(57)【要約】      （修正有）【課題】産業廃棄物である黒餡粕の分解と分解酵素および分解酵素生産菌。【解決手段】黒餡粕に含まれる繊維質の分解に有効な酵素ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ５４およびこれらを含むセルラーゼを産生するＢａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌ＥＴ６２、および、黒餡粕に含まれるデンプン質の分解に有効なアミラーゼを産生するＢａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌ＥＴ５３。それら細菌により産生される繊維質分解酵素、セルラーゼ及びアミラーゼ。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の性質を示す黒餡粕に含まれる繊維質の分解酵素。
（１）作用：黒餡粕に含まれる繊維質を分解糖化する。
（２）基質特異性：黒餡粕基質の分解能が高く、ＣＭ−セルロース基質の分解能が低い。
（３）最適反応温度：約５０℃
（４）最適反応pH：約８．０
（５）熱安定性：５０℃、３０分間の熱処理条件で未熱処理での酵素活性の約８０％の酵素活性を有する。
（６）分子量：１８ｋＤａ（ゲルろ過）
【請求項２】
次の性質を示す黒餡粕に含まれる繊維質の分解酵素。
（１）作用：黒餡粕に含まれる繊維質を分解糖化する。
（２）基質特異性：黒餡粕基質の分解能が高く、ＣＭ−セルロース基質の分解能が低い。
（３）最適反応温度：約５０℃
（４）最適反応pH：約８．０
（５）熱安定性：５０℃、３０分間の熱処理条件で未熱処理での酵素活性の約８０％の酵素活性を有する。
（６）分子量：６１ｋＤａ（ゲルろ過）
【請求項３】
次の性質を示す黒餡粕に含まれる繊維質の分解酵素。
（１）作用：黒餡粕に含まれる繊維質を分解糖化する。
（２）基質特異性：黒餡粕基質の分解能が高く、ＣＭ−セルロース基質の分解能が低い。
（３）最適反応温度：５０℃
（４）最適反応pH：８．０
（５）熱安定性：５０℃、３０分間の熱処理条件で未熱処理での酵素活性の８０％の酵素活性を有する。
（６）分子量：９６ｋＤａ（ゲルろ過）
【請求項４】
黒餡粕に含まれる繊維質の分解に有効な酵素を含むセルラーゼの産生能を備えたバチルス属に属する受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３８９として寄託されているバチルスＥＴ６２。
【請求項５】
黒餡粕に含まれるデンプン質の分解に有効な酵素を含むアミラーゼの産生能を備えたバチルス属に属する受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３８８として寄託されているバチルスＥＴ５３。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、黒餡の製造過程で産出される黒餡粕の分解に有効な酵素およびこの酵素を産生する微生物に関する。
【背景技術】
【０００２】
黒餡製造における副産物として産出される黒餡粕は、現在、１年間あたり約３万トンが産業廃棄物として排出され、その処理方法として焼却による方法で処分されている。
しかしながら、前記焼却による処理方法では、二酸化炭素の排出によって周辺環境へ悪影響を与える可能性が有り、また処理コストが高くその負担が大きいものであった。
【０００３】
ところで、黒餡粕中の主成分（乾燥状態）は、繊維質約９３％、デンプン質約６％、たんぱく質約０．４％である。
そこで、本願発明者は、繊維質の分解に有効な酵素であるセルラーゼの産生能を有する公知の微生物（トリコデルマ  リーゼ  （Tricoderma rieesei））と、デンプン質の分解に有効な酵素であるアミラーゼの産生能を有する公知の微生物（アスペルギルス  オリゼ（Aspergillus oryzea））を用いて黒餡粕の分解を試みた。
【０００４】
具体的には、トリコデルマ  リーゼ（Tricoderma rieesei）由来培養上清を用いた繊維質の分解率では、ＣＭ−セルロースが１８％の分解率であるのに対して、黒餡粕の繊維質では４％の分解率であった。
また、アスペルギルス  オリゼ（Aspergillus oryzea）由来培養上清を用いたデンプン質の分解率では、バレイショデンプンを基質とした場合では８９％の分解率、白餡粕のデンプンを基質とした場合では８４％の分解率であるのに対して、黒餡粕のデンプンを基質とした場合では２１％の分解率であった。
