(57)【要約】【課題】  新規な植物性抗腫瘍剤を見出し、新規な植物性抗腫瘍性成分を含む食品添加物及び健康食品を提供する。【解決手段】  琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウからなる群から選択される少なくとも１種以上の植物体の乾燥粉末又はその抽出物を有効成分とする抗腫瘍剤、食品添加物及び健康食品。【選択図】      図９
2005179193.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウからなる群から選択される少なくとも１種以上の植物体の乾燥粉末又はその抽出物を有効成分とする抗腫瘍剤。
【請求項２】
植物の乾燥粉末の抽出物が、水又はエタノールで抽出したものであることを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】
琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウからなる群から選択される少なくとも１種以上の植物体の乾燥粉末又はその抽出物を含む食品添加物。
【請求項４】
琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウからなる群から選択される少なくとも１種以上の植物体の乾燥粉末又はその抽出物を含む健康食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌の予防及び治療に有用な植物起源の抗腫瘍剤、食品添加物及び健康食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、抗腫瘍活性、発癌抑制活性、腫瘍細胞増殖抑制活性等の作用を有する種々の植物が知られており、抗癌剤（抗腫瘍剤、制癌剤とも呼ばれる）、癌の予防用の健康食品等として広く用いられている。
【０００３】
例えば、特許文献１には、ヨモギ、ヨモギの水抽出物、ウーロン茶の水抽出物、番茶の水抽出物、シソ及びシソの水抽出物が、癌の予防及び治療に有効であることが記載されている。
【０００４】
また、抗癌作用機序はそれぞれ異なっているが、例えば、グアバ（特許文献２）、ニガウリ（特許文献３）、ウコン（特許文献４）、ユーカリ（特許文献５）などにも抗癌作用があることが記載されている。
【０００５】
【特許文献１】特開平８−３０５４号公報
【特許文献２】特開平７−２９１８７３号公報
【特許文献３】特開２００２−２０５９５３号公報
【特許文献４】特開２００２−１３６２６７号公報
【特許文献５】特開２００２−３０６１３９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、新規な植物性抗腫瘍剤を見出すことを目的とする。
【０００７】
さらに、本発明は、新規な植物性抗腫瘍性成分を含む食品添加物及び健康食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記目的を達成するため、本発明者らは鋭意研究を重ね、沖縄県に生育する琉球ヨモギ、ボタンボウフウ及びウコンイソマツに抗腫瘍活性が有ることを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は、
（１）琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウからなる群から選択される少なくとも１種以上の植物体の乾燥粉末又はその抽出物を有効成分とする抗腫瘍剤；
（２）植物の乾燥粉末の抽出物が、水又はエタノールで抽出したものであることを特徴とする、上記（１）に記載の抗腫瘍剤；
（３）琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウからなる群から選択される少なくとも１種以上の植物体の乾燥粉末又はその抽出物を含む食品添加物；及び
（４）琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウからなる群から選択される少なくとも１種以上の植物体の乾燥粉末又はその抽出物を含む健康食品
