(57)【要約】【課題】  試料となる生体由来物質の吸着が少なく、有機溶剤耐性に優れ、溶出物の少ない生化学実験に適した器具類を提供する事。【解決手段】エチレン−ビニルアルコール共重合体で成形されている生化学研究用器具であり、好ましくは、エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン共重合比率が５ｍｏｌ％〜５０ｍｏｌ％であり、放射線照射又はプラズマ暴露されている生化学研究用器具。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エチレン−ビニルアルコール共重合体で成形されている事を特徴とする生化学研究用器具。
【請求項２】
エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン共重合比率が５ｍｏｌ％〜５０ｍｏｌ％である請求項１記載の生化学研究用器具。
【請求項３】
放射線照射又はプラズマ暴露されている請求項１又は２記載の生化学研究用器具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生化学研究、実験に使用する容器、ピペット等の器具類に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年蛋白質研究分野においてはゲノミクス・プロテオミクスの進展に伴い研究に使用する評価分析機器類はめざましい技術革新を続け、１０数年前には複数の研究者が何ヶ月もかかって出していたようなデータを一人の研究者が数日で出してしまう程までに発展している。
一方それら生化学研究、実験に用いる器具類は、ガラスからプラスチックに変革して以来全くの進歩を遂げておらず、多くの問題を抱えながらも未だに古典的な材料が使用され続けている。
現時点では既存の器具類が抱えている問題点について特にクローズアップされていないが、今後蛋白質評価分析後のデータ処理とその利用のようなインフォマティックスが整備される事で大規模解析化のシステムが構築され、生化学研究の対象となる物質の種類が増加し、より微量な生体由来物質が大量に扱われるようになると既存の器具類では既に圧倒的高感度化を果たした評価分析機器に性能的についてゆけなくなる事は明らかである。
【０００３】
既存の器具類が抱えている最も大きな問題点は、容器壁面への試料の吸着である。現在器具類に使用されているプラスチック材料は、ポリプロピレン及びポリスチレンであるが、何れの材料も蛋白質・ペプチド等の生体由来物質が容器壁面に強く吸着してしまい、例えば蛋白質溶液については特に１μｇ／ｍＬ以下の微量領域において溶液中の蛋白質の約３０％が吸着により失われてしまう事が明らかになっている。
分析対象となる生体由来物質が器具類に吸着してしまう事で、分析の結果得られるシグナルが低くなり、更に極微量のサンプルについては全くシグナルが得られない場合もあり、分析機器の性能が極微量のサンプルが検出可能な高感度のものを使用しても測定出来ないという事態が発生する。
【０００４】
また、例えば蛋白質の構造解析において、質量分析計を使用して蛋白質の構造を解析する場合、対象となる蛋白質を酵素等でペプチドに分断した後、質量分析計により分断されて発生したペプチドを分子量で分離／検出する事で蛋白質の構造を推定するという分析法が用いられるが、ペプチドの種類によって基材に吸着しやすいものと比較的吸着しにくいものがあるため、タンパク質を構成するペプチドが全て検出されるとは限らず、結果の解析を非常に困難にしている。
前述の吸着を防止するために、器具類の表面をシリコンコーティング等で疎水性に改質した製品が販売されているが、溶液中の生体由来物質が基材に吸着する際の最も大きな要因は疎水性相互作用である事から、それらの製品は外観の液切れ性は非常に良いが蛋白質の吸着は防止することは出来ない。
但し、実際最も強い吸着を示す表面はテフロン（Ｒ）やフッ素樹脂の様に極度に疎水性の表面ではなく、ポリプロピレンやポリスチレン表面に放射線照射等で若干の極性基を導入した表面において蛋白質の吸着量が極大値を示す事が知られている。
すなわち、超疎水性と超親水性の中間領域で吸着が極大値を示し、ポリプロピレンやポリスチレンはその極大値を示す領域より若干疎水性の表面であるが、それらの材料で成形された器具類は滅菌の為の放射線照射により更に強い吸着性の表面になってしまう。
【０００５】
また、吸着防止以外の要求性能として溶出物の少ないことと耐溶剤性の二点がある。溶出物は高感度化した測定機器類を用いた分析に致命的なノイズとして影響を与え、耐溶剤性については、あらゆるステージで使用される有機溶剤によって器具類から溶出物が出た場合、やはりノイズの問題が発生する。
溶出物及び耐溶剤性の点においても器具類の表面をコーティングによって改質する方法は適していない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、試料となる生体由来物質の吸着が少なく、有機溶剤耐性に優れ、溶出物の少ない生化学実験に適した器具類を提供する事である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
即ち本発明は、
（１）エチレン−ビニルアルコール共重合体で成形されている事を特徴とする生化学研究用器具、
（２）エチレン−ビニルアルコール共重合体のエチレン共重合比率が５ｍｏｌ％〜５０ｍｏｌ％である（１）記載の生化学研究用器具、
（３）放射線照射又はプラズマ暴露されている（１）又は（２）記載の生化学研究用器具、
