(57)【要約】【課題】レゾルシンから２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性がより高い微生物を検索し、それらの活性を有する微生物を用いて工業的に実施するのに有利な２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造法を提供する。【解決手段】リゾビウム（Rhizobium）属に属する微生物を培地を用いて培養し、得られた微生物の培養物、処理物または固定化物の存在下に、炭酸イオン及び／または二酸化炭素を水性溶媒中でレゾルシンに作用させて２，６−ジヒドロキシ安息香酸を生成させ、反応により生成した２，６−ジヒドロキシ安息香酸を該水性溶媒中より採取する。【効果】レゾルシンから２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性が従来より高い微生物を用いことにより、その反応選択性も利用し、極めて単純な工程で工業的に実施するのに有利な２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造法を提供することができる。【選択図】  なし 【特許請求の範囲】
【請求項１】
リゾビウム（Rhizobium）属に属する微生物を培地を用いて培養し、得られた微生物の培養物、処理物または固定化物の存在下に、炭酸イオン及び／または二酸化炭素を水性溶媒中でレゾルシンに作用させて２，６−ジヒドロキシ安息香酸を生成させ、反応により生成した２，６−ジヒドロキシ安息香酸を該水性溶媒中より採取することを特徴とする２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
【請求項２】
リゾビウム属に属する微生物がアグロバクテリウム（Agrobacterium）属を含まないところのリゾビウム（Rhizobium）属に属する微生物であることを特徴とする請求項１の記載の２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
【請求項３】
リゾビウム属に属する微生物がその１６ＳｒＤＮＡのうち５‘末端側の塩基配列が配列表の配列番号：1記載の配列の微生物であることを特徴とする請求項１又は２記載の２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
【請求項４】
リゾビウム属に属する微生物がリゾビウム  スピーシズ（Rhizobium  sp）ＭＴＰ−１０００５（ＦＥＲＭ Ｐ−１９４２６）に属する微生物であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
【請求項５】
リゾビウム（Rhizobium）属に属する微生物を培養する際に、培地へ２，６−ジヒドロキシ安息香酸を添加することを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬品・化学品で使用される２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
２，６−ジヒドロキシ安息香酸は、レゾルシンを原料としてコルベ−シュミット法による炭酸化反応により製造されている。すなわち、レゾルシンの金属塩に炭酸ガスを高温高圧下で反応させる方法により製造されているが、この方法によれば、対応する多価アルコ−ル芳香族カルボン酸の混合物が生成し、該混合物から目的化合物を分離精製するには非常な困難が伴う。そのため、選択的に目的化合物を製造する方法がいろいろ試みられているが、実用化するまでには至っていない。
【０００３】
一方、レゾルシンの２位選択的にカルボキシル基を導入する方法として、微生物菌体の触媒作用を利用した２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製法が知られている（特開２００１‐４６０９３号公報）。より具体的には、微生物菌体としてはプロピオニバクテリウム(Propionibacterium)属に属する微生物を使用し、炭酸緩衝液中においてレゾルシンと接触させることにより２，６−ジヒドロキシ安息香酸を製造する方法である。
【０００４】
また、第１回「生物機能を活用した生産プロセスの基盤技術開発」（中間評価）分科会における事業原簿（作成者  新エネルギー・産業技術総合開発機構バイオテクノロジー開発室）によるとエンテロバクター（Enterobacter）属、アグロバクテリウム（Agrobacterium）属細菌が、レゾルシンを２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する触媒作用を持つと記載されているが、それ以上の詳細な記載は無い。
