(57)【要約】 【課題】  本発明の課題は、抗アレルギー効果に優れ、気管支ぜん息、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患の予防・改善・治療に有効でかつ安全な抗アレルギー剤を提供することにある。【解決手段】  抗アレルギー剤は、ヘスペリジンを含有する未熟な柑橘類果実の４０％以上のエタノール抽出エキスを含有する。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が４０％以上のエタノール水溶液で抽出することにより得られたエキスを含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
ヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が６０％以上のエタノール水溶液で抽出することにより得られたエキスを含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項３】
ヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘類果実の乾燥粉末を含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項４】
未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が４０％以上のエタノール水溶液で抽出する工程を含むことを特徴とする抗アレルギー剤エキスの抽出方法。
【請求項５】
未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が６０％以上のエタノール水溶液で抽出する工程を含むことを特徴とする抗アレルギー剤エキスの抽出方法。
【請求項６】
柑橘類果実がウンシュウミカンであることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１つに記載の抗アレルギー剤。
【請求項７】
柑橘類果実がウンシュウミカンであることを特徴とする請求項４または５記載の抗アレルギー剤エキスの抽出方法。
【請求項８】
未成熟な柑橘類果実が、５月下旬に着果した後２カ月ないし３カ月を経過した横径が２．０ｃｍ以上、４．５ｃｍ以下の未成熟なウンシュウミカンであることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１つに記載の抗アレルギー剤。
【請求項９】
未成熟な柑橘類果実が、５月下旬に着果した後２カ月ないし３カ月を経過した横径が２．０ｃｍ以上、４．５ｃｍ以下の未成熟なウンシュウミカンであることを特徴とする請求項４または５記載の抗アレルギー剤エキスの抽出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘類果実のエタノール抽出エキスあるいは乾燥粉末を有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、抗アレルギー剤および抗炎症剤としては、グルココルチコイド型の副腎皮質ホルモン剤や、インドメタシンなどの非ステロイド性抗炎症剤などが用いられている。しかしながら、ステロイドホルモン剤は抗アレルギー作用および抗炎症作用を有するものの副作用が強いという問題があり、また、インドメタシンなどは抗炎症作用のみを有するため抗アレルギー剤としては有用でなかった。
【０００３】
また、薬物の投与で一時的に症状が抑制されることがあっても、効果および副作用の面で、充分とはいえない実状にある。かかる現状において、各種アレルギー疾患の中でも、特に気管支ぜん息、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎などに対して強い抗アレルギー効果を有し、しかも長時間の投与に耐え得る安全性の高い、かつ経口投与可能な新しい治療薬の開発が望まれている。
【０００４】
一方、ミカン科植物のＣｉｔｒｕｓ属植物やＦｏｒｔｕｎｅｌｌａ属植物の果実は柑橘類果実と総称され、世界的に食用とされているものが数多くある。また、柑橘類果実は古来、薬用に供されるものも多く、『第十四改正日本薬局方』には陳皮［ミカン科
（Rutaceae）のウンシュウミカン（Citrus unshiu）あるいはCitrus reticulataの成熟した果皮］、枳実・枳殻［ミカン科（Rutaceae）のダイダイCitrus aurantium var.
