(57)【要約】本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤を含む標的化送達組成物、ならびに被験体における病態を処置および診断するための該組成物の使用方法に関する。本発明の標的化送達組成物は、治療剤、診断剤、またはこれらの組み合わせを含むナノキャリア、および式Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉを有するコンジュゲート［Ａは上記コンジュゲートを上記ナノキャリアへ結合させるための結合成分であり、（ＬＰＥＧ）は、１〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリ、本明細書中で定義される［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ連結基、および本明細書中で定義される−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−連結基から選択される連結基であり、ＭＭＰｉはＭＭＰ阻害剤である］を含むことができる。
2015502946.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的化送達組成物であって、
（ａ）治療剤もしくは診断剤またはこれらの組み合わせを含むナノキャリア；および
（ｂ）以下の式を有するコンジュゲート：
Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉ；
（式中、
Ａは前記コンジュゲートを前記ナノキャリアへ結合させるための結合成分であり；
（ＬＰＥＧ）は、
（ｉ）  １〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリを有する連結基、
（ｉｉ）  式［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍを有する連結基であって、ここで、各ＥＧは、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ヘプタエチレングリコール、およびオクタエチレングリコールからなる群より独立して選択されるエチレングリコール基であり、Ｐはホスホリルまたはチオホスホリル基であり、ｍは１〜２０の整数である、連結基；または
（ｉｉｉ）  式−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−を有する連結基であって、ここで、
Ｚ１およびＺ３は、定義された長さを有するＰＥＧ成分およびＷｎからなる群より独立して選択され、ここで、Ｗはアミノ酸であり、下付き文字ｎは０〜３の整数であり；
Ｚ２は、定義された長さを有するＰＥＧ成分ならびにＺ１およびＺ３をつなげるためのアミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択されるカップリング基からなる群より選択される、連結基；
から選択され、
ＭＭＰｉはＭＭＰ酵素阻害剤である）
を含む、標的化送達組成物。
【請求項２】
（ＬＰＥＧ）が−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−である、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項３】
Ｚ１がＷｎであり、Ｚ２が、アミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択され、Ｚ３は定義された長さを有するＰＥＧ成分である、請求項２に記載の標的化送達組成物。
【請求項４】
前記下付き文字ｎが３である、請求項３に記載の標的化送達組成物。
【請求項５】
前記下付き文字ｎが２である、請求項３に記載の標的化送達組成物。
【請求項６】
前記下付き文字ｎが１である、請求項３に記載の標的化送達組成物。
【請求項７】
前記下付き文字ｎが０である、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項８】
前記アミノ酸がα−アミノ酸である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の標的化送達組成物。
【請求項９】
前記α−アミノ酸が、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、およびグリシンからなる群より選択される、請求項８に記載の標的化送達組成物。
【請求項１０】
前記α−アミノ酸が、グルタミン酸およびリジンからなる群より選択される、請求項９に記載の標的化送達組成物。
【請求項１１】
前記ＭＭＰ阻害剤が、式：
【化６】
2015502946.tif 000010
（式中、
Ｘは、ＯおよびＳからなる群より選択されるメンバーであり；
Ｙは、ピリジルおよびフェニルからなる群より選択されるメンバーであり、ここで、前記フェニルは、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、およびＣＨ３で場合により置換され；
波線は（ＬＰＥＧ）への結合点を示す）
を有する、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項１２】
前記ナノキャリアが、リポソーム、ミセル、脂質コーティングバブル、およびブロックコポリマーミセルからなる群より選択される、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項１３】
前記ナノキャリアがステルス剤をさらに含む、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項１４】
前記ナノキャリアが、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔｉｂｉｎｅ）、およびタキサンからなる群より選択される治療剤を含む、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項１５】
前記結合成分が脂質である、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項１６】
（ＬＰＥＧ）が、式：
−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−
（式中、Ｚ１およびＺ３の各々が定義された長さを有するＰＥＧ成分であり、Ｚ２が２つのＰＥＧ成分をつなげるためのアミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択されるカップリング基である）
を有する、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項１７】
ＭＭＰｉは、
【化７】
2015502946.tif 000011
からなる群より選択される、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項１８】
ＭＭＰｉは、
【化８】
2015502946.tif 000012
からなる群より選択される、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項１９】
（ａ）治療剤もしくは診断剤またはこれらの組み合わせを含むナノキャリア；および
（ｂ）以下の式を有するコンジュゲート：
Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉ；
（式中、
Ａは前記コンジュゲートを前記ナノキャリアへ結合させるための結合成分であり；
（ＬＰＥＧ）は、１〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリを有する連結基または式［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍを有する連結基であり、ここで、各ＥＧは、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ヘプタエチレングリコール、およびオクタエチレングリコールからなる群より独立して選択されるエチレングリコール基であり、Ｐはホスホリルまたはチオホスホリル基であり、ｍは１〜２０の整数であり；
ＭＭＰｉはＭＭＰ酵素阻害剤である）
を含む、請求項１に記載の標的化送達組成物。
【請求項２０】
前記ＭＭＰ阻害剤が、式：
【化９】
2015502946.tif 000013
（式中、
Ｘは、ＯおよびＳからなる群より選択されるメンバーであり；
Ｙは、ピリジルおよびフェニルからなる群より選択されるメンバーであり、ここで、前記フェニルは、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、およびＣＨ３で場合により置換され；
波線は（ＬＰＥＧ）への結合点を示す）
を有する、請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項２１】
前記ナノキャリアが、リポソーム、ミセル、脂質コーティングバブル、およびブロックコポリマーミセルからなる群より選択される、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項２２】
前記ナノキャリアがステルス剤をさらに含む、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項２３】
前記ステルス剤がポリ（エチレングリコール）である、請求項２２に記載の標的化送達組成物。
【請求項２４】
前記治療剤または診断剤が、前記ナノキャリア内に包埋されているか、前記ナノキャリア内に封入されているか、または前記ナノキャリアに係留されている、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項２５】
前記ナノキャリアがリポソームである、請求項２４に記載の標的化送達組成物。
【請求項２６】
前記ナノキャリアが、ＳＵＶ、ＬＵＶ、およびＭＬＶからなる群より選択されるリポソームである、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項２７】
前記ナノキャリアが、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、およびタキサンからなる群より選択される治療剤を含む、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項２８】
前記診断剤が、放射性作用物質、蛍光剤、または造影剤である、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項２９】
前記診断剤が、１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＤＴＰＡ、および９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＥＮＰｙ２からなる群より選択される放射性作用物質である、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項３０】
前記診断剤が蛍光剤である、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項３１】
前記診断剤がＭＲ剤またはＸ線造影剤である、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項３２】
前記結合成分が、前記ナノキャリアに共有結合するための官能基を含む、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項３３】
前記結合成分が脂質である、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項３４】
前記脂質がリン脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質、またはコレステロールである、請求項３３に記載の標的化送達組成物。
【請求項３５】
前記コンジュゲートのＡ部分が、前記ナノキャリアの脂質二重層部分に存在する、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項３６】
前記ナノキャリアがリポソームである、請求項３５に記載の標的化送達組成物。
【請求項３７】
（ＬＰＥＧ）が、１〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリを有する連結基である、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項３８】
（ＬＰＥＧ）が、式：
−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−
（式中、Ｚ１およびＺ３の各々が定義された長さを有するＰＥＧ成分であり、Ｚ２が２つのＰＥＧ成分をつなげるためのアミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択されるカップリング基である）
を有する、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項３９】
Ｚ１が、Ａに結合したＰＥＧ成分であり、ＰＥＧ３４００およびＰＥＧ５０００から選択される、請求項３８に記載の標的化送達組成物。
【請求項４０】
Ｚ３が、式：−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）２４ＮＨ−を有する結合ＰＥＧ成分である、請求項３８に記載の標的化送達組成物。
【請求項４１】
ＭＭＰｉが、
【化１０】
2015502946.tif 000014
からなる群より選択される、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項４２】
ＭＭＰｉが、
【化１１】
2015502946.tif 000015
からなる群より選択される、請求項１または請求項１９に記載の標的化送達組成物。
【請求項４３】
以下の式
Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉ
を有するコンジュゲートであって、
式中、
Ａは前記コンジュゲートを前記ナノキャリアへ結合させるための結合成分であり；
（ＬＰＥＧ）は、
（ｉ）  １〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリを有する連結基、
（ｉｉ）  式［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍを有する連結基であって、ここで、各ＥＧは、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ヘプタエチレングリコール、およびオクタエチレングリコールからなる群より独立して選択されるエチレングリコール基であり、Ｐはホスホリルまたはチオホスホリル基であり、ｍは１〜２０の整数である、連結基、または
（ｉｉｉ）  式−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−を有する連結基であって、ここで、
Ｚ１およびＺ３は、定義された長さを有するＰＥＧ成分およびＷｎからなる群より独立して選択され、ここで、Ｗはアミノ酸であり、下付き文字ｎは０〜３の整数であり；
Ｚ２は、定義された長さを有するＰＥＧ成分ならびにＺ１およびＺ３をつなげるためのアミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択されるカップリング基からなる群より選択される、連結基；
から選択され、
ＭＭＰｉはＭＭＰ阻害剤である、
コンジュゲート。
【請求項４４】
以下の式
Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉ
を有するコンジュゲートであって、式中、
Ａは前記コンジュゲートを前記ナノキャリアへ結合させるための結合成分であり、
（ＬＰＥＧ）は、１〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリを有する連結基または式［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍを有する連結基であり、ここで、各ＥＧは、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ヘプタエチレングリコール、およびオクタエチレングリコールからなる群より独立して選択されるエチレングリコール基であり、Ｐはホスホリルまたはチオホスホリル基であり、ｍは１〜２０の整数であり、
ＭＭＰｉはＭＭＰ阻害剤である、
請求項４３に記載のコンジュゲート。
【請求項４５】
前記結合成分が脂質である、請求項４３または請求項４４に記載のコンジュゲート。
【請求項４６】
前記脂質が、リン脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質、およびコレステロールからなる群より選択される、請求項４５に記載のコンジュゲート。
【請求項４７】
（ＬＰＥＧ）が、１〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリを有する連結基である、請求項４３または請求項４４に記載のコンジュゲート。
【請求項４８】
（ＬＰＥＧ）が、式：
−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−
（式中、Ｚ１およびＺ３の各々が定義された長さを有するＰＥＧ成分であり、Ｚ２が２つのＰＥＧ成分をつなげるためのアミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択されるカップリング基である）
を有する、請求項４３または請求項４４に記載のコンジュゲート。
【請求項４９】
Ｚ１が、Ａに結合したＰＥＧ成分であり、ＰＥＧ３４００およびＰＥＧ５０００から選択される、請求項４８に記載のコンジュゲート。
【請求項５０】
Ｚ３が、式：−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）２４ＮＨ−を有する結合ＰＥＧ成分である、請求項４８に記載のコンジュゲート。
【請求項５１】
ＭＭＰｉが、
【化１２】
2015502946.tif 000016
からなる群より選択される、請求項４３または請求項４４に記載のコンジュゲート。
【請求項５２】
ＭＭＰｉが、
【化１３】
2015502946.tif 000017
からなる群より選択される、請求項４３または請求項４４に記載のコンジュゲート。
【請求項５３】
標的化送達組成物の調製方法であって、治療剤または診断剤を含むナノキャリアを、以下の式
Ａ−（ＬＰＥＧ）−（Ｗ）ｎ−ＭＭＰｉ
を有するコンジュゲート
（式中、
Ａは前記コンジュゲートを前記ナノキャリアへ結合させるための結合成分であり；
（ＬＰＥＧ）は、
（ｉ）  １〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリを有する連結基、
（ｉｉ）  式［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍを有する連結基であって、ここで、各ＥＧは、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ヘプタエチレングリコール、およびオクタエチレングリコールからなる群より独立して選択されるエチレングリコール基であり、Ｐはホスホリルまたはチオホスホリル基であり、ｍは１〜２０の整数である、連結基；または
（ｉｉｉ）  式−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−を有する連結基であって、ここで、
Ｚ１およびＺ３は、定義された長さを有するＰＥＧ成分およびＷｎからなる群より独立して選択され、ここで、Ｗはアミノ酸であり、下付き文字ｎは０〜３の整数であり；
Ｚ２は、定義された長さを有するＰＥＧ成分ならびにＺ１およびＺ３をつなげるためのアミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択されるカップリング基からなる群より選択される、連結基；
から選択され、
ＭＭＰｉはＭＭＰ阻害剤である）
に結合させる工程を含む、方法。
【請求項５４】
治療剤または診断剤を含むナノキャリアを、以下の式
Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉ
を有するコンジュゲート
（式中、
Ａは前記コンジュゲートを前記ナノキャリアへ結合させるための結合成分であり；
（ＬＰＥＧ）は、１〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリを有する連結基または式［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍを有する連結基であり、ここで、各ＥＧは、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ヘプタエチレングリコール、およびオクタエチレングリコールからなる群より独立して選択されるエチレングリコール基であり、Ｐはホスホリルまたはチオホスホリル基であり、ｍは１〜２０の整数であり；
ＭＭＰｉはＭＭＰ阻害剤である）
に結合させる工程を含む、請求項５３に記載の標的化送達組成物の調製方法。
【請求項５５】
前記結合成分が脂質である、請求項５３または請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記脂質が、リン脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質、コレステロール、またはコレステロール誘導体である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記コンジュゲートのＡ部分が、前記ナノキャリアの脂質二重層部分に存在する、請求項５３または請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記ナノキャリアがリポソームである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
（ＬＰＥＧ）が、１〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリを有する連結基である、請求項５３または請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
