(57)【要約】【課題】医薬、食品、化粧品分野で利用可能な、安全で且つ、副作用のないインスリン分泌促進剤並びにエンドセリン−１産生抑制剤を提供すること。【解決手段】本発明のインスリン分泌促進剤並びにエンドセリン−１産生抑制剤は、式（１）で表されるホスホリルコリン類似基含有単量体を含む単量体組成物（Ａ）を重合してなる重合体を有効成分とする。【化１】2005008607.tif 000012（Ｘ：２価の有機残基、Ｙ：Ｃ１〜６のアルキレンオキシ基、Ｚ：Ｈ等、Ｒ１：Ｈ、−ＣＨ３、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４：Ｈ、Ｃ１〜６のアルキル基等、ｍ：０又は１、ｎ：１〜４。）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で表されるホスホリルコリン類似基含有単量体を含む単量体組成物（Ａ）を重合してなる重合体を有効成分とするインスリン分泌促進剤。
【化１】
2005008607.tif 000008
（式中、Ｘは２価の有機残基を示し、Ｙは炭素数１〜６のアルキレンオキシ基を示し、Ｚは水素原子もしくはＲ５−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（但しＲ５は炭素数１〜１０のアルキル基又は炭素数１〜１０のヒドロキシアルキル基を示す）を示す。また、Ｒ１は水素原子もしくはメチル基を示し、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は同一もしくは異なる基であって、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又はヒドロキシアルキル基を示す。ｍは０又は１を示す。ｎは１〜４の整数である。）
【請求項２】
単量体組成物（Ａ）が、前記ホスホリルコリン類似基含有単量体１０〜９０ｍｏｌ％と、疎水性単量体１０〜９０ｍｏｌ％とを含む請求項１記載のインスリン分泌促進剤。
【請求項３】
前記ホスホリルコリン類似基含有単量体が、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェートであり、前記疎水性単量体が式（２）で表される疎水性単量体である請求項２記載のインスリン分泌促進剤。
【化２】
2005008607.tif 000009
（式中、Ｌ１は、−Ｃ６Ｈ４−、−Ｃ６Ｈ１０−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−又は−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−を示し、Ｌ２は、水素原子、−（ＣＨ２）ｇ−Ｌ３又は（（ＣＨ２）ｐ−Ｏ）ｈ−Ｌ３を示す（但し、ｇ及びｈは独立に１〜２４の整数、ｐは３〜５の整数を示し、Ｌ３は、水素原子、メチル基、−Ｃ６Ｈ５、−Ｏ−Ｃ６Ｈ５を示す。））
【請求項４】
前記疎水性単量体が、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチルステアリレートである請求項２又は３記載のインスリン分泌促進剤。
【請求項５】
式（１）で表されるホスホリルコリン類似基含有単量体を含む単量体組成物（Ａ）を重合してなる重合体を有効成分とするエンドセリン−１産生抑制剤。
【化３】
2005008607.tif 000010
（式中、Ｘは２価の有機残基を示し、Ｙは炭素数１〜６のアルキレンオキシ基を示し、Ｚは水素原子もしくはＲ５−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（但しＲ５は炭素数１〜１０のアルキル基又は炭素数１〜１０のヒドロキシアルキル基を示す）を示す。また、Ｒ１は水素原子もしくはメチル基を示し、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は同一もしくは異なる基であって、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又はヒドロキシアルキル基を示す。ｍは０又は１を示す。ｎは１〜４の整数である。）
【請求項６】
単量体組成物（Ａ）が、前記ホスホリルコリン類似基含有単量体１０〜９０ｍｏｌ％と、疎水性単量体１０〜９０ｍｏｌ％とを含む請求項５記載のエンドセリン−１産生抑制剤。
【請求項７】
前記ホスホリルコリン類似基含有単量体が、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェートであり、前記疎水性単量体が式（２）で表される疎水性単量体である請求項６記載のエンドセリン−１産生抑制剤。
