(57)【要約】【課題】  増殖性腎疾患、特に腎症（糖尿病性腎症又は高血圧性腎症）の治療薬等として有用な薬剤の提供。【解決手段】  転写調節因子の結合部位への結合を阻害するおとり型核酸医薬（デコイ）であるNF-κBのデコイ、STAT-6のデコイ、AP-1のデコイ、Etsのデコイ及びE2Fのデコイから選ばれるものを有効成分とする、増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤。腎症（糖尿病性腎症又は高血圧性腎症）、糸球体硬化症又はアルブミン尿症の予防・治療・改善剤として好適である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
転写調節因子の結合部位への結合を阻害するデコイ（おとり）型核酸医薬を有効成分とする、増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤。
【請求項２】
デコイ（おとり）型核酸医薬が、NF-κB、STAT-6、AP-1、Ets及びE2Fのおとり型核酸医薬から選ばれる少なくとも１つのものである、請求項１記載の増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤。
【請求項３】
デコイ（おとり）型核酸医薬が、NF-κBのおとり型核酸医薬である、請求項１又は２記載の増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤。
【請求項４】
NF-κBのデコイ（おとり）型核酸医薬が、塩基配列中に配列番号１を含むものである、請求項１〜３のいずれかに記載の増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤。
【請求項５】
NF-κBのデコイ（おとり）型核酸医薬が、配列番号２及び配列番号３からなる二重鎖核酸である、請求項１〜４のいずれかに記載の増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤。
【請求項６】
増殖性腎疾患が、腎症、糸球体硬化症又はアルブミン尿症である、請求項１〜５のいずれかに記載の増殖性腎疾患予防・治療・改善剤。
【請求項７】
腎症が、糖尿病性腎症又は高血圧性腎症である、請求項６記載の増殖性腎疾患予防・治療・改善剤。
【請求項８】
剤型が注射剤を含む液剤である、請求項１〜７のいずれかに記載の増殖性腎疾患予防・治療・改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、デコイ（おとり）型核酸医薬を有効成分とする、腎症、糸球体硬化症又はアルブミン尿症等の増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、日本の糖尿病患者は約700万人存在し、さらに潜在的糖尿病予備群は推定2000万人以上とされている。生活習慣病と位置付けされる糖尿病の原因は多彩で、食生活をはじめ、遺伝子、内分泌、炎症などの多くの要因が絡み、複雑な相互関係の上に形づくられている。
【０００３】
糖尿病は慢性疾患で、その合併症性には細血管症、腎症、網膜症、神経症などがあり、患者個人としても多大な身体的、精神的な負荷があるが、医療福祉の面でも、現在から将来への日本社会が抱える社会的疾患へと進展している。最近の日本透析医学会の調査では、新規透析患者の内、糖尿病患者数は約３５％に上っている。
【０００４】
合併症性の内、糖尿病性腎症は、糸球体基底膜の肥厚、メサンジュウム細胞の増殖とKimmelstiel-Wilson 結節を代表とする線維化など細胞外基質の拡大を伴い、これら病理学的変化が糖尿病性腎症の直接的増悪因子となっている。
【０００５】
この糖尿病性腎症の病期は第１期から第５期に分類することができ、下記のとおり、それぞれの病期に応じた治療法が知られている。
【０００６】
第１期（腎症前期）：糸球体の中では高血圧になっていると考えられるが、現在の一般的な検査方法で検出できるような腎障害が認められない時期。厳格な血糖コントロールが有効。
【０００７】
第２期（早期腎症）：精密な尿検査でわずかな蛋白尿(微量アルブミン尿)が認められる時期。全身の血圧が上昇し始める。厳格な血糖コントロールおよび血圧の管理が有効（血圧は130／85ｍｍＨｇ程度に）。アンギオテンシン変換酵素阻害薬が有用。
【０００８】
第３期（顕性腎症）：持続性蛋白尿（簡易蛋白尿検査で異常がわかる）が認められる時期（前期）。さらに進行すると、糸球体機能（老廃物排泄機能）が低下する（後期）。高血圧を伴いやすい。厳格な血糖コントロールおよび高血圧の治療（血圧は130／85ｍｍＨｇ程度に）とともに食事中の塩分・蛋白質量を制限する（標準体重１キログラムあたり食事蛋白０．８グラム程度）必要がある。アンギオテンシン変換酵素阻害薬が有用。この時期になると腎症の進行を完全に防止することは困難となる。
【０００９】
第４期（腎不全期）：腎機能障害のため一般的な血液検査で異常が認められる時期。尿蛋白も増加し血液中の蛋白質が低下する（ネフローゼ症候群と呼ばれる）ことが多い。降圧療法（140−150／90−95ｍｍＨｇ程度に）、塩分制限、低蛋白食が必要。過激な運動は不可。透析療法導入の準備も必要となる。
【００１０】
第５期（透析療法期）：腎機能が廃絶し、慢性血液透析療法に導入された時期。
【００１１】
糖尿病性腎症は、生活習慣の変化等を原因とするものと考えられ、腎不全により透析導入された患者の第一位の原因疾患ともなっており（２０００年度）、より効果の高い治療法が求められている。
【非特許文献１】Gene Ther. 2000 Aug;7(15):1326-32.
