(57)【要約】【課題】  これまで充分な食経験がある食材どうしの組み合わせにより、安全でより高い効果の期待できる肝臓障害抑制作用をもつ健康食品、医薬品、ペットフード又は飼料の供給を可能にすること。【解決手段】  本発明はグルタチオンとウコンを組み合わせることにより、肝臓障害抑制効果において、それら単独効果から予測される以上の相乗効果が得られることを示した。医薬用として肝機能障害改善その他に使用されてきたほか、酵母エキスなどの健康食品中やレバーなど生の食材中にも存在することから、食経験としても充分なグルタチオンと、肝機能改善を含め、様々な好ましい生理作用が報告されており、これまでカレー等で充分な食経験があるウコンの抽出物の両者を組み合わせることにより、肝臓障害抑制、改善作用に関して両者の単独効果以上の相乗的な効果が期待できることを確認した。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルタチオン及びウコンを含有する組成物。
【請求項２】
グルタチオンが酵母または酵母抽出物である請求項１記載の組成物。
【請求項３】
ウコンがウコン抽出物である請求項１または２に記載の組成物
【請求項４】
グルタチオン１００重量部に対して、ウコン抽出物を０．０１重量部以上、１００重量部以下含有する請求項３記載の組成物。
【請求項５】
請求項１〜４記載の肝臓障害抑制作用組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の組成物の製造方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の組成物を用いて肝臓障害を抑制する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安全で有効な肝臓障害抑制効果を持つ食品、医薬品、ペットフード又は飼料等に応用可能な組成物及びその製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタチオンはシステイン、グルタミン酸、グリシンの３つのアミノ酸からなるペプチドで、生体内の全細胞内に存在し,活性酸素の消去作用、解毒作用、アミノ酸代謝など様々な重要な作用を担っている。医薬品として肝機能改善や解毒など内科領域の他、妊娠中毒、妊娠悪阻などの婦人科領域、角膜損傷や白内障などの眼科領域、湿疹、炎症後の色素沈着などの皮膚科領域など幅広く使われてきたほか、酵母エキス等としてグルタチオンを含む健康食品が利用されてきた。
【０００３】
一方ウコン（Curucuma Longa）は熱帯、亜熱帯系地域に生育するショウガ科に属する多年生草本であり、元来カレーのスパイスの主要成分であるターメリックとして知られている。ウコン属には他に，ガジュツ（Curucuma zedoaria）、ハルウコン（Curcuma aromatica）などがよく利用されている。乾燥したウコンの根茎をエタノール等で抽出することにより得られる抽出物中の主な成分はクルクミン（１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１，６−ヘプタジエン−３，５−ジオン）であるが、その関連物質（クルクミノイド）として他にデメトキシクルクミン、ビスデメトキシクルクミンがよく知られている。それら以外にもターメロンなどのセスキテルペン類を主成分とした精油成分も存在する。ウコンは食用の他、衣料用の着色料、中国の漢方、インドのアーユルヴェーダ、インドネシアのジャムーなどの伝統療法では、止血作用、健胃作用、抗菌作用、抗炎症作用があることから薬用としても利用されている。ウコン及びその主要成分であるクルクミンの生理作用としては、抗酸化作用、胆汁分泌促進（利胆）作用、肝臓及び膵臓機能増強作用、発癌抑制作用、脂質代謝改善作用、美白作用、また血糖降下作用、内臓脂肪型肥満の予防、改善作用（特許文献１）や、血圧上昇抑制作用（特許文献２）、腎臓障害改善作用（非特許文献１）などが知られている。また、臓器の加水分解物と植物由来の肝機能賦活成分としてウコンを含有する肝機能賦活剤についても既に知られているが（特許文献３）、これら、ウコン抽出物又はクルクミン類、及び、グルタチオンは共に肝機能改善という共通の使用目的が有りながら，それらを組み合わせることによって肝臓障害に対し,両者の相乗効果が発揮できるという研究報告は未だ知られていない。
【特許文献１】特開２００３−１２８５３９
【特許文献２】ＷＯ０２／４７６９９
【特許文献３】特開２００２−８０３８８
【非特許文献１】Molecular and Cellular Biochemistry,166,169〜175,1997
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
