(57)【要約】  【課題】  植物病原菌に対して強い殺菌効果を有するとともに、安全性の高い抗菌剤を提供する。  【解決手段】  ニンニクエキスを水で１／１０倍に希釈し、人為的に添加するか内生する菌を増殖発酵させることによって、真菌等の病原菌に対して強い抗菌力のあるエキスに変化させる。【選択図】  図３
2005206504.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細菌によって発酵された作物エキスを主成分とする抗菌剤。
【請求項２】
細菌によって発酵されたユリ科、アブラナ科、セリ科、ナス科、ウリ科、またはイネ科の植物の作物エキスを主成分とする抗菌剤。
【請求項３】
細菌によって発酵されたニンニクエキスを主成分とする抗菌剤。
【請求項４】
Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ、Ｒｉｚｏｃｔｏｎｉａ、Ｐｈｙｔｅｐｈｔｈｏｒａ，Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ、またはＳｃｌｅｒｏｔｉｕｍに対して抗菌性を示すことを特徴とする請求項１、請求項２または請求項３に記載の抗菌剤。
【請求項５】
作物エキスを細菌によって発酵させることを特徴とする抗菌剤の製造方法。
【請求項６】
ユリ科、アブラナ科、セリ科、ナス科、ウリ科、またはイネ科の植物の作物エキスを細菌によって発酵させることを特徴とする抗菌剤の製造方法。
【請求項７】
ニンニクエキスを細菌によって発酵させることを特徴とする抗菌剤の製造方法。
【請求項８】
ニンニクエキスを希釈するとともに、内生菌によって発酵させることを特徴とする請求項７に記載の抗菌剤の製造方法。
【請求項９】
発酵させる菌がＢａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ／ｓｕｂｔｉｌｉｓまたはＢａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ／ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎｓであることを特徴とする請求項８に記載の抗菌剤の製造方法。
【請求項１０】
Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ／ｓｕｂｔｉｌｉｓの発酵菌が寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−０８５５７の菌であることを特徴とする請求項８に記載の抗菌剤の製造方法。
【請求項１１】
Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ／ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎｓの発酵菌が寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−０８５５８の菌であることを特徴とする請求項８に記載の抗菌剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗菌剤とその製造方法に係り、とくに植物の作物エキスを用いる抗菌剤とその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
特開平６−２５３８２７号公報には、健全なニンニクの根、組織、根圏等を適当な培地で培養し、得られたコロニーの中から抗フザリウム活性を有するものを分離し、その菌株を懸濁液にニンニクの子球、珠球、種子等を浸漬処理したものを発酵圃場に植え、その発病程度、草丈、球の重さを調べ、防除効果のある菌株を分離することによって得るようにした植物真菌感染防除剤が開示されている。
【０００３】
この感染防除剤は、バチルス・サブチリス  ＦＲ−２、バチルス・ポリミキサ  ＫＴ−８、キサントモナス・キャンペストリス  Ｓ−９およびフラボバクテリュウム・ｓｐ  Ｓ−１０から選ばれる微生物の菌体の１種または２種以上を含有する植物真菌感染防除剤およびこれで植物の子球、珠球、根、種子および／または根圏土壌を処理して植物が真菌に感染するのを防除する防除方法であって、植物真菌感染防除剤で植物の子球、珠球、根、種子および／または根圏土壌を処理することによって、植物の真菌感染を効果的に防除するようにしたものである。
【０００４】
特開平６−２５３８２７号公報に記載されている植物真菌感染防除剤はその殺菌効果が十分でないばかりか、適用される作物が非常に限られており、広範な作物に応用できない欠点がある。
【０００５】
一方で本願発明者は、ユリ科、アブラナ科、セリ科、ナス科、ウリ科、イネ科の植物の作物エキス、とくに例えばユリ科のニンニクエキスを特定の微生物で醗酵させることによって、植物病原菌に対して強い殺菌効果を示すエキスを得ることができる知見を得た。従ってこのようなエキスを殺菌剤の代りに土壌に散布することによって、植物の真菌感染に対して大きな効果を得ることが可能になる。
