(57)【要約】  同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合する工学的に作製された多価および多重特異的二重可変ドメイン結合タンパク質、ならびに製造方法、および疾患の予防、診断および／または治療における使用が提供される。
2015509704.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それぞれ独立してＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含む、第一および第二のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
ＶＤ１は、第一の可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、但し、ＣＨ１ではなく、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、
ｎは、０または１であり、
第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ１ドメインが、第一の機能的標的結合部位を形成し、第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ２ドメインが、第二の機能的標的結合部位を形成し、
（ａ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＥＧＦＲを結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲと配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲと配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲと配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲと配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を独立して含み、
（ｂ）結合タンパク質がＲＯＮとＲＯＮを結合させることができ、ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲと配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲと配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を独立して含み、
（ｃ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒを結合させることができ、ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲと配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲと配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を独立して含み、
（ｄ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができ、Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲと配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲと配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を独立して含み、
（ｅ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＨＥＲ２を結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲと配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲと配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲと配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲと配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を含み、
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４からの３つのＣＤＲと配列番号４５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４６からの３つのＣＤＲと配列番号４７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｆ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒを結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲと配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲと配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲと配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲと配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を含み、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲと配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲと配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｇ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲと配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲと配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲと配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲと配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を含み、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲと配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲと配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｈ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＲＯＮを結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲと配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲと配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲと配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲと配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を含み、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲと配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲと配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｉ）結合タンパク質がＨＥＲ２とＲＯＮを結合させることができ、ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４からの３つのＣＤＲと配列番号４５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４６からの３つのＣＤＲと配列番号４７からの３つのＣＤＲ
を含み、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲと配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲと配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｊ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３とＲＯＮを結合させることができ、Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲと配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲと配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を含み、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲと配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲと配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｋ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲとＲＯＮを結合させることができ、ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲと配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲと配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を含み、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲと配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲと配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｌ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができ、ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲと配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲと配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を含み、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲと配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲと配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｍ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２を結合させることができ、ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲと配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲと配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を含み、
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４からの３つのＣＤＲと配列番号４５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４６からの３つのＣＤＲと配列番号４７からの３つのＣＤＲ
を含み、
または
（ｎ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３とＨＥＲ２を結合させることができ、Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲと配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲと配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を含み、
ＨＥＲ２に対して機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４からの３つのＣＤＲと配列番号４５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４６からの３つのＣＤＲと配列番号４７からの３つのＣＤＲ
を含む結合タンパク質。
【請求項２】
それぞれ独立してＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含む、２つの第一のポリペプチド鎖および２つの第二のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
ＶＤ１は、第一の可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、但し、ＣＨ１ではなく、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、
ｎは、０または１であり、
全部で４つの機能的標的結合部位について、第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ１ドメインが、第一の機能的標的結合部位を形成し、第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ２ドメインが、第二の機能的標的結合部位を形成する、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３】
第一のポリペプチド鎖が、第一のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は、第一の重鎖可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の重鎖可変ドメインであり、
Ｃは、重鎖定常ドメインであり、
Ｘ１は、第一のリンカーであり、但し、ＣＨ１ではなく、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、
ｎは、０または１であり、
第二のポリペプチド鎖が、第二のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は、第一の軽鎖可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の軽鎖可変ドメインであり、
Ｃは、軽鎖定常ドメインであり、
Ｘ１は、第二のリンカーであり、但し、ＣＨ１ではなく、
Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず、
ｎは、０または１であり、
第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ１ドメインが、第一の機能的標的結合部位を形成し、第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ２ドメインが、第二の機能的標的結合部位を形成する、請求項１または２に記載の結合タンパク質。
【請求項４】
（ａ）Ｘ１が、配列番号１−２７のいずれか１つであり、
（ｂ）Ｘ１が、ＣＬではなく、
（ｃ）（Ｘ１）ｎが（Ｘ１）０であり、および／もしくは（Ｘ２）ｎが（Ｘ２）０であり、
（ｄ）結合タンパク質が、２つの第一のポリペプチド鎖および２つの第二のポリペプチド鎖を含み、
（ｅ）Ｆｃ領域が、可変配列Ｆｃ領域であり、
（ｆ）Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥもしくはＩｇＤ由来のＦｃ領域であり、ならびに／または
（ｇ）結合タンパク質が、結晶化された結合タンパク質である、
請求項１から３のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
免疫接着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｎｓｉｏｎ）分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤である薬剤をさらに含み、場合によって、前記造影剤が放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンであり、場合によって、前記放射性標識が３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍであり、または場合によって、前記治療剤または細胞毒性剤が代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である、請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含む結合タンパク質コンジュゲート。