を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、新規な植物性抗腫瘍剤、食品添加物及び健康食品が提供される。
【００１１】
本発明の植物性抗腫瘍剤、食品添加物及び健康食品を摂取することにより、癌を予防及び治療することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の抗腫瘍剤、食品添加物及び健康食品は、琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウからなる群から選択される少なくとも１種以上の植物体の乾燥粉末又はその抽出物を有効成分とする。
【００１３】
琉球ヨモギ（Artemisa  campestris  L.）は、キク科の植物であり、インチングサ、ハママーチ等の方言名で呼ばれることもある。主として沖縄県の久米島、慶良間島、奥武島等の海岸に生育する低木状の多年生草木である。琉球ヨモギは、扁桃腺炎、黄疸、疸石、糖尿病、腎臓病などに有効であることが知られている（「おきなわの薬草百科」、多和田真淳・大田文子共著）。
【００１４】
ボタンボウフウ（Peucedanum  japonicum  Thanb.）は、セリ科の植物であり、サクナ、チョーミーグサ等の方言名で呼ばれることもある。主として沖縄県の海岸の岩石地、砂礫地等に自生する強壮で常緑の３年生草木であり、海辺の陽当たり良い地に生え、高さ９０ｃｍ位に達し、茎は自立して分枝する。ボタンボウフウは、高血圧、動脈硬化、神経痛、リュウマチ、肋膜炎、咳、喘息、百日咳、解熱などに有効であることが知られている（「おきなわの薬草百科」、多和田真淳・大田文子共著）。
【００１５】
ウコンイソマツ（Limoniom  wrightii  O.  kuntze）は、イソマツ科の植物であり、ガラサムパン、ウミマーチ、テンムグサ等の方言名で呼ばれることもある。主として沖縄本島の南部及び架橋のある島、宮古島、伊良部、下地、池間島、八重山の石垣・竹富町波照間島、与那国島の、海水に浸るか海水のかかる石の上に自生する。ウコンイソマツは、肝臓病、腎臓病、糖尿病、神経痛、風邪などに有効であり、下げ薬としても有用であることが知られている（「沖縄民俗薬用動植物誌」、ニライ社）。
【００１６】
本発明において、「植物体」とは、上記３種の植物の茎、葉などの地上部及び根部を意味する。
【００１７】
植物体の乾燥粉末の製造方法は特に限定されず、当業界で通常用いられる方法を採用することができ、例えば、図１に示す工程で製造することができる。植物の有用な部分を採取し、水洗し、適当な長さ（１〜１５ｃｍ程度）に切断し、５０〜７０℃の温風乾燥機で、８時間程度乾燥させた後、ソーゴ式粉砕機（相互産業社製）を用いて粉砕することによって植物体の乾燥粉末（粒度０．８ｍｍ  Ｐａｓｓ程度）を得る。
【００１８】
植物体の乾燥粉末は、１種の植物体のみから製造した単独の乾燥粉末としてもよいし、複数の植物体を混合したものから製造した混合乾燥粉末としてもよい。
【００１９】
植物体の乾燥粉末の抽出物の製造方法も特に限定されず、当業界で通常用いられる方法を採用することができ、例えば、図２に示す抽出工程を用いることができる。抽出に用いる溶媒としては、当業界で通常用いられるもの、例えば、水、エタノール等のアルコール類が好ましい。
【００２０】
植物体乾燥粉末の抽出物は、溶液、スラリー、乾燥粉末等の性状をとりうる。
【００２１】
上記図１の工程で得られた乾燥粉末を水抽出する場合には、例えば、図２に示すように、乾燥粉末１００ｇに、５００〜１５００ｍＬ（５〜１５倍量）の水を加え、室温〜９０℃の温度で、昇温後１５〜１２０分かけて成分を抽出し、遠心分離後、濾過（ADVANTEC社製濾紙Ｎｏ５Ｃ等を使用）して乾燥粉末の抽出残渣を除去し、水抽出液Ｉを得る。
上記乾燥粉末の抽出残渣に、５００〜２０００ｍＬ（２〜５倍量）の水を加え、さらに、上記と同様にして成分を抽出し、遠心分離後、濾過して乾燥粉末の抽出残渣を除去し、水抽出液IIを得る。ここでの抽出残渣は廃棄する。
【００２２】