（ＬＰＥＧ）が、式：
−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−
（式中、Ｚ１およびＺ３の各々が定義された長さを有するＰＥＧ成分であり、Ｚ２が２つのＰＥＧ成分をつなげるためのアミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択されるカップリング基である）
を有する、請求項５３または請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
Ｚ１が、Ａに結合したＰＥＧ成分であり、ＰＥＧ３４００およびＰＥＧ５０００から選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
Ｚ３が、式：−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）２４ＮＨ−を有する結合ＰＥＧ成分である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
ＭＭＰｉが、
【化１４】
2015502946.tif 000018
からなる群より選択される、請求項５３または請求項５４に記載の方法。
【請求項６４】
ＭＭＰｉが、
【化１５】
2015502946.tif 000019
からなる群より選択される、請求項５３または請求項５４に記載の方法。
【請求項６５】
被験体におけるがん状態を処置または診断するための方法であって、請求項１に記載の標的化送達組成物を前記被験体に投与する工程を含み、前記治療剤または診断剤が前記状態を処置または診断するのに十分である、方法。
【請求項６６】
被験体におけるがん状態を処置または診断するための方法であって、請求項１９に記載の標的化送達組成物を前記被験体に投与する工程を含み、前記治療剤または診断剤が前記状態を処置または診断するのに十分である、方法。
【請求項６７】
ＭＭＰｉが、
【化１６】
2015502946.tif 000020
からなる群より選択される、請求項６５または請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ＭＭＰｉが、
【化１７】
2015502946.tif 000021
からなる群より選択される、請求項６５または請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記ナノキャリアが、抗がん剤内に包埋されているか、抗がん剤内に封入されているか、または抗がん剤に係留されており、前記抗がん剤が、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、およびタキサンからなる群より選択される、請求項６５または請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
標的化治療処置に対する被験体の適性を判定する方法であって、
請求項１に記載の標的化送達組成物を前記被験体に投与する工程であって、前記ナノキャリアが診断剤を含む、工程と、
前記被験体をイメージングして前記診断剤を検出する工程とを含む、
方法。
【請求項７１】
標的化治療処置に対する被験体の適性を判定する方法であって、
請求項１９に記載の標的化送達組成物を前記被験体に投与する工程であって、前記ナノキャリアが診断剤を含む、工程と、
前記被験体をイメージングして前記診断剤を検出する工程とを含む、
方法。
【請求項７２】
治療剤を被験体に送達する方法であって、前記方法が、請求項１に記載のコンジュゲートを前記被験体に投与する工程を含み、前記組成物が治療剤を含む、方法。
【請求項７３】
治療剤を被験体に送達する方法であって、前記方法が、請求項１９に記載のコンジュゲートを前記被験体に投与する工程を含み、前記組成物が治療剤を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１１年１１月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／５６５，４６１号に対する優先権を主張し、この米国仮特許出願第６１／５６５，４６１号の全体が、本明細書に参考として援用される。
【０００２】
政府支援の研究開発下でなされた発明に対する権利に関する陳述
該当なし。
【０００３】
コンパクトディスクで提出した「配列表」、表、またはコンピュータプログラムを列挙している付録への参照
該当なし。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
がんは、あらゆる年齢の人々が罹患し得る疾患の一種である。したがって、患者のがんを処置または診断することができる治療法を提供しようとする多大な努力がなされている。最近、体内におけるナノキャリアの標的化送達が、薬物送達および画像診断技術の新たな手段の候補として議論されている。残念なことに、がんを有効に処置または診断することができるナノキャリア系製品の作製には、障害が依然として存在している。したがって、がんを処置または診断し、患者の個別介護を容易にする方法を提供することができる新たな標的化送達法の必要性がある。
【０００５】
全てではないが多くの固形腫瘍がマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）酵素をその表面上に発現するか、周辺基質内に排出するか、新脈管形成を介してＭＭＰ酵素を産生させる（Ｙ．Ｃｈａｕ，Ｆ．Ｅ．Ｔａｎ，およびＲ．Ｌａｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ，２００４，１５：９３１−９４１、ならびにＡ．Ｍａｔｔｅｒ，‘Ｔｕｍｏｒ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｓ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔ’，ＤＲＵＧ  ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ  ＴＯＤＡＹ，６：１００５−１０２４（２００１）を参照のこと）。したがって、腫瘍環境は、特に、ＭＭＰ２、９、および１３酵素含有量ならびにその他（膜結合ファミリーのメンバー（ＭＭＰ１４〜１７）など）に富む。マウス腫瘍モデルにおけるＭＭＰ酵素活性は、一旦色素保有分子が腫瘍に輸送されるとｉｎ  ｖｉｖｏで蛍光色素を放出するＦＲＥＴ系ＭＭＰ酵素アッセイの使用によって精巧に明らかとなっている（Ｌ．Ｚｈｕ，Ｊ．Ｘｉｅ，Ｍ．Ｓｗｉｅｒｃｚｅｗｓｋａ，Ｆ．Ｚｈａｎｇ，Ｑ．Ｑｕａｎ，Ｙ．Ｍａ，Ｘ．Ｆａｎｇ，Ｋ．Ｋｉｍ，Ｓ．Ｌｅｅ，Ｘ．Ｃｈｅｎ，Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ，２０１１，１：１８−２７）。
【０００６】
例えば、リポソームなどのナノ粒子は、一般的には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基をそれらの表面に取り込んでｉｎ  ｖｉｖｏ性能を高めるように修飾される。リポソームナノ粒子を腫瘍細胞関連受容体または腫瘍内の酵素に標的化すること、また、酵素／受容体認識および結合事象によって駆動されるエンドサイトーシス（または他の内在化機構）による細胞傷害性ペイロード（または他のカーゴ）の細胞取り込みに向けてリポソームナノ粒子が標的化されるようにすることも有利であろう。
がんを処置または診断し、患者の個別介護を容易にする方法を提供することができる新たな標的化送達法の必要性が依然としてある。本開示はこの必要性に取り組む。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｙ．Ｃｈａｕ，Ｆ．Ｅ．Ｔａｎ，およびＲ．Ｌａｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ，２００４，１５：９３１−９４１
【非特許文献２】Ａ．Ｍａｔｔｅｒ，‘Ｔｕｍｏｒ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｓ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔ’，ＤＲＵＧ  ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ  ＴＯＤＡＹ，６：１００５−１０２４（２００１）
【非特許文献３】Ｌ．Ｚｈｕ，Ｊ．Ｘｉｅ，Ｍ．Ｓｗｉｅｒｃｚｅｗｓｋａ，Ｆ．Ｚｈａｎｇ，Ｑ．Ｑｕａｎ，Ｙ．Ｍａ，Ｘ．Ｆａｎｇ，Ｋ．Ｋｉｍ，Ｓ．Ｌｅｅ，Ｘ．Ｃｈｅｎ，Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ，２０１１，１：１８−２７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の簡単な要旨
本発明は、標的化送達組成物、および被験体の病態（例えば、がん状態）の処置および診断におけるそれらの使用方法を提供する。
【０００９】
本発明の一態様では、標的化送達組成物は、治療剤、診断剤、またはこれらの組み合わせを含むナノキャリア、および以下の式を有するコンジュゲート：
Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉ；
［式中、
Ａは上記コンジュゲートを上記ナノキャリアへ結合させるための結合成分であり；
（ＬＰＥＧ）は、１〜３つのポリエチレングリコール成分の直鎖アセンブリ；本明細書中で定義される［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ連結基；および本明細書中で定義される−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−連結基から選択される連結基であり；
ＭＭＰｉはＭＭＰ阻害剤である］
を含むことができる。
【００１０】
標的化送達組成物、ならびにこのような組成物の作製方法および使用方法は、多数の利点を薬物送達および画像診断の領域にもたらす。例えば、標的化送達組成物の連結基を、個別のモノマー数を有するように合成し、例えば、特定の長さおよび／または化学的特性を提供するように調整することができる。さらに、連結基は、完全にカスタマイズ可能であり、１つのモノマー型のみまたは複数のモノマー型を任意の順序で含むように調製され得る。連結基を、簡単な自動化合成を可能にする固相支持体上に合成することもできる。連結基に加えて、標的化送達組成物を使用して、通常の投薬量で投与した場合に患者にその他の点で有毒であり得る用量よりも低い用量での剤の利用によってより有効に疾患を処置することができる。
【００１１】
本明細書の他の部分および図面を参照することによって、本発明の本質および利点についてのさらなる理解を実現することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、コンジュゲート１の質量スペクトルを示す。
【００１３】
【図２】図２は、１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシラートの合成を示す。
【００１４】
【図３】図３は、１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボン酸の合成を示す。
【００１５】
【図４】図４は、ｔｅｒｔ−ブチル４−（ベンジルオキシカルバモイル）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成を示す。
【００１６】
【図５】図５は、Ｎ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミドの合成を示す。
【００１７】
【図６】図６は、Ｎ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミドのＰＥＧ１０００ピペリジンアミドアミン誘導体の合成を示す。
【００１８】
【図７】図７は、Ｎ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミドのＰＥＧ１０００ピペリジンアミドアミン誘導体の脱保護を示す。
【００１９】
【図８】図８は、保護されたＮ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミド−ＰＥＧ１０００−ＰＥＧ５０００コンジュゲートの合成を示す。
【００２０】
【図９】図９は、Ｎ−ヒドロキシ−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニル−スルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミド−ＰＥＧ１０００−ＰＥＧ５０００コンジュゲート（コンジュゲート１）の合成を示す。
【００２１】
【図１０】図１０は、１−ベンジル４−メチル４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシラートの合成を示す。
【００２２】
【図１１】図１１は、１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）ピペリジン−４−カルボン酸の合成を示す。
【００２３】
【図１２】図１２は、ベンジル４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成を示す。
【００２４】
【図１３】図１３は、４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジンの合成を示す。
【００２５】
【図１４】図１４は、ベンジルｔｅｒｔ−ブチル（（５Ｓ）−６−オキソ−６−（４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）ヘキサン−１，５−ジイル）ジカルバマートの合成を示す。
【００２６】
【図１５】図１５は、ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ）−６−アミノ−１−オキソ−１−（４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）ヘキサン−２−イル）カルバマートの合成を示す。
【００２７】
【図１６】図１６は、保護された４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン−ＰＥＧ５０００−ＤＳＰＥコンジュゲートの合成を示す。
【００２８】
【図１７】図１７は、Ｎ−ヒドロキシ−４−（（４−フェノキシフェニル）−スルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミド−ＰＥＧ５０００−ＤＳＰＥコンジュゲート（コンジュゲート２）の合成を示す。
【００２９】
【図１８】図１８は、コンジュゲート２について観察された質量スペクトルを示す。
【００３０】
【図１９】図１９Ａは、非標的化リポソームオキサリプラチンおよび非リポソームオキサリプラチンで処置したマウスと比較した場合の、ＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチンで処置したＢｘＰＣ３膵腫瘍を保有するマウスで観察された平均腫瘍容積を示す。図１９Ｂは、ＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチン、非標的化リポソームオキサリプラチン、および非リポソームオキサリプラチンで処置した試験群の生存率を示す。
【００３１】
【図２０】図２０Ａは、非標的化リポソームオキサリプラチンおよび非リポソームオキサリプラチンで処置したマウスと比較した場合の、ＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチンで処置したＢｘＰＣ３膵腫瘍を保有するマウスで観察さられた体重変化を示す。図２０Ｂは、ＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチン、非標的化リポソームオキサリプラチン、および非リポソームオキサリプラチンで処置した試験群についての生存率、瀕死、体重減少、死亡、潰瘍化腫瘍、および腫瘍量を示す。
【００３２】
【図２１】図２１Ａは、非標的化リポソームオキサリプラチンおよび非リポソームオキサリプラチンで処置したマウスと比較した場合の、ＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチンで処置した、ＭＭＰ１４を過剰発現するヒト線維肉腫ＨＴ１０８０腫瘍を保有するヌードマウスで観察された平均腫瘍容積を示す。図２１Ｂは、ＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチン、非標的化リポソームオキサリプラチン、および非リポソームオキサリプラチンで処置した試験群の生存率を示す。
【００３３】
【図２２】図２２Ａは、種々の濃度のＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチンの存在下で観察されたＭＭＰ２活性を示す。図２２Ｂは、種々の濃度のＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチンの存在下で観察されたＭＭＰ１４活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
発明の詳細な説明
Ｉ．  定義
本明細書において使用される場合、用語「標的化送達組成物」は、本明細書においてさらに記載されるように、式：Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉを有するコンジュゲートに結合したナノキャリアの組成物を指す。本発明の組成物は、治療用組成物として、診断用組成物として、または治療用組成物および診断用組成物の両方として使用することができる。ある特定の実施形態では、該組成物は、本明細書においてさらに記載されるように、被験体または試験試料内の特定のＭＭＰ発現組織に標的化することができる。
【００３５】
本明細書において使用される場合、用語「ナノキャリア」は、様々なサイズ、形状、種類、および用途の粒子を指し、これらは、本明細書においてさらに記載される。当業者によって認識されるように、ナノキャリアの特性、例えば、サイズは、ナノキャリアの種類および／または用途、ならびに当技術分野において一般に周知の他の要因に依存し得る。一般に、ナノキャリアは、約１ｎｍ〜約１０００ｎｍのサイズの範囲であり得る。他の実施形態では、ナノキャリアは、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍのサイズの範囲であり得る。さらに他の実施形態では、ナノキャリアは、約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍのサイズの範囲であり得る。ある特定の実施形態では、ナノキャリアは、腎排泄限界よりサイズが大きく、例えば、直径が約６ｎｍより大きい。他の実施形態では、ナノキャリアは、肝臓による血流からのクリアランスを回避するのに十分小さく、例えば、直径が１０００ｎｍより小さい。ナノキャリアとしては、球体、円錐体、スフェロイド、および当技術分野において一般に公知の他の形状を挙げることができる。ナノキャリアは、中空（例えば、コアの外側が中実（ｓｏｌｉｄ）で、コアの内側が中空）でもよいし中実でもよく、中空層と中実層または様々な中実層とで多層化されていてもよい。例えば、ナノキャリアは、中実コア領域および中実外側封入領域を含むことができ、これらの両方を架橋することができる。ナノキャリアは、脂質、ポリマー、シリカ、磁性材料、または金、および酸化鉄などの金属材料などを含む様々な物質の中の１つの物質または任意の組み合わせから構成され得る。脂質としては、脂肪、ワックス、ステロール、コレステロール、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、カチオン性脂質またはアニオン性脂質、誘導体化脂質、およびカルジオリピンなどを挙げることができる。ポリマーとしては、一般にブロックコポリマー、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリエチレングリコール、アクリル酸ポリマー、カチオン性ポリマー、ならびにナノキャリアを作製するのに使用するための当技術分野において公知の他のポリマーを挙げることができる。いくつかの実施形態では、ポリマーは、生分解性および／または生体適合性であり得る。ナノキャリアとしては、リポソーム、ミセル、リポタンパク質、脂質コーティングバブル、ブロックコポリマーミセル、ポリマーソーム、ニオソーム、量子ドット、酸化鉄粒子、金粒子、デンドリマー、またはシリカ粒子を挙げることができる。ある特定の実施形態では、脂質単層または脂質二重層は、脂質によってコーティングされ得る材料から構成されるナノキャリア、例えば、ポリマーナノキャリアを完全または部分的にコーティングすることができる。いくつかの実施形態では、リポソームとしては、多層ベシクル（ＭＬＶ）、大単層ベシクル（ＬＵＶ）、および小単層ベシクル（ＳＵＶ）を挙げることができる。
【００３６】
本明細書において使用される場合、用語「治療剤」は、有効量で存在する場合、それを必要とする被験体に所望の治療効果を生じさせる化合物または分子を指す。本発明は、本明細書においてさらに記載されるように、広い範囲の治療剤、および標的化送達組成物と併せたこれらの使用を意図する。
【００３７】
本明細書において使用される場合、用語「診断剤」は、被験体または試験試料中で検出することができる成分を指し、本明細書においてさらに記載される。
【００３８】
本明細書において使用される場合、用語「コンジュゲート」は、一般に、連結基を含む分子を指す。いくつかの実施形態では、本発明のコンジュゲートは、式：Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉを有する。Ａは、上記コンジュゲートをナノキャリアに結合（共有結合または非共有結合）させることができる結合成分である。上記コンジュゲートを、上記ナノキャリアの任意の部分（表面領域または内部領域を含む）に共有結合させることができる。本明細書中にさらに記載されている、当技術分野で周知の連結化学を使用して官能基を介して共有結合を実現することができる。他の実施形態では、非共有結合としては、一般に当技術分野で周知であり、本明細書中にさらに記載されている相互作用を含むことができる。本発明のコンジュゲートは、式（ＬＰＥＧ）を有する連結基、および標的化剤であるＭＭＰｉ（それぞれ本明細書中にさらに記載されている）をさらに含むことができる。
【００３９】