【請求項６】
請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質をコードする単離された核酸。
【請求項７】
場合によって、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ、ｐＥＦ６、ｐＨｙｂＥ、ＴＯＰＯまたはｐＢＪである、請求項６に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項８】
場合によって、原核細胞、エシュリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、真核細胞、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞、Ｓｆ９細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、昆虫細胞、ＣＨＯ細胞またはＣＯＳ細胞である、請求項７に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９】
結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、請求項８に記載の宿主細胞を培地中において培養することを含む、結合タンパク質を生産する方法。
【請求項１０】
請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１１】
前記追加の治療剤が、場合によって、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断剤；接着分子遮断剤；抗サイトカイン抗体またはその機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストである、少なくとも１つの追加の治療剤をさらに含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
治療が達成されるように、結合タンパク質を対象に投与することによって、疾患または障害について対象を治療するための医薬の製造における、請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質の使用であって、場合によって、障害が、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型および多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患／アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病Ｎ���Ｓ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病および統合失調症）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛（疼痛の異なる形態）、ならびに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および腎臓癌および造血性悪性病変（白血病およびリンパ腫）などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）および動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウ��ルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、Ａ型肝炎、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ．ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・デジェリーヌ−トーマス・シャイ−ドレーガーおよびマシャド−ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群���小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ｃｉｓ）、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ  ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈
閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌および直腸癌および造血性悪性病変（白血病およびリンパ腫）、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性または創傷治癒である使用。
【請求項１３】
医薬が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮投与のために製剤化される、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
イムノアッセイは、試験試料を少なくとも１つの結合タンパク質および少なくとも１つの検出可能な標識と接触させることを含み、
少なくとも１つの結合タンパク質は、請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含む、
イムノアッセイによって試験試料中の少なくとも１つの標的またはその断片の存在、量または濃度を決定するためのインビトロ法。
【請求項１５】
（ｉ）第一の複合体を形成するために、試験試料を、標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの結合タンパク質と接触させること、
（ｉｉ）第二の複合体を形成するために、複合体を、結合タンパク質に結合しまたは結合タンパク質が結合しない標的もしくはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの検出可能な標識を接触させることおよび
（ｉｉｉ）第二の複合体における検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、試験試料中の標的またはその断片の存在、量または濃度を検出すること
をさらに含み、標的またはその断片の存在、量または濃度が、検出可能な標識によって発生したシグナルと直接相関する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
（ｉ）第一の複合体を形成するために、試験試料を、標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの結合タンパク質と接触させること、
（ｉｉ）第二の複合体を形成するために、前記複合体を、結合タンパク質への結合について標的またはその断片と競合する少なくとも１つの検出可能な標識と接触させることおよび
（ｉｉｉ）第二の複合体における検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、試験試料中の標的またはその断片の存在、量または濃度を検出すること
をさらに含み、標的またはその断片の存在、量または濃度が、検出可能な標識によって発生したシグナルに間接的に相関する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記試験試料が患者由来であり、前記方法が、
（ａ）患者の治療的／予防的処置の効力を診断、予後診断または評価することをさらに含み、
前記方法が、患者の治療的／予防的処置の効力を評価することをさらに含む場合、効力を改善するために必要な、患者の治療的／予防的処置を改変することを場合によってさらに含み、
（ｂ）自動化システムまたは半自動化システムにおける使用に適合され、および／または
（ｃ）試料中の１を超える標的の存在、量または濃度を決定する、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
（ａ）標的またはその断片について試験試料をアッセイするための説明書および
（ｂ）請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパクを含む少なくとも１つの結合タンパク質
を含む、標的またはその断片の存在、量または濃度についてインビトロ試験試料をアッセイするためのキット。
【請求項１９】
（ａ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＥＧＦＲを結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０と配列番号３１；
配列番号３２と配列番号３３；
配列番号３４と配列番号３５；もしくは
配列番号３６と配列番号３７
を独立して含み、
（ｂ）結合タンパク質がＲＯＮとＲＯＮを結合させることができ、ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４と配列番号５５；もしくは
配列番号５６と配列番号５７
を独立して含み、
（ｃ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒを結合させることができ、ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８と配列番号４９；
配列番号５０と配列番号５１；もしくは
配列番号５２と配列番号５３
を独立して含み、
（ｄ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができ、Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８と配列番号３９；
配列番号４０と配列番号４１；もしくは
配列番号４２と配列番号４３
を独立して含み、
（ｅ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＨＥＲ２を結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０と配列番号３１；
配列番号３２と配列番号３３；
配列番号３４と配列番号３５；もしくは
配列番号３６と配列番号３７
を含み、
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４と配列番号４５；もしくは
配列番号４６と配列番号４７
を含み、
（ｆ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒを結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０と配列番号３１；
配列番号３２と配列番号３３；
配列番号３４と配列番号３５；もしくは
配列番号３６と配列番号３７
を含み、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８と配列番号４９；
配列番号５０と配列番号５１；もしくは
配列番号５２と配列番号５３
を含み、
（ｇ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０と配列番号３１；
配列番号３２と配列番号３３；
配列番号３４と配列番号３５；もしくは
配列番号３６と配列番号３７
を含み、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８と配列番号３９；
配列番号４０と配列番号４１；もしくは
配列番号４２と配列番号４３
を含み、
（ｈ）結合タンパク質がＥＧＦＲとＲＯＮを結合させることができ、ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０と配列番号３１；
配列番号３２と配列番号３３；
配列番号３４と配列番号３５；もしくは
配列番号３６と配列番号３７
を含み、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４と配列番号５５；もしくは
配列番号５６と配列番号５７
を含み、
（ｉ）結合タンパク質がＨＥＲ２とＲＯＮを結合させることができ、ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４と配列番号４５；もしくは
配列番号４６と配列番号４７
を含み、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４と配列番号５５；もしくは
配列番号５６と配列番号５７
を含み、
（ｊ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３とＲＯＮを結合させることができ、Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８と配列番号３９；
配列番号４０と配列番号４１；もしくは
配列番号４２と配列番号４３
を含み、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４と配列番号５５；もしくは
配列番号５６と配列番号５７
を含み、
（ｋ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲとＲＯＮを結合させることができ、ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８と配列番号４９；
配列番号５０と配列番号５１；もしくは
配列番号５２と配列番号５３
を含み、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４と配列番号５５；もしくは
配列番号５６と配列番号５７
を含み、
（ｌ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができ、ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８と配列番号４９；
配列番号５０と配列番号５１；もしくは
配列番号５２と配列番号５３
を含み、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８と配列番号３９；
配列番号４０と配列番号４１；もしくは
配列番号４２と配列番号４３
を含み、
（ｍ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２を結合させることができ、ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８と配列番号４９；
配列番号５０と配列番号５１；もしくは
配列番号５２と配列番号５３
を含み、
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４と配列番号４５；もしくは
配列番号４６と配列番号４７
を含み、
または
（ｎ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３とＨＥＲ２を結合させることができ、Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８と配列番号３９；
配列番号４０と配列番号４１；もしくは
配列番号４２と配列番号４３
を含み、
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４と配列番号４５；もしくは
配列番号４６と配列番号４７
を含む、
請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【請求項２０】
ＤＶＤ２２０６−ＤＶＤ２２１９、ＤＶＤ２２２６−ＤＶＤ２２３１、ＤＶＤ２２３８−ＤＶＤ２２４９、ＤＶＤ２２６６−ＤＶＤ２３１１、ＤＶＤ２３１４−ＤＶＤ２３４３、またはＤＶＤ２３４６−ＤＶＤ２３４９のいずれか１つを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、２０１１年１２月３０日に出願した米国仮特許出願第６１／５８１，９６３号の優先権の利益を主張する。
【０００２】
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの重複しないエピトープを標的とする多価および多重特異的結合タンパク質、製造方法、ならびに疾患の診断、予防および／または治療における使用が提供される。
【背景技術】
【０００３】
２つまたはそれ以上の抗原に結合することができる多重特異的結合タンパク質などの工学的に作製されたタンパク質が、本分野において公知である。このような多重特異的結合タンパク質は、細胞融合、化学的連結または組換えＤＮＡ技術を用いて作製することが可能である。当該技術分野において公知の多重特異的結合タンパク質の構造は様々に存在し、多数の構造および方法には明らかな不利益がある。
【０００４】
二特異的抗体は、クアドローマ技術を用いて作製されてきた。しかしながら、この技術における誤対合された副産物の存在および大幅に減少した産生率は、複雑な精製操作が必要とされることを意味している。二特異的抗体は、２つの異なるｍＡｂの化学的連結によっても生産することが可能である。しかしながら、このアプローチは、均一な調製を与えない。
【０００５】
以前に使用された他のアプローチは、ヘテロ−二官能性クロスリンカーを有する２つの親抗体のカップリング、タンデムな一本鎖Ｆｖ分子、ダイアボディ、二特異的ダイアボディ、一本鎖ダイアボディおよびジ−ダイアボディの製造を含む。しかしながら、これらのアプローチのそれぞれは不利益を有する。さらに、ＩｇＧの重鎖中に２つのＦａｂリピートを含み、４つの抗原分子に結合することができる多価の抗体構築物が記載されている（ＰＣＴ公開ＷＯ０１７７３４２およびＭｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（９）：４８５４−６１参照）。
【０００６】
