(57)【要約】【課題】躁うつ病などの治療に有効な気分安定薬を評価したりスクリーニングするための新規な方法を提供することを解決すべき課題とした。【解決手段】気分安定薬の候補薬物がＡＴＦ６の発現又は活性を増大させるかどうかを分析することを含む、気分安定薬の評価方法。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
気分安定薬の候補薬物がＡＴＦ６の発現又は活性を増大させるかどうかを分析することを含む、気分安定薬の評価方法。
【請求項２】
ＡＴＦ６の発現又は活性を増大させるかどうかを指標として薬剤をスクリーニングすることを含む、気分安定薬のスクリーニング方法。
【請求項３】
躁うつ病患者のＸＢＰ１遺伝子の−１１６Ｃ／Ｇの遺伝子型を判別することを含む、気分安定薬に対する該患者の感受性を判定する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、気分安定薬の評価方法およびスクリーニング方法、並びに気分安定薬に対する感受性を判定する方法に関する。より詳細には、本発明は、ＡＴＦ６の発現又は活性を指標とした、気分安定薬の評価方法およびスクリーニング方法、並びに気分安定薬に対する感受性を判定する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
躁うつ病（双極性障害）は、成人期に発症し、うつ状態、躁状態という、２つの病相の再発を繰り返す精神疾患である。躁うつ病患者の２０％が自殺で死亡する上、躁状態における社会的問題行動によって、社会的生命を失う場合も少なくないため、生涯にわたる治療が必要とされることが多い。その病態（生物学的に疾患が生じるメカニズム）には、人類遺伝学の研究（家族研究、双生児研究、連鎖解析など）から病気と関係する遺伝子の存在が強く想定されるが、長い間不明であった。一方その治療においては、気分安定薬として、炭酸リチウム、バルプロ酸、カルバマゼピンが使用される。しかし、これらの薬はどのような機序で効果を発揮するのかは不明であり、このことが新薬開発の妨げとなっている。また薬の効果も人によって異なり、無効例も多い。病態が不明のため新薬の開発も出来ず、薬が何に効いているが不明であったため病態も明らかにならない、という状態が続いてきた。
【０００３】
最近本発明者らは、一卵性双生児間の遺伝子の違いを調べるという方法で、躁うつ病にはＸＢＰ１ループと呼ばれる分子機構が関与していることを見出した。ＸＢＰ１遺伝子の産物である蛋白質には、自分自身の機能を強めるという、正のフィードバック機構が存在し、その要になるＤＮＡ配列に個人差があり、−１１６Ｇという、ＸＢＰ１ループ機能が低下する遺伝子多型を持っている人は、持たない人に比べ、４．６倍躁うつ病にかかりやすいことがわかった。この日本人における結果は、白人でも確認された。この正のフィードバック機構（ＸＢＰ１ループ）は、傷ついた蛋白質がたまった時、これを修復する分子を増やすメカニズム（ＥＲストレス経路；小胞体に、傷ついた蛋白が多量に蓄積した時に、ＡＴＦ６、ＩＲＥ１という２つのセンサー分子およびＸＢＰ１を介して、これらの傷ついた蛋白を修復する分子（ＥＲシャペロン。ＧＲＰ７８が代表的な分子）を増やしたり、蛋白合成を阻害したりする、一連の反応を示す）に関与している（図４）。これらが躁うつ病に関係するメカニズムは不明であるが、ＥＲシャペロンは、抗うつ薬の作用点であるセロトニントランスポーターの機能発現に必要であること、気分安定薬であるリチウムが作用する細胞内情報伝達系（フォスファチジルイノシトール−カルシウム系）に影響を与えることなどから、何らかの形で躁うつ病の症状にかかわっていると推測される。
【０００４】
気分安定薬の一つであるバルプロ酸が、ＸＢＰ１の標的分子の一つであるＧＲＰ７８を増加させることは既に知られていたが、治療濃度よりはるかに高い濃度での結果であること、躁うつ病の病態にＧＲＰ７８が関与していることが知られていなかったことから、それほど注目されてはいなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、躁うつ病などの治療に有効な気分安定薬を評価したりスクリーニングするための新規な方法を提供することを解決すべき課題とした。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討し、２種の細胞を治療濃度の３種の気分安定薬（リチウム、バルプロ酸、カルバマゼピン）の存在下で培養し、ＥＲストレス反応の変化を調べた。その結果、バルプロ酸のみが、ＥＲストレス反応を強め、躁うつ病患者の細胞で見られるＥＲストレス反応の減弱を改善することを見出した。そのメカニズムを探るため、ＸＢＰ１上流の遺伝子に与える気分安定薬の影響を調べたところ、治療濃度のバルプロ酸がＸＢＰ１経路の上流に位置するＡＴＦ６の遺伝子発現を増加させること、即ち、バルプロ酸の投与によりＡＴＦ６蛋白が増加していることを見出した。
【０００７】
これらの結果から、バルプロ酸は、ＡＴＦ６の発現を増加させることで、躁うつ病で障害されているＸＢＰ１ループの機能を改善すると考えられた。以上の研究結果から、バルプロ酸は、ＡＴＦ６の発現を増加させることで、躁うつ病で障害されているＸＢＰ１ループの機能を回復させると考えられる。しかしながら、１）バルプロ酸処置後も、−１１６Ｇ／Ｇ型の細胞の機能は、Ｃ／Ｃ型のレベルまでは回復していないこと、２）バルプロ酸が無効な躁うつ病患者も少なからず存在すること、３）バルプロ酸には、副作用（催奇形性、肝障害など）が存在することより、より有効で安全な薬剤の開発が望まれている。そこで、ＡＴＦ６を増加させる薬剤を探索すれば、気分安定薬として有効な可能性が高い。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。
【０００８】