本明細書において使用される場合、用語「連結基」は、２つの成分（例えば、結合成分および標的化剤）を連結するコンジュゲートの一部を指す。調製されるコンジュゲートおよびコンジュゲートに望ましい特性に応じて、容易に利用可能な単量体成分から標的化剤およびナノキャリアまたは剤の適切な分離を達成するための連結基をアセンブリすることができる。
【００４０】
本明細書において使用される場合、用語「標的化剤」は、標的に対して特異的である分子、例えばマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）を指す。ある特定の実施形態では、標的化剤としては、低分子模倣体または標的酵素の阻害剤を挙げることができる。ＭＭＰ阻害剤（ＭＭＰｉ）は、疾患の特定の発症段階と関連し得る器官、組織、細胞、細胞外マトリックス成分、および／または細胞内コンパートメントにおける標的を含む多種多様なＭＭＰに結合することができる。いくつかの実施形態では、標的としては、がん細胞、特にがん幹細胞を挙げることができる。標的としては、細胞表面の抗原、またはがん細胞に存在するかもしくは正常組織と比較してがん細胞ではより優勢な抗原である腫瘍マーカーをさらに挙げることができる。
【００４１】
本明細書において使用される場合、用語「ステルス剤」は、ナノキャリアの表面特性を改変することができる分子を指す。ステルス剤は、ナノキャリアが互いにおよび血液細胞または血管壁に結合するのを防ぐことができる。ある特定の実施形態では、ステルスナノキャリア、例えばステルスリポソームは、ナノキャリアが被験体に投与される場合に、免疫原性および／または反応原性を減少させることができる。ステルス剤はまた、被験体内のナノキャリアの血液循環時間を増加させることができる。いくつかの実施形態では、ナノキャリアは、例えば、ナノキャリアがステルス剤から部分的もしくは完全に構成されるか、またはナノキャリアがステルス剤でコーティングされるように、ステルス剤を含むことができる。本発明に使用するためのステルス剤としては、当技術分野において一般に周知のものを挙げることができる。ある特定の実施形態では、ステルス剤としては、「ポリエチレングリコール」を挙げることができ、これは当技術分野において周知であり、一般に、エチレンオキシドのオリゴマーまたはポリマーを指す。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は直鎖状でもよいし分枝鎖状でもよく、分枝鎖状のＰＥＧ分子は、中核から生じるさらなるＰＥＧ分子を有することができ、そして／または、複数のＰＥＧ分子は、ポリマー骨格にグラフトすることができる。ＰＥＧとしては、低分子量または高分子量のＰＥＧ、例えば、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３４００、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ６０００、ＰＥＧ９０００、ＰＥＧ１００００、ＰＥＧ２００００、またはＰＥＧ５００００（上記数字、例えば５００は、平均分子量を示す）を挙げることができる。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ化脂質は、ナノキャリア（例えば、リポソーム）の二重層中に、ナノキャリア「ステルス」を作製するのに十分な量で存在し、ステルスナノキャリアは減少した免疫原性を示す。他の適切なステルス剤としては、限定されないが、デンドリマー、ポリアルキレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリカルボキシラート、ポリサッカリド、および／またはヒドロキシアルキルデンプンを挙げることができる。ステルス剤を、本明細書中にさらに記載のように、共有結合および／または非共有結合を介して本発明の標的化送達組成物に結合させることができる。
【００４２】
本明細書において使用される場合、用語「に包埋された」は、ナノキャリアの表面の、またはその表面の近傍の剤の位置を指す。ナノキャリアに包埋された剤は、例えば、リポソームの二重層膜内に位置してもよいし、ナノキャリアの外側ポリマーシェル内に、そのシェル内に含まれるように位置してもよい。
【００４３】
本明細書において使用される場合、用語「に封入された」は、ナノキャリアの内側に囲い込まれているかまたは完全に含まれている剤の位置を指す。リポソームの場合、例えば、治療剤および／または診断剤を、リポソームの水性内部に存在するように封入することができる。次いで、リポソームを不安定化するか、または封入された剤の放出を他の方法で生じさせることを目的とするある特定の条件によって、このような封入された剤の放出を誘発することができる。
【００４４】
本明細書において使用される場合、用語「に係留された」は、成分の１つまたは複数が空間内で自由に動き回ることができるような、ある成分の別の成分への結合を指す。ある特定の例示的な実施形態では、結合成分を、ナノキャリア周囲の溶液中で自由に動き回るようにナノキャリアに係留することができる。いくつかの実施形態では、結合成分は、ナノキャリアの表面に係留され、表面から離れるように延ばすことができる。
【００４５】
本明細書において使用される場合、用語「脂質」は脂質分子を指し、脂肪、ワックス、ステロール、コレステロール、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、カチオン性脂質またはアニオン性脂質、および誘導体化脂質などを挙げることができる。脂質は、ミセル、単層、および二重層膜を形成することができる。ある特定の実施形態では、脂質は、リポソームに自己組織化することができる。他の実施形態では、脂質は、単層または二重層としてナノキャリアの表面を覆うことができる。
【００４６】
本明細書において使用される場合、用語「被験体」は、寿命の任意の段階にある任意の哺乳動物、特にヒトを指す。
【００４７】
本明細書において使用される場合、用語「投与する」、「投与された」、または「投与すること」は、本発明の標的化送達組成物を投与する方法を指す。本発明の標的化送達組成物は、局所投与、非経口投与、静脈内投与、皮内投与、筋肉内投与、結腸投与、直腸投与、または腹腔内投与を含む様々な方法で投与することができる。非経口投与、および静脈内投与は、好ましい投与方法である。標的化送達組成物は、組成物または製剤の一部として投与することもできる。
【００４８】
本明細書において使用される場合、状態、疾患、障害、または症候を「処置する」または状態、疾患、障害、または症候の「処置」という用語は、（ｉ）疾患、障害、または症候を阻害すること、すなわち、その発達を停止すること、および（ｉｉ）疾患、障害、または症候を軽減すること、すなわち、疾患、障害、または症候の後退を引き起こすことを包含する。当技術分野において公知であるように、全身送達対局所送達、年齢、体重、全体的な健康、性別、食事、投与時間、薬物相互作用、および状態の重症度についての調整が必要であり得、当業者による通常の実験によって確認することができる。
【００４９】
本明細書において使用される場合、用語「製剤」は、被験体に投与するための成分の混合物を指す。例えば、関節内（関節内）経路、静脈内経路、筋肉内経路、腫瘍内経路、皮内経路、腹腔内経路、ならびに皮下経路などによる非経口投与に適切な製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を意図されたレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有することができる水性および非水性の等張性滅菌注射液剤、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含むことができる水性滅菌懸濁剤および非水性滅菌懸濁剤を含む。注射液剤および懸濁剤は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤からも調製することができる。標的化送達組成物の製剤は、単位用量または複数回用量の密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアルで提供することができる。標的化送達組成物は、単独でまたは他の適切な成分と組み合わせて、口または鼻部を通じた吸入を介して投与されるエアロゾル製剤（すなわち、これらを「噴霧する」ことができる）にすることができる。エアロゾル製剤は、加圧された許容され得る噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、および窒素などの中に入れることができる。直腸投与に適切な製剤としては、例えば、坐剤基剤とともに有効量の標的化送達組成物を含む坐剤が挙げられる。適切な坐剤基剤としては、天然または合成のトリグリセリドまたはパラフィン炭化水素が挙げられる。加えて、標的化送達組成物と、基剤（例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレングリコール、およびパラフィン炭化水素が挙げられる）との組み合わせを含有するゼラチン直腸カプセルを使用することも可能である。ある特定の実施形態では、製剤は、局所投与することもできるし、点眼剤の形態で投与することもできる。
【００５０】
本発明の実施形態
ＩＩ．  概要
本発明は、被験体における病態を処置および診断するための標的化送達組成物および該組成物の使用方法を提供する。開示される組成物および方法は、現存のアプローチを超える多数の有益な特徴を提供する。例えば、標的化送達組成物は、個別のモノマー数を有するように合成し、例えば、特定の長さおよび／または化学的特性を提供するように調整することができる連結基を含む。さらに、連結基は、完全にカスタマイズ可能であり、１つのモノマー型のみまたは複数のモノマー型を任意の順序で含むように調製され得る。連結基を、簡単な自動化合成を可能にする固相支持体上に合成することもできる。標的化送達組成物を使用して、通常の投薬量で投与した場合に患者に有毒であり得る用量よりも低い用量での剤の利用によってより有効に疾患を処置することができる。
【００５１】
この固形腫瘍微小環境への侵入は、ＭＭＰｉ標的化リポソームが全身血液供給を介して近づくことを可能にすることによって達成され得る。かなりの割合の腫瘍血管が不十分に形成されて「漏出性」を示すので、ＭＭＰｉ標的化リポソームはここで腫瘍間質ＭＭＰ酵素と接触して、酵素勾配に対して分配することができる。このことおよびＥＰＲ効果によって、効果的にナノ粒子リポソームが腫瘍間質に送達される。一旦間質内でＭＭＰｉ標的化リポソームが膜結合ＭＭＰ酵素と接触してエンドサイトーシスによって内在化することができると、リポソーム封入薬物を細胞に送達することができる。したがって、適切に係留および連結されたＭＭＰ酵素阻害剤（ＭＭＰｉ）分子は、腫瘍間質に結合することができ、適切に設計された場合、膜結合ＭＭＰ酵素を発現する細胞内に内在化することができ、したがって、ナノ粒子／細胞傷害性薬物を腫瘍または腫瘍間質細胞内に送達することができる。
【００５２】
ＩＩＩ．  標的化送達組成物
Ａ．  ナノキャリアを含む標的化送達組成物
一態様では、本発明の標的化送達組成物としては、（ａ）治療剤もしくは診断剤またはこれらの組み合わせを含むナノキャリア；および（ｂ）式：Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉを有するコンジュゲートを含む標的化送達組成物を挙げることができる。かかるコンジュゲートについて、Ａは上記コンジュゲートを上記ナノキャリアに結合させるための結合成分であり、ＭＭＰｉはＭＭＰの阻害剤である。（ＬＰＥＧ）は、ｉ）１〜３つのポリエチレングリコール成分を有する連結基；ｉｉ）式［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍを有する連結基；およびｉｉｉ）式−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−を有する連結基から選択される。式［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍを有する連結基について、ＥＧはエチレングリコール成分（例えば、エチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、およびヘキサエチレングリコールなど）を表し、Ｐはホスホリルまたはチオホスホリル基を表し、下付き文字ｍは１〜１５の整数である。式−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−を有する連結基について、Ｚ１およびＺ３は、定義された長さを有するＰＥＧ成分およびＷｎからなる群より独立して選択され、ここで、Ｗはアミノ酸であり、下付き文字ｎは０〜３の整数であり；Ｚ２は、定義された長さを有するＰＥＧ成分ならびにＺ１およびＺ３をつなげるためのアミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択されるカップリング基からなる群より選択される。
【００５３】
ナノキャリア
多種多様なナノキャリアを、標的化送達組成物の構築に使用することができる。当業者によって認識されているように、ナノキャリアの特性、例えば、サイズは、ナノキャリアの種類および／または用途、ならびに当技術分野において一般に周知の他の要因に依存し得る。適切な粒子は、球体、スフェロイド、平型、板形状、管、立方体、直平行六面体、長円形、楕円、円柱、円錐体または角錐であり得る。適切なナノキャリアは、最大寸法（例えば、直径）のサイズが約１ｎｍ〜約１０００ｎｍ、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍ、および約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍの範囲であり得る。
【００５４】
適切なナノキャリアは、当技術分野において一般に公知の様々な材料で作製することができる。いくつかの実施形態では、ナノキャリアは、脂質、ポリマー、シリカ、または金および酸化鉄などの金属材料などを含む１つの物質または様々な物質の任意の組み合わせを含むことができる。ナノキャリアの例としては、限定されないが、リポソーム、ミセル、リポタンパク質、脂質コーティングバブル、ブロックコポリマーミセル、ポリマーソーム、ニオソーム、酸化鉄粒子、金粒子、シリカ粒子、デンドリマー、または量子ドットを挙げることができる。
【００５５】
いくつかの実施形態では、ナノキャリアは、飽和脂質または不飽和脂質から部分的または完全に構成されるリポソームである。適切な脂質としては、限定されないが、脂肪、ワックス、ステロール、コレステロール、脂溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、および誘導体化脂質などを挙げることができる。いくつかの実施形態では、適切な脂質としては、両親媒性脂質、中性脂質、非カチオン性脂質、アニオン性脂質、カチオン性脂質、または疎水性脂質を挙げることができる。ある特定の実施形態では、脂質としては、細胞膜に典型的に存在する脂質、例えばリン脂質および／またはスフィンゴ脂質を挙げることができる。適切なリン脂質としては、限定されないが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）が挙げられる。適切なスフィンゴ脂質としては、限定されないが、スフィンゴシン、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、スルファチド、ガングリオシド、およびフィトスフィンゴシンが挙げられる。他の適切な脂質としては、脂質抽出物、例えば、卵ＰＣ、心臓抽出物、脳抽出物、肝臓抽出物、およびダイズＰＣを挙げることができる。いくつかの実施形態では、ダイズＰＣとしては、ヒドロダイズＰＣ（Ｈｙｄｒｏ  Ｓｏｙ  ＰＣ）（ＨＳＰＣ）を挙げることができる。カチオン性脂質としては、限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、およびＮ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）が挙げられる。非カチオン性脂質としては、限定されないが、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、およびジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ��、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６−Ｏ−モノメチルＰＥ、１６−Ｏ−ジメチルＰＥ、１８−１−トランスＰＥ、１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）（ＳＯＰＥ）、１，２−ジエライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ｐｈｏｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）（トランスＤＯＰＥ）、およびカルジオリピンが挙げられる。ある特定の実施形態では、脂質としては、ＰＥＧ化脂質などの誘導体化脂質を挙げることができる。誘導体化脂質としては、例えば、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００、コレステロール−ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ−ポリグリセロール、または当技術分野において一般に周知の他の誘導体を挙げることができる。
【００５６】
脂質の任意の組み合わせを、リポソームなどのナノキャリアを構築するのに使用することができる。ある特定の実施形態では、リポソームなどの標的化送達組成物の脂質組成は、リポソームの特性、例えば、漏出速度、安定性、粒子サイズ、ゼータ電位、タンパク質結合性、ｉｎ  ｖｉｖｏ循環、および／または腫瘍、肝臓、および脾臓などの組織への蓄積に影響を与えるように調整することができる。例えば、ＤＳＰＣおよび／またはコレステロールを使用して、リポソームからの漏出を減少させることができる。ＤＳＰＧおよび／またはＤＯＴＡＰなどの負または正に荷電した脂質は、リポソームの表面電荷に影響を与えるように含めることができる。いくつかの実施形態では、リポソームは、約１０種類以下の脂質、または約５種類以下の脂質、または約３種類以下の脂質を含むことができる。存在する特定の種類の脂質のモル百分率（ｍｏｌ％）は、典型的には、リポソームなどのナノキャリア中に存在する総脂質の約０％〜約１０％、約１０％〜約３０％、約３０％〜約５０％、約５０％〜約７０％、約７０％〜約９０％、または約９０％〜１００％に及ぶ。本明細書において記載される脂質はリポソームに含めることもできるし、または該脂質は、ポリマーナノキャリアなどの本発明のナノキャリアをコーティングするのに使用することもできる。コーティングは、ナノキャリアを部分的または完全に囲むものでもよく、単層および／または二重層を含むことができる。一実施形態では、リポソームは、約５０．６ｍｏｌ％のＨＳＰＣ、約４４．３ｍｏｌ％のコレステロール、および約５．１ｍｏｌ％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００から構成され得る。
【００５７】
他の実施形態では、ナノキャリアの一部または全部は、ポリマー、例えば、ブロックコポリマー、またはナノキャリアを作製するための技術分野で公知の他のポリマーを含むことができる。いくつかの実施形態では、ポリマーは、生分解性および／または生体適合性であり得る。適切なポリマーとしては、限定されないが、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマラート（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｆｕｍｅｒａｔｅ）、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリラート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリラート、ポリメタクリラート、ポリシアノアクリラート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、およびこれらの組み合わせを挙げることができる。いくつかの実施形態では、例示的な粒子としては、シェル架橋クネデル（ｓｈｅｌｌ  ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄ  ｋｎｅｄｅｌ）を挙げることができ、これは、以下の参考文献：Ｂｅｃｋｅｒら、米国特許出願第１１／２５０８３０号明細書；Ｔｈｕｒｍｏｎｄ，Ｋ．Ｂら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１９（２８）６６５６−６６６５（１９９７））；Ｗｏｏｌｅｙ，Ｋ．Ｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．，３（９）：１３９７−１３９９（１９９７）；Ｗｏｏｌｅｙ，Ｋ．Ｌ．，Ｊ．Ｐｏｌｙ．Ｓｃｉ．：Ｐａｒｔ  Ａ：Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｃｈｅｍ．，３８：１３９７−１４０７（２０００）にさらに記載されている。他の実施形態では、適切な粒子としては、ポリ（乳酸ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を挙げることができる（Ｆｕ，Ｋら、Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．，２７：１００−１０６（２０００））。
【００５８】
ナノキャリアへ結合させるためのコンジュゲート
ある特定の実施形態では、ナノキャリアを含む標的化送達組成物はまた、式：Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉを有するコンジュゲートを含むことができ、ここで、結合成分Ａを使用してコンジュゲートをナノキャリアへ結合させることができる。結合成分は、ナノキャリア上の任意の位置（ナノキャリア表面上など）に結合することができる。結合成分は、種々の方法（共有結合および／または非共有結合が含まれる）を介してナノキャリアに結合することができる。以下にさらに記載するように、コンジュゲートはまた、連結基（ＬＰＥＧ）およびＭＭＰｉ標的化剤を含む。
【００５９】
