(57)【要約】      （修正有）【課題】優れたアポＢ関連リポプロテインの分泌阻害作用を有し、優れた血液中のコレステロール及びトリグリセライドの低下作用を有する脂質低下剤として有用な新規な医薬、及び、他の脂質低下剤の脂質低下作用を増強する薬剤、即ち脂質低下作用増強剤として用いられる医薬の提供。【解決手段】テトラヒドロピランを有する誘導体が、強いアポＢ関連リポプロテイン分泌阻害活性を有し、強力なコレステロール、及びトリグリセライド低下作用を有し医薬として有用である事、及び該医薬を他の脂質低下剤と共に用いることにより、その脂質低下作用を増強できること見いだした。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（I）で示されるテトラヒドロピラン誘導体又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
【化１】
2005179347.tif 000023
（式中の記号は、以下の意味を示す。
Ｒ1及びＲ3：同一又は異なって、Ｈ、又は低級アルキル
Ｒ2：Ｈ、ハロゲン、Ｒa−低級アルキル−、又はＲ20Ｏ−ＣＯ−
Ｒa：Ｈ、Ｒ21Ｏ−ＣＯ−、Ｒ22Ｒ23Ｎ−、Ｒ24Ｒ25Ｎ−ＣＯ−、Ｒ26Ｏ−、シアノ、又は置換されてもよいヘテロ環−
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7：同一又は異なって、Ｈ、ハロゲン、ハロアルキル、シアノ、低級アルキル、低級アルキル−Ｏ−、Ｒ21Ｏ−ＣＯ−低級アルキル−、Ｒ27−ＣＯ−、又はＲ28Ｒ29Ｎ−Ｓ（Ｏ）2−
Ｒ8及びＲ9：同一又は異なって、Ｈ、低級アルキル、Ｒ30−低級アルキル−、Ｒ31Ｒ32Ｎ−、置換されてもよいヘテロ環−、又はＲ33Ｒ34Ｒ35Ｃ−
但し、Ｒ8及びＲ9は一体となって置換されてもよいヘテロ環を形成してもよい。
Ｘ：Ｎ、又はＣＲ36 
Ｒ20、Ｒ22乃至Ｒ26、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ32、Ｒ35、及びＲ36：同一又は異なって、Ｈ、又は低級アルキル
Ｒ21：Ｈ、低級アルキル、又はアリール−低級アルキル−
Ｒ27：ＨＯ−、低級アルキル−Ｏ−、又は置換されてもよいヘテロ環−
Ｒ30：置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロ環−、又は低級アルキル−Ｏ−
Ｒ31：置換されてもよいアリール、又は置換されてもよいヘテロ環−
Ｒ33：ＨＯ−低級アルキル−、又は置換されてもよいヘテロ環−低級アルキル−
Ｒ34：置換されてもよいアリール）
【請求項２】
脂質低下剤である請求項１記載の医薬。
【請求項３】
他の脂質低下剤の脂質低下作用増強剤である請求項１記載の医薬。
【請求項４】
他の脂質低下剤が、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤又はフィブラート系薬剤から選択される薬剤であるである請求項３記載の医薬。
【請求項５】
他の脂質低下剤が、アトルバスタチン又はシンバスタチンから選択される薬剤である請求項４記載の医薬。
【請求項６】
３−（２，４−ジメチル−９−｛４−[(S)−２−オキソ−２−（４−プロピルピペラジン−１−イル）−１−（テトラヒドロ−2H−ピラン−４−イル）エチル]ベンジル｝−9H−ピリド[２，３−b]インドール−３−イル）プロピオン酸又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する請求項２乃至５記載の医薬。
【請求項７】
請求項１項記載の医薬、及び他の脂質低下剤をそれぞれ別個に包装したものを組み合わせて包装したキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アポＢ関連リポプロテイン分泌阻害作用を有する新規テトラヒドロピラン誘導体又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬、殊に脂質低下剤、及び他の脂質低下剤の脂質低下作用増強剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高脂血症は、糖尿病、高血圧、喫煙などとともに虚血性心疾患などの動脈硬化性疾患の危険因子の一つであり、その改善は当該疾患の治療において有効である[JAMA. 1986;256:2835-2838、 JAMA. 1986;256:2823-2828、 JAMA. 1993;269:3015-3023]。高コレステロール血症は動脈硬化の危険因子として冠動脈疾患の原因となり、高トリグリセライド血症も心筋梗塞等の虚血性心疾患の原因の一つと考えられている。従って、高脂血症の治療には血中コレステロール及びトリグリセライドを低下させることが望ましい。高脂血症の治療薬としては、これまでに、HMG-CoA還元酵素阻害剤（特にスタチン系薬剤）、陰イオン交換樹脂製剤及びプロブコールなどが主に血液中コレステロールを低下させる薬剤として、一方フィブラートやニコチン酸製剤が主に血液中のトリグリセライドを低下させる薬剤として臨床で用いられている。
小腸で吸収されたコレステロールは、小腸上皮細胞の粗面小胞体内でアポ蛋白Ｂ（アポＢ）、リン脂質及びトリグリセライドとともにカイロミクロン複合体を形成し、リンパ管を経由して血液中に分泌され、肝臓等の組織に運ばれる。また、肝臓で合成されたコレステロールは、肝細胞の粗面小胞体内でアポＢ、リン脂質及びトリグリセライドとともにVLDL（超低密度リポ蛋白）複合体を形成し、血液中に分泌され、LDL（低密度リポ蛋白）に形を変えて他の組織に運ばれる[New England Journal of Medicine. 1983;309:288-296]。
ここでアポＢには、アポＢ−１００、アポＢ−４８の二つの分子種があり、これらは細胞内の粗面小胞体上で合成される。肝臓細胞においてはアポＢ−１００、小腸細胞においてはアポＢ mRNA editingによりアポＢ−４８が合成され、それぞれＶＬＤＬ、カイロミクロンの構造アポ蛋白となる。滑面小胞体で合成されたコレステロールエステル、トリグリセライドなどがＭＴＰにより転送され、小胞体内でアポＢと結合し未成熟リポ蛋白を形成する。この未成熟リポ蛋白はさらなる脂質負荷、ゴルジ体での糖鎖負荷などの過程を経て成熟リポ蛋白となり細胞外に分泌される[Biochem. Biophys. Acta. 1999;1440:1-31、 Biochem. Biophys. Acta. 1997;1345:11-26]。
従って小腸及び／または肝臓から血液中へのアポＢを構成成分とするアポＢ関連リポプロテイン（カイロミクロン、VLDL、LDLの総称）の分泌を阻害することにより、血液中のコレステロール及びトリグリセライドを低下させることが可能であり、このような化合物は高脂血症、動脈硬化、肥満、膵炎等の治療薬として有用である。
【０００３】
従来、脂質低下剤は世界中で広く用いられているが、その中でもスタチン系薬剤は、高脂血症治療薬シェアの約80〜90％を占め、高コレステロール血症の第一選択薬として、その安全性・有効性が確立された薬剤である。
しかしながら、スタチン系の薬剤で目標値までコレステロールを下げられるのは、患者の６０％と言われており、家族性高コレステロール血症などの重症高脂血症に対してはその効果は充分ではない。また、一部のスタチン系薬剤では用量増加に伴う副作用（肝酵素上昇等）発現も報告されている（Clinics in Liver Disease. 2003;7:415-433）。
一方、フィブラート系薬剤も高脂血症治療剤として広く用いられており、核内受容体のPPARαを介して様々な遺伝子発現を調節することが知られている。フィブラート系薬剤による血中脂質の変動としては、TG低下作用、HDL-C上昇作用が認められている。また細胞内脂質代謝への影響として、脂肪酸β酸化系酵素を誘導することが知られているが、LDL-C低下作用は弱い。
また、高脂血症は、糖尿病などの基礎疾患を有する場合も多く、このような場合には、従来の脂質低下剤による効果は不十分である。例えば、糖尿病患者に合併する高脂血症ではVLDL合成が促進され，リポ蛋白リパーゼ(LPL)活性の低下も伴い，血清トリグリセライド（TG）が増加する。このため，このような疾患に対してはスタチン系薬剤よりもフィブラート系薬剤が用いられる。これはフィブラート系薬剤によって肝臓におけるTG合成が抑制されるほか，LPLが活性化されてVLDLやその中間代謝産物であるレムナントの加水分解が促進されるためである。
しかし、その結果としてレムナントから転化したLDLの増加が懸念されるため，やはり治療効果は十分ではない（Medical tribune 2001年5月10日 (VOL.34 NO.19) p.14）。
このため、スタチン系薬剤とフィブラート系薬剤との併用が試みられているが、副作用として横紋筋融解症を発症しやすく、投与には慎重な注意が必要である（Current Therapy vol. 19 No.6 53-56, 1999）。
