(57)【要約】【課題】ラン科植物に含有される活性成分の詳細について解明し、その用途を開発することを課題とする。【解決手段】ラン科植物またはアルコール抽出物あるいは該抽出物中に含まれる活性化合物を有効成分として含む活性酸素消去または抗アレルギー用組成物により、上記の課題を解決する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラン科植物またはそのアルコール抽出物を有効成分として含むことを特徴とする活性酸素消去または抗アレルギー用組成物。
【請求項２】
ラン科植物が、手参または粗脈手参である請求項１に記載の活性酸素消去または抗アレルギー用組成物。
【請求項３】
ラン科植物が、手参または粗脈手参から得られる手掌参、仏手掌、掌参または手児参である請求項１に記載の活性酸素消去または抗アレルギー用組成物。
【請求項４】
アルコール抽出物が低級アルコール抽出物である請求項１〜３のいずれか一つに記載の組成物。
【請求項５】
式
【化１】
2005041788.tif 000014
［式中、Ｒ１は水素原子、ヒドロキシ基またはメトキシ基を表し、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは共に水素原子を表すか、または両者が一緒になって結合手を表し、Ｒ２ａとＲ２ｂが一緒になって結合手を表すとき、Ｒ３は水素原子または式：
【化２】
2005041788.tif 000015
［式中、Ｒ１は上記と同じである］
で表される基を表し、Ｒ２ａおよびＲ２ｂが共に水素原子を表すとき、Ｒ３は水素原子または式：
【化３】
2005041788.tif 000016
で表される基を表す］
で表される化合物からなる群から選択される一つ以上の化合物を有効成分として含むことを特徴とする、活性酸素消去または抗アレルギー用組成物。
【請求項６】
有効成分が、式：
【化４】
2005041788.tif 000017
で表される１以上の化合物である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一つに記載の組成物を含むヒトまたは動物用の医薬または食品。
【請求項８】
式：
【化５】
2005041788.tif 000018
で表される化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ラン科植物またはそのアルコール抽出物を有効成分として含む活性酸素消去または抗アレルギー用組成物に関するものである。より詳細には、本発明は、ラン科植物である手参または粗脈手参またはそのアルコール抽出物を有効成分とする活性酸素消去または抗アレルギー用組成物、ならびに該抽出物に含まれる新規化合物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ラン科植物（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）である手参（Ｇｙｍｎａｄｅｎｉａ  ｃｏｎｏｐｓｅａ  Ｒ．  Ｂｒ．）および粗脈手参（Ｇｙｍｎａｄｅｎｉａ  ｃｒａｓｓｉｎｅｒｖｉｓ  Ｆｉｎｅｔ）は、中国の東北、華北、西北、四川省およびチベットなどに分布している多年生草本である。その塊茎を乾燥させたものは、手掌参、仏手参などと称され、漢薬として肺虚咳喘、虚労消痩、神経衰弱、久瀉、失血、帯下、乳少、慢性肝炎などの治療に用いられている（非特許文献１）。
【０００３】
その有効成分については、数種のフラボノイド配糖体およびステロイドなどが報告されているのみで、ほとんど研究が行われていない（非特許文献２および３）。
【非特許文献１】
中薬大辞典第２巻、第１１８５〜１１８６頁、小学館出版
【非特許文献２】
Ｓ．  Ｌｉら、Ｚｈｏｎｇｃａｏｙａｏ  （２００１），  ３２（１），  １８，  ３８
【非特許文献３】
Ｄ．  Ｓｔｒａｃｋら、Ｚ．  Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．，  Ｃ：  Ｂｉｏｓｃｉ．  （１９８６），  ４１（７−８），  ７０７−１１
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、従来、上記のような症状の治療または緩解に広く用いられてきた漢薬である手掌参または仏手参に含まれる有効成分の特定、ならびに該漢薬に含まれる成分の新規用途の開発を課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、ラン科植物である手参および粗脈手参ならびにそれらの塊茎の乾燥品である漢薬の手掌参もしくは仏手参に含まれる生理活性成分について鋭意研究を行った結果、いくつかの新規化合物が含まれていることを見出した。さらにこれら新規化合物を含む上記植物の抽出物が、従来知られている漢薬としての薬効とは全く異なる、活性酸素消去作用および抗アレルギー作用を有することを意外にも見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