daidai、Citrus aurantium又はナツミカンCitrus natsudaidaiの未熟果をそのまま或いはそれを半分に横切したもの］、橙皮［ミカン科（Rutaceae）のCitrus aurantium又はダイダイCitrus aurantium var. daidaiの成熟した果皮］が収載されている。
【０００５】
これら柑橘系生薬はいずれも特有の芳香と苦味を有し、中国では、陳皮および橙皮は芳香性苦味健胃薬として用いられ、枳実は堅く充実したうっ滞、うっ血による腫脹の改善を目的とした漢方方剤に配合される。
【０００６】
柑橘系生薬には、精油成分としてリモネン（limonene）、フラボノイド配糖体としてヘスペリジン（hesperidin）、ネオヘスペリジン（neohesperidin）、ナリンギン
（naringin）、アルカロイドとしてシネフリン（synephrine）などが含まれている。
【０００７】
ミカン類生薬（陳皮、橘皮、枳実、橙皮）には、消化器系に対する作用や抗アレルギー作用などが証明されている。抗アレルギー作用に関しては、陳皮水製エキスの経口投与によりラット受身皮膚アナフィラキシー反応は抑制される。ウンシュウミカン果実についてもマスト細胞からのｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０によるヒスタミン遊離抑制作用を指標に、抗アレルギー作用を検討され、成熟したものよりも未成熟なものにより強い作用が認められている。たとえば、特許文献１参照。また、ヘスペリジンが主要成分と考えられている。たとえば、特許文献２参照。また、フラボノイド成分のノビレチン、タンゲリチン、３−メトキシノビレチンにもラット腹腔マスト細胞からのヒスタミン遊離抑制作用が認められている。また、枳実、枳殻の水エキスや５０％エタノールエキスにはラット受身皮膚アナフィラキシー反応やマウス塩化ピクリル誘発接触性皮膚炎を抑制する作用が報告されている。
【０００８】
【特許文献１】特開昭６３−１７０３２３
【特許文献２】特開平４−２９５４２８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
特許文献１記載の技術は、有効成分として柑橘類の未成熟な果実の水溶性エキスを含有してなる抗アレルギー剤を提供するものである。特許文献２記載の技術はヘスペリジンを有効成分としてなる抗アレルギー剤を提供するものである。しかし、ヘスペリジンは極めて水に難溶性故、柑橘類の未成熟な果実を水で抽出した抗アレルギー剤に抗アレルギー効果は期待できない。したがって、エキス中に多量のヘスペリジンを含有してなる抗アレルギー剤が求められている。
【００１０】
本発明の目的は、抗アレルギー効果に優れ、気管支ぜん息、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患の予防・改善・治療に有効でかつ安全な抗アレルギー剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
かかる事情により、本発明者らは鋭意研究を行った結果、ヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘系果実のエタノール抽出エキスあるいは乾燥粉末がジニトロフルオロベンゼン誘発３相性皮膚反応試験において極めて強い抗アレルギー作用を示すことを見出した。
【００１２】
本発明のヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘系果実とは、一般に柑橘系果実の着果後の生長過程において、果皮が黄変する以前の未成熟段階の果実を意味するものである。たとえば、実施例で実験材料に供した和歌山有田郡金屋町産のウンシュウミカンにおいては、５月２０日頃に着果し、その後２ヶ月ないし３ヶ月を経過したウンシュウミカンにおいては、着果後２カ月ないし３カ月を経過した横径が約２．０ｃｍ以上、約４．５ｃｍ以下の未成熟な果実がこれに相当する。
【００１３】
本発明のエタノール抽出エキスは、エタノールを含有した水溶液で抽出するエキスである。本発明においては、１００％エタノールも４０％以上のエタノール水溶液に含めるものとする。６０％以上のエタノール水溶液の場合も同様である。
【００１４】
本発明のヘスペリジン含有未成熟柑橘系果実のエキスは、一般の抽出方法によって得られる。即ち、果実を細切後、１０倍量の４０％以上のエタノールで抽出、ろ過後、そのろ液を減圧下でエタノールを留去後、抽出エキスを得る。また、ヘスペリジン含有未成熟柑橘系果実の乾燥粉末は、一般の乾燥方法によって得られる。すなわち、果実をそのままあるいは細切後、日陰あるいは陽干し、あるいは乾燥機を用いて乾燥し、粉末としたものである。
【００１５】
このようにして、得られるエキスあるいは粉末は、そのままあるいは必要に応じて他の公知の添加剤、たとえば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤などを混合して常法により、顆粒剤、散剤、カプセル剤、錠剤、ドライシロップ剤、液剤などの経口剤とすることができる。
【００１６】
