(57)【要約】【課題】  移植治療や免疫疾患治療のための研究用ツール等として利用可能なトランスジェニック動物を提供すること。【解決手段】  哺乳類由来Ｅ３ユビキチンリガーゼの１つであるc-MIR遺伝子を導入することにより、免疫細胞においてc-MIRを過剰発現し、その過剰発現によってMHCクラスII分子の発現が抑制されたトランスジェニックマウスの作製に成功した。このトランスジェニックマウスは、正常マウスと比較して血中抗体の低下が見られ、抗体産生機能が低下した免疫異常マウスであり、移植治療や免疫疾患治療のための研究用ツール等として利用可能である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原提示関連分子を標的とするＥ３ユビキチンリガーゼをコードする遺伝子が導入され、免疫機能の低下したトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項２】
血中抗体の低下した、請求項１記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項３】
免疫グロブリンＩｇＭおよび／又はＩｇＧの抗体産生機能が抑制された、請求項２記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項４】
免疫細胞において抗原提示関連分子であるMHCクラスII分子の発現が抑制された、請求項１記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項５】
脾臓においてMHCクラスII分子の発現が抑制された、請求項４記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項６】
マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、サルのいずれかである、請求項１記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項７】
マウスもしくはヒト由来のc-MIR、HSPC240、43171、XP-055276、CAD28529、20445、又は、配列番号６もしくは８に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝子のうち少なくともいずれかの遺伝子が導入された、請求項１記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項８】
マウス由来のc-MIR遺伝子が導入された、請求項７記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項９】
配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるc-MIR蛋白をコードする遺伝子が導入された、請求項８記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項１０】
配列番号１に示される塩基配列を含むＤＮＡが導入された、請求項９記載のトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗原提示関連分子を標的とするc-MIR等のＥ３ユビキチンリガーゼ遺伝子が導入されたトランスジェニック動物（遺伝子改変動物）に関するものである。本発明のトランスジェニック動物は、広く免疫制御機構の解明に利用することができるが、とりわけ移植治療や免疫疾患治療のための研究用ツール等として利用し得るものである。
【背景技術】
【０００２】
ウイルスは、ヒトに感染し、巧みに免疫学的排除を回避し、持続感染、潜伏感染する。この現象は、ヘルペスウイルスや肝炎ウイルスにてよく認められるが、最近になって、（１）ウイルスの発現する蛋白が、免疫認識に重要な抗原提示関連分子（MHC等）の細胞表面における発現を抑制し、（２）これにより、細胞傷害性Ｔリンパ球（CTL）、ナチュラルキラー細胞（NK）によるウイルス認識を逃れ、ウイルスが免疫学的排除を回避し得ることが分かってきた（例えば、下記の非特許文献１・２参照）。
【０００３】
より具体的には、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（KSHV）のK3, K5蛋白（それぞれ「MIR1」「MIR2」ともいう）、およびマウスγヘルペスウイルス-68（MHV-68）のK3蛋白といったウイルス蛋白は、Ｅ３ユビキチンリガーゼとして機能し、MHCクラスＩ分子の細胞表面における発現を負に制御することが分かってきた。これらのウイルス蛋白は、BKS-PHD/LAPジンクフィンガードメインと呼ばれるリガーゼ活性の触媒部位を共通に有し、このドメインを介してMHCクラスＩ分子をユビキチン化する。このユビキチン化は、MHCクラスＩ分子の迅速なエンドサイトーシスと分解を誘導する。カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスは、このようなK3, K5蛋白の作用（免疫抑制作用）によってMHCクラスＩ分子の細胞表面における発現を抑制し、免疫学的排除を巧みに回避する。
