(57)【要約】【課題】  遺伝子導入に見られる細胞障害や感染といった危険を伴うことなく、神経幹細胞を神経細胞へ分化誘導することにより難治性神経疾患を治療する。【解決手段】  神経幹細胞を神経細胞へ分化誘導し得るＶＨＬペプチドを神経幹細胞に導入して、神経幹細胞を神経細胞へ分化誘導することにより、あるいはＶＨＬペプチドを直接人体内へ投与して内在性幹細胞を神経細胞へ分化誘導することにより、パーキンソン病、脳梗塞、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳挫傷、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、悪性脳腫瘍等の難治性の神経疾患を再生医療により治療する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹細胞を神経細胞へ分化誘導するフォン・ヒッペル・リンドー蛋白質の部分アミノ酸配列を含むＶＨＬペプチド。
【請求項２】
フォン・ヒッペル・リンドー蛋白質のアミノ酸配列の第１５７番目から第１７１番目までの１５個のアミノ酸を含む請求項１記載のＶＨＬペプチド。
【請求項３】
配列番号１のアミノ酸配列の請求項２記載のＶＨＬペプチド。
【請求項４】
そのＮ末端またはＣ末端に配列番号２のアミノ酸配列のＴＡＴまたは配列番号３のアミノ酸配列のＡＮＴが融合した請求項３記載のＶＨＬペプチド。
【請求項５】
幹細胞へ導入される請求項１〜４のいずれかに記載のＶＨＬペプチド。
【請求項６】
幹細胞が神経幹細胞、皮膚幹細胞、骨髄間質細胞、脂肪幹細胞および胚性幹細胞からなる群から選択される請求項１記載のＶＨＬペプチド。
【請求項７】
以下の性質を有する請求項１〜４のいずれかに記載のＶＨＬペプチドを導入した幹細胞から分化誘導された神経細胞。
（１）神経細胞特異的蛋白質として、神経フィラメントおよび微小関連蛋白質２を発現する。
（２）神経として電気信号を伝達し、神経回路を形成し得る。
（３）試験管内で培養、増殖後、中枢神経系内あるいは末梢神経へ移植すると生着して、神経細胞として機能し、障害のある神経機能に関連した疾患の治療に使用し得る。
【請求項８】
幹細胞が神経幹細胞、皮膚幹細胞、骨髄間質細胞、脂肪幹細胞および胚性幹細胞からなる群から選択される請求項７記載の神経細胞。
【請求項９】
疾患がパーキンソン病、脳梗塞、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳挫傷、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病および悪性脳腫瘍からなる群から選択される請求項７記載の神経細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、幹細胞を神経細胞へ分化誘導しうるフォン・ヒッペル・リンドー(ＶＨＬ)蛋白質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチド（以下「ＶＨＬペプチド」という）に関する。本発明のＶＨＬペプチドを導入した幹細胞は神経細胞に分化誘導する。分化誘導された神経細胞は、中枢神経系あるいは末梢神経へ移植して生着し、神経細胞として機能させることにより、あるいは、直接人体内へ投与することにより内在性幹細胞を神経細胞へ分化誘導することにより、パーキンソン病、脳梗塞、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳挫傷、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病または悪性脳腫瘍を治療することが可能である。
【背景技術】
【０００２】
