(57)【要約】【課題】  血管新生促進作用を有し、虚血性疾患または褥瘡などの創傷、組織欠損の予防及び／又は治療のために有用な医薬する。【解決手段】  血管新生促進作用を有する医薬であって、4-(5H-7,8,9,10-テトラヒドロ-5,7,7,10,10- ペンタメチルベンゾ[e]ナフト[2,3-b][1,4]ジアゼピン-13-イル）安息香酸などのレチノイドアンタゴニストを有効成分として含み、虚血性疾患又は創傷の予防及び／又は治療のために有用な医薬。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管新生促進作用を有する医薬であって、レチノイドアンタゴニストを有効成分として含む医薬。
【請求項２】
血管新生促進により虚血性疾患を予防及び／又は治療するための医薬であって、レチノイドアンタゴニストを有効成分として含む医薬。
【請求項３】
虚血性疾患が心筋梗塞、狭心症、下肢閉塞性動脈硬化症、バージャー病、脳梗塞、胸郭出口症候群、又は高安病である請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
血管新生促進により創傷を予防及び／又は治療するための医薬であって、レチノイドアンタゴニストを有効成分として含む医薬。
【請求項５】
創傷が褥瘡である請求項４に記載の医薬。
【請求項６】
レチノイドアンタゴニストが下記の群：
4-(5H-7,8,9,10-テトラヒドロ-5,7,7,10,10- ペンタメチルベンゾ[e]ナフト[2,3-b][1,4]ジアゼピン-13-イル）安息香酸；
4-(13H-10,11,12,13-テトラヒドロ-10,10,13,13,15-ペンタメチルジナフト[2,3-b][1,2-e][1,4] ジアゼピン-7-イル）安息香酸；
4-[(4-メトキシ-3-トリクロロ[3.3.1.13,7]デク-1-イルベンゾイル)アミノ]安息香酸；
4-(5,6,7,8-テトラヒドロ-5,5,8,8-テトラメチル-1-フェニル-1H-ナフト[2,3-d]イミダゾール-2-イル)安息香酸；
4-[[5,6-ジヒドロ-5,5-ジメチル-8-(4-メチルフェニル)-2-ナフタレニル]エチニル]安息香酸；
2,6-ジフルオロ-4-[[8-ブロモ-2,2-ジメチル-4-(4-メチルフェニル)-6-クロマニル)カルボニル]アミノ]安息香酸；
4-[(1E)-2-[7-(ヘプチルオキシ)-3,4-ジヒドロ-4,4-ジメチル-1,1-ジオキソ-2H-1-ベンゾチオピラン-6-イル]-1-プロペニル]安息香酸；及び
4-[4,5,7,8,9,10-ヘキサヒドロ-7,7,10,10-テトラメチル-1-(3-プルチジルメチル)アントラ[1,2-b]ピロール-3-イル]安息香酸
から選ばれる化合物又は生理学的に許容されるその塩である請求項１ないし５のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項７】
レチノイドアンタゴニストが4-(5H-7,8,9,10-テトラヒドロ-5,7,7,10,10- ペンタメチルベンゾ[e]ナフト[2,3-b][1,4]ジアゼピン-13-イル）安息香酸又は生理学的に許容されるその塩である請求項１ないし５のいずれか１項に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は血管新生促進作用を有する医薬に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
動脈硬化症などの血管病態によって心臓、下肢、脳などに虚血が引き起こされた疾患に対しては血管バイパス手術などの外科的治療法、あるいはステント留置などのインターベンション術が行われている。しかしながら、これらの治療法が困難な場合には有効な治療法がないのが現状である。虚血部に対して血管新生を促して血流を改善することは有効な治療法となると考えられており、これまでに血管内皮細胞増殖因子(Vascular endothelial growth factor)や肝細胞増殖因子(Hepatocyte growth factor)を組織で発現させる遺伝子治療が試みられているが、有効性や安全性の問題はまだ解決されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の課題は、血管新生促進作用を有する医薬を提供することにある。