(57)【要約】【課題】イナゴマメやイナゴマメの抽出残渣を利用して得られ、生理活性を有するイナゴマメ抽出物提供すること。【解決手段】粗抽出工程と、吸着工程と、抽出工程とを行って得られることを特徴とするイナゴマメ抽出物である。上記粗抽出工程においては、イナゴマメの粉砕物又はイナゴマメの抽出残渣を極性溶媒で抽出して粗抽出液を得る。上記吸着工程においては、上記粗抽出液を、疎水性吸着樹脂を充填したカラムに通し、上記粗抽出液中に含まれるイナゴマメの粗抽出物を吸着させる。上記抽出工程においては、上記カラムに親水性有機溶媒を通してイナゴマメ抽出物を溶出する。【選択図】図６
2005119999.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イナゴマメの粉砕物又はイナゴマメの抽出残渣を極性溶媒で抽出して粗抽出液を得る抽出工程と、
上記粗抽出液を、疎水性吸着樹脂を充填したカラムに通し、上記粗抽出液中に含まれるイナゴマメの粗抽出物を吸着させる吸着工程と、
上記カラムに親水性有機溶媒を通してイナゴマメ抽出物を溶出する溶出工程とを行って得られることを特徴とするイナゴマメ抽出物。
【請求項２】
請求項１において、上記吸着工程と溶出工程との間に、上記カラムに水を通して洗浄する洗浄工程を行って得られることを特徴とするイナゴマメ抽出物。
【請求項３】
請求項１又は２において、上記溶出工程後に、クロマトグラフィーにより分画する分画工程を行って得られることを特徴とするイナゴマメ抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，イナゴマメから抽出されるイナゴマメ抽出物に関する。
【背景技術】
【０００２】
イナゴマメは、主に中近東から地中海が原産の食用のマメ科の植物であり、ローカストビーンとも呼ばれている。イナゴマメの木（カロブ樹）は、成長するとおよそ８〜１５ｍもの高さになり、年間でおよそ数百ｋｇの種子がとれる。この種子がイナゴマメである。
このイナゴマメは、産業的には、主としてチーズ等の増粘剤（ローカストビーンガム）として用いられている（非特許文献１参照）。
【０００３】
また、近年、イナゴマメは、ピニトールの原料としても注目されている。
ピニトールは、イナゴマメ等から抽出される機能性素材であり、筋肉中の細胞がブドウ糖を吸収してエネルギーに転換する際に、その作用を補助する役割をはたすことができる（非特許文献２参照）。そのため、ピニトールは、ブドウ糖代謝を増進するスポーツ栄養剤として利用することができる。また、血中のブドウ糖値（血糖値）を抑制することができるため、栄養補助剤等としても利用することができる。さらに、細胞内の水分を安定に保つ保水効果を有することも確認されており、化粧品等の保湿剤としても利用することができる。
【０００４】
このように、イナゴマメは、食品添加物、健康食品、化粧品等に利用することができる。しかしながら、イナゴマメの生理活性作用についての研究はまだ充分ではなく、健康食品、医薬品、化粧品等の多方面の用途に向けた開発が進められている。
また、上記のごとく、イナゴマメは、その大部分がチーズ等のローカストビーンガムとして用いられている。イナゴマメからローカストビーンガムを製造する際には、通常イナゴマメを水等で抽出し、濃縮沈殿させてその沈殿物を用いる。このときに生じる上清は、使い道がなく、イナゴマメの抽出残渣として大量に処分されていた。
【０００５】
【非特許文献１】林  良純、ローカストビーンガム、「別冊フードケミカル−８」、日本、株式会社食品化学新聞社、ｐ６７−７２
【非特許文献２】草山泰和等、「フードスタイル２１」（“Ｆｏｏｄ  Ｓｔｙｌｅ  ２１”）、Ｖｏｌ７、Ｎｏ．６、２００３年６月発行、Ｐ１１６−１２０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、かかる従来の問題点に鑑みてなされたものであって、イナゴマメやイナゴマメの抽出残渣を利用して得られ、生理活性を有するイナゴマメ抽出物を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
