(57)【要約】【課題】エビネ属、ガンセキラン属またはその他の偽球茎を有するラン科植物またはその搾汁からの抽出物から得られた安全の皮膚外用剤を提供する。【解決手段】ラン科植物の例えばエビネの花、根、茎、葉もしくは全草または部分を水洗、カッターで細切りしたのち、水またはアルコール類で抽出する。あるいは細片を圧搾して搾汁を得る。水もしくはアルコール抽出液または搾汁もしくは搾汁からの抽出液を、各種クロマトグラフィーの組み合わせで、分画溶出を繰り返し、インディカンを得る。インディカンには、必要に応じてビタミン類、アミノ酸、保湿剤、食塩等の補助的機能栄養剤を加えて、育毛剤、美白剤、保湿剤、抗フケ菌剤等の皮膚外用剤とする。天然由来のため無毒性、無刺激性であり、長期に連続使用できる皮膚ケア剤としても有効である。必要に応じてビタミン類などを添加してもよい。育毛剤、抗フケ菌剤、化粧料、美白剤等に適用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−ο−β−Ｄ−グルコピラノシル−２−ヒドロキシインドールを有効成分とすることを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エビネ属、ガンセキラン属、その他の偽球茎を有するラン科植物、または藍を含む植物もしくはその搾汁からの抽出物含有皮膚外用剤、特にインドール配糖体含有皮膚外用剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、インドール配糖体の皮膚外用剤に関しては、下記の文献が知られている。特許文献１は、エビネランから単離された３−ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル−３−ヒドロキシインドール（カラントサイドＡ）の皮膚血流量増進作用、育毛作用、抗チロシナーゼ活性、美白作用を開示している。特許文献２は、カラントサイドＡの抗菌作用、抗フケ菌作用を示している。特許文献３は、カラントサイドＡの抗チロシナーゼ活性、美白作用を開示している。特許文献４は、カラントサイドＡの酵素分解物である３−ヒドロキシインドールの育毛作用、抗チロシナーゼ活性を示し、美白剤としての用途も示唆している。
【０００３】
【特許文献１】特開平１０−２６５４９２号公報
【特許文献２】特開平１１−２９４８９号公報
【特許文献３】特開平１１−１９３２１１号公報
【特許文献４】特開平２０００−１６９２２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者は、インドール誘導体の機能性につき鋭意研究の結果、３−ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−３−ヒドロキシインドール（インディカン）にも、３−ヒドロキシインドールと同様の皮膚血液量増進作用、抗チロシナーゼ活性があることを見出し、本発明にいたった。
【０００５】
本発明は、インドール誘導体を有効成分として含む皮膚外用剤を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の皮膚外用剤は、３−ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−３−ヒドロキシインドール（インディカン）を有効成分として含むことを特徴としている。
【０００７】
本発明に用いるインディカンは、例えばエビネ属植物、その抽出液、搾汁または搾汁からの抽出液から単離することができる。その構造式を化１に示す。インディカンとともに単離される３−ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシル−３−ヒドロキシインドール（カラントサイドＡ）は化２に、２−Ｓ−β−Ｄ―グルコピラノシル−３−ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２−チオール−３−ヒドロキシインドール（カラントサイドＢ）は化３に示す。
【０００８】
【化１】
2005179216.tif 000002
【化２】
2005179216.tif 000003
【化３】
2005179216.tif 000004
【０００９】
