(57)【要約】【課題】            本発明は、優れた細胞賦活作用、美白作用、ヒアルロン酸産生促進作用、デコリン産生促進作用、抗酸化作用を有する有効成分を見出し、細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤、及び老化防止改善用皮膚外用剤として提供することを目的とする。【解決手段】        優れた細胞賦活作用、美白作用、ヒアルロン酸産生促進作用、デコリン産生促進作用、抗酸化作用を有するシノブゴケ科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）植物の抽出物を細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤として用いる。また、シノブゴケ科植物の抽出物を皮膚外用剤に配合し、老化防止改善用皮膚外用剤とする。特に、シノブゴケ科植物の抽出物として、シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）植物，ラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）植物の抽出物を用いることが望ましい。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シノブゴケ科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする細胞賦活剤。
【請求項２】
シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）植物もしくはラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする請求項１に記載の細胞賦活剤。
【請求項３】
シノブゴケ科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする美白剤。
【請求項４】
シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）植物もしくはラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする請求項３に記載の美白剤。
【請求項５】
シノブゴケ科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項６】
シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）植物もしくはラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする請求項５に記載のヒアルロン酸産生促進剤。
【請求項７】
シノブゴケ科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とするデコリン産生促進剤。
【請求項８】
シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）植物もしくはラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする請求項７に記載のデコリン産生促進剤。
【請求項９】
シノブゴケ科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項１０】
シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）植物もしくはラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする請求項９に記載の抗酸化剤。
【請求項１１】
シノブゴケ科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする老化防止改善用皮膚外用剤。
【請求項１２】
シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）植物もしくはラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有することを特徴とする請求項１１に記載の老化防止改善用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤、及び皮膚外用剤に関する。さらに詳しくは、シノブゴケ科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を含有する細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤、及び皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢や紫外線などによるシワ，シミ，皮膚の弾性低下といった老化症状の要因として、細胞機能低下、紫外線によるメラニン産生や色素沈着、ヒアルロン酸やデコリン等の真皮マトリックス成分の減少や変性、紫外線等による細胞の酸化傷害などが挙げられる。このような老化症状を防止・改善するために、様々な有効成分の検索及び配合検討が従来なされてきた。細胞賦活剤としては、ポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、美白剤としては、白鶴霊芝の水および／または有機溶媒抽出物（特許文献２参照）、ヒアルロン酸産生促進剤としては、アナアオサの抽出物（特許文献３参照）、デコリン産生促進剤としては、ペトロセリン酸（特許文献４参照）、抗酸化剤としては、サルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献５参照）が知られている。
【０００３】
なお、シノブゴケ科植物の抽出物を有効成分とする細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤、及び皮膚外用剤に関する先行技術は認められなかった。
【０００４】
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開２００３−８９６３０号公報
【特許文献３】特開平６−９４２２号公報
【特許文献４】特表２００２−５０６８００号公報
【特許文献５】特開平１０−１８２４１３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来用いられている細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤は、本質的な効果としては不十分な場合もあり、より優れた有効成分の開発が期待されていた。本発明は、このような従来の問題点に鑑みてなされたものであり、天然由来で安全性が高く、優れた細胞賦活作用、美白作用、ヒアルロン酸産生促進作用、デコリン産生促進作用、抗酸化作用を有する有効成分を見出し、老化防止・改善に有用な皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、老化防止・改善に有用な作用に関して、天然由来の種々の物質について検討を行った。その結果、シノブゴケ科植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物に優れた細胞賦活作用、美白作用、ヒアルロン酸産生促進作用、デコリン産生促進作用、抗酸化作用を見出し、さらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、シノブゴケ科植物の１種または２種以上の植物の抽出物を有効成分とする細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤、及び皮膚外用剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、優れた効果を有する細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤を提供することができる。