(57)【要約】【目的】ナメコ、および／または、マイタケよりの生理活性を有する物質ＥＥＭ−Ｐ、その製法および剤．【構成】ナメコ、および／または、マイタケの熱水または低級アルコール抽出物を分子フルイ法により処理し、低分子および高分子部分を除去して得られるＥＥＭ−Ｐ、その製造法、その剤および得られたＥＥＭ−Ｐの物理的、化学的性質が開示されている．【選択図】    図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナメコ、および／または、マイタケの茸を水、親水性溶媒もしくはこれらの混合溶媒で抽出し、次いで、この抽出物を分子フルイ法により処理し、分子量６，０００〜１００，０００で、水溶液中の紫外線吸収の極大値が２５５〜２６０ｎｍである部分を採取することにより得られる生理活性物質ＥＥＭ−Ｐ．
【請求項２】
親水性溶媒が、炭素数１から４の低級アルコールである請求の範囲第１項記載の生理活性物質ＥＥＭ−Ｐ．
【請求項３】
ナメコを水、炭素数１から４の低級アルコールもしくはこれらの混合溶媒で抽出し、次いで、分子フルイ法で処理することにより得られる、分子量６，０００〜１００，０００であり、水溶液中の紫外線吸収の極大値が２５５〜２６０ｎｍであり、赤外線吸収の極大吸収波数が  ３２３５、１５５６、１３９６、１０３３ｃｍ−１（いずれも±５０−１以内の誤差を含む）であり、蛋白含量が３８％〜４８％であり、糖含量が１４％〜２４％であり、アミノ酸の組成（モル比）が、アスパラギン酸：１２．２％、グルタミン酸：１３．９％、グリシン：１０．９％、アラニン：１１．３％、バリン：６．８％、セリン：６．５％、ロイシン：６．９％（いずれも±３％以内の誤差を含む）であり、構成糖としてグルコースを主とする生理活性物質ＥＥＭ−ＰＮ．
【請求項４】
マイタケを水、炭素数１から４の低級アルコールもしくはこれらの混合溶媒で抽出し、次いで、分子フルイ法で処理することにより得られる、分子量６，０００〜１００，０００であり、水溶液中の紫外線吸収の極大値が２５５〜２６０ｎｍであり、赤外線吸収の極大吸収波数が３２２０、１５７２、１３９５、９８７ｃｍ−１（いずれも±５０−１以内の誤差を含む）であり、蛋白含量が６０％〜７０％であり、糖含量が１０％〜２０％であり、アミノ酸の組成（モル比）が、アスパラギン酸：１２．６％、グルタミン酸：１３．２％、グリシン１１．２％、アラニン：１０．１％、バリン：６．７％、セリン：６．６％、ロイシン：６．７％（いずれも±３％以内の誤差を含む）であり、構成糖としてグルコース、ガラクトースを主とする生理活性物質ＥＥＭ−ＰＭ．
【請求項５】
ナメコ、および／または、マイタケの茸を水、親水性溶媒もしくはこれらの混合溶媒で抽出し、次いで、この抽出物を分子フルイ法により処理し、分子量６，０００〜１００，０００の部分を分取することを特徴とする、生理活性物質ＥＥＭ−Ｐの製造方法．
【請求項６】
親水性溶媒が、炭素数１から４の低級アルコールである請求の範囲第５項記載の生理活性物質ＥＥＭ−Ｐの製造方法．
【請求項７】
分子フルイ法が、分子フルイ膜（平膜）、中空ろ過膜、透析膜または分子クロマトを用いる方法である請求の範囲第５項記載または第６項記載の生理活性物質ＥＥＭ−Ｐの製造方法．
【請求項８】
請求の範囲第１項ないし第４項の何れかの項に記載の生理活性物質を有効成分として含有する剤．
【請求項９】
抗癌剤である請求の範囲第８項記載の剤．
【請求項１０】
錠剤、粉剤、顆粒剤、カプセル剤または液剤である請求の範囲第８項または第９項記載の剤．
【請求項１１】
大豆ペプチドおよび／または貝殻樹脂のフィルムコート剤でコートされた錠剤である請求の範囲第８項、第９項または第１０項記載の剤．
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【産業上の利用分野】
【０００１】  本発明は、ナメコ、および／または、マイタケの食用茸から得られた、抗癌活性、抗アレルギー、免疫賦活性、抗酸化活性などの生理活性を持つ物質およびその製造方法並びに当該生理活性物質を含有する製剤に関するものである．
【背景技術】
