(57)【要約】【課題】            神経刺激伝達に関与する神経ペプチドであり、神経伝達系を研究する試薬として有用であり、また、神経伝達系に作用するという全く異なった切り口から、新たな医薬および農薬へのアプローチを提供すること。【解決手段】        次の式（Ａ）：    Ｈ−Ｘａａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｘａｂ−ＮＨ２（Ａ）（式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定める３文字表記により表記し、ＸａａはＧｌｎまたはＴｙｒを示し、ＸａｂはＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅのいずれかを示し、ＮＨ２はＣ末端がアミド化されていることを示す。）で表されるペプチド。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式：
Ｈ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
（式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定める３文字表記により表記する）で示されるＣ末端がアミド化されたフリシン様神経ペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規な神経ペプチドに関し、更に詳細には、アフリカマイマイ（Ａｃｈａｔｉｎａ  ｆｕｌｉｃａ）のフリシン前駆体蛋白質ｃＤＮＡ中にコードされている新規な神経ペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
軟体動物の神経系は一般に高等動物に較べて単純であるので、情報処理の機構の解明に利用することが出来る。軟体動物より得られた知見は、少なくともそれが細胞下レベルの機構に関するものであれば、高等動物の神経系にも一般化できると考えられる。その際、神経伝達物質の探索が必要不可欠であり、古典的伝達物質に加えて、ペプチド性の伝達物質あるいはニューロモデュレーターの探索が精力的に行われている。
【０００３】
軟体動物の一種であるアフリカマイマイは、竹内らによって３０種以上の神経細胞が同定され、小林らによって心臓を支配する神経回路が示されている（非特許文献１）ので、神経伝達物質の研究に広く使われている。また、アフリカマイマイは農作物に多大な被害をもたらすため、その神経系に作用して駆除するという新しいタイプの薬物の開発という産業上の目的からも重要な研究対象である。
【０００４】
アフリカマイマイの神経ペプチドとして現在までに発見されたものは、神経節から単離されたアカチン−Ｉ（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｓｐ−ＯＨ、非特許文献２）およびフリシン（Ｈ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２、非特許文献３）が知られている。
（なお、本明細書中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定める３文字表記により表示し、ＮＨ２はＣ末端がアミド化されていることを示す。）
これら２種類の神経ペプチドは、いずれも分子内にＤ型のアミノ酸を含む内因性の神経ペプチドであり、その生合成機構の解明と共に、より多くの神経ペプチドの開発が待たれていた。
【非特許文献１】Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．１２９巻，２９５−３０７頁，１９８７年
【非特許文献２】釜谷ら：Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ・Ｃｏｍｍｕｎ．１６０巻，１０１５−１０２０頁，１９８９年
【非特許文献３】小林ら：ＢＢＲＣ．１７８巻，４８６−４９３頁，１９９１年
【非特許文献４】Ｐ．Ｊ．Ｂａｒｒ：Ｃｅｌｌ．６６巻，１頁，１９９１年
【非特許文献５】Ｂ．Ａ．Ｅｉｐｐｅｒら：Ａｎｎｕａｌ，Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５０巻，３３３頁，１９８８年
【非特許文献６】池田ら：Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９２，５７６−５７８頁，１９９３年
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
生理活性ペプチドのプロセッシング過程については、最近になって急速に解明されてきた分野（非特許文献４）であり、生理活性ペプチドは、その前駆体タンパク質の中に、その前後を塩基性アミノ酸対（Ｌｙｓ−ＡｒｇまたはＬｙｓ−Ｌｙｓ）に囲まれた形で存在し、アミド化される場合には、アミド化されるアミノ酸残基のＣ末端側にＧｌｙ残基が存在していること（非特許文献５）が報告されている。本発明者らは、これらの知見を基に、フリシンが真核生物における他の一般的なアミド化生理活性ペプチドと同様に、リボソーム上においてｍＲＮＡから翻訳された前駆体タンパク質からＤ型への変換を含む種々のプロセッシングを受けて生合成されるという仮定に基づき、フリシン前駆体タンパク質のｃＤＮＡの単離を試み、表１〜３に示すＤＮＡ配列を有するｃＤＮＡのクローン化に成功した。
【０００６】
【表１】
2005350473.tif 000002
【０００７】
【表２】
2005350473.tif 000003
【０００８】
【表３】
