(57)【要約】【課題】エビネ属またはガンセキラン属、その他の偽球茎を有するラン科植物に属する植物または搾汁からの抽出物であって、抗チロシナーゼ活性のある美白剤を提供する。【解決手段】エビネの花、根、茎、葉もしくは全草を水洗、カッターで細切りしたのち、水またはアルコール類で抽出する。あるいは細片を圧搾して搾汁を得る。水もしくはアルコール抽出液または搾汁もしくは搾汁からの抽出液から、各種クロマトグラフィーを組み合わせて、分画溶出を繰り返し、２−Ｓ−β−Ｄ−グルコピラノシル−３−ο−β−Ｄ−グルコピラノシル−２−チオール−３−ヒドロキシインドール（カラントサイドＢ）原液を得る。この原液に、通常の美白剤に一般的に使用されているビタミン類等の補助的栄養機能成分を適宜配合して美白剤を得る。この美白剤は、天然由来のため無毒性、無刺激性である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−Ｓ−β−Ｄ−グルコピラノシル−３−ο−β−Ｄ−グルコピラノシル−２−チオール−３−ヒドロキシインドールを有効成分とすることを特徴とする美白剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美白剤、特にエビネ属、ガンセキラン属、その他の偽球茎を有するラン科植物から単離されたインドール配糖体を有効成分とする美白剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、インドール配糖体の皮膚外用剤に関しては、下記の文献が知られている。特許文献１及び特許文献２には、エビネランから単離された３−ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル−３−ヒドロキシインドール（カラントサイドＡ）が強い抗チロシナーゼ活性を持ち、美白作用があることが開示されている。特許文献３には、カラントサイドＡの酵素分解物質である３−ヒドロキシインドールが抗チロシナーゼ活性を持ち、美白剤として使用できることが開示されている。
【０００３】
一方、特許文献４には、エビネランから２−Ｓ−β−Ｄ−グルコピラノシル−３−ο−β−Ｄ−グルコピラノシル−２−チオール−３−ヒドロキシインドール（カラントサイドＢ）を単離、新規化合物として同定した発明が開示されている。同文献には、またカラントサイドＢが皮膚血流量増進作用を有し、育毛効果をもつことを示唆している。
【０００４】
【特許文献１】特開平１０−２６５４９２号公報
【特許文献２】特開平１１−１９３２１１号公報
【特許文献３】特開平２０００−１６９２２号公報
【特許文献４】特開平１０−２６５４９３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者は、エビネ属、ガンセキラン属、その他の偽球茎を有するラン科植物由来のインドール配糖体について鋭意研究の結果、カラントサイドＢにも、カラントサイドＡが示す抗チロシナーゼ活性及び美白作用があることを見出し、本発明にいたった。
【０００６】
本発明は、天然由来の抗チロシナーゼ活性をもつ美白剤を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の美白剤は、化１に示す２−Ｓ−β−Ｄ−グルコピラノシル−３−ο−β−Ｄ−グルコピラノシル−２−チオール−３−ヒドロキシインドール（カラントサイドＢ）を有効成分とすることを特徴としている。
【０００８】
【化１】
2005179217.tif 000002
【０００９】
カラントサイドＢは、エビネ属、ガンセキラン属、その他の偽球茎を有するラン科植物の抽出液、搾汁または搾汁からの抽出液から単離することができる。例えば、エビネランからアルコールで熱時抽出して抽出エキスを得、抽出エキスを酢酸エチルと水（１：１）で分配抽出して、その水移行部から、クロマト溶出、分画を繰り返し、カラントサイドＢを得る。
【００１０】