ある特定の実施形態では、結合成分Ａは、ナノキャリア上に存在する反応基に結合成分を共有結合させるのに使用され得る官能基を含むことができる。官能基は、例えば、結合成分の末端位置などの結合成分のどこにでも位置することができる。多種多様な官能基が当技術分野において一般に公知であり、いくつかのクラスの反応、例えば、限定されないが、求核置換（例えば、アミンおよびアルコールのハロゲン化アシルまたは活性エステルとの反応）、求電子置換（例えば、エナミン反応）、ならびに炭素−炭素および炭素−ヘテロ原子多重結合への付加（例えば、マイケル反応またはディールス−アルダー付加）の下で反応することができる。これらのおよび他の有用な反応は、例えばＭａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８５；およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９９６で考察されている。適切な官能基としては、例えば、（ａ）限定されないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾールエステル、酸ハロゲン化物、アシルイミダゾール、チオエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、アルキル、アルケニル、アルキニル、および芳香族エステルを含むカルボキシル基およびこれらの種々の誘導体；（ｂ）エステル、エーテル、アルデヒドなどに変換することができるヒドロキシル基（ｃ）ハロアルキル基であって、ハロゲン化物を、求核基、例えば、アミン、カルボキシラートアニオン、チオールアニオン、カルボアニオン、またはアルコキシドイオンなどで、後に置き換えることができ、それにより、ハロゲン原子の部位において新しい基の共有結合をもたらすハロアルキル基；（ｄ）例えば、マレイミド基などの、ディールス−アルダー反応に関与することができるジエノフィル基；（ｅ）例えば、イミン、ヒドラゾン、セミカルバゾン、もしくはオキシムなどのカルボニル誘導体の形成を介して、またはグリニャール付加もしくはアルキルリチウム付加などの反応を介しての誘導体化のためのアルデヒド基またはケトン基；（ｆ）例えば、スルホンアミドを形成するためのアミンとの後続の反応のためのハロゲン化スルホニル基；（ｇ）ジスルフィドに変換することができるか、またはハロゲン化アシルもしくはマイケル受容体と反応することができるチオール基；（ｈ）例えば、アシル化、アルキル化、または酸化され得るアミン基またはスルフヒドリル基；（ｉ）例えば、付加環化、アシル化、マイケル付加などを起こすことができるアルケン；ならびに（ｊ）例えば、アミンおよびヒドロキシル化合物と反応することができるエポキシドを挙げることができる。いくつかの実施形態では、クリック化学ベースのプラットフォームを用いて、ナノキャリアに結合成分を結合させることができる（Ｋｏｌｂ，Ｈ．Ｃ．ら，Ｍ．Ｇ．Ｆｉｎｎ  ａｎｄ  Ｋ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｅｄ．４０（１１）：２００４−２０２１（２００１））。いくつかの実施形態では、結合成分は、１つの官能基、またはナノキャリアとの複数の���有結合をもたらす複数の官能基を含むことができる。
【００６０】
表１は、本発明に使用され得る官能基のさらなる非限定的かつ代表的なリストを提供する。
表１．  共役化学反応についての例示的な官能基のペア
【表１】
2015502946.tif 000003
【００６１】
他の実施形態では、結合成分は、非共有結合性の相互作用によってナノキャリアに結合させることができ、これらとしては、限定されないが、親和性相互作用、金属配位、物理的吸着、疎水性相互作用、ファンデルワールス相互作用、水素結合相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用、抗体結合相互作用、および相補性ＤＮＡ同士間のハイブリダイゼーション相互作用などを挙げることができる。いくつかの実施形態では、結合成分は、リポソームなどのナノキャリアの脂質二重層部分に存在してもよい。例えば、結合成分は、脂質二重層の疎水性領域および／または親水性領域と部分的または完全に相互作用する脂質であり得る。いくつかの実施形態では、結合成分は、ナノキャリアとの非共有結合性相互作用を可能にする１つの基を含むことができるが、複数の基も意図される。例えば、複数のイオン電荷を使用することによって、結合成分とナノキャリアとの間の十分な非共有結合性相互作用を生じさせることができる。代替の実施形態では、結合成分は、複数の脂質が、リポソームの二重層膜、またはナノキャリア上にコーティングされた二重層もしくは単層と相互作用するように、複数の脂質を含むことができる。ある特定の実施形態では、周囲の溶液の条件を改変して非共有結合性相互作用を破壊し、それにより、ナノキャリアから結合成分を解離させることができる。
【００６２】
連結基
（ＬＰＥＧ）と称される連結基は、本明細書中に提供した組成物中で使用される標的化送達コンジュゲートの別の特徴である。当業者であれば、様々な連結基が当技術分野において公知であり、例えば、以下の参考文献：Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２ｎｄＥｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（２００８）中に見出され得ることを認識することができる。本発明の連結基は、コンジュゲートの異なる部分（例えば、ＡおよびＭＭＰｉ）の間に間隔を提供するなど、さらなる特性を組成物に提供するのに使用され得る。この間隔を使用して、例えば、標的化剤が標的に結合する場合に、例えばナノキャリアによって引き起こされる立体障害問題を克服することができる。いくつかの実施形態では、連結基を使用して、標的化送達組成物の物理的特性を変化させることができる。
【００６３】
ある一群の実施形態では、連結基（ＬＰＥＧ）は、式：
−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−
を有する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、Ｚ１およびＺ３は、定義された長さを有するＰＥＧ成分およびＷｎからなる群より独立して選択され、ここで、Ｗはアミノ酸であり、下付き文字ｎは０〜３の整数であり；Ｚ２は、定義された長さを有するＰＥＧ成分ならびにＺ１およびＺ３をつなげるためのアミド、チオアミド、エステル、カルバマート、または尿素から選択されるカップリング基からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、（ＬＰＥＧ）は−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−である。いくつかの実施形態では、Ｚ１はＷｎであり；Ｚ２は、アミド、チオアミド、エステル、カルバマート、尿素、またはこれらの組み合わせから選択され；Ｚ３は定義された長さを有するＰＥＧ成分である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは１である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは２である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは３である。いくつかの実施形態では、下付き文字ｎは０である。下付き文字ｎが０以外である実施形態では、アミノ酸Ｗはα−アミノ酸であり得る。連結基は、任意の適切なα−アミノ酸を含むことができる。適切なα−アミノ酸の例としては、限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、およびチロシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、α−アミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、およびグリシンからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、α−アミノ酸は、グルタミン酸およびリジンからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、α−アミノ酸はリジンである。
【００６５】
いくつかの実施形態では、Ｚ１およびＺ３の各々は定義された長さを有するＰＥＧ成分であり、Ｚ２は２つのＰＥＧ成分をつなげるためのカップリング基（例えば、アミド、チオアミド、エステル、カルバマート、尿素、または組み合わせ連結基）である。当業者は、カップリング基（Ｚ２）が多くの場合、各末端に官能基を有するアルキレン基であり、官能基は、−Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３−のアセンブリを容易にするために同一であっても異なっていてもよいことを認識する。例えば、ある一群の実施形態では、Ｚ１は、結合成分（Ａ、好ましくは、リン脂質またはカルジオレプチン分子などの脂質）に結合したＰＥＧ成分である。同様に、Ｚ３は、ＭＭＰｉに結合したＰＥＧ成分である。連結アセンブリに用いる公知の長さおよび必要な官能基を有する多数のＰＥＧ成分は、市販されているか公知の方法によって調製され得る。例えば、式：ＨＯ２Ｃ−ＣＨ２ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）２４ＮＨ−ＢＯＣを有するＰＥＧ成分は容易に入手可能であり、適切な連結アセンブリを調製するために選択的に反応することができる官能基を有する。ある一群の実施形態では、Ｚ１はＰＥＧ３４００またはＰＥＧ５０００成分（それぞれ、７７または１４０ポリエチレングリコール単位）である。他の実施形態では、Ｚ３はＰＥＧ１０００成分（２４ポリエチレングリコール単位）である。ある特定の選択された実施形態では、（ＬＰＥＧ）は、式：
−Ｃ（Ｏ）−ＰＥＧ３４００−５０００−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＰＥＧ１０００−Ｃ（Ｏ）−
を有する。
【００６６】
いくつかの実施形態では、（ＬＰＥＧ）は、式：
−Ｃ（Ｏ）−ＰＥＧ３４００−５０００−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）−Ｃ（Ｏ）−
を有する。
【００６７】
ある一群の実施形態では、標的化送達組成物は、式：［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍを有する連結基（ＬＰＥＧ）を含むことができ、ここで、各ＥＧは、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ヘプタエチレングリコール、およびオクタエチレングリコールから独立して選択されるエチレングリコール基であり；Ｐは、ホスファートおよびチオホスファートからなる群より独立して選択される。いくつかの実施形態では、ｍは、ナノキャリアから延びているポリ（エチレングリコール）部分より長い連結基を作製するのに十分な数に等しい場合がある。いくつかの実施形態では、ｍは１を超え得る。他の実施形態では、ｍは、１〜１０、１〜２０、１〜３０、または１〜４０の整数であり得る。さらに他の実施形態では、ｍは、２〜１２、３〜１２、４〜１２、５〜１２、６〜１２、７〜１２、８〜１２、９〜１２、１０〜１２、および１１〜１２の整数であり得る。さらに他の実施形態では、ｍは、４〜２０、６〜２０、８〜２０、１０〜２０、１２〜２０、１４〜２０、１６〜２０、および１８〜２０の範囲であり得る。一実施形態では、ｍは８であり得る。さらに他の実施形態では、ｍは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり得る。ＥＧおよびＰに関して、両方の任意の組み合わせを、連結基に使用することができる。例えば、連結基は、１種のエチレングリコール（ホスファートのみを有するヘキサエチレングリコール（ＨＥＧｐ）など）から構成され得る。他の実施形態では、異なるエチレングリコールを使用し、ホスファートまたはチオホスファートの任意の組み合わせと組み合わせることができる。ある例示的な実施形態では、連結基は、テトラエチレングリコール−ホスファート−ヘキサエチレングリコール−チオホスファート−ヘキサエチレングリコール−ホスファート−トリエチレングリコール−ホスファートであり得る。当業者は、本発明の連結基に利用可能な非常に多くの組み合わせを認識する。
【００６８】
記載の連結基のいくつかのバリエーションを以下に図示する。
【化１】
2015502946.tif 000004
連結基Ａは、オクタエチレングリコールホスファートを示す。Ａでは、ｍは、例えば、１〜２０であり得る。Ａはまた場合により別の連結基の一部であり得るか、Ａを別の連結基に結合することができる。同様に、連結基Ｂは、ヘキサエチレングリコールホスファートを示す（本明細書中でＨＥＧｐとしても記載する）。Ｂは多数の反復単位を含むことができ、例えば、ｍは１〜２０、または、好ましくは約８であり得る。連結基Ｃ中に示すように、ｍは特定の整数（例えば、例示的なトリエチレングリコールホスファートの二量体として示されるように、ｍ＝２）に等しい場合がある。あるいは、連結基を、例えば、ｘ＋ｙ＝ｍであるようにさらなる下付き文字ｘおよびｙを使用して記載することができる。連結基Ｄは、例えば、トリエチレングリコールホスファートに連結されているテトラエチレングリコールホスファートを示す。ある特定の実施形態では、ｘおよびｙの下付き文字付きの括弧内のエチレングリコール部分（ＥＧ）を、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、ヘプタエチレングリコール、およびオクタエチレングリコールからなる群より独立して選択することができる。
【００６９】
治療剤
本発明の標的化治療または診断用送達組成物に使用されるナノキャリアは、治療剤もしくは診断剤またはこれらの組み合わせを含む。治療剤および／または診断剤は、ナノキャリア内、上記ナノキャリア上、または上記ナノキャリア周囲のどこにでも存在することができる。いくつかの実施形態では、治療剤および／または診断剤は、ナノキャリア内に包埋するか、ナノキャリア内に封入するか、またはナノキャリアに係留することができる。ある特定の実施形態では、ナノキャリアはリポソームであり、診断および／または治療剤は、上記リポソーム内に封入されている。
【００７０】
本発明に使用される治療剤は、被験体における状態を処置するように向けられた任意の剤を含むことができる。一般に、限定されないが、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（Ｕ．Ｓ．Ｐ．），Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，２００１；Ｋａｔｚｕｎｇ，Ｅｄ．，Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ／Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，８ｔｈ  ｅｄ．，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２１，２０００；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ；および／またはＴｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１８ｔｈ  ｅｄ．，２００６，  Ｂｅｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｅｒｋｏｗ，  Ｅｄｓ．，  Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ；または、動物の場合には、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，９ｔｈ  ｅｄ．，Ｋａｈｎ  Ｅｄ．，Ｍｅｒｃｋ，Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，  ２００５（これらの文献はすべて、参考として本明細書に援用される）に列挙されている剤を含む当技術分野において公知の任意の治療剤を使用することができる。
【００７１】
治療剤は、処置されることが所望される疾患の種類に応じて選択することができる。例えば、ある特定の種類のがんまたは腫瘍、例えば、がん、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、および中枢神経系がん、ならびに固形腫瘍および混合腫瘍は、同じまたは場合により異なる治療剤の投与を伴い得る。ある特定の実施形態では、被験体におけるがん状態を処置するかまたは該がん状態に影響を与えるように治療剤を送達することができ、治療剤としては、化学療法剤、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、および他の抗がん剤を挙げることができる。いくつかの実施形態では、上記剤としては、アンチセンス剤、マイクロＲＮＡ剤、ｓｉＲＮＡおよび／またはｓｈＲＮＡ剤を挙げることができる。
【００７２】
いくつかの実施形態では、治療剤としては、限定されないが、アバスチン、ドキソルビシン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔｉｂｉｎｅ）、またはタキサン、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルを含む抗がん剤または細胞傷害剤を挙げることができる。さらなる抗がん剤としては、限定されないが、２０−ｅｐｉ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３，４−イポメアノール、５−エチニルウラシル、９−ジヒドロタキソール、アビラテロン、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール塩酸塩、アクロニン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、全ての−ｔｋアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アンボマイシン、酢酸アメタントロン、アミドックス（ａｍｉｄｏｘ）、アミホスチン、アミノグルテチミド、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、新脈管形成阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリクス（ａｎｔａｒｅｌｉｘ）、アントラマイシン、；抗背側形態形成タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１）、抗エストロゲン剤、アンチネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィディコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス制御因子、アプリン酸、ＡＲＡ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザシチジン、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、アゼテパ、アゾトマイシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ベンゾクロリン、ベンゾデパ、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、β−アレチン、ベタクラマイシンＢ、ベツリン酸、ＢＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビサントレン塩酸塩、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ジメシル酸ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、ＢＲＣ／ＡＢＬアンタゴニスト、ブレフレート、ブレキナルナトリウム、ブロピリミン、ブドチタン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシイミン、カクチノマイシン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カルステロン、カンプトテシン誘導体、カナリアポックスＩＬ−２、カペシタビン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カレストＭ３、カルムスチン、ｃａｍ７００、軟骨由来阻害因子、カルビシン塩酸塩、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セデフィンゴール、セトロレリクス、クロラムブシル、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シロレマイシン、シスプラチン、ｃｉｓ−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベシジン８１６（ｃｒａｍｂｅｓｃｉｄｉｎ  ８１６）、クリスナトール、メシル酸クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、キュラシンＡ、シクロペンタアントラキノン、シクロホスファミド、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビン、シタラビンオクホスフェート、細胞溶解因子、シトスタチン、ダカルバジン、ダクリキシマブ、ダクチノマイシン、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、デスロレリン、デキシホスファミド、デキソルマプラチン、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、デザグアニン、メシル酸デザグアニン、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドキソルビシン塩酸塩、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、ドロナビノール、ズアゾマイシン（ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ）、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エダトレキサート、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロミチン、塩酸エフロミチン、エレメン、エルサミトルシン、エミテフール、エンロプラチン、エンプロメート、エピプロピジン、エピルビシン、エピルビシン塩酸塩、エプリステリド、エルブロゾール、赤血球遺伝子療法ベクターシステム、塩酸エソルビシン、エストラムスチン、エストラムスチン類似体、リン酸エストラムスチンナトリウム、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、エキセメスタン、ファドロゾール、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フロクスウリジン、フルアステロン、フルダラビン、リン酸フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン、フルオロウラシル、フルオロシタビン、ホルフェニメクス、フォルメスタン、ホスキドン、ホストリエシン、ホストリエシンナトリウム、ホテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリクス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ヒドロキシウレア、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、塩酸イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イホスファミド、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫賦活ペプチド、インスリン様増殖因子−１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロンアルファ−２Ａ、インターフェロンアルファ−２Ｂ、インターフェロンアルファ−Ｎ１、インターフェロンアルファ−Ｎ３、インターフェロンベータ−ＩＡ、インターフェロンガンマ−ＩＢ、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、ヨードドキソルビシン、イプロプラチン、イリノテカン、塩酸イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテ���ト、ランレオチド、酢酸ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病抑制因子、白血球アルファインターフェロン、酢酸ロイプロリド、ロイプロリド／エストロゲン／プロゲステロン、リュープロレリン、レバミゾール、リアロゾール、塩酸リアロゾール、直鎖ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リッソクリナミド７（ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ  ７）、ロバプラチン、ロンブリシン（ｌｏｍｂｒｉｃｉｎｅ）、ロメトレキソール、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロニダミン、ロソキサントロン、塩酸ロソキサントロン、ロバスタチン、ロキソリビン、ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解性ペプチド、メイタンシン（ｍａｉｔａｎｓｉｎｅ）、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリライシン阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、メイタンシン、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルバロン、メルカプトプリン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メトクロプラミド、メトプリン、メツレデパ、微細藻類プロテインキナーゼＣ阻害剤、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリモスチム、ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトグアゾン、ミトラクトール、ミトマルシン、マイトマイシン、マイトマイシン類似体、ミトナフィド、ミトスペル、ミトタン、マイトトキシン線維芽細胞増殖因子−サポリン、ミトキサントロン、塩酸ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、モノホスホリル脂質ａ／ミオバクテリウム細胞壁ＳＫ、モピダモール、多剤耐性遺伝子阻害剤、多発性腫瘍抑制因子１に基づく療法、マスタード抗がん剤、ミカペルオキシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミコフェノール酸、ミリアポロン、ｎ−アセチルジナリン、ナファレリン、ナグレスチプ、ナロキソン／ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素モジュレーター、窒素酸化物抗酸化剤、ニトルリン、ノコダゾール、ノガラマイシン、ｎ−置換ベンズアミド、０６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘導物質、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、オキシスラン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペグアスパラガーゼ、ペルデシン、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペントサンポリサルフェートナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、硫酸ペプロマイシン、ペルフルブロン、ペルホスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、フェニルア��テート、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピポブロマン、ピポスルファン、ピラルビシン、ピリトレキシム、塩酸ピロキサントロン、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター、白金錯体、白金化合物、白金−トリアミン錯体、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、プロピルビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、前立腺がん抗アンドロゲン剤、プロテアソーム阻害剤、プロテインＡに基づく免疫モジュレーター、プロテインキナーゼＣ阻害剤、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシン、プルプリン、ピラゾフリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、ＲＡＦアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ＲＡＳファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＲＡＳ阻害剤、ＲＡＳ−ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン、レニウムＲＥ１８６エチドロネート、リゾキシン、リボプリン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ＲＮＡｉ、ログレチミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメクス、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、塩酸サフィンゴール、サイントピン、ｓａｒｃｎｕ、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、ＳＤＩ  １模倣体、セムスチン、老化由来阻害因子１（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  １）、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達モジュレーター、シムトラゼン、単鎖抗原結合タンパク質、シゾフィラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）、ソブゾキサン、ボロカプテイトナトリウム、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルホス酸ナトリウム、スパルホス酸、スパルソマイシン、スピカマイシンＤ、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、スプレノペンチン、スポンギスタチン１、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストレプトニグリン、
ストレプトゾシン、ストロメライシン阻害剤、スルフィノシン、スロフェヌル、超活性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリソマイシン、タリムスチン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、塩酸テロキサントロン、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、タリブラスチン、サリドマイド、チアミプリン、チオコラリン、チオグアニン、チオテパ、トロンボポエチン、トロンボポエチン模倣体、チマルファシン、サイモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、チアゾフリン、スズエチルエチオプルプリン、チラパザミン、二塩化チタノセン、塩酸トポテカン、トプセンチン、トレミフェン、クエン酸トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、酢酸トレストロン、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、リン酸トリシリビン、トリメトレキセート、グルクロン酸トリメトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、塩酸ツブロゾール、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チロホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメクス、ウラシルマスタード、ウレデパ、尿生殖洞由来増殖阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベラレソール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、硫酸ビネピジン、硫酸ビングリシネート、硫酸ビンロイロシン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、ビンキサルチン、硫酸ビンゾリジン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、またはゾルビシン塩酸塩、または上記の薬物の適切なプロドラッグを挙げることができる。
【００７３】
いくつかの実施形態では、治療剤は、２つ以上の治療剤の投与を含む剤カクテルの一部であり得る。例えば、シスプラチンおよびオキサリプラチンの両方を有するリポソームを投与することができる。加えて、治療剤は、免疫刺激アジュバント、例えば、アルミニウムゲルもしくはアルミニウム塩のアジュバント（例えば、リン酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｍｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）または水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、エンドトキシン、およびトール様受容体アジュバントなどの前、それらの後、またはそれらとともに送達することができる。
【００７４】
本発明の治療剤は、治療用途に使用するための放射性核種も含むことができる。例えば、１１１Ｉｎなどのオージェ電子のエミッターを、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）または１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）などのキレートと結合させて、処置に使用するべき標的化送達組成物、例えばリポソームに含めることができる。他の適切な放射性核種および／または放射性核種−キレートの結合としては、限定されないが、ベータ放射性核種（１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、８８／９０Ｙ）とＤＯＴＡ、６４Ｃｕ−ＴＥＴＡ、１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）３−ＩＤＡ；１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）トリアミン（環状または直鎖状）、１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）３−Ｅｎｐｙ２、および１８８／１８６Ｒｅ（ＣＯ）３−ＤＴＰＡを挙げることができる。
【００７５】
上記のように、本発明に使用される治療剤は、ナノキャリアに包埋するか、ナノキャリアに封入するか、またはナノキャリアに係留するなどの様々な方法でナノキャリアに結合させることができる。治療剤の充填は、例えば、以下の参考文献：ｄｅ  Ｖｉｌｌｉｅｒｓ，Ｍ．Ｍら、Ｅｄｓ．，Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．，Ｅｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎｔｏ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００６）に開示されている当技術分野において公知の様々な方法によって行うことができる。一実施形態群では、１つまたは複数の治療剤をリポソームに充填することができる。リポソームの充填は、例えば、能動的または受動的に行うことができる。例えば、治療剤がリポソーム内に封入されるように、溶液中でのリポソームの自己組織化プロセスの間に治療剤を含めることができる。ある特定の実施形態では、治療剤は、リポソーム二重層に、または多重膜リポソームの複数の層内に包埋することもできる。代替の実施形態では、治療剤は、リポソームに能動的に充填することができる。例えば、治療剤を含有する溶液に対して二重層膜を透過性にするような条件（例えば、エレクトロポレーション）にリポソームを曝露し、それにより、治療剤がリポソームの内部体積に入ることを可能にすることができる。
【００７６】
診断剤
本発明に使用される診断剤としては、例えば、以下の参考文献：Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００４）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｅｄ．，Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５）；Ｖａｌｌａｂｈａｊｏｓｕｌａ，Ｓ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｆｏｒ  ＰＥＴ  ａｎｄ  ＳＰＥＣＴ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）に示されている当技術分野において公知の任意の診断剤を挙げることができる。診断剤は、限定されないが、γ放射シグナル、放射性シグナル、エコー源性シグナル、光学シグナル、蛍光シグナル、吸収シグナル、磁気シグナル、または断層撮影シグナルを含む検出可能なシグナルを提供および／または増強する剤を含む様々な方法によって検出することができる。診断剤をイメージングするための技術としては、限定されないが、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、光学的イメージング、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、Ｘ線イメージング、およびγ線イメージングなどを挙げることができる。
【００７７】
いくつかの実施形態では、診断剤は、例えば、様々な画像診断技術に使用される金属イオンに結合するキレーターを含むことができる。例示的なキレーターとしては、限定されないが、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［４−（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカ−１−イル）メチル］安息香酸（ＣＰＴＡ）、シクロヘキサンジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）四酢酸（ＥＧＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、クエン酸、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、イミノ二酢酸（ＩＤＡ）、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ（メチレンホスホン酸）（ＤＯＴＰ）、１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、およびこれらの誘導体が挙げられる。
【００７８】
放射性同位体は、本明細書において記載される診断剤のいくつかに組み込むことができ、放射性同位体としては、γ線、ポジトロン、β粒子およびα粒子、ならびにＸ線を放出する放射性核種を挙げることができる。適切な放射性核種としては、限定されないが、２２５Ａｃ、７２Ａｓ、２１１Ａｔ、１１Ｂ、１２８Ｂａ、２１２Ｂｉ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１４Ｃ、１０９Ｃｄ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、３Ｈ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３０Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１３Ｎ、１５Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、２１２Ｐｂ、１０３Ｐｄ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、４７Ｓｃ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、９９ｍＴｃ、８８Ｙおよび９０Ｙが挙げられる。ある特定の実施形態では、放射性作用物質としては、１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＤＴＰＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＥＮＰｙ２、６２／６４／６７Ｃｕ−ＴＥＴＡ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３−ＩＤＡ、および９９ｍＴｃ（ＣＯ）３トリアミン（環状または直鎖状）を挙げることができる。他の実施形態では、作用物質としては、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、８８／９０Ｙ、６２／６４／６７Ｃｕ、または６７／６８Ｇａを含むＤＯＴＡおよびその種々の類似体を挙げることができる。いくつかの実施形態では、リポソームは、例えば、以下の参考文献：Ｐｈｉｌｌｉｐｓら、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１（１）：６９−８３（２００８）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．＆Ｗｅｉｓｓｉｇ，Ｖ．，Ｅｄｓ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ２ｎｄ  Ｅｄ．：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（２００３）；Ｅｌｂａｙｏｕｍｉ，Ｔ．Ａ．＆Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ  ３３：１１９６−１２０５（２００６）；Ｍｏｕｇｉｎ−Ｄｅｇｒａｅｆ，Ｍら、Ｉｎｔ’ｌ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ３４４：１１０−１１７（２００７）に示されているようなキレートに結合した脂質、例えばＤＴＰＡ−脂質を組み込むことによって放射標識することができる。
【００７９】
