(57)【要約】本発明は、PAR4アゴニストペプチドを提供する。これらのペプチドは、堅固なPAR4受容体アッセイの開発に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (式I)
で示されるアミノ酸配列を含むPAR4アゴニストペプチドであって、
該ペプチドのアミノ末端は遊離型であり;
Xaa1はTyrまたはPhe(4-F)から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)またはスチリル-Alaから選択され;そして、
該C-末端はアミド化されている、
該PAR4アゴニストペプチド。
【請求項２】
Xaa1がPhe(4-F)である、請求項１に記載のPAR4アゴニストペプチド。
【請求項３】
Xaa2がTrpである、請求項２に記載のPAR4アゴニストペプチド。
【請求項４】
配列番号3のアミノ酸配列を含むPAR4アゴニストペプチド。
【請求項５】
さらにValの後にLysを含む、請求項１に記載のPAR4アゴニストペプチド。
【請求項６】
さらにValの後にLys-Asnを含む、請求項１に記載のPAR4アゴニストペプチド。
【請求項７】
さらにValの後にLys-Asn-Glyを含む、請求項１に記載のPAR4アゴニストペプチド。
【請求項８】
式I:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (式I)
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドであって、
該ペプチドのアミノ末端はアミノ酸に結合しておらず;
Xaa1は、TyrおよびPhe(4-F)からなる群から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)およびスチリル-Alaからなる群から選択され;そして、
該ペプチドはPAR4アゴニスト活性を有する、
該ペプチド。
【請求項９】
Xaa1がPhe(4-F)である、請求項８に記載のペプチド。
【請求項１０】
Xaa2がTrpである、請求項８に記載のペプチド。
【請求項１１】
配列番号3のアミノ酸配列を含むペプチド。
【請求項１２】
該アミノ酸配列がさらにValの後にLysを含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３】
該アミノ酸配列がさらにValの後にLys-Asnを含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１４】
該アミノ酸配列がさらにValの後にLys-Asn-Glyを含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５】
該アミノ酸配列から実質的に成るか、または成る、請求項８〜１４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１６】
該C-末端がアミド化されている、請求項８〜１５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１７】
PAR4受容体を活性化する、請求項１〜７のいずれか一項に記載のPAR4アゴニストペプチドまたは請求項８〜１６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１８】
該PAR4受容体活性化が血小板凝集アッセイ、FLIPRアッセイ、またはその両方によって測定される、請求項１７に記載のPAR4アゴニストペプチド。
【請求項１９】
該PAR4受容体活性化が配列番号1から成るペプチドによるPAR4受容体活性化よりも高い、請求項１７または１８に記載のPAR4アゴニストペプチドまたはペプチド。
【請求項２０】
該PAR4受容体活性化が、配列番号1から成るペプチドによるPAR4受容体活性化よりも、少なくとも約10倍、少なくとも約20倍、少なくとも約30倍、少なくとも約40倍、少なくとも約50倍、少なくとも約60倍、少なくとも約70倍、少なくとも約80倍、少なくとも約90倍、少なくとも約100倍、または少なくとも約110倍高い、請求項１９に記載のPAR4アゴニストペプチドまたはペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、PAR4受容体に結合し、アゴニストまたは部分アゴニスト活性を有する、新規ペプチドを提供する。該ペプチドは、堅固なPAR4受容体アッセイの開発に用いられ得る。
【背景技術】
【０００２】
血栓塞栓性疾患は、先進国において、抗凝固薬（例えばワルファリン(クマジン（Coumadin）（登録商標）)）、ヘパリン、低分子量ヘパリン(LMWH)、および合成五糖類ならびに抗血小板薬（例えばアスピリンおよびクロピドグレル(プラビックス（Plavix）（登録商標）)）の利用可能性にもかかわらず、依然として主要な死因である。
【０００３】
現在の抗血小板療法には限界がある（出血リスクの増大ならびに不完全な効果(20〜30%の範囲での相対的な心血管リスクの低下)が含まれる）。従って、広範な血栓塞栓性疾患の予防および治療のための安全で効果的な経口または非経口の抗血栓薬（antithrombotics）の発見および開発は、依然として重要な目標である。
【０００４】
α-トロンビンは、血小板凝集および脱顆粒の最も強力な公知の活性化因子である。血小板の活性化はアテローム血栓性血管閉塞と因果関係がある。トロンビンは、プロテアーゼ活性化受容体(PAR)と称されるGタンパク質共役受容体を切断することにより、血小板を活性化させる。PARは、N末端細胞外ドメインに存在するそれぞれの潜在的リガンドを提供し、それがタンパク質切断によりアンマスクされ、その後の受容体への分子内結合によりシグナル伝達が誘発される(非特許文献１)。タンパク質分解活性により新たに形成されたN-末端の配列を模倣する合成ペプチドには、受容体切断に依存しないシグナル伝達が含まれ得る。血小板は、アテローム血栓性の事象において中心的な存在である。ヒト血小板は少なくとも2つのトロンビン受容体（一般に、PAR1およびPAR4と称される）を発現する。PAR1の阻害剤は広く研究されており、ボラパクサールおよびアトパキサール（atopaxar）を含むいくつかの化合物）が臨床試験の最終段階に進んだ。最近、ACS患者でのTRACER第III相試験において、ボラパクサールは、心血管イベントを顕著に減少させなかったが、大出血リスクを顕著に増大させた(非特許文献２)。従って、依然として、効力が増大され、かつ出血の副作用が減少された新しい抗血小板薬の発見が求められている。
【０００５】
PAR4阻害剤の前臨床研究について、いくつかの初期の報告がある。非特許文献３は、要約中に、化合物:
【化１】
2015516983.tif 000002
が選択的で強力な阻害剤またはプロテアーゼ活性化受容体タイプ4(PAR4)-依存性血小板活性であることが分かったと記載している。
化合物58はまた、非特許文献４においてYD-3と称されている。また、非特許文献５も参照。
特許文献１および特許文献２は、血小板凝集の阻害剤として有用である様々なピラゾール誘導体を開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】EP1166785 A1
【特許文献２】EP0667345
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】tethered ligand mechanism; Coughlin, S.R., Nature, 407:258-264 (2000)
【非特許文献２】Tricoci, P. et al., N. Eng. J. Med., 366(1):20-33 (2012)
【非特許文献３】Lee, F-Y. et al., “Synthesis of 1-Benzyl-3-(5'-hydroxymethyl-2'-furyl)indazole Analogues as Novel Antiplatelet Agents”, J. Med. Chem., 44(22):3746-3749 (2001)
【非特許文献４】Wu, C-C. et al., “Selective Inhibition of Protease-activated Receptor 4-dependent Platelet Activation by YD-3”, Thromb. Haemost., 87:1026-1033 (2002)
【非特許文献５】Chen, H.S. et al., “Synthesis and platelet activity”, J. Bioorg. Med. Chem., 16:1262-1278 (2008)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明のいくつかの実施態様は、PAR4受容体のアゴニストまたは部分アゴニストとして該受容体を調節するペプチドに関する。これらのペプチドは当分野で公知の天然のPAR4アゴニスト配列に比べて向上した生物学的活性を示すことから、それらはPAR4受容体アッセイの開発のための理想的な候補である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、式I:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (式I)
で示されるアミノ酸配列を含む単離されたペプチドであり、ここで、
該ペプチドのアミノ末端は遊離型であり;
Xaa1はTyrまたはPhe(4-F)から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)またはスチリル-Alaから選択され;そして、
該C-末端はアミド化されている。
【００１０】
いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号1-8、12-16または18-34から選択されるペプチドを含む。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号2-7、12、13、15、18-24または26-34から選択されるペプチドを含む。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号3のペプチドを含む。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号2のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号4のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号5のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号6のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号7のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、PAR4アゴニストペプチドは、配列番号12のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号13のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号15のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号18のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号19のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号20のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号21のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号22のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号23のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号24のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号26のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号27のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号28のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号29のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号30のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号31のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号32のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号33のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号34のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。
【００１１】
いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、式Iのアミノ酸配列を含み、さらに、Valの後にLysを含む。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、式Iのアミノ酸配列を含み、さらに、Valの後にLys-Asnを含む。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、式Iのアミノ酸配列を含み、さらに、Valの後にLys-Asn-Glyを含む。
【００１２】
他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、さらに、下記式II:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val-Lys (式II)
に示される通り、Valの後にLysを含み、ここで、
該ペプチドのアミノ末端は遊離型であり;
Xaa1はTyrまたはPhe(4-F)から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)またはスチリル-Alaから選択され;そして、
該C-末端はアミド化されている。
【００１３】
他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチド、さらに、下記式III:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val-Lys-Asn (式III)
に示される通り、Valの後にLys-Asnを含み、ここで、
該ペプチドのアミノ末端は遊離型であり;
Xaa1はTyrまたはPhe(4-F)から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)またはスチリル-Alaから選択され;そして、
該C-末端はアミド化されている。
【００１４】
他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、さらに、下記式IV:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val-Lys-Asn-Gly (式IV)
に示される通り、Valの後にLys-Asn-Glyを含み、ここで、
該ペプチドのアミノ末端は遊離型であり;
Xaa1はTyrまたはPhe(4-F)から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)またはスチリル-Alaから選択され;そして、
該C-末端はアミド化されている。
【００１５】
本発明のいくつかの実施態様は、式I
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (式I)
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドに関するものであり、ここで、
該ペプチドのアミノ末端はアミノ酸に結合しておらず;
Xaa1は、TyrおよびPhe(4-F)からなる群から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)およびスチリル-Alaからなる群から選択され;そして、
該ペプチドはPAR4アゴニスト活性を有する。いくつかの実施態様において、Xaa1はPhe(4-F)である。他の実施態様において、Xaa2はTrpである。いくつかの実施態様において、該ペプチドは、該アミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該ペプチドのC-末端はアミド化されている。いくつかの実施態様において、該アミノ酸配列は、さらに、Valの後にLysを含む。他の実施態様において、該アミノ酸配列は、さらに、Valの後にLys-Asnを含む。他の実施態様において、該アミノ酸配列は、さらに、Valの後にLys-Asn-Glyを含む。いくつかの実施態様において、該ペプチドはPAR4受容体を活性化させる。他の実施態様において、該PAR4受容体活性化は、血小板凝集アッセイ、FLIPRアッセイ、またはその両方によって測定される。いくつかの実施態様において、該PAR4受容体活性化は、配列番号1から成るペプチドによるPAR4受容体活性化よりも高い。例えば、該PAR4受容体活性化は、配列番号1から成るペプチドによるPAR4受容体活性化よりも、少なくとも約10倍、少なくとも約20倍、少なくとも約30倍、少なくとも約40倍、少なくとも約50倍、少なくとも約60倍、少なくとも約70倍、少なくとも約80倍、少なくとも約90倍、少なくとも約100倍、または少なくとも約110倍、高いものであってよい。
【００１６】
本発明によるイミダゾチアジアゾールおよびイミダゾピリダジン化合物は、PAR4アンタゴニストであり、それはα-トロンビン誘発血小板凝集アッセイにおいて血小板凝集を阻害することが見いだされている。
【００１７】
従って、本発明は、PAR4アンタゴニストであって、血小板凝集の選択的阻害剤として有用である、新規のイミダゾチアジアゾールアナログおよびイミダゾピリダジンアナログ（その立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、またはプロドラッグエステルを含む）を提供する。
【００１８】
本発明はまた、本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルを製造するための方法および中間体を提供する。
【００１９】
本発明はまた、医薬的に許容される担体ならびに本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルのうちの少なくとも1つを含む、医薬組成物を提供する。
【００２０】
本発明はまた、血栓塞栓性疾患の治療または予防のための方法であって、そのような治療または予防が必要な患者に、治療上有効な量の本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルのうちの少なくとも1つを投与することを含む、該方法を提供する。
【００２１】
本発明はまた、療法で用いるための、本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルを提供する。
【００２２】
本発明はまた、血栓塞栓性疾患の治療または予防のための医薬の製造における、本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルの使用を提供する。
【００２３】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図1Aは、1.5 nM α-トロンビンにより刺激されたヒト洗浄血小板の凝集の阻害における実施例3の化合物の有効性を示すグラフである。
【００２５】
【図２】図1Bは、α-トロンビン誘発血小板凝集の阻害における実施例3の化合物のIC50を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
（詳細な説明）
PAR4アゴニストペプチド
本発明の実施態様は、公知のPAR4アゴニストペプチド, AYPGKF(配列番号1)に比べて効力が向上したPAR4アゴニストペプチドを提供する。Faruqi, T.R. et al., J. Biol. Chem., 275(26):19728-19734 (2000)参照。本発明のいくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号1に比べて、効力が最大20倍向上している。他の実施態様において、該PAR4ペプチドは、配列番号1に比べて、効力が最大60倍向上している。他の実施態様において、該PAR4ペプチドは、配列番号1に比べて、効力が最大100倍向上している。効力が向上された結果、本発明のPAR4アゴニストペプチドを用いて、感度および特異性が向上した堅固なPAR4受容体アッセイを開発することができる。
【００２７】
以下に示す定義は、制限されることなく、他に特別な場合の限定がない限り、本明細書全体で用いられる用語に適用される。
【００２８】
本明細書で用いる用語「PAR4アゴニストペプチド」は、PAR4受容体を完全または部分的に活性化し、シグナル伝達事象および/またはPAR4受容体活性化に関連した機能的応答を誘発することができるペプチドを意味する。PAR4アゴニストペプチドの例は、表1に示す配列番号1-8、12-16および18-34であり、ここで、該配列のN-末端は遊離型であり、該配列のC-末端はアミド化されている。表1において、該表の上位の1-10番は、該ペプチド内でのアミノ酸のポジションを示しており、ポジション1はN-末端から開始する。
表1
【表１】
2015516983.tif 000003
【００２９】
いくつかの実施態様において、PAR4アゴニストペプチドは、ED50＜100 μMである。他の実施態様において、PAR4アゴニストペプチドはED50＜10 μMである。PAR4アゴニスト活性を測定するためのアッセイの例としては、限定はされないが、実施例Gに記載の血小板凝集アッセイおよび実施例Hに記載のFLIPRアッセイが挙げられる。
【００３０】
いくつかの実施態様において、該ペプチドは、式I:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (式I)
で示される単離されたアミノ酸配列を含むペプチドであり、ここで、
該ペプチドのアミノ末端は遊離型であり;
Xaa1はTyrまたはPhe(4-F)から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)またはスチリル-Alaから選択され;そして、
該C-末端はアミド化されている。
【００３１】
用語「遊離型」は、当業者には周知の用語である。例えば、該用語「遊離型」は、ペプチドのアミノ末端がブロックまたは修飾されていないことを意味するように用いられ得る。該用語「遊離型」はまた、ペプチドのアミノ末端がアミノ酸に結合していないことを意味するように用いられ得る。いくつかの実施態様において、ペプチドのアミノ末端は、いずれのアミノ酸にも結合していないが、1つ以上の非アミノ酸部分に結合している。
【００３２】
式(I)、(II)、(III)または(IV)中のハイフン(-)、および本明細書においてアミノ酸配列中で用いられるハイフン(-)は、ペプチド結合を表す。
【００３３】
いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号1-8、12-16または18-34から選択されるペプチドを含む。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号2-7、12、13、15、18-24または26-34から選択されるペプチドを含む。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号3のペプチドを含む。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号2のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号4のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号5のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号6のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号7のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号12のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号13のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号15のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号18のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号19のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号20のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号21のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号22のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号23のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号24のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号26のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号27のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号28のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号29のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号30のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号31のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号32のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号33のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、配列番号34のアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。いくつかの実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、式Iのアミノ酸配列を含み、さらに、Valの後にLysを含む。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、式Iのアミノ酸配列を含み、さらに、Valの後にLys-Asnを含む。他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、式Iのアミノ酸配列を含み、さらに、Valの後にLys-Asn-Glyを含む。
【００３４】
他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、以下の式II:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val-Lys (式II)
に示される通り、さらに、Valの後にLysを含み、ここで、
該ペプチドのアミノ末端は遊離型であり;
Xaa1はTyrまたはPhe(4-F)から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)またはスチリル-Alaから選択され;そして、
該C-末端はアミド化されている。
【００３５】
他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、以下の式III:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val-Lys-Asn (式III)
に示される通り、さらに、Valの後にLys-Asnを含み、ここで、
該ペプチドのアミノ末端は遊離型であり;
Xaa1はTyrまたはPhe(4-F)から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)またはスチリル-Alaから選択され;そして、
該C-末端はアミド化されている。
【００３６】
他の実施態様において、該PAR4アゴニストペプチドは、以下の式IV:
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val-Lys-Asn-Gly (式IV)
に示される通り、さらに、Valの後にLys-Asn-Glyを含み、ここで、
該ペプチドのアミノ末端は遊離型であり;
Xaa1はTyrまたはPhe(4-F)から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)またはスチリル-Alaから選択され;そして、
該C-末端はアミド化されている。
【００３７】
本発明のいくつかの実施態様は、式I,
Ala-Xaa1-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (式I)
に示されるアミノ酸配列を含むペプチドに関するものであり、ここで、
該ペプチドのアミノ末端はアミノ酸に結合しておらず;
Xaa1は、TyrおよびPhe(4-F)からなる群から選択され;
Xaa2は、Trp(5-OH)、(D,L)-Trp(5-Br)、D-Trp、Bzt、Tpi、His、Tza、3-Thi、3-Fur、His(Bzl)、Phe、Tyr、Phe(ペンタ-F)、2-Pya、3-Pya、4-Pya、Dpa、3-Pya(4-トリル)、Bip(2-メチル)、1-ナフチル-Ala、2-ナフチル-Ala、Tyr(Bzl)およびスチリル-Alaからなる群から選択され;そして、
該ペプチドはPAR4アゴニスト活性を有する。いくつかの実施態様において、Xaa1はPhe(4-F)である。他の実施態様において、Xaa2はTrpである。いくつかの実施態様において、該ペプチドはアミノ酸配列から実質的に成るか、または成る。他の実施態様において、ペプチドのC-末端はアミド化されている。いくつかの実施態様において、該アミノ酸配列は、さらに、Valの後にLysを含む。他の実施態様において、該アミノ酸配列は、さらに、Valの後にLys-Asnを含む。他の実施態様において、該アミノ酸配列は、さらに、Valの後にLys-Asn-Glyを含む。いくつかの実施態様において、該ペプチドはPAR4受容体を活性化させる。他の実施態様において、該PAR4受容体活性化は、血小板凝集アッセイ、FLIPRアッセイ、またはその両方によって測定される。いくつかの実施態様において、該PAR4受容体活性化は、配列番号1から成るペプチドによるPAR4受容体活性化よりも高い。例えば、該PAR4受容体活性化は、配列番号1から成るペプチドによるPAR4受容体活性化よりも、少なくとも約10倍、少なくとも約20倍、少なくとも約30倍、少なくとも約40倍、少なくとも約50倍、少なくとも約60倍、少なくとも約70倍、少なくとも約80倍、少なくとも約90倍、少なくとも約100倍、または少なくとも約110倍高いものであってよい。
【００３８】
アミノ酸は、一般構造:
【化２】
2015516983.tif 000004
（式中、RおよびR'は、本明細書に記載の通りである）により示される化合物を含む。他に指定のない限り、本明細書で用いる用語「アミノ酸」は、単独または別の基の一部として、制限されることなく、同じ炭素（「α」炭素と称される）に結合したアミノ基およびカルボキシル基を含み、ここで、Rおよび/またはR'は天然または非天然型側鎖（水素を含む）であり得る。「α」炭素での絶対「S」配置は、通常、「L」または「天然」配置と称される（L-システイン（絶対「R」配置を有する）を除く）。「R」および「R'」(プライム)置換基の両方ともが水素である場合、該アミノ酸はグリシンであって、キラルでない。本明細書に記載のアミノ酸は、他に記載のない限り、「L」配置である。
【００３９】
アミノ酸は、本明細書において、IUPAC-IUB生化学命名法委員会によって推奨される、各々の周知の3文字の記号または1文字の記号により言及されてもよい。本発明のPAR4アゴニストペプチドは、天然のコード化アミノ酸(通常のアミノ酸)ならびに非天然のコード化アミノ酸を含んでもよい。「非天然のコード化アミノ酸」とは、20の通常のアミノ酸、ピロリシン、またはセレノシステインのうちの1つでないアミノ酸を言う。用語「非天然のコード化アミノ酸」と同義的に用いられうる他の用語は、「非天然アミノ酸（“non-natural amino acid”、“unnatural amino acid”、“non-naturally-occurring amino acid”、ならびにその様々なハイフンでつなげた形およびハイフンでつなげていない形）」である。該PAR4アゴニストペプチドに存在しうる非天然のコード化アミノ酸の例を以下に示す。
【化３】
2015516983.tif 000005
2015516983.tif 000006
本明細書に開示されるPAR4アゴニストペプチドは、PAR-4受容体に対する親和性が向上しており、PAR4受容体アッセイにおいてPAR-4受容体を活性化させるためのアゴニストとして用いられうる。
【００４０】
本明細書に記載のペプチドは、様々な固相法（例えば、Barany, G. et al., The Peptide: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 2:  “Special Methods in Peptide Synthesis, Part A”, pp. 3-284, Gross, E. et al., eds., Academic Press, New York, publ. (1980);および、Stewart, J.M. et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, 2nd Edition, Pierce Chemical Co., Rockford, IL, publ. (1984)に記載される方法）を用いて、化学合成により製造されうる。望ましい方法は、アミノ酸側鎖の一時的な保護のためのtert-ブチル基と組み合わせた、α-アミノ基の一時的な保護のためのFmoc(9-フルオレニルメチル メチル-オキシカルボニル)基に基づくものである(例えば、Atherton, E. et al., “The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group”, in The Peptide: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 9:  “Special Methods in Peptide Synthesis, Part C”, pp. 1-38, Undenfriend, S. et al., eds., Academic Press, San Diego, publ. (1987)参照)。
【００４１】
該ペプチドは、不溶性ポリマー支持体(「レジン」とも称される)での段階的な方法において、該ペプチドのC-末端から出発して、合成され得る。合成は、該ペプチドのC-末端アミノ酸を、アミドまたはエステル結合の形成によって、該レジンに付加させることにより、開始される。これにより、最終的に、各々、C-末端アミドまたはカルボン酸として得られたペプチドの遊離が可能となる。別法として、C-末端アミノアルコールが存在する場合、該C-末端残基を、本明細書に記載のように、2-メトキシ-4-アルコキシベンジルアルコールレジン(Sasrin, Bachem Bioscience, Inc., King of Prussia, PA)に結合させ、そして、ペプチド配列構築の完了後、得られたペプチドアルコールを、LiBH4／THFを用いて遊離させてもよい(Stewart, J.M. et al., supra, p. 92参照)。
【００４２】
合成に用いられるC-末端アミノ酸および全ての他のアミノ酸は、それらのα-アミノ基および側鎖官能基を有する必要がある（(存在する場合は)合成の間に該α-アミノ保護基が選択的に除去されうるように異なって（differentially）保護されている）。アミノ酸のカップリングは、アミノ酸のカルボキシル基を活性エステルとして活性化させること、ならびにレジンに結合したブロックされていないN-末端アミノ酸をα-アミノ基と反応させることによって、行われる。ペプチド配列全体が構築されるまで、α-アミノ基脱保護とカップリングの順序を繰り返す。その後、副反応を制限するために適切なスカベンジャーの存在下において、通常は側鎖官能基の脱保護を同時に行うことにより、該ペプチドをレジンから遊離させる。最終的に、得られたペプチドを逆相HPLCにより精製する。
【００４３】
最終ペプチドの前駆体として必要とされるペプチジル-レジンの合成には、市販の架橋ポリスチレンポリマーレジン(Novabiochem, San Diego, CA; Applied Biosystems, Foster City, CA)を用いる。C-末端カルボキサミドについての、好ましい固体支持体は、4-(2',4'-ジメトキシフェニル-Fmoc-アミノメチル)-フェノキシアセチル-p-メチルベンズヒドリルアミンレジン(リンクアミドMBHAレジン); 9-Fmoc-アミノ-キサンテン-3-イルオキシ-Merrifieldレジン(シーバーアミドレジン); 4-(9-Fmoc)アミノメチル-3,5-ジメトキシフェノキシ)バレリル-アミノメチル-Merrifieldレジン(PALレジン)である。1番目およびそれに続くアミノ酸のカップリングは、HOBTまたはHOAT活性エステル（各々、DIC/HOBT、HBTU/HOBT、BOP、PyBOPからか、またはDIC/HOAT、HATU/HOATから製造）を用いて達成され得る。保護されたペプチドフラグメントについての、好ましい固体支持体は、2-クロロトリチルクロリドレジンおよび9-Fmoc-アミノ-キサンテン-3-イルオキシ-Merrifieldレジン(シーバーアミドレジン)である。第1のアミノ酸の該2-クロロトリチルクロリドレジン上へのロードを達成する最良の方法は、ジクロロメタンおよびDIEA中でFmoc-保護アミノ酸と該レジンを反応させることである。必要ならば、アミノ酸の溶解を促進するために少量のDMFを加えてもよい。
【００４４】
本明細書に記載のPAR4アゴニストペプチドの合成は、ペプチド合成装置（例えば、Advanced ChemTech Multiple Peptide Synthesizer (MPS396（登録商標）)、Advanced ChemTech Model 90 synthesizer、またはApplied Biosystems Inc. peptide synthesizer (ABI 433A)）を用いて実施され得る。該MPS396（登録商標）合成装置を用いて最大96個のペプチドを同時に製造した。該Advanced ChemTech Model 90 Synthesizerを用いて通常のペプチド配列を大規模で製造した(最大5 mmolのレジン)。該ABI 433A合成装置を用いて個々のペプチドを最大0.25 mmolのスケールで製造した。全ての場合において、本明細書に記載のFmoc/t-ブチル保護方法を用いて、段階的な固相ペプチド合成を行った。固相合成において用いることができる直交的に保護された（orthogonally protected）アミノ酸の例を以下に示す。
【化４】
2015516983.tif 000007
【００４５】
