(57)【要約】【課題】食品、化粧品および医薬品として使用でき、活性酸素の発生を抑制でき、かつ発生した活性酸素を減少できる抗酸化組成物を提供すること。【解決手段】テアニンを含有してなる抗酸化組成物、Ｏ２−、Ｈ２Ｏ２およびＨＯＣｌからなる群より選ばれた活性酸素の発生を抑制し、または該活性酸素の量を減少させるためのテアニンを含有してなる抗酸化組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
テアニンを含有してなる抗酸化組成物。
【請求項２】
Ｏ２−、Ｈ２Ｏ２およびＨＯＣｌからなる群より選ばれた活性酸素の発生を抑制し、または該活性酸素の量を減少させるための請求項１記載の抗酸化組成物。
【請求項３】
食品または医薬品である請求項１または２記載の抗酸化組成物。
【請求項４】
錠剤またはカプセル剤のいずれかである請求項３記載の抗酸化組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、テアニンを含有することを特徴とする抗酸化組成物（以下、単に組成物という場合がある）に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、活性酸素は、生体内において生体防御系、細胞内シグナル系などで重要な働きをする一方で、生体成分に様々な酸化障害を起こし、老化、疾患の原因となることが明らかとなっている。
【０００３】
活性酸素としては、スーパーオキサイド（・Ｏ２−）、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ・）、ヒドロペルオキシルラジカル（ＨＯＯ・）、アルコキシルラジカル（ＬＯ・）、アルキルペルオキシルラジカル（ＬＯＯ・）、一酸化窒素（ＮＯ）などのラジカル種、および過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ペルオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）、脂質ヒドロペルオキシド（ＬＯＯＨ）、次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）、オゾン（Ｏ３）などのノンラジカル種が挙げられる。このうち、スーパーオキサイド（・Ｏ２−）、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ・）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）および一重項酸素（１Ｏ２）は、狭義の活性酸素と呼ばれる。
【０００４】
これらの活性酸素が、生体に及ぼす影響としては、ＤＮＡ螺旋の部分開裂、連鎖的ラジカルの発生による組織の損傷などが挙げられる。その結果として、気管支喘息などのアレルギー反応の惹起；ヒスタミン放出による炎症の惹起；心筋梗塞、狭心症などの虚血性心疾患、劇症肝炎、脂肪肝などの肝臓障害などの疾患の悪化；脳神経細胞間の情報伝達に重要であるグルタミン酸による各種受容体の過剰な刺激により引き起こされる活性酸素による脳梗塞などの脳血管障害、アルツハイマー型痴呆、パーキンソン病、脳組織の破壊などによる痴呆の誘発；未熟児網膜症、肺気腫、糖尿病、痛風、皮膚癌、妊娠中毒症、糸球体腎炎、糖尿病性腎炎、白内障、網膜鉄錆症、シミ、シワなど疾病の一因となることが知られている。
【０００５】
また、活性酸素は、上記のような影響を生体に及ぼすばかりでなく、食品などにおける変質もしくは劣化の引き金となるか、または変質もしくは劣化を加速することは、周知である。
【０００６】
従って、生体または食品において活性酸素の発生を抑制するか、または生体または食品において活性酸素を減少することは、これらの疾患を治療または予防する点、または食品の変質または劣化を抑制または予防する点で非常に重要なことである。このため、生体内または食品において活性酸素の発生を抑制、あるいは、生体内または食品内に発生した活性酸素を減少する作用（すなわち、抗酸化作用）のある物質（以下、抗酸化物質という場合がある）の探索が広く行われてきている。
【０００７】
