(57)【要約】    【課題】  男性または女性においてLHRH濃度の機能的抑制を招来する免疫原性の黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）ペプチドを提供する。    【解決手段】  ヘルパーT細胞エピトープを含有し、C末端にLHRHを有し、ここに、ヘルパーT細胞エピトープは、LHRHに対する免疫応答を刺激するのに役立ち、一般的な免疫刺激器として作用するインベーシンドメインを含むペプチドの提供。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
Inv - (Th)ｍ - LHRH
［式中、Invは、免疫刺激インベーシンドメイン配列番号：53であり、ThはＴ細胞エピトープであって、LHRHはペプチドハプテン配列番号：1である］
によって表される配列番号66−115よりなる群から選択される30ないし90個のアミノ酸の合成ペプチド。
【請求項２】
該ペプチドのアミノ末端に共有結合された(A)ｎを有するペプチドであって、Aが、アミノ酸、α-NH２、トリパルミトイルシステインまたは脂肪酸であり；nが1から10までであり、但し、n≧2の場合、複数のAは同一または異なる請求項1記載のペプチド。
【請求項３】
さらに、Thエピトープとペプチドハプテンとの間にスペーサー(B)ｏを含み、ここに、Bはアミノ酸でかつｏは0ないし10である請求項1記載のペプチド。
【請求項４】
oが2であってBがグリシンとグリシンである請求項3記載のペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、男性または女性においてLHRH濃度の機能的抑制を招来する免疫原性の黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）ペプチドに関する。
【０００２】
雄のラットがこれらのペプチドで免疫感作されると、血清テストステロンが低下し、アンドロゲン依存性器官が顕著に萎縮する。これらのペプチドは不妊症を誘導し、かつ男性の前立腺増殖、アンドロゲン依存型癌腫、前立腺癌腫および精巣癌腫を治療するのに有用である。女性では、そのペプチドは、子宮内膜症、良性の子宮腫瘍、再発性の機能的卵巣嚢腫および（重症の）月経前症候群を治療し、ならびにエストロゲン依存性胸部癌腫の予防または治療に有用である。主題のペプチドはヘルパーT細胞エピトープ(Thエピトープ)を含有し、C末端にLHRHを有する。ヘルパーT細胞エピトープは、LHRHに対する免疫応答を刺激するのに役立つものである。該ペプチドは、所望により、一般的な免疫刺激器として作用するインベーシン（invasin）ドメインを含んでいてもよい。
【０００３】
別の態様において、本発明は、インベーシンドメイン、ヘルパーT細胞エピトーおよびプペプチドハプテンを有する免疫原性の合成ペプチドと、疾病を治療しまたは防御免疫を与えるためのこれらのペプチドの使用方法とに関する。発明のペプチドハプテンには、LHRH、アミリン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、IgE CH4ペプチド、クラミジアMOMPペプチド、HIV V3ペプチドおよびプラスモディウム・ベルゲイ(Plasmodium berghei)がある。
【背景技術】
【０００４】
前立腺癌腫は男性の主要な死亡原因の第三位であり、70歳を越える男性の最も普通の悪性致命症である。新しい前立腺癌腫の症例数は、過去20年間にわたり確実に増加しており、その結果、21世紀初頭までに75歳を越える男性の4百万を上回る人が臨床的に検出可能な前立腺癌腫にかかるであろうと予測される[Perez等(1985)によるCancer Principles and Practice of Oncology, Vol. 9 （DeVita等、編集）J.B. Lippincott社、Philadelphia, PA, pp. 1023-48；Chodak等(1990)によるCurrent Concepts in Prostate Cancer Diagnosis and Management,26th Annual Meeting, American Society of Clinical Oncology] 。残念ながら、診断の時点で、新たに診断される前立腺癌腫を有する患者の約40-50%がほぼ2.4年という中位の生存時間を持つ進行疾病（段階D）にかかるであろう[Torty(1988)Adv.Onc. 4:15] 。従って、この病気と戦うために開発される治療法は可及的速やかに効能を立証しなければならない。
【０００５】
進行した前立腺癌腫の古典的治療法は、1940年代の初期にHugginsおよび他によって開発された外科的精巣摘除、即ち、去勢であった[Huggins等、(1941)Cancer Res. 1-293-297]。この方法によって、血清テストステロンが95%だけ減少され、ほぼ45%の患者における測定可能な癌腫退行とさらに40%の患者の疾病安定性とがもたらされる。尿道管症状の改善と痛みの軽減を含む進行した前立腺疾病の少なくとも一時的な安定性が約70%の患者に生ずる[Klein (1979) N. Engl. J. Med. 300:824-33]。そのような治療は有効であるが、特にエストロゲン療法と組み合わせた時、それに関連した心理学的ショックはいくらかの患者には受け入れられないものである。
【０００６】
95%を越えるテストステロン生成は精巣から生ずる。精巣のLeydig細胞におけるテストステロン生成は、黄体形成ホルモン(LH)の下垂体分泌によって制御される。LHの分泌は、続いて、瀘胞刺激ホルモン(FSH)と共に、視床下部からのLHRHの拍動性放出によって制御される[例えば、Paulsen(1974)によるTextbook of Endocrinology (Williams編) Saunders, Philadelphia, PA, pp323-367参照]。アンドロゲン依存性器官、例えば、前立腺に及ぼすテストステロンの影響を減ずるためLHRHを遮断するか、またはこの経路の他の部分を遮断しようとする試みは、エストロゲンまたはLHRHアナログでの処理を含めた前立腺癌腫に対する治療の代替処置法をもたらした。残念ながら、エストロゲンの治療用量は、心臓血管の死亡状態、女性化乳房、吐気、ナトリウム貯留、およびインポテンスのような顕著な副作用を引き起こし得るものである[Blackard (1975) Can. Chem. Rep. 59: 225-7]。ロイプロリドまたはゴセレリンのようなLHRHアナログでの処理は、血清テストステロンの最終的低下の原因となるが、血清のLHおよびFSHレベルの関連した初期上昇（各々、450および250パーセント）は、血清テストステロンの一時的上昇および他の症状が生ずる"発赤現象"(flare up phenomena)として知られている苦痛状態へ導くものである[Crawford等、(1991) Urol. Clin. N.A. 18:55-63]。加えて、LHRHアナログ治療は胃腸不調および顔面潮紅の原因となり得る。
【０００７】
LHRHに対する活性な免疫化は、血清ならびに下垂体LHおよびFSHを減少させ、血清テストステロンを減少させ、精子形成を抑制しそして性腺および副生殖器官の可逆的萎縮を起こさせることを含む多重効果を与えることで長年知られている[例えば、Fraser等、(1974) J. Endocrinol. 63:399-405; Giri等、(1991) Exp. Molec.Pathol. 54:255-264; Ladd等、(1989) J. Reprod. Immunol. 15:85-101;およびそこに引用された文献参照]。
【０００８】
アンドロゲン・ホルモンカスケードの免疫介入はまた、婦人の子宮内膜症の治療にも使うことができる。この病気は、感染誘発不妊症に次いで女性の二番目の主要不妊症原因である。子宮筋肉外部の子宮内膜組織の異所性発育と維持は、エストロゲンによって媒介される。LHRHは下垂体前葉によるFSHの生成を調節し、それが、続いて、卵巣によるエストロゲンの生成を調節するので、LHRHの活動を遮断することはこの病気に対する別の治療法である。従って、前立腺癌腫への類似性によって、胸部のエストロゲン誘発癌腫はまたLHRHの免疫治療にも感応しなければならない。
【０００９】
男性と女性の両方の多数の重大な疾病に対する治療法を提供することに加えて、免疫学的介入によるアンドロゲン・ホルモンカスケードの調節は、両性の受胎能を調節する手段を提供するものである。LHRHは、精子発生を調節するテストステロンの生成と、卵子の成熟の原因となるエストロゲンの生成とを両方とも制御するゆえ、LHRH作用の免疫学的遮断は元へ戻せる不妊症を生ずることになる。さらに、LHRHに基づく免疫治療によって、雄と雌の対の動物（例えば、犬、猫、馬および兎）の元に戻せる避妊のための手段が与えられ、ならびに発情、縄張り争いおよび攻撃のような好ましからざるアンドロゲンで誘導される挙動を和らげることができる。最後に、免疫学的去勢（例えば、LHRH作用の抗体ベースの阻害）は、食用肉動物産業における用途を有している。雄は、テストステロンを循環する結果としてのそれらの肉に関連したその不快な臭いと味のため（例えば、雄豚の汚染肉）、最良の肉の切り身には加工されない。雄の食用動物の機械的去勢はもはや人間のようには考えられないので、免疫学的去勢は、この実施のための許容し得る代替法を提供する。
【００１０】
LHRHのいくつかの免疫原性形態が試験されてきた。例えば、免疫能力を高めるため、LHRHはアジュバントと組み合わされまたはタンパク質と結合された。しかし、これらのアジュバントは人間に用いるには不適当であったし、タンパク質担体は大規模の使用には高価過ぎる。さらに、LHRHでの効果的免疫化はLHRHと担体との間の結合部位に左右される。担体タンパク質（ジフテリア毒素または破傷風トキソイド）をLHRHのアミノ末端へ結合することは、LHRHの他の結合部位に担体タンパク質を有する製剤に対し、免疫化および避妊用のより効果的なワクチンを実現できる[Ladd等、(1990) Am. J. Reprod. Immunol. 22:56-63] 。
【００１１】
さらに、LHRHへのタンパク質結合は問題が多い：何故なら、大半の免疫応答がLHRHへよりもむしろ担体の方へ向けられるからである（毒素分子の質量はLHRHのそれよりはるかに大きい）。この現象は、担体で誘発された免疫抑制となる。大多数の癌腫または子宮内膜症患者は、強制的免疫化計画の一部としてジフテリアおよび破傷風ワクチンで前もって免疫化されているので、ワクチンの破傷風またはジフテリア毒性成分へ向かう抗体および／またはサプレッサーT細胞の応答は、毒素結合したLHRH免疫原に対するその後の免疫応答に干渉し得るものである。
【００１２】
従って、人間の使用に適しており、安価でしかもLHRHに対する早くかつ強力な免疫応答を刺激できる免疫エンハンサーが捜し求められてきた。同様に、この免疫エンハンサーは担体誘発抑制を避けるべきである。故に、Thエピトープだけの特定構造配置かあるいは（免疫エンハンサーとしての）インバーシンドメインおよび（免疫原としての）LHRHと結合した特定の構造配置を含むペプチドは、LHRHに対する抗体の生成を刺激する上で有効である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
男性または女性においてLHRH濃度の機能的抑制を招来する免疫原性の黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）ペプチドを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、ペプチド、特に合成ペプチドに関連しており、それらは男性または女性のLHRHレベルの抑制に導くところのLHRHに対する抗体を誘発できるものである。主題のペプチドは、不妊症を誘導しかつ前立腺増殖、アンドロゲン依存性癌腫、前立腺癌腫、精巣癌腫、子宮内膜症、良性の子宮腫瘍、再発性の機能的卵巣嚢腫および（重症の）月経前症候群を治療し、ならびにエストロゲン依存性胸部癌腫の予防または治療に有用である。特に、本発明のペプチドは、Thエピトープおよびカルボキシル末端LHRH、またはLHRHのペプチドアナログを有する。これらのペプチドは、免疫原および治療剤として有効である。本発明のペプチドは、血清テストステロンを精巣摘除（去勢）によって得られるそれらに匹敵するレベルまで減ずることができかつ精巣、前立腺および他のアンドロゲンまたはエストロゲン依存性生殖器の可逆的萎縮を引き起こすことができる。所望により、該ペプチドは免疫刺激器としてインバーシンドメインを有していてもよい。
【００１５】
本発明の別の態様は、本発明による免疫学的に有効な量のペプチドおよび１種以上の医薬上許容される担体よりなるワクチン組成物を提供するものである。かかるワクチン組成物は、不妊症を誘導しまたは前立腺増殖、アンドロゲン依存性癌腫、前立腺癌腫、精巣癌腫、子宮内膜症、良性の子宮腫瘍、再発性の機能的卵巣嚢腫および／または（重症の）月経前症候群を治療し、ならびにエストロゲン依存性胸部癌腫の予防または治療に有用である。
【００１６】
本発明のさらに別の態様は、循環LHRHに向けられる機能的抗体を誘導するのに十分な時間の間および条件下で哺乳動物に１種以上の主題ペプチドを投与することによって、哺乳動物の該循環LHRHの活性を抑制する方法に関する。LHRH活性の抑制は、前立腺増殖、アンドロゲン依存性癌腫、前立腺癌腫、精巣癌腫、子宮内膜症、良性の子宮腫瘍、再発性の機能的卵巣嚢腫または（重症の）月経前症候群を治療し、もしくはエストロゲン依存性胸部癌腫の予防または治療に有用である。より詳細には、本発明は、哺乳動物の不妊症状態を作り出す時間の間および条件下で哺乳動物に主題のワクチン組成物を投与することによって、哺乳動物において不妊症を誘導する方法を提供する。同様に、癌腫の退化をもたらすかまたは成長を防止できる時間の間および条件下で哺乳動物に主題のワクチン組成物を投与することによって、アンドロゲン依存性癌腫を治療する方法に関する。
【００１７】
発明のさらに別の態様は、免疫刺激インバーシンドメイン、ヘルパーT細胞(Th)エピトープおよびペプチドハプテンを含有する約30〜約90個のアミノ酸からなる免疫原性合成ペプチドに関する。該ペプチドに関するこれらの3つの要素は、ペプチドハプテンの免疫反応性が実質的に維持されるかまたは自己ペプチドに対するその免疫反応性が形成され得るなら、任意の順序で共有結合されてよい。本発明のペプチドハプテンには、自己ペプチドLHRH、アミリン、ガストリン（ガストリン３４およびガストリン１７）、ガストリン放出ペプチドおよびIgE分子のCH4ドメインから誘導されたペプチド、ならびにクラミジア・トラコミティス(Chlamydia trachomitis)、ヒトの免疫不全ウイルス、プラスモディウム・ベルゲイ（Plasmodium berghei)、または他の任意の（例えば病原性生物由来の）B細胞エピトープもしくはCTL（細胞傷害性T細胞）が生成するエピトープが含まれる。さらに、これらのペプチドは、1つ以上のアミノ末端(A)ｎ基を有し、ここでAは、アミノ酸、α-NH２、トリパルミトイル・システインまたは脂肪酸であり、nは1から約10までである。主題のペプチドの3要素は、(B)ｏスペーサー基によって分離し得るもので、ここでBは独立して任意のアミノ酸であり、oは0から約10までである。
【００１８】
ペプチドハプテンがアミリンまたはその免疫原性アナログである場合、該ペプチドはワクチンに処方され、非インスリン依存型糖尿病の治療のために投与することができる。この治療は、循環アミリン濃度の低下および／または血中グルコース濃度の低下を来すことになる。
ペプチドハプテンが、ガストリン３４、ガストリン１７、またはその免疫原性アナログである場合、該ペプチドはワクチンに処方され、消化性潰瘍またはガストリン放出ペプチドで刺激された腫瘍の治療のために投与することができる。この治療は、ガストリン濃度の低下、従って酸分泌を起こす。
【００１９】
ペプチドハプテンがガストリン放出ペプチドまたはその免疫原性アナログである場合、該ペプチドはワクチンに処方され、消化性潰瘍、ガストリン刺激腫瘍または肺癌腫の治療のために投与することができる。この治療は、ガストリン放出ペプチド濃度を低下させることになる。
【００２０】
ペプチドハプテンがIgEのCH４ドメイン(配列番号:79)またはその免疫原性アナログから誘導される場合、該ペプチドはワクチンに処方され、アレルギーの治療のために投与することができる。この治療は、ヒスタミン濃度の低下を生じ、またはマスト細胞もしくは好塩基性細胞のIgE媒介活性化を遮断する。
【００２１】
ペプチドハプテンがクラミジア・トラコマティスの主要外膜タンパク質(MOMP)の可変ドメイン(VDI-IV)またはその免疫原性アナログである場合、該ペプチドはワクチンに処方され、クラミジア・トラコマティスに対する免疫化およびそれに対する中和抗体の生成のために投与することができる。
【００２２】
ペプチドハプテンがHIV V3の主要中和ドメインまたはその免疫原性アナログである場合、該ペプチドはワクチンに処方され、後天性免疫不全症候群（エイズ）の治療、または対HIV中和抗体の誘出によるHIV感染の防御のために投与することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明は、ペプチド、特に合成ペプチドに関し、それらは、男性または女性の活性LHRH濃度を抑制するに至るところの、LHRHに対する抗体を誘導できるものである。本発明に関しては、次の要素が主題のLHRH構築体の免疫効率に寄与する。単一もしくは組合せられたこれらの要素は、本発明によるペプチドを作製するための重要な態様であると考えられる。
【００２４】
1. 乱交雑のヘルパーT (Tｈ)細胞エピトープの付加
有効な抗体応答を引き出すためには、免疫原は主要組織適合性(MHC)クラスIIの抗原と共に提示されなければならない。抗原提示細胞(APCs)で生成されるMHCクラスIIの抗原は、配列に特異な手段で抗原に存在するT細胞エピトープに結合する。このMHCクラスIIの抗原複合体は、CD4＋リンパ球（Tｈ細胞）によって識別され、それらは、提示された免疫原からB細胞エピトープを識別できる特異的B細胞の増殖の原因となり、かつそれらによるB細胞エピトープ特異的抗体の生成をもたらすものである。LHRHは自己分子ゆえ、識別可能ないずれのTｈエピトープも持っていない。そのようなエピトープは、破傷風毒素、百日咳毒素、嚢虫ウイルスFタンパク質およびB型肝炎ウイルス表面抗原(HBsAg)を含む有効免疫原由来の特異配列で与えてよい。選択されたTｈエピトープは、好ましくは、種々のMHCハプロタイプを発現する多数の個体においてヘルパーT細胞を引き出すことができる。これらのエピトープは、異質性母集団の多くの異なった個体で機能し、そして乱交雑のTｈエピトープであると考えられる。乱交雑のTｈエピトープは、遺伝的に異なった母集団群のほとんどの要素において有力なLHRH抗体応答を引き出すという利点を与えるものである。
【００２５】
従って、本発明のヘルパーエピトープは、与えられた母集団のほとんどの要素において免疫応答を生ずる能力に関してのみならず、記憶／想起応答を生ずる能力に関して選択される。LHRH免疫治療を受けている大多数の人間の患者は、すでに、小児科ワクチン（嚢虫＋ムンプス＋風疹とジフテリア＋百日咳＋破傷風ワクチン）でおよび、多分、より新しいB型肝炎ウイルスワクチンで免疫化されている。それゆえ、これらの患者は、以前に、免疫原混合体に存在する少なくとも2つのTｈエピトープに晒されている。標準のワクチンでの免疫化を通じて先にTｈエピトープに晒されたということは、LHRH免疫治療（即ち、想起応答）の適用で即座に増殖できるTｈ細胞クローンを定着させるはずであり、それによってLHRHに対する急速B細胞応答を刺激する。加えて、Tｈエピトープは、担体誘発免疫抑制を招来し得る病原体に特異的B細胞および／またはサプレッサーT細胞エピトープの何れもおよびヘルパーT細胞応答を引き出すのに毒性分子が用いられるときに遭遇する問題を退ける。
【００２６】
2. 免疫原性要素間におけるスペーサー残基の付加
免疫原性は、乱交雑TｈエピトープおよびLHRH間におけるスペーサー残基（例えば、Gly-Gly）の付加によって改善することができる。TｈエピトープをB細胞エピトープ（即ち、LHRH）から物理的に分離することに加えて、グリシン残基はTｈエピトープのLHRHとの結合によって作り出される任意の人工的二次構造を破壊させることができ−−それによってTおよび／またはB細胞応答間の相互作用を排除できる。従って、ヘルパーエピトープと抗体引出し領域間のコンフォメーション分離によって、提示された免疫原と適当なTおよびB細胞間においてさらに効果的な相互作用が可能となる。
【００２７】
3. 広域スペクトル効率を生ずるためのTｈエピトープー改良免疫原の混合
本発明のTｈエピトープは乱交雑であるが普遍的ではない。この特性は、Tｈエピトープが異なったMHC抗原を発現する異系交配させた母集団の大部分で反応性があるが（母集団の50〜90%で反応性あり）、その母集団の全ての要素においてではない、ということを意味する。LHRH免疫治療構造についての普遍的免疫反応性に対処する総合試験を実現するためには、LHRH構造と異なったTｈエピトープとの組合せを準備してよい。例えば、破傷風と百日咳毒素、嚢虫ウイルスFタンパク質からおよびHBsAgからの乱交雑のTｈエピトープを含む、4つのTｈエピトープ：LHRH構造の組合せは特に有効である。当モルベースで、この混合体はその混合体の任意の単一免疫原よりさらに幅広く有効である。
【００２８】
4. Tｈエピトープのライブラリーの形成
別の具体例においては、Tｈエピトープは、引用して本明細書の一部とみなす1993年10月26日付けU.S.Serial No.143,412に記述されているような構築した合成抗原ライブラリー(SSAL)であってよい。この技術は、別の、多分より効果的手段として（乱交雑ヘルパーエピトープ構造を混合することとは対照するものとして）普遍的免疫反応性を得るために用いてよい。SSALは、2個から数兆個の異なった、しかし関連した、単一の自動化ペプチド合成で同時に作られ順序付けられた1組のペプチドから構成されるものである。ライブラリー内のペプチドの配列は、共通の構造的および／または機能的性質を共有する1組のペプチドまたはタンパク質領域によって定義される。任意のSSAL内の順序は、そのライブラリーのコア配列を定める不変アミノ酸残基によって規定される。コア配列は、エピトープの関連系統の一次アミノ酸配列を配列することにより決定され、その配列内の不変遺伝子座および各不変位置に存在する特異的アミノ酸残基を同定する。次いで、SSALは、その配列で限定されるような不変位置において保存アミノ酸残基にて合成される。ライブラリー内の縮退は、順序付けられたエピトープが比較されるとき、異なったアミノ酸残基を有する配列内の遺伝子座によって決定される。配列内の縮退の度合いはその配列内の可変遺伝子座の数および各可変遺伝子座で見い出される異なったアミノ酸の数によって決められる。
【００２９】
乱交雑Tｈエピトープは、それらが類似の標識点配列に基づいてしばしば共通の構造的特徴を共有するという理由から、構成されたライブラリーに包含されるものである。例えば、乱交雑Tｈエピトープは、約15から約30個の残基のサイズ範囲にある。両親媒性らせん（ヘリックス）はTｈエピトープの共通の特徴である。両親媒性らせんは、ヘリックスの1面を支配する疎水性アミノ酸残基と、周囲の諸面を支配する帯電した極性残基とを有するαヘリカル構造によって定義されるものである。Tｈエピトープは、付加的一次アミノ酸パターン、例えば：Glyまたは2〜3個の疎水性残基が続き次いで帯電した極性残基が続く帯電残基をしばしば含む。このパターンは、ロスバード(Rothbard)配列を定義する。Tｈエピトープは、しばしば1、4、5、8の法則に従い、ここで正に帯電した残基は帯電した残基の後の4番目、5番目および8番目の位置で疎水性残基が続く。これらの全ての構造は、共通の疎水性の、帯電した極性アミノ酸から構成されるので、各構造は単一のTｈエピトープの内部で同時に存在できるものである。
【００３０】
5. アジュバントとしてのインベーシンドメインの共有結合的付加
病原性バクテリア、Yersinia spp.のインベーシンは、哺乳動物の細胞へのバクテリアの侵入を媒介する外膜タンパク質である(IsbergとLeong, 1990, Cell 60:861)。バクテリアによる培養哺乳動物細胞の侵入には、培養細胞の上に存在するYersiniaインベーシン分子と数種のβ1系列のインテグリン間の相互作用を必要とすることが立証された(Tran Van NhieuとIsberg,1991, J.Biol.Chem. 266:24367)。Tリンパ球はβ1インテグリン（特に、活性化免疫又は記憶T細胞）に豊富にあるゆえ、ヒトのT細胞に及ぼすインベーシンの影響が研究されてきた(Brett等、1993, Eur.J. Immunol. 23:1608)。インテグリンは、血液ベッセルから接続組織を通って抗原攻撃部位までの免疫T細胞の移動を、フィブロネクチン、ラミニンおよびコラーゲンを含む細胞外基質タンパク質とそれらの相互作用によって容易化すると考えられている。インベーシン分子のカルボキシ末端は、非特異的ミトゲン、抗CD3抗体の不存在下で、未使用のヒトのCD4＋ T細胞に対して共刺激性であり、サイトカインの著しい増殖と発現を生ずることが見い出された。β1インテグリンと相互作用してこの刺激を生ずる特異的インベーシンドメインもまた確認された(Brett等、1993)。このドメインに関連のT細胞の共刺激性が立証されるため、それは乱交雑Tｈエピトープ：LHRH構築体に結合されてよい。
【００３１】
6. アジュバントとしてのPam３Cysの共有結合的付加
グラム陰性バクテリアの外膜タンパク質の多くは、脂質修飾型でかつ極めて免疫原性である。共有的脂質結合と免疫原性の間の明かな相関関係のため、トリパルミトイル-S-グリセロールシステイン(Pam３Cys)、即ちバクテリア膜タンパク質に共通の脂質は、細胞毒性T細胞エピトープのどちらかのB細胞を表す合成ペプチドに結合されてよい。顕著な補佐応答がこの脂質結合で引き出されるので、脂質修飾乱交雑Tｈエピトープ：LHRH構造が準備されてよい。そのような脂質修飾構造は、同一ペプチドの未修飾様式よりさらに免疫原性である。
【００３２】
7. 抗体応答を最大にするアジュバント／エマルジョン調合物の選択
Tｈエピトープ：LHRH構築体の共有結合的修飾（例えば、インベーシンドメインおよび／くたはPam３Cys）に関連した顕著な補佐性に加えて、LHRH免疫治療免疫原性に対する免疫応答を最大にする外因的アジュバント／エマルジョン調合物の付加が検討されてきた。評価されたアジュバントと担体は次のものである：(1)フェイズIのヒトの試行で首尾よく用いられたもの；(2)前臨床の安全性研究におけるそれらの反応性の欠如に基づき、ヒトにおける使用の認可に対し可能性を有するもの；もしくは(3)食物及び相手動物における使用が認可されたもの。
【００３３】
8. 修飾免疫原の微粒子の移送
最小数の用量投与、理想的にはただ1回の投与の後で最大の免疫応答を生ずる免疫治療養生は、極めて望ましいものである。この帰着は、微粒子での免疫原の捕捉によって対処してよい。例えば、吸収性縫合材のポリラクチド-コ-グリコリド共重合体は免疫原を含有する微粒子に形作ってよい。経口または非経口投与に続いて、生体内微粒子の加水分解で非毒性の副産物、乳酸とグリコール酸が生成され、捕捉処理で大幅に変更されない免疫原が放出される。微粒子分解速度および捕捉免疫原の放出はいくつかのパラメータで制御されてよく、それらには、(1)粒子調合に用いられるポリマーの比（コ-グリコリド濃度のより高い粒子ほどより早く分解する）；(2)粒子サイズ、（小さ目の粒子ほど大き目のものより早く分解する）；および、(3)捕捉効率、（より高濃度の捕捉抗原を有する粒子ほど低く目の負荷を有する粒子より早く分解する）がある。微粒子調合物はまた、異なった放出速度を有する免疫原捕捉微粒子を混合することにより単一の投与で一次およびその後のブースターの免疫化をも実現できる。1週間未満から6カ月を越える範囲の抗原を放出できる単一の用量調合は容易に達成できるものである[例えば、1994年2月25日付けU.S. Serial No. 205,524参照]。さらに、乱交雑Tｈエピトープ：微粒子に捕捉されたLHRH免疫原の移送はまた、微粒子化免疫原が外因的アジュバント／エマルジョン調合物と混合されるときは効率改善をもたらすことができる。
