(57)【要約】【課題】  簡便かつ網羅的なダイオキシン類の評価及び発現の程度の評価も可能な対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法及びその評価方法に用いられるマイクロアレイを提供すること。【解決手段】  シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１、アラニン・アミノペプチダーゼ、アデニル酸キナーゼ４及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子に対して、ダイオキシン類の影響評価の対象物を投与したマウスの肝臓から抽出したｍＲＮＡを反応させることとした。【選択図】  図１
2005065547.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダイオキシン類の影響を評価する対象物をマウスに投与する工程と、
前記マウスの肝臓からｍＲＮＡを抽出する工程と、
シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１、アラニン・アミノペプチダーゼ、アデニル酸キナーゼ４及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子に対して前記ｍＲＮＡを反応させる工程と、
前記反応された２種以上の遺伝子の発現量を定量する工程と
を具備することを特徴とする対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法。
【請求項２】
請求項１に記載の対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法において、
前記反応工程は、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１、アラニン・アミノペプチダーゼ、アデニル酸キナーゼ４及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子が搭載されたマイクロアレイを用いて行われることを特徴とする対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法。
【請求項３】
請求項２に記載の対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法において、
前記マイクロアレイには、コントロール遺伝子が搭載されていることを特徴とする対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法。
【請求項４】
請求項３に記載の対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法において、
前記コントロール遺伝子が、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド・メナジオン・オキシドレダクターゼ  ２、血清アミロイド・Ａ２、チロシン・３−モノオキシゲナーゼ／トリプトファン・５−モノオキシゲナーゼ・活性化タンパク質，ゼータ・ポリペプチド、ＷＷ・ドメイン−含有・オキシドレダクターゼ、酸性ケラチン複合体１遺伝子１８、フマリルアセト酢酸加水分解酵素、Ｄ−ドーパクロム・タウトメラーゼ、肝マンノース・結合・レクチン，（Ａ）の群の中から選ばれた１種以上の遺伝子であることを特徴とする対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法。
【請求項５】
請求項１から請求項４のうちいずれか１項に記載の対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法において、
前記対象物が、食品であることを特徴とする対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法。
【請求項６】
シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１、アラニン・アミノペプチダーゼ、アデニル酸キナーゼ４及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子が搭載されたことを特徴とするマイクロアレイ。
【請求項７】
請求項６に記載のマイクロアレイにおいて、
コントロール遺伝子が更に搭載されていることを特徴とするマイクロアレイ。
【請求項８】
請求項７に記載のマイクロアレイにおいて、
前記コントロール遺伝子が、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド・メナジオン・オキシドレダクターゼ２、血清アミロイド・Ａ２、チロシン・３−モノオキシゲナーゼ／トリプトファン・５−モノオキシゲナーゼ・活性化タンパク質，ゼータ・ポリペプチド、ＷＷ・ドメイン−含有・オキシドレダクターゼ、酸性ケラチン複合体１遺伝子１８、フマリルアセト酢酸加水分解酵素、Ｄ−ドーパクロム・タウトメラーゼ、肝マンノース・結合・レクチン，（Ａ）の群の中から選ばれた１種以上の遺伝子であることを特徴とするマイクロアレイ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば食品などの対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法及びその対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法に用いられるマイクロアレイに関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、遺伝子組み換え食品やＢＳＥ（ｂｏｖｉｎｅ  ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ）、ベルギー産鶏肉のダイオキシン類汚染など食品の安全性に係る不安材料が大きくなっている。その中でダイオキシン類は、その毒性の強さなどから大きな問題となっており、例えば食品中に含まれるダイオキシン類による生物体への影響を正確に評価する必要性があった。
【０００３】
そのダイオキシン類の評価方法として従来、高分解能ガスクロマトグラフィー質量分析装置（高分解能ＧＣ／ＭＳ装置）による異性体分析を行って定量分析する化学的分析方法がある（例えば、特許文献１参照。）。