本発明の皮膚外用剤には、通常用いられる補助的機能栄養成分として、ビタミン類、アミノ酸類、動植物油、塩化ナトリウム等を適宜選択して用いることができる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の皮膚外用剤は、含有するインディカンにより、インドール配糖体特有の皮膚血流量増進作用、抗フケ菌作用を示す。また強い抗チロシナーゼ活性に基づき美白作用もある。天然由来で作用がマイルド、皮膚刺激性がないことから長期の反復使用に適している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において、ラン科植物のエビネ属に属する植物としては、次のものを例示できる。
（０１）ジエビネ型：ジエビネ（Ｃ．ｄｉｓｃｏｌｏｒ）、キエビネ（Ｃ．ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ）、キリシマエビネ（Ｃ．ａｒｉｓｔｕｌｉｆｅｒａ）、アマミエビネ（Ｃ．ａｍａｍｉａｎａ）、ニオイエビネ（Ｃ．ｉｚｕ−ｉｎｓｕｌａｒｉｓ）、サルメンエビネ（Ｃ．ｔｒｉｃａｒｉｎａｔａ）、トクノシマエビネ（Ｃ．ｔｏｋｕｎｏｓｈｉｍａｅｎｓｉｓ）、アリサンエビネ（Ｃ．ａｒｉｓａｎｅｎｓｉｓ）、ホソバナエビネ（Ｃ．ｇｒａｃｉｌｉｆｌｏｒａ）、ヒマラヤニオイエビネ（Ｃ．ｐｌａｎｔａｇｉｎｅａ）、クロロレウカ（Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｌｅｕｃａ）、トガリバエビネ（Ｃ．ｃａｕｄａｔｉｌａｂｅｌｌａ）。
（０２）スズフリエビネ型：スズフリエビネ（Ｃ．ｌｉｕｋｉｕｅｎｓｉｓ）、タマザキエビネ（Ｃ．ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ）、プルクラ（Ｃ．ｐｕｌｃｈｒａ）。
（０３）タガネラン型：タガネラン（Ｃ．ｂｕｎｇｏａｎａ）、ホワイテアナ（Ｃ．ｗｈｉｔｅａｎａ）。
（０４）サクラジマエビネ型：サクラジマエビネ（Ｃ．ｏｂｌａｎｃｅｏｌａｔａ）、マンニイ（Ｃ．ｍａｎｎｉ）。
（０５）キソエビネ型：キソエビネ（Ｃ．ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｒｉ）、アルピナ（Ｃ．ａｌｐｉｎａ）。
（０６）キンセイラン型：キンセイラン（Ｃ．ｎｉｐｐｏｎｉｃａ）。
（０７）ヒロハノカラン型：ヒロハノカラン（Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ）。
（０８）アサヒエビネ型：アサヒエビネ（Ｃ．ｈａｔｔｏｒｉｉ）。
（０９）ナツエビネ型：ナツエビネ（Ｃ．ｒｅｆｌｅｘａ）。
（１０）ツルラン型：ツルラン（Ｃ．ｆｕｒｃａｔａ）、オナガエビネ（Ｃ．ｌｏｎｇｉｃａｌｃａｒａｔａ）、オキナワエビネ（Ｃ．ｏｋｉｎａｗａｅｎｓｉｓ）、マスカ（Ｃ．ｍａｓｕｃａ）、マダガスカリエンシス（Ｃ．ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ）、ナタレンシス（Ｃ．ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）。
（１１）トクサラン型：トクサラン（Ｃ．ｖｅｎｕｓｔａ）、シロトクサラン（Ｃ．ｌｏｎｇｉｐｅｓ）、ビロバ（Ｃ．ｂｉｌｏｂａ）。
（１２）ペステイタ型：ベステイタ（Ｃ．ｖｅｓｔｉｔａ）、ロゼア（Ｃ．ｒｏｓｅａ）、エルメリ（Ｃ．ｅｌｍｅｒｉ）、ルベンス（Ｃ．ｒｕｂｅｎｓ）、カージオグロッサ（Ｃ．ｃａｒｄｉｏｇｌｏｓｓａ）。
【００１２】
ガンセキラン属（Ｐｈａｉｕｓｆｌａｖｕｓ（Ｂｌｕｍｅ）  Ｌｉｎｄｌ．）、その他の偽球茎を有するラン科植物としては、ホテイラン属（Ｃａｌｙｐｓｏ  Ｓａｌｉｓｂ．）、ヒトツボクロ属（Ｔｉｐｕｌａｒｉａ  Ｎｕｔｔ．）、ナリヤラン属（Ａｒｕｎｄｉｖａ  Ｂｌｕｍｅ）、シラン属（Ｂｌｅｔｉｌｌａ  Ｒｅｉｃｈｂ．  Ｆｉｌ．）、クモキリソウ属（Ｌｉｐａｒｉｓ  Ｌ．Ｃ．  Ｒｉｃｈａｒｄ）、サワラン属（Ｅｌｅｏｒｃｈｉｓ  Ｆ．  Ｍｅａｋ．）、ヤチラン属（Ｍａｌａｘｉｓ  Ｓｏｌａｎｄ．）、コウトウシラン属（Ｓｐａｔｈｇｌｏｔｔｉｓ  Ｂｌｕｍｅ）、エンレイショウキラン属（Ａｃａｔｈｏｐｈｉｐｐｉｕｍ  Ｂｌｕｍｅ）、ヒメトケンラン属（Ｔａｉｎｉａ  Ｂｌｕｍｅ）、ヒメクリソラン属（Ｈａｎｃｏｃｋｉａ  Ｒｏｌｆｅ）、メオトラン属（Ｇｅｏｄｏｒｕｍ  Ｊａｃｋｓｏｎ）、イモネヤガラ属（Ｅｕｌｏｐｈｉａ  Ｒ．Ｂｒ．）、サイハイラン属（Ｃｒｅｍａｓｔｒａ  Ｌｉｎｄｌ．）、コハクラン属（Ｋｉｔｉｇｏｒｃｈｉｓ  Ｆ．Ｍｅａｋ）、コケイラン属（Ｏｒｅｏｒｃｈｉｓ  Ｌｉｎｄｌ．）、シュンラン属（Ｃｉｍｂｉｄｉｕｍ  Ｓｗ．）、オサラン属（Ｅｒｉａ  Ｌｉｎｄｌ．）、マツジタラン属（Ｂｕｌｂｏｐｈｌｌｕｍ  Ｔｈｏｕ．）等を挙げることができる。
