(57)【要約】【課題】極微量の検体溶液中の物質を高感度かつ高精度に分析することが可能な抗原測定装置、抗原測定方法、及び抗体チップの着脱が容易になるパレットと抗体チップ梱包体を提供する。【解決手段】基板１６と、基板１６の両端部表面に設置された入射側グレーティング１３ａ及び出射側グレーティング１３ｂと、入射側グレーティング１３ａ及び出射側グレーティング１３ｂの間に位置する抗体固定化層１４と、抗体固定化層１４を囲いセル１１を形成するセル壁１２とを具備する抗体チップ１と、入射側グレーティング１３ａに向けて光を入射する発光素子１０９と、抗体固定化層１４下の基板１６を伝達して、出射側グレーティング１３ｂから出射する光を受光する受光素子１１０とを含む。【選択図】図１
2005099011.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
透光性を有する基板と、前記基板の一方の主面に形成される抗体固定化層と、この抗体固定化層を挟むように配置される入射側光学要素及び出射側光学要素と、一端が前記基板の一方の主面に固着され前記抗体固定化層を囲うことによりセルを形成する枠体とを備える抗体チップと、
前記基板の他方の主面から入射側光学要素に向けて光を入射させる発光素子と、
前記基板内の前記抗体固定化層下領域を通過するよう伝達され前記出射側光学要素によって前記他方の主面から出射する前記光を受光する受光素子と、
を具備することを特徴とする抗原測定装置。
【請求項２】
前記セル内に溶液を注入するため、注入ポンプに接続された注入チューブをさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の抗原測定装置。
【請求項３】
前記セル内から前記溶液を排出するため、排出ポンプに接続された排出チューブをさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の抗原測定装置。
【請求項４】
前記抗体チップを覆い、前記注入チューブと前記排出チューブを固定する容器蓋をさらに含むことを特徴とする請求項３に記載の抗原測定装置。
【請求項５】
注入する前記溶液を選択するため、複数の溶液槽と前記注入ポンプに接続された溶液選択バルブをさらに含むことを特徴とする請求項４に記載の抗原測定装置。
【請求項６】
前記抗体チップが設置されている時のみ前記注入ポンプが動作することを特徴とする請求項５に記載の抗原測定装置。
【請求項７】
前記容器蓋が閉じている時のみ前記発光素子から光を入射することを特徴とする請求項６に記載の抗原測定装置。
【請求項８】
前記入射側光学要素及び前記出射側光学要素の配列方向と交わる方向に延設され、前記容器蓋の前記抗体チップ側に設置された遮光板を具備することを特徴とする請求項７に記載の抗原測定装置。
【請求項９】
複数の前記抗体チップを装着できるパレットをさらに含むことを特徴とする請求項１乃至８のいずれか１項に記載の抗原測定装置。
【請求項１０】
複数の前記パレットを連結して装着できることを特徴とする請求項９に記載の抗原測定装置。
【請求項１１】
前記パレットが、装着された前記抗体チップの種別の識別端子を具備することを特徴とする請求項１０に記載の抗原測定装置。
【請求項１２】
抗体チップの抗体固定化層上に検体溶液を滴下し、１次抗体−抗原複合体を形成させ、
前記抗体固定化層上に、酵素標識された２次抗体溶液を滴下し、１次抗体−抗原−２次抗体複合体を形成させ、
前記抗体固定化層上に緩衝液を注入して、前記抗体チップの入射側光学要素に発光素子から光を照射し、出射側光学要素からの出射光を受光素子で受光して基準光強度を測定し、
前記抗体固定化層上に発色試薬溶液を滴下して前記標識酵素との反応により発色する酵素反応産物を生成し、
前記抗体チップの前記入射側光学要素に前記発光素子から前記光を照射し、前記出射側光学要素からの前記出射光を前記受光素子で受光して発色後光強度を測定し、
前記基準光強度と前記発色後光強度との差分光強度より前記検体溶液中の抗原の濃度を算出すること
を特徴する抗原測定方法。
【請求項１３】
複数の抗体チップを、前記抗体チップの各中心間隔が９ミリメートルになるように装着するための凹部と、
前記抗体チップの種別を示す識別端子と
