(57)【要約】      （修正有）【課題】生体内でエラスターゼ阻害活性を有する複素環式化合物を提供する。【解決手段】  一般式（I）で表される複素環式化合物；2005053811.tif 000029[式中、Ｒ１は、2005053811.tif 000030（Ａは存在または不存在のベンゼン環を意味し、ＸはＯ、Ｓ又はＮＨであり、ＹはＮ又はＣＨである。）で表される複素環式基Ｒ２およびＲ３はそれぞれ異なって−ＣＦ３基または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４（Ｒ４は低級アルキル基等）]の化合物を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（I）で表される複素環式化合物；
【化１】
2005053811.tif 000023
［式中、Ｒ１は、
【化２】
2005053811.tif 000024
（ここにおいて、Ａは存在または不存在のベンゼン環を意味し、Ｘは酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、そしてＹは窒素原子またはＣＨである。）
で表される複素環式基であり、該複素環式基は、低級アルキル基；低級アルコキシ基；およびハロゲン原子で置換されていてもよい低級アルキル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子で置換されていてもよいフェニル基からなる群から選ばれる同一または異なる１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ異なってトリフルオロメチル基または
−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４（式中、Ｒ４は低級アルキル基；フェニル低級アルキル基；又はフェニル基（該フェニル基は、低級アルキル基、低級アルコキシ基若しくはハロゲン原子で置換されていてもよい）を示す。］
【請求項２】
一般式（I−ａ）で表される複素環式化合物；
【化３】
2005053811.tif 000025
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は請求項１における定義と同じである。］
【請求項３】
Ｒ１において、下記式で示される複素環式基
【化４】
2005053811.tif 000026
が、置換されていてもよいイソキサゾリル、イソチアゾリル、１,２,３−チアジアゾリル、ベンゾ[d]イソキサゾリル、ピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、トリアゾリル、１Ｈ−インダゾリルおよびベンゾ[３,４−d]１,２,３−チアジアゾリルからなる群から選ばれた１つの基である請求項１または２に記載の複素環式化合物。
【請求項４】
下記一般式（Ｉ）
【化５】
2005053811.tif 000027
[式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は請求項１における定義と同じである。]
で表される複素環式化合物を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項５】
下記一般式（Ｉ）
【化６】
2005053811.tif 000028
[式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は請求項１における定義と同じである。]
で表される複素環式化合物を有効成分とするエラスターゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生体内でエラスターゼ阻害作用を有する新規複素環式化合物、その医薬及び医薬組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
エラスターゼは、結合組織を構成するエラスチンを分解する活性を持つプロテアーゼの総称であり、好中球エラスターゼ、膵エラスターゼ、メタロエラスターゼなどが知られている。前２者は構造的にも類似したプロテアーゼであり、基質特異性も類似している。
【０００３】
好中球エラスターゼは、好中球の顆粒に存在するセリンプロテアーゼである。この好中球エラスターゼは感染症や炎症疾患時に組織に集積した好中球より大量に放出され、肺や軟骨、血管壁等の種々の組織の間質を構成する蛋白質、例えば、エラスチン、コラーゲン、プロテオグリカン、フィブロネクチン等を分解する。その他にも好中球エラスターゼは数多くの蛋白の分解や細胞の傷害に関与することが知られている。通常、好中球エラスターゼはα１―プロテアーゼインヒビターなどの内因性プロテアーゼ阻害蛋白質によって、その活性が過剰にならないように制御されている。しかしながら、激しい炎症の起こった組織においては、好中球より分泌される好中球エラスターゼの量が増加するのと同時に、その局所で産生される活性酸素によって内因性プロテアーゼ阻害蛋白質が不活化されるために好中球エラスターゼが過剰に作用し、組織が傷害されると考えられている。この様なことから、好中球エラスターゼを阻害する薬剤が望まれている。
【０００４】
