(57)【要約】【課題】  抗バベシア剤、特に、副作用の少ない化学療法薬剤として用いることができ、しかも抗バベシア活性の高いバベシアの予防及び／又は治療剤を提供すること。【解決手段】  クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物を含有する抗バベシア剤からなる。本発明の有効成分は、副作用が殆どなく、ヒトや動物のバベシア感染症の予防及び／又は治療薬として用いることが可能である。また、本発明は、クルクマ  キサントリーザ、クルクマ  ゼドアリア、又はフィランサス  ニルリの植物からの抗バベシア活性を有する化合物の抽出、精製、分離方法を包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物を含有する抗バベシア剤。
【請求項２】
クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（１）
【化１】
2005314345.tif 000027
で示される化合物、（１２Ｒ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項３】
クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（２）
【化２】
2005314345.tif 000028
で示される化合物、（１２Ｓ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項４】
クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（３）
【化３】
2005314345.tif 000029
で示される化合物、（１Ｓ、４Ｓ、５Ｓ、８Ｒ、１０Ｓ）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１）−エン−１２、８−オリデであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項５】
クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（４）
【化４】
2005314345.tif 000030
で示される化合物、（１Ｒ*、４Ｓ*、５Ｒ*、１０Ｒ*）−１、４、１０−トリヒドロキシグアイ−７（１１），８−ジエン−１２、８−オリデであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項６】
クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（５）
【化５】
2005314345.tif 000031
で示される化合物、（１Ｓ*、４Ｓ*、５Ｓ*、８Ｓ*、１０Ｓ*）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１），−エン−１２、８−オリデであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項７】
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（６）
【化６】
2005314345.tif 000032
で示される化合物、β−グルコガリンであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項８】
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（７）
【化７】
2005314345.tif 000033
で示される化合物、クエルセチン  ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシドであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項９】
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（８）
【化８】
2005314345.tif 000034
で示される化合物、β−シトステロールであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項１０】
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（９）
【化９】
2005314345.tif 000035
で示される化合物、没食子酸であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項１１】
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（１０）
【化１０】
2005314345.tif 000036
で示される化合物、エリゴ酸グリコシドであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか記載の抗バベシア活性を有する化合物、及びそれらの化合物の薬理学的に許容される塩の１又は２以上を有効成分とする抗バベシア剤。
【請求項１３】
抗バベシア剤が、バベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１〜１２のいずれか記載の抗バベシア剤。
【請求項１４】
抗バベシア剤が、医薬用又は動物薬用予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１〜１３のいずれか記載の抗バベシア剤。
【請求項１５】
動物薬用予防及び／又は治療薬が、イヌのバベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１４記載の抗バベシア剤。
【請求項１６】
クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物を水又は水性溶媒で抽出し、該抽出液を精製、分離することを特徴とする請求項１〜１１のいずれか記載の化合物の抽出、分離方法。
【請求項１７】
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する、式（１０）
【化１１】
2005314345.tif 000037
で示されるエリゴ酸グリコシド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗バベシア剤、特に、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出することができる化合物を有効成分とするバベシアの予防及び／又は治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
バベシア・ギブソニ（Babesia gibsoni）は、野生及び飼育下のイヌに溶血性貧血を引き起こす赤血球寄生虫である（J. Am. Vet. Med. Assoc. 180, 507-511, 1982; J. Protozool. Res. 3, 111-125, 1993）。バベシア・ギブソニは、イヌの赤血球に寄生し、その中で増殖し、最後には破壊する。そして、その後、バベシア・ギブソニは、新しい赤血球に寄生する。したがって、イヌがバベシア・ギブソニに感染すると、貧血を誘導する。バベシア・ギブソニのイヌへの感染は、日本の、特に関西において、長く問題になっている。最近では、この感染の地理的分布が更に拡大している。更に、他の動物での感染の拡大やヒトへの感染も危惧されている。
【０００３】
従来、バベシア・ギブソニの感染の治療のために、ジミナゼン・アセチュレート(Diminazene aceturate)（ガナゼッグ：Ganazeg））、フェナミジン  イセチアネート(phenamidine  isethionate)（ロマディン：Lomadine）及びイセチオン酸ペンタミジン（pentamidine  isethionate）(ロミディン：Lomidine)が開発され、バベシア・ギブソニ感染に対して効能を示してきた（Treatment of Babesia gibsoni infection with Phenamidine isethionate. Vet.Rec．86,8-10,1970;J.Am.Vet.Med.Assoc.180,507-511, 1982）。
【０００４】
しかしながら日本においては、ジミナゼン・アセチュレートのみが、バベシア・ギブソニ感染の治療に用いられてきた。ジミナゼン・アセチュレートは、バベシア・ギブソニに対して有効であるが、衰弱、過敏症、麻痺、刺激への無反応、及び中枢神経系の致命的な出血（fatal central nervous system haemorrhage）といった副作用を誘導することがある（Greene C．E． ed.B.W.Saunders Philadelphia.796-803, 1990）。しかし、この薬剤の日本国内での販売は最近になって停止された。したがって、バベシア・ギブソニに感染したイヌの治療については、代わりとなる、副作用の少ない化学療法薬剤が用意できない状況にあり、その開発が急務となっている。
【０００５】
近年、抗バベシア作用を有するいくつかの化合物や物質が開示されている（特開平２００１−８１０３４号公報、特表平８−５０２６４６号公報、特表平１０−５０７４４６号公報、特表平１０−５１１３４５号公報、特表２０００−５１５８７７号公報、特表平２００１−５１７２２３号公報、特表２００３−５０３０３９号公報、特表２００３−５０５３５７号公報、及び特表２００３−５３４０１６号公報、）。しかし、これらのものもまだ開発途中のものであり、副作用の少ない化学療法薬剤で、しかもバベシアに有効な薬剤は開発されていない。
【０００６】
一方、  インドネシアでは、さまざまな病気の治療に、薬草が伝統的に用いられ、“Jamu”と呼ばれている。クルクマ  キサントリーザ（Curcuma xanthorrhiza）の薬草は、インドネシアにおける重要で、非常に有名な薬草の１つであり、この薬草の樹皮は、しばしばJamuの素材（Jamu-material）として、特にマラリアの治療に用いられている。マラリアは、マラリア原虫（Plasmodium）により、蚊（Anopheles gambiae）を媒介として誘導される。マラリア原虫は、ヒトの赤血球に寄生し、その中で増殖し、最後に破壊する。次に、マラリア原虫は、新しい赤血球に寄生する。マラリアの典型的な症状である間隔の開いた高熱（interval high fever）は、赤血球が破壊したときに誘導される。このため、貧血はマラリア原虫に感染した時に誘導される。クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）は、和名：キサントリーサ（クスリウコン）と呼ばれ、ウコンの仲間で、ウコンの中でも特にクルクミンや亜鉛の含有量が多く、従来より健康維持に用いられてきた。
【０００７】
また、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）は、インドネシアにおける最も重要な薬草の１つとして知られ、この薬草の樹皮は、Jamuの素材として、特にマラリアの治療に使われている。マラリアは、蚊（Anopheles gambiae）を媒介としたマラリア原虫（Plasmodium）による感染で起こる病気の一般的な用語であるが、バベシア・ギブソニがは、ダニ（Haemaphysalis bispinosa, H. longicornis）によって媒介され、イヌにしか感染しない。しかし、マラリア原虫及びバベシア・ギブソニは、似通った生活様式及び病気の症状を有している。クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）は、和名：ガジュツ（紫咲ウコン）と呼ばれ、ウコンの仲間で沖縄や石垣島で栽培され、健康維持に利用されてきた。クルクマ  キサントリーザ（Curcuma xanthorrhiza）やクルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）のようなウコンは、医薬品としては一般的には、利胆薬として肝臓炎、胆道炎、胆石症、カタル性黄胆に用いられるほか、芳香性健胃薬として用いられており、その機能として、抗酸化、、内分泌系の亢進、生体酵素の調節、癌化の抑制などが報告されている。
【０００８】
更に、フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）は、俗称：チャンカピエドラ（キダチミカンソウ）と呼ばれる植物で、インドネシアではマラリアの民間治療薬としてフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  Niruri Linn  ）が従来より使用されてきた。フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）には、植物系エストロゲンやアルカロイド、及びステロイドやアルカンが含まれており、医薬的効能として、尿管結石症状治療、利尿効果、抗炎症治療、肝臓保護・肝炎治療、及び腎臓保護による病気治療としての効能が報告されている。
【特許文献１】特開平２００１−８１０３４号公報。
【特許文献２】特表平８−５０２６４６号公報。
【特許文献３】特表平１０−５０７４４６号公報。
【特許文献４】特表平１０−５１１３４５号公報。
【特許文献５】特表２０００−５１５８７７号公報。
【特許文献６】特表２００１−５１７２２３号公報。
【特許文献７】特表２００３−５０３０３９号公報。
【特許文献８】特表２００３−５０５３５７号公報。
【特許文献９】特表２００３−５３４０１６号公報。
【非特許文献１】J. Am. Vet. Med. Assoc. 180, 507-511, 1982。
【非特許文献２】J. Protozool. Res. 3, 111-125, 1993。
【非特許文献３】Treatment of Babesia gibsoni infection with Phenamidine isethionate. Vet.Rec．86,8-10,1970。