を具備することを特徴とするパレット。
【請求項１４】
複数の抗体チップを、前記抗体チップの各中心間隔が一定になるように収納する梱包容器と、
前記抗体チップを乾燥状態に保つための乾燥剤と、
前記梱包容器と熱圧着する梱包カバーと
を含むことを特徴とする抗体チップ梱包体。
【請求項１５】
前記抗体チップの中心の間隔は、９ミリメートルであることを特徴とする請求項１４に記載の抗体チップ梱包体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体による物質の分析に関し、特に検体溶液中の極微量の物質を高感度で分析するための抗体チップ、抗原測定装置、抗原測定方法、パレット及び抗体チップ梱包体に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、抗原と抗体の特異的な反応を利用した微量成分の測定方法として酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）が知られている。この方法を応用して光導波路を用いた抗原測定法が提案されている。この免疫センサは、基板表面の光の入射部及び出射部に一対のグレーティングを形成し、これらグレーティング間に位置する基板表面に単一の光導波路層を形成し、更にこの光導波路層上に抗体固定化膜を形成した構造を有する。
【０００３】
このような構造の免疫センサにおいて、抗体固定化膜に測定対象抗原を含む検体溶液を接触させると抗体と測定対象抗原が結合する。更に、蛍光標識されている抗体を添加すると抗体／測定対象抗原／蛍光標識抗体からなる免疫複合体が基板表面に形成される。このような状態でレーザ光をグレーティングを介して光導波路層に入射させ、エバネッセント波を発生させ、エバネッセント波と免疫複合体との反応に起因する検体溶液の蛍光の光量を受光素子により検出して、検体溶液中の生体分子量を分析する（例えば、特許文献１参照）。
【特許文献１】特開平８−２８５８５１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、従来の抗原測定法では面発光する蛍光の光量を検出する必要があり、検出感度に限界があり、極微量の検体溶液中の生体分子分析には不向きであった。そこで、本発明は、極微量の検体溶液中の物質を高感度かつ高精度で分析することが可能な抗体チップ、抗原測定装置、抗原測定方法、及び抗体チップの取り扱いを容易にするパレットと抗体チップ梱包体を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の第１の特徴は、（イ）基板と、基板の両端部表面に設置された入射側光学要素及び出射側光学要素と、入射側光学要素及び出射側光学要素の間に位置する抗体固定化層と、抗体固定化層を囲いセルを形成するセル壁とを具備する抗体チップと、（ロ）入射側光学要素に向けて光を入射する発光素子と、（ハ）基板内の抗体固定化層下領域を通過するよう伝達され、出射側光学要素から出射する光を受光する受光素子とを含む抗原測定装置であることを要旨とする。
【０００６】
本発明の第２の特徴は、（イ）抗体チップの抗体固定化層上に検体溶液を滴下し、１次抗体−抗原複合体を形成させ、（ロ）抗体固定化層上に、酵素標識された２次抗体溶液を滴下し、１次抗体−抗原−２次抗体複合体を形成させ、（ハ）抗体固定化層上に緩衝液を注入しながら、抗体チップの入射側光学要素に発光素子から光を照射し、出射側光学要素からの出射光を受光素子で受光して基準光強度を測定し、（ニ）抗体固定化層上に発色試薬溶液を滴下し、標識酵素との反応により発色する酵素反応産物を生成し、（ホ）抗体チップの入射側光学要素に発光素子から光を照射し、出射側光学要素からの出射光を受光素子で受光して発色後光強度を測定し、（へ）基準光強度と発色後光強度との差から検体溶液中の抗原の濃度を算出する抗原測定方法であることを要旨とする。
【０００７】
本発明の第３の特徴は、複数の抗体チップを、抗体チップの各中心間隔が９ミリメートルになるように装着するための凹部と、抗体チップの種別を示す識別端子とを具備するパレットであることを要旨とする。
【０００８】
