(57)【要約】【課題】      安価で品質安定性に優れ、皮膚症状の改善効果又は治癒効果を有する皮膚外用剤組成物を提供すること。【解決手段】  トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド及び遊離脂肪酸を含む皮膚外用剤組成物であって、γ−リノレン酸及びγ−リノレン酸グリセリドから選ばれる一種以上を含有する皮膚外用剤組成物である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド及び遊離脂肪酸を含む油脂組成物であって、γ−リノレン酸及びγ−リノレン酸グリセリドから選ばれる一種以上を含有する皮膚外用剤組成物。
【請求項２】
前記トリグリセリド、ジグリセリド及びモノグリセリドの含有割合が、グリセリド全量に対してそれぞれ１０〜７９質量％、２０〜７０質量％及び１〜７０質量％である請求項１に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項３】
前記トリグリセリド、ジグリセリド及びモノグリセリドの含有割合が、グリセリド全量に対してそれぞれ１０〜７０質量％、２５〜６０質量％及び３〜６５質量％である請求項２に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項４】
γ−リノレン酸の含有割合が、前記グリセリドを構成する脂肪酸と遊離脂肪酸の合計量に対して５質量％以上である請求項１〜３のいずれかに記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項５】
微生物体内油脂又は微生物分泌油脂の、加水分解処理又はエステル交換処理により得られるものである請求項１〜４のいずれかに記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項６】
前記微生物が、モルティエレラ（Mortierella)属菌である請求項５に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項７】
前記微生物が、ムコール（Mucor)属菌である請求項５に記載の皮膚外用剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動物細胞増殖促進能を有するγ−リノレン酸（以下、ＧＬＡと略記することがある。）を含む油脂組成物を有効成分とする皮膚外用剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、皮膚外用剤の分野において、皮膚細胞を賦活化し、皮膚の機能そのものを活性化して皮膚症状の改善や抗炎症効果又は創傷治癒効果を発現させる研究が多くなされてきている。従来、かかる皮膚外用剤として、ホルモン剤、ビタミン剤、γ−オリザノール、サポニン等の生薬抽出物、植物レクチン、キノコ抽出物、さらには動物由来の蛋白質など種々の物質が使用されてきた。
これらの物質の中で、しわなどの皮膚の老化症状の改善作用を有する物質や日光紫外線による皮膚の老化や炎症作用を防ぐ物質として、α−ヒドロキシ酸やレチノールが、しわの修復に有効であることが知られている。しかしながら、α−ヒドロキシ酸のうち特に有効な作用を示すグリコール酸や乳酸などは親油性であるため、経皮吸収が悪く、配合量を増やした場合には、皮膚刺激などの好ましくない副作用を示すこともあった。また、レチノールは、空気に触れると容易に酸化されるため、通常、脂肪酸とのエステル体として使用されるが、この脂肪酸エステルは脂溶性であるため、水溶性基材への配合が困難であった。
創傷（外科的切開、胃腸管の傷又は潰瘍、剥離、裂傷、切断、いわゆる床ずれと呼ばれる褥そう、ただれ、感染等により起こった表面組織の損傷）の治癒には、細胞増殖及び上皮組織の形成に依存し、創傷の治癒過程に含まれる細胞の分化、増殖過程を刺激あるいは促進する薬剤が有効であると考えられる。創傷治癒効果を示す薬剤として、有効成分としてアロエ等の抽出物、抗生物質、抗炎症剤、カリクレイン、アデニン、ニコチン酸、アラントイン、ビタミンＡ、亜鉛、ｃＡＭＰ誘導体（例えば、特許文献１参照）に加えて、上記細胞成長因子（ｂ−ＥＧＦ）を用いる試みもなされている（例えば、特許文献２参照）。しかしながら、前記有効成分は、十分な効果が得られない場合があり、生産が困難で、生産コストが高く、有効成分が化学的に不安定である等の問題があり、安価で品質安定性に優れ、皮膚症状の改善効果又は治癒効果を有する皮膚外用剤が求められていた。
