(57)【要約】【課題】  過酸化水素によるアストログリア細胞の死滅を最小限に食い止めてその絶対数を高いレベルで維持し、これによって神経細胞の機能を最大限に引き出すことにより、例えばアルツハイマー病などの神経系疾患を予防あるいは治療することのできる化合物を見い出すこと。【解決手段】  下記の一般式（Ｉ）で示される化合物あるいはその塩を含有してなることを特徴とするアストログリア細胞の細胞死阻害剤。【化１】2005213173.tif 000006［但し、上記一般式（Ｉ）におけるＲ１はメチル基またはエチル基、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜５の直鎖または側鎖のアルキル基であって、Ｒ１とＲ２は同一であっても異なっていてもよい。］【選択図】  図７
2005213173.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アストログリア細胞の細胞死を抑制する化合物であって、
下記の一般式（Ｉ）で示される化合物あるいはその塩を含有してなることを特徴とするアストログリア細胞の細胞死阻害剤。
【化１】
2005213173.tif 000005
［但し、上記一般式（Ｉ）におけるＲ１はメチル基またはエチル基、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜５の直鎖または側鎖のアルキル基であって、Ｒ１とＲ２は同一であっても異なっていてもよい。］
【請求項２】
前記化合物が、２−メトキシフェノール、２−メトキシ−４−メチルフェノール、及び２−メトキシ−４−エチルフェノールからなる群より選ばれた少なくとも１種であることを特徴とする請求項１に記載の細胞死阻害剤。
【請求項３】
抗痴呆症薬、パーキンソン病治療薬、脳血管障害治療薬、または脳機能改善薬用であることを特徴とする請求項１または２に記載の細胞死阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アストログリア細胞の細胞死阻害剤に関し、詳しくはアストログリア細胞の細胞死に対してこれを抑制的な方向に作用する化合物であってアルツハイマー病やパーキンソン病の治療や予防、あるいは脳機能改善用剤などに使用することのできる細胞死阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、アルツハイマー病やパーキンソン病などの神経系疾患を改善する薬剤や化合物はほとんど知られていないのが実情である。このような、決定的な治療薬が乏しい中、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤が注目されている。この薬は神経伝達物質であるアセチルコリンを分解したり伝達をさまたげる酵素（アセチルコリンエステラーゼ）を阻害する働きがあり、この作用によってアルツハイマー病の症状を改善しようと期待されており、ある程度の成果が得られている（例えば特許文献１〜３参照）。
【特許文献１】特開平８−２６８９４９号公報
【特許文献２】特表平６−５１０７８８号公報
【特許文献３】特開平９−２６８１７６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、アルツハイマー病などの神経系疾患の解明が進む中、他の発症メカニズムとして、アストログリア細胞が深く関与していることが判明し、違った切り口で神経系疾患を治癒したり症状を改善できないだろうかと提案されている。すなわち、脳内で働く主役は神経細胞であることに違いはないが、脳内には神経細胞の約９倍の数のグリア細胞が存在し、神経細胞を助けている。中でも、特にアストログリア細胞は脳の構造を支持する細胞として存在するのみならず、神経伝達を調整したり脳損傷を調節する役割を担っている。つまり、神経細胞は脳の主役に見えるが、アストログリア細胞の支えがないと正常に機能しない。そのアストログリア細胞も、体内で産生される過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）によって細胞死を誘起し、その細胞数が減少することが最近になって判明した。体内で産生される過酸化水素にアストログリア細胞が曝露されると、そのグリア細胞は細胞死の方向に誘導されるというわけである。
