(57)【要約】【課題】敗血症治療剤の提供。【解決手段】  一般式（Ｉ）【化１】2005350394.tif 000004（式中、ＰＹは１個または２個の低級アルキル基で置換されていてもよいピリジニル基または縮合ピリジニル基であり、Ｒ1は水素原子または低級アルキル基であり、Ｒ2は水素原子または低級アルキル基であり、Ｑはニトロ基、シアノ基、水素原子、カルバミル基、ハロゲン原子またはアミノ基である。）で示される２（１Ｈ）−ピリジノン誘導体、その薬理学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を有効成分とする敗血症治療剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
2005350394.tif 000003
（式中、ＰＹは１個または２個の低級アルキル基で置換されていてもよいピリジニル基または縮合ピリジニル基であり、Ｒ1は水素原子または低級アルキル基であり、Ｒ2は水素原子または低級アルキル基であり、Ｑはニトロ基、シアノ基、水素原子、カルバミル基、ハロゲン原子またはアミノ基である。）で示される２（１Ｈ）−ピリジノン誘導体、その薬理学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を有効成分とする敗血症治療剤。
【請求項２】
有効成分が１，２−ジヒドロ−５−（イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−６−イル）−６−メチル−２−オキソ−３−ピリジンカルボニトリル、その薬理学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物である請求項１に記載の敗血症治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２（１H）−ピリジノン誘導体を有効成分とする敗血症治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
敗血症は、細菌感染の症状が全身に及んだ状態を言い、細菌から出るリポ多糖体（LPS）及びLPSにより誘発されるサイトカインが全身に回って、肝臓や腎臓、肺などの多臓器不全を引き起こす病態である。
LPSは様々な生体反応の引き金となるが、血管においては、活性化された炎症性サイトカインにより血管内皮細胞障害が進行し、血栓形成が促進されて多臓器不全の原因の一つとなると考えられている。
【０００３】
血管内皮細胞の保護に働く物質としてNOが知られている。NOを産生する酵素の一つEndothelial nitric oxide synthase（eNOS）が、LPS投与により低下することが知られている（非特許文献１）。しかしながら、eNOSの活性と血管内皮細胞の損傷との関係は明らかではない。
【０００４】
本発明の敗血症治療剤の有効成分である一般式（Ｉ）で示される化合物、特に１，２−ジヒドロ−５−（イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−６−イル）−６−メチル−２−オキソ−３−ピリジンカルボニトリル（一般名：オルプリノン）は、公知の化合物であり、医薬の用途として、強心剤（特許文献１）、微小循環改善剤（特許文献２）などが報告されている。しかし、これらの各刊行物には、上記化合物の敗血症に対する作用は、示唆も教示もされておらず、また、科学的、臨床的なデータは全く報告されていない。
【０００５】
【特許文献１】特公平５−５８４３７号明細書
【特許文献２】特開２００２−２５５８１５号明細書
【非特許文献１】Matsuda N et al., J Pharmacol Exp Ther 307:175-181，2003
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、LPSにより低下するeNOSの活性を上昇させ、NO産生を高めて、LPSによる血管内皮細胞内の障害を和らげることができる２（１H）−ピリジノン誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
eNOSは、プロテインキナーゼＢ（以下Aktと称す）によりリン酸化されて活性が上昇することが知られている（Shiojima I. et al., Circ Res. 90(12):1243-50, 2002）。Aktは細胞内cAMP濃度による制御を受けている（Amano H. et al., Jpn J Pharmacol. 87(3):181-8, 2001）ので、本発明者は、血管内皮細胞内のcAMP濃度を上昇させることが出来れば、Aktの活性が上昇しeNOSが活性化して、LPSによる血管内皮の損傷が和らげられるのではないかと考えた。更に血管内皮細胞内でcAMP濃度が上昇すれば、VEGF（Vasculer endothelial Growth Factor）の産生が高まり、PI3Kの活性を高めて、Actは細胞膜で自己リン酸化を受けて活性型になると考えた。