好中球エラスターゼが病態発症に関与していると考えられている疾患としては、例えば、慢性閉塞性肺疾患（肺気腫および慢性気管支炎を含む）、慢性および急性間質性肺炎、特発性間質性肺炎(IIP)、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性肺線維症、急性肺傷害(ALI)／急性呼吸促迫症候群(ARDS)、気管支拡張症、喘息、膵炎、腎炎、肝炎（肝不全）、慢性関節リウマチ、関節硬化症、変形性関節炎、乾癬、歯周病、アテローム性動脈硬化症、臓器移植における拒絶反応、虚血・再灌流時の組織傷害、ショック、敗血症、播種性血管内凝固症(DIC)や深部静脈血栓症等を含む血液凝固異常、結膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、クローン病、全身性エリテマトーデス、切迫早産などが知られている。
【０００５】
また、膵エラスターゼは本来外分泌される消化酵素であるが、膵炎においては膵エラスターゼが自己消化による膵組織の傷害に関与していると考えられている。
【０００６】
この様に慢性、急性を問わず、多様な疾患に好中球エラスターゼが（膵炎においては膵エラスターゼも）関与すると考えられるが、慢性疾患にも適用可能な経口投与によって実用的なエラスターゼ阻害活性を示す化合物は少ない。したがって、経口投与可能なエラスターゼ阻害剤は、これらの疾患の治療剤、あるいは予防剤として極めて有用であると考えられる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、生体内で優れたエラスターゼ阻害活性を有する新規化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らが鋭意研究を重ねた結果、下記一般式（I）で表される化合物が、それ自体ではエラスターゼ阻害活性は見られないが、生体内に投与すると優れたエラスターゼ阻害作用を有することを見出し、本発明を完成した。即ち、本発明は、下記一般式（I）で表される複素環式化合物、これらを有効成分とする医薬及び医薬組成物を提供するものである；
【０００９】
【化１】
2005053811.tif 000002
【００１０】
［式中、Ｒ１は、
【００１１】
【化２】
2005053811.tif 000003
【００１２】
（ここにおいて、Ａは存在または不存在のベンゼン環を意味し、Ｘは酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、そしてＹは窒素原子またはＣＨである。）
で表される複素環式基であり、該複素環式基は、低級アルキル基；低級アルコキシ基；およびハロゲン原子で置換されていてもよい低級アルキル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子で置換されていてもよいフェニル基からなる群から選ばれる同一または異なる１〜３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ異なってトリフルオロメチル基または
−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４（式中、Ｒ４は低級アルキル基；フェニル低級アルキル基；又はフェニル基（該フェニル基は、低級アルキル基、低級アルコキシ基若しくはハロゲン原子で置換されていてもよい）を示す。］
前記一般式（Ｉ）の化合物は、生体内において、優れたエラスターゼ阻害作用を有し医薬として有用である。このような本発明の化合物（Ｉ）の優れた性質の発現には、
【００１３】
【化３】
2005053811.tif 000004
【００１４】
で表される部分構造が大きく寄与している。即ち、当該複素環式基は必ず窒素原子を含み、当該窒素原子が、少なくとも１つのヘテロ原子と直接結合し環を形成しているという構造をとる。
【００１５】
従って、本発明化合物（Ｉ）の化学構造上の第一の特徴は、前記特定部分構造を有している点にある。本発明化合物（Ｉ）の化学構造上の第二の特徴は、前記特定部分構造部と残余の構造との組み合わせにある。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の化合物は、生体内で優れたエラスターゼ阻害作用を有するので、エラスターゼ作用の亢進に起因する各種疾患、例えばエラスターゼによる蛋白質分解の亢進に起因する各種疾患、特に呼吸器疾患の予防・治療剤として有用な医薬を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明の化合物（Ｉ）について、さらに説明する。
【００１８】
前記一般式（Ｉ）で表される化合物、好ましくは、下記一般式（I−ａ）で表される複素環式化合物；
【００１９】
【化４】
2005053811.tif 000005
【００２０】
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は上記と同じである。］
は、生体内で優れたエラスターゼ阻害活性を有している。
【００２１】
Ｒ１で表される複素環式基：
本発明の化合物における下記式
【００２２】
【化５】
2005053811.tif 000006
【００２３】
で表わされる複素環式基（ここにおいて、Ａ、ＸおよびＹは上記定義と同じである。）としては、例えば、イソキサゾリル、イソチアゾリル、1,2,3-チアジアゾリル、ベンゾ[d]イソキサゾリル、ピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ[3,4-d]1,2,3-チアジアゾリル、トリアゾリル、1H‐インダゾリル等が例示できる。好ましくは、イソキサゾリル、ベンゾ[d]イソキサゾリル、ピラゾリルである。より好ましくはイソキサゾリル、ピラゾリルである。