【００３４】
本発明のペプチドは、ヘルパーT細胞エピトープ(Th エピトープ）とカルボキシル末端LHRHとを有する。さらに、主題のペプチドは、LHRHをLHRHの免疫原性類似体で置換してよい。
【００３５】
本発明のペプチドは、式：
(A)ｎ - (Th)ｍ - (B)ｏ - LHRH
［式中、Aは、独立して、アミノ酸、α-NH２、トリパルミトイル・システイン基、脂肪酸、インベーシンドメインまたは対応するインベーシンドメインの免疫刺激性アナログであり；
Bはアミノ酸；
各Thは、独立して、ヘルパーT細胞エピトープまたはその免疫増強アナログもしくはセグメントからなるアミノ酸配列であり；
LHRHは、黄体形成ホルモン放出ホルモンまたはその免疫原性アナログ；
nは1から約10；
mは1から約4；および
oは0から10である］
によって表される。
【００３６】
本発明のペプチドは、約20個から約100個のアミノ酸残基を、好ましくは約20個から約50個のアミノ酸残基を、より好ましくは約20個から約35個のアミノ酸残基を有する。別の好ましい具体例では、そのペプチドは約25個から約40個のアミノ酸残基を有する。
【００３７】
Aがアミノ酸である場合、それはいずれの非自然発生型アミノ酸またはいずれの自然発生型アミノ酸であってもよい。非自然発生型アミノ酸には、β-アラニン、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、チロキシン、γ-アミノ酪酸、ホモセリン、シトルリン等が含まれるが、これらに限定されるものではない。自然発生型アミノ酸には、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが含まれる。さらに、mが1より大きくかつ2つ以上のA基がアミノ酸であるとき、各アミノ酸は、独立して、同一または異なる。
【００３８】
Aがトリパルミトイルシステイン(Pam３ Cys)基である場合、それは、Thエピトープの免疫刺激性を増強することによって、アジュバントとして作用する[Weismuller等、(1992) Int. J. Peptide Res. 40:255-260およびここに引用した文献] 。Aが脂肪酸である場合、それは、通常、ペプチドのアミノ末端に配置される。さらに、Aの1つが脂肪酸であるとき、A部位として2または3個のアミノ酸が追加される。ここで用いられているように、脂肪酸は、8〜24個の炭素原子からなる長さの炭化水素の鎖をもつ。炭化水素の鎖は飽和されるかまたは不飽和であってよい。
【００３９】
Aがインベーシンドメインである場合、それは、Yersinia種のインベーシンタンパク質からの免疫刺激エピトープである。このインベーシンドメインはまた、本発明の上記詳細説明の5項以降に記載されているように、T細胞上、特に活性化免疫または記憶T細胞上に存在するβ1インテグリン分子と反応することができる。好ましい具体例では、インベーシンドメインは、配列：
Thr-Ala-Lys-Ser-Lys-Lys-Phe-Pro-Ser-Tyr-Thr-Ala-Thr-
Tyr-Gln-Phe                              Seq ID No: 53
を有するかまたは他のYersinia種のインベーシンタンパク質の対応領域からのその免疫刺激アナログである。従って、そのようなアナログは、もしそのアナログがその免疫刺激性を保持するとすれば、菌株から菌株への変更を図るため置換、欠失または挿入される。
【００４０】
1の具体例では、nは4であり、Aは、次の順序で、α-NH２、リシン、リシンおよびリシンである。別の具体例では、nは1であり、Aは、次の順序で、α-NH２、インベーシンドメイン、グリシンおよびグリシンである。
【００４１】
Bに対するアミノ酸は、上述の通り、自然発生型アミノ酸かまたは非自然発生型アミノ酸であってよい。各Bは、独立して、同じか異なる。Bがリシンなら、ポリマーが形成されてよい。例えば、もしoが7でかつ7つの全てのB基がリシンであるなら、ペプチド合成がリシル側鎖ε-アミノ基の保護なくして実行されるとき、分岐するヘプタリシルコア(K４K２KまたはKコア)が形成される。Kコアを有するペプチドは8本の分岐アームを有し、その各アームは同一であり、式(A)ｎ - (Th)ｍ - (B)ｏ-によって表される。加えて、Bのアミノ酸は、ThエピトープとLHRHに対する免疫応答を増強するため、柔軟なヒンジ、即ちスペーサーを形成してよい。柔軟なヒンジをコードする配列の例は、免疫グロブリン重鎖のヒンジ領域に見られる。柔軟なヒンジ配列は、しばしばプロリンに富んでいる。1つの特に有用な柔軟ヒンジは、配列Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Proで与えられ、ここで、Xaaは任意のアミノ酸であり、好ましくはアスパラギン酸である。スペーサーの例は、配列Gly-Glyで与えられる。
【００４２】
Thは、Thエピトープからなるアミノ酸（天然または非天然アミノ酸）の配列である。Thエピトープは、連続または不連続なエピトープからなってよい。ゆえに、Thのアミノ酸はどれでも必ずしもエピトープの部分ではない。従って、Thエピトープのアナログおよびセグメントを含むThエピトープは、LHRHに対する免疫応答を増強または刺激することができる。免疫優性Thエピトープは、広く分岐したMHC種を有する動物およびヒト母集団において広範囲に反応できる[Celis等、(1988) J. Immunol. 140:1808-1815; Demotz等、(1989) J. Immunol. 142:394-402;Chong等、(1992) Infect. Immun. 60:4640-4647]。主題のペプチドのTh領域は、約10個から約50個までのアミノ酸をおよび好ましくは約10個から約30個までのアミノ酸をもつ。多重Thエピトープが存在する場合（即ち、n≧2）、各Thエピトープは、独立して、同じか異なる。
【００４３】
ThエピトープアナログはそのThエピトープにおいて1から約10個のアミノ酸残基の置換、欠失および挿入を包含する。Thセグメントは、LHRHに対する免疫応答を増強または刺激するのに十分なThエピトープの隣接部分である。Thセグメントの例は、1本の比較的長いペプチドから誘導される一連の重複ペプチドである。
【００４４】
本発明のThエピトープには、B型肝炎表面抗原ヘルパーT細胞エピトープ(HBＳ Th)、百日咳毒素ヘルパーT細胞エピトープ(PT Th)、破傷風毒素ヘルパーT細胞エピトープ(TT Th)、嚢虫ウイルスFタンパク質ヘルパーT細胞エピトープ(MVＦ Th)、クラミジア・トラコマイティス(Chlamydia trachomatis)主外膜タンパク質ヘルパーT細胞エピトープ(CT Tｈ)、Plasmodium falciparum circumsporozoiteヘルパーT細胞エピトープ(PF Tｈ)、Schistosoma mansoni（マンソン住血吸虫）リン酸トリオースイソメラーゼ・ヘルパーT細胞エピトープ(SM Tｈ)、Escherichia coli（大腸菌）TraTヘルパーT細胞エピトープ(TraT Tｈ)およびこれらのThエピトープの何れかの免疫増強アナログと部分が含まれる。Thエピトープ配列の例は下に示す：
HB, Th:  Phe-Phe-Leu-Leu-Thr-Arg-Ile-Leu-Thr-Ile-Pro-Gln-
Ser-Leu-Asp                             配列番号:2
PT１ Th:  Lys-Lys-Leu-Arg-Arg-Leu-Leu-Tyr-Met-Ile-Tyr-Met-
Ser-Gly-Leu-Ala-Val-Arg-Val-His-Val-Ser-Lys-Glu-
Glu-Gln-Tyr-Tyr-Asp-Tyr                 配列番号:3
TT１ Th:  Lys-Lys-Gln-Tyr-Ile-Lys-Ala-Asn-Ser-Lys-Phe-Ile-
Gly-Ile-Thr-Glu-Leu                     配列番号:4
TT２ Th:  Lys-Lys-Phe-Asn-Asn-Phe-Thr-Val-Ser-Phe-Trp-Leu-
Arg-Val-Pro-Lys-Val-Ser-Ala-Ser-His-Leu 配列番号:5
PT１Ａ Th: Tyr-Met-Ser-Gly-Leu-Ala-Val-Arg-Val-His-Val-Ser-
Lys-Glu-Glu                             配列番号:6
TT３ Th:  Tyr-Asp-Pro-Asn-Tyr-Leu-Arg-Thr-Asp-Ser-Asp-Lys-
Asp-Arg-Phe-Leu-Gln-Thr-Met-Val-Lys-Leu-Phe-Asn-
Arg-Ile-Lys                             配列番号:7
PT２ Th:  Gly-Ala-Tyr-Ala-Arg-Cys-Pro-Asn-Gly-Thr-Arg-Ala-
Leu-Thr-Val-Ala-Glu-Leu-Arg-Gly-Asn-Ala-Glu-Leu
配列番号:8
MVF1 Th:  Leu-Ser-Glu-Ile-Lys-Gly-Val-Ile-Val-His-Arg-Leu-
Glu-Gly-Val                             配列番号:9
MVＦ２ Tｈ: Gly-Ile-Leu-Glu-Ser-Arg-Gly-Ile-Lys-Ala-Arg-Ile-
Thr-His-Val-Asp-Thr-Glu-Ser-Tyr        配列番号:42
TT４ Tｈ:  Trp-Val-Arg-Asp-Ile-Ile-Asp-AspPhe-Thr-Asn-Glu-
Ser-Ser-Gln-Lys-Thr                    配列番号:43
TT5Tｈ:   Asp-Val-Ser-Thr-Ile-Val-Pro-Tyr-Ile-Gly-Pro-Ala-
Leu-Asn-His-Val                        配列番号:44
PT2Tｈ:   Ala-Leu-Asn-Ile-Trp-Asp-Arg-Phe-Asp-Val-Phe-Cys-
Thr-Leu-Gly-Ala-Thr-Thr-Gly-Tyr-Leu-Lys-Gly-Asn-
Ser                                    配列番号:45
DT１ Tｈ:  Asp-Ser-Glu-Thr-Ala-Asp-Asn-Leu-Glu-Lys-Thr-Val-
Ala-Ala-Leu-Ser-Ile-Leu-Pro-Gly-Ile-Gly-Cys
配列番号:46
DT２ Tｈ:  Glu-Glu-Ile-Val-Ala-Gln-Ser-Ile-Ala-Leu-Ser-Ser
Leu-Met-Val-Ala-Gln-Ala-Ile-Pro-Leu-Val-Gly-Glu
Leu-Val-Asp-Ile-Gly-Phe-Ala-Ala-Thr-Asn-Phe-Val
Glu-Ser-
Cys                                    配列番号:47
PF Tｈ:   Asp-Ile-Glu-Lys-Lys-Ile-Ala-Lys-Met-Glu-Lys-Ala-
Ser-Ser-Val-Phe-Asn-Val-Val-Asn-Ser
配列番号:48
SM Tｈ:   Lys-Trp-Phe-Lys-Thr-Asn-Ala-Pro-Asn-Gly-Val-Asp-
Glu-Lys-Ile-Arg-Ile
配列番号:49
TraT１ Tｈ: Gly-Leu-Gln-Gly-Lys-Ile-Ala-Asp-Ala-Val-Lys-Ala-
Lys-Gly                               配列番号:50
TraT２ Tｈ: Gly-Leu-Ala-Ala-Gly-Leu-Val-Gly-Met-Ala-Ala-Asp-
Ala-Met-Val-Glu-Asp-Val-Asn           配列番号:51
TraT３ Tｈ: Ser-Thr-Glu-Thr-Gly-Asn-Gln-His-His-Tyr-Gln-Thr-
Arg-Val-Val-Ser-Asn-Ala-Asn-Lys       配列番号:52
好ましい具体例では、tHエピトープは、HB, TH、PT２ ThまたはTT１ ThまたはMVＦ１Tｈである。
【００４５】
LHRHは、アミノ酸配列 Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly (配列番号:1)を有する。本発明によるLHRHアナログは、もしそのアナログがLHRHと交差反応性の免疫応答を刺激できるならば、1から約4個のアミノ酸残基の置換、欠失、または挿入を有する。例えば、位置6のグリシン残基をD-アミノ酸、好ましくは、D-リシンで置き換えることにより、LHRHの免疫原性アナログが生成される(Jayashankar等)。置換と挿入は、本明細書で明らかにされたように、天然のまたは非天然のアミノ酸で遂行してよい。
【００４６】
従って、本発明のペプチドは、ペプチドA (配列番号:10; Table 1)、ペプチドF-L (配列番号:11-17; Table 4)及びペプチド18-41 (配列番号:18-41; Table 5)である。好ましいペプチドには、ペプチドA、ペプチドFおよびペプチドFがある。より好ましいペプチドには、ペプチド18、19、32-35、HおよびK、もっとも好ましくは、19、32、HおよびKがある。
【００４７】
本発明のペプチドは、当業者によく知られている合成化学法により作ってよい。例えば、Grant編、(1992) Synthetic Peptides:A User's Cuide, W.H.Freeman & Co., New York, NY, pp.382参照。ゆえに、ペプチドは、応用バイオシステムのペプチドシンセサイザ、430Aまたは431型でt-BocまたはF-mocの化学作用を用いる固相合成に関する自動化メリフィールド法を使って合成してよい。Kコア部位を合成するのに、保護されていない[Di(toBoc)またはDi(Fmoc)- Nα,Nε]リシン残基が保護ε-アミノ基を有するリシン残基の代わりに用いられる。Pam３Cysを付加するため、リポアミノ酸 S-[2,3-Bis(パルミトイロキシ-(2R)-プロピル-N-パルミトイル-(R)-システイン(Pam３Cys)が化学的方法で合成される。Pam３Cysは、リポアミノ酸を樹脂結合ペプチド鎖に連結するための最終結合段階でPam３Cys-OHを使う固相合成法によりペプチドに結合される。最終結合反応の特異性を改善するため、固相ペプチドは、N-末端にセリンおよびリシン残基を付加して伸ばしてよい。
【００４８】
所望のペプチドの完全な組立後、樹脂からペプチドを切断し、アミノ酸側鎖上の保護基をデブロックするため、標準の手順に従って樹脂を処理する。遊離ペプチドはLHRHにより精製し、例えば、アミノ酸分析または配列決定によって生化学的に特徴付ける。精製および特徴付け方法は当業者にはよく知られている。
【００４９】
あるいは、比較的長い線状ペプチドは、よく知られている組換えDNA法によって合成してよい。DNA技術に関する標準マニュアルは何れも、発明のペプチドを作るための詳細基準を与える。本発明のペプチドをコードする遺伝子を構築するため、アミノ酸配列は、好ましくは遺伝子がそこで発現されるであろう器官に対し最適化コドン法を用いて、核酸配列に逆転写される。次に、典型的には、ペプチドと、もし必要なら、任意の調節要素をコードする重複オリゴヌクレオチドとを合成することによって、合成遺伝子を作る。その合成遺伝子は、適当なクローニングベクターに挿入され、組換え体が得られ、特徴付けられる。次いで、ペプチドは、選択した発現系および宿主に適する適切な条件下で発現される。ペプチドは標準の方法で精製され、特徴付けされる。
【００５０】
主題のペプチドはまた重合してよい。重合は、日常の方法論を使って希釈グルタルアルデヒドとの反応によって達成してよい。
【００５１】
ペプチドの効能は、動物に、例えばラットに注入し、LHRHに対する免疫応答、血清テストステロン濃度を追跡し、そして精巣を触診することにより、立証・分析してよい。アンドロゲン依存型器官には、精巣、精巣上体、前立腺および精嚢がある。効能を測定する好ましい方法では、LHRH構築体はミヨウバンに調合され、ラットに注射される。この方法は実施例で詳述する。
【００５２】
本発明の別の態様は、免疫学的に有効な量の1種以上の本発明のペプチドおよび医薬上許容される担体からなるワクチン組成物を提供する。そのようなワクチン組成物は、不妊症を誘導しまたは前立腺増殖、アンドロゲン依存性癌腫、前立腺癌腫、精巣癌腫、子宮内膜症、良性の子宮腫瘍、再発性の機能的卵巣嚢腫または（重症の）月経前症候群を処理し、もしくはエストロゲン依存性胸部癌腫を予防または治療する方法に使われる。
【００５３】
従って、主題のペプチドは、アジュバント、医薬上許容される担体またはワクチン組成物で通常与えられる他の成分を使ってワクチン組成物として処方してよい。そのような処方は、通常の当業者によって容易に決められるものであり、速効性処方と徐放性処方、例えばマイクロカプセル化とがある。本ワクチンは、皮下、口径、筋肉内、または他の非経口または内臓経路を含む都合のよい経路の何れかで投与してよい。同様に、ワクチンは、単一の投与用量または多重投与用量に分割して投与してよい。免疫化スケジュールは通常の当業者によって容易に決められるものである。例えば、本発明に使用できるアジュバントまたは乳化剤には、ミョウバン、不完全フロイントアジュバント、リポシン、サポニン、スクアレン、L121、エムルシゲンおよびISA 720ならびに表7-9に掲げられた他の効能のあるアジュバントおよび乳化剤がある。好ましい具体例では、アジュバント／乳化剤は、ミョウバン、不完全フロイントアジュバント、リポシンとサポニンの配合物、スクアレンとL121の配合物またはエムルシゲンとサポニンの配合物である。  本発明のワクチン組成物は、免疫有効量の1種以上のLHRH含有ペプチドと医薬上許容できる担体とを含有する。そのような用量単位形の組成物は、体重kg当り約0.5μg〜約1mgの各ペプチドを含有してよい。多重投与で送り込まれるとき、その投与単位の形は投与当りの適当量に都合よく分けられる。
【００５４】
2種以上の主題のペプチドのカクテルを含有するワクチンは、より広範囲の母集団の免疫効率を増強しかつ従ってLHRHに対するより良好な免疫応答を与える。例えば、ペプチドA、FおよびHのカクテルは有用である。好ましいカクテルは、ペプチド18、19、KおよびHを包含し；他は32、19、KおよびHを包含する。他の免疫刺激合成ペプチドのLHRH免疫原は、有力ワクチンに対して生来のアジュバンティシティーを与えられるようリポペプチドに改良して送達される。合成ペプチドLHRH免疫原に対する免疫応答は、O'Hagan等、(1991) Vaccine 9:768-771に記述された方式の生分解性微粒子内またはその上への捕捉による送達で改善してよい。免疫原は、共有結合的に付着されたPam３Cys（実施例15参照）を含む、アジュバントと共にまたは無しで捕捉してよく、そのような微粒子は、フロイント不完全アジュバントまたはミョウバンのような免疫刺激アジュバントと共に投与してよい。微粒子は、免疫原に対する免疫応答を増強しかつ持効または周期応答に対し、口径投与に対し、そして局所適用に対して時間制御放出を実現するために機能する[O'Hagan等；Eldridge等、(1991) Molec. Immunol. 28:287-294]。
【００５５】
本発明のさらに別の態様は、LHRHに対して向けられた機能的抗体を誘導するに十分な時間の間かつその条件下で哺乳動物に1種以上の主題のペプチドを投与することによって哺乳動物のLHRH濃度の活性化を減少させまたは抑制する方法に関する。LHRH濃度の抑制は、精子形成または排卵の抑制により不妊症を誘導するために用いてよい。同様に、機能的な循環LHRHの濃度の抑制は、前立腺増殖、アンドロゲン依存性癌腫、前立腺癌腫、精巣癌腫、子宮内膜症、良性の子宮腫瘍、再発性の機能的卵巣嚢腫または（重症の）月経前症候群、もしくはエストロゲン依存性胸部癌腫を治療するのに有効である（前述の胸部癌腫の治療はその予防を含む）。動物では、機能的LHRHの循環濃度の抑制は、豚のテンジクネズミの病毒を軽減し、犬および猫を免疫去勢しかつ雄の成熟馬を去勢するのに有用である。
【００５６】
血清のLHRHは、ラジオイムノアッセイ（RIA)、酵素結合免疫吸着性検定法(enzyme-linked immunoadsorbent assay-EIA)または他の便利な方法で測定してよい。LHRHに対する抗体は、RIA（実施例2参照）またはEIAによって測定される。血清テストステロンはRIAで測定される。LHRHの活性を減少または抑制するのに要するワクチンの用量は、当業者によって決定されてよい。そのような用量単位形の組成物は、体重kg当り約0.5μg〜約1mgの各ペプチドを含有してよい。多重投与で送達される場合、その投与単位の形態は投与当りの適当量に都合よく分けられる。
【００５７】
より詳細には、本発明は、哺乳動物または養殖動物に不妊状態を生ずる時間の間かつ条件下で哺乳動物または養殖動物に主題のワクチン組成物を投与することにより、哺乳動物において不妊症を誘導する方法を提供するものである。ここで用いられているように、不妊状態は受胎を防ぐ状態のことである。不妊症は、当業者に公知の方法、例えば、精子形成または排卵の評価によって、並びに実験動物のデータの統計的モデル化によって測定してよい。雄における不妊症の指標には、去勢レベル近くまで血清テストステロンが減少することが含まれる。用量単位形の組成物は、体重kg当り約0.5μg〜約1mgの各ペプチドを含有してよい。多重投与で送達される場合、その投与単位の形態は投与当りの適当量に都合よく分けられる。
【００５８】
同様に、本発明は、癌腫の退化をもたらすか、もしくは癌腫の（これ以上の）成長を防ぐことのできる時間の間かつ条件下で哺乳動物に主題のワクチン組成物を投与することによりアンドロゲン依存性癌腫を治療する方法に関する。用量単位形の組成物は、体重kg当り約0.5μg〜約1mgの各ペプチドを含有してよい。多重投与で送達される場合、その投与単位の形態は投与当りの適当量に都合よく分けられる。
【００５９】
規定B細胞または細胞障害性T細胞エピトープおよびその即時型フランキング配列を有するペプチドの同定および合成によって、合成ペプチド免疫原の生成のための主要な成分が与えられる。しかし、効果的ヘルパーT細胞エピトープのような追加所要成分は、これらは所望の生物学的効果を引き出すのに必要な全範囲の免疫応答をもたらすために存在しなければならないものであるが、前述の配列に含まれなくてよい。乏しい抗原ペプチド免疫原に普遍的合成免疫刺激器を付加することでこの問題に対する有効な解が与えられる。普遍的免疫刺激器がB細胞および／または細胞障害性Tリンパ球(CTL)エピトープを有する、任意のペプチドまたはタンパク質（即ち、ペプチドハプテン）に連結されると、それは共役ペプチドまたはタンパク質に対する強力な免疫応答を生ずる。普遍的免疫刺激器は、（上文に明らかなように）種々のHLAの表現型を発現する異種母集団の系統において結合ペプチドに対する免疫応答を引き出す乱交雑ヘルパーT細胞(Tｈ)エピトープおよび（前述の部分において明らかにされたように）CD4＋及びCD8＋リンパ球に特異的に結び付くことができるYersiniaインベーシンタンパク質からのアジュバントペプチド配列を含んでなる。さらに、免疫刺激器は、生物膜に対する免疫刺激器の結合親和性を増やす作用をする脂質部位または帯電アミノ酸残基を有してよい。標的ペプチドハプテンは、自己分子であってよく、それゆえ、LHRHのように、修飾無しでは免疫原性でなくてよく、これは、免疫刺激器の付加に続いて、癌腫または他の非感染症の治療に際して用いてよい。同様に、ペプチドハプテンは、中和する決定因子またはワクチンとしてもしくは免疫治療に使用されるウイルス性、バクテリア性または寄生性病原体からのCTLエピトープペプチドを表すB細胞エピトープであってよい。
【００６０】
最大の適用範囲、即ち、遺伝的に種々異なった母集団の系統における最大免疫応答（例えば、できるだけ広域に基づく応答）を実現するため、インベーシンドメイン、乱交雑Tｈエピトープ、およびB細胞エピトープ（またはCTLエピトープ）を含有する合成ペプチドは、アジュバントおよびワクチン担体と混合・配合されてよい。あるいは、ペプチドの混合体というよりは、乱交雑Tｈエピトープおよび／またはB細胞もしくはCTLエピトープを表すむしろペプチドライブラリ（即ち、SSALs）が本発明のペプチドに合成され、ワクチン送達用に処方される。この技術、即ち、SSALは、免疫原として使用されるペプチドの単純混合体に関連してその製造を簡略化しならびに与えられた免疫原性の適用範囲を改善するという両面において顕著な利点をもたらすものである。
【００６１】
本発明の合成ペプチドは、上述のように自動化化学合成によって作られる。
【００６２】
本発明の特異的ペプチドハプテンは、そのようなペプチドに対する免疫応答によってまたは前述のペプチドで実現される免疫治療によって治癒できる疾病と共に、以下に記述する。
【００６３】
アミリンに基づく免疫治療による非インスリン依存型糖尿病の治療
アミリンは、ランゲルハンス島(islets of Langerhans)のβ細胞で生成された37個のアミノ酸残基のペプチドホルモンである(Snake等、1988, J. Biol. Chem.263:17243-17246)。それは、89個のアミノ酸プレプロペプチドとして生成され、成熟活性型の分子を作るためタンパク質的に開裂され、開裂処理中にカルボキシ末端でアミド化される(Cooper等、1989, Biochim. Biophys. Acta. 1014:247-258)。ジスルフィド架橋は、成熟アミリンのCys 2とCys 7との間に存在する。カルボキシ末端アミノ残基とジスルフィド架橋の両方とも、最大限の生物活性には必要とされるものである(Cooper等、1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 7763-7766)。アミリンはインスリンと共に膵臓から共分泌され、それらは、共働して、コリ回路(Cori cycle)として知られている、線条筋肉、肝臓及び脂肪組織に連結する代謝経路によってグルコース代謝と炭水化物のエネルギー貯蔵の産出とを調節する。インスリンは、最初に、この回路の前方弧、即ち、線条筋肉による血液からのグルコース吸収およびそのグリコーゲンへの変換、に働く。アミリンは、最初に、逆の弧、即ち、筋肉グリコーゲンの乳酸塩への分解の促進を調節し、これが肝臓における糖新生およびグリコーゲン形成の基質になる。アミリンの優性作用は、骨格筋肉および肝臓におけるインスリンの非競合的拮抗薬となり得るが、一方、脂肪組織におけるインスリンの作用は、このペプチドホルモンによって制約されない。
【００６４】
アミリンの過剰産出は、非インスリン依存型真性糖尿病(NIDDM)と関連があり、不溶性アミロイドの形でβ細胞にアミリンが沈着することになる。米国の人口の2%を越える人がこの障害を被っており、このことは、5百万を優に越える人々が現在苦しんでいることを意味する。膵臓におけるアミロイドの沈着はまた老化に関連した障害であり、この障害を有する老人は明白な症状を表すかまたは表さないかも知れない。血液中におけるアミリンの高濃度は、次の多くの生物学的結果に導く：それには、膵臓によるグルコース刺激インスリン生成の阻害；インスリン刺激グルコース吸収と線条筋肉によるグリコーゲンへのその混入との比の減少、即ち、グリコーゲン・シンテターゼ活性の阻害から生ずるインスリン耐性；グリコーゲン・ホスホリラーゼの不活性からその活性型への変換によって媒介される線条筋肉によるグリコーゲン分解の増加；グルコーゲンによるグルコース遊離インスリンでの抑制を克服すること；線条筋肉からの乳酸塩放出および肝臓によるそのグルコースへの混入を増加すること；および、肝グルコース出力のインスリンによる抑制に対抗すること、が含まれる。従って、（アミロイド沈着に加えて）アミリンの過剰発現の主要な特長は、血液における高濃度のグルコースの蓄積であり、これによって1つの続発症として肥満症が招来され得る：何故なら、グルコースの吸収と脂肪質組織によるトリグリセリドの生成は、アミリン過剰条件下では阻害されないからである。慢性NIDDMの長期間の結果は、アミロイド沈着による島のβ細胞の機能低下であり、従って、機能的アミリンとインスリンの両方の生成を減少させる。慢性NIDDMは、持続性高血圧、虚血、小管病、失明及び全身性感染と肢損失の発生率の増加を招来し得る。
