(57)【要約】【課題】  活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制することができる抗酸化組成物およびこれを含む製品を提供する。【解決手段】  ルテインエステルと黒米エキスとを含む抗酸化組成物である。ここで、ルテインエステルの質量ＷLと黒米エキスの質量ＷPとの比ＷL／ＷPが０．２以上５以下であることが好ましい。また、ルテインエステルの質量ＷLと黒米エキスの質量ＷPとの総和（ＷL＋ＷP）が抗酸化組成物全体の０．１質量％以上５０質量％以下であることが好ましい。また、上記に記載の抗酸化組成物を含む食品および錠剤である。【選択図】        図１
2005320319.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ルテインエステルと黒米エキスとを含むことを特徴とする、抗酸化組成物。
【請求項２】
前記ルテインエステルの質量ＷLと前記黒米エキスの質量ＷPとの比ＷL／ＷPが０．２以上５以下であることを特徴とする、請求項１に記載の抗酸化組成物。
【請求項３】
前記ルテインエステルの質量ＷLと前記黒米エキスの質量ＷPとの総和（ＷL＋ＷP）が前記抗酸化組成物全体の０．１質量％以上５０質量％以下であることを特徴とする、請求項１または２に記載の抗酸化組成物。
【請求項４】
前記ルテインエステルが天然由来のものであることを特徴とする、請求項１から３のいずれかに記載の抗酸化組成物。
【請求項５】
ラクトフェリンを含むことを特徴とする、請求項１から４のいずれかに記載の抗酸化組成物。
【請求項６】
請求項１から５のいずれかに記載の抗酸化組成物を含むことを特徴とする、食品。
【請求項７】
請求項１から５のいずれかに記載の抗酸化組成物を含むことを特徴とする、錠剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗酸化組成物およびこれを含む製品に関し、特に活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制することができる抗酸化組成物およびこれを含む製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、活性酸素については世界各国において研究が行なわれており、この活性酸素が人間の健康に大きな影響を与えていることが判明している。人間は呼吸することによって空気中から体内に酸素を取り入れており、体内の細胞内でミトコンドリアが酸素の代謝によってエネルギを作り出すときに酸素の一部が還元されて活性酸素（スーパーオキシドアニオン）となる。活性酸素としては、酸素分子が１電子還元されたスーパーオキシドアニオン（・Ｏ2-）の他に、スーパーオキシドアニオンから生成された過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）、過酸化水素の反応によって生成されたヒドロキシラジカル（・ＯＨ-）、光などのエネルギが吸収されて生成した一重項酸素（1Ｏ2）がある。
【０００３】
活性酸素は体内の脂質と反応して過酸化脂質を生成し、過酸化脂質は人体に悪影響を及ぼす原因となる。また、過酸化脂質は体内の細胞の細胞膜を障害して細胞のタンパク質や核酸に損傷を与えることによってがん細胞を発生させ、また動脈硬化などの原因にもなる。また、皮膚には紫外線などが直接照射されるため活性酸素が生成しやすく、これにより過酸化脂質が生成されて皮膚のシミやソバカスなどの原因にもなる。
【０００４】
したがって、人間の健康維持の観点からは、活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制する必要性は非常に大きいものと考えられる。
【特許文献１】特開２００３−２６５８９号公報
【特許文献２】特表２００１−８０１７９８号公報
【特許文献３】米国特許第５３８２７１４号明細書
【特許文献４】米国特許第５６４８５６４号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制することができる抗酸化組成物およびこれを含む製品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ルテインエステルと黒米エキスとを含む抗酸化組成物であることを特徴とする。