他の実施形態では、診断剤としては、光学剤、例えば、蛍光剤、リン光剤、および化学発光剤などを挙げることができる。多数の剤（例えば、色素、プローブ、標識、または指示薬）が当技術分野において公知であり、本発明に使用することができる。（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）を参照のこと）。蛍光剤としては、様々な有機および／もしくは無機の低分子、または様々な蛍光タンパク質、およびこれらの誘導体を挙げることができる。例えば、蛍光剤としては、限定されないが、シアニン、フタロシアニン、ポルフィリン、インドシアニン、ローダミン、フェノキサジン、フェニルキサンテン、フェノチアジン、フェノセレナジン、フルオレセイン、ベンゾポルフィリン、スクアライン、ジピロロピリミドン、テトラセン、キノリン、ピラジン、コリン、クロコニウム、アクリドン、フェナントリジン、ローダミン、アクリジン、アントラキノン、カルコゲノピリリウム類似体、クロリン、ナフタロシアニン、メチン色素、インドレニウム色素、アゾ化合物、アズレン、アザアズレン、トリフェニルメタン色素、インドール、ベンゾインドール、インドカルボシアニン、ベンゾインドカルボシアニン、および４，４−ジフルオロ−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセンの一般構造を有するＢＯＤＩＰＹ（商標）誘導体、ならびに／またはこれらの任意のコンジュゲートおよび／もしくは誘導体を挙げることができる。使用され得る他の剤としては、限定されないが、例えば、フルオレセイン、フルオレセイン−ポリアスパラギン酸コンジュゲート、フルオレセイン−ポリグルタミン酸コンジュゲート、フルオレセイン−ポリアルギニンコンジュゲート、インドシアニングリーン、インドシアニン−ドデカアスパラギン酸コンジュゲート、インドシアニン−ポリアスパラギン酸コンジュゲート、イソスルファンブルー、インドールジスルホネート、ベンゾインドールジスルホネート、ビス（エチルカルボキシメチル）インドシアニン、ビス（ペンチルカルボキシメチル）インドシアニン、ポリヒドロキシインドールスルホネート、ポリヒドロキシベンゾインドールスルホネート、リジッドヘテロ原子インドールスルホネート（ｒｉｇｉｄ  ｈｅｔｅｒｏａｔｏｍｉｃ  ｉｎｄｏｌｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、インドシアニンビスプロパン酸、インドシアニンビスヘキサン酸、３，６−ジシアノ−２，５−［（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（カルボキシメチル）アミノ］ピラジン、３，６−［（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−アザテジノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−モルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−ピペラジノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸、３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジン−２，５−ジカルボン酸Ｓ−オキシド、２，５−ジシアノ−３，６−ビス（Ｎ−チオモルホリノ）ピラジンＳ，Ｓ−ジオキシド、インドカルボシアニンテトラスルホネート、クロロインドカルボシアニン、および３，６−ジアミノピラジン−２，５−ジカルボン酸が挙げられる。
【００８０】
当業者であれば、使用される特定の光学剤が、励起に使用される波長、皮膚組織下の深さ、当技術分野において一般に周知の他の要因に依存し得ることを認識する。例えば、光学剤についての最適な吸収極大または、励起極大は、使用される剤に応じて変化し得るが、一般に、本発明の光学剤は、電磁スペクトルの紫外（ＵＶ）、可視、または赤外（ＩＲ）範囲の光を吸収するか、またはこれらの光によって励起される。イメージングについては、近ＩＲで吸収および放出する色素（約７００〜９００ｎｍ、例えば、インドシアニン）が好ましい。内視鏡的方法を使用する局所視覚化については、可視範囲で吸収する任意の色素が適切である。
【００８１】
いくつかの実施形態では、本発明のプロセスにおいて使用される非イオン化放射線は、約３５０ｎｍ〜約１２００ｎｍの波長の範囲であり得る。例示的な一実施形態では、蛍光剤は、電磁スペクトルの可視部分の青色範囲の波長（約４３０ｎｍ〜約５００ｎｍ）を有する光によって励起することができ、電磁スペクトルの可視部分の緑色範囲の波長（約５２０ｎｍ〜約５６５ｎｍ）で発光する。例えば、フルオレセイン色素は、約４８８ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約５２０ｎｍの発光波長を有する。別の例として、３，６−ジアミノピラジン−２，５−ジカルボン酸は、約４７０ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約５３２ｎｍの波長で蛍光を発する。別の実施形態では、光学剤の励起波長および発光波長は、電磁スペクトルの近赤外範囲に入り得る。例えば、インドシアニングリーンなどのインドシアニン色素は、約７８０ｎｍの波長を有する光で励起することができ、約８３０ｎｍの発光波長を有する。
【００８２】
さらに他の実施形態では、診断剤は、限定されないが、例えば、ヨウ素ベースのＸ線造影剤、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、およびガドリニウムまたはマンガンの錯体などを含む当技術分野において一般に周知の磁気共鳴（ＭＲ）およびＸ線造影剤を含むことができる。（例えば、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００４）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、診断剤は、磁気共鳴（ＭＲ）イメージング剤を含むことができる。例示的な磁気共鳴剤としては、限定されないが、常磁性剤、および超常磁性剤などが挙げられる。例示的な常磁性剤としては、限定されないが、ガドペンテト酸、ガドテル酸、ガドジアミド、ガドリニウム、ガドテリドール、マンガホジピル、ガドベルセタミド、クエン酸第二鉄アンモニウム、ガドベン酸、ガドブトロール、またはガドキセト酸を挙げることができる。超常磁性剤としては、限定されないが、超常磁性酸化鉄およびフェリステンを挙げることができる。ある特定の実施形態では、診断剤は、例えば、以下の参考文献：Ｈ．Ｓ  Ｔｈｏｍｓｅｎ，Ｒ．Ｎ．Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｒ．Ｆ．Ｍａｔｔｒｅｙ，Ｅｄｓ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ｍｅｄｉａ，（Ｂｅｒｌｉｎ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９９）；Ｐ．Ｄａｗｓｏｎ，Ｄ．Ｃｏｓｇｒｏｖｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｇｒａｉｎｇｅｒ，Ｅｄｓ．，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ｍｅｄｉａ（ＩＳＩＳ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａ  １９９９）；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：１８３−２１５（２０００）；Ｂｏｇｄａｎｏｖ，Ａ．Ａら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３７：２７９−２９３（１９９９）；Ｓａｃｈｓｅ，Ａら、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ３２（１）：４４−５０（１９９７）に示されているＸ線造影剤を挙げるができる。Ｘ線造影剤の例としては、限定されないが、イオパミドール、イオメプロール、イオヘキソール、イオペントール、イオプロミド、イオシミド、イオベルソール、イオトロラン、イオタスル、イオジキサノール、イオデシモール、イオグルカミド、イオグルニド、イオグラミド、イオサルコール、イオキシラン、イオパミロン、メトリザミド、イオビトリドール、およびイオシメノールが挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｘ線造影剤としては、イオパミドール、イオメプロール、イオプロミド、イオヘキソール、イオペントール、イオベルソール、イオビトリドール、イオジキサノール、イオトロラン、およびイオシメノールを挙げることができる。
【００８３】
上記治療剤と同様に、診断剤は、例えば、ナノキャリアに包埋され、ナノキャリアに封入され、またはナノキャリアに係留される工程を含む様々な方法でナノキャリアに結合させることができる。同様に、診断剤の充填は、例えば、以下の参考文献：ｄｅ  Ｖｉｌｌｉｅｒｓ，Ｍ．Ｍら、Ｅｄｓ．，Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００９）；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．，Ｅｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎｔｏ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００６）に開示されている当技術分野において公知の様々な方法によって行うことができる。
【００８４】
標的化剤
本発明の標的化送達組成物はまた、ＭＭＰｉ（標的化剤）を含む。一般に、ＭＭＰｉは、任意のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を指す。ある特定の実施形態では、ＭＭＰｉは、式：
【化２】
2015502946.tif 000005
（式中、
Ｘは、ＯおよびＳからなる群より選択されるメンバーであり；
Ｙは、ピリジルおよびフェニルからなる群より選択されるメンバーであり、ここで、上記フェニルは、場合によりＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、およびＣＨ３で置換され；
波線は（ＬＰＥＧ）への結合点を示す）を有する阻害剤である。
【００８５】
ある特定の具体的な実施形態では、ＭＭＰｉは、
【化３】
2015502946.tif 000006
から選択される。
【００８６】
ある特定の具体的な実施形態では、ＭＭＰｉは、
【化４】
2015502946.tif 000007
から選択される。
【００８７】
Ｂ．  ナノキャリアを含む標的化送達組成物の個々の成分
別の態様では、本発明は、本明細書中に開示の標的化送達組成物の個々の成分を提供する。特に、本発明は、式：Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉを有するコンジュゲートを含み、ここで、Ａは結合成分であり、（ＬＰＥＧ）は上記の通りの連結基であり、ＭＭＰｉはＭＭＰ阻害剤である。
【００８８】
当業者であれば、標的化送達組成物の成分は、同様に、上記具体的な各実施形態を含むことを認識するであろう。
【００８９】
ＩＶ．  標的化送達組成物および成分を調製する方法
Ａ．  ナノキャリアを含む標的化送達組成物
本発明の標的化送達組成物を、種々の方法で生成することができる。一態様では、本発明の標的化送達組成物を、ナノキャリアを式：Ａ−（ＬＰＥＧ）−ＭＭＰｉを有するコンジュゲートへ結合させることによって調製することができ、ここで、Ａは上記コンジュゲートの上記ナノキャリアへ結合させるための結合成分であり；（ＬＰＥＧ）は連結基であり；ＭＭＰｉはＭＭＰ阻害剤である。ナノキャリアを、負荷ナノキャリア（例えば、治療剤または診断剤を組み込んでいるもの）または非負荷のナノキャリアのいずれかとしてコンジュゲートと接触させることができる。
【００９０】
ナノキャリア
ナノキャリアを、当技術分野において一般に公知の様々な方法によって生成することができ、このようなナノキャリアを作製する方法は、所望される特定のナノキャリアに依存し得る。当技術分野において利用可能な任意の測定技術を使用して、標的化送達組成物およびナノキャリアの特性を決定することができる。例えば、動的光散乱、Ｘ線光電子顕微鏡法、粉末Ｘ線回折、走査電子顕微鏡法（ＳＥＭ）、透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）、および原子間力顕微鏡法（ＡＦＭ）などの技術を使用して、ナノキャリアおよび／または標的化送達組成物の平均サイズおよび分散度を決定することができる。
【００９１】
本発明の標的化送達組成物に使用されるリポソームを、当技術分野において一般に周知の様々な技術を使用して作製することができる。（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ａ．Ｐ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（２００３）；Ｌａｓｉｃ，Ｄ．Ｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ（１９９７）を参照のこと）。例えば、リポソームは、限定されないが、例えば、押し出し、撹拌、超音波処理、逆相蒸発、水溶液中の自己組織化、電極ベースの形成技術、およびマイクロフルイディック指向型形成技術（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）などの技術によって生成することができる。ある特定の実施形態では、大単層ベシクル（ＬＵＶ）および／または小単層ベシクル（ＳＵＶ）を含むことができる、多層および／または単層であるリポソームを生成するための方法を使用することができる。溶液中のリポソームの自己組織化と同様に、ミセルは、両親媒性分子が、ミセルを形成するのに十分な溶液条件下で溶解される場合にミセルを形成するように、当技術分野において一般に周知の技術を使用して生成することができる。脂質コーティングバブルおよびリポタンパク質も、当技術分野において公知の方法を使用して構築することができる（例えば、Ｆａｒｏｏｋ，Ｕ．，Ｊ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ，６（３２）：２７１−２７７（２００９）；Ｌａｃｋｏら、Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ  ａｓ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｖｅｈｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（２００７）を参照のこと）。
【００９２】
本発明に使用され得るポリマーナノキャリアを作製する方法は、当技術分野において一般に周知である（例えば、Ｓｉｇｍｕｎｄ，Ｗら、Ｅｄｓ．，Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｎａｎｏ−ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ（２００９）；Ｋａｒｎｉｋら、Ｎａｎｏ  Ｌｅｔｔ．，８（９）：２９０６−２９１２（２００８）を参照のこと）。例えば、ブロックコポリマーが溶液中で自己組織化してポリマーソームおよび／またはブロックコポリマーミセルを形成することができるように、当技術分野において公知の合成方法を使用して、ブロックコポリマーを作製することができる。ニオソームは、当技術分野において公知であり、様々な技術および組成物を使用して作製することができる（Ｂａｉｌｌｉｅ  Ａ．Ｊら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３８：５０２−５０５（１９８８））。磁性粒子および／または金属粒子は、当技術分野において公知の任意の方法、例えば、共沈、熱分解、およびマイクロエマルジョンを使用して構築することができる。（Ｎａｇａｒａｊａｎ，Ｒ．＆Ｈａｔｔｏｎ，Ｔ．Ａ．，Ｅｄｓ．，Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｐａｓｓｉｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（２００８）も参照のこと）。金粒子およびこれらの誘導体は、当技術分野において一般に公知の様々な技術、例えば、Ｔｕｒｋｅｖｉｃｈ法、Ｂｒｕｓｔ法、Ｐｅｒｒａｕｔ法、またはソノリシスを使用して作製することができる（Ｇｒｚｅｌｃｚａｋら、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．，３７：１７８３−１７９１（２００８）も参照のこと）。いくつかの実施形態では、結合成分は、硫黄−金連結化学反応によって結合させることができる。量子ドットまたは半導体ナノ結晶は、コロイド合成技術などの当技術分野において公知の任意の方法を使用して合成することができる。
【００９３】
ナノキャリアへ結合するコンジュゲート
本明細書中に記載の式Ａ−［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ−ＭＭＰｉを有するコンジュゲートを、種々の技術を使用して製造することができる。いくつかの実施形態では、コンジュゲート全体を、当技術分野で周知のオリゴヌクレオチド合成機で合成することができる。ある特定の実施形態では、［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ（例えば、（ＨＥＧｐ）ｍなど）の組み込みを、より効果的な組み込みのための修正合成サイクルを使用して行うことができる。特に、アミダイト等価物の増加および洗浄サイクルの延長により、本発明のコンジュゲート中に連結基として複数の［（ＥＧ）（Ｐ）］単位を組み込むことができる。ある特定の実施形態では、次いで、結合成分（コレステロールまたはコレステロール誘導体（例えば、コレステロール−テトラエチレングリコール）など）を、標準的または修正した合成サイクルを使用して添加することができ、このサイクルは、効果的な組み込みを確実にするためにカップリングリサイクル工程を繰り返す工程を含むことができる。ある特定の実施形態では、コンジュゲートを、固相アプローチ（シリカ系の支持体またはポリスチレン系の支持体など）を使用して合成することができる。
【００９４】
他の実施形態では、［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ連結基を、当技術分野で公知の従来の化学を使用して結合成分（コレステロール誘導体（コレステロール−テトラエチレングリコール）など）に結合することができる。［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ連結基を、上記方法を使用して合成することができる。次に、連結基および結合成分を混合し、コンジュゲートの一部（Ａ−［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ）を形成するのに十分な条件下で反応させることができる。その後、標的化剤（ＭＭＰｉ）を、［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ連結基の他の末端に結合することができる。あるいは、標的化剤をまず［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ連結基に結合し、その後に結合成分に結合することができる。当業者に認識されるように、本発明の標的化剤を、特定のＭＭＰｉ成分の特徴に依存し得る種々の方法によって［（ＥＧ）（Ｐ）］ｍ連結基に結合することができる。
【００９５】
Ｖ．標的化送達組成物を投与する方法
本明細書において記載されるように、本発明の標的化送達組成物および方法は、被験体に関連する任意の疾患、障害、および／または状態を処置および／または診断するのに使用することができる。一実施形態では、本発明の方法は、被験体におけるがん状態を処置または診断するための方法であって、該方法が、ナノキャリアを含む本発明の標的化送達組成物を上記被験体に投与する工程を含み、治療剤または診断剤が該状態を処置または診断するのに十分である、方法を含む。ある特定の実施形態では、がん状態としては、本発明の標的化送達組成物の標的化剤が標的とする受容体を十分に発現する（例えば、細胞表面上または血管系に）がんを挙げることができる。
【００９６】
別の実施形態では、本発明の方法は、標的化治療的処置に対する被験体の適性を判定する方法であって、該方法は、ナノキャリアを含む標的化送達組成物を上記被験体に投与すること、および上記被験体をイメージングして診断剤を検出する工程を含み、該ナノキャリアが該診断剤を含む、方法を含む。
【００９７】
投与
いくつかの実施形態では、本発明は、標的化送達組成物および生理学的に（すなわち、薬学的に）許容され得るキャリアを含むことができる。本明細書において使用される場合、用語「キャリア」は、治療剤などの薬物のための希釈剤またはビヒクルとして使用される典型的には不活性の物質を指す。この用語は、組成物に粘着性の品質を付与する典型的には不活性の物質も包含する。典型的には、生理学的に許容され得るキャリアは、液体形態で存在する。液体キャリアの例としては、生理食塩水、リン酸塩緩衝液、通常の緩衝食塩水（１３５〜１５０ｍＭのＮａＣｌ）、水、緩衝水、０．４％食塩水、０．３％グリシン、および安定性を増強するための糖タンパク質（例えば、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなど）などが挙げられる。生理学的に許容され得るキャリアは、投与される特定の組成物によって、ならびに組成物を投与するのに使用される特定の方法によって部分的には決定されるので、本発明の医薬組成物の多種多様な適切な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １７ｔｈ  ｅｄ．，  １９８９を参照のこと）。
【００９８】
本発明の組成物は、慣例的な周知の滅菌技術によって滅菌してもよいし、滅菌条件下で生成してもよい。水溶液は、使用のためにパッケージされ得るか、または無菌条件下でろ過し、凍結乾燥することができ、その凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌水溶液と合わされる。組成物は、生理的条件に近づけるために、必要に応じて薬学的に許容され得る補助物質、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調整剤、および湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、およびオレイン酸トリエタノールアミンを含有することができる。糖（例えば。凍結乾燥標的化送達組成物のための安定剤）も、組成物を安定化させるために含めることができる。
【００９９】
選択された標的化送達組成物は、単独でまたは他の適切な成分と組み合わせて、吸入を介して投与されるエアロゾル製剤（すなわち、これらは、「噴霧する」ことができる）にすることができる。エアロゾル製剤は、加圧された許容され得る噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、および窒素などの中に入れることができる。
【０１００】
