(57)【要約】    【課題】膵リパーゼあるいは細菌性リパーゼの阻害効果に優れ、しかも多くの植物に含有されて安全性に優れ、肥満化傾向あるいはニキビや皮膚炎などに有効に対応できるリパーゼ阻害剤を提供すること。      【解決手段】リパーゼ阻害剤は、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物、没食子酸又はその塩、没食子酸又はその塩の含有物からなる群から選ばれた１種又は２種以上を有効成分として含む。このリパーゼ阻害剤において、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩は、カフェー酸又はその塩、ロスマリン酸又はその塩のいずれかとしても良い。また、これらのリパーゼ阻害剤を含む飲食物としても良い。  【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物、没食子酸又はその塩、没食子酸又はその塩の含有物からなる群から選ばれた１種又は２種以上を有効成分として含み、膵リパーゼを阻害するリパーゼ阻害剤。
【請求項２】
３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩は、カフェー酸又はその塩、ロスマリン酸又はその塩のいずれかである請求項１に記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項３】
３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物は、カフェー酸又はその塩の含有物、ロスマリン酸又はその塩の含有物のいずれかである請求項１に記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項４】
カフェー酸又はその塩の含有物は、ヤラッパの根茎、洋なしの果実、バジルの葉、タイムの葉、ジャーマンダ−の葉、バーベナの葉、コーヒーの葉又はオレガノの全草の抽出物あるいはこれらの乾燥物である請求項３に記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項５】
ロスマリン酸又はその塩の含有物は、ウツボグサの全草、オレガノの全草、スペアミントの全草、ローズマリーの組織培養物、クラリセージの全草、マージョラムの全草、アップルミントの全草、ペニーロイヤルの全草、ペパーミントの全草、セージの全草、ハッカの全草、タイムの全草又はシソの葉、種子の抽出物あるいはこれらの乾燥物である請求項３に記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項６】
没食子酸又はその塩の含有物は、マンゴーの花、マンサクの葉、アムラの実、ザクロの果実又はドングリの果実の抽出物あるいはこれらの乾燥物である請求項１に記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれかに記載のリパーゼ阻害剤を含む飲食物。
【請求項８】
３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物、没食子酸又はその塩、没食子酸又はその塩の含有物からなる群から選ばれた１種又は２種以上を有効成分として含み、細菌性リパーゼを阻害するリパーゼ阻害剤。
【請求項９】
３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩は、カフェー酸又はその塩、ロスマリン酸又はその塩のいずれかである請求項８に記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項１０】
３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物は、カフェー酸又はその塩の含有物、ロスマリン酸又はその塩の含有物のいずれかである請求項８に記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項１１】
カフェー酸又はその塩の含有物は、ヤラッパの根茎、洋なしの果実、バジルの葉、タイムの葉、ジャーマンダ−の葉、バーベナの葉、コーヒーの葉又はオレガノの全草の抽出物あるいはこれらの乾燥物である請求項１０に記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項１２】
ロスマリン酸又はその塩の含有物は、ウツボグサの全草、オレガノの全草、スペアミントの全草、ローズマリーの組織培養物、クラリセージの全草、マージョラムの全草、アップルミントの全草、ペニーロイヤルの全草、ペパーミントの全草、セージの全草、ハッカの全草、タイムの全草又はシソの葉、種子の抽出物あるいはこれらの乾燥物である請求項１０に記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項１３】
