(57)【要約】【課題】 安全性の高い吸収性骨疾患の予防治療剤の提供。【解決手段】  吸収性骨疾患が、悪性高カルシウム血症、骨ページェット病に骨粗鬆症又は歯周病である請求項１記載の吸収性骨疾患予防治療剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒノキ科ネズミサシ属植物の抽出物を有効成分とする吸収性骨疾患予防治療剤。
【請求項２】
吸収性骨疾患が、悪性高カルシウム血症、骨ページェット病、骨粗鬆症又は歯周病である請求項１記載の吸収性骨疾患予防治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、悪性高カルシウム血症、骨ページェット病、骨粗鬆症、歯周病等の吸収性骨疾患の予防治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
骨は内膜面側（骨髄と接する側）において、古い骨を吸収して常に新しい骨に置き換えられている（リモデリング現象）。健常人では新しく作られる骨（骨形成）の量と吸収される骨（骨吸収）の量とのバランスがとられており、全体として骨量に変化が生じないように調節されている。加齢その他の原因によりそのバランスが崩れると、種々の骨疾患が発症する。
【０００３】
骨疾患のうち、骨吸収の異常亢進によって起こる疾患としては、悪性高カルシウム血症、骨ページェット病、骨粗鬆症などが挙げられる。
【０００４】
これらの吸収性骨疾患の治療には、カルシウムの補給、活性型ビタミンＤ3製剤、エストロゲン剤、カルシトニン剤が用いられ、また一部の抗炎症剤（非特許文献１、２及び特許文献１）やポドフィルム属、ノトプテリジウム属及びアスナロ属植物の抽出物（特許文献２）にも骨吸収抑制作用があることが知られている。
【非特許文献１】J. Periodont. Res., 23, 166-169, 1988
【非特許文献２】J. Periodont. Res., 17, 90-100, 1982
【非特許文献３】Endocr. Rev. 13:66-80, 1992
【非特許文献４】Academic Press, San Diego, 1996, p87-102
【特許文献１】特開昭６０−６１５２４号公報
【特許文献２】特開平６−３４０５４２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしこれらの薬剤の多くは、疼痛の軽減や病状の進行の防止にはある程度の効果はあるものの、その効果は満足できるものではない。また、抗炎症剤の連用は種々の副作用が懸念される。慢性病である吸収性骨疾患の予防・治療には、とりわけ長期間使用しても安全な薬剤を使用することが望ましく、従って長期連用の安全性が高く、かつ骨吸収阻止効果に優れた薬剤の開発が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明者等は、最近確立された骨芽細胞と骨髄細胞の共培養系（非特許文献３及び４）を用い、培養細胞にインターロイキンで刺激を与えると破骨細胞が分化誘導することに着目し、インターロイキンで刺激を与えても破骨細胞の分化誘導が起こらない成分を種々の植物からの抽出物について探索していたところ、ヒノキ科ネズミサン属植物の抽出物が、この評価系で、破骨細胞の分化誘導を抑制することを見出した。なお、歯周病は、歯周病原細菌により引き起こされる疾患であり、歯を支持している歯肉、歯根膜、セメント質及び歯槽骨からなる歯周組織に生じる疾患である。症状が進行すると付着上皮、歯肉結合組織、歯根膜等に強い結合組織破壊（炎症）が起こり、それに伴い歯を支えている歯槽骨の吸収が生じ、結果として歯を失うことになる。従って、歯周病も骨吸収の異常亢進によって起こる疾患と考えられる。
【０００７】
すなわち、本発明は、ヒノキ科ネズミサシ属植物の抽出物を有効成分とする吸収性骨疾患の予防治療剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の有効成分であるネズミサシ属植物抽出物は、破骨細胞の分化誘導を抑制することが確認され、しかも、これらの原料となる植物は、古くから薬用に広く用いられているものであり、安全性において特に問題になる点はないものである。従って、本発明の吸収性骨疾患の予防治療剤は、悪性高カルシウム血症、骨ページェット病、骨粗鬆症及び歯周病の予防または治療に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明に用いられるヒノキ科ネズミサシ属植物としては、西洋ネズ、シマムロ、ビャクシン等が挙げられる。これらのネズミサシ属植物のうち、例えば西洋ネズの漿果は、ジン、リキュールの調味にスパイスとして用いられ、また薬用には膀胱炎、尿道炎などの泌尿器の炎症のほか、気管支炎など呼吸器系の各症状、仙痛、咳、胃腸の炎症や寄生虫にも処方されている。しかし、骨吸収に対する作用は全く知られていない。