上記水抽出液Ｉ及びIIを併せ、ロータリーエバポレーター（SHIMAZU社製）で、固形量が１０〜２０％（１０〜２０ｇ／１００ｇ）程度になるまで減圧濃縮し、殺菌する。ここへ、必要に応じて、賦形剤（例えば、デキストリン等）を添加（１０％の減圧濃縮物であれば０〜３０ｇ；２０％の減圧濃縮物であれば０〜６０ｇ）し、スプレードライ又は凍結乾燥することにより、粉末状の水抽出物製品を得る。水抽出物の収量は、植物の種類により、琉球ヨモギの場合で植物体水抽出物の乾燥粉末１００ｇから、通常１７〜２３ｇ（収率１７〜２３％）、ウコンイソマツの場合で通常７〜１２ｇ（収率：７〜１２％）、ボタンボウフウの場合で通常２３〜３０ｇ（収率：２３〜３０％）程度である。
【００２３】
また、エタノール抽出する場合には、図３に示すように、例えば、乾燥粉末１００ｇに、５００〜１５００ｍＬ（５〜１５倍量）のエタノールを加え、室温〜７０℃の温度で、昇温後１５〜１２０分かけて成分を抽出し、遠心分離後、濾過して乾燥粉末の抽出残渣を除去し、エタノール抽出液Ｉを得る。
【００２４】
上記乾燥粉末の抽出残渣に、５００〜２０００ｍＬ（２〜５倍量）のエタノールを加え、さらに、上記と同様にして成分を抽出し、遠心分離後、濾過して乾燥粉末の抽出残渣を除去し、エタノール抽出液IIを得る。ここでの抽出残渣は廃棄する。
【００２５】
上記エタノール抽出液Ｉ及びIIを併せ、ロータリーエバポレーター（SHIMAZU社製）で、固形量が１０〜２０％（１０〜２０ｇ／１００ｇ）程度になるまで減圧濃縮し、殺菌する。ここへ、必要に応じて、賦形剤（例えば、デキストリン等）を添加（１０％の減圧濃縮物であれば０〜３０ｇ；２０％の減圧濃縮物であれば０〜６０ｇ）し、スプレードライ又は凍結乾燥することにより、粉末状のエタノール抽出物製品を得る。エタノール抽出物の収量は、植物の種類により、琉球ヨモギの場合で植物体エタノール抽出物の乾燥粉末１００ｇから通常１７〜２８ｇ（収率１７〜２８％）、ウコンイソマツの場合で通常８〜１２ｇ（収率８〜１２％）、ボタンボウフウの場合で通常２３〜３０ｇ（収率２３〜３０％）程度である。
【００２６】
乾燥粉末の抽出成分は、１種の植物から得た乾燥粉末から抽出したものでもよいし、複数種の植物のそれぞれの乾燥粉末を混合したものから抽出したものでもよい。また、上記の混合乾燥粉末から抽出したものでもよい。
【００２７】
上記のようにして得られた植物体の乾燥粉末又はその抽出物は、後述する試験例に示すように、抗腫瘍活性を有し、抗腫瘍剤として利用できる。
【００２８】
本発明の植物体の乾燥粉末を植物性抗腫瘍剤として投与する場合の投与形態としては、お茶（煎じ薬）、粉末、錠剤、顆粒、カプセルなどが挙げられる。また、植物体の乾燥粉末の抽出物の場合には、溶液、錠剤、顆粒、レトルトパウチ、カプセル等が挙げられる。これらの投与形態は、当業界で公知の手法、器具、添加剤等を用いて製造することができる。図４〜７に顆粒、錠剤、レトルトパウチ及びカプセルの製造工程を示すフロー図を示す。
【００２９】
本発明の植物性抗腫瘍剤の投与方法としては、上記形態のものを経口投与することが好ましい。
【００３０】
本発明の植物性抗腫瘍剤の急性毒性については、ウコンイソマツ、琉球ヨモギ、ボタンボウフウの３種類の抽出物（デキストリン等の賦形剤を添加していないもの）を、それぞれ５ｇ／ｋｇの投与量でマウスに経口投与し、２４時間までに死亡が認められるかを観察した結果、マウスの死亡は認められず、上記３種類の抽出物のＬＤ５０は５ｇ／ｋｇ以上であった。この数値は、体重６０ｋｇの人が一度に３００ｇの抽出物を摂取することに相当し、人体に対する安全性は高く、経口投与での毒性は発現しないと考えられる。
【００３１】
本発明の植物性抗腫瘍剤は、植物の乾燥粉末又はその抽出物の抗腫瘍活性を向上させることができる追加成分として、種々の栄養成分、薬効成分等を含むことができる。
【００３２】
本発明の食品添加物は、種々の食品に添加成分として加えられるものであり、種々の食品と共に摂取されて抗腫瘍活性を示す。本発明の食品添加物が添加される食品としては特に限定されないが、例えば、クッキー、麺類、清涼飲料、シリアル、スナック類、ドレッシング等が挙げられる。
【００３３】