【特許文献１】特開２０００−６５８１４号公報（段落[０００４]、[０００５]）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、高分解能ガスクロマトグラフィー質量分析装置による化学的分析方法では、高分解能ＧＣ／ＭＳ装置が非常に高価でありかつその使用にも熟練を必要とするため必ずしも容易ではない。
【０００５】
また、化学的分析方法ではダイオキシン類の汚染の度合いを評価できるが、人間も含めた生物体への影響を直接的には評価できない。
【０００６】
更に化学的分析方法では、分析対象を特定しなければならないためダイオキシン類と同様の作用を持ち、生物体への影響を及ぼす未知の物質を評価することができない。
【０００７】
これに対し、ダイオキシン類の評価方法として遺伝子の発現量で評価する手法が提唱されており、遺伝子として例えばシトクローム・Ｐ４５０・１ａ１が用いられている。
【０００８】
しかし、このシトクローム・Ｐ４５０，１ａ１は、特定の濃度の反応で急峻な発現量がありダイオキシン類の一定の評価は可能であるが、その濃度より少ない場合に発現量が少なく正確な評価ができず、また単に一定の発現量があることがわかるだけでその発現の程度までは見ることができない。
【０００９】
本発明は、上述の課題に鑑みてなされるもので、簡便かつ網羅的なダイオキシン類の評価及び発現の程度の評価も可能な対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法及びその評価方法に用いられるマイクロアレイを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するために、本発明の主たる観点に係る対象物に含まれるダイオキシン類の評価方法は、ダイオキシン類の影響を評価する対象物をマウスに投与する工程と、前記マウスの肝臓からｍＲＮＡを抽出する工程と、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１、アラニン・アミノペプチダーゼ、アデニル酸キナーゼ４及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子に対して前記ｍＲＮＡを反応させる工程と、前記反応された２種以上の遺伝子の発現量を定量する工程とを具備することを特徴とする。
【００１１】
本発明では、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１）、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ２）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ４）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５）、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，θ２）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１（ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、アラニン・アミノペプチダーゼ（Ａｌａｎｙｌ  ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）、アデニル酸キナーゼ４（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ  ４）及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２（Ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  ２）の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子に対して、ダイオキシン類の影響評価の対象物を投与したマウスの肝臓から抽出したｍＲＮＡを反応させることとしたので、例えば高いダイオキシン類の濃度で反応が強い遺伝子と低いダイオキシン類の濃度でも反応が現れる遺伝子との両方の発現量を定量・分析でき、１つの遺伝子で発現量を定量するより広い濃度領域でダイオキシン類の影響評価ができる。また、例えば２種以上の遺伝子の発現の現れ方を比較してみることによりダイオキシン類の濃度の程度などのより多くの分析情報が得られる。
【００１２】
本発明の一の形態によれば、前記反応工程は、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１、アラニン・アミノペプチダーゼ、アデニル酸キナーゼ４及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子が搭載されたマイクロアレイを用いて行われることを特徴とする。これにより、例えば高いダイオキシン類の濃度で反応が強い遺伝子と低いダイオキシン類の濃度でも反応が現れる遺伝子との両方の発現量を、マイクロアレイを用いて一般に市販されている装置により自動的に定量でき、１つの遺伝子で発現量を定量するより広い濃度領域でダイオキシン類の影響評価が簡易迅速にできる。
【００１３】
本発明の一の形態によれば、前記マイクロアレイには、コントロール遺伝子が搭載されていることを特徴とする。これにより、コントロール遺伝子の発現パターンと比較することができ、非特異的結合による偽陽性を排除できる。
【００１４】
本発明の一の形態によれば、前記コントロール遺伝子が、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド・メナジオン・オキシドレダクターゼ  ２、血清アミロイド・Ａ２、チロシン・３−モノオキシゲナーゼ／トリプトファン・５−モノオキシゲナーゼ・活性化タンパク質，ゼータ・ポリペプチド、ＷＷ・ドメイン−含有・オキシドレダクターゼ、酸性ケラチン複合体１遺伝子１８、フマリルアセト酢酸加水分解酵素、Ｄ−ドーパクロム・タウトメラーゼ、肝マンノース・結合・レクチン，（Ａ）の群の中から選ばれた１種以上の遺伝子であることを特徴とする。これにより、コントロール遺伝子の発現パターンと比較することができ、非特異的結合による偽陽性を排除できる。
【００１５】
本発明の一の形態によれば、前記対象物が、食品であることを特徴とする。これにより、例えば高いダイオキシン類の濃度で反応が強い遺伝子と低いダイオキシン類の濃度でも反応が現れる遺伝子との両方の発現量を定量・分析でき、１つの遺伝子で発現量を定量するより広い濃度領域でダイオキシン類の影響評価ができるので、食品の安全性を確保、維持できると共に、リスクを事前に察知し予防することがより簡易迅速に行える。
