(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）のフッ素化架橋スピロ［２．４］ヘプタン誘導体（式中、ｎ及びＲ１は明細書中に定義した通りである。）、それらの製造及び薬学的に活性な化合物としてのそれらの使用に関する。    【化１】2015516463.tif 000022【選択図】  なし
2015516463.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩：
【化１】
2015516463.tif 000021
式中、
ｎは、１又は２を表し、
Ｒ１は、水素又はフルオロを表す。
【請求項２】
ｎが１を表す；
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項３】
ｎが２を表す；
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項４】
Ｒ１が水素を表す；
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項５】
Ｒ１がフルオロを表す；
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項６】
Ｒ１が水素を表し、アミド窒素原子に結合するヘテロシクリル基の２つのキラル中心が、互いにｔｒａｎｓ配置にある；
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項７】
下記の化合物からなる群より選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（（３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｃｉｓ−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（３，３−ジフルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（
ｃｉｓ−４−フルオロピロリジン−３−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；及び
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｔｒａｎｓ−４−フルオロピロリジン−３−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
又はそのような化合物の塩。
【請求項８】
前記化合物が（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（（３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項９】
前記化合物が（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項１０】
前記化合物が（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｃｉｓ−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項１１】
前記化合物が（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｔｒａｎｓ−４−フルオロピロリジン−３−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項１２】
医薬として使用するための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
有効成分としての請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩と、少なくとも１種の治療上不活性な賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１４】
炎症性疾患、閉塞性気道疾患、アレルギー、ＨＩＶ−介在レトロウイルス感染、心血管障害、神経炎症、神経障害、疼痛、プリオン介在疾患及びアミロイド介在障害から選択される疾患の予防又は治療のための医薬の製造のための；及び免疫応答の調節のための医薬の製造のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１５】
炎症性疾患、閉塞性気道疾患、アレルギー、ＨＩＶ−介在レトロウイルス感染、心血管障害、神経炎症、神経障害、疼痛、プリオン介在疾患及びアミロイド介在障害から選択される疾患の予防又は治療における使用のための；及び免疫応答の調節のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（Ｉ）のフッ素化架橋スピロ［２．４］ヘプタン誘導体及び医薬としてのこれらの使用に関する。本発明はまた上記化合物の製造方法、式（Ｉ）の化合物を１又は２以上含有する医薬組成物、及び特にＡＬＸ受容体（ＡＬＸＲ）アゴニストとしてのそれらの使用を含む関連した側面に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＡＬＸＲ（別名Ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ４  受容体、ＦＰＲＬ１、ＦＰＲ２；国際公開公報第２００３／０８２３１４号にヌクレオチド配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２として開示）は、Ｇ−タンパク質結合受容体ファミリーの一員である。ＡＬＸＡは、高濃度のホルミル−メチオニン−ロイシル−フェニルアラニンペプチドに反応するカルシウム動員を介在することが見出された。さらに、ＡＬＸＲ導入細胞において、脂質代謝物、ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ４（ＬＸＡ４）及びそのアナログが、ＡＬＸＲと高い親和性で結合し、アラキドン酸産生及びＧ−タンパク質の活性化を増大させることが見出された（Ｃｈｉａｎｇら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．、２００６、５８、４６３−４８７）。ＬＸＡ４の効果は、種々の病態動物モデルで評価され、そしてＬＸＡ４が、高い抗炎症及び消散促進活性を有することが示された。ＬＸＡ４、又は誘導体、又は安定なアナログがｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示した病態モデルは、例えば、皮膚炎、背部空気嚢、虚血／再灌流損傷、腹膜炎、大腸炎、メサンギウム増殖性腎炎、胸膜炎、喘息、嚢胞性線維症、敗血症、角膜損傷、血管新生、歯周炎、カラゲナン誘発痛覚過敏及び移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）である（Ｓｃｈｗａｂ及びＳｅｒｈａｎ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２００６、４１４−４２０）。Ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ４は、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞においてＩＬ−６の発現を阻害し（Ｓｏｄｉｎ−Ｓｅｍｒｌら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００４）１７：１５−２５）、安定なＦＰＲ２アゴニストであるＢＭＬ−１１１は、コラーゲン誘発関節炎の重篤度を軽減したが（Ｚｈａｎｇら、（２００８）Ｉｎｆｌａｍｍ  Ｒｅｓ
５７：１５７−１６２）、これは、関節リウマチの治療におけるＦＰＲ２アゴニストの有用性を示すものである。急性肺障害（ＡＬＩ）マウスは、安定なｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ４で処置した場合、肺炎症の軽減を示した（Ｊｉｎら、（２００７）Ａｎｅｓｔｈ  Ａｎａｌｇ  １０４：３６９−３７７）。重篤な喘息においてｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ４レベルが下がっていること（Ｃｅｌｉｋら、（２００７）Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ３７：１４９４−１５０１；Ｐｌａｎａｇｕｍａら、（２００８）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １７８：５７４−５８２）及び安定なｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ４アナログにより、動物モデルの喘息症状が改善されたこと（Ｌｅｖｙら、（２００２）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ８：１０１８−１０２３；Ｌｅｖｙら、（２００７）ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２１：３８７７−３８８４）が記述されている。嚢胞性線維症については、嚢胞性線維症患者及びこの疾患の動物モデルの双方で肺のｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ４レベルが低下すること（Ｋａｒｐら、（２００４）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５：３８８−３９２）；安定なｌｉｐｏｘｉｎアナログによる処置により、同じ動物モデルにおいて、疾患を有する肺における炎症細胞の蓄積及び体重の減少が軽減されたことが示されている（Ｋａｒｐら、（２００４）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５：３８８−３９２）。ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ４で局所的に処理することにより、乾燥角膜表面の再上皮化が増大し、炎症が軽減されるが（Ｇｒｏｎｅｒｔ、（２００５）Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  Ｌｅｕｋｏｔ  Ｅｓｓｅｎｔ
Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ  ７３：２２１−２２９；Ｇｒｏｎｅｒｔら、（２００５）Ｊ
Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８０：１５２６７−１５２７８）、これは、角膜乾燥症の治療におけるＦＰＲ２アゴニストの有用性を示すものである。ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ４アナログ
の経口投与により、炎症性腸疾患のマウスモデルにおいて大腸炎の重篤度が軽減された（Ｇｅｗｉｒｔｚら、（２００２）Ｅｉｃｏｓａｎｏｉｄｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｌｉｐｉｄｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、ａｎｄ
Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｉｎｊｕｒｙ、Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ／Ｐｌｅｎｕｍ
Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、２２９−２３６）。
【０００３】
ＡＬＸＲはまた、プリオンタンパク質のフラグメント、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）−１ＬＡＩ株のｇｐ１２０由来ペプチド及びアミロイド−ベータ１−４２（Ａｂ４２）を含む種々のペプチドの機能性受容体としても同定され（概説については、Ｌｅら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｅｐｔ  Ｌｅｔｔ．、２００７、１４、８４６−８５３）、アルツハイマー病の病因における重要な関与が示唆されている（Ｙａｚａｗａら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、２００１、１５、２４５４−２４６２）。マクロファージ及び小膠細胞上でのＡＬＸＲの活性化は、細胞の指向性移動、食作用及び伝達物質の遊離を増大させるＧ−タンパク質介在シグナル伝達カスケードを開始させる。これらは、Ａｂ４２が過剰生産され、蓄積するＡＤ脳の病変領域における老人班周辺に、単核細胞が濃縮される現象を説明するかもしれない。組織損傷部位における白血球の蓄積は、有害な物質の除去を目的とする本来の宿主応答と考えられるが、活性化した単核食細胞もまた、ニューロンに対して有毒な過酸化物アニオン等の種々の物質を放出する。従って、ＡＬＸＲは、ＡＤ脳中のＡｂ４２によって誘起された炎症促進反応を仲介し、病態の進行を促進するのかもしれない。さらに、ヒューマニン（ｈｕｍａｎｉｎ）はＡＬＸＲの高親和性リガンドであり、アルツハイマー病モデルにおいて神経を保護する（Ｍａｍｉｙａら、（２００１）Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １３４：１５９７−１５９９；Ｙｉｎｇら、（２００４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７２：７０７８−７０８５；Ｍｉａｏら、（２００８）Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ  ４２：５５７−５６７）。
【０００４】
ＡＬＸＲアゴニストの生物学的特性は、単核球／マクロファージ／小膠細胞／樹状細胞の移動／活性化、好中球の移動／活性化、リンパ球の活性化、増殖及び分化の調節、炎症の調節、サイトカイン産生及び／又は放出の調節、炎症誘発性メディエーターの産生及び／又は放出の調節、免疫応答の調節を含むが、これらに限定されるものではない。
【０００５】
本発明は、ヒトＡＬＸ受容体の非ペプチド性アゴニストであるフッ素化架橋スピロ［２．４］ヘプタン誘導体を提供する。ヒトＡＬＸ受容体に対してアゴニスト活性を有する他の架橋スピロ［２．４］ヘプタン誘導体が、ＷＯ２０１０／１３４０１４、ＷＯ２０１１／１６３５０２、ＷＯ２０１２／０６６４８８及びＷＯ２０１３／００９５４３に開示されている。異なる架橋スピロ［２．４］ヘプタン誘導体がＷＯ９５／０２５８７に開示されている。本発明の化合物は、炎症性疾患、閉塞性気道疾患、アレルギー、ＨＩＶ−介在レトロウイルス感染、心血管障害、神経炎症、神経障害、疼痛、プリオン介在疾患及びアミロイド介在障害（特に、アルツハイマー病）等のＡＬＸ受容体の調節に反応する疾患の予防又は治療に有用である；加えて、本発明の化合物は、自己免疫疾患の予防又は治療並びに免疫応答（特に、免疫化によって誘起される免疫応答。）の調節に有用である。
【０００６】
ＷＯ２０１０／１３４０１４にクレームされた関連化合物と比較して、本発明の化合物は、経口投与した場合、驚くほど高いバイオアベイラビリティ及びｉｎ  ｖｉｖｏでのより良好な血漿暴露（ｐｌａｓｍａ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ）を示す。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の種々の態様を以下に記述する：
１）  本発明は、式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する：
【０００８】
【化１】
2015516463.tif 000003
式中、
ｎは、１又は２を表し、
Ｒ１は、水素又はフルオロを表す。
【０００９】
態様１）に従う式（Ｉ）の化合物のコンフィグレーションにおいて、２つのアミド置換基はｔｒａｎｓ配置にあり、シクロプロピル部分は、ヘテロシクリル−置換アミドに対して相対的に近接している（ｅｘｏ−位）。
【００１０】
いかなる疑義をも避けるために、式（Ｉ）の化合物は下記の例と同様に命名される：
構造
【００１１】
【化２】
