(57)【要約】  本開示は、アルツハイマー病、他のタウオパシーおよび関連神経変性疾患の疾患修飾治療における２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドの使用方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者におけるタウオパシーまたは関連神経変性疾患の疾患進行の予防または遅延における使用のための化合物２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
患者における異常なタウ過剰リン酸化または異常なタウ凝集が阻害される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項３】
タウオパシーまたは関連神経変性疾患を有する患者におけるリン酸化タウタンパク質のレベルが低減される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項４】
患者における神経原線維タングルの形成が阻害される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項５】
患者における神経性細胞の神経原線維タングルのレベルが阻害される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項６】
細胞骨格機能不全または他のタウ依存性機能の撹乱が遅延または停止される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項７】
患者における脳脊髄液中のリン酸化タウおよびタウのレベルが低減される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項８】
患者におけるタウ凝集体が分解または溶解される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項９】
患者におけるニューロン、グリア細胞またはレヴィ小体におけるタウタンパク質のリン酸化が阻害または低減される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項１０】
タウタンパク質は、微小管結合タウタンパク質である、請求項９に記載の使用のための化合物。
【請求項１１】
タウタンパク質は、神経原線維タングル内にある、請求項１０に記載の使用のための化合物。
【請求項１２】
タウタンパク質の過剰リン酸化が阻害または阻止される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項１３】
タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、アルツハイマー病である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１４】
タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、軽度から中等度のアルツハイマー病である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１５】
タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、中等度から重度のアルツハイマー病である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１６】
タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、症状発現前のアルツハイマー病である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１７】
タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、軽度認知障害である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１８】
２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩は、長期間にわたり少なくとも１日に１回投与される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１９】
２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩は、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項２０】
２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩は、長期間にわたり少なくとも１日に１回投与される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病（ＡＤ）、他のタウオパシーおよび関連神経変性疾患の疾患修飾治療（ｄｉｓｅａｓｅ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｙ）における使用のための化合物２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドに関する。
【背景技術】
【０００２】
タウオパシーは、脳内のタウ（τ）タンパク質の蓄積によって特徴づけられる一群の神経変性疾患である。ＡＤは、最もよく見られるタウオパシーであり、認知症の最も一般的な形態である。他のタウオパシーおよび関連神経変性疾患としては、ピック病、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、遺伝性前頭側頭型認知症（ｆｒｏｎｔｏ−ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、および第１７染色体に連鎖したパーキンソン症候群（ＦＴＤＰ−１７）が挙げられる。
【０００３】
認知症は、ヒトが正常な日常活動を行う能力に深刻な影響を与える脳障害である。ＡＤは、思考、記憶および言語を制御する脳の部位に関与する。世界中で集中的な研究が行われているにもかかわらず、ＡＤの原因は、稀に報告される家族性ＡＤ遺伝子突然変異の症例を除いて、未だ知られておらず、治癒法もない。
【０００４】
ＡＤの認知症状に対して、現在、いくつかの処置が利用可能である。アメリカでＡＤの処置のために現在使用されている５つの薬物のうち、４つはアセチルコリンエステラーゼ阻害剤である。別の１つの薬剤であるメマンチンは、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストであり、中等度から重度のＡＤの処置に利用されている。メマンチンおよびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含め、ＡＤの認知症状の処置に現在使用されている薬物は、わずかな効果しかなく、疾患の進行の遅延または停止について有効な効果は示されていない。ＡＤの病理進行を阻止する治療法の開発に対して関心が高まっているが、その理由は、ＡＤの神経変性につながる病態生理学的過程が、臨床症状の発生するかなり以前から始まっていると考えられるためである。このように、ＡＤ、他のタウオパシーおよび神経変性疾患の病理学的進行を遅延または停止させ得る薬物に対して未だ対処されていない大きな必要性が存在している。
【０００５】
ヒスタミンＨ３受容体は、中央および末梢神経系で見出せる。ヒスタミンＨ３受容体リガンドの投与は、脳および末梢における神経伝達物質の分泌に影響を与える場合があることから、ＡＤおよび他の認知症を含む認知障害の処置に有効と考えられてきた。Ｂｒｉｏｎｉらは、Ｈ３アンタゴニストが、ＡＤの疾患修飾治療のために使用し得ることを記載している（非特許文献１）。
【０００６】