【００６５】
グルコース代謝におけるその役割に加えて、アミリンは、血管拡張薬としても作用するカルシトニン遺伝子放出ペプチドの効果によく似ている。例えば、アミリンは、静脈に投与されると一時的高血圧を誘発する。2つの分子は、アミノ酸レベルでほぼ50%の相同性を分担する。各々は、37個のアミノ酸残基の長さであり、cys 2とcys 7との間にジスルフィド架橋を有し、カルボキシ末端でアミド化される。ジスルフィド架橋とカルボキシ末端のアミド化は、アミリンとCGRPの両方の最大限の生物活性には必要とされるものである。しかし、それらの密接な類似性に関わりなく、CGRPは、血管拡張ではアミリンより約100倍以上活性である。アミリンは、構造的にはカルシトニンにも関係がある。それは、これらの分子と同じようにいくつかの機能を分担する。例えば、どちらかが脳に投与されると、両方が食物吸収を抑え、且つ両方が破骨細胞による骨吸収と血清カルシウムの濃度を調節する。しかし再度、カルシトニンは、それらの活性において、アミリンよりも少なくともより効率的大きさである。
【００６６】
特殊な実施例は、抗体応答がこのペプチドホルモンに向けられるようアミリンへ普遍的合成免疫刺激器を連結することに関連して下に示す。アミリンに選択的免疫応答をのせることによりその活性を抑制すれば、その過剰生成に関わる病理、即ち、NIDDMの回復が来される。
【００６７】
ガストリンに基づく免疫治療によるガストリンの過剰生成に関連した消化性潰瘍と癌腫の治療
ガストリンは、よく特性付けられた胃腸ホルモンであって、その精製および化学的特性は、1964年に最初に達成されたものである(Gregory等、1964, Nature 204:931-933)。ガストリンは、プレプロガストリンとして知られている101個のアミノ酸の長さの前駆体分子として最初に作られるものである。プレプロガストリンは、アミノーからカルボキシー末端の次の部分からなる：21個のアミノ酸の長さのシグナル配列、33個の残基長の介在ペプチド、34個の残基長の"ビッグガストリン"分子、ガストリン３４、続いて、カルボキシ末端での9残基配列。シグナル配列は、小胞体へのその侵入中にプレプロガストリンの塊から開裂され、プロガストリンを産する。次いで、トリプシン様の切断によって、プロガストリンのアミノ末端から介在ペプチドが除去され、6個のカルボシキ末端残基も類似の処理で開裂される(ShieldsとBlobell, 1978, J. Biol. Chem. 253:3753-3756)。グリシン延長ガストリンと呼ばれる残留ペプチドは、カルボキシ末端終端部で配列-Cly-Arg-Argを有する。その後、これらの3つの残基が除去され、そしてビッグガストリンのカルボキ末端残基 Phe 、またはガストリン３４がアミド化される(Eipper等、1985, 116:2497-2504)。最後にカルボキシ末端の17個のアミノ酸残基が開裂されてガストリン１７を生ずる(Dockray等、a975, Nature 243:770-772)。幽門洞および十二指腸で見られる処理されたガストリン34と17の二分の一が特異なチロシン残基で硫酸処理される(Andersen, 1984, Scand. J. Clin. Lab. Invest. Suppl. 168:5-24)。
【００６８】
ガストリンは、いくつかの重要な機能を有しており、その2つの最も重要なのは胃酸分泌の刺激および胃腸管の細胞成長の刺激である。そのホルモンは、上述のように各分子のアミノ酸("AA")残基の数によって命名された少なくとも2つの分子形、G３４とG１７で存在する（表11, それぞれ、Seq ID Nos. 69と74参照)。
【００６９】
G３４とG１７が酸放出の刺激器としてモルベースで等効力であると考えられるが、G３４は、より確実に、胃腸粘膜の成長の刺激および胃の基底活性の維持の原因となる。G３４は、内部消化中に存在する主要形である。G３４は、血清の半分、即ちG１７のそれの約6倍長い（40分対6分）寿命を有しており、胃および十二指腸の両方で生成される。あるいは、G１７は食事後のガストリン刺激酸分泌の一次薬剤であり、これはガストリン媒介酸放出のほぼ60%-70%を占める。胃酸は、特殊な胃細胞、壁在細胞で作られる。壁在細胞は、アセチルコリン、ヒスタミンおよびガストリンによって酸を分泌するよう刺激でき、それはこれらの成分の各々と結ぶ付いている壁在細胞表面上の特異的レセプターに対する活性化に基づいて行われる。これらの刺激器のうち最も強力なのがガストリンG１７である。
【００７０】
胃酸の過剰分泌は消化性潰瘍の中心的因子であることが分かっており、それは2つの形、十二指腸潰瘍と胃潰瘍の形で存在する。制酸薬の処方は、潰瘍治療に通常用いられる方法である。制酸薬治療は、単に、胃酸が作られた後それを中和するだけであり、酸生成の源に影響を及ぼさないという理由から治療には不十分である。
【００７１】
消化性潰瘍を制御し治癒するための現行のアプローチは、酸生成又は分泌を誘い出す1つ以上の刺激器化合物の能力を阻害する薬剤を考案することに集中している。この用途のために開発された最も有効な薬物群は、H2拮抗薬（例えば、タガメットおよびザンタック）であり、それらは胃壁在細胞上のヒスタミンH2レセプターを遮断し、酸の分泌を阻害するものである。しかし、これらの薬剤は、毎日ベースで比較的大用量を要し、いくつかの好ましからざる副作用を誘発するかも知れない。H2拮抗薬が潰瘍を治すこれらの場合は、治療停止の1年以内に治療した個人のほとんど100%が再発する。不成功の化学的拮抗薬は、ペプチドホルモンガストリンの作用を阻害することが認められている。
【００７２】
壁在細胞による酸分泌の最も強力な刺激器であるのに加えて、ガストリンは、結腸癌腫、胃癌腫および胃の類癌腫の成長も助長する。ガストリンに構造的に関連する別のペプチドホルモンは、コレシストキニン(CCK)である。CCKは膵臓癌腫および小胞肺癌腫の成長を刺激する。さらに、胃腸管のある種の癌腫、アプドマ（apudomas）は、極めて大量のガストリンを作ると見られており、一方、下垂体のある種の腫瘍も過剰量のCCKを作り出すことが分かっている。アプドマによる過剰のガストリン生成によって、胃の酸分泌粘膜の肥大が刺激され、過剰胃酸分泌、消化性潰瘍、および粘膜に腫瘍性異変を来すことになる。膵臓細胞の過剰慢性CCK刺激は、膵臓肥大、過形成およびいくつかの前悪性異変を誘発することが立証されている。
【００７３】
ガストリンによってまたは関連CCKによって刺激された腫瘍に対するおよびガストリンまたはCCKを生成する腫瘍に対する現行の治療は、一次的に癌腫性組織の外科的切除からなる。このアプローチは、たびたび失敗に終わり、または適当ではない；多くの事例では、腫瘍は局在されず、または手術不可能な解剖的部位に存在する。ほとんどの事例で、これらの腫瘍は、放射線又は化学療法の養生に十分反応を示さない。現在の処置法を補足する新しい治療法が早急に必要とされるのである。
【００７４】
これらの胃腸ホルモン（例えば、ガストリンG３４、ガストリンG１７およびCCK）の生物活性を選択的に中和する治療法によって、過剰ホルモン生成から生ずる病理的異変を制御しまたは防御する効果的手段が提供されるであろう。能動的免疫化または前もって作られた抗体の受動的投与のいずれかによって誘発された抗ガストリン抗体によるガストリン濃度の制御は、前述のガストリン関連疾病介入に対する論理的アプローチである。そうした試みは、過去20年以上にわたって多くの研究者によってなされたが、(Jaffe, B.M.,等、1971, "Gastrin resistance following immunizations to the C-terminal tetrapeptide amide of gastrin, Surgery 69:232-238: Jaffe, B.M.等、1970,"Inhibition of endogenous gastrin activity by antibodies to the carboxyl terminal tetrapeptide amide of gastrin",Gastroenterology 58:151-156: Jaffe等、1969 "Inhibition of endogenous gastrin activity by incubation with antibodies to the C-terminal tetrapeptide of gastrin. Surgery 65:5633-639及びGevas,P.C.等、EPO 380230 "Immunogens against gastrin peptides")、ほとんどは、部位指向型ガストリンの反応性の欠如および不適当に設計されたガストリン免疫原の免疫遺伝学的不足に起因してそれほど成功はしなかった。
【００７５】
特定の実施例は、選択的抗体応答がこのペプチドホルモンの種々の部位に誘発されるようガストリンとその部分に対する普遍的合成免疫刺激器を連結することに関連して示される。これらの特異的ガストリン反応抗体は、ホルモンペプチドの生物活性および他の病理的変化を選択的に中和してよい。強力抗ガストリンおよびCCK交差反応性抗体の生成によるガストリンの特異的阻害または除去によって、ガストリンまたはCCKで刺激された腫瘍および何れかのホルモンを過剰生成する腫瘍の治療法がもたらされる。本発明に記述された免疫治療的アプローチは非侵入型であり、頻繁な繰返し処置を必要とせず、正常な組織に傷をつけず、従って副作用を軽減するものである。
【００７６】
ガストリン放出ペプチドに基づく免疫治療による胃潰瘍、腫瘍および肺癌腫の治療
ガストリン放出ペプチド(GRP)は、138個のアミノ酸残基長のプレプロ分子由来の27個のアミノ酸残基ホルモンである(Spindel等、1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:19-23)。GRPは、哺乳類相同のアンフィビアン・ボンペシンである(McDonald等、1979, Biochem. Biophys. Res. Commun. 90:227-233)。それは、胃腸管、神経系および肺管に見られる遍在性ホルモンである。胃腸管内部で、それは、ガストリン34、ガストリン17を含む胃腸ホルモンの生成を調節する(McDonald等、1983, Regul. Pept.5:125-137)。中枢神経系においては、その同じホルモンは、低温症と低血糖症を調節する(TacheとBrown, 1982, Trends Neurosici. 5:431-433)。GRPは、肺神経内分泌細胞の肺に存在し(Moody等、1981, Science 214:1246-1248)、神経内分泌細胞増生の重要なマーカーであると見られてきた(Aguayo等、1989, J. Clin. Invest. 84:1105-1113)。それはまた、小胞肺癌腫に対する顕著なオートクリン成長因子でもあり、それ故、肺癌腫処置の介入治療用の重要な標的である(Mulshine等、1991, Oncology 5:25-33)。それ故、それに対する抗体誘発によるGRPの免疫調節は、ホルモンに連結された普遍的合成免疫刺激器での免疫化を経て、胃潰瘍と腫瘍、ならびに肺がん腫に対する有効な治療法を提供する。
【００７７】
特殊な実施例は、抗体応答が発せられ有効なGRPに基づく免疫治療が可能となるよう、GRP、およびその部分に普遍的合成免疫刺激器を連結することに関連して下に与える。
【００７８】
IgE-CH4に基づく免疫治療によるアレルギーの治療
脱感作または低感作による喘息および花粉症のようなIgE媒介アレルギー応答の治療法は既に知られており、今世紀初頭以来実行されてきた(Noon L. (1911) Lancet, i:1572-1573)。そうしたアレルゲンベースの免疫治療の限界は、関連アレルゲンを同定することの困難さならびにいったんそれが同定されると今度はアレルゲンの使用により頻発する副作用を包含することにある（世界保健機構および免疫科学国際連合のワーキンググループ報告：アレルゲン免疫治療の現状. (1989) Lancet, i:259-261)。アレルギー除去のための他の治療法は、アレルギー反応の原因となる細胞性事象のカスケードをブロックする治療用化合物を用いることである。残念ながら、抗ヒスタミン・ブロックは遅延した部分的除去のみをもたらすようカスケードでゆっくり変化し、コルチコステロイドはカスケードで早過ぎるように作用して望ましくない広い免疫抑制を引き起こす。これらの2種類の化合物を使用することの結果として、IgEのレベルでアレルギー応答を阻害することによって治療薬適用性を開発する必要性が指摘される。これは、不便な脱感作法によって達成されるような、その合成を阻害することによるか、またはマスト細胞と好塩基細胞に及ぼすIgEの刺激作用をブロックすることによって可能かも知れない。
【００７９】
Stanworth等、(Stanworth D.R., Kings M, Roy PD等、(1979) Biochem. J., 180:665-668; Stanworth D.R. (1984) Mol. Immunol., 21:1183-1190; Stanworth D.R., とBint DS. (1986) Mol. Immunol., 23:1231-1235, 1986; Bint DS,とStanworth D.R. (1987) Eur. J. Immunol., 17:437-440; Stanworth D.R. (1988) Mol. Immunol., 25:1213-1215)は、免疫学的引き金（トリガ）処理に関わるヒトIgEのFc CH4領域内に配置された部位の同定を報告した。
Stanworth等は、さらに、ペプチド素地ワクチンの使用によって、IgE媒介アレルギー反応(StanworthD.R., Jones VM, Lewin IV,とNayyar S. (1990) Lancet, 336:1279-1281; Jones V, Lewin IV, Nayyar S.,とStanworth D.R. 英国特許出願9013478.4)を有する患者に免疫治療を施すことについての可能性を立証した。より詳細には、Lys-Thr-Lys-Gly-Ser-Gly-Phe-Phe-Val-Phe-NH２ (SEQ ID NO:79)という配列をもつIgE CH4デカペプチド（IgEによるマスト細胞と好塩基細胞の活性化に関わるIgE上の立体配座部位を近似するために先に示したもの）は、キーホール・リンペットヘモシアニン(KLH)のような担体タンパク質に結合され、免疫原として用いられた。そのような免疫化から得られた動物の免疫血清は、抗体依存方式においてラット腹膜のマスト細胞からのデカペプチド誘発ヒスタミン放出を適度に軽減すると見られた。これらお免疫血清による阻害活性は、さらに、多重アレルギー適用という条件下で生体内能動的皮膚アナフィラキシ(PCA)試験で確認された。
【００８０】
これらの原始型"IgE CH4ペプチド"ワクチンの主な欠陥は、ほとんど全ての自己抗原に関連する固有の問題であるところの弱免疫原性であるということである。本願発明において、特殊な実施例は、IgE上のこの活性化部位へ向かう強力抗体が作られ、それが引き続いてマスト細胞と好塩基細胞上のIgEの刺激活性をブロックし、従って有効なアレルギー治療法となるよう、IgEのCH4ペプチドに普遍的合成免疫刺激器を連結することに関連して下に与える。
【００８１】
他のペプチドハプテンと治療
クラミジア・トロコマティス(Chlamydia trachomatis)は、生殖器官および目の粘膜表面に影響を及ぼす偏性細胞内バクテリアである。血清学的反応性に基づけばC.trachomatisについては関連した15種の異なった血液型亜型がある。これらの血液型亜型は、主要な疾病症状に従いグループ分けされ、各々は、血液型亜型 B、Ba、AおよびCを含む眼病またはトラコーマ関連グループ；血液型亜型 D、E、F、G、H、I、J & Kを含む性的伝染病関連グループ；および性病性リンパ肉芽腫に関連する血液型亜型 L１、L２ & L３、と関連する(Murdin等、1993, Infect. Immun. 61:4406-4414)。それ自体およびNeisseria gonorrheaとの組合わせによる、C. trachomatisによる感染は、婦人の骨盤炎症性疾病(PID)または卵管炎の診断事例の二分の一以上の原因となっている。毎年、米国では百万人を越える婦人がPIDに関して診断されており、不妊症はその事例の25%以上に予測される続発症である(Washington等、1987, J. Am. Med. Assoc. 257:2070-2072)。生殖管の疾病に加えて、C. trachomatisは、世界における予防可能な失明（即ち、トラコーマ）の主要な原因である。現在、1千万人を越える人々がこの状態で永久的に盲目になっている(SuとCaldwell, 1992, J. Exp. Med. 175: 227-235)。
【００８２】
C. trachomatisの生活環(life cycle)には2つの代替型がある。生物の細胞外の、非転写の、濃縮された、胞子状感染型である基本体(EB)、および網状体(RB)は、EBを作り出す細胞内の増殖性型である。感染サイクルは、許容宿主（ホスト）の細胞へのEBsの付着で始められる。このプロセスには、非特異的電荷の相互作用、それに続くEBと宿主細胞膜との間の特異的レセプターーリガンド結合が含まれる。電荷の相互作用は、クラミジアの主外膜タンパク質(MOMP)によって媒介されるが、特異的バクテリア付着タンパク質（即ち、宿主細胞レセプターの認識に関わるタンパク質）は、未だ同定されていない(Stephens, 1993, Infect. Agents Dis. 1:279-293)。
【００８３】
その間にEBsが発せられる感染の初期鋭敏段階に続いて、疾病は、細胞のリンパ増殖性応答と大幅に関わる慢性異常に進行する(Morrison等、1989, J. Exp. Med.169:663-675; Morrison等、1989, J. Exp. Med. 170:1271-1283; Taylor等、1990, Infect. Immun. 58:3061-3063)。  従って、ほとんどの疾病異常は、クラミジア属タンパク質に対する免疫応答に関連し、病原体自体の複製には関係しない。この慢性期中は、EBまたはRBを分離／同定するのはまれである。
【００８４】
ワクチンの設計は、RBは得難くかつクラミジア属タンパク質は感染細胞の表面上で発現されないゆえ、許容細胞へのEBの付着を妨害することを目標としている。それゆえ、EBの主外膜タンパク質(MOMP)が重点的に研究されてきた。MOMPはEBsの表面上の優性免疫原であり、細胞へのEBの付着を媒介し、そしてMOMPへの抗体は異常とは関係付けられない。MOMP上の免疫優性部位は、非異変体によって連結された4つの表面露出された可変領域(VDI-IV)から構成される(Cheng等、1992, Infect. Imun. 60:4328-3432)。MOMPに対して、またはMOMPの特異的臨界可変領域に対して誘発された抗体は、許容宿主細胞膜とEBとの初期相互作用をブロックでき、感染を防ぐことができる(Caldwell等、1987, Infect. Immun. 55: 93-98; Taylor等、1988, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 29:1847-1853; SuとCaldwell, 1991, Infect. Immun. 59:2843-2845)。それゆえ、MOMPの広範囲の免疫原可変領域に対する免疫応答を最大にするワクチン設計は、幅広く効き目があると予想される。このワクチンは、MOMP可変領域を表すペプチドに普遍的合成免疫刺激器を連結することによりもたらされるものである。
【００８５】
世界保健機構によると、1千4百万人の人々が現在HIVに感染していると推定される。さらに、WHOは、2000年までに4千万の人がHIV-1にかかるであろうと推定している(Centers for Disease Control, 1991)。HIV感染の自然履歴が暗示することは、事実上、全てのHIV感染者は、結局は、無症候感染からエイズに関連した病的状態及び死に至るであろうということである。防御の地球的規模の研究ならびに教育キャンペンにもかかわらず、HIV感染率は世界の数地域でいぜんとして上昇している。公衆保健の観点から、HIV感染及び疾病から防御する安全かつ有効なワクチンの開発は、国際的最優先でなければならない。
【００８６】
いくつかの研究から、gp120のV3領域へ向けられる十分な滴定量の中和抗体がHIV-1による攻撃からチンパンジーを防御することが立証された(Berman等、1990,Nature 345:622-625; Girard等、1991, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 88:542-546; Emini等、1992, Nature 355:728-730)。この程度まで認識された他のHIV-1領域は、防御抗体応答を誘発することにおいてV3ほど効果的でなく、従ってV3は主要中和領域(PND)として知られている。V3領域は、許容細胞へのウイルスの侵入に必要とされ、かつそのウイルスに中和抗体が向けられる臨界事象を媒介するアミノ酸の直線伸長を包含する。それ故、V3 PNDに対応する合成ペプチドの配列に連結された普遍的合成免疫刺激器は、V3に対するかつ従ってHIVに対する抗体応答を増強することができる。以下に示す実施例は、効力のあるHIV-1ワクチンの封入体としての重要な免疫原である構造を記述するものである。
【００８７】
下記の諸実施例によって、本発明がさらに説明される。
【実施例】
【００８８】
実施例１
線状で八量体のＬＨＲＨ含有ペプチドによる
ラットの免疫感作
Ａ．免疫原調製: ペプチドＡ〜Ｅ（表１）および他の全てのペプチドは、アプライドバイオシステムズペプチドシンセサイザーモデル（Applied Biosystems Peptide Synthesizer Model）430Ａまたは431を製造者の指示に従って実施される標準的なＦ−moc化学を用いる固相合成法を使用して合成した。ヘプタリシルコア（Ｋ４Ｋ２ＫまたはＫcore）の合成には、各追加カップリングサイクルの後に２倍濃度のジ（Ｆmoc)−α，ε NH２保護リジンを使用した。ペプチドを完全に構築した後、標準的な方法に従って樹脂をＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）で処理してペプチドを樹脂から切り離し、アミノ酸側鎖の保護基を除去した。次に、遊離ペプチドをＨＰＬＣで精製し、アミノ酸分析で生化学的に特徴を決定した。
【００８９】
アミノ末端からカルボキシル末端までのペプチドの構造は次のとおりである: ペプチドＡは３個のドメイン: ３個のリジン残基（３Ｋ)、肝炎Ｂ表面抗原ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＨＢｓＴhエピトープ）およびＬＨＲＨを有する線状ペプチドである。それゆえ、ペプチドＡは３Ｋ−ＨＢｓＴh−ＬＨＲＨで表わされる。ペプチドＢは各ブランチが２個のＬＨＲＨコピーを有する八量体ペプチドである。これらのブランチはヘプタリシルコアに結合しており、そしてこのコアのＣ末端テールにＨＢｓＴhエピトープが結合している。それゆえ、ペプチドＢは(ＬＨＲＨ−ＬＨＲＨ)８−Ｋcore−ＨＢｓＴhで表わされる。(ＬＨＲＨ−ＬＨＲＨ−ＬＨＲＨ)８−Ｋcore−ＨＢｓＴhで表わされるペプチドＣは、ブランチが３個のＬＨＲＨコピーを有していることを除いてペプチドＢに類似している。ペプチドＤ、（ＬＨＲＨ−ＨＢｓＴh)８−Ｋcore−ＡＡは各ブランチが１個のＬＨＲＨドメインと１個のＨＢｓＴhを有する八量体ペプチドである。これらのブランチは、２個のアラニン残基（ＡＡ）がＣ末端リジンに結合したヘプタリシルコアに結合している。ペプチドＥ、（ＬＨＲＨ−ＬＨＲＨ−ＨＢｓＴh)８−Ｋcore−ＡＡは各ブランチが２個のＬＨＲＨドメインと１個のＨＢｓＴhを有する八量体である。これらのブランチは２個のアラニン残基がＣ末端リジンに結合したヘプタリシルコアに結合している。これらのペプチドの実際の配列は表１に示す。
【００９０】
０および２週目に投与して免疫感作するために、600μｇの各ペプチドを、0.2％のトウィーン80、2.5％のプルロニックＬ121、0.9％のＮaＣl（ＴＰ）のアジュバント溶液３mlに溶解した。この溶液は使用するまで４℃で貯蔵しそして注射前に３ないし５分間撹拌した。各ラットには0.5mlの１注射当たり100μｇを投与した。５週目にフロイントの完全アジュバントで投与して免疫感作するために、４mgの各ペプチドを0.9％のＮaＣl ２mlに溶解し、そして等容量のフロイントの完全アジュバントで乳化した。各ラットには１注射当たり500μｇを投与した。
【００９１】
Ｂ．免疫感作計画および血清採集: 性的に成熟した雄のスプラーグドゥリーラット（ｎ＝５）を皮下的（ｓ.ｃ.）に免疫感作した。ブースター注射は２および５週目にｓ.ｃ.投与した。ペプチドＡ、ＢおよびＣを注射したラットでは３、６、７および11週目にまたはペプチドＤおよびＥを注射したラットでは３、６、７および８週目に血液を集めた。
【００９２】
中尾動脈からの血液採集は、0.9％のＮaＣl中で10倍に希釈したペントバルビタールナトリウム（64.8mg／ml; Anthony Products Co.、カリフォルニア州アカディア）１mlを腹腔内投与してラットに注射することによって実施した。尾は48℃±0.5℃の水中で２分間保持しそして紙タオルで急速にマッサージした（即ち、絞り出した)。血液は直ちに、23ゲージ針を付けた５mlシリンジ中に集めた。典型的には、３〜４mlの血液が得られた。血清は3000rpmで25分間遠心して集めた。血清は300μＬ容量に分別し、そしてアッセイに使用するまで冷凍貯蔵した。
【００９３】
実施例２
ペプチドＡ〜Ｅの免疫原的および治療的有効性
Ａ: アッセイ方法及び臓器重量測定: 各血清試料中の抗ＬＨＲＨ力価はＲＩＡ［Ladd等（1988年）Am. J. Reprod. Immunol. 17:121〜127］で測定した。抗血清は１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ)、ｐＨ 7.4中で１：100（ｖ/ｖ）に希釈した。5.25pgのＬＨＲＨに対して約15000cpmを含有するように１％のＢＳＡ中で希釈した［125I]−ＬＨＲＨ（New England Nuclear Company、マサチューセッツ州ボストン）100μＬに等容量の希釈血清を加えた。この溶液を室温で一夜インキュベートし、そして抗体と結合したＬＨＲＨは、0.01Ｍのリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ)、ｐＨ 7.6中25％のポリエチレングリコール400μＬ及びＰＢＳ中５mg／mＬのウシガンマグロブリン200μＬを用いて沈殿させた。抗体の力価は血清１リットル当たりで結合したヨード化ＬＨＲＨのナノモルとして表わす。
【００９４】
血清テストステロン値はディアグノスチックプロダクツ(Diagnostic Products)（カリフォルニア州ロサンゼルス）のＲＩＡキットを製造者の指示に従って使用して測定した。テストステロンの検出下限は0.01から0.03ナノモル／Ｌまでの範囲であった。各試料は重複して分析した。
【００９５】
最初の注射後11週目（ペプチドＡ〜Ｃ）または８週目（ペプチドＤ及びＥ）に、ラットは二酸化炭素に過剰暴露して屠殺した。最大量の体幹血を集めた。アンドロゲン依存性性器（精巣、精巣上体、前立腺および精嚢）を各ラットから切り取り、紙タオルで乾燥し、そして重量を測定した。
【００９６】
Ｂ．結果: ５匹のラットの群をペプチドＡ〜Ｅで免疫感作した。試験経過中に抗ＬＨＲＨ力価およびテストステロン値を各ラットでモニターした。試験終了時に、ラットを屠殺し、アンドロゲン依存性器官の重量を得た。屠殺時の各ラットの抗ＬＨＲＨ力価、テストステロン値および精巣重量は表２に示す。このデータの要約は、他のアンドロゲン依存性器官の平均重量と一緒に表３に提供する。
【００９７】
