(57)【要約】【課題】  比較的安価で、免疫賦活作用の強い免疫賦活組成物の提供。【解決手段】  （Ａ）フコイダン及び（Ｂ）キトサンを含有する免疫賦活組成物。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）フコイダン及び（Ｂ）キトサンを含有する免疫賦活組成物。
【請求項２】
経口用組成物である請求項１記載の免疫賦活組成物。
【請求項３】
請求項１記載の免疫賦活組成物を含有する食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫力を高め、免疫力低下により生じる各種の疾患の予防・治療に有効な免疫賦活組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫はウイルス・細菌等の外敵やガン細胞等の体内で生じた異常物質から身を守る生体の重要な防御機構である。免疫力の低下は虚弱体質となって現れ、特に免疫力の弱い子供、高齢者では、感染症及びその他の疾患に対する抵抗性が乏しく、風邪をこじらせて死亡する例さえ発生している。また、近年ではＯ−１５７をはじめとして各種の食中毒が起こり社会問題となっている。このような疾患の予防や治療の一つの手段として、免疫力を高める医薬や健康食品が脚光をあびている。
【０００３】
フコイダン及びキトサンは、それぞれ単独で感染症に対する防御能の向上等の免疫賦活作用を有することが知られている（特許文献１、２）。
【特許文献１】特開２００２−６５２０６号公報
【特許文献２】特開２００２−２０９５５２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、フコイダンはその製造方法から高価なものである。そのため、経済的理由から大量に服用することが難しく、また、弱った免疫力を回復するには至らず、免疫賦活作用も十分ではなかった。
従って、本発明の目的は、比較的安価で、免疫賦活作用の強い免疫賦活組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
そこで本発明者は、比較的安価なキトサンをフコイダンと併用することにより、意外なことに免疫賦活作用が相乗的に増強され、少量の摂取でも十分な免疫賦活効果を有する組成物が得られることを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち、本発明は（Ａ）フコイダン及び（Ｂ）キトサンを含有する免疫賦活組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の免疫賦活組成物は、免疫力を高め、免疫力低下により生じる各種の疾患の予防・治療に有効であって、また食品としても有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明で使用する（Ａ）フコイダンとしては、硫酸化フコースを構成成分として含む硫酸化多糖類であって、特に限定はされないが、例えば、ガゴメ、トロロコンブ、ワカメ、クロメ、アラメ、カジメ、モズク、オキナワモズク、ヒジキ、ホンダワラ等のこんぶ目、ながまつも目、ひばまた目等の海藻由来のフコイダンが挙げられる。また、棘皮動物、例えば、ナマコ、ウニ、ヒトデ等由来のフコイダンを使用してもよい。
これらのフコイダンは、それぞれ公知の方法、例えば、海藻、棘皮動物等を熱水で抽出して得られた抽出液をろ過、遠心分離等で精製する方法等で調製される。抽出物はそのままで使用してもよいが、濃縮、凍結乾燥等の後処理をしてもよい。
【０００９】
本発明で使用する（Ｂ）キトサンとしては、主としてＤ−グルコサミンからなる多糖体であって、特に限定されないが、例えば、カニ、エビ、昆虫、貝、キノコ等由来のキチンをアルカリ処理、酵素処理等で脱アセチル化したものが使用できる。
これらのキトサンは、それぞれ公知の方法で調製される。また、全てのアセチル基が除かれている必要はなく、３０％以下のアセチル基が残存していてもよい。
【００１０】
本発明の免疫賦活組成物の（Ａ）フコイダンと（Ｂ）キトサンの含有重量比［（Ａ）：（Ｂ）］は、免疫賦活作用の点から、１：１〜１：５０、特に１：２〜１：２０が好ましい。なお、フコイダン及びキトサンの含有量は、乾燥体量で規定される。
【００１１】
本発明の免疫賦活組成物中の（Ａ）フコイダンの含有量は特に制限されないが、０．０１〜４０重量％、特に０．０５〜２０重量％が好ましい。また、（Ｂ）キトサンの含有量は特に制限されないが、０．１〜７０重量％、特に０．５〜５０重量％が好ましい。