それらの各々のペプチドに対するペプチジル-レジン前駆体は、いずれの標準的な方法を用いて、切断され、脱保護されてもよい(例えば、King, D.S. et al., Int. J. Peptide Protein Res., 36:255-266 (1990)参照)。望ましい方法は、水およびスカベンジャーとしてのTISの存在下におけるTFAの使用である。典型的には、該ペプチジル-レジンを、TFA/水/TIS(94:3:3, v:v:v; 1 mL/100 mgのペプチジル-レジン)中で2-6時間、室温にて撹拌する。次いで、使用済みのレジンを濾過して除き、該TFA溶液を減圧下で濃縮または乾燥させる。得られたクルードなペプチドを、Et2Oを用いて沈殿させて洗浄するか、あるいはプレパラティブHPLCによる精製のためにDMSOまたは50%酢酸水溶液中にそのまま溶解させる。プレパラティブHPLC（例えば、Waters Model 4000または島津 Model LC-8A 液体クロマトグラフにおいて）を用いた精製により、望ましい純度のペプチドを得ることができる。クルードなペプチドの溶液をYMC S5 ODS (20X 100 mm)カラムに注入し、流速14-20 mL/分を用いるMeCN／水（両者とも0.1% TFAで緩衝化）の直線グラジエントで、220 nmでのUV吸光度により流出液をモニタリングしながら、溶出する。精製されたペプチドの構造は、エレクトロスプレーMS分析によって確認され得る。
【００４６】
以下の略語は、本明細書の実施例およびその他の箇所で用いられる。
Ph = フェニル
BzまたはBnz = ベンジル
i-Bu = イソ-ブチル
i-Pr = イソ-プロピル
Me = メチル
Et = エチル
Pr = n-プロピル
Bu = n-ブチル
t-Bu = tert-ブチル
Trt = トリチル
TMS = トリメチルシリル
TIS = トリイソプロピルシラン
Et2O = ジエチルエーテル
HOAcまたはAcOH = 酢酸
AcCNまたはCH3CN = アセトニトリル
DMF = N,N-ジメチルホルムアミド
EtOAc = 酢酸エチル
TFA = トリフルオロ酢酸
NMM = N-メチルモルホリン
NMP = N-メチルピロリドン
DCM = ジクロロメタン
TEA = トリエチルアミン
min = 分
hまたはhr = 時間
L = リットル
mLまたはml = ミリリットル
μL = マイクロリットル
g = グラム
mg = ミリグラム
mol = モル
mmol = ミリモル
meq = ミリ当量
rtまたはRT = 室温
aq. = 水性または水溶液
BOP試薬 = ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ-トリス-ジメチルアミノ-ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(カストロ試薬)
PyBOP試薬 = ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ-トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
HBTU = 2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
HATU = O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
HCTU = 2-(6-クロロ-1-H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
DIEA = ジイソプロピルエチルアミン
FmocまたはFMOC = フルオレニルメチルオキシカルボニル
BocまたはBOC = tert-ブチルオキシカルボニル
HOBTまたはHOBT・H2O = 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
Cl-HOBt = 6-クロロ-ベンゾトリアゾール
HOAT = 1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール
HPLC = 高速液体クロマトグラフィー
LC/MS = 高速液体クロマトグラフィー/質量分析
NMR = 核磁気共鳴
【００４７】
PAR4アンタゴニスト
本発明のイミダゾチアジアゾールおよびイミダゾピリダジン化合物
第一の態様において、本発明は、構造:
【化５】
2015516983.tif 000008
［式中、
R0は、R1またはR1aであり;
Yは、
【化６】
2015516983.tif 000009
が、各環中の1個の窒素および1個の橋頭窒素を含む8または9員二環式ヘテロアリール環、すなわち、
【化７】
2015516983.tif 000010
であるように、Sまたは-CR8=CR9-であり;
R1は、
ハロ、例えば、F、Cl、BrまたはI、
C1-C4アルキル、例えば、メチル、エチル、n-プロピルまたはイソプロピル、
C1-C4アルコキシ、例えば、CH3O、
1〜5個のハロゲンを含むハロ-C1-C2-アルキル（ここで、ハロは、例えば、FまたはClである）、例えば、CF3、CF3CF2、-CF2CH3、
【化８】
2015516983.tif 000011
F2C(Cl)-、およびCHFCH3、あるいは、
C1-C4アルキルチオ、例えば、CH3S、
から選択され;
R1aは、
H、
ハロ、例えば、F、Cl、BrまたはI、
C1-C4アルキル、例えば、CH3、C2H5、n-C3H7、またはi-C3H7、
C1-C4アルコキシ、例えば、CH3O、
1〜5個のハロゲンを含むハロ-C1-C2-アルキル（ここで、ハロは、例えば、FまたはClである）、例えば、CF3、CF3CF2、-CF2CH3、
【化９】
2015516983.tif 000012
F2C(Cl)、CHF2、およびCHFCH3、あるいは、
C1-C4アルキルチオ、例えば、CH3S、
から選択され;
R8およびR9は、独立して、
H、
C1-C4アルキル、例えば、CH3、
ハロ、例えば、ClまたはF、
C1-C4アルコキシ、例えば、CH3O、
CF3、
CF3O、
CHF2、あるいは、
OH、
から選択されるが;ただし、
R1a、R8およびR9のうちの少なくとも1つは、H以外であり;
R2は、
H、
ハロ、例えば、FまたはCl、
C1-C4アルキル、
C1-C4アルコキシ、例えば、メトキシ、あるいは、
シアノ、
から選択され;
X1は、CH、NまたはCR10であり;
X2、X3およびX4は、独立して、CR3、またはNから選択され;
R3は、H、C1-C4アルコキシ（例えばCH3O）、C1-C4アルキルチオ（例えばCH3S）、ハロ（例えばFまたはCl）、CF3O、CHF2O、または1〜5個のハロゲンを含むハロ-C1-C2-アルキル（例えばCF3またはCHF2）から選択され;
R4およびR5は、独立して、HまたはC1-C4アルキル（例えばメチル）から選択されるか、あるいは、それらが結合している炭素と一緒になって、C3-C7シクロアルキル環（例えばシクロプロピル）を形成することができ;
【化１０】
2015516983.tif 000013
は、少なくとも1個のO、NまたはS原子（例えば、1もしくは2個のN原子および1個のS原子、または2もしくは3個のN原子）を含む5員ヘテロアリール環であり;
R6は、H、ハロ（例えば、F、Cl、BrまたはI）、OCF3、CF3、CHF2、OCHF2、OH、CN、NO2、NR11R12、COOH、C1-C4アルコキシカルボニル、(C=O)NR11R12、C1-C4アルキルスルホニル、S(=O)2NR11R12、または、ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキル、C1-C4アルコキシ、(ジ-C1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルキル)-C1-C4-アルキル、C1-C4アルキルチオ、もしくはジ-C1-C4-アルキルアミノフェニル-C1-C4-アルキルから独立して選択される0〜3個の基により置換されたC1-C4アルキルから選択されるか;あるいは、
R6は、A-D-
（式中、
Dは、
単結合、
-O-、
-S-、
【化１１】
2015516983.tif 000014
C1-C4アルキレン、例えば、-CH2-、
C1-C4アルキレンオキシ、例えば、-CH2O-、
C1-C4アルキレンチオ、例えば、-CH2S-、
C1-C4アルキレンオキシC1-C4アルキレン、例えば、-CH2OCH2-、
C1-C4アルキレンチオC1-C4アルキレン、例えば、-CH2SCH2-、
-S-C1-C4アルキレン、例えば、-S-CH2-、または、
-O-C1-C4アルキレン、例えば、-O-CH2-
から選択されるリンカーであり;そして、
Aは、
ハロ（例えば、FまたはCl）、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、CF3、OCF3、またはCF2CH3から独立して選択される0〜3個の基で置換されたC6-C10アリール(すなわち、フェニルまたはナフチル)
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5もしくは6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4アルキルまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基で置換された5〜10員ヘテロアリール、
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5もしくは6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4アルキル、C6-C10アリールまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基の基で置換された4〜10員ヘテロシクリル、あるいは、
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5もしくは6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4アルキル、C6-C10アリールまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基で置換されたC3-C6シクロアルキル、
から選択される）
であり;
R11およびR12は、各々、独立して、
H、
C1-C4アルキル、例えば、CH3、
ハロ、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、CF3、OCF3、OCHF2、またはシアノから独立して選択される0〜3個の基で置換された-(CH2)n1-フェニル、
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキルまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基で置換された-(CH2)n1-C3-C6-シクロアルキル、
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキルまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基で置換された-(CH2)n1-4〜10員ヘテロシクリル、
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキルまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基で置換された-(CH2)n1-5〜10員ヘテロアリール、
ジ-C1-C4-アルキルアミノ-C1-C4-アルキル、
C1-C4-アルキルカルボニルアミノ-C1-C4-アルキル、
ジ-C1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルキル、
ジ-C1-C4-アルキルアミノフェニル、
シアノ-C1-C4-アルキル、
C1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルキル、
から選択されるか、あるいは、
R11およびR12は、同じ窒素に結合している場合、結合して、炭素原子およびN、NR13、OもしくはS(O)pから選択される0〜2個のさらなるヘテロ原子を含む 4〜6員ヘテロ環を形成し;
R13は、各々、独立して、H、C1-C4アルキルまたは-(CH2)フェニルから選択され;
R7は、H、ハロ（例えばFまたはCl）、またはC1-C4アルキル（例えばCH3）から選択され;
R10は、C1-C4アルキル（例えば、CH3）、ハロ（F、Cl、Br、またはIである）、C1-C4アルコキシ（例えば、CH3O）、またはハロ-C1-C2-アルキル（1〜5個のハロゲンを含むことができ、ここで、ハロはFまたはClである）から選択され;
nは、各々、0、1、2または3から選択され;
n1は、0、1、2、3、4または5から選択され;そして、
pは、各々、0、1または2から選択される］
を有する式Iで示されるイミダゾチアジアゾールまたはイミダゾピリダジン化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルを提供する。
【００４８】
従って、R6は、
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキルまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基で置換されたC3-C6シクロアルキル;
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキルまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基で置換された5〜10員ヘテロアリール;
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキルまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基で置換された4〜10員ヘテロシクリル;
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキルまたはC1-C4アルキルから独立して選択される0〜3個の基で置換されたC3-C6シクロアルキルオキシ;
ハロ（例えば、FまたはCl）、1〜5個のハロゲン（例えばF）を含むハロ-C1-C2-アルキル（例えば、CF3および-CF2CH3）、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、またはOCF3から独立して選択される0〜3個の基で置換されたアリール（例えば、フェニルまたはナフチル）;
アリールオキシ（例えばフェニルオキシ）（ここで、該アリールは、ハロ、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、CF3、OCF3、OCHF2、またはシアノから独立して選択される0〜3個の基で置換されている）;
アリールチオ（例えば、フェニルチオ）（ここで、該アリールは、ハロ、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、CF3、OCF3、OCHF2、およびシアノからなる群から独立して選択される0〜3個の基で置換されている）;
アリール-C1-C4アルコキシ（例えば、フェニルアルコキシ）（ここで、該アリールは、ハロ、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、CF3、OCF3、OCHF2、またはシアノから独立して選択される0〜3個の基で置換されている）;
5〜10員ヘテロアリール-C1-C4-アルキル（ここで、該ヘテロアリールは、ハロ、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、CF3、OCF3、OCHF2、およびシアノからなる群から独立して選択される0〜3個の基で置換されている）;
5〜10員ヘテロアリール-C1-C4-アルコキシ（ここで、該ヘテロアリールは、ハロ、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、CF3、OCF3、OCHF2、およびシアノからなる群から独立して選択される0〜3個の基で置換されている）;
アリール-C1-C4-アルキル（例えば、フェニルアルキル）（ここで、該アリールは、ハロ、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、CF3、OCF3、OCHF2、またはシアノから独立して選択される0〜3個の基で置換されている）;
ジ-C1-C4-アルキルアミノフェニル-C1-C4-アルキル;
OH;
CN;
NO2;
NR11R12;
カルボキシ;
C1-C4アルコキシカルボニル;
C(=O)NR11R12;
C1-C4アルキルスルホニル;あるいは、
S(=O)2NR11R12
であり得る。
【００４９】
式Iで示される本発明の化合物のいくつかの実施態様において、
Yは、SまたはCH=CHであり;
X1は、CHまたはNであり;
X2、X3およびX4は、各々、独立して、CR3であり;
R0は、R1またはR1aであり;
R1およびR1aは、
C1-C4アルキル、例えば、CH3、
C1-C4アルキルチオ、例えば、CH3S、
C1-C4アルコキシ、例えば、CH3O、または、
1〜5個のハロ原子（例えば、FおよびCl）を含み得るハロ-C1-C2-アルキル、
から選択され;
R2は、Hであり;
R3は、
C1-C4アルコキシ、例えば、CH3O、
H、または
ハロ、例えば、FもしくはCl、
から選択され;
nは、1であり;そして、
R4およびR5は、各々Hである。
【００５０】
従って、本発明の化合物は、構造:
【化１２】
2015516983.tif 000015
で示されてもよい。
【００５１】
いくつかの実施態様において、本発明には、構造:
【化１３】
2015516983.tif 000016
で示される化合物が含まれる。
【００５２】
いくつかの実施態様において、本発明には、R6が、
【化１４】
2015516983.tif 000017
またはR6aである式Iの範囲内の化合物が含まれ、該化合物は、構造:
【化１５】
2015516983.tif 000018
［式中、
【化１６】
2015516983.tif 000019
は、
ハロ（例えば、FまたはCl）、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シクロプロピル、CF3、OCF3、またはCF2CH3から独立して選択される0〜3個の基で置換されたC6-C10アリール(すなわち、フェニルまたはナフチル)か、
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキル（例えば、HOCH2CH2-）、C1-C4アルキル（例えば、CH3）、C1-C4アルコキシ（例えば、CH3O）、またはジ-C1-C4アルキルアミノ（例えば、(CH3)2N）から独立して選択される0〜3個の基で置換された5〜10員ヘテロアリールか、
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C4-アルキル（例えば、HOCH2CH2-）、C1-C4アルキル（例えば、CH3）、C1-C4アルコキシ（例えば、CH3O）、またはジ-C1-C4アルキルアミノ（例えば、(CH3)2N）から独立して選択される0〜3個の基で置換された4〜10員ヘテロシクリルか、あるいは、
ハロ（例えば、F、Br、ClまたはI）、CF3、OCF3、5または6員ヘテロアリール、OH、ヒドロキシ-C1-C3-アルキル、C1-C4アルキル（例えば、CH3）、C1-C4アルコキシ（例えば、CH3O）、またはジ-C1-C4アルキルアミノ（例えば、(CH3)2N）から独立して選択される0〜3個の基で置換されたC3-C6シクロアルキルであり;
R6aは、H、ハロ、OCF3、OCHF2、C1-C4アルキル、1〜5個のフッ素で置換されたハロ-C1-C4-アルキル、CF3、CHF2、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキルチオ、C3-C6シクロアルコキシ、OH、CN、NO2、NR11R12、カルボキシ、C1-C4アルコキシカルボニル、C(=O)NR11R12、C1-C4アルキルスルホニル、S(=O)2NR11R12、フェニルオキシ、フェニルチオ、フェニル-C1-C4-アルコキシ、ヘテロアリール-C1-C4-アルコキシ、フェニル-C1-C4-アルキル、ジ-C1-C4-アルキルアミノフェニル-C1-C4-アルキル、(ジ-C1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルキル)C1-C4-アルキル、またはC1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルキルであり;そして、
R7は、H、F、ClまたはCH3である］
で示される。
【００５３】
式Iで示される化合物中に存在する5員ヘテロアリール環
【化１７】
2015516983.tif 000020
の例には、限定はされないが、
【化１８】
2015516983.tif 000021
が含まれる。
【００５４】
式Iで示される化合物中に存在するR6基の例には、限定はされないが:
【化１９】
2015516983.tif 000022
置換フェニル（例えば、
【化２０】
2015516983.tif 000023
）;
ヘテロシクリル（例えば、
【化２１】
2015516983.tif 000024
）;
置換ヘテロシクリル（例えば、
【化２２】
2015516983.tif 000025
）;
シクロアルキル（例えば、
【化２３】
2015516983.tif 000026
）;
ヘテロアリール（例えば、
【化２４】
2015516983.tif 000027
）;
置換ヘテロアリール（例えば、
【化２５】
2015516983.tif 000028
）;
ヘテロアリール-C1-C4-アルキル（例えば、
【化２６】
2015516983.tif 000029
）;
ハロアルキル（例えば、CF3）、
ハロ（例えば、Br）、
C1-C4アルコキシ-C1-C4-アルキルオキシ-C1-C4-アルキル（例えば、CH3OCH2CH2OCH2-）、
C1-C4アルキル（例えば、-CH2CH3またはCH3）、
アリール-C1-C4-アルキル（例えば、
【化２７】
2015516983.tif 000030
）、または、
H;
-NR11R12（例えば、
【化２８】
2015516983.tif 000031
）が含まれ;そして、
R7は、HまたはC1-C4アルキル（例えば、CH3）から選択される。
【００５５】
式Iで示される化合物において用いるのに適したR0基の例には、限定はされないが:
H;
C1-C4アルキル、例えば、CH3;
C1-C4アルキルチオ、例えば、CH3S;
C1-C4アルコキシ、例えば、CH3O;および、
ハロ-C1-C4-アルキル、例えば、F(CH3)CH-、F2(CH3)C-、またはCF3、
が含まれる。
【００５６】
式Iで示される化合物において用いるのに適したR3基の例には、限定はされないが:
C1-C4アルコキシ、例えば、CH3O;
H;および、
ハロ、例えば、Cl、
が含まれる。
【００５７】
R2は、好ましくは、Hである。
【００５８】
Yは、好ましくは、Sまたは-CH=CH-である。
【００５９】
いくつかの実施態様において、本発明には、
Yが、Sまたは-CH=CH-であり;
X1が、CHであり;
X2が、CHであり;
X3が、CR3であり;
X4が、CHであり;
R3が、CH3O、FまたはClであり;
R2が、Hであり;そして、
R4およびR5が、各々Hである、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００６０】
いくつかの実施態様において、本発明には、
Yが、Sまたは-CH=CH-であり;
X1が、CHであり;
X2が、CHであり;
X3が、CR3であり; 
X4が、CHであり;
R4およびR5が、各々Hであり;
R0が、R1およびR1aであり;
R1およびR1aが、独立して、CH3O、CH3S、CH3、またはハロ-C1-C2-アルキル（例えば、F(CH3)CH-またはF2(CH3)C-）から選択され;
R2が、Hであり;そして、
R3が、CH3O、F、またはClである、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００６１】
いくつかの実施態様において、本発明には、
R0が、R1およびR1aであり;
R1およびR1aが、独立して、CH3O、CH3S、CH3、またはハロ-C1-C2-アルキル（例えば、F(CH3)CH-）から選択され;
R2が、Hであり;
R3が、CH3O、F、またはClであり;そして、
【化２９】
2015516983.tif 000032
が、
【化３０】
2015516983.tif 000033
［式中、
R6aは前述のとおり定義され、
H、
1〜5個のフッ素で置換されたハロ-C1-C4-アルキル（例えば、CF3またはCHF2）、
ハロ（例えば、Br）、
OCF3、
OCHF2、
ヘテロアリール-C1-C3-アルキル（例えば、
【化３１】
2015516983.tif 000034
）、
C3-C6シクロアルコキシ、
OH、
CN、
NO2、
S(=O)2NR11R12、
NR11R12、
COOH、
C1-C4アルコキシカルボニル、
C(=O)NR11R12、
C1-C4アルキルスルホニル、
ジ-C1-C4-アルキルアミノフェニル-C1-C4-アルキル（例えば、
【化３２】
2015516983.tif 000035
）、
(ジ-C1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルキル)C1-C4-アルキル（例えば、
【化３３】
2015516983.tif 000036
）、
C1-C4アルコキシ-C1-C4-アルキルオキシ-C1-C4-アルキル（例えば、CH3OCH2CH2OCH2-）、
C1-C4アルキル（例えば、CH3またはC2H5）、
C1-C4アルコキシ（例えば、CH3O）、または、
アリール-C1-C4-アルキル（例えば、
【化３４】
2015516983.tif 000037
）
であることができ;そして、
R7は、HまたはC1-C4アルキル（例えば、CH3）である］
である、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００６２】
いくつかの実施態様において、本発明には、
R0が、R1またはR1aであり;
R1およびR1aが、独立して、CH3O、CH3S、CH3、またはハロ-C1-C2-アルキル（例えば、F(CH3)CH-）から選択され;
R2が、Hであり;
R3が、CH3O、F、またはClであり;そして、
【化３５】
2015516983.tif 000038
が、
【化３６】
2015516983.tif 000039
［式中、
【化３７】
2015516983.tif 000040
は、
【化３８】
2015516983.tif 000041
置換フェニル（例えば、
【化３９】
2015516983.tif 000042
）、
ヘテロアリール（例えば、
【化４０】
2015516983.tif 000043
）、
ヘテロシクリル（例えば、
【化４１】
2015516983.tif 000044
）、または、
シクロアルキル（例えば、
【化４２】
2015516983.tif 000045
）であり;そして、
R7は、HまたはC1-C4アルキル（例えば、CH3）である］
である、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００６３】
いくつかの実施態様において、本発明には、
Yが、Sであり;
X1が、CHであり;
X2が、CHであり;
X3が、CR3であり;
X4が、CHであり;
R2が、Hであり;
R4およびR5が、各々Hであり;
R0が、R1であり;
R1が、CH3OまたはF(CH3)CH-であり;
R3が、CH3Oであり;
R4およびR5が、各々Hであり;
【化４３】
2015516983.tif 000046
が、
【化４４】
2015516983.tif 000047
であり;
R6が、
【化４５】
2015516983.tif 000048
であり;そして、
R7が、HまたはCH3である、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００６４】
いくつかの実施態様において、本発明には、
Yが、CH=CHであり;
X1が、CHであり;
X2が、CHであり;
X3が、CR3であり;
X4が、CHであり;
R2が、Hであり;
R4およびR5が、各々Hであり;
R0が、R1aであり;
R1aが、CH3であり;
R3が、CH3Oであり;
【化４６】
2015516983.tif 000049
が、
【化４７】
2015516983.tif 000050
であり;
R6が、
【化４８】
2015516983.tif 000051
またはCH2CH3であり;そして、
R7が、Hである、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００６５】
いくつかの実施態様において、本発明には、
R0が、C1-C4アルコキシ（例えば、CH3O）、C1-C4アルキル（例えば、メチル、エチル、およびイソプロピル）、またはハロ（例えば、BrまたはCl）であり;
R2が、Hであり;
R3が、C1-C4アルコキシ（例えば、CH3O）、またはハロ（例えば、FまたはCl）であり;
R4が、Hであり;そして、
R5が、Hである、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００６６】
いくつかの実施態様において、本発明には、
X1が、CHであり;
R0が、C1-C2アルコキシ（例えば、メトキシ）、またはハロ（例えば、F）であり;
【化４９】
2015516983.tif 000052
が、
【化５０】
2015516983.tif 000053
（式中、R1またはR1aは、独立して、C1-C4アルキル（例えば、CH3、C2H5またはi-C3H7）、またはC1-C3アルコキシ（例えば、CH3O）から選択される;
R8およびR9は、各々Hであり;そして、
R2は、Hである）
である、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００６７】
いくつかの実施態様において、本発明には、
X1が、CHまたはNであり;
R3が、OCH3またはハロ（例えば、F）であり;そして、
R6が、
フェニル、または
1もしくは2個のハロ基（例えば、F）、1〜5個のハロゲンを含むハロ-C1-C2アルキル（例えば、CF3）、C1-C3アルキル（例えば、CH3）、または、C1-C3アルコキシから選択される0〜3個の置換基で置換されたフェニルであるか、あるいは、
R6が、C1-C3アルキル（例えば、CH3）、またはハロ-C1-C2-アルキル（例えば、CF3）である、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００６８】
いくつかの実施態様において、本発明には、
【化５１】
2015516983.tif 000054
が、1もしくは2個のN原子および1個のS原子、あるいは3個のN原子を含む、5員ヘテロアリール環である、式Iで示される化合物が含まれる。
【００６９】
いくつかの実施態様において、本発明には、
【化５２】
2015516983.tif 000055
が、
【化５３】
2015516983.tif 000056
であり;
X1が、CHであり;
R1が、CH3O、CH3、C2H5またはi-C3H7であり;
R1aが、CH3であり;
R2が、Hであり;
R3が、CHOまたはFであり;
R6が、CH3、CF3、フェニル、
【化５４】
2015516983.tif 000057
であり;そして、
R8およびR9が、各々Hである、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００７０】
いくつかの実施態様において、本発明には、
【化５５】
2015516983.tif 000058
が
【化５６】
2015516983.tif 000059
であり、
R1が、C1-C3アルコキシ（例えば、CH3O）、またはC1-C4アルキル（例えば、i-C3H7）であり、
R2が、Hであり、
X1が、CHであり、
R3が、C1-C3アルコキシ（例えば、CH3O）、またはハロ（例えば、F）であり、
R6が、CF3、フェニル、1または2個のハロゲン（例えば、FまたはCl）で置換されたフェニル（例えば、p-F-C6H4または2,4-ジ-F-C6H3）、またはCF3で置換されたフェニル（例えば、p-CF3-C6H4）であり、そして、
R8およびR9が、各々Hである、
式Iで示される化合物か、あるいは、
【化５７】
2015516983.tif 000060
が
【化５８】
2015516983.tif 000061
であり、
R1が、C1-C3アルキル（例えば、CH3）である）
X1が、CHであり、
R2が、Hであり、
R3が、C1-C3アルコキシ（例えば、CH3O）であり、
R6が、CF3で置換されたフェニル（例えば、p-CF3-C6H4）であり、そして、
R8およびR9が、各々Hである、
式Iで示される化合物が含まれる。
【００７１】
いくつかの実施態様において、本発明には、構造:
【化５９】
2015516983.tif 000062
【化６０】
2015516983.tif 000063
【化６１】
2015516983.tif 000064
【化６２】
2015516983.tif 000065
【化６３】
2015516983.tif 000066
【化６４】
2015516983.tif 000067
【化６５】
2015516983.tif 000068
【化６６】
2015516983.tif 000069
【化６７】
2015516983.tif 000070
で示される本発明の化合物が含まれる。
【００７２】
好ましくは、本発明のPAR4化合物は、FLIPRアッセイ(以降に記載される)において、5 μM以下、より好ましくは500 nM以下、およびさらに好ましくは10 nM以下のIC50を有する。そのような好ましいPAR4化合物の例は、本明細書中の特定の実施例において報告されるものである。多数のこれらの化合物についての活性データを実施例Fの表に示す。
【００７３】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも1つの本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグエステルを提供する。
【００７４】
いくつかの実施態様において、本発明は、医薬的に許容される担体ならびに治療上有効な量の式Iで示される化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、プロドラッグエステルもしくは溶媒和物を、単独で、または別の治療薬と組み合わせて含む、医薬組成物を提供する。
【００７５】
いくつかの実施態様において、本発明は、別の治療薬をさらに含む医薬組成物を提供する。好ましい実施態様において、本発明は、医薬組成物を提供し、ここで、該さらなる治療薬は、抗血小板薬またはそれらの組み合わせである。好ましくは、該抗血小板薬はP2Y12アンタゴニストおよび/またはアスピリンである。好ましくは、該P2Y12アンタゴニストは、クロピドグレル、チカグレロル、またはプラスグレルである。別の好ましい実施態様において、本発明は、該さらなる治療薬が抗凝固薬またはそれらの組み合わせである医薬組成物を提供する。好ましくは、該抗凝固薬は、FXa阻害剤またはトロンビン阻害剤である。好ましくは、該FXa阻害剤はアピキサバンまたはリバーロキサバンである。好ましくは、該トロンビン阻害剤はダビガトランである。
【００７６】
いくつかの実施態様において、本発明は血栓塞栓性疾患の治療または予防方法を提供し、それには、そのような治療または予防が必要な対象(例えば、ヒト)に治療上有効な量の少なくとも1つの本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルを投与するステップが含まれる。
【００７７】
いくつかの実施態様において、本発明は、血栓塞栓性疾患の処置のための方法または血栓塞栓性疾患の一次予防のための方法を含み、それには、それが必要な患者(例えば、ヒト)に治療上有効な量の式Iで示される化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、プロドラッグエステル、もしくは溶媒和物を投与するステップが含まれ、ここで、該血栓塞栓性疾患は、動脈性心血管血栓塞栓性疾患、静脈性心血管血栓塞栓性疾患、心室および心房または末梢循環における血栓塞栓性疾患、動脈性脳血管血栓塞栓性疾患、あるいは静脈性脳血管血栓塞栓性疾患から選択される。
【００７８】
いくつかの実施態様において、本発明は上記の方法を含み、ここで、該血栓塞栓性疾患は、不安定狭心症、急性冠症候群、心房細動、初回心筋梗塞、再発性心筋梗塞、虚血性突然死、一過性脳虚血発作、脳卒中、アテローム動脈硬化症、末梢閉塞性動脈疾患、静脈血栓症、深部静脈血栓症、血栓性静脈炎、動脈塞栓症、冠状動脈血栓症、脳動脈血栓症、脳塞栓症、腎塞栓症、肺塞栓症、あるいは 血栓形成を促進する人工表面に血液が曝露される医用インプラント、デバイスもしくは処置が原因の血栓症から選択される。
【００７９】
いくつかの実施態様において、本発明は血小板凝集を抑制もしくは防ぐ方法を含み、それには、それが必要な対象(例えば、ヒト)に治療上有効な量のPAR4アンタゴニスト（本発明の式Iで示される化合物である）を投与するステップが含まれる。
【００８０】
（本発明の他の実施態様）
いくつかの実施態様において、本発明は、本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルの製造方法を提供する。
【００８１】
いくつかの実施態様において、本発明は、本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルを製造するための中間体を提供する。
【００８２】
いくつかの実施態様において、本発明は、血栓塞栓性疾患の治療または予防方法を提供し、それには、それが必要な対象(例えば、ヒト)に治療上有効な量のPAR4に結合し(例えば、本発明の式Iの化合物)、PAR4切断および/またはシグナル伝達を阻害する化合物を投与することが含まれ、ここで、該対象は二重PAR1/PAR4血小板受容体レパートリーを有する。
【００８３】
いくつかの実施態様において、本発明は、血栓塞栓性疾患の治療または予防のための療法で用いるための、本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルを提供する。
【００８４】
いくつかの実施態様において、本発明はまた、血栓塞栓性疾患の治療または予防のための医薬の製造のための、本発明の化合物またはその立体異性体、互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグエステルを提供する。
【００８５】
本発明は、その精神または本質的特性から逸脱することなく、他の特定の形態において具体化されうる。本発明は、本明細書に記載の本発明の好ましい態様の全ての組み合わせを包含する。本発明のいずれかおよび全ての実施態様をいずれかの他の実施態様と組み合わせてさらなる実施態様を記載してもよいと理解される。また、該実施態様の各々個々の要素はそれぞれの独立した実施態様であると理解される。さらに、実施態様のいずれの要素は、さらなる実施態様を記載するためにいずれの実施態様からのいずれかおよび全ての他の要素と組み合わされように意図されている。
【００８６】
（化学）
本発明の化合物は1つ以上の不斉中心を有してもよい。他に指定のない限り、本発明の化合物の全てのキラル体(エナンチオマーおよびジアステレオマー)およびラセミ体が、本発明に含まれる。オレフィン、C=N二重結合などの多くの幾何異性体もまた、該化合物に存在することができ、全てのそのような安定な異性体が本発明において意図される。本発明の化合物のシス-およびトランス-幾何異性体が記載され、異性体の混合物としてかまたは分離された異性体として単離されてもよい。本化合物は、光学活性体またはラセミ体で単離され得る。光学活性体を製造する方法（例えば、ラセミ体の分割によるか、または光学活性出発物質からの合成による）が周知である。特定の立体化学または異性体が明確に示されない限り、構造の全てのキラル体(エナンチオマーおよびジアステレオマー)およびラセミ体ならびに全ての幾何異性体が意図される。化合物(または不斉炭素)の配置(シス、トランス、またはRもしくはS)の具体的な言及がない場合、異性体のいずれか1つまたは1つ以上の異性体の混合物が意図される。製造方法は、出発物質としてラセミ体、エナンチオマーまたはジアステレオマーを用いることができる。本発明の化合物を製造するために用いられる全ての方法およびそこで製造される中間体は、本発明の一部であるとみなされる。エナンチオマーまたはジアステレオマーの生成物を製造する場合、それらは、通常の方法（例えば、クロマトグラフィーまたは分別結晶法）により分離されうる。本発明の化合物およびその塩は、該分子の他の部分が水素原子で置き換えられており、その結果、該分子の原子間の化学結合が再編成されている、複数の互変異性体で存在してもよい。それらが存在する限り、全ての互変異性体は、本発明の範囲内に含まれることが理解されるべきである。
【００８７】
本発明の化合物の分子量は、好ましくは、約800 g／モル以下である。
【００８８】