このカラントサイドＢには、通常の美白剤、あるいはその他の皮膚外用剤に用いられている補助的栄養機能成分として、ビタミン類、アミノ酸類、動植物油等を適宜選択して用いることができる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の美白剤は、エビネ由来のインドール配糖体に共通する抗チロシナーゼ活性のあるカラントサイドＢを含有しており、優れた美白作用がある。特に、天然由来であるため、その作用がマイルドで毒性がなく、長期の反復使用に適しており、皮膚ケア剤としての効能も期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の原料ラン科植物のエビネ属に属する植物としては、次のものを例示することができる。
（０１）ジエビネ型：ジエビネ（Ｃ．ｄｉｓｃｏｌｏｒ）、キエビネ（Ｃ．ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ）、キリシマエビネ（Ｃ．ａｒｉｓｔｕｌｉｆｅｒａ）、アマミエビネ（Ｃ．ａｍａｍｉａｎａ）、ニオイエビネ（Ｃ．ｉｚｕ−ｉｎｓｕｌａｒｉｓ）、サルメンエビネ（Ｃ．ｔｒｉｃａｒｉｎａｔａ）、トクノシマエビネ（Ｃ．ｔｏｋｕｎｏｓｈｉｍａｅｎｓｉｓ）、アリサンエビネ（Ｃ．ａｒｉｓａｎｅｎｓｉｓ）、ホソバナエビネ（Ｃ．ｇｒａｃｉｌｉｆｌｏｒａ）、ヒマラヤニオイエビネ（Ｃ．ｐｌａｎｔａｇｉｎｅａ）、クロロレウカ（Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｌｅｕｃａ）、トガリバエビネ（Ｃ．ｃａｕｄａｔｉｌａｂｅｌｌａ）。
（０２）スズフリエビネ型：スズフリエビネ（Ｃ．ｌｉｕｋｉｕｅｎｓｉｓ）、タマザキエビネ（Ｃ．ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ）、プルクラ（Ｃ．ｐｕｌｃｈｒａ）。
（０３）タガネラン型：タガネラン（Ｃ．ｂｕｎｇｏａｎａ）、ホワイテアナ（Ｃ．ｗｈｉｔｅａｎａ）。
（０４）サクラジマエビネ型：サクラジマエビネ（Ｃ．ｏｂｌａｎｃｅｏｌａｔａ）、マンニイ（Ｃ．ｍａｎｎｉ）。
（０５）キソエビネ型：キソエビネ（Ｃ．ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｒｉ）、アルピナ（Ｃ．ａｌｐｉｎａ）。
（０６）キンセイラン型：キンセイラン（Ｃ．ｎｉｐｐｏｎｉｃａ）。
（０７）ヒロハノカラン型：ヒロハノカラン（Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ）。
（０８）アサヒエビネ型：アサヒエビネ（Ｃ．ｈａｔｔｏｒｉｉ）。
（０９）ナツエビネ型：ナツエビネ（Ｃ．ｒｅｆｌｅｘａ）。
（１０）ツルラン型：ツルラン（Ｃ．ｆｕｒｃａｔａ）、オナガエビネ（Ｃ．ｌｏｎｇｉｃａｌｃａｒａｔａ）、オキナワエビネ（Ｃ．ｏｋｉｎａｗａｅｎｓｉｓ）、マスカ（Ｃ．ｍａｓｕｃａ）、マダガスカリエンシス（Ｃ．ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ）、ナタレンシス（Ｃ．ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）。
（１１）トクサラン型：トクサラン（Ｃ．ｖｅｎｕｓｔａ）、シロトクサラン（Ｃ．ｌｏｎｇｉｐｅｓ）、ビロバ（Ｃ．ｂｉｌｏｂａ）。
（１２）ペステイタ型：ベステイタ（Ｃ．ｖｅｓｔｉｔａ）、ロゼア（Ｃ．ｒｏｓｅａ）、エルメリ（Ｃ．ｅｌｍｅｒｉ）、ルベンス（Ｃ．ｒｕｂｅｎｓ）、カージオグロッサ（Ｃ．ｃａｒｄｉｏｇｌｏｓｓａ）。
【００１３】
ガンセキラン属（Ｐｈａｉｕｓｆｌａｖｕｓ（Ｂｌｕｍｅ）  Ｌｉｎｄｌ．）、その他の偽球茎を有するラン科植物としては、ホテイラン属（Ｃａｌｙｐｓｏ  Ｓａｌｉｓｂ．）、ヒトツボクロ属（Ｔｉｐｕｌａｒｉａ  Ｎｕｔｔ．）、ナリヤラン属（Ａｒｕｎｄｉｖａ  Ｂｌｕｍｅ）、シラン属（Ｂｌｅｔｉｌｌａ  Ｒｅｉｃｈｂ．  Ｆｉｌ．）、クモキリソウ属（Ｌｉｐａｒｉｓ  Ｌ．Ｃ．  Ｒｉｃｈａｒｄ）、サワラン属（Ｅｌｅｏｒｃｈｉｓ  Ｆ．  Ｍｅａｋ．）、ヤチラン属（Ｍａｌａｘｉｓ  Ｓｏｌａｎｄ．）、コウトウシラン属（Ｓｐａｔｈｇｌｏｔｔｉｓ  Ｂｌｕｍｅ）、エンレイショウキラン属（Ａｃａｔｈｏｐｈｉｐｐｉｕｍ  Ｂｌｕｍｅ）、ヒメトケンラン属（Ｔａｉｎｉａ  Ｂｌｕｍｅ）、ヒメクリソラン属（Ｈａｎｃｏｃｋｉａ  Ｒｏｌｆｅ）、メオトラン属（Ｇｅｏｄｏｒｕｍ  Ｊａｃｋｓｏｎ）、イモネヤガラ属（Ｅｕｌｏｐｈｉａ  Ｒ．Ｂｒ．）、サイハイラン属（Ｃｒｅｍａｓｔｒａ  Ｌｉｎｄｌ．）、コハクラン属（Ｋｉｔｉｇｏｒｃｈｉｓ  Ｆ．Ｍｅａｋ）、コケイラン属（Ｏｒｅｏｒｃｈｉｓ  Ｌｉｎｄｌ．）、シュンラン属（Ｃｉｍｂｉｄｉｕｍ  Ｓｗ．）、オサラン属（Ｅｒｉａ  Ｌｉｎｄｌ．）、マツジタラン属（Ｂｕｌｂｏｐｈｌｌｕｍ  Ｔｈｏｕ．）を挙げることができる。
