(57)【要約】【課題】長期間に亘って服用しても副作用の心配がなく、脳の老化に伴う痴呆症やその他病的障害等の抑制効果が期待できる脳の老化抑制剤を提供する。【解決手段】脳の老化抑制剤に、ココア及び／又はカカオマスを有効成分として含有させる。この老化抑制剤は、前記ココア及び／又はカカオマスを１質量％以上含有することが好ましい。本老化抑制剤は、各種飲食品やペットの飼料に添加して摂取することもできる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ココア及び／又はカカオマスを有効成分として含有することを特徴とする脳の老化抑制剤。
【請求項２】
前記ココア及び／又はカカオマスを１質量％以上含有する、請求項１に記載の脳の老化抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ココア及び／又はカカオマスを有効成分として含有し、脳の老化に伴う痴呆症やその他病的障害等の予防効果が期待できる脳の老化抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
人の平均寿命が長くなり、いわゆる高齢化社会を迎えた現代においては、老化による様々な疾患が問題となっている。例えば、老化現象の前兆といわれる物忘れや度忘れは、通常、だれもが経験する現象であるが、脳血管性痴呆やアルツハイマー型痴呆症等の脳疾患は、日常生活や社会生活に支障をきたす場合が多く、大きな問題となっている。
【０００３】
これまでに、上記のような老化が関与していると考えられる脳疾患の予防、或いは症状を改善・治療するために様々な方法が提案されているが、現状においては、有効な予防方法及び治療方法は確立されていない。
【０００４】
ところで、チョコレートやココア飲料等の原料として広く用いられているココアは、様々な生理活性効果を有していることが知られており、例えば、下記特許文献１には、天然の抗酸化物質と抗酸化性ビタミンから成る高抗酸化性を有する抗酸化的ストレス物が開示されており、抗酸化物質としてココアパウダーが例示されている。そして、この抗酸化的ストレス物は、老化制御食品として利用できる旨記載されている。
【０００５】
また、下記特許文献２には、生カカオ豆又は半焙焼したカカオ豆のカカオニブをアルカリ処理し、乾燥、焙焼することにより、香味の改良された甘味低減効果及び集中度を向上し得る効果のあるカカオニブを得ることができる旨記載されている。
【０００６】
また、下記特許文献３には、ローストしたカカオハスクを溶媒抽出することにより、集中度を向上させ得るカカオ香味を含有するカカオハスクエキストラクトを得ることができる旨記載されている。
【０００７】
また、下記特許文献４には、カカオ豆及びフトモモ科植物Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ  Ｌｉｎｎ．よりなる群から１つ以上選択される原料の溶媒抽出物を有効成分として含有することを特徴とする精神安定性素材が開示されている。
【０００８】
【特許文献１】
特開平２−２６４７２０号公報
【特許文献２】
特開平６−８６６３７号公報
【特許文献３】
特開平６−１２５７１０号公報
【特許文献４】
特開平９−２２７３９３号公報
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記のような脳疾患に対する予防、改善、治療薬の多くは、長期間に亘って服用した場合、副作用の問題があるため、より安全なものが求められていた。
【００１０】
一方、上記特許文献１〜４に記載されているように、ココアやその抽出物、或いはカカオハスクの抽出物等が、抗酸化効果、集中力向上効果、精神安定効果等を有していることは知られているが、ココアが脳の老化抑制効果を有することについては知られていなかった。
【００１１】
したがって、本発明の目的は、長期間に亘って服用しても副作用の心配がなく、脳の老化に伴う痴呆症やその他病的障害等の予防効果が期待できる脳の老化抑制剤を提供することにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究した結果、ココアを摂取することにより、脳組織に存在するある種の細胞の変性（老化）を抑制できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明の脳の老化抑制剤は、ココア及び／又はカカオマスを有効成分として含有することを特徴とする。
