(57)【要約】【課題】  毒性が低く優れた水溶性を有し、且つ、生体組織中を透過できる領域の蛍光を放射し、腫瘍、癌及び／又は血管の特定の造影を可能にすることができる癌又は腫瘍用の診断用蛍光造影剤及び蛍光造影診断方法の提供。【解決手段】  ポリメチン鎖を有するオキソノール染料を含有することを特徴とする診断用蛍光造影剤。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリメチン鎖を有するオキソノール染料を含有することを特徴とする診断用蛍光造影剤。
【請求項２】
前記診断用蛍光造影剤が癌診断用蛍光造影剤又は腫瘍診断用蛍光造影剤であることを特徴とする請求項１に記載の診断用蛍光造影剤。
【請求項３】
前記ポリメチン鎖を有するオキソノール染料が下記一般式（Ｉ）で示されることを特徴とする請求項１又２に記載の診断用蛍光造影剤。
【化１】
2005145921.tif 000012
（式中、ｎは３又は４の整数を表わし、Ｑ1及びＱ2は炭素環または複素環形成する原子群を表わし、Ｌは置換されてもよく、同一でも異なってもよいメチン基を表わす。）
【請求項４】
前記一般式（Ｉ）で表されるポリメチン鎖を有するオキソノール染料が酸基としてスルホン酸基、カルボン酸基及び燐酸基から選ばれる少なくとも１種の基を有することを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【請求項５】
前記一般式（Ｉ）で表されるポリメチン鎖を有するオキソノール染料中の酸基がスルホン酸基又はカルボン酸基から選ばれる少なくとも１種の基を有し、該酸基の合計が２以上であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【請求項６】
前記一般式（Ｉ）で表されるポリメチン鎖を有するオキソノール染料中の酸基が少なくとも２つのスルホン酸基であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【請求項７】
酸基の塩がナトリウム塩であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【請求項８】
腫瘍又は癌が、脳、乳房部、胸部、前立腺、結腸、肺、肝臓、すい臓、胃、リンパ腫、子宮、子宮頸部、上下肢、肉腫及び黒腫から選ばれる少なくとも１種の生体内部分であることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【請求項９】
蛍光造影剤を用いて生体外で診断する蛍光造影診断方法において、請求項１〜８のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤を生体内に導入し、該生体内に励起光を照射し、該診断用造影剤からの蛍光を検出することにより生体外で診断することを特徴とする蛍光造影診断方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は診断用蛍光造影剤（以下、診断用造影剤、蛍光造影剤ともいう）及び該診断用蛍光造影剤を用いた蛍光造影診断方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
病気を治療する際に、病気の初期の段階においてその病気により生体内に引き起こされる形態変化を精密且つ迅速に簡便な方法で検出することが要求される。特に癌を治療する場合、初期の小さい病変の場所と大きさの確定が早期治療する上で必要不可欠である。この目的のために既に知られている方法として、内視鏡による生体検査、Ｘ線撮影、ＭＲＩ及び超音波撮影等のような映像診断を挙げることができる。生体検査は直接病変部を観察できるので診断確定に有効ではあるが、同時に被験者に痛みや苦痛を強いる。Ｘ線撮影及びＭＲＩは過度にすると有害となる放射線及び磁場を被験者にさらすものであり、時間的経過を追跡しようとするとその被爆時間は追跡時間に比例して増大してしまう。設備や装置も大掛かりになり、その設置と維持に多大の労力と費用が要求される。しかし、小型化が可能で運転の労力が軽減され、使用も簡便化される診断として近赤外蛍光撮影が最近注目されている。近赤外光は、７０％以上が水分から成り立つ生体組織を容易に透過し、厚さ１０ｃｍ〜２０ｃｍまでを検査診断できると言われている。そのため、臨床医学の分野で注目を集めつつ、近赤外ＣＴとする診断技術として開発されるようになった。