(57)【要約】【課題】  高いα‐グルコシダーゼ阻害作用を有し、これまで知られている糖尿病治療薬よりも優れた治療効果を示す植物由来の新規な血糖上昇抑制剤を提供する。【解決手段】【化１】2005132837.tif 000007で表わされるピロリジデインアルカロイド配糖体の金属結合体を有効成分としてなる血糖上昇抑制剤であって、フトモモ科、マレーフトモモ植物の樹皮のメチルアルコール浸出液を減圧下に濃縮し、得られた濃縮残渣を酢酸エチルエステルと水との間で分配処理し、得られた水層についてさらにｎ‐ブチルアルコールとの間の分配処理を行ったのち、水層から固形分を回収することにより製造する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2005132837.tif 000006
で表わされるピロリジデインアルカロイド配糖体の金属結合体を有効成分としてなる血糖上昇抑制剤。
【請求項２】
金属がマグネシウム、カルシウム及び亜鉛の中から選ばれた少なくとも１種である請求項１記載の血糖上昇抑制剤。
【請求項３】
フトモモ科（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）、マレーフトモモ［Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｍａｌａｃｃｅｎｓｅ（Ｌ．）Ｍｅｒｒｉｌｌ  ＆  Ｐｅｒｒｙ］植物の樹皮のメチルアルコール浸出液を減圧下に濃縮し、得られた濃縮残渣を酢酸エチルエステルと水との間で分配処理し、得られた水層についてさらにｎ‐ブチルアルコールとの間の分配処理を行ったのち、水層から固形分を回収することを特徴とする請求項１又は２記載の血糖上昇抑制剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食後の血糖値上昇を抑制するための新規な血糖上昇抑制剤及びその製造方法に関するものである。さらに詳しくいえば、本発明は、熱帯地域例えば南太平洋諸島に自生する植物から得られるα‐グルコシダーゼ阻害作用を利用した新規な血糖上昇抑制剤及びその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
最近、消化管粘膜に存在する二糖類分解酵素、すなわちα‐グルコシダーゼの作用を阻害し、デンプンやオリゴ糖からのブドウ糖の生成を抑制することにより、血糖値上昇を抑制する糖尿病治療薬が多数知られているが、この中の大部分は天然素材の植物由来のものである。
【０００３】
ところで、糖尿病は、インスリン依存性（Ｉ型）と非依存性（ＩＩ型）に分けられるが、後者が糖尿病全体の約９０％を占めており、その病態はインスリン分泌の遅延と肝臓や筋肉などの組織におけるインスリン抵抗性のため、食事摂取後の高血糖によって特徴づけられる。
【０００４】
したがって、食事療法や運動療法によっても高血糖、特に食後過血糖がみられるときには、デンプンやショ糖の消化・吸収を遅延させ、血糖値の上昇を抑制すれば、膵β細胞からのインスリン分泌を促進させたり、インスリン注射をすることなく、血糖をコントロールすることが可能となる。
【０００５】
一方、軽い症状の糖尿病治療に広く用いられているα‐グルコシダーゼ阻害剤は、小腸でのα‐グルコシダーゼを阻害することにより糖の吸収を遅延させ、食後の過血糖を抑制する薬理効果をもち、長期の使用で空腹時血糖価、ＨｂＡ1c価（糖尿病の血糖管理の指標とされている成人ヘモグロビン）の改善も認められているが、このα‐グルコシダーゼ阻害剤は食後高血糖が目立つが、空腹時血糖があまり高くない症状、すなわち比較的軽症のＩＩ型糖尿病患者への適用が最もよいとされている。
【０００６】
これらの糖尿病治療薬の原料は、主に植物を原料として調製されているが、この原料となる植物としては、例えばマオウ（Ｅｐｈｅｄｒａ  Ｈｅｒｂ）（特許文献１参照）、ヘラクレウム・ラナツム（Ｈｅｒａｃｌｅｕｍ  ｌａｎａｔｕｍ）及びドロノキ（Ｐｏｐｕｌｕｓ）（特許文献２参照）、ニシキギ科のサラシア・ブリノイデス（Ｓａｌａｃｉａ  ｐｒｉｎｏｉｄｅｓ）（特許文献３参照）、シソ（特許文献４参照）、紅景天属（Ｒｈｏｄｉｏｌａ）植物（特許文献５参照）、アオイ科フヨウ属植物（特許文献６参照）、エゾイシゲ（Ｐｅｌｖｅｔｉａ  ｗｒｉｇｈｔｉｉ  Ｏｋａｍｕｒａ）（特許文献７参照）、トリコカウロン（Ｔｒｉｃｈｏｃａｕｌｏｎ）属又はフーディア（Ｈｏｏｄｉａ）属植物（特許文献８参照）、ハナバ葉（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ  Ｓｐｅｃｉｏｓａ、Ｌｉｎｎ又はＰｅｒｓ．）（特許文献９参照）などがある。
