(57)【要約】【課題】IL-11含有凍結乾燥製剤の再溶解時白濁の懸念のない安定な凍結乾燥製剤を提供することにある。【解決手段】IL-11含有凍結乾燥製剤の種々の問題のうち特に再溶解時の白濁の問題、つまり再構成時の溶解性（濁度）に対しては、凍結乾燥製剤の調製液に非イオン性界面活性剤を添加することおよび／または糖類を添加すること見出した。そして、IL-11含有凍結乾燥製剤の再溶解時白濁の問題が解決されることと併せて、製剤の安定性に効果のあることを見出し、本発明を完成した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン１１及び緩衝剤を含むインターロイキン１１含有凍結乾燥製剤の製造工程において、インターロイキン１１の溶解性を改善する手段として以下から選択される少なくとも１を導入することを特徴とする凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
１）調製液に非イオン性界面活性剤を添加すること。
２）調製液に糖類を添加すること。
【請求項２】
非イオン性界面活性剤がポリオキシソルビタン脂肪酸エステルである請求項１に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
【請求項３】
非イオン性界面活性剤がポリソルベート80である請求項１又は２に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
【請求項４】
ポリソルベート80の濃度が調製時の溶液中約0.0001重量％乃至0.01重量％である請求項３に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
【請求項５】
糖類が精製白糖および／またはラクトースである請求項１に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
【請求項６】
緩衝剤がリン酸ナトリウムおよび／またはヒスチジンである請求項１乃至５に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれか1項に記載の方法を含むインターロイキン１１含有凍結乾燥製剤の製造方法。
【請求項８】
請求項７の製造方法によって調製されたインターロイキン１１含有凍結乾燥製剤。
【請求項９】
インターロイキン−１１、グリシン、緩衝剤、並びにポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル及び/又は精製白糖、ラクトースから選択される１種乃至２種の糖類を含有する非経口投与用凍結乾燥医薬組成物。
【請求項１０】
脂肪族アルコールのポリアルキレングリコールが、ポリソルベート80である請求項９記載の非経口投与用凍結乾燥医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン−１１含有凍結乾燥製剤の白濁防止方法及び再溶解時の白濁防止が達成されたインターロイキン−１１（以下IL-11と記す）含有凍結乾燥製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
生理活性蛋白質は、医薬品として様々の場で利用されており、各種インターフェロン、造血因子、TPA、ウロキナーゼ、各種CSF、各種インターロイキン（IL）類がある。これらが非経口的に投与される場合、製剤は投与時液剤化されるのが一般的である。生理活性蛋白質は保存安定性に乏しく、液状製剤化することは多々困難が存在している。一般的には、調製された製剤は凍結乾燥され、用時溶解液で液状化され非経口投与がなされる。
凍結乾燥製剤では、種々の安定化剤の検討がなされ、有用タンパク質と界面活性剤の併用（特許文献２）、IL-12と界面活性剤の混合（特許文献３）、IL-6への非還元糖の添加（特許文献４）、G-CSFへの各種糖類の添加（特許文献５）、人成長ホルモンへの水溶性複素環化合物の添加（特許文献６）等の報告がある。特許文献２、３、４は、それぞれに記載の蛋白質の活性低下回避を課題とするものであり、特許文献５、６は、不可逆的な凝集体生成の回避を課題とするものである。
【０００３】
生理活性蛋白質であるIL-11は、組換え遺伝子操作法により生産された蛋白質であり、種々の造血及び免疫機能を刺激する。Genetics Institute社（現Wyeth社）は、N末端のプロリン欠失体である組換えヒトIL-11（rhIL-11）からなる製剤「Neumega（製品名）」を開発し、「非骨髄性悪性腫瘍における骨髄防止化学療法後に見られる重度血小板減少症の予防及び血小板輸血の回避の向上」の適応で医療の現場に提供している。本製剤は、特許文献１に記載された凍結乾燥製剤であり、IL-11を製剤再溶解後の濃度として5ｍｇ／ｍｌ、リン酸ナトリウムを10ｍＭ（ｐＨ7.0）、グリシンを300ｍＭ含有する。
