(57)【要約】【課題】  高価で大掛かりな装置を必要とせず、常温下で長期間にわたり微生物を安定的に保存することができ、しかも保存している微生物の生死状態や他の有害菌の混入の有無等を肉眼で確認することができる微生物保存用ゲルを提供する。【解決手段】  微生物にバイオフィルムを形成させることにより長期保存を可能にした。バイオフィルムを形成させる媒体の一例として、無機塩化合物と炭素源とを含有し、ゲル化剤を加えることによってゲル状化したゲルが挙げられる。この場合、できるだけ窒素源を混入させないようにするのが好ましく、また透明度が高いゲルにするのが望ましい。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物にバイオフィルムを形成させることにより保存することを特徴とする微生物保存用ゲル。
【請求項２】
請求項１において、前記微生物保存用ゲルは、少なくとも無機塩化合物と炭素源とを含有し、ゲル化剤によってゲル状化されていることを特徴とする微生物保存用ゲル。
【請求項３】
請求項１または請求項２において、窒素源を混入させていないことを特徴とする微生物保存用ゲル。
【請求項４】
請求項１から請求項３のいずれかにおいて、ゲル化剤として、透明なゲルを形成するゲル化剤を使用することを特徴とする微生物保存用ゲル。
【請求項５】
請求項１から請求項４のいずれかにおいて、ゲル化剤として、細菌由来の多糖類を使用することを特徴とする微生物保存用ゲル。
【請求項６】
請求項５において、前記細菌由来のゲル化剤として、ジェランガムを使用することを特徴とする微生物保存用ゲル。
【請求項７】
請求項６において、ｐＨ値が３．５〜７．２の範囲に設定されていることを特徴とする微生物保存用ゲル。
【請求項８】
請求項６または請求項７において、前記無機塩化合物および前記炭素源を溶解した水溶液に対し、前記ジェランガムを０．２〜０．６％（ｗ／ｖ）添加してなることを特徴とする微生物保存用ゲル。
【請求項９】
請求項６から請求項８のいずれかにおいて、前記ジェランガムの針状結晶化を防止する針状結晶化防止材料を含有することを特徴とする微生物保存用ゲル。
【請求項１０】
請求項９において、前記針状結晶化防止材料として、多孔性セルロース球を使用することを特徴とする微生物保存用ゲル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細菌等の微生物を保存する微生物保存技術に関し、特に、微生物を室温で長期間にわたって保存するのに好適な微生物保存用ゲルに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来より、細菌等の微生物を保存する技術として、（１）植え継ぎ法、（２）凍結保存法および（３）凍結乾燥保存法等が知られている。（１）の植え継ぎ法は、生育の早い栄養培地で寒天斜面培地あるいは斜面のない固体培地を作り、画線あるいは穿刺で植え継いでゆく方法である。（２）の凍結保存法は、微生物を１０〜２０％のグリセロール含有凍結保存液として懸濁し、これを−８０℃に凍結するものである。（３）の凍結乾燥保存法は、分散液に懸濁した微生物をアンプルに収容し、これを凍結乾燥機により真空処理して凍結状態のまま水分を直接昇華させる方法である。
【０００３】
これらの方法のうち、特開平６−２９２５６４号公報には、上記（２）に該当する凍結保存法が開示されている（特許文献１）。この公報に記載の凍結保存法は、生物の細胞または組織をグリセリン２０〜７０％およびショ糖１０〜７０％を含有する水溶液からなる凍害防御液で処理し、これを極低温下で凍結させるようになっている。
【０００４】
【特許文献１】特開平６−２９２５６４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、上述した（１）の方法は、頻繁に微生物を植え継いで増殖させなければならず、多大な労力を必要とする上、汚染微生物を混入させる頻度が多くなるため生存期間が短い。また、常にＤＮＡ（DeoxyriboNucleic Acid）の複製を伴うレプリカを作成させ続ける状態であるため、何らかの原因で異なった複製が作成されてしまう場合がある。この場合、保存株の形質が変わってしまうという問題がある。また、致死的な性質が蓄積されると増殖能力が消失してしまうという問題もある。
