(57)【要約】  【課題】  メラノサイトのデンドライトの伸長を促進する手段を提供する。  【解決手段】  ムラサキ科ヒレハリソウ属の植物のエキスを有効成分とする、メラノサイトのデンドライト伸長促進組成物を提供する。前記メラノサイトのデンドライト伸長組成物は、前記ムラサキ科ヒレハリソウの植物体、好ましくは地上部を極性溶媒で抽出することにより得られる。かかる組成物を、メラノサイトを培養するための培地に含有させることにより、培養しているメラノサイトのデンドライトを伸長させ、デンドライトの存在状況を均一化させることが出来る。  【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ムラサキ科ヒレハリソウ属の植物のエキスを有効成分とする、メラノサイトのデンドライト伸長促進組成物。
【請求項２】
ムラサキ科ヒレハリソウ属の植物が、コンフリー（Symphytum offisinale L）であることを特徴とする、請求項１に記載のデンドライト伸長促進組成物。
【請求項３】
エキスが、水及び／又はアルコールの抽出物であることを特徴とする、請求項１又は２に記載のデンドライト伸長促進組成物。
【請求項４】
請求項１〜３何れか１項に記載のメラノサイトのデンドライト伸長促進組成物とメラノサイトとを共存させることを特徴とする、メラノサイトのデンドライト伸長促進方法。
【請求項５】
メラノサイトのデンドライト伸長促進組成物と、メラノサイトとの共存条件が、培地中での共存培養であることを特徴とする、請求項４に記載のデンドライト伸長促進方法。
【請求項６】
デンドライトの伸長促進が、デンドライトの伸長程度の均質化であることを特徴とする、請求項４又は５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メラノサイトのデンドライト伸長促進方法並びにデンドライトの伸長促進組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ケラチノサイトに存するメラニン顆粒は、メラノサイトで産生されたメラニン顆粒を、メラノサイトがデンドライトを伸長し、ケラチノサイトと接合して、該メラニン顆粒をトランスファーすることにより、ケラチノサイトに存するようになる。この意味に於いて、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制は、化粧料などに於ける美白作用の新しいメカニズムとなりうることが期待されている。この様な情景を背景に種々のメラノサイトのデンドライトの伸長を抑制する物質の研究が為されており、かかる作用を有する物質が知られるようになってきている。（例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３を参照）しかしながら、これらの知見では、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制には比較的大きなバラツキが存する。この様に、メラノサイトのデンドライト伸長に対する種々の物質の影響を調べる場合に於いて、伸長のバラツキを抑制することは重要な課題であり、メラノサイトのデンドライトの状態を均一化することは、前記バラツキを抑制し、影響の鑑別の確度を向上させる意味で重要であるが、かかる均一化手段については何ら知られていない。
【０００３】
一方、皮膚に於いて、、デンドライトの伸長が妨げられ、メラニン顆粒のトランスファーに支障が来すと、メラノサイトが細胞死を起こし、メラニン産生が妨げられ白斑などを生ずるようになると言われている。かかるメラニン・トランスファーの障害となる最も大きな原因としては、メラノサイトのデンドライトの伸長が阻害されることが挙げられる。（例えば、特許文献４を参照）従って、白斑の治療などに於いても、メラノサイトのデンドライトを伸長させることが、必要であり、この意味に於いても、メラノサイトのデンドライト伸長促進の手段の開発が望まれている。
【０００４】
他方、ムラサキ科ヒレハリソウ属の植物のエキスについては、抗炎症作用（例えば、特許文献５を参照）、活性酸素を消去させる作用（例えば、特許文献６を参照）、十二指腸潰瘍の予防・治療作用（例えば、特許文献７を参照）、ＳＣＦ阻害作用（例えば、特許文献８を参照）、ヘキソサミノダーゼ抑制作用（例えば、特許文献９を参照）等が知られているが、メラノサイトのデンドライト伸長促進作用については全く知られていない。
【０００５】
【特許文献１】特開２００３−１１３０２７号公報
【特許文献２】特開２００３−０８１７４７号公報
【特許文献３】特開２００２−０８８０８５号公報
【特許文献４】特開平０１−２０７２２５号公報
【特許文献５】特開２００３−０６３９４２号公報
【特許文献６】特開２００３−０２６５６０号公報
【特許文献７】特開２００３−００９８１５号公報
【特許文献８】特開２００２−３０２４５１号公報
【特許文献９】特開２０００−２３６８４８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、メラノサイトの伸長を促進する手段を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、メラノサイトの伸長を促進する手段を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、ムラサキ科ヒレハリソウ属の植物のエキスがその様な作用を有する成分を含有していることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示す技術に関するものである。
（１）ムラサキ科ヒレハリソウ属の植物のエキスを有効成分とする、メラノサイトのデンドライト伸長促進組成物。
（２）ムラサキ科ヒレハリソウ属の植物が、コンフリー（Symphytum offisinale L）であることを特徴とする、（１）に記載のデンドライト伸長促進組成物。
