(57)【要約】【解決手段】  ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、あるいは核酸等の生体高分子を含有し、これに酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が結合した、生理学的条件下での酸化窒素放出が可能な高分子組成物；該高分子組成物を含有する医薬組成物；酸化窒素の投与が治療となる生物学的障害の治療方法。【効果】  適用部位に酸化窒素放出の効果を集中させることができ、効果的な投薬の為に酸化窒素放出を制御することができる酸化窒素放出組成物の提供が可能となる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、ポリサッカライド、オリゴヌクレオチド、核酸、グリコーゲン、脂肪酸、糖タンパク質およびそれらのサブユニットからなる群より選択される生体高分子および該生体高分子に結合した酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基とを含有する、生理学的条件下での酸化窒素放出が可能な高分子組成物〔但し酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が下記式で表される場合を除く。
【化１】
2005325144.tif 000031
（式中、Ｍ+xは薬学上許容しうるカチオンであり、ｘは該カチオンの原子価である）〕
【請求項２】
該生体高分子が、抗体またはペプチドホルモンである請求の範囲第１項の高分子組成物。
【請求項３】
該生体高分子が、組織、細胞、あるいは腫瘍特異的な抗体またはその断片、腫瘍細胞接着に好適な受容体−リガンド相互作用の認識配列を有するタンパク質、抗走化性剤およびホルモンからなる群より選択される請求の範囲第１項の高分子組成物。
【請求項４】
該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【化２】
2005325144.tif 000032
（式中、ｂおよびｄは同一または異なって０または１であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は同一または異なって水素、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｘ、ｙおよびｚは同一または異なって２〜１２の整数である。）である請求の範囲第１項の高分子組成物。
【請求項５】
該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【化３】
2005325144.tif 000033
（式中、Ｂは
【化４】
2005325144.tif 000034
であり、Ｒ6およびＲ7は同一または異なって水素、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｆは０〜１２の整数であり、ただしＢが置換されたピペラジン部位
【化５】
2005325144.tif 000035
の場合、ｆは２〜１２の整数である。）である請求の範囲第１項の高分子組成物。
【請求項６】
該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【化６】
2005325144.tif 000036
（式中、Ｒ8は水素、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、Ｒ9は水素またはＣ1−Ｃ12直鎖または分枝鎖アルキルであり、ｇは２〜６である。）である請求の範囲第１項の高分子組成物。
【請求項７】
該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【化７】
2005325144.tif 000037
（式中、Ｒ1およびＲ2は独立してＣ1−Ｃ12直鎖または分枝鎖アルキル基およびベンジル基からなる群より選ばれ、あるいはＲ1およびＲ2がそれらが結合している窒素原子と共に複素環基、ピペリジノ、ピペラジノまたはモルホリノ基を形成し、Ｍ+xは該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基と生物学的に許容し得る塩を形成することができる医薬上許容されるカチオンであり、ｘはカチオンの原子価である。）である請求の範囲第１項の高分子組成物。
【請求項８】
該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【化８】
2005325144.tif 000038
（式中、Ｍは医薬上許容される金属、またはｘが少なくとも２の場合、異なる２種の医薬上許容される金属の混合物であり、Ｌは、Ｃ1-20アルキルオキシ、Ｃ1-20カルボキシレート、Ｃ1-20アルコール、Ｃ1-20アミン、Ｃ1-20エーテル、Ｃ1-20エステル、Ｃ1-20アミド、スルフェート、ホスフェート、ハライド、アンモニア、アクオ、ヒドロキソおよびオキソからなる群より選択される、（Ｒ1Ｒ2Ｎ−Ｎ2Ｏ2）とは異なる配位子であり、且つ少なくとも１つの金属に結合しており、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ有機部位であり、それらは同一または異なっていてよく、ｘは１〜１０の整数であり、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態を示し、１〜６の整数であり、ｙは１〜１８の整数であり、ただし、ｙが少なくとも２の場合、配位子Ｌは同一または異なっていてもよく、ｚは１〜２０の整数であり、Ｋは化合物を必要な程度まで中性にする医薬上許容される対イオンである。）である請求の範囲第１項の高分子組成物。
【請求項９】
該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【化９】
2005325144.tif 000039
（式中、ＲはＣ2-8低級アルキル、フェニル、ベンジルまたはＣ3-8シクロアルキルであり、Ｒ基のいかなるものも１〜３個の置換基で置換されていてもよく、その置換基は同一または異なっていて、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1-8アルコキシ、−ＮＨ2、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、−ＣＨ（Ｏ）、−Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび−ＮＯ2からなる群より選ばれ、Ｘは該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基と生物学的に許容し得る塩を形成することができる医薬上許容されるカチオン、医薬上許容される金属中心、またはＣ1-8低級アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ3および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2からなる群より選ばれる医薬上許容される有機基であり、ｙは１〜３の整数であり、Ｘの原子価と一致する。）である請求の範囲第１項の高分子組成物。
【請求項１０】
該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【化１０】
2005325144.tif 000040
〔式中、Ｒ1およびＲ2は独立して、Ｃ1-12直鎖アルキル、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ1-12直鎖アルキル、ヒドロキシまたはハロゲン置換されたＣ2-12直鎖アルキル、Ｃ3-12分枝鎖アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ3-12分枝鎖アルキル、置換されていないか、またはヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、ハロゲンまたはベンジルで置換されているＣ3-12直鎖または分枝鎖オレフィンから選ばれるか、あるいはＲ1およびＲ2がそれらが結合している窒素原子と共に複素環基、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノまたはモルホリノ基を形成し、Ｒ3は、置換されていないか、またはヒドロキシ、ハロゲン、アシルオキシまたはアルコキシで置換されているＣ1-12直鎖およびＣ3-12分枝鎖アルキル、置換されていないか、またはハロゲン、アルコキシ、アシルオキシまたはヒドロキシで置換されているＣ2-12直鎖またはＣ3-12分枝鎖オレフィン、置換されていないかまたは置換されているＣ1-12アシル、スルホニルおよびカルボキサミドから選ばれる基、あるいはＲ3は式−（ＣＨ2）n−ＯＮ＝Ｎ（Ｏ）ＮＲ1Ｒ2（式中、ｎは２〜８の整数であり、Ｒ1およびＲ2は上記に定義した通り）であり、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3はヘテロ原子のαにハロゲンまたはヒドロキシ置換基を含まない。〕である請求の範囲第１項の高分子組成物。
【請求項１１】
医薬上許容しうる担体と請求の範囲第１項〜第１０項のいずれかに記載の高分子組成物とを含有する医薬組成物。
【請求項１２】
治療有効量の酸化窒素を放出するに十分な量の請求の範囲第１項〜第１０項のいずれかに記載の高分子組成物を含む、酸化窒素の投与が治療となる、哺乳類の生物学的障害の治療薬剤。
【請求項１３】
該医薬上許容されるカチオンがナトリウムである請求の範囲第７項または第９項の高分子組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸化窒素放出が可能な高分子組成物に関する。特に本発明は、酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が結合している、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、核酸等の生体高分子を含有する高分子組成物、該高分子組成物を含有する医薬組成物、および該生体高分子組成物によって生物学的障害を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