【０００２】  本発明者らは、永年にわたり茸類の生理活性について詳しく研究を行っており、その結果、ある種の茸類に、抗癌作用、免疫賦活作用、抗酸化作用、血圧及び血糖低下作用などの生理活性を示すことがしられるようになっている．しかし、茸の種類によっては、それらの活性がないか、非常に弱いにも係らず、よく効くと過度に効果が宣伝され、発売されている．【０００３】  本発明者らは、膨大な研究データに基づく確実な研究結果から、特に茸の抗癌作用が、含まれる多糖体によるものであることを知り、茸の多糖体であるグルカンについて研究した．しかしながら、純粋な単純多糖体、グルカンは、注射によっては活性を示すが、経口では効果を示さないことが判明した。  注射による投与は、病院でしか行い得ず、また、経口での投与の方が投与を受けるものにとって苦痛が少ないため、経口で有効な茸の活性成分の提供が強く求められている．
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】  本発明の課題は、経口投与によって抗癌作用、免疫賦活作用などの生理活性を有する物質を高濃度に含有する茸類を選択し、それらの生理活性物質を効率よく採取する方法を提供するとともに、それら得られた活性物質を使用に適するようにした製剤を提供するものである．
【課題を解決するための手段】
【０００５】  本発明者らは、上記の課題を解決するため種々検討した結果、食用に供されている茸類、ナメコ、および／または、マイタケの子実体および／または菌糸体が、経口で有効な活性物質を多量に含有し、それらの茸類の水もしくは炭素数１から４の低級アルコールのような親水性溶媒またはこれらの混合溶媒での抽出物には経口で有効な活性物質が含有されており、これらの抽出物をさらに分子フルイ法により処理し、低分子部分及び高分子部分を除いた、一定分子量範囲のものは、優れた生理活性を示すことを見出し、本発明を完成した．
【０００６】  すなわち本発明は、ナメコ、および／または、マイタケの茸を水、親水性溶媒もしくはこれらの混合溶媒で抽出し、次いで、これらの抽出物を分子フルイ法により処理し、分子量６，０００〜１００，０００の部分を採取することにより得られる生理活性物質ＥＥＭ−Ｐを提供するものである．
【実施態対称】
【０００７】  また本発明の、生理活性物質ＥＥＭ−Ｐはナメコ、および／または、マイタケのような食用に供される茸類の子実体および／または菌糸体の少なくとも一つの微粉砕物（以下、「茸」と記載する）を水および／または親水性溶媒を用いて抽出することにより得られる．この抽出に用いられる親水性溶媒としては、炭素数１から４の低級アルコールが好ましく使用される．
【０００８】  上記茸から生理活性物質ＥＥＭ−Ｐを含む画分の抽出は、例えば、原料である茸に適量の水またはアルコール類の親水性溶媒を添加し、例えば、８０ないし９８℃程度、好ましくは、水の場合は９０から９８℃の温度条件で、還流下に、１ないし４時間程度、好ましくは、２〜４時間抽出することにより行われる．抽出にあたっては、茸の重量に対して、３ないし１０重量倍程度の溶媒が使用される．
【０００９】  上記のようにして得られた抽出液は、必要によりろ過等で固形不純物を分離した後、減圧下に溶媒を溜去することにより、固形物として抽出物を採取することができる．
【００１０】  このようにして得られた固形物は、それ自体でも経口投与で活性を示し、そのままでも使用できるが、活性を高めるため、抽出液を分子フルイ処理して不要の部分を除去し、再度減圧下に濃縮して得られた分子量６，０００〜１００，０００の部分を、生理活性物質ＥＥＭ−Ｐとして使用する．
【００１１】  上記の目的のために使用される分子フルイとしては、分子フルイ膜（平膜）、中空ろ過膜、透析膜、分子フルイクロマト等を挙げることができ、生理活性物質ＥＥＭ−Ｐの分取取得は、これらを用いる方法を適宜応用することができる．
【００１２】  以下、モジュールタイプの中空ろ過を用いた場合を例にとって生理活性物質ＥＥＭ−Ｐの分取取得方法を説明すれば次の通りである．すなわち、前記のように抽出して得た茸の水および／または親水性溶媒抽出液（生理活性物質ＥＥＭ−Ｐを含む画分）を、まず、低分子分画モジュール、例えば、ＡＩＰ−３０１３、ＡＩＰ−２０１３，またはＡＩＰ−１０１０（旭化成工業社製）で処理して低分子物質（分子量６，０００以下の物質）を除く、次いで、低分子物質が除去された濃縮液を高分子分画モジュール、例えば、ＡＩＰ−３０１３、ＡＩＰ−２０１３，またはＡＩＰ−１０１０（旭化成製）で処理して高分子物質（分子量１００，０００以上の物質）を除き、外液を再び低分子分画モジュールを用いて濃縮する．かくするころにより、分子量が６，０００〜１００，０００の生理活性物質ＥＥＭ−Ｐを得ることができる．