直腸投与に適切な製剤としては、例えば、坐剤基剤とともに有効量のパッケージされた標的化送達組成物を含む坐剤が挙げられる。適切な坐剤基剤としては、天然または合成のトリグリセリドまたはパラフィン炭化水素が挙げられる。加えて、選択された標的化送達組成物と、例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレングリコール、およびパラフィン炭化水素を含む基剤との組み合わせを含有するゼラチン直腸カプセルを使用することも可能である。
【０１０１】
例えば、関節内（関節内）経路、静脈内経路、筋肉内経路、腫瘍内経路、皮内経路、腹腔内経路、ならびに皮下経路などによる非経口投与に適切な製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を意図されたレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有することができる水性および非水性の等張性滅菌注射液剤、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含むことができる水性および非水性滅菌懸濁液を包含する。注射液剤および懸濁剤は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤からも調製することができる。本発明の実施において、組成物は、例えば、静脈内注入によって、局所に、腹腔内に、嚢内に、または髄腔内に投与することができる。非経口投与および静脈内投与は、好ましい投与方法である。標的化送達組成物の製剤は、単位用量または複数回用量の密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアルで提供することができる。
【０１０２】
医薬調製物は、好ましくは、単位剤形である。このような形態では、調製物は、適切な量の活性成分、例えば、標的化送達組成物を含有する単位用量にさらに小分けされる。単位剤形は、パッケージされた調製物とすることができ、パッケージは、別々の量の調製物を含有する。組成物は、所望により、他の適合した治療剤も含有することができる。
【０１０３】
がんを処置するための治療用途において、本発明の医薬組成物に用いられる治療および／または診断剤を含む標的化送達組成物は、毎日約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇの初期投与量で投与することができる。約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの１日量範囲を使用することができる。しかしながら、投与量は、患者の要求事項、処置される状態の重症度、および使用される標的化送達組成物に応じて変更することができる。例えば、投与量は、特定の患者において診断されたがんの種類および病期を考慮して経験的に決定することができる。患者に投与される用量は、本発明との関連において、経時的に患者における有益な治療応答に影響を与えるのに十分であるべきである。用量のサイズはまた、特定の患者における特定の標的化送達組成物の投与に付随する、あらゆる有害な副作用の存在、性質、および程度によって決定される。特定の状況に適切な投与量を決定することは、従事者の技量の範囲内である。全般的に、処置は、標的化送達組成物の最適用量未満であるより少ない投与量で開始する。その後、投与量は、状況下で最適の効果に到達するまで、少しずつ増加させる。便宜上、所望により、総１日投与量を分割して、１日の間に一部ずつ投与することができる。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本発明の標的化送達組成物は、疾患、障害、および／または状態を診断するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、標的化送達組成物は、被験体におけるがん状態、例えば、肺がん、乳がん、膵がん、前立腺がん、子宮頸がん、卵巣がん、結腸がん、肝がん、および食道がんなどを診断するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、病態を診断する方法は、標的化送達組成物を使用して、被験体の体内の腫瘍を物理的に検出および／または位置決定する工程を含むことができる。例えば、腫瘍は、本発明の標的化送達組成物の標的化剤が標的とする受容体を十分に発現する（例えば、細胞表面に、または血管系に）がんに関するものであり得る。いくつかの実施形態では、標的化送達組成物は、がん以外の疾患、例えば、増殖性疾患、心血管疾患、胃腸疾患、尿生殖器疾患、神経疾患、筋骨格疾患、血液系疾患、炎症疾患、自己免疫疾患、および関節リウマチなどを診断するのにも使用することができる。
【０１０５】
本明細書において開示されるように、本発明の標的化送達組成物は、本質的に検出可能な特性を有する診断剤を含むことができる。被験体における診断剤の検出において、標的化送達組成物、または標的化送達組成物である部分を有する粒子の集団を、被験体に投与することができる。次いで、診断剤をイメージングするための技術、例えば、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、光学的イメージング、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、Ｘ線イメージング、およびγ線イメージングなどを使用して被験体をイメージングすることができる。本明細書において記載されるイメージング技術はいずれも、他のイメージング技術を組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、イメージングのための放射性同位体を粒子に組み込むことにより、被験体において標的化送達組成物をｉｎ  ｖｉｖｏで追跡することが可能になる。例えば、標的化送達組成物の生体分布および／または排出を測定し、必要に応じて患者の処置を変更するのに使用することができる。例えば、患者の処置および／または診断を最適化するのに、より多くのまたはより少ない標的化送達組成物が必要となる場合がある。
【０１０６】
標的化送達
ある特定の実施形態では、本発明の標的化送達組成物は、治療剤または診断剤を標的化様式で放出するように被験体に送達することができる。例えば、標的化送達組成物が被験体における標的に送達され得ると、次いで、ナノキャリアなどの標的化送達組成物に包埋されたか、該標的化送達組成物に封入されたか、または該標的化送達組成物に係留された治療剤が、標的近傍の溶液条件に基づいて送達され得る。例えば、ｐＨ、および塩濃度などの溶液条件は、治療剤が標的近傍の領域に短期間または長期間にわたる放出を誘発することができる。あるいは、酵素は、標的化送達組成物から治療剤または診断剤を切断することによって、放出を開始することができる。いくつかの実施形態では、標的化送達組成物は、エンドサイトーシスによって細胞の内部領域に送達され、場合によりその後にリソソームなどの細胞の内部コンパートメント内で分解され得る。当業者であれば、治療剤または診断剤の標的化送達が、当技術分野において一般に公知の様々な方法を使用して行うことができることを認識する。
【０１０７】
キット
本発明はまた、病態を処置および／または診断するために、被験体に標的化送達組成物を投与するためのキットを提供する。このようなキットは、典型的には、がん状態などの病態を処置および／または診断するのに必要な２つ以上の構成要素を含む。構成要素としては、本発明の標的化送達組成物、試薬、容器、および／または器材（ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）を挙げることができる。いくつかの実施形態では、キットにおける容器は、使用前に放射標識される放射性薬品を含む標的化送達組成物を含有することができる。キットは、標的化送達組成物を投与するのに必要な反応構成要素（ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）またはバッファーのいずれかをさらに含むことができる。さらに、標的化送達組成物を凍結乾燥形態にして、次いで投与前に再構成することができる。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、本発明のキットは、患者の病態を処置および／または診断するのに使用される１つまたは複数の構成要素を含むことができるパッケージングアセンブリを含むことができる。例えば、パッケージングアセンブリは、本明細書において記載される標的化送達組成物の少なくとも１つを収容する容器を含むことができる。個別の容器は、患者への投与前に標的化送達組成物と混合することができる他の賦形剤または剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、医師は、特定の患者に必要な処置または診断に応じて、ある特定の構成要素および／またはパッケージングアセンブリを選択することおよび適合させることが可能である。
【０１０９】
本明細書において記載される実施形態は、例示目的のためのものにすぎず、当業者であれば、それらを踏まえて種々の改変または変更が示唆されるであろうし、該改変または変更は、本出願の精神および範囲、ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれると理解されよう。本明細書において引用されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、あらゆる目的でその全体が参考として本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１１０】
ＶＩ．実施例
略語：ｍＬ、ミリリットル；ＨＯＢＴ、ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＬＣＭＳ、液体クロマトグラフィー質量スペクトル；ＤＭＦ、ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ、ジメチルスルホキシド；ＥＡ、酢酸エチル；Ｈ、ヘキサン；ｒｔ、周囲温度；ｈ、時間；ＴＬＣ、薄層クロマトグラフィー；ＴＥＡ、トリエチルアミン；ＨＲＭＳ、高分解能質量スペクトル；Ｂｏｃ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル。
【０１１１】
実施例１
標的化送達組成物調製のためのＭＭＰ標的化コンジュゲートの合成
工程１：１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシラートの調製
１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシラートを、図２にしたがって調製した。マグネティックスターラーバー（Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）被覆）および冷却管を備えた丸底フラスコ（１００ｍＬ）に、１．５ｇのｐ−フルロ−スルホン（ｐ−ｆｌｕｒｏ−ｓｕｌｆｏｎｅ）、０．５ｇ（１．５当量）の３−ヒドロキシピリジン、および１．７６ｇ（１．５当量）の炭酸セシウムを含むＤＭＦ（５０ｍＬ）を入れた。反応物を９０℃に１８時間加熱した。２時間後のＬＣＭＳは４．４分に所望の生成物を示し、４．８分に出発物質スルホンを示す。揮発物質を除去し、残渣を酢酸エチルと飽和重炭酸ナトリウム水溶液との間で分配した。有機層を１０％クエン酸水溶液、重炭酸ナトリウム水溶液、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ＴＬＣ（シリカ）は、１つのスポット（４０％酢酸エチル：ヘキサン）を示す。酢酸エチルを除去し、得られた琥珀色の半固体を真空乾燥して１．７２ｇの生成物を琥珀色の泡状物として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）は所望の生成物と一致する。この中間体を、さらに精製せずに次の工程で使用した。
【０１１２】
工程２．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボン酸の調製
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボン酸を、図３にしたがって調製した。２５０ｍＬ丸底フラスコに、１．７ｇのエチルエステル（工程１由来）、０．７８ｇ（４当量）の水酸化カリウムを含む、１６ｍＬのエタノールおよび４ｍＬの水を入れた。反応混合物を９０℃に加熱した。１時間後のＬＣＭＳは完全な反応を示す。混合物を、酢酸エチルと１０％ＫＨＳＯ４−食塩水との間で分配した。黄色有機相を分離し、乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣を一晩真空乾燥して１．３２ｇのオフホワイト色の泡状物が生成された。これをさらに精製せずに使用した。
【０１１３】
工程３：ｔｅｒｔ−ブチル４−（ベンジルオキシカルバモイル）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−１−カルボキシラートの調製
ｔｅｒｔ−ブチル４−（ベンジルオキシカルバモイル）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−１−カルボキシラートを、図４にしたがって調製した。マグネティックスターラーバーを備えた１００ｍＬ丸底フラスコに、１．３２ｇの酸、０．６６ｇ（１．２当量）のＥＤＣ、０．５８（１．５当量）のＨＯＢＴ、および０．５８ｇ（２当量）のＴＥＡを含む、１５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を入れた。これを１０分間撹拌し、その間に、０．５５ｇ（１．２当量）のアミンＨＣｌ塩を添加した。反応物を周囲温度で撹拌した。２時間後のＬＣＭＳは、わずかな出発物質、および生成物と活性エステルとの約１：１混合物を示す。別の１当量のアミン−ＨＣｌ塩を反応混合物に添加した。ＬＣＭＳは、微量の酸および大部分の生成物を示す。ＨＯＢｔエステルは観察されない。反応物を固体に濃縮し、酢酸エチルと重炭酸ナトリウム水溶液との間で分配した。有機物を、１０％ＫＨＳＯ４水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥した。ＴＬＣ（シリカ、１：１酢酸エチル：ヘキサン）は１つのスポットを示した（Ｒｆ＝約０．４およびいくつかの原材料）。得られた酢酸エチル溶液を濃縮し（約１０ｍＬ）、シリカゲルプラグでろ過した。シリカを酢酸エチルで洗浄し、合わせた有機物を濃縮し、真空乾燥して１．２９ｇ（８０％）のオフホワイト色の泡状物を得た。
【０１１４】
工程４．Ｎ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミドの調製
Ｎ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミドを、図５にしたがって調製した。１００ｍＬ丸底フラスコに、１．３ｇの工程３で調製したＢｏｃ保護アミンおよび４Ｎ  ＨＣｌ−ジオキサン（１０ｍＬ）を入れ、混合物を２０分間撹拌した。２０分後のＬＣＭＳは、出発物質を示さない。反応混合物を真空中で濃縮し、一晩真空乾燥してＮ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミド（１．３ｇビスＨＣｌ塩）を得た。これをさらに精製せずに使用した。
【０１１５】
工程５：Ｎ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミドのＰＥＧ１０００ピペリジンアミドアミン誘導体の調製
Ｎ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミドのＰＥＧ１０００ピペリジンアミドアミン誘導体を、図６にしたがって調製した。１００ｍＬ丸底フラスコに、１．１６ｇ（１．０当量）のＰＥＧ酸モノＢｏｃアミン、０．２５ｇ（１．２当量）のＥＤＣ、０．２ｇ（１．５当量）のＨＯＢｔ、および０．０９ｇ（１．０当量）のＴＥＡを含むジクロロメタン（５ｍＬ）を入れた。０．５ｇ（１．０当量）のアミンおよび０．２８ｇ（３．０当量）のさらなるＴＥＡを、７ｍＬのジクロロメタンに添加し、反応物をアルゴン下で１０分間撹拌し、次いで、周囲温度で一晩撹拌した。反応物を８５ｍＬのＣＨＣｌ３で希釈し、１５ｍＬの脱イオン水、２５ｍＬの５％クエン酸水溶液で洗浄し、次いで、２５ｍＬの重炭酸ナトリウム水溶液−２５ｍＬの食塩水の混合物で洗浄した。有機層は淡黄色のままであり、乾燥し（硫酸ナトリウム、無水物）、真空中で濃縮した。ＴＬＣ（２０％ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ３）はＲｆ＝０．４を示すが、より重要なことには、最初にＵＶで見られなかった透明な１つのスポットである。濃縮後、生成物を真空乾燥して１．７ｇを得た。ＬＣ−ＨＲＭＳ（観測値）Ｍ＋Ｈ＝１６９５．８７８２ｇ／ｍｏｌ；Ｍ＋ＮＨ４＝１７１２．９０４６ｇ／ｍｏｌ。ＨＲＭＳ（計算値）Ｍ＋Ｈ＝１６９５．８７７５ｇ／ｍｏｌ；Ｍ＋ＮＨ４＝１７１２．９０４０ｇ／ｍｏｌ。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）は、所望の生成物と一致していた。
【０１１６】
工程６：
Ｎ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミドのＰＥＧ１０００ピペリジンアミドアミン誘導体の脱保護を、図７にしたがって行った。１００ｍＬ丸底フラスコに、１．６６ｇのＢｏｃ化合物を含む、４Ｎ  ＨＣｌ−ジオキサン（１５ｍＬ）を入れ、ロータリーエバポレーターにて３０分間タンブリングした。反応物を濃縮して油状物とし、その後に真空乾燥して透明な粘性の黄色シロップとした。脱ＢＯＣアミンが得られ（１．６８ｇのビス−ＨＣｌ塩）、これをさらに精製せずに使用した。材料をＬＣ−ＨＲＭＳおよび塩化物含有量に供した。Ｃｌ含有量は４％と決定され、これは２当量のＨＣｌと一致した。
【０１１７】
工程７：
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００の、Ｎ−（ベンジルオキシ）−４−（４−（ピリジン−３−イルオキシ）フェニルスルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミドのＰＥＧ１０００ピペリジンアミドアミン誘導体へのコンジュゲーションを、図８にしたがって行った。５０ｍＬ丸底フラスコに、６０ｍｇ（１．０当量）の工程６で調製したアミンおよび１５ｍｇ（４当量）のトリエチルアミンを含む、８ｍＬの塩化メチレンを入れた。ＤＳＰＥ-ＰＥＧ５０００のＮＨＳエステル（２２０ｍｇ、１．０当量）を添加し、反応物を周囲温度で２．５時間撹拌し、サンプルをＬＣＭＳによって分析した。反応物を濃縮して、透明油状物とした。これをアセトニトリル：水に再溶解し
、凍結し、一晩凍結乾燥して約２６０ｍｇの粗白色泡状物を得た。これをさらに精製せずに使用した。ＬＣ−ＨＲＭＳ：Ｍ／２−２Ｈ（観測値）＝３７８０．２１４１  ＬＣ−ＨＲＭＳ  Ｍ／２−２Ｈ（計算値）＝３７８０．２２４４。
【０１１８】
工程８：
工程８で得たＤＳＰＥ-ＰＥＧ-ＭＭＰｉ中間体のＮ−ベンジルオキシ−４−カルボキサミド部分からのベンジル基の切断を、図９にしたがって行った。３２５ｍｇの工程７で調製した凍結乾燥ベンジルエステルが入っている２００ｍＬ丸底フラスコ（マグネティックスターラーバーを備えたもの）に、１５ｍＬのメタノールを入れた。湿式１０％Ｐｄ−Ｃ触媒（７５ｍｇ、Ｄｅｇｕｓｓａ）を添加し、反応混合物をアルゴンで１０分間パージし、次いで、溶液を撹拌しながら水素をゆっくりバブリングした。反応を１時間２０分進行させ、次いで、ＭＳによって分析した。ＬＣＭＳは、生成物への部分的変換を示した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）でろ過し、温メタノール（４０ｍＬ）で洗浄した。得られた溶液を新鮮な触媒（７５ｍｇ）で処理し、さらに９０分間水素化した。ＬＣＭＳは出発物質を示さなかった。反応混合物をアルゴンでパージし、Ｃｅｌｉｔｅでろ過し、次いで、紙製漏斗に注いで僅かな濁りを除去し、ろ液を真空中で濃縮して透明油状物を得た。これを水／アセトニトリルに溶解させ、冷凍し、２日間凍結乾燥した。所望のＤＳＰＥ-ＰＥＧ-ＭＭＰｉ生成物を、乾燥白色粉末として得た（２３０ｍｇ）。ＬＣ−ＨＲＭＳの結果については図１を参照のこと。
【０１１９】
実施例２
ＭＭＰｉ標的化リポソームＴＤ−１の調製手順
【化５】
2015502946.tif 000008
細胞傷害性プロドラッグを含むＭＭＰｉ標的化リポソームの代表的な形成手順を、以下の実施例に提供する。
【０１２０】
１０ｍＭ酢酸ナトリウム水溶液／３００ｍＭスクロース（ｐＨ５．５）の溶液（９０ｍＬ）が入っている５００ｍＬの三口丸底フラスコに、ＴＤ−１（１８９ｍｇ、０．１８１ｍｍｏｌ）を添加した。完全に溶解させて、均一溶液をｐＨ５．５０に調整した。独立して、予備形成したリポソームの予め調製した溶液（ＤＳＰＣ：コレステロール（５５：４５））の体積を測定し、１０ｍＭ酢酸ナトリウム水溶液／３００ｍＭスクロース（ｐＨ５．５）で１００ｍＬに希釈した。不均一溶液のｐＨをｐＨ５．５に調整した。両溶液を６５℃にゆっくり加熱し、６５℃の時点でＴＤ−１溶液をリポソーム溶液に迅速に添加した。合わせた混合物を６５℃で１５分間保持し、次いで、５５℃に冷却した。一方、リポイド（１３８ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）およびコンジュゲート１（前の実施例を参照のこと、５ｍｇ、０．５５３μｍｏｌ）から得たＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）を、１０ｍＭアセタート／３００ｍＭスクロース（ｐＨ５．５）の溶液（５ｍＬ）に溶解させた。ＴＤ−１／リポソーム混合物が５５℃に達したら、ｐＨを測定し（ｐＨ５．９８）、粒径（強度および体積）を得（Ｚ．Ａｖｅ．＝１０９．４ｎｍ）、リポイド／コンジュゲート１標的の均一溶液を添加した。得られた混合物を５５℃で３０分間加熱し、次いで、室温に冷却した。ｐＨを測定し（ｐＨ５．８９）、粒径（強度および体積）を得た（Ｚ．Ａｖｅ．＝１１７．０）。このリポソーム溶液を６０ｍＬに濃縮し、次いで、ヒスタジン（２０ｍＭ）を含む生理食塩水（ｐＨ６．５）の１．８Ｌに対して透析ろ過した（最小で濃縮体積１．５倍）。得られた溶液を１４ｍＬに濃縮した（分析のために透過溶液の最終２ｍＬを収集）。ｐＨを測定し（ｐＨ６．４２）、粒径（強度および体積）を得（Ｚ．Ａｖｅ．＝１１８．９）、標的化ＭＭＰｉリガンドが存在することにより、１リポソーム粒子当たり１００ＭＭＰｉリガンド分子を超えることがｒｐｈｐｌｃ分析によって確認された。
【０１２１】
