(57)【要約】【課題】  アイソトープを使用せずに、癌組織及びその周囲組織を観察しながら、かつ、癌転移の有無に左右されず、癌組織からの流出リンパ流を受けるリンパ管及びセンチネルリンパ節の検出を簡便に効率よく行うことのできる検出試薬及び検出方法を提供すること。【解決手段】  クロリン環骨格及びポルフィリン環骨格からなる群より選ばれる環状骨格の１個又は該環状骨格２〜８個の繰り返しからなる構造を有する蛍光物質を含有する癌組織からの流出リンパ流を受けるリンパ管及びセンチネルリンパ節の検出試薬。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロリン環骨格及びポルフィリン環骨格からなる群より選ばれる環状骨格の１個又は該環状骨格２〜８個の繰り返しからなる構造を有する蛍光物質を含有する癌組織からの流出リンパ流を受けるリンパ管及びセンチネルリンパ節の検出試薬。
【請求項２】
前記蛍光物質が式（Ｉ）で表わされるクロリン誘導体又はその塩である、請求項１記載の検出試薬。
【化１】
2005132805.tif 000008
［式中、Ｒ２ａ及びＲ２ｂは、水素原子及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＲｘの組合せ又はメチル基及び水酸基の組合せを示し；Ｒ３ａ及びＲ３ｂは、一緒になって形成される＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｎ−ＯＨで表わされる基又は水素原子及びメチル基の組合せを示し；Ｒ１３は、エチル基又は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＲｘを示し；Ｒ１７は、メチル基又は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＲｘを示し；Ｒ１８は、メチル基又は−ＣＯＲｘを示し；Ｒ２０は、水素原子又は−ＣＨ２ＣＯＲｘを示し；Ｒｘは、水酸基、−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨ又は−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨを示す。］
【請求項３】
前記蛍光物質が式（ＩＩ）で表わされるクロリン誘導体又はその塩である、請求項１記載の検出試薬。
【化２】
2005132805.tif 000009
［式中、Ｒｘは、水酸基、−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨ又は−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨを示す。］
【請求項４】
前記蛍光物質が式（ＩＩＩ）で表わされるクロリン誘導体又はその塩である、請求項１記載の検出試薬。
【化３】
2005132805.tif 000010
［式中、Ｒｘは、水酸基、−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨ又は−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨを示す。］
【請求項５】
前記蛍光物質が、式（ＩＶ）、（Ｖ）及び（ＶＩ）で表わされる化合物からなる群より選ばれる少なくとも１の化合物又はその塩である、請求項１記載の検出試薬。
【化４】
2005132805.tif 000011
【化５】
2005132805.tif 000012
［式中、Ｒｘ１は、水酸基又は−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨを示す。］
【化６】
2005132805.tif 000013
［式中、ｎは０〜６の整数を示し、Ｒは１−ヒドロキシエチル基又はビニル基を示す。］
【請求項６】
前記癌組織が実質臓器癌の癌組織である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の検出試薬。
【請求項７】