イナゴマメの粉砕物又はイナゴマメの抽出残渣を極性溶媒で抽出して粗抽出液を得る抽出工程と、
上記粗抽出液を、疎水性吸着樹脂を充填したカラムに通し、上記粗抽出液中に含まれるイナゴマメの粗抽出物を吸着させる吸着工程と、
上記カラムに親水性有機溶媒を通してイナゴマメ抽出物を溶出する溶出工程とを行って得られることを特徴とするイナゴマメ抽出物にある（請求項１）。
【０００８】
本発明のイナゴマメ抽出物は、上記抽出工程、上記吸着工程、及び上記溶出工程を行うことによって得られるものである。このようにして得られた上記イナゴマメ抽出物は、α−グルコシダーゼに対する阻害活性を有しており、α−グルコシダーゼ阻害剤として用いることができる。
【０００９】
α−グルコシダーゼは、糖質を分解する酵素であり、ヒトの小腸等で食物に含まれる糖質をブドウ糖等に分解しその吸収を助ける働きを有する。
上記イナゴマメ抽出物は、上記のα−グルコシダーゼに対する阻害活性を有し、α−グルコシダーゼ阻害剤としてのはたらきを有する。即ち、上記イナゴマメ抽出物は、α−グルコシダーゼの活性を抑えて、小腸から血液中へのブドウ糖の吸収を抑制することができる。さらに、上記のごとく、ブドウ糖の吸収を抑制できるため、食物摂取後の血中のインシュリン分泌量を抑制することができ、ブドウ糖が脂肪細胞へ運ばれ難くくすることができる。
このように、上記イナゴマメ抽出物は、そのα−グルコシダーゼに対する阻害活性を利用して、ダイエット食品、食品添加剤、及び医薬品等に利用することができる。
【００１０】
また、上記抽出工程においては、天然のイナゴマメを粉砕したものを上記粉砕物として用いることもできるが、例えばイナゴマメをローカストビーンガム等の原料として用いたときに生じるイナゴマメの抽出残渣を用いることもできる。この場合には、従来その使用方法がほとんどなかったイナゴマメの抽出残渣を有効に利用することができると共に、上記イナゴマメ抽出物の製造コストを低減することができる。
【００１１】
以上のごとく、本発明によれば、イナゴマメやイナゴマメの抽出残渣を利用して得られ、生理活性を有するイナゴマメ抽出物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明において、上記イナゴマメ抽出物は、上記抽出工程、上記吸着工程、及び上記溶出工程を行うことにより得ることができる。
上記抽出工程においては、イナゴマメの粉砕物又はイナゴマメの抽出残渣を極性溶媒で抽出して粗抽出液を得る。
ここで、イナゴマメの破砕物は，イナゴマメを細片状に切り刻むこと，クラッシュすること，粉砕することなどにより得ることができるものであり、これらの処理は、イナゴマメから抽出物を抽出しやすくするためのものである。
【００１３】
また、イナゴマメの抽出残渣としては、例えばイナゴマメからローカストビーンガムを製造する際に生じる抽出残渣を用いることができる。
ローカストビーンガムの製造においては、まず、イナゴマメから水等によりイナゴマメの抽出液を得た後、ローカストビーンガムに用いる成分を濃縮沈殿させる。このとき、上清は抽出残渣として廃棄されるが、本発明においては、この抽出残渣を例えば濃縮し乾燥させたものを、上記抽出工程におけるイナゴマメの抽出残渣として用いることができる。
【００１４】
また、上記極性溶媒としては、例えば水、メタノール、エタノール、アセトン、及びアセトニトリル等から選ばれる１種、又はこれらを混合した混合溶媒を用いることができる。
上記抽出工程においては、イナゴマメの粉砕物又はイナゴマメの抽出残渣を上記極性溶媒に浸漬し、その後、例えばろ過等を行うにより上記粗抽出液を得ることができる。