リガンド−受容体系は、特異性を維持するために同時に進化してきた。それらの相互作用は、特定の生物活性に関して特定のシグナル伝達を活性化する。しかしながら、非リガンド−受容体結合タンパク質、例えば、単一特異性抗体、二重もしくは多重特異性結合タンパク質、非競合性抗体の組合せまたは受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対する他の受容体結合タンパク質は、受容体リガンド−結合部位と異なるエピトープを認識し得る。受容体のＥＣＤに対するこのような異なるエピトープへの結合は、新たな予期しないシグナル伝達カスケードを生じ得る細胞内ドメインに立体構造変化を形質導入することがある。
【０００７】
米国特許第７，６１２，１８１号は、二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）または二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））と呼ばれる、高親和性を有する２つ以上の抗原に結合することが可能な結合タンパク質の新規なファミリーを提供する。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、同じ分子または同時に２つの異なる分子上の２つの異なるエピトープに結合することができる四価の二重特異的Ｉｇ様タンパク質である。ＤＶＤ−Ｉｇは、二価抗体のＮ末端に融合した２つの可変ドメインから構成される固有の結合タンパク質である。可変ドメインは、互いに直接融合されてもよく、または各種の長さおよびアミノ酸組成を有する合成ペプチドリンカーを介して直接接続されてもよい。ＤＶＤ−Ｉｇは、完全であり、機能的なＦｃドメインを用いて遺伝子操作され得て、次に適切なエフェクター機能を媒介することができる。ＤＶＤ−Ｉｇフォーマットは、抗体対の最適な柔軟性、２つの抗原結合ドメインの配向およびこれらを連結するリンカーの長さに起因して、受容体の生物学のいくつかの固有の態様と、おそらく新たな治療法を明らかにすることができる。
【０００８】
種々の構造が当該技術分野において提供され、いくつかは利点と欠点を有するが、特定の構築物は、特定の標的に結合する特定の特性を有する多価結合タンパク質を調製するために必要とされる。さらに、新しい可変ドメイン配列は、結合タンパク質の特性をさらに改善することができる。具体的には、ある種の先行技術のＤＶＤ−Ｉｇ構築物を用いた場合、ある程度の立体障害は、これらの先行技術のＤＶＤ−Ｉｇ構築物への標的の結合に影響を与えている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２００１／０７７３４２号
【特許文献２】米国特許第７，６１２，１８１号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（９）：４８５４−６１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの重複しないエピトープに結合することができる、改良された多価結合タンパク質が、当該技術分野において必要とされている。同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの重複しないエピトープに結合する新規な結合タンパク質が提供され、ここで、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の要旨）
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープを標的とすることができる結合タンパク質が提供される。一実施形態において、高親和性で、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる結合タンパク質が提供される。
【００１３】
一実施形態において、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合するポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸またはポリペプチドを表し、Ｘ２はＦｃ領域を表し、ｎは０または１である結合タンパク質が提供される。一実施形態において、結合タンパク質中のＶＤ１およびＶＤ２は、重鎖可変ドメインである。別の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同じ受容体の２つの重複しないエピトープに結合することができる。別の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同じ細胞上に発現した２つの異なる受容体に結合することができる。さらに別の実施形態において、Ｃは、重鎖定常ドメインである。例えば、Ｘ１はリンカーである（但し、Ｘ１はＣＨ１ではない。）。
【００１４】
一実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合するポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域である。一実施形態において、Ｘ１は、リンカーであり、但し、ＣＨ１ではない。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６からの３つのＣＤＲを独立して含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６を独立して含む。
【００１５】
一実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合するポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。一実施形態において、Ｘ１はリンカーであり、但し、ＣＬではない。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７からの３つのＣＤＲを独立して含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７を独立して含む。
【００１６】
別の実施形態において、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合し、２つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第一のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第一のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域である。）を含み、前記第二のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第二のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。）を含む、結合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態において、第一および第二のＸ１は同じである。他の実施形態において、第一および第二のＸ１は異なっている。いくつかの実施形態において、第一のＸ１はＣＨ１ドメインではなく、および／または第二のＸ１はＣＬドメインではない。一実施形態において、第一のＸ１および第二のＸ１は短い（例えば、６アミノ酸）リンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１および第二のＸ１は長い（例えば、６を超えるアミノ酸）リンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１は短いリンカーであり、第二のＸ１は長いリンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１は長いリンカーであり、第二のＸ１は短いリンカーである。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６からの３つのＣＤＲを独立して含み、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７からの３つのＣＤＲを独立して含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６を独立して含み、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７を独立して含む。
【００１７】
一実施形態において、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、４つのポリペプチド鎖を含み、第一の２つのポリペプチド鎖のそれぞれは、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第一のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域であり、第二の２つのポリペプチド鎖のそれぞれは、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第二のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。このようなＤＶＤ結合タンパク質は、４つの抗原結合部位を有している。いくつかの実施形態において、第一および第二のＸ１は同じである。他の実施形態において、第一および第二のＸ１は異なる。いくつかの実施形態において、第一のＸ１は、ＣＨ１ドメインでないおよび／または第二のＸ１はＣＬドメインでない。別の実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる。したがって、いくつかの実施形態において、結合タンパク質は、任意の配向で、同じ細胞に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる少なくとも２つの可変ドメイン配列（例えば、ＶＤ１およびＶＤ２）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して選択される。したがって、いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同一の配列番号を含み、他の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、異なる配列番号を含む。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６からの３つのＣＤＲを独立して含み、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７からの３つのＣＤＲを独立して含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６を独立して含み、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７を独立して含む。
【００１８】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表１に示される重鎖および軽鎖配列を含む。
【００１９】
重鎖、軽鎖、二本鎖または四本鎖の実施形態のいずれかのさらなる実施形態は、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）；ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）；ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）；ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）；ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）；ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）；ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）；ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）；ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）；またはＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２７）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２８）；またはＧ／Ｓに基づく配列（例えば、Ｇ４ＳとＧ４Ｓリピート；配列番号２９）を含む少なくとも１つのＸ１リンカーを含む。一実施形態において、Ｘ２はＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｘ２は可変Ｆｃ領域である。
【００２０】
さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域は、第一のポリペプチド中に存在する場合、天然配列Ｆｃ領域またはバリアント配列Ｆｃ領域である。さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１のＦｃ領域、ＩｇＧ２のＦｃ領域、ＩｇＧ３のＦｃ領域、ＩｇＧ４のＦｃ領域、ＩｇＡのＦｃ領域、ＩｇＭのＦｃ領域、ＩｇＥのＦｃ領域またはＩｇＤのＦｃ領域である。
【００２１】
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合する結合タンパク質を作製する方法が提供される。一実施形態において、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合する結合タンパク質を作製する方法は、第一のエピトープまたは受容体に結合する第一の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程；ｂ）第二のエピトープまたは受容体に結合する第二の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程；ｃ）本明細書に記載されている結合タンパク質のいずれかをコードする構築物（単数または複数）を調製する工程；およびｄ）ポリペプチド鎖を発現させ、第一および第二のエピトープまたは受容体に結合する結合タンパク質を生じさせる工程を含む。
【００２２】
本明細書における実施形態のいずれかにおいて、存在する場合、ＶＤ１重鎖可変ドメイン、および存在する場合、軽鎖可変ドメインは、第一の親抗体またはその抗原結合部分由来であってもよく；存在する場合、ＶＤ２重鎖可変ドメイン、および存在する場合、軽鎖可変ドメインは、第二の親抗体またはその抗原結合部分由来であってもよい。第一および第二の親抗体は同じであってもよくまたは異なってもよい。
【００２３】
一実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は第一の抗原に結合し、第二の親抗体またはその抗原結合部分は第二の抗原に結合する。一実施形態において、第一および第二の抗原は同じ抗原である。別の実施形態において、親抗体は同じ抗原上の異なるエピトープに結合する。別の実施形態において、第一および第二の抗原は異なる抗原である。別の実施形態において、第一および第二の抗原は、同じ細胞上に発現した２つの異なる受容体由来である。別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する効力と異なる効力で第一の抗原に結合する。さらに別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する親和性と異なる親和性で第一の抗原に結合する。
【００２４】
別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分および第二の親抗体またはその抗原結合部分は、ヒト抗体、ＣＤＲ移植された抗体、ヒト化抗体および／または親和性成熟された抗体である。
【００２５】
別の実施形態において、結合タンパク質は、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分によって示される少なくとも１つの所望の特性を有する。あるいは、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分は、結合タンパク質によって示される少なくとも１つの所望の特性を有する。一実施形態において、所望の特性は、１つ以上の抗体パラメーターである。別の実施形態において、抗体パラメーターは、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合性である。一実施形態において、結合タンパク質は多価である。別の実施形態において、結合タンパク質は多重特異的である。本明細書に記載されている多価および／または多重特異的結合タンパク質は、特に治療的見地から望ましい特性を有する。例えば、多価および／または多重特異的結合タンパク質は、（１）抗体が結合する抗原を発現している細胞によって、二価抗体より速く内部に取り込まれる（および／または異化される）；（２）タンパク質に結合するアゴニストであり；および／または（３）多価結合タンパク質が結合することができる抗原を発現している細胞の細胞死および／またはアポトーシスを誘導し得る。多価および／または多重特異的結合タンパク質の少なくとも１つの抗原結合特異性を提供する「親抗体」は、抗体が結合する抗原を発現している細胞によって内部に取り込まれ（および／または異化される）抗体であり得、および／またはアゴニスト、細胞死誘導および／またはアポトーシス誘導抗体であり得、本明細書に記載されている多価および／または多重特異的結合タンパク質は、これらの特性の１つ以上の改善を示し得る。さらに、親抗体は、これらの特性の任意の１つ以上を欠損してもよいが、本明細書に記載されるように、多価結合タンパク質として構築された場合、これらの１つ以上を取得してもよい。
