(57)【要約】      （修正有）【課題】抗炎症作用を有する新規なプレニル誘導体化合物を提供すること。【解決手段】新規な化合物は式（Ｉ）で表されるプレニル誘導体化合物で、式中、Hetは式（II）、（III）又は（IV）で表されるヘテロ環基を表す。阜康阿魏（学名  Ferula fukanensis K M shen）の根から有機溶媒（例えばメタノール、クロロホルム、酢酸エチル）により抽出することができ、得られた化合物を出発原料として自体公知の方法に従って製造することができる。本化合物はＮＯ産生抑制作用を有し、抗炎症剤、抗アレルギー剤として有用である。2005053829.tif 0000342005053829.tif 000035【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で表されるプレニル誘導体化合物：
2005053829.tif 000023
式中、
Ｒ1とＲ2は共に水素原子を表すか、又は一緒になってオキソ基（＝Ｏ）を表し、
Ｒ3、Ｒ4及びＲ5はそれぞれ水素原子を表すか、又はＲ3とＲ4が一緒になって結合を表し、又はＲ4とＲ5が一緒になって結合を表し、
Ｈｅｔは以下の式（II）、（III）又は（IV）で表されるヘテロ環基を表し、
2005053829.tif 000024
又は、
2005053829.tif 000025
又は、
2005053829.tif 000026
上記式（II）、（III）又は（IV）中、Ｒ6ないしＲ12はそれぞれ独立に、同一又は異なり、水素原子、ヒドロキシル基又は脂肪族カルボン酸でエステル化されたヒドロキシル基を表す。
【請求項２】
以下の式（V）で表される請求項１に記載のプレニル誘導体化合物：
2005053829.tif 000027
【請求項３】
以下の式（VI）で表される請求項１に記載のプレニル誘導体化合物：
2005053829.tif 000028
【請求項４】
以下の式（VII）で表される請求項１に記載のプレニル誘導体化合物：
2005053829.tif 000029
【請求項５】
以下の式（VIII）で表される請求項１に記載のプレニル誘導体化合物：
2005053829.tif 000030
【請求項６】
以下の式（IX）で表される請求項１に記載のプレニル誘導体化合物：
2005053829.tif 000031
【請求項７】
以下の式（X）で表される請求項１に記載のプレニル誘導体化合物：
2005053829.tif 000032
【請求項８】
以下の式（XI）で表される請求項１に記載のプレニル誘導体化合物：
2005053829.tif 000033
【請求項９】
請求項１に記載のプレニル誘導体化合物、医薬として受容可能な担体及び／又は希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
医薬組成物が抗炎症剤である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
医薬組成物が抗アレルギー剤である、請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症剤として有用な新規なプレニル誘導体化合物及びそれを含む抗炎症剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
阜康阿魏（学名  Ferula fukanensis K M shen）は、アジアの乾燥地帯に分布するセリ科の多年草であり、その根茎から採取した樹脂は、リウマチ、婦人病、痙攣の治療に使用され、ヒステリー症の鎮静剤として用いられている。
コジマ（Kojima）らは、Ferula ferulioidesの根から分離したプレニルベンゾイルフラノン型のセスキテルペン誘導体及びその生合成の経路を報告しているが、その有用性については述べていない（非特許文献１）。
バオ−ニン ス（Bao-Ning Su）らは、Ferula pallidaの根から抽出したセスキテルペンクマリン及びその誘導体並びにその生合成経路を報告しているが、その有用性につては述べていない（非特許文献２）。
【０００３】
【非特許文献１】K. Kojima, et. al., Chem. Pharma. Bull., 47(8), pp. 1145-1147, 1999
【非特許文献２】Bao-Ning Su, et. al., J. Nat. Prod., 2000, 63, pp. 436-440
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、ＮＯ産生抑制作用を有する新規なプレニル誘導体化合物及びこれを含む抗炎症剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の新規なプレニル誘導体化合物は以下の一般式（Ｉ）を有する。
2005053829.tif 000002