本発明の第４の特徴は、複数の抗体チップを、抗体チップの中心の間隔が一定になるように収納する梱包容器と、抗体チップを乾燥状態に保つための乾燥剤と、梱包容器と熱圧着する梱包カバーとを含む抗体チップ梱包体であることを要旨とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の抗原測定装置及び抗原測定方法によれば、極微量の検体溶液中の物質を高感度かつ高精度に分析することが可能となる。また、本発明のパレットと抗体チップ梱包体によれば、抗体チップの着脱が容易になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
次に、図面を参照して、本発明の実施の形態を説明する。以下の図面の記載において、同一又は類似の部分は同一又は類似の符号を付している。ただし、図面は模式的なものであり、各寸法の比率等は現実のものとは異なることに留意すべきである。従って、具体的な寸法等は以下の説明を参酌して判断すべきものである。また図面相互間においても互いの寸法の関係や比率が異なる部分が含まれていることは勿論である。
【実施例】
【００１１】
（抗原測定装置）
本発明の実施の形態に係る抗原測定装置は、図１に示すように、（イ）透光性を有する基板１６と、基板１６の一方の主面に形成された抗体固定化層１４と、基板１６の一方の主面において抗体固定化層１４を挟むように配置された入射側グレーティング１３ａ及び出射側グレーティング１３ｂと、抗体固定化層１４を囲うことによってセル１１を形成するセル壁１２を形成する枠体とを具備する抗体チップ１と、（ロ）基板１６の他方の主面の側から一方の主面側に配設されている入射側グレーティング１３ａに向けて光を入射する発光素子１０９と、（ハ）基板１６内の抗体固定化層１４下の領域を通過して伝達され、出射側グレーティング１３ｂから出射する光を受光する受光素子１１０とを含む。
【００１２】
抗体チップ１の入射側グレーティング１３ａ及び出射側グレーティング１３ｂと、抗体固定化層１４以外の基板１６部分はフッ素樹脂膜１５で覆い、抗体固定化層１４上に反応ホール１０を形成するのが好ましい。
【００１３】
また、抗原測定装置は、セル壁１２が形成する開口による空間であるセル１１内に溶液を注入するための注入手段として、注入ポンプ１０４に接続された注入チューブ１０５と、セル１１内から溶液を排出するための排出手段として、排出ポンプ１０７に接続された排出チューブ１０６をさらに含む。注入チューブ１０５の注出口となる端部の位置としては、セル１１内において抗体固定化層１４の真上近傍に位置することが好ましく、排出チューブ１０６の吸入口となる端部の位置としては、セル壁１２近傍に位置することが好ましい。このようにすることで、注入する溶液が抗体固定化層１４上に確実に滴下され、反応ホール１０から溢れた溶液は、フッ素樹脂膜１５が撥水性のため、セル壁１２側へ流れていく。そしてセル壁１２の側の排出チューブ１０６から確実に排出される。注入チューブ１０５と排出チューブ１０６は、抗体チップ１を覆う容器蓋１１２に固定することで位置を安定に保てる。注入ポンプ１０４としては、シリンジポンプ等を使用し、排出ポンプとしては、バイモルフポンプ等を使用するのが好ましい。
【００１４】
さらに、抗原測定装置は、注入する溶液を選択するため、第１溶液槽１０１や第２溶液槽１０２と注入ポンプ１０４に接続された溶液選択バルブ１０３をさらに含む。例えば、第１溶液槽１０１には界面活性剤を含む洗浄液を入れ、第２溶液槽１０２には緩衝液を入れ、測定手順の必要に応じてどちらの溶液を反応ホール１０に注入するかを自動的に選択することができる。ここで、抗体チップ１が設置されている時のみ注入ポンプ１０４が動作するようにしておき、抗体チップ１を設置しないまま測定容器１１１内に溶液が注入されることのないようにしておく。
【００１５】
抗原測定装置の発光素子１０９から入射する光はレーザ光等であるため、眼球に照射されると危険である。そのため、容器蓋１１２が閉じている時のみ発光素子１０９が動作するようにしておく。また、基板１６内を伝達した光のみが受光素子１１０に到達するように、容器蓋１１２の抗体チップ１側に遮光板１０８を設置し、不要な経路からの光の侵入を防止する。
