(57)【要約】【課題】本発明の目的は、アカシア・アウリカリフォルミスとアカシア・マンギウムの種間雑種を確実に識別する方法を提供することにある。【解決手段】本発明は、特定の塩基配列、または、上記特定の塩基配列と少なくとも８０％の相同性を有し、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列の有無を、アカシア属植物のゲノムＤＮＡ中において調べることにより、アカシア・アウリカリフォルミスとアカシア・マンギウムとの種間雑種を識別する方法に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列を含むＤＮＡ。
【請求項２】
配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列と少なくとも８０％の相同性を有し、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列を含むＤＮＡ。
【請求項３】
配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列、または、配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列と少なくとも８０％の相同性を有し、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列の有無を、アカシア属植物のゲノムＤＮＡ中において検出することにより、アカシア・アウリカリフォルミスとアカシア・マンギウムとの種間雑種を識別する方法。
【請求項４】
請求項１もしくは２に記載のＤＮＡまたはその一部を増幅し得るように設計されたプライマーを用い、アカシア属植物のゲノムＤＮＡを鋳型として増幅反応を行うことを含む請求項３に記載の方法。
【請求項５】
配列番号７〜１８のいずれかで表される塩基配列またはそれらの相補配列を有するオリゴヌクレオチドからなるプライマー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムにおける新規なＤＮＡおよび、それらを利用した両樹種の種間雑種の判定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アカシア属植物は東南アジアを中心に植林が行われており、紙の原料として多く使われている。特にアカシア・アウリカリフォルミス（Ａｃａｃｉａ  ａｕｒｉｃｕｌｉｆｏｒｍｉｓ  Ａ．  Ｃｏｎｎ．  ｅｘ  Ｂｅｎｔｈ．）とアカシア・マンギウム（Ａｃａｃｉａ  ｍａｎｇｉｕｍ  Ｗｉｌｌｄ．）間の種間雑種は優れた特性を示すことから、広く利用され始めている。これらの種間雑種は主に自然交雑種であり、極めて成長性に優れ、雑種集団から優良個体選抜など育種的試みも行われている。
【０００３】
通常、形態的特徴の比較から雑種の判定を行っているのが一般的である。しかし形態による判定は、識別者の経験に基づく主観的判断であり、必ずしも正確な判定方法ではない。また、近年ではＤＮＡを用いた雑種の識別法が開発され、その手法としてＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ  Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ＤＮＡ）法が用いられている（特許文献１参照）。ＲＡＰＤ法は操作が簡便で少量のＤＮＡで分析可能であり、雑種の識別のほかに個体識別などにも利用されているが、再現性が悪いという致命的な欠陥があり、必ずしも正確で確実な雑種識別法ではない。
【０００４】
【特許文献１】特開平１０−２２９８９８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、アカシア・アウリカリフォルミスとアカシア・マンギウムの種間雑種を確実に識別する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは前記状況にかんがみ、より優れたアカシア種間雑種の鑑定方法を見いだすべく鋭意研究を重ねた結果、アカシア属植物のＤＮＡにおいて塩基配列の差異を効率よく検出する方法を開発し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、以下の発明を包含する。
（１）配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列を含むＤＮＡ。
（２）配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列と少なくとも８０％の相同性を有し、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列を含むＤＮＡ。