本発明は、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドを用いた処置により、遺伝子導入動物モデルにおけるタウ病理の進行遅延が可能であり、その用量はヒト集団で使用される用量に適合するという、症状発現前（ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ）研究からの新規結果に基づくものである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｖｏｌ．３３６、Ｎｏ．１、３８−４６（２０１１）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ＡＤならびに他のタウオパシーおよび関連神経変性疾患の進行を遅延または停止する方法であって、必要のある患者に、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む前記方法に関する。
【０００９】
本発明の別の態様は、ＡＤ、他のタウオパシーおよび関連神経変性疾患の疾患進行を遅延または停止するための２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩の使用である。
【００１０】
本発明の別の態様は、ＡＤ、他のタウオパシーおよび関連神経変性疾患の疾患進行の遅延または停止における使用のための化合物２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、有効成分で６カ月処置後の、ＴＨＹ−Ｔａｕ２２マウスの海馬（左）および皮質（右）のＡＤ２エピトープ（ｐＳｅｒ３９６−ｐＳｅｒ４０４）のタウリン酸化についてのウエスタンブロット解析結果を示す。
【図２】図２は、ＴＨＹ−Ｔａｕ２２マウスの皮質における異常なタウ過剰リン酸化（ｈｙｐｅｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）（ＡＴ８  ＩＨＣ）に対する６カ月処置後の有効成分の防御活性を示す。
【図３】図３は、ＴＨＹ−Ｔａｕ２２マウスの皮質、海馬ＣＡ１領域および扁桃体におけるＮＦＴ形成（Ｇａｌｌｙａｓ染色）に対する６カ月処置後の有効成分の防御活性を示す。
【図４】図４は、ＴＨＹ−Ｔａｕ２２マウスの海馬におけるＭＩＰ−１α遺伝子過剰発現に対する６カ月処置後の有効成分の防御活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
定義および略語
上記で使用するとき、および、本発明の説明を通じて、以下の略語および記号は、別途指示がない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする：
【００１３】
ＡＤ          アルツハイマー病
ＡＤＡＳ      アルツハイマー病評価スケール
ＢＳＡ        ウシ血清アルブミン
ＣＳＦ        脳脊髄液
ＤＳＭ−ＩＶ  精神障害の診断・統計マニュアル（第４版）
ＭＩＰ−１α  マクロファージ炎症タンパク質１−α
ＭＲＩ        磁気共鳴画像
ＮＦＴ        神経原線維タングル（Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ  ｔａｎｇｌｅ）
ＰＨＦ        対らせん状細線維（ｐａｉｒｅｄ  ｈｅｌｉｃａｌ  ｆｉｌａｍｅｎｔ）
ＰＢＳ        リン酸緩衝生理食塩水
ＲＯＩ        関心領域
Ｔｇ          遺伝子導入
ＷＴ          野性型
Ｖｅｈ        ビヒクル
【００１４】
上記で使用するとき、および、本発明の説明を通じて、以下の用語は、別途指示がない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする：
【００１５】
「有効成分」は、本明細書で使用するとき、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物または薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物を指す。
【００１６】
「基礎疾患への影響」は、１つまたはそれ以上のバイオマーカーまたは疾患の進行に関連する他のパラメータ（例えば、ＣＳＦもしくは血漿中の生化学的マーカー）の尺度の改善、脳（または脳の一部）の体積の変化、機能的イメージングによって測定される脳機能の変化、組織病理学的もしくは生化学的変化、または認知および障害の変化を意味する。ＡＤの治験および処置に使用し得る典型的なバイオマーカーとしては、ＣＳＦ中で測定される分析物、例えば、タウ、ホスホタウ、またはβ−アミロイドが挙げられる。
【００１７】
「処置を必要とする患者」または「タウオパシーもしくは関連神経変性疾患を有する患者」は、本明細書で使用するとき、１）任意の臨床病期のタウオパシー（例えばＡＤ）または関連神経変性疾患を有すると既に診断された患者、例えば、軽度認知障害から高度認知症を有する患者；および／または２）タウオパシー（例えばＡＤ）もしくは関連神経変性疾患の初期もしくは前駆症状もしくは徴候を有する患者；および／または３）年齢、遺伝性、測定可能なバイオマーカーもしくは他の要因により、タウオパシー（例えばＡＤ）もしくは関連神経変性疾患の疑いがあると診断され、処置経過において疾患の症状もしくは徴候の発症、進行、悪化もしくは劣化を遅延させることが医学的に推奨される患者を含む。
【００１８】
「患者」または「対象」は、あらゆる哺乳動物を含む。「哺乳動物」は、処置の目的に関して哺乳類として分類される任意の動物を指し、限定されないが、ヒト、家庭用および農業用動物、ならびに動物園、スポーツまたはペット用動物を含み、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ等が挙げられる。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【００１９】
本明細書で使用するとき、「症状発現前のアルツハイマー病」を有する患者は、機能障害は伴わないものの、アルツハイマー病の測定可能なバイオマーカーまたは認知障害のわずかな証拠の検出に基づいて診断された患者である。
【００２０】
本明細書で使用するとき、「軽度認知障害」を有する患者は、認知不全があるが、認知症と認めるに十分な障害を有しない患者である。
【００２１】
本明細書で使用するとき、「軽度から中等度のアルツハイマー病」を有する患者は、アルツハイマー型認知症ＤＳＭ−ＩＶ診断基準（Ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｔｙｐｅ  ＤＳＭ−ＩＶ  ｃｒｉｔｅｒｉａ）およびほぼ確実なＡＤに対するＮＩＮＣＤＳ／ＡＤＲＤＡ診断基準（ＮＩＮＣＤＳ／ＡＤＲＤＡ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｂａｂｌｅ  ＡＤ）（国立神経障害・脳卒中研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｖｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｋｅ）／アルツハイマー病関連障害協会（ＡＤ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ））に基づいてミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ））スコアが≧１０および≦２５であり、認知薬物研究グローバルスコア（Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｇｌｏｂａｌ  ｓｃｏｒｅ）＝０．５、１または２の患者である。
【００２２】
本明細書で使用するとき、「中等度から重度のアルツハイマー病」を有する患者は、アルツハイマー型認知症ＤＳＭ−ＩＶ診断基準およびほぼ確実なＡＤに対するＮＩＮＣＤＳ／ＡＤＲＤＡ診断基準（国立神経障害・脳卒中研究所／アルツハイマー病関連障害協会）に基づいてミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）スコアが１９未満であり、認知薬物研究グローバルスコア＝２または３の患者である。
【００２３】
本明細書で使用するとき、表現「関連神経変性疾患」には、限定されないが、ダウン症候群、筋緊張性ジストロフィー、およびニーマンピック病Ｃ型が含まれる。
【００２４】
用語「タウオパシー」は、本明細書で使用するとき、タウ病理に関連する神経変性疾患の任意の形態である。ＡＤおよび特定の形態の前頭側頭型認知症（ピック病、散発性前頭側頭型認知症、および第１７染色体に連鎖したパーキンソン症候群を伴う前頭側頭型認知症）が、タウオパシーの最も一般的な形態である。他のタウオパシーとしては、限定されないが、進行性核上性麻痺、ボクサー認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｐｕｇｉｌｉｓｔｉｃａ）（慢性の外傷性脳障害）、リティコ−ボディグ（Ｌｙｔｉｃｏ−Ｂｏｄｉｇ）病（グアム・パーキンソン認知症複合）、タングル優位型認知症、嗜銀顆粒性認知症、神経細胞神経膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節硬化症、ハレルフォルデン−スパッツ（Ｈａｌｌｅｒｖｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ）病、およびリポフスチン症が挙げられる。
【００２５】
用語「処置すること」、「処置」等は、本明細書で、所望の薬理学的および生理学的効果を得ることを指して使用する。効果は、疾患、症状もしくはその状態を予防もしくは部分的に予防する観点において防止的なものであってもよく、および／または疾患、状態、症状もしくは疾患に寄与する有害事象の部分的もしくは完全な治癒の観点において治療的なものであってもよい。用語「処置」は、本明細書で使用するとき、哺乳動物、特にヒトの疾患のあらゆる処置を包含し、以下のものを含む：（ａ）疾患の素因を有するが、疾患を有するとは診断されていない対象における疾患の発症を予防すること、即ち、疾患の素因を有し得るが疾患の症状を自覚または示していない対象において疾患の臨床症状を発症させないようにすること；（ｂ）疾患を阻害すること、即ち、疾患もしくはその臨床症状の発生を停止もしくは減少させること；または（ｃ）疾患を緩和、即ち、疾患および／またはその症状もしくは状態の退縮を引き起こすこと。
【００２６】
本明細書で使用するとき、用語「・・・使用のための２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド」は、用語「・・・のための２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドの使用」または「・・・における使用のための医薬の調製のための２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドの使用」と等しいとして理解されるべきである。
【００２７】
本発明の目的に関し、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドへの言及は、その薬学的に許容される塩、水和物および溶媒和物ならびに薬学的に許容される塩の溶媒和物および水和物を含む。１態様において、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドは、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物である。
【００２８】
２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドは、式（Ｉ）の構造：
【化１】
2015516963.tif 000002
を有しており、強力で特異的な非イミダゾールヒスタミン３（Ｈ３）受容体アンタゴニストである。２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドの調製ならびに物性および有益な薬理学的特性は、例えばＷＯ２００５／１１８５４７（さらにＵＳ２００７／０１０５８３４）に記述されている。２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドの二フマル酸一水和物塩は、ＷＯ２０１０／１５１６１１で記述されている。
【００２９】
タウタンパク質はニューロンで発現する微小管結合タンパク質である。タウタンパク質の過剰リン酸化、神経原線維タングル（ＮＦＴ）の形成および神経炎症は、ＡＤおよび他のタウオパシー（例えばピック病、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、遺伝性前頭側頭型認知症および第１７染色体に連鎖したパーキンソン症候群（ＦＴＤＰ−１７））の脳における病理学的特徴であり、疾患の経過とともに蓄積または進行する。
【００３０】
炎症もＡＤの特徴である。Ｔ細胞の発生増加がＡＤ患者の脳で報告されている。ＡＤ患者の末梢Ｔ細胞では、マクロファージ炎症性タンパク質１−α（ＭＩＰ−１α）が過剰発現している。このタンパク質は、脳内皮細胞上のケモカイン受容体ＣＣＲ５に結合し、ＭＩＰ−１α−ＣＣＲ５相互作用により、Ｔ細胞が内皮のタイトジャンクションを通過し、脳内に移動することを促進させる。さらにＣＣＲ５の上方調節も、老人斑における小膠細胞の漸増および蓄積に関与する。
【００３１】
ＴＨＹ−Ｔａｕ２２遺伝子導入モデルマウスが、ＡＤおよび他のタウオパシーにおけるタウタンパク質の役割を研究するために開発された（Ｓｃｈｉｎｄｏｗｓｋｉら、Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１６９、Ｎｏ．２、ｐｐ．５９９−６１６（２００６）参照）。ＴＨＹ−Ｔａｕ２２マウスは、タウおよび神経原線維タングル様封入体（Ｇａｌｌｙａｓ陽性）の過剰リン酸化を示す。これらのマウスは、６カ月齢で記憶障害も示す。ＴＨＹ−Ｔａｕ２２では、いくつかのＡＤ関連タウエピトープ：ＡＴ８、ＡＴ１００、ＡＴ１８０、ＡＴ２７０、１２Ｅ８、タウ−ｐ
Ｓｅｒ３９６およびＡＰ４２２においてタウの過剰リン酸化が示される。
【００３２】
本出願人らは、臨床的に適切な用量で６カ月間、ＴＨＹ−Ｔａｕ２２遺伝子導入モデルマウスを２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物で処置することにより、ＡＤ、他のタウオパシーおよび関連神経変性疾患の病理学的特徴であるタウの過剰リン酸化が減少し、神経原線維タングル（ＮＦＴ）数が減少し、神経炎症が減少し、認知不全が軽減されることを見出した。
【００３３】
ＡＤおよびタウオパシーのこれらのいくつかの病理学的特徴に対する２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物の長期効果は、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドが、これらの疾患における疾患修飾剤として使用し得ることを示している。
【００３４】
タウリン酸化に対する２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物の短期投与（２週間、実施例２）での効果の欠如（海馬のＡＤ−２エピトープ上のウエスタンブロットによって測定）は、Ｂｉｔｎｅｒらによって（Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、６０（２０１１）、ｐｐ．４６０−４６６）報告された異なるＨ３受容体アンタゴニストＡＢＴ−２３９の２週間の処置による組織病理学的試験でのＴＡＰＰ（タウｘＡＰＰ（β−アミロイド前駆タンパク質））遺伝子導入マウスの脊髄および海馬におけるタウタンパク質過剰リン酸化に対する効果とは、対照的である。この予期しなかった知見は、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドの効果が、Ｂｉｔｎｅｒ（Ｉｄ．）によって報告されたＡＢＴ−２３９を用いた場合に観察される効果とは異なる作用機序を有することを示している。
