター、PGKプロモーター、GAPプロモーター、ADHプロモーター、AOX1プロモーター等が挙げられる。酵母への組換えベクターの導入方法としては、酵母にＤＮＡを導入する方法であれば特に限定されず、例えばエレクトロポレーション法(Becker, D.M. et al. (1990) Methods. Enzymol., 194,182-187)、スフェロプラスト法(Hinnen, A. et al. (1978) Proc. Natl. Acad. Sci., USA 75, 1929-1933)、酢酸リチウム法(Itoh, H. (1983) J. Bacteriol. 153,163-168)等が挙げられる。
【００４０】
動物細胞を宿主とする場合は、サル細胞ＣＯＳ−７、Ｖｅｒｏ、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、マウスＬ細胞、ラットＧＨ３、ヒトＦＬ細胞などが用いられる。プロモーターとしてＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター等が用いられ、また、ヒトサイトメガロウイルスの初期遺伝子プロモーター等を用いてもよい。動物細胞への組換えベクターの導入方法としては、例えばエレクトロポレーション法、リン酸カルシウム法、リポフェクション法等が挙げられる。
【００４１】
昆虫細胞を宿主とする場合は、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞などが用いられる。昆虫細胞への組換えベクターの導入方法としては、例えばリン酸カルシウム法、リポフェクション法、エレクトロポレーション法などが用いられる。
【００４２】
（抗体）
本発明のタンパク質を抗原として用いて、その抗原に対する抗体を調製することができる。
[本発明のポリペプチドに対するポリクローナル抗体の作製]
前記の抗原を用いて動物を免疫する。抗原の動物１匹当たりの投与量は、ウサギの場合、例えばアジュバントを用いて100〜500μgである。アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント(FCA)、フロイント不完全アジュバント(FIA)、水酸化アルミニウムアジュバント等が挙げられる。
【００４３】
免疫は、哺乳動物（例えばラット、マウス、ウサギなどの非ヒト哺乳動物）に投与することにより行われる。投与部位は静脈内、皮下又は腹腔内である。また、免疫の間隔は特に限定されず、数日から数週間間隔、好ましくは２〜３週間間隔で、１〜10回、好ましくは２〜３回免疫を行う。そして、最終の免疫日から６〜60日後に抗体価を測定し、最大の抗体価を示した日に採血し、抗血清を得る。抗体価の測定は、酵素免疫測定法(ELISA；enzyme-linked immunosorbent assay)、放射性免疫測定法(RIA；radioimmuno assay)等により行うことができる。
【００４４】
抗血清から抗体の精製が必要とされる場合は、硫安塩析法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、アフィニティークロマトグラフィーなどの公知の方法を適宜選択して、又はこれらを組み合わせることにより精製することができる。
[タンパク質に対するモノクローナル抗体の作製]
上記抗原を用いて動物を免疫する。必要であれば、免疫を効果的に行うため、前記と同様アジュバント（市販のフロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント等）を混合してもよい。
【００４５】
免疫は、哺乳動物（例えばラット、マウス、ウサギなど）に投与することにより行われる。抗原の１回の投与量は、マウスの場合１匹当たり50μgである。投与部位は、主として静脈内、皮下、腹腔内である。また、免疫の間隔は特に限定されず、数日から数週間間隔、好ましくは２〜3週間間隔で、最低2〜3回行う。そして、最終免疫後、抗体産生細胞を採集する。抗体産生細胞としては、脾臓細胞、リンパ節細胞、末梢血細胞等が挙げられるが、脾臓細胞が好ましい。
【００４６】
[細胞融合]
ハイブリドーマを得るため、抗体産生細胞とミエローマ細胞との細胞融合を行う。抗体産生細胞と融合させるミエローマ細胞として、マウスなどの動物由来の細胞であって一般に入手可能な株化細胞を使用することができる。使用する細胞株として、薬剤選択性を有し、未融合の状態ではHAT選択培地 (ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む) で生存できず、抗体産生細胞と融合した状態でのみ生存できる性質を有するものが好ましい。例えば、ミエローマ細胞の具体例としてはＰ３Ｘ６３−Ａｇ．８．Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）、Ｐ３／ＮＳＩ／１−Ａｇ４−１、Ｓｐ２／０−Ａｇ１４などのマウスミエローマ細胞株が挙げられる。次に、上記ミエローマ細胞と抗体産生細胞とを細胞融合させる。細胞融合は、血清を含まないＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ−１６４０培地などの動物細胞培養用培地中に、抗体産生細胞とミエローマ細胞とを１５：１〜２５：１の割合で混合し、ポリエチレングリコール等の細胞融合促進剤存在のもとで、あるいは電気パルス処理(例えばエレクトロポレーション)により融合反応を行う。
【００４７】
[ハイブリドーマの選別及びクローニング]
細胞融合処理後の細胞から目的とするハイブリドーマを選別する。例えば、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む培地を用いて培養し、生育する細胞をハイブリドーマとして得ることができる。次に、増殖したハイブリドーマの培養上清中に、目的とする抗体が存在するか否かをスクリーニングする。ハイブリドーマのスクリーニングは、通常の方法に従えばよく、特に限定されるものではない。例えば、ハイブリドーマとして生育したウェルに含まれる培養上清の一部を採集し、酵素免疫測定法 (ELISA; enzyme-linked immunosorbent assay)、RIA (radioimmuno assay)等によってスクリーニングすることができる。融合細胞のクローニングは、限界希釈法等により行い、最終的に単クローン抗体産生細胞であるハイブリドーマを樹立する。
【００４８】
[モノクローナル抗体の採取]
樹立したハイブリドーマからモノクローナル抗体を採取する方法として、通常の細胞培養法等を採用することができる。細胞培養法においては、ハイブリドーマを１０％牛胎児血清含有  ＲＰＭＩ−１６４０培地又はＭＥＭ  培地等の動物細胞培養培地中、通常の培養条件  （例えば３７℃、５％  ＣＯ２濃度）  で３〜１０日間培養し、その培養上清から抗体を取得する。上記抗体の採取方法において、抗体の精製が必要とされる場合は、硫安分画法、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ゲルクロマトグラフィーなどの公知の方法を適宜に選択して、又はこれらの方法を組み合わせることにより精製することができる。
【００４９】
（本発明のポリペプチドの製造）
本発明のポリペプチドは、例えば、形質転換体を培養し、その培養物から採取することにより得ることができる。「培養物」とは、培養上清のほか、培養細胞若しくは培養菌体又は細胞若しくは菌体の破砕物のいずれをも意味するものである。「本発明の形質転換体を培養する方法」は、宿主の培養に適用される通常の方法に従って行われる。
【００５０】
大腸菌や酵母菌等の微生物を宿主として得られた形質転換体を培養する培地としては、微生物が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等を含有し、形質転換体の培養を効率的に行うことができる培地であれば、天然培地、合成培地のいずれを用いてもよい。炭素源としては、グルコース、フラクトース、スクロース、デンプン等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の有機酸、エタノール、プロパノール等のアルコール類が用いられる。窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機酸若しくは有機酸のアンモニウム塩又はその他の含窒素化合物のほか、ペプトン、肉エキス、コーンスティープリカー等が用いられる。無機物としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等が用いられる。
【００５１】
培養は、好ましくは、振盪培養又は通気攪拌培養などの好気的条件下、37℃で６〜24時間行う。培養期間中、ｐＨは７．０〜７．５に保持する。ｐＨの調整は、好ましくは無機又は有機酸、アルカリ溶液等を用いて行う。培養中は必要に応じてアンピシリンやテトラサイクリン等の抗生物質を培地に添加してもよい。
【００５２】
プロモーターとして誘導性のプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養する場合は、必要に応じてインデューサーを培地に添加してもよい。例えば、Ｌａｃプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときにはイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）等を、ｔｒｐプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときにはインドールアクリル酸（ＩＡＡ）等を培地に添加してもよい。
【００５３】
動物細胞を宿主として得られた形質転換体を培養する培地としては、一般に使用されているＲＰＭＩ１６４０培地、ＤＭＥＭ培地又はこれらの培地に牛胎児血清等を添加した培地等が用いられる。培養は、通常、５％ＣＯ２存在下、３７℃で１〜３０日行う。培養中は必要に応じてカナマイシン、ペニシリン等の抗生物質を培地に添加してもよい。
【００５４】
培養後、ポリペプチドが菌体内又は細胞内に生産される場合には、菌体又は細胞を破砕することによりポリペプチドを抽出する。また、本発明のポリペプチドが菌体外又は細胞外に生産される場合には、培養液をそのまま使用するか、遠心分離等により菌体又は細胞を除去する。その後、ポリペプチドの単離精製に用いられる一般的な生化学的方法、例えば硫酸アンモニウム沈殿、ゲルクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等を単独で又は適宜組み合わせて用いることにより、前記培養物中から本発明のタンパク質を単離精製することができる。この精製工程の間又は後において、プロテアーゼ処理により精製のために用いられたタグ配列を除去することができる。
【００５５】
（無細胞タンパク質合成系を用いる本発明のポリペプチドの製造方法）
好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドは無細胞タンパク質合成系を用いて製造することができる。無細胞タンパク質合成系は、細胞抽出液を用いて試験管内でタンパク質を合成する系である。「無細胞タンパク質合成系」は、ｍＲＮＡの情報を読み取ってリボソーム上でタンパク質を合成する無細胞翻訳系、及びＤＮＡを鋳型としてＲＮＡを合成する無細胞転写系と無細胞翻訳系の両者を含む。無細胞タンパク質合成系は、系を容易に改変することができるため、目的のタンパク質に適した発現系を構築しやすいという利点がある。なお、無細胞タンパク質合成系の詳細については、特許公開2000-175695号などに記載されている。
【００５６】
[細胞抽出液]
粗細胞抽出液は、細菌（例えば大腸菌等）、菌類（例えば出芽酵母等）、小麦胚芽、ウサギ網赤血球、マウスL−細胞、エールリッヒ腹水癌細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＨＯ細胞等の、高いタンパク質合成活性の状態の真核および原核生物細胞からの抽出液であってもよい（Clemens,M.J.,Transcriptionandtranslation-apracticalapproach,(1984),pp.231-270,Henes,B.D.とHiggins,S.J.編,IRLPress,Oxford)。
【００５７】
粗細胞抽出液はリボソーム、ｔＲＮＡなどのタンパク質合成に必要な成分を含むことが好ましい。粗抽出液の調製は、例えばPratt,J.M.ら,Transcription and translation-apractical approach,(1984),pp.179-209,Henes,B.D.とHiggins,S.J.編,IRLPress,Oxfordに記載の方法を使用できる。具体的には、フレンチプレッスによる破砕（Prattら、上掲）やグラスビーズを用いた破砕によって行うことができる。好ましい細胞抽出液は大腸菌Ｓ３０細胞抽出液である。Ｓ３０細胞抽出液は、大腸菌ＢＬ２１Ｃｏｄｏｎ  Ｐｌｕｓ株から既知の方法、例えばＰｒａｔｔら（上掲）の方法に従って調製できるし、あるいはＰｒｏｍｅｇａ社やＮｏｖａｇｅｎ社から市販されるものを使用してもよい。細胞抽出液としては、主に大腸菌、小麦胚、ウサギ網赤血球由来のものが使用される。
【００５８】
[透析装置]
透析膜を介して内液と外液とを隔離して含む振とうもしくは攪拌可能な透析装置を用いることができる。小スケール反応用装置としては、例えばDispo Dialyzer(登録商標)(Spectrum社製)やSlidealyzer(登録商標)(Pierce社製)が挙げられる。また、大スケール反応用装置としては、Spectra/Por(登録商標)透析用チューブ(Spectrum社製)を例示できる。
【００５９】
[透析内液]
無細胞タンパク質合成系における透析内液（すなわち、タンパク質合成反応液）には、大腸菌Ｓ３０等の濃縮細胞抽出液の他に、目的のタンパク質をコードするＤＮＡもしくはＲＮＡ（ｍＲＮＡ等）、ＡＴＰ（アデノシン５'−三リン酸）、ＧＴＰ（グアノシン５'−三リン酸）、ＣＴＰ（シチジン５'−三リン酸）、ＵＴＰ（ウリジン５'−三リン酸）、緩衝液、塩類、アミノ酸、ＲＮアーゼ阻害剤、抗菌剤、必要によりＲＮＡポリメラーゼ（ＤＮＡを鋳型として用いる場合）およびｔＲＮＡ、などを含んでもよい。
その他、ＡＴＰ再生系としてホスホエノールピルベートとピルビン酸キナーゼの組合わせまたはクレアチンホスフェートとクレアチンキナーゼの組合わせ、ポリエチレングリコール（例えば＃８０００）、３'，５'−ｃＡＭＰ、葉酸類、ＲＮアーゼ阻害剤、還元剤（例えばジチオトレイトール）、などを含むことができる。一方、透析外液（すなわち、タンパク質合成基質溶液）は、透析内液組成から細胞抽出液、ＲＮアーゼ阻害剤、ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ＲＮＡポリメラーゼを除いたものが使用できる。例えば、緩衝液、ＡＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、塩類、アミノ酸、抗菌剤などを含むことができる。添加成分の濃度は任意に選択することができる。
【００６０】
[緩衝液]
緩衝液としては、例えばＨｅｐｅｓ−ＫＯＨ、Ｔｒｉｓ−ＯＡｃのような緩衝剤を使用できる。塩類の例は、酢酸塩（例えばアンモニウム塩、マグネシウム塩など）、グルタミン酸塩などであり、抗菌剤の例はアジ化ナトリウム、アンピシリンなどである。アミノ酸はタンパク質を構成する２０種のアミノ酸である。また、ＤＮＡを鋳型として用いる場合にはＲＮＡポリメラーゼを反応系に添加するが、例えばＴ７ＲＮＡポリメラーゼなどの市販の酵素を使用できる。
【００６１】
透析膜の内部に上記透析内液を、一方その外部に透析外液を入れた、膜の分子量限界に応じて物質が膜を介して移動可能とする閉鎖系を振とうまたは攪拌（回転攪拌など）し、生成した目的タンパク質を、透析内液または外液から回収することができる。温度および攪拌速度などの反応条件は、タンパク質の種類に応じて任意の条件を使用できる。タンパク質の合成の場合、温度は通常約２５〜約５０℃、好ましくは３７℃であるが、高度好熱菌由来の菌体抽出液を用いる無細胞タンパク質合成系では５０℃を超える温度でもよい。
【００６２】
また、振とう速度もしくは攪拌速度は低速、例えば１００〜２００ｒｐｍを使用できる。目的のタンパク質の生成を監視しながら、反応時間を適当に選択することができる。
上記無細胞タンパク質合成系の透析外液を、反応速度が低下した時点で新鮮なものと交換することが好ましい。また、透析膜の分子量限界が１００００ダルトンを超えるもの、好ましくは約５００００ダルトンおよびそれ以上のものを使用する場合には、タンパク質の生産量をさらに高めることができる。
【００６３】
[ポリペプチドの精製]
生成ポリペプチドの精製は、生細胞からの分離と比べて混在する汚染物質の量および種類が格段に少ないため、比較的容易に行うことができる。精製法は、タンパク質の性質に応じて従来公知のものを単独にまたは適宜組合わせて使用できる。例えば硫酸アンモニウムもしくはアセトン沈殿、酸抽出、アニオンもしくはカチオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、電気泳動、クロマトフォーカシングなどの慣用の技術を挙げることができる。この精製工程の間又は後においてプロテアーゼ処理により、精製のために用いられたタグ配列を除去することができる。生成タンパク質の同定および定量は、活性測定、免疫学的測定、分光学的測定、アミノ酸分析などによって、必要に応じて標準サンプルと比較しながら行うことができる。
【００６４】
（立体構造解析）
ポリペプチドの立体構造は、ＮＭＲによる構造解析、Ｘ線構造解析などによって解析することができる。
【００６５】
（ＮＭＲ）
ＮＭＲに用いる試料としては、特に限定されるわけではないが、好ましくは、ポリペプチド中の１２Ｃ、または１４Ｎを１３Ｃ、１５Ｎ核で安定同位体標識した試料を用いる（多核多次元ＮＭＲ測定）。タンパク質を安定同位体標識する技術は慣用技術であり、例えば、Clore,G.M.& Gronenborn,A.M.,Science,252,p.1390-1399,1991等の文献に記載されている。特に、主鎖１５Ｎ均一安定同位体標識したタンパク質試料を用いた解析が容易であり好ましい。また、タンパク質の主鎖の骨格を、１３Ｃ、１５Ｎ及び２Ｈのうち少なくとも２種類以上の同位体標識したものを使用してもよい（特表2001-514239）。
【００６６】
好ましくは、ＩＰＡＰ−ＨＳＱＣスペクトルの観測等による１５Ｎ−１Ｈスピン結合定数の測定を行う。「ＩＰＡＰ−ＨＳＱＣスペクトル」とは、準位相、反位相の２つのＨＳＱＣスペクトルを同時に観測し、両者のスペクトルの足しあわせをすることにより、シグナルのオーバーラップを防いで、効果的に１５Ｎ−１Ｈスピン結合定数を読みとるための測定法である。
【００６７】
２種類以上のＮＭＲ法により化学シフト帰属が行われる。例えば、２次元ＮＭＲとしては２Ｄ、ＤＯＱ−ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ、ＮＯＥＳＹ、ＨＳＱＣ等、多次元ＮＭＲとしては、ＨＮＣＯ、ＨＣＡＣＯ、ＨＮＣＡ、ＨＣＡ（ＣＯ）Ｎ、ＨＮ（ＣＯ）ＣＡ、ＨＮＨＢ、ＣＢＣＡＮＨ、Ｈ（ＣＡ）ＮＨ、ＨＢＨＡ（ＣＯ）ＮＨ、ＨＣＣＨ−ＣＯＳＹ、ＨＣＡＮＨ、ＨＣＣＨ−ＴＯＣＳＹ、ＨＣＡＣＯＮ、１５Ｎ−ＮＯＥＳＹ−ＨＳＱＣ、１３Ｃ−ＮＯＥＳＹ−ＨＳＱＣ等が公知技術として知られている。ＮＭＲの一般的手法は周知であり、例えば、「タンパク質のＮＭＲ」（共立出版、１９９６、荒田洋治）；「日本生化学会編  基礎生化学実験法  第３巻  タンパク質Ｉ．検出・構造解析法」第１８章ＮＭＲによる立体構造解析（東京化学同人、２００１年２月）；伊藤隆ら、日本農薬学会誌２１，p.450-459、1996;田中俊之、化学と工業 第49巻 第2号 p.155-158、1996等に詳述されている。
【００６８】
立体構造解析にＮＭＲを用いる場合、ポリペプチドの各プロトン間の核オーバーハウザー効果の大きさから各プロトン間の距離を見積もり、その距離情報に基づき立体構造を決定する方法が一般的である。化学シフト値、スカラーカップリング値、残余双極子カップリング値、水素結合等の情報を加えて立体構造を精密化することも可能である。
ＮＭＲデータから構造解析を行うための多くのプログラムが周知である。好ましくは、化学シフト帰属のためのものとして、ＮＭＲ  Ｐｉｐｅ、ＰIＰＰ、Ｃａｐｐ、Ｆｅｌｉｘ、ＮＭＲ  Ｖｉｅｗ、ＸＥＡＳＹ、立体構造計算ソフトとしてＸ−ＰＬＯＲ、ＣＮＳ、ＤＹＡＮＡ、ＤＹＮＡＭＯ等を用いて構造解析を行う。
【００６９】
（Ｘ線結晶構造解析）
立体構造解析にＸ線結晶構造解析を用いる場合、結晶化させたタンパク質のX線回折像に基づき電子密度図を計算し、立体構造を決定する。すなわち、タンパク質を結晶化し、その結晶に単色化されたＸ線をあて、得られたＸ線の回折像をもとに、該蛋白質の３次元構造を明らかにしていくものである（Blundell,T.L.及びJohnson,L.N., PROTEIN CRYSTALLOGRAPHY,1-565頁，(1976) Academic Press, New York）。
【００７０】
（ホモロジーモデリングによる立体構造予測）
一般的にタンパク質の立体構造は、一次構造（アミノ酸配列）より進化的に保存されやすいと考えられている。２つのタンパク質のアミノ酸配列の相同性が３０％以上であれば、それらの立体構造も類似している可能性が高い。従って、本発明のポリペプチドの立体構造情報を用いて、アミノ酸配列の類似するポリペプチドの立体構造を予測することができる。「ホモロジー（相同性）」とは、２つのポリペプチド部分間における類似性のパーセントを意味する。パーセント配列同一性は、配列を整列させ、当該整列させた２つの配列間でマッチングしている正確な数を数え、より短いほうの配列の長さで割り、その結果を１００倍することにより、２つの分子間の配列情報を直接比較して決定することができる。このような分析を支援するためのコンピュータプログラムは容易に入手可能であり、例えば、ＡＬＩＧＮ(Dayhoff, M.O. et al)、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ等が挙げられる。例えば、ヒトＢＡＧ３、及びＢＡＧ５ドメイン等の構造未知のポリペプチドと本発明のポリペプチドのアミノ酸配列をアライメントし、本発明のポリペプチドをテンプレート構造として構造未知のポリペプチドの全原子をモデリングする。主鎖原子の座標はできるだけテンプレート構造を使い、挿入された配列の主鎖構造は新たに作成する。続いて側鎖原子の分子モデリングを行うことによって構造未知のポリペプチドの立体構造を推測することができる。
【００７１】
（立体構造情報に基づくスクリーニング方法）
次に、本発明は、本発明のポリペプチドの立体構造に関する情報を用いて、前記ポリペプチドのリガンドとの結合部位を決定する工程と、当該結合部位と相互作用する化合物をコンピュータ上で探索する工程とを含む、ＢＡＧ５ドメインポリペプチドと相互作用する化合物のスクリーニング方法をも提供する。
【００７２】
本発明のポリペプチドのリガンドとしては、いわゆる分子シャペロンとしてタンパク質のフォールディング反応に関与するＨｓｐ７０ファミリーが挙げられる。哺乳類の細胞質に構成的に存在するＨｓｐ７０ファミリーはＨｓｃ７０(heat shock cognate protein 70、熱ショック関連タンパク質７０)（Ｈｓｃ７３）である。これに対して、一部の組織や器官、培養細胞等では誘導型のＨｓｐ７０（Ｈｓｐ７２）も存在している。細胞内の各コンパートメント（細胞質、小胞体、ミトコンドリア）にそれぞれメンバーが存在する。これらの各メンバーのことをホモログ（相同体）と称する場合がある。Ｈｓｐ７０ファミリーは、不安定なタンパク質の疎水性領域に結合してシールドし、互いに凝集しないようにする役割をもつ。Ｈｓｐ７０ファミリーにはＡＴＰａｓｅ活性があり、Ｈｓｐ４０等のコシャペロン依存的に標的タンパク質との結合、解離を繰り返しながら、その本来あるべき立体構造形成を促進する。タンパク質の折れたたみ、オルガネラへのタンパク質輸送、複合体の会合、解離、変性タンパク質の修復、分解等の局面に関与している。また、Ｒａｆ１やＢｃｌ２等と相互作用して細胞増殖やアポトーシス等のシグナル伝達系を調節している。
【００７３】
（インシリコ スクリーニング）
分子の３次元構造に基づく薬物設計、いわゆる分子シミュレーションについては、医薬品の開発・第７巻「分子設計」（廣川書店）をはじめとして数多くの総説がある。具体的には、第一に、ターゲットとなるタンパク質又はポリペプチドのリガンド結合部位を発見する。リガンドの形状は、一般にタンパク質のリガンド結合部位の形状と立体構造的に相補的である傾向があるから、リガンドが結合するような幾何学的に特徴（溝、凹部）のある部位を探索することが、リガンド結合部位の候補発見として有効である。あるいは、リガンドとの複合体として構造が決定された類似のタンパク質との相同性から推測することができる。タンパク質の立体構造を比較するプログラムは種々のものが公知である（例えば、FSSP,http://www2.ebi.ac.uk/dali/fssp/、  DALI,http://www2.ebi. ac.uk/dali/  、MATRAS, http://spock.genes.nig.ac.jp/~takawaba/Matras.html等）。
【００７４】
次に、GOLD、FlexX等のフレキシブルリガンドドッキングシミュレーションソフトウエアを用いて、Oracle等のリレーショナルデータベースに格納された低分子（分子量500以下）化合物のライブラリー（たとえば約1000000種）をコンピュータでスクリーニングする。このライブラリー内の化学物質はCORINA等のプログラムで３次元構造を作成し、結合部位にはめ込める物質を選択することができる。選ばれた物質の中からSybylやMOE等の分子シミュレーションプログラムを用いて目視により更に詳細に結合状態を解析し化合物を絞り込む。一連の過程で利用されるコンピュータソフトウエアは、以下のようなものである（GOLD: Cambridge Crystallographic Data Centre;  FlexX: Tripos Inc.;  CORINA: Molecular Networks GmbH;  Oracle: Oracle Corp.;  Sybyl: Tripos Inc.;  MOE: Chemical Computing Group Inc.）。
【００７５】
他の方法は、未知の物質を含めた候補化合物のコンピュータによる設計である。この方法には、メチル、エチル等の化学基をリガンド結合部位に並べて適合するものを探す方法と、原子をリガンド結合部位にコンピュータプログラムを用いて並べていく方法とが知られている。
【００７６】
（ウエットスクリーニング）
本発明のポリペプチドと相互作用する候補化合物の有力候補を選択するために、インシリコスクリーニングにより得られた候補化合物と本発明のポリペプチドと接触させ、本発明のポリペプチドの分子機能又は生理活性を測定する。候補化合物と本発明のポリペプチドの立体構造データをもとに候補化合物を修飾し、より望ましい構造とする。
【００７７】
絞り込まれた化合物を合成し、実際に前記ポリペプチドと作用させ、スクリーニングする。前記ポリペプチドの活性を変化させた化合物を、更に動物実験によってインビボでの活性や、体内動態、あるいは毒性等に関する試験を行う。
【００７８】
（インビトロ  スクリーニング方法）
インビトロでのスクリーニング方法としては、本発明のポリペプチドまたはその塩と候補物質とを接触させる工程と、前記ポリペプチドと候補物質とが相互作用をするかどうかを確認する工程とを含む前記タンパク質と相互作用を有する化合物のスクリーニング方法が挙げられる。ここで、「相互作用を有する」とは、化合物とポリペプチドが結合して、そのポリペプチドの分子機能及び／又は生理活性を抑制または増強すること、などをいう。このスクリーニング方法においては、そのポリペプチドと候補物質を接触させて、そのポリペプチドの分子機能または生理活性が変化するか否かを測定する。
【００７９】
例えば、具体的な方法として、ＮＭＲを用いた相互作用物質探索、ビーズ等に固定したリガンドへの結合を遠心や溶出等によって調べるプルダウン解析やアフィニティークロマトグラフィー、さらに表面プラズモン共鳴（SPR: Surface Plasmon Resonance）を用いてリアルタイムに相互作用を解析する方法等がある。
【００８０】
相互作用物質探索にＮＭＲを用いる場合、候補物質の添加前後でのタンパク質のシグナル変化の有無により、相互作用の有無を判定することができる。すなわち、相互作用候補物質がタンパク質と相互作用する場合には、タンパク質の相互作用部位近傍に由来するＮＭＲシグナルの化学シフト値、線幅、個数等に変化が起きることが期待されるので、その変化を検出することで相互作用の有無を判定できる。特に15Nで標識したタンパク質は調製が比較的容易であり、そこから得られる１５Ｎ−ＨＳＱＣスペクトルは、分解能や感度が比較的高く、添加した相互作用候補物質由来のＮＭＲシグナルの影響を受けにくいため、その有用性は高い。
【００８１】
BIACORE（登録商標）はＳＰＲを測定原理として用い、生体分子間の相互作用を標識なしでリアルタイムにモニターすることができる装置である。BIACOREを用いて本発明のＢＡＧ５ドメインと相互作用する分子をスクリーニングするためには、対象となる生体分子の一方をセンサーチップと呼ばれる表面に固定化し、これに作用する分子を含む試料をマイクロ流路系を介して一定の流速で送液する。２分子間の結合、解離に伴うセンサーチップ表面での微量な質量変化をＳＰＲシグナルとして検出し、このシグナルの経時変化をセンサーグラムと呼ぶグラフとして表示する。さらに、生体分子間の相互作用に関して、平衡状態における２分子間の親和性（解離定数Ｋｄあるいは親和定数Ｋａ）だけでなく、結合、解離反応の速さに関する情報、即ち結合速度定数ka、及び解離速度定数kdを得ることができるという特徴をもっている。ＢＡＧ５ドメインはＨｓｃ７０と相互作用することから、本発明のＢＡＧ５ドメイン及びＨｓｃ７０タンパク質の何れか一方をセンサーチップに固定化することによりこれらの相互作用を解析することができる。まず、センサーチップ上で本発明のＢＡＧ５ドメインとＨｓｃ７０を結合させ、ランニングバッファーのみに切り替えたのち、種々の候補化合物を添加してこれらがＢＡＧ５ドメインとＨｓｃ７０の解離を促進するか否かを観察することにより、ＢＡＧ５ドメインとＨｓｃ７０と相互作用を阻害する化合物をスクリーニングすることができる。
【００８２】
（相互作用する物質を含む医薬）
本発明のポリペプチドと相互作用を有する物質は、そのポリペプチドが関与する疾患の予防及び／又は治療剤として用いることができる。そのような医薬は、経口又は非経口的に全身又は局所投与することができる。
【００８３】
本発明の医薬を経口投与する場合は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸剤、トローチ剤、内用水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤等のいずれのものであってもよく、使用する際に再溶解させる乾燥生成物にしてもよい。また、本発明の医薬を非経口投与する場合は、静脈内注射（点滴を含む）、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、坐剤などの製剤形態を選択することができ、注射用製剤の場合は単位投与量アンプル又は多投与量容器の状態で提供される。
【００８４】
これらの各種製剤は、製剤上通常用いられる賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、潤滑剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤、等張化剤等などを適宜選択し、常法により製造することができる。
【００８５】
上記各種製剤は、医薬的に許容される担体又は添加物を共に含むものであってもよい。このような担体及び添加物の例として、水、医薬的に許容される有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトースなどが挙げられる。使用される添加物は、本発明の剤型に応じて上記の中から適宜又は組み合わせて選択される。
【００８６】
本発明の医薬の投与量は、投与対象の年齢、投与経路、投与回数により異なり、広範囲に変えることができる。この場合、本発明のポリペプチドの有効量と適切な希釈剤及び薬理学的に使用し得る担体との組合せとして投与される有効量は、一回につき体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇ〜１０００  ｍｇの範囲の投与量を選ぶことができ、好ましくは１日１回から数回に分けて１日以上投与される。
【００８７】
（配列の説明）
本明細書の配列番号は、以下の配列を示す。
[配列番号１]
ＢＡＧ５ドメインポリペプチド（マウスＢＡＧ５タンパク質の７〜８６）をコードするＤＮＡ配列を示す。
[配列番号２]
ＢＡＧ５ドメインポリペプチド（マウスＢＡＧ５タンパク質の７〜８６）のアミノ酸配列を示す。
[配列番号３]
ＢＡＧ５ドメインポリペプチド（マウスＢＡＧ５タンパク質の１〜８６）をコードするＤＮＡ配列を示す。
［配列番号４］
ＢＡＧ５ドメインポリペプチド（マウスＢＡＧ５タンパク質の１〜８６）のアミノ酸配列を示す。
［配列番号５］
ＢＡＧ５ドメインポリペプチド（配列番号４に示されるアミノ酸配列のＮ末端とＣ末端にそれぞれアミノ酸残基ＧＳＳＧＳＳＧ、及びＳＧＰＳＳＧが付加されたポリペプチド）をコードするＤＮＡ配列を示す。
［配列番号６］
ＢＡＧ５ドメインポリペプチド（配列番号４に示されるアミノ酸配列のＮ末端とＣ末端にそれぞれアミノ酸残基ＧＳＳＧＳＳＧ、及びＳＧＰＳＳＧが付加されたポリペプチド）のアミノ酸配列を示す。
［配列番号７］
マウスＢＡＧ５タンパク質全長をコードするｃＤＮＡの塩基配列を示す。
［配列番号８］
マウスＢＡＧ５タンパク質全長のアミノ酸配列を示す。
［配列番号９］
実施例３の第１次ＰＣＲで使用するプライマーの塩基配列を示す。
［配列番号１０］
実施例３の第１次ＰＣＲで使用するプライマーの塩基配列を示す。
［配列番号１１］
実施例３の第２次ＰＣＲで使用するプライマーの塩基配列を示す。
［配列番号１２］
実施例３の第２次ＰＣＲで使用するプライマーの塩基配列を示す。
［配列番号１３］
実施例３の第２次ＰＣＲで使用するプライマーの塩基配列を示す。
【実施例】
【００８８】
以下に実施例を示して、本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００８９】
［実験例１］Bioinformaticsによるドメイン推定と評価
（１）ドメイン領域の推定
ドメイン領域の推定は以下の手順で行った。
まず、１）＜ＳＣＯＰ法＞問い合わせ配列が、タンパク質データベースＳＣＯＰ（Version1.55）に含まれる配列と相同性がある領域が検出された場合、その領域をドメインとして予測した。相同性検出手法はＢＬＡＳＴＰを利用し、E-valueが０．１以下のヒットがあった場合に相同性があったと判断した。
２）＜ＰＦＡＭ法＞問い合わせ配列が、タンパク質モチーフデータベースＰＦＡＭ（version7.1）に含まれる配列プロファイルと相同性がある領域が検出された場合、その領域をドメインとして予測した。相同性検出手法はＨＭＭＥＲを利用し、E-valueが０．１以下のヒットがあった場合に相同性があったと判断した。
３）＜ＰｒｏＤｏｍ法＞問い合わせ配列が、タンパク質モチーフデータベースＰｒｏＤｏｍ（2001年3月にWebより取得したバージョン）に含まれるコンセンサス配列のいずれかに対して相同性がある領域が検出された場合、その領域をドメインとして予測した。相同性検出手法はＢＬＡＳＴＰを利用し、E-valueが０．１以下のヒットがあった場合に相同性があったと判断した。
４）＜ＮＲ法＞問い合わせ配列を、タンパク質配列データセット（NCBI-nr）に対してＢＬＡＳＴＰによる相同性検索を行い、E-valueが０．１以下のヒットがあった場合、その相同性領域をグループとしてまとめ、ドメインとして予測した。
５）＜ＰＡＳＳ法＞問い合わせ配列を、タンパク質配列データセット（NCBI-nr）に対してＢＬＡＳＴＰによる相同性検索を行い、相同性が検出された頻度を計算した。頻度の高い部分を山、低い部分を谷として表示し、谷となっている部分でドメイン境界となるように、一つの山をドメインとして予測した。
６）＜Ｎｏ  Ｈｉｔ法＞以上１）から５）までの方法のいずれを用いてもドメインとして検出されなかった領域（残余領域）をドメインとして予測した。
７）＜差分ドメイン境界設定法＞上記６つのドメイン予測について、ヒット領域が重なっている場合の優先順位は１）を最優先として、以下２），３），４），５），６）の順序とし、ヒット領域が重なっているものの、ドメイン境界のずれが３０残基以上あり、かつ低い優先度での定義のほうがＮ末側あるいはＣ末側により長く存在している場合は、その差分の配列を別途ドメインとして予測した。
【００９０】
そして以上のいずれかの方法で推定されたドメイン領域のうち、Low-Complexity領域（複雑性の低い配列領域）を１箇所以上有するものや、全長３０残基に未満のものは、除外した。
【００９１】
配列番号８に示したマウスＢＡＧ５タンパク質の全長アミノ酸配列について、９−８６をＰＦＡＭ法によりドメインと推定した。Low-Complexity領域（複雑性の低い配列領域）をもたず、全長も３０残基以上であるため、最終的に本領域をBioinformaticsによるドメイン推定の結果とした。
【００９２】
（２）  推定ドメインの発現
上記Bioinformaticsにより推定されたマウスＢＡＧ５タンパク質ドメイン（ここで、推定ドメインと称する。）について、後述の無細胞タンパク質合成系を用い、タンパク質合成反応を行った。その後、得られた試料について定法に従ってＳＤＳゲル電気泳動を行い、タンパク質の発現状態を調べたところ、推定ドメインのアミノ酸配列情報からは、何れも目的とするタンパク質の発現を行うことができなかった。
【００９３】
［実施例２］コンストラクトの製造
そこで、上記推定ドメインのアミノ酸配列を基準にして、マウスＢＡＧ５タンパク質のアミノ酸配列に対し、該推定ドメインのドメイン境界の位置をＮ末端およびＣ末端においてそれぞれ数残基ずつ伸ばしたり縮めたりしたコンストラクトを系統的に作成した。
【００９４】
即ち、以下の表１に示したようにＢＡＧ５タンパク質の９番目のアミノ酸残基を基準としてＮ末端まで伸長させ、またＢＡＧ５タンパク質の８６番目のアミノ酸残基を基準として、Ｃ末端側に１０、２０又は３０残基伸長させたパターンとを用意した。これらのコンストラクトを後述の実施例と同様の方法に従ってＰＣＲにより鋳型ＤＮＡを増幅し、無細胞タンパク質合成系にてそれぞれのタンパク質合成を試みた。その結果、表１に示したように、ＢＡＧ５タンパク質ではアミノ酸残基１〜８６及び１〜１１６のコンストラクトのみ発現が認められた。実施例１で推定されたコンストラクトは発現しなかったことが分かる。発現が認められたタンパク質を用いて１次元ＮＭＲと１Ｈ−１５Ｎ  ＨＳＱＣスペクトル測定により構造安定性を評価したところ、いずれのタンパク質も１次元ＮＭＲスペクトルのメチル領域の高磁場側（０．７ｐｐｍ〜０．５ｐｐｍ付近）に高磁場シフトしたシグナルが認められ、また１Ｈ−１５Ｎ  ＨＳＱＣスペクトルには７ｐｐｍ〜９ｐｐｍにわたって分離したアミドプロトンのシグナルが認められた。これらの結果より安定した構造をとることが分かった。
【００９５】
【表１】
2005229876.tif 000002
【００９６】
[実施例３]
本実施例では、上述のようにして作成したコンストラクトのうち、立体構造解析に用いて好適なＢＡＧ５ドメインを有するポリペプチド（１〜８６）：（配列番号４）について検討した結果を説明する。
（１）発現ベクターの構築
[１]  第１次ＰＣＲ
