(57)【要約】【課題】  創傷治癒に関わる生体の再生能を促進し、創傷完治までの時間の短縮を達成し、且つ、安全性が高く、長期に投与しても副作用を生じない創傷治癒促進剤を提供する。【解決手段】  シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物を有効成分とする創傷治癒促進剤。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物を含有する創傷治癒促進剤。
【請求項２】
シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物からなる創傷治癒促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は外科手術又は傷害等による創傷の治癒を促進させる創傷治癒促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
外科手術に伴う皮膚又は粘膜の切開や、火傷、裂傷等により生じる創傷については、これまで抗生物質の経口投与又は外傷への直接的な塗布による細菌感染症の予防、抗炎症剤の投与による炎症の低減、鎮痛剤投与による疼痛の軽減などの治療が行われてきた。
【０００３】
しかしながら、これらの外科手術後の皮膚又は粘膜の創傷に対する治療は、細菌感染、炎症、疼痛などの２次的な障害を低減しようとする治療でしかなく、創傷の治癒は生体の皮膚再生能力に頼っているのが現状である。そのため、回復までに時間を要し、投薬による副作用のおそれが心配されていた。
【０００４】
そこで、生体に備わる創傷治癒能を促進する薬物の開発が進められているが、効果、安全性、製造コスト等の全てについて十分満足し得るものはなかった。
【０００５】
一方、不飽和脂肪酸の一つであるシス−６−ヘキサデセン酸は、ヒト皮膚最外層のバリアーを構成する皮脂の主要成分であるが、最近、シス−６−ヘキサデセン酸を含む皮脂由来の脂肪酸誘導体が、多くのグラム陽性菌及びグラム陰性菌に対して抗菌活性を有することが報告されている（特許文献１参照）。しかしながら、シス−６−ヘキサデセン酸に創傷治癒促進作用があることは知られていない。
【特許文献１】特表２００１−５０２３３７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、創傷治癒に関わる生体の再生能を促進し、創傷完治までの時間の短縮を達成し、且つ、安全性が高く、長期に投与しても副作用を生じない創傷治癒促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、創傷治癒を促し、且つ安全性の高い天然物を探索したところ、シス−６−ヘキサデセン酸が創傷治癒に関わる生体の再生能を促進する作用を示し、創傷治癒促進剤として有用であることを見出した。
【０００８】
すなわち本発明は、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物を有効成分とする創傷治癒促進剤を提供するものである。
【０００９】
また、本発明は、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物からなる創傷治癒促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の創傷治癒促進剤によれば、創傷治癒に関わる生体の再生能を促進することが可能となる。 
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明のシス−６−ヘキサデセン酸は、公知のメタセシス反応や微生物を用いる方法（特開平１−１４４９８２号公報、特公平４−１２７１８号公報）、又は蔓性植物のやはずかずら（ツンベルギアアラータ）から抽出する方法により得ることができるが、特に、パルミチン酸イソプロピルからロドコッカス属微生物を用いて生産する方法（特公平４−１２７１８号公報）で、シス−６−ヘキサデセン酸を工業的に生産することが可能である。やはずかずらから抽出する場合は、やはずかずらの全草、茎、花、葉又は種子を適当な抽出溶剤と共に浸漬又は加熱還流した後、適宜濾過、濃縮、凍結乾燥等し、濃縮エキスや乾燥粉末等として得ることができる。抽出溶剤としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、エーテル、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、石油エーテル、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、酢酸エチル、アセトン、トルエン等の一般に用いられる有機溶媒、及び水等を挙げることができ、これらの１種以上を混合して使用することができる。抽出処理は、通常３〜１００℃程度の温度で数時間〜数週間、常法によって行うことができ、更に抽出物をゲル濾過、カラムクロマトグラフィー、精密蒸留等で精製して用いることもできる。
【００１２】
