(57)【要約】【課題】  脈絡膜や網膜等の後眼部組織には薬物が到達しにくく、それらの部位における疾患の治療は困難なのが現状であり、いかにして薬物を効果的に送達するかが課題である。【解決手段】薬物を内包した高分子ミセルを全身投与、特に静脈投与することにより、薬物を脈絡膜、網膜等の後眼部組織、特に血管新生を発生したそれらの後眼部組織に効果的に送達できることを見出すと共に、薬物として光感受性物質を用いＰＤＴ施行すると脈絡膜新生血管を効果的に閉塞することができ、加齢黄斑変性の治療に有用であることを見出した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬物を内包した高分子ミセルを投与することにより、薬物を後眼部組織に効果的に送達させることを特徴とする眼科用ドラッグデリバリーシステム。
【請求項２】
高分子ミセルが親水性高分子連鎖を外殻に疎水性高分子連鎖を内核とするブロック共重合体で形成されている請求項１記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項３】
親水性高分子連鎖がポリオキシエチレンまたはポリエチレングリコールである請求項２記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項４】
疎水性高分子連鎖がポリラクトンである請求項２記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項５】
高分子ミセルが親水性高分子連鎖を外殻に荷電性高分子連鎖を内核とするブロック共重合体で形成されている請求項１記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項６】
荷電性高分子連鎖がポリアミン、ポリカルボン酸またはポリペプチドである請求項５記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項７】
高分子ミセルが親水性高分子連鎖を外殻に荷電性高分子連鎖と高分子電解質とを内核とするコアーシェル型ポリイオンコンプレックスである請求項１記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項８】
荷電性高分子連鎖がアニオン性高分子連鎖である請求項７記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項９】
アニオン性高分子連鎖がポリアスパラギン酸である請求項８記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１０】
荷電性高分子連鎖がポリアミンまたはポリカルボン酸である請求項７記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１１】
高分子電解質がポリペプチドである請求項７記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１２】
高分子電解質がポリリジンである請求項１１記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１３】
高分子ミセルの粒子径が１０ｎｍ以上、１００ｎｍ以下である請求項１〜１２記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１４】
投与方法が静脈注射である請求項１〜１２記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１５】
後眼部組織が脈絡膜または網膜である請求項１〜１４記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１６】
後眼部組織が新生血管を発生したものである請求項１５記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１７】
薬物が光感受性物質である請求項１〜１６記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１８】
光感受性物質が光力学療法に用いられるものである請求項１７記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項１９】
脈絡膜新生血管の閉塞に使用する請求項１８記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項２０】
加齢黄斑変性の治療に使用する請求項１８記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項２１】