【０００６】
また、特開平６−２９２５６４号公報に記載された発明を含め、（２）や（３）の方法では、微生物は増殖をせず、そのままの状態で保存されるため、細胞に傷みが生じ始めても、微生物自身がこれを修復したり回復させることができず、死滅する可能性が高くなる。また、高価な超低温冷凍庫や凍結乾燥機を必要とする上、保存中の微生物の存否を観察できないため培地に広げて確認しなければならない。その一方で解凍した微生物は、通常、再び保存することができない。したがって、微生物の保存者は、微生物が生存しているかどうかわからないまま保存していかなければならず、特に保存条件に関するデータの少ない環境微生物の場合、保存菌株を期せずして喪失してしまうという問題がある。さらに、（３）の方法では、極めて特殊な技術を習得していなければ、凍結乾燥操作中に微生物を汚染させてしまう可能性が高いという問題がある。
【０００７】
特に熱帯地域の国々では、細菌保存の難しい気候であって、植え継ぎ技術の熟練者が少なく、高価な超低温フリーザーや他の保存装置を購入できないなどの理由により、ある過程や動植物で長期にわたって受け継がれてきたような貴重な有用細菌等を失ってしまうケースがあり、深刻な問題となっている。
【０００８】
本発明は、このような問題点を解決するためになされたものであって、高価で大掛かりな装置を必要とせず、常温下で長期間にわたり微生物を安定的に保存することができ、しかも保存している微生物の生死状態や他の有害菌の混入の有無等を肉眼で確認することができる微生物保存用ゲルを提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明に係る微生物保存用ゲルの特徴は、微生物に３次元の膜構造であるバイオフィルムを形成させることにより保存する点にある。
【００１０】
また、本発明において、前記微生物保存用ゲルは、少なくとも無機塩化合物と炭素源とを含有し、ゲル化剤によってゲル状化されている点にある。この場合、微生物保存用ゲルにはできるだけ窒素源を混入させないようにすることが好ましい。
【００１１】
さらに、本発明において、ゲル化剤は、視覚によって外部から微生物の状態を正確に観察することができるようにするため、できるだけ透明度の高いゲルを形成し得るものが好ましい。
【００１２】
また、本発明において、微生物がバイオフィルムを形成する際、このマトリックスを生体異物ではなく微生物集団の一部であるかのごとく認識しやすい環境を整えるため、前記ゲル化剤として、細菌由来の多糖類を使用することが好ましく、その一つとしてジェランガムが好ましい。
【００１３】
さらに、本発明において、微生物保存用ゲルのｐＨ値は３．５〜７．２の範囲にすることが好ましい。
【００１４】
また、本発明において、前記無機塩化合物および前記炭素源を溶解した水溶液に対し、前記ジェランガムを０．２〜０．６％（ｗ／ｖ）添加して構成されていることが好ましい。
【００１５】
また、本発明において、前記ジェランガムの針状結晶化を防止する針状結晶化防止材料を含有することが好ましく、特に、多孔性セルロース球が望ましい。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、高価で大掛かりな装置を必要とせず、常温下で長期間にわたり微生物を安定的に保存することができ、しかも保存している微生物の生死状態や他の細菌の混入の有無等を肉眼で確認することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明に係る微生物保存用ゲルおよびその製造方法の実施の一形態について図面を用いて説明する。
【００１８】
本願発明者らは、前述した課題に対して鋭意研究した結果、１）常温で長期間保存が可能である、２）保存している微生物を外部から視覚によって観察できる程度に高い透過性を有する、３）ゲル状態から振動を与えることによって簡単に液化して微生物を容易に取り出すことができる、４）容易に再保存が可能である等の特徴を備えた微生物を保存するための媒体を発明するに至った。この発明に係る媒体は、微生物にバイオフィルムを形成させるゲル状媒体であり、たとえば、無機塩化合物と炭素源とを含有し、ゲル化剤によってゲル状化されることにより構成される。
【００１９】