酸化窒素（ＮＯ）は近年、血圧の正常な生理学的制御、マクロファージ誘導性の細胞性塞栓や細胞毒性、ならびに神経伝達を含め多様な生体制御過程に関与するようになった（Moncada et al., 「Ｌ−アルギニン由来の酸化窒素：生体制御系」（“Nitric Oxide from L-Arginine: A Bioregulatory System”）, Excerpta Medica, International Congress Series 897 (Elsevier Science Publishers B.V.: Amsterdam, 1990); Marletta et al., 「酸化窒素の生物学的意義の解明」（“Unraveling the Biological Significance of Nitric Oxide”）, Biofactors, 2, 219-225 (1990); Ignarro, 「酸化窒素  細胞を介した伝達の為の新しいシグナルトランスダクションの機構」（“Nitric Oxide. A Novel Signal Transduction Mechanism for Transcellular Communication”）, Hypertention (Dallas), 16, 477-483 (1990))。代謝されて酸化窒素を放出する化合物および水溶液中で自発的に酸化窒素を放出する化合物を含めた、酸化窒素を送達することのできる多数の化合物が開発されている。
【０００３】
代謝されて酸化窒素を放出するそれらの化合物には、広く使用されているニトロ血管拡張剤、三硝酸グリセリンおよびニトロプルシドナトリウムが含まれる（Ignarro et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 218, 739-749 (1981); Ignarro, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 30, 535-560 (1990); Kruszyna et al., Toxicol. Appl. Pharmacol., 91, 429-438 (1987); Wilcox et al., Chem. Res. Toxicol., 3, 71-76 (1990)）。他の化合物であるＳ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミンは溶液中で酸化窒素を放出し、ＤＮＡ合成阻害に有効であると報告されている（Garg et al., Biochem. and Biophys. Res. Comm., 171, 474-479 (1990)）。
【０００４】
数多くの酸化窒素−求核剤複合体が報告されている（例えば、Drago, ACS Adv. Chem. Ser., 36, 143-149 (1962)）。LonghiおよびDrago, Inorg. Chem., 2, 85 (1963)も参照。これらの複合体の幾つかは加熱または加水分解により酸化窒素を放出することが知られている（例えば、Maragos et al., J. Med. Chem., 34, 3242-3247 (1991)）。
【０００５】
インビトロでの、腫瘍細胞における酸化窒素の溶液の細胞増殖抑制効果が証明されてきた。特に、インビトロで、酸化窒素の溶液が腫瘍細胞のＤＮＡ合成およびミトコンドリア呼吸を阻害することが示されている（Hibbs et al., Biochem. and Biophys. Res. Comm., 157, 87-94 (1988); Stuehr et al., J. Exp. Med., 169, 1543-1555 (1989)）。
【０００６】
内皮細胞由来平滑筋弛緩因子（ＥＤＲＦ）は血管平滑筋の弛緩に関与する相互作用剤のカスケードの一部で働く、不安定な体液性の作用剤である。つまりＥＤＲＦは、血流に対する血管抵抗の制御や血圧の制御において重要である。幾つかの血管拡張剤は、内皮細胞からＥＤＲＦを放出させることにより作用する（Furchgott, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 24, 175-197 (1984)を参照）。１９８７年には、PalmerらはＥＤＲＦが単純な分子である酸化窒素ＮＯと等価であることを証明した（Nature, 317, 524-526 (1987)）が、より最近にはその結論に異論が唱えられている（Myers et al., Nature, 345, 161-163, 1990）。
【０００７】
しかしながら、酸化窒素は純粋な形態では、水性媒体に対して限られた溶解度を有する反応性の高いガスである（窒素酸化物の環境保健規準に関するＷＨＯ対策グループ、窒素酸化物、環境保健規準４(Oxides of Nitrogen, Environmental Health Criteria 4)（世界保健機関：ジュネーブ、１９７７年））。従って、大多数の生物学的システムに酸化窒素を早期に分解させることなく確実に導入することは困難である。
【０００８】
酸化窒素の投与における困難性は、ある場合には酸化窒素を、薬理学上プロドラッグの形態で投与することにより克服することが可能である。三硝酸グリセリンやニトロプルシドナトリウムといった化合物は比較的安定で、活性化されてはじめて酸化窒素を放出する（Ignarro et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 218, 739-749 (1981); Ignarro, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 30, 535-560 (1990); Kruszyna et al., Toxicol. Appl. Pharmacol., 91, 429-438 (1987); Wilcox et al., Chem. Res. Toxicol., 3, 71-76 (1990)）。この特徴はある適用では有利となるかもしれないが、重大な障害にもなりうる。例えば、三硝酸グリセリンに対する耐性が、関係する酵素／補因子システムの消耗によって発現する(Ignarro et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 25, 171-191 (1985); Kuhn et al., J. Cardiovasc. Pharmacol., 14 (Suppl. 11), S47-S54 (1989))。また、ニトロプルシドの長期投与はシアン化物の代謝産物を生じさせ、毒性につながる（Smith et al., 「生物学的に反応性の中間体の抜粋集」生物学的に反応性の中間体IV、分子的および細胞的効果とそれらの人間の健康に対する影響（“A Potpourri of Biologically Reactive Intermediates”, Biological Reactive Intermediates IV. Molecular and Cellular Effects and Their Impact on Human Health）（Witmer et al.編）、実験医学と生物学における進歩、第283 巻（プレナムプレス、ニューヨーク、１９９１年）３６５〜３６９頁（Advances in Experimental Medicine and Biology Volume 283 (Plenum Press: New York, 1991), pp. 365-369）。
【０００９】
酸化窒素が内皮細胞から放出され、それが血管平滑筋の弛緩の原因であり、従って血圧の制御ができるという証明は、インビボで酸化窒素を送達することが可能な人工的な薬剤の開発につながった。そのような薬剤の非常に重要なクラスは酸化窒素−求核剤複合体である。最近、ある種の酸化窒素−求核剤複合体を用いて哺乳類の心臓血管障害を治療する方法が開示された（例えば、米国特許第４，９５４，５２６号）。これらの化合物はアニオン性Ｎ2Ｏ2-基またはその誘導体を含有する。Maragos et al., J. Med. Chem., 34, 3242-3247 (1991)も参照。これらの化合物の多くは薬理学的に特に有望であることが判明した。なぜなら、ニトロプルシドやニトログリセリンのようなニトロ血管拡張剤と異なり、最初に活性化する必要がなく酸化窒素を放出するからである。純粋に自発的に酸化窒素を放出できることが現在知られている唯一の他のシリーズの薬剤は、Ｒ−Ｓ−ＮＯ構造の化合物群、すなわち、Ｓ−ニトロソチオールシリーズである（Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 89, 444-448 (1992); Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 89, 8087-8091 (1992)）。しかしながら、Ｒ−Ｓ−ＮＯ→ＮＯ反応は速度論的に複雑で、制御が難しい（Morley et al., J. Cardiovasc. Pharmacol., 21, 670-676 (1993)）。つまりＮ2Ｏ2-を含有する化合物は、きれいな一次反応を経て、いかなる所定のｐＨでも分解されて、予測でき、定量的かつ制御され得る量の酸化窒素を供給する点で現在知られている薬剤の中では有利なものである。例えば、Maragos et al., J. Med. Chem., 34, 3242-3247 (1991)参照。
【００１０】
水溶液中で酸化窒素を放出する酸化窒素／求核剤複合体はまた、米国特許第５，０３９，７０５号、第５，１８５，３７６号、第５，１５５，１３７号、第５，２０８，２３３号、第５，２１２，２０４号、第５，２５０，５５０号、第５，３６６，９９７号（発行日１９９４年１１月２２日）、および係属中の米国特許出願０７／７６４，９０８（出願日１９９１年９月２４日）、０７／８５８，８８５（出願日１９９２年３月２７日）、０７／８６７，７５９（出願日１９９２年４月１３日）、０７／９３５，５６５（出願日１９９２年８月２４日）、０８／０１７，２７０（出願日１９９３年２月１２日）および０８／１２１，１６９（出願日１９９３年９月１４日）にも有用な治療薬として開示されている（Maragos et al., J. Med. Chem., 34, 3242-3247 (1991)も参照）。
【００１１】
