(57)【要約】【課題】  イソフラキシジン、またはイソフラキシジンを含有することを特長とするエゾウコギ抽出物が、炎症誘発性の酵素蛋白質遺伝子、および炎症誘発性サイトカインの転写を抑制することを示すことによって、炎症抑制性の機能性物質ならびに薬剤の素材を提供する。【解決手段】  イソフラキシジン（７−Ｈｙｄｒｏｘｙ−６，８−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ）を有効成分として含有する抗炎症剤あるいは抗炎症性食品素材。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イソフラキシジン（７−Ｈｙｄｒｏｘｙ−６，８−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ）を有効成分として含有する抗炎症剤ならびに抗炎症性食品素材。
【請求項２】
エゾウコギ（学名Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ  ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ  Ｈａｒｍｓ）の抽出物であって、イソフラキシジンを有効成分として含有することを特長とする抗炎症剤ならびに抗炎症性食品素材。
【請求項３】
イソフラキシジンを有効成分として含有する抗リウマチ剤ならびに抗リウマチ性食品素材。
【請求項４】
エゾウコギの抽出物であって、イソフラキシジンを有効成分として含有することを特長とする抗リウマチ剤ならびに抗リウマチ性食品素材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、植物性の炎症抑制物質に関する。
【背景技術】
【０００２】  関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ＲＡ）に代表される慢性の炎症性疾患は、代表的な生活習慣病の一つであって、高齢化社会において、その予防、抑制、ならびに治療が望まれる主要な疾患の一群をなすものである。【０００３】  慢性の炎症性疾患のうち、とくにＲＡについて付け加えれば、この疾患は関節滑膜を病変の主座とする難治性の炎症性疾患であり、病変が進行すれば、軟骨ならびに骨の破壊を引き起こし、関節の機能低下、機能障害へと至る。これらの身体障害と、これに伴うさまざまな不利益こそが、この疾患の最大の問題点となる。現在のところ、ＲＡの発症には、遺伝的素因、免疫異常、未知の環境要因などが複雑に絡み合い、その詳細は不明である。慢性期ＲＡでは、マクロファージ、滑膜繊維芽細胞より炎症性サイトカインが過剰に産出されることが知られている。これら炎症性のサイトカインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）などが主であり、これら過剰に生産されたサイトカインはさらに多くの滑膜繊維芽細胞、マクロファージの活性化、増殖を惹起し、症状の悪化の原因となることが知られている。【０００４】  これら炎症性疾患の抑制ならびに治療のために、すでに多大な背景技術が蓄積している（例えば非特許文献１参照。）。すなわち、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、ならびに副腎皮質ステロイドで代表される薬剤が医薬品として開発され広範に使用されている。ここで、非ステロイド系抗炎症薬はアラキドン酸カスケードにかかわるシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）などの酵素反応の抑制により、炎症惹起物質であるプロスタグランジンの生成を抑制することによって炎症を抑制し、副腎皮質ステロイドは炎症性サイトカインの生産の抑制、細胞増殖の抑制、さらには免疫機能の抑制など広範な作用を示すことによって炎症を抑制することが明らかとなっている。加えて金製剤、メトトレキセートなどの細胞増殖抑制剤、免疫抑制剤が使用されている。またさらに最近は、炎症にともなって生産される酵素蛋白質に対するモノクローナル抗体などが治療薬として開発され、それぞれ限定された疾患に対して使用されつつある。【０００５】  これらの薬剤によって、症状の緩和、痛みの軽減などの治療効果が得られ、さらに病気の進行を遅らせ、身体の機能障害を防ぐなどの効果も得られている。