より具体的には、血管新生促進作用を有し、虚血性疾患または褥瘡などの創傷、組織欠損の予防及び／又は治療のための医薬、特に動脈硬化に起因する虚血性疾患（心筋梗塞、狭心症、下肢閉塞性動脈硬化症、バージャー病、脳梗塞）や褥瘡などの予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することが本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、4-(5H-7,8,9,10-テトラヒドロ-5,7,7,10,10-ペンタメチルベンゾ[e]ナフト[2,3-b][1,4]ジアゼピン-13-イル)安息香酸などのレチノイドアンタゴニストが血管内皮細胞の増殖や遊走活性化作用を有しており、新生血管を増加させる作用を見いだした。また、レチノイドアンタゴニストが上記の作用に基づいて、肉芽組織の形成を促し創傷治癒を改善する作用を有することを見いだした。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。
【０００５】
すなわち、本発明は、血管新生促進作用を有する医薬であって、レチノイドアンタゴニストを有効成分として含む医薬を提供するものである。また、本発明により、血管新生促進により虚血性疾患を予防及び／又は治療するための医薬であって、レチノイドアンタゴニストを有効成分として含む医薬；及び血管新生促進により創傷を予防及び／又は治療するための医薬であって、レチノイドアンタゴニストを有効成分として含む医薬が提供される。虚血性疾患としては、例えば、心筋梗塞、狭心症、下肢閉塞性動脈硬化症、バージャー病、脳梗塞、胸郭出口症候群、又は高安病などを挙げることができ、創傷には組織の物理的あるいは化学的傷害に起因する創傷が含まれ、好ましい例として褥瘡を挙げることができる。
【０００６】
別の観点からは、本発明により、ヒトを含む哺乳類動物の生体内において血管新生を促進する方法であって、レチノイドアンタゴニストの有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法が提供される。また、虚血性疾患の予防及び／又は治療方法であって、レチノイドアンタゴニストの有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；及び創傷の治癒促進方法であって、レチノイドアンタゴニストの有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法が本発明により提供される。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の医薬は血管新生促進作用を有しており、その作用に基づいて、虚血性疾患又は創傷の予防及び／又は治療のための医薬として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本明細書において、「レチノイド」という用語は、レチノイン酸及びレチノイン酸様の生物活性を有する化合物を含む概念として用いる。レチノイドに対して拮抗的に作用し、上記レチノイドの代表的な作用（代表的なものとして細胞分化作用、細胞増殖促進作用、及び生命維持作用など）を減弱する化合物の存在が知られている(Eyrolles, L., et al., Journal of Medicinal Chemistry, 37(10), pp.1508-1517, 1994)。この刊行物には、例えば、4-(5H-7,8,9,10-テトラヒドロ-5,7,7,10,10- ペンタメチルベンゾ[e]ナフト[2,3-b][1,4]ジアゼピン-13-イル）安息香酸（LE135）などの化合物がレチノイドのアンタゴニストとして作用することが開示されている。また、本発明者により、4-(13H-10,11,12,13-テトラヒドロ-10,10,13,13,15-ペンタメチルジナフト[2,3-b][1,2-e][1,4] ジアゼピン-7-イル）安息香酸などの化合物が、レチノイドに対して拮抗的に作用することが見い出されている（特願平7-255912号明細書）。本明細書において、このようにレチノイドに対して拮抗的に作用する物質を「レチノイドアンタゴニスト」と呼ぶ。
【０００９】
いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、レチノイドアンタゴニストは、レチノイン酸レセプター(RAR) とともに二量体を形成するレチノイドX レセプター(RXR) に結合し、レチノイン酸などのレチノイドの生理活性の発現を調節するものと考えられる。当業者は、上記の刊行物に記載された方法などに従って、ある化合物がレチノイドアンタゴニストであるか否かを容易に判定することが可能である。本発明の医薬の有効成分であるレチノイドアンタゴニストとしては、遊離形態の化合物のほか、塩、水和物、又は溶媒和物を用いてもよい。また、レチノイドアンタゴニストの立体異性体が存在する場合には、純粋な形態の任意の立体異性体（光学活性体、ジアステレオ異性体、又は幾何異性体など）、あるいは立体異性体の任意の混合物又はラセミ体などを用いてもよい。
【００１０】
本発明において好適に用いられるレチノイドアンタゴニストとしては、例えば、
4-(5H-7,8,9,10-テトラヒドロ-5,7,7,10,10- ペンタメチルベンゾ[e]ナフト[2,3-b][1,4]ジアゼピン-13-イル）安息香酸（LE135）；
4-(13H-10,11,12,13-テトラヒドロ-10,10,13,13,15-ペンタメチルジナフト[2,3-b][1,2-e][1,4] ジアゼピン-7-イル）安息香酸；
4-[(4-メトキシ-3-トリクロロ[3.3.1.13,7]デク-1-イルベンゾイル)アミノ]安息香酸；
4-(5,6,7,8-テトラヒドロ-5,5,8,8-テトラメチル-1-フェニル-1H-ナフト[2,3-d]イミダゾール-2-イル)安息香酸；
4-[[5,6-ジヒドロ-5,5-ジメチル-8-(4-メチルフェニル)-2-ナフタレニル]エチニル]安息香酸；
2,6-ジフルオロ-4-[[8-ブロモ-2,2-ジメチル-4-(4-メチルフェニル)-6-クロマニル)カルボニル]アミノ]安息香酸；
4-[(1E)-2-[7-(ヘプチルオキシ)-3,4-ジヒドロ-4,4-ジメチル-1,1-ジオキソ-2H-1-ベンゾチオピラン-6-イル]-1-プロペニル]安息香酸；及び
4-[4,5,7,8,9,10-ヘキサヒドロ-7,7,10,10-テトラメチル-1-(3-プルチジルメチル)アントラ[1,2-b]ピロール-3-イル]安息香酸
などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。
【００１１】
本発明の医薬は血管新生促進作用を有しており、例えば、虚血性疾患又は創傷の予防及び／又は治療に有用である。虚血性疾患としては、例えば、心筋梗塞、狭心症、下肢閉塞性動脈硬化症、バージャー病、脳梗塞、胸郭出口症候群、又は高安病などを挙げることができ、創傷としては、組織の物理的又は化学的傷害に起因する創傷、より具体的には褥瘡などを挙げることができる。創傷の予防には、例えば褥瘡の予防などが含まれる。もっとも、本発明の医薬の適用対象となる疾患はこれらに限定されることはない。本発明の医薬は肉芽組織の形成を実質的に活性化することができ、組織の物理的又は化学的傷害に起因する創傷や組織欠損を改善することができる。
【００１２】
本発明の医薬としては、有効成分であるレチノイドアンタゴニストそれ自体を投与してもよいが、好ましくは、当業者に周知の方法によって製造可能な経口用あるいは非経口用の医薬組成物を調製して投与することが望ましい。経口投与に適する医薬用組成物としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、及びシロップ剤等を挙げることができ、非経口投与に適する医薬組成物としては、例えば、注射剤、坐剤、吸入剤、点眼剤、点鼻剤、軟膏剤、クリーム剤、及び貼付剤等を挙げることができる。本発明の医薬は、好ましくは非経口的に病変部に局所投与することができる。局所投与の形態は特に限定されないが、注射剤の形態で局所注入することが望ましい。
【００１３】
上記の医薬組成物は、薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物を加えて製造することができる。薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物の例としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、pH調節剤、安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を挙げることができる。
【００１４】