【０００４】
そこで、本発明者はアルツハイマー病等の神経系疾患を治療あるいは予防するにあたり、アストログリア細胞の細胞死抑制に着目した。すなわち、過酸化水素によるアストログリア細胞の死滅を最小限に食い止め、その絶対数を高いレベルで維持することにより、アストログリア細胞の細胞数減少によってもたらされる神経系疾患を予防あるいは治癒することが出来るであろうと考え、そのような作用を持つ（過酸化水素に曝露されてもアストログリア細胞の細胞死を回避（予防）し得るような）化合物を種々試みた。いくつかの試行錯誤を重ねた結果、本発明者はついにある種の化合物がアストログリア細胞の死滅を抑制することを突き止め、そして本発明に至った。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
請求項１に記載のアストログリア細胞の細胞死阻害剤は、アストログリア細胞の細胞死を抑制する化合物であって、下記の一般式（Ｉ）で示される化合物あるいはその塩を含有してなるものである。
【化２】
2005213173.tif 000003
【０００６】
［但し、上記一般式（Ｉ）におけるＲ１はメチル基またはエチル基、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜５の直鎖または側鎖のアルキル基であって、Ｒ１とＲ２は同一であっても異なっていてもよい］。
【０００７】
請求項２に記載の細胞死阻害剤は、請求項１に記載の細胞死阻害剤であって、前記化合物が、２−メトキシフェノール、２−メトキシ−４−メチルフェノール、及び２−メトキシ−４−エチルフェノールからなる群より選ばれた少なくとも１種であることを特徴とする。
【０００８】
請求項３に記載の細胞死阻害剤は、請求項１または２に記載の細胞死阻害剤であって、抗痴呆症薬（アルツハイマー病を含む）、パーキンソン病治療薬、脳血管障害治療薬または脳機能改善薬用であることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、過酸化水素によるアストログリア細胞の死滅（アストログリア細胞数の減少）を最小限に食い止めることができるので、当該アストログリア細胞によって支えられている神経細胞の機能も維持され得、アルツハイマー病等の神経系疾患を治療あるいは予防することができ、また別のメカニズムを持つ他の薬剤（例えば、上述したアセチルコリンエステラーゼ阻害剤）と併用することにより、より一層効果的に前記疾患を予防あるいは治療することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
アストログリア細胞の細胞死阻害剤
前述したように、本発明のアストログリア細胞の細胞死阻害剤は、下記の一般式（Ｉ）で示される化合物あるいはその塩を含有してなるものである。
【化３】
2005213173.tif 000004
【００１１】
上記一般式（Ｉ）におけるＲ１はメチル基またはエチル基、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜５の直鎖または側鎖のアルキル基であって、Ｒ１とＲ２は同一であっても異なっていてもよい。以下に具体例を挙げるが、この例示でいう「ブチル」は、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチルを総称したものであり、また「プロピル」は、ｎ−プロピル、イソプロピルを総称したものである。すなわち、２−メトキシフェノール（グアヤコール）、２−メトキシ−３−メチルフェノール、２−メトキシ−３−エチルフェノール、２−メトキシ−３−プロピルフェノール、２−メトキシ−３−ブチルフェノール、２−メトキシ−４−メチルフェノール、２−メトキシ−４−エチルフェノール、２−メトキシ−４−プロピルフェノール、２−メトキシ−４−ブチルフェノール、２−メトキシ−５−メチルフェノール、２−メトキシ−５−エチルフェノール、２−メトキシ−５−プロピルフェノール、２−メトキシ−５−ブチルフェノール、２−エトキシフェノール、２−エトキシ−３−メチルフェノール、２−エトキシ−３−エチルフェノール、２−エトキシ−３−プロピルフェノール、２−エトキシ−３−ブチルフェノール、２−エトキシ−４−メチルフェノール、２−エトキシ−４−エチルフェノール、２−エトキシ−４−プロピルフェノール、２−エトキシ−４−ブチルフェノール、２−エトキシ−５−メチルフェノール、２−エトキシ−５−エチルフェノール、２−エトキシ−５−プロピルフェノール、２−エトキシ−５−ブチルフェノールなどが挙げられる。
