(57)【要約】【課題】  蛋白質の溶解度を低下させる沈殿剤を予めゲル中に保持させることにより、より簡便な方法で蛋白質の結晶化操作を行うことが可能である蛋白質結晶化剤の提供。【解決手段】  蛋白質沈殿剤、不飽和単量体を含有してなる溶液をゲル化させることにより、該結晶化剤がゲル中に均一に保持されたことを特徴とする蛋白質結晶化剤。本発明の蛋白質結晶化剤は、特定の沈殿剤と不飽和単量体とを組み合わせることにより、透明ゲルを得ることができる。ゲルが透明であると、生成した蛋白質結晶の観測が極めて容易となり、光学的検出系による自動化もより容易となる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アクリルアミド、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、メタクリルジメチルアミノエチルメチルクロライド塩の群から選択される少なくとも１種のモノマーを含むゲル状物に塩化ナトリウムが保持されている蛋白質結晶化用ゲル。
【請求項２】
ジメチルアクリルアミドを含むゲル状物に2-メチル-2,4-ペンタンジオールが保持されている蛋白質結晶化用ゲル。
【請求項３】
２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸を含むゲル状物にリン酸ナトリウム/カリウム塩が保持されている蛋白質結晶化剤。
【請求項４】
メタクリルジメチルアミノエチルメチルクロライド塩を含むゲル状物に、硫酸アンモニウムが保持されている蛋白質結晶化用ゲル。
【請求項５】
アクリルアミドを含むゲル状物に、マロン酸ナトリウムが保持されている蛋白質結晶化用ゲル。
【請求項６】
ポリオキシエチレンモノアクリレートを含むゲル状物にポリエチレングリコール  6000が保持されている蛋白質結晶化用ゲル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛋白質含有試料から蛋白質の結晶を析出させる目的で使用する蛋白質結晶化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、蛋白質の構造を網羅的に解析し、それに基づいて生命現象の仕組みを探索しようとするいわゆる構造ゲノム科学と呼ばれる動きが活発化している。
【０００３】
蛋白質の立体構造解析を行うにはその良好な結晶が必要とされ、蒸気拡散法を始めとしてとして様々な結晶化方法が考案されているが、実験操作が煩雑である等依然として課題は多い。これら従来法に変わる新しい結晶化方法や装置の開発が行われている。例えば特許文献１では、沈殿剤や蛋白質をゲル中に含有させ、これらを積層することにより、溶液中で見られる対流を抑えてゲル中で結晶を成長させる方法が提案されている。また、これ以外にも、結晶化方法を簡略化するため、ゲル状物を利用しようとする試みがなされている。
【０００４】
さらには、結晶化条件の探索に際して、様々な沈殿化剤が提案されている。
【特許文献１】特開平６−３２１７００号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、ゲル状物を利用する場合、ゲル状物と沈殿剤の組み合わせによっては、ゲルが白濁したり、ゲル化反応が進行しなかったりという問題があった。
【０００６】
ゲルが白濁すれば、結晶化状態の有無を顕微鏡により観察することができず問題となる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上述した課題を解決するため、本発明者が鋭意検討した結果、蛋白質沈殿剤とゲル状物を構成する成分の組み合わせにより、ゲル化反応が完結し、さらには白濁等を生じないゲル状物を形成するのに重要であることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
即ち、本発明は、（１）アクリルアミド、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、メタクリルジメチルアミノエチルメチルクロライド塩の群から選択される少なくとも１種のモノマーを含むゲル状物に塩化ナトリウムが保持されている蛋白質結晶化用ゲル、（２）ジメチルアクリルアミドを含むゲル状物にＭＰＤが保持されている蛋白質結晶化用ゲル、（３）２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸を含むゲル状物にリン酸Na/Kが保持されている蛋白質結晶化剤、（４）メタクリルジメチルアミノエチルメチルクロライド塩を含むゲル状物に、硫酸アンモニウムが保持されている蛋白質結晶化用ゲル、（５）アクリルアミドを含むゲル状物に、マロン酸ナトリウムが保持されている蛋白質結晶化用ゲル、（６）ポリオキシエチレンモノアクリレートを含むゲル状物にPEG6kが保持されている蛋白質結晶化用ゲル、である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ゲル化反応が完結し、さらには白濁等を生じないゲル状物を形成することができ、蛋白質結晶化剤を保持した透明なゲル状物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明は、蛋白質結晶化剤、不飽和単量体を含む溶液をゲル化することにより、該蛋白質結晶化剤がゲル中に均一に分散、溶解されたことを特徴とする蛋白質結晶化用ゲルである。