2015516463.tif 000004
の純粋な立体異性体は、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（（３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドと命名される。
【００１２】
態様１）に従う式（Ｉ）の化合物は、１又は２以上の不斉炭素原子などの、１又は２以上のキラル又は不斉中心を含んでいてもよい。二重結合の置換基は、特に明記しない限り、（Ｚ）−又は（Ｅ）−配置で存在してもよい。従って、式（Ｉ）の化合物は、立体異性体の混合物として、又は好ましくは純粋な立体異性体として存在してもよい。立体異性体の混合物は当業者に知られた方法で分離してもよい。
【００１３】
２）  本発明の好ましい態様は、式（ＩＳＴ１）の化合物でもある、態様１）に従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する：
【００１４】
【化３】
2015516463.tif 000005
式中、
ｎは、１又は２を表し；
Ｒ１は、水素又はフルオロを表す。
【００１５】
３）  本発明のさらなる態様は、
ｎが１を表す、
態様１）又は２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００１６】
４）  本発明のさらなる態様は、
ｎが２を表す；
態様１）又は２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００１７】
５）  本発明のさらなる態様は、
Ｒ１が水素を表す；
態様１）〜４）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００１８】
６）  本発明のさらなる態様は、
Ｒ１がフルオロを表す；
態様１）〜４）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００１９】
７）  本発明のさらなる態様は、
Ｒ１が水素を表し、アミド窒素原子に結合するヘテロシクリル基の２つのキラル中心が、互いにｔｒａｎｓ配置にある；
態様１）〜４）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００２０】
８）  本発明のさらなる態様は、
Ｒ１が水素を表し、Ｒ１に結合する炭素原子が（Ｓ）−配置である；
態様１）〜４）又は７）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００２１】
９）  本発明のさらなる態様は、
Ｒ１が水素を表し、Ｒ１に結合する炭素原子が（Ｒ）−配置である；
態様１）〜４）又は７）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００２２】
１０）  本発明のさらなる態様は、
アミド窒素原子に結合するヘテロシクリル基の炭素原子が（Ｓ）−配置である；
態様１）〜９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００２３】
１１）  本発明のさらなる態様は、
アミド窒素原子に結合するヘテロシクリル基の炭素原子が（Ｒ）−配置である；
態様１）〜９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００２４】
１２）  態様１）に定義した式（Ｉ）の好ましい化合物は、以下の化合物から成る群より選択される：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（（３Ｓ，４Ｓ）−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（（３Ｒ，４Ｒ）−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｃｉｓ−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（３，３−ジフルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｃｉｓ−４−フルオロピロリジン−３−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；及び
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｔｒａｎｓ−４−フルオロピロリジン−３−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド；
又はそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）。
【００２５】
上記の化合物のいずれについても、具体的に帰属されていないキラル中心は、絶対（Ｒ）配置にあっても、又は絶対（Ｓ）配置にあってもよいと解される。特に、キラル中心を１個より多く含む化合物は、具体的に帰属されていないそれぞれのキラル中心において、絶対（Ｒ）にあっても、又は絶対（Ｓ）配置にあってもよく；例えば、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｃｉｓ−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドとして記載される化合物は、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（（３Ｓ，４Ｒ）−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１
’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド、
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド又はそれらの混合物である。
【００２６】
当然ながら、本発明は、態様１）に係る；又は態様１）に従属する態様の特徴により限定された態様１）に係る；又は一連の従属態様の特徴により限定された態様１）（例えば、「態様１）に従属する態様２）に従属する態様３）」の形式）に係る化合物に関する。ある態様が１つを超える他の態様に従属している場合は、それぞれの組み合わせが具体的に開示されているものと解される。また、ある態様が１つを超える他の態様に従属し、当該他の態様自身の１つ又はそれ以上が、１つ又はそれ以上のさらなる他の態様に従属している場合は、当該所与の従属関係及び多項従属関係において可能とされるものであれば、それぞれの組み合わせが具体的に開示されているものと解される。特に、互いに従属する３つを超える態様の連なりから得られる態様は、所与の従属関係及び多項従属関係に基づいて解釈されてよく、従って具体的に開示されるものであることが意図されている。以上に開示した態様１）から１２）の従属関係に基づき可能とされる態様の例、つまり意図されており、そして個々の形態としてここに具体的に開示される態様の代表例は：
１、２＋１、３＋１、３＋２＋１、４＋１、４＋２＋１、５＋１、５＋２＋１、５＋３＋１、５＋３＋２＋１、５＋４＋１、５＋４＋２＋１、６＋１、６＋２＋１、６＋３＋１、６＋３＋２＋１、６＋４＋１、６＋４＋２＋１、７＋１、７＋２＋１、７＋３＋１、７＋３＋２＋１、７＋４＋１、７＋４＋２＋１、８＋１、８＋２＋１、８＋３＋１、８＋３＋２＋１、８＋４＋１、８＋４＋２＋１、８＋７＋１、８＋７＋２＋１、８＋７＋３＋１、８＋７＋３＋２＋１、８＋７＋４＋１、８＋７＋４＋２＋１、９＋１、９＋２＋１、９＋３＋１、９＋３＋２＋１、９＋４＋１、９＋４＋２＋１、９＋７＋１、９＋７＋２＋１、９＋７＋３＋１、９＋７＋３＋２＋１、９＋７＋４＋１、９＋７＋４＋２＋１、１０＋１、１０＋２＋１、１０＋３＋１、１０＋３＋２＋１、１０＋４＋１、１０＋４＋２＋１、１０＋５＋１、１０＋５＋２＋１、１０＋５＋３＋１、１０＋５＋３＋２＋１、１０＋５＋４＋１、１０＋５＋４＋２＋１、１０＋６＋１、１０＋６＋２＋１、１０＋６＋３＋１、１０＋６＋３＋２＋１、１０＋６＋４＋１、１０＋６＋４＋２＋１、１０＋７＋１、１０＋７＋２＋１、１０＋７＋３＋１、１０＋７＋３＋２＋１、１０＋７＋４＋１、１０＋７＋４＋２＋１、１０＋８＋１、１０＋８＋２＋１、１０＋８＋３＋１、１０＋８＋３＋２＋１、１０＋８＋４＋１、１０＋８＋４＋２＋１、１０＋８＋７＋１、１０＋８＋７＋２＋１、１０＋８＋７＋３＋１、１０＋８＋７＋３＋２＋１、１０＋８＋７＋４＋１、１０＋８＋７＋４＋２＋１、１０＋９＋１、１０＋９＋２＋１、１０＋９＋３＋１、１０＋９＋３＋２＋１、１０＋９＋４＋１、１０＋９＋４＋２＋１、１０＋９＋７＋１、１０＋９＋７＋２＋１、１０＋９＋７＋３＋１、１０＋９＋７＋３＋２＋１、１０＋９＋７＋４＋１、１０＋９＋７＋４＋２＋１、
１１＋１、１１＋２＋１、１１＋３＋１、１１＋３＋２＋１、１１＋４＋１、１１＋４＋２＋１、１１＋５＋１、１１＋５＋２＋１、１１＋５＋３＋１、１１＋５＋３＋２＋１、１１＋５＋４＋１、１１＋５＋４＋２＋１、１１＋６＋１、１１＋６＋２＋１、１１＋６＋３＋１、１１＋６＋３＋２＋１、１１＋６＋４＋１、１１＋６＋４＋２＋１、１１＋７＋１、１１＋７＋２＋１、１１＋７＋３＋１、１１＋７＋３＋２＋１、１１＋７＋４＋１、１１＋７＋４＋２＋１、１１＋８＋１、１１＋８＋２＋１、１１＋８＋３＋１、１１＋８＋３＋２＋１、１１＋８＋４＋１、１１＋８＋４＋２＋１、１１＋８＋７＋１、１１＋８＋７＋２＋１、１１＋８＋７＋３＋１、１１＋８＋７＋３＋２＋１、１１＋８＋７＋４＋１、１１＋８＋７＋４＋２＋１、１１＋９＋１、１１＋９＋２＋１、１１＋９＋３＋１、１１＋９＋３＋２＋１、１１＋９＋４＋１、１１＋９＋４＋２＋１、１１＋９＋７＋１、１１＋９＋７＋２＋１、１１＋９＋７＋３＋１、１１＋９＋７＋３＋２＋１、１１＋９＋７＋４＋１、１１＋９＋７＋４＋２＋１及び１２＋１。
【００２７】
上記の表中、数字は上記の番号に応じた態様を意味し、「＋」は他の態様への従属関係を表す。種々の態様は読点により個々に分けられている。換言すると、例えば「３＋２＋１」は、態様３）であって、態様２）に従属し、態様１）に従属することを意味し、すなわち、態様「３＋２＋１」は、態様２）及び３）の特徴によりさらに限定された態様１）に相当する。
【００２８】
「ヘテロシクリル」という用語は、単独で使用する場合も、組み合わせて使用する場合も、ピロリジニル又はピペリジニルを意味する。
【００２９】
本発明はまた、同位体標識された、特に２Ｈ（デューテリウム）標識された式（Ｉ）の化合物をも含み、当該同位体標識された化合物は、１又は２以上の原子が、同じ原子番号を有するが、自然において通常見出される原子量と異なる原子量を有する原子によってそれぞれ置き換えられていることを除いては、式（Ｉ）の化合物と同一である。同位体標識された、特に２Ｈ（デューテリウム）標識された式（Ｉ）の化合物、及びその塩は、本発明の範囲に含まれる。水素をより重い同位体２Ｈ（デューテリウム）に置換することにより代謝安定性が増大するため、例えば、ｉｎ−ｖｉｖｏでの半減期が長くなり、あるいは、必要用量を減らすことができ、又は、チトクロームＰ４５０酵素の阻害が軽減され得るため、例えば、安全性プロファイルが改善される。本発明の１つの態様においては、式（Ｉ）の化合物は同位体標識されていないか、又は、それらは１若しくは２以上のデューテリウム原子によってのみ標識されている。副態様においては、式Ｉの化合物は全く同位体標識されていない。同位体標識された式Ｉの化合物は、適切な試薬又は出発物質の適宜な同位体種を用いることを除いては、下記の方法と同様に製造してもよい。
【００３０】
「薬学的に許容される塩」という用語は、無毒性の無機若しくは有機酸及び／又は塩基付加塩を意味する。文献、例えば、「Ｓａｌｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｂａｓｉｃ  ｄｒｕｇｓ」、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．（１９８６）、３３、２０１−２１７。
【００３１】
化合物、塩、医薬組成物、疾患等に対して複数形が使用される場合には、単数の化合物、塩等をも意味することが意図されている。
【００３２】
態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬としての使用に適切である。特に、式（Ｉ）の化合物はＡＬＸ受容体を調節し、すなわち、ＡＬＸ受容体アゴニストとして作用し、炎症性疾患、閉塞性気道疾患、アレルギー、ＨＩＶ−介在レトロウイルス感染、心血管障害、神経炎症、神経障害、疼痛、プリオン介在疾患及びアミロイド介在障害（特に、アルツハイマー病）等のＡＬＸ受容体の活性化に反応する疾患の予防又は治療に有用である；加えて、これらは、免疫反応（特に、免疫化によって惹起される免疫反応）の調節に有用である。特に、式（Ｉ）の化合物は、炎症性疾患、閉塞性気道疾患、アレルギー、心血管障害、神経炎症、神経障害、疼痛、プリオン介在疾患及びアミロイド介在障害（特に、アルツハイマー病）等の疾患の予防又は治療に有用である。
【００３３】
特に、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、炎症性疾患、閉塞性気道疾患及びアレルギーから選択される疾患の予防又は治療に適切である。
【００３４】
炎症性疾患、閉塞性気道疾患及びアレルギーは、下記の群の疾患及び障害の１つ、幾つか又はすべてを含むが、これらに限定されるものではない：
１）  急性肺障害（ＡＬＩ）；成人／急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；慢性気管支炎
若しくはそれに関連する呼吸困難を含む慢性閉塞性肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）、気道又は肺（ｌｕｎｇ）疾患（ＣＯＰＤ，ＣＯＡＤ又はＣＯＬＤ）；肺気腫；及び他の薬物治療、特に他の吸入薬物治療に起因する気道過敏性の悪化。特に、炎症性疾患、閉塞性気道疾患及びアレルギーは、ＣＯＰＤ，ＣＯＡＤ及びＣＯＬＤを含む。
【００３５】
２）  さらに、炎症性疾患、閉塞性気道疾患及びアレルギーは、いかなるタイプの、又はいかなる病因による気管支炎をも包含する。
【００３６】
３）  さらに、炎症性疾患、閉塞性気道疾患及びアレルギーは、いかなるタイプの、又はいかなる病因による気管支拡張症及び塵肺症をも包含する。
【００３７】
４）  さらに、炎症性疾患、閉塞性気道疾患及びアレルギーは、内因性（非アレルギー性）喘息及び外因性（アレルギー性）喘息、軽度の喘息、中等度の喘息、重症喘息、気管支炎性喘息、運動誘発喘息、職業性喘息並びに細菌感染に続いて誘発される喘息を含む、いかなるタイプの、又はいかなる病因による喘息をも包含する。
【００３８】
５）  さらなる態様において、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、特に炎症性疾患の予防又は治療に適切である。炎症性疾患は、下記の群の疾患及び障害の１つ、幾つか又はすべてを含む：
５ａ）  特に、炎症性疾患は、好中球関連障害、特に、過剰−好中球増多症を含む、気道及び／又は肺に影響を与えるような気道の好中球関連障害を意味する。さらに、好中球関連障害はまた、歯周炎、糸球体腎炎、嚢胞性線維症をも含む。
【００３９】
５ｂ）  さらに、炎症性疾患は、乾癬、接触皮膚炎、アトピー性皮膚炎、ヘルペス状皮膚炎、硬皮症、過敏性血管炎、じんましん、紅斑性狼瘡及び表皮剥離等の皮膚疾患を含む。
【００４０】
５ｃ）  さらに、炎症性疾患はまた、炎症相を有する疾患又は状態にも関連する。炎症相を有する疾患又は状態は、ぶどう膜炎（前部、中間部及び後部）、ベーチェット症候群に伴うぶどう膜炎、結膜炎、角膜乾燥症、シェーグレン症候群に伴う角膜乾燥症及び春季カタル（特に、結膜炎、角膜乾燥症及び春季カタル）等の眼に影響を与える疾患及び状態；鼻炎及びアレルギー性鼻炎を含む鼻に影響を与える疾患（特にアレルギー性鼻炎）；並びに全身性紅斑性狼瘡、強直性脊椎炎、ベーチェット症候群、シェーグレン症候群、多発性軟骨炎、硬皮症、ウェゲナー肉芽腫症、膠原病、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、スティーブンス・ジョンソン症候群、突発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、バセドウ病眼症、慢性過敏性肺炎、原発性胆汁性肝硬変、角膜乾燥症及び春季カタル、間質性肺線維症、乾癬性関節炎及び糸球体腎炎；等の自己免疫反応が関連し、又は自己免疫相若しくは自己免疫的な病因を有する炎症性疾患を含むが、これらに限定されるものではない。
