(57)【要約】【課題】免疫グロブリン溶液の加熱処理工程を含み、より簡便で、凝集物の低減化された免疫グロブリン製剤の製造方法を提供すること。【解決手段】免疫グロブリン含有水溶液を、３（ｗ／ｖ）％以下の蛋白濃度でかつ、１０（ｗ／ｖ）％以上の安定化剤の存在下にｐＨ５．２±０．５、伝導度０．０１〜１ｍＳｉで加熱処理する工程、その後にｐＨ７〜９、伝導度０．０１〜１ｍＳｉの条件下で等電点分画処理および／または陰イオン交換体処理する工程を含み、さらに必要に応じて、ｐＨを６〜７に調整し、平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜を用いて濾過する工程を含む、免疫グロブリン製剤の製造方法。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫グロブリン含有溶液を、蛋白濃度が３（ｗ／ｖ）％以下でかつ、１０（ｗ／ｖ）％以上の安定化剤の存在下にｐＨ５．２±０．５、伝導度０．０１〜１ｍＳｉで加熱処理する工程、その後にｐＨ７〜９、伝導度０．０１〜１ｍＳｉで等電点分画処理および／または陰イオン交換体処理することを含む、免疫グロブリン製剤の製造方法。
【請求項２】
免疫グロブリン含有水溶液が、コーンの第ＩＩ＋ＩＩＩ水抽出画分またはコーンの第ＩＩ画分に由来するものである請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
安定化剤がソルビトールである請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項４】
加熱処理前に脱アルコール処理を行う請求項１〜３のいずれか１に記載の製造方法。
【請求項５】
加熱処理後さらにｐＨを６〜７に調整し、平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜を用いて濾過する工程を含む、請求項１〜４のいずれか１に記載の製造方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１に記載の製造方法により得られた免疫グロブリン製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は免疫グロブリン製剤の製造方法に関する。詳細には液状加熱工程を含む製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
血漿蛋白成分であるγ−グロブリンのうち、特にＩｇＧを主成分とする免疫グロブリン製剤は、これまで広く各種感染症の予防並びに治療に役立てられてきた。免疫グロブリンの製造方法は、種々検討されており、多数報告されている。例えば、非化学修飾型の免疫グロブリンの調製方法として、エタノール分画、ポリエチレングリコール分画（特開昭５３−４７５１５号公報）、ポリエチレングリコールとヒドロキシエチルスターチの組み合わせによる分画（特開昭５１−９１３２１号公報）、酸処理（特開昭５７−３２２２８号公報）、陰イオン交換体処理（特表昭５９−５０１５４６号公報、特開昭６０−４２３３６号公報）、加熱処理とポリエチレングリコール分画との組合せ（特開昭６３−１８３５３９号公報）、液状製剤化（特開昭５８−４３９１４号公報、特開昭６３−１９７２７４号公報）等が報告されている。
【０００３】
また、血漿分画製剤である免疫グロブリン製剤のより安全性の高い製剤を供給するために、上記方法により得られた免疫グロブリンにさらに加熱処理を施した製造方法も種々報告されている。例えば、液状加熱方法としては、安定化剤として高濃度の糖または糖アルコールを用いる方法（特開昭６１−１９１６２２号公報）、安定化剤として高濃度のソルビトールを用い、低イオン強度、酸性ｐＨで行う方法（特開昭６３−１４６８３２号公報）等が報告され、乾燥加熱方法としては、安定化剤としてアルブミン、グリシン、ポリエチレングリコール、塩化ナトリウム、マンニトール等を用いる方法（特開昭６１−７８７３０号公報）、安定化剤として二糖類、糖アルコールを用いる方法（特開昭６２−２２８０２４号公報、特開昭６３−２８３９３３号公報）、安定化剤としてアルブミンと二糖類または糖アルコールを併用する方法（特開昭６２−２８９５２３号公報）等が報告されている。
