(57)【要約】【課題】紫外線による色素沈着を簡便に有効に抑制し、しかも安全な経口組成物を提供することを課題とする。【解決手段】エンテロコッカス属に属する微生物の菌体を含有させることによって、簡便で有効に色素沈着を抑制するための経口組成物を提供できる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンテロコッカス属に属する微生物の菌体又はその処理物を含有する色素沈着抑制用経口組成物。
【請求項２】
菌体の処理物が、菌体を溶菌酵素で処理して得られたものであることを特徴とする請求項１に記載の色素沈着抑制用経口組成物。
【請求項３】
溶菌酵素が、アクチナーゼ、ザイモリエース、キタラーゼ、リゾチーム、ムタノシリン、アクロモペプチターゼから選ばれる１種または２種以上の溶菌酵素であることを特徴とする請求項１〜２のいずれかの項に記載の色素沈着抑制用経口組成物。
【請求項４】
エンテロコッカス属に属する微生物の菌体又はその処理物からなる色素沈着抑制剤。  
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な色素沈着抑制剤及び色素沈着抑制用経口組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の色は年齢、季節、部位によっても、さらには健康状態やストレスなどの情動によっても変化する。外観上の皮膚色は、メラニン、カロチン、酸化ヘモグロビン、還元ヘモグロビンなどの色素が反映されているが、なかでも表皮内のメラニン量の影響を大きく受け、メラニン量が多いと色黒になる。また、皮膚は外界からの有害な刺激を防御する機能も有し、たとえば、紫外線の照射を受けると、皮膚はメラノサイトの数を増加させるとともに、メラノサイトのメラニン合成活性を高め、メラニンによる有害な紫外線に対する防御能力を高めようとする。その結果、皮膚上には局所的なメラニンの沈着が生じ、肌の黒化が促進される。このような色素沈着として、しみ、そばかす、老人性色素斑等が知られている。これらの色素沈着の発生機序は、いまだ不明な点も多いが、紫外線が直接の原因であったり増悪因子となったりすることが知られている。そのため、色素沈着に対しては、日常的な紫外線防御が有効な対策であると言われている。
【０００３】
その対策としては、紫外線吸収繊維衣服の着用や紫外線を遮断するサンスクリーン剤（日焼け止め化粧料）などが使用されている。しかしながら、衣服の着用では露出部分のケアが十分にできず、また、日焼け止め化粧料では日光照射される部分を隈なく塗布することは容易でなく、これらのみでは、全身に浴びる紫外線を有効に遮断することはできなかった。これに対し、内服剤や食品などの経口用組成物は、服用するだけで全身にわたり色素沈着に対し簡便かつ有効なスキンケアが提供でき、しかも、肌が敏感な人や皮膚病を伴なう人であっても使用することができるという利点がある。
【０００４】
色素沈着を抑制する方法としては、クラブリジンとニコチン酸を含有する皮膚化粧料が紫外線等の外的刺激で生じる炎症や色素沈着を防止すること（特許文献１）、イソフラボン誘導体を配合した美白用食品がＵＶ照射による黒化に対する予防効果を有していること（特許文献２）が知られている。しかしながら、いずれの方法によっても、経口用組成物とした場合の有効性や安全性の面で十分とはいえなかった。
【０００５】
ところで、エンテロコッカス属に属する微生物は、一般的に腸球菌とも呼ばれ、粘膜免疫および消化吸収に係わる最大の器官である腸に常在している代表的な微生物である。エンテロコッカス属に属する微生物は様々な効果を有し、その菌体を溶菌酵素で処理した後、熱処理したものは抗アレルギー剤やカンジタ症の治療剤として知られており、経口投与においても安全性が確認されているものである（特許文献３、特許文献４）。
【０００６】
【特許文献１】特許３１１０７１３号公報
【特許文献２】特開平１１−２６９０６６号公報
【特許文献３】特許第３０４０７４４号公報
【特許文献４】特許第２９６９０１７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、紫外線による色素沈着を手軽に効果的に抑制して皮膚を白く保ち、しかも安全性の点でも優れている色素沈着抑制用経口組成物並びに色素沈着抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記目的を達成すべく鋭意研究した結果、全く意外にもエンテロコッカス属に属する微生物の菌体を含有する経口組成物が、紫外線誘発による色素沈着を抑制することを見出し、発明を完成させるに至った。