式中、
Ｒ1とＲ2は共に水素原子を表すか、又は一緒になってオキソ基（＝Ｏ）を表し、
Ｒ3、Ｒ4及びＲ5はそれぞれ水素原子を表すか、又はＲ3とＲ4が一緒になって結合を表し、又はＲ4とＲ5が一緒になって結合を表し、
Ｈｅｔは以下の式（II）、（III）又は（IV）で表されるヘテロ環基を表し、
2005053829.tif 000003
又は、
2005053829.tif 000004
又は
2005053829.tif 000005
上記式（II）、（III）又は（IV）中、Ｒ6ないしＲ12はそれぞれ独立に、同一又は異なり、水素原子、ヒドロキシル基又は脂肪族カルボン酸でエステル化されたヒドロキシル基を表す。
一般式（Ｉ）の化合物は、ＮＯ産生抑制活性を有し、抗炎症剤、抗アレルギー剤として使用することができる。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の化合物はＮＯ産生抑制活性を有するプレニル基を含む新規な化合物であり、抗炎症剤、抗アレルギー剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
一般式（Ｉ）で表されるプレニル誘導体化合物において、  Ｒ1とＲ2は共に水素原子を表すか、又は一緒になってオキソ基（＝Ｏ）を表し、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5はそれぞれ水素原子を表すか、又はＲ3とＲ4が一緒になって結合を表し、又はＲ4とＲ5が一緒になって結合を表す。
一般式（Ｉ）の化合物におけるＨｅｔは、一般式（II）、（III）又は（IV）で表されるヘテロ環基を表し、これらのヘテロ環基におけるＲ6ないしＲ12は、それぞれ独立に、同一又は異なり、水素原子、ヒドロキシル基又は脂肪族カルボン酸でエステル化されたヒドロキシル基を表す。エステル化に使用する脂肪酸としては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸などの低級飽和脂肪酸を挙げることができる。
【０００８】
本発明の望ましい化合物として、以下の式（V）で表される化合物２、式（X）表される化合物１０及び式（XI）で表される化合物１１を挙げることができる。
2005053829.tif 000006
2005053829.tif 000007
2005053829.tif 000008
【０００９】
本発明の化合物２、化合物３、化合物５ないし１１は、阜康阿魏の根茎をそのまま又は乾燥し、好ましくは粉砕し、有機溶媒（例えばメタノール、クロロホルム、酢酸エチル）を用いて室温で抽出して得ることができ、得られた抽出物を自体公知の方法で処理し、精製することにより製造することができる。
これらの化合物を出発原料として本発明の一般式（Ｉ）で表される他の化合物を製造することができる。
例えば、式（II）、（III）又は（IV）で表されるヘテロ環基において、Ｒ6ないしＲ12のいずれか又は全てがエステル基であるヘテロ環基を有する化合物は、Ｒ6ないしＲ12がヒドロキシル基である化合物を低級脂肪酸と直接、又はこれらの酸のハロゲン化物、無水物若しくはアミドと、酸触媒の存在下に反応させることによって製造することができる。
【実施例】
【００１０】
製造例１
阜康阿魏（学名  Ferula fukanensis K M shen）の根茎５．９kgを粉砕し、これを８０％メタノール（メタノール：水＝８：２容量）により３８リットルの溶液とし、室温で１２０時間温浸した。温浸を同一条件で繰り返し、得られた浸出液を合わせて減圧下に４０℃で濃縮して７１１gのエキスを得た。
このエキスの４５０gを水１．５リットルに溶解し、クロロホルム、酢酸エチルの各１．５リットルで、順次それぞれ３回ずつ抽出した。これらの抽出液をそれぞれ減圧下に４０℃で濃縮し、クロロホルム画分から２７０g、酢酸エチル画分から１４０gの濃縮エキスを得た。
クロロホルム画分から得られた濃縮エキス７０gをシリカゲルカラム（Wako gel C-200、和光純薬社製、６φ×１７cm）にのせ、ヘキサン：酢酸エチル系の展開溶媒を使用し、酢酸エチル濃度０％、２％、５％、１０％、２０％、４０％、６０％及び１００％の溶媒をそれぞれ３リットル順次使用して展開し、２００mlずつ分取して第１〜第１１の１１画分に分画した。
得られた第６画分（２０％の酢酸エチルを含むクロロホルム溶媒によって溶出した画分）の減圧濃縮物を、シリカゲルカラム（ワコーゲル C-300、和光純薬株式会社社製、４×２３cm）にのせ、ヘキサン：酢酸エチル系の展開溶媒を使用し、酢酸エチル濃度を０％、２％、５％、１０％、２０％、４０％、６０％及び１００％とした溶媒をそれぞれ１．５リットル順次使用して展開し、１００mlずつ分取して第１'〜第１１'の１１画分に分画した。