【非特許文献４】J.Am.Vet.Med.Assoc.180,507-511, 1982。
【非特許文献５】Greene C．E． ed.B.W.Saunders Philadelphia.796-803, 1990。
【非特許文献６】J. Nat. Prod. 45, 582-584, 1982。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、抗バベシア剤、特に、副作用の少ない化学療法薬剤として用いることができ、しかも抗バベシア活性の高いバベシアの予防及び／又は治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、上記課題を解決すべく、イヌ等の動物或いはヒトのバベシア感染症の予防及び／又は治療剤として、副作用が殆どない化学療法薬剤としての使用の可能性がある植物成分について鋭意探索の結果、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出した成分が顕著な抗バベシア活性を有することを見い出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物を含有する抗バベシア剤からなるものである。
【００１１】
また、本発明は、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出、分離され、かつ抗バベシア活性を有する化合物、及びその薬理学的に許容される塩の１又は２以上を有効成分とする抗バベシア剤からなるものである。また、本発明の抗バベシア剤の有効成分としては、上記抗バベシア活性を有する成分を含有するクルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物からの抽出物という形態の利用も包含するものである。本発明のこれらの有効成分は、副作用が殆どなく、ヒトや動物のバベシア感染症の予防及び／又は治療薬として用いることが可能である。
【００１２】
本発明の抗バベシア剤は、バベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬として顕著な効能があり、特に、イヌのバベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬としての利用が期待できる。
また、本発明は、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物からの抗バベシア活性を有する化合物の抽出、精製、分離方法を包含するものである。
【００１３】
すなわち具体的には本発明は、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物を含有する抗バベシア剤（請求項１）や、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（１）
【００１４】
【化１】
2005314345.tif 000002
で示される化合物、（１２Ｒ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項２）や、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（２）
【００１５】
【化２】
2005314345.tif 000003
で示される化合物、（１２Ｓ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項３）や、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（３）
【００１６】
【化３】
2005314345.tif 000004
で示される化合物、（１Ｓ、４Ｓ、５Ｓ、８Ｒ、１０Ｓ）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１）−エン−１２、８−オリデであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項４）や、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（４）
【００１７】
【化４】
2005314345.tif 000005
で示される化合物、（１Ｒ*、４Ｓ*、５Ｒ*、１０Ｒ*）−１、４、１０−トリヒドロキシグアイ−７（１１），８−ジエン−１２、８−オリデであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項５）からなる。
【００１８】
また本発明は、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（５）
【００１９】
【化５】
2005314345.tif 000006
で示される化合物、（１Ｓ*、４Ｓ*、５Ｓ*、８Ｓ*、１０Ｓ*）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１），−エン−１２、８−オリデであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項６）や、フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（６）
【００２０】
【化６】
2005314345.tif 000007
で示される化合物、β−グルコガリンであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項７）や、フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（７）
【００２１】
【化７】
2005314345.tif 000008
で示される化合物、クエルセチン  ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシドであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項８）や、フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（８）
【００２２】
【化８】
2005314345.tif 000009
で示される化合物、β−シトステロールであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項９）や、フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（９）
【００２３】
【化９】
2005314345.tif 000010
で示される化合物、没食子酸であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項１０）からなる。
【００２４】
更に本発明は、フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物が、式（１０）
【００２５】
【化１０】
2005314345.tif 000011
で示される化合物、エリゴ酸グリコシドであることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項１１）や、請求項１〜１１のいずれか記載の抗バベシア活性を有する化合物、及びそれらの化合物の薬理学的に許容される塩の１又は２以上を有効成分とする抗バベシア剤（請求項１２）や、抗バベシア剤が、バベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１〜１２のいずれか記載の抗バベシア剤（請求項１３）や、抗バベシア剤が、医薬用又は動物薬用予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１〜１３のいずれか記載の抗バベシア剤（請求項１４）や、動物薬用予防及び／又は治療薬が、イヌのバベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１４記載の抗バベシア剤（請求項１５）からなる。
【００２６】
また本発明は、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物を水又は水性溶媒で抽出し、該抽出液を精製、分離することを特徴とする請求項１〜１１のいずれか記載の化合物の抽出、分離方法（請求項１６）や、フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する、式（１０）
【００２７】
【化１１】
2005314345.tif 000012
で示されるエリゴ酸グリコシド（請求項１７）からなる。
【発明の効果】
【００２８】
本発明の活性成分は、その抗バベシア活性が、従来使用されていたガナゼック（ジナミゼン・アセチュレート）に匹敵し、また、漢方薬として使用されてきたクルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物体から抽出される成分であることからも、その副作用の殆どない有効成分であり、ヒトや動物のバベシア感染症の予防及び／又は治療薬として用いることが可能であり、また、高い抗バベシア活性を有しながら、その副作用のために製造が中止されたガナゼックに代わって、有力な抗バベシア剤としての実用化が可能なものである。本発明の抗バベシア剤は、特に、現在その感染が拡大しているイヌのバベシア感染の予防及び治療薬として、大きな期待が寄せられるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
本発明は、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ抗バベシア活性を有する化合物を含有する抗バベシア剤からなる。また、本発明は、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、抗バベシア活性を有する化合物、及びそれらの化合物の薬理学的に許容される塩の１又は２以上を有効成分とする抗バベシア剤からなる。
【００３０】
該本発明の化合物は以下の構造式で示される：すなわち、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）の植物から抽出され、かつ式（１）で示される（１２Ｒ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾール：
【００３１】
【化１２】
2005314345.tif 000013
クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）の植物から抽出され、かつ式（２）で示される（１２Ｓ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾール：
【００３２】
【化１３】
2005314345.tif 000014
クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から抽出され、かつ式（３）で示される（１Ｓ、４Ｓ、５Ｓ、８Ｒ、１０Ｓ）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１）−エン−１２、８−オリデ：
【００３３】
【化１４】
2005314345.tif 000015
クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から抽出され、かつ式（４）で示される（１Ｒ*、４Ｓ*、５Ｒ*、１０Ｒ*）−１、４、１０−トリヒドロキシグアイ−７（１１），８−ジエン−１２、８−オリデ：
【００３４】
【化１５】
2005314345.tif 000016
クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から抽出され、かつ式（５）で示される（１Ｓ*、４Ｓ*、５Ｓ*、８Ｓ*、１０Ｓ*）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１），−エン−１２、８−オリデ：
【００３５】
【化１６】
2005314345.tif 000017
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ式（６）で示されるβ−グルコガリン：
【００３６】
【化１７】
2005314345.tif 000018
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ式（７）で示されるクエルセチン  ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシド：
【００３７】
【化１８】
2005314345.tif 000019
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ式（８）で示されるβ−シトステロール：
【００３８】
【化１９】
2005314345.tif 000020
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ式（９）で示される没食子酸：
【００３９】
【化２０】
2005314345.tif 000021
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物から抽出され、かつ式（１０）で示されるエリゴ酸グリコシド：
【００４０】
【化２１】
2005314345.tif 000022