この方法は造影剤として生体の吸収の少ない７００ｎｍから１０００ｎｍの近赤外の波長を有する励起光の照射により蛍光を放射する化合物を生体中に投与し、身体の外側から近赤外の波長である励起光を照射し、体内の投与された化合物、所謂、蛍光造影剤から放射される蛍光を検出して、病変部を確定する。このような蛍光造影剤として、例えば、腫瘍中に蓄積するポルフィリン化合物やヘマトポルフィルンのような化合物が知られている。これらの化合物は、近赤外の光照射により励起され酸素分子が病変部の生体を酸化することが可能な３重項酸素を生成させ、癌のような病変部の細胞を死滅させて治療を可能にするが、病変部以外の組織を破壊してしまう危険性を孕んでいる。一方、フルオレセインやフルオレサミンのような既知の蛍光色素を用いた造影法が知られている（米国特許第４９４５２３９号）が、これらの蛍光色素は生体の光透過が非常に低い青〜緑の光を発するもので、身体の奥の部分の病変の検出が充分にできない。
【０００３】
近赤外領域で蛍光を発するシアニン色素は、蛍光造影剤として期待され、各種のシアニン色素化合物が検討された。シアニン化合物の蛍光造影剤が報告されて以来、親水性、モル吸光係数、量子収率の高い化合物に改変すべく、各種周辺シアニン化合物を造影剤とする技術が開示された（例えば、特許文献１、２、３）。しかしながら、正常な組織を病変組織と識別する能力（造影力）とともに、生体から造影後に生体内で完全に分解され無害となるか、又は完全に排出されることが必要で（非蓄積性）、両者を兼ねた安全な造影剤は見つかっていない。
【特許文献１】特開２０００−９５７５８号公報
【特許文献２】特表２００２−５２６４５８号公報
【特許文献３】特開２００３−１６０５５８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は毒性が低く優れた水溶性を有し、且つ、生体組織中を透過できる領域の蛍光を放射し、腫瘍、癌及び／又は血管の特定の造影を可能にすることができる癌又は腫瘍用の診断用蛍光造影剤及び蛍光造影診断方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の上記の目的は、下記各構成により達成される。
【０００６】
１．ポリメチン鎖を有するオキソノール染料を含有することを特徴とする診断用蛍光造影剤。
【０００７】
２．前記診断用蛍光造影剤が癌診断用蛍光造影剤又は腫瘍診断用蛍光造影剤であることを特徴とする前記１に記載の診断用蛍光造影剤。
【０００８】
３．前記ポリメチン鎖を有するオキソノール染料が下記一般式（Ｉ）で示されることを特徴とする前記１又２に記載の診断用蛍光造影剤。
【０００９】
【化１】
2005145921.tif 000002
【００１０】
（式中、ｎは３又は４の整数を表わし、Ｑ1及びＱ2は炭素環または複素環形成する原子群を表わし、Ｌは置換されてもよく、同一でも異なってもよいメチン基を表わす。）
４．前記一般式（Ｉ）で表されるポリメチン鎖を有するオキソノール染料が酸基としてスルホン酸基、カルボン酸基及び燐酸基から選ばれる少なくとも１種の基を有することを特徴とする前記１〜３の何れか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【００１１】
５．前記一般式（Ｉ）で表されるポリメチン鎖を有するオキソノール染料中の酸基がスルホン酸基又はカルボン酸基から選ばれる少なくとも１種の基を有し、該酸基の合計が２以上であることを特徴とする前記１〜４のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【００１２】
６．前記一般式（Ｉ）で表されるポリメチン鎖を有するオキソノール染料中の酸基が少なくとも２つのスルホン酸基であることを特徴とする前記１〜５のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【００１３】
７．酸基の塩がナトリウム塩であることを特徴とする前記１〜６のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【００１４】
８．腫瘍又は癌が、脳、乳房部、胸部、前立腺、結腸、肺、肝臓、すい臓、胃、リンパ腫、子宮、子宮頸部、上下肢、肉腫及び黒腫から選ばれる少なくとも１種の生体内部分であることを特徴とする前記１〜７のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤。
