(57)【要約】    【課題】ローヤルゼリーの生理活性の有効成分を同定し、ローヤルゼリー又はその成分に基づく生理活性作用を奏する組成物又は食品を開発すること。    【解決手段】ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量１００００以下の分画を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。並びに、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量１００００以下の分画を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用食品。【選択図】  図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量１００００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【請求項２】
ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量１５００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【請求項３】
ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量３００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【請求項４】
ローヤルゼリーの処理物が、凍結乾燥ローヤルゼリー、ローヤルゼリー酵素分解物及びローヤルゼリーエタノール水溶液沈殿残渣からなる群から選ばれるいずれかである請求項１〜３に記載の気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【請求項５】
気分の障害が、不眠、倦怠感、情動過多、抑うつ気分、うつ状態、いらいら感、脱力感、疲労感、頭重感、落ち込み感、不安感、焦燥感、不定愁訴、易怒性、筋緊張、集中力の喪失からなる群から選ばれる少なくとも１つである請求項１〜４に記載の気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【請求項６】
気分の障害が閉経周辺期又は更年期に伴うものである請求項１〜５に記載の気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【請求項７】
ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量 １００００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用食品。
【請求項８】
気分の障害の予防、治療又は改善用として表示された、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量 １００００以下の画分を含有する食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用組成物又は食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代はストレス社会と称されるように、多様なストレスの増大を反映して、精神面及び行動面に異常がみられる人々が顕在化している。特に、日常生活における不安・緊張・焦燥が持続することにより起こる不眠、倦怠感、情動過多、抑うつ状態、うつ病などは気分の障害として分類され（非特許文献１参照）、テクノストレスに代表される職場環境の変化、複雑な人間関係による社会的ストレスの増大、身体的・精神的過労、生活リズムの乱れなどを背景に増加の一途をたどっている。また、加齢による生殖腺機能の衰退による性ホルモンの低下は、更年期障害と総称される身体的あるいは精神的な変化を招来し、ストレスに対する生体の適応過程にも重大な影響を及ぼし気分の障害が惹起される。これらの症状は、精神活動の歪みから生じた自律神経系の異常による胃潰瘍、動悸、不整脈、高血圧などの身体的症状を伴い、適切な対応を早期に実施しなければ、絶望感や自責感から重篤なうつ病に移行する。うつ病は、その罹患患者の約10〜15％が自殺企図や自殺遂行をとることが知られており、思春期・成熟期・更年期・老年期を通じて大きな社会問題になっている。
【０００３】
従来、気分の障害の治療には三環系抗うつ薬、非三環系抗うつ薬及びモノアミン酸化酵素阻害などの薬剤が用いられているが、これらの薬剤には心機能に対する有害作用の発現も多いことから、長期の服用、高齢者の服用、予防的な服用が困難な状況にある。また、更年期における気分の障害に対しては、ホルモン補充療法が適用されてきたが、長期服用による生殖器系の異常、高い発ガン率、重篤な心臓障害などの有害作用から警告が発せられ（非特許文献２参照）、安全な補完代替医療の開発が待たれている。
【０００４】
加えて、気分の障害には、自覚的愁訴が主であるのでセルフケアにより発現を未然に予防すること、早期に対応して改善を図ること、長期服用における安全性が確認されている治療法であることなどが重要である。しかし、常用量でも有害作用を併せ持つ医薬品以外に補完代替医療が開発されておらず、また、抑うつ気分、うつ状態等の気分の障害は、環境の変化や直面する状況によっても一時的に陥ることがあることから、一般的には病気と認識されない場合が多く、行動面に異常が発現されるまで予防的処置や対応策がとられないことが多い。
