(57)【要約】【課題】表皮細胞によるラミニンの産生を促進して表皮基底膜の機能を回復せしめることにより、皮膚の老化や不健全化を防止し或いは改善する効果を奏すると共に、生体安全性、化粧料配合性にもすぐれた表皮細胞ラミニン産生促進剤が配合されてなり、皮膚の老化防止や美肌化に有用な化粧料を提供すること。【解決手段】ミツイシコンブ（Laminaria angusta)の抽出物を有効成分とする表皮細胞ラミニン産生促進剤を化粧料中に配合すること。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミツイシコンブ（Laminaria angusta)の抽出物を有効成分としてなる表皮細胞ラミニン産生促進剤を配合したことを特徴とする化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、表皮細胞によるラミニンの産生を促進して表皮基底膜の機能を回復させ、正常化する成分が配合されてなり、皮膚に対してすぐれた老化防止効果及び美肌化効果を付与し得る化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、皮膚の組織や機能を健全化し或いは活性化する上で表皮基底膜の果たす役割が注目されている。
表皮基底膜は、表皮と真皮との境界に存在する薄膜であり、表皮と真皮との結合や真皮から表皮への栄養補給等に関与して、皮膚の組織や機能を健全、健常な状態に保持するために重要な役割を果たしている。
この表皮基底膜が、加齢や紫外線曝露等によって傷害を受けると、表皮細胞の増殖、分化ひいては表皮組織の構築やターンオーバーに好ましからざる影響が及び、その結果肌荒れや肌のキメの低下等が生ずると共に、究極的にはシワ、たるみ或いはくすみの発生など皮膚の老化現象が進むこととなる。
表皮基底膜は、主としてコラーゲンとラミニン５を主体とするラミニン類などの糖蛋白質から構成されているが、それら成分のうちでも特にラミニン５が、表皮基底膜の示す上述の諸機能の鍵を握っていると判断される。
【０００３】
このため近年、表皮細胞によるラミニン５の産生を促進して表皮基底膜の機能回復を図ることにより、皮膚の老化や不健全化を防止し或いは改善することを目的として、ラミニン５産生促進能を有する成分の探索がなされ、又その化粧料配合原料としての利用が提案されている。
例えば、大豆粉末、大豆抽出物などの大豆調製物（特開平１１−３４３２２６号）、大豆リン脂質由来のリゾホスファチジルコリン等（特開２０００−２２６３０８号）、カフェー酸、フェルラ酸などのフェニルプロパノイド類（特開２００２−３３８４６０号）、カッコン抽出物、カンゾウ抽出物などの生薬抽出物又は乳清抽出物（特開２００３−１３７７６７号）、オノニス、メリロートなどのマメ科植物抽出物（特開２００３−１３７７６８号）、ケシ科ボコニア属植物抽出物（特開２００３−３１３１３５号）等がそれである。
【０００４】
しかしながら、ラミニン５の産生を促進し表皮基底膜の機能を回復せしめることにより皮膚の老化を防止し或いは美肌化を図るというこの皮膚老化防止並びに美肌化の改善策は、比較的最近になって注目され又提案されたものであるため、かかる目的に合致し、実用上十分満足し得る有効性を示す活性成分の数はなお限定されており、又成分によっては、配合性が不十分であったり、或いは皮膚刺激性があるなどの問題があり、このため、さらなる活性成分の開発、提案によって、上記の改善策に於ける選択肢がより多様化、豊富化されることが強く求められている。
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−３４３２２６号
【特許文献２】特開２０００−２２６３０８号
【特許文献３】特開２００２−３３８４６０号
【特許文献４】特開２００３−１３７７６７号
【特許文献５】特開２００３−１３７７６８号
【特許文献６】特開２００３−３１３１３５号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記の如き従来技術の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、表皮細胞によるラミニン、就中ラミニン５の産生を促進する作用を有し、これによって表皮基底膜の機能を回復せしめて、皮膚の老化や肌荒れ、キメの低下を防止し或いは改善する効果を奏すると共に、化粧料への配合性が良好で使い勝手がよく、しかも皮膚刺激性がなく生体安全性にもすぐれた活性成分を見出し、かかる成分を化粧料に配合することにより、シワ、たるみ等の皮膚老化の予防或いは症状改善や美肌化に高い有効性を示すと共に、保存安定性、生体安全性にもすぐれた化粧料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
即ち本発明は、ミツイシコンブ（Laminaria angusta)の抽出物を有効成分としてなる表皮細胞ラミニン産生促進剤を配合したことを特徴とする化粧料である。
ここで化粧料なる文言は、所謂化粧料のほかに医薬部外品をも含む広義で用いる。
【０００８】
本発明の化粧料に配合される表皮細胞ラミニン産生促進剤の有効成分たるミツイシコンブ（Laminaria angusta)の抽出物は、線維芽細胞賦活作用（特開平１０−３３０２８１号）や皮膚ケラチノサイトの細胞増殖促進作用（特開平１１−２６９０３６号）を有することから化粧料の配合原料として有用であることが知られており、又現に化粧料配合原料として一部で使用されているものであるが、該抽出物に顕著な表皮細胞ラミニン産生促進作用並びにこれに基づく皮膚老化防止効果、美肌化効果のあることは従来全く知られておらず、かかる事実は本発明者等の研究、検討の結果初めて明らかとなったところである。
【０００９】
【特許文献７】特開平１０−３３０２８１号
【特許文献８】特開平１１−２６９０３６号
【発明の効果】
【００１０】
本発明で用いるミツイシコンブ（Laminaria angusta)の抽出物は、後に試験例１に示すとおり、表皮細胞によるラミニン（その大部分はラミニン５からなる）の産生を顕著に促進する作用を有している。従って、かかるミツイシコンブ（Laminaria angusta)の抽出物を有効成分としてなる表皮細胞ラミニン産生促進剤を配合した化粧料を皮膚に適用した場合、表皮細胞によるラミニン５の産生量が顕著に増加して表皮基底膜の機能が亢進或いは修復され、これにより表皮細胞の増殖、分化さらには表皮組織の構築、ターンオーバーが正常な状態に維持もしくは改善される結果、シワ、たるみなどの皮膚老化現象の発生や肌荒れ、肌のキメの低下等が予防或いは改善され、皮膚は健全で若々しい状態に保持される。
又、本発明の表皮細胞ラミニン産生促進剤は、その有効成分たるミツイシコンブ抽出物が、前記の如く現に化粧料配合原料として利用されていることからも明らかな通り、化粧料への配合性が良好であり、又皮膚刺激性等の問題もなく生体安全性にもすぐれている。
なお、皮膚刺激性のないことは、後に示す試験例２の結果からも明らかである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の化粧料に配合される表皮細胞ラミニン産生促進剤は、ミツイシコンブの抽出物を有効成分としてなるものである。
