(57)【要約】【課題】  製造工程において、中空管状体に伸び、収縮、折れなどが起こりにくい、また薄片化工程においては割れや切断面の乱れ等の不都合が生じることがない、またはその確率が極めて低いＤＮＡチップの生産方法をまた、中空管状体スポットの変形、配列の乱れなどが極めて少ないマイクロアレイを提供する。【解決手段】  貫通孔を構成する中空管状体として、剛性率が０．０６以上であり、引っ張り試験における降伏強度が２００ｇ以上であり、熱収縮率が２％以下であり、且つ折れ試験で中空管状体が折れた時の円の直径が２ｍｍ以下る中空管状体を用いる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の貫通孔を含む生体関連物質検出用マイクロアレイにおいて、貫通孔が以下の（１）〜（４）の条件を満たす中空管状体により形成されていることを特徴とする生体関連物質検出用マイクロアレイ。
（１）剛性率が０．０６以上
（２）引っ張り試験における降伏強度が２００ｇ以上
（３）熱収縮率が２％以下
（４）折れ試験で中空管状体が折れた時の円の直径が２ｍｍ以下
【請求項２】
下記（１）〜（３）の工程を順次実施することを含む生体関連物質検出用マイクロアレイの製造方法。
（1）中空管状体の集束固定物を形成する工程。
（2）中空管状体の中空部内表面及び／又は中空部に生体関連物質を固定する工程、
（3）中空管状体集束固定物を管状体の長手方向に交叉する方向で切断して薄片化する工程。
〔ただし、中空管状体は、以下の（ａ）〜（ｄ）の条件を満たす。
（ａ）剛性率が０．０６以上、（ｂ）引っ張り試験における降伏強度が２００ｇ以上、（ｃ）熱収縮率が２％以下、（ｄ）折れ試験で中空管状体が折れた時の円の直径が２ｍｍ以下〕
【請求項３】
貫通孔が中心間距離Ｐで縦横に規則的に配置されている、複数の貫通孔を含む生体関連物質検出用マイクロアレイにおいて、縦横に隣接する中空管状体の中心間距離Ｐの変動率（式１）が２５％以下であることを特徴とするマイクロアレイ。
＜式１＞  
変動率＝（Ｘ／Ｐ）×１００
Ｘ＝（縦横に隣接する中空管状体の中心間距離の最大値）−（縦横に隣接する中空管状体の中心間距離の最小値）
【請求項４】
複数の貫通孔を含む生体関連物質検出用マイクロアレイにおいて、貫通孔の直径Ｒと、用いた元の中空管状体の直径Ｘの比（Ｒ／Ｘ）が０．８以下である中空管状体が、全体の配列数の５％以下であることを特徴とするマイクロアレイ。
【請求項５】
樹脂で固定化された複数の中空管状体の断面からなるマイクロアレイであって、断片中の管状体の真円度（中空管状体の短径／中空管状体の長径）が０．８以下である中空管状体が、全体の配列数の５％以下であることを特徴とするマイクロアレイ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は核酸等の生体関連物質を光学的に検出するために用いられる生体関連物質検出用マイクロアレイ及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、多数遺伝子の一括発現解析を可能とするＤＮＡマイクロアレイ法（ＤＮＡチップ法）と呼ばれる分析法が開発され注目を集めている。これらの方法は、いずれも核酸間のハイブリダイゼーション反応に基づく核酸の検出・定量法である。ＤＮＡチップとしては、従来からシート状物の表面上にキャプチャープローブを配置したものが知られている。
【０００３】
最近では、ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）等の透明樹脂製板状物上に設けられた多数の凹部にキャプチャープローブを配置したもの（特許文献１）、多数の貫通孔を有するシート物の貫通孔部にキャプチャープローブを配置したもの（特許文献２及び特許文献３）が知られている。
【０００４】