【０００９】
本発明はかかる知見に基づいて開発されたものである。
すなわち、本発明は下記（１）〜（４）に掲げる色素沈着抑制用の経口組成物及び色素沈着抑制剤である：
（１）エンテロコッカス属に属する微生物の菌体又はその処理物を含有する色素沈着抑制用経口組成物、
（２）菌体の処理物が、菌体を溶菌酵素で処理して得られたものであることを特徴とする（１）に記載の色素沈着抑制用経口組成物、
（３）溶菌酵素が、アクチナーゼ、ザイモリエース、キタラーゼ、リゾチーム、ムタノシリン、アクロモペプチターゼから選ばれる１種または２種以上の溶菌酵素であることを特徴とする（１）または（２）に記載の色素沈着抑制用経口組成物、
（４）エンテロコッカス属に属する微生物の菌体又はその処理物からなる色素沈着抑制剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の経口組成物を内服することによって、紫外線を浴びることによって生じる肌の色素沈着が抑制され、全身にわたって簡便かつ安全に対処することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明に用いられるエンテロコッカス属に属する微生物としては、エンテロコッカス属に属する微生物であればよく、例えば、エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）等の細菌が挙げられる。エンテロコッカス属に属する微生物は、一般的に腸球菌と呼ばれることもある。上記微生物は、ＡＴＣＣ、ＩＦＯ、ＪＣＭなどの国内、国際分譲機関から取り寄せることが可能である。これらの微生物は、食品中に一般的に存在している細菌、または食品製造に用いられる細菌、もしくは健常者の糞便から分離した細菌であることから、副作用の危険性はない。また、培養により容易に大量に得ることができるため、培養して得られた菌体を用いると生産コストが安く経済的である。有用な微生物としては、細胞壁の構成から、エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）が好ましく、特に有用な微生物は、健常者の糞便から分離された菌株であるエンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）ＮＦ−１０１１株である。当該菌株は工業技術院微生物工業研究所の微工研菌寄託第12564号として寄託されている。当該菌株の菌学的（形態学的、生化学的及び血清学的）性状は、特許文献４に記載している。
【００１２】
本発明に用いられるエンテロコッカス属に属する微生物の菌体としては、上記微生物から得られる菌体であればよく、１種または２種以上の菌体を合わせて用いる事ができる。本発明に用いられる菌体を得る方法の一例を書き記すが、これに特に限定されるものではない。上記微生物を、適量の滅菌ロゴザ液体培地に摂取し、３５〜３７℃にて１０〜１６時間好気的に静置培養し、前培養液を得る。これを１０リットルの滅菌ロゴザ液体培地に加え同様に静置培養する。得られた培養液は遠心分離操作を行い、生菌体を沈殿物として得る。生菌体を生理食塩水等の等張液で数回洗浄し、同様に遠心分離して菌体を得ることができる。菌体は、さらに、生理食塩水等の等張液に懸濁して菌体液として用いてもよいし、また、凍結乾燥法等によって乾燥して用いてもよい。
【００１３】
さらに、本発明において、菌体の細胞壁を完全にあるいは部分的に破壊し、少なくとも１以上の細胞内成分を放出させた菌体の処理物を用いることが出来る。本発明に用いられる菌体の処理物としては、菌体を熱、物理的力、または溶菌酵素などによって処理したものが挙げられる。熱による破壊処理の場合には、菌体懸濁液を１００℃以上で数分以上加熱すればよいが、破壊効率を考えるとオートクレーブ処理ができる温度（１１０℃〜１２５℃）が望ましい。例えば、１１０℃で１０分間加熱処理して菌体の処理物を得ることができる。また、物理的力による破壊処理の場合、超音波処理、フレンチプレスなどの物理的な方法を用いて、細胞壁を破壊して処理物を得ることもできる。さらに、溶菌酵素による溶菌処理の場合には、菌体を溶菌有効量の酵素によって処理する事により得ることができる。特に、高い破壊効率が得られるため酵素処理が好ましい。また、上記の処理方法はそれぞれ組み合わせて用いることも出来る。