【化４】
2005008607.tif 000011
（式中、Ｌ１は、−Ｃ６Ｈ４−、−Ｃ６Ｈ１０−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−又は−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−を示し、Ｌ２は、水素原子、−（ＣＨ２）ｇ−Ｌ３又は（（ＣＨ２）ｐ−Ｏ）ｈ−Ｌ３を示す（但し、ｇ及びｈは独立に１〜２４の整数、ｐは３〜５の整数を示し、Ｌ３は、水素原子、メチル基、−Ｃ６Ｈ５、−Ｏ−Ｃ６Ｈ５を示す。））
【請求項８】
前記疎水性単量体が、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチルステアリレートである請求項６又は７記載のエンドセリン−１産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ホスホリルコリン基含有単量体を含む単量体組成物の重合体してなる重合体よりなるインスリン分泌促進ならびにエンドセリン−１生産抑制物質に関する。
【０００２】
【従来の技術】
インスリンは膵臓ランゲルハンス島Ｂ（βとも言う）細胞から分泌されるホルモンで、その主な生理作用は血糖を下げることにあり、筋では糖、アミノ酸、カリウムの取り込みの促進、グリコーゲン合成、タンパク質合成の促進、脂肪組織では糖の取り込み及び利用促進、脂肪の合成促進及び分解抑制、タンパク質の合成促進、肝では糖新生の抑制、グリコーゲンの合成促進及び分解抑制、タンパク質の合成促進等の作用がある。そして、標的組織の細胞膜上にはインスリン受容体が存在する。食事等により血糖値が上がると、インスリンが膵臓から分泌され、上記作用により血糖値を正常に保つ。
糖尿病は、インスリンの欠乏、または作用の不足によって、ブドウ糖の代謝に異常が起こり、血液中のブドウ糖が増えすぎて尿の中に糖が溢れてきた状態で、慢性的に高血糖状態が続いている病気である。
糖尿病には、Ｉ型糖尿病（インスリン依存型）とＩＩ型糖尿病（インスリン非依存型）があり、糖尿病の大部分はＩＩ型糖尿病である。Ｉ型糖尿病は、主に１５才未満の子供に見られ、「若年型糖尿病」とも呼ばれてきた。膵臓Ｂ細胞が、なんらかの原因でインスリンを分泌できなくなり、高血糖として発症する。
ＩＩ型糖尿病は、インスリンの分泌量が低下しているか（インスリン分泌不全）、インスリンの血糖を下げる作用が弱くなって（インスリン抵抗性）発症するもので、遺伝素因の他に、エネルギーの過剰摂取や栄養の偏った食生活、運動不足、ストレスが大きくかかわっており、日本人の糖尿病の９０％を占めている。その治療にかならずしもインスリンを必要としないが、血糖値をコントロールするためにインスリン投与が必要になることもある。
インスリンは２１個のアミノ酸残基からなるＡ鎖と３０個のアミノ酸残基からなるＢ鎖から構成されるペプチドで、Ａ鎖とＢ鎖は２箇所のジスルフィド結合で結合されている。インスリンは膵臓Ｂ細胞の粗面小胞体で前駆体であるプロインスリンとして合成され、インスリンに転換後、Ｂ顆粒内に貯蔵され、分泌刺激に応じて血中に放出される。分泌は主としてグルコースにより促進されるが、その他の分泌促進因子としては、マンノース等の糖、アルギニン、リジン等のアミノ酸、グルカゴン、ガストリック・インビビトリー・ポリペプチド等のペプチドホルモン、迷走神経刺激剤、交感神経系β受容体刺激剤、交感神経系のα受容体遮断剤、スルホニル尿素剤等がある。
糖尿病の症状を改善するには、インスリンを直接注射する療法の他に、トルブタミド、クロルブロバミド、アセトヘキサミド、グリクロビラミド、グリベンクラミド、グリクラチド等のスルホニル尿素剤のように膵臓Ｂ細胞に直接働き、インスリンの分泌を促進する薬剤を服用する方法がある。この場合、インスリンの分泌を促進させるためには、膵臓からインスリンが分泌されていることが必要であり、インスリン非依存型のＩＩ型糖尿病に用いられる。他に、糖質の消化・吸収を遅らせる効果があり、食後の急激な血糖の上昇を抑制するα−グルコシダーゼ阻害剤を服用する方法もある。
【０００３】
エンドセリン−１は、血管内皮細胞の産生する強力な血管収縮ペプチドで２１残基のアミノ酸からなる。他に２種のイソフォームであるエンドセリン−２、エンドセリン−３が知られている。これらのエンドセリンは、標的細胞のエンドセリン受容体を介してホスホリパーゼＣの活性化、カルシウムチャンネルの開口など多様な細胞内シグナル伝達系を活性化する。エンドセリン−１は、血管内皮細胞に存在するエンドセリン変換酵素の働きでビッグエンドセリンから生成する。エンドセリン−１の濃度上昇は、血圧や心疾患等の病気と関連があると言われており、エンドセリン受容体拮抗物質、エンドセリン変換酵素阻害物質が種々開発されている。