【００１３】
またインディカンは、藍を含む植物、例えばタデ科のタデアイ（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｍ  Ｌｏｕｒ．）、マメ科コマツナギ属のインド藍（Ｉｎｄｉｇｏｆｅｒａ  ｔｉｎｃｔｏｒｉａ  Ｌ．）及びナンバンコマツナギ（Ｉｎｄｉｇｏｆｅｒａ  ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ  Ｍｉｌｌ．）、キツネノゴマ科の琉球藍（Ｓｔｒｏｂｉｌａｎｔｈｅｓ  ｃｕｓｉａ）、アブラナ科の大青（Ｉｓａｔｉｓ  ｔｉｎｃｔｏｒｉａ  Ｌ．）から、分離精製することができる。むろん、市販の粉末インディカンを使用してもよい。
【００１４】
抽出溶媒としては、水、低級アルキルアルコール、多価アルコールの単独または混合物を使用する。低級アルキルアルコールには、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどを使用でき、望ましくはエタノールを用いる。多価アルコールとしては、エチレングリコール、メトキシジグリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、メチルプロパンジオール、１，３−ブチレングリコール、２，３−ブタンジオール、３−メチル−１，３−ブタンジオール、１，２−ペンタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、その他のグリセリン、ジグリセリン、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレンメチルグルコシドなどを好適に用いることができる。
【００１５】
ラン科植物の例えばエビネ属植物からの抽出液または搾汁は、エビネ属に属する植物の少なくとも１種の花、根、茎、葉などの全草または部分を水洗、粗切りして、溶媒に浸漬抽出するか、プレス圧搾により得られる。溶媒抽出では、エビネ約１０ｋｇに対して、例えば２０〜９０％エチルアルコール約２０リットルを混合し、７〜１０日間冷暗所において密閉保存した後、固液分離して濾過する。望ましくは、圧搾して得られた搾汁に対して、２０〜９０％の含水エチルアルコールを約１：１（容量）の割合で混合抽出する。得られた抽出液は、約１〜２週間、冷暗所において密封熟成するとさらに効果的である。搾汁製造の際の圧縮圧は、５００〜５，０００ｋｇ／ｃｍ２程度でよい。搾汁はそのまま、または精製もしくは希釈して使用する。
【００１６】
本発明に使用するインディカンは、例えば次のようにして製造する。エビネランの地下部を粉砕し、アルコールで抽出する。抽出液を濾過し、残渣にまたアルコールを加え、同様の操作を複数回繰り返す。全アルコール抽出液を合わせて、減圧下で溶媒を留去する。アルコール抽出エキスを酢酸エチルと水で分配し、酢酸エチル移行部及び水移行部を得、水移行部を逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィーで糖除去し、アルコール溶出部を得、このアルコール溶出部を順相シリカゲルクロマトグラフィーで分離して５分画し、第４分画部を順相シリカゲルクロマトグラフィー及び逆相ＨＰＬＣで分離精製し、カラントサイドＡ、カラントサイドＢ及びインディカンを単離する。
【００１７】
本発明のインディカン含有溶液は、後述するようにカラントサイドＡまたは３−ヒドロキシインドール並みの皮膚血流量増進作用、抗チロシナーゼ活性を有し、育毛作用、美白作用が認められる。
【００１８】