抗酸化物質としては、天然物由来のものでは、脂溶性のトコフェロール（ビタミンＥ）、カロチノイド、水溶性のアスコルビン酸（ビタミンＣ）などが挙げられ、合成化合物では、ＢＨＴ（ブチルヒドロキシトルエン）、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニリン）などが挙げられる。
【０００８】
さらに、活性酸素を減少する目的で、スパーオキサイドデスムターゼ（ＳＯＤ）を用いる試みも行われている。
【０００９】
また、アミノ酸を抗酸化物質として用いて、皮膚の老化防止、各種疾患の防止などの効果が発現される報告もされている（例えば、特許文献１参照）。
【００１０】
また、最近では、充分な薬効と安全性を求めて、生薬抽出物から抗酸化作用を有する物質を得ようとする試みも数多くなされており（例えば、特許文献２〜１４参照）、これらはいずれも生薬または植物由来の抗酸化作用を有する物質を利用したものである。
【特許文献１】国際公開第９４／１４７５５号パンフレット
【特許文献２】特開昭６０−２２４６２９号公報
【特許文献３】特開昭６１−２４５２２号公報
【特許文献４】特開平２−１９３９３０号公報
【特許文献５】特開平２−２４３６３２号公報
【特許文献６】特開平２−２６４７２７号公報
【特許文献７】特開平３−１５３６２９号公報
【特許文献８】特開平３−２２１５８７号公報
【特許文献９】特開平４−６９３４３号公報
【特許文献１０】特開平４−２０２１３８号公報
【特許文献１１】特開平４−２４７０１０号公報
【特許文献１２】特開平１０−２２６７８７号公報
【特許文献１３】特開２０００−１２９２５６号公報
【特許文献１４】特開２００２−３０８７６７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかし、上記の抗酸化物質は、活性酸素を減少する作用が充分ではなく、さらに、ＢＨＴおよびＢＨＡは、発癌性の疑いがあり、何れも実用的とは言い難かった。
【００１２】
また、ＳＯＤはタンパク質であるため、その入手が困難であるばかりでなく、経口投与では消化されてしまうという問題があり、この問題を解決するために注射によって投与した場合においても、血中半減期が短く、抗酸化物質としては満足のいくものではなかった。
【００１３】
さらに、上記アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸ではなく、食品または食品添加物としての使用が認められていないので、従来の食品に使用することはできない。
【００１４】
従って、本発明の目的は、食品、化粧品および医薬品として使用でき、活性酸素の発生を抑制でき、かつ発生した活性酸素を減少できる抗酸化組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
すなわち、本発明は、
（１）テアニンを含有してなる抗酸化組成物、
（２）Ｏ２−、Ｈ２Ｏ２およびＨＯＣｌからなる群より選ばれた活性酸素の発生を抑制し、または該活性酸素の量を減少させるための前記（１）記載の抗酸化組成物、
（３）食品または医薬品である前記（１）または（２）記載の抗酸化組成物、ならびに
（４）錠剤またはカプセル剤のいずれかである前記（３）記載の抗酸化組成物
に関する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の抗酸化組成物によれば、安全で、かつ活性酸素の発生を抑制でき、かつ発生した活性酸素を減少できるという効果が奏される。さらに、本発明の抗酸化組成物は、食品、化粧品および医薬品として使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明の抗酸化組成物は、テアニンを含有することに一つの大きな特徴を有する。
【００１８】
なお、本発明において抗酸化とは、活性酸素の発生を抑制または活性酸素を減少することをいう。
【００１９】