【０００５】
一方、「王乳」の名でも知られるローヤルゼリーは、働き蜂から分泌されて女王蜂の食餌となる乳白色の物質で、蛋白質、炭水化物、脂質及び未知成分から構成される。伝承医学及び民族医学では、古来、健康の維持・増進・回復に有効な食品として使用されており、成長促進作用（非特許文献３参照）、延命効果（非特許文献４参照）、抗腫瘍作用（非特許文献５参照）、抑うつ症状改善（非特許文献６参照）など多くの生理活性を持つことが知られている。
【０００６】
しかしながら、ローヤルゼリーのそれらの効能を支持する科学的な根拠は乏しく、薬理活性を有する成分の特定には至っていなかった。とくに気分の障害や不定愁訴の改善など精神行動面に対して、ローヤルゼリーのどの成分が有効であるかの科学的評価や活性成分の同定は、ほとんどなされていない現状にある。
【非特許文献１】高橋三郎、大野裕、染矢俊幸、DSM-IV：精神障害の診断・統計マニュアル、医学書院、1996年6月
【非特許文献２】James V. Lacey, Jr. et al., JAMA, 2002, Vol.288, No.3
【非特許文献３】石黒伊三雄ら、1963、岐阜薬科大紀要13：17-21
【非特許文献４】河村潤之助、1961、昭和医学会雑誌20：1465-1474
【非特許文献５】田村豊幸ら、1987、日本薬理学雑誌89：73-80
【非特許文献６】吉村裕之ら、2002、日本神経精神薬理学雑誌、22:299
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、ローヤルゼリーの精神機能改善面、特に抑うつ気分やうつ状態などの気分の障害の改善に対する有効性を科学的に評価することを試み、ロ−ヤルゼリーに含有される如何なる成分が作用本体であるのかを追求し、抽出分離を重ねた結果、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分を精製した特定の画分が極めて少量で気分の障害の緩和に有効であると共に安全であることを見出し、更に検討を重ねて本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち、本発明は以下の組成物又は食品に係る。
１．ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量１００００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【０００９】
具体的には、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分を限外濾過膜で分離して得られる分子量１００００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用組成物が挙げられる。
【００１０】
２．ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量１５００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【００１１】
３．ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量３００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【００１２】
４．ローヤルゼリーの処理物が、凍結乾燥ローヤルゼリー、ローヤルゼリー酵素分解物及びローヤルゼリーエタノール水溶液沈殿残渣からなる群から選ばれるいずれかである項１〜３に記載の気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【００１３】
５．気分の障害が、不眠、倦怠感、情動過多、抑うつ気分、うつ状態、いらいら感、脱力感、疲労感、頭重感、落ち込み感、不安感、焦燥感、不定愁訴、易怒性、筋緊張、集中力の喪失からなる群から選ばれる少なくとも１つである項１〜４に記載の気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【００１４】
６．気分の障害が閉経周辺期又は更年期に伴うものである項１〜５に記載の気分の障害の予防、治療又は改善用組成物。
【００１５】
７．ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量 １００００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用食品。
【００１６】
好ましくは、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量 １５００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用食品、更に好ましくは、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量 ３００以下の画分を有効成分として含有する気分の障害の予防、治療又は改善用食品。
【００１７】
８．気分の障害の予防、治療又は改善用として表示された、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量 １００００以下の画分を含有する食品。
