(57)【要約】  【課題】  本発明は、被測定者への負担が少なく、しかも短時間で簡易且つ正確にストレスを測定しうる方法を提供することを課題とする。  【解決手段】  起炎物質（塩化ベンザルコニュウム、ラウリル硫酸ナトリウム等の長鎖アルキル硫酸塩、２，４−ジニトロベンゼン、ｐ−フェニレンジアミン、ベンゾカイン、ホルムアルデヒド、アゾ染料など）を皮膚に接触させて皮膚上で起こる炎症を検査するパッチテストを行い、該炎症の程度をＩＣＤＲＧＴ等の一定の評価基準で定量評価することにより、ストレスを定量的に測定する。  【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
起炎物質を皮膚に接触させて皮膚上で起こる炎症を測定するパッチテストを行い、該炎症の程度を定量的に測定することにより、ストレスを定量的に測定することを特徴とする、パッチテストによるストレス測定方法。
【請求項２】
前記起炎物質が、長鎖アルキル硫酸塩又は塩化ベンザルコニュウムであることを特徴とする、請求項１記載のパッチテストによるストレス測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パッチテストによるストレス測定方法に関する。詳しくは、皮膚上の炎症とストレスとの相関関係を利用したストレス測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代はストレス過負荷の時代であり、現代に暮らすものは多かれ少なかれ、負荷されたストレスの影響のもとに暮らしている。このようなストレスの人体に及ぼす影響は近年になって詳細に調査されるようになり、予想外に大きな影響を及ぼすことが明確になりつつある。
【０００３】
例えば、肩こりや心因性又は原因不明の脱毛症などに悩む人が近年急増しているが、これらもストレスが人体に及ぼす影響の一端ではないかと考えられている。また、アトピー性皮膚炎、あるいは肌荒れ等の肌トラブルを引き起こしやすい過敏症の人が増えている原因の一部にも、ストレスが大きく作用しているのではないかと言われている。
このようなストレス社会とも言われる現代社会においては、ストレス状態を迅速かつ正確に把握して予防や解決の手段をとることが、日常生活の上でも身近な課題となってきている。
【０００４】
従来、人体のストレスを計測する方法として、一酸化窒素合成酵素活性を測定し、その測定値を指標とする方法（特開平０８−２６２０２５）、微少振動を手の指先など人体の末端部で測定し、この測定値からストレス度を測定する方法（特開平０９−１１７４４０）、人体の指先等の末梢部である皮膚温度の低下量を測定し、その低下量をストレス度の指標とする方法（特開平０８−２５２２２６）などが開示されている。
【０００５】
しかしながら、これらの方法は、比較的大きな測定装置を必要とするため、時間及び費用の両面で簡便とは言い難いものである場合がある。また、大がかりなシステムを用いることにより被測定者に心理的負担を強いることとなり、かえってストレスを蓄積させるため、正確にストレスを測定することができなくなる場合もある。よって、被測定者への負担が軽く、しかも短時間で簡便且つ正確にストレスを測定できる方法の開発が望まれている。
【０００６】
ところで、過度な刺激や過剰な刺激（ストレス）を生体が受けると、交感神経系や内分泌系がその刺激に反応して副腎皮質ホルモンをはじめとする多くのホルモン分泌や自律神経系のバランスが崩れ、皮膚機能や免疫能が低下する、あるいは循環機能が亢進する等の状態に至ることが解明されてきている。
【０００７】
