(57)【要約】    【課題】  水系から、高効率かつ低コストにフェノール系化合物の除去する方法を提供することを目的とする。    【解決手段】    フェノール化合物を含む水系と、チロシナーゼと、ビーズ状キトサンを同時に接触させる工程を含む、水系からフェノール化合物を除去する方法。【選択図】    図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
フェノール系化合物を含む水系に、チロシナーゼを加えて前記フェノール系化合物をキノン化させ、このキノン化合物をビーズ状キトサンで吸着する工程を含む、水系からフェノール化合物を除去する方法。
【請求項２】
前記フェノール系化合物を含む水系に、前記チロシナーゼと前記キトサンを同時に加えることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記フェノール系化合物が、フェノール、ｐ−クレゾール、ｍ−クレゾール、アルキルフェノール、ハロゲン化フェノールおよびカテコールからなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記接触させる工程を、ｐＨ６．０〜７．０として行う、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記接触させる工程を、４０〜４５℃で行う、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記チロシナーゼの濃度を０．０２０〜０．０３０ｍｇ／ｃｍ3となるように加える、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記接触させる工程で、前記水系に過酸化水素を加える請求項１から６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
フェノール系化合物を含有する、水系の被処理液を反応槽に供給し、この反応層にチロシナーゼを供給するか、又は、チロシナーゼを支持する手段に前記被処理液を供給して、前記フェノール系化合物をキノン化合物に酸化させ、このキノン化合物を含む前記被処理液が在る前記反応槽にビーズ状のキトサンを供給するか、又はこの処理液をビーズ状のキトサンを支持する手段に供給して、前記被処理液から前記フェノール化合物を分離するシステム。
【請求項９】
被処理液のフェノール化合部を除去するために、ビーズ状に形成されたキトサン含有分離材。
【請求項１０】
請求項９に記載の分離材が容器内に充填された分離装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水系からフェノール系化合物を効率よく除去する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
フェノール及びその誘導体は、製油精製、化学薬品、繊維、染料、パルプ工場など幅広い工業分野からの排水に含まれ、直接的に、または分解中間体として間接的に環境中に放出され、土壌、河川・湖沼などを汚染する。その中でもアルキル置換体や塩素置換体は毒性が高く、生分解性も低いことから、活性汚泥などの微生物処理によって廃水からのこれら化合物の分解・除去が困難である。
【０００３】
これまでに、パルス放電処理、活性炭ろ過法、オゾン酸化と活性汚泥処理の併用、液膜法、緑藻・藍藻などの微細藻類などによるフェノール化合物の分解除去に関する報告がなされている。
【非特許文献１】Jimenez, M. et al.: Biochimica et Biophysica Acta 1297 (1996) 33-39
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、上記パルス放電処理等のフェノール化合物の分解除去方法は、いずれも設備が大型である、コストが高いなどの問題がある。これに対し、本発明者らは、フェノール系化合物をチロシナーゼによってキノン化合物に酸化させると、このキノン化合物をキトサンフィルムにより効果的に吸着除去できることを見出した。キトサンは、カニやエビの甲殻から精製するキチンを脱アセチル化して得られる安価な物質であり、コストも下げることが可能である。
【０００５】