【００２４】
次に上記複素環式基に結合していてもよい置換基は、低級アルキル基；低級アルコキシ基；またはハロゲン原子で置換されていてもよい低級アルキル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子で置換されていてもよいフェニル基である。本発明の化合物において、Ｒ１における該複素環式基は、例えば、上記置換基を、置換可能な位置に１〜３個有していてもよく、置換基数が２または３個の場合、各置換基は同一または異なっていてもよい。複素環式基を構成するヘテロ原子に上記置換基が結合していてもよい。
【００２５】
Ｒ２，Ｒ３
本発明におけるＲ２及びＲ３は、いずれか一方が−ＣＦ３であり、もう一方が−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ４｛式中、Ｒ４は低級アルキル基；フェニル低級アルキル基；又はフェニル基（該フェニル基は、低級アルキル基、低級アルコキシ基若しくはハロゲン原子で置換されていてもよい）を示す。｝である。
【００２６】
本発明において「低級アルキル基」とは、直鎖状または分枝状の炭素数１〜６、好ましくは１〜４のアルキル基を意味する。具体的には、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル等が挙げられる。
【００２７】
「低級アルコキシ基」とは、直鎖状または分枝状の炭素数１〜６、好ましくは１〜４のアルコキシ基を意味する。具体的には、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、イソブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ基等が挙げられる。
【００２８】
「ハロゲン原子」としては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素をいう。
【００２９】
「ハロゲン原子で置換された低級アルキル基」とは、上記低級アルキル基の１個又は２個以上（例えば、１〜５個、好ましくは1〜３個）の水素原子が同一又は相異なるハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）で置換されたものをいう。具体的には、クロロメチル、ジフルオロメチル、トリクロロメチル、トリフルオロメチル、２−ブロモエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、ペンタフルオロエチル、３，３，３−トリフルオロプロピル、４，４，４−トリフルオロブチル、５，５，５−トリフルオロペンチル、６，６，６−トリフルオロヘキシル等が挙げられる。
【００３０】
「フェニル低級アルキル基」とは、具体的には、フェニルメチル、フェニルエチル、フェニルブチル、1−メチル−２−フェニルエチル等が挙げられる。
【００３１】
「フェニル基（該フェニル基は、低級アルキル基、低級アルコキシ基若しくはハロゲン原子で置換されていてもよい）」とは、フェニル基或いは１〜５個の上記低級アルキル基、上記低級アルコキシ基または上記ハロゲン原子で置換されたフェニル基をいう。具体的には、フェニル、トリル、キシリル、メシチル、クメニル、４−（tert−ブチル）フェニル、４−クロロフェニル、３−クロロフェニル、２−クロロフェニル、２,３−ジクロロフェニル、２,４−ジクロロフェニル、３,４−ジクロロフェニル、２,５−ジクロロフェニル、２,６−ジクロロフェニル、３,５−ジクロロフェニル、２−フルオロフェニル、３−フルオロフェニル、４−フルオロフェニル、２−ブロモフェニル、３−ブロモフェニル、４−ブロモフェニル、２，４−ジフルオロフェニル、２，３−ジフルオロフェニル、２，５−ジフルオロフェニル、３，５−ジフルオロフェニル、３，４−ジフルオロフェニル、４−ブロモ−２−フルオロフェニル、２−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、４−クロロ−２−メトキシフェニル、４−クロロ−３−メトキシフェニル、３−クロロ−４-メトキシフェニル、４−メトキシ−２−メチルフェニル、３−クロロ−４−メチルフェニル、４−クロロ−３−メチルフェニル、３−クロロ−２−フルオロフェニル、４−クロロ−２−フルオロフェニル、２−クロロ−４−フルオロフェニル、２−クロロ−６−フルオロフェニル、３−クロロ−４−フルオロフェニル、４−クロロ−２−フルオロフェニルが例示できる。また、置換される位置は特に限定されない。
【００３２】
「ハロゲン原子で置換されていてもよい低級アルキル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子で置換されていてもよいフェニル基」とは、フェニル基或いは１〜５個の上記低級アルキル基、ハロゲン原子で置換された上記低級アルキル基、上記低級アルコキシ基またはハロゲン原子で置換されたフェニル基をいう。具体的には、上記例示に加え、３−トリフルオロメチルフェニル、４−トリフルオロメチルフェニル等が例示できる。また、置換される位置は特に限定されない。
【００３３】
本発明の化合物（Ｉ）には、幾何異性体（Ｉ’）および（Ｉ’’）
【００３４】
【化６】
2005053811.tif 000007
【００３５】