従って新しいタイプの脂質低下剤、殊に従来の脂質低下剤の作用増強作用をも有する安全な薬剤の創製が求められている。
【０００４】
アポＢ関連リポプロテインの生成及び／または分泌阻害剤としては、特許文献１又は特許文献２に開示のシクロアルカノ−インドール及びシクロアルカノ−アザインドール誘導体等のアミド型化合物が報告され、ピリドインドール若しくはカルバゾール環中の窒素原子がカルバモイルメチル置換ベンジルで置換された誘導体が開示されている。特許文献１の実施例５に記載された化合物はImplitapide（Bay-13-9952）として臨床段階に進んだ化合物である。その他にも、特許文献３及び４に開示のヒドラジド誘導体の他、様々な化合物が報告されているが、カルバモイルメチルのメチル部分がテトラヒドロピランで置換された化合物はこれまでに報告がない。
【０００５】
【特許文献１】特開平8-225526号
【特許文献２】特開平10-45759号
【特許文献３】国際公開パンフレットWO00/71502
【特許文献４】国際公開パンフレットWO01/74817
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、優れたアポＢ関連リポプロテインの分泌阻害作用を有し、優れた血液中のコレステロール及びトリグリセライドの低下作用を有する脂質低下剤として有用な新規な医薬を提供することである。
また、本発明の別の目的は、他の脂質低下剤の脂質低下作用を増強する薬剤、即ち脂質低下作用増強剤として用いられる医薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは，上記課題を解決すべく鋭意研究を行ったところ，意外にもこれまでに知られていなかったテトラヒドロピランを有する誘導体が、強いアポＢ関連リポプロテイン分泌阻害活性を有し、強力なコレステロール、及びトリグリセライド低下作用を有し医薬として有用である事、及び該医薬を他の脂質低下剤と共に用いることにより、その脂質低下作用を増強できること見いだし、以下の本発明を完成した。
（１）下記一般式（I）で示されるテトラヒドロピラン誘導体又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
【化１】
2005179347.tif 000002
（式中の記号は、以下の意味を示す。
Ｒ1及びＲ3：同一又は異なって、Ｈ、又は低級アルキル
Ｒ2：Ｈ、ハロゲン、Ｒa−低級アルキル−、又はＲ20Ｏ−ＣＯ−
Ｒa：Ｈ、Ｒ21Ｏ−ＣＯ−、Ｒ22Ｒ23Ｎ−、Ｒ24Ｒ25Ｎ−ＣＯ−、Ｒ26Ｏ−、シアノ、又は置換されてもよいヘテロ環−
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7：同一又は異なって、Ｈ、ハロゲン、ハロアルキル、シアノ、低級アルキル、低級アルキル−Ｏ−、Ｒ21Ｏ−ＣＯ−低級アルキル−、Ｒ27−ＣＯ−、又はＲ28Ｒ29Ｎ−Ｓ（Ｏ）2−
Ｒ8及びＲ9：同一又は異なって、Ｈ、低級アルキル、Ｒ30−低級アルキル−、Ｒ31Ｒ32Ｎ−、置換されてもよいヘテロ環−、又はＲ33Ｒ34Ｒ35Ｃ−
但し、Ｒ8及びＲ9は一体となって置換されてもよいヘテロ環を形成してもよい。
Ｘ：Ｎ、又はＣＲ36 
Ｒ20、Ｒ22乃至Ｒ26、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ32、Ｒ35、及びＲ36：同一又は異なって、Ｈ、又は低級アルキル
Ｒ21：Ｈ、低級アルキル、又はアリール−低級アルキル−
Ｒ27：ＨＯ−、低級アルキル−Ｏ−、又は置換されてもよいヘテロ環−
Ｒ30：置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロ環−、又は低級アルキル−Ｏ−
Ｒ31：置換されてもよいアリール、又は置換されてもよいヘテロ環−
Ｒ33：ＨＯ−低級アルキル−、又は置換されてもよいヘテロ環−低級アルキル−
Ｒ34：置換されてもよいアリール）
（２）脂質低下剤として用いるための上記（１）記載の医薬。
（３）他の脂質低下剤と共に投与され脂質低下作用増強剤として用いるための上記（１）記載の医薬。
（４）他の脂質低下剤が、以下に示される群から選択される前記（２）又は（３）記載の脂質低下作用増強剤；
（ａ）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤
（ｂ）アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素（ＡＣＡＴ）阻害剤
（ｃ）コレステロール吸収阻害剤
（ｄ）ニコチン酸製剤
（ｅ）フィブラート系薬剤
（ｆ）胆汁酸吸着剤
（ｇ）（ａ）〜（ｆ）以外に高脂血症の治療に用いられる薬剤。
（５）他の脂質低下剤がＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤又はフィブラート系薬剤から選択される薬剤である上記（３）又は（４）記載の医薬。
（６）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤がスタチン系薬剤である上記（５）記載の医薬。
（７）脂質低下作用がnon-HDLコレステロール低下作用である上記（２）記載の医薬。
（８）脂質低下作用がトリグリセライド低下作用である上記（２）記載の医薬。
（９）HDLコレステロール低下を伴わない上記（２）記載の医薬。
（１０）３−（２，４−ジメチル−９−｛４−[(S)−２−オキソ−２−（４−プロピルピペラジン−１−イル）−１−（テトラヒドロ−2H−ピラン−４−イル）エチル]ベンジル｝−9H−ピリド[２，３−b]インドール−３−イル）プロピオン酸又はその製薬学的に許容される塩である上記（２）乃至（９）記載の医薬。
（１１）上記（１）記載の医薬、及び一種または二種以上の他の脂質低下剤をそれぞれ別個に包装したものを組み合わせて包装したキット。
好ましくは、一般式（Ｉ）において、Ｒ8及びＲ9は一体となって置換されてもよいヘテロ環を形成してもよい。
更に好ましくは、Ｒ8及びＲ9は一体となって置換されてもよい飽和ヘテロ環を形成してもよい。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の医薬は、アポＢ関連リポプロテイン分泌阻害作用による優れた血中のコレステロール、トリグリセライド低下作用を有し、脂質低下剤として高脂血症、動脈硬化、肥満、膵炎の治療剤として有用である。
また、本発明の医薬は、他の脂質低下剤と共に用いられることにより、脂質低下作用、特にnon−コレステロール及びトリグリセライド低下作用の増強作用を有することから、家族性高コレステロール血症や、糖尿病を合併した高脂血症等の難治性高脂血症の治療剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明について更に説明すると、次の通りである。
一般式（Ｉ）で示される化合物について更に説明すると，次の通りである。
本明細書の一般式の定義において，特に断らない限り「低級」なる用語は炭素数が１乃至６個の直鎖又は分岐状の炭素鎖を意味する。
「低級アルキル」とは、Ｃ1-6アルキルであり、好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチルなどのＣ1-4アルキル、さらに好ましくはＣ1-3アルキルである。
「アリール」とは、炭素数６〜１４個の１−３環系芳香族炭化水素環基であり、好ましくは、フェニル、ナフチル、アントラニルである。
「ハロゲン」としては，フッ素，塩素，臭素又はヨウ素原子があげられる。
「ハロアルキル」とは、前述の低級アルキルの任意の水素原子が上記ハロゲンに置換した基であり、好ましくは、トリフルオロメチルなどが挙げられる。
「ヘテロ環」は、窒素原子，酸素原子又は硫黄原子から選択されるヘテロ原子１乃至３個を含む「飽和へテロ環」及び「不飽和へテロ環」を意味する。
「不飽和へテロ環」とは，窒素原子，酸素原子又は硫黄原子から選択されるヘテロ原子１乃至３個を含む縮合してもよい５又は６員不飽和へテロ環基を意味し，芳香族ヘテロ環を含む。好ましくは，ピロール、３−ピロリン，３，６−ジヒドロピリミジン、３，６−ジヒドロピリジン、ピリジン、フラン、チアゾール、チオフェン、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピリミジン、ピリダジン等であり、更に好ましくはの窒素原子１乃至２個を含む５又は６員単環不飽和へテロ環である。
「飽和へテロ環」は、窒素原子、酸素原子、硫黄原子から選択されるヘテロ原子１乃至３個を含むベンゼン環と縮合してもよい３〜１０員飽和ヘテロ環を意味する。該飽和へテロ環には、スピロ環を形成するもの及び架橋を有するものも含まれる。具体的には、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、アゼピン、ジアゼピン、モルホリン、チオモルホリン、チアゾリジン、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４，５］デカン、イソインドリン、ジヒドロイソインドール、テトラヒドロイソキノリン、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、テトラヒドロピランが挙げられる。好ましくは，４〜７員の飽和ヘテロ環である。