【００４１】
５ｄ）  さらに、自己免疫反応が関連し、又は自己免疫相若しくは自己免疫的な病因を有する炎症性疾患は、関節リウマチ、橋本病及びＩ又はＩＩ型糖尿病を含む。
【００４２】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、臓器又は組織移植拒絶の予防又は治療、例えば、心臓、肺、心肺、肝臓、腎臓、膵臓、皮膚又は角膜の被移植者の治療並びに、特に、急性又は慢性の自家−及び異種移植拒絶の治療において又はインスリン産生細胞、例えば膵島細胞の移植において、骨髄移植に続いて時々起るような移植片対宿主病の予防に適している。
【００４３】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許
容される塩は、ＨＩＶ−介在レトロウイルス感染の予防又は治療に適切である。
【００４４】
ＨＩＶ−介在レトロウイルス感染は、ＧＵＮ−４ｖ、ＧＵＮ−７ｗｔ、ＡＧ２０４、ＡＧ２０６、ＡＧ２０８、ＨＣＭ３０５、ＨＣＭ３０８、ＨＣＭ３４２、ｍＳＴＤ１０４及びＨＣＭ３０９等のＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２株によって引き起こされる疾患及び障害の群の１つ、幾つか又はすべてを含むが、これらに限定されるものではない。
【００４５】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、心血管障害の予防又は治療に適切である。
【００４６】
心血管障害は、（心臓を含む）心血管系統の１又は２以上の病的状態及び依存性組織の疾患を意味する。心血管系統の病的状態及び依存性組織の疾患は、突発性心筋症、糖尿病性心筋症を含む代謝性心筋症、アルコール性心筋症、薬剤誘発性心筋症、虚血性心筋症及び高血圧性心筋症等の心筋の障害（心筋症又は心筋炎）；大動脈、冠動脈、頸動脈、脳動脈、腎動脈、腸骨動脈、大腿動脈、膝窩動脈等の主要血管のアテローム性疾患（大血管性疾患）；網膜細動脈、糸球体細動脈、神経栄養血管、心細動脈、及び目、腎臓、心臓及び中枢及び末梢神経系の関連する毛細血管等の細血管の中毒性、薬剤誘発性及び（高血圧性及び／又は糖尿病性を含む）代謝性障害（微小血管障害）；並びに大動脈、冠動脈、頸動脈、脳動脈、腎動脈、腸骨動脈、大腿動脈、膝窩動脈等の主要血管のアテローム病変のプラーク破裂を含むが、これらに限定されるものではない。
【００４７】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、神経炎症の予防又は治療に適切である。神経炎症は、細胞情報伝達分子の産生、グリア若しくはグリアの活性化経路及び反応の活性化、炎症促進性サイトカイン若しくはケモカイン、アストロサイト若しくはアストロサイトの活性化経路及び反応の活性化、ミクログリア若しくはミクログリアの活性化経路及び反応の活性化、一酸化窒素合成酵素の産生及び一酸化窒素の蓄積、急性期タンパク質、シナプトフィジン及びシナプス後肥厚部タンパク９５（ＰＳＤ−９５）の喪失、補体カスケードの構成要素、シナプス機能の喪失若しくは減少、プロテインキナーゼ活性（例えば、細胞死関連プロテインキナーゼ活性）、行動障害、細胞損傷（例えば、神経細胞損傷）、細胞死（例えば、神経細胞死）及び／又はアミロイド班のアミロイドβ沈着等の酸化ストレス関連反応を意味する。
【００４８】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、神経障害の予防又は治療に適切である。
【００４９】
特に、神経障害は、てんかん、脳卒中、脳虚血、脳性麻痺、再発型多発性硬化症、進行型多発性硬化症、視神経脊髄炎、臨床的に孤発した症候群（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、アルパース病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、老年認知症、レビー小体型認知症、レット症候群、脊髄外傷、外傷性脳損傷、三叉神経痛、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、ギラン−バレー症候群、舌咽神経痛、ベル麻痺、重症筋無力症、筋ジストロフィー、進行型筋萎縮症、進行型延髄遺伝性筋萎縮症、ヘルニア性、破裂性若しくは脱出性椎間板症候群、頸椎症、神経叢疾患、胸郭出口破壊症候群、末梢神経障害、軽度の認知機能低下、認知機能低下、アルツハイマー病、パーキンソン病及びハンチントン舞踏病（特に、てんかん、脳卒中、脳虚血、脳性麻痺、再発型多発性硬化症、進行型多発性硬化症、アルパース病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、老年認知症、レビー小体型認知症、レット症候群、脊髄外傷、外傷性脳損傷、三叉神経痛、舌咽神経痛、ベル麻痺、重症筋無力症、筋ジストロフィー、進行型筋萎縮症、進行型延髄遺伝性筋萎縮症、ヘルニア性、破裂性若しくは脱出性椎間板症候群、頸椎症、神経叢疾患、胸郭出口破壊症候群、末梢神経障害、軽度の認知機能低下、認知機能低下、アルツハイマー病、パーキンソン病及びハンチントン舞踏病）を含むが、これらに限定されるものではない。
【００５０】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、疼痛の予防又は治療に適切である。疼痛は、糖尿病性神経障害、帯状疱疹後神経痛、三叉神経痛、有痛性糖尿病性多発神経障害、卒中後痛、切断後痛、骨髄障害性若しくは神経根性疼痛、非定形顔面痛及びカウザルギー様症候群等の状態を例とする神経因性疼痛を含むが、これらに限定されるものではない。
【００５１】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、プリオン介在疾患の予防又は治療に適切である。プリオン介在疾患は、伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）としても知られており、クールー、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）及びクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）を含むが、これらに限定されるものではない。
【００５２】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、アミロイド介在障害の治療に適切である。アミロイド介在障害は、アミロイド又はアミロイド様タンパク質により引き起こされ、又はこれらと関連する疾患又は障害と定義される。アミロイド又はアミロイド様タンパク質により引き起こされ、又はこれらと関連する疾患又は障害は、軽度の認知障害（ＭＣＩ）等の認知記憶能力の喪失により特徴づけられる疾患又は状態を含む、アルツハイマー病（ＡＤ）；レビー小体型認知症；ダウン症；アミロイドーシスを伴う脳内出血を含むが、これらに限定されるものではない。別の態様においては、アミロイド又はアミロイド様タンパク質により引き起こされ、又はこれらと関連する疾患又は障害は、進行性核上性麻痺、アミロイド軽鎖アミロイド症、家族性アミロイドニューロパチー、多発性硬化症、クロイツフェルト・ヤコブ病、パーキンソン病、血管性認知症、ＨＩＶ−関連痴呆、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、成人発症型糖尿病及び老人性心アミロイドーシス（特に、進行性核上性麻痺、多発性硬化症、クロイツフェルト・ヤコブ病、パーキンソン病、ＨＩＶ−関連痴呆、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、成人発症型糖尿病及び老人性心アミロイドーシス）を含む。
【００５３】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、免疫応答の調節に適切である。
【００５４】
免疫応答の調節は、少なくとも１つの抗原と少なくとも１つの態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の組成物を対象に投与することに基づく方法を含むが、これらに限定されるものではない。いくつかの場合においては、抗原含有組成物を最初に投与し、次いで、少なくとも１つの態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の組成物を投与する。他の場合においては、抗原含有組成物が最後に投与される。異なる組成物の投与は、同時に行ってもよく、連続的に行ってもよく、又は異なる時間に行ってもよい。これらの方法及び組成物は、治療的及び予防的免疫化（すなわち、獲得及び／又は自然免疫反応の意図的な誘発、増強（ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）、強化（ｉｎｔｅｎｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）又は調節）のために供されるものである。特記すべき利点は、以下の１又は２以上を含む：
１）  抗原を単独で投与した場合と比較した、態様１）〜１２）に従う少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩及び抗原の投与に続く免疫反応の促進；
２）  少量の抗原（例えば、毒素又は病原体）、又は通常強い免疫反応を惹起しない抗原に対する感受性の増強；及び
３）  より効果的な抗腫瘍治療。
【００５５】
さらに、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、嚢胞性線維症、肺線維症、肺高血圧、創傷治癒、糖尿病性腎症、移植組織における炎症の軽減、病原微生物により引き起こされる炎症性疾患の予防又は治療に適切である。
【００５６】
特に、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、下記の群の疾患及び障害の１つ、幾つか又はすべてから選択される疾患の予防又は治療に適切である：
１）  急性肺障害（ＡＬＩ）；成人／急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎及びそれに伴う呼吸困難を含む気道又は肺疾患（ＣＯＰＤ、ＣＯＡＤ又はＣＯＬＤ）、並びに内因性（非アレルギー性）喘息及び外因性（アレルギー性）喘息、軽度の喘息、中等度の喘息、重症喘息、気管支炎性喘息、運動誘発喘息、職業性喘息及び細菌感染に続いて誘発される喘息を含む、いかなるタイプの、又はいかなる病因によるかを問わない喘息（特に、急性肺障害（ＡＬＩ）；成人／急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；並びに内因性（非アレルギー性）喘息及び外因性（アレルギー性）喘息、軽度の喘息、中等度の喘息、重症喘息、気管支炎性喘息、運動誘発喘息、職業性喘息及び細菌感染に続いて誘発される喘息を含む、いかなるタイプの、又はいかなる病因によるかを問わない喘息）等の炎症性疾患、閉塞性気道疾患及びアレルギー；
２）  好中球関連障害、特に、過剰−好中球増多症を含む、気道及び／又は肺に影響を与えるような気道の好中球関連障害；歯周炎；糸球体腎炎；嚢胞性線維症；等の炎症性疾患及び乾癬、接触皮膚炎、アトピー性皮膚炎、ヘルペス状皮膚炎、硬皮症、過敏性血管炎、じんましん、紅斑性狼瘡及び表皮剥離；等の皮膚病；
３）  結膜炎、角膜乾燥症及び春季カタル等の眼に影響を与える疾患及び状態；自己免疫反応が関連し、又は自己免疫相若しくは自己免疫的な病因を有する炎症性疾患；並びに自己免疫性炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）；等の炎症相を有する疾患；
４）  ＧＵＮ−４ｖ、ＧＵＮ−７ｗｔ、ＡＧ２０４、ＡＧ２０６、ＡＧ２０８、ＨＣＭ３０５、ＨＣＭ３０８、ＨＣＭ３４２、ｍＳＴＤ１０４及びＨＣＭ３０９等のＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２株によって引き起こされる疾患及び障害等のＨＩＶ−介在レトロウイルス感染；
５）  細胞情報伝達分子の産生、グリア又はグリアの活性化経路及び反応の活性化、炎症促進性サイトカイン又はケモカイン、アストロサイト又はアストロサイトの活性化経路及び反応の活性化、ミクログリア又はミクログリアの活性化経路及び反応の活性化、アミロイド班のアミロイドβ沈着等の酸化ストレス関連反応に関連する神経炎症；
６）  脳卒中、脳虚血、アルツハイマー病及びパーキンソン病等の神経障害；
７）  伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）としても知られている、クールー、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）及びクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）等のプリオン介在疾患；
８）  アミロイド介在障害；
９）  嚢胞性線維症、創傷治癒及び病原微生物により引き起こされる炎症性疾患。
【００５７】
最も好ましくは、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、急性肺障害（ＡＬＩ）；喘息；嚢胞性線維症；角膜乾燥症；炎症性腸疾患；関節リウマチ；及びアルツハイマー病からなる群より選択される疾患の予防又は治療に適切である。
【００５８】
本発明はまた、上記の疾患の治療及び／又は予防のための医薬組成物の製造のための態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００５９】
本発明はまた、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の薬学的に許
容される塩並びに医薬組成物及び製剤に関する。
【００６０】
本発明に従う医薬組成物は、活性成分として、態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つ（又は、その薬学的に許容される塩）を、そして任意に、担体及び／又は希釈剤及び／又はアジュバントを含む。
【００６１】
態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそれらの薬学的に許容される塩は、医薬として、たとえば（特に経口等の）経腸又は（局所的適用又は吸入を含む）非経口投与のための医薬組成物の形態で使用することができる。
【００６２】
医薬組成物の製造は、いずれの当業者によく知られた様式で（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）、Ｐａｒｔ  ５、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ」［Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓにより出版］を見よ。）、記述された式（Ｉ）の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩を、任意にその他の治療的に有益な物質と組み合わせて、適切な無毒の不活性な治療上適合性のある固体又は液体の担体材料、及び必要に応じて、通常の薬学的アジュバントと共に、製剤投与形態とすることにより遂行することができる。
【００６３】
本発明はまた、薬学的に活性な量の態様１）〜１２）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、本明細書に言及した疾患又は障害の予防又は治療方法に関する。
【００６４】
本明細書における、式Ｉ又はＩＳＴ１の化合物に対するいかなる言及も、適宜かつ文脈に応じて、そのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）にも言及しているものと理解されるべきである。式Ｉの化合物に対して示した好適性は、当然のことながら、式ＩＳＴ１の化合物並びに式Ｉ又は式ＩＳＴ１の化合物の塩及び薬学的に許容される塩にも準用される。同様のことが、医薬としてのこれらの化合物に、これらの化合物を活性成分として含む医薬組成物に、又は疾患の治療のための医薬の製造のためのこれらの化合物の使用に適用される。
