(57)【要約】【課題】  キク科植物から抽出単離された新規化合物を提案する。【解決手段】  下記の一般式（Ｉ）：  ［上記式中、Ｒ１は水酸基を示し、Ｒ２はメトキシ基を示す］で表される、化合物。    【化１】2005179339.tif 000024【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
【化１】
2005179339.tif 000015
［上記式中、Ｒ１は水酸基を示し、Ｒ２はメトキシ基を示す］
で表される、化合物。
【請求項２】
下記一般式（ＩＩ）：
【化２】
2005179339.tif 000016
［上記式中、Ｒ３は水酸基を示し、Ｒ４はメトキシ基を示す］
で表される、化合物。
【請求項３】
下記一般式（III）：
【化３】
2005179339.tif 000017
［上記式中、３−ヒドロキシ−１−ブテニル基の３−ヒドロキシ基が３Ｓ立体配座とされてなるものである］
で表される、化合物。
【請求項４】
請求項１または２に記載の化合物を有効成分とする、抗癌剤。
【請求項５】
動物または人の癌治療に使用される、請求項４に記載の抗癌剤。
【請求項６】
前記癌が白血病である、請求項４または５に記載の抗癌剤。
【請求項７】
前記白血病が急性骨髄性白血病である、請求項６に記載の抗癌剤。
【請求項８】
上記一般式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２が水酸基を示す化合物、Ｒ１が水素原子を示しＲ２が水酸基を示す化合物、Ｒ１が水素原子を示しＲ２がメトキシ基を示す化合物、  
上記一般式（ＩＩ）において、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基を示す化合物、Ｒ３がメトキシ基を示しＲ４が水酸基を示す化合物、
下記の一般式（IV）：
【化４】
2005179339.tif 000018
で表される化合物、または
下記の一般式（Ｖ）：
【化５】
2005179339.tif 000019
で表される化合物の一種または二種以上の化合物を有効成分とする、抗急性骨髄性白血病剤。
【請求項９】
動物または人の急性骨髄性白血病治療に使用される、請求項８に記載の抗急性骨髄性白血病剤。
【請求項１０】
請求項１〜３および８に記載された化合物を含んでなる組成物を製造する方法であって、
前記各化合物を含んでなる原料を用意し、
必要に応じて加熱下において、前記原料を溶媒で抽出し、
前記抽出物をイオン交換クロマトグラフィーに供給し、第１の低級アルコールと、第２の低級アルコールと、必要に応じて低級エステルとをこれらの順により溶媒抽出し、
前記第２の低級アルコール画分中に、前記各化合物を含んでなる組成物を得ることを含んでなる、方法
【請求項１１】
前記原料がキク科植物またはアカバナ科チョウジタデ属植物である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜３および８に記載された化合物をそれぞれ得る方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物をクロマトグラフィーで分離することを複数回繰り返すことにより、前記各化合物をそれぞれ得ることを含んでなる、方法。
【請求項１３】
前記組成物が請求項１０または１１に記載の方法で得られたものである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜３および８に記載された化合物を含んでなる組成物を第１の組成物と第２の組成物とに分離する方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物を順相クロマトグラフィー、次いで逆相クロマトグラフィーで分離し、第１の組成物と第２の組成物とに分離するものであり、
第１の組成物が請求項１〜３に記載された化合物と、上記一般式（Ｉ）においてＲ１およびＲ２が水酸基を示す化合物と、上記一般式（IV）で表される化合物と、上記一般式（Ｖ）で表される化合物とを含んでなるものであり、
第２の組成物が上記一般式（Ｉ）において、Ｒ１が水素原子を示しＲ２が水酸基を示す化合物と、Ｒ１が水素原子を示しＲ２がメトキシ基を示す化合物とを含んでなるものである、方法。
【請求項１５】
前記組成物が請求項１０または１１に記載の方法で得られたものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１〜３に記載された化合物と、上記一般式（Ｉ）においてＲ１およびＲ２が水酸基を示す化合物と、上記一般式（IV）で表される化合物と、上記一般式（Ｖ）で表される化合物とをそれぞれ得る方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物を順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィーまたはこれらを組合せたもので分離し、前記各化合物を単離することを含んでなる、方法。
【請求項１７】
前記組成物が請求項１４または１５に記載の方法で得られた第１の組成物である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
上記一般式（Ｉ）において、Ｒ１が水素原子を示しＲ２が水酸基を示す化合物と、Ｒ１が水素原子を示しＲ２がメトキシ基を示す化合物とをそれぞれ得る方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物を順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、またはこれらを組合せたもので分離し、前記各化合物を単離することを含んでなる、方法。
【請求項１９】
前記組成物が請求項１４または１５に記載の方法で得られた第２の組成物である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１２〜１９のいずれか一項に記載の方法で得られた、請求項１〜３および８に記載された各化合物。
【請求項２１】
上記一般式（ＩＩ）において、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基を示す化合物を有効成分とする、抗卵巣癌剤。
【請求項２２】
動物または人の卵巣癌の治療に使用される、請求項２１に記載の抗卵巣癌剤。
【請求項２３】
上記一般式（ＩＩ）において、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基を示す化合物を有効成分とする、抗前立腺癌剤。
【請求項２４】
動物または人の前立腺癌の治療に使用される、請求項２１に記載の抗前立腺癌剤。
【請求項２５】
下記一般式（ＶＩ）：
【化６】
2005179339.tif 000020
で表される化合物と、
下記の一般式（ＶＩＩ）：
【化７】
2005179339.tif 000021
で表される化合物と、
下記の一般式（ＶＩＩＩ）：
【化８】
2005179339.tif 000022
で表される化合物と、
下記の一般式（ＩＸ）：
【化９】
2005179339.tif 000023
で表される化合物とを含んでなる組成物を製造する方法であって、
前記各化合物を含んでなる原料を用意し、
必要に応じて加熱下において、前記原料を溶媒で抽出し、
前記抽出物をイオン交換クロマトグラフィーに供給し、第１の低級アルコールと、第２の低級アルコールと、必要に応じて低級エステルとをこれらの順により溶媒抽出し、
前記第２の低級アルコール画分中に、前記各化合物を含んでなる組成物を得ることを含んでなる、方法
【請求項２６】
前記原料がキク科植物またはアカバナ科チョウジタデ属植物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