これまでウコンをはじめ肝臓障害に良いとされる食品は利用されてはいるが、必ずしも充分な効果が発揮されていない。そこで本発明の課題は充分な食経験がある食材の組み合わせにより、安全でこれまで以上に高い効果の期待できる肝臓障害抑制、改善のための健康食品、医薬品又は飼料の供給を可能にすることにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
これまで、医薬用として肝機能改善その他に使用されてきたほか、酵母エキスなどの健康食品中やレバーなど生の食材中にも存在することから、食経験としても充分なグルタチオンと、肝機能改善を含め、様々な好ましい生理作用が報告されており、カレー等で充分な食経験があるウコンの抽出物の両者を組み合わせることにより、肝臓障害抑制、改善作用に関して、単独では効果を発揮しない量を併用することで明らかな相乗効果がでることを確認し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち本発明は、グルタチオン及びウコンを含有する組成物に関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、医薬品として使用されているが、健康食品や自然の食材にも含有されているため、食経験も充分にあるグルタチオンと、有用な生理作用が確認されている食材であるウコンとを組み合わせることにより安全で優れた肝臓障害抑制機能を有する食品、医薬品、ペットフード又は飼料等に応用可能な組成物及びその製造法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の組成物は、グルタチオン及びウコンを含有する組成物であり、安全で優れた肝臓障害抑制作用を有する。
【０００９】
本発明において、「肝臓障害を抑制する」、また、「肝臓障害抑制作用」とは、ヒト及び動物の肝臓障害の指標として用いられている値、例えば血中ＧＰＴ（glutamic pyruvic transaminase）濃度を抑制することを意味する。
【００１０】
本発明に用いるグルタチオンは特にその由来を限定する必要は無く、合成法により得られたものでも、酵素反応により生合成されたものでも、動物の肝臓や微生物由来のものでも良い。微生物としては、グルタチオンが含まれる量が高ければ特に限定はしないが、酵母が好ましく使用できる。本発明に用いられる酵母としては、特に制限されず、サッカロミセス、トルラスポラ、キャンディダ、クルイベロミセス、ピキア、デバリオミセス、ロードトルラ、トルロプシス、シゾサッカロミセス、ファフィアなどが使用可能である。特にビールや酒、パンなどに使用され、食経験が豊富なサッカロミセス属がより好ましく使用でき、市販の酵母（例えばビール酵母やパン酵母など）も使用できるが、グルタチオンを高濃度で含有する（乾燥菌体当り５％以上）菌が最も好ましい。
【００１１】
酵母を培養して得られた菌体そのものか、さらに熱や酵素や酸、アルカリその他薬剤又は物理的処理により、細胞壁や膜の一部を破壊して菌体内のグルタチオンをより利用しやすくしたもの、またさらにこれらの処理のうち、１つ以上を施した後、遠心分離や濾過などにより、細胞壁その他の不溶性画分を除き、得られたグルタチオンを含む水溶性画分そのものか、それをさらに精製したものや、それらを濃縮してペースト状にしたり、乾燥して粉末や顆粒状にした酵母抽出物を用いることもできる。用いられる酵母としては上記と同じものが使用できる。
【００１２】
本発明に用いるウコンの形態は特に制限されず、カレーに使われるように根茎を粉砕して粉末にしたもので良いが、吸収性や保存安定性の点で、微粉末にして乾燥したものが好ましい。また根茎またはその粉砕物や粉末から水や有機溶媒で抽出して得た抽出物でも良い。ここで用いられる有機溶媒としては、医薬品や食品、食品添加物などの製造、加工に使用が許可されたものが望ましく、例えば,アセトン、エタノール、グリセリン、プロパノール、プロピレングリコール、ヘキサン、メタノールなどが挙げられ、食用油などの油脂類を用いても良い。またこれらの溶媒のうち少なくとも２種以上を混合して用いても良いし,これらの含水溶媒を用いても良い。水や溶媒で抽出する場合には、例えば、ウコンの粉末、粉砕したものまたは原形を、１〜２０倍量の上記溶媒に浸し、−２０℃〜１００℃、好ましくは１〜８０℃、より好ましくは２０〜６０℃で、０．１時間〜１ヶ月、好ましくは０．５時間〜７日間、攪拌または放置する。抽出により得た抽出液、またそれらから抽出溶媒を除去したものをウコン抽出物とする。また医薬品や食品として不適当な不純物を含有しない限り,粗抽出物または半精製抽出物として本発明に使用できる。経済性や食品や飼料に安全に使用できること、またその後の操作を考えると、エタノールを抽出溶媒として用い、抽出液を濾過した後、濃縮したものが最も好ましい。