また、赤ワインの消費が心臓病による死亡を減少させるという疫学的調査があり、赤ワイン抽出液や赤ワインに含まれるポリフェノール（ｐｉｃｅａｔａｎｎｎｏｌ、ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ等）がエンドセリン−１の産生を抑制することも報告されている（Ｎａｔｕｒｅ，４１４，８６３−８６４，（２００１））。他に、大豆イソフラボン（ゲニステイン・ダイゼイン）がエンドセリン−１の産生を抑制することも知られている。
エンドセリン−１は血管ばかりでなく種々の組織細胞で産生され、様々な生理的役割を担っていることがわかってきた。例えば、紫外線が肌にあたるとエンドセリン変換酵素が活発に働き、ケラチノサイトにあるビッグエンドセリンを分解してエンドセリン−１を産生する。エンドセリン−１は、メラノサイトを刺激して、メラニンを盛んに合成させシミ・ソバカスが増加し易くなる（Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ，  １００，２３−２６（１９９３））。
現在、市場にある美白化粧品の多くはチロシナーゼ活性を抑制する働きを持つが、カミツレの花から抽出して得られるカミツレエキスにはこのエンドセリンの働きを抑える作用があり、結果としてメラニンの産生を抑制することから新しいタイプの美白化粧品として販売されている。
【０００４】
ホスホリルコリン基含有重合体は、生体膜に由来するリン脂質類似構造に起因して、血液適合性、補体非活性化、生体物質非吸着性等の生体適合性に優れ、また防汚性、保湿性等の優れた性質を有することが知られており、それぞれの機能を生かした生体関連材料の開発を目的とした重合体の合成及びその用途に関する研究開発が活発に行われている。例えば、マウスハイブリドーマにおいて、２−（メタクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート単独重合体や、２−（メタクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェートと２−（メタクリロイルオキシ）エチル−ブチレートとの共重合体が抗体産生量を増加させることが提案されている（例えば、特許文献１参照）。
しかし、これら重合体が、インスリン分泌促進作用を有すること、並びにエンドセリン−１産生抑制作用を有することについては知られていない。
【０００５】
【特許文献１】
特開平４−３０４８８２号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
２０歳以上の日本人の６９０万人が糖尿病といわれており、その殆どがインスリン非依存型のＩＩ型糖尿病であり、インスリンの分泌量が低下した患者に有効なインスリン分泌促進剤は医薬品としてのみならず、特定保健用食品、機能性食品の素材としても常に求められている。また、エンドセリン−１合成抑制に基づいてより安全に心臓病を予防する、あるいは美白効果のある新規物質は医薬品としてのみならず、特定保健用食品、機能性食品、化粧品の素材としても常に求められている。
本発明の目的は、医薬、食品分野で利用可能な、安全で且つ、副作用のないインスリン分泌促進剤を提供することである。
本発明の別の目的は、医薬、食品、化粧品分野で利用可能な、安全で且つ、副作用のないエンドセリン−１産生抑制剤を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、特定のホスホリルコリン類似基含有単量体を含む単量体組成物を重合して得られるリン脂質系高分子が膵臓Ｂ細胞を刺激して、インスリン分泌を促進することを見出し、また、該リン脂質系高分子が血管内皮細胞に働いてエンドセリン−１の産生を抑制することを見出した。
即ち、本発明によれば、式（１）で表されるホスホリルコリン類似基含有単量体（以下、ＰＣ単量体と略す）を含む単量体組成物（Ａ）を重合してなる重合体（以下、ＰＣ重合体）を有効成分とするインスリン分泌促進剤又はエンドセリン−１産生抑制剤が提供される。
【化５】
2005008607.tif 000002