本明細書で用いる用語「アルキル」または「アルキレン」は、単独または別の基の一部として、1〜10個の炭素または特定の数の炭素原子を有する分枝および直鎖の両方の飽和脂肪族炭化水素基を含むことを意図する。例えば、「C1-10アルキル」(またはアルキレン)は、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、およびC10アルキル基を含むことを意図する。さらに、例えば、「C1-C6アルキル」は、1〜6個の炭素原子を有するアルキルを意味する。アルキル基は、無置換であり得るか、あるいは少なくとも1個の水素が別の化学基で置き換えられて置換され得る。アルキル基の例としては、限定はされないが、メチル(Me)、エチル(Et)、プロピル(例えば、n-プロピルおよびイソプロピル)、ブチル(例えば、n-ブチル、イソブチル、t-ブチル)、およびペンチル(例えば、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル)、ならびにその連鎖異性体など、ならびに、適宜、ハロ（例えば、F、Br、Cl、またはI）、またはCF3、アルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、アリール(アリール)もしくはジアリール、アリールアルキル、アリールアルキルオキシ、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルキルオキシ、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アシル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルコキシ、アリールオキシアルキル、アルキルチオ、アリールアルキルチオ、アリールオキシアリール、アルキルアミド、アルカノイルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ニトロ、シアノ、チオール、ハロアルキル、トリハロアルキル、および/またはアルキルチオ、ならびに、(=O)、ORa、SRa、(=S)、-NRaRb、-N(アルキル)3+、-NRaSO2、-NRaSO2Rc、-SO2Rc-SO2NRaRb、-SO2NRaC(=O)Rb、SO3H、-PO(OH)2、-C(=O)Ra、-CO2Ra、-C(=O)NRaRb、-C(=O)(C1-C4アルキレン)NRaRb、-C(=O)NRa(SO2)Rb、-CO2(C1-C4アルキレン)NRaRb、-NRaC(=O)Rb、-NRaCO2Rb、-NRa(C1-C4アルキレン)CO2Rb、=N-OH、=N-O-アルキル（ここで、RaおよびRbは同一かまたは異なっており、独立して、水素、アルキル、アルケニル、CO2H、CO2(アルキル)、C3-C7シクロアルキル、フェニル、ベンジル、フェニルエチル、ナフチル、4〜7員ヘテロシクロ、または5〜6員ヘテロアリールから選択されるか、あるいは、同一の窒素原子に結合している場合、一緒になってヘテロシクロまたはヘテロアリールを形成してもよく、そして、RcはRaおよびRbと同じ基から選択されるが水素ではない）といった1〜4個の置換基を含みうる該基が挙げられる。各基RaおよびRb（水素以外の場合）ならびに各Rc基は、適宜、最大3個のさらなる置換基（Ra、Rb、および/またはRcのいずれの利用可能な炭素もしくは窒素原子にて結合していて、同一または異なっている）を有しており、独立して、(C1-C6)アルキル、(C2-C6)アルケニル、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、CF3、O(C1-C6アルキル)、OCF3、C(=O)H、C(=O)(C1-C6アルキル)、CO2H、CO2(C1-C6アルキル)、NHCO2(C1-C6アルキル)、-S(C1-C6アルキル)、-NH2、NH(C1-C6アルキル)、N(C1-C6アルキル)2、N(CH3)3+、SO2(C1-C6アルキル)、C(=O)(C1-C4アルキレン)NH2、C(=O)(C1-C4アルキレン)NH(アルキル)、C(=O)(C1-C4アルキレン)N(C1-C4アルキル)2、C3-C7シクロアルキル、フェニル、ベンジル、フェニルエチル、フェニルオキシ、ベンジルオキシ、ナフチル、4〜7員ヘテロシクロ、または5〜6員ヘテロアリールからなる群から選択される。置換アルキルがアリール、ヘテロシクロ、シクロアルキル、またはヘテロアリール基で置換されている場合、該環系は以下に定義される通りであり、従って、また以下に定義される通り、0、1、2、または3個の置換基を有していてよい。
【００８９】
「アルケニル」または「アルケニレン」は、単独または別の基の一部として、直鎖または分枝のいずれかの配置の炭化水素鎖であって、該鎖に沿ったいずれか安定な位置で生じうる1個以上の炭素-炭素二重結合を有する該炭化水素鎖を含むことを意図する。例えば、「C2-6アルケニル」(またはアルケニレン)は、C2、C3、C4、C5、およびC6アルケニル基を含むことを意図する。アルケニルの例としては、限定はされないが、エテニル、1-プロペニル、2-プロペニル、2-ブテニル、3-ブテニル、2-ペンテニル、3-ペンテニル、4-ペンテニル、2-ヘキセニル、3-ヘキセニル、4-ヘキセニル、5-ヘキセニル、2-メチル-2-プロペニル、および4-メチル-3-ペンテニルが挙げられ、それは、適宜、1〜4個の置換基、すなわち、ハロゲン、ハロアルキル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、アミノ、ヒドロキシ、ヘテロアリール、シクロヘテロアルキル、アルカノイルアミノ、アルキルアミド、アリールカルボニル-アミノ、ニトロ、シアノ、チオール、および/またはアルキルチオで置換されていていよい。
【００９０】
「アルキニル」または「アルキニレン」は、単独または別の基の一部として、直鎖または分枝のいずれかの配置の炭化水素鎖であって、該鎖に沿ったいずれか安定な位置で生じうる1個以上の炭素-炭素三重結合を有する該炭化水素鎖を含むことを意図する。例えば、「C2-6アルキニル」(またはアルキニレン)は、C2、C3、C4、C5、およびC6アルキニル基;例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、およびヘキシニルを含むことを意図し、それは、適宜、1〜4個の置換基、すなわち、ハロゲン、ハロアルキル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、アミノ、ヘテロアリール、シクロヘテロアルキル、ヒドロキシ、アルカノイルアミノ、アルキルアミド、アリールカルボニルアミノ、ニトロ、シアノ、チオール、および/またはアルキルチオで置換されていてよい。
【００９１】
用語「アルコキシ」または「アルキルオキシ」は、単独または別の基の一部として、-O-アルキル基（アルキルは上記の通りである）を言う。「C1-6アルコキシ」(またはアルキルオキシ)は、C1、C2、C3、C4、C5、およびC6アルコキシ基を含むことを意図する。アルコキシ基の例としては、限定はされないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ(例えば、n-プロポキシおよびイソプロポキシ)、およびt-ブトキシが挙げられる。同様に、「アルキルチオ」または「チオアルコキシ」は、単独または別の基の一部として、硫黄架橋を介して結合した、示された数の炭素原子を有する、上記のアルキル基もしくはアルコキシ基;例えば、メチル-S-およびエチル-S-を言う。
【００９２】
「ハロ」または「ハロゲン」は、単独または別の基の一部として、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを含む。
【００９３】
「ハロアルキル」は、1〜7個のハロゲン、好ましくは1〜4個のハロゲン、好ましくはFおよび/またはClで置換された、特定の数の炭素原子を有する分枝および直鎖の両方の飽和脂肪族炭化水素基を含むことを意図する。ハロアルキルの例としては、限定はされないが、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、ペンタクロロエチル、1,1-ジフルオロエチル、1-フルオロエチル、2,2,2-トリフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピル、およびヘプタクロロプロピルが挙げられる。ハロアルキルの例としては、また、1〜7個のフッ素原子、好ましくは1〜4個のフッ素原子で置換された、特定の数の炭素原子を有する分枝および直鎖の両方の飽和脂肪族炭化水素基を含むことを意図する「フルオロアルキル」も挙げられる。
【００９４】
「ハロ-C1-C2-アルコキシ」または「ハロアルキルオキシ」は、酸素架橋により結合した示された数の炭素原子を有する、上記のハロアルキル基を示す。例えば、「C1-6ハロアルコキシ」は、C1、C2、C3、C4、C5、およびC6ハロアルコキシ基を含むことを意図する。ハロアルコキシの例としては、限定はされないが、トリフルオロメトキシ、2,2,2-トリフルオロエトキシ、ペンタフルオロエトキシ（pentafluorothoxy）などが挙げられる。同様に、「ハロアルキルチオ」または「チオハロアルコキシ」は、硫黄架橋により結合した示された数の炭素原子を有する、上記のハロアルキル基;例えば、トリフルオロメチル-S-、およびペンタフルオロエチル-S-を示す。
【００９５】
他に指定のない限り、本明細書で用いる用語「シクロアルキル」は、単独または別の基の一部として、1〜3個の環を含む飽和または部分不飽和(1または2個の二重結合を含む)環状炭化水素基（環を形成する計3〜10個の炭素を含む単環式アルキル、二環式アルキル(またはビシクロアルキル)、および三環式アルキル(C3-C10シクロアルキル)が含まれる）を含み、それは、アリールについて記載されるように、1または2個の芳香環に縮合していてよく、それには、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル、シクロドデシル、シクロヘキセニル、ノルボルニル、
【化６８】
2015516983.tif 000071
が含まれ、いずれの基も、適宜、1〜4個の置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アリール、アリールオキシ、アリールアルキル、シクロアルキル、アルキルアミド、アルカノイルアミノ、オキソ、アシル、アリールカルボニルアミノ、アミノ、ニトロ、シアノ、チオール、および/またはアルキルチオで置換されていてよく、さらに/あるいは、アルキルならびに2つのフリー結合（free bond）を含むかかる基についての置換基のいずれかは連結基である。
【００９６】
本明細書で用いる「炭素環」または「炭素環残基」は、いずれの安定な3-、4-、5-、6-、もしくは7-員の単環式もしくは二環式、または7-、8-、9-、10-、11-、12-、もしくは13-員の二環式もしくは三環式の環（それらのいずれかは、飽和、部分不飽和、不飽和または芳香族であってよい）を意味することを意図する。そのような炭素環の例としては、限定はされないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロブテニル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘプテニル、シクロヘプチル、シクロヘプテニル、アダマンチル、シクロオクチル、シクロオクテニル、シクロオクタジエニル、[3.3.0]ビシクロオクタン、[4.3.0]ビシクロノナン、[4.4.0]ビシクロデカン、[2.2.2]ビシクロオクタン、フルオレニル、フェニル、ナフチル、インダニル、アダマンチル、アントラセニル、およびテトラヒドロナフチル(テトラリン)が挙げられる。上記の通り、架橋環もまた、炭素環の定義に含まれる(例えば、[2.2.2]ビシクロオクタン)。他に特別の定めのない限り、好ましい炭素環は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニル、およびインダニルである。該用語「炭素環」を用いる場合、「アリール」を含むことを意図する。架橋環は、1個以上の炭素原子が2個の非隣接炭素原子と結合する場合に生じる。好ましい架橋は、1または2個の炭素原子である。架橋は常に単環を三環に変換することに留意する。環が架橋されている場合、該環に関して記載した置換基もまた、該架橋上に存在していてよい。
【００９７】
「アリール」基は、単環式または多環式の芳香族炭化水素（例えば、フェニル、ナフチル、およびフェナントラニルを含む）を言う。アリール部分は周知であり、例えば、Lewis, R.J., ed., Hawley's Condensed Chemical Dictionary, 13th Edition, John Wiley & Sons, New York (1997)に記載されている。「C6-10アリール」は、フェニルおよびナフチルを言う。他に特別の定めのない限り、「アリール」、「C6-10アリール」または 「芳香族残基」は、無置換であってよいか、あるいは、OH、OC1-C3アルコキシ、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、N(CH3)H、N(CH3)2、CF3、OCF3、OCHF2、C(=O)CH3、SCH3、S(=O)CH3、S(=O)2CH3、C1-C3アルキル、CO2H、またはCO2CH3から選択される1〜3個の基で置換されていてよい。
【００９８】
本明細書で用いる用語「ヘテロ環」、「ヘテロシクロ」または「ヘテロ環式」基は、飽和または部分不飽和であって、炭素原子、およびN、OもしくはSから独立して選択される1、2、3もしくは4個のヘテロ原子を含む、安定な5-、6-、もしくは7-員の単環式もしくは二環式、または7-、8-、9-、10-、11-、12-、13-、もしくは14-員の二環式ヘテロ環を意味することを意図し;上記のヘテロ環のいずれかがベンゼン環と縮合しているいずれの二環式基をも含む。該窒素および硫黄のヘテロ原子は、適宜、酸化されていてよい(すなわち、N→OおよびS(O)p、ここで、pは0、1または2である)。該窒素原子は、置換または無置換であってよい(すなわち、定義するならば、NまたはNR、ここで、RはHまたは別の置換基である)。該ヘテロ環は、いずれのヘテロ原子または炭素原子にてそのペンダント基に結合し、その結果安定な構造をもたらしうる。本明細書に記載のヘテロ環は、得られる化合物が安定である場合、適宜、炭素または窒素原子上にて、OH、OC1-C3アルコキシ、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、N(CH3)H、N(CH3)2、CF3、OCF3、OCHF2、=O、C(=O)CH3、SCH3、S(=O)CH3、S(=O)2CH3、C1-C3アルキル、CO2HまたはCO2CH3から選択される1〜3個の基で置換されていてよい。該ヘテロ環中の窒素は、適宜、四級化されてもよい。該ヘテロ環中のSおよびO原子の総数が１を超える場合、これらのヘテロ原子は互いに隣接しないことが好ましい。該ヘテロ環中のSおよびO原子の総数は１以下であることが好ましい。用語「ヘテロ環」を用いる場合、ヘテロアリールを含むことを意図する。
【００９９】
単環式ヘテロ環の例としては、アゼチジニル、ピロリジニル、オキセタニル、イミダゾリニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジル、ピペラジニル、2-オキソピペラジニル、2-オキソピペリジル、2-オキソピロロジニル、2-オキソアゼピニル、アゼピニル、4-ピペリドニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、1,3-ジオキソラン、およびテトラヒドロ-1,1-ジオキソチエニルなどが挙げられる。
【０１００】
二環式ヘテロシクロ基の例としては、キヌクリジニルが挙げられる。
【０１０１】
好ましいヘテロシクロ基としては、
【化６９】
2015516983.tif 000072
が挙げられ、それは、適宜、置換されていてよい。
【０１０２】
本明細書で用いる用語「芳香族ヘテロ環基」または「ヘテロアリール」は、少なくとも1つのヘテロ原子環要素（例えば、硫黄、酸素、または窒素）を含む、安定な単環式および多環式芳香族炭化水素を意味することを意図する。ヘテロアリール基としては、制限されることなく、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、フリル、キノリル、イソキノリル、チエニル、イミダゾリル、チアゾリル、インドリル、ピロイル、オキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インダゾリル、1,2,4-チアジアゾリル、イソチアゾリル、プリニル、カルバゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリニル、ベンゾジオキソラニル、およびベンゾジオキサンが挙げられる。ヘテロアリール基は、無置換であるか、あるいは、OH、OC1-C3アルコキシ、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、N(CH3)H、N(CH3)2、CF3、OCF3、OCHF2、=O、C(=O)CH3、SCH3、S(=O)CH3、S(=O)2CH3、C1-C3アルキル、CO2HまたはCO2CH3から選択される1〜3個の基で置換されている。該窒素原子は、置換されているか、または無置換である(すなわち、定義するならば、NまたはNR、ここで、RはHまたは別の置換基である)。該窒素および硫黄ヘテロ原子は、適宜、酸化されていてよい(すなわち、N→OおよびS(O)p、ここで、pは0、1または2である)。架橋環もまた、ヘテロ環の定義に含まれる。架橋環は、１個以上の原子(すなわち、C、O、N、またはS)が2個の非隣接炭素原子または窒素原子に結合する場合に生じる。架橋環の例としては、限定はされないが、1個の炭素原子、2個の炭素原子、1個の窒素原子、2個の窒素原子、および炭素-窒素基が挙げられる。架橋は常に単環を三環に変換することに留意する。環が架橋されている場合、該環に関して記載した置換基もまた、該架橋上に存在していてよい。
【０１０３】
好ましいヘテロアリール基としては、
【化７０】
2015516983.tif 000073
などが挙げられる。
【０１０４】
本明細書で用いる用語「不飽和」とは、基が完全不飽和または部分不飽和であってもよい環または基を言う。
【０１０５】
用語「アシル」は、単独または別の基の一部として、有機ラジカルに結合したカルボニル基、より具体的には、有機ラジカルに結合している基C(=O)Re、ならびに二価の基-C(=O)-または-C(=O)Re-を言う。該基Reは、本明細書に定義される、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミノアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、または置換アルキニルか、あるいは、適切な場合、対応する二価の基（例えば、アルキレン、アルケニレンなど）から選択され得る。
【０１０６】
環または他の基に結合した、記号「
【化７１】
2015516983.tif 000074
」、「
【化７２】
2015516983.tif 000075
」、または、
「
【化７３】
2015516983.tif 000076
」は、フリー結合または連結基を言う。
【０１０７】
本明細書の全体を通して、基およびそれらの置換基は、医薬的に許容される化合物および/または医薬的に許容される化合物の製造において有用な中間体化合物として有用な安定な部分および化合物をもたらすように、当業者により選択されうる。
【０１０８】
用語「対イオン」は、負電荷の種（例えばクロリド、ブロミド、ヒドロキシド、アセテート、およびスルフェート）を示すために用いられる。
【０１０９】
本明細書に記載の通り、用語「置換された」は、少なくとも1つの水素原子が非水素基で置き換えられる（ただし、正常な原子価が維持され、該置換により安定な化合物がもたらされる）ことを意味する。置換基がケト(すなわち、=O)である場合、該原子上の2個の水素が置き換えられる。ケト置換基は芳香族部分上に存在しない。本明細書で用いる環二重結合は、2個の隣接環内原子間で形成される二重結合(例えば、C=C、C=N、またはN=N)である。
【０１１０】
窒素原子(例えば、アミン)が本発明の化合物上に存在する場合、これらを酸化剤(例えば、mCPBAおよび/または過酸化水素)で処理することによりN-オキシドに変換して、本発明の他の化合物を得てもよい。従って、示しまた主張する窒素原子は、示された窒素およびそのN-オキシド(N→O)誘導体の両方を包含するとみなされる。四級炭素原子が本発明の化合物上に存在する場合、ケイ素原子により置換され得るがただし、それらはSi-NまたはSi-O結合を形成しない。
【０１１１】
いずれかの変数が、化合物についてのいずれかの組成または式中に1回以上現れる場合、各々のその定義は、他の全ての場合における定義から独立している。従って、例えば、基が0〜3個のR3a基で置換されていると示される場合、該基は適宜、最大3個のR3a基で置換されてよく、各R3aはR3aの定義から独立して選択される。また、置換基および/または変数の組み合わせは、該組み合わせが安定な化合物をもたらす場合にのみ許容され得る。
【０１１２】
置換基への結合が、環中の2個の原子をつなげる結合と交差するように示される場合、該置換基は、該環上のいずれの原子と結合しうる。置換基が、それが所定の式の化合物の他の部分と結合する原子を示すことなく記載されている場合、該置換基は該置換基中のいずれの原子を介して結合しうる。置換基および/または変数の組み合わせは、該組み合わせが安定な化合物をもたらす場合にのみ許容され得る。
【０１１３】
本明細書で用いられるフレーズ「医薬的に許容される」は、適切な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー反応、および/または他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒトおよび動物の組織と接触して用いるのに適しており、妥当な利益/リスク比に見合った、化合物、物質、組成物、および/または剤形を意味する。
【０１１４】
本明細書で用いる「医薬的に許容される塩」は、該親化合物がその酸塩または塩基塩の形成により修飾される、開示された化合物の誘導体を意味する。医薬的に許容される塩の例としては、限定はされないが、塩基性基（例えばアミン）の無機酸塩または有機酸塩; および、酸性基（例えばカルボン酸）のアルカリ塩または有機塩が挙げられる。該医薬的に許容される塩としては、例えば無毒の無機酸または有機酸から形成される、親化合物の通常の無毒の塩または第四級アンモニウム塩が挙げられる。例えば、該通常の無毒の塩としては、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、および硝酸）由来の塩;および、有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、2-アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、およびイセチオン酸など）から製造される塩が挙げられる。
【０１１５】
本発明の医薬的に許容される塩は、通常の化学的手法により、塩基性または酸性部分を有する親化合物から合成することができる。一般的に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または遊離塩基形態を化学量論量の適切な塩基または酸と、水もしくは有機溶媒、または該2つの混合液（一般的には、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい）の中で反応させることによって製造することができる。好ましい塩のリストは、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Company, Easton, PA (1990)に記載されており、該開示は引用により本明細書に援用される。
【０１１６】
加えて、式Iの化合物はプロドラッグ形態を有しうる。in vivoで変換されて生理活性薬物(すなわち、式Iの化合物)を提供しうるいずれの化合物も本発明の範囲と精神内のプロドラッグである。様々な形態のプロドラッグが当分野では周知である。そのようなプロドラッグ誘導体の例については:
a)Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985), and Widder, K. et al., eds., Methods in Enzymology, 112:309-396, Academic Press (1985);
b)Bundgaard, H., Chapter 5, "Design and Application of Prodrugs", Krosgaard-Larsen, P. et al., eds., A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113-191, Harwood Academic Publishers (1991);
c)Bundgaard, H., Adv. Drug Deliv. Rev., 8:1-38 (1992);
d)Bundgaard, H. et al., J. Pharm. Sci., 77:285 (1988);
e)Kakeya, N. et al., Chem. Pharm. Bull., 32:692 (1984);および、
f)King, F.D., ed., Medicinal Chemistry: Principles and Practice, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, UK (1994)
を参照。
【０１１７】
同位体で標識された本発明の化合物（すなわち、記載された原子の１個以上が該原子の同位体により置き換えられる(例えば、12Cは13Cまたは14Cにより置き換えられる;水素の同位体にはトリチウムおよびジュウテリウムが含まれる)）もまた本明細書中に提供する。そのような化合物は、様々な利用可能性（例えば、潜在的な医薬化合物の標的タンパク質または受容体への結合能力の測定における標準物質および試薬として、あるいは、in vivoまたはin vitroで生物学的な受容体と結合した本発明の化合物の造影のため）を有する。
【０１１８】
本発明の化合物を、それらの製造後に、好ましくは単離および精製して、98％以上、好ましくは99％以上(「実質的に純粋」)の重量比の量の本発明の化合物を含有する組成物を得て、次いで、本明細書に記載の通り用いるか、あるいは製剤化する。該「実質的に純粋」な化合物もまた、本発明の一部として本明細書中に意図する。
【０１１９】
「安定な化合物」および「安定な構造」とは、反応混合物から有用な純度への単離、および有効な治療薬への製剤化に耐えるのに十分強い化合物を示すことを意図する。本発明の化合物はN-ハロ、S(O)2H、またはS(O)H基を含まないことが好ましい。
【０１２０】
用語「溶媒和物」は、本発明の化合物と1個以上の溶媒分子（有機であろうと無機であろうと）との物理的結合を意味する。この物理的結合には、水素結合が含まれる。ある場合において、該溶媒和物は、例えば、1個以上の溶媒分子が結晶性固体の結晶格子中に取り込まれている場合に、単離され得る。「溶媒和物」は、溶液相および単離可能な溶媒和物の両方を包含する。溶媒和物の例としては、限定はされないが、水和物、エタノール付加物、メタノール付加物、およびイソプロパノール付加物が挙げられる。溶媒和の方法は、当分野では広く知られている。
【０１２１】
本明細書で用いる略語は、以下の通りに定義される:「1 x」は1回、「2 x」は2回、「3 x」は3回、「℃」は摂氏度、「eq」は当量、「g」はグラム、「mg」はミリグラム、「L」はリットル、「mL」はミリリットル、「μL」はマイクロリットル、「N」は規定、「M」はモル、「mmol」はミリモル、「min」は分、「h」は時間、「rt」は室温、「RT」は保持時間、「atm」は気圧、「psi」はポンド/平方インチ、「conc.」は濃縮物、「sat」または「sat'd」は飽和、「MW」は分子量、「mp」は融点、「MS」または「Mass Spec」は質量分析、「ESI」はエレクトロスプレーイオン化質量分析、「HR」は高分解能、「HRMS」は高分解能質量分析、「LCMS」は液体クロマトグラフィー質量分析、「HPLC」は高圧液体クロマトグラフィー、「RP HPLC」は逆相HPLC、「TLC」は薄層クロマトグラフィー、「NMR」は核磁気共鳴分光法、「SM」は出発物質、「NMR」は核磁気共鳴分光法、「1H」はプロトン、「δ」はデルタ、「s」は1重線、「d」は2重線、「t」は3重線、「q」は4重線、「m」は多重線、「br」はブロード、「Hz」はヘルツ、ならびに、「tlc」は薄層クロマトグラフィー。「α」、「β」、「R」、「S」、「E」、および「Z」は当業者に周知の立体化学の記号表示である。
2015516983.tif 000077
2015516983.tif 000078
【０１２２】
本発明の化合物は、有機合成の分野の当業者に公知の多くの方法で製造することができる。本発明の化合物は、以下に記載の方法を用いて、有機合成化学の分野で公知の合成方法と一緒に、あるいは当業者に認められているそれらの改変法により、合成することができる。好ましい方法としては、限定はされないが、以下に記載するものが挙げられる。該反応は、使用される試薬および物質に適していて、もたらされる変換に対して適切である溶媒または溶媒混合物中で実施される。分子上に存在する官能性が提示された変換と一致すべきであることが、有機合成の分野の当業者により理解されるであろう。これにより、本発明の目的の化合物を得るために、合成工程の順序を改変する判断か、またはさらに別の1つの特定のプロセススキームを選択する判断が、しばしば必要とされうる。
【０１２３】
本分野におけるいずれの合成経路の計画における別の主流の判断が、本発明に記載の化合物に存在する反応性官能基の保護のために用いられる保護基の賢明な選択であることもまた、認識されるであろう。当業者にとっての多くの代替方法を記載する信頼できる文献は、Wuts et al. (Greene's Protective Groups In Organic Synthesis, 4th Edition, Wiley-Interscience (2006))である。
【０１２４】
本発明の式Iの化合物は、スキーム1に示す通り、式IIIのアミンと式IVのケトン（脱離基Z（例えば、ブロミド、ヨージドまたはトシレート）および保護基PG（例えば、ベンジル）を含む）との縮合により得ることができる。式IIIおよびIVの化合物の両者とも、市販されているか、あるいは、当業者に公知の方法により製造され得る。この縮合は、熱的加熱によってか、または好ましくはマイクロ波照射による加熱によって、促進される。該保護基は、当分野で公知の方法によって、例えば、ペンタメチルベンゼンの存在下において-78℃にて、BCl3により、除去され得る。その後、光延条件下においてアルコールVIを用いるか、または塩基（例えば、炭酸カリウム）の存在下においてブロミドVIIを用いることによってアルキル化を行い、式Iの化合物を得る。アルコールVIおよびブロミドVIIは、市販されているか、あるいは、当分野で公知の方法によって製造され得る。
スキーム1
【化７４】
2015516983.tif 000079
【０１２５】
別法として、式Iの化合物は、スキーム2に示す通り、式IXの化合物から、チオメチル基を酸化によってスルホンVIIへと活性化させることによって製造され得る。これにより、塩基（例えば、炭酸カリウムまたは水素化ナトリウム）の存在下において、無溶媒かまたは極性非プロトン性溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）中で、基R0として様々な求核剤（例えば、アルコール、チオールおよびアミン）を導入して、化合物XIを得ることができる。化合物XIは、保護基(PG)の除去およびスキーム1に記載のアルキル化によって、式Iの化合物に変化され得る。
スキーム2
【化７５】
2015516983.tif 000080
【０１２６】
2位にα-ブロモケトン置換基を有する置換ベンゾフラン(XV)は、スキーム3に示す通りに製造され得る。o-ヒドロキシベンズアルデヒドXIIを、有機合成の当業者に公知の方法により製造することができ、脱離基Q（例えば、クロロ、ブロモまたはトシルオキシ）を有する式XIIIのケトンと縮合させてベンゾフランXIVを得ることができる。式XIVの化合物のブロム化によりブロモケトンXVを得て、それを、スキーム1に従って、置換アミノヘテロ環IIIと縮合させて式Iの化合物を得る。ブロモケトンXVは、スキーム1中の化合物IVの特定のサブセットである。
スキーム3
【化７６】
2015516983.tif 000081
【０１２７】
式Iのベンズオキサゾール化合物は、スキーム4に示す通り、置換アミノヘテロ環IIIおよび脱離基Z（例えば、ブロミド、ヨージドまたはトシレート）を含む式XVIのピルビン酸エステルから出発して製造され得る。式IIIおよびXVIの化合物の両者とも、市販されているか、あるいは、当業者に公知の方法によって入手可能である。該エステルを縮合およびけん化して酸XVIIIを得た後、式XIXのアミノフェノールを結合させて式XXのアミドを得て、それを酸触媒下において環化させて式XXIのベンズオキサゾール化合物を得ることができる。これらを、スキーム1に示す通り、脱保護およびアルキル化して式Iの化合物を得る。
スキーム4
【化７７】
2015516983.tif 000082
【０１２８】
アミノヘテロ環XXIVは、二硫化炭素(XXII)から、チオキサンテート中間体XXIIIを介して、製造され得る。これらのアミノヘテロ環は、式Iの化合物の製造において有用である。
スキーム5
【化７８】
2015516983.tif 000083
【０１２９】
式Iの化合物（式中、Y=-CH2CH2-）の製造に有用な中間体であるアミノヘテロ環XXXは、ケトエステルXXVから製造され得る。ヒドラジンを用いた環化の後、臭素を用いた酸化によってピリダジノンXXVIIを得る。塩素化、ヒドラジンでの置換、その後の水素化によって、アミノヘテロ環XXX（スキームI中の化合物IIIの特定のサブセットである）を得る。そのようなものとして、これらのアミノヘテロ環は、式Iの化合物の製造において有用である。
スキーム6
【化７９】
2015516983.tif 000084
【実施例】
【０１３０】
以下の本発明の化合物を、本明細書に記載の方法を用いて、製造、単離およびキャラクタライズした。それらは本発明の一部を説明するものであって、本発明の範囲を限定することを意味するのではない。以下の実験手順において、特に指定のない限り、溶液比は体積関係を表す。NMR化学シフト(δ)は、100万分の1(ppm)で報告する。生成物を、以下のメソッドを用いて逆相分析HPLCにより解析した:
メソッドA:  カラム: ZORBAX（登録商標） XDB-C18 3.5 micron, 4.6 x 30 mm; 移動相:  A=MeOH:H2O:TFA (95:5:05), B=MeOH:H2O:TFA (5:95:05).  Grad.: T=0: 100% 溶媒A; T=2:100% 溶媒B; 停止時間: 4分. 流速=3.0mL/分
メソッドB:  カラム: Agilent POROSHELL（登録商標） 120; EC-C18, 2.7um; 2.1x30 mm; 移動相:  Solv A: 5% MeOH: 95% H2O + 0.1% AcOH; 溶媒B: 95% MeOH: 5% H2O + 0.1% AcOH; Grad.: T=0: 100% 溶媒A; T=1:100% 溶媒B; 停止時間: 4分. 流速=1.0mL/分
メソッドC:  SunfireC18 3.5 micron column (4.6 x 30 mm) 100%A〜100%Bの2分のグラジエントで3 mL/分にて溶出(A: 5% メタノール, 94.95% 水, 0.05% TFA; B: 5% 水, 94.95% メタノール, 0.05% TFA, UV 220 nm)
メソッドD:  Eclipse XDB-C18 3.5 micron column (4.6 x 30 mm)  100%A〜100%Bの2分のグラジエントで3 mL/分にて溶出(A: 5% メタノール, 94.95% 水, 0.05% TFA; B: 5% 水, 94.95% メタノール, 0.05% TFA, UV 220 nm)
メソッドE:  Eclipse XDB-C18 3.5 micron column (4.6 x 30 mm)  100%A〜100%Bの2分のグラジエントで3 mL/分にて溶出(A: 5% アセトニトリル, 94.95% 水, 0.05% TFA; B: 5% 水, 94.95% アセトニトリル, 0.05% TFA, UV 220 nm)
メソッドF:  ZORBAX（登録商標） SB-フェニル 3.5micron column (4.6x50 mm)  100%A〜100%Bの2分のグラジエントで3 mL/分にて溶出(A: 5% メタノール, 94.95% 水, 0.05% TFA; B: 5% 水, 94.95% メタノール, 0.05% TFA, UV 220 nm)
【０１３１】
実施例1
2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((2-メチルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化８０】
2015516983.tif 000085
1A. (2-メチルチアゾール-4-イル)メタノール
【化８１】
2015516983.tif 000086
2-メチル-チアゾール-4-カルボン酸エチルエステル(1.26g, 7.36 mmol)／エチルエーテル(10 mL)溶液を-78℃まで冷却し、LAH(0.83g, 21.9 mmol)／乾燥THF(30 mL)溶液を、10分かけて滴下した。3時間後、-78℃にて、該混合液を飽和Na2SO4(約20 mL)でクエンチした。該混合液を22℃まで昇温させ、エチルエーテル(4 x 50 mL)で抽出した。抽出物を合わせて、食塩水で洗浄し、無水MgSO4で乾燥させ、濃縮して油状物を得た。シリカゲルパッド(3 x 7 cm)で濾過し、酢酸エチルで溶出して、油状物を得て、それを蒸留して、表題の物質(0.664g, 70%)を油状物として得た（それは結晶化した）。  B.p. 60-70℃ / 0.2 torr.  HRMS(ESI) C5H8NOSとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 130.0321, 実測値; 130.0342.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ 6.99 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 4.70 (s, 1H), 2.98 (br s, 1H), 2.68 (s, 3H).
【０１３２】
1B. 5-(ベンジルオキシ)-7-メトキシ-2,2-ジメチル-4H-ベンゾ[d][1,3]ジオキシン-4-オン
【化８２】
2015516983.tif 000087
5-ヒドロキシ-7-メトキシ-2,2-ジメチル-4H-ベンゾ[d][1,3]ジオキシン-4-オン(30.00 g, 0.134 mol)／N,N-ジメチルホルムアミド(400 mL)溶液に、粉末の無水炭酸カリウム(19.41 g, 0.14 mol)を一度に全て加えた。得られた混合液を減圧で10分間撹拌した後、窒素でフラッシュした。該反応フラスコを水浴(22℃)に入れ、ベンジルブロミド(24.03 g, 0.14 mol)を15分かけて滴下した。次いで、得られた混合液を22℃で18時間撹拌した(tlcによると出発物質は残っていない)。固形物を濾過し、N,N-ジメチルホルムアミドで洗浄した。濾液を減圧エバポレートし、残った油状物を、酢酸エチル(500 mL)で希釈し、冷0.1 N塩酸、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、溶媒をエバポレートして、濃いシロップ状物を得た。酢酸エチル(50 mL)およびヘキサン(150 mL)から結晶化させて、35.17 gの5-(ベンジルオキシ)-7-メトキシ-2,2-ジメチル-4H-ベンゾ[d][1,3]ジオキシン-4-オンを、大きな無色の角柱形の物質（prism）として得た。母液をシリカゲル(4 x 13 cm, トルエン-酢酸エチル 0-5%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、6.64 gのさらなる物質を得て、総収量 41.81 g(99%)を得た。  HRMS(ESI) C18H19O5として計算:計算値; [M+H]+ m/z 315.1227, 実測値; 315.1386.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ 1.68 (s, 6H), 3.77 (s, 3H), 5.19 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 6.04 (d, J = 2.03 Hz, 1H), 6.15 (d, J = 2.03 Hz, 1H), 7.27 (ブロードのt, 1H), 7.36 (ブロードのt, 2H), 7.52 (ブロードのd, 2H).
