(57)【要約】【課題】優れたウレアーゼ阻害作用を有し、しかも安全性の高い月見草由来のウレアーゼ阻害用組成物を提供する。【解決手段】本発明のウレアーゼ阻害用組成物は、月見草の溶媒抽出物を含有することを特徴とする。前記ウレアーゼ阻害用組成物は、月見草種子望ましくは脱脂月見草種子の溶媒抽出物であるとよい。前記ウレアーゼ阻害用組成物は、前記溶媒抽出物が含水エタノール、望ましくはエタノール濃度４０〜９０％（wt／wt）の含水エタノール抽出物であるとよい。本発明のウレアーゼ阻害用組成物は、飲食品または薬品の素材とするとよい。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
月見草の溶媒抽出物を含有することを特徴とするウレアーゼ阻害用組成物。
【請求項２】
前記溶媒抽出物が月見草種子の溶媒抽出物である、請求項１記載のウレアーゼ阻害用組成物。
【請求項３】
前記溶媒抽出物が脱脂月見草種子の溶媒抽出物である、請求項１記載のウレアーゼ阻害用組成物。
【請求項４】
前記溶媒抽出物が含水エタノール抽出物である、請求項１、２または３記載のウレアーゼ阻害用組成物。
【請求項５】
前記溶媒抽出物がエタノール濃度４０〜９０％（wt／wt）の含水エタノール抽出物である、請求項１、２または３記載のウレアーゼ阻害用組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項記載のウレアーゼ阻害用組成物を含有してなる飲食品。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項記載のウレアーゼ阻害用組成物を含有してなる薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、月見草由来のウレアーゼ阻害用組成物に関するもので、例えば、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）が産生するウレアーゼを阻害することにより、胃腸疾患を治療または予防しうる薬品、飲食品等に適用されるものである。
【背景技術】
【０００２】
胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等の疾病には、ヘリコバクター・ピロリ菌（Helicobacter pylori、以下ピロリ菌という。）が関与することが知られている。ピロリ菌は、グラム陰性の微好気性細菌で、ウレアーゼ活性によりアンモニアを産生し、胃酸を中和する。胃内で産生されたアンモニアは、胃の粘膜や粘液の性質を変化させるため、胃壁が爛れて炎症を起こす要因となっている。
【０００３】
従来、ウレアーゼ活性を阻害する薬剤（ウレアーゼ阻害剤）としては、ヒドロキシ尿素、ヒドロキサム酸誘導体等が知られている。
また、ピロリ菌除菌治療法として、ビスマス、メトロニダゾール、テトラサイクリン等の抗菌剤と、酸分泌抑制作用を有するプロトンポンプ阻害剤（抗消化性潰瘍薬、ＰＰＩ）との組み合わせる多剤併用治療が行われているが、この種の治療に用いられるプロトンポンプ阻害剤にも、ウレアーゼ阻害作用があることが報告されている。
【０００４】
しかしながら、このような従来のウレアーゼ阻害剤は、副作用や薬剤耐性菌の出現等の理由により臨床における使用には問題がある。このため、安全性の高い植物由来のウレアーゼ阻害剤が研究・開発されており、例えば、特許文献１は、ダイオウ属等の生薬植物（ダイオウ、アセンヤク等）の抽出物を有効成分とするウレアーゼ阻害剤、また、特許文献２は、クレンピ（苦楝皮）、コウボク（厚朴）等の植物抽出物を有効成分とするウレアーゼ阻害剤を開示している。
【０００５】
【特許文献１】特開２０００−１５４１４５号公報
【特許文献２】特開２００３−４８８４４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このような背景の下、本発明者らは、種々の植物由来の抽出物について、ポリフェノール含量・成分、抗癌作用（アポトーシス）、酵素阻害作用（抗糖尿病作用）等を調査し、月見草抽出物に着目するに至った。そして、各種実験を行った結果、月見草抽出物、特に、月見草種子の抽出物にウレアーゼ阻害作用があることを見出し、本発明を完成するに至ったものである。
本発明の目的は、優れたウレアーゼ阻害作用を有し、しかも安全性の高い月見草由来のウレアーゼ阻害用組成物を提供することにある。
また、本発明の他の目的は、月見草由来のウレアーゼ阻害用組成物を含有する飲食品および薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記課題を解決するための本発明のウレアーゼ阻害用組成物は、月見草の溶媒抽出物を含有することを特徴とする。
また、本発明のウレアーゼ阻害用組成物は、月見草種子の溶媒抽出物を含有することを特徴とする。
さらに、本発明のウレアーゼ阻害用組成物は、脱脂月見草種子の溶媒抽出物を含有することを特徴とする。