【００１２】
中でも、Ｒ２が炭素数１〜３であることが、アストログリア細胞の死滅を防ぐ能力に優れているという点で好ましく、メチル基あるいはエチル基であることがさらに好ましい。また、Ｒ２は３または４の位置に結合していることが、アストログリア細胞の死滅を防ぐ能力に優れているという点で好ましく、４の位置に結合していることがさらに好ましく、中でも、アストログリア細胞の死滅を防ぐ能力に優れているという点で、グアヤコール、２−メトキシ−４−メチルフェノール（以下、単に「２Ｍ４ＭＰ」ともいう）、２−メトキシ−４−エチルフェノール（以下、単に「２Ｍ４ＥＰ」ともいう）、２−エトキシ−４−メチルフェノール（以下、単に「２Ｅ４ＭＰ」ともいう）、２−エトキシ−４−エチルフェノール（以下、単に「２Ｅ４ＥＰ」ともいう）が好ましく、その中でもグアヤコール、２Ｍ４ＭＰ、及び２Ｍ４ＥＰが最も好ましい。なお、上記一般式（Ｉ）で示される化合物は１種類を単独で使用しても良いし、２種以上を併用することもできる。
【００１３】
これらグアヤコール、２Ｍ４ＭＰ、２Ｍ４ＥＰはいずれも、木クレオソートの構成成分である（ Ogata N., Baba T. Analysis of beechwood creosote by gas chromatography-mass spectrometry and high-performance liquid chromatography. Res Commun Chem Pathol Pharmacol ６６，４１１−４２３（１９８９）,ブナ木クレオソートのガスクロマトグラフィー・質量分析法および高速液体クロマトグラフィー法による分析）。緒方規男（N. Ogata）他著ファーマコロジー（Pharmacology）、４６巻、（１９９３）、第１７３頁には、クレオソートが腸管運動抑制に基づく止瀉作用を有する旨記載されている。また、医薬品製造指針（日本公定書協会編）１９８８年版第２４０頁の胃腸薬製造承認基準において、Ｖ欄の止瀉薬の区分中１項の殺菌剤として収載されている。また、伊藤宏著「薬理学」（（株）蛍光堂、１９８３年１月５日改訂第６版発行）第４１６頁にも、木クレオソートは腸内防腐に用いるほか、吸入適応により去痰作用を示す旨記載され、日本薬局方でも、去痰、腸内異常醗酵、食中毒などに用いる旨記載されている。ザ・ユナイテッド・ステーツ・ディスペンサトリー（The United States Dispensatory）、２７th ed.（１９７３）、第３５５頁にも、木クレオソートは、外用として殺菌剤、内用として去痰剤として使用される旨記載されている。
【００１４】
塩の形態 
また、本発明の細胞死阻害剤は、塩基を用いた塩の形態とすることも可能である。用いる塩としては、薬学的に（薬剤学的に）許容し得る塩であれば特に限定するものではなく、例えば、ナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、リチウムなどの金属塩、アミン類（モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン）との塩あるいはアンモニウム塩などが挙げられる。
【００１５】
神経系疾患
本発明のアストログリア細胞の細胞死阻害剤の対象疾患名としては、例えばアルツハイマー病などの痴呆症、パーキンソン病やうつ病などが挙げられる。さらに、脳血管障害や脳虚血後の機能改善やリハビリテーション効果向上（促進）用などへの適応が期待できる。
【００１６】
使用量
本発明のアストログリア細胞の細胞死阻害剤の投与量（使用量）については、対象となる動物の種類あるいは性別、年齢、症状の程度によって変わるので一概にはいえないが、ヒトにおける経口投与あるいは直腸内投与（坐剤）の場合は、およそのところ１日当たり成人体重１ｋｇに対して０．１〜１０ｍｇであり、０．５〜５ｍｇであることが好ましく、また注射剤としての投与の場合には、１日当たり成人体重１ｋｇに対して０．０５〜５ｍｇであり、０．２５〜２．５ｍｇであることが好ましい。これらの１日量を１回でまたは分２〜分４、あるいはそれ以上の回数に分けて投与することができる。
