(57)【要約】【課題】プロポリスの新規な用途の開発を目的とする。【解決手段】プロポリスまたはそのアルコール抽出物を有効成分とする神経障害の予防または治療用組成物、ならびに該組成物を含むヒトまたは動物用の食品および医薬により、上記の課題を解決する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロポリスまたはそのアルコール抽出物を有効成分として含む神経障害の予防または治療用組成物。
【請求項２】
アルコール抽出物が低級アルコール抽出物である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
低級アルコール抽出物がエタノール抽出物である請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
プロポリスがアレクリンプロポリスである請求項１〜３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
神経障害が痴呆症または糖尿病由来の末梢神経障害である請求項１〜４のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１つに記載の組成物を含むヒトまたは動物用の食品および医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、プロポリスを有効成分とする神経障害の予防または治療用組成物、ならびに前記組成物を含むヒトまたは動物用の食品および医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
近年、高齢者の増加に伴い、痴呆症が社会問題化している。
痴呆症は、物忘れ、記憶力低下、時間的・空間的な見当識障害などを症状とし、その生理学的病変として、脳細胞や神経細胞の死による脱落やそれに伴う脳の萎縮が見られる。
【０００３】
このため、神経細胞の脱落速度を低下させたり、脱落によって失われた記憶の神経回路網を他の神経細胞によって新たに構築することで、痴呆症を予防または治療することができると考えられている。
【０００４】
プロポリスは、ミツバチが採取した植物の新芽や浸出物、樹木の樹液、花粉、および蜜蝋などの混合物であって、樹脂状の固形塊である。したがって、原料プロポリスのことをプロポリス原塊とも言う。ミツバチは外敵の侵入を防ぐために、巣の隙間を埋めるなどの補修の目的でプロポリスを採取すると考えられている。プロポリスが人々の生活に用いられてきた歴史は大変古くて、ヨーロッパではアピセラピー（養蜂産品による治療法）として、ローヤルゼリー、蜂蜜、花粉荷など、他の養蜂産品とともに、現在も人々の健康のために利用されている。
【０００５】
プロポリスはフラボノイド、テルペノイド、有機酸、アミノ酸、多糖類、ミネラルなどの多種多様な天然成分からなっている。これまでに、プロポリスは、抗菌活性、抗炎症活性、鎮痛活性、鎮痒活性、免疫賦活活性、抗腫瘍活性、抗酸化活性など、様々な生物活性を有することが報告されており（特許文献１）、その成分や生物活性についてさらに研究が進められている。
【０００６】
近年、日本でも、プロポリスの経口摂取によるこれらの効果が期待されるようになり、健康食品などの原料に多用されるようになってきた。
しかしながら、プロポリスの有用性や活性成分については、十分に解明されているとは言えない。
上記のような状況の下、痴呆症の予防または治療用組成物としてプロポリスのような天然物を使用することができれば、安全性の面で極めて望ましい。
【０００７】
【特許文献１】
特開２００３−５５２９７号公報
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、プロポリスの新規で有用な生物活性を見出すことを目的として鋭意研究したところ、プロポリスが神経突起の形成を誘導することを見出し、この発明を完成した。
【０００９】
したがって、本発明によれば、プロポリスまたはそのアルコール抽出物を有効成分として含む神経障害の予防または治療用組成物、ならびに前記組成物を含むヒトまたは動物用の食品および医薬品が提供される。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明におけるプロポリスは特に限定されず、例えばブラジル、中国、ヨーロッパ諸国、オセアニア、アメリカなど、いずれの産地・植物由来のものであってもよい。したがって、アレクリン、スーパーグリーン、ユーカリ、ウルトラグリーンなどいずれのプロポリスも使用できるが、これらのうちブラジル産のアレクリンプロポリスが特に好ましい。
【００１１】
また、プロポリスはそれ自体であってもよいが、エタノール、メタノール、プロパノールのような低級アルコールを溶媒として得られるアルコール抽出物であることが好ましく、なかでもエタノール抽出物が特に好ましい。
【００１２】
プロポリスのアルコール抽出物を得る方法は特に限定されない。
原料としてのプロポリスは、通常、プロポリス原塊またはアルコール洗浄したプロポリス原塊が用いられる。これらのプロポリス原塊は、そのまま用いてもよいが、適当な大きさに切断もしくは粉砕したものを用いれば、抽出効率が向上して好ましい。
【００１３】
抽出時間は特に限定されず、原料として用いられるプロポリスの形態、抽出に用いられる溶媒の種類および量、抽出の際の温度や攪拌条件などにより適宜設定することができる。
抽出操作の終了後、通常の方法、例えばろ過などにより抽出混合物から固形物を除去し、さらに必要に応じて遠心分離などによりプロポリスのアルコール抽出画分を得ることができる。
【００１４】