光感受性物質がポルフィリン誘導体である請求項１８記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項２２】
ポルフィリン誘導体がデンドリマー型ポルフィリンである請求項１８記載のドラッグデリバリーシステム。
【請求項２３】
高分子ミセルに内包させた光感受性物質を活性成分とし、光力学療法により脈絡膜新生血管を閉塞することを特徴とする加齢黄斑変性治療剤。
【請求項２４】
光感受性物質がポルフィリン誘導体である請求項２３記載の加齢黄斑変性治療剤。
【請求項２５】
ポルフィリン誘導体がデンドリマー型ポルフィリンである請求項２３記載の加齢黄斑変性治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、眼疾患の治療薬として有用な薬物を内包した高分子ミセルを投与することにより、薬物を脈絡膜、網膜等の後眼部組織、特に血管新生を発生したそれらの後眼部組織に効果的に送達させることを特徴とする眼科用ドラッグデリバリーシステムに関する。本発明のドラッグデリバリーシステムは、薬物として光感受性物質を用いると、光力学療法に効果的に応用でき、脈絡膜新生血管を閉塞することにより加齢黄斑変性等の治療に供することができる。
【背景技術】
【０００２】
高分子ミセルは、基本的に親水性高分子連鎖を外殻（シェル）、疎水性高分子連鎖を内核（コア）として形成されるナノ粒子であり、薬物の可溶化や送達用担体として種々研究されている。例えば、親水性高分子連鎖としてポリアルキレンオキシド、ポリリンゴ酸、ポリアスパラギン酸等を用い、疎水性高分子連鎖として疎水性ポリアミノ酸、ポリスチレン、ポリメタクリル酸エステル等を用いたブロック共重合体の薬物担持用担体に関する報告（特許文献１）、薬物としてアムホテリンB等のポリエン系抗生物質を前記のようなブロック共重合体に閉じ込めたミセルに関する報告（特許文献２）、水難溶性薬物を含有する高分子ミセルの調製方法に関する報告（特許文献３、特許文献４、特許文献５）、ポリエチレングリコール等の親水性高分子連鎖およびポリアミンやポリカルボン酸等の荷電性高分子連鎖を含むブロック共重合体とポリペプチドやポリプソイドペプチド等の高分子電解質とから形成されるコア−シェル構造のポリイオンコンプレックスミセルの安定化方法に関する報告（特許文献６）がある。
【０００３】
また、高分子ミセルに薬物を内包させた溶液を調製し、それを点眼投与することにより薬物の角膜透過性を向上させた報告（特許文献７）や、前房へのDDSを図った報告（特許文献８）がある。
【０００４】
しかし、これらの報告には薬物の脈絡膜、網膜等の後眼部組織、特に血管新生を発生したそれらの後眼部組織への送達可能性については記載されていない。
【０００５】
また、光感受性物質を静脈注射等の方法により投与後、患部にレーザー光を当て、発生するラジカルにより脈絡膜新生血管を閉塞させ、加齢黄斑変性（AMD、age-related macular degeneration）を治療する方法、すなわち光力学療法（PDT、photodynamic therapy）が加齢黄斑変性の治療に有用であることが報告されている（非特許文献１）。このAMDの治療に用いる光感受性物質としては、ポルフィリン誘導体がよく知られており、非特許文献１には、verteporfin、SnET2、ATX-S10、MV6401等が紹介されている。中でもverteporfinは既に米国等でAMDの治療に実際に用いられている。
【０００６】
また、癌等のPDTに用いられるポルフィリン誘導体として、temoporfin（非特許文献２）talaporfin（非特許文献３）等が知られている。
【０００７】
さらに、PDTに用いられるポルフィリン誘導体として、幾多の特許出願がある。例えば、アメリカ特許第５７０７９８６号（特許文献１０）、ＷＯ２００１／８２８６０（特許文献１１）、日本公表特許平１１―５０２５２０（特許文献１２）、日本公表特許２００１―５１４６５８（特許文献１３）、ＷＯ２００２／９６３６５等（特許文献１４）がある。
【０００８】
しかし、上記のいずれの文献にも高分子ミセルを用いる技術に関する記載はない。
【０００９】
一方、高分子ミセルに光感受性物質を内包させ、PDTに用いる技術が報告されている（特許文献１５）。そこには、光感受性物質であるポルフィリン誘導体としてデンドリマー型ポルフィリンが記載され、癌等のPDTに好適に用い得ることが記載されている。しかし、この文献には眼科応用は記載されておらず、光感受性物質の後眼部組織への送達可能性は未知で、ましてやAMDへの適用可能性を予測できるものではない。
【特許文献１】日本特許  第２７７７５３０号公報
【特許文献２】日本特許  第３２２００６９号公報
【特許文献３】日本特許公開  平１１−３３５３６７号公報