【特許文献１】特開平６−２５３８２７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本願発明の課題は、上記のような知見に基いて従来の真菌防除剤の欠点を除去し、より強い殺菌効果を有するとともに安全性の高い抗菌剤とその製造方法を提供することである。
【０００７】
本願発明の別の課題は、安全性が高くてしかも高い抗菌活性を示し、植物病原菌に対して強い殺菌効果を有する抗菌剤を提供することである。
【０００８】
本願発明のさらに別の課題は、植物病原菌に対して強い殺菌効果を示す抗菌剤を安定的に製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願の一発明は、細菌によって発酵された作物エキスを主成分とする抗菌剤に関するものである。
【００１０】
本願の別の発明は、細菌によって発酵されたユリ科、アブラナ科、セリ科、ナス科、ウリ科、またはイネ科の植物の作物エキスを主成分とする抗菌剤に関するものである。
【００１１】
本願のさらに別の発明は、細菌によって発酵されたニンニクエキスを主成分とする抗菌剤に関するものである。
【００１２】
これらの発明において、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ、Ｒｉｚｏｃｔｏｎｉａ、Ｐｈｙｔｅｐｈｔｈｏｒａ、Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ、またはＳｃｌｅｒｏｔｉｕｍに対して抗菌性を示すことが好適である。
【００１３】
製造方法に関する一発明は、作物エキスを細菌によって発酵させることを特徴とする抗菌剤の製造方法に関するものである。
【００１４】
製造方法に関する別の発明は、ユリ科、アブラナ科、セリ科、ナス科、ウリ科、またはイネ科の植物の作物エキスを細菌によって発酵させることを特徴とする抗菌剤の製造方法に関するものである。
【００１５】
製造方法に関するさらに別の発明は、ニンニクエキスを細菌によって発酵させることを特徴とする抗菌剤の製造方法に関するものである。
【００１６】
ここでニンニクエキスを希釈するとともに、内生菌によって発酵させることが好ましい。また発酵させる菌がＢａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ／ｓｕｂｔｉｌｉｓ、またはＢａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ／ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎｓであることが好ましい。またＢａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ／ｓｕｂｔｉｌｉｓの発酵菌が寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−０８５５７の菌であであってよい。またＢａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ／ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎｓの発酵菌が寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−０８５５８の菌であってよい。
【発明の効果】
【００１７】
本願の主要な発明は、細菌によって発酵されたニンニクエキス等の植物の作物エキスを主成分とする抗菌剤である。このような抗菌剤によれば、安全性が高くてしかも高い抗菌活性を示し、植物病原菌に対して強い殺菌効果を有する抗菌剤が提供される。
【００１８】
製造方法に関する発明は、ニンニクエキス等の植物の作物エキスを細菌によって発酵させることを特徴とする抗菌剤の製造方法に関するものである。従ってこのような製造方法によって、植物病原菌に対して強い殺菌効果を示す抗菌剤を安定的に製造することが可能になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本願発明の好ましい態様は、作物エキスとしてユリ科の植物のニンニクエキスを用いるものである。ニンニクエキスは、生ニンニクを搾汁して得られる。搾汁された液を６０℃加温、濃度調整、１１８℃殺菌、濃縮、濃度調整、１００℃殺菌、１２０メッシュストレーナ処理、計量、包装の工程を経ることによってニンニクエキスが製品化される。ここで１Ｋｇのニンニクエキスは生ニンニク約１００個分に相当する。
【００２０】
ニンニクエキスは上述の如くその製造過程において１１８℃の殺菌工程を経て製造されるが、ここで死なない菌がエキスに内生しており、この菌がニンニクエキスを餌にして増殖して活性物質を作っている。この内生菌は恐らくもともとニンニクに存在する菌である。すなわちニンニクエキスは殺菌処理されてはいるが耐熱菌は０ではない。また実際に菌が内在されていたとしても、従来より調味料や食料として使用され、安全性は既に確認済みである。
【００２１】
このようなニンニクエキスをただ希釈して使用しただけでは植物病原菌に対して効果はない。ニンニクにはもともとアリシンという殺菌成分が含まれているために、多少の殺菌効果はあるものの、病原菌を抑制する程の効果がない。植物病原菌に対する抗菌活性を発現するためには、ニンニクエキスと発酵菌とが必要であり、所定の温度と時間とを必要とする。