【００１０】
本発明の吸収性骨疾患予防治療剤の有効成分であるネズミサシ属植物の抽出物は、前記植物の葉、漿果、小枝、樹皮等の植物体等の原料から、有効成分を効果的に抽出し得る溶媒を用いて抽出するか、これらを部分精製することにより得られる。
この抽出に使用される溶媒は、有効成分を効率的に抽出し得る溶媒であれば特に限定されるものではないが、例えば水や、アセトン、メタノール、エタノール、プロパノール等の低級アルコールのように水と混和する有機溶剤、またはそれらの混液、酢酸エチル等のエステル等を用いるのが好ましい。
有効成分の抽出にあたっては、原料をそのままこれらの溶媒で抽出することもできるが、好ましくは抽出効率を高めるために、これら原料を細かく裁断してから溶媒で抽出することが望ましい。更に、抽出を２〜４回繰り返して抽出効率を高めることも可能である。
更に、抽出物中の有効成分の濃度を高めるために、所望により、得られた抽出物を更に、濃縮、液液分配、吸着クロマトグラフィー、順相もしくは逆相クロマトグラフィー等の手段に付すことも可能である。
【００１１】
次に、本発明の有効成分であるネズミサシ属植物の抽出物について、その破骨細胞分化誘導抑制効果について説明する。
【００１２】
前述の骨のリモデリング現象は、骨形成に係わる骨芽細胞と、骨吸収に係わる破骨細胞によって維持されている。骨芽細胞は骨髄未分化間葉系幹細胞から形成される細胞であり、頭蓋骨などから比較的容易に単離・培養できる。破骨細胞は骨髄細胞（骨髄血液幹細胞）から形成され、その過程にはインターロイキンなどの破骨細胞の分化を促進するサイトカインに加えて、骨芽細胞との直接接触が必須である。近年、破骨細胞形成の分子機構の詳細が以下のように明らかにされた。
インターロイキンなどのサイトカインを骨芽細胞に作用させると、その細胞表面にRANKL(receptor activator of NF-κB ligand) の発現が誘導される。一方、骨髄細胞から分化した破骨細胞前駆細胞にはRANKLの受容体であるRANKが細胞表面に発現する。このRANKLとRANKが結合することで、初めて破骨細胞前駆細胞は破骨細胞への分化を開始する。骨吸収現象は、この骨を吸収する破骨細胞の活性化および出現率（分化）のアップにより起こる現象であり、破骨細胞の活性および分化をコントロールできれば、吸収性骨疾患の予防あるいは治療に有効な手段になる。なお、破骨細胞の単離・培養は非常に困難であり、効率的に破骨細胞を得るために、骨髄細胞と骨芽細胞の共培養系にインターロイキンを添加する方法が確立され広く用いられている（特許文献３及び４）。本発明においてはこの評価系を利用し、インターロイキンで刺激を与えると破骨細胞が分化誘導することに着目し、インターロイキンで刺激を与えても破骨細胞の分化誘導が起こらない成分を探索したところ、ネズミサシ属植物の抽出物は、この評価系で、破骨細胞の分化誘導を抑制する。従って、ネズミサシ属植物抽出物は、種々の吸収性骨疾患の予防治療剤として有用である。吸収性骨疾患としては、悪性高カルシウム血症、骨ページェット病、骨粗鬆症、歯周病等が挙げられる。
【００１３】
本発明の吸収性骨疾患の予防治療剤は、種々の剤型での投与が可能であり、例えば経口投与剤としては、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、シロップ剤、ドライシロップ剤等が例示でき、非経口投与剤としては、注射剤の他、坐薬、膣坐薬等の坐剤、噴霧剤等の経鼻投与剤、軟膏、経皮吸収性テープ等の経皮吸収剤、歯磨、洗口剤、マウスウォッシュ等の口腔用剤が例示できる。
【００１４】
本発明の吸収性骨疾患の予防治療剤は、乾燥物換算として、通常成人１日当たり０．０００１〜０．５ｇ、好ましくは０．００５〜０．１ｇを１〜３回に分けて経口または非経口で投与できる投与単位とすれば良い。これらの投与量は、年齢、症状等により適宜増減することが可能である。
【００１５】