「Ｒ8及びＲ9は一体となって置換されてもよいヘテロ環」とは、上記ヘテロ環のうち、環中のヘテロ原子として窒素原子を少なくとも１個を有するヘテロ環を意味する。好ましくは、環中のヘテロ原子として窒素原子１乃至２個を有する５又は６員飽和又は不飽和ヘテロ環であり、これらのヘテロ環は低級アルキル、低級アルキレン、ハロゲンで置換されてもよいアリール、シクロアルキル、及びピリジルから選択させる基で置換されてもよく、ベンゼン環と縮合していてもよい。
【００１０】
Ｒa、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ27、Ｒ30、Ｒ31、Ｒ33における「置換されてもよいヘテロ環」、及びＲ30、Ｒ31、Ｒ34における「置換されてもよいアリール」の置換基は，当該分野で慣用される１乃至３個の置換基であり、好ましくは以下に示されるＡ群から選択される基である。
Ａ群：ハロゲン、オキソ、（ＯＨで置換されてもよい）低級アルキル、（低級アルキル−Ｏ−で置換されてもよい）ハロアルキル−、低級アルケニル、低級アルキニル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8シクロアルキル−低級アルキル−、（ハロゲンで置換されてもよい）アリール、アリール−低級アルキル−、ヘテロ環基、ヘテロ環−低級アルキル−、ＨＯ−、低級アルキル−Ｏ−、［ＯＨで置換されてもよい低級アルキル］−Ｏ−低級アルキル−、低級アルキル−Ｏ−低級アルキル−ＣＯ−、低級アルケニル−Ｏ−、低級アルキニル−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキル−Ｏ−、アリール−Ｏ−、アリール−低級アルキル−Ｏ−、ヘテロ環−Ｏ−、ヘテロ環−低級アルキル−Ｏ−、低級アルキル−Ｓ（Ｏ）m−、（ｍ：０、１または２。以下同様）、低級アルキル−Ｓ（Ｏ）m−低級アルキル−、低級アルケニル−Ｓ（Ｏ）m−、低級アルキニル−Ｓ（Ｏ）m−、 Ｃ3-8シクロアルキル−Ｓ（Ｏ）m−、アリール−Ｓ（Ｏ）m−、アリール−低級アルキル−Ｓ（Ｏ）m−、ヘテロ環−Ｓ（Ｏ）m−、ヘテロ環−低級アルキル−Ｓ（Ｏ）m−、低級アルキル−Ｏ−ＣＯ−、低級アルケニル−Ｏ−ＣＯ−、低級アルキニル−Ｏ−ＣＯ−、Ｃ3-8シクロアルキル−Ｏ−ＣＯ−、アリール−Ｏ−ＣＯ−、アリール−低級アルキル−Ｏ−ＣＯ−、ヘテロ環−Ｏ−ＣＯ−、ヘテロ環−低級アルキル−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯＯＨ、ＨＯＯＣ−低級アルキル−、ＨＯＯＣ−低級アルキル−Ｏ−、低級アルキル−ＣＯＮＲx−（Ｒxは、同一又は異なってＨ、低級アルキルを意味する。以下同様。）、低級アルキル−ＣＯＮＲx−低級アルキル−、ＲxＲyＮ−（Ｒyは、同一又は異なってＨ、低級アルキルを意味する。以下同様。）、ＲxＲyＮ−低級アルキル−、ＲxＲyＮ−ＣＯ−、ＲxＲyＮ−ＣＯ−低級アルキル−、ＨＣＯ−、低級アルキル−ＣＯ−、低級アルケニル−ＣＯ−、低級アルキニル−ＣＯ−、 Ｃ3-8シクロアルキル−ＣＯ−、アリール−ＣＯ−、アリール−低級アルキル−ＣＯ−、ヘテロ環−ＣＯ−、ヘテロ環−低級アルキル−ＣＯ−、ＨＣＳ−、低級アルキル−ＣＳ−、低級アルケニル−ＣＳ−、低級アルキニル−ＣＳ−、 Ｃ3-8シクロアルキル−ＣＳ−、アリール−ＣＳ−、アリール−低級アルキル−ＣＳ−、ヘテロ環−ＣＳ−、ヘテロ環−低級アルキル−ＣＳ−、低級アルキル−Ｏ−ＣＯ−ＣＯ−、ＨＣＯ−Ｏ−、低級アルキル−ＣＯ−Ｏ−、低級アルケニル−ＣＯ−Ｏ−、低級アルキニル−ＣＯ−Ｏ−、 Ｃ3-8シクロアルキル−ＣＯ−Ｏ−、アリール−ＣＯ−Ｏ−、アリール−低級アルキル−ＣＯ−Ｏ−、ヘテロ環−ＣＯ−Ｏ−、ヘテロ環−低級アルキル−ＣＯ−Ｏ−、アリール−低級アルキル−Ｏ−ＣＯ−、ヘテロ環−Ｏ−ＣＯ−が挙げられる。
【００１１】
より好ましくは以下のＢ群で示される基から選択される基である。
Ｂ群：ハロゲン、オキソ、（ＯＨで置換されてもよい）低級アルキル、（低級アルキル−Ｏ−で置換されてもよい）ハロアルキル−、低級アルケニル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8シクロアルキル−低級アルキル−、（ハロゲンで置換されてもよい）アリール、アリール−低級アルキル−、ヘテロ環基、−ＯＨ、低級アルキル−Ｏ−、［ＯＨで置換されてもよい低級アルキル］−Ｏ−低級アルキル−、低級アルキル−Ｏ−低級アルキル−ＣＯ−、低級アルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ−、低級アルキル−Ｓ（Ｏ）ｍ−低級アルキル−、低級アルキル−Ｏ−ＣＯ−、ＨＯＯＣ−低級アルキル−、ＨＯＯＣ−低級アルキル−Ｏ−、
ＲxＲyＮ−ＣＯ−、ＲxＲyＮ−ＣＯ−低級アルキル−、ＲxＲyＮ−低級アルキル−、低級アルキル−ＣＯ−、アリール−低級アルキル−Ｏ−ＣＯ−、ヘテロ環−Ｏ−ＣＯ−である。
「Ｃ3-8シクロアルキル」とは、具体的にはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキサンが挙げられる。好ましくは炭素数３〜６、特に好ましくは炭素数４乃至６のシクロアルキルである。
【００１２】
「製薬学的に許容される塩」としては塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸や、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマール酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、グルタミン酸等の有機酸との酸付加塩を挙げることが出来る。
塩基との塩としてはナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基、メチルアミン、エチルアミン、メグルミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トロメタミン、リジン、アルギニン、オルニチン等の有機塩基との塩やアンモニウム塩が挙げられる。
また、本発明の医薬の有効成分である化合物には、化合物（Ｉ）及びその塩の各種水和物、溶媒和物及び結晶多形の物質をも包含する。
更に本発明の有効成分である化合物には、薬理学的に許容されるプロドラッグも含まれる。本発明の有効成分である化合物の薬理学的に許容されるプロドラッグを形成する基としては、Prog. Med. 5:2157-2161 (1985)に記載されている基や、広川書店１９９０年刊「医薬品の開発」第７巻  分子設計１６３頁から１９８頁に記載されている基が挙げられる。具体的には、加水分解、加溶媒分解により又は生理学的条件の下で本発明の１級アミン、又は２級アミン、ＯＨ、ＣＯＯＨ等に変換できる基であり、例としてはＯＨ基のプロドラッグとしては、例えば−ＯＣ（Ｏ）−［置換されてもよい低級アルキル］−Ｃ（Ｏ）ＯＲ（ＲはＨ又は低級アルキルを示す、以下同様）、−ＯＣ（Ｏ）−［置換されてもよい低級アルケニレン］−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）−［置換されてもよいアリール］、−ＯＣ（Ｏ）−低級アルキル−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）−［置換されてもよい低級アルキル］、−ＯＳＯ2−［置換されてもよい低級アルキル］−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｏ−フタリジル、５−メチル−１、３−ジオキソレン−２−オン−４−イル−メチルオキシ等が挙げられる。
前記一般式（Ｉ）において、Ｒ2がＲa−低級アルキル−であり、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7が同一又は異なって、Ｈ、又はハロゲンであり、Ｒ8及びＲ9が同一又は異なって、Ｈ、低級アルキル、或いはＲ30−低級アルキル−であるか、又はＲ8及びＲ9が一体となって置換されてもよいヘテロ環を形成してもよく、且つＸがＮである上記一般式（Ｉ）で示されるテトラヒドロピラン誘導体又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬が好ましい。
【００１３】