本発明の有効成分である化合物は、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）の植物を水又は水性溶媒で抽出し、該抽出液を精製、分離することにより製造することができる。該有効成分の抽出、分離手段としては、抽出溶媒として、水又は水性溶媒等、植物成分の抽出溶媒として公知の抽出溶媒を用いることができ、また、精製、分離手段としても適宜公知の精製、分離手段を用いることができる。本発明においては、有効成分として、該有効成分化合物を精製、分離した形で用いることができるが、例えば、クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）、又はフィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）のような植物から、抽出し、かつ本発明の有効成分化合物のいずれか或いは複数の化合物を含有する抽出物の形で用いることもできる。
【００４１】
本発明の有効成分である化合物や、該化合物を含有する抽出物等を医薬等として用いる場合には、本発明の有効成分である化合物を薬理学的に許容される塩の形で用いることができる。かかる薬理学上許容される塩としては、薬理学上公知のものを用いることができるが、例えば、薬理学上許容される金属塩、アンモニウム塩、含有アミン付加塩、アミノ酸付加塩等を適宜用いることができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられ、有機アミン付加塩としてはモルホリン、ピペリジン等の付加塩、アミノ酸付加塩としては、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン等の付加塩が挙げられる。
【００４２】
本発明の有効成分を医薬として投与するには、該有効成分を、製薬上用いられる適宜の形態に製剤化して、全身又は局所的に、経口又は非経口の形で投与することができる。製剤形態としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、注射剤、液剤、乳剤、懸濁剤、軟膏等適宜の形態を挙げることができる。該製剤化に際しては、例えば、各種の賦形剤、潤沢剤、結合剤、崩壊剤、懸濁化剤、乳化剤等の補助剤を用いることができる。本発明の有効成分を、動物用医薬として用いる場合には、本発明の有効成分を適宜の投与形態に製剤化して用いることができる。また、本発明の有効成分を飼料等に混合した形で投与することができる。
【００４３】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００４４】
［クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）からの抗バベシア活性を有する化合物の抽出、分離、同定、及びそのアッセイ］
クルクマ  キサントリーザ（Curcuma  xanthorrhixa）から、抗バベシア活性を有する化合物を抽出、分離し、その化合物の同定を行った。更に、該化合物の抗バベシア活性についてのアッセイを行った。
【００４５】
（化合物の抽出、分離、同定、活性のアッセイ、及びその結果）
インドネシアにおける伝統的な方法にしたがって、クルクマ  キサントリーザ（C. xanthorrhiza）の植物から熱湯を用いて抽出を行った。抽出物した化合物は、抗バベシア活性を有していた。抗バベシア活性を測定するアッセイのガイダンスに従って、８０ｇのクルクマ  キサントリーザの乾燥した地上部より、（１２Ｒ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾール［(12R)-12, 13-dihydro-12,13-dihydroxyxanthorrhizol（１、３．３ｍｇ）］（化合物１）、及び（１２Ｓ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾール［(12S)-12, 13-dihydro-12,13-dihydroxyxanthorrhizol（２、１．６ｍｇ）］（化合物２）を単離した（化学式（１）及び（２））。
【００４６】
化合物１は、オイルとして得られ、旋光度は−５３．５°であった（ＭｅＯＨ，ｃ０．３２）。化合物１の分子式は、ＥＩ−ＨＲ−ＭＳによってＣ15Ｈ24Ｏ3と決定した。1Ｈ−ＮＭＲスペクトラムは、δ７．００（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、６．６８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．５、７．５Ｈｚ）及び６．６０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ）で１，３，４−三置換フェニル基（trisubsituted phenyl group）に典型的な共鳴を含む。13Ｃ−ＮＭＲスペクトラムに１５本のシグナルがあった。炭素に直接結合するプロトンを、ＨＭＱＣの分析及びＨＭＱＣスペクトラムの分析により測定した。さらに置換位置を、ＨＭＢＣ分析及びＨＭＢＣスペクトラムの分析により測定し、主としてＨ−７とＣ−１／Ｃ−２／Ｃ−３、Ｈ−８とＣ−４／Ｃ−５／Ｃ−６、Ｈ−９とＣ−５／Ｃ−８／Ｃ−１０、Ｈ−１４とＣ−１２／Ｃ−１３、Ｈ−１５とＣ−１２／Ｃ−１３（図１）の間であった。この化合物は、既に本発明者によって報告されており、（１２Ｒ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールの旋光度は−５７°であると報告されている（ＭｅＯＨ、ｃ０．３）（４）。1Ｈ−ＮＭＲスペクトラム、13Ｃ−ＮＭＲスペクトラム及び旋光度との一致により、１の絶対的立体配置は、化学式式（１）に示す通り（８Ｓ、１２Ｒ）であると決定した。
【００４７】
化合物２を、オイルとして単離した。分子構造Ｃ15Ｈ24Ｏ3は、ＥＩ−ＨＲ−ＭＳ及び13Ｃ−ＮＭＲスペクトラム内の１５個の炭素シグナルから推定した。BIOACTIVE COMPOUND FROM IOSTEPHANE HETEROPHYLLA（４）の報告の中で、（１２Ｒ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾール及び（１２Ｓ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールを非分離混合物として単離した。各化合物を単離したが、化合物１及び２の1Ｈ−ＮＭＲは、報告されたデータと一致した。したがって、２の相対構造及び絶対的立体配置は、（１２Ｓ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールであると決定し、（１２Ｓ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールの旋光度を、７３．８°（ＭｅＯＨ、ｃ０．１４）であると初めて報告した。
【００４８】
このクルクマ  キサントリーザは、すでに調査がなされ、抗菌、抗腫瘍、抗炎症及び抗喘息などのさまざまな薬理効果が報告されている（Vet. Rec. 86, 8-10, 1970；Journal of Biochemistry, Molecular Biology and Biophysics 4, 213-222, 2000； Science 207, 1218-1220, 1980；ACS Symposium Series 660, 219-233, 1997）。しかし、抗マラリア活性に関する報告はなかった。表１に、バベシア・ギブソニに対するＩＣ50の値を示した。ジミナゼン・アセチュエート（Ganazeg）のＩＣ50の値と（１２Ｓ）−及び（１２Ｒ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールの値とを比較したところ、活性は２０分の１であった。Ganazegの副作用を考慮して、これらの化合物は、抗バベシア物質として有望であると考えられた。
【００４９】
【表１】
2005314345.tif 000023
［実験］
（実験の概要）
ＦＤＭＳは、Jeol 社製JMS-01SG-２で測定した。ＮＭＲスペクトラムは、Jeol 社製JNM-EX270FT-NMR system（２７０ＭＨzで１Ｈ；６７．５ＭＨｚで13Ｃ）（日本電子データム社製）。カラムクロマトグラフィーを、シリカゲル６０（関東化学社製）、Wakosil  5SIL φ６．０×２５０ｍｍ(和光純薬社製)及びCHIRALCELODφ４．６×２５０ｍｍ（ダイセル化学社製）を用いて行った。
【００５０】
（材料）
クルクマ  キサントリーザの樹皮は、２００２年１２月に、インドネシアのランプンの、薬草“jamu”の商店で購入した。ジミナゼン・アセチュエート（Ganazeg）は、診断治療学講座、獣医内科学教室から供与された。
【００５１】
（インビトロ抗バベシアアッセイの方法）
Levy and Ristic（Special Publication-Royal Society of Chemistry 269, 77-80, 2001）及びBrockelman and Tanariya（Am. J. Vet. Res. 46, 416-420, 1985）の方法を改良した方法に従った、バベシア・ギブソニに対するインビトロ抗バベシア活性。試験した化合物を、ＲＭＭＩ１６４０培地に溶解し、０．２２μｍの膜フィルタを通して無菌化した。バベシア・ギブソニのキャリアであったイヌの血を、４０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離し、血清及び赤血球（ＲＢＣ）を分離した。ＲＢＣを、４０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離して、改良したVega Y Ｍartinez リン酸緩衝食塩水（ｍＶＹＭ）（１１）で、３回洗浄した。白血球をＲＢＣ懸濁液の静止期から回収した。
【００５２】
次に、ＲＢＣを、４０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離し、ＲＰＭＩ１６４０培地で、２回洗浄した。ＲＢＣを、４０％イヌ血清で濃縮したＲＰＭＩ１６４０培地に添加し、６％ＲＢＣを含む培養培地を作製した。実験は、９６ウェルプレートで行い、各ウェルは、２５μｌの寄生赤血球懸濁液及び２５μｌの１％寄生虫血症を含む試験溶液を含有している。コントロールは、試験溶液を含まない培養培地内の寄生赤血球で構成されている。培養プレートは、インキュベーター内で、３７℃で、５％ＣＯ2、５％Ｏ2及び９０％Ｎ2の過湿雰囲気下で、インキュベーションを行った。Gimsaで染色したスメア標本を、各ウェルで作製し、寄生虫血症の百分率を顕微鏡で測定した。
【００５３】
（抽出及び単離）
活性化合物の抽出及び単離を、抗バベシア活性アッセイを指標として行った。C. xanthorrhizaの風乾した樹皮（８０ｇ）を、１ｌの水で、３０分間、２回沸騰した。濾過後、抽出物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（７５０ｍｌ×４）及びＨ2Ｏを得た。蒸発後、ＥｔＯＡｃ層の残基（７０ｇ）を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけた。カラムは、５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3で溶出し、３４のフラクションに分割した。フラクション１６−２２を濃縮し、ＨＰＬＣ（Wakosil 5SILφ６．０×２５０ｍｍ、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝８：２、フローレート：１．５ｍｌ／分。Ａ254nm）で精製し、ジアステレオマー混合物（１＋２）を調製した。これに、ＨＰＬＣ（CHIRALCEL  ODφ４．６×２５０ｍｍ、ＥｔＯＨ：ヘキサン＝５：９５、フローレート：０．５ｍｌ／分。Ａ254nm）を行い、各化合物を単離した（化合物１：（１２Ｒ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾール［(12R)-12, 13-dihydro-12,13-dihydroxyxanthorrhizol、３．３ｍｇ］及び化合物２：１２Ｓ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾール［(12S)-12,13-dihydro-12,13-dihydroxyxanthorrhizol、１．６ｍｇ］。
【００５４】
［（１２Ｒ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールの物性］
Ambar oil; [α]D -53.5゜(MeOH, c 0.32); 1H-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ1.09 (3H, s, H-14), 1.19 (3H, s, H-15), 1.23 (3H, d, J = 7.0 Hz, H-9), 1.5-1.9 (4H, m, H-10 and 11), 2.19 (3H, s, H-7), 2.59 (1H, six, J = 7.3 Hz, H-8), 3.27 (1H, dd, J = 2.6, 9.7 Hz, H-12), 6.60 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-6), 6.68 (1H, dd, J = 1.5, 7.5 Hz, H-4), 7.00 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-3); 13C-NMR (CDCl3, 67.5MHz) δ15.3 (C-
7), 22.3 (C-9), 23.1, 26.5 (C-14 or C-15), 29.7 (C-11), 35.2 (C-10), 39.7 (C-8), 73.2 (C-13), 78.8 (C-12), 113.4 (C-6), 119.2 (C-4), 121.1 (C-2), 130.8 (C-3), 146.9 (C-5), 153.8(C-1); FDMS m/z 252 [M]+; EIMS m/z (rel int) 252 (M+, 24), 194 (40), 175 (48), 135 (100), 109 (18), 59 (69).