したがって、本発明によれば、ラン科植物またはそのアルコール抽出物を有効成分として含むことを特徴とする、活性酸素消去または抗アレルギー用組成物が提供される。
【０００７】
また、本発明によれば、次の式：
【化６】
2005041788.tif 000002
で表される新規化合物が提供される。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明の活性酸素消去または抗アレルギー用組成物は、ラン科植物またはそのアルコール抽出物あるいは該抽出物中に含まれる化合物を有効成分として含む。
ラン科植物としては、具体的には、手参および粗脈手参が挙げられる。これらのラン科植物の産地は特に限定されないが、中国の東北、華北、西北、四川およびチベットなどに分布しているものが好適に用いられる。
本発明による抽出物の調製には、ラン科植物の全草または塊茎をそのまま、または細断もしくは粉砕したものを用いてもよいが、手参または粗脈手参の塊茎の乾燥品で、漢薬として用いられている手掌参、仏手参、掌参、手児参等を細断もしくは粉砕したものを用いると、抽出効率の面で好ましい。
【０００９】
本発明の抽出物を得るのに用いられるアルコールとしては、炭素数１〜４の低級アルコール類が挙げられ、具体的には、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔ−ブタノールもしくはこれらの混液またはこれらの３０容量％程度までの水を含有する含水アルコール等が挙げられる。なかでも、メタノールが特に好ましい。
これらの抽出溶媒は、抽出材料に対して、１〜５０倍（容量）程度、好ましくは２〜１０倍程度用いられる。
【００１０】
抽出温度は、室温〜溶媒の沸点の間で任意に設定できるが、例えば、５０℃〜抽出溶媒の沸点の温度で、振盪下もしくは非振盪下または還流下に、上記の抽出材料を上記の抽出溶媒に浸漬することによって行うのが適当である。抽出材料を振盪下に浸漬する場合には、３０分間〜１０時間程度行うのが適当であり、非振盪下に浸漬する場合には、１時間〜２０日間程度行うのが適当である。また、抽出溶媒の還流下に抽出するときは、３０分〜数時間加熱還流するのが好ましい。なお、５０℃より低い温度で浸漬して抽出することも可能であるが、その場合には、上記の時間よりも長時間浸漬するのが好ましい。抽出操作は、同一材料について１回だけ行ってもよいが、複数回、例えば、２〜５回程度繰り返すのが好ましい。
【００１１】
抽出混合物から固形物を除去して得られる抽出液は、常法により濃縮して抽出エキスとしてもよい。濃縮は、低温で減圧下に行うのが好ましい。濃縮は抽出液が乾固するまで行ってもよい。
抽出エキスは、そのまま本発明の組成物を調製するのに用いてもよいが、粉末状または凍結乾燥品等として用いてもよい。これらの固形物とする方法は、当該分野で公知の方法を採用することができる。
したがって、本発明における抽出物とは、抽出液、抽出エキス、およびそれらを固形化して得られる固形物のいずれをも包含する。
【００１２】
なお、抽出液は、濃縮する前後に精製処理に付してもよい。精製処理は、クロマトグラフ法、イオン交換クロマトグラフ法、溶媒による分配抽出等を単独または組み合わせて採用することができる。例えば、クロマトグラフ法としては、順相もしくは逆相担体またはイオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは遠心液体クロマトグラフィー等のいずれか、またはそれらを組み合わせて行う方法が挙げられる。この際の担体、溶出溶媒等の精製条件は、各種クロマトグラフィーに対応して適宜選択することができる。
【００１３】
なかでも、抽出液を濃縮して抽出エキスとし、この抽出エキスをイオン交換カラムクロマトグラフィーに付し、例えば、水、メタノール、アセトンなどで順次溶出して得られる溶出画分に対し、さらに上記の精製法を組合わせて、分離精製するのが好ましい。
また、水と非水和性有機溶媒を用いて分配抽出により精製してもよい。非水和性有機溶媒としては、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、ヘキサン、クロロホルムなどが挙げられる。さらに、このようにして得られた有機溶媒可溶画分を上記のような精製処理に付してもよい。
本発明の抽出物は、次に示す化合物の少なくとも１つを含有している。
【００１４】
式：
【化７】
2005041788.tif 000003
［式中、Ｒ１は水素原子、ヒドロキシ基またはメトキシ基を表し、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは共に水素原子を表すか、または両者が一緒になって結合手を表し、Ｒ２ａとＲ２ｂが一緒になって結合手を表すとき、Ｒ３は水素原子または式：
【００１５】
【化８】
2005041788.tif 000004
［式中、Ｒ１は上記と同じである］
で表される基を表し、Ｒ２ａおよびＲ２ｂが共に水素原子を表すとき、Ｒ３は水素原子または式：
【００１６】
【化９】
2005041788.tif 000005
で表される基を表す］
【００１７】
より具体的には、式：
