(57)【要約】【課題】  生産効率の良好なＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸（ＢＯＣＡ）含有溶液の製造法を提供する。【解決手段】  （ａ）〜（ｃ）工程を含むＢＯＣＡ含有溶液の製造法。（ａ）：水と混和しない有機溶媒と塩基と水の存在下に、ジ−ｔ−ブチルジカーボネートと該カーボネートに対して当量以上のアミノ酸を反応させてＢＯＣＡの塩を含む反応混合物を得る工程（ｂ）：上記反応混合物に酸を加えてフリーのＢＯＣＡを生成させ、該ＢＯＣＡを水と混和しない有機溶媒で抽出する工程（ｃ）：（ｂ）工程で得たＢＯＣＡと水と混和しない有機溶媒とを含む有機相と、上記酸と塩基の中和反応により生成した塩を含む水相とを、分離する工程【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の（ａ）工程、（ｂ）工程及び（ｃ）工程を含むことを特徴とするＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
但し（ａ）工程で用いる水と混和しない有機溶媒と（ｂ）工程で用いる水と混和しない有機溶媒とは、互いに同一でもよく、異なってもよい。
（ａ）工程：
水と混和しない有機溶媒と塩基と水の存在下に、ジ−ｔ−ブチルジカーボネートと該ジ−ｔ−ブチルジカーボネートに対して当量以上のアミノ酸を反応させてＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸の塩を含む反応混合物を得る工程
（ｂ）工程：
（ａ）工程で得た反応混合物に酸を加えてフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を生成させ、該フリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を水と混和しない有機溶媒で抽出する工程
（ｃ）工程：
（ｂ）工程で得たフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸と水と混和しない有機溶媒とを含む有機相と、上記酸と塩基との中和反応により生成した塩を含む水相とを、分離する工程
【請求項２】
次の（ａ'）工程、（ｄ）工程、（ｅ）工程及び（ｆ）工程を含むことを特徴とするＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
但し（ａ'）工程及び（ｄ）工程における水と混和しない有機溶媒と（ｅ）工程で用いる水と混和しない有機溶媒とは、互いに同一でもよく、異なってもよい。
（ａ'）工程：
水と混和しない有機溶媒と塩基と水の存在下に、アミノ酸と該アミノ酸に対して当量以上のジ−ｔ−ブチルジカーボネートを反応させてＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸の塩を含む反応混合物を得る工程
（ｄ）工程：
（ａ'）工程で得た反応混合物から、水と混和しない有機溶媒及び未反応のジ−ｔ−ブチルジカーボネートを含む有機相を抜き出す工程
（ｅ）工程：
（ｄ）工程で有機相を抜き出して得た水相に、水と混和しない有機溶媒及び酸を加えてフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を生成させ、該フリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を上記の水と混和しない有機溶媒で抽出して、フリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸と水と混和しない有機溶媒とを含む有機相、及び、上記酸と塩基との中和反応により生成した塩を含む水相を得る工程
（ｆ）工程：
（ｅ）工程で得たフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸と水と混和しない有機溶媒とを含む有機相と、上記酸と塩基との中和反応により生成した塩を含む水相とを分離する工程
【請求項３】
（ａ）工程における水と混和しない有機溶媒が、脂肪族エーテル類である請求項１に記載のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
【請求項４】
（ｂ）工程における水と混和しない有機溶媒が、脂肪族エーテル類である請求項１に記載のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
【請求項５】
（ａ'）工程における水と混和しない有機溶媒が、脂肪族エーテル類である請求項２に記載のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
【請求項６】
（ｅ）工程における水と混和しない有機溶媒が、脂肪族エーテル類である請求項２に記載のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
【請求項７】
脂肪族エーテル類が、メチル−ｔ−ブチルエーテルである請求項３〜６のいずれかに記載のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
【請求項８】
アミノ酸が、アラニン又はフェニルグリシンである請求項１〜７のいずれかに記載のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
【請求項９】
