(57)【要約】  【課題】癌浸潤抑制剤、癌遊走抑制剤又は癌転移抑制剤として有用である化合物を提供する。  【解決手段】下記一般式  【化１】2005023048.tif 000009  （式中、R1は直鎖状で炭素数１から３０のアルキル基、R2は、メチル基を除く、置換基を有していてもよいアルキル基、R3は水素原子である）で表される化合物又は薬理学的に許容しうる塩。  【選択図】【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式
【化１】
2005023048.tif 000008
（式中、R1は直鎖状で炭素数１から３０のアルキル基、R2は、メチル基を除く、置換基を有していてもよいアルキル基、R3は水素原子である）で表される化合物又はその薬理学的に許容しうる塩。
【請求項２】
R1がペンタデシル基であり、R2がベンジル基であり、R3が水素である請求項１記載の化合物又はその薬理学的に許容しうる塩。
【請求項３】
R1がペンタデシル基であり、R2がイソプロピル基であり、R3が水素である請求項１記載の化合物又はその薬理学的に許容しうる塩。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物と薬理上許容しうる担体又は賦形剤からなる癌浸潤抑制剤。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物と薬理上許容しうる担体又は賦形剤からなる癌遊走抑制剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物と薬理上許容しうる担体又は賦形剤からなる癌転移抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌浸潤抑制剤、癌遊走抑制剤又は癌転移抑制剤として有用な3-アシル-4-アルキル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体及びこの誘導体を含有する医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の外科手術、放射線療法の進歩によって、癌原発巣の除去技術の発展は目覚しいものがある。しかし、癌による死亡の殆どは転移が原因であり、癌転移を抑制することは癌化学療法の最重要課題である。
【０００３】
従来の抗がん剤は、癌細胞に直接作用し増殖抑制や殺細胞効果を示すが、骨髄毒性をはじめとした種々の副作用を引き起こすとともに、転移の過程にはほとんど作用しない点において満足できる薬剤ではない。
【０００４】
癌浸潤抑制剤、癌遊走抑制剤を含む癌転移抑制剤は、癌細胞の転移を予防する効果が期待できるだけではなく、すでに転移が進行した場合においても、微小転移巣が増大し、再び転移するのを防ぐ効果も期待できる。したがって、副作用が少なく、長期間の投与が可能な薬剤が癌転移抑制剤として望ましい。
【０００５】
転移のメカニズム研究は急激な進歩を遂げており、以下のような血行性転移メカニズムが提唱されている。即ち、（１）癌細胞の原発巣からの離脱、（２）細胞外マトリックス・基底膜への浸潤、（３）血管内侵入、（４）遠隔部位での接着、（５）血管外侵入、（６）基底膜・細胞外マトリックスへの浸潤、（７）標的臓器での増殖、というものである。中でも、細胞外マトリックス・基底膜への浸潤の過程は二回行われることから極めて重要なステップであると考えられる。
【０００６】
癌細胞の細胞外マトリックス・基底膜への浸潤阻害剤としてはMMP（マトリックスメタロプロテアーゼ）阻害剤が有名であり、数多くの化合物が合成され臨床試験に入っている。しかし、毒性や有効性の点で充分に満足できるものは、まだ得られておらず、新たなタイプの癌浸潤抑制剤・癌転移抑制剤が求められている。
【０００７】
3-アシル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体についてはいくつかの生物活性が報告されている。最初に、(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸がストレプトミセス属の微生物培養液より単離され、ホスソリパーゼA2阻害活性が報告され抗炎症剤としての可能性が示唆された（特開平5-43568号公報（特許文献１））。同化合物および類縁体のナトリウム塩がアクチノマイセテ属の微生物培養液より単離され、HIVプロテアーゼ阻害活性が報告された［J. Antibiot., 47, p136 (1994)（非特許文献１）］。さらに別種のストレプトミセス属の微生物培養液からも(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸が単離され、蛋白質脱リン酸化酵素VHRに対する阻害活性が報告され抗癌剤としての可能性が示唆された［特開平7-242545号公報（特許文献２）、FEBS Lett., 372, p54 (1995)（非特許文献２）］。また、テトロン酸ライブラリーの合成が行われ、蛋白質チロシン脱リン酸化酵素(PTPs)や二重基質特異性脱リン酸化酵素(DSPs)選択的阻害剤を含む可能性が示唆された［特開平10-45740号公報（特許文献３）、特開平10-212284号公報（特許文献４）、J. Med. Chem., 44, p3216 (2001)（非特許文献３）］。
【０００８】