前記実質臓器癌が胃癌、大腸癌、乳癌、女性内外生殖器癌、陰茎癌、甲状腺癌、副甲状腺癌及び肺癌からなる群より選ばれる少なくとも一つの癌である、請求項６記載の検出試薬。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の検出試薬を癌病巣に局所注入する工程と、波長４００〜５００ｎｍ又は６００〜７００ｎｍの照射光を癌病巣及びこの周囲の組織、リンパ管及びリンパ節に照射し、前記リンパ管及びリンパ節のうち蛍光を発するリンパ管及びリンパ節を検出する工程と、を含む、癌組織からの流出リンパ流を受けるリンパ管及びセンチネルリンパ節の検出方法。
【請求項９】
前記癌病巣がヒト又は非ヒト動物の癌病巣であることを特徴とする請求項８記載の検出方法。
【請求項１０】
癌組織からの流出リンパ流を受けるリンパ管及びセンチネルリンパ節の検出試薬の製造のための、クロリン環骨格及びポルフィリン環骨格からなる群より選ばれる環状骨格の１個又は該環状骨格２〜８個の繰り返しからなる構造を有する蛍光物質の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌組織からの流出リンパ流を受けるリンパ管及びセンチネルリンパ節の検出試薬及び検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リンパ節への癌転移の問題は癌治療における最も重要な課題の一つであり、癌の根治を目的として広範なリンパ節郭清術が画一的に行われてきた。しかしながら、癌が転移していないリンパ節まで郭清すると、体への負担が増大し患者のＱＯＬ（Quality of Life）が低下することになる。
【０００３】
そこで、近年、センチネルリンパ節（Ｓｅｎｔｉｎｅｌ  Ｌｙｍｐｈ  Ｎｏｄｅ、以下場合により「ＳＬＮ」と略す。）を同定する方法が注目されている。ＳＬＮとは癌病巣から最初にリンパ流を受けるリンパ節を指し、ＳＬＮに最初のリンパ節転移巣が形成されると考えられている。したがって、癌組織から流出するリンパ流を受けるＳＮＬの輸入リンパ管及びＳＬＮを同定する方法を確立することにより、術前または術中のＳＬＮ生検において癌転移が否定された時点でリンパ節の郭清を伴わない縮小手術が可能となる。一方、ＳＬＮへの癌転移が確認された場合は定型的なリンパ節郭清術を要すると判定される。以上二点により、ＳＬＮの検出と同定は癌治療における適切な術式の選択に寄与する。また、検出されたリンパ節がＳＬＮである事を確定するには癌組織から流出するリンパ流を受ける輸入リンパ管を同定することが重要である。
【０００４】
このように、ＳＬＮの検出と同定はリンパ節郭清の要否を決定し適切な外科的癌治療を行う上で重要であるが、癌病巣周囲のリンパ節を肉眼で観察しただけではＳＬＮか否かの判断がつかない。そのため、従来、ＳＬＮの検出方法として、９９ｍＴｃ−Ｓｎ  ｃｏｌｌｏｉｄ等のアイソトープを用いたＲＩ法やインドシアニングリーン（ＩＣＧ）、Isosulfan blue （Lymphazurin）又はＰａｔｅｎｔ  Ｂｌｕｅ等を用いた色素法等が用いられてきた。
【０００５】
【特許文献１】特開２００１−２９９６７６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、ＲＩ法には、アイソトープを使用できる施設が限られているという問題点や、γ線を検出する特殊な検出器を病巣の至近距離に近づけないとＳＬＮの検出ができないため、検出器の扱い方によるＳＬＮの見逃しや検出試薬注入部位から放出されるγ線によるバックグラウンドの上昇が起こるという問題点がある。
【０００７】
また、色素法には、癌転移の生じたＳＬＮに色素が十分に取り込まれないという問題点がある。癌腫の形成に伴い、癌への流入路である動脈系は血管新生により盛んに新生されるが、流出路である静脈及びリンパ管の新生はないと考えられている。従って癌病巣に注入した色素等が癌病巣からリンパ管及びＳＬＮへ流入するとは限らない。また、ＳＬＮに癌転移が生じている場合には、癌の転移がＳＬＮの輸入リンパ管のリンパ流をさらにブロックするため癌病巣に注入した色素がＳＬＮの輸入リンパ管及びＳＬＮに流入し難くなるため、ＳＬＮを検出するのは困難となりうる。
【０００８】
さらに、ＩＣＧの吸収波長である赤外光を利用したＩＣＧ・赤外法では、癌病巣及びその周囲組織の観察が難しく、癌転移の生じたＳＬＮの検出も困難であるという問題点がある。
【０００９】