【００１８】
好ましくは、気分の障害の予防、治療又は改善用として表示された、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量 １５００以下の画分を含有する食品、更に好ましくは、気分の障害の予防、治療又は改善用として表示された、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる分子量 ３００以下の画分を含有する食品。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を有効成分とすることによって、気分の障害の予防、治療又は改善に有効な組成物又は食品が提供されることとなる。
【００２０】
本発明の組成物及び食品は、従来のローヤルゼリーよりも低容量で、気分の障害を有効に予防、治療又は改善することができる。
【００２１】
この成分を添加することにより、気分の障害を有効に予防、治療又は改善する作用の増強されたＲＪ関連食品を開発できる。より具体的には、本発明におけるローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を添加することにより、気分の障害を有効に予防、治療又は改善する作用の増強されたローヤルゼリー関連食品を開発できる。
【００２２】
しかも、本発明の組成物及び食品の有効成分は、気分の障害の予防、治療又は改善に有効な量において、子宮重量の増大等の有害作用や毒性をほとんど示さない。また該有効成分の原料となるローヤルゼリー又はその処理物は、従来から食品等として使用されており、副作用や毒性をほとんど有しないので、長期間でも、安全に摂取することができる。
【００２３】
このように、本発明の組成物及び食品は、気分の障害の予防、治療乃至改善に有効でありながら、有害作用や毒性がほとんど無く、安全であって、気分の障害の予防、治療乃至改善において有用に用いられるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
以下、本発明について、更に詳細に説明する。
ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分
本発明の組成物及び食品は、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を有効成分とする。
【００２５】
本発明の有効成分の原料となるローヤルゼリー又はその処理物の種類は特に限定されず、所望に応じて適宜選定し得る。
【００２６】
ローヤルゼリーとしては、天然のもの、具体的には蜜蜂が分泌するものを収集したものを用いることができる。また一般に市販されているものを用いることもできる。
【００２７】
ローヤルゼリーの処理物とは、天然のローヤルゼリーを処理又は加工したものであり、その処理の種類は特に限定されないが、具体的には、凍結乾燥ローヤルゼリー、ローヤルゼリー酵素分解物及びローヤルゼリーエタノール水溶液沈殿残渣などが挙げられる。
【００２８】
凍結乾燥ローヤルゼリーとは、ローヤルゼリーを凍結した状態で真空乾燥処理したものである。
【００２９】
ローヤルゼリー酵素分解物とは、ローヤルゼリーを酵素により分解して得られる分解組成物である。酵素の種類や由来は特に限定されないが、例えば、糖鎖分解酵素、蛋白質分解酵素などが挙げられる。
【００３０】
糖鎖分解酵素としては、具体的には、アミラーゼ、セルラーゼ、アビセラーゼ、ヘミセルラーゼ、グルコシダーゼ、マンナナーゼ、ガラクトシダーゼ、キシラナーゼ、β−マンノシダーゼ等が挙げられる。
【００３１】
また、蛋白質分解酵素としては、具体的には、微生物由来のプロテアーゼの一種アスペルギロペプチダーゼＡや、動物由来の消化酵素であるペプシン、パンクレアチン、トリプシン、キモトリプシン等が挙げられる。
【００３２】
上記酵素は１種単独で用いることもでき、２種以上を適宜組み合わせて使用してもよい。使用される酵素の純度も特に規定されず、例えば、酵素を産出する微生物生産物、植物
又は動物からのホモジネートを用いても構わない。
【００３３】
酵素によるローヤルゼリーの分解処理は、常法に従い、適宜実施することができる。例えば、水性溶媒中、約１５℃から約５５℃、好ましくは約２０℃から約５０℃の条件で実施することができる。この際、反応液の液性は、使用する酵素の種類に応じて、適宜調整することができる。反応溶媒の種類も特に制限はなく、たとえば含水アルコールなどを適宜用いることができる。
【００３４】
ローヤルゼリーエタノール水溶液沈殿残渣とは、ローヤルゼリーを含水エタノール溶液で処理した際の沈殿した残渣である。
【００３５】
ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分は、上記ローヤルゼリー又はその処理物に含まれる水溶性の成分を区分けした画分であればよく、画分を区分けする方法は特に限定されない。
【００３６】
例えば、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶液、又はローヤルゼリー又はその処理物と水とを混合した懸濁液を、有機溶媒、例えば酢酸エチル又はブタノールで分配処理して抽出精製して得られる水溶性画分が挙げられる。
【００３７】
