(57)【要約】【課題】  微生物を利用し、安価で、且つ技術的に簡便な方法により、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物から高光学純度のＳ体１，２−プロパンジオールを製造する。【解決手段】  アセトバクター属に属し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として生育しうる微生物もしくはその培養菌体を、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とする培地中で培養し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを資化分解せしめ、その培養液から、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取するか、あるいは、アセトバクター属に属し、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、Ｓ体１，２−プロパンジオールを残存させる能力を有する微生物、培養菌体、またはその処理物を１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アセトバクター属に属し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として生育しうる微生物もしくはその培養菌体を、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とする培地中で培養し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを資化分解せしめ、その培養物から、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取することを特徴とするＳ体１，２−プロパンジオールの製法。
【請求項２】
アセトバクター属に属し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として生育しうる微生物もしくはその培養菌体を、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とする培地を培養槽に添加しながら連続培養し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを資化分解せしめ、培養槽から流出する培養物より、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取することを特徴とするＳ体１，２−プロパンジオールの製法。
【請求項３】
アセトバクター属に属し、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、Ｓ体１，２−プロパンジオールを残存させる能力を有する微生物、その培養菌体、またはその処理物を１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取することを特徴とするＳ体１，２−プロパンジオールの製法。
【請求項４】
微生物がＲ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として生育しうる微生物であることを特徴とする、請求項３に記載のＳ体１，２−プロパンジオールの製法。
【請求項５】
微生物がアセトバクター  パーオキシダンス  (Acetobacter peroxydans)  ＤＳ−ＮＫ−ＳＰ１（国内寄託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ-１９５１３）である請求項１〜４のいずれかに記載のＳ体１，２−プロパンジオールの製法。
【請求項６】
アセトバクター  パーオキシダンス(Acetobacter peroxydans)  ＤＳ−ＮＫ−ＳＰ１（国内寄託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ-１９５１３）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物からＳ体１，２−プロパンジオールのみを残存させうる能力を有する微生物を用い、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物よりＳ体１，２−プロパンジオールを分取する方法に関する。本発明により得られるＳ体１，２−プロパンジオールは、医薬品・農薬・生理活性物質などの光学活性化合物の製造において極めて重要、且つ有用な化合物である。
【背景技術】
【０００２】
Ｓ体１，２−プロパンジオールの製法としては、化学的方法としてＢＩＮＡＰ触媒やコバルトサレーン触媒などの化学触媒を用いる方法が知られている。しかし、これら製法では、得られる１，２−プロパンジオールは光学的、化学的に低純度であり、また、高価な光学活性触媒が必要であるため、工業的に安価で経済的な製法とはいい難い。
【０００３】