【００１４】
本発明に用いられる溶菌酵素としては、エンテロコッカス属に属する微生物の菌体の細胞壁を完全にあるいは部分的に破壊できる酵素であればよく、例えば、アクチナーゼ、ザイモリエース、キタラーゼ、リゾチーム、ムタノシリン、アクロモペプチターゼなど細菌類を溶菌するために普遍的に用いられているものであれば、種類を問わない。また、２種類以上の酵素を同時にあるいは別々に用いることも可能である。エンテロコッカス属に属する微生物の菌体に対する処理の方法は、溶菌酵素の種類により異なるが、例えば、アクチナーゼを用いる場合、菌体懸濁液にアクチナーゼを終濃度０．０１〜１ｍｇ／ｍｌとなるよう添加し、３０〜４０℃で１〜１０時間処理すればよく、溶菌処理の条件は適宜選択することが出来る。さらに、より破壊度を高めるために、酵素処理前後に熱処理や物理的な力による破壊処理を加えても良い。熱処理条件としては、１００℃以上であればかまわないが、抽出効率を考えるとオートクレーブ処理ができる温度（１１０℃〜１２５℃）が望ましく、また、超音波処理、フレンチプレスなどの物理的な方法も適宜組み合わせて、さらに細胞壁を破壊することもできる。
【００１５】
本発明の経口組成物におけるエンテロコッカス属に属する微生物の菌体又はその処理物の含有量はその使用形態により適宜選択することができるので特に限定されない。経口組成物中に菌体又はその処理物を有効量配合すればよいが、組成物の重量に対して菌体又はその処理物を乾燥重量で、通常、０．００１〜６０％、好ましくは０．０１〜４０％、特に好ましくは０．１〜３０％の比率で配合できる。
【００１６】
本発明の経口組成物の剤形は、特に限定されず、適宜公知の剤形に調製することができる。有効成分である菌体またはその処理物を必要に応じて濃縮状態とすることにより、多量の菌体またはその処理物であっても投与可能な剤形に調製することができる。組成物の用途に応じて、食品、医薬品に通常使用される剤形をとることができ、通常、固形剤、半固形剤または液剤であり、好ましくは固形剤または液剤である。具体的には、錠剤（口腔内側崩壊錠、咀嚼可能錠、発泡錠、トローチ剤、ゼリー状ドロップ剤などを含む）、丸剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、ドライシロップ剤、液剤（ドリンク剤、懸濁剤、シロップ剤を含む）、ゼリー剤などの公知の形態をとることができ、好ましくは錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、液剤である。
【００１７】
本発明の経口組成物の用途は、本発明の効果を奏すれば特に限定されないが、例えば医薬品、食品［健康食品、栄養補助食品（バランス栄養食、サプリメントなど）、栄養機能食品、特定保健用食品を含む］などに利用できる。具体的には、医薬品ではビタミン剤（錠剤、顆粒剤、ドリンク剤を含む）、女性用薬など、食品ではガム、錠菓等の菓子類、栄養飲料等の飲料類などのバランス栄養食、粉末、カプセル、錠剤等の形態を有するサプリメント、健康食品、栄養機能食品または特定保健用食品等を例示できる。
【００１８】
本発明の経口組成物は、上記成分の他に、組成物の用途あるいは剤形に応じて、食品、医薬品に通常使用される成分を適宜配合しても良い。配合できる成分としては、特に制限されないが、例えば、アミノ酸類、アルコール類、多価アルコール類、糖類、ガム質、多糖類などの高分子化合物、界面活性剤、防腐・抗菌・殺菌剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、抗酸化剤、酵素成分、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動化剤、清涼化剤の他、ミネラル類、細胞賦活剤、滋養強壮剤、賦形剤、増粘剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、分散剤、吸着剤、崩壊補助剤、湿潤剤または湿潤調節剤、防湿剤、着色料、着香剤または香料、芳香剤、還元剤、可溶化剤、溶解補助剤、発泡剤、粘稠剤または粘稠化剤、溶剤、基剤、乳化剤、可塑剤、緩衝剤、光沢化剤などをあげることができる。