［式中、Ｒ１及びＲ４は上記定義と同じである。］
が存在し、これら各異性体および化合物（Ｉ’）と化合物（Ｉ’’）の混合物も包含される。
【００３６】
本発明化合物は塩を形成しうる。本発明の化合物は、水和物や溶媒和物として存在することもある。また、本発明の化合物には光学異性体も含まれる。
【００３７】
本発明の化合物の製造方法：
本発明の化合物は、例えば、以下のようにして製造することができる。
【００３８】
【化７】
2005053811.tif 000008
【００３９】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、上記定義に同じである。）
工程１
工程１は、化合物（II）と（III）とを反応させて化合物（IＸ）を製造する工程である。本工程は、トリエチルアミンの如き塩基の存在下または非存在下、無溶媒またはピリジン、塩化メチレンやジメチルホルムアミドの如き溶媒中、化合物（II）と化合物（III）とを混合撹拌することにより実施できる。好ましくは、本工程は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩やＮ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１,１’−カルボニルジイミダゾール、炭酸Ｎ,Ｎ’−ジスクシンイミジルの如き縮合剤の存在下に行う。化合物（II）と（III）との使用割合は化合物（II）１モル当たり化合物（III）を０.９〜２モル量、好ましくは、０．９〜１．５モル量程度であり、縮合剤は化合物（II）１モル当たり、１〜２モル量、好ましくは１〜１．５モル量程度使用する。反応温度は０〜４０℃、好ましくは０〜２５℃程度の範囲から選ばれ、反応時間は１〜２０時間程度、好ましくは２〜１５時間程度の範囲から選択される。
【００４０】
なお、化合物（II）は、公知化合物であり、例えば、国際公開公報ＷＯ 00/52032号に記載の方法によって製造することができる。また、一般式(III)に含まれる化合物のほとんどは公知であるが、新規化合物も含まれる。新規化合物については、公知化合物の製造方法に準じて製造することができる。
【００４１】
工程２
工程２は化合物（IＸ）の水酸基を酸化し、化合物（Ｘ）を製造する工程である。本工程の酸化反応は塩化メチレンやジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、トルエンの如き溶媒中、化合物（IＸ）に酸化剤を作用させることにより実施できる。
【００４２】
酸化剤としてはヨードベンゼン誘導体であるデス−マーチン(Dess-Martin)試薬が挙げられる。デス−マーチン(Dess-Martin)試薬を用いる本工程は、化合物（IＸ）を上記溶媒に溶解させ、化合物（IＸ）１モル当たりt−ブタノールを１〜２モル量、およびデス−マーチン試薬を１．５〜３モル量、好ましくは１．５〜２．２モル量加え、０〜４０℃程度で、０．５〜１５時間、好ましくは１〜２時間攪拌することによって実施できる。また、ジメチルスルホキシドの存在下における五酸化リンによる酸化、ジメチルスルホキシドの存在下における１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドやＮ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド塩酸塩−ジクロロ酢酸（Cl2CHCOOH）による酸化またはオキザルクロリドとトリエチルアミンの組み合わせによる酸化（スワン：Swern酸化）も望ましい方法である。
【００４３】
工程３
工程３は化合物（Ｘ）のトリフルオロメチル基の隣のカルボニル基をアシル化し、化合物（Ｉ）を製造する工程である。本工程はトリエチルアミン、ジメチルアミノピリジンやＮ−メチルモルホリンの如き塩基の存在下または非存在下、ピリジン、塩化メチレン、アセトニトリルやジメチルホルムアミドの如き溶媒中、化合物（Ｘ）に酸無水物（（Ｒ４−ＣＯ）２Ｏ）や酸ハライド（Ｒ４−ＣＯ−Ｃｌ）を作用させることにより実施できる。酸無水物は化合物（Ｘ）１モル当たり過剰量、好ましくは３〜３０モル量程度、酸ハライドは化合物（Ｘ）１モル当たり１．１〜２モル量、好ましくは１．１〜１．５モル量程度使用する。反応温度は−４０〜４０℃、好ましくは−２０〜２０℃程度の範囲から選ばれ、反応時間は１〜２５時間、好ましくは２〜１６時間程度の範囲から選択される。尚、酸無水物（（Ｒ４−ＣＯ）２Ｏ）または酸ハライド（Ｒ４−ＣＯ−Ｃｌ）に含まれる化合物のほとんどは公知であるが、新規化合物も含まれる。新規化合物については、公知化合物の製造方法に準じて製造することができる。
【００４４】
反応混合物から本発明の化合物を単離するには、通常公知の分離精製手段、例えば、濃縮、溶媒抽出、濾過、再結晶、各種クロマトグラフィー等が利用される。また、各種の異性体の混合物として得られたときは、これらを常法により分離することもできる。例えば工程３においては、本発明化合物（Ｉ）は（Ｉ’）と（Ｉ’’）の混合物として得られることがあるが、当該混合物の状態でもよいし、クロマトグラフィー等を利用していずれかの幾何異性体のみに精製してもよい。
【００４５】
化合物（Ｉ）の光学異性体は、原料化合物として化合物（II）の光学異性体を用いることにより有利に製造することができる。
【００４６】
本発明のエラスターゼ阻害剤
本発明化合物（以下単に有効成分と略記することもある。）は生体内において好中球エラスターゼ阻害活性を有する。