サンプル（１．０ｍＬ）を、ＴＤ−１アッセイ、ＭＭＰｉ標的化アッセイ、ドセタキセル面積％、ＤＳＰＣ、コレステロール、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）、およびＬｙｓｏ−ＤＳＰＣアッセイに供した。
【表２】
2015502946.tif 000009
【０１２２】
実施例３
ＭＭＰｉ標的化リポソームオキサリプラチンの調製
工程１．
１−ベンジル４−メチル４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシラートを、図１０に示すように合成した。マグネティックスターラーバーを備えた１００ｍｌ  ＲＢＦに、１．１ｇ（２．６７ｍｍｏｌ）の４−メチル４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）ピペリジン−４−カルボキシラート、０．７３ｇ（２．９４ｍｍｏｌ）のＣｂｚ−ＯＳｕ、０．８ｇ（８．０１ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを入れた。１時間後のＬＣＭＳは、Ｍ＋Ｈ＝５１０ｇ／ｍｏｌとの完全な反応を示した。反応物を、ＥＡと飽和重炭酸ナトリウム水溶液との間で分配した。有機物を１０  ＫＨＳＯ４水溶液で洗浄し、乾燥し、濃縮して高粘度シロップとし、このシロップは高真空乾燥の際に白色乾燥泡状物となった。生成物を一晩乾燥して１．２９ｇ（収率９５％）のＣｂｚエステルを得た。これを工程２で使用した。
【０１２３】
工程２．
１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）ピペリジン−４−カルボン酸を、図１１に示すように合成した。２５０ｍｌ  ＲＢＦに、１．７５ｇの１−ベンジル４−メチル４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシラート（３．３９ｍｍｏｌ）、０．５７ｇ（１０．１６ｍｍｏｌ）水酸化カリウムを含む、３０ｍｌのエタノール／７．５ｍｌの水を入れた。反応混合物を、ＬＣＭＳでモニタリングしながら５０℃で撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、１時間後に約８０％変換を示し、２時間後に微量の夾雑物を伴うおよそ９０％変換を示した。溶液を１／４体積に濃縮し、ＥＡと１０％クエン酸水溶液との間で分配した。有機物を食塩水で洗浄し、乾燥し、真空中で濃縮した。生成物を一晩真空乾燥して１．６ｇ（収率９５％）の白色固体を得た。これを工程３で使用した。
【０１２４】
工程３．
ベンジル４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートを、図１２に示すように合成した。マグネティックスターラーバーを備えた２００ｍｌ  ＲＢＦに、１．４８ｇ（２．９９ｍｍｏｌ）の１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）ピペリジン−４−カルボン酸、０．４９ｇ（４．１８ｍｍｏｌ）のＯＴＨＰ−ヒドロキシルアミン、０．８ｇ（４．１８ｍｍｏｌ）のＥＤＣ、０．６４ｇ（４．１８ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔ、および１．２５ｍｌ（８．９６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを含む３０ｍｌのＤＭＦを入れた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、ＥＡと飽和重炭酸ナトリウム水溶液との間で分配した。有機物を１０％クエン酸水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥し、真空中で濃縮した。この材料を一晩真空乾燥して１．５０ｇ（８５％）の乾燥白色泡状物を得た。サンプルを直接注入ＭＳによって分析し、生成物が９０％超であり、いくらかの微量夾雑物を伴うことが示された。ＨＲＭＳ（理論値）Ｍ＋Ｈ＝５９５．２１０８ｇ／ｍｏｌ。ＨＲＭＳ（観測値）Ｍ＋Ｈ＝５９５．２１０９ｇ／ｍｏｌ。
【０１２５】
工程４．
４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジンを、図１３に示すように合成した。マグネティックスターラーバーを備えた２００ｍｌ  ＲＢＦに、１．５ｇのベンジル４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート化合物および１００ｍｇの湿式Ｄｅｇｕｓｓａ５％パラジウム炭素を含む４５ｍｌのメタノールを入れた。反応混合物をアルゴンで５分間パージした。次いで、水素を溶液に１時間バブリングした。この時点でのＭＳ分析（直接注入）は、反応の完了を示した。粗生成物をＣｅｌｉｔｅでろ過し、Ｃｅｌｉｔｅを４０ｍｌのさらなるメタノールで洗浄した。メタノール溶液を真空中で１．２ｇ白色固体に濃縮し、これを４時間真空乾燥して１．１ｇの生成物を得た。この生成物を工程５で使用した。ＨＲＭＳ（観測値）Ｍ＋Ｈ＝４５１．１７３７ｇ／ｍｏｌ。
【０１２６】
工程５．
ベンジルｔｅｒｔ−ブチル（（５Ｓ）−６−オキソ−６−（４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）ヘキサン−１，５−ジイル）ジカルバマートを、図１４に示すように合成した。マグネティックスターラーバーを備えた５０ｍｌ  ＲＢＦに、３３０ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）の４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン、２８６ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）の酸、１７２ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）のＥＤＣ、１６５ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔ、および２１８ｍｇ（２．１５ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを含む１０ｍｌの乾燥ＤＭＦを入れた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＤＭＦを除去し、反応残渣をＥＡと飽和重炭酸ナトリウム水溶液との間で分配した。有機物を食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮し、真空乾燥して５８５ｍｇ（収率９７％）の粗白色泡状物を得た。これを工程７で使用した。ＨＲＭＳ（理論値）Ｍ＋Ｎａ＝８４５．３４０２ｇ／ｍｏｌ．ＨＲＭＳ（観測値）Ｍ＋Ｈ＝８４５．３４０６ｇ／ｍｏｌ。
【０１２７】
工程６．
Ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ）−６−アミノ−１−オキソ−１−（４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）ヘキサン−２−イル）カルバマートを、図１５に示すように合成した。１００ｍｌ  ＲＢＦに、５８５ｍｇの工程６由来の粗生成物、８８ｍｇの５％湿式パラジウム炭素（Ｄｅｇｕｓｓａ）を含む４５ｍｌのメタノールを入れた。反応混合物をアルゴンで約５分間パージし、次いで、水素を溶液にゆっくりバブリングした。１時間後のＬＣＭＳ分析は、生成物への約５０〜６０％変換を示し、Ｍ＋Ｈ＝６８９ｇ／ｍｏｌであった。その後のＬＣＭＳ分析は、３時間後に約７５％変換を、そして４時間後に約９０％変換を示した。混合物をさらに１時間反応させたままにした。５分間のアルゴンパージ後、反応混合物をＣｅｌｉｔｅでろ過した。反応物を濃縮し、揮発物質をジクロロメタンを２回用いて無くし（ｃｈａｓｅ）、白色泡状物／固体を一晩真空乾燥して４９２ｍｇ（８７％）の白色固体を得た。
【０１２８】
工程７．
保護された４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）−４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルバモイル）ピペリジン−ＰＥＧ５０００−ＤＳＰＥコンジュゲートを、図１６に示すように合成した。マグネティックスターラーバーを備えた２５ｍｌ  ＲＢＦに、２００ｍｇのＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００−ＧＳ活性エステル（０．０３ｍｍｏｌ）、１９ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）のアミン、および１２ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを入れた。反応物をアルゴン下で一晩撹拌した。生成物を濃縮し、一晩真空乾燥させた。ＲＰＨＰＬＣ精製を、Ｃ８カラムにて１３分間にわたる３０ｍｌ／分での２０〜１００％勾配を使用して行った。溶媒は、最初に２０％  １：１アセトニトリル：イソプロパノール／８０％  水中２５ｍＭの酢酸アンモニウム（５％アセトニトリルを伴う）であった。画分を含む生成物を合わせ、濃縮して有機物を除去し、残渣を凍結乾燥して９３．５ｍｇ（収率４６％）の白色粉末を得た。
【０１２９】
工程８．
Ｎ−ヒドロキシ−４−（（４−フェノキシフェニル）スルホニル）ピペリジン−４−カルボキサミド−ＰＥＧ５０００−ＤＳＰＥコンジュゲート（コンジュゲート２）を、図１７に示すように合成した。１００ｍｌ  ＲＢＦに、１ｍｌのＴＦＡおよび０．１ｍｌのトリエチルシラン中の９３ｍｇを入れた。反応物を６０分間タンブリングした。サンプルをＬＣＭＳによって分析し、所望の生成物の形成のみが示された。１０ｍｌの水を添加し、ＮＨ４ＯＨ水溶液を使用してｐＨを７．１にした。これを一晩冷凍し、凍結乾燥した。過剰なＮＨ４ＴＦＡを除去するために、粗生成物を２０ｍｌ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ水に溶解させ、溶液を３５００ＭＷ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒカセットに入れ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ水を満たした１Ｌビーカー中で一晩撹拌した。その後１２時間の間に水を２回交換した。得られた透析水溶液を一晩冷凍し、凍結乾燥して約８３ｍｇの乾燥粉末を得た。生成物の高分解能質量スペクトルを図１８に示す。
【０１３０】
リポソームの調製
コンジュゲート２をＤＩ  Ｈ２Ｏに溶解させて１．０ｍｇ／ｍＬまたは２．０ｍｇ／ｍＬ溶液を生成した。次いで、これを、ホスファチジルコリン系のオキサリプラチン含有リポソーム調製物（１．０ｍｇ／ｍＬのリポソームで）に添加し、得られた混合物を３７℃で８時間撹拌した。粗材料をＳＥＣ−ＨＰＬＣによって分析した。遊離ＭＭＰｉおよび遊離オキサリプラチン（ｏｘａｐｌｉｐｌａｔｉｎ）を除去するために、粗製剤をＳｐｅｃｔｒｕｍ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｍｏｄｕｌｅ  Ｐ／Ｎ：Ｐ−ＤＩ−５００Ｅ−１００−０１Ｎ（１Ｌ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ水で予め洗浄した）に通過させ、９００ｍＬ（１０倍体積）の緩衝液（新たに調製した２０ｍＭ酢酸ナトリウムを伴う３００ｍＭスクロース）で洗浄した。これを、典型的には、２日間にわたって行った。緩衝液および製剤を、冷蔵室で一晩保持した。Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｍｏｄｕｌｅを０．１Ｎ  ＮａＯＨですすいだ後、一晩保存した。精製後、製剤を所望のオキサリプラチン濃度に濃縮した。最終サンプルをＳＥＣ−ＨＰＬＣによって分析した（１０μＬのサンプルを９０μＬのＰＢＳ（１：９希釈）で希釈し、５μＬを注入した）。粒径をＭａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒで測定した。脂質をＨＰＬＣによって分析する一方で、ＰｔをＩＣＰ−ＭＳによって定量した。「遊離」Ｐｔを、３０ＫＤａ  Ａｍｉｃｏｎ遠心分離フィルター（周囲温度にて９０００ｒｐｍで１０分間）から得たろ液のＩＣＰ−ＭＳによって決定した。標的化リガンドの挿入量を、検量線を使用したＨＰＬＣ法によって決定した。リポソームの平均粒径は１００ｎｍであり、１粒子当たり５４リガンド（コンジュゲート２）を含んでいた。
【０１３１】
実施例４
ＢｘＰＣ３異種移植腫瘍を保有するヌードマウスにおけるＭＭＰｉ−リポソームの有効性
実施例３で調製したＭＭＰｉ標的化リポソームオキサリプラチンを、ＢｘＰＣ３膵腫瘍保有マウスに投与した。
【０１３２】
雌Ｈｓｄ：胸腺欠損Ｎｕｄｅ−Ｆｏｘｎ１  ｎｕ／ｎｕマウス（（約２０ｇ）に、（２．５×１０６）ＢｘＰＣ３細胞を右脇腹に皮下移植した。用量群あたり１０匹のマウスを使用した。８用量群には、生理食塩水、オキサリプラチン、基剤オキサリプラチン含有リポソーム（２２ｍｇ／ｋｇ、４４ｍｇ／ｋｇ、および６６ｍｇ／ｋｇ）、および対応するＭＭＰｉ−リポソーム（３１ｍｇ／ｋｇ、６２ｍｇ／ｋｇ、および９４ｍｇ／ｋｇ）を含んでいた。
【０１３３】
腫瘍サイズの中央値が１５０ｍｍ３に到達したら、動物を無作為に群に分け、群間で腫瘍容積によって正規化した。腫瘍を保有しない動物は、本研究に含めなかった。試験物を１回静脈内投与した。
【０１３４】
腫瘍の長さおよび幅を、１週間に３回カリパスにて測定し、式：腫瘍容積（ｍｍ３）＝長さ×幅２×０．５から容積を計算した。動物を週１回体重測定した。腫瘍容積を中央値として表され、時間の関数としてプロットした。２０００ｍｍ３を超える過剰なサイズに起因して研究から除外した任意の動物は、その値がその後のプロットで２０００ｍｍ３として繰り越された。腫瘍容積を平均としても表され、時間の関数としてプロットした（残存する５０％未満の動物を有する群は繰り越されなかった）。成長曲線間で観察された相違の統計的有意性を、一元配置分散分析によって評価し、有意であるかどうかポストホック検定によって評価した。
【０１３５】
標的化リポソームで処置したマウスについての平均腫瘍容積および生存率を、コントロールマウスおよび非標的化オキサリプラチンリポソームおよびエロキサチン（非リポソームオキサリプラチン）を投与したマウスについての平均腫瘍容積および生存率と比較した。リポソームオキサリプラチンの投与により、エロキサチンよりも腫瘍容積が小さくなり、ＭＭＰｉ標的化リポソームオキサリプラチンの投与によって、同等の用量の非標的化リポソームオキサリプラチンよりも腫瘍容積が小さくなった（図１９Ａ。平均腫瘍容積を試験物の単回静脈内注射後に測定した。全用量を、オキサリプラチンモル当量として投与する。値は、５〜１０マウス／群についての平均±ＳＥＭである。）。図１９Ｂは、オキサリプラチンを含むＭＭＰ１４受容体標的化リポソーム（標的化リポソーム）、オキサリプラチンを含む非標的化リポソーム、エロキサチン、または生理食塩水の単回静脈内注射後のＢｘＰＣ−３ヒト膵臓異種移植片を保有するマウスの生存率を示すカプラン・マイヤープロットを示す。全用量を、オキサリプラチンモル当量として投与する。各群は、１０匹の腫瘍保有雌マウスから開始した。ほとんどの投薬量レベルでの標的化リポソームおよび非標的化リポソームについて、コントロール群およびエロキサチン群由来の体重変化の有意差は観察されなかった（図２０Ａ；値は、５〜１０マウス／群についての平均±ＳＥＭである）。
【０１３６】
実施例５
ＭＭＰ１４過剰発現ＨＴ−１０８０異種移植腫瘍を保有するヌードマウスにおけるＭＭＰｉ−リポソームの有効性
実施例３で調製したＭＭＰｉ標的化リポソームオキサリプラチンを、ヒト線維肉腫ＨＴ１０８０腫瘍過剰発現ＭＭＰ１４を保有するヌードマウスに投与した。
【０１３７】
雌Ｈｓｄ：胸腺欠損Ｎｕｄｅ−Ｆｏｘｎ１  ｎｕ／ｎｕマウス（２５ｇ）に、（５×１０６）ＨＴ１０８０／ＭＭＰ１４腫瘍細胞を側部に皮下移植した。用量群あたり１０匹のマウスを使用した。６用量群は、生理食塩水、オキサリプラチン、基剤オキサリプラチン含有リポソーム（１５ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ）、および対応するＭＭＰｉ−リポソーム（１５ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ）を含んでいた。
【０１３８】
腫瘍サイズの中央値が１５０ｍｍ３に到達したら、動物を無作為に群に分け、群間で腫瘍容積によって正規化した。腫瘍を保有しない動物は、本研究に含めなかった。試験物を１回静脈内投与した。
【０１３９】
腫瘍の長さおよび幅を、１週間に３回カリパスにて測定し、式：腫瘍容積（ｍｍ３）＝長さ×幅２×０．５から容積を計算した。動物を週１回体重測定した。腫瘍容積を中央値として表され、時間の関数としてプロットした。２０００ｍｍ３を超える過剰なサイズに起因して研究から除外した任意の動物は、その値がその後のプロットで２０００ｍｍ３として繰り越された。腫瘍容積を平均としても表され、時間の関数としてプロットした（残存する５０％未満の動物を有する群は繰り越されなかった）。成長曲線間で観察された相違の統計的有意性を、一元配置分散分析によって評価し、有意であるかどうかポストホック検定によって評価した。
【０１４０】
標的化リポソームで処置したマウスについての平均腫瘍容積および生存率を、コントロールマウスおよび非標的化オキサリプラチンリポソームおよびエロキサチン（非リポソームオキサリプラチン）を投与したマウスについての平均腫瘍容積および生存率と比較した。リポソームオキサリプラチンの投与により、エロキサチンよりも腫瘍容積が小さくなり、３０ｍｇ／ｋｇの用量のＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチンの投与によって同一用量の非標的化リポソームオキサリプラチンよりも腫瘍容積が小さくなった（図２１Ａ）。３０ｍｇ／ｋｇの用量でのＭＭＰ標的化リポソームオキサリプラチンの投与により、全試験群の生存率が最も高くなった（図２１Ｂ）。
【０１４１】
実施例６
ＭＭＰｉ標的化リポソーム製剤によるＭＭＰ阻害
実施例３で調製したＭＭＰｉ標的化リポソームオキサリプラチンサンプルの活性を、メタロプロテアーゼＭＭＰ２およびＭＭＰ１４に対して試験した。
【０１４２】
ｒｈＭＭＰ−２（１００μｇ／ｍＬ）を、１ｍＭ  ＡＰＭＡ（ｐ−アミノフェニル水銀（ＩＩ）アセタート）のアッセイ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｂｒｉｊ−３５、ｐＨ７．５）との３７℃で１時間のインキュベーションによって活性化した。活性化ｒｈＭＭＰ−２を、アッセイ緩衝液中で２４８ｎｇ／ｍＬに希釈した。ＭＭＰ基質（Ｍｃａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｐａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＮＨ２）を、アッセイ緩衝液中で２５μＭに希釈した。標的化リポソーム製剤を含む５×試験試料の２５μＬ、および２４８ｎｇ／ｍＬ活性化ｒｈＭＭＰ−２の５０μＬを、９６ウェル黒色側面プレートに添加した。５０μＬの２５μＭ基質を添加して酵素反応を開始させ、蛍光測定値（λｅｘ＝３２０ｎｍ；λｅｍ＝４０５ｎｍ）を、動態モードで５分間記録した。
【０１４３】
ｒｈＭＭＰ−１４（４０μｇ／ｍＬ）を、０．８６μｇ／ｍＬのｒｈＦｕｒｉｎの活性化緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｂｒｉｊ−３５、ｐＨ９．０）との３７℃で１時間のインキュベーションによって活性化した。活性化ｒｈＭＭＰ−１４を、アッセイ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、３ｍＭ  ＣａＣｌ２、１μＭ  ＺｎＣｌ２、ｐＨ８．５）中で１．２４μｇ／ｍＬに希釈した。ＭＭＰ基質（Ｍｃａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｐａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＮＨ２）を、アッセイ緩衝液中で２０μＭに希釈した。標的化リポソーム製剤を含む５×試験試料の２５μＬ、および１．２４μｇ／ｍＬ活性化ｒｈＭＭＰ−１４の５０μＬを、９６ウェル黒色側面プレートに添加した。５０μＬの２０μＭ基質を添加して酵素反応を開始させ、蛍光測定値（λｅｘ＝３２０ｎｍ；λｅｍ＝４０５ｎｍ）を、動態モードで５分間記録した。
【０１４４】
ＭＭＰ２およびＭＭＰ１４について１２．７ｎｍおよび３．９ｎｍのＩＣ５０値をそれぞれ観測した（図２２Ａおよび図２２Ｂ）。
【０１４５】
上記内容は、明確さおよび理解の目的で、図解および実施例を用いて詳細に記載しているが、当業者は、添付の特許請求の範囲の範囲内で一定の変更および修正を実施することができると認識する。さらに、本明細書中に提供した各参考文献は、各参考文献が個別に参考として援用されているのと同じ程度にその全体が参考として援用される。
【図２】
2015502946.tif 000022
【図３】
2015502946.tif 000023
【図４】
2015502946.tif 000024
【図５】
2015502946.tif 000025
【図６】
2015502946.tif 000026
【図７】
2015502946.tif 000027
【図８】
2015502946.tif 000028
【図１０】
2015502946.tif 000029
【図１１】
2015502946.tif 000030
【図１２】
2015502946.tif 000031
【図１３】
2015502946.tif 000032
【図１４】
2015502946.tif 000033
【図１５】
2015502946.tif 000034
【図１６】
2015502946.tif 000035
【図１７】
2015502946.tif 000036
【図１】
2015502946.tif 000037
【図９】
2015502946.tif 000038
【図１８】
2015502946.tif 000039
【図１９】
2015502946.tif 000040
【図２０】
2015502946.tif 000041
【図２１】
2015502946.tif 000042
【図２２】
2015502946.tif 000043
【国際調査報告】
2015502946.tif 000044
2015502946.tif 000045
2015502946.tif 000046