2005350473.tif 000004
【０００９】
このｃＤＮＡ中にフリシン前駆体は、上記報告の通りに、Ｎ末端側にＬｙｓ−Ａｒｇ−およびＣ末端側に−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇをコードするコドンに囲まれた形で、５９４〜６０８番目の塩基配列の箇所にコードされていた。このことから、フリシンは、全Ｌ型のペプチドとして生合成された後に、Ｎ末端のアミド化および２番目のＡｓｎのＤ型へのプロセッシングを受けて生合成されるものと考えられる。
【００１０】
一方、フリシンの他にも、池田ら（非特許文献６）がハンガリー産マイマイ（Ｈｅｌｉｘ  ｐｏｍａｔｉａ）から次の配列式：
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
で示される神経ペプチドを単離しているので、このｃＤＮＡ中にＮ末端側にＬｙｓ−Ａｒｇ−（またはＬｙｓ−Ｌｙｓ−）およびＣ末端側に−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ（または−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ）をコードするコドンに囲まれた形でコードされているペプチドを検索し、次の９箇所の塩基配列の箇所に以下のペプチドがコードされていることを見出した。
【００１１】
Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（８１９〜８３３番目）
Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（８４３〜８５７番目）
Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ（８６７〜８８１番目）
Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ（８９１〜９０８番目）
Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ（９１８〜９２９番目）
Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ（９３９〜９５６番目）
Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（９６６〜９８０番目）
Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ（９９０〜１００７番目）
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ（１１３１〜１１４５番目）
【００１２】
これらのペプチドのうち、９３９〜９５６番目および９９０〜１００７番目にコードされているペプチドは、池田らがハンガリー産マイマイから単離した神経ペプチドのアミノ酸配列と同一であった。本発明者らはこれらの知見に基づき、上記アミノ酸配列を有し、Ｎ末端がアミド化された次の配列番号１〜７で示されるペプチドを固相法で合成し、これらのペプチドがフリシンと同様に、ムラサキイガイ（Ｍｙｔｉｌｕｓ  ｅｄｕｌｉｓ）の足糸前牽引筋（ＡＢＲＭ）の一過性収縮を抑制する神経ペプチドであることを見出した。
【００１３】
配列番号１
Ｈ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（化合物Ａ１）
配列番号２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（化合物Ｂ１）
配列番号３
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（化合物Ｃ１）
配列番号４
Ｈ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（化合物Ｃ２）
配列番号５
Ｈ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（化合物Ｃ３）
配列番号６
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２（化合物Ｃ４）
配列番号７
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（化合物Ｄ１）
【００１４】
さらに本発明者らは、これらのペプチドおよびその類縁ペプチドについて、その構造活性相関を検討した結果、神経ペプチドとしての活性を示すためには、
（１）Ｃ末端に−Ｐｈｅ−Ｘａｂ−ＮＨ２（ＸａｂはＶａｌ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅの分岐脂肪族アミノ酸残基を示す。）の部分構造を有する。
（２）Ｐｈｅ残基の２個および／または３個Ｎ末端側にＴｙｒ残基を含む。
の２つの条件を充たすことが重要であることを見いだし、本発明を完成した。
【００１５】
すなわち、本発明によれば、次の式（Ａ）〜（Ｄ）：
Ｈ−Ｘａａ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｘａｂ−ＮＨ２（Ａ）
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｘａｂ−ＮＨ２（Ｂ）
Ｈ−Ｘａｃ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｘａｂ−ＮＨ２（Ｃ）
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｘａｂ−ＮＨ２（Ｄ）