【０００３】
【特許文献１】特開昭６３−１０７９３５号公報
【特許文献２】特開平３−１０６８２３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、前記事情に鑑みなされたもので、安価で品質安定性に優れ、皮膚症状の改善効果又は治癒効果を有する皮膚外用剤組成物を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、動物細胞増殖促進能を有する特定の物質を含有する油脂組成物により、上記目的が達成されることを見出した。本発明はかかる知見に基づいて完成したものである。
すなわち、本発明は、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド及び遊離脂肪酸を含む油脂組成物であって、γ−リノレン酸及びγ−リノレン酸グリセリドから選ばれる一種以上を含有する皮膚外用剤組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、安価で品質安定性に優れ、皮膚症状の改善効果又は治癒効果を有する皮膚外用剤組成物を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の皮膚外用剤組成物の成分であるトリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドを構成する脂肪酸に制限はなく、例えば炭素数２〜２４の飽和脂肪酸及び不飽和脂肪酸が挙げられる。好ましい脂肪酸としては、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、ペンタデセン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグレノリン酸、セロチン酸、オレイン酸、リノール酸、α−リノレン酸、γ−リノレン酸、オクタデカテトラエン酸、エイコセン酸、エイコサジエン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコセン酸、ドコサジエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。
グリセリドとしては特に制限はなく、化学合成品でも植物、動物由来のものでも、微生物由来のものでも用いることができるが、入手が容易である点から、植物又は微生物由来のものが好ましい。
本発明の皮膚外用剤組成物中に含まれるトリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドの含有割合は、動物細胞増殖効果にばらつきが生じるのを防ぐ点から、グリセリド全量に対し、それぞれ１０〜７９質量％、２０〜７０質量％、１〜７０質量％が好ましい。トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドの含有割合は、より好ましくは、グリセリド全量に対し、それぞれ１０〜７０質量％、２５〜６０質量％、３〜６５質量％である。最も好ましくは、グリセリド全量に対し、それぞれ１０〜６５質量％、３０〜６０質量％、５〜６０質量％である。
このような組成のグリセリドは公知の方法で製造することができる。例えば、トリグリセリド型油脂を化学触媒又は酵素触媒を用いて、ジグリセリド、モノグリセリドに誘導する方法（例えば、特開２０００−２３６８８８、特開２０００−３３３６８８号公報参照）により製造することができる。
【０００８】
本発明の皮膚外用剤組成物の有効成分であるＧＬＡは遊離脂肪酸としてのみならず、エステルとして存在してもよい。「ＧＬＡ含有量」とは、本発明の皮膚外用剤組成物中のＧＬＡ誘導体を全て遊離のＧＬＡとし、グリセリドを加水分解して得られる遊離脂肪酸と、皮膚外用剤組成物に存在している遊離脂肪酸の合計から算出する。例えば、ＧＬＡがエステルとして存在する場合には、このエステルを加水分解して得られる遊離のＧＬＡ量を測定すればよい。
