(57)【要約】【課題】  工業的生産に適したノビレチンの製造方法を提供する。【解決手段】  （ａ）柑橘類をエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液で抽出し、（ｂ）前記工程（ａ）で得られた抽出液を多孔性吸着樹脂に通液し、（ｃ）前記多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンを溶出する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記工程（ａ）〜（ｃ）を含むノビレチンの製造方法。
（ａ）柑橘類をエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液で抽出する工程
（ｂ）前記工程（ａ）で得られた抽出液を多孔性吸着樹脂に通液する工程
（ｃ）前記多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンを溶出する工程
【請求項２】
前記柑橘類がポンカンである請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記工程（ａ）において、前記柑橘類を前記エタノールで抽出する前又は抽出した後に、前記柑橘類を熱水で抽出する請求項１又は２記載の製造方法。
【請求項４】
前記工程（ｂ）において、前記抽出液を濃縮した後、前記多孔性吸着樹脂に通液する請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項５】
前記工程（ｂ）において、前記抽出液の空間速度が０．８〜１．５である請求項１〜４のいずれかに記載の製造方法。
【請求項６】
前記工程（ｃ）において、前記多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンをエタノール濃度が６０〜９０容量％のエタノール水溶液で溶出する請求項１〜５のいずれかに記載の製造方法。
【請求項７】
前記多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンをエタノール濃度が６０〜９０容量％のエタノール水溶液で溶出する前に、前記前記多孔性吸着樹脂をエタノール濃度が３０〜５０容量％のエタノール水溶液で洗浄する請求項６記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ノビレチンの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
柑橘類には、ノビレチン、タンゲレチン、ペンタメトキシフラボン、テトラメトキシフラボン、ヘプタメトキシフラボン等のポリアルコキシフラボノイドが含まれており、柑橘類に含まれているポリアルコシキフラボノイドは、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害活性（特許文献１参照）、神経突起伸長活性（特許文献２参照）、プロスタグランジンＥ２産生抑制活性（特許文献３参照）等を有することが知られている。
【０００３】
柑橘類からのポリアルコシキフラボノイドの製造方法としては、柑橘類の果皮をアセトン中に液浸し、粗フラボノイド抽出液を得た後、オクタデシルシリカゲルを担体とする逆相系カラムで精製する方法（特許文献１、３参照）、柑橘類の果皮を９０（ｖ／ｖ）％エタノールで抽出した後、酢酸エチル−水で分液し、酢酸エチル層を減圧濃縮する方法（特許文献２参照）が知られている。
【特許文献１】特開２０００−８００３５号公報
【特許文献２】特開２００２−６０３４０号公報
【特許文献３】特開２００３−１９２５８８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、工業的生産に適したノビレチンの製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために、本発明は、以下のノビレチンの製造方法を提供する。
（１）下記工程（ａ）〜（ｃ）を含むノビレチンの製造方法。
（ａ）柑橘類をエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液で抽出する工程
（ｂ）前記工程（ａ）で得られた抽出液を多孔性吸着樹脂に通液する工程
（ｃ）前記多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンを溶出する工程
（２）前記柑橘類がポンカンである前記（１）記載の製造方法。
（３）前記工程（ａ）において、前記柑橘類を前記エタノールで抽出する前又は抽出した後に、前記柑橘類を熱水で抽出する前記（１）又は（２）記載の製造方法。
（４）前記工程（ｂ）において、前記抽出液を濃縮した後、前記多孔性吸着樹脂に通液する前記（１）〜（３）のいずれかに記載の製造方法。
（５）前記工程（ｂ）において、前記抽出液の空間速度が０．８〜１．５である前記（１）〜（４）のいずれかに記載の製造方法。
（６）前記工程（ｃ）において、前記多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンをエタノール濃度が６０〜９０容量％のエタノール水溶液で溶出する前記（１）〜（５）のいずれかに記載の製造方法。
