(57)【要約】【課題】  シソ科に属する植物由来の活性物質とビートの製糖工程から生じる副産物である食物繊維からなる複合物を利用した脂質代謝改善作用を有する組成物を提供すること。【解決手段】  下記の化学式（Ａ）で表されるジヒドロキシベンゾエート誘導体およびビート由来の食物繊維を含有する脂質代謝改善剤を提供する。【化１】2005145866.tif 000010【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学構造式（Ａ）で表されるジヒドロキシベンゾエート誘導体およびビート由来の食物繊維を含有する脂質代謝改善剤。
【化１】
2005145866.tif 000009
【請求項２】
ジヒドロキシベンゾエート誘導体が、オレガノ（Origanum ｖulgare L.)の地上部から含水有機溶媒で抽出して得られる、該化合物を含む抽出物である請求項１記載の脂質代謝改善剤。
【請求項３】
ビート由来の食物繊維が、ビート製糖工程の副産物として生じるものである請求項１記載の脂質代謝改善剤。
【請求項４】
請求項１記載の脂質代謝改善剤を含有する食品素材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質代謝改善剤に関し、詳しくはシソ科に属する植物であるオレガノ（Origanum vulgare L.）由来のジヒドロキシベンゾエート誘導体とビート由来の食物繊維を含有する脂質代謝改善剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来の栄養成分や機能性成分に着目した複合食品の製造並びにその利用には、他の食品への添加、複合化を容易にする単一食品の粉末化技術（特許文献１参照）、食品製造の混合工程を改善するためのコーティングによる複合食品素材製造技術（特許文献２参照）など、添加する食品素材の工業的な利用性を改善し、素材が有する特性自体の混合・添加を可能とする技術がある。
また、複数の素材がそれぞれ持つ相異なる特性を混合した食品製造技術（特許文献３参照）、食品素材の配合による栄養素改善技術（特許文献４参照）など、相異なる特性の混合・添加を可能とする技術もある。
ところで、食品の摂取が十分になって栄養状態が良くなった反面、摂取栄養素の過不足や食生活の乱れ等による肥満、糖尿病、循環器疾患などの生活習慣病の増大が社会的問題となり、食品に含有される抗酸化物質など、食品の持つ生体調節機能の解明が進められ、生体調節機能成分を含有させた食品、飲料の開発も盛んに行われている。
しかしながら、これらの食品は毎日の食事摂取とは別に補充するもので、正しい内容の食事の規則的な摂取に資することを目的とする食品開発は遅れている。
【０００３】
【特許文献１】特開平5-316952号公報
【特許文献２】特開平8-70793号公報
【特許文献３】特開平11-276073号公報
【特許文献４】特開平11-103824号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、本発明は体内への安全性の点で安心な植物由来の優れた抗酸化物質について、毎日の食事で不足しがちな食物繊維成分との複合摂取時の相乗効果を解明し、さらに、当該植物由来物質を含む複合剤が有する生体抗酸化作用により脂質代謝改善効果を発揮し、毎日の食事で摂取することができる食品や飲料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上述の目的達成のため、先に発明した「ジヒドロキシベンゾエート誘導体、その製造方法およびその利用」（特願2003-50508号明細書）に着目し、鋭意研究を進める過程で、オレガノ（Origanum vulgare L.）の地上部から分画したジヒドロキシベンゾエート誘導体を含む抽出物が有する生体抗酸化作用に着目した。当該化合物の機能についてさらに検討を重ね、その過程で製糖工程から生じる副産物である食物繊維成分（例えば、ビートファイバー、（株）日本甜菜製糖）と組み合わせて用いることにより、これらが単独で有する機能性と比べて、より強い脂質代謝改善効果が奏されることを見出し、本発明に到達した。
【０００６】
請求項１に記載の本発明は、下記化学構造式（Ａ）で表されるジヒドロキシベンゾエート誘導体およびビート由来の食物繊維を含有する脂質代謝改善剤である。