神経細胞（ニューロン）は、高等生物個体の生命活動を統御する主要素であり、従来は中枢神経系の神経細胞は生後一切分裂せず、刻々と脱落してゆくのみで決して再生することはないとされてきた。ところが、1990年代になって、まず胎児脳において神経細胞へ分化する前の神経幹細胞が発見され、更に、成人の大脳においても神経幹細胞の存在が証明された結果、中枢神経が再生する可能性が示され、神経幹細胞などの組織幹細胞や胚性幹細胞（ＥＳ細胞）を用いた神経難病に対する治療が脚光を浴びている。しかしながら、神経幹細胞などの組織幹細胞や胚性幹細胞はそのまま移植してもほとんど神経細胞（ニューロン）へ分化せず、生着すら困難で、生着しても大部分は神経膠細胞（グリア）へ分化してしまうという問題がある。また、神経細胞（ニューロン）へ分化誘導が最も容易な神経幹細胞は成人の同一個人の脳からは採取が困難であり、胎児脳を用いる場合は倫理的問題や拒絶反応を克服しなければならない。他の神経細胞への分化が報告されている骨髄間質細胞、皮膚幹細胞、脂肪幹細胞の場合は神経細胞への分化誘導が困難であり、神経細胞へ高率で短期間に誘導する技術は確立されていない。
【０００３】
この問題に対して、本発明者らはＶＨＬ遺伝子およびＶＨＬ蛋白質が中枢神経系の神経細胞に特異的に発現しているということから、神経細胞の発生の段階から何らかの役割を担っていると考え、神経幹細胞におけるＶＨＬ蛋白質の発現を検討したところ、ＶＨＬ蛋白質は神経細胞へ分化するのに伴い主に細胞質に発現すること、更にＶＨＬ遺伝子をウイルスベクターを用いて神経幹細胞へ導入したところ神経細胞への分化が促進され、逆にＶＨＬ遺伝子のメッセンジャーリボ核酸（ＲＮＡ）の逆配列であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いてＶＨＬ遺伝子の働きを阻害すると神経幹細胞のままで、神経細胞への分化が抑制されたことから、ＶＨＬ遺伝子には神経分化誘導能があることが明らかとなった（非特許文献１）。このＶＨＬ遺伝子の神経分化誘導能は、神経芽細胞腫（非特許文献２）、ＥＳ細胞、皮膚幹細胞、骨髄間質細胞においても共通の現象であることが確認されている。このＶＨＬ遺伝子と同様な神経分化誘導能を示す遺伝子としては、Nurr 1およびMash1が知られているが、これまでは、遺伝子を何らかのベクターを用いて細胞へ導入するという方法しか報告されておらず、遺伝子の代わりに強力な神経分化誘導能を有する蛋白質を幹細胞へ導入することにより、神経細胞へ分化誘導する試みはなされていない。また、こうした神経分化誘導能を示す蛋白質を体内へ投与することにより内在性神経幹細胞を活性化し、神経再生を促すという方法も開発されていない。また、神経分化誘導能を示す化学的に合成可能なオリゴペプチドを作成した報告はなく、またそれを神経再生に利用するという報告もなされていない。
【０００４】
米国では、既に中絶した胎児脳をパーキンソン病の治療に用いる臨床試験が行われ、一定の効果が認められている。動物実験レベルでは、神経幹細胞やＥＳ細胞を脳・脊髄に移植し、そこで神経細胞へ分化させることにより、パーキンソン病だけでなく、脳梗塞、脊髄損傷などの難治性の神経疾患の治療を行う試みが行われ始めている。また、末梢神経の再生を試験管内あるいは生体内で神経線維の束の形にして再生する試みは以前からなされている。ところが、神経細胞は原則として分裂・増殖しないため、実用的な神経の束に作ることは困難である。末梢神経の断裂に対する神経移植においては、通常は下肢の自家神経を切除してそれを移植する治療法がなされているが、神経移植のための自家神経に代わる人造の神経の製造には成功していない。
【０００５】
【非特許文献１】Kanno H et al.: Cancer Res 60: 2820-4, 2000
【非特許文献２】Murata H, et al. : Cancer Res 62 :7004-7011, 2002
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
解決しようとする問題点は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進するための神経分化誘導能を示すＶＨＬ遺伝子の神経幹細胞への導入には多くの危険を伴う点である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、神経幹細胞を神経細胞へ分化誘導しうるＶＨＬペプチドを神経幹細胞に導入して、神経幹細胞を神経細胞へ分化誘導することにより、あるいはＶＨＬペプチドを直接人体内へ投与して内在性幹細胞を神経細胞へ分化誘導することにより、パーキンソン病、脳梗塞、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳挫傷、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、悪性脳腫瘍等の難治性の神経疾患を再生医療により治療することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