このように3-アシル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体は医薬としての可能性が期待される化合物であるが、選択性が乏しいこと、及び細胞に対する活性が低いことから抗癌剤としての開発が困難であった。そこでより細胞に対して活性の強い誘導体の開発が望まれている。また、癌浸潤抑制剤、癌遊走抑制剤又は癌転移抑制剤としての可能性については報告されていないのが現状である。
【０００９】
【特許文献１】特開平5-43568号公報
【特許文献２】特開平7-242545号公報
【特許文献３】特開平10-45740号公報
【特許文献４】特開平10-212284号公報
【非特許文献１】J. Antibiot., 47, p136 (1994)
【非特許文献２】FEBS Lett., 372, p54 (1995)
【非特許文献３】J. Med. Chem., 44, p3216 (2001)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
そこで本発明は、3-アシル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体のうち癌細胞の細胞外マトリックス・基底膜への浸潤および遊走を抑制する物質を探索し、癌細胞の転移を抑制しうる新規な医薬、とくに癌浸潤抑制剤、癌遊走抑制剤又は癌転移抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者等は、3-アシル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体の化学的特徴、即ち、4位が水酸基である場合には強力な負の電荷を帯びるという点に注目した。前述したようなさまざまな生物活性は負の電荷によるものであることが予想された。しかし、そのことが逆に細胞透過性を低下させ、細胞に対しては感受性を低くしていると考えられた。実際、4位をメチル化しプロトンの解離を起こらなくした誘導体の蛋白質脱リン酸化酵素VHR阻害活性を調べたところ、その活性が劇的に低下していた。このことは、前記の非特許文献３においても報告されている。即ち、以前に報告されている生物活性を試験管内で発揮するには4位がフリーの状態、即ち水酸基であることが重要であるということを意味する。我々は、逆に、4位をアルキル化しブロックすることで、非選択的な阻害活性を消失させることができ、かつ癌細胞への感受性を高める事ができるだろうと考えた。いくつかの4位をアルキル化した3-アシル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体を合成し、癌細胞の浸潤や遊走を抑制する効果を比較した結果、4位をアルキル化することで癌細胞の浸潤および遊走を強力に抑制することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１２】
即ち、本発明は、下記の一般式
【化２】
2005023048.tif 000002
（式中、R1は直鎖状で炭素数１から３０のアルキル基、R2は、メチル基を除く、置換基を有していてもよいアルキル基、R3は水素原子である）で表される化合物又はその薬理学的に許容しうる塩、及び上記化合物を又はその薬理学的に許容しうる塩を有効成分とする医薬を提供するものである。
【００１３】
本発明の医薬は、好ましくは、癌浸潤抑制剤、癌遊走抑制剤又は癌転移抑制剤である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の3-アシル-4-アルキル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体は、優れた癌細胞の浸潤及び遊走抑制活性を有しており、癌浸潤抑制剤、癌遊走抑制剤又は癌転移抑制剤としての有用性が期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明の医薬は、上記一般式で表される化合物又はその薬理学的に許容しうる塩を有効成分とする。
【００１６】
上記式中の置換基R1は直鎖状で炭素数１から３０のアルキル基、R2は、メチル基を除く、置換基を有していてもよいアルキル基、R3は水素原子を表す。
【００１７】
R1の直鎖状アルキル基は、具体的には、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ウンデシル基、ドデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、イコシル基、ヘニコシル基、オクタコシル基、ノナコシル基、トリアコンチル基などを例示することができ、好ましくは炭素数１０から２０であり、具体的には、ペンタデシル基が好ましい。
【００１８】
R2の「置換基を有していてもよいアルキル基」におけるアルキル基は、直鎖状、分岐状、環状のいずれでもよく、例えば炭素数２〜３０のアルキル基であることができ、具体的にはエチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、s-ブチル基、t-ブチル基、ペンチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基などを例示することができる。
【００１９】
上記アルキル基が有していてもよい置換基としては、例えばアルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、カルバモイル基、アリール基などを例示することができる。アルキル基は、直鎖状、分岐状、環状のいずれでもよく、例えば、炭素数１〜３０のアルキル基であることができ、具体的にはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、s-ブチル基、t-ブチル基、ペンチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基などを例示することができる。また、アリール基としては、ヘテロアリール基をも包含し、例えば、フェニル基、ナフチル基、アンスラニル基、ビフェニル基、4-ピリジル基、2-ピリジル基、イミダゾリル基、ピロリル基、インドリル基、フリル基などを例示することができる。