【０００４】
【特許文献１】国際公開WO95/28951号公報（対応米国特許6,270,757公報）
【特許文献２】特開2001-192343号公報
【特許文献３】特開2002-275197号公報
【特許文献４】特表平8-502722号公報
【特許文献５】特表平8-504784号公報
【特許文献６】特開平10-265404号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
以下に詳述するように本発明の課題は、IL-11含有凍結乾燥製剤の再溶解時の白濁防止方法、及び、再溶解時の白濁防止を起こさないIL-11を含有してなる安定な凍結乾燥製剤を提供することにある。
IL-11は水溶液中において中性付近のｐＨ領域で比較的安定であるため、従来、様々な意味で有利とされる注射用液状製剤の形で製剤化することが望ましい。しかし、温度に依存して加水分解するため液状製剤では実用上要求される期間の長期保存が困難であり、実際上、凍結乾燥製剤とせざるを得ない。凍結乾燥製剤とするため、IL-11溶液を−３０℃以下まで急速に冷却し、溶液の過冷却を破って凍結させ、その後、乾燥させる一般的な凍結乾燥方法では、再溶解時に一過的に白濁が観察された。
一般的に、生理活性蛋白質含有凍結乾燥製剤の中には、再溶解に際し、凍乾ケーキの一部に難溶化し白濁することが観察されるものがある。生理活性蛋白質の凍結乾燥製剤は臨床使用に際し、注射用水を用いて再溶解して調製するため、その際、異物の混入など、製剤の異常の有無を容易に確認できるよう、速やかに再溶解されることが必要である。従って、一過性であっても再溶解時の白濁を生じるような凍結乾燥製剤は臨床現場で扱いにくいものとされており、このような再溶解時の白濁を防止する方法が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は上記一過的な白濁等の課題解決のために種々検討を重ねた結果、IL-11含有凍結乾燥製剤の再溶解時の白濁の問題、つまり再構成時の溶解性（濁度）に対して，調製液に非イオン性界面活性剤を添加することおよび／または糖類を添加することによりIL-11含有凍結乾燥製剤の再溶解時白濁の問題が解決されること、溶解性が向上すること、製剤の安定性に効果があることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
つまり本発明は以下からなる。
１．インターロイキン１１及び緩衝剤を含むインターロイキン１１含有凍結乾燥製剤の製造工程において、インターロイキン１１の溶解性を改善する手段として以下から選択される少なくとも１を導入することを特徴とする凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
１）調製液に非イオン性界面活性剤を添加すること。
２）調製液に糖類を添加すること。
２．非イオン性界面活性剤がポリオキシソルビタン脂肪酸エステルである前記１に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
３．非イオン性界面活性剤がポリソルベート80である前記１又は２に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
４．ポリソルベート80の濃度が調製時の溶液中約0.0001重量％乃至0.01重量％である前記３に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
５．糖類が精製白糖および／またはラクトースである前記１に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
６．緩衝剤がリン酸ナトリウムおよび／またはヒスチジンである前記１乃至５に記載の凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法。
７．前記１乃至６のいずれか1に記載の方法を含むインターロイキン１１含有凍結乾燥製剤の製造方法。
８．前記７の製造方法によって調製されたインターロイキン１１含有凍結乾燥製剤。
９．インターロイキン−１１、グリシン、緩衝剤、並びにポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル及び/又は精製白糖、ラクトースから選択される１種乃至２種の糖類を含有する非経口投与用凍結乾燥医薬組成物。
１０．脂肪族アルコールのポリアルキレングリコールが、ポリソルベート80である前記９記載の非経口投与用凍結乾燥医薬組成物。
【０００８】
本発明は、少なくともIL-11及び緩衝剤を含むIL-11含有凍結乾燥製剤製造時の調製液に非イオン性界面活性剤を添加することおよび／または糖類を添加することを特徴とするIL-11含有凍結乾燥製剤及び非経口投与用凍結乾燥医薬組成物である。