【００４７】
エラスターゼに起因する疾患に罹患している患者に、本発明化合物の有効量が投与される。
【００４８】
本発明化合物は、好ましくは経口投与される。その投与量は、患者の症状、体重および年齢などにより大いに変動し得る。例えば、経口投与の場合、有効成分の用量は、通常１日につき体重60 kg当たり約 0.5 〜約 5000 mgの範囲内であり、好ましくは 1日につき体重60 kg当たり約 5 〜 約 2000 mgの範囲内であり、最も好ましくは 1日につき体重60 kg当たり15 〜 300 mgの範囲内にある。
【００４９】
本発明化合物は、通常の製剤の形で投与される。かかる通常の製剤には、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、水性もしくは油性の液剤のようなものが含まれる。これらの製剤は、有効成分を０．０１重量％以上、好ましくは０．１〜７０重量％の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上有効な他の成分を含有していてもよい。
【００５０】
これらの薬学上の製剤は、通常の薬学的に許容しうる製剤化成分を用い、通常の手法にて調合、製剤され得る。製剤化成分としては、製剤分野において常用され、かつ有効成分と反応しない物質が用いられる。具体的には、例えば乳糖、イノシトール、ブドウ糖、マンニトール、デキストラン、シクロデキストリン、ソルビトール、デンプン、部分アルファー化デンプン、白糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（低置換ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、カルボキシビニルポリマー、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、プロピレングリコール、水、エタノール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、塩化ナトリウム、水酸化ナトリウム、塩酸、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸、グルタミン酸、ベンジルアルコール、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル等が挙げられる。
【実施例】
【００５１】
以下、実施例、試験例および製剤例を示し、本発明をより詳しく説明する。
【００５２】
実施例１：N−[(１S)−２−((２S)−２−｛N−[(E)−２−アセチルオキシ−３,３,３−トリフルオロ−１−(メチルエチル)−１−プロペニル]カルバモイル｝ピロリジニル)−１−(メチルエチル)−２−オキソエチル]−(５−メチル−１−フェニルピラゾル−４−イル)カルボキサミドの製造
【００５３】
【化８】
2005053811.tif 000009
【００５４】
工程１: N−[(１S)−２−((２S)−２−｛N−[(１S,２S)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルバモイル｝ピロリジニル)−１−(メチルエチル)−２−オキソエチル]−(５−メチル−１−フェニルピラゾル−４−イル)カルボキサミドの製造：
工程１の出発物質である[(２S)−１−((２S)−２−アミノ−３−メチルブタノイル)ピロリジン−２−イル]−N−[(１S,２S)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルボキサミド塩酸塩は、国際公開公報ＷＯ00/52032に記載の方法に従って製造した。
【００５５】
得られた[(２S)−１−((２S)−２−アミノ−３−メチルブタノイル)ピロリジン−２−イル]−N−[(１S,２S)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルボキサミド塩酸塩を１４．７ｇ(２７．２mmol)および５−メチル−１−フェニルピラゾール−４−カルボン酸を５．０ｇ(２４．７mmol)含むピリジン溶液(１００ｍｌ)に、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を５．７ｇ(２９．７mmol)加え、室温にて約１２時間攪拌したのち反応液を減圧濃縮した。
【００５６】
残渣に酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、標題化合物１３．５ｇ(９９％)を得た。
APCI-MS：552(MH+)
1H-NMR (300MHz, CDCl3, δ): 0.91-1.11 (12H, m), 1.95-2.35 (6H, m), 2.56 (3H, s), 3.66-3.90 (1H, m), 4.06-4.16 (2H, m), 4.29-4.43 (1H, m), 4.53-4.62 (2H, m), 4.82 (1H, dd), 6.52 (1H, d), 6.92 (1H, d), 7.37-7.54 (5H, m), 7.91 (1H, s)。
【００５７】
工程２: N−[(１S)−２−((２S)−２−｛N−[(１S)−３,３,３−トリフルオロ−１−(メチルエチル)−２−オキソプロピル]カルバモイル｝ピロリジニル)−１−(メチルエチル)−２−オキソエチル]−(５−メチル−１−フェニルピラゾル−４−イル)カルボキサミドの製造：