ペプチドＡで免疫感作したラットはＲＩＡで測定するときＬＨＲＨに対する抗体を産生した。他のペプチド（例えば、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥ）で免疫感作したラットはいずれもＬＨＲＨに対して顕著な抗体力価を産生しなかった。11週目（ペプチドＡ〜Ｃ)、８週目（ペプチドＤ〜Ｅ）および対照ラットの平均抗ＬＨＲＨ力価（ナノモル／Ｌ）を表３に報告する。ペプチドＡで免疫感作した５匹のラットの平均抗ＬＨＲＨ力価は1.94ナノモル／Ｌであり、一方残りの群のラットは0.48から0.73ナノモル／Ｌまでの範囲の力価を有していた。これらの動物群のアンドロゲン依存性器官の平均重量を表３に報告し、そして図１に図で表わす。ペプチドＡで免疫感作したラットは対照動物と比較して器官重量の顕著な減少（約40％）を示した。
【００９８】
これらの結果は、ペプチドのＣ末端にＬＨＲＨが存在すると抗体産生およびアンドロゲン依存性器官の重量の付随的低下を刺激するのに一層有効であることを示している。この点に関して、ペプチドＡはＣ末端ＬＨＲＨドメインを有しており、一方有効でないペプチドＢ〜ＥはＬＨＲＨのＮ末端または内部コピーを有している。
【００９９】
ペプチドＢ〜Ｅラットおよび対照ラットに比べてペプチドＡラットのアンドロゲン依存性器官の重量の平均減少は顕著であったが、この減少は、５匹中３匹の動物で生起した劇的な減少によるものであった。それゆえ、Ａ群のラットを応答動物と非応答動物に分類し、そしてデータを再度分析した。図２に図で表わした応答動物及び非応答動物の平均アンドロゲン依存性器官重量はこれら２つのグループ間の大きな差異を示している。応答動物の血清テストステロン値は検出できなかった（表２)。図３は抗ＬＨＲＨ力価と精巣器官重量間の反比例関係を示す。この関係は他のアンドロゲン依存性器官重量についても同様である。
【０１００】
実施例３
百日咳トキシンＴhエピトープを含有する
線状ペプチドでの免疫感作
ペプチドＦ（ＰＴ１Ｔh−ＬＨＲＨ; 表４）は実施例１に記載したようにして合成しそして精製した。このペプチドは、アジュバントが0.5％のミョウバンであったことを除いて実施例１に記載したようにして免疫感作用に調製した。免疫感作は０、２および４週目にスプラーグドゥリーラットにｓ.ｃ.投与した。抗ＬＨＲＨ力価、テストステロン値およびアンドロゲン依存性器官重量の測定は実施例２に記載したようにして得、そして分析した。最初の免疫感作の11週間後に、精巣、精巣上体、前立腺および精嚢は対照動物で得られたものより顕著に小さかった（図４)。
【０１０１】
実施例４
広範な集団に抗ＬＨＲＨ応答を誘導するペプチド混合物
強力な合成ＬＨＲＨペプチド免疫原の混合物は、広範囲に強力なワクチンを提供するために組み合わせて処方する。ペプチドＡ、ＦおよびＨ（表１および表４）は実施例１に記載したようにして調製し、０、３および６週目に性的に成熟した雄ラットを免疫感作するために組み合わせて混合物にする。最初の注射はフロイントの完全アジュバントそしてブースター注射はフロイントの不完全アジュバントである。０、３、６、９および11週目に瀉血する。動物は器官重量測定のため11週目に屠殺する。これらの結果をアッセイしそして実施例２に記載したようにして評価する。
【０１０２】
実施例５
ペプチドＡの投与量依存性
ペプチドＡ、３Ｋ−ＨＢｓＴｈ−ＬＨＲＨは実施例１に記載したようにして合成した。このペプチドは、以下に記載した実験計画に従って有効性について試験した：
【０１０３】
実験計画：
免疫原:  ペプチドＡ
対照:  非修飾ＬＨＲＨ群およびアジュバント群
投与量:  １免疫感作当たり100または500μg
経路:  筋肉内
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
スケジュール:  ０週（ＦＣＡ)、３および６週（ＩＦＡ）
種:  ８匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー
雄ラット／群
アッセイ:  ＬＨＲＨ特異性抗体
血清テストステロン
ＬＨおよびＦＳＨ値
触診による相対的な精巣の大きさ
検死:  10週目に
精巣重量
前立腺＋精嚢の重量
精巣上体重量を測定する
【０１０４】
結果:
血液試料は免疫感作したラットと対照ラットから定期的に取り出した。これらの試料の血清はペプチドＡ特異的抗体、ＬＨＲＨ特異的抗体および血清テストステロンの存在について分析した。10週目に、動物を屠殺し、精巣および前立腺プラス精嚢を含む関連器官を切り取りそして重量を測定した。陽性対照として下垂体切除ラットをこの実験に含めた。３週目（最初のブースターの日）までに測定可能なＬＨＲＨ特異的抗体力価が観察され、ブースター免疫感作によってそれら力価の顕著な増加が達成された（図５)。抗体の力価はラジオイムノアッセイで測定した。これらの結果は、100μgまたは500μgの投与量のいずれかによって誘発された応答間に顕著な差異が存在していなかったので、使用した抗原の量が飽和値であったことを示している。図６は、ＬＨＲＨに対する血清抗体の増加と血清テストステロンの減少（ＬＨおよびＦＳＨの両方の付随的な劇的減少も観察された）間の強い相関関係を確立している。５週目（最初の免疫感作後）までに、血清テストステロンは10分の１に減少しそして８週目までに、血清テストステロンは全ての動物で去勢値（0.5ナノモル／Ｌ未満）であった。図７は、ＬＨＲＨ免疫感作によって血清テストステロンが減少する生物学的効果を示している。100μgのペプチドＡ投与量で免疫感作した動物の精巣の大きさは実験終了（10週）までに顕著に縮小した。これらの動物での精巣の大きさの縮小は下垂体切除（即ち、下垂体切除群）で得られた効果より大きくさえあった。交尾させては試験しなかったが、精巣の状態（組織病理学的試験を含む）は、ペプチドＡで免疫感作した動物が全て実験終了前に機能的に生殖不能であることを示した。前立腺重量（図８）は精巣で得られた結果に匹敵している、即ち、ペプチドＡ免疫感作によって前立腺の顕著な萎縮がもたらされた。どの測定によってもＬＨＲＨ単独では免疫感作によって顕著な効果は観測されず、無差別的なヘルパーＴ細胞エピトープと脆弱な免疫原との結合がこれらの免疫原に対する強力な免疫応答を刺激する手段を提供することを示していた。
【０１０５】
結論：
１．  ＨＢｓ ＴｈエピトープはＬＨＲＨに対する強力な抗体応答を誘発した。
２．  ペプチドＡの抗体はワクチン接種動物のＬＨＲＨ活性を効率良く無効化した。
３．  ＬＨＲＨ阻止は血清テストステロンを去勢値にまで十分低下させた。
４．  ペプチドＡによる免疫感作は所望の生物学的効果、即ち前立腺および精巣の劇的な収縮をもたらした。
【０１０６】
実施例５Ａ
追加的な有効なＴh：ＬＨＲＨ構築体の確認および試験
ペプチドＡの結果は多数の種々の試験で矛盾しないで再現され、95％を超える総合有効性であった（器官重量の減少を終了点として使用)。しかしながら、種々の「Ｔｈエピトープ：ＬＨＲＨ」構築体の相対的有効性またはその欠如を信頼度をもって測定するシステムを確立するために、我々は免疫感作プロトコールを修正した。ＬＨＲＨ構築体による最初の実験は、実施例５に記載した実験プロトコール（即ち、フロイントアジュバント製剤の筋肉内投与）によって評価したとき２つの別個のグループに分かれた。この構築体は有効性を欠いておりそして顕著な器官重量減少は何も生じさせなかったかまたは総合的に有効でありそしてペプチドＡの結果に類似していたかのどちらかであり、有効な候補のランク順位を確立することができなかった。かくして、上記したプロトコールの簡単な修正、即ち、候補ペプチド製剤の筋肉内投与とは対照的に皮下投与にすることによってランク順位を決定することができた。例えば、ＦＣＡ／ＩＦＡ中ぺプチドＡの皮下投与はこのペプチドに対する応答を軽減して、動物の95％以上とは対照的に、約30％が精巣および前立腺の収縮を生じさせるように十分応答した。
【０１０７】
従って、当モル量の種々のＴｈ：ＬＨＲＨ構築体（100μgのペプチドＡに相当）は上記のようにして製剤化したが、０、３および６週目に皮下投与した。試験したペプチドの配列は表５に示し、そして幾つかの異なる実験の結果は表６に集めた。各試験で、ペプチドＡは異なる実験間のデータを標準化するために陽性対照として含めた。示されているように、顕著な抗ＬＨＲＨ抗体力価を誘発するペプチドは免疫感作動物の血清テストステロン値を去勢値未満にまで低下させ、そして精巣重量を顕著に減少させた。表６を得るために実施した実験の結果は以下の実施例で提供する。
【０１０８】
実施例６
ペプチド１８、グリシンスペーサーを含有する
ＨＢＳＴｈエピトープ：ＬＨＲＨ構築体の有効性
ペプチド１８はアミノ末端からカルボキシル末端までが次のような４個の線状ドメイン: ３個のリジン残基（Ｋ３)、肝炎Ｂウイルスヘルパーエピトープ１９−３３（ＨＢＳＴｈ)、グリシンスペーサー（ＧＧ）およびＬＨＲＨで構成されている30個のアミノ酸残基の合成ペプチドである。ペプチド１８はＫ３：ＨＢＳ Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨとして表わされる。それゆえ、ペプチド１８の構造はヘルパーエピトープとＬＨＲＨの間にＧly−Ｇlyスペーサー配列が追加されていることだけがペプチドＡと異なっている。以下で、フロイントアジュバントで処方しそして皮下的に投与したときのペプチド１８の有効性分析を記載する。実験計画は別に示したものを除いて実施例５と同一である。
【０１０９】
実験計画：
免疫原:  ペプチドＡまたはペプチド１８
（即ち、別々の群で）
投与量:  100μgのペプチドＡ、
100μgのペプチドＡとモル当量のペプチド１８
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
種:  ６匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー雄ラット／群
【０１１０】
結果：
２回目のブースター免疫感作の２週間後（即ち８週目）に、ペプチド１８を投与された６匹の動物中６匹が１ナノモル／Ｌより高い抗ＬＨＲＨ抗体力価を示した（図９)。これらの高い抗体値は実験終了（10週）まで全ての動物で維持された。対照的にペプチドＡで免疫感作した６匹の動物中２匹しか10週目までに１ナノモル／Ｌより高い抗ＬＨＲＨ抗体力価を示さなかった（図10)。２つの群間のＬＨＲＨ特異的抗体力価の差異はこれらの動物中に存在する循環テストステロン値でも示された。10週目（動物が屠殺されたとき）までに、ペプチド１８を投与された６匹の動物中５匹が去勢値の血清テストステロンを示し（図11)、一方ペプチドＡを投与された６匹の動物中１匹がこのホルモンの去勢値を有していた（図12)。10週目の器官切除によって、ペプチド１８を投与された６匹の動物中５匹は顕著に萎縮した前立腺を有している（図13）ことが証明され、一方ペプチドＡを投与された６匹の動物中１匹しか収縮した前立腺を示さなかった。
【０１１１】
結論：
１．  ペプチド１８は所望の生物学的応答、すなわち、ＬＨＲＨ特異的抗体の発現、血清テストステロンの減少および関係器官の萎縮を誘発するのに有効であった。
２．  ＴｈエピトープとＬＨＲＨ間にＧly−Ｇlyスペーサー配列を挿入すると、ペプチド１８の結果とペプチドＡの結果を比較して分かるように、ペプチドに対する免疫応答が改善された。
【０１１２】
実施例７
ペプチド１９、麻疹ウイルスの無差別的
Ｔｈエピトープ：ＬＨＲＨ構築体の有効性
麻疹ウイルス（ＭＶ）のＦ糖タンパク質の15残基ドメインを、自動合成法によってＬＨＲＨ配列に結合させてペプチド１９を製造した。ペプチド１９はアミノ末端からカルボキシル末端までが次のような３個の線状ドメイン: 麻疹ウイルスヘルパーエピトープ（ＭＶＦ１ Ｔｈ)、グリシンスペーサー（ＧＧ）およびＬＨＲＨで構成されている。それゆえ、ペプチド１９はＭＶＦ１ Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨとして表わされる。このペプチドは、フロイントアジュバントで処方しそして下記のようにして皮下的に投与した。実験計画は別に示したものを除いて実施例５と同一である。
【０１１３】
実験計画：
免疫原:  ペプチド１９
投与量:  100μgのペプチドＡとモル当量
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全/不完全
種:  ６匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー雄ラット／群
【０１１４】
結果：
２回目のブースター免疫感作の２週間後（即ち８週目）に、免疫感作した６匹の動物中４匹で顕著なＬＨＲＨ特異的抗体力価が観察された（図14)。８週から
10週の間ではＬＨＲＨ抗体力価の増加はあまり大きくなく、そして加えて、最初は応答しなかった動物のうちの１匹（ラット♯726）はこの期間中に顕著な抗ＬＨＲＨ抗体を発現し始めた。図15も、顕著なＬＨＲＨ抗体の存在と血清テストステロンの減少の間の強固で明白な相関関係を示している。８週目に２ナノモル／Ｌより高い抗ＬＨＲＨ力価を発現していた４匹の動物は８週目までに0.5ナノモル／Ｌ未満の血清テストステロン値を有しており、そしてこれらの値は10週目まで維持された（図15ａ)。より低いＬＨＲＨ抗体力価を有する残りの動物は、去勢値までではないが、低いテストステロン値を有していることが見られた（図15ｂ)。去勢値未満までの血清テストステロンの顕著な減少は図16に示されるように、予想された重篤な精巣萎縮を生じさせた。前立腺萎縮については本質的に同一の結果が同様に観察された（図17)。ペプチド１９については、この「修正」プロトコールでは試験した動物の65％以上が去勢テストステロン値ならびに精巣および前立腺の重篤な萎縮を示した。実施例５のプロトコールに従って筋肉内に投与したとき、動物の95％以上が10週目までに関連器官の萎縮を示した。ペプチド１９の蓄積データは、２ナノモル／Ｌより大きいＬＨＲＨ抗体力価によって血清テストステロンは精巣と前立腺の両方の萎縮をもたらす去勢値（0.5ナノモル／Ｌ未満）にまで低下させられることを示している。ＬＨＲＨ特異的抗体力価はこれが所望の効果、即ち器官の萎縮を有するためには１〜２週間高くなくてはならない。これに基づくと、この試験が10週間を超えた場合、ラット♯726は去勢テストステロン値を達成したであろうと思われる。
【０１１５】
精巣萎縮が前立腺萎縮の絶対的な指標である: 前立腺の収縮は精巣重量の減少に先行する（即ち、前立腺はその維持を精巣に非常に依存するので、血清テストステロンの消失は急速な前立腺収縮を生じさせ、そしてこの後にだけ精巣萎縮が続く）ので、精巣重量の減少がスクリーニング実験の論理的終了点である; 精巣除去は前立腺と関連精嚢の除去に必要な複雑な解剖に比べると取るに足りないものであり; そして前立腺と精嚢に比べて精巣の形態が単純なため精巣重量測定が一層正確なものになる。
【０１１６】
結論：
１．  ペプチド１９はフロイントアジュバントと共に投与したとき有効である
（即ち、血清テストステロンに加えて精巣および前立腺重量の顕著な減少をもたらす）。
２．  ペプチド製剤の皮下投与によって免疫原の有効性をランク付ける手段が可能になる。
３．  ペプチド１９はペプチドＡより良好な有効性を有している。
【０１１７】
実施例８
ペプチドＫ、百日咳トキシンの
無差別的Ｔｈエピトープ：ＬＨＲＨ構築体の有効性
百日咳トキシンの24残基長のＴｈエピトープは自動合成法によってＬＨＲＨに結合させてペプチドＫを形成させた。このペプチドはアミノ末端からカルボキシル末端までが次のような２本の線状ドメイン: 百日咳トキシンヘルパーエピトープＴｈ2（ＰＴ２Ｔｈ）およびＬＨＲＨで構成されている。それゆえ、ペプチドＫはＰＴ２Ｔｈ：ＬＨＲＨとして表わされる。このペプチドはペプチド１８および１９を分析するために記載したのと同じプロトコール（上記実施例６および７）を使用して有効性について試験した。実験計画は別に示したものを除いて実施例５と同じである。
【０１１８】
実験計画：
免疫原:  ペプチドＫ
投与量:  100μgのペプチドＡとモル当量
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
種:  ６匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー雄ラット／群
検死:  10週目に精巣重量を測定する
【０１１９】
結果：
図18はペプチドＫを皮下的に投与された動物で発現したＬＨＲＨ特異的抗体力価を記載する。２匹の動物は８週目までに顕著なＬＨＲＨ特異的抗体力価（４ナノモル／Ｌ以上）を示し、２匹は中間の値（1.5〜2.0ナノモル／Ｌ）を示しそして２匹の動物は本質的に応答を示さなかった。更に、抗ＬＨＲＨ力価と血清テストステロン値の予想された相関関係が存在した。高い抗体力価を有する２匹の動物は８週目までに去勢値の血清テストステロンを有しており、そして実験終了までこの値のままであった（図19ａ)。ラット♯793は10週目に２ナノモル／Ｌより大きいＬＨＲＨ抗体力価を発現し、そしてその時点で去勢テストステロン値を有していた。10週目に1.6ナノモル／Ｌの測定ＬＨＲＨ抗体力価を有していたラット♯791（図18）はその時点で去勢の限界点に近いテストステロン値を有していた（図19ｂ)。高レベルのＬＨＲＨ抗体を発現した動物（図18）は10週目に顕著に萎縮した精巣を有していた（図20)。ラット♯791は精巣重量の減少を幾らか示し、そして血清テストステロン値の動力学に基づくと、11週後に検死を実施した場合には器官萎縮は顕著であったであろう。
【０１２０】
ペプチドＫに対する応答の多様性は、この試験に使用した異系交配ラット集団内での遺伝的差異を反映し、そしてこのＬＨＲＨ構築体内に含まれるＴｈエピトープを効果的に認識する能力の動物間の差異を明確にする可能性が非常にある。この結果によって、多様なＨＬＡ単相型を示している集団で均一で強力な応答をもたらすために種々の無差別的Ｔｈエピトープを含有する構築体混合物の使用が支持される。
【０１２１】
結論：
１．  ペプチドＫは、フロイントアジュバントと共に投与したとき有効である（即ち、血清テストステロン及び精巣重量サイズの顕著な減少をもたらす）。
２．  ペプチド製剤の皮下投与は免疫原の有効性をランク付ける手段を提供する。
３．  無差別的Ｔｈ構築体は、遺伝的に異種の集団で検分したとき、有効度を変えることが可能である。
４．  ペプチドＫはペプチドＡによって達成された有効性に近い有効性を有している。
【０１２２】
実施例９
ペプチドＨ、破傷風トキシンの
無差別的Ｔｈエピトープ：ＬＨＲＨ構築体の有効性
アミノ末端の近くに位置する破傷風トキシンの15個アミノ酸Ｔｈエピトープおよびそれに続くＬＨＲＨ配列からなる27個アミノ酸長のペプチドは、標準的な自動合成技術を使用して合成した。このペプチド、ペプチドＨはアミノ末端からカルボキシル末端までが次のような３個の線状ドメイン: ２個のリジン残基（Ｋ２)、破傷風トキシンヘルパーＴ細胞エピトープ１（ＴＴ１ Ｔｈ）およびＬＨＲＨで構成されている。それゆえ、ペプチドＨはＫ２：ＴＴ１ Ｔｈ：ＬＨＲＨとして表わされる。以下ではフロイントアジュバントで処方しそして皮下的に投与したときのペプチドＨの有効性の分析を記載する。実験計画は別に示したものを除いて実施例５と同じである。
【０１２３】
実験計画：
免疫原:  ペプチドＨ
投与量:  100μgのペプチドＡとモル当量
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全および／または不完全
種:  ５匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー雄ラット／群
検死:  10週目に精巣重量を測定する
【０１２４】
結果：
図17はＬＨＲＨ特異的抗体を産生させるペプチドＨの能力を示す。８週（２回目のブースター投与後２週）までに５匹の動物中４匹は2.0ナノモル／Ｌより大きい抗ＬＨＲＨ抗体力価を発現する。10週目までに、５匹目の動物は1.0ナノモル／Ｌより大きいＬＨＲＨ抗体を発現した。８週目に全ての動物で血清テストステロン値が顕著に減少し、そして10週目までに、血清テストステロンは全ての動物で去勢値であった（図22)。10週目に、動物を屠殺し、そして関連器官の重量を測定した。５匹のラット中４匹は劇的に萎縮した精巣を示した（図23)。５匹目の動物、ラット♯103は顕著に減少した精巣を示したが、ペプチドＨを投与されている他の動物の精巣より僅かに大きかった。これはこの動物によって発現されたより低い抗ＬＨＲＨ抗体値と相関する（図21)。
【０１２５】
結論：
１．  ペプチドＨはフロイントアジュバントと共に投与したとき有効である（即ち、血清テストステロンに加えて精巣および前立腺重量の顕著な減少)。
２．  このペプチド製剤の皮下投与は、免疫原有効性のランク付け手段を提供する。
３．  ペプチドＨはペプチドＡより顕著に有効である。
【０１２６】
実施例１０
フロイントアジュバントで投与した免疫原混合物
多数の異なるＴｈエピトープ：ＬＨＲＨ構築体（実施例５〜10; 表６）の相対的有効性を確立することによって免疫原混合物用の代表的なペプチドの選択が可能になる。免疫原混合物中に麻疹ウイルスＦ、肝炎Ｂ表面抗原、破傷風トキシン及び百日咳トキシンのＴｈを有する個々の構築体は有効性を示しており（表６）そして無差別的であり、遺伝的に多様な集団で最大の適用範囲を提供する。更に、これらのＴｈエピトープはそれまでに投与されたワクチン中に存在しているので、応答感作の可能性を提供する。以下の実験は、混合物方法を使用した関連器官の急速な萎縮を示す。実験計画は別に示したものを除いて実施例５と同じである。
【０１２７】
実験計画：
免疫原:  混合物（ＨＢs Ｔｈ：ＬＨＲＨ＋ＭＶＦ１Ｔｈ：ＬＨＲＨ＋ＰＴ２Ｔｈ：
ＬＨＲＨ＋ＴＴ１Ｔｈ：ＬＨＲＨ）
投与量:  各々が100μgのペプチドＡと等しいモル当量
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
種:  ６匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー雄ラット／群
検死:  10週目に精巣重量を測定する
【０１２８】
結果：
Ｔｈ：ＬＴＲＨ構築体の混合物は上記実施例６〜９に記載した方法によってフロイントアジュバントで皮下的に投与した。図24に示したように、急速でかつ強力な抗ＬＨＲＨ抗体応答が全ての動物で観察された。５週、即ち最初のブースター免疫感作の２週間後でかつ２回目のブースター前までに、６匹の動物中５匹は、血清テストステロン値を去勢で余儀なくされる値未満に低下させるのに十分なＬＨＲＨ特異的抗体力価を発現した。抗体力価の顕著な増加は２回目のブースター免疫感作後の全ての動物で達成された。血清テストステロン値は最初の免疫感作後５から８週の間に去勢で余儀なくされる閾値未満になり、そしてその後の実験でこれらの値のままであった（図25)。血清テストステロンのこの顕著な減少により10週目に測定した全ての動物で精巣の顕著な萎縮が生じた（図26)。この実験は免疫原混合物によってもたらされた利点を示している（図26を図16、20および23と比較されたい)。望ましい終了点は２,３匹の動物とは対照的に全ての動物で達成される。応答の均一性に加えて、応答の迅速性や強度がこの混合物を個々の成分の代わりに投与したときに高められた（図24を図14、18および21と比較されたい)。
【０１２９】
結論：
１．  Ｔｈ：ＬＨＲＨ免疫原混合物はこの混合物の個々のペプチドより有効である。
２．  免疫原混合物は所望の効果、即ち、関連器官の萎縮をもたらすのに十分効果的である（95％以上の動物が所望の特徴を示す)。
【０１３０】
実施例１１
ミョウバンで処方した免疫原混合物
ヒト前立腺癌治療法では、ヒトでの使用に許容されるワクチン製剤を使用して同じような器官重量減少値を達成することが必要である。それゆえ、アジュバンドとして水酸化アルミニウムを用いたＴｈ：ＬＨＲＨ構築体の混合物の有効性を試験した。以下はこの実験の要約である。実験計画は別に示したものを除いて実施例５と同じである。
【０１３１】
実験計画：
免疫原:  混合物(ＨＢs Ｔｈ：ＬＨＲＨ＋ＭＶＦ１Ｔｈ：ＬＨＲＨ＋ＰＴ２Ｔｈ：
ＬＨＲＨ＋ＴＴ１Ｔｈ：ＬＨＲＨ)
投与量:  250μg、各々のモル当量
経路:  筋肉内
アジュバント:  水酸化アルミニウム
スケジュール:  ０、２および４週
種:  ５匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー雄ラット／群
検死:  10週目に精巣重量を測定する
【０１３２】
結果：
実験開始後８週目に、全ての動物で顕著なＬＨＲＨ特異的抗体力価が観察され、３匹の動物は２ナノモル／Ｌを超える力価を発現し、そして２匹は1.5から2.0ナノモル／Ｌの間の力価を有していた（図27)。10週目までに、５匹の動物中４匹は２ナノモル／Ｌを超えるＬＨＲＨ抗体力価を示した。この時点で、５匹の動物中４匹は去勢血清テストステロン値を示し（図28)、そして同じ４匹の動物は顕著に萎縮した前立腺を有していた（図29)。５匹目の動物、♯231は、この群の他の動物と比較したとき不完全ではあるが顕著な前立腺重量減少を示した。その前立腺重量は、実験終了時のこの動物の測定可能ではあるが減少した血清テストステロン値と一致している。これは、所望の生物学的効果（即ち、血清テストステロンの消失と顕著な前立腺萎縮）がミョウバン上のＬＨＲＨ構築体による免疫感作によってもたらされたことが記載されている最初の報告書である。文献にこれまで記載された他の全ての場合では、ミョウバンをＬＨＲＨに基づく免疫原と共に使用する方法は失敗し、所望の効果をもたらすためには、反応原製剤（例えば、フロイントのアジュバント）の使用が必要であった。
【０１３３】
フロイントのアジュバント中の同じ免疫原混合物（図25）と比較したとき、ミョウバンに基づく製剤（図28）の有効性の低下は所望の応答のタイミングの遅延として現れた。これは、10週目に萎縮した前立腺を有していたが正常な精巣重量を有していたラット♯228（図29）によって示されている。実験が10週を超えて継続された場合、この動物は収縮した精巣を示していたであろうと思われる。対照的に、フロイントのアジュバントに基づく製剤を投与された動物は全て10週目までに萎縮した精巣を示した（図26)。
【０１３４】
結論：
１．  無差別的Ｔｈ：ＬＨＲＨ合成ペプチド構築物を混合すると有効なＬＨＲＨ免疫治療用ワクチンが提供される。
２．  この免疫原混合物はミョウバン（ヒトでの使用を認められた非常に少数で且つ最も安全なアジュバントの１つ）と共に処方することができ、そして必要な生物学的効果、即ち関連器官の萎縮を得ることができる。
【０１３５】
実施例１２
人工のＴｈエピトープＳＳＡＬ：ＬＨＲＨ構築体の有効性
ペプチド３８（ペプチドＳＳＡＬ1としても表わされる）は、麻疹ウイルス
Ｆ１ Ｔｈエピトープをモデルにした変性Ｔｈ配列がＬＨＲＨに結合しているペプチドライブラリーである。このペプチドはアミノ末端からカルボキシル末端までが次のような３個の線状ドメイン: 合成ヘルパーＴ細胞エピトープを表わす構築された合成抗原ライブラリー（ＳＳＡＬ Ｔｈ)、グリシンスペーサー（ＧＧ）およびＬＨＲＨで構成されている。それゆえ、ペプチド38はＳＳＡＬ Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨとして表わされ、そしてペプチド１９（即ち、ＭＶＦ１ Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨ）の類似体である。
【０１３６】
ペプチド３８の配列は表５に示す。ペプチドＳＳＡＬ1：ＳＳＡＬ Ｔｈ1：ＧＧ：ＬＨＲＨ（ＳＳＡＬ Ｔｈ1ＭＶＦ１ Ｔｈ誘導体)。
【０１３７】
このペプチドライブラリーは約5.24×10５個の種々の配列の混合物で構成されており、その際麻疹ウイルスの正確なＴｈ1エピトープはこれらの配列のたった１つによって表わされる。ＧlyスペーサーおよびＬＨＲＨはライブラリー配列中の不変体である。
【０１３８】
ペプチドＳＳＡＬ1に存在する変性ヘルパーＴ細胞エピトープは、Ｆタンパク質の残基288〜302によって表わされる麻疹ウイルスのＦタンパク質から同定された無差別ヘルパーＴ細胞エピトープをモデルにしており、そして次のアミノ酸配列、ＬＳＥＩＫＧＶＩＶＨＲＬＥＧＶを有している。該ライブラリー配列はこの配列を鋳型として使用して構築した。荷電した残基Ｇlu（Ｅ）およびＡsp（Ｄ）を１位に加えて両親媒性螺旋エピトープの疎水性面の周囲の荷電を高めた。この面は２、５、８、９、10、13および16位の残基から構成されている。一般に無差別エピトープと関係のある疎水性残基をこれらの位置に加えた。ロスバード（Rothbard）配列は基本型配列の残基６〜10に存在しそしてその特徴はライブラリー内の全ての配列で維持されている。１、４、５、８ルールに従う配列は基本型配列の残基５で開始し、そして同様に全ての配列で維持されている。