（式中、ＸａａはＧｌｎまたはＴｙｒを示し、ＸａｂはＶａｌ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅのいずれかを示し、ＸａｃはＳｅｒ，Ｔｈｒ，Ａｓｎまたは単結合のいずれかを示す。）で示される新規な神経ペプチドを提供することができる。このようなペプチドの具体例としては、次のようなペプチドを例示することができる。
【００１６】
Ｈ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
Ｈ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ一Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
Ｈ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
Ｈ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２
【００１７】
本発明の神経ペプチドは、いずれもＬ型アミノ酸よりなるペプチドとしてｃＤＮＡにコードされており、合成したペプチドは全Ｌ型ペプチドであるが、フリシンおよびアカチン−Ｉの例から、これらの神経ペプチドも、生体内では、幾つかのアミノ酸、例えば２番目のアミノ酸が、Ｄ型に変換されている可能性も考えられる。
【００１８】
本発明のペプチドはオリゴペプチドであるので、通常のペプチド合成法で容易に合成することができる。例えば、アプライドバイオシステム社製ペプチド合成機４３１Ａを用い、保護アミノ酸を用いて固相合成を行う。続いてトリフルオロ酢酸（以下ＴＦＡと略称する）を用いて、樹脂からペプチドを切り出すと同時に脱保護して粗ペプチドを得る。得られた粗ペプチドを各種クロマトグラフィー、例えば、Ｃ−１８担体を用いる逆相高速液体クロマトグラフィーを用いて精製すれば、目的とするペプチドを得ることができる。
【発明の効果】
【００１９】
本発明のペプチドは、ムラサキイガイの足糸前牽引筋（ＡＢＲＭ）に対してフリシンと同様に、電気刺激による一過性収縮を抑制する他、アフリカマイマイの歯舌牽引筋やペニス牽引筋に対してもフリシンと同様の生理活性を示した。これらのことから、本発明のペプチドは神経伝達系研究における有用な試薬として使用することができる。また、神経伝達系の研究を通して医薬および農薬研究の新しい糸口を与えることができる。
【実施例】
【００２０】
次に実施例によって本発明をさらに説明するが、本発明の範囲はこれらのみに限定されるものではない。 
【００２１】
実施例１．固相法によるＨ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（化合物Ａ１：式ＡにおいてＸａａがＧｌｎ、ＸａｂがＶａｌである化合物）の製造：
Ｆｍｏｃ−ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ−ＳＡＬ樹脂（渡辺化学工業製）を担体として、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ，Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）を用い、アプライドバイオシステム社製ペプチド合成機４３１Ａ型を用いて、ＦａｓｔＭｏｃＴＭの固相法により合成した（以下、本明細書において、Ｆｍｏｃ＝９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ，ＳＡＬ＝Ｓｕｐｅｒ Ａｃｉｄ Ｌａｂｉｌｅ，Ｔｒｔ＝Ｔｒｉｔｙｌ，ｔＢｕ＝ｔ−Ｂｕｔｙｌを示す。）。
【００２２】
反応終了後、ペプチド樹脂１ｇあたり１０ｍｌの試薬Ａ（１，２−エタンジオール２．５％／水２．５％／ＴＦＡ９５％）（以下、特に断らない限り、％は容量％を示す。）を加え、室温で約３時間処理して、樹脂からのペプチドの切り出しと脱保護を行い、これにエーテルを加えてペプチドを沈澱させた。得られた沈澱をエーテルで３回洗浄して粗ペプチドを得た。粗ペプチドはＣ−１８逆相高速液体クロマトグラフィーにより精製して化合物Ａ１を得た。精製ペプチドは、ＵＬＴＲＯＮ  ＶＸ−ＯＤＳカラム（φ４．６ｍｍ×１５０ｍｍ・信和化工製）を用い、流速１ｍｌ／ｍｉｎで、０．１％ＴＦＡ中、３０分で１０％から４０％のアセトニトリルの直線濃度勾配で展開し、２２０ｎｍのＵＶ吸収でモニターした時に、保持時間１４．０分の箇所にシングルピークを与え、ＦＡＢＭＡＳでｍ／ｚ６８４．４に〔Ｍ＋Ｈ〕＋のピークを与えた。分子式Ｃ３３Ｈ４５Ｏ９Ｎ７から計算された分子量は、６８３．３である。
【００２３】
実施例２．固相法によるＨ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（化合物Ｂ１：式ＢにおいてＸａｂがＬｅｕである化合物）の製造：
Ｆｍｏｃ−ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ−ＳＡＬ樹脂（渡辺化学工業製）を担体として、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ，Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ａｌａ，Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）を用い、アプライドバイオシステム社製ペプチド合成機４３１Ａ型を用いて、ＦａｓｔＭｏｃＴＭの固相法により合成した。反応終了後、ペプチド樹脂１ｇあたり１０ｍｌの試薬Ｂ（水５％／ＴＦＡ９５％）を加え、室温で約３時間処理して、樹脂からのペプチドの切り出しと脱保護を行い、これにエーテルを加えてペプチドを沈澱させた。得られた沈澱をエーテルで３回洗浄して粗ペプチドを得た。粗ペプチドはＣ−１８逆相高速液体クロマトグラフィーにより精製して化合物Ｂ１を得た。このペプチドは、実施例１と同条件のＨＰＬＣ分析で、保持時間１６．６分の箇所にシングルピークを与え、ＦＡＢＭＡＳでｍ／ｚ６４１．３に〔Ｍ＋Ｈ〕＋のピークを与えた。分子式Ｃ３２Ｈ４４Ｏ８Ｎ６から計算された分子量は、６４０．３である。