得られた第４'画分（１５％の酢酸エチルを含むヘキサン溶媒によって溶出した画分）を逆相ＨＰＬＣ（YMC-PAK ODS-ALL、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として７２％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝７２：２８）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０nm）で監視しつつ、保持時間１６分４５秒にピークを示す溶出液を分取し、これを減圧下に濃縮して、化合物１を得た。
【００１１】
製造例２
製造例１の２回目のシリカゲルカラムで得られた第３'画分（１５％の酢酸エチルを含むヘキサン溶媒によって溶出した画分）を逆相ＨＰＬＣ（YMC-PAK ODS-ALL、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として７１％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝７１：２９）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０nm）で監視しつつ、保持時間５分２秒にピークを示す溶出液を分取した。
この溶出液を順相ＨＰＬＣ（YMC-PAK SIL-06、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として８３％ヘキサン（ヘキサン：酢酸エチル＝８３：１７）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４nm）で監視しつつ、保持時間１３分３４秒にピークを示す溶出液を分取し、これを減圧下に濃縮して、化合物４を得た。
【００１２】
製造例３
製造例１の２回目のシリカゲルカラムで得られた第６'画分（１５％の酢酸エチルを含むヘキサン溶媒によって溶出した画分）を順相ＨＰＬＣ（YMC-PAK SIL-06、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として７０％ヘキサン（ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０）を用い、流速８．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４nm）で監視しつつ、保持時間１６分５７秒、２１分１８秒及び２３分１０秒にそれぞれピークを示す溶出液を分取した。
【００１３】
製造例４
製造例３で分取した、１６分５７秒にピークを示す溶出液を逆相ＨＰＬＣ（YMC-PAK ProC18、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として６０％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝６０：４０）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０nm）で監視しつつ、保持時間８分１６秒にピークを示す溶出液を分取した。この溶出液を減圧下に濃縮して化合物１１を得た。
【００１４】
製造例５
製造例３で分取した、２３分１０秒にピークを示す溶出液を逆相ＨＰＬＣ（YMC-PAK ProC18、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として６０％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝６０：４０）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０nm）で監視しつつ、保持時間９分２７秒及び１０分２８秒にそれぞれピークを示す溶出液をそれぞれ分取した。前者の９分２７秒にピークを示す溶出液を減圧下に濃縮して化合物６を得た。
【００１５】
製造例６
製造例５で分取した、１０分２８秒にピークを示す溶出液を順相ＨＰＬＣ（YMC-PAK SIL-06、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として６５％ヘキサン（ヘキサン：酢酸エチル＝６５：３５）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４nm）で監視しつつ、保持時間１２分２２秒及び１３分２０秒にそれぞれピークを示す溶出液を分取した。両者の溶出液をそれぞれ減圧下に濃縮して化合物１０及び化合物８を得た。
【００１６】
製造例７