【０００４】
【非特許文献１】Immunity, 2000 Sep:13(3):365-374
【非特許文献２】Journal of Virology, 2000 Jun:74(11):5300-5309
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のように、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス等は、上記K3, K5蛋白といったウイルス蛋白による免疫抑制機構を有しているが、本発明者は、上記K3, K5蛋白の機能解析を進めるうち、これらウイルス蛋白をコードする遺伝子は哺乳類ゲノムに由来し、これらウイルス蛋白の機能類似分子をコードする遺伝子が哺乳類ゲノム、特に  ヒトゲノムにも存在しているのではないかと考えた。
【０００６】
そして、もしそのような免疫抑制機能を持ったヒトホモログ等を見出すことができれば、ヒトの免疫調節機構の解明に役立つばかりでなく、例えば免疫抑制を効率良く人為的に行う方法の開発などにも利用でき、さらにこの方法は、細胞、臓器移植の際の拒絶反応の抑制、自己免疫疾患の治療などに応用可能であると考えた。
【０００７】
本発明者は、このような考えのもと、上記K3,K5蛋白といったウイルス蛋白の哺乳類ホモログを探索した結果、ヒトホモログ・マウスホモログとして複数の分子を同定した。さらにこれら分子の詳細な機能解析を進めた結果、抗原提示関連分子（B7-2共刺激分子やMHCクラスII分子）を標的とするＥ３ユビキチンリガーゼとしての機能が認められた。即ち、これら哺乳類ホモログは、抗原提示関連分子の細胞表面における発現を抑制する免疫抑制作用を有し、機能上も上記K3,K5蛋白と類似するものであった。
【０００８】
本発明の課題は、上記研究成果をもとに更に研究を進めることによって、広く免疫制御機構の解明に利用することができ、とりわけ移植治療や免疫疾患治療のための研究用ツール等として利用可能なトランスジェニック動物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、上記の課題に鑑み鋭意研究を進めた結果、哺乳類由来Ｅ３ユビキチンリガーゼの１つであるc-MIR遺伝子を導入することにより、実際に免疫細胞の一部にてc-MIRを過剰発現し、その過剰発現によってMHCクラスII分子の発現が抑制されたトランスジェニックマウスの作製に成功した。さらに解析の結果、このマウスは正常マウスと比較して血中抗体の低下が見られ、抗体産生機能が低下した免疫異常マウスであること等を明らかにし、本発明を完成させるに至った。
【００１０】
即ち、本発明のトランスジェニック非ヒト哺乳動物は、抗原提示関連分子（B7-2共刺激分子やMHCクラスII分子）を標的とするc-MIR等のＥ３ユビキチンリガーゼをコードする遺伝子が導入され、免疫機能が低下したことを特徴とするものである。
【００１１】
ここで、免疫機能が低下したとは、具体的には、正常マウスと比較して血中抗体の低下が認められる場合が挙げられる。例えば、免疫グロブリンＩｇＭおよび／又はＩｇＧの抗体産生機能が抑制されている場合であり、この場合は後述の実施例に記載の方法によって免疫機能の低下を確認することができる。
【００１２】
本発明のトランスジェニック動物は、Ｂ細胞や樹状細胞といった免疫細胞の少なくとも一部において、抗原提示関連分子であるMHCクラスII分子の発現が抑制されているものであってもよい。この場合も、免疫認識に重要な抗原提示関連分子の発現が抑制されることで、免疫機能の低下が生ずると考えられるからである。例えば、脾臓のＢ細胞および／又は樹状細胞においてMHCクラスII分子の発現が抑制されている場合であり、この場合は後述の組織化学法などによってMHCクラスII分子の発現抑制を確認することができる。
【００１３】
本発明のトランスジェニック動物は、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、サルのいずれかの動物種であることが好ましい。
【００１４】
本発明のトランスジェニック動物にはＥ３ユビキチンリガーゼ遺伝子が導入されるが、トランスジェニックマウスを作製する場合、導入する遺伝子は、後述のマウスもしくはヒト由来のc-MIR、HSPC240、43171、XP-055276、CAD28529、20445、又は、配列番号６もしくは８に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝子（後述のHSPC240 long又はHSPC240 long delta）のうち少なくともいずれかの遺伝子であることが好ましい。
【００１５】