また、本発明者らの一部も、中空管状体等の管状体の中空部にキャプチャープローブを配置したものを束ねて薄片化して得られるDNAマイクロアレイを提案している（特許文献４〜６）。これらのＤＮＡチップは、キャプチャープローブが中空管状体の中空部の内表面に直接保持、またはポリアクリルアミド架橋体等と水を含むゲル状物を介して中空部内に保持されている。
【０００５】
これらの従来技術のうち中空管状体を用いるマイクロアレイは、同じ形態のＤＮＡチップを大量生産できることから、生産コストの低減が期待されている。しかしながら、中空管状体を用いるマイクロアレイは、中空管状体を整然と配列する工程（配列工程）、配列された中空管状体を樹脂等で包埋する工程（包埋工程）、中空管状体内にキャプチャープローブを保持する工程（保持工程）、キャプチャープローブが保持された中空管状体束を切断して薄片化する工程（薄片化工程）等、多くの工程を有する。例えば、配列工程では、これまでに提案されている中空管状体では、剛性率が低いために整然とした配列することが難しく、配列精度が悪いマイクロアレイとなる場合があった。また、中空管状体の引っ張り試験における降伏強度が低く、配列中に中空管状体が伸びてしまうため、各中空管状体径にばらつきが生じる場合があった。包埋工程では、中空管状体の熱収縮率が大きいため、束を固定するために熱硬化性樹脂を用い包埋した場合、中空管状体の収縮等が生じ、中空管状体径にばらつきが生じる場合があった。薄片化工程では中空管状体に割れや中空管状体つぶれ（真円度の低下）の不都合が生じており、ゲル状物の飛び出しなどの不具合が生じやすかった。
【特許文献１】特開2000-60554号公報
【特許文献２】国際公開95/11755号パンフレット
【特許文献３】特開2000-78998号公報
【特許文献４】国際公開99/13311号パンフレット
【特許文献５】国際公開99/19711号パンフレット
【特許文献６】国際公開00/40942号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、すべての製造工程において、中空管状体に伸び、収縮、折れなどが起こりにくい、また薄片化工程においては割れや切断面の乱れ等の不都合が生じることがない、またはその確率が極めて低いＤＮＡチップの生産方法をまた、中空管状体スポットの変形、配列の乱れなどが極めて少ないマイクロアレイを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、貫通孔を構成する中空管状体として、剛性率が０．０６以上であり、引っ張り試験における降伏強度が２００ｇ以上であり、熱収縮率が２％以下であり、且つ折れ試験で中空管状体が折れた時の円の直径が２ｍｍ以下る中空管状体を用いることにより上記課題が解決できることを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
即ち本発明は、（Ａ）複数の貫通孔を含む生体関連物質検出用マイクロアレイにおいて、貫通孔が以下の（１）〜（４）の条件を満たす中空管状体により形成されていることを特徴とする生体関連物質検出用マイクロアレイ。
【０００９】
（１）剛性率が０．０６以上
（２）引っ張り試験における降伏強度が２００ｇ以上
（３）熱収縮率が２％以下
（４）折れ試験で中空管状体が折れた時の円の直径が２ｍｍ以下
（Ｂ）下記（１）〜（３）の工程を順次実施することを含む生体関連物質検出用マイクロアレイの製造方法。
【００１０】
（1）中空管状体の集束固定物を形成する工程。
【００１１】
（2）中空管状体の中空部内表面及び／又は中空部に生体関連物質を固定する工程、
（3）中空管状体集束固定物を管状体の長手方向に交叉する方向で切断して薄片化する工程。〔ただし、中空管状体は、以下の（ａ）〜（ｄ）の条件を満たす。
【００１２】
（ａ）剛性率が０．０６以上、（ｂ）引っ張り試験における降伏強度が２００ｇ以上、（ｃ）熱収縮率が２％以下、（ｄ）折れ試験で中空管状体が折れた時の円の直径が２ｍｍ以下〕