つまり、前記公知の酵素産生微生物では、黒餡粕の分解処理能力が低く、現実的に採用するには能力的に不足している。
本願発明者は、黒餡粕の分解に優れた能力を有する酵素およびこの酵素を産生する微生物を探索するために、鋭意研究を重ねた結果、目的の能力を有する酵素を発見し、この酵素を産生する微生物の単離に成功し、本発明に至ったものである。
なお、本願発明に関連する先行技術文献に関しては、本願出願人が知る限りにおいて無い。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、産業廃棄物である黒餡粕の分解能力に優れた微生物の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記した目的を達成するために本発明は、下記の性質を示す黒餡粕に含まれる繊維質の分解酵素とする。
【０００７】
請求項１に記載の酵素は、
（１）作用：黒餡粕に含まれる繊維質を分解糖化する。
（２）基質特異性：黒餡粕基質の分解能が高く、ＣＭ−セルロース基質の分解能が低い。
（３）最適反応温度：５０℃
（４）最適反応pH：８．０
（５）熱安定性：５０℃、３０分間の熱処理条件で未熱処理での酵素活性の８０％の酵素活性を有する。
（６）分子量：１８ｋＤａ（ゲルろ過）
という性質を示す。
【０００８】
請求項２に記載の酵素は、
（１）作用：黒餡粕に含まれる繊維質を分解する。
（２）基質特異性：黒餡粕基質の分解能が高く、ＣＭ−セルロース基質の分解能が低い。
（３）最適反応温度：５０℃
（４）最適反応pH：８．０
（５）熱安定性：５０℃、３０分間の熱処理条件で未熱処理での酵素活性の８０％の酵素活性を有する。
（６）分子量：６１ｋＤａ（ゲルろ過）
という性質を示す。
【０００９】
請求項３に記載の酵素は、
（１）作用：黒餡粕に含まれる繊維質を分解する。
（２）基質特異性：黒餡粕基質の分解能が高く、ＣＭ−セルロース基質の分解能が低い。
（３）最適反応温度：５０℃
（４）最適反応pH：８．０
（５）熱安定性：５０℃、３０分間の熱処理条件で未熱処理での酵素活性の８０％の酵素活性を有する。
（６）分子量：９６ｋＤａ（ゲルろ過）
という性質を示す。
【００１０】
黒餡粕に含まれる繊維質の分解には、前記請求項１乃至３記載の酵素が含まれるセルラーゼ産生能を有するバチルス属に属する黒餡粕分解微生物を用いる。
具体的には、バチルス属に属する受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３８９として寄託されているバチルス（Bucillus sp.）ＥＴ６２（以下「ＥＴ６２」という）である（請求項４）。
また、黒餡粕に含まれるデンプン質の分解には、この分解に有効な酵素が含まれるアミラーゼ産生能を有するバチルス属に属する黒餡粕分解微生物を用いる。
具体的には、アミラーゼ産生能を有する微生物は、バチルス属に属する受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３８８として寄託されているバチルス（Bucillus sp.）ＥＴ５３（以下「ＥＴ５３」という）である（請求項５）。
【発明の効果】
【００１１】
請求項１〜請求項３の発明における酵素は、後記するように黒餡粕の分解に高い活性を有していることから、当該繊維質の分解に有効な酵素であるとともに、繊維質の分解の過程で糖分が生成されるので、単なる産業廃棄物としての黒餡粕から、燃料、工業原料、薬品などの原料となる有用物質を生成するのに有効な酵素である。
請求項４の発明のＥＴ６２は、後記するように、黒餡粕に含まれる繊維質の減少率が高いことから、高温（５０℃）下で黒餡粕に含まれる繊維質の分解に有効な酵素を含むセルラーゼを産生している。
したがって、本願発明のＥＴ６２は、黒餡粕に含まれる繊維質の分解に有効な微生物である。
また、本願発明のＥＴ６２は、繊維質の分解の過程で糖分が生成されるので、単なる産業廃棄物としての黒餡粕から、燃料、工業原料、薬品などの原料となる有用物質を生成するのに有効な微生物である。  
【００１２】
請求項５の発明のＥＴ５３は、後記するように、黒餡粕に含まれるデンプン質の分解率が高いことから、高温（５０℃）下で黒餡粕に含まれるデンプン質の分解に有効な酵素であるアミラーゼを産生している。
したがって、本願発明のＥＴ５３は、黒餡粕に含まれるデンプン質の分解に有効な微生物である。