生物学的方法としては、Ｃ４化合物である１，２−ブタンジオール以上のアルキル鎖をもつ直鎖の１，２−ジオールのエナンチオマー混合物に微生物を作用させ、高光学純度のＳ体１，２−ジオールを採取する方法が知られているが、Ｃ３化合物である、１，２−プロパンジオールについては記載されてない（特許文献１。）また同発明者等は１，２−プロパンジオールに微生物を作用させたが、Ｓ体１，２−プロパンジオールの収率、光学純度とも５０％を超えるものは無かったと述べている(非特許文献３)。また、二階堂らによるシュードモナス属微生物を用いたＳ体１，２−プロパンジオールの製法も知られている（特許文献２）がアセトバクター属によるものではない。
【０００４】
以上に述べたように、アセトバクター属に属する微生物を使用して、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物からＳ体１，２−プロパンジオールを得る製法は今まで知られていない。
【０００５】
【特許文献１】特開平2-128699
【特許文献２】特開平6-30790
【非特許文献１】Tetrahedron Lett., vol. 32, pp. 4163-4166, 1991
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は微生物を利用し、上記に示す従来の方法より、安価で、且つ技術的に簡便な方法により、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物から高光学純度のＳ体１，２−プロパンジオールを製造することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物よりＳ体１，２−プロパンジオールのみを残存させうる能力を有する微生物を求め、鋭意研究した結果、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物からＲ体１，２−プロパンジオールを優先的に分解する能力を有し、かつＲ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として資化増殖し得る微生物の単離に成功し本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、アセトバクター属に属し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として生育しうる微生物もしくはその培養菌体を、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とする培地中で培養し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを資化分解せしめ、その培養液から、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取することを特徴とするＳ体１，２−プロパンジオールの製法に関する。
【０００９】
また本発明はアセトバクター属に属し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として生育しうる微生物もしくはその培養菌体を、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とする培地を培養槽に添加しながら連続培養し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを資化分解せしめ、培養槽から流出する培養物から、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取することを特徴とするＳ体１，２−プロパンジオールの製法に関する。
【００１０】
更に本発明は、アセトバクター属に属し、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、Ｓ体１，２−プロパンジオールを残存させる能力を有する微生物、培養菌体、またはその処理物を１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取することを特徴とするＳ体１，２−プロパンジオールの製法に関する。
本発明において作用させとは休止菌体あるいは酵素として基質と接触させることを意味する。
【００１１】
本発明の方法により、Ｓ体１，２−プロパンジオールを製造する際に利用する微生物としては、アセトバクター属に属し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として生育しうる微生物、あるいは１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、Ｓ体１，２−プロパンジオールを残存させ得る微生物である限り特に制限されないが、好ましくはアセトバクター  パーオキシダンス  (Acetobacter peroxydans)  ＤＳ−ＮＫ−ＳＰ１（国内寄託番号：  ＦＥＲＭ  Ｐ-１９５１３）である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によればアセトバクター属に属する微生物、例えばアセトバクター  パーオキシダンス（Acetobacter peroxydans）ＤＳ−ＮＫ−ＳＰ１を利用し、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物から、高光学純度のＳ体１，２−プロパンジオールを原料的に安価で、且つ工業的に簡便な方法によって製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明を実施するには、まず本発明で使用する微生物（以下、本微生物とも言う）の培養液を作る。