インディカン含有溶液には、必要に応じて通常皮膚外用剤に使用する補助的栄養機能成分を添加できる。例えば、ビタミン類としては、ビタミンＡ（レチノール）、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、ビタミンＣ（Ｌ−アスコルビン酸）、ビタミンＤ類、ビタミンＥ（トコフェロール）、パントテン酸ナトリウム、パントテン酸カリウム、ビタミンＨ（ビオチン）等がある。アミノ酸には、ドーパ（β−３−４−ジヒドロキシフェニルアラニン）、動植物油として、馬油、卵油、オリーブ油、ツバキ油、菜種油、ゴマ油、胚芽油等を用いることができる。また、保湿剤として、水飴、マルトース、メチルイソブチルケトン、メチルエチルケトン、３−メチル−１，３−ブタンジオール、ソルビトール、乳酸、ｔ−ブタノール、２，３−ブタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、メチルプロパンジオール、メトキシイソプロパノール、メトキシジグリコール、メトキシメチルブタノール、その他のグリコール類を使用することもできる。
【００１９】
添加剤の種類及び添加量は、使用目的によって異なるので特定できないが、一般的な皮膚外用剤にあっては、重量％で、エタノール１０〜５０％、インディカンが約０．０１〜１０％、酢酸トコフェロールが約０．０１〜１．０％、馬油が約０．０１〜５％、パントテン酸ナトリウムが約０．０１〜４％、ニコチン酸アミドが約０．０１〜５％、アスコルビン酸が約０．０１〜１０％、グリコール酸が約０．０１〜１０％、ビオチンが約０．００１〜１％、ビタミンＢ６が約０．０１〜２％、塩化ナトリウムが約０．１〜５％である。精製水は適量用いる。
【００２０】
また化粧用組成液にあっては、重量％で、エタノール１０〜５０％、インディカンが約０．０１〜１％、酢酸トコフェロールが約０．０１〜０．５％、馬油が約０．０１〜１％、パントテン酸ナトリウムが約０．０１〜１％、ニコチン酸アミドが約０．０１〜１％、アスコルビン酸が約０．０１〜２％、グリコール酸が約０．０１〜５％、ビオチンが約０．００１〜０．１％、ビタミンＢ６が約０．０１〜１％、塩化ナトリウムが約０．１〜５％である。
【００２１】
また上記物質以外であっても、通常皮膚外用剤や化粧料に添加される補助的添加剤は適宜使用することができる。またローション、乳液、クリーム、パック、軟膏、化粧水、浴用剤など、使用目的あるいは剤形に応じて、一般的に使われている材料は任意に用いてもよい。
【００２２】
本発明のインディカン含有溶液の育毛、抗フケ菌、美白、保湿作用の機序は、必ずしも明確ではないが、育毛作用は、カラントサイドＡ類似の皮膚血流量増進作用に、抗フケ作用は抗フケ菌作用に、美白作用は抗チロシナーゼ活性に基づくものと推定できる。
【００２３】
添加剤の作用は、必ずしも明確ではないが、ビタミン類は粘膜、神経の保健に役立ち、皮膚の角質化の防止機能がある。ビタミンＢ１、ビタミンＢ２は、皮膚、粘膜の神経を安定化させるとともに活性化し、細胞呼吸を助ける。ビタミンＣは皮膚の新陳代謝を促し、ビタミンＥは血行促進、細胞活性化作用がある。ビタミンＨ、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、パントテン酸とその塩類は、いずれも代謝機能を改善し、ビオチンは皮膚疾患の予防作用がある。動植物油は皮膚をやわらかくし、特に馬油と胚芽油は効果的である。グリコール酸はｐＨ調整のために使用し、塩化ナトリウムはその浸透圧的な作用により、有効成分が皮膚の深部まで浸透しやすくする。
【実施例１】
【００２４】
宮崎県産エビネ（Ｃａｌａｎｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｌｏｒ  Ｌ．）の地下部（７．５ｋｇ） を粉砕し、エタノール（１８リットル）を用い、熱時抽出を行なった。抽出液を濾過し、残渣にエタノール（１８リットル）を加え、同様の操作を計３回行った。全エタノール抽出液を合わせて減圧下で溶媒を留去し、エタノール抽出エキス（３３０ｇ，地下部からの収率４．４％） を得た。このエタノール抽出エキス（３００ｇ）を酢酸エチル：水（１：１，ｖ／ｖ）で分配し、酢酸エチル移行部（７５ｇ，１．１％）、及び水移行部（２２５ｇ，３．３％）を得た。得られた水移行部（３５ｇ）を逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー［１．０ｋｇ，水→メタノール］で糖除去し、メタノール溶出部（１３ｇ，０．１９％) を得た。このメタノール溶出部（１３ｇ）を順相シリカゲルクロマトグラフィー［１．０ｋｇ，クロロホルム：メタノール（１０：１→３：１→１：１）→クロロホルム：メタノール：水（６５：３５：１０，下層→６：４：１）→メタノール］で分離し、Ｆｒ．１（４９３ｍｇ）、Ｆｒ．２（４．１ｇ）、Ｆｒ．３（２．７ｇ）、Ｆｒ．