また本発明におけるIL-11としては、天然由来あるいは遺伝子組換え技術等によって得られた改変体であってもよく、それらの修飾体（例えばポリエチレングリコールなどによる化学修飾体）であってもよい。またこれらは単量体として用いても、ホモまたはヘテロの多量体として用いてもよい。
【０００９】
本発明の最適な態様として選ばれるIL-11は、例えば米国特許第5,215,895号、米国特許第5,270,181号、米国特許第5,292,646号に記載の蛋白質が挙げられる。また組み換え遺伝子操作法により生産された蛋白質、IL-11を生産する細胞ソースから精製された蛋白質または化学的方法により合成された蛋白質または上記の組み合わせにより得られる蛋白質を包含し、特にＮ末端のプロリン欠失体である組換えヒトIL-11（rhIL-11）を、好適なものとして選択することができる。本発明の目的を達成しうるIL-11であれば他のものを選択することも可能である。
なお本明細書中で、IL-11とは、天然型IL-11のみならず、天然型IL-11の配列又は乃至数個のアミノ酸配列が置換、欠失及び／若しくは挿入された配列を含み、IL-11活性（造血作用）を示す蛋白質を意味する。
【００１０】
本発明でIL-11の凍結乾燥前調製時の濃度は、0.1乃至20ｍｇ／ｍｌの濃度に調整されることが好ましく、より最適には1乃至10ｍｇ／ｍｌ、さらに好ましくは3乃至8ｍｇ／ｍｌに調整される。所望により、各蛋白質の安定化剤或は／及び溶解補助剤を選択し、各目的効果の達成範囲で添加することも可能である。例えば、IL-11の場合、凍結乾燥前調製時の蛋白質濃度は0.1ｍｇ／ｍｌから20.0ｍｇ／ｍｌまでの範囲が好ましく、より好ましくは1ｍｇ／ｍｌから10ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約5ｍｇ／ｍｌである。溶解補助剤としてアミノ酸、好ましくはグリシンが添加され、その至適濃度は100ｍＭから400ｍＭまでの範囲が好ましく、より好ましくは150ｍＭから350ｍＭ、約300ｍＭが最も好ましい。
【００１１】
本発明で緩衝剤とは、水溶液のｐＨの安定剤を意味し、医薬製造の分野で一般的に使用されているものを選択することができる。
IL-11の製剤化の場合、リン酸ナトリウムを含むリン酸緩衝液を選択することも可能である。この場合には、本発明の目的達成のため、安定化剤の添加が必要である。また、他の緩衝剤として、ヒスチジン、トリス緩衝液、へぺス緩衝液等を選択することも可能である。リン酸ナトリウムとヒスチジンを組み合わせて用いることも可能である。
適当な緩衝剤の凍結乾燥前調製時の濃度は、5ｍＭから40ｍＭの範囲であり、より好ましくは7乃至30ｍＭ、特に好ましくは約10乃至20ｍＭである。IL-11を選択し、リン酸ナトリウムを使う場合、5ｍＭから40ｍＭの範囲であり10ｍＭが好ましく、ヒスチジンの場合は5ｍＭから40ｍＭの範囲であり約20ｍＭが好ましい。
【００１２】
本発明は、凍結乾燥製剤製造時の調製液に非イオン性界面活性剤を添加することおよび／または糖類を添加することを主要なる手段とする。
凍結乾燥は、薬物溶液充填品を凍結乾燥庫内に入庫し、棚の上に静置する。次に、凍結乾燥庫の棚を−３０℃以下に冷却し充填品を凍結させる。凍結後、凍結乾燥庫内を減圧し、棚温を充填品が融解しない温度まで上昇させて水分を昇華させて一次乾燥を行う。その後、棚温を上昇させて付着水を除去することにより二次乾燥を行う。
このような、凍結乾燥製剤を製造するために本発明では以下のような手技から選ばれる手段を具体的に導入することができる。
１）調製液に非イオン性界面活性剤を添加すること。
２）調製液に糖類を添加すること。
３）緩衝剤を結晶化させること。
４）凍結乾燥処理前に−２０℃乃至０℃の温度条件化で前処理を施すこと。
以上から選択される少なくとも１を導入することは、凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法を提供する。
【００１３】
本発明で調製液に非イオン性界面活性剤を添加することとは、IL-11の凍結乾燥処理前の調製に際し使用する水溶液（調製液）に非イオン性界面活性剤を添加することを意味する。
本発明に用いられる非イオン性界面活性剤には、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル及びポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルなどイオン性を示さない界面活性剤を選択することができる。好ましくはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルを選択することが出来、より好ましくは、ポリソルベート80、ポリソルベート20であり、さらに好ましくはポリソルベート80であり、最も好ましくは植物由来のポリソルベート80である。本発明の非イオン性界面活性剤は、1種または2種以上を組合わせて配合することもできる。