さらに、本発明のウレアーゼ阻害用組成物は、前記溶媒抽出物がエタノール濃度４０〜９０％（wt／wt）の含水エタノール抽出物であることを特徴とする。
【０００８】
本発明によれば、優れたウレアーゼ阻害作用をもつ成分を安全な月見草由来の抽出物として服用することができる。これにより、ピロリ菌の産生するウレアーゼ活性を阻害し、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等の疾病を効果的に予防または治療することができる。
【０００９】
また、本発明のウレアーゼ阻害用組成物は、ピロリ菌以外の微生物が産生するウレアーゼに適用することもできる。例えば、腸内細菌の変形プロテウス菌は、尿路感染により尿中の尿素をアンモニアに分解し、リン酸結石症や腎盂腎炎を誘発することが知られるが、本発明のウレアーゼ阻害用組成物によれば、変形プロテウス菌のウレアーゼ活性を阻害することにより、リン酸結石症や腎盂腎炎を予防または治療することもできる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
月見草は、マツヨイグサ属の１〜２年草または多年草である。まれに茎は木質化し低木状をなすこともある。代表種は次の４種である。
(1)コマツヨイグサ（Oenothera laciniata）
(2)マツヨイグサ（Oenothera striata）
(3)メマツヨイグサ（Oenothera biennis）
(4)オオマツヨイグサ（Oenothera erythrosepala）
本発明では、月見草の種類は限定されず、いずれを用いてもよい。
【００１１】
従来、月見草は、その種子から採取される月見草油が広く知られている。月見草油にはγ−リノレン酸が多く含まれており、その効能としては、肥満、糖尿病、高コレステロール血症、多量アルコール飲用者、加齢、ビタミンＢ6不足に有効とされている。また、ウイルス感染の場合に生ずるリノール酸からγ−リノレン酸への転換阻害、喘息、アトピー性湿疹患者の治療に対して月見草油が有効なことも知られている。
月見草種子の脂溶性成分については生理活性が研究されているが、脂溶性成分以外の物質の生理活性についての報告は少ない。
【００１２】
また、月見草油の製造過程で生じる圧搾粕は、一部が飼料として利用される他、産業廃棄物として処理されるのが現状である。
本発明によれば、月見草種子の脂溶性成分以外の成分について、新たな用途を与えるとともに、月見草油の分離後の圧搾粕からウレアーゼ阻害用組成物を抽出することができる。圧搾粕から付加価値の高いウレアーゼ阻害用組成物を抽出し、資源の有効利用を図ることは、きわめて有意義なことである。
【００１３】
本発明のウレアーゼ阻害用組成物を抽出するための溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸エチル等を使用することができる。これらの溶媒を２種以上混合してもよい。望ましくは、水またはエタノールを抽出溶媒として用いると、ウレアーゼ阻害作用を示す有効成分が効率よく抽出される。特に、含水エタノールは、抽出の際に有効成分の活性を低下させにくく、抽出物の食品使用における安全面の上でも好ましい抽出溶媒である。抽出用の水の種類は、特に限定されず、水道水、蒸留水、ミネラル水、アルカリイオン水、深層水等を使用することができる。
【００１４】
本発明のウレアーゼ阻害用組成物を抽出する場合の抽出温度としては、例えば含水エタノールを使用する場合、抽出温度２０〜８０℃、望ましくは４０〜５０℃程度で行うとよい。抽出温度が低すぎると、有効成分が抽出されにくくなり、また、抽出温度が高すぎると、有効成分の活性が低下しやすくなるためである。
【００１５】
抽出溶媒としての含水エタノールは、エタノール濃度４０〜９０％（wt／wt）、望ましくはエタノール濃度６０〜８０％（wt／wt）であるとよい。エタノール濃度が４０％（wt／wt）未満であると、有効成分の抽出量が不十分になり、また、９０％（wt／wt）を超えると、月見草種子の油分が溶媒中に溶け出しやすくなるからである。なお、エタノール抽出は、有効成分の含有率を向上させるため、エタノール濃度を段階的に変えながら繰り返して行うとよい。
【００１６】
また、月見草種子には、脱脂月見草種子を使用するのが望ましい。これは、種子中の油分を除くことにより、有効成分が脱脂物中に濃縮されるためである。脱脂方法としては、例えば、月見草種子を圧搾して油分を分離した後、圧搾物の残留油分を脂溶性有機溶媒により抽出分離するとよい。
【００１７】
好ましい脱脂用溶媒としては、Ｎ−ヘキサンが挙げられる。Ｎ−ヘキサンを使用すると、抽出油分を食用油として使用し得るとともに、脱脂月見草種子の抽出物を食品素材等に利用しやすくなる。なお、月見草種子抽出物を食品以外の用途に用いる場合は、Ｎ−ヘキサンに限ることなく、その他の非極性溶媒を用いることも可能である。
【００１８】
本発明のウレアーゼ阻害用組成物の抽出方法としては、連続抽出、浸漬抽出、向流抽出、超臨界抽出など任意の方法を採用することができ、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
【００１９】
具体的な抽出方法としては、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料（月見草種子の脱脂物）を投入し、攪拌しながら有効成分を溶出させる。例えば、抽出溶媒として含水エタノールを用いる場合には、抽出原料の５〜１００倍量程度（重量比）の抽出溶媒を使用し、３０分〜２時間程度抽出を行う。溶媒中に有効成分を溶出させた後、ろ過して抽出残渣を除くことによって抽出液を得る。その後、常法に従って抽出液に希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施し、ウレアーゼ阻害用組成物を得る。
なお、精製方法としては、例えば、活性炭処理、樹脂吸着処理、イオン交換樹脂、液−液向流分配等の方法が挙げられるが、食品等に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままで使用してもよい。
【００２０】
発明者らの調査によれば、月見草種子抽出物には、エラグ酸、ペンタガロイルグルコース、没食子酸、カテキン、プロシアニジン、プロアントシアニジン等のポリフェノールが比較的多量に含まれる。月見草種子抽出物のウレアーゼ阻害作用は、これらのポリフェノールの生理活性によるところが大きいと推察される。また、これらのポリフェノールの相乗効果によってウレアーゼ阻害作用が高められると考えられる。
【００２１】
本発明のウレアーゼ阻害用組成物は、各種飲食品の素材として使用することができる。
飲食品としては、例えば、菓子類（ガム、キャンディー、キャラメル、チョコレート、クッキー、スナック、ゼリー、グミ、錠菓等）、麺類（そば、うどん、ラーメン等）、乳製品（ミルク、アイスクリーム、ヨーグルト等）、調味料（味噌、醤油等）、スープ類、飲料（ジュース、コーヒー、紅茶、茶、炭酸飲料、スポーツ飲料等）をはじめとする一般食品や、健康食品（錠剤、カプセル等）、栄養補助食品（栄養ドリンク等）が挙げられる。これらの飲食品に月見草抽出物、望ましくは脱脂月見草種子抽出物を適宜配合するとよい。
【００２２】
これら飲食品には、その種類に応じて種々の成分を配合することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等の食品素材を使用することができる。
【００２３】
具体的には、月見草抽出物、望ましくは脱脂月見草種子抽出物を粉末セルロースとともにスプレードライまたは凍結乾燥したものを、粉末、顆粒、打錠または溶液にすることで容易に飲食品（インスタント食品等）に含有させることができる。また、月見草抽出物、望ましくは脱脂月見草種子抽出物を、例えば、油脂、エタノール、グリセリンあるいはこれらの混合物に溶解して液状にし、飲料に添加するか、固形食品に添加することが可能である。必要に応じてアラビアガム、デキストリン等のバインダーと混合して粉末状あるいは顆粒状にし、飲料に添加するか固形食品に添加することも可能である。
【００２４】
本発明のウレアーゼ阻害用組成物を飲食品に適用する場合の添加量としては、病気予防や健康維持が目的であるので、飲食品に対して有効成分の含量が合計１〜２０wt％以下であるのが好ましい。
【００２５】
本発明のウレアーゼ阻害用組成物は、薬品（医薬品および医薬部外品を含む。）の素材として用いてもよい。薬品製剤用の原料に、有効成分である月見草抽出物、望ましくは脱脂月見草種子抽出物を適宜配合して製造することができる。本発明のウレアーゼ阻害用組成物に配合しうる製剤原料としては、例えば、賦形剤（ブドウ糖、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等）、結合剤（蒸留水、生理食塩水、エタノール水、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等）、崩壊剤（アルギン酸ナトリウム、カンテン、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖、アラビアゴム末、ゼラチン、エタノール等）、崩壊抑制剤（白糖、ステアリン、カカオ脂、水素添加油等）、吸収促進剤（第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等）、吸着剤（グリセリン、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、硅酸等）、滑沢剤（精製タルク、ステアリン酸塩、ポリエチレングリコール等）などが挙げられる。
【００２６】