他方、ピロリジデインアルカロイド（特許文献１０及び１１参照）及びその配糖体（非特許文献１、２参照）が弱いグルコシダーゼ阻害活性を示すことは知られている。
【０００７】
【特許文献１】特開平９−２９６３号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献２】特表平１０−５０８８８０号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献３】特開平１１−２９４７２号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献４】特開２０００−１０２３８３号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献５】特開２０００−１２８７９３号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献６】特開２０００−２３９１６４号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献７】特開２０００−３４２２２４号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献８】特開２００２−６８９９４号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献９】特開２００１−３９８８０号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献１０】特開平３−１０６８８３号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献１１】特開平３−１４１２８０号公報（特許請求の範囲その他）
【非特許文献１】「テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ）」、第３５巻、第４２号、１９９４年、ｐ．７８４９−７８５２
【非特許文献２】「カーボハイドレート・レターズ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｌｅｔｔｅｒｓ）」、第２巻、第３号、１９９６年、ｐ．１６７−１７４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、高いα‐グルコシダーゼ阻害作用を有し、これまで知られている糖尿病治療薬よりも優れた治療効果を示す植物由来の新規な血糖上昇抑制剤を提供することを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
最近、フィジーを含む南太平洋諸国では、食生活環境の変化から、１９６０年までは皆無であった糖尿病患者が急増し、大きな社会問題となっている。
ところで、この糖尿病を治療するために、いくつかの植物が用いられており、それらの中にはフトモモ科（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）に属するマレーフトモモ［Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｍａｌａｃｃｅｎｓｅ（Ｌ．）Ｍｅｒｒｉｌｌ  ＆  Ｐｅｒｒｙ］、バンジロウ・グアバ［Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ（Ｌ．）］、デカスペルマム・フルティコサム（Ｄｅｃａｓｐｅｒｍｕｍ  ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｍ  Ｆｏｒｓｔ．）などが含まれているが、本発明者の研究の結果、この中のフィジー語でカビカ（Ｋａｖｉｋａ）と称されるマレーフトモモの樹皮から得られる物質が強いα‐グルコシダーゼ阻害作用を示すことを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は、
【化１】
2005132837.tif 000002