【００１４】
本発明における、非イオン性界面活性剤の濃度は、溶液中約0.0001重量％ 乃至 0.01重量％の範囲が好ましく、さらに好ましくは0.0005 乃至 0.001重量％である。かかる濃度が0.0001重量％より薄い場合には、凍乾ケーキの再溶解時に白濁を生じることが懸念される。また0.01重量％より高い場合は、非イオン性界面活性剤中の不純物あるいは変化体（劣化物）による蛋白質の特異的な酸化促進に起因した製剤中の酸化体増加が懸念される。従って本発明における非イオン性界面活性剤の濃度は、例えばIL-11の酸化体の増加が懸念されない濃度を選択することによって決定することが可能である。なお、本発明の非イオン性界面活性剤は、凍乾ケーキの再溶解性を改善する効果も持つ。
【００１５】
本発明で調製液に糖類を添加することとは、IL-11の凍結乾燥処理前の調製に際し使用する水溶液（調製液）に糖類を添加することを意味する。かかる糖類としては、具体的にはグルコース、キシロース、ガラクトース、フラクトース等の単糖類、ラクトース、マルトース、精製白糖、ショ糖等の二糖類、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、イノシトール等の糖アルコールなどが挙げられる。好ましくは、精製白糖、ラクトースである。本発明の糖類は、１種または２種以上を組合わせて配合することもできる。なお、本発明の糖類は、IL-11を含む製剤の安定性の改善効果及び再溶解時の凍乾ケーキの崩壊性改善の機能も有する。
【００１６】
本発明において、添加する糖類の濃度は、0.1 乃至 50重量％が好ましく、0.5 乃至 5重量％がさらに好ましい。かかる濃度が0.1 重量％より薄い場合には、蛋白質の力価低下および類縁物質増加が懸念される。また、50重量％より濃い場合には、糖類等の析出が懸念される。  
IL-11との組み合わせにおいて、グリシン、緩衝剤、並びに非イオン性界面活性剤及び／又は糖類を選択することで、本発明の目的効果を達成することが可能となり、緩衝剤としてリン酸緩衝剤、好ましくはリン酸ナトリウム、非イオン性界面活性剤としてポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（より好ましくは、ポリソルベート80、ポリソルベート20であり、さらに好ましくはポリソルベート80であり、最も好ましくは植物由来のポリソルベート80）、並びに糖類として精製白糖および／又はラクトースを選択することで更なる効果を達成することが可能である。
【００１７】
本発明は以上のような手技を選択することで、凍結乾燥処理時におけるIL-11の表面が疎水的となることを回避する手段を提供する。また、本発明以外にも、凍結乾燥処理時におけるIL-11の表面が疎水的となることを回避する手段として、凍結乾燥条件を制御する方法があり、具体的には１）緩衝剤を結晶化させること、または２）凍結乾燥処理前に−２０℃乃至０℃の温度条件下で前処理を施すこととがとして挙げられる。無論、これらの２つ以上を同時に採用し、適用することも可能である。
【００１８】
かくして凍結乾燥製剤の再溶解時白濁防止方法の手段を導入して製造される非経口用医薬製剤は、通常製薬的に許容される剤形であれば特に制限されない。なお、凍結乾燥製剤の製造時の凍結乾燥条件は、前処理条件に関係する条件を除いて自体公知の条件を適宜設定することができる。
【００１９】
本発明のIL-11凍結乾燥製剤の製造法の一例は以下の通りである。高濃度で蛋白質を含有する水溶液と、グリシン、非イオン性界面活性剤および／または糖類などを最終の所望濃度になるように混合・溶解した希釈用緩衝液を混合することにより液を調製する。調製した液を容器に充填し、−３０℃以下で凍結させる。その後、減圧して乾燥させることにより、本発明の凍結乾燥製剤を調製することができる。
【００２０】
本発明のIL-11含有凍結乾燥製剤の非経口用医薬組成物には、通常非経口用医薬組成物に添加される医薬品添加物（例えば、溶解補助剤、保存剤、安定剤、乳化剤、無痛化剤、等張化剤、緩衝剤、賦形剤、着色剤、増粘剤）を配合することもできる。例えば、溶解補助剤としては、Ｌ−アルギニン、シクロデキストリン類等が挙げられる。保存剤としては、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸メチル等が挙げられる。乳化剤としては、レシチン等が挙げられる。無痛化剤としては、ベンジルアルコール、クロロブタノール等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム等が挙げられる。賦形剤は、本発明の糖類としても使用されるマルトース等が挙げられる。増粘剤としては、ヒアルロン酸等が挙げられる。
