(57)【要約】【課題】  表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定において、チップ上のパターンと同一の方向に、ＳＰＲ像が映しだされる画像測定方法を得る。チップ上の場所の特定と、スポットのずれの修正を容易とする。【解決手段】  ＳＰＲ法において、ＣＣＤカメラによって撮影した画像をコンピュータ演算によって、上下反転及び／または左右反転及び／または回転させて表示及び／または演算を行う。【選択図】なし 【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＣＤカメラによって撮影した画像をコンピュータ演算によって、上下反転及び／または左右反転及び／または回転させて表示及び／または演算することを特徴とする表面プラズモン共鳴法における画像測定方法
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、表面プラズモン共鳴法における画像測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体分子の相互作用解析方法として表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法が注目を浴びている。ＳＰＲ法は金属表面の屈折率変化を反射光の強度変化、ＳＰＲ角のシフト量で捉える方法である。ＳＰＲ法の利点はラベルフリーであることとリアルタイム測定可能であることの２点である。ラベルフリーであるために、蛋白や糖などの不安定な生体分子であっても、機能を損なうことなく相互作用解析することができる。また、リアルタイム測定可能であるため、相互作用の速度も解析可能であり、多くの情報量が得られる。
【０００３】
しかし、従来のＳＰＲ法は１〜４点の相互作用を解析することしかできず、スループットが低く、多種類のサンプルを解析することができなかった。また、用途は基礎研究分野のみに限られており、創薬のスクリーニング、発現分子のプロファイリング、もしくは診断などの用途には応用できないとされてきた。
【０００４】
Ｊｏｒｄａｎらはレーザー光を広げて、金属チップ表面に照射し、その反射像を撮影する方法により、複数のＤＮＡハイブリダイゼーションをＳＰＲ変化で検出することに成功した（非特許文献１）。また、Ｎｅｌｓｏｎらは白色光源を用いることで干渉縞がない像を得て、ＤＮＡ−蛋白相互作用観察に成功した（非特許文献２）。しかし、これらのＳＰＲイメージング法においては光学系が複雑であるために、チップ上の位置の特定は困難であり、どの生体分子が相互作用しているかを判断するのは煩雑な操作が必要であった。Ｎｅｌｓｏｎらはパターンで生体分子を固定化することで、相互作用した分子を断定することに成功した（非特許文献３）。
【０００５】
チップ上の位置を特定するために、チップ上に形成したパターンをそのまま映し出す手段が望まれる。しかし、このような技術は今までに存在していなかった。
類似の技術として、ＳＰＲイメージング法におけるアスペクト比を改善する手段が示されている（特許文献１）。ＳＰＲ現象を引き起こす光の入射角で正方形の像を撮影すると、像は長方形となる。長方形となった像を正方形に戻す手段として、コンピュータ演算、アナモフィックレンズ、プリズムなどを用いる手段が開示されている。
【０００６】
同様に像の歪みを補償する補償光学系が設けられた、表面プラズモン共鳴装置を含む全反射減衰を利用したセンサーも開示されている。（特許文献２）
【０００７】
しかし、これらの文献には画像の反転や回転については全く触れられておらず、チップ上の位置の特定に関して何ら解決方法を示していない。本発明はコンピュータ演算により反転や回転を行うことで、チップ上に形成した固定化分子のパターンを、そのまま映し出すことを可能とする。
【０００８】
【非特許文献１】Ｊｏｒｄａｎら  Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６９,  １４４９−１４５６，１９９７
【非特許文献２】Ｎｅｌｓｏｎら  Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，７１，３９２８−３９３４，１９９９
【非特許文献３】Ｎｅｌｓｏｎら  Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，７３,  １−７，２００１
【特許文献１】特開２００１−２５５２６７号公報
【特許文献２】特開２００２−２２１４８８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、画像の反転・回転を行い、チップ上のパターンをそのまま映し出すことのできる測定方法を得ることにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは鋭意検討した結果、以下に示す手段を採用した画像測定方法により、上記課題を解決できることを見出した。