原料のミツイシコンブは、海中から採取したものをそのまま用いることもできるが、一般かつ好適には、水洗等により異物を取り除いた後、乾燥もしくは半乾燥し、さらに好ましくは抽出処理に好適な大きさに細断した上、抽出処理に供する。
抽出処理は、浸漬法、向流抽出法など常法に従って行うことができる。
【００１２】
ここで抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノールなどの低級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、１、３−ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチルなどのエステル類；アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などが挙げられ、それらは単独でもしくは二種以上混合して用いられる。
【００１３】
それら抽出溶媒のうちでも、得られる抽出物のラミニン産生促進作用の観点、さらには化粧料への幅広い応用が可能であるという観点から、本発明に於いては水、低級アルコール類或いは多価アルコール類などの親水性溶媒が好適に用いられる。この親水性溶媒を用いる場合の好ましい例としては、例えば水もしくは低級アルコール類（特にエタノール）の単独使用、或いは水と低級アルコール類（特にエタノール）との混合溶媒又は水と多価アルコール類（特に１，３−ブチレングリコールもしくはプロピレングリコール）との混合溶媒の使用等が挙げられるが、なかでも水の単独使用が最も好ましい。
混合溶媒を用いる場合、水と水混和性有機溶媒の混合比は、一般に１：５〜２５：１の範囲、特に１：１〜１５：１の範囲とすることが好ましい。
【００１４】
抽出に際して、抽出液のｐＨに特に限定はないが一般には４〜８の範囲とすることが好ましく、かかる意味で、必要ならば前記の抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤や、クエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤等を添加し、目的とするｐＨとなるように調整してもよい。
【００１５】
抽出温度、抽出時間、浴比等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨ、或いはミツイシコンブの細切度等によっても異なるが、例えば水を抽出溶媒とする浸漬法の場合であれば、抽出温度は一般に１〜１００℃、好ましくは４〜８０℃の範囲であり、又抽出時間は、４℃の冷温抽出の場合で１時間〜５日間、特に４〜８時間、２０℃の中温抽出の場合で１分〜１時間、特に３〜３０分の範囲である。
浸漬法の場合、浴比は重量比で、ミツイシコンブに対して溶媒が一般に１〜５０倍量、好ましくは１〜２０倍量の範囲となるようにするのがよい。
【００１６】
かくして得られる抽出物溶液は、一般にはｐＨを４〜８に調整した上、これをそのまま表皮細胞ラミニン産生促進剤として使用してもよく、又必要ならば減圧濃縮等により適宜の濃度として用いてもよい。さらに場合によっては、スプレードライ法、凍結乾燥法など常法に従って粉末化することもできる。
【００１７】
上記の如くして調製される表皮細胞ラミニン産生促進剤を配合してなる本発明の化粧料としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、洗顔料などの基礎化粧料、口紅、ファンデーション、リキッドファンデーション、メイクアッププレスパウダーなどのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディーシャンプー、石けんなどの清浄用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。
【００１８】
本発明の化粧料中に於ける表皮細胞ラミニン産生促進剤の配合量は、ミツイシコンブ抽出物の固形分換算で、基礎化粧料の場合は、一般に０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜２重量％の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に０．００１〜３重量％、好ましくは０．０１〜１重量％の範囲、清浄用化粧料の場合は、一般に０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜２重量％の範囲、又浴剤の場合は、一般に０．００１〜５重量％、好ましくは０．０１〜２重量％の範囲である。
【００１９】
本発明の化粧料には、上記の必須成分の他に、通常化粧料に用いられる配合成分、例えば油性成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、色素、香料、抗酸化剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２０】
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００２１】
界面活性剤としては，例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。
又、乳化剤乃至乳化助剤として、酵素処理ステビアなどのステビア誘導体、レシチン及びその誘導体、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀など）、ジュアゼイロ（Zizyphus juazeiro：Rhamnaceae)抽出物等を配合することもできる。
【００２２】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、乳酸菌醗酵米、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、ビャッキュウ抽出物、魚介類由来コラーゲン及びその誘導体、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００２３】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻或いは紅藻由来成分、ビャッキュウ抽出物、ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００２４】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物等がある。
【００２５】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、６−又は12−ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビなど）のパウダー、豆類（大豆、小豆など）のパウダー並びに発酵物等がある。
【００２６】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００２７】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体、イネ抽出物等がある。
【００２８】