遺伝子導入によらない本発明のＶＨＬペプチドの導入により、組織幹細胞の神経分化が可能となる。また、ＶＨＬペプチドを、細胞膜貫通を容易にするＴＡＴ（配列番号２のアミノ酸配列：YGRKKRRQRRRD）あるいはＡＮＴ（配列番号３のアミノ酸配列：KKWKMRRNQFWVKVQRGK）と融合させると、ほとんど細胞障害性は認められない。さらに、ペプチド導入ではウイルスベクターにおいてみられるような感染に伴うリスクはない。したがって、合成したペプチドは通常の薬剤と同様に使用できるという利点を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明は、以下の発明を包含する。
（１）幹細胞を神経細胞へ分化誘導するフォン・ヒッペル・リンドー蛋白質の部分アミノ酸配列を含むＶＨＬペプチド。
（２）フォン・ヒッペル・リンドー蛋白質のアミノ酸配列の第１５７番目から第１７１番目までの１５個のアミノ酸を含む（１）記載のＶＨＬペプチド。
【００１０】
（３）配列番号１のアミノ酸配列（TLKERCLQVVRSLVK）での（２）記載のＶＨＬペプチド。
（４）そのＮ末端またはＣ末端に配列番号２のアミノ酸配列のＴＡＴまたは配列番号３のアミノ酸配列のＡＮＴが融合した（３）記載のＶＨＬペプチド。
（５）幹細胞へ導入される（１）〜（４）のいずれかに記載のＶＨＬペプチド。
（６）幹細胞が神経幹細胞、皮膚幹細胞、骨髄間質細胞、脂肪幹細胞および胚性幹細胞からなる群から選択される（１）記載のＶＨＬペプチド。
【００１１】
（７）以下の性質を有する（１）〜（４）のいずれかに記載のＶＨＬペプチドを導入した幹細胞から分化誘導された神経細胞。
（イ）神経細胞特異的蛋白質として、神経フィラメントおよび微小関連蛋白質２を発現する。
（ロ）神経として電気信号を伝達し、神経回路を形成し得る。
（ハ）試験管内で培養、増殖後、中枢神経系内あるいは末梢神経へ移植すると生着して、神経細胞として機能し、障害のある神経機能に関連した疾患の治療に使用し得る。
【００１２】
（８）幹細胞が神経幹細胞、皮膚幹細胞、骨髄間質細胞、脂肪幹細胞および胚性幹細胞からなる群から選択される（７）記載の神経細胞。
（９）疾患がパーキンソン病、脳梗塞、アルツハイマー病、脊髄損傷、脳挫傷、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病および悪性脳腫瘍からなる群から選択される（７）記載の神経細胞。
【００１３】
以下、本発明を詳細に説明する。
脳腫瘍（血管芽腫）や腎癌を生じる遺伝病のフォン・ヒッペル・リンドー（von Hippel-Lindau）病の原因遺伝子であるＶＨＬ遺伝子は、腫瘍抑制遺伝子の一種である。この遺伝子は、１９９３年に米国のツバー（Zbar）博士らのグループによりヒトの第３番染色体より単離された。この遺伝子および蛋白は神経細胞（ニューロン）に発現していることは報告されていたが、この遺伝子の神経系に関する機能については不明であった。そこで本発明者等は、この遺伝子は胎児の発生段階で神経系が形成される時に関わっているのではないかと考え、ラットの胎児脳から分離した神経幹細胞の分化を経時的に検討したところ、神経幹細胞が神経細胞へ分化するに伴い、ＶＨＬ蛋白が神経細胞に発現することを見出した。このことから、ＶＨＬ蛋白は神経細胞への分化に関わっていることが示唆されたため、更に本発明者等はＶＨＬ遺伝子を、単純ヘルペスベクターを用いて神経幹細胞へ導入し、ＶＨＬ蛋白を発現させると神経細胞へ分化するかどうかを検討した。その結果、ＶＨＬ遺伝子を導入しＶＨＬ蛋白を発現させると神経幹細胞は神経細胞（ニューロン）へ分化した。