【０１３９】
ペプチド３８は、メリーフィールド（Merrifield）によって開拓された固相合成経路のような技術分野で周知の標準的な技術を使用して化学的合成によって製造した。一定の位置での多数のアミノ酸のカップリングは、処方で示されるような適当な比率の所望のアミノ酸の混合物を提供することによって達成される。例えば、Ｎ末端から２、５、８、９、10、13および15位では、対応する各カップリング工程用に、１個の保護されたアミノ酸の代わりに当モル量の保護されたＮα−アミノ基、Ｌeu（Ｌ)、Ｉle（Ｉ)、Ｖal（Ｖ）およびＰhe（Ｆ）を使用した。必要な場合には、混合物中のアミノ酸の比率を変えてこれらアミノ酸の種々のカップリング効率を明らかにすることができる。合成終了時に、ペプチドライブラリーは遊離ペプチド混合物を放出する標準的な方法に従って個々に開裂した。実験計画は別に示したものを除いて実施例５と同じである。
【０１４０】
実験計画：
免疫原:  ペプチド３８またはペプチド１９（別々の群で）
投与量:  400μgの各ペプチド
経路:  筋肉内
アジュバント:  不完全フロイント
スケジュール:  ０週（ＦＣＡ)、３および４週（ＩＦＡ）
種:  ５匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー雄ラット／群
検死:  10週目に精巣重量を測定する
【０１４１】
結果：
実験開始６週間後（即ち、最初のブースター免疫感作の２週間後でかつ２回目のブースターの直前）に、ペプチド３８を投与された５匹の動物中４匹は去勢値の血清テストステロンを示した。８週目に血清テストステロンは５匹の動物中５匹で去勢値であった。その時点の精巣の触診で、６週目に無視できるほどの血清テストステロンを有していた４匹の動物は器官が萎縮していることが示された。対照的に、ペプチド１９で免疫感作した５匹の動物中１匹しか６週目までに去勢血清テストステロン値を示さず、残りは正常な範囲内であり、そしてこの数は８週目まで変化しなかった。８週目までに、６週目に無視できるほどのテストステロン値を有していたペプチド１９を投与された動物は触診で萎縮した精巣を有していた。
【０１４２】
結果：
１．  Ｔｈエピトープライブラリーは、血清テストステロンを去勢値にまで減少させることによってペプチド３８を投与された全ての動物で顕著な有効性を示した。
２．  Ｔｈエピトープライブラリーペプチドは、ＬＨＲＨに結合した無差別的Ｔｈエピトープで構成された１個のペプチド免疫原では提供できないもの、即ち、異系交配集団の全てのメンバーでの総合的有効性を提供した。
【０１４３】
実施例１３
抗体誘発を増幅するためのＬＨＲＨ免疫原の
更なる修飾: インバジンドメインの付加
Ｔ細胞活性化は、病原菌エルシニア種（spp）のインバーシンタンパク質の特異的フラグメントに共有結合しているＬＨＲＨによっても生じさせることができる。インバーシンタンパク質のあるドメインがＨＢs Ｔｈエピトープ：ＬＨＲＨ構築体に結合しているペプチド３２（即ち、Ｉnv７１８−７３２＋ペプチド１８）が合成されている。ペプチド３２はアミノ末端からカルボキシル末端までが次のような５個の線状ドメイン: インバーシンＴ細胞刺激物質（Inv)、グリシンスペーサー（ＧＧ)、肝炎Ｂ表面抗原ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＨＢsＡg Ｔｈ1)、グリシンスペーサー（ＧＧ）およびＬＨＲＨで構成されている。それゆえ、ペプチド３２は次のように表わされる: Ｉnv：ＧＧ：ＨＢs Ｔｈ1：ＧＧ：ＬＨＲＨ。以下は、インバーシンドメインを付加することによってＬＨＲＨ免疫原に付与された顕著な有効性の特別の例を提供する。実験計画は別に示したものを除いて実施例５と同じである。
【０１４４】
実験計画：
免疫原: ペプチド３２
投与量: １投与量当たり100μg
経路:  皮下
アジュバント:  水酸化アルミニウム
種:  ５匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー雄ラット／群
検死: 10週目に精巣重量を測定する
【０１４５】
結果：
図30は、ペプチド３２で免疫感作したラットでもたらされたＬＨＲＨ特異的抗体力価を記載している。顕著な力価は最初のブースター免疫感作（３週目）後に達成され、そしてこれは６週目の２回目のブースター免疫感作後増加し続けた。８週目までに、５匹の動物中４匹は２ナノモル／Ｌを超えるＬＨＲＨ抗体力価を示した。Ｔｈエピトープを欠くＩnv７１８−７３２：ＬＨＲＨ構築体で免疫感作した対照動物は測定可能なＬＨＲＨ特異的抗体を産生しなかった。血清テストステロン値（図31）はペプチド３２に応答する動物で急激に低下し、そして８週目までにテストステロン値は去勢の閾値未満であった。これらの動物の血清テストステロンはその後の実験で測定不能のままであった。図32で示されるように、劇的な臓器萎縮は４匹の応答動物で達成された。ペプチド１８（ＨＢs Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨ; インバーシンエピトープを欠いている）で免疫感作した対照動物の精巣はこの実験の終了時（即ち、10週目）に影響を受けていなかった。この結果は、インバーシン含有ＬＨＲＨペプチドをミョウバンで処方しそして皮下に投与したので、特に重要である。高分子量の担体分子、例えば破傷風およびジフテリアトキシンに結合したＬＨＲＨによる以前の研究では、顕著な有効度を達成するために、フロイントの完全アジュバントまたは他の反応原アジュバントを有する製剤が必要であった。
【０１４６】
結論：
１．  インバーシンフラグメントはＴｈ：ＬＨＲＨ構築体に対する免疫応答で顕著な改善を提供する。
２．  ミョウバンはペプチド３２の十分なアジュバントであった。
３．  ペプチド３２は器官萎縮を生じさせることができる。
【０１４７】
実施例１４
ペプチド３２を含有するＬＨＲＨ免疫原混合物の有効性
実施例１０および１１に記載した免疫原の混合物の有効性を試験する実験を実施したが、但しＨＢs Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨ構築体はペプチド３２で置換した。この実施例のプロトコールは実施例１１で使用したものと同一である。上記したように、ミョウバン上のペプチド100μgを投与した動物には０、３および６週目に投与した。図33に示されるように、急速かつ強力な抗ＬＨＲＨ抗体応答は、ミョウバンで処方したときインバーシンフラグメント含有混合物による免疫感作に応答してもたらされた。８週目までに、混合物を投与した６匹の動物中６匹が去勢閾値未満（即ち、0.5ナノモル／Ｌ未満）の血清テストステロン値を示した（図34)。対照的に、ミョウバン上のペプチド３２単独の当量投与量を投与された６匹の動物中４匹は去勢テストステロン値を有していた。これらのデータは、インバーシンフラグメントに対する応答に関係した遺伝的な変異性が種々のＴｈ構築体を含有する混合物中での該フラグメントの存在によって克服されることを示唆している。図35は実験終了時（10週目）の精巣重量を記載している。ペプチド３２を含有する免疫原混合物を投与した５匹の動物中５匹が顕著な器官萎縮を示し、そして組織学的試験からみて機能的に生殖不能であった。
【０１４８】
インバーシン７１８−７３２は、ＨＢs Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨに結合してペプチド３２を生成し、ＭＶＦ１Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨに結合してペプチド３３を生成し、ＰＴ２Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨに結合してペプチド３４を生成し、ＴＴ１Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨに結合してペプチド３５を生成し、ＴＴ４Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨに結合してペプチド３６を生成し、そしてＴＴ５Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨに結合してペプチド３７を生成する。ペプチド３２〜３７の有効性を単独および組合せて評価するために設計した実験はこの実施例及び実施例１３に従って実施される。
【０１４９】
実施例１５
Ｐam３Ｃysの共有結合によってＬＨＲＨ免疫原に
提供される有効性の改善
ＨＢＳ Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨペプチドは脂質部分Ｐam３Ｃysを加えて更に修飾した。この脂質残基は、ペプチドの合成に使用した樹脂から開裂する前にペプチド１８のアミノ末端に共有結合させた。それゆえ、この修飾されたペプチドはアミノ末端からカルボキシル末端までが次のような４個の線状ドメイン: トリパルミトイル−Ｓ−グリセロールシステイン（Ｐam３Ｃys)、肝炎Ｂ表面抗原無差別的ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＨＢsＡg Ｔｈ)、グリシンスペーサー（ＧＧ）およびＬＨＲＨで構成されている。このペプチドは次のように表わされる: Ｐam３Ｃys：ＨＢＳ Ｔｈ：ＧＧ：ＬＨＲＨ。脂質修飾ペプチドは安定な脂質エマルジョン、リポシン（Lyposyn）(乳化した大豆油とサフラワー油の混合物）中で処方し、そしてスプラーグドゥリーラットに皮下投与した。使用した投与量は100μｇのペプチド１８のモル当量であり、０、３および６週目に投与した。第２の動物群には非修飾ペプチド１８を０、３および６週目に100μgの投与量で投与した。実験を開始して10週間後に、免疫感作した動物の血清でエリザ（ＥＬＩＳＡ）アッセイを実施した。Ｐam３Ｃys：ＨＢsＡg：ＧＧ：ＬＨＲＨで免疫感作した５匹の動物中５匹が顕著な抗ペプチド１８抗体を示した（１：100希釈でＯＤ＞0.5)。対照的に、修飾されていないペプチド１８で免疫感作した動物はいずれもこの値の抗体を示さなかった。それゆえ、共有結合させて脂質を加えることにより、免疫応答を強化する有効な手段が提供される。
【０１５０】
実施例１６
微粒子中のペプチドＡの送達
ＬＨＲＨ免疫原を取り込んでいる10μmかまたはそれ未満の微粒子を皮下または筋肉内的に送達したとき、効果的な免疫応答が生じる。これらの小さい微粒子はマクロファージによって効果的に吸収され、有効な抗原提供を可能にした。
【０１５１】
ペプチドＡを含有する微粒子は、1994年2月25日付で出願された米国特許出願番号 201524に記載されているようなポリ（ラクチド−コ−グリセリド）コポリマーを用いて製造した。
【０１５２】
無菌の(油中水系)水中エマルジョンは次のようにして製造した: 1.5％(ｗ／ｗ)の合成ペプチドＡの水溶液は、ペプチド溶液を無菌0.2μmフィルターを通して製造した。ポリマーを4.0％（ｗ／ｗ）の濃度でジクロロメタンに溶解し; この溶液200ｇをペプチド溶液20ｇに加え、そしてホモジナイザー（モデルＳＴＤ１、Silverson Machiens、マサチューセッツ州イーストロングメドウ、１インチの管状ヘッド、13,000rpm、４分）で混合した。油中水系エマルジョンを形成させた後、これに10％（ｗ／ｗ）のポリビニルアルコール600ｇを加え、そしてホモジナイザーで混合した（13,000rpm、６分)。安定な油中水系水中エマルジョンが形成され、そしてこれを２Ｌの濾過フラスコに移した。ジクロロメタンは周囲条件下で磁石撹拌棒によって16時間撹拌しながら留去した。0.2μmフィルターおよびエマルジョンの４cm上部に置いた気体分散管を通して蒸発フラスコ中に無菌空気を導入した。ジクロロメタンが蒸発したとき、それはフラスコの側枝から出る空気流によってフラスコから除去した。空気／ジクロロメタン混合物を乾燥した氷−アセトン冷トラップ中に通過させてジクロロメタンを凝縮させた。ジクロロメタンの蒸発は16時間後に完了し、そして分離した粒子が形成されていた。粒子を遠心してポリビニルアルコールから回収し、無菌水で洗浄しそして24時間凍結乾燥して乾燥粉末を得た。この粒子の大きさは10μm未満である。微粒子ペプチドＡに対する免疫応答は以下に記載した実験においてラットで評価しそして表７に要約した。実験計画は別に示したものを除いて実施例５と同じである。
【０１５３】
実験計画：
免疫原:  急速放出微粒子（１：１、ポリラクチド:コ−グリコリド）中のペプチドＡ（ＨＢs Ｔｈ：ＬＨＲＨ、スペーサー無し）
投与量:  １投与量当たりペプチドＡ100μg
経路:  皮下
アジュバント:  実験的に変動可能
種:  ６匹の性的に成熟したスプラーグドゥリー雄ラット／群
検死:  10週目に精巣重量を測定する
【０１５４】
結果：
微粒子ペプチドＡは６匹の免疫感作動物中２匹に顕著なＬＨＲＨ特異的抗体産生及び精巣の劇的な萎縮を生じさせた。ミョウバンで処方したペプチドＡの等量投与量を同一の方法で投与したとき、動物はいずれも顕著な器官重量の減少を示さなかった。それゆえ微粒子は、所望の効果、即ちＬＨＲＨ特異的抗体力価の上昇、血清テストステロンの消失および器官萎縮を生じさせる際にミョウバンより効果的であった。微粒子の送達は好都合にも、６匹の動物中３匹に器官萎縮を生じさせたフロイントのアジュバント中の可溶性ペプチドＡの送達によって示される有効性に匹敵する。比較すると、実施例６に示されたように、グリシンスペーサー配列（ペプチド１８に見られる）をＨＢＳ Ｔｈ：ＬＨＲＨ構築体に単に加えただけで免疫原性を顕著に改善した; ＦＣＡ／ＩＦＡ中のペプチド１８を投与した６匹の動物中６匹が萎縮した精巣を有していた。
【０１５５】
ペプチドＡを負荷した微粒子を種々のアジュバント／エマルジョン製剤に混合したときの効果を試験した。表７で見ることができるように、リポシン＋サポニン及びスクアレン＋Ｌ121を含有するある製剤（各群の６匹の動物中４匹は萎縮した精巣を有していた）は、明らかに微粒子ペプチドＡによって誘発される免疫応答を改善する。リポシンはヒトの静脈内栄養用に調製された大豆油とサフラワー油のエマルジョンであり、サポニンはクイル（Ｑuil）Ａの水溶性抽出物であり、スクアレンはワクチン担体としてこれまでにヒトで試験された代謝可能な動物油であり、そしてＬ121は、ヒトの癌治療法で有効性が証明されているトリブロックポリマーである。100％の有効性はエマルシゲン（Emulsigen）＋サポニンで処方したペプチドＡ負荷微粒子で達成された。エマルシゲンは食用動物での使用が承認されているアジュバントであり、そしてこの製剤（即ち、エマルシゲン＋サポニン中免疫原混合物）はペットの避妊ワクチンでまたは雄豚の汚染処置に使用することができる。
【０１５６】
免疫原混合物を含有するポリラクチド−コ−グリコリド微粒子を製剤化しそしてこの実施例に従って免疫力価を試験する。
【０１５７】
実施例１７
エマルジョンで送達したＴｈ：ＬＨＲＨの有効性
Ｔｈエピトープ：ＬＨＲＨ免疫原は、標準的なフロイントの完全／不完全免疫感作プロトコールを使用して同定しそしてそれらの有効性の順にランク付けた。これらの結果は、免疫原混合物に処方するための多数の異なるＴｈ構築体の選択を可能にした。ミョウバンに結合したこの混合物は顕著な有効性を示した（実施例１１)。インバーシンドメインを加えると主題ＬＨＲＨ構築体の免疫原性が高まったので、単一のインバジンエピトープを有するペプチドはミョウバンで投与したとき顕著な有効性を示す（実施例１３)。インバーシン含有構築体はまた、これが免疫原混合物の１成分であるとき、特別でかつ均一な応答を誘発する（実施例１４)。
【０１５８】
エマルジョン製剤での免疫治療用免疫原の微粒子送達に加えて、可溶性免疫原のアジュバント／エマルジョンに基づく製剤を評価した。更に、ペプチドＡを使用して種々の製剤の相対的有効性を比較する手段を提供した。評価した種々のアジュバント／エマルジョン組合せ物の代表例は表８に示す。表８は、どのアジュバント／エマルジョン組合せ物がヒトまたは動物での使用に適しているかを示す。癌患者での使用が承認されている更に多くの反応原アジュバントの幾つかを含めた。動物は、皮下に投与される指示製剤のペプチドＡ 100μgを用いて０、３および６週目に免疫感作した。良好であるかまたはフロイントの完全アジュバントを用いて達成されたものより良好な顕著な有効性がこれら製剤の幾つか、例えばエマルシゲン＋Ｌ121およびＩＳＡ 720で得られた。
【０１５９】
実施例１８
特有のエマルジョン製剤中の
インバーシン含有ペプチド混合物の有効性
次に、ミョウバンに基づく製剤、例えばＩＦＡ、ＩＳＡ 720、ＩＳＡ 51、デトックス（Detox)、リポシン＋アブリジン（Avridine)、スクアレン＋Ｌ121、ＭＰＬ＋ＴＤＥ、エマルシゲン＋ＤＤＡおよびエマルシゲン＋Ｌ121と比較したときにペプチドＡの有効性を改善したアジュバント製剤を使用して実施例１４に記載したペプチド３２含有混合物を調製した。これらの種々の製剤の有効性の試験結果は表９に要約する。顕著な有効性（動物の100％で８週目に去勢閾値未満の血清テストステロン値および10週目の動物の100％で精巣萎縮によって測定）がこれらアジュバントの幾つかで観察された。これらの所見は強力な免疫原、即ち、インバジンドメインを含有するＴｈエピトープ：ＬＨＲＨ混合物と有効で安全なエマルジョン製剤を組み合わせることの強力さを示している。
【０１６０】
実施例１９
普遍的な合成免疫刺激器 − アミリン構築体の有効性
ペプチド９２から９４（ペプチドＩＤ Ｎo:92〜94）は標準的なＦmoc合成方法を使用して合成する。ＨＰＬＣで精製した後、ペプチドの完全性および真正性をマススペクトロフォトメーター分析で測定する。各合成ペプチド構築体の有効性は、次の実験計画を使用して実験用動物を免疫感作することによって構築体を個々におよび混合物として測定する：
免疫原:  ペプチド92〜94、個々に
ペプチド92〜94、組み合わせて
投与量:  100μgのペプチド92とモル当量
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
スケジュール:  ０週、フロイントの完全アジュバント中のペプチド
３および６週、不完全フロイントアジュバント中のペプチド
種: １群当たり５匹の雌スプラーグドゥリーラット
対照:  １群、アジュバント単独投与
血液試料:  最初の免疫感作後０、３、６および10週目に採取する
検死:  10週目に膵臓を単離する
【０１６１】
免疫感作した動物から取り出した血液試料から分離した血清は、標準的なエリザアッセイによってアミリン特異的抗体の存在について試験する。全長アミリンペプチドを使用して微量滴定プレートを被覆し、各血清試料の連続希釈物を試験して力価を測定する。エリザ陽性血清中に存在するアミリン特異的抗体がアミリン介在性グルコース摂取阻止をブロックする能力は、クーパー（Cooper）等（1988年、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:7763〜7766）が記載したインスリン刺激によるグリコーゲン合成についてインサイチュアッセイで測定する。簡単に述べると、ヒラメ筋片を、絶食雄ウィスターラットから調製しそして修正クレブス・リンガー（Krebs-Ringer）重炭酸緩衝液中で保持する。簡単なインキュベーション（30分）後、筋肉片は［Ｕ１４Ｃ］グルコースと、前以てエリザ陽性のラット血清と共にインキュベートした全長アミリンペプチドの連続希釈物を含有する新しい緩衝溶液に移す。１時間インキュベーションした後、筋肉組織中のグリコーゲン中に取り込まれた［Ｕ１４Ｃ］グルコースの量を測定する。対照試料、即ち通常の生理食塩液中でインキュベートしたアミリンおよびアジュバント対照動物の血清中でインキュベートしたアミリンも含める。アミリンの機能的活性をブロックすることができる抗体は筋繊維によるインスリン刺激性グルコース摂取のアミリン阻止を妨げる。
【０１６２】
実験完了時（即ち、10週目）に、動物を屠殺しそしてそれらの膵臓を取り出す。これらの器官の組織切片はペプチドホルモンに特異的な免疫組織化学的染色方法（Westermark等、1987年、Diabetologia、30:887〜892）を使用してアミリンの存在について評価する。アミリンの機能を顕著に阻止しそしてインスリン分泌細胞中でのアミリン沈着をブロックする合成免疫原は、ヒトに使用可能なアジュバントを使用してラットモデルでの有効性について試験する。
【０１６３】
実施例２０
普遍的合成免疫刺激器 − ガストリン構築体の有効性
ペプチド９５から１００（ペプチドＩＤ Ｎo:95〜100）は標準的なＦmoc合成方法を使用して合成する。ＨＰＬＣで精製した後、ペプチドの完全性および真正性をマススペクトロフォトメーター分析で測定する。各合成ペプチド構築体の有効性は、次の実験計画を使用して実験用動物を免疫感作することによって構築体を個々におよび混合物として測定する：
免疫原:  ペプチド95〜100、個々に
ペプチド95〜100、組み合わせて
投与量:  100μgのペプチド95とモル当量
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
スケジュール:  ０週、フロイントの完全アジュバント中のペプチド
３および６週、不完全フロイントアジュバント中のペプチド
種:  １群当たり５匹の雌スプラーグドゥリーラット
対照:  １群、アジュバント単独投与
血液試料:  最初の免疫感作後０、３、６および10週目に採取する
【０１６４】
結果：
血液試料は免疫感作したラットおよび対照ラットから定期的に取り出す。これらの試料から処理した血清はガストリン１７、ガストリン３４およびＣＣＫ特異的抗体の存在について分析する。
２つのタイプのアッセイを使用して抗ガストリン抗体を検出する: 固相エリザアッセイ（ＥＬＩＺＡ）および液相ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ)。
【０１６５】
ＥＬＩＺＡを使用してガストリン３４、ガストリン１７およびＣＣＫに対して生じた抗血清の反応性または交差反応性についてスクリーニングする。ＲＩＡを使用して、抗血清１マイクロリットル当たりで結合したホルモンのpg（pg／μL）として表わされる抗原結合能力を測定するために血清分別物をこれら各ホルモンと反応させて各免疫感作動物の血清中の抗体値を定量する。
【０１６６】
ＥＬＩＺＡは、ポリスチレン製の96ウエルプレートを１μg／mLのペプチドガストリン３４、ガストリン１７またはＣＣＫで被覆することによって実施する。試験血清の連続希釈物を使用して血清の終末点力価を測定する。
【０１６７】
ＲＩＡでは抗血清の0.1、1.0または10.0μl分別物を125I−標識ガストリン３４、ガストリン１７またはＣＣＫと共にインキュベートする。抗血清は標識したホルモンと共に２時間インキュベートし、続いて25％のポリエチレングリコールを用いてホルモン−抗体コンプレックスを沈殿させる。各抗血清の抗原結合能力は、沈殿した各放射性ホルモンの量から測定する。
【０１６８】
ＥＬＩＺＡまたはＲＩＡ陽性血清中に存在するガストリン反応性抗体がインビボでガストリンの酸刺激活性を無効化する能力は、ジーバス（Gevas)、Ｐ.Ｃ.等のヨーロッパ特許 380230、1991年に記載された灌流ラット胃法を使用して測定する。簡単に述べると、酸分泌を誘発するようにガストリンまたはガストリン−抗ガストリンコンプレックスを注射されたラットは、胃分泌物を採集するために外科的に調製する。全身麻酔下でそして気管切開後に、食道および十二指腸を経由してラットにカニューレを挿入して0.9％の生理食塩液を用いて胃を連続灌流させる。胃灌流物を定期的に集め、そして各間隔の試料は塩基（ＮaＯＨ）で中和して酸含量を滴定する。実験期間中および各処置直後に増えた酸増分および総計を測定する。
胃酸産出は、最大酸産出のパーセント＝100×（Ａn−Ａb／Ａmax−Ａb）（式中、Ａnは各試料採取間隔で産生された酸（ＮaＯＨで滴定して測定）であり; 
Ａmaxは刺激による胃酸の最大間隔放出であり、そしてＡbは一定の刺激を受けた時に存在する酸の基線値である）として計算される。
【０１６９】
ＥＬＩＳＡまたはＲＩＡ陽性血清中に存在するガストリン反応性抗体がガストリンのインビトロ腫瘍刺激活性を無効化する能力は、［Ｈ３]−チミジン取込みによって測定されるような、免疫血清が結腸癌腫細胞株のガストリン誘発性増殖応答を阻止する能力によって測定する。
【０１７０】
実施例２１
普遍的合成免疫刺激器 − ＧＲＰ構築体の有効性
ペプチド１０１から１０２（ペプチドＩＤ Ｎo:101〜102）は標準的なＦmoc合成方法を使用して合成する。ＨＰＬＣで精製した後、ペプチドの完全性および真正性をマススペクトロフォトメーター分析で測定する。各合成ペプチド構築体の有効性は、次の実験計画を使用して実験用動物を免疫感作することによって構築体を個々におよび混合物として測定する：
免疫原:  ペプチド101および102、個々に
ペプチド101および102、組み合わせて
投与量:  100μgのペプチド101とモル当量
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
スケジュール:  ０週、フロイントの完全アジュバント中のペプチド
３および６週、不完全フロイントアジュバント中のペプチド
種:  １群当たり５匹の雌スプラーグドゥリーラット
対照:  １群、アジュバント単独投与
血液試料:  最初の免疫感作後０、３、６および10週目に採取する
【０１７１】
免疫感作した動物から取り出した血液試料から分離した血清は、標準的なＥＬＩＳＡアッセイによってガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）の存在について試験する。全長ＧＲＰペプチドを使用して微量滴定プレートを被覆し、そして各血清試料の連続希釈物を試験して力価を測定する。
【０１７２】
ＥＬＩＺＡ陽性血清中に存在するＧＲＰ特異的抗体が腫瘍増殖のＧＲＰ介在誘発を阻止する能力は、選択した癌腫細胞株のＧＲＰ誘発性増殖応答によって［Ｈ３]−チミジン取込みについてインビトロアッセイで測定する。
実施例２２
普遍的合成免疫刺激器 − ＩgＥ−ＣＨ4構築体の有効性
ペプチド１０３および１０４（ペプチドＩＤ Ｎo:103〜104）は標準的なＦmoc合成方法を使用して合成する。ＨＰＬＣで精製した後、ペプチドの完全性および真正性をマススペクトロフォトメーター分析で測定する。各合成ペプチド構築体の有効性は、次の実験計画を使用して実験用動物を免疫感作することによって構築物を個々におよび混合物として測定する：
免疫原:  ペプチド103および104、個々に
ペプチド103および104、組み合わせて
投与量:  100μgのペプチド103とモル当量
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
スケジュール:  ０週、フロイントの完全アジュバント中のペプチド
３および６週、不完全フロイントアジュバント中のペプチド
種:  １群当たり５匹の雌スプラーグドゥリーラット
対照:  １群、アジュバント単独投与
血液試料:  最初の免疫感作後０、３、６および10週目に採取する
【０１７３】
免疫感作した動物から取り出した血液試料から単離した血清は、標準的な
ＥＬＩＳＡアッセイによってＩgＥ ＣＨ4に特異的な抗体の存在について試験する。ＩgＥ ＣＨ4ペプチド（配列ＩＤ ＮＯ:79）を使用して微量滴定プレートを被覆し、そして各血清試料の連続希釈物を試験して力価を測定する。
【０１７４】
ＥＬＩＺＡ陽性血清中に存在するＩgＥ ＣＨ4特異的抗体が、ラット腹膜肥満細胞に与えるＩgＥ ＣＨ4ペプチドのヒスタミン放出作用を直接阻止する能力は、スタンワース（Stanworth）Ｄ.Ｒ.等（Lancet、1990年、336:1279〜1281）が記載したようにして試験する。これらの陽性血清は更にインビボで試験して、スタンワースＤ.Ｒ.等（Lancet、1990年、336:1279〜1281）が記載したようにして、血清がラットパッシブキューティナスアナフィラキシスアッセイ（Rat Passive Cutaneous Anaphylaxis Assay）で青色化反応を阻止する能力を試験する。
【０１７５】
実施例２３
普遍的合成免疫刺激器 −
クラミジアトラコマティスＭＯＭＰ構築体の有効性