（Ｃ）貫通孔が中心間距離Ｐで縦横に規則的に配置されている、複数の貫通孔を含む生体関連物質検出用マイクロアレイにおいて、縦横に隣接する中空管状体の中心間距離Ｐの変動率（式１）が２５％以下であることを特徴とするマイクロアレイ。
【００１３】
＜式１＞
変動率＝（Ｘ／Ｐ）×１００
Ｘ＝（縦横に隣接する中空管状体の中心間距離の最大値）−（縦横に隣接する中空管状体の中心間距離の最小値）
（Ｄ）複数の貫通孔を含む生体関連物質検出用マイクロアレイにおいて、貫通孔の直径Ｒと、用いた元の中空管状体の直径Ｘの比（Ｒ／Ｘ）が０．８以下である中空管状体が、全体の配列数の５％以下であることを特徴とするマイクロアレイ。
【００１４】
（Ｅ）樹脂で固定化された複数の中空管状体の断面からなるマイクロアレイであって、該断面中の中空管状体の真円度（中空管状体の短径／中空管状体の長径）が０．８以下である中空管状体が、全体の配列数の５％以下であることを特徴とするマイクロアレイ。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のマイクロアレイの製造方法は、中空管状体の束状化工程から束状物の薄片化工程の間に中空管状体の配列乱れや、切断面における中空管状体の割れ等の不都合が生じる確率が極めて低い。即ち、本発明の製造技術は製品歩留まりが高いので、マイクロアレイの生産コストを低減できる。
【００１６】
また、本発明のマイクロアレイは配列精度か極めてよく、また中空管状体スポット径のむらや中空管状体の変形が極めて少ないため、精度良い検出が可能になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１８】
本発明は、複数の貫通孔を含む生体関連物質検出用マイクロアレイにおいて、貫通孔が以下の（１）〜（４）の条件をすべて満たす中空管状体により形成されていることを特徴とする生体関連物質検出用マイクロアレイ、である。
【００１９】
（１）剛性率が０．０６以上、
（２）引っ張り試験における降伏強度が２００ｇ以上、
（３）熱収縮率が２％以下、
（４）折れ試験で中空管状体が折れた時の円の直径が２ｍｍ以下。
【００２０】
複数の貫通孔を含むマイクロアレイとは、例えば複数本の中空管状体を準備し、その管状体を互いに平行になるように配置し束状とし、その束を樹脂等の包埋剤により固定し、固定した束を管状体の長手方向と交叉する方向で切断することにより得られる。
【００２１】
上記のマイクロアレイにおいて、中空管状体の剛性率とは、下記の＜１＞〜＜５＞により測定される（図１参照）。
【００２２】
＜１＞  長さ２０ｃｍ、直径２７０μｍの中空管状体を用意する。
【００２３】
＜２＞  その中空管状体を使用し、ある直径の円形の輪１を作り、その繊維の交叉点２を、５ｍｍ×５ｍｍのテープで止める。
【００２４】
＜３＞  ある重さ（Ｐ１）の錘をぶら下げ、このときの長径の直径（ｄ４）を測定する。
【００２５】
＜４＞  ある重さ（Ｐ２）の錘をぶら下げ、このときの長径の直径（ｄ５）を測定する。
【００２６】
＜５＞  剛性率を以下の式１により算出する。
【００２７】
＜式１＞
剛性率Ｇ＝Ｐ２−Ｐ１／ｄ５−ｄ４
このようにして測定した剛性率は中空管状体の硬さの指標として表される。剛性率の小さい中空管状体は剛直性がなく、やわらかい中空管状体となる。一方剛性率の大きい中空管状体は剛直性があり、硬い中空管状体となる。
【００２８】
本発明では、剛性率が0.06以上の中空管状体を使用する。好ましくは、0.08以上である。剛性率が0.06以下の中空管状体を使用した場合、複数の管状体を配列し、束状とする際に管状体同士が絡みあう場合がある。また、束を切断する際に、管状体が変形し、中空部に保持されているゲル状物が飛び出る場合がある。
【００２９】
次に降伏強度は、通常の引っ張り試験で使用される試験機で測定することができる。一般に中空管状体を一定速度で延伸したとき、ある応力までは、応力をはずすと該管状体は元の長さに戻る（弾性領域）。しかし、ある応力を超えると、該管状体の長さは応力をはずしても元の長さには戻らなくなる（塑性領域）。このときの応力を降伏応力という。
