(57)【要約】  抗ＣＤ２２抗体、ならびにそれを作製する方法および使用する方法であって、この抗ＣＤ２２抗体は、少なくとも１のこのような抗ＣＤ２２抗体をコードする単離された核酸、ベクター、宿主細胞、トランスジェニック動物または植物を含み、この方法は治療組成物、方法、およびデバイスを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ２２に結合する単離された抗体または抗体フラグメントであって、配列ＩＤ番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、または６４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列ＩＤ番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、１若しくはそれ以上のヒト抗体から誘導された定常領域とを有する、単離された抗体または抗体フラグメント。
【請求項２】
ヒトＣＤ２２に結合する単離された抗体または抗体フラグメントであって、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５の１若しくはそれ以上からの可変領域から誘導された重鎖および軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、１若しくはそれ以上のヒト抗体から誘導された定常領域とを有する、単離された抗体または抗体フラグメント。
【請求項３】
請求項１または２記載の抗体またはフラグメントにおいて、前記抗体またはフラグメントは抗ＣＤ２２マウス抗体のヒトＣＤ２２への結合をインビボで競合阻害する、抗体またはフラグメント。
【請求項４】
請求項１または２記載の抗ＣＤ２２抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または特殊化された部分若しくはバリアントは、少なくとも１０−９Ｍの親和性（Ｋｄ）でＣＤ２２を結合する、抗ＣＤ２２抗体または抗体フラグメント。
【請求項５】
請求項１または２記載のＣＤ２２抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または特殊化された部分若しくはバリアントは、少なくとも１０−１１Ｍの親和性（Ｋｄ）でＣＤ２２を結合する、ＣＤ２２抗体または抗体フラグメント。
【請求項６】
請求項１または２記載のＣＤ２２抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または特殊化された部分若しくはバリアントは、少なくとも１０−１２Ｍの親和性（Ｋｄ）で結合する、ＣＤ２２抗体または抗体フラグメント。
【請求項７】
請求項１または２記載のＣＤ２２抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または特殊化された部分若しくはバリアントは、少なくとも１のＣＤ２２の少なくとも１の活性を実質的に中和する、ＣＤ２２抗体または抗体フラグメント。
【請求項８】
請求項１または２記載の単離されたＣＤ２２抗体または特殊化された部分若しくはバリアントと、担体または希釈剤とを有する、ＣＤ２２抗体組成物または抗体フラグメント組成物。
【請求項９】
細胞、組織、器官、または動物における免疫状態、障害、または疾患を治療する方法であって、少なくとも１の選択された免疫調節有効量の請求項１または２記載の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体または抗体フラグメントを、前記細胞、組織、器官、または動物と接触させ、または前記細胞、組織、器官、または動物に投与する工程を有する、方法。
【請求項１０】
請求項９記載の方法において、前記免疫状態、障害、または疾患は、関節リウマチ／血清反応陰性関節症、骨関節炎、炎症性大腸炎、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｉｓ）、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎（ｕｖｅｔｉｓ）／視神経炎から選択される少なくとも１つである、方法。
【請求項１１】
請求項９記載の方法において、前記有効量は前記細胞、組織、器官、または動物の０．０００１〜５０ｍｇ／キログラムである、方法。
【請求項１２】
細胞、組織、器官、または動物における癌性障害または状態を調節する方法であって、薬学的有効量の少なくとも１の請求項１または２記載の抗ＣＤ２２抗体組成物または抗体フラグメントを、前記細胞、組織、器官、または動物と接触させ、または前記細胞、組織、器官、または動物に投与する工程を有する、方法。
【請求項１３】
請求項１２記載の方法において、前記癌性障害または状態が、白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、および多発性骨髄腫から選択される少なくとも１つである、方法。
【請求項１４】
請求項１２記載の方法において、前記有効量は前記細胞、組織、器官または動物の０．０１〜１００ｍｇ／キログラムである、方法。
【請求項１５】
請求項１２記載の方法において、前記接触させる工程または前記投与する工程が、静脈内、筋肉内、ボーラス、皮下、呼吸、吸入、膣、直腸、頬側、舌下、鼻内、または経皮から選択される少なくとも１つの様式によるものである、方法。
【請求項１６】
請求項１または２記載の少なくとも１つの抗ＣＤ２２抗体組成物または抗体フラグメントを有する医療用デバイスであって、前記デバイスは、静脈内、筋肉内、ボーラス、皮下、呼吸、吸入、膣、直腸、頬側、舌下、鼻内、または経皮から選択される少なくとも１つの様式によって、前記少なくとも１つのＣＤ２２抗体組成物または抗体フラグメントを接触させ、または投与することに適している、医療用デバイス。
【請求項１７】
単離された完全ヒト抗体組成物またはその抗体フラグメントであって、前記抗体または特殊化された部分若しくはバリアントが、請求項１または２記載の抗ＣＤ２２抗体またはフラグメントと同じエピトープまたは抗原性領域を結合する、単離された完全ヒト抗体組成物または抗体フラグメント。
【請求項１８】
請求項１または２記載の少なくとも１つの抗ＣＤ２２抗体組成物または抗体フラグメントと、滅菌水、滅菌緩衝化水、またはフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム、アルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、およびチメロサール、若しくはこれらの混合物から成る群から選択される水性希釈剤中の少なくとも１つの保存剤から選択される少なくとも１つの担体とを有する製剤。
【請求項１９】
請求項１８記載の製剤において、抗ＣＤ２２抗体組成物または抗体フラグメントの濃度は約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌである、製剤。
【請求項２０】
請求項１８記載の製剤であって、さらに、等張剤を有する、製剤。
【請求項２１】
請求項１８記載の製剤であって、さらに、生理学的に許容可能な緩衝液を有する、製剤。
【請求項２２】
第１の容器中における凍結乾燥型の請求項１または２記載の少なくとも１つの抗ＣＤ２２抗体組成物または抗体フラグメントと、滅菌水、滅菌緩衝化水、またはフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム、アルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、およびチメロサール、若しくはこれらの混合物から成る群から選択される水性希釈剤中の少なくとも１つの保存剤を有する選択的な第２の容器とを有する、キット。
【請求項２３】
請求項２２記載のキットにおいて、抗ＣＤ２２抗体組成物または抗体フラグメントの濃度が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５００ｍｇ／ｍｌの濃度に再構成される、キット。
【請求項２４】
請求項２２記載のキットであって、さらに、等張剤を有する、キット。
【請求項２５】
請求項２２記載のキットであって、さらに、生理学的に許容可能な緩衝液を有する、キット。
【請求項２６】
その必要がある患者に請求項１８記載の製剤を投与する工程を有する、少なくとも１つの抗ＣＤ２２が媒介する状態を治療する方法。
【請求項２７】
パッケージング材料と、溶液型または凍結乾燥型の請求項１または２記載の少なくとも１つのＣＤ２２抗体組成物または抗体フラグメントを有する容器とを有する、ヒトの薬学的使用のための製品。
【請求項２８】
請求項２７記載の製品において、前記容器は多目的投与のためのストッパーを有するガラスまたはプラスチック容器である、製品。
【請求項２９】
請求項１または２記載の抗ＣＤ２２抗体またはフラグメントを製造する方法であって、前記抗体またはフラグメントをコードするヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞またはトランスジェニック動物またはトランスジェニック植物または植物細胞から前記抗体またはフラグメントを発現させる工程と、そのような抗体またはそのフラグメントをそれらから回収する工程とを有する、方法。
【請求項３０】
請求項２９記載の方法において、前記宿主細胞が、哺乳動物細胞、植物細胞、または酵母細胞である、方法。
【請求項３１】
請求項２９記載の方法において、前記トランスジェニック動物が哺乳動物である、方法。
【請求項３２】
請求項３１記載の方法において、前記トランスジェニック哺乳動物が、ヤギ、ウシ、ヒツジ、ウマ、および非ヒト霊長類から選択される、方法。
【請求項３３】
請求項１または２記載の少なくとも１つの抗体を発現することが可能なトランスジェニック動物または植物。
【請求項３４】
請求項２９記載の方法によって産生された少なくとも１つの抗ＣＤ２２抗体または特殊化された部分若しくはバリアント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも１のＣＤ２２タンパク質またはそのフラグメントに特異的な特殊化された部分またはバリアントを含む抗体、ならびにこのような抗ＣＤ２２抗体をコードする核酸、相補的核酸、ベクター、宿主細胞、ならびに治療用製剤、投与、およびデバイスを含むこれらを製造する方法および使用する方法に関連する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ２２は、Ｓｉｇｌｅｃ、シアル酸結合受容体タンパク質スーパーファミリーのメンバーであり、Ｂ細胞を発生させることによって産生される。インビボにおいて、Ｂ細胞は、ＣＤ２２の主要な供給源を表す。リンパ腫、白血病性およびリンパ球性Ｂ細胞などの他の細胞もまた、ＣＤ２２を産生する。ＣＤ２２は、非ホジキンリンパ腫および急性と慢性の両方の慢性リンパ球性白血病の癌の進行の予後因子として関係があるとされてきた。ＣＤ２２産生は、リンパ節の胚中心におけるＢ細胞分化プロセスによって調節できる。
【０００３】
ＣＤ２２リガンド、シアル酸含有細胞外表面分子は、体液性免疫応答の間に、発生しつつあるＢ細胞上で発現されたＣＤ２２受容体に結合できる。ＣＤ２２受容体は、ＣＤ２２−リガンド結合の原因である免疫グロブリン様反復配列を有する。
【０００４】
ＣＤ２２の少なくとも２の主要な生物学的機能が存在する：ＣＤ２２は、Ｂ細胞受容体複合体（ＢＣＲ）と相互作用して、細胞内シグナル伝達を刺激してＢ細胞分化と免疫グロブリンの産生と促進でき、そしてまた、ＢＣＲと相互作用して、細胞内シグナル伝達ならびに細胞の増殖および分化を阻害もできる。マウスモノクローナル抗ＣＤ２２抗体の結合は、ＣＤ２２チロシンリン酸化を刺激し、そしてマイトジェンシグナル伝達をネガティブに調節する（Ｃａｒｎａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １，２００３  ９；３９８２ｓ）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
リンパ腫、急性および慢性白血病、ならびに他のＢ細胞異形成およびＢ細胞依存性自己免疫疾患に関連する状態を、予防、治療、改善、または診断する際の使用のための、ＣＤ２２に対する高親和性中和キメラ抗体またはヒト抗体、またはそのフラグメントを提供する必要性が存在する。  
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の要旨
本発明は、高親和性ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５抗ＣＤ２２抗体から誘導された少なくとも１の抗原結合領域を有する単離されたヒト化抗ＣＤ２２抗体、ならびに抗ＣＤ２２抗体組成物、これらの抗ＣＤ２２抗体の結合体バージョン、これらに関連するコード核酸または相補的核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、製剤、デバイス、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、ならびに、当該分野において公知であるものと組み合わせて、本明細書に記載されかつ可能にされているような、その製造方法および使用方法を提供する。本発明の抗体は、高い親和性でヒトＣＤ２２を特異的に中和する。
【０００７】
本発明は、本明細書に記載されるような少なくとも１の単離された抗ＣＤ２２抗体を提供する。本発明に従う抗体は、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５のいずれか１つ、または、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５の１から誘導されたそれらの重鎖または軽鎖またはリガンド結合部分の少なくとも１の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）を有する任意のタンパク質またはペプチド分子を、本発明の抗体に取り込むことができる、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはこれらの任意の部分と組み合わせて含む。１つの実施形態において、本発明は、軽鎖および重鎖を有する抗ＣＤ２２抗体に向けられ、これらの鎖の各々は、ヒト定常領域の少なくとも一部、および、各々がヒトＣＤ２２に特異性を有する、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５の１若しくはそれ以上から誘導された可変領域（ｖ）の少なくとも一部を有し、上記抗体は、ヒトＣＤ２２の阻害および／または中和エピトープに対して高い親和性で結合する。本発明はまた、このような抗体のフラグメントまたは誘導体、例えば、抗体鎖の１若しくはそれ以上の部分、例えば、重鎖定常領域、重鎖連結領域、重鎖多様性若しくは可変領域、または軽鎖定常領域、軽鎖連結領域、若しくは可変領域もまた含む。
【０００８】
この抗体は、抗ＣＤ２２抗体（このような用語は本明細書に規定される通りである）から誘導された少なくとも１の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、重鎖または軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）の少なくとも１の特殊化された部分、および／または少なくとも１の定常領域若しくは可変フレームワーク領域若しくはその任意の部分を有することができる。抗体アミノ酸配列は、さらに、本明細書に記載されるような、または当該分野において公知であるような、少なくとも１の特殊化された置換、挿入、または欠失を選択的に有することができる。
【０００９】
本発明の好ましい抗体は、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５、ならびにこれらのフラグメントおよび領域を含む。
【００１０】
１つの実施形態において、本開示は、配列ＩＤ番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、または６４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；配列ＩＤ番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域；および１若しくはそれ以上のヒト抗体から誘導された定常領域を有する、単離された抗体、またはヒトＣＤ２２に結合する抗体フラグメントを提供する。１つの態様において、本開示は、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５の１若しくはそれ以上からの可変領域から誘導された重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに１若しくはそれ以上のヒト抗体から誘導された定常領域を有する、単離された抗体、またはヒトＣＤ２２に結合する抗体フラグメントを提供する。別の態様において、本開示は、請求項１または２記載の抗体またはフラグメントを提供し、上記抗体またはフラグメントは、抗ＣＤ２２マウス抗体のヒトＣＤ２２への結合をインビボで競合阻害する。
【００１１】
本発明の好ましい抗体は、ヒトＣＤ２２を結合し、ＣＤ２２チロシンリン酸化および内在化を誘導し、ならびにＢ細胞増殖および分化をネガティブに調節するものである。競合阻害によるモノクローナル抗体の特異性および親和性を決定するための好ましい方法は、参照により本願に組み込まれる、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）に見出すことができる。例えば、（Ｓｔｅｉｎ  Ｒ，Ｂｅｌｉｓｌｅ  Ｅ，Ｈａｎｓｅｎ  ＨＪ，Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ＤＭ：Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−（Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＬＬ２．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  １９９３，３７：２９３−２９８）によって記載されているように、本発明の少なくとも１の抗体は、ヒトＣＤ２２タンパク質、サブユニット、フラグメント、部分、またはこれらの任意の組み合わせに対して特異的な少なくとも１の特殊化されたエピトープを結合する。モノクローナル抗体ＬＬ２は、ＣＤ２２の細胞外ドメインにおける第３の免疫グロブリン（Ｉｇ）反復配列に結合し、ＣＤ２２を発現するＢ細胞集団およびリンパ腫および白血病細胞に対するその調節効果のために重要である。このエピトープは、少なくとも１の抗体結合領域を有することができ、このエピトープは、好ましくは、少なくとも１のその部分の少なくとも１〜５アミノ酸から構成され、例えば、これに限定されるものではないが、ヒトＣＤ２２タンパク質の機能的ドメイン、細胞外ドメイン、可溶性ドメイン、親水性ドメイン、外部ドメイン、または細胞質ドメイン、またはこれらの任意の部分の少なくとも１である。
【００１２】
１つの実施形態において、本発明は、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５、ならびにこれらをコードする核酸配列の１から少なくとも１の可変領域を有する、少なくとも１の単離された哺乳動物抗ＣＤ２２抗体を提供する。
【００１３】
別の態様において、本発明は、（ｉ）ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、若しくはＶＭ１０１５から誘導される重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列のすべておよびこれらをコードする核酸配列、または（ｉｉ）ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、若しくはＶＭ１０１５の１からの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列のすべておよびこれらをコードする核酸配列のいずれかを有する少なくとも１の単離された哺乳動物抗ＣＤ２２抗体を提供する。
【００１４】
別の態様において、本発明は、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５から誘導されたアミノ酸配列を有する少なくとも１の重鎖または軽鎖ＣＤＲ、ならびにこれらをコードする核酸配列を有する、少なくとも１の単離された哺乳動物抗ＣＤ２２抗体を提供する。
【００１５】
他の態様において、本発明は、少なくとも１のヒトＣＤＲを有するかまたはヒトＣＤＲを有さない、少なくとも１の単離された哺乳動物キメラ、ヒト化、またはＣＤＲ移植抗ＣＤ２２抗体を提供し、ここで、この抗体は、ヒトＣＤ２２のエピトープの少なくとも１〜３アミノ酸を有する少なくとも１のエピトープを特異的に結合する。
【００１６】
少なくとも１の抗体は、一定の親和性（少なくとも１０−９Ｍ、好ましくは、少なくとも１０−１０ＭのＫＤでＣＤ２２をさらに選択的に結合し、および／または少なくとも１のＣＤ２２タンパク質の少なくとも１の活性を実質的に中和することができる。好ましい実施形態において、抗体は、少なくとも５×１０−１０Ｍ、好ましくは、５×１０−１１、より好ましくは、５×１０−１２の親和性（ＫＤ）でＣＤ２２を結合し、ヒトＣＤ２２を中和する。
【００１７】
本発明は、１つの態様において、上述の特異的抗ＣＤ２２抗体をコードするポリヌクレオチドを有し、これと相補的であり、またはこれにハイブリダイズする単離された核酸分子を提供し、これは、少なくとも１のその特殊化された配列、ドメイン、部位、またはバリアントを有する。本発明は、上記ＣＤ２２抗体核酸分子を有する組換えベクター、このような核酸分子および／若しくは組換えベクターを含有する宿主細胞、ならびにこのような抗体核酸、ベクター、および／若しくは宿主細胞を作製する方法および／若しくは使用する方法をさらに提供する。それゆえに、本発明は、少なくとも１の単離された哺乳動物抗ＣＤ２２抗体をコードする単離された核酸；単離された核酸を有する単離された核酸ベクター、および／または単離された核酸を有する原核生物若しくは真核生物宿主細胞を有する。宿主細胞は、選択的に、ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、Ｈｅｐ  Ｇ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＨｅＬａ、骨髄腫、またはリンパ腫細胞、またはその任意の誘導体、不死化細胞若しくは形質転換細胞から選択される少なくとも１であり得る。ＣＤ２２抗体が検出可能なまたは回収可能な量で発現されるように、インビトロ、インビボ、またはインサイチュの条件下で、核酸をコードする抗体を翻訳する工程を有する、少なくとも１のＣＤ２２抗体を産生するための方法もまた提供される。
【００１８】
本発明はまた、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体が検出可能なおよび／または回収可能な量で発現される条件下で、本明細書に記載されるように宿主細胞を培養する工程を有する、宿主細胞中で、少なくとも１の上述の抗ＣＤ２２抗体を発現するための少なくとも１の方法も提供する。
【００１９】
本発明はまた、（ａ）本明細書に記載されるような単離された抗ＣＤ２２抗体をコードする核酸および／または抗体；ならびに（ｂ）適切な担体または希釈剤を有する、少なくとも１の組成物も提供する。この担体または希釈剤は、選択的に、公知の担体または希釈剤に従って、薬学的に受容可能であり得る。この組成物は、選択的に、さらなる化合物、タンパク質、または組成物の少なくとも１をさらに有することができる。
【００２０】
本発明はさらに、当該分野において公知であるように、および／または本明細書に記載されるように、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１のＣＤ２２関連状態を調節または治療するために、および／または関連する状態の前、それに続いて、またはその間に、治療有効量を投与するための、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の方法または組成物を提供する。それゆえに、本発明は、有効量の少なくとも１の単離された本発明の抗ＣＤ２２抗体を有する組成物を、細胞、組織、器官、または動物と、または細胞、組織、器官、または動物に、接触または投与する工程を有する、細胞、組織、器官、または動物におけるＣＤ２２関連状態を診断または治療するための方法を提供する。この方法は、細胞、組織、器官、または動物に対して、有効量の０．００１〜５０ｍｇ／キログラムの本発明の抗ＣＤ２２抗体を使用する工程を選択的にさらに有することができる。この方法は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内（ｉｎｔｒａｒｔｉｃｕｌａｒ）、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内（ｉｎｔｒａｃｅｌｅｂｅｌｌａｒ）、脳室内、結腸内、頸部内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻内、または経皮から選択される少なくとも１の様式によって、接触または投与を使用する工程を選択的にさらに有することができる。この方法は、検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ剤、筋弛緩剤、麻薬、非ステロイド系抗炎症薬物（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬（ｎｅｕｒｏｍｓｕｃｕｌａ−ｒ  ｂｌｏｃｋｅｒ）、抗菌剤、抗乾癬剤、副腎皮質ステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫付与、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬物、放射性医薬品、抗鬱剤、抗精神病薬、興奮剤、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンまたはそのアナログ、細胞毒性薬または他の抗癌剤、メトトレキサートなどの代謝拮抗物質、抗増殖剤、サイトカイン、サイトカインアンタゴニスト、および抗ＴＮＦαまたは他のモノクローナル抗体または二機能抗体の少なくとも１から選択される、有効量の少なくとも１の化合物またはタンパク質を有する少なくとも１の組成物を、抗体を接触させる工程または投与する工程の前に、それと同時に、またはその後に、投与する工程を選択的にさらに有することができる。
【００２１】
本発明はさらに、当該分野において公知であるように、および／または本明細書に記載されるように、細胞、組織、器官、動物または患者において、および／または関連する状態の前、それに続いて、若しくはその間に、少なくとも１のＣＤ２２関連状態を診断するために、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の方法をさらに提供する。
【００２２】
本発明はまた、本発明に従う、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の診断のための、少なくとも１の組成物、デバイス、および／または送達の方法も提供する。
【００２３】
本発明の少なくとも１の単離された哺乳動物抗ＣＤ２２抗体を有する医療用デバイスもまた提供され、ここで、このデバイスは、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内（ｉｎｔｒａｒｔｉｃｕｌａｒ）、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内（ｉｎｔｒａｃｅｌｅｂｅｌｌａｒ）、脳室内、結腸内、頸部内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻内、または経皮から選択される少なくとも１の様式によって、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を接触または投与するために適切である。
【００２４】
さらなる態様において、本開示は、第１の容器に凍結乾燥型の本開示の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体またはフラグメント、ならびに、滅菌水、滅菌緩衝化水、または、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム、アルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、若しくはこれらの混合物から成る群から選択される水性希釈剤中の少なくとも１の保存剤を有する選択的な第２の容器を有するキットを提供する。１つの態様において、キット中で、第１の容器における抗ＣＤ２２抗体または特殊化された部分若しくはバリアントの濃度は、第２の容器の内容物とともに、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５００ｍｇ／ｍｌの濃度まで再構成される。別の態様において、第２の容器は、さらに、等張剤を有する。別の態様において、第２の容器は、さらに、薬学的に受容可能な緩衝液を有する。１つの態様において、本開示は、キットの中で提供されかつ投与前に再構成される製剤を、投与が必要な患者に投与する工程を有する、少なくとも１の抗ＣＤ２２媒介状態を治療する方法を提供する。
【００２５】
パッケージング材料、および溶液型または凍結乾燥型である本発明の少なくとも１の単離された哺乳動物抗ＣＤ２２抗体を有する容器を有する、ヒトの薬学的使用または診断的使用のための製品もまた提供される。この製品は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内（ｉｎｔｒａｒｔｉｃｕｌａｒ）、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内（ｉｎｔｒａｃｅｌｅｂｅｌｌａｒ）、脳室内、結腸内、頸部内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻内、または経皮の送達デバイスまたはシステムの構成要素としての容器を有することを選択的に有することができる。
【００２６】