【００１３】
本発明の組成物におけるグルタチオン及びウコン抽出物の重量混合比は、グルタチオン１００に対しウコン抽出物が０．０１から１００がよく、特に好ましい範囲はグルタチオン１００に対しウコン抽出物が０．１から１０であり、それぞれ上記比率になるように計量し、混合してやれば良い。ウコンが粉末や、破砕物である場合、グルタチオン１００に対しウコンが０．１から１０００が良く、１から１００が特に好ましい。グルタチオンは生体内にも存在し、大量に摂取しても安全性や味に好ましく無い影響を与える危険性は少ないが、ウコンを多く摂取すると味に影響が出やすいことからこの混合比の範囲が好ましい。
【００１４】
このようにして調製したグルタチオンとウコンは各々を混合し、粉末、錠剤やカプセル、また乳化液や溶液の形態にしても良いし、混合せずに各々を連続して摂取しても良いし、様々な食品に混入させて食品形態で摂取しても、また動物や魚類用飼料に混入させて利用することも可能である。混合方法には特に制限はなく、例えば、グルタチオンとウコンを上記重量比になるようにそれぞれ混合して調整すれば良く、グルタチオンとウコン粉末を混合する場合は、粉末のまま混合しても良いし、各々溶解する溶媒に溶解し、混合しても良い。グルタチオンは水溶性であり、水、生理食塩水、その他の水溶性溶媒などに溶解して用いることが出来るが、取り扱いが容易であることから水又は生理食塩水が好ましい。ウコンを溶解する溶媒としては、ウコンの抽出に使用した前記溶媒と同様のものが使用できる。本発明の組成物を製造する際は、必要に応じてショ糖脂肪酸エステル、レシチン、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリンエステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコールなどの乳化剤を添加しても良い。これらは、２種以上用いてもよい。これら乳化剤を用いる場合は、乳化剤の種類により、最適量を適宜用いれば良いが、例えば、ウコンに対して０．１重量部以上、１０００重量部以下含有するのが好ましく、１重量部以上、１００重量部以下含有するのがさらに好ましい。乳化剤を添加する順序は特に制限されず、グルタチオンを含有する溶液に乳化剤を添加した後に、ウコンを添加しても良いし、ウコンを含有する溶液に乳化剤を添加した後にグルタチオンを添加しても良い。必要に応じて賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、コーティング剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤を加えても良い。
【００１５】
本発明で得られるグルタチオンおよびウコンを含有する組成物は混合して用いることで、肝臓障害を抑制する作用があり、各々を単独で用いた場合よりも、肝臓障害抑制に関して高い効果を有する。本発明における組成物の投与方法は特に制限されず、グルタチオンとウコンを含有する組成物を、経口投与しても良いし、注射、点滴薬として投与しても良い。グルタチオンを含有する組成物とウコンを含有する組成物をそれぞれ連続して順次投与しても同様な効果を得ることができる。
【実施例】
【００１６】
これより実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１７】
（実施例１）
ガラス瓶（梅酒用）にウコン粉末（カネカサンスパイスより購入）２Kgをいれ，１０Lのエタノールを注ぎ入れ、アルミホイルで覆い、室温暗所で１週間放置して抽出した。抽出液をろ紙（ADVANTEC  Ｎｏ．２  １５ｃｍ径）を２枚重ねて２回減圧ろ過し、ロータリーエバポレーターで減圧濃縮（４０℃の水浴を使用）した。さらにこの部分濃縮液をナスフラスコに移し、真空ポンプで濃縮乾固し２３７．９ｇのウコン抽出物を得た。
【００１８】
（実施例２）
グルタチオンとウコン抽出物との肝障害保護作用に対する相乗効果についてアセトアミノフェン（ＡＡＰ）経口投与による肝障害モデルマウスを用いて検討した。グルタチオンは和光純薬より購入した標品を生理食塩水に１００ｍｇ／５ｍｌの濃度で溶解したものを用いた。ウコン抽出物は実施例１の抽出物をコーン油に一旦、１０ｍｇ／５ｍｌで溶解（縣濁）し、コーン油で希釈して１ｍｇ／５ｍｌの濃度に調整した。ＡＡＰは蒸留水に４００ｍｇ／２０ｍｌで溶解した。実験にはＩＣＲ雄性マウスを５週令で日本チャールズリバー（株）より購入し、７週令の時点で試験を行った。試験前日夕方より絶食し、表１に示した４つの投与群で実験を行なった。
【００１９】
【表１】
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【００２０】