［（１２Ｓ）−１２、１３−ジヒドロ−１２，１３−ジヒドロキシキサントリゾールの物性］
Ambar oil; [α]D -73.8゜(MeOH, c 0.14); 1H-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ1.07 (3H, s, H-14), 1.19 (3H, s, H-15), 1.22 (3H, m, H-9), 1.5-1.9 (4H, m, H-10 and 11), 2.19 (3H, s, H-7), 2.62 (1H, m, H-8), 3.39 (1H, broad d, J = 10.0 Hz, H-12), 6.60 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-6), 6.64 (1H, dd, J = 1.5, 7.5 Hz, H-4), 7.06 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-3); 13C-NMR (CDCl3, 67.5MHz) δ15.3 (C-7), 22.1 (C-9), 23.2, 26.6 (C-14 or C-15
), 29.4 (C-11), 35.1 (C-10), 39.4 (C-8), 73.2 (C-13), 78.8 (C-12), 113.3 (C-6), 119.4 (C-4), 121.1 (C-2), 130.9 (C-3), 146.6 (C-5), 152.8 (C-1); FDMS m/z 252 [M]+; EIMS m/z (rel int) 252 (M+, 24), 194 (40), 175 (48), 135 (100), 109 (18), 59 (69).
【実施例２】
【００５５】
［クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）からの抗バベシア活性を有する化合物の抽出、分離、同定、及びそのアッセイ］
クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）から、抗バベシア活性を有する化合物を抽出、分離し、その化合物の同定を行った。更に、該化合物の抗バベシア活性についてのアッセイを行った。
【００５６】
（化合物の抽出、分離、同定、活性のアッセイ、及びその結果）
インドネシアにおける伝統的な方法にしたがって、クルクマ  ゼドアリア（Curcuma  zedoaria）の植物から熱湯を用いて抽出を行った。抽出物した化合物は、３種類の抗バベシア化合物（１Ｓ、４Ｓ、５Ｓ、８Ｒ、１０Ｓ）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１）−エン−１２、８−オリデで［(1S, 4S, 5S, 8R, 10S)-4, 10-dihydroxyguai-7(11)-en-12, 8-olide ］(Zedoalactone A（１）、３．２ｍｇ)（化合物３）、（１Ｒ*、４Ｓ*、５Ｒ*、１０Ｒ*）−１、４、１０−トリヒドロキシグアイ−７（１１），８−ジエン−１２、８−オリデ［(1R*, 4S*, 5R*, 10R*)-1,4,10-trihydroxyguai-7(11), 8-dien-12, 8-olide］ (Zedoalactone B（２）、５．０ｍｇ)（化合物４）、（１Ｓ*、４Ｓ*、５Ｓ*、８Ｓ*、１０Ｓ*）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１），−エン−１２、８−オリデ［(1S*, 4S*, 5S*, 8S*, 10S*)-4, 10-dihydroxyguai-7(11)-en-12, 8-olide］ (Zedoalactone C（３）、１．６ｍｇ)（化合物５）（化学式（３）、（４）、（５））を、抗バベシア活性を測定するアッセイのガイダンスに従って、クルクマ  ゼドアリア（C.zedoaria）の乾燥した地上部１００ｇから単離した。これらの化合物の1Ｈ−及び13Ｃ−ＮＭＲスペクトラムデータを表２及び表３に示す。
【００５７】
【表２】
2005314345.tif 000024
【００５８】
【表３】
2005314345.tif 000025
化合物３及び５を、オイルとして抽出した。化合物３の旋光度は−２８．９°（ＭｅＯＨ，ｃ０．３２）であった。分子式Ｃ12Ｈ22Ｏ4は、ＥＩ−ＨＲ−ＭＳ（ｍ／ｚ２６６．１５２７、Ｃ15Ｈ24Ｏ3として計算、ｍ／ｚ２６６．１５１８）から推定した。化合物２の旋光度は、＋１７０．２°（ＭｅＯＨ，ｃ０．５０）。脱水した分子式Ｃ15Ｈ18Ｏ4は、ＥＩ−ＨＲ−ＭＳ（ｍ／ｚ２６２．１２１９、Ｃ15Ｈ24Ｏ3として計算、ｍ／ｚ２６２．１２０５）から推定し、分子式Ｃ15Ｈ20Ｏ5を示唆した。これらの化合物は既に報告されている（Phytochemistry, 40,1197-1200, 1995）。化合物１の旋光度は、−３４．３°（ＭｅＯＨ，ｃ０．４）、化合物4の旋光度は、＋１７７．７°（ＭｅＯＨ，ｃ０．４）であると報告されている。1Ｈ−ＮＭＲスペクトラム、13Ｃ−ＮＭＲスペクトラム及び旋光度との一致により、１の絶対的立体配置（Blay et al. 2000）及び２の相対構造は、化学式（３）、（４）及び（５）に示す通りであると決定した。
【００５９】
化合物５をオイルとして単離した。分子式は、Ｃ15Ｈ22Ｏ4であり、ＥＩ−ＨＲ−ＭＳ（ｍ／ｚ２６６．１４９３、Ｃ15Ｈ24Ｏ3として計算、ｍ／ｚ２６６．１５１８）から推定した。極性により、ＥＩ−ＭＳ、1Ｈ−及び13Ｃ−ＮＭＲスペクトラムデータは、化合物１と類似しており、化合物３は、化合物１の相対化合物であるとされた。ＩＲスペクトラルデータは、ヒドロキシ基（３４２１ｃｍ-1）及びα、β―不飽和γラクトン（１３５ｃｍ-1）を示した。1Ｈ−ＮＭＲ（表１）スペクトラムは、３つのメチルカーボン（δ１．２７ｓ、１．４４ｓ、１．７３ｄ）及びカービニルプロトン（δ５．７５ｄｄｄ）の存在を示した。13Ｃ−ＮＭＲ（表２）スペクトラムは１５個の炭素；３個のメチル（δ８．３、２５．３、３１．９）；４個のメチレン（δ２４．４、２４．４、３７．３、４０．７）、３個のメチン（δ４７．９、５２．６、７９．３）炭素を含んでいる。炭素に直接結合するプロトンは、ＨＭＱＣの分析により測定した。さらに、置換位置は、ＨＭＢＣの分析により測定した。構造を構築するための、重要なクロスピークは、Ｈ−１とＣ−２／Ｃ−５／Ｃ−１０、Ｈ−５とＣ−４／Ｃ−６、Ｈ−８とＣ−７／Ｃ−９、Ｈ−１３とＣ−７／Ｃ−１１／Ｃ−１２、Ｈ−１４とＣ−３／Ｃ−４／Ｃ−５、Ｈ−１５とＣ−１／Ｃ−９／Ｃ−１０（図２）の間であった。
【００６０】
これらのスペクトラルによる論拠は、化合物５が、４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１），−エン−１２、８−オリデ［4,10-dihydroxyguai-7(11)-en-12,8-olide］であることを示唆した。化合物５の相対立体配座（relative conformation）は、結合定数、ＮＯＥＳＹ実験及び1Ｈ−ＮＭＲ内のピリジン誘導溶媒シフト(Paul et al. 1968)により、以下の通り決定した。Ｈ−５及びＣ−６メチレンプロトンは、1Ｈ−ＮＭＲ及び1Ｈ−1ＨＣＯＳＹ実験により測定した結合定数（Ｈ−５及びＨ−６α：Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−５及びＨ−６β：Ｊ＝５．４Ｈｚ）を示した。これらの結合定数は、Ｈ−５及びＨ−６αがペリプラナー（periplanar）の位置にあり、Ｈ−５及びＨ−６βがアンチペリプラナー（antiperiplanar）であることを示した。ＮＯＥＳＹ実験においては、Ｈ−１、Ｈ−５、Ｈ−８は図２の通り相関関係にあり、これらのプロトンが各プロトンと非常に近接して局在していることを示唆した。さらに、Ｈ−１、Ｈ−５、Ｈ−８において、顕著なピリジン誘導溶媒シフトを観察した（表４）。これらの反遮蔽効果は、これらのプロトン及びヒドロキシ基（４−ＯＨ、１０−ＯＨ）が、分子の同じ側面に向かって配置されていることを示唆した。化合物５の絶対的立体配置は決定できないが、化合物３を初めて同定した。