【００３５】
ＡＤに対する処置の疾患修飾効果を証明する最も実質的で直接的な方法は、その病気の重要な病理学的特徴が修飾されたことを示すことであろう。病理学的証拠自体は剖検または脳生検を通じてしか得られないものであることから、より間接的にそのような証拠を得る方法が臨床設定上、必要である。ＡＤに対する薬物の疾患修飾効果、即ち基礎疾患への影響を実証する方法としては、臨床試験デザイン（例えばランダム化治療中止試験デザイン、ランダム化治療開始試験デザイン）、生化学的マーカー（例えばβ−アミロイドペプチド、タウタンパク質）、脳イメージングによる治療効果の測定（例えば容積測定磁気共鳴画像、磁気共鳴分光法、陽電子射出断層撮影法、単一光子放射コンピュータ断層装置）、ならびに認知および障害測定の使用が挙げられる。
【００３６】
本発明の１つの態様は、タウオパシーまたは関連神経変性疾患を有する患者における異常なタウの過剰リン酸化または凝集を阻害する方法であって、前記患者に有効量の２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む前記方法である。
【００３７】
本発明の別の態様は、患者におけるタウオパシーまたは関連神経変性疾患の疾患進行の予防または遅延における使用のための化合物２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩である。
【００３８】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたはその関連神経変性疾患を有する患者における異常なタウの過剰リン酸化または凝集の阻害における使用のための化合物２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩の１つである。
【００３９】
本発明の別の態様は、患者におけるタウオパシーまたは関連神経変性疾患の進行を予防または遅延させる方法であって、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を前記患者に前記タウオパシーまたは関連神経変性疾患の進行を予防または遅延させるように投与することを含む前記方法である。
【００４０】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたは関連神経変性疾患を有する患者におけるリン酸化タウタンパク質のレベルを低減する方法であって、有効量の２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を前記患者に投与することを含む前記方法である。
【００４１】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたはその関連神経変性疾患を有する患者におけるリン酸化タウタンパク質のレベルの低減における使用のための化合物２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩の１つである。
【００４２】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたは関連神経変性疾患を有する患者における神経源線維タングルの形成を阻害する方法であって、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を、前記患者に神経原線維タングルの形成が阻害されるように投与することを含む前記方法である。
【００４３】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたはその関連神経変性疾患を有する患者における神経原線維タングルの形成阻害における使用のための化合物２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩の１つである。
【００４４】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたは関連神経変性疾患を有する患者の処置方法であって、前記患者に２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を、前記患者の神経細胞における神経原線維タングルのレベルおよび／または拡張を阻害するために有効な量で投与することを含む前記方法である。
【００４５】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたはその関連神経変性疾患を有する患者における神経細胞の神経原線維タングルのレベルおよび／または拡張の阻害における使用のための化合物２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩の１つである。
【００４６】
特定の態様においては、患者の脳脊髄液中のリン酸化タウおよびタウのレベルが低減される。
【００４７】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたは関連神経変性疾患を有する患者の処置方法であって、前記患者に、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩の１つを、前記患者のタウタンパク質のリン酸化の減少に有効な量で投与することを含む前記方法である。本発明の特定の態様において、タウオパシーはアルツハイマー病である。さらに特定の態様において、処置は、前記患者におけるアルツハイマー病の１つの病期がアルツハイマー病のより重度の病期に移行することを遅延させる。
【００４８】
本発明の別の態様は、患者におけるタウオパシーまたは関連神経変性疾患を修飾する方法であって、前記患者に、細胞骨格機能不全または他のタウ依存性機能の撹乱の遅延または停止に治療的に有効である一定量の２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩の１つを投与することを含む前記方法である。
【００４９】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたは関連神経変性疾患を有する患者におけるタウ凝集体の分解または溶解誘発のための方法であって、前記患者に治療有効量の２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を投与することを含む前記方法である。
【００５０】
本発明の別の態様は、タウオパシーまたはその関連神経変性疾患を有する患者におけるタウ凝集体の分解または溶解誘発における使用のための化合物２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩の１つである。
【００５１】
本発明の別の態様は、患者のタウオパシーまたは関連神経変性疾患の処置方法であって、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を前記患者に投与することを含み、前記２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩が基礎疾患に影響を及ぼすことにおいて治療的に有効である、前記方法である。
【００５２】
本発明の別の態様は、ニューロン、グリア細胞またはレヴィ小体におけるタウタンパク質のリン酸化を阻害または低減する方法であって、ニューロン、グリア細胞またはレヴィ小体に有効量の２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を曝露することを含む前記方法である。特定の態様において、タウタンパク質は、微小管結合タウタンパク質である。別の特定の態様において、タウタンパク質は神経原線維タングル内にある。別の態様において、タウタンパク質の過剰リン酸化が阻害または阻止される。
【００５３】