【０００５】
以上のように、本発明者が知る限りは、レゾルシンを２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する触媒作用を有する微生物に関する報告は、限られている。
【０００６】
微生物菌体が有する触媒作用を利用して産業上の有用物質を工業的に製造するためには、該有用物質の全製造コストに占める該微生物菌体の製造コストを下げることが重要であり、より具体的には単位微生物重量・単位時間あたりの該有用物質の生成速度（以下、菌体活性と呼ぶ）を高くする必要がある。そのための手法の一つとして、該微生物を培養して菌体を調製する際に、一般的には誘導剤と呼ばれる適当な化学物質を添加し、目的とする触媒作用を強化する方法がよく知られている。
【０００７】
たとえば、特開２００１−４６０９３号公報では、菌体を増殖させるための培地に２，６−ジヒドロキシ安息香酸を添加し培養することがレゾルシンを２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性を亢進させるのに有効である旨記載されている。しかしながら、このような場合においても後述の比較例で示すように、レゾルシンから２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する菌体活性は必ずしも十分ではない。また、同報では、リゾビウム（Rhizobium）属に属する微生物に対する２，６−ジヒドロキシ安息香酸の効果については、何ら開示されていない。
【０００８】
一方、Tschechら（Arch. Microbiol., 155:68-74(1990)）は、クロストリヂウム(Clostridium)属の混合培養において培地に２，６−ジヒドロキシ安息香酸を添加し培養することにより、２，６−ジヒドロキシ安息香酸をレゾルシンに変換する活性が誘導されることを報告しているが、レゾルシンから２，６−ジヒドロキシ安息香酸への変換については、何ら開示していない。
すなわち、微生物菌体が保有するレゾルシンを２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する触媒作用を強化するための方策は限定的であり、かつ、その活性も十分とは言えない。
【０００９】
【特許文献１】特開２００１‐４６０９３号公報
【非特許文献１】第1回「生物機能を活用した生産プロセスの基盤技術開発」（中間評価）分科会における事業原簿（作成者  新エネルギー・産業技術総合開発機構バイオテクノロジー開発室）：ＨＰアドレスhttp://www.nedo.go.jp/iinkai/hyouka/nittei/150512.html
【非特許文献２】Arch. Microbiol., 155:68-74(1990)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、レゾルシンから２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性がより高い微生物を検索し、それらの活性を有する微生物を用いて工業的に実施するのに有利な２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記の課題を解決すべく２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法について鋭意研究を重ねた結果、新規に、リゾビウム（Rhizobium）属する微生物が、レゾルシンから２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
特に、本発明者が見出したリゾビウム  スピーシズ（Rhizobium sp）MTP-10005株は、レゾルシンを２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性が著しく高いことが判明した。
【００１３】
さらに、驚くべきことに、リゾビウム（Rhizobium）属する微生物を培養する際に、培地中に２，６−ジヒドロキシ安息香酸を存在させるだけで、従来知られている微生物より高い菌体活性を有する微生物菌体を調製できることも同時に見出し、本発明を完成させた。
【００１４】
すなわち、本発明は、レゾルシンから２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性が従来知られている微生物よりも高い微生物を提供し、もって、工業的に有利な２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造法を提供するものであり、より具体的には、以下の通りである。