【００６１】
【表４】
2005314345.tif 000026
【００６２】
クルクマ  ゼドアリアの植物については、すでに調査が行われ、抗腫瘍、抗潰瘍、抗炎症、及び子宮内膜症の治療など、さまざまな薬理効果が報告されている（Shenyang Yaoke Daxue Xuebao, 17, 197-199, 2000；YAKUGAKUZASSHI, 106, 1137-1142, 1986；Inflammation Research, 47, 476-481, 1998；CHUNG-KUO CHUNG HSI I CHIEH HO TSA CHIH, 19, 159-161, 1999）。しかし抗バベシア活性に関する報告はなかった。Zedoalacone A (１)、Ｂ(２)、Ｃ(３)の活性は、Ganazegと比べると活性化していなかったが、単離した化合物は、バベシア・ギブソニに対する顕著なＩＣ50の値を、表４に示した。Ganazegの潜在的な副作用を考慮して、これらの化合物は、バベシア感染に対する有望な薬剤であると思われる。
【００６３】
［実験］
（実験の概要）
ＭＳスペクトラムは、Jeol 社製JMS-01SG-2に記録した（日本電子データム社製）。ＮＭＲスペクトラムは、Jeol 社製JNM-EX270FT-NMR system（２７０ＭＨｚで１Ｈ；６７．５ＭＨｚで13Ｃ）で測定した。ＩＲはPerkin-Elmer社製FT-IRで測定した。旋光度は、JASCO DPI-370 Digital polarimeterに記録した。カラムクロマトグラフィーを、シリカゲル６０（関東化学社製）、Wakosil5SIL φ６．０×２５０ｍｍ(和光純薬社製)及びInertsil Prep-ODS φ２０．０×２５０ｍｍ（GL Science社製）を用いて行った。
【００６４】
（材料）
クルクマ  ゼドアリア（Curcuma zedoaria）の樹皮は、２００２年１２月に、インドネシアのランプンの、薬草“jamu”の商店で購入した。ジミナゼン・アセチュエート（Ganazeg）は、北海道大学獣医学研究科診断治療学講座獣医内科学教室から供与された。
【００６５】
（インビトロ抗バベシアアッセイ）
Levy and Ristic（Science 207, 1218-1220, 1980）及びBrockelman and Tanariya（J. Parasitol. 77, 994-997, 1991）の方法を改良した方法に従った、バベシア・ギブソニに対するインビトロ抗バベシア活性。試験した化合物を、ＲＭＭＩ１６４０培地に溶解し、０．２２μｍの膜フィルタを通して無菌化した。バベシア・ギブソニのキャリアであったイヌの血を、４０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離し、血清及び赤血球（ＲＢＣ）を分離した。ＲＢＣを、４０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離して、修飾したVega Y Ｍartinez リン酸緩衝食塩水（ｍＶＹＭ）（J. Am. Vet. Med. Assoc. 180, 507-511, 1982）で、３回洗浄した。
【００６６】
上記操作で得られたＲＢＣを４０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離し、ＲＰＭＩ１６４０培地で、２回洗浄した。ＲＢＣを、４０％イヌ血清で濃縮したＲＰＭＩ１６４０培地に添加し、６％ＲＢＣを含む培養培地を作製した。実験は、９６ウェルプレートで行い、各ウェルは、２５μｌの寄生赤血球懸濁液及び２５μｌの１％寄生虫血症を含む試験溶液を含有している。コントロールは、試験溶液を含まない培養培地内の寄生赤血球で構成されている。培養プレートは、インキュベーター内で、３７℃で、５％ＣＯ2、５％Ｏ2及び９０％Ｎ2の過湿雰囲気下で、インキュベーションを行った。Gimsaで染色した薄いスメア標本を、各ウェルで作製し、寄生虫血症の百分率を顕微鏡で測定した。
【００６７】
（抽出及び単離）
抗バベシア活性化合物の抽出及び単離を、抗バベシア活性アッセイを指標に行った。クルクマ  ゼドアリア（C. zedoria）の風乾した樹皮（１００ｇ）を、１ｌの水で、３０分間、２回沸騰した。濾過後、抽出物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（７５０ｍｌ×４）及びＨ2Ｏを得た。蒸発後、Ｈ2Ｏ層の残基を、Charcoalカラムクロマトグラフィーにかけた（１００ｇ）。カラムは、Ｈ2Ｏ、ＥｔＯＨ、５０％ＥｔＯＨ／ＥｔＯａＡｃ、ＥｔＯＡｃ及びヘキサンで溶出した。ＥｔＯＨ及び５０％ＥｔＯＨ／ＥｔＯａＡｃフラクションを濃縮し、ＨＰＬＣ（Intersil Prep-ODSφ２０．０×２５０ｍｍ、Ｈ2Ｏ：ＭｅＯＨ＝６：４、フローレート：５．０ｍｌ／分。Ａ254nm）で精製し、化合物（４）（１Ｒ*、４Ｓ*、５Ｒ*、１０Ｒ*）−１、４、１０−トリヒドロキシグアイ−７（１１），８−ジエン−１２、８−オリデ［(1R*, 4S*, 5R*, 10R*)-1,4,10-trihydroxyguai-7(11), 8-dien-12, 8-olide ］(Zedoalactone B)、５．０ｍｇを得た。ＥｔＯＡｃの残基を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけた（１００ｇ）。
【００６８】
カラムは、ＣＨＣＬ3、３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3、２０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣＬ3及びＭｅＯＨで溶出した。３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3、２０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3フラクションを濃縮し、シリカゲルクロマトフラフィーにかけた（７０ｇ）。カラムは、５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3で溶出し、３４のフラクションに分割した。フラクション１９−２２を濃縮し、ＨＰＬＣ（Wakosil 5SILφ６．０×２５０ｍｍ、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝８５：１５、フローレート：１．５ｍｌ／分。Ａ254nm）で精製し、化合物（３）１Ｓ、４Ｓ、５Ｓ、８Ｒ、１０Ｓ）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１）−エン−１２、８−オリデ［(1S, 4S, 5S, 8R, 10S)-4, 10-dihydroxyguai-7(11)-en-12, 8-olide］ (Zedoalactone A)、３．２ｍｇ及び化合物（５）（１Ｓ*、４Ｓ*、５Ｓ*、８Ｓ*、１０Ｓ*）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１），−エン−１２、８−オリデ［(1S*, 4S*, 5S*, 8S*, 10S*)-4, 10-dihydroxyguai-7(11)-en-12, 8-olide］ (Zedoalactone C)、１．６ｍｇを得た。
【００６９】
［（１Ｓ、４Ｓ、５Ｓ、８Ｒ、１０Ｓ）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１）−エン−１２、８−オリデの物性］
Oil; [α]D -28.9゜(MeOH, c 0.32); IR nmax: 3422, 2965, 1734 cm-1; 1H-NMR (表１); 13C-NMR (表２); EIMS m/z (rel int) 266 ([M]+, 1.3), 248 ([M-H2O] +, 100), 230 (72); EIHRMS anal, m/z 266.1527, calc for C15H24O3, m/z 266.1518.