本発明の抗アレルギー剤の有効成分であるヘスペリジン含有未成熟柑橘系果実のエキスあるいは粉末は、１日０．１ｇ〜２０ｇ用いる。特に１日０．５ｇから５ｇ用いることが好ましい。
【００１７】
本発明は、ヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が４０％以上のエタノール水溶液で抽出することにより得られたエキスを含有することを特徴とする抗アレルギー剤である。
【００１８】
本発明に従えば、未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が４０％以上のエタノールで抽出する。水の場合と比較してエタノール濃度が４０％以上であると抽出されるエキス中にヘスペリジンが増加する。したがって、抗アレルギー効果に優れた抗アレルギー剤を提供することができる。
【００１９】
また本発明は、ヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が６０％以上のエタノール水溶液で抽出することにより得られたエキスを含有することを特徴とする抗アレルギー剤である。
【００２０】
本発明に従えば、未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が６０％以上のエタノールで抽出する。エタノール濃度が６０％未満の場合と比較してエタノール濃度が６０％以上であると抽出されるエキス中に急激にヘスペリジン含有量が増加する。したがって、抗アレルギー効果に優れた抗アレルギー剤を提供することができる。
【００２１】
また本発明は、ヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘類果実の乾燥粉末を含有することを特徴とする抗アレルギー剤である。
【００２２】
本発明に従えば、ヘスペリジンを含有する未成熟な柑橘類果実の乾燥粉末を有効成分として含有するので、抗アレルギー効果に優れた抗アレルギー剤を提供することができる。
【００２３】
また本発明は、未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が４０％以上のエタノール水溶液で抽出する工程を含むことを特徴とする抗アレルギー剤エキスの抽出方法である。
【００２４】
本発明に従えば、未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が４０％以上のエタノール水溶液でエキスを抽出する。水で抽出する場合と比較してエタノール濃度が４０％以上であると抽出されるエキス中にヘスペリジン含有量が増加する。
【００２５】
また本発明は、未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が６０％以上のエタノール水溶液で抽出する工程を含むことを特徴とする抗アレルギー剤エキスの抽出方法である。
【００２６】
本発明に従えば、未成熟な柑橘類果実をエタノール濃度が６０％以上のエタノール水溶液でエキスを抽出する。エタノール濃度が６０％未満の場合と比較してエタノール濃度が６０％以上であると抽出されるエキス中に急激にヘスペリジン含有量が増加する。
【００２７】
また本発明は、柑橘類果実がウンシュウミカンであることを特徴とする。
本発明に従えば、未成熟なウンシュウミカンにはヘスペリジンが多く含まれている。したがって、抗アレルギー効果に優れたヘスペリジンを多量に含有する抗アレルギー剤を提供することができる。
【００２８】
また本発明は、柑橘類果実がウンシュウミカンであることを特徴とする。
本発明に従えば、未成熟なウンシュウミカンにはヘスペリジンが多く含まれている。したがって、抗アレルギー効果に優れたヘスペリジンを多量に含有するエキスを抽出することができる。
【００２９】
また本発明は、未成熟な柑橘類果実が、５月下旬に着果した後２カ月ないし３カ月を経過した横径が２．０ｃｍ以上、４．５ｃｍ以下の未成熟なウンシュウミカンであることを特徴とする。
【００３０】
本発明に従えば、５月下旬に着果した時点から２カ月ないし３カ月を経過した横径が２．０ｃｍ以上、４．５ｃｍ以下の未成熟なウンシュウミカンには多量のヘスペリジンが含まれている。したがって、抗アレルギー効果に優れたヘスペリジンを多量に含有する抗アレルギー剤を提供することができる。
【００３１】
また本発明は、未成熟な柑橘類果実が、５月下旬に着果した後２カ月ないし３カ月を経過した横径が２．０ｃｍ以上、４．５ｃｍ以下の未成熟なウンシュウミカンであることを特徴とする。
【００３２】
本発明に従えば、５月下旬に着果した時点から２カ月ないし３カ月を経過した横径が２．０ｃｍ以上、４．５ｃｍ以下の未成熟なウンシュウミカンには多量のヘスペリジンが含まれている。したがって、抗アレルギー効果に優れたヘスペリジンを多量に含有するエキスを抽出することができる。
【発明の効果】
【００３３】
本発明によれば、本発明の抗アレルギー剤の有効成分であるヘスペリジン含有未成熟柑橘系果実の４０％のエタノール抽出エキスは、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制するので、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支ぜん息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００３４】