そして、LPSにより低下したAkt活性が、本発明の敗血症治療剤の有効成分である一般式（Ｉ）で示される化合物を投与することにより回復することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、一般式（Ｉ）
【０００９】
【化２】
2005350394.tif 000002
【００１０】
（式中、ＰＹは１個または２個の低級アルキル基で置換されていてもよいピリジニル基または縮合ピリジニル基であり、Ｒ1は水素原子または低級アルキル基であり、Ｒ2は水素原子または低級アルキル基であり、Ｑはニトロ基、シアノ基、水素原子、カルバミル基、ハロゲン原子またはアミノ基である。）で示される２（１Ｈ）−ピリジノン誘導体、その薬理学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物、より具体的には１，２−ジヒドロ−５−（イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−６−イル）−６−メチル−２−オキソ−３−ピリジンカルボニトリル（一般名：オルプリノン）、３−アミノ−５−（４−ピリジニル）−２（１Ｈ）−ピリジノン（一般名：アムリノン）または３−シアノ−５−（４−ピリジニル）−６−メチル−２（１Ｈ）−ピリジノン（一般名：ミルリノン）を有効成分として含むことを特徴とする敗血症治療剤である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の敗血症治療剤の有効成分である一般式（Ｉ）で示される２（１Ｈ）−ピリジノン誘導体において、置換基Ｒ1、Ｒ2およびＰＹの置換基としての低級アルキル基としては、炭素数１〜８、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜４の直鎖または分枝したアルキル基が挙げられ、好ましい低級アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基などが挙げられる。また、ハロゲン原子としてはフッ素、塩素、臭素などが挙げられる。本発明の敗血症治療剤の有効成分である一般式（Ｉ）で示される２（１Ｈ）−ピリジノン誘導体において、置換基ＰＹにおけるピリジニル基としては、２−、３−または４−ピリジニル基が挙げられ、縮合ピリジニル基としては、前記した２−、３−または４−ピリジン環にさらに他の環が縮合したものが挙げられる。ピリジン環に縮合する環としては、４〜７員の炭素環または複素環が挙げられ、当該複素環としては１〜３個の窒素原子、酸素原子または硫黄原子を異種原子として有するものが挙げられる。ピリジン環に縮合する位置としては特に制限はなく、任意の位置で縮合していてよい。ピリジン環の窒素原子を含む位置で縮合した場合には、当該窒素原子は縮合する環と共有する異種原子となる。縮合ピリジニル基が２（１Ｈ）−ピリジノン基に結合する位置としては、縮合した環から結合することもできるが、縮合ピリジニル基のピリジン環から結合したものが好ましい。好ましい縮合ピリジニル基としては、イミダゾピリジニル基、ピロロピリジニル基などが挙げられ、なかでもイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−６−イル基が好ましい。本発明の一般式（Ｉ）で示される２（１Ｈ）−ピリジノン誘導体において、置換基ＰＹは、前記ピリジニル基や縮合ピリジニル基が無置換のものが好ましいが、置換基を有するものであってもよい。好ましい置換基としては、１個以上、より詳細には１個または２個の前記低級アルキル基が置換したものであってもよい。
【００１２】
本発明の敗血症治療剤の有効成分である一般式（Ｉ）で示される２（１Ｈ）−ピリジノン誘導体の好ましい例としては、例えば１，２−ジヒドロ−５−（イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−６−イル）−６−メチル−２−オキソ−３−ピリジンカルボニトリル（オルプリノン）、３−アミノ−５−（４−ピリジニル）−２（１Ｈ）−ピリジノン（アムリノン）、３−シアノ−５−（４−ピリジニル）−６−メチル−２（１Ｈ）−ピリジノン（ミルリノン）等が挙げられる。
【００１３】
本発明の敗血症治療剤の有効成分として用いられる２（１Ｈ）−ピリジノン誘導体は、遊離形態の上記化合物のほか、その薬理学的に許容される塩を本発明の目的のため適宜に用いることができる。上記化合物の薬理学的に許容される塩としては、酸付加塩または塩基付加塩を用いることができる。例えば鉱酸塩（例えば塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩など）、有機酸塩（例えばメタンスルホン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩など）、金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩など）などを用いることができる。また、前記化合物の溶媒和物（例えば水和物、またはアルコールなどとの溶媒和物）を用いてもよい。