［１］  リゾビウム（Rhizobium）属に属する微生物を培地を用いて培養し、得られた微生物の培養物、処理物または固定化物の存在下に、炭酸イオン及び／または二酸化炭素を水性溶媒中でレゾルシンに作用させて２，６−ジヒドロキシ安息香酸を生成させ、反応により生成した２，６−ジヒドロキシ安息香酸を該水性溶媒中より採取することを特徴とする２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
［２］  リゾビウム属に属する微生物がアグロバクテリウム（Agrobacterium）属を含まないところのリゾビウム（Rhizobium）属に属する微生物であることを特徴とする［１］の記載の２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
［３］  リゾビウム属に属する微生物がその１６ＳｒＤＮＡのうち５‘末端側の塩基配列が配列表の配列番号：1記載の配列の微生物であることを特徴とする［１］又は［２］記載の２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
［４］  リゾビウム属に属する微生物がリゾビウム  スピーシズ（Rhizobium  sp）ＭＴＰ−１０００５（ＦＥＲＭ Ｐ−１９４２６）に属する微生物であることを特徴とする［１］〜［３］のいずれか一項に記載の２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
［５］  リゾビウム（Rhizobium）属に属する微生物を培養する際に、培地へ２，６−ジヒドロキシ安息香酸を添加することを特徴とする［１］〜［４］のいずれか一項に記載の
２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によりレゾルシンから２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性が従来より高い微生物を用いことにより、その反応選択性も利用し、極めて単純な工程で工業的に実施するのに有利な２，６−ジヒドロキシ安息香酸の製造法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明における微生物は、リゾビウム（Rhizobium）属に属する微生物であればいずれのものでも良いが、より具体的には、リゾビウム  スピーシズ（Rhizobium  sp）MTP-10005（FERM P-19426）を好適な事例として挙げる事ができる。本菌は、吹田市の土壌中より分離した菌株であり、本菌株の菌学的性質は以下の［表１］とおりである。
【００１７】
【表１】
2005065554.tif 000002
【００１８】
以上の菌学的緒性質を基にして、「バージェイーズ・マニュアル・オブ・システマチック・バクテリオロジー第１巻（１９８４）ウイリアムス&ウイルキンス[Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Vol.1(1984) Williams&Wilkins]」、「ジー  アイ  バロー
&アール  ケイ  エイ  フェルタム版：コーエン  アンド  スチールス  マニュアル  フォー  ザ  アイデンティフィケーション  オブ  メディカル  バクテリア  第3版  ケンブリッジ  ユニバーシティ  プレス  （１９９３） [G.I Barrow and R.K.A.Feltham ed.,Cowan&Steel's Mannual for the Identification of Medical Bacteria 3rd .ed,Cambridge univ.press,(1993)]」の分類方法によりMTP-10005株の同定を行った結果、本株はリゾビウム  ラヂオバクター（Rhizobium radiobacter）に類似した性状を有していることが示された。しかしながら、グルコン酸カリウム資化性がなく、リゾビウム  ラヂオバクター（Rhizobium radiobacter）の典型性状と完全に一致しなかった。
【００１９】
さらに、本菌株をLB Broth(Becton Dickinson社製)寒天培地に塗抹後、３０℃、2日間培養して得られた菌体よりPrepMan Method(Applied Biosystem社製)を用いてゲノムＤＮＡを抽出した。抽出したゲノムDNAを鋳型としてPCRにより16S rDNAのうち5'末端側約500bpの領域を増幅した。増幅された塩基配列をシーケンシングし、16S rDNAの塩基配列が配列表の配列番号：1記載の配列を得た。