（３）エキスが、水及び／又はアルコールの抽出物であることを特徴とする、（１）又は（２）に記載のデンドライト伸長促進組成物。
（４）（１）〜（３）何れか１項に記載のメラノサイトのデンドライト伸長促進組成物とメラノサイトとを共存させることを特徴とする、メラノサイトのデンドライト伸長促進方法。
（５）メラノサイトのデンドライト伸長促進組成物と、メラノサイトとの共存条件が、培地中での共存培養であることを特徴とする、（４）に記載のデンドライト伸長促進方法。
（６）デンドライトの伸長促進が、デンドライトの伸長程度の均質化であることを特徴とする、（４）又は（５）に記載の方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、メラノサイトのデンドライトの伸長を促進する手段を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明のメラノサイトのデンドライト伸長促進組成物は、ムラサキ科ヒレハリソウ属の植物のエキスを有効成分として含有することを特徴とする。ムラサキ科ヒレハリソウ属の植物としては、コンフリー（Symphytum offisinale L）が特に好ましく例示できる。かかるエキスとしては、溶剤抽出物が好ましく、前記溶剤としては、極性溶剤を含むことが好ましい。好ましい極性溶剤としては、水、エタノール、イソプロパノール、１，３−ブタンジオール等のアルコール類、蟻酸メチル、酢酸エチル、吉草酸イソプロピルなどのエステル類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類などが好適に例示でき、水及び／又はアルコール類がより好ましく、水及び／又はエタノールが更に好ましい。特に好ましいものは３０〜６０％エタノール水溶液である。これは溶剤の毒性が極めて低い点と、有効成分の抽出効率が高い点の２点による。エキスの製造は、常法に準じて行えば良く、植物体乃至はその乾燥物や、前記乾燥物の細断物に、１〜１０質量倍の溶剤を加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、しかる後に不溶物を濾過などで除去し、必要に応じて減圧濃縮或いは凍結乾燥などを行い溶剤を除去すればよい。又、更にカラムクロマトグラフィーなどで精製し、有効成分を更に濃縮することも出来る。
【００１０】
本発明のメラノサイトのデンドライト伸長促進組成物は、前記エキスをそのまま使用することも出来るし、前記エキスに、防腐剤や抗酸化剤などの保存のための成分や、希釈媒等を加えて、組成物とすることも出来る。前記希釈媒としては、抽出に使用した溶剤やそれに準じた溶剤を用いることも出来るし、吸水軟膏、親水軟膏或いはそれらに準じた乳化物などを用いることも出来るし、化粧料などで使用されている基材を用いることも出来る。かかる組成物に於ける、前記エキスの含有量は、組成物全量に対して、０．０１〜１０質量％が好ましく、０．０５〜５質量％が更に好ましい。かかる組成物の用途は、メラノサイトのンドライトの伸長促進を目的とするものであれば、特段の限定は受けず、例えば、培地添加物、試薬、動物前処置薬等の研究用の薬剤、人の生体上でのメラノサイトのデンドライトを伸長するための化粧料、医薬などが例示できる。かかるデンドライト伸長促進組成物は、エキスを添加物、希釈媒を常法に従って処理することにより製造することが出来る。この時、希釈媒の成分としては通常使用されている任意成分を含むことが出来る。この様な任意成分としては、例えば、マカデミアナッツ油、アボガド油、トウモロコシ油、オリーブ油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油、ミツロウ、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバロウ等のオイル、ワックス類、流動パラフィン、スクワラン、プリスタン、オゾケライト、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類、オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類、セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、オクチルドデカノール、ミリスチルアルコール、セトステアリルアルコール等の高級アルコール等、イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸ヘキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリトリット等の合成エステル油類、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサンシロキサン等の環状ポリシロキサン、アミノ変性ポリシロキサン、ポリエーテル変性ポリシロキサン、アルキル変性ポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等の変性ポリシロキサン等のシリコーン油等の油剤類、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−−ヘキシレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等の多価アルコール類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類、グアガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、キサンタンガム、カードラン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸，ローカストビーンガム，サクシノグルカン，カロニン酸，キチン，キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ベントナイト等の増粘剤、表面