【０００７】
【化１】
2005145866.tif 000002
【０００８】
請求項２に記載の本発明は、ジヒドロキシベンゾエート誘導体が、オレガノ（Origanum vulgare L.）の地上部から含水有機溶媒で抽出して得られる、該化合物を含む抽出物である請求項１記載の脂質代謝改善剤である。
請求項３に記載の本発明は、ビート由来の食物繊維が、ビート製糖工程の副産物として生じるものである請求項１記載の脂質代謝改善剤である。
請求項４に記載の本発明は、請求項１記載の脂質代謝改善剤を含有する食品素材である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、シソ科植物であるオレガノ由来のジヒドロキシベンゾエート誘導体並びにビート製糖工程の副産物として生じる食物繊維を含有する脂質代謝改善剤が提供される。
本発明のジヒドロキシベンゾエート誘導体は、従来から香辛料として利用されてきた天然の植物であるオレガノに由来するので、取り扱いが平易で、安全性が高く、副作用の心配もない。食物繊維も、製糖原料のビートに由来し、製糖工程において副産物として生産される成分であり、安定的に入手することが可能で、同様に安全性が高く、副作用の心配もない。
【００１０】
本発明の脂質代謝改善剤は、かかる天然の植物に由来する素材を組み合わせた複合物からなり、様々な食品、医薬品等に広く適用される。特に、肝臓におけるコレステロール合成抑制効果を有しているので、生活習慣病の効果的な予防などへの利用が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明について詳細に説明する。
請求項１に記載の脂質代謝改善剤に係るジヒドロキシベンゾエート誘導体は、前記化学構造式（Ａ）で表されるものであり、オレガノ（Origanum vulgare L.）から抽出される成分の一つである。本物質の正式名は、4'-β-D-グルコピラノシルオキシ-3'-ヒドロキシフェニルメチル-3,4-ジヒドロキシベンゾエート（4'-β-D-glucopyranosyloxy-3'-hydroxyphenylmethyl-3,4-dihydroxybenzoate）である。
本発明においては、該化合物として必ずしも純品を用いる必要はなく、下記するオレガノの含水有機溶媒抽出物であっても良く、あるいは使用目的などを考慮して該抽出物を適度に精製したものを使用することができる。すなわち、使用目的などに応じて、所望の純度の濃縮液として用いられる他、凍結乾燥により粉末化して使用することができる。
オレガノは、先述した通り、シソ科に属する植物で香辛料として用いられている植物である。オレガノ，グリークオレガノ，シリアンオレガノ，ゴールデンオレガノまたは、オレガノ品種と他品種との交配種などの品種があるが、本発明に用いられるものは、これらに限定されるものではなく、近縁種にも含まれている。
【００１２】
請求項１に記載の脂質代謝改善剤に係るジヒドロキシベンゾエート誘導体は、このようなオレガノの植物体の地上部、特に葉，花，茎，芽等に含まれている。例えば葉には、1g中に約3.8mgと比較的豊富に含まれている。
このように、ジヒドロキシベンゾエート誘導体は、オレガノという天然の植物に由来するので、取り扱いが平易であり、安全性が高く、副作用の心配もない。また、先述のように、オレガノ葉1g中に約3.8mgと比較的大量に含有されているので、工業的利用に適している。
該ジヒドロキシベンゾエート誘導体は、オレガノから抽出、製造することができるが、上記化学構造式（Ａ）で表されるものであれば由来や製造方法は限定されず、オレガノ以外の天然の植物（例えば、ハーブ類）、微生物、動物から抽出されたものであっても、また、合成されたものであっても良い。
【００１３】
オレガノの地上部からジヒドロキシベンゾエート誘導体を効率よく製造するには、オレガノの地上部から含水有機溶媒で抽出する方法が好ましい。
ここで、オレガノの地上部とは、先述の通り葉，茎，芽等が例示されるが、乾燥による粉末化などの加工を施し、抽出を容易にすることができる点で、葉の使用が適している。
また、含水有機溶媒としては、アセトン，メタノール，エタノール，ブタノール，アセトニトリル，テトラヒドロフランなど有機溶媒の含水物を用いることができる。