【００１７】
剤型
本発明のアストログリア細胞の細胞死阻害剤は、医療用薬剤における一般的な形態で以て使用される。一般的な形態としては、例えば、錠剤、丸剤、散剤、カプセル剤（軟カプセル剤、硬カプセル剤）、顆粒剤、トローチ剤、チュアブル剤、内服液剤や、注射剤（血管内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与など）、あるいは坐剤などが挙げられる。錠剤、顆粒剤、散剤の形態に調製する際には、従来公知の担体を広く使用でき、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、澱粉、結晶セルロース等の賦形剤、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ゼラチン、トラガント、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム等の結合剤、例えば、澱粉、カルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム等の崩壊剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸などの滑沢剤が使用できる。錠剤には、必要に応じて、通常の剤皮を施すこともでき、例えば、糖衣錠、フィルムコーティング錠等とすることができ、さらに二層錠、多層錠としてもよい。また、顆粒剤や散剤も通常の剤皮を施すことができる。
【００１８】
医薬品としてのみならず、本発明のアストログリア細胞の細胞死阻害剤は一般の飲食物として摂取することもできる。すなわち、菓子類（クッキー、ビスケット、ケーキ、饅頭、スナック菓子、ガム、キャンデーなど）や飲料水（栄養ドリンク、炭酸飲料水、乳酸飲料水、清涼飲料水など）、インスタント食品（即席麺、即席カレーやシチューなど）、練り食品（ハム、ソーセージ、かまぼこなど）、油脂加工品（バター、マーガリン、マヨネーズ、ドレッシングなど）、調味料（ソース、しょう油、塩、コショウなど）、乳製品（ヨーグルト、加工乳など）に含ませて本発明のアストログリア細胞の細胞死阻害剤の摂取を図ることもできる。
【実施例】
【００１９】
本発明の一実施例を以下に説明するが、本発明はこれによって限定されない。
【００２０】
アストログリア細胞（アストロサイト）の培養（図１参照）
従来公知の方法によってアストログリア細胞を培養した。すなわち、Wistarラットの妊娠２０日齢胎児より大脳皮質（cortex）を取り出した。これを０．２５％トリプシン液を用いて３７℃で２０分処理した。これをポリエチレンイミンでコーティングした培養皿に植え込み、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）１０％含有ＤＭＥＭ（ダルベッコ改変ＭＥＭ）で培養した。培養１週間後、０．２５％トリプシン液で細胞を剥がし、再びプレートに播種した。さらに、培養１〜２週間後に０．２５％トリプシン液で細胞を剥がし、９６穴マイクロプレートに播種し、実験に使用した。
【００２１】
なお、下記図２に示すように、同定試験として、Immunocytochemistry法およびWestern blotting法で、グリア繊維酸性蛋白質（Glial Fibrillary Acidic Protein：GFAP）および微小管結合蛋白質（Microtubule-Associated Protein：MAP-2）の陽性・陰性の反応を調べた結果、神経細胞ではなくアストログリア細胞が培養されたことが判断できた。
【００２２】
過酸化水素によるアストログリア細胞の影響（図３参照）