【００２２】
すなわちニンニクエキスを水で１／１０程度に希釈し、例えば３０℃で７日以上培養すると、カビ（真菌）に対して強い抗菌力のあるエキスが得られる。従ってニンニクエキスに発酵菌を加えて例えば約３０℃で７日間程度の培養を行なうことによって、植物病原菌に対して強い殺菌効果を有する抗菌剤が得られる。
【００２３】
ここで上記ニンニクエキスに添加して発酵を行なうための菌として３種類の菌を得ている。これらの菌は、呼吸代謝プロセス中の炭素源の資化パターンを利用して種を同定するＢＩＯＬＯＧ（バイオログ）という同定装置を用いて種を判定している。
【００２４】
このような判定によって次のような菌が同定された。
【００２５】
Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ／ｓｕｂｔｉｌｉｓ（ＦＥＲＰ  Ｂ−０８５５７）
Ｂａｃｉｌｉｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ／ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎｓ（ＦＥＲＭ  Ｂ−０８５５８）
上記のような菌を用いて発酵を行なったところ、多種類の植物病原菌に対して高い抗菌効果があることが確認された。しかも殺菌効果を有する発酵エキスはその活性の熱安定性が高く、殺菌効果を安定に保持することが確認されている。なおここでとくに次のような植物病原菌に対して大きな効果が得られる。
【００２６】
Ｆｕｓａｒｉｕｍ
Ｐｙｔｈｉｕｍ
Ｒｉｚｏｃｔｏｎｉａ
Ｐｈｙｔｅｐｈｔｈｏｒａ
Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ
Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ
従って本願発明は作物エキスを殺菌によって発酵することで得る抗菌剤とその製造方法に関する。とくに作物エキスがニンニクエキスであって、ニンニクエキスを細菌によって発酵することで得られる抗菌性資材とその製造方法に関するものである。そして発酵を促す細菌がＢａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ／ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｉｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ／ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎｓ等である。またＦｕｓａｒｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ、Ｒｉｚｏｃｔｏｎｉａ、Ｐｈｙｔｅｐｈｔｈｏｒａ、Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ等の作物病原菌に対して抗菌性を示す植物真菌感染防除剤である。
【００２７】
なお発酵を行なうための菌は作物エキスに人為的に加えることができるばかりでなく、該当する菌が内生する作物エキスを使用してもよい。発酵が困難な場合には作物エキスを希釈し、例えば１／１０程度の濃度にして使用するとより効果的に病原菌に対する抗菌力を発生できるようになる。
【００２８】
本願発明者は図１に示すように、細菌を加えたニンニクエキスの原液を３０℃で７日間培養したところ、内生菌はほとんど増加せず、これによって抗菌活性が出ないことを確認した。
【００２９】
一方でニンニクエキスを水によって１／１０に希釈することで、３０℃で７日間培養を行なったところ、内生菌が発生して増殖することによって、抗菌活性が発現することを確認している。
【００３０】
また本願発明者はニンニクエキス中に内在する内生菌として５種類の菌を確認した。そしてこれら５種類の菌を分離するとともに、それぞれを別々に培養することによって、図２に示すように、２種類の抗菌性の菌を検出した。すなわちＢａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ／ｓｕｂｔｉｌｉｓ、およびＢａｃｉｌｉｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ／ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎｓの２種類の菌である。
【実施例】
【００３１】
実施例１  ニンニクエキスの発酵と病原菌に対する活性評価
１．目的
Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ  ｒｏｌｆｓｉｉ、Ｐｙｔｈｉｕｍ  ａｐｈｅｎｉｄｅｒｍａｔｕｍの活性が保存状態によって差を生ずるかどうかを確認する。
【００３２】
２．材料
ニンニクエキス（井村屋製菓株式会社製）
病原菌：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ  ＡＧ２−２  ３Ｂ
３．方法
（１）ニンニクエキスの原液と１／１０倍液を各２０ｍｌ試験管に準備し、３０℃で静置保管した。