【００１６】
本発明の他の観点に係るマイクロアレイは、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１、アラニン・アミノペプチダーゼ、アデニル酸キナーゼ４及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子が搭載されたことを特徴とする。
【００１７】
本発明では、マイクロアレイにシトクローム・Ｐ４５０，１ａ１、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１、アラニン・アミノペプチダーゼ、アデニル酸キナーゼ４及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子が搭載されているので、例えば高いダイオキシン類の濃度で反応が強い遺伝子と低いダイオキシン類の濃度でも反応が現れる遺伝子との両方の発現量を定量・分析でき、１つの遺伝子で発現量を定量するより広い濃度領域でダイオキシン類の影響評価ができる。また、例えば２種以上の遺伝子の発現の現れ方を比較してみることによりダイオキシン類の濃度の程度などのより多くの分析情報が得られる。
【００１８】
本発明の一の形態によれば、コントロール遺伝子が更に搭載されていることを特徴とする。これにより、コントロール遺伝子の発現パターンと比較することができ、非特異的結合による偽陽性を排除できる。
【００１９】
本発明の一の形態によれば、前記コントロール遺伝子が、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド・メナジオン・オキシドレダクターゼ２、血清アミロイド・Ａ２、チロシン・３−モノオキシゲナーゼ／トリプトファン・５−モノオキシゲナーゼ・活性化タンパク質，ゼータ・ポリペプチド、ＷＷ・ドメイン−含有・オキシドレダクターゼ、酸性ケラチン複合体１遺伝子１８、フマリルアセト酢酸加水分解酵素、Ｄ−ドーパクロム・タウトメラーゼ、肝マンノース・結合・レクチン，（Ａ）の群の中から選ばれた１種以上の遺伝子であることを特徴とする。これにより、コントロール遺伝子の発現パターンと比較することができ、非特異的結合による偽陽性を排除できる。
【発明の効果】
【００２０】
以上のように、本発明によれば、簡便かつ網羅的なダイオキシン類の評価及び発現の程度の評価ができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明の実施の形態を図面に基づき説明する。なお、以下に実施形態を説明するにあたっては、前半で２種以上の遺伝子を固定化したマイクロアレイの構成を中心に説明し、後半でそのマイクロアレイを用いたダイオキシン類の評価方法について説明するが、該評価方法には勿論マイクロアレイ以外の評価機器を用いてもよい。
【００２２】
図１は本発明の一実施形態に係るマイクロアレイ概略斜視図、図２はそのマイクロアレイの部分拡大図、図３は野生型マウス肝臓中のＴＣＤＤ濃度を表すグラフ、図４はＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１の発現量を表すグラフ、図５はＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ２の発現量を表すグラフ、図６はＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ４の発現量を表すグラフ、図７はＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５の発現量を表すグラフ、図８はＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，θ２の発現量を表すグラフ、図９はＬｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １の発現量を表すグラフ、図１０はＡｌａｎｙｌ  ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅの発現量を表すグラフ、図１１はＡｄｅｎｙｌａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ４の発現量を表すグラフ、図１２はＨｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  ２の発現量を表すグラフ、図１３はダイオキシン類の肝臓への移行率を表すグラフ及び図１４はマイクロアレイを用いて対象物に含まれるダイオキシン類を評価する方法の手順を説明するフローチャートである。
【００２３】
まずマイクロアレイ１は、例えば図１に示すようにガラス板や石英板などの基板２のほぼ中央部に（図１では点線で囲まれた部分）９種のマーカー遺伝子と８種のコントロール遺伝子とを夫々固定したものである。
【００２４】
具体的には、例えば図２に示すように３〜１１までの位置にシトクローム・Ｐ４５０，１ａ１（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１）、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ２）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ４）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５）、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，θ２）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１（ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、アラニン・アミノペプチダーゼ（Ａｌａｎｙｌ  ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）、アデニル酸キナーゼ４（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ  ４）及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２（Ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  ２）が、夫々数十μｍ〜数百μｍのサイズでその順序に規則的間隔で定量的にアレイヤーでスポットされている。