上記一般式（ＶＩ）〜（ＩＸ）で表される化合物をそれぞれ得る方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物をクロマトグラフィーで分離することを複数回繰り返すことにより、前記各化合物をそれぞれ得ることを含んでなる、方法。
【請求項２８】
前記組成物が請求項２５または２６に記載の方法で得られたものである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
上記一般式（ＶＩ）〜（ＩＸ）で表される化合物を含んでなる組成物を第３の組成物と第４の組成物とに分離する方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物を順相クロマトグラフィー、次いで逆相クロマトグラフィーで分離し、第３の組成物と第４の組成物とに分離するものであり、
第３の組成物が上記一般式（ＶＩ）で表される化合物と、上記一般式（ＩＸ）で表される化合物とを含んでなるものであり、
第４の組成物が上記一般式（ＶＩＩ）で表される化合物と、上記一般式（ＶＩＩＩ）で表される化合物とを含んでなるものである、方法。
【請求項３０】
前記組成物が請求項２５または２６に記載の方法で得られたものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
上記一般式（ＶＩ）で表される化合物と、上記一般式（ＩＸ）で表される化合物とをそれぞれ得る方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物を順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィーまたはこれらを組合せたもので分離し、前記各化合物を単離することを含んでなる、方法。
【請求項３２】
前記組成物が請求項２９または３０に記載の方法で得られた第３の組成物である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
上記一般式（ＶＩＩ）で表される化合物と、上記一般式（ＶＩＩＩ）で表される化合物とをそれぞれ得る方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物を順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィーまたはこれらを組合せたもので分離し、前記各化合物を単離することを含んでなる、方法。
【請求項３４】
前記組成物が請求項２９または３０に記載の方法で得られた第４の組成物である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
請求項２７〜３４のいずれか一項に記載の方法で得られた、上記一般式（ＶＩ）〜（ＩＸ）で表された各化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、特に、キク科植物またはアカバナ科チョウジタデ属植物から抽出単離された新規化合物およびその用途に関する。また、本発明はキク科植物またはアカバナ科チョウジタデ属植物から抽出単離された既知物質の医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
キク科植物またはアカバナ科チョウジタデ属植物、特に、ニトベギクは、皮膚病（水虫病）、肝炎、黄疸、膀胱炎を抑制する等の薬理効果を有するものとして知られている。例えば、特許第２６０９７８０号公報（特許文献１）および特願平８−１２７５３８号公報（特許文献２）によれば、ニトベギクを煎じたものまたはその抽出エキスを用いた糖尿病治療薬が提案されている。
【０００３】
また、ニトベギク抽出物から単離された化合物と同一の化合物が文献に開示されている。例えば、Raghwendra Pal, et al. Indian Journal of Chemistry, Section B: Organic  Chemical Including Medicinal Chemistry, 14B, 259 - 262 (1976)（非特許文献１）、Raghwendra Pal, et al. Indian Journal of Chemistry, Section B: Organic Chemical Including Medicinal Chemistry, 15B, 208 - 211 (1977)（非特許文献２）、Schuster A, et al. Phytochemistry, 31, 3139 - 3141 (1992)（非特許文献３）には、これらの文献順に、下記の一般式（Ｉ）で表される化合物：
【化１】
2005179339.tif 000002
において、Ｒ１およびＲ２が水酸基を示す化合物（以下、「ＴＤ−７」という）、Ｒ１ が水素原子を示しＲ２が水酸基を示す化合物（以下、「ＴＤ−９」という）、Ｒ１が水素原子を示しＲ２がメトキシ基を示す化合物（以下、「ＴＤ−１０」という）が開示されている。
【０００４】
Paulo Sergio Pereira, et al. Phytochemistry, 45, 1445-1448 (1997)（非特許文献４）、C. Zdero et al. Phytochemistry, 26, 1999 - 2006 (1987)（非特許文献５）には、下記の一般式（ＩＩ）で表される化合物：
【化２】
2005179339.tif 000003
において、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基を示す化合物（以下、「ＴＤ−１」という）、Ｒ３がメトキシ基を示しＲ４が水酸基を示す化合物（以下、「ＴＤ−４」という）が開示されている。
【０００５】
Baruah Nabin C., et al. Journal of Organic Chemistry, 44, 1831 - 1835 (1979)（非特許文献６）には、下記の一般式（IV）：
【化３】
2005179339.tif 000004
で表される化合物（以下、「ＴＤ−２」という）が開示されている。
Baruah Nabin C., et al. Journal of Organic Chemistry, 44, 1831 - 1835 (1979)（非特許文献７）には、下記の一般式（Ｖ）：
【化４】
2005179339.tif 000005
で表される化合物（以下、「ＴＤ−８」という）が開示されている。
Antonia G. Gonzalez, et al, Journal of Natural Products, 57, 400 - 402 (1994)（非特許文献８）では、（４Ｓ，５Ｒ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−［（１Ｅ，３Ｒ）−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｂｕｔｅｎｙｌ］−３，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｏｎｅ）が開示されている。
【０００６】
一方、Raghwendra Pal., et al. Journal of Phamaceutical Science, 65, 918 - 920 (1976)（非特許文献９）では、ニトベギクの抽出液からタギチニン(Tagitinin）Ａ〜Ｆが単離されたとの報告、およびこれら化合物中で、タギチニンＦのみがＰ３８８マウス白血病を腹腔内移植したマウスに対して延命効果を与えたとの報告がなされている。ここで、タギチニンＡはＴＤ−７に、タギチニンＣはＴＤ−２に、タギチニンＤはＴＤ−９に、タギチニンＥはＴＤ−８にそれぞれ相当するものであるが、タギチニンＦは本願発明におけるＴＤ−１〜１０に相当するものではない。
【０００７】
また、Raghwendra Pal, et al. Indian Journal of Chemistry, Section B: Organic Chemistry Including Medicinal Chemistry, 15B, 208-211 (1977)（非特許文献１０）には、下記の一般式（ＶＩ）：