本微生物を培養するための培地としては、通常本微生物が生育する培地ならばいずれでも使用することができる。例えば炭素源としては、グルコース、フラクトースなどの炭水化物、エタノール、１，２−プロパンジオール等のアルコール類、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸等の有機酸もしくはその塩類が挙げられるが、好ましくは１，２−プロパンジオールである。また窒素源としては硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機窒素化合物および尿素、ペプトン、カゼイン、酵母エキス、肉エキス、コーンスチープリカー等の有機窒素化合物とそれらの混合物を挙げることができる。その他、無機塩としてリン酸塩、マグネシウム塩、カリウム塩、マンガン塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩など、さらに必要に応じてビタミン類を加えてもよい。
【００１４】
具体的には１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とし、各種アンモニウム塩や硝酸塩等の無機態窒素を窒素源として、その他微量の金属塩やリン酸塩等の無機塩類を加えた完全合成培地、あるいはブイヨン培地やペプトン培地等の有機態炭素源ならびに窒素源、そして無機栄養源を含む通常一般によく用いられる栄養培地中に１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を添加した培地等が使用できる。
【００１５】
培養は常法によればよく例えばｐＨを３から６、好ましくは４から５ 、培養温度は１５℃から４０℃、好ましくは２０℃ から３７℃の範囲で振盪培養あるいは通気撹拌培養等の方法を用いて好気的に２０から９６時間行うことが好ましい。
【００１６】
本発明を実施するための第1の実施形態
本発明を実施するための第1の実施形態は、アセトバクター属に属し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として生育しうる微生物もしくはその培養菌体を、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とする培地中で培養し、Ｒ体１，２−プロパンジオールを資化分解せしめ、その培養液から、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取することを特徴とするＳ体１，２−プロパンジオールの製法(以下資化分割法とも言う)である。
【００１７】
具体的には予め前記方法で培養しておいた本微生物の培養液を種菌として、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源として含有する培地に接種し、さらに好気的に培養し、培養液から残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取する方法である。
【００１８】
本発明の資化分割法による光学分割法では、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物の濃度は０.１〜１５％(v/v)が好ましく、初期に一括して加えてもよいし、分割添加してもよい。また、連続的に添加を行うことも可能である。基質を連続的に添加する場合、２槽以上の培養槽を連結して使用しても良い。培養は通常、攪拌下あるいは振盪下で行う。また、必要に応じて通気等を行ってもよい。培養時間は基質濃度ならびにその他の条件により異なるが２４〜１２０時間で終了するのがよい。好ましくは目的とする光学活性体の光学純度を測定して終点を決定するのがよい。すなわち１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物のＲ体１，２−プロパンジオールが全て資化された時点で培養を停止するのがよい。
【００１９】
本培養は至適ｐＨ 、至適温度の範囲内で行うのがよい。例えばｐＨを３から６、好ましくは４から５ 、温度は１５℃から４０℃、好ましくは２０℃ から３７℃の範囲で行う。なお、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物の分解に伴い、培養液中のｐＨ が徐々に低下または上昇する場合、適当なアルカリ源または酸源を添加することにより培養液中のｐＨ を至適範囲内にコントロールする必要がある。
【００２０】