【非特許文献２】Exp Nephrol．2001;9(3):181-90
【非特許文献３】Genes Immun．2001 ０ct;2(6):304-8.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
非特許文献１では、組織の炎症性変化に起因する腎炎の治療にNF-κBのデコイ化合物である合成オリゴヌクレオチド（ODN）を使用したことが開示されているが、増殖性変化による疾患の治療についての開示はない。
【００１３】
本発明は、増殖性変化による増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、２型糖尿病モデル動物として知られ、ヒト糖尿病性腎症の腎病変と酷似した病変ができる唯一のモデルとして知られるOtsuka-Long-Evance-Tokushima-Fatty(OLETF)ラットを用い、すでに腎病変形成期に入った動物の腎臓にデコイODNをトランスフェクトすることで、各種増殖因子やレセプターの遺伝子発現を抑制できることを見出し、本発明を完成した。
【００１５】
即ち本発明は、課題の解決手段として、転写調節因子の結合部位への結合を阻害するデコイ（おとり）型核酸医薬（以下「デコイ」という）を有効成分とする、増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤を提供するものである。
【００１６】
本発明で用いる「デコイ」又は「デコイ化合物」は、NF-κB、STAT-6、AP-1、Ets及びE2F等が結合する染色体上の部位、又はNF-κB、STAT-6、AP-1、Ets及びE2F等に制御される遺伝子の他の転写調節因子が結合する染色体上の部位（標的結合部位）に結合し、NF-κB、STAT-6、AP-1、Ets及びE2F等と、これらの標的結合部位への結合について拮抗する化合物をいう。代表的なデコイ又はデコイ化合物は、核酸及びその類似体である。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の増殖性変化による増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤は、増殖性変化による増殖性腎疾患の治療等において有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明の増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤（以下「増殖性腎疾患用の薬剤」という）は、転写調節因子の結合部位への結合を阻害するデコイを有効成分とし、必要に応じて薬学的に許容できる担体を含むものである。
【００１９】
デコイは、WO02/066070及びUS2002-0052333 A1等に開示されているものを用いることができ、中でも下記のデコイから選ばれる少なくとも１つのものが好ましい。
【００２０】
NF-κBのデコイ（配列番号２）（WO02/066070参照）
STAT-6のデコイ（配列番号４）（WO02/066070参照）
AP-1のデコイ（配列番号５）（WO02/066070参照）
Etsのデコイ（配列番号６）（WO02/066070参照）
E2Fのデコイ（配列番号７と配列番号８は、ずれて２本鎖を形成している。）（US2002-0052333 A1参照）
デコイとしては、上記のデコイの相補体を含むオリゴヌクレオチド、これらの変異体、これらを分子内に含む化合物も用いることができる。オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡでも
ＲＮＡでもよく、或いはそのオリゴヌクレオチド内に核酸修飾体及び／又は擬核酸を含むものであってもよい。
【００２１】
オリゴヌクレオチドには、リン酸ジエステル結合部の酸素原子をイオウ原子で置換したチオリン酸ジエステル結合を持つオリゴヌクレオチド（Ｓ−オリゴ）、リン酸ジエステル結合を電荷を持たないメチルホスフェート基で置換したオリゴヌクレオチド等の生体内で分解を受けにくくするために改変されたものも含まれる。