【００２５】
尚スポット方式としてはピン方式、インクジェット方式及びキャピラリー方式などがあるが、手動でピペットマンを利用してもよい。
【００２６】
また、同様に例えば図２に示すように１２〜１９までの位置にコントロール遺伝子である還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド・メナジオン・オキシドレダクターゼ  ２（ＮＡＤＨ  ｍｅｎａｄｉｏｎｅ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ２）、血清アミロイド・Ａ２（Ｓｅｒｕｍ  ａｍｙｌｏｉｄ  Ａ  ２）、チロシン・３−モノオキシゲナーゼ／トリプトファン・５−モノオキシゲナーゼ・活性化タンパク質，ゼータ・ポリペプチド（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ３−ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ／ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ  ５−ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ，ｚｅｔａ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、ＷＷ・ドメイン−含有・オキシドレダクターゼ（ＷＷ  ｄｏｍａｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ）、酸性ケラチン複合体１遺伝子１８（Ｋｅｒａｔｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  １，ａｃｉｄｉｃ，ｇｅｎｅ  １８）、フマリルアセト酢酸加水分解酵素（Ｆｕｍａｒｙｌａｃｅｔｏａｃｅｔａｔｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ）、Ｄ−ドーパクロム・タウトメラーゼ（Ｄ−ｄｏｐａｃｈｒｏｍｅ  ｔａｕｔｏｍｅｒａｓｅ）、肝マンノース・結合・レクチン，（Ａ）（Ｍａｎｎｏｓｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｌｅｃｔｉｎ，ｌｉｖｅｒ（Ａ））もつづけてアレイヤーでスポットされている。
【００２７】
尚、遺伝子の基板２への固定方法は一般に知られている遺伝子の電荷を利用して静電結合させたり、共有結合により結合させることができる。
【００２８】
次に、９種の遺伝子（マーカー遺伝子）を特に選択した経緯について以下に実験内容を示し説明する。
【００２９】
（実験内容）
まず、マーカー遺伝子の指標性を確認した。
【００３０】
すなわち、野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ）雄６週齢に、飼料としてＡＩＮ−９３Ｇ組成半合成飼料を自由摂食させ、飲水として逆浸透水を自由摂水させた。
【００３１】
また、野生型マウスに１日１回２，３，７，８−ＴＣＤＤ（四塩化ジベンゾパラジオキシン）（以下単に「ＴＣＤＤ」という。）／コーン油を０，５，５０，５００ｎｇ／ｋｇ体重（ｋｇＢ．Ｗ）の４群（１群６匹）に分けて経口投与した。これを１８日間連続し、該野生型マウスの肝臓を取り出し、遺伝子発現プロファイルを作成後、クラスター解析し、ＴＣＤＤによって変化する遺伝子を７０種程度選択した。
【００３２】
尚、野生型マウスの肝臓から抽出されたＴＣＤＤ濃度の検出は、ガスクロマトグラフ（ＧＣ）による定性と質量分析装置（ＭＳ）による定量とにより行った。
【００３３】
具体的には、ヒューレットパッカード社製のＨＰ６８９０による定性と日本電子社製のＪＭＳ−７００Ｄによる定量によった。
【００３４】
また、定性条件は以下のようにした。
【００３５】
まず、使用キャピラリーカラムはＤＢ−５ＭＳ  ３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍとした。
【００３６】
オーブン昇温条件は１３０℃  ２．５ｍｉｎ  ｈｏｌｄ、１３０℃〜２００℃  ２０℃／ｍｉｎ、２００℃〜２８０℃  ４℃／ｍｉｎ  ９．０ｍｉｎ  ｈｏｌｄとした。
【００３７】
注入口温度は１１５℃〜３００℃  １０℃／ｓｅｃとした。
【００３８】
注入方式は大量注入  アットカラム方式とした。
【００３９】
キャリヤーガスはＨｅ  １．０ｍＬ／ｍｉｎとした。
【００４０】
次に、定量条件はイオン化電流が７００μＡ、イオン源温度が２７０℃、加速電圧が１０ｋＶ、電子加速電圧が４０ｅＶとした。
【００４１】
以上の定性及び定量条件によりＴＣＤＤ濃度は図３に示すように０，５，５０，５００ｎｇ／ｋｇ体重の４群で、夫々の投与量を比較検討可能だけ現れており、このことからも０，５，５０，５００ｎｇ／ｋｇ体重の４群（１群６匹）に分けて経口投与し、その群に分けて遺伝子発現量を定量したことが適切であることがわかった。
【００４２】
更に該７０種の遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）を用いて定量した。
【００４３】
具体的には、Aｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ７０００で９５℃１０分間の後、９５℃１５秒間、６０℃１分間を４５回繰り返し、発現量に変化が見られた遺伝子を９種（シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１）、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ２）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ４）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５）、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，θ２）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１（ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、アラニン・アミノペプチダーゼ（Ａｌａｎｙｌ  ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）、アデニル酸キナーゼ４（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ  ４）及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２（Ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  ２））同定して、図４から図１２までにその発現量を示した。