特に、3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(4-ピリジン-2-イルピペラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸；3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(4-プロピルピペラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸；3-(9-{4-[(S)-(ベンジルカルバモイル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル]ベンジル}-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸；3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-(ジメチルカルバモイル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸；3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-モルフォリン-4-イル-2-オキソ-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸；3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-(4-イソブチルピペラジン-1-イル)-2-オキソ-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸；3-(9-{4-[(S)-2-(4-シクロブチルピペラジン-1-イル)-2-オキソ-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸；3-(9-{4-[(S)-2-(4-シクロペンチルピペラジン-1-イル)-2-オキソ-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸から選択される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬が好ましい。
【００１４】
本発明と組み合わせて用いられる他の脂質低下剤としては以下から選択される１種又は2種以上の脂質低下剤が挙げられる。
（ａ）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤：スタチン系薬剤が好ましく、具体的にはプラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、セリバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン等が更に好ましい。
（ｂ）アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素（ＡＣＡＴ）阻害剤：好ましくはメリナミド（Melinamide）が挙げられる。
（ｃ）コレステロール吸収阻害剤：好ましくはコレスチラミン（Cholestyramine）、コレスチポール（Colestipol）等の陰イオン交換樹脂製剤、エゼチミベ（Ezetimibe）が挙げられる。
（ｄ）ニコチン酸製剤：好ましくはニセリトロール、ニコモール、又はニコチン酸トコフェロール等が挙げられる。
（ｅ）フィブラート系薬剤：好ましくはフェノフィブラート、クロフィブラート、クリノフィブラート、シンフィブラート、ブザフィブラート、ゲムフィブロジル等が挙げられる。
（ｆ）胆汁酸吸着剤：好ましくはアバレリックス（abalelix）等が挙げられる。
（ｇ）（ａ）〜（ｆ）以外に高脂血症の治療に用いられる薬剤：好ましくはプロブコール、フォスファチジルコリン、リボフラビン酪酸エステル、エラスターゼ、イコサペント酸エチル、デキストラン硫酸ナトリウムの他、ポリエンホスファチジルコリン、ソイステロール、ガンマ・オリザノール、パンテチン、ウルソデオキシコール酸等が挙げられる。
特に、３−（２，４−ジメチル−９−｛４−[(S)−２−オキソ−２−（４−プロピルピペラジン−１−イル）−１−（テトラヒドロ−2H−ピラン−４−イル）エチル]ベンジル｝−9H−ピリド[２，３−b]インドール−３−イル）プロピオン酸又はその製薬学的に許容される塩と上記（ａ）〜（ｇ）に示される他の脂質低下剤との組み合わせが好ましい。
本発明の医薬の有効成分である化合物のうち、Ｒ2がＨＯ−ＣＯ−低級アルキル−である化合物は、薬物代謝酵素cytochromeP450(CYP)に対する阻害作用、特にCYP3A4に対する阻害作用が弱く、副作用の少ない化合物であるため、他剤との併用に有用である。なお、CYP3A4に対する阻害作用は、WO02/44179のp16  ９〜２２行目に記載されている方法を用いて確認した。
【００１５】
製造法
化合物(I)は、置換基の種類に応じて以下の第1から第6製法に示す方法を適宜選択することにより合成出来る。また、化合物(I)が光学活性体である場合も、以下に記載の反応条件を適切に選択することにより、製造途中でのラセミ化の問題なく後述の光学活性な化合物(XVII*)を用いて化合物(I)を合成することが出来る。
製法中の原料化合物の調製方法については、国際公開パンフレットWO03/101983を参照することにより合成出来る。
【００１６】
第1製法
【化２】
2005179347.tif 000003
化合物(I)は、化合物(II)で示すカルボン酸化合物と化合物(III)で示すアミン化合物を縮合反応に付すことにより合成出来る。反応は、通常反応に影響を及ぼさない有機溶媒中、縮合剤の存在下、室温下或いは加温下にて行われる。かかる溶媒としては、塩化メチレン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、1-メチルピロリジノン、テトラヒドロフラン等が挙げられる。縮合剤としては、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド・塩酸塩(WSC・HCl)、ジフェニルホスホリルアジド(DPPA)、カルボニルジイミダゾール(CDI)、ジイソプロピルカルボジイミド(DIPCI)等が挙げられる。また、本反応は塩基の存在下に行われても良く、かかる塩基としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、4-メチルモルホリン、1,8-ジアザビシクロ[5,4,0]-7-ウンデセン(DBU)等が挙げられる。また、本反応は、活性化剤の存在下に行われても良く、かかる活性化剤としては、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)、ヒドロキシスクシンイミド(HOSu)、ジメチルアミノピリジン(DMAP)、ヒドロキシフタルイミド(HOPht)等が挙げられる。化合物(II)と(III)は、等モル量或いは一方をやや過剰量用い、縮合剤及び塩基或いは活性化剤は、化合物(II)または(III)に対して、1乃至2当量用いることが好ましい。
或いは、化合物(I)は、上記縮合剤を用いる反応ではなく、化合物(II)を塩化チオニルやオキサリルクロライドと反応させることにより導かれる酸クロライドや、クロロギ酸エチルやクロロギ酸イソプロピルと反応させることにより導かれる混合酸無水物等の反応性誘導体に変換した後に、上述と同様の塩基の存在下に化合物(III)と反応させることにより合成することも出来る。
【００１７】
第2製法
【化３】
2005179347.tif 000004
化合物(I)中、二級アミド化合物(Ia)は、アミド部がtert-ブトキシカルボニル基(Boc基)により保護されている化合物(IV)の脱保護反応により合成出来る。反応は通常反応に影響しないジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタンなどの有機溶媒中、塩酸或いはトリフルオロ酢酸等の酸の存在下に、室温乃至は加温下に行うことが出来る。
化合物(I)のうちの一部の化合物は、上述の第1及び第2製法の如くして得られる化合物の置換基を、更に目的とする置換基へ変換することによって合成することが出来る。このような置換基の変換方法は、目的とする置換基の種類に応じて適宜選択すればよいが、例えば以下に示す第3製法から第6製法の如く実施することが出来る。
【００１８】
第3製法
【化４】
2005179347.tif 000005
化合物(I)中、カルボン酸化合物(Ic)は、第1製法により合成可能なエステル化合物(Ib)の加水分解反応により合成することが出来る。R37が低級アルキル基の場合、反応は、通常反応に関与しないメタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、ジオキサン等の有機溶媒及び水との混合溶媒中、塩基または酸を等量或いは過剰量用いて室温または加温下にて行われる。かかる塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム等の無機塩基が、また酸としては塩酸、硫酸、臭化水素酸等が用いられる。また、R37がベンジル基の場合には、ベンジルエステル体(Ib)の加水素分解反応によりカルボン酸化合物(Ic)を得ることが出来る。反応は通常反応に関与しない有機溶媒、例えばエタノール、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、酢酸等中、水素ガス雰囲気下に、パラジウム炭素等の金属触媒の存在下に室温にて行われるのが好ましい。