本発明によれば、本発明の抗アレルギー剤の有効成分であるヘスペリジン含有未成熟柑橘系果実の６０％のエタノール抽出エキスは、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制するので、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支ぜん息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００３５】
本発明によれば、本発明の抗アレルギー剤の有効成分であるヘスペリジン含有未成熟柑橘系果実の粉末は、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制するので、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支ぜん息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００３６】
本発明によれば、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制する成分の１つであるヘスペリジンを含んだエキスを抽出することができる。
【００３７】
本発明によれば、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制する成分の１つであるヘスペリジンを多量に含んだエキスを抽出することができる。
【００３８】
本発明によれば、未成熟なウンシュウミカンにはヘスペリジンが多く含まれている。したがって、抗アレルギー効果に優れたヘスペリジンを多量に含有する抗アレルギー剤を提供することができる。
【００３９】
本発明によれば、未成熟なウンシュウミカンにはヘスペリジンが多く含まれている。したがって、抗アレルギー効果に優れたヘスペリジンを多量に含有するエキスを抽出することができる。
【００４０】
本発明によれば、５月下旬に着果した時点から２カ月ないし３カ月を経過した横径が２．０ｃｍ以上、４．５ｃｍ以下の未成熟なウンシュウミカンには多量のヘスペリジンが含まれている。したがって、抗アレルギー効果に優れたヘスペリジンを多量に含有する抗アレルギー剤を提供することができる。
【００４１】
本発明によれば、５月下旬に着果した時点から２カ月ないし３カ月を経過した横径が２．０ｃｍ以上、４．５ｃｍ以下の未成熟なウンシュウミカンには多量のヘスペリジンが含まれている。したがって、抗アレルギー効果に優れたヘスペリジンを多量に含有するエキスを抽出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４２】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００４３】
試験例１
ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）誘発３相性皮膚反応に及ぼす未成熟なウンシュウミカン果実の影響
【００４４】
検体１；２００３年、８月５日、和歌山県有田郡金屋町で栽培されている未成熟なウンシュウミカン果実を採取、細切後乾燥し、さらに粉砕、粉末とし、被検体に供した。
【００４５】
検体２；２００３年、８月５日、和歌山県有田郡金屋町で栽培されている未成熟なウンシュウミカン果実を採取、細切後乾燥し、粉砕後、１０倍量の水で２時間、２回熱時（約１００℃）抽出した。抽出液を熱時ろ過し、ろ液を減圧下に濃縮し、凍結乾燥を施して得た乾燥水抽出エキス（収率；３４．０％）を被検体に供した。
【００４６】
検体３；検体２の水を２０％エタノールで熱時（約８５℃）抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３６．０％）。
【００４７】
検体４；検体２の水を４０％エタノールで熱時（約８５℃）抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３８．０％）。
【００４８】
検体５；検体２の水を６０％エタノールで熱時（約８０℃）抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３９．７％）。
【００４９】
検体６；検体２の水をエタノールで熱時（約８０℃）抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３４．９％）。
【００５０】
（試験方法）
１）ジニトロフェニル化卵白アルブミン（ＤＮＰ−ＯＶＡ）の調製；卵白アルブミン（ovalbumin、type V）およびＫ２ＣＯ３を各２ｇずつ１００ｍｌの水に溶解し、この溶液に２ｇのジニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム塩（dinitrobenzenesulfonic acid
sodium salt）を加え、遮光下で３７℃にて、２４時間スターラーで攪拌し、得られた反応液を水で２日間透析後、その内液を凍結乾燥し、調製した。