を処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面を処理されていても良い、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類、表面を処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２−（２’−ヒドロキシ−５’−ｔ−オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４’−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ6塩酸塩，ビタミンＢ6トリパルミテート，ビタミンＢ6ジオクタノエート，ビタミンＢ2又はその誘導体，ビタミンＢ12，ビタミンＢ15又はその誘導体等のビタミンＢ類、α−トコフェロール，β−トコフェロール，γ−トコフェロール，ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類などが好ましく例示できる。
【００１１】
＜製造例１＞
ムラサキ科ヒレハリソウ属コンフリーの地上部の乾燥物１００ｇを細切し、これに５００ｍｌの５０％エタノール水溶液を加え、２時間加熱還流し、冷却後濾過して不溶物を除き、減圧濃縮した後、凍結乾燥し、更に、これに水１Ｌを加え分散させて、ダイアイオンＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）を充填したカラムにチャージし、水５ｌを流して水洗した後、エタノール２Ｌを流して、吸着成分を溶出させて、減圧濃縮により溶剤を除去し、エキス１をアモルファスとして３．４ｇ得た。
【００１２】
＜製造例２＞
エキス１を１質量部取り、これに０．１質量部のメチルパラベン、１０質量部の１，３−ブタンジオール、５質量部のエタノール、０．１質量部のポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油及び水８３．８質量部を加え、加熱可溶化し、冷却し、メラノサイトのデンドライト伸長促進組成物組成物１を得た。
【００１３】
かくして得られた、本発明のメラノサイトのデンドライト伸長促進組成物は、メラノサイトのデンドライトの伸長を促進する作用に優れるため、メラノサイトの培養に於いて、培地に加え、以てメラノサイトのデンドライトを伸長させて、各メラノサイトに於けるデンドライトの長さのバラツキを抑制し、均一性を向上させることが出来る。この様な系でデンドライトの伸長抑制作用の検定を行うと、従来よりも再現性を向上することが出来る。又、本発明のデンドライト伸長促進組成物を、実験動物又は人の皮膚に投与することにより、デンドライトの伸長を抑制されていた、皮膚に存在するメラノサイトのデンドライト伸長させ、正常域に戻すことが出来るので、白斑などの治療や予防に使用できる。
【実施例】
【００１４】
以下に、実施例を挙げて、本発明について、更に詳細に説明を加えるが、本発明が、かかる実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
【００１５】
＜実施例１＞
前記エキス１を本発明の組成物２として用い、メラノサイトの培養に於いて、デンドライトを伸長させる作用を確かめた。
【００１６】
（試薬類）
細胞・培地・増殖添加剤はクラボウより購入した
（細胞）正常ヒトメラノサイト
（培地）基礎培地：Medium 154S
（試薬）増殖添加剤：ウシ胎児血清（FBS）（培地中の最終濃度 0.5% v/v）、ヒト組換え型塩基性繊維芽細胞増殖因子（rFGF-B）（培地中の最終濃度 3 ng/ml）、ハイドロコーチゾン（培地中の最終濃度 0.18 mg/ml）、インスリン（培地中の最終濃度 5 mg/ml）、トランスフェリン（培地中の最終濃度 5 mg/ml）、PSA溶液（ペニシリン濃度50,000 Unit/ml、ストレプトマイシン濃度50 mg/ml、アンフォテリシンB濃度12.5 mg/mlの混合溶液。培地500 mlに対して1 ml添加。）
培地は、試薬を基礎培地に添加した増殖用培地を使用した。
【００１７】
（方法）
・正常ヒトメラノサイトを４８穴マイクロプレートに播種した。（３０００cells/well,200μl）
・０時間後に１０％に希釈した本発明のデンドライト伸長促進組成物（エキス１）の５０μｌを、５μｇ／プレートになるように添加した。
・サンプル添加２４時間後にデンドライト伸長促進を観察した。
【００１８】
（結果）
結果を、デンドライトの長さとして、表１に示す。コントロールに比して、メラノサイトのデンドライトの伸長促進剤添加群では何れも伸長が促進されていることがわかる。
【００１９】
【表１】
2005132784.tif 000002
【００２０】
＜実施例２＞
メラノサイトのデンドライト伸長抑制作用が知られているバクモンドウのエキスについて、予め実施例１の手技によって前処置し、デンドライトを伸長させたメラノサイト富む処置のメラノサイトを用いて、伸長抑制効果の差を見た。バクモンドウのエキスは、５０％エタノールで２時間加熱還流し、不溶分を濾過で取り除き、減圧濃縮して得たものを、培地に０．００１％加えて用いた。他の培養条件は実施例１に準じた。結果を表２に示す。これより、前処置を行った方が、バラツキが少なく、再現性が良いことが判る。
【００２１】
【表２】
2005132784.tif 000003
【００２２】
＜実施例３＞
製造例２のメラノサイトのデンドライト伸長促進組成物１を用いて、白斑のある人の白斑に３０日連日で塗布し続けてもらったところ、塗布前に比して、処置後は色差計による明度（Ｌａｂ表色系のＬ値）が０．５４減じた。これより、本発明のメラノサイトのデンドライト伸長促進組成物を塗布することにより、白斑部位に於いて、メラニン産生が再開していることが判った。
【産業上の利用可能性】
【００２３】
本発明は、メラノサイトの培養のための培地添加物などに応用することが出来る。