工程１で得た化合物２．５０ｇ(４．５３mmol)を塩化メチレン(５０ｍｌ)に溶解し、ｔ−ブタノールを０．４５ｍｌ、デス−マーチン(Dess-Martin)試薬を３．８４ｇ(９．０６mmol)加え室温にて１時間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチルを加え、飽和チオ硫酸ナトリウム水、飽和炭酸水素ナトリウム水、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をアセトニトリルに溶解後、CHP−２０Pを用いた中圧カラムクロマトグラフィー(溶出液：水−アセトニトリル)で精製した。目的物を含む画分を減圧濃縮乾固し、標題化合物２．３０ｇ(９２％)を得た。
APCI-MS：550(MH+)
1H-NMR (300MHz, CDCl3, δ): 0.91-1.07 (12H, m), 1.92-2.17 (4H, m), 2.31-2.40 (2H, m), 2.57 (3H, s), 3.67-3.72 (1H, m), 3.84-3.89 (1H, m), 4.65 (1H, dd), 4.80-4.88 (2H, m), 6.49 (1H, d), 7.38-7.55 (6H, m), 7.89 (1H, s)。
【００５８】
工程３: N−[(１S)−２−((２S)−２−｛N−[(E)−２−アセチルオキシ−３,３,３−トリフルオロ−１−(メチルエチル)−１−プロペニル]カルバモイル｝ピロリジニル)−１−(メチルエチル)−２−オキソエチル]−(５−メチル−１−フェニルピラゾル−４−イル)カルボキサミドの製造：
工程２で得た化合物１．６２ｇ(２．９５mmol)をピリジン(１０ｍｌ)に溶解し、氷冷下、無水酢酸を２．７９ｍｌ(２９．５mmol)加え氷冷下で約１２時間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣をアセトニトリルに溶解後、CHP−２０Pを用いた中圧カラムクロマトグラフィー(溶出液：水−アセトニトリル)で精製した。目的物を含む画分を減圧濃縮乾固し、得られたアモルファスを酢酸tert-ブチル−石油エーテルから結晶化し、標題化合物１．０７ｇ(６２％)を無色結晶として得た。
融点：96-97.5℃
APCI-MS：592(MH+)
1H-NMR (300MHz, CDCl3, δ): 1.01-1.08 (12H, m), 1.84-1.97 (1H, m), 2.05-2.22 (3H, m), 2.25 (3H, s), 2.47-2.53 (1H, m), 2.57 (3H, s), 2.67-2.77 (1H, m), 3.66-3.73 (1H, m), 3.82-3.91 (1H, m), 4.69 (1H, dd), 4.85 (1H, dd), 6.45 (1H, d), 7.39-7.54 (5H, m), 7.90 (1H, s), 8.12 (1H, s)
元素分析: C29H36F3N5O5・0.25H2Oとして
計算値  C 58.43  H 6.17  F 9.56  N 11.75
実験値  C 58.30  H 6.08  F 9.51  N 11.65。
【００５９】
実施例２〜実施例７
実施例１と同様の方法により、以下の化合物を製造した。製造した化合物の物性値を第１表に示す。表中、マススペクトルは、特に記載が無い限りAPCIMSで測定した。
【００６０】
実施例２  N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(E)-2-アセチルオキシ-3,3,3-トリフルオロ-1-(メチルエチル)-1-プロペニル]カルバモイル}ピロリジニル)-1-(メチルエチル)-2-オキソエチル]-(5-メチルイソキサゾル-3-イル)カルボキサミド。
【００６１】
実施例３  N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(E)-3,3,3-トリフルオロ-1-(メチルエチル)-2-プロピオニルオキシ-1-プロペニル]カルバモイル}ピロリジニル)-1-(メチルエチル)-2-オキソエチル]-(5-メチルイソキサゾル-3-イル)カルボキサミド。
【００６２】
実施例４  N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(E)-2-アセチルオキシ-3,3,3-トリフルオロ-1-(メチルエチル)-1-プロペニル]カルバモイル}ピロリジニル)-1-(メチルエチル)-2-オキソエチル]-[1-(2-クロロ-4-フルオロフェニル)-5-メチルピラゾル-4-イル]カルボキサミド。
【００６３】
実施例５  N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(E)-2-アセチルオキシ-3,3,3-トリフルオロ-1-(メチルエチル)-1-プロペニル]カルバモイル}ピロリジニル)-1-(メチルエチル)-2-オキソエチル]-(1-tert-ブチル-5-メチルピラゾル-4-イル)カルボキサミド。
【００６４】
実施例６  N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(E)-2-アセチルオキシ-3,3,3-トリフルオロ-1-(メチルエチル)-1-プロペニル]カルバモイル}ピロリジニル)-1-(メチルエチル)-2-オキソエチル]-[1-(4-メトキシフェニル)-5-メチルピラゾル-4-イル]カルボキサミド。
