(57)【要約】【課題】優れたトリプシン阻害活性を有し、安全なトリプシン阻害剤の提供。【解決手段】ウイッチヘーゼル、ローズマリー、レンギョウ、ムクゲ、チョウジ、バナバ、フウ、セイヨウヤマハッカ及びザクロから成る群より選ばれる少なくとも１種類の植物又はその抽出物を含有するトリプシン阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイッチヘーゼル、ローズマリー、レンギョウ、ムクゲ、チョウジ、バナバ、フウ、セイヨウヤマハッカ及びザクロから成る群より選ばれる少なくとも１種類の植物又はその抽出物を含有するトリプシン阻害剤。
【請求項２】
植物の抽出物が、ムクゲ、バナバ、セイヨウヤマハッカ及びザクロから成る植物より選ばれる少なくとも１種類の植物の水抽出物である請求項１記載のトリプシン阻害剤。
【請求項３】
植物の抽出物が、ウイッチヘーゼル、ローズマリー、レンギョウ、チョウジ、フウ、ムクゲから成る群より選ばれる少なくとも１種類の植物の低級アルコール抽出物である請求項１記載のトリプシン阻害剤。
【請求項４】
ウイッチヘーゼル、ローズマリー、レンギョウ、ムクゲ、チョウジ、バナバ、フウ、セイヨウヤマハッカ及びザクロから成る群より選ばれる少なくとも１種類の植物又はその抽出物を含有する膵臓炎予防治療剤。
【請求項５】
植物の抽出物が、ムクゲ、バナバ、セイヨウヤマハッカ及びザクロから成る植物より選ばれる少なくとも１種類の植物の水抽出物である請求項４記載の膵臓炎予防治療剤。
【請求項６】
植物の抽出物が、ウイッチヘーゼル、ローズマリー、レンギョウ、チョウジ、フウ、ムクゲから成る群より選ばれる少なくとも１種類の植物の低級アルコール抽出物である請求項４記載の膵臓炎予防治療剤。
【請求項７】
ウイッチヘーゼル、ローズマリー、レンギョウ、ムクゲ、チョウジ、バナバ、フウ、セイヨウヤマハッカ及びザクロから成る群より選ばれる少なくとも１種類の植物又はその抽出物を含有する血栓症予防治療剤。
【請求項８】
植物の抽出物が、ムクゲ、バナバ、セイヨウヤマハッカ及びザクロから成る植物より選ばれる少なくとも１種類の植物の水抽出物である請求項７記載の血栓症予防治療剤。
【請求項９】
植物の抽出物が、ウイッチヘーゼル、ローズマリー、レンギョウ、チョウジ、フウ、ムクゲから成る群より選ばれる少なくとも１種類の植物の低級アルコール抽出物である請求項７記載の血栓症予防治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリプシン阻害剤に関し、詳細には、蛋白分解酵素トリプシンを強く阻害する作用を有し、急性、慢性膵臓炎や血栓症等の予防あるいは治療に有用なトリプシン阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、欧米化された食生活により、肉類、特に脂肪分の摂取過多及び酒類の飲料過多による急性及び慢性の膵臓炎に罹患する患者が増加している。また、この膵臓炎により糖尿病へ移行したり、あるいは膵臓炎による血中トリプシンの増加に伴う血栓症が引き起こされる場合もある。これらの疾患の予防又は治療薬としてこれまでにいくつかのトリプシン阻害剤が開発されている（特許文献１〜８参照）。これらのトリプシン阻害剤はグアニジノ安息香酸誘導体、アミジン誘導体及びアルギニン誘導体からなり、いずれも合成化合物である。薬用植物由来としては、トリテルペン化合物であるヘデラゲニン（特許文献９、１０参照）、アカシア属、ユーカリ属（特許文献１１参照）、セージ、クワ属（特許文献１２参照）、シロナタマメ（特許文献１３参照）、ニガウリ（特許文献１４、１５参照）などがトリプシン阻害活性を有するものとして報告されているが、未だ十分な効果は得られていない。
【特許文献１】特公昭５７−３５８７０号公報
【特許文献２】特公昭６０−４９１８５号公報
【特許文献３】特公昭６１−４１５１０号公報
【特許文献４】特公昭６１−１０６３号公報
【特許文献５】特公平２−１０８２２号公報
【特許文献６】特公昭６２−１３８９号公報
【特許文献７】特開昭６０−１６３８５５号公報
【特許文献８】特開昭６０−１６３８１５号公報
【特許文献９】特開平１−４２４１１号公報
【特許文献１０】特開平２−２６２５１０号公報
【特許文献１１】特開２００２−３２２０７６号公報
【特許文献１２】特開平１１−１４７８３４号公報
【特許文献１３】特開２０００−８６５３０号公報
【特許文献１４】特開平８−１４３４６７号公報
【特許文献１５】特開平８−１４０４７７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、優れたトリプシン阻害活性を示し、かつ安全性の高いトリプシン阻害剤を提供することである。本発明の目的はまた、急性、慢性の膵臓炎予防治療剤、血栓症予防治療剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
そこで本発明者は、安全性を考慮して植物由来のトリプシン阻害剤を探索してきたところ、ある特定の種の植物又はその抽出物が強いトリプシン阻害活性を有し、膵臓炎予防治療剤及び血栓症予防治療剤として有用であることを見出し、本発明を完成させた。
【０００５】