【００２０】
以上のように決定した16S rDNAの部分塩基配列を相同性検索ソフトを利用して解析した結果、アグロバクテリウム  ルビ（Agrobacterium rubi）、つまり現在名リゾビウム  ルビ（Rhizobium rubi）と相同率９７．２％に最も高い相同性を示す結果を得たが、種の同一性を論じられる９９．０%以上の高い相同性を見出す基準株は見出せなかった。尚、リゾビウム  ラジオバクター（Rhizobium radiobacter）との相同性は９７．０％であった。
【００２１】
尚、PCR産物の精製、サイクルシークエンスにはMicroSeq500 16S rDNA  Bacterial Sequencing Kit(Applied Biosystem社製)を使用した。相同性の解析ではMicroseq Microbial IdentificationSystem SoftwareV.1.4.1(Applied Biosystem社製)を使用し、相同性検索を行う際のデータベースとしてMicroseq Microbial 500 Library v.0023を利用した。
【００２２】
尚、Youngらによるとアグロバクテリウム（Agrobacterium）属についてはリゾビウム（Rhizobium）属に含めることが提案されている（International Journal of Systematic
and Evolutionary Microbiology(2001),51,89-103）。上記の菌学的性質および１６ＳｒＤＮＡの部分塩基配列解析より本菌株がリゾビウム属、アグロバクテリウム（Agrobacterium）属のいずれの種にも属さない。以上の事実より、本菌株をリゾビウム  スピーシズ（Rhizobium  sp）ＭＴＰ−１０００５と命名した。本菌株は受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１９４２６として茨城県つくば市東1丁目1番1号中央第６にある独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに平成５年７月８日から寄託されている。
【００２３】
本発明において用いられる微生物の代表例は、以上のとおりであるが、本発明においては、同菌株に対する突然変異処理等により、２，６−ジヒドロキシ安息香酸の触媒活性を強化させた菌株についても、その発明の範囲に含まれる。このような突然変異株としては、例えば、レゾルシンや２，６−ジヒドロキシ安息香酸に対する耐性の向上した変異株、レゾルシン、２，６−ジヒドロキシ安息香酸を分解しなくなった変異株、２，６−ジヒドロキシ安息香酸に関与する酵素の生産性の高い変異株などが挙げられる。
【００２４】
本発明でいう微生物の培養物とは、当該分野で一般的な微生物の培養方法に準拠した方法を採用することにより得ることができるが、より具体的には、以下のような条件である。
【００２５】
培養用の培地は、当該微生物を通常この分野において用いる培地、例えば、肉エキス、酵母エキス、麦芽エキス、ペプトン、ＮＺアミン等の有機栄養源、グルコース、マルトース、しょ糖、でんぷん、有機酸等の炭素源、硫酸アンモニウム、尿素、塩化アンモニウム等の窒素源、リン酸塩、マグネシウム、カリウム、鉄等の無機栄養源、ビタミン類を適宜組み合わせて使用すればよい。
【００２６】
培養温度は、２０〜４０℃、より好ましくは２５〜３５℃で、培養ｐＨは、ｐＨ５．０〜１０．０でより好ましくはｐＨ６．０〜９．０で行いうる。また、嫌気下、好気下でいずれの条件下でも行うことができるが、通常は増殖速度が速い好気下での振盪培養が好ましい。培養日数は、特に制限されるものではないが、好ましくは、１〜７日の範囲で目的の活性が最大になるまで培養すればよい。
【００２７】
また、レゾルシンを２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性を高めるためには、菌体を増殖させるための培地に２，６−ジヒドロキシ安息香酸の添加が有効である。添加量は、培地中に１〜１００ｍＭ 、好ましくは１０〜５０ｍＭとなるように添加することが好ましい。
【００２８】
尚、以上の培養条件は、用いる微生物や培地組成などに応じて変更することは可能であるが、レゾルシンを２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性が最大になるように設定することが重要であることは当然である。
【００２９】
本発明でいう微生物の培養物とは、上記のように微生物を培養して得た培養液自体、もしくは、該培養液から遠心分離・濾過等の操作により分離される該微生物菌体が含まれる。