【００３３】
（２）保管後１０日目と２０日目にエキスを取出し、ＰＤＡ（Ｐｏｔａｔｏ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ  Ａｇａｒ）の粉末を試験管に加えた後に、１２１℃、１５分間で滅菌し、シャーレに分注して固化した。対照区として４℃で保管した原液とＰＤＡ培地を用いた。
【００３４】
（３）シャーレの中央部にＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ菌のコロニーを置き、２５℃暗条件下で培養した。
【００３５】
４．結果
保存期間が１０日間と２０日間の何れにおいても、１／１０倍エキスで強い抑制活性が現われた。図３に保管期間１０日の活性状態を、図４に保管期間２０日間の活性状態を示す。原液を３０℃保管したものは４℃保管したものとの間に差が見られなかった。１／１０倍エキスではｐＨの変化が確認された。培養前にはｐＨ５〜６であったものが１０日保管の場合にはｐＨ４付近に、２０日保管のものはｐＨ８付近に変化していた。これらの結果から、ニンニクエキスを希釈することによって内生する微生物が繁殖（発酵）し、活性が増したことが確認された。
【００３６】
実施例２  ニンニクエキス原液からの微生物の分離
１．目的
Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ菌の抑制活性に関与する微生物の内生を確認するために、ニンニクエキス原液中の微生物の有無を調査する。
【００３７】
２．材料
ニンニクエキス
３．方法
（１）ニンニクエキス原液を任意の濃度に滅菌水で希釈し、ＮＢＡ（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｂｒｏｔｈ  Ａｇａｒ）培地上に塗布して３０℃、暗条件下で保管した。
【００３８】
（２）形成されたコロニーを色と形態とグラム染色で分取した。
【００３９】
４．結果
ニンニクエキスからは５種類の菌が分離された。これらの菌を図５に示す。菌は総て細菌で、オレンジ色を呈する菌が１つ、白〜クリーム色を呈する菌が４つ確認された。グラム染色では、陽性菌が４種類であって、陰性菌が１種類であった。
【００４０】
実施例３  Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ菌に効果を示す希釈エキスと微生物の関係
１．目的
分離された各菌をニンニクエキスに加えて培養し、発酵による抑制効果の証明と有用菌の選抜を行なう。
【００４１】
２．材料
ニンニクエキス（１／１０倍）
分離菌：実施例２で分離されたＡ１、Ａ２、Ｂ、Ｃ、Ｄの５種類（これらの菌は図５に示される。）
３．方法
（１）分離したＡ１、Ａ２、Ｂ、Ｃ、Ｄの５種類の菌をＮＢＡ培地で１晩培養した。
【００４２】
（２）水で希釈した１／１０倍エキスを２０ｍｌの試験管に準備し、１２１℃で１５分間滅菌した。
【００４３】
（３）各試験管に５種類の菌をそれぞれ少量準備し、３０℃、１３０ｒ．ｐ．ｍ．で振とう培養した。
【００４４】
（４）７日間培養した試験管にＰＤＡの粉末を加え、１２１℃、１５分間滅菌し、シャーレに分注して固化した。対照区には予め滅菌処理した１／１０倍エキスを用いた。
【００４５】
（５）シャーレの中央部にＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ菌のコロニーを置き、２５℃、暗条件下で培養した。
【００４６】
（６）３日間以上培養した後に、コロニーの中心部から菌糸の先端までの距離を測定して比較した。
【００４７】
４．結果
評価開始３日目ではＡ２、Ｂ、Ｃ、Ｄの４種類の菌で抑制効果が確認された（図６）。さらに６日目ではＡ２、Ｂ、Ｄのの３種類の菌で強い活性が維持されていた（図７）。ｐＨの影響によるものかどうかはＰＤＡ培地を使用して評価したが、影響がないという結果が得られた（表１）。
【００４８】
【表１】
2005206504.tif 000003
次にＢ、Ｃ、Ｄの菌を用いて培養期間を短縮して評価を行なった。培養期間を４日に短縮して行なった結果、総ての試験区で活性は認められなかった（表２）。そこで活性の強かったＡ２、Ｂ、Ｄの３種類について培養期間を９日間として再試験を実施した。この結果Ａ２、Ｂについてのみ再現性が確認された（図８、図９、表３）。これらの結果から、１〜数種類の菌の繁殖により抑制作用が現われていることが確認された。また活性が菌体の増殖期間と一致していないために、活性物質は２次代謝物質の可能性が考えられる。
【００４９】
【表２】
2005206504.tif 000004
【００５０】
【表３】
2005206504.tif 000005
【００５１】
実施例４  活性の発現にニンニクエキスが必要かどうかの評価
１．目的
分離菌が増殖できる条件であれば、どのような培地であっても抑制活性を示すかどうかを調査する。
【００５２】
２．材料
ニンニクエキス（１／１０倍）、ＮＢ培地
分離菌：Ａ２、Ｂ、Ｄの３種類
３．方法
（１）Ａ２、Ｂ、Ｄの３種類の菌をＮＢＡ培地で１晩培養した。
【００５３】
（２）水で希釈した１／１０倍エキスとＮＢ培地を２０ｍｌ試験管に準備し、１２１℃、１５分で滅菌した。