【００６５】
実施例７  N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(E)-2-アセチルオキシ-3,3,3-トリフルオロ-1-(メチルエチル)-1-プロペニル]カルバモイル}ピロリジニル)-1-(メチルエチル)-2-オキソエチル]-(ベンゾ[d]イソキサゾル-3-イル)カルボキサミド。
【００６６】
【表１】
2005053811.tif 000010
【００６７】
実施例８
実施例１と同様にして第２表に記載の以下の化合物を得ることができる。
【００６８】
【表２】
2005053811.tif 000011
【００６９】
【表３】
2005053811.tif 000012
【００７０】
【表４】
2005053811.tif 000013
【００７１】
【表５】
2005053811.tif 000014
【００７２】
試験例１  ヒト好中球エラスターゼ(HNE)に対する阻害活性：
本試験はin vitroにおける本発明の化合物のヒト好中球エラスターゼに対する阻害活性を試験したものである。
【００７３】
1M NaClおよび0.001% Brij−35(ポリオキシエチレンラウリルエーテル)を含む100 mM HEPES｛［N−(２−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(２−エタンスルホン酸)］, pH 7.5｝緩衝液に、ヒト好中球エラスタ−ゼ（終濃度：0.2 U/ml、エラスチンプロダクト社）および本発明の化合物（10% ジメチルスルホキシド溶液に溶解；終濃度：10−１０〜 3 × 10−３ M）を混合し、37℃で3分間プレインキュベートした。その反応液に基質として、MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA （メトキシサクシニル−アラニル−アラニル−プロリル−バリル−ｐ−ニトロアニリド（シグマ社）を終濃度が0.5mMとなるように加えて反応を開始した。この際の37℃における反応生成物ｐ−ニトロアニリド（pNA）の生成速度を吸光度(404 nm)で３分間測定した。
【００７４】
本発明の化合物のヒト好中球エラスターゼ（HNE）の阻害活性は、次式で表した。
【００７５】
【数１】
2005053811.tif 000015
【００７６】
HNEを50%阻害する本発明の化合物の濃度（IC５０値）は、本発明の化合物濃度−阻害率曲線より算出した。結果を下記第３表に示す。
【００７７】
【表６】
2005053811.tif 000016
【００７８】
上記の結果に示すように、本発明の化合物はin vitroにおけるヒト好中球エラスターゼに対する阻害活性がみられなかった。
【００７９】
試験例２：ヒト好中球エラスターゼ(HNE)誘発肺出血に対する抑制活性：
本試験はin vivoにおける本発明の化合物の効力を試験したものである。即ち、ハムスターにヒト好中球エラスターゼを気管支内投与すると肺において出血が誘発される。このため、エラスターゼ投与の一定時間後に経気道的に肺を洗浄して得られる気管支肺胞洗浄液中にはヘモグロビンが検出される。本実験は、このヘモグロビン濃度を測定することにより、本発明の化合物によってこの出血がどの程度抑制されるかを試験したものである。
【００８０】
ハムスタ−（Syrian系、7−10週齢の雄性）を一群あたり3〜6匹に分け、各群について以下の処理を行った。
【００８１】
（Ａ）本発明化合物非投与群（病態対照群）：
25 単位のヒト好中球エラスターゼ(エラスチンプロダクト社)を溶解した生理食塩水0.2 mlをハムスターの気管支内に投与して肺出血を誘発せしめた。エラスターゼ投与の１時間後、ハムスターを脱血により屠殺し、生理食塩液2.5 mlで経気道的に肺胞を２回洗浄し、その肺胞洗浄液５ml中のヘモグロビン濃度（414 nmの吸光度（Ａ４１４）)を測定した。
【００８２】
（Ｂ）本発明化合物投与群：
所定量の本発明化合物を、ジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解した後、0.5% トラガント溶液を加えて懸濁し、ヒト好中球エラスターゼ（HNE）投与の30分前にハムスターに経口投与した（DMSO終濃度、1%）。さらに前記（Ａ）と同様の方法によりヒト好中球エラスターゼを投与した。そして、その１時間後に（Ａ）と同様にして肺胞洗浄液中のヘモグロビン濃度を測定した。
【００８３】
本発明化合物の出血抑制活性は次式より出血抑制率として表した。
【００８４】
【数２】
2005053811.tif 000017
【００８５】
肺出血を50%阻害する本発明化合物の投与量（ED５０値）は投与量−出血抑制率曲線より算出した。
【００８６】
一部の本発明化合物は、3 mg/kgの投与量における出血抑制率を算出した。
【００８７】
結果を第４表および第５表に示す。
【００８８】
【表７】
2005053811.tif 000018
【００８９】
【表８】
2005053811.tif 000019
【００９０】
第４表および第５表に示すように、本発明化合物はin vivoの本試験において強い肺出血抑制作用を示した。
【００９１】
試験例３  
試験例１および２の結果から、本発明化合物は、それ自体は活性を有しないが、生体内で活性化されていると予測された。そこで、本発明の化合物をエステラーゼで処理することにより、活性化されるか否かの試験を行った。