【００１４】
抽出溶媒としては、水、低級アルキルアルコール、多価アルコールの単独または混合物を使用する。低級アルキルアルコールには、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等、望ましくはエタノールを用いる。多価アルコールとしては、例えばエチレングリコール、メトキシジグリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルプロパンジオール、１，３−ブチレングリコール、２，３−ブタンジオール、３−メチル−１，３−ブタンジオール、１，２−ペンタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、グリセリン、ジグリセリン、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレンメチルグルコシドなどを好適に用いることができる。
【００１５】
ラン科属植物、例えばエビネ属に属する植物からの抽出液は、一般的にエビネ属植物の少なくとも１種の花、根、茎、葉など全草または部分を水洗、粗切りして、溶媒に浸漬抽出して得られる。搾汁は、プレス圧搾により取得できる。溶媒抽出では、エビネ約１０，０００ｇに対して、例えば２０〜９０％のエチルアルコール約２０，０００ｍｌを混合し、７〜１０日間冷暗所において密閉保存した後、固液分離して濾過する。望ましくは、圧搾して得られた搾汁に対して、２０〜９０％の含水エチルアルコールを約１：１（容量）の割合で混合抽出する。得られた抽出液は、約１〜２週間、冷暗所において密封熟成する。搾汁製造の際のプレス圧縮圧は、５００〜５，０００ｋｇ／ｃｍ２程度に設定すればよい。搾汁はそのまままたは精製もしくは希釈して使用することもできる。
【００１６】
カラントサイドＢは、次のようにして得られる。例えば、エビネランまたはその搾汁から、望ましくはエタノールで熱時抽出し、エタノール抽出エキスを得る。得られたエタノール抽出エキスを酢酸エチルと水（１：１）で分配抽出する。次いで水移行部を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、水、エタノールで順次溶出し、エタノール溶出部を得る。エタノール溶出部を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで分画し、さらに順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで分画し、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー及び逆相高速液体クロマトグラフィーを用いて分離して、カラントサイドＢ原液を得る。使用に際しては、溶剤の留去、精製等を十分行う。
【００１７】
本発明の美白剤には、通常の美白剤またはその他の皮膚外用剤に一般的に用いられている補助的栄養機能成分を添加できる。例えば、ビタミン類としては、ビタミンＡ（レチノール）、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、ビタミンＣ（Ｌ−アスコルビン酸）、ビタミンＤ類、ビタミンＥ（トコフェロール）、パントテン酸ナトリウム、パントテン酸カリウム、ビタミンＨ（ビオチン）等がある。アミノ酸には、ドーパ（β−３−４−ジヒドロキシフェニルアラニン）、動植物油として、馬油、卵油、オリーブ油、ツバキ油、菜種油、ゴマ油、胚芽油等を用いることができる。また、保湿剤として、水飴、マルトース、メチルイソブチルケトン、メチルエチルケトン、３−メチル−１，３−ブタンジオール、ソルビトール、乳酸、ｔ−ブタノール、２，３−ブタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、メチルプロパンジオール、メトキシイソプロパノール、メトキシジグリコール、メトキシメチルブタノール、その他のグリコール類を使用することもできる。