【００３０】
本発明でいう微生物の処理物とは、上記の微生物菌体の洗浄物、破砕物、または、抽出物等を示す。洗浄菌体は、菌体を生理食塩水などで洗浄して得られ、乾燥菌体は菌体や洗浄菌体を凍結乾燥、アセトン乾燥処理することなどにより得られる。菌体破砕物は、種々の物理化学的方法、例えば超音波破砕、フレンチプレス、浸透圧、凍結融解、溶菌酵素、界面活性剤及び有機溶媒処理等により得られる。抽出物は、例えば菌体破砕物や培養上清等から、硫安分画、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、疎水クロマトグラフィー、アフィニイティークロマトグラフィー等の常法（これらの組み合わせを含む）により、レゾルシンを２，６−ジヒドロキシ安息香酸に変換する活性画分を特定・分離して得ることができる。
【００３１】
本発明でいう微生物の固定化物とは、上述の微生物の培養物またはその処理物を、ポリ
アクリルアミド法、アルギン酸法、カラギーナン法、または適当な坦体に共有結合法、吸着法等公知の方法で固定化することにより得ることができる。
【００３２】
これら微生物の培養物、処理物、および、固定化物は、その製造直後に反応して用いることはもちろん、たとえば低温条件下等にて製造後一旦保管し、必要に応じて必要量を使用することもできる。
【００３３】
このように調製された微生物の培養物・処理物・固定化物は、２，６−ジヒドロキシ安息香酸を生成させるために水性溶媒中でレゾルシンに作用させるが、その際の培養物、処理物や固定化物の使用量は、通常、目的とする効果を発揮する量（有効量）であれば良く、この有効量は当業者であれば簡単な予備実験により容易に求められる。例えば、洗浄湿潤菌体を用いるのであれば、反応液１リットル当り１０〜４０ｇが一つの目安である。
【００３４】
本発明における水性溶媒は、２，６−ジヒドロキシ安息香酸の生成に悪影響を及ぼさない限りは、水もしくは水と水に混和する溶媒との混合物からなる均一系であっても、或いは、水と水に混和しない溶媒もしくは水と水に混和する溶媒と水に混和しない溶媒の混合物からなる二相系であってもよい。
【００３５】
本発明における炭酸イオン及び／または二酸化炭素の存在下とは、レゾルシンに付加されるカルボキシル基の供給源を水生溶媒中に共存させるためであり、より具体的には、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウムに代表される炭酸塩を上述の水生溶媒中に添加し、もしくは、気体・液体・固体の二酸化炭素を該水生溶媒中に吹き込み、または、添加することで調製することができる。尚、炭酸イオン及び／または二酸化炭素の水性媒体中での濃度は特に制限はないが、５０〜５０００ｍＭの濃度が例示できる。また、ＣＯ2超臨界条件下での反応も特に制限されるものではない。
【００３６】
本発明における２，６−ジヒドロキシ安息香酸を生成（以後、単に反応と呼ぶ）させる条件は、反応ｐＨとしては、ｐＨ３〜１２、好ましくはｐＨ６〜９である。また、反応の進行により反応液のｐＨが変化する場合はｐＨを至適ｐＨに調節するのが好ましい。反応温度は、氷点〜６０℃、好ましくは２０〜４０℃の範囲である。反応時間については、特に制限されるものではないが、より具体的には、１分間から１２０時間程度である。反応時の圧力も特に制限されるものではないが、通常、常圧〜１００ｋｇ／ｃｍ2の範囲が好適である。反応時のレゾルシン濃度は特に制限されないが、１〜２０００ｍＭが望ましい。レゾルシンは、固体のまま、あるいは、水や反応に影響を与えない有機溶媒に溶解し、あるいは、適当な界面活性剤を含む溶媒に分散させたりして添加すればよい。また、反応の開始当初一括して添加してもよいし、反応の進行に応じて、所要量を逐次分割添加しても良い。さらに、以上の反応方法は、攪拌下あるいは静置下いずれでもよいし、また、バッチ式または適当なバイオリアクターを用いた連続式のいずれでも可能である。
【００３７】
本発明における水性溶媒中より２，６−ジヒドロキシ安息香酸を採取する方法とは、生成した２，６−ジヒドロキシ安息香酸を反応液から分離・精製する方法であれば特に制限はないが、たとえば、反応液を濾過や遠心分離等により前処理した後、得られた上精液に塩酸や硫酸等の酸溶液を加えて酸性化することにより、２，６−ジヒドロキシ安息香酸の粗結晶を回収する方法を好適な例として挙げることができる。また、溶剤抽出等の方法により回収することも可能であり、クロマトグラフィー等公知の精製方法を適宜併用することもできる。
【００３８】