ここで口腔用剤とする場合には、前記有効成分に加えて、例えば発泡剤、発泡助剤、界面活性剤、研磨剤、増量剤、甘味剤、保存料、他の薬効成分、pH調整剤、粘着剤、顔料、色素、香料等を適宜配合できる。口腔用剤中の有効成分の含有量は乾燥物換算で０．００１〜１０重量％、さらに０．０１〜５重量％、特に０．１〜３重量％が好ましい。
【００１６】
また、上記のようにして得たネズミサシ属植物抽出物を通常の飲食物中に添加し、日常的に摂取することも可能である。添加し得る食品の種類には特に限定はないが、例えばドリンク剤等の飲料や、キャンディー、ガム等の食品に添加することが好ましい。
【００１７】
このようにして得られた飲食物は、日常的に摂取することが可能であるため、吸収性骨疾患の予防効果が期待でき、保健用食品として有用である。
【００１８】
このような飲食物における該植物抽出物の添加量は、対象食品の種類に応じ、食品本来の味を損なわない範囲で添加すれば良く、通常対象食品に対し、０．０１〜１重量％の範囲内で添加すれば良い。
【実施例】
【００１９】
製造例１．西洋ネズの漿果（ジェニパーベリー）抽出物の製造：西洋ネズの漿果粉砕物１Ｋｇを８リットルのエタノールに常温で７日間浸漬し、エタノール可溶成分を抽出した。次いで、抽出液を分離した残さについて同様の操作を再度行い、合計１６リットルの抽出液を得た。この抽出液の溶媒を留去して１リットルまで濃縮した後、活性炭３０ｇを加え、６時間攪拌し、脱臭・脱色処理を施した後、活性炭をろ別し、ろ液を減圧濃縮し、抽出物５５ｇをシロップとして得た。
【００２０】
試験例１．骨芽細胞、骨髄細胞の共培養系でのジェニパーベリー抽出物の破骨細胞分化誘導抑制効果
７〜９週齢ddyマウス（♂）より骨を採取、骨髄細胞を単離、新生ddyマウスより頭蓋骨を採取、酵素処理（０．１％コラゲナーゼ、０．２％ディスパーゼ処理）により骨芽細胞を単離し、１０％ＦＣＳを含むαＭＥＭ培地中（２００μｌ）、骨芽細胞数１×１０4／ｍｌ、骨髄細胞数１．５×１０6／ｍｌになるように調整し、骨芽細胞と骨髄細胞の共培養を行う。また破骨細胞の分化誘導にはマウスインターロイキン１（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加し、分化誘導を開始する。分化誘導開始時にこの共培養系にエキスを添加し、マウスインターロイキン１共存下96時間培養した後（24時間毎に培地交換）、定法に従い、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）活性染色を行い、比色定量により破骨細胞の分化誘導の割合を検討した。
【００２１】
その結果、図１に示すようにジェニパーベリー抽出物は、優れた破骨細胞の分化誘導抑制効果を有することが判明した。従ってジェニパーベリー抽出物は、骨吸収性疾患の予防治療剤として有用である。
【００２２】
実施例１．下記成分を用い、常法に従って歯磨き剤を製造した。
ジェニパーベリー抽出物            １.0重量％
シリカ                            30
ソルビトール                      30
ラウリル硫酸ナトリウム            1.0
カルボキシメチルセルロース        1.0
サッカリン                        0.1
香料                              適量
水                                バランス
全    100重量％
【００２３】
実施例２．下記成分を用い、常法に従って洗口剤を製造した。
ジェニパーベリー抽出物            1.0重量％
エタノール                        20
ピロリン酸ナトリウム              2
サッカリン                        0.1
香料                              適量
水                                バランス
全    100重量％
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】ジェニパーベリー抽出物の破骨細胞の分化誘導抑制効果を示す図である。
【図１】
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