【００１５】
９．蛍光造影剤を用いて生体外で診断する蛍光造影診断方法において、前記１〜８のいずれか１項に記載の診断用蛍光造影剤を生体内に導入し、該生体内に励起光を照射し、該診断用造影剤からの蛍光を検出することにより生体外で診断することを特徴とする蛍光造影診断方法。
【発明の効果】
【００１６】
本発明による診断用蛍光造影剤及び蛍光造影診断方法は、毒性が低く優れた水溶性を有し、さらに、生体組織中を透過できる領域の蛍光を放射し、腫瘍、癌及び／又は血管の特定の造影を可能にすることができ優れた効果を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
次に本発明を実施するための最良の形態について説明するが、本発明はこれにより限定されるものではない。
【００１８】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１９】
本発明に好ましく用いられる一般式（Ｉ）で表わされるポリメチン鎖を有するオキソノール染料について述べる。
【００２０】
前記一般式（Ｉ）において、Ｑ1およびＱ2は１，３−シクロペンタンジオン、１，３−インダンジオンのような炭素環およびピラゾロン、イソオキサゾロン、バルビツール酸、チオバルビツール酸、３−オキシチオナフテン、ローダニン、２−チオヒダントイン、２−チオキサゾリジンジオン、ピラゾロピリジン、キノロンのような複素環を形成するのに必要な原子群を表わす。Ｌはメチン基を表わすが、炭素数１〜３のアルキル基（例えばメチル基、エチル基など）、フエニル基、ベンジル基、フエネチル基、ヒドロキシ基、アシルオキシ基、ハロゲン原子等で置換されていても良い。又、メチン基の置換基が環（例えば５，５−ジメチル−１−シクロヘキセン−１−イル−３−イリデンなど）を形成してもよい。
【００２１】
一般式（Ｉ）で表わされるポリメチン鎖を有するオキソノール染料は分子中に酸基（スルホ基、カルボキシル基、りん酸基等）を有することが好ましく、少くとも２個のスルホ基又はカルボキシ基を有するのが更に好ましい。一般式（Ｉ）で表わされるポリメチン鎖を有するオキソノール染料としては例えば下記の一般式（Ｉ）−１で表わされるピラゾロンオキソノール染料および一般式（Ｉ）−２で示されるバルビツール酸及びチオバルビツール酸染料化合物等が挙げられる。又、メチン基は５，５−ジメチル−１−シクロヘキセン−１−イル−３−イリデンなどの環を形成しているものが好ましい。
【００２２】
【化２】
2005145921.tif 000003
【００２３】
一般式（Ｉ）−１において。ｎは３又は４の整数を表わす。Ｒ11，Ｒ12は水素原子、アルキル基、アラルキル基、アリール基、複素環基を表わす。Ｒ11、Ｒ12で表わされるアルキル基としては例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、シクロヘキシル等の直鎖、分岐、環状の基が挙げられ、アラルキル基としては例えばベンジル、フエネチル等が挙げられ、アリール基としては例えばフエニル、ナフチル等が挙げられ、複素環基としては例えばベンゾチアゾリル、ピリジル、ピリミジル、スルホラニル等が挙げられるが、好ましくはアルキル基、アラルキル基及びアリール基である。Ｒ11、Ｒ12で表わされるアルキル基、アラルキル基、アリール基、複素環基は種々の置換基を有することができ、例えばスルホ、カルボキシ、ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン（例えばフッ素、塩素など）、アルキル（例えばメチル、イソプロピル、トリフルオロメチル、ｔ−ブチル、エトキシカルボニルメチル、スルホメチルなど）、アミノ（例えばアミノ、ジメチルアミノ、スルホエチルアミノ、ピペリジノ、モルホリノなど）、アルコキシ（例えばメトキシ、エトキシ、スルホプロポキシなど）、スルホニル（例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニルなど）、スルファモイル（例えばスルファモイル、ジメチルスルファモイルなど）、アシルアミノ（例えばアセトアミド、ベンズアミド、スルホベンズアミドなど）、カルバモイル（例えばカルバモイル、フエニルカルバモイル、スルホフエニルカルバモイルなど）、スルホンアミド（例えば、メタンスルホンアミド、ベンゼンスルホンアミドなど）、アルコキシカルボニル（例えばエトキシカルボニル、ヒドロキシエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルなど）、アリールオキシカルボニル（例えばフエノキシカルボニル、ニトロフエノキシカルボニルなど）、などの基を挙げることができる。