４（２．０ｇ）、Ｆｒ．５（４．０ｇ）の各分画を得た。Ｆｒ．４（２．０ｇ）を順相シリカゲルクロマトグラフィー ［４０ｇ，クロロホルム：メタノール：水（７：３：１，下層→６５：３５：１０，下層→６：４：１）→メタノール］及び逆相ＨＰＬＣ［Ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−Ａ（２５０×２０ｍｍ  ｉ．ｄ．），ｓｏｌｖｅｎｔ：１］メタノール：水（３０：７０，ｖ／ｖ），２］［メタノール：水（２５：７５，ｖ／ｖ），流速：９．０ｍｌ／ｍｉｎ］で分離精製し、カラントサイドＡ（８１．９ｍｇ，０．００１２％）、カラントサイドＢ（３２．７ｍｇ，０．０００４８％)およびインディカン（３４．１ｍｇ，０．０００５０％）を単離した。
【試験例１】
【００２５】
（ラット皮膚血流量増進作用）
実験動物として、ＳＬｃ：ウィスター系雄性ラット（体重１８０〜２００ｇ）を用いた。皮膚血流量は、レーザードップラー血流計（Ｌａｓｅｒ  Ｄｏｐｐｌｅｒ  Ｆｌｏｗｍｅｔｅｒ  ＰＦ２Ｂ，Ｐｅｒｉｍｅｄ）を用いて測定した。ラットの背部を剪毛し、翌日にウレタン（１ｇ／ｋｇ）麻酔下でラットの皮膚血流量を測定し、前値とした。前値測定直後に被験液２５μｌ（５０％エタノール溶液）を前値測定部位に塗布し、その２０分後に塗布部位の皮膚血流量を再度測定し、前値に対する増加率を算出した。被検群には実施例１で得られたインディカン溶液（０．２％）とカラントサイドＡ液（０．２％）を用い、対照群には５０％エタノール溶液を塗布した。結果を表１に示す。
【００２６】
【表１】
2005179216.tif 000005
【試験例２】
【００２７】
（抗フケ菌作用）
被検群として、実施例1のインディカンとカラントサイドＡを用い、対照例としてテトラサイクリン・ＨＣｌを用いて、次の方法により試験した。インディカン含有液とカラントサイドＡ液から４５℃減圧下で溶媒を完全に留去して、各乾燥物を得た。次いで、各乾燥物を精製水に溶かして試料液を調製、滅菌済みのメンブレンフィルターを用いて濾過除菌した。滅菌精製水を用いて、濾過した試料液を希釈した。１ｍｌの液体培地に試料７．５μｌを加えて被検培地とした。このとき試料の希釈濃度は以下の２倍希釈とした。用いた培地は、ペプトン０．５％、酵母エキス０．３％、ブドウ糖１０％、オリーブ油１．０％、ｐＨ６．０であった。菌の接種及び培養は、凍結保存菌を解凍して、その１０μｌを液体培地１０ｍｌに接種、２５℃で一晩振盪培養した。接種菌液は、あらかじめ測定した一晩振盪培養後の菌数により、菌数約１０６ 個／ｍｌとした。被検培地への接種菌液（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）１０μｌ、最終菌液量は約１０４個／ｍｌとした。判定は、以下の基準に従い最小阻止濃度（ＭＩＣ）を求めた。結果を表２に示す。
【００２８】
（１） 発育陽性（＋）の判定基準：肉眼的に混濁または沈殿が認められた場合。
（２） 発育阻止（−）の判定基準：肉眼的に混濁または沈殿が認められない場合。
【００２９】
【表２】
2005179216.tif 000006
【試験例３】
【００３０】
（抗チロシナーゼ活性）
ＭａｓｏｎとＰｅｔｅｒｓｏｎの方法に準じて、美白効果につき次の試験をした。被検液として、実施例１のインディカンとカラントサイドＡを用い、対照例として陽性対照薬コウジ酸を用いた。被検液０．５ｍｌにＬ−ドーパ溶液（ｐＨ６．８、ＰＢＳ中０．０３％）０．５ｍｌを加えて、２５℃、１０分間インキュベートした。次いで、マッシュルーム由来のチロシナーゼ溶液（ｐＨ６．８、ＰＢＳ中０．２ｍｇ／ｍｌ）０．５ｍｌを添加し、２５℃、５分間インキュベートした。反応後、４７５ｎｍ吸光度（Ｄ１）を測定した。別にドーパ溶液を添加せずに、同様な操作で吸光度（Ｄ２）を測定するとともに、さらに被検液無添加におけるドーパクロム生成量としての吸光度（Ｄ３）を測定した。前記Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３を用い、下式によりドーパクロム生成阻害率（阻害率％）を求め、抗チロシナーゼ活性とした。結果を表３に示す。表３において、ＯＤは光学的濃度、ＳＤはその標準偏差である。
阻害率（％）＝｛［Ｄ３−（Ｄ１−Ｄ２）］／Ｄ３｝×１００
【００３１】
【表３】
2005179216.tif 000007
【試験例４】
【００３２】