【化１０】
2005041788.tif 000006
で表される化合物群、ならびに、式：
【００１８】
【化１１】
2005041788.tif 000007
で表される化合物群を含む。
【００１９】
これらの化合物群のうち、化合物（１）〜（４）は、新規化合物であるが、化合物（２１）、（２２）および（２４）は既知化合物である（高木ら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２２，（４），  １０１１−１０１５頁、１９８３、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２８，  （１２），  ３５０３−３５０５頁、１９８９およびＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２９，  （７），  ２２８５−２２８７頁、１９９０）。
上記の化合物（１）〜（４）、（２１）、（２２）および（２４）は、いずれも活性酸素消去作用および抗アレルギー作用を有することも見出された。
なお、過剰の活性酸素は、生体内で過酸化脂質の増加に関与しており、心筋梗塞、動脈硬化、糖尿病、癌、脳卒中、白内障、肩こり、冷え性、高血圧および老人性痴呆症等の疾患を招たり、シミ、ソバカス、しわ等を生じ得るといった問題が指摘されている。
また、近年、ハウスダスト、ダニ、各種花粉、カビ類または食物等によるアレルギー患者の増加も問題となっている。
【００２０】
したがって、上記の各化合物ならびに上記の各化合物を含むラン科植物およびそのアルコール抽出物は、上記疾患の予防または治療を目的とする活性酸素消去または抗アレルギー用組成物の有効成分として用いることができる。
本発明のアルコール抽出物は、そのままの状態、または適当な媒体で希釈して、あるいは医薬品の製造分野において公知の方法により、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤または液剤等、種々の医薬品の形態で使用することができる。
上記の各化合物も、上記の抽出物と同様に製剤化して用いることができる。
【００２１】
これらの医薬品形態においては、適当な媒体を添加してもよい。そのような媒体としては、医薬的に許容される賦形剤、例えば結合剤（例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガントまたはポリビニルピロリドン）、充填剤（例えば乳糖、砂糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルクまたはポリエチレングリコール）、崩壊剤（例えば馬鈴薯澱粉）または湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）等が挙げられる。
錠剤は、通常の方法でコーティングしてもよい。液体製剤は、例えば水性または油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、使用前に水または他の適切な賦形剤で再生する乾燥製品として提供してもよい。
【００２２】
こうした液体製剤は、通常の添加剤、例えば懸濁化剤（例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン水添加食用脂）、乳化剤（例えばレシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアラビアゴム）、（食用脂を含んでいてもよい）非水性賦形剤（例えばアーモンド油、分画ココヤシ油またはグリセリン、プロピレングリコールまたはエチルアルコールのような油性エステル）、保存剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピル、またはソルビン酸）、および所望により着色剤または香料等を含んでいてもよい。
【００２３】
上記の抽出物は単独でまたは混合物として、また上記の個々の化合物は混合物として、食品および／または健康食品に利用することができる。健康食品とは、通常の食品よりも積極的な意味で保健、健康維持・増進等を目的とした食品を意味し、例えば、液体または半固形、固形の製品、具体的には、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤または液剤等のほか、クッキー、せんべい、ゼリー、ようかん、ヨーグルト、まんじゅう等の菓子類、清涼飲料、お茶類、栄養飲料、スープ等の形態が挙げられる。
これらの食品の製造工程において、あるいは最終製品に、上記の抽出物および／または化合物等を混合または塗布、噴霧などにより添加して、健康食品とすることができる。
【００２４】
上記の抽出物および化合物の使用量は、抽出液の濃縮・精製の程度、疾患の重篤度、服用者の体重、年齢等によって適宜調節することができ、例えば、成人１回につき抽出物（固形分）として、１００ｍｇ〜２ｇ程度が挙げられ、化合物としては１０〜１００ｍｇ程度が挙げられる。
