(57)【要約】  本発明は、天然医薬品及び薬剤化学の分野に属するものであり、特に式（Ｉ）の新規な２−アミノ化メチレン若しくは２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩、これらの化合物の調製方法、そのような化合物を含有する組成物の調製方法、及び抗腫瘍医薬品の調製におけるそれらの使用に関する。Ｘが窒素である場合、式Ｉは２−アミノ化メチレンタンシノンＩを表し、Ｘが酸素である場合、式Ｉは２−エステル化メチレンタンシノンＩを表す。    【化１】2015500801.tif 000078
2015500801.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体
【化１】
2015500801.tif 000063
（式中、Ｘは窒素又は酸素であり；
Ｘが窒素であり、Ｙが（Ｒ１  Ｒ２）である場合、式（Ｉ）の化合物は式Ｉ−１の２−アミノ化メチレンタンシノンＩであり；Ｘが酸素であり、Ｙが−（ＣＯ）Ｒである場合、式（Ｉ）の化合物は式Ｉ−２の２−エステル化メチレンタンシノンＩであり、
【化２】
2015500801.tif 000064
式中、Ｒ、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ、置換若しくは非置換のＣ１−Ｃ１８アルキル、置換若しくは非置換のＣ２−Ｃ１８アルケニル又はアルキニル、置換若しくは非置換のＣ３−Ｃ７シクロアルキル又はシクロアルケニル、置換若しくは非置換のアリール及び置換若しくは非置換のヘテロアリール又はヘテロシクリルからなる群から選択される；又はＲ１及びＲ２は、それらが結合している炭素原子と一緒になって非芳香族窒素含有ヘテロシクリル又は窒素含有ヘテロアリールを形成する；上記置換基のそれぞれは、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、ヒドロキシル、チオール、カルボキシル、Ｃ１−Ｃ６置換アミノ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ及びＣ１−Ｃ６アルキルチオからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で置換されていてもよい）
又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
Ｘが窒素である、請求項１に記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
Ｒ１がＨ、メチル又はエチルであり；
Ｒ２が、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキルカルボニルオキシ、シクロアルキルカルボニルオキシ、ヘテロシクリルカルボニルオキシ、アミノ−酸エステル基（アミノは、Ｃ１−Ｃ６アルコキシカルボニルで置換されていてもよい）、及び、炭素−炭素二重結合を含有していてもよいＣ２−Ｃ８ジカルボン酸エステル基（その中の１つのカルボキシルがＣ１−Ｃ６アルキルでエステル化されていてもよい）からなる群から選択される置換基で置換されたＣ１−Ｃ３アルキルである、
請求項１に記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
Ｒ１がＨ又はメチルであり；Ｒ２が置換基で置換されたエチルである、請求項３に記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項５】
置換基が、ヒドロキシル、アセトキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、イソブチリルオキシ、バレリルオキシ、イソバレリルオキシ、ｔｅｒｔ−バレリルオキシ、ピペリジルカルボニルオキシ、ピペラジニルカルボニルオキシ、モルホリニルカルボニルオキシ、ピロリジルカルボニルオキシ、イミダゾリジニルカルボニルオキシ、グリシンエステル基、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルグリシンエステル基、バリンエステル基、グルタミン酸エステル基、リシンエステル基、マロン酸モノエステル基、コハク酸モノエステル基、マレイン酸モノエステル基、メチルマレイン酸エステル基、グルタル酸モノエステル基、アジピン酸モノエステル基及びピメリン酸モノエステル基からなる群から選択される、請求項３又は４に記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項６】
フェニル環上でハロゲンで置換されていてもよいベンジルによって四級化されている、請求項２に記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
Ｘが酸素又は硫黄であり、Ｒが、ヒドロキシル若しくはハロゲンで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル、又はヒドロキシル若しくはハロゲンで置換されていてもよいアリール若しくはヘテロアリールである、請求項１に記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項８】
以下の化合物
【化３】
2015500801.tif 000065
２−（Ｎ−メチルベンジルアミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000066
２−（Ｎ−メチルエチルアミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000067
２−（Ｎ−メチルエタノールアミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000068
２−（Ｎ−メチル−アセトキシエチル−アミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000069
２−（Ｎ−メチル−ｔ−ブチリルオキシエチル−アミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000070
２−（（Ｎ−メチル−（４−ピペリジルカルボニル）オキシエチル−アミノ））メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000071
２−（エタノールアミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000072
２−（Ｎ−メチル−Ｌ−バリルオキシエチル−アミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000073
２−（Ｎ−メチル−Ｂｏｃ−グリシルオキシエチル−アミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000074
２−（Ｎ−メチル−モノスクシニルオキシエチル−アミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000075
２−（Ｎ−メチルＮ−（メトキシカルボニルアクリロキシエチル）−アミノ）メチル−タンシノンＩ
からなる群から選択される、請求項１に記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項９】
式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、
【化４】
2015500801.tif 000076
最初にタンシノンＩ（ＴＡ）にクロロメチル化を施して２−クロロメチルタンシノンＩ中間体を生成するステップ；次いで得られた２−クロロメチルタンシノンＩをアルカリの存在下で対応する有機アミンと反応させて式（Ｉ−１）の２−アミノ化メチレンタンシノンＩ（Ｒ１及びＲ２は請求項１〜８のいずれかに記載の式（Ｉ−１）において定義される通りである）を生成するステップ；及び、任意で、得られた化合物に誘導体化をさらに施して他の式（Ｉ）の化合物を生成するステップ、を含む方法、又は
【化５】
2015500801.tif 000077
最初にタンシノンＩ（ＴＡ）にヒドロキシメチル化を施して２−ヒドロキシメチルタンシノンＩ中間体を生成するステップ；次いで得られた２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをアルカリの存在下で対応する有機アシルクロリド又は酸無水物と反応させて式（Ｉ−２）の２−エステル化メチレンタンシノンＩ（Ｒは請求項１〜８のいずれかに記載の式（Ｉ−２）において定義される通りである）を生成するステップ；及び、任意で、得られた化合物に誘導体化をさらに施して他の式（Ｉ）の化合物を生成するステップ、を含む方法。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれかに記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩を含み、任意で薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１１】
抗腫瘍性医薬の製造における、請求項１〜８のいずれかに記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれかに記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、腫瘍に罹患している前記対象を治療する方法。
【請求項１３】
抗腫瘍剤として使用するための、請求項１〜８のいずれかに記載のタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項１４】
腫瘍が、白血病、多発性骨髄腫、リンパ腫、肝臓がん、胃がん、乳がん、胆管細胞癌、膵臓がん、肺がん、結腸直腸がん、骨肉腫、ヒト子宮頸がん、神経膠腫、鼻咽腔癌、喉頭癌、食道がん、中耳腫瘍、黒色腫及び前立腺がんから選択される、それぞれ請求項１１、１２又は１３に記載の使用、方法又はタンシノンＩ誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然医薬品及び薬剤化学の分野に属するものであり、新規なタンシノン誘導体、特に２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体に関し、これらの化合物の調製方法、そのような化合物を含有する組成物及び抗悪性腫瘍医薬の調製におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンシンキノンＩとしても公知のタンシノンＩは、１，６−ジメチル−フェナントレノ［１，２−ｂ］フラン−１０，１１−ジケトンの化学式を有しており、シソ科植物であるタンジン（Salvia miltiorrhiza Bge）の根及び茎から抽出される。タンシノンＩは様々な薬理効果及び広範な臨床用途を有している。これは、冠状動脈性心臓疾患、アンギナ、心筋梗塞症、ウイルス性心筋炎、心不整脈、脳血管疾患、脳虚血、脳血栓症、脳梗塞、肝炎、腫瘍、高血圧症及び他の疾患を処置するために使用することができる。したがって、科学者によって、以下のタンシノン誘導体に関する数多くの研究が行われている。
【０００３】
【化１】
2015500801.tif 000003
2015500801.tif 000004
2015500801.tif 000005
2015500801.tif 000006
2015500801.tif 000007
2015500801.tif 000008
【０００４】
タンシノンＩは水に対する溶解度が低く、そのためインビボにおける生物学的利用能が低い。したがって、科学者により、タンシノンＩの薬効が増大するようにその水溶性及び生物学的利用能を改善するために、タンシノンＩの構造を改変する試みがなされている（中国特許出願公開第１８３７１９９号明細書（QIN Yinlin, Tanshinone I derivatives and applications thereof in pharmaceuticals, 2006）；中国特許出願公開第１８３７２００号明細書（QIN Yinlin, Tanshinone I derivatives and applications thereof in pharmaceuticals, 2006）；中国特許出願公開第１０１０１２２７０号明細書（DU Zhiyun et al., Tanshinone derivatives and applications thereof in the preparation of a medicament for aldose reductase inhibitors, 2007））。
【０００５】
タンシノンＩはある特定の抗腫瘍効果を有している。インビトロ及びインビボでの実験におけるＨｅｐ  Ｇ２細胞の種々の指標に対するタンシノンＩの効果を観察することによって、それが抗腫瘍効果を有するかどうかを全般的に判断することができると報告されている。インビトロでの実験による結果は、タンシノンＩがＨｅｐ  Ｇ２細胞の増殖を阻害できることを示している。さらに、腫瘍を担持するヌードマウスについて実施された腫瘍阻害実験による結果は、タンシノンＩがマウスにおける腫瘍成長を阻害できることを示している。すなわち、タンシノンＩはインビボでも抗腫瘍効果を有する（ZHENG Guocan, LI Zhiying, Study on the inhibiting effect of Tanshinone I on HepG2 cell line in vitro, Modern Medical Journal, 2004, 32 (15):296-298；ZHENG Guocan, LI Zhiying, Study on the anti-tumor effect and mechanism of tanshinone I, Journal of Practical Oncology, 2005, 20 (1):33-35）。
【０００６】