また、本発明のウレアーゼ阻害用組成物をピロリ菌除菌治療に用いる場合には、抗菌作用等を発揮する他の薬理剤と併用してもよい。例えば月見草抽出物、望ましくは脱脂月見草種子抽出物に、抗生物質（アモキシシリン、クラリスロマイシン等）、抗原虫剤（チニダゾール、メトロニダゾール等）、抗腫瘍剤（ビスマス製剤、ソファルコン、プロウノトール等）、プロトンポンプ阻害剤（オメプラゾール、ランソプラゾール等）などを適宜配合してもよい。
【００２７】
本発明によるウレアーゼ阻害用組成物の投与方法は、一般的には、錠剤、丸剤、軟・硬カプセル剤、細粒剤、散剤、顆粒剤、液剤等の形態で経口投与することができるが、非経口投与であってもよい。非経口剤として投与する場合は、溶液の状態、または分散剤、懸濁剤、安定剤などを添加した状態で、局所組織内投与、皮内、皮下、筋肉内および静脈内注射などによることができる。また、坐剤などの形態としてもよい。
【００２８】
投与量は、投与方法、病状、患者の年齢等によって変化し得るが、大人では、通常、１日当たり有効成分として０．５〜５０００ｍｇ、子供では通常０．５〜３０００ｍｇ程度投与することができる。
ウレアーゼ阻害用組成物の配合比については、剤型によって適宜変更することが可能であるが、通常、経口または粘膜吸収により投与される場合は約０．３〜１５．０ｗｔ％、非経口投与による場合は、０．０１〜１０ｗｔ％程度にするとよい。なお、投与量は種々の条件で異なるので、前記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、また、範囲を超えて投与する必要のある場合もある。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明の実施例を説明する。なお、以下に示す実施例は、本発明による月見草抽出物のウレアーゼ阻害作用の確認のために説明するもので、本発明の範囲は、これらの製品および製法に限定されるものではない。
【００３０】
［ウレアーゼ阻害用組成物の製造］
月見草油の製造過程で得られる圧搾粕をウレアーゼ阻害用組成物の原料とした。まず、月見草種子の圧搾粕１ｋｇを破砕し、Ｎ−ヘキサンで還流し、圧搾粕に残存する油分を除いて脱脂物とした。次いで、この脱脂物をエタノール濃度６０ｗｔ％の含水エタノールで還流し、エタノール抽出液を乾固させて月見草エキス（実施例１：ウレアーゼ阻害用組成物）６０ｇを得た。なお、月見草エキス（実施例１）のポリフェノール濃度は約６０ｗｔ％であった。
【００３１】
［ウレアーゼ阻害試験］
ナタ豆由来ウレアーゼ（和光純薬工業株式会社製）を終濃度０．０２単位／ｍｌに調整し、酵素液とした。上記ウレアーゼ１単位は、尿素を加水分解して、２５℃で１分間に１μＭのアンモニアを生成する活性として定義される。
この酵素液５０μｌと月見草エキス（実施例１）を試験管に加えてよく混合し、３７℃で１５分間放置した後、４００ｍＭ尿素添加１００ｍＭリン酸緩衝液を基質液として３００μｌ添加し、直ちに振とうした。この混合液を３７℃で１５分間放置し、１Ｎの硫酸を１００μｌ添加して反応を停止させた。
得られた反応液に、インドフェノール法に従って、下記の溶液Ａ：２．５ｍｌと溶液Ｂ：２．５ｍｌとを添加し、６５℃で２０分間放置した。
溶液Ａ：フェノール５．０ｇおよびニトロプルシドナトリウム２５ｍｇを水５００ｍ            ｌに溶解させたもの
溶液Ｂ：約３００ｍｌの水にリン酸水素ナトリウム２．２ｇおよび水酸化ナトリウム            ２．５ｇを溶解し、有効塩素１０％以上の次亜塩素酸ナトリウム３．０ｍｌ            を添加し、水で５００ｍｌとしたもの
【００３２】
得られた混合液について、波長６３０ｍｌにおける吸光度からウレアーゼ活性値を測定し、ウレアーゼ阻害率を調べた。結果を図１に示す。なお、ウレアーゼ活性値およびウレアーゼ阻害率は次式によって計算した。
ウレアーゼ活性値（Ｕ）＝Ｅｓ−Ｅｂ
Ｅｓ：酵素液を使用して測定した吸光度
Ｅｂ：酵素液の代わりに緩衝液を使用して測定した吸光度
ウレアーゼ阻害率（％）＝｛（Ｕｂ−Ｕｓ）／Ｕｂ｝×１００
Ｕｂ：抽出液の代わりに水を使用して測定したウレアーゼ活性値
Ｕｓ：抽出液を使用して測定したウレアーゼ活性値
【００３３】
図１に示すように、月見草エキス（実施例１）は、濃度依存的なウレアーゼ阻害作用を示した。図１の結果からＩＣ50（５０％阻害濃度）を求めたところ、８．５４μｇ／ｍｌであり、他の植物由来のウレアーゼ阻害剤と比較しても優れたウレアーゼ阻害作用を有することが確認された。
【００３４】
［配合例］
本発明によるウレアーゼ阻害用組成物の配合例を示す。以下の配合例において、「月見草エキス」には、脱脂月見草種子のエタノール抽出物を用いるとよい。
配合例１：チューインガム 
砂糖                                ５３．０wt％
ガムベース                          ２０．０
グルコース                          １０．０
水飴                                １６．０
香料                                  ０．５