［（１Ｒ*、４Ｓ*、５Ｒ*、１０Ｒ*）−１、４、１０−トリヒドロキシグアイ−７（１１），８−ジエン−１２、８−オリデの物性］
Oil; [a]D ＋170.2゜(MeOH, c 0.50); 1H-NMR (表１); 13C-NMR ((表２); EIMS m/z (rel int) 280 ([M]+, 32), 262 ([M-H2O] +, 34), 219 (44), 153 (82), 124 (100); EIHRMS (C15H18O4 [M-H2O] +) anal, m/z 262.1219, calc for C15H24O3, m/z 262.1205.
［（１Ｓ*、４Ｓ*、５Ｓ*、８Ｓ*、１０Ｓ*）−４、１０−ジヒドロキシグアイ−７（１１），−エン−１２、８−オリデの物性］
Oil; [a]D ＋101.1゜(MeOH, c 0.16); IR nmax: 3421, 2967, 1735 cm-1; 1H-NMR (表１); 13C-NMR (表２); EIMS m/z (rel int) 266 ([M]+, 2.4), 248 ([M-H2O] +, 90), 230 (77); EIHRMS anal, m/z 266.1493, calc for C15H24O3, m/z 266.1518.
【実施例３】
【００７０】
［フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）からの抗バベシア活性を有する化合物の抽出、分離、同定、及びそのアッセイ］
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus  niruri）から、抗バベシア活性を有する化合物を抽出、分離し、その化合物の同定を行った。更に、該化合物の抗バベシア活性についてのアッセイを行った。
【００７１】
（化合物の抽出、分離、同定、活性のアッセイ、及びその結果）
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus niruri  Linn：キダチコミカンソウ）からの煮沸した抽出物のバイオアッセイにより導かれた分画は、４つの既知の化合物、β−グルコガリン（b-glucogallin）（化合物６）(Phytochemistry 58, 657-661, 2001)、クエルセチン  ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシド（quercetin 3-O-b-D-glucopyranosyl-(1→2) O-b-D-xylopyranoside）（化合物７）(L. J. Agric. Food Chem. 47, 4079-4082, 1999)、β−シトステロール（b-sitosterol）（化合物８）(Phytochemistry 31, 805-811, 1992)及び没食子酸（gallic acid）（化合物９）(Phytochemistry 36, 2015-2018, 1992)（化学式（６）、（７）、（８）、及び（９））と共に新規のエリゴ酸グリコシド（ellagic acid glycoside）（化合物１０）（化学式（１０））の分離を導いた。これらの化合物は、文献記載の1Ｈ及び13Ｃ  ＮＭＲ及び質量スペクトラルデータの比較により同定した。
【００７２】
化合物１０は、黄色い粉末で、ネガティブイオンで測定したＨＲ−ＦＡＢ−ＭＳの親イオンピーク(parent ion peak)を、m/z 633.0707 ([M-H]+ calc. for C27H21O18: 633.0726)に得た。これらの結果は13Ｃ−ＮＭＲ分光学的分析と共に５に、Ｃ27Ｈ22Ｏ18の分子式を提案した。ＩＲスペクトラムは、ヒドロキシ基（３３８７ｃｍ-1）、不飽和ラクトン機能（１７１９ｃｍ-1）及び芳香環（１６１８ｃｍ-1）に、特有の吸収を示した。1Ｈ−ＮＭＲスペクトラムでは、酸素化したメチレンシグナルとともに４の芳香一重項を含む１０のプロトンシグナル及び５の酸素化したメチンプロトンを観察し、１個のデオキシ糖の存在を示唆した。
【００７３】
グリコシドは、化学シフト及びプロトンシグナルのカップリングパターンによりグルコースとして定量した。グルコース部分によるプロトン共鳴は、d３．９９〜６．３７の領域で現れた。グルコース部分のアノマープロトンを、d６．３７で一重項として観察した。５の13Ｃ−ＮＭＲ及びＤＥＰＴ実験は、不飽和ラクトンによりd１７０．１、１６８．５、１６６．７で３個のエステル炭素、９の酸素化した芳香炭素、５の芳香四級炭素、４の芳香メチン炭素、５の酸素化したメチン炭素、及びグルコースにより酸素化した１のメチレン炭素の２７個のシグナルを示した。その結果グルコースと共にエラグ酸としての構造を示した。
【００７４】
ＨＭＢＣスペクトラルデータ（図３）では、1Ｈ−13Ｃ長距離相関は、d６．６（Ｈ−２）での芳香プロトンとd１７０．１（Ｃ−７）のラクトンカルボニル炭素間、d１３７．６（Ｃ−１）と１１６．７（Ｃ−３）で２の四級炭素、d１４５．９（Ｃ−３）と１４５．４（Ｃ−４）で２の酸素化した芳香炭素を観察した。d６．６９（Ｈ−２×）での他の芳香プロトンは、d１６８．５（Ｃ−７×）でラクトンカルボニル炭素に、d１３８．２（Ｃ−１×）及び１１７．２（Ｃ−６×）で２の四級炭素に、d１４５．５（Ｃ−３×）及び１４５．４（Ｃ−４×）で２の酸素化した芳香炭素に相関していた。
【００７５】
d７．０６（Ｈ−２３、Ｈ−６３）での他の２の集積芳香プロトンからd１６６．７（Ｃ−７３）での他のランクトンカルボニル、d１２０．５（Ｃ−１３）での四級炭素とd１４６．３（Ｃ−３３、Ｃ−５３）及び１４０．４での３の酸素化した芳香炭素、５のアグリコンでも長距離相関を観察した。糖部分では、d６．３７（Ｈ−１３）からＣ−７へのアノマープロトン、d４．９６（Ｈ−６３）からＣ−７への酸素化したメチレンプロトンの長距離相関は、没食子酸（gallic acid）がＣ−１///でグルコースに結合し、ほかの没食子酸がＣ−６///に結合していることを示唆した。上記分析に基づき、化合物１０は１−Ｏ−ガロイル−６−Ｏ−ジガロイル−Ｒ−Ｄ−グルコース（1-O-galloyl-6-O-digalloyl-b-D-glucose）であると提案された。
【００７６】
分離した全ての化合物６〜１０の、バベシア・ギブソニ増殖に対するインビトロでの抗バベシア活性を調べた。結果を図４に示した。化合物１０及び６は、ＩＣ50値がそれぞれ４．７及び７．３μｇ／ｍｌのときに寄生虫の増殖を阻害する強い活性を示した。化合物７、８及び９は、ＩＣ50値がそれぞれ３５．４、６０．４、１３．５μｇ／ｍｌの時に、バベシア・ギブソニに対する中度の活性を示した。バベシア・ギブソニに対するＩＣ50値が０．６μｇ／ｍｌであるGanazegの市販薬と比べて、分離した化合物の活性は少なかった。分離した化合物は、熱帯熱マラリア原虫（P. falciparum）に対するインビトロの抗マラリア活性を調べた（図５）。結果は、化合物１０及び６がＩＣ50値が１．４５及び４．６１μｇ／ｍｌで、強い活性を示し、寄生虫の増殖を阻害した。化合物７、８及び９は、ＩＣ値がそれぞれ１０．９５、３５．１２、１４．８４μｇ／ｍｌで、活性は低かった。
【００７７】
宿主赤血球は、光学顕微鏡で定量した化合物１０の使用した濃度によって影響されなかった。コントロールの赤血球のバベシア・ギブソニ及び熱帯熱マラリア原虫の大部分は、３日目に、それぞれ細胞の端に透明な細胞質及び核をそれぞれ有する、典型的な花弁状及び繁殖体の形状を示した（図６Ａ、Ｃ）。反対に、化合物１０で処理した赤血球は、核の縮小と細胞質の消失を含む環の変形を示した（図６Ｂ、Ｄ）。
【００７８】
バベシア寄生虫に対するこれらの化合物の機能活性はまだ完全に判っていない。１つの可能性として、熱帯熱マラリア原虫に記されている（Trans. Royal Soc. Trop. Med. Hyg. 88, 686-687, 1994）ように、化合物が赤血球のメロゾイト侵入を妨げていることである。Plasmodium寄生虫による赤血球の侵入は、寄生虫のリガンド及びシアル酸の赤血球レセプターを必要としている（J. Cell Biol. 116, 901-909, 1992；Science 264, 1941-1944, 1994）。シアル酸はイヌの赤血球でも見い出され（J. Appl. Anim. Res. 20, 125-128, 2001）、バベシア・ギブソニによる赤血球の侵入にも同様の役割を演じるかもしれない。したがって、化合物６〜１０が、メロゾイト寄生虫と結合し、赤血球のシアル酸レセプターへメロゾイドをブロッキングすることにより、赤血球の侵入を防ぐことができる。他の可能性として、化合物が直接又は間接的に、赤血球に侵入し、定着した両方の寄生虫の増殖及び繁殖に影響することである。その効果を完全に展開できように、これらの化合物の寄生虫に対する詳細な機能活性を定量する必要がある。
【００７９】
［実験］
（実験の概要）
融点をミクロ融点装置 Yanacoで測定した。ＩＲスペクトラムは、Perkin Elmer system 2000 FT-IR 分光計で測定した。ＦＤ−ＭＳ、ＥＩ−ＭＳ、ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ、ＦＡＢ−ＭＳ及びＨＲ−ＦＡＢ−ＭＳの質量スペクトラムは、JOEL社製JMS-SX102A 分光計及びJOEL社製JMS-AX500分光計で測定した。ＮＭＲデータは、Bruker AM-500 FT-NMR分光計及びJOEL JNM-EX 270 FT-NMR分光計で分析した。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル６０（関東化学社製）、セファデックスLH-20（pharmacia社製）及びdiaion HP-20（Mitsubishi社製）を用いて行った。シリカゲル６０  Ｆ254プレート（Merck社製）は分析用ＴＬＣ及び調製用ＴＬＣに用いた。
【００８０】
（材料）
フィランサス  ニルリ（Phyllanthus niruri Linn）(Euphorbiaceae)の全植物は、２０００年７月にインドネシア、中央カリマンタン、パランカラヤ地区で採集した。植物をDr. Irawatiによりインドネシア、Herbarium Bogoriense  （植物標本館）で同定した。種の証拠標本は、インドネシア、ボゴール生物学研究開発部門（Department of Research and Development for Biology）に寄託した。
【００８１】
（抽出及び分離）
