(57)【要約】【課題】  有用性が認められているハナビラタケについて、発生操作をおこなわずに子実体形成率を高めることによって、コストを増大させることなく、より商業栽培に適した栽培方法を提供する。【解決手段】  ハナビラタケを栽培する方法において、液体培養して得られた菌糸体を種菌として固形培地に接種することを特徴とするハナビラタケの栽培方法を要旨とするものであり、また、ハナビラタケを栽培する方法において、液体培養して得られた菌糸体を粉砕した後に種菌として固形培地に接種することを特徴とするハナビラタケの栽培方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハナビラタケを栽培する方法において、液体培養して得られた菌糸体を種菌として固形培地に接種することを特徴とするハナビラタケの栽培方法。
【請求項２】
請求項１において、液体培養して得られた菌糸体を粉砕した後、種菌として固形培地に接種することを特徴とするハナビラタケの栽培方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハナビラタケ（Sparasiss crispa）の栽培方法に関するものであり、さらに詳しくは液体種菌を用いたハナビラタケの栽培方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現在食用キノコの栽培では、その過程において、低温刺激、菌掻き、注水、覆土などの経験的に得られた発生操作をおこなうことによって、子実体の発生促進や子実体発生時期の制御をしている。この操作をおこなうことによって、効率のよい生産が可能となる。
【０００３】
ところで、現在商業規模で栽培されているキノコは全て白色腐朽菌と呼ばれるリグニン分解能が高いキノコである。一方、褐色腐朽菌と呼ばれるリグニン分解能の低いキノコの場合、商業規模での栽培はおこなわれていなかった。その原因の一つとして発生操作による子実体の発生促進や子実体形成時期の制御が難しいことが考えられる。
【０００４】
褐色腐朽菌に分類されるハナビラタケは、カラマツに生える非常に僅少なキノコであって、歯ごたえが良く、その純白の色合いと葉牡丹の様な形態に特徴を有する食用キノコである。このハナビラタケは、長い間人工培地で子実体を形成させることが出来なかったが、近年比較的短期間で栽培可能な新しい栽培法が確立され（例えば、特許文献１参照）、商業規模での供給が可能となった。このハナビラタケから抽出により得られたβ−グルカンを主成分とする抽出物について医薬品、食品分野での用途が提案されている（例えば、特許文献２、３参照）。
【０００５】
しかし、従来のハナビラタケ栽培では培養時の子実体形成率が極めて低い上に、発生時期がばらつくという問題点があった。この問題は、白色腐朽菌で通常用いられる発生操作をおこなっても解決することが難しかった。この問題を解決する手段として、子実体発生操作に異種キノコの種菌を接種するという手法を用いることによってハナビラタケの子実体形成率が飛躍的に向上することが最近報告されている（特許文献４参照）。しかしながら、この手法を用いた場合、工程の増加などの問題からコストが増大するという問題点があった。
【０００６】
一方、キノコの栽培において液体種菌を用いる方法が知られている。例えば、連続で液体培養した菌を種菌とする方法（特許文献５参照）においては、連続培養することにより菌糸が分散され菌体の活着力を強くし、固体培地における菌糸の蔓延速度を上昇させることが可能であることが示されている。また、液体培養したキノコ菌体と栄養分を含有した培養液とを殺菌固体培地に混合して菌床とすることにより、完全殺菌培地の使用が可能なキノコの人工栽培方法が提案されている（特許文献６参照）。さらに、培地に開けた植菌孔に接種装置を用いて液体種菌を植菌孔の内面略全面と瓶口の培地表面に放射し培養することにより培養期間を短縮できることが開示されている（特許文献７参照）。
【０００７】
しかしながら、従来の液体種菌を用いた栽培方法において、子実体発生の操作が省略できることの記載はなく、またハナビラタケの人工栽培に適用した例も報告されていない。
【特許文献１】特開平１１−５６９０８号公報
【特許文献２】特開２０００−２１７５４３号公報
【特許文献３】特開２００２−１２５４６０号公報
【特許文献４】特開２００２−３６９６２１号公報
【特許文献５】特開平５−１９２０３６号公報
【特許文献６】特開平６−６２６６２号公報
【特許文献７】特開２００３−１５８９２１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は有用性が認められているハナビラタケについて、発生操作をおこなわずに子実体形成率を高めることによって、コストを増大させることなく、より商業栽培に適した栽培方法を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、接種源を通常用いられるオガクズ培地で培養した菌糸体ではなく、液体培養した菌糸体とし、これを培地基材に均一かつ高密度に接種し菌糸密度を高くすることによって、発生操作をおこなわずに子実体形成率を高めることが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち本発明は、ハナビラタケを栽培する方法において、液体培養して得られた菌糸体を種菌として固形培地に接種することを特徴とするハナビラタケの栽培方法を要旨とするものであり、また、ハナビラタケを栽培する方法において、液体培養して得られた菌糸体を粉砕した後に種菌として固形培地に接種することを特徴とするハナビラタケの栽培方法を要旨とするものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の栽培方法によれば、発生操作をおこなわずに子実体形成率を高めることができ、それによりハナビラタケの栽培日数を短縮し、栽培工程を簡略化できるなど栽培効率を大幅に上げることができるほか、より大きな収量を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明のハナビラテケの栽培方法は、液体培養による種菌作成の工程と、得られた種菌を固形培地に接種して栽培する工程の２つの工程に分けることができる。
【００１３】
まず、液体培養による種菌作成工程について説明する。
【００１４】
この工程は以下の操作よりなる。1)保存菌株を平板培地に接種する。培地材はPDA培地など通常の菌培養に用いられるものでよい。2)これを２５℃付近で培養し、十分な大きさまで生育した後、直径５〜６ｍｍの小片に培地を切り取る。このときの培養期間は通常２週以上かかる。3)切り取った培地をあらかじめ滅菌しておいた液体培地に接種する。このとき、小片は複数個用いても良い。4)液体培養を行い、液体培地全体に菌糸が生育したところで種菌として利用する。5)種菌には液体培養した菌糸体を液体培地に植継いで培養したものを用いてもかまわない。
【００１５】
本発明で用いられるハナビラタケは特に菌株を限定するものではなく、どのような菌株でも用いることができる。ハナビラタケの取得方法としては、野生に生育しているものを採取してもよいし、（財）日本きのこ研究所の保存菌株を取り寄せることもできる。さらに生食用として市販されているハナビラタケの小片をできるだけ無菌的に切取り、例えばPDA寒天培地に植菌し培養した後スラントに植継げば、保存用のハナビラタケとすることができる。
【００１６】
本発明において用いられる液体培養の培地成分は、特殊なものを用いる必要はない。具体的には、培地成分の窒素源としては無機または有機窒素源を使用することができるが、生育速度の観点からは有機窒素源を用いることが好ましい。炭素源としてはグルコースなどの単糖の他、デンプンなどの多糖など、通常用いられる炭素源を使用することができる。また、必要に応じて微量元素やビタミン等の生育因子を添加することは通常の場合と何ら変わりはない。ｐＨは２．５〜８．０、好ましくは３．０〜７．０であり、３．５〜５．５が最も好ましい。培地には不溶成分を添加することが均一に生育させることができることから好ましい。不溶成分としては、大豆粉などが用いられ、これらを液体培地の容量に対して０．０５％〜数％程度添加すればよい。
【００１７】
液体培養の培養条件としては、培養温度は１５℃〜３０℃、好ましくは１８℃〜２８℃、最も好ましくは２０〜２５℃であり、静置培養と振盪培養、もしくは一定期間静置してから振盪培養するなど、どのような方法を用いても良い。培養時間は、菌糸体濃度2mg/ml以上となるまでを培養終了の目安とすればよく、時間的には菌株により異なるが、数日から数週間程度であり、通常２〜３週間である。
【００１８】
次に液体種菌を固形培地に接種して栽培する工程について説明する。
【００１９】
この工程は以下の操作よりなる。1)栽培ビンに固形培地を作成しておく。固形培地には接種孔を開けておくことが望ましい。2)前工程で得られた液体種菌を固形培地に接種する。3)接種した培地を通常の条件で培養する。子実体形成が見られたものについては、順次栽培ビンのふたを取って、通常の条件に設定された栽培室に移し、子実体を生育させる。
【００２０】
固形培地はオガクズ培地が好ましい。培地基材としてカラマツのオガクズを使用し、これに小麦粉を１％〜３０％混合する。小麦粉は３％〜２０％が好ましく、５％〜１０％が更に好ましい。培地基材にはコーンコブや広葉樹と針葉樹の混合物などを用いることもできる。これを通常８５０ｃｃのポリプロピレン製栽培ビンに約５２０ｇ充填する。この際、培地中央に接種孔を開けておくと、接種量を多くすることができ培地全体に菌糸が回りやすくなり、また通気がよくなるため好ましい。接種孔を開けることにより結果として収穫までの期間が短縮でき、収量が上がるなどの利点が生じる。接種孔の大きさは接種に使用する器具にあわせて決められるが、断面積がほぼ７ｍｍ2以上あればよい。また、接種孔は複数開けた方がよい。固形培地は、高圧殺菌などの方法により殺菌をしておく。
【００２１】
本発明においては、液体培養した種菌を接種する前に無菌的に粉砕しておくことが好ましい。液体培養した菌糸体は通常、スラリー状もしくは毬藻状になっているため、粉砕した後に接種することによって接種孔と培地上面に菌糸体を均一に接種することができ、その結果。高密度の子実体を得ることができる。粉砕はホモジナイザーを用いて行うことができ、スラリー状もしくは毬藻状の菌糸体が崩壊し均一な分散状態になれば十分である。
【００２２】