【００１４】
本発明の脳の老化抑制剤においては、前記ココア及び／又はカカオマスを１質量％以上含有することが好ましい。
【００１５】
本発明の脳の老化抑制剤は、食品として長年利用されているココア及び／又はカカオマスを有効成分として含有するので、長期間服用しても副作用の心配がなく、効果的に脳の老化を抑制することができる。また、ココアやカカオマスは栄養的に優れた素材であるので栄養補給効果や、ココアやカカオマスの有する他の生理活性効果も同時に期待することができる。
【００１６】
なお、本発明において、脳の老化抑制とは、脳組織に存在する「間藤細胞（ＦＧＰ）」の形態及び組織化学的変化（老化）を抑制すると共に脳血管の老化に伴う形態的変化を抑制することを意味する。
【００１７】
「間藤細胞」は、これまでに、▲１▼脳血管にある血液脳関門の一部をなし、異物摂取能によるタンパク、脂質の脳への侵入阻止、▲２▼血管壁の脂質、酸化脂質の摂取・分解、▲３▼脳内の酸化脂質、変性物、浮腫の除去、▲４▼過剰神経伝達物質の摂取・分解、▲５▼脳脊髄液の循環に対する関与、脳脊髄液内の異物摂取、▲６▼脳（神経）免疫反応に対する関与、▲７▼ミクログリア活性（活動）の調節等といった様々な機能が確認或いは推定されている。そして、「間藤細胞」は、若年時は脳血管及び血行を経て脳内に移行する諸物質を取り込んで消化するが、老化に伴い摂取した物質が蓄積し、ライソゾーム顆粒が大型化して細胞は泡沫化（変性）することが知られている。肥大した「間藤細胞」が血管壁を圧迫し、血管腔の狭小化を起こすことが分かっている。したがって、この「間藤細胞」の機能である清掃作用を維持し、脳の血液循環を良好に保つことにより、老化に伴う痴呆症やその他の病的障害の抑制効果が期待できる。
【００１８】
【発明の実施の形態】
本発明の脳の老化抑制剤（以下、単に老化抑制剤という。）の有効成分であるココア及び／又はカカオマスは、通常、チョコレートやココア飲料等に使用されているものを用いることができる。例えば、クリーナーでカカオ豆を選別し、セパレータで豆を砕いて皮などを取り除き、リアクターでアルカリ剤を加えて反応させ、ロースターで焙焼した後、グラインダーで磨砕することによりカカオマスを得ることができる。なお、アルカリ剤による反応を行わない場合もある。そして、このカカオマスを、ココアプレスで搾油してココアバターを分離し、ココアミルで粉砕して細かい粉末にすることによりココアを得ることができる。本発明においては、通常、カカオバター含量が０〜２５質量％のココアが好ましく用いられる。
【００１９】
本発明においては、上記のようにして調製されたココア及び／又はカカオマスをそのまま老化抑制剤として用いることができる。
【００２０】
本発明の老化抑制剤は、通常、ココア及び／又はカカオマスを１〜５０質量％含むことが好ましく、１〜１０質量％含むことがより好ましい。
【００２１】
また、本発明の老化抑制剤の有効摂取量は、成人１日当たり、ココア及び／又はカカオマス換算で１〜４０ｇが好ましく、５〜１５ｇがより好ましい。
【００２２】
本発明の老化抑制剤の製剤形態は、特に制限はなく、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等が例示できる。
【００２３】
また、本発明の老化抑制剤を、例えば、菓子、飲料等の各種飲食品、ペット等の飼料に添加することもできる。
【００２４】
上記飲食品や飼料における老化抑制剤の添加量は、上記の有効摂取量に基づいて適宜設定できるが、ココア及び／又はカカオマス換算で０．１〜１５質量％が好ましく、１〜１０質量％がより好ましい。
【００２５】
本発明の老化抑制剤を経口摂取することにより、後述する実施例に示されるように、脳内環境の維持に重要な役割を果たしている「間藤細胞」の泡沫化（変性）を抑制することができると共に、脳血管の形態的変化を抑制することができるので、老化に伴う痴呆症やその他病的障害等の予防効果が期待できる。
【００２６】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明する。
【００２７】
実施例