【００６５】
温度に関して使用されていない場合には、数値「Ｘ」の前に置かれる「約」（あるいは「およそ」）という用語は、本出願において、Ｘ−１０％ＸからＸ＋１０％Ｘの間、好ましくはＸ−５％ＸからＸ＋５％Ｘの間を表す。温度の特定の場合には、温度「Ｙ」の前に置かれる「約」（あるいは「およそ」）という用語は、この出願において、Ｙ−１０℃からＹ＋１０℃の間、好ましくはＹ−５℃からＹ＋５℃の間を表す。さらに、ここで使用される「室温」（ｒｔ）という用語は、約２５℃の温度を意味する。
【００６６】
数値の範囲を記述するために「間」という単語が使用される場合は常に、示された範囲の末端の点は明示的にその範囲に含まれることが理解されるべきである。これは、例えば、温度範囲が４０℃と８０℃の間であると記述される場合、末端の点である４０℃と８０℃はその範囲に含まれることを意味し；あるいは、可変数が１と４の間の整数であると定義される場合、可変数は整数の１、２、３又は４であることを意味する。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物は、以下の方法によって、実施例に示された方法によって、又は類似の方法によって製造することができる。最適反応条件は、使用する具体的反応物又は溶媒によって変わるが、このような条件は、当業者により、ルーチンの最適化手順によって決定することができる。
【００６８】
別段の記載がない限り、包括的な基、Ｒ１及びｎは、式（Ｉ）に定義した通りである。
使用される他の略語は、実験の部に定義する。
【００６９】
Ａ．  最終化合物の合成
式（Ｉ）の化合物は、下記の一般的手順（実験の部）に記載するように、構造１の化合物のＢＯＣ脱保護により、構造１の化合物から製造することができる。
【００７０】
【化４】
2015516463.tif 000006
【００７１】
構造１の化合物は、ＤＩＰＥＡ又はＤＭＡＰ又は両者の組み合わせ等の塩基の存在下、ｒｔから約６０℃の範囲の温度にて、ＣＨ２Ｃｌ２又はＴＨＦ／ＤＭＦ等の適切な溶媒中で、ＥＤＣ／ＨＯＢｔ又はＤＣＣ／ＨＯＡｔ又はＰｙＢＯＰ又はＨＡＴＵ等の標準的なアミドカップリング条件を用いて、適切なアミンとの反応により、構造２のカルボン酸から製造することができる。あるいは、式（Ｉ）の化合物は、ＤＣＥ／ピリジン（１：１）等の適切な溶媒中で、ＰＯＣｌ３を用いて、構造２のカルボン酸を適切なアミンとカップリングすることにより製造することができる。あるいは、式（Ｉ）の化合物は、（トルエン又はＣＨ２Ｃｌ２等の溶媒中で、塩化オキサリル及び触媒量のＤＭＦ等の標準的な条件を用いて）塩化アシルの形成を介して、適切なアミンを構造２のカルボン酸とカップリングすることにより製造することができる。
【００７２】
【化５】
2015516463.tif 000007
【００７３】
構造２のカルボン酸は、実験の部に記載された手順に従って合成することができる（ＷＯ２０１０／１３４０１４も参照されたい。）。
【００７４】
適切なアミンは、市販されているか、又は下記若しくは実験の部に記載された方法により合成することができる。
【００７５】
アミンであるｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート及びｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートは、既知の手順（ＷＯ２００５／０９０３３０）に従って合成することができる。
【００７６】
ラセミ体のｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３，３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレートは、下記の合成シークエンスを用いて、１−ベンジル−３，３−ジフルオロピペリジン−４，４−ジオール（ＷＯ２００８／１２１６８７及びＷＯ２００５／０４０１２０）から製造することができる：１）  ＴＨＦ等の溶媒中における、０℃からｒｔの範囲の温度での、ＮａＢＨ４等の還元剤を用いたジオールの還元；２）  Ｐｄ（ＯＨ）２等の触媒の存在下での、ＥｔＯＨ等の溶媒中における、ｒｔでの、１−ベンジル−３，３−ジフルオロピペリジン−４−オールの水素化、続く、ＣＨ２Ｃｌ２等の溶媒中における、ｒｔでの、ジ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルを用いたＢｏｃ保護による、ベンジルからＢｏｃへの保護基の変換；３）  ＣＨ２Ｃｌ２等の適切な溶媒中における、０℃からｒｔの範囲の温度での、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン等の酸化剤を用いたヒドロキシ基の酸化；４）  ＣＨ２Ｃｌ２等の適切な溶媒中における、ｒｔでの、ベンジルアミン及びＮａＢＨ（ＯＡｃ）３又はＮａＢＨ４等の適切な還元剤を用いた還元的アミノ化；及び５）  ＭｅＯＨ等の溶媒中における、ｒｔでの、Ｐｄ等の金属を用いた水素化によるベンジル保護基の開裂。
【００７７】
Ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート、ｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート及びｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３，３−ジフルオロピロリジン−１−カルボキシレートの合成を、スキーム１に概略する。
【００７８】
Ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレートは、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキシレート（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  ２０１０、５３、６７３０−６７４６）から、ＣＨ２Ｃｌ２等の適切な溶媒中で、−７８℃から０℃の範囲の温度にて、ＤＡＳＴ等の適切なフッ素化剤を用いてフッ素化し、次いで、ＴＨＦ等の適切な溶媒中で、約６０℃の温度にて、ＰＰｈ３／Ｈ２Ｏを用いて、アジド基を対応するアミンに還元するか、又は、ＭｅＯＨ等の適切な溶媒中で、ｒｔにて、Ｐｄ又はＰｔＯ２等の触媒を用いて水素化することにより製造することができる。
【００７９】
Ｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレートは、下記のシークエンスを用いて得ることができる：１）  例えば、約５℃からｒｔの範囲の温度における、ピリジン中ＴｓＣｌを用いたトシル化によるｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキシレートのヒドロキシ基の活性化；２）  ＴＨＦ等の適切な溶媒中における、ｒｔから約６５℃の範囲の温度での、フッ化ｎ−トリブチルアンモニウム等の適切なフッ素化剤を用いたフッ素化；及び３）  ＴＨＦ等の適切な溶媒中における、約６０℃の温度での、ＰＰｈ３／Ｈ２Ｏを用いた、アジド基の対応するアミンへの還元、又は、ＭｅＯＨ等の適切な溶媒中における、ｒｔでの、Ｐｄ又はＰｔＯ２等の触媒を用いた水素化。
【００８０】
Ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３，３−ジフルオロピロリジン−１−カルボキシレートは、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−ヒドロキシピロリジン−１−カ
ルボキシレートから出発する３つの合成工程で得られる：１）  例えばＳｗｅｒｎの条件、すなわちＣＨ２Ｃｌ２等の適切な溶媒中における、−７８℃から−６０℃の範囲の温度での、塩化オキサリル及びＤＭＳＯを用いた、又は、ＣＨ２Ｃｌ２又はＴＨＦ等の適切な溶媒中における、０℃からｒｔの範囲の温度での、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナンを用いたヒドロキシ基の酸化；２）  ＣＨ２Ｃｌ２等の適切な溶媒中における、０℃からｒｔの範囲の温度での、ＤＡＳＴ又はＤｅｏｘｏｆｌｕｏｒ等の適切なフッ素化剤を用いたフッ素化；及び３）  ＴＨＦ等の適切な溶媒中における、約６０℃の温度での、ＰＰｈ３／Ｈ２Ｏを用いた、アジド基の対応するアミンへの還元、又は、ＭｅＯＨ等の適切な溶媒中における、ｒｔでの、Ｐｄ又はＰｔＯ２等の触媒を用いた水素化。
【００８１】
光学的に純粋な（Ｅｎａｎｔｉｏｐｕｒｅ）ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート、ｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート及びｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３，３−ジフルオロピロリジン−１−カルボキシレートは、光学的に純粋なｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキシレートを出発物質として製造することができ、この化合物は、例えばＪａｃｏｂｓｅｎのサレン触媒を用いた、対応するエポキシドの不斉開環反応を介して得られる（ＷＯ２００６／１１４４０１）。触媒のコンフィグレーションに応じて、一方又は他方のエナンチオマーが得られる。
【００８２】
【化６】
2015516463.tif 000008
【００８３】
実験の部（この項において、及び明細書の上記の部分において使用される）略語：
Ａｃ            アセチル
ａｑ．          水溶液
Ｂｏｃ          ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｂｐ            沸点
（ｎ−）Ｂｕ    ブチル
ｃａ．          約
ＣＯＡＤ        慢性閉塞性気道疾患
ＣＯＬＤ        慢性閉塞性肺疾患
ＣＯＰＤ        慢性閉塞性肺疾患
ＤＡＤ          ダイオードアレイ検出器
ＤＡＳＴ        三フッ化Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ硫黄
ＤＣＣ          Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＥ          １，２−ジクロロエタン
ＤＥＡ          ジエチルアミン
ＤＩＰＥＡ      ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ        ４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥＭ        ダルベッコ修正イーグル培地
ＤＭＦ          ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ        ジメチルスルフォキシド
ＥＡ            酢酸エチル
ＥＣ５０        半数効果濃度
ＥＤＣ          Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミドＥＬＳＤ        蒸発光散乱検出器
ｅｑ．          当量
Ｅｔ            エチル
エーテル又はＥｔ２Ｏ  ジエチルエーテル
Ｅｔ３Ｎ        トリエチルアミン
ＥｔＯＨ        エタノール
ＦＣ            シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー
ＦＬＩＰＲ      蛍光イメージングプレートリーダー
ＦＰＲＬ１      ホルミルペプチド受容体ｌｉｋｅ−１
ＦＰＲＬ２      ホルミルペプチド受容体ｌｉｋｅ−２
ＧＳＨ          グルタチオン
ｈ              時間
ＨＡＴＵ        ２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，
３，３−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスファート
ＨＥＰＥＳ      ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ｈｅｐｔ        ヘプタン
ＨＩＶ          ヒト免疫不全ウイルス
ＨＯＢｔ        ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＯＡｔ        ７−アザ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ        高速液体クロマトグラフィー
ｉ．ｐ．        腹腔内
ｉ．ｖ．        静脈内
ＬＣ−ＭＳ      液体クロマトグラフィー−質量分析
ｌｅｍ          発光波長
ｌｅｘ          励起波長
Ｍｅ            メチル
ＭｅＯＨ        メタノール
ｍｉｎ          分
ｍＭ            ミリモル
μＭ            マイクロモル
ＭＳ            質量分析
ｎｍ            ナノメーター
ｎＭ            ナノモル
ＮＭＲ          核磁気共鳴
ＯＡｃ          アセテート
ｏｒｇ．        有機
ｐ              パラ
ｐ．ｏ．        経口
ＰｙＢＯＰ      ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−
ホスフォニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート
ｒｆ            保持係数
ｒｐｍ          分当たりの回転数
ｒｔ            室温
ｓａｔ．        飽和
ｓ．ｃ．        皮下注射
ｔ−Ｂｕ        ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＦＡ          トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ          テトラヒドロフラン
ＴＬＣ          薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳ          トリメチル−シリル
ｔＲ            保持時間
ＴｓＣｌ        塩化トシル
ＵＩ            国際単位
ＵＶ            紫外線
Ｖｉｓ          可視
【００８４】
Ｉ−化学
全般。すべての温度は摂氏温度（℃）で示す。別段の記載が無い限り、反応はｒｔで行う。
【００８５】
分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、０．２ｍｍプレート：Ｍｅｒｃｋ、Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４を用いて行った。分取用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、０．２又は０．５ｍｍプレート：Ｍｅｒｃｋ、Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４を用いて行った。検出は、ＵＶ、又はＫＭｎＯ４（３ｇ）、Ｋ２ＣＯ３（２０ｇ）、ＮａＯＨ５％（３ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３００ｍＬ）の溶液を用い、次いで加熱することにより行った。
【００８６】
フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣ）及びろ過は、Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０  Ｍｅｒｃｋ（０．０６３−０．２００ｍｍ）又はＭａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ  シリカゲル（０．０６３−０．２００ｍｍ）を用いて行った：溶出は、ＥＡ、Ｅｔ２Ｏ、ｈｅｐｔ、ヘキサン、石油エーテル、ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨＣｌ３、ＭｅＯＨ、ＮＨ４ＯＨ又はこれらの混合物を用いて行った。