すなわち、本発明は、ウイッチヘーゼル（Hamamelis virginiana）、ローズマリー（Rosmarinus officinalis）、レンギョウ（Forsythiae fructus）、ムクゲ（Hibiscus syriacus）、チョウジ（Syzygium aromaticum）、バナバ（Lagerstroemia speciosa）、フウ（Liquidambaris fructus）、セイヨウヤマハッカ（Melissa officinalis）及びザクロ（Granati pericarpium）から成る群より選ばれる少なくとも１種類の植物又はその抽出物を含有するトリプシン阻害剤及びそれらを含有する急性、慢性の膵臓炎予防治療剤、血栓症予防治療剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の植物又はその抽出物は、トリプシン活性を強力に阻害することから、急性、慢性の膵臓炎、糖尿病や血栓症の予防、治療に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明で使用される植物は、ウイッチヘーゼル（Hamamelis virginiana）、ローズマリー（Rosmarinus officinalis）、レンギョウ（Forsythiae fructus）、ムクゲ（Hibiscus syriacus）、チョウジ（Syzygium aromaticum）、バナバ（Lagerstroemia speciosa）、フウ（Liquidambaris fructus）、セイヨウヤマハッカ（Melissa officinalis）及びザクロ（Granati pericarpium）である。本発明における植物は、葉、茎、芽、花、木質部、木皮部（樹皮）などの地上部及び根、塊茎などの地下部、種子、果実、樹脂などのすべての部位が使用可能である。また本発明における植物は、植物自身を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、それら自身を圧搾抽出することにより得られる搾汁、あるいは抽出物として用いることができるが、抽出物として用いるのが好ましい。
【０００８】
抽出する溶媒としては水；エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール；エチルエーテル、イソプロピルエーテル等のエーテル類；アセトンなどの極性溶媒が挙げられ、これらは単独で用いてもよく、また２種以上の混合溶媒として用いてもよい。このうち、水又は低級アルコールが特に好ましい。抽出方法としては、室温、冷却、加温した状態で浸漬して抽出する方法が挙げられる。抽出の際の植物と溶媒との比率は植物に対して溶媒１〜１００重量倍、特に２〜２０重量倍が好ましい。また抽出時間は、抽出温度によっても異なるが、水を用いた場合は１〜１２０分の範囲とすることが好ましく、特に５〜３０分が好ましい。一方、低級アルコールを用いた場合は１時間〜７日間の範囲とすることが好ましく、特に１時間〜４８時間が好ましい。この様にして得られた抽出物は、そのまま用いることもできるがカラムクロマトなどの各種クロマトグラフィー等を用いて抽出分画物として用いることもできる。
【０００９】
特に好ましい抽出物は、ムクゲ、バナバ、セイヨウヤマハッカ及びザクロの水抽出物；並びにウイッチヘーゼル、ローズマリー、レンギョウ、チョウジ、フウ及びムクゲの低級アルコール抽出物である。
【００１０】
またこれらの植物又はその抽出物は１種又は２種以上を混合して用いてもよい。
【００１１】
本発明で用いるこれらの特定の植物の乾燥物又は抽出物が、トリプシン阻害活性を有することは、従来から全く知られておらず、本発明により得られた新知見である。本発明による植物は、従来の薬用植物から得られた抗トリプシン剤における阻害活性よりも卓越したトリプシン阻害活性を有しており、かつ安全性が高く急性、慢性の膵臓炎や血栓症等の予防治療剤として、またこれらを目的とした食品として有用である。
【００１２】
本発明のトリプシン阻害剤、急性、慢性の膵臓炎や血栓症等の予防治療剤の投与方法は、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。投与に際しては、これらの植物又はその抽出物を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬品製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤；溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤；凍結乾燥製剤などが挙げられる。これらの製剤は通常の手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００１３】
本発明のトリプシン阻害剤を食品として用いる場合には、前記の植物をそのまま、又は種々の栄養成分を加えて、あるいは飲食品中に含有せしめて、急性、慢性の膵臓炎あるいは血栓症の治療及び予防に有用な保健用食品又は食品素材として用いる。例えば、前記の植物に、上述した適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品；かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品；パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。医薬品として利用する場合の本発明品の植物又は抽出物の有効投与量は、患者の年齢、体重、症状、患者の程度、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の阻害活性の強さなどにより、適宜決定されるが、例えば、経口投与の場合、植物又は抽出物の乾燥物として、一般に１日当たり０．００１〜１０００mg／kg体重程度が望ましい。ムクゲの熱水抽出物の場合、１日当たり５〜３００mg／kg体重程度とされ、１日に数回に分けて投与してもよい。