さらに必要ならば、本発明で用いる表皮細胞ラミニン産生促進剤の作用効果及び特長を損なわない範囲で、他の活性成分（美白剤、皮膚老化防止・美肌化剤等）を配合してもよく、かかるものとしては、例えば美白剤であれば、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン誘導体、エラグ酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、米糠抽出物、米糠抽出物加水分解物、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀類）、白芥子加水分解抽出物、党参抽出物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物（商品名：カモミラET)、コンブ等の海藻の抽出物、アマモ等の海草の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸など）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体等が、又皮膚老化防止・美肌化成分であれば、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、アラントイン、α−ヒドロキシ酸類、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナエキス、甘草エキス、ハトムギエキス、カミツレエキス、ニンジンエキス、アロエエキスなどの生薬抽出エキス、米糠抽出物加水分解物、米醗酵エキス、アナアオサ抽出物、アマモ等の海草の抽出物、ソウハクヒエキス、ジュアゼイロ（Rhamnaceae zizyphus joazeiro)抽出物、紫蘭根抽出物、ハクガイシ抽出物、ムラサキシキブ抽出物、サンゴ草抽出物等が挙げられる。
【００２９】
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレートなどのコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシドなどのコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウムなどのアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド（５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）などのアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基など）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステルなどのＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム等が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、レゾルシノール誘導体としては、例えば４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、ビタミンＥ誘導体としては、例えばビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００３０】
次に、調製例（表皮細胞ラミニン産生促進剤の調製例）、実施例（化粧料の処方例)及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下に於いて、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。
【００３１】
調製例１  表皮細胞ラミニン産生促進剤の調製（１）
ミツイシコンブの乾燥細切物１０ｇに精製水１００ｇを加え、２０℃で１０分間抽出した。得られた抽出液をろ過して、淡黄色透明の抽出物溶液（固形分濃度：１．５％）８５ｇを得た。
【００３２】
調製例２．表皮細胞ラミニン産生促進剤の調製（２）
ミツイシコンブの乾燥細切物１０ｇに３０％１，３−ブチレングリコール水溶液１００ｇを加え、８０℃で５０秒間抽出した。得られた抽出液をろ過して、淡黄色透明の抽出物溶液（固形分濃度：１．４％）９３ｇを得た。
【００３３】
調製例３．表皮細胞ラミニン産生促進剤の調製（３）
ミツイシコンブの乾燥細切物１０ｇに２０％エタノール水溶液１００ｇを加え、４℃で５時間抽出した。得られた抽出液をろ過して、淡黄色透明の抽出物溶液（固形分濃度：１．５％）９２ｇを得た。
【００３４】
調製例４．表皮細胞ラミニン産生促進剤の調製（４）
調製例１と同様にして得られた抽出物溶液（固形分濃度１．５％）５０ｍｌを１０ｍｌに濃縮した後凍結乾燥し、抽出物粉末からなる表皮細胞ラミニン産生促進剤０．７ｇを得た。
【００３５】
実施例１．クリーム
［Ａ成分］                                                        部
流動パラフィン                                                ５．０
ヘキサラン    （注１）                                        ４．０
パラフィン                                                    ５．０
グリセリルモノステアレート                                    ２．０
ポリオキシエチレン（20）ソルビタンモノステアレート            ６．０
ブチルパラベン                                                ０．１
（注１）株式会社テクノーブル製 トリオクタン酸グリセリル        
［Ｂ成分］
調製例１の表皮細胞ラミニン産生促進剤                        ２０．０
グリセリン                                                    ５．０
カルボキシメチルモノステアレート                              ０．１
モイストン・Ｃ    （注２）                                    １．０
精製水                                        全量が１００部となる量
（注２）株式会社テクノーブル製 ＮＭＦ成分 
［Ｃ成分］
香料                                                           適量 
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合してクリームを得た。
【００３６】
実施例２．乳液
［Ａ成分］                                                          部
流動パラフィン                                                ６．０
ヘキサラン                                                    ４．０