【００８７】
ＬＣ−ＭＳ−条件０２（別段の記載が無い限り）：分析用：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００
Ｂｉｎａｒｙ  Ｐｕｍｐ及びＤＡＤを備えたＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＭＳＱ
Ｐｌｕｓ  ＭＳ。カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＺｏｒｂａｘ
ＳＢ−ＡＱ  ５μｍ、４．６ｘ５０ｍｍＩＤ。溶出液：Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０４％ＴＦＡ；Ｂ：ＣＨ３ＣＮ；勾配：１分に渡り５％Ｂから９５％Ｂへ。流速：４．５０ｍＬ／ｍｉｎ。検出：ＵＶ／Ｖｉｓ及び／又はＥＬＳＤ及びＭＳ、ｔＲはｍｉｎ．で示す。
【００８８】
ＬＣ−ＭＳ−条件０７（別段の記載が無い限り）：分析用。ポンプ：Ｄｉｏｎｅｘ  Ｈ
ＰＧ−３２００ＲＳ、ＭＳ：Ｔｈｅｒｍｏ  ＭＳＱ  Ｐｌｕｓ、ＤＡＤ：Ｄｉｏｎｅｘ  ＤＡＤ−３０００ＲＳ、ＥＬＳＤ：Ｓｅｄｅｒｅ  Ｓｅｄｅｘ  ８５。カラム：Ｄｉｏｎｅｘ  ＴＣＣ−３２００コンパートメント内で温度制御された、ＷａｔｅｒｓのＸｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ２．５μＭ、４．６ｘ３０ｍｍＩＤ。溶出液：Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０４％ＴＦＡ；Ｂ：ＣＨ３ＣＮ。方法：勾配：１．００分に渡り５％Ｂから９５％Ｂへ。流速：４．５ｍＬ／ｍｉｎ。検出：ＵＶ／Ｖｉｓ及び／又はＥＬＳＤ、及びＭＳ、ｔＲはｍｉｎ．で示す。
【００８９】
ＬＣ−ＭＳ−条件０８（別段の記載が無い限り）：分析用。ポンプ：Ｄｉｏｎｅｘ  ＨＰＧ−３２００ＲＳ、ＭＳ：Ｔｈｅｒｍｏ  ＭＳＱ  Ｐｌｕｓ、ＤＡＤ：Ｄｉｏｎｅｘ  ＤＡＤ−３０００ＲＳ、ＥＬＳＤ：Ｓｅｄｅｒｅ  Ｓｅｄｅｘ  ８５。カラム：Ｄｉｏｎｅｘ  ＴＣＣ−３２００コンパートメント内で温度制御された、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＺｏｒｂａｘ  ＳＢ−ＡＱ  ３．５μｍ、４．６ｘ５０ｍｍＩＤ。溶出液：Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０４％ＴＦＡ；Ｂ：ＣＨ３ＣＮ。方法：勾配：１．００分に渡り５％Ｂから９５％Ｂへ。流速：４．５ｍＬ／ｍｉｎ。検出：ＵＶ／Ｖｉｓ及び／又はＥＬＳＤ、及びＭＳ、ｔＲはｍｉｎ．で示す。
【００９０】
ＬＣ−ＭＳ−条件０９（別段の記載が無い限り）：分析用。ポンプ：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｇ１３１２Ａ、ＭＳ：Ｔｈｅｒｍｏ  ＭＳＱ  Ｐｌｕｓ、ＤＡＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｇ１３１５Ａ、ＥＬＳＤ：Ｓｅｄｅｒｅ  Ｓｅｄｅｘ  ８５。カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ５μｍ、４．６ｘ５０ｍｍ、溶出液：Ａ：水／ＮＨ３［ｃ（ＮＨ３）＝１３ｍｍｏｌ／Ｌ］；Ｂ：ＣＨ３ＣＮ；溶出液の調整（Ｅｌｕｅｎｔ  ＭａｋｅＵｐ）：緩衝液、ｃ（ＮＨ４ＨＣＯＯ）＝１０ｍｍｏｌ／Ｌ。方法：勾配：０．７５ｍｉｎに渡り５％Ｂから９５％Ｂへ。流速：４．５ｍＬ／ｍｉｎ。検出：ＵＶ／Ｖｉｓ及び／又はＥＬＳＤ及びＭＳ、ｔＲはｍｉｎ．で示す。
【００９１】
ＬＣ−ＭＳ−条件１０（別段の記載が無い限り）：分析用。ポンプ：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｇ４２２０Ａ、ＭＳ：Ｔｈｅｒｍｏ  ＭＳＱ  Ｐｌｕｓ、ＤＡＤ：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｇ４２１２Ａ、ＥＬＳＤ：Ｓｅｄｅｒｅ  Ｓｅｄｅｘ  ９０。カラム：Ｄｉｏｎｅｘ  ＴＣＣ−３２００コンパートメント内で温度制御された、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＺｏｒｂａｘ  ＳＢ−ＡＱ  ３．５μｍ、４．６ｘ５０ｍｍＩＤ。溶出液：Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０４％ＴＦＡ；Ｂ：ＣＨ３ＣＮ。溶出液の調整（Ｅｌｕｅｎｔ  ＭａｋｅＵｐ）：ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ  ７：３を０．２５０ｍＬ／ｍｉｎで。方法：勾配：１．０７ｍｉｎに渡り５％Ｂから９５％Ｂへ。流速：４．５ｍＬ／ｍｉｎ。検出：ＵＶ／Ｖｉｓ及び／又はＥＬＳＤ及びＭＳ、ｔＲはｍｉｎ．で示す。
【００９２】
分取用ＨＰＬＣ：ＷａｔｅｒｓのＸ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ５μｍ、５０ｘ１９ｍｍＩＤ。溶出液：Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．５％ＮＨ４ＯＨ；Ｂ：ＣＨ３ＣＮ；勾配：５ｍｉｎに渡って１０％Ｂから９０％Ｂへ。流速：４０．０ｍＬ／ｍｉｎ。検出：ＵＶ／Ｖｉｓ及び／又はＥＬＳＤ、及びＭＳ、ｔＲはｍｉｎ．で示す。
【００９３】
キラルＨＰＬＣ、分析用：（Ｒ，Ｒ）  Ｗｈｅｌｋ−Ｏ１  ２５０ｘ４．６ｍｍＩＤ、５μｍ。溶出液Ａ（８０％）：ヘプタン＋０．０５％ＤＥＡ。溶出液Ｂ（２０％）：エタノール＋０．０５％ＤＥＡ。流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ。検出：ＵＶ／Ｖｉｓ、ｔＲはｍｉｎ．で示す。
【００９４】
ＮＭＲ：Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ４００（４００ＭＨｚ）；Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ３００（３００ＭＨｚ）；化学シフトは、使用する溶媒と関連して、ｐｐｍで示す；多重度：ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｐ＝五重項、ｈｅｘ＝六重項、ｈｅｐｔ＝七重項、ｍ＝多重項、ｂｒ＝広域、結合定数はＨｚで示す。
【実施例】
【００９５】
以下の実施例は本発明を説明するものであり、その範囲を限定するものではまったくない。
【００９６】
一般的手順Ａ：アミドカップリング：
磁気撹拌棒を備えた火炎乾燥した丸底フラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、カルボン酸（１．０ｅｑ．）をＣＨ２Ｃｌ２（０．２Ｍ）中に溶解したものに、アミン（１．０−２．０ｅｑ．）、ＥＤＣ．ＨＣｌ（２．０−４．０ｅｑ．）、ＨＯＢｔ（１．２−２．４ｅｑ．）及びＤＩＰＥＡ（３．０−６．０ｅｑ．）を加えた。反応混合物を、反応が完結するまでｒｔで撹拌した。次いで、水を加え、層を分離し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。必要に応じて残渣をＦＣ又はＨＰＬＣで精製し、所望の化合物を得た。
【００９７】
一般的手順Ｂ：Ｂｏｃ脱保護
ガラスバイアル内で、不活性雰囲気下（Ｎ２）、Ｂｏｃ−保護アミン（１．０ｅｑ．）をＣＨ２Ｃｌ２中に溶解したものを、ジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ（１０．０ｅｑ．）で処理し、反応混合物を、反応が完結するまで０℃又はｒｔで撹拌した。混合物を１Ｍ  ａｑ．ＮａＯＨで塩基性化し、化合物をＥＡで抽出した。有機性抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。必要に応じて残渣をＦＣ又はＨＰＬＣで精製し、所望の化合物を得た。
【００９８】
中間体の合成：
スピロ［２．４］ヘプタ−４，６−ジエン：
【００９９】
【化７】
2015516463.tif 000009
【０１００】
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド（１８．０ｇ、７８ｍｍｏｌ）を５０％ＮａＯＨ水溶液（１．２Ｌ）中に混合したものを、４５℃に加熱した。シクロペンタジエン（シクロペンタジエン二量体の１８０℃におけるクラッキングにより形成、１４０ｍＬ、１．７０ｍｏｌ）を１，２−ジクロロエタン（１２２ｍＬ、１．５５ｍｏｌ）中に溶解した冷溶液を、内部温度を５５℃未満に保ちながら、攪拌したＮａＯＨ溶液に加えた。添加完了後（ｃａ．１．７５ｈ）、反応混合物を５０℃にて２ｈ攪拌し、ｒｔに冷ました。層を分離し、有機層を１Ｍ  ＮａＯＨで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過した。粗製の茶色の液体を減圧下で蒸留し（８５−９５ｍｂａｒ）、表題化合物を無色の液体として得た（８０ｍｂａｒにおいてｂｐ＝４５−５０℃）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ６．５８（ｍ、２Ｈ）、６．１９（ｍ、２Ｈ）、１．７１（ｓ、４Ｈ）。
【０１０１】
Ｄｉｅｌｓ  Ａｌｄｅｒ反応−（５Ｒ，６Ｒ）−５，６−ビス−［（１−（１Ｓ）−エトキシカルボニル）−エトキシ−カルボニル］−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エテニレン−スピロ［２．４］ヘプタン］の形成：
【０１０２】
【化８】
2015516463.tif 000010
【０１０３】
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、（Ｅ）−１，２−ビス−［（（１Ｓ）−１−エトキシカルボニル）−エトキシ−カルボニル］−エテン（７．４０ｇ、２２．７ｍｍｏｌ）をｎ−ヘキサン（７６ｍＬ）中に溶解したものに、スピロ［２．４］ヘプタ−４，６−ジエン（３．１４ｇ、３４．０ｍｍｏｌ）をｒｔにて加えた。反応混合物をこの温度で一晩攪拌した。混合物を減圧下で濃縮し、粗製の残渣をＦＣ（ｈｅｐｔ／ＥＡ、９：１）で精製した。表題化合物を薄黄色のオイルとして得た。ＴＬＣ：ｒｆ（ｈｅｐｔ／ＥＡ、９：１）＝０．２５。ＬＣ−ＭＳ−条件０２：ｔＲ＝１．１２ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０９．００。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．４４（ｄｄ、Ｊ＝５．５、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．３２（ｄｄ、Ｊ＝５．５、２．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．１２（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．０６（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．２８−４．１４（ｍ、４Ｈ）、３．７６（ａｐｐ．ｔ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．９２（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．８６（ｍ、１Ｈ）、２．８０（ｍ、１Ｈ）、１．５５−１．４７（ｍ、６Ｈ）、１．２９（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）、１．２９（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）、０．７０（ｍ、１Ｈ）、０．５６−０．４４（ｍ、３Ｈ）。
【０１０４】
けん化−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エテニレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−（５Ｒ，６Ｒ）−５，６−ビス−カルボン酸の形成：
【０１０５】
【化９】
2015516463.tif 000011
【０１０６】
（５Ｒ，６Ｒ）−５，６−ビス−［（１−（１Ｓ）−エトキシカルボニル）−エトキシ−カルボニル］−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エテニレン−スピロ［２．４］ヘプタン］（９．５１ｇ、２３．２８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１：１、２３２ｍＬ）中に溶解したものに、ＬｉＯＨ（３．９１ｇ、９３．１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をｒｔにて一晩攪拌した。１Ｎ  ＨＣを加え、反応混合物のｐＨをｐＨ＝３に調整し、層を分離し、水層をＥＡ（３ｘ）で抽出した。合わせた有機性抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製の残渣をＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９：１）で精製し、表題化合物を無色のオイルとして得た。ＴＬＣ：ｒｆ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９：１）＝０．３１。ＬＣ−ＭＳ−条件０２：ｔＲ＝０．７２ｍｉｎ；［Ｍ＋ＣＨ３ＣＮ＋Ｈ］＋＝２５０．１８。
【０１０７】
ヨードラクトン化−６−ヨード−２−オキソヘキサヒドロスピロ［３，５−メタノシクロペンタ［ｂ］フラン−４，１’−シクロプロパン］−７−カルボン酸の形成：
【０１０８】
【化１０】
2015516463.tif 000012
【０１０９】
（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エテニレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−（５Ｒ，６Ｒ）−５，６−ビス−カルボン酸（５．６０ｇ、２２．３２ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（３３ｍＬ）中に溶解したものに、ＮａＨＣＯ３（２．０６ｇ、２４．５６ｍｍｏｌ）、水（１００ｍＬ）、ＫＩ（１．３７ｇ、８２．６０ｍｍｏｌ）及びＩ２（６．８０ｇ、２６．７９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をｒｔにて３ｈ攪拌した。反応を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液の添加によりクェンチした。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ）で抽出した。合わせた有機性抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製のフォームをＦＣ（ＥＡ）により精製し、表題化合物を白色の固体として得た。ＴＬＣ：ｒｆ（ＥＡ）＝０．３３。
【０１１０】
エステル化−メチル  ６−ヨード−２−オキソヘキサヒドロスピロ［３，５−メタノシクロペンタ［ｂ］フラン−４，１’−シクロプロパン］−７−カルボキシレートの形成：
【０１１１】
【化１１】
2015516463.tif 000013
【０１１２】
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、６−ヨード−２−オキソヘキサヒドロスピロ［３，５−メタノシクロペンタ［ｂ］フラン−４，１’−シクロプロパン］−７−カルボン酸（５．００ｇ、１４．９６ｍｍｏｌ）を乾燥ＭｅＯＨ（７５ｍＬ）中に溶解したものに、ＴＭＳＣＨ２Ｎ２（ヘキサン中２．０Ｍ、３７．０ｍＬ、７４．８３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をｒｔにて一晩攪拌し、減圧下で濃縮し、ＦＣ（ｈｅｐｔ／ＥＡ、４：１）で精製し、表題化合物を白色の固体として得た。ＴＬＣ：ｒｆ（ｈｅｐｔ／ＥＡ、４：１）＝０．１８。