研究されてきた酸化窒素／求核剤付加物は有望であるにもかかわらず、それらは媒体中に均一に分布する傾向があるため薬理学的適用は制限されてきた。このような均一分布は多くの研究適用においては非常に有利であるが、作用の選択性を危うくする傾向がある。これらの酸化窒素／求核剤付加物の適用を制限するもう一つの要因は、それらが酸化窒素を比較的速く放出する傾向にある点であり、そのために持続性の生物学的効果を達成するためには頻繁に投与する必要があるということである。すなわち適用部位に酸化窒素放出の効果を集中することができ、効果的な投薬の為に酸化窒素放出を制御することができる酸化窒素放出組成物が必要とされる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って本発明の主要な目的は、生理学的な条件下でＮＯを放出することが可能な、Ｎ2Ｏ2-官能基を結合している生体高分子を含有する高分子組成物を提供することである。本発明の他の目的は、局所、あるいは細胞／組織特異的な放出を果たせるような、ＮＯの放出を制御し得る、Ｎ2Ｏ2-官能基を結合している生体高分子を含有する高分子組成物を提供することである。本発明の別の目的は、ＮＯの放出が持続的な生物学的効果を達成できるようなＮ2Ｏ2-官能基を結合している生体高分子を含有する高分子組成物を提供することである。また、本発明の他の目的は、該生体高分子組成物を含有する医薬組成物を提供することである。本発明のさらなる目的は、該生体高分子組成物の投与を含む、生物学的な障害を治療する方法を提供することである。本発明のこれらのおよびその他の目的や長所、ならびに他の発明の特徴は、ここに述べる発明の記載から明らかとなるだろう。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、生理的条件下で酸化窒素を自発的に放出しうる高分子組成物を提供する。高分子組成物は酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が結合する生体高分子を含む。“生体高分子（的）”とは、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチドおよび核酸のようなあらゆる生物学的高分子を含むことを意味し、これらは自然に生じる、および／または人工的に生じるサブユニットも含む。特別の例示として抗体やその断片および、標的細胞型がその為の受容体を高集団で有するペプチドホルモン、タンパク質および成長因子が挙げられる。本発明の生体高分子結合ＮＯＮＯエート（ＮＯＮＯａｔｅ）を形成するのに使用される酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基は、式：
【００１４】
【化１】
2005325144.tif 000002
【００１５】
（式中、Ｘは有機または無機部位であり、Ｘ’はＸと同じでもよいし、あるいは医薬的に許容しうる金属中心あるいは医薬的に許容しうるカチオン等でもよい）で定義される。Ｎ2Ｏ2-基は片方あるいは両方の結合基ＸおよびＸ’を通して生体高分子に結合する。
【００１６】
“高分子に結合する”とは、Ｎ2Ｏ2-官能基が物理的にあるいは化学的に生体高分子の一部と結びつけられている(associated)、生体高分子の一部に取り込まれるている(incorporated)、あるいは含まれている(contained)ことを意味する。高分子へのＮ2Ｏ2-官能基の結合は結合基ＸあるいはＸ’を通してＮ2Ｏ2-基が生体高分子へ共有結合することによって達成される。生体高分子へのＮ2Ｏ2-官能基の化学結合は、結合基が生体高分子それ自身の一部を形成しているような生体高分子への結合基ＸあるいはＸ’の共有結合によってであってもよい。（すなわち、結合基が生体高分子のバックボーン中にあったり、生体高分子のバックボーンにぶらさがっている基に結合している。）酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基を高分子の一部と結びつける、生体高分子の一部に取り込ませる、あるいは含ませる、すなわち高分子に「結合する」方法は、本発明ではあまり重要でなく、結びつき(association)、取り込み、結合の全ての方法が考慮される。
【００１７】
本発明の他の局面は、本発明の生体高分子結合酸化窒素放出組成物が生体高分子ではない高分子（以下「非生体高分子」という）に結合あるいは物理的に結びつけることである。
【００１８】
本発明はまた、医薬的に許容しうる担体および酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が結合している生体高分子を含む高分子組成物を含む医薬組成物を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、生物学的障害を患っている哺乳類に酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が結合している生体高分子を含む高分子組成物を治療に有効な量の酸化窒素を放出するのに十分な量で投与することを含む、酸化窒素の投与が治療となる生物学的障害の治療方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明は酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基を生体高分子に取り込むことによって有用な医薬剤が提供され得るという発見に基づいている。したがって、ここで定義されるようにＮ2Ｏ2-官能基は「ポリマーに結合している」。ここで使用しているＮＯＮＯエートという語は、酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-基を短くしたものである。
【００２１】
ＮＯＮＯエートを生体高分子に取り込むことで、目的とする生物学的部位に特異性をもって適用できる生体高分子結合ＮＯＮＯエート組成物を提供するということが発見された。生体高分子結合ＮＯＮＯエートの部位特異的適用は、酸化窒素放出ＮＯＮＯエートの作用の選択性を高める。もし生体高分子に結合しているＮ2Ｏ2-官能基が必然的に局在化しているならば、酸化窒素放出の効果はそれらが接触した組織中に集中するだろう。もし生体高分子が可溶性であれば、たとえば標的組織に対して特異的な抗体に結合するあるいはそのような抗体の誘導体とする(derivatization)ことによって、作用の選択性はさらにアレンジすることができる。同様に、重要な受容体のリガンドの認識配列を模倣した小さなペプチドにＮ2Ｏ2-基を結合することにより、核酸中の標的配列との部位特異的な相互作用が可能なオリゴヌクレオチドに結合する場合と同様な、酸化窒素放出の局在化した集中した効果を与える。ホルモンおよび運動性、走化性、いっ出性因子あるいは作用剤を含め、他のタンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸およびポリサッカロイドも同様に利用することができる。
【００２２】
実例として、ピペラジン モノＮＯＮＯエート誘導体は、腫瘍細胞走化性において重要なＩＫＶＡＶ認識配列を含むポリペプチドに共有結合することができる。抗走化性剤としての、ＮＯを再生成する能力と腫瘍細胞が接着する傾向にある血管およびリンパ系での腫瘍細胞および／または部位へのＩＫＶＡＶ配列の親和性によって、転移を減少あるいは阻止することさえできる。
【００２３】
他のいかなる特定の理論に束縛されているわけではないが、本発明の生体高分子結合ＮＯＮＯエート組成物の酸化窒素放出の持続性は、組成物の物理的構造と静電効果の両方に帰すると考えられる。したがって、もし生体高分子が不溶性固体であるならば、粒子の表面に近いＮ2Ｏ2-基は速く放出されることが可能であるはずだが、より深く埋め込まれたものは立体的に遮蔽され、酸化窒素が媒体中を進んで行くためにより多くの時間および／またはエネルギーを必要とすると考えられる。予想外にも、Ｎ2Ｏ2-官能基の周辺の正電荷の増加によって、酸化窒素発生の半減期もまた増大する傾向があることが見出された。この速度遅延の機構は単に反発静電相互作用、すなわち、Ｎ2Ｏ2-基の周辺のＨ+反発正電荷の数が増大することにより、正電荷に荷電したＨ+イオンのＮ2Ｏ2-官能基に対する攻撃を阻害し、Ｈ+が触媒する分解速度を遅延させることに起因するのかもしれない。たとえば、酸化窒素と反応させることで酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基を形成させることのできるアミノ基を高分子支持体に結合することによって、消耗することにはならない程度の酸化窒素を用いる治療において、水に曝された後、Ｎ2Ｏ2-基周辺の数多くの正に荷電している、酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基からの酸化窒素損失をおこしうるＨ+イオンのアプローチを静電気的に阻害するアンモニウム中央を含む、部分的に変換された構造を製造することができる。
【００２４】
生体高分子に結合した酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基は一般に水性の環境と接触すると、水性の環境において自発的に酸化窒素を放出することができる。すなわち、当該官能基は、三硝酸グリセリンやニトロプルシドナトリウムに必要とされるような酸化還元反応あるいは電子伝達によって活性化する必要がない。本発明に関して有用な酸化窒素／求核剤複合体の幾つかは特定の方法による活性化が必要なものもあるが、これは単に目的とする特定の細胞の周辺で酸化窒素を放出するＸ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］-基を遊離させるために必要なだけである。たとえば、アニオン性［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］-官能基に保護基を共有結合させることにより、代謝により保護基を除去することのできる器官に分子が到達するまで酸化窒素放出を遅らせる手段が提供される。たとえば、目的とする腫瘍、生物学的障害、細胞、または組織に特異的な酵素により選択的に開裂される保護基を選択することにより、所望の効果が最大限に奏するように酸化窒素／求核剤複合体の作用の目標を定めることができる。本発明の生体高分子結合ＮＯＮＯエート組成物は水溶液中で酸化窒素を放出することができるが、そのような化合物は生理的条件下で酸化窒素を放出するのが好ましい。
【００２５】
たとえば、ＮＯＮＯエート官能基は、腫瘍特異抗体または１個以上のタンパク質の機能には必要でないリジン側鎖アミノ基をもつ他のタンパク質に、該リジン基を、先ずリジンアミノ窒素に共有結合し、その次の段階で該分子の他の場所に隔てられている遊離のチオールを含むＯ−官能性ＮＯＮＯエートのイオウ原子に共有結合することができる誘導体化剤(derivatizing agent)と反応させることによって結合することができる。そのようなタンパク質を全身投与した後、ひとたび目的の標的組織に届くと、酸素に結合した置換基が酵素的に、あるいは加水分解的に脱離して、アニオン性ＮＯＮＯエートの機能を解放しその部位でＮＯ放出が集中する。
【００２６】
本発明の生体高分子結合ＮＯＮＯエートを生成するのに用いられる酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基の好ましいものとして、式：