没食子酸又はその塩の含有物は、マンゴーの花、マンサクの葉、アムラの実、ザクロの果実又はドングリの果実の抽出物あるいはこれらの乾燥物である請求項８に記載のリパーゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膵リパーゼの作用を阻害し、肥満の予防と治療に寄与するリパーゼ阻害剤及び皮膚表層に常在する細菌が産生するリパーゼの作用を阻害し、細菌性リパーゼに起因するニキビや皮膚炎などを予防、治療するリパーゼ阻害剤に関する。  
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の簡便化、欧米化による脂質の過剰摂取と慢性的な運動不足により肥満が増加傾向にある。肥満は、糖尿病、心臓病、高血圧症などの生活習慣病の誘発因子として高齢者のみならず若年層にとっても重大な問題となっている。しかし、肥満の治療と予防は、本人の強い意志や家族の協力による食生活の改善が必要とされるものの容易なことではない。かかる事情下、食生活の改善という困難な課題を解決する一助とすべく、従来、抗肥満剤として種々のリパーゼ阻害剤が提案されている。食餌中に含まれる脂質は、膵臓のリパーゼで分解されて小腸から吸収されるため、リパーゼを阻害すれば脂質の体内への吸収が抑制され、肥満の治療と予防が可能と考えられ、リパーゼ阻害剤を抗肥満剤として利用するものである。
【０００３】
また、皮脂中に含まれるトリグリセライドが皮膚表層に常在するプロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）、シュードモナス・スピーシーズ（Pseudomonas sp.）、マイクロコッカス・スピーシーズ（Micrococcus sp.）などの細菌、特にはプロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium acnes）が産生するリパーゼにより分解されて生成する遊離脂肪酸は皮膚に炎症を惹起し、ニキビや皮膚炎の原因となる。  ニキビや皮膚炎などは、思春期、食生活の乱れ、睡眠不足、ストレスの増進など様々な要因で皮脂の分泌が亢進した場合に好発する。したがって、細菌が産生するリパーゼを抑制できれば、遊離脂肪酸に起因するニキビや皮膚炎を予防、治療できる。
【０００４】
従来、リパーゼ阻害剤は、フラボノイド類を含有するリパーゼ阻害剤(特許文献１参照)、トリテルペン類化合物及びその誘導体からなる群から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有するリパーゼ阻害剤（特許文献２参照）、芍薬の花または芍薬の花エキスを有効成分とするリパーゼ阻害剤（特許文献３参照）、バラ科、ボケ科、カリン及び／又はシソ科、タツナミソウ属、コガネバナの抽出物を有効成分とする細菌性リパーゼに対する皮膚疾患の治療剤（特許文献４参照）等数多くの提案がある。しかし、カフェー酸は、例えば飲食用組成物における高血圧の予防・治療効果を有するものとしての提案があり（特許文献５参照）、ロスマリン酸は、例えば香味劣化抑制剤としての提案があり（特許文献６参照）、また、没食子酸は、例えば酸化防止成分として皮膚外用剤に利用することが提案されているが（特許文献７参照）、これらがリパーゼの阻害効果を有するとの報告、提案はこれまでにない。
【特許文献１】特開平７−６１９２７号公報
【特許文献２】特開平９−４０６８９号公報
【特許文献３】特開２００２−５３４８４号公報
【特許文献４】特開２０００−２２６３０９号公報
【特許文献５】特開２００２−１５４９７７号公報
【特許文献６】特開２００２−３６３５５７号公報
【特許文献７】特開２００３−１３７７２７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、膵リパーゼ及び細菌性リパーゼの阻害効果に優れ、しかも多くの植物に含有され安全性に優れたリパーゼ阻害剤を提供することを課題とする。  
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決するために検討を重ね、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物、没食子酸又はその塩、没食子酸又はその塩の含有物からなる群から選ばれた１種又は２種以上を有効成分として含み、膵リパーゼを阻害するリパーゼ阻害剤を要旨とする。
【０００７】
上記の発明において、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩は、カフェー酸又はその塩、ロスマリン酸又はその塩のいずれかでも良い。また、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物は、カフェー酸又はその塩の含有物、ロスマリン酸又はその塩の含有物のいずれかでも良い。