（式中、Ｘは２価の有機残基を示し、Ｙは炭素数１〜６のアルキレンオキシ基を示し、Ｚは水素原子もしくはＲ５−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（但しＲ５は炭素数１〜１０のアルキル基又は炭素数１〜１０のヒドロキシアルキル基を示す）を示す。また、Ｒ１は水素原子もしくはメチル基を示し、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は同一もしくは異なる基であって、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又はヒドロキシアルキル基を示す。ｍは０又は１を示す。ｎは１〜４の整数である。）
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を更に詳細に説明する。
本発明のインスリン分泌促進剤又はエンドセリン−１産生抑制剤は、前記式（１）で示されるＰＣ単量体を含む単量体組成物（Ａ）を重合してなるＰＣ重合体を有効成分とする。
前記ＰＣ単量体を示す式（１）において、Ｘは、例えば、−Ｃ６Ｈ４−、−Ｃ６Ｈ１０−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−、−ＣＨ２Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ６Ｈ４−Ｏ−、−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｃ６Ｈ４−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−等の２価の有機残基を示す。Ｙは、例えば、メチルオキシ基、エチルオキシ基、プロピルオキシ基、ブチルオキシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基等の炭素数１〜６のアルキレンオキシ基を示す。Ｚは、水素原子もしくはＲ５−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−基を示す。
ここで、Ｒ５は、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等の炭素数１〜１０のアルキル基、又は例えば、ヒドロキシメチル基、２−ヒドロキシエチル基、３−ヒドロキシプロピル基、２−ヒドロキシプロピル基、４−ヒドロキシブチル基、２−ヒドロキシブチル基、５−ヒドロキシペンチル基、２−ヒドロキシペンチル基、６−ヒドロキシヘキシル基、２−ヒドロキシヘキシル基、７−ヒドロキシヘプチル基、２−ヒドロキシヘプチル基、８−ヒドロキシオクチル基、２−ヒドロキシオクチル基、９−ヒドロキシノニル基、２−ヒドロキシノニル基、１０−ヒドロキシデシル基、２−ヒドロキシデシル基等の炭素数１〜１０のヒドロキシアルキル基を示す。
【０００９】
前記ＰＣ単量体としては、例えば、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、３−（（メタ）アクリロイルオキシ）プロピル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、４−（（メタ）アクリロイルオキシ）ブチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、５−（（メタ）アクリロイルオキシ）ペンチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、６−（（メタ）アクリロイルオキシ）ヘキシル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリエチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリプロピルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリブチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリシクロヘキシルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリフェニルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリメタノールアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）プロピル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）ブチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）ペンチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）ヘキシル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（ビニルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（アリルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（ｐ−ビニルベンジルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（ｐ−ビニルベンゾイルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（スチリルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（ｐ−ビニルベンジル）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（ビニルオキシカルボニル）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（アリルオキシカルボニル）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（アクリロイルアミノ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（ビニルカルボニルアミノ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、エチル−（２’−トリメチルアンモニオエチルホスホリルエチル）フマレート、ブチル−（２’−トリメチルアンモニオエチルホスホリルエチル）フマレート、ヒドロキシエチル−（２’−トリメチルアンモニオエチルホスホリルエチル）フマレート、エチル−（２’−トリメチルアンモニオエチルホスホリルエチル）マレート、ブチル−（２’−トリメチルアンモニオエチルホスホリルエチル）マレート、ヒドロキシエチル−（２’−トリメチルアンモニオエチルホスホリルエチル）マレート等を挙げることができる。中でも２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェートが好ましく、更に２−（メタクリロイルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリンともいう、以下、ＭＰＣと略す）が入手性等の点でより好ましい。
【００１０】
前記ＰＣ単量体は、公知の方法で製造できる。例えば、特開昭５４−６３０２５号公報、特開昭５８−１５４５９１号公報等に示された公知の方法等に準じて製造することができる。
【００１１】
前記単量体組成物（Ａ）は、ＰＣ単量体の他に重合可能な他の単量体等を含んでいても良く、このような他の単量体としては、例えば、疎水性単量体等が挙げられる。
前記疎水性単量体としては、式（２）で表される疎水性単量体が好ましく挙げられる。
【００１２】
【化６】
2005008607.tif 000003
式（２）中、Ｌ１は、−Ｃ６Ｈ４−、−Ｃ６Ｈ１０−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−又は−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−を示し、Ｌ２は、水素原子、−（ＣＨ２）ｇ−Ｌ３又は（（ＣＨ２）ｐ−Ｏ）ｈ−Ｌ３を示す。但し、ｇ及びｈは独立に１〜２４の整数、ｐは３〜５の整数を示し、Ｌ３は、水素原子、メチル基、−Ｃ６Ｈ５、−Ｏ−Ｃ６Ｈ５を示す。
【００１３】
前記式（２）で示される疎水性単量体としては、例えば、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート、等の直鎖又は分岐アルキル（メタ）アクリレート；シクロヘキシル（メタ）アクリレート等の環状アルキル（メタ）アクリレート；ベンジル（メタ）アクリレート、フェノキシエチル（メタ）アクリレート等の芳香環（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート等のポリアルキレングリコール（メタ）アクリレート；スチレン、メチルスチレン、クロロメチルスチレン等のスチレン系単量体；メチルビニルエーテル、ブチルビニルエーテル等のビニルエーテル系単量体；酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル等のビニルエステル系単量体等が挙げられる。これらは使用に際しては単独若しくは２種以上の混合物として用いられる。