ＧＬＡの含有量は、皮膚外用剤組成物の剤型や種類に応じて適宜調整すればよい。一般的には、剤型や使用用途による治癒効果のばらつきを防ぐ点から、グリセリドを構成する脂肪酸と遊離脂肪酸の合計量に対し、５質量％以上が好ましい。より好ましくは１０質量％以上、さらに好ましくは２０質量％以上である。ＧＬＡの含有量には特に上限はないが、９８質量％を超えて含有しても、治癒効果がより向上するものでもなく、経済的な観点から９８質量％以下が好ましい。
ＧＬＡは化学的に合成して得ることもでき、ボラージ、月見草、ユキノシタ等の植物種子やスピルリナ（Spirulina)属等の藻類、カニンガメラ（Cunninghamella）属、モルティエレラ（Mortierella)属、ムコール（Mucor)属等の微生物から得ることもできる。得られたＧＬＡが誘導体である場合には、そのまま用いてもよく、加水分解処理やエステル交換処理を行ってもよい。
【０００９】
本発明の皮膚外用剤組成物は、グリセリドとＧＬＡ油脂とを前記所定の割合で、公知の混合方法で混合することにより製造することができる。また、本発明の皮膚外用剤組成物は、ＧＬＡを含有する微生物から、ＧＬＡを含有する微生物体内油脂又は微生物分泌油脂を抽出し、このＧＬＡ含有油脂を、加水分解処理又はエステル交換処理することにより得ることができる。
このＧＬＡ含有油脂は、ＧＬＡ含有油脂生産能を有する微生物を常法により培養することによって得ることができる。ＧＬＡ含有油脂生産能を有する微生物としては、前述したように、糸状菌や酵母、藻類など種々のものが挙げられる。例えば、γ−リノレン酸含有油脂生産能を有する微生物としては、特開昭６０−１６８３９１号公報等に記載されているモルティエレラ（Mortierella)属に属する微生物、特開昭６３−２８３５８９号公報等に記載されているムコール（Mucor)属に属する微生物、特開昭６３−１３３９９４号公報等に記載されているリゾプス（Rhizopus）属に属する微生物などが挙げられる。
より具体的には、モルティエレラ（Mortierella)属に属する微生物として、例えばモルティエレラ・イサベリナ（Mortierella isabellina）ＩＦＯ７８２４やモルティエレラ・ラマニアナ・アングリスポラ（Mortierella ramaniana var.angrispora）ＩＦＯ８１８７などが挙げられる。また、ムコール（Mucor)属に属する微生物としては、例えばムコール・シルシネロイデス（Mucor circinelloides）ＨＵＴ１１２１（ＦＥＲＭ  Ｐ−９３５９）やムコール・ジャバニクス（Mucor javanicus)ＨＵＴ１１６２（ＦＥＲＭ  Ｐ−９３６０）などが挙げられる。
【００１０】
前記微生物を培養するための培地は、前記微生物が良く生育して目的とする脂質を生産し得るものであればよく、炭素源、窒素源、無機塩類及び必要により微生物の生育に好適なアミノ酸等の成分を含むものが用いられる。炭素源としては、グルコース、デンプン、廃糖蜜等の糖類や有機酸や酢酸ナトリウムなどが使用でき、特にグルコース等の糖類が好適である。また、窒素源としては、アンモニウム塩、酵母エキス、コーンスティープリカー、ペプトンなどが挙げられる。無機塩類としては、マグネシウム塩、カルシウム塩、リン酸塩、鉄塩、銅塩などが挙げられる。
培養にあたり、炭素源や窒素源あるいはリン酸塩を、培地に最初から全量を加えた場合、微生物の生育に悪影響を及ぼすことがあるので、培養開始以降の適当な時期に一部追加することにより、γ−リノレン酸の生産性を向上させることができ、好ましい。
その他の培養条件、例えば温度、培養時間は、培地組成や目的とするγ−リノレン酸の含有率や脂質の生産性を考えて好ましい条件を設定すればよい。温度は通常２０〜３５℃程度、好ましくは２５〜３０℃、ｐＨは通常３〜７程度、好ましくは３．５〜６．５にて、通常７２〜２４０時間程度、好ましくは９６〜１６８時間行えばよい。
【００１１】
ＧＬＡを含有する脂質は、通常、微生物菌体中に蓄積されるので、常法により培養液を固液分離し、ＧＬＡを含有する脂質を含む菌体を得る。ＧＬＡの用途によってはこの菌体をそのまま用いることもできるが、さらに油脂を抽出し精製するためには、Ｂｌｉｇｈ＆Ｄｙｅｒ法、Ｆｏｌｉｃｈ法や特開昭５７−１４４９８６号公報などに記載の方法で菌体破砕、溶剤抽出を行い、目的とするＧＬＡ含有油脂を得ることができる。
以上のようにして得られたＧＬＡ含有油脂を、公知の方法により加水分解処理又はエステル交換処理することにより、本発明の皮膚外用剤組成物を得ることができる。このような方法で本発明の皮膚外用剤組成物を得る場合、油脂組成物におけるＧＬＡの含有割合は、油脂組成物の一部を採り、メチルエステル化の後、ガスクロマトグラフィーにより決定される（特開昭５７−１４４９８６号公報参照）。
