(57)【要約】【課題】新規な作用に基づく慢性腎疾患治療薬を提供する。【解決手段】ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害活性を有する化合物を有効成分とする慢性腎疾患治療薬。【選択図】なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害活性を有する化合物を有効成分とする慢性腎疾患治療薬。
【請求項２】
式（１）
【化１】
2005023038.tif 000004
［式中、Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって水素原子、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のアルコキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基を示すか、又はＲ１及びＲ２が一緒になってオキソ、ヒドロキシイミノ基、炭素数１〜５のアルコキシイミノ基又は炭素数１〜５のアルキリデン基を形成し、
Ｒ３及びＲ４は同一又は異なって水素原子、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のアルコキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基を示すか、又はＲ３及びＲ４が一緒になってオキソ、ヒドロキシイミノ基、炭素数１〜５のアルコキシイミノ基又は炭素数１〜５のアルキリデン基を形成し、
Ｘは酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｙは式−ＣＲ５Ｒ６−［式中、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって水素原子；ハロゲン原子；ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基；若しくはハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数２〜１０のアルケニル基である］を示すか、
又は式−ＣＲ７Ｒ８−ＣＲ９Ｒ１０−（式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は同一又は異なって水素原子；ハロゲン原子；ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を示すか、又はＲ７とＲ９が隣接する炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数３〜８のシクロアルキル基；ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数４〜８のシクロアルケニル基；ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルキル基；又はハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルケニル基を形成する）を示し、
Ｚは水素原子；又はハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を示すか、
又はＹ及びＺが隣接する窒素原子とともに一緒になって、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び−ＯＲ１５（式中Ｒ１５は炭素数１〜５の鎖状アルキル基、アミノカルボニルメチル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数２〜１０の環状アミノ基を形成する］で表されるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬。
【請求項３】
式（１）においてＲ１はハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のアルコキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４がそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のアルコキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項２記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項４】
式（１）においてＲ１がフッ素原子又は塩素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項２又は３に記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項５】
式（１）において  Ｒ１がフッ素原子であり、Ｒ２が水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項２又は３に記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項６】
式（１）においてＲ１がフッ素原子であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項２記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項７】
式（２）
【化２】
2005023038.tif 000005
［式中、Ｘは酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｙは式−ＣＲ５Ｒ６−［式中、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって水素原子；ハロゲン原子；ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基；若しくはハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数２〜１０のアルケニル基である］を示すか、