すなわち、本発明者は、生体が受けるストレスに対する応答及びその影響について鋭意研究した結果、ストレスによる生体の特徴的な変化として、体重の減少、副腎肥大、性腺及び胸腺の萎縮、消化器系潰瘍、ストレスホルモン（副腎皮質ホルモン及びカテコールアミン）の分泌亢進といった兆候があることを、先に見いだした。そして、このようなストレスが、高血圧、動脈硬化、狭心症、心筋梗塞等の循環器疾患、糖尿病、高脂血症等の代謝異常、アトピー性皮膚炎、乾癬の悪化等の皮膚疾患、不安性障害、心的外傷後ストレス症候群、鬱病等の精神疾患、及び感染症、発癌等の慢性的な疾患や弊害に大きく関与していることがわかってきた。
【０００８】
本発明者は、このような知見に基づいて、先に、実験的ストレス動物モデルを確立し、ストレスの負荷量と生体への影響との関係を測ることにより、生体が受けるストレス量を客観的に測定する方法を開発した。すなわち、ヒトの社会・心理的ストレスに近いとされる過密負荷（例えば、狭い閉鎖空間に過剰数のマウスを入れて飼育する、など）をかけると、全身への影響として体重増加抑制、摂餌量の減少、副腎皮質ホルモン分泌亢進、副腎肥大、胸腺と性腺の萎縮、モノアミン代謝産物の増加等の影響が認められ、また皮膚機能への影響として、皮膚障害惹起後の経表皮性水分蒸散量（ＴＥＷＬ：バリアー能）の回復遅延、表皮基底細胞増殖活性の上昇と表皮厚、表皮Langerhans細胞数の減少並びに細胞面積の低下等が認められる。
【０００９】
したがって、このようなストレス動物モデルを用い、例えば過密負荷をかけた後の動物のストレスホルモン量を測定する、あるいは副腎等の重量を測定する等によって、ストレスを定量することが可能となる。
しかしながら、このようなストレス動物モデルを用いる方法でストレス量を測定しようとすると、いずれにせよ動物を飼育し殺す工程を必要とする。また、ストレスホルモン量の測定には特定の測定装置を必要とする。よって、さらに簡便でしかも正確なストレス測定方法の開発が望まれる。
【００１０】
【非特許文献１】Biol. Pharm. Bull. 26(2) 170-181(2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、被測定者への負担が少なく、しかも短時間で簡易且つ正確にストレスを測定しうる方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、上述した課題に鑑み鋭意検討した結果、ストレスの皮膚に及ぼす影響に着目し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（２）に示すパッチテストによるストレス測定方法を提供するものである。
（１）起炎物質を皮膚に接触させて皮膚上で起こる炎症を測定するパッチテストを行い、該炎症の程度を定量的に測定することにより、ストレスを定量的に測定することを特徴とする、パッチテストによるストレス測定方法。
（２）前記起炎物質が、長鎖アルキル硫酸塩又は塩化ベンザルコニュウムであることを特徴とする、（１）記載のパッチテストによるストレス測定方法。
【００１３】
ストレスの生体への影響のうち、皮膚機能に及ぼす影響は、例えばアトピー性皮膚炎などの慢性皮膚炎の悪化などに見ることができる。生体の受けるストレスが高い（ストレス量が多い）ほど、皮膚表面の細胞性免疫能は低下し、それに伴って体液性免疫能は必然的に上昇する。これにより、皮膚は必要以上に過敏となり、炎症が起こりやすくなる。すなわち、ストレスが皮膚の炎症を誘導していると言うこともできる。よって、皮膚の炎症の程度がひどい、あるいは皮膚が過敏であるほど、生体が受けているストレス量が大きいことを示している。
【００１４】
このように、ストレスが皮膚の免疫能の低下に与える影響は非常に大きく、ストレス量がよりセンシティブに皮膚の状態に現れるため、皮膚に起こる炎症の程度を測定することにより、ストレス量をより高感度で定量することができるのである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明は、アトピー性皮膚炎等の慢性的皮膚炎の悪化にストレスが大きく影響していること、更にはストレスが皮膚の免疫能の低下を招き、その結果皮膚の炎症の悪化又は皮膚の過敏化を引き起こしていること、などの知見に基づき、ストレス量が皮膚の状態によりセンシティブに出現することに着目して完成したものである。
