(57)【要約】【課題】抗腫瘍活性を有する新規な化合物を提供すること。【解決手段】本発明の新規な化合物は式（Ｉ）で表されるジテルペン化合物である。式中、Ｒ１ないしＲ６は脂肪族基又は一般式ＲＣＯ−で表される基を意味し、式中Ｒは脂肪族基、芳香族基又はヘテロ芳香族基を表す。本発明の化合物は、甘遂（学名：Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ  ｋａｎｓｕｉ  Ｌ．）の根から有機溶媒（クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール）により抽出することができ、得られた化合物を出発原料として自体公知の方法に従って製造することができる。本発明の化合物は細胞増殖阻害作用を有し、抗悪性腫瘍剤として有用である。2005041800.tif 000027【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で表されるジテルペン化合物：
2005041800.tif 000024
式中、
Ｒ１ないしＲ６は、同一又は異なっていてもよく、水素原子、直鎖若しくは分岐した、飽和若しくは不飽和の、置換若しくは未置換の脂肪族基、又は一般式ＲＣＯ−で表される基を意味し、式中Ｒは直鎖若しくは分岐した、飽和若しくは不飽和の、置換若しくは未置換の脂肪族基、置換又は未置換の芳香族基又はヘテロ芳香族基を表す。
【請求項２】
以下の式（ＩＩ）で表される、請求項１に記載のジテルペン化合物：
2005041800.tif 000025
式中、Ａｃはアセチル基を、Ｂｚはベンゾイル基を表す。
【請求項３】
以下の式（ＩＩＩ）で表される、請求項１に記載のジテルペン化合物：
2005041800.tif 000026
式中、Ａｃはアセチル基を、Ｂｚはベンゾイル基を、Ｎｉはニコチノイル基を表す。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗悪性腫瘍剤として有用な、甘遂から単離された新規なジテルペン化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
甘遂（学名：Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ  ｋａｎｓｕｉ  Ｌ．）は、トウダイグサ科の多年生の植物で、中国北西部に分布する。中国では甘遂を慢性気管支炎、気管支喘息等のアレルギー疾患の治療に使用するほか、食道癌、乳腺癌などの悪性腫瘍の治療にも用いている。甘遂の成分研究は１９４３年頃から始められ、現在までに十数種類のジテルペン及びトリテルペンが見出されている。これらの成分のうちジテルペン化合物のいくつかに抗癌作用、抗ウィルス作用、細胞毒性作用があることが見出され、注目されている。
カプチャン（Ｓ．  Ｍ．  Ｋｕｐｃｈａｎ）らは、Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ  ｅｓｕｌａ  Ｌ．  から抽出した下記の式（１）のインゲノール誘導体がマウスにおけるＰ−３８８リンパ性白血病に対する活性を有することを示している（非特許文献１）。
2005041800.tif 000002
ウー（Ｔｉａｎ−Ｓｈｕｎｇ  Ｗｕ）らは、甘遂（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ  ｋａｎｓｕｉ  Ｌ．）の根から抽出したカンスイホリンＡ（下記の式（２））及びカンスイホリンＢ（下記の式（３））が、インビボ（Ｐ−３８８）アッセイにより、活性を有することを示している（非特許文献２）。
2005041800.tif 000003
2005041800.tif 000004
ブランコ−モリナ（Ｍａｇｄａｌｅｎａ  Ｂｌａｎｃｏ−Ｍｏｌｉｎａ）らは、以下の式（４）のインゲノール誘導体がジュルカト（Ｊｕｒｋａｔ）細胞にアポトーシスを誘導することを記載している（非特許文献３）。
2005041800.tif 000005
しかしながら、いずれも本発明の化合物を開示していない。
【０００３】
【非特許文献１】
Ｓ．  Ｍｏｒｒｉｓ  Ｋｕｐｃｈａｎ，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｖｏｌ．  １９１，  ｐｐ．  ５７１−５７２，  １３，  Ｆｅｂ．，  １９７６
【非特許文献２】
Ｔｉａｎ−Ｓｈｕｎｇ  Ｗｕ，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎａｔ．  Ｐｒｏｄ．，  Ｖｏｌ．  ５４，  Ｎｏ．  ３，  ｐｐ．  ８２３−８２９，  １９９１
【非特許文献３】
Ｍａｇｄａｌｅｎａ  Ｂｌａｎｃｏ−Ｍｏｌｉｎａ，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ８／８，  ｐｐ．  ７６７−７７８，  ２００１