製造例３で分取した、１６分５７秒にピークを示す溶出液を逆相ＨＰＬＣ（YMC-PAK ProC18、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として６０％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝６０：４０）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０nm）で監視しつつ、９分１３秒にピークを示す溶出液を分取した。この溶出液を順相ＨＰＬＣ（YMC-PAK SIL-06、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として６８％ヘキサン（ヘキサン：酢酸エチル＝６８：３２）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４nm）で監視しつつ、保持時間１０分５９秒及び１２分２２秒にそれぞれピークを示す溶出液をそれぞれ分取した。両者の溶出液をそれぞれ減圧下に濃縮してそれぞれ化合物３及び化合物２を得た。
【００１７】
製造例８
製造例３で分取した、２１分１８秒にピークを示す溶出液を逆相ＨＰＬＣ（YMC-PAK ProC18、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として５６％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝５６：４４）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０nm）で監視しつつ、１２分４２秒、１４分４秒及び１６分２２秒にピークを示す溶出液を分取した。このうち、１２分４２秒にピークを示す溶出液を順相ＨＰＬＣ（YMC-PAK SIL-06、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として６８％ヘキサン（ヘキサン：酢酸エチル＝６８：３２）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４nm）で監視しつつ、保持時間１５分５７秒にピークを示す溶出液を分取した。この流出液を減圧下に濃縮して化合物５を得た。
【００１８】
製造例９
製造例８における逆相ＨＰＬＣで分離した溶出液のうち、１４分４秒にピークを示す溶出液を順相ＨＰＬＣ（YMC-PAK SIL-06、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として７０％ヘキサン（ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４nm）で監視しつつ、保持時間１３分３７秒にピークを示す溶出液を分取した。この溶出液を減圧下に濃縮して化合物９を得た。
【００１９】
製造例１０
製造例８における逆相ＨＰＬＣで分離した溶出液のうち、１６分２２秒にピークを示す溶出液を順相ＨＰＬＣ（YMC-PAK SIL-06、株式会社ＹＭＣ社製）により分離した。移動相として７０％ヘキサン（ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０）を用い、流速３．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４nm）で監視しつつ、保持時間１５分３９秒にピークを示す溶出液を分取した。この溶出液を減圧下に濃縮して化合物７を得た。
以下に、得られた化合物の1Ｈ−及び13Ｃ−ＮＭＲのデータ、ＭＳ、ＩＲ、ＵＶのデータを示す。なお、化合物３は、日本電子  JNM-GSK 500 FT NMR により測定した。よって1H-NMRは500 MHz、 13C-NMRは125 MHzにより測定した。その他の化合物は、VARIAN Mercury 300 により測定し、1H-NMRは300 MHz、 13C-NMRは75 MHzにより測定した。また溶媒はすべてCDCl3である。
【００２０】
化合物２及び化合物３の性状、分子量、13Ｃ−ＮＭＲ及び1Ｈ−ＮＭＲのデータを表１に示す。
【表１】
2005053829.tif 000009
【００２１】
これらのデータから化合物２及び化合物３はそれぞれ下記の式（V）及び（VI）の構造を有することが確認された。
2005053829.tif 000010
2005053829.tif 000011
【００２２】
化合物４の性状、分子量、13Ｃ−ＮＭＲ及び1Ｈ−ＮＭＲのデータを表２に示す。
【表２】
2005053829.tif 000012
【００２３】
これらのデータから化合物４は下記の式（XII）の構造を有することが確認された。
2005053829.tif 000013
【００２４】
化合物７の性状、分子量、13Ｃ−ＮＭＲ及び1Ｈ−ＮＭＲのデータを表３に示す。
【表３】
2005053829.tif 000014
【００２５】
これらのデータから化合物７は下記の式（VII）の構造を有することが確認された。
2005053829.tif 000015
【００２６】
化合物８ないし化合物１０の性状、分子量、13Ｃ−ＮＭＲ及び1Ｈ−ＮＭＲのデータを表４に示す。
【表４】