本発明に係る微生物保存用ゲルの一実施形態の組成物について詳述すると、無機塩化合物は、微生物の初期増殖に必要な無機塩を含有している。しかし、この無機塩化合物には微生物の窒素源となり得る成分が含まれていない。通常、窒素がなければ微生物は生きていけない。しかし、多くの微生物が窒素源を原料としてアンモニアを代謝産物として生成し、自らの生育環境を悪化させて死滅してしまうおそれがある。必要以上の窒素源の存在は、逆に好ましくない。例えば、高アンモニア、高タンパク、高アミノ酸のような培地組成は長期保存の観点から好ましくない。したがって、本実施形態における無機塩化合物は、少なくともアンモニウム塩や硝酸塩、あるいは含窒素有機物を含んでおらず、微生物が利用する窒素源を存在させていないことが望ましい。
【００２０】
前述した無窒素の無機塩化合物の一例として、本実施形態では、アゾトバクター培養用のいわゆるウィノグラドスキィ（Winogradsky）無窒素無機塩培地（以下、ウィノグラドスキィ培地）を使用している。本実施形態で示すウィノグラドスキィ培地の組成は、リン酸カリ（ＫＨ２ＰＯ４）５０．０ｇ／ｌと、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ）２５．０ｇ／ｌと、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）２５．０ｇ／ｌと、硫酸第一鉄（ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ）１．０ｇ／ｌと、モリブデン酸ナトリウム（Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ）１．０ｇ／ｌと、硫酸マンガン（ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ）１．０ｇ／ｌをストック液として、このストック液５ｍｌと超純水１０００ｍｌとから構成されている。
【００２１】
また、本実施形態では、微生物に必須の無機金属元素であるカルシウムを加える目的で、炭酸カルシウム（ＣａＣＯ３）を別途、添加している。このように炭酸カルシウムを別途混合させるのは、他の無機塩化合物と高濃度で混合すると、極めて難溶性の硝酸カルシウムを形成し、他の金属塩を共沈させてしまうからである。また、この炭酸カルシウムを添加しないと、ゲル化剤によりゲル状化しない場合もある。このため、本実施形態では、微細粉末状の炭酸カルシウムをウィノグラドスキィ培地の一倍希釈液の最終工程で加え、完全な無機塩溶液を生成している。
【００２２】
つぎに、炭素源は、微生物のエネルギー源であり細胞を構成させる役割を果たすものである。本実施形態では、保存中の微生物に最低限の増殖能力を持たせるためだけの量を添加する。言葉を換えれば、微生物が不必要な増殖をしない半休眠状態に保持し、形質の変動をほとんどさせない環境にするためである。本実施形態で用いられる炭素源としては、ブドウ糖（Glucose）、ショ糖（Saccharose）、マンニット（Mannitol）等の各種の糖類、有機酸ナトリウム塩、有機酸カリウム塩、クエン酸、リンゴ酸等が挙げられる。特に、ショ糖やマンニット等は、不純物を含まない良好な結晶であり、かつ、前述した無機塩溶液のｐＨ値や微生物が成育する途上の培地ｐＨ値を急激に変化させないので好ましい。
【００２３】
つぎに、ゲル化剤について説明する。本実施形態においてゲル化剤を加える目的は、第１に、保存する微生物が受ける衝撃を緩衝させるためである。つまり、微生物を固体中で保存する場合、その微生物は外部からの衝撃を直接的に受けてしまって損傷しやすい。また、微生物を液体中で保存する場合、その微生物は、容器壁面に衝突したり、底に沈んだものは凝集塊を形成してしまうため、損傷を受けやすい。これに対し、微生物を半流動性のゲル中で保存する場合、その微生物は、ゲルの作用により動きが緩慢になって壁面に強く衝突することもなく、外部から受ける衝撃もゲルによって緩衝されるため、微生物が死滅したり、遺伝子が傷つき形質変化してしまう確率を低減できる。このため、ゲルが微生物を保存するのに適当な硬度、粘度、弾性を有するものであり、かつ、微生物による分解を受けにくいものが好ましい。
【００２４】