【化５】
2005179339.tif 000006
で表される化合物（以下、「ＴＤ−１１」という）が開示されている。
Isao Agata, et al. Yakugaku zasshi, 101, 1067-1071 (1981)（非特許文献１１）には、下記の一般式（ＶＩＩ）：
【化６】
2005179339.tif 000007
で表される化合物（以下、「ＴＤ−１２」という）が開示されている。
S. Shibata, et al. Yakugaku Zasshi, 80, 620-624 (1960)（非特許文献１２）には、下記の一般式（ＶＩＩＩ）：
【化７】
2005179339.tif 000008
で表される化合物（以下、「ＴＤ−１３」という）が開示されている。
Christa Zdero, et al. Phytochemistry, 26, 1999-2006 (1987)（非特許文献１３）には、下記の一般式（ＩＸ）：
【化８】
2005179339.tif 000009
で表される化合物（以下、「ＴＤ−１４」という）が開示されている。
【０００８】
しかしながら、キク科植物またはアカバナ科チョウジタデ属植物中には未知化合物が存在しており、これら化合物の同定が切望されている。また、これら植物から抽出単離された既知、未知の化合物の新たな用途（薬理効果等）についても解明することが急務とされている。
【特許文献１】特許２６０９７８０号公報
【特許文献２】特願平８−１２７５３８号公報
【非特許文献１】Raghwendra Pal, et al. Indian Journal of Chemistry, Section B: Organic  Chemical Including Medicinal Chemistry, 14B, 259 - 262 (1976)。
【非特許文献２】Raghwendra Pal, et al. Indian Journal of Chemistry, Section B: Organic Chemical Including Medicinal Chemistry, 15B, 208 - 211 (1977)。
【非特許文献３】Schuster A, et al. Phytochemistry, 31, 3139 - 3141 (1992)。
【非特許文献４】Paulo Sergio Pereira, et al. Phytochemistry, 45, 1445 - 1448 (1997)。
【非特許文献５】C. Zdero et al. Phytochemistry, 26, 1999 - 2006 (1987)。
【非特許文献６】Raghwendra Pal, et al. Indian Journal of Chemistry, Section B: Organic Chemical Including Medicinal Chemistry, 15B, 208 - 211 (1977)。
【非特許文献７】Baruah Nabin C, et al. Journal of Organic Chemistry, 44, 1831 - 1835 (1979)。
【非特許文献８】Antonia G. Gonzalez, et al, Journal of Natural Products, 57, 400 - 402 (1994)
【非特許文献９】Raghwendra Pal, et al. Journal of Phamaceutical Science, 65, 918 - 920 (1976)。
【非特許文献１０】Raghwendra Pal, et al. Indian Journal of Chemistry, Section B: Organic Chemistry Including Medicinal Chemistry, 15B, 208-211 (1977)
【非特許文献１１】Isao Agata, et al. Yakugaku zasshi, 101, 1067-1071 (1981)
【非特許文献１２】S. Shibata, et al. Yakugaku Zasshi, 80, 620-624 (1960)
【非特許文献１３】Christa Zdero, et al. Phytochemistry, 26, 1999-2006 (1987)
【発明の概要】
【０００９】
本発明者等は、今般、抗癌作用を有する新規化合物と、既知化合物が特定の癌細胞に対して抗癌作用を有することを見出した。本発明はかかる知見によるものである。従って、本発明は、新規化合物と、特定の癌に対して抗癌性を有する既知化合物の医薬用途を提供するものである。
本発明の第一の態様
本発明の第一の態様によれば、新規化合物を提供でき、その化合物は下記の一般式で表されるものである。
下記の一般式（Ｉ）：
【化９】
2005179339.tif 000010
［上記式中、Ｒ１は水酸基を示し、Ｒ２はメトキシ基を示す］
で表される化合物（以下、「ＴＤ−３」という）。
下記の一般式（ＩＩ）：
【化１０】
2005179339.tif 000011
［上記式中、Ｒ３は水酸基を示し、Ｒ４はメトキシ基を示す］
で表される化合物（以下、「ＴＤ−６」という）。
下記の一般式（III）：
【化１１】
2005179339.tif 000012
［上記式中、３−ヒドロキシ−１−ブテニル基の３−ヒドロキシ基が３Ｓ立体配座とされてなるものである］
で表される、化合物（以下、「ＴＤ−５」という）。
【００１０】
本発明の第二の態様
本発明の第二の態様によれば、既知である下記の一般式で表される化合物の一種または二種以上を含んでなる抗急性骨髄性白血病剤を提供することができる。
上記した一般式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２が水酸基を示す化合物（ＴＤ−７）、Ｒ１が水素原子を示しＲ２が水酸基を示す化合物（ＴＤ−９）、Ｒ１が水素原子を示しＲ２がメトキシ基を示す化合物（ＴＤ−１０）、  
上記した一般式（ＩＩ）において、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基を示す化合物（ＴＤ−１）、Ｒ３がメトキシ基を示しＲ４が水酸基を示す化合物（ＴＤ−４）、
下記の一般式（IV）：
【化１２】
2005179339.tif 000013
で表される化合物（ＴＤ−２）、および
下記の一般式（Ｖ）：
【化１３】
2005179339.tif 000014
で表される化合物（ＴＤ−８）。
【００１１】
本発明の第三の態様
本発明の第三の態様によれば、上記一般式（ＩＩ）において、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基を示す化合物（ＴＤ−１）を有効成分とする、抗卵巣癌剤または抗前立腺癌剤を提供することができる。また、本発明にあっては、卵巣癌または前立腺癌の治療に使用される、抗卵巣癌剤または抗前立腺癌剤が提供される。
【００１２】
本発明の第四の態様
本発明の第四の態様によれば、ＴＤ−１〜ＴＤ−１４を単離する方法が提案される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の第一の態様
本発明の第一の態様で提供する新規化合物は、上記一般式（Ｉ）において、式中、Ｒ１ が水酸基を示しＲ２がメトキシ基を示す化合物（ＴＤ−３）、上記一般式（ＩＩ）において、式中、Ｒ３が水酸基を示しＲ４がメトキシ基を示す化合物（ＴＤ−６）、上記一般式（III）で表される化合物（ＴＤ−５）である。
ＴＤ−５は、非特許文献８に記載された化合物と立体配座が異なる異性体化合物であり、具体的には、３−ヒドロキシ−１−ブテニル基のヒドロキシ基が３Ｓ立体配座とされてなる新規化合物である。
【００１４】
新規化合物の用途