本発明の健康食品は、それ自体を食品として摂取されて抗腫瘍活性を示す。本発明の健康食品は、当業界で通常用いられる方法を用いて、粉末、錠剤、カプセル等種々の形態とすることができる。
【００３４】
本発明の抗腫瘍剤、食品添加物及び健康食品は、抗腫瘍活性を有しており、癌の予防、治療に有用である。
【実施例】
【００３５】
以下、実施例、試験例を記載して、本発明をより具体的に説明する。
【００３６】
実施例１：植物体の乾燥粉末水抽出物の製造
(1)琉球ヨモギの植物体乾燥粉末１００ｇを、ロータリーエバポレーター（SHIMAZU社製）に入れ、水９００ｍＬを加えて、９０℃まで昇温し、６０分間抽出を行い、濾過して抽出残渣を除去し、琉球ヨモギの水抽出液Ｉを得た。上記抽出残渣に、水８７０ｍＬを加え、上記と同様の条件で再度抽出を行い、琉球ヨモギの水抽出液IIを得た。得られた水抽出液Ｉ及びIIを併せ、ロータリーエバポレーターで、温度７０℃で、固形量が２０％程度になるまで濃縮し、凍結乾燥（EYELA社製）し、琉球ヨモギの水抽出物乾燥粉末２２ｇを得た。
【００３７】
(2)上記(1)において、抽出残渣に加える水の量を７５１ｍLとした以外は、ボタンボウフウの植物体乾燥粉末についても上記(1)と同様にして、水抽出物乾燥粉末２７．５ｇを得た。
(3)上記(1)において、抽出残渣への水の添加量を７５０ｍＬとした以外は、ウコンイソマツの植物体乾燥粉末についても上記(1)と同様にして、水抽出物乾燥粉末１１．１ｇを得た。
【００３８】
実施例２：植物体の乾燥粉末エタノール抽出物の製造
(1)琉球ヨモギの植物体乾燥粉末１００ｇを、ロータリーエバポレーター（SHIMAZU社製）に入れ、５０％エタノール９００ｍＬを加えて、７０℃まで昇温し、６０分間抽出を行い、濾過して抽出残渣を除去し、琉球ヨモギのエタノール抽出液Ｉを得た。上記抽出残渣に、５０％エタノール７５０ｍＬを加え、上記と同様の条件で再度抽出を行い、琉球ヨモギのエタノール抽出液IIを得た。得られたエタノール抽出液Ｉ及びIIを併せ、ロータリーエバポレーターで、温度７０℃で、固形量が２０％程度になるまで濃縮し、凍結乾燥し、琉球ヨモギのエタノール抽出物乾燥粉末１９．５ｇを得た。
【００３９】
(2)上記(1)において、抽出残渣への５０％エタノールの添加量を７００ｍＬとした以外は、ボタンボウフウについても上記(1)と同様にして、エタノール抽出物乾燥粉末２３ｇを得た。
【００４０】
(3)上記(1)において、抽出残渣への添加量を７００ｍＬとした以外は、ウコンイソマツについても上記(1)と同様にして、エタノール抽出物乾燥粉末１０．３ｇを得た。
【００４１】
試験例：植物体の水抽出物の抗腫瘍活性の測定
本試験は、図８に示す手順で実施した。
(1)ＨＬ−６０腫瘍細胞に対する抗腫瘍活性
予め培養しておいたＨＬ−６０腫瘍細胞を、８００ｒｐｍで２分間遠心し、細胞をＰＢＳ（−）で２回洗浄し、１０％ＦＣＳ（fetal  calf  serum；Biofluids社製）を加えたＲＰＭＩ１６４０培地（Gibco社製）中で細胞濃度を調整し、細胞懸濁液を調整した。
【００４２】
上記実施例１で製造した３種の植物体の水抽出物をＰＢＳ（−）に溶解し、それぞれ０．６２５、１．２５、２．５、５．０及び１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度になるように細胞懸濁液に添加し、試料溶液とした。
【００４３】
９６穴マイクロプレートに、１．０×１０４個／ウェルとなるように、上記細胞懸濁液１８０μＬを播き、上記各濃度の試料溶液２０μＬをそれぞれ添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で３日間培養した後、２−（４−ロドフェニル９−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム  一ナトリウム塩（2-(4-lodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium,  monosodium  salt；ＷＳＴ−１）と１−メトキシ−５−メチル−フェナジニウム  メチル  スルフェート（1-Methoxy-5-methyl-phenazinium  methylsulfate；ＰＭＳ）との混合溶液２０μＬを加え、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で３時間培養した後、マイクロプレートミキサー（NISSIN社製）で攪拌し、マイクロプレートリーダー（Bio-TEK社製）を用い、４５０ｎｍでの吸光度を測定し、腫瘍細胞の生存率を求めた。結果を図９のグラフに示す。