【００５１】
２）ＤＮＦＢ誘発３相性皮膚反応試験；ＩＣＲ系雌性マウスにゲル状の水酸化アルミニウム（aluminumhydroxide gel）  １ｍｇとＤＮＰ−ＯＶＡ  １０μｇを含む生理食塩液０．２ｍＬを腹腔内投与し、能動的に感作する。その１週間後、０．１％  ＤＮＦＢエタノール溶液を両耳の表裏に１０μｌずつ塗布し、誘発２４時間後に充分に腫脹しているマウス（浮腫率１０％以上）を選別する。その後、選別したマウスに再度感作し、１週間後に反応を惹起する。耳介の厚さは反応惹起前および惹起後１、２４時間および８日後に
dial thickness gaugeを用いて測定し、耳介浮腫率として算定する。反応を惹起した時点から１時間後の耳介浮腫率をＩＰＲ（Immediate Phase Response）浮腫率、２４時間後の耳介浮腫率をＬＰＲ(Late Phase Response)浮腫率、８日後の耳介浮腫率をｖＬＰＲ(very
Late Phase Response)浮腫率とする。なお、被検体は反応惹起１時間前および惹起２日後から８日後まで連日経口投与する。被検体および陽性対照薬は、０．２％ＣＭＣ・Ｎａに溶解あるいは懸濁し、ウンシュウミカン粉末は水に懸濁し、マウス体重１０ｇあたり０．２ｍＬの用量で経口投与した。
【００５２】
（結果）結果を表１に示す。
表１は、３相性皮膚反応に及ぼす未成熟ウンシュウミカン果実の影響を示す。
【００５３】
【表１】
2005132791.tif 000002
【００５４】
マウスに３相性皮膚反応を惹起させたところ、ＩＰＲにおいては１９．７±１．３％、ＬＰＲにおいては１８．１±１．２％、ｖＬＰＲにおいては１９．７±０．９％の耳浮腫が観察された。検体１は２００ｍｇ／ｋｇ用量の経口投与で、いずれの耳浮腫も有意に抑制した。未成熟なウンシュウミカン果実を水で抽出した検体２はいずれの耳浮腫に対しても有意な抑制作用が認められなかった。ウンシュウミカン果実を２０％のエタノールで抽出した検体２においては、ＩＰＲとＬＰＲの耳浮腫を有意に抑制したが、ｖＬＰＲには無効であった。ウンシュウミカン果実を４０％以上のエタノールで抽出すると、いずれの浮腫に対しても有意な抑制作用がみられる。その作用強度はエタノールの含量が高まるほど強まった。特に６０％のエタノールで抽出した検体５では検体４に比べて急激に作用強度が強まった。
【００５５】
試験例２
ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）誘発３相性皮膚反応に及ぼすヘスペリジンの影響
【００５６】
検体１；２００３年、８月５日、和歌山県有田郡金屋町で栽培されている未成熟なウンシュウミカン果実を採取、その後細切、乾燥した。乾燥未成熟ウンシュウミカン果実から、松田ら［薬学雑誌、１１１、１９３−１９８（１９９１）］の方法でヘスペリジンを単離・同定し、被検体に供した。
【００５７】
（試験方法）
１）ジニトロフェニル化卵白アルブミン（ＤＮＰ−ＯＶＡ）の調製；卵白アルブミン（ovalbumin、type V）およびＫ２ＣＯ３を各２ｇずつ１００ｍｌの水に溶解し、この溶液に２ｇのジニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム塩（dinitrobenzenesulfonic acid
sodium salt）を加え、遮光下で３７℃にて、２４時間スターラーで攪拌し、得られた反応液を水で２日間透析後、その内液を凍結乾燥し、調製した。
【００５８】
２）ＤＮＦＢ誘発３相性皮膚反応試験；ＩＣＲ系雌性マウスにゲル状の水酸化アルミニウム（aluminumhydroxide gel）  １ｍｇとＤＮＰ−ＯＶＡ  １０μｇを含む生理食塩液０．２ｍＬを腹腔内投与し、能動的に感作する。その１週間後、０．１％ＤＮＦＢエタノール溶液を両耳の表裏に１０μｌずつ塗布し、誘発２４時間後に充分に腫脹しているマウス（浮腫率１０％以上）を選別する。その後、選別したマウスに再度感作し、１週間後に反応を惹起する。耳介の厚さは反応惹起前および惹起後１、２４時間および８日後にdial thickness gaugeを用いて測定し、耳介浮腫率として算定する。なお、被検体は反応惹起１時間前および惹起２日後から８日後まで連日経口投与する。被検体および陽性対照薬は、０．２％ＣＭＣ・Ｎａに溶解あるいは懸濁し、ウンシュウミカン粉末は水に懸濁し、マウス体重１０ｇあたり０．２ｍＬの用量で経口投与した。
【００５９】
（結果）結果を表２に示す。
表２は、３相性皮膚反応に及ぼすヘスペリジンの影響を示す。
【００６０】
【表２】
2005132791.tif 000003
【００６１】
ヘスペリジンは２０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇの用量で、ＤＮＦＢによって誘発される３相性皮膚反応による耳浮腫を有意に抑制する作用を示した。１００ｍｇ／ｋｇ用量のヘスペリジンの作用強度はステロイド剤のプレゾニゾロン  １０ｍｇ／ｋｇ用量の抑制作用とほぼ同程度であった。
【００６２】
試験例３
未成熟なウンシュウミカン果実エキスおよび乾燥果実中のヘスペリジン含量の測定