本発明のシス−６−ヘキサデセン酸の誘導体としては、シス−６−ヘキサデセン酸のエステル誘導体、アミド誘導体、アジド誘導体、酸塩化物誘導体、酸無水物誘導体、ニトリル誘導体等のカルボン酸誘導体が挙げられ、常法により、シス−６−ヘキサデセン酸から合成により得ることができる。中でも、合成の容易で安定なエステル誘導体、アミド誘導体が好ましく、特にエステル誘導体が好ましい。エステル誘導体は、シス−６−ヘキサデセン酸とアルコールとの縮合反応により得ることができ、アルコールは置換基を有してもよい炭素数１−２０のアルコールが好ましく、好ましくは炭素数１−１０のアルコール、より好ましくは炭素数１−５のアルコール、特にエチルアルコール、イソプロピルアルコールがエステル誘導体としての効果の点から好ましい。
【００１３】
本発明のシス−６−ヘキサデセン酸は、常法によりその薬理学的に許容される塩とすることができる。このような塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アミンとのアンモニウム塩、又はアルギニン、リジン等とのアミノ酸塩を挙げることができる。効果の点からナトリウム塩、カリウム塩が好ましい。
【００１４】
斯くして得られたシス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物は、後記実施例に示すように、創傷の治癒を促進する効果を有することから創傷治癒促進剤となり得る。すなわち、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物を有効成分とする創傷治癒促進剤は、創傷の治癒を促進する効果を発揮する医薬品、医薬部外品又は化粧料等として、また、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物からなる創傷治癒促進剤は、種々の成分を配合することができ、同様の医薬品、医薬部外品又は化粧料等として創傷の治癒に利用できる。
【００１５】
斯かる医薬品、医薬部外品又は化粧料は、外用、内用のいずれの方法でも投与することができるが、外用投与、特に皮膚外用剤の製剤形態とすることが好ましい。その剤型は、目的に応じて任意に選択でき、常法により固形、半固形又は液状の製剤、さらに具体的には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、液剤、乳剤、懸濁剤、軟膏、浸液、スプレー剤、散剤等とすることができる。また、水を含む液状製剤のｐＨは効果の点からｐＨ４〜８が好ましく、ｐＨ４〜６がより好ましい。
【００１６】
本発明のシス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物を有効成分とする創傷治癒促進剤におけるシス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物の総含有量は、通常全組成の０ ．００１ 〜５０重量％、より好ましくは０．００５ 〜３０重量％、特に効果の点から０．０１〜１０重量％が好ましい。
【００１７】
また、本発明の創傷治癒促進剤には、他の薬効成分を配合することができる。該薬効成分としては例えばアクリノール、アルキルポリアミノエチルグリシン、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、オキシドール、過マンガン酸カリウム、グルクロン酸クロルヘキシジン、チメロサール、ブロノポール、ポビドンヨード、マーキュロクロム等の外用殺菌消毒剤；カラミン等の創傷保護剤；エリスロマイシン、塩化オキシテトラサイクリン、塩酸グラミシジンＳ、硫酸ストレプトマイシン、塩酸テトラサイクリン、塩酸デメチルクロル、硫酸カナマイシン等の化膿性疾患用剤；塩化亜鉛、ヘパリン、デキストラン硫酸ナトリウム、クロタミトン、吉草酸ベタメサゾン、トリアムシノロンアセトニド等の鎮痛収斂消炎剤；繊維芽細胞成長因子、上皮細胞成長因子等の生物学的製剤などが挙げられる。
【００１８】
本発明の創傷治癒促進剤の投与量は、用法、患者の年令、創傷の程度、剤形等により適宜選択することができるが、好ましくは、１日当たり０．１〜５０００ｍｇ、より好ましくは１〜２０００ｍｇ、特に好ましくは１０ｍｇ〜１０００ｍｇであり、これを１日１回ないし数回に分けて投与するのが適当である。
【００１９】
本発明の創傷治癒促進剤のヒトへの投与方法は、経口投与又は静脈内投与、筋肉内投与、皮下・皮内投与、外用投与、経粘膜投与、直腸投与等の非経口投与が挙げられる。創傷部位や創傷の程度に応じて各種の形態で投与できるが、例えば外用剤として使用する場合は、本剤を皮膚などの所要部位（患部）に直接塗布、噴霧または貼付することが好ましい。
【００２０】
以上のように、シス−６−ヘキサデセン酸は、ヒト皮膚最外層のバリアーを構成する皮脂の主要成分であり、長期投与しても安全性が高く、創傷治癒に関わる生体の再生能を促進する物質である。さらに、シス−６−ヘキサデセン酸の構造異性体であるシス−９−ヘキサデセン酸（パルミトレイン酸）には、抗精神疾患剤（特開平８−１５７３８２）、抗腫瘍剤（特開昭５９−６２５２３）、脳卒中予防剤（特開昭５９−１７５４２５）としての作用も知られていることから、構造的に極めて類似しているシス−６−ヘキサデセン酸も同様な作用を有すると考えられる。すなわち、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物は、優れた創傷治癒促進効果だけではなく、抗精神疾患効果、抗腫瘍効果、脳卒中予防効果をも有し得る優れた医薬となり得るものである。
【実施例】
【００２１】
実施例１  創傷治癒促進効果