【発明の効果】
【００２１】
本発明では、凍結乾燥製剤の再溶解に際し良好な再溶解性を有するIL-11含有凍結乾燥製剤を提供し、IL-11含有凍結乾燥製剤の臨床現場における利便性の向上を達成した。本発明のIL-11含有凍結乾燥製剤は、溶液状態あるいは凍結乾燥状態において、優れた安定性を示す。特に、凍結乾燥状態においては、室温保存が可能であり、さらに凍結乾燥製剤は優れた再溶解性及び再溶解時の白濁防止効果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下で本発明を実施例、参考例、実験例等で説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２３】
以下実施例で用いた試験方法について記載する。なお濁度の測定には試験方法１を用いた。
［試験方法１］ 吸光度測定による再溶解液の濁度評価
再溶解液の濁度評価として、IL-11を5 mg含む凍結乾燥製剤に、注射用水(1.2 mL)を注入し、3, 5, 7分経過後の再溶解液のOD650 nmにおける吸光度を測定する。なお、吸光度測定による溶液の濁度評価方法に関しては、以下に記す２報を参考にした。
（1） 医薬品研究 26(4) 223-230 (1955)「医薬品の溶状試験における濁度評価方法に関する検討」
（2） J. Pharm. Sci. Tech., 48(2) 64-70 (1994)「A turbidimetric method to determine visual appearance of protein solutions」
［試験方法２］ SDS-PAGE（銀染色）による類縁物質の確認
SDS-PAGE（銀染色）による類縁物質の確認として、共有結合による二量体および分解物を測定対象とする。ゲルは10 乃至 20 ％のアクリルアミド濃度勾配を有するポリアクリルアミドゲル（ラージゲルフォーマット）を用いる。各レーンには試料50 μｇを添加し、45 mA定電流下泳動を行う。また染色には銀染色キット（2D-銀染色試薬・II「第一」、第一化学薬品製）を用い、添付説明書に従い染色を行う。なお、評価については目視での確認による定性的な評価のみ行う。
【００２４】
［試験方法３］ 高速液体クロマトグラフ法による類縁物質量の定量 (RP-HPLC)
高速液体クロマトグラフ法による類縁物質量の定量として、分解物、Met122酸化体および共有結合による多量体の変化体を測定対象とする。IL-11を0.65 mg含む溶液の100 μＬにつき、次の条件で液体クロマトグラフ法により試験を行う。ピーク面積を自動積分法によりIL-11以外のピーク面積の面積百分率を測定する。
検出器：紫外吸光光度計
カラム：内径約4.6 mm、長さ約10 cmのステンレス管に10 μｍの液体クロマトグラフ用スチレン-ジビニルベンゼン共重合体を充填。
カラム温度：２５℃付近の一定温度。
移動相Ａ：トリフルオロ酢酸1.0 gに水を加えて1000 mLとした溶液。
移動相Ｂ：トリフルオロ酢酸1.0 gに液体クロマトグラフ用アセトニトリル800 mLおよび水を加えて1000 mLとした溶液。
移動相の送液： 移動相Ａおよび移動相Ｂの混合比を次のように変えて濃度勾配制御。
【００２５】
【表１】
2005060377.tif 000002
流量：毎分0.5 mL
【００２６】
[試験方法４］ 高速液体クロマトグラフ法による多量体量の定量 (SE-HPLC)
多量体量の定量として、非共有結合および共有結合による多量体を測定対象とする。IL-11を0.6 mg含む溶液の50 μＬにつき、次の条件で液体クロマトグラフ法により試験を行う。ピーク面積を自動積分法によりIL-11より保持時間の小さいピーク面積の面積百分率を測定する。
検出器：紫外吸光光度計
カラム：内径約7.8 mm、長さ約30 cmのステンレス管に5 μｍの液体クロマトグラフ用多孔質シリカゲルを充填。
カラム温度：４℃付近の一定温度。
移動相：グリシン7.5 mg、塩化ナトリウム29.2 g、2-モルホリノエタンスルホン酸9.75 gを水750 mLに溶かし、水酸化ナトリウム試液を加えてpHを6.0に調整し、水を加えて1000 mLとした溶液。
流量：IL-11の保持時間が約9分になるように調整。
【００２７】
安定剤として非イオン性界面活性剤、糖類の添加効果を実施例１乃至９、比較例１及び２の製剤を調製して確認した。
【実施例１】
【００２８】
IL-11濃度5 mg/mL、リン酸ナトリウム緩衝液濃度10 mM、グリシン濃度300 mMを基本として、表２に記載する糖類を添加した試料溶液を調製した。
【実施例２】
【００２９】
表２に記載する糖類以外は実施例１と同様にして、試料溶液を調整した。