そこで、本発明の目的は、アイソトープを使用せずに、癌病巣及びその周囲組織を観察しながら、かつ、癌転移の有無に関わらず癌組織からの流出リンパ流を受けるリンパ管及びＳＬＮの検出を簡便に効率よく行うことのできる検出試薬及び検出方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するために、本発明は、クロリン環骨格及びポルフィリン環骨格からなる群より選ばれる環状骨格の１個又は該環状骨格２〜８個の繰り返しからなる構造を有する蛍光物質を含有する癌組織の流出リンパ流を受けるＳＬＮの輸入リンパ管及びＳＬＮの検出試薬を提供する。
【００１１】
また、本発明は、本発明の検出試薬を癌病巣に局所注入する工程と、波長４００〜５００ｎｍ又は６００〜７００ｎｍの照射光を癌病巣及びこの周囲のリンパ管及びリンパ節に照射し、生理的に存在する数多くのリンパ管及びリンパ節のうち蛍光を発するリンパ管及びリンパ節を検出する工程と、を含む癌組織の流出リンパ流を受けるＳＬＮの輸入リンパ管及びＳＬＮ検出方法を提供する。
【００１２】
さらに、本発明は、癌組織の流出リンパ流を受けるＳＬＮの輸入リンパ管及びＳＬＮの検出試薬の製造のためのクロリン環骨格及びポルフィリン環骨格からなる群より選ばれる環状骨格の１個又は該環状骨格２〜８個の繰り返しからなる構造を有する蛍光物質の使用を提供する。
【００１３】
色素法において従来使用されている色素は、癌転移が生じていないリンパ節及びそのリンパ節に流入するリンパ管には流入できるため、癌転移が生じていないＳＬＮの検出は可能であった。一方、リンパ節に癌転移が生じている場合にはリンパ流が阻害されるため、癌転移が生じているリンパ節及びそのリンパ節に流入するリンパ管には、従来の色素は流入し難く、したがって癌転移が生じているＳＬＮの検出は困難であった。
【００１４】
しかしながら、本発明者らは、クロリン環骨格及びポルフィリン環骨格からなる群より選ばれる環状骨格の１個又は該環状骨格２〜８個の繰り返しからなる構造を有する蛍光物質は、リンパ節に癌転移が生じている場合であっても、癌転移が生じているリンパ節及びそのリンパ節に流入する輸入リンパ管に速やかに流入することができ、かつその蛍光を容易に検出することが可能であるため、ＳＬＮを見落とすことなく検出できることを見出した。
【００１５】
すなわち、本発明の検出試薬は癌病巣に注入されると、リンパ節の癌転移の有無に関わらず、癌病巣から流れ出るリンパ管及びリンパ節へと速やかに流入する。そして、癌病巣及びその周囲の組織に波長４００〜５００ｎｍ又は６００〜７００ｎｍの光を照射することにより、上記検出試薬が橙や赤などの蛍光を発するため、ＳＬＮの検出が可能となる。この蛍光の観察は適切な観察フィルターを用いることで肉眼でも行うことができるため、ＳＬＮ及びＳＬＮに流入する輸入リンパ管の解剖学的位置を正確に同定することが可能である。
【００１６】
また、従来の色素は癌転移したリンパ節に取り込まれにくかったが、本発明者らは、本発明に係る蛍光物質は癌転移したリンパ節にも十分取り込まれることを見出した。したがって、従来技術では困難であった癌転移が生じているＳＬＮの検出を本発明の検出試薬及び検出方法を用いて行うことが可能である。
【発明の効果】
【００１７】
アイソトープを使用せずに、癌病巣及びその周囲組織を観察しながら、かつ、癌転移の有無に関わらずＳＬＮの検出を簡便に効率よく行うことのできる検出試薬及び検出方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、本発明の検出試薬及び検出方法の好適な実施形態について詳細に説明する。
【００１９】
まず、本発明の検出試薬について説明する。本発明の検出試薬はクロリン環骨格及びポルフィリン環骨格からなる群より選ばれる環状骨格の１個又は該環状骨格２〜８個の繰り返しからなる構造を有する蛍光物質を含有する。ＳＬＮを検出するには、上記蛍光物質は、リンパ管及びリンパ節への流入がしやすく、十分な蛍光強度を有している等の性質を備えていることが好ましい。したがって、蛍光物質としては、このような特性をより顕著に発揮する下記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表わされる化合物が好ましい。
【００２０】