マウスＢＡＧ５タンパク質をコードするｃＤＮＡ（FANTOM2 Clone ID: 4930405J06）がプラスミドpBluescriptII SK+にクローン化されたプラスミドを含む組換え大腸菌培養液を用いて、BAG5 domain FWプライマー：5'-CCAGCGGCTCCTCGGGAATGGATATGGGAAACCAAC-3'（配列番号９）、BAG5 domain RVプライマー:5'-CCTGACGAGGGCCCCGAGGCATTCTGCTCCAACT-3'（配列番号１０）を用いてＰＣＲを行った。ＰＣＲ反応液組成は、表２に示す通りとし、プログラムは、通常のＰＣＲのプロトコルに従った。
【００９７】
【表２】
2005229876.tif 000003
【００９８】
[２]  第２次ＰＣＲ
次に、上記反応によって得られた第１次ＰＣＲ産物と、Ｔ７プロモーター配列の下流にＨｉｓタグ配列を有するT7P-DM5-KH6プライマー：5'-GCTCTTGTCATTGTGCTTCGCATGATTACG AATTCAGATCTCGATCCCGCGAAATTAATACGACTCACTATAGGGAGACCACAACGGTTTCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAAAGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACGATTACGATATCCCAACGACCGAAAACCTGTATTTTCAGGGATCCAGCGGCTCCTCGGG-3'(配列番号１１)とＴ７ターミネーター配列を有するT7T-DM3-Termプライマー：5'-CGGGGCCCTCGTCAGGATAATAATTGATTGATGCTGAGTTGGCTGC TGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGGAACTATATCCGGATAACCTCGAGCTGCAGGCATGCA AGCTTGGCGA AGCACAATGACAAGAGC-3'（配列番号１８)、及びユニバーサルプライマーＵ２:5'-GCTCTTGTCATTGTGCTTCG-3'(配列番号１３)とを用いて、第２次ＰＣＲを行った。ＰＣＲ反応液組成は、表３に示す通りとし、プログラムは上記第１次ＰＣＲと同様とした。
【００９９】
【表３】
2005229876.tif 000004
【０１００】
この結果、Ｔ７プロモーターの制御下で、Ｈｉｓタグ配列とＢＡＧ５ドメインポリペプチド（１〜８６）との融合タンパク質を発現することのできる直鎖状二本鎖ＤＮＡ断片を増幅できた。
【０１０１】
[３]  クローン化
上記第２次ＰＣＲ反応により得られたＤＮＡ断片を、ＴＯＰＯ  ＴＡ−クローニングキット（cloning kit） (インビトロジェン（invtrogen）社) により、ベクターｐＰＣＲ２．１（インビトロジェン社）にクローン化することにより、発現ベクターｐＰＣＲ２．１を構築した。
【０１０２】
（２）ＢＡＧ５ドメインポリペプチド（１〜８６）の発現
[１]  透析法を用いた無細胞タンパク質合成法による１５Ｎ標識ＢＡＧ５ドメインの合成
大腸菌Ｓ３０抽出液は、Zubayら(Annu. Rev. Geneti. 7, 267-287, 1973)の方法に従って、大腸菌ＢＬ２１ コドン プラス(codon plus)株から調製した。
【０１０３】
タンパク質合成反応は、表４に示す反応液組成の反応液３ｍｌ、および表４に示す透析外液組成の透析外液３０ｍｌのスケールで、液温を３０℃に維持しつつ一晩行った。
【０１０４】
【表４】
2005229876.tif 000005
【０１０５】
【表５】
2005229876.tif 000006
【０１０６】
[２]  ＳＤＳゲル電気泳動による発現状態の判定
合成反応終了後、常法に従ってＳＤＳゲル電気泳動を行い、得られたタンパク質の発現状態を判定した。その結果、分子量約１００００のバンドが検出され、目的とするＢＡＧ５ドメインが発現することが確認された。
【０１０７】
［実施例４］マウス由来のＢＡＧ５ドメインのＮＭＲによる構造決定
（１）１３Ｃ１５Ｎ標識ドメインの精製
全ての炭素核および窒素核をそれぞれ安定同位体である炭素１３、窒素１５により置換した配列番号６に記載されたポリペプチドを、上述の無細胞タンパク質発現系により作成した。配列番号６に記載されたポリペプチドは、配列番号４に記載されたポリペプチドのＮ末端にＧＳＳＧＳＳＧ、Ｃ末端にＳＧＰＳＳＧで表されるアミノ酸残基を付加したものであり、これらの付加配列は立体構造には影響を与えないものである。したがって、配列番号６に記載されたポリペプチドの立体構造を解析すれば、配列番号４に記載された本発明のポリペプチドの立体構造に関する情報を得ることができる。
【０１０８】
得られた高純度標品を高速遠心機用の限外濾過膜付タンパク質濃縮器を用いて標品濃度がおよそ０．７ｍＭとなるまで濃縮した。その後、ＮＭＲ解析用標品緩衝液により濃縮液を１０倍に希釈した。この濃縮、希釈の操作を３回繰返し、標品精製用の緩衝液をＮＭＲ解析用標品緩衝液に完全に置換した。用いたＮＭＲ解析用標品緩衝液の組成は、２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）、２００ｍＭ塩化ナトリウム、０．４ｍＭアジ化ナトリウムであった。ＮＭＲ解析用標品緩衝液に完全置換された標品の最終的な標品濃度は、およそ０．７ｍＭであった。得られた標品を、外径５ｍｍのＮＭＲ測定用シゲミ試料管に注入、脱気後、測定に用いた。
【０１０９】
（２）ＮＭＲ測定
ＮＭＲ実験には、アメリカ・バリアン社製Unity INOVA600、及びUnity INOVA800を使用した。全ての測定を２５℃の温度環境下で行った。主鎖シグナルの帰属を目的としたＮＭＲ実験として、二次元スペクトルは１Ｈ−１５Ｎ  ＨＳＱＣ、三次元スペクトルはＨＮＣＯ、ＨＮ（ＣＯ）ＣＡ、（ＨＣＡ）ＣＯ（ＣＡ）ＮＨ、ＣＢＣＡ（ＣＯ）ＮＨ、ＨＮＣＡＣＢ  を測定した。また、側鎖シグナルの帰属を目的としたＮＭＲ実験として、二次元スペクトルは１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣ、芳香族系側鎖用ＨＣＣＨ−ＴＯＣＳＹ、三次元スペクトルはＨＢＨＡ（ＣＢＣＡＣＯ）ＮＨ、ＨＢＨＡＮＨ、Ｃ（ＣＣＣＯ）ＮＨ、脂肪族系側鎖用ＣＣＨ−ＴＯＣＳＹ、同ＨＣＣＨ−ＴＯＣＳＹを測定した。距離制限情報採取を目的としたＮＭＲ実験として、三次元１５Ｎ−ｅｄｉｔｅｄ  ＮＯＥＳＹと三次元１３Ｃ−ｅｄｉｔｅｄ  ＮＯＥＳＹを測定した。
【０１１０】
（３）測定データの解析
測定データを、アメリカ・シリコングラフィックス社製ワークステーションオクタン（Octane）2、およびオリジン（Origin）3800を用いてフーリエ変換計算を行い、各二次元および三次元スペクトルを得た。得られたスペクトルデータに基づいて、アミノ酸残基における主鎖シグナルとしてα位およびβ位の炭素核であるＣαとＣβ、カルボニル基の炭素核であるＣ’、アミド基の水素核であるＨＮ、アミド基の窒素核であるＮを連鎖的に帰属した。この手法は、まずＨＮ（ＣＯ）ＣＡ上で隣接残基のＣαシグナルの化学シフト値に一致するシグナルをＨＮＣＡＣＢ上で検索し、自身と隣接する残基のＣαシグナルの連鎖性を明らかにする。この操作を繰り返すことによりプロリン残基および何らかの原因でアミドプロトンシグナルが観測できない場合を除く全てのＣαシグナルを連鎖的に帰属できる。同様の操作を行うことにより、ＣＢＣＡ（ＣＯ）ＮＨと  ＨＮＣＡＣＢによりＣβシグナル、さらにＨＮＣＯと（ＨＣＡ）ＣＯ（ＣＡ）ＮＨによりＣ’シグナルを帰属することで、より正確に帰属を行うことができる。さらに、得られた主鎖帰属情報および側鎖帰属用に測定したスペクトルデータを用いてγ、δ、ε、ζ、η位の炭素核、窒素核、水素核の帰属を行う。以上の操作によりほぼ全てのアミノ酸残基に対するシグナルの帰属データを得た。また、１５Ｎ−ｅｄｉｔｅｄ  ＮＯＥＳＹからは８７１個のシグナル、１３Ｃ−ｅｄｉｔｅｄ  ＮＯＥＳＹでは２１３９個のシグナルから距離制限データを得た。これらシグナルの帰属データ、距離制限データを元に、タンパク質立体構造計算用ソフトウエアであるＣＹＡＮＡを用いてドメイン構造の計算を行った。得られた立体構造に基づいて、供した距離制限が満たされていないＮＯＥ群を比較検討しながら最適化を行った。これを繰返すことで最終的に２８０４個の距離制限を用いて計算し、エネルギー的に安定な上位２０個の立体構造を得た。これら構造において二次構造を形成するアミノ酸残基部分の収斂度は、主鎖の原子団に対して０．４１Å、側鎖を含めた水素原子以外の全原子団に対しても０．９４Åであった。
【０１１１】
（４）立体構造座標
得られた構造座標を以下に示す。なお、座標表記は簡略化のため得られた２０構造のうちの最初の１構造のみを示す。この構造は、２０個の構造のうちでもエネルギー的に最安定な立体構造であり、残りの１９構造も上記収斂度の精度で互いに重なり合う。
【０１１２】
以下の立体構造座標データは、プロテインデータバンク（ＰＤＢ）のフォーマットに準じて記載されているものである。１列目のATOMはこの行が原子座標の行であることを示し、２列目は、その原子の順番を、３列目はアミノ酸残基等における原子の区別を、４列目はアミノ酸残基等を、５列目は配列番号６に対応したアミノ酸の番号を、６、７、８列目はその原子の座標（ａ軸、ｂ軸、ｃ軸方向の順番でÅ単位）を、９列目は、その原子の占有率（本発明においてはすべて１．００）を、１０列目はその原子の温度因子を示している。最終行は、この表の終わりの行であることを示している。
【０１１３】
ＢＡＧ５立体構造座標表１
ATOM      1  N   GLY A   1      -9.657  -5.046 -15.587  1.00  0.00           N  
ATOM      2  CA  GLY A   1     -10.838  -4.200 -15.622  1.00  0.00           C  
ATOM      3  C   GLY A   1     -11.631  -4.312 -14.318  1.00  0.00           C  
ATOM      4  O   GLY A   1     -11.779  -3.331 -13.591  1.00  0.00           O  
ATOM      5  H   GLY A   1      -9.301  -5.312 -16.482  1.00  0.00           H  
ATOM      6 1HA  GLY A   1     -10.543  -3.164 -15.784  1.00  0.00           H  
ATOM      7 2HA  GLY A   1     -11.470  -4.487 -16.462  1.00  0.00           H  
ATOM      8  N   SER A   2     -12.121  -5.517 -14.062  1.00  0.00           N  
ATOM      9  CA  SER A   2     -12.895  -5.770 -12.859  1.00  0.00           C  
ATOM     10  C   SER A   2     -12.827  -7.254 -12.495  1.00  0.00           C  
ATOM     11  O   SER A   2     -13.543  -8.071 -13.071  1.00  0.00           O  
ATOM     12  CB  SER A   2     -14.350  -5.334 -13.039  1.00  0.00           C  
ATOM     13  OG  SER A   2     -14.931  -4.894 -11.814  1.00  0.00           O  
ATOM     14  H   SER A   2     -11.995  -6.309 -14.658  1.00  0.00           H  
ATOM     15  HA  SER A   2     -12.428  -5.163 -12.082  1.00  0.00           H  
ATOM     16 1HB  SER A   2     -14.400  -4.529 -13.773  1.00  0.00           H  
ATOM     17 2HB  SER A   2     -14.931  -6.165 -13.438  1.00  0.00           H  
ATOM     18  HG  SER A   2     -14.963  -3.895 -11.790  1.00  0.00           H  
ATOM     19  N   SER A   3     -11.958  -7.557 -11.541  1.00  0.00           N  
ATOM     20  CA  SER A   3     -11.787  -8.929 -11.094  1.00  0.00           C  
ATOM     21  C   SER A   3     -12.815  -9.258 -10.009  1.00  0.00           C  
ATOM     22  O   SER A   3     -12.622  -8.918  -8.843  1.00  0.00           O  
ATOM     23  CB  SER A   3     -10.369  -9.165 -10.570  1.00  0.00           C  
ATOM     24  OG  SER A   3      -9.381  -8.878 -11.557  1.00  0.00           O  
ATOM     25  H   SER A   3     -11.379  -6.886 -11.078  1.00  0.00           H  
ATOM     26  HA  SER A   3     -11.954  -9.544 -11.978  1.00  0.00           H  
ATOM     27 1HB  SER A   3     -10.198  -8.540  -9.693  1.00  0.00           H  
ATOM     28 2HB  SER A   3     -10.269 -10.201 -10.248  1.00  0.00           H  
ATOM     29  HG  SER A   3      -8.954  -9.726 -11.870  1.00  0.00           H  
ATOM     30  N   GLY A   4     -13.885  -9.915 -10.431  1.00  0.00           N  
ATOM     31  CA  GLY A   4     -14.943 -10.293  -9.510  1.00  0.00           C  
ATOM     32  C   GLY A   4     -15.609 -11.600  -9.947  1.00  0.00           C  
ATOM     33  O   GLY A   4     -16.741 -11.593 -10.429  1.00  0.00           O  
ATOM     34  H   GLY A   4     -14.034 -10.188 -11.382  1.00  0.00           H  
ATOM     35 1HA  GLY A   4     -14.533 -10.408  -8.507  1.00  0.00           H  
ATOM     36 2HA  GLY A   4     -15.688  -9.500  -9.462  1.00  0.00           H  
ATOM     37  N   SER A   5     -14.878 -12.690  -9.764  1.00  0.00           N  
ATOM     38  CA  SER A   5     -15.384 -14.001 -10.133  1.00  0.00           C  
ATOM     39  C   SER A   5     -14.402 -15.085  -9.684  1.00  0.00           C  
ATOM     40  O   SER A   5     -13.576 -15.544 -10.471  1.00  0.00           O  
ATOM     41  CB  SER A   5     -15.625 -14.094 -11.641  1.00  0.00           C  
ATOM     42  OG  SER A   5     -16.070 -15.390 -12.031  1.00  0.00           O  
ATOM     43  H   SER A   5     -13.958 -12.687  -9.371  1.00  0.00           H  
ATOM     44  HA  SER A   5     -16.333 -14.103  -9.607  1.00  0.00           H  
ATOM     45 1HB  SER A   5     -16.367 -13.352 -11.936  1.00  0.00           H  
ATOM     46 2HB  SER A   5     -14.704 -13.852 -12.171  1.00  0.00           H  
ATOM     47  HG  SER A   5     -17.046 -15.367 -12.245  1.00  0.00           H  
ATOM     48  N   SER A   6     -14.526 -15.465  -8.421  1.00  0.00           N  
ATOM     49  CA  SER A   6     -13.660 -16.487  -7.858  1.00  0.00           C  
ATOM     50  C   SER A   6     -14.261 -17.024  -6.558  1.00  0.00           C  
ATOM     51  O   SER A   6     -14.868 -16.275  -5.794  1.00  0.00           O  
ATOM     52  CB  SER A   6     -12.254 -15.941  -7.607  1.00  0.00           C  
ATOM     53  OG  SER A   6     -11.259 -16.956  -7.714  1.00  0.00           O  
ATOM     54  H   SER A   6     -15.201 -15.088  -7.787  1.00  0.00           H  
ATOM     55  HA  SER A   6     -13.615 -17.273  -8.612  1.00  0.00           H  
ATOM     56 1HB  SER A   6     -12.040 -15.147  -8.323  1.00  0.00           H  
ATOM     57 2HB  SER A   6     -12.210 -15.494  -6.614  1.00  0.00           H  
ATOM     58  HG  SER A   6     -11.146 -17.418  -6.835  1.00  0.00           H  
ATOM     59  N   GLY A   7     -14.071 -18.318  -6.345  1.00  0.00           N  
ATOM     60  CA  GLY A   7     -14.587 -18.964  -5.150  1.00  0.00           C  
ATOM     61  C   GLY A   7     -13.524 -19.010  -4.050  1.00  0.00           C  
ATOM     62  O   GLY A   7     -12.389 -18.585  -4.260  1.00  0.00           O  
ATOM     63  H   GLY A   7     -13.576 -18.921  -6.971  1.00  0.00           H  
ATOM     64 1HA  GLY A   7     -15.464 -18.426  -4.791  1.00  0.00           H  
ATOM     65 2HA  GLY A   7     -14.910 -19.977  -5.390  1.00  0.00           H  
ATOM     66  N   MET A   8     -13.930 -19.529  -2.901  1.00  0.00           N  
ATOM     67  CA  MET A   8     -13.028 -19.637  -1.767  1.00  0.00           C  
ATOM     68  C   MET A   8     -13.617 -20.537  -0.680  1.00  0.00           C  
ATOM     69  O   MET A   8     -14.528 -20.131   0.041  1.00  0.00           O  
ATOM     70  CB  MET A   8     -12.764 -18.244  -1.191  1.00  0.00           C  
ATOM     71  CG  MET A   8     -11.265 -17.945  -1.144  1.00  0.00           C  
ATOM     72  SD  MET A   8     -10.924 -16.733   0.122  1.00  0.00           S  
ATOM     73  CE  MET A   8      -9.141 -16.688   0.036  1.00  0.00           C  
ATOM     74  H   MET A   8     -14.855 -19.873  -2.738  1.00  0.00           H  
ATOM     75  HA  MET A   8     -12.114 -20.082  -2.162  1.00  0.00           H  
ATOM     76 1HB  MET A   8     -13.270 -17.493  -1.798  1.00  0.00           H  
ATOM     77 2HB  MET A   8     -13.184 -18.177  -0.187  1.00  0.00           H  
ATOM     78 1HG  MET A   8     -10.709 -18.860  -0.941  1.00  0.00           H  
ATOM     79 2HG  MET A   8     -10.928 -17.575  -2.112  1.00  0.00           H  
ATOM     80 1HE  MET A   8      -8.827 -16.695  -1.008  1.00  0.00           H  
ATOM     81 2HE  MET A   8      -8.777 -15.782   0.519  1.00  0.00           H  
ATOM     82 3HE  MET A   8      -8.731 -17.561   0.544  1.00  0.00           H  
ATOM     83  N   ASP A   9     -13.074 -21.742  -0.595  1.00  0.00           N  
ATOM     84  CA  ASP A   9     -13.535 -22.703   0.393  1.00  0.00           C  
ATOM     85  C   ASP A   9     -12.358 -23.572   0.840  1.00  0.00           C  
ATOM     86  O   ASP A   9     -11.865 -24.398   0.074  1.00  0.00           O  
ATOM     87  CB  ASP A   9     -14.607 -23.624  -0.193  1.00  0.00           C  
ATOM     88  CG  ASP A   9     -15.859 -23.789   0.670  1.00  0.00           C  
ATOM     89  OD1 ASP A   9     -16.547 -22.766   0.874  1.00  0.00           O  
ATOM     90  OD2 ASP A   9     -16.101 -24.936   1.106  1.00  0.00           O  
ATOM     91  H   ASP A   9     -12.334 -22.064  -1.185  1.00  0.00           H  
ATOM     92  HA  ASP A   9     -13.944 -22.104   1.206  1.00  0.00           H  
ATOM     93 1HB  ASP A   9     -14.904 -23.236  -1.168  1.00  0.00           H  
ATOM     94 2HB  ASP A   9     -14.168 -24.607  -0.362  1.00  0.00           H  
ATOM     95  N   MET A  10     -11.942 -23.357   2.080  1.00  0.00           N  
ATOM     96  CA  MET A  10     -10.833 -24.110   2.638  1.00  0.00           C  
ATOM     97  C   MET A  10     -10.521 -23.652   4.064  1.00  0.00           C  
ATOM     98  O   MET A  10     -10.610 -22.464   4.372  1.00  0.00           O  
ATOM     99  CB  MET A  10      -9.594 -23.923   1.760  1.00  0.00           C  
ATOM    100  CG  MET A  10      -9.087 -25.267   1.233  1.00  0.00           C  
ATOM    101  SD  MET A  10      -7.556 -25.701   2.041  1.00  0.00           S  
ATOM    102  CE  MET A  10      -7.434 -27.419   1.573  1.00  0.00           C  
ATOM    103  H   MET A  10     -12.349 -22.683   2.697  1.00  0.00           H  
ATOM    104  HA  MET A  10     -11.160 -25.150   2.647  1.00  0.00           H  
ATOM    105 1HB  MET A  10      -9.834 -23.267   0.922  1.00  0.00           H  
ATOM    106 2HB  MET A  10      -8.808 -23.433   2.333  1.00  0.00           H  
ATOM    107 1HG  MET A  10      -9.833 -26.041   1.410  1.00  0.00           H  
ATOM    108 2HG  MET A  10      -8.936 -25.211   0.155  1.00  0.00           H  
ATOM    109 1HE  MET A  10      -7.849 -28.042   2.366  1.00  0.00           H  
ATOM    110 2HE  MET A  10      -7.992 -27.585   0.652  1.00  0.00           H  
ATOM    111 3HE  MET A  10      -6.388 -27.680   1.417  1.00  0.00           H  
ATOM    112  N   GLY A  11     -10.163 -24.618   4.897  1.00  0.00           N  
ATOM    113  CA  GLY A  11      -9.838 -24.328   6.284  1.00  0.00           C  
ATOM    114  C   GLY A  11      -8.347 -24.021   6.445  1.00  0.00           C  
ATOM    115  O   GLY A  11      -7.571 -24.887   6.845  1.00  0.00           O  
ATOM    116  H   GLY A  11     -10.093 -25.581   4.639  1.00  0.00           H  
ATOM    117 1HA  GLY A  11     -10.427 -23.479   6.629  1.00  0.00           H  
ATOM    118 2HA  GLY A  11     -10.107 -25.179   6.909  1.00  0.00           H  
ATOM    119  N   ASN A  12      -7.993 -22.785   6.125  1.00  0.00           N  
ATOM    120  CA  ASN A  12      -6.610 -22.352   6.229  1.00  0.00           C  
ATOM    121  C   ASN A  12      -6.463 -20.970   5.590  1.00  0.00           C  
ATOM    122  O   ASN A  12      -6.736 -20.798   4.404  1.00  0.00           O  
ATOM    123  CB  ASN A  12      -5.675 -23.315   5.494  1.00  0.00           C  
ATOM    124  CG  ASN A  12      -4.955 -24.239   6.478  1.00  0.00           C  
ATOM    125  OD1 ASN A  12      -4.837 -23.959   7.660  1.00  0.00           O  
ATOM    126  ND2 ASN A  12      -4.482 -25.353   5.926  1.00  0.00           N  
ATOM    127  H   ASN A  12      -8.631 -22.086   5.801  1.00  0.00           H  
ATOM    128  HA  ASN A  12      -6.392 -22.344   7.297  1.00  0.00           H  
ATOM    129 1HB  ASN A  12      -6.247 -23.910   4.782  1.00  0.00           H  
ATOM    130 2HB  ASN A  12      -4.942 -22.748   4.919  1.00  0.00           H  
ATOM    131 1HD2 ASN A  12      -4.612 -25.522   4.950  1.00  0.00           H  
ATOM    132 2HD2 ASN A  12      -3.995 -26.021   6.489  1.00  0.00           H  
ATOM    133  N   GLN A  13      -6.031 -20.019   6.406  1.00  0.00           N  
ATOM    134  CA  GLN A  13      -5.844 -18.657   5.936  1.00  0.00           C  
ATOM    135  C   GLN A  13      -4.391 -18.437   5.510  1.00  0.00           C  
ATOM    136  O   GLN A  13      -3.509 -18.290   6.354  1.00  0.00           O  
ATOM    137  CB  GLN A  13      -6.261 -17.646   7.005  1.00  0.00           C  
ATOM    138  CG  GLN A  13      -6.378 -16.239   6.414  1.00  0.00           C  
ATOM    139  CD  GLN A  13      -7.301 -15.363   7.263  1.00  0.00           C  
ATOM    140  OE1 GLN A  13      -7.848 -15.784   8.268  1.00  0.00           O  
ATOM    141  NE2 GLN A  13      -7.442 -14.123   6.804  1.00  0.00           N  
ATOM    142  H   GLN A  13      -5.811 -20.167   7.370  1.00  0.00           H  
ATOM    143  HA  GLN A  13      -6.502 -18.556   5.073  1.00  0.00           H  
ATOM    144 1HB  GLN A  13      -7.216 -17.942   7.439  1.00  0.00           H  
ATOM    145 2HB  GLN A  13      -5.530 -17.644   7.814  1.00  0.00           H  
ATOM    146 1HG  GLN A  13      -5.390 -15.783   6.355  1.00  0.00           H  
ATOM    147 2HG  GLN A  13      -6.763 -16.300   5.396  1.00  0.00           H  
ATOM    148 1HE2 GLN A  13      -6.964 -13.840   5.972  1.00  0.00           H  
ATOM    149 2HE2 GLN A  13      -8.026 -13.473   7.290  1.00  0.00           H  
ATOM    150  N   HIS A  14      -4.188 -18.423   4.200  1.00  0.00           N  
ATOM    151  CA  HIS A  14      -2.857 -18.224   3.652  1.00  0.00           C  
ATOM    152  C   HIS A  14      -2.151 -17.101   4.415  1.00  0.00           C  
ATOM    153  O   HIS A  14      -2.773 -16.103   4.776  1.00  0.00           O  
ATOM    154  CB  HIS A  14      -2.923 -17.966   2.145  1.00  0.00           C  
ATOM    155  CG  HIS A  14      -1.674 -18.368   1.398  1.00  0.00           C  
ATOM    156  ND1 HIS A  14      -0.611 -17.505   1.197  1.00  0.00           N  
ATOM    157  CD2 HIS A  14      -1.329 -19.548   0.808  1.00  0.00           C  
ATOM    158  CE1 HIS A  14       0.326 -18.147   0.514  1.00  0.00           C  
ATOM    159  NE2 HIS A  14      -0.121 -19.413   0.274  1.00  0.00           N  
ATOM    160  H   HIS A  14      -4.911 -18.544   3.521  1.00  0.00           H  
ATOM    161  HA  HIS A  14      -2.312 -19.155   3.807  1.00  0.00           H  
ATOM    162 1HB  HIS A  14      -3.772 -18.510   1.731  1.00  0.00           H  
ATOM    163 2HB  HIS A  14      -3.111 -16.906   1.976  1.00  0.00           H  
ATOM    164  HD2 HIS A  14      -1.941 -20.450   0.781  1.00  0.00           H  
ATOM    165  HE1 HIS A  14       1.285 -17.735   0.199  1.00  0.00           H  
ATOM    166  HE2 HIS A  14       0.401 -20.139  -0.173  1.00  0.00           H  
ATOM    167  N   PRO A  15      -0.826 -17.307   4.643  1.00  0.00           N  
ATOM    168  CA  PRO A  15      -0.028 -16.324   5.356  1.00  0.00           C  