又は式−ＣＲ７Ｒ８−ＣＲ９Ｒ１０−（式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は同一又は異なって水素原子；ハロゲン原子；ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を示すか、又はＲ７とＲ９が隣接する炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数３〜８のシクロアルキル基；ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数４〜８のシクロアルケニル基；ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルキル基；又はハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルケニル基を形成する）を示し、
Ｚは水素原子；又はハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を示すか、
又はＹ及びＺが隣接する窒素原子とともに一緒になって、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び−ＯＲ１５（式中Ｒ１５は炭素数１〜５の鎖状アルキル基、アミノカルボニルメチル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数２〜１０の環状アミノ基を形成する］で表されるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬。
【請求項８】
式（１）又は式（２）においてＸが酸素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項２〜７のいずれかに記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項９】
式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＨ２−であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項８記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項１０】
式（１）又は式（２）においてＺが水酸基及び炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基からなる群より選ばれる一つ以上で置換されてよい、炭素数４〜１０の分岐鎖状又は環状アルキル基であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項９記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項１１】
式（１）又は式（２）においてＺがｔｅｒｔ−ブチル基、（１−ヒドロキシメチル）シクロペンチル基又は（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル）エチル基であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項９記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項１２】
式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＲ５Ｒ６−（式中、Ｒ５が水素である）であり、Ｚが水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項８記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項１３】
式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＲ５Ｒ６−（式中、Ｒ５が水素であり、Ｒ６が炭素数３〜６の分岐鎖状又は環状アルキル基である）であり、Ｚが水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項８記載の慢性腎疾患治療薬。
【請求項１４】
式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＨ［ＣＨ（ＣＨ３）２］−、−ＣＨ［Ｃ（ＣＨ３）３］−又は−ＣＨ［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３］−であり、Ｚが水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする請求項８記載の慢性腎疾患治療薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規な慢性腎疾患治療薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）はＮ末端から２番目にプロリン又はアラニンを有するペプチド鎖からジペプチドを加水分解するセリンプロテアーゼの一種である。ＤＰＰＩＶは腎臓、肝臓など広く組織、血漿中に分布しており、さまざまな生理活性ペプチドの代謝に関与している。
【０００３】
ＤＰＰＩＶを阻害することは、２型糖尿病治療、免疫疾患、皮膚病及び良性の前立腺肥大の治療に有用であると期待されている。
【０００４】
これまで、ＤＰＰＩＶ阻害化合物としては、ピロリジンの２位がリンで置換された化合物（非特許文献１）、ホウ素で置換された化合物（非特許文献２）、ピロリジンの２位がシアノ基で置換された化合物（非特許文献３〜５）、２−シアノピロリジン誘導体で３位、４位に置換基を有する化合物（特許文献１）の報告がある。
【特許文献】ＷＯ０２／３８５４１
【非特許文献】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７，３９６９−３９７６，１９９４
【非特許文献】Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２，８７２３−８７３１，１９９３