で表わされるピロリジデインアルカロイド配糖体の金属結合体を有効成分としてなる血糖上昇抑制剤、及びフトモモ科（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）、マレーフトモモ［Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｍａｌａｃｃｅｎｓｅ（Ｌ．）Ｍｅｒｒｉｌｌ  ＆  Ｐｅｒｒｙ］植物の樹皮のメチルアルコール浸出物を有効成分としてなる血糖上昇抑制剤、及びフトモモ科（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）、マレーフトモモ［Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｍａｌａｃｃｅｎｓｅ（Ｌ．）Ｍｅｒｒｉｌｌ  ＆  Ｐｅｒｒｙ］植物の樹皮のメチルアルコール浸出液を減圧下に濃縮し、得られた濃縮残渣を酢酸エチルエステルと水との間で分配処理し、得られた水層についてさらにｎ‐ブチルアルコールとの間の分配処理を行ったのち、水層から固形分を回収することを特徴とする上記の血糖上昇抑制剤の製造方法を提供するものである。
【００１１】
本発明の血糖上昇抑制剤は、例えばマレーフトモモの新鮮な樹皮を原料として製造することができる。
すなわち、先ずマレーフトモモの樹皮を、好ましくは粉砕して細かい粒状とする。このチップサイズは微細であればあるほど抽出効率が大きくなるが、あまり微細にすると取り扱いにくくなるので、通常は０．１〜３ｍｍ、好ましくは０．３〜１．５ｍｍのサイズに粉砕して用いる。
【００１２】
次に、このようにして得た粒状体をメチルアルコールのような抽出溶媒で浸出する。このメチルアルコールの使用量は、粒状体の体積割合で２〜１０倍、好ましくは３〜６倍の範囲で選ばれる。浸出は室温下、静置して行うが、所望により浸出速度を速めるために加温したり、かきまぜることもできる。
【００１３】
また、メチルアルコールを還流させながら行うこともできる。この際の抽出溶媒としては、メチルアルコールに対し、エチルアルコールやジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミドなどを添加して溶解力を増強したものを用いることもできる。浸出時間は、浸出条件より左右されるが、通常５０〜１８０時間の範囲であり、多くの場合７０〜１５０時間で十分である。
【００１４】
次に、このようにして得た浸出液から溶媒を留去して固体残渣を得る。この際、減圧や加熱を行って留去を促進させることが好ましい。
得られた残渣を、次いで非水溶性有機溶媒、例えば酢酸エチルエステルと水とで分配処理し、水層部をさらにｎ‐ブチルアルコールで分配処理し、水層を分離したのち、これを凍結乾燥することにより前記一般式（Ｉ）の化合物の金属結合体を得ることができる。
このものは、例えば、それを水に溶解させたのち、水酸化バリウム粉末を加え、生成した沈殿を除去し、凍結乾燥することにより精製することができる。
【００１５】
このようにして得た精製物は、α‐グルコシダーゼ阻害活性９９．５％を示した。これに対し、市販されているα‐グルコシダーゼ阻害剤の放線菌の１種であるアクチノプレーンズ（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ）属の培養液から得られるアカルボース（ａｃａｒｂｏｓｅ）及び同じく放線菌の培養液から得られたアミノ酸バリオールにグリセロールを脱水縮合させたボグリボース（ｖｏｇｌｉｂｏｓｅ）のα‐グルコシダーゼ阻害作用は、それぞれ９０．６％及び９８．７％であった。
このことより、本発明の血糖上昇抑制剤は、従来のものに匹敵する又はより優れた薬理効果を示すことが分る。
【００１６】
このようにして得た精製物について、核磁気共鳴スペクトル1Ｈ−ＮＭＲ及び13Ｃ−ＮＭＲを測定し、解析した結果、この主成分は、一般式（Ｉ）の化学構造をもつピロリジデインアルカロイド配糖体（Ｃａｓｕａｒｉｎｅ‐６‐Ｏ‐α‐Ｄ‐ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）であると同定された。
また、蛍光Ｘ線元素分析の結果、この精製物は、マグネシウム、カリウム、カルシウム、鉄、銅、亜鉛などの金属を含むことが分った。
そして、精製したカビカ（Ｈ）画分の酵素阻害活性は２．４μｇ／ｍｌと高いにもかかわらず、単離精製したピロリジデインアルカロイド配糖体の酵素阻害活性は４３μｇ／ｍｌと弱いこと、これにマグネシウム塩又は亜鉛塩を加えると、１８．５μｇ／ｍｌ又は５．７μｇ／ｍｌに増大することからみて、本発明の血糖上昇抑制作用は、前記一般式（Ｉ）の化学構造をもつピロリジデインアルカロイド配糖体と金属との結合体に基づくものであることが分る。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の血糖値上昇抑制剤は、これまでのバンジロウ・グアバから抽出される血糖値上昇抑制剤に比べ、約３倍以上の抑制効果を示す。また、市販品例えばアカルボース又はボグリボースと比較しても同等若しくはより優れた抑制効果を示すので、α‐グルコシダーゼ阻害作用による血糖値上昇抑制剤として好適である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