式（Ｉ）で表わされる化合物はクロリン誘導体であり、蛍光物質としてはその塩も適用できる。
【化１】
2005132805.tif 000002
［式中、Ｒ２ａ及びＲ２ｂは、水素原子及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＲｘの組合せ又はメチル基及び水酸基の組合せを示し；Ｒ３ａ及びＲ３ｂは、一緒になって形成される＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｎ−ＯＨで表わされる基又は水素原子及びメチル基の組合せを示し；Ｒ１３は、エチル基又は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＲｘを示し；Ｒ１７は、メチル基又は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＲｘを示し；Ｒ１８は、メチル基又は−ＣＯＲｘを示し；Ｒ２０は、水素原子又は−ＣＨ２ＣＯＲｘを示し；Ｒｘは、水酸基、−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨ又は−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨを示す。なお、Ｒｘが複数存在するときは、Ｒｘのそれぞれは同一でも異なっていてもよい。］
【００２１】
本発明の蛍光物質の好適な態様としては、下記式（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表わされるクロリン誘導体又はその塩が挙げられる。
【化２】
2005132805.tif 000003
［式中、Ｒｘは、水酸基、−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨ又は−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨを示す。なお、Ｒｘが複数存在するときは、Ｒｘのそれぞれは同一でも異なっていてもよい。］
【化３】
2005132805.tif 000004
［式中、Ｒｘは、水酸基、−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨ又は−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨを示す。なお、Ｒｘが複数存在するときは、Ｒｘのそれぞれは同一でも異なっていてもよい。］
【００２２】
本発明の蛍光物質の更に好適な態様としては、下記式（ＩＶ）、（Ｖ）及び（ＶＩ）で表わされる化合物からなる群より選ばれる少なくとも１の化合物又はその塩が挙げられる。
【化４】
2005132805.tif 000005
【化５】
2005132805.tif 000006
［式中、Ｒｘ１は、水酸基又は−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨを示す。］
【化６】
2005132805.tif 000007
［式中、ｎは０〜６の整数を示し、Ｒは１−ヒドロキシエチル基又はビニル基を示す。なお、複数存在するＲのそれぞれは同一でも異なっていてもよい。］
【００２３】
上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表わされる化合物は、特許第３１９１２２３号明細書、特公平６−８８９０２号公報、特公平６−８９０００号公報等に記載の方法で合成することが可能である。
【００２４】
上記化合物の塩は薬理学的に許容される塩であることが好ましく、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩や、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩等が挙げられるが、その中でもナトリウム塩が好ましい。
【００２５】
本発明の検出試薬は、上記蛍光物質の他に、必要に応じて添加物を含有していてもよい。添加物としては、例えば、ｐＨ調整剤、溶解剤、安定化剤、等張化剤等が挙げられる。また、本発明の検出試薬は、溶媒に溶解させた溶解物も含む。この溶媒として好ましいものとしては、例えば、滅菌水、生理的食塩水、各種緩衝液等が挙げられる。