【非特許文献】Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｂｉｏｐｈｙｓ．３２３，１４８−１５２，１９９５
【非特許文献】Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．６，１１６３−１１６６，１９９６
【非特許文献】Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３８，１１５９７−１１６０３，１９９９
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、新規な作用に基づく慢性腎疾患治療薬を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するべく鋭意検討を重ねた結果、ＤＰＰＩＶ阻害活性を有する化合物が優れた腎保護作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明の１の態様によると、本発明は、ＤＰＰＩＶ阻害活性を有する化合物を有効成分とする慢性腎疾患治療薬（以下「本発明の慢性腎疾患治療薬」または「本発明治療薬」という）を提供する。
【０００７】
また、本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）
【０００８】
【化３】
2005023038.tif 000002
【０００９】
［式中、Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって水素原子、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のアルコキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基を示すか、又はＲ１及びＲ２が一緒になってオキソ、ヒドロキシイミノ基、炭素数１〜５のアルコキシイミノ基又は炭素数１〜５のアルキリデン基を形成し、
Ｒ３及びＲ４は同一又は異なって水素原子、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のアルコキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基を示すか、又はＲ３及びＲ４が一緒になってオキソ、ヒドロキシイミノ基、炭素数１〜５のアルコキシイミノ基又は炭素数１〜５のアルキリデン基を形成し、
Ｘは酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｙは式−ＣＲ５Ｒ６−［式中、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって水素原子；ハロゲン原子；ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基；若しくはハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数２〜１０のアルケニル基である］を示すか、
又は式−ＣＲ７Ｒ８−ＣＲ９Ｒ１０−（式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は同一又は異なって水素原子；ハロゲン原子；ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を示すか、又はＲ７とＲ９が隣接する炭素原子と一緒になって、ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数３〜８のシクロアルキル基；ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数４〜８のシクロアルケニル基；ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルキル基；又はハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び炭素数１〜５の鎖状アルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルケニル基を形成する）を示し、
Ｚは水素原子；又はハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を示すか、
又はＹ及びＺが隣接する窒素原子とともに一緒になって、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、炭素数１〜５の鎖状アルキル基及び−ＯＲ１５（式中Ｒ１５は炭素数１〜５の鎖状アルキル基、アミノカルボニルメチル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい炭素数２〜１０の環状アミノ基を形成する］で表されるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００１０】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）においてＲ１はハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のアルコキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４がそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のアルコキシ基又は炭素数１〜５のアルキル基であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００１１】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）においてＲ１がフッ素原子又は塩素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００１２】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）において  Ｒ１がフッ素原子であり、Ｒ２が水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００１３】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）においてＲ１がフッ素原子であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００１４】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（２）