【００２０】
［化合物の製造方法］
上記一般式で表される本発明の化合物は、下記スキームで示される文献既知の方法［Tetrahedron Lett., 37, p8775 (1996)、J. Med. Chem., 44, p3216 (2001)、特開平10-45740、特開平10-212284］に従って合成することができる。この際、原料として光学活性体（(R)-体もしくは(S)-体）を用いた場合、対応する光学活性体が生成物として得られる。
あるいは、後述する実施例において説明するように、下記スキーム中の一般式[III]で表されるグリセリン酸エステルは、ストレプトミセス属等の微生物の培養液から抽出することもできる。
【００２１】
【化３】
2005023048.tif 000003
【００２２】
＜第１工程＞第１工程で用いられるグリセリン酸誘導体（(R)-[I]及び(S)-[I]）は、安価なD-マンニトール及びL-アスコルビン酸より容易に合成できる［Tetrahedron: Asymmetry, 2, p359 (1991)］。グリセリン酸誘導体[I]を溶媒中、ジアゾアルカンと０℃から溶媒の沸点までの適当な温度で反応させるか、または適当な塩基存在下、ハロゲン化アルキル、硫酸ジアルキルなどのアルキル化剤と０℃から溶媒の沸点までの適当な温度で反応させてエステル化し、対応するアルキルエステルを得ることができる。反応に用いられる溶媒としてはヘキサン、ベンゼン、トルエンなどの炭化水素系溶媒、またはジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素系溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド等のアミド系溶媒が用いられる。ジアゾアルカンとしては、例えば、ジアゾメタン等を挙げることができる。ハロゲン化アルキルとしては、例えば、ヨウ化メチル等を挙げることができる。硫酸ジアルキルとしては、例えば、硫酸ジメチル等を挙げることができる。アルキル化剤との反応において使用される適当な塩基としては、例えば、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウムなどの無機塩基、1,8-ジアザビシクロ[5,4,0]ウンデカ-7-エンなどの有機塩基を挙げることができる。
【００２３】
得られたアルキルエステルを含水溶媒中、０℃から溶媒の沸点までの適当な温度で酸処理してアセトニドをはずしてジオールとする。反応に用いられる溶媒としては水、あるいはメタノール、エタノールなどのアルコール系溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド等のアミド系溶媒が用いられる。反応に用いられる酸としては、塩酸、硫酸などの無機酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、p-トルエンスルホン酸などの有機酸が用いられる。
【００２４】
さらに得られたジオールの１級水酸基を溶媒中、塩基存在下、０℃から溶媒の沸点までの適当な温度で無置換またはメトキシ基で置換された塩化トリフェニルメチルあるいは塩化トリアルキルシリルと反応させるか、あるいは酸触媒存在下イソブテンと反応させて選択的に保護する。反応に用いられる塩基としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、イミダゾールなどが用いられる。反応に用いられる酸触媒としては、塩酸、硫酸、リン酸などの無機酸、アンバーリストH-15などの酸性イオン交換樹脂などが用いられる。反応に用いられる溶媒としては、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素系溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミドなどのアミド系溶媒、あるいはアセトニトリルなどのニトリル系溶媒が用いられ、一般式[II]で表される対応する１級ヒドロキシル基選択的保護体を得ることができる。
【００２５】
＜第２工程＞式[II]で表されるヒドロキシエステルと公知の方法［Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 18, p72 (1979)］により合成した式[VI]で表されるb-ケト-チオエステルを溶媒中、重金属塩と０℃から溶媒の沸点までの適当な温度で反応させてエステル化し、一般式[III]で表されるグリセリン酸エステルを得ることができる。反応に用いられる溶媒としては、ヘキサン、ベンゼン、トルエンなどの炭化水素系溶媒、またはジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素系溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミドなどのアミド系溶媒、あるいはアセトニトリルなどのニトリル系溶媒が用いられる。重金属塩としてはトリフルオロ酢酸銀、トリフルオロ酢酸水銀、トリフルオロ酢酸銅などが用いられる。置換基R1が異なる化合物を合成する際には、対応するb-ケト-チオエステル[VI]を合成し、上記エステル化反応に供することで得ることができる。即ち、R1がアルキル基である一般式[III]で表されるグリセリン酸エステルは、対応するR1を有するb-ケト-チオエステル[VI]を上記公知の方法に従って合成することで得ることができる。尚、b-ケト-チオエステル[VI]中のR5は、例えば、t-ブチル基であることができる。