【００４４】
次に、ダイオキシンレセプター欠損マウスを用いた遺伝子発現プロファイルを作成した。
【００４５】
すなわち、Ａｈレセプター欠損マウス雄７週齢に野生型マウスと同様に飼料としてＡＩＮ−９３Ｇ組成半合成飼料を自由摂食させ、飲水として逆浸透水を自由摂水させた。また、Ａｈレセプター欠損マウスに１日１回２，３，７，８−ＴＣＤＤ／コーン油を０，５，５０，５００ｎｇ／ｋｇ体重の４群（１群６匹）に分けて経口投与した。以下その４群は例えば図４から図１２では、その順にｃｏｎｔｒｏｌ、５ｎｇ  ＴＣＤＤ／ｋｇ  Ｂ．Ｗ（ｋｇ  体重）、５０ｎｇ  ＴＣＤＤ／ｋｇ  Ｂ．Ｗ及び５００ｎｇ  ＴＣＤＤ／ｋｇ  Ｂ．Ｗとする。
【００４６】
その経口投与を１８日間連続し、該Ａｈレセプター欠損マウスの肝臓を取り出して、野生型マウスにおいて変化が見られた９種の遺伝子について、該Ａｈレセプター欠損マウスにおいても変化するのか否かをリアルタイムＰＣＲを用いて解析した。
【００４７】
具体的には、Aｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ７０００で９５℃１０分間の後、９５℃１５秒間、６０℃１分間を４５回繰り返し、野生型マウスと同様に図４から図１２にその発現量を示した。尚、各図中のＫ．Ｏと示された棒グラフがＡｈレセプター欠損マウスの発現量を表す。
【００４８】
（実験結果の解析）
まず、Ａｈレセプター欠損マウス（Ｋ．Ｏマウスともいう。）の遺伝子発現量を図４から図１２で見ると、図４のＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１ではｃｏｎｔｒｏｌも５ｎｇ  ＴＣＤＤ／ｋｇ  Ｂ．Ｗ、５０ｎｇ  ＴＣＤＤ／ｋｇ  Ｂ．Ｗ及び５００ｎｇ  ＴＣＤＤ／ｋｇ  Ｂ．ＷもすべてＮＤ（検出限界以下）であり、その発現量に有意な変化は認められなかった。
【００４９】
また、図５のＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ２ではいずれのＴＣＤＤの投与量においても２以下であり、その発現量に有意な変化は認められなかった。
【００５０】
以下図６から図１２においてもＫ．Ｏマウスには投与量の変化に対し、その発現量に有意な変化は認められなかった。
【００５１】
以上から、野生型マウスでＴＣＤＤ投与によりその発現量に変化が見られた９種の遺伝子、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１）、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ２）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ４）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５）、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，θ２）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１（ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、アラニン・アミノペプチダーゼ（Ａｌａｎｙｌ  ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）、アデニル酸キナーゼ４（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ  ４）及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２（Ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  ２）は、ＡｈＲの下流に存在する遺伝子であることが確認された。
【００５２】
以上から、該９種の遺伝子はダイオキシン類の生体に対する影響を評価する指標として選定できた。
【００５３】
また、ダイオキシン類の体内移行量の評価についても図１３に示すように投与量に依存してＴＣＤＤ濃度は高くなっており、５０ｎｇ／ｋｇ体重の投与群（以下単に「ｋｇ体重投与群」という。）では、５ｎｇ／ｋｇ体重投与群に比べ１．５倍の差が認められた。尚、図１３は１８日間トータルのＴＣＤＤの投与量の何％が肝臓に移行したかを示すものである。
【００５４】
一方、５００ｎｇ／ｋｇ体重投与群では、５０ｎｇ／ｋｇ体重投与群に比べ６倍の差が認められた。
【００５５】
以上から、ＴＣＤＤの投与量が高くなると、肝臓への移行率が高くなることが示唆された。
【００５６】
更に肝臓ＴＣＤＤの濃度と遺伝子発現との相関関係について考察したところ、図４に示すようにＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１（シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１）は、高濃度である５００ｎｇＴＣＤＤ／ｋｇＢ．Ｗで他の濃度より際立って発現量が変化しており、５００ｎｇＴＣＤＤ／ｋｇＢ．Ｗのような高濃度でのＴＣＤＤを検出可能なマーカー遺伝子として用いられることが示唆された。
【００５７】