すなわち、ＶＨＬ蛋白には神経分化を誘導する機能を有することが明らかとなった。逆に、ＶＨＬ遺伝子のメッセンジャーＲＮＡの逆配列（アンチセンス）にて神経幹細胞のＶＨＬ遺伝子の機能を抑制すると神経幹細胞は神経細胞へ分化せず、神経幹細胞のままで分化が抑制されることが示された（上記非特許文献１）。このＶＨＬ蛋白の機能は、神経幹細胞に対してのみ示されるのではなく、癌細胞の一種である神経芽腫細胞に対しても示され、神経芽腫細胞へＶＨＬ遺伝子を導入することにより、神経芽腫細胞は機能的な神経細胞へ分化することが判明した（上記非特許文献２）。さらに、皮膚幹細胞に対しても神経細胞（ニューロン）へ分化誘導することが判明した（図１）。
【００１４】
本発明においては、ＶＨＬ遺伝子を導入した細胞においてＶＨＬ蛋白を発現させるのではなく、ＶＨＬ蛋白そのものを神経幹細胞等の組織幹細胞、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）へ導入することによって神経分化を誘導する。ＶＨＬ蛋白は、全長でアミノ酸が２１３個からなる比較的小さな蛋白であるが、細胞へ導入するためには小さい方がより有利であり、また合成も容易である。ＶＨＬ蛋白の全長のうち、神経分化を誘導する機能を有する部分として、ＶＨＬ蛋白の３次元構造から、ＶＨＬ蛋白のリガンド（結合蛋白）と結合する部位の２カ所のうちで結合蛋白の一つエロンジン（elongin）BおよびCと結合する部位の１５個のアミノ酸配列（ＶＨＬ１５７−１７１）が最も神経分化の機能に関わる重要な機能を示す部位として同定した。
【実施例１】
【００１５】
ＶＨＬ蛋白の重要な結合蛋白であるエロンジンの結合部位であるアミノ酸１５７番目〜第１７１番目のＶＨＬオリゴペプチドをFmoc法に基づく固相合成法にて作成した。オリゴペプチドはFmoc法に基づく固相合成を行った。固相担体として、Fmoc-SAL-PEG樹脂（渡辺化学）を使用した。この樹脂を用いることで、カルボキシル（Ｃ）末端がアミノ化されたオリゴペプチドを得ることができる。この樹脂をDMF (N,N−ジメチルフォルムアミド）で洗浄した後、20%ピペリジン ／ DMFでアミノ基の保護基であるFmoc基を除去した。DMFで洗浄した後、樹脂上のアミノ基に対して３等量Fmoc-AA (アミノ酸)-OH／３等量HATU （O−(７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１、１、３、３−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート）／ ６等量DIEA （ジイソプロピルエチルアミン）を加えてアミノ酸の縮合反応を行い、ニンヒドリン反応によって縮合反応の進行を確認した。全てのアミノ酸のカップリング終了後、20%ピペリジン / DMFでFmoc基をはずし、無水酢酸でアミノ（N）末端のアセチル化を行った。合成が終了した樹脂を真空中で乾燥させ、m-クレゾール / エタンジチオール / チオアニソール / TFA (トリフルオロ酢酸)を加え、室温で1時間撹拌させてオリゴペプチドの樹脂からの切り出しとアミノ酸側鎖（p）の脱保護を行った（図２）。この濾液をエーテル沈殿させて粗ペプチドを得た。粗ペプチドは逆相HPLCで精製し、目的とするオリゴペプチドを得た。合成されたペプチドの分子量はMADLI-TOF型質量分析によって確認し、ペプチド濃度は芳香族アミノ酸残基のUV領域における吸光係数から算出した。
【００１６】
以上の方法によって作成したオリゴペプチドを成体ラット海馬由来の神経幹細胞に10〜1000ng/mLの濃度にして、BioPORTER Reagent（BioPORTERタンパク質送達試薬：Gene Therapy Systems, Inc., San Diego, CA, USA）を用いて試験管内に導入した。これによって、10ng/mL以上の濃度で４時間後から形態上、神経幹細胞は神経細胞（ニューロン）へ分化する傾向を示し、神経突起の伸長を認めた。導入８時間後にはその形態上の変化は対照群と比べより顕著となった（図３）。これを100ng/mLの濃度で導入２４時間後に蛍光免疫染色すると、そのうちの72%は神経細胞（ニューロン）に、12%は神経膠細胞（グリア）に分化していることが確認された（図４）。これによって、ＶＨＬは、遺伝子導入という方法ではなく、そのペプチド導入という方法によっても神経分化誘導可能であることが明らかとなった。