本発明のトランスジェニック動物として、例えば、マウス由来のc-MIR遺伝子が導入され、c-MIRを過剰発現するトランスジェニックマウスが提供される。このトランスジェニックマウスを作製する場合、マウス由来のc-MIR遺伝子としては、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるc-MIR蛋白をコードする遺伝子（例えば、配列番号１に示される塩基配列を含有するＤＮＡ）を使用することができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明のトランスジェニック動物（形質転換動物）は、c-MIR等のＥ３ユビキチンリガーゼ遺伝子が導入されることによって、免疫機能の低下した動物が得られるので、少なくとも産業上以下の用途が考えられ、移植医療の発展、免疫疾患の治療法の開発などに有用である。
（１）人為的免疫制御方法の研究用ツール：例えば、本トランスジェニック動物の臓器（心臓など）を他の動物へ移植し、その生着率を調査する実験等によって、c-MIR等の人為的免疫制御への応用を検討できる。また、これにより免疫抑制剤の使用を従来に比べて少なくする新たな臓器移植方法の開発にも利用できる。
（２）自己免疫疾患の解明と治療法開発への利用：例えば、本トランスジェニック動物の免疫細胞を自己免疫疾患モデル動物へ投与し、あるいは、本トランスジェニック動物と自己免疫疾患モデル動物とを交配させ、免疫抑制の有無を調査することによって、自己免疫疾患の解明などに利用できる。
（３）c-MIR等の制御物質（調節因子）の同定と新薬の開発：本トランスジェニック動物は、生体内においてc-MIR等を制御（その機能を亢進または抑制）する薬剤、物質の探索、検定に極めて重要なツールとなる。
（４）その他、本トランスジェニック動物は、c-MIR等の個体レベルでの機能解析を通じて、広く免疫制御機構の解明に資すると共に、アトピー等の皮膚疾患、その他の免疫疾患に対する新たな治療方法の提供や、新たな抗ウイルス戦略の提供などにも利用し得るものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明の実施の一形態について説明する。
本発明のトランスジェニック動物としては、後述の実施例に記載のc-MIR遺伝子が導入されたトランスジェニックマウスを挙げることができる。
【００１８】
配列表の配列番号１には、本発明者が上記トランスジェニックマウスの作製に使用したマウス（Mus musculus）由来のc-MIR遺伝子のｃＤＮＡ配列が示される。このc-MIR遺伝子によってコードされるc-MIR蛋白は、配列番号２に示される２８６アミノ酸残基からなり、２つの膜貫通領域とBKS-PHD/LAPジンクフィンガードメインとを有する。c-MIRの詳細な機能解析の結果は、国際出願（国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０３／１２１７３）に記載されているが、c-MIRはＥ３ユビキチンリガーゼとして機能し、B7-2分子さらにMHCクラスII分子といった抗原提示関連分子の発現を抑制する作用を有する。
【００１９】
本発明のトランスジェニック動物の作製方法については、特に限定されるものではなく、公知のトランスジェニック動物作製方法のいずれを使用するものであってもよい。例えば、「遺伝子工学キーワードブック  改訂第２版」（羊土社、２０００年１月１日発行）の２８３−２８４頁に記載の方法、「実験医学別冊  新訂  新遺伝子工学ハンドブック  改訂第３版」（羊土社、１９９９年９月１０日発行）の２３４−２３８頁に記載の方法、などが挙げられる。
【００２０】
トランスジェニックマウスを作製する場合は、通常行われる方法として、目的遺伝子（本発明の場合は、c-MIR等のＥ３ユビキチンリガーゼ遺伝子）をプロモーターの制御下に配置した組換えＤＮＡを構築し、この組換えＤＮＡをマウスの受精卵、初期胚または胚性幹細胞などの分化全能性をもつ細胞に導入し、得られた細胞を偽妊娠マウスに移植し、生まれた仔マウスから前記組換えＤＮＡを有する仔マウスを選別するステップを含む作製方法を挙げることができる。後述の実施例に記載のトランスジェニックマウス（c-MIR遺伝子導入マウス）も、基本的にこの方法にしたがって作製した。
【００２１】
解析の結果、本発明者が作製した上記c-MIR遺伝子導入マウスにおいては、主に脾臓のＢ細胞にてc-MIRの過剰発現が認められた（図２参照）。また、その過剰発現によってMHCクラスII分子の発現が抑制されていた（図４〜図６参照）。さらに、このマウスは正常マウスと比較して血中抗体の低下が見られ、即ちIgM, IgGの抗体産生機能が抑制され、免疫機能の低下が認められた（図８・図９参照）。尚、詳細は後述する。
【００２２】
上記c-MIR遺伝子導入マウスにおける免疫機能の低下は、c-MIRが生体内において免疫抑制分子として機能することを示す重要な知見である。このc-MIR遺伝子導入マウスは、本発明のトランスジェニック動物として前述した産業上の用途を有するものであるが、特に将来c-MIRが治療の標的分子となれば、生体内においてc-MIRを制御（その機能を抑制あるいは亢進）する薬剤、物質の探索、検定に極めて重要なマウスとなる。
【００２３】