【００２２】
オリゴヌクレオチド、その変異体又はこれらを分子内に含む化合物は、１本鎖でも２本鎖でもよく、線状でも環状でもよい。変異体とは、上記配列の一部が変異、置換、挿入、又は欠失しているもので、NF-κB等又はNF-κB等に制御される遺伝子のその他の転写調節因子が結合する核酸結合部位と特異的に拮抗する能力を有する核酸を意味する。
【００２３】
デコイとしては、特にNF-κBのデコイが好ましい。NF-κBは炎症・免疫、細胞増殖、癌化に関与する転写因子である。NF-κBは、細胞外からのシグナルに応答すると、その阻害分子であるI-κBが分解され、遊離する。遊離したI-κBは、細胞質から核へと移行して行き、種々のDNA認識部位に結合することにより、細胞増殖や炎症に関係するインターロイキン（IL）-１、IL-６、IL-８、GM-CSF、TNFなどのサイトカイン、ケモカイン、インターフェロン及び種々の接着因子（E-selectin、VCAM-1、ICAM-1）などの発現のための重要な媒介物として働く。NF-κBのデコイ化合物である合成オリゴヌクレオチド（ODN）は、NF-κBに高い親和性がある合成２本鎖DNAを有しており、目的遺伝子のプロモーター領域への核因子の結合を阻害することにより、遺伝子トランス活性化を阻止する。
【００２４】
NF-κBのデコイは、塩基配列中に配列番号１を含むものが好ましく、特に配列番号２(SEQ1)及び配列番号３(SEQ2)からなる二重鎖核酸（NF-κBデコイオリゴヌクレオチド）（ＵＳ6，262，033参照）が好ましい。
【００２５】
デコイは、WO02/066070に記載された方法により、製造することができる。
【００２６】
本発明の増殖性腎疾患用の薬剤は、デコイ単独、又は必要に応じて薬学的に許容できる担体とデコイとを用い、投与方法に応じた剤型にすることができ、例えば、WO02/066070に記載された投与方法（経口投与又は非経口投与）及び剤型にすることができる。
【００２７】
経口投与する場合の剤型は、錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤等を挙げることができる。
【００２８】
非経口投与法としては、局所投与、皮膚塗布投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与、鼻孔投与等を挙げることができ、注射剤を含む液剤にすることが好ましい。
【００２９】
注射剤は、デコイをハンクスの溶液、リンゲル溶液、緩衝化生理食塩水等の生理学的に適合する緩衝液中に溶解乃至は懸濁させて得ることができる。
【００３０】
注射剤を水性注射懸濁物にする場合には、懸濁物の粘度を安定させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、デキストランを含有させることができる。また、注射剤は、ゴマ油のような脂肪酸、オレイン酸エチル又はトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、リポソームを含む油状注射剤懸濁物にすることができる。
【００３１】
本発明の増殖性腎疾患用の薬剤を注射剤とするときは、薬剤の注射と超音波照射を併用することが治療効果等を高める観点から望ましい。
【００３２】
具体的には、NF-κB等を超音波心臓検査コントラスト剤Optison（商標名；米国Mallinkrodt社製の造影剤）と混合したものを循環血液中に投与し、目的臓器である腎臓にのみに循環血液側から導入するため、腎臓に超音波照射（例えば、実施例に記載の超音波遺伝子導入装置を使用する）を行い、腎糸球体支持細胞であるメサンジュウム細胞内に特異的にデコイODNをトランスフェクトする方法を適用する。なお、腎臓への超音波照射は、開腹手術後、腎臓に直接照射してもよいし、開腹することなく体外から腹部に照射してもよい。
【００３３】