ペプチド１０５から１１４（ペプチドＩＤ Ｎo:105から114）は標準的なＦmoc合成方法を使用して合成した。各普遍的免疫刺激器 − Ｃ.トラコマティス  ＭＯＭＰペプチド構築体は単独および組み合わせて処方し、そしてその後以下の実験計画を使用して、相対的免疫原性を測定するために実験用動物に注入する：      免疫原:  ペプチド105から114、個々に
ペプチド105から114、組み合わせて
投与量:  100μgのペプチド107とモル当量
経路:  腹腔内
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
スケジュール:  ０週、フロイントの完全アジュバント中のペプチド
３および10週、不完全フロイントアジュバント中のペプチド
種:  １群当たり５匹の雌ダンキンハートレーモルモット
（450〜500グラム）
対照:  アジュバントを単独投与した１群
血液試料:  ０、５、８および12週目に採取する
【０１７６】
免疫感作した動物から取り出した血液試料から分離した血清は、標準的なＥＬＩＳＡアッセイによってＭＯＭＰ可変ドメイン特異的抗体の存在について試験する。個々の微量滴定プレートは、ＭＯＭＰ可変ドメインＩ〜IＶに相当し普遍的免疫刺激器を欠いている各合成ペプチドを別個のプレート上に被覆する。各免疫感作動物の血清の連続希釈物を試験して抗ＭＯＭＰペプチド抗体力価を測定する。次に、ＥＬＩＺＡ陽性血清は、微量滴定プレート上に被覆された種々のＣ.トラコマティス セロバース（serovars）（ＡからＬ3）の各々に相当する精製基本小体（ＥＢ）に結合する能力について試験する。次に、ＥＢ結合陽性血清は、全ての関連Ｃ.トラコマティス セロバースによる培養中の任意の哺乳動物細胞の感染性を該血清がブロックする能力について試験する(Su等、1990年、Infect. Immun. 58:1017〜1025)。Ｃ.トラコマティス無効化抗体を誘発する顕著な能力を示すこれらの合成免疫原は、ヒトに使用できるアジュバントを使用してモルモットで有効性を試験する。ペプチドは、マウス卵管炎モデル（Tuffrey等、1992年、J. Ｇen. Microbiol. 138:1707〜1715）またはシノモルグスサル目抗原投与モデル（Taylor等、1988年、Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 29:1847〜1853）を使用してインビボでの感染をブロックする能力について評価することができる。
【０１７７】
実施例２４
普遍的免疫刺激器 −
ＨＩＶ−1 Ｖ3 ＰＮＤ構築体の有効性
ペプチド１１５（配列ＩＤ Ｎo:115）は標準的なＦmoc合成方法を使用して合成した。実験用動物でのＨＩＶ−１無効化抗体の誘発における該構築体の有効性は以下の実験計画に従って測定する：
免疫原:  ペプチド
投与量:  １免疫感作当たり100μg
経路:  皮下
アジュバント:  フロイントの完全／不完全
スケジュール:  ０週、フロイントの完全アジュバント中のペプチド
４週、不完全フロイントアジュバント中のペプチド
種:  １群当たり５匹の雌ダンキンハートレーモルモット
（450〜500グラム）
対照:  アジュバントを単独投与した１群
血液試料:  ０、４および８週目に採取する
【０１７８】
免疫感作した動物から取り出した血液試料から分離した血清は、標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって抗Ｖ3 ＰＮＤ抗体の存在について試験する。合成免疫刺激物質に結合していないＶ3 ＰＮＤの単量体を使用してＥＬＩＳＡ微量滴定プレートを被覆し、そして各血清試料の連続希釈物をそれらに対して試験してＥＬＩＳＡ力価を測定する。陽性試料は、合胞体病巣減少アッセイ（Wang等、1991年、Science 245:285）を使用してインビトロでのＨＩＶ−１株ＭＮを無効化する能力について評価する。実験室用に適合させた株、ＨＩＶ−１ＭＮの感染性を無効化できる血清は、詰合せ野生ウイルス単離体(White−Scharf等、1993年、Virology 192:197〜206）による原発リンパ球の感染を該血清がブロックする能力について試験する。
【０１７９】
【表１】
2005060406.tif 000002
【０１８０】
【表２】
2005060406.tif 000003
【０１８１】
【表３】
2005060406.tif 000004
【０１８２】
【表４】
2005060406.tif 000005
【０１８３】
【表５−１】
2005060406.tif 000006
【表５−２】
2005060406.tif 000007
【表５−３】
2005060406.tif 000008
【０１８４】
【表６】
2005060406.tif 000009
【０１８５】
【表７】
2005060406.tif 000010
【０１８６】
【表８】
2005060406.tif 000011
【０１８７】
【表９】
2005060406.tif 000012
【０１８８】
【表１０】
2005060406.tif 000013
【０１８９】
【表１１−１】
2005060406.tif 000014
【表１１−２】
2005060406.tif 000015
【表１１−３】
2005060406.tif 000016
【０１９０】
【表１２−１】
2005060406.tif 000017
【表１２−２】
2005060406.tif 000018
【表１２−３】
2005060406.tif 000019
【表１２−４】
2005060406.tif 000020
【０１９１】
配列リスト
（1）一般情報：
（i）出願人:  Ladd, Anna
Wang, Chang Yi
Zamb, Timothy
（ii）発明の名称:  ワクチン用免疫原性ＬＨＲＨペプチド構築体および合成普遍免疫刺激器
（iii）配列の数:  114
（iv）通信宛先：
（Ａ）名宛人: Scully, Scott, Murphy および Presser
（Ｂ）ストリート: ガーデンシティプラザ 400
（Ｃ）シティ: ガーデンシティ
（Ｄ）州: ニューヨーク
（Ｅ）国: アメリカ合衆国
（Ｆ）郵便番号: 11530
（ｖ）コンピュータ読取りフォーム：
（Ａ）媒体のタイプ: フロッピーディスク
（Ｂ）コンピュータ: ＩＢＭ ＰＣ  互換性
（Ｃ）操作システム: ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ
（Ｄ）ソフトウェア: パテントインリリース ♯1.0、
バージョン ♯1.25
（vi）現在の出願データ：
（Ａ）出願番号：
（Ｂ）出願日：
（Ｃ）分類：
（viii）弁護士／代理人の情報：
（Ａ）氏名: Grolz, Edward W.
（Ｂ）登録番号: 33,705
（Ｃ）参照／文書番号: 9284
（ix）遠隔通信情報：
（Ａ）電話: （516）742−4343
（Ｂ）テレファックス: （516）742−4366
【０１９２】
（2）配列番号:１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 10個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１：
【０１９３】
【化１】
2005060406.tif 000021
【０１９４】
（2）配列番号:２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 15個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２：
【０１９５】
【化２】
2005060406.tif 000022
【０１９６】
（2）配列番号:３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 28個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:３：
【０１９７】
【化３】
2005060406.tif 000023
【０１９８】
（2）配列番号:４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 17個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:４：
【０１９９】
【化４】
2005060406.tif 000024
【０２００】
（2）配列番号:５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 22個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５：
【０２０１】
【化５】
2005060406.tif 000025
【０２０２】
（2）配列番号:６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 15個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６：
【０２０３】
【化６】
2005060406.tif 000026
【０２０４】
（2）配列番号:７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 27個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７：
【０２０５】
【化７】
2005060406.tif 000027
【０２０６】
（2）配列番号:８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 24個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:８：
【０２０７】
【化８】
2005060406.tif 000028
【０２０８】
（2）配列番号:９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 15個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９：
【０２０９】
【化９】
2005060406.tif 000029
【０２１０】
（2）配列番号:１０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 28個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１０：
【０２１１】
【化１０】
2005060406.tif 000030
【０２１２】
（2）配列番号:１１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 38個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１１：
【０２１３】
【化１１】
2005060406.tif 000031
【０２１４】
（2）配列番号:１２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 25個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１２：
【０２１５】
【化１２】
2005060406.tif 000032
【０２１６】
（2）配列番号:１３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 27個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１３：
【０２１７】
【化１３】
2005060406.tif 000033
【０２１８】
（2）配列番号:１４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 32個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１４：
【０２１９】
【化１４】
2005060406.tif 000034
【０２２０】
（2）配列番号:１５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 37個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１５：
【０２２１】
【化１５】
2005060406.tif 000035
【０２２２】
（2）配列番号:１６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 34個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１６：
【０２２３】
【化１６】
2005060406.tif 000036
【０２２４】
（2）配列番号:１７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 25個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１７：
【０２２５】
【化１７】
2005060406.tif 000037
【０２２６】
（2）配列番号:１８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 30個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１８：
【０２２７】
【化１８】
2005060406.tif 000038
【０２２８】
（2）配列番号:１９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 27個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１９：
【０２２９】
【化１９】
2005060406.tif 000039
【０２３０】
（2）配列番号:２０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 42個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２０：
【０２３１】
【化２０】
2005060406.tif 000040
【０２３２】
（2）配列番号:２１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 32個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２１：
【０２３３】
【化２１】
2005060406.tif 000041
【０２３４】
（2）配列番号:２２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 31個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２２：
【０２３５】
【化２２】
2005060406.tif 000042
【０２３６】
（2）配列番号:２３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 30個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２３：
【０２３７】
【化２３】
2005060406.tif 000043
【０２３８】
（2）配列番号:２４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 37個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２４：
【０２３９】
【化２４】
2005060406.tif 000044
【０２４０】
（2）配列番号:２５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 35個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２５：
【０２４１】
【化２５】
2005060406.tif 000045
【０２４２】
（2）配列番号:２６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 51個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２６：
【０２４３】
【化２６】
2005060406.tif 000046
【０２４４】
（2）配列番号:２７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 33個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２７：
【０２４５】
【化２７】
2005060406.tif 000047
【０２４６】
（2）配列番号:２８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 29個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２８：
【０２４７】
【化２８】
2005060406.tif 000048
【０２４８】
（2）配列番号:２９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 26個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:２９：
【０２４９】
【化２９】
2005060406.tif 000049
【０２５０】
（2）配列番号:３０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 31個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:３０：
【０２５１】
【化３０】
2005060406.tif 000050
【０２５２】
（2）配列番号:３１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 32個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:３１：
【０２５３】
【化３１】
2005060406.tif 000051
【０２５４】
（2）配列番号:３２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 45個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:３２：
【０２５５】
【化３２】
2005060406.tif 000052
【０２５６】
（2）配列番号:３３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 45個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:３３：
【０２５７】
【化３３】
2005060406.tif 000053
【０２５８】
（2）配列番号:３４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 54個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:３４：
【０２５９】
【化３４】
2005060406.tif 000054
【０２６０】
（2）配列番号:３５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 47個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:３５：
【０２６１】
【化３５】
2005060406.tif 000055
【０２６２】
（2）配列番号:３６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 49個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:３６：
【０２６３】
【化３６】
2005060406.tif 000056
【０２６４】
（2）配列番号:３７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 48個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:３７：
【０２６５】
【化３７】
2005060406.tif 000057
【０２６６】
（2）配列番号:３８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 28個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.50;Ｅ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（xi）配列の記載: 配列番号:３８：
【０２６７】
【化３８】
2005060406.tif 000058
【０２６８】
（2）配列番号:３９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 30個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｋ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.34;Ｋ0.33;Ｒ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｑ0.20;Ｌ0.20;Ｉ0.20;Ｆ0.20;Ｖ0.20」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.50;Ｒ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:３９：
【０２６９】
【化３９】
2005060406.tif 000059
【０２７０】
（2）配列番号:４０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 46個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.50;Ｅ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（xi）配列の記載: 配列番号:４０：
【０２７１】
【化４０】
2005060406.tif 000060
【０２７２】
（2）配列番号:４１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 48個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.34;Ｋ0.33;Ｒ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｒ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｑ0.20;Ｌ0.20;Ｉ0.20;Ｆ0.20;Ｖ0.20」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｌ0.25;Ｉ0.25;Ｖ0.25;Ｆ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.50;Ｒ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:４１：
【０２７３】
【化４１】
2005060406.tif 000061
【０２７４】
（2）配列番号:４２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 20個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:４２：
【０２７５】
【化４２】
2005060406.tif 000062
【０２７６】
（2）配列番号:４３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 17個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:４３：
【０２７７】
【化４３】
2005060406.tif 000063
【０２７８】
（2）配列番号:４４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 16個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:４４：
【０２７９】
【化４４】
2005060406.tif 000064
【０２８０】
（2）配列番号:４５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 25個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:４５：
【０２８１】
【化４５】
2005060406.tif 000065
【０２８２】
（2）配列番号:４６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 23個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:４６：
【０２８３】
【化４６】
2005060406.tif 000066
【０２８４】
（2）配列番号:４７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 39個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:４７：
【０２８５】
【化４７】
2005060406.tif 000067
【０２８６】
（2）配列番号:４８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 21個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:４８：
【０２８７】
【化４８】
2005060406.tif 000068
【０２８８】
（2）配列番号:４９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 17個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:４９：
【０２８９】
【化４９】
2005060406.tif 000069
【０２９０】
（2）配列番号:５０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 14個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５０：
【０２９１】
【化５０】
2005060406.tif 000070
【０２９２】
（2）配列番号:５１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 19個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５１：
【０２９３】
【化５１】
2005060406.tif 000071
【０２９４】
（2）配列番号:５２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 20個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５２：
【０２９５】
【化５２】
2005060406.tif 000072
【０２９６】
（2）配列番号:５３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 16個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５３：
【０２９７】
【化５３】
2005060406.tif 000073