【００２６】
本発明の検出試薬は、対象となる癌組織が実質臓器癌の癌組織であることが好ましく、実質臓器癌は、胃癌、大腸癌、乳癌、女性内外生殖器癌、陰茎癌、甲状腺癌、副甲状腺癌及び肺癌からなる群より選ばれる少なくともひとつの癌であることがさらに好ましい。
【００２７】
次に、本発明の検出方法の実施形態について説明する。好適な実施形態においては、まず、本発明の検出試薬を適切な溶媒に溶解した後、注射器等を用いて癌病巣及びその周囲組織に局所注入する。この際、できるだけ癌病巣直下に注入する。検出試薬が含有する上記蛍光物質の濃度及び注入量は蛍光物質の種類や癌病巣の大きさ等によって異なるが、式（ＩＶ）で表わされる化合物（以下、「ＡＴＸ−Ｓ１０」と略す。）をラットに注入する場合は０．１〜１０ｍｇ／ｍＬを１０〜３０μＬ注入することが好ましく、ヒトに注入する場合は０．１〜１０ｍｇ／ｍＬを０．１〜０．５ｍＬずつ癌病巣を取り囲むように癌病巣辺縁より４ヶ所に注入することが好ましい。式（Ｖ）で表わされる化合物（以下、Ｒｘ１が−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＯＯＨの場合、「ＮＰｅ６」と略す。）をラットに注入する場合は０．１〜２０μＭを１０〜３０μＬ注入することが好ましく、ヒトに注入する場合は０．１〜２０μＭを０．１〜０．５ｍＬずつ４ヶ所に注入することが好ましい。
【００２８】
次に、波長４００〜５００ｎｍ又は６００〜７００ｎｍの照射光を癌病巣及びこの周囲のリンパ管及びリンパ節に照射し、生理的に存在する数多くのリンパ管及びリンパ節のうち蛍光を発するリンパ管及びリンパ節を検出する。ここで、波長４００〜５００ｎｍ又は６００〜７００ｎｍの照射光は、例えば、キセノンランプ光源の光を適切なバンドパスフィルターに通すことにより得られる。また、蛍光を発するリンパ節を検出するには、本発明の検出試薬に含有される蛍光物質の蛍光波長よりも短い波長の光をカットするロングパスフィルターや照射光の波長の光をカットするノッチフィルターを通じて、癌病巣及びこの周囲のリンパ節を観察することが好ましい。ここで、照射光をできるだけカットした方が癌病巣及びこの周囲のリンパ節の観察をより的確に行えるため、照射光の波長と本発明の検出試薬に含有される蛍光物質の蛍光波長とができるだけ離れていることが好ましく、照射光の波長は４００〜５００ｎｍ又は６００〜７００ｎｍであることが好ましい。
【００２９】
蛍光を発するリンパ管が癌病巣から流出するリンパ管に相当し、蛍光を発するリンパ節がＳＬＮに相当する。また、蛍光を発するリンパ節に流入するリンパ管がＳＬＮの輸入リンパ管に相当する。一方、蛍光を発しないリンパ管及びリンパ節は癌病巣とは無関係のリンパ管及びリンパ節である。このように、蛍光の有無によりセンチネルリンパ節か否かを容易に判別することが可能である。したがって、癌転移の有無に関わらずセンチネルリンパ節の検出を簡便に効率よく行うことができる。このような検出が可能になることから、リンパ節摘出の範囲を必要最小限とすることができ、ＱＯＬを高めることが可能になる。
【００３０】
なお、本発明の検出試薬が注入される癌病巣はヒト又は非ヒト動物の癌病巣であることが好ましく、非ヒト動物は哺乳類であることが好ましい。また、本発明の検出方法によるＳＬＮの検出は、直視下又は鏡視下のいずれで行ってもよい。
【実施例】
【００３１】
以下、実施例及び比較例を挙げて本発明について更に詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３２】
（実施例１）
＜ヒト胃癌正所性移植モデルラットの作成＞
６〜８週齢の雌ヌードラット（Ｆ３４４／Ｎ−ｒｎｕ／ｒｎｕ）に３ＧｙのＸ線照射を行った。Ｘ線照射から３日後、ラットにペントバルビタール−Ｎａ（４０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与し全身麻酔を施行した。ラットを背臥位にして四肢を固定した。ポビドンヨード（商品名「イソジン」、明治製菓）を用いて腹部を消毒し、剣上突起直上より１〜２ｃｍ下方まで皮切を加え、上腹部正中切開を行った。開腹創から胃を引き出し、漿膜側から胃前壁小弯側に、２９Ｇ針付インスリン注射用シリンジを用いて、ヒト胃癌細胞株であるＯＣＵＭ−２Ｍ  ＬＮの細胞懸濁液（１×１０８ｃｅｌｌ／ｍＬ，無血清ＤＭＥＭに懸濁）を１０μＬ注入した。注入した細胞懸濁液の漏れを生理食塩水にて洗浄した後、出血がないことを確認した上で縫合糸（４−０ナイロン糸）を用いて閉腹した。エアゾール式殺菌性プラスチック包帯材（商品名「ノベクタンスプレー」、三菱ウェルファーマ株式会社）を噴霧し術創を被覆した。