【００６３】
検体１；２００３年、８月５日、和歌山県有田郡金屋町で栽培されている未成熟なウンシュウミカン果実を採取乾燥し、粉砕後、粉末とした。この粉末１０ｇに１００ｍＬのメタノールを加え、２時間、２回熱時抽出した。抽出液を熱時ろ過し、ろ液を減圧下に濃縮し、凍結乾燥を施して得た乾燥メタノール抽出エキス（収率；４１．０％）を被検体とした。
【００６４】
検体２；２００３年、８月５日、和歌山県有田郡金屋町で栽培されている未成熟なウンシュウミカン果実を採取、細切後乾燥し、粉砕後、１０倍量の水で２時間、２回熱時抽出した。抽出液を熱時ろ過し、ろ液を減圧下に濃縮し、凍結乾燥を施して得た乾燥水抽出エキス（収率；３４．０％）を被検体に供した。
【００６５】
検体３；検体２の水を２０％エタノールで抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３６．０％）。
【００６６】
検体４；検体２の水を４０％エタノールで抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３８．０％）。
【００６７】
検体５；検体２の水を６０％エタノールで抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３９．７％）。
【００６８】
検体６；検体２の水をエタノールで抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３４．９％）。
【００６９】
（試験方法）
各検体を５００ｍｇ精秤した。１００ｍＬのメタノールで３０分、３回還流抽出した（水浴８０℃）。抽出液をろ紙ろ過し、そのろ液をエバポレーターで濃縮した。濃縮した抽出液をメタノールで５０ｍＬにメスアップ後、メタノールで１０倍に希釈した。希釈液をウルトラフリーＭＣ（０．２２ｍｍ）（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ）にてろ過した後、下記の方法でＨＰＬＣ分析を行った。
【００７０】
［ＨＰＬＣ分析条件］
１）検量線の作成；ヘスペリジンの標準品はＳＩＧＭＡ社より購入し、再結晶したものを使用した。メタノールにて１ｍｇ／ｍＬに調製後、２５、５０、１００、２５０、５００（ｍｇ／ｍＬ）に調製し、ウルトラフリーＭＣ（０．２２ｍｍ）（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ）にてろ過したものを検量線作成用の溶液とした。これについて、下記の条件により、ＨＰＬＣ分析を行い、得られたヘスペリジンのピーク面積値から検量線を作成した。
【００７１】
２）ＨＰＬＣの分析条件
装置  ；バイナリポンプ：Ｇ１３１２Ａ（Ａｇｉｌｅｎｔ製）
デガッサー；Ｇ１３７７９Ａ  ＤＥＧＡＳＳＥＲ（Ａｇｉｌｅｎｔ製）
検出器；ＵＶ−Ｖｉｓ検出器Ｇ１３１４Ａ  ＶＷＤ（Ａｇｉｌｅｎｔ製）
カラム恒温槽；Ｇ１３１６Ａ  ＣＯＬＣＯＭ（Ａｇｉｌｅｎｔ製）
オートサンプラー；Ｇ１３１３Ａ  ＡＬＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ製）
カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ  ｉ．ｄ．）（ＹＭＣ製）
ガードカラム；Ｃ−ＫＧＣ−３２４ＡＳＣ−３（ＹＭＣ製）
移動相；ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ／１０ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４（２０：８０（ｖ／ｖ））
流速；１．０ｍＬ／ｍｉｎ
温度；３７℃
検出波長；２８０ｎｍ
注入量；５ｍＬ
データ処理ソフト；Ｘｃａｌｉｂｕｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ製）ヘスペリジンのＲｅｔｅｎｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ；１８．５−１９．５ｍｉｎ
【００７２】
（結果）結果を表３に示す。
表３は、未成熟なウンシュウミカン果実からのエキス収率とヘスペリジン含量を示す。
【００７３】
【表３】
2005132791.tif 000004
【００７４】
未成熟なウンシュウミカン果実の乾燥粉末（検体1）をメタノールで抽出し、その含量を測定した結果、１２．１％であった。未成熟なウンシュウミカン果実を水で抽出したエキス（検体２）１ｇ中には１６．４ｍｇのヘスペリジンが含まれ、エキス中の含量から求められる乾燥果実１ｇ中のヘスペリジン含量（％）はわずか０．５６％となり、乾燥果実に含まれるヘスペリジンの約１／２０量しか抽出されていない。抽出溶媒を水からエタノールに変換すると、その濃度は増加するにつれて抽出されてくるヘスペリジン含量が増加する。エタノール濃度が４０％以上であると、水に比べてヘスペリジンの量が明らかに増加している。さらに、エタノール濃度４０％と比較してエタノール濃度６０％では急激にヘスペリジン含量が増加している。１００％エタノールで抽出すると、果実に含まれているヘスペリジンの約１／６量が抽出された。