(57)【要約】【課題】            本発明は、β−エンドルフィン及び／またはβ−エンドルフィンの産生を促進する作用のある物質を含有することを特徴とする皮膚外用剤を提供することにある。【解決手段】        βＥが皮膚において細胞賦活作用と美白作用を発揮することが明らかとなったことから、βＥを皮膚外用剤に配合して、もしくはβＥの産生を促進する作用のある物質を配合した皮膚外用剤を用いて、βＥの産生を促進することにより、細胞賦活作用や美白作用による皮膚症状の予防や改善が可能である。本発明により予防や改善が図られる皮膚症状の例としては、しわ，たるみ，しみ，くすみ，乾燥，肌荒れなどを挙げることができる。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−エンドルフィン及び／またはβ−エンドルフィンの産生を促進する作用のある物質を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項２】
化粧料であることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、β−エンドルフィン及び／またはβ−エンドルフィンの産生を促進する作用のある物質を含有することを特徴とする皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
β−エンドルフィン（以下βＥと略す）は、脳や心臓その他の臓器に含まれ、脳下垂体の副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）及びメラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）と共通の前駆体タンパク質であるプレプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）から生合成される内因性モルヒネ様ペプチド（オピオタイドペプチド）の一種であり、鎮痛作用や抗ストレス作用を有することから脳内快楽物質として知られている。感情に関わりのある右脳や大脳辺縁系に多く存在し、喜びを感じる時などに重要な役割を果たしている。
【０００３】
ある種の芳香成分においては、βＥ遊離促進効果があり、それを嗅ぐことによって身体および精神がリラックスしてストレスが緩和されることから、アロマ関連商品に利用されることがある。
【０００４】
βＥは、特に脳下垂体中葉・後葉に多く含まれ、ストレスなどの侵害要因によって血中にも分泌されることが知られているが、近年の研究によって、皮膚においてもＰＯＭＣが合成され、表皮ケラチノサイトよりβ−エンドルフィンが遊離することが明らかとされている（非特許文献１，２参照）。
【０００５】
しかし、βＥの皮膚における生理的作用については、未だ不明な点も多く、詳細な検討はなされていない現状であった。βＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を、皮膚外用剤、特に化粧料などに用いられた例はない。そこで、本発明者らは、ストレスによって分泌されるβＥが皮膚に対して何らかの有利な作用を発揮しているのではないかとの仮説のもとに種々の検討を行った。
【０００６】
これらの検討の結果、本発明者らは、βＥが皮膚において細胞賦活作用と美白作用を発揮することを見出した。
【０００７】
【非特許文献１】Zenello S.B.,Jackson D.M.,Holick M.F. et.al.,An immunocytochemical approach to the study of beta-endorphin production in human keratinocytes using confocal microscopy,Annals New York Academy of Sciences,1999,885(20),85-99
【非特許文献２】Wintzen M.,Zanello S.B.,Holick M.F.,Wiegant V.M.,Burbach J.P.,Vermeer B.J.,Condition-dependent presence of beta-lipotropin-like peptide in human keratinocytes,Peptides,2000,21(5),691-697
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
βＥが皮膚において細胞賦活作用と美白作用を発揮することが明らかとなったことから、βＥを皮膚外用剤に配合して、もしくはβＥの産生を促進する作用のある物質を配合した皮膚外用剤を用いて、βＥの産生を促進することにより、細胞賦活作用や美白作用による皮膚症状の予防や改善が可能であることが示された。このため、本発明者らはβＥを用いて、種々の皮膚症状に応用することが可能な皮膚外用剤を提供することを目的に種々の検討を行った。
【０００９】
したがって、本発明の目的は、βＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を用いて、種々の皮膚症状に応用することが可能な皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
βＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を用いて、優れた効果を発揮する皮膚外用剤を見出すために、本発明者らは、βＥについての検討を行った。その結果、βＥに細胞賦活作用や美白作用による皮膚症状の予防や改善効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、βＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を含有することを特徴とし、細胞賦活作用や美白作用による皮膚症状の予防や改善効果がある皮膚外用剤に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、βＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を含有する皮膚外用剤を得ることができる。βＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を皮膚に適用することにより、βＥの作用によって、皮膚にリラックス効果を与えるとともに、ストレスに起因する種々の皮膚症状を予防あるいは改善することが可能である。特に、細胞賦活作用や美白作用に基づく皮膚症状の予防や改善を図ることが可能である。本発明により予防や改善が図られる皮膚症状の例としては、しわ，たるみ，しみ，くすみ，乾燥，肌荒れなどを挙げることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明のβＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を含有することを特徴とする皮膚外用剤によって、細胞賦活作用や美白作用に基づく皮膚症状の予防や改善を図ることが可能である。これらは唯１種を含有させることもできるし、２種以上を組み合わせて含有させることもできる。本発明の皮膚外用剤におけるβＥの含有量は、０．００００１〜０．１重量％が好ましく、０．０００１〜０．０５重量％がさらに好ましい。その理由としては、濃度が高すぎると頭打ちになり、それ以上の効果が発揮されないことにある。これは経皮吸収性が高濃度では低下するのが原因である。逆に、濃度が低いと目的とする有効性を発揮できない。βＥの産生を促進する作用のある物質を用いる場合の含有量は、有効性や使用性などの点から、組成物の全量に対して０．０００１〜７５重量％が好ましく、より好ましくは０．００１〜５０重量％であり、最も好ましくは０．０１〜２５重量である。
【００１４】
βＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を含有する皮膚外用剤の剤型は任意であるが、ローションなどの可溶化系，乳液やクリームなどの乳化系，カラミンローションなどの分散系，噴射剤と共に充填したエアゾール類，軟膏剤，粉末，顆粒などの種々の剤型として、あらゆる剤型の皮膚外用剤を提供することができる。
【００１５】
本発明のβＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を含有する皮膚外用剤の効果を損なわない範囲において、必要に応じてこれら皮膚外用剤で使用される任意の成分を含有することができる。例えば、医薬品，医薬部外品，皮膚化粧料，頭髪化粧料，育毛養毛料，浴用剤，洗浄剤などに配合される油性成分，保湿剤，粉体，色素，乳化剤，可溶化剤，洗浄剤，紫外線吸収剤，増粘剤，薬剤，香料，樹脂，アルコール類などを適宜配合することができる。
【００１６】
本発明のβＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を含有する皮膚外用剤は、ストレスに起因する種々の皮膚症状を予防あるいは改善することが可能である。特に、細胞賦活作用や美白作用に基づく皮膚症状の予防や改善を図ることができ、その例としては、しわ，たるみ，しみ，くすみ，乾燥，肌荒れなどの皮膚症状を挙げることができる。
【００１７】
以下に、本発明者らが明らかにしたβＥの皮膚における生理的作用の検討について示すが、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。
【００１８】
［βＥによる表皮細胞賦活作用の評価］
評価は、試料としてヒトβＥを用い、以下の手順で行った。正常ヒト表皮細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、市販のクラボウ社製Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２を用いた。２４時間培養後、任意の濃度の試料を添加した試験培地に交換し、さらに２４時間培養した。次いで３−(４,５−ジメチル−２−チアゾリル)−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を１００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を１００とした場合の相対値にて表１に示す。なお、表中の**は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率１％未満の危険率（Ｐ＜０．０１）で有意差が認められたものを表したものである。
【００１９】
【表１】
2005179224.tif 000002
【００２０】
表１より明らかなように、βＥを添加した培地において、有意な表皮細胞賦活作用が認められた。特に、βＥを０．１２５〜０．５ｎｇ／ｍＬ添加した場合には、ブランクと比較して、危険率１％未満で有意な表皮細胞賦活作用が認められた。このことから、βＥは、優れた表皮細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００２１】
［βＥによる真皮線維芽細胞賦活作用の評価］
評価は、試料としてヒトβＥを用い、以下の手順で行った。正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１％のウシ胎児血清を添加したものを用いた。２４時間培養後、任意の濃度の試料を添加した試験培地に交換し、さらに４８時間培養した。次いで３−(４,５−ジメチル−２−チアゾリル)−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を１００とした相対値にて表２に示す。なお、表中の**は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を表したものである。
【００２２】
【表２】
2005179224.tif 000003
【００２３】
表２より明らかなように、βＥを添加した培地において、有意な真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。特に、βＥを０．１２５〜０．５ｎｇ／ｍＬ添加した場合には、ブランクと比較して、危険率１％未満で有意な真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。このことから、βＥは、優れた真皮線維芽細胞賦活作用を有することが明らかとなった。
【００２４】
［βＥによるチロシナーゼ活性阻害作用の評価］
評価は、試料としてヒトβＥを用い、以下の手順で行った。正常ヒト表皮メラニン細胞を１ウェル当り３．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはクラボウ社製Ｍｅｄｉｕｍ１５４Ｓを用いた。２４時間後にＭｅｄｉｕｍ１５４Ｓによって各濃度に調整した試料液に交換し、さらに４８時間培養した。次に、１重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ含有リン酸緩衝液７５μＬに交換し、細胞を完全に溶解させた。その５０μＬを粗酵素液とし、これに基質となる５０μＬの０．０５重量％Ｌ−ドーパ含有リン酸緩衝液を加え、３７℃で２時間静置した。基質添加直後と反応終了時の４０５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定し、生成したドーパメラニン量を測定した。同時に各試料におけるタンパク量を測定し、タンパク量当たりのドーパメラニン生成量を算出した。チロシナーゼ活性阻害作用として、試料無添加のブランクにおけるタンパク量あたりのドーパメラニン生成量を１００とした相対値にて表３に示した。なお、表中の**は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を表したものである。
【００２５】
【表３】
2005179224.tif 000004
【００２６】
表３より明らかなように、βＥを添加した培地を用いた場合に、有意なチロシナーゼ活性阻害作用が認められた。特に、βＥを２．５〜３．５ｎｇ／ｍＬ添加した場合には、ブランクと比較して、危険率１％未満で有意なチロシナーゼ活性阻害作用が認められた。このことから、βＥは、チロシナーゼ活性阻害作用を有し、優れた美白作用を発揮することが明らかとなった。
【００２７】
上記の検討により、βＥが皮膚において細胞賦活作用と美白作用を発揮することが明らかとされ、βＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を皮膚に適用することによって、βＥの有する細胞賦活作用や美白作用により、しわ，たるみ，しみ，くすみ，乾燥，肌荒れなど皮膚症状の予防や改善が可能であることが明らかとなった。
【００２８】
最後に、処方例１〜２に、βＥ及び／またはβＥの産生を促進する作用のある物質を含有した皮膚外用剤の処方例を示す。
【００２９】
［処方例１］クリーム
（１）スクワラン                                      １０．０（重量％）
（２）ステアリン酸                                      ２．０
（３）水素添加パーム核油                                ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                              ０．１
（５）セタノール                                        ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン                  ２．０
（７）グリセリン                                      １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（９）アルギニン（２０重量％水溶液）                  １５．０
（10）精製水                                          ４０．６５
（11）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液）      １５．０
（12）β−エンドルフィン                                ０．０５
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（11）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００３０】
［処方例２］美白美容液
（１）トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                ７．０（重量％）
（２）水素添加大豆リン脂質                              ０．１
（３）バチルアルコール                                  ０．１
（４）ジステアリン酸ポリグリセリル                      ３．０
（５）精製水                                          ７１．６８５
（６）グリセリン                                        ８．０
（７）１，３−ブチレングリコール                        ２．０
（８）リン酸Ｌ−アスコルビルマグネシウム                ３．０
（９）キサンタンガム                                    ０．４
（10）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（11）エタノール                                        ４．０
（12）クエン酸ナトリウム                                ０．５
（13）乳酸                                              ０．００５
（14）香料                                              ０．１
（15）β−エンドルフィン                                ０．０１
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、５０℃にて（11）〜(15)を加え、均一に混合する。