また、本願発明のＥＴ５３は、デンプン質の分解の過程で糖分が生成されるので、単なる産業廃棄物としての黒餡粕から、燃料、工業原料、薬品などの原料となる有用物質を生成するのに有効な微生物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本願発明のＥＴ６２およびＥＴ５３は、以下に示す菌学的性質を有している。
【００１４】
（ＥＴ６２）
１．好気性グラム陽性桿菌
２．芽胞（＋）
３．カタラーゼテスト（＋）
４．レシチナーゼ（−）
５．ＶＰ（−）
６．インドール（−）
７．硝酸塩（−）
８．クエン酸（−）
９．マルトース（−）
１０．溶血性（−）
【００１５】
（ＥＴ５３）
１．好気性グラム陽性桿菌
２．芽胞（＋）
３．カタラーゼテスト（＋）
４．レシチナーゼ（−）
５．ＶＰ（−）
６．インドール（−）
７．硝酸塩（−）
８．クエン酸（−）
９．マルトース（−）
１０．溶血性（−）
【００１６】
また、遺伝学的解析方法として１６ＳｒＤＮＡ塩基配列を用いた微生物同定法を採用し、ＥＴ６２およびＥＴ５３から回収したＤＮＡを増幅し、これをシーケンスを使用して解析したところ、バチルス（Bucillus sp.）との相同性が９７％であった。
なお、前記解析に用いた試薬および器具は以下のとおりである。
【００１７】
１．ＤＮＡ抽出
ＤＮＡ抽出キットには、BIO-RAD社製、AquaPure Genomic ＤＮＡIsolation Kitを用い、Lytic Enzyme Solutionには、フナコシ社製のものを用いた。
２．ＰＣＲ法
プライマーには、Amersham PHalmacia Biotec社製、10-28F（5'-agtttgatcmtggctca-3'）および1510-R（5'-ggctaccttgttacga-3'）を用いた。１０×ＰＣＲ bufferおよびdNTP,Tacには、Takara Ex Taqを用いた。サーマルサイクラーには、サーモバイオアナリシスジャパン（株）製ＰＣＲ Ｅｘｐｒｅｓｓを用いた。
３．ＰＣＲ産物の精製
ＰＣＲ産物の精製には、株式会社キアゲンのQIAquick ＰＣＲ Purification Kit（５０）を用いた。
４．サイクルシーケンス
プライマーには、日清紡（株）製IRD800 Infrared Dyeを用いた。A,C,G,T各溶液には、Amersham Biosciences社製 DYEnamic Direct Cycle Sequencing Kitを用いた。
５．ゲル板作成
尿素には、Invitrogen社製 ultra PURE Ureaを用いた。アクリルアミド溶液には、BMA社製 LONG Ranger 50％ gel solutionを用いた。10w/v% Ammonium Peroxodisulfate Solution、N,N,N',N',‐テトラジメチルジアミンには、和光純薬（株）製の試薬を用いた。
６．シーケンシング
ＤＮＡシーケンサーには、（株）ALOKA LI-COR 4000Lを用いた。
７．ＰＣＲ産物の確認（アガロース電気泳動法）
アガロースには、和光純薬工業（株）製Agarose-ｌを用いた。Loading Dyeには、東洋紡（株）製6×Loading Dyeを用いた。マーカーには、東洋紡（株）製Loading Quick λ/EcoRI＋HindＩＩＩを用いた。電気泳動装置には、（株）アドバンス製Mupid-２を用いた。
【００１８】
以上のように、バチルスＥＴ６２およびバチルスＥＴ５３は共に、好気性グラム陽性桿菌であり、芽胞およびカタラーゼテストが陽性である顕著な特徴およびその相同性から判断してバチルス属に属する微生物と同定した。
なお、それぞれバチルス（Bucillus sp.）ＥＴ６２、バチルス（Bucillus sp.）ＥＴ５３と命名し、平成15年6月25日独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託され、バチルス（Bucillus sp.）ＥＴ６２には受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３８９が、バチルス（Bucillus sp.）ＥＴ５３には受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３８８がそれぞれ付与されている。
【実施例】
【００１９】
本発明のＥＴ６２とＥＴ５３は、下記のように単離した。
【００２０】