しかしながら、一方、重大な副作用が発生するなどの問題を無視できず、また対症療法的な治療にとどまっているなど、完成されたものとはいいがたい。【０００６】  さらにＲＡについて付け加えれば、ＲＡの治療は生涯に及ぶことが多く、薬剤に対しては薬効にも増して安全性が重視される。比較的頻繁に使用されているＮＳＡＩＤｓに関していえば、これらは安全性に富む薬剤として、治療上欠かすことのできない薬剤であるが、実際には胃腸障害、腎障害など多様な副作用を有することが明らかとなっている（例えば、非特許文献２参照。）。さらに薬剤共通の課題として、効力の強い薬剤は概して副作用が強いことから、安全性を重視した毒性の少ない治療薬が望まれている。【０００７】  従来リウマチ性の関節炎に対する漢方薬、あるいは民間薬として、２０にあまる多数の処方が知られており（例えば、非特許文献３参照。）。芍薬、附子、甘草、五加皮などの生薬がこれらに含まれている。五加皮について付け加えれば、これらの処方に主に使用されている生薬であるが、五加皮には、従来より由来する植物が異なる北五加皮（杠柳、ｐｅｒｉｐｌｏｃａ  ｓｅｐｉｕｍ由来）と南五加皮（エゾウコギ、Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ  ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ  Ｈａｒｍｓ由来）の２種類が知られている。北五加皮に関しては、発明者らにより、ｐｅｒｉｐｌｏｃａ  ｓｅｐｉｕｍの植物体熱水抽出物がリウマチ性関節患者由来の滑膜繊維芽細胞の増殖、ＩＬ−６の生産性を抑制することを示し、有効成分を含む分画の製造方法を発明している（例えば、特許文献１参照。）。【０００８】  一方、南五加皮として種別される本邦産のエゾウコギ（ウコギ科に属し、学名がＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ  ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ  Ｈａｒｍｓがさす植物と同じ）ついては、抗ストレス、血圧調整、強壮、精神安定、リウマチ性関節炎等に用いられてきた。エゾウコギにはイソフラキシジン、各種エレウテロサイド類、クロロゲン酸が薬効成分として含有されることが指摘されてきている。これらの成分の内、イソフラキシジンは鎮静作用、エレウテロサイド類は抗ストレス、抗疲労作用、クロロゲン酸は抗酸化を示すと言われているが、その詳細な生化学機構に対する理解は不十分であり、とくにエゾウコギの抗リウマチ効果が、これら含有物質のうちのどの物質によるものであり、またいかなる作用によって起因するものであるか、科学的に裏付けがなされずに、単に経験的な使用にとどまって現在に至ったものである。
【非特許文献１】  高橋明「慢性関節リュウマチの治療の実際  治療総論／治療のストラテジー」．内科７８，２，２７１−２７６（１９９６−９８）
【非特許文献２】  斎藤輝信「ＮＳＡＩＤｓの功罪」医学の歩み１８２，９，６２１−６２５（１９９７）
【非特許文献３】  水野瑞夫、米田該典、「家庭の民間薬・漢方薬」新日本法規（１９９７）参照
【特許文献１】  特開２００３−３４６４５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする問題】
【０００９】  慢性炎症疾患とくにＲＡに対しては、上記背景技術の項に示したように、これを完全に治す治療法がなく、対症療法的に抗炎症剤、免疫抑制剤が使用されているのが現状である。これらは、多くの副作用を引き起こすという問題点があり、長期使用の際にはなお注意が必要となる。
【００１０】  したがって、本発明の目的は、従来より食品素材として使用されていて、安全性が確保されており、長期に渡る服用が可能で副作用が起こりにくいうえに、関節性リウマチに対して効果があると言われてきたエゾウコギの成分のなかから、抗炎症作用を示す物質を特定し、さらにその作用機序を明らかにすることによって、炎症性疾患に対して効果を有する副作用の少ない作用物質を提供することにある。また、ここで特定した作用物質を、有効成分として含有し、炎症性疾患、特にＲＡを抑制する効果を有する副作用の少ない食品素材ならびに治療薬素材を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】  すなわち、本発明は、この課題を解決するために、ＲＡにおいては、滑膜組織が増殖、肥厚し、機能過剰になることにより、ＩＬ−６を初めとするサイトカインやプロテアーゼ蛋白質、プロスタグランジンなどの炎症惹起物質が産出されることに着目した（例えば、非特許文献４参照。）。