活性化合物の抽出及び単離を、抗バベシア活性アッセイにより監視した。P. niruriの全植物（１００ｇ）を２ｌの水で、３０分間、２回煮沸した。沸騰した水を濾過し、ＥｔＯＡで抽出し、水及びＥｔＯＡｃ層を得た。水層（１３．１ｇ）は、diaion HP-20カラムでクロマトグラフィーにかけ、Ｈ2Ｏ（１ｌ）、ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１ｌ）、７０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１ｌ）及ＭｅＯＨ（１ｌ）で連続して溶出した。３０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏフラクション（１９４ｍｇ）は、Sephadex LH-20でカラムクロマトグラフィにかけ、ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ（５０：４０：１０）で溶出し、３個のフラクションを得た。化合物６（３４．５ｍｇ）は、ＰＴＬＣ（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ、５０：４０：１０）で精製後フラクション２から入手した。７０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏフラクション（２１５ｍｇ）は、溶出剤としてＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ（５０：４０：１０）を用いて、sephadex LH-20でクロマトグラフィにかけ、４個のフラクションを得た。
【００８２】
フラクション３は、ＰＴＬＣ（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ、５０：４０：１０）で精製し、化合物７（３４．２ｍｇ）を産生した。ＥｔＯＡｃ層（２．８ｇ）は、シリカゲルカラムでクロマトグラフィにかけ、ＣＨＣＬ3（５００ｍｌ）、３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3（５００ｍｌ）、 ２０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3（５００ｍｌ）及びＭｅＯＨ（５００ｍｌ）で連続して溶出した。ＣＨＣｌ3フラクション（１３８ｍｇ）を、シリカゲルでカラムクロマトグラフィにかけ、ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ（９９：１）で溶出し、５個のフラクションを得た。フラクション３をＰＴＬＣ（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ、９８：２）で精製し、化合物８（７．６ｍｇ）を産生した。２０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3フラクション（３２９ｍｇ）を、溶出剤としてＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ（８０：２０）を用いて、シリカゲルカラムでクロマトグルフィにかけ、５個のフラクションを得た。化合物９（２３．５ｇ）は、ＰＴＬＣ（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ、８０：２０）で精製後、フラクション３から得た。化合物１０（２７．３ｍｇ）はＰＴＬＣ（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ、７０：３０）で精製後、フラクション４から得た。
【００８３】
（β−グルコガリン（β-Glucogallin）：化合物６の物性）
黄アモルファス固体、 FAB-MS m/z 331 [M-H]+, HR-FAB-MS m/z 331.0678 ([M-H]+, cald for [C13H15O10]+: 331.0664); 1H-NMR (270 MHz, CD3OD): δ 7.08 (1H, s, H-2), 7.08 (1H, s, H-6), 5.59 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1'), 3.26~3.42 (4H, m, H-2'〜H5') 3.66 (2H, dd, J = 5.2, 12.2 Hz, H-6'); 13C-NMR (270 MHz, CD3OD): δ 120.7 (C-1), 110.6 (C-2), 146.5 (C-3), 140.3 (C-4), 146.5 (C-5), 110.6 (C-6), 167.1 (C-7), 96.0 (C-1'), 78.8 (C-2'), 74.1 (C-3'), 71.1 (C-4'), 78.2 (C-5'), 62.3 (C-6').
（クエルセチン  ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシド（Quercetin 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2) O-β-D-xylopyranoside：化合物７の物性）
黄茶色アモルファス固体、FAB-MS m/z 595 [M-H]+, HR-FAB-MS m/z 595.1309 ([M-H]+, cald for [C26H27O16]+: 595.1298); 1H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ 6.14 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 6.33 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 7.57 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2'), 6.82 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'), 7.59 (1H, dd, J = 1.8, 8.4 Hz, H-6'), 5.42 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1"), 3.68 (1H, dd, J = 7.6, 8.8 Hz, H-2"), 3.18 (1H, m, H-3"), 3.37 (1H, m, H-4"), 3.56 (1H, m, H-5"), 3.66 (1H, d, J = 10.3 Hz, H-6a"), 3.50 (1H, m, H-6b"), 4.72 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1"'), 3.33 (1H, dd, J = 7.8, 9.3 Hz, H-2'"), 3.35 (1H, m, H-3"'), 3.47 (1H, m, H-4"'), 3.89 (1H, dd, J = 16.3, 6.2 Hz, H-5a'"), 3.21 (1H, m, H-5b'"); 13C-NMR (500 MHz, CD3OD): δ 158.2 (C-2), 134.9 (C-3), 179.3 (C-4), 105.4 (C-4a), 162.0 (C-5), 99.7  (C-6), 165.5 (C-7), 94.5 (C-8), 158.1 C-8a), 123.3 (C-1'), 117.2 (C-2'), 145.8 (C-3'), 149.5 (C-4'), 115.9 (C-5'), 123.0 (C-6'), 100.8 (C-1''), 82.2 (C-2''), 78.1 (C-3''), 71.0 (C-4''), 78.2 (C-5''), 62.3 (C-6''), 105.2 (C-1'''), 74.8 (C-2'''), 76.9 (C-3'''), 70.9 (C-4'''), 66.6 (C-5''').
（β−シトステロール（β-sitosterol）：化合物８の物性）
無色固体、 FD-MS m/z 414 [M]+, HR-EI-MS m/z 414.3910 ([M]+, cald for [C29H50O]+: 414.3864); 1H-NMR (270 MHz, CDCl3): δ 1.32 (1H, m, H-1), 1.45 (1H, m, H-2), 3.53 (1H, m, H-3), 2.25 (1H, m, H-4), 5.35 (1H, m, H-6), 1.75 (1H, m, H-7), 1.51 (1H, m, H-8), 0.82 (1H, m, H-9), 1.50 (1H, m, H-11), 2.00 (1H, m, H-12), 1.15 (1H, m, H-14), 1.62 (1H, m, H-15), 1.85 (1H, m, H-16), 1.15 (1H, m, H-17), 0.68 (1H, s, H-18), 1.01 (1H, s, H-19), 1.54 (1H, m, H-20), 0.95 (1H, d, J = 6.5 Hz, H-21), 1.01 (1H, m, H-22), 1.09 (1H, m, H-23), 0.94 (1H, m, H-24), 2.82 (1H, m, H-25), 0.97 (1H, dd, J = 6.5, 12.5 Hz, H-26), 0.98 (1H, t, J = 7.0 Hz, H-27), 5.11 (1H, q, J = 7.0 Hz, H-28), 1.59 (1H, d, J = 7.0 Hz, H-29); 13C-NMR (270 MHz, CDCl3): δ 37.2 (C-1), 31.7 (C-2), 71.8 (C-3), 42.3 (C-4), 140.7 (C-5), 121.7 (C-6), 31.7 (C-7), 31.9 (C-8), 50.1 (C-9), 36.5 (C-10), 21.1 (C-11), 39.8 (C-12), 42.3 (C-13), 56.8 (C-14), 24.3 (C-15), 28.2 (C-16), 56.0 (C-17), 11.8 (C-18), 19.4 (C-19), 36.1 (C-20), 18.8 (C-21), 33.9 (C-22), 26.1 (C-23), 45.8 (C-24), 29.1 (C-25), 19.8 (C-26), 19.0 (C-27), 23.1 (C-28), 11.9 (C-29).