（３）配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列、または、配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列と少なくとも８０％の相同性を有し、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列の有無を、アカシア属植物のゲノムＤＮＡ中において検出することにより、アカシア・アウリカリフォルミスとアカシア・マンギウムとの種間雑種を識別する方法。
（４）上記（１）もしくは（２）に記載のＤＮＡまたはその一部を増幅し得るように設計されたプライマーを用い、アカシア属植物のゲノムＤＮＡを鋳型として増幅反応を行うことを含む上記（３）に記載の方法。
（５）配列番号７〜１８のいずれかで表される塩基配列またはそれらの相補配列を有するオリゴヌクレオチドからなるプライマー。
【発明の効果】
【０００８】
本発明を用いることで、従来行われてきた形態的特徴等による識別方法に比べて、より正確にアカシア・マンギウムとアカシア・アウリカリフォルミスの種間雑種を識別することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明を具体的に説明する。本発明は、アカシア・アウリカリフォルミスとアカシア・マンギウムとの種間雑種を識別する方法に関する。この識別方法は、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列が、検査対象であるアカシア属植物のゲノムＤＮＡ中に存在するか否かを調べることによって行う。例えば、検査対象であるアカシア属植物のゲノムＤＮＡ中に、アカシア・アウリカリフォルミスのゲノムＤＮＡ中にのみ特異的に存在する塩基配列と、アカシア・マンギウムのゲノムＤＮＡ中にのみ特異的に存在する塩基配列とが両者共に含まれていれば、そのアカシア属植物は、アカシア・アウリカリフォルミスとアカシア・マンギウムとの種間雑種であると判断される。
【００１０】
アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列としては、（ａ）配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列、および（ｂ）配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列と少なくとも８０％の相同性を有し、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列が挙げられる。配列番号１、３、５で表される塩基配列はアカシア・マンギウムのゲノムＤＮＡ中に特異的に存在し、配列番号２、４、６で表される塩基配列はアカシア・アウリカリフォルミスのゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する。
【００１１】
ここで配列番号１〜６で表される塩基配列を決定する手順について説明する。まずアカシア・マンギウムとアカシア・アウリカリフォルミスからＣＴＡＢ（臭化セチルトリメチルアンモニウム）法を用いてゲノムＤＮＡを抽出する。次に、該ゲノムＤＮＡをＲＡＰＤ法により増幅させる。プライマーとして配列番号１９〜２４のオリゴヌクレオチドが用いられる。このようにして得られた増幅ＤＮＡをアガロースゲル電気泳動により分離する。その後、アカシア・アウリカリフォルミス、またはアカシア・マンギウム特異的な増幅ＤＮＡについてクローニングを行い、それぞれの種に特異的なＤＮＡの塩基配列を決定する。
【００１２】
配列番号１９を用いたＲＡＰＤ法により得られたアカシア・マンギウム特異的なＤＮＡ断片を配列番号１のＤＮＡ、配列番号２０を用いたＲＡＰＤ法によって得られたアカシア・アウリカリフォルミス特異的なＤＮＡ断片を配列番号２のＤＮＡ、配列番号２１を用いたＲＡＰＤ法によって得られたアカシア・マンギウム特異的なＤＮＡ断片を配列番号３のＤＮＡ、配列番号２２を用いたＲＡＰＤ法によって得られたアカシア・アウリカリフォルミス特異的なＤＮＡ断片を配列番号４のＤＮＡ、配列番号２３を用いたＲＡＰＤ法によって得られたアカシア・マンギウム特異的なＤＮＡ断片を配列番号５のＤＮＡ、配列番号２４を用いたＲＡＰＤ法によって得られたアカシア・アウリカリフォルミス特異的なＤＮＡ断片を配列番号６のＤＮＡと記す。
【００１３】
本発明はまた、配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列を含むＤＮＡに関する。かかるＤＮＡはアカシア属雑種の識別の指標として有用である。
【００１４】
配列番号１〜６において１または数個の塩基が置換、欠失、挿入または付加された塩基配列であって、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列を含むＤＮＡもまたアカシア属雑種の識別の指標として有用である。
【００１５】
配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列と少なくとも８０％の相同性を有し、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列を含むＤＮＡもまたアカシア属雑種の識別の指標として有用である。