【００１１】
蛋白質結晶化剤としては、蛋白質溶液の蛋白質の溶解度を下げることができるものであれば特に限定はない。例えば、塩類として、硫酸アンモニウム、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リチウムクロライド、マロン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸リチウム、硝酸ナトリウム、硫酸カドミウム、硫酸ナトリウム等が挙げられる。有機溶媒としては２−メチル−２，４−ペンタンジオール（以下、ＭＰＤとする）、エタノール、イソプロパノール、ジオキサン、メタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−プロパノール等が挙げられる。水溶性高分子化合物としては、ポリエチレングリコール（以下、ＰＥＧとする）、ポリエチレングリコールモノアルキルエーテル、ポリエチレンイミン等が挙げられる。
【００１２】
これらの沈殿剤は、単独もしくは２種類以上の組み合わせで使用することができる。これらの中で、特に、硫酸アンモニウム、塩化ナトリウム、リン酸カリウムナトリウム、リチウムクロライド、マロン酸ナトリウム、ＭＰＤ、ＰＥＧが好適である。
【００１３】
市販品として、Emerald BioStructures社製「WIZARD II」、Hampton Research社製「Crystal screen」、「Grid Screen」等を用いることができる。
沈殿剤の使用濃度は、塩類では0.1〜5.0mol/Lが好ましく、有機溶媒では1〜80体積％が好ましく、水溶性高分子化合物では１〜５０重量％が好ましい。
【００１４】
蛋白質の結晶化は特定のｐＨ領域で行うことが好ましく、ｐＨを維持するために緩衝液を使用しても良い。使用する緩衝液には特に限定はないが、例えば、クエン酸、２−（Ｎ−モリホリノ）エタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ−エタンスルホン酸、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）グリシン等を含有するものが挙げられ、単独もしくは２種類以上の混合物を、必要に応じて酸あるいはアルカリなどで中和し所定のpＨに調整する。pHは、3.0〜10.0の範囲が好ましく、4.0〜9.0の範囲がより好ましい。
本発明において、ゲル化剤として不飽和単量体が使用される。不飽和単量体は、水性媒体中で重合することによりゲル形成が可能なものであれば特に限定はないが、（メタ）アクリルアミド系モノマーや（メタ）アクリル系モノマーであることが好ましい。
【００１５】
（メタ）アクリルアミド系モノマーとしては、（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアクリルアミド等のＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ（メタ）アクリルアミド、（メタ）アクリルアミドメタンスルホン酸、（メタ）アクリルアミドエタンスルホン酸、２−（メタ）アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸等の（メタ）アクリルアミドアルキルスルホン酸、ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、ジメチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド等のジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリルアミド、ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミドメチルクロライド塩、ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミドメチルエチルクロライド塩、ジメチルアミノエチル（メタ）アクリルアミドメチルクロライド塩等のジアルキルアミノ（メタ）アクリルアミド４級アンモニウム塩が好適に用いられる。
【００１６】
また、（メタ）アクリル系モノマーとしては、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、４−ヒドロキシブチル（メタ）アクリレート、６−ヒドロキシヘキシル（メタ）アクリレート、ジエチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、トリエチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールモノ（メタ）アクリレート等の水酸基含有（メタ）アクリレート、ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート等のジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレート、ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレートメチルクロライド塩、ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートのエチルクロライド塩等のジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートの４級アンモニウム塩が好適に用いられる。