また、これらを皮膚外用剤に配合することにより、シワ，タルミ，肌のハリ，シミ，クスミといった皮膚老化症状の防止・改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用の皮膚外用剤や食品等の組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の原料として用いられる植物は、シノブゴケ科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）の植物であればよい。シノブゴケ科植物としては、イワイトゴケ属（Ｈａｐｌｏｈｙｍｅｎｉｕｍ），キヌイトゴケ属（Ａｎｏｍｏｄｏｎ），コバノキヌゴケ属（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ），シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ），チャボスズゴケ属（Ｂｏｕｌａｙａ），ヌマシノブゴケ属（Ｈｅｌｏｄｉｕｍ），ハリゴケ属（Ｃｌａｏｐｏｄｉｕｍ），バンダイゴケ属（Ｒａｕｉｅｌｌａ），ヒナトラノオゴケ属（Ｈｙｌｏｃｏｍｉｏｐｓｉｓ），ホンシノブゴケ属（Ｂｒｙｏｎｏｇｕｃｈｉａ），ミヤベゴケ属（Ｍｉｙａｂｅａ），モミシノブゴケ属（Ａｂｉｅｔｉｎｅｌｌａ），ラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）など１９属余りが知られている。イワイトゴケ属の植物としては、イワイトゴケ（Ｈａｐｌｏｈｙｍｅｎｉｕｍ ｔｒｉｓｔｅ），イワイトゴケモドキ（Ｈａｐｌｏｈｙｍｅｎｉｕｍ ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ），コバノイトゴケ（Ｈａｐｌｏｈｙｍｅｎｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏ-ｔｒｉｓｔｅ），ナガスジイトゴケ（Ｈａｐｌｏｈｙｍｅｎｉｕｍ ｌｏｎｇｉｍｅｒｖｅ）などが知られている。キヌイトゴケ属の植物としては、エゾイトゴケ（Ａｎｏｍｏｄｏｎ ｒｕｇｅｌｌｉ），オオギボウシゴケモドキ（Ａｎｏｍｏｄｏｎ ｇｉｒａｌｄｉｉ），キスジキヌイトゴケ（Ａｎｏｍｏｄｏｎ ｖｉｔｉｃｕｌｏｓｕｓ），キヌイトゴケ（Ａｎｏｍｏｄｏｎ ｌｏｎｇｉｆｏｌｉｕｓ），ギボウシゴケモドキ（Ａｎｏｍｏｄｏｎ ｍｉｎｏｒ），コマノキヌイトゴケ（Ａｎｏｍｏｄｏｎ ｔｈｒａｕｓｔｕｓ），ミヤマギボウシゴケモドキ（Ａｎｏｍｏｄｏｎ ａｂｂｒｅｖｉａｔｕｓ）などが知られている。コバノキヌゴケ属の植物としては、コメバキヌゴケ（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ），ノミハニワゴケ（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍ）などが知られている。シノブゴケ属の植物としては、アオシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｇｌａｕｃｉｎｕｍ），エゾシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｒｅｃｏｇｎｉｔｕｍ），オオシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｔａｍａｒｉｓｃｉｎｕｍ），コバノエゾシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｄｅｌｉｃａｔｕｌｕｍ），チャボシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｂｉｐｉｎｎａｔｕｌｕｍ），アソシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｋａｎｅｄａｅ），ヒメシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｃｙｍｂｉｆｏｌｉｕｍ）などが知られている。チャボスズゴケ属の植物としては、チャボスズゴケ（Ｂｏｕｌａｙａ ｍｉｔｔｅｎｉｉ）などが知られている。ヌマシノブゴケ属の植物としては、カラフトシノブゴケ（Ｈｅｌｏｄｉｕｍ ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｅ），ヌマシノブゴケ（Ｈｅｌｏｄｉｕｍ ｐａｌｕｄｏｓｕｍ）などが知られている。ハリゴケ属の植物としては、ナガスジハリゴケ（Ｃｌａｏｐｏｄｉｕｍ ｎｅｒｖｏｓｕｍ），ハリゴケ（Ｃｌａｏｐｏｄｉｕｍ ａｃｉｃｕｌｕｍ），フトハリゴケ（Ｃｌａｏｐｏｄｉｕｍ ｐｅｌｌｕｃｉｎｅｒｖｅ），ホソハリゴケ（Ｃｌａｏｐｏｄｉｕｍ ｇｒａｃｉｌｌｉｍｕｍ），マキハハリゴケ（Ｃｌａｏｐｏｄｉｕｍ ａｓｓｕｒｇｅｎｓ），ミヤマハリゴケ（Ｃｌａｏｐｏｄｉｕｍ ｃｒｉｓｐｉｆｏｌｉｕｍ）などが知られている。バンダイゴケ属の植物としては、バンダイゴケ（Ｒａｕｉｅｌｌａ ｆｕｊｉｓａｎａ）などが知られている。ヒナトラノオゴケ属の植物としては、ヒナトラノオゴケ（Ｈｙｌｏｃｏｍｉｏｐｓｉｓ ｏｖｉｃａｒｐａ）などが知られている。ホンシノブゴケ属の植物としては、ホンシノブゴケ（Ｂｒｙｏｎｏｇｕｃｈｉａ ｍｏｌｋｅｎｂｏｅｒｉ）などが知られている。ミヤベゴケ属の植物としては、マルバミヤベゴケ（Ｍｉｙａｂｅａ ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉａ），ミヤベゴケ（Ｍｉｙａｂｅａ ｆｒｕｔｉｃｅｌｌａ）などが知られている。モミシノブゴケ属の植物としては、モミシノブゴケ（Ａｂｉｅｔｉｎｅｌｌａ ａｂｉｅｔｉｎａ）などが知られている。ラセンゴケ属の植物としては、ラセンゴケ（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ ｔｏｃｃｏａｅ）などが知られている。
【０００９】
本発明に用いられる原料となる植物は、シノブゴケ科植物であれば特に限定されないが、入手が比較的容易であることや有効性などの理由から、シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）植物，ラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）を好適に用いることが出来る。シノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）植物，ラセンゴケ属（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ）植物としては、チャボシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｂｉｐｉｎｎａｔｕｌｕｍ），アソシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｋａｎｅｄａｅ），ラセンゴケ（Ｈｅｒｐｅｔｉｎｅｕｒｏｎ ｔｏｃｃｏａｅ）を用いることが好ましく、チャボシノブゴケを用いることが有効性の点から特に好ましい。
【００１０】