【００２４】
Ｒ11、Ｒ12で表わされるアラルキル基及びアリール基はその芳香核上にスルホ基、カルボキシ基、りん酸基のうちの少くとも１つの基を有することが望ましく、更に好ましくは少くとも１つのスルホ基が有することが望ましい。
【００２５】
Ｒ13、Ｒ14はアルキル基、アリール基、アラルキル基、複素環基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、カルバモイル基、ウレイド基、チオウレイド基、アシルアミノ基、アシル基、イミド基、シアノ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基を表わす。
【００２６】
Ｒ13、Ｒ14で表わされるアルキル基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、カルバモイル基、アシルアミノ基、アルコキシ基、アミノ基の具体例は前述したＲ11、Ｒ12で表わされる、アルキル基、アラルキル基、アリール基、複素環基へ導入される置換基の具体例と同じものを挙げることができる。
【００２７】
更にＲ13、Ｒ14で表わされるアリール基としては、例えばフエニル、スルホプロポキシフエニル、シアノフエニル、カルボキシフエニル、ニトロフエニル、スルホフエニル等、アラルキル基としては例えばベンジル、フエネチル、スルホベンジル等、複素環基としては例えばフリル、チエニル等、ウレイド基としては例えば、メチルウレイド、フエニルウレイド等が挙げられ、チオウレイド基としては例えばメチルチオウレイド、フエニルチオウレイド等、イミド基として、例えばスクシンイミド、フタルイミド等、アシル基としては例えばアセチル、ピバリル等が挙げられる。
【００２８】
Ｒ13、Ｒ14で表わされる基としては、アルキル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、ウレイド基、アシルアミノ基、アシル基、イミド基、シアノ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基が好ましいが、更に好ましくはアルキル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、アシル基、シアノ基、アルコキシ基、アミノ基である
【００２９】
【化３】
2005145921.tif 000004
【００３０】
一般式（Ｉ）−２において、ｎは３又は４の整数を表わし、Ｗは酸素原子及び硫黄原子を表わし、Ｌはメチン基を表わし、Ｒ21〜Ｒ24は水素原子、アルキル基、アリール基、アラルキル基、複素環基を表わす。Ｌで表わされるメチン基は前記一般式（Ｉ）で述べてたものを挙げることができる。
【００３１】
Ｒ21〜Ｒ24で表わされるアルキル基としては前記一般式（Ｉ）−１で挙げたＲ11及びＲ12のアルキル基と同じものが挙げられ、アルキル基は置換基を有しても良く、置換基としては、例えば一般式（Ｉ）−１でＲ11及びＲ12Ｒ21〜Ｒ24で表わされるアリール基はフエニル基が好ましく、このフエニル基に導入される置換基としては、前記一般式（Ｉ）−１で、Ｒ11及びＲ12の基に導入される置換基として挙げた種々のものが挙げられるが、この芳香核上にスルホ基、カルボキシ基のうちの少くとも１つの基を有することが望ましい。
【００３２】
Ｒ21〜Ｒ24で表わされるアラルキル基はベンジル基、フエネチル基が好ましく、この芳香核上に導入される置換基としては前述したＲ21〜Ｒ24のアリール基の置換基と同じものを挙げることができる。
【００３３】
Ｒ21〜Ｒ24で表わされる複素環基としては、例えばピリジル、ピリミジル等を挙げることができ、この複素環上に導入される置換基としては、前述したＲ21〜Ｒ24のアリール基の置換基と同じものを挙げることができる。
【００３４】
Ｒ21〜Ｒ24で表わされる基としては、アルキル基及びアリール基が好ましく、更に前記一般式（Ｉ）−２で表わされるバルビツール酸及びチオバルビツール酸、オキソノール染料の分子内にカルボキシル基、スルホ基のうちの少くとも２つの基を有することが望ましい。