即ち、本発明によれば、気分安定薬の候補薬物がＡＴＦ６の発現又は活性を増大させるかどうかを分析することを含む、気分安定薬の評価方法が提供される。
本発明の別の側面によれば、ＡＴＦ６の発現又は活性を増大させるかどうかを指標として薬剤をスクリーニングすることを含む、気分安定薬のスクリーニング方法が提供される。
本発明のさらに別の側面によれば、躁うつ病患者のＸＢＰ１遺伝子の−１１６Ｃ／Ｇの遺伝子型を判別することを含む、気分安定薬に対する該患者の感受性を判定する方法が提供される。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の実施の形態について以下に詳細に説明する。
本発明の気分安定薬の評価方法は、気分安定薬の候補薬物がＡＴＦ６の発現又は活性を増大させるかどうかを分析することを特徴とする方法である。上記の通り、本発明では、バルプロ酸はＡＴＦ６の発現を増加させることにより躁うつ病で障害されているＸＢＰ１ループの機能を改善することが示された。従って、バルプロ酸と同様にＡＴＦ６を増加させる作用を有する薬剤を探索することにより、新規な気分安定薬を見出すことが可能になる。さらに、本発明では、上記した気分安定薬の評価方法に基づいて、ＡＴＦ６の発現又は活性を増大させるかどうかを指標として薬剤をスクリーニングすることによって気分安定薬のスクリーニングすることもできる。このようなスクリーニング方法も本発明の範囲内である。
【００１０】
ＡＴＦ６（Ｙｏｓｈｉｄａ  Ｈ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｉｓ−ａｃｔｉｎｇ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｓｔｒｅｓｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．  Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｂａｓｉｃ  ｌｅｕｃｉｎｅ  ｚｉｐｐｅｒ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  １９９８  ２７３（５０）：  ３３７４１−９）は、ＥＲ  膜に埋め込まれたタンパク質であり、そのＮ  末側（細胞質側）  に塩基性ロイシンジッパーモチーフを有している。ＡＴＦ６  は  ＥＲ  ストレスに応答  してプロテアーゼによる切断を受け塩基性ロイシンジッパーを含む  Ｎ  末側が  ＥＲ  膜  より遊離し、その後、遊離した  Ｎ  末断片は核へ移行し種々のシャペロンの転写  誘導に寄与します。プロテアーゼによる切断により  ＡＴＦ６  は転写因子としての機能を発揮するので、この過程が  ＡＴＦ６  の活性化の制御段階であると考えられている。また、ＡＴＦ６  の切断はゴルジで起き、ＡＴＦ６  のゴルジへの輸送は  ＥＲ  ストレス依存的に生じることが判明している。
【００１１】
本発明による気分安定薬の評価方法およびスクリーニング方法は、ＡＴＦ６の発現又は活性の増大を評価できる系で行うことができ、具体的には、ＡＴＦ６を発現できる細胞系を用いて行うことができる。ＡＴＦ６を発現できる細胞としては、細胞自体が本来からＡＴＦ６遺伝子を有していて、ＡＴＦ６を発現できる細胞でもよいし、ＡＴＦ６をコードする組み換え遺伝子で宿主細胞を形質転換して得られる形質転換体でもよい。前者の例としては、例えば、末梢血由来のリンパ球やＳＨＳＹ５Ｙ細胞株などを用いることができる。
【００１２】
ＡＴＦ６をコードする組み換え遺伝子で宿主細胞を形質転換する場合に用いる宿主細胞の例としては、哺乳動物細胞が好ましく、例えばヒト、サル、マウス、ラット、ハムスター等の細胞を使用することができる。具体的には、ＣＯＰ、Ｌ、Ｃ１２７、Ｓｐ２／０、ＮＳ−１、ＮＩＨ３Ｔ３、ＳＴ２等のマウス又はラット由来の細胞、ＢＨＫ、ＣＨＯ等のハムスター由来細胞、ＣＯＳ１、ＣＯＳ３、ＣＯＳ７、ＣＶ１、Ｖｅｒｏ等のサル由来細胞、およびＨｅＬａ、２９３Ｔ等のヒト由来細胞などを使用することができる。組み換え遺伝子による宿主細胞の形質転換は、当業者に慣用の、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、リポソーム法又はエレクトロポレーション法などを用いて行うことができる。
【００１３】
本発明では、上記した細胞系に被験物質（即ち、気分安定薬の候補薬物）を添加する。被験物質としては任意の物質を使用することができる。被験物質の種類は特に限定されず、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。例えば、気分安定薬の候補薬物として、個々の低分子合成化合物を用いることができる。
あるいは、気分安定薬のスクリーニングを行う場合には、天然物抽出物中に存在する化合物でもよく、あるいは化合物ライブラリー、ファージディスプレーライブラリーもしくはコンビナトリアルライブラリーなどを使用することができる。被験物質は、好ましくは低分子化合物であり、低分子化合物の化合物ライブラリーを用いることも好ましい。化合物ライブラリーの構築は当業者に公知であり、また市販の化合物ライブラリーを使用することもできる。
【００１４】
本発明では、ＡＴＦ６を発現することができる細胞系に被験物質を添加した後、細胞を一定時間培養する。動物細胞を培養する培地としては、例えば、ＲＰＭＩ１６４０培地、ＥａｇｌｅのＭＥＭ培地、ダルベッコ改変ＭＥＭ培地、１９９培地、またはこれらの培地に牛胎児血清等を添加した培地を用いることができる。培養は通常ｐＨ６〜８で３０〜４０℃で５％ＣＯ２下で行うことができる。培養期間は特に限定されず、数時間から数日間培養することができる。
【００１５】