本発明の別の態様は、細胞内のタウタンパク質の量およびタウのリン酸化を低減する方法であって、細胞に有効量の２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を曝露することを含む前記方法である。特定の態様において、タウタンパク質は異常にリン酸化されている。別の特定の態様において、異常にリン酸化されたタウタンパク質は、過剰リン酸化タウタンパク質である。
【００５４】
本発明のいくつかの実施形態において、タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、アルツハイマー病である。
【００５５】
本発明の他の実施形態において、タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、軽度から中等度のアルツハイマー病である。
【００５６】
本発明の他の実施形態において、タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、中等度から重度のアルツハイマー病である。
【００５７】
本発明の他の実施形態において、タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、症状発現前のアルツハイマー病である。
【００５８】
本発明の他の実施形態において、タウオパシーまたは関連神経変性疾患は、軽度認知障害である。
【００５９】
本発明のいくつかの実施形態において、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩は、長期間にわたり少なくとも１日に１回投与される。
【００６０】
１つの態様において、ＡＤの処置は、さらにＡＤの１つまたはそれ以上の症状の処置を含む。例えば、ＡＤの処置は、記憶障害、行動障害（ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒａｘｉｓ）、注意障害、混乱、癇癪および攻撃性、情緒不安定、言語障害、長期記憶喪失、被害者の離脱症状および運動制御不能（ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｍｏｔｏｒ  ｃｏｎｔｒｏｌ）からなる群から選択される１つまたはそれ以上の症状の処置を含む。
【００６１】
別の態様において、ＡＤの処置は、認知の維持または低下（ＡＤＡＳ認知の下位スケールによって測定可能）；日常生活動作の維持または低下（ＡＤＣＳ−ＡＤＬ下位スケールによって測定可能）；ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）合計スコアの維持または低下；認知薬物研究システム（ＣＤＲ−Ｓ）電算機計算評価からの５つの要因の維持または低下；精神神経症状評価（ＮＰＩ）スコアの維持または低下；ＮＰＩアパシースコアおよびアパシー評価スケール−報告者（ＡＥＳ−Ｉ）スコアの維持または低下からなる群から選択される１つまたはそれ以上の要素をさらに含む。
【００６２】
本発明のいくつかの態様において、有効成分の投与は、患者におけるＡＤの１つの病期からＡＤのより重度の病期に移行することを遅延する。例えば、本発明の１実施形態は、ＡＤを有する患者において臨床認知症尺度（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｓｃａｌｅ）の１から２への変化を遅延させることを含む。別の実施形態は、患者における軽度から中等度のＡＤが中等度から重度のＡＤへ移行することを遅延させることを含む。別の実施形態は、症状発現前のＡＤが、アルツハイマー病による軽度認知障害に移行することを遅延させることを含む。別の実施形態は、アルツハイマー病による軽度認知障害が、軽度から中等度のＡＤに移行することを遅延させることを含む。
【００６３】
投与様式としては、限定されないが、経口、非経口（例えば、皮下、硬膜下、静脈内、筋肉内、鞘内、腹腔内、大脳内、動脈内、病変内への投与経路）、局所的、局部的（例えば手術の適用もしくは外科的坐薬）、直腸、肺性（例えば、エアゾール剤、吸入もしくは粉末）が挙げられる。投与経路は、当業者に知られているように、投与される組成物、対象組織等に基づいて決まる。投与経路は、薬物の物理的特性ならびに患者および介護者の利便性に応じた任意の方法において様々に変更し得る。
【００６４】
本発明の有効成分は、通常、医薬組成物の形態で投与される。医薬組成物は、有効成分を、１つまたはそれ以上の薬学的に許容される担体または賦形剤と併用して含有する。
【００６５】
使用される賦形剤は、通常、ヒト対象または他の哺乳類への投与に適した賦形剤である。薬学的に許容される賦形剤としては、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、安定化剤、懸濁化剤、等張化剤、甘味剤、香料、芳香剤、着色剤、抗菌剤、抗真菌剤、他の治療薬、潤滑剤、吸収遅延剤もしくは促進剤、および調合剤（ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）などの薬学的に許容される担体、希釈剤、コーティング剤、補助薬、賦形剤またはビヒクルを含む群から投与様式と投薬形態の性質に依存して選択される少なくとも１つの成分が挙げられる。
【００６６】
医薬組成物は、当業者に既知の従来技術を使用して調製することができる。
【００６７】
本発明の１つの態様において、医薬組成物は治療上有効な量の有効成分を含有する。用語「治療上有効な量」は、本明細書で使用するとき、所望の薬理学的または治療的効果（単数または複数）を誘発するために十分な量で投与される医薬組成物に存在する有効成分の量を指す。有効な量または用量の決定において、いくつかの要因が担当の臨床医師によって考慮される。要因としては、例えば限定されないが：哺乳動物の種類、その大きさ、年齢および全身の健康状態；特別な疾患の存在；疾患の関与または重要性の程度；個々の患者の応答性；投与様式；投与される調製物の生物学的利用可能性；選択した投与計画；併用薬の使用；および他の関連する状態が挙げられる。
【００６８】
１つの態様において、本発明の方法は、基礎形態で測定したときに１日あたり約０．２５〜約１０ｍｇの２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたは１日あたり約０．２５〜約１０ｍｇの２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドの薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。特定の実施形態において、本発明の方法は、基礎形態で測定したときに１日あたり約０．５ｍｇ〜約５ｍｇ（例えば約０．５、約１ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．５ｍｇ、約３ｍｇ、約３．５ｍｇ、約４ｍｇ、約４．５ｍｇ、または約５ｍｇ）の２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−ｙｌ］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、基礎形態で測定したときに１日あたり約０．２５ｍｇ〜約２．５ｍｇの２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−ｙｌ］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。
【００６９】
本発明のいくつかの態様において、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドは、長期間、例えば、少なくとも６カ月間、投与される。別の態様において、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドは、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、少なくとも７カ月、少なくとも８カ月、少なくとも９カ月、少なくとも１０カ月、少なくとも１１カ月、および少なくとも１２カ月から選択される長期間にかけて投与される。特定の実施形態においては、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドは、長期間にわたり少なくとも１日に１回投与される。