ホホバ油                                                      １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート          ２．０
大豆レシチン                                                  １．５
メチルパラベン                                              ０．１５
エチルパラベン                                              ０．０３
［Ｂ成分］
調製例１の表皮細胞ラミニン産生促進剤                        ２０．０
グリセリン                                                    ３．０
１、３−ブチレングリコール                                    ２．０
カルボキシメチルセルロース                                    ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム                                      ０．０１
精製水                                       全量が１００部となる量 
［Ｃ成分］
香料                                                           適量 
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。こ
れを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００３７】
実施例３．乳液
実施例２のＢ成分中調製例１の表皮細胞ラミニン産生促進剤に代えて調製例２の表皮細胞ラミニン産生促進剤を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００３８】
実施例４．乳液
実施例２のＢ成分中調製例１の表皮細胞ラミニン産生促進剤に代えて調製例３の表皮細胞ラミニン産生促進剤を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００３９】
実施例５．ローション
［成分］                                                            部
調製例２の表皮細胞ラミニン産生促進剤                        ３０．０
エタノール                                                  １０．０
グリセリン                                                    ３．０
１、３−ブチレングリコール                                    ２．０
メチルパラベン                                                ０．２
クエン酸                                                      ０．１
クエン酸ナトリウム                                            ０．３
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１
香料                                                           適量 
水酸化カリウム                                                 適量
精製水                                       全量が１００部となる量 
上記の成分を混合してローションを得た。
【００４０】
実施例６．化粧水
［Ａ成分］                                                          部
オリーブ油                                                    １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール                  ５．０
ブチルパラベン                                                ０．１
［Ｂ成分］
調製例３の表皮細胞ラミニン産生促進剤                        ３０．０
エタノール                                                    ５．０
グリセリン                                                    ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
メチルパラベン                                                ０．１
水酸化カリウム                                                  適量
精製水                                       全量が１００部となる量 
［Ｃ成分］
香料                                                           適量 
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。
これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して化粧水を得た。
【００４１】
実施例７．乳液
［Ａ成分］                                                            部
流動パラフィン                                                  ６．０
ヘキサラン                                                      ４．０
ホホバ油                                                        １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート            ２．０
大豆レシチン                                                    １．５
メチルパラベン                                                ０．１５
エチルパラベン                                                ０．０３