【００１７】
モノマー濃度は、蛋白質結晶化剤溶液１００質量％に対し、０．１〜５０質量％が好ましく、１〜１０質量％がより好ましい。
【００１８】
また、本発明で必要に応じて使用される上記のモノマーと共重合可能な架橋性モノマーとしては、２官能以上のラジカル重合性基を有する単量体ならば特に限定はないが、例えばＮ，Ｎ’−メチレンビス（メタ）アクリルアミド、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ジエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、トリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパンエチレンオキサイド変性トリ（メタ）アクリレート等が挙げられるが、特にＮ，Ｎ’−メチレンビス（メタ）アクリルアミド、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレートが好適である。架橋性モノマーの添加量は、（Ａ）群あるいは（Ｂ）群のモノマーに対し、０．０１〜１０質量部であり、好ましくは０．１〜５質量部である。
【００１９】
本発明の蛋白質結晶化剤は、特定の沈殿剤と特定の不飽和単量体とを組み合わせることにより、透明ゲルを得ることができる。ゲルが透明であると、生成した蛋白質結晶の観察が極めて容易となり、光学的検出系による自動化もより容易となる。
【００２０】
透明ゲルが得られる不飽和単量体及び蛋白質結晶化剤の組み合わせとしては、（１）アクリルアミド、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、メタクリルジメチルアミノエチルメチルクロライド塩の群から選択される少なくとも１種のモノマーと塩化ナトリウム、
（２）ジメチルアクリルアミドとＭＰＤ、
（３）２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸リとリン酸Na/K、（４）メタクリルジメチルアミノエチルメチルクロライド塩と硫酸アンモニウム、（５）アクリルアミドとマロン酸ナトリウム、
（６）ポリオキシエチレンモノアクリレートとPEG6k、
である。
【００２１】
本発明の蛋白質結晶化剤は、少なくとも沈殿剤、緩衝液、不飽和単量体を含有してなる水溶液を熱重合させるか、もしくは熱および／または光ラジカル重合開始剤存在下に重合させることによりゲル化させ、沈殿剤をゲル中に均一に保持させることにより調製することができる。ラジカル重合開始剤存在下に重合を行うのが好適である。水溶液中において好適に使用されるラジカル重合開始剤としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルハイドロパーオキサイド、過酸化水素、過硫酸アンモニウム、過硫酸カリウム等の過酸化物、２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）２塩酸塩、２，２’−アゾビス（２−アミジノブタン）２塩酸塩、２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］２塩酸塩等のアゾ系重合開始剤が挙げられる。これらのラジカル重合開始剤は、単独もしくは２種類以上の混合物として使用することができる。また、前記の過酸化物に第三級アミン、亜硫酸塩、第１鉄塩等の還元剤を組み合わせたレドックス系重合開始剤、さらには、レドックス系重合開始剤とアゾ系重合開始剤を組み合わせた併用重合開始剤を使用してもよい。
【００２２】
また、特定波長の光を与える光源下で、光ラジカル重合開始剤を用いて重合を行うこともできる。その際、使用される光ラジカル重合開始剤は、特定波長の範囲内の光照射により分解し、ラジカルを発生するものであれば特に限定はないが、好適に利用できるものとして、例えば、アシルホスフィンオキサイド、ベンゾイン、ベンゾインアルキルエーテル、ベンジル、ベンゾフェノン、アントラキノン等の通常光重合に使用される開始剤、その他に、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）塩酸塩、４，４’−アゾビス（４−シアノ吉草酸）ナトリウム塩、２，２’−アゾビス［２−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）プロピオンアミド］等のアゾ系重合開始剤が挙げられる。これらのうちから、利用する光波長に応じて、任意のものを１種類以上を選択し使用することができる。また、前記の特定波長とは、反応液中に含有される単量体自身による光吸収、ラジカル生成に利用される光量子エネルギーの二つの点を考慮すると、波長が２００〜６５０ｎｍの領域の光を用いることが望ましい。波長が２００〜６５０ｎｍの領域の光照射に利用可能な光源の代表例としては、高圧水銀ランプ、低圧水銀ランプ、メタルハライドランプ、蛍光ケミカルランプ、蛍光青色ランプ等が挙げられる。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例により本発明を詳細に説明する。緩衝液は以下のものを使用し、常法に従って調製した。