【００３５】
本発明のポリメチン鎖を有するオキソノール染料の合成法について述べる。
【００３６】
本発明の前記一般式（Ｉ）で表わされるポリメチン鎖を有するオキソノール染料のメチン鎖供給体としては、
例えば、ハーマー著「ザ・シアニン・ダイズ・アンド・リレーテッドコンパウンヅ」（Ｆ・Ｍ・Ｈａｍｅｒ  “Ｔｈｅ  ｃｙａｎｉｎｅ  ｄｙｅｓ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”  １９６４，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）のＰ２４９〜Ｐ２５１に述べられているようなジアニル化合物を使用することができる。
【００３７】
１モルのメチン鎖供給体に対し２モルのピラゾロンのような酸性母核化合物を反応させれば本発明の対称型の化合物を得ることができる。非対称型の化合物に関しては、まず１モルのメチン鎖供給体と１モルの母核化合物を反応させてアミノポリメチン置換母核化合物を合成後、更にもう１モルの適当な母核化合物を反応させて合成することができる。これらの縮合反応については例えば特公昭５４−３８１２９号、特公昭５２−３８０５６号、特開昭４９−９９６２０号、特開昭５０−９１６２７等に詳しく記載されており参考にすることができる。
【００３８】
以下に前記一般式（Ｉ）で表わされるポリメチン鎖を有するオキソノール染料の具体例を以下に示すが、本発明の具体例はこれらに限定されるものではない。
【００３９】
【化４】
2005145921.tif 000005
【００４０】
【化５】
2005145921.tif 000006
【００４１】
【化６】
2005145921.tif 000007
【００４２】
【化７】
2005145921.tif 000008
【００４３】
【化８】
2005145921.tif 000009
【００４４】
生体内で使用されることになる蛍光造影剤は、体内に蓄積されず、速やかに体外に排出されることが重要で、基本的に水溶性であることが必要条件である。水溶性を向上させる手段としては、アニオン系のカルボン酸やスルホン酸の塩類であることが好ましく、本発明の近赤外蛍光造影剤は上記化合物中に３個以上のスルホン酸基を導入することにより水溶性が顕著に改善されている。
【００４５】
優れた水溶性を得るには、スルホン酸基の数は４個以上であることが好ましい。合成を容易にするには、スルホン酸基の数は１０個以下、好ましくは８個以下である。水溶性の尺度は各化合物の分配係数の測定、例えば分配係数を脂肪族アルコール、例えば、ブタノールと水の二相系で測定することにより調べることができる。例えば、３個以上のスルホン酸基の導入によりｎ−ブタノール／水の分配係数ｌｏｇＰｏ／ｗは−１．００以下となる。
【００４６】
生体における水溶性の判断の方法としては、生理的食塩水に溶解し、３６℃において時間経過後も沈殿や析出のないことである。生体内に投与されて許容される塩は前記一般式（Ｉ）のポリメチン鎖を有するオキソノール染料と非毒性の塩を形成するものであればよい。
【００４７】
それらの例としては、ナトリウム塩、カリウム塩のようなアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のようなアルカリ土類金属塩、トリプトファン、メチオニン、リジン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、スレオニン、アルギニン等の塩のようなアミノ酸塩が挙げられる。特に好ましいのは生体内での毒性が低いナトリウム塩である。
【００４８】
本発明の診断用造影剤は、血管（静脈、動脈）内、経口内、腹腔内、皮下、皮内、膀胱内、気管（支）内等へ注入、噴霧もしくは塗布等の手段により生体内に投与することができる。
【００４９】
本発明の体外蛍光造影診断方法に用いる診断用蛍光造影剤は、具体的には、本発明の前記一般式（Ｉ）で表されるポリメチン鎖を有するオキソノール染料を、注射用蒸留水、生理食塩水、又はリンゲル液等のような溶媒中に懸濁若しくは溶解させたものであり、必要に応じて、担体、賦形剤等のような薬理上許容しうる添加物を加えてもよい。これらの添加物としては、薬理上許容しうる電解質、バッファー、洗剤のような物質及び浸透圧を調整し安定性及び溶解性を改善するための物質（例えば、シクロデキストリン、リポソーム等）が挙げられる。関連分野で一般に使用される多様な添加物が使用できる。本発明に係わる蛍光造影剤は医薬用の場合は好ましくは滅菌処理を経て製造される。当該蛍光造影剤は、注射、噴射又は塗布、血管内（静脈、動脈）、経口、腹膜内、経皮、皮下、膀胱内又は気管支内投与によって前記生体部位に投与することができる。好ましくは、本造影剤は血管内に水剤、乳剤又は懸濁剤の形態で投与される。