アミノ酸が、アラニンである請求項１、３又は４に記載のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
【請求項１０】
アミノ酸が、フェニルグリシンである請求項２、５又は６に記載のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチドや抗生物質等を製造する際の中間体化合物として有用なフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を含む溶液の製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１、特許文献２には、化学量論以上の水酸化ナトリウムとアミノ酸を水及びｔ−ブチルアルコール（水に任意の割合に混ざる親水性有機溶媒）の存在下に反応させて得た水溶性塩を含む水相を、さらに、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート等のジアルキルジカーボネートと反応させてＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸の塩を得た後、上記ｔ−ブチルアルコールを減圧下で留去後、得られたＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸塩の水溶液を酸で中和して得たＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸の懸濁液をクロロホルムや酢酸ブチル又はｍ−キシレン（水と共沸混合物を作り得る水と混和しない有機溶媒）と接触させてＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を抽出後、得られた有機相を共沸脱水するＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法が記載されている。
【０００３】
【特許文献１】特開平７−１７９４１号公報（実施例の項を参照）
【０００４】
【特許文献２】特開平７−１２６２４０号公報（実施例の項を参照）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、上記のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液を製造する場合、特許文献１や特許文献２に記載のような方法では、水と共沸混合物を作り得る溶媒と共沸脱水する前に水に任意の割合に混ざる親水性有機溶媒のｔ−ブチルアルコールを留去して、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸と水に混和しない有機溶媒からなる懸濁液又は水溶液を得る必要があり、上記ｔ−ブチルアルコールの留去に時間がかかり、生産効率が悪いという問題点があった。
【０００６】
本発明の目的は、生産効率の良好なＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、
（イ）次の（ａ）工程、（ｂ）工程及び（ｃ）工程を含むことを特徴とするＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法を提供するものである。但し（ａ）工程で用いる水と混和しない有機溶媒と（ｂ）工程で用いる水と混和しない有機溶媒とは、互いに同一でもよく、異なってもよい。
【０００８】
（ａ）工程：
水と混和しない有機溶媒と塩基と水の存在下に、ジ−ｔ−ブチルジカーボネートと該ジ−ｔ−ブチルジカーボネートとアミノ酸に対して当量以上のアミノ酸を反応させてＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸の塩を含む反応混合物を得る工程
【０００９】
（ｂ）工程：
（ａ）工程で得た反応混合物に酸を加えてフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を生成させ、該フリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を水と混和しない有機溶媒で抽出する工程
【００１０】
（ｃ）工程：
（ｂ）工程で得たフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸と水と混和しない有機溶媒とを含む有機相と、上記酸と塩基との中和反応により生成した塩を含む水相とを、分離する工程
【００１１】
また、本発明は、
（ロ）次の（ａ'）工程、（ｄ）工程、（ｅ）工程及び（ｆ）工程を含むことを特徴とするＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸含有溶液の製造法を提供するものである。
但し（ａ'）工程及び（ｄ）工程における水と混和しない有機溶媒と（ｅ）工程で用いる水と混和しない有機溶媒とは、互いに同一でもよく、異なってもよい。
【００１２】
（ａ'）工程：
水と混和しない有機溶媒と塩基と水の存在下に、アミノ酸と該アミノ酸に対して当量以上のジ−ｔ−ブチルジカーボネートを反応させてＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸の塩を含む反応混合物を得る工程
【００１３】
（ｄ）工程：
（ａ'）工程で得た反応混合物から、水と混和しない有機溶媒及び未反応のジ−ｔ−ブチルジカーボネートを含む有機相を抜き出す工程