【００７０】
本発明の別の態様は、ＡＤ、他のタウオパシーおよび関連神経変性疾患の疾患進行を遅延または停止するための２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩の使用である。上述の態様、実施形態および特徴はすべて、前記使用にも適用される。
【００７１】
以下の実施例は、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物の投与が、遺伝子導入マウスＴＨＹ−Ｔａｕ２２における：
−  ウエスタンブロット解析による、ＡＤ−２（ｐＳｅｒ３９６−ｐＳｅｒ４０４）エピトープに対するタンパク質タウ過剰リン酸化；
−  免疫組織化学による、皮質、海馬および扁桃体におけるＡＴ−８（ｐＳｅｒ１９９−２０２／Ｔｈｒ２０５）エピトープに対するタンパク質タウ過剰リン酸化；
−  Ｇａｌｌｙａｓ染色による、皮質、海馬および扁桃体におけるＮＦＴの形成；ならびに
−  定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＱＰＣＲ）による、海馬における神経炎症（ＭＩＰαのｍＲＮＡ発現）
に与える影響について記述する。
【００７２】
〔実施例１〕
２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物（１回の経口投与あたり３および１０ｍｇ／ｋｇ（メチルセルロース／Ｔｗｅｅｎ８０懸濁液に含有））のＴＨＹ−Ｔａｕ２２マウス（処置群あたり９匹のマウス）への単独投与は、ウエスタンブロット解析において、皮質のＡＤ−２エピトープのタンパク質タウリン酸化に何ら影響を引き起こさなかった。
【００７３】
〔実施例２〕
２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物（０．００２％および０．０２％を飲料水に含有）のＴＨＹ−Ｔａｕ２２マウス（処置群あたり９匹のマウス）への２週間の投与は、ウエスタンブロット解析において、海馬のＡＤ−２エピトープのタンパク質タウリン酸化に何ら影響を引き起こさなかった。
【００７４】
０．００２％および０．０２％の用量を含む水への曝露は、実施例３で述べられている試験で使用される０．００３４％および０．０３４％の用量を含む食品への曝露と同程度の大きさとなる。
【００７５】
〔実施例３〕
２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物を、以下のように、０．０００３４％、０．００３４％および０．０３４％の用量での食品への添加物として、６カ月間ＴＨＹ−Ｔａｕ２２および野性型マウスに投与した：
Ｔｇ  Ｖｅｈ（ｎ＝１７）
Ｔｇ有効成分−０．０３４％（ｎ＝１７）
Ｔｇ有効成分−０．００３４％（ｎ＝１７）
Ｔｇ有効成分−０．０００３４％（ｎ＝１７）
ＷＴ  Ｖｅｈ（ｎ＝１７）
ＷＴ有効成分−０．０３４％（ｎ＝１７）
ＷＴ有効成分−０．００３４％（ｎ＝１７）
ＷＴ有効成分−０．０００３４％（ｎ＝１７）
【００７６】
有効成分を処置したＷＴ群は、生化学的および組織学的試験には用いない。
【００７７】
次の効果が、ビヒクル（即ち、添加を行っていない食品）で処置されたＴＨＹ−Ｔａｕ２２マウスと比較して観察された：
−  海馬における０．００３４％の用量でのＡＤ−２エピトープのタンパク質タウリン酸化の統計学的に有意な減少（図１）；
−  皮質における０．００３４％および０．０３４％の用量での（ｎ＝９）ＡＴ−８エピトープのタンパク質タウリン酸化の統計学的に有意な減少（図２）；
−  皮質、海馬ＣＡ１領域における０．００３４％および０．０３４％の用量での、ならびに扁桃体における０．０３４％の用量での（ｎ＝９）ＮＦＴ形成の統計学的に有意な減少（図３）；
−  海馬における０．０００３４％および０．００３４％の用量でのＭＩＰ−１α遺伝子発現の統計学的に有意な減少（図４）。
【００７８】
ＴＨＹ−Ｔａｕ２２遺伝子導入マウスを、２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物を用いて６カ月処置した後、病理学的ニューロン［即ち、Ｇａｌｌｙａｓ銀含浸によって証拠づけられる神経原線維タングル（ＮＦＴ）］の数の有意な減少が皮質において観察された（０．００３４％で−４８％、０．０３４％で−４１％）。タングル数の有意な減少が海馬ＣＡ１領域において観察された（０．００３４％で−２５％、０．０３４％で−２２％）。扁桃体内では、最高用量（０．０３４％）でＮＦＴの減少が有意であり（−３１％）、０．００３４％用量では統計的には有意でない減少（−１９％）があった。最も少ない用量（０．０００３４％）では、すべての分析した脳ＲＯＩにおいて、病理学的ニューロン（即ち、タングル数）に対する防御効果はなかった。
【００７９】
皮質内では、ＡＴ８陽性ニューロン細胞（タンパク質タウの異常な過剰リン酸化を示す）の数の有意な減少が２つの高用量で観察された（０．００３４％で−４７％、０．０３４％で−３２％）。さらに、神経細胞体および線維内のＡＴ８免疫染色の強度低下が０．００３４％用量で処置したマウスの皮質において定性的に観察された。ＡＴ８陽性神経細胞数の有意な減少は、他の分析されたＲＯＩ（即ち、扁桃体ならびに海馬ＣＡ１および歯状回領域の両方）では観察されなかった。
【００８０】
マウスの食品中に２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−｛２−［（２Ｓ）−１−メチルピロリジン−２−イル］エチル｝−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−スルホンアミド二フマル酸塩一水和物を６カ月投与して達成される曝露を、ＡＤ患者に６カ月経口投与した後の定常状態での予測と比較すると、マウスにおける０．０００３４％および０．００３４％の用量は、患者に対して安全な用量（それぞれヒトの用量で約０．２５および約２．５ｍｇ）であることが示唆される。
【００８１】
組織病理学的解析
脳組織切片
マウスを断首後、脳を摘出し、１つの半脳（ｈｅｍｉｂｒａｉｎ）（組織病理学研究のために使用）を、７日間、４℃で、４％ホルムアルデヒド（Ｃａｒｌｏ  Ｅｒｂａ／コード４１５６９１）を用いて浸漬固定した。別の半脳を生化学的定量測度のために調製した。
【００８２】
固定後の半脳を、リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ、Ｐ３８１３−１０ＰＡＫ、Ｓｉｇｍａ）でインキュベートし、２０％スクロース溶液（コード２７４８０．２９４−Ｐｒｏｌａｂｏ）に移して４８時間４℃でインキュベートして、次の凍結の間の組織の低温保存を確実にした。凍結に関しては、半脳をイソペンタン溶液（参照番号２４８７２−３２３−Ｐｒｏｌａｂｏ）に１分間浸し、ドライアイスで−２５℃〜−３０℃に冷却し、その後−２５℃で保存した。
【００８３】
半脳全体を低温保持装置（Ｍｉｃｒｏｍ、ＨＭ５６０）で切断した。一続きの矢状面脳組織切片を、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ  ｐｌｕｓ顕微鏡用スライドガラス（ＶＷＲ）上に集め、次いで−２０℃で保存し（厚さ２０μｍの切片）、または混入物を避けるためにＰＢＳアジ化ナトリウム０．１％（Ｓ−２００２、Ｓｉｇｍａ）含有ウェルに入れて４℃で保存した（厚さ３０μｍの切片）。
【００８４】
Ｇａｌｌｙａｓ銀染色
ＮＦＴは、ＡＤのタウ病理を主に定義する神経病理学的特徴である。それらは対らせん状細線維および直線状細線維の束から成り、主要な構成要素は過剰リン酸化された微小管結合タンパク質のタウである。一般的に、Ｇａｌｌｙａｓ染色を使用して、神経原線維の病理を染色する（Ｓｕｎ  Ａ．ら、Ｊ．  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ、２００２、５０、４、ｐｐ．４６３−４７２）。