【００２６】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１のうちの１つ以上の標的への結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、約１０２Ｍ−１ｓ−１から約１０３Ｍ−１ｓ−１、約１０３Ｍ−１ｓ−１から約１０４Ｍ−１ｓ−１、約１０４Ｍ−１ｓ−１から約１０５Ｍ−１ｓ−１、または約１０５Ｍ−１ｓ−１から約１０６Ｍ−１ｓ−１の、１つ以上の標的に対する結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。
【００２７】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約１０−３ｓ−１；最大約１０−４ｓ−１；最大約１０−５ｓ−１；または最大約１０−６ｓ−１のうちの１つ以上の標的への解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、約１０−３ｓ−１から約１０−４ｓ−１の、約１０−４ｓ−１から約１０−５ｓ−１の、または約１０−５ｓ−１から約１０−６ｓ−１の間の、１つ以上の標的に対する解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。
【００２８】
別の実施形態において、結合タンパク質は、最大約１０−７Ｍ；最大約１０−８Ｍ；最大約１０−９Ｍ；最大約１０−１０Ｍ；最大約１０−１１Ｍ；最大約１０−１２Ｍまたは最大約１０−１３Ｍのうちの１つ以上の標的への解離定数（Ｋｄ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、約１０−７Ｍから約１０−８Ｍの；約１０−８Ｍから約１０−９Ｍの；約１０−９Ｍから約１０−１０Ｍの；約１０−１０Ｍから約１０−１１Ｍの；約１０−１１Ｍから約１０−１２Ｍの；または約１０−１２Ｍから約１０−１３Ｍのその標的に対する解離定数（Ｋｄ）を有する。
【００２９】
別の実施形態において、結合タンパク質は、薬剤をさらに含むコンジュゲートである。一実施形態において、抗原は、免疫接着分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤である。一実施形態において、造影剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンである。別の実施形態において、放射性標識は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍである。さらに別の実施形態において、治療剤または細胞毒性剤は、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である。
【００３０】
別の実施形態において、結合タンパク質は結晶化された結合タンパク質であり、結晶として存在する。一実施形態において、この結晶は、無担体医薬徐放結晶である。別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は、この結合タンパク質の可溶性対応物より大きなインビボ半減期を有する。さらに別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は生物学的活性を保持する。
【００３１】
別の実施形態において、本明細書に記載されている結合タンパク質はグリコシル化される。例えば、グリコシル化パターンは、ヒトグリコシル化パターンである。
【００３２】
本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか１つをコードする単離された核酸も提供される。さらなる実施形態は、本明細書に開示されている単離された核酸を含むベクターを提供し、ベクターは、ｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３０（２）；ｐＴＴ３（追加の多重クローニング部位を有するｐＴＴ）；ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ、（１９９０年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：（１７）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ；ｐＥＦ６  ＴＯＰＯ；ｐＢＯＳ；ｐＨｙｂＥ；またはｐＢＪである。一実施形態において、ベクターは、米国特許公開第２００９０２３９２５９号に開示されているベクターである。
【００３３】
別の態様において、宿主細胞は、本明細書に開示されたベクターで形質転換される。一実施形態において、宿主細胞は原核細胞、例えば、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。別の実施形態において、宿主細胞は真核細胞、例えば、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞または真菌細胞である。一実施形態において、宿主細胞は、これらに限定されないが、ＣＨＯ、ＣＯＳ；ＮＳ０、ＳＰ２、ＰＥＲ．Ｃ６を含む哺乳動物細胞；またはサッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌細胞；またはＳｆ９などの昆虫細胞である。一実施形態において、異なる特異性を有する２つまたはそれ以上の結合タンパク質は、単一の組換え宿主細胞中で生産される。例えば、抗体の混合物の発現は、Ｏｌｉｇｏｃｌｏｎｉｃｓ（商標）（Ｍｅｒｕｓ  Ｂ．Ｖ．，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）米国特許第７，２６２，０２８号および第７，４２９，４８６号と呼ばれている。
【００３４】
結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、本明細書に開示されている宿主細胞のいずれか１つを培地中において培養することを含む、本明細書に開示されている結合タンパク質を生産する方法が提供される。一実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の５０％から７５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。別の実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の７５％から９０％が、二重特異的四価結合タンパク質である。別の実施形態において、生産された結合タンパク質の９０％から９５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。
【００３５】
一実施形態は、結合タンパク質の放出のための組成物を提供し、この組成物は、結晶化された結合タンパク質、成分、および少なくとも１つのポリマー性担体を含む。一実施形態において、ポリマー担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリラート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチラート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン、硫酸化多糖またはこれらの混和物および共重合体である。一実施形態において、成分は、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコールである。
【００３６】
別の実施形態は、本明細書に開示された組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む哺乳動物を治療する方法を提供する。
【００３７】
本明細書に開示された結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物が提供される。さらなる実施形態において、この医薬組成物は、疾患を治療するための少なくとも１つの追加の治療剤を含む。例えば、追加の薬剤は、治療剤、化学治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤（抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ−トラップが含まれるが、これらに限定されない。）、キナーゼ阻害剤（ＫＤＲおよびＴＩＥ−２阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）、共刺激分子遮断剤（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０が含まれるが、これらに限定されない。）、接着分子遮断剤（抗ＬＦＡ−１抗体、抗Ｅ／Ｌセレクチン抗体、小分子阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）、抗サイトカイン抗体またはその機能的断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦおよび抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体が含まれるが、これらに限定されない。）、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性薬剤、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸引用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストであり得る。
【００３８】
本明細書に開示されている結合部分によって結合され得る標的または複数の標的が有害である障害に罹患しているヒト対象を診断および／または治療する方法であって、標的または複数の標的の活性が、ヒト対象において阻害され、１以上の症状が緩和されまたは治療が達成されるように、本明細書に開示されている結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む方法が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質は、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱および尿路上皮を含む。）、女性生殖路（子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む。）、男性生殖路（前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む。）、内分泌腺（甲状腺、副腎および下垂体を含む。）および皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫（骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む。）、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍（星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む。）、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫の両方）を含む原発性および転移性の癌に罹患しているヒトを診断および／または治療するために使用することができる。
【００３９】
別の実施形態において、治療されるべき障害または状態は、例えば、ＨＩＶ、ヒトライノウイルス、エンテロウイルス、コロナウイルス、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルスまたはアデノウイルスによって引き起こされる、ヒトにおけるウイルス感染によって生じる症状を含む。
【００４０】
本明細書において提供される結合タンパク質は、神経障害を治療するために用いることができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、神経再生および脊髄損傷を含む神経変性疾患および状態を治療するために用いられる。
【００４１】
別の実施形態は、疾患または障害の治療における結合タンパク質の使用を提供し、前記疾患または障害は、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型および多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、アテローム性疾患／アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合���織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害、うつ病、統合失調症、Ｔｈ２型およびＴｈ１型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛、疼痛の様々な形態、癌、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、造血性悪性病変、白血病、リンパ腫、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）および動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失���症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎（Ａ型）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ．ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・デジェリーヌ−トーマス・シャイ−ドレーガーおよびマシャド−ジョセフ）、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフ��ラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ｃｉｓ）、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｊｕｎｔｉｖｉｔｉｓ  ｓｉｃｃａ）、クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ  ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多
内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）、原発性パーキンソニズム、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎）、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、坐骨神経痛、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性、もしくは創傷治癒である。
【００４２】
一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療剤および／または化学療法剤と組み合わせて用いる場合、癌を治療するために使用されまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防もしくは阻害において使用される。
【００４３】