【０００７】
ここで、本発明の抗酸化組成物においては、ルテインエステルの質量ＷLと黒米エキスの質量ＷPとの比ＷL／ＷPが０．２以上５以下であることが好ましい。
【０００８】
また、本発明の抗酸化組成物においては、ルテインエステルの質量ＷLと黒米エキスの質量ＷPとの総和（ＷL＋ＷP）が抗酸化組成物全体の０．１質量％以上５０質量％以下であることが好ましい。
【０００９】
また、本発明の抗酸化組成物においては、ルテインエステルが天然由来のものであることが好ましい。
【００１０】
また、本発明の抗酸化組成物は、ラクトフェリンを含むことが好ましい。
【００１１】
また、本発明は、上記のいずれかに記載の抗酸化組成物を含む食品である。
【００１２】
さらに、本発明は、上記のいずれかに記載の抗酸化組成物を含む錠剤である。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制することができる（以下、「抗酸化作用」ということもある。）抗酸化組成物およびこれを含む食品や錠剤などの製品を提供することができる。また、本発明の抗酸化組成物およびこれを含む食品や錠剤などの製品は体内から活性酸素を除去する効果も有し得る。
【００１４】
また、本発明の効果としては、動脈硬化抑制作用、肝保護作用または抗炎症作用などが考えられる。さらに、本発明は、自律神経失調症、膀胱炎、腎孟炎、結石、生理痛、生理不順、冷え性、吹出物、湿疹、慢性皮膚病、水虫、蓄膿症、気管支炎、喘息、緑内障、白内障、口内炎、中耳炎、耳鳴り、前立腺肥大、甲状腺肥大、貧血、不眠症、メニエール病、頭痛、肩こり、高血圧、肝臓、腎臓、糖尿病、低血圧、動脈硬化、リュウマチ、神経痛、関節炎、椎間板ヘルニア、腰痛、ネフローゼ、脳卒中、胃弱、アレルギー体質（鼻炎、ジンマシン、アトピー性皮膚炎、小児喘息など）、痔、心臓病、更年期障害、各種婦人病、川崎病、ベーチェット病、胃がん、肺がん、腎臓がん、肝臓がん、大腸がん、肺炎、シミ、そばかす、シワまたは肌のトラブルなどの活性酸素が関与する疾患にも効果があるものと考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明の抗酸化組成物は、ルテインエステルと黒米エキスとを含んでいることを特徴としている。これは、本発明者が鋭意検討した結果、ルテインエステルと黒米エキスとを混合することによりルテインエステルと黒米エキスの相乗効果が発現して特に優れた抗酸化作用が発揮されることを見い出し、本発明を完成するに至ったものである。
【００１６】
ここで、ルテインエステルはルテイン（Ｃ40Ｈ56Ｏ2）と脂肪酸とのエステルであり、ルテインエステルを構成する脂肪酸としては、たとえばパルミチン酸、ミリスチン酸、アラキドン酸、ステアリン酸、ラウリン酸、リノレン酸、オレイン酸またはリノール酸などがある。これらの脂肪酸がルテインの２つの水酸基とエステル結合することによりルテインエステルが形成される。ルテインエステルはビタミンＡの類縁体から合成することもできるが、本発明の抗酸化組成物を食品として口から体内に取り入れて吸収させ、体内における抗酸化作用を十分に発揮させるためにはたとえば天然物の抽出物のような天然由来のものであることが好ましい。また、ルテインエステルは、たとえば天然物であるホウレンソウ、ケール、キーウィ、卵黄、トウモロコシ、ブロッコリ、グリンピース、インゲンマメ、葉レタス、コラード、ロマインレタス、セロリ、芽キャベツ、ネギ、黄ピーマンまたはサケなどに含まれるがその含有量はマリーゴールドと比較すると格段に小さいため、製造効率および製造コストの観点から、本発明に用いられるルテインエステルはマリーゴールドから抽出されたものであることが好ましい。
【００１７】
また、黒米エキスは、黒米、黒米糠、黒米胚芽または黒米玄米などの黒米由来のものを水とメタノールの混合物、水とエタノールの混合物、水とアセトンの混合物または水と酢酸の混合物などの水と有機溶媒の混合物で抽出して得られ、各種成分を含むが、通常、たとえば下記に示すクリサンテミン（シアニジン−３−モノグルコシド）、シアニジン−３−ラムノグルコシド、マルビジン−３−モノガラクトシドおよびペオニジン−３−モノグルコシドのうち少なくとも１種類のアントシアニン配糖体を含む。