【００１５】
【化４】
2005023038.tif 000003
【００１６】
（式中、Ｘ、Ｙ及びＺは、上記と同じである。）
で表されるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００１７】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）又は式（２）においてＸが酸素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００１８】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＨ２−であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００１９】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＨ２−であり、Ｚが水酸基及び炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基からなる群より選ばれる一つ以上で置換されてよい、炭素数４〜１０の分岐鎖状又は環状アルキル基であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００２０】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＨ２−であり、Ｚがｔｅｒｔ−ブチル基、（１−ヒドロキシメチル）シクロペンチル基又は（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル）エチル基であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００２１】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＲ５Ｒ６−（式中、Ｒ５が水素である）であり、Ｚが水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００２２】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＲ５Ｒ６−（式中、Ｒ５が水素であり、Ｒ６が炭素数３〜６の分岐鎖状又は環状アルキル基である）であり、Ｚが水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００２３】
本発明の他の態様によると、本発明は、式（１）又は式（２）においてＹが−ＣＨ［ＣＨ（ＣＨ３）２］−、−ＣＨ［Ｃ（ＣＨ３）３］−又は−ＣＨ［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３］−であり、Ｚが水素原子であるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とする慢性腎疾患治療薬を提供する。
【００２４】
【発明の実施の形態】
本発明においてジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）阻害活性を有する化合物とは、ペプチド鎖からジペプチドを加水分解するプロテアーゼ活性を阻害する化合物であれば特に制限はなく、例えば、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４７、７６４−７６９、１９９８に掲載された方法により測定し、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害活性が認められた化合物を挙げることができる。さらに、具体的には、以下の公報に記載された化合物を挙げることができる。
【００２５】
ＷＯ９５／１５３０９、ＷＯ９８／１９９９８、ＷＯ００／３４２４１、ＷＯ０１／５５１０５、ＷＯ０１／６８６０３、ＷＯ０１／９６２９５、ＷＯ０２／１４２７１、ＷＯ０２／３０８９１、ＷＯ０２／３０８９１、ＷＯ０２／５１８３６、ＷＯ０２／０７６４５０、ＷＯ０２／０８３１２８、ＷＯ０３／０００２５０、ＷＯ０３／０００１８０、ＷＯ０３／０００１８１、ＷＯ０３／００４４９８、ＷＯ０３／００２５３０、ＷＯ０３／００２５３１、ＷＯ０３／００２５５３、ＷＯ０３／００２５９５、ＷＯ０３／０３５０５７、ＷＯ０３／０３５０６７、ＷＯ０３／０３７３２７、ＷＯ０２／０２５６０、ＷＯ０２／６２７６４、ＷＯ０２／６８４２０、ＷＯ０３／００４４９６、ＷＯ０３／００４４９８。
【００２６】
特に、式（１）で表されるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩を有効成分とすることが好ましく、さらに好ましくは式（２）で表されるシアノピロリジン誘導体又はその薬学的に許容される塩である。
【００２７】
式（１）および（２）において、鎖状とは、直鎖状又は分岐鎖状を意味する。
ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を示す。
炭素数１〜５のアルコキシ基とは、直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルコキシ基を意味し、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、シクロプロピルメトキシ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基などを挙げることができる。
【００２８】