【００１９】
第4製法
【化５】
2005179347.tif 000006
化合物(I)中、アルコール化合物(Id)は、第1製法により合成可能なエステル化合物(Ib)或いは第2製法により合成可能なカルボン酸化合物(Ic)の還元反応により合成出来る。反応は、通常反応に関与しない有機溶媒中、適当な還元剤の存在下に実施することが出来る。かかる溶媒としては、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジオキサン、ジメトキシエタンなどが挙げられる。適当な還元剤としては、ボラン-テトラヒドロフラン錯体、水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素リチウム等が挙げられる。還元剤は、化合物(Ib)または(Ic)に対して、1乃至2当量用いることが好ましい。
【００２０】
第5製法
【化６】
2005179347.tif 000007
化合物(I)中、アミド化合物(Ie)は、第2製法により合成可能な(Ic)とアミン化合物(IIIa)との縮合反応により合成出来る。反応は第1製法に記載の方法に準じて実施することが出来る。
【００２１】
第6製法
【化７】
2005179347.tif 000008
化合物(I)中、テトラゾール化合物(Ig)は、第1製法により合成可能なニトリル化合物(If)とアジド化剤を反応させることにより合成出来る。反応は、通常反応に関与しないトルエン、キシレン、ベンゼン等の有機溶媒中、加温下に行われる。アジド化剤としては、アジ化トリブチル錫、アジ化ナトリウム等が好適である。
【００２２】
本発明に用いられる化合物(I)又はその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する製剤は，通常製剤化に用いられる担体や賦形剤，その他の添加剤を用いて調製され、投与量は症状，投与対象の年令，性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが，通常経口投与の場合成人１日当り０．０１〜５００ｍｇ程度，非経口投与の場合成人１日当り０．００１〜１００ｍｇ程度であり，これを１回で，あるいは２〜４回に分けて投与する。
本発明の医薬を他の脂質低下剤と共に用いる場合は、他の脂質低下剤は、その投与量を減じることができ、症状，投与対象の年令，性別等を考慮して個々の場合に応じて適量選択することができる。他の脂質低下剤は、本発明の脂質低下作用増強剤と合剤としてもよく、または、それぞれ別個に製剤化しておき、共に投与してもよい。
「共に」投与するとは、各薬剤を異なる日に投与すること、及び同時に投与することを意味する。
「異なる日に」投与するとは、一方の薬剤が相互に影響を及ぼす期間内に、他方の薬剤を投与することを意味する。影響を及ぼす期間は、薬剤の血中濃度の半減期等を参考に決定することができる。
「同時に」投与するとは、投与する薬剤の用法の範囲内で、同一の投与時期に投与されることを言う。例えば食後投与と定められている場合には、本発明の脂質低下作用増強剤と他の脂質低下剤は、食後投与の範囲内で、一時に投与され、或いは時間差を有して投与しても良い。また、両薬剤の1日投与回数が異なる場合であっても、いずれかの投与時に両薬剤を投与する場合には、「同時に」投与されるものとする。
投与方法は、その治療効果が増強される限りいずれでも良い。
本発明による経口投与のための固体組成物としては，錠剤，散剤，顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては，一つまたはそれ以上の活性物質が，少なくとも一つの不活性な希釈剤，例えば乳糖，マンニトール，ブドウ糖，ヒドロキシプロピルセルロース，微結晶セルロース，デンプン，ポリビニルピロリドン，メタケイ酸アルミン酸マグネシウムと混合される。組成物は，常法に従って，不活性な希釈剤以外の添加剤，例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤や繊維素グルコール酸カルシウムのような崩壊剤，ラクトースのような安定化剤，グルタミン酸又はアスパラギン酸のような溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要によりショ糖，ゼラチン，ヒドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等の糖衣又は胃溶性あるいは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
経口投与のための液体組成物は，薬剤的に許容される乳濁剤，溶液剤，懸濁剤，シロップ剤，エリキシル剤等を含み，一般的に用いられる不活性な希釈剤，例えば精製水，エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤，懸濁剤のような補助剤，甘味剤，風味剤，芳香剤，防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与の例としては注射剤が代表的な投与方法であり、注射剤としては，無菌の水性又は非水性の溶液剤，懸濁剤，乳濁剤を包含する。水性の溶液剤，懸濁剤としては，例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤，懸濁剤としては，例えばプロピレングリコール，ポリエチレングリコール，オリーブ油のような植物油，エタノールのようなアルコール類，ポリソルベート８０（商品名）等がある。このような組成物はさらに防腐剤，湿潤剤，乳化剤，分散剤，安定化剤（例えば，ラクトース），溶解補助剤（例えば，グルタミン酸，アスパラギン酸）のような補助剤を含んでいてもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過，殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また，これらは無菌の固体組成物を製造し，使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００２３】
以下に本発明の医薬の有効成分として用いられる化合物の製造例を製造例１乃至１８６として示す。本発明は，これらの実施例に何ら制限されるものではない。尚、製造例で用いられる原料化合物の製造方法は国際公開パンフレットWO03/101983を参照することにより製造することができる。。
【００２４】
製造例1：(-)-3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(4-ピリジン-2-イルピペラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸エチル
WO03/101983の参考例64で合成した(S)-(+)-(4-{[3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-9-イル]メチル}フェニル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)酢酸2.0gをDMF 30mlに溶解し、室温にて1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)560mg、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド・塩酸塩(WSC・HCl)780mg、1-(2-ピリジル)ピペラジン680mg及びトリエチルアミン580mgを順次加え、同温度にて終夜撹拌する。溶媒を減圧下に留去し、残渣に酢酸エチル100mlを加え、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水にて洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、溶媒を減圧下にて留去する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：メタノールの混合溶媒(100/1,v/v)にて溶出することにより、標記化合物2.42gを淡黄色泡状物質として得た。これをエタノールより結晶化することにより、標記化合物1.85gを無色結晶として得た。
製造例2：(+)-3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(4-プロピルピペラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸ベンジル
WO03/101983の参考例78で合成した(S)-(+)-(4-{[3-(3-ベンジルオキシ-3-オキソプロピル)-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-9-イル]メチル}フェニル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)酢酸1.8gをDMF 40mlに溶解し、室温にてHOBt 460mg、WSC・HCl 650mg、1-(n-プロピル)ピペラジン 二臭化水素酸塩980mg及びトリエチルアミン930mgを順次加え、同温度にて10時間撹拌する。溶媒を減圧下に留去し、残渣に酢酸エチル150mlを加え、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水にて洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、溶媒を減圧下にて留去する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：メタノールの混合溶媒(20/1,v/v)にて溶出することにより、標記化合物1.85gを無色泡状物質として得た。このうち、300mgをエタノールより結晶化することにより、標記化合物148mgを無色結晶として得た。
【００２５】
製造例1と同様の方法により、Table 1に示す化合物を合成した。
なお、表中、No.は製造例番号を、DATAは物性値を示す。
【表１】
2005179347.tif 000009
【００２６】
製造例16:(+)-3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(ピペラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸エチル 二塩酸塩
4-(tert-ブトキシカルボニル)ピペラジン2.11gをDMF 40mlに溶解し、室温にてWO03/101983の参考例64で合成した(S)-(+)-(4-{[3-(3-エトキシ-3-オキソプロピル)-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-9-イル]メチル}フェニル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)酢酸4.0g、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド・塩酸塩(WSC・HCl)1.74g及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)1.23gを順次加え、同温度にて終夜撹拌する。反応液に酢酸エチル及び炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出する。有機層を水、1.0M塩酸及び飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、溶媒を減圧下にて留去することにより、無色泡状物質を得た。得られた泡状物質を酢酸エチル20mlに溶解し、室温にて塩化水素の4M酢酸エチル溶液20mlを加え、1時間撹拌する。反応液を減圧留去した後、酢酸エチルにて洗浄することにより、標記化合物5.07gを無色固体として得た。
FAB-MS m/z:597(M++1)
製造例17： (-)-3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(4-ピリジン-2-イルピペラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸
製造例1で合成した(-)-3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(4-ピリジン-2-イルピペラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸エチル1.84gにメタノール100ml、水15mlを加え、無水炭酸カリウム830mgを加え、70℃にて3時間撹拌する。氷冷後、1M塩酸5.95mlを加え、溶媒を減圧下に留去する。残渣にクロロホルムを加え、飽和食塩水にて洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、溶媒を減圧下に留去する。残渣をシリカゲルカラムクマトグラフィーに付し、クロロホルム：メタノールの混合溶媒(20/1,v/v)にて溶出することにより、標記化合物1.8gを無色泡状物質として得た。これをエタノール続いてアセトンより順次結晶化することにより、標記化合物710mgを無色結晶として得た。
【００２７】
製造例18：(+)-3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(4-プロピルピペラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸
製造例2で合成した(+)-3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(4-プロピルピペラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸ベンジル1.96gをテトラヒドロフラン50mlに溶解し、アルゴン気流下に10%パラジウム-炭素300mgを加えた。反応系内に水素ガスを導入し、室温にて終夜撹拌した。反応系内をアルゴンガスに置換後、セライトを用いて不溶物を濾去後、濾液を減圧下に留去する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：メタノール(20:1,v/v)の混合溶媒にて溶出することにより、標記化合物1.75gを無色泡状物質として得た。これを酢酸エチル、エタノールより順次結晶化することにより、標記化合物765mgを無色結晶として得た。
製造例19：（-）-3-(9-{4-[(S)-(ベンジルカルバモイル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル]ベンジル}-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸
製造例9で合成した（-）-3-(9-{4-[(S)-(ベンジルカルバモイル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル]ベンジル}-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸ベンジル3.2gをテトラヒドロフラン120mlに溶解し、アルゴン気流下に10%パラジウム-炭素500mgを加えた。反応系内に水素ガスを導入し、室温にて２日間撹拌した。反応系内をアルゴンガスに置換後、セライトを用いて不溶物を濾去後、濾液を減圧下に留去する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：メタノール(20:1,v/v)の混合溶媒にて溶出することにより、標記化合物3.31gを無色泡状物質として得た。これをエタノールより結晶化することにより、標記化合物2.58gを無色結晶として得た。
【００２８】
製造例20：(+)-3-(9-{4-[(S)-2-(4-シクロプロピルメチルピペラジン-1-イル)-2-オキソ-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル}プロパン酸
シクロプロピルアルデヒド94mgを1,2-ジクロロエタン6mlに溶解し、製造例16で合成した(+)-3-(2,4-ジメチル-9-{4-[(S)-2-オキソ-2-(ピラジン-1-イル)-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸エチル 二塩酸塩300mgを加え、1時間撹拌する。反応液に同温度にて水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム285mgを加え、１時間撹拌する。反応液にクロロホルム及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた後、クロロホルムにて抽出する。有機層を、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、溶媒を減圧下に留去する。残渣をシリカゲルカラムクマトグラフィーに付し、クロロホルム：メタノールの混合溶媒(99/1,v/v)にて溶出することにより、無色泡状物質261mgを得た。得られた泡状物質をメタノール12ml及び蒸留水６mlに溶解し、室温にて炭酸カリウム196mg加える。反応液を80℃にて終夜撹拌した後、減圧留去する。残渣に１M塩酸を2.8ml加え、クロロホルムにて抽出する。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、溶媒を減圧下に留去後、残渣を酢酸エチル及びn-ヘキサンの混合溶媒で再結晶することにより、標記化合物194mgを無色結晶として得た。