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、抗悪性腫瘍作用を有する新規なジテルペン化合物を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明の新規なジテルペン化合物は以下の一般式（Ｉ）を有する。
2005041800.tif 000006
式中、
Ｒ１ないしＲ６は、同一又は異なっていてもよく、水素原子、直鎖若しくは分岐した、飽和若しくは不飽和の、置換若しくは未置換の脂肪族基、又は一般式ＲＣＯ−で表される基を意味し、式中Ｒは直鎖若しくは分岐した、飽和若しくは不飽和の、置換若しくは未置換の脂肪族基、置換又は未置換の芳香族基又はヘテロ芳香族基を表す。
一般式（Ｉ）の化合物は、食道癌、乳腺癌などの悪性腫瘍の治療剤として使用することができる。
【０００６】
【発明の実施の形態】
一般式（Ｉ）の化合物のＲ１ないしＲ６における、脂肪族基としては直鎖若しくは分岐した、飽和又は不飽和の１〜３０の炭素原子を含む芳香族基が好ましく、１〜１６の炭素原子を含む脂肪族基がより好ましい。脂肪族基の置換基としては、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、エーテル基、カルボニル基、カルボキシル基、アミノ基、アミド基を挙げることができる。
一般式ＲＣＯ−で表される基が誘導されるもとのカルボン酸のうち、Ｒがアルキル基であるものとしては酢酸、プロピオン酸、酪酸、２，３−ジメチルブタン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸等の炭素原子数１〜１６の飽和脂肪酸、２，４−デカジエン酸のような炭素原子数１〜１６の不飽和脂肪酸等を挙げることができる。Ｒが芳香族基であるものとしては、安息香酸、フタル酸、サリチル酸、アントラニル酸等の芳香族カルボン酸を挙げることができる。Ｒがヘテロ芳香族基であるものとしては、フランカルボン酸、チオフェンカルボン酸、ピリジンカルボン酸、例えばニコチン酸、イソニコチン酸等のヘテロ芳香族カルボン酸を挙げることができる。芳香族基及びヘテロ芳香族基の置換基としては、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、エーテル基、カルボニル基、カルボキシル基、アミノ基、アミド基を挙げることができる。
【０００７】
本発明の一般式（Ｉ）においてＲ１〜Ｒ３、Ｒ５及びＲ６がアセチル基、Ｒ４がベンゾイル基である化合物（化合物５）及びＲ１〜Ｒ３及びＲ６がアセチル基、Ｒ４がベンゾイル基、Ｒ５がニコチノイル基である化合物（化合物８）は、甘遂の根をそのま又は乾燥して、好ましくは粉砕し、有機溶媒（例えば、クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール）で室温において抽出して得ることができ、得られた抽出物を自体公知の方法で処理し、精製することにより製造することができる。
これらの化合物を出発原料として本発明の一般式（Ｉ）で表される他の化合物を製造することができる。
例えば、化合物５を加水分解してＲ１が水素原子である化合物を得、次いで該化合物を出発原料としてウイリアムソン合成を利用して、以下のようにナトリウムアルコキシドとハロゲン化アルキル（Ｒ’Ｘ：Ｒ’はＲ１と同じ意味を有し、Ｘはハロゲン原子を表す）の反応により、本発明のエーテル化物を得ることができる。
2005041800.tif 000007
また、Ｒ１が水素原子である化合物を出発原料として、無水ピリジンの存在下に酸無水物（（Ｒ”ＣＯ）２Ｏ）と以下のように反応させることによって、本発明のエステル化物を製造することができる。
2005041800.tif 000008
【０００８】
【実施例】
製造例１
中国産の甘遂（学名：Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ  ｋａｎｓｕｉ  Ｌ．）の根の乾燥品１５ｋｇを粉砕し、これを６０％エタノール水溶液（ｖ／ｖ）４５Ｌに加えて、撹拌しながら室温で１２時間浸漬した。浸漬を同一条件で２回繰り返し、得られた浸出液をあわせて減圧下に４０℃で濃縮して１２００ｇのエキスを得た。これを水４Ｌに溶解し、クロロホルム、酢酸エチル及びブタノールの各４Ｌで、順次それぞれ３回ずつ抽出した。これらの画分を減圧下で濃縮して、クロロホルム画分からは１６５ｇ、酢酸エチル画分からは２３ｇ、ブタノール画分からは６４ｇの濃縮エキスを得た。
クロロホルム画分から得られた濃縮エキス１５０ｇをシリカゲルカラム（Ｗａｋｏ  ｇｅｌ  Ｃ−２００、和光純薬社製、１３×２２ｃｍ）にのせ、ヘキサン：酢酸エチル系の展開溶媒を使用し、酢酸エチル濃度を０％、２％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、５０％及び１００％とした溶媒を順次使用して展開し、第１〜第９の９画分に分画した。