１．ＣＣＤカメラによって撮影した画像をコンピュータ演算によって、上下反転及び／または左右反転及び／または回転させて表示及び／または演算することを特徴とする表面プラズモン共鳴法における画像測定方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）用チップ上のパターンとコンピュータ上に映しだされる画像のパターンが一致するため、ＳＰＲ用チップ上の位置を特定することが容易となる。また、スポットのずれを修正することも容易となる。本発明はＳＰＲイメージング法に広く応用されていくと期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明におけるＳＰＲ装置では、像の撮影にＣＣＤカメラが使用される。チップの広い範囲に照射された光は、反射してＣＣＤカメラに取り込まれる。本発明におけるＳＰＲ装置では、光は分子の固定される金属面の背後から照射される。
ＣＣＤカメラも金属面の背後から撮影するために、撮影される像は反転することになる。また、チップの置く方向、ＣＣＤカメラの設置方向によって、像は回転する。そこで、ＣＣＤカメラによって撮影した画像をコンピュータ演算によって、上下反転及び／または左右反転及び／または回転させて表示及び／または演算することが好ましい。その結果、チップ上の形成したパターンがそのまま映しだされるため、好ましい。
【００１３】
反転する方法として、レンズを用いた光学系を適用することも可能であるが、ＣＣＤカメラにレンズ筒を装着する必要があり、ＣＣＤカメラを含む検出部分が長くなることが欠点であり、好ましくない。
回転操作を行う場合、回転角は特に限定されるものではないが、通常は９０°、１８０°、２７０°の中から選択される。
【００１４】
本発明では反転・回転処理された映像は、そのまま表示されてもよく、演算処理に用いられてもよい。演算処理は特に限定されるものではないが、通常はコンストラクト調整、明るさ調整、画像の減算などが行われる。また、画像はライブ画像でも、以前に映した画像であってもよい。
このように本発明は画像処理に関するものであり、画像が表示されないＳＰＲ測定は本発明には含まれない。
【００１５】
こうしてチップ上と全く同じ方向、パターンで映し出されることで、チップ上のスポットの場所を特定することが容易となる。また、自動スポッターを用いて、チップ上にアレイを形成した場合、チップ上のパターンとスポットした位置のずれが存在する場合がある。その場合、ずれの方向を容易に知ることができるため、次にアレイを作製する場合に、自動スポッターのスポットする位置を修正して、パターン通りにアレイを作製することが容易である。
【実施例】
【００１６】
以下に実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
【００１７】
［実施例］
アルキル鎖の炭素数が２であり、末端の官能基がチオール基であるＰＥＧチオール（日本油脂製ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＳＨ−５０Ｈ）を1ｍＭの濃度で７ｍｌのエタノール：水＝６：１の混合溶液に溶解させた。ＰＥＧチオールの分子量は５０００である。
【００１８】
１８ｍｍ四方、１ｍｍ厚のＬａｋ１０ガラススライド（松浪硝子工業製）にクロムを３ｎｍ蒸着し、金を４５ｎｍ蒸着した金蒸着スライドを、上記ＰＥＧチオール溶液に３時間浸漬させ、金基板全体にＰＥＧチオールを結合させた。
【００１９】
このスライドの上に文字と数字が入っている９６スポット型のフォトマスクを載せ、５００Ｗ超高圧水銀ランプ（ウシオ電機製）で２時間照射し、図１に示すパターンで固定化部のＰＥＧチオールを除去した。この場合、チップ上には９６穴プレートと同様のパターンが形成される。
【００２０】
次に７−カルボキシ−１−ヘプタンチオール（７−ＣＨＴ：同仁化学研究所）の１ｍＭ溶液中にスライドを１時間浸漬し、紫外線照射部分にカルボキシル基を導入した。
【００２１】
こうして得られたパターン化チップをＳＰＲイメージング装置（東洋紡績製）に装着し、ミリＱ水（超純水、ミリポア社製、ｍｉｌｌｉ−Ｑシステム）を流し、ＳＰＲ像の観察を行った。何も処理していない画像を図２に示す。この画像では文字と数字の方向は正しい方向ではない。
コンピュータ演算により、画像を回転し、さらに画像を左右反転した場合の画像を図３に示す。文字と数字は正しい方向であり、チップ面のパターンがそのまま映し出されている。
本発明により、ＳＰＲチップの場所の特定が容易となるだけではなく、チップ上のスポットのずれ方向も容易に判断することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】実施例で使用したフォトマスク
【図２】コンピュータ演算をしない状態のＳＰＲ像
【図３】回転処理＋左右反転処理を行ったＳＰＲ像
【図１】
2005077247.tif 000002
【図２】
2005077247.tif 000003
【図３】
2005077247.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成15年9月25日(2003.9.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２】
2005077247.tif 000005
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３】
2005077247.tif 000006