炭素数１〜５のアルキル基とは、直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基（シクロアルキルアルキル基も含む）を意味し、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、１−エチルプロピル基などを挙げることができる。
【００２９】
炭素数１〜５のアルコキシイミノ基とは直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルコキシ基で置換されたイミノ基を意味し、メトキシイミノ基、エトキシイミノ基、プロポキシイミノ基、イソプロポシイミノ基、ブトキシイミノ基、イソブトキシイミノ基、ｔｅｒｔ−ブトキシイミノ基、シクロプロピルメトキシイミノ基、ペンチルオキシイミノ基、イソペンチルオキシイミノ基などを挙げることができる。
【００３０】
炭素数１〜５のアルキリデン基とは、直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキリデン基を意味し、例えばメチレン基、エチリデン基、プロピリデン基、イソプロピリデン基、ブチリデン基、イソブチリデン基、シクロプロピルメチレン基、ペンチリデン基などを挙げることができる。
【００３１】
置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基とは、置換又は無置換の直鎖状、分岐鎖状又は環状の炭素数１〜１０のアルキル基（シクロアルキルアルキル基も含む）を意味し、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基（例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基など）、炭素数４〜８のシクロアルケニル基（例えば、シクロブテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基、シクロヘプテニル基、シクロオクテニル基など）、置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルキル基（例えば、ビシクロペンチル基、ビシクロヘキシル基、ビシクロヘプチル基、ビシクロオクチル基、ビシクロノニル基、ビシクロデシル基など）、置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルケニル基（例えば、ビシクロペンテニル基、ビシクロヘキセニル基、ビシクロヘプテニル基、ビシクロオクテニル基、ビシクロノネル基、ビシクロデセル基など）、架橋環式炭化水素（例えば、アダマンチル基、ボルニル基、ノルボルニル基、ピナニル基、ツヨイル基、カルイル基、カルファニル基など）などのアルキル基の他、これらのアルキル基の水素原子をハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、メルカプト基、炭素数１〜５のアルキルチオ基、グアニジル基、置換されてもよいフェニル基、イミダゾリル基、インドリル基、−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は水素原子、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいピリジル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）、−ＣＯＮＨＲ１２｛式中Ｒ１２は水素原子又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１３（式中ｍは整数１〜５を示し、Ｒ１３は水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基若しくはベンジルオキシカルボニル基を示す）を示す｝並びに−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の直鎖状又は分岐鎖状アルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換したアルキル基を挙げることができる。
【００３２】
置換されてもよいフェニル基の置換されたフェニル基とは、例えば、水酸基及び直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されたフェニル基（例えば、４−ヒドロキシフェニル基、３，４−ジメトキシフェニル基など）を挙げることができる。
【００３３】
置換されてもよいピリジル基（例えば、ピリジン−２−イル基など）の置換されたピリジル基とは、例えば、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子及びアミノカルボニル基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換されたピリジル基（例えば、５−シアノピリジン−２−イル基、５−ニトロピリジン−２−イル基、５−クロロピリジン−２−イル基、５−アミノカルボニルピリジン−２−イル基など）を挙げることができる。
【００３４】
炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基とは、ヒドロキシメチル基、１−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシエチル基、１−ヒドロキシプロピル基、２−ヒドロキシプロピル基、３−ヒドロキシプロピル基、１−（ヒドロキシメチル）エチル基、１−ヒドロキシ−１−メチルエチル基、４−ヒドロキシブチル基、５−ヒドロキシペンチル基などがあげられる。
【００３５】
炭素数１〜５のアルキルチオ基とは、メチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基、イソプロピルチオ基、ブチルチオ基、ｔｅｒｔ−ブチルチオ基、ペンチルチオ基などがあげられる。
【００３６】