【００８５】
１マウスあたり２０μｍの一続きの半脳切片（直接スライドにマウントしたもの）を用いてＧａｌｌｙａｓ染色を行った（Ｂｒａａｋ  ａｎｄ  Ｂｒａａｋ、１９９１、Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、１、ｐｐ．２１３−２１６）。詳細なプロトコルは、以下の通りである：
【００８６】
次の試薬を使用する：過ヨウ素酸（Ｓｉｇｍａ参照番号Ｐ７８７５）；水酸化ナトリウム（Ｐｒｏｌａｂｏ参照番号１７３７−１０００）；ヨウ化カリウム（Ｍｅｒｃｋ参照番号１．０５０４３．１０００番）；硝酸銀（Ｓｉｇｍａ参照番号Ｓ．８１５７）；１００％酢酸（Ｐｒｏｌａｂｏ参照番号２０  １０４．２９８）；炭酸ナトリウム無水物（Ｍｅｒｃｋ参照番号１．０６３９２−０５００）；硝酸アンモニウム（Ｐｒｏｌａｂｏ参照番号２１２８０−２９３）；タングストケイ酸（Ｓｉｇｍａ参照番号Ｔ２７８６）；４０％ホルムアルデヒド（Ｃａｒｌｏ  Ｅｒｂａ参照番号４１５６６１）；チオ硫酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ参照番号２１７２４−５００ｇ）。
【００８７】
第１の原液（番号Ｉ）を、５０ｇの炭酸ナトリウム無水物を１０００ｍｌの脱イオン水に溶解することにより調製した。第２の原液（番号ＩＩ）は、２ｇの硝酸アンモニウム、２ｇの硝酸銀、および１０ｇのケイ化タングステン酸を１０００ｍｌの脱イオン水に溶解することにより調製した。第３の原液（番号ＩＩＩ）は、２ｇの硝酸アンモニウム、２ｇの硝酸銀、１０ｇのケイ化タングステン酸、および７．３ｍｌの市販３７％ホルムアルデヒド溶液を１０００ｍｌの脱イオン水に溶解することにより調製した。原液は安定しており、不透明な容器に格納し得る。
【００８８】
方法における以下の各工程は、攪拌しながら行う。
１．前処置：スライド上の切片を５％過ヨウ素酸水溶液に５分間浸漬し、次いで、脱イオン水で５分間２度すすいだ。
２．鍍銀：ヨウ化銀溶液を、４ｇの水酸化ナトリウムを５０ｍｌの蒸留水に溶解し、１０ｇのヨウ化カリウムを加えて新たに調製し、これを混合し、完全に溶解させる。３．５ｍｌの１％硝酸銀水溶液を撹拌しながら添加する。蒸留水を加えて最終容積を１００ｍｌとし、溶液が透明になるまで激しく混合する。半脳切片を、アルカリ性のヨウ化銀溶液に１分間浸す。次いで、０．５％酢酸水溶液でおよそ１０分間すすぐ。
３．検出：検出試薬を、１０体積（５０ｍｌ）の原液Ｉと３体積（１５ｍｌ）の原液ＩＩと７体積（３５ｍｌ）の原液ＩＩＩとを合わせて溶液が透明になるまで激しく混合することにより、新たに調製する。検出は、５〜３０分行う。薄茶色となれば、検出は十分である。検出の程度は、顕微鏡下でスライドを観察することにより確認する。
４．切片を、脱イオン水で迅速にすすぐ。
５．固定：切片を、１％のチオ硫酸ナトリウム中に５分間固定し、次いで脱イオン水で素早くすすぐ。
６．切片を加熱プレート上で脱水する。
７．少量のマウント培地（Ｐｅｒｔｅｘ（登録商標）Ｍｏｕｎｔｉｎｇ  Ｍｅｄｉａ）をスライド上に置き、カバーガラスを穏やかにその上に置く。
【００８９】
ＡＴ８に対する免疫組織化学
過剰リン酸化された微小管結合タンパク質タウは、対らせん状細線維の主要な構成要素である。リン酸化依存性抗タウ抗体を使用して、正常な脳およびＡＤ脳由来のタウでリン酸化される特定のアミノ酸を同定することができる。例えば、単クローン抗体ＡＴ８は広く使用されている。抗体は、リン酸化タウのリン酸化セリン２０２およびリン酸化スレオニン２０５エピトープを検出し得る（ＡＴ８エピトープ（Ｍ．Ｇｏｅｄｅｒｔら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、（１９９５）１８９、３、ｐｐ．１６７−１６９））。
【００９０】
ＡＴ８抗体を使用し、アビジン−ビオチン・ホースラディシュペルオキシダーゼ法に基づく免疫組織化学のプロトコルを、３０μｍの浮動切片に適用した。詳細なプロトコルは、以下の通りである：
【００９１】
次の試薬を使用する：０．１ＭのＰＢＳバッファーを含有する１リットルのＨ２〇（２．２３ｇのＮａＨ２ＰＯ４、２Ｈ２Ｏ（Ｐｒｏｌａｂｏ参照番号３３  ６１６．２６２）、２９ｇのＮａ２ＨＰＯ４、１２Ｈ２Ｏ（Ｐｒｏｌａｂｏ参照番号２８０２８．２９８）、９ｇのＮａＣｌ（Ｐｒｏｌａｂｏ参照番号２７８１０．２９５））；ＰＢＳ−トリトン（０．１５％）バッファートリトン×１００（Ｓｉｇｍａ参照番号２３４７９−９）（ＰＢＳ−Ｔ）（１ｌの０．１ＭのＰＢＳバッファー、１．５ｍｌのトリトン）；０．２ＭのＰＢＳバッファーを含有する１リットルＨ２Ｏ（４．４６ｇのＮａＨ２ＰＯ４、２Ｈ２Ｏ、５８ｇのＮａ２ＨＰＯ４，１２Ｈ２Ｏ、１８ｇのＮａＣｌ）；３０％Ｈ２Ｏ２（Ｓｉｇｍａ参照番号Ｈ  １００９）；３，３’−ジアミノベンジジン四塩酸（Ｓｉｇｍａ参照番号Ｄ９０１５、１００ｍｇ、−２０℃で保存）；Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ（登録商標）ＡＢＣキット（参照番号ＰＫ４０００、Ｖｅｃｔｏｒ）；ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ参照番号Ａ８０２２）。
【００９２】
切片を、０．１Ｍ−ＰＢＳ−０．１５％のトリトン溶液で３×１０分間、次いで０．１Ｍ−ＰＢＳ−１．５％過酸化水素５０％メタノールで、室温で３０分間、プレインキュベートした。０．１Ｍ−ＰＢＳ−０．１５％トリトンで３回洗浄した後、それらをさらにブロッキングバッファー［即ち、０．０１ＭのＰＢＳで１０％に希釈したＢＳＡ］中で３０分間インキュベートした。それらを、マウス抗ヒトＰＨＦ−Ｔａｕモノクローナル抗体（クローンＡＴ８、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、ＭＮ１０２０、０．１Ｍ  ＰＢＳ−０．０５％トリトンで１／５００希釈）を用いて室温で一晩インキュベートし、次いで二次抗体（ヤギ由来の抗マウスＩｇＧビオチニル化全抗体、Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＲＰＮ１１７７、０．１Ｍ  ＰＢＳ−０．０５％トリトンで１／５００希釈）を用いて１時間３０分間希釈した。それらを、最後に、ペルオキシダーゼ結合アビジン複合体（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣキット、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、０．１Ｍ  ＰＢＳで１／４００希釈）中で３０分間インキュベートした。切片を、ペルオキシダーゼ基質溶液（０．００３％の過酸化水素、０．０５％のジアミノベンジジンテトラヒドロクロリドを含有する０．１ＭのＰＢＳ）中で短くインキュベートし、０．９％ＮａＣｌ溶液ですすいだ。最後に、それらをスライド上にマウントし、室温で乾燥させて、脱水して、Ｅｕｋｉｔｔを使用してカバーガラスをかけた。
【００９３】
Ｇａｌｌｙａｓ染色およびＡＴ８免疫染色の定量的画像解析
タウ病理の２つのマーカー（つまり、Ｇａｌｌｙａｓ染色およびＡＴ８免疫染色）を、画像解析システムを使用して定量的に測定した。微視的仮想スライド技術（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ｄｏｔｓｌｉｄｅスキャナシステムを使用）を適用して、高倍率（つまり、対象物×１０）および高解像度で、全半脳部位の染色画像を取得した。これらの切片は異なる関心領域（ＲＯＩ）の中内外の軸椎に沿って様々な位置で得た。
【００９４】
画像はすべてコンピュータ・ベースのワークステーション（Ｍｅｒｃａｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ／Ｅｘｐｌｏｒａ  Ｎｏｖａ  ｕｓｉｎｇ  Ｄｏｔｓｌｉｄｅ  ｓｏｆｔｗａｒｅ）で定量的に分析した。様々なＲＯＩの概略は、各画像に対して最初に手動で定義した。Ｇａｌｌｙａｓ着色に関しては、３つのＲＯＩを分析した：（皮質、海馬ＣＡ１領域、および扁桃体）。ＡＴ８免疫染色に関しては、４つのＲＯＩ：皮質、扁桃体、海馬ＣＡ１および歯状回領域ならびに歯状回を分析した。