【０１３３】
1C. 2-(ベンジルオキシ)-6-ヒドロキシ-4-メトキシベンズアルデヒド
【化８３】
2015516983.tif 000088
5-(ベンジルオキシ)-7-メトキシ-2,2-ジメチル-4H-ベンゾ[d][1,3]ジオキシン-4-オン(実施例1B, 6.76 g, 21.5 mmol)／ジクロロメタン(120 mL)溶液を-78℃まで冷却し、43 mL(64.5 mmol)の水素化ジイソブチルアルミニウム／トルエンの1.5 M 溶液を20分かけて滴下した。次いで、得られた混合液を-78℃で3時間撹拌した。該反応混合液を、メタノール(5 mL)を15分かけて慎重に加えることによりクエンチした後、1N 塩酸(50 mL)を15分かけて滴下した。その後、冷却浴を取り外し、さらなる150 mLの1N 塩酸を20分かけて加えた。次いで、該混合液を22℃で2時間撹拌し、ジクロロメタン(400 mL)で希釈した。有機相を集め、水相(pH 〜1)をジクロロメタン(3 x 50 mL)で抽出した。有機抽出物を合わせて、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧濃縮した。残った油状物をテトラヒドロフラン(70 mL)で希釈し、10 mLの0.1N 塩酸で処理し、20℃で2時間撹拌した。該反応混合液を、酢酸エチル(300 mL)で希釈し、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧エバポレートして澄明な油状物を得た。シリカゲル(4 x 13 cm, トルエンで溶出)でクロマトグラフィー処理して、4.08 g(73% 収率)の表題のアルデヒドを澄明な油状物として得て、それを静置により固化させた。  LC (メソッドC): 2.237分.  HRMS(ESI) C15H15O4として計算:計算値; [M+H]+ m/z 259.0965, 実測値; 259.1153.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ 3.80 (s, 3H), 5.07 (s, 2H), 5.97 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.01 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.3 - 7.4 (m, 5 H), 10.15 (s, 1H), 12.49 (s, 1H).
【０１３４】
1D. 1-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)エタノン
【化８４】
2015516983.tif 000089
2-(ベンジルオキシ)-6-ヒドロキシ-4-メトキシベンズアルデヒド(実施例1C, 3.46 g, 13.4 mmol)／N,N-ジメチルホルムアミド(50 mL)溶液に、粉末の無水炭酸セシウム(4.58 g, 14.05 mmol)を一度に全て加えた。得られた混合液を減圧で10分間撹拌した後、窒素でフラッシュした。反応フラスコを水浴(22℃)に入れ、クロロアセトン(1.74 g, 18.7 mmol)を5分かけて滴下した。次いで、得られた混合液を22℃で18時間撹拌した(tlcによると出発アルデヒドは残っておらず、中間体アルキル化アルデヒドが形成された)。固形物を濾過し、N,N-ジメチルホルムアミドで洗浄した。濾液を減圧エバポレートし、残った油状物を、酢酸エチル(300 mL)で希釈し、冷0.1 N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、溶媒をエバポレートして、濃いシロップ状物を得た。このシロップ状物をテトラヒドロフラン(50 mL)および酢酸エチル(50 mL)で希釈し、p-トルエンスルホン酸一水和物(0.2 g)で処理し、20℃で1時間撹拌した(tlcにより、該中間体アルキル化アルデヒドのベンゾフランへの完全な環化が示された)。該反応混合液を酢酸エチル(300 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、溶媒をエバポレートして、濃いシロップ状物を得た。シリカゲル(4 x 12 cm, トルエン-酢酸エチル 2-4%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、3.51 g(88% 収率)の表題のベンゾフランを黄色の固形物として得た。酢酸エチル(10 mL)およびヘキサン(20 mL)から再結晶化させて、表題の物質を大きな黄色の角柱形の物質として得た(3.15 g)。  LC (メソッドD):  2.148分. HRMS(ESI) C18H17O4として計算:計算値; [M+H]+ m/z 297.1121, 実測値; 297.1092.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ 2.51 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 5.13 (s, 2H), 6.37 (d, J = 1.77 Hz, 1H), 6.63 (ブロードのs, 1H), 7.34 (ブロードのt, 1H), 7.39 (ブロードのt, 2H), 7.44 (ブロードのd, 2H), 7.55 (d, J = 0.7 Hz,1H).
【０１３５】
1E. 1-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモエタノン
【化８５】
2015516983.tif 000090
250-mLの3ツ口フラスコに磁気撹拌子を備え付け、窒素雰囲気でパージし、無水テトラヒドロフラン(25 mL)、次いで9.3 mL(9.3 mmol)のリチウムビス(トリメチルシリル)アミド／テトラヒドロフランの1M 溶液を入れた。該混合液を-78℃まで冷却し、1-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)エタノン(実施例1D, 2.40 g, 8.1 mmol)／テトラヒドロフラン(20 mL)溶液を10分かけて滴下した。その後、得られた混合液を-78℃で45分間撹拌した。次いで、クロロトリメチルシラン(1.18 mL, 9.31 mmol)を5分かけて滴下し、得られた溶液を-78℃でさらに20分間撹拌した。その後、冷却浴を取り外し、該混合液を30分かけて室温まで昇温させた。次いで、該反応混合液に、酢酸エチル(200 mL)、飽和炭酸水素ナトリウム(30 mL)および氷の冷たい溶液を加えることにより、クエンチした。有機相を、無水硫酸マグネシウムで急速に乾燥させ(磁気撹拌しながら)、減圧エバポレートしてシリルエノールエーテルを油状物として得て、それをトルエン(20 mL)と共エバポレートした。その後、該シリルエノールエーテルを乾燥テトラヒドロフラン(40 mL)に溶解させ、-20℃まで冷却し、固体の炭酸水素ナトリウム(0.10 g)、次いでN-ブロモスクシンイミド(1.44 g, 8.1 mmol)を、15分かけて少しずつ加えた。該反応混合液を、2時間かけて0℃まで昇温させた後、酢酸エチル(300 mL)および飽和炭酸水素ナトリウムを加えることによりクエンチした。有機相を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、エバポレートして、オレンジ色の油状物を得た。シリカゲル(4 x 12 cm, トルエン-酢酸エチル 0-5%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、2.62 g(86% 収率)の表題のブロモメチルケトンを黄色の固形物として得た。酢酸エチル(10 mL)およびヘキサン(20 mL)から再結晶化させて黄色の角柱形の物質として得た(2.30 g)。  LC (メソッドE): 1.977分.  HRMS(ESI) C18H16BrO4として計算:計算値; [M+H]+ m/z 375.0226, 実測値; 375.0277.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ 3.84 (s, 3H), 4.33 (s, 2H), 5.14 (s, 2H), 6.38 (d, J = 1.76 Hz, 1H), 6.64 (ブロードのs, 1H), 7.35 (ブロードのt, 1H), 7.40 (ブロードのt, 2H), 7.44 (ブロードのd, 2H), 7.70 (s, 1H).
【０１３６】
1F. 6-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化８６】
2015516983.tif 000091
イソプロパノール(100 mL)中の1-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモエタノン(実施例1E, 3.00 g, 8.0 mmol)および5-ブロモ-1,3,4-チアジアゾール-2-アミン(1.65 g, 9.16 mmol)の混合液を、磁気撹拌子を備えた圧力フラスコにおいて、78-80℃で18時間、加熱した(20分後に均一になり、次いで、2時間後に沈殿が生じた)。次いで、混合液を冷却し、5個の20 mLのマイクロ波バイアルに移した後、マイクロ波装置において150℃まで30分間加熱した。その後、各バイアルをジクロロメタン(250 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム(25 mL)および食塩水(25 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。画分を合わせて、減圧濃縮した。オレンジ-茶色の残留固形物をシリカゲル(4 x 10 cm, 溶解性が乏しいため、ジクロロメタンでゆっくりと溶出)でクロマトグラフィー処理して、2.96 gの表題のイミダゾチアジアゾール（いくらかの1-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)エタノンが混入していた）を得た。該固体の物質を酢酸エチル(20 mL)でトリチュレートし、濾過し、酢酸エチル(10 ml)で洗浄し、減圧乾燥させて、2.34 g(64% 収率)の純粋な表題のイミダゾチアジアゾールをオフホワイト色の固形物として得て、それをそのまま次の工程に用いた。  LC (メソッドE): 2.188分.  HRMS(ESI) C20H15BrN3O3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 456.00175, 実測値; 456.00397.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ 3.82 (s, 3H), 5.16 (s, 2H), 6.38 (d, J = 1.67 Hz, 1H), 6.66 (ブロードのs, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.31 (ブロードのt, 1H), 7.38 (ブロードのt, 2H), 7.45 (ブロードのd, 2H), 8.02 (s, 1H).
【０１３７】
1G. 6-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化８７】
2015516983.tif 000092
ジクロロメタン(180 mL)およびメタノール(45 mL)の混合液中の6-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(実施例1F, 2.30 g, 5.04 mmol)の溶液に、22℃にて、4.2 mLのメトキシド／メタノール(0.2 mmol)の25 wt.%溶液を一度に加えた。さらなるメタノール(45 mL)を加え、該混合液を1時間撹拌した。該反応混合液を、25 mLの1N 塩酸、次いで20 mlの飽和炭酸水素ナトリウムを加えることによりクエンチした。溶媒を減圧下でエバポレートし、残渣をジクロロメタン(400 mL)で希釈し、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧エバポレートした。残渣をシリカゲル(3 x 10 cm, ジクロロメタン-酢酸エチル 0-4%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、1.70 g(83% 収率)の表題の化合物を白色の固形物として得た。この物質を酢酸エチルから再結晶化させて(30 mL/g, 80% 回収)、白色の針状晶を得た。  LC (メソッドD): 2.293分.  HRMS(ESI) C21H18N3O4Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 408.1013, 実測値; 408.1024.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ 3.81 (s, 3H), 4.18 (s, 3H), 5.16 (s, 2H), 6.37 (d, J = 1.75 Hz, 1H), 6.67 (ブロードのs, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.31 (ブロードのt, 1H), 7.37 (ブロードのt, 2H), 7.45 (ブロードのd, 2H), 7.81 (s, 1H).
【０１３８】
1H. 6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール
【化８８】
2015516983.tif 000093
ジクロロメタン(200 mL)中の6-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(実施例1G, 1.250 g, 3.06 mmol)およびペンタメチルベンゼン(3.17 g, 21.4 mmol)の混合液を窒素雰囲気下において-78℃まで冷却した後、すぐに8 mL(8 mmol)の1 M 三塩化ホウ素／ジクロロメタン溶液を3分かけて滴下した(結晶化を避けるため)。得られた混合液を-78℃で1時間撹拌した。次いで、該反応混合液を、炭酸水素ナトリウム(6 g)／水(100 mL)溶液を一度に加えることによりクエンチした。冷却浴を取り外し、得られた混合液を室温で1時間撹拌した。生じた固形物を濾過し、水(50 m)およびジクロロメタン(50 mL)で連続的に洗浄した。濾過ケーキを無水エタノール(15 ml)で浸した後、吸引乾燥させた。次いで、得られた白色の固形物を減圧下で24時間乾燥させて0.788 g(80% 収率)の純粋な表題の物質(hplcによると＞95%)を得た。濾過物と洗液を合わせて、ジクロロメタン(600 mL)で希釈し、有機相が澄明（懸濁液中に固形物が認められない）になるまで、温水浴中で撹拌した。該有機相を集め、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、まだ温かいうちに素早くに濾過した。濾液をエバポレートし、残渣(生成物およびヘキサメチルベンゼン)をトルエン(20 mL)でトリチュレートし、固形物を集め、トルエン(20 mL)で洗浄して、0.186 g(19% 収率, 99% 合わせた収率)の表題の物質を黄褐色の固形物として得た(hplcによると＞95%)。  LC (メソッドE): 1.444分.  HRMS(ESI) C14H12N3O4Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 318.0543, 実測値; 318.0578.  1H NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ 3.71 (s, 3H), 4.16 (s, 3H), 6.21 (d, J = 1.87 Hz, 1H), 6.61 (ブロードのs, 1H), 6.95 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 9.96 (s, 1H).
【０１３９】
実施例1. 2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((2-メチルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化８９】
2015516983.tif 000094
6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例1H, 0.100g, 0.315 mmol)およびトリフェニルホスフィン(0.123g, 0.47 mmol)の混合物を減圧下で10分間維持した。該混合物を窒素でフラッシュした後、乾燥THF(8 mL)および(2-メチルチアゾール-4-イル)メタノール(実施例1A, 0.049g, 0.38 mmol)を加えた。該混合液を50℃まで昇温させ、5分間超音波処理した。冷却した混合液にDIAD(0.096g, 0.47 mmol)／乾燥THF(2 mL)溶液を3回に分けて20分かけて滴下した。該混合液は40分後に均一になり、22℃で6時間撹拌した。該反応混合液をジクロロメタン(250 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム、食塩水で洗浄し、無水MgSO4で乾燥させた。エバポレートして半固体の残渣を得て、それをシリカゲル(2.5 x 10 cm, ジクロロメタン/EtOAc 8:2)でのクロマトグラフィーにより精製して、表題の物質(0.103g, 76%)を白色の立方形の物質として得た。  LC (メソッドA): 2.224分.  HRMS(ESI) として計算:計算値; C19H17N4O4S2 [M+H]+ m/z 429.0686, 実測値; 429.0605.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ 7.82 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.67 (m, 1H), 6.39 (d, J = 1.89 Hz, 1H), 5.25 (d, J=0.9 Hz, 2H), 4.18 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 2.72 (s, 3H).
【０１４０】
実施例2
2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((2-(トリフルオロメチル)チアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化９０】
2015516983.tif 000095
2A. エチル 2-(トリフルオロメチル)チアゾール-4-カルボキシレート
【化９１】
2015516983.tif 000096
THF(60 mL)中の2,2,2-トルフルオロアセトアミド(7.12g, 63 mmol)およびローソン試薬(15.3g, 37.8 mmol)の混合液を、18時間、還流加熱した。その後、該反応液を室温まで冷却し、ブロモピルビン酸エチル(8.0 mL, 63 mmol)で処理した。該反応液を、さらに18時間、還流にて撹拌した後、減圧下で濃縮し、酢酸エチルで希釈した。この混合液を水(1X)および食塩水(1X)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(8X11 cm, トルエン, 次いで120g シリカゲル, ヘキサン/酢酸エチルを用いて二回目)により精製して、表題の物質(4.47g, 32%)を淡黄色の固形物として得た。  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.37 (s, 1H), 4.45 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.41 (t, J = 7.0 Hz, 1H).
【０１４１】
2B. (2-(トリフルオロメチル)チアゾール-4-イル)メタノール
【化９２】
2015516983.tif 000097
エチル 2-(トリフルオロメチル)チアゾール-4-カルボキシレート(実施例2A, 1.50g, 6.66 mmol)を、実施例1Aに記載の通り反応させ、蒸留(b.p.: 55-65℃ /0.2 torr)した後、目的の表題の物質(0.95g, 78%)を澄明な油状物として得た。  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.47 (s, 1H), 4.85 (s, 2H), 2.25 (br s, 1H).
【０１４２】
実施例2. 2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((2-(トリフルオロメチル)チアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化９３】
2015516983.tif 000098
6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例1H, 0.100g, 0.315mmol)および(2-(トリフルオロメチル)チアゾール-4-イル)メタノール(実施例2B, 0.075g, 0.409 mmol)を、実施例1に記載の通りに反応させ、AcOEt中において結晶化させた後、表題の物質(0.070, 46%)を得た。 LC (メソッドB): 2.448分.  HRMS(ESI) C19H14F3N4O4S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 483.0403, 実測値; 483.0411.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ 7.82 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.67 (m, 1H), 6.39 (d, J = 1.89 Hz, 1H), 5.25 (d, J=0.9 Hz, 2H), 4.18 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 2.72 (s, 3H).
【０１４３】
実施例3
2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化９４】
2015516983.tif 000099
3A. メチル 2-フェニルチアゾール-4-カルボキシレート
【化９５】
2015516983.tif 000100
ベンゾチオアミド(4.0g, 29.2 mmol)／THF(80 mL)溶液にブロモピルビン酸エチル(7.6g, 39 mmol)を滴下し、18時間、還流加熱した。次いで、該反応液を減圧下で濃縮し、酢酸エチルで希釈し、水(1x)、食塩水(1x)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濃縮後に得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(4.5 x 11 cm, 20% AcOEt/トルエン) により精製した後、20% AcOEt/ヘキサンを用いた第2の精製により精製した。濃縮して、表題の物質を黄色の油状物として得た(5.25, 77%)。  1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 8.14 (s, 1H) 8.00 (m, 2H) 7.46-7.42 (m, 3H) 4.43 (q, J=7.0 Hz, 2H) 1.42 (t, J=7.3 Hz, 3H).
【０１４４】
3B. (2-フェニルチアゾール-4-イル)メタノール
【化９６】
2015516983.tif 000101
250 mL 丸底フラスコ中において、メチル 2-フェニルチアゾール-4-カルボキシレート(実施例3A, 1.50 g, 6.43 mmol)をエチルエーテル(40 mL)に溶解させた。該溶液を-78℃まで冷却し、水素化リチウムアルミニウム(0.75g, 19.76 mmol)を20分かけて滴下した。該反応液を-78℃で3.5時間撹拌した後、20 mLの飽和Na2SO4溶液で処理した。該反応液を室温まで昇温させ、酢酸エチルで希釈し、HCl 1N(1x)、食塩水(1x)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(3 x 12cm, 30% 酢酸エチル/ジクロロメタン)により精製して、淡黄色の油状物(1.06 g)として得た後、それを蒸留(バルブ-トゥ-バルブ（bulb to bulb）, bp: 110-120 ℃/0.2 torr)して、表題の物質(0.88 g, 72%)を澄明な油状物として得た。 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 7.95-7.90 (m, 2H) 7.45-7.40 (m, 3H) 7.16 (s, 1H) 4.82 (s, 2H) 2.34 (br s, 1H).
【０１４５】
実施例3. 2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化９７】
2015516983.tif 000102
付加漏斗を取り付けた200 mL フラスコ中の6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例1H, 0.800 g, 2.52 mmol)、トリフェニルホスフィン(0.992 g, 3.78 mmol)および(2-フェニルチアゾール-4-イル)メタノール(実施例3B, 0.555 g, 2.90 mmol)の混合物を、10分間、減圧下において維持した。次いで、該混合物を窒素でフラッシュし、乾燥テトラヒドロフラン(60 mL, 水素化リチウムアルミニウムで蒸留)を加えた。該溶液を〜50℃まで昇温させた後、5分間超音波処理した。その後、冷却した不均一な混合液に、22℃にて、アゾジカルボン酸ジイソプロピル(0.663 g, 3.28 mmol)／テトラヒドロフラン(15 mL)溶液を2.5時間かけて滴下した。添加の終了時、該反応液は均一であった(淡黄色)。次いで、該混合液をさらに2.5時間撹拌した(計5時間)。その後、該反応混合液をジクロロメタン(400 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム(20 mL)、食塩水で洗浄し、乾燥させた(無水硫酸マグネシウム)。 エバポレートして白色の固形物を得て、それをシリカゲル(3 x 12 cm, ジクロロメタン-酢酸エチル 98.5:1.5〜97:3で溶出)でクロマトグラフィー処理した。画分を集め、エバポレートして、目的の化合物(1.40 g)を白色の固形物として得た（tlcによるとヒドラジドが混入していた）。酢酸エチル(40 mL)中で結晶化させて、純粋な表題の物質(0.838 g, 68%)を白色の固形物として得た。母液(0.475 g)をシリカゲル(3 x 12 cm, ジクロロメタン-酢酸エチル 98.5:1.5〜97:3で溶出)でクロマトグラフィー処理して、酢酸エチル(30 mL)から結晶化させた後、さらなる目的の化合物(0.160 g, 13%, 合計81%)を白色の固形物として得た。  LC (メソッドC): 2.480分.  HRMS(ESI) C24H19N4O4S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 491.0842, 実測値; 491.0865.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) 3.85 (s, 3H) 4.21 (s, 3H) 5.33 - 5.55 (m, 2H) 6.48 (d, J=1.96 Hz, 1H) 6.72 (dd, J=1.96, 0.78 Hz, 1H) 7.12 (s, 1H) 7.36 - 7.39 (m, 1H) 7.41 - 7.50 (m, 3H) 7.86 (s, 1H) 7.95 - 8.02 (m, 2H).
【０１４６】
実施例4
2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((4-フェニルチアゾール-2-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化９８】
2015516983.tif 000103
4A. エチル 2-アミノ-2-チオキソアセテート
【化９９】
2015516983.tif 000104
エチル 2-アミノ-2-オキソアセテート(5.00 g, 42.7 mmol)／テトラヒドロフラン(150 mL)溶液を粉末にした(乳鉢および乳棒)ローソン試薬(9.50 g, 23.49 mmol)で処理し、得られたオレンジ色の澄明な溶液を、4時間、還流加熱(浴温度 85 ℃)した(高いRfを有するTLC生成物が形成され、いくらかの出発物質が残っていた)。該混合液を冷却し、減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル(400 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。エバポレートしてオレンジ色の固形物を得て、それをシリカゲル(3 x 10 cm, トルエン-酢酸エチル 9:1で溶出)でクロマトグラフィー処理して、黄色の固形物の表題の物質(3.189 g, 56%)を得た。  LC (メソッドC): 0.816分.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 1.41 (t, J=7.0 Hz, 3H), 4.38 (q, J=7.0 Hz, 2H), 7.69 (br s, 1H) 8.24 (br s, 1H).
【０１４７】
4B. エチル 4-フェニルチアゾール-2-カルボキシレート
【化１００】
2015516983.tif 000105
ベンゼン(80 mL)およびエタノール(10 mL)中の2-ブロモ-1-フェニルエタノン(1.790 g, 8.99 mmol)およびエチル 2-アミノ-2-チオキソアセテート(実施例4A, 1.20 g, 9.01 mmol)の混合液を、室温で18時間撹拌した。該混合液を80℃で1時間加熱した。溶媒を減圧下でエバポレートし、残渣を酢酸エチル(300 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(100 mL)間に分配した。有機相を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧濃縮した。残った澄明な油状物を、シリカゲル(4 x 10 cm, トルエン-酢酸エチル 0-2-4%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、黄色の油状物(1.588g)を得た。これを減圧蒸留(bp: 105-115℃/0.1 torr, バルブ-トゥ-バルブ蒸留, 空気浴温度)して、表題の物質(1.409g, 67%)を淡黄色のシロップ状物として得て、それを静置により固化させてほぼ無色の固形物を得た。  LC (メソッドC): 2.009分.  HRMS(ESI) C12H12NO2Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 234.0583, 実測値; 234.0597.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 1.48 (t, J=7.2 Hz, 3H), 4.52 (q, J=7.2 Hz, 2H), 7.35 - 7.49 (m, 3H), 7.75 (s, 1H), 7.93 - 8.00 (m, 2H).
【０１４８】
4C. 2-(ヒドロキシメチル)-4-フェニルチアゾール
【化１０１】
2015516983.tif 000106
500 mL フラスコ中のエチル 4-フェニルチアゾール-2-カルボキシレート(実施例4B, 1.300 g, 5.57 mmol)／ジエチルエーテル(60 mL)溶液を、窒素雰囲気下において、-40℃まで冷却し(ドライアイス-水-塩化カルシウム浴)、固体のLiAlH4(0.40 g, 10.54 mmol)を一度に全て加えた。該混合液を、2.5時間にわたって-40℃で撹拌した。該反応液を、酢酸エチル(1 mL)、水(0.4 mL)、次いで15%水酸化ナトリウム水溶液(0.4 mL)および水(1.2 mL)を滴下することにより、クエンチした。その後、該浴を取り外し、該混合液を室温で50分間撹拌した。生じた固形物を濾過し、エーテル(50 mL)で洗浄した。濾過物および洗液を合わせて、食塩水(20 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。エバポレートして黄色の油状物を得て、それをシリカゲルクロマトグラフィー(2.5 x 8 cm, トルエン-酢酸エチル 9:1, 8:2〜7:3で溶出)により精製した。その後、得られた薄黄色の油状物(0.931g)を減圧蒸留(bp: 105-110 ℃/0.1 torr, バルブ-トゥ-バルブ, 空気浴温度)して、無色のシロップ状物の表題の物質(0.918g, 86%)を得た。  LC (メソッドC): 1.672分.  HRMS(ESI) C10H10NOSとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 192.0478, 実測値; 192.0508.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 2.90 (br t, 1H), 5.02 (d, J=4.30 Hz, 2H), 7.31 - 7.38 (m, 1H), 7.39 - 7.45 (m, 2H), 7.46 (d, J=0.8 Hz, 1H), 7.85 - 7.92 (m, 2H).
【０１４９】
4D. 2-(ブロモメチル)-4-フェニルチアゾール
【化１０２】
2015516983.tif 000107
(4-フェニルチアゾール-2-イル)メタノール(実施例4C, 0.530 g, 2.77 mmol)／ジクロロメタン(10 mL)溶液を0℃まで冷却し(氷浴)、PBr3(0.118 mL, 1.247 mmol)を2分かけて滴下した。すぐに濃い（heavy）白色のガム状物質が生じた。10分後、該浴を取り外し、該溶液を22℃で4時間撹拌した。該反応混合液を氷(〜10 g)でクエンチし、酢酸エチル(150 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム(50 mL)の混合液に注ぎ入れた。有機相を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧濃縮した。固体の残渣をシリカゲル(2.5 x 6 cm, トルエンで溶出)でクロマトグラフィー処理して表題の物質(0.561 g, 80%)を薄黄色の油状物として得て、それを冷蔵庫で固化させて淡黄色の固形物を得た。  LC (メソッドC): 2.062分.  HRMS(ESI) C10H9BrNSとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 253.9634, 実測値; 253.9655.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 4.81 (s, 2H), 7.34 - 7.39 (m, 1H), 7.41 - 7.47 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.86 - 7.92 (m, 2H).
【０１５０】
実施例4. 2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((4-フェニルチアゾール-2-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１０３】
2015516983.tif 000108
N,N-ジメチルホルムアミド(3 mL)中の6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例1H, 0.080 g, 0.252 mmol)および2-(ブロモメチル)-4-フェニルチアゾール(0.128 g, 0.504 mmol)の懸濁液を減圧(10 mbar)下で5分間維持した。次いで、該フラスコを窒素でフラッシュし、直前に粉末にした(乳鉢および乳棒)無水の炭酸カリウム(0.105 g, 0.756 mmol)を一度に全て加えた。得られた混合液を、室温で1時間、短い時間(〜1分)の超音波処理を数回行うとともに、撹拌した。該不均一な混合液は、10分後、ほぼ均一になり(炭酸カリウムを除く)、そして、再び沈殿し始めてクリーム色の固形物が生じた。該反応混合液を1N 塩酸(2 mL)でクエンチし、次いで、ジクロロメタン(150 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム(20 mL)間に分配した。有機相を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧濃縮した。固体の淡黄色の残渣を、シリカゲル(2.5 x 6 cm, ジクロロメタン-酢酸エチル 0-2-5%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、表題の物質(0.116 g, 94%)を淡黄色の固形物として得た。酢酸エチル(12 mL)中で結晶化させて、表題の物質(0.086 g)を淡黄色の固形物として得た。  LC (メソッドC): 2.474分.  HRMS(ESI) C24H19N4O4S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 491.0842, 実測値; 491.0864.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 3.86 (s, 3H), 4.22 (s, 3H), 5.54 (s, 2H), 6.48 (d, J=1.96 Hz, 1H), 6.75 (ブロードのd, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.32 - 7.39 (m, 1H), 7.41 - 7.49 (m, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.90 - 7.95 (m, 2H).
【０１５１】
実施例5
4-(4-(((6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-イル)オキシ)メチル)チアゾール-2-イル)モルホリン
【化１０４】
2015516983.tif 000109
5A. メチル 2-モルホリノチアゾール-4-カルボキシレート
【化１０５】
2015516983.tif 000110
メチル 2-ブロモチアゾール-4-カルボキシレート(0.20 g, 0.901 mmol)／THF(10 mL)溶液をモルホリン(0.17 mL, 1.94 mmol)で処理し、18時間還流した。次いで、該反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和NaHCO3(1x)、食塩水(1x)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(2.5 x 10 cm, 50% AcOEt/CH2Cl2)により精製して、表題の物質(0.192 g, 92%)を黄色の固形物として得た。  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.44 (s, 1H) 3.82 (s, 3H) 3.75 (m, 4H) 3.45 (m, 4H).
【０１５２】
5B. (2-モルホリノチアゾール-4-イル)メタノール
【化１０６】
2015516983.tif 000111
メチル 2-モルホリノチアゾール-4-カルボキシレート(0.76 g, 3.33 mmol)／エチルエーテル(20 mL)溶液を、水素化リチウムアルミニウム(0.38 g, 10.01 mmol)で、10分かけて少しずつ処理した。該混合液を-78℃で4時間撹拌した後、酢酸エチル(10 mL)および飽和Na2SO4(20 mL)でゆっくりと処理した。該混合液を室温まで昇温させ、酢酸エチルで希釈し、飽和NaHCO3(1x)、食塩水(1x)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(3 x 10 cm, 25%AcOEt/CH2Cl2〜100%AcOEt)で精製して、表題の物質をベージュ色の固形物(0.458 g)として得た後、それを蒸留(バルブ-トゥ-バルブ, 135-145℃ / 0.2 torr)して、目的の生成物(0.455g, 68%)を白色の固形物として得た。  LC (メソッドF): 0.873分.  HRMS(ESI) C8H13N2O2Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 201.07, 実測値; 201.2.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 6.43 (s, 1H) 4.53 (d, J=3.9 Hz, 2H) 3.79 (m, 4H) 3.44 (m, 4H) 2.17 (s, 1H).
【０１５３】
実施例5. 4-(4-(((6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-イル)オキシ)メチル)チアゾール-2-イル)モルホリン
【化１０７】
2015516983.tif 000112
6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例1H, 0.10g, 0.315 mmol)、トリフェニルホスフィン(0.124g, 0.473 mmol)および(2-モルホリノチアゾール-4-イル)メタノール(実施例5B, 0.086g, 0.429 mmol)を、25 mL 丸底フラスコに加え、減圧下で窒素をパージした。次いで、テトラヒドロフラン(8 mL)を加え、該混合液をDIAD(0.083g, 0.410 mmol)／テトラヒドロフラン(10 mL)で処理した。該混合液を22℃で1時間撹拌し、酢酸エチルで希釈した。これを飽和NaHCO3(1x)および食塩水(1x)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(2.5 x 10 cm, 40%酢酸エチル／CH2Cl2)で精製し、濃縮した後に得られた残渣を酢酸エチル中で結晶化させて、表題の物質を、結晶状物(0.083g, 53%)として、および母液からのアモルファスで純粋でない固形物(0.169g)として得た。  LC (メソッドF): 2.466分.  HRMS(ESI) C22H22N5O5S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 500.1057, 実測値; 500.1075.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.82 (s, 1H) 7.07 (s, 1H) 6.67 (d, J=2 Hz, 1H) 6.62 (s, 1H) 6.40 (d, J=1.5 Hz, 1H) 5.10 (s, 2H) 4.19 (s, 3H) 3.82 (s, 3H) 3.81 (m, 4H) 3.46 (m, 4H).
【０１５４】
実施例6
2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((2-((2-メトキシエトキシ)メチル)チアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１０８】
2015516983.tif 000113
6A. 2-(2-メトキシエトキシ)アセトアミド
【化１０９】
2015516983.tif 000114
2-(2-メトキシエトキシ)酢酸(5.0g, 37.3 mmol)／CH2Cl2(50 mL)溶液を塩化オキサリル(9.5 mL, 109 mmol)およびDMF(2滴)で処理し、該反応液を3時間撹拌した。減圧下でエバポレートした後、残渣を、CH2Cl2(2x)を用いて共エバポレートし、次いでTHF(10 mL)に溶解させ、水酸化アンモニウム(12 mL)、THF(25 mL)および水(10 mL)の混合液を5分間滴下した。次いで該反応液を、0-5℃で30分間撹拌した後、22℃で1時間撹拌した。該反応液を、CH2Cl2で希釈し、水(1x)、HCl 1N(1x)、飽和NaHCO3(1x)および食塩水(1x)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。該生成物は水に可溶であると思われたので、水相を減圧下でエバポレートし、CH2Cl2(5x 200 mL)で抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題の物質(3.59 g, 72%)を油状物として得た（それは固化した）。これを蒸留(バルブ-トゥ-バルブ, 105-115℃/0.2 torr)して、純粋な目的の生成物(3.39g)を澄明な油状物として得て、それを白色の固形物として固化させた。  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 6.93 (非常にブロードのs, 1H), 5.43 (非常にブロードのs, 1H), 3.99 (s, 2H), 3.66 - 3.70 (m, 2H), 3.53 - 3.56 (m, 2H), 3.39 (s, 3H).