次に、実施例により本発明を実施するための最良の形態をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによりなんら限定されるものではない。
なお、この例におけるα‐グルコシダーゼ阻害作用は以下の方法により測定した。
【００１９】
（１）酵素・基質溶液の調製
ウイスター（Ｗｉｓｔａｒ系）ラット（６週令・オス）の小腸粘膜上部を洗浄後かき出し、粘膜１ｇに対し５ｍＭ濃度のＥＤＴＡを含む１００ｍＭ濃度のリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）を１ｍｌ加え、４℃においてホモジナイズ処理した。このようにして得た処理物を２１，０００×ｇで６０分間遠心分離処理したのち、沈澱物に３％トリトンＸ−１００を含む１００ｍＭ濃度リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）を遠心後の上清と同量加え、４℃で６０分間かきまぜることにより可溶化させた。得られた溶液を１１０，０００×ｇで９０分間遠心処理し、得た上清を１０ｍＭ濃度リン酸カリウム緩衝液を外液として２４時間透析することにより酵素溶液を調製した。また、基質溶液としてはショ糖を用い、最終濃度を８０ｍＭとした。
【００２０】
（２）酵素活性測定
試験管中で基質溶液４００μｌに検体溶液１００μｌを最終濃度が１ｍｇ／ｍｌになるように加え、さらに酵素１００μｌを加えて３７℃において３０分間反応させたのち、試験管を沸騰水浴中に２分間浸漬して反応を停止させた。
次いで、発色試薬（和光純薬社製、商品名「グルコースＢ−テストワコー」）３ｍｌを分注し、これに反応液の一部（２０μｌ）を加え、３７℃で２０分間反応させたのち、吸光度（Ａ505）を測定することにより、グルコース濃度を求めた。また、検体がＧＯＤ活性へ及ぼす影響を考慮して、基質を最終濃度２４０ｍｇ／ｄｌのグルコースとして、３７℃において２０分間反応させ、その結果に基づいて数値を補正した。
【００２１】
（３）タンパク定量
ロウリー（Ｌｏｗｒｙ）法［「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）」，第１９３巻，第２６５ページ（１９５１）参照］により行った。
【実施例１】
【００２２】
新鮮なマレーフトモモ樹皮（平均粒径１ｍｍ）４．０ｋｇを３倍体積のメチルアルコールに浸漬し、５日間抽出した。この抽出液から溶媒を減圧留去することにより粗抽出残渣（Ａ）を得た。
次に、この粗抽出残渣（Ａ）を同体積の酢酸エチルエステルと水との間で分配させ、酢酸エチル層から酢酸エチルエステル可溶分（Ｂ）２．７ｇを得た。一方、水層（Ｃ）をさらに同体積のｎ‐ブチルアルコールと水との間で分配させて、水層とｎ‐ブチルアルコール層に分け、ｎ‐ブチルアルコール層からｎ‐ブチルアルコール可溶分（Ｄ）９．５ｇを回収し、またこの水層を凍結乾燥することにより、固体分（Ｅ）［以下未精製カビカ（Ｅ）という］１０８ｇを得た。
次いでこの未精製カビカ（Ｅ）を水に溶解し、水酸化バリウム粉末を加えて沈殿を生成させ、この沈殿を除いたのち、液相部分を凍結乾燥することにより、精製カビカ（Ｆ）を約６０質量％の収率で得た。以上の方法の工程図を図１として示す。
【００２３】
このようにして得た各画分のα‐グルコシダーゼ阻害率は、粗抽出残渣（Ａ）９８．０％、酢酸エチルエステル可溶分（Ｂ）９．０％、ｎ‐ブチルアルコール可溶分（Ｄ）７９．０％、未精製カビカ（Ｅ）９９．１％、精製カビカ（Ｆ）９９．５％であった。
また、阻害活性の基質特異性（ＩＣ50）を未精製カビカ（Ｅ）及び精製カビカ（Ｆ）について測定し、その結果を市販品のボグリボース及びアカルボースのそれとともに表１に示す。
【００２４】
【表１】
2005132837.tif 000003
【００２５】
この表から分るように、未精製カビカ（Ｅ）及び精製カビカ（Ｆ）は市販品と同等の強い活性を示し、また広い範囲の酵素基質に対し阻害作用を有する。
【実施例２】
【００２６】
この血糖上昇抑制を示す化合物を特定するため以下のような実験を行った。