本発明の医薬の投与量は特に限定されず、有効成分の種類や作用の強弱などに応じて適宜選択することができ、さらに患者の体重や年齢、疾患の種類や症状、投与経路など通常考慮すべき種々の要因に応じて、適宜増減することができる。本発明の医薬を局所投与する場合には、一般的には成人一日あたり 0.01 〜1,000 mg程度の範囲で用いることができる。
【実施例】
【００１５】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。以下の実施例においては、レチノイドアンタゴニストとして4-(5H-7,8,9,10-テトラヒドロ-5,7,7,10,10- ペンタメチルベンゾ[e]ナフト[2,3-b][1,4]ジアゼピン-13-イル）安息香酸（LE135）を用いた。
【００１６】
例1：血管新生あるいは脈管形成への効果
ヒト臍静脈内皮細胞とヒト皮膚線維芽細胞の共培養系(血管新生キット：クラボウ社)を用い、LE135の血管新生に対する作用を検討した。強力な血管新生作用を有する血管内皮細胞増殖因子VEGF 2μg/mlを添加したwell(8個)を陽性対照とした。薬剤無添加、培養液のみのwell(8個)を陰性対照とし各種濃度のLE135を添加(それぞれ8wellずつ)、11日間培養し、血管内皮細胞に対する抗CD31(PECAM1)抗体を用いて免疫染色を行ない、陽性を示す血管類似の管腔構造の面積、形成された管腔構造の成熟度の指標として分枝数を測定した。陰性対照である薬剤無添加wellの管腔構造面積、分枝数をそれぞれ100とした場合、それぞれの濃度の薬剤(LE135または陽性対照であるVEGF)を添加したwellの管腔構造面積、分枝数の数値を表1に示した。LE135 は10-10M及び10-9Mの濃度で有意に血管新生を促進することが示された。
【００１７】
【表１】
2005239631.tif 000002
数値は平均値±標準偏差を示し、*は陰性対照に比して有意差があることを示す。
【００１８】
例２：マウス下肢虚血モデルを用いた血管新生実験
24〜36週齢、オスの野生型マウス(C3H/HeNCrj)の片側大腿動脈を結紮及び切離し、下肢虚血モデルマウスを作成した。LE135を5mg/kgで経口投与を行うマウス(15匹)、薬剤非投与マウス(15匹)の２群に分け、手術前日、1、3、4、5、7、9、12、14、16、18、21、24、及び28日後にレーザードプラー法を用いて患肢/健肢の血流比を測定した。その結果を図１に示す。薬剤非投与マウスに比して、LE135投与マウスにおいて有意な血流改善を認めた。また、薬剤非投与マウスにおいては手術後28日目の時点で、その約30%の下肢に壊死または切断を認めたのに比し、LE135投与マウスにおいて下肢の壊死または切断は１例も認められなかった。21日目の患肢筋組織に対して血管内皮細胞を検出する目的で抗CD31 (PECAM1) 抗体を用いて免疫染色を施行したところ、薬剤非投与群に比してLE135投与群において有意に多数の内皮細胞(CD31陽性細胞)が観察された(表２)。
【００１９】
【表２】
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【００２０】
例３：ウサギ下肢虚血モデルに対する筋肉内投与
ウサギの片側外腸骨動脈を結紮、切除後同側の大腿部筋肉内に10-8 MのLE135溶液を注射し、その血管新生効果を検討した。陰性対照としてLE135を溶解する場合と同量の有機溶媒のみを溶解した溶液を用いた。投与は結紮術翌日より3回/週の頻度で行い、結紮術後28日目に下肢血管造影を行い観察したところ、対照群に比してLE135投与群では、明らかに良好な側副血行路形成を認めた。血管造影所見を図２に示す。点線の枠内に認める血管は側副血行路であると考えられる。図中、*白色矢印は総腸骨動脈を示す
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】マウス下肢虚血モデルを用いた血管新生実験の結果を示した図である。
【図２】ウサギ下肢虚血モデルに対する筋肉内投与において本発明の医薬の血管新生効果を血管造影により示した写真である。
【図１】
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【図２】
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