さらに、いくつかの研究は、ＳＧＣ−７９０１胃腺癌細胞のインビトロでの増殖及びアポトーシスに対するタンシノンＩの効果を報告している。実験により、タンシノンＩは、インビトロで培養されたＳＧＣ−７９０１ヒト胃腺癌細胞の成長に対して著しい阻害効果を有しており、細胞成長の阻害は、ある特定の範囲でタンシノンＩの濃度に依存することが分かっている（ZHOU Xiaoli et al., The effect of Tanshinone I on proliferation and apoptosis of human gastric adenocarcinoma cell line SGC-7901, Journal of Modern Oncology, 2011, 19 (3):423-427）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】中国特許出願公開第１８３７１９９号明細書
【特許文献２】中国特許出願公開第１８３７２００号明細書
【特許文献３】中国特許出願公開第１０１０１２２７０号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】ZHENG Guocan, LI Zhiying, Study on the inhibiting effect of Tanshinone I on HepG2 cell line in vitro, Modern Medical Journal, 2004, 32 (15):296-298
【非特許文献２】ZHENG Guocan, LI Zhiying, Study on the anti-tumor effect and mechanism of tanshinone I, Journal of Practical Oncology, 2005, 20 (1):33-35
【非特許文献３】ZHOU Xiaoli et al., The effect of Tanshinone I on proliferation and apoptosis of human gastric adenocarcinoma cell line SGC-7901, Journal of Modern Oncology, 2011, 19 (3):423-427
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
タンシノンＩの構造的改変及び生物活性に関する数多くの研究にも関わらず、良好な水溶性、低い毒性及び優れた生物活性を有する抗腫瘍性タンシノン化合物の合成及び応用についての報告はいまだ見られない。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の１つの目的は、式（Ｉ）を特徴とする新規なタンシノンＩ誘導体
【００１１】
【化２】
2015500801.tif 000009
【００１２】
（式中、Ｘは窒素又は酸素であり；
Ｘが窒素であり、Ｙが（Ｒ１  Ｒ２）である場合、式Ｉ−１の２−アミノ化メチレンタンシノンＩである式（Ｉ）の化合物をもたらし；Ｘが酸素であり、Ｙが−（ＣＯ）Ｒである場合、式Ｉ−２の２−エステル化メチレンタンシノンＩである式（Ｉ）の化合物をもたらし、
【００１３】
【化３】
2015500801.tif 000010
【００１４】
式中、Ｒ、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ、置換若しくは非置換のＣ１−Ｃ１８アルキル、置換若しくは非置換のＣ２−Ｃ１８アルケニル又はアルキニル、置換若しくは非置換のＣ３−Ｃ７シクロアルキル又はシクロアルケニル、置換若しくは非置換のアリール及び置換若しくは非置換のヘテロアリール又はヘテロシクリルからなる群から選択される、又はＲ１及びＲ２は、それらが結合している炭素原子と一緒になって非芳香族窒素含有ヘテロシクリル又は窒素含有ヘテロアリールを形成する；
上記置換基のそれぞれは、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、ヒドロキシル、チオール、カルボキシル、Ｃ１−Ｃ６置換アミノ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ及びＣ１−Ｃ６アルキルチオからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で置換されている）
又は薬学的に許容されるその塩を提供することである。
【００１５】
本発明の第２の目的は、本発明の式（Ｉ）の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体を調製するための方法を提供することである。
【００１６】
【化４】
2015500801.tif 000011
【００１７】
本発明の式（Ｉ−１）の２−アミノ化メチレンタンシノンＩ誘導体は、上記した２段階反応で調製することができ、最初に、タンシノンＩ（ＴＡ）にクロロメチル化を施して２−クロロメチレンタンシノンＩ中間体を生成するステップ；次いで、得られた２−クロロメチレンタンシノンＩをアルカリの存在下で対応する有機アミンと反応させて式（Ｉ−１）の２−アミノ化メチレンタンシノンＩ（Ｒ１及びＲ２は式（Ｉ）について上記に定義した通りである）を生成するステップ；及び、任意で、得られた化合物に誘導体化をさらに施して他の式（Ｉ）の化合物を生成するステップ、を含む。
【００１８】
【化５】
2015500801.tif 000012
【００１９】
本発明の式（Ｉ−２）の２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体は、上記した２段階反応で調製することができ、最初に、タンシノンＩ（ＴＡ）にヒドロキシメチル化を施して２−ヒドロキシメチルタンシノンＩ中間体を生成するステップ；次いで、得られた２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをアルカリの存在下で対応する有機アシルクロリド又は酸無水物と反応させて式（Ｉ−２）の２−エステル化メチレンタンシノンＩ（Ｒは式（Ｉ）について上記に定義した通りである）を生成するステップ；及び、任意で、得られた化合物に誘導体化をさらに施して他の式（Ｉ）の化合物を生成するステップ、を含む。
【００２０】
本発明の第３の目的は、本発明の化合物を含む医薬組成物であって、少なくとも１つの本発明の化合物を含み、任意で薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供することである。
【００２１】
本発明の第４の目的は、医薬、特に抗腫瘍性医薬の製造における本発明の化合物又はその化合物を含む医薬組成物の使用を提供することである。したがって、本発明は、有効量の少なくとも１つの本発明の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む、腫瘍に罹患している対象を処置する方法を提供する。前記腫瘍は、特に、白血病、多発性骨髄腫、リンパ腫、肝臓がん、胃がん、乳がん、胆管細胞癌、膵臓がん、肺がん、結腸直腸がん、骨肉腫、黒色腫、ヒト子宮頸がん、神経膠腫、鼻咽腔癌、喉頭癌、食道がん、中耳腫瘍、前立腺がんなどから選択される。
【００２２】
本発明は、腫瘍を処置するために使用される本発明の化合物にも関する。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明は、式（Ｉ）の新規な２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体
【００２４】
【化６】
2015500801.tif 000013
【００２５】
（式中、Ｘは窒素又は酸素であり；
Ｘが窒素であり、Ｙが（Ｒ１  Ｒ２）である場合、式（Ｉ）の化合物は式Ｉ−１の２−アミノ化メチレンタンシノンＩであり；Ｘが酸素であり、Ｙが−（ＣＯ）Ｒである場合、式（Ｉ）の化合物は式Ｉ−２の２−エステル化メチレンタンシノンＩであり、
【００２６】
【化７】
2015500801.tif 000014
【００２７】
式中、Ｒ、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ、置換若しくは非置換のＣ１−Ｃ１８アルキル、置換若しくは非置換のＣ２−Ｃ１８アルケニル又はアルキニル、置換若しくは非置換のＣ３−Ｃ７シクロアルキル又はシクロアルケニル、置換若しくは非置換のアリール及び置換若しくは非置換のヘテロアリール又はヘテロシクリルからなる群から選択される、又はＲ１及びＲ２は、それらが結合している炭素原子と一緒になって非芳香族窒素含有ヘテロシクリル又は窒素含有ヘテロアリールを形成する；上記置換基のそれぞれは、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、ヒドロキシル、チオール、カルボキシル、Ｃ１−Ｃ６置換アミノ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ及びＣ１−Ｃ６アルキルチオからなる群から選択される１つ又は２つ以上の置換基で置換されている）
又は薬学的に許容されるその塩に関する。
【００２８】
本発明の好ましい実施形態によれば、Ｘは窒素である。
【００２９】
本発明の別の好ましい実施形態によれば、Ｒ１はＨ、メチル又はエチルであり；Ｒ２は、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキルカルボニルオキシ、シクロアルキルカルボニルオキシ、ヘテロシクリルカルボニルオキシ、アミノ−酸エステル基（アミノは、Ｃ１−Ｃ６アルコキシカルボニル置換されていてもよい）、及び、炭素−炭素二重結合を含有していてもよいＣ２−Ｃ８ジカルボン酸エステル基（その中の１つのカルボキシルがＣ１−Ｃ６アルキルでエステル化されていてもよい）からなる群から選択される置換基で置換されたＣ１−Ｃ３アルキルである。
【００３０】
本発明の好ましい実施形態によれば、Ｒ１はＨ又はメチルであり；Ｒ２は前記置換基で置換されたエチルである。
【００３１】
本発明の別の好ましい実施形態によれば、前記置換基は、ヒドロキシル、アセトキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、イソブチリルオキシ、バレリルオキシ、イソバレリルオキシ、ｔｅｒｔ−バレリルオキシ、ピペリジルカルボニルオキシ、ピペラジニルカルボニルオキシ、モルホリニルカルボニルオキシ、ピロリジルカルボニルオキシ、イミダゾリジニルカルボニルオキシ、グリシンエステル基、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルグリシンエステル基、バリンエステル基、グルタミン酸エステル基、リシンエステル基、マロン酸モノエステル基、コハク酸モノエステル基、マレイン酸モノエステル基、メチルマレイン酸エステル基、グルタル酸モノエステル基、アジピン酸モノエステル基及びピメリン酸モノエステル基からなる群から選択される。
【００３２】
本発明の好ましい実施形態によれば、２−アミノ化メチレンタンシノンＩは、フェニル環上でハロゲンで置換されていてもよいベンジルによって四級化されている。
【００３３】
本発明の好ましい実施形態によれば、Ｘは酸素又は硫黄であり、Ｒは、ヒドロキシル若しくはハロゲンで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル、又はヒドロキシル若しくはハロゲンで置換されていてもよいアリール若しくはヘテロアリールである。
【００３４】
本発明によるいくつかの好ましい２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体を以下の通り示す。これらの例は、本発明をさらに例示しようとするためだけのものであり、本発明の範囲のいかなる限定もしようとするものではない。
【００３５】
【化８】
2015500801.tif 000015
2015500801.tif 000016
2015500801.tif 000017
2015500801.tif 000018
2015500801.tif 000019
2015500801.tif 000020
2015500801.tif 000021
2015500801.tif 000022
2015500801.tif 000023
2015500801.tif 000024
【００３６】
上記化合物についてのいくつかのデータを以下の表に列挙する：
【００３７】
【表１】
2015500801.tif 000025
2015500801.tif 000026
【００３８】
本発明の別の実施形態によれば、式（Ｉ）の以下の化合物が特に好ましい：
【００３９】
【化９】
2015500801.tif 000027
２−（Ｎ−メチルベンジルアミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000028
２−（Ｎ−メチルエチルアミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000029
２−（Ｎ−メチルエタノールアミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000030
２−（Ｎ−メチル−アセトキシエチル−アミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000031
２−（Ｎ−メチル−ｔ−ブチリルオキシエチル−アミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000032
２−（（Ｎ−メチル−（４−ピペリジルカルボニル）オキシエチル−アミノ））メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000033
２−（エタノールアミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000034
２−（Ｎ−メチル−Ｌ−バリルオキシエチルアミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000035