本発明のストレス測定方法によれば、被測定者にかかる心理的負担が少ないため、本来的なストレス量を正確に測ることができる。また、大がかりな装置や分析機器を必要とせず、短時間で簡便にストレスを測定することができる。しかも、皮膚の炎症の程度とストレス量とが良好な相関関係にあるため、ストレス量が高感度に測定される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下に、本発明の実施の形態を説明する。
（１）起炎物質
本発明で用いられる起炎物質とは、皮膚に直接塗布するなど皮膚と接触させることによって炎症を引き起こすことが可能なものであれば特に限定されないが、好ましくは長鎖アルキル硫酸塩、塩化ベンザルコニュウム（Benzalkonium Chloride）、２，４−ジニトロベンゼン、ｐ−フェニレンジアミン、ベンゾカイン、ホルムアルデヒド、アゾ染料等が挙げられる。これらのうち特に好ましいものは長鎖アルキル硫酸塩又は塩化ベンザルコニュウムである。
【００１７】
塩化ベンザルコニュウムや長鎖アルキル硫酸塩のアルキル基としては、好ましくは炭素数８〜１８のものが挙げられ、特に好ましくはラウリル基が挙げられる。このうち、特に好ましい起炎物質としてラウリル硫酸ナトリウム（Sodium Lauryl Sulfate;ＳＬＳ or Lauric Alcohol Sodium Sulfate;ＬＡＳ）と塩化ベンザルコニュウム（Benzalkonium Chloride;ＢＡＣ）がある。これら起炎物質の使用方法は特に限定されるものではないが、例えばラウリル硫酸ナトリウムは、水又はアルコール等の溶剤を用いて濃度１〜３％程度の溶液として使用するのが好ましい。塩化ベンザルコニュウムの場合は、水又はアルコール等の溶剤を用いて濃度０．２〜１．２％程度の溶液として使用するのが好ましい。
【００１８】
（２）パッチテスト
パッチテストは、皮膚に直接塗布する薬剤等が皮膚に対し悪影響を及ぼすかどうかを調べるために、被検物を皮膚に数時間接触させて皮膚上で起こる抗原抗体反応を検査する目的で、一般的に行われている。
本発明のパッチテストの方法としては、このような一般的な方法を採用すればよく、特に限定されるものではない。最も簡便には、上記起炎物質を直接被測定者の皮膚へ塗布し、一定時間後に皮膚の状態を検査して後述するストレスの評価基準に基づいてストレス量を測定する。
【００１９】
本発明のストレス測定方法を、より多くの機関において広く一般的に且つ効率よく行うためには、従来からメーカーや研究機関で使用されているパッチテスト用ツールを用いることもできる。例えば、片面全面に粘着剤が塗布された粘着シートと、この粘着面上に貼付される円形パッドと、上記粘着面全面を覆う剥離紙とで構成されたパッチテストテープ等を用いることも可能である。
【００２０】
このようなパッチテストテープでパッチテストを行う場合は、まず剥離紙を剥がして円形パッドを露出させて検査しようとする被検物（本発明の起炎物質に相当する）を円形パッドに塗布し、次いで円形パッドを粘着シートから剥がして被検物塗布面をモニターの皮膚に接触させ、その上から上記粘着シートを貼って各円形パッドを固定する。そして、数時間（例えば１２〜４８時間程度）放置したのち、上記粘着シート及び円形パッドを剥がして、被検物と接していた部位の状態を観察する、あるいは経皮性水分蒸散量を計る、などの方法により、被検物に対する皮膚の反応を検査する。
【００２１】
（３）ストレスの測定
本発明のストレス測定方法においては、起炎物質によって皮膚に起こる炎症による腫れ、赤み（紅斑など）、浸潤、丘疹、水泡等の症状の程度及びかかる症状が見られる範囲の面積等を、ＩＣＤＲＧＴ（International Contact Dermatitis Research Group Test）による評価基準に基づいて、総合的に判断してストレスを定量することができる。