（2）配列番号:５４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 35個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５４：
【０２９８】
【化５４】
2005060406.tif 000074
【０２９９】
（2）配列番号:５５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 35個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５５：
【０３００】
【化５５】
2005060406.tif 000075
【０３０１】
（2）配列番号:５６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 43個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５６：
【０３０２】
【化５６】
2005060406.tif 000076
【０３０３】
（2）配列番号:５７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 37個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５７：
【０３０４】
【化５７】
2005060406.tif 000077
【０３０５】
（2）配列番号:５８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 39個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５８：
【０３０６】
【化５８】
2005060406.tif 000078
【０３０７】
（2）配列番号:５９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 38個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:５９：
【０３０８】
【化５９】
2005060406.tif 000079
【０３０９】
（2）配列番号:６０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 35個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６０：
【０３１０】
【化６０】
2005060406.tif 000080
【０３１１】
（2）配列番号:６１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 35個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６１：
【０３１２】
【化６１】
2005060406.tif 000081
【０３１３】
（2）配列番号:６２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 43個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６２：
【０３１４】
【化６２】
2005060406.tif 000082
【０３１５】
（2）配列番号:６３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 37個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６３：
【０３１６】
【化６３】
2005060406.tif 000083
【０３１７】
（2）配列番号:６４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 39個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６４：
【０３１８】
【化６４】
2005060406.tif 000084
【０３１９】
（2）配列番号:６５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 38個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６５：
【０３２０】
【化６５】
2005060406.tif 000085
【０３２１】
（2）配列番号:６６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 37個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６６：
【０３２２】
【化６６】
2005060406.tif 000086
【０３２３】
（2）配列番号:６７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 20個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６７：
【０３２４】
【化６７】
2005060406.tif 000087
【０３２５】
（2）配列番号:６８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 19個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６８：
【０３２６】
【化６８】
2005060406.tif 000088
【０３２７】
（2）配列番号:６９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 34個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:６９：
【０３２８】
【化６９】
2005060406.tif 000089
【０３２９】
（2）配列番号:７０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 22個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７０：
【０３３０】
【化７０】
2005060406.tif 000090
【０３３１】
（2）配列番号:７１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 18個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７１：
【０３３２】
【化７１】
2005060406.tif 000091
【０３３３】
（2）配列番号:７２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: ９個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７２：
【０３３４】
【化７２】
2005060406.tif 000092
【０３３５】
（2）配列番号:７３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 11個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７３：
【０３３６】
【化７３】
2005060406.tif 000093
【０３３７】
（2）配列番号:７４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 17個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７４：
【０３３８】
【化７４】
2005060406.tif 000094
【０３３９】
（2）配列番号:７５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 12個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７５：
【０３４０】
【化７５】
2005060406.tif 000095
【０３４１】
（2）配列番号:７６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: ８個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７６：
【０３４２】
【化７６】
2005060406.tif 000096
【０３４３】
（2）配列番号:７７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 27個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７７：
【０３４４】
【化７７】
2005060406.tif 000097
【０３４５】
（2）配列番号:７８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 10個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７８：
【０３４６】
【化７８】
2005060406.tif 000098
【０３４７】
（2）配列番号:７９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 10個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:７９：
【０３４８】
【化７９】
2005060406.tif 000099
【０３４９】
（2）配列番号:８０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 26個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｅ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｓ0.25;Ｎ0.25;Ｋ0.25;Ｒ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｖ0.33;Ａ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｅ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｇ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.34;Ｅ0.33;Ｓ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｋ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｖ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ａ0.33;Ｖ0.33」
（xi）配列の記載: 配列番号:８０：
【０３５０】
【化８０】
2005060406.tif 000100
【０３５１】
（2）配列番号:８１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 24個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ａ0.33;Ｓ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｄ0.33;Ｓ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｓ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｔ0.33;Ｖ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｌ0.50;Ｃ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:８１：
【０３５２】
【化８１】
2005060406.tif 000101
【０３５３】
（2）配列番号:８２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 25個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:８２：
【０３５４】
【化８２】
2005060406.tif 000102
【０３５５】
（2）配列番号:８３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 26個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.50;Ｋ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.34;Ａ0.33;Ｙ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｎ0.20;Ｓ0.20;Ｇ0.20;Ｄ0.20;Ｋ0.20」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｎ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｌ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ｆ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｉ0.33;Ａ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.34;Ｒ0.33;Ｅ0.33」
（xi）配列の記載: 配列番号:８３：
【０３５６】
【化８３】
2005060406.tif 000103
【０３５７】
（2）配列番号:８４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 24個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.50;Ｈ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｇ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｔ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.50;Ｌ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:８４：
【０３５８】
【化８４】
2005060406.tif 000104
【０３５９】
（2）配列番号:８５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 25個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｇ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.34;Ｓ0.33;Ｔ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｋ0.33;Ｑ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ｐ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｔ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｅ0.25;Ｎ0.25;Ｄ0.25;Ｔ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｍ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｑ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.50;Ｎ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:８５：
【０３６０】
【化８５】
2005060406.tif 000105
【０３６１】
（2）配列番号:８６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 30個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｅ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｔ0.33;Ｐ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｉ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｋ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.34;Ｔ0.33;Ｅ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ａ0.33;Ｓ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.34;Ｇ0.33;Ｎ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｇ0.50;Ｎ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.50;Ｅ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｇ0.50;Ａ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:８６：
【０３６２】
【化８６】
2005060406.tif 000106
【０３６３】
（2）配列番号:８７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 31個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.34;Ｔ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｐ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｉ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｌ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｃ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.34;Ｔ0.33;Ａ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｓ0.33;Ｇ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｇ0.50;Ｎ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｇ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.34;Ｄ0.33;Ｑ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｌ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｓ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:８７：
【０３６４】
【化８７】
2005060406.tif 000107
【０３６５】
（2）配列番号:８８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 24個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｋ0.33;Ｑ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.34;Ａ0.33;Ｎ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｉ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｓ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.50;Ａ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:８８：
【０３６６】
【化８８】
2005060406.tif 000108
【０３６７】
（2）配列番号:８９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 24個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:８９：
【０３６８】
【化８９】
2005060406.tif 000109
【０３６９】
（2）配列番号:９０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 32個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９０：
【０３７０】
【化９０】
2005060406.tif 000110
【０３７１】
（2）配列番号:９１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 20個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９１：
【０３７２】
【化９１】
2005060406.tif 000111
【０３７３】
（2）配列番号:９２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 55個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９２：
【０３７４】
【化９２】
2005060406.tif 000112
【０３７５】
（2）配列番号:９３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 55個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９３：
【０３７６】
【化９３】
2005060406.tif 000113
【０３７７】
（2）配列番号:９４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 33個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９４：
【０３７８】
【化９４】
2005060406.tif 000114
【０３７９】
（2）配列番号:９５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 63個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９５：
【０３８０】
【化９５】
2005060406.tif 000115
【０３８１】
（2）配列番号:９６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 57個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９６：
【０３８２】
【化９６】
2005060406.tif 000116
【０３８３】
（2）配列番号:９７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 53個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９７：
【０３８４】
【化９７】
2005060406.tif 000117
【０３８５】
（2）配列番号:９８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 44個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９８：
【０３８６】
【化９８】
2005060406.tif 000118
【０３８７】
（2）配列番号:９９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 50個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:９９：
【０３８８】
【化９９】
2005060406.tif 000119
【０３８９】
（2）配列番号:１００に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 45個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１００：
【０３９０】
【化１００】
2005060406.tif 000120
【０３９１】
（2）配列番号:１０１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 62個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１０１：
【０３９２】
【化１０１】
2005060406.tif 000121
【０３９３】
（2）配列番号:１０２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 43個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１０２：
【０３９４】
【化１０２】
2005060406.tif 000122
【０３９５】
（2）配列番号:１０３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 45個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１０３：
【０３９６】
【化１０３】
2005060406.tif 000123
【０３９７】
（2）配列番号:１０４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 33個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１０４：
【０３９８】
【化１０４】
2005060406.tif 000124
【０３９９】
（2）配列番号:１０５に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 63個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｅ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｓ0.25;Ｎ0.25;Ｋ0.25;Ｒ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｖ0.33;Ａ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｅ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｇ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.34;Ｅ0.33;Ｓ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｋ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｖ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ａ0.33;Ｖ0.33」