マウス・ラット用の飼育繁殖用飼料（商品名「ＣＥ−２」、日本クレア株式会社製）に、純ココア（商品名「森永ココア純ココア」、森永製菓株式会社製）を２．５質量％添加した固形飼料（以下、ココア添加飼料という）を調製した（日本クレア株式会社に依頼）。
【００２８】
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラットを日本クレア株式会社より購入し、１週間予備飼育を行った後、２群（１群３匹）に分け、１群（試験群）には上記ココア添加飼料、もう１群（対照群）にはマウス・ラット用の飼育繁殖用飼料（商品名「ＣＥ−２」、日本クレア株式会社製）をそれぞれ自由摂取させた。そして、温度２０〜２６℃、湿度４０〜６０％、照明時間：明期（６〜１８時）、暗期（１８〜６時）の環境で、８５週間飼育した。
【００２９】
飼育期間最終日に、各群のラットの脳を摘出し、以下の方法で標本を作製して間藤細胞の状態を観察した。
【００３０】
・ＰＡＳ反応（染色）（病理標本の作り方（文光堂）参照）
一般的に間藤細胞は脳の老化にともない、細胞に含まれる顆粒内にＰＡＳ陽性物質の蓄積が増加していくことが知られているが、その一方、あまりに蓄積が進んだ顆粒ではＰＡＳ染色性が低下（消失）することが知られている。
【００３１】
各群のラットをエーテル麻酔後、生理的食塩水及び２％パラフォルムアルデヒド／０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）にて灌流固定を行った。その後、脳を摘出し、１０％緩衝ホルマリンにて後固定した後、常法にしたがって脱水、包埋を行った。ミクロトームによる薄切の後、スライドグラスに伸展させ、１％過ヨウ素液、更にシッフ液に反応させ、亜硫酸水にて発色させ、ヘマトキシリンにて対象染色を行い、間藤細胞に含まれる紅色〜赤紫色のＰＡＳ陽性物質を検出した。その結果を図１に示す。
【００３２】
図１から、対照群においては、比較的少数のＰＡＳ陽性顆粒と大型のＰＡＳ陰性の顆粒が検出され、試験群においては、ＰＡＳ陽性の中〜小型顆粒に富み少数の大型顆粒が弱陽性となっていることが分かる。この所見は、対照群において間藤細胞の変性がより進み、大型の顆粒のＰＡＳ反応性が低下し、残存した小〜中型の顆粒のみがＰＡＳ反応を残しているためであると推察され、後述する電子顕微鏡による形態の所見とよく一致していた。
【００３３】
また、高度に変性が進むと間藤細胞はＰＡＳ反応性を失い、また一部の細胞は萎縮すると推定されており、組織標本においてＰＡＳ反応による細胞の検出が困難になる。したがって、対照群と試験群の脳標本において、強いＰＡＳ反応によって検出される間藤細胞の数は、同標本における間藤細胞の活性を反映していると考えられる。ＰＡＳ反応によって検出された間藤細胞の数を表１に示す。
【００３４】
【表１】
2005008606.tif 000002
【００３５】
表１から、対照群に比べて試験群の方が、強いＰＡＳ反応を示した間藤細胞の残存数が多く、試験群のラットの脳の老化が抑制されていることが分かる。
【００３６】
・酸性ホスファターゼ（ＡＣＰ）染色（実験組織化学（丸善株式会社）参照）
この染色法によれば、間藤細胞内の顆粒（ライソゾーム）内に存在する主要な酵素の一種と考えられる酸性ホスファターゼ（ＡＣＰ）が、その活性に応じて濃淡に染色される。間藤細胞は加齢に伴いその変性（老化）が進むと、同酵素の活性が低下することが知られている。
【００３７】
各群のラットをエーテル麻酔後、生理的食塩水にて灌流固定した後、断頭して脳を摘出した。大脳皮質を細片に切り出した後、ストレッチ標本を作製し、更にパラフォルムアルデヒドガス（４２℃、５分）にてガス固定を行った。固定後、下記表２に示す反応液（Ｇｏｍｏｒｉ法）に３０分浸漬した後、１％黄色硫化アンモニウム液による発色を行い、間藤細胞の酸性ホスファターゼ（ＡＣＰ）活性を検出した。その結果を図２に示す。
【００３８】
【表２】
2005008606.tif 000003
【００３９】
図２から、試験群の間藤細胞の酸性ホスファターゼ（ＡＣＰ）活性は、対照群に比べて高いことが分かり、加齢による酸性ホスファターゼ（ＡＣＰ）の活性低下が抑制されていることが分かる。
【００４０】
・ズダン黒Ｂ染色（新染色法のすべて（医歯薬出版株式会社）参照）
この染色法によれば、成長に伴い、間藤細胞内の顆粒（ライソゾーム）に含まれる脂質（複合脂質）が黒色に染色されるが、更に加齢が進み、間藤細胞の変性（老化）が進むと、顆粒の空胞化が進み、染色性が悪くなることが知られている。