【０００４】
しかしながら、上記加熱処理した免疫グロブリン製剤は免疫グロブリンの凝集物（ポリマー）を低減化させ、安定性に優れた製剤を得るために、加熱処理に加えてポリエチレングリコール分画法やベントナイト法などの処理法を組み合わせて行っており、処理工程に時間を要していた。
【０００５】
そこで、免疫グロブリン溶液の加熱処理工程を含み、より簡便で、凝集物の低減化された免疫グロブリン製剤の製造方法の開発が望まれている。このような製造方法として、シーエスエルは、Ｃｏｈｎ−Ｏｎｃｌｅｙ法に基づく方法により精製して得たコーン分画法（上清ＩＩＩ）またはフィブリノゲン（画分Ｉ）を除去し、次にイオン交換クロマトグラフィー法を行って得た免疫グロブリン溶液を、タンパク質濃度が約３（ｗ／ｖ）％またはそれ以下で液状加熱する方法を開示している（特表２０００−５１５８５７公表公報）。当該公報では液状加熱後の後処理は不要であるというのが特徴であり、加熱処理後に精製処理は行っていない。当該公報では、得られた免疫グロブリン調製物は、蛋白質濃度が０．５％でかつ安定化剤（ショ糖）濃度が４０％の場合では、凝集物の濃度は０．２１％であるが、蛋白質濃度が２．０％で安定化（ショ糖）濃度が３０％の場合では、凝集物の濃度は４．５５％混入することが報告されている。
【０００６】
筋注用免疫グロブリン製剤の液状加熱処理については、蛋白濃度４±１（ｗ／ｖ）％、ｐＨは６±０．５を開示する報告がある（ＥＳ−２０９１１６１）。しかも、当該出願では、液状加熱処理後にデプスろ過を行っており、等電点分画処理および／または陰イオン交換処理についての報告はない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、免疫グロブリン溶液の加熱処理工程を含み、より簡便で、凝集物の低減化された免疫グロブリン製剤の製造方法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記の事情を考慮して鋭意研究を行った結果、特定の条件下で免疫グロブリン含有溶液を液状加熱および必要に応じて膜処理を行い、加熱処理により生成した高分子画分を等電点分画処理および／または陰イオン交換体処理により除去することによって、所期の目的を達成できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、
１．免疫グロブリン含有溶液を、蛋白濃度が３（ｗ／ｖ）％以下でかつ、１０（ｗ／ｖ）％以上の安定化剤の存在下にｐＨ５．２±０．５、伝導度０．０１〜１ｍＳｉで加熱処理する工程、その後にｐＨ７〜９、伝導度０．０１〜１ｍＳｉで等電点分画処理および／または陰イオン交換体処理することを含む、免疫グロブリン製剤の製造方法、
２．免疫グロブリン含有水溶液が、コーンの第ＩＩ＋ＩＩＩ水抽出画分またはコーンの第ＩＩ画分に由来するものである前項１に記載の製造方法、
３．安定化剤がソルビトールである前項１または２に記載の製造方法、
４．加熱処理前に脱アルコール処理を行う前項１〜３のいずれか１に記載の製造方法、
５．加熱処理後さらにｐＨを６〜７に調整し、平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜を用いて濾過する工程を含む、前項１〜４のいずれか１に記載の製造方法、
６．前項１〜５のいずれか１に記載の製造方法により得られた免疫グロブリン製剤、からなる。
【００１０】
【発明の実施の形態】
（免疫グロブリン含有水溶液）
本発明において免疫グロブリン含有水溶液は、免疫グロブリンを含む水溶液であれば特に限定されるものではないが、好ましくはコーンのエタノール分画により得られる第ＩＩ＋ＩＩＩ画分 、第ＩＩ画分や、免疫グロブリンを含むこれらと同等の画分のペースト等が挙げられる。これらの画分を水性溶媒に懸濁して、免疫グロブリンが抽出される方法が例示される。この時、当該画分の少なくとも２倍容量以上、好ましくは５倍容量以上の水性媒体が使用される。
【００１１】
（液状加熱）