【００１２】
本発明の皮膚外用剤組成物には、本発明の効果を阻害しないものであれば、一般に皮膚外用剤成分として使用されている他の成分を含有させてもよい。他の成分としては、例えば、精製水、アルコール類、油性物質、抗フケ剤、殺菌剤、薬効成分、防腐剤、増粘剤、収れん剤、保湿剤、粉体、香料、乳化安定剤、ｐＨ調整剤などが挙げられる。グリセリドやＧＬＡとして、植物由来、微生物由来のものを用いる場合には、植物由来、微生物由来の他の成分を含有させてもよい。
アルコール類としては、エタノール、直鎖又は分岐鎖のアルキル基又はアルケニル基を有する高級アルコール類などが挙げられ、油性物質としては、流動パラフィン、ワセリン、固形パラフィン等の炭化水素類；液状ラノリン、ラノリン脂肪酸等のラノリン誘導体；ジメチルポリシロキサン、ポリエーテル変性ポリシロキサン、アミノ変性ポリシロキサン等のシリコーン誘導体、高級アルコール高級脂肪酸エステル類、高級脂肪酸、アルキル基又はアルケニル基を有する長鎖アミドアミン等の油脂類；ミンクオイル、オリーブ油等の動植物性油脂類などが挙げられる。薬効成分としてはビタミン類などが挙げられる。防腐剤としてはパラベン類などが挙げられ、増粘剤としては水溶性高分子化合物などが挙げられる。保湿剤てしては、プロピレングリコール、グリセリン、カルビトール、３−メチル−１，３−ブタンジオール、糖類などが挙げられる。
【００１３】
本発明の皮膚外用剤組成物の剤型としては特に限定されず、そのまま用いてもよく、クリーム状、乳液状、ローション状、軟膏状、パウダー状、ハップ剤、粉末剤、滴下剤、貼付剤、エアゾール剤などの通常の皮膚外用剤の剤型を適用することもできる。
本発明の皮膚外用剤組成物の使用量は、用途によって適宜調整すればよい。例えば、化粧品に配合する場合、化粧品中の濃度は通常０．００１〜１００ｍｇ／ミリリットル程度とすることができ、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ミリリットル、より好ましくは０．０１〜１ｍｇ／ミリリットルとなるように配合する。また、創傷（褥そうを含む）の治療に使用する場合、治療薬中の濃度は通常０．００１ｍｇ／ミリリットル以上〜（そのまま使用）とすることができ、好ましくは０．０１〜５００ｍｇ／ミリリットル、より好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／ミリリットルとなるように配合する。
【実施例】
【００１４】
次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
下記実施例及び比較例で用いた原料油脂及び皮膚外用剤組成物の脂肪酸組成は、特開昭５７−１４４８９６号公報に記載されている方法によりメチルエステル化し、ガスクロマトグラフィーにより測定した。また、実施例及び比較例の皮膚外用剤組成物の構成グリセリド組成は、イアトロスキャン法（Ｊ．Ｊｐｎ．Ｏｉｌ  Ｃｈｅｍ．ｓｏｃ．，Ｖｏｌ３５，Ｎｏ．８，６２５−６３１（１９８６））に基づき、薄層クロマトグラフ（ＴＬＣ）と水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）を組み合わせたＩａｔｒｏｓｃａｎ  ＴＨ−１０型（ヤトロン社製）により求めた。すなわち、試料溶液１マイクロリットルをシリカゲル薄層棒（クロマロッド  Ｓ−１１１、ヤトロン社製）の片側に滴下した後、溶媒展開を行い、溶媒展開後、シリカゲル薄層棒を前記分析機ＴＨ−１０型に取り付け、下記条件で分析した。
【００１５】
試料溶液濃度：２０ｍｇ／ミリリットルアセトン
ＴＬＣ展開溶媒及び展開条件
展開溶媒：ヘキサン／ジエチルエーテル／酢酸＝７０／３０／１（容量比）
展開距離：１０．０ｃｍ
イアトロスキャン分析条件
水素流量    ：１６０ミリリットル／ｍｉｎ
空気流量    ：２．０ミリリットル／ｍｉｎ
スキャン速度：３０ｓｅｃ／ＳＣＡＮ
検出器      ：水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）
【００１６】
実施例１（皮膚外用剤組成物の製造）