また、健康食品としての使用時には、食品の味や外観に悪影響を及ぼさない量、例えば、対象となる食品１ｋｇに対して、上記の抽出物または化合物として、１０ｍｇ〜１０ｇ程度の範囲で用いることが適当である。
【００２５】
【実施例】
以下、本発明の抽出物、新規化合物およびそれらの作用について、実施例および試験例で具体的に説明する。
なお、実施例では、特に記載がない限り、以下の各種溶媒、ろ紙、クロマトグラフィー用担体およびＨＰＬＣカラムを用いた：
メタノール：ナカライテスク社、特級、
アセトン：ナカライテスク社、特級、
ｎ−へキサン：ナカライテスク社、特級、
酢酸エチル：ナカライテスク社、特級、
クロロホルム：ナカライテスク社、特級、
ろ紙：アドバンテック社、Ｎｏ．２
イオン交換樹脂：Ｄｉａｉｏｎ−ＨＰ２０、日本練水社製、
順相シリカゲル：富士シリシア社製、ＢＷ−２００、１５０〜３５０メッシュ、
逆相オクタデシルシリカゲル（以下、ＯＤＳ）：富士シリシア社製、Ｃｈｒｏｍａｔｒｅｘ    ＯＤＳ  ＤＭ１０２０Ｔ、１００〜２００メッシュ、
ＨＰＬＣカラム：ＹＭＣ社製、ＹＭＣ  Ｐａｃｋ−ＯＤＳ−Ａ、２０ｍｍ（ｉ．ｄ．）×２５０ｍ  ｍ。
【００２６】
実施例１
（１）手掌参メタノール抽出エキスの調製
乾燥した手参（Ｇ．  ｃｏｎｏｐｓｅａ）の塊茎（手掌参）  １２．０  ｋｇを粉砕し、これに約１０倍量のメタノール（１２０  Ｌ）を加え、加熱還流下３時間抽出した。抽出後、ひだ折りろ紙でろ過した後、抽出残査に再度メタノール（１２０  Ｌ）を加え、３時間加熱還流し抽出を行った。合計３回の抽出を行い、その抽出液をあわせ、ロータリーエバポレーターを用いて、減圧下に溶媒を留去して手掌参のメタノール抽出エキス９３０  ｇ  （生薬からの収率７．７５％）を得た。
【００２７】
（２）メタノール抽出エキスの溶出分画の調製
手掌参のメタノール抽出エキス（３０７  ｇ）をイオン交換樹脂ダイアイオン−ＨＰ２０  （４．０  ｋｇ）に付し、移動相として水、メタノールおよびアセトンで順次溶出し、各溶出液を減圧下に溶媒留去して、それぞれ水溶出部（２５１．２  ｇ、６．３４％）、メタノール溶出部（５０．５  ｇ、１．２７％）およびアセトン溶出部（５．３  ｇ、０．１４％）を得た。
【００２８】
（３）メタノール溶出部の分離および精製
メタノール溶出部（４５．５  ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１．４  ｋｇ、移動相：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（５／１〜１／１、（ｖ／ｖ））、クロロホルム／メタノール／水（１０／３／１〜７／３／１〜６／４／１（ｖ／ｖ））の下層〜メタノールの各濃度勾配で順次溶出し、溶出画分１（１．８２  ｇ）、２（１．０３  ｇ）、３（０．４０  ｇ）、４（０．９５  ｇ）、５（１．３５  ｇ）、６（３．３４  ｇ）、７（６．９５  ｇ）、８（２１．３６  ｇ）、９（６．７９  ｇ）、１０（１．５１  ｇ）を得た。このうち、溶出画分２（１．０３  ｇ）について、ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（３０  ｇ、移動相：メタノール／水（５０／５０〜７０／３０（ｖ／ｖ））〜メタノール）および逆相ＨＰＬＣ  （移動相：メタノール／水（４０：６０  （ｖ／ｖ））にて分離、精製し、２，６−ジメトキシフェノール（６、９．５  ｍｇ、０．０００３％）、４−メトキシベンジルアルコール（９、２７８．９  ｍｇ、０．００７８％）、４−エトキシベンジルアルコール（１０、８３．８  ｍｇ、０．００２３％）および４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１３、７７．７  ｍｇ、０．００２２％）を得た。
【００２９】
溶出画分３（０．４０  ｇ）について、ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（１５  ｇ、移動相：メタノール／水（３０／７０〜５０／５０〜７０／３０（ｖ／ｖ））〜メタノール）および逆相ＨＰＬＣ（移動相：メタノール／水（５５／４５（ｖ／ｖ））で分離し、精製して、４−メトキシ−９，１０−ジヒドロフェナントレン−２，７−ジオール（２２、４２．５  ｍｇ、０．００１２％）およびバタタシンＩＩＩ  （２７、５８．３  ｍｇ、０．０１６％）を得た。
【００３０】