ATOM    169  C   PRO A  15       0.278 -15.116   4.467  1.00  0.00           C  
ATOM    170  O   PRO A  15       0.855 -14.132   4.928  1.00  0.00           O  
ATOM    171  CB  PRO A  15       1.222 -17.072   5.791  1.00  0.00           C  
ATOM    172  CG  PRO A  15       1.293 -18.311   4.913  1.00  0.00           C  
ATOM    173  CD  PRO A  15      -0.055 -18.476   4.230  1.00  0.00           C  
ATOM    174  HA  PRO A  15      -0.537 -15.965   6.139  1.00  0.00           H  
ATOM    175 1HB  PRO A  15       2.110 -16.454   5.667  1.00  0.00           H  
ATOM    176 2HB  PRO A  15       1.167 -17.344   6.846  1.00  0.00           H  
ATOM    177 1HG  PRO A  15       2.086 -18.208   4.172  1.00  0.00           H  
ATOM    178 2HG  PRO A  15       1.528 -19.191   5.512  1.00  0.00           H  
ATOM    179 1HD  PRO A  15       0.052 -18.517   3.146  1.00  0.00           H  
ATOM    180 2HD  PRO A  15      -0.544 -19.401   4.537  1.00  0.00           H  
ATOM    181  N   SER A  16      -0.123 -15.231   3.210  1.00  0.00           N  
ATOM    182  CA  SER A  16       0.100 -14.161   2.252  1.00  0.00           C  
ATOM    183  C   SER A  16      -1.172 -13.327   2.093  1.00  0.00           C  
ATOM    184  O   SER A  16      -1.103 -12.116   1.888  1.00  0.00           O  
ATOM    185  CB  SER A  16       0.543 -14.718   0.898  1.00  0.00           C  
ATOM    186  OG  SER A  16       1.743 -15.480   1.000  1.00  0.00           O  
ATOM    187  H   SER A  16      -0.592 -16.035   2.843  1.00  0.00           H  
ATOM    188  HA  SER A  16       0.903 -13.558   2.676  1.00  0.00           H  
ATOM    189 1HB  SER A  16      -0.249 -15.343   0.486  1.00  0.00           H  
ATOM    190 2HB  SER A  16       0.694 -13.895   0.200  1.00  0.00           H  
ATOM    191  HG  SER A  16       2.140 -15.371   1.911  1.00  0.00           H  
ATOM    192  N   ILE A  17      -2.304 -14.008   2.194  1.00  0.00           N  
ATOM    193  CA  ILE A  17      -3.591 -13.345   2.064  1.00  0.00           C  
ATOM    194  C   ILE A  17      -3.811 -12.428   3.268  1.00  0.00           C  
ATOM    195  O   ILE A  17      -4.060 -11.234   3.107  1.00  0.00           O  
ATOM    196  CB  ILE A  17      -4.706 -14.373   1.861  1.00  0.00           C  
ATOM    197  CG1 ILE A  17      -4.617 -15.012   0.474  1.00  0.00           C  
ATOM    198  CG2 ILE A  17      -6.079 -13.750   2.119  1.00  0.00           C  
ATOM    199  CD1 ILE A  17      -5.029 -14.019  -0.614  1.00  0.00           C  
ATOM    200  H   ILE A  17      -2.352 -14.993   2.361  1.00  0.00           H  
ATOM    201  HA  ILE A  17      -3.552 -12.730   1.164  1.00  0.00           H  
ATOM    202  HB  ILE A  17      -4.572 -15.170   2.592  1.00  0.00           H  
ATOM    203 1HG1 ILE A  17      -3.598 -15.354   0.292  1.00  0.00           H  
ATOM    204 2HG1 ILE A  17      -5.261 -15.891   0.433  1.00  0.00           H  
ATOM    205 1HG2 ILE A  17      -6.365 -13.918   3.157  1.00  0.00           H  
ATOM    206 2HG2 ILE A  17      -6.035 -12.679   1.923  1.00  0.00           H  
ATOM    207 3HG2 ILE A  17      -6.816 -14.210   1.460  1.00  0.00           H  
ATOM    208 1HD1 ILE A  17      -5.704 -13.275  -0.191  1.00  0.00           H  
ATOM    209 2HD1 ILE A  17      -4.142 -13.523  -1.009  1.00  0.00           H  
ATOM    210 3HD1 ILE A  17      -5.536 -14.552  -1.419  1.00  0.00           H  
ATOM    211  N   SER A  18      -3.711 -13.021   4.449  1.00  0.00           N  
ATOM    212  CA  SER A  18      -3.897 -12.272   5.681  1.00  0.00           C  
ATOM    213  C   SER A  18      -2.982 -11.045   5.690  1.00  0.00           C  
ATOM    214  O   SER A  18      -3.405  -9.955   6.070  1.00  0.00           O  
ATOM    215  CB  SER A  18      -3.622 -13.148   6.904  1.00  0.00           C  
ATOM    216  OG  SER A  18      -3.884 -12.459   8.124  1.00  0.00           O  
ATOM    217  H   SER A  18      -3.508 -13.992   4.572  1.00  0.00           H  
ATOM    218  HA  SER A  18      -4.944 -11.969   5.679  1.00  0.00           H  
ATOM    219 1HB  SER A  18      -4.239 -14.045   6.855  1.00  0.00           H  
ATOM    220 2HB  SER A  18      -2.582 -13.476   6.890  1.00  0.00           H  
ATOM    221  HG  SER A  18      -3.903 -11.472   7.962  1.00  0.00           H  
ATOM    222  N   ARG A  19      -1.746 -11.265   5.266  1.00  0.00           N  
ATOM    223  CA  ARG A  19      -0.769 -10.191   5.221  1.00  0.00           C  
ATOM    224  C   ARG A  19      -1.293  -9.032   4.370  1.00  0.00           C  
ATOM    225  O   ARG A  19      -1.480  -7.924   4.872  1.00  0.00           O  
ATOM    226  CB  ARG A  19       0.560 -10.679   4.641  1.00  0.00           C  
ATOM    227  CG  ARG A  19       1.679 -10.585   5.681  1.00  0.00           C  
ATOM    228  CD  ARG A  19       1.338 -11.401   6.929  1.00  0.00           C  
ATOM    229  NE  ARG A  19       2.580 -11.809   7.622  1.00  0.00           N  
ATOM    230  CZ  ARG A  19       3.340 -12.849   7.253  1.00  0.00           C  
ATOM    231  NH1 ARG A  19       2.988 -13.594   6.196  1.00  0.00           N  
ATOM    232  NH2 ARG A  19       4.451 -13.145   7.942  1.00  0.00           N  
ATOM    233  H   ARG A  19      -1.411 -12.155   4.958  1.00  0.00           H  
ATOM    234  HA  ARG A  19      -0.640  -9.887   6.260  1.00  0.00           H  
ATOM    235 1HB  ARG A  19       0.457 -11.711   4.305  1.00  0.00           H  
ATOM    236 2HB  ARG A  19       0.820 -10.084   3.766  1.00  0.00           H  
ATOM    237 1HG  ARG A  19       2.612 -10.947   5.249  1.00  0.00           H  
ATOM    238 2HG  ARG A  19       1.838  -9.542   5.956  1.00  0.00           H  
ATOM    239 1HD  ARG A  19       0.714 -10.811   7.600  1.00  0.00           H  
ATOM    240 2HD  ARG A  19       0.761 -12.283   6.651  1.00  0.00           H  
ATOM    241  HE  ARG A  19       2.871 -11.274   8.416  1.00  0.00           H  
ATOM    242 1HH1 ARG A  19       2.159 -13.373   5.682  1.00  0.00           H  
ATOM    243 2HH1 ARG A  19       3.555 -14.370   5.921  1.00  0.00           H  
ATOM    244 1HH2 ARG A  19       4.713 -12.590   8.731  1.00  0.00           H  
ATOM    245 2HH2 ARG A  19       5.017 -13.922   7.666  1.00  0.00           H  
ATOM    246  N   LEU A  20      -1.514  -9.327   3.098  1.00  0.00           N  
ATOM    247  CA  LEU A  20      -2.013  -8.323   2.173  1.00  0.00           C  
ATOM    248  C   LEU A  20      -3.244  -7.645   2.778  1.00  0.00           C  
ATOM    249  O   LEU A  20      -3.444  -6.444   2.602  1.00  0.00           O  
ATOM    250  CB  LEU A  20      -2.266  -8.941   0.796  1.00  0.00           C  
ATOM    251  CG  LEU A  20      -1.022  -9.250  -0.039  1.00  0.00           C  
ATOM    252  CD1 LEU A  20      -1.336 -10.271  -1.134  1.00  0.00           C  
ATOM    253  CD2 LEU A  20      -0.412  -7.967  -0.609  1.00  0.00           C  
ATOM    254  H   LEU A  20      -1.359 -10.230   2.698  1.00  0.00           H  
ATOM    255  HA  LEU A  20      -1.231  -7.574   2.051  1.00  0.00           H  
ATOM    256 1HB  LEU A  20      -2.826  -9.867   0.933  1.00  0.00           H  
ATOM    257 2HB  LEU A  20      -2.903  -8.264   0.227  1.00  0.00           H  
ATOM    258  HG  LEU A  20      -0.274  -9.699   0.614  1.00  0.00           H  
ATOM    259 1HD1 LEU A  20      -1.436  -9.758  -2.091  1.00  0.00           H  
ATOM    260 2HD1 LEU A  20      -0.527 -10.999  -1.195  1.00  0.00           H  
ATOM    261 3HD1 LEU A  20      -2.269 -10.783  -0.897  1.00  0.00           H  
ATOM    262 1HD2 LEU A  20       0.540  -8.199  -1.086  1.00  0.00           H  
ATOM    263 2HD2 LEU A  20      -1.092  -7.538  -1.345  1.00  0.00           H  
ATOM    264 3HD2 LEU A  20      -0.251  -7.252   0.198  1.00  0.00           H  
ATOM    265  N   GLN A  21      -4.036  -8.444   3.477  1.00  0.00           N  
ATOM    266  CA  GLN A  21      -5.242  -7.936   4.109  1.00  0.00           C  
ATOM    267  C   GLN A  21      -4.882  -7.050   5.304  1.00  0.00           C  
ATOM    268  O   GLN A  21      -5.663  -6.184   5.696  1.00  0.00           O  
ATOM    269  CB  GLN A  21      -6.163  -9.081   4.534  1.00  0.00           C  
ATOM    270  CG  GLN A  21      -7.218  -9.362   3.462  1.00  0.00           C  
ATOM    271  CD  GLN A  21      -8.553  -9.759   4.097  1.00  0.00           C  
ATOM    272  OE1 GLN A  21      -9.310  -8.933   4.578  1.00  0.00           O  
ATOM    273  NE2 GLN A  21      -8.797 -11.066   4.071  1.00  0.00           N  
ATOM    274  H   GLN A  21      -3.866  -9.419   3.615  1.00  0.00           H  
ATOM    275  HA  GLN A  21      -5.741  -7.341   3.344  1.00  0.00           H  
ATOM    276 1HB  GLN A  21      -5.573  -9.980   4.712  1.00  0.00           H  
ATOM    277 2HB  GLN A  21      -6.653  -8.829   5.474  1.00  0.00           H  
ATOM    278 1HG  GLN A  21      -7.356  -8.477   2.841  1.00  0.00           H  
ATOM    279 2HG  GLN A  21      -6.872 -10.161   2.806  1.00  0.00           H  
ATOM    280 1HE2 GLN A  21      -8.132 -11.691   3.660  1.00  0.00           H  
ATOM    281 2HE2 GLN A  21      -9.644 -11.424   4.462  1.00  0.00           H  
ATOM    282  N   GLU A  22      -3.700  -7.297   5.849  1.00  0.00           N  
ATOM    283  CA  GLU A  22      -3.228  -6.533   6.990  1.00  0.00           C  
ATOM    284  C   GLU A  22      -2.392  -5.340   6.522  1.00  0.00           C  
ATOM    285  O   GLU A  22      -2.140  -4.414   7.291  1.00  0.00           O  
ATOM    286  CB  GLU A  22      -2.430  -7.418   7.950  1.00  0.00           C  
ATOM    287  CG  GLU A  22      -3.353  -8.108   8.956  1.00  0.00           C  
ATOM    288  CD  GLU A  22      -2.655  -8.293  10.305  1.00  0.00           C  
ATOM    289  OE1 GLU A  22      -1.688  -9.085  10.339  1.00  0.00           O  
ATOM    290  OE2 GLU A  22      -3.103  -7.638  11.270  1.00  0.00           O  
ATOM    291  H   GLU A  22      -3.071  -8.003   5.523  1.00  0.00           H  
ATOM    292  HA  GLU A  22      -4.127  -6.180   7.495  1.00  0.00           H  
ATOM    293 1HB  GLU A  22      -1.877  -8.168   7.384  1.00  0.00           H  
ATOM    294 2HB  GLU A  22      -1.694  -6.813   8.481  1.00  0.00           H  
ATOM    295 1HG  GLU A  22      -4.259  -7.516   9.089  1.00  0.00           H  
ATOM    296 2HG  GLU A  22      -3.661  -9.078   8.566  1.00  0.00           H  
ATOM    297  N   ILE A  23      -1.987  -5.401   5.262  1.00  0.00           N  
ATOM    298  CA  ILE A  23      -1.186  -4.337   4.681  1.00  0.00           C  
ATOM    299  C   ILE A  23      -2.080  -3.442   3.820  1.00  0.00           C  
ATOM    300  O   ILE A  23      -1.823  -2.247   3.686  1.00  0.00           O  
ATOM    301  CB  ILE A  23       0.011  -4.919   3.927  1.00  0.00           C  
ATOM    302  CG1 ILE A  23       1.103  -5.373   4.897  1.00  0.00           C  
ATOM    303  CG2 ILE A  23       0.542  -3.925   2.891  1.00  0.00           C  
ATOM    304  CD1 ILE A  23       1.505  -6.825   4.629  1.00  0.00           C  
ATOM    305  H   ILE A  23      -2.197  -6.157   4.642  1.00  0.00           H  
ATOM    306  HA  ILE A  23      -0.789  -3.741   5.503  1.00  0.00           H  
ATOM    307  HB  ILE A  23      -0.324  -5.802   3.383  1.00  0.00           H  
ATOM    308 1HG1 ILE A  23       1.975  -4.726   4.798  1.00  0.00           H  
ATOM    309 2HG1 ILE A  23       0.748  -5.274   5.923  1.00  0.00           H  
ATOM    310 1HG2 ILE A  23       1.624  -4.032   2.807  1.00  0.00           H  
ATOM    311 2HG2 ILE A  23       0.081  -4.127   1.924  1.00  0.00           H  
ATOM    312 3HG2 ILE A  23       0.301  -2.910   3.205  1.00  0.00           H  
ATOM    313 1HD1 ILE A  23       2.433  -7.048   5.157  1.00  0.00           H  
ATOM    314 2HD1 ILE A  23       0.718  -7.491   4.982  1.00  0.00           H  
ATOM    315 3HD1 ILE A  23       1.652  -6.970   3.559  1.00  0.00           H  
ATOM    316  N   GLN A  24      -3.111  -4.056   3.259  1.00  0.00           N  
ATOM    317  CA  GLN A  24      -4.045  -3.330   2.415  1.00  0.00           C  
ATOM    318  C   GLN A  24      -4.865  -2.347   3.253  1.00  0.00           C  
ATOM    319  O   GLN A  24      -4.929  -1.160   2.938  1.00  0.00           O  
ATOM    320  CB  GLN A  24      -4.957  -4.293   1.652  1.00  0.00           C  
ATOM    321  CG  GLN A  24      -4.263  -4.826   0.396  1.00  0.00           C  
ATOM    322  CD  GLN A  24      -5.125  -4.594  -0.847  1.00  0.00           C  
ATOM    323  OE1 GLN A  24      -5.719  -3.546  -1.035  1.00  0.00           O  
ATOM    324  NE2 GLN A  24      -5.159  -5.629  -1.681  1.00  0.00           N  
ATOM    325  H   GLN A  24      -3.313  -5.028   3.374  1.00  0.00           H  
ATOM    326  HA  GLN A  24      -3.427  -2.783   1.703  1.00  0.00           H  
ATOM    327 1HB  GLN A  24      -5.236  -5.125   2.298  1.00  0.00           H  
ATOM    328 2HB  GLN A  24      -5.879  -3.782   1.373  1.00  0.00           H  
ATOM    329 1HG  GLN A  24      -3.299  -4.332   0.272  1.00  0.00           H  
ATOM    330 2HG  GLN A  24      -4.063  -5.891   0.512  1.00  0.00           H  
ATOM    331 1HE2 GLN A  24      -4.647  -6.462  -1.467  1.00  0.00           H  
ATOM    332 2HE2 GLN A  24      -5.696  -5.575  -2.523  1.00  0.00           H  
ATOM    333  N   ARG A  25      -5.471  -2.878   4.305  1.00  0.00           N  
ATOM    334  CA  ARG A  25      -6.284  -2.062   5.191  1.00  0.00           C  
ATOM    335  C   ARG A  25      -5.474  -0.874   5.711  1.00  0.00           C  
ATOM    336  O   ARG A  25      -6.042   0.131   6.137  1.00  0.00           O  
ATOM    337  CB  ARG A  25      -6.796  -2.881   6.378  1.00  0.00           C  
ATOM    338  CG  ARG A  25      -5.639  -3.544   7.126  1.00  0.00           C  
ATOM    339  CD  ARG A  25      -6.152  -4.379   8.301  1.00  0.00           C  
ATOM    340  NE  ARG A  25      -5.577  -3.876   9.569  1.00  0.00           N  
ATOM    341  CZ  ARG A  25      -6.088  -4.136  10.780  1.00  0.00           C  
ATOM    342  NH1 ARG A  25      -7.186  -4.894  10.896  1.00  0.00           N  
ATOM    343  NH2 ARG A  25      -5.499  -3.636  11.876  1.00  0.00           N  
ATOM    344  H   ARG A  25      -5.414  -3.844   4.555  1.00  0.00           H  
ATOM    345  HA  ARG A  25      -7.119  -1.728   4.574  1.00  0.00           H  
ATOM    346 1HB  ARG A  25      -7.351  -2.234   7.058  1.00  0.00           H  
ATOM    347 2HB  ARG A  25      -7.491  -3.643   6.026  1.00  0.00           H  
ATOM    348 1HG  ARG A  25      -5.076  -4.180   6.443  1.00  0.00           H  
ATOM    349 2HG  ARG A  25      -4.951  -2.781   7.491  1.00  0.00           H  
ATOM    350 1HD  ARG A  25      -7.240  -4.333   8.342  1.00  0.00           H  
ATOM    351 2HD  ARG A  25      -5.882  -5.425   8.160  1.00  0.00           H  
ATOM    352  HE  ARG A  25      -4.757  -3.306   9.518  1.00  0.00           H  
ATOM    353 1HH1 ARG A  25      -7.625  -5.267  10.079  1.00  0.00           H  
ATOM    354 2HH1 ARG A  25      -7.567  -5.088  11.801  1.00  0.00           H  
ATOM    355 1HH2 ARG A  25      -4.680  -3.070  11.790  1.00  0.00           H  
ATOM    356 2HH2 ARG A  25      -5.880  -3.830  12.780  1.00  0.00           H  
ATOM    357  N   GLU A  26      -4.159  -1.027   5.660  1.00  0.00           N  
ATOM    358  CA  GLU A  26      -3.264   0.021   6.121  1.00  0.00           C  
ATOM    359  C   GLU A  26      -3.187   1.145   5.087  1.00  0.00           C  
ATOM    360  O   GLU A  26      -3.482   2.299   5.395  1.00  0.00           O  
ATOM    361  CB  GLU A  26      -1.874  -0.540   6.426  1.00  0.00           C  
ATOM    362  CG  GLU A  26      -1.861  -1.272   7.770  1.00  0.00           C  
ATOM    363  CD  GLU A  26      -1.083  -0.477   8.820  1.00  0.00           C  
ATOM    364  OE1 GLU A  26      -1.696   0.444   9.403  1.00  0.00           O  
ATOM    365  OE2 GLU A  26       0.106  -0.807   9.017  1.00  0.00           O  
ATOM    366  H   GLU A  26      -3.705  -1.848   5.312  1.00  0.00           H  
ATOM    367  HA  GLU A  26      -3.708   0.396   7.043  1.00  0.00           H  
ATOM    368 1HB  GLU A  26      -1.571  -1.223   5.633  1.00  0.00           H  
ATOM    369 2HB  GLU A  26      -1.146   0.271   6.443  1.00  0.00           H  
ATOM    370 1HG  GLU A  26      -2.884  -1.431   8.112  1.00  0.00           H  
ATOM    371 2HG  GLU A  26      -1.410  -2.257   7.647  1.00  0.00           H  
ATOM    372  N   VAL A  27      -2.788   0.770   3.880  1.00  0.00           N  
ATOM    373  CA  VAL A  27      -2.668   1.733   2.799  1.00  0.00           C  
ATOM    374  C   VAL A  27      -4.034   2.371   2.535  1.00  0.00           C  
ATOM    375  O   VAL A  27      -4.114   3.530   2.132  1.00  0.00           O  
ATOM    376  CB  VAL A  27      -2.075   1.058   1.560  1.00  0.00           C  
ATOM    377  CG1 VAL A  27      -0.739   0.387   1.889  1.00  0.00           C  
ATOM    378  CG2 VAL A  27      -3.060   0.053   0.959  1.00  0.00           C  
ATOM    379  H   VAL A  27      -2.550  -0.170   3.637  1.00  0.00           H  
ATOM    380  HA  VAL A  27      -1.975   2.509   3.124  1.00  0.00           H  
ATOM    381  HB  VAL A  27      -1.887   1.830   0.815  1.00  0.00           H  
ATOM    382 1HG1 VAL A  27      -0.312  -0.036   0.979  1.00  0.00           H  
ATOM    383 2HG1 VAL A  27      -0.053   1.127   2.302  1.00  0.00           H  
ATOM    384 3HG1 VAL A  27      -0.901  -0.407   2.618  1.00  0.00           H  
ATOM    385 1HG2 VAL A  27      -4.039   0.521   0.858  1.00  0.00           H  
ATOM    386 2HG2 VAL A  27      -2.704  -0.261  -0.022  1.00  0.00           H  
ATOM    387 3HG2 VAL A  27      -3.137  -0.815   1.613  1.00  0.00           H  
ATOM    388  N   LYS A  28      -5.074   1.585   2.774  1.00  0.00           N  