例えば、アルカリ源として、炭酸カルシウム懸濁液、炭酸ナトリウム溶液、炭酸カリウム、炭酸アンモニウなどの炭酸アルカリ塩水溶液、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、水酸化カルウム水溶液などの水酸化アルカリ塩水溶液、あるいはアンモニア水溶液など通常、酸を中和させることができるものを用いてｐＨを至適範囲内に制御するのがよい。また酸源としては塩酸、硫酸、リン酸などを使用できる。
【００２１】
このようにして培養液中に残存するＳ体１，２−プロパンジオールは一般的な方法で回収および精製できる。例えば、培養液から菌体を遠心分離で除いた後、上清をエバポレーターにより濃縮し、酢酸エチル等の溶媒で抽出する。次いで抽出液を無水硫酸マグネシウムにより脱水した後、減圧下で溶媒を除去しＳ体１，２−プロパンジオールのシロップを得ることができる。さらに蒸留により精製してもよい。
【００２２】
本発明を実施するための第２の実施形態
本発明を実施するための第２の実施形態は、アセトバクター属に属し、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、Ｓ体１，２−プロパンジオールを残存させる能力を有する微生物、培養菌体、またはその処理物を１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、残存するＳ体１，２−プロパンジオールを分取することを特徴とするＳ体１，２−プロパンジオールの製法（以下休止菌体法とも言う)である。
【００２３】
具体的には、前記方法で作られた培養液をそのまま用い、該培養液に１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を添加する方法、または、遠心分離などにより菌体を分離し、これをそのまま、あるいは洗浄後、緩衝液や水などに懸濁したものに１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を添加し反応させる方法等が挙げられる。この方法で用いる菌体は、そのままでもよいし、菌体破砕物、アセトン処理、凍結乾燥などの処理を行ったものでもよい。また菌体または菌体処理物を、アルギン酸ゲル法、ポリアクリルアミドゲル法、寒天ゲル法などの公知の方法で固定化して用いることもできる。さらに、処理物としては公知の方法を組み合わせて菌体から精製取得した酵素も利用できる。
【００２４】
本発明の休止菌体法による光学分割法では、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物の濃度は０.１〜１５％(v/v)が好ましく、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物は初期に一括して加えてもよいし、分割添加してもよい。また、連続的に添加を行うことも可能である。反応は通常、攪拌下あるいは振盪下で行う。また、必要に応じて通気等を行ってもよい。反応時間は基質濃度ならびにその他の条件により異なるが２４〜１２０時間で終了するのがよい。好ましくは目的とする光学活性体の光学純度を測定して終点を決定するのがよい。すなわち１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物のＲ体１，２−プロパンジオールが全て分解された時点で反応を停止するのがよい。
【００２５】
本反応は至適ｐＨ 、至適温度の範囲内で行うのがよい。例えばｐＨを３から６、好ましくは４から５、温度は１５℃から４０℃、好ましくは２０℃ から３７℃の範囲で行なうのが良い。なお、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物の分解に伴い、反応液中のｐＨが徐々に低下または上昇する場合、適当なアルカリ源または酸源を添加することにより反応液中のｐＨを至適範囲内にコントロールする必要がある。
【００２６】
例えば、アルカリ源として炭酸カルシウム懸濁液、炭酸ナトリウム溶液、炭酸カリウム、炭酸アンモニウなどの炭酸アルカリ塩水溶液、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、水酸化カルウム水溶液などの水酸化アルカリ塩水溶液、あるいはアンモニア水溶液など通常、酸を中和させることができるものを用いてｐＨを至適範囲内に制御するのがよい。また酸源としては塩酸、硫酸、リン酸等を使用できる。
【００２７】
このようにして反応液中に残存するＳ体１，２−プロパンジオールは一般的な方法で回収および精製できる。例えば、反応液から菌体を遠心分離で除いた後、上清をエバポレーターにより濃縮し、酢酸エチル等の溶媒で抽出する。次いで抽出液を無水硫酸マグネシウムにより脱水した後、減圧下で溶媒を除去しＳ体１，２−プロパンジオールのシロップを得ることができる。さらに蒸留により精製してもよい。
【００２８】
本発明の資化分割法による光学分割法では、使用する培地が１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とする完全合成培地であるため、雑菌に汚染されることが少ない。なお、本願発明方法を実施するには、予め大量の菌体を調製することなく、本微生物を１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とする完全合成培地に直接植菌、培養し、目的とするＳ体１，２−プロパンジオールを回収することができるため、高価な栄養培地を用いない経済的なに生産方法である。