【００２４】
０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）、
０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）、
０．１Ｍ−ＭＥＳ（ｐＨ６．０）、
０．１Ｍ−ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）
０．１Ｍ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、
０．１Ｍ−Ｂｉｃｉｎｅ（ｐＨ９．０）
＜実施例１＞
沈殿剤である塩化ナトリウム０．４８ｇを１０ｍｌメスフラスコに秤量し、    ０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）で定容して１．２Ｍ−ＮａＣｌ水溶液（これをa液とする）を調製した。また、５０％アクリルアミド水溶液（三菱レイヨン製）９０ｇにＮ，Ｎ‘−メチレンビスアクリルアミド（以下、MBAAmと略す）５ｇ、脱イオン水５ｇを加えて溶解し、５０％モノマー溶液（これをｂ液とする）を調製した。更に、水溶性重合開始剤である２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］二塩酸塩（和光純薬工業製、ＶＡ−０４４）の１０％水溶液（これをｃ液とする）を調製した。２ｍｌのサンプルチューブに、ａ液を８４０μｌ、ｂ液を１６０μｌ注入して混合し、蛋白質結晶化剤水溶液（１．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更にｃ液を１０μｌ添加してよく混合した後、５５℃の温浴で３時間重合し、透明なハイドロゲルを得た。
【００２５】
前記の手順でハイドロゲルを形成したサンプルチューブに、４０ｍｇ／ｍｌの
リゾチーム水溶液１ｍｌを加え、２０℃で２４時間インキュベートしたところ、リゾチーム水溶液中にリゾチーム結晶が析出していた。尚、結晶生成は肉眼および実体顕微鏡で確認した。
【００２６】
＜実施例２＞
実施例１において、ａ液の濃度２．４Ｍに変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液（２．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００２７】
＜実施例３＞
実施例１において、ａ液の濃度３．６Ｍに変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液（３．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００２８】
＜実施例４＞
実施例１において、ａ液の濃度４．８Ｍに変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液（４．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００２９】
＜実施例５〜８＞
実施例１〜４において、緩衝液を０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３０】
＜実施例９〜１２＞
実施例１〜４において、緩衝液を０．１Ｍ−ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３１】
＜実施例１３〜１６＞
実施例１〜４において、緩衝液を０．１Ｍ−ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３２】
＜実施例１７〜２０＞
実施例１〜４において、緩衝液を０．１Ｍ−Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３３】
＜実施例２１〜２４＞
実施例１〜４において、緩衝液を０．１Ｍ−Ｂｉｃｉｎｅ緩衝液（ｐＨ９．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３４】
＜実施例２５＞