【０１５５】
6B. 2-(2-メトキシエトキシ)エタンチオアミド
【化１１０】
2015516983.tif 000115
2-(2-メトキシエトキシ)アセトアミド(実施例6A, 3.39g, 25.5 mmol)／THF(40 mL)溶液をローソン試薬(6.55g, 16.19 mmol)で処理し、該反応液を18時間還流した。次いで、該反応液を室温まで冷却し、減圧下で濃縮し、酢酸エチルで希釈し、飽和NaHCO3(1x)および食塩水(1x)で洗浄した。水相を酢酸エチル(2 x 200 mL)で抽出し、有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(3.5 x 11 cm, 30% AcOEt/CH2Cl2)により精製して、表題の物質(3.26g, 86%)を黄色の油状物として得た。  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 8.58 (非常にブロードのs, 1H), 7.50 (非常にブロードのs, 1H), 4.36 (s, 2H), 3.66 - 3.69 (m, 2H), 3.53 - 3.56 (m, 2H), 3.39 (s, 3H).
【０１５６】
6C. エチル 2-((2-メトキシエトキシ)メチル)チアゾール-4-カルボキシレート
【化１１１】
2015516983.tif 000116
2-(2-メトキシエトキシ)エタンチオアミド(実施例6B, 3.26g, 21.85 mmol)／エタノール(60 mL)溶液に、エチルブロモピルベート(3.7 mL, 29.5 mmol)を滴下し、該混合液を18時間還流した。次いで、該反応液を減圧下で濃縮し、酢酸エチルで希釈し、水(1x)、食塩水(1x)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(3.5 x 10cm, 30% 酢酸エチル/CH2Cl2)により精製して、表題の物質(4.36g, 81%)を油状物として得た。  LC (メソッドF): 1.791分.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 8.16 (s, 1H), 4.87 (s, 2H), 4.41 (q, J = 7.10 Hz, 2H), 3.74 - 3.77 (m, 2H), 3.57 - 3.60 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 1.39 (t, J = 7.10 Hz, 3H).
【０１５７】
6D. (2-((2-メトキシエトキシ)メチル)チアゾール-4-イル)メタノール
【化１１２】
2015516983.tif 000117
エチル 2-((2-メトキシエトキシ)メチル)チアゾール-4-カルボキシレート(実施例6C, 2.27g, 9.25 mmol)／エーテル(50 mL)溶液に、水素化リチウムアルミニウム(1.06g, 27.9 mmol)を-78℃にて10分かけて滴下した。次いで、該反応液を-78℃で1時間撹拌した。その後、酢酸エチル(10 mL)を該反応液に加え、次いで水(20 mL)を加え、該反応液を室温まで昇温させた。その後、該混合液を酢酸エチルで希釈し、HCl 1N(1x)および食塩水(1x)で洗浄した。水相を合わせて、酢酸エチル(2 x 300 mL)で抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(3.5 x 10 cm, 酢酸エチル)により精製して、表題の物質(0.357g, 19%)を茶色の油状物として得た。  LC (メソッドF): 1.791分.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.16 (s, 1H), 4.82 (s, 2H), 4.74 (ブロードのs, 2H), 3.7 - 3.75 (m, 2H), 3.54 - 3.61 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 2.28 (ブロードのs, 1H).
【０１５８】
6E. 4-(ブロモメチル)-2-((2-メトキシエトキシ)メチル)チアゾール
【化１１３】
2015516983.tif 000118
(2-((2-メトキシエトキシ)メチル)チアゾール-4-イル)メタノール(0.35 g, 1.72 mmol)／エーテル(15 mL)溶液を、室温にて、PBr3(0.1 mL, 1.06 mmol)で処理した。沈殿物が生じた。該反応液を室温で18時間撹拌した後、酢酸エチルで希釈し、飽和NaHCO3(1x)および食塩水(1x)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(3 x 10 cm, 20% 酢酸エチル/CH2Cl2)により精製して、表題の物質(0.233 g, 51%)を澄明な油状物として得た。  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm:  7.27 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 3.73 - 3.76 (m, 2H), 3.57 - 3.60 (m, 2H), 3.39 (s, 3H).
【０１５９】
実施例6. 2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((2-((2-メトキシエトキシ)メチル)チアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１１４】
2015516983.tif 000119
DMF(5 mL)中の6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例1H, 0.10g, 0.315 mmol)および4-(ブロモメチル)-2-((2-メトキシエトキシ)メチル)チアゾール(実施例6E, 0.10g, 0.376 mmol)の懸濁液を、減圧下において窒素で10分間パージした。次いで、該混合液を炭酸カリウム(0.10g, 0.724 mmol)で処理し、該反応液を室温で2.5時間撹拌した。その後、該反応液をジクロロメタンで希釈し、水(1x)、食塩水(1x)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(2.5 x 10 cm, 50% 酢酸エチル/CH2Cl2)により精製して表題の物質を得て、それを酢酸エチル中で結晶化させて、非結晶性物質(9 mg, 6%)とともに目的の表題の物質(0.055g, 35%)を得た。  LC (メソッドF): 2.476分.  HRMS(ESI) C22H23N4O6S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 503.1054, 実測値; 503.1066.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm:  7.82 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.68 (ブロードのs, 1H), 6.39 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.28 (s, 2H), 4.86 (s, 2H), 4.19 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.74 - 3.77 (m, 2H), 3.58 - 3.61 (m, 2H), 3.39 (s, 3H).
【０１６０】
実施例7
2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((5-フェニル-1,2,4-チアジアゾール-3-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１１５】
2015516983.tif 000120
7A. エチル 5-フェニル-1,2,4-チアジアゾール-3-カルボキシレート
【化１１６】
2015516983.tif 000121
1,2-ジクロロベンゼン（dichrlotobenzene）(15.42 ml, 137 mmol)中のエチル 2-オキソ-1,3,4-オキサチアゾール-5-カルボキシレート(米国特許出願公開第2005/0096362号)(1.5 g, 8.56 mmol)およびベンゾニトリル(4.37 ml, 42.8 mmol)の混合液を160℃まで4日間加熱した。次いで、該反応液を室温まで冷却し、該反応液を、最大減圧にて75℃にて、加熱することによって溶媒をエバポレートした。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(100%CH2Cl2〜3%EtOAc／CH2Cl2)で精製して、表題の物質(0.064g, 3%)を得た。  LC (メソッドB): 2.021分.  HRMS(ESI) C11H11N2O2Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 235.0541, 実測値; 235.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 8.01 - 8.09 (m, 1H), 7.49 - 7.59 (m, 2H), 4.56 (q, J=7.17 Hz, 1H), 1.50 (t, J=7.24 Hz, 1H).
【０１６１】
7B. (5-フェニル-1,2,4-チアジアゾール-3-イル)メタノール
【化１１７】
2015516983.tif 000122
エチル 5-フェニル-1,2,4-チアジアゾール-3-カルボキシレート(実施例7A, 230 mg, 0.982 mmol)／無水エタノール(3 mL, 51.4 mmol)溶液に、NaBH4(149 mg, 3.93 mmol)を0℃にて加えた。該反応混合液を80℃まで30分間加熱した後、HCl 1N(1 mL)を加え、そしてエタノールをエバポレートした。ジクロロメタンを該反応液に加え、次いで食塩水を加え、これをジクロロメタン(3x)で抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(100%CH2Cl2〜10%EtOAc/CH2Cl2)で精製して、表題の物質(25 mg, 13%)を得た。  LC (メソッドB): 1.858分.  LCMS (APCI) C9H9N2OSとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 193.04, 実測値; 193.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.89 - 8.03 (m, 2H), 7.46 - 7.62 (m, 3H), 4.99 (d, J=5.87 Hz, 2H), 2.81 (t, J=6.06 Hz, 1H).
【０１６２】
実施例7. 2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((5-フェニル-1,2,4-チアジアゾール-3-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１１８】
2015516983.tif 000123
6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例1H, 8.25 mg, 0.026 mmol)および(5-フェニル-1,2,4-チアジアゾール-3-イル)メタノール(実施例7B, 5 mg, 0.025 mmol)をフラスコに入れ、これをN2でフラッシュした。乾燥THF(4 mL)を加え、この得られた懸濁液にトリ-n-ブチルホスフィン(0.017 mL, 0.065 mmol)を加え、1,1'-(アゾジカルボニル)ジピペリジン(16.57 mg, 0.065 mmol)／乾燥THF(2.5 mL)溶液をシリンジポンプによって2時間かけて滴下した。得られた懸濁液をさらに2時間室温で撹拌した。その時点でLCによって出発物質が残っていないことが示された。該混合液をEtOAcで希釈し、0.2N HCl、飽和NaHCO3水溶液および食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(50%ジクロロメタン/ヘキサン〜100%ジクロロメタン〜1%EtOAc/CH2Cl2〜7%EtOAc/CH2Cl2)で精製し、MeCN/水中で凍結乾燥させて、表題の物質(6.2 mg, 49%)を得た。  LC (メソッドB): 2.615分.  HRMS(ESI) C23H18N5O4S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 492.0795, 実測値; 492.0828.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 8.00 (dd, J=8.02, 1.37 Hz, 2H), 7.85 (s, 1H), 7.50 - 7.56 (m, 3H), 7.14 (s, 1H), 6.71 - 6.75 (m, 1H), 6.51 (d, J=1.57 Hz, 1H), 5.51 (s, 2H), 4.21 (s, 3H), 3.84 (s, 3H).
【０１６３】
実施例8
2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((5-フェニル-1,3,4-チアジアゾール-2-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１１９】
2015516983.tif 000124
8A. エチル 5-フェニル-1,3,4-チアジアゾール-2-カルボキシレート
【化１２０】
2015516983.tif 000125
エチル 2-(2-ベンゾイルヒドラジニル)-2-オキソアセテート(1g, 4.23 mmol)／乾燥THF(5 ml, 61.0 mmol)溶液に、ローソン試薬(1.079 g, 2.67 mmol)を加えた。該反応液をいずれの反応も伴わずに室温で2時間撹拌した。次いで、該混合液を50℃まで加熱した後、還流加熱した。さらなるローソン試薬(1.079 g, 2.67 mmol)を加え、還流にて16時間後、該反応液は部分的に完了していた。該混合液を乾固するまでエバポレートし、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(50% CH2Cl2/ヘキサン〜100% CH2Cl2)により精製して、表題の物質(0.35g, 35%)を得た。 LC (メソッドB):  2.063分, LCMS (APCI) C11H11N2O2Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 235.05, 実測値; 235.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 1.49 (t, J=1.00 Hz, 3H), 4.55 (q, J=1.00 Hz, 2H), 7.45 - 7.65 (m, 3H), 8.02 - 8.07 (m, 2H).
【０１６４】
8B. (5-フェニル-1,3,4-チアジアゾール-2-イル)メタノール
【化１２１】
2015516983.tif 000126
エチル 5-フェニル-1,3,4-チアジアゾール-2-カルボキシレート(350 mg, 1.494 mmol)／無水メタノール(5 mL, 124 mmol)溶液に、NaBH4(226 mg, 5.98 mmol)を0℃にて加えた。該反応混合液を周囲温度にて16時間撹拌した。AcOH(2 mL)を加え、該反応液を乾固するまで濃縮した。残渣を、EtOAc、食塩水および水に溶解させ、EtOAc(3x)で抽出した。有機抽出物を合わせて、飽和NaHCO3水溶液および食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過およびエバポレートした後、残渣を、エチルエーテルを用いてトリチュレートして、表題の物質を第1クロップ(150 mg, 52%)として得た。  LC (メソッドB): 2.022分, LCMS (APCI) C9H9N2OSとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 193.04, 実測値; 193.2.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.92 - 8.03 (m, 2H), 7.44 - 7.59 (m, 3H), 5.14 (br. d, J=3.90 Hz, 2H), 2.63 (br. s., 1H).
【０１６５】
実施例8. 2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((5-フェニル-1,3,4-チアジアゾール-2-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１２２】
2015516983.tif 000127
200 mL 丸底フラスコにおいて、ベンゼンをエチル 5-フェニル-1,3,4-チアジアゾール-2-カルボキシレート(実施例8B, 80 mg, 0.252 mmol)および6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例1H, 58.2 mg, 0.303 mmol)に加え、該混合液を30秒間超音波処理し、減圧濃縮して、出発物質中の微量の水を除去した。トリフェニルホスフィン(99 mg, 0.378 mmol)を加え、該混合液を高真空にて10分間乾燥させた。THF(40 mL)を加え、該反応液を、5分間、超音波処理/加熱した。ジイソプロピルアゾジカルボキシレート(68.6 μl, 0.353 mmol)／THF(4 mL)を約1時間で滴下し、LC/MSによって、反応の完了が示された。ジイソプロピルアゾジカルボキシレート(2滴)を再び加え、該混合液をCH2Cl2に希釈し、飽和NaHCO3水溶液(1x)、食塩水(1x)で洗浄し、無水MgSO4で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(100%CH2Cl2〜15%EtOAc/CH2Cl2)で精製して残渣を得て、それを、MeCNを用いてトリチュレートし、表題の物質(36 mg, 29%)を得た。  LC (メソッドA): 2.901分.  HRMS(ESI) C23H17N5O4S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 492.0722, 実測値; 492.0806. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.96 - 8.02 (m, 2H), 7.87 (s, 1H), 7.45 - 7.55 (m, 3H), 7.10 (s, 1H), 6.73 - 6.78 (m, 1H), 6.48 (d, J=1.57 Hz, 1H), 5.63 (s, 2H), 4.22 (s, 3H), 3.86 (s, 3H).
【０１６６】
実施例9
2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((1-フェニル-1H-1,2,3-トリアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１２３】
2015516983.tif 000128
9A. 2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-(プロパ-2-イン-1-イルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１２４】
2015516983.tif 000129
6-メトキシ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例1H, 205 mg, 0.646 mmol)／THF(10 mL)溶液に、窒素雰囲気下において、室温で、プロパルギルアルコール(0.096 mL, 1.615 mmol)、トリ-n-ブチルホスフィン(0.398 mL, 1.615 mmol)で処理し、1,1'-(アゾジカルボニル)ジピペリジン(408 mg, 1.615 mmol)／THF(10 mL)溶液を25分かけて滴下した。該混合液を浴において30分間超音波処理し、室温でさらに30分間撹拌した。次いで、該混合液をジクロロメタン(50 mL)に溶解させ、飽和NaHCO3水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥させた(MgSO4)。溶媒をエバポレートして固形物を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィーISCOにより精製して、表題の物質(180 mg, 0.507 mmol, 78% 収率)を得た。  1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm: 8.38 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.86 (dd, J=1.8, 1.0 Hz, 1H), 6.53 (d, J=1.6 Hz, 1H), 4.94 (d, J=2.7 Hz, 2H), 4.21 (s, 3H), 3.77-3.84 (m, 3H), 3.60-3.66 (m, 1H).
【０１６７】
9B. アジドベンゼン
【化１２５】
2015516983.tif 000130
アニリン(500 mg, 5.37 mmol)／アセトニトリル(10 mL, 191 mmol)溶液を氷浴中で冷却し、亜硝酸tert-ブチル(680 mg, 6.59 mmol)で処理し、TMS-N3(0.713 mL, 5.37 mmol)を滴下した。該氷浴を取り外し、該混合液をN2下において室温で終夜撹拌した。アセトニトリルを慎重にエバポレートし(NB:アジドベンゼンも揮発性である)、残渣(750 mg)にシリカゲルパッド(20g)を通過させ、石油エーテル(35-55℃)で溶出した。溶媒をエバポレートして表題の物質を油状物(500 mg, 4.20 mmol, 78% 収率)として得た（1H NMRによって示される通り、それは依然として微量の溶媒を含む）。  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.32-7.41 (m, 2H), 7.12-7.19 (m, 1H), 7.01-7.09 (m, 2H).
【０１６８】
実施例9. 2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((1-フェニル-1H-1,2,3-トリアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１２６】
2015516983.tif 000131
DMF(4 mL, 51.7 mmol)中の2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-(プロパ-2-イン-1-イルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(実施例9A, 20 mg, 0.056 mmol)およびアジドベンゼン(実施例9B, 19 mg, 0.159 mmol)の溶液を、室温で窒素雰囲気下において、ナトリウム (R)-2-((S)-1,2-ジヒドロキシエチル)-4-ヒドロキシ-5-オキソ-2,5-ジヒドロフラン-3-オレート(8 mg, 0.040 mmol)および硫酸銅(II)五水和物(5 mg, 0.020 mmol)で処理した。該混合液を2時間撹拌(反応後、HPLC)した後、ジクロロメタン(60 mL)で希釈し、飽和NaHCO3、食塩水で洗浄し、乾燥させた(MgSO4)。溶媒をエバポレートし、固体の残渣を、アセトニトリル(2 x 1 mL)を用いてトリチュレートし、凍結乾燥させて表題の物質(13 mg, 0.027 mmol, 49% 収率)を得た。  LC (メソッドA): 2.213分.  HRMS(ESI) C23H19N6O4Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 475.1183, 実測値; 475.1204. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm: 9.04 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.90-7.99 (m, 2H), 7.58-7.67 (m, 2H), 7.51 (tt, J=7.4, 1.2 Hz, 1H), 6.97-7.03 (m, 1H), 6.83-6.88 (m, 1H), 6.71 (d, J=1.6 Hz, 1H), 5.38 (s, 3H), 4.20 (s, 3H), 3.83 (s, 3H).
【０１６９】
実施例10
2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-((1-フェニル-1H-1,2,3-トリアゾール-5-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１２７】
2015516983.tif 000132
5 mL マイクロ波バイアルに、2-メトキシ-6-(6-メトキシ-4-(プロパ-2-イン-1-イルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(実施例9A, 27 mg, 0.076 mmol)、アジドベンゼン(実施例9B, 30 mg, 0.252 mmol)、無水DMF(2.5 mL, 32.3 mmol)および(Cp*RuCl)4(12 mg)を窒素雰囲気下において加えた。バイアルの蓋をし、マイクロ波装置において110℃で20分間加熱した。溶媒をエバポレートし、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーISCOにより精製し、濃縮し、メタノール(2 x 1 mL)を用いて2回トリチュレートした。固形物にアセトニトリル(2 mL)および水(4 mL)を加え、該混合液を週末にかけて凍結乾燥させて、表題の物質(5 mg, 10.54 μmol, 14% 収率)を得た。  LC (メソッドF): 2.480分.  HRMS(ESI) C23H19N6O4Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 475.1183, 実測値; 475.1234. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm:  8.35 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.66-7.73 (m, 2H), 7.53-7.63 (m, 3H), 6.84 (dd, J=2.0, 0.8 Hz, 1H), 6.75 (d, J=0.8 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.20 (s, 3H), 3.79 (s, 3H).
【０１７０】
アルコールの製造
以下のアルコールを、実施例3〜8に記載の方法に従って製造した。
【表２】
2015516983.tif 000133
【表３】
2015516983.tif 000134
【表４】
2015516983.tif 000135
【表５】
2015516983.tif 000136
【表６】
2015516983.tif 000137
【表７】
2015516983.tif 000138
【表８】
2015516983.tif 000139
【表９】
2015516983.tif 000140
【０１７１】
ブロミドの製造
以下のブロミドを、実施例4に記載の方法に従って製造した。
【表１０】
2015516983.tif 000141
【表１１】
2015516983.tif 000142
【表１２】
2015516983.tif 000143
【表１３】
2015516983.tif 000144
【０１７２】
実施例11〜35
以下のさらなる実施例を、上記の方法を用いて、製造し、単離し、キャラクタライズした。
【表１４】
2015516983.tif 000145
【表１５】
2015516983.tif 000146
【表１６】
2015516983.tif 000147
【表１７】
2015516983.tif 000148
【表１８】
2015516983.tif 000149
【表１９】
2015516983.tif 000150
【表２０】
2015516983.tif 000151
【表２１】
2015516983.tif 000152
【表２２】
2015516983.tif 000153
【表２３】
2015516983.tif 000154
【表２４】
2015516983.tif 000155
【表２５】
2015516983.tif 000156
【表２６】
2015516983.tif 000157
【０１７３】
実施例36
6-(6-フルオロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１２８】
2015516983.tif 000158
36A. 4-フルオロ-2-ヒドロキシ-6-メトキシベンズアルデヒドおよび2-フルオロ-6-ヒドロキシ-4-メトキシベンズアルデヒド
【化１２９】
2015516983.tif 000159
30 mLのジクロロメタン中の4-フルオロ-2,6-ジメトキシベンズアルデヒドおよび2-フルオロ-4,6-ジメトキシベンズアルデヒド(Helvetica Chim. Acta, 81:1596-1607 (1998), 1 g, 5.43 mmol)の1:5の混合液を0-5℃まで冷却した。この混合液に、10 mLのジクロロメタン中のトリブロモボラン(7.33 mL, 7.33 mmol)を25分かけて滴下し、該反応液を0-5℃で約5-10分間撹拌した。次いで、該混合液を氷に注ぎ入れ、ジクロロメタンで希釈し、ジクロロメタンで3回抽出した。有機層を合わせて、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、ISCOシリカゲルカラムクロマトグラフィー(40g gold column 90%ヘキサンおよび10%ジクロロメタン〜10%ジクロロメタンおよび10%酢酸エチル含有80%ヘキサンを使用)で精製した。両方の異性体を同時に集めて、表題の物質(720 mg, 78%)を白色の結晶性固形物として得た。
【０１７４】
2-フルオロ-6-ヒドロキシ-4-メトキシベンズアルデヒド(主要な異性体, 目的でない)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 11.91 (s, 1H), 10.05 (s, 1H), 6.17 - 6.25 (m, 1H), 3.86 (s, 3H).
【０１７５】
4-フルオロ-2-ヒドロキシ-6-メトキシベンズアルデヒド (少量の異性体, 目的)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 12.23-12.42 (m, 1H), 10.22 (s, 1H), 6.23 - 6.27 (m, 1H), 6.13 (dd, J=10.96, 2.35 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H).
【０１７６】
36B. 1-(6-フルオロ-4-メトキシベンゾフラン-2-イル)エタノン
【化１３０】
2015516983.tif 000160
アセトニトリル(49.7 mL, 952 mmol)中の4-フルオロ-2-ヒドロキシ-6-メトキシベンズアルデヒドおよび2-フルオロ-6-ヒドロキシ-4-メトキシベンズアルデヒド(実施例36A, 4.63 g, 27.2 mmol)の混合物の溶液に、ヨウ化カリウム(0.903 g, 5.44 mmol)、炭酸セシウム(9.75 g, 29.9 mmol)および1-クロロプロパン-2-オン(2.395 mL, 28.6 mmol)を加えた。該混合液を室温で2時間撹拌し、0.1当量の炭酸セシウムで処理し、60℃まで1時間加熱し、80℃までさらに1時間（another hour）加熱した。該反応液を室温で終夜そのままにした後、シリカの小さなパッドで濾過し、酢酸エチル(約500 mL)ですすいだ。濃縮して残渣を得て、シリカゲルクロマトグラフィー(ISCO, 120gのシリカ 100%トルエン（315 nmにてUVを使用）、次いで、極性を最大10%酢酸エチルまで時間と共に増大させた)により精製した。画分をエバポレートして目的の異性体/目的でない異性体の7:1の混合物を得て、それを終夜、酢酸エチルで再結晶化させた。表題の物質(216 mg, 3.8%)無色の結晶状物として得た。  LC (メソッドB): 1.928分.  LCMS (APCI) C11H10FO3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 209.06, 実測値; 209.1.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.55-7.61 (m, 1H), 6.78- 6.99 (m, 1H), 6.46-6.53 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.55-2.60 (m, 3H).
【０１７７】
36C. 1-(6-フルオロ-4-ヒドロキシベンゾフラン-2-イル)エタノン
【化１３１】
2015516983.tif 000161
クロロベンゼン(3.69 mL, 36.3 mmol)中の1-(4,6-ジメトキシベンゾフラン-2-イル)エタノン(実施例36B, 216 mg, 1.038 mmol)の撹拌溶液に、三塩化アルミニウム(277 mg, 2.075 mmol)を加えた。85℃で3時間加熱した後、該混合液を氷および1.0N HClでクエンチし、酢酸エチル(4x)で抽出した。有機層を合わせて、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(BIOTAGE（登録商標） 24g, ヘキサンおよび酢酸エチルのグラジエントで溶出)で精製して、表題の物質(0.191 g, 95%)を白色の固形物として得た。  LC (メソッドB): 1.794分.  LCMS (APCI) C10H8FO3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 195.05, 実測値; 195.9.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.58 (s, 1H), 6.87 - 6.93 (m, 1H), 6.46 - 6.53 (m, 1H), 5.62 (s, 1H), 2.60 (s, 3H).
【０１７８】
36D. 1-(6-フルオロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)エタノン
【化１３２】
2015516983.tif 000162
ベンゼンを1-(6-フルオロ-4-ヒドロキシベンゾフラン-2-イル)エタノン(実施例36C, 178 mg, 0.917 mmol)に加え、該混合物を30秒間超音波処理し、減圧濃縮して、出発物質中の微量の水を除去した。トリフェニルホスフィン(373 mg, 1.421 mmol)を加え、該混合物を高真空で10分間乾燥させた。(2-フェニルチアゾール-4-イル)メタノール(実施例3B, 175 mg, 0.917 mmol)およびTHF(15 mL)を加え、該混合液を5分間、超音波処理/加熱した。ジイソプロピルアゾジカルボキシレート(275 μL, 1.412 mmol)／THF(2 mL)を1時間かけて滴下し、得られた黄色の溶液を15分間超音波処理し、室温で終夜撹拌した。該混合液をジクロロメタンで希釈し、飽和NaHCO3、食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ISCO 24 g gold column, 5%酢酸エチル／ヘキサン〜40%を用いる(10%増加))で精製して、表題の物質(132 mg, 32%)を白色の固形物として得た。  LC (メソッドB): 2.613分.  LCMS (APCI) C20H15FNO3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 368.07, 実測値; 368.2.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.94-8.02 (m, 2H), 7.62-7.67 (m, 1H), 7.44-7.51 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 6.91-6.96 (m, 1H), 6.64-6.72 (m, 1H), 5.39 (d, J=0.78 Hz, 2H), 2.58 (s, 3H).
【０１７９】
36E. 2-ブロモ-1-(6-フルオロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)エタノン
【化１３３】
2015516983.tif 000163
酢酸エチル(5 mL)中の1-(6-フルオロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)エタノン(実施例36D, 132 mg, 0.359 mmol)の懸濁液に、臭化銅(II)(160 mg, 0.719 mmol)を加え、該混合液を80℃まで48時間加熱した。固形物を濾過して除き、冷EtOAcですすいだ。固形物をシリカゲルクロマトグラフィー(ISCO 12g  ジクロロメタンおよび酢酸エチル(95:5)を使用)で精製して、表題の物質(55 mg, 34%)をオフホワイト色の固形物として得た。  LC (メソッドB): 2.424分.  LCMS (APCI) C20H14BrFNO3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 445.99, 実測値; 446.0.
【０１８０】
36F. 2-ブロモ-6-(6-フルオロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１３４】
2015516983.tif 000164
2-5 mLのマイクロ波圧力バイアルに、2-ブロモ-1-(6-フルオロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)エタノン(実施例36E, 35 mg, 0.078 mmol)／プロパン-2-オール(2 mL)、次いで5-ブロモ-1,3,4-チアジアゾール-2-アミン(16.2 mg, 0.09 mmol)を加えた。該反応液を、マイクロ波オーブン（microwave oven）において、80℃まで終夜、そして150℃まで1時間加熱した。次いで、該反応混合液をジクロロメタン(8 mL)および飽和NaHCO3(2 mL)の混合液に注ぎ入れ、これをジクロロメタンで2回抽出した。有機抽出物をMgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ISCO 12g gold column 100%ジクロロメタン、次いで1%酢酸エチル／ジクロロメタンの後、2%酢酸エチル／ジクロロメタンを用いる)により精製して、表題の物質(18 mg, 43%)を黄色がかった固形物として得た。 LC (メソッドB): 2.754分.  LCMS (APCI) C22H13BrFN4O2S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 526.96, 実測値; 527.0.
【０１８１】
実施例36. 6-(6-フルオロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１３５】
2015516983.tif 000165
2-ブロモ-6-(6-フルオロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(17 mg, 0.032 mmol)をジクロロメタン(1.3 mL)に溶解させた(いくらかの加熱と超音波処理が必要であった)。その後、メタノールを加え(0.3 mL)、次いでナトリウムメトキシド(14.74 μL, 0.064 mmol)を1回で加えた。該反応液を室温で25分間撹拌した後、HCl 1.0 Nでクエンチし、該反応液の色が黄色に変化するまで撹拌した。次いで、飽和NaHCO3を加え、これをジクロロメタン(4x)で抽出した。有機層を合わせて、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を was purified by シリカゲルカラムクロマトグラフィー(BIOTAGE（登録商標） 12g column 100%ジクロロメタン〜5%酢酸エチル／ジクロロメタンを用いる(1%の増加))により精製して、表題の物質(10 mg, 64%)を黄色がかった固形物として得た。  LC (メソッドA): 2.488分.  HRMS(ESI) C23H15FN4O3S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 479.0570, 実測値; 479.0661.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm:  7.94-8.03 (m, 2H), 7.89 (s, 1H), 7.43 - 7.53 (m, 3H), 7.39 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.85 - 6.94 (m, 1H), 6.59 - 6.68 (m, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.23 (s, 3H).
【０１８２】
実施例37
6-(6-クロロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１３６】
2015516983.tif 000166
37A. 4-クロロ-2,6-ジメトキシベンズアルデヒド
【化１３７】
2015516983.tif 000167
ジエチルエーテル(100 mL, 962 mmol)中の1-クロロ-3,5-ジメトキシベンゼン(5 g, 29.0 mmol)およびTMEDA(4.37 mL, 29.0 mmol)の溶液に、N2雰囲気下において-78℃にて、BuLi(19.91 mL, 31.9 mmol)をシリンジポンプによって30分かけて滴下した。-78℃で4時間撹拌し、次いでDMFを加え、該反応混合液を1.5時間撹拌し続けた後、1N HCl(〜30 mL)を加えた(全て-78℃にて)。該反応混合液を室温まで昇温させ、酢酸エチルで抽出した。有機相を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、乾固するまで濃縮した。残渣を、溶出液としてヘキサン/EtOAcを用いてISCOにより、精製した。目的の生成物を含む画分を乾固するまで濃縮して、表題の物質(1.97 g, 9.82 mmol, 33.9% 収率)を薄黄色の固形物として得た。  LC (メソッドB): 1.924分.  LCMS (APCI) C9H10ClO3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 201.03, 実測値; 201.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 10.28 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 3.86 (s, 6H).