［Ｂ成分］
調製例１の表皮細胞ラミニン産生促進剤                          ２０．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド                              ２．０
水酸化カリウム                                                  ０．５
グリセリン                                                      ３．０
１、３−ブチレングリコール                                      ２．０
カルボキシメチルセルロース                                      ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム                                        ０．０１
精製水                                          全量が１００部となる量 
［Ｃ成分］
香料                                                             適量 
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００４２】
実施例８．乳液
実施例７のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム２．０部を用いるほかは実施例７と同様にして乳液を得た。
【００４３】
実施例９．乳液
実施例７のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム２．０部を用いるほかは実施例７と同様にして乳液を得た。
【００４４】
実施例１０．乳液
実施例７のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン２．０部を用いるほかは実施例７と同様にして乳液を得た。
【００４５】
実施例１１．乳液
実施例７のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えて米糠抽出物加水分解物（株式会社テクノーブル製、商品名「グレイスノウ＊雪＊ＨＰ」、固形分濃度3.5％）５．０部を用いるほかは実施例７と同様にして乳液を得た。
【００４６】
実施例１２．乳液
実施例７のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えて白芥子抽出物（株式会社テクノーブル製、商品名「シナブランカ−ＷＨ」、固形分濃度1.0％）５．０部を用いるほかは実施例７と同様にして乳液を得た。
【００４７】
実施例１３．乳液
実施例７のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてγ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸１．０部を用いるほかは実施例７と同様にして乳液を得た。
【００４８】
実施例１４．プレストパウダー
［Ａ成分］                                                        部
ベンガラ                                                      ０．５
黄酸化鉄                                                      １．５
黒酸化鉄                                                      ０．１
酸化チタン                                                  １０．０
ナイロンパウダー                                              ４．０
セリサイト                                    全量が１００部となる量
マイカ                                                      ２３．０
タルク                                                      ２５．０
調製例４の表皮細胞ラミニン産生促進剤                          ０．５
［Ｂ成分］
スクワラン                                                    １．０
メチルポリシロキサン                                          ４．０
プロピルパラベン                                              ０．１
デヒドロ酢酸                                                  ０．１
流動パラフィン                                                ２．０
香料                                                           適量 
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ混合攪拌し混合した後、２００メッシュのタイラーメッシュの篩にかけ、得られた混合粉末を金型に打型してプレストパウダーを得た。
【００４９】
実施例１５．リクイドファンデーション
［Ａ成分］                                                          部
ステアリン酸                                                  ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール                          ２．０
セトステアリルアルコール                                      ０．２
液状ラノリン                                                  ２．０
流動パラフィン                                                ３．０
ミリスチン酸イソプロピル                                      ８．５
プロピルパラベン                                            ０．０５
［Ｂ成分］
調製例１の表皮細胞ラミニン産生促進剤                          ５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                          ０．２