沈殿剤であるポリエチレングリコール（和光純薬工業製、ＰＥＧ６０００、重量平均分子量：６０００）０．５５ｇを１０ｍｌメスフラスコに秤量し、０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）で定容して５．５％−ＰＥＧ水溶液（これをｄ液とする）を調製した。また、ポリエチレングリコールモノアクリレート（日本油脂製ブレンマ−ＡＥ９０）９５ｇに、ポリエチレングリコールジアクリレート（新中村化学製ＮＫＥＳＴＥＲＡ−２００）を溶解したモノマー溶液（これをｅ液とする）を調製した。更に、水溶性重合開始剤である２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］二塩酸塩（和光純薬工業製、ＶＡ−０４４）の１０％水溶液（これをｃ液とする）を調製した。２ｍｌのサンプルチューブに、ａ液を９２０μｌ、ｂ液を８０μｌを注入して混合し、蛋白質結晶化剤水溶液（５％−ＰＥＧ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更にｃ液を１０μｌ添加してよく混合した後、５５℃の温浴で３時間重合し、透明なハイドロゲルを得た。以下、実施例１と同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３５】
＜実施例２６＞
実施例２５において、ｄ液の濃度を１１％に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液（１０％−ＰＥＧ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３６】
＜実施例２７＞
実施例２５において、ｄ液の濃度を２２％に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液（２０％−ＰＥＧ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３７】
＜実施例２８＞
実施例２５において、ｄ液の濃度を３３％に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液（３０％−ＰＥＧ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３８】
＜実施例２９〜３２＞
実施例２５〜２８において、緩衝液を０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００３９】
＜実施例３３〜３６＞
実施例２５〜２８において、緩衝液を０．１Ｍ−ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００４０】
＜実施例３７〜４０＞
実施例２５〜２８において、緩衝液を０．１Ｍ−ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００４１】
＜実施例４１〜４４＞
実施例２５〜２８において、緩衝液を０．１Ｍ−Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【００４２】
＜実施例４５〜４８＞
実施例２５〜２８において、緩衝液を０．１Ｍ−Ｂｉｃｉｎｅ緩衝液（ｐＨ９．０）に変更した以外は同様の手順で、結晶化剤水溶液を調製し、更に同様の手順で透明なハイドロゲルを得た。また、同様の方法でリゾチーム結晶の生成を確認した。結果を表―１に示す。
【表１】
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＜実施例４９＞
沈殿剤である塩化ナトリウム０．４８ｇを１０ｍｌメスフラスコに秤量し、  ０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）で定容して１．２Ｍ−ＮａＣｌ水溶液（これをa液とする）を調製した。
【００４３】
また、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸４７．５ｇにＮ，Ｎ‘−メチレンビスアクリルアミド（以下、MBAAmと略す）２．５ｇ、脱イオン水５０ｇを加えて溶解し、５０％モノマー溶液（これをｂ液とする）を調製した。更に、水溶性重合開始剤である２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］二塩酸塩（和光純薬工業製、ＶＡ−０４４）の１０％水溶液（これをｃ液とする）を調製した。２ｍｌのサンプルチューブに、ａ液を８４０μｌ、ｂ液を１６０μｌ注入して混合し、蛋白質結晶化剤水溶液（１．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更にｃ液を１０μｌ添加してよく混合した後、５５℃の温浴で３時間重合し、透明なハイドロゲルを得た。
【００４４】
＜実施例５０＞
沈殿剤である塩化ナトリウム０．４８ｇを１０ｍｌメスフラスコに秤量し、  ０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）で定容して１．２Ｍ−ＮａＣｌ水溶液（これをa液とする）を調製した。
【００４５】
また、８０％メタクリルジメチルアミノエチルメチルクロライド塩水溶液６２．５ｇにＮ，Ｎ‘−メチレンビスアクリルアミド（以下、MBAAmと略す）２．５ｇ、脱イオン水３５ｇを加えて溶解し、５０％モノマー溶液（これをｂ液とする）を調製した。更に、水溶性重合開始剤である２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］二塩酸塩（和光純薬工業製、ＶＡ−０４４）の１０％水溶液（これをｃ液とする）を調製した。２ｍｌのサンプルチューブに、ａ液を８４０μｌ、ｂ液を１６０μｌ注入して混合し、蛋白質結晶化剤水溶液（１．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更にｃ液を１０μｌ添加してよく混合した後、５５℃の温浴で３時間重合し、透明なハイドロゲルを得た。