本工程は本製剤中に夾雑する可能性のあるウイルスを不活化するためのものである。蛋白濃度としては３（ｗ／ｖ）％以下、好ましくは０．１〜３（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．５〜２（ｗ／ｖ）％程度である。本工程では免疫グロブリンの安定性を確保する目的で安定化剤を添加する。液状加熱処理時の安定化剤としては、糖類（例えば、ブドウ糖などの単糖類、ショ糖などの二糖類、ソルビトールなどの糖アルコール）、アミノ酸、有機酸、非イオン系界面活性剤などが挙げられる。好ましくは、ショ糖またはソルビトールを用いる。安定化剤の添加量としては免疫グロブリンの溶液１Ｌ当たり１００ｇ以上、好ましくは１００〜７００ｇ、より好ましくは３００〜７００ｇ程度である。ｐＨとしては５．２±０．５、より好ましくは５．２±０．２程度、伝導度としては０．０１〜１ｍＳｉ、より好ましくは０．１〜０．３ｍＳｉ程度が例示される。液状加熱の処理条件としては５０〜７０℃（好ましくは６０℃程度）で１０分間〜２０時間（好ましくは１０時間程度）が例示される。
また、出発原料をコーンのエタノール分画で得られる第ＩＩ＋ＩＩＩ画分 、第ＩＩ画分にはアルコールが含まれていることが考えられるが、加熱処理を行う際の免疫グロブリン溶液のアルコール濃度は、低いほうが凝集物の発生を抑制することができる。アルコール濃度は１．０％以下、好ましくは０．３％以下、より好ましくは０．１％で行うのが良い。出発原料からアルコール分を除去する方法として注射用水を外液とした透析処理などが例示される。
【００１２】
（安定化剤除去）
本工程は液状加熱後に高濃度の安定化剤を除去するためのものである。具体的には注射用水を外液とした透析処理などが例示される。
【００１３】
（等電点分画処理）
本工程は加熱処理で生成した（ＩｇＧの）高分子画分を除去するためのものである。具体的には上記の工程により安定化剤を除去処理した免疫グロブリン含有水溶液のｐＨおよび伝導度を調整することにより、高分子画分を沈殿させて上清画分を回収する。蛋白濃度としては０．１〜４（ｗ／ｖ）％、より好ましくは１〜３．５（ｗ／ｖ）％程度が例示される。ｐＨ条件としては７〜９、より好ましくは７．５〜８．５程度が例示される。また、伝導度としては０．０１〜１ｍＳｉ、より好ましくは０．１〜０．３ｍＳｉ程度が例示される。
【００１４】
（陰イオン交換体処理）
本工程も加熱処理で生成した（ＩｇＧの）高分子画分を除去するためのものである。具体的には上記の工程により安定化剤を除去処理した免疫グロブリン含有水溶液を陰イオン交換体で接触処理して、非吸着画分（パス画分）を回収する。陰イオン交換体は、陰イオン交換能を有する置換基（陰イオン交換基）を不溶性担体に結合したものである。このような置換基として、ジエチルアミノエチル基（ＤＥＡＥ）、四級アミノエチル基（ＱＡＥ）等が例示される。不溶性担体としては架橋デキストラン（商品名セファデックス、ファルマシア製）、セルロース、アガロース（商品名セファロース、ファルマシア製）、ポリビニル（商品名トヨパール、東ソー製）、ポリアクリルアミド等が例示される。陰イオン交換体は市販のものを使用することもできる。処理条件は、ｐＨとして７〜９、より好ましくは７〜８．５程度が例示される。また、伝導度として０．０１〜１ｍＳｉ、より好ましくは０．１〜０．３ｍＳｉ程度が例示される。
【００１５】
当該溶液中の蛋白濃度としては０．１〜４（ｗ／ｖ）％、より好ましくは１〜３．５（ｗ／ｖ）％程度である。さらに、上記の水性溶媒で平衡化した陰イオン交換体と接触処理する。その処理に際してはバッチ法、カラム法のどちらを用いてもよい。例えばバッチ法では、陰イオン交換体１ｍｌに対して処理対象溶液１０〜１００ｍｌ程度と混合させ、０〜４℃で３０分〜２時間程度攪拌した後、遠心分離（６０００〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して上清を回収する。カラム法でも、陰イオン交換体１ｍｌに対して処理対象溶液１０〜１００ｍｌ程度を接触させ、非吸着画分を回収する。本工程により同時にＩｇＭも除去することができる。