一方、例えば図７に示すようにＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５（シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５）の遺伝子の発現量の変化を見ると、高濃度である５００ｎｇＴＣＤＤ／ｋｇＢ．Ｗと５０ｎｇ／ｋｇＢ．Ｗとの比較では、さほど変化が見られないが低濃度である５ｎｇＴＣＤＤ／ｋｇＢ．Ｗと５０ｎｇＴＣＤＤ／ｋｇＢ．Ｗとの比較では変化が見られ、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５（シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５）の遺伝子がＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１（シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１）より低濃度のＴＣＤＤを検出するためのマーカー遺伝子として用いられることが示唆された。
【００５８】
以下同様に該９種の他の遺伝子についても、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１（シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１）よりも相対的に低いＴＣＤＤ濃度で変化が見られることが明らかとなり、特に低濃度のＴＣＤＤを検出するためのマーカー遺伝子として用いられることが示唆された。
【００５９】
以上から、例えばＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１（シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１）とＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５（シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５）などの該９種の遺伝子の他の遺伝子とを利用することによって、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１（シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１）だけでは得られない低濃度の影響評価が可能となることが示唆された。
【００６０】
また、図４に示すようにＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１（シトクローム・Ｐ４５０・１ａ１）では、ｃｏｎｔｒｏｌ〜５０ｎｇＴＣＤＤ／ｋｇＢ．Ｗまでの変化は、５００ｎｇＴＣＤＤ／ｋｇＢ．Ｗに対する変化に比較して小さく、見出すことは困難であった。
【００６１】
これに対し、例えば図７に示すようにＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５（シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５）では、ｃｏｎｔｒｏｌ〜５０ｎｇＴＣＤＤ／ｋｇＢ．Ｗまでの変化は、５００ｎｇＴＣＤＤ／ｋｇＢ．Ｗに対する変化に比較しても十分見出せるものであった。
【００６２】
以上から、図４のＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１（シトクローム・Ｐ４５０・１ａ１）では見ることは困難であった小さな発現量の変化も、例えばＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５（シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５）で見ることが可能となり、該９種のうちＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１（シトクローム・Ｐ４５０・１ａ１）以外の遺伝子のＴＣＤＤを検出するマーカー遺伝子としての有用性も示唆された。
【００６３】
次に、マイクロアレイ１にマーカー遺伝子である該９種の遺伝子の発現パターンと比較して、非特異的結合による偽陽性を排除するためにコントロール遺伝子として還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド・メナジオン・オキシドレダクターゼ  ２（ＮＡＤＨ  ｍｅｎａｄｉｏｎｅ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ２）、血清アミロイド・Ａ２（Ｓｅｒｕｍ  ａｍｙｌｏｉｄ  Ａ２）、チロシン・３−モノオキシゲナーゼ／トリプトファン・５−モノオキシゲナーゼ・活性化タンパク質，ゼータ・ポリペプチド（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ３−ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ／ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ  ５−ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ，ｚｅｔａ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、ＷＷ・ドメイン−含有・オキシドレダクターゼ（ＷＷ  ｄｏｍａｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ）、酸性ケラチン複合体１遺伝子１８（Ｋｅｒａｔｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  １，ａｃｉｄｉｃ，ｇｅｎｅ  １８）、フマリルアセト酢酸加水分解酵素（Ｆｕｍａｒｙｌａｃｅｔｏａｃｅｔａｔｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ）、Ｄ−ドーパクロム・タウトメラーゼ（Ｄ−ｄｏｐａｃｈｒｏｍｅ  ｔａｕｔｏｍｅｒａｓｅ）、肝マンノース・結合・レクチン，（Ａ）（Ｍａｎｎｏｓｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｌｅｃｔｉｎ，ｌｉｖｅｒ（Ａ））を選定し固定した。
【００６４】
尚、これらのコントロール遺伝子は、最初のマイクロアレイのスクリーニングで比較的発現量が高いと考えられた７０種程度の遺伝子で、ＴＣＤＤの影響を受けないことが、リアルタイムＰＣＲによる定量で明らかとなったものである。
【００６５】
次に、以上のように構成されたマイクロアレイ１を用いて対象物に含まれるダイオキシン類を評価する方法について、その手順を中心に図１４のフローチャートに基づき説明する。
【００６６】