（７）前記多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンをエタノール濃度が６０〜９０容量％のエタノール水溶液で溶出する前に、前記前記多孔性吸着樹脂をエタノール濃度が３０〜５０容量％のエタノール水溶液で洗浄する前記（６）記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００６】
柑橘類の抽出溶媒としてエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液を使用することにより、柑橘類から高収率でノビレチンを抽出することができる。
また、柑橘類の抽出溶媒としてエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液を使用することにより、柑橘類抽出液の濃縮時に析出物の発生を防止することができ、析出物により柑橘類抽出液の多孔性吸着樹脂への通液が阻害されることを防止することができる。
したがって、柑橘類の抽出溶媒としてエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液を使用することにより、ノビレチンの工業的生産が可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
工程（ａ）
工程（ａ）は、柑橘類をエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液で抽出する工程である。
柑橘類としては、ミカン科に属するシークワーシャー（Citrus depressa）、タチバナ（C.tachibana）、コウジ（C.leiocarpa）、ギリミカン（C.tardiva）、ジミカン（C.succosa）、キシュウ（C.kinokuni）、コベニミカン（C.erythrosa）、スンキ（C.sunki）、チチュウカイマンダリン（C.deliciosa）、キング（C.nobilis）、ポンカン（C.retuculata）、ダンシータンジェリン（C.tangerina）；ユズ区に属するハナユ（C.hanayu）、コウライタチバナ（C.nippokoreana）等が挙げられ、これらのうち１種又は２種以上の柑橘類を抽出原料として使用することができるが、ポンカンを抽出原料として使用することが好ましい。
【０００８】
抽出原料として使用できる柑橘類の部位としては、例えば、果実、果皮、葉等が挙げられ、これらのうち１種又は２種以上を抽出原料として使用することができるが、果実又は果皮を抽出原料として使用することが好ましい。果実としては、果皮を含む果実全体を使用することが好ましい。果実又は果皮としては、未熟な果実（摘果果実）又はその果皮及び成熟した果実又はその果皮のいずれを使用してもよい。抽出原料には、切断、破砕、乾燥等の前処理を行うことができる。
【０００９】
エタノール水溶液におけるエタノール濃度は０〜４０容量％の範囲内で適宜変更することができる。なお、エタノール濃度が０容量％のエタノール水溶液とは、水を意味する。水には、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。
【００１０】
抽出処理は、柑橘類に含まれるノビレチンを抽出できる限り特に限定されず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の１〜２０倍量（質量比）の抽出溶媒に抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で０．１〜３時間抽出した後、濾過して残渣を除去することにより、ノビレチンを含有する抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、常法に従って濃縮してもよい。また、得られた抽出液は、脱色等を目的として活性炭処理してもよい。
【００１１】
柑橘類をエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液で抽出する前又は抽出した後に、柑橘類を熱水で抽出することが好ましい。これにより、柑橘類からのノビレチン収率を向上させることができる。熱水の温度は通常４０〜１００℃、好ましくは６０〜９０℃である。エタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液で抽出する前に熱水で抽出する場合には、柑橘類を熱水で抽出し、濾過して、ノビレチンを含有する抽出液を得た後、残渣をエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液で抽出し、濾過して、ノビレチンを含有する抽出液を得、両抽出液を混合する。エタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液で抽出した後に熱水で抽出する場合には、柑橘類をエタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液で抽出し、濾過して、ノビレチンを含有する抽出液を得た後、残渣を熱水で抽出し、濾過して、ノビレチンを含有する抽出液を得、両抽出液を混合する。