【０００８】
上記の発明において、カフェー酸又はその塩の含有物は、ヤラッパの根茎、洋なしの果実、バジルの葉、タイムの葉、ジャーマンダ−の葉、バーベナの葉、コーヒーの葉又はオレガノの全草の抽出物あるいはこれらの乾燥物でも良い。
【０００９】
上記の発明において、ロスマリン酸又はその塩の含有物は、ウツボグサの全草、オレガノの全草、スペアミントの全草、ローズマリーの組織培養物、クラリセージの全草、マージョラムの全草、アップルミントの全草、ペニーロイヤルの全草、ペパーミントの全草、セージの全草、ハッカの全草、タイムの全草又はシソの葉、種子の抽出物あるいはこれらの乾燥物でも良い。
【００１０】
上記の発明において、没食子酸又はその塩の含有物は、マンゴーの花、マンサクの葉、アムラの実、ザクロの果実又はドングリの果実の抽出物あるいはこれらの乾燥物でも良い。
【００１１】
また、本発明は、上記のいずれかのリパーゼ阻害剤を含む飲食物を要旨とする。
【００１２】
また、本発明は、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物、没食子酸又はその塩、没食子酸又はその塩の含有物からなる群から選ばれた１種又は２種以上を有効成分として含み、細菌性リパーゼを阻害するリパーゼ阻害剤を要旨とする。
【００１３】
上記の発明において、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩は、カフェー酸又はその塩、ロスマリン酸又はその塩のいずれかでも良い。また、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物は、カフェー酸又はその塩の含有物、ロスマリン酸又はその塩の含有物のいずれかでも良い。
【００１４】
上記の発明において、カフェー酸又はその塩の含有物は、ヤラッパの根茎、洋なしの果実、バジルの葉、タイムの葉、ジャーマンダ−の葉、バーベナの葉、コーヒーの葉又はオレガノの全草の抽出物あるいはこれらの乾燥物でも良い。
【００１５】
上記の発明において、ロスマリン酸又はその塩の含有物は、ウツボグサの全草、オレガノの全草、スペアミントの全草、ローズマリーの組織培養物、クラリセージの全草、マージョラムの全草、アップルミントの全草、ペニーロイヤルの全草、ペパーミントの全草、セージの全草、ハッカの全草、タイムの全草又はシソの葉、種子の抽出物あるいはこれらの乾燥物でも良い。
【００１６】
上記の発明において、没食子酸又はその塩の含有物は、マンゴーの花、マンサクの葉、アムラの実、ザクロの果実又はドングリの果実の抽出物あるいはこれらの乾燥物でも良い。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のリパーゼ阻害剤は、膵リパーゼに対する阻害効果に優れ、しかも植物に含まれ安全性にも優れるため、摂取することにより肥満の予防と治療をする抗肥満剤として有用である。また、本発明のリパーゼ阻害剤は、皮膚表層に常在する細菌の産生するリパーゼに対する阻害効果に優れ、しかも植物に含まれ安全性にも優れるため、ニキビや皮膚炎を予防、治療する外用剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
リパーゼ阻害剤の有効成分として３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸に分類されるカフェー酸とロスマリン酸は、それぞれ市販されているものを用いることができる。また、３，４，５−トリヒドロキシフェニルカルボン酸に分類される没食子酸も市販されているものを用いることができる。カフェー酸、ロスマリン酸あるいは没食子酸の塩は、その種類に限定はなく、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、バリウム塩、マグネシウム塩などを例示できる。  
【００１９】
カフェー酸又はその塩の含有物は、これらの含有量の多い植物の抽出物あるいは乾燥物が好ましく、このようなものとしてヤラッパの根茎、洋なしの果実、バジルの葉、タイムの葉、ジャーマンダ−の葉、バーベナの葉、コーヒーの葉又はオレガノの全草の抽出物あるいはこれらの乾燥物を例示できる。
【００２０】
ロスマリン酸又はその塩の含有物は、これらの含有量の多い植物の抽出物あるいは乾燥物が好ましく、ウツボグサの全草、オレガノの全草、スペアミントの全草、ローズマリーの組織培養物、クラリセージの全草、マージョラムの全草、アップルミントの全草、ペニーロイヤルの全草、ペパーミントの全草、セージの全草、ハッカの全草、タイムの全草又はシソの葉、種子の抽出物あるいはこれらの乾燥物を例示できる。
【００２１】