尚、本発明の製造法においては２，６−ジヒドロキシ安息香酸の検出及び定量は、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって行われる。すなわち、オクタデシル基を有したシリカゲルパックドカラムなどを固定相に用い、水とアセトニトリルの混合物に０．１％
トリフロロ酢酸を添加したものを移動相とする一般的な逆相クロマトグラフィーによって分析が可能である。検出は紫外部分光検出器によって波長２８０ｎｍ付近で行う。
【００３９】
次に本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００４０】
ＬＢ培地（イーストエキス：５ｇ/ｌ、ポリペプトン：１０ｇ/ｌ、ＮａＣｌ：１０ｇ/ｌ  ｐＨ７．０）を所定濃度に調整したものを、口径２１ｍｍの試験管に５ｍｌ入れ、１２１℃、１５分間オートクレーブ殺菌を行った。これにＬＢ培地に１．５％の寒天を加えたスラント培地で継代培養している菌体（リゾビウムスピーシス  ＭＴＰ−１０００５）を１白金耳接種した。２５℃の恒温室にて１日間振盪培養を行い、種菌体を増殖させた。その０．５ｍｌを、表２に示す組成（ｐＨ８．５に、５Ｎ  ＫＯＨにて調整）オートクレーブ殺菌済みの培地５０ｍｌが入った５００ｍｌバッフル付き三角フラスコに接種した。２５℃で２日間振盪培養し菌体を遠心分離（３０００ｒｐｍ で１０分間）によって回収した（乾物重換算で約５０ｍｇ）。
【００４１】
【表２】
2005065554.tif 000003
【００４２】
回収した菌体は生理食塩水（ＮａＣｌ  ９ｇ／ｌ）で洗浄後、培養液の１／２０量の０．０２％  ２−メルカプトエタノール入りの１０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁した。この懸濁液を超音波処理により菌体破砕し、遠心分離後（１５０００ｒｐｍ 、１０分間）上澄みを回収し酵素液とした。次に以下の表３の反応組成の反応液１ｍｌを１０ｍｌ容のネジ口式遠沈管にて３０℃、５分間振とうしながら反応した。反応停止は5Ｎ塩酸２００μｌを加えることにより行った。
【００４３】
【表３】
2005065554.tif 000004
【００４４】
遠心分離（１５０００ｒｐｍ 、１０分間）により除蛋白後、上清を下記の条件で高速液体クロマトグラフィーにより分析した。ＨＰＬＣにより分析した。
その結果、原料に用いたレゾルシンのピ−ク以外は標品の２，６−ジヒドロキシ安息香酸と一致するピークのみが検出された。このピークをLＣ/ＭＳで分析した結果、確かに２，６−ジヒドロキシ安息香酸であることが確認された。
【００４５】
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−２（ＧＬＳｃｉｅｎｃｅｓＩｎｃ．製）
移動相：水：アセトニトリル（８５：１５）
送液：０．６ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出方法：ＵＶ吸収波長２８０ｎｍ
本方法で２，６−ジヒドロキシ安息香酸の生成量を定量した結果、３μｇが生成していると計算された。
【実施例２】
【００４６】
実施例１記載の方法において、培地に２，６−ジヒドロキシ安息香酸を２０ｍＭになるように添加すること以外は同様の操作を行い、反応における２，６−ジヒドロキシ安息香酸の生成量を測定した。その結果、得られた菌体量は実施例１と同等（乾物重換算で約５０ｍｇ）であったが、反応により生成した２，６−ジヒドロキシ安息香酸量は６０μｇが生成していると計算された。
【００４７】
[比較例１]
特開２００１‐４６０９３公報に開示されているPropionibacterium freudenreichii  
ＭＴ−１０８８３（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７４１５）を実施例１と同様に培養し反応を行い、２，６−ジヒドロキシ安息香酸の生成量を定量した結果、得られた菌体量は実施例１と同等（乾物重換算で約５０ｍｇ）であったが、反応により生成した２，６−ジヒドロキシ安息香酸量は１μｇが生成していると計算された。
【００４８】
[比較例２]
特開２００１‐４６０９３公報に開示されているPropionibacterium freudenreichii ＭＴ−１０８８３（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７４１５）を実施例２と同様に培養し反応を行い、２，６−ジヒドロキシ安息香酸の生成量を定量した結果、得られた菌体量は実施例１と同等（乾物重換算で約５０ｍｇ）であったが、反応により生成した２，６−ジヒドロキシ安息香酸量は８μｇが生成していると計算された。
【配列表】
2005065554000001.app