【００１４】
本発明の敗血症治療剤に用いられる有効成分である一般式（Ｉ）で表される化合物は、公知の方法、例えば特公昭６０−３２６３０号明細書、特公昭６１−５９６２５号明細書、特公平５−５８４３７号明細書に記載された方法により製造することができる。
【００１５】
本発明の敗血症治療剤の剤型は、例えば液剤または固形剤が挙げられ、好ましくは液剤としての形態で使用することができる。前記敗血症治療剤は、例えば精製水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、クエン酸緩衝液などの薬理学的に許容される緩衝液または等張化液などに上記化合物を溶解、懸濁または乳化させて調製することができる。固形剤としては、例えば錠剤、顆粒、散剤などが挙げられ、これらは公知の方法により適宜調製することができ、使用時に溶解して使用してもよい。これら製剤には通常用いられる賦形剤、結合剤、崩壊剤または崩壊補助剤、分散剤、溶解剤または溶解補助剤、保存剤、等張化剤、安定化剤またはｐＨ調整剤などの各種添加剤を適宜使用してもよい。本発明の敗血症治療剤には、上記化合物のうち１種または２種以上を適宜組み合せて含有させることもできる。
【００１６】
本発明の敗血症治療剤は、経口又は非経口で投与することができるが、好ましくは非経口投与であり、より好ましくは静脈内投与である。静脈内投与用注射剤は、適当な希釈剤（例えばポリエチレングリコール等のグリコール、オリーブ油等の植物油、エタノール等のアルコール類など）、懸濁剤又は乳濁剤として調製することが可能である。また、注射剤は、用時調製の粉末形態アンプルとして製造することができる。本発明の敗血症治療剤の投与量は、患者の様態や、基礎疾患の種類により異なるが、通常一回、0.1 mg〜100 mg/kg、好ましくは0.1 mg〜50 mg/kgである。静脈内投与で持続投与する場合には、0.02μg〜10μg/kg/分、好ましくは0.05μg〜1μg/kg/分の持続注入が良い。
【実施例】
【００１７】
以下、実施例により本発明についてより詳細に説明するが、本発明はこれらにより何等限定されるものではない。
１．Aktリン酸化に及ぼすLPSの影響と塩酸オルプリノンの効果
［被験物質］
１，２−ジヒドロ−５−（イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−６−イル）−６−メチル−２−オキソ−３−ピリジンカルボニトリル（オルプリノン）は、塩酸オルプリノン注射液［コアテック（登録商標）、エーザイ社］を0.9％生理的食塩水で希釈し、12 μg/mLの濃度に調整し、以下の実験に使用した。
【００１８】
［敗血症モデル動物］
2〜2.5 kgの雄家兎に100μg/kgのLPS（Escherichia coli 055; List Biological Laboratories社製）または同量の生理食塩水を静脈内投与した。塩酸オルプリノンは、投与後から0.1μg/kg/minで持続投与した。
【００１９】
［Akt及びリン酸化Aktの測定］
Akt及びリン酸化Aktは、抗Akt抗体（Santa Cruz Biotechnology社製）及び抗リン酸化Akt（pSer473）抗体（Santa Cruz Biotechnology社製）を用いたウエスタンブロット法により測定した。
具体的には、LPS投与６時間後に肺動脈を取り出し、滅菌蒸留水にてホモゲナイズした後、SDS電気泳動のサンプル可溶化バッファーに可溶化した。可溶化したサンプルをSDS電気泳動で分離した後、polyvinldin difluorideフィルターに転写した。フィルターは１％ BSAを含むリン酸バッファーでブロッキングした後、抗Akt抗体及び抗リン酸化Akt抗体を反応させ、0.05% Tween20を含むリン酸バッファーで充分に洗浄した。抗体が結合したバンドは、更にhorseradish peroxidase標識抗マウス抗体を反応させた後、化学発光検出キット（アマシャム社製）を用いてＸ線フィルムを感光させて検出した。定量はNIH Image Softwareにより行った。
【００２０】
［Aktリン酸化に及ぼすLPSの影響と塩酸オルプリノンの効果］
図１に示す通り、LPS投与は肺動脈のAktの量には影響を及ぼさなかった（図１下）。しかし、LPS投与によりリン酸化Aktの量は、投与しない個体と比較して49%にまで低下し、その低下は塩酸オルプリノン0.1μg/kg/minの持続投与により79%にまで回復した。
以上のことから、塩酸オルプリノン投与により、Aktの活性が高められ、血管内皮細胞のアポトーシスの抑制作用、eNOS活性回復による血管内皮細胞の保護作用が示された。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】LPS投与によるAkt活性の低下と、オルプリノン投与による回復を示す図。
【図１】
2005350394.tif 000005