これらシノブゴケ科植物を使用する際は、抽出物を用いるのが一般的である。抽出には、シノブゴケ科植物の胞子，胞子体，配偶体のいずれの部位を用いても構わないが、簡便に利用するには、胞子体と配偶体の全草を用いるとよい。抽出の際は、生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１１】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール，エタノール，プロパノール，イソプロパノール等の低級アルコール、１，３−ブチレングリコール，プロピレングリコール，ジプロピレングリコール，グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル，プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル，酢酸エチル等のエステル類、アセトン，エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水，リン酸緩衝液，リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素，エチレン，プロピレン，エタノール，メタノール，アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【００１２】
シノブゴケ科植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮，乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解したり、或いはこれらの生理作用を損なわない範囲で脱色，脱臭，脱塩等の精製処理を行ったり、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。シノブゴケ科植物の前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。
【００１３】
シノブゴケ科植物の抽出物は、優れた細胞賦活作用、美白作用、ヒアルロン酸産生促進作用、デコリン産生促進作用、抗酸化作用を有し、細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤として利用することができる。
【００１４】
シノブゴケ科植物の抽出物を有効成分とする細胞賦活剤は、種々の細胞に対して優れた賦活作用を発揮するが、特に真皮線維芽細胞に対して優れた効果を発揮する。
【００１５】
シノブゴケ科植物の抽出物を有効成分とする美白剤は、シミ・ソバカスといった色素沈着症状の改善に効果を発揮し、特にチロシナーゼ活性阻害に基づくメラニンの産生抑制に対して優れた効果を発揮する。
【００１６】
シノブゴケ科植物の抽出物を有効成分とするヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤は、真皮マトリックス成分の産生促進に優れた効果を発揮し、ヒアルロン酸やデコリンの産生促進に優れた効果を発揮する。
【００１７】
シノブゴケ科植物の抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、優れた抗酸化作用を発揮するが、特にフリーラジカル消去作用に優れた効果を発揮する。
【００１８】
また、シノブゴケ科植物の抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、皮膚老化症状の防止・改善に優れた効果を発揮する老化防止改善用の皮膚外用剤を得ることができる。さらに、シノブゴケ科植物の抽出物は、健康維持や栄養補給を目的とするような食品や飲料にも用いることもできる。
【００１９】
シノブゴケ科植物の抽出物を皮膚外用剤に配合する際の配合量は、皮膚外用剤の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して、０．０００１〜５０．０重量％が好ましく、より好ましくは、０．００１〜１０．０重量％である。
【００２０】
シノブゴケ科植物の抽出物を配合する皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば、ローションなどの可溶化系、クリームや乳液などの乳化系，カラミンローション等の分散系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填したエアゾール，軟膏剤，粉末，顆粒などの種々の剤型で提供することもできる。
【００２１】
なお、シノブゴケ科植物の抽出物を配合する皮膚外用剤には、シノブゴケ科植物の抽出物の他に、必要に応じて、通常医薬品，医薬部外品，皮膚化粧料，毛髪用化粧料及び洗浄料に配合される、油性成分，保湿剤，粉体，色素，乳化剤，可溶化剤，洗浄剤，紫外線吸収剤，増粘剤，薬剤，香料，樹脂，防菌防黴剤，アルコール類等を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の細胞賦活剤、美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、デコリン産生促進剤、抗酸化剤との併用も可能である。
【実施例】
【００２２】
以下に、シノブゴケ科植物の抽出物の製造例、各作用を評価するための試験、皮膚外用剤としての処方例、使用試験についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。
【００２３】
［製造例１］
シノブゴケ科植物の全草の乾燥粉砕物１ｋｇに５０重量％エタノール水溶液を１０リットル加え、室温で７日間浸漬した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、シノブゴケ科植物抽出物を得た。
【００２４】
［製造例２］
シノブゴケ科植物の全草の乾燥粉砕物１ｋｇに水を９リットル加え、９０℃にて６時間還流して抽出した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、シノブゴケ科植物抽出物を得た。
【００２５】
［製造例３］
シノブゴケ科植物の全草の乾燥粉砕物１ｋｇにメタノールを９リットル加え、室温で７日間浸漬した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、シノブゴケ科植物抽出物を得た。
【００２６】
［製造例４］
超臨界抽出装置にシノブゴケ科植物の全草を投入し、４０℃において１５ＭＰａの気圧下で二酸化炭素の超臨界流体を用いて抽出した。抽出物を回収し、シノブゴケ科植物抽出物を得た。
【００２７】
次に、シノブゴケ科植物抽出物の真皮線維芽細胞の賦活作用について示す。試料には、チャボシノブゴケより製造例１を用いて抽出したチャボシノブゴケ抽出物を用いた。
【００２８】
評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１％のウシ胎児血清を添加したものを用いた。２４時間培養後、任意の濃度の試料を添加した試験培地に交換し、さらに４８時間培養した。次いで３−(４,５−ジメチル−２−チアゾリル)−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を１００とした相対値にて表１に示す。なお、表中の*及び**は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を*で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を**で表したものである。
【００２９】
【表１】
2005060343.tif 000002
【００３０】
表１より明らかなように、チャボシノブゴケ抽出物を添加した培地では、有意な真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。特に、チャボシノブゴケ抽出物を０．２５〜０．５ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、ブランクと比較して、危険率１％未満で有意な真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。このことから、チャボシノブゴケ抽出物は、優れた真皮線維芽細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００３１】