【００２９】
製造例17,18,19或いは製造例20と同様の方法により、下記Table 2に示す化合物を合成した。
【表２】
2005179347.tif 000010
【００３０】
【表３】
2005179347.tif 000011
【００３１】
【表４】
2005179347.tif 000012
【００３２】
製造例69：(S)-(-)-N-ベンジル-2-(4-{[2,4-ジメチル-3-(3-ヒドロキシプロピル)-9H-ピリド[2,3-b]インドール-9-イル]メチル}フェニル)-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アセタミド
製造例19で合成した (-)-3-(9-{4-[(S)-(ベンジルカルバモイル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル]ベンジル}-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)プロパン酸295mgをテトラヒドロフラン10mlに溶解し、アルゴン気流下、0℃にてボラン−テトラヒドロフラン錯体の1.0Mテトラヒドロフラン溶液3.0mlを加えた。室温にて3.5時間攪拌した後、水15ml、炭酸カリウム6.0gを加え室温にて1時間攪拌した。反応液を酢酸エチルにて抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥する。溶媒を減圧下に留去後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム/メタノール(50/1、v/v)にて溶出することにより、標記化合物296mgを無色固体として得た。これをエタノールから結晶化することにより、標記化合物217mgを結晶として得た。
FAB-MS m/z:576(M++1),[α]25.0,D=-72.0(c=1.00,DMF)
製造例70 (±)-N-ベンジル-2-(4-{[3-(2-シアノエチル)-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-9-イル]メチル}フェニル)-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アセタミド
WO03/101983の参考例85で合成した(±)-N-ベンジル-[2-(4-{[3-(2-シアノエチル)-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-9-イル]メチル}フェニル)-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エタノイル]カルバミン酸 tert-ブチルエステル1.1gを1,2-ジクロロエタン10mlに溶解し、室温にてトリフルオロ酢酸5mlを加え、3時間撹拌する。反応液を減圧留去したのち、残渣に酢酸エチル及び炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出する。有機層を蒸留水及び飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、溶媒を減圧下にて留去する。残渣を酢酸エチルにて再結晶することにより、標記化合物728mgを無色結晶として得た。
FAB-MS m/z:571(M++1)
【００３３】
製造例71：(±)-(9-{4-[ベンジルカルバモイル-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル]ベンジル}-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)酢酸ナトリウム
WO03/101983の参考例83で合成した(±)- (9-{4-[2-(ベンジル-tert-ブトキシカルボニルアミノ)-2-オキソ-1-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル]ベンジル}-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)酢酸メチル500mgを酢酸エチル5mlに溶解し、室温にて塩化水素の4M酢酸エチル溶液5mlを加え、２時間撹拌する。反応液を減圧留去したのち、残渣をメタノール5mlに溶解し、室温にて１M水酸化ナトリウム水溶液3.6ml加え、室温にて終夜撹拌する。反応液を減圧留去したのち、残渣に酢酸エチル及びクエン酸水溶液を加え、生じた無色固体をろ取する。ろ液を酢酸エチルにて抽出し、有機層を蒸留水及び飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、溶媒を減圧下にて留去する。残渣に先にろ取した無色固体を混合し、酢酸エチルにて洗浄することにより、無色固体240mgを得た。得られた無色固体240mgをエタノール5mlに溶解し、室温にて１M水酸化ナトリウム水溶液0.41mlを加え、生じた固体をろ取乾燥することにより、標記化合物185mgを無色固体として得た。
FAB-MS m/z:598(M++1)
製造例71と同様の方法により、下記製造例72に示す化合物を合成した。
製造例72：(±)-(9-{4-[ベンジルカルバモイル-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル]ベンジル}-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-3-イル)ブタン酸ナトリウム
FAB-MS m/z:626(M++1)
【００３４】
製造例73：(±)-N-ベンジル-2-[4-({2,4-ジメチル-3-[2-(1H-テトラゾール-5-イル)エチル]-9H-ピリド[2,3-b]インドール-9-イル}メチル)フェニル]-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アセタミド
アジド化トリブチル錫1.45gをトルエン5mlに溶解し、室温にて製造例70で合成した(±)-N-ベンジル-2-(4-{[3-(2-シアノエチル)-2,4-ジメチル-9H-ピリド[2,3-b]インドール-9-イル]メチル}フェニル)-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アセタミド500mgを加え、加熱還流下終夜撹拌する。反応液に１M塩酸10ml及び酢酸エチル20mlを加える。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及びクエン酸水を加え、生じた固体をろ取する。ろ液を酢酸エチルにて抽出した後、有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、溶媒を減圧下に留去する。残渣に先にろ取した固体を混ぜ、熱ヘキサンにて洗浄する。得られた無色固体をエタノールで再結晶することにより、標記化合物272mgを無色結晶として得た。
FAB-MS m/z:614(M++1)
【００３５】
下記Table 3、4に示す化合物は、WO03/101983の参考例及び製造例化合物と同様の方法を用いて、或いは必要に応じて更に当業者が通常用いる操作を用いて合成した。
【表５】
2005179347.tif 000013
【００３６】
【表６】
2005179347.tif 000014
【００３７】
【表７】
2005179347.tif 000015
【００３８】
【表８】
2005179347.tif 000016
【００３９】
【表９】
2005179347.tif 000017
【００４０】
【表１０】
2005179347.tif 000018
【００４１】
上述の製造例化合物のうち、特に記載の無いものはフリー体（遊離酸又は遊離塩基）として合成した。尚、下記に製造例番号を示す化合物は、HCl或いはフマル酸の塩として合成した。
（HCl塩）：製造例3,4,7,8,10,22,27,32,35,75,84,88,89,90,91,92,93,94,95,96, 97,101,102,103,107,108,109,110,111,113,119,120,123,124,132,133,134,136,137, 138, 185
(フマル酸)：製造例99
【実施例】
【００４２】
本発明化合物のアポＢ関連リポプロテイン分泌阻害作用及びラットにおける血中のコレステロール、トリグリセライド低下作用は以下の実施例により確認した。
なお、本発明は，これらの実施例に何ら制限されるものではない。
実施例１
肝細胞中のアポＢ関連リポプロテイン分泌の測定
Hep G2細胞を10%牛胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地(以後「10%FBS含有DME培地」と呼ぶ)を用いて96穴プレートにて培養した。培地を試験物質のDMSO溶液(DMSO最終濃度0.1%)を含む10%FBS含有DME培地に交換し18時間培養し、培養上清を得た。DMSO(最終濃度0.1%)のみ含む10%FBS含有DME培地から得られた培養上清をコントロールとした。培養上清中に生成したアポＢ関連リポプロテインを以下に示すエンザイムイムノアッセイ法により定量した。