一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質と組み合わせることができる化学療法剤は、以下：１３−ｃｉｓ−レチノイン酸；２−ＣｄＡ；２−クロロデオキシアデノシン；５−アザシチジン；５−フルオロウラシル；５−ＦＵ；６−メルカプトプリン；６−ＭＰ；６−ＴＧ；６−チオグアニン；アブラキサン；Ａｃｃｕｔａｎｅ（登録商標）；アクチノマイシン−Ｄ；Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）；Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）；Ａｇｒｙｌｉｎ（登録商標）；Ａｌａ−Ｃｏｒｔ（登録商標）；アルデスロイキン；アレムツズマブ；ＡＬＩＭＴＡ；アリトレチノイン；Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）；Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）；オールトランスレチノイン酸；アルファインターフェロン；アルトレタミン；アメトプテリン；アミホスチン；アミノグルテチミド；アナグレリド；Ａｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）；アナストロゾール；アラビノシルシトシン；Ａｒａ−Ｃ  Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）；Ａｒｅｄｉａ（登録商標）；Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）；Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）；Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）；三酸化ヒ素；Ａｒｚｅｒｒａ（商標）；アスパラギナーゼ；ＡＴＲＡ；Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）；アザシチジン；ＢＣＧ；ＢＣＮＵ；ベンダムスチン；ベバシズマブ：ベキサロテン；ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）；ビカルタミド；ＢｉＣＮＵ；Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）；ブレオマイシン；ボルテゾミブ；ブスルファン；Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）；Ｃ２２５；カルシウムロイコボリン；Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）；Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）；カンプトセシン−１１；カペシタビン；Ｃａｒａｃ（商標）；カルボプラチン；カルムスチン；カルムスチンウエハー；Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）；ＣＣ−５０１３；ＣＣＩ−７７９；ＣＣＮＵ；ＣＤＤＰ；ＣｅｅＮＵ；セルビジン；セツキシマブ；クロラムブシル；シスプラチン；シトロボラム因子；クラドリビン；コルチゾン；Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）；ＣＰＴ−１１；シクロフォスファミド；Ｃｙｔａｄｒｅｎ（登録商標）；シタラビン；シタラビンリポゾーマル；Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）；Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）；ダカルバジン；ダコゲン；ダクチノマイシン；ダルベポエチンアルファ；ダサチニブ；ダウノマイシン；ダウノルビシン；塩酸ダウノルビシン；ダウノルビシンリポゾーマル；ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）；デカドロン；デシタビン；Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）；Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）；デニロイキン；ジフチトクス；ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）；デキサメタゾン；酢酸デキサメタゾン；リン酸デキサメタゾンナトリウム；デキサゾン；デクスラゾキサン；ＤＨＡＤ；ＤＩＣ；ジオデックス；ドセタキセル；Ｄｏｘｉｌ（登録商標）；ドキソルビシン；ドキソルビシンリポゾーマル；Ｄｒｏｘｉａ（商標）；ＤＴＩＣ；ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）；Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）；Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）；Ｅｌｉｇａｒｄ（商標）；Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標）；Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）；Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）；Ｅｍｃｙｔ（登録商標）；エピルビシン；エポエチンアルファ；エル���タックス；エルロチニブ；エルウィニア  Ｌ−アスパラギナーゼ；エストラムスチン；エチオール；Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）；エトポシド；リン酸エトポシド；Ｅｕｌｅｘｉｎｅ（登録商標）；エベロリムス；Ｅｖｉｓｔａ（登録商標）；エキセメスタン；Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）；Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）；Ｆｅｍａｒａ（登録商標）；フィルグラスチム；フロクスウリジン；Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）；フルダラビン；Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）；フルオロウラシル；フルオロウラシル（クリーム）；フルオキシムエステロン；フルタミド；フォリン酸；ＦＵＤＲ（登録商標）；フルベストラント；ゲフィチニブ；ゲムシタビン；ゲムツズマブオゾガマイシン；ジェムザール；Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）；Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標）ウエハー；ＧＭ−ＣＳＦ；ゴセレリン；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Ｇ−ＭＣＳＦ）；Ｈａｌｏｔｅｓｔｉｎ（登録商標）；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；ヘキサドロール；Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）；ヘキサメチルメラミン；ＨＭＭ；Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）；Ｈｙｄｒｅａ（登録商標）；Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ  Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）；ヒドロコルチゾン；リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム；コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム；リン酸ハイドロコートン；ヒドロキシ尿素；イブリツモマブ；イブリツモマブチウキセタン；Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ  ｉｆｅｘ（登録商標）；インターフェロン−アルファ；インターフェロン−アルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）；イホスファミド；インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）；インターロイキン−２（ＩＬ−２）；メシル酸イマチニブ；イミダゾールカルボキサミド；Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標）；Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）；イリノテカン；イソトレチノイン；イキサベピロン；Ｉｘｅｍｐｒａ（商標）；キドロラーゼ（ｔ）；Ｌａｎａｃｏｒｔ（登録商標）；ラパチニブ；Ｌ−アスパラギナーゼ；ＬＣＲ；レナリドミド；レトロゾール；ロイコボリン；リューケラン；Ｌｅｕｋｉｎ（商標）；ロイプロリド；ロイコクリスチン；Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（商標）；リポゾーマルＡｒａ−Ｃ；Ｌｉｑｕｉｄ  Ｐｒｅｄ（登録商標）；ロムスチン；Ｌ−ＰＡＭ；Ｌ−サルコリジン；Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標）；Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（登録商標）；Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標）；マキシデックス；メクロレタミン；塩酸メクロレタミン；Ｍｅｄｒａｌｏｎｅ（登録商標）；Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）；Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）；メゲストロール；酢酸メゲストロール；メルファラン；メルカプトプリン；メスナ；Ｍｅｓｎｅｘ（商標）；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メチルプレドニゾロン；Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）；マイトマイシン；マイトマイシン−Ｃ；ミトキサントロン；Ｍ−Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）；ＭＴＣ；ＭＴＸ；Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標）；ムスチン；Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標）；Ｍｙｌｏｃｅｌ（商標）；Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）；Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）；ネララビン；Ｎｅ���ｓａｒ（登録商標）；Ｎｅｕｌａｓｔａ（商標）；Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）；Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）；Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標）；Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）；ニルタミド；Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標）；Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｎｏｖａｌｄｅｘ（登録商標）；Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）；エヌプレート；オクトレオチド；酢酸オクトレオチド；オフタツムマブ；Ｏｎｃｏｓｐａｒ（登録商標）；Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）；Ｏｎｔａｋ（登録商標）；Ｏｎｘａｌ（商標）；オプレルベキン；Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）；Ｏｒａｓｏｎｅ（登録商標）；オキサリプラチン；パクリタキセル；タンパク質に結合したパクリタキセル；パミドロネート；パニツムマブ；Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）；パゾパニブ；Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）；ＰＥＧインターフェロン；ペグアスパラガーゼ；ペグフィルグラスチム；ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（商標）；ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ；ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ；ペントスタチン；フェニルアラニンマスタード；Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）；Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（登録商標）；プレドニゾロン；プレドニゾン；Ｐｒｅｌｏｎｅ（登録商標）；プロカルバジン；ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）；カルムスチンインプラントを伴うＰｒｏｌｉｆｅｐｒｏｓｐａｎ  ２０；Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標）；ラロキシフェン；Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）；Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標）；Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；リツキシマブ；Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ（登録商標）；ロミプロスチン；Ｒｕｂｅｘ（登録商標）；塩酸ルビドマイシン；Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（登録商標）；Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ＬＡＲ（登録商標）；サーグラモスティム；Ｓｏｌｕ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）；Ｓｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）；ソラフェニブ；ＳＰＲＹＣＥＬ（商標）；ＳＴＩ−５７１；ストレプトゾシン；ＳＵ１１２４８；スニチニブ；Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）；Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標）；Ｔａｘｏｌ（登録商標）；Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）；Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）；テモゾロマイド；テムシロリムス；テニポシド；ＴＥＳＰＡ；サリドマイド；Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）；ＴｈｅｒａＣｙｓ（登録商標）；チオグアニン；Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ  Ｔａｂｌｏｉｄ（登録商標）；チオホスファミド；Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標）；チオテパ；ＴＩＣＥ（登録商標）；Ｔｏｐｏｓａｒ（登録商標）；トポテカン；トレミフェン；Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標）；トシツモマブ；トラスツズマブ；Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標）；トレチノイン；Ｔｒｅｘａｌｌ（商標）；Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）；ＴＳＰＡ；ＶＣＲ；Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標）；Ｖｅｌｂａｎ（登録商標）；Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）；Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標）；Ｖｅｓａｎｏｉｄ（商標）；Ｖｉａｄｕｒ（登録商標）；Ｖｉｄａｚａ（登録商標）；ビンブラスチン；硫酸ビンブラスチン；Ｖｉｎｃａｓａｒ  Ｐｆｓ（登録商標）；ビンクリスチン；ビノレルビン��酒石酸ビノレルビン；ＶＬＢ；ＶＭ−２６；ボリノスタット；ヴォトリエント；ＶＰ−１６；Ｖｕｍｏｎ（登録商標）；Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）；Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標）；Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）；Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標）；Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）；ゾレドロン酸；ゾリンザ；またはＺｏｍｅｔａ（登録商標）を含む。
【００４４】
別の態様において、本明細書に論述されているような第二の作用物質の投与前、投与と同時または投与後に、本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか１つを投与する工程を含む、疾患に罹患している患者を治療する方法が提供される。一実施形態において、第二の作用物質は、ブデノシド、上皮増殖因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチラート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１βｍＡｂ、抗ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体ｍＡｂ、増殖因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ−１９、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはこれらのリガンドに対する抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３またはＴＧＦβである。特定の実施形態において、本明細書に開示されている医薬組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮投与によって、患者に投与される。