また、本実施形態で添加されるゲル化剤の第２の目的は、ゲル化された保存用ゲル中に保存された微生物がバイオフィルムを形成して、代謝活動を一時的に休止させ得る作用を有することである。本実施形態では、ゲル化剤として細菌由来の多糖類であるジェランガム（Gellan gum）を使用している。このジェランガムを加えて微生物保存用ゲルを生成し、微生物を保存して所定期間経過させた後、酢酸エチルを被せて抽出したところ、バイオフィルムを形成する内性因子であるＮ−アシルホモセリンラクトン類が多数抽出された。これはジェランガムが細菌由来であることで、微生物にとっても生体異物としてではなく微生物集団の一部として認識しやすいのではないかと考えられる。
【００２５】
また、本実施形態で使用するゲル化剤としては、微生物の保存中における死滅を防ぐため、高濃度で毒性を示すようなカチオン種をため込まない性質や、栄養素やリン酸塩の透過と吸収を妨げない性質を有するものが好ましい。
【００２６】
さらに、保存する微生物周辺のｐＨ値を長期間維持し得る性質、ラジカルを消去したり、あるいは溶存酸素濃度を一定に保つなどの付加的な機能を持るゲル化剤であればより好ましいと考えられる。
【００２７】
本実施形態ではゲル化剤としてジェランガムを使用しているが、これに限らず、微生物との相性がよく、微生物がバイオフィルムを形成するようなゲル化剤であればよく、そのような性質を備えた人工ゲル化剤であってもよい。なお、従来よりゲル化剤としてよく知られている寒天やカラギーナンおよびアルギン酸等は、カルボキシ基や硫酸エステル基を有しており、特定の金属と強くキレートしたり、大量のナトリウムをゲル内に濃縮したりする性質を有している。このため、金属イオン類のインバランスを引き起こし、微生物の生育を阻害するため、本発明のように保存を目的とする媒体には使用できない。
【００２８】
また、本実施形態の微生物保存用ゲルに、多孔性セルロース球等の多孔質な不溶性材料を混入させて凍結乾燥させると、保存期間が大幅に延長されて恒久的な保存が可能である。詳述すると、ジェランガムによりゲル化されたゲルは、急速に乾燥されると針状の方向性を持った擬結晶を生じさせる性質を有している。この擬結晶は、細かな繊維を束ねたようなものであるため、内部に保存されている微生物が押し潰されたり、その繊維からはみ出して放出されてしまうおそれがある。このような現象を回避するには、ジェランガムに３次元構造を保持させるような相互作用を有するマトリクスを混入させ、ジェランガム繊維の方向性を喪失させる必要がある。
【００２９】
したがって、本実施形態では、多孔性セルロース球を添加することにより立体的な空間を構築させて針状結晶の形成を阻害している。これにより、本実施形態の微生物保存用ゲルに閉じ込められた微生物は、凍結乾燥させても、立体的な空間の中で高分子のマトリクス格子に包含されるため、ダメージを受けることなく穏やかに保存される。
【００３０】
なお、多孔質の不溶性材料としては、多孔性セルロース球に限られず、活性炭やセライトを使用することも可能と考えられる。ただ、活性炭は表面場の吸着性が強いため、多孔性セルロース球に比べると不都合が生じるおそれがある。また、セライトは吸着力は弱いが、有効細孔容積が小さいという欠点がある。
【００３１】
つぎに、本実施形態の微生物保存用ゲルの製造方法について図１を用いて説明する。
【００３２】
本実施形態では、まず、窒素源を含有しない無機塩化合物として上述したウィノグラドスキィ培地を生成し、これに水酸化ナトリウム（４Ｍ  ＮａＯＨ）を加えてｐＨ値を７．２に調整し、均一な無機塩溶液である懸濁液を生成する（ステップＳ１）。このとき、ｐＨ値を７．２に調整するのは、ウィノグラドスキィ培地中の無機塩の安定性を保つためである。すなわち、ｐＨ値が約７．２に設定されていれば、無機塩はそれぞれ細かい不溶物として存在するが、ｐＨ値が酸性へ傾くと、石膏のように不溶性かつ結晶性の塊となって沈殿し、全く懸濁できなくなるからである。
【００３３】
つぎに、１リットルの超純水に前記懸濁液５ｍｌと、炭素源であるショ糖０．２〜１．０％と、微細粉末状の炭酸カルシウム１００ｍｇとを添加して溶解させ基礎水溶液を生成する（ステップＳ２）。そして、この基礎水溶液に、超音波を１５〜３０分程度かけて難溶性の無機塩を溶解させる（ステップＳ３）。その後、前記基礎水溶液に硫酸（２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４）を用いてｐＨ値６．２に調整した後、孔径が０．４５μｍのメンブレンフィルターにより濾過する（ステップＳ４）。これにより、不溶性微粒子が除去されて高い透明度が得られる。