（皮膚刺激性試験）
外用で用いられている実施例１のインディカン含有液について、モルモットを用いた皮膚刺激性の試験を行った。ハートレー系モルモットは雌性３００ｇ前後を６匹一群として用いた。試験前にエーテルで麻酔し、背部を広く電気バリカンで剃毛し、さらにシェーバーで剃毛する。除毛部を消毒用アルコールでよく拭き、試料の塗布部位の一方を注射針で格子状の傷を入れた。検体の抽出０．５ｍｌを２．５×２．５ｃｍの濾紙上に吸着させ、しっかりと防水フィルム（森下仁丹社製）で固定し、その上を伸縮粘着包帯で固定した。貼布後２４時間目にパッチをはがし、紅斑や浮腫の程度をエタノールをブランクとして比較した。その結果、実施例１のインディカン含有原液に、特に皮膚を刺激する反応は認められず、ブランクの場合と同様であった。
【００３３】
試験例１，２，３の結果、実施例１のインディカン含有液は、ラット皮膚血流促進作用、抗フケ菌作用、抗チロシナーゼ活性において、カラントサイドＡ同様の効果があることが判明した。また試験例４の結果から、インディカン含有液には皮膚刺激性も認められない。
【配合例１】
【００３４】
（頭皮外用剤）
各成分を下記の割合で配合し、頭皮外用剤を調製した。単位は（ｇ）である。
エタノール                        ４００．００
インディカン含有液                  １０．００
酢酸トコフェロール                    ０．２０
馬油                                  ２．００
パントテン酸ナトリウム                １．００
ニコチン酸アミド                      １．５０
アスコルビン酸                        ３．００
グリコール酸                        １０．００
ビオチン                              ０．６０
ビタミンＢ６                          ０．７５
塩化ナトリウム                        ９．００
精製水                          （全体が１リットルになるように適量補充。）
【試験例５】
【００３５】
フケ、抜け毛の激しい男性５人と女性５人に、配合例１で得た頭皮外用剤を２回／日６ヶ月間試用してもらった。フケ及び抜け毛の発生は、全員１週間後には顕著に改善された。６ヵ月後には、全員頭髪が増えて起立してきた。特に女性の抜け毛の改善が顕著であった。
【配合例２】
【００３６】
（化粧水）
各成分を下記の割合で配合し、化粧水を調製した。単位は（ｇ）である。
エタノール                        ２５０．００
インディカン含有液                    １．００
酢酸トコフェロール                    ０．２０
馬油                                  ２．００
パントテン酸ナトリウム                １．００
ニコチン酸アミド                      １．００
アスコルビン酸                        ５．００
グリコール酸                          ５．００
ビオチン                              ０．４０
ビタミンＢ６                          ０．５０
塩化ナトリウム                        ９．００
精製水                          （全体が１リットルになるように適量補充。）
【試験例６】
【００３７】
年齢４０〜５０歳の女性３人と男性２人に、配合例２の化粧水を２回／日、２０日間試用してもらい、美白効果と保湿効果を中心に聴取した。その結果、全員３日目頃から肌がしっとりしてきた。しみはほとんど消失し、くすみのあった女性２人のうち１人は消失、１人は薄くなった。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
本発明の皮膚外用剤は、含有するインディカンの作用から、育毛、養毛剤、抗フケ菌剤等の頭皮外用剤、化粧料、浴用剤等、広く皮膚ケア剤として利用できる。剤形も、用途に応じてローション、乳液、クリーム、パック、軟膏、リキッドなどを、適宜選択できる。