（xi）配列の記載: 配列番号:１０５：
【０４００】
【化１０５】
2005060406.tif 000125
【０４０１】
（2）配列番号:１０６に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 59個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ａ0.33;Ｓ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｄ0.33;Ｓ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｓ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｔ0.33;Ｖ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｌ0.50;Ｃ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:１０６：
【０４０２】
【化１０６】
2005060406.tif 000126
【０４０３】
（2）配列番号:１０７に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 60個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１０７：
【０４０４】
【化１０７】
2005060406.tif 000127
【０４０５】
（2）配列番号:１０８に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 61個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.50;Ｋ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.34;Ａ0.33;Ｙ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｎ0.20;Ｓ0.20;Ｇ0.20;Ｄ0.20;Ｋ0.20」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｎ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｌ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ｆ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｉ0.33;Ａ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.34;Ｒ0.33;Ｅ0.33」
（xi）配列の記載: 配列番号:１０８：
【０４０６】
【化１０８】
2005060406.tif 000128
【０４０７】
（2）配列番号:１０９に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 57個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.50;Ｈ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｇ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｔ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.50;Ｌ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:１０９：
【０４０８】
【化１０９】
2005060406.tif 000129
【０４０９】
（2）配列番号:１１０に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 60個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｇ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.34;Ｓ0.33;Ｔ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｋ0.33;Ｑ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ｐ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｔ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝
「Ｅ0.25;Ｎ0.25;Ｄ0.25;Ｔ0.25」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｍ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｑ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.50;Ｎ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:１１０：
【０４１０】
【化１１０】
2005060406.tif 000130
【０４１１】
（2）配列番号:１１１に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 65個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ｅ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｔ0.33;Ｐ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｉ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｋ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.34;Ｔ0.33;Ｅ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.34;Ａ0.33;Ｓ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.34;Ｇ0.33;Ｎ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｇ0.50;Ｎ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｑ0.50;Ｅ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｇ0.50;Ａ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:１１１：
【０４１２】
【化１１１】
2005060406.tif 000131
【０４１３】
（2）配列番号:１１２に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 66個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.34;Ｔ0.33;Ｋ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｐ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｉ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｌ0.50;Ｖ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｃ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.34;Ｔ0.33;Ａ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｖ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｓ0.33;Ｇ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ａ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２５
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｇ0.50;Ｎ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｓ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｎ0.50;Ｇ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２９
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.34;Ｄ0.33;Ｑ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３０
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｌ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ３１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｓ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:１１２：
【０４１４】
【化１１２】
2005060406.tif 000132
【０４１５】
（2）配列番号:１１３に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 59個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｋ0.50;Ｔ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ６
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.34;Ｋ0.33;Ｑ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ８
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｆ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １１
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.34;Ａ0.33;Ｎ0.33」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １２
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｉ0.50;Ｌ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １３
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｔ0.50;Ｉ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ａ0.50;Ｓ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: １７
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｅ0.50;Ｄ0.50」
（ix）特徴：
（Ａ）ネーム／キー: 修飾部位
（Ｂ）ロケーション: ２４
（Ｄ）他の情報: ／ノート＝「Ｄ0.50;Ａ0.50」
（xi）配列の記載: 配列番号:１１３：
【０４１６】
【化１１３】
2005060406.tif 000133
【０４１７】
（2）配列番号:１１４に関する情報：
（i）配列の特徴：
（Ａ）長さ: 59個アミノ酸
（Ｂ）タイプ: アミノ酸
（Ｄ）トポロジー: 鎖状
（ii）分子のタイプ: ペプチド
（xi）配列の記載: 配列番号:１１４：
【０４１８】
【化１１４】
2005060406.tif 000134
【図面の簡単な説明】
【０４１９】
【図１】図1Ａ、1Ｂおよび１Ｃは、ペプチドA-Eでのラット(n=5)の免疫化の後8または11週で得られたアンドロゲン依存器官の平均重量(g)をグラフに図示したものである。図１Aは精巣の重量を与え；図１Bは精巣上体の重量を与え；図１Cは前立腺に加えて関連精嚢の重量を与える。器官重量は、ペプチドA-Cに関して11週でおよびペプチドDとEに関しては8週で得たものである。対照動物(n=8)の器官の平均重量は、"Co"で示す。
【図２】図2は、ペプチドAで免疫化された応答（塗りつぶした棒線）と非応答（中抜き棒線）動物の相対的アンドロゲン依存性器官重量を示すものである。省略：Epid. 精巣上体；P+SV 前立腺および精嚢。
【図３】図3は、精巣の重量(g)とペプチドAで免疫化後、ラジオイムノアッセイ(RIA)で測定した血清の抗LHRH抗体濃度(nmole/L)との間の相関関係をグラフで示したものである。
【図４】図4は、対照動物またはペプチドFで処理した動物のアンドロゲン依存性器官のサイズを説明する写真である。
【図５】図5は、HBSAg Tｈ: LHRH（ペプチドA）と命名された免疫原性LHRH構築体での免疫化に続きラットで生成した抗LHRH特異的抗体の濃度をグラフで示す。グループ当り8匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgまたは500μgのペプチドAを筋肉内投与で与えた。抗原は、フロイントの完全アジュバントに配合し、週0で、および不完全フロイントアジュバントにて週3および6で投与した。この図と後の図で報告するようにLHRHー特異的抗体は標準的なラジオイムノアッセイで測定し、血清リットル当りナノモル単位の全LHRH抗体の平均値で表した。対照群には、同一の免疫化スケジュールを使ってフロイントのアジュバントにて未修飾LHRHを与えた。
【図６】図6は、図5に説明されたようなペプチドAの投与に続くラットにおける血清テストステロン濃度をグラフで示すものである。本図および後の図で報告するように、テストステロンは、LHRHー特異的抗体力価を測定する際に用いた血清試料で測定した。血清テストステロンは標準的なラジオイムノアッセイで測定し、血清リットル当たりナノモル単位のテストステロンの平均値で表した。
【図７】図7は、図5に説明されたようなペプチドAを与えられた動物の精巣重量をグラフで示す。図5に対する凡例に記述された実験の開始後11週で動物は犠牲にされ、関連器官を切開し、秤量した。精巣重量は、体重100グラム当りの器官重量のグラム単位の平均値として表す。HypoXは下垂体切除ラットを指す。グループ1の動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原無しのフロイントアジュバントで免疫化した。
【図８】図8は、図5に説明されたようなペプチドAを与えられた動物の前立腺と精嚢の重量をグラフで示す。前立腺および精嚢は一緒に秤量し、それらの合わせた重量は、体重100グラム当りの組織のグラム単位の平均値として表す。HypoXは下垂体切除ラットを指す。グループ1の動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原無しのフロイントアジュバントで免疫化した。
【図９】図9は、HBSAg Tｈ: GG: LHRH（ペプチド18）と命名された免疫原性LHRH構築体での免疫化に続きラットで生成した抗LHRHの特異的抗体の濃度をグラフで示す。グループ当り6匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgのペプチド18を皮下投与で与えた。抗原は、フロイントの完全アジュバントに配合し、週0で、および不完全フロイントアジュバントにて週3および6で投与した。対照群には、同一の免疫化スケジュールを使ってフロイントのアジュバントにて未修飾LHRHを与えた。
【図１０】図10は、HBSAg Tｈ: LHRH（ペプチドA）での免疫化後ラットで生成した抗LHRHの特異的抗体の濃度をグラフで示す。グループ当り6匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgのペプチドAを皮下投与で与えた。抗原は、フロイントの完全アジュバントに配合し、週0で、および不完全フロイントアジュバントにて週3および6で投与された。コントロール群には、同一の免疫化スケジュールを使ってフロイントのアジュバントにて未修飾LHRHを与えた。
【図１１】図11は、フロイントアジュバントにてペプチド18の投与後のラットの血清テストステロン濃度をグラフで示す。実験計画は図9に対する凡例に記載されているものである。
【図１２】図12は、ペプチドAの投与後のラットの血清テストステロン濃度をグラフで示す。実験計画は図10に対する凡例に記載されているものである。
【図１３】図13は、ペプチド18を与えられた動物の前立腺と精嚢の重量をグラフで示すものである。実験基準は図9に対する凡例に記載されている。前立腺と精嚢は一緒に秤量し、それらの合わせた重量は、体重100グラム当りの組織のグラム単位の平均値として表す。対照動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原無しのフロイントアジュバントで免疫化した。
【図１４】図14は、MVＦ１ Tｈ: LHRH（ペプチド19）での免疫化後ラットで生成した抗LHRHの特異的抗体の濃度をグラフで示すものである。ペプチド19は、LHRHのアミノ末端に連結された"はしか"のウイルスからのFタンパク質の部分を包含する。グループ当り6匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgのペプチドAと等価のペプチド19を皮下投与で与えた。抗原は、フロイントの完全アジュバントに配合され、週0で、および不完全フロイントアジュバントにて週3および6で投与した。対照群には、同一の免疫化スケジュールを使ってフロイントのアジュバントにて未修飾LHRHを与えた。
【図１５ａ−ｂ】図15aおよび15bは、ペプチド19の投与後のラットの血清テストステロン濃度をグラフで示す。実験計画は図14に対する凡例に記載されているものである。図15aは去勢閾値を下回る血清テストステロン濃度に達した動物についてのデータを示し、図15bは週8までテストステロンの去勢濃度に達しなかったた動物についてのデータを示す。
【図１６】図16は、ペプチド19を与えられた動物の精巣重量をグラフで示す。図14に対する凡例に記述された実験の開始後10週で動物は犠牲にされ、関連器官を切開し、秤量した。精巣重量は、体重100グラム当りの器官重量のグラム単位の平均値として表す。対照動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原無しのフロイントアジュバントで免疫化した。
【図１７】図17は、ペプチド19を与えられた動物の前立腺と精嚢の重量をグラフで示すものである。実験基準は図14に対する凡例に記載されている。前立腺と精嚢は一緒に秤量し、それらの合わせた重量は、体重100グラム当りの組織のグラム単位の平均値として表す。対照動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原無しのフロイントアジュバントで免疫化した。
【図１８】図18は、PT Tｈ2: LHRH（ペプチドK, Seq ID No:16）での免疫化後ラットで生成した抗LHRHの特異的抗体をグラフで示すものである。ペプチドKは、LHRHのアミノ末端に連結された百日咳毒素のセグメントからなる。グループ当り6匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgのペプチドAと等価のペプチドKを皮下投与で与えた。抗原は、フロイントの完全アジュバントに配合され、週0で、および不完全フロイントアジュバントにて週3および6で投与した。対照群には、同一の免疫化スケジュールを使ってFreundのアジュバントにて未修飾LHRHを与えた。
【図１９ａ−ｂ】図19aおよび19bは、ペプチドKの投与後のラットの血清テストステロン濃度をグラフで示す。実験計画は図18に対する凡例に記載されているものである。図19aは去勢閾値を下回る血清テストステロン濃度に達した動物についてのデータを示し、図19bは週8までテストステロンの去勢濃度に達しなかったた動物についてのデータを示す。
【図２０】図20は、ペプチドKを与えられた動物の精巣重量をグラフで示す。図18に対する凡例に記述された実験の開始後10週で動物は犠牲にされ、関連器官を切開し、秤量した。精巣重量は、体重100グラム当りの器官重量のグラム単位の平均値として表す。対照動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原無しのフロイントアジュバントで免疫化した。
【図２１】図21は、TT１ Tｈ: LHRH（ペプチドH）と命名された免疫原性LHRH構築体で免疫化した後ラットで生成した抗LHRHの特異的抗体の濃度をグラフで示す。グループ当り5匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgのペプチドHを皮下投与で与えた。抗原は、フロイントの完全アジュバントに配合し、週0で、および不完全フロイントアジュバントにて週3および6で投与した。対照群には、同一の免疫化スケジュールを使ってミョウバンと共に未修飾LHRHを与えた。
【図２２】図22は、ペプチドHの投与後のラットの血清テストステロン濃度をグラフで示す。実験計画は図21に対する凡例に記載されているものである。
【図２３】図23は、ペプチドHを与えられた動物の精巣重量をグラフで示す。図21に対する凡例に記述された実験の開始後10週で動物は犠牲にされ、関連器官を切開し、秤量した。精巣重量は、体重100グラム当りの器官重量のグラム単位の平均値として表す。対照動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原無しのミョウバンのアジュバントで免疫化した。
【図２４】図24は、フロイントアジュバントと共に配合されたプロトタイプ免疫原カクテルでの免疫化によって生成した抗LHRHの特異的抗体の濃度をグラフで示す。HBｓTｈ: LHRH + MVＦ１Tｈ: LHRH + PT２Tｈ: LHRH + TT１Tｈ: LHRHの当モル量を混合し、フロイントアジュバントに配合した。グループ当り6匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgのペプチドAに等しいモル等価の免疫原カクテルをフロイントの完全アジュバントと共に週0で、およびフロイント不完全アジュバントと共に週3および6で投与した。皮下投与で与えた。免疫化は全て皮下経路経由で行われた。
【図２５】図25は、フロイントアジュバントと共にプロトタイプ免疫原カクテルの投与後のラットの血清テストステロン濃度をグラフで示す。実験計画は図24に対する凡例に記載されているものである。
【図２６】図26は、フロイントアジュバントと共にプロトタイプ免疫原カクテルを投与された動物の精巣重量をグラフで示す。図24に対する凡例に記述された実験の開始後10週で動物は犠牲にされ、関連器官を切開し、秤量した。精巣重量は、体重100グラム当りの器官重量のグラム単位の平均値として表す。対照動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原を含まないフロイントアジュバントで免疫化した。
【図２７】図27は、プロトタイプ免疫原カクテルでの免疫化によって生成した抗LHRHの特異的抗体の濃度をグラフで示す。HBｓTｈ: LHRH + MVＦ１Tｈ: LHRH + PT２Tｈ: LHRH + TT１Tｈ: LHRHの当モル量を混合し、ミョウバン上に配合した。グループ当り6匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgのペプチドAに等しいモル等価の免疫原カクテルを筋肉内投与により週0、3および6で投与した。
【図２８】図28は、プロトタイプ免疫原カクテルを投与した後のラットの血清テストステロン濃度をグラフで示す。実験計画は図27に対する凡例に記載されているものである。
【図２９】図29は、プロトタイプ免疫原カクテルを投与された動物の精巣重量をグラフで示す。図27に対する凡例に記述された実験の開始後10週で動物は犠牲にされ、関連器官を切開し、秤量した。精巣と前立腺の重量はグラム単位で表す。対照動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原を含まないミョウバンのアジュバントで免疫化した。
【図３０】図30は、Inv: HBｓTｈ: LHRH（ペプチド32）で免疫化後ラットで生成した抗LHRHの特異的抗体の濃度をグラフで示す。ペプチド32は、LHRHに結合されたB型肝炎ウイルス面の抗原由来のT細胞ヘルパーエピトープに結合された、Yersinia付着分子の部分、インベーシンからなる。グループ当り5匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgのペプチドAに等価のペプチド32を皮下投与により与えた。抗原は水酸化アルミニウム上で配合され、週0、3および6で投与した。対照群には、同一の免疫化スケジュールを使ってミョウバン上の未修飾LHRHを与えた。
【図３１】図31は、ペプチド32の投与後のラットの血清テストステロン濃度をグラフで示す。実験計画は図30に対する凡例に記載されているものである。
【図３２】図32は、ペプチド32を投与された動物の精巣重量をグラフで示す。図30に対する凡例に記述された実験の開始後10週で動物は犠牲にされ、関連器官を切開し、秤量した。精巣重量は、体重100グラム当りの器官重量のグラム単位の平均値として表す。対照動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原を含まないミョウバンのアジュバントで免疫化した。
【図３３】図33は、ペプチドHを含有する免疫原カクテルでの免疫化によって生成した抗LHRHの特異的抗体の濃度をグラフにて示す。HBｓTｈ: LHRH + MVＦ１Tｈ: LHRH + PT２Tｈ: LHRH + TT１Tｈ: LHRHの当モル量を混合し、ミョウバンん上に配合した。グループ当り5匹の性的に成熟したSprague-Dawleyの雄ラットに100μgのペプチドAに等しいモル等価の免疫原カクテルを筋肉内投与により週0、3および6で投与した。
【図３４】図34は、プロトタイプ免疫原カクテルの投与後のラットの血清テストステロン濃度をグラフで示す。実験計画は図33に対する凡例に記載されているものである。
【図３５】図35は、プロトタイプ免疫原カクテルを投与された動物の精巣重量をグラフで示す。図33に対する凡例に記述された実験の開始後10週で動物は犠牲にされ、関連器官を切開し、秤量した。精巣重量はグラム単位で表す。対照動物は、実験グループに対するものと同一のスケジュールを使って、抗原を含まないミョウバンのアジュバントで免疫化した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５ａ】
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【図１５ｂ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９ａ】
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【図１９ｂ】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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