（ｅ）工程：
（ｄ）工程で有機相を抜き出して得た水相に、水と混和しない有機溶媒及び酸を加えてフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を生成させ、該フリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を上記の水と混和しない有機溶媒で抽出して、フリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸と水と混和しない有機溶媒とを含む有機相、及び、上記酸と塩基との中和反応により生成した塩を含む水相を得る工程
【００１４】
（ｆ）工程：
（ｅ）工程で得たフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸と水と混和しない有機溶媒とを含む有機相と、上記酸と塩基との中和反応により生成した塩を含む水相とを分離する工程
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を効率良く製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の（イ）及び（ロ）において、（ａ）工程及び（ａ'）工程で用いる水と混和しない有機溶媒としては、例えばトルエン、キシレンやエチルベンゼン等の芳香族炭化水素類、クロロベンゼンやｏ−ジクロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、メチル−ｔ−ブチルエーテル、エチル−ｔ−ブチルエーテルやジ−ｔ−ブチルエーテル等の炭素数５〜８の脂肪族エーテル類等が挙げられる。
本発明の（イ）及び（ロ）において、（ａ）工程で用いる水と混和しない有機溶媒としては、上記炭素数５〜８の脂肪族エーテル類が好ましい。
【００１７】
本発明の（イ）及び（ロ）において、（ａ）工程及び（ａ'）工程で用いる塩基としては、例えば以下のものが挙げられる。
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウムや炭酸水素カリウム等の無機塩基、又は、トリエチルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルピロリジン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジンやＮ−メチルモルホリン等の有機塩基。
【００１８】
これらの塩基の使用量は、アミノ酸に対して０．１〜２当量の範囲であることが好ましく、０．５〜１．５当量の範囲であることが特に好ましい。
【００１９】
本発明の（イ）及び（ロ）において、（ａ）工程及び（ａ'）工程で用いるアミノ酸としては、一つ以上のアミノ基又はイミノ基と一つ以上のカルボキシル基とを分子内に有する化合物であればよい。
このような化合物としては、例えば、以下のものが挙げられる。
グリシン、アラニン、β−アラニン、バリン、ノルバリン、ロイシン、ノルロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、ジヨードチロシン、トレオニン、セリン、ホモセリン、イソセリン、アゼチジン−２−カルボン酸、プロリン、ヒドロキシプロリン、ピペリジン−２−カルボン、トリプトファン、チロキシン、メチオニン、ホモメチオニン、シスチン、ホモシスチン、α−アミノ酪酸、β−アミノ酪酸、γ−アミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、アスパラギン酸、アスパラギン酸−β−シクロへキシルエステル、アスパラギン酸−β−メチルエステル、アスパラギン酸−β−イソプロピルエステル、アスパラギン酸−β−ベンジルエステル、グルタミン酸、グルタミン酸−γ−シクロへキシルエステル、グルタミン酸−γ−メチルエステル、グルタミン酸−γ−イソプロピルエステル、グルタミン酸−γ−ベンジルエステル、リジン、ヒドロキシリジン、オルニチン、アルギニン、ヒスチジン、アンチカプシン、Ｎ５−イミノメチルオルニチン、α−アミノ−β−（２−イミダゾリジル）プロピオン酸、タウリン、γ−ホルミル−Ｎ−メチルノルバリン、Ｎｇ−トシルアルギニン、Ｎｇ−ベンジルオキシカルボニルアルギニン、Ｓ−アセトアミドメチルシスティン、Ｓ−ベンジルシスティン、Ｎｉｍ−ベンジルオキシカルボニルヒスチジン、Ｎ６−ベンジルオキシカルボニルリジン、Ｎ５−ベンジルオキシカルボニルオルニチン、Ｏ−ベンジルセリン、Ｏ−ベンジルトレオニン、Ｎｉｎ−ホルミルトリプトファン、２−（２−アミノ−４−チアゾリル）−２−メトキシイミノ酢酸、２−（２−アミノ−４−チアゾリル）−２−ヒドロキシイミノ酢酸、２−（２−アミノ−４−チアゾリル）−２−グリオキシ酢酸、２−（２−アミノ−４−チアゾリル）−２−ペンテン酸、フェニルグリシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン酸等。これらのアミノ酸の中でも、ペプチドや抗生物質用中間体化合物の製造原料として、アラニンやフェニルグリシンが好ましい。
上述したアミノ酸のアミノ基の水素原子はメチル基等のアルキル基で置換されていてもよい。また、前述したアミノ酸は光学活性体であってもよく、ラセミ体であってもよい。
【００２０】
本発明の（イ）及び（ロ）において、（ａ）工程及び（ａ'）工程で用いるジ−ｔ−ブチルジカーボネートの使用量は、経済性の観点からは、保護したいアミノ基又はイミノ基に対して、通常０．５〜２当量、好ましくは０．７〜１．５当量の範囲である。