本発明はさらに、本明細書に記載されるいずれかの発明を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、ＶＭ１０００の軽鎖（配列ＩＤ番号：１、１７）および重鎖（配列ＩＤ番号：３３、４９）の可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図２】図２は、ＶＭ１００１の軽鎖（配列ＩＤ番号：２、１８）および重鎖（配列ＩＤ番号：３４、５０）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図３】図３は、ＶＭ１００２の軽鎖（配列ＩＤ番号：３、１９）および重鎖（配列ＩＤ番号：３５、５１）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図４】図４は、ＶＭ１００３の軽鎖（配列ＩＤ番号：４、２０）および重鎖（配列ＩＤ番号：３６、５２）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図５】図５は、ＶＭ１００４の軽鎖（配列ＩＤ番号：５、２１）および重鎖（配列ＩＤ番号：３７、５３）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図６】図６は、ＶＭ１００５の軽鎖（配列ＩＤ番号：６、２２）および重鎖（配列ＩＤ番号：３８、５４）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図７】図７は、ＶＭ１００６の軽鎖（配列ＩＤ番号：７、２３）および重鎖（配列ＩＤ番号：３９、５５）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図８】図８は、ＶＭ１００７の軽鎖（配列ＩＤ番号：８、２４）および重鎖（配列ＩＤ番号：４０、５６）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図９】図９は、抗ＣＤ２２  Ａｂ  ＶＭ１００８の軽鎖（配列ＩＤ番号：９、２５）および重鎖（配列ＩＤ番号：４１、５７）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図１０】図１０は、ＶＭ１００９の軽鎖（配列ＩＤ番号：１０、２６）および重鎖（配列ＩＤ番号：４２、５８）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図１１】図１１は、ＶＭ１０１０の軽鎖（配列ＩＤ番号：１１、２７）および重鎖（配列ＩＤ番号：４３、５９）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図１２】図１２は、ＶＭ１０１１の軽鎖（配列ＩＤ番号：１２、２８）および重鎖（配列ＩＤ番号：４４、６０）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図１３】図１３は、ＶＭ１０１２の軽鎖（配列ＩＤ番号：１３、２９）および重鎖（配列ＩＤ番号：４５、６１）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図１４】図１４は、ＶＭ１０１３の軽鎖（配列ＩＤ番号：１４、３０）および重鎖（配列ＩＤ番号：４６、６２）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図１５】図１５は、ＶＭ１０１４の軽鎖（配列ＩＤ番号：１５、３１）および重鎖（配列ＩＤ番号：４７、６３）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図１６】図１６は、ＶＭ１０１５の軽鎖（配列ＩＤ番号：１６、３２）および重鎖（配列ＩＤ番号：４８、６４）可変領域についての核酸配列およびアミノ酸配列をそれぞれ示す。
【図１７】図１７は、本発明のＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５の選択されたクローンの親和性ＥＬＩＳＡ分析についてのデータを示す。
【図１８】図１８は、本発明のＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５、ならびに対照（ＶＭ００６ＧおよびＶＭ００６Ｈ）の組換えＣＤ２２細胞外ドメインについての親和性定数（ＫＤ）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定のデータを示す。
【図１９】図１９は、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５、ならびに対照からの選択されたクローンの蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）による、Ｄａｕｄｉ、ＲＡＭＯＳ、およびＲＡＪＩ  Ｂ細胞系統などの、ＣＤ２２を発現するヒトリンパ腫細胞に対する、表面結合および内在化分析についてのデータを示す。各ボックスの右のすべてのピークは対照（抗体なし）を表し；各ボックスの左のすべてのピークは抗体ありのデータを示し、それによって、より低い蛍光シグナルへのシフトは受容体／抗体の内在化を示す。ボックス１はポジティブ対照抗体を示し、ボックス２はＶＭ１０００を示し、ボックス３はＶＭ１００１を示し、ボックス４はＶＭ１００２を示し、ボックス５はＶＭ１００４を示し、ボックス６はＶＭ１００５を示し、ボックス７はＶＭ１００６を示し、そしてボックス８はＶＭ１０１１を示す。
【図２０】図２０は、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５、ならびに対照（ＢＡ００６Ｇ）のＦＡＣＳを使用する、表面結合および内在化分析からのデータを有する表を示す。
【図２１】図２１は、本発明の抗体ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５の定量的共焦点免疫蛍光顕微鏡法を使用する、急速な表面結合および細胞内内在化についてのデータを示す。
【図２２】図２２Ａおよび２２Ｂは、本発明のＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５からの選択された抗体への曝露の際に、ヒトリンパ腫細胞系統Ｄａｕｄｉの表面上に提示されたＣＤ２２のＣＤ２２チロシンリン酸化の誘導を示す。
【図２３】図２３は、霊長類種、カニクイザル  マカクザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）の細胞で発現されるＣＤ２２に対する抗ＣＤ２２抗体の交差反応性を実証するデータを示す。各試験条件の細胞は、ＰＢＳで洗浄され、次いで、ＰＢＳ中の４％ホルムアルデヒドで室温にて１０分間、固定された。次いで、細胞は、２％ＦＢＳを含有する０．５ｍｌのＰＢＳに再懸濁され、次いで、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析（１）によって、ＣＤ２２およびＣＤ２０表面染色について分析された。抗体で処理されなかった細胞は、ＦＩＴＣまたはＰＥチャネルのいずれにおいても感知できるほどの蛍光強度のシフトを有さなかった（１Ａ）のに対して、ＶＭ１０１−ＰＥで染色された細胞はＣＤ２２ポジティブ集団を含有した（１Ｂ）。同様に、抗ＣＤ２０−ＦＩＴで染色された細胞はＣＤ２０ポジティブ集団を含有した（１Ｃ）。ＶＭ１０１−ＰＥ抗体とＣＤ２０−ＦＩＴＣ抗体の両方で染色された細胞は、ＰＢＭＣ中での両方の抗原の発現パターンに基づいて予測されるように、二重標識集団を有する（１Ｄ）。ＶＭ１０１は、カニクイザルＣＤ２２タンパク質を特異的に認識する。
【図２４】図２４は、哺乳動物細胞中の本発明の抗ＣＤ２２抗体の高いレベルの発現データを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
引用
本明細書に引用されるすべての刊行物および特許は、あたかもこれらが本明細書の時点での当該分野の状態を示し、ならびに／または本発明の説明および実施可能性を提供するように、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。刊行物とは、任意の科学刊行物、または特許刊行物、またはすべての記録された形式、電子的形式、若しくは印刷形式を含む任意の媒体形式で利用可能な任意の他の情報をいう。以下の引用文献は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．（１９８７−２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２．ｓｕｐ．ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．，（１９９７−２００１）。
【００２９】
アミノ酸コード
本発明の抗ＣＤ２２抗体を形作るアミノ酸はしばしば略記される。アミノ酸記号表示は、当該分野において十分に理解されているように、アミノ酸を、その一文字コードによって、その三文字コードによって、名称によって、または３ヌクレオチドコドンによって、記号表示することによって示されることができる（Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４を参照のこと）。
【００３０】
定義
本明細書で使用される場合、「抗ＣＤ２２抗体」、「抗ＣＤ２２抗体」、「抗ＣＤ２２抗体部分」、または「抗ＣＤ２２抗体フラグメント」および／若しくは「抗ＣＤ２２抗体バリアント」などは、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を有する分子を含有する任意のタンパク質またはペプチドを含み、この分子は、本発明の抗体に組み込むことができる、非マウス起源、好ましくはヒト起源の、重鎖若しくは軽鎖可変領域、重鎖若しくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはその任意の部分と組み合わせて、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５の少なくとも１から誘導されたその重鎖または軽鎖またはリガンド結合部分の少なくとも１の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有する。あるいは、「抗ＣＤ２２抗体」という用語は、集合的にまたは個別に、ヒト化モノクローナル抗体ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５をいうべきである。このような抗体は、インビトロ、インサイチュ、および／またはインビボにおいて、少なくとも１のＣＤ２２活性または結合を、またはＣＤ２２受容体活性または結合を、調節し、減少し、これと拮抗し、これを軽減し、緩和し、遮断し、阻害し、無効にし、および／またはこれに干渉することが可能である。非限定的な例として、適切な本発明の抗ＣＤ２２抗体、特殊化された部分、またはバリアントは、モノクローナル抗体ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５の少なくとも１によって認識されるヒトＣＤ２２の阻害エピトープおよび／または中和エピトープに高い親和性で結合できる。適切な抗ＣＤ２２抗体、特殊化された部分、またはバリアントはまた、選択的に、例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡまたはタンパク質合成、ＣＤ２２放出、ＣＤ２２受容体シグナル伝達、膜ＣＤ２２切断、ＣＤ２２活性、ＣＤ２２産生および／または合成であるがこれらに限定されない、ＣＤ２２活性または機能の少なくとも１に影響を与えることができる。
【００３１】
「抗体」という用語は、さらに、抗体、その消化フラグメント、特殊化された部分、およびバリアントを包含することが意図され、これは抗体模倣物を含むか、または、単鎖抗体若しくはそのフラグメントを含む、抗体若しくは特殊化されたフラグメント若しくはその部分の構造および／または機能を模倣する抗体の部分を含み、各々が抗ＣＤ２２から誘導された少なくとも１のＣＤＲを含有する。機能的フラグメントは、哺乳動物ＣＤ２２に結合する抗原結合フラグメントを含む。例えば、これに限定されるものではないが、Ｆａｂフラグメント（例えば、パパイン消化による）、Ｆａｂ’フラグメント（例えば、ペプシン消化および部分的還元による）およびＦ（ａｂ’）２フラグメント（例えば、ペプシン消化による）、ｆａｃｂフラグメント（例えば、プラスミン消化による）、ｐＦｃ’フラグメント（例えば、ペプシンまたはプラスミン消化による）、Ｆｄフラグメント（例えば、ペプシン消化、部分的還元、および再凝集による）、ＦｖまたはｓｃＦｖフラグメント（例えば、分子生物学技術による）を含むＣＤ２２またはその部分に結合が可能である抗体フラグメントは、本発明によって包含される（例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、前出を参照のこと）。
【００３２】
抗体フラグメントは、当該分野において公知であるように、および／または本明細書に記載されるように、酵素的切断、合成または組換え技術によって産生できる。抗体はまた、１若しくはそれ以上の終始コドンが天然の終始部位の上流に導入されている抗体遺伝子を使用して、様々な短縮型で産生できる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２重鎖部分をコードする組み合わせ遺伝子は、重鎖のＣＨ１ドメインおよび／またはヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むように設計できる。抗体の様々な部分は、従来的な技術によって化学的に一緒に結合でき、または遺伝子操作技術を使用して隣接タンパク質として調製できる。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「キメラ」抗体または「ヒト化」抗体または「ＣＤＲ移植」は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２  Ａｂｓの任意の組み合わせ、または、そこから誘導された任意のＣＤＲであって、非マウス、好ましくは、ヒト抗体から誘導された１若しくはそれ以上のタンパク質若しくはペプチドと組み合わされたものを含む。本発明に従うと、キメラ抗体またはヒト化抗体は、ＣＤＲが、本明細書に記載される１若しくはそれ以上の抗ＣＤ２２  Ａｂから誘導され、そして抗体の少なくとも一部、または残りは、１若しくはそれ以上のヒト抗体から誘導されるものを含む。従って、抗体のヒト部分は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である、フレームワークドメイン、ＣＬドメイン、ＣＨドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、（ＶＬ、ＶＨ））領域を含んでもよい。ヒト抗体から誘導される抗体の領域は、ヒト抗体と１００％の同一性を有する必要はない。好ましい実施形態において、免疫原性が無視できるように、可能な限り多くのヒトアミノ酸残基が保持されるが、しかし、ヒト残基は、抗体のヒト化を同時に最大化しながら、ＣＤＲによって形成された抗原結合部位を支持するために必要に応じて修飾されてもよい。このような変化またはバリエーションは、選択的にまたは好ましくは、非修飾抗体と比較して、ヒトまたは他の種において免疫原性を保持または減少している。ヒト化抗体は、再配置されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖および／または軽鎖）遺伝子を機能的に発現可能である非ヒト動物または原核生物細胞または真核生物細胞によって産生できることが指摘される。さらに、抗体が単鎖抗体であるとき、これは、ネイティブヒト抗体においては見出されないリンカーペプチドを有することができる。例えば、Ｆｖは、２〜約８個のグリシンまたは他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを有することができ、これは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域を連結する。このようなリンカーペプチドはヒト起源であると見なされる。
【００３４】
抗体のヒト化は、例えば、個別のヒトフレームワークのプールに、インフレームで融合された非ヒト標的モノクローナル抗体の６つのＣＤＲを有するコンビナトリアルライブラリーを合成することによって実施できる。すべての公知の重鎖および軽鎖ヒト生殖系列遺伝子を表す遺伝子を含有するヒトフレームワークライブラリーが利用できる。次いで、得られたコンビナトリアルライブラリーは、関心対象の抗原に結合することについてスクリーニングできる。このアプローチは、親の抗体に対する結合活性を維持することによって、完全なヒトフレームワークの最も好ましい組み合わせの選択を可能にできる。次いで、ヒト抗体は、様々な技術によってさらに最適化できる。
【００３５】
全長抗体分子については、免疫グロブリン遺伝子は、ハイブリドーマ細胞系統のゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡから入手できる。抗体重鎖および軽鎖は、哺乳動物ベクター系の中でクローニングされる。アセンブリーは二本鎖配列分析を用いて報告されている。抗体構築物は、他のヒトまたは哺乳動物宿主細胞系統において発現できる。次いで、この構築物は、一過性トランスフェクションアッセイおよび関心対象の発現された抗体のウェスタンブロット分析によって確認できる。最高の生産性を有する安定な細胞系統は、迅速アッセイ方法を使用して単離およびスクリーニングできる。
【００３６】
いくつかの刊行物が、本発明の抗ＣＤ２２抗体を含む、抗ＣＤ２２抗体の使用、適用、ならびに使用方法および適用方法を詳細に記載しており、これらは、例えば、「Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉ−ＣＤ２２  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」という表題の米国特許出願第２０１１０１８２８８７号、「Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒ  ＣＤ２２」という表題の米国特許出願第２０１１００２０３４４号、および「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｔｈａｔ  Ｂｉｎｄ  ＣＤ２２  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という表題の米国特許出願第２０１００１４３３６８号であり、これらのすべてが、この参照により本明細書に組み込まれる。
【００３７】
本発明の抗体
本発明に従うと、抗ＣＤ２２抗体は、抗体ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５、または可変領域若しくはＣＤＲが、抗体ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、若しくはＶＭ１０１５のいずれか１つから誘導され、抗体のフレームワークおよび定常領域が１若しくはそれ以上のヒト抗体から誘導された抗体のいずれか１つを有する。キメラ抗体がＣＤ２２に結合しかつ阻害する能力を維持している限り、置換、挿入、および欠失を含む任意のおよびすべての修飾が意図されるが、抗体から誘導された可変領域またはＣＤＲは、好ましくは、抗体ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５のいずれか１つの可変領域またはＣＤＲと、約９０％〜約１００％の同一性を有する。ヒト抗体から誘導されるキメラ抗体、ヒト化抗体、またはＣＤＲ移植抗体の領域は、ヒト抗体と１００％同一性を有する必要はない。好ましい実施形態において、免疫原性が無視できるように、可能な限り多くのヒトアミノ酸残基が保持されるが、しかし、ヒト残基、特に、フレームワーク領域の残基は、本発明に従って、必要に応じておよび以下に教示されるように置換される。本明細書に開示されるようなこのような修飾は、抗体のヒト化を同時に最大化しながら、ＣＤＲによって形成された抗原結合部位を支持するために必要である。
【００３８】
本発明に従って、抗ＣＤ２２抗体の可変領域（軽鎖および重鎖）の核酸配列および推定アミノ酸配列は、図１〜１５に示される。重鎖および軽鎖の可変領域の各々は、組み合わせて抗原結合部位を形成する３つのＣＤＲを含有する。これらの３つのＣＤＲは、主としてＣＤＲを支持するように機能する４つのフレームワーク領域によって取り囲まれている。重鎖および軽鎖の可変領域の配列の中のＣＤＲの配列は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈ  ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．に従うコンピュータ支援アラインメントによって、または例えば、Ｌｅｖｉｔｔ（１９８３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５によって記載されるようなＥＮＣＡＤプログラムを利用する可変領域の分子モデリングによって、同定できる。
【００３９】
好ましい実施形態において、ＣＤＲは、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５のいずれか１つから誘導される。重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲの決定は、十分に当業者の範囲内である。例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／を参照のこと。
【００４０】
抗ＣＤ２２抗体のＣＤＲの配列は、ＣＤＲ移植抗体がヒトＣＤ２２に結合しかつこれを阻害する能力を維持する程度まで、挿入、置換、および欠失によって修飾されてもよい。当業者は、本明細書中以下に記載されている機能アッセイを実施することによって、この活性の維持を確認することができる。
【００４１】
あるいは、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５のいずれか１つの全体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域が、ヒト定常領域およびフレームワーク領域と組み合わされて、本発明のキメラ抗体を形成してもよい。クローンＶＭ１０００は軽鎖ＶＭ１０００ＬＣ（配列ＩＤ番号１）および重鎖ＶＭ１０００ＨＣ（配列ＩＤ番号３３）を有する。クローンＶＭ１００１は軽鎖ＶＭ１００１ＬＣ（配列ＩＤ番号２）および重鎖ＶＭ１００１ＨＣ（配列ＩＤ番号３４）を有する。クローンＶＭ１００２は軽鎖ＶＭ１００２ＬＣ（配列ＩＤ番号３）および重鎖ＶＭ１００２ＨＣ（配列ＩＤ番号３５）を有する。クローンＶＭ１００３は軽鎖ＶＭ１００３ＬＣ（配列ＩＤ番号４）および重鎖ＶＭ１００３ＨＣ（配列ＩＤ番号３６）を有する。クローンＶＭ１００４は軽鎖ＶＭ１００４ＬＣ（配列ＩＤ番号５）および重鎖ＶＭ１００４ＨＣ（配列ＩＤ番号３７）を有する。クローンＶＭ１００５は軽鎖ＶＭ１００５ＬＣ（配列ＩＤ番号６）および重鎖ＶＭ１００５ＨＣ（配列ＩＤ番号３８）を有する。クローンＶＭ１００６は軽鎖ＶＭ１００６ＬＣ（配列ＩＤ番号７）および重鎖ＶＭ１００６ＨＣ（配列ＩＤ番号３９）を有する。クローンＶＭ１００７は軽鎖ＶＭ１００７ＬＣ（配列ＩＤ番号８）および重鎖ＶＭ１００７ＨＣ（配列ＩＤ番号４０）を有する。クローンＶＭ１００８は軽鎖ＶＭ１００８ＬＣ（配列ＩＤ番号９）および重鎖ＶＭ１００８ＨＣ（配列ＩＤ番号４１）を有する。クローンＶＭ１００９は軽鎖ＶＭ１００９ＬＣ（配列ＩＤ番号１０）および重鎖ＶＭ１００９ＨＣ（配列ＩＤ番号４２）を有する。クローンＶＭ１０１０は軽鎖ＶＭ１０１０ＬＣ（配列ＩＤ番号１１）および重鎖ＶＭ１０１０ＨＣ（配列ＩＤ番号４３）を有する。クローンＶＭ１０１１は軽鎖ＶＭ１０１１ＬＣ（配列ＩＤ番号１２）および重鎖ＶＭ１０１１ＨＣ（配列ＩＤ番号４４）を有する。クローンＶＭ１０１２は軽鎖ＶＭ１０１２ＬＣ（配列ＩＤ番号１３）および重鎖ＶＭ１０１２ＨＣ（配列ＩＤ番号４５）を有する。クローンＶＭ１０１３は軽鎖ＶＭ１０１３ＬＣ（配列ＩＤ番号１４）および重鎖ＶＭ１０１３ＨＣ（配列ＩＤ番号４６）を有する。クローンＶＭ１０１４は軽鎖ＶＭ１０１４ＬＣ（配列ＩＤ番号１５）および重鎖ＶＭ１０１４ＨＣ（配列ＩＤ番号４７）を有する。クローンＶＭ１０１５は軽鎖ＶＭ１０１５ＬＣ（配列ＩＤ番号１６）および重鎖ＶＭ１０１５ＨＣ（配列ＩＤ番号４８）を有する。
【００４２】
本発明のヒト化抗体の定常（Ｃ）領域、フラグメント、および領域をコードするヒト遺伝子は、公知の方法によって、ヒト胎児肝臓ライブラリーから誘導できる。ヒトＣ領域遺伝子は、ヒト免疫グロブリンを発現および産生するものを含む、任意のヒト細胞から誘導できる。ヒトＣＨ領域は、γ、μ、α、δ、ε、および、Ｇｌ、Ｇ２、Ｇ３、およびＧ４などのそのサブタイプを含む、ヒトＨ鎖の公知のクラスまたはアイソタイプのいずれかから誘導できる。Ｈ鎖アイソタイプは抗体の様々なエフェクター機能の原因であるので、ＣＨ領域の選択は、補体結合、または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の活性などの所望のエフェクター機能によって導かれる。好ましくは、ＣＨ領域はガンマ１（ＩｇＧ１）から誘導される。
【００４３】
ヒトＣＬ領域は、ヒトＬ鎖アイソタイプ、カッパまたはラムダのいずれか、好ましくは、カッパから誘導できる。
【００４４】
ヒト免疫グロブリンＣ領域をコードする遺伝子は、標準的なクローニング技術（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８７−１９９３））によってヒト細胞から得られる。ヒトＣ領域遺伝子は、Ｌ鎖の２つのクラス、Ｈ鎖の５つのクラス、およびこれらのサブクラスを表す遺伝子を含有する公知のクローンから容易に利用可能である。Ｆ（ａｂ１）２およびＦａｂなどのキメラ抗体フラグメントは、適切に短縮化されるキメラＨ鎖遺伝子を設計することによって調製できる。例えば、Ｆ（ａｂ１）２フラグメントのＨ鎖部分をコードするキメラ遺伝子は、Ｈ鎖のＣＨＩドメインおよびヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列、続いて、翻訳終止コドンを含み、短縮型分子を生じる。
【００４５】
一般的に、１つの例において、本発明のヒト化抗体、フラグメント、および領域は、抗ＣＤ２２特異的抗体のＨ鎖およびＬ鎖抗原結合領域をコードするＤＮＡセグメントをクローニングすること、およびこれらのＤＮＡセグメントを、ＣＨ領域およびＣＬ領域を含むＤＮＡセグメントにそれぞれ連結し、全長免疫グロブリンコード遺伝子を産生することによって産生される。
【００４６】
抗体の可変領域の配列は、キメラ抗体がヒトＣＤ２２に結合しかつこれを阻害する能力を維持する程度まで、挿入、置換、および欠失によって修飾されてもよい。当業者は、本明細書中以下に記載される機能的アッセイを実施することによってこの活性の維持を確認できる。この可変領域は、例えば、配列ＩＤ番号：１〜６４の可変領域に対して、約５０％〜約１００％相同性を有することができる。好ましい実施形態において、抗体の可変領域は、配列ＩＤ番号：１〜６４の可変領域に対して、約８０％〜約１００％相同性を有する。より好ましい実施形態において、この可変領域は、配列ＩＤ番号：１〜６４の可変領域に対して、約９０％〜約１００％相同性を有する。
【００４７】
１つの特定の態様において、本開示の好ましい抗ＣＤ２２  Ｍａｂは、配列ＩＤ番号１７〜３２に対して９５％、９６％、９７％、９８％または９９％アミノ酸配列相同性を有する可変軽鎖領域を有し、そしてさらに、配列ＩＤ番号４９〜６４に対して９５％、９６％、９７％、９８％または９９％アミノ酸配列相同性を有する可変重鎖領域を有する。
【００４８】
１つの特定の態様において、本開示の好ましい抗ＣＤ２２  Ｍａｂは、配列ＩＤ番号１〜１６の１つから選択された可変軽鎖領域を有する。別の特定の態様において、本開示の好ましい抗ＣＤ２２  Ｍａｂは、配列ＩＤ番号３３〜４８の１つから選択された可変重鎖領域を有する。
【００４９】
非ヒト抗体またはヒト抗体を操作またはヒト化するための方法が使用でき、当該分野において周知である。一般的に、ヒト化または操作された抗体は、これに限定されるものではないが、非ヒト、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類または他の哺乳動物である供給源からの１若しくはそれ以上のアミノ酸残基を有する。これらのヒトアミノ酸残基は、しばしば、「インポート」残基といわれ、これは、典型的には、既知のヒト配列の「インポート」可変ドメイン、定常ドメイン、または他のドメインから取られる。公知のヒトＩｇ配列は例えば、以下に開示されている：
ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；
ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉ−ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；
ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；
ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；
ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；
ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；
ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３４０９１３．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；
ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；
ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰＳｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓ１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｖｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；
ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；
ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；
ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；
ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ＿ｐｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｎ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）、各々は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００５０】
このようなインポートされた配列は、免疫原性を減少し、結合、親和性、オンレート、オフレート、結合活性、特異性、半減期、または当該分野において公知であるような任意の他の適切な特徴を減少、増強、若しくは修飾するために使用できる。一般的に、非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部またはすべてが維持される一方、可変領域および定常領域の非ヒト配列は、ヒトまたは他のアミノ酸で置き換えられる。抗体はまた、選択的に、抗原および他の好ましい生物学的特性についての高い親和性の保持を伴って、ヒト化できる。この目的を達成するために、ヒト化抗体は、選択的に、親の配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用して、親の配列および様々な概念的なヒト化産物の分析のプロセスによって調製できる。三次元的な免疫グロブリンモデルは一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元コンホメーション構造を図示および表示する、コンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析を可能にする。このようにして、ＦＲ残基は、標的抗原についての親和性の増加などの望ましい抗体の特徴が達成されるように、コンセンサス配列およびインポート配列から選択および組み合わせできる。一般的に、ＣＤＲ残基は、直接的にかつ最も実質的に、抗原結合に影響を与えることに関与する。本発明の抗体のヒト化または操作は、これに限定されるものではないが、例えば、以下に記載されている任意の公知の方法を使用して実施できる：Ｗｉｎｔｅｒ（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８））、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）、米国特許第５，７２３，３２３号明細書、同第５，９７６，８６２号明細書、同第５，８２４，５１４号明細書、同第５，８１７，４８３号明細書、同第５，８１４，４７６号明細書、同第５，７６３，１９２号明細書、同第５，７２３，３２３号明細書、同第５，７６６，８８６号明細書、同第５，７１４，３５２号明細書、同第６，２０４，０２３号明細書、同第６，１８０，３７０号明細書、同第５，６９３，７６２号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書、同第５，５８５，０８９号明細書、同第５，２２５，５３９号明細書；同第４，８１６，５６７号明細書、ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０、ＵＳ９６／１８９７８、ＵＳ９１／０９６３０、ＵＳ９１／０５９３９、ＵＳ９４／０１２３４、ＧＢ８９／０１３３４、ＧＢ９１／０１１３４、ＧＢ９２／０１７５５；国際公開第９０／１４４４��号パンフレット、同第９０／１４４２４号パンフレット、同第９０／１４４３０号パンフレット、欧州特許第２２９２４６号明細書、これらの各々は、そこに引用されている参考文献を含めて、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００５１】
本発明のヒト化抗体のヒト定常領域は、任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤなど）またはアイソタイプであり得、カッパまたはラムダ軽鎖を有することができる。１つの実施形態において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ重鎖または規定されたフラグメント、例えば、少なくとも１のアイソタイプ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４を有する。別の実施形態において、抗ヒトＣＤ２２ヒト抗体は、ＩｇＧ１重鎖およびＩｇＧ１  Ｋ軽鎖を有する。本発明の単離された抗ＣＤ２２抗体は、任意の適切なポリヌクレオチドによってコードされた本明細書に開示される抗体アミノ酸配列を同様に有する。好ましくは、抗体または抗原結合フラグメントはヒトＣＤ２２を結合し、それによって、タンパク質の少なくとも１の生物学的活性を部分的にまたは実質的に中和する。抗体、またはその特殊化された部分若しくはバリアントは、少なくとも１のＣＤ２２タンパク質またはフラグメントの少なくとも１の生物学的活性を部分的にまたは好ましくは実質的に中和し、それによって、ＣＤ２２受容体へのＣＤ２２の結合を通して、または他のＣＤ２２依存性若しくは媒介性メカニズムを通して媒介される活性を阻害する。本明細書で使用される場合、「中和抗体」という用語は、ＣＤ２２依存性活性を、アッセイに依存して、約２０〜１２０％、好ましくは、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％若しくはそれ以上阻害できる抗体をいう。抗ＣＤ２２抗体がＣＤ２２依存性活性を阻害する能力は、好ましくは、本明細書に記載されるように、および／または当該分野において公知であるように、少なくとも１の適切なＣＤ２２タンパク質またはレポーターアッセイによって評価される。
【００５２】
本発明の少なくとも１の抗体は、少なくとも１のＣＤ２２タンパク質、サブユニット、フラグメント、部分またはこれらの任意の組み合わせに特異的な少なくとも１の特殊化されたエピトープを結合する。少なくとも１のエピトープは、少なくとも１のタンパク質の部分を有する少なくとも１の抗体結合領域を有することができ、このエピトープは、好ましくは、少なくとも１のタンパク質の細胞外部分、可溶性部分、親水性部分、外部部分、または細胞質部分から構成される。一般的に、本発明のヒト抗体または抗原結合フラグメントは、本明細書に記載される抗ＣＤ２２  Ａｂから誘導された、少なくとも１のヒト相補性決定領域（ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）または少なくとも１の重鎖可変領域のバリアント、および少なくとも１のヒト相補性決定領域（ＣＤＲ４、ＣＤＲ５、およびＣＤＲ６）または少なくとも１の軽鎖可変領域のバリアントを有する抗原結合領域を有する。特定の実施形態において、抗体または抗原結合フラグメントは、対応するＣＤＲ１、２、および／または３のアミノ酸配列を有する、少なくとも１の重鎖ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３）の少なくとも部分を有する抗原結合領域を有することができる。別の特定の実施形態において、抗体または抗原結合部分またはバリアントは、対応するＣＤＲ４、５、および／または６のアミノ酸配列を有する少なくとも１の軽鎖ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ４、ＣＤＲ５、および／またはＣＤＲ６）の少なくとも部分を有する抗原結合領域を有することができる。好ましい実施形態において、抗体または抗原結合フラグメントの３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲは、ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、またはＶＭ１０１５の少なくとも１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を有する。このような抗体は、従来的な技術を使用して、抗体の様々な部分（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク）を一緒に化学的に連結することによって、組換えＤＮＡの従来的な技術を使用して、抗体をコードする（すなわち、１若しくはそれ以上の）核酸分子を調製および発現させることによって、または任意の他の適切な方法を使用することおよび本発明のポリペプチドの発現を生じる可能な縮重コドンのいずれかを使用することによって調製できる。
【００５３】
軽鎖および重鎖のためのコンビナトリアル可変ドメインヒト化ライブラリーの液相合成が利用できる。ヒト化軽鎖（ＬＣ）可変ドメインライブラリーのアセンブリーは、例えば、ヒト軽鎖フレームワーク（ＦＷ）および非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有している。このライブラリーは、例えば、ＦＷおよびＣＤＲ  ＤＮＡフラグメントの段階的液相ライゲーションを使用することによってアセンブルされる。これらのライブラリーは、当業者に公知である技術によって、ＦＷ１−ＣＤＲ１−ＦＷ２−ＣＤＲ２−ＦＷ３−ＣＤＲ３の順番で、ＦＷおよびＣＤＲ  ＤＮＡフラグメントの段階的液相ライゲーションを使用することによってアセンブルされる。例えば、以下の参考文献の１若しくはそれ以上の技術によってであり、この参照によりそれらの各々が本明細書に組み込まれる。Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．，２００３，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＣＤＲ  ｇｒａｆｔｉｎｇ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．Ｅｄｉｔ  ｂｙ  Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２４８，１３５−１５９；Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ａ  ｍｉｎｉｍａｌｌｙ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｂｙ  ＣＤＲ  ｇｒａｆｔｉｎｇ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．Ｅｄｉｔ  ｂｙ  Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２４８，３６１−３７６；Ｂａｓｓｅｔｔｅ，Ｐ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｇｅｎｅ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ．Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｃｒｅａｔｉｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．Ｅｄｉｔ．Ａｒｎｏｌｄ  ａｎｄ  Ｇｅｏｒｇｉｏｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２３１，２９−３７；Ｃｈａｍｅｓ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｓ  ｏｎ  Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｅｄｉｔ  ｂｙ  Ｒ．Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｓ．Ｄｕｂｅｌ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ，１４９−１６６；Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  Ｓ．，ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ，Ｔ．，２００１，Ｈｕｍａｎｉｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  ＣＤＲ  ｇｒａｆｔｉｎｇ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｅｄｉｔ  ｂｙ  Ｒ．Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｓ．Ｄｕｂｅｌ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ，５６７−５９０．
ヒトＣＤ２２に結合しかつ規定された重鎖または軽鎖可変領域若しくはＣＤＲ領域を有する抗体は、当該分野において公知であるように、および／または本明細書に記載されるように、ファージディスプレイ（Ｋａｔｓｕｂｅ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ，ｌ（５）：８６３−８６８（１９９８））またはトランスジェニック動物を利用する方法などの適切な方法を使用して調製できる。例えば、抗体、特殊化された部分若しくはバリアントは、適切な宿主細胞中でのコード核酸またはその部分を使用して発現できる。
【００５４】
言及されるように、本発明はまた、本明細書に記載されるアミノ酸配列と実質的に同じである配列のアミノ酸を有する、抗体、抗原結合フラグメント、免疫グロブリン鎖、およびＣＤＲに関連する。このような抗ＣＤ２２抗体は、本明細書に特定されるように、天然の変異またはヒトの操作からのいずれかである、１若しくはそれ以上のアミノ酸の置換、欠失、または付加を含むことができる。好ましくは、このような抗体または抗原結合フラグメントおよびこのような鎖またはＣＤＲを有する抗体は、高い親和性（例えば、約１０−９Ｍ若しくはそれ以下のＫＤ）でヒトＣＤ２２を結合できる。本明細書に記載される配列と実質的に同じであるアミノ酸配列には、保存性アミノ酸置換、ならびにアミノ酸欠失および／または挿入を有する配列が含まれる。保存性アミノ酸置換とは、第１のアミノ酸の化学的および／または物理的特性（例えば、電荷、構造、極性、疎水性／親水性）に類似している化学的および／または物理的特性を有する第２のアミノ酸による、第１のアミノ酸の置き換えをいう。保存性置換には、以下のグループ内での１のアミノ酸の別のアミノ酸への置き換えが含まれる：リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｄ、およびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、Ｗ、およびＹ；Ｃ、Ｓ、およびＴ。
【００５５】
当然、当業者が作成するアミノ酸置換の数は、上記のものを含む多くの要因に依存する。一般的にいえば、任意の所定の抗ＣＤ２２抗体、フラグメント若しくはバリアントについてのアミノ酸置換、挿入、または欠失の数は、本明細書に特定されるように、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１を超えない、例えば、１〜３０またはこの中の任意の範囲または値である。
【００５６】
機能のために必須である本発明の抗ＣＤ２２抗体におけるアミノ酸は、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発などの当該分野において公知の方法によって同定できる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、前出、Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ８，１５；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））。後者の手順は、分子中のすべての残基において単一のアラニン変異を導入する。次いで、得られる変異型分子は、これに限定されるものではないが、少なくとも１のＣＤ２２中和活性などの生物学的活性について試験される。抗体結合のために決定的に重要である部位もまた、結晶化、核磁気共鳴、または光親和性標識などの構造分析によって同定できる（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ  Ｖｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２（１９９２））。
【００５７】
本発明の抗ＣＤ２２抗体は、これに限定されるものではないが、配列ＩＤ番号：１７〜３２および４９〜６４から誘導されたＣＤＲの少なくとも１の連続するアミノ酸の５〜すべてから選択される、少なくとも１の部分、配列、または組み合わせを含むことができる。
【００５８】
抗ＣＤ２２抗体は、配列ＩＤ番号：１７〜３２および４９〜６４の少なくとも１から誘導されたＣＤＲの連続するアミノ酸の７０〜１００％の少なくとも１のポリペプチドをさらに選択的に有することができる。１つの特定の態様において、抗ＣＤ２２抗体は、配列ＩＤ番号１〜１６に対して９５〜９９％配列相同性のポリペプチドを有する。別の特定の態様において、抗ＣＤ２２抗体は、配列ＩＤ番号３３〜４８に対して９５〜９９％配列相同性のポリペプチドを有する。
【００５９】
１つの実施形態において、免疫グロブリン鎖またはその部分（例えば、可変領域、ＣＤＲ）のアミノ酸配列は、配列ＩＤ番号：１７〜３２または４９〜６４の少なくとも１のアミノ酸配列に対して、約７０〜１００％同一性（例えば、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはこれらの中の任意の範囲または値）を有する。好ましくは、７０〜１００％アミノ酸同一性（すなわち、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはこれらの中の任意の範囲または値）は、当該分野において公知であるように、適切なコンピュータアルゴリズムを使用して決定される。１つの特定の態様において、抗ＣＤ２２抗体は、配列ＩＤ番号１７〜３２または４９〜６４に対して９５〜９９％配列相同性のポリペプチドを有する。
【００６０】
例示的な重鎖および軽鎖可変領域配列は、配列ＩＤ番号：１〜６４において提供される。本発明の抗体、または特殊化されたそのバリアントは、本発明の抗体からの任意の数の連続したアミノ酸残基を有することができ、ここで、この数は、抗ＣＤ２２抗体における連続する残基の数の１０〜１００％から成る整数の群から選択される。選択的に、この連続するアミノ酸のサブ配列は、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０若しくはそれ以上のアミノ酸長、またはこれらの中の任意の範囲または値である。さらに、このようなサブ配列の数は、１〜２０から成る群から選択される任意の整数、例えば、少なくとも２、３、４、または５であり得る。
【００６１】
当業者が認識するように、本発明は、本発明の少なくとも１の生物学的に活性な抗体を含む。生物学的に活性な抗体は、ネイティブ（非合成）、内因性、または関連および公知の抗体の活性の少なくとも２０％、３０％、または４０％、好ましくは、少なくとも５０％、６０％、または７０％、最も好ましくは、少なくとも８０％、９０％、または９５％〜１００％である特異的活性を有する。酵素活性および基質特異性の尺度をアッセイおよび定量する方法は当業者に周知である。
【００６２】
別の態様において、本発明は、有機部分の共有結合によって修飾されている、本明細書に記載されるような、ヒト抗体および抗原結合フラグメントに関連する。このような修飾は、薬物動態学特性が改善された（例えば、インビボ血清半減期が増加している）抗体または抗原結合フラグメントを産生できる。この有機部分は、直鎖状または分枝状の親水性ポリマー基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であり得る。特定の実施形態において、親水性ポリマー基は、約８００〜約１２０，０００ダルトンの分子量を有することができ、ポリアルカングリコール（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマー、またはポリビニルピロリドンであり得、そして脂肪酸または脂肪酸エステル基は、約８個〜約４０個の炭素原子を有することができる。
【００６３】
本発明の修飾された抗体および抗原結合フラグメントは、直接的にまたは間接的に、共有結合されている、１若しくはそれ以上の有機部分を有することができる。本発明の抗体または抗原結合フラグメントに結合されている各有機部分は、独立して、親水性ポリマー基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であり得る。本明細書で使用される場合、「脂肪酸」という用語は、モノカルボン酸およびジカルボン酸を包含する。本明細書で使用される用語としての「親水性ポリマー基」は、オクタンよりも水に溶解性である有機ポリマーをいう。例えば、ポリリジンは、オクタンよりも水に溶解性である。従って、ポリリジンの共有結合によって修飾された抗体は、本発明に包含される。本発明の抗体を修飾するために適切な親水性ポリマーは、直鎖状または分枝状であり得、これには、例えば、ポリアルカングリコール（例えば、ＰＥＧ、モノメトキシ−ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧなど）、炭水化物（例えば、デキストラン、セルロース、オリゴサッカリド、ポリサッカリドなど）、親水性アミノ酸のポリマー（例えば、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリアスパラギン酸など）、ポリアルカンオキサイド（例えば、ポリエチレンオキサイド、ポリプロピレンオキサイドなど）およびポリビニルピロリドンが含まれる。好ましくは、本発明の抗体を修飾する親水性ポリマーは、別々の分子実体として、約８００〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する。例えば、下付文字がダルトンで表されたポリマーの平均分子量である、ＰＥＧ５０００およびＰＥＧ２０，０００が使用できる。親水性ポリマー基は、１〜約６のアルキル、脂肪酸、または脂肪酸エステル基で置換できる。脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換されている親水性ポリマーは、適切な方法を利用することによって調製できる。例えば、アミン基を有するポリマーは、脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボン酸にカップリングでき、脂肪酸または脂肪酸エステル上の活性化カルボン酸（例えば、Ｎ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールで活性化される）はポリマー上のヒドロキシル基にカップリングできる。
【００６４】
本発明の抗体を修飾するために適切な脂肪酸および脂肪酸エステルは飽和されることができ、または１若しくはそれ以上の不飽和の単位を含有することができる。本発明の抗体を修飾するために適切である脂肪酸には、例えば、ｎ−ドデカノエート（Ｃ１２、ラウレート）、ｎ−テトラデカノエート（Ｃ１４、ミリステート）、ｎ−オクタデカノエート（Ｃ１８、ステアレート）、ｎ−エイコサノエート（Ｃ２０、アラキデート）、ｎ−ドコサノエート（Ｃ２２、ベヘネート）、ｎ−トリアコンタノエート（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタノエート（Ｃ４０）、シス−δ  ９−オクタデカノエート（Ｃ１８、オレエート）、すべてのシス−δ  ５，８，１１，１４−エイコサテトラエノエート（Ｃ２０、アラキドネート）、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサエン二酸などが含まれる。適切な脂肪酸エステルには、直鎖または分枝鎖低級アルキル基を有するジカルボン酸のモノエステルが含まれる。低級アルキル基には、１〜約１２、好ましくは１〜約６の炭素原子を有することができる。
【００６５】
修飾されたヒト抗体および抗原結合フラグメントは、例えば、１若しくはそれ以上の修飾剤を用いる反応によって、適切な方法を使用して調製できる。本明細書で使用される場合の「修飾剤」は、活性化基を有する適切な有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）をいう。「活性化基」は、適切な条件下で第２の化学基と反応でき、それによって修飾剤と第２の化学基の間で共有結合を形成する、化学部分または官能基である。例えば、アミン反応性活性化基には、トシレート、メシレート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）など求電子基が含まれる。チオールと反応できる活性化基には、例えば、マレイミド、ヨードアセチル、アクリロイル（ａｃｒｙｌｏｌｙｌ）、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などが含まれる。アルデヒド官能基は、アミンまたはヒドラジン含有分子にカップリングでき、アジド基は、三価リン基と反応でき、ホスホルアミダートまたはホスホルイミド連結を形成する。活性化基を分子に導入するための適切な方法は当該分野で公知である（例えば、Ｈｅｒｎａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９６）を参照のこと）。活性化基は、有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接結合でき、またはリンカー部分、例えば、二価Ｃ１−Ｃ１２基を通して結合でき、ここで、１若しくはそれ以上の炭素原子は、酸素、窒素、または硫黄などのヘテロ原子によって置き換えることができる。適切なリンカー部分には、例えば、テトラエチレングリコール、−−（ＣＨ２）３−−，−−ＮＨ−−（ＣＨ２）６−−ＮＨ−−、−−（ＣＨ２）２−−ＮＨ−−、および−−ＣＨ２−−Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−Ｏ−−ＣＨ−−ＮＨ−−が含まれる。リンカー部分を有する修飾剤は、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、モノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えば、モノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミンヘキサン）を脂肪酸と反応させて、遊離のアミンと脂肪酸カルボキシレートの間にアミド結合を形成することによって、産生できる。Ｂｏｃ保護基は、記載されるように、別のカルボキシレートにカップリングできる一級アミンを露出させるために、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いる処理によって生成物から除去でき、または、無水マレイン酸と反応でき、得られる生成物は環化して脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を生成できる（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９２／１６２２１号パンフレットを参照のこと、この全体の教示は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００６６】
本発明の修飾抗体は、ヒト抗体または抗原結合フラグメントを修飾剤と反応させることによって産生できる。例えば、有機部分が、アミン反応性修飾剤、例えば、ＰＥＧのＮＨＳエステルを利用することによって、非部位特異的な様式で抗体に結合できる。修飾ヒト抗体または抗原結合フラグメントはまた、抗体または抗原結合フラグメントのジスルフィド結合（例えば、鎖間ジスルフィド結合）を還元することによって調製できる。次いで、還元された抗体または抗原結合フラグメントは、チオール反応性修飾剤と反応でき、本発明の修飾抗体を産生する。本発明の抗体の特異的部位に結合する有機部分を有する修飾ヒト抗体および抗原結合フラグメントは、適切な方法、例えば、リバースプロテオリシス（Ｆｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，３：１４７−１５３（１９９２）；Ｗｅｒｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，５：４１１−４１７（１９９４）；Ｋｕｍａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１（１９９７）；Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４（１）：５９−６８（１９９６）；Ｃａｐｅｌｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，５６（４）：４５６−４６３（１９９７））およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９６）に記載されている方法を使用して調製できる。
【００６７】
本発明の抗体は、広い範囲の親和性（ＫＤ）でヒトＣＤ２２を結合することができる。好ましい実施形態において、本発明の少なくとも１のヒトｍＡｂは、選択的に、高い親和性でヒトＣＤ２２を結合することができる。例えば、ｍＡｂは、約１０−７Ｍ以下のＫＤ、例えば、これに限定されるものではないが、０．１〜９．９（またはその中の任意の範囲または値）×１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３またはその中の任意の範囲または値でヒトＣＤ２２を結合できる。
【００６８】
抗原についての抗体の親和性または結合活性は、任意の適切な方法を使用して実験的に決定できる。（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ，ｅｔ  ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」，Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）；およびそこに記載されている方法を参照のこと）。特定の抗体−抗原相互作用の測定された親和性は、異なる条件下で（例えば、塩濃度、ｐＨ）測定されるならば、変動し得る。従って、親和性および他の抗原−結合パラメーター（例えば、ＫＤ、Ｋａ、Ｋｄ）の測定は、好ましくは、抗体および抗原の標準化された溶液、および、本明細書に記載される緩衝液などの標準化された緩衝液を用いて行われる。
【００６９】