【０１１３】
レトロ−ヨードラクトン化−（６Ｒ）−６−メトキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エテニレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−（５Ｒ）−５−カルボン酸の形成：
【０１１４】
【化１２】
2015516463.tif 000014
【０１１５】
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、メチル  ６−ヨード−２−オキソヘキサヒドロスピロ［３，５−メタノシクロペンタ［ｂ］フラン−４，１’−シクロプロパン］−７−カルボキシレート（２．８６ｇ、８．２１ｍｍｏｌ）を酢酸（２９ｍＬ）中に溶解したものに、亜鉛粉末（８．０６ｇ、１２３．２３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６５℃にて４ｈ攪拌し、ｒｔに冷却し、ろ過し、水とＥＡの間で分画した。層を分離し、水層をＥＡ（３ｘ）で抽出した。合わせた有機性抽出物を塩水（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製の残渣をＦＣ（ｈｅｐｔ／ＥＡ、１：１）で精製し、表題化合物を無色のオイルとして得た。ＴＬＣ：ｒｆ（１：１、ｈｅｐｔ／ＥＡ）＝０．４１。
【０１１６】
二重結合の還元−（６Ｒ）−６−メトキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−（５Ｒ）−５−カルボン酸の形成：
【０１１７】
【化１３】
2015516463.tif 000015
【０１１８】
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、（６Ｒ）−６−メトキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エテニレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−（５Ｒ）−５−カルボン酸（２２０ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ１０％（４４ｍｇ）及びシクロヘキセン（０．２０ｍＬ、１．９８ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（２．５ｍＬ）中に懸濁した脱酸素懸濁液を、還流下にて２ｈ攪拌した。反応混合物をセライトを通してろ過し、フィルターケークをＴＨＦで洗浄した。ろ液を減圧下で濃縮し、表題化合物を白色の固体として得た。ＴＬＣ：ｒｆ（ｈｅｐｔ／ＥＡ、２：３）＝０．４８。
【０１１９】
４−ブロモ−２−フルオロベンジルアミンとのアミドカップリング−（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−メトキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミドの形成：
【０１２０】
【化１４】
2015516463.tif 000016
【０１２１】
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、（６Ｒ）−６−メトキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−（５Ｒ）−５−カルボン酸（５．００ｇ、２２．３０ｍｍｏｌ）を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３５ｍＬ）中に溶解したものに、３滴のＤＭＦ及び塩化オキサリル（２．２５ｍＬ、２５．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をｒｔにて６０分攪拌し、減圧下で濃縮した。４−ブロモ−２−フルオロベンジルアミン塩酸塩（５．４２ｇ、２２．３０ｍｍｏｌ）をピリジン（５．４０ｍＬ）中に懸濁したものに、塩化アシルをアセトン中に溶解したもの（３５ｍＬ）を加えた。反応混合物をｒｔにて１ｈ攪拌し、ＥＡで希釈し、ａｑ．１Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び塩水で連続的に洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、表題化合物を黄色のオイルとして得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．９４ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０９．８４。
【０１２２】
（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−ヒドロキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミド（ＷＯ２０１０／１３４０１４）：
【０１２３】
【化１５】
2015516463.tif 000017
【０１２４】
（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−メトキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミド（５．７０ｇ、１３．９０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）中に溶解したものに、２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（３１．００ｍＬ、６２．００ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、反応が完結するまでｒｔにて攪拌した。次いで、混合物をａｑ．１Ｎ
ＨＣｌ中に注ぎ、ＥＡ（３ｘ）で抽出した。合わせた有機性抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、表題化合物を白色のフォームとして得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．８５ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９５．７７。
【０１２５】
１−ベンジル−３，３−ジフルオロピペリジン−４−オール：
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、１−ベンジル−３，３−ジフルオロピペリジン−４，４−ジオール（ＷＯ２００８／１２
１６８７及びＷＯ２００５／０４０１２０）（２．８８ｇ、１１．８５ｍｍｏｌ）を乾燥ＭｅＯＨ（５８ｍＬ）中に溶解したものに、ＮａＢＨ４（６７２ｍｇ、１７．７６ｍｍｏｌ）を０℃にて少しずつ加えた。反応混合物を０℃にて１５ｍｉｎ攪拌した。次いで、０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）を加え、混合物を５ｍｉｎさらに攪拌し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製の残渣をＦＣ（ｈｅｐｔ／ＥＡ、２：１から１：１へ）で精製し、そして表題化合物をベージュ色のオイルとして得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．４２ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２２８．３２。
【０１２６】
３，３−ジフルオロピペリジン−４−オール：
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、１−ベンジル−３，３−ジフルオロピペリジン−４−オール（１．７３ｇ、７．６２ｍｍｏｌ）とＰｄ（ＯＨ）２（２０％Ｐｄ、１０７ｍｇ）を乾燥ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中に懸濁したものを、反応が完結するまでＨ２気圧下でｒｔにて攪拌した。次いで、混合物をろ過し、ＥＡ／ＥｔＯＨで洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮し、表題化合物をベージュ色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．１５ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３８．２７。
【０１２７】
ｔｅｒｔ−ブチル  ３，３−ジフルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート：
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、３，３−ジフルオロピペリジン−４−オール（７００ｍｇ、５．１０ｍｍｏｌ）を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中に溶液したものに、Ｂｏｃ２Ｏ（１．１１ｇ、５．１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をｒｔにて２ｈ攪拌した。次いで水を加え、層を分離し、そして水層をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ）で抽出した。有機性抽出物を合わせて、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、表題化合物を黄色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．６９ｍｉｎ；［Ｍ−ＣＨ３＋Ｈ］＋＝２２３．３０。
【０１２８】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（ベンジルアミノ）−３，３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレート：
磁気撹拌棒を備えた火炎乾燥した丸底フラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ｔｅｒｔ−ブチル  ３，３−ジフルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート（２．４０ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中に溶解した氷冷溶液に、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナンの溶液（ＣＨ２Ｃｌ２中の１５％溶液を５０ｍＬ、２４．００ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、反応が完結するまでｒｔで撹拌した。次に、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）、次いで１０％  ａｑ．Ｎａ２ＳＯ３（５０ｍＬ）を加えた。混合物をｒｔにて１ｈ撹拌し、層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ）で抽出した。有機性抽出物を合わせて、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製残渣をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中に再溶解し、モレキュラー・シーヴの存在下で２４ｈ撹拌し、ろ過し、減圧下で濃縮し、ｔｅｒｔ−ブチル  ３，３−ジフルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボキシレートを黄色の固体として得た。
【０１２９】
ｔｅｒｔ−ブチル  ３，３−ジフルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（０．２５０ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（４．５ｍＬ）中に溶解したものに、ベンジルアミン（０．１３ｍＬ、１．１７ｍｍｏｌ）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．３５６ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）を加え、溶液をｒｔにて２２ｈ撹拌した。反応混合物を飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液で処理し、ＥＡ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機性抽出物を合わせて、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いた。残渣をＦＣ（ヘプタン／ＥＡ、１：１）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（ベンジルアミノ）−３，３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレートを得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．６５ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２７．３２。
【０１３０】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３，３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレート：
磁気撹拌棒を備えた火炎乾燥した丸底フラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（ベンジルアミノ）−３，３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレート（０．１８６ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に溶解し、ウェットＰｄ／Ｃ１０％（５０ｍｇ）を加えた。フラスコをＨ２ガスでパージし、反応混合物をＨ２雰囲気下においてｒｔで２ｈ撹拌した。反応混合物をセライトでろ過し、ケークをＭｅＯＨ及びＥＡで洗浄した。ろ液を減圧下で濃縮し、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３，３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレートを無色のオイルとして得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．４９ｍｉｎ；［Ｍ−ＣＨ３＋Ｈ］＋＝２２２．３２。
【０１３１】
ｔｅｒｔ−ブチル  ３−フルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート：
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（５．００ｇ、２５．０９ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２５ｍＬ）中に溶解したものに、クロロトリメチルシラン（５．７７ｍＬ、４５．１７ｍｍｏｌ）、次いでＥｔ３Ｎ（８．３８ｍＬ、６０．２３ｍｍｏｌ）をｒｔにて加えた。反応混合物を８０℃にて２４ｈ攪拌した。次いで、混合物をｒｔに冷却し、ヘキサンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。層を分離し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をＦＣ（ヘキサン／ＥＡ、９：１）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（（トリメチルシリル）オキシ）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボキシレートを無色のオイルとして得た。Ｒｆ（ヘキサン／ＥＡ、９：１）＝０．５０。