次に、シノブゴケ科植物抽出物のメラニン産生抑制作用の評価を示す。試料には、チャボシノブゴケより製造例１を用いて抽出したチャボシノブゴケ抽出物を用いた。
【００３２】
評価は、以下の手順で行った。Ｂ１６マウスメラノーマＦ０ストレイン（Ｂ１６Ｆ０）細胞を３５ｍｍディッシュに１ディッシュあたり２０００個にて播種した。２４時間培養後、任意の濃度の試料を添加した５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）添加ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に交換した。７日間培養後、０．２５％トリプシンを用いて細胞を回収し、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。さらに、試料を添加した培地の代わりに、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を添加したものをブランクとし、同様に目視判定を行った。また、目視判定は、表２に示す通り、５段階評価によって行った。表３に判定の結果を示した。
【００３３】
【表２】
2005060343.tif 000003
【００３４】
【表３】
2005060343.tif 000004
【００３５】
表３より明らかなように、チャボシノブゴケ抽出物を１５．６〜１２５μｇ／ｍＬ添加した培地を用いた場合に、有意なメラニン産生抑制作用が認められた。特に、チャボシノブゴケ抽出物を６２．５〜１２５μｇ／ｍＬ添加した場合には、全く黒化は認められなかった。このことから、チャボシノブゴケ抽出物は、優れたメラニン産生抑制作用を有することが明らかとなった。
【００３６】
次に、シノブゴケ科植物抽出物のチロシナーゼ活性阻害作用の評価を示す。試料には、チャボシノブゴケより製造例１を用いて抽出したチャボシノブゴケ抽出物を用いた。
【００３７】
評価は、以下の手順で行った。正常ヒト表皮メラニン細胞を１ウェル当り３．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはクラボウ社製Ｍｅｄｉｕｍ１５４Ｓを用いた。２４時間後にＭｅｄｉｕｍ１５４Ｓによって各濃度に調整した試料液に交換し、さらに４８時間培養した。次に、１重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ含有リン酸緩衝液７５μLに交換し、細胞を完全に溶解させた。その５０μＬを粗酵素液とし、これに基質となる５０μＬの０．０５重量％Ｌ−ドーパ含有リン酸緩衝液を加え、３７℃で２時間静置した。基質添加直後と反応終了時の４０５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定し、生成したドーパメラニン量を測定した。同時に各試料におけるタンパク量を測定し、タンパク量当たりのドーパメラニン生成量を算出した。チロシナーゼ活性阻害作用として、試料無添加のブランクにおけるタンパク量あたりのドーパメラニン生成量を１００とした相対値にて表４に示した。なお、表中の*及び**は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を*で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を**で表したものである。
【００３８】
【表４】
2005060343.tif 000005
【００３９】
表４より明らかなように、チャボシノブゴケ抽出物を添加した培地を用いた場合に、有意なチロシナーゼ活性阻害作用が認められた。特に、チャボシノブゴケ抽出物を０．２５〜１．０ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、ブランクと比較して、危険率１％未満で有意なチロシナーゼ活性阻害作用が認められた。このことから、チャボシノブゴケ抽出物は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有することが明らかとなった。
【００４０】
次に、シノブゴケ科植物抽出物のヒアルロン酸産生促進作用の評価を示す。試料には、チャボシノブゴケより製造例１を用いて抽出したチャボシノブゴケ抽出物を用いた。
【００４１】
評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種し、任意の濃度の試料を添加した０．５重量％牛胎仔血清添加ダルベッコ修正基礎培地（ＤＭＥＭ）にて３７℃で５日間培養し、培養上清のヒアルロン酸量をＥｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）法により測定した。同時に線維芽細胞数を計測し、細胞当たりのヒアルロン酸産生量を算出して、試料を含有しないブランクの細胞当たりのヒアルロン酸産生量を１００とした相対値にて表５に示した。
【００４２】
【表５】
2005060343.tif 000006
【００４３】
表５より明らかなように、チャボシノブゴケ抽出物を７．８〜６２．５μｇ/ｍＬの添加した場合に、未添加の場合と比較して、有意なヒアルロン酸産生促進作用が認められた。特に、チャボシノブゴケ抽出物を３１．３〜６２．５μｇ/ｍＬ添加した場合には、危険率１％未満で有意なヒアルロン酸産生促進作用が認められた。このことから、チャボシノブゴケ抽出物は、優れたヒアルロン酸産生促進作用を有することが明らかとなった。
【００４４】
次に、シノブゴケ科植物抽出物のデコリン産生促進作用の評価を示す。試料には、チャボシノブゴケより製造例１を用いて抽出したチャボシノブゴケ抽出物を用いた。
【００４５】
評価は、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種し、試料を任意の濃度添加した１．０重量％牛胎仔血清添加ダルベッコ修正基礎培地（ＤＭＥＭ）にて３７℃で２４時間培養し、培養上清のデコリン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。同時に線維芽細胞数を計測し、細胞当たりのデコリン産生量を算出して、試料を含有しないブランクの細胞当たりのデコリン産生量を１００とした相対値にて表６に示した。
【００４６】
【表６】
2005060343.tif 000007
【００４７】
表６より明らかなように、チャボシノブゴケ抽出物を添加した場合に、未添加の場合と比較して、有意なデコリン産生促進作用が認められた。特に、チャボシノブゴケ抽出物を０．０５〜０．１ｍｇ/ｍＬ添加した場合には、危険率１％未満で有意なデコリン産生促進作用が認められた。このことから、チャボシノブゴケ抽出物は、優れたデコリン産生促進作用を有することが明らかとなった。
【００４８】
次に、シノブゴケ科植物抽出物の抗酸化作用について示す。試料には、チャボシノブゴケより製造例１を用いて抽出したチャボシノブゴケ抽出物を用いた。
【００４９】
評価は、以下の手順で行った。５０重量％エタノール水溶液にて任意の濃度に希釈したチャボシノブゴケ抽出物溶液を９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。次に、０．２ｍＭの濃度になるようにエタノールにて調製した１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）溶液を９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。攪拌しながら暗所に放置し、２４時間後に５１６ｎｍの吸光度を測定した。試料が無添加のブランクの吸光度を（Ａ）、試料を添加したときの吸光度を（Ｂ）としたとき、式（１）の値をラジカル消去率とした。評価結果を表７に示した。