溶出画分４（０．９５  ｇ）について、ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（３０  ｇ、移動相：メタノール／水（３０／７０〜５０／５０〜７０／３０（ｖ／ｖ））〜メタノール）および逆相ＨＰＬＣ（移動相：メタノール／水（３０／７０、４０／６０、４８／５２、５５／４５、６０／４０または６５／３５（ｖ／ｖ））で分離、精製し、新規化合物ジムコノピン（ｇｙｍｃｏｎｏｐｉｎ）  Ａ  （１、２４．１  ｍｇ、０．０００６％）およびＣ  （３、４．８  ｍｇ、０．０００１％）を単離するとともに、１，２−ベンゼンジオール（５、３．２  ｍｇ、０．０００１％）、４−ヒドロキシベンジルアルコール（８、９５．０  ｍｇ、０．００２７％）、４−ヒドロキシ安息香酸（１４、３２．８  ｍｇ、０．０００９％）、３−メトキシ−４−ヒドロキシ安息香酸（１５、３７．７  ｍｇ、０．００１１％）、ｐ−クマル酸（１６、１９．７  ｍｇ、０．０００６％）、５−ヒドロキシメチルフルアルデヒド（１８、１５．８  ｍｇ、０．０００４％）、４−メトキシ−１−（４−ヒドロキシベンジル）フェナントレン−２，７−ジオール（２０、１２．１  ｍｇ、０．０００３％）、４−メトキシ−１−（４−ヒドロキシベンジル）−９、１０−ジヒドロフェナントレン−２，７−ジオール（２１、４７．８  ｍｇ、０．００１３％）、ブレストリアレン（ｂｌｅｓｔｒｉａｒｅｎｅ）  Ａ  （２４、１４．６  ｍｇ、０．０００４％）、ブレストリアレンＢ  （２５、２．５  ｍｇ、０．０００１％）、ブレストリアレンＣ  （２６、１．３  ｍｇ、０．０００１％）、２−（４−ヒドロキシベンジル）バタタシンＩＩＩ  （３０、３２．６  ｍｇ、０．０００９％）、３，３’−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシベンジル）−５−メトキシビベンジル（３２、２７．７  ｍｇ、０．０００８％）、バルボコジン（ｂｕｌｂｏｃｏｄｉｎ）  Ｃ  （３３、３．７  ｍｇ、０．０００１％）、バルボコジンＤ  （３４、３．８  ｍｇ、０．０００１％）、アルンジン（ａｒｕｎｄｉｎ）  （３５、８．８  ｍｇ、０．０００３％）およびアルンジニン（ａｒｕｎｄｉｎｉｎ）  （３６、８．８  ｍｇ、０．０００３％）を得た。
【００３１】
溶出画分５（１．３５  ｇ）について、ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（３０  ｇ、移動相：メタノール／水（５０／５０〜７０／３０（ｖ／ｖ））〜メタノール）およびＨＰＬＣ（移動相：メタノール／水（３０／７０、４０／６０、６０／４０および６５／３５（ｖ／ｖ））で分離し、精製して、新規化合物ジムコノピンＢ  （２、１０．４  ｍｇ、０．０００３％）およびＤ  （４、９．２  ｍｇ、０．０００２％）を単離するとともに、３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（７、６．６  ｍｇ、０．０００２％）、４−ヒドロキシベンジルメチルエーテル（１１、４．４  ｍｇ、０．０００１％）、ビス（４−ヒドロキシベンジル）エーテル（１２、９．１  ｍｇ、０．０００３％）、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１３、５．０  ｍｇ、０．０００１％）、フェルル酸（１７、５．５  ｍｇ、０．０００２％）、（−）−ピノレシノール（ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌ）  （１９、７．９  ｍｇ、０．０００２％）、４−メトキシ−９，１０−ジヒドロフェナントレン−２，７−ジオール（２２、５．６  ｍｇ、０．０００２％）、２−メトキシ−９，１０−ジヒドロフェナントレン−４．５−ジオール（２３，  ３５．１  ｍｇ、０．００１０％）、３’−Ｏ−メチルバタタシンＩＩＩ  （２８、１８．２  ｍｇ、０．０００５％）、５−Ｏ−メチルバタタシンＩＩＩ  （２９、５．４  ｍｇ、０．０００２％）および２−（４−ヒドロキシベンジル）−３’−Ｏ−メチルバタタシンＩＩＩ  （３１、７．８  ｍｇ、０．０００２％）を得た。
【００３２】
なお、以下の１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲによる構造解析に用いたナンバリングは、例えば、式
【化１２】
2005041788.tif 000008
のナンバリングに基づいている。
【００３３】
ジムコノピンＡ  （１）の物性値
性状：白色粉末
高分解能質量分析（ハイレゾルーションＥＩ−ＭＳ）：
理論値（Ｃ２２Ｈ２０Ｏ４  （Ｍ＋））  ：  ３４８．１３６１
実測値                  ：  ３４８．１３５６
紫外吸収スペクトル（ＭｅＯＨ、ｎｍ  （ｌｏｇε））：  ２２０  （４．３７），  ２７４  （４．０１），  ３０６  （３．８０）
赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ、ｃｍ−１）：  ３４３２，  ２９２０，  １６０６，  １５８０，  １５０８，  １４５８
質量分析ＥＩ−ＭＳ  （％）：  ｍ／ｚ  ３４８  （Ｍ＋，  １００），  ２５４  （Ｍ＋  −Ｃ６Ｈ６Ｏ，  １２），  ２４２  （Ｍ＋  −Ｃ７Ｈ６Ｏ，  ８７），  １０７  （Ｃ７Ｈ７Ｏ＋，  ２５）。