【００１３】  なお、一般に分子フルイ法によるときは、分子の形状によってフルイにかかり方が異なり、他の方法で求めた分子量と異なる場合がある．従って、本発明における、分子量とは、分子フルイ法によるものを意味し、より正確にいうなら、低分子量の分子量は、ＡＩＰ−３０１３ないしはこれと同等の低分子分画モジュールを使用して測定した値である。同様、高分子分側の分子量は、ＡＩＰ−３０１３ないしはこれと同等の低分子分画モジュールを使用して測定した値である．
【００１４】  このようにして得られた茸類の生理活性物質ＥＥＭ−Ｐと記したが、茸からの生理活性物質は、茸菌糸体を原料として使用する場合、培養条件によってその収率が異なり、培地、培養温度などを最適に選ぶ必要がある．また、茸の種類によっても若干異なる物理化学的性状を示すことがある．
【００１５】  例えば、ナメコを原料として製造した生理活性物質ＥＥＭ−Ｐ（以下、ＥＥＭ−ＰＮと記す）は、後記実施例１に示す物理化学的性状を示す．また、マイタケを原料として製造した生理活性物質ＥＥＭ−Ｐ（以下、ＥＥＭ−ＰＭと記す）は、後記実施例２に示す物理化学的性状を示すものである．
【００１６】  このように、物理化学的性質においては、若干の相違があっても、いずれも後記実施例３に示すように、各茸の単純な熱水抽出物と比べより高い生理活性を有するものであって、共通な性質を保有するものといえる．
【００１７】  以上説明した生理活性物質ＥＥＭ−Ｐは、経口投与により生理活性を発揮しうるものが、所期の効果を発揮させるための経口摂取量は、人の年齢、体重、目的などにより異なるが、一般的に、成人１日あたりＥＥＭ−Ｐとして２００〜５０００ｍｇの範囲、好ましくは、１０００〜３０００ｍｇの範囲が好ましく、この量を１日数回に分けて服用することが適当であろう．
【００１８】  なお、本発明の生理活性物質ＥＥＭ−Ｐは、常法により錠剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤として使用できるが、そのまま大気中に放置すると吸湿して変色、変質することがあるので、フィルムコートを施した錠剤として使用することが好ましい．この目的のために使用されるフィルムコート材としては、大豆ペプチド、貝殻樹脂材等が好ましく、他のフィルムコート材では十分に吸湿を防止し得ない場合があり、変色、変質を生じることもあり得る。
【００１９】  以下に実施例を示して本発明を更に具体的に説明する．なお実施例においては、生理活性として抗癌効果を示したが、本願物質は、抗癌性に限定されるものでなく、前記の生理活性を有するものであることはいうまでもない．
【００２０】実施例  １    ナメコ１０００グラムを細かく粉砕した後、熱水抽出し、得られた抽出液から沈殿物をＰＳ−８８膜（大塚実業社製）で除去する．この熱水抽出液を低分子分画用モジュールタイプの中空ろ過膜、ＡＩＰ−３０１３（旭化成工業社製）を用いて高分子物質（分子量１００，０００以上の物質）を含有する画分を濃縮した．その濃縮液を高分子分画用モジュールタイプの中空ろ過膜、ＡＩＰ−３０１３（旭化成工業社製）を用いて高分子物質（分子量１００，０００以上）除き、その外液を再び低分子分画膜モジュールＡＩＰ−３０１３を用いて、濃縮した．このように連続的処理して、分子量４，０００〜１００，０００め生理活性物質ＥＥＭ−ＰＮを得た．  ［ＥＥＭ−ＰＮの物理化学的性質］（１）紫外線吸収（水溶液中３７０〜１９０ｎｍのＵＶ吸収を測定）：      極大値：２５８．０ｎｍ（２）赤外線吸収（ＡＴＲ法で測定）：      極大値（ｃｍ−１）：３２３５，１５５６，１３９６，１０３３        （吸収曲線を図１として示す）（３）１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ中で測定）：      チャートを図３として示す．（４）１３Ｃ−ＮＭＲＤ２Ｏ中で測定）：      チャートを図５に示す．（５）蛋白含量      ４２．９％（６）糖含量      １９．１％（７）主たる糖の構成比      グルコース：ガラクトース：マンノース＝３：１：１（８）アミノ酸組成      アスパラギン酸：１２．２％、グルタミン酸：１３．９％、グリシン：１０．９％      、アラニン：１１．３％、バリン：６．８％、セリン：６．５％、ロイシン：６．      ９％。こうして得られたＥＥＭ−ＰＮは、凍結乾燥することにより固形粉末とすることができ、更にそれを打錠することにより、経口投与可能な錠剤となしえた．