【００１５】
次に、上記吸着工程においては、上記粗抽出液を、疎水性吸着樹脂を充填したカラムに通し、粗抽出液中に含まれるイナゴマメの粗抽出物を吸着させる。
上記疎水性吸着樹脂は、非極性であり、多数の細孔を有する表面積の大きなポリマーである。そして、その微粒子表面は疎水性である。このような疎水性吸着樹脂としては、例えばＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）、ＨＰ−４０（三菱化学株式会社製）、アンバーライトＸＡＤ１１８０（Ｒｏｈｍ  ａｎｄ  Ｈａｓ社製）等を用いることができる。
【００１６】
次に、上記溶出工程においては、上記カラムに親水性有機溶媒を通してイナゴマメ抽出物を溶出する。
ここで、上記親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、アセトン、アセトニトリル、及びこれらの有機溶媒と水との混合溶媒等を用いることができる。
【００１７】
また、上記吸着工程と溶出工程との間に、上記カラムに水を通して洗浄する洗浄工程を行うことが好ましい（請求項２）。
この場合には、上記吸着工程において、上記疎水性吸着樹脂に吸着した粗抽出物のうち、所望のα−グルコシダーゼ阻害活性を有する上記イナゴマメ抽出物以外の成分を予め溶出除去することができる。また、上記粗抽出物のうち上記疎水性吸着樹脂に吸着しない成分を溶出により除去することができる。
そのため、上記溶出工程後に得られる上記イナゴマメ抽出物のα−グルコシダーゼに対する阻害活性を向上させることができる。
【００１８】
具体的には、上記洗浄工程を行うことにより、上記疎水性吸着樹脂に吸着した上記粗抽出物のうち比較的分子量の大きな成分が溶出され、α−グルコシダーゼの阻害活性を有する成分である、比較的に分子量の小さな成分が残る。次いで、上記溶出工程を行うことにより、α−グルコシダーゼに対する阻害活性を有する成分を多く含んだ上記イナゴマメ抽出物を溶出することができる。
【００１９】
また、上記洗浄工程においては、上記疎水性吸着樹脂の体積の１．５倍〜３倍量の水を用いて洗浄を行うことが好ましい。
洗浄に用いる水の量が疎水性吸着樹脂の体積の１．５倍量未満の場合には、洗浄が不充分となり、上記洗浄工程によるα−グルコシダーゼ阻害活性の向上効果を充分に得ることができないおそれがある。一方、３倍量を越える場合には、α−グルコシダーゼ阻害活性を有する成分の一部が洗浄工程において溶出され、上記溶出工程後に得られる上記イナゴマメ抽出物のα−グルコシダーゼ阻害活性が低下するおそれがある。
【００２０】
また、上記溶出工程後に、クロマトグラフィーにより分画する分画工程を行うことが好ましい（請求項３）。
この場合には、上記イナゴマメ抽出物を例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等のクロマトグラフィーにより分画し、α−グルコシダーゼに対する阻害活性の高い分画を採取することができる。そのため、この場合には、上記イナゴマメ抽出物のα−グルコシダーゼに対する阻害活性を高めることができる。
【００２１】
また、上記イナゴマメ抽出物は、上記溶出工程後又は上記分画工程後に、濃縮し、乾固することができる。この場合には、上記イナゴマメ抽出物の活性を安定化させることができる。
【実施例】
【００２２】
（実施例１）
次に、本発明の実施例につき説明する。
本例においては、上記抽出工程、上記吸着工程、及び上記溶出工程を行って、上記イナゴマメ抽出物を作製する。
即ち、上記抽出工程においては、イナゴマメの粉砕物を極性溶媒で抽出して粗抽出液を得る
。また、上記吸着工程においては、上記粗抽出液を、疎水性吸着樹脂を充填したカラムに通し、上記粗抽出液中に含まれるイナゴマメの粗抽出物を吸着させる。また、上記溶出工程においては、上記カラムに親水性有機溶媒を通してイナゴマメ抽出物を溶出する。