試験管に蒸留水５mlと黒餡粕０．０５ｇとを加え、１２０℃で１５分間高圧蒸気滅菌し、pH７．０に調整した１％黒餡粕液体培地に、採取した土壌を０．０５ｇ加え、５０℃恒温下で１２０spmとして４日間振とう培養した。
前記で得られた集積培養液１００uｌを、黒餡粕１．０％、寒天４．０％の組成とした５％黒餡粕寒天培地上に植菌し、これを５０℃恒温下で２日間静置培養してコロニー単離を行った。
【００２１】
前記で得られた単離株菌を１％黒餡粕液体培地に植菌し、５０℃恒温下で２日間静置培養を行い、培養液の濁度測定を行うことによって、単離株菌の資化能評価を行った。
前記で得られた株菌の培養上清を１％黒餡粕液体培地に加え、５０℃恒温下で加水分解反応を行い、反応後の溶液についてデンプン濃度をヨウ素デンプン法により経時的に測定した。（図１参照）
なお、図１の分解率の数値は反応開始６時間後のものである。
その結果、デンプン分解率の高い株菌（ＥＴ５３、ＥＴ５９、ＥＴ６９と命名）を３株得た。
デンプン分解率については、アスペルギルス  オリゼ（Aspergillus  oryzea）が２１％の分解率であるのに対して、ＥＴ５３で５８％、ＥＴ５９で４５％、ＥＴ６９で４７％の分解率であった。
この数値から判断して、これらの３株は、黒餡粕に含まれるデンプン質の分解に有効なアミラーゼの産生能を有する微生物であり、その中でもＥＴ５３が最もアミラーゼの産生能が優れている微生物であることが証明された。
また、ＥＴ５３のデンプン分解率の数値から判断すれば、当該ＥＴ５３は、還元糖の生成に優れていると推察できる。
【００２２】
前記ＥＴ６２、ＥＴ６４、ＥＴ６５は、デンプン分解率が１０％以下であったが（図１参照）、これらは、培養上清濁度が０．６以上という高い数値（図示せず）を示した。
つまり、これらの株菌は黒餡粕の繊維質の資化分解に有効なセルラーゼを産生していることが推察される。
そして、１％黒餡粕液体培地に前記ＥＴ６２、ＥＴ６４、ＥＴ６５の培養上清を添加して、そのときのデンプン分解量および還元糖生成量（Somogi-Nelson法）を測定した。（図２参照）
その結果、アスペルギルス  オリゼ（Aspergillus  oryzea）のデンプン分解量が０．６mgに対して還元糖生成量が０．４mgであったが、前記ＥＴ６２、ＥＴ６４、ＥＴ６５のデンプン分解量に対する還元糖生成量が、ＥＴ６２では６倍、ＥＴ６４では４倍、ＥＴ６５では５倍であることが示され、これら３株由来の培養上清には、黒餡粕に含まれる繊維質を分解するのに有効なセルラーゼが含まれていることが示唆された。
【００２３】
さらに、前記ＥＴ６２、ＥＴ６４、ＥＴ６５由来の培養上清を用いて、黒餡粕に含まれる繊維質の分解能を調査してセルラーゼ活性評価を行った。
測定方法は、可溶性デンプンを除去した１％黒餡粕液体培地に前記３株由来の培養上清を添加し、５０℃恒温下で６時間反応を行い、反応終了後の反応液を遠心分離することによって、残存黒餡粕を分離し、分離した残存黒餡粕をろ過して乾燥し、乾燥後の残存重量を測定した。
この測定結果に基づいて、〔数１〕に従って黒餡粕重量減少率を、〔数２〕に従って還元糖生成率を算出した。
【００２４】
【数１】
2005052140.tif 000002
【００２５】
【数２】
2005052140.tif 000003
【００２６】
算出した結果、黒餡粕重量減少率は、トリコデルマ  リーゼ（Tricoderma  rieesei）では４％であるのに対して、ＥＴ６２では１５％、ＥＴ６４では１４％、ＥＴ６５では１０％であった。（図３参照）
また、還元糖生成率は、トリコデルマ  リーゼ（Tricoderma  rieesei）では、２％であるのに対して、ＥＴ６２では１４％、ＥＴ６４では１２％、ＥＴ６５では９％であった。（図４参照）
つまり、ＥＴ６２、ＥＴ６４、ＥＴ６５は、公知のトリコデルマ  リーゼ（Tricoderma  rieesei）に比較して、黒餡粕に含まれる繊維質の分解に有効なセルラーゼ産生能に優れた微生物であることが証明され、しかも、有用物質として利用できる糖の生成が効率的である微生物であることが証明された。
そして、前記３株の中でも、ＥＴ６２が最もセルラーゼ産生能および糖生成に優れていることが証明された。
【００２７】
前記セルラーゼ産生能および糖生成に優れたＥＴ６２の性質については以下のとおりでる。
公知のトリコデルマ  リーゼ（Tricoderma  rieesei）他由来のセルラーゼでは、反応温度が２４℃と比較的低温側で活性を示し、５０℃の比較的高温側で活性が失活してしまうが、ＥＴ６２由来のセルラーゼでは反応温度が５０℃において最大活性を示した。（図５参照）