【０１８３】
37B. 4-クロロ-2-ヒドロキシ-6-メトキシベンズアルデヒド
【化１３８】
2015516983.tif 000168
DCM(20 mL, 311 mmol)中の4-クロロ-2,6-ジメトキシベンズアルデヒド(実施例37A, 1.95 g, 9.72 mmol)の撹拌溶液に、-78℃にて、三臭化ホウ素(9.72 mL, 9.72 mmol)を加えた。該反応混合液を-78℃で10分間撹拌した後、室温まで昇温させ、LCMSにより反応の進行をモニタリングしながら、1時間撹拌した。全てのs.m.が消費された後、該反応液を水でクエンチし、DCMで抽出した。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、乾固するまで濃縮して、表題の物質(1.79 g, 9.59 mmol, 99% 収率)を紫色の固形物として得た。 LC (メソッドB): 2.199分.  LCMS (APCI) C8H8ClO3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 187.02, 実測値; 187.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 11.89 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 6.75 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 6.66 (m, 1H), 3.91 (s, 1H).
【０１８４】
37C. 1-(6-クロロ-4-メトキシベンゾフラン-2-イル)エタノン
【化１３９】
2015516983.tif 000169
N,N-ジメチルホルムアミド(15 mL, 9.59 mmol)中の4-クロロ-2-ヒドロキシ-6-メトキシベンズアルデヒド(実施例37B, 1.79 g, 9.59 mmol)の撹拌溶液に、炭酸セシウム(3.75 g, 11.51 mmol)および1-クロロプロパン-2-オン(0.975 mL, 11.51 mmol)を加えた。該反応混合液を、密閉可能な容器中において65℃で7時間加熱し、Whatmanろ紙で濾過して不溶性物質を除去し（DCMですすぐ）、その後、飽和NaHCO3で洗浄した。有機相を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、乾固するまで濃縮した。残渣を、溶出液としてヘキサン/EtOAcを用いてISCOにより精製した。目的の生成物を含む画分を濃縮して、表題の物質(1.43 g, 6.37 mmol, 66% 収率)を薄黄色の固形物として得た。 LC (メソッドA): 1.952分.  LCMS (APCI) C11H10ClO3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 225.03, 実測値; 225.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 7.94 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 0.8, 1.6 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H).
【０１８５】
37D. 1-(6-クロロ-4-ヒドロキシベンゾフラン-2-イル)エタノン
【化１４０】
2015516983.tif 000170
クロロベンゼン(15 mL, 148 mmol)中の1-(6-クロロ-4-メトキシベンゾフラン-2-イル)エタノン(実施例37C, 1.43 g, 6.37 mmol)の撹拌溶液に、塩化アルミニウム(3.40 g, 25.5 mmol)を10分かけて少しずつ加えた。次いで、該反応容器を密閉し、100℃で40分間加熱した後、室温まで冷却し、砕いた氷上に注いだ(EtOAcで撹拌子をすすいだ)。これを30分間撹拌した後、酢酸エチルで抽出した。有機相を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、乾固するまで濃縮した。残渣を、溶出液としてヘキサン/EtOAcを用いてISCOにより精製した。目的の生成物を含む画分を濃縮して、表題の物質(1.18 g, 5.60 mmol, 88% 収率)を薄茶色の固形物として得た。  LC (メソッドA): 1.783分.  LCMS (APCI) C10H8ClO3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 211.02, 実測値; 211.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 11.01 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 2.52 (s, 3H).
【０１８６】
37E. 1-(4-(ベンジルオキシ)-6-クロロベンゾフラン-2-イル)エタノン
【化１４１】
2015516983.tif 000171
乾燥DMF(10 mL, 129 mmol)中の1-(6-クロロ-4-ヒドロキシベンゾフラン-2-イル)エタノン(実施例37D, 1.18 g, 5.60 mmol)の撹拌溶液に、室温にて、K2CO3(0.774 g, 5.60 mmol)およびDMFを加えた。該反応混合液を1.5時間撹拌した後、酢酸エチルおよび水間に分配した。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、乾固するまで濃縮した。残渣を、溶出液としてヘキサン/EtOAcを用いてISCOにより精製した。目的の生成物を含む画分を濃縮して、表題の物質(1.57 g, 5.22 mmol, 93% 収率)を琥珀色の油状物として得た。  LC (メソッドB): 2.420分.  LCMS (APCI) C17H14ClO3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 301.06, 実測値; 301.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 8.00 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.53 (m, 3H), 7.44 (m, 2H), 7.38 (m, 1H), 7.10 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.53 (s, 2H), 2.54 (s, 3H).
【０１８７】
37F. 1-(4-(ベンジルオキシ)-6-クロロベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモエタノン
【化１４２】
2015516983.tif 000172
炎で乾燥させた200 ml 丸底フラスコ（撹拌子を備えている）に、窒素雰囲気下において、無水THF(12 mL)、次いでリチウムビス(トリメチルシリル)アミド(6.22 mL, 6.22 mmol)を加えた。該混合液を-78℃まで冷却し、1-(4-(ベンジルオキシ)-6-クロロベンゾフラン-2-イル)エタノン(実施例37E, 1.56 g, 5.19 mmol)／THF(6ml + 2ml洗液)溶液をシリンジポンプによって10分かけて滴下した。得られた混合液を-78℃で45分間撹拌した後、トリメチルクロロシラン(0.769 mL, 6.02 mmol)をシリンジポンプによって5分かけて滴下し、その後、さらに20分間撹拌した。冷却浴を取り外し、該混合液を+10℃まで30分間昇温させた。該反応混合液を冷酢酸エチル(80 mL)、飽和NaHCO3(12 mL)および氷の混合液でクエンチした。有機相を乾燥させ(MgSO4)（水を完全に除去するために〜5分間撹拌)、濾過し、乾固するまで濃縮してシリルエノールエーテルを黄色の油状物として得て、それをトルエン(4 mL)とともに共エバポレートした。該シリルエノールエーテルを乾燥THF(20 mL)に溶解させ、-30℃まで冷却し(ドライアイスを用いて1:1のCaCl2:水で作った冷却浴を使用, 浴をおよそ-30〜-45℃で一定に保持)、NaHCO3(〜50 mg)で処理し、次いでN-ブロモスクシンイミド(0.923 g, 5.19 mmol)で15分かけて少しずつ処理した。該反応混合液を、0℃まで2時間かけて昇温させた(LCMSによりモニタリングした)後、酢酸エチル(100 mL)および飽和NaHCO3を加えることによりクエンチした。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、エバポレートしてオレンジ色の固形物を得て、それを溶出液としてヘキサン/EtOAcを用いてISCOにより精製した。目的の生成物を含む画分を濃縮して表題の物質(1.48 g, 3.51 mmol, 67.6% 収率)を黄色の固形物として得た。  LC (メソッドB): 2.528分.  LCMS (APCI) C17H13BrClO3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 378.97, 実測値; 379.0.
【０１８８】
37G. 6-(4-(ベンジルオキシ)-6-クロロベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１４３】
2015516983.tif 000173
密閉可能な容器に、1-(4-(ベンジルオキシ)-6-クロロベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモエタノン(実施例37F, 1.48 g, 3.51 mmol)、5-ブロモ-1,3,4-チアジアゾール-2-アミン(0.632 g, 3.51 mmol)およびIPA(25 mL, 324 mmol)を加えた。該反応混合液を、油浴中で80℃にて6時間加熱した後、マイクロ波において150℃で1時間加熱した。該反応混合液を1時間静置し、不溶性物質を濾過して除き、MeOHですすいで目的の生成物を茶色の固形物(1.19 g, 2.58 mmol, 73.6% 収率)として得た。  LC (メソッドA): 2.549分.  LCMS (APCI) C19H12BrClN3O2Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 459.95, 実測値; 460.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 8.74 (s, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 2H), 7.45 - 7.34 (m, 4H), 7.17 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.32 (s, 2H).
【０１８９】
37H. 6-(4-(ベンジルオキシ)-6-クロロベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１４４】
2015516983.tif 000174
DCM(40 mL, 622 mmol)およびメタノール(10 mL, 247 mmol)中の6-(4-(ベンジルオキシ)-6-クロロベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(実施例37G, 1.18 g, 2.56 mmol)の撹拌溶液に、ナトリウムメトキシド(1.164 mL, 5.12 mmol)を加えた。該反応混合液を、TLC(7:3 ヘキサン:EtOAc)によりモニタリングしながら、室温で1時間15分間撹拌した。該反応混合液を1N HClでクエンチし、DCMで抽出した。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、乾固するまで濃縮した。残渣を、MeOHを用いてトリチュレートし(超音波処理)、固形物質を濾過して除き、MeOHですすぎ、吸引乾燥して、目的の化合物を茶色の固形物(859 mg, 2.086 mmol, 81% 収率)として得た。  LC (メソッドA): 2.478分.  LCMS (APCI) C20H15ClN3O3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 412.05, 実測値; 412.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 8.50 (s, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.43 (m, 2H), 7.36 (m, 2H), 7.09 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.31 (s, 2H), 4.21 (s, 3H).
【０１９０】
37I. 6-クロロ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール
【化１４５】
2015516983.tif 000175
DCM中の6-(4-(ベンジルオキシ)-6-クロロベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(実施例37H, 0.85 g, 2.064 mmol)およびペンタメチルベンゼン(2.142 g, 14.45 mmol)の撹拌溶液を、N2雰囲気下において、-78℃まで冷却した後、三塩化ホウ素(5.16 mL, 5.16 mmol)を〜4分かけて滴下した。該反応液をTLC（溶出液として1:1 ヘキサン:EtOAcを使用）によりモニタリングした。該反応混合液を-78℃で30分間撹拌した後、水(40 mL)および飽和NaHCO3(5 mL)の混合液を加え(-78℃にて)、該混合液を、周囲温度になるまで(冷却浴から取り出した)撹拌した。固体の沈殿物を濾過して除き、ジエチルエーテルですすいだ後、終夜乾燥させて、表題の物質(441 mg, 1.371 mmol, 66.4% 収率)をベージュ色の固形物として得た。濾過物をDCMで抽出した。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、乾固するまで濃縮した。残渣を、溶出液としてDCM/EtOAcを用いてISCOにより精製した。目的の生成物を含む画分を濃縮して、表題の物質(25 mg, 0.078 mmol, 3.77% 収率)をベージュ色の固形物として得た。  LC (メソッドA): 2.167分.  LCMS (APCI) C13H9ClN3O3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 322.00, 実測値; 322.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 10.50 (br. S, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.17 (dd, J = 0.8, 1.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 4.21 (s, 3H).
【０１９１】
実施例37. 6-(6-クロロ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１４６】
2015516983.tif 000176
乾燥THF(4 mL)中の6-クロロ-2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例37I, 25 mg, 0.078 mmol)および(2-フェニルチアゾール-4-イル)メタノール(実施例3B, 37.2 mg, 0.194 mmol)を含む、炎で乾燥させた100 mL 丸底フラスコに、トリブチルホスフィン(0.050 mL, 0.194 mmol)を加えた。得られた溶液に、ADDP(49.0 mg, 0.194 mmol)／THF(1 mL)溶液をシリンジポンプによって30分かけて滴下した。1.5時間撹拌した後、該反応混合液をEtOAcで希釈し、次いで、1N HCl、飽和NaHCO3、水および食塩水で洗浄した。有機相を乾燥させ(MgSO4)た後、乾固するまで濃縮した。残渣を、0〜10%ジエチルエーテル／DCMを用いてISCOにより精製した。目的の生成物を含む画分を濃縮して、表題の物質をベージュ色の固形物(20 mg, 0.040 mmol, 52.0% 収率) として得た。  LC (メソッドA): 2.534分.  LCMS (APCI) C23H16ClN4O3S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 495.03, 実測値; 495.0.  1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 8.49 (s, 1H), 7.99 - 7.96 (m, 2H), 7.93 (s, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 3H), 7.40 (dd, J = 0.8, 1.6 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 0.4, 1.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.21 (s, 3H).
【０１９２】
実施例38
2-メトキシ-6-(4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１４７】
2015516983.tif 000177
38A. 5-(ベンジルオキシ)-2,2-ジメチル-4H-ベンゾ[d][1,3]ジオキシン-4-オン
【化１４８】
2015516983.tif 000178
5-ヒドロキシ-2,2-ジメチル-4H-ベンゾ[d][1,3]ジオキシン-4-オン(6.00 g, 30.9 mmol)(Hadfield, A. et al., Synthetic Communications, 24(7):1025-1028 (1994))／N,N-ジメチルホルムアミド(35 mL)溶液に、粉末の無水炭酸カリウム(5.15 g, 37.26 mmol)を全て一度に加えた。得られた混合液を減圧で10分間撹拌した後、窒素でフラッシュした。該反応フラスコを水浴(22℃)に入れ、ベンジルブロミド(5.55 g, 32.16 mmol)を15分かけて滴下した。次いで、得られた混合液を22℃で18時間撹拌した。生じた固形物を濾過し、N,N-ジメチルホルムアミドで洗浄した。濾過物を減圧エバポレートし、残った油状物を酢酸エチル(300 mL)で希釈し、冷0.1 N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、溶媒をエバポレートして、濃いシロップ状物を得た。シリカゲル(4 x 13 cm, トルエン-酢酸エチル 0-5%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、8.78 g(100% 収率)の表題の物質を白色の固形物として得た。  LC (メソッドA): 1.982分.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ ppm: 1.69 (s, 6H), 5.23 (s, 2H), 6.53 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.24 - 7.3  (m, 1H), 7.34 - 7.4 (m, 3 H), 7.52 (ブロードのd, J = 7.4 Hz 2H).
【０１９３】
38B. 2-(ベンジルオキシ)-6-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化１４９】
2015516983.tif 000179
5-(ベンジルオキシ)-2,2-ジメチル-4H-ベンゾ[d][1,3]ジオキシン-4-オン(実施例38A, 4.00 g, 14.07 mmol)／ジクロロメタン(80 mL)溶液を-78℃まで冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウム(6.00 g, 42.2 mmol)／トルエン(40 mL)溶液を20分かけて滴下した。次いで、得られた混合液を-78℃で3時間撹拌した。該反応混合液を、メタノール(5 mL)を15分かけて慎重に滴下し、次いで4 N 塩酸(20 mL)を15分かけて滴下することにより、クエンチした。その後、冷却浴を取り外し、さらなる80 mLの4N 塩酸を10分かけて加え、該混合液を22℃で4時間、激しく撹拌した。該反応混合液を酢酸エチル(200 mL)で希釈し、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧エバポレートした。得られた油状物をシリカゲル(4 x 10 cm, トルエンで溶出)でクロマトグラフィー処理して、2.25 g(70% 収率)の表題の物質を淡黄色の固形物として得た。  LC (メソッドA): 2.219分. HRMS(ESI) C14H13O3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 229.0859, 実測値; 229.0859.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ ppm: 5.12 (s, 2H), 6.43 (d, J = 8.25 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 8.46 Hz, 1H), 7.34 - 7.4 (m, 6 H), 10.39 (s, 1H), 11.95 (s, 1H).
【０１９４】
38C. 1-(4-(ベンジルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)エタノン
【化１５０】
2015516983.tif 000180
2-(ベンジルオキシ)-6-ヒドロキシベンズアルデヒド(実施例38B, 11.10 g, 48.63 mmol)／N,N-ジメチルホルムアミド(120 mL)溶液に、粉末の無水炭酸セシウム(15.8 g, 48.63 mmol)を全て一度に加えた。得られた混合液を減圧で10分間撹拌した後、窒素でフラッシュした。該反応フラスコを水浴(22℃)に入れ、クロロアセトン(4.65 mL, 58.4 mmol)を10分かけて滴下した。次いで、得られた混合液を22℃で18時間撹拌した(tlcによると出発アルデヒドは残っておらず、中間体アルキル化アルデヒドが形成された)。その後、該反応混合液を減圧(10 mbar)下で15分間維持して、いずれの未反応のクロロアセトンを除去し、次いで窒素でフラッシュした。その後、無水炭酸セシウム(1.0 g, 3.1 mmol)を加え、該混合液を55℃で加熱し、TLCによるモニタリングで中間体アルキル化アルデヒドがベンゾフランに完全に変換されるまで、40時間(24時間と32時間後に、さらなる炭酸セシウム, 1 gを加えた)撹拌した。固形物を濾過し、N,N-ジメチルホルムアミド洗浄した。濾過物を減圧エバポレートし、残った油状物を酢酸エチル(400 mL)で希釈し、冷0.1 N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、溶媒をエバポレートして、濃いシロップ状物を得た。シリカゲル(4.5 x 12 cm, トルエン-酢酸エチル 2-4%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、11.67 g(90% 収率)の表題のベンゾフランを薄黄色の固形物として得た。酢酸エチル(40 mL)およびヘキサン(40 mL)の混合液から再結晶化させて、無色の角柱形の物質(10.50 g)を得た。  LC (メソッドA): 2.162分. HRMS(ESI) C17H15O3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 267.1016, 実測値; 267.1022.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ ppm: 2.56 (s, 3H), 5.20 (s, 2H), 6.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.3 - 7.5 (m, 6H), 7.63 (s, 1H).
【０１９５】
38D. 1-(4-(ベンジルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモエタノン
【化１５１】
2015516983.tif 000181
250-mL, 3ツ口フラスコに磁気撹拌子を備え付け、窒素雰囲気でパージし、無水テトラヒドロフラン(40 mL)、次いで、21.6 mL(21.6 mmol)の1M リチウム ビス(トリメチルシリル)アミド／テトラヒドロフラン溶液を加えた。該混合液を-78℃まで冷却し、1-(4-(ベンジルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)エタノン(実施例38C, 5.00 g, 18.77 mmol)／テトラヒドロフラン(20 mL)溶液を10分かけて滴下した。その後、得られた混合液を-78℃で45分間撹拌した。次いで、クロロトリメチルシラン(2.74 mL, 21.6 mmol)を5分かけて滴下し、得られた溶液を-78℃でさらに20分間撹拌した。その後、冷却浴を取り外し、該混合液を30分かけて室温まで昇温させた。次いで該反応混合液を、酢酸エチル(300 mL)、飽和炭酸水素ナトリウム(40 mL)および氷の冷溶液に加えることによりクエンチした。有機相を、無水硫酸マグネシウムで迅速に乾燥させ(磁気撹拌しながら)、減圧エバポレートしてシリルエノールエーテルを油状物として得て、それをトルエン(20 mL)とともに共エバポレートした。その後、該シリルエノールエーテルを乾燥テトラヒドロフラン(80 mL)に溶解させ、-25℃まで冷却し、固体の炭酸水素ナトリウム(0.10 g)で処理し、次いでN-ブロモスクシンイミド(3.34 g, 18.8 mmol)を、10分かけて少しずつ加えた。該反応混合液を、2時間かけて0℃まで昇温させた後、酢酸エチル(350 mL)および飽和炭酸水素ナトリウムを加えることによりクエンチした。有機相を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、エバポレートして、オレンジ色の油状物を得た。シリカゲル(4.5 x 12 cm, トルエン-酢酸エチル 0-1%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、6.13 gの表題のブロモメチルケトンを黄色の固形物として得た。酢酸エチル(20 mL)およびヘキサン(40 mL)から再結晶化させて、淡黄色の角柱形の物質(4.93 g, 76% 収率)を得た。  LC (メソッドA): 2.215分. HRMS(ESI) C17H14BrOとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 345.0121, 実測値; 345.0109.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ ppm: 4.39 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 6.75 (d, J = 7.86 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.25 Hz, 1H), 7.34 - 7.46 (m, 6H), 7.78 (s, 1H).
【０１９６】
38E. 6-(4-(ベンジルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１５２】
2015516983.tif 000182
イソプロパノール(100 mL)中の1-(4-(ベンジルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモエタノン(実施例38D, 3.00 g, 8.69 mmol)および5-ブロモ-1,3,4-チアジアゾール-2-アミン(1.80 g, 10.0 mmol)の混合液を、磁気撹拌子を備えた圧力フラスコ中で80℃にて20時間加熱した(20分後に均一、その後、2時間後に沈殿物の形成)。その後、該混合液を冷却し、5つの20 mL マイクロ波バイアルに移し、次いで、マイクロ波装置において150℃まで30分間加熱した。その後、各バイアルをジクロロメタン(250 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム(25 mL)および食塩水(25 mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。画分を合わせて、減圧濃縮した。オレンジ-茶色の残留固形物をシリカゲル(4 x 10 cm, ジクロロメタンでゆっくり溶出)でクロマトグラフィー処理して、2.82 gの表題のイミダゾチアジアゾール（いくらかの1-(4-(ベンジルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)エタノンが混入）を得た。該固形物質を酢酸エチル(15 mL)でトリチュレートし、濾過し、酢酸エチル(10 ml)で洗浄し、減圧乾燥させて、2.37 g(64% 収率)の純粋な表題のイミダゾチアジアゾールをオフホワイト色の固形物として得て、それを次の工程でそのまま用いた。  LC (メソッドA): 2.425分. HRMS(ESI) C19H13BrN3O2Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 425.9906, 実測値; 425.9893.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ ppm:  5.21 (s, 2H), 6.72 (d, J = 8.07 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.26 Hz, 1H), 7.18 (ブロードのt, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.32 (ブロードのt, 1H), 7.38 (ブロードのt, 2H), 7.47 (ブロードのd, 2H), 8.09 (s, 1H).
【０１９７】
38F. 6-(4-(ベンジルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１５３】
2015516983.tif 000183
ジクロロメタン(400 mL)およびメタノール(50 mL)の混合液中の6-(4-(ベンジルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(実施例38E,3.22 g, 7.55 mmol)の溶液に、22℃にて、6.3 mLの25 wt.% ナトリウムメトキシド／メタノール溶液(30.2 mmol)を一度に加えた。さらなるメタノール(45 mL)を加え、該混合液を40分間撹拌した。該反応混合液を、40 mLの1 N 塩酸、次いで10 mlの飽和炭酸水素ナトリウムを加えることにより、クエンチした。溶媒を減圧下でエバポレートし、残渣をジクロロメタン(400 mL)で希釈し、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧エバポレートした。1,2-ジクロロエタン(30 mL)から白色の固体の残渣を結晶化させて、2.19 gの表題の物質を白色の固形物として得た。母液をシリカゲル(3 x 10 cm, ジクロロメタン-酢酸エチル 0-1%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、さらなる0.46 gの生成物(総収量  2.65 g, 93%)を得た。  LC (メソッドA): 2.379分. HRMS(ESI) C20H16N3O3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 378.0907, 実測値; 378.0911.  1H NMR (CDCl3, 600 MHz) δ ppm: 4.18 (s, 3H), 5.21 (s, 2H), 6.71 (dd, J = 7.4 Hz および J = 0.95 Hz, 1H), 7.12 - 7.17 (m, 3H), 7.32 (ブロードのt, 1H), 7.38 (ブロードのt, 2H), 7.47 (ブロードのd, 2H), 7.88 (s, 1H).
【０１９８】
38G. 2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール
【化１５４】
2015516983.tif 000184
ジクロロメタン(400 mL)中の6-(4-(ベンジルオキシ)ベンゾフラン-2-イル)-2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(実施例38F, 2.640 g, 6.99 mmol)およびペンタメチルベンゼン(7.25 g, 48.9 mmol)の混合液を、窒素雰囲気下において-78℃まで冷却した後、すぐに、18.2 mL(8.2 mmol)の1 M 三塩化ホウ素／ジクロロメタン溶液を3分かけて滴下した。得られた混合液を-78℃で1時間撹拌した。次いで該反応混合液を、炭酸水素ナトリウム(10.6 g)／水(50 mL)溶液を一度に加えることによりクエンチした。冷却浴を取り外し、得られた混合液を室温で1時間撹拌した。生じた固形物を濾過し、水(50 mL)およびジクロロメタン(25 mL)で連続的に洗浄した。濾過ケーキを無水エタノール(10 ml)に浸した後、吸引乾燥させた。その後、得られた白色の固形物を、重量が一定になるまで、減圧下で数日間、五酸化リンを用いて乾燥させて、1.459 g(72% 収率)の表題の物質を得た。濾過物および洗液(脱保護工程からの有機相および水相)を合わせて、ジクロロメタン(500 mL)で希釈し、有機相が澄明（懸濁液中に固形物が認められない）になるまで、温水浴中で撹拌した。有機相を集め、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、まだ温かいうちに素早く濾過した。濾液をエバポレートし、残渣(生成物およびペンタメチルベンゼン)をトルエン(20 mL)でトリチュレートした。固形物を濾過により集め、トルエン(20 mL)で洗浄して、減圧乾燥させた後、0.239 g(12% 収率, 84% 合わせた収率)の表題の物質を黄褐色の固形物として得た。  LC (メソッドA): 1.908分. HRMS(ESI) C13H10N3O3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 288.0437, 実測値; 288.0446.  1H NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ ppm: 4.46 (s, 3H), 6.58 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.15 Hz, 1H), 7.0 - 7.07 (m, 3H), 8.40 (s, 1H).
【０１９９】
実施例38. 2-メトキシ-6-(4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１５５】
2015516983.tif 000185
50 ml フラスコ中の2-(2-メトキシイミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例38G, 0.100 g, 0.349 mmol)、トリフェニルホスフィン(0.165 g, 0.627 mmol)および(2-フェニルチアゾール-4-イル)メタノール(実施例3B, 0.080 g, 0.418 mmol)の混合物を、減圧下で10分間維持した後、窒素でパージした。乾燥テトラヒドロフラン(10 mL)を加え、得られた混合液を少し温めて、超音波処理器中で5分間維持した。冷却した混合液(依然として不均一)に、22℃にて、アゾジカルボン酸ジイソプロピル(0.113 g, 0.558 mmol)／テトラヒドロフラン(2 mL)溶液を1時間かけて滴下した。次いで、該混合液を2℃で4時間撹拌した。該澄明な反応混合液を、ジクロロメタン(100 mL)および飽和炭酸水素ナトリウム(10 mL)を加えることによりクエンチした。有機相を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧濃縮した。残渣をシリカゲル(2.5 x 12 cm, ジクロロメタン-酢酸エチル 0-3%で溶出)でクロマトグラフィー処理し、次いで、目的の画分を酢酸エチル(8 mL)から結晶化させて、0.028 g(24% 収率)の表題の物質を白色の固形物として得た。  LC (メソッドA): 2.426分. HRMS(ESI) C23H17N4O3S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 461.0737, 実測値; 461.0926. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 4.22 (s, 3H), 5.45 (d, J=0.78 Hz, 2H), 6.80 (dd, J=7.04, 1.57 Hz, 1H), 7.15 - 7.21 (m, 2H), 7.22 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.42 - 7.51 (m, 3H), 7.92 (s, 1H), 7.95 - 8.03 (m, 2H).
【０２００】
実施例39
4-(((6-メトキシ-2-(6-メチルイミダゾ[1,2-b]ピリダジン-2-イル)ベンゾフラン-4-イル)オキシ)メチル)-2-フェニルチアゾール
【化１５６】
2015516983.tif 000186
39A. 2-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-6-メチルイミダゾ[1,2-b]ピリダジン
【化１５７】
2015516983.tif 000187
150 mL 圧力フラスコ中の6-メチルピリダジン-3-アミン(1.52 g, 13.93 mmol)、1-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモエタノン(実施例1E, 5.00 g, 13.33 mmol)および2-プロパノール(110 mL)の混合液を、65℃にて加熱した。該混合液は、30分の加熱後にほぼ均一になり、40分後に再び沈殿が生じた。該混合液を合計48時間加熱した。該反応混合液を冷却し、ジクロロメタン(600 mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。エバポレートして、橙褐色（orange brown）の固形物を得て、それをシリカゲル(4 x 9 cm, ジクロロメタン-酢酸エチル 0-5%で溶出)でクロマトグラフィー処理して、表題の物質(3.64 g)を橙褐色の固形物として得た。該固形物を、酢酸エチル(30 mL, 一部溶解)とともに煮沸し、室温で2時間静置した。結晶状物を濾過により集め、終夜、減圧乾燥させて、表題の物質(3.440 g, 67%)を淡い黄茶色の針状晶として得た、  LC (メソッドA):  2.279分. HRMS(ESI) C23H20N3O3として計算:計算値; [M+H]+ m/z 386.1499, 実測値; 386.1532. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 2.59 (s, 3 H), 3.86 (s, 3 H), 5.21 (s, 2 H), 6.43 (d, J=1.96 Hz, 1 H), 6.75 (ブロードのd, 1 H), 6.94 (d, J=9.39 Hz, 1 H), 7.31 - 7.38 (m, 2 H), 7.38 - 7.45 (m, 2 H), 7.50 (ブロードのd, J=7.43 Hz, 2 H), 7.82 (d, J=9.39 Hz, 1 H), 8.19 (s, 1 H).
【０２０１】
39B. 6-メトキシ-2-(6-メチルイミダゾ[1,2-b]ピリダジン-2-イル)ベンゾフラン-4-オール
【化１５８】
2015516983.tif 000188
1 L フラスコにおいて、ジクロロメタン(420 mL)およびメタノール(150 mL)の混合液中の2-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-6-メチルイミダゾ[1,2-b]ピリダジン(実施例39A, 1.00 g, 2.59 mmol)の溶液を、10%パラジウム炭素(0.30 g, すなわち、30 mg Pd)で、1 atmの水素下において6時間、水素化した。該反応混合液を、減圧下で2分間維持した後、窒素でフラッシュした。触媒を濾過し、温ジクロロメタン-メタノール(8:2, 100 mL)で洗浄し、濾液を合わせて減圧下で濃縮した。黄色の残渣を1,2-ジクロロエタン(30 mL)とともに煮沸し、室温で18時間静置した。固形物を濾過し(NMRによるとメタノールを含む)、120℃で12時間減圧乾燥させて、表題の物質(0.760 g, 99% 収率)を黄色の固形物として得た。  LC (メソッドA):  1.844分. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm: 2.54 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 6.28 (d, J=1.96 Hz, 1H), 6.70 (dd, J=1.96, 1.17 Hz, 1H), 7.20 (d, J=9.39 Hz, 1H), 7.24 (d, J=0.78 Hz, 1H), 8.03 (d, J=9.78 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 10.10 (br s, 1H).
【０２０２】
実施例39. 4-(((6-メトキシ-2-(6-メチルイミダゾ[1,2-b]ピリダジン-2-イル)ベンゾフラン-4-イル)オキシ)メチル)-2-フェニルチアゾール
【化１５９】
2015516983.tif 000189
100 mL 丸底フラスコにおいて、DMF(5 mL)中の6-メトキシ-2-(6-メチルイミダゾ[1,2-b]ピリダジン-2-イル)ベンゾフラン-4-オール(実施例39B, 0.190 g, 0.643 mmol)および4-(ブロモメチル)-2-フェニルチアゾール(ブロミドに関する表, 0.180 g, 0.708 mmol)の懸濁液を、減圧下においてN2で10分間パージした。該反応液を炭酸カリウム(0.24 g, 1.737 mmol)で処理し、22℃で18時間撹拌した後、DCMで希釈し、水(1x)、食塩水(1x)で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(2.5 x 10 cm, 0%〜50% EtOAc／CH2Cl2)により精製して、純粋でない表題の物質(0.198 g, 66%)を得た。固形物を温酢酸エチルでトリチュレートして、純粋な表題の物質(0.176 g)を得た。  LC (メソッドA):  2.414分. HRMS(ESI) C26H21N4O3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z 469.1329, 実測値; 469.1379. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm: 2.57 (s, 3H), 3.84 (s, 3 H), 5.39 (s, 2 H), 6.46 (d, J=1.96 Hz, 1 H), 6.74 (ブロードのd, 1 H), 6.91 (d, J=9.1 Hz, 1 H), 7.34 (s, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 7.39 - 7.46 (m, 3 H), 7.80 (d, J=9.1 Hz, 1 H), 7.90 - 8.0 (m, 2 H), 8.19 (s, 1 H).