超音波照射の条件は、実施例に記載の超音波遺伝子導入装置を使用するとき、１〜１０Ｗ／ｃｍ2、好ましくは２〜５Ｗ／ｃｍ2で、３０秒〜３０分、好ましくは５〜２５分でよい。このときduty比を１０〜１００％、好ましくは５０〜１００％にすることができる。
【００３４】
注射と超音波照射は、
（１）注射をした後に超音波照射を開始する方法、
（２）超音波照射と注射を同時にする方法、
（３）超音波照射をしながら注射をする方法、
のいずれかの方法を適用することができるが、本発明においては、治療効果等を高める観点から、特に（１）、（２）の方法が好ましい。
【００３５】
本発明の増殖性腎疾患用の薬剤の投与量及び投与回数は、投与方法、治療期間、年齢、体重等により異なるが、注射剤では、有効成分であるデコイ量に換算して、通常１ｍｇ〜１ｇ／日を１日１回又は複数回に分けて投与する。
【００３６】
本発明の増殖性腎疾患用の薬剤は、腎症（例えば、糖尿病性腎症又は高血圧性腎症）、糸球体硬化症又はアルブミン尿症の予防剤、治療剤及び改善剤として好適である。
【実施例】
【００３７】
実施例１〔灌流法による腎臓へのFITC標識NF-κB デコイ導入〕
ラットは、２匹の雌のウイスター（リタイヤ）１年齢を用いた。開腹後、左腎の腎動脈を分離し、腎動脈へサーフローでカニュレーションを行い、ヘパリン液で腎臓を灌流した後、FITC標識NF-κB デコイ２００μgとOptison（商標名）(１０％)及び生理食塩水（合計で５００μl）を混和した本発明の薬剤を注入した。
【００３８】
薬剤の注入直後に超音波照射を開始した。超音波の照射条件は、超音波遺伝子導入装置（Sonitoron 1000、ネッパジーン,千葉）で連続（１００％）、１Ｗ/ｃｍ2、１０分間とした。
【００３９】
腎臓組織は、超音波照射直後、４時間後、４日後に採取し、腎組織横断面をコンパウンドで包埋後、凍結し、DAPI（4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール）により核染し、蛍光顕微鏡下で観察した。実験終了時、両腎とも梗塞は起こしていなかった。
【００４０】
FITCの蛍光は、超音波照射を受けていない部分（写真左側）に比べ、右側では蛍光は強い。超音波照射腎半面にのみ認められ、非照射の裏半面にはほとんど蛍光はなかった（図１）。
【００４１】
蛍光は腎組織内細動脈内には認められず、一部尿細管上皮細胞内に認められたが、主に糸球体細胞内に認められた（図２）。
【００４２】
４時間後では、糸球体内に蛍光は残存するものの、照射直後より減少していた。逆に尿
細管内の方が優位となり、上皮細胞内に顆粒状に分布していた（図３）。
【００４３】
４日後でも糸球体内に蛍光はなお残存し、尿細管上皮細胞内では顆粒状に認められた。反対側腎臓には、直後および４時間、４日後ともほとんど蛍光は認められなかった。
【００４４】
実施例２〔静注法による腎臓へのFITC標識NF-κBデコイ導入〕
体重及び腎臓の大きさによる影響を見る目的で、マウス及びラットを用い、FITC標識NF-κB デコイの腎臓内導入効率を検討した。
【００４５】
マウスは３匹のWBB6F1+/+で、雄、体重約２５ｇ、年齢２ヶ月齢を用いた。麻酔下でマウスを開腹後、左腎を露出させ、FITC-NF-κBデコイ４００μg/100μに超音波コントラスト剤Optison（商標名）１００μlを超音波照射直前に混和した本発明の薬剤を静注した。
【００４６】
薬剤の注入直後に超音波照射を開始した。腎への超音波の照射条件は、超音波遺伝子導入装置で２Ｗ/ｃｍ2、duty比を５０％、１００％、照射時間５分間、１０分間とした。
【００４７】
マウスの場合、照射時間を一定にし（１０分間）、duty比を減少させると、腎細胞内導入率は減少した。超音波照射プローブを当てた場所にのみ、限局性に蛍光が見られ、その深さは皮質内にとどまっていた。蛍光は糸球体と尿細管内にも認められた（図４）。
【００４８】
duty比を減少させると、細胞内導入率も減少した。逆に、出血斑などは連続照射より少なくなった。超音波照射をしていない反対側の腎臓を見ると、糸球体内細胞には蛍光は見られないものの、尿細管上皮細胞内に顆粒状に蛍光が観察された。