没食子酸又はその塩の含有物は、これらの含有量の多い植物の抽出物あるいは乾燥物が好ましく、マンゴーの花、マンサクの葉、アムラの実、ザクロの果実又はドングリの果実の抽出物あるいはこれらの乾燥物を例示できる。
【００２２】
上記植物の抽出物は、一般的に用いられる水や有機溶媒、あるいはこれらの任意な混合溶媒で抽出して得ることができる。有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、クロロホルム、ジクロロエタン、メチルエーテル、エチルエーテル、ジオキサン、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチル、アセトン等を挙げることができる。  
【００２３】
上記植物の乾燥物は、植物を十分に乾燥させた後、これを粉砕し粉末化することにより得ることができる。
【００２４】
本発明のリパーゼ阻害剤は、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物、没食子酸又はその塩、没食子酸又はその塩の含有物からなる群から選ばれた１種のみならず、２種以上を有効成分として含ませることもできる。
【００２５】
本発明のリパーゼ阻害剤の生理的・薬理学的作用を奏する有効量は、抗肥満剤として経口摂取する場合、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩、没食子酸又はその塩の場合、成人について体重１ｋｇ当たり５〜２０ｍｇ／日を１〜３回に分けて摂取することが好ましいが、健康状態、肥満の程度などを考慮して適宜増減できる。また、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸又はその塩の含有物、没食子酸又はその塩の含有物の場合、成人について体重１ｋｇ当たり３０〜１２０ｍｇ／日を１〜３回に分けて摂取することが好ましいが、健康状態、肥満の程度などを考慮して適宜増減できる。飲食物として、本発明のリパーゼ阻害剤を他の食品素材に含有させる場合も、前記と同様の量を添加することが好ましいが、利用される食品の種類、形態、形状などに応じて適宜増減することができる。
【００２６】
また、本発明のリパーゼ阻害剤を経口摂取させるための剤型は、適宜選択することができ、一般的に用いられる結合剤、崩壊剤などを用いて散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤などの剤型にできる。さらに、本発明のリパーゼ阻害剤の作用効果を失わない限り、他の成分などを配合した組成物として供することもできる。
【００２７】
本発明のリパーゼ阻害剤の生理的・薬理学的作用を奏する有効量は、細菌性リパーゼに起因するニキビや皮膚炎などを予防、治療する外用剤として適用する場合、抽出物の乾燥物としては０．００５〜２０重量％が好ましく、更に好ましくは０．０１〜１０重量％である。０．００５重量％未満であると効果が十分に発揮されないおそれがあり、２０重量％を超えると製剤上好ましくないからである。外用剤として用いる場合の剤型は、外用剤として適用できる剤型を適宜選択することができ、例えば、軟膏基剤や添加剤などを用いて軟膏剤、パスタ剤、リニメント剤、ローション剤として用いることができる。さらに、本発明のリパーゼ阻害剤の作用効果を失わない限り、他の成分などを配合した組成物として供することもできる。
【実施例】
【００２８】
次いで、本発明を実施例を挙げて詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２９】
（膵リパーゼに対する阻害作用の検討）
トリオレイン（和光純薬工業社製）80mg、フォスファチジルコリン(和光純薬工業社製)10mg、タウロコール酸ナトリウム（ナカライテスク社製）5mgに9mlの0.1M HEPES緩衝液
（pH7.0）を加え、超音波処理して基質溶液とした。この基質溶液20μlに表１に示す実施例（１）と比較例（１）の化合物を各々20μlずつ加え、37℃、30分インキュベートした。次いで、15,000単位/mlの豚由来膵リパーゼ（シグマ社製）10μlを加えて、さらに37℃、30分インキュベートした。反応停止後、遊離脂肪酸をACS・ACOD法により測定した。すなわち、アシル-CoAシンターゼにより遊離脂肪酸から生成したアシル-CoAをアシル-CoAオキシダーゼで酸化し同時に生成される過酸化水素とペルオキシダーゼにより縮合したMEHAと4-アミノアンチピリンの発色をマイクロプレートリーダー（バイオラド社製）を用いて570nmで測定した。
【００３０】
実施例（１）と比較例（１）の化合物の阻害率(%)は、(対照の吸光度-各検体の吸光度)／（対照の吸光度)×100により求めた（表１参照）。また、サンプル濃度1mg/ml(終濃度＝400μg/ml）で比較的高いリパーゼ阻害活性を示した化合物は、サンプル濃度を多段階にとり、IC５０を求めた（表２参照）。