【０００９】
製造例２
実施例１で得た第６画分（２０％の酢酸エチルを含むヘキサン溶媒によって溶出した画分）を、逆相カラム（ＯＤＳ−７５１５−１２Ａ、ＳＳＣ社製）により、水：メタノール系の展開溶媒を使用し、水濃度を７０％、５０％、４０％、３０％、１０％及び０％とした溶媒を順次使用して展開し、第１〜第６の６画分に分画した。第４画分（水濃度３０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）を順相ＨＰＬＣにより分離した。シリカゲルのカラム（Ｓｈｅｎｓｈｕ−ＰＥＧＡＳＩＬ  ＳＩＬＩＣＡ−６０−５、２５０×１０ｍｍ）を使用し、移動相としてクロロホルム：ヘキサン：酢酸エチル＝２０：６５：１５（ｖ／ｖ／ｖ）を用い、流速４ｍｌ／ｍｉｎ（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４ｎｍ）で監視しつつ、保持時間１５分５７秒及び１７分２６秒にピークを示す溶出液を分取した。これらの流出液を減圧下に濃縮して、化合物３（収量５０．１ｍｇ）及び化合物４（収量１６．１ｍｇ）を無色蝋燭状物質として得た。
【００１０】
製造例３
製造例１で得た第６画分（２０％の酢酸エチルを含むヘキサン溶媒によって溶出した画分）を、逆相カラム（ＯＤＳ−７５１５−１２Ａ、ＳＳＣ社製）により、水：メタノール系の展開溶媒を使用し、水濃度を７０％、５０％、４０％、３０％及び１０％とした溶媒を順次使用して展開し、第１〜第５の５画分に分画した。第５画分（水濃度１０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）を順相ＨＰＬＣにより分離した。逆相カラム（Ｓｈｅｎｓｈｕ−ＰＥＧＡＳＩＬ、ＯＤＳ社製、２５０×１０ｍｍ）を使用し、移動相としてアセトニトリル：水＝１０：１（ｖ／ｖ）を用い、流速４ｍｌ／ｍｉｎ（室温）で溶出させ、溶出液をＲＩ（ｓｈｏｄｅｘ  ＲＩ−１０１）で監視しつつ、保持時間３１分６秒及び３７分１２秒にピークを示す溶出液を分取した。これらの流出液を減圧下に濃縮して、化合物１（収量１２．１ｍｇ）及び化合物２（収量１０．１ｍｇ）を無色蝋燭状物質として得た。
第４画分（水濃度３０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）を順相ＨＰＬＣにより分離した。シリカゲルのカラム（Ｓｈｅｎｓｈｕ−ＰＥＧＡＳＩＬ  ＳＩＬＩＣＡ−６０−５、２５０×１０ｍｍ）を使用し、移動相としてクロロホルム：ヘキサン：酢酸エチル＝３０：１０：１０（ｖ／ｖ／ｖ）を用い、流速４ｍｌ／ｍｉｎ（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４ｎｍ）で監視しつつ、保持時間８分３０秒及び９分１１秒にピークを示す溶出液を分取した。これらの流出液を減圧下に濃縮して、化合物３（収量１４．０ｍｇ）及び化合物４（収量１．３ｍｇ）を無色蝋燭状物質として得た。
【００１１】
製造例４
製造例１で得た第７画分（３０％の酢酸エチルを含むヘキサン溶媒によって溶出した画分）を、逆相カラム（ＯＤＳ−７５１５−１２Ａ、ＳＳＣ社製）により、水：メタノール系の展開溶媒を使用し、水濃度を７０％、５０％、４０％、３０％及び１０％とした溶媒を順次使用して展開し、第１〜第５の５画分に分画した。
第２画分（水濃度５０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）の溶媒を蒸発させて結晶を得た。メタノールから再結晶して化合物５（２００ｍｇ）の白色針状結晶を得た。
第１画分（水濃度７０％のメタノール溶液によって溶出した画分）を逆相ＨＰＬＣにより分離した。カラムとしてＦｌｕｏＦｉｘ（ｔｙｐｅ：  ＩＥＷ２０５）を用い、移動相を４５％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝４５：５５（ｖ／ｖ））として流速６．０ｍｌ／ｍｉｎ（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０ｎｍ）で監視しつつ、保持時間１１分０秒及び１２分４０秒にピークを示す溶出液を分取した。それぞれの画分の溶媒を蒸発させ、メタノールから再結晶して、化合物６（２０．０ｍｇ）の白色粉末及び化合物７（１０．０ｍｇ）の白色針状結晶を得た。
第３画分（水濃度４０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）をＨＰＬＣにより分離した。ＰＥＧＡＳＩＬ  ＯＤＳ−２（ＳＳＣ社製、２５０×１０ｍｍ）カラムを使用し、移動相を６０％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝６０：４０（ｖ／ｖ））として流速３ｍｌ／ｍｉｎ（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０ｎｍ）で監視しつつ、保持時間２６分３秒にピークを示す溶出液を分取した。得られた画分の溶媒を蒸発させ、メタノールから再結晶して、化合物８（４０．１ｍｇ）の白色針状結晶を得た。