また、本例においては、上記吸着工程と上記溶出工程との間に、上記カラムに水を通して洗浄する洗浄工程を行う。
【００２３】
具体的には、まず、イナゴマメを粉砕して粉砕物を準備した。続いて、この粉砕物を水に浸漬し、その後ろ過してイナゴマメの粗抽出液を得た。
次いで、この粗抽出液を、疎水性吸着樹脂（三菱化学株式会社製のＨＰ−２０）５０ｍｌを充填したカラム（口径２ｃｍ、長さ１６ｃｍ）に、ＳＶ
２ｈ-1で流通させた。なお、ＳＶは、Ｓｐａｃｅ
Ｖｅｌｏｃｉｔｙ（空間速度）の略であり、１時間当たりの流通量を疎水性吸着樹脂の量に対する比にて表したものである。例えば１時間当たりに疎水性吸着樹脂量の１０倍量を通過させた場合には、その空間速度はＳＶ
１０ｈ-1として表される。
続いて、カラム内の疎水性吸着樹脂に水１００ｍｌを通して洗浄した。
【００２４】
次に、親水性有機溶媒として、アセトンと水との混合溶媒を準備した。この混合溶媒は、アセトンと水とをその体積比がそれぞれ９０：１０になるように混合して作製した。
続いて、この親水性有機溶媒をカラム内の疎水性吸着樹脂に、ＳＶ ２ｈ-1で通し、疎水性吸着樹脂に吸着したイナゴマメ抽出物を溶出させた。次いで、この溶出液中の親水性有機溶媒を減圧下に蒸発除去して乾固し、イナゴマメ抽出物を得た。これを試料Ｅとする。
【００２５】
次に、上記のようにして得られた試料Ｅについて、そのα−グルコシダーゼに対する阻害活性を調べた。
「α−グルコシダーゼ阻害活性」
まず、酵素としてα−グルコシダーゼ（酵母製、和光純薬工業株式会社製）を準備し、その１００Ｕを０．０５Ｍの酢酸緩衝液（ｐＨ＝５．５）に溶解して全量を５０ｍｌにし、酵素液を作製した。
また、基質としてｐ−ニトロフェニル−α−グルコピラノシドを準備し、その３８ｍｇを０．０５Ｍの酢酸緩衝液（ｐＨ＝５．５）に溶解して全量を１００ｍｌにし、濃度１．２ｍＭの基質溶液を作製した。
さらに、上記にて作製した試料Ｅを０．０５Ｍの酢酸緩衝液（ｐＨ＝５．５）に溶解して、濃度１ｍｇ／ｍｌの試料溶液を作製した。
【００２６】
次に、酵素反応を下記のようにして行い、試料Ｅのα−グルコシダーゼに対する阻害活性度を測定した。
（第１段階）酵素液１ｍｌに試料溶液１ｍｌを加え、温度３５℃で１０分間加温した。
（第２段階）第１段階後の溶液に２ｍｌの基質溶液を加え、温度３５℃で１５分間加温した。
（第３段階）α−グルコシダーゼの作用による反応生成物であるニトロフェノールの量を、４０５ｎｍの吸光度の測定により算出した。
【００２７】
また、試料Ｅの比較用として、上記第１段階で試料溶液の代わりに０．０５Ｍの酢酸緩衝液（ｐＨ＝５．５）を加えて他は上記と同様にして酵素反応を行い、ニトロフェノールの量を算出した。
試料Ｅのグルコシダーゼ阻害活性度（％）の算出にあたっては、試料Ｅを添加したときのニトロフェノールの量と試料Ｅを添加しないときのニトロフェノールの量とを比較することにより行った。
その結果、試料Ｅは、１ｍｇ／ｍｌの濃度で、α−グルコシダーゼに対する阻害活性を１００％有していることが確認された。
また、上記と同様にして、試料Ｅの濃度を変えたときのα−グルコシダーゼに対する阻害活性の変化を調べた。その結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
2005119999.tif 000003
【００２９】
表１より知られるごとく、試料Ｅは、α−グルコシダーゼの活性を濃度依存的に阻害することが確認された。
【００３０】
次に、本例にて得られた上記試料Ｅについて、他の生理活性を調べるために、α−アミラーゼ及びリパーゼに対する阻害活性を測定した。
「アミラーゼ阻害活性」
試料Ｅのアミラーゼ阻害活性の測定は、アミラーゼテストワコー測定キット（和光純薬工業株式会社製）を用いて行った。この測定キットにおいては、ヨードでんぷん反応を利用して、アミラーゼに対する阻害活性を測定できる。