本発明においては、気分安定薬の候補薬物がＡＴＦ６の発現又は活性を増大させるかどうかを分析する。本発明において、「ＡＴＦ６の発現又は活性を増大させる」とは、被験物質や気分安定薬の候補薬物が存在しない場合と比較して、存在する場合の方が、ＡＴＦ６の発現量がｍＲＮＡレベル又はタンパク質レベルで増大すること、或いはＡＴＦ６の発現量は不変であってもＡＴＦ６活性が増大することを意味する。
【００１６】
ＡＴＦ６のｍＲＮＡレベルでの発現量は、ＲＴ−ＰＣＲ法、ノーザンブロット法、又はＲＮａｓｅ保護アッセイ法等の方法により測定することができる。また、ＡＴＦ６のタンパク質レベルでの発現量は、例えば、免疫学的方法により測定することができ、例えば、蛍光抗体法、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射性物質標識免疫抗体法（ＲＩＡ）、免疫細胞染色法、ウェスタンブロッティング法、ドットブロッティング法などが挙げられる。
【００１７】
ＡＴＦ６の発現又は活性の増大とは、例えば、ＡＴＦ６遺伝子の転写効率の増加、ＡＴＦ６ｍＲＮＡの安定性の増加、ＡＴＦ６  ｍＲＮＡの翻訳効率の増加、ＡＴＦ６タンパク質の安定性の増加、ＡＴＦ６タンパク質のプロセシングの増加、ＡＴＦ６タンパク質の核移行の増加、ＡＴＦ６の活性の増加などが考えられる。従って、ＡＴＦ６の発現又は活性を増大する薬剤をスクリーニング  する際には、これらの作用点の１つ以上を指標として行うことができる。本発明では、特に、ＡＴＦ６の発現の増大を指標することが好ましく、具体的には、ＡＴＦ６遺伝子の転写効率の増加を指標とすることが好ましい。
【００１８】
ＡＴＦ６の発現又は活性の増大の程度は特に限定されないが、定量的に測定できる場合には、例えば１．１倍以上、好ましくは１．２倍以上、より好ましくは１．５倍以上、さらに好ましくは２倍以上増大させることを指標とすることができる。
【００１９】
組み換えＡＴＦ６遺伝子を用いて、ＡＴＦ６の発現量を評価する場合には、ＡＴＦ６遺伝子に検出が容易なレポーター遺伝子を連結することにより得られる組み換え遺伝子を用いて融合タンパク質を発現させて、それを検出してもよい。これにより、高感度で簡便なスクリーニング  系の構築が可能となる。レポーター遺伝子としては、例えば、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、ペルオキシダーゼ、ＧＦＰ、ビーナス（Ｖｅｎｕｓ）、カエデ（Ｋａｅｄｅ）等をコードする遺伝子が挙げられるが、特に好ましくはルシシフェラーゼ遺伝子を使用することができる。
【００２０】
上記した方法によりＡＴＦ６の発現又は活性を増大させることが認められた物質は、ＡＴＦ６の発現を増加させることにより躁うつ病で障害されているＸＢＰ１ループの機能を改善することができるため、気分安定薬として有用である。
【００２１】
本発明の気分安定薬の評価方法およびスクリーニング方法の一例としては、例えば、細胞の培養液中に被験物質（気分安定薬の候補物質）  を添加して、インキュベーションした後、細胞を回収し、ＡＴＦ６のｍＲＮＡ量あるいはタンパク質量を測定することによって行うことができる。被験物質を添加しない場合と比較して、ＡＴＦ６のｍＲＮＡ量あるいはタンパク質量が増大させた被験物質を陽性とすることができる。
【００２２】
本発明はさらに、躁うつ病患者のＸＢＰ１遺伝子の−１１６Ｃ／Ｇの遺伝子型を判別することを含む、気分安定薬に対する該患者の感受性を判定する方法に関する。ここで用いる気分安定薬はＡＴＦ６の発現を増加させる薬剤であり、その一例としては、バルプロ酸である。ＡＴＦ６の発現を増加させる薬剤の別の例としては、上記した本発明による気分安定薬の評価方法およびスクリーニング方法においてＡＴＦ６の発現又は活性を増大させるものとして同定された気分安定薬を挙げることができる。
【００２３】
本発明においては、以下の実施例で実証する通り、ＸＢＰ１遺伝子の−１１６のアレルの遺伝子型が、気分安定薬に対する感受性と相関していることが判明した。従って、躁うつ病患者のＸＢＰ１遺伝子の−１１６Ｃ／Ｇの遺伝子型を判別することによって気分安定薬に対する該患者の感受性を判定することができる。
以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例に制限されるものではない。
【００２４】
【実施例】
（方法）
（１）対象
ＤＮＡマイクロアレイ分析のために、２組の１卵性双生児不一致例（１人が躁うつ病、もう一人が健常者の躁うつ病双生児）と１組の健常双生児を用いた。躁うつ病双生児は４９歳の男性（躁うつ病双生児１）と４２歳の男性（躁うつ病双生児２）である。対照の健常双生児は３４歳の男性である。ＥＲストレス応答の実験は、５人のＩ型躁うつ病患者と５人の健常者に由来するリンパ芽球細胞株で行った。上記５人の患者は主としてリチウム又はバルプロ酸で治療した。また、これらの患者は抗精神病薬や抗うつ薬などの各種の向精神剤を摂取してきていた。ＸＢＰ１遺伝子の上流の−１１６Ｃ／Ｇ遺伝子型におけるＥＲストレス応答の差異を、健常者由来のリンパ芽球細胞（Ｃ／Ｃが３例、Ｃ／Ｇが７例、Ｇ／Ｇが５例）又はエプスタインバーウイルスで形質転換してしないリンパ球（Ｃ／Ｃが３例、Ｇ／Ｇが４例）で調べた。
リンパ球は、Ｔ細胞と、Ｂ細胞であると考えられる他の細胞から、ＣＤ３ミネラルビーズを添付のプロトコール（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，  Ａｕｂｕｒｎ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）に従って使用して、ポジティブ及びネガティブセレクションによって単離した。ＸＢＰ１遺伝子の相関分析用の被験者としては、１９７人の躁うつ病患者（１４０人のＩ型躁うつ病及び５７人のＩＩ型躁うつ病）と４５１人の対照者を用いた。躁うつ病の診断は、ＤＳＭ−ＩＶ規準（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，  １９９４）を使用して行った。