化合物１ないし化合物８のＭＳ、ＵＶ、ＩＲのデータを表１に、化合物１ないし化合物４の１Ｈ  ＮＭＲデータを表２に、化合物１ないし化合物４の１３Ｃ  ＮＭＲデータを表３に、化合物５ないし化合物７の１Ｈ  ＮＭＲ、１３Ｃ  ＮＭＲデータを表４に、化合物８の１Ｈ  ＮＭＲ、１３Ｃ  ＮＭＲデータを表５に示す。
【００１２】
【表１】
表１  化合物１ないし化合物８のＭＳ、ＵＶ、ＩＲデータ
2005041800.tif 000009
表１（続き）
2005041800.tif 000010
【００１３】
【表２】
表２  化合物１ないし化合物４の１Ｈ  ＮＭＲデータ
（３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３，  ＴＭＳ，  δ（ｐｐｍ）（Ｊ＝Ｈｚ））
2005041800.tif 000011
【００１４】
【表３】
2005041800.tif 000012
【００１５】
【表４】
2005041800.tif 000013
【００１６】
【表５】
表５  化合物８の１ＨＮＭＲ、１３Ｃ  ＮＭＲデータ（３００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３，  ＴＭＳ）
2005041800.tif 000014
【００１７】
以上のデータから、化合物１ないし化合物８は以下の構造式を有することが確認された。
2005041800.tif 000015
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2005041800.tif 000018
2005041800.tif 000019
式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｚはベンゾイル基を表す。
2005041800.tif 000020
式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｚはベンゾイル基を表す。
2005041800.tif 000021
式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｚはベンゾイル基を表す。
2005041800.tif 000022
式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｚはベンゾイル基、Ｎｉはニコチノイル基を表す。
【００１８】
本発明の化合物は細胞増殖を阻害する作用を有し、この作用を以下に述べるアニマルキャップアッセイ法によって確認した。アニマルキャップアッセイ法の詳細は、Ｇｏｄｓａｖｅ，  Ｓ．  Ｆ．  ａｎｄ  Ｓｌａｃｋ，  Ｊ．  Ｍ．  Ｗ．  （１９８９年），  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．  １３４：  ４８６−４９０を参照。
アフリカツメガエルの胞胚後期のアニマルキャップ細胞をピンセットで培養液中に分離する。分離したアニマルキャップ細胞の動物極組織から細胞を分離し、培養液中に移して細胞分散液を調製する。
０．２ｍｇ／ｍｌのγ−グロブリンを含む５０％のアニマルメディウムを含むテラサキプレートに、得られた細胞分散液を入れる。本発明の化合物を１０μｇ／ｍｌ含む溶液をテラサキプレートに加え、翌日顕微鏡で個々の細胞が分裂しているかどうかを観察した。阻害率は（分裂していない細胞の数）／（細胞の総数）である。結果を表６に示す。
表６  細胞分裂の阻害作用
2005041800.tif 000023
化合物の濃度は１０μｇ／ｍｌである。
【００１９】
表６から明らかなように、本発明の化合物は細胞分裂の阻害作用を有することから、食道癌、乳腺癌などの悪性腫瘍の治療剤として有用である。
本発明の化合物を経口、非経口又は経皮投与することができる。投与量は成人一人の１日、体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜１００ｍｇが適当である。
本発明の化合物を種々の剤形で投与することができ、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤、座剤、軟膏剤、パップ剤等の形態で投与することができる。本発明の化合物をこれらの剤形に形成する場合、これらの製剤化に通常使用する担体や添加物、例えば溶剤、基剤、希釈剤、充填剤などの賦形剤、溶解補助剤、乳化剤、分散剤、崩壊剤、可溶化剤、増粘剤、滑沢剤等の補助剤、抗酸化剤、保存剤、芳香剤、甘味剤等の添加剤を常法に従って使用し、製剤化することができる。
【００２０】
【発明の効果】
本発明の化合物は、抗悪性腫瘍作用を有する新規なジテルペン化合物であり、抗悪性腫瘍剤として有用である。