置換されてもよい炭素数２〜１０のアルケニル基とは、置換又は無置換の直鎖状、分岐鎖状又は環状の炭素数２〜１０のアルケニル基を意味し、例えばビニル基、アリル基、プロペニル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基、ヘプテニル基、オクテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基などのアルケニル基の他、これらアルケニル基の水素原子をハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基及び直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換したアルケニル基を挙げることができる。
【００３７】
置換されてもよい炭素数３〜８のシクロアルキル基とは、置換又は無置換のシクロアルキル基を意味し、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基などのシクロアルキル基の他、これらシクロアルキル基の水素原子をハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルキル基及び直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換したシクロアルキル基を挙げることができる。
【００３８】
置換されてもよい炭素数４〜８のシクロアルケニル基とは、置換又は無置換のシクロアルケニル基を意味し、例えば、シクロブテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基、シクロヘプテニル基、シクロオクテニル基などのシクロアルケニル基の他、これらシクロアルケニル基の水素原子をハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルキル基及び直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換したシクロアルケニル基を挙げることができる。
【００３９】
置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルキル基とは、置換又は無置換のビシクロアルキル基を意味し、例えば、ビシクロペンチル基、ビシクロヘキシル基、ビシクロヘプチル基、ビシクロオクチル基、ビシクロノニル基、ビシクロデシル基などのビシクロアルキル基の他、これらビシクロアルキル基の水素原子をハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルキル基及び直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換したビシクロアルキル基を挙げることができる。
【００４０】
置換されてもよい炭素数５〜１０のビシクロアルケニル基とは、置換又は無置換のビシクロアルケニル基を意味し、例えば、ビシクロペンテニル基、ビシクロヘキセニル基、ビシクロヘプテニル基、ビシクロオクテニル基、ビシクロノネル基、ビシクロデセル基などのビシクロアルケニル基の他、これらビシクロアルケニル基の水素原子をハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アミノカルボニル基、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルキル基及び直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルコキシ基からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換したビシクロアルケニル基を挙げることができる。
【００４１】
置換されてもよい炭素数２〜１０の環状アミノ基とは、環内に一つ以上の窒素原子を有し、また一つ以上の酸素原子、硫黄原子が存在してもよい置換又は無置換の環状アミノ基を意味し、例えばアジリジル基、アゼチジル基、ピロリジル基、イミダゾリジル基、オキサゾリジル基、チアゾリジル基、ピペリジル基、モルホリル基、アザビシクロヘプチル基、アザビシクロオクチル基などの環状アミノ基の他、これら環状アミノ基にベンゼン環又はピリジン環が縮合した環状アミノ基や環状アミノ基（環状アミノ基に縮合したベンゼン環又はピリジン環も含む）の水素原子をハロゲン原子、水酸基、アミノ基、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルキル基及び−ＯＲ１５（式中Ｒ１５は直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５のアルキル基、アミノカルボニルメチル基若しくはベンジル基を示す）からなる群より選ばれる一つ以上の基で置換した環状アミノ基を挙げることができる。
【００４２】
また、薬学的に許容される塩とは、例えば硫酸、塩酸、臭化水素酸、燐酸などの鉱酸との塩、酢酸、シュウ酸、乳酸、酒石酸、フマール酸、マレイン酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸などの有機酸との塩を挙げることができる。
【００４３】
式（１）において、Ｒ１はハロゲン原子であることが好ましく、さらに好ましくはフッ素原子である。Ｒ２は水素原子又はハロゲン原子であることが好ましいが、水素原子であることがさらに好ましい。
【００４４】
式（１）又は式（２）において、Ｙが−ＣＨ２−であるとき、Ｚは、水酸基、炭素数１〜５のアルコキシル基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、置換されてもよいフェニル基及び−ＮＨＲ１１（式中Ｒ１１は置換されてもよいピリジル基である）からなる群の一つ以上で置換されてよい、炭素数１〜１０のアルキル基が好ましい。この場合、Ｚは、好ましくは、水酸基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基及び炭素数１〜５のアルコキシル基からなる群の一つ以上で置換されてよい、炭素数４〜１０の分岐鎖状若しくは環状アルキル基であり、より好ましくは、水酸基及び炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基からなる群の一つ以上で置換されてよい、炭素数４〜１０の分岐鎖状アルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキル基若しくはアダマンチル基であり、さらに好ましくは、ｔｅｒｔ−ブチル基、（１−ヒドロキシメチル）シクロペンチル基又は（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル）エチル基である。