本発明の方法および組成物において有用な抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２への高親和性結合および選択的におよび好ましくは低毒性を有することによって特徴付けられる。特に、可変領域、定常領域、およびフレームワークなどの個々の成分が、個別におよび／または集合的に、選択的および好ましくは低い免疫原性を保有している、本発明の抗体、特殊化されたフラグメントまたはバリアントは、本発明において有用である。本発明において使用できる抗体は、徴候の測定可能な緩和、ならびに低いおよび／または受容可能な毒性を伴って長期間の間、患者を治療するそれらの能力によって、選択的に特徴付けられる。低いかまたは受容可能な免疫原性および／または高親和性、ならびに他の適切な特性は、達成される治療結果に寄与できる。「低免疫原性」は、治療された患者の約７５％未満、または好ましくはその約５０％未満で有意なＨＡＨＡ、ＨＡＣＡまたはＨＡＭＡ応答を惹起すること、および／または治療された患者において低力価を惹起すること（二重抗原酵素イムノアッセイを用いて測定される約３００未満、好ましくは約１００未満）として、本明細書に定義される（Ｅｌｌｉｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００７０】
少なくとも２の異なる抗原についての結合特異性を有するモノクローナル、ヒト化抗体である、二重特異性、ヘテロ特異性、ヘテロ結合体、または同様の抗体もまた使用できる。今回の場合では、結合特異性の１つが少なくとも１のＣＤ２２タンパク質用であり、他の１つが任意の他の抗原用である。二重特異性抗体を作製するための方法は当該分野において知られている。伝統的に、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいており、ここで、２つの重鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな仕分けのために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は１０の異なる抗体分子の潜在的な混合物を生じ、これらのうちの１つのみが正しい二重特異性構造を有する。アフィニティークロマトグラフィー工程によって通常行われる正しい分子の精製はむしろ厄介であり、生成物収率は低い。同様の手順は、例えば、国際公開第９３／０８８２９号パンフレット、米国特許第６，２１０，６６８号明細書、同第６，１９３，９６７号明細書、同第６，１３２，９９２号明細書、同第６，１０６，８３３号明細書、同第６，０６０，２８５号明細書、同第６，０３７，４５３号明細書、同第６，０１０，９０２号明細書、同第５，９８９，５３０号明細書、同第５，９５９，０８４号明細書、同第５，９５９，０８３号明細書、同第５，９３２，４４８号明細書、同第５，８３３，９８５号明細書、同第５，８２１，３３３号明細書、同第５，８０７，７０６号明細書、同第５，６４３，７５９号明細書、同第５，６０１，８１９号明細書、同第５，５８２，９９６号明細書、同第５，４９６，５４９号明細書、同第４，６７６，９８０号明細書、国際公開第９１／００３６０号パンフレット、同第９２／００３７３号パンフレット、欧州特許第０３０８９号明細書、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）に開示されており、各々は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００７１】
核酸分子
配列ＩＤ番号：１７〜３２または４９〜６４、これらのバリアント、若しくはコンセンサス配列の少なくとも１の連続するアミノ酸の少なくとも７０〜１００％をコードするヌクレオチド配列、またはこれらの配列の少なくとも１を有する寄託ベクターなどの本明細書に提供される情報を使用して、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体をコードする本発明の核酸分子が、本明細書に記載される方法を使用して、または当該分野において公知であるように、得ることができる。
【００７２】
本発明の核酸分子は、これに限定されるものではないが、クローニングによって得られ、または合成的に産生されたｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ、またはこれらの任意の組み合わせを含む、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡまたは他の任意の型などのＲＮＡの型、またはＤＮＡの型であり得る。ＤＮＡは、三本鎖、二本鎖、または一本鎖、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。ＤＮＡまたはＲＮＡの少なくとも１の鎖の任意の部分が、センス鎖としてもまた知られるコード鎖であり得、またはこれは、アンチセンス鎖としてもまた知られる非コード鎖であり得る。
【００７３】
本発明の単離された核酸分子は、１若しくはそれ以上のイントロンを選択的に伴うオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する核酸分子、これに限定されるものではないが、例えば、少なくとも１の重鎖（例えば、配列ＩＤ番号：３３〜４８）または軽鎖（例えば、配列ＩＤ番号：１〜１６）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３としての少なくとも１のＣＤＲの少なくとも１の特殊化された部分；抗ＣＤ２２抗体または可変領域についてのコード配列を有する核酸分子；ならびに、上記のものとは実質的に異なるヌクレオチドを有するが、しかし、これは、本明細書に記載されるようにおよび／または当該分野において公知であるように、遺伝コードの縮重に起因して、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体をなおコードしている核酸配列、を含むことができる。当然、遺伝コードは当該分野において周知である。従って、本発明の特異的抗ＣＤ２２抗体をコードするこのような縮重核酸バリアントを生成することは当業者にとっては日常的である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．、前出を参照のこと、そしてこのような核酸バリアントは本発明に含まれる。本発明の単離された核酸分子の非限定的な例には配列ＩＤ番号：１〜１６および３３〜４８が含まれ；ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、ＬＣ  ＣＤＲ３、ＨＣ可変領域、およびＬＣ可変領域をそれぞれコードする核酸の非限定的な例に対応する。
【００７４】
本明細書に示されるように、抗ＣＤ２２抗体をコードする核酸を有する本発明の核酸分子は、これに限定されるものではないが以下を含むことができる：それ自体、抗体フラグメントのアミノ酸配列をコードするもの、全体の抗体またはその一部のコード配列、抗体、フラグメント、または部分のコード配列、ならびに、少なくとも１のイントロンなどの上述のさらなるコード配列を伴うかまたは伴わない、少なくとも１のシグナルリーダーまたは融合ペプチドのコード配列などのさらなる配列、これらは、これに限定されるものではないが以下を含むさらなる非コード配列を伴う：転写、スプライシングを含むｍＲＮＡプロセシング、およびポリアデニル化シグナル（例えば、リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）において役割を果たす、転写され翻訳されない配列などの非コード５’および３’配列；さらなる機能を提供するものなどのさらなるアミノ酸をコードするさらなるコード配列。従って、抗体をコードする配列は、抗体フラグメントまたは部分を有する融合抗体の精製を容易にするペプチドをコードする配列などのマーカー配列に融合できる。
【００７５】
本明細書に記載されるようなポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチド
本発明は、選択的ハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に開示されているポリヌクレオチドにハイブリダイズする単離された核酸分子を提供する。従って、この実施形態のポリヌクレオチドは、このようなポリヌクレオチドを有する核酸を単離、検出、および／または定量するために使用できる。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、寄託ライブラリーにおける部分または全長クローンを同定、単離、または増幅するために使用できる。ある実施形態において、ポリヌクレオチドは、ヒトまたは哺乳動物核酸ライブラリーから単離されたか、またはさもなくばそこからのｃＤＮＡに相補性である、ゲノム配列またはｃＤＮＡ配列である。
【００７６】
好ましくは、ｃＤＮＡライブラリーは、少なくとも８０％全長配列、好ましくは、少なくとも８５％または９０％全長配列、およびより好ましくは、少なくとも９５％全長配列を有する。ｃＤＮＡライブラリーは、めったにない配列の表示を増加させるように標準化できる。低または中程度のストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は、典型的であるが、しかし、排他的ではなく、相補的配列と比較して配列同一性が減少している配列とともに利用される。中程度および高ストリンジェンシー条件は、より高い同一性の配列のために選択的に利用できる。低ストリンジェンシー条件は、約７０％配列同一性を有する配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能にし、オーソロガス配列またはパラロガス配列を同定するために利用できる。
【００７７】
選択的に、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるポリヌクレオチドによってコードされる抗体の少なくとも一部をコードする。本発明のポリヌクレオチドは、本発明の抗体をコードしているポリヌクレオチドに対する選択的ハイブリダイゼーションのために利用できる核酸配列を包含する。例えば、各々がこの参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ、前出；Ｃｏｌｌｉｇａｎ、前出を参照のこと。
【００７８】
核酸の構築
本発明の単離された核酸は、当該分野において周知であるように、（ａ）組換え方法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、またはこれらの組み合わせを使用して作製できる。
【００７９】
これらの核酸は、本発明のポリヌクレオチドに加えて、配列を便利に有することができる。例えば、１若しくはそれ以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を有するマルチクローニングサイトが核酸に挿入し、ポリヌクレオチドの単離に役立つことができる。また、翻訳可能な配列を挿入し、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離に役立つことができる。例えば、ヘキサヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するための便利な手段を提供する。本発明の核酸（コード配列を除く）は、選択的に、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／または発現のためのベクター、アダプター、またはリンカーである。
【００８０】
さらなる配列は、クローニングおよび／若しくは発現におけるそれらの機能を最適化するため、ポリヌクレオチドの単離に役立つため、または細胞へのポリヌクレオチドの導入を改善するために、このようなクローニングおよび／若しくは発現配列に加えることができる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプターおよびリンカーの使用は、当該分野で周知である。（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、前出；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、前出を参照のこと）。
【００８１】
核酸を構築するための組換え方法
ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはこれらの任意の組み合わせなどの本発明の単離された核酸組成物は、当業者に公知である任意の数のクローニング方法論を使用して、生物学的供給源から得ることができる。ある実施形態において、ストリンジェントな条件下で本発明のポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブが使用されて、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリー中の所望の配列を同定する。ＲＮＡの単離、ならびにｃＤＮＡおよびゲノムライブラリーの構築は当業者には周知である。（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、前出；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、前出を参照のこと）。
【００８２】
核酸スクリーニングおよび単離の方法
ｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーは、本発明のポリヌクレオチドの配列、例えば、本明細書に開示されているものに基づくプローブを使用してスクリーニングできる。プローブは、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ配列とハイブリダイズし、同じまたは異なる生物における相同遺伝子を単離するために使用できる。当業者は、様々な程度のハイブリダイゼーションのストリンジェンシーがアッセイにおいて利用できることを認識しており；ハイブリダイゼーションまたは洗浄媒体がストリンジェントであり得る。ハイブリダイゼーションのための条件がよりストリンジェントになるに従って、二重鎖形成が起こるためのプローブと標的の間のより高い程度の相補性が存在するに違いない。ストリンジェンシーの程度は、温度、イオン強度、ｐＨ、およびホルムアミドなどの部分変性剤の存在の１若しくはそれ以上によって制御できる。例えば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、例えば、０％〜５０％の範囲内でのホルムアミドの濃度の操作を通して、反応溶液の極性を変化させることによって便利に変動される。検出可能な結合のために要求される相補性（配列同一性）の程度は、ハイブリダイゼーション媒体および／または洗浄媒体のストリンジェンシーに従って変動する。相補性の程度は、最適には、１００％、または７０〜１００％、またはその中の任意の範囲または値である。しかし、プローブおよびプライマー中の少ない配列のバリエーションは、ハイブリダイゼーションおよび／または洗浄媒体のストリンジェンシーを減少させることによって補うことができることが理解されるべきである。
【００８３】
ＲＮＡまたはＤＮＡの増幅の方法は当該分野において周知であり、本明細書に提示される教示およびガイダンスに基づいて、過度の実験を伴うことなく、本発明に従って使用することができる。
【００８４】
ＤＮＡまたはＲＮＡ増幅の公知の方法は、これに限定されるものではないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および関連する増幅プロセス（例えば、Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ  ａｌ．への米国特許第４，６８３，１９５号明細書、同第４，６８３，２０２号明細書、同第４，８００，１５９号明細書、同第４，９６５，１８８号明細書；Ｔａｂｏｒ，ｅｔ  ａｌへの米国特許第４，７９５，６９９号明細書および同第４，９２１，７９４号明細書；Ｉｎｎｉｓへの米国特許第５，１４２，０３３号明細書；Ｗｉｌｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．への米国特許第５，１２２，４６４号明細書；Ｉｎｎｉｓへの米国特許第５，０９１，３１０号明細書；Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎ，ｅｔ  ａｌへの米国特許第５，０６６，５８４号明細書；Ｇｅｌｆａｎｄ，ｅｔ  ａｌへの米国特許第４，８８９，８１８号明細書；Ｓｉｌｖｅｒ，ｅｔ  ａｌへの米国特許第４，９９４，３７０号明細書；Ｂｉｓｗａｓへの米国特許第４，７６６，０６７号明細書；Ｒｉｎｇｏｌｄへの米国特許第４，６５６，１３４号明細書を参照のこと）、および二本鎖ＤＮＡ合成のための鋳型として標的配列に対するアンチセンスＲＮＡを使用するＲＮＡ媒介増幅（Ｍａｌｅｋ，ｅｔ  ａｌ．への米国特許第５，１３０，２３８号明細書、商品名ＮＡＳＢＡ）を含み、これらの全体の内容は、この参照により本明細書に組み込まれる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、前出；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、前出を参照のこと）。
【００８５】
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術は、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリーから直接的に本発明のポリヌクレオチドまたは関連遺伝子の配列を増幅するために使用できる。ＰＣＲおよび他のインビトロ増幅方法もまた、例えば、発現されるタンパク質をコードする核酸配列をクローニングするため、サンプル中の所望のｍＲＮＡの存在を検出するため、核酸配列決定のため、または他の目的のためのプローブとして使用するための核酸を作製するために有用であり得る。インビトロ増幅方法を通して当業者を方向付けるために十分な技術の例は、Ｂｅｒｇｅｒ、前出、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、前出、およびＡｕｓｕｂｅｌ、前出、ならびにＭｕｌｌｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，６８３，２０２号明細書（１９８７）；およびＩｎｎｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）において見い出すことができる。ゲノムＰＣＲ増幅のための市販のキットは、当該分野において公知である。例えば、Ａｄｖａｎｔａｇｅ−ＧＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を参照のこと。加えて、Ｔ４遺伝子３２タンパク質（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）は、長いＰＣＲ産物の収率を改善するために使用することができる。
【００８６】
核酸を構築するための合成方法
単離された本発明の核酸はまた、公知の方法によって直接化学合成によって調製できる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．、前出を参照のこと）。化学合成は、一般的に、一本鎖オリゴヌクレオチドを産生し、これは、相補性配列とのハイブリダイゼーションによって、または鋳型として一本鎖を使用するＤＮＡポリメラーゼを用いる重合によって、二本鎖ＤＮＡに転換できる。当業者は、ＤＮＡの化学合成が約１００若しくはそれ以上の塩基の配列に制限できないが、より長い配列は、より短い配列のライゲージョンによって得ることができることを認識している。
【００８７】
組換え発現カセット
本発明はさらに、本発明の核酸を有する組換え発現カセットを提供する。本発明の核酸配列、例えば、本発明の抗体をコードしているｃＤＮＡまたはゲノム配列は、少なくとも１の所望の宿主細胞に導入できる組換え発現カセットを構築するために使用できる。組換え発現カセットは、典型的には、意図される宿主細胞の中でポリヌクレオチドの転写を方向付ける転写開始制御配列に作動可能に連結されている本発明のポリペプチドを有する。異種プロモーターと非異種（内在性）プロモーターの両方が、本発明の核酸の発現を指向するために利用できる。
【００８８】
ある実施形態において、プロモーター、エンハンサー、または他のエレメントとして役立つ単離された核酸は、本発明のポリヌクレオチドの発現をアップレギュレーションまたはダウンレギュレーションするために、本発明のポリヌクレオチドの非相同型の適切な位置（上流、下流、またはイントロン中）に導入できる。例えば、内在性プロモーターは、変異、欠失、および／または置換によって、インビボまたはインビトロで変更できる。
【００８９】
ベクターおよび宿主細胞
本発明はまた、本発明の単離された核酸分子を含むベクター、組換えベクターで遺伝子操作されている宿主細胞、および、当該分野において周知であるような、組換え技術による少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の産生にも関連する。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．、前出；Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．、前出を参照のこと、この参照により各々が完全に本明細書に組み込まれる。
【００９０】
ポリヌクレオチドは、選択的に、宿主中での伝播のための選択マーカーを含有するベクターに結合できる。一般的に、プラスミドベクターが、リン酸カルシウム沈殿などの沈殿物中に、または電荷を有する脂質との複合体中に導入される。ベクターがウイルスであるならば、これは適切なパッケージング細胞系統を使用してインビトロでパッケージングでき、次いで、宿主細胞に導入できる。
【００９１】
ＤＮＡ挿入物は、適切なプロモーターに作動可能に連結されるべきである。発現構築物は、さらに、転写の開始、終結のための部位、および、転写領域中に、翻訳のためのリボソーム結合部位を含有する。構築物によって発現される成熟転写物のコード部分は、好ましくは、翻訳されるｍＲＮＡの最初に翻訳開始コドンを含み、そして翻訳されるｍＲＮＡの最後に適切に位置する終止コドン（例えば、ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含み、哺乳動物または真核生物発現のためにはＵＡＡおよびＵＡＧが好ましい。
【００９２】
発現ベクターは、好ましくは、しかし選択的に、少なくとも１の選択マーカーを含む。このようなマーカーは、これに限定されるものではないが、例えば、真核生物細胞培養のための、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号明細書；同第４，６３４，６６５号明細書；同第４，６５６，１３４号明細書；同第４，９５６，２８８号明細書；同第５，１４９，６３６号明細書；同第５，１７９，０１７号明細書、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ミコフェノール酸、またはグルタミンシンテターゼ（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号明細書；同第５，７７０，３５９号明細書；同第５，８２７，７３９号明細書）耐性、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他の細菌または原核生物の培養のためのテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子を含む（上記の特許はこの参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。上記に記載された宿主細胞のための適切な培養培地および条件は当該分野において公知である。適切なベクターは、当業者に容易に明らかである。ベクター構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の公知の方法によってもたらすことができる。このような方法は、当該分野において、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、前出、１〜４章および１６〜１８章；Ａｕｓｕｂｅｌ、前出、１章、９章、１３章、１５章、１６章に記載されている。
【００９３】
本発明の少なくとも１の抗体は、融合タンパク質などの修飾型で発現でき、分泌シグナルを含むことができるのみならず、さらなる異種機能領域もまた含むことができる。例えば、さらなるアミノ酸、特に、電荷を有するアミノ酸の領域が、抗体のＮ末端に加えられて、精製の間、またはそれに続く取り扱いおよび保存の間の、宿主細胞の安定性および持続性を改善できる。また、ペプチド部分が本発明の抗体に加えられて、精製を容易にすることができる。このような領域は、抗体またはその少なくとも１のフラグメントの最終調製の前に除去できる。このような方法は、多くの標準的な実験室マニュアル、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、前出、１７．２９章〜１７．４２章および１８．１章〜１８．７４章；Ａｕｓｕｂｅｌ、前出、１６章、１７章、および１８章に記載されている。
【００９４】
当業者は、本発明のタンパク質をコードする核酸の発現のために利用可能な多数の発現系における知識を持っている。
【００９５】
あるいは、本発明の核酸は、本発明の抗体をコードする内在性ＤＮＡを含有する宿主細胞中で（操作によって）スイッチを入れることによって、宿主細胞中で発現させることができる。このような方法は当該分野において周知であり、例えば、米国特許第５，５８０，７３４号明細書、同第５，６４１，６７０号明細書、同第５，７３３，７４６号明細書、および同第５，７３３，７６１号明細書に記載されており、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００９６】
抗体、その特殊化された部分またはバリアントの産生のために有用な細胞培養の例は哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞系は、しばしば、単層の細胞の型であるが、哺乳動物細胞懸濁物またはバイオリアクターもまた使用できる。インタクトなグリコシル化タンパク質を発現することが可能である多数の適切な宿主細胞系統が当該分野において開発されており、これには、ＣＯＳ−１（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５０）、ＣＯＳ−７（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５１）、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１０）、ＣＨＯ（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６１０）およびＢＳＣ−１（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６）細胞系統、Ｃｏｓ−７細胞、ＣＨＯ細胞、ｈｅｐ  Ｇ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０−Ａｇｌ４、２９３細胞、ＨｅＬａ細胞など
が含まれ、これらは、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）から容易に入手可能である。好ましい宿主細胞には、骨髄腫およびリンパ腫細胞などのリンパ起源の細胞が含まれる。特に好ましい宿主細胞はＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＣＲＬ−１５８０）およびＳＰ２／０−Ａｇｌ４細胞（ＡＴＣＣ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＣＲＬ−１８５１）である。特に好ましい実施形態において、組換え細胞はＰ３Ｘ６３Ａｂ８．６５３またはＳＰ２／０−Ａｇｌ４細胞である。
【００９７】
これらの細胞の発現ベクターは、以下の発現制御配列の１若しくはそれ以上、これに限定されるものではないが、複製起点；プロモーター（例えば、後期または初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（米国特許第５，１６８，０６２号明細書；同第５，３８５，８３９号明細書）、ＨＳＶ  ｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホグリセレートキナーゼ）プロモーター、ＥＦ−１アルファプロモーター（米国特許第５，２６６，４９１号明細書）、少なくとも１のヒト免疫グロブリンプロモーター）；エンハンサー、および／またはプロセシング情報部位、例えば、リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライシング部位、ポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０ラージＴ  Ａｇ  ポリＡ付加部位）、および転写ターミネーター配列などである。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、前出；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．、前出を参照のこと。本発明の核酸またはタンパク質の産生のために有用な他の細胞は公知であり、および／あるいは、例えば、細胞系統およびハイブリドーマのＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎカタログ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）から、または他の公知の若しくは商業的な供給源から利用可能である。
【００９８】
真核生物宿主細胞が利用されるとき、ポリアデニル化または転写ターミネーター配列は、典型的には、ベクターに組み込まれる。ターミネーター配列の１つの例は、ウシ成長ホルモン遺伝子からのポリアデニル化配列である。転写物の正確なスプライシングのための配列もまた含むことができる。スプライシング配列の１つの例は、ＳＶ４０からのＶＰ１イントロンである（Ｓｐｒａｇｕｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３−７８１（１９８３））。さらに、宿主細胞において複製を制御するための遺伝子配列は、当該分野において公知であるように、ベクターに組み込まれる。
【００９９】
抗体の産生