【００３１】
具体的には、まず、豚の膵臓由来のα−アミラーゼ（シグマアルドリッチジャパン株式会社製）を０．２５モルの燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、濃度を１ｍｇ／ｍｌに調整して酵素溶液を作製した。
また、上記試料Ｅを０．２５モルの燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、濃度を１ｍｇ／ｍｌに調整して試料溶液を作製した。
【００３２】
次いで、上記酵素溶液０．０１ｍｌを上記試料溶液０．５ｍｌに加えて、温度３７℃で１０分間インキュベートした。その後、基質緩衝溶液（可溶性でんぷん４０ｍｇ／ｄｌ、０．２５モル燐酸緩衝液ｐＨ７．０）を加えて、温度３７℃でさらに７．５分間インキュベートした。次いで、上記のアミラーゼテストワコー測定キットに付属の発色試薬１ｍｌと蒸留水５ｍｌとを加えて、６６０ｎｍの吸光度を分光光度計にて測定した。その値をＡSとした。
【００３３】
また、ネガティブコントロールとして、上記酵素溶液０．０１ｍｌと上記試料溶液０．５ｍｌとの代わりに０．２５モルの燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．５１ｍｌを用いて、上記と同様の操作を行った。このときの吸光度をＡNとした。
また、ポジティブコントロールとして、上記酵素溶液０．０１ｍｌと上記試料溶液０．５ｍｌとの代わりに、上記酵素溶液０．０１ｍｌと０．２５モルの燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．５ｍｌとを用いて、上記と同様の操作を行った。このときの吸光度をＡPとした。
【００３４】
その後、下記の式（１）を用いて、試料Ｅのα−アミラーゼに対する阻害活性ＩｈA（％）を算出した。
ＩｈA（％）＝（ＡN−ＡS）×１００／（ＡN−ＡP）・・・（１）
【００３５】
また、上記試料Ｅについて、そのα−アミラーゼに対する阻害活性の濃度依存性を調べた。具体的には、上記試料Ｅの濃度を変え、各濃度におけるα−アミラーゼに対する阻害活性を上記と同様にアミラーゼテストワコー測定キットを用いて算出した。
その結果を下記の表２に示す。
【００３６】
「リパーゼ阻害活性」
日本農芸化学会誌、第６７巻、Ｎｏ．１１に記載されている脂質の消化阻害力の測定方法に従って測定した。
即ち、まず、豚の膵臓由来のリパーゼＴｙｐｅ−II（シグマアルドリッチジャパン株式会社製）を０．１モルの燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）にて、濃度１６８Ｕ／ｍｌに調整して酵素溶液を作製した。
また、上記試料Ｅを０．２５モルの燐酸緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解し、濃度を１％に調整して試料溶液を作製した。
また、トリオレイン（和光純薬工業株式会社製）をエーテルとエタノールとの混合溶媒（エーテルとエタノールとの混合比は１：１）に溶解し、１０ｍｇ／ｍｌの濃度に調整して基質溶液を作製した。
【００３７】
次いで、上記酵素溶液１ｍｌと上記試料溶液１ｍｌとを混合し、この混合溶液を３７℃で１０分間プレインキュベートした。その後、この混合溶液に上記基質溶液を加えて３７℃でさらに６０分間インキュベートした。その後、煮沸により反応を停止し、１０ｍｌのエーテルとエタノールとの混合溶媒（エーテルとエタノールとの混合比は１：１）を加えて反応基質を抽出し、反応物を１／１００ＮのＫＯＨでｐＨが９．０になるまで滴定した。このときの滴定量をＶSとした。
【００３８】