各ウエルに対して細胞数が約１．２×１０５個／ｃｍ３となるようにアストログリア細胞を１００μｇの培養液とともに９６穴マイクロプレートに播種し、インキュベーター内で２４時間培養した（５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃）。その後、最終濃度として（０μＭ、３０μＭ、１００μＭ、３００μＭ、及び１ｍＭ）となるように調製した過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を各ウエルに１０μｌずつ添加し、アストログリア細胞を過酸化水素に曝露した。曝露２時間後に培地を同量交換し、細胞増殖／細胞毒性測定用試薬の１つである、Cell Counting Kit-8（同仁化学社製、特許公報第２７５７３４８号公報参照）の溶液（2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium monosodium salt (WST-8)5mmol/リットル、1-methoxy phenazine methosulfate（1-methoxy PMS）0.2mmol/リットル、NaClが150mmol/リットル）を各ウエルに１０μｌずつ添加した。そして、炭酸ガスインキュベーター内で３０分呈色反応を行い、マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍ（参照波長６５０ｎｍ）の吸光度を測定した。
【００２３】
その結果、図４に示すように、３０μＭに調製した過酸化水素を使用した場合は細胞死はある程度確認されたものの不十分であり、また１００μＭ、３００μＭ及び１ｍＭの場合には細胞死が顕著であったため、以降の実験にあってはアストログリア細胞の細胞死を誘起させる過酸化水素濃度を１００μＭとした。
【００２４】
実施例１（過酸化水素による細胞死の誘導とグアヤコールによる細胞死阻害）
アストログリア細胞に対し、グアヤコール（０μＭ、１０μＭ、１００μＭ、１０００μＭ）および過酸化水素（濃度１００μＭ）を２時間、細胞に曝露した。２時間後のアストログリア細胞の生存率を、過酸化水素（濃度１００μＭ）で曝露しなかった系と比較した。結果を図５および図６に示す。
【００２５】
図から明らかなように、アストログリア細胞の細胞死が１００μＭ過酸化水素によってもたらされているが（グアヤコール濃度０μＭ）、過酸化水素とグアヤコール（濃度１０μＭ、１００μＭ、１０００μＭ）を併用した系では、アストログリア細胞の生存率が上がっていることから過酸化水素の細胞死誘導をグアヤコールが阻止したと考えられ、グアヤコールには過酸化水素によるアストログリア細胞の細胞死を防く作用効果があることがこれにより明かである。特に濃度が１ｍＭの場合は顕著である。
【００２６】
実施例２（過酸化水素による細胞死の誘導と２Ｍ４ＭＰによる細胞死阻害）
アストログリア細胞に対し、２Ｍ４ＭＰ（０μＭ、１０μＭ、１００μＭ、１０００μＭ）および過酸化水素（濃度１００μＭ）を２時間、細胞に曝露した。２時間後のアストログリア細胞の生存率を、過酸化水素（濃度１００μＭ）で曝露しなかった系と比較した。結果を図５および図７に示す。
【００２７】
図から明らかなように、アストログリア細胞の細胞死が１００μＭ過酸化水素によってもたらされているが（２Ｍ４ＭＰ濃度０μＭ）、過酸化水素と２Ｍ４ＭＰ（濃度１０μＭ、１００μＭ、１０００μＭ）を併用した系では、アストログリア細胞の生存率が上がっていることから過酸化水素の細胞死誘導を２Ｍ４ＭＰが阻止したと考えられ、２Ｍ４ＭＰには過酸化水素によるアストログリア細胞の細胞死を防く作用効果があることがこれにより明かである。特に濃度が１００μＭの場合は顕著である。
【００２８】
実施例３（過酸化水素による細胞死の誘導と２Ｍ４ＥＰによる細胞死阻害）
アストログリア細胞に対し、２Ｍ４ＥＰ（０μＭ、１０μＭ、１００μＭ、１０００μＭ）および過酸化水素（濃度１００μＭ）を２時間、細胞に曝露した。２時間後のアストログリア細胞の生存率を、過酸化水素（濃度１００μＭ）で曝露しなかった系と比較した。結果を図５および図８に示す。
【００２９】
図から明らかなように、アストログリア細胞の細胞死が１００μＭ過酸化水素によってもたらされているが（２Ｍ４ＥＰ濃度０μＭ）、過酸化水素と２Ｍ４ＥＰ（濃度１０μＭ、１００μＭ、１０００μＭ）を併用した系では、アストログリア細胞の生存率が上がっていることから過酸化水素の細胞死誘導を２Ｍ４ＥＰが阻止したと考えられ、２Ｍ４ＥＰには過酸化水素によるアストログリア細胞の細胞死を防く作用効果があることがこれにより明かである。特に濃度が１００μＭ〜１ｍＭの場合は顕著である。