である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の生化学研究用器具類を使用することにより、生化学研究において蛋白質・ペプチド・核酸等の生体由来物質を取り扱う際に従来の欠点である器具類壁面への吸着による損失が無く、尚且つシリコンコート等の表面改質コーティング処理器具類の欠点であった有機溶剤に対しても耐性を有している為、高感度・高精度な分析を行なう事が出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の生化学研究用器具類とは、生化学研究に使用されるピペット、ディスペンサーチップ等の液体操作用器具類及び遠沈管、凍結保存チューブ、チューブ、マルチウェルプレート等の容器類である。
【００１０】
本発明者は前述の問題点を解決する為に親水性樹脂を用いた射出成形というアイデアを考案し、鋭意検討の結果エチレンビニルアルコールが射出成形可能で且つ蛋白質の吸着を防止し得るレベルの親水性表面を有し、更に耐溶剤性にも優れている事を見いだした。
【００１１】
更に検討を重ねた結果、エチレンとビニルアルコール共重合比を限定する事で生化学研究用器具類として特に蛋白質吸着防止の点で優れた性能を発揮する事を見いだした。
つまり、本発明に使用するエチレンビニルアルコール共重合体はエチレンとビニルアルコールの共重合比率が重要であり、エチレンの共重合比率が５ｍｏｌ％〜５０ｍｏｌ％である事が好ましい。
エチレンの共重合比率が５ｍｏｌ％未満であれば、耐水性が著しく低下する為に生化学研究用器具類としての用途には適さず、５０ｍｏｌ％を超えると蛋白質の吸着を効果的に防止可能なレベルの親水性表面が得られない。
【００１２】
本発明におけるエチレンビニルアルコール共重合体の優れたもう一つの特徴は、成形品の表面に極性基を導入した場合、蛋白質の吸着性は更に低下する方向であるという点である。滅菌の為の放射線照射により表面に極性基が導入された場合、ポリプロピレンやポリスチレンの様に吸着性が強くなる事は無く、蛋白質の吸着性は更に低下する。
【００１３】
本発明の器具類の成形方法については特に限定するものではなく、ピペット、ディスペンサーチップ等の液体操作用器具類及び遠沈管、凍結保存チューブ、チューブ、マルチウェルプレート等の容器類を成形するのに適した射出成形法を選択する事が好ましい。
また、用途によって押し出し成形等他の成形法を用いた場合でも本発明の特徴は何ら影響を受けるものではない。
【実施例】
【００１４】
以下、実施例によって本発明を更に具体的に説明する。
（実施例１）
エチレンビニルアルコール共重合体：エチレン共重合比率２９ｍｏｌ％（ソアライト（Ｒ）Ｍ  日本合成化学工業株式会社製）を用いて射出成形により容量２ｍＬのチューブを成形した。
【００１５】
（実施例２）
エチレンビニルアルコール共重合体：エチレン共重合比率４４ｍｏｌ％（エバール（Ｒ）Ｅ１０５  株式会社クラレエバールカンパニー製）を用いて射出成形により容量２ｍＬのチューブを成形した。
【００１６】
（比較例１）
ポリプロピレン製２ｍＬチューブ（ＭＳ−４６０３  住友ベークライト社製）を比較例１とした。
【００１７】
（比較例２）
比較例１のチューブに市販のシリコンコート剤を用いて表面にシリコン化処理を行なったものを比較例２とした。
【００１８】
（蛋白質吸着性の比較）
ペルオキシターゼ標識アビジン（４３−４４２３  ＺＹＭＥＤ社製）を０．５μｇ／ｍＬに希釈した溶液、及びペルオキシターゼ標識坑ウシアルブミン抗体（５５２８５  ＣＡＰＰＥＬ社製）を１．０μｇ／ｍＬで希釈した溶液（希釈には何れもリン酸緩衝液ｐＨ７．４を使用）をそれぞれ実施例１、実施例２、及び比較例１のチューブに１．０ｍＬづつ分注し、室温で１時間静置した後、０．０５％ｔｗｅｅｎ２０入りリン酸緩衝液ｐＨ７．４で３回洗浄した後に壁面に吸着残留した蛋白質の量をペルオキシターゼ発色基質液（ＭＬ−１１２０Ｔ  住友ベークライト社製）を用いて測定した。
【００１９】
結果は表１に示す通りで、ペルオキシターゼ標識アビジン及びペルオキシターゼ標識坑ウシアルブミン抗体共に比較例１に対しては高い吸着性を示したが、実施例１、実施例２に対する吸着性は低い事を確認した。
【００２０】
【表１】
2005034060.tif 000002
【００２１】
（耐溶剤性の比較）
蛋白質研究に使用されるアセトニトリル及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を用いて耐溶剤性の試験を実施した。
実施例１及び比較例２のチューブにアセトニトリル及びＤＭＳＯをそれぞれ２ｍＬづつ分注し、室温で１時間静置させた後に純水で洗浄−乾燥させ、前記操作前後におけるそれぞれの容器の吸着性を（蛋白質吸着性の比較）で用いた吸着試験にて評価を行なった。
【００２２】
結果は表２に示す通りで、比較例２は有機溶剤接触前後で表面の吸着特性が大きく変化しており、シリコン処理層が劣化していると思われた。
一方、実施例１においては有機溶剤接触前後で表面の吸着特性は変化しておらず、耐溶剤性を有する事が確認された。
【００２３】
【表２】
2005034060.tif 000003
【産業上の利用可能性】
【００２４】
本発明は遺伝子工学、蛋白質工学、臨床検査学等の生化学研究に使用する器具類に関するものであり、試料の吸着による損失が無く、有機溶剤を使用する事が可能で、高精度かつ高感度な分析を行なう事が出来るため、特に生体由来物質の分析を行なう際の器具類であるピペット、ディスペンサーチップ、保存容器、希釈容器等として使用する事ができる。