活性酸素としては、例えば、スーパーオキサイド（・Ｏ２−）、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ・）、ヒドロペルオキシルラジカル（ＨＯＯ・）、アルコキシルラジカル（ＬＯ・）、アルキルペルオキシルラジカル（ＬＯＯ・）、一酸化窒素（ＮＯ）などのラジカル種、および過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ペルオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）、脂質ヒドロペルオキシド（ＬＯＯＨ）、次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）、オゾン（Ｏ３）などのノンラジカル種が挙げられる。このうち、スーパーオキサイド（・Ｏ２−）、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ・）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）および一重項酸素（１Ｏ２）は、狭義の活性酸素と呼ばれ、本発明の抗酸化組成物により、特に顕著な抗酸化作用が及ぼされる活性酸素である。
【００２０】
テアニンによる抗酸化作用の発現は、例えば、ヨウ素滴定法、ロダン鉄法などの過酸化物価測定法、カルボニル価、ＴＢＡ価、揮発性物質などを測定する分解物測定法、溶存酸素計もしくはワールブルグ計を用いることにより、または重量法により酸素消費量を測定する方法、紫外吸収分析、赤外吸収分析、電子スピン共鳴分析、蛍光分析、極微弱発光分析などの物理化学的方法、生体系を用いた方法などにより評価することができる。
【００２１】
本発明に用いられるテアニンとは、グルタミン酸の誘導体（γ−グルタルエチルアミド）であり、天然には茶葉に多く含まれるアミノ酸成分である。本発明に用いられるテアニンの製造法としては、例えば、茶葉から抽出する方法、有機合成による方法（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１９（７）１３０１−１３０７（１９７１））、グルタミンとエチルアミンの混合物にグルタミナーゼを作用させてテアニンを得る方法（特公平７−５５１５４号公報）、エチルアミンを含有する培地で茶の培養細胞群を培養し、培養細胞群中のテアニン蓄積量を増加させつつ培養細胞群の増殖促進を図る方法（特開平５−１２３１６６号公報）、また、特公平７−５５１５４号公報、特開平５−１２３１６６号公報におけるエチルアミンをエチルアミン塩酸塩などのエチルアミン誘導体に置き換えてＬ−テアニンを得る方法などがあり、いずれの方法でもよい。なお、前記茶葉としては、緑茶葉、ウーロン茶葉、紅茶葉などが挙げられる。
【００２２】
テアニンは、Ｌ−テアニン、Ｄ−テアニン、ＤＬ−テアニンのいずれも使用可能であるが、中でもＬ−体は、食品添加物にも認められており、経済的にも利用しやすいため、本発明においてはＬ−体が好ましい。また、使用されるテアニンの形態としては、精製品、粗精製品、抽出エキスなど、いずれの形態でもよい。また、市販品（サンテアニン（登録商標）太陽化学社製）を用いてもよい。
【００２３】
本発明の組成物におけるテアニンの含有量は、特に限定されるものではなく、所望により適宜調整すればよい。例えば、組成物中における好適なテアニン含有量は、本発明の所望の効果の発現を考慮し、好ましくは、０．０１〜９９．９重量％、より好ましくは、０．１〜９９重量％である。
【００２４】
本発明の組成物中のテアニンの検出方法としては、特に限定されるものではないが、オルトフタルアルデヒド（ＯＰＡ）によるプレカラムでの誘導体化後、ＯＤＳカラムを用いての高速液体カラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分離し、蛍光検出器で検出定量する方法、ＯＤＳカラムを用いてＨＰＬＣで分離し、波長２１０ｎｍで検出定量する方法などが挙げられる。
【００２５】
本発明の組成物には、さらに、抗酸化作用をさらに増強させる観点から、活性酸素スカベンジャーを共に含有させることが好ましい。本発明の組成物における活性酸素スカベンジャーの含有量は特に限定されるものではなく、所望により適宜調整すればよい。例えば、組成物中における好適な活性酸素スカベンジャー含有量は、本発明の所望の効果の発現を考慮し、好ましくは、０．０１〜９９．９重量％、より好ましくは、０．１〜９９重量％である。活性酸素スカベンジャーとは、スーパーオキシサイド、過酸化水素、ヒドロキシラジカル、一重項酸素などの活性酸素を除去するという性質を有する物質をいい、例えば、カテキン類、タンニン類、アントシアニン類、フラボノイド類、サポニン類、およびこれらの各関連成分が挙げられる。これらは単独でまたは２種以上混合して用いてもよい。これらの活性酸素スカベンジャーの多くは、弱いながらも単独でスカベンジャー作用または抗酸化作用を有することが確認されている。