【００２２】
より具体的には、腫れ部分の厚み、または赤み部分の面積を計り、併せて浸潤や水泡の有無や程度より炎症状態を数量的に表す。炎症の具体的表記例としては、「−：反応なし、＋？：紅斑のみ、＋：紅斑、浸潤及び丘疹、＋＋：紅斑、浮腫、丘疹及び小水泡、＋＋＋：大水泡」などがある。
【００２３】
なお、赤み部分の面積を測定する方法としては、例えばパッチテスト部位をデジタルカメラで撮影してパソコンに取り込み、市販のソフト（たとえばPhotoshop）で赤み部分を抽出後、画像解析ソフト（たとえばNIH Image）でその面積を求める、といった方法が挙げられる。
しかし、本発明のストレスの定量方法としてはこれらに限られず、客観的な一定基準に基づくものであれば、いずれの方法を採用しても良い。
【００２４】
また、ＩＣＤＲＧＴを用いてストレス量の評価を行う場合、起炎物質の皮膚への塗布面積は０．５ｃｍ×０．５ｃｍ〜１．５ｃｍ×１．５ｃｍ程度を目安とするのがよい。また、起炎物質の種類にもよるが、ＳＬＳを用いる場合の皮膚への起炎物質の接触時間は、１２〜２４時間程度を基準とするのがよい。
【００２５】
また、その他の条件として特に制限はないが、汗をかかない程度の日常活動条件下において測定を行うのが好ましく、より好ましくは室温１５〜２５℃、湿度５０〜９０％の雰囲気下で測定するのが望ましい。
【００２６】
以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例にのみ限定されるものではない。
【実施例１】
【００２７】
＜過密負荷群の作成＞
７週令の雌性Ｓｋｈ−１ヘアレスマウスを日本ＳＬＣ株式会社より購入し、予備飼育後１２週令のものを実験に供した。また、実験期間中、空調（温度２６．５±１℃、湿度５５．４±３％）管理下、１２時間隔の明暗スケジュールで維持された動物室内で、普通飼料（ＭＦ、オリエンタル酵母社)と水を自由摂取させた。１ケージ（２２５×３３８×１４０ｍｍ）あたり５匹飼いをnormal、２０匹飼いを過密負荷群とした。
【００２８】
＜塩化ベンザルコニュウムによる皮膚障害の惹起＞
濃塩化ベンザルコニュウム液５０(日華（株）)を１００％エタノールで終濃度０．６、０．８、および１．０％（ｖ／ｖ）に調製したものを実験に供した。各検体１００μＬをパッチ布にスポイトしてから、一定の期間過密負荷をかけた動物の背部に、２日間接着固定した。
尚、ノーマル群とコントロール群には同一容量の１００％エタノールのみを使用した。
【００２９】
＜病態進展の評価＞
上記動物の背部の、パッチ布を固定した箇所を、実験開始後１日目、３日目、５日目、及び７日目に観察し、病態進展の評価を行った。評価は、Carolyn M.らの方法を参考に、観察時点における皮膚障害のグレード付けを以下の基準で行うことにより実施した。
Grade 0：変化なし
Grade I：わずかな紅斑
Grade II：所々に紅斑
Grade III：背部全体に紅斑
Grade IV：腫脹を伴った紅斑
判定は動物ごとに行い、グレードの総和を求めて病変指数（Ｌ．Ｐ．；グレード数×個体数）とした。また、角質の剥離が観察された動物にはさらに1点を加えた。結果を表１に示す。
【００３０】
【表１】
2005081019.tif 000002
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明のストレス測定方法によれば、ストレス量を高感度で正確に、且つ短時間で簡便に測ることができる。このような本発明のストレス測定方法は、現代のストレス社会において、ストレス状態を迅速かつ正確に把握し、ストレスが大きく影響する慢性疾患や弊害などの予防や治療を行う上で、大きく役立つことが期待される。