しかし、工業廃水の十分な浄化のためには、さらに高効率なフェノール系化合物の除去方法が必要とされている。そこで、本発明は、フェノール系化合物を効率的に、かつ低コストで吸着除去する処理技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題に鑑みて鋭意研究を重ねた結果、フェノール系化合物をチロシナーゼによって、キノン化合物に酸化したのち、ビーズ状のキトサンを用いることによって非常に効率よく、このキノン化合物を吸着できることを見出した。また、通常チロシナーゼの基質とならないフェノール系化合物も、過酸化水素を加えることによってチロシナーゼによって酸化され、これによってキトサンビーズにより効率よく水系から除去することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
即ち、本発明は、
［１］フェノール系化合物を含む水系に、チロシナーゼを加えて前記フェノール系化合物をキノン化させ、このキノン化合物をビーズ状キトサンで吸着する工程を含む、水系からフェノール化合物を除去する方法；
［２］前記フェノール系化合物を含む水系に、前記チロシナーゼと前記キトサンを同時に加えることを特徴とする、上記［１］に記載の方法；
［３］前記フェノール系化合物が、フェノール、ｐ−クレゾール、ｍ−クレゾール、アルキルフェノール、ハロゲン化フェノールおよびカテコールからなる群から選択される、上記［１］または［２］に記載の方法
［４］前記接触させる工程を、ｐＨ６．０〜７．０として行う、上記［１］から［３］のいずれか１項に記載の方法；
［５］前記接触させる工程を、４０〜４５℃で行う、上記［１］から［４］のいずれか１項に記載の方法；
［６］前記チロシナーゼの濃度を０．０２０〜０．０３０ｍｇ／ｃｍ3となるように加える、上記［１］から［５］のいずれか１項に記載の方法；
［７］前記接触させる工程で、前記水系に過酸化水素を加える上記［１］から［６］のいずれか１項に記載の方法；
［８］フェノール系化合物を含有する、水系の被処理液を反応槽に供給し、この反応層にチロシナーゼを供給するか、又は、チロシナーゼを支持する手段に前記被処理液を供給して、前記フェノール系化合物をキノン化合物に酸化させ、このキノン化合物を含む前記被処理液が在る前記反応槽にビーズ状のキトサンを供給するか、又はこの処理液をビーズ状のキトサンを支持する手段に供給して、前記被処理液から前記フェノール化合物を分離するシステム；
［９］被処理液のフェノール化合部を除去するために、ビーズ状に形成されたキトサン含有分離材；
［１０］上記［９］に記載の分離材が容器内に充填された分離装置、に関する。
【０００８】
以下に、本明細書において記載する記号、用語等の意義、本発明の実施の形態等を示して、本発明を詳細に説明する。
【０００９】
本発明にかかる方法では、チロシナーゼ（ＥＣ１．１４．１８．１）を用いて、フェノール系化合物を酵素的に酸化する。チロシナーゼ（ＥＣ１．１４．１８．１）は、酸化還元酵素の一種であり、酸素存在下でジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニン（ＤＯＰＡ）をＤＯＰＡキノンに酸化することが知られるが、基質特異性が低く、ＤＯＰＡ以外に多くのフェノール化合物に対して酵素活性を示す。従って、複数種類のフェノール系化合物を含む水系に添加すれば、それらの化合物を同時に酸化することも可能であり、一般に酵素活性が高く、単位重量あたりのユニット数が大きいので、コストを下げることもできる。
【００１０】
なお、チロシナーゼに代えて、フェノール系化合物を基質として酸化する他の酵素を用いることもでき、例えば、カテコールオキシダーゼ、ラッカーゼ、ペルオキシダーゼ、ポリフェノールオキシダーゼなどが挙げられる。
【００１１】
ここで、キノン化合物とは、芳香族炭化水素中のベンゼン核の水素原子２個を酸素原子２個で置換した構造のジカルボニル化合物を意味する。
【００１２】
本発明にかかる方法では、フェノールの酵素的酸化により得られたキノン化合物がビーズ状のキトサンに吸着する。キトサンは、カニやエビなどの甲殻から単離されるキチンを脱アセチル化することに生成され、安価に入手することができる。
【００１３】