ATOM    389  CA  LYS A  28      -6.432   2.059   2.568  1.00  0.00           C  
ATOM    390  C   LYS A  28      -6.843   2.946   3.745  1.00  0.00           C  
ATOM    391  O   LYS A  28      -7.474   3.984   3.554  1.00  0.00           O  
ATOM    392  CB  LYS A  28      -7.379   0.882   2.326  1.00  0.00           C  
ATOM    393  CG  LYS A  28      -8.674   1.348   1.659  1.00  0.00           C  
ATOM    394  CD  LYS A  28      -9.041   0.445   0.480  1.00  0.00           C  
ATOM    395  CE  LYS A  28      -9.102   1.243  -0.824  1.00  0.00           C  
ATOM    396  NZ  LYS A  28      -9.910   0.524  -1.834  1.00  0.00           N  
ATOM    397  H   LYS A  28      -5.000   0.644   3.103  1.00  0.00           H  
ATOM    398  HA  LYS A  28      -6.433   2.665   1.662  1.00  0.00           H  
ATOM    399 1HB  LYS A  28      -6.888   0.139   1.696  1.00  0.00           H  
ATOM    400 2HB  LYS A  28      -7.608   0.393   3.273  1.00  0.00           H  
ATOM    401 1HG  LYS A  28      -9.484   1.346   2.389  1.00  0.00           H  
ATOM    402 2HG  LYS A  28      -8.560   2.376   1.313  1.00  0.00           H  
ATOM    403 1HD  LYS A  28      -8.305  -0.354   0.387  1.00  0.00           H  
ATOM    404 2HD  LYS A  28     -10.004  -0.029   0.666  1.00  0.00           H  
ATOM    405 1HE  LYS A  28      -9.535   2.226  -0.636  1.00  0.00           H  
ATOM    406 2HE  LYS A  28      -8.094   1.407  -1.205  1.00  0.00           H  
ATOM    407 1HZ  LYS A  28      -9.647  -0.441  -1.846  1.00  0.00           H  
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ATOM    409 3HZ  LYS A  28      -9.748   0.924  -2.736  1.00  0.00           H  
ATOM    410  N   ALA A  29      -6.467   2.504   4.937  1.00  0.00           N  
ATOM    411  CA  ALA A  29      -6.789   3.245   6.145  1.00  0.00           C  
ATOM    412  C   ALA A  29      -5.961   4.531   6.184  1.00  0.00           C  
ATOM    413  O   ALA A  29      -6.236   5.426   6.983  1.00  0.00           O  
ATOM    414  CB  ALA A  29      -6.546   2.358   7.368  1.00  0.00           C  
ATOM    415  H   ALA A  29      -5.954   1.658   5.084  1.00  0.00           H  
ATOM    416  HA  ALA A  29      -7.847   3.504   6.104  1.00  0.00           H  
ATOM    417 1HB  ALA A  29      -6.649   2.953   8.275  1.00  0.00           H  
ATOM    418 2HB  ALA A  29      -7.276   1.548   7.380  1.00  0.00           H  
ATOM    419 3HB  ALA A  29      -5.540   1.940   7.320  1.00  0.00           H  
ATOM    420  N   ILE A  30      -4.965   4.583   5.312  1.00  0.00           N  
ATOM    421  CA  ILE A  30      -4.096   5.745   5.238  1.00  0.00           C  
ATOM    422  C   ILE A  30      -4.275   6.424   3.878  1.00  0.00           C  
ATOM    423  O   ILE A  30      -3.715   7.491   3.635  1.00  0.00           O  
ATOM    424  CB  ILE A  30      -2.649   5.353   5.544  1.00  0.00           C  
ATOM    425  CG1 ILE A  30      -2.077   4.463   4.438  1.00  0.00           C  
ATOM    426  CG2 ILE A  30      -2.538   4.697   6.922  1.00  0.00           C  
ATOM    427  CD1 ILE A  30      -1.078   5.236   3.574  1.00  0.00           C  
ATOM    428  H   ILE A  30      -4.748   3.851   4.666  1.00  0.00           H  
ATOM    429  HA  ILE A  30      -4.413   6.441   6.015  1.00  0.00           H  
ATOM    430  HB  ILE A  30      -2.047   6.261   5.570  1.00  0.00           H  
ATOM    431 1HG1 ILE A  30      -1.586   3.597   4.881  1.00  0.00           H  
ATOM    432 2HG1 ILE A  30      -2.887   4.086   3.814  1.00  0.00           H  
ATOM    433 1HG2 ILE A  30      -3.528   4.386   7.256  1.00  0.00           H  
ATOM    434 2HG2 ILE A  30      -1.886   3.826   6.858  1.00  0.00           H  
ATOM    435 3HG2 ILE A  30      -2.123   5.412   7.632  1.00  0.00           H  
ATOM    436 1HD1 ILE A  30      -0.797   4.631   2.713  1.00  0.00           H  
ATOM    437 2HD1 ILE A  30      -1.536   6.165   3.232  1.00  0.00           H  
ATOM    438 3HD1 ILE A  30      -0.189   5.465   4.163  1.00  0.00           H  
ATOM    439  N   GLU A  31      -5.057   5.776   3.028  1.00  0.00           N  
ATOM    440  CA  GLU A  31      -5.317   6.304   1.699  1.00  0.00           C  
ATOM    441  C   GLU A  31      -5.804   7.751   1.788  1.00  0.00           C  
ATOM    442  O   GLU A  31      -5.341   8.613   1.042  1.00  0.00           O  
ATOM    443  CB  GLU A  31      -6.326   5.431   0.950  1.00  0.00           C  
ATOM    444  CG  GLU A  31      -7.028   6.227  -0.152  1.00  0.00           C  
ATOM    445  CD  GLU A  31      -8.109   5.385  -0.833  1.00  0.00           C  
ATOM    446  OE1 GLU A  31      -9.229   5.343  -0.279  1.00  0.00           O  
ATOM    447  OE2 GLU A  31      -7.792   4.803  -1.892  1.00  0.00           O  
ATOM    448  H   GLU A  31      -5.509   4.908   3.233  1.00  0.00           H  
ATOM    449  HA  GLU A  31      -4.359   6.266   1.180  1.00  0.00           H  
ATOM    450 1HB  GLU A  31      -5.817   4.571   0.514  1.00  0.00           H  
ATOM    451 2HB  GLU A  31      -7.066   5.042   1.650  1.00  0.00           H  
ATOM    452 1HG  GLU A  31      -7.475   7.126   0.272  1.00  0.00           H  
ATOM    453 2HG  GLU A  31      -6.297   6.553  -0.892  1.00  0.00           H  
ATOM    454  N   PRO A  32      -6.755   7.980   2.732  1.00  0.00           N  
ATOM    455  CA  PRO A  32      -7.310   9.309   2.929  1.00  0.00           C  
ATOM    456  C   PRO A  32      -6.317  10.215   3.660  1.00  0.00           C  
ATOM    457  O   PRO A  32      -6.290  11.423   3.433  1.00  0.00           O  
ATOM    458  CB  PRO A  32      -8.596   9.087   3.708  1.00  0.00           C  
ATOM    459  CG  PRO A  32      -8.480   7.700   4.319  1.00  0.00           C  
ATOM    460  CD  PRO A  32      -7.327   6.985   3.634  1.00  0.00           C  
ATOM    461  HA  PRO A  32      -7.482   9.748   2.047  1.00  0.00           H  
ATOM    462 1HB  PRO A  32      -8.721   9.846   4.480  1.00  0.00           H  
ATOM    463 2HB  PRO A  32      -9.465   9.154   3.053  1.00  0.00           H  
ATOM    464 1HG  PRO A  32      -8.302   7.770   5.392  1.00  0.00           H  
ATOM    465 2HG  PRO A  32      -9.408   7.145   4.185  1.00  0.00           H  
ATOM    466 1HD  PRO A  32      -6.590   6.637   4.358  1.00  0.00           H  
ATOM    467 2HD  PRO A  32      -7.674   6.108   3.087  1.00  0.00           H  
ATOM    468  N   GLN A  33      -5.526   9.596   4.524  1.00  0.00           N  
ATOM    469  CA  GLN A  33      -4.534  10.331   5.290  1.00  0.00           C  
ATOM    470  C   GLN A  33      -3.579  11.071   4.351  1.00  0.00           C  
ATOM    471  O   GLN A  33      -2.972  12.068   4.737  1.00  0.00           O  
ATOM    472  CB  GLN A  33      -3.766   9.399   6.229  1.00  0.00           C  
ATOM    473  CG  GLN A  33      -4.605   9.046   7.459  1.00  0.00           C  
ATOM    474  CD  GLN A  33      -3.715   8.791   8.677  1.00  0.00           C  
ATOM    475  OE1 GLN A  33      -3.914   9.337   9.749  1.00  0.00           O  
ATOM    476  NE2 GLN A  33      -2.723   7.934   8.452  1.00  0.00           N  
ATOM    477  H   GLN A  33      -5.554   8.612   4.703  1.00  0.00           H  
ATOM    478  HA  GLN A  33      -5.100  11.049   5.883  1.00  0.00           H  
ATOM    479 1HB  GLN A  33      -3.490   8.488   5.699  1.00  0.00           H  
ATOM    480 2HB  GLN A  33      -2.838   9.878   6.544  1.00  0.00           H  
ATOM    481 1HG  GLN A  33      -5.299   9.858   7.675  1.00  0.00           H  
ATOM    482 2HG  GLN A  33      -5.206   8.160   7.251  1.00  0.00           H  
ATOM    483 1HE2 GLN A  33      -2.615   7.521   7.547  1.00  0.00           H  
ATOM    484 2HE2 GLN A  33      -2.086   7.702   9.187  1.00  0.00           H  
ATOM    485  N   VAL A  34      -3.477  10.554   3.135  1.00  0.00           N  
ATOM    486  CA  VAL A  34      -2.607  11.153   2.138  1.00  0.00           C  
ATOM    487  C   VAL A  34      -3.419  12.121   1.274  1.00  0.00           C  
ATOM    488  O   VAL A  34      -3.016  13.265   1.072  1.00  0.00           O  
ATOM    489  CB  VAL A  34      -1.915  10.059   1.322  1.00  0.00           C  
ATOM    490  CG1 VAL A  34      -1.043  10.666   0.221  1.00  0.00           C  
ATOM    491  CG2 VAL A  34      -1.095   9.137   2.226  1.00  0.00           C  
ATOM    492  H   VAL A  34      -3.975   9.743   2.829  1.00  0.00           H  
ATOM    493  HA  VAL A  34      -1.838  11.716   2.667  1.00  0.00           H  
ATOM    494  HB  VAL A  34      -2.688   9.458   0.843  1.00  0.00           H  
ATOM    495 1HG1 VAL A  34      -0.298  11.325   0.668  1.00  0.00           H  
ATOM    496 2HG1 VAL A  34      -0.540   9.868  -0.326  1.00  0.00           H  
ATOM    497 3HG1 VAL A  34      -1.668  11.237  -0.465  1.00  0.00           H  
ATOM    498 1HG2 VAL A  34      -0.796   8.251   1.665  1.00  0.00           H  
ATOM    499 2HG2 VAL A  34      -0.206   9.664   2.572  1.00  0.00           H  
ATOM    500 3HG2 VAL A  34      -1.698   8.839   3.083  1.00  0.00           H  
ATOM    501  N   VAL A  35      -4.547  11.625   0.787  1.00  0.00           N  
ATOM    502  CA  VAL A  35      -5.419  12.431  -0.050  1.00  0.00           C  
ATOM    503  C   VAL A  35      -5.866  13.669   0.730  1.00  0.00           C  
ATOM    504  O   VAL A  35      -6.052  14.738   0.150  1.00  0.00           O  
ATOM    505  CB  VAL A  35      -6.591  11.585  -0.552  1.00  0.00           C  
ATOM    506  CG1 VAL A  35      -7.534  12.417  -1.423  1.00  0.00           C  
ATOM    507  CG2 VAL A  35      -6.093  10.351  -1.307  1.00  0.00           C  
ATOM    508  H   VAL A  35      -4.867  10.693   0.957  1.00  0.00           H  
ATOM    509  HA  VAL A  35      -4.839  12.752  -0.916  1.00  0.00           H  
ATOM    510  HB  VAL A  35      -7.153  11.242   0.317  1.00  0.00           H  
ATOM    511 1HG1 VAL A  35      -7.065  12.605  -2.389  1.00  0.00           H  
ATOM    512 2HG1 VAL A  35      -8.467  11.873  -1.572  1.00  0.00           H  
ATOM    513 3HG1 VAL A  35      -7.742  13.366  -0.930  1.00  0.00           H  
ATOM    514 1HG2 VAL A  35      -5.735  10.648  -2.292  1.00  0.00           H  
ATOM    515 2HG2 VAL A  35      -5.279   9.888  -0.749  1.00  0.00           H  
ATOM    516 3HG2 VAL A  35      -6.910   9.638  -1.416  1.00  0.00           H  
ATOM    517  N   GLY A  36      -6.026  13.483   2.032  1.00  0.00           N  
ATOM    518  CA  GLY A  36      -6.447  14.572   2.897  1.00  0.00           C  
ATOM    519  C   GLY A  36      -5.250  15.193   3.619  1.00  0.00           C  
ATOM    520  O   GLY A  36      -5.416  15.872   4.632  1.00  0.00           O  
ATOM    521  H   GLY A  36      -5.872  12.610   2.495  1.00  0.00           H  
ATOM    522 1HA  GLY A  36      -6.956  15.334   2.307  1.00  0.00           H  
ATOM    523 2HA  GLY A  36      -7.166  14.202   3.628  1.00  0.00           H  
ATOM    524  N   PHE A  37      -4.072  14.939   3.071  1.00  0.00           N  
ATOM    525  CA  PHE A  37      -2.847  15.465   3.650  1.00  0.00           C  
ATOM    526  C   PHE A  37      -2.718  16.967   3.388  1.00  0.00           C  
ATOM    527  O   PHE A  37      -3.469  17.529   2.593  1.00  0.00           O  
ATOM    528  CB  PHE A  37      -1.684  14.739   2.972  1.00  0.00           C  
ATOM    529  CG  PHE A  37      -0.303  15.211   3.433  1.00  0.00           C  
ATOM    530  CD1 PHE A  37       0.033  15.148   4.749  1.00  0.00           C  
ATOM    531  CD2 PHE A  37       0.588  15.693   2.525  1.00  0.00           C  
ATOM    532  CE1 PHE A  37       1.315  15.587   5.176  1.00  0.00           C  
ATOM    533  CE2 PHE A  37       1.870  16.131   2.953  1.00  0.00           C  
ATOM    534  CZ  PHE A  37       2.206  16.069   4.269  1.00  0.00           C  
ATOM    535  H   PHE A  37      -3.946  14.386   2.247  1.00  0.00           H  
ATOM    536  HA  PHE A  37      -2.896  15.289   4.725  1.00  0.00           H  
ATOM    537 1HB  PHE A  37      -1.774  13.670   3.166  1.00  0.00           H  
ATOM    538 2HB  PHE A  37      -1.762  14.875   1.894  1.00  0.00           H  
ATOM    539  HD1 PHE A  37      -0.681  14.762   5.476  1.00  0.00           H  
ATOM    540  HD2 PHE A  37       0.319  15.743   1.471  1.00  0.00           H  
ATOM    541  HE1 PHE A  37       1.584  15.537   6.231  1.00  0.00           H  
ATOM    542  HE2 PHE A  37       2.584  16.517   2.225  1.00  0.00           H  
ATOM    543  HZ  PHE A  37       3.189  16.405   4.597  1.00  0.00           H  
ATOM    544  N   SER A  38      -1.758  17.574   4.071  1.00  0.00           N  
ATOM    545  CA  SER A  38      -1.520  19.000   3.922  1.00  0.00           C  
ATOM    546  C   SER A  38      -0.161  19.369   4.519  1.00  0.00           C  
ATOM    547  O   SER A  38      -0.081  19.800   5.668  1.00  0.00           O  
ATOM    548  CB  SER A  38      -2.631  19.816   4.586  1.00  0.00           C  
ATOM    549  OG  SER A  38      -3.598  20.268   3.642  1.00  0.00           O  
ATOM    550  H   SER A  38      -1.151  17.109   4.716  1.00  0.00           H  
ATOM    551  HA  SER A  38      -1.529  19.183   2.847  1.00  0.00           H  
ATOM    552 1HB  SER A  38      -3.123  19.208   5.346  1.00  0.00           H  
ATOM    553 2HB  SER A  38      -2.195  20.673   5.097  1.00  0.00           H  
ATOM    554  HG  SER A  38      -3.816  21.230   3.809  1.00  0.00           H  
ATOM    555  N   GLY A  39       0.873  19.186   3.712  1.00  0.00           N  
ATOM    556  CA  GLY A  39       2.225  19.494   4.146  1.00  0.00           C  
ATOM    557  C   GLY A  39       3.198  19.478   2.965  1.00  0.00           C  
ATOM    558  O   GLY A  39       3.066  18.657   2.059  1.00  0.00           O  
ATOM    559  H   GLY A  39       0.799  18.835   2.779  1.00  0.00           H  
ATOM    560 1HA  GLY A  39       2.243  20.474   4.623  1.00  0.00           H  
ATOM    561 2HA  GLY A  39       2.545  18.770   4.895  1.00  0.00           H  
ATOM    562  N   LEU A  40       4.153  20.394   3.014  1.00  0.00           N  
ATOM    563  CA  LEU A  40       5.148  20.495   1.960  1.00  0.00           C  
ATOM    564  C   LEU A  40       5.890  19.163   1.835  1.00  0.00           C  
ATOM    565  O   LEU A  40       5.818  18.322   2.729  1.00  0.00           O  
ATOM    566  CB  LEU A  40       6.070  21.692   2.205  1.00  0.00           C  
ATOM    567  CG  LEU A  40       5.709  22.980   1.463  1.00  0.00           C  
ATOM    568  CD1 LEU A  40       6.261  22.964   0.037  1.00  0.00           C  
ATOM    569  CD2 LEU A  40       4.198  23.223   1.490  1.00  0.00           C  
ATOM    570  H   LEU A  40       4.254  21.058   3.755  1.00  0.00           H  
ATOM    571  HA  LEU A  40       4.617  20.684   1.027  1.00  0.00           H  
ATOM    572 1HB  LEU A  40       6.081  21.902   3.275  1.00  0.00           H  
ATOM    573 2HB  LEU A  40       7.084  21.407   1.926  1.00  0.00           H  
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ATOM    667 2HB  TYR A  46       6.641  15.255   5.096  1.00  0.00           H  
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ATOM    669  HD2 TYR A  46       4.588  15.422   2.171  1.00  0.00           H  
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ATOM    671  HE2 TYR A  46       5.253  14.504  -0.105  1.00  0.00           H  
ATOM    672  HH  TYR A  46       7.235  13.617  -1.176  1.00  0.00           H  
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ATOM    680  CE  LYS A  47      11.517  13.351   5.702  1.00  0.00           C  
ATOM    681  NZ  LYS A  47      11.535  14.736   6.224  1.00  0.00           N  
ATOM    682  H   LYS A  47       6.930  13.315   7.097  1.00  0.00           H  
ATOM    683  HA  LYS A  47       8.037  11.176   5.654  1.00  0.00           H  
ATOM    684 1HB  LYS A  47       8.339  11.832   8.599  1.00  0.00           H  
ATOM    685 2HB  LYS A  47       9.413  10.842   7.633  1.00  0.00           H  
ATOM    686 1HG  LYS A  47       8.837  13.808   7.175  1.00  0.00           H  
ATOM    687 2HG  LYS A  47      10.299  13.151   7.883  1.00  0.00           H  
ATOM    688 1HD  LYS A  47      10.127  11.713   5.509  1.00  0.00           H  
ATOM    689 2HD  LYS A  47       9.468  13.266   5.033  1.00  0.00           H  
ATOM    690 1HE  LYS A  47      12.199  12.728   6.281  1.00  0.00           H  
ATOM    691 2HE  LYS A  47      11.873  13.339   4.672  1.00  0.00           H  
ATOM    692 1HZ  LYS A  47      12.331  15.219   5.859  1.00  0.00           H  
ATOM    693 2HZ  LYS A  47      10.701  15.209   5.942  1.00  0.00           H  
ATOM    694 3HZ  LYS A  47      11.586  14.715   7.222  1.00  0.00           H  
ATOM    695  N   ARG A  48       6.050  10.372   8.170  1.00  0.00           N  
ATOM    696  CA  ARG A  48       5.187   9.324   8.687  1.00  0.00           C  
ATOM    697  C   ARG A  48       4.365   8.706   7.555  1.00  0.00           C  
ATOM    698  O   ARG A  48       4.491   7.516   7.269  1.00  0.00           O  
ATOM    699  CB  ARG A  48       4.240   9.869   9.757  1.00  0.00           C  
ATOM    700  CG  ARG A  48       3.980   8.824  10.844  1.00  0.00           C  
ATOM    701  CD  ARG A  48       3.708   9.491  12.193  1.00  0.00           C  
ATOM    702  NE  ARG A  48       4.968  10.027  12.756  1.00  0.00           N  
ATOM    703  CZ  ARG A  48       5.037  10.767  13.871  1.00  0.00           C  
ATOM    704  NH1 ARG A  48       3.921  11.063  14.550  1.00  0.00           N  
ATOM    705  NH2 ARG A  48       6.224  11.211  14.308  1.00  0.00           N  
ATOM    706  H   ARG A  48       6.087  11.202   8.726  1.00  0.00           H  
ATOM    707  HA  ARG A  48       5.868   8.592   9.122  1.00  0.00           H  