また、ローヤルゼリーと水とを混合した懸濁液を静置および/または遠心分離し、上清から得られる水溶性画分が挙げられる。
ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分は、上記水溶性画分を、特定の分子量を有する成分に区分けして得られる画分である。該特定の分子量とは分子量１００００以下、好ましくは分子量１５００以下、更に好ましくは分子量３００以下の画分である。
【００３８】
特定の分子量画分を区分けする方法又は手段は特に限定されず、例えばローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分を、限外濾過膜および/またはゲル濾過を用いて分離して得られる画分などが挙げられる。
【００３９】
本発明者が、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を投与した卵巣摘出マウスを強制遊泳試験に付したところ、それらを投与していない群に比べて、不動状態で浮遊する時間、すなわち不動時間が著しく短縮されることが、明らかになった。また、それらの不動時間を短縮する量を卵巣摘出マウスに投与した場合においても、ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分は子宮重量が異常に肥大するような有害作用を示さないことも明らかになった。また、それらの不動時間を短縮するために必要な特定の分子量画分の量は、もとのローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分が不動時間を短縮する量と比較して著しく少量であることも明らかになった。具体的には、分子量１万以下の画分では、もとのローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分と比較して55％以下、分子量１５００以下の画分では55％以下、分子量３００以下の画分では１％以下の量で、不動時間を短縮することが明らかになった。分子量１万以下の画分における有効成分は、分子量1500以下の物質が重要であり、分子量300以下の物質がさらに重要である。
【００４０】
強制遊泳試験は、抗うつ作用等の気分の障害の前臨床評価に広く用いられている。臨床的に有効な抗うつ薬は不動時間を短縮することが知られている（Porsort et al., Nature, 266:730-732, 1977）。また、岡田ら（Okada et al., Jpn. J. Pharmacol., 73:93-96,1997））及び吉村ら[吉村、山川、脳の科学、22：49-54, 2000]は、雌性動物の卵巣を摘出して人為的な閉経状態におくと、不動時間が有意に延長されることを見出し、閉経周辺期の抑うつ気分又はうつ状態を反映した病態モデルとなることを報告している。
【００４１】
さらにその卵巣摘出雌性動物に女性ホルモンのエストロゲンを投与すると、不動時間は短縮し、正常値に戻ることが報告されている（別宮、吉村他、日本神経精神薬理学雑誌、22：298,2002）。このことはエストロゲンが閉経周辺期の“うつ状態”を改善することを示す。しかし、卵巣摘出雌マウスが不動時間を短縮する量でエストロゲンを投与すると卵巣を摘出していない雌性動物に比べて子宮重量を著しく肥大させるということも分かっている。このことは“うつ状態”を改善する投与量では、エストロゲンは子宮重量を異常に肥大させる有害作用を発現することを意味する。このエストロゲンの子宮重量の異常な増加は、人のホルモン補充療法で指摘される有害作用に相当する症状と考えられる。
【００４２】
これに対し、前述したように、本発明におけるローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分は、不動時間を短縮する量で、子宮重量に対する有害作用を示さない。
【００４３】
したがって、該ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量分画を有効成分とすることにより、低容量で優れた効果を奏する安全な気分の障害の予防、治療又は改善用組成物又は食品が提供される。
気分の障害の予防、治療又は改善用組成物
本発明における気分の障害の予防、治療又は改善用組成物は、上記ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を有効成分として含有する。
【００４４】
組成物の製法は特に限定されず、適宜公知の方法を用いて製造することができる。
【００４５】
また、本発明の組成物は、本発明の所望の効果を満たす限りで、他の添加剤を混合することもできる。他の添加剤としては、例えば、水溶性ビタミン、キサンチン誘導体、生薬、賦形剤、pH調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤、香料などが挙げられる。
【００４６】
また、本発明の組成物は、公知の製法に従って、適宜製剤化することができる。例えば、本発明の組成物を経口投与に適した固体製剤又は液体製剤の形態で用いることができる。
【００４７】
固体製剤としては散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、チュアブル剤、トローチ剤などの形態が上げられる。
【００４８】
また液体製剤としては液剤、シロップ剤、ドリンク剤などが挙げられる。