【００１９】
本発明の経口組成物の服用量は、症状、患者の年齢、体重、剤形等に応じて適宜増減することができる。成人１日あたり、菌体またはその処理物を乾燥重量として、通常、０．００１〜０．５ｇ／Ｋｇ体重を、好ましくは、０．００２〜０．１ｇ／Ｋｇ体重を投与することができ、さらに、１日１回又は数回に分けて投与することができる。
【００２０】
本発明のエンテロコッカス属に属する微生物の菌体又はその処理物は、紫外線による色素沈着を抑制することができるため、色素沈着抑制剤として使用することができる。また、本発明の経口組成物は、色素沈着を抑制し、紫外線による皮膚黒化、シミ、ソバカスの発生を防止などに使用することができる。
【００２１】
以下に本発明を実施例及び試験例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例等に限定されるものではない。なお、下記の各処方において％とは、特に言及しない限り、重量（W/W）％を意味するものとする。
【００２２】
実施例  1    色素沈着抑制用経口組成物
エンテロッコカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）ＮＦ−１０１１（微工研菌寄第１２５６４号）を以下に示す組成のロゴザ液体培地１０ｍｌに摂種し、３７℃にて１５時間好気的に静置培養（前培養）し、約１０９個／ｍｌの菌体液（シード）を得た。これをロゴサ液体培地１０Lに接種（菌数：１０６個／ｍｌ）し、３７℃で１６時間静置培養し、生菌数約１０９個／ｍｌの菌体液を得た。得られた菌体液を遠心分離（１２，０００×ｇ、２０分間）して集菌し、これを生理食塩水（０．８５％塩化ナトリウム水溶液）で２回洗浄して、蒸留水１００ｍｌに懸濁し、菌体懸濁液を得た。この菌体懸濁液にリゾチームを終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ量となるよう添加し、３７℃で４時間処理後、１１０℃で１０分間加熱処理して、菌体処理物を得た。この菌体処理物を乾燥し、乾燥重量で、１ｍｇ／ｍｌとなるよう水溶液に分散し液剤とした。
【００２３】
ロゴザ液体培地の調製方法
下記表１の成分を蒸留水１０００ｍｌに溶解し、ｐH７．０に調整後、１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌して調製した。
【００２４】
2005126342.tif 000002
【００２５】
試験例：色素沈着抑制試験
５週齡の褐色モルモット（雄）１０匹を１群５匹に分け、１群に対して、実施例１で作成した菌体処理物の乾燥物を１ｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与量となるよう混餌して投与し、試験群とした。他の群は、餌のみを投与し、対照群とした。試験開始後７日目に、褐色モルモット背部を剃毛し、さらに、試験開始後8日目に両群にＵＶＡを照射した。詳細には、ＵＶＡ照射１時間前に８―ＭＯＰ（8-methoxypsoralen）を５ｍｇ／ｋｇとなるよう腹腔投与した後、ケタラール・セラクタール混合麻酔液（混合比１０：１）を筋肉投与し麻酔した。背部に白いビニールテープを貼り６区画の照射部位を設け、ＵＶＡランプ（Ｎａｔｉｏｎａｌ社製）を使用し、エネルギー量 ４００ｍＪ／ｃｍ２で１回照射を行った。色素沈着の程度は、色彩色差計（ミノルタ社製、ＣＲ―２００型）を用いて経時的に測定を行い、得られたマンセル値よりＬ値（明度）を算出した。色素沈着の程度が強くなるほどＬ値が低くなる。ＵＶ照射直前のＬ値とＵＶ照射後のＬ値との明度差△Ｌ（△Ｌ＝ＵＶ照射直前のＬ値―ＵＶ照射後のＬ値）を算出し、色素沈着の強さとして表した。なお、本試験中において、菌体処理物に起因すると考えられる副作用は認められなかった。結果を表２に示す。
【００２６】
2005126342.tif 000003
【００２７】
表２は、紫外線照射前後における明度差の変化を示した表である。この表から明らかなように、対照群では明度差が上昇し紫外線照射により色素沈着が生じているが、投与群では、明度差の上昇が小さく、紫外線による色素沈着が３０％以上抑制できていることがわかる。これは、本発明の菌体処理物を紫外線照射前から経口投与すると、紫外線照射による色素沈着を抑制し、肌を白く保つことができることを示している。