月見草エキス（ウレアーゼ阻害用組成物）０．５    
１００．０wt％
【００３５】
配合例２：グミ
還元水飴                            ４０．０wt％
グラニュー糖                        ２０．０
ブドウ糖                            ２０．０
ゼラチン                              ４．７
水                                    ９．６８
ウメ果汁                              ４．０
ウメフレーバー                        ０．６
色素                                  ０．０２
月見草エキス（ウレアーゼ阻害用組成物）１．０    
１００．０wt％
【００３６】
配合例３：キャンディー
砂糖                                ５０．０wt％
水飴                                ３３．０
水                                  １４．４
有機酸                                ２．０
香料                                  ０．２
月見草エキス（ウレアーゼ阻害用組成物）０．４    
１００．０wt％
【００３７】
配合例４：ヨーグルト（ハード・ソフト）
牛乳                                ４１．５wt％
脱脂粉乳                              ５．８
砂糖                                  ８．０
寒天                                  ０．１５
ゼラチン                              ０．１
乳酸菌                                ０．００５
月見草エキス（ウレアーゼ阻害用組成物）０．４    
香料                                  微量
水                                    残余      
１００．０wt％
【００３８】
配合例５：ソフトカプセル
玄米胚芽油                          ８７．０wt％
乳化剤                              １２．０
月見草エキス（ウレアーゼ阻害用組成物）１．０    
１００．０wt％
【００３９】
配合例６：清涼飲料
果糖ブドウ糖液糖                    ３０．０wt％
乳化剤                                ０．５
月見草エキス（ウレアーゼ阻害用組成物）０．０５
香料                                  微量
精製水                                残余      
１００．０wt％
【００４０】
配合例７：錠剤
乳糖                                ５４．０wt％
結晶セルロース                      ３０．０
澱粉分解物                          １０．０
グリセリン脂肪酸エステル              ５．０
月見草エキス（ウレアーゼ阻害用組成物）１．０    
１００．０wt％
【００４１】
配合例８：錠菓
砂糖                                ７６．４wt％
グルコース                          １９．０
ショ糖脂肪酸エステル                  ０．２
月見草エキス（ウレアーゼ阻害用組成物）０．５
精製水                                ３．９      
１００．０wt％
【産業上の利用可能性】
【００４２】
以上説明したように、本発明によれば、次のような優れた効果を奏する。
(a)  月見草由来の安全な抽出物を摂取することにより、ピロリ菌や変形プロテウス菌が産生するウレアーゼを阻害し、胃炎、胃腫瘍、十二指腸腫瘍、リン酸結石症、腎盂腎炎等の疾病を予防または治療することができる。
(b)  月見草由来の安全な抽出物であるから、飲食品や薬品の素材として安心して使用することができる。
(c)  脱脂月見草種子を原料として付加価値の高いウレアーゼ阻害用組成物を得ることができるため、資源の有効利用に役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】ウレアーゼ阻害試験の結果を示すもので、月見草エキス（ウレアーゼ阻害用組成物）の反応系の終濃度とウレアーゼ阻害率との関係を示すグラフである。
【図１】
2005104888.tif 000003