【００１２】
工程（ｂ）
工程（ｂ）は、工程（ａ）で得られた抽出液を多孔性吸着樹脂に通液する工程である。
工程（ａ）で得られた抽出液には、エタノール濃度が０〜４０容量％のエタノール水溶液を用いて得られた抽出液、及び該抽出液と熱水を用いて得られた抽出液との混合液が含まれる。
多孔性吸着樹脂は、ノビレチンを吸着し得る限り特に限定されるものではない。多孔性吸着樹脂としては、例えば、合成吸着樹脂、活性炭等が挙げられ、これらのうち１種類又は２種類以上を使用することができるが、合成吸着樹脂を使用することが好ましい。
【００１３】
工程（ａ）で得られた抽出液は、濃縮した後、多孔性吸着樹脂に通液することが好ましい。これにより、多孔性吸着樹脂への通液時間を短縮することができる。濃縮は、減圧濃縮等の常法に従って行うことができ、通常３〜１０倍、好ましくは４〜６倍に濃縮する。
【００１４】
抽出液の空間速度は通常０．１〜４、好ましくは０．８〜１．５である。なお、１時間当たり樹脂量の１倍量を通過させる速度を空間速度（Space Velocity，SV）＝１とする。
【００１５】
工程（ａ）で得られた抽出液を多孔性吸着樹脂に通液し、多孔性吸着樹脂から流出してくる液には多孔性吸着樹脂に吸着しなかったノビレチンが含まれている可能性があるので、これを回収しておくことが好ましい。
【００１６】
工程（ｃ）
工程（ｃ）は、多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンを溶出する工程である。
多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンを溶出させることができる溶媒としては、例えば、エタノール水溶液、メタノール水溶液、イソプロパノール水溶液等が挙げられるが、これらのうちエタノール水溶液を使用することが好ましい。ノビレチンの溶出に使用するエタノール水溶液のエタノール濃度は、通常５５〜９５容量％、好ましくは６０〜９０容量％である。
【００１７】
多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンを溶出させる前に、多孔性吸着樹脂を洗浄し、多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチン以外の成分を溶出させることが好ましい。多孔性吸着樹脂の洗浄液としては、例えば、水、エタノール水溶液、メタノール水溶液、イソプロパノール水溶液、水酸化ナトリウム水溶液等が挙げられるが、これらのうちエタノール水溶液を使用することが好ましい。多孔性吸着樹脂の洗浄に使用するエタノール水溶液のエタノール濃度は、通常１０〜５０容量％、好ましくは３０〜５０容量％である。
【００１８】
多孔性吸着樹脂からの溶出液を、減圧乾燥等の常法に従って乾燥することによりノビレチン粗精製物を得ることができる。多孔性吸着樹脂からの溶出液に、工程（ｃ）で得られる多孔性吸着樹脂洗浄液を混合し、この混合液を乾燥することによりノビレチン粗精製物を得ることもできる。
ノビレチン粗精製物には、通常、柑橘類に含まれるノビレチン以外のポリメトキシフラボノイド（例えば、タンゲレチン、ペンタメトキシフラボン、テトラメトキシフラボン、ヘプタメトキシフラボン）が含まれている。
【００１９】
多孔性吸着樹脂に吸着したノビレチンを溶出させる後、多孔性吸着樹脂を洗浄し、多孔性吸着樹脂に吸着している成分を溶出させることにより、多孔性吸着樹脂を繰り返し使用することができる。多孔性吸着樹脂の洗浄液としては、例えば、水、エタノール水溶液、メタノール水溶液、イソプロパノール水溶液、水酸化ナトリウム水溶液等が挙げられるが、これらのうちエタノール水溶液を使用することが好ましい。多孔性吸着樹脂の洗浄に使用するエタノール水溶液のエタノール濃度は、通常７０〜９９容量％である。
【実施例】
【００２０】
以下、比較例及び実施例に基づき本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。なお、以下の比較例及び実施例において、「％」は容量％を表す。
【００２１】
〔比較例１〕
ポンカン摘果果実（果皮を含む果実全体）５５６．４ｇを９０％エタノール１５００ｍＬで還流下にて１時間抽出した後、濾過して、９０％エタノール１番抽出液を得た。次いで、残渣を再び９０％エタノール１５００ｍＬで還流下にて１時間抽出した後、濾過して、９０％エタノール２番抽出液を得た。次いで、残渣を９０℃の熱水１５００ｍＬで抽出した後、濾過して、熱水抽出液を得た。９０％エタノール１番抽出液及び９０％エタノール２番抽出液を合わせ、９０％エタノール総抽出液を得、これを活性炭（カルボラフィン（商品名、日本エンバイロケミカルズ株式会社製）５ｇ）処理して脱色した。
【００２２】
(i)９０％エタノール１番抽出液、(ii)９０％エタノール２番抽出液、(iii)９０％エタノール総抽出液、(iv)活性炭処理後の９０％エタノール総抽出液、(v)熱水抽出液、(vi)活性炭処理後の９０％エタノール総抽出液と熱水抽出液との混合液における固形分量、固形分中のノビレチン含量、原料に対するノビレチン収率を表１に示す。
【００２３】
【表１】
2005145824.tif 000002