まず、図１４に示すように検査対象物を野生型マウスに所定期間例えば１８日間所定量を投与し続ける（ＳＴ１０１）。
【００６７】
また、１８日後に該野生型マウスから肝臓を摘出しｍＲＮＡを抽出する（ＳＴ１０２）。
【００６８】
例えば酸性フェノール−グアニンジチオシアン酸法により、抽出する。
【００６９】
具体的にはＡＧＰＣ（ａｃｉｄ  ｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ  ｐｈｅｎｏｌ−ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ  ｍｅｔｈｏｄ）法により、以下のようにしてｔｏｔａｌ  ＲＮＡの調整を行なった。
【００７０】
まず、ポリスチレンチューブにＩＳＯＧＥＮ（フェノール及びチオシアン酸グアニジンを主成分とした均一溶液：日本ジーン）１ｍｌを分注し、ＲＮＡｌａｔｅｒＴＭ中に保存していた肝臓のサンプル０．１ｇを移した。
【００７１】
次にそのサンプルをポリトロンＰＴ２１でホモジェネートし、室温で５分間放置した後、ホモジェネート液全量を１．５ｍｌチューブに移し、クロロホルム２００μｌを加え、ボルテックスで１５秒間撹拌して室温で３分間放置した。
【００７２】
更に、１３０００ｒｐｍ、４℃で１５分間遠心分離し、ＲＮＡの入っている上層を新しい１．５ｍｌチューブに分取し、イソプロパノール沈殿によりＲＮＡを回収し、７５％  ＥｔＯＨでＲＮＡ沈殿を洗浄した後、軽く風乾した。これにジエチルピロカーボネイト処理水（以下ＤＥＰ  Ｈ２Ｏ）４００μｌを加えてＲＮＡを溶解させ、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ溶液とした。  次に、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ溶液にビオチン化Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）を加え、ｐｏｌｙ  Ａ＋ＲＮＡとアニーリングさせた。
【００７３】
更にストレプトアビジン磁性粒子を添加し、ｐｏｌｙ  Ａ＋ＲＮＡ〜ビオチン化 Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）〜ストレプトアビジン磁性粒子の複合体を磁石でチューブの内壁に集め、ｐｏｌｙ  Ａ−ＲＮＡを除き、チューブ内に残った分画を洗浄した後、ＤＥＰ  Ｈ２Ｏに溶解しｐｏｌｙ  Ａ＋ＲＮＡを溶出した。
【００７４】
また、磁性粒子を磁石で回収し、ｐｏｌｙ  Ａ＋ＲＮＡを含む水層を新しい１．５ｍｌチューブに移して２５０μｌ溶液とした。
【００７５】
更に抽出されたｍＲＮＡを例えば蛍光物質（フルオレセンなど）、放射性物質などで検出可能なように標識とする。
【００７６】
また、該９種のマーカー遺伝子の内２種以上の遺伝子が固定されたマイクロアレイ１に標識ｍＲＮＡを反応させ、ハイブリダイゼーションする（ＳＴ１０３）。
【００７７】
例えば自動ハイブリダイゼーション装置としてＬｕｃｕｄｅａ  ＳｌｉｄｅＰｒｏ（アマシャム）を用いることで容易に標識ｍＲＮＡを反応させ、ハイブリダイゼーションすることができる。
【００７８】
ここで、ハイブリダイゼーションをマーカー遺伝子への浸漬により行う場合はハイブリダイゼーション及び洗浄における溶液の濃度、温度、時間などを遺伝子が相同性の高い標識ｍＲＮＡとのみハイブリダイズするように設定する。
【００７９】
次に、ハイブリダイゼーションによりマイクロアレイ１上に形成された二重鎖を蛍光イメージスキャナーなどで解析することによって、遺伝子の発現量を測定することができる（ＳＴ１０４）。
【００８０】
例えば蛍光のマイクロアレイ用スキャナーとしてＧｅｎｅＰｉｘ  Ｐｅｒｓｏｎａｌ  ４１００Ａ（アマシャム）を用いることで容易にマイクロアレイ１上の蛍光量を測定できる。
【００８１】
また、測定で得られたデータを例えばマイクロアレイ用スキャナーに付随したソフトにより定量化することができるが、その際にボトルネックになる可能性があるので注意しなければならない。
【００８２】
以上でマイクロアレイ１を用いて対象物に含まれるダイオキシン類を評価する方法の説明を終了する。
【００８３】
このように本実施形態によれば、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１）、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ２）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ４）、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５）、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，θ２）、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１（ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、アラニン・アミノペプチダーゼ（Ａｌａｎｙｌ  ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）、アデニル酸キナーゼ４（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ  ４）及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２（Ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  ２）の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子に対して、ダイオキシン類の影響評価の対象物を投与したマウスの肝臓から抽出したｍＲＮＡを反応させることとしたので、例えば高いダイオキシン類の濃度で反応が強い遺伝子（例えばシトクローム・Ｐ４５０，１ａ１）と低いダイオキシン類の濃度で反応が現れる遺伝子（例えばシトクローム・Ｐ４５０，２ａ５）との両方の発現量を対比して定量・分析でき、１つの遺伝子で発現量を定量するより、広い濃度領域でダイオキシン類の影響評価ができる。また、例えば２種以上の遺伝子の発現の現れ方を比較してみることによりダイオキシン類の濃度の程度などのより多くの分析情報が得られる。
【００８４】
