(57)【要約】【課題】アルテピリンＣの新規な用途の開発を目的とする。【解決手段】アルテピリンＣまたはその塩を有効成分とする神経障害の予防または治療用組成物、ならびに前記組成物を含むヒトまたは動物用の食品および医薬により、上記の課題を解決する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルテピリンＣまたはその塩を有効成分とする神経障害の予防または治療用組成物。
【請求項２】
神経障害が痴呆症または糖尿病由来の末梢神経障害である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の組成物を含むヒトまたは動物用の食品および医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アルテピリンＣを有効成分とする神経障害の予防または治療用組成物、ならびに前記組成物を含むヒトまたは動物用の食品および医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
近年、高齢者の増加に伴い、痴呆症が社会問題化している。
痴呆症は、物忘れ、記憶力低下、時間的・空間的な見当識障害などを症状とし、その生理学的病変として、脳細胞や神経細胞の死による脱落やそれに伴う脳の萎縮が見られる。
【０００３】
このため、神経細胞の脱落速度を低下させたり、脱落によって失われた記憶の神経回路網を他の、神経細胞によって新たに構築することで、痴呆症を予防したり、治療したりすることができると考えられている。
【０００４】
プロポリスは、ミツバチが採取した植物の新芽や浸出物、樹木の樹液、花粉、および蜜蝋などの混合物であって、樹脂状の固形塊である。したがって、原料プロポリスのことをプロポリス原塊とも言う。ミツバチは外敵の侵入を防ぐために、巣の隙間を埋めるなどの補修の目的でプロポリスを採取すると考えられる。プロポリスが人々の生活に用いられてきた歴史は大変古くて、ヨーロッパではアピセラピー（養蜂産品による治療法）として、ローヤルゼリー、蜂蜜、花粉荷など、他の養蜂産品とともに、現在も人々の健康のために利用されている。
【０００５】
プロポリスはフラボノイド、テルペノイド、有機酸、アミノ酸、多糖類、ミネラルなどの多種多様な天然成分からなっている。これまでに、プロポリスは、抗菌活性、抗炎症活性、鎮痛活性、鎮痒活性、免疫賦活活性、抗腫瘍活性、抗酸化活性など、様々な生物活性を有することが報告されている。
【０００６】
また、プロポリスの一成分であるアルテピリンＣ  （Ａｒｔｅｐｉｌｌｉｎ  Ｃ、３−［４−ヒドロキシ−３，５−ビス（３−メチル−２−ブテニル）フェニル］−２−プロペン酸）は、抗腫瘍活性を有することが知られている（特許文献１および２）。
しかしながら、アルテピリンＣが神経突起の形成を誘導し、神経障害の予防または治療に有用であることは、まだ知られていない。
【０００７】
【特許文献１】
特開２００３−５５２９７号公報
【特許文献２】
特開２００１−３４２１５４号公報
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、アルテピリンＣの新規で有用な生物活性を見出すことを目的として鋭意研究したところ、アルテピリンＣが神経突起の形成を誘導することを見出し、この発明を完成した。
したがって、本発明によれば、アルテピリンＣまたはその塩を有効成分とする神経障害の予防または治療用組成物、ならびに前記組成物を含むヒトまたは動物用の食品および医薬が提供される。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の組成物において有効成分として用いられるアルテピリンＣは、プロポリスに含まれる一成分であり、そのＥ体、Ｚ体あるいはそれらの混合物のいずれであってもよい。そして、これらのアルテピリンＣは、例えば特開２００３−５５２９７号公報に記載の方法により得ることができる。
【００１０】
アルテピリンＣの塩としては、生理的に許容される塩であればよく、例えばナトリウムおよびカリウムのようなアルカリ金属との塩、カルシウムおよびマグネシウムのようなアルカリ土類金属との塩、銅、鉄または亜鉛のような遷移金属との塩などが挙げられる。
【００１１】
アルテピリンＣおよびその塩は、神経突起誘導に作用することが知られているｐ３８キナーゼを活性化し、神経突起の形成を誘導し得ることが、本発明者らにより新たに見出された。
【００１２】
したがって、本発明によれば、神経損傷を伴う疾患、例えば痴呆症または糖尿病由来の末梢神経障害などの神経障害の予防または治療を目的とした、アルテピリンＣまたはその塩を有効成分とする神経障害の予防または治療用組成物が提供される。
