(57)【要約】【課題】  歯面での歯周病関連細菌の共凝集を抑制することによって歯周病関連細菌の口腔内への付着・定着を防止し、歯周病関連疾患の予防・改善に有用な口腔用製剤を提供する。【解決手段】  リジン若しくはヒスチジン又はその塩を有効成分とするフソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌の共凝集抑制剤。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リジン若しくはヒスチジン又はその塩を有効成分とするフソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌の共凝集抑制剤。
【請求項２】
歯周病関連細菌が、アクチノバシルス属、ポルフィロモナス  属又はプレボテラ属細菌である請求項１記載の共凝集抑制剤。
【請求項３】
歯周病関連細菌が、アクチノバシルス  アクチノマイセテムコミタンス、ポルフィロモナス  ギンギバリス又はプレボテラ  インターメディアである請求項１記載の共凝集抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、口腔内での歯周病関連細菌の共凝集を抑制する共凝集抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯周病は、病原性細菌の歯面への付着、定着により発症へと向かう口腔内感染症である。歯周病関連細菌の歯面への定着機構は、先ず、唾液の薄膜（ペリクル）によって覆われたエナメル質表面に、ストレプトコッカス  オラリス、ストレプトコッカス  サンガイス、ストレプトコッカス  ゴードニィ、アクチノマイセス  ナエスランディ等の初期定着細菌が吸着する。そして、これら初期定着細菌は増殖に伴って互いに共凝集（co-aggregation）を起こし、歯垢（プラーク）の形成を開始する。次いで、プラークの成熟化に伴い、微生物菌叢が通性嫌気性菌から偏性嫌気性菌へと遷移し、フソバクテリウム  ヌクレアタムに代表される偏性嫌気性菌が初期定着細菌に共凝集する。そして、当該フソバクテリウム  ヌクレアタムにアクチノバシルス  アクチノマイセテムコミタンス、ポルフィロモナス  ギンギバリス、プレボテラ  インターメディア等の歯周病関連細菌が共凝集し、定着すると考えられている。
【０００３】
共凝集は、細菌同士の非特異的静電気的相互作用やレクチン・レセプター型相互作用、粘着性多糖合成による付着作用、非特異性疎水的相互作用によって引き起こされるものであり、病原性細菌の歯面への定着においては、特に重要な役割を果たしている。
【０００４】
口腔内感染症の予防手段としては、従来から、病原性細菌の歯面への定着を阻害することが有力であると考えられており、例えば特定のアミノ糖を用いて口腔内細菌の共凝集を阻害し歯垢形成を抑制すること（例えば、特許文献１参照）、Ｓ．サンギスより単離されたオリゴ糖類を用いて歯垢の構築を阻害すること（例えば、特許文献２参照）、キサンタンガム、ガム・トラガカンス、グアーガム等を用いて細菌凝集を阻害すること（例えば、特許文献３参照）、等が報告されている。また、リジン又はその誘導体と抗菌活性を示す化合物と界面活性剤からなる抗菌製剤が微生物の集合体や塊に対して抗菌効果を発揮することが報告されている（例えば、特許文献４参照）。
【特許文献１】特開平６−２４９４８号公報
【特許文献２】米国特許第７，３４９，７７２号明細書
【特許文献３】米国特許第４，８５５，１２８号明細書
【特許文献４】特開平８−１５１３２５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、歯面での歯周病関連細菌の共凝集を抑制することによって歯周病関連細菌の歯面への付着・定着を防止し、歯周病関連疾患の予防・改善に有用な口腔用製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、プラーク形成に関与する口腔内細菌の共凝集に着目し、共凝集を抑制する成分について検討したところ、リジン若しくはヒスチジン又はその塩が、初期定着細菌に付着するフソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌の共凝集抑制作用を有し、歯面への歯周病関連細菌の付着・定着を防ぎ、歯周病関連疾患の予防・改善に有用であることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、リジン若しくはヒスチジン又はその塩又は誘導体を有効成分とするフソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌の共凝集抑制剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の共凝集阻害剤は、フソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌との共凝集を抑制し、歯周病関連細菌の歯面への付着を防止できる。