【００４５】
式（１）又は式（２）において、Ｙが、式−ＣＲ５Ｒ６−（式中、Ｒ５が水素であり、Ｒ６が置換されてもよい炭素数１〜１０のアルキル基または式−ＣＲ７Ｒ８−ＣＲ９Ｒ１０−（式中、Ｒ８とＲ１０は水素であり、Ｒ７とＲ９が隣接する炭素原子と一緒になって炭素数３〜８のシクロアルキル基を形成する）であるとき、ＺはＨ又はＣＨ３が好ましい。
【００４６】
この場合、好ましくは、Ｙが、式−ＣＲ５Ｒ６−｛式中、Ｒ５が水素であり、Ｒ６が水酸基及び−ＯＲ１４（式中Ｒ１４は炭素数１〜５の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基若しくはベンジル基を示す）からなる群から選択される一つ以上で置換されてもよい炭素数３〜６の分岐鎖状又は環状アルキル基である）であるとき、Ｚが水素原子であり、より好ましくは、Ｙが、−ＣＲ５Ｒ６−（式中、Ｒ５が水素であり、Ｒ６が炭素数３〜６の分岐鎖状又は環状アルキル基である）であるとき、Ｚが水素原子であり、さらにより好ましくは、Ｙが−ＣＨ［ＣＨ（ＣＨ３）２］−、−ＣＨ［Ｃ（ＣＨ３）３］−又は−ＣＨ［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３］−であるとき、Ｚが水素原子である。
【００４７】
式（１）又は式（２）において、Ｙ及びＺが隣接する窒素原子とともに一緒になって形成する置換されてもよい炭素数２〜１０の環状アミノ基を形成する場合の好ましい例としては、ピロリジル基、ピペリジル基又はこれらの基にベンゼン環が縮合した環状アミノ基であり、好ましい置換基としては水酸基及び−ＯＲ１５（式中Ｒ１５は上記で定義した通りである）があげられる。
【００４８】
本発明において慢性腎疾患治療薬とは、慢性腎不全、腎糸球体硬化症、糖尿病性腎症、腎硬化症、慢性腎炎、慢性糸球体腎炎、多発性嚢胞腎等を含む慢性腎疾患の腎生理機能を低下させる疾患の治療薬を意味し、尿中蛋白やアルブミンを減少させるなど優れた腎保護作用を有する。
【００４９】
本発明の医薬は、全身的又は局所的に経口又は直腸内、皮下、筋肉内、静脈内、経皮等の非経口投与することができる。
【００５０】
本発明の化合物を医薬として用いるためには、固体組成物、液体組成物、及びその他の組成物のいずれの形態でもよく、必要に応じて最適のものが選択される。本発明の医薬は、本発明の化合物に薬学的に許容されるキャリヤーを配合して製造することができる。具体的には、常用の賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、被覆剤、糖衣剤、ｐＨ調整剤、溶解剤、又は水性若しくは非水性溶媒などを添加し、常用の製剤技術によって、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、散剤、液剤、乳剤、懸濁剤、注射剤、などに調製する事ができる。賦形剤、増量剤としては、たとえば、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールなどやその他常用されるものをあげる事ができる。
【００５１】
また、本発明の慢性腎疾患治療薬は、α、β若しくはγ−シクロデキストリン又はメチル化シクロデキストリン等と包接化合物を形成させて製剤化することができる。
【００５２】
本発明の慢性腎疾患治療薬の投与量は、疾患、症状、体重、年齢、性別、投与経路等により異なるが、成人に対し、経口投与の場合、好ましくは約１〜約１０００  ｍｇ  ／  ｋｇ体重／日であり、より好ましくは約１０〜約２００  ｍｇ  ／  ｋｇ体重／日であり、これを１日１回又は数回に分けて投与することができる。
【００５３】
さらに、試験例により本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
試験例  １［ジペプチジルペプチダーゼＩＶ活性阻害実験］
ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）活性阻害実験はＤｉａｂｅｔｅｓ、４７、７６４−７６９、１９９８に掲載された方法に従って行った。ジペプチジルペプチダーゼＩＶを含む血漿は、健常人ボランティアから血液を採取し、遠心分離により調製した。酵素反応は９６穴平底プレートを用い、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％ＢＳＡ、ｐＨ７．８から成る緩衝液中で行った。  １００μＭ      Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−４−メチルクマリル−７−アミド（ペプチド研究所製）溶液    ２５μｌ、１３３ｍＭ  塩化マグネシウム溶液７．５μｌ、検体化合物５μｌを混合し、次いで上記緩衝液で１／１００倍に希釈した血漿１２．５μｌを加えた。室温で２時間反応させた後、２５％酢酸水溶液５０μｌを添加し反応を止めた。遊離した７−アミノ−４−メチルクマリン量を蛍光プレートリーダー（１４２０  ＡＲＶＯＴＭ  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒ；Ｗａｌｌａｃ社製）を用いて３９０ｎｍで励起させたときの４６０ｎｍの蛍光強度を測定した。溶媒添加して反応時間を０分としたときの蛍光強度をブランク値とし、各測定値からブランク値を差し引いたものを特異的蛍光強度とした。得られた特異的蛍光強度から、下式によりジペプチジルペプチダーゼＩＶ活性阻害率（％）を求めた。被検化合物は１０００倍高濃度のジメチルスルフォキシド溶液を調製し、上記緩衝液で希釈して使用した。各濃度の阻害率から５０％阻害を示す化合物濃度（ＩＣ５０値）を算出した。
【００５４】
阻害率（％）＝Ａ÷Ｂ×１００
（Ａ＝溶媒添加における蛍光強度−検体化合物添加における蛍光強度）