ベントナイト                                                  ０．５
プロピレングリコール                                          ４．０
トリエタノールアミン                                          １．１
メチルパラベン                                                ０．１
精製水                                        全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
酸化チタン                                                    ８．０
タルク                                                        ４．０
着色顔料                                                        適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のＣ成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリキッドファンデーションを得た。
【００５０】
実施例１６．クリームファンデーション
［Ａ成分］                                                          部
ステアリン酸                                                ５．０
セタノール                                                  ２．０
モノステアリン酸グリセリル                                  ３．０
流動パラフィン                                              ５．０
スクワラン                                                  ３．０
ミリスチン酸イソプロピル                                    ８．０
ポリオキシエチレン（２０）モノステアリン酸グリセリル        ２．０
プロピルパラベン                                            ０．１
［Ｂ成分］
調製例２の表皮細胞ラミニン産生促進剤                      １０．０
ソルビトール                                                ３．０
１，３−ブチレングリコール                                  ５．０
トリエタノールアミン                                        １．５
メチルパラベン                                              ０．１
精製水                                      全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
酸化チタン                                                  ８．０
タルク                                                      ２．０
カオリン                                                    ５．０
ベントナイト                                                １．０
着色顔料                                                    適  量
［Ｄ成分］
香料                                                        ０．３
Ｃ成分を混合し、粉砕機で粉砕した。Ｂ成分を混合し、これに粉砕したＣ成分を加え、コロイドミルで均一分散させた。Ａ成分及び均一分散させたＢ、Ｃ成分をそれぞれ８０℃に加温後、Ｂ、Ｃ成分にＡ成分を攪拌しながら加え、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを５０℃まで冷却した後、Ｄ成分を加えて攪拌混合し、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却してクリームファンデーションを得た。
【００５１】
実施例１７．ボディシャンプー
［Ａ成分］                                                          部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム                    ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％）                          ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                              ３．０
メチルパラベン                                              ０．１
［Ｂ成分］
調製例２の表皮細胞ラミニン産生促進剤                      １０．０
１，３−ブチレングリコール                                  ２．０
精製水                                      全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してボディシャンプーを得た。
【００５２】
実施例１８．石けん
［Ａ成分］                                                          部
硬化ヒマシ油                                              ２６．０
ヤシ油                                                    １０．０
オリーブ油                                                  ４．０
［Ｂ成分］
水酸化ナトリウム                                            ６．０
砂糖                                                      １０．０
グリセリン                                                  ５．０