【００２５】
（２）細胞培養
末梢血由来のリンパ球を、標準法によりエプスタインバーウイルスで形質転換した。形質転換後、培地を使用するまでの３日間毎日交換した。ＤＮＡマイクロアレイ解析の際には、凍結しない細胞を使用した。ｍＲＮＡの定量の際には、細胞を一回凍結し、使用するまで液体窒素中で保管した。融解し再度培養した後、ＲＮＡを抽出した。ＳＨＳＹ５Ｙ細胞株は１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）を含むＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）培地中で培養した。ＥＲストレス誘導の際には、リンパ芽球細胞をサプシガルギン（３００ｎＭ）と一緒にインキュベートした。気分安定薬の効果を調べるために、リンパ芽球細胞をリチウム（０．７５ｍＭ）、バルプロ酸（１００μｇ／ｍｌ）又はカルバマゼピン（７．５μｇ／ｍｌ）と一緒に２４時間又は７日間インキュベートした。カルバマゼピンの対照実験としては、同量のＤＭＳＯを培地に添加した。
【００２６】
（３）ＤＮＡマイクロアレイ解析
ＤＮＡマイクロアレイ解析は、Ｈｕ９５Ａ  Ｃｈｉｐ（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ，  Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を添付のプロトコールに従って使用して行った。Ｈｕ９５Ａ  Ｃｈｉｐ上での実験前に、全ＲＮＡ又はｃＲＮＡの量を変性アガロースゲル及びＴｅｓｔ２ｃｈｉｐ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）によって確認した。実験は全て２回行った。各遺伝子の発現は、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）発現により標準化し、各組の双生児で比較した。「ｐｒｅｓｅｎｔ」評価された遺伝子のみをＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇソフトウエアを用いて解析した（Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  Ｒｅｄｗｏｏｄ，  ＣＡ，  Ｕ．Ｓ．Ａ）。
【００２７】
（４）定量的（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ）ＰＣＲ
リアルタイム定量的ＰＣＲを行い、ｍＲＮＡ量とＸＢＰ１遺伝子のコピー数の定量を行った（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）。ｍＲＮＡ量の定量においては、ＤＮＡマイクロアレイ法の場合と同様の方法で一本鎖ｃＤＮＡを調製した。ＲＴ−ＰＣＲ用のプライマーは以下の通りである。
【００２８】
ＧＡＰＤＨ；
５’−ＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣ（配列番号１）
５’−ＡＴＧＧＣＡＴＧＧＡＣＴＧＴＧＧＴＣＡＴＧ（配列番号２）
ＧＲＰ７８；
５’−ＧＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＴ（配列番号３）
５’−ＣＧＧＣＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡ（配列番号４）
ＸＢＰ１；
５’−ＴＴＧＴＣＡＣＣＣＣＴＣＣＡＧＡＡＣＡＴＣＴ（配列番号５）
５’−ＧＧＴＣＣＡＡＧＴＴＧＴＣＣＡＧＡＡＴＧＣ（配列番号６）
未スプライシング型のＸＢＰ１；
５’−ＣＴＣＡＧＡＣＴＡＣＧＴＧＣＡＣＣＴＣＴＧＣ（配列番号７）
５’−ＡＧＴＣＡＡＴＡＣＣＧＣＣＡＧＡＡＴＣＣＡＴ（配列番号８）
【００２９】
ＡＴＦ６
５’−ＴＧＧＡＧＴＣＴＡＴＴＣＣＴＧＧＡＴＴＣＡＡＴＧ（配列番号９）
５’−ＴＣＴＣＴＧＧＣＴＧＣＡＴＡＴＡＧＧＡＴＴＣＣ（配列番号１０）
Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ；
５’−ＴＣＡＴＴＴＧＴＴＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＣＴＴＴ（配列番号１１）
５’−ＴＧＡＧＧＣＡＴＡＣＧＣＴＧＡＧＧＡＧＴＴ（配列番号１２）
Ａｓｐａｒａｇｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；
５’−ＴＴＧＣＡＴＣＣＧＴＧＧＡＡＡＴＧＧＴＴ（配列番号１３）
５’−ＡＡＣＣＴＧＧＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＣＣＡＣＡＴ（配列番号１４）
【００３０】
ＲＴ−ＰＣＲ産物は４％アガロースゲル電気泳動にてシングルバンドであることを確認した。逆転写酵素なしで同一の反応を行ってゲノムＤＮＡの混入がないことを確認した。各サンプルについて、定量的ＲＴ−ＰＣＲによってΔＣｔ［Ｃｔ（各遺伝子）−Ｃｔ（ＧＡＰＤＨ）］を測定した。全実験においてＧＡＰＤＨに対する各ｍＲＮＡ量の比率における躁うつ病患者と対照者との間の差異を２サンプルｔ−検定により調べた。ＸＢＰ１遺伝子のコピー数の定量については、エクソン４の増幅を対照遺伝子（ＲＮａｓｅＰ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ））の増幅と比較した。ＰＣＲのプライマー及びプローブは以下の通りである。
５’−ＧＣＡＧＡＧＧＴＧＣＡＣＧＴＡＧＴＣＴＧＡＧＴ（配列番号１５）
５’−ＣＡＧＣＴＧＴＣＴＡＧＣＡＡＧＣＡＴＴＴＣＣＴ（配列番号１６）
