【手続補正書】
【提出日】平成22年1月14日(2010.1.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法であって、
（ａ）前記タンパク質コードを有するキャリアを含む宿主細胞を提供する工程と、
（ｂ）前記宿主細胞内に前記タンパク質を発現する工程と、
（ｃ）前記発現タンパク質の不純溶液を得る工程と、
（ｄ）前記溶液から前記タンパク質を精製する工程であって、
（ｉ）前記溶液をＨｉｓＴｒａｐカラムに通し、
（ｉｉ）前記ＨｉｓＴｒａｐカラムを洗浄し、
（ｉｉｉ）前記一部が精製されたタンパク質を前記ＨｉｓＴｒａｐカラムから溶離し、一部が精製されたタンパク質溶液を生成し、
（ｉｖ）前記一部が精製されたタンパク質溶液をＭｏｎｏＳＰカラムに通し、
（ｖ）前記ＭｏｎｏＳＰカラムを洗浄し、
（ｖｉ）精製されたタンパク質を変性形態にて前記ＭｏｎｏＳＰカラムから溶離する、上記（ｉ）から（ｖｉ）の手順で前記溶液から前記タンパク質を精製する工程と、
（ｅ）疏水性化合物を用いて溶離した変性タンパク質を新たに折り畳む工程であって、
（ｉ）前記溶離した変性タンパク質と疏水性化合物溶液とを混合してタンパク質−疏水性化合物溶液を生成し、
（ｉｉ）前記タンパク質−疏水性化合物溶液を脱塩してタンパク質−疏水性化合物脱塩溶液を得て、
（ｉｉｉ）超ろ過工程で、前記疏水性化合物を前記タンパク質−疏水性化合物脱塩溶液中から除去する、上記（ｉ）から（ｉｉｉ）の手順で疏水性化合物を用いて溶離した変性タンパク質を新たに折り畳む工程と、
を含むことを特徴とするＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法
【請求項２】
前記ＨｉｓＴｒａｐカラム洗浄液は、８Ｍ尿素、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭ  ＤＴＴ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０の緩衝溶液および１０ｍＭイミダゾールを含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項３】
前記一部が精製されたタンパク質を前記ＨｉｓＴｒａｐカラムから溶離する溶離緩衝溶液は、少なくとも５０ｍＭイミダゾールおよび８Ｍ尿素、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭ  ＤＴＴ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０の緩衝溶液を含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項４】
前記一部が精製されたタンパク質を前記ＨｉｓＴｒａｐカラムから溶離する溶離緩衝溶液は、５０〜１００ｍＭのイミダゾールを含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項５】
前記一部が精製されたタンパク質を前記ＨｉｓＴｒａｐカラムから溶離する溶離緩衝溶液は、１００〜２５０ｍＭのイミダゾールを含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項６】
前記ＭｏｎｏＳＰカラム洗浄液は、４Ｍ尿素、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６.５の緩衝溶液を含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項７】
前記精製されたタンパク質をＭｏｎｏＳＰカラムから溶離する溶離緩衝溶液は、１．５Ｍ  ＮａＣｌおよび２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．０を含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項８】
前記疏水性化合物は、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ｔｗｅｅｎ−２０または多ベンゼン環化合物を含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項９】
前記超ろ過工程は、タンパク質濃縮カラムまたはタンパク質超ろ膜により行われることを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項１０】
前記精製されたタンパク質は、ＩＭＤＭ培養基またはＤＭＥＭ培養基中で保存されることを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法で製造されたＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質。
【請求項１２】
造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬であって、も必要な使用者に有効量を投与し、前記使用者の骨髄内の造血幹細胞の絶対数を増幅することを許容し、これにより造血幹細胞が前記使用者の末梢血液へ動員されることを促すことを特徴とする、請求項１１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質を含む造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項１３】
前記必要な使用者は、造血幹細胞のドナーであることを特徴とする請求項１２に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項１４】
前記必要な使用者は、自己造血幹細胞移植を行う患者であることを特徴とする請求項１２に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項１５】
前記必要な使用者は、顆粒球コロニー刺激因子に反応しない患者であることを特徴とする請求項１２に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項１６】
前記使用者は、先天性の造血幹細胞欠乏が引き起こす疾病を罹患していることを特徴とする請求項１５に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項１７】
前記使用者は、先天性の再生不良貧血を罹患している請求項１６に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項１８】
前記使用者は、血液疾病、充実性腫瘍または免疫疾病を罹患していることを特徴とする請求項１２に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項１９】
前記血液疾病は、リンパ腫、白血病、ホジキン病および骨髄増幅性疾病を含む一群から選ばれることを特徴とする請求項１８に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項２０】
造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬であって、必要な使用者に有効量を投与し、前記使用者の骨髄内の造血幹細胞の絶対数を増幅することを許容することを特徴とする、請求項１１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質を含む造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項２１】
前記必要な使用者は、造血幹細胞のドナーであることを特徴とする請求項２０に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項２２】
前記必要な使用者は、自己造血幹細胞移植を行う患者であることを特徴とする請求項２０に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項２３】
前記必要な使用者は、顆粒球コロニー刺激因子に反応しない患者であることを特徴とする請求項２０に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項２４】
前記使用者は、先天性の造血幹細胞欠乏が引き起こす疾病を罹患していることを特徴とする請求項２３に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項２５】
前記使用者は、先天性の再生不良貧血を罹患していることを特徴とする請求項２４に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項２６】
前記使用者は、血液疾病、充実性腫瘍または免疫疾病を罹患していることを特徴とする請求項２０に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項２７】
前記血液疾病は、リンパ腫、白血病、ホジキン病および骨髄増幅性疾病のいずれか一つであることを特徴とする請求項２６に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項２８】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質のＮ−末端のヒスチジンタグを除去する行程をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項２９】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質のＣ−末端のヒスチジンタグを除去する行程をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項３０】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質のＮ−末端及びＣ−末端のヒスチジンタグを除去する行程をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載のＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質の製造方法。
【請求項３１】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質のＮ−末端のヒスチジンタグを除去する行程をさらに含むことを特徴とする請求項１２に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項３２】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質のＣ−末端のヒスチジンタグを除去する行程をさらに含むことを特徴とする請求項１２に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項３３】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質のＮ−末端及びＣ−末端のヒスチジンタグを除去する行程をさらに含むことを特徴とする請求項１２に記載の造血幹細胞の骨髄から末梢血液への動員を促す薬。
【請求項３４】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質のＮ−末端のヒスチジンタグを除去する行程をさらに含むことを特徴とする請求項２０に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項３５】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質のＣ−末端のヒスチジンタグを除去する行程をさらに含むことを特徴とする請求項２０に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。
【請求項３６】
ＴＡＴ−ＨＯＸＢ４Ｈタンパク質のＮ−末端及びＣ−末端のヒスチジンタグを除去する行程をさらに含むことを特徴とする請求項２０に記載の造血幹細胞移植患者、放射線治療患者または化学療法患者の回復時間を改善するための薬。