【００１８】
【化１】
2005320319.tif 000003
【００１９】
【化２】
2005320319.tif 000004
【００２０】
【化３】
2005320319.tif 000005
【００２１】
【化４】
2005320319.tif 000006
【００２２】
黒米エキスは、黒米、黒米糠、黒米胚芽または黒米玄米などの黒米由来のものに無極性溶媒または弱極性溶媒である酢酸エチル、エーテル、ヘキサンまたは二酸化炭素などを加えて脱脂した後、たとえば上記に列挙した水と有機溶媒の混合物を加えて加熱抽出し、抽出後にろ過して得られたろ液から溶媒を除去して濃縮した後に乾燥することによって得られる。なお、黒米は中国原産の古代米の一種で、紫黒米、紫米とも呼ばれるものである。
【００２３】
本発明の抗酸化組成物中におけるルテインエステルの質量ＷLと黒米エキスの質量ＷPとの比ＷL／ＷPは０．２以上５以下であることが好ましく、０．２以上３以下であることがより好ましい。ＷL／ＷPが０．２以上５以下である場合には本発明の抗酸化組成物が優れた抗酸化作用を発揮する傾向にある。また、ＷL／ＷPが０．２以上３以下である場合には本発明の抗酸化組成物がさらに優れた抗酸化作用を発揮する傾向にある。ここで、上記のＷL／ＷPを０．２以上５以下または０．２以上３以下の範囲に設定するのに用いられるルテインエステルとしてはたとえばマリーゴールドの花弁をヘキサンで抽出して得られたものを用いることができ、黒米エキスとしてはたとえば黒米をエタノール濃度が１０質量％以上７０質量％以下（下記においては「１０〜７０％」ということもある。）であるエタノール水溶液で抽出して得られたものを用いることができる。ここで、上記のエタノール濃度はエタノール水溶液の全体の質量に対するエタノールの質量の割合を示している。
【００２４】
また、本発明の抗酸化組成物中におけるルテインエステルの質量ＷLと黒米エキスの質量ＷPとの総和（ＷL＋ＷP）は抗酸化組成物全体の０．１質量％以上５０質量％以下であることが好ましく、０．２質量％以上２０質量％以下であることがより好ましい。（ＷL＋ＷP）が抗酸化組成物全体の０．１質量％未満である場合および５０質量％よりも大きい場合には本発明の抗酸化組成物の抗酸化作用が発揮されにくい傾向にある。また、（ＷL＋ＷP）が０．２質量％以上２０質量％以下である場合には本発明の抗酸化組成物が優れた抗酸化作用を発揮する傾向にある。
【００２５】
本発明の抗酸化組成物中のルテインエステルは、ルテインエステルを加水分解してルテインを生じさせた試料について高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて可視光の波長を利用してルテインのピークを同定することによりその存在が確認される。また、本発明の抗酸化組成物中の黒米エキスは、可視光および紫外光の吸収スペクトルを同定することによりその存在が確認される。
【００２６】
なお、本発明の抗酸化組成物にはルテインエステルと黒米エキス以外の成分が含まれていてもよい。ルテインエステルと黒米エキス以外の成分としては、たとえば還元型アスコルビン酸（ビタミンＣ）、ビタミンＥ、還元型グルタチオン、トコトリエノール、ビタミンＡ誘導体、リコピン、β−クリプトキサンチン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、フコキサンチン、尿酸、ユビキノン、コエンザイムＱ１０、葉酸、ニンニクエキス、アリシン、セザミン、リグナン類、カテキン、イソフラボン、カルコン、タンニン類、フラボノイド類、クマリン、イソクマリン類、ブルーベリーエキス、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、ビタミンＰ、コリン、ナイアシン、パントテン酸、葉酸カルシウム、ＥＰＡ、オリゴ糖、食物繊維、スクアレン、大豆レシチン、タウリン、ドナリエラ、プロテイン、オクタコサノール、ＤＨＡ、卵黄レシチン、リノール酸、ラクトフェリン、マグネシウム、亜鉛、クロム、セレン、カリウム、ヘム鉄、カキ肉エキス、キトサン、ケイヒ、サンザシ、生姜、霊芝、オオバコ、カミツレ、カモミール、セイヨウタンポポ、ハイビスカス、ハチミツ、ボーレン、ローヤルゼリー、ライム、ラベンダー、ローズヒップ、ローズマリー、セージ、ビフィズス菌、フェーカリス菌、ラクリス、小麦胚芽油、ゴマ油、シソ油、大豆油、中鎖脂肪酸、アガリクス、イチョウ葉エキス、ウコン、コンドロイチン、玄米胚芽エキス、タマネギ、ＤＰＡ、茶、冬虫夏草、ニンニク、蜂の子、パパイヤ、プーアル、プロポリス、メグスリの木、ヤブシタケ、ノコギリヤシ、ヒアルロン酸、コラーゲン、ギャバ、ハープシールオイル、サメ軟骨、グルコサミン、レシチン、ホスファチジルセリン、田七ニンジン、桑葉、大豆抽出物、オリーブ葉、オリーブ実、ギムネマ、バナバ、サラシア、ガルシニア、キトサン、セントジョーンズワート、ナツメ、ニンジン、パッションフラワー、ブロッコリ、プラセンタ、ハトムギ、ブドウ種子、ピーナッツ種皮、ビルベリー、ブラックコホシュ、マリアアゼミ、月桂樹、セージ、ラフマ、黒酢、ゴーヤ、マカ、紅花、亜麻、ウーロン茶、カフェイン、カプサイシン、キシロオリゴ糖、グロコサミン、ソバ、シトラス、プルーン、スピルリナ、大麦若葉、核酸、酵母、椎茸、梅肉、アミノ酸、深海鮫抽出物、ノニ、カキ肉、スッポン、シャンピニオン、オオバコ、アセロラ、パイナップル、バナナ、モモ、アンズ、メロン、イチゴ、ラズベリー、オレンジ、フコイダン、メシマコブ、グリシン、ナイアシン、チェストツリー、セラミド、Ｌシステイン、赤ワイン葉、ミレット、ホーステール、ビオチン、センテラアジアティカ、ハスカップ、ピクノジェノール、フキ、ルバーブ、クローブ、プーアル、クエン酸、ビール酵母、メリロート、ブラックジンガー、カジュツ、ナットウキナーゼ、ベニコウジ、シナモン、ダッタンソバまたはココアなどがある。
【００２７】
なかでも、本発明の抗酸化組成物はラクトフェリンを含むことが好ましい。この場合には、本発明の抗酸化組成物は抗酸化作用に加えて整腸作用も有するものと考えられる。ラクトフェリンは、一本のポリペプチド鎖にガラクトース、マンノース、シアル酸などの糖類が結合した分子量約８００００の糖タンパク質である。ラクトフェリンは、多くの哺乳動物の乳汁（たとえば牛乳など）に含まれている。
【００２８】
図１に本発明の抗酸化組成物の製造方法の好ましい一例のフローチャートを示す。まず、ステップＳ１ａにおいて、ルテインエステルはマリーゴールドからヘキサンに抽出される。次に、ステップＳ２ａにおいて、ルテインエステルの溶媒であるヘキサンが除去される。続いて、ステップＳ３ａにおいて、ルテインエステルが濃縮される。そして、ステップＳ４ａにおいて、濃縮されたルテインエステルが乾燥されて粉末化される。
【００２９】
また、ステップＳ１ｂにおいて、黒米エキスは黒米からエタノール濃度がたとえば１０〜７０％のエタノール水溶液に抽出される。次に、ステップＳ２ｂにおいて、黒米エキスの溶媒であるエタノール水溶液が除去される。続いて、ステップＳ３ｂにおいて、黒米エキスが濃縮される。そして、ステップＳ４ｂにおいて、濃縮された黒米エキスが乾燥されて粉末化される。
【００３０】
最後にステップＳ５において、粉末化されたルテインエステルと黒米エキスとその他の成分とが混合されて本発明の抗酸化組成物が生成される。本発明の抗酸化組成物の形態は、粉末状、固形状または液体状などのいずれであってもよく、ルテインエステルと黒米エキスとが含まれていればその形態は問わない。また、上記の本発明の抗酸化組成物の製造方法においては、脱脂、ろ過または精製などの上記以外の工程が含まれていてもよいことは言うまでもない。
【００３１】
本発明の抗酸化組成物を、たとえばガム、キャンディー、キャラメル、チョコレート、クッキー、ビスケット、スナック菓子、ゼリー、グミ、飴、ケーキ、饅頭、最中などの菓子類、そば、うどん、ラーメンなどの麺類、ミルク、バター、チーズ、プリン、アイスクリーム、ヨーグルトなどの乳製品、味噌、醤油、みりん、ポン酢、酢、ソース、ケチャップ、ジャム、ふりかけなどの調味料類、スープ類、ジュース、コーヒー、紅茶、茶、炭酸飲料、スポーツ飲料などの飲料類、健康食品類または栄養補助食品類などの食品に含ませることができる。