【００２８】
以下に製剤実施例を挙げる。なお、全て成人１日あたりの用量として示す。
【００２９】
実施例２  （錠剤）
実施例１記載の菌体処理物の乾燥物      ２４０ｍｇ
粉末還元麦芽糖水アメ                    ７３ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース            １６ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム            １０ｍｇ
トウモロコシデンプン                      適量
結晶セルロース                            適量
ステアリン酸マグネシウム                  微量        
合    計                          ６００ｍｇ
上記の成分を秤りとり、第１４改正日本薬局方製剤総則「錠剤」の項に準じて、１錠３００ｍｇの錠剤を製した。
【００３０】
実施例３  （顆粒剤）
実施例１記載の菌体処理物の乾燥物    ５００ｍｇ
結晶セルロース                      ４００ｍｇ
粉末還元麦芽糖水アメ                  ７３ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース          ６０ｍｇ
マンニット                            適量
軽質無水ケイ酸                        微量
香料                                  微量        
合計                              ３６００ｍｇ
上記の成分を秤りとり、第１４改正日本薬局方製剤総則「顆粒剤」の項に準じて、１包１．２ｇの顆粒剤を製した。
【００３１】
実施例４  （散剤）
実施例１記載の菌体処理物の乾燥物      ２４０ｍｇ
合成ヒドロタルサイト                  ２００ｍｇ
アスパルテーム                          １０ｍｇ
コーンスターチ                          適量
香料                                    微量
ステアリン酸マグネシウム                微量        
合計                                ３６００ｍｇ
上記の成分を秤りとり、第１４改正日本薬局方製剤総則「散剤」の項に準じて、１包１．２ｇの散剤を製した。
【００３２】
実施例５  （カプセル剤）
実施例１記載の菌体処理物の乾燥物      １７００ｍｇ  
結晶セルロース                            適量
ステアリン酸マグネシウム                  微量        
合計                                  ２２２０ｍｇ
上記の成分を秤りとり、第１４改正日本薬局方製剤総則「カプセル剤」の項に準じて、１カプセル（内容重量）が３７０ｍｇのカプセル剤を製した。
【００３３】
実施例６  （ドリンク剤）
実施例１記載の菌体処理物の乾燥物      ２４０ｍｇ
ソルビトール                          １．８ｇ
硫酸マグネシウム                      ６００ｍｇ
クエン酸                              １００ｍｇ
デキストリン                            適量
香料                                    微量
精製水                                  適量        
合計                                  １００ｍｌ
上記の成分を秤りとり、第１４改正日本薬局方製剤総則「液剤」の項に準じて、内容量１００ｍｌ／瓶のドリンク剤を製した。