すなわち、未精製カビカ（Ｅ）１０ｇをＳｈｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０を用いてカラムクロマトグラフィーに付し、始めに流出する部分のメタノール難溶部から精製カビカ（Ｇ）３ｇを得た。精製カビカ（Ｇ）は酵素基質にスクローゼを用いたときの酵素阻害活性はＩＣ50が４．４μｇ／ｍｌと著しく高い値を示した。さらに、精製カビカ（Ｇ）３ｇをカラム（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｃｏｌｕｍｕｎ）を用いて高速液体クロマトグラフィーに付し、溶媒アセトニトリル：水＝４：１にて流出させ、精製カビカ（Ｈ）１ｇを得た。この収率は新鮮マレーフトモモの樹皮に基づき約０．２５質量％、未精製カビカ（Ｅ）に基づき約１質量％であった。この精製カビカ（Ｈ）について酵素阻害活性を調べたところ、ＩＣ50２．４μｇ／ｍｌとさらに活性が強まっていることが分った。以上の方法の工程図を図２として示す。
【実施例３】
【００２７】
精製カビカ（Ｇ）２ｇをイオン交換樹脂（オルガノ株式会社製、アンバーライトＣＧ１２０）を用いて吸着後、０．１Ｍアンモニア水により流出させ、高速液体クロマト上純粋な物質５０ｍｇを得た。この物質の核磁気共鳴スペクトル、1Ｈ−ＮＭＲを図３に、13Ｃ−ＮＭＲを図４に示す。これらのスペクトルを既知のデータ［テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ）］、第３５巻（第４２号）、１９９４年、第７８４９〜７８５２ページ及びカーボハイドレート・レターズ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｌｅｔｔｅｒｓ）］、第２巻（第３号）、１９９６年、第１６７〜１７４ページと対比した結果、
【化２】
2005132837.tif 000004
で示されるカズアリン‐６‐Ｏ‐α‐Ｄ‐グルコシドと同定された。
また、蛍光Ｘ線元素分析装置［堀場製作所製、製品名「メサ（ＭＥＳＡ）−５００Ｗ」を用いて分析した結果、炭素、水素、酸素、窒素以外に表２に示す元素が含まれていることが分った。
【００２８】
【表２】
2005132837.tif 000005
【実施例４】
【００２９】
実施例３で得たピロリジン・アルカロイド配糖体のα‐グルコシダーゼ阻害作用をスクラーゼを用いて試験したところＩＣ50４３μｇ／ｍｌであり、精製カビカ（Ｇ）の阻害活性ＩＣ50４．４μｇ／ｍｌと比較して活性が約１／１０と著しく弱いことが分った。
【実施例５】
【００３０】
単離精製したカズアリン‐６‐Ｏ‐α‐Ｄ‐グルコシドの水溶液に、酢酸マグネシウム（Ｍｇ換算４９ｗｔ％）又は酢酸亜鉛（Ｚｎ換算２．３ｗｔ％）を別々に加え、十分にかきまぜたのち、それぞれのα‐グルコシダーゼ阻害作用を調べた。
その結果、酢酸マグネシウムを加えたものはＩＣ50１８．５μｇ／ｍｌ、酢酸亜鉛を加えたものはＩＣ50５．７μｇ／ｍｌと活性が増すことが判明した。
【実施例６】
【００３１】
（血糖値上昇抑制効果）
正常Ｗｉｓｔａｒ系ラット、ストレプトゾトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ）糖尿病ラット（以下ＳＴＺという）と自然発症糖尿病ラット（以下ＧＫラットという）に未精製カビカ（Ｅ）を７．５ｍｇ／ｋｇの濃度で精製水に溶解したものを単回経口投与した。また、ＳＴＺラットとしては７週令の正常Ｗｉｓｔａｒ系ラットを用い、ＳＴＺ３０ｍｇ／ｋｇを尾静脈より２回連日投与し、糖負荷時血糖値が３００ｍｇ／ｄｌ−３５０ｍｇ／ｄｌに達したものを用いた。対照群には同量の精製水を投与した。検体投与１５分後にスクロースを３．７５ｍｇ／ｋｇで経口投与し、投与３０、６０、１２０分後に尾静脈より採血し、その血漿グルコースをＧＯＤ法で測定した。その結果を経時的なグルコース量を示すグラフとして図５に示す。図中、■印は、試験群に対する結果であり、◆印は対照群に対する結果である。
【００３２】
この図から分るように、単回投与で未精製カビカ（Ｅ）投与群は比較した場合、正常ラット、糖尿病ラットともにスクロース投与後の血糖上昇を抑制した。特にスクロース投与３０分後において有意な抑制が認められた。すなわち、正常ラットでは、スクロース負荷３０分後に非投与群で１９８．４ｍｇ／ｄｌであった血糖値が１６０．５ｍｇ／ｄｌへと有意に抑制され（危険率１％以下）、また、６０分で１７９．９ｍｇ／ｄｌが１５８．３ｍｇ／ｄｌに、１２９分で１６５．７ｍｇ／ｄｌが１５２．７ｍｇ／ｄｌにと、それぞれ有意に（危険率５％以下）低下していた。同様に、ストレプトゾトシンで糖尿病を引き起こさせたラットや、自然発症に罹患したラットでも、同様な効果が確認された。
【実施例７】
【００３３】
（長期継続投与効果）