ATOM    708 1HB  ARG A  48       4.668  10.766  10.205  1.00  0.00           H  
ATOM    709 2HB  ARG A  48       3.296  10.163   9.298  1.00  0.00           H  
ATOM    710 1HG  ARG A  48       3.128   8.205  10.562  1.00  0.00           H  
ATOM    711 2HG  ARG A  48       4.842   8.161  10.929  1.00  0.00           H  
ATOM    712 1HD  ARG A  48       2.983  10.296  12.071  1.00  0.00           H  
ATOM    713 2HD  ARG A  48       3.270   8.770  12.883  1.00  0.00           H  
ATOM    714  HE  ARG A  48       5.820   9.825  12.274  1.00  0.00           H  
ATOM    715 1HH1 ARG A  48       3.035  10.732  14.224  1.00  0.00           H  
ATOM    716 2HH1 ARG A  48       3.973  11.616  15.382  1.00  0.00           H  
ATOM    717 1HH2 ARG A  48       7.058  10.990  13.801  1.00  0.00           H  
ATOM    718 2HH2 ARG A  48       6.276  11.763  15.140  1.00  0.00           H  
ATOM    719  N   LEU A  49       3.541   9.542   6.940  1.00  0.00           N  
ATOM    720  CA  LEU A  49       2.698   9.093   5.845  1.00  0.00           C  
ATOM    721  C   LEU A  49       3.519   8.206   4.907  1.00  0.00           C  
ATOM    722  O   LEU A  49       3.260   7.008   4.795  1.00  0.00           O  
ATOM    723  CB  LEU A  49       2.044  10.287   5.147  1.00  0.00           C  
ATOM    724  CG  LEU A  49       0.931  10.992   5.925  1.00  0.00           C  
ATOM    725  CD1 LEU A  49       0.118  11.909   5.010  1.00  0.00           C  
ATOM    726  CD2 LEU A  49       0.046   9.979   6.655  1.00  0.00           C  
ATOM    727  H   LEU A  49       3.445  10.509   7.179  1.00  0.00           H  
ATOM    728  HA  LEU A  49       1.896   8.493   6.275  1.00  0.00           H  
ATOM    729 1HB  LEU A  49       2.820  11.018   4.919  1.00  0.00           H  
ATOM    730 2HB  LEU A  49       1.636   9.948   4.195  1.00  0.00           H  
ATOM    731  HG  LEU A  49       1.392  11.623   6.686  1.00  0.00           H  
ATOM    732 1HD1 LEU A  49      -0.882  12.040   5.422  1.00  0.00           H  
ATOM    733 2HD1 LEU A  49       0.611  12.879   4.937  1.00  0.00           H  
ATOM    734 3HD1 LEU A  49       0.048  11.462   4.018  1.00  0.00           H  
ATOM    735 1HD2 LEU A  49      -0.875  10.466   6.975  1.00  0.00           H  
ATOM    736 2HD2 LEU A  49      -0.193   9.156   5.982  1.00  0.00           H  
ATOM    737 3HD2 LEU A  49       0.576   9.594   7.526  1.00  0.00           H  
ATOM    738  N   GLU A  50       4.491   8.828   4.256  1.00  0.00           N  
ATOM    739  CA  GLU A  50       5.351   8.110   3.330  1.00  0.00           C  
ATOM    740  C   GLU A  50       5.876   6.828   3.980  1.00  0.00           C  
ATOM    741  O   GLU A  50       5.734   5.741   3.421  1.00  0.00           O  
ATOM    742  CB  GLU A  50       6.504   8.995   2.854  1.00  0.00           C  
ATOM    743  CG  GLU A  50       7.472   8.206   1.971  1.00  0.00           C  
ATOM    744  CD  GLU A  50       7.861   9.009   0.728  1.00  0.00           C  
ATOM    745  OE1 GLU A  50       9.014   8.836   0.279  1.00  0.00           O  
ATOM    746  OE2 GLU A  50       6.996   9.778   0.256  1.00  0.00           O  
ATOM    747  H   GLU A  50       4.694   9.802   4.352  1.00  0.00           H  
ATOM    748  HA  GLU A  50       4.716   7.860   2.480  1.00  0.00           H  
ATOM    749 1HB  GLU A  50       6.108   9.844   2.296  1.00  0.00           H  
ATOM    750 2HB  GLU A  50       7.037   9.399   3.714  1.00  0.00           H  
ATOM    751 1HG  GLU A  50       8.367   7.955   2.541  1.00  0.00           H  
ATOM    752 2HG  GLU A  50       7.012   7.265   1.671  1.00  0.00           H  
ATOM    753  N   ARG A  51       6.471   6.997   5.151  1.00  0.00           N  
ATOM    754  CA  ARG A  51       7.019   5.867   5.883  1.00  0.00           C  
ATOM    755  C   ARG A  51       6.025   4.704   5.884  1.00  0.00           C  
ATOM    756  O   ARG A  51       6.392   3.569   5.582  1.00  0.00           O  
ATOM    757  CB  ARG A  51       7.344   6.252   7.327  1.00  0.00           C  
ATOM    758  CG  ARG A  51       8.841   6.105   7.610  1.00  0.00           C  
ATOM    759  CD  ARG A  51       9.411   7.383   8.227  1.00  0.00           C  
ATOM    760  NE  ARG A  51      10.651   7.076   8.973  1.00  0.00           N  
ATOM    761  CZ  ARG A  51      11.508   8.004   9.421  1.00  0.00           C  
ATOM    762  NH1 ARG A  51      11.265   9.303   9.200  1.00  0.00           N  
ATOM    763  NH2 ARG A  51      12.609   7.633  10.089  1.00  0.00           N  
ATOM    764  H   ARG A  51       6.583   7.884   5.599  1.00  0.00           H  
ATOM    765  HA  ARG A  51       7.931   5.604   5.347  1.00  0.00           H  
ATOM    766 1HB  ARG A  51       7.035   7.281   7.512  1.00  0.00           H  
ATOM    767 2HB  ARG A  51       6.777   5.621   8.012  1.00  0.00           H  
ATOM    768 1HG  ARG A  51       9.006   5.266   8.286  1.00  0.00           H  
ATOM    769 2HG  ARG A  51       9.369   5.877   6.684  1.00  0.00           H  
ATOM    770 1HD  ARG A  51       9.618   8.113   7.445  1.00  0.00           H  
ATOM    771 2HD  ARG A  51       8.676   7.833   8.896  1.00  0.00           H  
ATOM    772  HE  ARG A  51      10.863   6.116   9.155  1.00  0.00           H  
ATOM    773 1HH1 ARG A  51      10.443   9.580   8.702  1.00  0.00           H  
ATOM    774 2HH1 ARG A  51      11.904   9.995   9.534  1.00  0.00           H  
ATOM    775 1HH2 ARG A  51      12.791   6.663  10.253  1.00  0.00           H  
ATOM    776 2HH2 ARG A  51      13.249   8.325  10.423  1.00  0.00           H  
ATOM    777  N   ILE A  52       4.786   5.026   6.226  1.00  0.00           N  
ATOM    778  CA  ILE A  52       3.737   4.022   6.271  1.00  0.00           C  
ATOM    779  C   ILE A  52       3.720   3.249   4.950  1.00  0.00           C  
ATOM    780  O   ILE A  52       3.995   2.051   4.924  1.00  0.00           O  
ATOM    781  CB  ILE A  52       2.394   4.665   6.624  1.00  0.00           C  
ATOM    782  CG1 ILE A  52       2.473   5.395   7.966  1.00  0.00           C  
ATOM    783  CG2 ILE A  52       1.268   3.630   6.599  1.00  0.00           C  
ATOM    784  CD1 ILE A  52       1.493   6.569   8.009  1.00  0.00           C  
ATOM    785  H   ILE A  52       4.496   5.951   6.470  1.00  0.00           H  
ATOM    786  HA  ILE A  52       3.983   3.327   7.074  1.00  0.00           H  
ATOM    787  HB  ILE A  52       2.163   5.411   5.864  1.00  0.00           H  
ATOM    788 1HG1 ILE A  52       2.250   4.701   8.776  1.00  0.00           H  
ATOM    789 2HG1 ILE A  52       3.488   5.758   8.128  1.00  0.00           H  
ATOM    790 1HG2 ILE A  52       1.601   2.743   6.061  1.00  0.00           H  
ATOM    791 2HG2 ILE A  52       1.003   3.357   7.621  1.00  0.00           H  
ATOM    792 3HG2 ILE A  52       0.397   4.053   6.099  1.00  0.00           H  
ATOM    793 1HD1 ILE A  52       1.116   6.766   7.005  1.00  0.00           H  
ATOM    794 2HD1 ILE A  52       0.659   6.323   8.667  1.00  0.00           H  
ATOM    795 3HD1 ILE A  52       2.003   7.456   8.385  1.00  0.00           H  
ATOM    796  N   LEU A  53       3.396   3.968   3.885  1.00  0.00           N  
ATOM    797  CA  LEU A  53       3.339   3.365   2.564  1.00  0.00           C  
ATOM    798  C   LEU A  53       4.644   2.612   2.296  1.00  0.00           C  
ATOM    799  O   LEU A  53       4.624   1.438   1.929  1.00  0.00           O  
ATOM    800  CB  LEU A  53       3.010   4.421   1.507  1.00  0.00           C  
ATOM    801  CG  LEU A  53       1.567   4.929   1.493  1.00  0.00           C  
ATOM    802  CD1 LEU A  53       1.461   6.259   0.744  1.00  0.00           C  
ATOM    803  CD2 LEU A  53       0.619   3.872   0.922  1.00  0.00           C  
ATOM    804  H   LEU A  53       3.174   4.942   3.915  1.00  0.00           H  
ATOM    805  HA  LEU A  53       2.520   2.646   2.568  1.00  0.00           H  
ATOM    806 1HB  LEU A  53       3.673   5.273   1.655  1.00  0.00           H  
ATOM    807 2HB  LEU A  53       3.238   4.006   0.525  1.00  0.00           H  
ATOM    808  HG  LEU A  53       1.260   5.114   2.523  1.00  0.00           H  
ATOM    809 1HD1 LEU A  53       0.831   6.945   1.311  1.00  0.00           H  
ATOM    810 2HD1 LEU A  53       2.455   6.690   0.628  1.00  0.00           H  
ATOM    811 3HD1 LEU A  53       1.021   6.089  -0.238  1.00  0.00           H  
ATOM    812 1HD2 LEU A  53       0.998   3.527  -0.040  1.00  0.00           H  
ATOM    813 2HD2 LEU A  53       0.556   3.030   1.611  1.00  0.00           H  
ATOM    814 3HD2 LEU A  53      -0.371   4.307   0.788  1.00  0.00           H  
ATOM    815  N   THR A  54       5.748   3.319   2.489  1.00  0.00           N  
ATOM    816  CA  THR A  54       7.060   2.732   2.273  1.00  0.00           C  
ATOM    817  C   THR A  54       7.204   1.437   3.074  1.00  0.00           C  
ATOM    818  O   THR A  54       7.791   0.468   2.595  1.00  0.00           O  
ATOM    819  CB  THR A  54       8.113   3.785   2.625  1.00  0.00           C  
ATOM    820  OG1 THR A  54       9.028   3.740   1.534  1.00  0.00           O  
ATOM    821  CG2 THR A  54       8.957   3.386   3.837  1.00  0.00           C  
ATOM    822  H   THR A  54       5.756   4.273   2.788  1.00  0.00           H  
ATOM    823  HA  THR A  54       7.148   2.468   1.219  1.00  0.00           H  
ATOM    824  HB  THR A  54       7.652   4.761   2.776  1.00  0.00           H  
ATOM    825  HG1 THR A  54       9.357   4.660   1.325  1.00  0.00           H  
ATOM    826 1HG2 THR A  54       9.527   4.248   4.183  1.00  0.00           H  
ATOM    827 2HG2 THR A  54       8.303   3.039   4.637  1.00  0.00           H  
ATOM    828 3HG2 THR A  54       9.642   2.587   3.555  1.00  0.00           H  
ATOM    829  N   LYS A  55       6.657   1.462   4.281  1.00  0.00           N  
ATOM    830  CA  LYS A  55       6.718   0.302   5.154  1.00  0.00           C  
ATOM    831  C   LYS A  55       5.769  -0.777   4.627  1.00  0.00           C  
ATOM    832  O   LYS A  55       6.172  -1.922   4.433  1.00  0.00           O  
ATOM    833  CB  LYS A  55       6.444   0.707   6.604  1.00  0.00           C  
ATOM    834  CG  LYS A  55       7.741   0.755   7.414  1.00  0.00           C  
ATOM    835  CD  LYS A  55       8.048   2.182   7.873  1.00  0.00           C  
ATOM    836  CE  LYS A  55       8.492   2.203   9.337  1.00  0.00           C  
ATOM    837  NZ  LYS A  55       8.296   3.550   9.919  1.00  0.00           N  
ATOM    838  H   LYS A  55       6.182   2.254   4.664  1.00  0.00           H  
ATOM    839  HA  LYS A  55       7.736  -0.084   5.114  1.00  0.00           H  
ATOM    840 1HB  LYS A  55       5.960   1.684   6.628  1.00  0.00           H  
ATOM    841 2HB  LYS A  55       5.752  -0.002   7.059  1.00  0.00           H  
ATOM    842 1HG  LYS A  55       7.657   0.100   8.281  1.00  0.00           H  
ATOM    843 2HG  LYS A  55       8.566   0.379   6.809  1.00  0.00           H  
ATOM    844 1HD  LYS A  55       8.830   2.609   7.246  1.00  0.00           H  
ATOM    845 2HD  LYS A  55       7.163   2.806   7.749  1.00  0.00           H  
ATOM    846 1HE  LYS A  55       7.923   1.468   9.906  1.00  0.00           H  
ATOM    847 2HE  LYS A  55       9.541   1.919   9.409  1.00  0.00           H  
ATOM    848 1HZ  LYS A  55       7.729   4.099   9.304  1.00  0.00           H  
ATOM    849 2HZ  LYS A  55       7.841   3.467  10.806  1.00  0.00           H  
ATOM    850 3HZ  LYS A  55       9.184   3.993  10.040  1.00  0.00           H  
ATOM    851  N   GLN A  56       4.526  -0.372   4.411  1.00  0.00           N  
ATOM    852  CA  GLN A  56       3.516  -1.289   3.911  1.00  0.00           C  
ATOM    853  C   GLN A  56       3.982  -1.927   2.601  1.00  0.00           C  
ATOM    854  O   GLN A  56       3.887  -3.142   2.430  1.00  0.00           O  
ATOM    855  CB  GLN A  56       2.173  -0.580   3.729  1.00  0.00           C  
ATOM    856  CG  GLN A  56       1.646  -0.053   5.065  1.00  0.00           C  
ATOM    857  CD  GLN A  56       1.675  -1.145   6.136  1.00  0.00           C  
ATOM    858  OE1 GLN A  56       2.437  -1.096   7.088  1.00  0.00           O  
ATOM    859  NE2 GLN A  56       0.806  -2.130   5.928  1.00  0.00           N  
ATOM    860  H   GLN A  56       4.206   0.562   4.572  1.00  0.00           H  
ATOM    861  HA  GLN A  56       3.414  -2.055   4.680  1.00  0.00           H  
ATOM    862 1HB  GLN A  56       2.286   0.246   3.027  1.00  0.00           H  
ATOM    863 2HB  GLN A  56       1.449  -1.270   3.295  1.00  0.00           H  
ATOM    864 1HG  GLN A  56       2.249   0.796   5.388  1.00  0.00           H  
ATOM    865 2HG  GLN A  56       0.626   0.311   4.939  1.00  0.00           H  
ATOM    866 1HE2 GLN A  56       0.210  -2.109   5.126  1.00  0.00           H  
ATOM    867 2HE2 GLN A  56       0.750  -2.892   6.574  1.00  0.00           H  
ATOM    868  N   LEU A  57       4.474  -1.080   1.709  1.00  0.00           N  
ATOM    869  CA  LEU A  57       4.954  -1.546   0.419  1.00  0.00           C  
ATOM    870  C   LEU A  57       6.009  -2.632   0.635  1.00  0.00           C  
ATOM    871  O   LEU A  57       5.861  -3.752   0.147  1.00  0.00           O  
ATOM    872  CB  LEU A  57       5.446  -0.369  -0.426  1.00  0.00           C  
ATOM    873  CG  LEU A  57       6.191  -0.733  -1.712  1.00  0.00           C  
ATOM    874  CD1 LEU A  57       7.659  -1.054  -1.424  1.00  0.00           C  
ATOM    875  CD2 LEU A  57       5.489  -1.875  -2.448  1.00  0.00           C  
ATOM    876  H   LEU A  57       4.547  -0.094   1.856  1.00  0.00           H  
ATOM    877  HA  LEU A  57       4.106  -1.987  -0.105  1.00  0.00           H  
ATOM    878 1HB  LEU A  57       4.587   0.248  -0.689  1.00  0.00           H  
ATOM    879 2HB  LEU A  57       6.103   0.245   0.190  1.00  0.00           H  
ATOM    880  HG  LEU A  57       6.175   0.134  -2.373  1.00  0.00           H  
ATOM    881 1HD1 LEU A  57       7.905  -0.748  -0.407  1.00  0.00           H  
ATOM    882 2HD1 LEU A  57       7.824  -2.126  -1.531  1.00  0.00           H  
ATOM    883 3HD1 LEU A  57       8.294  -0.516  -2.128  1.00  0.00           H  
ATOM    884 1HD2 LEU A  57       5.106  -2.594  -1.723  1.00  0.00           H  
ATOM    885 2HD2 LEU A  57       4.662  -1.475  -3.035  1.00  0.00           H  
ATOM    886 3HD2 LEU A  57       6.198  -2.371  -3.111  1.00  0.00           H  
ATOM    887  N   PHE A  58       7.051  -2.264   1.366  1.00  0.00           N  
ATOM    888  CA  PHE A  58       8.131  -3.193   1.652  1.00  0.00           C  
ATOM    889  C   PHE A  58       7.583  -4.543   2.121  1.00  0.00           C  
ATOM    890  O   PHE A  58       8.220  -5.577   1.928  1.00  0.00           O  
ATOM    891  CB  PHE A  58       8.965  -2.577   2.777  1.00  0.00           C  
ATOM    892  CG  PHE A  58      10.469  -2.819   2.640  1.00  0.00           C  
ATOM    893  CD1 PHE A  58      10.943  -4.084   2.482  1.00  0.00           C  
ATOM    894  CD2 PHE A  58      11.333  -1.769   2.676  1.00  0.00           C  
ATOM    895  CE1 PHE A  58      12.339  -4.309   2.355  1.00  0.00           C  
ATOM    896  CE2 PHE A  58      12.730  -1.994   2.549  1.00  0.00           C  
ATOM    897  CZ  PHE A  58      13.203  -3.259   2.391  1.00  0.00           C  
ATOM    898  H   PHE A  58       7.163  -1.351   1.759  1.00  0.00           H  
ATOM    899  HA  PHE A  58       8.691  -3.332   0.728  1.00  0.00           H  
ATOM    900 1HB  PHE A  58       8.781  -1.503   2.805  1.00  0.00           H  
ATOM    901 2HB  PHE A  58       8.627  -2.983   3.731  1.00  0.00           H  
ATOM    902  HD1 PHE A  58      10.250  -4.925   2.453  1.00  0.00           H  
ATOM    903  HD2 PHE A  58      10.954  -0.755   2.803  1.00  0.00           H  
ATOM    904  HE1 PHE A  58      12.719  -5.323   2.229  1.00  0.00           H  
ATOM    905  HE2 PHE A  58      13.422  -1.153   2.578  1.00  0.00           H  
ATOM    906  HZ  PHE A  58      14.275  -3.432   2.294  1.00  0.00           H  
ATOM    907  N   GLU A  59       6.406  -4.489   2.728  1.00  0.00           N  
ATOM    908  CA  GLU A  59       5.765  -5.694   3.226  1.00  0.00           C  
ATOM    909  C   GLU A  59       5.105  -6.458   2.076  1.00  0.00           C  
ATOM    910  O   GLU A  59       5.035  -7.686   2.101  1.00  0.00           O  
ATOM    911  CB  GLU A  59       4.748  -5.363   4.319  1.00  0.00           C  
ATOM    912  CG  GLU A  59       5.378  -5.483   5.709  1.00  0.00           C  
ATOM    913  CD  GLU A  59       5.306  -6.924   6.220  1.00  0.00           C  
ATOM    914  OE1 GLU A  59       4.234  -7.284   6.754  1.00  0.00           O  
ATOM    915  OE2 GLU A  59       6.324  -7.632   6.066  1.00  0.00           O  
ATOM    916  H   GLU A  59       5.894  -3.644   2.881  1.00  0.00           H  
ATOM    917  HA  GLU A  59       6.568  -6.294   3.655  1.00  0.00           H  
ATOM    918 1HB  GLU A  59       4.369  -4.351   4.174  1.00  0.00           H  
ATOM    919 2HB  GLU A  59       3.894  -6.036   4.243  1.00  0.00           H  
ATOM    920 1HG  GLU A  59       6.417  -5.159   5.670  1.00  0.00           H  
ATOM    921 2HG  GLU A  59       4.862  -4.821   6.404  1.00  0.00           H  
ATOM    922  N   ILE A  60       4.637  -5.699   1.095  1.00  0.00           N  
ATOM    923  CA  ILE A  60       3.985  -6.289  -0.061  1.00  0.00           C  
ATOM    924  C   ILE A  60       4.981  -7.184  -0.801  1.00  0.00           C  
ATOM    925  O   ILE A  60       4.670  -8.330  -1.124  1.00  0.00           O  
ATOM    926  CB  ILE A  60       3.366  -5.200  -0.940  1.00  0.00           C  
ATOM    927  CG1 ILE A  60       2.334  -4.386  -0.158  1.00  0.00           C  