表１に示す脂肪酸組成を有するＧＬＡ含有油脂（出光興産（株）製、商品名：グラノイルＨＧＣ、ＧＬＡ：２５．９質量％）１００ｇ及び蒸留水１００ｇを含む反応系に、Rhizopus niveus 産生リパーゼ（天野エンザイム（株）製、ニューラーゼＦ３Ｇ、３０，０００Ｕ／ｇ）を２０，０００ユニット加え、攪拌しながら３０℃で４８時間反応させた。
【００１７】
【表１】
2005179211.tif 000002
【００１８】
得られた分解反応物に１０質量％水酸化ナトリウム水溶液を添加して分解反応物のｐＨを８〜９に調整した後、ジエチルエーテル２００ミリリットルを用いて分解反応物中の油分を抽出し、水洗し、脱水後エーテルを除去して油分（皮膚外用剤組成物）５６．４ｇを得た。
この皮膚外用剤組成物の一部を用いて前記方法により構成グリセリド組成分析を行い、また、皮膚外用剤組成物の一部をメチルエステル化した後、ガスクロマトグラフィーで脂肪酸組成を分析した。その結果を表３に示す。なお、表３において、例えばＣ16:0は、炭素数１６で、二重結合を有しない脂肪酸を意味し、Ｃ18:3は、炭素数１８で、二重結合を３個有する脂肪酸を意味する。
【００１９】
実施例２（皮膚外用剤組成物の製造）
実施例１で用いたものと同じＧＬＡ含有油脂１００ｇに、水３ｇ、グリセリン３０ｇ及びAlcaligenes sp. 産生リパーゼ（名糖産業（株）製、リパーゼＰＬ、９０，０００Ｕ／ｇ）を３００，０００ユニット加え、攪拌しながら３０℃で７２時間反応させた。
得られた分解反応物に１０質量％水酸化ナトリウム水溶液を添加して分解反応物のｐＨを８〜９に調整した後、ジエチルエーテル２００ミリリットルを用いて分解反応物中の油分を抽出し、水洗し、脱水後エーテルを除去して油分（皮膚外用剤組成物）８７．９ｇを得た。
この皮膚外用剤組成物の一部を用いて前記方法により構成グリセリド組成分析を行い、また、皮膚外用剤組成物の一部をメチルエステル化した後、ガスクロマトグラフィーで脂肪酸組成を分析した。その結果を表３に示す。
【００２０】
実施例３（皮膚外用剤組成物の製造）
実施例１において、ＧＬＡ含有油脂として、表２に示す脂肪酸組成を有するＧＬＡ含有油脂（出光興産（株）製、商品名：グラノイルＣＳ、ＧＬＡ：７．９質量％）を用いた以外は、実施例１と同様の酵素処理及び抽出により皮膚外用剤組成物を得た。
【００２１】
【表２】
2005179211.tif 000003
【００２２】
得られた皮膚外用剤組成物の分析結果を表３に示す。
比較例１（皮膚外用剤組成物の製造）
実施例１において、ＧＬＡ含有油脂を用いる代わりに、ＧＬＡを含まないサフラワー油（ＳＩＧＭＡ社製）を用いた以外は、実施例１と同様の処理を行い、皮膚外用剤組成物を得た。得られた皮膚外用剤組成物の分析結果を表３に示す。
【００２３】
【表３】
2005179211.tif 000004
【００２４】
実施例４（治癒効果試験）
実施例１〜３及び比較例１で得られた皮膚外用剤組成物の治癒効果を評価した。
グリセリン１０ｇ、流動パラフィン１０ｇ及び白色ワセリン７９ｇを、８０℃まで加温しながら溶解させ、その後４５℃まで冷却して、実施例１で得られた皮膚外用剤組成物１ｇを添加混合し、この混合物を急冷して均一な軟膏剤を調製した。これを実施例１軟膏とした。同様して、実施例２，３及び比較例１で得られた皮膚外用剤組成物を用いて、実施例２軟膏、実施例３軟膏及び比較例１軟膏を調製した。
これらの軟膏剤の治癒効果を以下の方法により評価した。すなわち、皮膚に老化症状（しわ）が見られる５０〜６０歳の女性２０人を５名ずつ４群に分け、第１群には実施例１の軟膏剤を、第２群には実施例２の軟膏剤を、第３群には実施例３の軟膏剤を、第４群には比較例１の軟膏剤を１ヶ月間使用させ、使用前後の皮膚のしわの状況を下記の評価基準により評価した。評価結果を表４に示す。なお、表４の数値は各評価基準に該当する人数を示す。
＜評価基準＞
効果あり：しわの顕著な消失、表皮のはりの回復が見られる。
やや効果あり：しわが浅くなり、目立たなくなる等の改善効果が見られる。
効果なし：使用前後において効果が見られない。
【００２５】
【表４】
2005179211.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【００２６】
本発明の皮膚外用剤組成物は、ヒト及び動物の上皮形成促進能を有し、表皮の新陳代謝によるシミ、しわ対策、創傷（褥そうを含む）治療等における治癒効果が期待できるものである。