【０２０３】
実施例40
(S)-2-(1-フルオロエチル)-6-(6-メトキシ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１６０】
2015516983.tif 000190
40A. (S)-5-(1-フルオロエチル)-1,3,4-チアジアゾール-2-アミン
【化１６１】
2015516983.tif 000191
350 mLの密閉可能な圧力容器にチオセミカルバジド(11.17 g, 122.5 mmol)および乾燥ジオキサン(100 mL)を加え、該混合液をN2雰囲気下において0℃で冷却した。この混合液を急速撹拌しながら、そこに、(S)-2-フルオロプロパン酸(9.40 g, 102.1 mmol, Fritz-Langhals, E., Tetrahedron Asymmetry, 981 (1994)から)／ジオキサン(10 mL)溶液をゆっくりと加えた。得られた混合液にPOCl3(11.22 mL, 122.5 mmol)を滴下し、次いで、冷却浴を取り外し、濃い白色のスラリーを室温で1時間撹拌した。その後、該容器を密閉し、該混合液を90-95℃(油浴温度)で5時間加熱した。該混合液を冷却し、室温で14時間撹拌した(注記:これは便宜のためだけのものであって、任意である)後、該懸濁液を(2相の混合液)をデカントし、減圧下で濃縮した。下部の相をゆっくりと氷水(250 mL)に注ぎ入れた後、該濃縮物も加えた。この混合液を、実質的に均一な(混濁)溶液になるまで急速撹拌し、次いで、40%NaOH水溶液を用いてpH 9-9.5まで塩基性化した。得られたスラリーを濾過し、濾過ケーキを水で洗浄した(注記:このベージュ色の固形物のLCによって微量の目的の生成物のみが含まれることが示されたため、さらなる調査はしなかった)。その後、濾過物を合わせて、EtOAc(x3)で抽出し、有機相を乾燥させ(Na2SO4)、エバポレートしてクリーム色の固形物(10.58 g, 70%)を得た（それは、LCおよびLCMSによると、実質的に純粋な生成物であった）。この物質をさらなる精製は行わずにそのまま用いた。分析サンプルをフラッシュクロマトグラフィー[Isco/ 0-20% (MeOH-NH4OH, 9:1)-DCM]により精製して、白色の固形物を得た。  LC (メソッドB):  0.608分.  MS(ESI) C4H6FN3Sとして計算:計算値; m/z:  147.03; 実測値: 148.05 [M+H]+.  1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 7.38 (s, 2H), 5.82 (dq, J= 6.4, 48.0 Hz, 1H), 1.65 (dd, J= 6.4, 24.0 Hz, 3H).  Chiral LC: S:R= 95:5.
【０２０４】
40B. (S)-6-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-(1-フルオロエチル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１６２】
2015516983.tif 000192
20 mL バイアルにおいて、1-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-ブロモエタノン(実施例1E, 407 mg, 1.085 mmol)および(S)-5-(1-フルオロエチル)-1,3,4-チアジアゾール-2-アミン(実施例40A, 202 mg, 1.373 mmol)を2-プロパノール(10 ml, 130 mmol)で懸濁し、80℃で18時間加熱した。5分後、該溶液は均一になった。終夜撹拌した後で沈殿が生じた。該混合液を冷却し、20 mL マイクロ波バイアルに移した後、150℃で30分加熱した。該混合液を合わせて、CH2Cl2(200 mL)で希釈し、飽和NaHCO3で1回、食塩水で1回洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、濃縮した。残渣をISCO（REDISEP（登録商標） Gold 40 g column (CH2Cl2/EtOAc)を使用）で精製した。粗生成物をSiO2上に吸着させた。画分を集め、得られたオレンジ色の固形物をACN中で2回トリチュレートして（tritured）、表題の物質を薄黄色の固形物として得た。  LC (メソッドB):  2.403分.  MS(ESI) C22H19FN3O3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z:  424.1126; 実測値:  424.1146.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.61 (s, 1H) 7.51 (d, J=7.4 Hz, 2H) 7.42 (t, J=7.6 Hz, 2H) 7.35 (t, J=7.0 Hz, 1H) 7.08 (s, 1 H) 6.83 - 6.85 (m, 1H) 6.54 (d, J=1.2 Hz, 1H) 6.16 (dq, J=47.1, 6.4 Hz, 1H) 5.26 (s, 2H) 3.80 (s, 3H) 1.79 (dd, J=24.5, 6.8 Hz, 3H).
【０２０５】
40C. (S)-2-(2-(1-フルオロエチル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)-6-メトキシベンゾフラン-4-オール
【化１６３】
2015516983.tif 000193
ジクロロメタン(24 ml, 373 mmol)中の(S)-6-(4-(ベンジルオキシ)-6-メトキシベンゾフラン-2-イル)-2-(1-フルオロエチル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール(実施例40B, 0.152 g, 0.359 mmol)およびペンタメチルベンゼン(0.374 g, 2.52 mmol)の混合液を窒素雰囲気下において-78℃まで冷却した後、すぐに、三塩化ホウ素 1.0M／ジクロロメタン(1 ml, 1.000 mmol)を3分かけて滴下した(結晶化を避けるため)。得られた混合液を-78℃で1時間撹拌した。該反応混合液を、炭酸水素ナトリウム(0.71 g)／水(12 mL)溶液を一度に加えることによりクエンチした。冷却浴を取り外し、得られた混合液を室温で1時間撹拌した。生じた固形物を濾過し、水(8 mL)およびジクロロメタン(8 mL)で連続的に洗浄した。濾過ケーキを無水エタノールに浸し、吸引乾燥させた。得られた白色の固形物を、減圧下でP2O5上を用いて36時間乾燥させた。  LC (メソッドB):  2.038分.  MS(ESI) C15H13FN3O3Sとして計算:計算値; [M+H]+ m/z:  334.0656; 実測値:  334.0680.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.06 (s, 1H) 8.56 (s, 1H) 7.09 (s, 1H) 6.67 (s, 1H) 6.26 - 6.28 (m, 1H) 6.16 (dq, J=46.9, 6.4 Hz, 1H) 3.76 (s, 3H) 1.80 (dd, J=24.7, 6.3 Hz, 3H).
【０２０６】
実施例40. (S)-2-(1-フルオロエチル)-6-(6-メトキシ-4-((2-フェニルチアゾール-4-イル)メトキシ)ベンゾフラン-2-イル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール
【化１６４】
2015516983.tif 000194
(S)-2-(2-(1-フルオロエチル)イミダゾ[2,1-b][1,3,4]チアジアゾール-6-イル)-6-メトキシベンゾフラン-4-オール(実施例40C, 0.050 g, 0.150 mmol)、(2-フェニルチアゾール-4-イル)メタノール(実施例3B, 0.086 g, 0.450 mmol)およびトリフェニルホスフィン(0.118 g, 0.450 mmol)の混合物に、N2下において、乾燥THF(3 mL)を加えた。得られた薄い琥珀色の溶液に、DIAD(0.087 mL, 0.450 mmol)／乾燥THF(2 mL)溶液を2時間かけて滴下して、薄黄-茶色の溶液を得た。室温でさらに30分間撹拌した後、LCによって出発物質が残っていないことが示された。その後、揮発性物質を減圧下において除去して、琥珀色のガム状物質を得た。フラッシュクロマトグラフィー(Isco/ 0-20% エーテル-DCM)により、ほぼ無色のガム状物質として生成物を得た。このガム状物質を最少量のMeOHでトリチュレートし、得られたスラリーを濾過し、濾過ケーキを最少量のMeOHで洗浄し、次いで減圧乾燥させて、表題の物質(0.048 g, 63.2% 収率)をクリーム色の固形物として得た。得られたサンプルを、MeCN-H2Oから、クリーム色の固形物として凍結乾燥させた。  LC (メソッドA):  2.453分. HRMS(ESI) C25H20FN4O3S2として計算:計算値; [M+H]+ m/z 507.0955, 実測値; 506.098. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm: 8.67 (s, 1H), 8.05-8.02 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 7.60-7.56 (m, 3H), 7.20 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 6.93 (dd, J= 0.8, 2.0 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 6.23 (dq, J= 6.7, 47.0 Hz, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 1.86 (d, J= 6.7, 24.6 Hz, 3H).
【０２０７】
（生物学）
用語「PAR4アンタゴニスト」は、血小板凝集の阻害剤を意味し、それはPAR4に結合し、PAR4切断および/またはシグナル伝達を阻害する。典型的には、PAR4活性を、用量依存的に、コントロール細胞におけるその活性に比べて、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、または100%、低下させる。該コントロール細胞は、該化合物で処理していない細胞である。PAR4活性は、本明細書に記載される方法を含む(例えば、PAR4発現細胞におけるカルシウム動員、血小板凝集、血小板活性化アッセイ（例えば、カルシウム動員、p-セレクチンまたはCD40L放出を測定する）、あるいは血栓および止血モデル)を含む、いずれの当分野で標準的な方法によって決定される。該用語「PAR4アンタゴニスト」にはまた、PAR1およびPAR4の両方を阻害する化合物が含まれる。
【０２０８】
以下のカテゴリー（例として挙げるものであって、限定することを意図しない）:(a)薬物動態学的特性（経口バイオアベイラビリティー、半減期、およびクリアランスが含まれる）;(b)医薬的特性;(c)必要用量;(d)血中濃度の最高最低間特性を低下する因子;(e)受容体での活性薬物の濃度を増大させる因子;(f)臨床的な薬物-薬物相互作用の傾向を低下させる因子;(g)有害な副作用の可能性を低下させる因子（他の生物学的標的に対する選択性を含む）;(h)向上した治療指数（出血傾向の低下）;ならびに、(h)製造コストまたは製造の実現可能性を改善する因子、の1つ以上において、公知の抗血小板薬よりも有利かつ向上した特性を有する化合物を見いだすことが望ましい。
【０２０９】
本明細書で用いる用語「化合物」は、天然または人工の化学物質を意味する。化合物には、例えば、ペプチド、ポリペプチド、合成有機分子、天然有機分子、核酸分子、ペプチド核酸分子、ならびに、それらの構成成分および誘導体が含まれうる。
【０２１０】
本明細書で用いる用語「患者」は、全ての哺乳動物種を包含する。
【０２１１】
本明細書で用いる用語「対象」は、PAR4アンタゴニストを用いた処置が有効であり得る、いずれのヒトまたはヒト以外の生物を言う。対象の例には、血管疾患のリスク因子を有するいずれの年齢のヒト、あるいは心血管疾患の1つのエピソードを既に経験した患者が含まれる。一般的なリスク因子には、限定はされないが、年齢、雄性、高血圧、喫煙または喫煙歴、トリグリセリド上昇、総コレステロールもしくはLDLコレステロールの上昇が含まれる。
【０２１２】
いくつかの実施態様において、該対象は、二重PAR1/PAR4血小板受容体レパートリーを有する種（species）である。本明細書で用いる用語「二重PAR1/PAR4血小板受容体レパートリー」は、対象が血小板またはその前駆体においてPAR1およびPAR4を発現することを意味する。二重PAR1/PAR4血小板受容体レパートリーを有する対象の例には、ヒト、ヒト以外の霊長類、およびモルモットが含まれる。
【０２１３】
他の実施態様において、該対象は二重PAR3/PAR4血小板受容体レパートリーを有する種である。本明細書で用いる用語「二重PAR3/PAR4血小板受容体レパートリー」は、対象が血小板またはその前駆体においてPAR3およびPAR4を発現することを意味する。二重PAR3/PAR4血小板受容体レパートリーを有する対象の例には、齧歯類およびウサギが含まれる。
【０２１４】
本明細書で用いる「処置すること」または「処置」は、哺乳動物（特に、ヒト）における病態の処置を包含し:(a)病態の抑制（すなわち、その進行を抑止すること）;および/または(b)病態の軽減（すなわち、病態の後退をもたらすこと）を含む。
【０２１５】
本明細書で用いる「予防（prophylaxis）」または「予防（prevention）」は、臨床的病態の出現可能性を低下させることを目的とする、哺乳動物（特に、ヒト）における無症候性の病態の予防的処置を包含する。一般集団に比べて臨床的病態に罹るリスクを増大させることが知られている要因に基づいて、患者に対する予防的療法を選択する。「予防」療法は、(a)一次予防および(b)二次予防に分けることができる。一次予防は、まだ臨床的病態を呈していない患者における処置として定義される一方、二次予防は、同一または同様の臨床的病態の再発を予防することとして定義される。
【０２１６】
本明細書で用いる「リスク低減」は、臨床的病態の進行の発生を低下させる療法を包含する。従って、一次および二次予防療法はリスク低減の例である。
【０２１７】
「治療上有効な量」とは、PAR4を阻害および/または拮抗するために、ならびに／あるいは本明細書に記載の疾患を予防または処置するために、単独でまたは組み合わせて投与する場合に有効である、本発明の化合物の量を含むことを意図する。組み合わせに対して用いる場合、該用語は、組み合わせて、連続的に、または同時に投与するいずれの場合においても予防または治療効果をもたらす、活性成分の組み合わせた量を意味する。
【０２１８】
本明細書で用いる用語「血栓症」は、血管内の血栓（その血管が注ぎ込む組織の虚血または梗塞を引き起こしうる）の形成または存在を言う。本明細書で用いる用語「塞栓症」は、血流によってその沈積部位にもたらされた血餅または異物による動脈の突然の遮断を言う。本明細書で用いる該用語「血栓塞栓症」は、発生部位から血流により運ばれて別の血管を塞ぐ血栓物質による血管の閉塞を言う。該用語「血栓塞栓性疾患」は、「血栓性」および「塞栓性」疾患(上記参照)の両方を包含する。
【０２１９】
本明細書で用いる用語「血栓塞栓性疾患」には、動脈性心血管血栓塞栓性疾患、静脈性心血管または脳血管血栓塞栓性疾患、ならびに心室および心房または末梢循環における血栓塞栓性疾患が含まれる。本明細書で用いる用語「血栓塞栓性疾患」には、また、限定はされないが、不安定狭心症または他の急性冠症候群、心房細動、初回または再発性心筋梗塞、虚血性突然死、一過性脳虚血発作、脳卒中、アテローム動脈硬化症、末梢閉塞性動脈疾患、静脈血栓症、深部静脈血栓症、血栓性静脈炎、動脈塞栓症、冠状動脈血栓症、脳動脈血栓症、脳塞栓症、腎塞栓症、肺塞栓症、あるいは血栓形成を促進する人工表面に血液が曝露される医用インプラント、デバイスもしくは処置が原因の血栓症から選択さえる特定の疾患が含まれる。該医用インプラントまたはデバイスとしては、限定はされないが:人工弁（prosthetic valves/artificial valve）、留置カテーテル、ステント、血液酸素付加装置、シャント、血管アクセスポート、心室補助装置および人工心臓もしくは心腔、ならびに血管移植片が挙げられる。該処置としては、限定はされないが:心肺バイパス、経皮的冠動脈インターベンション、および血液透析が挙げられる。別の実施態様において、該用語「血栓塞栓性疾患」には、急性冠症候群、脳卒中、深部静脈血栓症、および肺塞栓症が含まれる。
【０２２０】
別の実施態様において、本発明は、血栓塞栓性疾患の処置方法であって、該血栓塞栓性疾患が、不安定狭心症、急性冠症候群、心房細動、心筋梗塞、一過性脳虚血発作、脳卒中、アテローム動脈硬化症、末梢閉塞性動脈疾患、静脈血栓症、深部静脈血栓症、血栓性静脈炎、動脈塞栓症、冠状動脈血栓症、脳動脈血栓症、脳塞栓症、腎塞栓症、肺塞栓症、または血栓形成を促進する人工表面に血液が曝露される医用インプラント、デバイスもしくは処置が原因の血栓症から選択される該方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、血栓塞栓性疾患の処置方法であって、該血栓塞栓性疾患が、急性冠症候群、脳卒中、静脈血栓症、心房細動、あるいは医用インプラントおよびデバイスが原因の血栓症から選択される該方法を提供する。
【０２２１】
別の実施態様において、本発明は、血栓塞栓性疾患の一次予防のための方法であって、該血栓塞栓性疾患が、不安定狭心症、急性冠症候群、心房細動、心筋梗塞、虚血性突然死、一過性脳虚血発作、脳卒中、アテローム動脈硬化症、末梢閉塞性動脈疾患、静脈血栓症、深部静脈血栓症、血栓性静脈炎、動脈塞栓症、冠状動脈血栓症、脳動脈血栓症、脳塞栓症、腎塞栓症、肺塞栓症、または血栓形成を促進する人工表面に血液が曝露される医用インプラント、デバイスもしくは処置が原因の血栓症から選択される該方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、血栓塞栓性疾患の一次予防のための方法であって、該血栓塞栓性疾患が、急性冠症候群、脳卒中、静脈血栓症、あるいは医用インプラントおよびデバイスが原因の血栓症から選択される該方法を提供する。
【０２２２】
別の実施態様において、本発明は、血栓塞栓性疾患の二次予防のための方法であって、該血栓塞栓性疾患が、不安定狭心症、急性冠症候群、心房細動、再発性心筋梗塞、一過性脳虚血発作、脳卒中、アテローム動脈硬化症、末梢閉塞性動脈疾患、静脈血栓症、深部静脈血栓症、血栓性静脈炎、動脈塞栓症、冠状動脈血栓症、脳動脈血栓症、脳塞栓症、腎塞栓症、肺塞栓症、または血栓形成を促進する人工表面に血液が曝露される医用インプラント、デバイスもしくは処置が原因の血栓症から選択される該方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、血栓塞栓性疾患の二次予防ための方法であって、該血栓塞栓性疾患が、急性冠症候群、脳卒中、心房細動または静脈血栓症から選択される該方法を提供する。
【０２２３】
本明細書で用いる用語「脳卒中」は、総頚動脈、内頚動脈、または脳内動脈における閉塞性血栓症から生じる塞栓性脳卒中またはアテローム血栓性脳卒中を言う。
【０２２４】
血栓症には、血管閉塞(例えば、バイパス後)および再閉塞(例えば、経皮経管冠動脈形成術の間または後)が含まれることに留意する。血栓塞栓性疾患は、限定はされないが、アテローム動脈硬化症、手術または手術合併症、長時間の拘束、心房細動（arterial fibrillation）、先天性血栓形成傾向、がん、糖尿病、投薬もしくはホルモンの影響、および妊娠合併症を含む状態に起因しうる。
【０２２５】
血栓閉塞性疾患は、アテローム動脈硬化症を有する患者にしばしば付随する。アテローム動脈硬化症のリスク因子としては、限定はされないが、雄性、年齢、高血圧、脂質障害、および糖尿病が挙げられる。アテローム動脈硬化症のリスク因子は、同時に、アテローム動脈硬化症合併症（すなわち、血栓塞栓性疾患）のリスク因子である。
【０２２６】
同様に、心房細動は血栓塞栓性疾患にしばしば付随する。心房細動および付随する血栓塞栓性疾患のリスク因子としては、心血管疾患、リウマチ性心疾患、非リウマチ性僧帽弁疾患、高血圧性心血管疾患、慢性肺疾患、および様々な種々の心臓の異常ならびに甲状腺中毒症が挙げられる。
【０２２７】
糖尿病は、アテローム動脈硬化症および血栓塞栓性疾患にしばしば付随する。より一般的な2型に対するリスク因子としては、限定はされないが、家系、肥満、運動不足、人種/民族、生来の（previously）空腹時血糖異常またはブドウ糖負荷試験異常、妊娠糖尿病歴または「大きな新生児」の出産歴、高血圧、低HDLコレステロール、ならびに多嚢胞性卵巣症候群が挙げられる。
【０２２８】
血栓症は、様々な腫瘍タイプ、例えば、膵臓がん、乳がん、脳腫瘍、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、胃腸悪性腫瘍、およびホジキンもしくは非ホジキンリンパ腫に関連している。最近の研究により、血栓症を有する患者におけるがんの頻度は、一般集団における特定のがんタイプの頻度を反映することが示唆されている(Levitan, N. et al., Medicine (Baltimore), 78(5):285-291 (1999); Levine M. et al., N. Engl. J. Med., 334(11):677-681 (1996); Blom, J.W. et al., JAMA, 293(6):715-722 (2005))。それ故に、男性において血栓症に付随する最も一般的ながんは、前立腺、結腸直腸、脳、および肺のがんであり、女性においては乳房、卵巣、および肺のがんである。がん患者において認められる静脈性血栓塞栓症(VTE)の率はかなり高い。異なる腫瘍タイプ間でのVTEの変動率は、患者集団の選択に関与している可能性が高い。血栓症のリスクのあるがん患者は、以下のリスク因子:(i)がんのステージ(すなわち、転移の存在)、(ii)中心静脈カテーテルの存在、(iii)手術および化学療法を含む抗がん療法、ならびに(iv)ホルモンおよび血管新生抑制薬のいずれかまたは全てを有しうる。従って、進行性腫瘍を有する患者に、ヘパリンまたは低分子量ヘパリンを一緒に投与して、血栓塞栓性疾患を防ぐことが一般的な診療である。多くの低分子量ヘパリン製剤が、これらの適応症のためにFDAにより認可されている。
【０２２９】
本明細書で用いる用語「医薬組成物」は、少なくとも1つの治療上有効なもしくは生物学的に活性な薬物を含んでいて、患者への投与し適している、いずれの組成物を意味する。これらの製剤のいずれも、当分野において周知かつ認められた方法によって製造され得る。例えば, Gennaro, A.R., ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Mack Publishing Co., Easton, PA (2000)参照。
【０２３０】
本発明には、PAR4に結合し、PAR4切断および/またはシグナル伝達を阻害する化合物(本明細書において「PAR4アンタゴニスト」または「治療用化合物」と称される)を含む医薬組成物を対象に投与することが含まれる。
【０２３１】
該医薬組成物は、当分野で公知の方法を用いて投与される。好ましくは、該化合物は、経口、直腸内、経鼻的（吸入による）、局所的、または非経口的（例えば、皮下、腹腔内、筋肉内、および静脈内）に投与される。該化合物は、適宜、血栓塞栓性疾患を処置するための治療薬のカクテル療法（cocktail）の構成要素として製剤化される。好ましい実施態様において、該医薬組成物は経口投与される。
【０２３２】
本明細書に記載の治療用化合物は、通常の方法を用いて、医薬組成物へと製剤化される。例えば、PAR4アンタゴニストは、経口投与のためにカプセル剤または錠剤として製剤化される。カプセル剤はいずれの標準的な医薬的に許容される物質（例えば、ゼラチンまたはセルロース）を含んでよい。錠剤は、通常の方法に従って、治療用化合物と固体担体および滑沢剤との混合物を圧縮することにより、製剤化されうる。固体担体の例としては、デンプンおよび糖、ベントナイト（sugar bentonite）が含まれる。該化合物は、結合剤（例えば、ラクトースまたはマンニトール）、通常の充填剤、および錠剤化剤（tableting agent）を含む、硬殻錠剤（hard shell tablet）またはカプセル剤の形態で投与される。他の製剤としては、軟膏剤、坐剤、ペースト剤、スプレー剤、パッチ、クリーム剤、ゲル剤、吸収性スポンジ、またはフォーム剤が挙げられる。該製剤は、当分野で周知の方法を用いて製造される。本発明の組成物はまた、非経口投与、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、および腹腔内において、有用である。非経口投与に適した製剤の例としては、等張生理食塩水、5%グルコース溶液、または別の標準的な医薬的に許容される賦形剤中の、活性薬物の水溶液が挙げられる。標準的な可溶化剤（例えば、PVPまたはシクロデキストリン）もまた、治療用化合物の送達のための医薬品賦形剤として用いられる。
【０２３３】
該PAR4アンタゴニストの好ましい用量は、生物学的に活性な用量である。生物学的に活性な用量は、PAR4の切断および/またはシグナル伝達を阻害し、抗血栓効果を有しうる用量である。望ましくは、該PAR4アンタゴニストは、PAR4の活性を、未処理のコントロールのレベルより、少なくとも5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、または100%以上、低下させる能力を有する。血小板中のPAR4の濃度は、当分野で公知のいずれの方法（例えば、受容体結合アッセイ、血小板凝集、血小板活性化アッセイ(例えば、FACS（登録商標）によるp-セレクチン発現)、PAR4切断感受性抗体を用いたウエスタンブロットもしくはELISA解析を含む）によって測定される。別法として、PAR4の生物学的活性は、PAR4によって誘発される細胞内シグナル伝達を評価することにより(例えば、カルシウム動員または他の二次メッセンジャーアッセイ)測定される。
【０２３４】
いくつかの実施態様において、PAR4化合物の治療上有効な量は、好ましくは、おおよそ、100 mg/kg未満、50 mg/kg未満、10 mg/kg未満、5 mg/kg未満、または1 mg/kg未満である。より好ましい実施態様において、PAR4化合物の治療上有効な量は、5 mg/kg未満である。最も好ましい実施態様において、PAR4化合物の治療上有効な量は、1 mg/kg未満である。有効量は、当業者によって認識されている通り、投与経路および賦形剤の使用量に依存して変化する。
【０２３５】
本発明のPAR4アンタゴニストの活性は、様々なin vitroアッセイで測定され得る。アッセイの例を、以下の実施例において示す。
【０２３６】
FLIPRアッセイは、本発明のPAR4アンタゴニストの活性を測定するためのin vitro アッセイの例である。このアッセイでは、PAR4発現細胞においてPAR4アゴニストにより細胞内のカルシウム動員を誘発し、カルシウム動員をモニタリングする。例えば、実施例Aを参照。該FLIPRアッセイはまた、PAR4アゴニストペプチドのアゴニスト活性を測定するためのin vitro アッセイの例でもある。実施例H参照。
【０２３７】
AYPGKF(配列番号1)は公知のPAR4アゴニストである。別のPAR4アゴニストは、H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2である。下記実施例Bに示される通り、該FLIPRアッセイにおいて、H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)はPAR4アゴニストであることを確認した。〜180個の化合物のIC50値の対照比較（side-by-side comparison）を、AYPGKF(配列番号1)とH-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2を対比させることにより、実施した。その結果、該2つのアッセイ間の強い相関関係が実証された。さらに、H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)は、AYPGKF(配列番号1)に比べて向上したアゴニスト活性を有する（FLIPRアッセイにおいて、AYPGKF(配列番号1)のEC50よりも10倍低い）。効力が向上したPAR4アゴニストペプチドは、感度および特異性が向上したより堅固なアッセイを可能にする。H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)は、実施例AA-DDに示す通り、当業者に周知の方法を用いて合成され得る。
【０２３８】
また、該FLIPRアッセイは、PAR1およびPAR4の両方を発現する細胞株において、アゴニスト活性もしくはPAR1アンタゴニスト活性を試験するためのカウンタースクリーニングとして用いられ得る。該PAR1アンタゴニスト活性は、該化合物のPAR1アゴニストペプチドSFFLRR(配列番号35)または他のPAR1アゴニストペプチドにより誘発されるカルシウム動員を阻害する能力によって、試験され得る。
【０２３９】
本発明の化合物は、実施例Cに示す通り、γ-トロンビンにより誘発される血小板凝集を阻害する能力についてin vitroで試験され得る。もはやPAR1と相互作用しないγ-トロンビン（α-トロンビンのタンパク質分解産物）は、PAR4(Soslau, G. et al., “Unique pathway of thrombin-induced platelet aggregation mediated by glycoprotein Ib”, J. Biol. Chem., 276:21173-21183 (2001))を、選択的に切断および活性化させる。血小板凝集を、96-ウェルマイクロプレート凝集アッセイ方式か、または凝集測定器を用いて、モニタリングすることができる。該凝集アッセイはまた、PAR4アゴニストペプチド、PAR1アゴニストペプチド、ADP、またはトロンボキサンアナログ U46619により誘発される血小板凝集の阻害に対する化合物の選択性を試験するために、用いられ得る。PAR4アゴニストペプチドのアゴニスト活性を測定するための血小板凝集アッセイを実施例Gに示す。
【０２４０】
実施例Dはα-トロンビン誘発血小板凝集アッセイである。α-トロンビンはPAR1およびPAR4の両方を活性化する。本発明の選択的PAR4アンタゴニスト（すなわち、実施例3の化合物）の血小板凝集を阻害する能力を、標準的な光学的凝集測定器を用いて測定した。実施例3の化合物によるα-トロンビン誘発血小板凝集の阻害を、図1Aおよび1Bに示す。該データは、当分野で初めて、PAR4アンタゴニストのみが血小板凝集を効果的に阻害し得ることを示す。該PAR4アンタゴニストによる血小板阻害の程度は、PAR1アンタゴニストについて以前に記載されたものと、同等以上である。
【０２４１】
実施例Eは組織因子誘発血小板凝集アッセイである。該アッセイにおける条件は、血栓形成の間の生理的イベントを模倣する。該アッセイにおいて、ヒトPRPにおける血小板凝集を、組織因子およびCaCl2の添加により開始させた。組織因子（外因性凝固カスケードの阻害因子）はヒトのアテローム動脈動脈硬化プラークにおいて高く上昇している。アテローム動脈硬化部位での組織因子への血液の曝露は、トロンビンの着実な産生を引き起こし、閉塞性血栓の形成をもたらす。
【０２４２】
本発明のPAR4アンタゴニストの活性はまた、様々なin vivo アッセイにおいて測定され得る。抗血栓薬としての本発明のPAR4アンタゴニストの有効性を試験するための血栓および止血のモデルとなり得る哺乳動物の例としては、限定はされないが、モルモットおよび霊長類が挙げられる。関連する有効性モデルとしては、限定はされないが、電気によって誘発された頸動脈血栓症、FeCl3によって誘発された頸動脈血栓症および動静脈シャント血栓症が挙げられる。腎出血時間および他の出血時間測定のモデルを用いて、本発明に記載の抗血栓薬の出血のリスクを評価することができる。
【０２４３】
アッセイ
材料
1)PAR1およびPAR4アゴニストペプチド
SFFLRR(配列番号35)は、公知の高親和性PAR1選択的アゴニストペプチドである(参考文献:  Seiler, S.M., “Thrombin receptor antagonists”, Seminars in Thrombosis and Hemostasis, 22(3):223-232 (1996))。PAR4アゴニストペプチドAYPGKF(配列番号1)およびH-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)を合成した。示されたH-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)は、FLIPRアッセイ(EC50は、H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)については2.3 μM、AYPGKF(配列番号1)については61 μM)、および洗浄血小板凝集アッセイ(EC50は、H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)については0.86 μMおよびAYPGKF(配列番号1))において、AYPGKF(配列番号1)については13 μM）よりもPAR4アゴニスト活性を向上させた。
【０２４４】
2)PAR4発現細胞
PAR4を安定して発現するHEK293細胞は、ヒト F2R23 cDNA 発現ベクターのトランスフェクションの標準的な方法によってか、あるいは、Athersys Inc. (Cleveland, OH)からのRAGE技術によって産生され、mRNA発現のPAR4タンパク質発現に基づいて選択された。それらの細胞により、FLIPR（登録商標）(Fluorometric Imaging Plate Reader; Molecular Devices Corp.)を用いて、PAR4アゴニストペプチド-誘発細胞内カルシウム上昇に対する機能的応答が実証された。これらの細胞は、内在性PAR1を発現し、そして、PAR1アゴニストペプチドでの刺激によってカルシウムシグナルを誘発し得る。細胞を、Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)(Invitrogen, Carlsbad, CA), 10% FBS, 1% PSG, 3 μg/mlピューロマイシンおよび25 nMメトトレキサート)中において、5%CO2で37℃にて、増殖させた。
【０２４５】
3)多血小板血漿(PRP)の調製
ヒト血液を、3.8% クエン酸ナトリウム中に、9 mlの血液あたり1 mlの比率で、採取した。該多血小板血漿を、170 gにて14分間の遠心分離によって単離した。
【０２４６】
4)洗浄血小板(WP)の調製
ヒト血液を、ACD(85 mM クエン酸三ナトリウム, 78 mM クエン酸, 110 mM D-グルコース, pH 4.4)中に、10 mlの血液あたり1.4 mlの比率で、採取した。PRPを、170 gにて14分間の遠心分離によって単離し、血小板をさらに、1300 gにて6分間の遠心分離によってペレットにした。血小板を10 ml ACD（1 mg/mlウシ血清アルブミン含有）で1回洗浄した。血小板をタイロードバッファー(137 mM NaCl, 2 mM KCl, 1.0 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 5 mM グルコース, 20 mM HEPES pH 7.4)中に〜2.5X108/mlで再懸濁した。
【０２４７】
実施例A
PAR4発現HEK293細胞におけるFLIPRアッセイ
(アンタゴニスト活性についての試験)