本発明の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体は、当該分野において周知であるように、細胞系統、混合された細胞系統、不死化細胞、または不死化細胞のクローン性集団によって、選択的に産生できる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．（１９８７−２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２．ｓｕｐ．ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）．Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．，（１９９７−２００１）を参照のこと、各々がこの参照により本明細書に組み込まれる。
【０１００】
１つのアプローチにおいて、ハイブリドーマは、当該分野において公知であるように、適切な不死化細胞系統（例えば、骨髄腫細胞系統、これに限定されるものではないが、Ｓｐ２／０、Ｓｐ２／０−ＡＧ１４、ＮＳＯ、ＮＳ１、ＮＳ２、ＡＥ−１、Ｌ．５、>２４３、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、Ｓｐ２  ＳＡ３、Ｓｐ２  ＭＡＩ、Ｓｐ２  ＳＳ１、Ｓｐ２  ＳＡ５、Ｕ９３７、ＭＬＡ  １４４、ＡＣＴ  ＩＶ、ＭＯＬＴ４、ＤＡ−１、ＪＵＲＫＡＴ、ＷＥＨＩ、Ｋ−５６２、ＣＯＳ、ＲＡＪＩ、ＮＩＨ  ３Ｔ３、ＨＬ−６０、ＭＬＡ  １４４、ＮＡＭＡＩＷＡ、ＮＥＵＲＯ  ２Ａなど）または同様のもの、またはヘテロミエローマ（ｈｅｔｅｒｏｍｙｌｏｍａ）、その融合産物、またはそこから誘導された任意の細胞若しくは融合細胞、または任意の他の適切な細胞系統を融合することによって産生される。例えば、ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ、ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍ．などを参照のこと、抗体産生細胞は、これに限定されるものではないが、例えば、単離されたかまたはクローニングされた、脾臓、末梢血、リンパ液、扁桃腺、または他の免疫またはＢ細胞含有細胞、または、組換え若しくは内在性の、ウイルス、細菌、藻類、原核生物、両生類、昆虫、爬虫類、魚類、哺乳動物、齧歯類、ウマ、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）、ヤギ、ヒツジ（ｓｈｅｅｐ）、霊長類、真核生物、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡまたはＲＮＡ、葉緑体ＤＮＡまたは  ＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、一本鎖、二本鎖または三本鎖、ハイブリダイズしたなど、またはこれらの任意の組み合わせとしての内在性または異種核酸のいずれかとして、重鎖または軽鎖定常または可変配列またはフレームワーク配列またはＣＤＲ配列を発現する任意の他の細胞である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、前出、およびＣｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，前出、第２章を参照のこと、この参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０１】
任意の他の適切な宿主細胞はまた、本発明の抗体、その特殊化されたフラグメントまたはバリアントをコードする異種または内在性核酸を発現するためにも使用できる。融合細胞（ハイブリドーマ）または組換え細胞は、選択的培養条件または他の公知の方法を使用して単離でき、そして限界希釈若しくはセルソーティング、または他の公知の方法によってクローニングできる。所望の特異性を有する抗体を産生する細胞は、適切なアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）によって選択できる。
【０１０２】
本発明の抗体は、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体をコードする核酸を使用して調製され、ヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどのトランスジェニック動物または哺乳動物を提供でき、これらの動物はこのような抗体をこれらのミルクの中で産生する。このような動物は公知の方法を使用して提供できる。例えば、これに限定されないが、米国特許第５，８２７，６９０号明細書；同第５，８４９，９９２号明細書；同第４，８７３，３１６号明細書；同第５，８４９，９９２号明細書；同第５，９９４，６１６号明細書、同第５，５６５，３６２号明細書；同第５，３０４，４８９号明細書などを参照のこと、これらの各々は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０３】
本発明の抗体は、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体をコードする核酸を使用してさらに調製され、植物の部分の中で、またはそこから培養された細胞の中で、このような抗体、特殊化された部分、またはバリアントを産生するトランスジェニック植物および培養植物細胞（例えば、これに限定されるものではないが、タバコおよびトウモロコシを含む）を提供することができる。非限定的な例として、組換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバコ葉は、例えば、誘導性プロモーターを使用して、大量の組換えタンパク質を提供するために首尾よく使用されてきた。例えば、Ｃｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５−１１８（１９９９）およびその中で引用された参考文献を参照のこと。また、トランスジェニックトウモロコシは、他の組換え系において産生されたもの、または天然の供給源から精製されたものと等価な生物学的活性を有する、商業的な製造レベルで哺乳動物タンパク質を発現するために使用されてきた。例えば、Ｈｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７−１４７（１９９９）およびそこに引用された参考文献を参照のこと。抗体はまた、タバコ種子およびジャガイモ塊茎を含む、単鎖抗体（ｓｃＦｖ’ｓ）などの抗体フラグメントを含むトランスジェニック植物種子から大量に産生されたきた。例えば、Ｃｏｎｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９（１９９８）およびそこに引用された参考文献を参照のこと。従って、本発明の抗体はまた、公知の方法に従って、トランスジェニック植物を使用して産生できる。例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９−１０８（Ｏｃｔｏｂｅｒ，１９９９），Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２−７（１９９５）；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１−６（１９９５）；Ｗｈｉｔｅｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０−９４４（１９９４）；およびそこに引用された参考文献もまた参照のこと。上記の参考文献の各々は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０４】
抗体の精製
抗ＣＤ２２抗体は、これに限定されるものではないが、プロテインＡ精製、プロテインＧ精製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーを含む周知の方法によって、組換え細胞培養から回収および精製できる。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）もまた、精製のために利用できる。例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｏｒ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｔｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．，（１９９７−２００１）、例えば、１章、４章、６章、８章、９章、および１０章を参照のこと、各々はこの参照によりその全体が本明細書に組み込まれる．
を参照のこと。
【０１０５】
本発明の抗体には、天然に精製された生成物、化学合成手順の生成物、例えば、酵母、高等植物、昆虫、および哺乳動物細胞を含む真核生物宿主から、組換え技術によって産生される生成物が含まれる。組換え産生手順において利用される宿主に依存して、本発明の抗体はグリコシル化でき、またはグリコシル化されないこともでき、グリコシル化が好ましい。このような方法は多くの標準的な実験室マニュアルに記載されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、前出、１７．３７〜１７．４２節；Ａｕｓｕｂｅｌ、前出、１０章、１２章、１３章、１６章、１８章、および２０章、Ｃｏｌｌｉｇａｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、前出、１２〜１４章であり、すべてがこの参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０６】
精製された抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、フローサイトメトリー、免疫細胞学、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）分析、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  ＫｉｎＥｘＡ（商標）キネティック排除アッセイ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによって、またはＨＰＬＣ分析によって、ならびに本明細書に開示されている他の機能アッセイによって、特徴付けができる。
【０１０７】
哺乳動物細胞におけるＣＤ２２抗体のクローニングおよび発現
典型的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介する少なくとも１のプロモーターエレメント、抗体コード配列、ならびに転写の終結および転写物のポリアデニル化のために必要とされるシグナルを含有する。さらなるエレメントには、エンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列、およびドナーによって隣接されている介在配列、およびＲＮＡスプライシングのためのアクセプター部位が含まれる。高度に効率的な転写は、ＳＶ４０からの初期および後期プロモーター、レトロウイルス、例えば、ＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩからの長い末端反復配列（ＬＴＲＳ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成できる。しかし、細胞エレメントもまた使用できる（例えば、ヒトアクチンプロモーター）。本発明を実施する際の使用のための適切な発現ベクターには、例えば、ｐＩＲＥＳｌｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｆｆ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｎ、ＰＬＸＳＮ、またはｐＬＮＣＸ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ  Ｌａｂｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／−）またはｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋／−）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＰＳＶＬおよびＰＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ  ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ  ３７１４６）、ならびにｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ  ６７１０９）などのベクターが含まれる。使用できる哺乳動物宿主細胞には、ヒトＨｅｌａ  ２９３、Ｈ９およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ１、Ｃｏｓ７およびＣＶ１、ウズラＱＣｌ−３細胞、マウスＬ細胞、ならびにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が含まれる。
【０１０８】
あるいは、遺伝子は、染色体に組み込まれる遺伝子を含有する安定な細胞系統の中で発現できる。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、またはハイグロマイシンなどの選択マーカーを用いる同時トランスフェクションは、トランスフェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。
【０１０９】
トランスフェクトされた遺伝子はまた、大量のコードされた抗体を発現するために増幅できる。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、数百コピーまたは数千コピーさえもの関心対象の遺伝子を保有する細胞系統を開発するために有用である。別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒｐｈｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６９−１７５（１９９２））。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞が選択培地中で増殖され、最高の耐性を有する細胞が選択される。これらの細胞系統は染色体に組み込まれた増幅された遺伝子を含有する。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は、しばしば、抗体の産生のために使用される。
【０１１０】
ＣＨＯ細胞中でのクローニングおよび発現
単離された可変領域および定常領域をコードしているＤＮＡ、ならびに脱リン酸化されたベクターが、Ｔ４  ＤＮＡリガーゼでライゲージョンされる。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＨＢ１０１または  ＸＬ−１  Ｂｌｕｅ細胞が形質転換され、例えば、制限酵素分析を使用して、プラスミドｐＣ４に挿入されたフラグメントを含有している細菌が同定される。
【０１１１】
活性ＤＨＦＲ遺伝子を欠いているチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞がトランスフェクションのために使用される。リポフェクションを使用して、５μｇの発現プラスミドｐＣ４が、０．５μｇのプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏとともに同時トランスフェクトされる。プラスミドｐＳＶ２ｎｅｏは、優生選択マーカーを含有し、これは、Ｇ４１８を含む一群の抗生物質に対して耐性を付与する酵素をコードしているＴｎ５からのｎｅｏ遺伝子である。これらの細胞は、１μｇ／ｍｌ  Ｇ４１８が補充されたアルファマイナスＭＥＭに播種される。２日後、細胞はトリプシン処理され、１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートプラス１μｇ／ｍｌ  Ｇ４１８が補充されたアルファマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に播種される。約１０〜１４日後、単一クローンがトリプシン処理され、次いで、様々な濃度のメトトレキサート（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、６ウェルペトリディッシュまたは１０ｍｌフラスコに播種される。次いで、最高濃度のメトトレキサートで増殖しているクローンは、さらに高い濃度（１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）のメトトレキサートを含有する新たな６ウェルプレートに移された。１００〜２００ｍＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで、同じ手順が反復される。所望の遺伝子産物の発現は、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析される。
【０１１２】
抗ＣＤ２２抗体組成物
本発明はまた、天然には存在しない組成物、混合物、または型で提供される、本明細書に記載されているように、および／または当該分野において公知であるように、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６若しくはそれ以上の本発明の抗ＣＤ２２抗体を有する、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物もまた提供する。このような組成物は、本明細書に記載された抗体、またはその特殊化されたフラグメント、ドメインまたはバリアントのＣＤＲ領域の連続するアミノ酸の７０〜１００％から成る群から選択される、抗ＣＤ２２抗体アミノ酸配列の少なくとも１または２の全長、Ｃ末端および／またはＮ末端欠失バリアント、ドメイン、フラグメント、または特殊化されたバリアントを有する、天然に存在しない組成物を有する。好ましい抗ＣＤ２２抗体組成物には、本明細書に記載される抗ＣＤ２２抗体配列の一部を含有する少なくとも１のＣＤＲまたはＬＢＲとして、少なくとも１または２の全長、フラグメント、ドメイン、またはバリアントが含まれる。さらなる好ましい組成物は、本明細書に記載される抗ＣＤ２２ＡｂのＣＤＲ領域の７０〜１００％の少なくとも１の４０〜９９％を有する。このような組成物のパーセンテージは、当該分野において公知であるようにまたは本明細書に記載されるように、重量、体積、濃度、モル濃度、または液体若しくは乾燥溶液、混合物、懸濁液、エマルジョン、若しくはコロイドとしてのモル濃度による。
【０１１３】
本発明の抗ＣＤ２２抗体組成物は、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を有する、任意の適切かつ有効な量の組成物または薬学的組成物の少なくとも１をさらに有することができ、この組成物は、このような調節、処理、または治療の必要がある細胞、組織、器官、動物、または患者に対してのものであり、選択的に、さらに以下から選択される少なくとも１を有する：少なくとも１のＴＮＦアンタゴニスト（例えば、これに限定されるものではないが、ＴＮＦ抗体またはフラグメント  可溶性ＴＮＦ受容体またはフラグメント、その融合タンパク質、または小分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ剤（例えば、メトトレキサート、オーラノフィン、オーロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト、金チオマレートナトリウム、ヒドロキシクロロキン硫酸塩、レフルノミド、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌｚｉｎｅ））、筋弛緩剤、麻薬、非ステロイド系抗炎症薬物（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤（例えば、アミノグリコシド、抗真菌剤、駆虫薬、抗ウイルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フルオロキノリン（ｆｌｕｒｏｒｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、別の抗菌剤）、抗乾癬剤、副腎皮質ステロイド、アナボリックステロイド、糖尿病関連薬剤、ミネラル剤、栄養剤、甲状腺製剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、下痢止め剤、咳止め薬、制吐薬、抗潰瘍剤、通じ薬、抗凝血剤、エリスロポエチン（例えば、エポエチンアルファ）、フィルグラスチム（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、ニューポジェン）、サルグラモスチム（ＧＭ−ＣＳＦ、ロイキン（Ｌｅｕｋｉｎｅ））、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制剤（例えば、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン補充薬物、エストロゲン受容体調節因子、散瞳薬、毛様筋調節薬、アルキル化剤、代謝拮抗物質、分裂抑制剤、放射性医薬品、抗鬱剤、抗躁剤、抗精神病薬、精神安定剤、睡眠薬、交感神経様作用薬、興奮剤、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンまたはそのアナログ、ドルナーゼ（ｄｏｍａｓｅ）アルファ（プルモザイム）、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニスト。このようなサイトカインの非限定的な例には、これに限定されるものではないが、ＩＬ−１〜ＩＬ−３４のいずれかが含まれる。適切な投薬量は当該分野において周知である。例えば，Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２．ｓｕｐ．ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．（２０００）；ＰＤＲ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ  ２０００，Ｄｅｌｕｘｅ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ  Ｌｉｎｄａ，Ｃａｌｉｆ．（２０００）を参照のこと、これらの各々は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１１４】
本発明の抗ＣＤ２２抗体化合物、組成物、または組み合わせは、任意の適切な補助剤の少なくとも１、例えば、これに限定されるものではないが、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、保存剤、アジュバントなどをさらに有することができる。薬学的に受容可能な補助剤が好ましい。このような滅菌溶液の非限定的な例、およびこのような滅菌溶液を調製する方法は当該分野において周知であり、例えば、これに限定されるものではないが、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）１９９０である。当該分野において周知であるように、または本明細書に記載されるように、抗ＣＤ２２抗体、フラグメントまたはバリアント組成物の投与の様式、溶解性、および／または安定性のために適切である薬学的に受容可能な担体は、日常的に選択することができる。
【０１１５】
本発明の組成物において有用な薬学的賦形剤および添加剤は、これに限定されるものではないが、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、および炭水化物（例えば、モノサッカリド、ジ−、トリ−、テトラ−、およびオリゴサッカリド；アルジトール、アルジトール酸、エステル化糖などの誘導化糖類；およびポリサッカリドまたは糖ポリマーを含む糖類）を含み、これは、単独でまたは組み合わせで存在し得、重量でまたは体積で１〜９９．９９％を有する。例示的なタンパク質賦形剤には、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）などの血清アルブミン、ゼラチン、カゼインなどが含まれる。緩衝能力においてもまた機能することができる代表的なアミノ酸／抗体成分には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどが含まれる。１つの好ましいアミノ酸はグリシンである。
【０１１６】
本発明における使用のために適切な炭水化物賦形剤は、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどのモノサッカリド；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどのジサッカリド；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどのポリサッカリド；およびマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどのアルジトールを含む。本発明における使用のための好ましい炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロース、およびラフィノースである。
【０１１７】
抗ＣＤ２２抗体組成物はまた、緩衝剤またはｐＨ調整剤も含むことができ；典型的には、この緩衝剤は、有機酸または塩基から調製された塩である。代表的な緩衝剤には、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、またはフタル酸の塩などの有機酸塩、Ｔｒｉｓ、トロメタミン塩酸塩、またはリン酸緩衝液が含まれる。本発明の組成物における使用のための好ましい緩衝液は、クエン酸塩などの有機酸塩である。
【０１１８】
加えて、本発明の抗ＣＤ２２抗体組成物は、ポリビニルピロリドン、フィコール（ポリマー性糖）、デキストレート（例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン）、ポリエチレングリコールなどのポリマー性賦形剤／添加剤、香料、抗菌剤、甘味料、抗酸化剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば、「ＴＷＥＥＮ  ２０」および「ＴＷＥＥＮ  ８０」などのポリソルベート）、脂質（例えば、リン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、およびキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）を含むことができる。
【０１１９】
本発明に従う抗ＣＤ２２抗体、部分またはバリアント組成物における使用のために適切なこれらおよびさらなる公知の薬学的賦形剤および／または添加剤は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  &  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」，１９．ｓｕｐ．ｔｈ  ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  &  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）において、および、「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」，５２ｎｄ  ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（１９９８）において列挙されているように、当該分野において公知であり、これらの開示は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。好ましい担体または賦形剤は炭水化物（例えば、サッカリドおよびアルジトール）および緩衝剤（例えば、クエン酸）またはポリマー性剤である。
【０１２０】
製剤
上記の通り、本発明は、安定な製剤を提供し、これは、好ましくは、生理食塩水または選択された塩を伴うリン酸緩衝液であり、ならびに保存剤を含有する保存溶液および製剤、ならびに薬学的および獣医学的使用のために適切である多目的保存製剤であり、薬学的に受容可能な製剤の中に少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を有する。保存製剤は、少なくとも１の公知の保存剤、または、水性希釈剤中の少なくとも１のフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、およびチメロサール、若しくはこれらの混合物から成る群から選択的に選択される。任意の適切な濃縮物または混合物が、当該分野において公知であるように使用でき、例えば、０．００１〜５％、またはその中の任意の範囲若しくは値、例えば、これに限定されるものではないが、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、またはその中の任意の範囲若しくは値である。非限定的な例には以下が含まれる：保存剤なし、０．１〜２％ｍ−クレゾール（例えば、０．２、０．３．０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１〜３％ベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１〜０．５％チメロサール（例えば、０．００５、０．０１）、０．００１〜２．０％フェノール（例えば、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５〜１．０％アルキルパラベン（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）など。
【０１２１】