【００２７】
【化２】
2005325144.tif 000003
【００２８】
（式中、Ｘは有機または無機部位であり、Ｘ’は有機または無機置換基、医薬的に許容しうる金属中心、医薬的に許容しうるカチオン等である）で定義されるものが挙げられる。該Ｎ2Ｏ2-基は片方あるいは両方の結合基ＸおよびＸ’を通して生体高分子に結合する。
【００２９】
酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基は、好ましくは酸化窒素／求核剤付加物、たとえば、酸化窒素と求核剤との複合体であり、最も好ましくはアニオン性部位Ｘ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］-（式中、Ｘは任意の適当な求核剤残基を示す）を含む酸化窒素／求核剤複合体である。求核剤残基は、好ましくは第一アミン（例えば、（ＣＨ3）2ＣＨＮＨ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］ＮａにおけるＸ＝（ＣＨ3）2ＣＨＮＨ）、第二アミン（例えば、（ＣＨ3ＣＨ2）2Ｎ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］ＮａにおけるＸ＝（ＣＨ3ＣＨ2）2Ｎ）、ポリアミン（例えば、両性イオンＨ2Ｎ（ＣＨ2）3ＮＨ2+（ＣＨ2）4Ｎ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］-（ＣＨ2）3ＮＨ2におけるＸ＝スペルミン、両性イオンＣＨ3ＣＨ2Ｎ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］-ＣＨ2ＣＨ2ＮＨ3+におけるＸ＝２−（エチルアミノ）エチルアミン、または両性イオンＣＨ3ＣＨ2ＣＨ2Ｎ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］-ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＮＨ3+におけるＸ＝３−（ｎ−プロピルアミノ）プロピルアミン）、またはオキシド（すなわち、ＮａＯ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］ＮａにおけるＸ＝Ｏ-）、またはそれらの誘導体である。このような酸化窒素／求核剤複合体は、酸化窒素を予測された速度で生物学的に使用可能な形態で送達することができる。
【００３０】
他の適切な酸化窒素／求核剤複合体としては、次式で表されるものが例示される。
【００３１】
言及によってここに組み入れられる米国特許第５，２０８，２３３号に記載されている
【００３２】
【化３】
2005325144.tif 000004
【００３３】
〔式中、Ｊは有機または無機部位であり、Ｍ+xは医薬上許容されるカチオン（式中、ｘはカチオンの原子価である）であり、ａは少なくとも１の整数であり、ｂおよびｃは中性化合物を与える最も小さい整数である。〕
【００３４】
言及によってここに組み入れられる米国特許第５，１５５，１３７号に記載されている
【００３５】
【化４】
2005325144.tif 000005
【００３６】
（式中、ｂおよびｄは同一または異なって０または１であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は同一または異なって水素、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｘ、ｙおよびｚは同一または異なって２〜１２の整数である。）
【００３７】
言及によってここに組み入れられる米国特許第５，１５５，１３７号に記載されている
【００３８】
【化５】
2005325144.tif 000006
【００３９】
（式中、Ｂは
【００４０】
【化６】
2005325144.tif 000007
【００４１】
であり、Ｒ6およびＲ7は同一または異なって水素、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｆは０〜１２の整数であり、ただしＢが置換されたピペラジン部位
【００４２】
【化７】
2005325144.tif 000008
【００４３】
の場合、ｆは２〜１２の整数である。）
【００４４】
言及によってここに組み入れられる米国特許第５，２５０，５５０号に記載されている
【００４５】
【化８】
2005325144.tif 000009
【００４６】
（式中、Ｒ8は水素、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、Ｒ9は水素またはＣ1−Ｃ12直鎖または分枝鎖アルキルであり、ｇは２〜６である。）
【００４７】
言及によってここに組み入れられる米国特許第５，０３９，７０５号および同第５，２０８，２３３号および１９９３年２月１２日に出願された米国特許出願番号０８／０１７，２７０に記載されている
【００４８】
【化９】
2005325144.tif 000010
【００４９】
（式中、Ｒ1およびＲ2は独立して直鎖または分枝鎖Ｃ1−Ｃ12アルキル基およびベンジル基からなる群より選ばれ、あるいはＲ1およびＲ2が窒素原子と共に結合して、複素環基、好ましくはピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノまたはモルホリノ基を形成し、Ｍ+xは医薬上許容されるカチオンであり、ｘはカチオンの原子価である。）
【００５０】
言及によってここに組み入れられる１９９２年３月２７日に出願された米国特許出願番号０７／８５８，８８５に記載されている
【００５１】
【化１０】
2005325144.tif 000011
【００５２】
（式中、Ｍは医薬上許容される金属、またはｘが少なくとも２の場合、異なる２種の医薬上許容される金属の混合物であり、Ｌは（Ｒ1Ｒ2Ｎ−Ｎ2Ｏ2）とは異なる配位子であり、少なくとも１つの金属に結合しており、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ有機部位であり、それらは同一または異なっていてよく、ｘは１〜１０の整数であり、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態(formal oxidation state)を示し、１〜６の整数であり、ｙは１〜１８の整数であり、ｙが２以上の場合、配位子Ｌは同一または異なっていてもよく、ｚは１〜２０の整数であり、Ｋは化合物を必要な程度まで中性にする医薬上許容しうる対イオンである。）
【００５３】
言及によってここに組み入れられる米国特許第４，９５４，５２６号に記載されている
【００５４】
【化１１】
2005325144.tif 000012
【００５５】
（式中、ＲはＣ2-8低級アルキル、フェニル、ベンジルまたはＣ3-8シクロアルキルであり、Ｒ基は１〜３個の置換基で置換されていてもよく、その置換基は同一または異なっていて、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1-8アルコキシ、−ＮＨ2、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、−ＣＨ（Ｏ）、−Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび−ＮＯ2からなる群より選ばれ、Ｘは医薬上許容されるカチオン、医薬上許容される金属中心、またはＣ1-8低級アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ3および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2からなる群より選ばれる医薬上許容される有機基であり、ｙは１〜３であり、Ｘの原子価と一致する。）
【００５６】
言及によってここに組み入れられる１９９２年９月２３日に出願された米国特許出願番号０７／９５０，６３７に記載されている
【００５７】
【化１２】
2005325144.tif 000013
【００５８】
〔式中、Ｒ1およびＲ2は独立して、Ｃ1-12直鎖アルキル、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ1-12直鎖アルキル、ヒドロキシまたはハロゲン置換されたＣ2-12直鎖アルキル、Ｃ3-12分枝鎖アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ3-12分枝鎖アルキル、Ｃ3-12直鎖オレフィンおよびＣ3-12分枝鎖オレフィン（これらは置換されていないか、またはヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、ハロゲンまたはベンジルで置換されている）から選ばれるか、あるいはＲ1、Ｒ2およびそれらが結合している窒素原子と共に複素環基、好ましくはピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノまたはモルホリノ基を形成し、Ｒ3は、置換されていないか、またはヒドロキシ、ハロゲン、アシルオキシまたはアルコキシで置換されているＣ1-12直鎖およびＣ3-12分枝鎖アルキル、置換されていないか、またはハロゲン、アルコキシ、アシルオキシまたはヒドロキシで置換されているＣ2-12直鎖またはＣ3-12分枝鎖オレフィン、置換されていないかまたは置換されているＣ1-12アシル、スルホニルおよびカルボキサミドから選ばれる基、あるいはＲ3は式−（ＣＨ2）n−ＯＮ＝Ｎ（Ｏ）ＮＲ1Ｒ2（式中、ｎは２〜８の整数であり、Ｒ1およびＲ2は上記に定義した通り）で表される基であり、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3はヘテロ原子のαにハロゲンまたはヒドロキシ置換基(a halo or a hydroxy substituent α to a hetero atom)を含まない。〕
【００５９】
本発明に関して、広範な種類の如何なる生体高分子も使用可能である。使用に好適な生体高分子としては、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、核酸（例えばＲＮＡやＤＮＡ）、抗体、ペプチドホルモン、糖タンパク質、グリコーゲン等が挙げられる。あるいは、脂肪酸、グルコース、アミノ酸、コハク酸塩、リボヌクレオチド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオチド、およびデオキシリボヌクレオシド等の生体高分子のサブユニットが使用できる。具体例としては、抗体あるいはその断片；ラミニンやフィブロネクチン等の細胞外マトリックスタンパク質あるいは、それらの細胞接着(cell-attachment)部位のペプチド認識配列（ＲＧＤＳ、ＩＫＶＡＶ、ＹＩＧＳＲ等）；成長因子、ペプチドホルモン、およびその他の細胞表面の受容体部位と高い親和性を有するポリペプチド（ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβおよびＴＮＦ等）が挙げられる。そのような分子は、受容体に結合する際、標的細胞に内部移行し、それによりＮＯの供与体部位の細胞内送達を容易にする。