【特許文献４】日本特許公開  ２００１−２２６２９４号公報
【特許文献５】日本特許公開  ２００３−２６８１２号公報
【特許文献６】日本特許公開  ２００１−１４６５５６号公報
【特許文献７】アメリカ特許公開  ２００２／００６４５１３号公報
【特許文献８】日本特許公開  平１０−５１０２９３号公報
【特許文献９】アメリカ特許  第５７０７９８６号公報
【特許文献１０】アメリカ特許第５７０７９８６号公報
【特許文献１１】ＷＯ２００１／８２８６０号公報
【特許文献１２】日本公表特許平１１―５０２５２０号公報
【特許文献１３】日本公表特許２００１―５１４６５８号公報
【特許文献１４】ＷＯ２００２／９６３６５号公報
【特許文献１５】日本特許  第３４２２４８１号公報
【非特許文献１】VISION TIMES ８巻、第２号、７−９頁（２００１）
【非特許文献２】Scrip Daily Online、２００１年１月２８日、S00716156
【非特許文献３】Scrip Daily Online、２００１年１月１５日、S00693630
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
眼疾患の治療には薬物を点眼投与するのが一般的であるが、点眼投与では脈絡膜や網膜等の後眼部組織に薬物が殆ど到達せず、それらの部位における疾患の治療は困難なのが現状であり、いかにして薬物を後眼部組織に効果的に送達するかが課題となっている。
【００１１】
また、後眼部疾患には難治性疾患が多く、その中でAMDは脈絡膜血管新生により引き起こされ、失明の主要原因の一つとされている。特に滲出性AMDは重度視力障害を引き起こす疾病であり、その治療は非常に困難なものである。最近、この滲出性AMDの治療方法として、光感受性物質を用いたPDTが開発された。その光感受性物質の代表的なものがポルフィン誘導体で、従来の技術の項で述べたように様々なポルフィン誘導体が開発されている。このPDTは光感受性物質を静脈注射等により投与後、患部に集積した光感受性物質にレーザー光を照射してラジカル（一重項酸素）を発生させ、その一重項酸素により新生血管を閉塞させAMDの治療を図るものであるが、レーザー光の照射は眼組織に影響を与えるので、従来の技術では、反復継続して照射することが難しく、ある程度の期間失明に至るのを防ぐに留まっていた。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
そこで、薬物の送達担体として研究されている高分子ミセルに着目し、鋭意研究を行った結果、薬物を内包した高分子ミセルを静脈投与することにより、薬物を脈絡膜、網膜等の後眼部組織、特に血管新生を発生したそれらの後眼部組織に効果的に送達できることを見出した。
【００１３】
また、高分子ミセルを用いると光感受性物質を安定化させると共に、効果的に脈絡膜新生血管に集積させることができるので、低いレーザー照射量でも効果的な新生血管の閉塞を可能にし、さらに高分子ミセルを用いると光感受性物質の水溶化ができるので投与がし易くなることを見出した。
【００１４】
本発明は、薬物を内包した高分子ミセルを投与することにより、薬物を後眼部組織に効果的に送達させることを特徴とする眼科用ドラッグデリバリーシステムに関する。
【００１５】
本発明で用いる高分子ミセルは、基本的に親水性高分子連鎖を外殻（シェル）、疎水性高分子連鎖を内核（コア）として形成されるナノ粒子であり、その粒子径は１０ｎｍ以上、１００ｎｍ以下で、数十ｎｍ程度が好ましい。高分子ミセルとしては、公知のミセル、例えば、前述の特許文献１〜６に記載されているようなミセルを用いることができる。
【００１６】
親水性高分子連鎖としては、ポリオキシエチレン等のポリアルキレンオキシド、ポリエチレングリコール、ポリリンゴ酸、ポリアスパラギン酸等が用いられる。疎水性高分子連鎖としては、ポリラクトン、疎水性ポリアミノ酸、ポリスチレン、ポリメタクリル酸エステル等が用いられ、親水性高分子連鎖と疎水性高分子連鎖がブロック共重合体を形成している。内核（コア）としてポリアスパラギン酸等のポリペプチド、ポリアミン、ポリカルボン酸等のアニオン性またはカチオン性の荷電性高分子連鎖を用いることもできる。また、それらの荷電性高分子連鎖とポリリジン等のポリペプチドやポリプソイドペプチド等の高分子電解質とを内核とするコアーシェル型ポリイオンコンプレックスも好適に用いることができる。
【００１７】
薬物を内包させる方法も公知の方法に準じて行えばよく、薬物を物理的にミセル内に閉じ込める方法、ミセルを形成する高分子と共有結合させる方法や、薬物がイオン性の場合、荷電性高分子連鎖を用いてそれとイオン結合させる方法が用いられる。
【００１８】