従って、これを用いることにより、歯周病、歯槽膿漏等の歯周病関連疾患を予防・改善することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の共凝集抑制剤の有効成分であるリジン及びヒスチジンは、Ｌ体、Ｄ体、ＤＬ体の何れでもよいが、好ましくはＬ体である。リジン若しくはヒスチジンの塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、酢酸塩等が挙げられ、このうち塩酸塩が好ましい。
【００１０】
斯かるリジン若しくはヒスチジン又はその塩としては、Ｌ-リジン、Ｌ-リジンの塩、Ｌ-ヒスチジンが好ましく、特にＬ-リジン塩酸塩が好ましい。
尚、リジン若しくはヒスチジン又はその塩は、常法により化学合成することも可能であり、また市販品を使用してもよい。
【００１１】
リジン若しくはヒスチジン又はその塩は、後記実施例に示すように、フソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌の共凝集を抑制する。
フソバクテリウム  ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）は、プラーク形成において、ペリクルによって覆われた歯面上に付着・凝集した初期定着細菌（例えば、ストレプトコッカス  オラリス(Streptococcusoralis)、ストレプトコッカス  サンガイス（Streptococcus sanguis）、ストレプトコッカス  ゴードニィ(Streptococcusgordonii)、アクチノマイセス  ナエスランディ（Actinomyces naeslundii）等）に付着する偏性嫌気性菌である。歯周病関連細菌の歯面への付着・定着は、このフソバクテリウム  ヌクレアタムが歯周病関連細菌と共凝集を起こすことによりなされると考えられていることから、フソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌の共凝集を抑制すれば、歯周病関連細菌の歯面への付着・定着を防止することが可能となる。
【００１２】
ここで、歯周病関連細菌としては、例えば、アクチノバシルス  アクチノマイセテムコミタンス（Actinobacillus actinomycetemcomitans）等のアクチノバシルス属細菌、ポルフィロモナス  ギンギバリス (Porphyromonas gingivalis)等のポルフィロモナス属細菌、プレボテラ  インターメディア (Prevotellaintermedia)等のプレボテラ属細菌他、バクテロイデス  フォーサイサス（Bacteroides fosythus）、トレポネーマ  デンティコーラ（Treponemadenticola）等が挙げられる。
【００１３】
このように、リジン若しくはヒスチジン又はその塩は、歯周病関連細菌の歯面への付着・定着を防止することから、歯周病、歯槽膿漏等の歯周病関連疾患に対して予防改善効果を発揮する口腔用製剤として有用である。
【００１４】
すなわち、本発明の共凝集抑制剤は、通常の口腔用組成物に用いられる成分、例えば発泡剤、発泡助剤、界面活性剤、研磨剤、増量剤、甘味剤、保存料、薬効成分、ｐＨ調整剤、粘着剤、顔料、色素、香料等を適宜配合することにより、歯周病関連疾患に対する予防改善効果をもった歯磨、液状歯磨、液体歯磨、潤製歯磨、洗口剤、マウススプレー、チューインガム等とすることができる。
【００１５】
ここで、薬効成分としては、フッカナトリウム、トリクロサン、クロルヘキシジン、塩化ベンゼトニウム等の殺菌剤、ポリフェノール類（グルコシルトランスフェラーゼ阻害作用）等の酵素阻害剤、インドメタシン、グリチルリチン酸ジカリウム等の抗炎症剤等が挙げられ、通常口腔用製剤として用いられるものを用いることができる。
【００１６】
また、甘味料としては、オリゴ糖類又は糖アルコール類、例えば、キシロオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、乳果オリゴ糖、ラクチュロース、ラフィノース、トレハロース、グルコシルシュクロース、マルトシルシュクロース、パラチノース、マルチトール、エリスリトール、還元パラチノース、キシリトール等が好適な例として挙げられる。