上記c-MIR遺伝子導入マウスは、人為的免疫制御へのc-MIRの応用を検討するための研究材料としても利用できる。c-MIRによる免疫制御が実現すれば、臓器移植の際に使用する免疫抑制剤の投与量を従来に比べて減少させることができ、これにより副作用が軽減され、患者の負担が軽減されることになる。
このように、上記c-MIR遺伝子導入マウスは、免疫学において、臨床医学、基礎医学の発展に重要な役割をするものと期待出来るマウスである。
【００２４】
勿論、本発明のトランスジェニック動物には、上記c-MIR遺伝子のほかに、他の哺乳類由来Ｅ３ユビキチンリガーゼ遺伝子が導入されるものであってもよい。例えば、トランスジェニックマウスを作製する場合、マウス由来c-MIR以外に、ヒト由来c-MIR遺伝子が導入されるものであってもよいし、マウスもしくはヒト由来のHSPC240、43171、XP-055276、CAD28529、20445遺伝子、又は、マウス由来のHSPC240 long、HSPC240 long delta遺伝子など、これらいずれかのＥ３ユビキチンリガーゼ遺伝子が導入されるものであってもよい。
【００２５】
上述の各遺伝子のうち、マウス由来のc-MIR、HSPC240、および、ヒト由来のc-MIR、HSPC240、43171、XP-055276、CAD28529、20445のｃＤＮＡ配列についてはいずれも、国際出願（国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ０３／１２１７３）に記載されている。
【００２６】
また、マウス由来c-MIRのｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列については配列番号１・２に、マウス由来XP-055276のｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列については配列番号３・４に、マウス由来HSPC240 longのｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列については配列番号５・６に、マウス由来HSPC240 long deltaのｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列については配列番号７・８に、マウス由来CAD28529のｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列については配列番号９・１０に、マウス由来43171のｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列については配列番号１１・１２に、マウス由来20445のｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列については配列番号１３・１４に、それぞれ示される。
【００２７】
尚、マウス由来のc-MIR、HSPC240、HSPC240 long、HSPC240 long delta、CAD28529、43171、20445、および、ヒト由来のc-MIR、HSPC240、CAD28529、20445の各遺伝子配列については、遺伝子配列データベース（DDBJ/EMBL/GenBank databases）において、それぞれアクセッション番号BC053090、BC002144、AK039778、AK040163、AK086052、AK036489、AK009364、BC025394、AF151074、AL713759、BC015480として登録されている。
【００２８】
本発明のトランスジェニック動物に導入される遺伝子は、ｃＤＮＡであってもゲノムＤＮＡであってもよいし、ＤＮＡのほかＲＮＡを使用してもよい。さらに、常法に従って導入する遺伝子の元の塩基配列中の１個または数個の塩基を置換、欠失、挿入、及び／又は付加させ、このように人為的に改変した遺伝子を対象動物に導入することにしてもよい。
対象動物は、マウスに限定されるものではなく、ラット、モルモット、ハムスター、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、サルなどの動物種であってもよい。また、導入遺伝子は、対象動物において、一部の細胞、組織、器官に発現させるようにしてもよい。
【実施例】
【００２９】
以下、図面を参照して本発明の実施例について説明するが、本発明はこれら実施例によって何ら限定されるものではない。
〔１〕本発明のトランスジェニックマウスの作製
マウス由来c-MIR遺伝子の全長ｃＤＮＡ配列（配列番号１に示される塩基配列）をＰＣＲ法によって増幅し、さらに、このc-MIR蛋白のカルボキシル基末端をHA tagでエピトープ標識するため、c-MIR遺伝子にHA tag塩基配列が付加されたc-MIR cDNA（c-MIR-HA）をpDOI6ベクター（図１参照）のCla I siteに挿入した。
【００３０】
上記ベクター（プラスミドＤＮＡ）をXhoI, PvuIにて切断し、c-MIR-HA cDNAを含む断片を回収した。このＤＮＡ断片をBDF1由来の前核期胚に顕微注入し、CD-1偽妊娠マウスの卵管内に胚移植を行った。産仔の尻尾よりＤＮＡを抽出し、ＰＣＲ法によって遺伝子改変マウスの選別を行った。