【００１８】
添加剤の種類及び添加量は、使用目的によって異なるので特定できないが、一般的な皮膚外用剤にあっては、重量％で、エタノール１０〜５０％、カラントサイドＢが約０．０１〜１０％、酢酸トコフェロールが約０．０１〜１．０％、馬油が約０．０１〜５％、パントテン酸ナトリウムが約０．０１〜４％、ニコチン酸アミドが約０．０１〜５％、アスコルビン酸が約０．０１〜１０％、グリコール酸が約０．０１〜１０％、ビオチンが約０．００１〜１％、ビタミンＢ６が約０．０１〜２％、塩化ナトリウムが約０．１〜５％である。精製水は適量用いる。
【００１９】
また化粧用組成液にあっては、重量％で、エタノール１０〜５０％、カラントサイドＢが約０．０１〜１０％、酢酸トコフェロールが約０．０１〜１．０％、馬油が約０．０１〜５％、パントテン酸ナトリウムが約０．０１〜４％、ニコチン酸アミドが約０．０１〜５％、アスコルビン酸が約０．０１〜１０％、グリコール酸が約０．０１〜１０％、ビオチンが約０．００１〜１％、ビタミンＢ６が約０．０１〜２％、塩化ナトリウムが約０．１〜５％である。
【００２０】
また上記物質以外であっても、通常皮膚外用剤や化粧料に添加される補助的添加剤は適宜使用することができる。またローション、乳液、クリーム、パック、軟膏、化粧水、浴用剤など、使用目的あるいは剤形に応じて、一般的に使われている材料は任意に用いてもよい。
【００２１】
添加剤の作用は、必ずしも明確ではないが、ビタミン類は粘膜、神経の保健に役立ち、皮膚の角質化の防止機能がある。ビタミンＢ１、ビタミンＢ２は、皮膚、粘膜の神経を安定化させるとともに活性化し、細胞呼吸を助ける。ビタミンＣは皮膚の新陳代謝を促し、ビタミンＥは血行促進、細胞活性化作用がある。ビタミンＨ、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、パントテン酸とその塩類は、いずれも代謝機能を改善し、ビオチンは皮膚疾患の予防作用がある。動植物油は皮膚をやわらかくし、特に馬油と胚芽油は効果的である。グリコール酸はｐＨ調整のために使用し、塩化ナトリウムはその浸透圧的な作用により、有効成分が皮膚の深部まで浸透するのを助ける。
【００２２】
本発明のカラントサイドＢの美白作用の機序は、必ずしも明確ではないが、抗チロシナーゼ活性に基づくものと推定できる。
【実施例１】
【００２３】
エビネ新鮮根茎（１０ｋｇ）を細切りした後、エタノール（１８リットル）で熱時抽出を計３回おこなった。エタノール抽出液３回分をあわせて減圧下溶媒留去し、エタノール抽出エキス（３６０ｇ，３．６％）を得た。エタノール抽出エキス（３６０ｇ）を酢酸エチル−水（１：１）で分配し、酢酸エチル移行部（１１０ｇ，１．１％）、水移行部（２５０ｇ，２．５％）を得た。水移行部を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー［１．０ｋｇ，水→メタノール］で糖除去し、メタノール溶出部（１５ｇ，０．１５％）を得た。メタノール溶出部（１５ｇ）を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー［１３０ｇ，メタノール：水（５０：５０→８０：２０，ｖ／ｖ）］で分画し、Ｆｒ．１（１．５ｇ，０．０１５％）、Ｆｒ．２（３．０ｇ，０．０３０％）、Ｆｒ．３（３．４ｇ，０．０３４％）、Ｆｒ．４（０．５ｇ，０．００５％）、Ｆｒ．５（０．７ｇ，０．００７％）、Ｆｒ．６（３．１ｇ，０．０３１％）、Ｆｒ．７（３．４ｇ，０．０３４％）を得た。Ｆｒ．１（１．５ｇ）をさらに順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー［１５ｇ，クロロフォルム：メタノール：水＝７：３：１（下層）→６５：３５：１０（下層）→６：４：１］で分画し、Ｆｒ．１−１〜Ｆｒ１−８を得た。Ｆｒ．１−５（２１０ｍｇ，０．００２２％）を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー［１３０ｇ，メタノール：水（４０：６０，ｖ／ｖ）］、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）［カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｒ＆Ｄ  ＯＤＳ−５（２５０×２０ｍｍ  ｉ．ｄ．），溶媒；アセトニトリル−Ｈ２Ｏ（２５：７５，ｖ／ｖ），流速；９．０ｍｌ／ｍｉｎ］で分離精製し、カラントサイドＢ（１５ｍｇ，０．０００１５％）、アデノシン（ａｄｅｎｏｓｉｎ）（８．８ｍｇ，０．００００９％）を得た。