上記の通り、本発明は、パッケージング材料、および、選択的に水性希釈剤中で、処方された緩衝剤および／または保存剤とともに、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の溶液を有する少なくとも１のバイアルを有する製品を提供し、ここで、上記パッケージング材料は、このような溶液が１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間若しくはそれ以上の期間にわたって保持できることを示すラベルを有する。本発明はさらに、パッケージング材料、凍結乾燥された少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を有する第１のバイアル、および処方された緩衝剤または保存剤の水性希釈液を有する第２のバイアルを有する製品を有し、ここで、上記パッケージング材料は、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を水性希釈液中で再構成して、２４時間若しくはそれ以上の期間にわたって保持できる溶液を形成することを患者に指示するラベルを有する。
【０１２２】
本発明に従って使用される少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体は、哺乳動物細胞またはトランスジェニック調製物からを含む、組換え手段によって産生でき、または、本明細書に記載されるように、若しくは当該分野において公知であるように、他の生物学的供給源から精製できる。
【０１２３】
本発明の生成物中の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の範囲には、再構成の際に生じる量が含まれ、湿／乾系における場合、約１．０マイクログラム／ｍｌ〜約１０００ｍｇ／ｍｌの濃度であるが、より低い濃度およびより高い濃度が操作可能であり、そして意図される送達ビヒクルに依存し、例えば、溶液製剤は、経皮パッチ、肺、経粘膜、または浸透圧若しくはマイクロポンプ方法とは異なる。
【０１２４】
好ましくは、水性希釈剤は、選択的に、さらに、薬学的に受容可能な保存剤を有する。好ましい保存剤には、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、およびチメロサール、またはその混合物から成る群から選択されるものが含まれる。製剤中で使用される保存剤の濃度は、抗菌効果を生じるために十分な濃度である。このような濃度は、選択された保存剤に依存し、当業者によって容易に決定される。
【０１２５】
他の賦形剤、例えば、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、保存増強剤は、選択的にかつ好ましく希釈剤に添加できる。グリセリンなどの等張剤は、既知の濃度で一般的に使用される。生理学的に耐容性である緩衝剤は、ｐＨ調節の改善を提供するために好ましく添加される。これらの製剤は、広い範囲のｐＨ、例えば、ｐＨ４〜約ｐＨ１０を網羅することができ、好ましい範囲は約ｐＨ５〜約ｐＨ９、最も好ましい範囲は約６．０〜約８．０である。好ましくは、本発明の製剤は、約６．８から約７．８の間のｐＨを有する。好ましい緩衝剤にはリン酸緩衝剤が含まれ、最も好ましくは、リン酸ナトリウム、特に、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）である。
【０１２６】
他の添加剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、プルロニックＦ６８（ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー）、およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）のような薬学的に受容可能な可容化剤、またはポリソルベート２０若しくは８０またはポロキサマー１８４若しくは１８８、プルロニック．ＲＴＭ．ポリオール（ｐｏｌｙｌｓ）などの非イオン系界面活性剤、他のブロックコポリマー、およびキレート剤、例えば、ＥＤＴＡおよびＥＧＴＡは、凝集を減少させるために、製剤または組成物に選択的に加えることができる。これらの添加剤は、ポンプまたはプラスチック容器が製剤を管理するために使用される場合に特に有用である。薬学的に受容可能な界面活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を軽減する。
【０１２７】
本発明の製剤は、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体、ならびに、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン、（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、およびチメロサールまたはこれらの混合物から成る群から選択される水性希釈剤中の保存剤を混合する工程を有するプロセスによって調製できる。少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体および水性希釈剤中の保存剤を混合する工程は、従来的な溶解手順および混合手順を使用して実行される。適切な製剤を調製するために、例えば、緩衝溶液中の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の測定量は、所望の濃度のタンパク質および保存剤を提供するために十分な量で緩衝溶液中で所望の保存剤と組み合わされる。このプロセスのバリエーションは、当業者によって認識される。例えば、さらなる添加剤が使用されるか否かにかかわらず、成分が加えられる順番、製剤が調製される温度およびｐＨは、使用される濃度および投与の手段のために最適化できるすべての因子である。
【０１２８】
特許請求された製剤は、透明溶液として、または凍結乾燥した少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体のバイアルを有し、このバイアルがともに再構成される水性希釈剤中に水、保存剤および／または賦形剤、好ましくは、リン酸緩衝液および／または生理食塩水、および選択された塩を含有する第２のバイアルを有する２バイアルとして、患者に提供できる。単一溶液バイアルまたは再構成を必要とする２バイアルのいずれかが、複数回再使用でき、患者の治療の単回または複数回サイクルのために十分であり得、従って、現在利用可能であるよりも便利な治療投薬計画を提供できる。
【０１２９】
現在特許請求されている製品は、即時から２４時間若しくはそれ以上までの期間にわたって、投与のために有用である。従って、現在特許請求されている製品は、患者に対して有意な利点を提供する。本発明の製剤は、選択的に、約２〜約４０℃の温度で安全に保存でき、長期間の間、タンパク質の生物学的活性を保持し、従って、溶液が、６、１２、１８、２４、３６、４８、７２、または９６時間若しくはそれ以上の期間にわたって保持または使用できること示すパッケージ材料を可能にする。保存された希釈剤が使用される場合、このようなラベルは、１〜１２ヶ月間、半年間、１年半、および／または２年間までの使用を含むことができる。
【０１３０】
本発明の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の溶液は、水性希釈剤中で少なくとも１の抗体を混合する工程を有するプロセスによって調製できる。混合は、従来的な溶解および混合の手順を使用して実行される。適切な希釈剤を調製するために、例えば、水または緩衝剤中の少なくとも１の抗体の測定量は、所望の濃度でタンパク質および任意選択で保存剤または緩衝剤を提供するために十分な量で組み合わされる。このプロセスのバリエーションは当業者によって認識されている。例えば、さらなる添加剤が加えられるか否かにかかわらず、成分が加えられる順番、製剤が調製される温度およびｐＨは、使用される濃度および投与の手段のために最適化できるすべての因子である。
【０１３１】
特許請求された製品は、透明溶液として、または凍結乾燥した少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体のバイアルを有し、このバイアルがともに再構成される水性希釈剤を含有する第２のバイアルを有する２バイアルとして患者に提供できる。単一溶液バイアルまたは再構成を必要とする２バイアルのいずれかが、複数回再使用でき、患者の治療の単回または複数回サイクルのために十分であり得、従って、現在利用可能であるよりも便利な治療投薬計画を提供する。
【０１３２】
特許請求された製品は、透明溶液、または凍結乾燥した少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体のバイアルを有し、このバイアルがともに再構成される水性希釈剤を含有する第２のバイアルを有する２バイアルを、薬局、医院、または他のこのような機関若しくは施設に提供することによって患者に直接的に提供できる。この場合の透明溶液は、１リットルまたはさらに大きなサイズまでであり得、少なくとも１の抗体溶液のより小さな部分がより小さなバイアルへの移動のために１回若しくは複数回回収できる大きなリザーバーを提供し、薬局または医院によって彼らの顧客および／または患者まで提供できる。
【０１３３】
これらの単一バイアル系を有する認識されているデバイスは、ＢＤ  Ｐｅｎｓ、ＢＤ  Ａｕｔｏｊｅｃｔｏｒ．ＲＴＭ．、Ｈｕｍａｊｅｃｔ．ＲＴＭ．、ＮｏｖｏＰｅｎ．ＲＴＭ．、Ｂ−Ｄ．ＲＴＭ．Ｐｅｎ、ＡｕｔｏＰｅｎ．ＲＴＭ．、およびＯｐｔｉＰｅｎ．ＲＴＭ．、ＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎＰｅｎ．ＲＴＭ．、Ｇｅｎｏｔｒｏｎｏｒｍ  Ｐｅｎ．ＲＴＭ．、Ｈｕｍａｔｒｏ  Ｐｅｎ．ＲＴＭ．、Ｒｅｃｏ−Ｐｅｎ．ＲＴＭ．、Ｒｏｆｅｒｏｎ  Ｐｅｎ．ＲＴＭ．、Ｂｉｏｊｅｃｔｏｒ．ＲＴＭ．、ｉｊｅｃ  ＲＴＭ．、Ｊ−ｔｉｐ  Ｎｅｅｄｌｅ−Ｆｒｅｅ  Ｉｎｊｅｃｔｏｒ．ＲＴＭ．、Ｉｎｔｒａｊｅｃｔ．ＲＴＭ．、Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ．ＲＴＭ．、例えば、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｅｎ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，Ｎ．Ｊ．，ｗｗｗ．ｂｅｃｔｏｎｄｉｃｋｅｎｓｏｎ．ｃｏｍ）によって製造または開発されたもの、Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ（Ｂｕｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，ｗｗｗ．ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ．ｃｏｍ；Ｂｉｏｊｅｃｔ，Ｐｏｒｔｌａｎｄ，Ｏｒｅｇ．（ｗｗｗ．ｂｉｏｊｅｃｔ．ｃｏｍ）；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｗｅｓｔｏｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ（Ｐｅｔｅｒｂｏｒｏｕｇｈ、ＵＫ、ｗｗｗ．ｗｅｓｔｏｎ−ｍｅｄｉｃａｌ．ｃｏｍ）、Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ  Ｃｏｒｐ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ．，ｗｗｗ．ｍｅｄｉｊｅｃｔ．ｃｏｍ）などの、溶液の送達のためのこれらのペンインジェクターデバイスが含まれる。２バイアル系を有する認識されているデバイスには、ＨｕｍａｔｒｏＰｅｎ．ＲＴＭなどの再構成溶液の送達のためのカートリッジ中で凍結乾燥薬物を再構成するためのこれらのペンインジェクター系が含まれる。
【０１３４】
現在特許請求されている製品にはパッケージング材料が含まれる。パッケージング材料は、監督官庁によって必要とされる情報に加えて、製品が使用できる条件を提供する。本発明のパッケージング材料は、２バイアル、湿／乾、製品のために、水性希釈剤中で少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を再構成して、溶液を形成し、かつその溶液を、２〜２４時間若しくはそれ以上の期間にわたって使用するために患者に説明書を提供する。単一バイアル、溶液製品について、ラベルはこのような溶液が２〜２４時間若しくはそれ以上の期間にわたって使用できることを示す。現在特許請求されている製品は、ヒト薬学的製品用途のために有用である。
【０１３５】
本発明の製剤は、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体、および選択された緩衝液、好ましくは、生理食塩水または選択された塩を含有するリン酸緩衝液を混合することを有するプロセスによって調製できる。水性希釈剤中で少なくとも１の抗体および緩衝液を混合することは、従来的な溶解手順および混合手順を使用して実行される。適切な製剤を調製するために、例えば、水または緩衝液中の少なくとも１の抗体の測定量は、所望の濃度のタンパク質および緩衝液を提供するために十分な量の水中の所望の緩衝剤とともに組み合わせられる。このプロセスのバリエーションは当業者によって認識されている。例えば、さらなる添加剤が使用されるか否かにかかわらず、成分が加えられる順番、製剤が調製される温度およびｐＨは、使用される濃度および投与の手段のために最適化できるすべての因子である。
【０１３６】
特許請求された安定なまたは保存された製剤は、透明溶液として、または凍結乾燥した少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体のバイアルを有し、このバイアルがともに再構成される水性希釈剤中に保存剤および／または賦形剤を含有する第２のバイアルを有する２バイアルとして、患者に提供できる。単一溶液バイアルまたは再構成を必要とする２バイアルのいずれかが、複数回再使用でき、患者の治療の単回または複数回サイクルのために十分であり得、従って、現在利用可能であるよりも便利な治療投薬計画を提供する。
【０１３７】
本明細書に記載される安定なまたは提示された製剤または溶液のいずれかにおける少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体は、当該分野において周知であるように、ＳＣまたはＩＭ注射；経皮、肺、経粘膜、移植、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプ、または当業者によって認識される他の手段を含む様々な送達方法を介して、本発明に従って患者に投与できる。
【０１３８】
治療用適用
ＣＤ２２は、Ｓｉｇｌｅｃシアル酸結合タンパク質受容体スーパーファミリーのメンバーであり、Ｂ細胞の発生に対して、ならびに、リンパ腫ならびに急性および慢性リンパ球性白血病を含む様々なＢ細胞癌に対して、高度に特異的な様式で発現される（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７，２５５−２６６，２００７）。抗ＣＤ２２抗体は、Ｂ細胞を発現するＣＤ２２の増殖をネガティブに調節することが見出されており、様々な疾患の治療において関係している。ＣＤ２２抗体は、Ｂ細胞依存性自己免疫疾患の患者、およびＣＤ２２が発現する血液学的癌の患者における臨床試験において試験されてきた。特定の抗体は、細胞複製を遮断するネガティブ成長シグナルを刺激するプロセスである、ＣＤ２２のチロシンリン酸化を誘導することが示されてきた。加えて、ＣＤ２２抗体は、細胞内分泌経路およびリソソームの中で内在化されることが示されてきた。従って、迅速に内在化される強力なネガティブな成長調節特性を有するＣＤ２２に対する高親和性ヒト抗体は、血液学的癌、ＳＬＥ、関節リウマチ、多発性硬化症、ならびに他のＢ細胞依存性自己免疫疾患などのＣＤ２２関連疾患において使用されることが望ましい。抗ＣＤ２２  Ａｂｓ、またはキメラ若しくはヒト化、若しくはフラグメントを含むこれらのｍＡｂｓの任意の誘導体は、非ホジキンリンパ腫、他のリンパ腫、およびリンパ増殖性疾患、急性および慢性リンパ球性白血病、ならびにＣＤ２２が関与している他の疾患の治療において使用できる。これらの抗体は、単一の薬剤として、または他の治療剤と組み合わせてのいずれかで使用できる。これらはまた、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、および／またはＩＦＮαなどの他の腫瘍免疫調節剤と組み合わせて使用できる。加えて、抗ＣＤ２２抗体は、抗ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３、ＩＬ−２、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体、ＣＤ５２、ＣＤ２０、ＲＳＶタンパク質、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体などの他のモノクローナル抗体；ならびにリツキサン、ハーセプチン、ミロターグ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）、キャンパス、ゼバリン、ベックサー（Ｂｅｘｘａｒ）、エルビタックス、アバスチン、およびベクチビックスを含む商業的に認可された抗体と組み合わせて使用できる。
【０１３９】
これらの抗体は、単一の剤として、または他の治療剤と組み合わせて使用できる。これらはまた、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、および／またはＩＦＮαなどの他の腫瘍免疫調節剤と組み合わせても使用できる。加えて、抗ＣＤ２２抗体は、抗ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３、ＩＬ−２、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体、ＣＤ５２、ＣＤ２０、ＲＳＶタンパク質、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体などの他のモノクローナル抗体；ならびにリツキサン、ハーセプチン、ミロターグ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）、キャンパス、ゼバリン、ベックサー（Ｂｅｘｘａｒ）、エルビタックス、アバスチン、およびベクチビックスを含む商業的に認可された抗体と組み合わせて使用できる。
【０１４０】
従って、本発明はまた、本発明の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を使用して、当該分野において公知であるように、または本明細書に記載されるように、細胞、組織、器官、動物、または患者における、少なくとも１のＣＤ２２関連疾患を調節または治療するための方法も提供する。
【０１４１】
ＣＤ２２は、Ｂ細胞癌および異形成に対して高いレベルで発現されることが知られており、有害な細胞のアポトーシスの誘導を包含する自己分泌または傍分泌メカニズムを調節してもよい。高いレベルでＣＤ２２を発現するＢ細胞癌は、これに限定されるものではないが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣ）、濾胞性リンパ腫、急性および慢性Ｂ細胞リンパ球性白血病（ＡＬＬ／ＣＬＬ）、粘膜関連リンパ管リンパ腫（ＭＡＬＴ）、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、および他のリンパ形質細胞増殖（ＷＨＯ腫瘍分類、２００１）を含む。従って、抗ＣＤ２２抗体は、単独で、または他の化学療法剤およびＢ細胞を標的とする生物製剤と組み合わせて、これらの疾患を治療するために使用できる。加えて、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）などの、Ｂ細胞産生自己抗体形成が疾患に関与している、他のＢ細胞依存性自己免疫疾患が、抗ＣＤ２２抗体を用いて治療できる。腫瘍細胞の生存および疾患の進行を調節するためにＣＤ２２に向けられる抗体の能力は、インビトロとインビボの両方での腫瘍増殖に対する抗ＣＤ２２  ｍＡｂの阻害作用によって確認された。ＣＤ２２を発現するリンパ腫細胞への特定の抗ＣＤ２２抗体の結合は、インビボでの増殖を阻害できることが報告された（Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＬＬ２．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３７：２９３，１９９３）。マウス坑ＣＤ２２  ＭＡｂ（元はＥＰＢ−２と命名され、今はＬＬ２と呼ばれている）は、ヒト化することができ、ＮＨＬまたは慢性リンパ管白血病の画像化および治療のために使用できる。免疫組織化学研究は、ＬＬ２が、びまん性および結節性、低分化性リンパ球性リンパ腫、ならびに組織球性大細胞リンパ腫を含む実質的にすべてのＮＨＬの症例と反応性であることを明らかにした。ＬＬ２は高度に制限された特異性を有し、正常リンパ節の胚中心および白脾髄のＢ細胞集団のみと反応性であり、骨髄における巨核球、ミエロイド細胞、または赤血球とは反応性でない。さらに、ＬＬ２は、末梢血正常Ｂ細胞を含むいかなる末梢血細胞とも反応性ではなく、または任意の他の正常組織とも反応性ではない。ＬＬ２はまた、その標的抗原に関連する他の独特な特徴を有し、他の抗Ｂ細胞リンパ腫抗体からこれを区別する。インビトロ研究は、Ｒａｊｉリンパ腫細胞系統の表面上でそのＣＤ２２標的抗原に結合後にＬＬ２が内在化されること、および抗原が細胞表面上で迅速に再発現されることを明確に実証した。エプラツズマブとして知られるマウスモノクローナル抗体のヒト化は、ヒトリンパ腫細胞系統に対して免疫調節効果および増殖調節効果を有する。（Ｃａｒｎａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４４：１３３１，２００７）ａｌ．２００１）。
【０１４２】
抗ＣＤ２２モノクローナル抗体
ＣＤ２２はまた、予後因子および悪性度のマーカーであり得る。ＣＤ２２は、実質的にすべてのリンパ腫において、ならびに大部分のＡＬＬおよびＣＬＬ  Ｂ細胞白血病で高いレベルで発現されている。ＣＤ２２発現は、ＣＤ２０標的治療用抗体リツキサンの治療後の患者の腫瘍において増加しており、ＣＤ２２標的抗体が、リツキサン耐性および再発患者を治療するために使用できることを示唆している（Ｍｉｃａｌｌｅｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１８：４０５３，２０１１）。
【０１４３】
ＣＤ２２は、無力症／悪液質および骨吸収などの癌関連の病的状態における原因因子であると仮定されている。腫瘍誘導性の悪液質（Ｃａｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０００）および骨吸収（高カルシウム血症に続いて起こる）（Ｓａｎｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．１９９９）は、ＣＤ２２ノックアウトマウスにおいて減少していることが見出された。脳腫瘍に対して二次的である癌に付随するうつ病および脳水腫もまた、高レベルのＣＤ２２と関連付けられてきた（Ｍｕｓｓｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１）。本発明の抗ＣＤ２２抗体はまた、ヒトメラノーマを阻害することができ、ヒト前立腺癌腫は、ヌードマウスにおいて悪液質を誘導した。
【０１４４】
本発明は、細胞、組織、器官、動物、または患者における少なくとも１の悪性疾患を調節または治療するための方法を含み、この疾患は、これに限定されるものではないが、以下の少なくとも１を含む：非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、およびヘアリー細胞白血病。このような方法は、選択的に、このようなＣＤ２２抗体の投与の前、これらの投与と同時に、またはこれらの投与の後で、放射線治療、抗血管新生薬、化学療法剤、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤などと組み合わせて使用できる。
【０１４５】
本発明はまた、細胞、組織、器官、動物、または患者における少なくとも１のＣＤ２２媒介免疫関連疾患を調節または治療するための方法も提供し、この疾患は、これに限定されるものではないが、以下の少なくとも１を含む：関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性発症若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  ｓｐｏｎｄｉｌｉｔｉｓ）、胃潰瘍、血清反応陰性関節症、変形性関節症（ａｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、炎症性大腸炎、潰瘍性大腸炎（ｕｌｖｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｉｓ）、抗リン脂質症候群、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、特発性肺線維症、全身性血管炎／ヴェーゲナー肉芽腫症、サルコイドーシス、精巣炎／精管切除戻し手術、アレルギー性／アトピー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性結膜炎、過敏性肺炎、移植、臓器移植拒絶、移植片対宿主病、全身性炎症反応症候群、敗血症症候群、グラム陽性菌敗血症、グラム陰性菌敗血症、培養陰性敗血症、真菌敗血症、好中球減少性発熱、尿性敗血症、髄膜炎菌血症、外傷／出血、熱傷、電離放射線曝露、急性膵炎、成人呼吸窮迫症候群、関節リウマチ、アルコール性肝炎、慢性炎症性病変、サルコイドーシス、クローン病変、鎌状赤血球貧血、糖尿病、ネフローゼ、アトピー性疾患、過敏反応（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、アレルギー性鼻炎、花粉症、通年性鼻炎、結膜炎、子宮内膜症、喘息、じんましん、全身性アナフィラキシー（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｎａｐｈａｌａｘｉｓ）、皮膚炎、悪性貧血、溶血性疾患、血小板減少症、任意の臓器または組織の移植片拒絶、腎臓移植拒絶、心臓移植拒絶、肝臓移植拒絶、膵臓移植拒絶、肺移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、皮膚同種移植片拒絶、軟骨移植拒絶、骨移植片拒絶（ｈｏｎｅ  ｇｒａｆｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ）、小腸移植拒絶、胎児胸腺移植拒絶、副甲状腺移植拒絶、任意の臓器または組織の異種移植片拒絶、同種移植片拒絶、抗受容体過敏性反応、グレーブス病、レイノー病（Ｒａｙｎｏｕｄ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、Ｂ型インスリン抵抗性糖尿病、喘息、重症筋無力症、抗体媒介性細胞傷害性、ＩＩＩ型過敏性反応、全身性エリテマトーデス、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器肥大症、内分泌障害、モノクローナル免疫グロブリン異常症、および皮膚変化症候群）、多発性神経障害、臓器肥大症、内分泌障害、モノクローナル免疫グロブリン異常症、皮膚変化症候群、リン脂質症候群、天疱瘡、強皮症、混合性結合組織病、特発性アジソン病、真性糖尿病、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、白斑、血管炎、ＭＩ後心臓切開術症候群、ＩＶ型過敏性、接触性皮膚炎、過敏性肺炎、同種移植片拒絶、細胞内生物による肉芽腫、薬物過敏性、代謝性／特発性、ウィルソン病、ヘモクロマトーシス（ｈｅｍａｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、α−１−抗トリプシン欠乏症、糖尿病性網膜症、橋本甲状腺炎、骨粗しょう症、視床下部−下垂体−副腎軸評価、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺炎、脳脊髄炎、悪液質、嚢胞性線維症、新生児慢性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ���、家族性血球貪食リンパ組織球増多症、皮膚病変、乾癬、脱毛症、ネフローゼ症候群、腎炎、糸球体腎炎、急性腎不全、血液透析、尿毒症、毒性、子癇前症、ｏｋｔ３治療、抗ｃｄ３治療、サイトカイン治療、化学療法、放射線治療（例えば、これに限定されるものではないが、無力症、貧血、悪液質などを含む）、慢性サリチル酸塩中毒、睡眠時無呼吸、肥満、心不全、副鼻腔炎、炎症性大腸炎など。例えば、ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，１２ｔｈ−１７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎｓ，Ｍｅｒｃｋ  &  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．（１９７２，１９７７，１９８２，１９８７，１９９２，１９９９），Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．（１９９８，２０００）を参照のこと、各々がこの参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４６】
治療的処置
本発明の任意の方法は、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を有する有効量の組成物または薬学的組成物を、このような調節、処理、または治療の必要がある細胞、組織、器官、動物、または患者に投与する工程を有する、ＣＤ２２媒介障害を治療するための方法を有することができる。このような方法は、選択的に、さらに、このような免疫疾患を治療するための同時投与または組み合わせ治療を有し、ここで、上記少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体、その特殊化された部分、若しくはバリアントを投与する工程は、上記に記載されたような少なくとも１の薬剤の前、それと同時に、および／またはその後に、投与する工程をさらに有する。
【０１４７】