【００２６】
＜第３工程＞一般式[III]で表されるエステルを溶媒中、フッ素イオン源と０℃から溶媒の沸点までの適当な温度で反応させて閉環し、一般式[IV]で表されるテトロン酸誘導体を得ることができる。フッ素イオン源としてはフッ化テトラブチルアンモニウム、フッ化テトラメチルアンモニウム、フッ化テトラエチルアンモニウム等のフッ化テトラアルキルアンモニウム、フッ化ナトリウム、フッ化セシウムなどの金属塩が用いられる。
【００２７】
置換基R3が３級アルキル基を保護基として用いた場合には保護体[IV]（R3はヒドロキシル基の保護基）が得られ、ヒドロキシル体[IV]（R3は水素原子）を得るためには以下に述べる脱保護反応を行う。一方、原料としてヒドロキシ体[III]（R3は水素原子）を用いて反応させることにより、あるいはシリル基を保護基として用いた場合にはシリル基の脱保護反応も同時に進行するため、直接ヒドロキシ体[IV]（R3は水素原子）が得られる。保護体[IV]（R3はヒドロキシル基の保護基）の脱保護反応は、含水溶媒中、０℃から溶媒の沸点までの適当な温度で酸処理して保護基をはずして3-アシル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体[IV]（R3は水素原子）を得ることができる。反応に用いられる溶媒としては水、あるいはメタノール、エタノールなどのアルコール系溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド等のアミド系溶媒が用いられる。反応に用いられる酸としては、塩酸、硫酸などの無機酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、p-トルエンスルホン酸などの有機酸が用いられる。
【００２８】
＜第４工程＞一般式[IV]で表されるテトロン酸誘導体を溶媒中、ジアゾアルカンと０℃から溶媒の沸点までの適当な温度で反応させるか、または適当な塩基存在下、ハロゲン化アルキル、硫酸ジアルキルなどのアルキル化剤と反応させてアルキル化し、対応するアルキルテトロン酸誘導体[V]を得ることができる。反応に用いられる溶媒としてはヘキサン、ベンゼン、トルエンなどの炭化水素系溶媒、またはジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素系溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、ジメチルホルムアミド等のアミド系溶媒が用いられる。ジアゾアルカンとしては、例えば、ジアゾメタン等を挙げることができる。ハロゲン化アルキルとしては、例えば、ヨウ化メチル等を挙げることができる。硫酸ジアルキルとしては、例えば、硫酸ジメチル等を挙げることができる。アルキル化剤との反応において使用される適当な塩基としては、例えば、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウムなどの無機塩基、1,8-ジアザビシクロ[5,4,0]ウンデカ-7-エンなどの有機塩基を挙げることができる。
【００２９】
本発明は、上記一般式で示される3-アシル-4-アルキル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体とその薬理学的に許容しうる塩を包含する。本発明において、薬理学的に許容しうる塩とは、無機塩基または有機塩基、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、トリエチルアミン塩、エタノールアミン塩、リジン塩、アルギニン塩、ピリジン塩等の脂肪族または複素環芳香族アミン塩、テトラメチルアンモニウム塩等の四級アンモニウム塩などが挙げられる。また、上記一般式で示される3-アシル-4-アルキル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体の塩は溶媒中、前記無機塩基または有機塩基と０℃から溶媒の沸点までの適当な温度で反応させる等の従来公知の方法により調整することができる。用いる溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン等が挙げられる。
【００３０】
本発明の3-アシル-4-アルキル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸誘導体は、それ単独で又は薬理学的に許容される担体と混合して各種の投与形態に調製して投与される。ここで用いられる担体としては通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば充填剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の希釈剤及び賦形剤等を例示できる。
【００３１】
本発明の医薬を、ヒトを含む哺乳動物の癌転移抑制の目的で使用する際の投与形態は特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤等を例示できる。
【００３２】