【００４１】
各群のラットをエーテル麻酔後、生理的食塩水にて灌流固定した後、断頭して脳を摘出した。大脳皮質を細片に切り出した後、ストレッチ標本を作製し、更にパラフォルムアルデヒドガス（４２℃、５分）にてガス固定を行った。固定後、７０％エタノール液に溶解したズダン黒Ｂ染色液に６０分浸漬した後、７０％エタノール液で分別し、間藤細胞内の脂肪成分を検出した。その結果を図３に示す。
【００４２】
図３から、試験群は、対照群に比べて間藤細胞内の顆粒にズダン黒Ｂの染色性がより残存していることが分かり、試験群において、間藤細胞の脂質（複合脂質）の摂取能がより残存していること、及び酸化脂質の少ないことが示された。
【００４３】
・電子顕微鏡による観察（電子顕微鏡の試料作製法（ニュー・サイエンス社）参照）
各群のラットをエーテル麻酔後、生理的食塩水及び２％パラフォルムアルデヒド／０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）にて灌流固定を行った。その後、脳を摘出し、２．５％パラフォルムアルデヒド／２％グルタールアルデヒド／０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）にて固定し、更に１％オスミウム固定液にて後固定を行った後、アルコール系列により脱水し、エポン８１２に包埋した。そして、ウルトラミクロトームで超薄切片にした後、酢酸ウランと水酸化鉛により二重染色し、透過型電子顕微鏡で観察した。その結果を図４に示す。
【００４４】
図４から、対照群は、試験群に比べてライソゾームの大型化と内部の蜂の巣状化、更に細胞の膨化が進んでいることが分かる。その結果、試験群に比べて対照群においては、脳血管についても、間藤細胞より内側の細胞群（内皮細胞、平滑筋細胞等）を血管内腔へ圧迫し血管腔を狭くする傾向が認められ、更に、内皮細胞表面の凹凸がより著明で、内皮細胞の外側に位置する基底膜を含む細胞間隙がより拡大していることが分かる。細胞間隙の拡大は、血管壁の浮腫傾向を示すものである。
【００４５】
以上の所見から、試験群においては、間藤細胞ばかりでなく、脳の血管を構成する他の細胞・構造（内皮細胞等）においても、老化に伴う形態的変化がより軽微であることが示唆された。
【００４６】
更に、ライソゾーム顆粒が空胞化した場合には、前述のＡＣＰ反応が陰性化するため、その部分は酵素活性が極めて低下する。そのため本実験に於いてはライソゾーム顆粒内の空胞の部分と黒染部分との比率を測定してみた。具体的には、この電子顕微鏡で観察される多数の間藤細胞の画像から、その細胞内に含まれるライソゾーム全体に占める、蜂の巣（空胞化）した部分の割合を、空胞化率（％）として画像解析から算出して、その平均を求めた。その結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】
2005008606.tif 000004
【００４８】
表３から、試験群は、対照群に比べて、空胞化率が低く、ライソゾームの変性が抑制されていることが分かる。
【００４９】
【発明の効果】
以上説明したように本発明の老化抑制剤によれば、食品として長年利用されているココア及び／又はカカオマスを有効成分として含有するので、長期間服用しても副作用の心配がなく、脳組織に存在する「間藤細胞」の変性（萎縮）を抑制することができ、脳老廃物を処理すると共に、脳循環を維持し、老化に伴う痴呆症やその他病的障害等の予防効果が期待できる。また、ココアやカカオマスは栄養的に優れた素材であるので栄養補給効果や、ココアやカカオマスの有する他の生理活性効果も同時に期待することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】脳組織のＰＡＳ染色の結果を示す図である。
【図２】脳組織の酸性ホスファアーゼ染色の結果を示す図である。
【図３】脳組織のズダン黒Ｂ染色の結果を示す図である。
【図４】脳組織の透過型電子顕微鏡による観察結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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