入射側グレーティング１３ａに入射したレーザ光は、入射側グレーティング１３ａにおいて反射・回折して基板１６に残るもののほか、ほとんどは入射グレーティング１３ａを通過して基板１６から容器蓋１１２側に出射してしまう。このため、容器蓋１１２によって、外部にレーザ光が漏れ出ないように遮光する。また、容器蓋１１２に入射した光は、容器蓋１１２により吸光されるが、反射する成分も存在する。この反射した成分が基板１６に再入射しないようにする必要がある。このため、容器蓋１１２の抗体チップに対向する表面の、抗体チップ１に設けられるグレーティング１３ａ，１３ｂの間に位置するように、グレーティング１３ａ，１３ｂの配列方向に交わる方向に細長く延設されている仕切り様の遮光板１０８を配置する。遮光板１０８の突端は、容器蓋１１２が閉じられた際に、抗体チップ１に接触しない位置に配置される。このとき、抗体チップ１に近い位置にあるほど好ましい。グレーティング１３ａ，１３ｂの配列方向にそって、複数枚並べて配置されていてもよい。抗体チップ１はグレーティング１３ａ，１３ｂの配列方向と直行する方向に８枚平行に並べて配置されるため、これら複数の抗体チップ１に対して機能できるように、遮光版１１２は、その延設方向について連続した一枚の板で構成するとよい。この際、セル壁１２を構成する枠体を避けるように、切欠やスリットが設けられていてもよい。
容器蓋１１２が閉じられているとき、測定容器１１１に設けられた図示しないスイッチが容器蓋１１２によって押下される。このスイッチは発光素子１０９の電源回路と電気的に接続されていて、スイッチが閉じていない場合には、レーザ光が出射しないように構成されている。
【００１６】
（パレット）
本発明の実施の形態に係るパレット１１３には、抗体チップ１をはめ込む凹部が設けられている。そして図２に示すように、複数の抗体チップ１を装着した１個のパレット１１３により１個のユニットが構成される。具体的には、パレット１１３は８個の抗体チップ１を各中心間隔が９ミリメートルになるように装着するための８個の凹部を具備する。抗原測定装置には、第１ユニット２００ａ、第２ユニット２００ｂ、第３ユニット２００ｃ、及び第４ユニット２００ｄ等の複数のパレット１１３を連結して装着できる。このように複数のパレット１１３を連結した場合、パレット１１３に装着された抗体チップ１の種別を識別できるようにしておくのが好ましい。そのためにパレット１１３は、測定容器１１１と対向する表面、すなわち抗体チップ１が配列される主面とは異なる他方の主面に、識別端子（図示せず）を具備する。識別端子はパレット１１３内に埋め込まれた書き込みや読み出しが自在に設定されているＩＣチップに接続されている。このＩＣチップには抗体チップ１の種別を示す識別情報が記録されている。識別情報は抗体チップ１の種類に応じて適宜書き換えられる。
抗原測定装置は、測定容器１１１内の各々のパレットと対向する部分に識別端子に接触する図示しないプローブを有している。このプローブが識別端子と接触してＩＣチップ内の識別情報を読み取り、抗体チップの種別を認識をし適切な抗原測定手順を自動で選択する。
識別端子とＩＣチップの組み合わせは、無線化することも出来る。このとき、測定容器１１１側には無線ＩＣチップとの通信が可能な送受信回路が、プローブの代わりに設けられる。
【００１７】
（抗体チップ梱包体）
本発明の実施の形態に係る抗体チップ梱包体は、図３及び図４に示すように、（イ）複数の抗体チップ１を、抗体チップ１の中心の間隔が一定になるように収納する梱包容器２０２と、（ロ）抗体チップ１を乾燥状態に保つための乾燥剤２０１と、（ハ）梱包容器２０２と熱圧着する梱包カバー２０３とを含む。
【００１８】
梱包容器２０２は、ポリスチレン等からなる。乾燥剤２０１としては、シリカゲル等を使用する。また、梱包カバー２０３は、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリスチレン、ラミネートフィルム等からなる。
【００１９】
現在市販され、広く使用されているマルチピペットやマイクロウェルプレート操作器具は、８連式でその間隔が９ミリメートルになっている。そうした器具との互換性から、抗体チップ梱包体は、８個の抗体チップ１を収納でき、その中心間隔が９ミリメートルとするのが好ましい。
【００２０】