【００２９】
また、本発明の休止菌体法による光学分割法では、１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物を単一炭素源とする完全合成培地で増殖可能な微生物を用いても良いく、この場合には菌体の調製に高価な栄養培地を用いる必要はなく、より安価な培地での菌体調製が可能である。
【００３０】
本発明で使用する微生物は、上記の如くＲ体１，２−プロパンジオールの立体選択的資化能を有しＲ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源として資化増殖することができるか、あるいは１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、Ｒ体１，２−プロパンジオールを立体選択的に分解することができるアセトバクター属に属する微生物であり、好ましくはアセトバクター  パーオキシダンス（Acetobacter peroxydans）ＤＳ−ＮＫ−ＳＰ１を挙げることができる。また、本微生物は野生株、変異株、または細胞融合、もしくは遺伝子組換え株など、いずれの株でも用いることができる。
【００３１】
アセトバクター  パーオキシダンス（Acetobacter peroxydans）ＤＳ−ＮＫ−ＳＰ１株はＲ体１，２−プロパンジオールの立体選択的資化能を有し、かつ１，２−プロパンジオールのエナンチオマー混合物に作用させ、Ｒ体１，２−プロパンジオールを立体選択的に分解することができる菌である。
【００３２】
本菌株は形態学的・生理性状学的試験および16SrRNA塩基配列解析からアセトバクター  パーオキシダンス（Acetobacter peroxydans）と同定され、独立行政法人産業技術総合研究所に以下の国内寄託番号で寄託されている。国内寄託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ-１９５１３  アセトバクター  パーオキシダンス(Acetobacter peroxydans)  ＤＳ−ＮＫ−ＳＰ１
以下に本菌株の形態学的、生理性状学的性質を示す。
【００３３】
【表１】
2005192445.tif 000002
【００３４】
【表２】
2005192445.tif 000003
【００３５】
以下実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが本発明はこれらの例に限定されるものではない。なお、実施例中の％は特に記載のない限り％（w/v）を表す。
【実施例１】
【００３６】
ラセミ体１，２−プロパンジオール１０g/L、酵母エキス１０g/L、ペプトン１０g/Lからなる組成の培地１００ｍｌ（ｐＨ５．０）を入れた５００ｍｌ容のバッフル付き三角フラスコを１２１℃で１５分間、加圧蒸気滅菌した。次いで、あらかじめ同栄養培地プレートで生育させたAcetobacter peroxydans  ＤＳ−ＮＫ−ＳＰ１株の菌体を１白金耳分植菌し、３０℃で２４時間培養を行い、種培養液を得た。
【００３７】
【表３】
2005192445.tif 000004
【００３８】
表３に示す組成の溶液にラセミ体１，２−プロパンジオールを８％添加した培地２．５Ｌ（ｐＨ５．０）を入れた５Ｌ容培養器を１２１℃、１５分間加圧蒸気滅菌し、ラセミ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源とする完全合成培地を作製した。次いで種培養液１００ｍｌ（４％（v/v））を上記ラセミ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源とする完全合成培地に無菌的に接種し、３０℃、５００ｒｐｍ、０．1ｖｖｍの条件で３日間通気撹拌培養を行った。 
【００３９】
なお、ｐＨの測定および制御は連動させたｐＨコントローラーを用いて行い、７.５Ｎ の水酸化ナトリウム水溶液あるいは2Ｎの塩酸によりｐＨ４．０から５．５に制御した。培養終了後の培地中に生育した微生物の濁度は１２．５ＯＤ（660nmでの濁度）で、その時の培養液中に残存する１，２−プロパンジオールをガスクロマトグラフィー（ カラム担体：Silicone OV1701、Uniport HP 、10% 、mesh60/80）で分析した結果、１，２−プロパンジオールの濃度は２．６％ であった。培養終了後、培養液を取り出し、遠心操作により菌体を除去し、上清液を得た。この上清液をエバポレーターで濃縮し、エーテルにより抽出した。続いて無水硫酸マグネシウムにより脱水後、減圧下でエーテルを除去し、１，２−プロパンジオールのシロップを得た。
【００４０】
本物質の光学純度の測定は、得られた１，２−プロパンジオールの光学異性体を無水トリフルオロ酢酸によりトリフルオロ酢酸化した後、アステック社製のキャピラリーカラムＧ − Ｔ Ａ （ ０.２５ mm(ID) ｘ ３０m (Length)） を用いたガスクロマトグラフィーにより光学異性体の分析を行なった。その結果、得られた１，２−プロパンジオールは光学純度９９％ｅ．ｅ．以上のＳ体１，２−プロパンジオールであった。