５’−（ＶＩＣ）−ＣＣＡＣＴＧＧＣＣＴＣＡＣＴＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧ（配列番号１７）
【００３１】
（５）ＤＮＡメチル化
ゲノムＤＮＡのメチル化パターンを、硫酸水素塩改良法を用いて、全双生児（躁うつ病双生児１、躁うつ病双生児２、及び対照双生児）で調べた。硫酸水素塩配列決定はＸＢＰ１遺伝子のエクソン１の周辺のＣｐＧアイランドで行った（プライマー；５’−ＴＴＡＡＧＴＡＴＴＴＴＴＧＧＴＴＡＧＧＧＡＴＴＧＴ（配列番号１８）及び５’−ＣＣＣＴＣＴＣＴＡＡＡＣＴＡＡＣＡＣＣＡＴＡＡＡＣ（配列番号１９））。亜硫酸塩修飾の前と後に、メチル化特異的及び非メチル化特異的ＰＣＲをＣｐＧアイランドで行い（メチル化に特異的なプライマー；５’−ＣＧＧＡＴＴＴＴＴＡＡＡＧＴＴＴＴＧＴＴＴＴＴＧＴＣ（配列番号２０）及び５’−ＡＡＣＴＣＡＡＡＴＡＣＧＴＡＡＡＡＣＧＣＴＡＴＣＧ（配列番号２１）、非メチル化に特異的なプライマー；５’−ＴＴＴＴＴＡＡＡＧＴＴＴＴＧＴＴＴＴＴＧＴＴＧＧ（配列番号２２）及び５’−ＡＡＡＣＴＣＡＡＡＴＡＣＡＴＡＡＡＡＣＡＣＴＡＴＣＡＣＴ（配列番号２３））、アガロースゲル電気泳動で増幅を確認した。さらに、亜硫酸塩修飾の影響を受けないプライマー（５’−ＴＴＡＡＧＴＡＴＴＴＴＴＧＧＴＴＡＧＧＧＡＴＴＧＴ（配列番号２４）及び５’−ＣＣＣＴＣＴＣＴＡＡＡＣＴＡＡＣＡＣＣＡＴＡＡＡＣ（配列番号２５））で増幅したＣｐＧアイランドのＰＣＲ産物をＢｓｔＵ１（ＣＧ／ＣＧ）で消化し、アガロースゲル電気泳動でメチル化状態を確認した。
【００３２】
（６）プロモーターアッセイ
ＸＢＰ１遺伝子（登録番号；ＸＢＰ１のゲノム配列：ＮＴ＿０１１５２０．８）の４１８ｂｐの断片（−２８９から＋１２９）をＰＣＲにより増幅し、ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＭｌｕＩ／ＢｇｌＩＩ部位にクローニングした。−１１６Ｃ又は−１１６Ｇの何れかを有する２種のレポータープラスミドを用意した。スプライスしたＸＢＰ１ｃＤＮＡをｐＣＭＶ−Ｔａｇ３ベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）のＢａｍＨＩ／ＳａｌＩ部位にクローニングして、スプライスしたＸＢＰＩ発現ベクターを構築した。９６穴プレートで培養したＨｅＬａＳ３細胞に、Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、０．３μｇのレポータープラスミド、スプライスしたＸＢＰ１発現ベクター（０又は０．３μｇ）、０．０２μｇの参照プラスミド（ｐＲＬ−ＳＶ４０）を含む０．６２μｇのＤＮＡと、ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃベクター又はインサートを有さないｐＣＭＶ−Ｔａｇ３ベクターをトランスフェクションした。３６時間インキュベートした後、ルシフェラーゼ活性をＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて測定した。
【００３３】
（結果）
（１）ＤＮＡマイクロアレイ解析
２組の１卵性双生児不一致例（１人が躁うつ病、もう一人が健常者；双生児はほぼ完全にＤＮＡが一致しているはずで躁うつ病においても病気の一致率は著しく高い。しかしまれに片方のみしか発病していないことがあり、これらを比較すると遺伝子の個人間差異をキャンセルして、病気特異的な遺伝子を見つけ出すことができるのではないかと考えた）のリンパ芽球においてＤＮＡマイクロアレイを用い、ｍＲＮＡ量を網羅的に調べたところ、２組とも患者において小胞体ストレス関連遺伝子の発現が低下していることを見出した。
ＸＢＰ１遺伝子のプロモーター領域にＸＢＰ１自身が認識すると予想される配列を新たに見出したが、そのコア配列内（−１１６）にはＣ／Ｇの遺伝子多型がみられ、ＣならＸＢＰ１に認識されるがＧなら認識されないと予想された（認識されれば自分自身の遺伝子の発現をさらに促す、という正のフィードバック機構となる）。この多型について日本人の症例―対照研究を行ったところ統計学的に有意な差がみられ、患者では４．６倍のオッヅ比を示した。またこの事実は白人サンプルを用いた場合でも認められた。ＸＢＰ１を過剰発現させた細胞でプロモーターアッセイを行い、−１１６がＣかＧかで違いを比べたところ、−１１６Ｇでは活性が低かった。さらに小胞体ストレスをかけてＸＢＰ１の増加具合を調べたところ、Ｇアレルを持っている細胞では持っていない細胞よりも反応が悪いことが判明した。このＣからＧの変異による不良な反応はバルプロ酸（気分安定薬）により回復したが、それをもたらしたのはＸＢＰ１の上流にあるＡＴＦ６を増やすことを介してであった。ＸＢＰ１遺伝子の−１１６ＣからＧへの変異は、ＸＢＰ１自身のフィードバック機構を傷害し、躁うつ病のリスクを増やす。
【００３４】
一卵性双生児における躁うつ病の一致率は２卵性双生児に比べ著しく高いがまれに不一致例が存在する。一方、躁うつ病患者のリンパ芽球において細胞内シグナル伝達の変化が知られている。候補遺伝子を効率的に見出すために、躁うつ病不一致例のリンパ芽球におけるＤＮＡマイクロアレイ法を採用した。２組の不一致例、及び１組の健常双子について約１２０００遺伝子の発現量を調べ、健常双子間では１．６倍以内であるが、不一致例では１．６倍以上変動している遺伝子を選び出した。変動している遺伝子の数は健常双生児に比して不一致例において多かった（図１ａ）。１７遺伝子の変動が患者でみられたが（図１ｂ）、ＸＢＰ１とＧＲＰ７８に注目した。ＧＲＰ７８は気分安定薬の１つであるバルプロ酸との関連が示唆されている遺伝子であり、ＸＢＰ１はＧＲＰ７８を制御しているからである。このＸＢＰ１遺伝子は２２ｑ１２にあり、この周辺は連鎖解析により躁うつ病との関連が示唆されている個所だからである。両遺伝子はともに小胞体ストレス反応に必須の遺伝子であることが知られている。