【００２１】実施例  ２マイタケ１０００グラムを熱水で還流しながら抽出し、熱水抽出物１０７グラムを得る．これを水に溶解した後、透析チューブに入れて透析し、透析内膜の高分子物質（分子量６０，０００以上）を含む画分を得た．この高分子物質を含む画分を分子フルイ膜ＰＭ−１０で処理して高分子物質（分子量５０，０００以上）を除き、凍結乾燥して、分子量が６，０００〜５０，０００の生理活性物質ＥＥＭ−ＰＭ高含量物質を得た．これを粉末剤とした．［ＥＥＭ−ＰＭの物理化学的性質］（１）紫外線吸収（水溶液中３７０〜１９０ｎｍのＵＶ吸収を測定）：      極大値：２５８．４ｎｍ（２）赤外線吸収（ＡＴＲ法で測定）：      極大値（ｃｍ−１）：３２２０，１５７２，１３９５，９８７        （吸収曲線を図２に示す）（３）１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ中で測定）：      チャートを図４に示す．（４）蛋白含量      ６４．８％（５）糖含量      １５．７％（６）主たる糖の構成比      グルコース：ガラクトース：マンノース＝１：２：１（７）アミノ酸組成      アスパラギン酸：１２．６％、グルタミン酸：１３．２％、グリシン１１．２％、アラニン：１０．１％、バリン：６．７％、セリン：６．６％、ロイシン：６．７％。
【００２２】実施例  ３  実施例１または２で得た生理活性物質ＥＥＭ−ＰＮまたはＰＭを用いて粉末剤を調製し、下記のような抗癌試験を行った．抗癌試験における生存率を対照群と比較して抗癌活性を決定した．この結果を表１に示す．  （抗癌試験）  ルイス肺癌の生細胞をＢＤＦ１雌マウスの皮下に移植し、翌日よりそれぞれの実施例で得た生理活性物質ＥＥＭ−ＰＭまたはＰＮを１日１回５００ｍｇ／ｋｇを精製水に懸濁して２０日間経口投与した．そして精製水だけを投与した対照群と茸の熱水抽出物投与群及び実施例１または２で得た生理活性物質を投与した群について、それぞれの群のマウスの平均生存日数から延命率を算出した結果を表１に示した．
【００２３】
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【発明の効果】
【００２４】    本発明により、効率良く生理活性の強い物質が食用茸ナメコ、および／または、マイタケから簡単に得られ、薬品または健康食品として有用な製品が得られる．
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は実施例１で得られた生理活性物質ＥＥＭ−ＰＮのＡＴＲ法で測定した赤外線吸収曲線の図である．
【図２】図２は実施例２で得られた生理活性物質ＥＥＭ−ＰＭのＡＴＲ法で測定した赤外線吸収曲線の図である．
【図３】図３は実施例１で得られた生理活性物質ＥＥＭ−ＰＮの１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）のチャートである．
【図４】図４は実施例２で得られた生理活性物質ＥＥＭ−ＰＭの１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）のチャートである．
【図５】図５は実施例１で得られた生理活性物質ＥＥＭ−ＰＮの１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）のチャートである．
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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