【００１６】
（多孔性膜による膜濾過）
本工程は免疫グロブリン製剤中に夾雑する可能性のあるウイルスを除去するためのものである。具体的には上記の工程により処理された免疫グロブリン含有水溶液を多孔性膜（例えば、中空糸状、シート状等）等による濾過処理方法等が挙げられる。
【００１７】
本発明に使用される多孔性膜の素材としては、特に制限はないが、好ましくは再生セルロースが挙げられる。またその形状としては、中空糸状、シート状等が挙げられるが、好ましくは中空糸状である。例えば該再生セルロースの多孔性中空糸は、好ましくはセルロース銅アンモニア溶液からのミクロ相分離法〔アメリカン・ケミカル・ソサイアティー（Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．），９，１９７−２２８（１９８５）〕により調製される。
【００１８】
多孔性膜の平均孔径は１〜１００ｎｍ、好ましくは１０〜７５ｎｍ、より好ましくは１０〜５０ｎｍ、特に好ましくは３５±２ｎｍまたは２０±２ｎｍ、膜厚は好ましくは３５±３．５μｍであり、その膜は好ましくは多重層構造である。多孔性膜が中空糸状である場合には、内径は好ましくは３３０±３０μｍである。多孔性膜が中空糸状である場合には、好ましくはモジュールの態様で使用される。該モジュールは、膜面積が好ましくは０．００１〜１．０ｍ２である多孔性中空糸膜とこれを充填するための容器およびこれらを一体化するための接着剤により構成される。
【００１９】
多孔性膜による濾過処理の処理条件としてはｐＨ６〜７、低イオン強度（具体的には０．０１〜１ｍＳｉ、好ましくは０．１〜０．３ｍＳｉ程度）であることが好ましい。当該水性溶媒は上記の工程で記載したものと同様の溶質を含んでいてもよい。当該溶液中の蛋白濃度としては０．１〜４（ｗ／ｖ）％、好ましくは１〜３．５（ｗ／ｖ）％程度である。
【００２０】
当該免疫グロブリン製剤は、静注用免疫グロブリンまたは筋注用免疫グロブリン製剤として、好ましくは筋注用免疫グロブリン製剤として使用することができる。免疫グロブリン製剤は、本発明の目的に反しない範囲で、さらに精製処理を施し、例えば静注用製剤の規格に適合する製剤を調製する事もできる。本発明の目的に反しない範囲とは、ポリエチレングリコール処理やベントナイト処理を行わない範囲をいう。医薬品に用いられる薬理的に許容される添加剤（例えば担体、賦形剤、希釈剤等）、安定化剤または製薬上必要な成分を含有していてもよい。安定化剤としては、グルコース等の単糖類、サッカロース、マルトース等の二糖類、マンニトール、ソルビトール等の糖アルコール、塩化ナトリウム等の中性塩、グリシン等のアミノ酸、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体（プルロニック）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（トゥイーン）等の非イオン系界面活性剤等が例示される。その添加量としては糖類、アミノ酸は１〜１０（ｗ／ｖ）％程度、塩類は０．１〜１（ｗ／ｖ）％程度、界面活性剤は０．０１〜０．１（ｗ／ｖ）％程度が添加されていることが好ましい。
【００２１】
上記の免疫グロブリン含有水溶液を、多孔性膜を用いて濾過処理を行う。この時の濾過圧力は好ましくは０．１〜１ｋｇｆ／ｃｍ２ 、より好ましくは０．１〜０．５ｋｇｆ／ｃｍ２ 、特に好ましくは０．１〜０．３ｋｇｆ／ｃｍ２である。また、処理温度は好ましくは４〜５０℃であり、処理時間は１０分〜１０時間、好ましくは１〜５時間である。濾過処理の態様としては、流体にひずみ速度を与えながら濾過するクロスフロー濾過法（循環式）とひずみ速度を与えずに濾過するデッドエンド法（非循環式）があるが、好ましくは加圧空気によるクロスフロー濾過法が採用される。また、このような濾過処理は複数回行うことができる。さらに、この濾過処理前に、予め免疫グロブリン含有水溶液に、上述の中空糸膜による濾過処理以外の濾過処理を施してもよい。
【００２２】
（透析（濃縮））