【００１４】
本発明に用いる植物は、天然であるためその毒性は低く、例えばバナバの熱水抽出物を毎日１０００mg／kg、１００日間という長期に亘ってラットに経口投与しても、死亡例は認められず、体重変化も観察されなかった。従って本発明のトリプシン阻害剤は非常に安全性の高い優れたトリプシン阻害活性を有するものといえる。
【実施例】
【００１５】
以下に実施例を挙げて、具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１６】
実施例１
（植物の抽出）ムクゲ（Hibiscus cortex）、バナバ（Lagerstroemia speciosa）、セイヨウヤマハッカ（Melissa officinalis）、ザクロ（Granati pericarpium）各１０ｇに蒸留水２００mLを加え、１００℃で３０分間、煮沸した後、凍結乾燥することにより、各熱水抽出乾燥物を得た。
【００１７】
（トリプシン阻害活性試験）トリプシン活性は、塩化カルシウム２０mmol／Ｌを含んだ、０．２mol／Ｌトリエタノラミン緩衝液（pH７．８）０．７mLに、ブタ膵臓由来トリプシン（5207USP unit/mg，和光純薬社製）溶液（１００μg/mL）０．０５mL及び抽出物を含む試料サンプル溶液０．０５mL（盲検用は水０．０５mL）を添加して２５℃で１５分間インキュベートを行い、基質として４mmol／Ｌ  Ｂｚ−Ｌ−Ａｒｇ−４−ＮＡ（Ｎ−α−ベンゾイル−Ｌ−アルギニン−４−ニトロアニリド塩酸塩）０．２mLを加えて更に２５℃で１０分間インキュベート後、０．１Ｎ塩酸溶液を１mL添加して反応を停止し、４０５nmの吸光度を測定することにより評価した。トリプシン阻害活性は以下の式を用いて算出した。
【００１８】
トリプシン阻害活性＝100−（ＡＴ−ＡＢT）／（ＡＣ−ＡＢC）×100（％）
ＡＴ：試料サンプルの吸光度
ＡＢT：試料サンプルのブランク吸光度
ＡＣ：盲検用サンプルの吸光度
ＡＢC：盲検用サンプルのブランク吸光度
また、比較例として、すでにトリプシン阻害活性を有すると報告されているアカシア、ユーカリ、セージ、クワについても同様の試験を行った。その結果も併せて表１に示した。
【００１９】
表１からわかるように、本発明のムクゲ、バナバ、セイヨウヤマハッカ、ザクロの水抽出物は高いトリプシン阻害活性を有することがわかる。
【００２０】
【表１】
2005053818.tif 000002
【００２１】
実施例２
（植物の抽出）ウイッチヘーゼルバーク（Hamamelis virginiana）、ローズマリー（Rosmarinus officinalis）、レンギョウ（Forsythiae fructus）、チョウジ（Syzygium aromaticum）、フウ（Liquidambaris fructus）、ムクゲ（Hibiscus syriacus）各２．５ｇにエタノール５０mLを加え、室温にて１週間抽出を行った。得られた抽出溶液を減圧濃縮に供し、溶媒を完全に除去し、各アルコール抽出乾燥物を得た。
【００２２】
（トリプシン阻害活性試験）実施例１に記した方法にてトリプシン阻害活性の測定を行った。ただし、盲検用にエタノール５０μLを用いた。また、比較例として、すでにトリプシン阻害活性を有すると報告されているアカシア、ユーカリ、セージ、クワについても同様の試験を行った。その結果も併せて表２に示す。表２からわかるように、本発明のウイッチヘーゼルバーク、ローズマリー、レンギョウ、チョウジ、フウ、ムクゲの低級アルコール抽出物は高いトリプシン阻害活性を有することがわかる。
【００２３】
【表２】
2005053818.tif 000003
【００２４】
処方例１（錠剤）
下記の処方で各種成分を混合して造粒・乾燥・整粒した後に、打錠して錠剤を製造した。
（処方）                          （mg）
ウイッチヘーゼル抽出物          ４０
微結晶セルロース              １００
乳糖                            ８０
ステアリン酸マグネシウム          ０．５
メチルセルロース                １２
【００２５】
処方例２（清涼飲料）
下記処方により、常法に従って各成分を配合し、均質化して清涼飲料を得た。得られた清涼飲料は褐色瓶に充填後、アルミキャップにて封印し、加熱処理を施した。これらは外観・風味ともに良好なものであった。
（処方）                          （ｇ）
ムクゲ抽出物                      ０．８
香料                              ０．８
水                            １００
還元澱粉糖化物                  ２４
果糖                            １８