【００６０】
酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基は、上記の式を有するタイプの酸化窒素／求核剤複合体を、その場で生体高分子上に形成することにより、生体高分子に結合されてもよい。Ｎ2Ｏ2-官能基は、生体高分子のバックボーンの原子に結合するか、生体高分子バックボーンにぶらさがっている基に結合しても、あるいは単に生体高分子マトリックスに捕捉されるだけでもよい。Ｎ2Ｏ2-官能基が生体高分子バックボーンに結合している場合、生体高分子は将来の放出のために酸化窒素と反応して該酸化窒素を結合する部位をバックボーンに有する。該生体高分子は、例えば、酸化窒素と反応して、窒素原子でＮ2Ｏ2-官能基を形成する求核窒素原子をバックボーン中にもつ。Ｎ2Ｏ2-官能基が生体高分子バックボーンにぶらさがっている基の場合、生体高分子は、酸化窒素と反応してＮ2Ｏ2-官能基を形成し得る、適当なぶらさがった求核剤残基を含むか、あるいは当該求核剤残基で誘導体とされている。このように、適当な求核残基を含む生体高分子または適当に誘導体とされた生体高分子と酸化窒素との反応は、生体高分子結合酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基を提供する。
【００６１】
生体高分子結合酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基を形成するためには、一般にＮ2Ｏ2-官能基が形成されるべき生体高分子上の部位の近くの高分子に対して、実効電荷を与えることが好ましい。実例として、幾つかの一般的な方法がＮＯＮＯエート官能基に結合した生体高分子を含有する生体高分子組成物の合成に利用可能である。一例として、Ｘ−Ｎ2Ｏ2-の構造を有するイオンを求電子剤（［Ｘ］+供与体）と反応させると、式Ｘ−Ｎ（Ｏ）＝ＮＯＸ’で表される共有結合ＮＯＮＯエートが得られる。ついで、この保護された複合体を所望の生体高分子に、求核剤残基Ｘあるいは求電子残基Ｘ’を介して結合させる。あるいは、すでに生体高分子の一部である（あるいは結合している）求核剤残基から、基本的な条件下でＮＯと反応させることにより、Ｎ2Ｏ2-官能基を含有する酸化窒素複合体を製造することができる。特例として、第二アミノ基を有する単一のアミノ酸を酸化窒素と反応して本発明による化合物を製造することができる。同様に、ＮＯＮＯエート官能基はペプチド内で塩基性窒素に結合することができる。他の方法でも本発明に従ってＮＯＮＯエート含有分子をペプチド、ポリペプチドあるいはタンパク質内のチオール基あるいは活性化されたカルボン酸基に結合させることができる。
【００６２】
さらに、実例として、Ｎ2Ｏ2-官能基をａｒｇ−ｇｌｙ−ａｓｐ（ＲＧＤ）のようなペプチドに結合してａｒｇ−ｇｌｙ−ａｓｐ−［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］-分子を製造してもよい。好ましくは、ＲＧＤトリペプチドはＮＯＮＯエートに追加のペプチド単位といった結合基を介して結合させる。他の受容体／リガンド認識配列も同じように使用される。
【００６３】
本発明の生体高分子結合酸化窒素放出組成物は、治療されるべき生物学的障害に応じて、広範な種類の適用および広範な種類の形態において有用性が知られているであろう。例えば、目的に好適なように、生体高分子結合ＮＯＮＯエートはそれ自体で構造的に十分にインプラント、パッチ、ステント、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロスフェア、ビーズ、顆粒、液体、ゲル、モノリス樹脂、ディスク等として働き、あるいは生体高分子結合ＮＯＮＯエートは非生体高分子等とも結合することができる。ここで用いられる非生体高分子という語は、生体高分子でない全ての高分子を意味する。さらに、実例として、生体高分子結合ＮＯＮＯエート組成物は他の高分子マトリックス、基質等に取り込ませたり、あるいはマイクロカプセル化したりしてもよい。
【００６４】
本発明の生体高分子結合酸化窒素／求核剤組成物は広範囲の生物学的利用性を有する。酸化窒素が、特に多能でバイオエフェクター種としても重要であり、血管緊張低下、神経伝達および免疫反応のような重大な身体の機能において機能的に関与している（Moncada et al., Pharmacol. Rev., 43, 109-142 (1991)）という高まりつつある認識に鑑みて、酸化窒素放出が必要とされる適用に、本発明の組成物は有用性が見い出される。例えば、生体高分子結合ＮＯＮＯエートを血管形成術後の再狭窄の危険性を減ずるために使用してもよい。
【００６５】
さらに詳細に、が、本発明はこれになんら限定されることなく本発明の生体高分子結合組成物の広範な使用および適用について説明する。即ち、例えば酸化窒素によってもたらされる劇的ではあるが短期間の、肺の血管および気管支の拡張特性（Roberts et al., Circulation (Suppl. II), 84, A1279 (1991)）に鑑みて、生体高分子結合酸化窒素／求核剤付加物組成物のエアロゾル形態での肺への投与を、多様な肺障害の治療に使用してもよい。天然の、内因性の酸化窒素は陰茎勃起のエフェクターとして同定されているので（Blakeslee, New York Times, １９９２年１月９日，Ａ１頁）、本発明の生体高分子結合酸化窒素／求核剤付加物組成物は男性のインポテンツの治療のための適当な陰茎インプラント、経尿道投与用製剤、経皮投与用パッチ剤あるいはコンドームに組み込むことができる。ある種の単量体酸化窒素／求核剤付加物の血小板凝集の阻害能は、立証されている細胞増殖抑制活性とあいまって、血管形成後の再狭窄の予防の為の非常に貴重な二股のアプローチ(two-pronged approach)を予期させる。すなわち、高分子結合酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基組成物で製造されるステントは、損傷をうけた内皮部位での細胞の分裂を阻害し、そしてこれらの部位での血小板の付着も予防するという両方に用いることができ、閉塞の再発の危険性を最小限にする。腫瘍細胞による酸化窒素の生成と該細胞の転移能間の反比例の関係が提案されているので（Radomski et al., Cancer Res., 51, 6073-6078 (1991)）、高分子結合酸化窒素／求核剤組成物を癌患者における転移の危険性を減ずるのに用いることができる。同様に本発明の生体高分子結合酸化窒素放出組成物は、プロテーゼや胸部インプラントのような医療用インプラントに関わる固形癌の発生の危険性を減ずる手段として、生体に外科的に連結する前にそれらを被覆するのに用いることができることが予測される。Ｎ2Ｏ2-官能基を有する腫瘍特異的な抗体は、癌細胞を放射線治療に感作的にするのに用いることができる。Ｎ2Ｏ2-官能基は、子宮内に集中するホルモンに結合させることができ、そこでのＮＯの放出は、早産をとめることができる。さらに酸化窒素は、胃の運動性、神経伝達、侵害受容、およびその他の本来自然な役割にも関連していることが暗示されているので、本発明の組成物はそれらの適用においても使用することができる。
【００６６】
本発明の別の局面は、本発明の新規な生体高分子結合酸化窒素放出組成物および共に係属中の出願番号０７／９３５，５６５号に開示されている非生体高分子とを含む高分子結合酸化窒素放出組成物を提供することである。本発明のこの局面によれば、ここで述べられた生体高分子結合ＮＯＮＯエートは、非生体高分子に組み入れられるか、あるいは結合される。この用途に関しては、広範な種類の如何なる高分子も使用可能である。選択される高分子は、ただ、生物学的に許容し得るものであればよい。本発明において使用に適した高分子を例示すれば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリビニリデン ジフルオライド、ポリビニルクロライド等のポリオレフィン類；ポリエチレンイミンまたはその誘導体類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ポリサッカライド類；ポリ（ラクチド／グリコリド）等のポリエステル類；ナイロン等のポリアミド類；ポリウレタン類；コレスチポールおよびその誘導体類が挙げられる。上述の生体高分子酸化窒素放出組成物は、非生体高分子支持体に多数の異なる方法で結合させることができる。例えば、生体高分子結合ＮＯＮＯエートは、生体高分子を非生体高分子とともに共沈させることにより、該非生体高分子に結合できる。共沈方法は、例えば、非生体高分子と生体高分子結合ＮＯＮＯエートとを可溶化し、溶媒を留去させることを含む。あるいは、生体高分子結合ＮＯＮＯエートを化学的に非生体高分子に結合させてもよい。
【００６７】
本発明において使用に適した非生体高分子の物理的および構造的特徴は狭く臨界的なものではなく、むしろ最終的な用途に依存する。得られた高分子組成物が局所、皮膚、経皮あるいは同様の使用を意図する場合には、当該組成物が生物分解性である必要がないことは、当業者であれば理解されるであろう。経口摂取等のある用途にとっては、非生体高分子が生理的環境下においてゆっくりと溶解すること、あるいは生物分解性であることが望ましい。得られた高分子形態は、生理的液体中で生体腐食性（bioerodible）、恒久性、あるいは即可溶性（instantly soluble）であり得る。
【００６８】
本発明の生体高分子結合酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基組成物を動物に投与する適当な方法を利用し得ること、およびある特定の組成物を投与するために一を超える投与経路を用いることができるが、ある特定の投与経路が別の投与経路よりも、より迅速により効果的な反応を提供することは、当業者であれば理解できるであろう。医薬的に許容される担体もまた当業者によく知られている。担体の選択は、特定の組成物ならびに該組成物を投与するために用いられる特定の方法によりある程度決定されるだろう。従って、本発明の医薬組成物の適当な製剤は多種多様である。
【００６９】