2005053829.tif 000016
【００２７】
これらのデータから化合物８ないし１０は下記の式（VIII）ないし式（X）の構造を有することが確認された。
2005053829.tif 000017
2005053829.tif 000018
2005053829.tif 000019
【００２８】
化合物１１の性状、分子量、13Ｃ−ＮＭＲ及び1Ｈ−ＮＭＲのデータを表５に示す。
【表５】
2005053829.tif 000020
【００２９】
これらのデータから化合物１１は下記の式（XI）の構造を有することが確認された。
2005053829.tif 000021
【００３０】
本発明の化合物はＮＯ産生抑制活性を有し、この作用を、一酸化窒素産生抑制試験により評価した。
〔一酸化窒素産生抑制試験〕
生体内の一酸化窒素（ＮＯ）はＬ−アルギニンを前駆体とする。アルギニンのグアニジノ基に分子酸素が添加し、Ｌ−シトルリンへ変換され、同時にＮＯが産生される。この反応を触媒するのがＮＯ合成酵素（ＮＯＳ）であり、神経型ＮＯＳ、内皮型ＮＯＳとｉＮＯＳの３種類のアイソフォームが存在する。
ｉＮＯＳは通常発現しておらず、マクロファージ、白血球、血管平滑筋、内皮細胞、腎メンサギウム細胞、心筋細胞など多くの細胞で、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、ＩＬ−１、ＴＮＦ−αなどのサイトカインやリポポリサッカライド（ＬＰＳ）の刺激により誘導される。
炎症巣において、好中球やマクロファージはＮＯと同時に活性酸素の一種であるＯ2-を産生する。ＮＯは速やかにＯ2-と反応し、ＮＯより反応性の高いＯＮＯＯ-を生成する。この結果、慢性的な炎症やアレルギー、糖尿病、動脈硬化などが引き起こされる。
【００３１】
マクロファージとしてアベルソン ロイケミア（Abelson leukemia）ウィルスで形質転換したマウス腹腔より得られたマクロファージ様株化細胞RAW264.7細胞（ATCCより購入）を使用した。この細胞を、ウシ胎児血清を１０％含むHam's培地中に１〜５×１０5個／mlの濃度に調製し、９６穴プレート（住友ベークライト製、8096R）に２００μlずつ分注し、１時間、ＣＯ2インキュベーターで細胞を接着させた。各種濃度の試験化合物と共にＩＦＮ−γ及びＬＰＳ（シグマ（Sigma）製、055:B5）を加えた。最終濃度がＩＦＮ−γは０．３３ng／ml、ＬＰＳは１００ng／mlとなるように調整した。試験化合物はＤＭＳＯに溶解し、培地に対する含量が０．２％となるように調整した。
培養上清を採取し、グリース法（L. J. Ignarro, et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 1987, pp. 9265-9269）により培地中のＮＯ2-を定量した。得られたＮＯ2-量から、抑制率を次式により算出した。
抑制率（％）＝｛１−（Ｘ−Ｙ）／（Ｚ−Ｙ）｝×１００
Ｘ：試験化合物の存在下でＩＦＮ−γとＬＰＳにより誘導されるＮＯ2-の量
Ｙ：試験化合物、ＩＦＮ−γ及びＬＰＳがない状態で誘導されるＮＯ2-の量
Ｚ：ＩＦＮ−γとＬＰＳにより誘導されるＮＯ2-の量
試験化合物のＩＣ50、すなわち抑制率が５０％となる試験化合物の濃度を表６に示す。
【表６】
2005053829.tif 000022
【００３２】
このように、本発明の化合物はＮＯの産生を抑制する作用を有するので、抗アレルギー剤、抗炎症剤として有用である。
本発明の化合物を経口、非経口又は経皮投与することができる。その投与量は患者の年齢、疾病の状況等によって変化するが、成人１日１人当たり０．０１mg／kg〜５００mg／kg、好ましくは０．１mg／kg〜１００mg／kg、さらに好ましくは０．５mg／kg〜５０mg／kgである。
本発明の化合物を種々の剤形で投与することができ、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤、座剤、軟膏剤、パップ剤等の形態で投与することができる。本発明の化合物をこれらの剤形に形成する場合、これらの製剤化に通常使用する担体や添加物、例えば溶剤、基剤、希釈剤、充填剤などの賦形剤、溶解補助剤、乳化剤、分散剤、崩壊剤、可溶化剤、増粘剤、滑沢剤等の補助剤、抗酸化剤、保存剤、芳香剤、甘味剤等の添加剤を常法に従って使用し、製剤化することができる。
【００３３】
製剤例
５５０mgの化合物２、１０５５０mgの乳糖、４５００mgのデンプンを均一に混合し、これにヒドロキシプロピルセルロース液０．１５mlを添加し、練合して軟塊を製造し、顆粒機を通して顆粒を製造し、乾燥する。乾燥後の顆粒に３００mgのステアリン酸マグネシウムを加え、均一に混合した後、打錠機によって錠剤とする。
【産業上の利用可能性】
【００３４】
本発明の化合物はＮＯの産生を抑制する作用を有するプレニル基を含む新規な化合物であり、抗アレルギー剤、抗炎症剤として有用である。