また、パレット１１３への抗体チップ１の装着配列もこれに準ずるため、抗体チップ梱包体からパレット１１３への装着操作も簡単となる。一方、使用済みの抗体チップ１をパレット１１３から捨てる時も、この抗体チップ梱包体に戻せば手を汚すことなく捨てることができる。
【００２１】
（抗体チップ）
本発明の抗体チップは、内部を光が全反射で伝播可能な光導波路層を構成する基板１６と、この光導波路層の全反射させる表面の少なくとも一部に形成される抗体固定化層１４と、を具備する抗体チップである。好ましくは、基板１６表面に形成されており、表面が抗体固定化層よりも高くなるように、前記抗体固定化層１４の少なくとも一部が露出するように開口して反応ホールを形成する撥液性を有する膜１５を具備する抗体チップであり、また、光導波路層表面に固着されており、突端が撥液性を有する膜よりも高く、反応ホールを囲むように形成されてセル１１を構成している枠体を具備する抗体チップである。
この抗体チップは、抗体固定化層を囲ってセルを形成するセル壁１２を具備し、そのセル１１中に反応ホール１０を形成することが好ましい。このような抗体チップを用いれば、極微量の検体溶液中の測定対象物質を高感度かつ高精度に分析することが可能となる。
【００２２】
抗体チップは、例えばホウケイ酸ガラスからなる基板１６と、基板１６の両端部表面に設置された光学要素である入射側グレーティング１３ａ及び出射側グレーティング１３ｂと、それらの間に位置する抗体固定化層１４とを具備する。さらに、抗体固定化層１４を囲い、セル１１を形成するセル壁１２を基板１６上に具備する。また、抗体固定化層１４上部に反応ホール１０を有する撥液性樹脂膜１５を、入射側グレーティング１３ａ及び出射側グレーティング１３ｂの上部と、抗体固定化層１４を除くセル１１の底面に具備する。
抗体固定化層１４の厚み（光導波路層表面から抗体固定化層の表面までの距離）は、好ましくは３０ｎｍ〜５００ｎｍ、更に好ましくは１００ｎｍ以下、特に好ましくは８０ｎｍ以下である。
【００２３】
セル壁１２は、枠体であり、黒等の有色樹脂で形成することが好ましい。樹脂材料は、試薬、溶媒等との反応性、相溶性がなく、成形性が良いものであれば特に制限はなく、キットの構成に応じて、アクリル樹脂、ＡＢＳ樹脂等を選択し、使用することができる。
セル壁１２を構成する枠体は、光導波路層を形成する基板１６の全反射面を構成する主面の表面に、開口する一方の端部を塞ぐようにＵＶ硬化性接着剤によって直接接着されている。セル壁１２は、反応ホール１０内に投入される試薬・検体溶液・洗浄液等の薬液が意図しない時点において外部に漏出しないように、測定エリアを囲うものである。したがって、枠体端部によって規定される基板表面からの高さは、撥液性樹脂膜１５の高さよりも高く形成されている。
抗体チップはレーザ発信器や反射光を受光する光電変換素子等と組み合わせて使用される。このようなセル壁を設けることによって装置上での薬液操作による各種装置の薬液による侵食を防止することが可能となる。セル壁１２は、測定用キットに含まれる薬品と反応しない構成であれば、その大きさや高さ、枠の開口の形状、材質等は使い勝手に応じて自由に決定してよい。
【００２４】
撥液性樹脂膜１５は、基板１６の全反射面を構成する主面の表面のうち、抗体固定化層１４の少なくとも一部、及びセル壁１２が設けられている領域以外の部分をくまなく覆うように配設される。撥液性樹脂膜１５には、基板１６下方から入射される光を外部に漏らさないように、遮光性がある、黒等の有色樹脂を用いるのが好ましい。撥液性樹脂は、キットとの反応性、相溶性がなく、撥液性、撥水性が良いものであれば特に制限はないが、特にフッ素樹脂が好適である。
入射側グレーティング１３ａ及び出射側グレーティング１３ｂは、例えば酸化チタン（ＴｉＯ２）、酸化錫（ＳｎＯ２）、酸化亜鉛、ニオブ酸リチウム、ガリウム砒素（ＧａＡｓ）、インジウム錫酸化物（ＩＴＯ）、ポリイミド等で形成することが好ましい。
グレーティング１３ａ及び１３ｂは、抗体チップにレーザ光を導入し、また出射させるための光学的機能を有しているが、他の部材を用いて同様の機能を実現できるならば、特に備える必要はない。また、同様の機能を実現できるものであればプリズム等の他の光学要素が配置されていてもよい。