【００５４】
（３）各試験管に３種類の菌をそれぞれ少量接種し、３０℃、１３０ｒ．ｐ．ｍ．で振とう培養した。
【００５５】
（４）９日後、試験管にＰＤＡの粉末を加え、１２１℃、１５分間で滅菌し、シャーレに分注して固化した。
【００５６】
（５）シャーレの中央部にＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ菌のコロニーを置き、２５℃、暗条件下で培養した。
【００５７】
（６）３日後、コロニーの中心部から菌糸の先端までの距離を測定して比較した。
【００５８】
４．結果
Ａ２とＤについてはＮＢ培地では活性が見られなかった（図１０、表４）。Ｂについては他の２種類の菌と比較すると活性は見られるものの、ニンニクエキスのような効果はなかった。このために活性の発現にはニンニクエキスが必要であることが確認された。
【００５９】
【表４】
2005206504.tif 000006
【００６０】
実施例５  野菜病原菌に対する１／１０倍醗酵エキスの効果
１．目的
Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ菌に対して強い抑制活性を示す１／１０倍醗酵エキスが、他の菌に活性があるかどうかを評価する。
【００６１】
２．材料
ニンニクエキス（１／１０倍）
病原菌：Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  ｆ．  ｓｐ．  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ（トマト萎凋病菌）、Ｆ．  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  ｆ．  ｓｐ．  ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ（キュウリつる割病菌）、Ｆ．  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  ｆ．  ｓｐ．  ｍｅｌｏｎｉｓ（メロンつる割病菌）、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ  ＡＧ２−２  ３Ｂ（多作物立枯れ病菌）、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ  ｒｏｌｆｓｉｉ  （多作物白絹病）、Ｐｙｔｈｉｕｍ  ａｐｈｅｒｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ（多作物立枯れ病菌）
３．方法
（１）ニンニクエキス１／１０倍液を２０ｍｌ試験管に準備し、３０℃で７日間振とうした。
【００６２】
（２）試験管にＰＤＡの粉末を加え、１２１℃、１５分間で滅菌し、シャーレに分注して固化した。
【００６３】
（３）シャーレに各病原菌のコロニーを置き、２５℃、暗条件下で培養した。
【００６４】
４．結果
発酵処理した１／１０倍ニンニクエキスは総ての菌の繁殖を完全に抑制した（図１１）。
【００６５】
実施例６  分離菌の同定
１．目的
今回の結果から病原菌の抑制活性に有効なＡ２、Ｂの２種類の菌が分離された。これらの菌について呼吸代謝プロセス中の炭素源の資化パターンを利用して種を同定する。
【００６６】
２．材料
分離菌：Ａ２、Ｂの２種
ＢＩＯＬＯＧ同定装置
３．方法
（１）Ａ２、Ｂの２種の分離菌についてグラム染色で評価する。
【００６７】
（２）専用のＢＵＧ培地にて１晩培養する。
【００６８】
（３）培養した菌を専用のマイクロプレートへ接種し、所定温度で２４時間培養する。
【００６９】
（４）各種炭素源が組込まれたマイクロプレートの資化パターンをＢＩＯＬＯＧ同定装置で読取り、種を同定する。
【００７０】
４．結果
グラム染色の結果、Ａ２とＢはグラム陽性菌であった。表５に示すようにＢＩＯＬＯＧによる同定の結果、Ａ２は相同性８５％でＢａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ／ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂは相同性１００％でＢａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓまたはＢ．  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎｓであった。なおＢのＢａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓとＢ．  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎｓは非常に類似しているため、この方法では判定することが難しい。表６にＡ２とＢで資化が確認された炭素源を示す。
【００７１】
【表５】
2005206504.tif 000007
【００７２】
【表６】
2005206504.tif 000008
【００７３】
実施例７  イネいもち病菌に対する１／１０倍発酵エキスの効果
１．材料
ニンニクエキス（１／１０倍）