本工程は多孔性膜による濾過処理後に免疫グロブリン含有水溶液を濃縮するものである。具体的には蛋白濃度を１０〜２０（ｗ／ｖ）％、好ましくは１３〜１７（ｗ／ｖ）％程度に調整するために行う。注射用水を用いて透析濾過を行うことにより実施される。
【００２３】
（最終製剤化）
得られた画分は小分け分注することにより液状製剤化することができる。また、さらに当該液状製剤を凍結乾燥などの処理を施すことにより乾燥製剤とすることもできる。
【００２４】
（調製された免疫グロブリン製剤の性状）
本製剤は、蛋白濃度１０〜２０（ｗ／ｖ）％、好ましくは１３〜１７（ｗ／ｖ）％、ｐＨ６〜８、好ましくは６．４〜７．６、浸透圧１〜３、好ましくは１〜２程度等の性状を有する。また、本発明の目的に反しない範囲で通常医薬品に用いられる薬理的に許容される添加剤（例えば担体、賦形剤、希釈剤等）、安定化剤または製薬上必要な成分を含有していてもよい。安定化剤の種類・添加量としては、上述の通りである。なお、通常筋注用免疫グロブリン製剤等に添加される防腐剤（例えば、チメロサールなど）を添加する必要はない。本発明の液状加熱により滅菌の効果も改善されているからである。本製剤中のＩｇＧ凝集物含量は免疫グロブリンの総量に対して２．５（ｗ／ｗ）％以下好ましくは１（ｗ／ｗ）％以下であり、力価（麻疹抗体価）は少なくとも５Ｕ／１５０ｍｇ蛋白程度であることが好ましい。本製剤は液状製剤、乾燥製剤いずれの態様でもよい。液状製剤の場合はそのまま、乾燥製剤の場合は注射用水などに溶解して、患者の筋肉内に注射することができる。
【００２５】
【実施例】
本発明をより詳細に説明するために実施例・実験例を挙げるが、これらにより本発明は何ら限定されるものではない。
【００２６】
（実施例１）
ＨＢｓ抗原、抗ＨＣＶ抗体、抗ＨＩＶ−１抗体、抗ＨＩＶ−２抗体陰性で、かつＡＬＴ（ＧＰＴ）値でスクリーニングし、さらにＨＩＶ、ＨＢＶ及びＨＣＶについての核酸増幅検査を実施して陰性であることを確認したヒト血漿から得られたプール血漿を原料として、コーンの冷エタノール法により調製した第ＩＩ画分を注射用水に懸濁し、蛋白濃度が１（ｗ／ｖ）％となるように調整した。ソルビトールを溶液１Ｌ当たり５００ｇとなるように各免疫グロブリン溶液に添加し、ｐＨを５．２に調整した。６０℃で１０時間液状（溶液状態）にて加熱した。注射用水を外液として透析することによりソルビトールを除去し、ｐＨ７．８に調整して等電点分画処理を行い、上清画分を回収した。さらにｐＨ７．８の条件下でＤＥＡＥ−セルロース（ワットマン社製）を用いて陰イオン交換体処理を行い、非吸着画分（パス画分）を回収し、液状加熱により生成した高分子画分を除去した。さらに、グリシンを２．２５（ｗ／ｖ）％、塩化ナトリウムを０．５（ｗ／ｖ）％となるように添加し、ｐＨを６．６に調整した。平均孔径３５ｎｍの多孔性膜（ＢＭＭ。プラノバ３５、旭化成工業製）を用いて膜濾過処理した。注射用水を用いて透析濾過し、最終蛋白濃度を１５（ｗ／ｖ）％となるように濃縮した。孔径０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）を用いて除菌濾過し、最終製剤とした。
【００２７】
（実施例２）
実施例１に準じて免疫グロブリンを液状加熱した。注射用水を外液として透析することによりソルビトールを除去し、蛋白濃度３（ｗ／ｖ）％、ｐＨ７．８の条件下で等電点分画処理を行い、上清画分を回収し、さらに蛋白濃度３（ｗ／ｖ）％、ｐＨ７．８の条件下でＤＥＡＥ−セルロースを用いて陰イオン交換体処理を行い、非吸着画分（パス画分）を回収し、液状加熱により生成した高分子画分を除去した。次いで、平均孔径２０ｎｍの多孔性膜（ＢＭＭ。プラノバ２１、旭化成工業）を用いて膜濾過処理した。注射用水を用いて透析濾過し、最終蛋白濃度を１５（ｗ／ｖ）％となるように濃縮した。この１５％溶液に、グリシンを２．２５（ｗ／ｖ）％、塩化ナトリウムを０．５（ｗ／ｖ）％となるように添加し、ｐＨを６．５に調整して、孔径０．２２μｍのフィルターを用いて除菌濾過し、最終製剤とした。
【００２８】
（実施例３）
陰イオン交換体として湿重量０．５％のイオン交換セルロースろ紙（ＤＥ８１、ワットマンジャパン社製）を用いる以外は実施例２に準じて操作した。