【００３０】
本発明では、管状体（外径は約２７０μｍ）の初期長を２０ｍｍ、引っ張り速度を２０ｍｍ／ｍｉｎ．とし、室温（25℃）にて降伏強度の測定を行う。
【００３１】
本発明で集束固定物を製造する工程において、中空管状体は整然と配列することから張力をかけることが好ましい。このとき、中空管状体の降伏応力以上の力をかけると、中空管状体は延伸されてしまい、配列精度が悪くなる。また管状体の径が変わってしまうことから、キャプチャープローブを中空管状体内に固定化する際に不具合が生じる。
【００３２】
よって、降伏強度は、２００ｇ以上のものが好ましい。
【００３３】
次に熱収縮率は以下の＜１＞〜＜４＞の方法で測定される。
【００３４】
＜１＞  長さ２０ｃｍの中空管状体を用意する。
【００３５】
＜２＞  ７０℃に昇温した乾燥機に張力を付与しない状態で中空管状体を入れる。
【００３６】
＜３＞  １時間後乾燥機から取り出し、長さを測る。
【００３７】
＜４＞  収縮率を測定する。
【００３８】
中空管状体の集束固定物を作成する工程では、熱硬化性樹脂を用いる。このとき熱収縮率の大きい中空管状体を用いると、樹脂の硬化時の熱により中空管状体が収縮し、配列が乱れる恐れがある。またゲル重合時の熱によっても同様に収縮が起こってしまう恐れがある。この段階で配列が乱れると、スライス後のチップの配列も乱れるため、検出時、スポットの位置の認識が難しくなり、精度良い結果を得ることが困難になる。そのため、本発明に用いられる中空管状体の熱収縮率は７０度で１時間測定した場合、２％以下であることが好ましい。熱収縮率は、材料の種類によっても異なるが、中空管状体の高次構造によっても大きく異なってくる。ドラフト比が高い中空管状体や、後工程での延伸を行った中空管状体は、熱処理などにより高次構造を固定し、熱収縮率を抑える必要がある。
【００３９】
また、上記の他に本発明に用いる中空管状体として、中空管状体集束固定物を薄片化する際、中空管状体のつぶれおよび割れが起こりにくいものが好ましい。薄片化によって中空管状体に割れが生じると、検体が割れの隙間に入り込み、ノイズの増加につながる。またつぶれやすいと中空管状体内部のゲルが飛び出してしまう恐れがある。
【００４０】
本発明において、折れ試験は以下の＜１＞〜＜４＞の方法で測定を行う。
【００４１】
＜１＞  長さ１０ｃｍ、外径２７０μｍの中空管状体を用意する。
【００４２】
＜２＞  結節を作る（輪の大きさは１ｃｍ程度）。
【００４３】
＜３＞  中空管状体の両端を徐々に引っ張る。
【００４４】
＜４＞  結節部分を徐々に小さくし、糸が折れる直前の、結節部分の円の直径を測定する。
【００４５】
本発明では、中空管状体の集束工程などで曲げに対する中空管状体の折れが起こると、ゲル状物を中空管状体内に充填する際、折れた部分での液の流れの変化や折れにより中空管状体に穴があくことなどにより、充填に不具合が生じる可能性がある。こうして作製したマイクロアレイはゲル状物が充填されないスポットが生じる。このような観点から上記折れ試験において、中空管状体の結節部分の折れが２ｍｍ以下の中空管状体を用いることが好ましい。
【００４６】
上述の条件をすべて満たす材料としては、例えばポリカーボネート系、ポリプロピレン系、ポリエチレンテレフタレート系、ポリフッ化ビニリデン系中空管状体が挙げられる。
【００４７】
そのような材料から構成される中空管状体を使用してマイクロアレイが作成される。以下にマイクロアレイの製造方法に関して説明する。本発明のマイクロアレイは例えば、下記の（１）〜（３）の工程に従い、製造することができる。
【００４８】
（１）複数の管状体を準備し、該管状体を束状とする工程。
【００４９】
（２）束状とした管状体の各管状体の中空部に生体関連物質を検出しうる物質を含むゲル前駆体溶液を充填し、ゲル状物を管状体内に保持する工程。