本発明の（イ）及び（ロ）において、（ａ）工程及び（ａ'）工程で用いる上記のアミノ酸、塩基及びジ−ｔ−ブチルジカーボネートの仕込み順序は任意であるが、急激な発熱や発砲を防ぐ観点からは、水に溶解又は懸濁させたアミノ酸と上記の水と混和しない有機溶媒に溶解させたジ−ｔ−ブチルジカーボネートとの混合物中に上記の塩基又はその水溶液等を添加する方法が好ましく、前記混合物中に上記の塩基又はその水溶液等を滴下する方法がより好ましい。
本発明の（イ）及び（ロ）において、（ａ）工程及び（ａ'）工程における反応温度は、通常は−２０〜８０℃の範囲、好ましくは０〜６０℃の範囲である。
反応時における水の使用量は、通常はアミノ酸の１００重量部に対して５０〜２０００重量部の範囲であり、好ましくはアミノ酸の１００重量部に対して１００〜１０００重量部の範囲である。
また、前記の水と混和しない有機溶媒の使用量は、通常はアミノ酸の１００重量部に対して１０〜２０００重量部の範囲であり、好ましくはアミノ酸の１００重量部に対して２０〜３００重量部の範囲である。
本発明の（イ）及び（ロ）において、（ａ）工程及び（ａ'）工程で得た反応混合物は、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸の塩を含む水相と、前記の水と混和しない有機溶媒を含む有機相とからなる。
また、本発明の（イ）においては、水と混和しない有機溶媒を含む有機相には、通常、未反応のジ−ｔ−ブチルジカーボネートが含まれない。
一方、本発明の（ロ）においては、水と混和しない有機溶媒を含む有機相には、通常、未反応のジ−ｔ−ブチルジカーボネートが含まれる。
【００２１】
本発明の（イ）において、（ａ）工程で得た反応混合物は、（ｂ）工程において、酸を加えることによってフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸とすることできる。この生成したフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸は水と混和しない有機溶媒で有機相に抽出される。
本発明の（イ）においては、上述のとおり、水と混和しない有機溶媒を含む有機相に未反応のジ−ｔ−ブチルジカーボネートが含まれないので、（ａ）工程における水と混和しない有機溶媒として脂肪族エーテル類を用いた場合は、この脂肪族エーテル類が（ｂ）工程における抽出溶媒を兼ねることができ、生産効率の観点から有利である。
【００２２】
本発明の（ロ）においては、（ａ’）工程におけるアミノ酸に対するジ−ｔ−ブチルジカーボネートの使用量が過剰であるので、有機相中に未反応のジ−ｔ−ブチルジカーボネートが残存する。この有機相中に残存する未反応のジ−ｔ−ブチルジカーボネートは、（ｄ）工程において攪拌を停めて静置後、有機相を抜き出すことにより水相と分離することができる。
本発明の（ロ）における（ｅ）工程では、（ｄ）工程において有機相を抜き出して得た水相に水と混和しない有機溶媒及び酸を加えてフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を生成させ、該フリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を上記の水と混和しない有機溶媒で抽出して、フリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸と水と混和しない有機溶媒とを含む有機相、及び上記の酸と塩基との中和反応により生成した塩を含む水相が得られる。
【００２３】
（ａ'）工程におけるアミノ酸に対するジ−ｔ−ブチルジカーボネートの使用量が過剰である本発明の（ロ）においては、（ｄ）工程において、水と混和しない有機溶媒と未反応のジ−ｔ−ブチルジカーボネートからなる有機相を（ａ'）工程で得た反応混合物から抜き出す。
本発明（ロ）の（ｆ）工程では、（ｄ）工程で得たフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸と水と混和しない有機溶媒とを含む有機相が、酸と塩基の中和反応により生成した塩を含む水相と分離される。
【００２４】
本発明の（ロ）において、（ａ'）工程における水と混和しない有機溶媒として芳香族炭化水素類又はハロゲン化芳香族炭化水素類を用いて反応させた場合は、得られた反応混合物を静置した状態で反応容器から有機相のみを抜き出して未反応のジ−ｔ−ブチルジカーボネートを除去するので、（ｅ）工程における抽出溶媒を、上記の芳香族炭化水素類やハロゲン化芳香族炭化水素類とは異なる水と混和しない有機溶媒に換えることが可能である。
上記の置き換え可能な有機溶媒としては、例えば、炭素数５〜８の脂肪族エーテル類が挙げられる。そして、上記の（ｅ）工程における抽出溶媒の置き換えにより、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸に対する抽出効率を向上させてもよい。
【００２５】
本発明の（ロ）における（ａ'）工程において、水と混和しない有機溶媒として、脂肪族エーテル類を用いた場合及び脂肪族エーテル類以外の溶媒を用いた場合のいずれであっても、（ｅ）工程において酸を加えることにより生成したフリーのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を水と混和しない有機溶媒で抽出後、次の（ｆ）工程において有機相を水相と分液することによって、前記の塩基及び酸の中和反応により生成した塩を容易に除去することができる。