また、ネガティブコントロールとして、上記酵素溶液１ｍｌと上記試料溶液１ｍｌとの混合溶液の代わりに０．１モルの燐酸緩衝液（ｐＨ８．０）２ｍｌを用いて、上記と同様の操作を行った。このときの滴定量をＶNとした。
また、ポジティブコントロールとして、上記酵素溶液１ｍｌと上記試料溶液１ｍｌとの混合溶液の代わりに、上記酵素溶液１ｍｌと０．１モルの燐酸緩衝液（ｐＨ８．０）１ｍｌとの混合溶液を用いて、上記と同様の操作を行った。このときの滴定量をＶPとした。
【００３９】
次いで、ＶSの値をＶNの値で調整してこれをＶS’とし、また、ＶPの値をＶNの値で調整してこれをＶP’とし、以下の式（２）を用いて、試料Ｅのリーパーゼに対する阻害活性ＩｈL（％）を算出した。
ＩｈL（％）＝（ＶP’−ＶS’）×１００／ＶP’・・・（２）
【００４０】
また、上記試料Ｅについて、そのリパーゼに対する阻害活性の濃度依存性を調べた。具体的には、上記試料Ｅの濃度を変え、上記と同様の方法によりリパーゼ阻害活性（％）を算出した。
その結果を下記の表３に示す。
【００４１】
【表２】
2005119999.tif 000004
【００４２】
【表３】
2005119999.tif 000005
【００４３】
表２及び表３より知られるごとく、本例の試料Ｅは、α−アミラーゼや、リパーゼに対しても阻害活性を有していることがわかる。また、試料Ｅは、α−アミラーゼやリパーゼの活性を濃度依存的に阻害することがわかる。
【００４４】
このように、本例においては、イナゴマメからイナゴマメ抽出物を作製し、該イナゴマメ抽出物がα−グルコシダーゼに対する優れた阻害活性を有していることを確認した。また、本例において得られるイナゴマメ抽出物は、α−グルコシダーゼのみならず、α−アミラーゼやリパーゼに対しても優れた阻害活性を有していた。
なお、本例においては、イナゴマメの粉砕物から上記イナゴマメ抽出物を作製したが、イナゴマメからローカストビーンガムを作製するときに生じる抽出残渣を用いても同様の結果が得られることを確認している。
【００４５】
（実施例２）
本例では、実施例１にて得られた上記試料Ｅについて、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分析及び分画を行い、活性部分の同定を試みた。
まず１００ｇの試料Ｅを１０ｍｌの水に溶解して試料溶液を作製した。ＨＰＬＣには、この試料溶液の１０μｌを用いた。
ＨＰＬＣによる分析条件は、カラムに２５０ｍｍ×４．６ｍｍＩ．Ｄ．のＤＡＩＳＯ−ＰＡＫ  ＳＰ−１２０−５−ＯＤＳ−ＡＰ用い、移動相には、１５％メタノール水溶液を用いた。流速は１ｍｌ／分、温度は３５℃とし、検出には２２０ｎｍのＵＶを用いた。その結果を図１に示す。
【００４６】
図１より知られるごとく、試料Ｅは、ＨＰＬＣ分析において複数のピークを示しており、複数の成分からなることがわかる。したがって、α−グルコシダーゼに対する阻害活性を有する成分を明らかにするために、ＨＰＬＣにより試料Ｅの分画を行った。
【００４７】
分画には、上記のようにして準備した試料溶液１ｍｌを用いた。
ＨＰＬＣによる分画条件は、カラムに５００ｍｍ×６ｍｍＩ．Ｄ．のＤＡＩＳＯ−ＰＡＫ  ＳＰ−１２０−４０／６０−ＯＤＳ−ＡＰを用い、移動相には、２０％メタノール水溶液を用いた。流速は１ｍｌ／分、温度は室温とし、検出には２２０ｎｍのＵＶを用いた。その結果を図２に示す。
【００４８】
図２より知られるごとく、ＨＰＬＣによる分画により試料Ｅは４つのフラクション（Ｆ１〜Ｆ４）に分画することができた。
次いで、各フラクション（Ｆ１〜Ｆ４）について、そのα−グルコシダーゼに対する阻害活性を実施例１と同様にして調べたところ、Ｆ１に阻害活性が確認された。
【００４９】
次に、Ｆ１のＨＰＬＣの分析を行った。
分析条件は、上記試料Ｅの分析と同様にして行った。その結果を図３に示す。
図３より知られるごとく、Ｆ１は、複数の成分からなっていることが確認された。
したがって、試料Ｅと同様に、ＨＰＬＣによりこのＦ１をさらに分画した。