【００２６】
カテキン類としては、特に限定されるものではないが、カテキン、カテキンガレート、エピカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、ガロカテキン、ガロカテキンガレートなどが挙げられる。
【００２７】
タンニン類としては、大別して加水分解型タンニンと縮合型タンニンが挙げられる。加水分解型タンニンとは、加水分解により没食子酸またはエラグ酸を生成するタンニンをいい、特に限定されるものではないが、ガロタンニン、エラグタンニン、テオガリン、クロロゲン酸、ネオクロロゲン酸などが挙げられ、縮合型タンニンとは、フラバン−３−オール骨格を持ったカテキン類が縮重合したタンニンをいい、特に限定されるものではないが、プロシアニジン、プロデルフィニジンなどのプロアントシアニジン類が挙げられる。
【００２８】
アントシアニン類としては、特に限定されるものではないが、非アシル化アントシアニン、アシル化アントシアニンとして脂肪族有機アシル化アントシアニン、モノアシル化アントシアニン、ポリアシル化アントシアニン、複合体化アントシアニンとしてコピグメント化したアントシアニン、メタロアントシアニン、ホルデミン、赤ワインの色素などが挙げられる。
【００２９】
フラボノイド類としては、特に限定されるものではないが、フラボン、フラボノール、フラバノン、フラバノール、イソフラボンなどが挙げられる。
【００３０】
サポニン類としては、大別してトリテルペノイド型サポニンとステロイド型サポニンが挙げられる。トリテルペノイド型サポニンとしては、特に限定されるものではないが、キキョウ、マロニエ、シクラメンなどに含まれるオレアナン型サポニン、薬用ニンジンなどに含まれるダマラン型サポニンなどが挙げられる。ステロイド系サポニンとしては、特に限定されるものではないが、ヤマノイモに含まれるディオシン、チモに含まれるチモサポニンＡ−III、バクモンドウに含まれるオフィオポゴニンＡ、ジギタリスに含まれるジギトニンなどが挙げられる。
【００３１】
これらの活性酸素スカベンジャーは、生薬、民間薬、ハーブ、植物性食品（例えば、豆類、穀物、野菜、果実など）、動物用餌（牧草、糠など）などに少なからず含まれているので、これらの素材・原料から公知の方法を用いて抽出したものを用いてもよいし、素材・原料をそのまま用いてもよい。これらの素材・原料は、単独でまたは２種以上混合して用いてもよい。
【００３２】
生薬としては、特に限定されるものではないが、カノコソウ、当帰、芍薬、牡丹、高麗人参、キキョウ(根)、カンゾウ（根茎）、セネガ（根）キラヤ（樹皮）、ジキタリス(葉)、オニドコロ（根茎）、サルサ(根)、チモ(ハナスゲの根)などが挙げられる。その形態としては、特に限定されるものではないが、抽出物、乾燥品などが挙げられる。
【００３３】
民間薬としては、特に限定されるものではないが、ウコン、甘茶、イチジク、カミツレ、サフラン、ニンジン、柏子仁が挙げられる。
【００３４】
ハーブとしては、特に限定されるものではないが、アニス、キャロットシード、クローブ、コリアンダー、サイプレス、シナモン、ジュニパー、ジンジャー、スイートオレンジ、パインニードル、バジル、パチュリ、ビターオレンジ、フェンネル、ブラックペッパー、ベイ、ペパーミント、ベルガモット、マンダリン、ミルラ、レモングラス、ローズマリー、グレープフルーツ、シダーウッド、シトロネラ、セージ、タイム、ティートゥリー、バイオレットリーフ、バニラ、ヒソップ、ユーカリ、ライム、レモン、イランイラン、カルダモン、クラリセージ、ジャスミン、ゼラニウム、カモミール、ブルガリアローズ、ローズ、オリバナム、ラベンダー、カミツレ、ゼラニウム、サンダルウッドネロリ、バーベナ、プチグレン、ベチバー、マージョラム、メリッサ、ローズウッド、オトギリソウ、セイントジョーンズワート、カワカワなどが挙げられる。その形態としては、特に限定されるものではないが、抽出エキス、精油、ハーブティーなどが挙げられる。
【００３５】
植物性食品としては、特に限定されるものではないが、ダイス、アズキ、インゲン、ホウレンソウ、サトウダイコン、ナガイモ、食用ユリ、ニラ、ネギ、ラッキョウ、ニンニク、ユズ、ラカンカ、ブドウ、ニンジン、トマト、タマネギ、グアバ、クランベリーなどが挙げられる。