脂肪族エーテル類としては、メチル−ｔ−ブチルエーテルが特に好ましい。
【００２６】
本発明（イ）の（ｂ）工程及び本発明（ロ）の（ｄ）工程で用いられる酸としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸や燐酸等の無機酸、酢酸、蟻酸やシュウ酸等の有機酸、硫酸水素カリウム、燐酸水素カリウムや燐酸水素ナトリウム等のアルカリ金属塩等が挙げられる。
これらの酸の添加量は、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸のｐＫａ値により異なるが、通常は水相のｐＨが１〜４の範囲になるように選ばれる。
本発明の上記（ｂ）工程及び（ｄ）工程における抽出温度は、ｔ−ブチルオキシカルボニル基の脱離を抑制する観点から８０℃以下であることが好ましく、より好ましくは−２０〜５０℃の範囲である。
【００２７】
本発明の（イ）の（ｂ）工程又は本発明（ロ）の（ｄ）工程において、塩基及び酸の中和反応により生成した塩を本発明（イ）の（ｃ）工程又は本発明（ロ）の（ｆ）工程で除去した後の有機相は、これを濃縮してＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸の結晶を得てもよく、必要に応じて上記の水と混和しない有機溶媒を蒸留により一部濃縮して得た有機相を冷却することにより晶析してＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸の結晶を得てもよい。
また、本発明の（イ）又は（ロ）において、塩基及び酸の中和反応により生成した塩を除去した後のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ酸を含む有機相は、そのままでペプチドや抗生物質へ誘導する反応に供してもよいし、上記有機相を乾燥処理又は共沸脱水処理して脱水した後でペプチドや抗生物質へ誘導する反応に供してもよい。
【実施例】
【００２８】
次に実施例等により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によって、何ら限定されるものではない。
【００２９】
実施例１
アラニン(0.58mol)を水97gに懸濁させ、メチル−ｔ−ブチルエーテル26.5gに溶解したジ−ｔ−ブチルジカーボネート(0.49mol)の溶液を添加した。この混合液を４０℃に昇温後、同温度で２８％水酸化ナトリウム水溶液（水酸化ナトリウムとして0.64mol）を４時間かけて滴下した。滴下終了後、４０℃で４時間保温した［以上、本発明の（ａ）工程に相当する］。
保温終了後、反応液にメチル−ｔ−ブチルエーテル280gを加え、25℃まで冷却した。次に35％塩酸（塩化水素として0.74mol）を滴下し、滴下後の水相のｐＨを測定したところ1.6であった［以上、本発明の（ｂ）工程に相当する］。
次いで、水相を分液により除去した。有機相を20％食塩水で２回洗浄した［以上、本発明の（ｃ）工程に相当する］。
洗浄後の有機相402.9g中には、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアラニンが86.4g含まれていた。Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアラニンのジ−ｔ−ブチルジカーボネートに対する収率は、94.2％であった。
【００３０】
実施例２
水280g中に、フェニルグリシン(0.13mol)及び水97.5gの混合物と、メチル−ｔ−ブチルエーテル34.1gに溶解したジ−ｔ−ブチルジカーボネート(0.32mol)の溶液を添加した。
この混合液を３０℃に昇温後、３０〜４０℃の内温で２８％水酸化ナトリウム水溶液（水酸化ナトリウムとして0.26mol）を1.2時間かけて滴下した。滴下終了後、冷却することにより内温を２０℃まで低下させた後、フェニルグリシン(0.13mol)を添加し、その後３０℃に昇温して２８％水酸化ナトリウム水溶液（水酸化ナトリウムとして0.40mol）を３０〜４０℃の内温で1.8時間かけて滴下した。その後、３５℃で３時間保温した［以上、本発明の（ａ'）工程に相当する］。
保温終了後、反応液を25℃まで冷却し、メチル−ｔ−ブチルエーテルの120gを加えて攪拌した。攪拌を止め、分液により有機相を除去した［以上、本発明の（ｄ）工程に相当する］。水相にメチル−ｔ−ブチルエーテル280gを加え、次に35％塩酸（塩化水素として0.79mol）を滴下し、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルフェニルグリシンを抽出した［以上、本発明の（ｅ）工程に相当する］。なお、35％塩酸滴下後の水相のｐＨは2.5であった。
次いで、水相を分液により除去した。有機相を20％食塩水で２回洗浄した［以上、本発明の（ｆ）工程に相当する］。
洗浄後の有機相347.3g中には、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルフェニルグリシンが60.1g含まれていた。Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルフェニルグリシンのフェニルグリシンに対する収率は、90.4％であった。