錠剤の形態に成形する際の担体としては、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン酸、カカオバター等の崩壊抑制剤、第4級アンモニウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被包、フィルムコーティング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。
【００３３】
丸剤の形態に成形する際の担体としては、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。
【００３４】
カプセル剤は、上記で例示した各種の担体と混合し、硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して調製される。
【００３５】
坐剤の形態に成形する際の担体としては、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコールのエステル類、ゼラチン等を使用できる。
【００３６】
注射剤として調製される場合、液剤、乳剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であるのが望ましく、これらの形態に成形する際の希釈剤として、例えば水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用できる。この場合、等張溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを医薬製剤中に含有してもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。
【００３７】
軟膏剤の形態に調製する際には、希釈剤として例えば白色ワセリン、パラフィン、グリセリン、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン等を使用できる。
【００３８】
更に上記各製剤には必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を配合してもよい。
【００３９】
本発明医薬品の投与方法は特に限定されず、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、患者の症状の程度等に応じて決定される。例えば錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤は経口投与される。坐剤は直腸内投与される。注射剤は単独で又はブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与され、さらに必要に応じ単独で動脈内、筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与される。軟膏剤は、皮膚、口腔内粘膜等に塗布される。
【００４０】
上記の各投与単位形態中に配合されるべき本発明の化合物の量は、これを適用すべき患者の症状により或いはその剤形等により一定ではないが、一般に投与単位形態当たり約0.1〜1000mgとするのが望ましい。また、上記投与形態を有する薬剤の1日当たりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なるが、通常成人1日当たり約0.1〜5000mg、好ましくは1〜1000mgであり、これを1回又は2〜4回程度に分けて投与するのが好ましい。
【００４１】
本発明の化合物を有効成分とする医薬品を投与することにより抑制できる癌転移は、特に制限はないが、例えば肝転移、肺転移、リンパ節転移等が挙げられる。本発明は、本発明の化合物を有効成分とする癌浸潤抑制剤、癌遊走抑制剤及び癌転移抑制剤を包含する。
癌浸潤抑制剤とは、原発巣にできた癌細胞が周囲の細胞外マトリックスの間を浸潤して遠隔部位に転移する過程を抑制する薬剤である。多くの基礎及び臨床研究が精力的に行われているが、これまで臨床で用いられている癌浸潤抑制剤はなかった。
癌遊走抑制剤とは、癌細胞が細胞外マトリックス中や組織内を遊走（移動）する過程を抑制する薬剤である。多くの基礎及び臨床研究が精力的に行われているが、これまで臨床で用いられている癌遊走抑制剤なかった。
癌転移抑制剤とは、癌細胞が原発巣から遠隔部位に転移する過程を抑制する薬剤である。結果的に転移を抑制する薬剤であれば全て包含し、前記の癌浸潤抑制剤、癌遊走抑制剤などもその範疇に入る。その他、代表的なものとしては、血管新生阻害剤や接着阻害剤などが挙げられる。
【実施例】
【００４２】
以下、本発明を実施例及び試験例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
製造例１
【化４】
2005023048.tif 000004
【００４３】
化合物１［(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸］はある種のストレプトミセス属の微生物培養液（例えばStreptomyces sp. RK88-682やRK99-A234）から単離できる。または、文献既知の方法［M. Sodeoka, et al., Tetrahedron Lett., 37, p8775 (1996)］により合成することもできる。
【００４４】
可溶性澱粉2.0％、グルコース1.0％、大豆粉1.5％、麦芽エキス0.5％、硫酸マグネシウム７水和物0.05％、リン酸第二カリウム0.05％、Ｖ８ジュース10％、及びポテトデキストロース2.2％の組成からなる培地（1.5L）に、放線菌RK99-A234株を接種して、28℃で72時間振盪培養を行った。