【試験例１】
【００２４】
（抗チロシナーゼ活性）
ＭａｓｏｎとＰｅｔｅｒｓｏｎの方法に準じて、美白効果につき次の試験をした。被検液として、実施例１のカラントサイドＢを用い、対照例として陽性対照薬コウジ酸を用いた。被検液０．５ｍｌにＬ−ドーパ溶液（ｐＨ６．８、ＰＢＳ中０．０３％）０．５ｍｌを加えて、２５℃、１０分間インキュベートした。次いで、マッシュルーム由来のチロシナーゼ溶液（ｐＨ６．８、ＰＢＳ中０．２ｍｇ／ｍｌ）０．５ｍｌを添加し、２５℃、５分間インキュベートした。反応後、４７５ｎｍ吸光度（Ｄ１）を測定した。別にドーパ溶液を添加せずに、同様な操作で吸光度（Ｄ２）を測定するとともに、さらに被検液無添加におけるドーパクロム生成量としての吸光度（Ｄ３）を測定した。前記Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３を用い、下式によりドーパクロム生成阻害率（阻害率％）を求め、チロシナーゼ阻害活性とした。結果を表１に示す。表１において、ＯＤは光学的濃度、ＳＤはその標準偏差である。
阻害率（％）＝｛［Ｄ３−（Ｄ１−Ｄ２）］／Ｄ３｝×１００
【００２５】
【表１】
2005179217.tif 000003
【試験例２】
【００２６】
（皮膚刺激性試験）
外用で用いられている実施例１のカラントサイドＢ液について、モルモットを用いた皮膚刺激性の試験を行った。ハートレー系モルモットは雌性３００ｇ前後を６匹一群として用いた。試験前にエーテルで麻酔し、背部を広く電気バリカンで剃毛し、さらにシェーバーで剃毛する。除毛部を消毒用アルコールでよく拭き、試料の塗布部位の一方を注射針で格子状の傷を入れた。検体の抽出０．５ｍｌを２．５×２．５ｃｍの濾紙上に吸着させ、しっかりと防水フィルム（森下仁丹社製）で固定し、その上を伸縮粘着包帯で固定した。貼布後２４時間目にパッチをはがし、紅斑や浮腫の程度をブランクとしてエタノールを用い比較した。その結果、カラントサイドＢ液に、特に皮膚を刺激する反応は認められず、ブランクの場合と同様であった。
【００２７】
試験例１の結果、カラントサイドＢは、抗チロシナーゼ作用を有することが判明した。また試験例２の結果、皮膚刺激性は認められない。
【配合例１】
【００２８】
（化粧水）
各成分を下記の割合で配合し、化粧水を調製した。単位は（ｇ）である。
エタノール                        ２００．００
カラントサイドＢ                      ５．００
酢酸トコフェロール                    ０．２０
馬油                                  ２．００
パントテン酸ナトリウム                １．００
ニコチン酸アミド                      １．５０
アスコルビン酸                        ３．００
グリコール酸                        １０．００
ビオチン                              ０．６０
ビタミンＢ６                          ０．７５
塩化ナトリウム                        ９．００
精製水                          （全体が１リットルになるように適量補充。）
【試験例３】
【００２９】
年齢４０〜５０歳の女性３人と男性２人に、配合例１の化粧水を２回／日、２０日間試用してもらい、美白効果と保湿効果を中心に聴取した。その結果、全員３日目頃から肌がしっとりしてきた。しみはほとんど消失し、くすみのあった女性２人のうち１人は消失、１人は薄くなった。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本発明のカラントサイドＢは、抗チロシナーゼ活性を有し、天然由来の皮膚刺激性のない美白剤として広く用いることができる。