【００３４】
基礎水溶液のｐＨ値６．２は、ｐＨ指示薬であるブロモチモールブルー（ＢＴＢ）をゲル化後の媒体に４０ｐｐｍで加えたとき、中性を示す緑色に保たれるｐＨ６．０〜ｐＨ７．６の範囲内となるように設定される。これは、本願発明者らが実験を繰り返した結果、前記範囲内であれは、ゲルの半流動性の再現性がよく、また、ブロモチモールブルーの色あいにより、ゲルのｐＨ値を速やかに下げる細菌とそうでない細菌とを容易に判別できるからである。
【００３５】
つづいて、濾過後の基礎水溶液にジェランガムを０．３％（ｗ／ｖ）添加し、予備加熱することによりジェランガム溶液を生成する（ステップＳ５）。このとき、添加するジェランガムの量は、０．３％（ｗ／ｖ）を標準として、目的に応じて０．２〜０．６％（ｗ／ｖ）の範囲内が望ましい。この範囲内であれば、ゲル化された後のゲル内では、微生物が均一に広がることができるし、振動を与えれば容易に液化させられる程度の硬度となるからである。一方、ジェランガムが０．２％（ｗ／ｖ）よりも少ないと、基礎水溶液をゲル化させることが難しく、また、０．６％（ｗ／ｖ）よりも多くすると、ゲルが硬化し過ぎる。
【００３６】
そして、ジェランガム溶液をスクリューキャップ付き試験管に適当量分注し、オートクレーブにより１２０℃で２０分間滅菌処理を施し（ステップＳ６）、その後、室温下で３〜１２時間冷却させる（ステップＳ７）。以上の工程により、半流動性を備え、かつ、透明度の高いゲルが生成される。
【００３７】
前述した本実施形態の微生物保存用ゲルによれば、保存する微生物を微生物保存用ゲル内に閉じ込めると、ゲル内には窒素源が含有されていないため、微生物は必要量の窒素を窒素固定や菌体タンパクの分解により取得し、余分な窒素を体外に排出するのではなく、常に再利用するようになると考えられる。
【００３８】
また、ゲル内には必要最低限の炭素源とジェランガムが含有されているため、微生物は集団として不必要に増殖せず、バイオフィルムを形成して自己の代謝活動を一時的に休止させ半休眠状態となる。これにより、形質の変動が小さくなり、常に増殖能力を持った新鮮な細胞が限られた集団密度の中で更新され続ける状態になる。
【００３９】
したがって、本実施形態の微生物保存用ゲルは、従来の保存法のような、増殖を完全に停止させる凍結保存法や凍結乾燥保存法、あるいはこれと逆に、常にインターバルの増殖、つまり遺伝子の複製を伴うレプリカを作成し続けるという植え継ぎ法等とはまったく異なり、微生物自身が複製する環境や能力を最小限に制限することによって、自己制御下でゆっくりと増殖を行う保存法であるといえる。換言すれば、本実施形態の微生物保存用ゲル内の微生物は、微生物集団として不必要な増殖をしない半休眠状態を保ち、形質変動がほとんどなく、しかも常に増殖能力を持った新鮮な細胞が限られた集団密度の中で更新され続ける状態にある。これにより、例えば、もし保存中の微生物に損傷が生じたとしても、ゆっくりではあるが、確実にＤＮＡに生じた傷を修復するため、微生物は長期間にわたって常温で保存される耐性を有するに至る。
【００４０】
また、多くの細菌は、生存している間は球状もしくはそれに類似する楕円球状の形態を持つため、透過光を散乱させる。そのため、生菌の多くは明らかな濁りや白色の粒として肉眼で観察できる。細菌が死んでしまうと、溶菌と呼ばれる自己溶解が起こるため、しばしば光の散乱が消えて透明になる。このため、透過性が低いゲルは死滅の有無を外部から見て判断するのが困難であるが、ジェランガムを使用した本実施形態の微生物保存用ゲルは透明度が高いため、微生物を保存した状態であっても微生物の色を透過させ、外部から微生物の死滅の有無や他の細菌の混入を肉眼で確認できるようになっている。
【００４１】
つぎに、本実施形態における微生物保存用ゲルのより具体的な実施例について説明する。
【実施例１】
【００４２】