【００４９】
液体製剤を製造する場合には、賦形剤として、水、グリセリン、プロピレングリコール、単シロップ、エタノール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトールなどを用いることができる。
【００５０】
気分の障害の予防、治療又は改善用食品
本発明の食品は、上記ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を含有してなり、気分の障害の予防、治療又は改善用食品として用いることができる。具体的には、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント又は特定保健用食品などとして用いることができる。
【００５１】
本発明の食品の種類は、特に限定されず、例えば、飲料類(コーヒー、ジュース、茶飲料のような清涼飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料、日本酒、洋酒、果実種、ハチミツ酒のような酒)；スプレッド類(カスタードクリームなど)；ペースト類(フルーツペーストなど)；洋菓子類(チョコレート、ドーナツ、パイ、シュークリーム、ガム、ゼリー、キャンデー、クッキー、ケーキ、プリン)；和菓子類(大福、餅、饅頭、カステラ、あんみつ、羊羹)；氷菓類(アイスクリーム、アイスキャンデー、シャーベット)；食品類(カレー、牛丼、雑炊、味噌汁、スープ、ミートソース、パスタ、漬物、ジャム、ハチミツ、プロポリス)；調味料類(ドレッシング、ふりかけ、旨味調味料、スープの素)などの原料として用いることができる。
【００５２】
従来のローヤルゼリー商品にローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を少量または適量加えることによって、上記の目的に特化し強化した商品（特に、気分の障害の予防、治療又は改善に特に適した食品）を得ることができる。
【００５３】
本発明の食品の製法も特に限定されず、適宜公知の方法に従うことができる。例えば、前記のような食品の製造工程における中間製品、又は最終製品に、上記ローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を混合又は噴霧等して、上記の目的に用いられる食品を得ることができる。
【００５４】
適用対象
本発明の組成物及び食品の適用対象となる気分の障害には、病気として認識される場合だけでなく、自覚的愁訴に基づく症状も含まれる。
【００５５】
気分の障害としては、具体的には、不眠、倦怠感、情動過多、抑うつ気分、うつ状態、いらいら感、脱力感、疲労感、頭重感、落ち込み感、不安感、焦燥感、不定愁訴、易怒性、筋緊張、集中力の喪失などが挙げられる。
特に本発明の組成物及び食品は、閉経周辺期又は更年期に伴う気分の障害の予防、治療乃至改善に有効に用いられる。
【００５６】
気分の障害の予防、治療乃至改善に有効な、本発明の組成物の摂取量は、対象者の症状、健康状態、年齢、体型、体質、又は投与方法や他の薬剤と組合せ等に応じて適宜設定し得るが、通常、上記画分、即ちローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を、体重60kgの成人に一日当たり、0.01mg以上10 g以下程度の用量範囲、好ましくは0.1mg以上1g以下程度の用量範囲で用いることができる。
【００５７】
従来のローヤルゼリーでは多量に摂取する必要のある人でも、本発明の特定の画分、即ちローヤルゼリー又はその処理物の水溶性画分から得られる特定の分子量画分を摂取する場合は少量の摂取で十分な効果が得られることになる。
【００５８】
以下、試験例及び実施例を挙げて説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００５９】
試験例１
（１―１）サンプル調製
（ｉ）水溶性画分の調製
凍結乾燥ローヤルゼリー109.41gに、精製水１Lを加え、超音波で30分20℃撹拌し、さらにスリーワンモーターで2時間室温で攪拌した後、遠心分離機（日立高速冷却遠心分離機CR-21、ローター（R10A、約400ml×6本）、最高回転数10000rpm（最大遠心加速度  18780×g））を用いて、10000rpm×10min、20℃にて遠心を行った。
【００６０】
上清を別け取り、沈殿物に精製水１Lを加え、懸濁させ、スリーワンモーターで30分室温で攪拌した後、上記遠心分離機で10000rpm×10min、20℃にて遠心を行った。
【００６１】
さらにもう一度、上清を別け取り、沈殿物に精製水１Lを加え、懸濁させ、スリーワンモーターで30分室温で攪拌した後、上記遠心分離機で10000rpm×10min、20℃にて遠心を行った。得られた上清（計約３L）、および、沈殿物に精製水300mlを加え、懸濁した物を凍結乾燥した。
【００６２】
その結果、水溶性分画（A1S  90.1g）と不溶性分画（B1  20.5g）を得た。
（ｉｉ）特定の分子量画分の調製
（ｉ）で得られた水溶性画分（A1S）より88.1 gを量りとり精製水１Lを加え溶解した。その溶解物を限外濾過膜(Millipore製、Prep/Scale-TFF Cartridge PLGC10k 1ft2、分画分子量1万、材質：セルロースタイプ)を用いて分画を行った。これを凍結乾燥し、MW（重量平均分子量）10000以上の分画（A2S  25.5g）とMW10000以下の分画（A3S  58.0g）を得た。