【００４５】
また、本明細書に開示されている結合タンパク質に対する抗イディオタイプ抗体も提供される。抗イディオタイプ抗体は、本明細書において提供される結合タンパク質に組み込むことができる、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク領域または任意のその一部などの、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。
【００４６】
試験試料における１以上の抗原もしくはその断片の存在、量または濃度を決定する方法が提供され、１以上の抗原は、ＥＧＦＲ、ＲＯＮ、ＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｆｂ−Ｂ３および／またはＨＥＲ２である。この方法は、イムノアッセイによって、抗原またはその断片について試験試料をアッセイすることを含む。イムノアッセイは、（ｉ）少なくとも１つの結合タンパク質および少なくとも１つの検出可能な標識を使用し、（ｉｉ）試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的指標としての検出可能な標識によって生じるシグナルと、対照または較正因子における抗原またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的指標として生じるシグナルとを比較することを含む。較正因子は、場合によって、一連の較正因子の一部であり、この場合、較正因子のそれぞれは、抗原またはその断片の濃度によって、その一連の較正因子中の他の較正因子と異なっている。本方法は、（ｉ）捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を形成するために、試料を、抗原またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの捕捉剤と接触させること、（ｉｉ）捕捉剤／抗原またはその断片／検出剤の複合体を形成するために、捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を、検出可能な標識を含み、抗原またはその断片上のエピトープに結合し、捕捉剤に結合しない少なくとも１つの検出剤と接触させることおよび（ｉｉｉ）（ｉｉ）において形成された捕捉剤／抗原またはその断片／検出剤の複合体における検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度を決定することを含むことができ、少なくとも１つの捕捉剤および／または少なくとも１つの検出剤は少なくとも１つの結合タンパク質である。
【００４７】
あるいは、本方法は、（ｉ）捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を形成するために、試験試料と、抗原またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの捕捉剤とを接触させ、同時にまたはいずれかの順番で連続して、試験試料と、少なくとも１つの捕捉剤への結合に関して試験試料中の任意の抗原またはその断片と競合し得る、検出可能に標識された抗原またはその断片とを接触させ、試験試料中に存在する任意の抗原またはその断片および検出可能に標識された抗原は互いに競合し、それぞれ、捕捉剤／抗原またはその断片の複合体と捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体を形成することおよび（ｉｉ）（ｉｉ）において形成された捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体において検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度を決定することを含むことができ、少なくとも１つの捕捉剤は、少なくとも１つの結合タンパク質であり、捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体における検出可能な標識によって生じるシグナルは、試験試料中の抗原またはその断片の量または濃度に反比例する。
【００４８】
試験試料は、患者由来であり得、この場合、本方法は、患者の治療的／予防的処置の効力を診断、予後診断または評価する工程をさらに含み得る。本方法が、患者の治療的／予防的処置の効力を評価することをさらに含む場合、この方法は、場合によって、効力を改善するために必要な、患者の治療的／予防的処置の改変を加えることをさらに含む。本方法は、自動化システムまたは半自動化システムにおける使用に適合させることができる。したがって、本明細書に記載されている方法はまた、対象が、所与の疾患、障害または状態を有するまたはそれを発症する危険性があるか否かを判定するために使用することができる。具体的には、このような方法は、以下：
（ａ）対象由来の試験試料中の、分析物またはその断片の濃度または量を（例えば、本明細書に記載されている方法または当該技術分野において公知の方法を用いて）決定する工程；
（ｂ）工程（ａ）において決定された分析物またはその断片の濃度または量と、予め決定されたレベルとを比較する工程を含むことができ、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量が予め決定されたレベルと比較して好ましい場合、対象は、所定の疾患、障害または状態を有さないまたはその危険性がないと決定される。
しかしながら、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量が予め決定されたレベルと比較して好ましくない場合、対象は、所定の疾患、障害または状態を有するまたはその危険性があると決定される。
【００４９】
さらに、対象における疾患の進行を監視する方法が本明細書に提供される。場合によって、本方法は、以下：
（ａ）分析物の対象由来の試験試料中の濃度または量を決定する工程；
（ｂ）分析物の対象由来の後者の試験試料中の濃度または量を決定する工程；および
（ｃ）工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量と、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量とを比較することを含み、工程（ｂ）において決定された濃度または量が変化しない場合または工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して好ましくない場合、対象における疾患は継続し、進行しまたは悪化していると判断される。比較して、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量が、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して好ましい場合、対象における疾患は中断し、軽減しまたは改善されたと判断される。
【００５０】
場合によって、本方法は、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量と、例えば、予め決定されたレベルとを比較することをさらに含む。さらに、場合によって、例えば、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量が、予め決定されたレベルと比較して、不利に変更されたことを比較が示す場合、本方法は、ある期間、１以上の医薬組成物を用いて対象を治療することを含む。
【００５１】
また、１以上の抗原またはその断片について試験試料をアッセイするキットが提供され、１つ以上の抗原は、ＥＧＦＲ、ＲＯＮ、ＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３および／またはＨＥＲ２である。キットは、抗原またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分、抗原またはその断片について試験試料をアッセイするための指示書を含み、少なくとも１つの成分は、本明細書に開示されている結合タンパク質を含む少なくとも１つの組成物を含み、結合タンパク質は、場合によって、検出可能に標識されている。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質構築物の模式図であり、２つの親抗体からＤＶＤ結合タンパク質を作製するための戦略を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
同じ細胞上に発現する同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる多価および／または多重特異的結合タンパク質が提供される。二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）または二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））およびこれらの医薬組成物ならびに核酸、組換え発現ベクターおよびこのようなＤＶＤ結合タンパク質を作製するための宿主細胞もまた提供される。インビトロまたはインビボのいずれかにおいて、特定の抗原を検出するＤＶＤ結合タンパク質を使用する方法もまた提供される。
【００５４】
本明細書に別段の定義がなければ、本明細書で使用される科学および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。何らかの曖昧さが伏在している場合には、本明細書中に付与されている定義は、すべての辞書または本明細書外の定義に優越する。文脈上別段の必要がなければ、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。「または」の使用は、別段の記載がなければ、「および／または」を意味する。「含んでいる」という用語ならびに「含む」および「含まれた」などのその他の形式の使用は、限定的なものではない。
【００５５】
一般的に、本明細書に記載されている細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリッド形成に関連して使用される命名法は、周知のものであり、本分野において一般的に使用されている。一般に、本明細書において提供される方法および技術は、別段の記載がなければ、本分野において周知の慣用方法に従い、ならびに本明細書を通じて引用および論述されている様々な一般的参考文献およびより具体的な参考文献中に記載されているように、実施することができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明書に従って、本分野で一般的に遂行されているように、または本明細書に記載されているように、実施される。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学に関して使用される命名法、ならびに本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学の実験室操作および技術は、周知のものであり、本分野で一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、調合、および送達、および患者の治療に対しては、標準的な技術を使用し得る。
【００５６】
本開示がより容易に理解し得るように、特定の用語を以下に定義する。
【００５７】
「抗体」という用語は、４つのポリペプチド鎖（２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖）から一般に構成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子またはＩｇ分子のエピトープ結合特性を保持した機能的断片、変異体、バリアントまたはこれらの誘導体を表すものとする。このような断片、変異体、バリアントまたは誘導体抗体のフォーマットは、本分野において公知である。完全長の抗体の一実施形態において、各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。ＣＨは、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＣＬは単一のＣＬドメインから構成される。ＶＨおよびＶＬは、より保存された領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。）が散在された超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される。）へ、さらに細分割することが可能である。一般に、各ＶＨおよびＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。免疫グロブリン分子は、あらゆる種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
【００５８】
「二特異的抗体」という用語は、その２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの一対）の１つの上に１つの抗原（またはエピトープ）を結合し、その第二の結合アーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）の上の異なる抗原（またはエピトープ）に結合する抗体を指す。二特異的抗体は、２つの異なる抗原結合アーム（特異性とＣＤＲ配列の両方における）を有し、それが結合するそれぞれの抗原について一価である。二特異的抗体には、クアドローマ技術（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ（１９８３年）Ｎａｔｕｒｅ  ３０５（５９３４）：５３７−４０）によって、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的コンジュゲーション（Ｓｔａｅｒｚｅｔ  ａｌ．（１９８５年）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４（６０１２）：６２８−３１）によってまたはノブ・イントゥ・ホールもしくはＦｃ領域中に突然変異を導入する同様のアプローチ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０（１４）：６４４４−６４４８）によって生成されるものが含まれる。
【００５９】
「親和性成熟された」抗体とは、変化を有しない親抗体と比べて、抗体の１つ以上のＣＤＲ中に、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす１つ以上の変化を有する抗体である。典型的な親和性成熟された抗体は、標的抗原に対してｎＭの親和性を有し、またはｐＭの親和性さえ有する。親和性成熟された抗体は、本分野において公知の操作によって産生される。「Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３」は、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載している。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基の無作為な突然変異導入は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）ＰｒｏｃＮａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６によって記載されており、活性増強アミノ酸残基による選択的突然変異導入位置、接触または過剰変異位置での突然変異は、米国特許第６，９１４，１２８号に記載されている。
【００６０】
「ＣＤＲ移植された抗体」という用語は、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域の１つ以上の配列が別の抗体のＣＤＲ配列で置換されている重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体を指す。例えば、２つの抗体は、マウスＣＤＲの１つ以上がヒトＣＤＲ配列で置換されているマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体などの異なる種由来であり得る。
【００６１】