経口投与に適した製剤は、（ａ）水または生理食塩水のような希釈剤に溶解した有効量の生体高分子結合組成物のような液体溶液、（ｂ）予め決められた量の活性成分を固形物又は顆粒としてそれぞれ含むカプセル剤、小袋剤(sachet)、錠剤、（ｃ）適当な液体に懸濁した懸濁剤、および（ｄ）適当な乳剤からなりうる。錠剤は、乳糖、マンニトール、トウモロコシ澱粉、バレイショ澱粉、微結晶セルロース、アラビアゴム、ゼラチン、コロイドシリコンジオキシド、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、及び他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、矯味剤、及び薬理学的に適合し得る担体の一またはそれ以上を含んでいてもよい。ロゼンジ剤は、矯味剤、通常、ショ糖およびアラビアゴムまたはトラガント中に活性成分を含み、同様に香剤は、ゼラチンおよびグリセリンまたはショ糖およびアラビアゴム乳剤、ゲル剤等の不活性基剤中に活性成分を含み、活性成分に加えて当分野で知られた担体を含む。
【００７０】
本発明の生体高分子結合酸化窒素放出組成物は、単独でまたは他の適当な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエアロゾル製剤に調製され得る。これらエアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の加圧された許容し得る噴射剤中に置かれる。
【００７１】
非経口投与に適切な製剤としては、抗酸化剤、緩衝液、制菌剤および該製剤を投薬を受ける者の血液と等張にするための溶質を含有することのできる水性および非水性の等張性無菌注射溶液、および懸濁化剤、溶解補助剤、増粘剤、安定化剤および保存剤を含有することのできる水性および非水性の無菌の懸濁液が包含される。該製剤は、アンプルおよびバイアルのような１回投与量または複数回投与量の密閉された容器で供せられ、注射には使用直前に、例えば水のような無菌の液体担体を添加するだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存され得る。即席注射溶液および懸濁液は前に述べた種類の無菌の粉末剤、顆粒剤および錠剤から調製され得る。
【００７２】
本発明において動物、特にヒトに投与する量は、適当な時間枠にわたって動物に対して治療の効果を奏するのに十分なものとすべきである。投与量は、用いられるある特定の組成物の強さ、治療すべき動物の状態および体重により決定されるであろう。投与量はまた、ある特定組成物の投与に伴うかもしれない悪い副作用の有無、性質及び程度によっても決定されるであろう。
【００７３】
以下の実施例により本発明をさらに説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００７４】
実施例において、酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基を含有する高分子から酸処理により回収され得る酸化窒素の総量の化学発光分析は次のようにして行った。
ＮＯ付加物、すなわち酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基を含有する高分子の分析は酸化窒素分析機上で行い、Maragos et al., J. Med. Chem., 34, 3242-3247 (1991)の方法に従ってパターン化した。セプタムを付けた反応容器に試験すべき高分子の少量の一定量を充填し、この系をヘリウムで数分間洗浄して微量の酸素を除去した。１０ｍＭ硫酸 ２ｍｌをセプタムを通して注入し反応を開始した。気体状の放出物を、反応容器の底に置いた（すなわち、酸溶液に浸漬した）フリットガラス気泡放出管を介して継続的に化学発光検出器(サーマルエネルギーアナライザーモデル５０２ＬＣ，Thermal Energy Analyzer Model 502LC, Thermedics, Inc., Woburn, MA)に吹き込んだ。得られた化学発光シグナルの時間に対する曲線がなす面積を電子的にコンピューター処理し、既知量の酸化窒素ガス標準と比較することにより、一定量の高分子の酸処理により発生した酸化窒素の量を測定した。
【００７５】
高分子から回収され得る酸化窒素の総量を算出するためにこの方法を用いた。
生理的条件下での酸化窒素発生の割合を算出するために、硫酸溶液の代わりに１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、３７℃）２ｍｌを反応容器に注入して反応を開始した以外は上記と同じ方法で本発明の高分子を処理した。
【実施例】
【００７６】
以下の実施例において、酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基を含有する生体高分子の調製および特性解析について説明する。
実施例Ｉ
この実施例では、以下に模式的に示すように、１−（２Ｓ−カルボキシピロリジン−１−イル）−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼン二ナトリウム塩の調製について説明する。
【００７７】
【化１３】
2005325144.tif 000014
【００７８】
２５％ナトリウムメトキシド（メタノール中）３９ｍｌ（０．１８ｍｏｌ）およびメタノール２０ｍｌ中の、Ｌ−プロリン１０ｇ（０．０８７ｍｏｌ）の溶液を脱気し、４０ｐｓｉのＮＯに２０時間曝露した。圧力を緩めて固形残渣を濾過にて集め、エーテルで洗浄し、減圧下で乾燥して白色固体１７ｇを得た：UV（0.01M NaOH）λmax（ε）250 nm(ε = 4.9 mM-1cm-1); NMR（D2O）δ 1.71 (m, 1H), 1.91 (m, 2H), 2.27 (m, 1H), 3.27-3.43 (m, 2H), 4.04 (m, 1H)。メタノールのピークも存在したが、該固体にはプロリンおよびＮ−ニトロソプロリンは両方とも含まれなかった。
【００７９】
実施例II
この実施例では、以下に模式的に示すように、１−ヒドロキシ−２−オキソ−３−カルボキシメチル−３−メチル−１−トリアゼン二ナトリウム塩の調製について説明する。
【００８０】
【化１４】
2005325144.tif 000015
【００８１】
メタノール１００ｍｌおよび水２０ｍｌ中の、水酸化ナトリウム８ｇ（０．２ｍｏｌ）の溶液にサルコシン８．９ｇ（０．１ｍｏｌ）を加えた。該溶液に４０ｐｓｉのＮＯを負荷し、２５℃で４８時間攪拌した。圧力を緩め、該溶液を減圧で溶媒留去して、UV λmax 250 nmの白色固体を得た。該蒸留物は強いアミン臭を有し、メチルアミンの塩化ベンゾイル誘導体であると決定された。
該固形残渣を高真空下で乾燥後、Ｄ2Ｏ中のＮＭＲにより解析した。ＮＭＲにより５つの生成物が検出された：メチルアミン，δ 2.28, 36%; １−ジメチルアミノ−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼンナトリウム塩，δ 2.79, 15%; Ｎ−ニトロソジメチルアミン，δ 3.11 および3.91, 8%; Ｎ−ニトロソサルコシンナトリウム塩，δ 3.15 (s, E メチル), 3.84 (s, Z メチル), 4.21 (s, Z メチレン), 4.80 (s, E メチレン), 10%。標記化合物は該混合物の３２％として存在した：δ3.11 (s, 3H)および3.60 (s, 2H)。
【００８２】
実施例III
この実施例では、以下に模式的に示すように、１−ヒドロキシ−２−オキソ−３−カルボキシメチル−３−メチル−１−トリアゼンＮ−メチルアミドナトリウム塩の調製について説明する。
【００８３】
【化１５】
2005325144.tif 000016
【００８４】
４０％メチルアミン水溶液１５０ｍｌ（１．９ｍｏｌ）を０℃まで冷却した。該溶液に１０Ｍ水酸化ナトリウム４０ｍｌを加え、続いてα−クロロアセチルクロリド（２７ｇ，０．２４ｍｏｌ）を０℃で２時間かけて注意深く加えた。
室温にて一晩攪拌し続けた。得られた溶液を塩化ナトリウムで飽和、ジクロロメタンで抽出して硫酸ナトリウム上で乾燥し、硫酸マグネシウム層を通して濾過した。溶媒のほとんどをロータリーエバポレーターで除去し、残渣を１気圧にて、次いで適当な減圧下で蒸留した。該生成物を９０〜２℃、１２５ｍｍＨｇで蒸留し、サルコシンＮ−メチルアミド１５ｇ（６１％）を得た：IR（film）3318, 2952, 2889, 1659, 1553, 1462, 1413, 1166 cm-1; NMR（CDCl3）δ 2.42 (s, 3H), 2.86 (s, 1.5H), 2.83 (s, 1.5H), 3.23 (s, 2H)。
【００８５】
２５％ナトリウムメトキシド（メタノール中）３．５ｍｌ（０．０１６ｍｏｌ）中のサルコシンＮ−メチルアミド１．７ｇ（０．０１６７ｍｏｌ）の溶液を圧力ビン中に置き、窒素をどっと流した後４０ｐｓｉの酸化窒素を負荷した。該溶液を４８時間２５℃に保って濃厚なペーストを得た。圧力を緩め、残渣をエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥して、UV λmax（ε）250 nm（2.4 mM-1cm-1）の固体１．４ｇを得た。
【００８６】
実施例IV
この実施例では、以下に模式的に示すように、Ｌ−プロリル−Ｌ−ロイシルグリシンアミドのビス（酸化窒素）付加物の調製について説明する。
【００８７】
【化１６】
2005325144.tif 000017
【００８８】
アセトニトリル４ｍｌ中のＬ−プロリル−Ｌ−ロイシルグリシンアミド（Ｓｉｇｍａ）１２０ｍｇ（０．４２３ｍｍｏｌ）のスラリーに、メタノール中の２５％ナトリウムメトキシド１００μｌを加えた。得られたゲルを均一な溶液が得られるまで数滴のメタノールで処理した。該溶液を微小Ｐａｒｒビンに移し、５分間窒素で発泡した後４０ｐｓｉのＮＯに７２時間曝露した。該反応混合物を減圧下で乾燥して、ｐＨ７．４の緩衝液中でのλmax（ε）250 nm（6.2 mM-1cm-1）の固体１８７ｍｇを得た。この固体は３７℃で７分の半減期で０．８６ｍｏｌのＮＯ（このｐＨで分解されるトリペプチド１ｍｏｌあたり）を放出した。
鎖長を増したオリゴペプチドおよびタンパク質も同様にＮＯによって誘導することができる。
【００８９】
実施例Ｖ
この実施例では、以下に模式的に示すように、ＮＯと容易に反応する求核中心を含まないタンパク質への求核中心の結合について説明する。
【００９０】
【化１７】
2005325144.tif 000018
【００９１】