また、反応工程は、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ１、シトクローム・Ｐ４５０，１ａ２、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ４、シトクローム・Ｐ４５０，２ａ５、グルタチオン・Ｓ  トランスフェラーゼ，シータ２、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１、アラニン・アミノペプチダーゼ、アデニル酸キナーゼ４及びハイ・モビリティー・グループ・ボックス２の群の中から選ばれた２種以上の遺伝子が搭載されたマイクロアレイを用いて行われることとしたので、例えば高いダイオキシン類の濃度で反応が強い遺伝子と低いダイオキシン類の濃度で反応が現れる遺伝子との両方の発現量を、マイクロアレイを用いて一般に市販されている装置により自動的に定量でき、１つの遺伝子で発現量を定量するより広い濃度領域でダイオキシン類の影響評価が簡易迅速にできる。
【００８５】
更にマイクロアレイ１にコントロール遺伝子として、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド・メナジオン・オキシドレダクターゼ  ２、血清アミロイド・Ａ２、チロシン・３−モノオキシゲナーゼ／トリプトファン・５−モノオキシゲナーゼ・活性化タンパク質，ゼータ・ポリペプチド、ＷＷ・ドメイン−含有・オキシドレダクターゼ、酸性ケラチン複合体１遺伝子１８、フマリルアセト酢酸加水分解酵素、Ｄ−ドーパクロム・タウトメラーゼ、肝マンノース・結合・レクチン，（Ａ）の群の中から選ばれた１種以上の遺伝子を搭載することとしたので、コントロール遺伝子の発現パターンと比較することができ、非特異的結合による偽陽性を排除できる。
【００８６】
尚、本発明は上述したいずれの実施形態にも限定されず、本発明の技術思想の範囲内で適宜変更して実施できる。
【００８７】
例えば上述した実施形態では、９種のマーカー遺伝子及び８種のコントロール遺伝子のすべてをマイクロアレイ１に搭載したがこれに限られるものではなく、例えば該９種のマーカー遺伝子から２種以上のマーカー遺伝子と該８種のコントロール遺伝子から１種以上のコントロール遺伝子が搭載されたものでもよい。これにより、より個別的な発現量の分析が可能となる。
【００８８】
更に上述した実施形態では、該９種のマーカー遺伝子及び８種のコントロール遺伝子を１枚のマイクロアレイ１に搭載したがこれに限られるものではなく、該９種のマーカー遺伝子から２種以上のマーカー遺伝子のみを搭載してもよい。これにより、マイクロアレイ１の製造コストを軽減しかつ遺伝子発現の定量化の迅速化が図れる。また、コントロール遺伝子を選定できない場合も対象物に含まれるダイオキシン類の簡易迅速な評価が可能となる。
【００８９】
また、上述した実施形態では基板２に該９種のマーカー遺伝子及び８種のコントロール遺伝子を固定しマイクロアレイ１としたがこれに限られるものではなく、例えばＰＣＲプライマリーセットに該９種のマーカー遺伝子及び８種のコントロール遺伝子を搭載することもできる。これにより、より多目的なダイオキシン類の簡易迅速な評価が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】本発明の一実施形態に係るマイクロアレイ概略斜視図である。
【図２】本発明の一実施形態に係るマイクロアレイの部分拡大図である。
【図３】本発明の一実施形態に係る野生型マウス肝臓中のＴＣＤＤ濃度を表すグラフである。
【図４】本発明の一実施形態に係るＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ１の発現量を表すグラフである。
【図５】本発明の一実施形態に係るＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，１ａ２の発現量を表すグラフである。
【図６】本発明の一実施形態に係るＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ４の発現量を表すグラフである。
【図７】本発明の一実施形態に係るＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，２ａ５の発現量を表すグラフである。
【図８】本発明の一実施形態に係るＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ｔｈｅｔａ  ２の発現量を表すグラフである。
【図９】本発明の一実施形態に係るＬｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １の発現量を表すグラフである。
【図１０】本発明の一実施形態に係るＡｌａｎｙｌ  ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅの発現量を表すグラフである。
【図１１】本発明の一実施形態に係るＡｄｅｎｙｌａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ４の発現量を表すグラフである。
【図１２】本発明の一実施形態に係るＨｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  ２の発現量を表すグラフである。
【図１３】本発明の一実施形態に係るダイオキシン類の肝臓への移行率を表すグラフである。
【図１４】本発明の一実施形態に係るマイクロアレイを用いて対象物に含まれるダイオキシン類を評価する方法の手順を説明するフローチャートである。
【符号の説明】
【００９１】
１  マイクロアレイ
２  基板
【図１】
2005065547.tif 000003
【図２】
2005065547.tif 000004
【図３】
2005065547.tif 000005
【図４】
2005065547.tif 000006
【図５】
2005065547.tif 000007
【図６】
2005065547.tif 000008
【図７】
2005065547.tif 000009
【図８】
2005065547.tif 000010
【図９】
2005065547.tif 000011
【図１０】
2005065547.tif 000012
【図１１】
2005065547.tif 000013
【図１２】
2005065547.tif 000014
【図１３】
2005065547.tif 000015
【図１４】
2005065547.tif 000016