【００３６】
動物用餌としては、特に限定されるものでないが、牧草、トウモロコシ、グレーンソルガム、麦類などの穀類、フスマ、ヌカ類などの糟糖類、植物性油粕類などが挙げられる。
【００３７】
本発明の組成物には、さらに、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、その他食品に許容される素材・原料を共に含有させてもよい。これらは単独でまたは２種以上混合して用いてもよい。
【００３８】
アミノ酸としては、特に限定されるものではないが、グルタミン、グルタミン酸、イノシン酸、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、スレオニン、セリン、γ−アミノ酪酸、タウリン、チオタウリン、ヒポタウリンなどが挙げられる。
【００３９】
ビタミンとしては、特に限定されるものではないが、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、葉酸、ニコチン酸、リポ酸、パントテン酸、ビオチン、ユビキノン、プロスタグランジン、これらの誘導体などが挙げられる。
【００４０】
ミネラルとしては、特に限定されるものではないが、カルシウム、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、セレン、カリウムなどが挙げられる。
【００４１】
その他食品に許容される素材・原料としては、アロエ、ローヤルゼリー、メラトニン、プラセンタ、プロポリス、イソフラボン、大豆レシチン、卵黄レシチン、卵黄油、コンドロイチン、カカオマス、コラーゲン、酢、クロレラ、スピルリナ、イチョウ葉、緑茶、杜仲茶、黄妃茶、ウーロン茶、桑の葉、甜茶、バナバ茶、不飽和脂肪酸、糖アルコールやオリゴ糖などの糖類、ビフィズス菌や紅麹などの菌類、アガリクス茸、姫マツタケ、霊芝、マイタケなどのキノコ類、ブルーベリー、プルーン、ブドウ、オリーブ、うめや柑橘類などの果実類、落花生、アーモンド、ゴマや胡椒などの種実類、ピーマン、唐辛子、ネギ、カボチャ、ウリ、人参、ゴボウ、モロヘイヤ、ニンニク、シソ、ワサビ、トマト、らっきょ、葉菜、芋や豆などの野菜類、ワカメなどの海草類、魚介類、獣鳥鯨肉類、穀類など、そのもの、あるいは、これらの抽出物、乾燥品、粗精製品、精製品、加工品、醸造品などが挙げられる。
【００４２】
また、本発明の組成物としては、日常の使用に適するという観点から、食品または医薬品が好ましい。
【００４３】
本発明における食品としては、テアニンを含有する食品のみならず、テアニンを含有する食品添加物も含まれる。
【００４４】
本発明に包含される食品としては、乾燥食品、サプリメントなどの固形食品、また、清涼飲料やミネラルウォーター、嗜好飲料、アルコール飲料などの液状食品が挙げられる。固形食品としては、特に限定されるものではないが、練り製品、大豆加工品、調味料、ムース、ゼリー、冷菓、飴、チョコレート、ガム、クラッカー、ケーキ、パンなどが挙げられる。また、液状食品としては、特に限定されるものではないが、緑茶、ウーロン茶、紅茶、ハーブティーなどの茶類、濃縮果汁、濃縮還元ジュース、ストレートジュース、果実ミックスジュース、果肉入り果実ジュース、果汁入り飲料、果実・野菜ミックスジュース、野菜ジュース、炭酸飲料、清涼飲料、乳飲料、日本酒、ビール、ワイン、カクテル、焼酎、ウイスキーなどが挙げられる。
【００４５】
また、本発明に包含される医薬品としては、テアニンを含有するものであれば特に限定されるものではない。例えば、その形態としては、溶液、懸濁物、粉末、固体成型物などのいずれでもよく、その剤型としては、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤、注射剤、貼付剤、坐剤、吸入剤などが挙げられる。
【００４６】
本発明の組成物の製法は、特に限定されるものではなく、例えば、テアニンと他の原材料を粉体混合する製法、溶媒中にテアニンと他の原材料を溶かし混合溶液とする製法、またその混合溶液を凍結乾燥する製法、噴霧乾燥する製法など、一般的な食品または医薬品の製法を適用することができる。
【００４７】