【００３２】
また、本発明の抗酸化組成物を賦形剤などと混合して打錠することにより錠剤に含ませることができる。なお、本発明の抗酸化組成物をカプセル中に入れることもできることは言うまでもない。
【００３３】
実験例
以下、本発明の実験例について説明する。なお、実験例１〜５において用いられたルテインエステルは以下のようにして得られた。まず、マリーゴールドの花弁にヘキサンを加えてルテインエステルを抽出した。次に、この抽出液をろ過して得られたろ液にヘキサンおよびエタノールを加えてルテインエステルを精製した。そして、ろ液からヘキサンおよびエタノールを除去し、続いてルテインエステルの濃縮を行なった。最後に、濃縮されたルテインエステルを乾燥し、粉砕して粉末状のルテインエステルを得た。
【００３４】
このルテインエステルは、ルテインとパルミチン酸とのエステルが４４．５％、ルテインとミリスチン酸とのエステルが２３．０％、ルテインとアラキドン酸とのエステルが１２．０％、ルテインとステアリン酸とのエステルが１１．０％、ルテインとラウリン酸とのエステルが２．０％、その他、ルテインとリノレン酸とのエステル、ルテインとオレイン酸とのエステルおよびルテインとリノール酸とのエステルが少量ずつ含まれて構成されていることがガスクロマトグラフィーにより確認された。ここで、「％」は、ルテインエステルを構成するエステル全体の個数に対する個々のエステルの個数の割合を示している。
【００３５】
このルテインエステル１２ｍｇを正確に量り採り、ヘキサンとアセトンとエタノールとトルエンとを体積比で１０：７：６：７の割合で混合した抽出溶媒を約８０ｍｌ加えて２分間超音波処理を行なった後、正確に１００ｍｌとした。この液２０ｍｌを摺り合わせ三角フラスコに正確に量り採り、上記抽出溶媒を１０ｍｌおよび４０ｇの水酸化カリウムをメタノールで溶解し冷却後１００ｍｌとした４０％ＫＯＨ／メタノールを２ｍｌ加えて、５６℃の水浴中で２０分間反応させた。これを冷却した後、ヘキサン３０ｍｌおよび１００ｇの無水硫酸ナトリウムを１０００ｍｌの蒸留水に溶解した１０％Ｎａ2ＳＯ4溶液を４０ｍｌ加えて激しく混合した。そして、暗所で１時間放置した後、２層に分離した上層をメンブランフィルタ（細孔径；０．２〜０．４５μｍ）でろ過を行なって得たろ液をＨＰＬＣ分析用試料とし、以下の条件でＨＰＬＣ分析を行なった。その結果を図２に示す。図２に示すようにＨＰＬＣ分析開始から約１２．７分後にルテインエステルが加水分解して生じたルテインのピークが見られた。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
検出器：分光光度検出器
カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ  １００−５  （４．６ｍｍＩＤ．×１５０ｍｍ）
カラム温度：２５℃
測定波長：４４７ｎｍ
移動相：ヘキサン／酢酸エチル＝７／３
流量：１．５ｍｌ／ｍｉｎ
また、実験例１〜５において用いられた黒米エキスは以下のようにして得られた。まず、黒米１００ｇにエーテル５００ｍｌを加えて室温（２５℃）で放置した後にエーテルを除去して脱脂した。次に、脱脂された黒米に水とエタノールが体積比で４０：６０の割合で混合された混合物を５００ｍｌ加えて黒米エキスを加熱抽出した。そして、抽出後にろ過して得られたろ液から溶媒を除去し、続いて黒米エキスを濃縮した。最後に、濃縮した黒米エキスを乾燥することによって粉末状の黒米エキス１５ｇが得られた。
【００３６】
この黒米エキス中には黒米エキスを構成する物質全体の個数に対してポリフェノールが１５％以上の個数含まれていることがＦｏｌｉｎ−Ｄｅｎｉｓ法により確認され、このポリフェノール中にはこのポリフェノールを構成する物質全体の個数に対してアントシアニン配糖体が５％以上の個数含まれていることが吸光光度分析法により確認された。
【００３７】
この黒米エキスを蒸留水に溶解し、可視光および紫外光の吸収スペクトルを測定した。その結果を図３に示す。図３に示すように、黒米エキスは可視光よりも紫外光を強く吸収する傾向にあった。