【００１２】  さらに、細胞バンクから容易に入手できるヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞が、ＩＬ−１β刺激の有無にかかわらず、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ−β）、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）１、３など、ＲＡの病態に決定的な役割を果たしている種々の炎症性サイトカインやメタロプロテアーゼを産出していること、ならびに、ＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β刺激下でのこれらサイトカインやメタロプロテアーゼ産生が、関節リウマチならびに多くの炎症性疾患発生の細胞レベルでのモデルとなること、に着目した（例えば、非特許文献５参照）。
【００１３】  そこで、ＳＷ９８２細胞を培養し、細胞の増殖、ＩＬ−１βにより誘導されるＩＬ−６蛋白質の産出、ならびに各種遺伝子の転写発現変化をそれぞれ定量的に測定できる手段を構築した。
【００１４】  このようにして構築した作用物質評価系を用いて、細胞増殖への影響、ＩＬ−６蛋白質の産出抑制効果、ならびにＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＭＭＰ−１、及びＣＯＸ−２蛋白質遺伝子の転写抑制効果を鋭意検討した結果、エゾウコギ有効成分の一つであるイソフラキシジンが、これら炎症性サイトカイン遺伝子ならびに炎症性蛋白質遺伝子の転写の抑制を来すこと、ならびにこれら遺伝子の産物である蛋白質の産生の抑制を来すことを見いだし、本発明に到達したものである。
【非特許文献４】  山村昌弘、槇野博史「慢性間接リウマチ」医学の歩み５７３−５７８（１９９７）
【非特許文献５】  Ｔｓｕｊｉ  Ｆら（１９９９）  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ６８，２７５−２７９．
【発明の効果】
【００１５】  １．イソフラキシジンが、ＭＭＰ−１、ＣＯＸ−２といった炎症誘発性の酵素蛋白質遺伝子の転写を間接、又は直接に抑制することを示すことによって、従来知られている炎症抑制物質に加え、新たな炎症抑制性の機能性物質あるいは薬剤の素材を提供した。
【００１６】  ２．イソフラキシジンを有効成分として含有することを特長とするエゾウコギ抽出物が、その含有するイソフラキシジンの作用により、ＭＭＰ−１、ＣＯＸ−２といった炎症誘発性酵素蛋白質遺伝子の転写を間接的又は直接的に抑制することを示すことによって、抗炎症作用機序の明らかな新たな機能性食品の素材を提供した。
【００１７】  ３．イソフラキシジンが、炎症誘発性サイトカインＩＬ−１βならびにＩＬ−６について、ＩＬ−６蛋白質産生の抑制、ならびにＩＬ−１β遺伝子及びＩＬ−６遺伝子転写を、間接的又は直接的に抑制することを示すことによって、抗リウマチ作用を含む炎症抑制性の新たな機能性食品、あるいは薬剤、の素材を提供した。
【００１８】  ４．イソフラキシジンを含有することを特長とするエゾウコギ抽出物が、その含有するイソフラキシジンの作用によって、炎症を誘発するサイトカインであるＩＬ−１βならびにＩＬ−６について、ＩＬ−６蛋白質の産生、ならびにＩＬ−１β遺伝子及びＩＬ−６遺伝子の転写を、間接的又は直接的に抑制することを示すことによって、抗リウマチ作用を含む炎症抑制性の新たな機能性食品、あるいは薬剤、の素材を提供した。