光学異性体の分析条件：カラム温度，６０℃；検出器温度，２００℃；キャリアーガス，窒素；流速，０．５ml/min；検出器，ＦＩＤ；スプリット比，２００／１；リテンションタイム：Ｒ体  １１．４分、Ｓ体  １７．６分
【実施例２】
【００４１】
表１に示す組成の溶液にラセミ体１，２−プロパンジオールを５％添加した培地１．０Ｌ（ｐＨ５．０）を入れた２Ｌ容培養器を１２１℃、１５分間加圧蒸気滅菌し、ラセミ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源とする完全合成培地を作製した。次いで実施例１と同様の方法で得た種培養液を４０ｍｌ（４％（v/v））を上記ラセミ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源とする完全合成培地に無菌的に接種し、３０℃、５００ｒｐｍ、０．１ｖｖｍの条件で４０時間培養を行ったところ、４０時間後の時点で菌体濁度は５．６ＯＤ(660nmでの濁度)で、その時の１，２−プロパンジオール濃度は３.２％ であった。なお、ｐＨ の測定および制御は実施例１と同様に行った。
【００４２】
次に連続培養に移り、表１に示す組成の溶液１．０Ｌ（ｐＨ５．０）を入れた２Ｌ容培養器を１２１℃で１５分間、加圧蒸気滅菌後、一槽目と接続した。一槽目、二槽目とも、３０℃、５００ｒｐｍ、０.１ｖｖｍの条件で行った。表１に示す組成の溶液に単一炭素源としてラセミ体１，２−プロパンジオールを１０％加え、連続培養時の供給培地とした。一槽目への培地供給流量を０．０１Ｌ／時間、として連続培養を行った。
【００４３】
結果として、定常状態において一槽目の１，２−プロパンジオール濃度は３．３％、菌体濁度は１１．０ＯＤ(660nmでの濁度)、比増殖速度μは０．０１(ｈ-1)、比基質消費速度νは０．０６３(ｇ／ＯＤ・ｈ・ｌ)に維持された。このとき、二槽目の菌体濁度は１３ＯＤ(660nmでの濁度) １，２−プロパンジオール濃度は１．５％であった。
【００４４】
二槽目から流出する培養液中の１，２−プロパンジオールを回収し実施例１と同様に光学純度を測定した。その結果、得られた１，２−プロパンジオールは光学純度９８％ｅ．ｅ．以上のＳ体１，２−プロパンジオールであった。
【実施例３】
【００４５】
表３に示す組成の溶液にラセミ体１，２−プロパンジオールを３％添加した培地１．０Ｌ（ｐＨ５．０）を入れた２Ｌ容培養器を１２１℃、１５分間加圧蒸気滅菌し、ラセミ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源とする完全合成培地を作製した。次いで実施例１と同様の方法で得た種培養液４０ｍｌ（４％（v/v））を上記ラセミ体１，２−プロパンジオールを単一炭素源とする完全合成培地に無菌的に接種し、３０℃、５００ｒｐｍ、０.１ｖｖｍの条件で２４時間培養を行ったところ、菌体濁度は９．６ＯＤ(660nmでの濁度)で、その時の１，２−プロパンジオール濃度は０．９％ であった。なお、ｐＨ の測定および制御は実施例１と同様に行った。
【００４６】
次いで、ラセミ体１，２−プロパンジオールを５０g(５％)添加し、３０℃、８００ｒｐｍ、０.２ｖｖｍの条件で３０時間反応を行った。このときの１，２−プロパンジオール濃度は１．３％ であった。反応終了後、反応液を取り出し、実施例１と同様にして１，２−プロパンジオールを回収し光学純度を測定した。その結果、得られた１，２−プロパンジオールは光学純度９９％ｅ．ｅ．以上のＳ体１，２−プロパンジオールであった。
【実施例４】
【００４７】
ラセミ体１，２−プロパンジオール１０g/L、酵母エキス１０g/L、ペプトン１０g/Lからなる組成の培地１．０L（ｐＨ５．０）を入れた２Ｌ容培養器を１２１℃、１５分間加圧蒸気滅菌し、次いで、実施例１と同様の方法で得た種培養液１０ml（１％(v/v)）を無菌的に接種し、３０℃、５００ｒｐｍ、０.１ｖｖｍの条件で２４時間培養を行った。遠心分離により培養液から菌体を分離し、１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．０）で洗浄後、同緩衝液１．０Ｌに菌体を懸濁した。これにラセミ体１，２−プロパンジオールを５０ｇ(５％)添加し、２Ｌ容培養器にて３０℃、８００ｒｐｍ、０．２ｖｖｍの条件で３０時間反応を行った。結果として、反応終了後の１，２−プロパンジオール濃度は２．０%であった。反応終了後、反応液を取り出し、実施例１と同様にして光学純度の測定を行った。その結果、得られた１，２−プロパンジオールは光学純度９９％ｅ．ｅ．以上のＳ体１，２−プロパンジオールであった。
【実施例５】
【００４８】
培地を表３に示す組成の溶液にラセミ体１，２−プロパンジオールを３％添加した培地に変更した以外は実施例４と同様にして行った。結果として、反応終了後の１，２−プロパンジオール濃度は１．９%であった。反応終了後、反応液を取り出し、実施例１と同様にして光学純度の測定を行った。その結果、得られた１，２−プロパンジオールは光学純度９９％ｅ．ｅ．以上のＳ体１，２−プロパンジオールであった。