【００３３】
＜腫瘍マーカーによる腫瘍生着の確認＞
ラットに胃癌細胞を注入してから３〜４週間後、眼窩採血を行った。採血した検体を常温で３０〜４０分放置した後、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分間）を行い、血清を得た。得られた血清が５００μＬ以上の場合には、そのまま腫瘍マーカー測定用サンプルとし、得られた血清が５００μＬ未満の場合は、ラット血清を加えて全量を５００μＬ以上にし、腫瘍マーカー測定用サンプルとした。腫瘍マーカー測定用サンプルを用いて腫瘍マーカー（ＴＰＡ及びＣＡ１９−９）の測定を行った。経時的に採血を行い、腫瘍マーカーの上昇（ＴＰＡが５００Ｕ／Ｌ以上又はＣＡ１９−９が６Ｕ／ｍＬ以上）が確認されたラットを腫瘍が生着したラットと判断した。
【００３４】
＜肉眼による腫瘍生着の確認及びＡＴＸ−Ｓ１０の注入＞
腫瘍マーカーの上昇が確認されたラットを全身麻酔下に再開腹し、ヒト胃癌細胞を注入した部位の腫瘍の生着の有無、胃周囲リンパ節の存在及びリンパ節腫脹の有無、並びに他部位リンパ節の存在及びリンパ節腫脹の有無を肉眼で確認した。ヒト胃癌細胞を接種した３５匹のラットのうち、３３匹のラットにおいて正所性に腫瘍が生着したことが確認され、そのうちリンパ節の病理組織学的診断が可能であった２０匹においてリンパ節転移が確認された。図１〜図３は、リンパ節転移が確認されたラットの胃及びその周囲を示す写真である。図１に示したように、胃前壁小弯側に３ｍｍ大の隆起性病変１０が認められた。図２に示したように、胃小弯側にリンパ節の腫大２０が認められた。図３に示したように、リンパ節転移３０及び胃癌原発巣４０が認められた。
【００３５】
リンパ節転移の認められたラットに、腫瘍生着部位の漿膜下、できる限り腫瘍直下に、ＡＴＸ−Ｓ１０（光ケミカル研究所製、５ｍｇ／ｍＬ（溶媒：滅菌水），ラット１匹あたり１０〜３０μＬ）を２７Ｇ針インスリン用注射シリンジを用いて注入した。図４は、生着した腫瘍５０及びその周囲を表わす写真である。腫瘍５０に注射シリンジ６０を用いてＡＴＸ−Ｓ１０を注入した。図５は、生着した腫瘍５０及びその周囲を表わす写真である。図６は、生着した腫瘍５０及びその周囲を表わす写真（ＡＴＸ−Ｓ１０の吸収波長による観察）である。
【００３６】
＜蛍光顕微鏡観察によるＡＴＸ−Ｓ１０の取り込みの確認＞
以下、組織の観察及び写真（蛍光像）の撮影をＬｅｉｃａ蛍光実体顕微鏡ＭＺ  ＦＬ  ＩＩＩ（フィルター：ＧＦＰ励起フィルターＢＰ４２５／６０ｎｍ，吸収フィルターＬＰ４８０ｎｍ）を用いて行った。図７〜図９はＡＴＸ−Ｓ１０を注入後の腫瘍及びその周囲を表わす写真（蛍光像）であり、図８は胃癌原発巣４０からＳＬＮ９０付近を拡大した写真を表わし、図９はＳＬＮ９０付近を拡大した写真を表わす。胃癌原発巣４０、リンパ管８０及びＳＬＮ９０が蛍光を発しているのが確認でき、リンパ管８０及びＳＬＮ９０への速やかな取り込みが確認された。また、ＡＴＸ−Ｓ１０の注入部位より流出するリンパ網、ＳＬＮ及びＳＬＮに続くリンパ管が癌の転移の有無に関わらず鮮明な赤色蛍光の陽性像として観察された。さらに、腫瘍で完全に占拠されたリンパ節にもＡＴＸ−Ｓ１０は取り込まれ、ＳＬＮに流入するリンパ管及びＳＬＮを同定することが可能であった。
【００３７】
次に、ＳＬＮの生検を行った。図１０は摘出したＳＬＮを表わす写真（蛍光像）であり、図１１は摘出したＳＬＮを切断した断面図を表わす写真（蛍光像）である。また、図１２は摘出したＳＬＮの組織像を表わす。蛍光を発していた部位において癌の転移が組織学的に認められ、ＡＴＸ−Ｓ１０が腫瘍部位に取り込まれることが確認された。
【００３８】
（実施例２）