グルタチオン及びウコン抽出物の溶液は体重１Ｋｇ当り５ｍｌ経口投与し、対照は体重１Ｋｇ当り生理食塩水５ｍｌとコーン油を５ｍｌ経口投与した。その３０分後にＡＡＰ溶液を体重１Ｋｇ当り２０ｍｌ経口投与し、その５時間後に腹大静脈より採血した。遠心分離した血漿を冷蔵保存し、翌日に和光純薬のトランスアミナーゼＣＩＩ−テストワコーを用いてＧＰＴ（ｇｌｕｔａｍｉｃ  ｐｙｒｕｖｉｃ  ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ）を測定した。その結果を表２に示す。
【００２１】
【表２】
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【００２２】
ＩＣＲマウスでの生理的なＧＰＴ値の上限を１００ＩＵ（実験動物の生物学的特性データ、ソフトサイエンス社、１９８９年）として、１００ＩＵ以上の値を示す個体を「障害」、１００ＩＵ未満の個体を「正常」としてスコアリングして統計学的検定（Ｄｕｎｎｅｔ型）を行った。対照群、グルタチオン投与群、ウコン投与群の３群共、１０匹すべてが血漿中ＧＰＴ値が１００ＩＵ以上の障害マウスであったのに対し、グルタチオン＋ウコン投与群は障害マウスが７匹で、３匹はＧＰＴ値が１００ＩＵ以下の正常値を示した。これは統計的に有意な差（Ｄｕｎｎｅｔの母平均の比較）であり、グルタチオンとウコンとが肝臓障害に対して相乗効果を示したと言える。
【００２３】
（実施例３）
グルタチオン高生産酵母菌株であるＦＥＲＭ  Ｐ−１９０７２株（特許寄託株  Saccharomyces cerevisiaeに属す）をＹＰＤ培地（イーストエキス１％、ポリペプトン２％、グルコース２％）５０ｍｌ入り坂口フラスコ（５００ｍｌ容量）１５本で２０時間培養したものを種母とし、５Ｌジャーファーメンターに糖蜜３６ｇ（糖換算）、尿素２．４ｇ、リン酸２．４ｇを含む培地１．７Ｌを加えて殺菌したもの３台にそれぞれ坂口フラスコ５本分の種母を加え、糖蜜２７０ｇ（糖換算）を流加方式で加えながら、温度３１〜３５℃、ｐＨ下限５．０（安水でコントロール）、通気量２Ｌ／分、攪拌６００ｒｐｍで１４時間培養した。培養液を遠心分離して菌体を集め、蒸留水１Lで３回洗浄した。得られた菌体は乾燥（１０５℃で５時間）重量にして１３２ｇ、グルタチオン含量は乾燥菌体当り６．６％であった。（グルタチオン含量はアロキサン法で測定した。ここでいうアロキサン法とは、０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．５）を０．４ｍｌ、グルタチオンを含むサンプル水溶液（酵母菌体であれば４０％エタノールで抽出した液）を４０μｌ、Ｍ／３０アロキサン水溶液を１．２ｍｌ加えて攪拌し、３０℃で６分間反応させた後、１ＮのＮａＯＨを１ｍｌ加えて攪拌して反応を終了させ、３０５ｎｍの吸光度を測定するものである。アロキサン水溶液の代わりに水１．２ｍｌを加えたものでバックグラウンドを測定しておく。グルタチオン標準液としてはグルタチオン標品を４０％エタノールに０〜１ｇ／ｍｌの間で２００μｇ／ｍｌ毎に６段階程度希釈したものを用いて、３０５ｎｍ吸光度を測定した。グルタチオンの測定方法としてはここではアロキサン法を用いた例を示したが、精度と操作性に問題がなければ酵素法、ヨード滴定法、液体クロマトグラフ法等その他の方法も使用可能である。）この菌体に蒸留水を加え、全量１５００ｍｌの縣濁液とし、９０℃で３０分間熱処理を行った。室温まで冷却後、１／３量（５００ｍｌ）を遠心分離により菌体を除き、その上清にデキストリンを１．３ｇ加え、スプレー乾燥機で乾燥粉末を得た。乾燥粉末中のグルタチオン含量は１６％であった。この粉末６４重量部、実施例１で得られたウコン抽出物１重量部、乳糖２２重量部、結晶セルロース１０重量部、ショ糖脂肪酸エステル３重量部を混合し、打錠することにより、グルタチオン含有酵母とウコン抽出物を含んだ錠剤を得た。
【００２４】
（実施例４）
実施例３で得た加熱処理済み菌体縣濁液５００ｍｌにショ糖脂肪酸エステル１ｇ、実施例１で得られたウコンの抽出物３０ｍｇ、エタノール３ｍｌを混合し、凍結乾燥機（東京理科機械ＦＤ−１）で凍結乾燥した。得られた乾燥菌体をミルにかけ、均一な粉末を得た。こうしてグルタチオン、酵母菌体、ウコン抽出物を含む乾燥粉末を得た。
【００２５】
（実施例５）
実施例３で得た加熱処理済み菌体縣濁液５００ｍｌを遠心分離して菌体を除いた上清液を凍結乾燥したものを３９．５重量部、実施例１で得られたウコン抽出物を０．５重量部、ゴマ油を５５重量部、グリセリン脂肪酸エステルを５重量部加えて混合したものをゼラチンカプセルに入れてグルタチオンとウコン抽出物を含有させた健康食品用又は医薬用カプセルを作製した。