【００３４】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ２．５２  （４Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  ９，１０−Ｈ２），  ３．８０  （３Ｈ，  ｓ，  ２−ＯＣＨ３），  ３．９５  （２Ｈ，  ｓ，  ７’−Ｈ２），  ６．５５  （１Ｈ，  ｓ，  ３−Ｈ），  ６．６３  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  ３’，５’−Ｈ），  ６．７８  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  ８−Ｈ），  ６．８２  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ，  ６−Ｈ），  ６．８８  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １’，６’−Ｈ），  ７．０３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．３，  ７．９  Ｈｚ，  ７−Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δｃを表１に記載
【００３５】
ジムコノピンＢ  （２）の物性値
性状：白色粉末
高分解能質量分析（ハイレゾルーションＥＩ−ＭＳ）：
理論値（Ｃ２２Ｈ２０Ｏ４  （Ｍ＋））  ：  ３４８．１３６１
実測値                  ：  ３４８．１３５９
紫外吸収スペクトル  ［ＭｅＯＨ，  ｎｍ  （ｌｏｇε）］：  ２２３  （４．４３），  ２７７  （４．１４），  ３０６  （３．８８）
赤外吸収スペクトル  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３４３０，  ２９６０，  １５７８，  １５０９，  １４５８
質量分析  ＥＩ−ＭＳ  （％）：  ｍ／ｚ  ３４８  （Ｍ＋，  ２８），  ２５４  （Ｍ＋  −Ｃ６Ｈ６Ｏ，  １００），  ２４２  （Ｍ＋  −Ｃ７Ｈ７Ｏ，  ３），  １０７  （Ｃ７Ｈ７Ｏ＋，  １２）
【００３６】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ２．６５  （４Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  ９，１０−Ｈ２），  ３．８０  （３Ｈ，  ｓ，  ２−ＯＣＨ３），  ３．９５  （２Ｈ，  ｓ，  ７’−Ｈ２），  ６．５４  （１Ｈ，  ｓ，  １−Ｈ），  ６．６０  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  ３’−および５’−Ｈ），  ６．８６  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ８−Ｈ），  ６．８６  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ６−Ｈ），  ７．０６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．６，  ７．６  Ｈｚ，  ７−Ｈ），  ７．０７  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １’−および６’−Ｈ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δＣを表１に記載
【００３７】
ジムコノピンＣ  （３）の物性値
性状：白色粉末
高分解能質量分析（ハイレゾルーションＥＩ−ＭＳ）：
理論値（Ｃ３０Ｈ２６Ｏ６  （Ｍ＋））    ：  ４８２．１７２９
実測値                    ：  ４８２．１７３２
紫外吸収スペクトル  ［ＭｅＯＨ，  ｎｍ  （ｌｏｇε）］：  ２１６  （４．７４），  ２８１  （４．５６），  ２９７  （４．４５）
赤外吸収スペクトル  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３４７５，  １５６０，  １５０８，  １４６０
質量分析  ＥＩ−ＭＳ  （％）：  ｍ／ｚ  ４８２  （Ｍ＋，  １００），  ２４１  （Ｃ１５Ｈ１３Ｏ３＋，  ２６）．
【００３８】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ２．５０  （２Ｈ，  ｍ，  １０−Ｈ２），  ２．５３  （２Ｈ，  ｍ，  ９−Ｈ２），  ２．７０  （４Ｈ，  ｓ，  ９’−および１０’−Ｈ２），  ３．７４および３．８８  （３Ｈ，  ｓ，  ４’−および４−ＯＣＨ３），  ６．３２および６．３７  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．５  Ｈｚ，  １’−および３’−Ｈ），  ６．５７  （１Ｈ，  ｓ，  ３−Ｈ），  ６．６０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．７  Ｈｚ，  ８−Ｈ），  ６．６３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ２．７，  ８．５  Ｈｚ，  ６−Ｈ），  ６．７６および７．８７  （１Ｈ，  ｓ，  ８’−および５’−Ｈ），  ８．０３  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  ５−Ｈ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δｃを表１に記載