【００２４】
実施例３．固相法によるＨ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（化合物Ｃ１：式ＣにおいてＸａＣがＳｅｒ、ＸａｂがＶａｌである化合物）の製造：
Ｆｍｏｃ−ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ−ＳＡＬ樹脂（渡辺化学工業製）を担体として、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ，Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）を用い、アプライドバイオシステム社製ペプチド合成機４３１Ａ型を用いて、ＦａｓｔＭｏｃＴＭの固相法により合成した。反応終了後、実施例２と同様に処理して化合物Ｃ１を得た。このペプチドは、実施例１と同条件のＨＰＬＣ分析で保持時間１４．５分の箇所にシングルピークを与え、ＦＡＢＭＡＳでｍ／ｚ６２９．３に〔Ｍ＋Ｈ〕＋のピークを与えた。分子式Ｃ３０Ｈ４０Ｏ９Ｎ６として計算された分子量は、６２８．３である。
【００２５】
実施例４．固相法によるＨ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（化合物Ｃ２：式ＣにおいてＸａｃがＴｈｒ、ＸａｂがＬｅｕである化合物）の製造：
Ｆｍｏｃ−ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ−ＳＡＬ樹脂（渡辺化学工業製）を担体として、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ，Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）を用い、アプライドバイオシステム社製ペプチド合成機４３１Ａ型を用いて、ＦａｓｔＭｏｃＴＭの固相法により合成した。反応終了後、実施例２と同様に処理して化合物Ｃ２を得た。このペプチドは、実施例１と同条件のＨＰＬＣ分析で、保持時間１８．６分の箇所にシングルピークを与え、ＦＡＢＭＡＳでｍ／ｚ６５７．４に〔Ｍ＋Ｈ〕＋のピークを与えた。分子式Ｃ３２Ｈ４４Ｏ９Ｎ６として計算された分子量は、６５６．３である。
【００２６】
実施例５．固相法によるＨ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＮＨ２（化合物Ｃ３：式ＣにおいてＸａｃがＡｓｎ、ＸａｂがＶａｌである化合物）の製造：
Ｆｍｏｃ−ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ−ＳＡＬ樹脂（渡辺化学工業製）を担体として、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ，Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）を用い、アプライドバイオシステム社製ペプチド合成機４３１Ａ型を用いて、ＦａｓｔＭｏｃＴＭの固相法により合成した。反応終了後、実施例１と同様に処理して化合物Ｃ３を得た。このペプチドは、実施例１と同条件のＨＰＬＣ分析で、保持時間１４．５分の箇所にシングルピークを与え、ＦＡＢＭＡＳでｍ／ｚ６５６．３に〔Ｍ＋Ｈ〕＋のピークを与えた。分子式Ｃ３１Ｈ４１Ｏ９Ｎ７として計算された分子量は、６５５．３である。
【００２７】
実施例６．固相法によるＨ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＮＨ２（化合物Ｃ４：式ＣにおいてＸａｃが単結合、ＸａｂがＩｌｅである化合物）の製造：
Ｆｍｏｃ−ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ−ＳＡＬ樹脂（渡辺化学工業製）を担体として、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ，Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）を用い、アプライドバイオシステム社製ペプチド合成機４３１Ａ型を用いて、ＦａｓｔＭｏｃＴＭの固相法により合成した。反応終了後、実施例２と同様に処理して化合物Ｃ４を得た。このペプチドは、実施例１と同条件のＨＰＬＣ分析で、保持時間１６．６分の箇所にシングルピークを与え、ＦＡＢＭＡＳでｍ／ｚ５５６．２に〔Ｍ＋Ｈ〕＋のピークを与えた。分子式Ｃ２８Ｈ３７Ｏ７Ｎ５として計算された分子量は５５５．３である。
【００２８】
実施例７．固相法によるＨ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（化合物Ｄ１：式ＤにおいてＸａｂがＬｅｕである化合物）の製造：