（１−２）動物実験
（ｉ）被験動物の調整
試験動物としてICR系雌性マウス（9週齢、体重29〜33g）の卵巣摘出モデル動物を用いた。マウスは全て１ケージ10匹群居飼育し、1週間に1回床敷きホワイトフレークを交換した。卵巣摘出術は、ペントバルビタール（65mg/kg,i.p）麻酔下にマウスの背腹部を約5mm切開し、卵巣および卵巣周辺の付着脂肪組織を一時的に露出し、卵巣と子宮端部の間を結紮後、卵巣を切除摘出した。その後、速やかに子宮及び卵巣周辺組織を腹腔内に戻したのち、腹壁及び皮膚を縫合した。比較対照群として、手術群と同様に開腹するが、卵巣を切除摘出しないで縫合した偽手術群、及び正常群（手術及び偽手術を行っていない群）を用いた。
（ｉｉ）被験物質の投与
ローヤルゼリーが原料換算量で約2.5g/50ml含まれるように、各サンプルを水に溶解し懸濁液を作製した。各水性懸濁液をマウス体重10gあたり0.1mlの割合で経口ゾンデを用いて卵巣を摘出した日から1日1回2週間の間経口投与した。
【００６３】
被験物質の対照として、注射用蒸留水をマウス体重10gあたり0.1mlの割合で経口投与した。
（ｉｉｉ）不動時間の測定試験
卵巣摘出の2週間後、強制遊泳試験をPorsortの方法に準拠して以下のように行った。透明のポリカーボネート製のメスシリンダー（内径10cm、高さ25cm）に25℃の水を入れ、底面から10cmの位置に水面を合わせた。6分間遊泳させ、高感度ビデオシステムにて録画、その後、録画画面を観察しながらイベントレコーダを操作することにより、不動状態で浮遊している時間を計測した。具体的には、遊泳時間の２分目からを不動時間として測定し、不動時間は最長で４分まで解析した。
【００６４】
（ｉｖ）子宮重量の測定試験
不動時間の観察終了後、マウスを過量のペントバルビタール(100 mg/kg以上)投与により呼吸停止に至らしめ、屠殺し、開腹して子宮を摘出した。摘出子宮を濾紙上に展開して付着する奬膜及び血管を除去後、ただちに湿重量を化学天秤にて計量した。
【００６５】
（１−３）結果
不動時間の測定結果を図１に示す
図１に示されるように、ローヤルゼリー（RJ）の水溶性画分（A1S）および分子量1万以下の画分（A3S）により不動時間が短縮することが確認された。水不溶性画分（B1）および分子量1万以上の画分（A2S）は不動時間に影響を与えなかった。
【００６６】
また、限外濾過膜で分離した分子量1万以下の画分（A3S）について、TOFMASSにより測定を行った。具体的には、A3Sの画分について、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析装置（島津/KRATOS質量分析装置  KOMPACT MALDIII tDE）を
用いてマトリックス（UFP）のメタノール懸濁液（２００μｌ）に試料（A3S、1mg）を混合した後、一部を乾燥後、ＭＡＳＳ測定装置にてレーザーイオン化を行い、ポジティブイオンを検出した。A3SについてのMASS測定結果を、図２に示す。図２に示されるように、A3Sに含まれる成分は分子量1500以下の物質であることが分かった。つまり、水溶性の画分に含まれる分子量1500以下の物質が不動時間を短縮させることが分かった。
【００６７】
また、水溶性画分A1Sは凍結乾燥ローヤルゼリーの約82％を占め、水溶性画分1万以下の画分（A3S）は約54％を占めることが分かった。この事は同じように不動時間を短縮させるために必要な量が、水溶性画分A1Sの場合は凍結乾燥ローヤルゼリーの約82％の重量で、水溶性画分1万以下の画分（A3S）の場合は約54％の重量ですむことを意味する。
【００６８】
上記の数値（約82％、約54％）は、以下のように計算した。例えば約82％は、90.1g（A1Sの収量）÷109.4g（凍結乾燥RJ）＝0.82（約82％）から計算した。これは、凍結乾燥RJのマウス投与のためには凍結乾燥RJ を2.5g/50mlに調製、A1Sのマウス投与のためにはA1Sを（2.5g/50ml）×0.82に調製すると、このA1S量（約82％）が凍結乾燥RJと動物実験で同等の活性を有することを意味する。同様に、約54％は、2)0.82×[58.0mg（A3Sの収量）÷88.1mg（A3Sを分画するために使用したA1S量）]＝0.54（約54％）から計算した。
【００６９】
また、子宮重量の測定結果を図３に示す。
【００７０】
図３に示されるように、不動時間を短縮させる分画（A1S、A3S）とRJで子宮重量の増大は認められなかった。
【００７１】
試験例２
有効成分をより明確化するために、更に以下のような試験を行った。
（２−１）サンプル調製
試験例１で得られたA3S（10g）をイオン交換水50mlに懸濁し、室温で攪拌した。それを濾過して、その濾液を流速8ml/minで、UV210nmを指標としてゲル濾過カラム（Toyopeal HW40F  ２L）にかけ、96mlごとに、導入開始より以下のように分画を行った。溶出溶媒はイオン交換水を用いた。分取したD1、D2、D3、D4を凍結乾燥し、画分D1S（360mg）、D2S（8.0g）、D3S（120mg）、D4S（130mg）を得た。
Fr３〜11：D1
Fr12〜24：D2
Fr25〜40：D3
Fr41〜（4.5L溶出するまで）：D4