【００４５】
菌体と上清をアセトン−メタノール溶液（1：1）を用いて抽出した。減圧濃縮後、クロロホルムと水で分液した。得られたクロロホルム抽出液を減圧濃縮後、シリカゲルカラム（Silica gel 60、メルク社製、直径4cm、長さ40cm）にかけ、クロロホルム−メタノール溶液（1：1）で溶出した。目的画分を減圧濃縮後、セファデックスLH-20カラム（シグマ社製、直径4cm、長さ40cm）にかけ、クロロホルム−メタノール溶液（1：1）で溶出した。目的画分を減圧濃縮後、さらにシリカゲルカラム（Kiesel gel 60、メルク社製、直径4cm、長さ40cm）にかけ、クロロホルム−メタノール溶液（9：1）で溶出することで、白色粉末として化合物１を57mg得た。
【００４６】
化合物１（30.0 mg, 81.4 mmol）と1,2,3-トリイソプロピル-イソウレア（30.3 mg, 162.8 mmol）のテトラヒドロフラン溶液（0.5 mL）を還流下24時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応液をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝5：1）で精製することにより化合物２：(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチル-4-イソプロピルテトロン酸（6.8 mg, 20 %）が無色結晶として得られた。1,2,3-トリイソプロピル-イソウレアは文献記載の方法［L. J. Mathias, Synthesis, p561 (1979)］に従って調製した。
【００４７】
分子量：410
分子式：C24H42O5
MALDI-TOFMS (Pos.) m/z = 433.235 [433.293 calcd for C24H42O5Na, (M+Na)+]
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) d = 5.38 (1H, sep, J=5.6 Hz), 4.70 (1H, t, J= 3.2 Hz), 4.05 (1H, m), 3.85 (1H, m), 3.00 (1H, dt, J=18.0, 7.8 Hz), 2.94 (1H, dt, J=18.0, 7.8 Hz), 1.87 (1H, br), 1.57 (2H, m), 1.25 (22H, m), 0.87 (5H, m).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) d = 197.7, 177.2, 105.3, 79.6, 78.7, 61.5, 42.5, 31.9, 29.9, 29.68, 29.66, 29.62, 29.52, 29.48, 29.4, 29.2, 27.4, 23.8, 22.7, 22.1, 21.8, 14.1.
【００４８】
製造例２
【化５】
2005023048.tif 000005
【００４９】
化合物１は製造例１に記載の方法に従って、放線菌RK99-A234株を培養し、抽出、精製を行うことで得た。
化合物１（30.0 mg, 81.4 mmol）と2-ベンジル-1,3-ジシクロヘキシル-イソウレア（51.2 mg, 162.8 mmol）のテトラヒドロフラン溶液（0.5 mL）を還流下24時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応液をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝5：1）で精製することにより化合物３：4-ベンジル-(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸（20.1 mg, 54%）が無色結晶として得られた。2-ベンジル-1,3-ジシクロヘキシル-イソウレアは文献記載の方法［L. J. Mathias, Synthesis, p561 (1979)］に従って調製した。
【００５０】
分子量：458
分子式：C28H42O5
MALDI-TOFMS (Pos.) m/z = 481.224 [481.293 calcd for C28H42O5Na, (M+Na)+]
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) d = 7.41-7.30 (5H, m), 5.50 (1H, d, J=12.0 Hz), 5.34 (1H, d, J=12.0 Hz), 4.78 (1H, t, J=3.2 Hz), 4.08 (1H, brm), 3.90 (1H, brm), 2.87 (1H, dt, J=17.8, 7.6 Hz), 2.78 (1H, dt, J=17.8, 7.6 Hz), 2.04 (1H, br), 1.51 (2H, m), 1.25 (22H, m), 0.86 (5H, m).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) d = 197.8, 177.5, 170.3, 134.2, 129.1, 128.8, 128.0, 106.9, 78.7, 77.4, 61.2, 42.4, 39.0, 31.9, 29.67, 29.66, 29.65, 29.62, 29.5, 29.45, 29.3, 29.1, 28.0, 27.4, 23.6, 22.69, 22.65, 14.1.
