【手続補正書】
【提出日】平成22年4月21日(2010.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シアニジン−３−Ｏ−配糖体を有効成分として含有する疲れ目の改善又は予防用の食品であって、該シアニジン−３−Ｏ−配糖体の一日あたりの摂取量が１〜１０００ｍｇであることを特徴とする、食品。
【請求項２】
前記シアニジン−３−Ｏ−配糖体として、シアニジン−３−Ｏ−グルコシドと、シアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとをともに含有することを特徴とする、請求項１に記載の食品。
【請求項３】
前記シアニジン−３−Ｏ−ルチノシドの含有量が、シアニジン−３−Ｏ−グルコシドの含有量の１〜１０質量％であることを特徴とする、請求項２に記載の食品。
【請求項４】
前記シアニジン−３−Ｏ−配糖体の基源が、スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）の果実の抽出物であることを特徴とする、請求項１〜３の何れかに記載の食品。
【請求項５】
前記スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）の果実が中華人民共和国産のものであることを特徴とする、請求項４に記載の食品。
【請求項６】
スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）の果実の抽出物を含有する、疲れ目の予防又は改善用の食品であって、前記スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）の果実の抽出物における、シアニジン−３−Ｏ−配糖体の含有量が３〜３０質量％であることを特徴とする、食品。
【請求項７】
前記シアニジン−３−Ｏ−配糖体として、シアニジン−３−Ｏ−グルコシドと、シアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとをともに含有することを特徴とする、請求項６に記載の食品。
【請求項８】
スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）の果実の抽出物を濃縮し、該濃縮物中のシアニジン−３−Ｏ−グルコシドと、シアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとを定量し、両者を含み、且つ、濃縮物総量に対するシアニジン−３−Ｏ−配糖体
の含有量が３〜３０質量％であることを確認し、これを配合することを特徴とする、疲れ目の予防又は改善用の食品の製造法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、有用な疲れ目改善素材の効果を安定して維持して行く技術を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、シアニジン−３−Ｏ−配糖体がこの様な作用の有効成分であり、かかる成分が一日あたりの摂取量が１〜１０００ｍｇになるように、前記疲れ目改善素材を含有する食品を製剤設計することにより、この様な維持が為しうることを見いだし、発明を完成させた。即ち、本発明は以下に示すとおりである。
（１）シアニジン−３−Ｏ−配糖体を有効成分として含有する疲れ目の改善又は予防用の食品であって、該シアニジン−３−Ｏ−配糖体の一日あたりの摂取量が１〜１０００ｍｇであることを特徴とする、食品。
（２）前記シアニジン−３−Ｏ−配糖体として、シアニジン−３−Ｏ−グルコシドと、シアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとをともに含有することを特徴とする、（１）に記載の食品。
（３）前記シアニジン−３−Ｏ−ルチノシドの含有量が、シアニジン−３−Ｏ−グルコシドの含有量の１〜１０質量％であることを特徴とする、（２）に記載の食品。
（４）前記シアニジン−３−Ｏ−配糖体の基源が、スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）の果実の抽出物であることを特徴とする、（１）〜（３）の何れかに記載の食品。
（５）前記スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）は中華人民共和国産のものであることを特徴とする、（４）に記載の食品。
（６）スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）の果実の抽出物を含有する、疲れ目の予防又は改善用の食品であって、前記スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）の果実の抽出物における、シアニジン−３−Ｏ−配糖体の含有量が３〜３０質量％であることを特徴とする、食品。
（７）前記シアニジン−３−Ｏ−配糖体として、シアニジン−３−Ｏ−グルコシドと、シアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとをともに含有することを特徴とする、（６）に記載の食品。
（８）スイカズラ科スイカズラ属に属するハスカップ（Lonicera caerulea L.）の果実の抽出物を濃縮し、該濃縮物中のシアニジン−３−Ｏ−グルコシドと、シアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとを定量し、両者を含み、且つ、濃縮物総量に対するシアニジン−３−Ｏ−配糖体の含有量が３〜３０質量％であることを確認し、これを配合することを特徴とする、疲れ目の予防又は改善用の食品の製造法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
＜比較試験例＞