キノン化合物は、キトサンに含まれるアミノ基との反応性が高く、効率よくキトサンに吸着される。アミノ基がプロトン化（−ＮＨ2基→−ＮＨ3+基）していると、キノン化合物との反応効率が著しく低下することが知られるが、キトサン中のアミノ基はｐＫ値が高く、プロトン化が起こりにくい。また、キトサンは、ｐＨ６．５以上で水に不溶であり、吸着担体として好適である。キトサンは分子量が小さすぎると溶解性が高くなり、分子量が大きすぎると粘性が高く取り扱いにくいため、分子量１０4〜１０5程度のものを用いることが好ましい。
【００１４】
本発明にかかる方法には、特にビーズ状のキトサンが用いられる。これにより、キノン化合物と反応する表面積が増大するので、より好適にキノン化合物を吸着させることができる。本発明にかかる方法は、工業廃水の浄化に用いられることが期待されるが、かかる場合に高効率な吸着除去が非常に重要となる。ビーズ状のキトサンは、例えば、キトサンを酸性溶液に分散溶解後、凝固材と接触させてキトサンを再生することによって製造することができる。
【００１５】
なお、キトサンに代えて、キノン化合物を吸着する他のアミノ基を有する高分子化合物を用いることもでき、例えば、ポリアリルアミン、ポリビニルアミン、直鎖型ポリエチレンイミン、分岐型ポリエチレンイミンなどが挙げられる。
【００１６】
フェノール化合物を含む水系と、チロシナーゼおよびビーズ状キトサンとは、同時に接触させることが好ましい。チロシナーゼとフェノール化合物を混合して放置すると、フェノール化合物はキノン化合物に変化した後、さらに別の化合物へと変化し、キトサンと反応しない物質となってしまう。従って、キノン化合物に変化した直後にキトサンと反応させる必要があり、フェノール化合物とチロシナーゼとを接触させるのと同時に、この水系にビーズ状キトサンを接触させることが望ましい。
【００１７】
本発明にかかる方法で除去するフェノール化合物は、チロシナーゼの基質となりうるものである限り特に限定されない。例えば、フェノール、ｐ−クレゾール、ｍ−クレゾール、アルキルフェノール、ハロゲン化フェノール、カテコールなどが挙げられる。
【００１８】
本発明において、フェノール系化合物にチロシナーゼとビーズ状キトサンとを接触させる工程は、チロシナーゼの至適ｐＨ、および至適温度下、すなわちｐＨ５．０〜８．０、２０〜５０℃で行い、特にｐＨ６．０〜７．０、４０〜４５℃で行うと、酵素活性が最大となって好ましい。また、この際、チロシナーゼ濃度を０．０２０〜０．０３０ｍｇ／ｃｍ3とすることによって、最も好適に酸化反応を進めることが可能となる。
【００１９】
本発明にかかる方法は、また、チロシナーゼの添加と同時に過酸化水素を加えることを含む。例えば、４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール（４ＴＢＰ）は、通常チロシナーゼの基質とならないが、過酸化水素を添加することによって、チロシナーゼに酸化されることが知られる（非特許文献１）。従って、過酸化水素を加えることによって、４ＴＢＰ等もキトサンに吸着させることができ、本発明にかかる方法によって水系から除去することができる。過酸化水素は、添加量が多すぎると、キノン化合物をさらに別の物質に変化させ、キトサンによって吸着させることができなくなる。
【００２０】
また、本発明は、フェノール系化合物を含有する、水系の被処理液を反応槽に供給し、この反応層にチロシナーゼを供給するか、又は、チロシナーゼを支持する手段に前記被処理液を供給して、前記フェノール系化合物をキノン化合物に酸化させ、このキノン化合物を含む前記被処理液が在る前記反応槽にビーズ状のキトサンを供給するか、又はこの処理液をビーズ状のキトサンを支持する手段に供給して、前記被処理液から前記フェノール化合物を分離するシステム、被処理液のフェノール化合部を除去するために、ビーズ状に形成されたキトサン含有分離材および、この分離材が容器内に充填された分離装置も提供する。
【００２１】
かかるシステム、分離材および分離装置は、工業廃液等からのフェノール系化合物の吸着除去に供され、大規模な浄化処理に用いることができる。
【発明の効果】
【００２２】
本発明にかかる方法によれば、水系に含まれるフェノール化合物を、大型の設備を必要とせずに、低コストで効率よく除去することができる。本発明にかかる方法を用いて、工業廃水中に含まれるフェノール化合物を処理し、その排出を防止することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