【００１３】
本発明による神経障害の予防または治療用組成物は、通常、経口投与に適した液体製剤または固体製剤の形態で用いられる。
【００１４】
液体製剤としては液剤、シロップ剤など、固体製剤としては散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、チュアブル剤、トローチ剤などの経口投与用形態が挙げられる。
【００１５】
液体製剤を製造する際には、賦形剤として、水、グリセリン、プロピレングリコール、単シロップ、エタノール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトールなどを用いることができる。
【００１６】
また、固体製剤を製造する際には、賦形剤として、例えば、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ゼラチン、澱粉、デキストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成又は天然のケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、乾燥酵母などを用いることができる。
【００１７】
さらに、本発明の組成物には、所望によりクエン酸、リン酸、リンゴ酸又はそれらの塩類などの安定化剤；スクラロース、アセスルファムカリウムなどの高甘味度甘味料や、ショ糖、果糖、はちみつなどの甘味剤；アルコール類、グリセリンなどの防腐剤；希釈剤、緩衝剤、着香剤及び着色剤のような通常の添加剤が加えられてもよい。
【００１８】
このようにして製造される本発明の組成物は、それ自体を食品または医薬として使用できるが、これらの組成物を、食品または医薬の原料、中間製品もしくは最終製品に混合または噴霧等することにより、神経障害の予防または治療を目的とした、ヒトまたは動物用の食品または医薬、あるいは動物用健康食品とすることもできる。
【００１９】
ここで、食品としては、日常的な食品のほか、通常の食品より積極的な意味での保健、健康維持、増進等を目的とする食品、例えば健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、あるいは厚生労働省の定める特別用途食品（例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、病者用食品、病者用組合せ食品、高齢者用食品など）等が挙げられる。
【００２０】
通常の食品としては、例えば、飲料類（茶飲料、コーヒー、ジュース、栄養ドリンクのような清涼飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料、日本酒、洋酒、果実酒、はちみつ酒のような酒）；スプレッド類（カスタードクリームなど）；ペースト類（フルーツペーストなど）；洋菓子類（チョコレート、ドーナツ、パイ、シュークリーム、ガム、ゼリー、キャンデー、クッキー、ケーキ、プリン）；和菓子類（大福、餅、饅頭、カステラ、あんみつ、羊羹）；氷菓類（アイスクリーム、アイスキャンデー、シャーベット）；養蜂産品（例えば、蜂蜜、ローヤルゼリー、蜂の子、花粉荷など）；レトルト食品（例えば、カレー、牛丼、おかゆ、雑炊、ミートソースなど）；即席食品（例えば、即席ラーメン、粉末スープの素、粉末ジュースなど）；瓶詰；缶詰；ゼリー状食品（例えば、ゼリー、寒天、ゼリー状飲料など）；穀類加工品（例えば、麺、パスタ、パン、ビーフンなど）；惣菜類（例えば、和え物、揚げ物など）；冷凍食品（例えば、コロッケ、春巻き、あんまんなど）；調味料類（ドレッシング、ふりかけ、旨味調味料、スープの素）  などが挙げられる。
【００２１】
本発明の組成物を健康食品、医薬品などとして使用する場合、通常、アルテピリンＣとして、一日当たり例えば０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で用いられ、好ましくは約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で用いられる。
しかしながら、これらの用量は、上記の組成物を摂取する人の健康状態、投与方法および他の薬剤との組み合わせなど、種々の因子により変動し得る。
また、食品として使用する場合には、食品の味、匂い、外観などに悪影響を及ぼさない範囲の量で用いるのが好ましい。
本発明の組成物を動物用の食品または医薬として使用する場合にも、上記と同様である。
【００２２】
【実施例】
以下、本発明を試験例および実施例により説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２３】
試験例１