【００２９】
（実施例４）
多孔性膜としてバイオソルプＮＦＰ（ミリポア社）を用いる以外は実施例２に準じて操作した。
【００３０】
（実験例１）性状
実施例により調製された筋注用免疫グロブリン製剤の各性状は以下のとおりであった。
蛋白濃度            ：１５（ｗ／ｖ）％
グリシン濃度        ：２．２５（ｗ／ｖ）％
塩化ナトリウム濃度  ：０．５（ｗ／ｖ）％
ｐＨ                ：６．４〜７．２
浸透圧              ：約２（整理食塩液との比）
外観                ：無色ないし黄褐色の澄明な液剤
麻疹抗体価          ：５Ｕ／１５０ｍｇ蛋白以上
【００３１】
（参考例）加熱処理条件の選定
１）ｐＨの検討
加熱処理時における免疫グロブリン溶液の至適ｐＨについて検討した。免疫グロブリン溶液を蛋白濃度を５％、安定化剤としてソルビトール濃度を５０％となるように添加し、免疫グロブリン水溶液を調製した。次に、各免疫グロブリン溶液のｐＨを４．７、５．０、５．２、５．５および５．７になるよう調整した後、６０℃１０時間加熱処理した。加熱処理後の各免疫グロブリンの組成（ポリマー（凝集物）、ダイマー、モノマー、その他）を測定し、表１に結果を示した。蛋白量は、分光光度計を用いて、波長A280nmでの吸光度を測定して得た。免疫グロブリンの組成は、ＨＰＬＣ−ＧＰＣ分析（ゲルろ過：高速液体クロマトグラフィー）により行った。
その結果、ｐＨ５．０〜５．５の免疫グロブリン溶液でポリマーの発生が最も低く抑えられた。ただし、本条件では加熱前に比べ、加熱後のポリマー量は増加した。
【００３２】
【表１】
2005320248.tif 000002
【００３３】
（実験例２）
１）蛋白濃度の検討
加熱処理時における免疫グロブリン溶液の至適濃度について検討した。免疫グロブリン溶液を、蛋白濃度が１．０、２．５、５．０、７．５（ｗ／ｖ）％となるように調整し、安定剤としてソルビトールを５０（ｗ／ｖ）％となるように配合した。更に、ｐＨを５．２±０．５に調整した後、６０℃１０時間加熱処理した。加熱処理後の各免疫グロブリンの組成を上記１）と同様に測定し、その結果を表２に示した。
その結果、蛋白濃度が、２．５（ｗ／ｖ）％以下の場合には、加熱処理後であってもポリマー含量が０．１５％であった。
【００３４】
【表２】
2005320248.tif 000003
【００３５】
（参考例）
２）ソルビトール添加濃度の検討
免疫グロブリン溶液の加熱処理時における含有する安定化剤の至適濃度について検討した。免疫グロブリン溶液を蛋白量が５±１（ｗ／ｖ）％となるように調整し、ソルビトールが各々５０、５５、６０、６５（ｗ／ｖ）％となるように配合した。各免疫グロブリン溶液を６０℃１０時間加熱処理した。加熱処理後の各免疫グロブリンの組成を上記１）と同様に測定し、その結果を表３に示した。
その結果、ソルビトール添加濃度が高濃度となるほど加熱処理時のポリマーの発生は抑制された。
【００３６】
【表３】
2005320248.tif 000004
【００３７】
（参考例）
３）ベントナイト処理について
加熱処理工程におけるベントナイト処理によるポリマー発生に及ぼす効果を調べた。免疫グロブリン溶液の加熱処理前に、ベントナイトの濃度が、各々１．０、２．０及び３．０％となるように添加した（ｐＨ６．８）。免疫グロブリン溶液の蛋白濃度５．０±１（ｗ／ｖ）％、ｐＨ５．２、ソルビトールが５０（ｗ／ｖ）％となるように配合し、６０℃１０時間加熱処理を行った。加熱処理後の各免疫グロブリンの組成を上記１）と同様に測定し、その結果を表４に示した。
その結果、ベントナイト処理によるポリマー発生の抑制効果はほとんど得られなかった。よって、本発明において、ベントナイト添加によるポリマー画分の削減の効果は得られなかった。このことより、加熱処理時にベントナイトの添加の必要がないことがわかった。
【００３８】
【表４】
2005320248.tif 000005
【００３９】
（参考例）
４）アルコール存在下での加熱に及ぼす影響の確認