（Ｂ＝溶媒添加における蛍光強度）
（２Ｓ，４Ｓ）―２―シアノ−フルオロ―１―［（２−ヒドロキシ―１，１―ジメチレル）エチルアミノ］アセチルピロリジン・ベンゼンスルホン酸塩（以下化合物Ａとする）、（２Ｓ，４Ｓ）―１―［（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−３−メチルペンタノイル］―２−シアノ−４−フルオロピロリジン塩酸塩、（２Ｓ，４Ｓ）―１―［（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル］―２−シアノ−４−フルオロピロリジン塩酸塩、（２Ｓ，４Ｓ）―１―［（２Ｓ）−２−アミノ−３，３−ジメチルブタノイル］―２−シアノ−４−フルオロピロリジン塩酸塩、（２Ｓ，４Ｓ）―１―（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）アセチル−２−シアノ−４−フルオロピロリジン塩酸塩、（２Ｓ，４Ｓ）―２―シアノ−１−［２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチルアミノ］アセチル−４−フルオロピロリジンマレイン酸塩のＩＣ５０値は、それぞれ５．４ｎＭ、０．６ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、２．９ｎＭ、１．１ｎＭであった。
【００５５】
試験例２
Ｄａｈｌ−ｓａｌｔ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｒａｔ  における  ＤＰＰＩＶ阻害による腎保護作用
本試験は、Ｊ．  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  第  ２３  巻  ９７０  頁（１９９４）に記載の方法に準拠して行なった。具体的には、以下のように行なった。
＜方法＞
実験には  Ｄａｈｌ−ｓａｌｔ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  （Ｄａｈｌ−Ｓ）  ｒａｔ  および対照動物であるＤａｈｌ−ｓａｌｔ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  （Ｄａｈｌ−Ｒ）  ｒａｔ  （オス、７  週齢）を用い、下記のように  ３  群に分けて（１  群各  ６  例）試験を行なった。
Ｉ群：  Ｄａｈｌ−Ｒ  ＋  ４％  ＮａＣｌ食  ＋  溶媒経口投与（１  日  ２  回）
ＩＩ群：  Ｄａｈｌ−Ｓ  ＋  ４％  ＮａＣｌ食  ＋  溶媒経口投与（１  日  ２  回）
ＩＩＩ群：  Ｄａｈｌ−Ｓ  ＋  ４％  ＮａＣｌ食  ＋  化合物Ａ  １０  ｍｇ／ｋｇ  経口投与（１  日  ２  回）
【００５６】
各群の動物には  ４％  ＮａＣｌ  高食塩含有飼料（正常飼料は  ０．６  ％）を与え、飲料水は自由に摂取させた。溶媒および  化合物Ａ  は  １  日  ２  回経口投与し（１  回目は  ８：３０〜９：３０，  ２  回目は１６：３０〜１７：３０）  ６  週間連続経口投与する。投与開始より  ６  週間後、代謝ケージにラットを一匹ずつ入れて尿を採取し、尿中蛋白およびアルブミン量を測定して腎機能に及ぼす影響を観察した。尿中蛋白およびアルブミンの測定は、それぞれ  Ｂｕｎｓｅｋｉ  Ｋａｇａｋｕ  第  ３２  巻  Ｅ３７９−Ｅ３８６  頁（１９８３）および  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  第  ４０  巻  ６  号  ８３４−８３９  頁（２００２）に記載の方法に準拠して、日立自動分析装置  ７０６０を用いて行なった。
【００５７】
試験開始  ６  週間後の尿中蛋白排泄量は、化合物Ａ  投与群（ＩＩＩ群）では  溶媒投与群（ＩＩ群）と比較して低値であった。
また、尿中アルブミン排泄量は、化合物Ａ  投与群（ＩＩＩ群）では  溶媒投与群（ＩＩ群）と比較して低値であった。
【００５８】
試験例３
自然発症糖尿病ラット（ＺＳＦ−１）におけるＤＰＰＩＶ阻害による腎保護作用
＜方法＞
ＺＳＦ−１  は自然発症の糖尿病ラットであり、腎機能障害を来たすことが知られている（Ｒｅｎａｌ  Ｆａｉｌｕｒｅ  第  ２２  巻  ４  号，  ３８７−４０６  頁、２０００）。本試験では、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  から入手した  ８  週齢の  ＺＳＦ−１  および対照動物である  ＺＳＦ−１／ｌｅａｎ  を用い、下記のように  ５  群に分けて（１  群各  ８  例）試験を行なった。
Ｉ群：  ＺＳＦ−１／ｌｅａｎ  ＋  溶媒経口投与（１  日  ２  回）
ＩＩ群：  ＺＳＦ−１  ＋  溶媒経口投与（１  日  ２  回）
ＩＩＩ群：  ＺＳＦ−１  ＋  化合物Ａ  １  ｍｇ／ｋｇ  経口投与（１  日  ２  回）
ＩＶ群：  ＺＳＦ−１  ＋  化合物Ａ  ３  ｍｇ／ｋｇ  経口投与（１  日  ２  回）
Ｖ群：  ＺＳＦ−１  ＋  化合物Ａ  １０  ｍｇ／ｋｇ  経口投与（１  日  ２  回）
【００５９】
溶媒および  化合物Ａ  は  １  日  ２  回（１  回目は  ８：３０〜１０：３０，  ２  回目は１６：３０〜１８：３０）で  ８週間連続経口投与する。投与開始から  ８週間後、代謝ケージにラットを一匹ずつ入れて尿を採取し、尿中蛋白およびアルブミン量を測定して腎機能に及ぼす影響を観察した。尿中蛋白およびアルブミン量の測定は、上記の文献の記載に準拠して、日立自動分析装置  ７０６０  で行なった。
【００６０】
試験開始  ８  週間後の尿中蛋白排泄量は、化合物Ａ  １０  ｍｇ／ｋｇ  投与群（Ｖ群）は溶媒投与群（ＩＩ群）と比較して低値であった。
また、尿中アルブミン排泄量は、  化合物Ａ  １０  ｍｇ／ｋｇ  投与群（Ｖ群）は溶媒投与群（ＩＩ群）と比較して低値であった。
【００６１】
【発明の効果】
本発明により、新規な作用機序に基づく慢性腎疾患治療薬の提供が可能となり、副作用の少ない慢性腎疾患の治療、予防に有用である。