【００３０】
製剤例１（丸剤）
（処方１）
グアヤコール、２Ｍ４ＭＰまたは２Ｍ４ＥＰ  ５ｍｇ
カンゾウ  ２５ｍｇ
グリセリン  １０ｍｇ
常水  ５０ｍｇ
下記処方の各成分を練合し、その丸剤塊を切丸機で分割し、製丸機で成丸し、１丸中に本発明のアストログリア細胞の細胞死阻害剤５ｍｇを含有する丸剤を調製した。
【００３１】
製剤例２（硬カプセル剤）
（処方２）
グアヤコール、２Ｍ４ＭＰまたは２Ｍ４ＥＰ  １０ｍｇ
デンプン  ２５０ｍｇ
グアヤコール、２Ｍ４ＭＰまたは２Ｍ４ＥＰとデンプンを混合して混合末とし、硬カプセルに充填して１カプセル中に本発明のアストログリア細胞の細胞死阻害剤１０ｍｇを含有する硬カプセル剤を調製した。
【００３２】
製剤例３（軟カプセル剤）
（処方３）
グアヤコール、２Ｍ４ＭＰまたは２Ｍ４ＥＰ  １０ｍｇ
オリーブ油  ２００ｍｇ
グアヤコール、２Ｍ４ＭＰまたは２Ｍ４ＥＰとオリーブ油に溶解して溶液を得、ソフトカプセルに充填して、１カプセル中に本発明のアストログリア細胞の細胞死阻害剤１０ｍｇを含有する軟カプセル剤を調製した。
【００３３】
製剤例４（錠剤）
（処方４）
グアヤコール、２Ｍ４ＭＰまたは２Ｍ４ＥＰ  ２０ｍｇ
乳糖  ２５０ｍｇ
メチルセルロース  ３ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  ２ｍｇ
カルボキシメチルセルロース  １０ｍｇ
上記処方のステアリン酸マグネシウム以外の各成分を混合し、これを水と混練して顆粒とし、この顆粒を乾燥後、ステアリン酸マグネシウムと混合して圧縮成型するか、あるいは上記処方の各成分を混合して直接圧縮成型し、１錠２８５ｍｇの錠剤を調製した。
【産業上の利用可能性】
【００３４】
本発明によれば、過酸化水素によるアストログリア細胞の死滅（アストログリア細胞数の減少）を最小限に食い止めることができるので、当該アストログリア細胞によって支えられている神経細胞の機能も維持され得、痴呆症（アルツハイマー病治を含む）、パーキンソン病などの神経系疾患を治療あるいは予防することができ、あるいは脳機能改善に適応することもでき、別のメカニズムを持つ他の薬剤（例えば、上述したアセチルコリンエステラーゼ阻害剤）と併用することにより、より一層効果的に前記疾患を予防あるいは治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】アストログリア細胞の培養方法を示した略示説明図である。
【図２】培養したアストログリア細胞に過酸化水素を加えて細胞死を誘起する手順を示した略示説明図である。
【図３】培養したアストログリア細胞の同定試験として、Western blotting法でGFAPが陽性反応を示し、MAP-2が陰性反応であることを示した顕微鏡写真の図である。
【図４】過酸化水素によって影響を及ぼされたアストログリア細胞の状態を示した顕微鏡写真の図である。
【図５】各濃度（１００μＭと１ｍＭ）のグアヤコール、２Ｍ４ＭＰおよび２Ｍ４ＥＰで前処理したアストログリア細胞が、濃度１００μＭの過酸化水素に曝露されても影響を受けないことを示した顕微鏡写真の図である。
【図６】過酸化水素によって細胞死を誘導する状況下でのグアヤコールの細胞死阻害作用（アストログリア細胞生存率）を示したグラフ図である。
【図７】過酸化水素によって細胞死を誘導する状況下での２Ｍ４ＭＰの細胞死阻害作用（アストログリア細胞生存率）を示したグラフ図である。
【図８】過酸化水素によって細胞死を誘導する状況下での２Ｍ４ＥＰの細胞死阻害作用（アストログリア細胞生存率）を示したグラフ図である。
【図１】
2005213173.tif 000007
【図２】
2005213173.tif 000008
【図６】
2005213173.tif 000009
【図７】
2005213173.tif 000010
【図８】
2005213173.tif 000011
【図３】
2005213173.tif 000012
【図４】
2005213173.tif 000013
【図５】
2005213173.tif 000014