抽出の際の条件は、使用目的や使用濃度に応じて、所望の純度のジヒドロキシベンゾエート誘導体を得ることができるように適宜定めることができる。例えば室温（15〜30℃）にて１週間以上、通常は１週間〜10日間とすることができる、また、各種カラムを用いた吸着クロマトグラフィー，ゲル濾過クロマトグラフィー，逆相クロマトグラフィー等の各種クロマトグラフィーを単独で、または組み合わせて精製することもできる。
ここで、抗酸化性物質であり、ジヒドロキシベンゾエート誘導体の部分構造であるプロトカテキュ酸が脂質代謝改善効果を示すことが明らかとなっている（Akiko Tamura, Michihiro Fukushima, Ken-ichiro Shimada, Kyu-Ho Han, Mitsuo Sekikawa, Masayuki Mikami, Masuo Nakano, Megumi Matsumoto, Hideyuki Chiji, Cholesterol Metabolism in Rat Is Affected by Protocatechuic Acid. J. Nutr. Sci. Vitaminol.（印刷中、2003）ので、抗酸化活性を指標に分画を行うことができる。
【００１４】
オレガノの地上部からジヒドロキシベンゾエート誘導体を製造する方法の具体的な例を示すと、オレガノの地上部（例えば、オレガノ乾燥葉）を含水有機溶媒（例えば、含水エタノール溶液）を用いて抽出後、抽出液と残渣を濾紙やガラスフィルター等で分離し，濾液を減圧濃縮する。必要に応じて、得られた濃縮液を有機溶媒可溶部と水可溶部に分配し、水可溶部を濃縮して適当な有機溶媒濃度（例えば、70〜95％）となるように調製する。得られた溶液を−40〜−10℃で静置し、沈殿が生じた場合は、濾紙やガラスフィルター等を用いて、除去する。
【００１５】
こうして得られるオレガノの抽出物（濃縮液）は、目的とするジヒドロキシベンゾエート誘導体を含有している。
なお、使用目的や使用濃度によっては、さらに純度の高い高度に精製された化合物を得たい場合もある。その場合、例えば、上述の抽出を第一段階として、所望の純度に応じて以下の工程を続けて行うことにより、各工程を経るごとに純度の高いジヒドロキシベンゾエート誘導体を得ることができる。
【００１６】
すなわち、第二段階としては、上述の第一段階で得られたオレガノ抽出物（濃縮液）を、活性炭やダイヤイオンHP-20（三菱化学）等を担体に用いた吸着カラムクロマトグラフィーに供する。吸着物質を含水有機溶剤（例えば、含水エタノール溶液）を用いて溶出し、抗酸化活性を指標として、活性の高い溶出分画を得る。
ここで、抗酸化活性の測定は、一般的な方法により行うことができるが、例えば1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl（DPPH）ラジカルの消去能を指標にした方法（Yamaguchi T., Takamura H., Matoba, T.,and Terao, J., HPLC method for evaluation of the free-radical scavenging activity of foods by using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl. Biosci. Biotechnol. Biochem., 62, 1201-1204(1998)）で行うことができる。
【００１７】
第三段階として、第二段階で得られる溶出分画を、例えば、Sephadex LH-20（Amersham Biosciences社）等のカラムを用いたゲル濾過クロマトグラフィーに供して、含水有機溶媒（例えば、含水エタノール溶液）を用いて溶出し、抗酸化活性を指標として、活性の高い分画を得る。なお、抗酸化活性の測定については、上述したのと同様の方法を用いることができる。
【００１８】
第四段階として、第二段階で得られる溶出分画を、逆相系中圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムは、例えば、Lobar LiChroprep RP-18 (Merck社)等を使用することができる。含水有機溶媒（例えば、エタノール：水：酢酸混液）を用いて溶出し、抗酸化活性を指標として、活性の高い分画を得る。