式（１）  ｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）
【００５０】
【表７】
2005060343.tif 000008
【００５１】
表７より明らかなように、チャボシノブゴケ抽出物は抗酸化作用を有することが分かった。
【００５２】
続いて、本発明に係るシノブゴケ科植物抽出物を配合した皮膚外用剤の処方例を示す。
【００５３】
［処方例１］乳液
（１）スクワラン                                      １０．０（重量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン                      ４．０
（３）水素添加パーム核油                                ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                              ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）    １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン                        １．０
（７）グリセリン                                        ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー                          ０．１５
（10）精製水                                          ５３．８５
（11）アルギニン（１重量％水溶液）                    ２０．０
（12）チャボシノブゴケ抽出物［製造例１］                ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（11）と（12）を順次加え、均一に混合する。
【００５４】
［処方例２］化粧水
（１）エタノール                                      １５．０（重量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油    ０．３
（３）香料                                              ０．１
（４）精製水                                          ７８．３８
（５）クエン酸                                          ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム                                ０．１
（７）グリセリン                                        １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース                        ０．１
（９）チャボシノブゴケ抽出物［製造例３］                ５．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００５５】
［処方例３］クリーム
（１）スクワラン                                      １０．０（重量％）
（２）ステアリン酸                                      ２．０
（３）水素添加パーム核油                                ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                              ０．１
（５）セタノール                                        ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン                  ２．０
（７）グリセリン                                      １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（９）アルギニン（２０重量％水溶液）                  １５．０
（10）精製水                                          ４０．７
（11）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液）      １５．０
（12）チャボシノブゴケ抽出物［製造例１］                １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（11）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００５６】
［処方例４］美容液
（１）精製水                                          ２７．４５(重量％)
（２）グリセリン                                      １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル                              １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液）      １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム(１重量％水溶液)            １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル                      １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル            ３．０
（８）N-ラウロイル-L-グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル）          ２．０
（９）硬化パーム油                                      ２．０
（10）スクワラン（オリーブ由来）                        １．０
（11）ベヘニルアルコール                                ０．７５
（12）ミツロウ                                          １．０
（13）ホホバ油                                          １．０
（14）１，３−ブチレングリコール                      １０．０
（15）Ｌ−アルギニン（１０重量％水溶液）                ２．０