【００３８】
（実験例１）
１ｍＬあたりに０．５ｍｇのプロテインを含むラット肝ホモジネート（Ｓ−９ｍｉｘ）、０．１５ｍＭのＦｅＣｌ3および３ｍＭのＡＤＰを含有する５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍＬに、表１に示す組成のサンプル溶液を０．１ｍＬ添加した。ここで、サンプル溶液の調製において、ルテインエステルはエタノールに溶解させ、黒米エキスは１０％ＤＭＳＯ溶液に溶解させたものを用いた。そして、サンプル溶液が添加されたトリス緩衝液を３７℃で１０分間インキュベートした後に２ｍＭのＮＡＤＰＨを１００μＬ加え、さらに３７℃で３０分間インキュベートした。
【００３９】
続いて、７％ドデシル硫酸ナトリウムを０．２ｍＬ、０．１ＮのＨＣｌを２ｍＬ、１０％リンタングステン酸を０．３ｍＬおよび５％チオバルビツール酸を１ｍＬ加え、９５℃で３５分間加温した。そして、加温後の溶液を氷冷した後に、ｎ−ブタノールを５ｍＬ加えて混合し、ｎ−ブタノール層を分離した。分離後のｎ−ブタノール層に波長５３２ｎｍの光を照射してｎ−ブタノール層の吸光度を測定し、ラット肝脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率を算出した。その結果を表１に示す。なお、表１に示すラット肝脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率は対照（表１に示す組成のサンプル溶液を添加していないもの）の吸光度（０．２３８２）に対する各サンプルの吸光度の割合を用いて下記式により算出した。また、表１に示す組成（μｇ／ｍｌ）は、各サンプル溶液１ｍＬあたりのルテインエステル量および黒米エキス量を示している。
抑制率（％）＝{１−（サンプルの吸光度／対照の吸光度）}×１００
【００４０】
【表１】
2005320319.tif 000007
【００４１】
表１に示すように、ルテインエステルと黒米エキスとを含むサンプル５においては、ルテインエステルのみを含むサンプル１および黒米エキスのみを含むサンプル２〜４と比べてラット肝脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率が向上していた。
【００４２】
（実験例２）
表２に示す組成の各サンプルのエタノール溶液を０．２ｍＬ、２．５１％リノール酸エタノール溶液を０．２ｍＬ、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を０．４ｍＬ、精製水を０．１９ｍＬおよび１０％ツイーン８０を０．０１ｍＬ混合し、４０℃の遮光条件で１２日間静置した。この液に７５％エタノールを０．９７ｍＬ、３０％チオシアン酸アンモニウム水溶液を０．０１ｍＬ加えて混合した。これに、０．０２Ｍ塩化第一鉄３．５％塩酸溶液を０．０１ｍＬ添加した後に、波長５００ｎｍの光を照射してその吸光度を測定した。その結果を表２に示す。なお、表２に示すリノール酸の酸化の抑制率は対照（表２に示す組成のサンプルを混合していないもの）の吸光度（０．２２３）に対する各サンプルの吸光度の割合を用いて下記式により算出した。また、表２に示す組成（μｇ／ｍｌ）はエタノール１ｍＬあたりの粉末状のルテインエステル量および黒米エキス量を示している。
抑制率（％）＝{１−（サンプルの吸光度／対照の吸光度）}×１００
【００４３】
【表２】
2005320319.tif 000008
【００４４】
表２に示すように、ルテインエステルと黒米エキスとを含むサンプル１１〜１２においては、ルテインエステルのみを含むサンプル６〜７および黒米エキスのみを含むサンプル８〜１０と比べてリノール酸の酸化の抑制率が向上していた。
【００４５】
（実験例３）
マウス（ｄｄＹ、雄、５週齢）に表３に示す組成の各サンプルを経口投与し、３時間後に腹部大動脈から全量採血を行なった。得られた血液から血清を分離し、血清中のチオバルビツール反応物（ＴＢＡ−ＲＳ）量を比較した。なお、実験例３において、ルテインエステルとしては粉末状のルテインエステルをオリーブ油に溶解させたものを用い、黒米エキスとしては粉末状の黒米エキスを蒸留水に溶解させたものを用いた。