【００１２】
本発明の免疫賦活組成物は、これらの成分と他の動物抽出物、植物抽出物等公知の成分とを混合して製造されるが、担体を使用して、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、ペースト剤、シロップ剤、乳剤等の経口剤形にするのが好ましい。
【００１３】
例えば、錠剤、散剤、顆粒剤等の経口用固形製剤の形態に成形するに際しては、担体として、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、無水第二リン酸カルシウム及びアルギン酸等の賦形剤；単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、エチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、コーンファイバー、水及びエタノール等の結合剤；アルギン酸、寒天末、デンプン、架橋ポリビニルピロリドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム及びデンプングルコール酸ナトリウム等の崩壊剤；ステアリルアルコール、ステアリン酸、カカオバター及び水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩及びラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、無水ケイ酸、含水二酸化ケイ素、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム及びコロイド状ケイ酸等の吸収剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ポリエチレングリコール及びショ糖脂肪酸エステル等の滑沢剤等を使用できる。
カプセル剤は、上記で例示した各種の担体と混合し、硬質ゼラチンカプセル及び軟質カプセル等に充填して調製される。カプセル剤には、水、グリセリンや小麦胚芽油、サフラワー油等の油脂類等を含有してもよい。
液体、ペースト製剤は、水性又は油性の懸濁液、溶液、シロップ及びエリキシル剤であってもよく、これらは、水、アルコール類、含水アルコール、糖類、ハチミツ、プルーンエキス等の通常の添加剤を用いて常法に従い、調製される。
【００１４】
本発明の免疫賦活組成物は、水、黒糖、オリゴ糖、砂糖等の甘味類、油脂類、澱粉類、無機質、ビタミン類、アルコール類、有用菌類、有機酸類、蛋白質類、植物繊維、各種薬草類等と併用した健康食品の形態とするのが、日常的に摂取できて免疫力の低下を補う点で好ましい。
【００１５】
食品の形状は、液体、ペースト、粉末、顆粒、固形等の形状が挙げられ、液体、ペーストが服用し易く好ましい。食品としては、液体飲料、ペースト飲料、特にペースト飲料が好ましい。
【００１６】
医薬又は食品中には、本発明の免疫賦活組成物を、そのまま用いてよいが、液体、ペースト、錠剤等の剤型によって水、担体等で希釈して使用するが、例えば、乾燥固形物として０．７〜７０重量％含有するのが好ましい。
【００１７】
医薬としての投与量又は食品としての摂取量は、本発明の免疫賦活組成物として、成人に対して０．１〜３０ｇ／人／日、特に０．３〜１５ｇ／人／日となる量であるのが好ましい。
【実施例】
【００１８】
以下に実施例を示し本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１９】
実施例１
免疫賦活作用の指標として、免疫生体防御機能を担っているナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）を使って、その細胞傷害活性を比較して免疫賦活作用を測定した。
【００２０】
（１）  ＮＫ細胞の採取
使用動物：ＢＡＬＢ／Ｃ雄性、６週齢マウス
試験方法：マウス３２匹を、免疫賦活組成物投与群、対照としてフコイダン投与群、キトサン投与群、生理食塩水投与群（コントロール）の４群に分けた。各群とも経口投与を行い、２４時間後に脾臓を摘出し、２００メッシュでろ過後、ＰＢＳ（−）で３回洗浄し、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６１０培地中に脾細胞を回収した。ＮＫ細胞を含む脾浮遊細胞をチュルク液で染色し、生細胞数を算出し、得られた脾浮遊細胞を２×１０7cell／ｍＬに１０重量％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用いて調整し、エフェクター細胞（Ｅ）とした。