（16）チャボシノブゴケ抽出物［製造例１］                ５．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（14）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（15）を加える。さらに４０℃まで冷却し、（16）を加え、均一に混合する。
【００５７】
［処方例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー                          ０．５（重量％）
（２）精製水                                          ８６．７
（３）水酸化ナトリウム（１０重量％水溶液）              ０．５
（４）エタノール                                      １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（６）香料                                              ０．１
（７）チャボシノブゴケ抽出物［製造例４］                ２．０
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油    ０．１
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後，（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００５８】
［処方例６］クレンジング料
（１）スクワラン                                      ８１．０（重量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル    １５．０
（３）精製水                                            ３．０
（４）チャボシノブゴケ抽出物［製造例４］                １．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００５９】
［処方例７］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸                                    １６．０（重量％）
（２）ミリスチン酸                                    １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン                  ２．０
（４）グリセリン                                      ２０．０
（５）水酸化ナトリウム                                  ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                １．０
（７）精製水                                          ３６．５
（８）チャボシノブゴケ抽出物［製造例３］                １．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００６０】
［処方例８］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン                                      １０．０(重量％)
（２）セタノール                                        ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル      ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル                  １．０
（５）プロピレングリコール                            １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル                              １．３
（７）精製水                                          ６９．４
（８）酸化チタン                                        １．０
（９）ベンガラ                                          ０．１
（10）黄酸化鉄                                          ０．４
（11）香料                                              ０．１
（12）チャボシノブゴケ抽出物［製造例２］                １．２
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（10）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００６１】
［処方例９］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン                              ２．０(重量％)
（２）スクワラン                                        ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル                      ５．０
（４）セタノール                                        １．０
（５）ポリオキシエチレン(２０Ｅ．Ｏ．)
ソルビタンモノステアリン酸エステル              １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン                        ０．７
（７）１，３−ブチレングリコール                        ８．０
（８）キサンタンガム                                    ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（10）精製水                                          ５７．４
（11）酸化チタン                                        ９．０
（12）タルク                                            ７．４
（13）ベンガラ                                          ０．５
（14）黄酸化鉄                                          １．１
（15）黒酸化鉄                                          ０．１
（16）香料                                              ０．１
（17）チャボシノブゴケ抽出物［製造例４］                １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（10）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（11）〜（15）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（16）と（17）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００６２】