本発明による新規化合物ＴＤ−３、ＴＤ−５およびＴＤ−６は、免疫力の向上、新陳代謝機能の活性化、病原菌に対する減殺および殺菌作用、過剰な炎症またはアレルギーの抑制効果、生活習慣病（糖尿病等）、免疫疾患の抑制および治癒等を付与する有効成分としての用途が考えられる。これら新規化合物の中でも、「ＴＤ−３」および「ＴＤ−６」は抗癌性が認められ、好ましくは白血病（より好ましくは急性骨髄性白血病）に抗癌性が認められる。従って、新規化合物の「ＴＤ−３」および「ＴＤ−６」は抗癌剤の有効成分とされ、この抗癌剤は癌治療に使用することができる。
【００１５】
新規化合物の「ＴＤ−３」および「ＴＤ−６」の化合物を癌療用の抗癌剤として使用するには、種々の投与形態に合わせて、これらの新規化合物を公知の医薬品用担体と組合せて製剤化することが可能である。例えば、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、座薬などによる非経口投与、または錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などによる経口投与の全身投与のほか、軟膏剤、ローション剤、座薬、エアゾール剤などの局所投与の形態を例示することができる。
投与量は、動物および人の年齢、体重、症状に合わせて適宜定めることができる。
【００１６】
本発明の第二の態様
本発明の第二の態様によれば、既知化合物の一種または二種以上を含んでなる抗急性骨髄性白血病剤を提供することができる。先に説明した通り、「ＴＤ−１」、「ＴＤ−２」、「ＴＤ−４」、「ＴＤ−７」、「ＴＤ−８」、「ＴＤ−９」、「ＴＤ−１０」は既知化合物である。これらの既知化合物は、動物または人（好ましい）の急性骨髄性白血病に対して優れた抑制および治療効果があることが今回の実験結果により明らかになったものである。従って、これらＴＤ化合物はこれらを有効成分として含む抗急性骨髄性白血病剤として利用することができる。医薬品としての薬剤および投与形態等は本発明の第一の態様で説明したのと同様であってよい。
【００１７】
本発明の第三の態様
本発明の第三の態様によれば、既知化合物「ＴＤ−１」を有効成分とする、抗卵巣癌剤または抗前立腺癌剤を提供することができる。ＴＤ−１は、動物または人（好ましい）の卵巣癌または前立腺癌に対して優れた抑制および治療効果があることが追加の実験結果により明らかになったものである。従って、ＴＤ−１はこれを有効成分として含む抗卵巣癌または抗前立腺癌剤として利用することができる。医薬品としての薬剤および投与形態等は本発明の第一の態様で説明したのと同様であってよい。
【００１８】
本発明の第四の態様
１）ＴＤ−１〜１０を含んでなる組成物の製造方法（抽出方法）
本発明によれば、ＴＤ−１〜１０を含んでなる組成物を得る方法を提案することができ、その方法は、ＴＤ−１〜１０を含んでなる原料を用意し、
必要に応じて加熱下において、前記原料を溶媒で抽出し、
前記抽出物をイオン交換クロマトグラフィーに供給し、第１の低級アルコールと、第２の低級アルコールと、必要に応じて低級エステルとをこれらの順により溶媒抽出し、
前記第２の低級アルコール画分中に、ＴＤ−１〜１０を含んでなる組成物を得ることを含んでなるものである。
【００１９】
原料
原料は、ＴＤ−１〜１０（およびＴＤ−１１〜１４）を有意量含んでなるものであればいずれのものであってよいが、好ましくはキク科植物またはアカバナ科チョウジタデ属植物が挙げられる。
キク科植物の好ましい具体例としてはニトベギク〔（ティソニア・ディベルシフォリア（ヘムスル）エー、グレイ：「Ｔｉｔｈｏｎｉａ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉａ（Ｈｅｍｓｌ）Ａ，Ｇｒａｙ」、（同族としてティソニア・フラティコサ・キャンバイ・アンド・ローズ：「Ｔｉｔｈｏｎｉａ ｆｒｕｔｉｃｏｓａＣａｎｂｙ ＆ Ｒｏｓｅ」）、（ティソニア・スカベリマア・ベンス：「Ｔｉｔｈｏｎｉａ ｓｃａｂｅｒｒｉｍａ Ｂｅｎｔｈ」）、（ティソニア・ロンゲラデイアタ（バートル）ブレイク：「Ｔｉｔｈｏｎｉａ ｌｏｎｇｅｒａｄｉａｔａ（Ｂｅｒｔｏｌ）Ｂｌａｋｅ」）〕等の約１０種類のもの、また、メキシコヒマワリ〔学名はティソニア・ロタンディフォリア（ミル）ブレイク：「Ｔｉｔｈｏｎｉａ ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉａ（Ｍｉｌｌ）Ｂｌａｋｅ〕）が挙げられる。
アカバナ科チョウジタデ属の植物の好ましい具体例としては、キダチキンバイ〔（ラドウィギア・オクトバルビス・ラーベン：「Ｌｕｄｗｉｇｉａ ｏｃｔｏｖａｌｖｉｓ Ｒａｖｅｎ」）、チョウジタデ（ラドウィギア・プロストラータ・ロックス：「Ｌｕｄｗｉｇｉａ ｐｒｏｓｔｒａｔａＲｏｘｂ」）〕が挙げられる。
【００２０】
抽出手法
ＴＤ−１〜１０を含んでなる原料を抽出する際に使用する溶媒の具体例としては、炭素数１〜５の低級アルコール、好ましくはエタノールを使用する。
また、第１の低級アルコールと、第２の低級アルコールとは同一または異なるものであってよいが好ましくは別のものがよい。第１の低級アルコールと第２の低級アルコールとは炭素数１〜６、好ましくは１〜３のものを挙げることができる。本発明にあっては、第１の低級アルコールがメタノールであり、第２の低級アルコールがエタノールである組合せが好ましくは挙げられる。本発明の好ましい態様によれば、このイオン交換クロマトグラフィーの抽出を迅速に行うために、第二の低級アルコールをカラム内に入れた後に、低級エステルを抽出溶媒として用いることが好ましい。溶媒抽出において、加熱してもよく、その加熱温度は−２０℃以上１００℃以下、好ましくは上限が８０℃以下であり、下限が１℃以上である。
使用するイオン交換クロマトグラフィーはカラムにイオン交換物質（好ましくは多孔質イオン交換樹脂：例えば、三菱化学株式会社製「ダイヤイオンＨＰ−２０」）を充填したものが挙げられる。
溶媒抽出後、この溶媒を蒸発し濃縮させて抽出物としてＴＤ−１〜１０の化合物を含んでなる組成物とすることが好ましい。
【００２１】
１−１）ＴＤ−１〜１０の単離
本発明によれば、ＴＤ−１〜１０の化合物を単離する方法を提案することができ、その方法は、ＴＤ−１〜１０を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物をクロマトグラフィーで分離することを複数回繰り返すことにより、
ＴＤ−１〜１０の化合物を得るものである。
【００２２】
本発明の好ましい態様によれば、ＴＤ−１〜１０を含んでなる組成物は先に説明したＴＤ−１〜１０を含んでなる組成物の製造方法で得たものを利用することが好ましい。分離溶媒は、水、アセトン、クロロホルム、炭素数５以下の低級アルコール、炭素数５以下の低級エステル、およびこれらの混合溶媒を使用することができる。使用するクロマトグラフィーは順相、逆相のものであってよく、充填剤として多孔質物質（好ましくはシリカゲル）を使用してよい。さらに、（高速）液体クロマトグラフィーを使用することができる。本発明にあっては、これらクロマトグラフィーの組合せによって、ＴＤ化合物を単離することが好ましい。
【００２３】
本発明によるＴＤ−１〜１０の化合物を単離する方法の具体例は、下記の方法が挙げられる。従って、カラム充填剤、クロマトグラフィー、抽出溶媒等は先のＴＤ化合物の単離方法で説明したのと同様であってよい。
１−２）ＴＤ−１〜１０を含む組成物の分画
本発明によれば、ＴＤ−１〜１０を含む組成物からＴＤ−１〜８を含む第１の組成物と、ＴＤ−９および１０を含む第２の組成物それぞれに分離する方法を提供することができ、その方法は、ＴＤ−１〜１０を含んでなる組成物を順相カラムクロマトグラフィー、次いで逆相カラムクロマトグラフィーで分離し、ＴＤ−１〜８を含む第１の組成物と、ＴＤ−９および１０を含む第２の組成物の二種に分離するものである。
【００２４】
本発明によれば、ＴＤ−１〜８を含む第１の組成物と、ＴＤ−９および１０を含む第２の組成物から、ＴＤ−１〜１０をそれぞれ単離する方法が提供される。具体的には以下の通りである。
１−３）ＴＤ−１、２、４および５の単離