また、ＥＴ６２由来のセルラーゼは、pH８において比活性２．１unitのセルラーゼ活性を示し、さらに、pH１０〜pH１２でもpH８と同等のセルラーゼ活性を示したことから、ＥＴ６２由来のセルラーゼは、アルカリ側でも酵素活性が失活せず、最適反応pHはアルカリ側に広範囲である。（図６参照）
【００２８】
以上説明したとおり、本願発明のＥＴ６２は、高温（５０℃）下で黒餡粕に含まれる繊維質の分解と還元糖の生成に優れた微生物であり、本願発明のＥＴ５３は、高温（５０℃）下で黒餡粕のデンプン質の分解と還元糖の生成に優れた微生物である。
【００２９】
次に、黒餡粕に含まれる繊維質の分解に有効なＥＴ６２由来の酵素を以下の方法で精製するとともに、その性質を調べた。
【００３０】
セルラーゼの精製は、１％黒飽粕液体培地10LにＥＴ６２株を植菌し、５０℃恒温下、１２０rpmの条件にて、３日間振とう培養を行ない、得られた培養液について、４℃恒温下、7000×gにて１５分間遠心分離を行なうことにより菌体と上澄液とを分離した。
得られた上澄液に、攪拌しながら飽和度４０%となるように硫酸アンモニウムを添加し、これを４℃恒温下で一夜静置し、４℃恒温下、15000×gにて２０分間遠心分離することにより沈殿画分を除去した。
この上澄液に、飽和度６０%となるように硫酸アンモニウムを添加し、タンパク質成分を沈殿させ、得られた沈殿物を20mM Tris-HCl緩衝溶液(pH8.5)10mLに溶解したタンパク質溶液の透析を行なった。
透析後のタンパク質溶液10mLをカラムに添加し、さらに、lM NaC1を含む20mM Tris-HCl緩衝溶液(pH8.5)50mLにて粗酵素液の溶出を行い、得られたイオン交換溶出液1.5mLについてカラムにかけてゲルろ過を行なって精製した。
ゲルろ過で分取された画分0.7mLにメルカプトエタノール200μLを加え、熱水(90℃)中に2分間放置することにより、ゲルろ過画分の変性(還元処理)を行ない、還元処理後の試料についてカラムにかけてゲルろ過を行なって精製した。
なお、ゲルろ過の展開条件は、カラム直径０．９ｃｍ、カラム長さ４２．５ｃｍ、ゲル体積２７ｃｍ２、流速０．１３ｍｌ／ｍｉｎ、展開溶液20mM Tris-HClである。
ゲルろ過後に得られたのタンパク質溶液を黒館粕由来のセルロースを基質として反応を行なった場合、硫安塩析、イオン交換クロマトグラフィー及びゲルろ過の組み合わせにより、電気泳動的に単一バンドまで精製されたタンパク質が5つのフラクションで得られた(以下、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４という)。
これらのフラクションについてセルラーゼ活性を測定した結果、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４において、黒鮨粕由来のセルロースを基質とした反応においてグルコース濃度の経時的な増加が観測された。
【００３１】
前記で得られたＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４の基質特異性は、これらによるＣＭ−セルロースを基質とした場合と、黒餡粕を基質とした場合のセルラーゼ活性を測定することにより調べた。
その結果、ＣＭ−セルロースを基質とした場合では、0.9u/mg proteinから5.4u/mg proteinであるのに対し、黒舘粕を基質とした場合では、ＮＯ．２８で16u/mg protein、ＮＯ．３５で30u/mg protein、ＮＯ．５４で27u/mg proteinの比活性を示したことから、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４は、ＣＭ−セルロースの分解糖化では活性が低く、黒飽粕の分解糖化に高い活性を有することが示された（図７参照）。
【００３２】
また、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４の最適反応温度は、種々の反応温度におけるセルラーゼ活性を測定することにより調べた。
その結果、反応温度５０℃でのセルラーゼ活性が、ＮＯ．２８で16u/mg protein、ＮＯ．３５で21u/mg protein、ＮＯ．５４で22u/mg proteinの最も高い比活性を示したことから、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４いずれにおいても最適反応温度は、５０℃付近である（図８〜図１０参照）。