【００５０】
（３）管状体の長手方向を交叉する方向で切断を繰り返し、マイクロアレイを得る工程。
【００５１】
第一の工程において、管状体を束とするには、粘着シート等のシート状物に複数本の中空管状体を平行に配置して固定した後、このシートを螺旋状に巻き取る方法、複数の穴の開いた多孔板２枚を重ね、それらの多孔板に存在する各穴に、各中空管状体を通過させ、２枚の多孔板の間隔を開くことによって２枚の多孔板の間で集束させる方法、等が例示できる。いずれの方法でも、管状体の配列の規則性を保つため、各管状体に張力を付与することが好ましい。
【００５２】
集束される中空管状体間の間隔は中空管状体の外径や本数に応じて適宜設定されるが、各中空管状体間の間隔は一定値であることが好ましい。中空管状体は全長に亘って集束固定することもでき、また長さ方向の一部を集束固定することもできる。中空管状体の集束固定化物を形成した後に各中空管状体中空部に生体関連物質を固定する場合、中空部内への生体関連物質の導入操作を容易にするために、中空管状体の一方の端部側の所定長さの部分を集束固定し、他端部側を集束せずに自由端とすることが好ましい。
【００５３】
管状体を配列した後、その束は、硬化性樹脂原料等により配列を固定する。硬化性樹脂原料としては、ウレタン樹脂、エポキシ樹脂等が使用される。蛍光測定時のノイズ減少の観点から、熱硬化性樹脂原料にも黒色顔料を含有させることができる。熱硬化性樹脂原料を使用する場合は加熱により樹脂原料を硬化させて中空管状体の集束固定物を得る。中空管状体配列時における張力を保ち、配列制度を維持する目的から、熱硬化性樹脂のなかでも、室温で硬化可能な樹脂が好ましく、硬化促進のための加熱は７０℃以下が好ましい。
【００５４】
第２の工程において、束状とした管状体の各管状体の中空部に生体関連物質を検出しうる物質を含むゲル前駆体溶液を充填する。
【００５５】
本発明において、生体関連物質は中空管状体の中空部内表面及びまたは中空部に固定される。生体関連物質は、中空管状体の中空部内表面に直接固定化させることができ、またゲル状物等と共に中空管状体の中空部に固定することができる。
【００５６】
固定化の際、固定化効率の観点から中空管状体の中空部内表面は、予めプラズマ処理、γ線、電子線などの放射線処理、poly-L-lysine等によるコーティング処理等を施すことが好ましい。更に、生体関連物質をゲル状物と共に中空管状体の中空部に固定する場合は、中空管状体とゲル状物の密着性を向上させるために、中空管状体の中空部内表面に反応性官能基を有する重合体、親水性重合体等でコーティング処理することもできる。反応性官能基を有する重合体としては、その主鎖の末端あるいは側鎖のいずれかにビニル基を有するものが例示される。
【００５７】
生体関連物質を検出しうる物質としては、以下の（1）〜（3）の物質群から選択されるものが挙げられる。
【００５８】
（1）核酸、アミノ酸、糖又は脂質。
【００５９】
（2）前記（1）の物質のうち少なくとも１種類の成分からなる重合物。
【００６０】
（3）前記（1）又は（2）の物質と相互作用を有する物質。
【００６１】
例えば、核酸を用いる場合、生細胞からのDNAの調製は、Blinらの方法(Nucleic Acids Res.3.2303(1976))等により行うことができ、また、RNAの抽出については、Favaloroらの方法(Methods.Enzymol.65.718(1980))等により行うことができる。また、鎖状若しくは環状のプラスミドDNA又は染色体DNAも使用することができる。これらのDNAとしては、制限酵素を用いて若しくは化学的手法を用いて切断したDNA断片、試験管内で酵素等により合成したDNA又は化学合成したDNA等を使用することもできる。
【００６２】