典型的には、病理学的状態の治療は、組成物中に含有される特異的活性に依存して、単回または複数回投与あたり、全体で、平均で、用量あたり、患者キログラムあたり、少なくとも約０．０１〜５００ミリグラムの範囲の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体、および好ましくは、少なくとも約０．１〜１００ミリグラム抗体／キログラム患者である、１つの有効量または投薬量の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物を投与することによってもたらされる。あるいは、有効な血清濃度は、単回または複数回投与あたり、０．１〜５０００μｇ／ｍｌ血清濃度を有することができる。適切な投薬量は医療従事者に公知であり、当然、特定の疾患状態、投与される組成物の特異的活性、および、いくつかの例においては、治療を受ける特定の患者に依存して、所望の治療量が達成され、これが、反復投与、すなわち、モニターされ、または測定された特定の用量の個々の投与の反復のために提供することが必要であり得、その場合、所望の日々の用量または効果が達成されるまで、個々の投与が反復される。
【０１４８】
好ましい用量は、選択的に、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９および／若しくは１００〜５００ｍｇ／ｋｇ／投与、若しくはその任意の範囲、値、若しくは分数を含むことができ、または、単回または複数回投与あたり、０．１、０．５、０．９、１．０、１．１、１．２、１．５、１．９、２．０、２．５、２．９、３．０、３．５、３．９、４．０、４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、２０、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４．０、１４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、１２、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４、１４．５、１５、１５．５、１５．９、１．６、１６．５、１６．９、１７、１７．５、１７．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９．５、１９．９、２０、２０．５、２０．９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、および／若しくは５０００μｇ／ｍｌ血清濃度、若しくはその任意の範囲、値、若しくは分数を達成するためである。
【０１４９】
あるいは、投与される用量は、特定の薬剤の薬力学的特徴、ならびにその投与の様式および経路；レシピエントの年齢、健康、および体重；徴候の性質および程度、同時治療の種類、治療の頻度、ならびに所望される効果などの既知の因子に依存して変動する可能性がある。普通は、活性成分の投薬量は、体重キログラムあたり、約０．１〜１００ミリグラムであり得る。投与あたりまたは持続放出型で、キログラムあたり、通常、０．１〜５０、および好ましくは、０．１〜１０ミリグラムが、所望の結果を得るために有効である。
【０１５０】
非限定的な例として、ヒトまたは動物の治療は、少なくとも１の本発明の抗体の１回または定期的な投薬量として、１日あたり、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇを、１日め、２日め、３日め、４日め、５日め、６日め、７日め、８日め、９日め、１０日め、１１日め、１２日め、１３日め、１４日め、１５日め、１６日め、１７日め、１８日め、１９日め、２０日め、２１日め、２２日め、２３日め、２４日め、２５日め、２６日め、２７日め、２８日め、２９日め、３０日め、３１日め、３２日め、３３日め、３４日め、３５日め、３６日め、３７日め、３８日め、３９日め、または４０日めの少なくとも１に、または、代替的にまたはさらに、１週め、２週め、３週め、４週め、５週め、６週め、７週め、８週め、９週め、１０週め、１１週め、１２週め、１３週め、１４週め、１５週め、１６週め、１７週め、１８週め、１９週め、２０週め、２１週め、２２週め、２３週め、２４週め、２５週め、２６週め、２７週め、２８週め、２９週め、３０週め、３１週め、３２週め、３３週め、３４週め、３５週め、３６週め、３７週め、３８週め、３９週め、４０週め、４１週め、４２週め、４３週め、４４週め、４５週め、４６週め、４７週め、４８週め、４９週め、５０週め、５１週め、または５２週めの少なくとも１に、または、代替的にまたはさらに、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、または２０年の少なくとも１に、またはこれらの任意の組み合わせに、単回、注入、または反復用量を使用して、提供されることができる。
【０１５１】
内部投与のために適切な剤形（組成物）は、一般的には、単位または容器あたり、約０．１ミリグラム〜約５００ミリグラムの活性成分を含有する。これらの薬学的組成物中で、活性成分は、通常、組成物の総重量に基づいて約０．５〜９９．９９９重量％の量で存在する。
【０１５２】
非経口製剤および投与
非経口投与のために、抗体は、薬学的に受容可能な非経口ビヒクルと一緒に、または別々に提供される、溶液、懸濁液、エマルジョン、または凍結乾燥粉末として製剤化できる。このようなビヒクルの例は、水、生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、および１〜１０％ヒト血清アルブミンである。リポソームおよび固定油などの非水系ビヒクルもまた使用できる。ビヒクルまたは凍結乾燥粉末は、等張性を維持する添加剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）および化学安定性を維持する添加剤（例えば、緩衝剤および保存剤）を含有することができる。この製剤は公知のまたは適切な技術によって滅菌される。
【０１５３】
適切な薬学的担体は、この分野における標準的な参考テキストである、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌの最新の版に記載されている。
【０１５４】
非経口投与のための製剤は、一般的な賦形剤として、滅菌水または生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物起源の油、水素化ナフタレンなどを含有することができる。注射のための水性または油性懸濁液は、公知の方法に従って、適切な乳化剤または湿潤剤および懸濁剤を使用することによって調製できる。注射のための薬剤は、水溶液、または滅菌注射溶液、または溶媒中の懸濁液などの、非毒性、非経口投与可能な希釈剤であり得る。使用可能なビヒクルまたは溶媒として、水、リンガー液、等張性生理食塩水などが許容される：通常の溶媒、または懸濁溶媒として、滅菌不揮発性オイルが使用できる。これらの目的のために、いずれかの種類の不揮発性オイルおよび脂肪酸が使用でき、これには、天然または合成または半合成の脂肪油または脂肪酸；天然または合成または半合成のモノ−またはジ−またはトリ−グリセリドが含まれる。非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）投与は当該分野において公知であり、これに限定されるものではないが、従来的な注射手段、米国特許第５，８５１，１９８号明細書に記載されているようなガス圧無針注射デバイス、および米国特許第５，８３９，４４６号明細書に記載されているようなレーザー穿孔デバイスを含み、これらはこの参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１５５】
代替的な送達
本発明は、さらに、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内（ｉｎｔｒａｒｔｉｃｕｌａｒ）、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内（ｉｎｔｒａｃｅｌｅｂｅｌｌａｒ）、脳室内、結腸内、頸部内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻内、または経皮の手段による少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の投与に関連する。少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物は、非経口（皮下、筋肉内または静脈内）または任意の他の投与のため、特に、液体溶液または懸濁液の型での使用のため；膣または直腸投与における使用のため、特に、半固体、これに限定されるものではないが、例えば、クリームおよび坐剤の型で；頬側または舌下投与のため、例えば、これに限定されるものではないが、錠剤またはカプセルの型で；または鼻内、例えば、これに限定されるものではないが、散剤、鼻ドロップ、またはエアロゾルまたは特定の薬剤の型で；または、経皮的に、例えば、これに限定されるものではないが、ゲル、軟膏、ローション、懸濁液、または、皮膚構造を修飾するために、若しくは経皮パッチ中の薬物濃度を増加させるためのいずれかのために、ジメチルスルホキシドなどの化学エンハンサーを有し（Ｊｕｎｇｉｎｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎ「Ｄｒｕｇ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ」；Ｈｓｉｅｈ，Ｄ、Ｓ．，Ｅｄｓ．，ｐｐ．５９−９０，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９４、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、または、皮膚上へのタンパク質およびペプチドを含有する製剤の適用を可能にする酸化剤を有する（国際公開第９８／５３８４７号パンフレット）パッチ送達デバイス系、または一過性の輸送経路を作製するためのエレクトロポレーションなど、または、電荷を有する薬剤の皮膚を通しての移動性を高めるためのイオントフォレシスなどの電場の適用、またはソノフォレシスなどの超音波の適用（米国特許第４，３０９，９８９号明細書および同第４，７６７，４０２号明細書）のために調製できる（上記の刊行物および特許は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１５６】
肺／鼻投与
肺投与のために、好ましくは、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物は、肺の下気道または副鼻腔に到達するために有効な粒子サイズで送達される。本発明に従って、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体は、吸入による治療剤の投与のために、当該分野において公知である様々な吸入または鼻デバイスのいずれかによって送達できる。患者の副鼻腔または肺胞におけるエアロゾル化製剤を沈着させることが可能なこれらのデバイスは、定量吸入器、噴霧器、乾燥粉末発生器、スプレーヤーなどを含む。抗体の肺または鼻投与を指向するために適切な他のデバイスもまた、当該分野において公知である。すべてのこのようなデバイスは、エアロゾル中での抗体の分配のために、投与のために適切な製剤の使用ができる。このようなエアロゾルは、溶液（水系と非水系の両方）または固体粒子のいずれかから構成されることができる。Ｖｅｎｔｏｌｉｎ．ＲＴＭ．定量用量吸入器のような定量用量吸入器は、典型的には、推進ガスを使用し、呼気の間に作動を必要とする（例えば、国際公開第９４／１６９７０号パンフレット、同第９８／３５８８８号パンフレットを参照のこと）。Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ．ＴＭ．（Ａｓｔｒａ）、Ｒｏｔａｈａｌｅｒ．ＲＴＭ．（Ｇｌａｘｏ）、Ｄｉｓｋｕｓ．ＲＴＭ．（Ｇｌａｘｏ）、Ｓｐｉｒｏｓ．ＴＭ．ｉｎｈａｌｅｒ（Ｄｕｒａ）、Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって販売されているデバイス、およびＳｐｉｎｈａｌｅｒ．ＲＴＭ．粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ）のような粉末吸入器は、混合粉末の呼気作動を使用する（米国特許第４，６６８，２１８号明細書  Ａｓｔｒａ、欧州特許第２３７５０７号明細書  Ａｓｔｒａ、国際公開第９７／２５０８６号パンフレット  Ｇｌａｘｏ、同第９４／０８５５２号パンフレット  Ｄｕｒａ、米国特許第５，４５８，１３５号明細書  Ｉｎｈａｌｅ、国際公開第９４／０６４９８号パンフレット  Ｆｉｓｏｎｓ、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＡＥＲｘ．ＴＭ．Ａｒａｄｉｇｍ、ｔｈｅ  Ｕｌｔｒａｖｅｎｔ．ＲＴＭ．噴霧器（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）、およびＡｃｏｒｎ  ＩＩ．ＲＴＭ．噴霧器（Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（米国特許第５，４０４，８７１号明細書  Ａｒａｄｉｇｍ、国際公開第９７／２２３７６号パンフレット）のような噴霧器は、溶液からエアロゾルを産生し、一方、定量用量吸入器、乾燥粉末吸入器などは小粒子溶液を生成し、上記の引用文献はこの参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。市販の吸入デバイスのこれらの特定の例は、本発明の実施のために適切な特定のデバイスの代表であることを意図し、本発明の範囲を限定することとしては意図されない。好ましくは、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を有する組成物は、乾燥粉末吸入器またはスプレーヤーによって送達される。本発明の少なくとも１の抗体を投与するための吸入デバイスのいくつかの望ましい特徴が存在する。例えば、吸入デバイスによる送達は、有利には、信頼性があり、再現可能で、かつ正確である。吸入デバイスは、良好な呼吸性のために、選択的に、小さな乾燥粒子、例えば、約１０μｍ未満、好ましくは、約１〜５μｍを送達できる。
【０１５７】
スプレーとしてのＣＤ２２抗体組成物の投与
ＣＤ２２抗体組成物タンパク質を含むスプレーは、圧力下でノズルを通して少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の懸濁液または溶液を押し進めることによって産生できる。ノズルのサイズと構成、適用される圧力、および液体供給速度は、所望のアウトプットおよび粒子サイズを達成するために選択できる。エレクトロスプレーは、例えば、キャピラリーまたはノズルフィードと接続した電場によって産生できる。有利には、スプレーヤーによって送達された少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満の粒子サイズ、好ましくは、約１μｍ〜約５μｍの範囲の、最も好ましくは、約２μｍ〜約３μｍの粒径を有する。
【０１５８】
スプレーヤーとの使用のために適切な少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物タンパク質の製剤は、典型的には、ｍｌ溶液あたり約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇの少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物タンパク質、すなわち、ｍｇ／ｇｍ、またはこれらの中の任意の範囲または値、例えば、これに限定されるものではないが、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｍｌまたはｍｇ／ｇｍの濃度の水性溶液の抗体組成物タンパク質を含む。この製剤は、賦形剤、緩衝剤、等張剤、保存剤、界面活性剤、および好ましくは、亜鉛などの剤を含むことができる。この製剤はまた、賦形剤または抗体組成物タンパク質の安定化のための剤、例えば、緩衝剤、還元剤、バルクタンパク質、または炭水化物も含むことができる。抗体組成物タンパク質を製剤する際に有用なバルクタンパク質は、アルブミン、プロタミンなどを含む。抗体組成物タンパク質を製剤する際に有用な典型的な炭水化物は、スクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースなどを含む。抗体組成物タンパク質製剤はまた、エアロゾルを形成する際の溶液の噴霧化によって引き起こされる抗体組成物タンパク質の表面誘導性凝集を減少または妨害できる、界面活性剤も含むことができる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、ならびにポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの様々な従来的な界面活性剤が利用できる。量は、一般的には、製剤の０．００１から１４重量％の間の範囲である。本発明の目的のためにとりわけ好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０などである。ＣＤ２２抗体、または特殊化された部分、またはバリアントなどのタンパク質の製剤のための当該分野において公知であるさらなる剤もまた、製剤中に含められることができる。
【０１５９】
噴霧器によるＣＤ２２抗体組成物の投与
抗体組成物タンパク質は、ジェット噴霧器または超音波噴霧器などの噴霧器によって投与できる。典型的には、ジェット噴霧器において、圧縮空気の供給源が、オリフィスを通して高速空気ジェットを作るために使用される。ガスがノズルを越えて広がるとき、低圧領域が作られ、これは、液体リザーバーに接続されたキャピラリーチューブを通して、抗体組成物タンパク質の溶液を引き出す。キャピラリーチューブからの液体の流れは、それがチューブを出たときに、不安定なフィラメントおよび液滴にせん断され、エアロゾルを作る。一定の範囲の構成、流速、およびバッフル型が、所定のジェット噴霧器からの所望の性能特性を達成するために利用できる。超音波噴霧器において、高周波電気エネルギーが、典型的には、圧電変換器を利用して、振動エネルギー、力学的エネルギーを作るために使用される。このエネルギーは、直接的に、またはカップリング液体を通してのいずれかで、抗体組成物タンパク質の製剤に移され、抗体組成物タンパク質を含むエアロゾルを作製する。有利には、噴霧器によって送達される抗体組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満の粒径、好ましくは、約１μｍ〜約５μｍの範囲、最も好ましくは、約２μｍ〜約３μｍの範囲の粒径を有する。
【０１６０】
ジェットまたは超音波のいずれかの、噴霧器を用いる使用のために適切な少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の製剤は、典型的には、溶液ｍｌあたり、約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇの濃度の少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体タンパク質を含む。この製剤は、賦形剤、緩衝剤、等張剤、保存剤、界面活性剤、および好ましくは、亜鉛などの剤を含むことができる。この製剤はまた、緩衝剤、還元剤、バルクタンパク質、または炭水化物などの、賦形剤、または少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物タンパク質の安定化のための剤を含むこともできる。少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物タンパク質を製剤する際に有用なバルクタンパク質は、アルブミン、プロタミンなどを含む。少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を製剤する際に有用な典型的な炭水化物は、スクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースなどを含む。少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体製剤はまた、エアロゾルを形成する際に溶液の噴霧化によって引き起こされる少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の表面誘導性凝集を減少または防止できる、界面活性剤も含むことができる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、ならびにポリオキシエチレンソルビタン（ｓｏｒｂｉｔａｌ）脂肪酸エステルなどの様々な従来的な界面活性剤が利用できる。量は、一般的に、製剤の０．００１から４重量％の間の範囲である。本発明の目的のためのとりわけ好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノ−オレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０などである。抗体タンパク質などのタンパク質の製剤のための当該分野において公知のさらなる剤もまた、製剤において含められることができる。
【０１６１】
定量用量吸入器によるＣＤ２２抗体組成物の投与
定量用量吸入器（ＭＤＩ）において、推進剤、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体、および任意の賦形剤または他の添加剤は、液化圧縮ガスを含む混合物としてキャニスターの中に含有される。定量バルブの作動は、好ましくは、約１０μｍ未満、好ましくは、約１μｍ〜約５μｍ、最も好ましくは、約２μｍ〜約３μｍのサイズ範囲の粒子を含有するエアロゾルとしてダイ（ｄｉｅ）混合物を放出する。所望のエアロゾル粒径は、ジェットミリング、スプレー乾燥、臨界点凝縮などを含む、当業者に公知である様々な方法によって製造された抗体組成物タンパク質の製剤を利用することによって得ることができる。好ましい定量用量吸入器に、３ＭまたはＧｌａｘｏによって製造され、ハイドロフルオロカーボン推進剤を利用するものが含まれる。
【０１６２】
定量用量吸入デバイスを用いる使用のための少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体の製剤は、一般的には、例えば、界面活性剤の補助を伴って推進剤中に懸濁された、非水系媒体中の懸濁物として、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を含有する微細に分割された粉末を含む。推進剤は、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール、および１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１３４ａ（ハイドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦＡ−２２７（ハイドロフルオロアルカン−２２７）などを含む、クロロフルオロカーボン、ハイドロクロロフルオロカーボン、ハイドロフルオロカーボン、またはハイドロカーボンなどの、この目的のために利用される任意の従来的な材料であり得る。好ましくは、推進剤はハイドロフルオロカーボンである。界面活性剤は、推進剤中の懸濁液としての少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を安定化するように選択でき、化学分解に対して活性薬剤を保護するなどである。適切な界面活性剤には、ソルビタントリオレエート、大豆レシチン、オレイン酸などが含まれる。ある例において、溶液エアロゾルは、エタノールなどの溶媒を使用することが好ましい。タンパク質の製剤のために当該分野において公知のさらなる剤もまた、製剤において含めることができる。
【０１６３】
当業者は、本発明の方法が、本明細書に記載されていないデバイスを介して少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体組成物の肺投与によって達成できることを認識している。
【０１６４】
経口製剤および投与
経口投与のための製剤は、腸壁の浸透性を人工的に増加させるためのアジュバント（例えば、レゾルシノール、ならびにポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルなどの非イオン性界面活性剤）の同時投与、ならびに酵素的分解を阻害するための酵素阻害剤（例えば、膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）およびトラジロール）の同時投与に依存する。経口投与のための固形剤形の活性成分化合物は、スクロース、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、デンプン類、寒天、アルギン酸（ａｒｇｉｎａｔｅｓ）、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアガム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成または半合成ポリマー、およびグリセリドを含む少なくとも１の添加剤と混合できる。これらの剤形はまた、他の型の（単数または複数の）添加剤、例えば、不活性希釈剤、ステアリン酸マグネシウムなどの滑剤、パラベン、ソルビン酸、アスコルビン酸、αトコフェロールなどの保存剤、システインなどの抗酸化剤、崩壊剤、結合剤、濃厚剤、緩衝剤、甘味料、香料、芳香剤なども含有する。
【０１６５】
錠剤および丸薬はさらに、腸溶コーティング調製物に加工されることができる。経口投与のための液体調製物は、医学用途のために許容可能な、エマルジョン、シロップ、エリキシル、懸濁液、および溶液調製物を含む。これらの調製物は、上記分野において通常使用される不活性希釈剤、例えば、水を含有することができる。リポソームもまた、インスリンおよびヘパリンのための薬物送達系として記載されてきた（米国特許第４，２３９，７５４号明細書）。より最近では、混合アミノ酸の人工ポリマー（プロテイノイド）のミクロスフェアが医薬を送達するために使用されてきた（米国特許第４，９２５，６７３号明細書）。さらに、米国特許第５，８７９，６８１号明細書および同第５，５，８７１，７５３号明細書に記載されている担体化合物が、当該分野において公知である生物学的に活性な薬剤を経口的に送達するために使用されている。
【０１６６】
粘膜性剤および投与
粘膜表面を通しての吸収のために、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体を投与する組成物および方法は、複数のミクロン以下粒子、粘膜付着高分子、生体活性ペプチド、およびエマルジョン粒子の粘膜付着を達成することにより粘膜表面を通して吸収を促進する水性連続相を有するエマルジョンを含む（米国特許第５，５１４，６７０号明細書）。本発明のエマルジョンの適用のために適切な粘膜表面は、角膜、結膜、頬側、舌下、鼻、膣、肺、胃、腸、および直腸の投与の経路を含むことができる。膣または直腸投与のための製剤、例えば、坐剤は、賦形剤として、例えば、ポリアルキレングリコール、ワセリン、ココアバターなどを含有することができる。鼻内投与のための製剤は固体であり得、賦形剤として、例えば、ラクトースを含有することができ、または、水系若しくは油系溶液の鼻ドロップであり得る。頬側投与のために、賦形剤は、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、前もってゼラチン化されたデンプン（ｐｒｅｇｅｌｉｎａｔｉｎｅｄ  ｓｔａｒｃｈ）などを含む（米国特許第５，８４９，６９５号明細書）。
【０１６７】
経皮製剤および投与
経皮投与のために、少なくとも１の抗ＣＤ２２抗体は、リポソームまたはポリマーナノ粒子、微粒子、マイクロカプセル、またはミクロスフェア（他に言及されない限り、集合的に微粒子のことをいう）などの送達デバイス中でカプセル化される。多数の適切なデバイスが知られており、これには、合成ポリマー、例えば、ポリ乳酸などのポリヒドロキシ酸、ポリグリコール酸およびそのコポリマー、ポリオルトエスエル、ポリ無水物、およびポリホスファジン、ならびに天然ポリマー、例えば、コラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミン、および他のタンパク質、アルギン酸および他のポリサッカリド、ならびにこれらの組み合わせ（米国特許第５，８１４，５９９号明細書）から作製される微粒子が含まれる。
【０１６８】
長期的な投与および製剤
本発明の化合物を、長期間の間、例えば、単回投与から１週間から１年間までの期間の間、被験体に到達することが時折所望され得る。様々な遅延放出、デポー、または移植剤形が利用できる。例えば、剤形は、体液中で低い程度の溶解性を有する化合物の薬学的に受容可能な非毒性塩を含有することができ、例えば、（ａ）多塩基酸との酸付加塩、例えば、リン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンモノ−またジ−スルホン酸、ポリガラクツロン酸など；（ｂ）多価金属カチオンとの塩、例えば、亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなど、または、例えば、Ν，Ν’−ジベンジル−エチレンジアミンまたはエチレンジアミンから形成される有機カチオンとの塩；または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組み合わせ、例えば、タンニン酸亜鉛である。加えて、本発明の化合物、または、好ましくは、比較的不溶性の塩、例えば、ちょうど記載されたものは、ゲル、例えば、モノステアリン酸アルミニウムゲル中で、例えば、注射のために適切なゴマ油とともに製剤できる。特に好ましい塩は、亜鉛塩、タンニン酸亜鉛塩、パモン酸塩などである。注射用の別の型の遅延放出デポー製剤は、例えば米国特許第３，７７３，９１９号明細書、に記載されるような、ポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマーなどのゆっくりと分解する非毒性非抗原性ポリマー中にカプセル化されるように分散された化合物または塩を含有する。上記に記載されたものなどの化合物、または好ましくは、比較的不溶性の塩はまた、特に、動物中での使用のために、コレステロールマトリックスシラスティックペレット中で製剤できる。さらなる遅延放出、デポー、または移植物製剤、例えば、ガスまたは液体リポソームは、文献中で公知である（米国特許第５，７７０，２２２号明細書および「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．，１９７８）。
【０１６９】
略語
ＢＳＡ−ウシ血清アルブミン
ＥＩＡ−エンザイムイムノアッセイ
ＦＢＳ−ウシ胎仔血清
Ｈ２Ｏ２−過酸化水素
ＨＲＰ−西洋ワサビペルオキシダーゼ
Ｉｇ−免疫グロブリン
ＣＤ２２−ＩＣＤ２２
ＩＰ−腹腔内
ＩＶ−静脈内
Ｍａｂ−モノクローナル抗体
ＯＤ−光学密度