【００３９】
ジュムコノピンＤ  （４）の物性値
性状：白色粉末
高分解能質量分析（ハイレゾルーションＥＩ−ＭＳ）：
理論値（Ｃ２３Ｈ２４Ｏ４  （Ｍ＋））  ：  ３６４．１６７４
実測値                  ：  ３６４．１６８１
紫外吸収スペクトル  ［ＭｅＯＨ，  ｎｍ  （ｌｏｇε）］：  ２１０  （４．５８），  ２８０  （３．７７）
赤外吸収スペクトル  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：  ３４１０，  ２９４０，  １６１０，  １５９３，  １５１０，  １４６０
質量分析  ＥＩ−ＭＳ  （％）：  ｍ／ｚ  ３６４  （Ｍ＋，  １００），  ２７０  （Ｍ＋  −Ｃ６Ｈ６Ｏ，  １５），  ２５８  （Ｍ＋  −Ｃ７Ｈ８Ｏ，  ５１），  １０７  （Ｃ７Ｈ７Ｏ＋，  ３０）。
【００４０】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ２．５６および２．７２  （２Ｈ，  ｍ，  β−およびα−Ｈ２），  ３．６９および３．７２  （３Ｈ，  ｓ，  ５−および３’−ＯＣＨ３），  ３．８６  （２Ｈ，  ｓ，  ７’’−Ｈ２），  ６．２４および６．３１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，  ６−および４−Ｈ），  ６．５４  （１Ｈ，  ｂｒ  ｓ，  ２’−Ｈ），  ６．６４  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ，  ３’’−および５’’−Ｈ），  ６．６４  （１Ｈ，  ｂｒ  ｄｄ，  Ｊ  ＝約３，  ８  Ｈｚ，  ６’−Ｈ），  ６．６８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ２．７，  ８．２  Ｈｚ，  ４’−Ｈ），  ６．９３  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ，  ２’’−および６’’−Ｈ），  ７．１１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．９，  ８．２  Ｈｚ，  ５’−Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ  （１２５  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δＣを表  １に記載
【００４１】
表１：  化合物（１）〜（４）の１３Ｃ−ＮＭＲデータ（δＣ）（１２５  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）
【００４２】
【表１】
2005041788.tif 000009
【００４３】
試験例１
（１）抗酸化活性
抗酸化活性試験として、各種ラジカル（１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）、・Ｏ２−）消去活性試験を、以下の方法に従って実施した。試験結果を表２に示す。
【００４４】
ＤＰＰＨラジカル消去活性試験
ＤＰＰＨラジカル消去活性試験を、Ｍａｔｓｕｄａ  Ｈらの方法（Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ９，  ４１〜５０  （２００１））に従って行った。
０．１  Ｍ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ  ５．５）  １．０  ｍｌ、ＤＰＰＨラジカルの２００μＭエタノール溶液０．５  ｍｌ、各濃度の被験物質のエタノール溶液１．０  ｍｌを混合した。室温で３０分間放置した後、５１７  ｎｍにおける吸光度を測定し、吸光度の変化からＤＰＰＨラジカル（終濃度４０μＭ）の５０％を消去するのに要した被験物質の濃度（ＳＣ５０）を算出した。なお、被験物質はＤＭＳＯにて溶解した後、エタノールで希釈して用いた（ＤＭＳＯの最終濃度；１．０％）。
【００４５】
・Ｏ２−消去活性試験