抗体固定化層１４は、例えば抗体を架橋高分子で固定化した構造を有する。抗体固定化層１４で用いられる架橋高分子としては、例えば光架橋性ポリビニルアルコールのような水素結合性の官能基を含む高分子を挙げることができる。抗体は一般的に親水性であるので、抗体固定化層も親水性を有しているものが好ましい。
【００２５】
（抗体チップの製造方法）
次に、前述した抗体チップ１の製造工程の一例を図７、図８及び図９を参照して説明する；
Ｓ１０：まず、図８（ａ）に示すように、例えばホウケイ酸ガラスからなる基板１６の表面に、例えばＴｉＯ２をスパッタし、薄膜１３を形成する。  
Ｓ１１：次に、図８（ｂ）に示すように、薄膜１３をフォトエッチング技術でパターニングすることにより、両端部表面上に入射側グレーティング１３ａ及び出射側グレーティング１３ｂを形成する。  
Ｓ１２：次に、図８（ｃ）に示すように、入射側グレーティング１３ａ及び出射側グレーティング１３ｂ上と、基板１６表面の反応ホール１０及びセル壁１２接着部以外の部分に、例えば遮光性有色フッ素樹脂を印刷し、フッ素樹脂膜１５を形成する。  
Ｓ１３：次に、図９（ｄ）に示すように、例えば黒色アクリルでできたセル壁１２を、反応ホール１０を囲うように設置し、紫外線硬化する接着剤を利用して基板１６に接着し、セル１１を形成する。  
Ｓ１４：次に、図９（ｅ）に示すように、反応ホール１０内に抗体固定化層１４を形成する。具体的には、（イ）シランカップリング剤であるアミノシランを用いて、シランカップリング処理を施し、基板１６表面をアミノ基で修飾する。（ロ）次に、グルタルアルデヒド処理を施し、架橋による抗体の基板１６への固定化を行う。（ハ）最後に、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）等によって余分なアミノ基をブロッキングして、抗体固定化層１４を形成する。
【００２６】
（抗体チップによる抗原測定方法）
次に、図１０及び図１１を用いて、本発明の実施の形態に係る抗体チップ１による検体溶液中の特定物質の抗原測定方法について説明する：
Ｓ２０：抗体チップ１の反応ホール１０の基板１６の表面には、図１１（ａ）に示すように、タンパク質、遺伝子等の測定対象となる抗原２０ａを特異的に認識する１次抗体１４ａからなる抗体固定化層１４が形成されている。この反応ホール１０内の抗体固定化層１４上に抗原２０ａを含む検体溶液２０を滴下すると、図１１（ｂ）に示すように、抗原２０ａが１次抗体１４ａと結合し、１次抗体−抗原複合体を形成する。  
Ｓ２１：次に、１次抗体１４ａに結合した抗原２０ａ以外の検体溶液２０を、界面活性剤を含むリン酸バッファ（ＰＢＳ）等の洗浄液によって洗浄する。  
Ｓ２２：次に、酵素標識されている２次抗体溶液２１を滴下する。すると、図１１（ｃ）に示すように、２次抗体２１ａは、１次抗体１４ａとは別の部位で抗原２０ａにさらに結合する。その結果、１次抗体−抗原−２次抗体複合体が形成される。なお、２次抗体２１ａを標識している標識酵素として、例えば酸化還元酵素としてペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）等を用いることができる。  
Ｓ２３：次に、複合体を形成しなかった２次抗体２１ａを含む２次抗体溶液２１を、界面活性剤を含むＰＢＳ等の洗浄液によって再洗浄する。  
Ｓ２４：次に、洗浄に使用した界面活性剤を取り除き、安定化させるためにＰＢＳ等のみを緩衝液として注入する。  
Ｓ２５：この時点で、抗体チップの入射側グレーティング１３ａに向けて発光素子からレーザ光等を照射して、出射側グレーティング１３ｂからの出射光を受光素子で受光し、基準光強度として測定する。  
Ｓ２６：次に、図１１（ｄ）に示すように、セル１１に発色試薬溶液２２を滴下する。発色試薬溶液２２としては、例えばｐＨ＝４．９の緩衝液１リットル中に、酢酸８０ミリモル、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢＺ）１．１３ミリモル、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）１．９１ミリモル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１％未満を含むものを使用するのが好ましい。すると、ＰＯＤ等の標識酵素と、標識酵素の基質であるＨ２Ｏ２との酸化還元酵素反応によりラジカル酸素原子（Ｏ＊）が生成される。この酵素反応により生成されるＯ＊により発色試薬２２ａが発色する酵素反応産物を生成する。  