【００３５】
小胞体は蛋白の折りたたみを行って正しい立体構造をとらせるための場所である。小胞体にうまく折りたたみができていない蛋白（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）がたまると、ＧＲＰ７８といった小胞体シャペロン（介添え役）がその再折りたたみをアシストして正しい立体構造をとらせようとする。そうするとＧＲＰ７８が消費されて減ってしまう。ＧＲＰ７８蛋白が減ると、小胞体の膜上にあるＡＴＦ６蛋白を覆っていたＧＲＰ７８が外れてしまい、剥き出しになった部分が酵素によって認識されてしまうため、切られてしまう。このちぎれた蛋白が核へ移行し、ＥＲ  ｓｔｒｅｓｓ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ  （ＥＲＳＥ）（ＣＣＡＡＴＮ９ＣＣＡＣＧ）という配列を認識して、その配列をもつ遺伝子（ＸＢＰ１やＧＲＰ７８など）の発現を促す。また、このＡＴＦ６がちぎれるのに並行して、ＧＲＰ７８が消費されるのに伴い別の小胞体の膜上にあるＩＲＥ１というたんぱく質が活性化される。活性化したＩＲＥ１は、その前にＡＴＦ６により誘導されてできてきたＸＢＰ１ｍＲＮＡを不活性型（ｕｎｓｐｌｉｃｅｄ  ｆｏｒｍ）から活性型（ｓｐｌｉｃｅｄ  ｆｏｒｍ）へとｓｐｌｉｃｅする。こうして出来たｓｐｌｉｃｅｄ  ｆｏｒｍ  ＸＢＰ１から作られたＸＢＰ１たんぱく質は強力な活性をもち、さらにＧＲＰ７８などのシャペロン群を増やすようになる。面白いことに活性型のＸＢＰ１蛋白は自分自身の上流（ＥＲＳＥ）にも働き自分自身をさらに増やし、正のフィードバックを生じさせ、より強力にこの反応を進めている。これらの一連の反応は小胞体ストレス反応と呼ばれ、試験管内では小胞体Ｃａ２＋−ＡＴＰａｓｅの阻害剤であるタプシガルギンで誘導されることが知られている。
【００３６】
一卵性双生児で不一致例が生じる理由はあまりわかっていない。Ｐｏｉｎｔ  ｍｕｔａｔｉｏｎ、ｔｒｉｐｌｅｔ  ｒｅｐｅａｔの伸長、染色体異常、Ｘ染色体の不活化の違い或いはメチル化の状態の違いなどが考えられる。不一致例の発現量の違いにおいては、ＡＴＦ６の発現量が双子間で差がなかったことから、ＸＢＰ１及びＧＲＰ７８の発現量の違いを説明するものとしてはＸＢＰ１遺伝子の欠失、ＡＴＦ６のｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅであるＥＲＳＥを含む上流配列におけるｍｕｔａｔｉｏｎやメチル化の違いで説明できる可能性が考えられる。
【００３７】
（２）ＡＴＦ６、ＸＢＰ１、ＧＲＰ７８の発現と多型との関係
躁うつ病に対するＥＲ  ｓｔｒｅｓｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅの関係をさらに検証するために、健常者及び患者のリンパ芽球におけるＡＴＦ６、ＸＢＰ１、ＧＲＰ７８のｍＲＮＡ量を測定した。通常の培地で培養した細胞では健常者及び患者で差はみられなかったが、タプシガルギンで３時間処理をしてＥＲ  ｓｔｒｅｓｓをかけて調べてみると、患者細胞においてはＡＴＦ６の上昇具合は変わらないが、ＸＢＰ１およびＧＲＰ７８の上昇が不良であることが判明した。このことはＸＢＰ１の上流配列における個人間差異が反応に違いを生じさせている可能性を示唆する。転写因子結合配列予測プログラムを用いて、上流配列を調べなおしてみたところ、ＥＲＳＥ以外にもＸＢＰ１自身が結合する部位を見出した（−１２４  ｔｏ  −１１０）（図２ａ）。ＸＢＰ１はこのようなＣＲＥ−ｌｉｋｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅに結合しやすい特徴を持っているとされており、なかでも回文構造になっているＡＣＧＴが特によく保存されている。そこでこの部分について日本人６４８サンプルをｓｅｑｕｅｎｃｅして調べたところ、この最も保存されているべきＡＣＧＴの配列内に多型がみられた。この多型はｃｏｒｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅであるＡＣＧＴをＡＧＧＴに変えてしまう。この多型が躁うつ病と関係しているかを１９７人の患者サンプル、４５１人の健常者で調べたところ、有意に相関していた（図２ａ）。なおこの違いが人口の階層化の違いでないことをｐｒｉｃｈａｒｄの方法に基づいて確認している（図２ｂ）。Ｇアレルを持っていると病気になりやすさは４．６倍である。また白人において、トリオサンプルを用い伝達不平衡テストを行ったところ、Ｇアレルが病気の子供に伝達されていることが判明した（図２ｄ）。ただし、日本人ではＧアレルのほうが多くみられ、白人ではＣアレルを持っている人の方が多く、分布がことなる。厳密にはＧアレルがｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒであるか、Ｃ／Ｃ  ｇｅｎｏｔｙｐｅがｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｆａｃｔｏｒであるかのどちらかである。
【００３８】
ＸＢＰ１遺伝子の上流の−１１６ＣがＧに変わることによって、ＡＣＧＴがＡＧＧＴになりＸＢＰ１がｂｉｎｄ出来なくなると考えられるため、このことによって正のフィードバックが障害されるかどうかを調べた。−１１６がＣ／Ｃ、Ｃ／Ｇ、Ｇ／Ｇ  のリンパ芽球を３時間タプシガルギンとともに培養し、ＸＢＰ１  ｍＲＮＡの増加具合をみたところ、Ｃ／Ｃの細胞においてはＣ／ＧやＧ／Ｇの細胞よりも有意に高かった（図２ｅ）。さらにこの事実は、ＥＢ  ｖｉｒｕｓによるｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎの影響によるものではないことをリンパ球において確認した（図２ｆ）。次に−１１６Ｃないし−１１６Ｇを含む上流配列を含むコンストラクトにおいて転写活性をみたところ、ＸＢＰ１を過剰発現させていない状態では差がみられなかったが、過剰発現させた状態では−１１６Ｃに比べて−１１６Ｇの活性は有意に低かった（図２ｇ）。この結果は既知のＥＲＳＥのみならず、−１１６Ｃ／Ｇを含む領域もＸＢＰ１の結合部位となっており、−１１６がＣからＧになっていることでこのフィードバックループが障害されるということを示す。