ＣＨ2Ｃｌ2：アセトニトリル（１２０ｍｌ）中のＮ−アセチル−Ｌ−メチオニン４．７８ｇ（０．０２５ｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。この溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）５．３６ｇ（０．０２５ｍｏｌ）を加えた後、ジクロロメタン６ｍｌ中のＮ−ｔ−ブトキシカルボニルピペラジン３．９０ｇ（０．０２１ｍｏｌ）をすばやく加えた。アセトニトリル：テトラヒドロフラン（４：１）で展開したシリカゲルＴＬＣプレート上で反応を追跡し、ヨウ素あるいはニンヒドリンスプレーのいずれかを用いて可視化した。反応は２時間以内に完了した。該反応混合物に数滴の氷酢酸を加え、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣をエーテル中に溶解して濾過した。透明な濾液を希酸、次いで希塩基で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、さらに溶媒留去して、１−（ｔ−ブトキシカルボニル）−４−（Ｎ−アセチル−Ｌ−メチオニル）ピペラジンの、さらなる精製を要しない無色の油８．２ｇを得た：IR（film）3304, 3058, 2973, 2931, 2868, 1701, 1645, 1539, 1420, 1237, 1173 cm-1; NMR（CDCl3）δ 1.47 (s, 9H), 1.80 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.46 (m, 2H), 3.53 (m, 8H), 5.10 (M, 1H), 6.35 (b, 0.5H), 6.43 (b, 0.5H)。
【００９２】
ジクロロメタン６０ｍｌ中の１−（ｔ−ブトキシカルボニル）−４−（Ｎ−アセチル−Ｌ−メチオニル）ピペラジン８．６ｇ（０．０２４ｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸１０ｍｌを加え、該混合物を室温にて一晩攪拌した。該溶液を水で抽出し、得られた水性溶液を水酸化ナトリウムを用いてアルカリ性にした。該生成物をジクロロメタンで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥後濾過した。溶媒を留去して１−（Ｎ−アセチル−Ｌ−メチオニル）ピペラジン２．１ｇを油として得た：IR（film）3304, 3051, 2917, 2861, 1645, 1546, 1448, 1377 cm-1； NMR（CDCl3）δ 1.95 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.54 (m, 2H), 2.98 (m, 4H), 3.74 (m, 4H), 5.10 (m, 1H), 6.40 (b, 0.5H), 6.48 (b, 0.5H)。
【００９３】
メタノール１ｍｌ中の１−（Ｎ−アセチル−Ｌ−メチオニル）ピペラジン５１０ｍｇ（１．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、メタノール中の２５％ナトリウムメトキシド４２８μｌ（１．９７ｍｍｏｌ）を加えた。この系を脱気して４０ｐｓｉの酸化窒素を負荷した。該溶液をＮＯに１２０時間曝露した後、圧力を緩めて固体生成物を濾過にて集め、エーテルで洗浄後、乾燥して１−［４−（Ｎ−アセチル−Ｌ−メチオニル）ピペラジン−１−イル］−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼンナトリウム塩２７ｍｇを、UV λmax（ε）252 nm（12.0 mM-1cm-1）の白色固体として得た。該生成物はｐＨ７および２５℃にて６．９分の半減期で分解して試薬１ｍｏｌあたり１．７２ｍｏｌのＮＯを生成した。
【００９４】
実施例VI
この実施例では、以下に模式的に示すように、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質のＣ末端に、前もって形成しておいた求核窒素原子を含むＮＯＮＯエートの結合について説明する。
【００９５】
【化１８】
2005325144.tif 000019
【００９６】
メタノール６０ｍｌ中のエチル  １−ピペラジンカルボキシレート２０ｇ（０．１２６ｍｏｌ）の溶液をＰａｒｒビン中に置き、該溶液をメタノール中の２５％ナトリウムメトキシド２７．４ｍｌ（０．１２６ｍｏｌ）で処理した。この系を脱気し、４０ｐｓｉの酸化窒素を負荷して２５℃に４８時間保った。白色結晶状生成物を濾集し、冷メタノール、さらに多量のエーテルで洗浄した。該生成物を減圧乾燥して収量１４．５ｇ（４８％）の１−（４−カルベトキシピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼンナトリウム塩を得た：融点184-5℃; UV（0.01 M NaOH）λmax（ε）252 nm (10.4 mM-1cm-1); NMR（D2O）δ1.25 (t, 3H), 3.11 (m, 2H), 3.68 (m, 2H), 4.15 (q, 2H)。
元素分析 Ｃ6Ｈ13Ｎ4Ｏ4Ｎａ 計算値：C, 35.00%; H, 5.42%; N, 23.33%; Na, 9.58%。実測値：C, 34.87%; H, 5.53%; N, 23.26%; Na, 9.69% 。この化合物のｐＨ７および２５℃での半減期は５分であった。この測定は紫外線スペクトルにおける２５２ｎｍの発色団の消失に基づいた。
【００９７】
０．０１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１０ｍｌ中の１−（４−カルベトキシピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼンナトリウム塩１．３ｇ（５．４ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴中で冷却した。メタノール１０ｍｌ中の硫酸ジメチル２ｍｌの溶液を滴下しながら加えた。得られた溶液を０℃にて１時間攪拌した後、室温まで徐々に加温した。２４時間後、該溶液をロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣をジクロロメタンで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥して硫酸マグネシウム層を通して濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけた。ジクロロメタン：酢酸エチル（２：１）で溶出することにより、１−（４−カルベトキシピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼン６８３ｍｇ（５５％）が油として得られ、静置することにより結晶化した：融点 46℃; UV λmax（ε）240nm (8.4 mM-1cm-1); IR（film）2988, 2945, 2875, 1707, 1504, 1068 cm-1; NMRδ 3.38 (m, 4H), 3.67 (m, 4H), 4.03 (s, 3H), 4.16 (q, 2H); MS m／z(相対強度, %）, 232(M+, 3), 217 (16), 187 (10), 157 (100), 142 (5), 98 (4), 85 (27), 70 (26), 56 (94), 54 (19); Ｃ8Ｈ16Ｎ4Ｏ4の計算される正確な質量（M+）232.1171, 実測値 232.1172。元素分析 Ｃ8Ｈ16Ｎ4Ｏ4 計算値：C, 41.38%; H, 6.90%; N, 24.14%。実測値：C, 41.23%; H, 6.82%; N, 24.05%。
【００９８】
１−（４−カルベトキシピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼン１．８ｇ（０．００７８ｍｏｌ）と５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２０ｍｌの混合物を還流加熱した。定性的薄層クロマトグラフィーで調べると、４５分後には出発材料は該混合物中に残っていなかった。該溶液を室温まで冷却するようにし、残渣が粘稠になるまで溶媒留去し、該残渣を酢酸エチルで抽出、硫酸ナトリウムで乾燥、濾過した後溶媒留去した。生成物をシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけ、ジクロロメタン：アセトン（１：１）で溶出して１−（ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼン８２０ｍｇ（６６％）を淡黄色の油として得た：UV λmax（ε）234 nm (7.0 mM-1cm-1); NMR δ 3.03 (m, 4H), 3.38 (m, 4H), 4.06 (s, 3H); IR（film）3318, 2945, 2854, 1447, 1364, 1286, 1230, 1046, 1004 cm-1; MS m/z(相対強度, %), 160 (M+, 2), 145 (7), 143 (10), 115 (9), 85 (56), 58 (7), 56 (100); Ｃ5Ｈ12Ｎ4Ｏ2の計算される正確な質量（M+）160.0960, 実測値 160.0966。
【００９９】
ジクロロメタン：アセトニトリル（１：１）１０ｍｌ中のＮ−アセチル−Ｌ−メチオニン１６４ｍｇ（０．８５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）２０６ｍｇ（１ｍｍｏｌ）を加え、次いでジクロロメタン３ｍｌ中の１−（ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼン１３７ｍｇ（０．８５６ｍｍｏｌ）をすばやく導入した。該反応混合物を２５℃にて４時間攪拌した。氷酢酸を数滴加えて過剰のＤＣＣを分解した。該混合物を濾過し、溶媒留去した。残渣を酢酸エチルで抽出し、次いでそれを希塩酸で、その後希水酸化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、硫酸マグネシウム層を通して濾過し、減圧下で溶媒留去した。１−（４−［Ｎ−アセチル］−Ｌ−メチオニルピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼンの精製は、アセトニトリル：テトラヒドロフラン（４：１）を溶出液として用いてシリカゲル上で達成された：UV λmax（ε）230 nm (8.7 mM-1cm-1); NMR δ 2.02 (s, 3H), 2.07 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 3.46 (m, 4H), 3.83 (m, 4H), 4.03 (s, 3H), 5.15 (m, 1H), 6.28 (b, 0.5H), 6.35 (b, 0.5H), IR 3297, 2931, 2847, 1645, 1546, 1497, 1441, 1223 cm-1; MS m/z(相対強度, %), 333(M+, 4), 318 (2), 304 (3), 303 (16), 288 (12), 260 (11), 259 (100), 258 (9), 214 (78), 184 (37), 183 (10), 174 (5), 146 (26), 142 (56), 141 (5), 104 (63), 61 (60); Ｃ12Ｈ23Ｎ5Ｏ4Ｓの計算される正確な質量（M+）333.1470, 実測値 333.1471。