Ｓ２７：このような状態で、抗体チップの入射側グレーティング１３ａに向けて発光素子からレーザ光等を照射して、出射側グレーティング１３ｂからの反射光を受光素子で受光し、発色後光強度を測定する。  
Ｓ２８：Ｓ２５で測定した基準光強度とＳ２７で測定した発色後光強度との差により検体溶液２０中の測定対象となる抗原２０ａの濃度を算出する。
【００２７】
この測定方法を用いて光強度を連続して測定すると、Ｓ２４からＳ２５までの間の所定のＡ時点の値を基準光強度、Ｓ２６後の所定のＢ時点の値を発色後光強度として採用して濃度を算出することができる。したがって、無抗原溶液を用いた対象実験等をして基準光強度を測定する必要がない。
【００２８】
本発明の抗体チップ１は、反応ホール１０内で抗原抗体反応及び発色反応を起こさせるので、検体溶液２０は１マイクロリットル程度あれば十分測定できる。
【００２９】
本発明はここでは記載していない様々な実施の形態等を含むことは勿論である。本発明の技術的範囲は上記の説明から妥当な特許請求の範囲に係る発明特定事項によってのみ定められるものである。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
抗原抗体反応を用いる測定において、蛍光ではなく参照光の増減で検体の濃度測定を行なうことから、新生児・小動物に対する検査の場合など、検体の量を多く確保しにくい場合に活用できる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明の実施の形態に係る抗原測定装置の概略図である。
【図２】本発明の実施の形態に係る抗原測定装置の測定容器の上面図である。
【図３】本発明の実施の形態に係る抗体チップ梱包体の上面図である。
【図４】本発明の実施の形態に係る抗体チップ梱包体の側面図である。
【図５】本発明の実施の形態に係る抗体チップを示す上面図である。
【図６】本発明の実施の形態に係る抗体チップを示す、図５のＩ−Ｉの断面図である。
【図７】本発明の実施の形態に係る抗体チップの製造工程を示すフロー図である。
【図８】本発明の実施の形態に係る抗体チップの製造工程を示す工程断面図である（その１）。
【図９】本発明の実施の形態に係る抗体チップの製造工程を示す工程断面図である（その２）。
【図１０】本発明の実施の形態に係る抗体チップによる抗原測定方法の工程を示すフロー図である。
【図１１】本発明の実施の形態に係る抗体チップによる抗原測定方法を説明する図である。
【符号の説明】
【００３２】
１…抗体チップ、１０…反応ホール、１１…セル、１２…セル壁、１３…薄膜、１３ａ…入射側グレーティング、１３ｂ…出射側グレーティング、１４…抗体固定化層、１４ａ…１次抗体、１５…フッ素樹脂膜、１６…基板、２０…検体溶液、２０ａ…抗原、２１…２次抗体溶液、２１ａ…２次抗体、２２…発色試薬溶液、２２ａ…酵素反応産物、１０１…第１溶液槽、１０２…第２溶液槽、１０３…溶液選択バルブ、１０４…注入ポンプ、１０５…注入チューブ、１０６…排出チューブ、１０７…排出ポンプ、１０８…遮光板、１０９…発光素子、１１０…受光素子、１１１…測定容器、１１２…容器蓋、１１３…パレット、２００ａ…第１ユニット、２００ｂ…第２ユニット、２００ｃ…第３ユニット、２００ｄ…第４ユニット、２０１…乾燥剤、２０２…梱包容器、２０３…梱包カバー
【図１】
2005099011.tif 000003
【図２】
2005099011.tif 000004
【図３】
2005099011.tif 000005
【図４】
2005099011.tif 000006
【図５】
2005099011.tif 000007
【図６】
2005099011.tif 000008
【図７】
2005099011.tif 000009
【図８】
2005099011.tif 000010
【図９】
2005099011.tif 000011
【図１０】
2005099011.tif 000012
【図１１】
2005099011.tif 000013