【００４６】
ＴＢＡ−ＲＳ量は、０．１ｍＬの血清に０．１Ｍリン酸を０．６ｍＬおよび０．０４Ｍの２−チオバルビツール酸を０．２ｍＬ加えて、９５℃で１時間、水浴上で加熱処理を行なった後、これを冷却し、波長５３５ｎｍの光と波長５２０ｎｍの光とをそれぞれ照射して波長５３５ｎｍと波長５２０ｎｍの光の吸光度の差により比較された（比色法）。そして、その吸光度の差から、マウス血清中の脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率を求めた。その結果を表３に示す。
【００４７】
なお、表３に示す吸光度の差は、各サンプルごとに１〜３回測定された吸光度の差の最大値と最小値の平均値を算出し、±においてその最大値と最小値を表わしている。また、抑制率は、対照（表３に示す組成のサンプルを経口投与していないもの）の吸光度の差の平均値（０．０１３６）に対する各サンプルの吸光度の差の平均値を用いて下記式により算出した。また、表３に示す組成（ｍｇ／ｋｇ）は、マウスの体重１ｋｇ当たりに経口投与されるルテインエステルおよび黒米エキスの量を示している。
抑制率（％）＝{１−（サンプルの吸光度の差の平均値／対照の吸光度の差の平均値）}×１００
【００４８】
【表３】
2005320319.tif 000009
【００４９】
表３に示すように、ルテインエステルと黒米エキスとを含むサンプル１５〜１６においては、黒米エキスのみを含むサンプル１３〜１４と比べてマウス血清中の脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率が向上していた。
【００５０】
（実験例４）
１８〜２２時間絶食したマウスに表４に示す組成の各サンプルを投与し、その１時間後に１０％四塩化炭素オリーブ油溶液（５ｍＬ／ｋｇ）を皮下投与した。そして、その４時間後にマウスから肝臓を摘出し、酸化障害の指標となる肝臓中のチオバルビツール反応物（ＴＢＡ−ＲＳ）量を測定した。
【００５１】
具体的には、摘出した約２００ｍｇの肝臓片にその１０倍量の氷冷された０．１５Ｍ塩化カリウムを加えてホモジネート処理を行なった。そして、得られた破砕液（０．５ｍＬ）に０．１Ｍリン酸を３ｍＬ、０．０４Ｍの２−チオバルビツール酸を１ｍＬ加えて水浴上において９５℃で１時間の加熱処理を行なった後冷却した。その後、ｎ−ブタノールを４ｍＬ加えてＴＢＡ−ＲＳを分配抽出した。ｎ−ブタノール中のＴＢＡ−ＲＳ量は、ｎ−ブタノールに波長５３５ｎｍの光と波長５２０ｎｍの光とをそれぞれ照射して波長５３５ｎｍと波長５２０ｎｍの光の吸光度の差により比較された（比色法）。そして、測定された吸光度の差から、マウス肝脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率を求めた。その結果を表４に示す。
【００５２】
なお、表４に示す吸光度の差は、各サンプルごとに１〜３回測定された吸光度の差の最大値と最小値の平均値を算出し、±においてその最大値と最小値を表わしている。また、抑制率は、対照（表４に示す組成のサンプルを投与していないもの）の吸光度の差の平均値（０．３８７）に対する各サンプルの吸光度の差の平均値を用いて下記式により算出した。また、実験例４において、ルテインエステルとしては上記粉末状のルテインエステルをオリーブ油に溶解させたものを用い、黒米エキスとしては上記粉末状の黒米エキスを蒸留水に溶解させたものを用いた。また、表４に示す組成（ｍｇ／ｋｇ）は、マウスの体重１ｋｇ当たりに経口投与されるルテインエステルおよび黒米エキスの量を示している。
抑制率（％）＝{１−（サンプルの吸光度の差の平均値／対照の吸光度の差の平均値）}×１００
【００５３】
【表４】
2005320319.tif 000010
【００５４】
表４に示すように、ルテインエステルと黒米エキスとを含むサンプル２０〜２２においては、ルテインエステルのみを含むサンプル１７および黒米エキスのみを含むサンプル１８〜１９と比べてマウス肝脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率が向上していた。