【００５１】
試験例
試験例１（浸潤阻害活性試験）
文献記載の方法 [A. Albini, et. al., Cancer Res., 47, 3239-3245 (1987)]に準じて行った。即ち、基底膜再構成基質マトリゲルでプレコートされたポアサイズ8-μmのバイオコート・マトリゲル・インベージョン・チャンバー（Becton Dickinson Labware）を24穴プレートに設置し、チャンバー内（上層）にDMEM培地（無血清）で調製した細胞浮遊液（5 × 104 cells / mL）を0.5 mL播種し（2.5 × 104 cells / chamber）、24穴プレート内（下層）にDMEM（10 % FCS）培養液を0.7 mL添加した。上層および下層に各薬剤を細胞増殖阻害が起こらない濃度で添加し、37 °C、5 % CO2の条件下、20時間インキュベーションした。上層に残った細胞およびマトリゲルを綿棒できれいにふき取り、下層に残った細胞をメタノールで固定後、クリスタル・バイオレットで染色した。下層の細胞を顕微鏡で計測し、化合物無添加群をもとに各濃度における阻害活性（％）を求めた。結果を表１に示す。
【００５２】
阻害活性（％）＝ 100−（化合物添加時の浸潤癌細胞数／化合物無添加時の浸潤癌細胞数）×100
【００５３】
【表１】
2005023048.tif 000006
【００５４】
表１の結果より、4位をアルキル化していない化合物１［(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸］は100μMにおいて、ヒト繊維肉腫HT1080細胞の浸潤を全く阻害しなかった。一方、4位をイソプロピル化した化合物２［(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチル-4-イソプロピルテトロン酸］は10 μM以上の濃度でほぼ完全に浸潤を阻害しIC50値は3 μMであった。また、4位をベンジル化した化合物３［4-ベンジル-(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸］は10 μM以上の濃度でほぼ完全に浸潤を阻害した。1 μMにおいても約40 %阻害し、IC50値は1.5 μMであった。これらの結果より4位がアルキル化された発明の化合物では、癌細胞の浸潤阻害活性が劇的に上昇することが示された。
【００５５】
試験例２（遊走阻害活性試験）
ポアサイズ8-μmのセルカルチャー・インサート（Becton Dickinson Labware）を24穴プレートに設置し、チャンバー内（上層）にDMEM培地（無血清）で調製した細胞浮遊液（5 × 104 cells / mL）を0.5 mL播種し（2.5 × 104 cells / chamber）、24穴プレート内（下層）にDMEM（10 % FCS）培養液を0.7 mL添加した。上層および下層に各薬剤を細胞増殖阻害が起こらない濃度で添加し、37 °C、5 % CO2の条件下、20時間インキュベーションした。上層に残った細胞を綿棒できれいにふき取り、下層に残った細胞をメタノールで固定後、クリスタル・バイオレットで染色した。下層の細胞を顕微鏡で計測し、化合物無添加群をもとに各濃度における阻害活性（％）を求めた。結果を表２に示す。
【００５６】
阻害活性（％）＝ 100−（化合物添加時の遊走癌細胞数／化合物無添加時の遊走癌細胞数）×100
【００５７】
【表２】
2005023048.tif 000007
【００５８】
表２の結果より、4位をアルキル化していない化合物１［(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸］は100 μMにおいて、ヒト繊維肉腫HT1080細胞の遊走を約30 %阻害した。一方、4位をイソプロピル化した化合物２［(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチル-4-イソプロピルテトロン酸］は100 μM以上の濃度でほぼ完全に遊走を阻害した。10 μMにおいては約70 %阻害し、IC50値は5 μMであった。また、4位をベンジル化した化合物３［4-ベンジル-(R)-3-ヘキサデカノイル-5-ヒドロキシメチルテトロン酸］は100μM以上の濃度でほぼ完全に遊走を阻害した。10 μMにおいては約70 %、1 μMにおいては約30 %阻害し、IC50値は3 μMであった。これらの結果より、4位がアルキル化された本発明の化合物では、癌細胞の遊走阻害活性が劇的に上昇することが示された。