抗ヒトアポリポプロテインＢモノクローナル抗体液(4μg / ml)を96穴イムノプレートに100 μl分注し、4℃で18時間静置した。0.1%Tween20を添加したリン酸緩衝液(以後「PBS-Tと呼ぶ)で3回洗浄後、4倍希釈した免疫ブロック剤「Block Ace」を300μl添加、37℃で1時間静置した。前述の培養上清を添加、37℃で3時間静置した。PBS-Tで3回洗浄後、ヤギ抗アポリポプロテインＢポリクローナル抗体液(2000倍希釈)を100μl添加、37℃で1時間静置した。PBS-Tで3回洗浄後、アルカリフォスファターゼ標識抗ヤギIgG抗体液(2000倍希釈)を100μl添加、37℃で1時間静置した。PBS-Tで4回、PBSで1回、炭酸緩衝液(pH 9.5)で洗浄後、アルカリフォスファターゼ基質液を100μl添加、室温で5分間静置した。0.2M水酸化ナトリウムを50μl添加し反応を止め、405nmの吸光度を測定した。ヒト低密度リポプロテインを標準品とした検量線よりアポＢ関連リポプロテインの絶対量を求めた。
結果を以下の表(Table 5)に示す。
【００４３】
【表１１】
2005179347.tif 000019
本発明化合物はアポＢ関連リポプロテインの分泌を抑制することが示された。
【００４４】
実施例2
ラットにおける血中のコレステロール、トリグリセライドの測定
In vivoにおけるVLDL分泌に関する試験物質の影響をラットで検討した。雄性SDラットに試験物質を含有する0.5%メチルセルロース懸濁液を経口投与した。1時間後Triton WR-1339生理食塩水溶液(400 mg/kg相当)を尾静脈より投与した。4時間後、ジエチルエーテル麻酔下において採血を行った。血清中の総コレステロール、トリグリセライドの測定はそれぞれ「コレステロールＣテストワコー」及び「トリグリセライドＧテストワコー」（和光純薬）を用いて行った。0.5%メチルセルロース液を経口投与し生理食塩水を静脈内投与したラットをノーマル群、0.5%メチルセルロース液を経口投与しTriton WR-1339生理食塩水溶液を静脈内投与したラットをコントロール群とした。コントロール群とノーマル群の血清中の総コレステロール(TC)、トリグリセライド(TG)の差を時間当たりの分泌量とし、試験物質投与による分泌量の低下をED50値で表した。
結果を表(Table 6)に示す。
【００４５】
【表１２】
2005179347.tif 000020
本発明化合物は、同薬効のImplitapideと同等以上の優れたコレステロール、トリグリセライド低下作用を示した。
【００４６】
実施例３
高コレステロール食負荷ラットに対する薬理試験法
In vivoにおける血漿中脂質に関する試験物質の影響を高コレステロール食負荷ラットで検討した。高コレステロール食（1.5%コレステロール，10%ココナッツ油，0.5%コール酸）を負荷した雄性SDラットに試験物質を含有する0.5%メチルセルロース懸濁液を1日1回7日間反復経口投与した。最終投与後絶食し、6時間後にジエチルエーテル麻酔下において採血を行った。血漿中の総コレステロール、HDLコレステロール、トリグリセライドの測定を日立自動分析装置7250を用いて行った。総コレステロールからHDLコレステロールを減算することによりnon-HDLコレステロールを算出した。試験物質投与による、コントロール群に対するnon-HDLコレステロールの低下をED50値で表した。
結果を以下の表(Table 7)に示す。
【００４７】
【表１３】
2005179347.tif 000021
本発明化合物は、食餌性の高コレステロール血症に対し、Implitapideと同等〜３０倍以上優れたコレステロール低下作用を有し、コレステロール低下剤として有用であることが確認された。
【００４８】
実施例４
KK−Ayマウスに対する薬理試験法
In vivoにおける血漿中脂質に関する試験物質の影響をKK-Ayマウスで検討した。雄性KK-Ayマウスに試験物質を含有する0.5%メチルセルロース懸濁液を1日1回7日間反復経口投与した。最終投与後絶食し、6時間後にジエチルエーテル麻酔下において採血を行った。血漿中の総コレステロール、HDLコレステロール、トリグリセライドの測定を日立自動分析装置7250を用いて行った。総コレステロールからHDLコレステロールを減算することによりnon-HDLコレステロールを算出した。試験物質投与による、コントロール群に対する血漿中脂質の低下を低下率で表した。
結果を、以下の表(Table 8)に示す。
【００４９】
【表１４】
2005179347.tif 000022
本発明化合物は、コレステロール、及びトリグリセライドの両方が高値となる病態モデルにおいても、Implitapideに対し優れたコレステロール、トリグリセライド低下作用を示し、高脂血症の治療薬として有用であることが確認された。
【００５０】
脂質低下増強作用
本発明の医薬を他の脂質低下剤と共に用い、脂質低下作用の増強作用を確認した。
実施例５  スタチン系薬剤に対する作用
本発明の医薬として製造例１８の化合物を用い、脂質低下剤としてアトルバスタチン及びシンバスタチンを用いた。
Hartleyモルモット(雄性，5週齢)に各被験物質の0.5%メチルセルロース懸濁液を1日1回2週間反復経口投与した(5 ml/kg)。最終投与後絶食し，6時間後に採血を行った。血漿中TC、HDL-C、TGを日立7250自動分析装置を用いて測定した。
結果を図１乃至４に示す。
なお、図１及び２の記号は以下の意味を示す。
* : p < 0.05, *** : p < 0.001 vs 対照 (Dunnett’s test).
aa : p < 0.01 vs アトルバスタチン 10 mg/kg, 
bb : p < 0.01 vs アトルバスタチン 30 mg/kg (Student’s t-test).
図３及び４の記号は以下の意味を示す。
* : p < 0.05, ** : p < 0.01, *** : p < 0.001 vs 対照 (Dunnett’s test).
a : p < 0.05, aa : p < 0.01 vs シンバスタチン 10 mg/kg, 
b : p < 0.05, bb : p < 0.01 vs シンバスタチン 30 mg/kg (Student’s t-test)
製造例１８は、各薬剤単独のコレステロールの低下率及び／又はトリグリセライドの低下率の総和を超える低下作用を示した。特にトリグリセライドに対しては顕著に優れた低下作用を示した。
上記の結果により、本発明の有効成分は、共に投与される他のスタチン系薬剤のコレステロール（特にnon-HDLコレステロール低下作用）及び／又はトリグリセライド低下作用を相乗的に増強することが確認され、特にトリグリセリドに対する低下作用を顕著に増強することが確認された。
実施例６  フィブラート系薬剤に対する作用
被検化合物として製造例１８の化合物を用い、脂質低下剤としてフェノフィブラートを用いて試験を行った。
SDラット(雄性，6週齢)に68%ショ糖含有食を3週間与えた。ショ糖食開始2週目に血中脂質パラメーターに差がないように群分けを行い、各被験物質の0.5%メチルセルロース懸濁液を1日1回1週間反復経口投与した(10 ml/kg)。最終投与後絶食し、6時間後に採血を行った。血漿中TC, HDL-C, TGを日立7250自動分析装置を用いて測定した。
以上の実施例により、本発明の医薬は、単独でも優れたコレステロール、トリグリセリド低下作用を有し、高脂血症の治療剤として有用であり、また、共に投与される脂質低下剤の投与量を低下させることができ、或いは、好ましい作用を増強する薬剤としても有用であることを確認した。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】実施例５における製造例１８の化合物とアトルバスタチンの単独及び併用投与による血漿コレステロール低下作用の比較を示すグラフ
【図２】実施例５における製造例１８の化合物とアトルバスタチンの単独及び併用投与によるトリグリセライド低下作用の比較を示すグラフ
【図３】実施例５における製造例１８の化合物とシンバスタチンの単独及び併用投与による血漿コレステロール低下作用の比較を示すグラフ
【図４】実施例５における製造例１８の化合物とシンバスタチンの単独及び併用投与によるトリグリセライド低下作用の比較を示すグラフ
【図１】
2005179347.tif 000024
【図２】
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【図３】
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【図４】
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