例えば、既存の食品に対し、製造後の本発明の食品におけるテアニンの含有量が、好ましくは前記食品における好適なテアニンの含有量範囲となるように、テアニンを常法により配合し、本発明の食品を製造することができる。また、テアニンを、例えば、公知の経口投与に適した有機または無機の担体、賦形剤、結合剤、安定剤などと、食品の製造の場合と同様、好ましくは前記好適なテアニンの含有量範囲となるように、テアニンを常法により配合し、本発明の医薬品を製造することができる。
【００４８】
以上のように製造された本発明の組成物は、活性酸素、特にＯ２−、Ｈ２Ｏ２またはＨＯＣｌに対して、抗酸化作用を有する。
【００４９】
本発明の所望の効果を得るための本発明の組成物の投与量は、通常、テアニンとして、好ましくは１〜１０００ｍｇ／日、より好ましくは、５〜５００ｍｇ／日である。ただし、個体差（症状の種類や程度、年齢など）があるため、本発明における投与量は、かかる範囲にのみ限定されるものではなく、本発明の所望の効果が得られるように、個別具体的に投与量を適宜設定すればよい。
【００５０】
本発明の組成物の投与方法としては、特に限定されないが、好ましくは、経口投与、静脈投与、経直腸投与、より好ましくは、経口投与であり、前記の好適範囲で投与すればよい。
【００５１】
本発明に用いられるテアニンの安全性は高く、例えば、マウスを用いた急性毒性試験において５ｇ／ｋｇ経口投与で死亡例はなく、一般状態および体重などに異常は認められない。また、特にＬ−テアニンは茶のうまみ成分として知られているものであり、呈味を用途とする食品添加物としても使用され、食品衛生法上、その添加量に制限はない。しかも、従来の薬物と異なり、テアニンによる副作用は全く認められないので、本発明によれば、安全で、かつ効果的な抗酸化作用を有する組成物が提供される。
【実施例】
【００５２】
以下、実施例および試験例により本発明をより詳細に説明するが、本発明は当該実施例および試験例に限定されるものではない。
【００５３】
製造例１  酵素法によるＬ−テアニンの製造
０．３Ｍグルタミンおよび１．５Ｍ塩酸エチルアミンを０．０５Ｍホウ酸緩衝液（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７−ＮａＯＨ、ｐＨ１１）中、０．３Ｕグルタミナーゼ存在下にて３０℃で２２時間反応させ、２２５ｎｍｏｌのテアニンを得た。次いで、反応液からのテアニンの精製は、反応液をＤｏｗｅｘ５０×８カラムおよびＤｏｗｅｘ１×２カラム（共に室町化学工業社製）によるクロマトグラフィーにかけ、次いでエタノール処理することにより行った。
【００５４】
まず、Ｌ−テアニンの確認は、前記精製により得られた単離物質をアミノ酸アナライザー（日立製作所社製）、ペーパークロマトグラフィーにかけ、単離物質が標準物質と同じ挙動を示すことを確認することにより行った。次いで、単離物質に対し塩酸またはグルタミナーゼで加水分解処理を行うと、１：１の割合で、グルタミン酸とエチルアミンを生じた。このように、単離物質が、グルタミナーゼによって加水分解されたことから、エチルアミンがグルタミン酸のγ位に結合していることが示された。また、加水分解で生じたグルタミン酸がＬ−体であることも、グルタミン酸デヒドロゲナーゼにより確認された。以上より、得られた化合物がＬ−テアニンであることを最終的に確認した。このとき、得られたＬ−テアニンは、８．５ｇであった。
【００５５】
製造例２  Ｌ−テアニンの茶葉からの抽出
茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）葉１０ｋｇを熱水で抽出後、得られた抽出液をカチオン交換樹脂（室町化学工業社製；Ｄｏｗｅｘ  ＨＣＲ  Ｗ−２）にかけ、１Ｎ  ＮａＯＨにより溶出した。溶出画分を活性炭（二村化学工業社製；太閤活性炭  ＳＧ）に通し、１５％エタノールによる溶出画分をＲＯ膜（日東電工社製；ＮＴＲ  ７２９  ＨＦ）を用いて濃縮した。次いで、濃縮物をカラムクロマトグラフィーにて精製し、更に再結晶を行い、Ｌ−テアニン２４．８ｇを得た。
【００５６】
なお、以下の実施例にはテアニンとしてサンテアニン（登録商標）（太陽化学社製）を用いた。
【００５７】
抗酸化作用の評価方法