【００３１】
さらに、得られた１６匹のfounder（Ｆ０マウス）をC57BL/6N Crjマウスと交配させることによって、Ｆ１マウスを作出し、c-MIR-HA cDNAが伝達されていることをＰＣＲ法によって確認した。
【００３２】
上記の実験の結果、最終的にc-MIR-HAが伝達されているトランスジェニックマウス系統を８系統（即ち、#8, 60, 59, 64, 71, 65, 22, 49）得た。これらの各系統（line）についてc-MIR-HAの脾臓における発現を調べると、#49, 22は中程度発現しており、#64は高レベルにて発現していた。#60,59,71は極めて低レベルの発現で、#8では発現が認められなかった。
【００３３】
図２は、上記トランスジェニックマウスの脾臓におけるc-MIR-HA蛋白の発現を組織化学法によって検出した結果を示すものである。方法は、まず脾臓を摘出し、OCTコンパウンド、液体窒素にて包埋し、クリオスタットにて薄切切片を作製した。次いで、切片をアセトンにて固定し、抗ＨＡ抗体（α-HA）を用いた組織化学法にてc-MIR-HA蛋白の発現を調べた。
【００３４】
図２（ａ）の「TG#64」は、c-MIRの高い発現レベルを持つ上記系統#64であり、主に白脾髄に発現が認められた。「Non-TG」は同腹のコントロールマウスである。同図（ｂ）は、c-MIR陽性細胞の強拡大であり、c-MIRは主に細胞膜に発現している。また、同図（ｃ）に示すように、c-MIR-HAはB220陽性細胞群に主に発現しており、このようにトランスジェニックマウスにおいて、c-MIRの発現は主にＢ細胞にて認められた。
【００３５】
また、リンパ節にて発現を検討すると、図３に示すように、Ｔ細胞領域に存在する樹状細胞に発現が認められた。図３は、腸間膜リンパ節の樹状細胞におけるc-MIR-HA蛋白の発現を上記と同様の方法で検出した結果を示すものである。同図の「CD11C」は、樹状細胞をCD11C染色にて示したもの、「merge」は、c-MIR-HA染色の結果とCD11C染色の結果とを重ね合わせたものであり、この結果から、c-MIRは樹状細胞に発現していることが認められた。
【００３６】
〔２〕c-MIRトランスジェニックマウスにおけるMHC class II発現の抑制
c-MIR-HA高発現のトランスジェニックマウスである上記#64にて、MHCクラスII分子（MHC class II）の発現を調べた。
図４は、上記トランスジェニックマウス#64（TG#64）とコントロールマウス（Non-TG）の脾臓におけるMHC class IIの発現を組織化学法にて比較検討した結果を示すものである。同図に示すように、脾臓をMHC class IIの抗体にて染色すると、TG#64の白脾髄の内側においてMHC class IIの発現が顕著に低下していた。
【００３７】
この発現低下がc-MIR-HAによるものかをHA抗体とMHC class II抗体とを用いて二重染色し、検討した。その結果、c-MIR-HA陽性領域においてMHC class II発現が低下していることが明らかとなった（図５参照）。図中、「c-MIR-HA」はc-MIR-HA染色の結果、「MHC II」はMHC class II染色の結果、「merge」は、c-MIR-HA染色の結果とMHC class II染色の結果とを重ね合わせたものであり、上段は低倍率（×４０）、下段は高倍率（×４００）で示したものである。
【００３８】
このように、c-MIR-HA陽性領域においてMHC class IIの発現は殆ど認められなかった。一方、c-MIR-HAが発現していない白脾髄の外側ではMHC class IIの発現はコントロールマウスと同程度であった。
さらに、この結果を確認するため、脾臓細胞をフローサイトメトリー法によって解析し、Ｂ及びＴリンパ球の細胞数、それらの細胞におけるMHC class IIの発現程度を検討した。
【００３９】
図６（ａ）は、上記トランスジェニックマウス#64（#64 TG）とコントロールマウス（Cont）の脾臓におけるMHC class IIの発現をフローサイトメトリー法にて比較検討した結果を示すグラフである。また、同図（ｂ）は、B220陽性細胞群におけるMHC class IIの発現を比較検討した結果を示すグラフである。この結果に示すように、B220陽性細胞、すなわちＢ細胞の分画の約６０％の細胞にて顕著なMHC class II発現抑制が認められ、組織化学法にて得られたものと同様の結果が得られた。
【００４０】
さらに、上記トランスジェニックマウス#64（#64）とコントロールマウス（Cont）に対して、リポ多糖（ＬＰＳ）７５μｇを腹腔内投与し、免疫刺激によるMHC class IIの発現亢進が抑制されるかを投与１８時間後の脾臓にて調べた。その結果、図７に示すように、コントロールマウス（Cont）においては、樹状細胞（CD11C陽性細胞）が集まっているＴ細胞領域においてMHC class IIを高く発現している細胞群が認められるのに対して、トランスジェニックマウス#64（#64）においては、樹状細胞の集積が認められるにもかかわらず、MHC class IIを高く発現している細胞群は認められなかった。