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】  本発明で用いられているイソフラキシジンは化学式７−Ｈｙｄｒｏｘｙ−６，８−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎであり、その配糖体Ｉｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ  ７−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（エレウテロサイドＢ１）についても、容易に加水分解されイソフラキシジンに変換されることから、この配糖体及び、他の糖で修飾されたイソフラキシジンについても、本発明に含まれる。【００２０】  また、イソフラキシジンは、単体でも本発明の効果を発揮するが、エゾウコギの茎、根茎、根、葉より熱水、エタノール等により抽出したエキスについても十分な含量を有していることが明らかであり、これらのエキスを使用しても本発明の効果を有する。
【実施例】
【００２１】以下に実験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実験例のみに限定されるものではない。以下の本実施例においては、イソフラキシジンは、和光純薬より販売されているＩｓｏｆｒａｘｉｄｉｎ  ｓｔａｎｄａｒｄを使用している。しかし、同様の標品、その水和物、等級品は他のルートからも入手可能であり、化学式７−Ｈｙｄｒｏｘｙ−６，８−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎであればその品位によらない。また以下実施例におけるデキサメサゾンは、すでに作用の知られた対照物質として用いたものである。【００２２】実験例１：細胞増殖に対する影響
試験方法：凍結保存してある、ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞を解凍し、終濃度が１０％ｖ／ｖとなるように牛胎児血清（ＦＢＳ）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地−（以下増殖培地）中に浮遊させ、１ウエルにつき３０００個になるように、０．５ｍＬずつ、９６穴ウエルプレートに播種した。同時にＩＬ−１βを終濃度２ｎｇ／ｍＬになるように添加した。さらに、デキサメサゾンについては、終濃度０．０８、０．５、３μＭになるように添加し、イソフラキシジンについては、終濃度４．５、１３．５、４５、１３５、４５０μＭになるように添加し、クロロゲン酸については、最終濃度２．７、８．１、２７、８１、２７０μＭになるように添加した。このようにして播種した細胞培養を、５％ＣＯ２ガスを含む加湿した気相中、３７℃に保温して２日間培養を行った。培養後、細胞の増殖をＭＴＴ法（例えば、非特許文献６参照。）にて測定し無添加群の増殖に対する比をとって、増殖抑制効果を判定した。【００２３】試験結果：このようにして培養したＳＷ９８２細胞の増殖に及ぼすデキサメサゾン、イソフラキシジン、クロロゲン酸の効果をそれぞれ図１、２、３に示す。デキサメサゾン添加群では、各濃度においても、無処理と比べて細胞増殖に差は見られなかった。またイソフラキシジン添加群では、４．５から１３５μＭまでの濃度では、増殖への影響は見られないが、４５０μＭの濃度では、６０％近くの抑制が見られた。さらにまたクロロゲン酸添加群では、各濃度においても、増殖の差は見られなかった。したがって、どの物質においても、特にイソフラキシジンについては、４５０μＭといった高濃度に達しないかぎり、細胞増殖に対する影響はないと判断された。【００２４】実験例２：ＩＬ−６産出に対する影響
試験方法：ＳＷ９８２細胞を、増殖培地に浮遊させ、１ウエルにつき３０００個になるように、０．５ｍＬずつ９６穴ウエルプレートに播種した。同時にＩＬ−１βを終濃度２ｎｇ／ｍＬになるように添加した。それぞれの培養皿に、デキサメサゾンについては終濃度０．０８、０．５、３μＭになるように添加し、イソフラキシジンについては、４．５、１３．５、４５、１３５、４５０μＭになるように添加し、クロロゲン酸については、２．７、８．１、２７、８１、２７０μＭになるように添加し、このようにして播種した細胞培養を、５％ＣＯ２ガスを含む加湿した気相中、３７℃に保温して２日間培養を行った。この培養上清中のＩＬ−６の濃度をＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（Ｅｎｄｏｇｅｎ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）によって測定した。