【０１３２】
磁気攪拌棒を備えた、火炎乾燥した丸底スラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（（トリメチルシリル）オキシ）−５，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（５．００ｇ、１８．４０ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（２５ｍＬ）中に溶解したものに、Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（登録商標）（７．５５ｇ、２０．３ｍｍｏｌ）をｒｔにて加えた。反応混合物をｒｔにて２ｈ乾燥し、次いでＥＡ中に注ぎ、１％ＮａＨＣＯ３水溶液と塩水で連続的に洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をＦＣ（ヘキサン／ＥＡ、４：１）で精製し、表題化合物を薄黄色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．５５ｍｉｎ；［Ｍ−ＣＨ３＋Ｈ］＋＝２０３．２３；ＴＬＣ：ｒｆ（ヘキサン／ＥＡ、４：１）＝０．１７。
【０１３３】
ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート及びｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート：
磁気撹拌棒を備えた火炎乾燥した丸底フラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−フルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（０．８０ｇ、３．６８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中に溶解したものに、酢酸アンモニウム（１．９９ｇ、２５．８０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液をｒｔで２ｈ撹拌した。次いで、ＮａＣＮＢＨ３（０．２９ｇ、４．４２ｍｍｏｌ）を加え、溶液をｒｔで一晩撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、有機物を１％Ｎａ２ＣＯ３水溶液からＥＡで抽出した。有機性抽出物を合わせて、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９：１）で精製し、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート及びｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートの双方を自然に固化する無色のオイルとして得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．４８ｍｉｎ；［Ｍ−ＣＨ３＋Ｈ］＋＝２０４．２５及びｔＲ＝０．４６；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１９．２６；ＴＬＣ：ｒｆ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９：１）＝０．３０及び０．０９。
【０１３４】
ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート：
磁気撹拌棒を備えた火炎乾燥した丸底フラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキシレート（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１０、５３、６７３０−６７４６）（２８８ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１．１ｍＬ）中に溶解したものに、ＤＡＳＴ（０．３４５ｍＬ、２．６１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１．１ｍＬ）中に溶解したものを−７８℃で滴下した。−６０℃で２ｈ撹拌した後、反応混合物を０℃に温め、ａｑ．１０％Ｎａ２ＣＯ３中に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を分離し、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をＦＣ（Ｈｅｐｔ／ＥＡ、９．５：０．５から７：３へ）で精製し、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレートを黄色のオイルとして得た。ＴＬＣ：ｒｆ（Ｈｅｐｔ／ＥＡ、７：３）＝０．５３。
【０１３５】
ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート：
磁気撹拌棒及び還流凝縮器を備えた丸底フラスコ内において、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート（４５ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２．５ｍＬ）中に溶解したものに、ＰＰｈ３ポリスチレン（１．６ｍｍｏｌ／ｇ、１２０ｍｇ、０．１９３ｍｍｏｌ）及び水（０．１５ｍＬ）を加えた。反応混合物を６０℃にて２ｈ撹拌した。次いで混合物をろ過し、ろ液をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過した。溶媒を減圧下で除き、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレートを薄黄色のオイルとして得た。ＬＣ−ＭＳ−条件１０：ｔＲ＝０．４８ｍｉｎ；［Ｍ−ＣＨ３＋Ｈ］＋＝１９０．３８。
【０１３６】
ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−（トシルオキシ）ピロリジン−１−カルボキシレート：
磁気撹拌棒を備えた火炎乾燥した丸底フラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキシレート（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１０、５３、６７３０−６７４６）（３２０ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）をピリジン（３ｍＬ）中に溶解したものに、ＴｓＣｌ（５８８ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除き、混合物をＣＨ２Ｃｌ２と１０％  ａｑ．ＮａＨＣＯ３の間で分画した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。残渣をＦＣ（Ｈｅｐｔ／ＥＡ、９．５：０．５から８：２へ）で精製し、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−（トシルオキシ）ピロリジン−１−カルボキシレートを無色のオイルとして得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．９６ｍｉｎ；［Ｍ−ＣＨ３＋Ｈ］＋＝３６８．１０。ＴＬＣ：ｒｆ（Ｈｅｐｔ／ＥＡ、８：２）＝０．２２。
【０１３７】
ｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート：
磁気撹拌棒及び還流凝縮器を備えた火炎乾燥した丸底フラスコ内において、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−（トシルオキシ）ピロリジン−１−カルボキシレート（４３８ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）をテトラ−ｎ−ブチル−アンモニウム  フルオリドの１ＭＴＨＦ溶液（７．００ｍＬ、７．００ｍｍｏｌ）中に溶解したものを、還流下、一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をＦＣ（Ｈｅｐｔ／ＥＡ、９：１から７：３へ）で精製し、ｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アジド−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレートを無色のオイルとして得た。ＴＬ
Ｃ：ｒｆ（Ｈｅｐｔ／ＥＡ、７：３）＝０．３３。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．８１ｍｉｎ；［Ｍ−ＣＨ３＋Ｈ］＋＝２１６．１５。
【０１３８】
ｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート：
磁気撹拌棒及び還流凝縮器を備えた丸底フラスコ内において、ｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル
３−アジド−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート（８６ｍｇ、０．３７４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５．５ｍＬ）中に溶解したものに、ＰＰｈ３ポリスチレン（１．６ｍｍｏｌ／ｇ、２８０ｍｇ、０．４４８ｍｍｏｌ）及び水（０．３３ｍＬ）を加えた。反応混合物を６０℃にて２ｈ撹拌した。次いで、混合物をろ過し、ろ液をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過した。溶媒を減圧下で除き、ｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレートを無色のオイルとして得た。ＬＣ−ＭＳ−条件１０：ｔＲ＝０．４５ｍｉｎ；［Ｍ−ＣＨ３＋Ｈ］＋＝１９０．４１。
【０１３９】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）カルバモイル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−３−イルカルボキサミド）−３，４−ｔｒａｎｓ−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート：
【０１４０】
【化１６】
2015516463.tif 000018
【０１４１】
（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−ヒドロキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミド及びラセミ体ｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートを出発物質として、一般的手順Ａに従って。ジアステレオマーをＦＣ（ｈｅｐｔ／ＥＡ、１：０から６：４へ）で分離した。最初に溶出するジアステレオマー：ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．９８ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９６．２６；ＴＬＣ：ｒｆ（Ｈｅｐｔ／ＥＡ、６：４）＝０．２２。２番目に溶出するジアステレオマー：ｔＲ＝０．９７ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９６．２５；ＴＬＣ：ｒｆ（Ｈｅｐｔ／ＥＡ、６：４）＝０．１３。
【０１４２】
実施例の製造：
実施例１：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（３，３−ジフルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド：
（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−ヒド
ロキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミド及びラセミ体ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３，３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレートを出発物質として、一般的手順Ａ及びＢに従って。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．７１ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１４．２６。
【０１４３】
実施例２：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｔｒａｎｓ−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド（ジアステレオ異性体１）：
最初に溶出するジアステレオ異性体ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）カルバモイル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−３−イルカルボキサミド）−３，４−ｔｒａｎｓ−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートを出発物質として、一般的手順Ｂに従って。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．７０ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９６．２４。キラルＨＰＬＣ、分析用：ｔＲ＝１２．７２ｍｉｎ。
【０１４４】
実施例３：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｔｒａｎｓ−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド（ジアステレオ異性体２）：
２番目に溶出するジアステレオ異性体ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）カルバモイル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−３−イルカルボキサミド）−３，４−ｔｒａｎｓ−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートを出発物質として、一般的手順Ｂに従って。ＬＣ−ＭＳ−条件０８：ｔＲ＝０．６９ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９６．２７。キラルＨＰＬＣ、分析用：ｔＲ＝１０．５８ｍｉｎ。
【０１４５】
実施例４：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｃｉｓ−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド：
（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−ヒドロキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミド及びｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノ−３−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートを出発物質として、一般的手順Ａ及びＢに従って、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｃｉｓ−３−フルオロピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドをジアステレオ異性体の混合物として得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０９：ｔＲ＝０．８２ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９５．９８。