【００３３】
また、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４の最適反応pHは、種々のpH条件にてセルラーゼ活性を測定することにより調べた。
その結果、pH８．０では、ＮＯ．２８で13u/mg protein、ＮＯ．３５で30u/mg protein、ＮＯ．５４で27u/mg proteinの最も高い比活性を示したことから、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４いずれにおいても最適反応pHは、pH８．０付近であることが示された（図１１〜図１３参照）。  
【００３４】
また、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４の熱安定性は、黒露粕を基質とした場合の熱未処理の比活性と50℃、30分間の熱処理条件における加熱処理後の比活性とを調べた。
その結果、ＮＯ．２８で未処理の場合16u/mg protein、加熱処理後の場合12u/mg protein、ＮＯ．３５で未処理の場合21 u/mg protein、加熱処理後の場合18u/mg protein、ＮＯ．５４で未処理の場合22 u/mg protein、加熱処理後の場合18u/mg proteinであり、いずれにおいても未処理の場合の80%の酵素活性を示したことから、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４は、５０℃、３０分間の熱処理条件下において熱安定性を有することが示された（図１４参照）。
【００３５】
また、ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４の分子量は、これら酵素の還元処理後にゲルろ過した状態において電気泳動で分析した。
その結果、ＮＯ．２８で９６ｋＤａ、ＮＯ．３５で６１ｋＤａ、ＮＯ．５４で１８ｋＤａであることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本願発明の酵素であるＥＴ６２由来のＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４は、黒餡粕に含まれる繊維質の分解糖化の他、製紙スラッジの分解糖化にも高い効果を有することが示された。
【００３７】
前記ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４における製紙スラッジ分解について、ＮＯ．２８でllu/mg protein、ＮＯ．３５で6u/mg protein、ＮＯ．５４で5u/mg proteinの比活性を示したことから、これらＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４は、製紙スラッジの分解糖化にも有効な酵素である（図７参照）。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】デンプン分解率を示す。
【図２】デンプン分解量および還元糖生成量を示す。
【図３】黒餡粕重量減少率を示す。
【図４】還元糖生成率を示す。
【図５】反応温度を示す。
【図６】反応pHを示す。
【図７】ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４の基質特異性を示す。
【図８】ＮＯ．２８の最適反応温度を示す。
【図９】ＮＯ．３５の最適反応温度を示す。
【図１０】ＮＯ．５４の最適反応温度を示す。
【図１１】ＮＯ．２８の最適反応pHを示す。
【図１２】ＮＯ．３５の最適反応pHを示す。
【図１３】ＮＯ．５４の最適反応pHを示す。
【図１４】ＮＯ．２８、ＮＯ．３５、ＮＯ．５４の熱安定性を示す。
【図１】
2005052140.tif 000004
【図２】
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【図３】
2005052140.tif 000006
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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