このように、c-MIRトランスジェニックマウス#64においては、MHC class IIの発現抑制がＴ細胞領域において認められた。
【００４１】
〔３〕c-MIRトランスジェニックマウスにおける免疫機能の低下
以上のように、c-MIRトランスジェニックマウスにおいてMHC class IIの発現抑制が認められたことから、次に、免疫機能の一つである抗体産生機能を下記の方法によりトランスジェニック系統#64及び#22それぞれについて調べた。
【００４２】
上記各系統のマウスに対して、Ｔ細胞依存性抗原であるNP36-CGG 100μgをアジュバンドと共に腹腔内投与し、その後、吸光度（波長４９０ｎｍ）を測定することによって、経時的にNP-25に対する血清中のIgM, IgG抗体価と、NP-2に対する血清中のIgG抗体価とを調べた。その結果を図８と図９に示す。図８は#64の結果、図９は#22の結果を示す。各グラフにおいて、破線はトランスジェニック系統#64, #22の結果を示したもの、実線は同腹のコントロールマウスの結果を示したものである。
【００４３】
トランスジェニック系統#64については、投与後１週までNP-25に対するIgM, IgG抗体産生の顕著な抑制が認められ、４週間後にてNP-25に対するIgG抗体産生は正常マウスと同等となった。しかしながら、NP-25に対するIgM産生は依然としてコントロールマウスに比較し抑制される傾向にあった。NP-2に対するIgG抗体産生は２週間までは低下していたが、４週後は正常マウスと同等であった。
【００４４】
トランスジェニック系統#22については、図９に示すように、４週まで、NP-25に対するIgG, IgM抗体産生、NP-2に対するIgG抗体産生すべてにおいて抑制が認められた。
【００４５】
以上の結果から、c-MIRトランスジェニックマウスの上記両系統において、抗体産生機能の抑制の程度、持続期間に違いは認められるが、いずれも抗体産生機能の抑制が認められ、免疫機能が低下していることが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００４６】
以上のように、本発明のトランスジェニック動物は、c-MIR等のＥ３ユビキチンリガーゼ遺伝子が導入されることによって、免疫機能の低下した動物が得られるので、前述したとおり、移植治療や免疫疾患治療のための研究用ツールとして利用できるほか、産業上種々の利用可能性を有するものである。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】本発明のトランスジェニックマウスの作製に使用したベクターの構造を概略的に示す図である。
【図２】（ａ）〜（ｃ）は、上記トランスジェニックマウスの脾臓におけるc-MIR-HA蛋白の発現を組織化学法によって検出した結果を示す図である。
【図３】上記トランスジェニックマウスのリンパ節におけるc-MIR-HA蛋白の発現を検討した結果を示す図である。
【図４】上記トランスジェニックマウスとコントロールマウスの脾臓におけるMHCクラスII分子の発現を組織化学法にて比較検討した結果を示す図である。
【図５】上記トランスジェニックマウスにおけるc-MIR-HA蛋白の発現領域とMHCクラスII分子の発現領域とを二重染色により比較検討した結果を示す図である。
【図６】（ａ）は、上記トランスジェニックマウスとコントロールマウスの脾臓におけるMHCクラスII分子の発現をフローサイトメトリー法にて比較検討した結果を示すグラフであり、（ｂ）は、B220陽性細胞群におけるMHCクラスII分子の発現を比較検討した結果を示すグラフである。
【図７】上記トランスジェニックマウスとコントロールマウスに対してＬＰＳを投与し、免疫刺激によるMHCクラスII分子の発現亢進が抑制されるかどうかを脾臓にて調べた結果を示す図である。
【図８】上記トランスジェニックマウスの系統#64について、Ｔ細胞依存性抗原を投与し、その後、経時的に血清中のIgM, IgG抗体価を調べた結果を示すグラフである。
【図９】上記トランスジェニックマウスの系統#22について、Ｔ細胞依存性抗原を投与し、その後、経時的に血清中のIgM, IgG抗体価を調べた結果を示すグラフである。
【図１】
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【図６】
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【図８】
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【図９】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図７】
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【配列表】
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