神経細胞に分化するＰＣ１２ｍ３細胞（ＮｅｕｒｏＳｃｉ．Ｌｅｔｔ．，  ３０３，  ２１−２４，  ２００１参照）を用い、プロポリス成分による神経突起誘導への影響を検討した。
ＰＣ１２ｍ３細胞を、１０％ウマ血清、５％ウシ胎児血清および８０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含む高グルコース型ＤＭＥ培地を用いて５％ＣＯ２で３７℃で継代し、維持した。
アルテピリンＣ  、トランス−桂皮酸（和光純薬工業株式会社製）、ヘスペリチン（和光純薬工業株式会社製）およびケンフェロール（和光純薬工業株式会社製）の各エタノール溶解物５〜２００μＭを神経成長因子（ＮＧＦ、３０ｎｇ／ｍｌ）（宝酒造株式会社製）と共に培養シャーレに添加し、７日間培養した。
プロポリスを与えたＰＣ１２ｍ３細胞の細胞または細胞集団１００〜３００個を位相差顕微鏡下に観察し、その細胞または細胞集団から出ている全ての神経突起を計測し、細胞または細胞集団当たりの神経突起誘導率を求めた。
図１は、ＮＧＦを培地に加えたときの神経突起形成を１としたときの各種プロポリス成分による神経突起形成促進の割合の違いを示している。
これによると、アルテピリンＣは神経突起の形成促進に有効であり、特にその添加量が２０μＭと５０μＭのものは、ＮＧＦのみの対照と比べて７．１３倍の高い神経突起形成作用を有することが示された。
【００２４】
試験例２
試験例１と同様にして、アルテピリンＣ（２０μＭ）をＰＣ１２ｍ３細胞の培養シャーレに添加し、神経突起の形成を観察した。
その結果、アルテピリンＣは、ＮＧＦだけを与えた対照よりも、有意な神経突起形成の促進作用を示すことが示された（図２）。
【００２５】
試験例３
神経突起は、ＮＧＦが神経細胞のレセプターに結合することによりＭＡＰキナーゼを活性化させ、このキナーゼが種々の遺伝子を発現することで、伸長または再生される。
そこで、アルテピリンＣの神経再生作用の分子メカニズムを明らかにするため、無血清下でアルテピリンＣ、ＮＧＦまたはＥＲＫの阻害剤であるＵ０１２６（プロメガ株式会社製）（１５μｍ）を与えたＰＣ１２ｍ３細胞から全タンパク質を抽出し、１０％ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分画後、ＰＣ１２ｍ３細胞のＭＡＰキナーゼ活性をウエスタンブロット法により検出した。
その結果、アルテピリンＣは、ＭＡＰキナーゼファミリーのうち、神経分化に作用することが知られるＥＲＫは活性化しないが、ｐ３８キナーゼを活性化することが認められ、ｐ３８キナーゼが神経突起形成に寄与しているとのこれまでの知見が裏付けられた（図３）。
【００２６】
実施例１（カプセル剤）
アルテピリンＣ                ２０ｍｇ
乳糖                ２３０ｍｇ
上記の成分（１カプセ当たり）を均一に混合し、２号カプセルに充填し、内容量２５０ｍｇのカプセル剤を得た。
【００２７】
実施例２（錠剤）
アルテピリンＣ                ２０ｍｇ
乳糖                ２２０ｍｇ
蔗糖脂肪酸エステル    １０ｍｇ
上記の成分（１錠当たり）を均一に混合し、打錠機により、２５０ｍｇの錠剤を得た。
【００２８】
実施例３（顆粒剤）
アルテピリンＣ                ５０ｍｇ
セルロース          １００ｍｇ
デキストリン        １５０ｍｇ
乳糖                ７００ｍｇ
上記の成分（１包当たり）を均一に混合し、押出造粒機により造粒し、乾燥して、顆粒剤を得た。
【００２９】
【発明の効果】
本発明による、アルテピリンＣまたはその塩を有効成分とする神経障害の予防または治療用組成物、ならびに該組成物を含むヒトまたは動物用の食品および医薬は、天然のプロポリス由来の成分を有効成分としているので、安全性に問題なく用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】各種プロポリス成分による神経突起誘導率を示すグラフである。
【図２】アルテピリンＣによる神経突起の誘発を示す顕微鏡写真であり、ＡはＮＧＦだけを与えた場合の結果を示し、ＢはアルテピリンＣを添加した場合の結果を示す。
【図３】アルテピリンＣによるＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ）とｐ３８キナーゼの活性化を表わすウェスタンブロットの結果を示す写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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