【００２５】試験結果：このようにして培養したＳＷ９８２細胞のＩＬ−６産生に及ぼすデキサメサゾンの効果を図４、イソフラキシジンの効果を図５、クロロゲン酸の効果を図６に示す。デキサメサゾンは濃度依存的にＩＬ−６産出量を抑制し、３μＭでは、６割近くＩＬ−６産出量が減少した。イソフラキシジンは、４．５から４５μＭまでの濃度では、０μＭと変わらず、１３５、４５０μＭにおいて産生の減少が見られた。クロロゲン酸は、２．７から２７μＭまでの低濃度では０μＭに比べ、ＩＬ−６の産生を増加させる結果となった。８１から２７０μＭの高濃度になると、コントロールと同程度となった。したがって、デキサメサゾン、イソフラキシジンは、ＩＬ−１βが誘導するＩＬ−６産出を抑制し、クロロゲン酸は、低濃度ではＩＬ−６産出を促進する。すなわち、イソフラキシジンは、ＩＬ−６の産生抑制することにより、ＲＡの進行を抑制する作用を有していることを示している。【００２６】実験例３遺伝子発現に対する影響：
試験方法：ＳＷ９８２細胞を、増殖培地に浮遊させ、１ウエルにつき３０００個になるように、０．５ｍＬずつ、９６穴ウエルプレートに播種した。同時にＩＬ−１βを終濃度２ｎｇ／ｍＬになるように添加した。それぞれの培養皿に、デキサメサゾンについては終濃度０．３、３μＭになるように添加し、イソフラキシジンについては、１３５、４５０μＭになるように添加し、クロロゲン酸については、８１、２７０μＭになるように添加し、このようにして播種した細胞培養を、５％ＣＯ２ガスを含む加湿した気相中、３７℃に保温して２日間培養を行った。培養後、トリプシン−ＥＤＴＡにて細胞を剥離し、グアニジウムチオシアネート法（例えば、非特許文献７参照。）を用いることで、ＲＮＡを抽出した。【００２７】  逆転写酵素反応（ＲＴ反応）は、１００ＵのＭＭＬＶ逆転写酵素を用いて４２℃、２０分行った。得られたｃＤＮＡ溶液に対し、ＩＬ−１β遺伝子に特異的なプライマー（センスプライマーとアンチセンスプライマー）を加え、１．２５Ｕ  ＴａｑＤＮＡポリメラーゼを用いて２０サイクルのＰＣＲ（熱変性９４℃で１分、アニーリング５５℃で１分、伸長反応７２℃で２分）を行った。ＰＣＲ増幅によって、３９１ｂｐのＩＬ−１βｃＤＮＡを得た。用いたプライマーは、配列番号１と配列番号２である。【００２８】  また、ＲＴ反応によって得られたｃＤＮＡ溶液に対し、ＩＬ−６遺伝子に特異的なプライマーを加え、１．２５Ｕ  ＴａｑＤＮＡポリメラーゼを用いて２０サイクルのＰＣＲ（熱変性９４℃で１分、アニーリング５５℃で１分、伸長反応７２℃で２分）を行った。ＰＣＲ増幅によって、６２９ｂｐのＩＬ−６ｃＤＮＡを得た。用いたプライマーは、配列番号３と配列番号４である。【００２９】  さらにまた、ＲＴ反応によって得られたｃＤＮＡ溶液に対し、ＣＯＸ−２遺伝子に特異的なプライマーを加え、１．２５Ｕ  ＴａｑＤＮＡポリメラーゼを用いて２０サイクルのＰＣＲ（熱変性９４℃で１分、アニーリング５５℃で１分、伸長反応７２℃で２分）を行った。ＰＣＲ増幅によって、３０５ｂｐのＣＯＸ−１ｃＤＮＡを得た。用いたプライマーは、配列番号５と配列番号６である。【００３０】  さらにまた、ＲＴ反応によって得られたｃＤＮＡ溶液に対し、ＭＭＰ−１遺伝子に特異的なプライマーを加え、１．２５Ｕ  ＴａｑＤＮＡポリメラーゼを用いて２０サイクルのＰＣＲ（熱変性９４℃で１分、アニーリング５５℃で１分、伸長反応７２℃で２分）を行った。ＰＣＲ増幅によって、５５０ｂｐのＭＭＰ−１ｃＤＮＡを得た。用いたプライマーは、配列番号７と配列番号８である。【００３１】  さらにまた、ハウスキーピング遺伝子であるグリセルアルデヒド三リン酸脱水素酵素（Ｇ３ＰＤＨ）を内標準物質として採用した。ＲＴ反応によって得られたｃＤＮＡ溶液に対し、Ｇ３ＰＤＨ遺伝子に特異的なプライマーを加え、１．２５Ｕ  ＴａｑＤＮＡポリメラーゼを用いて２０サイクルのＰＣＲ（熱変性９４℃で１分、アニーリング５５℃で１分、伸長反応７２℃で２分）を行った。ＰＣＲ増幅によって、５５０ｂｐのＧ３ＰＤＨｃＤＮＡを得た。用いたプライマーは、配列番号９と配列番号１０である。【００３２】  以上のようにして各々増幅させたＰＣＲ産物は、１．��％アガロースゲル内で電気泳動を行い、エチジウムブロマイドにより染色を施した。