エーテル麻酔下、正中線が対称軸となるように左右から摘み上げたヘアレスマウス（ICR，雌，２８週齢）の背部を、プラスチック板（1.0×1.5cm）２枚で挟み、文房具用クリップで１時間保持した後、プラスチック板を固定していた跡（３cm2）に、シス−６−ヘキサデセン酸０．１重量％スクワラン溶液５０μＬを塗布する事を１日１回、２週間続け、処置部位の厚みを左右から摘み上げた状態でノギスを用いて計測した。各々の試験群は３匹ずつ同時に評価し、厚みの平均値（mm）の経日変化を図１に示した。スクワランのみを塗布した対照群に比べ、０．１重量％のシス−６−ヘキサデセン酸塗布群では、皮膚の肥厚化を抑制した。この結果から、シス−６−ヘキサデセン酸は創傷治癒を促進することが示唆された。
【００２２】
実施例２  ＤＮＡアレイ
（１） 細胞毒性の検討
ケラチノサイト（NHEK6509 Normal human epidermal keratinocytes  (Cat. NO. cc-2503)）を９６穴プレートに１×１０４／cm2で播き、３７℃、５％CO2で一晩培養した。この培地にシス−６−ヘキサデセン酸を１，１０，１００ｎＭ，１，１０，５０，１００，２５０μＭで添加し、２４時間培養した（培地量２００μl／well）。１８時間培養した時点でAlamar Blue（BIO SOURCE）を２０μl添加し、さらに６時間培養後のAlamar Blue活性を測定し、細胞毒性の指標とした。シス−６−ヘキサデセン酸は添加後２４時間で１μＭより高い濃度で毒性が確認された。これらの結果から、作用させる剤の濃度は、シス−６−ヘキサデセン酸  １μＭとした。
（２） 細胞の調製
ケラチノサイトをSupplement (+)培地で一晩培養した。その後Supplement (-)培地に交換し、さらに６〜８時間培養した。シス−６−ヘキサデセン酸を１μＭで添加し、０、２４、４８時間後の細胞を採取した。なお、培地にシス−６−ヘキサデセン酸を添加する場合は１％  ＢＳＡに懸濁し、２０〜３０秒間ソニケーションしたものを添加した。
（３）RNAの抽出
培養したケラチノサイトをＰＢＳ (-)で洗浄後、１ml／１０cm dish のISOGEN（ニッポンジーン）で回収した。以下の操作はRNase free で行った。室温で５分間放置した後、２００μｌのクロロホルムを加え攪拌した。遠心機で１５０００ｇ、１５分間分離し、上清５００μｌを等量のイソプロパノールと混合した。室温で５〜１０分間放置し、１５０００ｇ、１０分間分離した。上清を除去し、残ったペレットを７０％エタノールで洗浄した後、蒸留水（RNase free）に溶解させＤＮＡアレイに用いた。
（４）ＤＮＡアレイ
Atlas TM Nylon cDNA Expression Arrays 1.2 Array (Cat. NO.7850-1) (CLONTECH)を用いて、Total RNAを用いたＤＮＡアレイを行った。方法は添付のプロトコールに従った。ハイブリダイゼーション、洗浄を終えたメンブレンはイメージングプレート（富士フィルム）に暴露し、BAS2500（富士フィルム）で解析した。なお、各スポットの定量は、Image guage（富士フィルム）を用いた。
ＤＮＡアレイの結果、コントロールに対して発現量が２倍以上に変化した遺伝子が４８、０．５倍以下に変化した遺伝子が９存在した。
この内２．８倍の発現上昇が認められたIntegrin αｖ（ＴＧＦβ２）はビトロネクチン受容体であり、表皮基底層においてαｖβ５複合体を形成し細胞間接着を担っている。創傷治癒時の表皮においては、基底層におけるIntegrin αｖの発現上昇が認められ、またこの上昇はＴＧＦβによる誘導であることが報告されている。以上のことから、シス−６−ヘキサデセン酸は創傷治癒促進効果を有するものと考えられる。
またInterferon gamma receptor 2は2.0倍、Interferon alpha, beta, omega receptor 2は2.0倍の発現上昇が認められた。インターフェロンは免疫システムが作り出す物質に似ており、ウィルス及びガン細胞を抑制する一方で、免疫システムを活性化する機能をもつ。したがって、インターフェロンレセプターの発現上昇はこれらの機能を活性化する可能性が示唆された。
Caspase-8には3.45倍の発現上昇が認められた。これらは細胞死（アポトーシス）に関連する因子であり、これらの分子の発現上昇により活性が上昇すると、アポトーシスが促進される。つまり、なんらかの異常により増殖異常となった細胞のアポトーシスを促進することにより、癌を抑制する可能性が示唆された。
Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A(melanoma, p16)には4.45倍の発現上昇が認められた。Cdk inhibitorの１つであるp16は細胞周期を正に制御するサイクリン/Cdk複合体を結合しその活性を抑制することにより、細胞周期を負に制御する因子である。Cdk inhibitor の中でもp16INK4a遺伝子のみが多くのヒトの癌において失活しており、癌抑制遺伝子として機能している。また、Melanomaではこの分子に異常があることが知られている。つまり、この因子の発現が上昇することにより、癌を抑制する可能性が示唆された。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１はシス−６−ヘキサデセン酸の創傷の治癒促進効果を示す図である。
【図１】
2005179190.tif 000002