Ｆｍｏｃ−ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ−ＳＡＬ樹脂（渡辺化学工業製）を担体として、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ，Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ，Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）を用い、アプライドバイオシステム社製ペプチド合成機４３１Ａ型を用いて、ＦａｓｔＭｏｃＴＭの固相法により合成した。反応終了後、実施例２と同様に処理して化合物Ｄ１を得た。このペプチドは、実施例１と同条件のＨＰＬＣ分析で、保持時間２１．２分の箇所にシングルピークを与え、ＦＡＢＭＡＳでｍ／ｚ７８８．４に〔Ｍ＋Ｈ〕＋のピークを与えた。分子式Ｃ２８Ｈ３７Ｏ７Ｎ５として計算された分子量は７８７．４である。
【００２９】
評価例１．ムラサキイガイ足糸前牽引筋収縮試験
ムラサキイガイ足糸前牽引筋（ＡＢＲＭ）を用いた生物活性検定試験は、宗岡らの方法（宗岡ら：Ｊ．Ｐｈａｒｍｃ．ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２０２巻，６０１−６０９頁，１９７７年）に従って実施した。即ち、分離したムラサキイガイ足糸前牽引筋の上端と下端を木綿糸で結紮し、２ｍｌのチャンバーに取り付けた。検定すべき試料は、ＮａＣｌ：４４５ｍＭ，ＫＣｌ：１０ｍＭ，ＣａＣｌ２：１０ｍＭ，ＭｇＣｌ２：５５ｍＭを含む、ｐＨ７．８の１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液に、１０−４Ｍ、１０−５Ｍ、１０−６Ｍ、１０−７Ｍおよび１０−８Ｍの濃度に溶解して用いた。強収縮は、上下の木綿糸に接触させた一対の銀電極に１０分おきに１５Ｖ，３ｍｓｅｃ，１０Ｈｚ，５秒間の電気刺激を与えて誘発した。試料は電気刺激の８分前から作用させておき、収縮を記録した後は速やかに上述の緩衝液で洗浄した。
【００３０】
本発明のペプチドは、いずれもムラサキイガイ足糸前牽引筋（ＡＢＲＭ）の強収縮を抑制し、その閾値は１０−７Ｍ〜１０−６Ｍであり、強収縮を５０％抑制する濃度（ＩＣ５０）は１０−５Ｍ〜２×１０−４Ｍであった。同時に測定したフリシンの閾値が１０−６Ｍ、ＩＣ５０が１０−５Ｍであったことから、このアッセイ系では、本発明のペプチドは、フリシンと同程度〜５分の１程度の活性を示すことが明らかとなった。
【００３１】
本発明のフリシン関連ペプチドは、そのレセプターと構造活性相関の研究に重要な手掛かりを与える生化学試薬として有用であり、またアフリカマイマイのみならず各種動物の神経伝達機構の解明に寄与し、新たな医薬あるいは農薬の開発に結びつくものである。
【００３２】
配列番号：１
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
配列の種類：ペプチド
起源：
生物名：アフリカマイマイ（Ａｃｈａｔｉｎａ ｆｕｌｉｃａ）
配列の特徴：
他の特徴：Ｃ末端アミド化
存在位置：５
特徴を決定した方法：Ｅ
配列： 
Gln Tyr Glu Phe Val
1                5
【００３３】
配列番号：２
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
配列の種類：ペプチド
起源：
生物名：アフリカマイマイ（Ａｃｈａｔｉｎａ ｆｕｌｉｃａ）
配列の特徴：
他の特徴：Ｃ末端アミド化
存在位置：５
特徴を決定した方法：Ｅ
配列： 
Tyr Ala Glu Phe Leu
1               5
【００３４】
配列番号：３
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
配列の種類：ペプチド
起源：
生物名：アフリカマイマイ（Ａｃｈａｔｉｎａ ｆｕｌｉｃａ）
配列の特徴：
他の特徴：Ｃ末端アミド化
存在位置：５
特徴を決定した方法：Ｅ
配列： 
Ser Tyr Asp Phe Val
1                5
【００３５】
配列番号：４
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
配列の種類：ペプチド
起源：
生物名：アフリカマイマイ（Ａｃｈａｔｉｎａ ｆｕｌｉｃａ）
配列の特徴：
他の特徴：Ｃ末端アミド化
存在位置：５
特徴を決定した方法：Ｅ
配列： 
Thr Tyr Asp Phe Leu
1                5
【００３６】
配列番号：５
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
配列の種類：ペプチド
起源：
生物名：アフリカマイマイ（Ａｃｈａｔｉｎａ ｆｕｌｉｃａ）
配列の特徴：
他の特徴：Ｃ末端アミド化
存在位置：５
特徴を決定した方法：Ｅ
配列： 
Asn Tyr Asp Phe Val
1                5
【００３７】
配列番号：６
配列の長さ：４
配列の型：アミノ酸
配列の種類：ペプチド
起源：
生物名：アフリカマイマイ（Ａｃｈａｔｉｎａ ｆｕｌｉｃａ）
配列の特徴：
他の特徴：Ｃ末端アミド化
存在位置：４
特徴を決定した方法：Ｅ
配列： 
Tyr Asp Phe Ile
1           4
【００３８】
配列番号：７
配列の長さ：６
配列の型：アミノ酸
配列の種類：ペプチド
起源：
生物名：アフリカマイマイ（Ａｃｈａｔｉｎａ ｆｕｌｉｃａ）
配列の特徴：
他の特徴：Ｃ末端アミド化
存在位置：６
特徴を決定した方法：Ｅ
配列： 
Ser Pro Tyr Tyr Phe Leu
1                5     
【配列表】
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