【００３１】
【表１】
2005053891.tif 000002
【００３２】
表１から明らかなように、実施例（１）のカフェー酸、没食子酸、ロスマリン酸は、いずれも高い膵リパーゼの阻害効果を示した。カフェー酸の３位のOH基がメトキシ化されたフェルラ酸とカフェー酸の３位のOH基を欠くｐ−クマル酸のリパーゼの阻害効果はほとんど認められなかった。このことより、フェニルカルボン酸が膵リパーゼの阻害効果を有するには、フェニル基の３位と４位にOH基が必要であり、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸は、高いリパーゼの阻害効果を期待できることが示唆された。比較例（１）は、上記のフェルラ酸とｐ−クマル酸を除きすべてがフラボノイド類である。その中でもペオニジン、ミリセチン、シアニジンは、リパーゼの阻害効果を有するが、カフェー酸と没食子酸よりは劣っていた。また、これら以外のフラボノイド類のリパーゼの阻害効果は、カフェー酸、没食子酸、ロスマリン酸に比べ、著しく劣っていた。  
【００３３】
【表２】
2005053891.tif 000003
【００３４】
また、表２から明らかなように、実施例（１）のカフェー酸、ロスマリン酸、没食子酸の各IC50の数値は、フラボノイド類より低く、特にカフェー酸はフラボノイド類で最も低い数値のミリセチンの約半値であった。このことより、カフェー酸、ロスマリン酸、没食子酸はいずれも高いリパーゼの阻害効果を有し、しかもこれまでに報告されているフラボノイド類より著しく高いリパーゼの阻害効果を有することが判明した。
【００３５】
（細菌性リパーゼに対する阻害作用の検討）  
トリオレイン（和光純薬工業社製）100mgと3.5倍量の2％ポリビニルアルコール(和光純薬工業社製、12(重合度1700）:1（重合度500))溶液とを混和し、10℃以下で超音波処理してエマルジョンを調製し、さらに0.1Mマッキルバイン緩衝液（pH7.0)を加えてトリオレイン5mMの基質溶液とした。この基質溶液20μlに、表１に示す実施例（２）と比較例（２）を各サンプル20μl(300μg/ml、終濃度100μg/ml）とシュードモナス・スピーシーズ（Pseudomonas sp）由来リパーゼ（シグマ社製）20μl（0.001単位）とを加え、37℃、30分インキュベートした。反応停止後、遊離脂肪酸をACS・ACOD法により測定した。アシル-CoAシンターゼにより遊離脂肪酸から生成したアシル-CoAをアシル-CoAオキシダーゼで酸化し同時に生成される過酸化水素とペルオキシダーゼにより縮合したMEHAと4-アミノアンチピリンの発色をマイクロプレートリーダー（バイオラド社製）を用いて570nmで測定した。  実施例（２）と比較例（２）の化合物の阻害率(%)は、上記と同様に、(対照の吸光度-各検体の吸光度)／（対照の吸光度)×100により求めた（表３参照）。なお、オレガノ、セージ、マジョラムは20倍量の70%エタノールで１時間加熱還流した溶液をNO.2のろ紙で濾過し、エバポレート後、0.1Mマッキルバイン緩衝液（pH7.0)で他のサンプルと同じ濃度(300μg/ml、終濃度100μg/ml）に調製して用いた。
【００３６】
また、上記の実施例（２）について、サンプル濃度を多段階（10、30、100（μg/ml））にとり、そのときの各阻害率からIC５０を求めた。
【００３７】
【表３】
2005053891.tif 000004
【００３８】
【表４】
2005053891.tif 000005
【００３９】
表１から明らかなように、実施例（２）のカフェー酸（３，４−ジオキシケイ皮酸）、没食子酸、ロスマリン酸は、いずれも高い細菌性リパーゼの阻害効果を示した。カフェー酸の３位のOH基がメトキシ化されたフェルラ酸（４−オキシ−３−メトキシケイ皮酸）とカフェー酸の３位のOH基を欠くｐ−クマル酸（ｐ−オキシケイ皮酸）のリパーゼの阻害効果はほとんど認められなかった。このことより、フェニルカルボン酸が細菌性リパーゼの阻害効果を有するには、フェニル基の３位と４位にOH基が必要であり、３，４−ジヒドロキシフェニルカルボン酸は、高いリパーゼの阻害効果を期待できることが示唆された。また、没食子酸のカルボキシル基がエチルエステルになると活性が低下した。没食子酸の３位、５位のＯＨ基が脱落したｐ−ヒドロキシ安息香酸は活性を示さなかった。比較例（２）のペオニジン、シアニジン、マルビジンのアントシアニン系化合物も、実施例（２）の化合物より阻害活性が劣っていた。また、カフェー酸とロスマリン酸を含有するオレガノ、ロスマリン酸を含有するセージ、マジョラムは、カフェー酸、没食子酸、ロスマリン酸より阻害活性は低いものの、いずれも阻害活性を有していた。したがって、これらの植物の乾燥物や抽出物は、細菌性リパーゼに起因するニキビや皮膚炎などに有効であることが判明した。