２−（Ｎ−メチル−Ｂｏｃ−グリシルオキシエチル−アミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000036
２−（Ｎ−メチル−モノスクシニルオキシエチル−アミノ）メチル−タンシノンＩ
2015500801.tif 000037
２−（Ｎ−メチルＮ−（メトキシカルボニルアクリロキシエチル）−アミノ）メチル−タンシノンＩ。
【００４０】
本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体は、抗腫瘍活性を有する。タンシノンＩそれ自体と比較して、本発明の好ましい化合物は数倍、さらには数十倍改善された高い抗腫瘍活性を有する。
【００４１】
本明細書で用いる「アルキル」という用語は、指定された数の炭素原子を含有する直鎖状又は分岐状炭化水素ラジカルを指す。アルキルは、１〜１８個の炭素原子、例えば１〜１２個、１〜１０個、１〜８個、１〜６個、１〜５個、１〜４個又は１〜３個の炭素原子を含むことができる。アルキルの例には、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル及びｎ−オクタデシルが含まれる。
【００４２】
「アルケニル」という用語は、指定された数の炭素原子を含有する直鎖状又は分岐状アルケニルを指す。アルケニルは、２〜１８個の炭素原子、例えば２〜１２個、２〜１０個、２〜８個、２〜６個、２〜５個、２〜４個又は２〜３個の炭素原子を含むことができる。アルケニルの例には、これらに限定されないが、ビニル、アリル及びオクタデセニルが含まれる。
【００４３】
「Ｃ１−Ｃ１８アルキルアシル」という用語は、１〜１８個の炭素原子を含有する直鎖状又は分岐状アルキルアシルを指す。Ｃ１−Ｃ１８アルキルアシルの例には、これらに限定されないが、アセチル及びブチリルが含まれる。
【００４４】
「Ｃ１−Ｃ１８アルコキシカルボニル」という用語は、１〜１８個の炭素原子を含有する直鎖状又は分岐状アルコキシカルボニルを指す。Ｃ１−Ｃ１８アルコキシカルボニルの例には、これらに限定されないが、メトキシカルボニル及びｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルが含まれる。
【００４５】
「Ｃ１−Ｃ１８アルキルチオカルボニル」という用語は、１〜１８個の炭素原子を含有する直鎖状又は分岐状アルキルチオカルボニルを指す。Ｃ１−Ｃ１８アルキルチオカルボニルの例には、これらに限定されないが、メチルチオカルボニル及びエチルチオカルボニルが含まれる。
【００４６】
「Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル又はシクロアルケニル」という用語は、飽和又は不飽和の３〜７員単環式炭化水素ラジカルを指す。Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル又はシクロアルケニルはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロプロペニル及びシクロヘキセニルであってもよい。
【００４７】
「アリール」という用語は、縮合した又は縮合していない６〜１４個（６〜１２個及び６〜１０個など）の炭素原子を含有する単環式アリール又は多環式アリールを指す。多環式アリールの場合、少なくとも１つの環は芳香族である。アリールは、ヘテロシクリルと縮合したものであってもよい。アリールの例には、フェニル、ビフェニル、ナフチル、５，６，７，８−テトラヒドロナフチル、２，３−ジヒドロベンゾフラニルなどが含まれる。
【００４８】
「ヘテロアリール」という用語は、環原子としてその環中に１〜４個のヘテロ原子（例えば、１、２、３又は４個のヘテロ原子）を有する芳香族環基を指す。ヘテロ原子は窒素、酸素又は硫黄を指す。ヘテロアリールは、５〜７個の環原子を有する単環式ヘテロアリール又は７〜１１個の環原子を有する二環式ヘテロアリールであってもよい。前記二環式ヘテロアリールは少なくとも１つの芳香族複素環を含むべきであり、他方は、ヘテロ原子を含む又は含まない芳香族又は非芳香族であってもよい。ヘテロアリールの例には、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、ピリジル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、イソオキサゾリル、インドリルなどが含まれる。
【００４９】
「窒素含有ヘテロアリール」という用語は、環員として少なくとも１個の窒素原子を有する上記に定義した「ヘテロアリール」を指す。
【００５０】
「ヘテロシクリル」という用語は、環員として１〜４個のヘテロ原子（例えば、１、２、３又は４個のヘテロ原子）を含有する非芳香族環状基を指す。ヘテロ原子は窒素、酸素又は硫黄を指す。ヘテロシクリルは、４〜８個の環原子（４〜７員環、５〜７員環、５〜６員環など）を有する単環式ヘテロシクリル又は７〜１１個の環原子を有する二環式ヘテロシクリルであってもよい。ヘテロシクリルは芳香族であっても非芳香族であってもよい。ヘテロシクリルの例には、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、ピペラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチエニルなどが含まれる。
【００５１】
「窒素含有ヘテロシクリル」という用語は、環員として少なくとも１個の窒素原子を有する、上記に定義した「ヘテロシクリル」を指す。
【００５２】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を指す。
【００５３】
「アルキル置換アミノ」という用語は−Ｎ−アルキルを指す。
【００５４】
「アルコキシ」という用語は−Ｏ−アルキルを指す。
【００５５】
「アルキルチオ」という用語は−Ｓ−アルキルを指す。
【００５６】
「アミノ−酸エステル基」という用語は、アミノ酸のカルボキシル基から水素原子を除去した後の基を指す。
【００５７】
「アミノ酸」という用語は、カルボキシルのα−炭素原子上にアミノ基を有する有機小分子の基、好ましくは天然由来のＬ−アミノ酸又はそれらの対応するＤ−異性体を指す。天然由来のアミノ酸の例には、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸及びグルタミン酸等が含まれる。
【００５８】
本明細書で用いる「式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩」という用語は、薬学的に許容されるアニオンを含む有機酸によって形成される有機酸塩で例示することができる。これらの有機酸塩には、これらに限定されないが、トシル酸塩、メタンスルホン酸塩、リンゴ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、乳酸塩、α−ケトグルタル酸塩及びα−グリセロリン酸塩が含まれる。これらに限定されないが、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、重炭酸塩及び炭酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などを含む適切な無機塩も形成させることができる。
【００５９】
薬学的に許容される塩は、例えば、十分量のアルカリ化合物を薬学的に許容されるアニオンを提供する適切な酸と反応させることによって、当業界で周知の標準的な手順を用いて得ることができる。
【００６０】
本明細書で用いる「処置（treatment）」、「処置する（treating）」、「処置する（treat）」などの用語は一般に、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを指す。この効果は、その疾患又は症状を完全に又は部分的に防止するという観点で予防的であってよく、及び／又は疾患及び／又はその疾患によって引き起こされる悪影響を部分的に又は完全に安定化させる又は治癒させるという観点で治療的であってもよい。本明細書で用いる「処置」は：（ａ）疾患又は症状にかかり易いが、まだそれにかかっていると診断されてはいない対象において疾患又は症状の発現を防止すること；（ｂ）疾患の症状を阻害する、すなわちその増悪を停止させること；又は（ｃ）疾患の症状を取り除く、すなわち、疾患又は症状の退行を引き起こすことを含む、対象における疾患のあらゆる処置を包含する。
【００６１】
本発明の化合物は、従来の有機化学合成方法によって調製することができる。例えば、本発明の式（Ｉ）の化合物は以下のようにして調製することができる：
【００６２】
【化１０】
2015500801.tif 000038
【００６３】
本発明の式（Ｉ−１）の２−アミノ化メチレンタンシノンＩ誘導体は、上記した２段階反応で調製することができ、最初に、タンシノンＩ（ＴＡ）にクロロメチル化を施して２−クロロメチレンタンシノンＩ中間体を生成するステップ；次いで、得られた２−クロロメチレンタンシノンＩをアルカリの存在下で対応する有機アミンと反応させて式（Ｉ−１）の２−アミノ化メチレンタンシノンＩ（Ｒ１及びＲ２は上記式（Ｉ）において定義した通りである）を生成するステップ；及び、任意で、得られた化合物に誘導体化をさらに施して他の式（Ｉ）の化合物を生成するステップ、を含む。
【００６４】
タンシノンＩ（ＴＡ）のクロロメチル化はクロロメチル化のためのブラン反応（Blanc Reaction）と称され、低温又は室温下で一般に実施される。
【００６５】
上記クロロメチル化は一般に、活性なクロロメチル化剤の存在下で実施される。本明細書ではクロロメチル化剤は、これらに限定されないが、パラホルムアルデヒド及び塩酸と塩化亜鉛との混合物（すなわち、慣用的なブラン反応）又はクロロメチルメチルエーテルであってよい。
【００６６】
２−クロロメチレンタンシノンＩのアミノ化は一般に、アルカリの存在下で実施される。本明細書ではアルカリは、これらに限定されないが、炭酸カリウム及びトリエチルアミンであってよい。
【００６７】
２−クロロメチレンタンシノンＩのアミノ化は一般に、低温又は室温下で実施される。反応温度は有機アミンの活性に依存する。
【００６８】
２−クロロメチレンタンシノンＩのアミノ化は一般に、溶媒中で実施される。反応のための溶媒は、これらに限定されないが、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ， dimethyl sulfoxide）等であってよい。
【００６９】
【化１１】
2015500801.tif 000039
【００７０】
上記スキームに示すように、本発明の式（Ｉ−２）の２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体は、２段階反応で調製することができ、最初に、タンシノンＩ（ＴＡ）にヒドロキシメチル化を施して２−ヒドロキシメチルタンシノンＩ中間体を生成するステップ；次いで、得られた２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをアルカリの存在下で対応する有機アシルクロリド又は酸無水物と反応させて式（Ｉ−２）の２−エステル化メチレンタンシノンＩ（Ｒは上記式（Ｉ）について上記に定義した通りである）を生成するステップ；及び、場合によって、得られた化合物に誘導体化をさらに施して他の式（Ｉ）の化合物を生成するステップ、を含む。
【００７１】
溶媒としての酢酸中で、タンシノンＩをクロロメチルメチルエーテルと反応させて２−クロロメチルタンシノンＩと２−ヒドロキシメチルタンシノンＩとの混合物を生成させる。前者を加水分解して後者を生成させることができる。
【００７２】
２−ヒドロキシメチルタンシノンＩのエステル化は一般に、アルカリの存在下で実施される。本明細書ではアルカリは、これらに限定されないが、炭酸カリウム、ジメチルアミノピリジン及びトリエチルアミンであってよい。
【００７３】
２−ヒドロキシメチルタンシノンＩのエステル化は一般に、０℃〜８０℃の温度で実施される。反応温度は有機アシル又は酸無水物の反応性に依存する。
【００７４】
式（Ｉ）の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体の調製は、一般に以下のようにして行われる。
【００７５】
塩酸及び塩化亜鉛の存在下で、抽出及び分離により得られた天然由来のタンシノンＩ並びにホルムアルデヒドに、クロロメチル化のためのブラン反応を施して２−クロロメチルタンシノンＩを生成する。クロロメチル化のためのブラン反応は一般に、古典的で成熟した操作手順（C. C. Price, Org. React. 3, 1(1946)）にしたがって、低温又は室温下で実施される。
【００７６】
２−クロロメチルタンシノンＩに加水分解を施して対応する２−ヒドロキシメチルタンシノンＩを生成させる。
【００７７】
タンシノンＩを酢酸溶液中、室温でクロロメチルメチルエーテルと反応させて２−ヒドロキシメチルタンシノンＩと２−クロロメチルタンシノンＩとの赤色の固体混合物を生成させる。後者を加水分解して前者を生成させることができる。
【００７８】
得られた２−ヒドロキシメチルタンシノンＩを、トリエチルアミン及びジメチルアミノピリジンの存在下で対応する有機アシルクロリドと反応させて２−エステル化メチレンタンシノンＩを生成させる。或いは、２−クロロメチルタンシノンＩ及び対応する有機酸ナトリウム塩を、有機溶媒中、加熱下、アルカリの存在下で求核置換して２−エステル化メチレンタンシノンＩを生成させることもできる。反応が終了したら、得られた生成物を有機溶媒で抽出し、水及び飽和食塩水で洗浄し、乾燥し濃縮して粗生成物を得る。次いでこれをシリカゲルカラム又はＨＰＬＣにより分離して純粋な生成物を得る。
【００７９】
得られた２−クロロメチルタンシノンＩを、アルカリの存在下、室温で、対応する有機アミンと反応させて２−アミノ化メチレンタンシノンＩを生成させることもできる。反応が終了したら、得られた生成物を有機溶媒で抽出し、水及び飽和食塩水で洗浄し、乾燥し濃縮して粗生成物を得る。次いでこれをシリカゲルカラム又はＨＰＬＣにより分離して純粋な生成物を得る。
【００８０】