【００１４】
前記単量体組成物（Ａ）は、前記ＰＣ単量体の１種又は２種以上からなるものでも良いが、ＰＣ単量体と前記疎水性単量体とを含むものが好ましい。この際のＰＣ単量体と疎水性単量体との割合は、ＰＣ単量体が１０〜９０ｍｏｌ％、特に２０〜８０ｍｏｌ％が好ましく、疎水性単量が１０〜９０ｍｏｌ％、特に２０〜８０％が好ましい。
ＰＣ単量体が１０ｍｏｌ％未満又は疎水性単量体が８０ｍｏｌ％を超える場合は、ホスホリルコリン類似基（以下、ＰＣ基と略す）による効果を発揮させるのが困難であるので好ましくない。
【００１５】
本発明において有効成分として含有するＰＣ重合体は、前記単量体組成物（Ａ）を重合したものであれば良く、通常のラジカル共重合により製造できる。
ＰＣ重合体の分子量は、重量平均で、通常５０００〜５００００００、好ましくは１００００〜２００００００の範囲である。該分子量が５０００未満では、十分にインスリン分泌促進作用又はエンドセリン−１産生抑制作用を得ることが困難となり好ましくない。一方、該分子量が５００００００より大きいとＰＣ重合体を水性溶液とした場合、粘性が高くなりすぎて細胞増殖等の一般の生化学反応を阻害する恐れがあるため好ましくない。
【００１６】
本発明のインスリン分泌促進剤及びエンドセリン−１産生抑制剤において、前記有効成分としてのＰＣ重合体の含有量は、その投与経路、剤形等によって適宜変更しうるが、例えば、製剤とする場合には、製剤中に０．５〜５０質量％含有させることが好ましく、また、機能性食品、特定保健用食品に添加して用いる場合には、例えば、該食品中に０．０１〜５０質量％含有させることが好ましい。
【００１７】
本発明のインスリン分泌促進剤及びエンドセリン−１産生抑制剤は、前記ＰＣ重合体を含む有効成分をそのまま、若しくは該有効成分を、通常用いられる固体坦体、液体坦体、乳化分散剤等を用いて錠剤、粉剤、乳剤、カプセル剤等の所望の剤型に公知の方法等により調製することで得ることができる。
前記坦体としては、例えば、水、ゼラチン、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、ラクトース、植物油等が挙げられる。
【００１８】
本発明のインスリン分泌促進剤及びエンドセリン−１産生抑制剤は、医薬としての利用の他、様々な食品中に添加して機能性食品、特定保健用食品等として使用できる。かかる食品としては、例えば、清涼飲料、乳酸飲料、スープ、チーズ、ハム、菓子類等が挙げられる。また、ペットフード、飼料等に添加してペットや家畜の糖尿病等の改善にも利用することができる。
本発明のエンドセリン−１産生抑制剤は、美白作用等を期待して、化粧品や繊維処理剤等に添加して用いることもできる。
【００１９】
本発明のインスリン分泌促進剤及びエンドセリン−１産生抑制剤の使用方法としては、例えば、静脈注射、直腸投与等の非経口的投与、あるいは経口的投与等が挙げられる。また、エンドセリン−１産生抑制剤を用いた化粧品等については、皮膚に直接塗布して用いることもできる。
【００２０】
本発明のインスリン分泌促進剤及びエンドセリン−１産生抑制剤の投与量は、例えば、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、症状の程度、又は投与方法等に応じて適宜決定することができる。例えば、軽症の糖尿病患者への経口投与の場合には、有効成分としてのＰＣ重合体換算で、１日当たり１〜２０ｍｇ／ｋｇが好ましい。
【００２１】
【実施例】
以下、合成例及び実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
合成例１：ＭＰＣ／ブチルメタクリレート共重合体の合成
ＭＰＣ  ３５．７ｇ、ブチルメタクリレート４．３ｇをエタノール１６０ｇに溶解し４つ口フラスコに入れ、３０分間窒素を吹き込んだ後に、６０℃でアゾビスブチロニトリル（以下、ＡＩＢＮと略す）０．８２ｇを加えて８時間重合反応させた。重合液を３リットルのジエチルエーテル中に撹拌しながら滴下し、析出した沈殿を濾過し、４８時間室温で真空乾燥を行って粉末（これをポリマー１とする）２９．６ｇを得た。ポリマー１の分子量をゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により分析した。分析条件は２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を溶離液とし、ポリエチレングリコールを標準物質とし、屈折率により検出した。更に、ポリマー１の共重合組成比を１Ｈ−ＮＭＲにより求めた。結果を表１に示す。