ＴＤ−１〜８を含む第１の組成物を順相または逆相の（シリカゲル）カラムクロマトグラフィーを繰り返し行い、さらに（高速）液体クロマトグラフィーを行うことで、ＴＤ−１、ＴＤ−２、ＴＤ−４、ＴＤ−５をそれぞれ単離することができる。
本発明のより好ましい態様によれば、ＴＤ−１〜８を含む第１の組成物を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムを装着した高速液体クロマトグラフィーにより、順次分離精製することにより、ＴＤ−１、ＴＤ−２、ＴＤ−４、ＴＤ−５をそれぞれ単離することができる。
【００２５】
１−４）ＴＤ−３および７の単離
ＴＤ−１〜８を含む第１の組成物を順相または逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返し行い、ＴＤ−３および７をそれぞれ単離することができる。
本発明のより好ましい態様によれば、ＴＤ−１〜８を含む第１の組成物を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、順次分離精製することにより、ＴＤ−３およびＴＤ−７をそれぞれ単離することができる。
【００２６】
１−５）ＴＤ−６および８の単離
ＴＤ−１〜８を含む第１の組成物を順相または逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返し行い、ＴＤ−６および８をそれぞれ単離することができる。
本発明のより好ましい態様によれば、ＴＤ−１〜８を含む第１の組成物を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、順次分離精製することにより、ＴＤ−６およびＴＤ−８をそれぞれ単離することができる。
【００２７】
１−６）ＴＤ−９および１０の単離
ＴＤ−９および１０を含んでなる第２の組成物を順相または逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返し行い、ＴＤ−９および１０をそれぞれ単離することができる。本発明のより好ましい態様によれば、ＴＤ−９および１０を含んでなる第２の組成物を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより順次精製することにより、ＴＤ−９およびＴＤ−１０をそれぞれ単離することができる。
【００２８】
２）ＴＤ−１１〜１４を含んでなる組成物の製造方法（抽出）
ＴＤ−１１〜１４を含んでなる組成物の製造方法は、１）ＴＤ−１〜１０を含んでなる組成物の製造方法（抽出方法）の項で説明したのと同様であって良い。よって、この１）の項で説明した原料および抽出方法はＴＤ−１１〜１４を含んでなる組成物の製造方法においても同様であってよい。また、この製造方法により、ＴＤ−１１〜１４はＴＤ−１〜１０と混合された組成物として得られるものであってよい。
【００２９】
２−１）ＴＤ−１１〜１４の単離
本発明によれば、ＴＤ−１１〜１４の化合物を単離する方法を提案することができ、その方法は、ＴＤ−１１〜１４を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物をクロマトグラフィーで分離することを複数回繰り返すことにより、
ＴＤ−１１〜１４の化合物を得るものである。
本発明にあっては、ＴＤ−１１〜１４の単離はＴＤ−１〜１０の単離で説明したのと同様であって良い。また、この単離により、ＴＤ−１１〜１４はＴＤ−１〜１０と混合された組成物として得られるものであってよい。
【００３０】
２−２）ＴＤ−１１〜１４を含む組成物の分画
本発明によれば、ＴＤ−１１〜１４を含む組成物からＴＤ−１１とＴＤ−１４を含む第３の組成物と、ＴＤ−１２およびＴＤ−１３を含む第４の組成物それぞれに分離する方法を提供することができる。その方法は、ＴＤ−１１〜１４を含んでなる組成物を順相カラムクロマトグラフィー、次いで逆相カラムクロマトグラフィーで分離し、ＴＤ−１１と１４を含む第３の組成物と、ＴＤ−１２および１３を含む第４の組成物に分離するものである。
【００３１】
本発明の好ましい態様によれば、ＴＤ−１〜ＴＤ−１４を含む組成物を用いて第１の組成物〜第４の組成物を得る方法が提案される。この方法は、１−２）ＴＤ−１〜１０を含む組成物の分画と、２−２）ＴＤ−１１〜１４を含む組成物の分画と同様の手法で行うことができる。具体的には、ＴＤ−１〜ＴＤ−１４を含んでなる組成物を順相カラムクロマトグラフィー、次いで逆相カラムクロマトグラフィーで分離することにより、ＴＤ−１〜８を含む第１の組成物と、ＴＤ−９および１０を含む第２の組成物と、ＴＤ−１１とＴＤ−１４を含む第３の組成物と、ＴＤ−１２およびＴＤ−１３を含む第４の組成物をそれぞれ分離することができる。本発明の好ましい態様によれば、これら第１の組成物〜第４の組成物を用いて、上記または後記する方法を用いて、ＴＤ−１〜ＴＤ−１４をそれぞれ単離することができる。
【００３２】
２−３）ＴＤ−１１および１４の単離
ＴＤ−１１および１４を含んでなる第３の組成物を順相または逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返し行い、ＴＤ−１１および１４をそれぞれ単離することができる。本発明のより好ましい態様によれば、ＴＤ−１１および１４を含んでなる第３の組成物を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、順次分離精製することにより、ＴＤ−１１およびＴＤ−１４をそれぞれ単離することができる。
【００３３】
２−４）ＴＤ−１２および１３の単離
ＴＤ−１２および１３を含んでなる第４の組成物を順相または逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返し行い、ＴＤ−１２および１３をそれぞれ単離することができる。本発明のより好ましい態様によれば、ＴＤ−１２および１３を含んでなる第４の組成物を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより順次精製することにより、ＴＤ−１２および１３をそれぞれ単離することができる。
【００３４】
実施例
ＴＤ−１〜１４の化合物の抽出および分画 
ニトベギク（ティソニア・ディベルシフォリア（ヘムスル）エー、グレイ）の地上部分を乾燥した粉末３．０ｋｇを８０％エタノール４５リットルで６５℃、２時間加熱抽出後、濾過し不純物を取り除いた後に溶媒を除去し濃縮エキスとした。
この濃縮エキス（３２０ｇ）をイオン交換カラムクロマトグラフィー（イオン交換剤：ダイヤイオンＨＰ−２０）に充填した。次に、第１のアルコール溶媒（メタノール：水の比率が５０％以上）を流し、次に、第２のアルコール溶媒（８０％エタノール）４５リットルを流し、最後に低級エステルである酢酸エチルを流して、６５℃、２時間加温抽出し、第２のアルコール画分を得た。この第２のアルコール画分を濾過し不純物を除去した後に第２のアルコール溶媒を蒸発させて濃縮した抽出物を得た。
次に、この抽出物（３２０ｇ）を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルムとメタノールの比率が９：１の溶媒）、次いで逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（充填剤：ＯＤＳシリカゲル、メタノールと水の比率が１：１の溶媒）に付し、２−１画分（ＴＤ−１〜８を含有）、２−２画分（ＴＤ−１１および１４を含有）、２−３画分（ＴＤ−９および１０を含有）、２−４画分（ＴＤ−１２および１３を含有）のそれぞれを得た。順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては固定相であるシリカゲルへの吸着力の差により、逆相ＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、オクタデシル基でシリカゲル表面を置換したものを充填剤として使用し、それにより固定相（ＯＤＳシリカゲル）と移動相（溶媒）への分配作用を利用して、上記４つの画分を分離した。