酵素反応のｐＨ及び温度依存性(至適ｐＨと温度の決定)は初速度より評価した。結果を図１に示す。
【００２４】
45℃でpHを5〜8でチロシナーゼ緩衝溶液20cm3と基質(m-クレゾール、p-クレゾール)緩衝溶液20cm3を混合し(混合時の両溶液のpHは同じ)、酵素濃度が0.04mg/cm3、基質濃度が0.5mMとなるようにした。酵素濃度0.04mg/cm3、基質(m-クレゾール、p-クレゾール)、温度45℃でチロシナーゼはリン酸緩衝溶液pH4〜8(イオン強度0.1M)で酵素反応を示し、最も高い酵素反応を示したpHは、いずれの基質の場合も７となり、pH5〜7で高い活性が得られ、この範囲での使用が好ましい。
【００２５】
酵素濃度0.04mg/cm3で基質をp-クレゾールとして、pH6で酵素反応を行うと、60℃以下で酵素反応を示した(60℃では、熱による変性により酵素活性は短時間で失活する)。図２に示されるように、20〜50℃程度の範囲での使用が好ましく、酵素反応が最大となった45℃での使用が特に好ましい。
【００２６】
キトサンは和光純薬(株)製のキトサン１０００を用い、pH2〜3の塩酸にキトサン試料を溶解させ、濃度1g/100cm3とした。キトサンの分子量にも依るが、濃度3g/100cm3程度までは調製可能である。濃度1g/100cm3のキトサン溶液約４ｇを直径約３cmのシャーレに展開し、50℃で蒸発乾固させ、キトサンフィルムを作成した。キトサンフィルムをシャーレからはく離し、0.1〜1ＭのNaOH水溶液で洗浄し、溶解時にプロトン化したアミノ基を脱プロトン化させた。続いて純水で洗浄後、減圧乾燥した。
【００２７】
45℃でpHを５〜８で混合溶液の酵素濃度が0.04mg/cm3、基質(m-クレゾール、p-クレゾール)濃度が0.5mMとなるようにし、更に上述で作成したキトサンフィルムを加え、所定時間ごとに60分間溶液の波長300〜600nmでのスペクトルを測定した(チロシナーゼはo-クレゾールに対しては活性を示さない、ただし、過酸化水素を加えた際については現在実験を行ってないので、不詳)。また、同条件で酵素・基質混合溶液に10〜60分間(10分間隔)キトサンフィルムを浸漬させた。そのキトサンフィルムを純水で洗浄後減圧乾燥させ、波長300〜600nmでのスペクトルを測定した。
【００２８】
キトサンフィルムには、波長460nm付近にアミノ基にMichael's付加反応によって化学吸着したと考えられるピークが見られ、浸漬時間とともにそのピークは増大した。このピークの増大はキトサンフィルムによるキノン化合物の吸着を意味し、pH5〜8の範囲で見られた。pH5、6では混合溶液中でキトサンフィルム中のアミノ基の一部がプロトン化するため、キトサンフィルムが溶解または劣化するため、使用条件として好ましくない。また、pH8では酵素活性の低下によりキノン生成が少なくなるため、キトサンフィルムの吸着が下がる。従って、pH7前後での行うと、酵素反応によるキノン化合物の生成とキトサンフィルムによる吸着が首尾よく起こると言える。
【００２９】
図３にp-クレゾールでのpH７でのキトサンフィルム添加と無添加の混合溶液の波長400nmのピーク強度の反応時間変化を示す。
【００３０】
また、図４（ａ）にp-クレゾールでのpH７でのキトサンフィルムのスペクトル変化を、図４(b)にp-クレゾールでのpH５〜８でのキトサンフィルムの波長460nmでの吸光度の浸漬時間に対する変化を示す。図４（ａ）は、下から０分、１０分、２０分、３０分、４０分、５０分、６０分におけるスペクトルを示す。
【００３１】
45℃、pH７で基質をm-クレゾールまたはp-クレゾールとしてチロシナーゼと基質からなる混合溶液中の酵素濃度を0.005〜0.05mg/cm3となるようにして酵素濃度依存性を検討した。いずれの基質においても酵素濃度0.02mg/cm3以下で、比初速度(酵素1mg当たりの初速度)が一定となり、効率よく酵素反応を行うことができる。この濃度以上においても酵素反応は起こるが、比初速度は低下するため、その効率は低下する。
【００３２】