「ヒト化抗体」という用語は、ヒト以外の種由来の、より「ヒト類似に」、すなわち、ヒト生殖系列配列により類似するように改変された抗体を表す。ヒト化抗体の１つの種類は、非ヒトＣＤＲ配列がヒトのＶＨおよびＶＬ配列中に導入されて、対応するヒトＣＤＲ配列が置換されているＣＤＲ移植された抗体である。「ヒト化抗体」はまた、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に（例えば、アミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性で）有するフレームワーク領域（ＦＲ）配列と、非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する少なくとも１つのＣＤＲを含む抗体またはそのバリアント、誘導体、類似体もしくは断片である。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列が非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）の配列に対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列がヒト免疫グロブリンの配列である、少なくとも１つの、典型的には２つ可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的にすべてを含んでもよい。ヒト化抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含んでもよい。一実施形態において、ヒト化抗体はまた、ヒト免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／または重鎖のヒト化可変ドメインのみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖、ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、重鎖、ならびに軽鎖の少なくとも可変ドメインを含有する。
【００６２】
「二重可変ドメイン結合タンパク質」および「二重可変ドメイン免疫グロブリン」という用語は、その２つの結合アーム（例えば、ＨＣ／ＬＣの一対）のそれぞれにおいて２つの可変ドメインを有する結合タンパク質を指し（ＰＣＴ出願公開第ＷＯ０２／０２７７３号参照）、それぞれが抗原に結合することができる。一実施形態において、それぞれの可変ドメインは、異なる抗原またはエピトープに結合する。別の実施形態において、それぞれの可変ドメインは、同じ抗原またはエピトープに結合する。別の実施形態において、二重可変ドメイン結合タンパク質は、同一の特異性と同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一の抗原結合アームを有し、それが結合するそれぞれの抗原に対して二価である。一実施形態において、ＤＶＤ結合タンパク質は、単一特異的であってもよく、すなわち、１つの抗原に結合することができまたは多重特異的であってもよく、すなわち、２つ以上の抗原に結合することができる。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）と呼ばれる。一実施形態において、４本鎖ＤＶＤ結合タンパク質の各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド、軽鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの抗原結合部位を含む。一実施形態において、それぞれの結合部位は、抗原結合部位あたりの抗原結合に関与する全６つのＣＤＲを有する重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。
【００６３】
「抗イディオタイプ抗体」という用語は、別の抗体の抗原結合部位のアミノ酸配列に対して惹起された抗体を指す。抗イディオタイプ抗体は、抗原に対する免疫応答を増強するために投与され得る。
【００６４】
「生物学的活性」という用語は、分子の１つ以上の固有の生物学的特性（インビボで見られるように天然に存在するものであっても、組換え手段によって提供される、または可能にされるものであっても）を表す。生物学的特性には、受容体に結合すること；細胞増殖の誘導、細胞増殖を阻害すること、他のサイトカインの誘導、アポトーシスの誘導および酵素活性が含まれるが、これらに限定されない。
【００６５】
「中和」という用語は、結合タンパク質が抗原に特異的に結合した場合、抗原の生物学的活性を相殺することを指す。一実施形態において、中和結合タンパク質は、抗原（例えば、サイトカイン）に結合し、少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれ以上にその生物学的活性を低下させる。
【００６６】
「特異性」とは、抗原に選択的に結合する結合タンパク質の能力を指す。
【００６７】
「親和性」は、結合タンパク質と抗原との間の相互作用の強さであり、結合タンパク質のＣＤＲの配列によって、ならびに抗原の性質、例えばそのサイズ、形状および／または電荷によって決定される。結合タンパク質は、負の副作用を最小限にしながら、所望の治療の評価項目を提供する親和性について選択することができる。親和性は、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて測定することができる。
【００６８】
「効力」という用語は、所望の効果を達成するための結合タンパク質の能力を意味し、その治療有効性の測定である。効力は、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて評価することができる。
【００６９】
「交差反応性」という用語は、惹起された標的以外の標的に結合する結合タンパク質の能力を指す。一般に、結合タンパク質は、適切に高い親和性でその標的組織（単数または複数）／抗原（単数または複数）に結合するが、非標的の正常組織に対して適切に低い親和性を示す。個々の結合タンパク質は、一般に、２つの基準を満たすように選択される。（１）抗体標的の既知の発現に適切な組織染色。（２）同じ臓器からのヒトとｔｏｘ種（マウスおよびカニクイザル）との間の類似した染色パターン。交差反応性を評価するためのこれらの方法および他の方法は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７０】
「生物学的機能」という用語は、結合タンパク質の特異的なインビトロまたはインビボにおける作用を意味する。結合タンパク質は、抗原のいくつかのクラスを対象とし、複数の作用機序を介して所望の治療結果を達成することができる。結合タンパク質は、可溶性タンパク質、細胞表面抗原ならびに細胞外タンパク質沈着物を対象にすることができる。結合タンパク質は、それらの標的の活性を作働させ、拮抗しまたは中和することができる。結合タンパク質は、それらが結合する標的のクリアランスを助けることができまたは細胞に結合したときに細胞毒性をもたらすことがある。２つ以上の抗体の部分は、単一の結合タンパク質分子において異なる機能を達成するために、多価フォーマットに組み込むことができる。生物学的機能を評価するために使用されるインビトロアッセイおよびインビボモデルは、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７１】
「安定な」結合タンパク質は、結合タンパク質が、保存時にその物理的安定性、化学的安定性および／または生物学的活性を本質的に保持しているものである。長期間にわたって、種々の温度にてインビトロで安定である多価結合タンパク質が望ましい。結合タンパク質を安定化し、種々の温度でそれらの安定性を評価する方法は、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７２】
「溶解性」という用語は、水性溶液中に分散させたままにするタンパク質の能力を意味する。水性製剤中のタンパク質の溶解性は、疎水性および親水性アミノ酸残基の適切な分布に依存し、したがって、溶解性は、正確に折り畳まれたタンパク質の生成と相関し得る。当業者は、日常的なＨＰＬＣ技術および当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて、結合タンパク質の可溶性の増加または減少を検出することができる。
【００７３】
結合タンパク質は、様々な宿主細胞を用いて生成されてもよく、またはインビトロで生成されてもよく、労力あたりの相対収率は「生成効率」を決定する。生成効率に影響を及ぼす因子には、限定されないが、宿主細胞型（原核生物または真核生物）、発現ベクターの選択、ヌクレオチド配列の選択および使用される方法が挙げられる。結合タンパク質生成に使用される材料および方法、ならびに生成効率の測定は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７４】
「免疫原性」という用語は、免疫応答を誘導する物質の能力を意味する。治療的結合タンパク質の投与は、免疫応答の特定の発生率をもたらし得る。多価形式の免疫原性を誘導し得る潜在的な要素は、親抗体の選択中に分析することができ、このような危険性を低下させるための工程は、多価結合タンパク質形式にそれらの配列を組み込む前に、親抗体を最適化するために採用することができる。抗体と結合タンパク質の免疫原性を減少させる方法は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７５】
「標識」および「検出可能な標識」という用語は、特異的結合対のメンバー間の反応（例えば、結合）を検出可能なものにするために、抗体またはその分析物などの特異的結合対のメンバーに結合させた部分を意味する。特異的結合対の標識された部分は、「検出可能に標識されている」と呼ばれる。したがって、「標識された結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の同定を与える標識が取り込まれたタンパク質を表す。一実施形態において、標識は、視覚または計測手段によって検出可能な信号を生成することができる、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識されたアミノ酸の取り込み、または印を付けたアビジン（例えば、光学的方法または比色分析法によって検出することができる、蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができるビオチン部分のポリペプチドへの付着である。ポリペプチド用の標識の例には、以下の放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍ）；色原体、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）；酵素的標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；およびガドリニウムキレートなどの磁気作用物質が含まれるが、これらに限定されない。イムノアッセイに一般に使用される標識の代表例には、光を生じる部分、例えばアクリジニウム化合物および蛍光を生じる部分、例えばフルオレセインが含まれる。この関連で、部分自体が検出可能に標識され得るが、さらに別の部分との反応後に検出可能にされ得る。
【００７６】
「連結体」という用語は、第二の化学部分（治療剤または細胞毒性剤など）に化学的に連結された抗体などの結合タンパク質を表す。「作用物質」という用語は、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子または生物由来物質から作製された抽出物を含む。一実施形態において、治療剤または細胞毒性剤には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらの類似体または相同体が含まれるが、これらに限定されるものではない。イムノアッセイとの関連において使用される場合、連結抗体は、検出抗体として使用される検出可能に標識された抗体であってよい。
【００７７】
「結晶」および「結晶化された」という用語は、結晶の形態で存在する結合タンパク質（例えば、抗体）またはその抗原結合部分を表す。結晶は、物質の固体状態の一形態であり、これは、非晶質の固体状態または液体の結晶状態などの他の形態とは異なる。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）または分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な反復する三次元配列から構成される。これらの三次元配列は、本分野においてよく理解されている特異的な数学的関係に従って整列されている。結晶中で反復されている基礎的単位または構築ブロックは、非対称単位と呼ばれる。所定の十分に整えられた結晶的対称性に合致する配置での非対称単位の反復は、結晶の「単位格子」を与える。すべての三次元中での規則的な転換による単位格子の反復は、結晶を与える。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）を参照されたい。
【００７８】
「ベクター」という用語は、核酸分子に連結されている別の核酸を輸送することができる該核酸分子を表す。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、その中にさらなるＤＮＡセグメントを連結し得る環状二本鎖ＤＮＡループを表す。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、ここで、追加のＤＮＡセグメントはウイルスゲノム中に連結され得る。他のベクターにはＲＮＡベクターが含まれる。ある種のベクターは、当該ベクターがその中に導入された宿主細胞中で自律的複製を行うことができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中へ導入されて、宿主細胞のゲノム中に組み込まれることが可能であり、これにより、宿主ゲノムとともに複製される。ある種のベクターは、それらが作用可能に連結されている遺伝子の発現を誘導することが可能である。このようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に、「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。プラスミドは、最も一般的に使用されるベクターの形態であるので、本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、発現ベクターの他の形態もまた含まれ、例えば、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）なども含まれる。一群のｐＨｙｂＥベクター（米国特許出願第６１／０２１，２８２号）は、親抗体およびＤＶＤ結合タンパク質のクローニングに使用された。ｐＪＰ１８３由来のＶ１；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇ１，ｚ，非Ｖ２は、抗体および野生型定常領域を有するＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１９１由来のＶ２；ｐＨｙｂＥ−ｈＣＫ  Ｖ３は、抗体およびカッパ定常領域を有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１９２由来のＶ３；ｐＨｙｂＥ−ｈＣＩ  Ｖ２は、抗体およびランダ定常領域を有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。Ｖ４は、ラムダシグナルペプチドおよびカッパ定常領域を用いて構築され、ラムダ−カッパハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。Ｖ５は、カッパシグナルペプチドおよびラムダ定常領域を用いて構築され、カッパ−ラムダハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１８３由来のＶ７；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇ１，ｚ，非Ｖ２は、抗体および（２３４、２３５ＡＡ）突然変異定常領域を有するＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用された。
【００７９】
「組換え宿主細胞」または「宿主細胞」という用語は、外来ＤＮＡがその中に導入されている細胞を表す。このような用語は、当該細胞を表すのみならず、このような細胞の子孫も表す。突然変異または環境的な影響のために、後続の世代中にある種の修飾が生じ得るので、このような子孫は、実際には親細胞と同一でないことがあり得るが、本明細書において使用される「宿主細胞」という用語の範囲になお含まれる。一実施形態において、宿主細胞には、原核および真核細胞が含まれる。一実施形態において、真核細胞には、原生生物、真菌、植物および動物細胞が含まれる。別の実施形態において、宿主細胞には、原核細胞株Ｅ．コリ；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３、ＣＯＳ、ＮＳ０、ＳＰ２およびＰＥＲ．Ｃ６；昆虫細胞株Ｓｆ９および真菌細胞サッカロミセス・セレビシアエが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００８０】
「トランスフェクション」という用語は、宿主細胞への外因性核酸（例えば、ＤＮＡ）を導入するために一般的に用いられる様々な技術を包含し、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどが挙げられる。
【００８１】
「サイトカイン」という用語は、細胞間媒介物質として別の細胞集団に作用する１つの細胞集団から放出されるタンパク質を指す。「サイトカイン」という用語には、天然源由来または組換え細胞培養物由来のタンパク質および天然配列のサイトカインの生物学的に活性な同等物が含まれる。
【００８２】
「生物学的試料」という用語は、生物または生物であったものから得られた物質の量を意味する。このような物質には、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が含まれるが、これらに限定されない。
【００８３】