【００５０】
分画の条件は、カラムに５００ｍｍ×６ｍｍＩ．Ｄ．のＤＡＩＳＯ−ＰＡＫ  ＳＰ−１２０−４０／６０−ＯＤＳ−ＡＰを用い、移動相には、０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液／メタノール＝９５／５を用いた。流速は１ｍｌ／分、温度は室温とし、検出には２２０ｎｍのＵＶを用いた。その結果を図４に示す。
図４に示すごとく、Ｆ１は、さらに二つの分画、即ちＦ１−１及びＦ１−２に分画することができた。
また、各フラクション（Ｆ１−１及びＦ１−２）について、そのα−グルコシダーゼに対する阻害活性を実施例１と同様に調べたところ、Ｆ１−１に阻害活性が確認された。
【００５１】
次に、α−グルコシダーゼに対する阻害活性が確認できたＦ１−１について、ＨＰＬＣにより分析を行った。
分析条件は、カラムに２５０ｍｍ×４．６ｍｍＩ．Ｄ．のＤＡＩＳＯ−ＰＡＫ  ＳＰ−１２０−５−ＯＤＳ−ＡＰを用い、移動相には０．０５％のトリフルオロ酢酸水溶液を用いた。流速は１ｍｌ／分、温度は３５℃とし、検出には２２０ｎｍのＵＶを用いた。その結果を図５に示す。
図５より知られるごとく、Ｆ１−１は、複数のピーク群を有しており、Ｆ１−１もまだ複数の成分からなっていることがわかった。
【００５２】
このように、本例においては、イナゴマメ抽出物におけるα−グルコシダーゼ阻害活性を有する成分を同定することはできなかったが、上記試料Ｅを分画して得られるＦ１及びＦ１−１が共に、α−グルコシダーゼに対する優れた阻害活性を有していることを確認できた。
【００５３】
（実施例３）
次に、実施例１にて作製した試料Ｅについて、そのα−グルコシダーゼ阻害活性を動物実験にて確認した。具体的には、試料Ｅをマウスに毎日経口投与し、非投与マウスとの体重増加の割合を比較した。
【００５４】
即ち、まず、マウスの粉末飼料に上記試料Ｅを５重量％加え、さらに等量の水を加えて混合した。これを３０ｇの団子状にして、５匹のｄｄｙ系マウス（雄；体重２０ｇ付近のもの）に毎日１２日間投与し、これを試験群とした。
また、比較用として、上記試料Ｅを添加していない粉末飼料を準備し、試験群と同量の飼料を、別の５匹のｄｄｙ系マウス（雄；体重２０ｇ付近のもの）に毎日１２日間投与し、これを対照群とした。
【００５５】
投与開始から毎日、試験群及び対照群の各マウスの体重を測定し、その平均を算出すると共に、投与開始時の体重に対する体重増加指数を調べた。
その結果を図６に示す。
【００５６】
図６より知られるごとく、対照群のマウスと試験群のマウスには、体重増加指数に有意差が現れた。即ち、対照群に比べて、イナゴマメ抽出物を含有する飼料を投与した試験群のマウスは、体重増加率が小さかった。
このことから、上記イナゴマメ抽出物は、体重増加を抑制するダイエット効果を有していることがわかる。
したがって、上記イナゴマメ抽出物は、ダイエット効果を有する健康食品、食品添加物、及び医薬品等として利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】実施例２にかかる、試料ＥのＨＰＬＣ分析の結果を示す説明図。
【図２】実施例２にかかる、試料ＥのＨＰＬによる分画の結果を示す説明図。
【図３】実施例２にかかる、Ｆ１のＨＰＬＣ分析の結果を示す説明図。
【図４】実施例２にかかる、Ｆ１のＨＰＬによる分画の結果を示す説明図。
【図５】実施例２にかかる、Ｆ１−１のＨＰＬＣ分析の結果を示す説明図。
【図６】実施例３にかかる、イナゴマメ抽出物のマウス経口投与時における体重増加指数と投与日数との関係を示す説明図。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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