ATOM    928  CG2 ILE A  60       2.775  -5.798  -2.219  1.00  0.00           C  
ATOM    929  CD1 ILE A  60       1.655  -3.351  -1.059  1.00  0.00           C  
ATOM    930  H   ILE A  60       4.698  -4.701   1.083  1.00  0.00           H  
ATOM    931  HA  ILE A  60       3.168  -6.910   0.306  1.00  0.00           H  
ATOM    932  HB  ILE A  60       4.157  -4.514  -1.242  1.00  0.00           H  
ATOM    933 1HG1 ILE A  60       1.583  -5.053   0.264  1.00  0.00           H  
ATOM    934 2HG1 ILE A  60       2.819  -3.883   0.678  1.00  0.00           H  
ATOM    935 1HG2 ILE A  60       3.399  -6.627  -2.554  1.00  0.00           H  
ATOM    936 2HG2 ILE A  60       1.767  -6.160  -2.019  1.00  0.00           H  
ATOM    937 3HG2 ILE A  60       2.740  -5.033  -2.995  1.00  0.00           H  
ATOM    938 1HD1 ILE A  60       0.692  -3.073  -0.631  1.00  0.00           H  
ATOM    939 2HD1 ILE A  60       2.288  -2.467  -1.136  1.00  0.00           H  
ATOM    940 3HD1 ILE A  60       1.503  -3.777  -2.050  1.00  0.00           H  
ATOM    941  N   ASP A  61       6.158  -6.628  -1.049  1.00  0.00           N  
ATOM    942  CA  ASP A  61       7.201  -7.362  -1.745  1.00  0.00           C  
ATOM    943  C   ASP A  61       7.638  -8.553  -0.890  1.00  0.00           C  
ATOM    944  O   ASP A  61       8.137  -9.548  -1.413  1.00  0.00           O  
ATOM    945  CB  ASP A  61       8.427  -6.479  -1.988  1.00  0.00           C  
ATOM    946  CG  ASP A  61       9.354  -6.954  -3.108  1.00  0.00           C  
ATOM    947  OD1 ASP A  61       9.251  -6.378  -4.212  1.00  0.00           O  
ATOM    948  OD2 ASP A  61      10.144  -7.884  -2.835  1.00  0.00           O  
ATOM    949  H   ASP A  61       6.403  -5.696  -0.783  1.00  0.00           H  
ATOM    950  HA  ASP A  61       6.753  -7.669  -2.690  1.00  0.00           H  
ATOM    951 1HB  ASP A  61       8.089  -5.470  -2.220  1.00  0.00           H  
ATOM    952 2HB  ASP A  61       9.001  -6.418  -1.063  1.00  0.00           H  
ATOM    953  N   SER A  62       7.434  -8.413   0.412  1.00  0.00           N  
ATOM    954  CA  SER A  62       7.800  -9.465   1.345  1.00  0.00           C  
ATOM    955  C   SER A  62       6.780 -10.603   1.277  1.00  0.00           C  
ATOM    956  O   SER A  62       7.095 -11.745   1.607  1.00  0.00           O  
ATOM    957  CB  SER A  62       7.900  -8.925   2.773  1.00  0.00           C  
ATOM    958  OG  SER A  62       9.067  -9.396   3.441  1.00  0.00           O  
ATOM    959  H   SER A  62       7.027  -7.601   0.830  1.00  0.00           H  
ATOM    960  HA  SER A  62       8.781  -9.811   1.018  1.00  0.00           H  
ATOM    961 1HB  SER A  62       7.911  -7.835   2.748  1.00  0.00           H  
ATOM    962 2HB  SER A  62       7.015  -9.222   3.335  1.00  0.00           H  
ATOM    963  HG  SER A  62       9.588  -8.624   3.804  1.00  0.00           H  
ATOM    964  N   VAL A  63       5.576 -10.251   0.848  1.00  0.00           N  
ATOM    965  CA  VAL A  63       4.508 -11.229   0.733  1.00  0.00           C  
ATOM    966  C   VAL A  63       4.805 -12.169  -0.436  1.00  0.00           C  
ATOM    967  O   VAL A  63       4.833 -11.742  -1.589  1.00  0.00           O  
ATOM    968  CB  VAL A  63       3.160 -10.517   0.600  1.00  0.00           C  
ATOM    969  CG1 VAL A  63       2.092 -11.464   0.048  1.00  0.00           C  
ATOM    970  CG2 VAL A  63       2.722  -9.916   1.937  1.00  0.00           C  
ATOM    971  H   VAL A  63       5.328  -9.320   0.582  1.00  0.00           H  
ATOM    972  HA  VAL A  63       4.492 -11.809   1.656  1.00  0.00           H  
ATOM    973  HB  VAL A  63       3.282  -9.699  -0.111  1.00  0.00           H  
ATOM    974 1HG1 VAL A  63       1.177 -10.905  -0.148  1.00  0.00           H  
ATOM    975 2HG1 VAL A  63       2.449 -11.913  -0.879  1.00  0.00           H  
ATOM    976 3HG1 VAL A  63       1.890 -12.248   0.777  1.00  0.00           H  
ATOM    977 1HG2 VAL A  63       3.023 -10.579   2.749  1.00  0.00           H  
ATOM    978 2HG2 VAL A  63       3.193  -8.942   2.069  1.00  0.00           H  
ATOM    979 3HG2 VAL A  63       1.638  -9.800   1.946  1.00  0.00           H  
ATOM    980  N   ASP A  64       5.021 -13.432  -0.098  1.00  0.00           N  
ATOM    981  CA  ASP A  64       5.316 -14.436  -1.106  1.00  0.00           C  
ATOM    982  C   ASP A  64       4.017 -14.857  -1.796  1.00  0.00           C  
ATOM    983  O   ASP A  64       2.944 -14.801  -1.196  1.00  0.00           O  
ATOM    984  CB  ASP A  64       5.941 -15.682  -0.475  1.00  0.00           C  
ATOM    985  CG  ASP A  64       6.670 -16.606  -1.453  1.00  0.00           C  
ATOM    986  OD1 ASP A  64       6.524 -17.836  -1.287  1.00  0.00           O  
ATOM    987  OD2 ASP A  64       7.356 -16.061  -2.344  1.00  0.00           O  
ATOM    988  H   ASP A  64       4.997 -13.771   0.842  1.00  0.00           H  
ATOM    989  HA  ASP A  64       6.016 -13.958  -1.790  1.00  0.00           H  
ATOM    990 1HB  ASP A  64       6.644 -15.367   0.297  1.00  0.00           H  
ATOM    991 2HB  ASP A  64       5.156 -16.252   0.023  1.00  0.00           H  
ATOM    992  N   THR A  65       4.156 -15.269  -3.048  1.00  0.00           N  
ATOM    993  CA  THR A  65       3.007 -15.698  -3.826  1.00  0.00           C  
ATOM    994  C   THR A  65       3.058 -17.209  -4.064  1.00  0.00           C  
ATOM    995  O   THR A  65       2.084 -17.915  -3.811  1.00  0.00           O  
ATOM    996  CB  THR A  65       2.978 -14.880  -5.118  1.00  0.00           C  
ATOM    997  OG1 THR A  65       4.204 -15.210  -5.765  1.00  0.00           O  
ATOM    998  CG2 THR A  65       3.086 -13.375  -4.861  1.00  0.00           C  
ATOM    999  H   THR A  65       5.032 -15.311  -3.528  1.00  0.00           H  
ATOM   1000  HA  THR A  65       2.105 -15.497  -3.247  1.00  0.00           H  
ATOM   1001  HB  THR A  65       2.090 -15.112  -5.706  1.00  0.00           H  
ATOM   1002  HG1 THR A  65       4.377 -14.572  -6.516  1.00  0.00           H  
ATOM   1003 1HG2 THR A  65       2.500 -12.837  -5.605  1.00  0.00           H  
ATOM   1004 2HG2 THR A  65       2.705 -13.149  -3.865  1.00  0.00           H  
ATOM   1005 3HG2 THR A  65       4.130 -13.069  -4.929  1.00  0.00           H  
ATOM   1006  N   GLU A  66       4.206 -17.660  -4.549  1.00  0.00           N  
ATOM   1007  CA  GLU A  66       4.398 -19.074  -4.824  1.00  0.00           C  
ATOM   1008  C   GLU A  66       3.595 -19.488  -6.059  1.00  0.00           C  
ATOM   1009  O   GLU A  66       3.306 -20.668  -6.249  1.00  0.00           O  
ATOM   1010  CB  GLU A  66       4.017 -19.925  -3.612  1.00  0.00           C  
ATOM   1011  CG  GLU A  66       5.171 -20.842  -3.201  1.00  0.00           C  
ATOM   1012  CD  GLU A  66       4.662 -22.242  -2.852  1.00  0.00           C  
ATOM   1013  OE1 GLU A  66       3.667 -22.312  -2.099  1.00  0.00           O  
ATOM   1014  OE2 GLU A  66       5.279 -23.210  -3.347  1.00  0.00           O  
ATOM   1015  H   GLU A  66       4.994 -17.079  -4.752  1.00  0.00           H  
ATOM   1016  HA  GLU A  66       5.464 -19.188  -5.021  1.00  0.00           H  
ATOM   1017 1HB  GLU A  66       3.748 -19.277  -2.778  1.00  0.00           H  
ATOM   1018 2HB  GLU A  66       3.137 -20.525  -3.846  1.00  0.00           H  
ATOM   1019 1HG  GLU A  66       5.896 -20.906  -4.013  1.00  0.00           H  
ATOM   1020 2HG  GLU A  66       5.691 -20.416  -2.343  1.00  0.00           H  
ATOM   1021  N   GLY A  67       3.257 -18.493  -6.867  1.00  0.00           N  
ATOM   1022  CA  GLY A  67       2.493 -18.739  -8.078  1.00  0.00           C  
ATOM   1023  C   GLY A  67       1.013 -18.956  -7.758  1.00  0.00           C  
ATOM   1024  O   GLY A  67       0.430 -19.965  -8.153  1.00  0.00           O  
ATOM   1025  H   GLY A  67       3.496 -17.535  -6.705  1.00  0.00           H  
ATOM   1026 1HA  GLY A  67       2.601 -17.894  -8.758  1.00  0.00           H  
ATOM   1027 2HA  GLY A  67       2.890 -19.615  -8.591  1.00  0.00           H  
ATOM   1028  N   LYS A  68       0.447 -17.994  -7.045  1.00  0.00           N  
ATOM   1029  CA  LYS A  68      -0.954 -18.067  -6.667  1.00  0.00           C  
ATOM   1030  C   LYS A  68      -1.664 -16.784  -7.105  1.00  0.00           C  
ATOM   1031  O   LYS A  68      -1.689 -15.802  -6.366  1.00  0.00           O  
ATOM   1032  CB  LYS A  68      -1.091 -18.367  -5.173  1.00  0.00           C  
ATOM   1033  CG  LYS A  68      -0.409 -19.688  -4.814  1.00  0.00           C  
ATOM   1034  CD  LYS A  68      -0.670 -20.061  -3.353  1.00  0.00           C  
ATOM   1035  CE  LYS A  68       0.075 -21.342  -2.973  1.00  0.00           C  
ATOM   1036  NZ  LYS A  68      -0.818 -22.516  -3.092  1.00  0.00           N  
ATOM   1037  H   LYS A  68       0.928 -17.176  -6.728  1.00  0.00           H  
ATOM   1038  HA  LYS A  68      -1.394 -18.906  -7.206  1.00  0.00           H  
ATOM   1039 1HB  LYS A  68      -0.650 -17.556  -4.594  1.00  0.00           H  
ATOM   1040 2HB  LYS A  68      -2.146 -18.413  -4.903  1.00  0.00           H  
ATOM   1041 1HG  LYS A  68      -0.777 -20.480  -5.466  1.00  0.00           H  
ATOM   1042 2HG  LYS A  68       0.664 -19.606  -4.987  1.00  0.00           H  
ATOM   1043 1HD  LYS A  68      -0.352 -19.244  -2.704  1.00  0.00           H  
ATOM   1044 2HD  LYS A  68      -1.739 -20.197  -3.194  1.00  0.00           H  
ATOM   1045 1HE  LYS A  68       0.943 -21.470  -3.619  1.00  0.00           H  
ATOM   1046 2HE  LYS A  68       0.448 -21.263  -1.951  1.00  0.00           H  
ATOM   1047 1HZ  LYS A  68      -1.467 -22.366  -3.838  1.00  0.00           H  
ATOM   1048 2HZ  LYS A  68      -0.272 -23.331  -3.283  1.00  0.00           H  
ATOM   1049 3HZ  LYS A  68      -1.318 -22.642  -2.235  1.00  0.00           H  
ATOM   1050  N   GLY A  69      -2.223 -16.835  -8.305  1.00  0.00           N  
ATOM   1051  CA  GLY A  69      -2.931 -15.689  -8.850  1.00  0.00           C  
ATOM   1052  C   GLY A  69      -3.704 -14.951  -7.755  1.00  0.00           C  
ATOM   1053  O   GLY A  69      -3.482 -13.762  -7.528  1.00  0.00           O  
ATOM   1054  H   GLY A  69      -2.198 -17.638  -8.900  1.00  0.00           H  
ATOM   1055 1HA  GLY A  69      -2.222 -15.009  -9.321  1.00  0.00           H  
ATOM   1056 2HA  GLY A  69      -3.621 -16.019  -9.627  1.00  0.00           H  
ATOM   1057  N   ASP A  70      -4.594 -15.686  -7.105  1.00  0.00           N  
ATOM   1058  CA  ASP A  70      -5.400 -15.115  -6.039  1.00  0.00           C  
ATOM   1059  C   ASP A  70      -4.540 -14.160  -5.210  1.00  0.00           C  
ATOM   1060  O   ASP A  70      -4.978 -13.062  -4.868  1.00  0.00           O  
ATOM   1061  CB  ASP A  70      -5.930 -16.205  -5.106  1.00  0.00           C  
ATOM   1062  CG  ASP A  70      -6.458 -17.458  -5.808  1.00  0.00           C  
ATOM   1063  OD1 ASP A  70      -7.090 -17.287  -6.873  1.00  0.00           O  
ATOM   1064  OD2 ASP A  70      -6.217 -18.557  -5.264  1.00  0.00           O  
ATOM   1065  H   ASP A  70      -4.768 -16.652  -7.295  1.00  0.00           H  
ATOM   1066  HA  ASP A  70      -6.222 -14.606  -6.543  1.00  0.00           H  
ATOM   1067 1HB  ASP A  70      -5.132 -16.498  -4.424  1.00  0.00           H  
ATOM   1068 2HB  ASP A  70      -6.730 -15.784  -4.497  1.00  0.00           H  
ATOM   1069  N   ILE A  71      -3.331 -14.612  -4.911  1.00  0.00           N  
ATOM   1070  CA  ILE A  71      -2.405 -13.811  -4.129  1.00  0.00           C  
ATOM   1071  C   ILE A  71      -1.655 -12.853  -5.057  1.00  0.00           C  
ATOM   1072  O   ILE A  71      -1.704 -11.638  -4.872  1.00  0.00           O  
ATOM   1073  CB  ILE A  71      -1.485 -14.710  -3.301  1.00  0.00           C  
ATOM   1074  CG1 ILE A  71      -2.272 -15.451  -2.218  1.00  0.00           C  
ATOM   1075  CG2 ILE A  71      -0.317 -13.912  -2.717  1.00  0.00           C  
ATOM   1076  CD1 ILE A  71      -1.406 -16.515  -1.541  1.00  0.00           C  
ATOM   1077  H   ILE A  71      -2.982 -15.505  -5.193  1.00  0.00           H  
ATOM   1078  HA  ILE A  71      -2.995 -13.221  -3.427  1.00  0.00           H  
ATOM   1079  HB  ILE A  71      -1.060 -15.465  -3.962  1.00  0.00           H  
ATOM   1080 1HG1 ILE A  71      -2.629 -14.740  -1.472  1.00  0.00           H  
ATOM   1081 2HG1 ILE A  71      -3.152 -15.919  -2.658  1.00  0.00           H  
ATOM   1082 1HG2 ILE A  71       0.110 -13.275  -3.491  1.00  0.00           H  
ATOM   1083 2HG2 ILE A  71      -0.676 -13.293  -1.894  1.00  0.00           H  
ATOM   1084 3HG2 ILE A  71       0.445 -14.600  -2.349  1.00  0.00           H  
ATOM   1085 1HD1 ILE A  71      -0.413 -16.107  -1.349  1.00  0.00           H  
ATOM   1086 2HD1 ILE A  71      -1.865 -16.813  -0.599  1.00  0.00           H  
ATOM   1087 3HD1 ILE A  71      -1.321 -17.384  -2.194  1.00  0.00           H  
ATOM   1088  N   GLN A  72      -0.979 -13.436  -6.035  1.00  0.00           N  
ATOM   1089  CA  GLN A  72      -0.220 -12.649  -6.993  1.00  0.00           C  
ATOM   1090  C   GLN A  72      -0.997 -11.390  -7.380  1.00  0.00           C  
ATOM   1091  O   GLN A  72      -0.453 -10.287  -7.352  1.00  0.00           O  
ATOM   1092  CB  GLN A  72       0.130 -13.479  -8.230  1.00  0.00           C  
ATOM   1093  CG  GLN A  72       1.634 -13.441  -8.508  1.00  0.00           C  
ATOM   1094  CD  GLN A  72       1.916 -12.951  -9.930  1.00  0.00           C  
ATOM   1095  OE1 GLN A  72       1.237 -13.301 -10.881  1.00  0.00           O  
ATOM   1096  NE2 GLN A  72       2.953 -12.123 -10.021  1.00  0.00           N  
ATOM   1097  H   GLN A  72      -0.944 -14.425  -6.179  1.00  0.00           H  
ATOM   1098  HA  GLN A  72       0.700 -12.373  -6.477  1.00  0.00           H  
ATOM   1099 1HB  GLN A  72      -0.190 -14.511  -8.082  1.00  0.00           H  
ATOM   1100 2HB  GLN A  72      -0.414 -13.097  -9.094  1.00  0.00           H  
ATOM   1101 1HG  GLN A  72       2.124 -12.785  -7.789  1.00  0.00           H  
ATOM   1102 2HG  GLN A  72       2.058 -14.436  -8.372  1.00  0.00           H  
ATOM   1103 1HE2 GLN A  72       3.468 -11.876  -9.201  1.00  0.00           H  
ATOM   1104 2HE2 GLN A  72       3.217 -11.748 -10.910  1.00  0.00           H  
ATOM   1105  N   GLN A  73      -2.258 -11.596  -7.731  1.00  0.00           N  
ATOM   1106  CA  GLN A  73      -3.116 -10.490  -8.122  1.00  0.00           C  
ATOM   1107  C   GLN A  73      -3.159  -9.434  -7.016  1.00  0.00           C  
ATOM   1108  O   GLN A  73      -2.762  -8.290  -7.230  1.00  0.00           O  
ATOM   1109  CB  GLN A  73      -4.523 -10.983  -8.465  1.00  0.00           C  
ATOM   1110  CG  GLN A  73      -4.769 -10.935  -9.975  1.00  0.00           C  
ATOM   1111  CD  GLN A  73      -5.287 -12.279 -10.489  1.00  0.00           C  
ATOM   1112  OE1 GLN A  73      -5.879 -13.063  -9.766  1.00  0.00           O  
ATOM   1113  NE2 GLN A  73      -5.032 -12.501 -11.776  1.00  0.00           N  
ATOM   1114  H   GLN A  73      -2.693 -12.496  -7.750  1.00  0.00           H  
ATOM   1115  HA  GLN A  73      -2.657 -10.070  -9.018  1.00  0.00           H  
ATOM   1116 1HB  GLN A  73      -4.653 -12.003  -8.105  1.00  0.00           H  
ATOM   1117 2HB  GLN A  73      -5.263 -10.368  -7.953  1.00  0.00           H  
ATOM   1118 1HG  GLN A  73      -5.490 -10.151 -10.204  1.00  0.00           H  
ATOM   1119 2HG  GLN A  73      -3.843 -10.677 -10.489  1.00  0.00           H  
ATOM   1120 1HE2 GLN A  73      -4.541 -11.815 -12.313  1.00  0.00           H  
ATOM   1121 2HE2 GLN A  73      -5.331 -13.353 -12.205  1.00  0.00           H  
ATOM   1122  N   ALA A  74      -3.644  -9.856  -5.858  1.00  0.00           N  
ATOM   1123  CA  ALA A  74      -3.745  -8.960  -4.718  1.00  0.00           C  
ATOM   1124  C   ALA A  74      -2.411  -8.236  -4.525  1.00  0.00           C  
ATOM   1125  O   ALA A  74      -2.349  -7.010  -4.611  1.00  0.00           O  
ATOM   1126  CB  ALA A  74      -4.160  -9.756  -3.479  1.00  0.00           C  
ATOM   1127  H   ALA A  74      -3.965 -10.788  -5.692  1.00  0.00           H  
ATOM   1128  HA  ALA A  74      -4.519  -8.226  -4.940  1.00  0.00           H  
ATOM   1129 1HB  ALA A  74      -4.436 -10.769  -3.773  1.00  0.00           H  
ATOM   1130 2HB  ALA A  74      -3.327  -9.796  -2.776  1.00  0.00           H  
ATOM   1131 3HB  ALA A  74      -5.013  -9.270  -3.004  1.00  0.00           H  
ATOM   1132  N   ARG A  75      -1.377  -9.024  -4.269  1.00  0.00           N  
ATOM   1133  CA  ARG A  75      -0.049  -8.472  -4.064  1.00  0.00           C  
ATOM   1134  C   ARG A  75       0.233  -7.371  -5.088  1.00  0.00           C  
ATOM   1135  O   ARG A  75       0.314  -6.196  -4.735  1.00  0.00           O  
ATOM   1136  CB  ARG A  75       1.023  -9.558  -4.184  1.00  0.00           C  
ATOM   1137  CG  ARG A  75       2.224  -9.244  -3.290  1.00  0.00           C  
ATOM   1138  CD  ARG A  75       3.529  -9.705  -3.942  1.00  0.00           C  
ATOM   1139  NE  ARG A  75       4.424  -8.547  -4.157  1.00  0.00           N  
ATOM   1140  CZ  ARG A  75       4.379  -7.753  -5.235  1.00  0.00           C  
ATOM   1141  NH1 ARG A  75       3.482  -7.987  -6.203  1.00  0.00           N  
ATOM   1142  NH2 ARG A  75       5.231  -6.724  -5.346  1.00  0.00           N  
ATOM   1143  H   ARG A  75      -1.437 -10.020  -4.201  1.00  0.00           H  
ATOM   1144  HA  ARG A  75      -0.067  -8.070  -3.051  1.00  0.00           H  
ATOM   1145 1HB  ARG A  75       0.600 -10.523  -3.906  1.00  0.00           H  
ATOM   1146 2HB  ARG A  75       1.348  -9.639  -5.221  1.00  0.00           H  
ATOM   1147 1HG  ARG A  75       2.268  -8.173  -3.097  1.00  0.00           H  