【００１６】
配列番号１〜６のいずれかで表される塩基配列の全部又は一部からなるＤＮＡに対し相補的な塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであって、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列を含むＤＮＡもまたアカシア属雑種の識別の指標として有用である。ここで、ストリンジェントな条件とは、特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいい、すなわち、各遺伝子に対し高い相同性（相同性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上）を有するＤＮＡがハイブリダイズする条件をいう。より具体的には、このような条件は、０．５〜１ＭのＮａＣｌ存在下４２〜６８℃で、又は５０％ホルムアミド存在下４２℃で、又は水溶液中６５〜６８℃で、ハイブリダイゼーションを行った後、０．１〜２倍濃度のＳＳＣ（saline sodium citrate）溶液を用いて室温〜６８℃でフィルターを洗浄することにより達成され得る。ここで、「塩基配列の一部からなるＤＮＡの塩基配列」とは、各遺伝子の塩基配列の一部分を含むＤＮＡの塩基配列であって、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズさせるのに十分な塩基配列の長さを有するもの、例えば、少なくとも５０塩基、好ましくは少なくとも１００塩基、より好ましくは少なくとも２００塩基の配列である。
【００１７】
なお本明細書において「塩基配列を含むＤＮＡ」とは、所定の塩基配列のみからなるＤＮＡだけでなく、所定の塩基配列をその一部に含むＤＮＡをも包含する概念である。また「塩基配列有するＤＮＡ」とは、所定の塩基配列のみからなるＤＮＡを意味する。
【００１８】
本発明のアカシア属雑種の識別方法においては、配列番号１、２、３、４、５もしくは６で示される塩基配列、または、配列番号１、２、３、４、５もしくは６で示される塩基配列と少なくとも８０％の相同性を有し、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列が、アカシア属植物のゲノム中に存在するか否かをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法を用いて調べる。
【００１９】
本発明の識別方法におけるＰＣＲ法に使用されるプライマーは、配列番号１、２、３、４、５もしくは６で示される塩基配列を含むＤＮＡ、または、配列番号１、２、３、４、５もしくは６で示される塩基配列と少なくとも８０％の相同性を有し、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムの一方のゲノムＤＮＡ中に特異的に存在する塩基配列を含むＤＮＡ、またはその一部、または該ＤＮＡを含むＤＮＡ断片を含むＤＮＡ（以下単に「アカシア・アウリカリフォルミス（またはアカシア・マンギウム）に特異的なＤＮＡという」）を増幅し得るオリゴヌクレオチドからなるプライマーであればよい。
【００２０】
本発明の識別方法では、例えば、アカシア・マンギウムに特異的なＤＮＡを増幅し得るプライマーを用いるＰＣＲ法と、アカシア・アウリカリフォルミスに特異的なＤＮＡを増幅し得るプライマーを用いるＰＣＲ法とを別々に行い、ＰＣＲ産物をそれぞれ調べることにより識別が行われる。本発明の識別方法では、より典型的には、これら２種類のプライマーを両者併用してＰＣＲ法を行い、ＰＣＲ産物を調べることにより識別が行われる。後者の方法は増幅反応が１回で済むため好ましい。
【００２１】
次に本発明に使用され得るプライマーについて説明する。
【００２２】
（１）配列番号１のＤＮＡを増幅し得るプライマーの一例：
セット番号１
フォワード：５’−ＡＡＣＧＡＣＣＣＡＡＡＡＣＴＡＡＡＴＡＧＧＡＧＴＣＴＧ−３’（配列番号７）
リバース：５’−ＡＡＡＴＣＴＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＣＧＴＣ−３’（配列番号８）
【００２３】
（２）配列番号２のＤＮＡを増幅し得るプライマーの一例：
セット番号２
フォワード：５’−ＣＴＧＣＣＡＴＡＡＴＧＧＡＧＧＡＣＧＣＣ−３’（配列番号９）
リバース：５’−ＴＣＡＣＡＴＣＣＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＴＡＧＧ−３’（配列番号１０）
【００２４】
（３）配列番号３のＤＮＡを増幅し得るプライマーの一例：
セット番号３
フォワード：５’−ＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＡＴＣＡＴＣＴＡＣＣＡＡＣＡ−３’（配列番号１１）