【００１７】
次に、ＶＨＬ(１５７−１７１)オリゴペプチドを導入した神経幹細胞を神経疾患動物の中枢神経系内へ移植することによって症状が改善するか検討した。ラットの脳内へ６−ヒドロキシドーパミンを微量注入して一側のドーパミン産生細胞を枯渇させることによって神経疾患動物としてのパーキンソン病モデルラット作成し、２週間後にアポモルフィンによる誘発回転数によって検討し、一分間に７回以上回転するラットをパーキンソン病モデルとした。このラットの大脳の線状体に105個のＶＨＬ（１５７−１７１）オリゴペプチドを導入した神経幹細胞を移植した。移植後、１週間毎にアポモルフィン誘発回転数を測定した。その結果、約３割のラットでは２ヶ月後にアポモルフィン誘発回転数が０になった（図５）。行動解析としては、このアポモルフィン誘発回転以外にpaw reaching 試験（障害のある片方の側の脚を伸ばして、階段に置かれたペレットを取り出して食べる能力を調べる試験）で検討したところ、ＶＨＬ（１５７−１７１）オリゴペプチドを導入した（図６）。また、ＶＨＬ（１５７−１７１）オリゴペプチドを導入した神経幹神経幹細胞を移植したパーキンソン病モデルラットは対照群に比べて有意にこれらの行動解析でも改善を示した細胞を移植したパーキンソン病モデルラットの脳を病理組織学的に検討すると、移植した約７割の細胞が脳内に生着し、そのほとんどが神経フィラメント（Neurofilament）陽性の神経細胞であった（図７）。
【００１８】
さらに、細胞膜を容易に貫通する作用を有する融合蛋白ＴＡＴあるいはＡＮＴをＶＨＬオリゴペプチドに結合させて合成し、ＴＡＴ−ＶＨＬ（１５７−１７１）あるいはＶＨＬ(１５７−１７１)−ＡＮＴという形にして、BioPORTER Reagentを用いずに合成したペプチドを10ng/mLの濃度で添加するだけで神経幹細胞へ導入して神経細胞へ分化させた。この細胞膜貫通融合蛋白を結合する方法では、BioPORTER Reagentを用いる場合に比べて、BioPORTER Reagentの有する細胞毒性を示さず、生体内への投与も安全と考えられた。実際、ＴＡＴの融合蛋白を結合させたオリゴペプチドを生体内へ投与して治療実験を行ったところ、ＴＡＴ−ＶＨＬ（１５７−１７１）あるいはＶＨＬ(１５７−１７１)-ＡＮＴはそのまま薬剤として使用しうる可能性が示唆された。試験管内で実際に神経幹細胞の培地中にこのＴＡＴ−ＶＨＬ（１５７−１７１）あるいはＶＨＬ(１５７−１７１)−ＡＮＴを添加すると、10ng/mL以上の濃度で神経分化誘導能の生理活性を示し、機能性ペプチドであることが証明できた。対照群として、腫瘍抑制活性を示すＴＡＴ−ＶＨＬ（１０４−１２１）およびＴＡＴのみとで比較したが、ＴＡＴ−ＶＨＬ（１５７−１７１）が最も高い神経分化誘導活性を示した。このことから、ＶＨＬ（１５７−１７１）は、神経分化誘導活性を有することが明らかとなり、ＴＡＴ−ＶＨＬ（１５７−１７１）は神経分化誘導という機能を有する機能性ペプチドであることが判明した。
【００１９】
次に、細胞の種類を変えて、組織幹細胞のうち、皮膚幹細胞と骨髄間質細胞に対しても同様な生理活性を示すか検討した。皮膚幹細胞は、ラット新生仔とヒトの皮膚の真皮層を細切し、フィルターを通したのち、培養した。この培養方法の詳細は、Nature Cell Biology 2001 Sep;3(9):778-84.に記載されている。培地は、DMEM/F12（Gibco）にN2 supplement（Gibco）と塩基性線維芽細胞成長因子を10ng/mL、上皮成長因子を20ng/mL添加した。この初代培養１０日後の細胞に対し、ＴＡＴ−ＶＨＬ（１５７−１７１）ペプチドを100ng/mLの濃度で添加すると８時間後より神経細胞（ニューロン）への分化を認め、２４時間後には明瞭に神経細胞（ニューロン）への分化を認めた。また、骨髄間質細胞については、まず、６週齢ラットの大腿骨骨髄より、骨髄細胞を分離し、10%FCS in RPMIの培地で培養し、２代あるいは３代の経代培養を経たのち、接着細胞だけをβ−メルカプトエタノールを培地中に加えて一晩処理後、さらにβ−メルカプトエタノールおよびDMSOにて３時間処理したのち、ＴＡＴ−ＶＨＬ（１５７−１７１）ペプチドを100ng/mLの濃度で添加し、リジンでコートした培養皿にて培養を続けると、８時間後より神経細胞への分化を認め、２４時間後には明瞭に神経細胞（ニューロン）への分化を認めた。