本発明を実施するために従来の化学的変換方法を用いることができる。当業者は、これらの化学的変換のための適切な化学薬品、溶媒、保護基及び反応条件を決定することができる。関連情報は、例えば、R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rdEd., John Wiley and Sons (1999); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)及びその後続の版に記載されている。
【００８１】
保護基は、活性部分（例えば、ヒドロキシル又はアミノ基）に結合すると、その部分が後続の反応において影響を受けることを防止し、その反応後、従来の方法によって取り外すことができる基を指す。ヒドロキシル保護基の例には、これらに限定されないが、アルキル、ベンジル、アリル、トリチル（トリフェニルメチルとしても公知である）、アシル（例えば、ベンゾイル、アセチル又はＨＯＯＣ−Ｘ”−ＣＯ−（Ｘ”はアルキリデン、アルケニレン、シクロアルキレン又はアリーレンである））、シリル（例えば、トリメチルシリル、トリエチルシリル及びｔ−ブチルジメチルシリル）、アルコキシルカルボニル、アミノカルボニル（例えば、ジメチルアミノカルボニル、メチルエチルアミノカルボニル及びフェニルアミノカルボニル）、アルコキシメチル、ベンジルオキシメチル及びアルキルメルカプトメチルが含まれる。アミノ保護基の例には、これらに限定されないが、アルコキシカルボニル、アルカノイル、アリールオキシカルボニル、アリール置換アルキルなどが含まれる。ヒドロキシル及びアミノ保護基はT.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd. Ed., John Wiley and Sons (1991)において論じられている。すべてのヒドロキシル及びアミノ保護基は、反応後に従来の方法で取り外すことができる。
【００８２】
特に、本発明の式（Ｉ）の好ましい化合物の中で、ＢＳ−ＴＡ−Ａ０１及びＢＳ−ＴＡ−Ａ０３は、出発原料として抽出され分離された天然由来のタンシノンＩ（ＴＡ）を用いて、ヒドロキシメチル化及びエステル化により調製される。
【００８３】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０３、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０５、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０６、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０７、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０８、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０９、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１０、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１１、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１２、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１３、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１４、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１６、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１８、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ２１、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ２２及びＢＳ−ＴＡ−６５は、出発原料として抽出され分離された天然由来のタンシノンＩ（ＴＡ）を用いて、クロロメチル化及びアミノ化により調製される。
【００８４】
ＢＳ−ＴＡ−５０及びＢＳ−ＴＡ−６０は、出発原料としてのＢＳ−ＴＡ−０３の四級化により得られる。
【００８５】
ＢＳ−ＴＡ−６１、ＢＳ−ＴＡ−６２及びＢＳ−ＴＡ−６３は、出発原料としてのＢＳ−ＴＡ−１７のエステル化により得られる。
【００８６】
ＢＳ−ＴＡ−６４、ＢＳ−ＴＡ−７１、ＢＳ−ＴＡ−７２及びＢＳ−ＴＡ−７４は、出発原料としてのＢＳ−ＴＡ−１７のエステル化、続く保護基の除去によって得られる。
【００８７】
ＢＳ−ＴＡ−７３は、出発原料としてのＢＳ−ＴＡ−１７のエステル化により得られる。
【００８８】
ＢＳ−ＴＡ−７９は、出発原料としてのＢＳ−ＴＡ−６５のＣｂｚ−誘導体化及びエステル化、続くＣｂｚの除去によって得られる。
【００８９】
ＢＳ−ＴＡ−８０は、出発原料としてのＢＳ−ＴＡ−６５のアミド化により得られる。
【００９０】
ＢＳ−ＴＡ−８１は、出発原料としてのＢＳ−ＴＡ−６５のアミド化及びエステル化により得られる。
【００９１】
本発明は、本発明の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物も提供する。
【００９２】
本発明は、少なくとも１つの上記で定義した本発明の式（Ｉ）の化合物を含み、任意で薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００９３】
所与の量の活性成分を有する種々の医薬組成物を調製するための方法は公知であるか、又は本開示に照らせば当業者に明らかになる。例えば、その説明は、REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES, Martin, E.W., ed., Mack Publishing Company, 19th ed.(1995)において見ることができる。そのような医薬組成物を調製するための方法は、他の適切な薬剤用の賦形剤、担体、希釈剤等の取り込みを含む。
【００９４】
本発明の医薬製剤は、従来の混合、溶解又は凍結乾燥工程を含む公知の方法で製造される。
【００９５】
本発明の化合物は医薬組成物に処方することができ、これを、選択された投与方式に適した経路、例えば経口又は非経口で（例えば、静脈内、筋肉内、局所又は皮下経路で）いずれの対象にも投与することができる。
【００９６】
したがって、本発明の化合物は、不活性希釈剤又は吸収可能な可食性担体などの薬学的に許容される担体と一緒に全身的に投与する、例えば経口で投与することができる。これらは、硬質又は軟質のゼラチンカプセル中に封入することも、また圧縮して錠剤にすることもできる。治療用経口投与のためには、活性化合物を１又は２以上の賦形剤と一緒にすることができ、それらは、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハーなどの形態をとることができる。そのような組成物又は製剤は少なくとも０．１％の活性化合物を含有するべきである。もちろん、組成物及び製剤中の活性化合物の割合は変えることができ、所与の単位剤形の約１重量％〜約９９重量％であってもよい。治療上有用な組成物において、活性化合物は、有効な投与量レベルが達成されるような量で存在する。
【００９７】
錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などは、トラガカントゴム、アラビアゴム、トウモロコシデンプン又はゼラチンなどの結合剤；リン酸二水素カルシウムなどの賦形剤；トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；及びスクロース、フルクトース、ラクトース若しくはアスパルテームなどの甘味剤；又はペパーミント、冬緑油若しくはチェリーフレーバーなどの香味剤を含むこともできる。単位剤形がカプセル剤である場合、それは、上記材料に加えて、植物油又はポリエチレングリコールなどの液媒体を含むことができる。種々の他の材料がコーティングとして存在してよく、或いは、固体単位剤形の物理的形態を改変することができる。例えば、錠剤、丸剤又はカプセル剤を、ゼラチン、ワックス、シェラック又は糖などでコーティングすることができる。シロップ剤又はエリキシル剤は、活性化合物、スクロース又はフルクトースなどの甘味剤、メチルパラベン又はプロピルパラベンなどの保存剤、染料及び香味剤（チェリー又はオレンジフレーバーなど）を含有することができる。もちろん、単位剤形を調製するのに使用するいずれの材料も、使用される量で薬学的に許容され、実質的に非毒性のものでなければならない。さらに、活性化合物を、持続放出型の製剤又はデバイスに組み込むことができる。
【００９８】
活性化合物は、注入又は注射によって静脈内又は腹腔内に投与することもできる。活性化合物又はその塩の水溶液を調製してもよく、非毒性界面活性剤と混合して調製してもよい。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン若しくはその混合物中又は油中の分散液剤も調製することができる。通常の貯蔵及び使用条件下で、これらの製剤は、微生物の増殖を防止するための保存剤を含有する。
【００９９】
注射又は注入に適した医薬剤形は、滅菌した注射又は注入可能な溶液又は分散液の即時調製のために適合されている、活性要素（リポソーム中にカプセル化されていてもよい）を含む滅菌した水溶液、分散液又は滅菌粉末を含むことができる。すべての場合、最終的剤形は、製造及び貯蔵条件下で滅菌された安定な液剤でなければならない。液状の担体又は媒体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、非毒性グリセリド及び適切なその混合物を含む溶媒又は液体分散媒であってもよい。適切な流動性は、例えば、リポソームの形成、分散液の場合の所要粒径の維持、又は界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の防止は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどの種々の抗菌剤及び抗真菌剤によって達成することができる。多くの場合、糖、緩衝剤又は塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが好ましい。注射可能な組成物の遅延性吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムやゼラチンの組成物の使用によって得ることができる。
【０１００】
注射可能な滅菌溶液は、適切な溶媒中で所要量の活性化合物を上記した種々のさらなる所望成分と合わせ、続いてろ過し殺菌することによって調製される。注射可能な滅菌溶液を調製するために使用される滅菌粉末に好ましい調製方法は、予めろ過された滅菌溶液中に存在する、活性要素と任意のさらなる所望要素の粉末をもたらす真空乾燥及び凍結乾燥技術である。
【０１０１】
有用な固体担体には、タルク、粘土、微結晶性セルロース、シリカ、アルミナなどの微粉化された固体が含まれる。有用な液体担体には、その中に本発明の化合物を、非毒性界面活性剤の助けを得てもよいが、効果的な含量で溶解又は分散させることができる水、エタノール又はエチレングリコール或いは水−エタノール／エチレングリコール混合物が含まれる。所与の用途のために特性が最適化されるように、補助剤（香味剤など）及び追加的な抗微生物剤を加えることができる。
【０１０２】
使用者の皮膚に直接塗布するのに展性のあるペースト剤、ゲル剤、軟膏剤、せっけんなどを形成させるために、増粘剤（合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸の塩及びエステル、脂肪アルコール、変性セルロース又は変性無機材料など）を液体担体と一緒に使用することもできる。
【０１０３】
処置に必要な化合物又は活性なその塩若しくは誘導体の量は、選択された具体的な塩だけでなく、投与経路、処置を受ける状態の性質並びに対象の年齢及び状態によっても変動し、最終的には担当医又は臨床医の裁量で決定されることになる。
【０１０４】
上記処方物は、ヒト又は他の哺乳動物に投与するのに適した単位投薬量を含有する物理的に離散した単位である単位剤形で存在することができる。単位剤形は、１つのカプセル剤又は錠剤であっても、複数のカプセル剤又は錠剤であってもよい。目的とする具体的な治療に応じて、単位剤形中の活性要素の量は、約０．１ｍｇ〜約１，０００ｍｇ又はそれ以上の範囲で変化する又は調整することができる。
【０１０５】
本発明は、医薬、特に抗腫瘍性医薬の製造における、本発明による化合物又は本発明の化合物を含む医薬組成物の使用も提供する。したがって、本発明は、治療有効量の少なくとも１つの本発明の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む、腫瘍に罹患している対象を処置するための方法を提供する。本発明の２−アミノ化メチレン若しくは２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体又は薬学的に許容されるその塩を、例えば白血病、多発性骨髄腫、リンパ腫、肝臓がん、胃がん、乳がん、胆管細胞癌、膵臓がん、肺がん、結腸直腸がん、骨肉腫、黒色腫、子宮頸がん、神経膠腫、鼻咽腔癌、喉頭癌、食道がん、中耳腫瘍、前立腺がんなどの処置のために使用することができる。
【０１０６】
本発明を、以下の実施例によってより詳細に説明することとする。しかし、以下の実施例は例示を目的とするものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものでは全くないことを理解すべきである。
【０１０７】
以下の実施例で使用する原料化学品は、市販されているか、又は当業界で公知の合成方法で調製することができる。
【実施例１】
【０１０８】
化合物ＢＳ−ＴＡ−Ａ０３の合成
【０１０９】
【化１２】
2015500801.tif 000040
【０１１０】
ここで、ＭＯＭＣｌはクロロメチルメチルエーテルである。