【０１４６】
実施例５：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｃｉｓ−４−フルオロピロリジン−３−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド：
（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−ヒドロキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミド及びｃｉｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレートを出発物質として、一般的手順Ａ及びＢに従って、（１Ｓ，
２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｃｉｓ−４−フルオロピロリジン−３−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドをジアステレオ異性体の混合物として得た。ＬＣ−ＭＳ−条件１０：ｔＲ＝０．７０ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８２．１２。
【０１４７】
実施例６：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｔｒａｎｓ−４−フルオロピロリジン−３−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド：
（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−ヒドロキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミド及びｔｒａｎｓ−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−アミノ−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレートを出発物質として、一般的手順Ａ及びＢに従って、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ｔｒａｎｓ−４−フルオロピロリジン−３−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドをジアステレオ異性体の混合物として得た。ＬＣ−ＭＳ−条件１０：ｔＲ＝０．７０ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８２．１２。
【０１４８】
参照実施例の製造：
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）カルバモイル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−３−イルカルボキサミド）ピペリジン−１−カルボキシレート：
（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−ヒドロキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミド及びｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノピペリジン−１−カルボキシレートを出発物質として、一般的手順Ａに従って。残渣をＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ、９８：２：０．５）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）カルバモイル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−３−イルカルボキサミド）ピペリジン−１−カルボキシレートを得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０７：ｔＲ＝０．９３ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５７７．５５。
【０１４９】
参照実施例１：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド塩酸塩：
ガラスバイアル内で、不活性雰囲気下（Ｎ２）、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）カルバモイル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−３−イルカルボキサミド）ピペリジン−１−カルボキシレート（１．０ｅｑ．）をＣＨ２Ｃｌ２中に溶解したものを、ジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ（１０．０ｅｑ．）で処理し、反応混合物を、反応が完結するまで０℃又はｒｔで撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、４−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）カルバモイル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−３−イルカルボキサミド）ピペリジン−１−イウムクロリドを得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０７：ｔＲ＝０．６５ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７７．９７。
【０１５０】
参照実施例２：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（
ピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミド：
（５Ｒ）−Ｎ５−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル−メチル）−（６Ｒ）−６−ヒドロキシカルボニル−（４Ｓ，７Ｒ）−［４，７−エチレン−スピロ［２．４］ヘプタン］−５−カルボキサミド及びｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノピペリジン−１−カルボキシレートを出発物質として、一般的手順Ａ及びＢに従って、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−Ｎ２−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−Ｎ３−（ピペリジン−４−イル）スピロ［ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７，１’−シクロプロパン］−２，３−ジカルボキサミドを得た。ＬＣ−ＭＳ−条件０３：ｔＲ＝１．１２ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７８．０４。
【０１５１】
ＩＩ．  生物学的アッセイ
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  アッセイ
式（Ｉ）の化合物のＡＬＸ受容体アゴニスト活性を、下記の実験法に従って測定する。
【０１５２】
実験方法：
細胞内カルシウムの測定：
リコンビナントヒトＡＬＸ受容体及びＧ−タンパク質Ｇα１６（ＨＥＫ２９３−ｈＡＬＸＲ−Ｇα１６）発現細胞を、Ｇｒｏｗｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＧＭ）中で、８０％の培養密度になるまで培養した。細胞解離バッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１３１５１−０１４）を用いて、細胞を培養皿からはがし、ｒｔにて５ｍｉｎ、アッセイバッファー（ＡＢ）（同量のハンクス平衡塩溶液（Ｈａｎｋ’ｓ  ＢＳＳ）（Ｇｉｂｃｏ、１４０６５−０４９）と、Ｐｈｅｍｏｌ  Ｒｅｄを含まないＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、１１８８０−０２８））中にて１’０００ｒｐｍで遠心して集めた。５％のＣＯ２下、１μＭのＦｌｕｏ−４（ＡＭ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｆ１４２０２）及び２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ、１５６３０−０５６）を添加したＡＢ中で、３７℃にて６０ｍｉｎインキュベートした後、細胞を洗浄し、ＡＢに再懸濁した。次に、それらを、３８４−ウェルのＦＬＩＰＲアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、７８１０９１）上に、１ウェル当たり７０μｌ、５０’０００個を播種し、１’０００ｒｐｍで１ｍｉｎ遠心して沈殿させた。被検化合物の保存溶液はＤＭＳＯ中に１０ｍＭの濃度で調製し、ＡＢで段階希釈することにより活性用量反応曲線に必要な濃度とした。対照アゴニストとしては、ＷＫＹＭＶｍ（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）を用いた。ＦＬＩＰＲ  Ｔｅｔｒａ装置（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｄｅｖｉｃｅｓ）は製造元の標準使用説明書に従って操作し、ＤＭＳＯ中に１０ｍＭの濃度で溶解し、所望の最終濃度を得るために実験に先立ってアッセイバッファーで希釈した被検化合物を４μｌ添加した。被検化合物添加の前後における蛍光の変化を、ｌｅｘ＝４８８ｎｍ、ｌｅｍ＝５４０ｎｍにてモニターした。化合物添加後の、ベースレベルを超える発光強度のピーク値を、ベースラインを差し引いた後に出力した。値は、ベースラインの値（ＡＢの添加）を差し引いた後、ハイレベルコントロール（ＷＫＹＭＶｍ化合物、１０ｎＭの最終濃度）に基づいて調整した。
【０１５３】
例示化合物のＡＬＸ受容体に対するアゴニスト活性（ＥＣ５０値）を表１に示す。
【０１５４】
【表１】
2015516463.tif 000019
【０１５５】
グルタチオン添加試験
基質（０．０５ｍｍｏｌ）を０．５ｍＬのＣＨ３ＣＮ（０．５ｍＬ）に溶解したものに、ＧＳＨ（１０．０−２０．０ｅｑ）を０．５ｍＬのリン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）に溶解したものを添加した。得られた曇った溶液を４０℃で２ｈ撹拌し、ＬＣ−ＭＳで分析した。
【０１５６】
ダンシル−グルタチオントラッピング試験
イン  ヴィトロでのインキュベーション
被験化合物は、通常、１ｍｇ／ｍＬのヒト肝ミクロソーム及び１ｍＭのダンシル−ＧＳＨを含む０．１Ｍのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中１０μＭの濃度で、３７℃で５ｍｉｎ、遮光試験管中でプレインキュベートする。ＮＡＤＰＨ再生系（ＮＡＤＰＨ  −ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ）の添加により反応を開始する。６０ｍｉｎ後、５ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）を含む氷冷メタノールを２倍量の体積添加することにより反応を停止する。遠心後、上清をさらに蛍光検出器を備えたＨＰＬＣで分析する。ダンシル−ＧＳＨに代えてＧＳＨの存在下で対照実験を行い、蛍光を有する親薬剤及び／又は代謝物の干渉を同定する。別の対象実験を親薬剤の非存在下で行い、ダンシル−グルタチオンの分解／不純物に起因するバックグラウンドシグナルを測定する。
【０１５７】
分析／定量
インキュベートした試料の上清を、高圧（６００ｂａｒ）で作動可能な蛍光検出器（λｅｘ３４０、λｅｍ５２５ｎｍ）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムに導入する。４．６ｘ１００ｍｍ  ＲＰ  Ｋｉｎｅｔｉｃｓカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、２．６μｍ）を用いて１．５ｍｌ／ｍｉｎで分離を行う。全勾配において、水とアセトニトリルの双方を０．１％のギ酸で酸性化したものを用いる。ポストカラムで２ｍｌのアセトニトリルを添加して溶媒に依存する蛍光を減らす。インキュベーションと対照試料のクロマトグラムを目視で比較し、ダンシル−ＧＳＨによりトラップされた化合物を確認する。トラップされた物質の量を既知の濃度のダンシル−ＧＳＨを用いて外部キャリブレーション（ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ）により定量化し、ｎｍｏｌ／ｌ＊ｈ又はｐｍｏｌ／ｍｌ＊ｈで表す。
【０１５８】
薬物動態パラメータの測定
この試験の目的は、正常覚醒ラットへの単回経口投与後又は静脈経路での投与後における化合物の薬物動態を評価することであった。
【０１５９】
方法に関する記述：
−  麻酔：Ｗｉｓｔａｒ系ラットを、０．０３ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンのｓ．ｃ．により前処理し（０．０３ｍｇ／ｍｌの麻酔用保存溶液）、３０分後に、９０ｍｇ／ｋｇのケタミンと１０ｍｇ／ｋｇのキシラジンの混合物のｉ．ｐ．により麻酔するか又はイソフルラン吸入麻酔下に置いた。
【０１６０】
−  ラットの準備：頭頂部及び頸部を剃毛し、ＭｅｒｆｅｎとＢｅｔａｄｉｎｅで消毒した。
【０１６１】
−  外科手術：（イソフルラン）麻酔下にある間に、頭頂部（両耳の間）を１．５ｃｍ切開し、アンカーボタン（ａｎｃｈｏｒ  ｂｕｔｔｏｎ）を固定した。１．５−２ｃｍの２回目の切開を頸部上（右鎖骨近傍）に設けた。トロカールを用いてカテーテル（ＩＤ／ＤＩ：０．５０８ｍｍ、Ｕｌｒｉｃｈ  Ｓｗｉｓｓ）を皮膚下にくぐらせ、アクセスポートを４−０の絹糸で固定した。次いで、カテーテルをヘパリン添加生理食塩水（１００ＵＩ／ｍｌ）で満たし、鉗子でクランプして生理食塩水の損失を防ぎ、傷口を組織接着剤（３Ｍ  Ｖｅｔｂｏｎｄ）で閉じた。次に、頸静脈を分離し、４−０の絹糸で頭部側で結紮し、第１の結紮の尾部側に設けた第２の結紮は固く締めずにおいた。虹彩切除用はさみ（ｉｒｉｄｅｃｔｏｍｙ  ｓｃｉｓｓｏｒｓ）を用いて静脈にＶ−型の孔を設け、カテーテルをゆっくりと血管内に押し込んだ。次いで、すべての結紮を血管とカテーテルの周囲で結んだ。血流を確かめるためにＮａＣｌ−ヘパリン１００ＵＩフラッシュ（ｆｌｕｓｈ）を行った。次に、傷口を組織接着剤と縫合糸で閉じた。フラッシュを再度行った。
【０１６２】
−  術後のケア：手術後、各動物を小箱内で個別に飼育し、（箱の床に直接置いた）餌と水を自由に摂取させ、固形飲料（ｓｏｌｉｄ  ｄｒｉｎｋ）へアクセスさせた。実験に先立って１又は２日間外科手術から回復させた。手術の翌日、動物をＮａＣｌ−ヘパリン１００ＵＩ／ｍＬでフラッシュし、各試験管に１０μｌのＥＤＴＡを加えて採血管を準備した。
【０１６３】
−  実験：１ｍｇ／ｋｇの被験化合物を経口及び静脈を介して与えた。経口用製剤はゼラチン中の溶液（７．５％のゼラチン水溶液９８％と２％のＤＭＳＯ）であり、静脈用製剤はｐＨを調整した水溶液又はシクロデキストリン中の溶液（５％のＤＭＳＯ、９５％のＨＰＢＣＤ３０％（ｗ／ｖ））であった。被験化合物を投与した後（ｐ．ｏ．又はｉ．ｖ．）、血液試料（２５０μｌ）を種々の時点で採取した。試料を速やかにアイス中に置いた後、遠心した（４℃、８ｍｉｎ、１６０００ｇ）。次いで、血漿を吸引し、９６ウェル
プレートに移した。分析を行うまで、プレートを−２０℃に維持した。
−  化合物の血漿濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を用いて測定した。
【０１６４】
【表２】
2015516463.tif 000020
【国際調査報告】
2015516463.tif 000023
2015516463.tif 000024