このようにして染色したゲル上で、トランスイルミネーターを使用したＵＶ照射によってバンドを検出した。このバンドが分子量標準ＤＮＡのサイズとの比較によって、ＰＣＲ増幅によって得られる目的のバンドであることを確認した後、写真撮影を行った。目的とするＤＮＡバンドの発色強度をデンシトメーターにて数値化し、Ｇ３ＰＤＨの発色強度を対照とし、その相対値（ＯＤ／Ｇ３ＰＤＨ）を算出した。【００３３】試験結果（１）：このようにして培養したＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＣＯＸ−２、ＭＭＰ−１各遺伝子発現の変化におけるデキサメサゾンの効果を図７に示す。
ＩＬ−１β未添加では、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＭＭＰ−１が恒常的に発現しており、一方でＣＯＸ−１の発現はほとんど見られなかった。ＩＬ−１βのみを添加したものについては、高発現している３種について、ほとんど変化が確認されなかったが、ＣＯＸ−２は、約１０倍に増加していた。デキサメサゾンを添加したものについては、測定を行ったすべてについて減少が見られ、特にＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＭＭＰ−１については、０．３μＭの添加で、１／３〜１／６倍に減少していた。【００３４】  ＩＬ−１β未添加の結果から、ＳＷ９８２細胞では、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＭＭＰ−１が高発現しており、これらが恒常的に遺伝子発現をしていることを示している。さらにＩＬ−１βの添加によって、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ２のリガンドであるＧＲＯα、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、ＴＮＦ−ａのサイトカインが誘導されることが知られている（例えば非特許文献５参照。）。これらの炎症性物質に加え、ＣＯＸ−２についても発現量が１０倍近く増加し、ＩＬ−１βによるＣＯＸ−２の誘導が引き起こされることが示された。デキサメサゾンを加えることにより、これら炎症性物質の転写が抑制され、恒常的に発現しているＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＭＭＰ−１、及びＩＬ−１βにより誘導されたＣＯＸ−２を強く抑制した。【００３５】試験結果（２）：ＩＬ−１β刺激下で培養したＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＣＯＸ−２、ＭＭＰ−１各遺伝子発現の変化におけるイソフラキシジンの効果を図８に示す。イソフラキシジン未添加では、試験結果（１）と同実験系であるので、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＭＭＰ−１が恒常的に発現し、ＣＯＸ−２が誘導されて発現していることを示している。イソフラキシジンを添加することにより、これらの転写は、１３５μＭの濃度で抑制効果が見られた。その傾向は、測定している炎症性物質によらず、約１／２の同程度な抑制を示した。すなわち、イソフラキシジンは、測定したすべての炎症性物質に効果があり、ＩＬ−６に関していえば、遺伝子発現を抑制することで、蛋白合成を抑制し、ＩＬ−６産出量の減少を引き起こしていると考えられる。【００３６】試験結果（３）：ＩＬ−１β刺激下で培養したＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＣＯＸ−２、ＭＭＰ−１各遺伝子発現の変化におけるクロロゲン酸の効果を図９に示す。ＩＬ−１β未添加では、試験結果（１）と同実験系であるので、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＭＭＰ−１が恒常的に発現し、ＣＯＸ−２が誘導されて発現していることを示している。クロロゲン酸は、ＩＬ−１β、ＣＯＸ−２の遺伝子発現の濃度依存的な抑制を示した。これに対し、ＩＬ−６、ＭＭＰ−１の遺伝子発現量には変化は見られなかった。この結果から、クロロゲン酸の抗炎症作用は一部に限られるものと推察された。