【産業上の利用可能性】
【００２０】
本発明は、遺伝子導入によらずにペプチド（蛋白）導入により、組織幹細胞の神経分化を可能にする。遺伝子導入には、現在の技術では様々なリスクが伴う。ウイルスベクターを使用する場合には、ウイルスによる感染とウイルスによる細胞障害性を考慮しなければならない。また、プラスミドベクターの場合は遺伝子導入効率が低く、また導入法によって細胞障害性があることを考慮する必要がある。これに対して、ペプチド（蛋白）導入では、ＴＡＴあるいはＡＮＴを用いて細胞膜貫通を容易にした融合蛋白を結合させると、ほとんど細胞障害性は認められなかった。また、ペプチド（蛋白）導入ではウイルスベクターにおいてみられるような感染に伴うリスクはない。したがって、合成したペプチド（蛋白）は通常の薬剤と同様に使用できる。したがって、本発明のペプチドを薬剤として考えれば、投与することにより神経細胞（ニューロン）への特異的な分化が試験管内のみならず、生体内でも可能になる。これを利用することによって、自己の組織幹細胞を取り出してまず試験管内で神経幹細胞へ分化させたのち、それを戻すこと（自己移植）によって神経を再生させ、パーキンソン病、脳梗塞、アルツハイマー病、脊髄損傷などの神経難病を治療することができる。本発明はそのために必要な薬剤としてのＶＨＬペプチドを提供する。さらに、神経分化誘導活性を有するＶＨＬペプチドを薬剤として生体内へ投与することにより、自己の内在性の神経幹細胞を取り出すことなく、生体内で神経細胞（ニューロン）へ分化誘導することが可能である。これによって、神経を再生させ、パーキンソン病、脳梗塞、アルツハイマー病、脊髄損傷などの神経難病を治療することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】皮膚幹細胞が神経フィラメント陽性の神経細胞へ分化誘導することを示す蛍光顕微鏡写真である。
【図２】ペプチド固相合成法による本発明のペプチド合成の説明図である。
【図３】ＢｉｏＰＯＲＴＥＲ試薬を用いてＶＨＬペプチドを神経幹細胞に導入すると、導入８時間後には形態上の変化は対照群と比べ顕著で神経細胞に分化する傾向を示す顕微鏡写真である。
【図４】ＢｉｏＰＯＲＴＥＲ試薬を用いてＶＨＬペプチドを神経幹細胞に導入すると、導入２４時間後には、その７２％は神経細胞に、その１２％は神経膠に分化していることを示す蛍光免疫染色した細胞の蛍光顕微鏡写真である。
【図５】ラットの脳内に微量の６−ヒドロキシドーパミンを注入して作成した一側のドーパミン産生細胞を枯渇させた神経疾患動物としてのパーキンソン病モデルラットにＶＨＬペプチドを導入した神経幹細胞を移植後１週間毎にアポモルフィン誘発回転数を測定した結果を示す図である。対照群のみの移植群および神経肝細胞のみの移植群の結果も合わせて示す。
【図６】上記パーキンソン病モデルラットに対するPaw reaching 試験の結果を示す図である。横軸は、ＶＨＬペプチド移植前および移植後（週）を示し、縦軸は、障害のある側の脚で取り出し、食べられたペレットの割合を示す。神経幹細胞を移植したパーキンソン病モデルラットは対照群に比べて有意にこの行動解析で改善を示した。
【図７】ＶＨＬペプチドを移植した上記パーキンソン病モデルラットの脳の組織の顕微鏡写真である。移植した約７割の細胞が脳内に生着しその殆どが神経フィラメントであることが分かる。図中Ｂｒｄ−Ｕは、ブロモデオキシウリジン、ＧＦＡＰは、神経膠細胞のマーカー、Ｏ４は、希突起細胞のマーカーを表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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