【００１７】
尚、斯かる共凝集抑制剤中のリジン若しくはヒスチジン又はその塩の含有量は、製造上コストの点から０．００１〜１０重量％が好ましく、特に０．０１〜５重量％であるのが好ましい。
【実施例】
【００１８】
＜共凝集抑制試験＞
（１）使用菌株
歯周病関連細菌（Porphyromonas gingivalis ATCC33277（Ｐｇ）；Prevotella intermediaATCC25611（Ｐｉ）；Actinobacillus actinomycetemcomitans ATCC33384（Ａａ））と口腔内細菌（Fusobacteriumnucleatum ATCC25586（Ｆｎ））を用いた。
【００１９】
（２）培養及び洗浄
歯周病関連細菌は、K1, Hシェドラーブロス（ベクトンディッキンソン社製）、Fusobacteriumnucleatum（Ｆｎ）はＧＡＭブイヨン（日水製薬株式会社）で37℃、10％ＣＯ2，10％Ｈ2，80％Ｎ2の条件下で対数増殖期から定常期まで培養し、5000rpm、5分遠心分離を行い集菌した。その後、PBSバッファー(144mg/L KH2PO4, 9g/L NaCl, 795mg/L Na2HPO4, pH7.4)で3回遠心洗浄後(5000rpm,5分)、OD600nmで1.0に調製した。
【００２０】
（３）チューブ法
共凝集抑制素材評価を行う場合、試験管に素材の最終濃度が 100ｍＭになるように 200μＬ添加後、Fusobacteriumnucleatum（Ｆｎ）を 600μＬ分注攪拌し、歯周病関連細菌 600μＬを添加し、混合攪拌後、19時間4℃で保存後、目視で共凝集反応を確認した。
【００２１】
（４）96穴マイクロプレートを用いた共凝集測定法
96穴マイクロプレートに各種素材が最終濃度 100ｍＭになるように 20μＬ添加後、Fusobacteriumnucleatum（Ｆｎ）を  60μＬ分注攪拌し、歯周病関連細菌  60μＬを添加した。その後、マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製） を用い1分間隔で30分間吸光度（OD600nm）を測定し、吸光度の変化率Vmax(mOD/min)を計算し相対共凝集率を算出することにより共凝集反応を測定した。
【００２２】
実施例１
Ｌ-ヒスチジン（和光純薬工業）又はＬ-リジン塩酸塩（和光純薬工業）及び比較として水、Ｌ-アルギニン（和光純薬工業）又はＤ-ガラクトース（和光純薬工業）を用い、口腔内細菌であるFusobacteriumnucleatum（Ｆｎ）と歯周病関連細菌であるPrevotella intermedia（Ｐｉ）の共凝集抑制効果を96穴マイクロプレート法で測定した。その結果、水、Ｄ-ガラクトース、Ｌ-アルギニンでは相対共凝集率が 100％であったが、Ｌ-ヒスチジンでは 84％、Ｌ-リジン塩酸塩では 20％となり、Ｌ-ヒスチジン又はＬ-リジン塩酸塩に共凝集抑制効果が認められた（図１）。さらに、リジンの共凝集抑制効果をチューブ法で検討したところ、水においては、チューブの底に凝集物が出現したが、Ｌ-リジン塩酸塩では凝集物が出現せず、96穴マイクロプレート法と同様に高い共凝集抑制効果がみられた（図２）。
【００２３】
実施例２
Ｌ-リジン塩酸塩（和光純薬工業）及び比較としてＰＢＳ、Ｄ-ガラクトース（和光純薬工業）各100ｍＭを用い、口腔内細菌であるFusobacteriumnucleatum（Ｆｎ）と歯周病関連細菌であるPorphyromonas gingivalis（Ｐｇ）及びActinobacillusactinomycetemcomitans（Ａａ）の共凝集抑制効果をチューブ法で測定した。その結果、ＰＢＳ、Ｄ-ガラクトースではチューブの底に凝集物が出現したが、Ｌ-リジン塩酸塩では凝集物が出現せず、Ｌ-リジン塩酸塩には高い共凝集抑制効果がみられた（図３、図４）。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、ＦｎとＰｉの共凝集抑制効果（マイクロプレート法）を示す図である。
【図２】図２は、ＦｎとＰｉの共凝集抑制効果（チューブ法）を示す図である。
【図３】図３は、ＦｎとＰｇの共凝集抑制効果（チューブ法）を示す図である。
【図４】図４は、ＦｎとＡａの共凝集抑制効果（チューブ法）を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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