［処方例１０］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン                                  ３０．０(重量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス                      ２．０
（３）ワセリン                                          ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル                    ５．０
（５）塩化ナトリウム                                    １．３
（６）塩化カリウム                                      ０．１
（７）プロピレングリコール                              ３．０
（８）１，３−ブチレングリコール                        ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（10）チャボシノブゴケ抽出物［製造例１］                １．０
（11）精製水                                          ４７．４
（12）香料                                              ０．１
製法：（５）と（６）を（11）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（10）を（11）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００６３】
［処方例１１］パック
（１）精製水                                          ５８．９(重量％)
（２）ポリビニルアルコール                            １２．０
（３）エタノール                                      １７．０
（４）グリセリン                                        ５．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００）      ２．０
（６）チャボシノブゴケ抽出物［製造例２］                ５．０
（７）香料                                              ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００６４】
［処方例１２］入浴剤
（１）香料                                              ０．３(重量％)
（２）チャボシノブゴケ抽出物［製造例１］                １．０
（３）炭酸水素ナトリウム                              ５０．０
（４）硫酸ナトリウム                                  ４８．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００６５】
［処方例１３］ヘアーワックス
（１）ステアリン酸                                      ３．０(重量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス                      ２．０
（３）セチルアルコール                                  ３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン                        ２．０
（５）メチルポリシロキサン                              ５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体              １．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（８）１，３−ブチレングリコール                        ７．５
（９）アルギニン                                        ０．７
（10）精製水                                          ７３．６
（11）チャボシノブゴケ抽出物［製造例１］                ２．０
（12）香料                                              ０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（10）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００６６】
［処方例１４］ヘアートニック
（１）エタノール                                      ５０．０(重量％)
（２）精製水                                          ４８．９
（３）チャボシノブゴケ抽出物［製造例３］                １．０
（４）香料                                              ０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合，均一化する。
【００６７】
次に、シノブゴケ科植物抽出物を配合した処方を用いて使用試験を行い、シワ，タルミ，肌のハリ，シミ，クスミについて改善効果を評価した。その際、処方例１に示した乳液の処方に表８に記載するシノブゴケ科植物抽出物をそれぞれ配合し、実施例１〜５として使用試験を行った。また、シノブゴケ科植物抽出物を精製水に代替し、比較例１として同時に使用試験を行った。
【００６８】
【表８】
2005060343.tif 000009
【００６９】
各試料について、シワ，タルミ，肌のハリ，シミ，クスミといった症状が顕著に認められる４０〜６０才代の男女パネラー各２０名をそれぞれ一群とし、ブラインドにて２カ月間使用させ、使用前後の皮膚状態の変化を観察して評価した。皮膚症状の指標として、シワ，タルミ，肌のハリ，シミ，クスミについて、「改善」，「やや改善」，「変化なし」の三段階で評価し、表９に各評価を得たパネラー数にて示した。
【００７０】
【表９】
2005060343.tif 000010
【００７１】
表９より、シワ，タルミ，肌のハリ，シミ，クスミについて、シノブゴケ科植物抽出物を含有しない比較例使用群においては、６割以上のパネラーに改善は認められなかったが、シノブゴケ科植物抽出物を配合した実施例使用群においては、６割以上のパネラーに明確な改善が認められた。
【００７２】
以上のように、本発明の実施例においては、従来の比較例よりも、シワ，タルミ，肌のハリ，シミ，クスミの改善に優れた効果を有していた。このことから、シノブゴケ科植物抽出物を配合した皮膚外用剤は、皮膚老化症状の防止・改善に優れた効果を発揮することが明らかとなった。