本発明の組成物の抗酸化作用を、ケミルミネッセンスアナライザー（ＣＬＡ−ＳＰ２、東北電子産業社製）を用いて、活性酸素によって生じる発光物質からの化学発光を測定することにより評価した。検出波長範囲を４００〜８７０ｎｍに設定し、解像度を２７０と８７０ｎｍ間の帯域波長において４ｎｍに設定した。
【００５８】
実施例１  スーパーオキサイド（Ｏ２−）に対するテアニンの抗酸化作用
テアニンを０、１、１０および１００ｍｇ／ｍｌの最終濃度となるように５０ｍＭリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）に溶解し、サンプルを調製した。得られたサンプル２００μｌをケミルミネッセンスアナライザー（ＣＬＡ−ＳＰ２、東北電子産業社製）のサンプルチャンバに添加し、サンプル添加１００秒後に、発光物質として０．１ｍＭルシゲニン５００μｌをサンプルチャンバに添加した。次いで、サンプル添加１５０秒後に、０．１ｍＭキサンチン５００μｌおよび０．００４Ｕキサンチンオキシダーゼ５０μｌをサンプルチャンバに添加した。この一連の操作中の化学発光を測定した結果を図１に示す。
【００５９】
次に、テアニン０、１００、１５０、２００および３００ｍｇを５０ｍＭリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）２００μｌと混合してサンプルを調製した。得られたサンプルをケミルミネッセンスアナライザー（ＣＬＡ−ＳＰ２、東北電子産業社製）のサンプルチャンバに添加し、サンプル添加１００秒後に、発光物質として０．１ｍＭルシゲニン５００μｌをサンプルチャンバに添加した。次いで、サンプル添加１５０秒後に、０．１ｍＭキサンチン５００μｌおよび０．００４Ｕキサンチンオキシダーゼ５０μｌをサンプルチャンバに添加した。キサンチンおよびキサンチンオキシゲナーゼ添加１５０秒後の化学発光を測定し、その結果を図２に示す。
【００６０】
図１より、化学発光カウントはテアニンの入っていないブランクに比べ、テアニンの濃度依存的に減少し、スーパーオキサイド（Ｏ２−）に対するテアニンの抗酸化作用が認められる。図２より、テアニン１００ｍｇ以上の添加により化学発光カウントはブランクに対し有意に減少し（ｐ＜０．０５）、スーパーオキサイド（Ｏ２−）に対するテアニンの抗酸化作用が認められる。
【００６１】
実施例２  次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）に対するテアニンの抗酸化作用
テアニン０、１０、５０、１００、１５０、２００および３００ｍｇを５０ｍＭリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）２００μｌと混合してサンプルを調製した。得られたサンプルをケミルミネッセンスアナライザー（ＣＬＡ−ＳＰ２、東北電子産業社製）のサンプルチャンバに添加し、サンプル添加１００秒後に、発光物質として２５μＭルミノール５００μｌをサンプルチャンバに添加した。次いで、サンプル添加１５０秒後に、０．１２重量％次亜塩素酸１００μｌをサンプルチャンバに添加した。次亜塩素酸添加１５０秒後の化学発光を測定し、その結果を図３に示す。
【００６２】
化学発光カウントはテアニンの添加によりブランクに対し有意に減少し（ｐ＜０．０５）、次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）に対するテアニンの抗酸化作用が認められる。
【００６３】
実施例３  過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）に対するテアニンの抗酸化作用
テアニンを０、２００ｍｇおよび３００ｍｇを５０ｍＭリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）２００μｌと混合してサンプルを調製した。得られたサンプルをケミルミネッセンスアナライザー（ＣＬＡ−ＳＰ２、東北電子産業社製）のサンプルチャンバに添加し、サンプル添加１００秒後に、発光物質として２５μＭルミノール５００μｌをサンプルチャンバに添加した。次いで、サンプル添加１５０秒後に、０．３重量％過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）をサンプルチャンバに添加した。過酸化水素添加１５０秒後の化学発光を測定し、その結果を図４に示す。