【００４９】
一方、ラット（雄のウイスター２匹、８週齢、体重約３００ｇ）では、FITC-NF-κB デコイ６００μgとOptison（商標名）(３００μl)を投与直前に混和後、静注し、duty比５０％、１００％、２Ｗ／ｃｍ2、照射時間５分間、１０分間、２０分間の超音波照射を行い、プローブの径が５ｍｍ程度で小さいため、プローブをゆっくり動かしながら腎全体に照射した。
【００５０】
マウスでの最適条件（２Ｗ／ｃｍ2、duty比５０％、照射時間１０分間）では、ラットの導入効率は明らかに悪かった。マウスとほぼ同一の遺伝子導入効率は、ラットでは２Ｗ／ｃｍ2、duty比５０％、照射時間２０分間だった（図５，６）。
【００５１】
FITC-NF-κB デコイ導入後、蛍光は糸球体内に特異的に見られ、その蛍光分布は上皮内や内皮内ではなく、結合組織内にある細胞（メサンジュム細胞）内に存在している（図５，６）。
【００５２】
尿細管上皮細胞内の蛍光は、照射直後では顆粒状に認められたものの（図７Ａ）、時間が経つにつれ徐々に減少し、６日目になるとほとんど認められなくなった（図７Ｂ）。
【００５３】
実施例３〔糖尿病モデル動物の腎臓へのNF-κBデコイによる治療と遺伝子発現〕
ヒト２型糖尿病モデル動物であるOLETFラット（２匹）、オス、２０ヶ月齢（平均体重６２５ｇ）を用いた。麻酔後、正中線からやや右側を５ｃｍ程度、縦に切開し右腎を露出させた。腸を注意深く片側に寄せ、麻酔下で、NF-κBデコイ１５ｍｇ／生理食塩水１．５ｍｌとOptison（商標名）５００μlの混合液を投与した。超音波の照射条件は、duty比（５０％）、２Ｗ/ｃｍ2、２０分間とし、注入直後より右腎臓全体に照射した（表１）。プローブの径が５ｍｍ程度で小さいため、プローブをゆっくり動かしながら全体に照射した。
【００５４】
【表１】
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【００５５】
２０分間の超音波照射後、腎臓はやや腫れ、色は暗褐色になっていたが、徐々に色調は戻った。腎臓を元の場所に戻し、切開創を縫合し、その後１ヶ月間、通常飼育した。１ヶ月後、深麻酔下、左右の腎臓を採取し、腎皮質を分離後、即座に液体窒素内で皮質組織を凍結、遺伝子解析まで保存した。
【００５６】
〔組織学的変化の検討〕
腎の組織学的障害を表す糸球体硬化と間質障害のどちらも、コントロール群に比べOLETFラットで明らかに進行していたものの、NF-κBデコイ投与後に超音波治療した右腎と対照の左腎の間には、両ラットとも、大きな差は認められなかった。糸球体や尿細管の機能低下時に見られる尿円柱は、OLETFラットでは尿細管腔内にPAS陽性の無構造な尿円柱（＊）が数多く見られたものの（図８C）、コントロール群ではごく少数しか認められなかった（図８Ａ＝左腎、図８Ｂ＝右腎）。しかし、OLETFラットの超音波処理した右腎（図８Ｄ）は対照の左腎（図８Ｃ）に比べ、尿円柱形成は明らかに減少していた。
【００５７】
〔腎皮質内遺伝子発現の検討〕
採取した腎皮質内RNAをRT-PCRでcDNAとして増幅後、それぞれ左腎サンプルを対照とし（cy5）、右腎を治療サンプル（cy3）とし、DNAチップ（Atlas Glass Rat 1.0 Microarray, １０８１遺伝子、CLONTECH, CA,USA）を用い、検討した。全１０８１遺伝子の中で増殖因子、増殖因子レセプターに関係するものは４９遺伝子含まれている。標本による発現のばらつきはチップ内にある９種類のhose-keeping 遺伝子（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, alpha-tubulin, Ornitine decarboxylase, myosin IB, beta actin, Ribosomal protein S29, polyubiquitin, phospholipase A2, hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase）の平均値で補正した。最終的に、１０８１遺伝子中検討できた遺伝子は１０６２個であった。検討した遺伝子の度数分布を示す（図９）。