【００４６】
＜実施例５１＞
沈殿剤で2-メチル-2,4-ペンタンジオール２ｇを１０ｍｌメスフラスコに秤量し、  ０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）で定容して２０％−2-メチル-2,4-ペンタンジオール水溶液（これをa液とする）を調製した。
【００４７】
また、ジメチルアクリルアミド４７．５ｇにＮ，Ｎ‘−メチレンビスアクリルアミド（以下、MBAAmと略す）２．５ｇ、脱イオン水５０ｇを加えて溶解し、５０％モノマー溶液（これをｂ液とする）を調製した。更に、水溶性重合開始剤である２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］二塩酸塩（和光純薬工業製、ＶＡ−０４４）の１０％水溶液（これをｃ液とする）を調製した。２ｍｌのサンプルチューブに、ａ液を８４０μｌ、ｂ液を１６０μｌ注入して混合し、蛋白質結晶化剤水溶液（１．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更にｃ液を１０μｌ添加してよく混合した後、５５℃の温浴で３時間重合し、透明なハイドロゲルを得た。
【００４８】
＜実施例５２＞
沈殿剤であるリン酸ナトリウム塩１．１７６ｇ、リン酸カリウム塩０．０３５ｇを１０ｍｌメスフラスコに秤量し、  ０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）で定容して１．０Ｍ−リン酸ナトリウム/カリウム塩水溶液（これをa液とする）を調製した。
【００４９】
また、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸４７．５ｇにＮ，Ｎ‘−メチレンビスアクリルアミド（以下、MBAAmと略す）２．５ｇ、脱イオン水５０ｇを加えて溶解し、５０％モノマー溶液（これをｂ液とする）を調製した。更に、水溶性重合開始剤である２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］二塩酸塩（和光純薬工業製、ＶＡ−０４４）の１０％水溶液（これをｃ液とする）を調製した。２ｍｌのサンプルチューブに、ａ液を８４０μｌ、ｂ液を１６０μｌ注入して混合し、蛋白質結晶化剤水溶液（１．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更にｃ液を１０μｌ添加してよく混合した後、５５℃の温浴で３時間重合し、透明なハイドロゲルを得た。
【００５０】
＜実施例５３＞
沈殿剤である硫酸アンモニウム３．１７ｇを１０ｍｌメスフラスコに秤量し、０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）で定容して２．４Ｍ−硫酸アンモニウム水溶液（これをa液とする）を調製した。
【００５１】
また、８０％メタクリルジメチルアミノエチルメチルクロライド塩水溶液６２．５ｇにＮ，Ｎ‘−メチレンビスアクリルアミド（以下、MBAAmと略す）２．５ｇ、脱イオン水３５ｇを加えて溶解し、５０％モノマー溶液（これをｂ液とする）を調製した。更に、水溶性重合開始剤である２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］二塩酸塩（和光純薬工業製、ＶＡ−０４４）の１０％水溶液（これをｃ液とする）を調製した。２ｍｌのサンプルチューブに、ａ液を８４０μｌ、ｂ液を１６０μｌ注入して混合し、蛋白質結晶化剤水溶液（１．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更にｃ液を１０μｌ添加してよく混合した後、５５℃の温浴で３時間重合し、透明なハイドロゲルを得た。
【００５２】
＜実施例５４＞
沈殿剤であるマロン酸１．０４ｇを１０ｍｌメスフラスコに秤量し、２０％−水酸化ナトリウム水溶液４ｇを加えて中和したのち、０．１Ｍ−クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）で定容して１．０Ｍ−マロン酸ナトリウム水溶液（これをa液とする）を調製した。
【００５３】
また、５０％アクリルアミド水溶液（三菱レイヨン製）９０ｇにＮ，Ｎ‘−メチレンビスアクリルアミド（以下、MBAAmと略す）５ｇ、脱イオン水５ｇを加えて溶解し、５０％モノマー溶液（これをｂ液とする）を調製した。更に、水溶性重合開始剤である２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］二塩酸塩（和光純薬工業製、ＶＡ−０４４）の１０％水溶液（これをｃ液とする）を調製した。２ｍｌのサンプルチューブに、ａ液を８４０μｌ、ｂ液を１６０μｌ注入して混合し、蛋白質結晶化剤水溶液（１．０Ｍ−ＮａＣｌ、ｐＨ４．０、モノマー濃度８％）を調製し、更にｃ液を１０μｌ添加してよく混合した後、５５℃の温浴で３時間重合し、透明なハイドロゲルを得た。