溶出パターンのチャートを図４に示す。
（２−２）動物実験
上記（１−２）と同様の方法で、不動時間の測定試験、及び、子宮重量の測定試験を行った。
（２−３）結果
不動時間の測定結果を図５に示す。
【００７２】
図５に示されるように、ローヤルゼリーの水溶性の画分（D4S）の投与により卵巣摘出による不動時間の延長が、有意に短縮され、偽手術群の正常値（点線）になることが確認された。しかし、Vehicleおよび画分D1S,D2S,D3Sは不動時間に影響を与えなかった。
【００７３】
このD4Sの画分について、上記A3S画分と同様に、TOFMASSによる測定を行った。具体的には、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析装置（島津/KRATOS質量分析装置  KOMPACT MALDIII tDE）を用いてマトリックス（UFP）のメタノール
懸濁液（２００μｌ）に試料（D4S、1mg）を混合した後、一部を乾燥後、ＭＡＳＳ測定装置にてレーザーイオン化を行い、ポジティブイオンを検出した。
【００７４】
D４SについてのMASS測定結果を図６に示す。図６に示されるように、D4Sに含まれる成分は分子量300以下の成分であることが分かった。従って、水溶性の分子量300以下の画分（D4S）が不動時間を短縮することが分かった。
【００７５】
また、D4Sが不動時間を短縮させるために必要な量は同等の短縮を示す凍結乾燥ローヤルゼリーの約1％以下（0.8％程度）の少量で十分であることが分かった。上記の数値（約1％以下）は、以下のように計算した。既に説明した通りA3Sは凍結乾燥RJの54％を占め、さらにD4SがA3Sに占める割合は130mg（D4S）÷[360mg（D1S） +8g （D2S）+120mg （D3S）+130mg (D4S)]=0.015 =約1.5％である。つまり、D4Sが凍結乾燥RJに含まれる割合は54％×0.015＝0.81％＝0.8％程度（即ち、約１％以下）である。
【００７６】
また、子宮重量の測定結果を図７に示す。
【００７７】
図７に示されるように、不動時間を短縮させる分画（D4S）でも子宮重量の増大は認められなかった。
【００７８】
試験例１及び２の結果から、本発明のローヤルゼリー又はその処理物から得られる特定分画が、不動時間を有効に改善しつつ、有害作用の危険性は極めて少なく、気分の障害の改善、予防乃至治療により適した成分であることが明らかになった。
【００７９】
製剤例
試験例２で得られた、D4Sの画分を用いて、以下のような組成物及び食品を得た。
【００８０】
製剤例１（カプセル剤）
D4S               10mg
乳糖              240mg
上記の成分（１カプセル当たり）を均一に混合し、2号カプセルに充填し、内容量250mgのカプセル剤を得た。
【００８１】
製剤例２（錠剤）
D4S                 10mg
乳糖                230mg
蔗糖脂肪酸エステル  10mg
上記の成分（1錠当たり）を均一に混合し、打錠機により、250mgの錠剤を得た。
製剤例３（顆粒剤）
D4S                 20mg
セルロース          100mg
デキストリン        150mg
乳糖                700mg
上記の成分（1包当たり）を均一に混合し、押出造粒機により造粒し、乾燥し、顆粒剤を得た。
製剤例４（ドリンク剤）
D4S                 10mg
アスコルビン酸      300mg
ハチミツ            10g
レモン果汁          10ml
水                  適量
上記の材料を混合し、全量50mlのローヤルゼリー抽出物含有ドリンクを得た。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】試験例１の強制遊泳試験における不動時間の測定結果を示すグラフである。縦軸は不動時間を示す。点線は、卵巣を摘出していない偽手術群の不動時間（正常値）を示すラインである。RJは凍結乾燥ローヤルゼリー（ローヤルゼリー処理物）を示す。Vehicleは対照として用いた注射用蒸留水を表す。
【図２】試験例１におけるA3SのMASSスペクトルチャートを示す図面である。
【図３】試験例１における各分画が子宮重量に与える影響の測定結果を示す図面である  縦軸は子宮重量を示す。点線は卵巣摘出しない場合のマウスの子宮重量（正常値）である。
【図４】試験例２においてゲル濾過カラムで分画した各画分の溶出パターンのチャートを示す図面である。
【図５】試験例２の強制遊泳試験による不動時間の測定結果を示すグラフである。縦軸は不動時間を示す。点線は、卵巣を摘出していない偽手術群の不動時間（正常値）を示すラインである。Vehicleは対照として用いた注射用蒸留水を表す。
【図６】試験例２におけるD4SのMASSスペクトルチャートを示す図面である。
【図７】試験例２における各分画が子宮重量に与える影響の測定結果を示す図面である  。縦軸は子宮重量を示す。点線は卵巣を摘出していない偽手術群の子宮重量（正常値）である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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