【００５８】
図９から明らかなとおり、全遺伝子の発現分布はほぼ正規分布を示すが、全体の中心が１からやや左にずれている。両端の棄却域を約１０％とすると、減少した遺伝子は発現比０．７５以下、減少傾向のある遺伝子を発現比０．７５以上０．８未満、増加傾向のある遺伝子は発現比１．２以上１．５未満、増加した遺伝子は発現比１．５以上とし、それ以外のもの（０．８以上、１．５未満）を変動なしとして表２に示した。
【００５９】
【表２】
2005314381.tif 000003
【００６０】
表２から明らかなとおり、全体として大きな変動のある遺伝子はきわめて少なかった。変動のあった遺伝子の内、増殖因子、増殖因子レセプター、血圧に関係する遺伝子の変動率を表３に示す。
【００６１】
【表３】
2005314381.tif 000004
【００６２】
表３から明らかなとおり、最も減少したものはレニンで、その他増殖因子・サイトカインに関連するPDGFおよびVEGFレセプター遺伝子に減少を認めた。減少傾向を認めたものはTGFβとαおよびTNFであった。逆に増加したものは、増殖因子・サイトカインにはなかったものの、尿細管で発現のあるチトクロームP450に増加をみとめ、もっとも増加したものはニュウレキシン３であった。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】ラット腎動脈からのFITC-NF-κBデコイの灌流による投与後、超音波照射した腎臓内のFITC分布を示す蛍光顕微鏡写真（１００倍）。
【図２】図１と同様の条件による、尿細管内のFITC分布を示す蛍光顕微鏡写真（１００倍）。
【図３】図１と同様の条件でFITC-NF-κBデコイ投与後４時間の腎尿細管のFITC分布を示す蛍光顕微鏡写真（１００倍）。
【図４】マウスへのFITC-NF-κBデコイの静注による全身投与後、超音波処理した腎組織のFITC分布を示す蛍光顕微鏡写真（１００倍）。
【図５】ラットへのFITC-NF-κBデコイの静注による全身投与投与後、超音波処理した腎組織のFITC分布を示す蛍光顕微鏡写真（１００倍）。
【図６】ラットへのFITC-NF-κBデコイの静注による全身投与投与後、超音波処理した腎組織のFITC分布を示す蛍光顕微鏡写真（１００倍）。
【図７】図５，６と同様の条件でFITC-NF-κBデコイの静注による全身投与投与後、超音波処理した尿細管上皮細胞内のFITC分布を示す蛍光顕微鏡写真（１００倍）。
【図８】ラットへの静注によるNF-κBデコイの全身投与後、右腎に超音波照射し１ヶ月後の腎組織像（PAS染色）を示す蛍光顕微鏡写真（１００倍）。
【図９】遺伝子発現度数を示す図。
【図９】
2005314381.tif 000005
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2005314381.tif 000011
【図７】
2005314381.tif 000012
【図８】
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【配列表】
2005314381000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成17年4月6日(2005.4.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
マウスは３匹のWBB6F1+/+で、雄、体重約２５ｇ、年齢２ヶ月齢を用いた。麻酔下でマウスを開腹後、左腎を露出させ、FITC-NF-κBデコイ４００μg/100μlに超音波コントラスト剤Optison（商標名）１００μlを超音波照射直前に混和した本発明の薬剤を静注した。