リバース：５’−ＧＡＧＡＧＡＧＡＡＡＣＧＣＴＧＣＣＡＣＣ−３’（配列番号１２）
【００２５】
（４）配列番号４のＤＮＡを増幅し得るプライマーの一例：
セット番号４
フォワード：５’−ＴＴＴＴＴＴＧＴＣＡＣＴＡＴＣＡＣＴＴＴＴＴＣＡＣＣＧ−３’（配列番号１３）
リバース：５’−ＡＡＧＣＧＡＡＧＧＡＴＡＡＧＡＡＧＡＡＧＴＧＣＧ−３’（配列番号１４）
【００２６】
（５）配列番号５のＤＮＡを増幅し得るプライマーの一例：
セット番号５
フォワード：５’−ＧＧＴＡＡＣＧＡＧＡＡＡＧＴＧＧＴＣＣＡＡＧＧ−３’（配列番号１５）
リバース：５’−ＴＣＡＧＡＴＣＧＧＡＧＣＴＡＡＣＣＡＧＡＧＧ−３’（配列番号１６）
【００２７】
（６）配列番号６のＤＮＡを増幅し得るプライマーの一例：
セット番号６
フォワード：５’−ＧＧＡＡＣＧＴＴＡＣＡＡＡＣＡＡＡＴＡＧＴＡＴＡＴＣＡＡＧＧＧ−３’（配列番号１７）
リバース：５’−ＣＡＴＴＡＴＴＣＴＴＴＴＧＣＣＡＴＡＡＧＴＧＴＴＧＡＣＣ−３’（配列番号１８）
【００２８】
上記のプライマーを用いて、ＰＣＲ法によりアカシア属植物のゲノムＤＮＡを増幅し、該増幅ゲノムＤＮＡを電気泳動によって分離後、増幅ゲノムＤＮＡの視覚検出を行うことにより、アカシア・アウリカリフォルミス特異的ＤＮＡ、または、アカシア・マンギウム特異的ＤＮＡが存在するか否かに基づいてアカシア種間雑種を識別することができる。上記のプライマーのセット１〜６は１回の増幅反応においてそれぞれ単独でまたは適宜組み合わされて使用される。例えば下記の実施例で示されるようにプライマーのセット１〜６の全部を１回の増幅反応に使用することができる。
【００２９】
配列番号７〜１８のいずれかで表される塩基配列の相補配列を有するオリゴヌクレオチドもまた、配列番号７〜１８のいずれかで表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドと同様に、プライマーとして本発明に好適に使用することができる。
【実施例】
【００３０】
以下に実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。本発明は以下の実施例によってなんら制限されるものではない。
【００３１】
＜材料と方法＞
アカシア・アウリカリフォルミス４５個体、アカシア・マンギウム４８個体、両樹種の雑種３個体を用いた。
【００３２】
＜ゲノムＤＮＡ抽出＞
ゲノムＤＮＡは白石らの方法（白石  進・渡辺敦史（１９９５）ｒｂｃＬ遺伝子多型を利用したアカマツとクロマツの葉緑体ゲノム識別．日林誌  ７７：４２９−４３６）に従っての抽出を行った。得られたＤＮＡはＴＥ緩衝液に溶解した。
【００３３】
＜アカシア・マンギウム特異的ＤＮＡの取得＞
上記方法で得られたアカシア・アウリカリフォルミスまたはアカシア・マンギウムのゲノムＤＮＡを鋳型としてＲＡＰＤ分析を行った。ＲＡＰＤ分析はゲノムＤＮＡ１０ｎｇ、プライマーＡＡＣＧＧＴＧＡＣＣＴＧＣ（配列番号１９）終濃度１μＭ、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｒｏｃｈｅ社製）０．１ユニット、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰ各２００μＭを加えた増幅用緩衝液２０μｌ中で行った。ＰＣＲサイクルはサーマルサイクラー（ＭＰ、宝酒造社製）中で、鋳型ＤＮＡを９５℃で５分間変性させ、変性：９５℃１分間、アニーリング：３７℃９０秒間、伸長反応：７２℃２分間を１サイクルとして４５サイクル繰り返した後、さらに伸長反応：７２℃で５分間で行った。
【００３４】
次にＰＣＲ産物を分離させるために、１．５％アガロースゲルによる電気泳動を行った。ＰＣＲ反応液９μｌと１μｌのローディングバッファーを混合した後、１．５％アガロースゲルで、１００Ｖにて１時間電気泳動を行った。泳動終了後、該アガロースゲルを０．５μｇ／ｍｌのエチジウムブロマイドを含むＴＡＥバッファー溶液に約３０分浸漬し、アガロースゲル内のＤＮＡを染色した。その後、暗所で紫外線を照射し、ゲル中のＤＮＡバンドを検出した。
【００３５】
複数されるＤＮＡバンドのうち、アカシア・マンギウムのゲノムＤＮＡ全てに検出され、かつ、アカシア・アウリカリフォルミスのゲノムＤＮＡからは検出されないアカシア・マンギウム特異的なバンドが６４３ｂｐに観察された。このバンドをゲルごとカッターで切りだし、市販の精製キット（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて、使用法に従い、ＤＮＡを回収、精製した。次にＴＯＰＯ  ＴＡクローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いて、使用法に従い、該ＰＣＲ産物をクローニングし、ＬＩ−ＣＯＲ社製のシーケンサーを用いて目的のＤＮＡ配列と長さを決定し、配列番号１で示されるＤＮＡを得た。
【００３６】