固定用の生体関連物質は、真空吸引法等によって中空管状体の中空部内に導入される。中空管状体集束固定物に生体関連物質を導入する場合、非集束端部の中空管状体を、生体関連物質を含む充填液中に浸した状態で、中空管状体の集束端部側を減圧状態にして中空管状体の中空部内に充填液を導入する方法が例示できる。
【００６３】
その際、異なる生体関連物質を含む複数の充填液が準備され、各中空管状体は互いに異なる生体関連物質と水等からなる充填液に浸される。尚、複数本の中空管状体を同一の充填液に浸すこともできる。生体関連物質をゲル状物と共に中空管状体の中空部に固定する場合は、これらの充填液中には、ゲル状物の原料となる単量体成分や架橋剤成分等を含有させることができる。
【００６４】
ゲル状物としては、例えばアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、Ｎ−アクリロイルアミノエトキシエタノール、Ｎ−アクリロイルアミノプロパノール、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドン、ヒドロキシエチルメタクリレート、（メタ）アクリル酸、アリルデキストリン等の単量体の一種類以上と、メチレンビス（メタ）アクリルアミド、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート等の多官能性単量体と共重合した架橋重合体を、水で膨潤させたゲルを用いることができる。
【００６５】
生体関連物質をゲル状物と共に中空管状体の中空部に固定する方法として、核酸の末端にビニル基を導入し、アクリルアミド等のゲル構成原料と共重合させる方法が挙げられる（WO 98/39351号公報参照）。また、アガロースを臭化シアン法でイミドカルボネート化しておき、末端をアミノ化した核酸のアミノ基と結合させ、ゲル化することもできる。他の方法としては、例えば、ビオチン化した核酸とアビジン化したアガロースビーズ（シグマ社製  アビジン化アガロース等）を反応させることによって、核酸が固定化されたアガロースビーズを得ることができる。この核酸固定化アガロースビーズはアクリルアミドゲル等に包括固定化することができる。
【００６６】
これらゲル状物の原料となる単量体成分の濃度は単量体の種類にもよるが、例えばアクリルアミド系モノマーの場合は２〜２０質量％程度である。充填液中にはメチレンビス（メタ）アクリルアミド等の架橋剤成分と共にアゾ系、過酸化物系、レドックス系等の重合開始剤が添加される。
【００６７】
第３の工程において、管状体の長手方向を交叉する方向で切断を繰り返し、マイクロアレイを得る。切断の角度は管状体の長手方向に対して垂直であることが好ましい。薄片シートの厚みは通常０．１〜１ｍｍ程度である。切断器具としてはミクロトーム、レーザー等が使用される。
【００６８】
このようにして得られた薄片シートは、複数の遺伝子の一括分析に利用されるため、１つの薄片シートに存在する中空管状体の本数は多い方が好ましく、薄片シート１cm2あたり100本以上であることが好ましい。薄片シート中の中空管状体に保持されている生体関連物質は、すべて異種類のものであってもよい。またｎ種類（ｎは任意の整数）の生体関連物質が一種類当たりｍ〜ｐ本（ｍ、ｐは整数）の中空管状体に保持されたものであってもよい。
【００６９】
中空管状体の内径、外径、厚み、長さ、使用本数は目的に応じて適宜設定できる。最終的に製造されるマイクロアレイの検出器としての感度・精度と検出素子密度を考慮して設定される。中空管状体の外径は通常２ｍｍ以下であるが、１ｍｍ以下であることが好ましく、３００μｍ以下であることがより好ましい。また厚みは０．０２ｍｍ以上であることが好ましい。また中空管状体の数は目的に応じて適宜設定でき、例えば５０〜１０００本程度である。
【００７０】
また、マイクロアレイを使用した蛍光測定時のノイズ減少の観点から、この中空管状体にはカーボンブラック等の黒色顔料を適量含有させたものを用いることができる。
【００７１】