【０１１１】
クロロメチルメチルエーテル（１．６ｇ、２０ｍｍｏｌ）を氷浴中のタンシノンＩ（０．２７６ｇ、１ｍｍｏｌ）の酢酸溶液（２４ｍＬ）に加える。反応溶液を室温で２０時間撹拌した後、得られた沈殿物をろ過する。残留物を水で洗浄し、乾燥して赤色固体を得る。これは２−ヒドロキシメチルタンシノンＩと２−クロロメチルタンシノンＩとの混合物（０．２ｇ、収率６２％）である。後者を加水分解して前者を生成することができる。
【０１１２】
【化１３】
2015500801.tif 000041
【０１１３】
ここでＥｔ３Ｎはトリエチルアミンであり、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンである。
【０１１４】
０℃で、塩化プロピオニル（２０ｍｇ、０．２１６ｍｍｏｌ）を、その中に２−ヒドロキシメチルタンシノンＩ（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（４ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）が溶解されているクロロホルム（３ｍＬ）に滴加する。次いで反応溶液を６５℃まで加熱し、終夜撹拌する。反応が完了したら、水を加え、溶液を抽出にかけ、シリカゲルカラム又は分取クロマトグラフィーカラムによって分離し精製して化合物ＢＳ−ＴＡ−Ａ０３（１．１ｍｇ、収率１．２％）を赤色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：４．２ｍｉｎ（８３．１３％）；ｍ／ｚ：３６３．３（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＤＭＳＯ  ｄ−６）δ  ９．１９６（ｄ，１Ｈ）、８．４６５（ｄ，１Ｈ）、７．８８２（ｄ，１Ｈ）、７．６２４（ｍ，１Ｈ）、７．４６２（ｄ，１Ｈ）、５．２０６（ｓ，２Ｈ）、２．６８９（ｓ，３Ｈ）、２．３９２（ｍ，２Ｈ）、２．２６１（ｓ，３Ｈ）、１．０７４（ｍ，３Ｈ）。
【０１１５】
ＢＳ−ＴＡ−Ａ０１を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ａ０３のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩを２−クロロイソニコチン酸と反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：４．４ｍｉｎ（２１．７７％）；ｍ／ｚ：４４６．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１６】
ＢＳ−ＴＡ−Ａ０２を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ａ０３のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをｐ−フルオロ安息香酸と反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：４．６ｍｉｎ（９２．００％）；ｍ／ｚ：４２９．３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例２】
【０１１７】
化合物ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１の合成
【０１１８】
【化１４】
2015500801.tif 000042
【０１１９】
２−クロロメチルタンシノンＩ（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、これに、Ｎ−メチル（フェニル）メチルアミン（４７ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（３ｍＬ）並びに炭酸カリウム（４３ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を室温で３〜５時間撹拌する。反応が完了したら、溶液を抽出にかけ、続いて分取薄層クロマトグラフィーにより精製し分離して化合物ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１（１７．８ｍｇ、収率２０．０％）を深紅色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．２ｍｉｎ（９２．２９％）；ｍ／ｚ：４１０．２（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＤＭＳＯ  ｄ−６）δ  ９．１８１（ｄ，１Ｈ）、８．５０５（ｄ，１Ｈ）、７．９１６（ｄ，１Ｈ）、７．６３３（ｍ，３Ｈ）、７．４７９（ｍ，４Ｈ）、４．５６３（ｓ，２Ｈ）、４．４１６（ｓ，２Ｈ）、２．７２７（ｓ，３Ｈ）、２．６９４（ｓ，３Ｈ）、２．３１２（ｓ，３Ｈ）。
【０１２０】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０３を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをＮ−メチルエチルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．７ｍｉｎ（９６．３８％）；ｍ／ｚ：３４８．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２１】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０５を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをＮ−メチルシクロヘキシルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．２ｍｉｎ（８０．０５％）；ｍ／ｚ：４０２．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２２】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０６を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをシクロヘキシルメチルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．３ｍｉｎ（８５．４９％）；ｍ／ｚ：４０２．４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２３】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０７を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをシクロプロパンメチルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．９ｍｉｎ（９５．９７％）；ｍ／ｚ：３６０．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２４】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０８を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをＮ−メチルアニリンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：４．７ｍｉｎ（９１．４０％）；ｍ／ｚ：３９６．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２５】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０９を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩを２−メチルシクロヘキシルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．２ｍｉｎ（６９．５５％）；ｍ／ｚ：４０２．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２６】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１０を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをブチルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．０ｍｉｎ（８７．９８％）；ｍ／ｚ：３６２．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２７】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１１を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをベンジルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：４．２ｍｉｎ（８２．７８％）；ｍ／ｚ：３９６．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２８】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１２を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをＮ−メチルホモピペラジンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．４ｍｉｎ（９５．０４％）；ｍ／ｚ：４０３．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２９】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１３を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩを２−チエニルメチルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：４．２ｍｉｎ（９９．５４％）；ｍ／ｚ：４０２．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３０】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１４を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩを２−チエニルメチルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．３ｍｉｎ（８６．０３％）；ｍ／ｚ：３９０．４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３１】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１６を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩを４−ピペリジルホルムアミドと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．６ｍｉｎ（９１．９１％）；ｍ／ｚ：４１７．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３２】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをＮ−メチル−２−ヒドロキシエチルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．０ｍｉｎ（９４．２３％）；ｍ／ｚ：３６４．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３３】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１８を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをチオモルホリンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：４．１ｍｉｎ（９８．８０％）；ｍ／ｚ：３９２．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３４】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ２１を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをアリルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．６ｍｉｎ（６７．９９％）；ｍ／ｚ：３４４．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３５】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ２２を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１のための方法にしたがって、化合物２−ヒドロキシメチルタンシノンＩをｐ−クロロベンジルアミンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：４．４ｍｉｎ（７６．４９％）；ｍ／ｚ：４３０．３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３】
【０１３６】
化合物ＢＳ−ＴＡ−５０の合成
【０１３７】
【化１５】
2015500801.tif 000043
【０１３８】
ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０３（１００ｍｇ、０．２８８ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（８ｍＬ）に、４−（ブロモメチル）−２−クロロ−１−フルオロベンゼン（１９３ｍｇ、０．８６４ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を４５℃まで加熱し、１６時間撹拌する。反応が完了したら、得られた固体をろ過し、残留物をトルエン（５ｍＬ＊２）及びジクロロメタン（１０ｍＬ＊２）で洗浄して化合物ＢＳ−ＴＡ−５０（２８．０６ｍｇ、収率１６．９％）を緑色固体として得る。
【０１３９】
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．５３ｍｉｎ（１００％）；ｍ／ｚ：４９０（Ｍ−Ｂｒ）；
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＤＭＳＯ  ｄ−６）δ  ９．１８７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．４９２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．９０２（ｔ，２Ｈ）、７．６７７〜７．５９２（ｍ，３Ｈ）、７．５０２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．８８８（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５２（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．６６４（ｓ，２Ｈ）、３．４３５（ｍ，１Ｈ）、３．３２０（ｍ，１Ｈ）、３．０４０（ｓ，３Ｈ）、２．６９３（ｓ，３Ｈ）、２．３７２（ｓ，３Ｈ）、１．４９６（ｔ，３Ｈ）。
【０１４０】
ＢＳ−ＴＡ−６０を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−５０のための方法にしたがって、化合物ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７を４−（ブロモメチル）−２−クロロ−１−フルオロベンゼンと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．４８ｍｉｎ（９２．０７％）；ｍ／ｚ：５０６（Ｍ−Ｂｒ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＤＭＳＯ  ｄ−６）δ  ９．１９０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．４９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．９８５〜７．９３２（ｍ，２Ｈ）、７．７１７〜７．５９６（ｍ，３Ｈ）、７．５０４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．５１０（ｓ，１Ｈ）、４．９９６（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．８２１（ｔ，２Ｈ）、４．６８６（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．０７１（ｓ，２Ｈ）、３．５４１（ｍ，２Ｈ）、３．１０１（ｓ，３Ｈ）、２．６９９（ｓ，３Ｈ）、２．３７４（ｓ，３Ｈ）。
【実施例４】
【０１４１】
化合物ＢＳ−ＴＡ−６１の合成
【０１４２】
【化１６】
2015500801.tif 000044
【０１４３】
０℃で、ジクロロメタン（１５ｍＬ）に、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７（２００ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１１１．４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加え、次いで塩化アセチル（６４．８ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を室温まで温め、１．５時間撹拌する。反応が完了したら１滴の水を加え、溶媒を除去する。得られた粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル２：１）により分離し精製して化合物ＢＳ−ＴＡ−６１（５３．３４ｍｇ、収率３１．５％）を褐色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．１ｍｉｎ（９８．００％）；ｍ／ｚ：４０６．２（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＤＭＳＯ  ｄ−６）δ  ９．１６４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．４４８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．８５３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０７（ｔ，１Ｈ）、７．４４２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．１５８（ｓ，２Ｈ）、３．６９８（ｓ，２Ｈ）、２．６８１（ｓ，５Ｈ）、２．２７６（ｓ，３Ｈ）、２．２１２（ｓ，３Ｈ）、２．０１０（ｓ，３Ｈ）。
【０１４４】
ＢＳ−ＴＡ−６２を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−６１のための方法にしたがって、化合物ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７を塩化ピバロイルと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．４ｍｉｎ（１００．０％）；ｍ／ｚ：４４８．３（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．２６８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３１２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．８７４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．５６７（ｔ，１Ｈ）、７．３６７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．２７７（ｓ，２Ｈ）、３．６８９（ｓ，２Ｈ）、２．７９０（ｓ，２Ｈ）、２．７０８（ｓ，３Ｈ）、２．３９８（ｓ，３Ｈ）、２．２９８（ｓ，３Ｈ）、１．２１２（ｓ，９Ｈ）。
【０１４５】
ＢＳ−ＴＡ−６３を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−６１のための方法にしたがって、化合物ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７をイソプロピルクロロホーメートと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．３ｍｉｎ（１００．０％）；ｍ／ｚ：４５０．３（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．２６８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３１２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．８７４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５６５（ｔ，１Ｈ）、７．３６７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．８８２（ｍ，１Ｈ）、４．２９８（ｓ，２Ｈ）、３．７０７（ｓ，２Ｈ）、２．９４６（ｓ，１Ｈ）、２．８１８（ｓ，１Ｈ）、２．７０７（ｓ，３Ｈ）、２．４０１（ｓ，３Ｈ）、２．２９４（ｓ，３Ｈ）、１．２９５（ｄ，６Ｈ）。
【実施例５】
【０１４６】
化合物ＢＳ−ＴＡ−６４の合成
【０１４７】
【化１７】
2015500801.tif 000045
【０１４８】
ここで、ＨＯＢＴは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、ＥＤＣｌは１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩であり、ＤＩＰＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである。
【０１４９】
ジクロロメタン（１５ｍＬ）に、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７（２００ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、１−Ｂｏｃ−４−ピペリジルカルボン酸（１５１．４ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１４８．６ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２１０．９ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１７７．１ｍｇ、１．３７５ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を室温で４８時間撹拌する。反応が完了したら、溶媒を除去する。得られた粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル１：２）により分離し精製して化合物ＢＳ−ＴＡ−６４−１（４５ｍｇ、収率１４．２５％）を褐色固体として得る。
【０１５０】
【化１８】
2015500801.tif 000046
【０１５１】
ここで、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表す。
【０１５２】
ジクロロメタン（６ｍＬ）にＢＳ−ＴＡ−６４−１（４５ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を加え、続いてトリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を加える。反応溶液を室温で２時間撹拌する。反応が完了したら、反応溶液を濃縮し、重炭酸ナトリウム飽和溶液でｐＨ９に調整する。反応溶液の抽出により得られた有機相を、分取薄層クロマトグラフィーにより分離し精製して化合物ＢＳ−ＴＡ−６４（２２．４１ｍｇ、収率６０．６％）を褐色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．０ｍｉｎ（１００．０％）；ｍ／ｚ：４７５．３（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＤＭＳＯ  ｄ−６）δ  ９．１４０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．４０５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．８０８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５８７（ｔ，１Ｈ）、７．４２６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．１６５（ｓ，２Ｈ）、３．６６４（ｓ，２Ｈ）、２．８１８（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．６６５（ｓ，５Ｈ）、２．４１５〜２．２７８（ｍ，３Ｈ）、２．２３５（ｓ，３Ｈ）、２．１９６（ｓ，３Ｈ）、２．１１５（ｍ，１Ｈ）、１．６７７（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ）、１．４２７〜１．３４１（ｍ，２Ｈ）。
【実施例６】
【０１５３】
化合物ＢＳ−ＴＡ−６５の合成
【０１５４】
【化１９】
2015500801.tif 000047
【０１５５】
ジクロロメタン（１０ｍＬ）に２−クロロメチルタンシノンＩ（１００ｍｇ、０．３０９ｍｍｏｌ）を加え、続いてエタノールアミン（５６．４ｍｇ、０．９２６ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１２７．６ｍｇ、０．９２６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１５ｍＬ）を加える。反応溶液を室温で２時間撹拌した後、得られた生成物をろ過する。残留物を水（１０ｍＬ＊２）及びジクロロメタン（５ｍＬ＊２）で洗浄して化合物ＢＳ−ＴＡ−６５（２７．２１ｍｇ、収率３２．２％）を褐色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．０ｍｉｎ（９７．４６％）；ｍ／ｚ：３５０．２（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＤＭＳＯ  ｄ−６）δ  ９．１４８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．４１８（ｓ，１Ｈ）、７．８６３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５７９（ｍ，１Ｈ）、７．４３４（ｓ，１Ｈ）、４．５２５（ｓ，１Ｈ）、３．７９０（ｓ，２Ｈ）、３．４８２（ｓ，２Ｈ）、２．６７１〜２．６２８（ｍ，５Ｈ）、２．１９４〜２．１５６（ｍ，４Ｈ）。
【実施例７】