【００１９】
さらに、第五段階として、第四段階で得られる溶出分画を濃縮し、逆相高圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムは、例えば、Inertsil ODS カラム（GL Science社）等を使用することができる。移動層として含水有機溶媒（例えば、エタノール：水：酢酸混液）を用いて溶出し、抗酸化活性を指標として、活性の高い溶出区を得る。
【００２０】
第五段階終了後、得られる溶出分画を所望により濃縮すると、純度の高い、高度に精製された白色粉末状のジヒドロキシベンゾエート誘導体を得ることができる。
なお、所望の純度のオレガノ抽出物が得られた等の理由で第二、第三、第四および第五段階のいずれかで抽出を終了する場合も、各段階で得られる溶出分画を所望により濃縮して、オレガノ抽出物を得ることができる。また、所望により、任意の純度のものを凍結乾燥などにより粉末化して用いることもできる。
【００２１】
一方、食物繊維（ビートファイバー）は、砂糖の原料であるビート（甜菜、砂糖大根、学名：Bete vulgaris L.）の製糖工程において副産物として生産されるものである。これは、水溶性食物繊維と不溶性食物繊維の複合型食物繊維素材であり、通常は灰白色の粉末として得られる。その成分組成は、水分4.5％、粗タンパク質9.0％、粗脂肪0.6％、糖質1.5％、灰分3.0％、繊維質81.4％である。
繊維質成分の内訳は、ペクチン19.0％、ヘミセルロース36.4％、セルロース23.0％、リグニン3.0％である。
従って、ビート由来の食物繊維は天然の各種食物繊維製品の中でも、高い繊維含有率を示し、野菜由来の繊維質をそのまま保持しているので、その利用にあたっては、微量の単体で本来の食物繊維形態での摂取を可能にする。
【００２２】
本発明に用いるジヒドロキシベンゾエート誘導体、あるいは当該化合物を含むオレガノの抽出物（以下において、単にジヒドロキシベンゾエート誘導体と称することがある）は、ビート製糖工程の副産物として生じる食物繊維と組み合わせて脂質代謝改善剤として利用される。かかる複合剤の調製方法について、以下に例示する。
【００２３】
本発明の脂質代謝改善剤において、ジヒドロキシベンゾエート誘導体と食物繊維の配合比率については、厚生労働省の定める栄養表示基準第５条〜第７条に規定される食物繊維強化等基準量により、食品100gあたり3〜6g（3〜6％添加）を参考に、複合剤の配合上限量を食品100gあたり5g（5％添加）として、上限量範囲内でジヒドロキシベンゾエート誘導体と食物繊維の配合割合を変え、ラットを用いた摂食試験、成長試験、生体機能阻害試験を繰り返し行って、以下の結果を得た。
ジヒドロキシベンゾエート誘導体が100mg／gの濃度で含まれているオレガノの抽出物5％（これは添加量の上限であり、食物繊維無添加）の飼料では、ハーブ特有の渋みによる摂食量の低下が確認されたため、順次オレガノ抽出物の添加量を減少させ、食物繊維：当該オレガノ抽出物＝9：1の割合とした複合物を5％添加することが適正比率であると解明した。
このことは、ヒトの摂食においても、食品100gあたり上記オレガノ抽出物0.5gと食物繊維4.5gの割合で配合した複合物が適正配合量であることを示すものである。
【００２４】
そこで、請求項１記載の本発明に係る脂質代謝改善剤の具体的な利用例について検討した。
すなわち、食物繊維を外付添加しないウィンナーソーセージを用いて、複合剤の混合試験を実施した。動物試験で得たジヒドロキシベンゾエート誘導体含有オレガノ抽出物と食物繊維の適正配合割合である複合剤（食物繊維：オレガノ抽出物＝9：1）をウィンナーソーセージ100gに混合して製造性試験、官能試験を行い、表１に示す結果を得た。つまり、ウィンナーソーセージには複合剤1％の外付添加（ウィンナーソーセージ100gに対して複合剤1g）が最適であることが明らかとなった。
次に、上記の複合剤最適配合量1％に基づいて、当該複合剤1％を外付配合したウィンナーソーセージに、日常の食事で不足しがちなカルシウムを添加し、当該複合剤と他の栄養素の同時配合による栄養分析試験を実施した。その結果、表２に示す通り、食品本来の栄養価に何ら悪影響を与えることなく、カルシウム高含有食品を製造できることが明らかになり、今後、目的に応じた機能性と栄養素を強化した食品設計が可能である。