図５(a)にp-クレゾールでのpH７での酵素濃度依存性を、図５(b)にm-クレゾールでのpH７での酵素濃度依存性を波長400nmでの吸光度の反応時間に対する変化として測定した結果を示す。また図５（ｃ）に、p-クレゾールとm-クレゾールでのpH７での酵素濃度依存性を酵素濃度に対する比初速度の変化として測定した結果を示す。
【００３３】
また、キトサンフィルムの入った酵素溶液に基質溶液を加えて、キトサンフィルムのキノン吸着能に及ぼす酵素濃度依存性を評価した結果、いずれの濃度においてもキノン化合物の吸着が確認できたが、m-クレゾールでは0.03mg/cm3以上で、p-クレゾールでは0.02 mg/cm3以上で、キノン吸着を示す波長460nmでのピークの浸漬時間に対する上昇がほぼ類似したため、45℃、pH７、基質濃度0.5mMの条件でキノン吸着に適した酵素濃度をm-クレゾールでは0.03mg/cm3、p-クレゾールでは0.02mg/cm3とした。
【００３４】
図６（ａ）に、p-クレゾールでのpH７での酵素濃度依存性を、図６（ｂ）にm-クレゾールでのpH７での酵素濃度依存性を、それぞれキトサンフィルムの波長460nmでの吸光度の浸漬時間に対する変化として測定した結果を示す。
【００３５】
チロシナーゼは4-tert-ブチルフェノール(４ＴＢＰ)を基質とすると、酵素反応を示さないが、過酸化水素の存在下では酵素反応を示す。45℃、pH７、酵素濃度0.02mg/cm3、基質濃度0.5mMとして過酸化水素濃度を0.5〜2.0mMとしてキノン生成の経時変化を混合溶液のスペクトル測定から評価した結果、反応時間に対してキノン化合物の生成を示す400nmのピークは増大するが、それに併せて480nm付近に別の化合物を示すピークが現れた。このピークも反応時間とともに増大し、キノン化合物が更に溶液中で他の化合物へと変化したと考えられる。この480nm付近のピークの増大は過酸化水素濃度が高いほど顕著であり、過酸化水素濃度0.5mMではこのピークはほとんど出現しなかった。これはキノン化合物の別の化合物への変化が起きていないことを示し、キトサンフィルムによるキノン吸着において好ましい条件である。酵素濃度0.04及び0.06mg/cm3においても同様な結果が得られた。しかし、４ＴＢＰにおいてはキノン生成を示す波長400nmでのピーク強度はm-クレゾールやp-クレゾールに比べて低いことがわかった。
【００３６】
図７(a)〜(d)に、４ＴＢＰでの過酸化水素濃度依存性(スペクトルの時間変化)を、図８に４ＴＢＰでの過酸化水素濃度依存性を、波長400nmと480nmでの吸光度の反応時間に対する変化として測定した結果を示す。(a)は0.5mM、(b)2.0mMである。
【００３７】
45℃、pH７、酵素濃度0.02mg/cm3、基質濃度0.5mMとして過酸化水素濃度を0.5〜2.0mMの範囲で、キトサンのキノン吸着能を調べた結果、過酸化水素濃度1.0mM以下でそれ以上の濃度に比べて高いキノン吸着を示した。過酸化水素濃度が高いと、溶液中でキノン化合物が更に他の化合物に変化し、キトサンフィルムへの吸着が低下したことから、溶液中でのキノン化合物の存在がキトサンフィルムの吸着能の向上に重要であるといえる。
【００３８】
図９に、４ＴＢＰでの過酸化水素濃度依存性を、波長420nmでのキトサンフィルムの吸光度の浸漬時間に対する変化として測定した結果を示す。
【００３９】
上記の結果からチロシナーゼによるキノン生成とキトサンフィルムによるキノン吸着によって水溶液中のフェノール化合物の除去ができることが見いだせたので、更に高いキノン化合物の吸着を行うため、キトサンフィルムの代わりに市販のキトサンビーズを用いて同様の実験を行った。本研究で用いたキトサンビーズは、富士紡績(株)製のキトパールAL-01である。キトパールAL-01は水膨潤した状態で製品化されているため、pH７の緩衝溶液で外部溶液を洗浄、置換し、冷所に保存した。実験では所定重量のキトパールを添加することができないので、所定体積を加えて行った。使用したキトパールは、粒径分布70〜200μm、比表面積70〜100m2/gであり（市販品はこの一種のみで公称値）、1cm3当たりの乾燥キトパール量は、0.070g/cm3（実験値）、水に膨潤させたキトパール1g中に含まれる乾燥キトパールは0.075g、水に膨潤させたキトパール1g中の含水量は0.925g、つまり含水率92.5％（実験値）である。10μm〜数mmまでの粒径が使用可能である。
【００４０】