上記方法で得られたマイクロアレイは、貫通孔が中心間距離Ｐで縦横に規則的に配置されている、複数の貫通孔を含む生体関連物質検出用マイクロアレイにおいて、縦横に隣接する中空管状体の中心間距離の変動率（式１）が２５％以下であることを特徴とするマイクロアレイ、である。
【００７２】
＜式１＞
変動率＝（Ｘ／Ｐ）×１００
Ｘ＝（縦横に隣接する中空管状体の中心間距離の最大値）−（縦横に隣接する中空管状体の中心間距離の最小値）
また、樹脂で固定化された複数の中空管状体の断面からなるマイクロアレイであって、  断面中の該管状体の真円度（中空管状体の短径／中空管状体の長径）が０．８以下である中空管状体が、全体の配列数の５％以下であることを特徴とするマイクロアレイ、である。
【実施例】
【００７３】
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
【００７４】
＜実施例１＞  中空管状体配列物の形成
直径0.32 mmの孔を有し、孔の中心間距離が0.42 mmの多孔板であって、縦横各１０列に合計１００個配列された厚さ0.1 mmの多孔板２枚を重ね、これらの多孔板の各孔に、ポリカーボネート中空管状体（三菱エンジニアリングプラスチックス株式会社製  ユーピロンＥ２０００  カーボンブラック１％添加グレード）１００本を通過させた。２枚の多孔板の間隔を５０ｍｍとし、張力をかけた状態で中空管状体の一方の端部から５０ｍｍの位置と１００ｍｍの位置の２ヶ所を固定した。この管状体配列物の配列状態を確認したところ、配列状態は良好であることが分かった。なおこの中空管状体は外径２７５μｍ、剛性率０．０９、降伏強度２４０ｇ、７０度における熱収縮率０％、折れ試験１ｍｍであった。
【００７５】
＜実施例２＞  中空管状体集束固定物の作成
実施例１で作製した管状体配列物中の２枚の多孔板間に樹脂原料を流し込んだ。樹脂としては、ポリウレタン樹脂接着剤（日本ポリウレタン工業（株）ニッポラン4276、コロネート4403）を使用した。またこの接着剤の総重量に対し、2.5質量％のカーボンブラックを添加したものを使用した。室温で１週間静置して樹脂を硬化させた。次いで多孔板を取り除き、中空管状体集束固定物を得た。
【００７６】
＜実施例３＞
（１）メタクリレート基を有するオリゴヌクレオチドの製造
オリゴヌクレオチドの合成は、自動合成機DNA/RNA synthesizer (model394)（PEバイオシステムズ社製）を用いて行い、GCATの配列のオリゴヌクレオチドを合成した。これらは、一般的手法によって脱保護及び精製して使用した。
【００７７】
得られたGCAT（500nmol/ml）50μl、グリシジルメタクリレート 5μl及びジメチルホルムアミド（DMF）5μlを混合し、70℃で2時間反応させ、水190μlを加えて、100nmol/mlのメタクリレート基を有するGCAT（MA-GCAT）を得た。
【００７８】
（２）  中空部への生体関連物質の導入・固定
次に、下記の質量比で混合したモノマー及び開始剤を含むゲル用の原料溶液を調製した。
【００７９】
・アクリルアミド                                                ９質量部
・Ｎ，Ｎ′−メチレンビスアクリルアミド                          １質量部
・2,2’−アゾビス（2−メチルプロピオンアミジン）
ジヒドロクロライド（V-50）                                 ０．１質量部
・水                                                          ９０質量部
この溶液に対して、（１）で調製したMA-GCATを0.5nmol/Lとなるように混合した。
【００８０】