【００６４】
化学発光カウントはテアニンの添加によりブランクに対し有意に減少し（ｐ＜０．０５）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）に対するテアニンの抗酸化作用が認められる。
【００６５】
実施例４  テアニン含有錠剤の製造
テアニン含有抗酸化組成物の１例として、次に示す原料を混合し、造粒後に１錠０．７５ｇとなるように打錠し、テアニン含有錠剤を製造した。
フロストシュガー              ７１．６７重量％（０．５３７５ｇ）
トレハロース                  １０．００重量％（０．０７５０ｇ）
テアニン                      １３．３３重量％（０．１０００ｇ）
ショ糖脂肪酸エステル            １．００重量％（０．００７５ｇ）
香料（高砂香料工業社製）        ４．００重量％（０．０３００ｇ）
合計                              １００重量％（０．７５００ｇ）
【００６６】
実施例５  テアニン含有キャンディーの製造
テアニン（１０ｋｇ）を水１０ｋｇに溶解してテアニン溶液を調製した。次いでグラニュー糖（６４ｋｇ）を水２０ｋｇに溶解しながら１１０℃まで加熱し、テアニン溶液および水飴を加えて、１４５℃まで温度を上げた。次に、火を止め、５０重量％酒石酸（１ｋｇ）および香料（１ｋｇ、高砂香料工業社製）を添加して混合した。７５〜８０℃まで冷却し、成型ローラーで成型し、テアニン含有抗酸化組成物の１例として、テアニン含有キャンディーを製造した。なお、キャンディー中のテアニンの含有量を測定した結果、含有量は１コ１．２ｇで８９．６ｍｇ／ｇであった。
【００６７】
実施例６  テアニン含有ブルーベリー飲料の製造
果糖ブドウ糖（１２ｋｇ）、ブルーベリー濃縮果汁（１ｋｇ）、１／５透明レモン果汁（０．４ｋｇ）、クエン酸Ｎａ（０．０５ｋｇ）およびテアニン（０．１ｋｇ）を水に加え攪拌溶解した。５０重量％クエン酸Ｎａ（結晶）を用いｐＨ３．１に調整し９５℃まで昇温後香料（０．０５ｋｇ、高砂香料工業社製）を加えて全量１００ｋｇになるように水を加えた。一缶１００ｇとなるように缶充填した後に殺菌し、冷却して、テアニン含有抗酸化組成物の１例として、テアニン含有ブルーベリー飲料を製造した。なお、ブルーベリー飲料中のテアニン含有量を測定した結果、含有量は９８．３ｍｇ／１００ｇであった。
【００６８】
実施例７  テアニン含有グレープフルーツ飲料の製造
果糖ブドウ糖液（６ｋｇ）、テアニン（０．１ｋｇ）、ピロリン酸第二鉄（０．０６ｋｇ）、プラセンタエキス（０．０１ｋｇ）およびグレープフルーツ果汁１００％（３０ｋｇ）を水に加え攪拌溶解した。クエン酸Ｎａを用いｐＨ３．１に調製し９５℃まで昇温後香料（０．０５ｋｇ、高砂香料工業社製）を加えて、全量１００ｋｇになるように水を加えた。一缶１００ｇとなるように缶充填した後に殺菌し、冷却して、テアニン含有抗酸化組成物の１例として、テアニン含有グレープフルーツ飲料を製造した。なお、グレープフルーツ飲料中のテアニン含有量を測定した結果、含有量は９６．４ｍｇ／１００ｇであった。１００ｍｌづつ充填して冷却し、テアニン含有グレープフルーツ飲料を製造した。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明の抗酸化組成物は、安全であり、かつ効果的な抗酸化作用を有しているので、食品、化粧品および医薬品として使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１は、スーパーオキサイド（Ｏ２−）に対するテアニンの抗酸化作用を示す。
【図２】図２は、スーパーオキサイド（Ｏ２−）に対するテアニンの抗酸化作用を示す。
【図３】図３は、ヒドロキシラジカル（ＨＯＣｌ）に対するテアニンの抗酸化作用を示す。
【図４】図４は、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）に対するテアニンの抗酸化作用を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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