ＯＰＤ−ｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩
ＰＥＧ−ポリエチレングリコール
ＰＳＡ−ペニシリン、ストレプトマイシン、アムホテリシン
ＲＴ−室温
ＳＱ−皮下
ｖ／ｖ−体積あたり体積
ｗ／ｖ−体積あたり重量
【実施例１】
【０１７０】
実施例１．親和性および定量ＥＬＩＳＡ
Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏ  ＭａｘｉＳｏｒｐ  ９６ウェルプレートは、コーティング溶液（ＰＢＳ中炭酸水素ナトリウム）中、１００μｌの２μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．０２μｇ／ｍｌまたは０．００２μｇ／ｍｌ組換えＣＤ２２細胞外ドメイン（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．カタログ番号１００−０１）でコートされた。プレートはプレートシーラーで覆われ、４℃で一晩インキュベートされた。プレートは空にされ、残りの液体はペーパータオルにたたいて落とされた。２００μｌ洗浄溶液（ＰＢＳ中０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０）が加えられ、室温で５分間、２００ＲＰＭにて振盪された。プレートは空にされ、残りの液体はペーパータオルにたたいて落とされた。２００μｌのブロッキング溶液（ＰＢＳ中２％Ｃａｒｎａｔｉｏｎミルク）が加えられ、室温で１時間、２００ＲＰＭにて振盪された。プレートは空にされ、残りの液体はペーパータオルにたたいて落とされた。ＥＬＩＳＡのための抗体ＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５を含有する１００μｌの希釈サンプルが使用された。サンプルは室温で１時間の間、２００ＲＰＭにて振盪され；プレートは空にされ、残りの液体はペーパータオルにたたいて落とされた。２００μｌ洗浄溶液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）が加えられ、室温で５分間、２００ＲＰＭにて振盪された；プレートは空にされ、残りの液体はペーパータオルにたたいて落とされた。このプロセスは３回反復された。ブロック溶液（ＰＢＳ中２％Ｃａｒｎａｔｉｏｎミルク）中で希釈されたＨＲＰで結合体化された抗ヒトＩｇＧの１：２５００希釈の１００μｌがすべてのサンプルに加えられた。ブロック溶液（ＰＢＳ中２％Ｃａｒｎａｔｉｏｎミルク）中で希釈されたＨＲＰで結合体化された抗ウサギＩｇＧの１：２５００希釈の１００μｌが対照抗体に加えられた。内容物は室温で１時間の間、２００ＲＰＭにて振盪され；プレートは空にされ、残りの液体はペーパータオルにたたいて落とされた。２００μｌ洗浄溶液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）が加えられ、室温で５分間、２００ＲＰＭにて振盪された；プレートは空にされ、残りの液体はペーパータオルにたたいて落とされた。このプロセスは３回反復された。１００μｌ  ＴＭＢ気質溶液が加えられ、室温でインキュベートされた。反応は１Ｎ  ＨＣｌで停止され、プレートは４５０ｎｍにて読み取られ、相対的な結合親和性を決定した（図１７）。
【実施例２】
【０１７１】
定量ＥＬＩＳＡ
実施例２．ＣＨＯ−Ｓ細胞トランスフェクション
トランスフェクションの１週間前に、ＣＨＯ−Ｓ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）が、血清を補充したダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中の単層に移された。トランスフェクションの１日前に、細胞は、９６ウェル形式で、トランスフェクションサンプルあたり、血清を補充したＤ−ＭＥＭの１００ｕＬ中０．４×１０５細胞でプレーティングされる。各トランスフェクションサンプルについて、ＤＮＡ−リポフェクタミン複合体を調製する。２５ｕＬ  Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ血清減少培地中で０．２５ｕｇ  ＤＮＡを希釈し、穏やかに混合し、そして室温で５分間インキュベートする。０．５ｕＬ  リポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を２５ｕＬ  Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ血清減少培地中で希釈する。穏やかに混合し、そして室温で５分間インキュベートする。希釈したＤＮＡを希釈したリポフェクタミンと合わせる。穏やかに混合し、そして室温で２０分間インキュベートする。細胞および培地を含有している各ウェルに、５０ｕＬ  ＤＮＡ−リポフェクタミン複合体を加える。プレートを揺することによって穏やかに混合する。５％ＣＯ２インキュベーター中で、３７Ｃで一晩、細胞をインキュベートする。各ウェルの培地を吸引する。各ウェルに、血清を補充したＤ−ＭＥＭ  １００ｕＬを加える。ＥＬＩＳＡのために上清を収集し、β−ガラクトシダーゼアッセイのために細胞溶解物を収集する。
【実施例３】
【０１７２】
実施例３．細胞培養上清からの抗体精製
以下の緩衝液が標準様式で調製された。結合緩衝剤１０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４／ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．０。溶出緩衝液：１２．５ｍＭクエン酸、ｐＨ２．７（Ｎａ３−クエン酸を使用）。噴霧緩衝液：０．５Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４／ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ８．０。２０％エタノールおよび水。すべての緩衝液は使用前にろ過された（０．４５μｍ）。上清は、ＨｉＴｒａｐ（商標）プロテインＧ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨＰ（１ｍＬ体積）カラムを装着したＡＫＴＡ（商標）ＦＰＬＣ（商標）システムを使用して精製された。サンプルローディングのために、ローディングチューブがエタノール（２０ｍＬ、５ｍＬ／分）、次いで、結合緩衝液（２０ｍＬ、５ｍＬ／分）ですすがれた。プロテインＧカラムはシステムに装着され、結合緩衝液（１０ｍＬ、１ｍＬ／分）ですすがれた。サンプルは１ｍＬ／分若しくはそれ以下でローディングされる（一晩ローディングのため）。ローディング後、カラムは取り外され、ローディングチューブは水（２０ｍＬ、５ｍＬ／分）で、次いで、２０％エタノール（２０ｍＬ、５ｍＬ／分）ですすがれる。抗体精製のために、ＡＫＴＡシステムは結合緩衝液で洗浄される（ポンプＡおよびすべてのチュービング）。収集チューブは各チューブに５０μｌ中和緩衝液を加えることによるフラクション収集のために準備されている。プロテインＧカラムはこのシステムに接続された。流速は１ｍＬ／分に設定され、ベースラインが安定するまで実行した。カラムバルブはポジション３に切り換えられた。カラムは、ベースラインに達するまで、結合緩衝液（最小限１０ｍＬ）で洗浄された。ポンプは停止され、水で洗浄され、次いで溶出緩衝液で洗浄された。流速は１ｍｌ／分に設定され、ベースラインが安定するまで実行した。カラムバルブはポジション３に切り換えられ、フラクションコレクターが開始された（０．５ｍＬフラクション）。フラクションはベースラインに達するまで収集され、その時点で、システムは停止された。溶出プロフィールがクリップボードおよびＷＯＲＤ文書にコピーされた。ポンプは水で洗浄され；次いで結合緩衝液で洗浄された。プロテインＧカラムは結合緩衝液（１０ｍＬ）で洗浄された。ポンプは２０％エタノールで洗浄された。カラムは２０％エタノール（２０ｍＬ）で洗浄され、低温室に保存された。
【０１７３】
抗体は、滅菌１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２％アジ化ナトリウム、１０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ中で再構成された。抗原は、０．５ｍｇ、１ｍｇ、０．５ｍｇ、および０．５ｍｇの４つの別々のバイアル中のＣＤ２２（２１，０００ｋＤａ）であり、滅菌１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２％アジ化ナトリウム中で、３７５ｕｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、５００ｕｇ／ｍＬ、および５００ｕｇ／ｍＬに希釈された。標識、Ｃｙ５−結合体化ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、Ｃｙ５、１．５μｇ／ｍＬは、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）から購入された。標識は、滅菌１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２％アジ化ナトリウム中で再構成され、０．５００ｍｇ／ｍＬに希釈された。実行緩衝液は、滅菌１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２％アジ化ナトリウムであった。サンプル緩衝液は、滅菌１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２％アジ化ナトリウム、１ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）であった。ＰＭＭＡビーズ（Ｐａｒｔ＃４４０１９７／Ｌｏｔ３２５７）は、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｉｎｃ．（Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）によって提供され、以下の様式で捕捉試薬でコートされた。ビーズは２００ｍｇ部分の乾燥アリコートとされ、１ｍＬコーティング溶液（実行緩衝液中３０ｕｇ／ｍＬ  ＢＡＰ００１）中で２時間揺すられた。次いで、ビーズはブロッキング溶液（実行緩衝液中１０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ）中で１時間揺すられ、４℃で保存された。
【０１７４】
平衡分析のために、ＣＤ２２でコートされたＰＭＭＡビーズは、平衡している受容体（抗ＣＤ２２抗体）のサンプルとリガンド（抗原；ＣＤ２２）から遊離の受容体の部分を捕捉するために使用された。各データ点について、リガンドコートされたビーズの新鮮なカラムがフローセルに導入された。平衡サンプルはカラムを過ぎて急速に引き出されて、固定化されたリガンドとの接触時間を最小化した。このことは、固定化されたリガンドとの接触時間が、サンプル平衡を破壊しないことを確実にした。従って、固定化されたリガンドは、溶液中の遊離の受容体を捕捉するためのプローブとして作用した。捕捉された抗体は、蛍光標識された抗ヒト二次抗体を用いて検出された。結合しない試薬は洗浄で除かれ、シグナルを放出し、これは平衡サンプル中での遊離の受容体に比例している。蛍光は電圧に変換され、これは、平衡サンプル中の遊離の受容体（抗体）の量に直接比例している。高濃度受容体と低濃度受容体の両方で実験が実行され、次いで、最適な結果のために、ｎ−曲線分析において一緒に利用された。反応速度論的分析の直接方法のために、同じ固定化リガンド（ＣＤ２２コートされたＰＭＭＡ）が、平衡実験と同様に、反応速度論実験のための捕捉試薬として使用された。サンプル中の遊離の受容体（抗体）の量は、前平衡で測定され、これは、サンプルが平衡に向かって動くときに、経時的に遊離の受容体（抗体）の減少をモニターするデータ点を生じる。図３３は、抗ＩＬ６抗体ＢＡＰ００１−クローン１〜ＢＡＰ００１−クローン１０について、ＢＡ００３（ＣＮＴＯ１３６）と比較した、上位１０ヒットのＳａｐｉｄｙｎｅ分析からのデータの表を示す。
【実施例４】
【０１７５】
実施例４．本発明の抗ＣＤ２２抗体の組換えＣＤ２２細胞外ドメインへの親和性定数の表面プラズモン共鳴決定
ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅは、結合曲線および反応速度論パラメーターを決定するために使用された。抗ヒトＦｃ（１．８ｍｇ／ｍｌ）がＮａＯＡｃ緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ４．８）中で５０ｕｇ／ｍｌの濃度に希釈され、
ＢＩＡｃｏｒｅシステムマニュアルに記載されているように、製造業者のアミンカップリング化学を使用して、ＣＭ−５センサーチップのカルボキシメチル化デキストランマトリックスにカップリングされた。１００００ＲＵに向けられた表面準備ウィザードを使用して、センサー表面上のカルボキシル基がＮＨＳ／ＥＤＣで最初に活性化され、続いて、抗ヒトＦｃの付加を行った。残りの活性化基は、１Ｍエタノールアミンの注入によってブロックされた。各々のフローセルは個別にカップリングされた。これらの条件を利用して、抗ヒトＦｃの７５５４−９５７１  ＲＵを含有する４つのフローセル表面が調製された。予備実験において、３回の注入（１５ｕｌ、３０ｕｌ／分）１００ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４／０．０５％ＣＨＡＰＳが結合した免疫グロブリンを効率的に除去し、固定化された抗ヒトＦｃの結合能力を保存することが決定された。
【０１７６】
実験は、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００上で、２５℃および３０ｕｌ／分の流速で実施された。抗体候補は、ＨＢＳ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｗｉｔｈ  ０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３．４ｍＭ  ＥＤＴＡ、および０．０５％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）中に５ｕｇ／ｍｌで溶解された。分析物、ＣＤ２２は、０．２５、０．１２５、０．０６２、０．０３１、および０．０１５ｕｇ／ｍｌでＨＢＳに溶解された。３＊３０ｕｌの５ｕｇ／ｍｌの抗体ＢＡ００１が、そのそれぞれのフローセル上に流され、続いて、３０ｕｌ／分で２４０ｕｌの各ＣＤ２２濃度の注入（結合フェーズ）、中断しない１２００秒間の緩衝液流（解離フェーズ）を行った。チップの表面は、各１５ｕｌの１００ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４／０．０５％ＣＨＡＰＳの３回の逐次的注入によって再生された。ＨＢＳの注入は、分析のためのバルク屈折率の減算のための参照（ブランクセンソグラム）として役立つ。ＢＩＡｅｖｅｌｕａｔｉｏｎ  ４．１の１：１モデルを使用して、両方のローカルフィットおよびグローバルフィットが解離（ｋｄ、［ｓ−１］）と結合（ｋａ、［Ｍ−１ｓ−１］）の両方について行われ、解離定数（ＫＤ、［Ｍ］）が計算された（ｋｄ／ｋａ）。
【０１７７】
分析はＢＩＡｅｖｅｌｕａｔｉｏｎバージョン３．０を使用して行われた。反応速度論定数は、実験曲線を、相互作用メカニズムのモデルから誘導された速度式にフィットさせることによってセンソグラムデータから誘導された。ローカルＲＵｍａｘフィット、ｋａ、ｋｄ、およびＫＤとともに１：１結合モデルを使用するグローバル分析が決定された。
【０１７８】
以下の式が利用された：
【数１】
2015516984.tif 000002
【０１７９】
親和性成熟前のヒト化抗ＣＤ２２モノクローナル抗体のためのＢｉａｃｏｒｅデータは、図１８に示される（ＢＡ００６Ｇ）。ＢＡ６００Ｇ親和性成熟および引き続くヒト化の後に、選択されたクローンが、図１８に示されるように、Ｂｉａｃｏｒｅ分析によって試験された。
【実施例５】
【０１８０】
実施例５．抗ＣＤ２２選択された抗ＣＤ２２抗体は、リンパ腫細胞系統において発現された細胞表面ＣＤ２２に結合し、内在化を誘導する
ＣＤ２２タンパク質は、Ｄａｕｉｄ、ＲＡＭＯＳ、およびＲＡＪＩ  Ｂ細胞系統（Ｂ  ｃｅｌｌ  ｉｎｅｓ）を含む、発生しているＢ細胞および大部分のヒト非ホジキンリンパ腫系統において発現されていることが示されてきた（Ｋｎｏｗｌｅｓ  Ｄ．Ｍ．，Ｃｈａｄｂｕｒｎ  Ａ．，Ｉｎｇｈｉｒａｍｉ  Ｇ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ  Ｋｎｏｗｌｅｓ  Ｄ．Ｍ．ｅｄｓ．．Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  Ｈｅｍａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，７３−９５，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  &  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ  １９９２）。健常個体および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を有する患者からのＢ細胞系統または一次Ｂ細胞への抗ＣＤ２２抗体の結合は、ＣＤ２２／抗体複合体の迅速な内在化を生じる。内在化は、一次Ｂ細胞およびＮＨＬ患者由来Ｂ細胞よりも細胞系統の早い時点においてより速いようであるが、しかし、到達した最大内在化は、処理の数時間後、すべてのＢ細胞集団について比較できるものであり、より高い抗体濃度において飽和に達するようである。
【０１８１】
本発明において選択される抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、本発明のクローンＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５は、蛍光活性化セルソーティング分析によって決定されるように、Ｄａｕｄｉ、ＲＡＭＯＳ、およびＲＡＪＩ  Ｂリンパ腫細胞系統において、細胞表面発現されたＣＤ２２を結合するそれらの能力について試験された。細胞培養は、分析の前に、１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ  １６４０培地中で対数増殖期で維持された。抗ＣＤ２２発現レベルは、フィコエリトリン（ＰＥ）に結合体化された市販の抗ＣＤ２２抗体（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ，ｃａｔａｌｏｇ  ｎｕｍｂｅｒ  ３４０７０８）を使用して、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳ分析によって決定された。ベースライン（ｂａｓｌｉｎｅ）表面発現について、１×１０ｅ６  Ｄａｕｄｉ細胞（例えば）は、２％ＦＢＳおよび１２ｕｇ／ｕｌ抗ＣＤ２２−ＰＥ結合体を含有するＰＢＳとともに氷上（ｏｎ  ｉｎｃｅ）で４５分間インキュベートし、次いで、氷冷ＰＢＳ−ＦＢＳ溶液で洗浄された。次いで、細胞は、標準的な手順を使用してＦＡＣＳによって分析され、標的細胞集団における表面結合を定量した。
【０１８２】
並行して、Ｄａｕｄｉ細胞、１×１０ｅ６は、ＰＢＳ−ＦＢＳ溶液中の同様の濃度の選択された本発明の抗ＣＤ２２  ＭａｂクローンＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５で、３７Ｃで２０時間処理されて、結合および内在化を可能にした。この期間後、細胞は洗浄され、次いで、氷上のＰＢＳ−ＦＢＳ溶液中の１２ｕｇ／ｍｌ抗ＣＤ２２−ＰＥ結合体に曝露された。これらの条件（ｔｈｅｓ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）下で、残りの表面ＣＤ２２は、上記のようなＦＡＣＳ分析を使用して検出および定量される。本発明の抗ＣＤ２２抗体の典型的な結果は図１９Ａに示される。２０時間の曝露後、より低い検出のレベルを示す、蛍光集団の左へのシフトとして測定される表面ＣＤ２２発現の減少が存在する。ＣＤ２２表面発現の相対量の減少は、２つの集団の割当量として表現できる。３７Ｃで２０時間の曝露の間にＣＤ２２受容体を内在化する能力についての、抗ＣＤ２２抗体のパネルの評価の結果が図１９Ｂに示され、これは、前の曝露後の抗ＣＤ２２−ＰＥ結合体のパーセンテージシフトによって決定される。ＣＤ２２発現の変化のスペクトルは、ＣＤ２２ポジティブ集団の左へのシフトによって可視化されたものとして検出される。内在化の程度の定量は図２０に示される。個々の抗ＣＤ２２クローン、本発明の選択された抗ＣＤ２２  ＭａｂクローンＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５は、上記のように分析され、ＣＤ２２内在化の想定的な程度は、抗体曝露後のベースラインを超えた集団の中のパーセントシフトとして表現された。
【実施例６】
【０１８３】
実施例６．リンパ腫細胞系統における定量的共焦点免疫蛍光顕微鏡法による本発明の抗ＣＤ２２抗体の迅速な内在化の測定。
【０１８４】
Ｄａｕｄｉ細胞は、１０％ＦＢＡを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地中での３７Ｃでの対数増殖の条件下で維持され、次いで、分析のために収穫された。選択された本発明の抗ＣＤ２２  ＭａｂクローンＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５は、製造業者の推奨する手順を使用して、Ｚｅｎｏｎ標識複合体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使用して、ＦＩＴＣに直接結合体化された。約１×１０ｅ７  Ｄａｕｄｉ細胞は、５ｕｇ／ｍｌ標識抗ＣＤ２２抗体を含有するＰＢＳ中に再懸濁され、氷上で４５分間インキュベートされた。次いで、細胞は、０ＣのＰＢＳ−ＦＢＳ溶液で２回洗浄された。次いで、細胞は、３７Ｃにて、様々な期間の間、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地中でインキュベートされ、収穫され、そして０ＣのＰＢＳで洗浄された。次いで、細胞は、室温で５分間、４％パラホルムアルデヒド中で手短に固定され、次いで、０．０５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含有するＰＢＳ中で洗浄した。細胞ペレットは遠心分離により収集され、最小量のＰＢＳニート中に再懸濁され、次いで顕微鏡用ガラスプレートに適用された。分析の前に、スライドは、核染色ＤＡＰＩを含有するマウント溶液で処理され、次いで、カバースリップが適用された。共焦点画像は、ＡＣＡＳ  Ｕｌｔｉｍａ共焦点顕微鏡（Ｍｅｒｉｄｉａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｏｋｅｍｏｓ、ＭＩ）を使用して記録され、１００×油浸対物レンズを使用して、焦点面の中心を通して１μｍ切片を表示した。
【０１８５】
抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、選択された本発明のクローンＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５は、細胞内エンドサイトーシス区画に対する細胞表面上の免疫蛍光シグナルによって判断されるように、細胞内区画への迅速な内在化されるそれらの能力について分析された。本発明の抗体は、マウスモノクローナル抗体ＬＬ２のヒト化バージョンであるＢＡ００６Ｈと比較された。この例、図２１Ａにおいて、本発明の抗ＣＤ２２抗体は、相対平均蛍光（ＲＭＦ）によって判断されるように、ＢＡ００６Ｈと比較して約２０倍Ｄａｕｄｉ細胞の表面上に発現されたＣＤ２２タンパク質に結合し、そして９０分以内に、実質的に完全に細胞内に内在化され、核周辺ゴルジ装置および付随するリソソームの中に優先的に局在する。本発明の個々の抗ＣＤ２２抗体について、この様式で得られたＲＭＦ表面結合値のチャートが図２１Ｂに示される。
【実施例７】
【０１８６】
実施例７．抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、選択された本発明のクローンＶＭ１０００、ＶＭ１００１、ＶＭ１００２、ＶＭ１００３、ＶＭ１００４、ＶＭ１００５、ＶＭ１００６、ＶＭ１００７、ＶＭ１００８、ＶＭ１００９、ＶＭ１０１０、ＶＭ１０１１、ＶＭ１０１２、ＶＭ１０１３、ＶＭ１０１４、およびＶＭ１０１５で処理後のＣＤ２２ポジティブリンパ腫細胞系統のＣＤ２２チロシンリン酸化の刺激。抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２を発現する細胞に結合し、受容体の細胞質領域のチロシンリン酸化を刺激することが以前に示されてきた（Ｃａｒｎａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １，２００３  ９；３９８２ｓ）。抗ＣＤ２２抗体のこの生物活性は、リンパ腫細胞の増殖の減少および細胞死の誘導を生じるＢＣＲシグナル伝達複合体のネガティブ調節と関連付けられてきた。従って、選択された抗ＣＤ２２抗体は、受容体を発現する細胞系統への曝露の際にＣＤ２２チロシンリン酸化を刺激するそれらの能力について分析された。Ｄａｕｄｉ細胞は、収穫および抗ＣＤ２２抗体を用いる処理の前に、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ  １６４０中で培養することによって対数増殖に維持された。次いで、処理された細胞は界面活性剤緩衝液で溶解され、ＣＤ２２は抗ＣＤ２２  ＢＡ００６Ｈを使用して免疫沈殿され、次いで、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析に供された。次いで、得られたブロットは、抗ホスホチロシン抗体（４Ｇ１０）またはウサギポリクローナル抗ＣＤ２２抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，Ｃａｔａｌｏｇ  ｎｕｍｂｅｒ  ＳＣ−７９３２でプローブされた。図２２ＡおよびＢは、これらの分析の結果を示す。チロシンリン酸化ＣＤ２２タンパク質対総ＣＤ２２の比率は、各抗体処理の下に示される。対照として、Ｄａｕｄｉ細胞が、抗ＩｇＭ抗体で処理され、ＣＤ２２細胞質ドメインをトランスリン酸化する潜在能力を飽和させるための手段として、Ｂ細胞受容体複合体を関与させかつ刺激する。
【実施例８】
【０１８７】
実施例８．交差反応性。表面タンパク質ＣＤ２２は、Ｂ細胞系統から誘導されたリンパ腫および白血病細胞上でＢ細胞を発生させる表面上で発現されることが知られている。本発明の抗ＣＤ２２抗体は、マウスおよび齧歯類Ｂ細胞上で発現されるＣＤ２２と交差反応する能力について評価された。結果は、齧歯類型のタンパク質に対する結合は認められないことを示す。本発明の抗ＣＤ２２抗体はまた、霊長類種、カニクイザル  マカクザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に対する交差反応性についても評価された。カニクイザル  マカクザル（供給源Ｐｒｉｍａｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）から単離された末梢血リンパ球（ＰＢＭＣ）（ＣＤ２２陽性Ｂ細胞で富化されている）が分析された。本発明の抗ＣＤ２２抗体（本明細書中のデータにおいて「ＶＭ１０１」と称する抗ＣＤ２２抗体）は蛍光分子フィコエリトリン（ＰＥ）で直接標識された。陽性染色を試験するために、各試験条件について約２．５×１０ｅ６  ＰＢＭＣがＰＢＳ中で洗浄され、次いで、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有するＰＢＳ中に再懸濁された。次いで、細胞は、抗体なし、抗ＣＤ２２  ＰＥ標識抗体（２０ｕｇ／ｍｌ）、またはカニクイザルＣＤ２０と交差反応性を示した抗ヒトＣＤ２０−ＦＩＴＣ結合体化抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，ｃａｔａｌｏｇ  ｎｕｍｂｅｒ  １３０−０９１−１０８、ストック試薬の１：１０希釈）のいずれかに曝露され、次いで、０Ｃで６０分間インキュベートされた。各試験条件の細胞はＰＢＳ中で洗浄され、次いで、ＰＢＳ中４％ホルムアルデヒドを用いて、室温で１０分間固定された。次いで、細胞は、２％ＦＢＳを含有する０．５ｍｌ  ＰＢＳに再懸濁され、次いで、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析によってＣＤ２２およびＣＤ２０表面染色について分析された（図１）。抗体で処理されなかった細胞は、ＦＩＴＣまたはＰＥのいずれのチャンネルでも蛍光強度の見かけのシフトを有さなかったのに対して（図１Ａ）、ＶＭ１０１−ＰＥで染色された細胞はＣＤ２２ポジティブ集団を含んだ（図１Ｂ）。同様に、抗ＣＤ２０−ＦＩＴで染色された細胞は、ＣＤ２０ポジティブ集団を含んだ（図１Ｃ）。ＶＭ１０１−ＰＥ抗体とＣＤ２０−ＦＩＴＣ抗体の両方で染色された細胞は、ＰＢＭＣ中の両方の抗原の発現パターンに基づいて予測されるように、二重標識集団を有した（図１Ｄ）。ＶＭ１０１は、特異的に、カニクイザルＣＤ２２タンパク質を認識する。
【実施例９】
【０１８８】
実施例９．抗ＣＤ２２抗体の相対的発現。本発明の抗ＣＤ２２抗体は、哺乳動物細胞中で発現され、臨床的研究のための材料を産生するための製造プロセスにおける高いレベルの産生と一貫している特性をこれらが有しているか否かを決定した。本発明の抗ＣＤ２２抗体（抗体１、抗体２、および抗体３）の発現は、対照抗体（「対照」）、ヒト化ＣＤ２２抗体と比較された。各ＣＤ２２抗体を発現する得られた細胞は、哺乳動物細胞培養条件において等価な期間の間培養され、馴化培地が、モノクローナル抗体の存在および収率について試験された。結果は、これらの条件の間に高レベルで発現される市販の抗体（トラスツズマブ、ハーセプチンとしても知られる）と比較され、これは比較対照として役立った。表１は、これらの条件下での発現および製造性のためのこの試験の結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３】
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【図２４】
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【国際調査報告】
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