【０１５６】
化合物ＢＳ−ＴＡ−７１の合成
【０１５７】
【化２０】
2015500801.tif 000048
【０１５８】
ジクロロメタン（１０ｍＬ）に、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７（１５０ｍｇ、０．４１３ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１１１ｍｇ、０．８２６ｍｍｏｌ）、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１５７ｍｇ、０．８２６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１３３ｍｇ、１．０３３ｍｍｏｌ）を加え、続いてＢｏｃ−Ｌ−バリン（１０７ｍｇ、０．４９６ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を室温で１時間撹拌する。反応が完了したら、水（１０ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を抽出のために使用する。有機相を濃縮して得られた粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル１：１）により分離し精製して化合物ＢＳ−ＴＡ−７１−１（７０ｍｇ、収率３０．２％）を褐色固体として得る。
【０１５９】
【化２１】
2015500801.tif 000049
【０１６０】
化合物ＢＳ−ＴＡ−７１−１（７０ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）とジクロロメタン（１０ｍＬ）との混合溶液に溶解する。反応溶液を室温で３時間撹拌する。反応が完了したら、溶媒を除去する。得られた粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィーにより分離し精製して化合物ＢＳ−ＴＡ−７１（２４ｍｇ、収率４１．７％）を褐色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．８ｍｉｎ（９６．２８％）；ｍ／ｚ：４６３．２（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．２５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５（ｔ，１Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．３３（ｔ，２Ｈ）、３．７２（ｓ，２Ｈ）、３．３７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．８２（ｔ，２Ｈ）、２．７０（ｓ，３Ｈ）、２．４１（ｓ，３Ｈ）、２．３０（ｓ，３Ｈ）、２．１９（ｓ，１Ｈ）、０．９９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）、０．９２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【実施例８】
【０１６１】
化合物ＢＳ−ＴＡ−７２の合成
【０１６２】
【化２２】
2015500801.tif 000050
【０１６３】
ジクロロメタン（１０ｍＬ）に、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７（２００ｍｇ、０．５５０ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１４９ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２１１ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１７８ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を加え、続いてＢｏｃ−グリシン（１４５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を室温で３０分間撹拌する。反応が完了したら、水（１０ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を抽出のために使用する。有機相を濃縮して得られた粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル１：１）及び分取クロマトグラフィーにより分離し精製して化合物ＢＳ−ＴＡ−７２（２５ｍｇ、収率２２．２％）を褐色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．０ｍｉｎ（１００％）；ｍ／ｚ：５２１．２（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．２６（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．３２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５６（ｔ，１Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．０１（ｓ，１Ｈ）、４．３５（ｔ，２Ｈ）、３．９５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．７０（ｓ，２Ｈ）、２．８０（ｍ，２Ｈ）、２．７０（ｓ，３Ｈ）、２．３９（ｓ，３Ｈ）、２．２９（ｓ，３Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【０１６４】
ＢＳ−ＴＡ−７４を、上記と同じ試薬を用いて、ＢＳ−ＴＡ−７２のための方法にしたがって、化合物ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７をフマル酸モノメチルと反応させることによって調製する。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：２．３ｍｉｎ（９６．８７％）；ｍ／ｚ：４７６．３（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．２５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．２９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．５６（ｔ，１Ｈ）、７．３５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．８６（ｓ，２Ｈ）、４．３８（ｔ，２Ｈ）、３．７４（ｓ，３Ｈ）、３．６８（ｓ，２Ｈ）、２．８２（ｔ，２Ｈ）、２．７０（ｓ，３Ｈ）、２．４１（ｓ，３Ｈ）、２．２８（ｓ，３Ｈ）。
【実施例９】
【０１６５】
化合物ＢＳ−ＴＡ−７３の合成
【０１６６】
【化２３】
2015500801.tif 000051
【０１６７】
ここで、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンを表す。
【０１６８】
ジクロロメタン（８ｍＬ）に、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７（２００ｍｇ、０．５５０ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（６．７ｍｇ、０．０５５０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５６ｍｇ、０．５５０ｍｍｏｌ）を加え、続いて無水コハク酸（６６ｍｇ、０．６６０ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を室温で１時間撹拌する。反応が完了したら、得られた固体をろ過する。得られた粗生成物を、分取クロマトグラフィーにより分離し精製して化合物ＢＳ−ＴＡ−７３（２５ｍｇ、収率９．８％）を褐色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：１．５ｍｉｎ（９７．５６％）；ｍ／ｚ：４６４．０（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＤＭＳＯ  ｄ−６）δ  ９．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．４２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．８３（ｔ，１Ｈ）、７．５９（ｔ，１Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｔ，２Ｈ）、３．６７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．７０〜２．６４（ｍ，５Ｈ）、２．４８〜２．４０（ｍ，４Ｈ）、２．２７（ｓ，３Ｈ）、２．２０（ｓ，３Ｈ）。
【実施例１０】
【０１６９】
化合物ＢＳ−ＴＡ−７９の合成
【０１７０】
【化２４】
2015500801.tif 000052
【０１７１】
ここで、Ｃｂｚ−Ｃｌはフェニルメチルクロロホーメートを表す。
【０１７２】
１Ｍ水酸化ナトリウム溶液を、氷浴中のＢＳ−ＴＡ−６５（６．０ｇ、１７．１４ｍｍｏｌ）のジオキサン（１２０ｍＬ）懸濁液に加え、続いてベンジルクロロホーメート（８．５ｇ、３４．２８ｍｍｏｌ）を滴加し、０℃で撹拌しながら３時間反応させる。反応が完了したら、水を反応溶液に加え、酢酸エチル（５０ｍＬ＊２）を抽出のために使用する。有機相を重炭酸ナトリウム飽和溶液で洗浄し、乾燥し濃縮して化合物ＢＳ−ＴＡ−６５−Ｃｂｚ（６．２ｇ、７４．７％）を得る。
【０１７３】
【化２５】
2015500801.tif 000053
【０１７４】
氷浴中で、ジクロロメタン（１００ｍＬ）に、ＢＳ−ＴＡ−６５−Ｃｂｚ（６．２ｇ、１２．８４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．７ｇ、１４．１２ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（１２９．５ｍｇ、０．１２８４ｍｍｏｌ）を加え、続いて無水酢酸（２．６ｇ、２５．６８ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を３０分間撹拌した後、水を加え、ジクロロメタン（５０ｍＬ＊２）を抽出のために使用する。乾燥し濃縮した後、粗生成物ＢＳ−ＴＡ−７９−Ｃｂｚ（５．４ｇ、８０．１％）を得る。これを、精製することなく、次の反応ステップに直接適用する。
【０１７５】
【化２６】
2015500801.tif 000054
【０１７６】
Ｐｄ／Ｃ（１．０ｇ）をＢＳ−ＴＡ−７９−Ｃｂｚ（５．４ｇ、１０．２９ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１６０ｍＬ）に加える。反応溶液を水素で３回置き換え（displaced）、常温、水素下で４時間撹拌する。反応が完了したら、反応溶液をろ過する。ろ液を濃縮して得られた粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル１：１）により精製し分離して化合物ＢＳ−ＴＡ−７９（１．３ｇ、収率１１．１％）を褐色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．５６ｍｉｎ（８５．６２％）、ｍ／ｚ：３９２．０（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．２６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．８６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．５７（ｔ，１Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２４（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．９２（ｓ，２Ｈ）、２．９７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．７１（ｓ，３Ｈ）、２．３０（ｓ，３Ｈ）、２．０９（ｓ，３Ｈ）。
【実施例１１】
【０１７７】
化合物ＢＳ−ＴＡ−８０の合成
【０１７８】
【化２７】
2015500801.tif 000055
【０１７９】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に、０℃で、ＢＳ−ＴＡ−６５（５０ｍｇ、０．１４２９ｍｍｏｌ）及び重炭酸ナトリウム（６ｍｇ、０．０７１４５ｍｍｏｌ）を加え、続いて塩化アセチル（１１ｍｇ、１０．２９ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を３０分間撹拌する。反応が完了したら、水を加え、ジクロロメタン（１０ｍＬ＊２）を抽出のために使用する。乾燥し濃縮した後、得られた粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル１：１）により精製し分離して化合物ＢＳ−ＴＡ−８０（１３．４ｍｇ、収率２．８％）を褐色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．０７ｍｉｎ（８８．７５％）；ｍ／ｚ：３９２．０（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．１７（ｍ，１Ｈ）、８．４３（ｍ，１Ｈ）、７．８４（ｍ，１Ｈ）、７．７５（ｍ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．６４（ｍ，２Ｈ）、３．６４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．４７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．０８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．０８（ｓ，３Ｈ）、２．２５（ｓ，３Ｈ）、２．１０〜１．７９（ｍ，３Ｈ）。