45℃、pH７、酵素濃度0.02mg/cm3、基質濃度0.5mMの条件で、キトパール0.2〜2.0cm3を加えたチロシナーゼ・p-クレゾール混合溶液の波長400nmでのピークを測定した。波長400nmでのピークは攪拌時間を長くすると、徐々に低下した。この傾向はキトパール添加量が多いほど顕著であり、キトサンフィルムを加えたときに比べて波長400nmでのピーク強度は著しく小さくなった。これはキトサンフィルムを浸漬するよりもキトパールを用いた方が、より効率よくキノン化合物を吸着できることを示し、キトパール添加量1.0cm3以上ではほぼ同様の結果が得られたので、最適添加量を1.0cm3とした。また、基質をm-クレゾールとした場合も同様にキトサンフィルムを浸漬するよりもキトパールを用いた方が、より効率よくキノン化合物を吸着できた。
【００４１】
図10に、p-クレゾールでのpH７でのキトパール添加量依存性を、波長400nmでの混合溶液の吸光度の攪拌時間に対する変化として測定した結果を示す。
【００４２】
更に、p-クレゾールを基質としてキトパール添加量を1.0cm3として、反応温度25と35℃で行うと、温度が高いほど、混合溶液の波長400nmでのピーク強度が低下したので、45℃でキトパールを用いて吸着させることが好ましいが、いずれの温度においても攪拌時間60分で、キトパールを添加した溶液の波長400nmでのピーク強度はキトパール不在な溶液の10分の１程度となった。また、p-クレゾールとm-クレゾールを基質とした場合、混合溶液中に60分間浸漬したキトパールは、こげ茶色に変色し、キノン化合物の吸着が確認できた。
【００４３】
酵素反応を起こすために過酸化水素を必要とする４ＴＢＰにおいても45℃、pH７、酵素濃度0.02mg/cm3、基質濃度0.5mM、過酸化水素濃度0.5mMで、キトパール添加量を1.0〜5.0cm3としてキトパールの吸着能を調べた結果、キトパールを添加した混合溶液の波長400cmでの吸光度は無添加の混合溶液に比べて低下し、キトパールへのキノン化合物の吸着を示した。また、60分間浸漬したキトパールは薄茶色を呈した。
【００４４】
図11に、４ＴＢＰでのpH７でのキトパール添加量依存性を、波長400nmでの混合溶液の吸光度の攪拌時間に対する変化として測定した結果を示す。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】酵素反応の至適ｐＨを求めた結果を示す。
【図２】酵素反応の至適温度を求めた結果を示す。
【図３】ｐ−クレゾールでのｐＨ７における、キトサンフィルム添加および無添加の混合溶液の波長４００ｎｍの吸光度の時間変化を示す。
【図４】（ａ）は、ｐ−クレゾールでのｐＨ７におけるキノン吸着キトサンフィルムのスペクトルの時間変化を、（ｂ）は、ｐ−クレゾールでのｐＨ５〜８におけるキノン吸着キトサンフィルムの波長４６０ｎｍでの吸光度の浸漬時間に対する変化を示す。
【図５】（ａ）は、ｐ−クレゾールでの酵素活性時の酵素濃度依存性を、（ｂ）は、ｍ−クレゾールでの酵素活性時の酵素濃度依存性（波長４００ｎｍでの吸光度の反応時間に対する変化）を示す。（ｃ）は、ｐ−クレゾールとｍ−クレゾールでの酵素濃度依存性（酵素濃度に対する比初速度の変化）を示す。
【図６】（ａ）は、ｐ−クレゾールでの吸着時の酵素濃度依存性を、（ｂ）は、ｍ−クレゾールでの吸着時の酵素濃度依存性（波長４６０ｎｍでのキトサンフィルムの吸光度の浸漬時間に対する変化）を示す。
【図７】（ａ）〜（ｄ）は、４ＴＢＰでの過酸化水素濃度依存性(スペクトルの時間変化)を示す。
【図８】（ａ）、（ｂ）は、４ＴＢＰでの過酸化水素濃度依存性（波長４００ｎｍと４８０ｎｍでの吸光度の反応時間に対する変化）を示す。
【図９】４ＴＢＰでの過酸化水素濃度依存性（波長４２０ｎｍでのキトサンフィルムの吸光度の浸漬時間に対する変化）を示す。
【図１０】ｐ−クレゾールでのキトパール添加量依存性（波長４００ｎｍでの混合溶液の吸光度の攪拌時間に対する変化）を示す。
【図１１】４ＴＢＰでのキトパール添加量依存性（波長４００ｎｍでの混合溶液の吸光度の攪拌時間に対する変化）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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