【非特許文献６】  Ｎ．ＮｏｍｕｒａらＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．  ８８３−８８８．  １０（１１）．  １９９６．
【非特許文献７】  Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉら．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６２，１５６−１５９，１９８７．
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】  ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞の増殖に及ぼすデキサメサゾンの影響  縦軸：無処理コントロールに対する、細胞数の相対値（％）  横軸：培養液中に添加されたデキサメサゾンの濃度（μＭ）
【図２】  ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞の増殖に及ぼすイソフラキシジンの影響  縦軸：無処理コントロールに対する、生細胞数の相対値（％）  横軸：培養液中に添加されたイソフラキシジンの濃度（μＭ）
【図３】  ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞の増殖に及ぼすクロロゲン酸の影響  縦軸：無処理コントロールに対する、生細胞数の相対値（％）  横軸：培養液中に添加されたクロロゲン酸の濃度（μＭ）
【図４】  ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β刺激下でのＩＬ−６産生に及ぼすデキサメサゾンの影響  縦軸：無処理コントロールに対する、細胞１０００個当たりのＩＬ−６産生量（ｐｇ）  横軸：培養液中に添加されたデキサメサゾンの濃度（μＭ）
【図５】  ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β刺激下でのＩＬ−６産生に及ぼすイソフラキシジンの影響  縦軸：無処理コントロールに対する、細胞１０００個当たりのＩＬ−６産生量（ｐｇ）  横軸：培養液中に添加されたイソフラキシジンの濃度（μＭ）
【図６】  ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β刺激下でのＩＬ−６産生に及ぼすクロロゲン酸の影響  縦軸：無処理コントロールに対する、細胞１０００個当たりのＩＬ−６産生量（ｐｇ）  横軸：培養液中に添加されたクロロゲン酸の濃度（μＭ）
【図７】  ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β刺激下、無刺激下でのデキサメサゾン添加時のＩＬ−１β（左上）、ＩＬ−６（右上）、ＣＯＸ−２（左下）、ＭＭＰ−１（右下）各種遺伝子発現への影響  縦軸：内標準Ｇ３ＰＤＨに対するｍＲＮＡ吸光度の相対値（ＯＤ／Ｇ３ＰＤＨ）  横軸：上段：培養液中に添加されたＩＬ−１βの有無（有：２ｎｇ／ｍＬ）  下段：培養液中に添加されたデキサメサゾンの濃度（μＭ）
【図８】  ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β刺激下でのイソフラキシジン添加時のＩＬ−１β（左上）、ＩＬ−６（右上）、ＣＯＸ−２（左下）、ＭＭＰ−１（右下）各種遺伝子発現への影響  縦軸：内標準Ｇ３ＰＤＨに対するｍＲＮＡ吸光度の相対値（ＯＤ／Ｇ３ＰＤＨ）  横軸：培養液中に添加されたイソフラキシジンの濃度（μＭ）
【図９】  ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２細胞のＩＬ−１β刺激下でのクロロゲン酸添加時のＩＬ−１β（左上）、ＩＬ−６（右上）、ＣＯＸ−２（左下）、ＭＭＰ−１（右下）各種遺伝子発現への影響  縦軸：内標準Ｇ３ＰＤＨに対するｍＲＮＡ吸光度の相対値（ＯＤ／Ｇ３ＰＤＨ）  横軸：培養液中に添加されたクロロゲン酸の濃度（μＭ）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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