【００９２】
即ち、実施例１の化合物およびエステラーゼ処理により得られると予測される化合物の一つ（N-[(1S)-2-((2S)-2-｛N-[(1S)-3,3,3-トリフルオロ-1-(メチルエチル)-2-オキソプロピル]カルバモイル｝ピロリジニル)-1-(メチルエチル)-2-オキソエチル]-(5-メチル-1-フェニルピラゾル-4-イル)カルボキサミド（以下参照化合物という。））（各終濃度 100 μＭ）各々をブタ肝エステラーゼ（10 Unit/ml, Sigma）を含むPBS中で37℃、30 分インキュベートした。反応終了後直ちにHPLCによる分析およびHNE阻害活性の測定を行った。HNE阻害活性は、試験例１中に記載の方法で行った。また、参照化合物は実施例１の工程２で得られた化合物である。HPLCによる分析の条件は下記の通りである。
【００９３】
HPLC 分析条件
移動相：50mM リン酸緩衝液, pH 5.0 : AcCN = 1：1
カラム：コスモシール（Cosmosil） 5Ph（ナカライテスク（株））
4.6 I.D.× 150 mm
流  速：1 ml/分、温度： 40℃、検出： 260 nm、試料量：20 μl。
【００９４】
結果を図１及び第６表に示す。
【００９５】
【表９】
2005053811.tif 000020
【００９６】
実施例１の化合物は、エステラーゼ処理をすることによってエラスターゼ阻害活性を示し、その活性の程度は参照化合物の約１／２であった。また、参照化合物はエステラーゼ処理によって活性値は変化しなかった。
【００９７】
図１に示すように、実施例１の化合物はエステラーゼ処理することによって、参照化合物のピークおよび立体異性体と推定されるピーク（面積比で約１：１）が検出され、実施例１の化合物自身のピークはほとんど認められなかった。
【００９８】
従って、本発明の化合物は、生体内でエステラーゼ等による加水分解を受けることによって活性化するプロドラッグであることが示された。
【００９９】
試験例４  ヒト好中球エラスターゼ(HNE)誘発肺出血抑制活性の持続性：
試験例２中の（Ｂ）本発明化合物投与群において、本発明化合物10 mg/kgの投与を、ヒト好中球エラスターゼ（HNE）投与30分前から270分前まで延長して経口投与する以外は同様の方法で試験をおこなった。
【０１００】
その結果、実施例１の化合物は、270分前の投与であっても、強い肺出血抑制作用を示し、本発明化合物が持続性を高いことが判明した。
【０１０１】
以上の試験例が示すように、本発明化合物はin vivoにおいて優れたエラスターゼ阻害作用を示した。したがって、本発明化合物は、エラスターゼの作用の亢進に起因する疾患、例えば、エラスターゼによる蛋白質分解亢進に起因する種々の疾患、特に呼吸器疾患の治療剤・予防剤として有用である。
【０１０２】
次に製剤に関する実施例を挙げる。なお、活性成分である本発明化合物は、5 μm もしくはそれ以下の大きさに微紛化したものを使用した。
【０１０３】
実施例Ａ、ＢおよびＣ: 錠剤；
第７表に記載の顆粒成分を、常法により顆粒化し、それに、賦形剤を加えて、打錠し、120 mg から 300 mgの重さの錠剤を得た。
【０１０４】
【表１０】
2005053811.tif 000021
【０１０５】
実施例Ｄ、ＥおよびＦ: 顆粒剤；
第８表に記載の顆粒成分を常法により顆粒化し、それに賦形剤を加えて顆粒剤を得た。
【０１０６】
【表１１】
2005053811.tif 000022
【産業上の利用可能性】
【０１０７】
本発明によれば、生体内で優れたエラスターゼ阻害作用を有し、エラスターゼ作用の亢進に起因する各種疾患、例えばエラスターゼによる蛋白質分解の亢進に起因する各種疾患、特に呼吸器疾患の予防・治療剤として有用な医薬を提供することができる。より具体的には、慢性閉塞性肺疾患（肺気腫および慢性気管支炎を含む）、慢性および急性間質性肺炎、特発性間質性肺炎(IIP)、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性肺線維症、急性肺傷害(ALI)／急性呼吸促迫症候群(ARDS)、気管支拡張症、喘息、膵炎、腎炎、肝炎（肝不全）、慢性関節リウマチ、関節硬化症、変形性関節炎、乾癬、歯周病、アテローム性動脈硬化症、臓器移植における拒絶反応、虚血・再灌流時の組織傷害、ショック、敗血症、播種性血管内凝固症(DIC)や深部静脈血栓症等を含む血液凝固異常、結膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、クローン病、全身性エリテマトーデス、切迫早産などの治療・予防薬として有用な医薬を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１０８】
【図１】図１は、実施例１化合物のエステラーゼ処理前後及び参照化合物のエステラーゼ処理前でのHPLCによる分析結果を示す。縦軸は260nmでの吸光度の変化を電位差として表したものである（×１０−２ボルト(Volts)）であり、横軸は時間（分）を示す。（Ａ）はエステラーゼ処理前の実施例１化合物のHPLCによる分析結果、（Ｂ）はエステラーゼ処理前の参照化合物のHPLCによる分析結果、（Ｃ）はエステラーゼ処理後の実施例１化合物のHPLCによる分析結果を示す。
【図１】
2005053811.tif 000031
【配列表】
2005053811000001.app