【００２２】
合成例２：ＭＰＣ／メトキシポリ（エチレンオキシド（付加モル数＝４））モノメタクリレート）共重合体の合成
ＭＰＣ２３．０ｇ、メトキシポリ（エチレンオキシド（付加モル数＝４））モノメタクリレート）７．７ｇをエタノール１６０ｇに溶解して、４つ口フラスコに入れ、３０分間窒素を吹き込んだ後に、６０℃でＡＩＢＮ  ０．８２ｇを加えて８時間重合反応させた。重合液を３リットルのジエチルエーテル中にかき混ぜながら滴下し、析出した沈殿を濾過し、４８時間室温で真空乾燥を行って粉末（これをポリマー２とする）１９．８ｇを得た。ポリマー２の分子量及び共重合組成比を合成例１と同様に分析した。結果を表１に示す。
【００２３】
合成例３：ＭＰＣ／２−ヒドロキシ−３−メタクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウムクロライド共重合体の合成
ＭＰＣ  １３．４ｇ、５０％２−ヒドロキシ−３−メタクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウムクロライド水溶液９．２ｇを水７７ｇに溶解して、４つ口フラスコに入れ、３０分間窒素を吹き込んだ後に、６０℃でコハク酸パーオキサイド０．１５ｇを加えて８時間重合反応させた。重合液を３リットルのジエチルエーテル中にかき混ぜながら滴下し、析出した沈殿を濾過し、４８時間室温で真空乾燥を行って粉末（これをポリマー３とする）１４．８ｇを得た。ポリマー３の分子量及び共重合組成比を合成例１と同様に分析した。結果を表１に示す。
【００２４】
合成例４：ＭＰＣ／ステアリルメタクリレート共重合体の合成
ＭＰＣ  ２９．１ｇ、ステアリルメタクリレート８．４ｇをエタノール２０４ｇに溶解し４つ口フラスコに入れ、３０分間窒素を吹き込んだ後に、６０℃でＡＩＢＮ  ０．６７ｇを加えて８時間重合反応させた。重合液を３リットルのジエチルエーテル中に撹拌しながら滴下し、析出した沈殿を濾過し、４８時間室温で真空乾燥を行って粉末（これをポリマー４とする）３０．１ｇを得た。ポリマー４の分子量及び共重合組成比を合成例１と同様に分析した。結果を表１に示す。
【００２５】
【表１】
2005008607.tif 000004
【００２６】
実施例１−１（インスリン分泌促進活性測定）
ラットの膵臓Ｂ株細胞ＲＩＮｍ５Ｆ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２０５８）をＤｉａｂｅｔｅｓ，Ｖｏｌ．３４，ｐ．７１７  （１９８５）に記載された方法を改良して培養した。即ち、ＲＰＭＩ１６４０培地（グルタミン３００ｍｇ／ｌを含む、大日本製薬社製）に、炭酸水素ナトリウム２ｇ／ｌ、非働化処理したウシ胎児血清１０％、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍｌ、ペニシリン１００  ｕｎｉｔｓ／ｍｌを添加した培地を用いて、２４穴（１穴２ｃｍ２）のマイクロプレートにて、５％ＣＯ２存在下、３７℃で３日間前記細胞を培養した。次いで、古い培地を捨て、各穴当たり１ｍｌの新しい培地を加え更に１日間培養した。
次にプレートの各穴の培地を捨て、１ｍｌのＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ  ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ（ＫＲＢ）緩衝液（ＮａＣｌ  １２９ｍＭ、ＮａＨＣＯ３  ５ｍＭ、ＫＣｌ  ４．８ｍＭ、ＫＨ２ＰＯ４  １．２ｍＭ、ＣａＣｌ２  １．０ｍＭ、ＭｇＳＯ４  １．２ｍＭ、Ｇｌｕｃｏｓｅ  ２．８ｍＭ、Ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ  ０．１％、ＨＥＰＥＳ  １０ｍＭ、ｐＨ７．４）にて各穴を２回洗浄した。その後、３６０μｌのＫＲＢ緩衝液に４０μｌの試料（表２に示すポリマー４、あるいは対照としての蒸留水、グルカゴン）を加えた溶液４００μｌを各穴に添加し、５％ＣＯ２存在下、３７℃で０〜１２０分間静置した。尚、試料添加時における細胞数は１穴あたり１．２×１０６個である。
上清２００μｌを回収して、遠心により混入した細胞を除去した。上清中のインスリン量は、試料を希釈後、ラットインスリンＥＩＡシステム（アマシャム・ファルマシアバイオテク社製）を用いた酵素免疫測定法により測定した。結果を表２及び図１に示す。数値はマイクロプレート１穴（ｗｅｌｌ）に添加した緩衝液０．４ｍｌ中のインスリン量を示す。