高濃度のエタノール存在下で免疫グロブリン溶液を加熱したときのポリマー発生に及ぼす影響を調べた。アルコール濃度０、１．０、２．０及び３．０％となるように免疫グロブリン溶液に添加した。免疫グロブリン溶液の蛋白濃度５．０±１（ｗ／ｖ）％、ｐＨ５．２、ソルビトールが５０（ｗ／ｖ）％となるように配合し、６０℃１０時間加熱処理を行った。加熱処理後の各免疫グロブリンの組成を上記１）と同様に測定し、その結果を表５に示した。
その結果、ポリマー画分はアルコール濃度に比例して増加することが確認された。このことより、加熱処理時には、脱アルコール処理を行うことが望ましい。
【００４０】
【表５】
2005320248.tif 000006
【００４１】
（実験例２）
２）蛋白濃度とアルコール濃度の検討。
蛋白濃度とアルコール濃度の関係を変えて加熱処理を行った場合のポリマー発生に及ぼす影響を調べた。加熱処理時はｐＨ５．２、ソルビトールが５０（ｗ／ｖ）％の条件で６０℃１０時間行った。加熱処理後の各免疫グロブリンの組成を上記１）と同様に測定し、その結果を表６に示した。
その結果、蛋白濃度が１％の場合では、アルコール濃度が０．３％でもポリマー画分の増加は認められなかった。蛋白濃度が２．５％の場合では、アルコール濃度に比例してポリマー画分の増加傾向が認められた。
【００４２】
【表６】
2005320248.tif 000007
【００４３】
（実験例３）陰イオン交換体処理条件の選定
蛋白濃度が３（ｗ／ｖ）％となるように調整した免疫グロブリン溶液を、ｐＨ５．２、ソルビトールが５０（ｗ／ｖ）％の条件で６０℃１０時間加熱処理を行い、その後超ろ過膜（ＵＦ膜：ＭＷ50,000）でソルビトールを除去した。その後、各種ｐＨ条件で陰イオン交換体体処理したときのポリマー画分の除去効果の検討を行った。処理後の各免疫グロブリンの組成を上記１）と同様に測定し、その結果を表７に示した。
その結果、ｐＨ７．８〜８．２でＤＥＡＥ−セルロース（陰イオン交換体）を湿重量３（ｗ／ｖ）％程度添加した場合にポリマー画分が効果的に除去された。
【００４４】
【表７】
2005320248.tif 000008
【００４５】
（実験例４）
蛋白濃度３（ｗ／ｖ）％で加熱処理したＩｇＧ画分をｐＨ８．０に調整し、市販のイオン交換体ろ紙（ＤＥ８１、ワットマンジャパン社製またはＰ８１、ワットマンジャパン社製）を湿重量３％となるように添加してポリマー画分の除去効果を調べた。ＤＥＡＥ−セルロース（湿重量５％）処理と比較した。結果を表８に示す。
【００４６】
【表８】
2005320248.tif 000009
【００４７】
（実験例５）
蛋白濃度３（ｗ／ｖ）％で加熱処理したＩｇＧ画分を蛋白濃度１〜５（ｗ／ｖ）％に、また、ｐＨ６．５〜８．２に調整して静置することにより等電点分画処理を行い、ポリマー画分の除去効果を調べた。結果を表９に示す。
【００４８】
【表９】
2005320248.tif 000010
【００４９】
（実験例６）
蛋白濃度３（ｗ／ｖ）％で加熱処理したＩｇＧ画分を、ｐＨ５．５〜８．５に調整して等電点分画処理を行い、ポリマー画分の除去効果を調べた。さらにｐＨ７．８で等電点分画処理を行ったものについて、引続きｐＨ８．０の条件下、湿重量１〜５％でＤＥＡＥ−セルロースを添加して陰イオン交換体処理を行い、同様に調べた。結果を表１０に示す。
【００５０】
【表１０】
2005320248.tif 000011
【００５１】
（実験例７）
蛋白濃度３（ｗ／ｖ）％で加熱処理したＩｇＧ画分を、ｐＨ８．０に等電点分画処理を行った後に、ｐＨ７．８の条件下、湿重量０．５％でＤＥＡＥ−セルロースを添加して陰イオン交換体処理を行い、ポリマー画分の除去効果を調べた。結果を表１１に示す。
【００５２】
【表１１】
2005320248.tif 000012
【００５３】
【発明の効果】
本発明の製造方法によれば、夾雑の可能性のあるウイルスは不活化され、安全性がより改善されている。また液状加熱を行っているにもかかわらず、その他の本来の性状は損なわれることなく維持でき、従来のレベルと比べて同等以上の品質が確保される。したがって、従来よりも安全で、しかも有用性は従来と変わらない免疫グロブリン製剤を臨床の場に提供できることとなる。