受田らの方法（Ｂｉｏｓｃｉ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ６３，  ４８５−４８８  （１９９９））に準じて試験を行った。すなわち，１００μＭ  キサンチン、１００μＭ  ＥＤＴＡ、２５μＭ  ＷＳＴ−１を含む５０  ｍＭ  炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ  １０．２）および被験サンプルを含む反応液２．９  ｍｌを３７℃で１０分間予備加温し、５８  ｍＵ／ｍｌキサンチンオキシダーゼ１００μｌを加えて、２０分間インキュベーションした。インキュベーション後、２Ｍ塩酸１００μｌを加えて反応を止め、・Ｏ２−により還元されて生成したＷＳＴ−１ホルマザンの吸光度を４５０  ｎｍを測定波長として測定した。得られた値より５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を算出した。比較対照物質としてルチン（ＩＣ５０＝４．５μＭ）を用いた。
キサンチンオキシダーゼ阻害活性については、上記方法においてＷＳＴ−１を除いて反応させた後、２９０  ｎｍでの吸光度の変化から算出した。
【００４６】
表２：  手参含有化合物のＤＰＰＨラジカルおよびスーパーオキシドの除去活性
【００４７】
【表２】
2005041788.tif 000010
【００４８】
（２）抗アレルギー作用
抗アレルギー作用として，抗原刺激により惹起されたラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）の脱顆粒の際に、ヒスタミンと共に放出されるβ−ヘキソサミニダーゼ（ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）の遊離量を測定することで脱顆粒の指標とし、その遊離抑制作用を検討した。
【００４９】
β−ヘキソサミニダーゼ遊離阻害率の測定
ヒューマンサイエンス研究資源バンクから購入したＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％ウシ子牛血清（ＦＣＳ）、１００  Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン含有イーグルＭＥＭ培地（ＭＥＭ、シグマ社）で、５％ＣＯ２の存在下に３７℃で培養した。次に細胞培養用２４ウェル平底マイクロプレート（４００μｌ  培地／ウェル）に、２．０×１０５細胞ずつ播種し、１時間培養した後、ラットモノクローナル抗  ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体（シグマ社）を培養液に加え（終濃度：  ０．４５μｇ／ｍｌ）、５％ＣＯ２の存在下に３７℃で２４時間培養することによって細胞を感作させた。その後、感作した細胞を５００μｌのシラガニアン（ｓｉｒａｇａｎｉａｎ）緩衝液（１１９  ｍＭ  ＮａＣｌ、５  ｍＭ  ＫＣｌ、０．４  ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２５  ｍＭ  ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）  （ＰＩＰＥＳ）、４０  ｍＭ  ＮａＯＨ、ｐＨ  ７．２）で２回洗浄し、１６０μｌの５．６  ｍＭ  グルコース、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．１％ＢＳＡ含有シラガニアン緩衝液を加えて、５％ＣＯ２の存在下に３７℃で１０分間予備加温した。２０μｌの被験物質溶液（ＤＭＳＯの最終濃度：  ０．１％）を加え、１０分後に抗原（ＤＮＰ−ＢＳＡ、最終濃度：  １０μｇ／ｍｌ）を加えて１０分間インキュベートして細胞を刺激した。１０分間氷冷して反応を止めた後、上清５０μｌを９６ウェル平底マイクロプレートに移し、０．１  Ｍ  クエン酸緩衝液に溶解した１  ｍＭ  ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド（ＰＮＡＧ）  ５０μｌを加えて混和後、  ３７℃で１時間反応させた。反応溶液に２００μｌの反応停止緩衝液（０．１  Ｍ  ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＣＯ３、ｐＨ  １０．０）を加えて混和し、マイクロプレートリーダー（モデル５５０、バイオ−ラッド社）で吸光度を測定し（測定波長：  ４０５  ｎｍ、参照波長：  ６５５  ｎｍ）、以下の式により遊離率を求めた。また、被験物質のみの吸光度も併せて測定し、補正した。試験結果を表３に示す。
なお、細胞内全β−ヘキソサミニダーゼの測定には、超音波破砕機で破砕した細胞を遠心分離した上清を用いた。
【００５０】
【数１】
2005041788.tif 000011
また、被験物質のβ−ヘキソサミニダーゼ遊離阻害率は以下の式により求めた。
【００５１】
【数２】
2005041788.tif 000012
【００５２】
表３：  手参含有化合物のβ−ヘキソサミニダーゼの放出に対する阻害活性
【００５３】
【表３】
2005041788.tif 000013
【００５４】
【発明の効果】
本発明によれば、ラン科植物またはそのアルコール抽出物、あるいは該抽出物中に含まれる活性成分を、活性酸素消去用組成物および抗アレルギー用組成物として安全に使用することができる。