【００２５】
【表１】
2005145866.tif 000003
【００２６】
【表２】
2005145866.tif 000004
【００２７】
本発明の脂質代謝改善剤は、種々の形態として上記複合物単独で用いられる他、様々な食品に添加したり、あるいは医薬品などとして広く利用することができる。
【実施例】
【００２８】
以下に実施例などを示し、本発明を具体的に示す。しかし、本発明の範囲は、これらの実施例に限定されるものではない。
【００２９】
製造例１〔ジヒドロキシベンゾエート誘導体を含むオレガノ抽出物の分離〕
オレガノ乾燥葉（100g）を含水メタノール溶液（メタノール：水＝8：2）を用いて抽出した。抽出液は濾紙を用い濾過し、濾液を減圧下、濃縮した。得られた濃緑色シラップを、有機溶媒（酢酸エチル）可溶部と水可溶部とに分配した。
有機溶媒（酢酸エチル）可溶部と水可溶部について、抗酸化活性を調べた。すなわち、所定の濃度の1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl（DPPH）ラジカルエタノール溶液に抽出物を加え、20分後の溶液の脱色の度合いを、吸光度を測定することで評価した。脱色能が高い分画に抗酸化物質が含まれていると判断した。なお、以下の工程における抗酸化活性の測定も、同様の方法により行った。
その結果、両可溶部に抗酸化活性が観察されたが、水可溶部において、より強い抗酸化活性が観察された。
【００３０】
そこで、活性の強い水可溶部について再び精査した。すなわち、得られた水可溶部を濃縮し、80％エタノール溶液になるように調製し、−25℃の条件で静置した。この工程により沈殿が生じたので、濾紙を用いて沈殿を除去し、得られた濾液を濃縮した。
濃縮後、得られたシラップをダイヤイオンHP-20（三菱化学）を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに供した。水および含水メタノール溶液（メタノール：水＝7：3）を用いて溶出した。活性の確認された溶出区を濃縮し、シラップを得た。
得られたシラップを凍結乾燥し、ジヒドロキシベンゾエート誘導体を含むオレガノ抽出物（粉体）3.98ｇを得た。
【００３１】
製造例２〔オレガノ抽出物とビート食物繊維の複合剤の調製〕
製造例1で得られたジヒドロキシベンゾエート含有オレガノ抽出物とビートの製糖工程において副産物として生産される食物繊維成分（ビートファイバー、（株）日本甜菜製糖製）との複合剤を以下の通りに調製した。
25％カゼイン飼料をラット給餌用基本飼料とし、これにオレガノ抽出物の添加率を変えてラットに与える実験を繰り返し行い、ラットが摂食可能な添加量について検討した。その結果、オレガノ抽出物の添加量を0.5％にすることで摂食量の減少、それに伴う成長阻害が起きることなく、ラットが摂食可能な添加量であることが明らかとなった。
【００３２】
そこで、対照の25％カゼイン飼料（Control）、該対照に0.5％オレガノ抽出物を添加した飼料、該対照に5％ビートファイバーを添加した飼料、該対照に0.5％オレガノ抽出物と4.5％ビートファイバーを添加した飼料並びにジヒドロキシベンゾエートの構成成分であるプロトカテキュ酸と比較するため、該対照に0.5％プロトカテキュ酸を添加した飼料の合計５種類の飼料を調製した。表３に投与した飼料群、表４に各飼料の組成を示す。
【００３３】
【表３】
2005145866.tif 000005
【００３４】
【表４】
2005145866.tif 000006
【００３５】
実施例１〔肝臓コレステロール合成抑制効果〕
製造例２で調製した５種類の飼料を用いて、肝臓コレステロール合成抑制効果について評価した。
実験動物は７週齢のSprague Dawley系雄ラット30匹を用いて25％カゼイン飼料で６日間予備飼育後、尾静脈中の総コレステロール濃度が等しくなるように１群６匹として組換え、各群に対して表３に示す飼料を投与して３週間飼育した。飼育期間中、飼料および飲料水(水道水)は自由摂取とした。
３週間飼育後、４時間絶食、絶水後、ネンブタール（0.09ml／体重100ｇ)麻酔下で開腹し、放血後、肝灌流処理をした肝臓、腎臓、腎周囲脂肪組織、副睾丸周囲脂肪組織および盲腸を摘出し、重量を測定した。
【００３６】