【００２４】
９０％エタノール抽出液の活性炭処理時にノビレチンの損失が大きかった。
また、活性炭処理後の９０％エタノール総抽出液と熱水抽出液との混合液を減圧濃縮したところ、析出物が多かった。ノビレチン粗精製物を得るためには、抽出液を多孔性吸着樹脂に通液する必要があるが、抽出液中の析出物は通液の阻害物となる。
【００２５】
〔比較例２〕
ポンカン摘果果実（果皮を含む果実全体）５００．０ｇを９０％エタノール１５００ｍＬで還流下にて１時間抽出した後、濾過して、９０％エタノール抽出液を得た。次いで、残渣を９０℃の熱水１５００ｍＬで抽出した後、濾過して、熱水抽出液を得た。９０％エタノール抽出液を活性炭（カルボラフィン（商品名、日本エンバイロケミカルズ株式会社製）２ｇ）処理して脱色した。
【００２６】
(i)９０％エタノール抽出液、(ii)活性炭処理後の９０％エタノール抽出液、(iii)熱水抽出液、(iv)活性炭処理後の９０％エタノール抽出液と熱水抽出液との混合液における固形分量、固形分中のノビレチン含量、原料に対するノビレチン収率を表２に示す。
【００２７】
【表２】
2005145824.tif 000003
【００２８】
活性炭量を減少させることにより、９０％エタノール抽出液の活性炭処理時のノビレチンの損失は減少した。しかし、活性炭処理後の９０％エタノール抽出液と熱水抽出液との混合液を濃縮したところ、析出物は依然多かった。
【００２９】
〔実施例１〕
ポンカン摘果果実（果皮を含む果実全体）５００．０ｇを３０％エタノール１０００ｍＬで還流下にて１時間抽出した後、濾過して、３０％エタノール抽出液を得た。次いで、残渣を９０℃の熱水１０００ｍＬで抽出した後、濾過して、熱水抽出液を得た。
【００３０】
(i)３０％エタノール抽出液、(ii)熱水抽出液、(iii)３０％エタノール抽出液と熱水抽出液との混合液における固形分量、固形分中のノビレチン含量、原料に対するノビレチン収率を表３に示す。
【００３１】
【表３】
2005145824.tif 000004
【００３２】
３０％エタノールを用いる場合には、９０％エタノールを用いる場合によりもノビレチン収率が高かった。また、３０％エタノール抽出液と熱水抽出液との混合液を減圧濃縮したところ懸濁溶液となったが、多孔性吸着樹脂への通液は可能であった。
【００３３】
〔実施例２〕
ポンカン摘果果実（果皮を含む果実全体）２７８．０ｇを９０℃の熱水１０００ｍＬで抽出した後、濾過して、熱水１番抽出液を得た。次いで、残渣を９０℃の熱水１０００ｍＬで抽出した後、濾過して、熱水２番抽出液を得た。熱水１番抽出液と２番抽出液とを合わせて熱水総抽出液を得た。
【００３４】
(i)熱水１番抽出液、(ii)熱水２番抽出液、(iii)熱水総抽出液における固形分量、固形分中のノビレチン含量、原料に対するノビレチン収率を表４に示す。
【００３５】
【表４】
2005145824.tif 000005
【００３６】
熱水を用いる場合には、９０％エタノールを用いる場合よりもノビレチン収率が高かった。また、熱水総抽出液を減圧濃縮したところ懸濁溶液となったが、多孔性吸着樹脂への通液は可能であった。
【００３７】
〔実施例３〕
ポンカン摘果果実（果皮を含む果実全体）２５００ｋｇを３０％エタノール２８００Ｌで還流下にて１時間抽出した後、濾過して、３０％エタノール抽出液を得た。次いで、残渣を９０℃以上の熱水２３００ｍＬで１時間抽出した後、濾過して、熱水抽出液を得た。３０％エタノール抽出液と熱水抽出液とを合わせた後、減圧濃縮し、濃縮液５００Ｌを得た。減圧濃縮に用いた濃縮缶を７０％エタノール１００Ｌで洗浄し、洗浄液と濃縮液と合わせた。洗浄液と濃縮液との混合液を室温で２日間保管した後、デカントし、デカント上清５４０Ｌを得た。デカント上清をＳＶ＝１にて多孔性吸着樹脂（ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製））５００Ｌに通液し、多孔性吸着樹脂通過液を回収した。
【００３８】
デカント上清を通液した後の多孔性吸着樹脂に１５％エタノール５００Ｌ、５０％エタノール２０００Ｌ、７０％エタノール２５００Ｌ及び９０％エタノール１０００Ｌを順次通液し、１５％エタノール溶出液、５０％エタノール溶出液、７０％エタノール溶出液、９０％エタノール溶出液を得た。
【００３９】
７０％エタノール溶出液を減圧濃縮し、濃縮液６０Ｌを得た。減圧濃縮に用いた濃縮缶を７０％エタノール１００Ｌで洗浄し、洗浄液と濃縮液とを合わせた。減圧濃縮時にクロロフィルを除去した。減圧濃縮後、減圧乾燥してポンカン粗精製物１．３０ｋｇを得た。
【００４０】
(i)３０％エタノール抽出液、(ii)熱水抽出液、(iii)３０％エタノール抽出液と熱水抽出液との混合液の濃縮液、(iv)デカント上清、(v)多孔性吸着樹脂通過液、(vi)５０％エタノール溶出液、(vii)７０％エタノール溶出液、(viii)９０％エタノール溶出液における固形分量、固形分中のノビレチン含量、ノビレチン回収率を表５に示す。
【００４１】
【表５】
2005145824.tif 000006
【００４２】
７０％エタノール溶出液におけるノビレチン回収率は７０％であったが、デカントでの損失部分及び９０％エタノール溶出液に含まれるノビレチンは回収が可能である。