同様にして、ＲＡＰＤ分析の際にプライマーＧＧＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣＡ（配列番号２１）を使うことにより配列番号３で示されるＤＮＡを、プライマーＡＡＣＧＧＴＧＡＣＣＧＡＴ（配列番号２３）を使うことにより配列番号５で示されるＤＮＡをそれぞれ得た。
【００３７】
＜アカシア・アウリカリフォルミス特異的ＤＮＡの取得＞
上記と同様にＲＡＰＤの際に、プライマーＡＧＴＣＧＧＧＴＧＧＣＴＧ（配列番号２０）を使い、アカシア・アウリカリフォルミスのゲノムＤＮＡ全てに検出され、かつ、アカシア・マンギウムのゲノムＤＮＡからは検出されない、アカシア・アウリカリフォルミス特異的なバンドを選抜することにより配列番号２で示されるＤＮＡを得た。
【００３８】
同様にして、ＲＡＰＤ分析の際にプライマーＧＧＡＧＧＡＧＡＧＧＣＡＴ（配列番号２２）を使うことにより配列番号４で示されるＤＮＡを、プライマーＧＧＡＧＧＡＧＡＧＧＧＴＡ（配列番号２４）を使うことにより配列番号６で示されるＤＮＡをそれぞれ得た。
【００３９】
得られたＤＮＡの塩基配列（配列番号１〜６）を基に、これらのＤＮＡの一部をＰＣＲ増幅可能なプライマーを設計して、配列番号７〜１８で示されるオリゴヌクレオチドプライマーを得た。
【００４０】
＜雑種の識別＞
配列番号１〜６で示される塩基配列からなるＤＮＡを増幅し得るオリゴヌクレオチドの組み合わせ（セット番号１〜６）をプライマーとして用いるＰＣＲ法により、アカシア・マンギウム４８個体、アカシア・アウリカリフォルミス４５個体、両樹種の雑種３個体の識別を行った。
【００４１】
ＰＣＲ反応は、アカシア・マンギウム、アカシア・アウリカリフォルミス、または、両樹種の雑種のゲノムＤＮＡ約１０ｎｇ、配列番号７〜１８のそれぞれにより示される配列からなる１２種類のプライマー各２００ｎＭ、ＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）１．０ユニット、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰ各２００μＭ、ＭｇＣｌ２３ｍＭを加えた増幅用緩衝液２０μｌ中で行った。ＰＣＲサイクルは９５℃で５分熱変性させ、変性：９５℃３０秒間、アニーリング：６０℃６０秒間、伸長反応：７２℃６０分間のサイクルを３０サイクル繰り返した後、伸長反応：７２℃５分間で行った。
【００４２】
次にＰＣＲ産物を分離させるために、１．５％アガロースゲルによる電気泳動を行った。ＰＣＲ反応液９μｌと１μｌのローディングバッファーを混合した後、１．５％アガロースゲルで、１００Ｖにて１時間電気泳動を行った。泳動終了後、該アガロースゲルを０．５μｇ／ｍｌのエチジウムブロマイドを含むＴＡＥバッファー溶液に約３０分浸漬し、アガロースゲル内のＤＮＡを染色した。その後、暗所で紫外線を照射し、ゲル中のＤＮＡバンドを検出した。
【００４３】
図１に示すように、アカシア・マンギウムのゲノムＤＮＡからはアカシア・マンギウム特異的なＰＣＲ産物のみが観察され、アカシア・アウリカリフォルミスのゲノムＤＮＡからはアカシア・アウリカリフォルミス特異的なＰＣＲ産物のみが観察され、雑種のゲノムＤＮＡからはアカシア・マンギウム特異的なＰＣＲ産物とアカシア・アウリカリフォルミス特異的なＰＣＲ産物の両方が全て検出された。
【００４４】
図１はオリゴヌクレオチドセット番号１〜６をプライマーとして用いてＰＣＲを行って得られたＰＣＲ産物のアガロース電気泳動パターンの一部である。図中、Ａｍはアカシア・マンギウムを、Ａｒはアカシア・アウリカリフォルミスを、Ｈｙは両樹種の種間雑種を、Ｍは電気泳動マーカーを示す。図中の矢印（白抜き）はアカシア・マンギウムに特異的なバンドを、矢印（黒）はアカシア・アウリカリフォルミス特異的なバンドを示す。
【００４５】
以上の結果より、オリゴヌクレオチドセット番号１〜６をプライマーとして用いて行ったＰＣＲによる分析結果を単独、あるいは複数比較して用いることによって、アカシア・マンギウムとアカシア・アウリカリフォルミスの種間雑種の識別が可能であることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】オリゴヌクレオチドセット番号１〜６の全てをプライマーとして用いてＰＣＲを行って得られたＰＣＲ産物のアガロース電気泳動のパターンの一部を示す図である。
【配列表フリーテキスト】
【００４７】
配列番号７：合成ＤＮＡ
配列番号８：合成ＤＮＡ
配列番号９：合成ＤＮＡ
配列番号１０：合成ＤＮＡ
配列番号１１：合成ＤＮＡ
配列番号１２：合成ＤＮＡ
配列番号１３：合成ＤＮＡ
配列番号１４：合成ＤＮＡ
配列番号１５：合成ＤＮＡ
配列番号１６：合成ＤＮＡ
配列番号１７：合成ＤＮＡ
配列番号１８：合成ＤＮＡ
配列番号１９：合成ＤＮＡ
配列番号２０：合成ＤＮＡ
配列番号２１：合成ＤＮＡ
配列番号２２：合成ＤＮＡ
配列番号２３：合成ＤＮＡ
配列番号２４：合成ＤＮＡ
【図１】
2005295925.tif 000003
【配列表】
2005295925000001.app