【実施例３】
【００３０】
表２に記載する糖類以外は実施例１と同様にして、試料溶液を調整した。
【００３１】
（比較例１）
糖類を添加しない以外は実施例１と同様にして、試料溶液を調整した。
【表２】
2005060377.tif 000003
【００３２】
実施例１〜３及び比較例１の試料溶液を無菌濾過後、無菌環境下で1 mLずつ予め滅菌処理したバイアル瓶に充填し、凍結乾燥後、打栓閉塞を行い、本発明製剤を得た。本発明製剤および比較製剤を５℃および４０℃で保存し、安定性について比較検討した。試験結果を表２に示す。表２からも明らかなように、比較例の糖無添加の製剤では、特に高温（４０℃）条件下、多量体量の増加ならびに力価残存率の低下が顕著に認められたのに対し、実施例１乃至３の糖添加の製剤では、多量体量の増加傾向および力価残存率の低下傾向について、防止効果が認められた。特に、実施例３の精製白糖を添加した製剤では、何れの保存条件においても、多量体量および力価残存率の明確な変動は認められなかった。したがって、本発明製剤は、安定性が非常に高い製剤であることが言える。
【実施例４】
【００３３】
IL-11濃度5 mg/mL、リン酸ナトリウム緩衝液濃度10 mM、グリシン濃度300 mMを基本として、表３に記載する精製白糖およびポリソルベート80の添加量を変動させた試料溶液を調製した。
【実施例５】
【００３４】
表３に記載する精製白糖およびポリソルベート80の添加量を変動させた以外は実施例４と同様にして、試料溶液を調整した。
【実施例６】
【００３５】
表３に記載する精製白糖およびポリソルベート80の添加量を変動させた以外は実施例４と同様にして、試料溶液を調整した。
【実施例７】
【００３６】
表３に記載する精製白糖およびポリソルベート80の添加量を変動させた以外は実施例４と同様にして、試料溶液を調整した。
【００３７】
（比較例２）
精製白糖およびポリソルベート80を添加しなかった以外は実施例４と同様にして、試料溶液を調整した。
【表３】
2005060377.tif 000004
---：測定せず
【００３８】
実施例４〜７及び比較例２の試料溶液を無菌濾過後、無菌環境下で1 mLずつ予め滅菌処理したバイアル瓶に充填し、凍結乾燥後、打栓閉塞を行い、本発明製剤を得た。本発明製剤および比較製剤を４０℃で保存し、安定性について比較検討した。試験結果を表３ならびに図１〜図３に示す。分析試料は50 μｇ/Laneである。表３から明らかなように、比較例の精製白糖、ポリソルベート80無添加の製剤（比較例２）では、高温（４０℃）条件下、類縁物質および多量体が増加しているのに対し本発明の精製白糖含有製剤（実施例４乃至６）では類縁物質量多量体量とも増加は認められなかった。図１〜図３からも比較例では共有結合型二量体（SDS-Stable Dimer）の顕著な増加および低分子量分解物の増加が認められたが本発明製剤では共有結合型二量体が1本のバンドのみ僅かに増加した程度であった。したがって本発明製剤は安定性が非常に高い製剤であることが言える。なお、図１〜図３における各レーンの意味は以下の表４のとおりである。
【表４】
2005060377.tif 000005
【実施例８】
【００３９】
IL-11濃度5 mg/mL、リン酸ナトリウム緩衝液濃度10 mM、グリシン濃度300 mMを基本として表５に記載する精製白糖およびポリソルベート80の添加量を変動させた試料溶液を調整した。
【実施例９】
【００４０】
表５に記載するポリソルベート80の添加量を変動させた以外は実施例８と同様にして、試料溶液を調整した。
【００４１】
【表５】
2005060377.tif 000006
実施例４〜９及び比較例２の試料溶液を無菌濾過後無菌環境下で1 mLずつ予め滅菌処理したバイアル瓶に充填し、凍結乾燥後打栓閉塞を行い本発明製剤を得た。本発明製剤および比較製剤の注射用水による再溶解性について比較検討した。試験結果を表５に示す。比較例の製剤では比較的高い吸光度（すなわち高い濁度または低い澄明度）を示したのに対し、実施例で調製された本発明製剤では低い吸光度（すなわち低い濁度または高い澄明度）を示した。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】試料の試験開始時および４０℃／１箇月保存試料のSDS-PAGE（銀染色）の分析結果である。
【図２】試料の試験開始時および４０℃／１箇月保存試料のSDS-PAGE（銀染色）の分析結果である。
【図３】試料の試験開始時および４０℃／１箇月保存試料のSDS-PAGE（銀染色）の分析結果である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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