２−１画分〜２−４画分のそれぞれについて下記の処理を行い、各ＴＤ化合物を単離した。
【００３５】
２−１画分／ＴＤ−１、２、４および５の単離
２−１画分の一部を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルムとアセトンとの比率が９：１、４９：１の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（アセトニトリルと水との比率が２：３の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノールと水との比率が１１：９の溶媒）、逆相シリカゲルカラムを装着した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（メタノールと水との比率が７：３、３：２の溶媒）により、順次精製することにより、ＴＤ−１（２８．０ｍｇ）、ＴＤ−２（１４．０ｍｇ）、ＴＤ−４（３５．３ｍｇ）、ＴＤ−５（１３．０ｍｇ）を単離した。
【００３６】
２−１画分／ＴＤ−３および７の単離
２−１画分の一部を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルムとアセトンとの比率が４９：１の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノールと水との比率が１１：９の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（アセトニトリルと水との比率が１：２の溶媒）により順次精製することにより、ＴＤ−３（５６．２ｍｇ）およびＴＤ−７（５０．０ｍｇ）を単離した。
【００３７】
２−１画分／ＴＤ−６および８の単離
２−１画分の一部を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルムとアセトンの比率が４９：１、１９：１の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノールと水との比率が３：２の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（アセトニトリルと水との比率が１：２の溶媒）により順次精製することにより、ＴＤ−６（１４．０ｍｇ）およびＴＤ−８（８．７ｍｇ）を単離した。
【００３８】
２−３画分／ＴＤ−９および１０の単離
２−３画分を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルムとアセトンとの比率が１９：１、４：１、２：１の溶媒）、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサンとアセトンとの比率が９：１、７：３の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（アセトニトリルと水との比率が９：１、４：１、３：１、２：１、１：１の溶媒）により順次精製することにより、ＴＤ−９（８．４ｍｇ）およびＴＤ−１０（７．８ｍｇ）を単離した。
【００３９】
２−２画分／ＴＤ−１１および１４の単離
２−２画分を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルムとアセトンとの比率が４９：１の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノールと水の比率が１：１の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（アセトニトリルと水の比率が３：１，５：８，１：２の溶媒）により順次精製することにより、ＴＤ−１１（６７．９ｍｇ）およびＴＤ−１４（８．７ｍｇ）を単離した。
【００４０】
２−４画分／ＴＤ−１２および１３の単離
２−４画分を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルムとアセトンとの比率が４：１，３：２の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノールと水の比率が１：１の溶媒）、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（アセトニトリルと水の比率が１：２，１：１，２：１の溶媒）により順次精製することにより、ＴＤ−１２（１８．８ｍｇ）およびＴＤ−１３（６０．８ｍｇ）を単離した。
【００４１】
ＴＤ−１〜１４の構造決定 
上記で得られたＴＤ−１〜ＴＤ−１４の構造を決定した。
（１）新規化合物の構造決定
新規化合物質であるＴＤ−３、ＴＤ−５およびＴＤ−６は下記のスペクトルデータ等により構造を決定した。
【００４２】
ＴＤ−３（Ｃ２０Ｈ３０Ｏ７）
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｒ，１０Ｒ）−１−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｅｔｈｏｘｙ−３，１０−ｅｐｏｘｙ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｅｒｍａｃｒａ−１１（１３）−ｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ
１）性状：白色粉末  [α]D26 -102度 (メタノール)
２）HR-ESI-MS m/z： 383.2058 (Calcd for C20H31O7, 383.2070)
３）UV (メタノール)λmax (log ε)： 216 (log ε = 3.81)
４）IR (film) cm-1：3446, 2972, 2933, 1761, 1736, 1460, 1317, 1261, 1194, 1155, 1072, 1007, 984. 
５）1H-NMR (重クロロホルム) ppm： 6.19 (1H, d, J=3.4 Hz, H-13a), 5.54 (1H, ddd, J=11.4, 5.3, 2.6 Hz, H-8), 5.47 (1H, d, J=2.9 Hz, H-13b), 4.46 (1H, ddd, J=10.6, 6.9, 1.1 Hz, H-6), 4.06 (1H, dd, J=9.5, 8.6 Hz, H-1), 3.92 (1H, m, H-7), 3.10 (3H, s, OMe), 2.49 (1H, dd, J=14.5, 9.5 Hz, H-2b), 2.37 (1H, m, H-2'), 2.06 (1H, m, H-5b), 1.99 (1H, m, H-4), 1.97 (1H, dd, J=14.5, 5.4 Hz, H-9a), 1.81 (1H, dd, J=14.5, 8.6 Hz, H-2a), 1.72 (1H, br d, J=13.3 Hz, H-5a), 1.63 (1H, dd, J=14.5, 11.4 Hz, H-9b), 1.37 (3H, s, Me-14), 1.01 and 0.99 (each 3H, d, J=7.0 Hz, Me-3' and Me-4'), 0.99 (3H, d, J=7.0 Hz, Me-15).
６）13C-NMR (重クロロホルム) ppm：79.7 (C-1), 41.7 (C-2), 108.8 (C-3), 46.4 (C-4), 38.2 (C-5), 82.3 (C-6), 48.2 (C-7), 70.2 (C-8), 35.1 (C-9), 81.3 (C-10), 137.7 (C-11), 169.8 (C-12), 121.7 (C-13), 24.1 (C-14), 18.3 (C-15), 176.7 (C-1'), 34.5 (C-2'), 19.1 (C-3' or C-4’）, 19.6 (C-3’and C-4'), 49.2 (OMe).