【０１００】
本発明には以下の態様が含まれる。
［１］  生体高分子および該生体高分子に結合した酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基とを含有する、生理学的条件下での酸化窒素放出が可能な高分子組成物。
［２］  該生体高分子が、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、および核酸からなる群より選択される［１］記載の高分子組成物。
［３］  該生体高分子が、組織、細胞、あるいは腫瘍特異的な抗体またはその断片、腫瘍細胞接着に好適な受容体−リガンド相互作用の認識配列を有するタンパク質、抗走化性剤およびホルモンからなる群より選択される［２］記載の高分子組成物。
［４］  該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【０１０１】
【化１９】
2005325144.tif 000020
【０１０２】
（式中、Ｘは有機または無機部位であり、Ｘ’はＸ、医薬的に許容しうる金属中心あるいは医薬的に許容しうるカチオンからなる群より選択される）であり、該Ｎ2Ｏ2-基がＸあるいはＸ’の少なくとも一方を介して生体高分子に結合している［１］記載の高分子組成物。
［５］  該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【０１０３】
【化２０】
2005325144.tif 000021
【０１０４】
〔式中、Ｊは有機または無機部位であり、Ｍ+xは医薬上許容されるカチオン（式中、ｘはカチオンの原子価である）であり、ａは少なくとも１の整数であり、ｂおよびｃは中性化合物を与える最も小さい整数である。）である［４］記載の高分子組成物。
［６］  Ｊが、炭素原子以外の原子を介して複合体の残りの部分の窒素に結合している［５］記載の方法。
［７］  該酸化窒素放出基がアラノシンあるいはドパスチンの塩以外の化合物である［５］記載の高分子組成物。
［８］  該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【０１０５】
【化２１】
2005325144.tif 000022
【０１０６】
（式中、ｂおよびｄは同一または異なって０または１であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は同一または異なって水素、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｘ、ｙおよびｚは同一または異なって２〜１２の整数である。）である［４］記載の高分子組成物。
［９］  該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【０１０７】
【化２２】
2005325144.tif 000023
【０１０８】
（式中、Ｂは
【０１０９】
【化２３】
2005325144.tif 000024
【０１１０】
であり、Ｒ6およびＲ7は同一または異なって水素、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｆは０〜１２の整数であり、ただしＢが置換されたピペラジン部位
【０１１１】
【化２４】
2005325144.tif 000025
【０１１２】
の場合、ｆは２〜１２の整数である。）である［４］記載の高分子組成物。
［１０］  該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【０１１３】
【化２５】
2005325144.tif 000026
【０１１４】
（式中、Ｒ8は水素、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、Ｒ9は水素またはＣ1−Ｃ12直鎖または分枝鎖アルキルであり、ｇは２〜６である。）である［４］記載の高分子組成物。
［１１］  該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【０１１５】
【化２６】
2005325144.tif 000027
【０１１６】
（式中、Ｒ1およびＲ2は独立してＣ1−Ｃ12直鎖または分枝鎖アルキル基およびベンジル基からなる群より選ばれ、あるいはＲ1およびＲ2が窒素原子と共に結合して、複素環基、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノまたはモルホリノ基を形成し、Ｍ+xは医薬上許容されるカチオンであり、ｘはカチオンの原子価である。）である［４］記載の高分子組成物。
［１２］  該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【０１１７】
【化２７】
2005325144.tif 000028
【０１１８】
（式中、Ｍは医薬上許容される金属、またはｘが少なくとも２の場合、異なる２種の医薬上許容される金属の混合物であり、Ｌは（Ｒ1Ｒ2Ｎ−Ｎ2Ｏ2）とは異なる配位子であり、少なくとも１つの金属に結合しており、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ有機部位であり、それらは同一または異なっていてよく、ｘは１〜１０の整数であり、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態を示し、１〜６の整数であり、ｙは１〜１８の整数であり、ただし、ｙが少なくとも２の場合、配位子Ｌは同一または異なっていてもよく、ｚは１〜２０の整数であり、Ｋは化合物を必要な程度まで中性にする医薬上許容される対イオンである。）である［４］記載の高分子組成物。
［１３］  該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【０１１９】
【化２８】
2005325144.tif 000029
【０１２０】
（式中、ＲはＣ2-8低級アルキル、フェニル、ベンジルまたはＣ3-8シクロアルキルであり、Ｒ基のいかなるものも１〜３個の置換基で置換されていてもよく、その置換基は同一または異なっていて、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1-8アルコキシ、−ＮＨ2、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、−ＣＨ（Ｏ）、−Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび−ＮＯ2からなる群より選ばれ、Ｘは医薬上許容されるカチオン、医薬上許容される金属中心、またはＣ1-8低級アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ3および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2からなる群より選ばれる医薬上許容される有機基であり、ｙは１〜３の整数であり、Ｘの原子価と一致する。）である［４］記載の高分子組成物。
［１４］  該酸化窒素放出Ｎ2Ｏ2-官能基が式：
【０１２１】
【化２９】
2005325144.tif 000030
【０１２２】
〔式中、Ｒ1およびＲ2は独立して、Ｃ1-12直鎖アルキル、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ1-12直鎖アルキル、ヒドロキシまたはハロゲン置換されたＣ2-12直鎖アルキル、Ｃ3-12分枝鎖アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ3-12分枝鎖アルキル、置換されていないか、またはヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、ハロゲンまたはベンジルで置換されているＣ3-12直鎖または分枝鎖オレフィンから選ばれるか、あるいはＲ1およびＲ2がそれらが結合している窒素原子と共に複素環基、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノまたはモルホリノ基を形成し、Ｒ3は、置換されていないか、またはヒドロキシ、ハロゲン、アシルオキシまたはアルコキシで置換されているＣ1-12直鎖およびＣ3-12分枝鎖アルキル、置換されていないか、またはハロゲン、アルコキシ、アシルオキシまたはヒドロキシで置換されているＣ2-12直鎖またはＣ3-12分枝鎖オレフィン、置換されていないかまたは置換されているＣ1-12アシル、スルホニルおよびカルボキサミドから選ばれる基、あるいはＲ3は式−（ＣＨ2）n−ＯＮ＝Ｎ（Ｏ）ＮＲ1Ｒ2（式中、ｎは２〜８の整数であり、Ｒ1およびＲ2は上記に定義した通り）であり、ただし、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3はヘテロ原子のαにハロゲンまたはヒドロキシ置換基を含まない。〕である［４］記載の高分子組成物。
［１５］  医薬上許容しうる担体と［１］〜［１２］のいずれかに記載の高分子組成物とを含有する医薬組成物。
［１６］  治療有効量の酸化窒素を放出するに十分な量で［１］〜［１２］のいずれかに記載の高分子組成物を哺乳類に投与することを含む、酸化窒素の投与が治療となる、哺乳類の生物学的障害を治療する方法。
【０１２３】
ここに挙げた刊行物、特許、および特許出願は、各個々の文書が言及によって組み込まれるために個々にそして具体的に述べられ、ここに完全に明らかにされたと同程度に、ここに言及することで組み入れられるものである。
本発明を、好ましい実施態様を強調して説明してきたが、当業者には好ましい実施態様が変更され得ることが自明であろう。本発明はここで特別に記載された以外の方法でも実施され得ることが意図される。従って、本発明は添付の請求の範囲の精神と範囲に包含されるすべての変形を含むものである。