イネいもち病菌  Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ  ｏｒｙｚａｅ  レース００７
２．方法
（１）ニンニクエキス１／１０倍液を２０ｍｌの試験管に準備し、３０℃で７日間振とうした。
【００７４】
（２）試験管にＰＤＡの粉末を加え、１２１℃で１５分間滅菌し、シャーレに分注して固化した。
【００７５】
（３）シャーレにイネいもち病菌  Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ  ｏｒｙｚａｅ  レース００７のコロニーを置き、２週間、２５℃、暗条件下で培養した。
【００７６】
３．結果
シャーレに置いたＰｙｒｉｃｕｌａｒｉａ  ｏｒｙｚａｅのコロニーからは菌糸が全く伸長せず、抗菌活性があることを確認した。
【００７７】
実施例８  野菜パウダーを原料とした発酵エキスの効果
１．方法
オニオン（ユリ科）、ハクサイ（アブラナ科）、ニンジン（セリ科）、スイートコーン（イネ科）、ヤサイブイヨン（ユリ科のタマネギをベースにセロリ、ニンジン、チキンを混合）のそれぞれの野菜パウダーを１％含有させた水溶液にＡ２、Ｂ、Ｄの菌を少量懸濁混合し、１２日間３０℃で培養した。培養後の液にＰＤＡの粉末を加え、１２１℃で１５分間滅菌し、シャーレで固化した。野菜病原菌のコロニーを培地上にのせて、２５℃で２日間培養し、菌糸の伸長距離を測定して菌を接種していない対照区と比較した。
【００７８】
２．結果
スイートコーンのＳｃｌｅｒｏｔｉｕｍ  ｒｏｌｆｓｉｉに対する効果以外はすべての菌に対して抑制活性を示した。結果を次の表７に示す。
【００７９】
【表７】
2005206504.tif 000009
【００８０】
実施例９  野菜の搾汁液を原料とした発酵エキスの効果
１．方法
セリ科（ニンジン・パセリ）、ユリ科（タマネギ・ニンニク）、アブラナ科（ダイコン・キヤベツ）、ナス科（ジャガイモ・ピーマン）、ウリ科（カボチャ）、ミックス（総ての材料の混合）の各野菜の搾汁液１５０ｍｌにＡ２菌またはＢ菌を少量加え、７日間３０℃で培養した。培養後の液にＰＤＡの粉末を加え、１２１℃で１５分間滅菌し、シャーレで固化した。
【００８１】
Ｐｙｔｈｉｕｍ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ、Ｐｈｙｔｅｐｈｔｈｏｒａ、Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ、Ｆｕｓａｒｉｕｍの各野菜病原菌のコロニーを培地上に載せて、２５℃で４日間培養し、菌糸の伸長距離を測定して菌を接種していない対照区と比較した。
【００８２】
２．結果
表８に示されるように、各野菜病原菌についての菌糸の伸長状況を測定したところ、全体的にユリ科のニンニクやタマネギで強い活性が得られることが確認されている。
【００８３】
【表８】
2005206504.tif 000010
【００８４】
まとめ
今回の一連の実験例から、ニンニクエキスの原液には数種類の細菌が内生し、それが希釈されることによって培養され、病原菌の繁殖を強く抑制するエキスに変化することが明らかになった。
【００８５】
また今回使用したニンニクエキスには少なくとも５種類以上の菌が内生しているが、この内試験結果から最も有効なＢ菌を含め、数種類が活性に関与している。さらに原液ではＦｕｓａｒｉｕｍには効果がなかったが、発酵によってＦｕｓａｒｉｕｍに対しても強い活性を示している点は注目に値する。
【００８６】
以上本願発明を実施例によって説明したが、本願発明は上記実施例によって限定されることなく、本願に含まれる発明の技術的思想の範囲内で各種の変更が可能である。例えば増殖発酵する菌の種類についても、上記実施例で述べた菌に限定されることなく、その他各種の菌を利用できる。また対象とする病原菌も上記実施例において列挙したものに限定されない。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
本願発明は、植物病原菌に対して殺菌効果を有する抗菌剤として産業上利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】培養による内生菌の増殖を示す平面図である。
【図２】分離された各菌を希釈して増殖させる状態を示す平面図である。
【図３】保管期間１０日のエキスの活性状態を示す平面図である。
【図４】保管期間２０日のエキスの活性状態を示す平面図である。
【図５】エキスから分離された細菌の菌叢を示す平面図である。
【図６】培養期間７日の活性状態を示す３日後の菌叢の平面図である。
【図７】培養期間７日の活性状態を示す６日後の菌叢の平面図である。
【図８】培養期間９日の活性状態を示す３日後の菌叢の平面図である。
【図９】培養期間９日の活性状態を示す６日後の菌叢の平面図である。
【図１０】ニンニクエキスとＮＢ培地での活性の比較を示す平面図である。
【図１１】野菜病原菌に対するエキスの効果を示す平面図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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