ATOM   1148 2HG  ARG A  75       2.102  -9.737  -2.325  1.00  0.00           H  
ATOM   1149 1HD  ARG A  75       4.021 -10.443  -3.309  1.00  0.00           H  
ATOM   1150 2HD  ARG A  75       3.317 -10.193  -4.894  1.00  0.00           H  
ATOM   1151  HE  ARG A  75       5.105  -8.344  -3.454  1.00  0.00           H  
ATOM   1152 1HH1 ARG A  75       2.847  -8.755  -6.121  1.00  0.00           H  
ATOM   1153 2HH1 ARG A  75       3.449  -7.394  -7.008  1.00  0.00           H  
ATOM   1154 1HH2 ARG A  75       5.900  -6.549  -4.624  1.00  0.00           H  
ATOM   1155 2HH2 ARG A  75       5.197  -6.131  -6.151  1.00  0.00           H  
ATOM   1156  N   LYS A  76       0.375  -7.791  -6.337  1.00  0.00           N  
ATOM   1157  CA  LYS A  76       0.647  -6.855  -7.415  1.00  0.00           C  
ATOM   1158  C   LYS A  76      -0.371  -5.714  -7.361  1.00  0.00           C  
ATOM   1159  O   LYS A  76      -0.037  -4.566  -7.653  1.00  0.00           O  
ATOM   1160  CB  LYS A  76       0.683  -7.584  -8.760  1.00  0.00           C  
ATOM   1161  CG  LYS A  76      -0.731  -7.879  -9.262  1.00  0.00           C  
ATOM   1162  CD  LYS A  76      -0.719  -8.254 -10.746  1.00  0.00           C  
ATOM   1163  CE  LYS A  76      -0.015  -9.594 -10.967  1.00  0.00           C  
ATOM   1164  NZ  LYS A  76       0.655  -9.616 -12.286  1.00  0.00           N  
ATOM   1165  H   LYS A  76       0.308  -8.749  -6.616  1.00  0.00           H  
ATOM   1166  HA  LYS A  76       1.640  -6.441  -7.245  1.00  0.00           H  
ATOM   1167 1HB  LYS A  76       1.214  -6.976  -9.493  1.00  0.00           H  
ATOM   1168 2HB  LYS A  76       1.239  -8.516  -8.658  1.00  0.00           H  
ATOM   1169 1HG  LYS A  76      -1.165  -8.693  -8.681  1.00  0.00           H  
ATOM   1170 2HG  LYS A  76      -1.365  -7.005  -9.109  1.00  0.00           H  
ATOM   1171 1HD  LYS A  76      -1.742  -8.310 -11.119  1.00  0.00           H  
ATOM   1172 2HD  LYS A  76      -0.214  -7.475 -11.317  1.00  0.00           H  
ATOM   1173 1HE  LYS A  76       0.717  -9.761 -10.177  1.00  0.00           H  
ATOM   1174 2HE  LYS A  76      -0.740 -10.406 -10.907  1.00  0.00           H  
ATOM   1175 1HZ  LYS A  76       0.192 -10.270 -12.884  1.00  0.00           H  
ATOM   1176 2HZ  LYS A  76       0.616  -8.705 -12.695  1.00  0.00           H  
ATOM   1177 3HZ  LYS A  76       1.610  -9.889 -12.170  1.00  0.00           H  
ATOM   1178  N   ARG A  77      -1.591  -6.068  -6.986  1.00  0.00           N  
ATOM   1179  CA  ARG A  77      -2.659  -5.088  -6.890  1.00  0.00           C  
ATOM   1180  C   ARG A  77      -2.405  -4.139  -5.716  1.00  0.00           C  
ATOM   1181  O   ARG A  77      -2.904  -3.015  -5.703  1.00  0.00           O  
ATOM   1182  CB  ARG A  77      -4.016  -5.768  -6.703  1.00  0.00           C  
ATOM   1183  CG  ARG A  77      -4.667  -6.074  -8.053  1.00  0.00           C  
ATOM   1184  CD  ARG A  77      -6.193  -6.015  -7.952  1.00  0.00           C  
ATOM   1185  NE  ARG A  77      -6.743  -7.381  -7.805  1.00  0.00           N  
ATOM   1186  CZ  ARG A  77      -7.945  -7.654  -7.280  1.00  0.00           C  
ATOM   1187  NH1 ARG A  77      -8.730  -6.657  -6.848  1.00  0.00           N  
ATOM   1188  NH2 ARG A  77      -8.363  -8.924  -7.186  1.00  0.00           N  
ATOM   1189  H   ARG A  77      -1.854  -7.004  -6.750  1.00  0.00           H  
ATOM   1190  HA  ARG A  77      -2.632  -4.553  -7.839  1.00  0.00           H  
ATOM   1191 1HB  ARG A  77      -3.889  -6.692  -6.139  1.00  0.00           H  
ATOM   1192 2HB  ARG A  77      -4.672  -5.124  -6.116  1.00  0.00           H  
ATOM   1193 1HG  ARG A  77      -4.321  -5.357  -8.798  1.00  0.00           H  
ATOM   1194 2HG  ARG A  77      -4.360  -7.062  -8.394  1.00  0.00           H  
ATOM   1195 1HD  ARG A  77      -6.486  -5.402  -7.100  1.00  0.00           H  
ATOM   1196 2HD  ARG A  77      -6.607  -5.541  -8.842  1.00  0.00           H  
ATOM   1197  HE  ARG A  77      -6.183  -8.148  -8.117  1.00  0.00           H  
ATOM   1198 1HH1 ARG A  77      -8.419  -5.710  -6.918  1.00  0.00           H  
ATOM   1199 2HH1 ARG A  77      -9.627  -6.861  -6.456  1.00  0.00           H  
ATOM   1200 1HH2 ARG A  77      -7.777  -9.668  -7.508  1.00  0.00           H  
ATOM   1201 2HH2 ARG A  77      -9.260  -9.128  -6.794  1.00  0.00           H  
ATOM   1202  N   ALA A  78      -1.630  -4.628  -4.759  1.00  0.00           N  
ATOM   1203  CA  ALA A  78      -1.304  -3.838  -3.584  1.00  0.00           C  
ATOM   1204  C   ALA A  78       0.017  -3.103  -3.819  1.00  0.00           C  
ATOM   1205  O   ALA A  78       0.246  -2.034  -3.255  1.00  0.00           O  
ATOM   1206  CB  ALA A  78      -1.255  -4.747  -2.355  1.00  0.00           C  
ATOM   1207  H   ALA A  78      -1.229  -5.543  -4.778  1.00  0.00           H  
ATOM   1208  HA  ALA A  78      -2.099  -3.104  -3.446  1.00  0.00           H  
ATOM   1209 1HB  ALA A  78      -2.208  -4.699  -1.828  1.00  0.00           H  
ATOM   1210 2HB  ALA A  78      -1.066  -5.774  -2.670  1.00  0.00           H  
ATOM   1211 3HB  ALA A  78      -0.456  -4.418  -1.691  1.00  0.00           H  
ATOM   1212  N   ALA A  79       0.852  -3.705  -4.653  1.00  0.00           N  
ATOM   1213  CA  ALA A  79       2.145  -3.122  -4.969  1.00  0.00           C  
ATOM   1214  C   ALA A  79       1.935  -1.801  -5.713  1.00  0.00           C  
ATOM   1215  O   ALA A  79       2.690  -0.850  -5.522  1.00  0.00           O  
ATOM   1216  CB  ALA A  79       2.972  -4.122  -5.779  1.00  0.00           C  
ATOM   1217  H   ALA A  79       0.658  -4.575  -5.107  1.00  0.00           H  
ATOM   1218  HA  ALA A  79       2.658  -2.921  -4.029  1.00  0.00           H  
ATOM   1219 1HB  ALA A  79       2.720  -5.136  -5.470  1.00  0.00           H  
ATOM   1220 2HB  ALA A  79       2.753  -4.000  -6.840  1.00  0.00           H  
ATOM   1221 3HB  ALA A  79       4.033  -3.942  -5.604  1.00  0.00           H  
ATOM   1222  N   GLN A  80       0.904  -1.786  -6.547  1.00  0.00           N  
ATOM   1223  CA  GLN A  80       0.586  -0.598  -7.320  1.00  0.00           C  
ATOM   1224  C   GLN A  80      -0.251   0.372  -6.483  1.00  0.00           C  
ATOM   1225  O   GLN A  80      -0.050   1.584  -6.546  1.00  0.00           O  
ATOM   1226  CB  GLN A  80      -0.137  -0.966  -8.618  1.00  0.00           C  
ATOM   1227  CG  GLN A  80       0.799  -1.710  -9.574  1.00  0.00           C  
ATOM   1228  CD  GLN A  80       0.104  -2.000 -10.906  1.00  0.00           C  
ATOM   1229  OE1 GLN A  80      -0.862  -2.741 -10.983  1.00  0.00           O  
ATOM   1230  NE2 GLN A  80       0.647  -1.376 -11.947  1.00  0.00           N  
ATOM   1231  H   GLN A  80       0.295  -2.564  -6.697  1.00  0.00           H  
ATOM   1232  HA  GLN A  80       1.546  -0.144  -7.563  1.00  0.00           H  
ATOM   1233 1HB  GLN A  80      -1.002  -1.590  -8.392  1.00  0.00           H  
ATOM   1234 2HB  GLN A  80      -0.511  -0.063  -9.099  1.00  0.00           H  
ATOM   1235 1HG  GLN A  80       1.694  -1.113  -9.749  1.00  0.00           H  
ATOM   1236 2HG  GLN A  80       1.123  -2.645  -9.117  1.00  0.00           H  
ATOM   1237 1HE2 GLN A  80       1.440  -0.781 -11.815  1.00  0.00           H  
ATOM   1238 2HE2 GLN A  80       0.263  -1.502 -12.862  1.00  0.00           H  
ATOM   1239  N   GLU A  81      -1.172  -0.198  -5.720  1.00  0.00           N  
ATOM   1240  CA  GLU A  81      -2.040   0.601  -4.871  1.00  0.00           C  
ATOM   1241  C   GLU A  81      -1.206   1.446  -3.906  1.00  0.00           C  
ATOM   1242  O   GLU A  81      -1.359   2.666  -3.853  1.00  0.00           O  
ATOM   1243  CB  GLU A  81      -3.029  -0.285  -4.111  1.00  0.00           C  
ATOM   1244  CG  GLU A  81      -4.450  -0.105  -4.648  1.00  0.00           C  
ATOM   1245  CD  GLU A  81      -4.580  -0.680  -6.060  1.00  0.00           C  
ATOM   1246  OE1 GLU A  81      -4.069  -0.021  -6.990  1.00  0.00           O  
ATOM   1247  OE2 GLU A  81      -5.187  -1.767  -6.176  1.00  0.00           O  
ATOM   1248  H   GLU A  81      -1.328  -1.185  -5.675  1.00  0.00           H  
ATOM   1249  HA  GLU A  81      -2.591   1.250  -5.551  1.00  0.00           H  
ATOM   1250 1HB  GLU A  81      -2.732  -1.329  -4.201  1.00  0.00           H  
ATOM   1251 2HB  GLU A  81      -3.003  -0.036  -3.050  1.00  0.00           H  
ATOM   1252 1HG  GLU A  81      -5.159  -0.599  -3.984  1.00  0.00           H  
ATOM   1253 2HG  GLU A  81      -4.708   0.954  -4.658  1.00  0.00           H  
ATOM   1254  N   THR A  82      -0.343   0.765  -3.167  1.00  0.00           N  
ATOM   1255  CA  THR A  82       0.514   1.438  -2.206  1.00  0.00           C  
ATOM   1256  C   THR A  82       1.242   2.609  -2.870  1.00  0.00           C  
ATOM   1257  O   THR A  82       1.073   3.759  -2.468  1.00  0.00           O  
ATOM   1258  CB  THR A  82       1.460   0.397  -1.605  1.00  0.00           C  
ATOM   1259  OG1 THR A  82       0.591  -0.528  -0.957  1.00  0.00           O  
ATOM   1260  CG2 THR A  82       2.312   0.966  -0.469  1.00  0.00           C  
ATOM   1261  H   THR A  82      -0.226  -0.227  -3.216  1.00  0.00           H  
ATOM   1262  HA  THR A  82      -0.114   1.857  -1.420  1.00  0.00           H  
ATOM   1263  HB  THR A  82       2.087  -0.050  -2.376  1.00  0.00           H  
ATOM   1264  HG1 THR A  82       0.397  -1.299  -1.565  1.00  0.00           H  
ATOM   1265 1HG2 THR A  82       2.745   0.147   0.106  1.00  0.00           H  
ATOM   1266 2HG2 THR A  82       3.110   1.580  -0.885  1.00  0.00           H  
ATOM   1267 3HG2 THR A  82       1.687   1.576   0.183  1.00  0.00           H  
ATOM   1268  N   GLU A  83       2.038   2.275  -3.876  1.00  0.00           N  
ATOM   1269  CA  GLU A  83       2.792   3.284  -4.599  1.00  0.00           C  
ATOM   1270  C   GLU A  83       1.875   4.435  -5.018  1.00  0.00           C  
ATOM   1271  O   GLU A  83       2.229   5.603  -4.866  1.00  0.00           O  
ATOM   1272  CB  GLU A  83       3.497   2.676  -5.814  1.00  0.00           C  
ATOM   1273  CG  GLU A  83       4.450   1.556  -5.390  1.00  0.00           C  
ATOM   1274  CD  GLU A  83       5.895   2.056  -5.339  1.00  0.00           C  
ATOM   1275  OE1 GLU A  83       6.398   2.222  -4.207  1.00  0.00           O  
ATOM   1276  OE2 GLU A  83       6.464   2.261  -6.433  1.00  0.00           O  
ATOM   1277  H   GLU A  83       2.170   1.338  -4.197  1.00  0.00           H  
ATOM   1278  HA  GLU A  83       3.542   3.646  -3.895  1.00  0.00           H  
ATOM   1279 1HB  GLU A  83       2.756   2.284  -6.510  1.00  0.00           H  
ATOM   1280 2HB  GLU A  83       4.053   3.451  -6.342  1.00  0.00           H  
ATOM   1281 1HG  GLU A  83       4.158   1.176  -4.411  1.00  0.00           H  
ATOM   1282 2HG  GLU A  83       4.373   0.725  -6.091  1.00  0.00           H  
ATOM   1283  N   ARG A  84       0.713   4.065  -5.536  1.00  0.00           N  
ATOM   1284  CA  ARG A  84      -0.258   5.052  -5.977  1.00  0.00           C  
ATOM   1285  C   ARG A  84      -0.373   6.180  -4.949  1.00  0.00           C  
ATOM   1286  O   ARG A  84      -0.071   7.333  -5.252  1.00  0.00           O  
ATOM   1287  CB  ARG A  84      -1.635   4.416  -6.182  1.00  0.00           C  
ATOM   1288  CG  ARG A  84      -2.196   4.758  -7.564  1.00  0.00           C  
ATOM   1289  CD  ARG A  84      -3.231   3.722  -8.007  1.00  0.00           C  
ATOM   1290  NE  ARG A  84      -3.192   3.565  -9.478  1.00  0.00           N  
ATOM   1291  CZ  ARG A  84      -2.137   3.093 -10.156  1.00  0.00           C  
ATOM   1292  NH1 ARG A  84      -1.027   2.730  -9.499  1.00  0.00           N  
ATOM   1293  NH2 ARG A  84      -2.192   2.985 -11.491  1.00  0.00           N  
ATOM   1294  H   ARG A  84       0.432   3.113  -5.655  1.00  0.00           H  
ATOM   1295  HA  ARG A  84       0.132   5.422  -6.924  1.00  0.00           H  
ATOM   1296 1HB  ARG A  84      -1.560   3.334  -6.073  1.00  0.00           H  
ATOM   1297 2HB  ARG A  84      -2.320   4.767  -5.411  1.00  0.00           H  
ATOM   1298 1HG  ARG A  84      -2.653   5.747  -7.541  1.00  0.00           H  
ATOM   1299 2HG  ARG A  84      -1.384   4.799  -8.290  1.00  0.00           H  
ATOM   1300 1HD  ARG A  84      -3.029   2.765  -7.526  1.00  0.00           H  
ATOM   1301 2HD  ARG A  84      -4.227   4.033  -7.692  1.00  0.00           H  
ATOM   1302  HE  ARG A  84      -4.005   3.827  -9.999  1.00  0.00           H  
ATOM   1303 1HH1 ARG A  84      -0.986   2.811  -8.504  1.00  0.00           H  
ATOM   1304 2HH1 ARG A  84      -0.239   2.378 -10.005  1.00  0.00           H  
ATOM   1305 1HH2 ARG A  84      -3.020   3.256 -11.981  1.00  0.00           H  
ATOM   1306 2HH2 ARG A  84      -1.404   2.634 -11.997  1.00  0.00           H  
ATOM   1307  N   LEU A  85      -0.810   5.807  -3.755  1.00  0.00           N  
ATOM   1308  CA  LEU A  85      -0.969   6.773  -2.682  1.00  0.00           C  
ATOM   1309  C   LEU A  85       0.327   7.572  -2.525  1.00  0.00           C  
ATOM   1310  O   LEU A  85       0.306   8.802  -2.524  1.00  0.00           O  
ATOM   1311  CB  LEU A  85      -1.421   6.077  -1.397  1.00  0.00           C  
ATOM   1312  CG  LEU A  85      -2.931   6.044  -1.148  1.00  0.00           C  
ATOM   1313  CD1 LEU A  85      -3.445   7.419  -0.717  1.00  0.00           C  
ATOM   1314  CD2 LEU A  85      -3.677   5.510  -2.372  1.00  0.00           C  
ATOM   1315  H   LEU A  85      -1.054   4.867  -3.517  1.00  0.00           H  
ATOM   1316  HA  LEU A  85      -1.764   7.459  -2.974  1.00  0.00           H  
ATOM   1317 1HB  LEU A  85      -1.054   5.051  -1.414  1.00  0.00           H  
ATOM   1318 2HB  LEU A  85      -0.944   6.572  -0.551  1.00  0.00           H  
ATOM   1319  HG  LEU A  85      -3.126   5.355  -0.326  1.00  0.00           H  
ATOM   1320 1HD1 LEU A  85      -4.531   7.445  -0.810  1.00  0.00           H  
ATOM   1321 2HD1 LEU A  85      -3.165   7.603   0.320  1.00  0.00           H  
ATOM   1322 3HD1 LEU A  85      -3.007   8.187  -1.354  1.00  0.00           H  
ATOM   1323 1HD2 LEU A  85      -3.650   6.256  -3.167  1.00  0.00           H  
ATOM   1324 2HD2 LEU A  85      -3.200   4.593  -2.718  1.00  0.00           H  
ATOM   1325 3HD2 LEU A  85      -4.713   5.302  -2.104  1.00  0.00           H  
ATOM   1326  N   LEU A  86       1.424   6.840  -2.395  1.00  0.00           N  
ATOM   1327  CA  LEU A  86       2.726   7.464  -2.238  1.00  0.00           C  
ATOM   1328  C   LEU A  86       2.839   8.648  -3.201  1.00  0.00           C  
ATOM   1329  O   LEU A  86       3.195   9.753  -2.793  1.00  0.00           O  
ATOM   1330  CB  LEU A  86       3.840   6.429  -2.403  1.00  0.00           C  
ATOM   1331  CG  LEU A  86       4.726   6.196  -1.177  1.00  0.00           C  
ATOM   1332  CD1 LEU A  86       5.600   4.953  -1.361  1.00  0.00           C  
ATOM   1333  CD2 LEU A  86       5.558   7.439  -0.857  1.00  0.00           C  
ATOM   1334  H   LEU A  86       1.432   5.840  -2.397  1.00  0.00           H  
ATOM   1335  HA  LEU A  86       2.786   7.842  -1.217  1.00  0.00           H  
ATOM   1336 1HB  LEU A  86       3.387   5.479  -2.685  1.00  0.00           H  
ATOM   1337 2HB  LEU A  86       4.476   6.738  -3.232  1.00  0.00           H  
ATOM   1338  HG  LEU A  86       4.080   6.011  -0.319  1.00  0.00           H  
ATOM   1339 1HD1 LEU A  86       4.985   4.127  -1.718  1.00  0.00           H  
ATOM   1340 2HD1 LEU A  86       6.384   5.164  -2.087  1.00  0.00           H  
ATOM   1341 3HD1 LEU A  86       6.052   4.683  -0.406  1.00  0.00           H  
ATOM   1342 1HD2 LEU A  86       4.988   8.100  -0.204  1.00  0.00           H  
ATOM   1343 2HD2 LEU A  86       6.480   7.141  -0.358  1.00  0.00           H  
ATOM   1344 3HD2 LEU A  86       5.799   7.963  -1.782  1.00  0.00           H  
ATOM   1345  N   LYS A  87       2.530   8.377  -4.460  1.00  0.00           N  
ATOM   1346  CA  LYS A  87       2.592   9.405  -5.484  1.00  0.00           C  
ATOM   1347  C   LYS A  87       1.708  10.584  -5.071  1.00  0.00           C  
ATOM   1348  O   LYS A  87       2.159  11.729  -5.061  1.00  0.00           O  
ATOM   1349  CB  LYS A  87       2.237   8.821  -6.853  1.00  0.00           C  
ATOM   1350  CG  LYS A  87       3.280   7.793  -7.297  1.00  0.00           C  
ATOM   1351  CD  LYS A  87       4.499   8.480  -7.915  1.00  0.00           C  
ATOM   1352  CE  LYS A  87       4.268   8.775  -9.399  1.00  0.00           C  
ATOM   1353  NZ  LYS A  87       4.421   7.542 -10.202  1.00  0.00           N  
ATOM   1354  H   LYS A  87       2.241   7.475  -4.783  1.00  0.00           H  
ATOM   1355  HA  LYS A  87       3.624   9.750  -5.539  1.00  0.00           H  
ATOM   1356 1HB  LYS A  87       1.254   8.352  -6.809  1.00  0.00           H  
ATOM   1357 2HB  LYS A  87       2.175   9.622  -7.589  1.00  0.00           H  
ATOM   1358 1HG  LYS A  87       3.591   7.193  -6.442  1.00  0.00           H  
ATOM   1359 2HG  LYS A  87       2.836   7.110  -8.022  1.00  0.00           H  
ATOM   1360 1HD  LYS A  87       4.706   9.409  -7.384  1.00  0.00           H  
ATOM   1361 2HD  LYS A  87       5.377   7.844  -7.800  1.00  0.00           H  
ATOM   1362 1HE  LYS A  87       3.270   9.189  -9.542  1.00  0.00           H  
ATOM   1363 2HE  LYS A  87       4.978   9.529  -9.740  1.00  0.00           H  
ATOM   1364 1HZ  LYS A  87       5.383   7.269 -10.215  1.00  0.00           H  
ATOM   1365 2HZ  LYS A  87       3.872   6.810  -9.798  1.00  0.00           H  
ATOM   1366 3HZ  LYS A  87       4.110   7.713 -11.138  1.00  0.00           H  
ATOM   1367  N   GLU A  88       0.466  10.264  -4.740  1.00  0.00           N  