解剖時に摘出、重量測定した臓器および組織重量の結果を表５と図１に示す。表５における数値はラット体重100ｇ当たりのｇ数を示し、また、表５と図１中の異なったアルファベット間に有意差（ｐ<0.05）があることを示す。
これらの結果から明らかなように、盲腸重量は、飼料にオレガノ抽出物を単味で添加したオレガノ抽出物添加群（Org.Ext.群）、飼料にオレガノ抽出物とビートファイバーの混合物を添加した群（Org.Ext. + SBF群）で有意に増加し、ビートファイバーを単味で添加した群（SBF群）より腸内発酵が盛んに行われていることが認められた。
また、内臓脂肪である腎周囲脂肪組織重量では、対照群に比べ、飼料にビートファイバーを単味で添加した群（SBF群）では有意に増加したが、オレガノ抽出物とビートファイバーの混合物を添加した群（Org.Ext. + SBF群）では有意に低下した。副睾丸周囲脂肪組織重量では、対照群, Org.Ext.群,飼料にプロトカテキュ酸を添加した群（PA群）に比べてSBF群で増加傾向が認められ、Org.Ext. + SBF群では有意に低下していた。
【００３７】
【表５】
2005145866.tif 000007
P<0.05
【００３８】
次に、肝臓は凍結乾燥後、Folchらの方法（Folch, J.,Lee, M. and Sloane-Stanley, J. H., A Simple Method for the Isolation and Purification of Total Lipids from Animal Tissues, J. Bio. Chem., 226, 497-509(1957))に従って脂質を抽出し、定容後、総コレステロール、トリグリセリド、リン脂質含量を(株)カイノスのキットを用いて測定し、肝臓1g中の各脂質の含有量を算出した。その結果を表６、図２、図３および図４に示す。表６中の数値の単位はmg/g肝臓である。
これらの図表から明らかなように、肝臓1g中の総コレステロール含量は、Org.Ext. + SBF群で有意に低下した。また、トリグリセリド含量およびリン脂質含量については、対照群に比べ、他の４群で有意に低下したが、この４群の中でもOrg.Ext. + SBF群は一層低下傾向にあった。なお、表６、図２、３並びに４中の異なったアルファベット間に有意差（ｐ<0.05）があることを示す。
【００３９】
【表６】
2005145866.tif 000008
（ｐ<0.05）
【００４０】
以上の結果から、飼料にオレガノ抽出物あるいはビートファイバーを単味で添加した場合よりも、オレガノ抽出物とビートファイバーを組み合わせた複合剤を添加した場合において肝臓中の総コレステロール含量、トリグリセリド含量、リン脂質含量を減少させ、内臓脂肪の蓄積を有意に抑制することが分かった。
このことから、オレガノ抽出物とビートファイバーからなる複合物は、肝臓中の脂質含量の有意な低下から、肝臓におけるコレステロール合成抑制効果があることが明らかとなった。また、オレガノ抽出物における内臓脂肪組織重量、肝臓中の脂質含有量、腹部大動脈血の脂質代謝に及ぼす影響は、オレガノ抽出物単味よりもビートファイバーと組み合わせることにより、相乗効果をもたらすことが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
したがって、本発明により肝臓におけるコレステロール合成抑制機能を有する脂質代謝改善剤が提供される。本発明に用いるオレガノ抽出物とビートファイバーは共に従来から食素材として利用されてきた天然の植物に由来するのであり、取り扱いが平易で、安全性が高く、副作用の心配もない。それ故、脂質代謝改善機能を有する新規な素材として、様々な食品、医薬品に広く適用され、生活習慣病の効果的な予防などに利用されることが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】各飼料投与群におけるラット内臓脂肪重量の測定値を示す。
【図２】肝臓１ｇ中の総コレステロール含量を示す。
【図３】肝臓１ｇ中のトリグリセリド含量を示す。
【図４】肝臓１ｇ中のリン脂質含量を示す。
【図１】
2005145866.tif 000011
【図２】
2005145866.tif 000012
【図３】
2005145866.tif 000013
【図４】
2005145866.tif 000014