このようにして得られるアルコール抽出画分は、そのまま本発明における神経障害の予防または治療用組成物の有効成分として用いることができるが、アルコール抽出画分を通常の方法により濃縮して得られる濃縮液の形態、あるいは濃縮液を噴霧乾燥、凍結乾燥などに付して得られる粉末の形態で用いることもできる。
【００１５】
本発明者らの行った試験によれば、プロポリスおよび上記のようにして得られるプロポリスのアルコール抽出物は、神経分化ならびに神経突起の伸張および再生に作用することが知られている各種キナーゼを活性化し、神経突起の形成を誘発することが認められた。
【００１６】
したがって、本発明によれば、神経損傷を伴う疾患、例えば痴呆症または糖尿病由来の末梢神経障害などの神経障害の予防または治療を目的とした、プロポリスまたはそのアルコール抽出物を有効成分とする組成物が提供される。
【００１７】
本発明の組成物は、通常、経口投与に適した液体製剤または固体製剤の形態で用いられる。
液体製剤としては液剤、シロップ剤など、固体製剤としては散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、チュアブル剤、トローチ剤などの経口投与用形態が挙げられる。
【００１８】
液体製剤を製造する際には、賦形剤として、水、グリセリン、プロピレングリコール、単シロップ、エタノール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトールなどを用いることができる。
【００１９】
また、固体製剤を製造する際には、賦形剤として、例えば、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ゼラチン、澱粉、デキストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成又は天然のケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、乾燥酵母などを用いることができる。
【００２０】
さらに、本発明の組成物には、所望によりクエン酸、リン酸、リンゴ酸またはそれらの塩類などの安定化剤；スクラロース、アセスルファムカリウムなどの高甘味度甘味料や、ショ糖、果糖、はちみつなどの甘味剤；アルコール類、グリセリンなどの防腐剤；希釈剤、緩衝剤、着香剤及び着色剤のような通常の添加剤が加えられてもよい。
【００２１】
このようにして製造される本発明の組成物は、それ自体を食品または医薬品として使用できるが、これらの組成物を、食品または医薬品の原料、中間製品もしくは最終製品に混合または噴霧等することにより、神経障害の予防または治療を目的とした、ヒトまたは動物用の食品または医薬、あるいは動物用健康食品とすることもできる。
【００２２】
ここで、食品としては、日常的な食品のほか、通常の食品より積極的な意味での保健、健康維持、増進等を目的とする食品、例えば健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、あるいは厚生労働省の定める特別用途食品（例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、病者用食品、病者用組合せ食品、高齢者用食品など）等が挙げられる。
【００２３】
通常の食品としては、例えば、飲料類（茶飲料、コーヒー、ジュース、栄養ドリンクのような清涼飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料、日本酒、洋酒、果実酒、はちみつ酒のような酒）；スプレッド類（カスタードクリームなど）；ペースト類（フルーツペーストなど）；洋菓子類（チョコレート、ドーナツ、パイ、シュークリーム、ガム、ゼリー、キャンデー、クッキー、ケーキ、プリン）；和菓子類（大福、餅、饅頭、カステラ、あんみつ、羊羹）；氷菓類（アイスクリーム、アイスキャンデー、シャーベット）；養蜂産品（例えば、蜂蜜、ローヤルゼリー、蜂の子、花粉荷など）；レトルト食品（例えば、カレー、牛丼、おかゆ、雑炊、ミートソースなど）；即席食品（例えば、即席ラーメン、粉末スープの素、粉末ジュースなど）；瓶詰；缶詰；ゼリー状食品（例えば、ゼリー、寒天、ゼリー状飲料など）；穀類加工品（例えば、麺、パスタ、パン、ビーフンなど）；惣菜類（例えば、和え物、揚げ物など）；冷凍食品（例えば、コロッケ、春巻き、あんまんなど）；調味料類（ドレッシング、ふりかけ、旨味調味料、スープの素）  などが挙げられる。
【００２４】
本発明の組成物を健康食品、医薬などとして使用する場合、通常、プロポリスのアルコール抽出物（固形分）として、一日当たり例えば０．１〜１５ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で、好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で用いられる。
しかしながら、これらの用量は、組成物を摂取する人の健康状態、摂取方法あるいは他の薬剤との組み合わせなど、種々の因子により変動し得る。
【００２５】
また、食品への添加物として使用する場合には、食品の味、匂い、外観などに悪影響を及ぼさない範囲の量で用いるのが好ましい。
本発明の組成物を動物用の食品または医薬品として使用する場合にも、上記と同様である。
【００２６】
【実施例】
以下、本発明を試験例および実施例により説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２７】
試験例１
神経細胞に分化するＰＣ１２ｍ３細胞（ＮｅｕｒｏＳｃｉ．Ｌｅｔｔ．，  ３０３，  ２１−２４，  ２００１参照）を用い、プロポリスによる神経突起誘導への影響を検討した。