本発明のPAR4アンタゴニストの活性を、FDSS6000(Hamamatsu Photonics, Japan)を用いて、fluo-4により、H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)-誘発細胞内カルシウム動員をモニタリングすることによって、PAR4発現細胞において試験した。アゴニスト活性およびPAR1アンタゴニスト活性のカウンタースクリーニングも実施した。手短に言えば、HEK293 EBNA PAR4 クローン 20664.1J 細胞を24時間播種した後、384ウェル, ポリ-D-リシンコート, 黒色, クリアボトムプレート(Greiner Bio-One, Monroe, NC)において実験を行った。細胞を、20 μl 増殖培地中に20,000細胞/ウェルで播種し、5%CO2で37℃にて、終夜、インキュベートした。アッセイ時に、培地を40 μl 1x ハンクス緩衝塩溶液(HBSS)(10 mM HEPES含有)で置き換え、20 μl 試験化合物も1X HBSSバッファーで希釈し、アゴニスト測定のために、様々な濃度および0.67% DMSO最終濃度にて、該FDSSに加えた。次いで、該細胞を室温で30分間インキュベートした後、該FDSSでのアンタゴニスト測定のための20 μlのアゴニストペプチドを加えた。PAR4アンタゴニストスクリーニング用のアゴニストペプチド H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)またはPAR1カウンタースクリーニング用のSFFLRRを、ルーチン的に試験して、該アッセイにおけるEC50での応答を確認した(H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)については〜2.3 μM、およびSFFLRRについては600 nM)。
【０２４８】
実施例B
PAR4アゴニストとしてのH-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)の検証
FLIPRアッセイにおいてH-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)はPAR4アゴニストであることを確認するために、〜180個の化合物のIC50値の対照比較を、AYPGKF(配列番号1)とH-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2を対比させることにより、実施した。その結果、該2つのアッセイ間の強い相関関係が実証された(スピアマンの順位相関係数 rho= 0.7760, p＜0.0001)。HEK293細胞におけるFLIPRアッセイの妥当性を、洗浄血小板アッセイとの直接的なアッセイ関連性によって確認した。AYPGKF FLIPRアッセイからの〜200個の化合物のIC50値は、AYPGKF洗浄血小板凝集アッセイからのものと強い相関関係にあった(スピアマンの順位相関係数 rho= 0.836, p＜0.001)。H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2を用いたFLIPRおよび洗浄血小板データを比較することによって同様の結果が得られた。
【０２４９】
実施例C
γトロンビン誘発血小板凝集アッセイ
(アンタゴニスト活性についての試験)
本発明の化合物のγ-トロンビンにより誘発された血小板凝集を阻害する能力を、96-ウェルマイクロプレート凝集アッセイ方式において試験した。手短に言えば、PRPまたは洗浄血小板懸濁液(100 μl)を、様々な濃度の化合物とともに、室温で5分間プレインキュベートした。〜10-50 nM γトロンビン(Haematologic Technologies, Essex Junction, VT)により凝集が開始し、毎日徐々に増量して、80%血小板凝集に達した。1 U/mLのレフルダン(Berlex, Montville, NJ)を該γトロンビンサンプルに加えて、残ったα-トロンビン混入によるPAR1活性化の誘発を防いだ。次いで、該プレートを、37℃のMolecular Devices (Sunnyvale, CA)製 SPECTRAMAX（登録商標） Plus プレートリーダーに入れた。該プレートを、最初の読み込みの前に10秒間、および各読み込みの間に50秒間振盪させた（405 nMで最大15分間）。データを、SOFTMAX（登録商標） 4.71ソフトウェアを用いて収集した。該プレートは、ODmaxを得るための未処理コントロールサンプルと、一方でODminを得るための血小板を含まないバッファーも含んでいた。血小板凝集は、100%凝集値について、ODminからODmaxを減じることにより決定された。実験サンプルにおいて、透過の実測値を最小値から減じた後、100%凝集値と比較して、凝集率を決定した。IC50値は、Excel Fit ソフトウェアを用いて決定される。
【０２５０】
また、凝集アッセイを用いて、他の血小板受容体に対する該化合物の選択性について、PAR1にはSFFLRR、コラーゲン受容体にはコラーゲン(Chrono-Log, Havertown, PA)、P2Y1およびP2Y12にはADP、ならびにトロンボキサン受容体にはU46619(Cayman-Chemical, Ann Arbor, MI)を用いることによって、試験した。
【０２５１】
実施例D
α-トロンビン誘発血小板凝集アッセイ
(アンタゴニスト活性についての試験)
PAR4アンタゴニストのα-トロンビンにより誘発される血小板凝集を阻害する能力を、ヒト洗浄血小板を用いて試験した。実施例3を、洗浄血小板とともに20分間プレインキュベートした。1000 rpmの撹拌スピードにて、1.5 nM α-トロンビン(Haematologic Technologies, Essex Junction, VT)を300 μlの洗浄血小板に加えることにより、凝集を開始させた。血小板凝集を、光学的凝集測定器(Chrono-Log, Havertown, PA)を用いてモニタリングし、6分にて曲線下面積(AUC)を測定した。IC50を、0%阻害としてビヒクルコントロールを用いて算出した。実施例3による血小板凝集の阻害についてのIC50は、5 nM(n=3)であると算出された(図1Aおよび1B)。
【０２５２】
実施例E
組織因子-誘発血小板凝集アッセイ
(アンタゴニスト活性についての試験)
PAR1もしくはPAR4アンタゴニストの外因性トロンビンにより誘発される血小板凝集を阻害する能力を、組織因子誘発凝集アッセイにおいて試験することができる。凝集を、CaCl2およびリコンビナントヒト組織因子（血漿中の凝固経路を活性化させることによってトロンビンを産生させる）を加えることにより開始させる。また、抗凝固薬、例えば、50 μg/mlのトウモロコシトリプシンインヒビター（corn trypsin inhibitor）(Haematologic Technologies, Essex Junction, VT)およびPEFABLOC（登録商標） FG(Centerchem, Norwalk, CT)も、研究期間中のフィブリン塊形成を防ぐために加える。血小板凝集を、標準的な装置（光学的凝集測定器またはインピーダンス式凝集測定器を含む）を用いてモニタリングする。
【０２５３】
実施例F
以下の表は、FLIPRアッセイおよび血小板凝集アッセイ(PRPアッセイ)で試験した様々な本発明の化合物を用いて得られた結果を示す。上記の通り、該FLIPRアッセイ（in vitro アッセイ）によって、試験した化合物のPAR4アンタゴニスト活性が評価される（実施例Aに記載の通り）。PRPアッセイ（in vitro アッセイ）によって、血漿タンパク質およびトロンビンアゴニストの存在下における試験した化合物のPAR4アンタゴニストアッセイが評価される（実施例Cに記載の通り）。
【表２７】
2015516983.tif 000195
【０２５４】
実施例G
PAR4アゴニストペプチド誘発血小板凝集アッセイ
(PAR4アゴニストペプチドのアゴニスト活性についての試験)
本発明の化合物の血小板凝集を誘発する能力を、96-ウェルマイクロプレート凝集アッセイ方式で試験した。手短に言うと、様々な濃度のアゴニスト化合物との洗浄血小板懸濁液をアッセイした。滴定濃度の（titered）試験アゴニストペプチドを加えることにより、凝集を開始させた。その後、該プレートを、37℃のMolecular Devices製のSPECTRAMAX（登録商標） Plus プレートリーダー(Sunnyvale, CA)に入れた。該プレートを、最初の読み込みの前に10秒間、および各読み込みの間に20秒間振盪させた（405 nMで最大15分間）。データを、SOFTMAX（登録商標） 4.71ソフトウェアを用いて集めた。該プレートは、ODmaxを得るための未処理コントロールサンプルと、一方でODminを得るための血小板を含まないバッファーも含んでいた。血小板凝集は、100%凝集値について、ODminからODmaxを減じることにより決定された。実験サンプルにおいて、透過の実測値を最小値から減じた後、100%凝集値と比較して、凝集率を決定した。ED50値は、Excel Fit ソフトウェアを用いて決定される。
【０２５５】
実施例H
PAR4-発現HEK293細胞におけるFLIPRアッセイ
(PAR4アゴニストペプチドのアゴニスト活性についての試験)
本発明の該PAR4アゴニストペプチドの活性を、FDSS6000(Hamamatsu Photonics, Japan)を用いて、fluo-4により、PAR4-誘発細胞内カルシウム動員をモニタリングすることによって、PAR4発現細胞において試験した。手短に言うと、ヒトPAR4を発現するHEK293細胞を24時間播種した後、96ウェルまたは384ウェル, ポリ-D-リシンコート, 黒色, クリアボトムプレート(Greiner Bio-One, Monroe, NC)において実験を行った。細胞を、40,000細胞/ウェル(96ウェル)または20,000細胞/ウェル(384ウェル)にて播種し、5%CO2で37℃にて、終夜、インキュベートした。アッセイ時に、96ウェルまたは384ウェルアッセイの各々について、培地を1x ハンクス緩衝塩溶液(HBSS)(10 mM HEPES含有)で置き換えた。次いで、該細胞を室温で30分間インキュベートした後、該FDSSでの測定のために様々な濃度のアゴニストペプチドを加えた。
【０２５６】
実施例I
以下の表は、実施例GおよびHにおいて上述された方法を用いていくつかのペプチドを評価して得られた結果を示す。
【表２８】
2015516983.tif 000196
【０２５７】
PAR4アゴニストペプチドの合成
実施例AA
Advanced ChemTech Model 90 SynthesizerおよびAdvanced ChemTech Model 396Ω Multiple Peptide Synthesizerを用いたペプチドの固相ペプチド合成
ペプチド-レジン Fmoc-Pro-Gly-Lys(Boc)-Phe-リンクアミドMBHAレジンを、以下の方法を用いて調製した。Fmoc-リンクアミドMBHAレジン(6.3 g, 0.66 mmol/g, 合計4.16 mmol)を200 mLの反応器に入れ、Advanced ChemTech Model 90 Synthesizerに設置した。レジンを以下のサイクルで処理した:
1.            DMF洗浄, 1 x 60 mL x 2分
2.            20%ピペリジン／DMF, 1 x 60 mL x 5分
3.            20%ピペリジン／DMF, 1 x 60 mL x 15分
4.            DMF洗浄, 4 x 60 mL x 1分
5.            NMP洗浄, 4 x 60 mL x 1分
6.            カップリング(下記参照)
7.            NMP洗浄, 4 x 60 mL x 1分
【０２５８】
下記表中の試薬を用いてカップリングを実施した。Fmoc-AAおよびHCTUをNMP/DCM 3:1(45 mL)中に溶解させた。ここに、撹拌しながらDIEAを加えた。次いで、得られた溶液を脱保護されたレジンに加え、Kaiserニンヒドリン試験で陰性が得られるまで、1〜3.5時間混合した。
【表２９】
2015516983.tif 000197
【０２５９】
Fmoc基を、上記の工程2〜5を用いて、Pro残基から除去した。Pro-Gly-Lys(Boc)-Phe-リンクアミドMBHAレジンを、NMP/DCM 1:1(200 mL)に懸濁させ、2 mLの該懸濁液を、Advanced ChemTech Model 396Ω multiple peptide synthesizer上の88個のウェルに加えた。各ウェルに、DMF溶液(0.5 mL)中の0.3 M Fmoc-AA/0.3 M HOAtを加え、次いで0.2 mLの0.77 M DIC／DMFを加えた。該反応ブロックを25時間ボルテックスした。該ペプチジル-レジンを洗浄し、以下の通り脱保護した。
【０２６０】
Fmoc-アラニンまたは適切なFmoc-AAを、上記の通りペプチジル-レジンに結合させた後、上記の通り、洗浄し、Fmoc保護基を除去した。NMP次いでDCM（両者とも4 x 2 mL x 1分）で最終的な洗浄を行い、その後、該ペプチジル-レジンを10分間窒素でパージした。
【０２６１】
a.切断/脱保護
目的のペプチドを、TFA切断混合液で以下の通り処理することにより、それらの各ペプチジル-レジンから、切断/脱保護した。TFA/水/トリ-イソプロピルシラン(96:2:2)(1.0 mL)溶液を反応ブロック中の各ウェルに加え、次いで、それを30分間ボルテックスルした。これをもう一度繰り返し、該ウェルからのTFA溶液を、予め風袋の重量を測定したバイアル（該反応器の底に96-バイアルブロックに一致するように位置する）中に陽圧によって集めた。該バイアルを、該混合物（cocktail）との総接触時間が80分であるように、静置させた。該バイアルをSPEEDVAC（登録商標）(Savant)で約1.0 mLの体積まで濃縮した後、それをジイソプロピルエーテル(10 mL)に加え、短時間振盪させた。該バイアルを15℃で1時間保持した。沈殿物を遠心分離によってペレットにし、上清をデカントした。該バイアルをSPEEDVAC（登録商標）(Savant)で30分間乾燥させて、クルードなペプチドを、典型的には＞100% 収率(20-40 mg)で得た。該クルードなペプチドを水(2.5 mL)およびアセトニトリル(0.5 mL)中にそのまま溶解させ、バイアル中に濾過した。溶媒をSPEEDVAC（登録商標）(Savant)で除去してクルードなペプチドを得て、それをそのまま用いた。
【０２６２】
b.該ペプチドのHPLC分析
上記の通りプレパラティブHPLCによって精製した後、各ペプチドを、島津LC-10ADもしくはLC-10AT分析HPLCシステム（SCL-10Aシステムコントローラ、SIL-10Aオートインジェクタ、SPD10AVもしくはSPD-M6A UV/VIS検出器、またはSPD-M10Aダイオードアレイ検出器で構成される）にて、分析RP-HPLCにより分析した。以下の方法のうちの1つを用いた: PHENOMENEX（登録商標） Luna C18(2) 5 μm (4.6 x 50 mm)カラムを用い、以下のグラジエント: 10分かけて10-100%B／A, 1.25 mL/分を用いて溶出を行った（移動相A: 0.1% TFA/水; 移動相B: 0.1% TFA/アセトニトリル）。
【０２６３】
c.質量分析によるキャラクタリゼーション(下記を参照)
実施例BB
Advanced ChemTech Model 396Ω Peptide Synthesizerでのペプチドの同時固相ペプチド合成
リンクアミドレジン(0.6 mmol/g置換の0.6822 g)をDMF/DCM 1:1中で膨潤させた(最終体積 8 mL)。該レジン懸濁液を該反応ブロック中の8ウェルに分配した(1 mL／ウェル)。次いで、該Fmoc基を、2つの処理（5および15分、各々、20% ピペリジン／DMF(1 mL／処理)）によって除去した。該レジンをNMP(10 x 1.5 mL x 1分)で洗浄した。0.31 M 溶液のFmoc-アミノ酸および0.31 M 6-Cl-HOBt／NMP(1 mL)を、レジン、次いで0.78 M DIC／NMP溶液(0.4 mL)に加えた。該レジンを2時間ボルテックスした後、該レジンをドレインし、NMP(7 x 1.5 mL x 1分)で洗浄した。このサイクルを、予めプログラムされた配列合成テーブルによって決定される通りに各ペプチド配列を組み立てるために必要な自動カップリングサイクル数まで、繰り返した。
【０２６４】
典型的な0.05 mmol/ウェル ペプチド同時合成で用いられる詳細な段階的合成プロトコールを以下に記載する。このプロトコールは、個々の実行あたり4〜96の範囲の多くのアナログの同時合成に適していた。
【０２６５】
PAR4アゴニストペプチドの自動合成
【化１６５】
2015516983.tif 000198
合成を開始する前に、以下の試薬溶液を調製し、必要に応じて装置に設置した:20%ピペリジン／DMF; 0.78 M DIC／NMP。必要なFmoc-保護アミノ酸を、0.31 M 6-Cl-HOBt/NMP中の0.31 M 溶液として調製し、32-ポジションのアミノ酸ラックの適切な位置に設置した。
【０２６６】
最終的に、該Fmoc基を上記の通り20%ピペリジン／DMFで除去し、該ペプチジル-レジンをNMP(3 x 1.5 mL)およびDCM(6 x 1.5 mL)で洗浄した。
【０２６７】
a.切断/脱保護
目的のペプチドを、以下の通り、TFA切断混合液での処理により、それらの各ペプチジル-レジンから切断/脱保護した。TFA/水/トリ-イソプロピルシラン(96:2:2)(1.0 mL)溶液を反応ブロックの各ウェルに加えた後、それを30分間ボルテックスした。これをさらに2回繰り返し、該ウェルからのTFA溶液を、予め風袋の重量を測定したバイアル（該反応器の底に96-バイアルブロックに一致するように位置する）中に陽圧によって集めた。該バイアルをSPEEDVAC（登録商標）(Savant)で約0.2 mLの体積まで濃縮した。次いで、該クルードなペプチドを、ジイソプロピルエーテル(4 mL)を加え、短時間ボルテックスすることによって沈殿させた。該沈殿物を遠心分離によってペレットにし、上清をデカントした。バイアルをSPEEDVAC（登録商標）(Savant)で乾燥させて、クルードなペプチドを、典型的には＞100%収率(20-40 mg)で得た。該クルードなペプチドを2 mLの水に直接溶解させ、完全に溶解させるために必要に応じてアセトニトリルを加えた。該ペプチドをプレパラティブHPLCにより精製した。
【０２６８】
b.クルードなペプチドのプレパラティブHPLC精製
プレパラティブHPLCを、Waters Model 4000または島津 Model LC-8A液体クロマトグラフのいずれかにおいて実施した。クルードなペプチドの各溶液をYMC S5 ODS-A(250 x 20 mm)カラムに注入し、MeCN／水（両者とも0.1%TFAで緩衝）の直線グラジエントを用いて溶出した。用いた典型的なグラジエントは、流速 15 mL/分で40分かけて0%〜50% 0.1%TFA/MeCN／0.1%TFA/水（217 nmにて溶出物をUV検出）であった。画分(5〜10 mL)をフラクションコレクターで集めた。HPLCおよびMS分析による判定で目的のペプチドを含む画分をプールし、凍結乾燥させてアモルファスな白色の粉末を得た。
【０２６９】
c.精製ペプチドのHPLC分析
上記の通りプレパラティブHPLCにより精製した後、各ペプチドを、島津LC-10ADまたはLC-10AT分析HPLCシステム（SCL-10Aシステムコントローラ、SIL-10Aオートインジェクタ、SPD10AVもしくはSPD-M6A UV/VIS検出器、またはSPD-M10Aダイオードアレイ検出器で構成される）での分析RP-HPLCにより分析した。以下の方法のうちの1つを用いた: メソッドA; A YMC ODS-AQ S3 (4.6 x 150 mmカラムを用い、以下のグラジエント: 30分かけて0-60% B／A, 1.0 mL/分、を用いて溶出を行った; メソッドB; A YMC ODS-AQ S3 (4.6 x 150 mm)カラムを用い、以下のグラジエント: 60分かけて0-60% B／A, 1.0 mL/分、を用いて溶出を行った（移動相A: 0.1%TFA/水; 移動相B: 0.1%TFA/アセトニトリル）。
【０２７０】
d.質量分析によるキャラクタリゼーション
各ペプチドを、エレクトロスプレー質量分析(ES-MS)により、フローインジェクションまたはLC/MSモードのいずれかにおいて、キャラクタライズした。Finnigan SSQ7000 シングル四重極質量分析計(ThermoFinnigan, San Jose, CA)を、陽および陰イオンエレクトロスプレーモードにおける全ての分析において用いた。フルスキャンデータを、300〜2200 amuの質量範囲にわたって、スキャン時間 1.0秒で得た。該四重極子をユニット分解能で作動させた。フローインジェクション分析のために、該質量分析計をWaters 616 HPLC ポンプ(Waters Corp., Milford, MA)に接続し、また、該質量分析計にHTS PALオートサンプラー(CTC Analytics, Zwingen, Switzerland)を備え付けた。サンプルを、50:50 水:アセトニトリル（0.1% 水酸化アンモニウム含有）を含む移動相中に注入した。該分析における流速は0.42 mL/分であり、注入量は6 μlであった。LC/MS分析について、ThermoSeparations Constametric 3500 液体クロマトグラフ(ThermoSeparation Products, San Jose, CA)およびHTS PAL オートサンプラーを用いた。クロマトグラフィー分離を、Luna C18, 5 ミクロンカラム, 2 x 30 mm (Phenomenex, Torrance, CA)を用いて行った。エレクトロスプレー接続部（interface）への流量が400 μl/分であるように、該分析における流速を1.0 mL/分とし、そしてカラム溶出物を分けた。4分かけて0%〜100% B／Aの直線グラジエントを実行した（ここで、移動相Aは98:2 水:アセトニトリル（10 mM 酢酸アンモニウム含有）であって、移動相Bは10:90 水:アセトニトリル（10 mM 酢酸アンモニウム含有）であった）。UV応答を220 nmでモニタリングした。サンプルを200 μlの50:50 H2O:MeCN(0.05% TFA)中に溶解させた。注入量は5 μlであった。
【０２７１】
全てのケースにおいて、実験的に測定された重量は、モノアイソトピック分子量の計算値である0.5ダルトン以内であった。
【０２７２】
実施例CC
H-Ala-Phe(4-F)-Pro-Gly-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-Gly-NH2(配列番号3)の合成
配列番号3のペプチドを、Advanced ChemTech Model 90 Peptide Synthesizerを用いて、固相合成により合成した。各カップリングサイクルは以下の工程を含んでいた:
1.20%ピペリジン／DMF 1 x 30 mL x 5分
2.20%ピペリジン／DMF 1 x 30 mL x 15分
3.NMP洗浄: 8 x 30 mL x 1分
4.適切なFmoc-アミノ酸のカップリング
5.DMF洗浄: 4 x 30 mL x 1分
【０２７３】
Fmoc-Gly-OHのシーバーアミドレジンへのカップリング
シーバーアミドレジン(4.02 g, 0.66 mmol/g)をDMF(1 x 40 mL x 5分)で洗浄し、Fmoc基を上記工程1〜3を用いて除去した。NMP(18 mL)中のFmoc-Gly-OH(1.58 g, 5.31 mmol)およびHCTU(2.62 g, 6.33 mmol)の溶液に、DIEA(1.68 g, 13.0 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスした後、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を反応器に加え、該混合液を合計3時間混合した。次いで、該レジンをDMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄し、10%無水酢酸／DCM(1 x 60 mL)で処理し、DCM(4 x 30 mL x 1分)で洗浄した。該レジンを、終夜、減圧乾燥させた。レジンの収量は4.40 gであった。該レジンのサンプルを、Fmoc定量方法で処理した(Green et al., Tetrahedron, 49(20):4141-4146 (1993))。置換は、0.60 mmol/gであると決定された。レジン上の総mmolは2.64 mmolであった。
【０２７４】
Fmoc-Asn(Trt)-OHのカップリング
該レジンをDMF(1 x 40 mL x 5分)で洗浄した後、上記の通りに処理して、Fmoc基を除去した。NMP(18 mL)中のFmoc-Asn(Trt)-OH(3.17 g, 5.31 mmol)およびHCTU(2.63 g, 6.36 mmol)の溶液に、DIEA(1.68 g, 13.0 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスし、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を該反応器に加え、全体を4時間混合させた後、DMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。該ペプチド-レジンのKaiserニンヒドリン試験は陰性であった。
【０２７５】
Fmoc-Lys(Boc)-OHのカップリング
該Fmoc基を上記の通り除去した。NMP(18 mL)中のFmoc-Lys(Boc)-OH(2.50 g, 5.34 mmol)およびHCTU(2.66 g, 6.43 mmol)の溶液に、DIEA(1.68 g, 13.0 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスし、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を該反応器に加え、該混合液を合計3時間混合した。次いで、該ペプチド-レジンをDMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。該ペプチド-レジンを10% 無水酢酸／DCMで20分間処理した後、DCM(6 x 30 mL x 1分)で洗浄した。
【０２７６】
Fmoc-Val-OHのカップリング
該ペプチド-レジンをDMF(1 x 30 mL x 5分)で洗浄し、該Fmoc基を上記の通り除去した。NMP(18 mL)中のFmoc-Val-OH(1.81 g, 5.33 mmol)およびHCTU(2.64 g, 6.38 mmol)の溶液に、DIEA(1.63 g, 12.6 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスし、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を該反応器に加え、該混合液を4時間混合した後、DMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。
【０２７７】
Fmoc-Leu-OHのカップリング
該ペプチド-レジンをDMF(1 x 30 mL x 5分)で洗浄し、該Fmoc基を上記の通り除去した。NMP(18 mL)中のFmoc-Leu-OH(1.87 g, 5.29 mmol)およびHCTU(2.66 g, 6.43 mmol)の溶液に、DIEA(1.71 g, 13.2 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスし、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を該反応器に加え、該混合液を2.5時間撹拌した後、DMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。
【０２７８】
Fmoc-Trp(Boc)-OHのカップリング
該Fmoc基を上記の通り除去した。NMP(18 mL)中のFmoc-Trp(Boc)-OH(2.80 g, 5.32 mmol)およびHCTU(2.66 g, 6.43)の溶液に、DIEA(1.67 g, 12.92 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスし、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を該反応器に加え、該混合液を1時間混合した。レジンのサンプルをKaiserニンヒドリン試験で2回処理し、その結果は両ケースとも陽性であった。次いで、該ペプチド-レジンをDMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。該ペプチド-レジンのサンプル(〜4 mg)を、TFA/TIS/H2O 96:2:2(1 mL)を用いて、1時間、切断/脱保護した。単離された生成物によって、カップリングは大部分が不完全であることが示された。
【０２７９】
NMP(30 mL)中のFmoc-Trp(Boc)-OH(7.00 g, 13.29 mmol)および6-Cl-HOBt(2.21 g, 13.03 mmol)の溶液に、DIC(1.69 g, 13.39 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスした後、脱保護されたレジンに加えた。DCM(10 mL)を該反応器に加え、全体を16時間混合した後、DMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。該ペプチド-レジンのサンプルはKaiserニンヒドリン試験で陰性を示した（カップリングの完了を示唆する）。
【０２８０】
Fmoc-Gly-OHのカップリング
該Fmoc基を上記の通り除去した。Fmoc-Gly-OH(1.60 g, 5.38 mmol)およびHCTU(2.66 g, 6.43 mmol)の溶液に、DIEA(1.65 g, 12.77 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスした後、脱保護されたレジンに加えた。DCM(10 mL)を該反応器に加え、該混合液を4時間混合した後、DMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。該ペプチド-レジンのサンプルはKaiserニンヒドリン試験で陽性を示した。
【０２８１】
NMP(18 mL)中のFmoc-Gly-OH(2.36 g, 7.94 mmol)および6-Cl-HOBt(1.36 g, 8.02 mmol)の溶液に、DIC(1.02 g, 8.08 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスした後、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を該反応器に加え、該混合液を80分間混合した。該ペプチド-レジンのサンプルはKaiserニンヒドリン試験で陰性を示した。該ペプチド-レジンをDMF(4 x 30 mL x 1分)で洗浄した。
【０２８２】
Fmoc-Pro-OHのカップリング
該Fmoc基を上記の通り除去した。NMP(18 mL)中のFmoc-Pro-OH(2.71 g, 8.03 mmol)および6-Cl-HOBt(1.37 g, 8.08 mmol)の溶液に、DIC(1.02 g, 8.08 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスした後、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を該反応器に加え、該混合液を4時間混合した後、DMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。該ペプチド-レジンのサンプルはKaiserニンヒドリン試験で陰性を示した。
【０２８３】
Fmoc-Phe(4-F)-OHのカップリング
該Fmoc基を上記の通り除去した。NMP(18 mL)中のFmoc-Phe(4-F)-OH(1.83 g, 4.51 mmol)および6-Cl-HOBt(0.78 g, 4.60 mmol)の溶液に、DIC(0.57 g, 4.52 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスした後、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を該反応器に加え、該混合液を20時間混合した。次いで、該ペプチド-レジンをDMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。該ペプチド-レジンのサンプル(〜4 mg)をTFA/TIS/H2O 96:2:2(1 mL)で1時間処理した。単離された生成物によってカップリングの完了が示された。
【０２８４】
Boc-Ala-OHのカップリング
該Fmoc基を上記の通り除去した。NMP(18 mL)中のBoc-Ala-OH(1.50 g, 7.93 mmol)および6-Cl-HOBt(1.34 g, 7.90 mmol)の溶液に、DIC(1.02 g, 8.08 mmol)を加えた。得られた溶液を短時間ボルテックスした後、脱保護されたレジンに加えた。DCM(6 mL)を該反応器に加え、該混合液を16時間混合した。次いで、該ペプチド-レジンをDMFおよびDCM(両者とも4 x 30 mL x 1分)で連続的に洗浄した。該ペプチド-レジンのサンプルをKaiserニンヒドリン試験で処理し、陰性の結果を得た（カップリングの完了を示唆する）。
【０２８５】
レジンからの切断および脱保護
該ペプチド-レジンを、DMFを用いて、ACT 90 反応器から250 mL 手動反応器に移した。該ペプチド-レジンをDCM(6 x 40 mL x 1分)で洗浄した後、TFA/TIS/水 96:2:2(1 x 40 mL x 20分および2 x 15 mL x 20分)、次いでDCM(1 x 30 mL x 20分)で処理した。濾液を連続的に集め、合わせた後、減圧により濃縮した。得られた残渣をジイソプロピルエーテル(75 mL)でトリチュレートし、沈殿物を濾過により集め、ジイソプロピルエーテル(2 x 10 mL)で洗浄し、減圧乾燥させて、クルードなペプチド(3.58 g)を得た。該クルードなペプチドの分析によって、Nim-COOH Trpの存在が示された。それ故に、該ペプチドを2% 酢酸／水(50 mL)に溶解させ、得られた溶液を室温で1時間静置した。該ペプチド溶液を濾過し、凍結させ、凍結乾燥させて、目的のクルードなペプチド(3.16 g)を得た。
【０２８６】
プレパラティブHPLC
プレパラティブHPLCを、Waters Model 4000 プレパラティブHPLCにおいて実施した。該クルードなペプチドを、PHENOMENEX（登録商標） Luna C18(2) 5 μm 250 x 30 mm カラムに注入し、流速 15 mL/分にて60分かけて10%B〜40%Bの直線グラジエントを用いて溶出した（溶出物を217 nmにてUV検出）。バッファーAは0.1% TFA／水であった。バッファーBは0.1% TFA／MeCNであった。3回のプレパラティブHPLC実行からの目的の生成物を含む画分をプールし、減圧により濃縮し、凍結させて凍結乾燥し、1.68 gの精製ペプチドを得た。目的のペプチドを含むが純度が不十分である画分を合わせて、濃縮し、凍結させて凍結乾燥させた。これらをさらに上記の通り精製し、1.68 gの精製ペプチドを合わせて、2.20 gの最終ペプチドを得た(分析HPLCによると99%純粋)。
【０２８７】
実施例DD
上記の方法を用いて以下のペプチドを合成した:
【表３０】
2015516983.tif 000199
【図１】
2015516983.tif 000200
【図２】
2015516983.tif 000201
【配列表】
2015516983000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年12月18日(2014.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2015516983000001.app
【国際調査報告】
2015516983.tif 000202
2015516983.tif 000203
2015516983.tif 000204