本発明は薬物を脈絡膜、網膜等の後眼部組織、特に血管新生を発生したそれらの後眼部組織に効果的に送達させることに特徴があって、薬物の種類には何ら制約はなく、脈絡膜、網膜等の後眼部組織疾患の治療に用いられるものであればよい。
【００１９】
薬物を内包させた高分子ミセルの投与方法としては、特に制約はないが、静脈注射が好ましい。
【００２０】
本発明の効果は、実施例の項で詳しく述べるが、蛍光標識した高分子ミセルをラット脈絡膜新生血管（CNV）モデルに全身投与（静脈注射）した際の高分子ミセルの眼内移行について検討した。その結果、投与１時間後では脈絡膜毛細血管板およびＣＮＶに一致した強い蛍光の集積を認めた。投与２４時間後では正常脈絡膜毛細血管板の蛍光は減弱したが、ＣＮＶに一致した強い蛍光の集積が残存していた。即ち、高分子ミセルはＣＮＶに対して高い集積性があり、ＣＮＶに対するＤＤＳとして有効であることが分かった。
【００２１】
また、薬物として光感受性物質を用いると、AMDの治療に効果的に用いることができる。光感受性物質としては、特に制約はないが、従来の技術の項で示したようなポルフィン誘導体が好ましく、デンドリマー型ポルフィリン、verteporfin、SnET2、ATX-S10、MV6401、temoporfin、talaporfin等が例示され、特にデンドリマー型ポルフィリンが好ましい。
【００２２】
光感受性物質の担体として、高分子ミセルを用いると、光感受性物質を安定化させると共に、後述の実施例でも明らかなように、効果的にCNVに集積させることができ、低いレーザー照射量でも効果的な新生血管の閉塞を可能にする。従って、眼組織への影響も少なく長期反復継続治療が可能であり、AMDの完治も期待できる。
【００２３】
また、PDTに用いられる光感受性物質には難水溶性のものが多く、リポソーム製剤にする等の工夫がなされ投与されているが、その場合には一定間隔で長時間をかけて静脈投与する必要もあり、患者にとっての負担も大きくなる。高分子ミセルを用いると光感受性物質の水溶化ができるので、通常の静脈注射等による投与も可能で、上記のような患者の負担も解消できる。
【００２４】
さらに、PDTには皮膚の光線過敏性の問題もあるが、光感受性物質としてデンドリマー型ポルフィリンを用いると、光線過敏性はほとんど見られず、デンドリマー型ポルフィリンの優れた特性が認められた。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
次に、本発明の実施例をいくつか挙げる。
【実施例１】
【００２６】
（蛍光標識した高分子ミセルの調製）
親水性高分子連鎖としてポリエチレングリコール（PEG）、アニオン性高分子連鎖としてポリアスパラギン酸（P(Asp)）を一分子内に有するジブロック共重合体を水に分散させ、FITC標識したポリリジン（FITC―P(Lｙｓ)）と混合することにより、P(Asp)とFITC―P(Lｙｓ)からなるポリイオンコンプレックス（PIC）を内核、PEGを外殻に配したコアーシェル型PICミセル溶液（５ｍｇ／ｍL）を調製した。
【００２７】
（脈絡膜新生血管（CNV）モデルの作製）
BNラットに５％塩酸ケタミン注射液および２％塩酸キシラジン注射液の混合液（７：１）１ｍL / ｋｇを筋肉内投与することによりラットを全身麻酔し、０．５％トロピカミド−０．５％塩酸フェニレフリン点眼液を点眼して散瞳させた後、半導体レーザー光凝固装置により光凝固を行った。光凝固は、眼底後局部において、太い網膜血管を避け、焦点を網膜深層に合わせて１眼につき６ヶ所散在状に実施した（凝固条件：スポットサイズ７５μｍ、出力２００ｍW、凝固時間０．０５秒）。光凝固後、眼底撮影を行い、レーザー照射部位を確認した。
【００２８】
（高分子ミセルの投与方法）
PICミセルを、レーザー照射７日後に静脈内へ４００μL投与した。比較群としてFITC、およびFITC―P(Lｙｓ)を５ｍｇ／ｍLになるよう生理食塩水に溶解し、同様に投与した。
【００２９】
（評価方法）
投与後、所定時間に眼球を摘出し、凍結組織切片を作製した後に蛍光顕微鏡により脈絡膜新生血管部位への蛍光の漏出を定性的に観察した。
【００３０】
（結果）
PICミセル投与群では、投与１時間後には脈絡膜毛細血管板および脈絡膜新生血管に一致した強い蛍光の集積を認めた。投与２４時間後では脈絡膜血管板の蛍光は減弱したが、脈絡膜新生血管に一致した強い蛍光の集積が残存しており、蛍光は、１６８時間後においても認めた。
【００３１】
FITC投与群では、投与１時間後には脈絡膜毛細血管板および脈絡膜新生血管に一致した強い蛍光の集積が認められたが、２４時間後以降では蛍光は認められなかった。
【００３２】
FITC―P(Lｙｓ)投与群では、投与１時間後にはその毒性のために死亡した。  
【実施例２】
【００３３】