【００５５】
（実験例５）
１ｍＬあたりに０．５ｍｇのプロテインを含むラット肝ホモジネート（Ｓ−９ｍｉｘ）、０．１５ｍＭのＦｅＣｌ3および３ｍＭのＡＤＰ（adenosine diphosphate；アデノシン二リン酸）を含有する５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍＬに、表５に示す組成および質量比でルテインエステルおよび黒米エキスを含むサンプル溶液を０．１ｍＬ添加した。ここで、サンプル溶液の調製において、ルテインエステルはエタノールに溶解させ、黒米エキスは１０％ＤＭＳＯ（dimethyl sulfoxide;ジメチルスルホキシド）溶液に溶解させたものを用いた。そして、サンプル溶液が添加されたトリス緩衝液を３７℃で１０分間インキュベートした後に２ｍＭのＮＡＤＰＨ（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸）を１００μＬ加え、さらに３７℃で３０分間インキュベートした。
【００５６】
続いて、７％ドデシル硫酸ナトリウムを０．２ｍＬ、０．１ＮのＨＣｌを２ｍＬ、１０％リンタングステン酸を０．３ｍＬおよび５％チオバルビツール酸を１ｍＬ加え、９５℃で３５分間加温した。そして、加温後の溶液を氷冷した後に、ｎ−ブタノールを５ｍＬ加えて混合し、ｎ−ブタノール層を分離した。分離後のｎ−ブタノール層に波長５３２ｎｍの光を照射してｎ−ブタノール層の吸光度を測定し、ラット肝脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率を算出した。その結果を表５に示す。なお、表５に示すラット肝脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率は対照（表５に示す組成のサンプル溶液を添加していないもの）の吸光度（０．０７９４）に対する各サンプルの吸光度の割合を用いて下記式により算出した。また、表５に示す組成（μｇ／ｍｌ）は各サンプル溶液１ｍＬ当たりに含まれているルテインエステルの質量および黒米エキスの質量を示している。また、表５に示す質量比（ＷL／ＷP）は各サンプル溶液に含まれているルテインエステルの質量ＷLと黒米エキスの質量ＷPとの比（ＷL／ＷP）示している。
抑制率（％）＝{１−（サンプルの吸光度／対照の吸光度）}×１００
【００５７】
【表５】
2005320319.tif 000011
【００５８】
表５に示すように、ルテインエステルの質量ＷLと黒米エキスの質量ＷPとの比ＷL／ＷPが０．２以上５以下の範囲でルテインエステルと黒米エキスとを含むサンプル２４〜２６は、ルテインエステルのみを含むサンプル２３と比べて、ラット肝脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率が向上していた。特に、ルテインエステルの質量ＷLと黒米エキスの質量ＷPとの比ＷL／ＷPが０．２以上３以下の範囲でルテインエステルと黒米エキスとを含むサンプル２５〜２６は、さらにラット肝脂質の過酸化脂質への酸化の抑制率が向上していた。
【００５９】
今回開示された実施の形態および実験例はすべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した説明ではなくて特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明の抗酸化組成物はそのままでも利用可能であるが、食品や錠剤などに含ませることによっても好適に利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】本発明の抗酸化組成物の製造方法の好ましい一例のフローチャートである。
【図２】実験例において用いられたルテインエステルを加水分解したルテインのＨＰＬＣ分析の結果を示すチャートである。
【図３】実験例において用いられた黒米エキスの可視光および紫外光の吸収スペクトルである。
【図１】
2005320319.tif 000012
【図２】
2005320319.tif 000013
【図３】
2005320319.tif 000014