(57)【要約】【課題】  歯面での口腔内細菌の共凝集を抑制することによって、歯周病関連細菌の歯面への付着・定着を防止し、歯周病関連疾患の予防・改善に有用な口腔用製剤を提供する。【解決手段】  グリシン若しくはアラニンを有効成分とする口腔内細菌の共凝集抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリシン若しくはアラニンを有効成分とする口腔内細菌の共凝集抑制剤。
【請求項２】
フソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌の共凝集を抑制するものである請求項１記載の共凝集抑制剤。
【請求項３】
歯周病関連細菌が、プレボテラ属細菌である請求項２記載の共凝集抑制剤。
【請求項４】
歯周病関連細菌が、プレボテラ  インターメディアである請求項２記載の共凝集抑制剤。
【請求項５】
グリシン若しくはアラニンを有効成分とする歯周病関連疾患の予防又は改善剤。
【請求項６】
グリシン若しくはアラニンを含有する口腔用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯面での口腔内細菌の共凝集を抑制する共凝集抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯周病は、病原性細菌の歯面への付着、定着により発症へと向かう口腔内感染症である。歯周病関連細菌の歯面への定着機構は、先ず、唾液の薄膜（ペリクル）によって覆われたエナメル質表面に、ストレプトコッカス  オラリス、ストレプトコッカス  サンガイス、ストレプトコッカス  ゴードニィ、アクチノマイセス  ナエスランディ等の初期定着細菌が吸着する。そして、これら初期定着細菌は増殖に伴って互いに共凝集（co-aggregation）を起こし、歯垢（プラーク）の形成を開始する。次いで、プラークの成熟化に伴い、微生物菌叢が通性嫌気性菌から偏性嫌気性菌へと遷移し、フソバクテリウム  ヌクレアタムに代表される偏性嫌気性菌が初期定着細菌に共凝集する。そして、当該フソバクテリウム  ヌクレアタムにアクチノバシルス  アクノマイセテムコミタンス、ポーフィロモナス  ギンギバリス、プレボテラ  インターメディア等の歯周病関連細菌が共凝集し、定着すると考えられている。
【０００３】
共凝集は、細菌同士の非特異的静電気的相互作用やレクチン・レセプター型相互作用、粘着性多糖合成による付着作用、非特異性疎水的相互作用によって引き起こされるものであり、病原性細菌の口腔内への定着においては、特に重要な役割を果たしている。
【０００４】
口腔内感染症の予防手段としては、従来から、病原性細菌の歯面への定着を阻害することが有力であると考えられており、例えば特定のアミノ糖を用いて口腔内細菌の共凝集を阻害し歯垢形成を抑制すること（例えば、特許文献１参照）、Ｓ．サンギスより単離されたオリゴ糖類を用いて歯垢の構築を阻害すること（例えば、特許文献２参照）、キサンタンガム、ガム・トラガカンス、グアーガム等を用いて細菌凝集を阻害すること（例えば、特許文献３参照）、等が報告されている。また、リジン又はその誘導体と抗菌活性を示す化合物と界面活性剤からなる抗菌製剤が微生物の集合体や塊に対して抗菌効果を発揮することが報告されている（例えば、特許文献４参照）。
【０００５】
一方、グリシンやアラニンは、広く食品等に使用されているが、口腔内細菌の共凝集を抑制する作用があることはこれまでに知られていない。
【特許文献１】特開平６−２４９４８号公報
【特許文献２】米国特許第７，３４９，７７２号明細書
【特許文献３】米国特許第４，８５５，１２８号明細書
【特許文献４】特開平８−１５１３２５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、歯面での口腔内細菌の共凝集を抑制することによって、歯周病関連細菌の歯面への付着・定着を防止し、歯周病関連疾患の予防・改善に有用な口腔用製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、プラーク形成に関与する口腔内細菌の共凝集に着目し、共凝集を抑制する成分について検討したところ、グリシン若しくはアラニンが、初期定着細菌に付着するフソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌の共凝集抑制作用を有し、歯面への歯周病関連細菌の付着・定着を防ぎ、歯周病関連疾患の予防・改善に有用であることを見出した。
【０００８】
すなわち本発明は、グリシン若しくはアラニンを有効成分とする口腔内細菌の共凝集抑制剤、及び歯周病関連疾患の予防又は改善剤を提供するものである。
【０００９】
また本発明は、グリシン若しくはアラニンを含有する口腔用組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の共凝集阻害剤は、口腔内細菌の共凝集を抑制し、歯周病関連細菌の歯面への付着を防止できる。従って、これを用いることにより、歯周病関連疾患を予防・改善することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の共凝集抑制剤の有効成分であるアラニンは、Ｌ体、Ｄ体、ＤＬ体の何れでもよい。
尚、グリシン若しくはアラニンは、常法により化学合成することも可能であり、また市販品を使用することでもよい。
【００１２】
本発明の共凝集抑制剤は、口腔内細菌同士の共凝集を抑制するものである。
ここで、口腔内細菌としては、歯面においてプラーク形成に関与する口腔内細菌が挙げられる。例えば、ストレプトコッカス  オラリス(Streptococcus oralis)、ストレプトコッカス  サンガイス（Streptococcussanguis）、ストレプトコッカス  ゴードニィ(Streptococcus gordonii)、アクチノマイセス  ナエスランディ（Actinomycesnaeslundii）等の歯面を覆うペリクルに付着する初期定着細菌；フソバクテリウム  ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）に代表される偏性嫌気性菌；アクチノバシルス  アクチノマイセテムコミタンス（Actinobacillusactinomycetemcomitans）等のアクチノバシルス属細菌、ポルフィロモナス  ギンギバリス (Porphyromonasgingivalis)等のポルフィロモナス属細菌、プレボテラ  インターメディア (Prevotella intermedia)等のプレボテラ属細菌他、バクテロイデス  フォーサイサス（Bacteroidesfosythus）、トレポネーマ  デンティコーラ（Treponema denticola）等の歯周病関連細菌が挙げられる。
【００１３】
このうち、フソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌、又は初期定着細菌との共凝集を抑制するのが好ましい。フソバクテリウム  ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）は、プラーク形成において、ペリクルによって覆われた歯面上に付着・凝集した初期定着細菌に付着する偏性嫌気性菌である。歯周病関連細菌の歯面への付着・定着は、このフソバクテリウム  ヌクレアタムが歯周病関連細菌と共凝集を起こすことによりなされると考えられていることから、フソバクテリウム  ヌクレアタムと歯周病関連細菌又は初期定着細菌との共凝集を抑制すれば、歯周病関連細菌の歯面への付着・定着を防止することが可能となる。
【００１４】
このように、グリシン若しくはアラニンは、歯周病関連細菌の口腔内への付着・定着を防止することから、歯周病関連疾患に対して予防改善効果を発揮する口腔内細菌の共凝集抑制剤、歯周病関連疾患の予防又は改善剤等の口腔用組成物として有用である。
【００１５】
すなわち、本発明の共凝集抑制剤、歯周病関連疾患の予防又は改善剤及び口腔用組成物は、通常の口腔用組成物に用いられる成分、例えば発泡剤、発泡助剤、界面活性剤、研磨剤、増量剤、甘味剤、保存料、薬効成分、ｐＨ調整剤、粘着剤、顔料、色素、香料等を適宜配合することにより、歯周病関連疾患に対する予防改善効果をもった歯磨、液状歯磨、液体歯磨、潤製歯磨、洗口剤、マウススプレー、チューインガム等とすることができる。
【００１６】
ここで、薬効成分としては、トリクロサン、クロルヘキシジン、塩化ベンゼトニウム等の殺菌剤、ポリフェノール類（グルコシルトランスフェラーゼ阻害作用）等の酵素阻害剤、インドメタシン、グリチルリチン酸ジカリウム等の抗炎症剤等が挙げられ、通常口腔用製剤として用いられるものを用いることができる。
【００１７】
また、甘味料としては、オリゴ糖類又は糖アルコール類、例えば、キシロオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、乳果オリゴ糖、ラクチュロース、ラフィノース、トレハロース、グルコシルシュクロース、マルトシルシュクロース、パラチノース、マルチトール、エリスリトール、還元パラチノース、キシリトール等が好適な例として挙げられる。
【００１８】
尚、斯かる共凝集抑制剤中のアラニン若しくはグリシンの含有量は、製造コストの点から０．００１〜１０重量％が好ましく、特に０．０１〜５重量％であるのが好ましい。
【実施例】
【００１９】
実施例１
（１）使用菌株
歯周病関連細菌（Prevotella intermedia ATCC25611（Ｐｉ））と口腔内細菌（Fusobacterium nucleatumATCC25586（Ｆｎ））を用いた。
【００２０】
（２）培養及び洗浄
歯周病関連細菌は、K1, Hシェドラーブロス（ベクトンディッキンソン社製）、Fusobacteriumnucleatum（Ｆｎ）はＧＡＭブイヨン（日水製薬株式会社）で37℃、10％ＣＯ2，10％Ｈ2，80％Ｎ2の条件下で対数増殖期から定常期まで培養し、5000rpm、5分遠心分離を行い集菌した。その後、PBSバッファー(144mg/L KH2PO4, 9g/L NaCl, 795mg/L Na2HPO4, pH7.4)で3回遠心洗浄後(5000rpm,5分)、OD600nmで1.0に調製した。
【００２１】
（３）共凝集測定法
96穴マイクロプレートにＬ-アラニン（和光純薬工業）、グリシン（和光純薬工業）及び比較としてＬ-セリン（和光純薬工業）、Ｌ-アルギニン（和光純薬工業）を最終濃度 100ｍＭになるように 20μＬ添加後、Fusobacterium nucleatum（Ｆｎ）を 60μＬ分注攪拌し、歯周病関連細菌 60μＬを添加した。その後、マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製） を用い1分間隔で30分間吸光度（OD600nm）を測定し、吸光度の変化率Vmax(mOD/min)を計算し相対共凝集率を算出することにより共凝集反応を測定した。
【００２２】
（４）結果
図１に示すとおり、水、Ｌ-セリン、Ｌ-アルギニンでは相対共凝集率が 100％であったが、Ｌ-アラニンでは 58％、グリシンでは 79％となり、アラニン及びグリシンに共凝集抑制効果がみられた。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、ＦｎとＰｉの共凝集抑制効果を示す図である。
【図１】
2005053851.tif 000002