種菌の接種は、インジェクターを用いて無菌的におこなってもよいし、市販の液体接種機を用いておこなってもよい。この際、接種孔と培地上面に菌糸体を均一に接種するのが好ましい。栽培ビン１本あたりの最適な接種量は、液量にして５〜３０ｍLであり、７〜２５ｍLが更によく、１０〜２０ｍLが最も好ましい。菌糸体の濃度は高い方がよい。0.5mg/ml以上ある方がよく、好ましくは1mg/ml以上、更に好ましくは2mg/ml以上である。
【００２３】
種菌を接種した培地の培養条件としては、温度は１５℃〜３０℃、好ましくは１８℃〜２８℃、２０〜２５℃が最も好ましく、湿度は５０％〜８０％、好ましくは５５％〜７５％、６０％〜７０％が最も好ましい。以上のような方法により培養することで、特別な操作無しにほぼ９０％以上の子実体形成が見られるようになる。子実体形成が見られたものについては、順次栽培ビンのふたを取って、通常の条件、すなわち温度１０℃〜３０℃、好ましくは１５℃〜２８℃、最も好ましくは１７〜２５℃、湿度８０％以上、好ましくは８５％以上、最も好ましくは９０％以上の栽培室に移し、子実体を生育させる。このような栽培により子実体は安定して１３０ｇ以上（栽培ビン1本あたり）収穫できる。
【実施例】
【００２４】
実施例１
ハナビラタケの保存菌株（ユニチカ市販ハナビラタケの断片よりスラント保存）をPDA平板培地に接種し、２５℃で３週間培養した。直径５〜６ｍｍの小片に培地を切り取り、あらかじめ滅菌しておいた液体培地（コウボエキス0.5%、グルコース2%、pH 4.0）に接種した。２５℃で静置培養し、２週間経過したところで液体培地に植継いだ。植継ぎの際は菌糸体を培地と共にホモジナイザーを用いて10,000 rpmで１分間無菌的に粉砕し上記の液体培地に接種した。接種量は培地100 mL あたり10 mL（乾燥菌体重量12 mg）である。これを更に２週間培養し、液体培地全体に菌糸が生育したものを種菌として利用した。利用した種菌の菌濃度は3.5 mg / mLであった。接種時はこの種菌をホモジナイザーを用いて10,000 rpmで１分間無菌的に粉砕し、オガクズ培地に接種した。
【００２５】
オガクズ培地の培地基材にはカラマツのオガクズを用い、これに小麦粉を７％混合し、水を加えて水分を６１％に調整した。これを８５０ｃｃのポリプロピレンの栽培ビンに５２０ｇ充填し、直径２０ｍｍの接種孔を市販の穴開け機を用いて栽培ビンの中央に１つ開けた後１１０℃で３時間高圧殺菌した。その後、培地温度が３０℃以下まで下がるのを待って種菌を接種した。接種量は接種孔に6 mL（乾燥菌体重量21 mg）、培地上面に4 mL（乾燥菌体重量14 mg）である。これを２３℃、湿度６５％で培養したところ、４２日経過時点でほぼ１００％の子実体の形成がみられた。子実体形成が見られたものについては、順次栽培ビンのふたを取って、温度１９℃、湿度９０％の栽培室に移し、子実体を生育させた。１６０本の栽培ビンで栽培したところ、１本あたりの平均収量は約１５０ｇであった。
【００２６】
実施例２
（財）日本きのこ研究所より入手したハナビラタケの保存菌株NS421、NS422、NS423、NS424、NS425、TMC504、TMC572の７株について実施例１と同様の手順によって接種し、栽培したところ、全てにおいて子実体の形成が見られた。表１に菌株ごとの結果を示す。
【００２７】
【表１】
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比較例１
種菌としてオガクズ培地に生育させた菌糸体を用いた以外は実施例１と全く同様の操作により接種を行い培養した。
【００２８】
５６日経過時点で１５％程度子実体の形成がみられた。ただし、形成の時期にはかなりのばらつきが見られた。子実体形成が見られたものについては、順次栽培ビンのふたを取って、温度１９℃、湿度９０％の栽培室に移し、子実体を生育させた。最終的な子実体率は２０％程度であり、１６０本あたりの平均収量は約９０ｇであった。
比較例２
比較例１と同じ培養を行い、１５％程度子実体の形成がみられた５６日経過時点で、子実体形成が見られたものと見られなかったもの全てについて培地表面を掻き取り、異種キノコの種菌を接種した。異種キノコは、同様のオガクズ培地でホウライタケを培養して作成した種菌２ｇを用いた。
【００２９】
接種後２週ほどでハナビラタケの子実体の形成が見られ、その形成率は９０％程度であった。子実体形成が見られたものについては、順次栽培ビンのふたを取って、温度１９℃、湿度９０％の栽培室に移し、子実体を生育させた。栽培ビン１６０本につき１本あたりの平均収量は約１３０ｇであった。
【００３０】
表２は、実施例１と比較例１，２において顕著に差が見られた内容をまとめたものである。液体接種をおこなうことによって、子実体形成までの期間が短縮されていることが分かる。また、子実体形成率もほぼ１００％まで上昇し、その形成時期も良くそろっており、平均収量も増加したことがわかる。
【００３１】
【表２】
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このように、液体種菌を用いることによって、子実体発生操作が不要となり、子実体形成率が上昇し、その形成までの時期が短縮できるなどハナビラタケの栽培効率を大幅に上げることができ、さらには収量も上げることができる。これらより商業規模での栽培において大きくコストダウンを図ることが可能となる。