ラット７匹ずつの２グループに対し、それぞれ未精製カビカ（Ｅ）を７．５ｍｇ／ｋｇずつ、又は３７．５ｍｇ／ｋｇずつ２８日間投与した。また対照群には精製水を投与した。０、７、２１及び２８日目に尾静脈より採血を行い、その血漿グルコースを測定した。この結果をグラフとして図６に示す。図では対照群を◆印で、７．５ｍｇ／ｋｇ投与を■印で、３７．５ｍｇ／ｋｇ投与を▲印で示した。また糖負荷後３０分の血漿グルコースを測定し、その結果をグラフとして図７に示す。各数値は７個の平均値である。
【００３４】
これらの図から分るように、長期投与においても、未精製カビカ（Ｅ）を投与した群は、対照群と比較して、血糖値上昇抑制又は改善する傾向が認められる。すなわち、投与２〜３週以降では、ストレプトゾトシンで糖尿病を引き起こさせたラットの空腹時血糖を４５０ｍｇ／ｄｌ前後から３５０〜４００ｍｇ／ｄｌへ（図６）、また、糖負荷後３０分の血糖を５００ｍｇ／ｄｌ前後から４００〜４５０ｍｇ／ｄｌへとそれぞれ低下させた（図７）。
【実施例８】
【００３５】
膵臓ランゲルハンス島のβ細胞の状態を調べるため、β細胞内のインスリン量をインスリン抗体を用いた免疫染色を行った。染色キット（ＶＡＣＴＡＳＴＡＩＮ  Ｅｌｉｔｅ  ＡＢＣ  Ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＣＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用し、一次抗体にＡｎｔｉ−ｐｏｒｃｉｎ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＣＡＰＰＥＬ  ＲＥＳＥＲＣＨ  ＲＥＡＧＥＮＴＳ）を、二次抗体にキットのＧｏａｔ  ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｙを用いた。
また、肝臓内の脂肪量は、オイルレッドオー（Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ）法を行い、脂肪滴・中性脂肪を染色して観察した。
さらに、腎臓の糸球体の状況を調べるため、ＰＡＭ染色を行い、腎糸球体基底膜を染色し、ＨＥ（ヘマトキシリン−エオジン）で核染色・後染色した。
【００３６】
この結果、未精製カビカ（Ｅ）の長期投与群のランゲルハンス島は対照群のそれと比較して、インスリン含量が多いことが分った。また、形態的にも検体投与群のランゲルハンス島は正常に近いものが多かった。肝臓は対照群と比較して、脂肪量は少なかった。さらに、腎糸球体基底膜（メサンギウム領域）は投与群で正常に近いのに対し、対照群のそれは肥厚しており、また糸球体も萎縮傾向を示した。
【実施例９】
【００３７】
（毒性試験）
（１）単回経口投与による毒性
未精製カビカ（Ｅ）をそれぞれ７５、７５０、１０００ｍｇ／ｋｇを各群２匹の正常ラットに単回投与し、投与後１４日間毒性を観察した。
この結果、本発明の血糖上昇抑制剤は急性毒性を有しないことが分った。
【００３８】
（２）大量経口投与による毒性
未精製カビカ（Ｅ）を大量投与した群においても死亡はみられなかった。体重増加の抑制もみられなかった。ＧＯＴ、ＧＰＴ値は、７５０ｍｇ／ｋｇ投与群で投与１日後にＧＯＰ値の軽度な増加がみられたが、７日、１４日後では異常はみられなかった。また、外観上の変化や病理組織学的な異常についても検討したが、いずれの群にも異常は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明は、食後の血糖値上昇を抑制するための血糖上昇抑制剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】実施例１の操作を示す工程図。
【図２】実施例２の操作を示す工程図。
【図３】実施例３で得た物質の1Ｈ−ＮＭＲスペクトル図。
【図４】実施例３で得た物質の13Ｃ−ＮＭＲスペクトル図。
【図５】ショ糖を投与した正常ラットの血糖値上昇抑制に対する未精製カビカ（Ｅ）成分の効果を示すグラフ。
【図６】糖尿病ラットに対する未精製カビカ（Ｅ）成分の効果を示すグラフ。
【図７】糖尿病ラットの糖負荷後３０分後の未精製カビカ（Ｅ）成分の効果を示すグラフ。
【図１】
2005132837.tif 000008
【図２】
2005132837.tif 000009
【図３】
2005132837.tif 000010
【図４】
2005132837.tif 000011
【図５】
2005132837.tif 000012
【図６】
2005132837.tif 000013
【図７】
2005132837.tif 000014