（２）51ＣｒラベルマウスＮＫ細胞感受性細胞（ＹＡＣ−１）の調製
脾浮遊細胞を２×１０7cell／ｍＬになるように１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用いて調整した培養液０．５ｍＬに１００μＣｉクロム酸ナトリウム（ＩＣＮ）を０．３ｍＬ添加し、３７℃で４５分間ＣＯ2インキュベーターで培養した。培養後遠心分離して上清を除いた。得られた細胞に１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地を添加し、遠心分離を行い遊離のアイソトープを除去した。この操作を２回繰り返した後、得られた細胞をトリバンブルーで染色後生細胞数を計測して２×１０5cell／ｍＬになるように１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地で調整し、ターゲット細胞（Ｔ）とした。
（３）ＮＫ細胞障害活性の測定
エフェクター細胞及びターゲット細胞をそれぞれ９６穴平底プレートに１００μＬずつ播いた（Ｅ／Ｔ＝１００/１）。自然解離をみるために培地を１００μＬ、最大解離をみるため０．５重量％非イオン界面活性剤（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）を１００μＬそれぞれエフェクター細胞の代わりに添加した。３７℃で４時間培養した後、細胞をフィルターろ過により除去し、培養液を各ｗｅｌｌあたり１００μＬ採取した。γ−カウンターで培養液中の放射活性を測定した。次の式によりＮＫ細胞障害活性を求めた。
ＮＫ細胞障害活性＝１００×（被験体解離ｃｐｍ−培地ｃｐｍ）／（最大解離ｃｐｍ−コントロール培地ｃｐｍ）
【００２１】
投与：本発明免疫賦活組成物
フコイダン                        ０．５ｇ（    １．２５重量％）
キトサン                          ５．０  （  １２．５        ）
精製水                          ３４．５  （  ８６．２５      ）
計                        ４０．０  （１００．０        ）
【００２２】
使用したフコイダン及びキトサンは次法で調製した。
フコイダンの調製：
洗浄、脱塩したワカメの芽株を熱水で加熱して熱水可溶成分を抽出した。得られた抽出液をろ過し、ろ液を中和した後、減圧濃縮した。その後、乾燥してフコイダンの粉末を得た。
キトサン粉末の調製：
カニ殻より調製された乾燥キチンを、４７重量％水酸化ナトリウム水溶液で１０５℃、４時間加熱して脱アセチル化してキトサンを得た。次いで、ろ過してろ液を除き、５回水洗後、５０℃で３時間乾燥し、自然冷却させた後、インペラー式粉砕機を用いて１５０メッシュに粉砕してキトサン粉末を得た。
【００２３】
免疫賦活組成物投与群には、上記の本発明免疫賦活組成物を、マウス体重１ｋｇあたり２０ｇ（フコイダン０．１ｇ、キトサン１．０ｇ）となるように投与した。フコイダン投与群には、フコイダンを精製水に溶解し、マウス体重１ｋｇあたり０．２ｇとなるように投与した。キトサン投与群には、キトサンを精製水に懸濁し、マウス体重１ｋｇあたり２ｇとなるように投与した。生理食塩水投与群には生理食塩水０．４ｍＬを投与した。飼料は市販固型飼料を自由摂取させた。
【００２４】
測定結果を下記の表に示す。なお、生理食塩水投与群のＮＫ細胞の傷害活性を１００％として細胞傷害活性を評価した。
【００２５】
【表１】
2005060327.tif 000002
【００２６】
ＮＫ細胞障害活性増加％（対生理食塩水投与群）を比較すると、免疫賦活組成物投与群の倍量のキトサン及びフコイダンをそれぞれ投与した群は、３．８％及び１３．８％の増加しか示さなかったが、本発明の免疫賦活組成物投与群は３４．７％の増加であった。本発明の免疫賦活組成物投与群は、キトサン及びフコイダンが単独投与群の半量であったにもかかわらず、キトサン投与群に比べ約９．１倍、フコイダン投与群に比べ約２．５倍のＮＫ細胞障害活性を上昇させ、本発明の免疫賦活組成物は極めて優れた免疫増強効果を示した。