以下に示す手順に従って、ビルベリーとハスカップの抽出物の含有成分の比較を行った。ハスカップについては、北海道産のものと、中国黒竜江省産のものを用い、ビルベリーとしては、フィンランド産のものを用いた。果実１００ｇを擂壊し、超音波を３０分間照
射し、遠心分離（２０００ｒｐｍ、２０分）し、果汁を取り出し、残渣に１％塩酸加５０％メタノール水溶液５０ｍｌを加え、超音波を３０分間照射し、遠心分離（２０００ｒｐｍ、２０分）し、上清を果汁と合わせ、１％塩酸加５０％メタノール水溶液を加えて１００ｍｌにメスアップし、０．４５μｍの「ミリポア」フィルターで濾過し検体とした。これをＨＰＬＣを用いて、次に示す条件でアントシアニン総量、シアニジン−３−Ｏ−グルコシド（以下、Ｃ３Ｇと略することもある。）量、シアニジン−３−Ｏ−ルチノシド（以下、Ｃ３Ｒと略することもある。）量を絶対検量線法にて定量した。結果を図１に示す。ハスカップとビルベリーはアントシアニンの総含有量については殆ど同じであったが、Ｃ３Ｇ、Ｃ３Ｒについては、ハスカップの方が有意に多かった。又、ハスカップにおいても北海道産と中国黒竜江省産では有意な差が存した。又、後記に示す効果の差より、疲れ目にはアントシアニン総量よりも、Ｃ３ＧやＣ３Ｒと言ったシアニジン配糖体含有量により、疲れ目の改善・予防効果は律せられることがわかる。この意味でアントシアニンの内、シアニジン配糖体の含有量の多い、ハスカップ、取り分け中国産のハスカップは疲れ目の改善・予防用の有効成分の基源として好ましいことが分かる。
（ＨＰＬＣ条件）カラム；Develosil RPAQUEOUS(C-30,i.d. 4.6×250mm)(Nomura Chemical Co. Ltd)、検出器：PDA検出器  520nm、流速；1mL/min、カラム温度；４０℃、移動相；0.05％リン酸・8％CH3CN：0.05％リン酸・30％CH3CN＝１００：０→０：１００（リニアグラージェント）
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
この様なシアニジン配糖体を含むハスカップの果実抽出物における、前記シアニジン配糖体の含有量の調整は、製剤において、一日あたりの摂取量が１〜１０００ｍｇである様に調整することが好ましく、より好ましくは、２〜５００ｍｇ、さらに好ましくは３〜１００ｍｇになるように調整することが例示できる。この様な条件を達成するには、シアニジン−３−Ｏ−配糖体の含有量が３〜３０質量％、より好ましくは５〜２５質量％である、ハスカップの抽出物の濃縮物を、１０〜５０質量％製剤に含有させることが例示できる。かかる製剤を適宜１回乃至は数回に分けて摂取し、前記の量範囲のシアニジン配糖体を摂取することが好ましい。この様な製剤の剤形化に際しては、通常食品で使用される任意成分をともに含有せしめることが出来る。この様な任意成分としては、例えば、乳糖や還元麦芽糖などの糖類、アラビアゴムやキサンタンゴムなどの結合剤、結晶セルロースやデンプンなどの崩壊剤、ゼインやシェラックのような被覆剤、矯味矯臭剤、分散剤、乳化剤、糖衣剤などが好適に例示できる。前記必須成分と前記任意成分とを常法に従って処理することにより、本発明の食品は、食品として知られている剤形であれば特段の限定無く適用することが出来、例えば、錠剤、散剤、粉末ジュースを包含する顆粒剤等に加工することが出来る。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
＜製造例１＞
比較試験例で用いた中国黒竜江省産のハスカップの果実１００ｇを擂潰して、これに５０％エタノール水溶液２００ｍｌを加え、超音波を１０分間照射し、遠心分離（１０００
ｒｐｍ×１０分）を行い、上清を得た。上清を減圧濃縮した後、凍結乾燥に付し、１２．５ｇのアモルファスを得た。このものを前記のＨＰＬＣ条件で分析し、シアニジン配糖体の含有量を求めたところ、Ｃ３Ｇを３．２質量％、Ｃ３Ｒを０．１質量％含有していた。又、総アントシアニン量は３．４％であった。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
＜飲用試験＞
製造例３の食品１と製造例４の比較例１について、１群１５名の疲れ目のパネラー３０名（２群）での飲用試験を行った。飲用期間は２ヶ月で、連日朝、昼、晩の３回６錠づつ錠剤を摂取してもらった。食品１の群では１日あたり５９．４ｍｇのシアニジン配糖体を、比較例１の群では５．４ｍｇのシアニジン配糖体を摂取することになる。試験の前後に、目元のサーモグラフィー、フリッカーテスト、近点位置、暗順応を計測し、飲用による変化を見た。結果を図２（フリッカーテスト）、図３（近点位置）、図４（暗順応）に示す。これより、食品１は有意に比較例１よりも、疲れ目の改善・予防作用に優れることが分かる。即ち、アントシアニン類の内、シアニジン配糖体が疲れ目の改善・予防に大きな寄与をしていることが分かる。シアニジン配糖体の量をコントロールすることにより、疲れ目の改善・予防作用を制御できることが分かる。
具体的な測定手順は以下に示す。
（１）サーモグラフィー
測定機器：日本アビオニクス株式会社  Ｎｅｏ  Ｔｈｅｒｍｏ  ＴＶＳ−７００
測定環境：室温２５±２℃、湿度５０±１５％
手順：恒温恒湿の部屋に入室後１０分間の馴化を行い、サーモグラフィーの撮影を行った。
（２）フリッカーテスト
測定機器：柴田科学株式会社  学研デジタルフリッカー値測定器  ＲＤＦ−１
測定環境：特に指定なし（実際はサーモ撮影と同じ部屋で実施）
手順：サーモグラフィーと同様に馴化後、フリッカー値測定  ５回／セット×３セットを測定（はじめの１セットは暗順応として実際には２から３セットの値を解析）
（３）近点位置
測定機器：浜松ホトニクス株式会社  近見反応測定装置  ＴｒｉＩＲＩＳ  Ｃ９０００
測定環境：特に指定なし（実際はサーモ撮影と同じ部屋で実施）
測定手順：サーモグラフィーと同様に馴化後、５回測定
（４）暗順応
測定機器：とくになし
測定環境：一定光量下の部屋
測定手順：入室後２０分間馴化し、消灯後、３０ｃｍほど離れたところにある視力検診用の標準指標であるランドル環を認識する時間を測定した。