本実施例１で使用した微生物保存用ゲルは、超純水に対して、無機塩化合物としてウィノグラドスキィ培地用ストック液０．５％（ｖ／ｖ）、炭素源としてショ糖０．３％（ｗ／ｖ）、炭酸カルシウムとして微細粉末状炭酸カルシウム１００ｍｇ、ゲル化剤としてジェランガム０．３％（ｗ／ｖ）を用いて作成した。そして、この微生物保存用ゲル内にシンジュガヤの茎内部から分離した「ヘルバスピリラム」（Herbaspirillum sp.）を閉じ込め、常温（約２０℃）で保存し、生存期間を測定した。
【００４３】
一方、本実施例１の比較対象として、ウィノグラドスキィ培地０．５％（ｖ／ｖ）、ショ糖１．０％（ｗ／ｖ）、酵母エキス０．００５％（ｗ／ｖ）により作成した寒天斜面培地に、ヘルバスピリラムを閉じ込めて保存したものを比較例１とし、生存期間を測定した。また、比較例２として、１０％のグリセロール含有凍結保存液を使用し、ヘルバスピリラムを−８０℃に凍結させ、その生存期間を測定した。
【００４４】
本実施例１および比較例１，２の結果を図２に示す。図２に示すように、比較例１では、ヘルバスピリラムは約２ヶ月でほぼ死滅してしまった。また、比較例２では、１年以上生存したものもみられたが、２年後にはほぼ死滅してしまった。一方、本実施例１の微生物保存用ゲル内では、２年以上経過してもヘルバスピリラムは死滅せず、長いものでは約３年半経過しても生存していることが確認された。
【００４５】
以上のような本実施例１によれば、本実施形態の微生物保存用ゲル内に閉じ込められたヘルバスピリラムは、常温で長期間生存することが確認された。
【実施例２】
【００４６】
つぎに、本実施例２では、前述の実施例１で使用した微生物保存用ゲルを使用し、この微生物保存用ゲル内にリゾビウム（Rhizobium sp.）を閉じ込めて常温で保存し、生存期間を測定した。
【００４７】
一方、本実施例２の比較対象として、ウィノグラドスキィ培地０．５％（ｖ／ｖ）、ショ糖０．００５％（ｗ／ｖ）、酵母エキス１．０％（ｖ／ｖ）により作成した寒天斜面培地に、リゾビウムを閉じ込めて保存したものを比較例３とした。また、日本水産株式会社製のブイヨン培地（１× Nutrient broth agar）３０ｇ／Ｌにおいてリゾビウムを保存したものを比較例４とし、この比較例４で使用したブイヨン寒天培地を１０倍に希釈したものを使用してリゾビウムを保存したものを比較例５とし、さらに、Difco社製のポテト−デキストロース寒天培地においてリゾビウムを保存したものを比較例６とし、各比較例３〜６における常温での生存期間をそれぞれ測定した。
【００４８】
本実施例２および比較例３〜６の結果を図３に示す。図３に示すように、比較例３では、リゾビウムは約１ヶ月でほぼ死滅してしまった。また、比較例４および比較例５においては、約１週間、比較例６でも２週間でほぼ死滅してしまった。一方、本実施例２の微生物保存用ゲル内では、１年以上経過してもリゾビウムは生存していることが確認された。
【００４９】
以上のような本実施例２によれば、本実施形態の微生物保存用ゲル内に閉じ込められたリゾビウムは、常温で長期間生存することが確認された。
【００５０】
なお、本発明に係る微生物保存用ゲルは、前述した実施例に限定されるものではなく、適宜変更することができる。
【００５１】
例えば、本実施形態では、ゲル化後のゲルの硬度を、微生物が均一に広がることができ、振動を与えれば容易に液化させられる程度に設定している。しかしながら、保存しようとする微生物によっては、生息していた環境に応じて元素を強化したり、任意のｐＨに調整する必要がある。このため、ｐＨ値が低くなったり、Ａｌ３＋（アルミニウムカチオン）等のようなゲル化能を低減させる因子がある場合には、ｐＨ値の設定を変更したり、各種のマトリックスの量を増減させてゲル硬度を調整するのがよい。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】本発明に係る微生物保存用ゲルの製造方法の一実施形態を示すフローチャート図である。
【図２】本実施例１および比較例１，２におけるヘルバスピリラムの生存期間を示す図である。
【図３】本実施例２および比較例３〜６におけるリゾビウムの生存期間を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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