【００４３】
ＴＤ−５（Ｃ１３Ｈ２2Ｏ3）
（４Ｓ，５Ｒ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−［（１Ｅ，３Ｓ）−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｂｕｔｅｎｙｌ］−３，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｏｎｅ）
１）性状：白色粉末  [α]D26 -8度 (メタノール)
２）HR-ESI-MS m/z: 227.1050 (Calcd for C13H22O3, 227.1647)
３）IR (film) cm-1: 3415, 2968, 11900, 2877, 1695, 1454, 1412, 1369, 1286, 1140, 1061, 1030, 977, 939.
４）1H-NMR (重クロロホルム) ppm: 2.77 (1H, d, J=13.6 Hz, H-2ax), 1.84 (1H, dd, J=13.6, 2.2 Hz, H-2ax), 2.35 (1H, t-like, J=12.9 Hz, H-4ax), 2.13 (1H, ddd, J=13.6, 4.5, 2.2 Hz, H-4eq), 2.19 (1H, ddq, J=12.9, 6.5, 4.5 Hz, H-5), 5.63 (1H, dd, J=15.8, 0.8 Hz, H-7), 5.77 (1H, dd, J=15.8, 5.7 Hz, H-8), 4.36 (1H, ddd, J=6.4, 5.7, 0.8 Hz, H-9), 1.25 (3H, d, J=6.4 Hz, Me-10), 0.87 (3H, s, Me-11), 0.90 (3H, s, Me-12), 0.81 (3H, d, J=6.5 Hz, Me-13).
５）13C-NMR (重クロロホルム) ppm: 42.5 (C-1), 51.4 (C-2), 211.4 (C-3), 45.1 (C-4), 36.4 (C-5), 77.0 (C-6), 131.8 (C-7), 135.2 (C-8), 68.3 (C-9), 23.9 (C-10), 24.5 (C-11), 24.4 (C-12), 15.9 (C-13).
【００４４】
ＴＤ−６（Ｃ２０Ｈ２８Ｏ７）
（１Ｓ，３Ｒ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，１０Ｒ）−１−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｅｔｈｏｘｙ−３，１０−ｅｐｏｘｙ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｅｒｍａｃｒａ−４，１１（１３）−ｄｉｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ
１）性状：白色粉末  [α]D26 -110度 (メタノール)
２）HR-ESI-MS m/z: 381.1947 (Calcd for C20H29O7, 381.1913)
３）UV (メタノール) λmax (log ε)：213 (log ε= 3.88)
４）IR (film) cm-1: 3421, 2972, 1763, 1732, 1587, 1282, 1186, 1111, 1064, 991
５）1H-NMR (重クロロホルム) ppm: 6.20 (1H, d, J=2.8 Hz, H-13a), 5.66 (1H, m, H-5), 5.59 (1H, ddd, J=11.2, 5.0, 4.6 Hz, H-8), 5.55 (1H, d, J=2.3 Hz, H-13b), 5.20 (1H, m, H-6), 4.16 (1H, m, H-7), 3.77 (1H, dd, J=11.1, 3.9 Hz, H-1), 3.11 (3H, s, OMe), 2.91 (1H, br d, J=11.3 Hz, H-2b), 2.34 (1H, m, H-2'), 2.31 (1H, m, H-2a), 1.82 (1H, dd, J=14.1, 5.0 Hz, H-9a), 1.70 (3H, t-like, J=1.8 Hz, Me-15), 1.66 (1H, dd, J=14.1, 11.2 Hz, H-9b), 1.44 (3H, s, Me-14), 1.00 (3H, d, J=7.1 Hz, Me-3' or Me-4'), 0.97 (3H, d, J=7.2 Hz, Me-3' or Me-4').
６）13C-NMR (重クロロホルム) ppm: 77.1 (C-1), 45.2 (C-2), 109.7 (C-3), 138.4 C-4), 131.2 (C-5), 75.8 (C-6), 49.6 (C-7), 71.2 (C-8), 39.7 (C-9), 87.5 (C-10), 136.2 (C-11), 169.5 (C-12), 122.7 (C-13), 20.8 (C-14), 21.6 (C-15), 175.9 (C-1'), 334.0 (C-2'), 18.6 (C-3' or C-4'), 19.0 (C-3' or C-4'), 50.1 (OMe).
【００４５】
（２）既知化合物の構造決定
Ａ）ＴＤ−１、ＴＤ−２、ＴＤ−４、ＴＤ−７、ＴＤ−８、ＴＤ−９、ＴＤ−１０は既知化合物であり、各種スペクトルデータを上記した非特許文献１〜１３の記載内容に基づいてこれらの構造を決定した。具体的には下記の通りであった。
ＴＤ−１
（１Ｒ，３Ｒ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，１０Ｒ）−１，３−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−３，１０−ｅｐｏｘｙ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｅｒｍａｃｒａ−４，１１（１３）−ｄｉｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ
ＴＤ−２
（６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，１０Ｒ）−１０−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｏｘｏ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｅｒｍａｃｒａ−１，４，１１（１３）−ｔｒｉｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ
ＴＤ−４
（１Ｒ，３Ｒ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，１０Ｒ）−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｍｅｔｈｏｘｙ−３，１０−ｅｐｏｘｙ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｅｒｍａｃｒａ−４，１１（１３）−ｄｉｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ
ＴＤ−７
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｒ，１０Ｒ）−１，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３，１０−ｅｐｏｘｙ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｅｒｍａｃｒａ−１１（１３）−ｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ
ＴＤ−８
（１Ｒ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，１０Ｒ）−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，１０−ｅｐｏｘｙ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｇｅｒｍａｃｒａ−４，  １１（１３）−ｄｉｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ
ＴＤ−９
（３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｒ，１０Ｓ）−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，１０−ｅｐｏｘｙ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｅｒｍａｃｒａ−１１（１３）−ｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ
ＴＤ−１０
（３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｒ，１０Ｓ）−３−ｍｅｔｈｏｘｙ−３，１０−ｅｐｏｘｙ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｅｒｍａｃｒａ−１１（１３）−ｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ  
【００４６】
Ｂ）ＴＤ−１１〜１４は既知化合物であり、各種スペクトルデータを上記した非特許文献１０〜１３の記載内容に基づいてこれらの構造を決定した。具体的には下記の通りであった。
ＴＤ−１１（一般名：タギチニンＦ）
（３Ｒ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｒ，１０Ｒ）−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−３，１０−ｅｐｏｘｙ−８−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｅｒｍａｃｒａ−１，４，１１（１３）−ｔｒｉｅｎ−６，１２−ｏｌｉｄｅ
ＴＤ−１２（一般名：ルテオリン）
３’，４’５，７−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙ−ｆｌａｖｏｎｅ
ＴＤ−１３（一般名：ネペチン）
３’，４’，５，７−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙ−６−ｍｅｔｈｏｘｙ−ｆｌａｖｏｎｅ
ＴＤ−１４
７ａ，１０ａ−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｏｘｏ−８ｂ−ｉｓｏｂｕｔｙｒｙｌｏｘｙｇｕａｉａ−１１（１３）−ｅｎ−１２，６ａ−ｏｌｉｄｅ
【００４７】
評価試験
評価試験１：ＴＤ−１〜１０の評価試験
ＴＤ−１〜１０の抗癌作用を、ヒト急性骨髄性白血病細胞株ＨＬ−６０を用いた細胞毒性活性の数値により検討した。具体的には下記の通りに試験した。
ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中で前培養したＨＬ−６０細胞数を１ｍＬ中４×１０４個となるようにＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁させ、懸濁液を９６−ｗｅｌｌマイクロプレートの各ｗｅｌｌに１９６ｍＬずつ分注し、３７℃、５％炭酸ガス中、２４時間プレインキュベートした。  続いて、コントロールとしてＥｔＯＨ−Ｈ２Ｏ（１：１）、サンプルとして各ＴＤ化合物をＥｔＯＨ−Ｈ２Ｏ（１：１）に溶解したものを各々４ｍＬずつ各ｗｅｌｌに添加した。３７℃、５％炭酸ガス中、７２時間インキュベートした後、ＭＴＴ試薬を１０ｍＬずつ各ｗｅｌｌに添加し、さらに４時間インキュベートした。培地を除去した後、生成したＭＴＴホルマザンを１７５ｍＬＤＭＳＯに溶解させ、マイクロプレートリーダーを用いて、吸光波長５５０ｎｍで検出して、コントロールに対する生細胞数を算出した。ＩＣ５０値は用量−作用曲線から算出した。
ＴＤ−１〜１０のＩＣ５０値（μｇ／ｍＬ）は下記の表１の通りであった。
【００４８】
表１
化合物    ＩＣ５０値（μｇ／ｍＬ）
ＴＤ−１    （０．６０）
ＴＤ−２    （０．３８）
ＴＤ−３    （４．９７）
ＴＤ−４    （０．０５）
ＴＤ−６    （２．５０）  
ＴＤ−７    （３．８７）  
ＴＤ−８    （０．９２）  
ＴＤ−９    （２．５０）  
ＴＤ−１０  （０．７８）          
【００４９】
評価試験２：ＴＤ−１の評価試験（抗癌性試験）
ＴＤ−１の抗癌性を調べるために、ヒト培養癌細胞パネルスクリーニング試験を行った。具体的には、ヒト培養がん細胞パネルスクリーニング試験は、「癌と化学療法（矢守隆夫），２４，１２９−１３５，１９９７」に記載された方法に準じて、ＴＤ−１について全３９種のヒト腫瘍細胞に対する５０％細胞増殖抑制濃度（ＧＩ５０）を測定することにより行った。その結果は下記表２に記載する通りであった。
表２
ＴＤ−１                         ＧＩ５０（μＭ）             
全３９種の癌細胞の平均値            ６．８
卵巣癌細胞系
ＯＶＣＡＲ−３                      ３．３
ＯＶＣＡＲ−４                      ５．６
ＯＶＣＡＲ−５                      ２．９
ＯＶＣＡＲ−８                      ３．６
ＳＫ−ＯＶ−３                      ４．０
前立腺癌細胞系
ＤＵ−１４５                        ４．２
ＰＣ−３                            ３．３                    
【００５０】
評価結果
表２の結果の通り、ＴＤ−１は卵巣癌細胞系、前立線癌細胞系のＧＩ５０の値が全３９種癌細胞のＧＩ５０の平均値より数値が低く、これらの癌細胞系に対して抗癌作用を有することが理解される。
【手続補正書】
【提出日】平成17年5月17日(2005.5.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
【化１】
2005179339.tif 000025
［上記式中、Ｒ１は水酸基を示し、Ｒ２はメトキシ基を示す］
で表される、化合物。
【請求項２】
下記一般式（ＩＩ）：
【化２】
2005179339.tif 000026
［上記式中、
Ｒ３は水酸基を示し、かつ、Ｓ立体配座とされてなり、
Ｒ４はメトキシ基を示す］
で表される、化合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物を有効成分とする、抗癌剤。
【請求項４】
動物または人の癌治療に使用される、請求項３に記載の抗癌剤。
【請求項５】
前記癌が白血病である、請求項３または４に記載の抗癌剤。
【請求項６】
前記白血病が急性骨髄性白血病である、請求項５に記載の抗癌剤。
【請求項７】
請求項１または２に記載された化合物を含んでなる組成物を製造する方法であって、
前記各化合物を含んでなる原料を用意し、
必要に応じて加熱下において、前記原料を溶媒で抽出し、
前記抽出物をイオン交換クロマトグラフィーに供給し、第１の低級アルコールと、第２の低級アルコールと、必要に応じて低級エステルとをこれらの順により溶媒抽出し、
前記第２の低級アルコール画分中に、前記各化合物を含んでなる組成物を得ることを含んでなる、方法
【請求項８】
前記原料がキク科植物またはアカバナ科チョウジタデ属植物である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
請求項１または２に記載された化合物を含んでなる組成物を第１の組成物と第２の組成物とに分離する方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物を順相クロマトグラフィー、次いで逆相クロマトグラフィーで分離し、第１の組成物と第２の組成物とに分離するものであり、
第１の組成物が請求項１または２に記載された化合物を含んでなるものであり、
第２の組成物が上記一般式（Ｉ）において、Ｒ１が水素原子を示しＲ２が水酸基を示す化合物と、Ｒ１が水素原子を示しＲ２がメトキシ基を示す化合物とを含んでなるものである、方法。
【請求項１０】
前記組成物が請求項７または８に記載の方法で得られたものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１または２に記載された化合物をそれぞれ得る方法であって、
前記各化合物を含んでなる組成物を用意し、
前記組成物をクロマトグラフィーで分離することを複数回繰り返すことにより、前記各化合物をそれぞれ得ることを含んでなる、方法。
【請求項１２】
前記クロマトグラフィーで分離することが、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィーまたはこれらを組合せたものにより行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物が請求項９または１０に記載の方法で得られた第１の組成物である、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１２または１３のいずれか一項に記載の方法で得られた、請求項１または２に記載された、化合物。