【００９５】
Ｇａｌｌｙａｓ陽性細胞またはＡＴ８陽性細胞の総数は、半脳の中内外軸の８つの切片由来の異なるＲＯＩから見積もった（タウオパシーは、ＴＨＹ−ＴＡＵ２２動物の屠殺時（即ち、８カ月齢）において見られ得る）。このパラメータを使用して所与の群のＧａｌｌｙａｓまたはＡＴ８陽性細胞の総数の平均±標準誤差を計算した。
【００９６】
すべてのデータはソフトウェアによって保存し、エクセル・スプレッドシートで抽出して回収した。
【００９７】
ＭＩＰ１αのｍＲＮＡ発現−プロトコル
１．ＲＮＡ調製：各マウス由来の半海馬を、５０の１．４ｍｍセラミックビーズと０．５ｍｌのＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ核酸精製溶解液（１×）を含むＰｒｅｃｅｌｌｙｓ  ＣＫ１４チューブ内に置いた。組織は、ホモジナイザーＰｒｅｃｅｌｌｙｓ２４（Ｂｅｒｔｉｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して２×１０秒のバースト間でホモジナイズした。総ＲＮＡを、製造業者の指示に従って６１００  ＰｒｅｐＳｔａｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、ＤＮアーゼ処理（植物と動物組織からの総ＲＮＡの単離プロトコル）を含めて、単離した。全ＲＮＡの質および濃度を評価するために、１μｌを、ＲＮＡ  ＬａｂＣｈｉｐ（Ａｇｉｌｅｎｔ）上で２１００Ｂｉｏａｎａｌｙｓｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して分析した。
【００９８】
２．リアルタイムＰＣＲ
各マウスからの総ＲＮＡ２μｇを、オリゴ（ｄＴ）１６およびランダムプライマーを用い、高容量ｃＤＮＡアーカイブキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を製造業者の推奨に従って使用して、逆転写した。最終逆転写反応に含まれていた鋳型は１００μｌであった。その後、サンプルを２５℃で１０分間、次いで３７℃で１２０分間インキュベートし、その後、９５℃に加熱して酵素を変性させ、反応を停止した。リアルタイムＰＣＲに関しては、ハウスキーピング遺伝子Ｒ．Ｌ３７Ａを、Ｑｉａｇｅｎのｑｕａｎｔｉｔｅｃｔプライマーアッセイ（ＱＴ００２５２２６６）を使用して増幅させ、ＭＩＰ１αを、以下のプライマー（５’−ＴＧＣＣＣＴＴＧＣＴＧＴＴＣＴＴＣＴＣＴ−３’）；（５’−ＧＴＧＧＡＡＴＣＴＴＣＣＧＧＣＴＧＴＡＧ−３’）を用いて増幅させた。増幅は、ＡＢＩプリズム７９００配列検出器を使用して、製造業者（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の指示書に従って行った。
【００９９】
３．発現結果
ｑＰＣＲに関しては、サイクル閾値（Ｃｔ）を、方程式２（Ｃｔ（Ｌ３７ａ）−Ｃｔ（ＭＩＰ１α）を使用して、各海馬サンプルの値について、脳全体の参照サンプルに基づく２（Ｃｔ（Ｌ３７ａ）−Ｃｔ（ＭＩＰ１α））で割って、相対量（ＲＱ）に変換した。
【０１００】
皮質および海馬ホモジネートでのタウのリン酸化のウエスタンブロット解析
免疫ブロット分析に関しては、凍結マウス組織（海馬または皮質のいずれか）を、Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ  ２４組織ホモジナイザーを使用して、３５０μｌのＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ製ＲＩＰＡバッファー（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＮａ２  ＥＤＴＡ、１ｍＭのＥＧＴＡ、１％ＮＰ−４０、１％デオキシコール酸ナトリウム、２．５ｍＭのピロリン酸ナトリウム、１ｍＭのβ−グリセロリン酸塩、１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、１μｇ／ｍｌのロイペプチン）中でホモジナイズし、これにプロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ  ｃｏｃｋｔａｉｌ  １％ｖ／ｖ）およびホスファターゼ阻害剤（オカダ酸１μＭ、フッ化ナトリウム１００ｍＭ）を添加した。１６０００×ｇ  ４℃で１０分間遠心分離後、上清のタンパク質含有量を、標準としてＢＳＡを使用して、ＢｉｏＲａｄ  ＤＣタンパク質分析キットで決定した。等量のタンパク質（５μｇ）を、１５ウェルの４〜１２％のＢｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（ＮｕＰＡＧＥ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に負荷し、製造業者の指示に従って電気泳動を２００Ｖで５０分間、ＭＯＰＳバッファー中で行った。次いで、タンパク質を、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に移し、２時間３０Ｖで、２０％メタノールを含有する移送バッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で移送させた。５％脱脂粉乳含有ＴＢＳＴｗｅｅｎ中０．１％でブロッキング後、ブロットを、一次抗体を５％ＢＳＡ含有ＴＢＳＴｗｅｅｎ中で０．１％に希釈した中で、一晩４℃でインキュベートした。タウタンパク質を、以下のマウス抗体：Ｓｅｒ３９６とＳｅｒ４０４でリン酸化されたタウタンパク質を認識するＡＤ−２  １／２０．０００ｅ（Ｂｉｏｒａｄ、５６４８４）を使用して検出した。各ブロットを抗βアクチン抗体１／５．０００ｅ（Ｓｉｇｍａ、Ａ−５３１６）で再プロービングし、全タンパク質量に対して正規化した。
【０１０１】
一次抗体を用いてインキュベートした後、ブロットをＴＢＳ  Ｔｗｅｅｎ０．１％を用いてすすぎ、抗マウスＩｇＧホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合二次抗体１／１０，０００ｅ（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＮＡ９３１０）の５％脱脂粉乳含有ＴＢＳ  Ｔｗｅｅｎ０．１％希釈液で１時間、室温でインキュベートした。洗浄後、ブロットを、増強化学発光（ＥＣＬ  ａｄｖａｎｃｅ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で発色させ、画像を発光イメージ・アナライザーＬＡＳ  ３０００（ＦＵＪＩＦＩＬＭ）を使用して取得した。免疫反応シグナルの定量化は、Ｍｕｌｔｉｇａｕｇｅ  Ｖ３．０ソフトウェア（ＦＵＪＩＦＩＬＭ）を使用して行った。各信号は、それぞれβ−アクチンに対して正規化した（同じゲル、同じウェル）。統計分析については、ノンパラメトリック検定法を使用した（ビヒクルに対するＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ両側比較検定）。
【０１０２】
異常なタウの過剰リン酸化に対するＴＨＹ−Ｔａｕ２２マウスの海馬中の有効成分の、
ウエスタンブロット解析による阻害活性が、図１に示される。
【０１０３】
ＡＤ−２エピトープでのタウリン酸化について、０．００３４％の用量で有意な阻害が示されたが（−３７％、ｐ＝０．０２２９）、ＡＴ−８エピトープではわずかな阻害の傾向があるのみであった（−２２％、ｎｓ）。同様であるが顕著ではない効果が、皮質でも観察された（−５７％、ｐ＝０．１８０７）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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