【実施例１２】
【０１８０】
化合物ＢＳ−ＴＡ−８１の合成
【０１８１】
【化２８】
2015500801.tif 000056
【０１８２】
ここで、ＮＭＭはＮ−メチルモルホリンを表す。
【０１８３】
ジクロロメタン（５ｍＬ）に、０℃で、ＢＳ−ＴＡ−６５（５０ｍｇ、０．１４２９ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（７ｍｇ、０．１４２９ｍｍｏｌ）を加え、続いて塩化アセチル（１１ｍｇ、０．１４２９ｍｍｏｌ）を加える。反応溶液を３０分間撹拌する。反応が完了したら、水を加え、ジクロロメタン（１０ｍＬ＊２）を抽出のために使用する。有機相を乾燥し濃縮した後、得られた粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル１：１）により精製し分離して化合物ＢＳ−ＴＡ−８１（１１．６ｍｇ、１８．７％）を褐色固体として得る。
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：３．４９ｍｉｎ（９２．１６％）、ｍ／ｚ：４３３．８（Ｍ＋Ｈ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．２７（ｍ，１Ｈ）、８．３３（ｍ，１Ｈ）、７．８０（ｍ，１Ｈ）、７．５７（ｍ，１Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．６９（ｓ，１Ｈ）、４．６０（ｓ，１Ｈ）、４．３０（ｍ，２Ｈ）、２．７１（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，３Ｈ）、２．３７〜２．０８（ｍ，９Ｈ）。
【実施例１３】
【０１８４】
本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体のそれらの抗白血病活性についての評価
（１）実験材料
白血病細胞株：白血病細胞株：Ｋ５６２／ａｄｒ（薬物耐性、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ, chronic myeloid leukemia））、ＮＢ４（急性前骨髄球性白血病（ＡＭＬ, acute promyelocytic leukemia））、Ｋａｓｕｍｉ−１（急性骨髄性白血病Ｍ２型（ＡＭＬ−Ｍ２, acute myeloid leukemia M2 type））、及びＪｕｒｋａｔ（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ, acute lymphoblastic leukemia））（これらはすべてCancer Research Institute of Zhejiang University, Chinaから提供されたものである）；及びＨ９（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ, acute lymphoblastic leukemia））（これはChina Center for Type Culture Collection(CCTCC)から購入したものである）。
試薬：タンシノンＩ（ＴＡ）の標準試料は、Chengdu Mansite Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chinaから購入する；２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体は本発明にしたがって調製する。
主要装置：細胞インキュベーター（モデル：Thermo Scientific 3111）及びマイクロプレート吸光度リーダー（モデル：Bio-Rad iMark）。
【０１８５】
（２）実験方法
タンシノンＩ（ＴＡ）の標準試料及び本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体を、ジメチルスルホキシドで十分溶解させて１０ｍｇ／ｍＬのストック溶液を作製し、これを４℃で冷蔵し、暗所で貯蔵し、実験の前に細胞培養培地で所望濃度に希釈する。
【０１８６】
６０００個の十分成長した白血病細胞を入手し、これらを９６ウェル細胞培養プレートのウェル中に播種する。培養培地は１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ−１６４０細胞培養培地である。２日目に異なる濃度の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体を加え、均一に混合した後、プレートを３７℃の二酸化炭素細胞インキュベーター（５％ＣＯ２）中に置き、７２時間インキュベートする。次いで、生存細胞濃度をＭＴＴ法により測定する。この実験において、対照群（いずれの化合物によっても処理されていない）の細胞生存率を１００％と設定し、白血病細胞について７２時間での、化合物で処理した後の細胞生存率（％）及び最大半量阻害濃度（７２時間のＩＣ５０値、μｇ／ｍＬ）を計算する。
【０１８７】
（３）実験結果
実験結果を表１に示す。
表１は、本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体が、ヒト慢性骨髄性白血病細胞、急性骨髄性白血病細胞及び急性リンパ性白血病細胞の死滅を誘発させ、これらの白血病細胞の増殖を阻害することができることを示している。これは特に化合物ＢＳ−ＴＡ−６５について明らかであり、この実験におけるすべての細胞株について幅広い抗腫瘍活性を示している。特に、タンシノンＩそれ自体と比較して、化合物ＢＳ−ＴＡ−６５は、抗Ｈ９（急性リンパ性白血病）及び抗ＮＢ４（急性前骨髄球性白血病）細胞株活性をそれぞれ２７倍及び２４倍改善している。ＢＳ−ＴＡ−７１は抗Ｈ９（急性リンパ性白血病）活性を２８倍改善している。さらに、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７は抗Ｊｕｒｋａｔ（急性リンパ性白血病）活性を１０倍超改善している。
【０１８８】
【表２】
2015500801.tif 000057
【０１８９】
【表３】
2015500801.tif 000058
【実施例１４】
【０１９０】
本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体による抗ヒト多発性骨髄腫細胞活性の評価
（１）実験材料
骨髄腫細胞株：ＲＰＭＩ８２２６（多発性骨髄腫）はFuxiang Bio-tech Co. Ltd., Shanghai, Chinaから購入。
試薬：実施例１３と同じ。
主要装置：細胞インキュベーター（モデル：Thermo Scientific 3111）及びマイクロプレート吸光度リーダー（モデル：Bio-Rad iMark）。
【０１９１】
（２）実験方法
タンシノンＩ（ＴＡ）の標準試料及び本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体を、ジメチルスルホキシドで十分溶解させて１０ｍｇ／ｍＬのストック溶液を作製し、これを４℃で冷蔵し、暗所で貯蔵し、実験の前に細胞培養培地で所望濃度に希釈する。
【０１９２】
６０００個の十分成長した上述の骨髄腫細胞を入手し、これらを９６ウェル細胞培養プレートのウェル中に播種する。培養培地は１０％ウシ胎仔血清を含む１６４０細胞培養培地である。異なる濃度の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体を加え、均一に混合した後、プレートを３７℃の二酸化炭素細胞インキュベーター（５％ＣＯ２）中に置き、７２時間インキュベートする。次いで、生存細胞濃度をＭＴＴ法により測定する。この実験において、対照群（いずれの化合物によっても処理されていない）の細胞生存率を１００％と設定し、白血病細胞について７２時間での、化合物で処理した後の細胞生存率（％）及び最大半量阻害濃度（７２時間のＩＣ５０値、μｇ／ｍＬ）を計算する。
【０１９３】
（３）実験結果
実験結果を表２に示す。
表２は、本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体が、ヒト骨髄腫細胞の死滅を誘発させ、腫瘍細胞の増殖を阻害することができることを示している。タンシノンＩそれ自体と比較して、本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体ＢＳ−ＴＡ−６５及びＢＳ−ＴＡ−７２は、ＲＰＭＩ８２２６細胞株の阻害を７倍超改善している。
【実施例１５】
【０１９４】
本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体の抗ヒト固形腫瘍効果の評価。
（１）実験材料
ヒト固形腫瘍細胞株：
Ｈｅｐ−２（喉頭癌）、Ａ５４９（ヒト肺がん）、ＣａＥＳ−１７（食道がん細胞）、ＰＣ−３（前立腺がん）、ＣＮＥ（鼻咽腔癌細胞）及びＳＫ−ＯＶ−３（卵巣がん細胞）（これらはすべてChina Center For Type Culture Collectionから購入したものである）；ＲＫＯ（ヒト結腸腺癌細胞）、ＭＧＣ８０３（ヒト胃がん細胞）、ＭＧ６３（骨肉腫）及びＵ８７ＭＧ（悪性神経膠腫細胞）（これらはすべてFuxiang Bio-tech Co. Ltd., Shanghai, Chinaから購入したものである）；ＰＡＮＣ−１（膵臓がん）、Ｈｅｐ  Ｇ２（ヒト肝臓がん細胞）、Ｂｅｃａｐ３７（ヒト乳がん細胞）及びＨｅｌａ（ヒト子宮頸がん細胞）（これらはすべてCancer Research Institute of Zhejiang University, Chinaから提供されたものである）。
試薬：実施例１３と同じ。
主要装置：細胞インキュベーター（モデル：Thermo Scientific 3111）及びマイクロプレート吸光度リーダー（モデル：Bio-Rad iMark）。
【０１９５】
（２）実験方法
タンシノンＩ（ＴＡ）の標準試料及び本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体を、ジメチルスルホキシドで十分溶解させて１０ｍｇ／ｍＬのストック溶液を作製し、これを４℃で冷蔵し、暗所で貯蔵し、実験の前に細胞培養培地で所望濃度に希釈する。
【０１９６】
４０００個の十分成長したヒト固形腫瘍細胞を入手し、これらを９６ウェル細胞培養プレートのウェル中に播種する。培養培地は１０％ウシ胎仔血清を含有するＤＭＥＭ高グルコース細胞培養培地である。プレートを３７℃の二酸化炭素細胞インキュベーター（５％ＣＯ２）中に置き、２４時間インキュベートする。異なる濃度の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体を加え、均一に混合した後、プレートを３７℃の二酸化炭素細胞インキュベーター（５％ＣＯ２）中に置き、７２時間インキュベートする。次いで、生存細胞濃度をＭＴＴ法により決定する。この実験において、対照群（いずれの化合物によっても処置されていない）の細胞生存率を１００％と設定し、白血病細胞について７２時間での、化合物で処理した後の細胞生存率（％）及び最大半量阻害濃度（７２時間のＩＣ５０値、μｇ／ｍＬ）を計算する。
【０１９７】
（３）実験結果
実験結果を表２に示す。
表２は、本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体が、ヒト固形腫瘍細胞の死滅を誘発させ、これらの腫瘍細胞の成長を阻害することができることを示している。タンシノンＩそれ自体と比較して、本発明の２−アミノ化メチレン又は２−エステル化メチレンタンシノンＩ誘導体は、抗固形腫瘍細胞活性の著しい改善を示している。特に、ＢＳ−ＴＡ−６５は、この実験において試験したすべての細胞株について幅広い抗腫瘍活性を示している。特に、この化合物は抗Ｕ８７ＭＧ（悪性神経膠腫細胞）活性を４２倍超改善している。さらに、化合物ＢＳ−ＴＡ−７１、ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０３及びＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７は抗Ａ５４９（ヒト肺がん）活性を４倍超改善し；化合物ＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７は抗ＰＡＮＣ−１（膵臓がん）及び抗ＣａＥＳ−１７（食道がん細胞）活性をそれぞれ１０倍超及び７倍超改善している。ＢＳ−ＴＡ−７１、ＢＳ−ＴＡ−７２及びＢＳ−ＴＡ−Ｂ１７は抗Ｈｅｐ−Ｇ２（ヒト肝臓がん細胞）活性を３倍超改善している。ＢＳ−ＴＡ−７１及びＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１は抗Ｂｅｃａｐ３７（ヒト乳がん細胞）活性を７倍超改善している。化合物ＢＳ−ＴＡ−７１は抗Ｈｅｐ−２（喉頭癌）活性を４倍超改善している。ＢＳ−ＴＡ−Ｂ０１は抗ＭＧ６３（骨肉腫）活性をほぼ３倍改善している。ＢＳ−ＴＡ−７１は抗Ｈｅｌａ（ヒト子宮頸がん細胞）活性を８倍超改善している。ＢＳ−ＴＡ−７１及びＢＡ−ＴＡ−Ｂ１２は抗ＣＮＥ（鼻咽腔癌細胞）活性を１１倍超改善している。
【０１９８】
【表４】
2015500801.tif 000059
【０１９９】
【表５】
2015500801.tif 000060
【０２００】
【表６】
2015500801.tif 000061
【０２０１】
【表７】
2015500801.tif 000062
【国際調査報告】
2015500801.tif 000079
2015500801.tif 000080
2015500801.tif 000081
2015500801.tif 000082
2015500801.tif 000083
2015500801.tif 000084
2015500801.tif 000085
2015500801.tif 000086