【００５０】
本発明の診断用造影剤の投与量は、最終的に診断する部位を検出できる量であれば特に限定されず、使用する近赤外蛍光を発する化合物の種類、投与される対象の年齢や身体の大きさおよび標的とする臓器等によって適宜増減できるが、通常、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ・体重、好ましくは０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ・体重の範囲の投与である。
【００５１】
本発明の診断用造影剤は動物用の造影剤としても好適に用いることができ、その投与形態、投与経路、投与量等は対象となる動物の体重や状態によって適宜選択する。
【００５２】
本発明においては、前記一般式（Ｉ）で表されるポリメチン鎖を有するオキソノール染料分子内に２個以上、好ましくは４個以上のスルホン酸基を有する一連の化合物は、ある濃度において腫瘍組織に集積し、ある濃度以下になると体外に排出されやすくなる性質を有し、その特性を利用して腫瘍組織を、選択的且つ、特異的に造影することが可能な蛍光造影剤として使用できる。
【００５３】
また、本発明の化合物は、血管内に一旦注入されると血管壁外に拡散しにくく、血管内に留まる性質が高く、血管造影剤としても使用できる。
【００５４】
本発明の蛍光造影方法は、本発明の蛍光造影剤を用いることを特徴とする。その測定方法は当業者には公知の方法を用いて行われ、励起波長、検出のための蛍光波長等の各条件は、最適で最高の検出能状態を得るために、投与する蛍光造影剤の種類、投与する対象等に応じて適宜決定される。
【００５５】
本発明の蛍光造影剤を測定対象物に投与してから、本発明の蛍光造影方法を用いて測定を開始するのに要する時間も、投与する蛍光造影剤の種類、投与する対象等によって異なるが、例えば腫瘍や癌造影を目的として投与する場合には投与後１０分〜６時間の経過時間を選択することが好ましい。経過時間が１０分未満であると全体に蛍光が偏在して目的とする部位とそれ以外の部位との識別が困難であり、６時間を超えると該造影剤が体外に排泄されてしまう。血管造影を目的とする場合には投与直後〜１時間の経過時間で測定することが好ましい。
【００５６】
本発明の体外蛍光造影診断方法は本発明の蛍光造影剤の使用により特徴づけられる。この方法は公知の方法に準じて実施され、励起波長及び検出すべき蛍光波長のようなそれぞれのパラメーターは投与される近赤外蛍光造影剤の種類及び投与対象により最適となるように適宜決定される。本発明の蛍光造影剤の測定対象への投与から本発明の蛍光イメージング法による測定開始までにかかる時間は使用される近赤外蛍光造影剤の種類及び投与対象によって異なる。例えば、腫瘍イメージングを目的とした場合、消失時間は投与後およそ４−１２０時間と考えられる。消失時間が短すぎると、蛍光が強すぎて標的部位と他の部位を明確に分けることができない。長すぎると、当該造影剤が身体から排泄されてしまうことがある。血管造影が求められる場合には、投与直後又はその約３０分以内に検出する。
【００５７】
本方法においては、前記蛍光造影剤を検出標的に投与し、検出標的を励起光源からの励起光に露光する。次いで、近赤外蛍光造影剤から当該励起光により発生された蛍光を蛍光検出器で検出する。励起波長は使用される近赤外蛍光造影剤によって異なるが、当該化合物が近赤外領域に有効に蛍光を放射する範囲でさえあれば制限されない。好ましくは、優れた生物透過能を有する近赤外光が使用される。
【００５８】
露光する波長は、好ましくは２００〜１０１０ｎｍ、より好ましくは６００〜１０００ｎｍ、更に好ましくは７００〜８５０ｎｍの波長の励起光で励起し、蛍光を高感度に検出する。この場合、蛍光励起光源としては、各種レーザー光源、例えば、イオンレーザー、色素レーザー、半導体レーザー等、或いはハロゲン光源、キセノン光源等の通常の励起光源を使用してもよく、更に最適な励起波長を得るために各種光学フィルターを使用することができる。同様に、蛍光の検出に際しても、蛍光造影剤からの蛍光のみを選択する各種光学フィルターを使用して、蛍光の検出感度を高めることができる。