ATOM   1368  CA  GLU A  88      -0.485  11.282  -4.328  1.00  0.00           C  
ATOM   1369  C   GLU A  88       0.159  12.229  -3.312  1.00  0.00           C  
ATOM   1370  O   GLU A  88       0.171  13.443  -3.511  1.00  0.00           O  
ATOM   1371  CB  GLU A  88      -1.755  10.648  -3.757  1.00  0.00           C  
ATOM   1372  CG  GLU A  88      -2.432   9.750  -4.795  1.00  0.00           C  
ATOM   1373  CD  GLU A  88      -3.576  10.488  -5.494  1.00  0.00           C  
ATOM   1374  OE1 GLU A  88      -4.740  10.135  -5.205  1.00  0.00           O  
ATOM   1375  OE2 GLU A  88      -3.260  11.387  -6.303  1.00  0.00           O  
ATOM   1376  H   GLU A  88       0.107   9.331  -4.751  1.00  0.00           H  
ATOM   1377  HA  GLU A  88      -0.736  11.829  -5.236  1.00  0.00           H  
ATOM   1378 1HB  GLU A  88      -1.507  10.063  -2.871  1.00  0.00           H  
ATOM   1379 2HB  GLU A  88      -2.445  11.429  -3.441  1.00  0.00           H  
ATOM   1380 1HG  GLU A  88      -1.700   9.424  -5.533  1.00  0.00           H  
ATOM   1381 2HG  GLU A  88      -2.817   8.853  -4.309  1.00  0.00           H  
ATOM   1382  N   LEU A  89       0.678  11.638  -2.247  1.00  0.00           N  
ATOM   1383  CA  LEU A  89       1.322  12.413  -1.200  1.00  0.00           C  
ATOM   1384  C   LEU A  89       2.138  13.541  -1.835  1.00  0.00           C  
ATOM   1385  O   LEU A  89       1.836  14.717  -1.639  1.00  0.00           O  
ATOM   1386  CB  LEU A  89       2.142  11.501  -0.285  1.00  0.00           C  
ATOM   1387  CG  LEU A  89       2.772  12.170   0.939  1.00  0.00           C  
ATOM   1388  CD1 LEU A  89       1.703  12.560   1.961  1.00  0.00           C  
ATOM   1389  CD2 LEU A  89       3.855  11.281   1.553  1.00  0.00           C  
ATOM   1390  H   LEU A  89       0.665  10.650  -2.093  1.00  0.00           H  
ATOM   1391  HA  LEU A  89       0.535  12.857  -0.591  1.00  0.00           H  
ATOM   1392 1HB  LEU A  89       1.498  10.692   0.059  1.00  0.00           H  
ATOM   1393 2HB  LEU A  89       2.937  11.047  -0.876  1.00  0.00           H  
ATOM   1394  HG  LEU A  89       3.257  13.090   0.613  1.00  0.00           H  
ATOM   1395 1HD1 LEU A  89       0.862  13.027   1.448  1.00  0.00           H  
ATOM   1396 2HD1 LEU A  89       1.359  11.669   2.486  1.00  0.00           H  
ATOM   1397 3HD1 LEU A  89       2.126  13.263   2.679  1.00  0.00           H  
ATOM   1398 1HD2 LEU A  89       4.801  11.454   1.039  1.00  0.00           H  
ATOM   1399 2HD2 LEU A  89       3.967  11.522   2.610  1.00  0.00           H  
ATOM   1400 3HD2 LEU A  89       3.570  10.234   1.446  1.00  0.00           H  
ATOM   1401  N   GLU A  90       3.156  13.143  -2.583  1.00  0.00           N  
ATOM   1402  CA  GLU A  90       4.018  14.105  -3.249  1.00  0.00           C  
ATOM   1403  C   GLU A  90       3.192  15.281  -3.776  1.00  0.00           C  
ATOM   1404  O   GLU A  90       3.605  16.434  -3.662  1.00  0.00           O  
ATOM   1405  CB  GLU A  90       4.811  13.443  -4.376  1.00  0.00           C  
ATOM   1406  CG  GLU A  90       6.305  13.406  -4.047  1.00  0.00           C  
ATOM   1407  CD  GLU A  90       7.145  13.308  -5.322  1.00  0.00           C  
ATOM   1408  OE1 GLU A  90       6.993  12.285  -6.025  1.00  0.00           O  
ATOM   1409  OE2 GLU A  90       7.920  14.258  -5.566  1.00  0.00           O  
ATOM   1410  H   GLU A  90       3.395  12.184  -2.738  1.00  0.00           H  
ATOM   1411  HA  GLU A  90       4.709  14.453  -2.482  1.00  0.00           H  
ATOM   1412 1HB  GLU A  90       4.446  12.429  -4.537  1.00  0.00           H  
ATOM   1413 2HB  GLU A  90       4.654  13.989  -5.306  1.00  0.00           H  
ATOM   1414 1HG  GLU A  90       6.581  14.304  -3.494  1.00  0.00           H  
ATOM   1415 2HG  GLU A  90       6.518  12.555  -3.401  1.00  0.00           H  
ATOM   1416  N   GLN A  91       2.041  14.948  -4.342  1.00  0.00           N  
ATOM   1417  CA  GLN A  91       1.154  15.961  -4.887  1.00  0.00           C  
ATOM   1418  C   GLN A  91       0.363  16.634  -3.763  1.00  0.00           C  
ATOM   1419  O   GLN A  91       0.470  17.843  -3.562  1.00  0.00           O  
ATOM   1420  CB  GLN A  91       0.216  15.362  -5.936  1.00  0.00           C  
ATOM   1421  CG  GLN A  91       0.454  15.993  -7.309  1.00  0.00           C  
ATOM   1422  CD  GLN A  91      -0.836  16.018  -8.132  1.00  0.00           C  
ATOM   1423  OE1 GLN A  91      -1.310  15.006  -8.622  1.00  0.00           O  
ATOM   1424  NE2 GLN A  91      -1.375  17.227  -8.256  1.00  0.00           N  
ATOM   1425  H   GLN A  91       1.713  14.007  -4.431  1.00  0.00           H  
ATOM   1426  HA  GLN A  91       1.808  16.690  -5.367  1.00  0.00           H  
ATOM   1427 1HB  GLN A  91       0.371  14.285  -5.995  1.00  0.00           H  
ATOM   1428 2HB  GLN A  91      -0.820  15.519  -5.634  1.00  0.00           H  
ATOM   1429 1HG  GLN A  91       0.831  17.008  -7.186  1.00  0.00           H  
ATOM   1430 2HG  GLN A  91       1.220  15.431  -7.844  1.00  0.00           H  
ATOM   1431 1HE2 GLN A  91      -0.935  18.017  -7.829  1.00  0.00           H  
ATOM   1432 2HE2 GLN A  91      -2.220  17.347  -8.777  1.00  0.00           H  
ATOM   1433  N   ASN A  92      -0.413  15.822  -3.061  1.00  0.00           N  
ATOM   1434  CA  ASN A  92      -1.222  16.323  -1.964  1.00  0.00           C  
ATOM   1435  C   ASN A  92      -0.381  17.273  -1.108  1.00  0.00           C  
ATOM   1436  O   ASN A  92      -0.895  18.257  -0.579  1.00  0.00           O  
ATOM   1437  CB  ASN A  92      -1.703  15.180  -1.067  1.00  0.00           C  
ATOM   1438  CG  ASN A  92      -3.016  14.591  -1.587  1.00  0.00           C  
ATOM   1439  OD1 ASN A  92      -4.071  15.198  -1.514  1.00  0.00           O  
ATOM   1440  ND2 ASN A  92      -2.891  13.376  -2.116  1.00  0.00           N  
ATOM   1441  H   ASN A  92      -0.494  14.840  -3.232  1.00  0.00           H  
ATOM   1442  HA  ASN A  92      -2.067  16.825  -2.436  1.00  0.00           H  
ATOM   1443 1HB  ASN A  92      -0.942  14.402  -1.025  1.00  0.00           H  
ATOM   1444 2HB  ASN A  92      -1.843  15.546  -0.050  1.00  0.00           H  
ATOM   1445 1HD2 ASN A  92      -1.995  12.934  -2.145  1.00  0.00           H  
ATOM   1446 2HD2 ASN A  92      -3.694  12.906  -2.484  1.00  0.00           H  
ATOM   1447  N   ALA A  93       0.898  16.944  -0.999  1.00  0.00           N  
ATOM   1448  CA  ALA A  93       1.815  17.756  -0.217  1.00  0.00           C  
ATOM   1449  C   ALA A  93       1.569  19.234  -0.523  1.00  0.00           C  
ATOM   1450  O   ALA A  93       0.975  19.949   0.283  1.00  0.00           O  
ATOM   1451  CB  ALA A  93       3.254  17.330  -0.515  1.00  0.00           C  
ATOM   1452  H   ALA A  93       1.308  16.142  -1.432  1.00  0.00           H  
ATOM   1453  HA  ALA A  93       1.605  17.572   0.837  1.00  0.00           H  
ATOM   1454 1HB  ALA A  93       3.374  17.179  -1.587  1.00  0.00           H  
ATOM   1455 2HB  ALA A  93       3.940  18.108  -0.179  1.00  0.00           H  
ATOM   1456 3HB  ALA A  93       3.474  16.401   0.010  1.00  0.00           H  
ATOM   1457  N   SER A  94       2.038  19.650  -1.691  1.00  0.00           N  
ATOM   1458  CA  SER A  94       1.877  21.031  -2.113  1.00  0.00           C  
ATOM   1459  C   SER A  94       2.498  21.231  -3.497  1.00  0.00           C  
ATOM   1460  O   SER A  94       1.958  21.963  -4.324  1.00  0.00           O  
ATOM   1461  CB  SER A  94       2.506  21.993  -1.104  1.00  0.00           C  
ATOM   1462  OG  SER A  94       1.808  23.234  -1.042  1.00  0.00           O  
ATOM   1463  H   SER A  94       2.520  19.063  -2.341  1.00  0.00           H  
ATOM   1464  HA  SER A  94       0.800  21.197  -2.150  1.00  0.00           H  
ATOM   1465 1HB  SER A  94       2.512  21.530  -0.117  1.00  0.00           H  
ATOM   1466 2HB  SER A  94       3.546  22.175  -1.377  1.00  0.00           H  
ATOM   1467  HG  SER A  94       2.458  23.987  -0.945  1.00  0.00           H  
ATOM   1468  N   GLY A  95       3.626  20.566  -3.706  1.00  0.00           N  
ATOM   1469  CA  GLY A  95       4.327  20.661  -4.975  1.00  0.00           C  
ATOM   1470  C   GLY A  95       3.705  19.728  -6.016  1.00  0.00           C  
ATOM   1471  O   GLY A  95       3.009  18.777  -5.665  1.00  0.00           O  
ATOM   1472  H   GLY A  95       4.058  19.972  -3.027  1.00  0.00           H  
ATOM   1473 1HA  GLY A  95       4.293  21.689  -5.336  1.00  0.00           H  
ATOM   1474 2HA  GLY A  95       5.377  20.407  -4.834  1.00  0.00           H  
ATOM   1475  N   PRO A  96       3.987  20.042  -7.309  1.00  0.00           N  
ATOM   1476  CA  PRO A  96       3.463  19.242  -8.404  1.00  0.00           C  
ATOM   1477  C   PRO A  96       4.218  17.917  -8.524  1.00  0.00           C  
ATOM   1478  O   PRO A  96       5.344  17.794  -8.045  1.00  0.00           O  
ATOM   1479  CB  PRO A  96       3.605  20.121  -9.636  1.00  0.00           C  
ATOM   1480  CG  PRO A  96       4.622  21.190  -9.270  1.00  0.00           C  
ATOM   1481  CD  PRO A  96       4.807  21.161  -7.762  1.00  0.00           C  
ATOM   1482  HA  PRO A  96       2.509  18.998  -8.230  1.00  0.00           H  
ATOM   1483 1HB  PRO A  96       3.942  19.539 -10.494  1.00  0.00           H  
ATOM   1484 2HB  PRO A  96       2.650  20.568  -9.909  1.00  0.00           H  
ATOM   1485 1HG  PRO A  96       5.571  21.003  -9.775  1.00  0.00           H  
ATOM   1486 2HG  PRO A  96       4.277  22.172  -9.594  1.00  0.00           H  
ATOM   1487 1HD  PRO A  96       5.854  21.018  -7.494  1.00  0.00           H  
ATOM   1488 2HD  PRO A  96       4.486  22.097  -7.306  1.00  0.00           H  
ATOM   1489  N   SER A  97       3.568  16.958  -9.168  1.00  0.00           N  
ATOM   1490  CA  SER A  97       4.163  15.647  -9.358  1.00  0.00           C  
ATOM   1491  C   SER A  97       5.490  15.778 -10.109  1.00  0.00           C  
ATOM   1492  O   SER A  97       6.534  15.364  -9.608  1.00  0.00           O  
ATOM   1493  CB  SER A  97       3.215  14.715 -10.115  1.00  0.00           C  
ATOM   1494  OG  SER A  97       3.791  13.431 -10.336  1.00  0.00           O  
ATOM   1495  H   SER A  97       2.652  17.067  -9.555  1.00  0.00           H  
ATOM   1496  HA  SER A  97       4.329  15.257  -8.353  1.00  0.00           H  
ATOM   1497 1HB  SER A  97       2.288  14.605  -9.551  1.00  0.00           H  
ATOM   1498 2HB  SER A  97       2.953  15.165 -11.073  1.00  0.00           H  
ATOM   1499  HG  SER A  97       4.534  13.500 -11.002  1.00  0.00           H  
ATOM   1500  N   SER A  98       5.405  16.357 -11.298  1.00  0.00           N  
ATOM   1501  CA  SER A  98       6.586  16.548 -12.122  1.00  0.00           C  
ATOM   1502  C   SER A  98       6.452  17.835 -12.938  1.00  0.00           C  
ATOM   1503  O   SER A  98       7.329  18.696 -12.894  1.00  0.00           O  
ATOM   1504  CB  SER A  98       6.809  15.352 -13.051  1.00  0.00           C  
ATOM   1505  OG  SER A  98       5.643  15.039 -13.808  1.00  0.00           O  
ATOM   1506  H   SER A  98       4.552  16.691 -11.697  1.00  0.00           H  
ATOM   1507  HA  SER A  98       7.418  16.624 -11.422  1.00  0.00           H  
ATOM   1508 1HB  SER A  98       7.634  15.569 -13.729  1.00  0.00           H  
ATOM   1509 2HB  SER A  98       7.101  14.484 -12.460  1.00  0.00           H  
ATOM   1510  HG  SER A  98       5.108  14.336 -13.338  1.00  0.00           H  
ATOM   1511  N   GLY A  99       5.346  17.926 -13.663  1.00  0.00           N  
ATOM   1512  CA  GLY A  99       5.086  19.094 -14.488  1.00  0.00           C  
ATOM   1513  C   GLY A  99       5.014  18.715 -15.968  1.00  0.00           C  
ATOM   1514  O   GLY A  99       6.038  18.650 -16.647  1.00  0.00           O  
ATOM   1515  H   GLY A  99       4.638  17.221 -13.693  1.00  0.00           H  
ATOM   1516 1HA  GLY A  99       4.149  19.558 -14.181  1.00  0.00           H  
ATOM   1517 2HA  GLY A  99       5.872  19.833 -14.336  1.00  0.00           H  
TER    1518      GLY A  99                                                      
ENDMDL
END
【０１１４】
なお、得られた原子座標はプロテイン・データ・バンク（Protein Data Bank(PDB)、Research Collaboratory for Structural Bioinformatics (RCSB)が運営）に受け入れコードＰＤＢ  ＩＤ：１ＵＧＯとして登録予定であり、本明細書において援用される。
【０１１５】
このように、タンパク質全長からコンピュータによりタンパク質の構造・機能を有する構成要素（ドメイン）を予測して、予測した領域を中心にＮ端、Ｃ端へ伸ばしたりカットしたりしたコンストラクトを各種作成し、これらのタンパク質を発現させ、実際に取得したドメインタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥでその発現を確認した。さらに構造を有するか否かはＮＭＲを用いてＨＳＱＣ測定を行い個々のドメイン全てについて確認した。したがって、実際に構造をもつ（フォールドする）ドメインのタンパク質配列上の位置を正確に決定できたことが確認された。また、このような分子量の小さいドメインタンパク質を用いることで、容易に立体構造解析を行うことができるようになったことが確認された。
【０１１６】
［実施例５］ＢＡＧ５ドメインと相互作用する化合物のインシリコスクリーニング
上記の立体構造解析結果に基づいてインシリコスクリーニングを行い、リガンド候補の検索と、BAG５ドメインのファーマコフォアを探索した。
【０１１７】
（１）データベース最適化
低分子化合物データベースの対照データベースとしてSPECS社から提供されている低分子化合物カタログデータベース用いた。１エントリーに複数分子を含むものは１分子ごとに分割した上で、重複を除いたライブラリをスクリーニングの母集団として用いた。ここには152323分子含まれている。
【０１１８】
Lipinski's Rule of 5に基づき、低分子化合物データベースについてターゲット非依存最適化を行った。ここで用いた絞込み条件は以下の通りである。
１．分子量100以上500以下
２．計算LogP値(o/w)5以下(XLOGP-1アルゴリズム使用)
３．水素結合アクセプター原子数（低分子化合物に含まれるNとOの数）  10以下
４．水素結合ドナー原子数（低分子化合物に含まれるNHとOHの数）  5以下
更にドッキング計算を適切に行うために以下のような分子を除外した。
１．回転可能な端結合数が２1以上のもの
２．ラジカルを含むもの
３．H、C、N、O、F、S、P、Cl、Br、I以外の原子を含むもの
絞込み後の候補化合物の分子個数は、103773となった。
【０１１９】
（２）結合部位予測
[１]立体構造類似性検索
距離行列比較[Holm L., Sander C., J. Mol. Biol. (1993), 233:123-138]を用いて、NCBIが公開しているNon-redundat PDB chain setのうちredundancy levelがnon-identicalなものを対象に立体構造類似性検索を行った。この立体構造類似性検索には立体構造座標表１を用いた。
[２]結合部位予測 
図１（ｂ）にターゲットであるＢＡＧ５ドメイン(赤)と、複合体構造として得られているＢＡＧ１（青）／Ｈｓｃ７０（緑）（ＰＤＢ：１ＨＸ１）のＢＡＧ１とを重ね合わせたもの示す。重ね合わせはＢＡＧ５ドメインとＢＡＧ１との配列アライメントに基づいている。次に図１（ｃ）に予測結合部位を黄で示す．ＳＰＨＧＥNにより生成したスフィアのうち、ＢＡＧ１／Ｈｓｃ７０の相互作用（Science 291, 1553-1557 (2001)）に関わるＨｓｃ７０側残基のうちArg258, Arg261, Arg262, Thr265, Glu283, Ser286, Asp292及びTyr294(に含まれる原子)との中心間距離が4.5オングストローム以内にあるものを結合部位として選択した。
【０１２０】
（３）スクリーニング
[１]一次スクリーニング
Dock4.0を用いて、結合サイトについて先に最適化を行った低分子化合物ライブラリー全体に対してドッキングを行った。Dockのエネルギースコア(energy score)に基づいて低分子化合物をランク付けした。
[２]二次スクリーニング
１次スクリーニングの結果得られた上位10000分子について、AutoDock 3.0.5 を用いて、詳細なドッキングを行った。AutoDock終了後、ドッキングの際に使用したスフィアーから4オングストローム以内にある化合物に絞り込み更に計算が異常終了した分子を除去した結果、最終的に9949分子についてドッキング構造を得た。
【０１２１】
（４）ファーマコフォア定義における重要な残基の探索
ターゲットであるＢＡＧ５ドメインの構造座標情報から、各リガンドについて４オングストローム以内のものを選択することによりファーマコフォア定義における重要なアミノ酸（立体構造座標表１に示したSer41、Asp42、Tyr46、Lys47、Glu50、Arg51、Thr54、Leu57、Phe58、Glu83、Leu86、Lys87、Glu90）を求めた。
【０１２２】
［実施例６］細胞増殖の測定
（１）細胞培養
[１]  ＨｅＬａ細胞
１０％のＩＣＮ社製細胞培養用ウシ胎児血清 (fetal bovine serum （FBS）)、２ｍＭのシグマ社製Ｌ−グルタミン（L-glutamine）、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン(penicillin）、及び１００μｇ／ｍｌのシグマ社製ストレプトマイシン（streptomycin）を含むシグマ社製ダルベッコＭＥＭ培地（Dulbecco's modified essential medium（ＤＭＥＭ）培地）を用い、５％の二酸化炭素を含む３７℃の湿った環境のもとでＨｅＬａ細胞を培養した。
[２]  ２９３細胞
１０％のＩＣＮ社製細胞培養用ウシ胎児血清 (fetal bovine serum （FBS）)、２ｍＭのシグマ社製L-グルタミン（L-glutamine）、０．１ｍＭのシグマ社製非必須アミノ酸（non-essential amino acids）、１ｍＭのシグマ社製ピルビン酸ナトリウム（sodium pyruvate）、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン（penicillin）、及び１００μｇ／ｍｌのシグマ社製ストレプトマイシン（streptomycin）を含むシグマ社製ダルベッコＭＥＭ培地（Dulbecco's modified essential medium（ＤＭＥＭ）培地）を用い、５％の二酸化炭素を含む３７℃の湿った環境のもとで２９３細胞を培養した。
【０１２３】
（２）培養細胞への本発明のポリペプチドの遺伝子導入
配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるマウスＢＡＧ５ドメインのｃＤＮＡ（配列番号３）を実施例３の発現ベクターより、制限酵素BamHＩ、XhoIで切り出し、インビトロジェン社のエントリーベクター（ゲートウェイシステム）のBamHI/XhoIマルチクローニングサイトに導入し、サブクローニングした。その後、ゲートウェイＬＲ反応によりｃＤＮＡ部分を、動物培養細胞の発現ベクターであるインビトロジェン社製ｐＤＥＳＴ２６（ＦＬＡＧ−ｔａｇおよびＩＲＥＳ−ＤｓＲｅｄ配列を導入し、改変した。以下、単にｐＤＥＳＴ２６と記す。）に導入した。９６穴カルチャープレートの各ウェルに上記の２９３細胞、及びＨｅＬａ細胞をそれぞれ７５００個、５０００個ずつ蒔き、３７℃、５％ＣＯ２存在下で約２４時間培養を行った。その後、それぞれに上記ｃＤＮＡを導入したプラスミドＤＮＡを遺伝子導入試薬である、インビトロジェン社のリポフェクタミン(LipoFectamine）２０００を用い、公知のプロトコルに従って、細胞に遺伝子を一過的に導入した。その際に対照として、ｐＤＥＳＴ２６のみを導入した細胞を調製し、３７℃、５％ＣＯ２存在下で培養を行った。
【０１２４】
（３）細胞増殖の測定
細胞増殖の測定をするために、以下の対照実験を行った。遺伝子導入から４８時間後、生細胞数測定用試薬ＳＦ(Cell Count Reagent SF)（ナカライテスク株式会社製）を各ウェルに培地容量の１０％となるように添加した。炭酸ガスインキュベーター内で１〜４時間呈色反応を行い、マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍ（参照波長：６００ｎｍ）の吸光度を測定した。生成した水溶性ホルマザン（ＷＳＴ−８ホルマザン）の量は生細胞数と比例関係にあるため、上記の吸光度を測定することによって容易に生細胞数を測定することができる。測定は６個の独立したウェルについて行い、その平均値と標準偏差（SE）を求めた。その結果を図２に示す。図２から、２９３細胞、及びＨｅＬａ細胞のいずれの場合においても、ＢＡＧ５ドメインを発現するｃＤＮＡを導入したものは、導入しないものに比べて生細胞の数が減少していることがわかる。以上から、本発明のポリペプチドを培養動物細胞内で発現させる事によって、細胞は増殖抑制性の制御をうけることがわかる。
【０１２５】
［実施例７］抗アポトーシス活性の測定
ＨｅＬａ細胞を１ｗｅｌｌのチャンバースライド（Ｎｕｎｃ社製）に２×１０５個で蒔いた。その後、約２４時間の培養を行った後、実施例６で作製したプラスミドＤＮＡは、遺伝子導入試薬であるインビトロジェン社のリポフェクタミン(LipoFectamine）２０００を用い、公知のプロトコルに従って、細胞に遺伝子を一過的に導入した。その際に対照として、ｐＤＥＳＴ２６のみを導入した細胞を調整し、３７℃、５％ＣＯ２存在下で２４時間培養を行った。
【０１２６】
アポトーシスの誘導は、細胞を１．０μｇ／ｍｌの抗Ｆａｓ抗体（ＣＨ１１、ＭＢＬ社製）で３時間処理して行った。細胞の固定は、ＰＢＳで洗浄後、４％のPara formaldehyde用いて室温で１時間行った。再びＰＢＳで洗浄した後、In Situ Cell Death Detection Kit Fluorescein（Ｒｏｃｈｅ社製）を用いて付属のマニュアルに従ってアポトーシス細胞の蛍光染色を行った。作成した標本は、Laser Scanning Cytometer（オリンパス社製）により蛍光強度を測定し、アポトーシスの評価とした。その結果を下記表６及び図３に示した。
【０１２７】
【表６】
2005229876.tif 000007
【０１２８】
図３に示したように、コントロールベクターを添加した細胞は抗Ｆａｓ抗体によって染色されアポトーシスが誘導されていることが分かる。これに対し、ＢＡＧ５ドメインを含むベクターを添加した系では有意にアポトーシスの誘導が抑えられていることが分かった。
【０１２９】
［実施例８］Ｈｓｃ７０との結合実験
本発明のポリペプチドがＨｓｃ７０と結合することをインビトロで確認するために、表面プラズモン共鳴センサーとしてBIACORE-3000 (Biacore社）を用いて以下の実験を行った。BiacoreのセンサーチップにマウスのＨｓｃ７０の全長（ＦＬ：１−６４６アミノ酸残基）とＡＴＰａｓｅドメイン（１−３８６アミノ酸残基)をそれぞれ固定化し、実施例３と同様の方法で調製したＢＡＧ５ドメインの濃度を変えて測定した。
【０１３０】
図４（ａ）は、Ｈｓｃ７０ＦＬとＢＡＧ５ドメインとの相互作用の解析例を示し、図４（ｂ）はＨｓｃ７０ＡＴＰａｓｅドメインとＢＡＧ５ドメインとの相互作用の解析例を示す。流したＢＡＧ５ドメインの濃度は下から２５０、５００ｎＭ、１、２、４μＭ、及び６μＭで、それぞれのセンサーグラムを重ねて表示した。図４に示したように、解離速度が非常に速いため、速度論的解析は不可能であった。そこで、平衡状態におけるアフィニティー解析を行ったところ、以下のような結果が得られた。
【０１３１】
【表７】
2005229876.tif 000008
【０１３２】
表７に示したように、ＢＡＧ５ドメインは、Ｈｓｃ７０及びＨｓｃ７０ＡＴＰａｓｅドメインと中程度の強さで結合することが分かった。
【図面の簡単な説明】
【０１３３】
【図１】ＢＡＧ５ドメインの立体構造を表す図である。
【図２】ＢＡＧ５ドメインの細胞増殖阻害活性を表すグラフである。
【図３】ＢＡＧ５ドメインの抗アポトーシス活性を表すグラフである。
【図４】ＢＡＧ５ドメインとＨｓｃ７０との相互作用を解析したセンサーグラムである。
【図１】
2005229876.tif 000009
【図２】
2005229876.tif 000010
【図３】
2005229876.tif 000011
【図４】
2005229876.tif 000012
【配列表】
2005229876000001.app