ＰＣ１２ｍ３細胞を、１０％ウマ血清、５％ウシ胎児血清および８０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含む高グルコース型ＤＭＥ培地を用いて、５％ＣＯ２で３７℃で継代し、維持した。
プロポリス原塊０．８ｋｇをエタノール１Ｌに溶解し、蝋分を除去して得たプロポリスのエタノール抽出画分を６０〜２００μｇ（固形分）／ｍｌおよび神経成長因子（ＮＧＦ  ３０ｎｇ／ｍｌ）（宝酒造株式会社製）を培地に添加し、７日間培養した。
プロポリスを与えたＰＣ１２ｍ３細胞の細胞または細胞集団１００〜３００個を位相差顕微鏡下に観察し、その細胞または細胞集団から出ている全ての神経突起を計測し、細胞または細胞集団当たりの神経突起誘導率を求めた。
図１は、ＮＧＦを培地に加えたときの神経突起形成を１としたときの各種プロポリスによる神経突起形成促進の割合の違いを示す。
これによると、いずれの種類のプロポリスも神経突起の形成促進に有効であることが示された。
【００２８】
試験例２
試験例１で神経突起の形成促進が特に著しかったアレクリンプロポリス（アピ株式会社製）を用い、腸管から吸収されたプロポリスが生体内で神経突起形成を誘発するかどうかを調べた。
アレクリンプロポリス５５０ｍｇ／ｋｇ（体重）をウイスター系ラットに経口投与し、投与３０分後に採血し、その血清１００μｌを試験例１と同様にＰＣ１２ｍ３細胞に与え、神経突起の形成を観察した。
その結果、アレクリンプロポリスを与えて得られる血清の場合（図２Ｂ）は、ＮＧＦだけを与えた対照血清の場合（図２Ａ）と比べて、４．８７倍の神経突起誘導率を有し、アレクリンプロポリスは体内に吸収された後でも高い神経突起形成促進作用を有することが示された。
【００２９】
試験例３
神経突起は、ＮＧＦが神経細胞のレセプターに結合することによりＭＡＰキナーゼを活性化させ、このキナーゼが種々の遺伝子を発現することで、伸長または再生される。
そこで、プロポリスの神経再生作用の分子メカニズムを明らかにするため、無血清下でアレクリンプロポリス（１００μｇ（固形分）／ｍｌ）または陽性コントロールであるカルシマイシン（シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社製）（０．６μＭ量）を与えたＰＣ１２ｍ３細胞から全タンパク質を抽出し、１０％ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分画後、ＰＣ１２ｍ３細胞のＭＡＰキナーゼ活性をウエスタンブロット法により検出した。
その結果、アレクリンプロポリスは、ＭＡＰキナーゼファミリーのうち、神経分化に作用することが知られるＥＲＫと、神経突起誘導に作用するとの報告があるｐ３８キナーゼを活性化することが認められた（図３）。
また、ＥＲＫの阻害剤であるＵ０１２６（プロメガ株式会社製）  １５μＭとｐ３８キナーゼの阻害剤であるＳＢ２０３５８（シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社製）  １μＭそれぞれをアレクリンプロポリス１００μｇと共にＰＣ１２ｍ３細胞に与え、試験例１と同様にして神経突起誘導率を算出したところ、どちらの阻害剤もプロポリスによる神経突起の再生を大きく抑制しており、プロポリスは、ＥＲＫとｐ３８キナーゼの双方を介して神経再生に関与していることが分かった（図４）。
【００３０】
実施例１
試験例１で調製したプロポリスのエタノール抽出物２００ｍｌを、乳糖  １ｋｇに噴霧・乾燥し、粉末化して、ハードカプセルに充填し、プロポリスのエタノール抽出物含有カプセルを得た。
【００３１】
実施例２
試験例１のプロポリスの抽出物        ５０ｍｌ
水飴                              ２５０ｇ
砂糖                              ３００ｇ
水                                  ５０ｍｌ
水飴、砂糖、水を加熱して溶かし、プロポリスの抽出物を加える。適当な大きさにとりわけ、成型し、プロポリスのエタノール抽出物含有キャンディを得た。
【００３２】
実施例３
試験例１のプロポリスの抽出物      ０．５ｍｌ
アスコルビン酸                    ３００ｍｇ
ハチミツ                          １０ｇ
レモン果汁                        １０ｍｌ
水                              適量
上記の材料を混合し、全量５０ｍｌのプロポリスのエタノール抽出物含有ドリンクを得た。
【００３３】
【発明の効果】
本発明によるプロポリスまたはそのアルコール抽出物を有効成分として含む神経障害の予防または治療用組成物は、天然のプロポリスに由来するものであり、安全性に問題がなく、特に痴呆症または糖尿病由来の末梢神経障害の予防または治療に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】各種プロポリスによる神経突起誘導率を示すグラフである。
【図２】プロポリスを与えて得られる血清による神経突起の誘導を示す顕微鏡写真であり、ＡはＮＧＦだけを与えた対照血清についての結果を示し、Ｂはプロポリス血清についての結果を示す。
【図３】プロポリスによるＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ）とｐ３８キナーゼの活性化を表わすウェスタンブロットの結果を示す写真である。
【図４】プロポリスの神経突起形成作用に対する阻害剤の影響を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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