【００３９】
（３）バルプロ酸によるＡＴＦ６  ｍＲＮＡの増加
本発明者らは躁うつ病の病態を探る過程で、ＸＢＰ１遺伝子のプロモーター領域にある−１１６Ｃ  ｔｏ  Ｇの遺伝子多型はＥＲ  ｓｔｒｅｓｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ能力の低下をまねき、躁うつ病のリスクを増やすことを明らかにした。そこで、治療薬である３種類の気分安定薬がこのカスケード及びその機能低下にどのような効果があるのか調べた。リチウム、バルプロ酸、カルバマゼピンは気分安定薬として効果があることが知られているが、治療反応性は人により異なる。即ち、リチウムが効く人もいれば効かない人もいる。バルプロ酸が効くのにリチウムが効かない人もいる。またどの薬も効かない場合もある。これらの薬物においては、多様な作用機序が想定されてきたが、躁うつ病の病態が不明であったため、結論には至っていない。
【００４０】
２種類の細胞（ＳＨＳＹ５Ｙ細胞及びリンパ芽球）を治療における推奨濃度（気分安定薬はずっと飲みつづける必要があり、血中濃度をある範囲に保っておくことが重要とされている。低すぎると効果がなく、高すぎると副作用がｓｅｖｅｒｅになる）と同じ条件となるようにリチウム（０．７５ｍＭ）、バルプロ酸（１００ｕｇ／ｍｌ）、カルバマゼピン（７．５ｕｇ／ｍｌ）を加えた培地（１０％ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ入りＲＰＭＩ１６４０）で２４時間ないし７日間培養した。その後、細胞をＴｒｉｚｏｌ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）  に回収し、ｍＲＮＡを抽出、逆転写酵素ＳＳＲＴＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて１本鎖ｃＤＮＡを作製した。これらのｃＤＮＡを用いて、ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ＰＣＲを行いＡＴＦ６、ＸＢＰ１及びＧＲＰ７８のｍＲＮＡ量を測定した。
【００４１】
Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ＰＣＲはＳＹＢＲ／ＧＲＥＥＮ  Ｉ  ｄｙｅを用い、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ７９００ＨＴの機械で、アプライドバイオシステムズのプロトコールどおりに行った。使用したｃＤＮＡテンプレートは１ｗｅｌｌあたり、４ｎｇのｔｏｔａｌ  ＲＮＡから作製されたもので、２ｘＳＹＢＲ／ＧＲＥＥＮ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ）及び２５０ｎＭのＦｏｒｗａｒｄ及びＲｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒにより増幅している。ＰＣＲ使用したｐｒｉｍｅｒは上記の通りである（配列番号１，２、３、４、５、６、９及び１０）ｍＲＮＡ量はコントロールとしてＧＡＰＤＨによる補正を行った。
【００４２】
３種の薬剤の中で、バルプロ酸のみが、ＡＴＦ６のｍＲＮＡを上昇させることが判明した（図３ａ）。バルプロ酸が小胞体ストレスを与えることによりＡＴＦ６の上昇を引き起こしているのかどうかを確かめるために、ｕｎｓｐｌｉｃｅｄ  ｆｏｒｍのＸＢＰ１のｍＲＮＡ量も測定し、ｕｎｓｐｌｉｃｅｄ  ｆｏｒｍ  ／  ｔｏｔａｌ  ＸＢＰ１の比を計算した（この比は小胞体ストレスがかかると低下する）がバルプロ酸を加えた時には変化しなかった。従ってバルプロ酸は小胞体ストレスではない別の機序でＡＴＦ６の発現量を増やしていると考えられる。
【００４３】
（４）バルプロ酸による反応の改善
ＡＴＦ６  ｍＲＮＡの増加はＥＲ膜上における全長のＡＴＦ６蛋白の増加を生じさせ、小胞体ストレスが加わった際には切られた活性型のＡＴＦ６をふやすと考えられるため、バルプロ酸はこの小胞体ストレス反応を増強させるのではないかと考えた。この仮説を検証するために、気分安定薬とともにあらかじめ培養しておいた細胞に対して、小胞体ストレスを加えて小胞体関連遺伝子の増加の程度を調べることにした。ＳＨＳＹ５Ｙ細胞を７日間気分安定薬とともに培養したあと、３時間３００ｎＭのサプシガルギンとともにさらに培養しＡＴＦ６のｔａｒｇｅｔ分子であるＸＢＰ１、ＧＲＰ７８、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ及びＡｓｐａｒａｇｉｎｅ  ＳｙｎｔｈｅｔａｓｅのｍＲＮＡ量を測定し、サプシガルギンによるそれぞれの遺伝子の発現量の増加具合を計算し、気分安定薬を加えず同様の実験を行ったものと比較した。その結果あらかじめバルプロ酸とともにｉｎｃｕｂａｔｅしておいたもののみにおいて増加率は有意に高かった（図３ｂ）。さらに、バルプロ酸が−１１６Ｇ／Ｇであることにより障害されている反応を改善するのかを調べた。−１１６Ｇ／Ｇのｇｅｎｏｔｙｐｅをもつリンパ芽球をあらかじめ気分安定薬とともに（加えないものも）７日間培養しておき、３時間のサプシガルギンによる処理に対するＸＢＰ１ｍＲＮＡの上昇具合を調べた。コントロールとして−１１６Ｃ／Ｃ  ｇｅｎｏｔｙｐｅの細胞については気分安定薬を加えていないもののみ同様の実験を行った。−１１６Ｇ／Ｇ  ｇｅｎｏｔｙｐｅの細胞において、あらかじめバルプロ酸とともに培養しておいた細胞は、−１１６Ｃ／Ｃのレベルにまでは達していなかったが、コントロール或いはリチウムないしカルバマゼピンとともに培養しておいた細胞に比べてＸＢＰ１  ｍＲＮＡの上昇の程度が有意に増加していた（図３ｃ）。これらの結果はバルプロ酸が−１１６Ｇによって障害されていたＸＢＰ１の小胞体ストレス時の反応を、その上流にあるＡＴＦ６を増やしておくことによってレスキューすることを意味する。