（ 没食子酸（Gallic acid ）：化合物９の物性）
無色固体、 FAB-MS m/z 169 [M-H]+, HR-FAB-MS m/z 169.0137 ([M-H]+, cald for [C7H5O5]+: 169.0136); 1H-NMR (270 MHz, CD3OD): δ 7.01 (1H, s, H-2), 7.01 (1H, s, H-6); 13C-NMR (270 MHz, CD3OD): δ 121.8 (C-1), 110.2 (C-2), 146.2 (C-3), 139.4 (C-4), 146.2 (C-5), 110.2 (C-6) and 170.2 (C-7).
（１−Ｏ−ガロイル−６−Ｏ−ジガロイル−b−Ｄ−グルコース（1-O-galloyl-6-O-digalloyl-b-D-glucose）：化合物１０の物性）
黄色粉、 mp 204-205 oC, [a]D -152.3 (c 0.1, MeOH), FAB-MS m/z 633 [M-H]+, HR-FAB-MS m/z 633.0707 ([M-H]+ cald for [C27H21O18]+: 633.0726); 1H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ 6.66 (1H, s, H-2), 6.69 (1H, s, H-2'), 7.06 (1H, s, H-2''), 7.06 (1H, s, H-6''), 6.37 (1H, br s, H-1"'), 3.99 (1H, br s, H-2"'), 4.81 (1H, br s, H-3"'), 4.47 (1H, br s, H-4"'), 4.52 (1H, ddd, J = 2.3, 5.4, 11.9 Hz, H-5"'), 4.16 (1H, dd, J = 2.3, 11.9 Hz, H-6a"'), 4.96 (1H, dd, J = 5.4, 11.9 Hz, H-6b"'); 13C-NMR (500 MHz, CD3OD): δ 137.6 (C-1), 108.3 (C-2), 145.9 (C-3), 145.4 (C-4), 125.3 (C-5), 116.7 (C-6), 170.1 (C-7), 138.2 (C-1'), 110.2 (C-2'), 145.5 (C-3'), 145.4 (C-4'), 125.4 (C-5'), 117.2 (C-6'), 168.5 (C-7'), 120.5 (C-1''), 110.9 (C-2''), 146.3 (C-3''), 140.4 (C-4''), 146.3 (C-5''), 110.9 (C-6''), 166.7 (C-7"), 94.9 (C-1'''), 69.3 (C-2'''), 71.5 (C-3'''), 62.4 (C-4'''), 76.1 (C-5'''), 64.9 (C-6''').
（抗バベシア活性）
インビトロにおけるバベシア・ギブソニに対するアッセイは、Brockelman
and  Tanariyaの方法(J. Parasitol. 77, 994-997, 1991)を改良した方法で行  っ
た。分離した化合物は、少量のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、更  
にピルビン酸ナトリム（０．１ｍｇ／ｍｌ）、グルタミン（０．３ｍｇ／ｍｌ）  、
炭酸水素ナトリウム（２ｍｇ／ｍｌ）、ペニシリン（１００ユニット／ｍｌ）及  び
ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を追加したＲＰＭＩ  １６４０内で希  
釈した。最終的なＤＭＳＯ濃度は、２．５％以下であった。本研究に用いたバベ  
シア・ギブソニ寄生虫は、Murase らの方法（Murase et al., 1991）を改良し  た
方法に従った培地に維持した。健康なイヌからのヘパリン処置した静脈血を、
Vega y Martinez （ＶＹＭ）溶液（Vega, 1985）で３回洗浄し、ＲＰＭＩ  １６  
４０で２回洗浄した。洗浄後、赤血球は、６０％ＲＰＭＩ培地及び４０％健康な  
イヌの血清を含む培養培地内の６％の最終的な濃縮細胞容積まで再懸濁した。
【００８４】
培養培地は、感染した赤血球と混合し、インキュベーションの開始時に０．５
〜１．０％寄生虫血症を得た。試験は、９６−ウェル培養プレートで行い、各ウ
ェルには、２５μｌの寄生虫−培地混合物及び試験化合物０、 １．９、 ３．９、
７．８、１５．６、 ３１．２、 ６２．５、 １２５， ２５０、５００ 又は１０
００μｇ／ｍｌを含む２５μｌのＲＰＭＩ  １６４０培地が含まれる。コントロ
ールは、試験化合物なしで２．５％ＤＭＳＯで構成された。培養プレートは、３
７℃で、５％ＣＯ2、５％Ｏ2及び９０％Ｎ2の加湿雰囲気下で７２時間インキュ
ーベーションを行った。全ての試験は、３回行われた。Gimsaで染色した薄いス
メア標本を、各ウェルで作製し、１０００個の赤血球内の感染した細胞を測定し
て寄生虫血症レベルを定量した。
【００８５】
（抗マラリアアッセイ）
ＦＣＲ寄生虫からの熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum ）株を、
Trager and Jensenの方法（Science 196, 673-675, 1976）を改良した方法で、１０％ヒト血清（ＲＰＭＩ  １６４０（+））及びＯ型ヒト血液とＲＰＭＩ  １６４０培地を用いて培養した。試験化合物を少量のＤＭＳＯで可溶化し、さらにＲＰＭＩ−１６４０内で溶出し、原液を得た。最終的なＤＭＳＯ濃度は０．１％以下であった。寄生虫は、Ｄ−ソルビトル処理（ J. Parasitol. 65, 418-420, 1979）で同期化し、０．２５〜０．５０％の感染率で寄生した赤血球は、インキュベーションの開始時にＲＰＭＩ（+）内で５％の濃度となるよう調整した。試験は、２４−ウェル培養プレートで行い、各ウェルには５００μｌの寄生した赤血球懸濁液及び各化合物のそれぞれの濃度の２０μｌの試験化合物溶液が含まれる。試験化合物の最終濃度は、０、 １．９、 ３．９、 ７．８、 １５．６、 ３１．２、 ６２．５、 １２５、 ２５０、 ５００ 又は１０００ ｇ／ｍｌであった。
【００８６】
試験化合物を含まない他のウェルは、培養物内のシゾントの割合を検討するために調製した。培養プレートは、３７度で５％ＣＯ2、５％Ｏ2及び９０％Ｎ2の加湿雰囲気下で、インキュベーションを行った。プレートをインキュベーター内で２４時間維持した後、コントロールモニターの寄生虫の一部を取り出し、Gimsa染色したスメア標本を調製し、シゾントを顕微鏡で測定した。シゾントの割合が、測定可能なレベルに達していない場合には、材料をインキュベーターに戻し、培養を継続した。２０％以上の適切なシゾントの割合が現れた時、全ての培養プレートをインキュベーターから取り出し、各ウェルのシゾントの割合を顕微鏡で測定した。増殖した寄生虫に対する分離した化合物の効果を、シゾントの数と試験化合物の濃度に対する単純グラフから計算した５０％抑制濃度（ＩＣ50）で示した。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】本発明の抗バベシア活性を持つ化合物（１）に対するHMBCの重要な相関関係を示す図である。
【図２】本発明の抗バベシア活性を持つ化合物（５）に対するHMBCの重要な相関関係を示す図である。
【図３】本発明の抗バベシア活性を持つ化合物（１０）に対する1Ｈ−1Ｈ  ＣＯＳＹ及びＨＭＢＣの重要な相関関係を示す図である。
【図４】本発明の実施例において、フィランサス  ニルリ（Phylanthus niruri）からの分離した化合物６〜１０の、インビトロでのバベシア・キブソニの増殖に対する効果について示す図である。
【図５】本発明の実施例において、フィランサス  ニルリ（Phylanthus niruri）からの分離した化合物６〜１０のインビトロでの熱帯熱マラリア原虫の増殖に対する効果について示す図である。
【図６】本発明のの実施例において、Giemsa染色した血液標本における、バベシア・ギブソニ及び熱帯熱マラリア原虫の形態学的変化について示す図である。記号は：バベシア・ギブソニ：（Ａ）コントロール、（Ｂ）バベシア・ギブソニで処理した化合物１０、（Ｂ）コントロール（Ａ、Ｃ）及び化合物１０で処理した（Ｂ、Ｄ）ことを示す。倍率１０００倍。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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