この混合溶液と実施例２で得られた中空管状体集束固定物をデシケータ中に入れ、中空管状体集束固定物の非集束端部（自由端部）をこの混合溶液中に浸漬した状態で、デシケータ内を減圧状態にして中空管状体の中空部に混合液を導入した。次いでこの中空管状体集束固定物を内部が水蒸気で飽和された密閉ガラス容器に移し、70℃で３時間かけて重合反応を行った。このようにして生体関連物質がゲル状物と共に中空管状体の中空部に固定された中空管状体集束固定物を得た。
【００８１】
＜実施例４＞  薄片化
ミクロトームを用いてこの中空管状体集束固定物を管状体の長手方向と垂直方向に厚さ０．５ｍｍにスライスして薄片シート５０枚を得た。この薄片シートを実体顕微鏡で観察し、隣接する中空管状体の中心間距離を測定したところ、変動率は１５％であり、配列状態は極めて良好であった。また中空管状体断面中の中空管状体の直径Ｒと、用いた元の中空管状体の直径Ｘの比（Ｒ／Ｘ）は、全ての中空管状体スポットで０．８以下であった。さらに、中空管状体断面中の中空管状体の真円度（中空管状体の短径／中空管状体の長径）が０．８以下である中空管状体は１本も存在せず、切断面は良好であり、割れなどは確認できなかった。中空部内のゲル状物形体を実体顕微鏡で観察したところ、１００本の中空管状体のすべてにゲル状物が隙間なく充填されていた。
【００８２】
＜比較例１＞
中空管状体材料としてポリプロピレン中空管状体（外径２７０μｍ、剛性率０．０４８、降伏強度１６０ｇ、折れ試験１ｍｍ以下、７０度の熱収縮率０％）を用い、実施例１と同様の方法で中空管状体集束固定物を形成した。その結果、多孔板の各孔に中空管状体を通過させる際、糸先がたるみ、孔に通過させにくく、作業に時間がかかった。２枚の多孔板の間隔を広げる際、中空管状体同士が絡み合い、制度良い配列体を作ることが難しかった。中空管状体１本あたりの張力を１００ｇ程度にして中空管状体を固定した後、実施例１〜４と同様の方法で薄片シートを得た。この薄片シートを実体顕微鏡で観察したところ、縦横に隣接する中空管状体の中心間距離の変動率は３０％であった。また中空管状体断面中の中空管状体の真円度（中空管状体の短径／中空管状体の長径）が０．８以下である中空管状体が、全体の配列数の１０％存在していた。  また、つぶれた中空管状体からはゲル状物が飛び出していることが確認できた。中空管状体１本あたり２００ｇ程度の張力をかけ中空管状体を固定し、実施例１から４と同様の方法にて薄片シートを作製したところ、中空管状体断面中の中空管状体の直径Ｒと、用いた元の中空管状体の直径Ｘの比（Ｒ／Ｘ）が０．８以下である中空管状体が、全体の配列数の１５％であった。
【００８３】
＜比較例２＞
剛性率０．０８、降伏強度３００ｇ、７０度における熱収縮率が２．７％、折れ試験５ｍｍであるポリメチルメタクリレート系中空管状体（外径２７０μｍ）を用い、実施例１および２の方法で繊維集束固定物を得た。このとき中空管状体１０本に折れが生じていることが確認できた。さらに実施例３と同様の方法にて生体関連物質がゲル状物と共に中空管状体の中空部に固定された中空管状体集束固定物を得た。この集束固定物を、ミクロトームを用いてこの中空管状体集束固定物を管状体の長手方向と垂直方向に厚さ０．５ｍｍにスライスして薄片シート５０枚を得た。この薄片シートを実体顕微鏡で観察したところ、ゲルの重合工程での熱による中空管状体の収縮により、中空管状体の配列状態が一部乱れ、縦横に隣接する中空管状体の中心間距離の変動率が３０％であった。また中空部内のゲル状物形体を実体顕微鏡で観察したところ、１００本の中空管状体のうち１５本にゲル状物が充填されていなかった。
【００８４】
更に、この薄片シートの中空管状体の切断面をキーエンス社製のＶＫ−８５００超深度形状測定顕微鏡によって観察したところ、中空管状体の一部に薄片化工程による割れが確認できた。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】弾性率測定の概略を示す図である。
【図２】折れ試験の概略を示す図である。
【図１】
2005249702.tif 000002
【図２】
2005249702.tif 000003