薬物として光感受性物質であるデンドリマー型ポルフィリン（ＤＰ）を用い、細胞内への取り込み性を調べた。
【００３４】
（ＤＰを内包する高分子ミセルの調製）
ＤＰを内包する高分子ミセルは、特許文献１５の実施例１に従って調製した（以下の実施例において同じ）。
【００３５】
ここで用いたＤＰは、特許文献１５の実施例１に記載のアニオン性ポルフィリンデンドリマー［３２（−）（L３）４PZn］である（以下、DPZｎという）。
【００３６】
（細胞内取り込み性試験）
DPZnを内包した高分子ミセル（以下、DPZn／高分子ミセルという）とLLC（Lewis Lung Carcinoma）細胞とを暗所で３７℃、８時間、リン酸緩衝液中でインキュベートした。リン酸緩衝液で洗浄後、細胞内への取り込みを蛍光顕微鏡で定性的に観察した。
【００３７】
比較対照として、DPZnとLLC細胞とを同条件でインキュベートした。
【００３８】
（結果）図１に示すように、DPZn／高分子ミセルはDPZn比べて明らかに多く細胞内に取り込まれており、高分子ミセル化することによる効果は明らかである。
【実施例３】
【００３９】
薬物としてＤＰZnを用い、CNVへの集積性を調べた。
【００４０】
（投与方法）
実施例１に準じてCNVを発症させたラットにDPZn／高分子ミセルを静脈投与した。
【００４１】
（評価方法および結果）
投与後、所定時間に眼球を摘出し、凍結組織切片を作製した後に蛍光顕微鏡によりCNVへの集積を定性的に観察したところ、図２に示すように、投与後０．２５時間、１時間、４時間および２４時間においてCNV部位に一致した高い集積性が認められた。
【実施例４】
【００４２】
薬物としてＤＰZnを用い、皮膚に対する光線過敏症を調べた。
【００４３】
（投与方法）
実施例１に準じてCNVを発症させたラットの腹部を剃毛し、翌日DPZn／高分子ミセルを静脈投与した。
【００４４】
比較対照として、フォトフリンを同条件で投与した。
【００４５】
（評価方法および結果）
投与４時間後、キセノンランプを剃毛部に照射し（波長：３７７−７００ｎｍ、出力密度：３０ｍW／ｃｍ２、照射面積：４ｃｍ２）、経時的に観察したところ、DPZn／高分子ミセル投与群では照射後２週間においても光線過敏症は認められなかったが、フォトフリン投与群では照射1日後から光線過敏症が認められた。
【実施例５】
【００４６】
薬物としてＤＰZnを用い、PDT施行によるCNV閉塞効果を調べた。
【００４７】
（投与方法およびPDT施行）
DPZn／高分子ミセルを生理食塩水に溶解し（１．５ｍｇ／ｍｌ：DPZn換算）、その溶液４００μｌを実施例１に準じてCNVを発症させたラット（１群４匹）に静脈投与した。投与０．２５時間および４時間後にＰＤＴ用レーザーを照射した（レーザー波長：４３８ｎｍ、出力密度：６００ｍＷ／ｃｍ２、スポットサイズ：１１２０μｍ）。照射量は、５、１０，２５、５０、１００Ｊ／ｃｍ２とした。
【００４８】
ＰＤＴ用レーザー照射の１日および７日後にフルオレセインを静脈投与し、眼底カメラにてCNVからのフルオレセインの漏出を観察し、CNVの閉塞効果を評価した。
【００４９】
（結果）結果を表１および２に示す。CNV閉塞割合は平均値で示す（１群４匹）。
【表１】
2005008614.tif 000002
【表２】
2005008614.tif 000003
【００５０】
表に示した結果から明らかなように、高分子ミセルにポルフィリンを内包すると、低いレーザー照射量でも十分なCNVの閉塞効果が認められ、またその効果の持続性も認められた。
【００５１】
このことから、本発明はＡＭＤの治療に非常に有用であることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１−１】DPZnとLLC細胞をインキュベートしたときの蛍光顕微鏡写真である。
【図１−２】DPZn内包高分子ミセルとLLC細胞をインキュベートしたときの蛍光顕微鏡写真である。
【図２−１】DPZn内包高分子ミセルのCNVへの集積性を調べた０．２５時間後の蛍光顕微鏡写真である。
【図２−２】DPZn内包高分子ミセルのCNVへの集積性を調べた１時間後の蛍光顕微鏡写真である。
【図２−３】DPZn内包高分子ミセルのCNVへの集積性を調べた４時間後の蛍光顕微鏡写真である。
【図２−４】DPZn内包高分子ミセルのCNVへの集積性を調べた２４時間後の蛍光顕微鏡写真である。
【図１−１】
2005008614.tif 000004
【図１−２】
2005008614.tif 000005
【図２−１】
2005008614.tif 000006
【図２−２】
2005008614.tif 000007
【図２−３】
2005008614.tif 000008
【図２−４】
2005008614.tif 000009