次に、細胞増殖に対するポリマー４の影響をロッシュ社製のＭＴＴ（３−［４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｅ−２−ｙｌ］−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄ）キットにより検討した。その結果、ポリマー４の０．５％添加では細胞増殖に影響ないことが確認できた。
【００２７】
【表２】
2005008607.tif 000005
【００２８】
表２に示すように各濃度におけるポリマー４を添加１２０分後のＫＲＢ緩衝液中のインスリン量は蒸留水に比べて明らかに上昇していることが確認できた。比較のためにグルカゴン添加時のインスリン量も示す。また、図１に示すようにポリマー４を０．５％添加することにより、添加直後からＫＲＢ緩衝液中への継続的なインスリン分泌促進効果が認められた。一方、グルカゴン添加区は効果がほとんど持続しないことが判った。従って、このような継続的なインスリン分泌促進効果はポリマー４の特長の一つであると判断できる。
【００２９】
実施例２−１（エンドセリン−１産生抑制活性測定）
ブタ大動脈内皮細胞（継代数１、セルシステムズ社製）を、ＣＳ−Ｃ培地（Ｄ−ＭＥＭ培地とハムＦ１２培地とを１：１に等比混合した培地に、１０％ウシ胎児血清、１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、Ａｃｉｄｉｃ  ＦＧＦ、ヘパリンを添加した培地、セルシステムズ社製）を用いて、コラーゲンをコーティングした２４穴（１穴２ｃｍ２）のプレートにて、５％ＣＯ２存在下、３７℃で４日間培養を行った。次に、プレートの各穴の培地を捨て、１ｍｌのＫＲＢ緩衝液（実施例１−１と同じ組成）にて各穴を２回洗浄した。その後、３６０μｌのＫＲＢ緩衝液に４０μｌの試料（ポリマー４あるいは対照としての蒸留水）を加えた溶液４００μｌを各穴に添加し、５％ＣＯ２存在下、３７℃で０〜５時間静置した。尚、試料添加時における細胞数は１穴あたり４．０×１０５個である。
上清２００μｌを回収して、遠心により混入した細胞を除去した。上清中のエンドセリン−１量は、エンドセリン−１  ＥＬＩＳＡシステム（アマシャム・ファルマシアバイオテク社製）を用いた酵素免疫測定法により測定した。結果を表３及び図２に示す。数値はマイクロプレート１穴（ｗｅｌｌ）に添加した緩衝液０．４ｍｌ中のエンドセリン−１量を示す。ポリマー４を０．５％添加することにより、エンドセリン−１産生抑制効果が認められた。
次に、実施例１−１と同様にロッシュ社製のＭＴＴキットにより細胞増殖に対するポリマー４の影響を検討した。その結果、ポリマー４の０．５％添加では細胞増殖に影響ないことが確認できた。
【００３０】
【表３】
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【００３１】
実施例２−２（エンドセリン−１産生抑制活性測定）
添加試料として表４に示す各濃度のポリマー又はグルカゴンを用いた以外は、実施例２−１と同様に行い、試料添加３時間後のブタ大動脈内皮細胞ＫＲＢ緩衝液中のエンドセリン−１量を測定した。結果を表４に示す。
【００３２】
【表４】
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【００３３】
【発明の効果】
本発明のインスリン分泌促進剤は、優れたインスリン分泌促進作用を有するＰＣ重合体を有効成分として含有するので、ヒトの他、犬、猫等のペットにおける糖尿病疾患、並びに高血圧等の症状を改善、予防することができる。
また本発明のエンドセリン−１産生抑制剤は、優れたエンドセリン−１産生抑制作用を有するＰＣ重合体を有効成分として含有するので、ヒトの皮膚等に塗布することにより美白効果が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１−１において測定したＲＩＮｍ５Ｆ細胞のＫＲＢ緩衝液中における分泌インスリン量と時間との関係を示すチャートである。
【図２】実施例２−１において測定したブタ大動脈内皮細胞のＫＲＢ緩衝液中におけるエンドセリン−１産生抑制量と時間との関係を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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