【００５９】
検出された蛍光を蛍光情報としてデータ処理し、記録可能な蛍光イメージを生成させるのに用いる。蛍光イメージは標的組織を含む広い領域に照射して、ＣＣＤカメラで蛍光を検出し、得られた蛍光情報をイメージ処理することにより生成させる。或いは、光学ＣＴ装置を使用したり、内視鏡を使用したり、眼底カメラを使用してもよい。本発明の蛍光イメージング法は全身性の疾患、腫瘍、血管などを生体を傷つけることなく可視化させることができる。
【実施例】
【００６０】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の実施態様はこれらに限定されるものではない。
【００６１】
実施例１
乳癌発癌モデルマウスの作製
乳癌発癌モデルマウスの作出老化促進マウス、所謂ＳＡＭ系の１系統であるＳＡＭＰ６／Ｔａ系マウスに乳癌を発症させるために発癌物質７，１２−ジメチルベンズ［ａ］アントラセン（ＤＭＢＡ）を投与して乳癌発癌モデルマウスを作出した。マウスの発癌方法は、特開２００３−０３３１２５号に準じて行った。ＳＡＭＰ６／Ｔａ系マウスを各２０匹に、ＤＭＢＡを０．５ｍｇ／マウス／週で計６回投与した。飼料としては高タンパク質高カロリーのＣＡ−１固形（日本クレア社製）を与えた。発癌物質の第６回目の投与の後、第１回目投与から起算して第２０週迄までを休薬期間とした。乳癌および乳癌の肺転移を病理組織学的に検索した。ＤＭＢＡを１週間隔で６回投与し、その後の投与開始より第２０週目まで休薬し、乳癌発生したマウス（乳癌発生率７５％）を使用した。
【００６２】
蛍光造影試験
マウス乳癌の腫瘍組織断片（２ｍｍ×２ｍｍ角辺）をＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（５週齢、クレアジャパン社）の左胸部の乳房部皮下に移植した。１０日後、腫瘍が直径約５ｍｍに成長した時点で上記マウスを試験に供した。蛍光励起光源としてチタンサファイアレーザーを使用した。照射の分散が２％以内になるようにリングタイプの光ガイド（住田光学グラス社）を用いて試験用マウスにレーザー光を均一に照射した。照射出力はマウスの皮膚表面付近で約３６μＷ／ｃｍ2になるように調整した。蛍光は各化合物の最大励起波長で励起させ、マウスからの蛍光放射をＣＣＤカメラ（Ｃ４８８０，浜松フォトニクス社）を用いて短波長カットフィルターを通して検出及び造影した。カットフィルターは化合物の励起波長（８００ｎｍ〜９００ｎｍ）に適合するように選択した。照射時間は各化合物の蛍光強度によって調整した。
【００６３】
蛍光造影剤として、各試験化合物を蒸留水に溶解し（０．５ｍｇ／ｍｌ）、マウスに乳管及び線葉から投与した。用量は各１ｍｇ／ｋｇであった。化合物投与の１２分後にマウスをジエチルエーテルで麻酔し、マウス全身の蛍光イメージを造影した。センサーは蛍光光度計（日本分光ＦＰ−６６００）のフォトダイオード（波長範囲２２０〜１０１０ｎｍ）を使用した。
【００６４】
条件を下記に、蛍光感度は比較を１００とする相対感度で表した。基準に対する発生蛍光量の対数で表示した。造影剤の体外排出量は、造影剤投与後の化合物の体内量を１００とし、１３週間後の尿道からのカテーテルによる蓄積排出量を合算し、液体クロマトグラフ２０１０Ａ（島津製作所社製）から体外排出量を算出し、初期濃度に対する排出率を求めた。結果を表１に示す。尚、比較用造影剤として特表２００２−５２６４５８の５０番で示される化合物を使用した。化合物の水溶性試験は、０．９％の生理的食塩水１ｍｌに０．５ｍｇを溶解し、３６℃２週間静置放置し、析出、沈殿物を確認した。
【００６５】
◎：全くないレベルを、
○：わずかヘイズがかかって見られるが、攪拌により消失してしますレベル、
△：ヘイズがかかっているが、攪拌では消失しないレベル、
×：析出してしまうレベル、
として評価した。
【００６６】
【化９】
2005145921.tif 000010
【００６７】
【表１】
2005145921.tif 000011
【００６８】
本発明の一般式（Ｉ）で表されるポリメチン鎖を有するオキソノール染料を含有する診断用蛍光造影剤は、比較蛍光造影剤に比して水溶性、蛍光感度、体外排出率において優れており、腫瘍又は癌の診断のために有効であることが分かる。