【００４４】
（５）−１１６Ｃ／Ｇアレルの違いと薬物反応性
ＸＢＰ１遺伝子の−１１６のアレルが気分安定薬に対する治療反応性と関係しているかどうかを調べるために、臨床情報と−１１６Ｃ／Ｇのｇｅｎｏｔｙｐｅを比べてみた。リチウムに対する反応性がわかっている５１人の躁うつ病患者において−１１６のｇｅｎｏｔｙｐｅを行なった。
【００４５】
リチウム血中濃度が０．３〜１．０ｍＭに保たれている５１人の日本人躁うつ病患者について、書状で研究に対する同意を得た。これについては各施設において倫理委員会の承認を得ている。躁うつ病の診断は、２人の精神科医によってＤＳＭ−ＩＶの診断基準に基づいてなされた。リチウムに対する反応性はカルテをもとに評価している。リチウム維持療法中に抗うつ薬、或いは抗精神病薬の使用を余儀なくされた場合は再発として取り扱った。これら５１人はリチウムへの反応者（１０人）、非反応者（４１人）の２群にわけられた。反応者は維持療法中に再発しなかったものであり、非反応者は再発がみられたものである。リチウム服用を遵守していないものは対象から外している。
【００４６】
Ｇｅｎｏｔｙｐｅは以下の方法で行った。ＧＣ  ｂｕｆｆｅｒＩ及びＬＡ  Ｔａｑ（Ｔａｋａｒａ）、テンプレートとして患者末梢血リンパ球より抽出したＤＮＡ１０ｎｇ、０．５ｕＭのＦｏｒｗａｒｄ及びＲｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒを用いてＰＣＲ反応を行った。Ｐｒｉｍｅｒの配列は５’−ＣＧＡＣＡＧＡＡＧＣＡＧＡＡＣＴＴＴＡＧ（配列番号２６）及び５’−ＣＴＧＡＧＧＴＡＡＴＴＣＴＣＴＧＴＴＡＧ（配列番号２７）である。ＰＣＲ産物は、ＢｉｇＤｙｅ  ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒを用いＰＣＲダイレクトシーケンスを行った後  、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ３７００  ＤＮＡ  ａｎａｌｙｚｅｒで配列を決定した。リチウム反応者、非反応者と−１１６Ｃ／Ｇアレル頻度を比較したところ、Ｇアレルは非反応者で有意に多かった。
【００４７】
【表１】
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【００４８】
この結果はリチウム反応について調べられたものであり、直接バルプロ酸に対する反応、非反応をみたわけではないが、この多型が薬物に対する反応性と関係していることを意味する。
【００４９】
実験の結果（−１１６がＧアレルを有していると小胞体ストレスが減弱化してそのことが躁うつ病の危険因子となること、バルプロ酸のみがＡＴＦ６をふやすことによって減弱化した小胞体ストレス反応を改善させること）と合わせて考えると、この多型が少なくともＧ／Ｇである場合は最初からバルプロ酸を使用するのが好ましいと言える。またバルプロ酸はＡＴＦ６を小胞体ストレスのない状態で増やしておき、その結果いざ小胞体ストレスが生じたときの反応を良くする作用があり、躁うつ病の危険因子を解消していると考えられる。従ってバルプロ酸と同様にＡＴＦ６の発現量をふやす薬物があれば、躁うつ病の危険因子を除去する気分安定薬として働く可能性が高いと考えられる。
【００５０】
【発明の効果】
本発明により、躁うつ病におけるＸＢＰ１  ｌｏｏｐの病態生理との関係が示された。ＸＢＰ１は前頭葉においても比較的高いレベルで発現しており、所定の役割を有していると考えられる。一般に気分の障害にはモノアミンによる伝達の変化が関わっているとされる。セロトニントランスポーターは抗うつ薬のターゲットの一つであるが、機能的に働くためには小胞体シャペロンが必要という報告がある。ＸＢＰ１  ｌｏｏｐの機能低下により、小胞体シャペロンが不足した結果、セロトニントランスポーターの機能不全が生じ、気分の障害を引き起こしている可能性がある。また、ＸＢＰ１の下流の遺伝子は全て同定されているわけではなく、その中には気分の調節と関わっているものがあるかもしれない。臨床的には、−１１６ＧによるＸＢＰ１  ｌｏｏｐの障害がバルプロ酸のみで改善し、リチウムやカルバマゼピンでは改善しなかったことが重要である。この−１１６Ｃ／Ｇ多型が治療反応性と関係している。本発明の知見に基づいて、遺伝子多型を利用したオーダーメード治療も可能となる。
【００５１】
即ち、本発明により、躁うつ病などの治療に有効な気分安定薬の新規な評価方法およびスクリーニング方法を提供することが可能になった。さらに本発明により、気分安定薬に対する患者の感受性を判定する方法を提供することも可能になった。
【００５２】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ＤＮＡマイクロアレイ解析の結果を示す。
【図２】図２は、躁うつ病の危険因子としてのＸＢＰ１の−１１６Ｃ／Ｇの多型を解析した結果を示す。
【図３】図３は、ＥＲストレス応答カスケードに対する３種の気分安定薬の効果を示す。
【図４】図４は、ＥＲストレス経路の概要を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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