【００４４】
図９の結果から、琉球ヨモギ、ボタンボウフウ及びウコンイソマツの植物体の水抽出物は、抗腫瘍活性を有することが明らかとなった。
【００４５】
ウコンイソマツは、０．６２５ｍｇ／ｍＬの低い添加量でＨＬ−６０腫瘍細胞を２０％以下まで抑制でき、さらに１．２５ｍｇ／ｍＬの添加量で１０％以下まで強力に抑制できることがわかる。
【００４６】
琉球ヨモギも、１．２５ｍｇ／ｍＬの低い添加量でＨＬ−６０腫瘍細胞を約２０％まで抑制でき、さらに２．５ｍｇ／ｍＬの添加量で約１０％以下まで強力に抑制できることがわかる。
【００４７】
ボタンボウフウについては、１０．０ｍｇ／ｍＬの添加量では、ＨＬ−６０腫瘍細胞を約１０％まで強力に抑制できるが、５ｍｇ／ｍＬ以下の添加量では、ＨＬ−６０腫瘍細胞の生存率は逆に増加していることを示す結果となった。添加量５．０ｍｇ／ｍＬ以下の濃度で吸光度が上昇した理由は不明である。
【００４８】
(2)Ｋ−５６２腫瘍細胞に対する抗腫瘍活性
用いた腫瘍細胞をＫ−５６２に変えた以外は上記(1)と同様にしてＫ−５６２腫瘍細胞に対する抗腫瘍活性を測定した。結果を図１０のグラフに示す。
【００４９】
図１０の結果から、琉球ヨモギは、０．６２５ｍｇ／ｍＬの低い添加量でＫ−５６２腫瘍細胞を約４０％まで抑制することができ、１．２５ｍｇ／ｍＬの添加量では１０％以下まで強力に抑制できることがわかる。
【００５０】
ウコンイソマツは、０．６２５ｍｇ／ｍＬの低い添加量でＫ−５６２腫瘍細胞を１０％以下まで強力に抑制できることがわかる。
【００５１】
ボタンボウフウについては、１０．０ｍｇ／ｍＬの添加量では、Ｋ−５６２腫瘍細胞を約１０％まで強力に抑制できるが、５．０ｍｇ／ｍＬ以下の添加量では、Ｋ−５６２腫瘍細胞の生存率は逆に増加していることを示す結果となった。この理由も、ＨＬ−６０腫瘍細胞について述べたのと同様である。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明によって、新たな植物性抗腫瘍剤、食品添加物及び健康食品が提供された。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１は、植物体乾燥粉末の製造工程を示すフロー図である。
【図２】図２は、植物体乾燥粉末の水抽出物の製造工程を示すフロー図である。
【図３】図３は、植物体乾燥粉末のエタノール抽出物の製造工程を示すフロー図である。
【図４】図４は、植物体の乾燥粉末又はその抽出物の顆粒化フロー図である。
【図５】図５は、植物体の乾燥粉末又はその抽出物の錠剤化フロー図である。
【図６】図６は、植物体の乾燥粉末又はその抽出物のレトルトパウチ化フロー図である。
【図７】図７は、植物体の乾燥粉末又はその抽出物のカプセル化フロー図である。
【図８】図８は、抗腫瘍活性の測定方法の手順を示すフロー図である。
【図９】図９は、植物体水抽出物のＨＬ−６０腫瘍細胞に対する細胞増殖抑制効果を示すグラフである。
【図１０】図１０は、植物体水抽出物のＫ−５６２腫瘍細胞に対する細胞増殖抑制効果を示すグラフである。
【図１】
2005179193.tif 000003
【図２】
2005179193.tif 000004
【図３】
2005179193.tif 000005
【図４】
2005179193.tif 000006
【図５】
2005179193.tif 000007
【図６】
2005179193.tif 000008
【図７】
2005179193.tif 000009
【図８】
2005179193.tif 000010
【図９】
2005179193.tif 000011
【図１０】
2005179193.tif 000012