調製例４の表皮細胞ラミニン産生促進剤                        ０．５
精製水                                      全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
エタノール                                                ２０．０
香料                                                          適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加えてケン化した。これを攪拌しながら５０℃まで冷却し、Ｃ成分を加えた。これを型に流し込み冷却した後、室温下で数日間乾燥させ、充分に乾燥したものを型から取りだして石けんを得た。
【００５３】
比較例．クリーム
実施例１のＢ成分中、製造例１の表皮細胞ラミニン産生促進剤に代えて精製水を用いるほかは実施例１と同様にしてクリームを得た。
【００５４】
試験例１．表皮細胞のラミニン産生促進作用
試料として調製例１で得られた表皮細胞ラミニン産生促進剤を用い、そのヒト表皮細胞に於けるラミニン産生促進作用を調べた。
【００５５】
［試験方法］
培養ヒト表皮細胞（PHK16-Ob(Lot.031117(4)))を、９６穴マイクロプレートに１×１０４個／穴播種し、エピダーセルHKGS（クラボウ(株)製）添加MCDB153培地（機能性ペプチド研究所製）中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下に２日間プレ培養した後、培地を、調製例１の表皮細胞ラミニン産生促進剤を0.058％の濃度（固形分として）で含む上記と同様の培地に置換し、同条件で２日間培養した。
次に、ここに得られた培養液の上清を採取し、上清中のラミニン量をエンザイムイムノアッセイにより求めた。
即ち、抗ヒトラミニン抗体をコーティングした９６ウェルプレートに上記細胞培養上清１００μLを添加し、１時間反応させた。これを０．１％Tween80含有PBS(−)で３回洗浄し、ペルオキシダーゼ標識した抗ヒトラミニン抗体溶液１００μLを添加してさらに１時間反応させた後、０．１％Tween80含有PBS(−)で４回洗浄し、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン溶液１００μLを添加した。１５分後、１Ｎ硫酸１００μLを添加して反応を停止させ、マイクロプレートリーダーを用いて４１５nmに於ける吸光度を測定した。ヒトラミニン標準物質を用いて同様の試験を行った結果から検量線を作成し、この検量線に基づいて試料中のラミニン量（ng/mL）を求めた。
次に、上記の方法で得られたラミニン量を生細胞当たりに換算するため、培養した細胞に対してMTT還元法による細胞活性の測定を行った。
即ち、上記のラミニン量測定試験に供するために上清を採取したウェルに対し、完全に培地を除いた後、０．０３％MTT溶液を添加して１時間反応させ、生成したホルマザンをイソプロパノールで溶解させた後、５７０nmに於ける吸光度を測定し、細胞残渣による濁度（ABS630）を差し引いた値を細胞活性とした。
これらの試験の結果から、生細胞当たりのラミニン合成量を下式により求めた。
生細胞当たりのラミニン合成量＝
ウェル当たりのラミニン合成量（ng/mL）／同ウェルの細胞活性（ABS550-630)
このようにして得られた生細胞当たりのラミニン合成量は、試料無添加区の値を１００とした時の相対値（合成率（％））で示した。
【００５６】
［結果］
上記の試験で得られた結果を表１に示した。
【表１】
2005314230.tif 000002
【００５７】
表１に示す通り、本発明の表皮細胞ラミニン産生促進剤を添加した試験区は、試料無添加区と比較して、顕著な生細胞当たりのラミニン合成量の亢進がみられた。
なお、ヒト表皮細胞が産生するラミニンは、その大部分がラミニン５からなることが示されていることから、上記の試験結果から本発明の表皮細胞ラミニン産生促進剤が顕著なラミニン５産生促進能を有することが明らかである。
【００５８】
試験例２．皮膚一次刺激性試験
モルモットを用いて、本発明の表皮細胞ラミニン産生促進剤の皮膚一次刺激性を調べた。
［試験方法］
Hartley系モルモット（雄、４週齢）３匹（GA、GB及びGC)を用い、その背部をバリカン及び電気シェーバーで除毛した後、除毛部に、パッチテスト用絆創膏の布地部（直径２５mm）に調製例１の表皮細胞ラミニン産生促進剤又は対照として精製水０．５mLを湿潤させたものを貼付した。貼付開始から２４時間後に絆創膏を除去し、除去直後（貼付開始から２４時間後）、除去２４時間後（貼付開始から４８時間後） 及び除去４８時間後（貼付開始から７２時間後）に、絆創膏貼付部位の紅斑、痂皮及び浮腫形成の程度を観察し、下記のドレイズ（Draize）の判定基準に従って評価した。
【００５９】
（紅斑）
スコア     皮膚の状態
０    ：  紅斑なし
１    ：  極く軽度の紅斑
２    ：  明らかな紅斑
３    ：  中程度から強い紅斑
４    ：  深紅色の強い紅斑に軽い痂皮形成
（浮腫）
スコア     皮膚の状態
０    ：  浮腫なし
１    ：  極く軽度の浮腫
２    ：  明らかな浮腫（周囲と明らかに区別可能）
３    ：  中程度の浮腫（１mm以上の盛り上がり）
４    ：  強い浮腫（さらに周囲にも広がり）
【００６０】
［結果］
結果を表２に示す。
【表２】
2005314230.tif 000003
【００６１】
表２の結果から明らかな通り、本発明の表皮細胞ラミニン産生促進剤は皮膚に対する一次刺激性がなく、生体安全性に極めてすぐれている。
【００６２】
試験例３．モニターテスト
実施例１のクリームと比較例のクリームについて、モニターテストにより皮膚に対する効果を調べた。
［試験方法］
無作為に抽出した年齢１８〜５０歳の女性２０名を被験者とし、被験者の左右の頬部に、実施例１又は比較例のクリームを１日２回（朝、晩）、２ヵ月間塗布してもらった後、小ジワに対する改善効果、肌のはり、艶に対する改善効果及びくすみに対する改善効果を、以下の評価基準に基づいて評価した。
【００６３】
［評価基準］
（小ジワに対する改善効果）
Ａ：殆ど目立たなくなった
Ｂ：かなり目立たなくなった
Ｃ：わずかに目立たなくなった
Ｄ：変わらない
Ｅ：かえって増えた
（肌のはり、艶に対する改善効果）
Ａ：明らかに改善された
Ｂ：かなり改善された
Ｃ：僅かに改善された
Ｄ：変わらない
Ｅ：かえって悪くなった
（くすみの改善効果）
Ａ：明らかに改善された
Ｂ：かなり改善された
Ｃ：僅かに改善された
Ｄ：変わらない
Ｅ：かえって悪くなった
【００６４】
［結果］
結果を表３に示す。
【表３】
2005314230.tif 000004
【００６５】
表３に示す通り、ミツイシコンブの抽出物からなる表皮細胞ラミニン産生促進剤を配合した本発明の化粧料は、該抽出物の有するラミニン５産生促進作用に基づく表皮基底膜機能の亢進或いは改善により、皮膚の老化或いは不健全化の典型的な症状であるシワやたるみ或いは艶、くすみ等のいずれに対してもすぐれた改善効果を示し、皮膚に総合的な美肌化効果を付与する。