リンパ節転移の認められた別のラット（図１３に、胃癌原発巣４０及びＳＬＮ９０付近の写真を示す）に、ＡＴＸ−Ｓ１０を実施例１と同様に注入し、腹腔鏡による観察を行った。腹腔鏡として、ラパロスコープ（ＯＬＹＭＰＵＳ，波長：投射光６６５±１０ｎｍ）を用いた。図１４は胃癌原発巣４０及びＳＬＮ９０付近の写真（蛍光実体顕微鏡に接続したデジタルビデオカメラにより白色光下で撮影）であり、図１５は対応する蛍光像の写真（蛍光実体顕微鏡に接続したデジタルビデオカメラにより蛍光観察下で撮影）である。胃癌原発巣４０並びにＳＬＮ９０及びその周囲のリンパ管が蛍光を発していることが確認でき、腹腔鏡を用いた観察によってもＳＬＮ、ＳＬＮへの流入リンパ管及びＳＬＮ周囲のリンパ網は蛍光観察により鮮明に描出することができた。その後、ＳＬＮの生検を行った。図１６は、摘出したＳＬＮ９０の組織像を表わす。ＳＬＮへの癌の転移が組織学的に認められた。
【００３９】
（実施例３）
リンパ節転移の認められた別のラットに、ＮＰｅ６（１０μＭ（７．７２ｍｇ／ｍＬ），ラット１匹あたり１０〜３０μＬ）を実施例１と同様に注入し、肉眼又は蛍光顕微鏡下で胃癌病巣及びその周囲組織の観察を行った。用いた蛍光顕微鏡は、実施例１で用いたものと同じである。
【００４０】
図１７〜２０は、ＮＰｅ６を注入後、リンパ管８０及びＳＬＮ９０を経時的に撮影した写真（蛍光像）である。リンパ流に乗ったＮＰｅ６の赤色蛍光が確認され、ＮＰｅ６がリンパ管８０からＳＬＮ９０に流入していく様子が観察された。
【００４１】
次に、ＳＬＮの生検を行った。図２１〜２３は、ＳＬＮを４％中性緩衝ホルマリンで固定しヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色した写真である。蛍光を発していた部位において癌の転移が組織学的に認められ、ＮＰｅ６が腫瘍部位に取り込まれることが確認された。
【００４２】
（比較例１）
リンパ節転移の認められた別のラットに、ＩＣＧ（インドシアニングリーン，５ｍｇ／ｍＬ，ラット１匹あたり１０〜３０μＬ）を注入し、蛍光実体顕微鏡及び腹腔鏡（ラパロスコープ（ＯＬＹＭＰＵＳ，波長：８０５ｎｍ））を用いて癌病巣及び周囲を観察したが、腫瘍に占拠されたリンパ節は描出されなかった。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】リンパ節転移が確認されたラットの胃及びその周囲を示す写真である。
【図２】リンパ節転移が確認されたラットの胃及びその周囲を示す写真である。
【図３】リンパ節転移が確認されたラットの胃及びその周囲を示す写真である。
【図４】生着した腫瘍及びその周囲を表わす写真である。
【図５】生着した腫瘍及びその周囲を表わす写真である。
【図６】生着した腫瘍及びその周囲を表わす写真である。
【図７】ＡＴＸ−Ｓ１０を注入後の腫瘍及びその周囲を表わす写真（蛍光像）である。
【図８】ＡＴＸ−Ｓ１０を注入後の腫瘍及びその周囲を表わす写真（蛍光像）である。
【図９】ＡＴＸ−Ｓ１０を注入後の腫瘍及びその周囲を表わす写真（蛍光像）である。
【図１０】摘出したＳＬＮを表わす写真（蛍光像）である。
【図１１】摘出したＳＬＮを切断した断面図を表わす写真（蛍光像）である。
【図１２】摘出したＳＬＮの組織像を表わす。
【図１３】胃癌原発巣及びＳＬＮ付近の写真である。
【図１４】胃癌原発巣及びＳＬＮ付近の写真である。
【図１５】胃癌原発巣及びＳＬＮ付近の写真（蛍光像）である。
【図１６】摘出したＳＬＮの組織像を表わす。
【図１７】ＮＰｅ６を注入後、ＳＬＮ及びリンパ管を経時的に撮影した写真（蛍光像）である。
【図１８】ＮＰｅ６を注入後、ＳＬＮ及びリンパ管を経時的に撮影した写真（蛍光像）である。
【図１９】ＮＰｅ６を注入後、ＳＬＮ及びリンパ管を経時的に撮影した写真（蛍光像）である。
【図２０】ＮＰｅ６を注入後、ＳＬＮ及びリンパ管を経時的に撮影した写真（蛍光像）である。
【図２１】ＳＬＮを４％中性緩衝ホルマリンで固定しＨＥ染色した写真である。
【図２２】ＳＬＮを４％中性緩衝ホルマリンで固定しＨＥ染色した写真である。
【図２３】図２２のＡの部分を拡大した写真である。
【符号の説明】
【００４４】
１０…隆起性病変、２０…リンパ節、３０…リンパ節転移、４０…胃癌原発巣、８０…リンパ管、９０…ＳＬＮ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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