「成分」という用語は、組成物の要素を指す。診断キットに関連して、例えば、成分は、試験試料のアッセイ用のキットに含めることができる、捕捉抗体、検出またはコンジュゲート抗体、対照、較正因子、一連の較正因子、感受性パネル、容器、緩衝液、希釈剤、塩、酵素、酵素の補因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液として）、停止液などであってもよい。したがって、「成分」は、例えば、抗分析物（例えば、抗ポリペプチド）抗体に結合させることによって、固体支持体上に固定されている、上記のポリペプチドまたは他の分析物を含めることができる。いくつかの成分は、溶液中にあってもよくまたはアッセイにおける使用として再構成するために凍結乾燥されてもよい。
【００８４】
「対照」は、分析物を含まない（「陰性対照」）または分析物を含む（「陽性対照」）ことが知られている組成物を表す。陽性対照は、既知の濃度の分析物を含み得る。「対照」、「陽性対照」および「較正物質」は、既知の濃度の分析物を含む組成物を表すために本明細書において互換的に使用され得る。「陽性対照」は、アッセイ性能特性を確立するために使用することが可能であり、試薬（例えば、分析物）の完全性の有用な指標である。
【００８５】
「所定のカットオフ」および「所定のレベル」は、所定のカットオフ／レベルに対してアッセイの結果を比較することにより診断／予後診断／治療的効力の結果を評価するために使用されるアッセイのカットオフ値を一般に表し、所定のカットオフ／レベルは様々な臨床的パラメーター（例えば、疾患の重症度、進行／非進行／改善など）にすでにつながっておりまたは関連している。本開示は例示的な所定のレベルを提供し得るが、カットオフ値はイムノアッセイの性質（例えば、使用される抗体など）に応じて様々となり得ることが周知である。さらに、本明細書における開示を他のイムノアッセイに適合させて、本開示を基礎とする他のイムノアッセイについてのイムノアッセイ特異的なカットオフ値を得ることは、当業者の通常の技術の範囲内に十分にある。所定のカットオフ／レベルの正確な値はアッセイ間で様々となり得るが、（もしあれば）本明細書に記載されている相関は一般に適用可能であるはずである。
【００８６】
本明細書に記載されている診断アッセイにおいて使用される「前処理試薬」、例えば、溶解、沈殿および／または可溶化試薬は、あらゆる細胞を溶解するものおよび／または試験試料中に存在するあらゆる分析物を可溶化するものである。前処理は、本明細書でさらに記載されるように、すべての試料に必要というわけでない。とりわけ、分析物（例えば、目的のポリペプチド）の可溶化は、試料中に存在するあらゆる内在性結合タンパク質からの分析物の放出を伴い得る。前処理試薬は均一（分離工程を必要としない）または不均一（分離工程を必要とする）であり得る。不均一前処理試薬を使用すると、アッセイの次の工程に進行する前に任意の沈殿した分析物結合タンパク質は試験試料から除去される。
【００８７】
本明細書に記載されているイムノアッセイおよびキットとの関連で「品質管理試薬」には、較正物質、対照および感受性パネルが含まれるが、これらに限定されない。「較正物質」または「標準物質」は、抗体または分析物などの分析物の濃度を内挿するための較正（標準）曲線を確立するために典型的に（例えば複数など、１つ以上）使用される。あるいは、所定の陽性／陰性カットオフ近くにある単一の較正物質を使用することが可能である。「感受性パネル」を含むように、複数の較正物質（すなわち、２つ以上の較正物質または様々な量の（複数の）較正物質）を組み合わせて使用することが可能である。
【００８８】
「特異的結合パートナー」という用語は、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学的または物理的な手段を介して互いに特異的に結合する２つの異なる分子を含む。したがって、抗原および抗体の特異的結合に加えて、他の特異的結合対は、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物およびレクチン、相補的なヌクレオチド配列、エフェクターおよび受容体分子、補因子および酵素、酵素阻害剤および酵素などを含み得る。さらに、特異的結合対は、元の特異的結合メンバーの類似体、例えば、分析物類似体であるメンバーを含み得る。免疫反応性特異的結合メンバーには、単離または組換えで産生された抗原、抗原断片およびモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む抗体ならびにその複合体、断片およびバリアント（バリアントの断片を含む）が含まれる。
【００８９】
「Ｆｃ領域」という用語は、無傷の抗体のパパイン消化によって生成され得る、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義する。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン（ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）を含み、場合によって、ＣＨ４ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変化させるために、Ｆｃ部分中のアミノ酸残基を置換することが、本分野において周知である（例えば、米国特許第５，６４８，２６０号および第５，６２４，８２１号）。Ｆｃ領域は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および抗体と抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。いくつかの場合において、これらのエフェクター機能は、治療用の免疫グロブリンに対して望ましいが、他の場合において、治療目的に応じて、不要であるまたは有害でさえあり得る。
【００９０】
結合タンパク質の「抗原結合部分」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する結合タンパク質（例えば、抗体）の１つ以上の断片を意味する。結合タンパク質の抗原結合部分は、完全長の抗体の断片、ならびに、２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する、二特異的、二重特異的または多重特異的フォーマットで行うことができる。結合タンパク質の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域において、ジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別個の遺伝子によってコードされているが、これらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子を形成している単一のタンパク質鎖として、これらの作製を可能とする合成リンカーによって、組換え法を用いて連結することが可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている。）。このような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものとする。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態も包含される。さらに、一本鎖抗体も、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒に、抗原結合領域の対を形成する直列Ｆｖセグメントの対を含む「直鎖抗体」（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。
【００９１】
「多価結合タンパク質」という用語は、２つまたはそれ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を意味する。一実施形態において、多価結合タンパク質は、３つまたはそれ以上の抗原結合部位を有するように工学的に作製され、天然に存在しない抗体である。「多重特異的結合タンパク質」という用語は、２つ以上の関連標的または非関連標的に結合することができる結合タンパク質を指す。一実施形態において、本明細書に提供される二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含み、四価または多価の結合タンパク質である。
【００９２】
「リンカー」という用語は、アミノ酸残基または２つのポリペプチド（例えば、２つのＶＨまたは２つのＶＬドメイン）に連結させて用いられるペプチド結合によって接続された２つ以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドを意味する。このようなリンカーポリペプチドは、本分野において周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。
【００９３】
「Ｋａｂａｔ番号」、「Ｋａｂａｔ定義」および「Ｋａｂａｔ標識」という用語は、本明細書において、互換的に使用される。本分野において認められているこれらの用語は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基に比べて、より可変的な（すなわち、超可変的な）アミノ酸残基に付番するシステムを表す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置３１から３５、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から６５およびＣＤＲ３に対するアミノ酸位置９５から１０２にわたる。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置２４から３４、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から５６およびＣＤＲ３に対するアミノ酸位置８９から９７にわたる。
【００９４】
「ＣＤＲ」という用語は、免疫グロブリン可変領域配列内の相補性決定領域を意味する。重鎖および軽鎖可変領域のそれぞれについて、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と命名されている、重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれにおいて３つのＣＤＲが存在する。「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる単一の可変領域中に生じる３つのＣＤＲ群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なる系に従って、異なって定義されてきた。Ｋａｂａｔによって記載された系（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））は、抗体のいずれの可変領域に対しても適用可能な明瞭な残基付番系を提供するのみならず、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界を提供する。これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲと称され得る。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３）は、ＫａｂａｔＣＤＲ内のある種の亜部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造を採ることを見出した。これらの亜部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３（「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ、軽鎖および重鎖領域を表記する。）と表記される。これらの領域は、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲと称される場合があり、これは、ＫａｂａｔＣＤＲと重複する境界を有する。ＫａｂａｔＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界が、Ｐａｄｌａｎ（１９９５）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２−４５によって記載されている。さらに別のＣＤＲ境界定義が、上記系の１つに厳格に従わない場合があり得るが、それにも関わらず、ＫａｂａｔＣＤＲと重複するが、これらは、特定の残基または残基の群またはさらにはＣＤＲ全体が、抗原結合に著しい影響を与えないという予測または実験的な発見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書に使用されている方法は、これらの系のいずれかに従って定義されたＣＤＲを使用し得るが、ある種の実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを使用する。
【００９５】
「エピトープ」という用語は、結合タンパク質、例えば、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる、ポリペプチドおよび／または他の決定因子によって結合される抗原の領域を意味する。ある種の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホリルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、ある種の実施形態において、特異的な三次元構造的特徴および／または特異的な電荷特徴を有し得る。一実施形態において、エピトープは、特異的結合パートナー上の相補的部位に結合することが知られている抗原（またはその断片）の領域のアミノ酸残基を含む。抗原断片は１を超えるエピトープを含むことができる。ある種の実施形態において、結合タンパク質が、タンパク質および／または高分子の複雑な混合物中で、その標的抗原を認識する場合に、抗体は抗原を特異的に結合する。抗体が交差競合する（一方が他方の結合または調節作用を妨げる）場合、結合タンパク質は「同じエピトープに結合する」。さらに、エピトープの構造上の定義（重複、類似、同一）は有益であり、機能上の定義は、構造上（結合）および機能上（調節、競合）のパラメーターを包含する。タンパク質の異なる領域は、異なる機能を果たすことができる。例えば、サイトカインの特定の領域は、受容体活性をもたらすそのサイトカイン受容体と相互作用し、一方、このタンパク質の他の領域は、サイトカインを安定化するために必要とされ得る。サイトカインシグナル伝達の負の影響を排除するために、サイトカインは、受容体相互作用領域（単数または複数）に特異的に結合する結合タンパク質を用いて標的化され得て、それによってその受容体の結合を阻止する。あるいは、結合タンパク質は、サイトカイン安定化に関与する領域を標的化され得て、それによって、分解のためのタンパク質を指定する。エピトープ認識を可視化し、モデル化する方法は、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００９６】
「薬物動態」とは、薬物が、生物によって、吸収され、分散され、代謝されおよび排泄されるプロセスを指す。所望の薬物動態プロファイルを有する多価結合タンパク質分子を生成するために、同様の所望の薬物動態プロファイルを有する親モノクローナル抗体が選択される。選択された親モノクローナル抗体のＰＫプロファイルは、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて、げっ歯類において容易に決定することができる。
【００９７】
「生物学的利用能」とは、投与後にその標的に到達する活性薬剤の量を指す。生物学的利用能は、安定性、溶解性、免疫原性および薬物動態を含む前述の特性のいくつかの関数であり、当業者に知られている方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて評価することができる。
【００９８】
「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの会社）、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムな生物特異的相互作用の分析を可能とする光学現象を意味する。さらなる記載については、Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６を参照されたい。「Ｋｏｎ」という用語は、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ／抗原複合体を形成する、結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ）と抗原の結合についての結合速度（ｏｎ  ｒａｔｅ）定数を意味する。「Ｋｏｎ」という用語はまた、本明細書において互換的に用いられ、「会合速度定数」または「ｋａ」を意味する。その標的抗原への結合タンパク質の結合速度または結合タンパク質、例えば抗体、と抗原との間の複合体形成の速度を示すこの値はまた、以下の式によって示される。
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ
【００９９】
「Ｋｏｆｆ」という用語は、結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ）の、例えば、本分野で知られているＤＶＤ−Ｉｇ／抗原複合体からの解離についての解離速度（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）定数または「解離速度（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）定数」を意味する。この値は、以下の式によって示されるように、結合タンパク質、例えば抗体、のその標的抗原からの解離速度または遊離抗体と抗原への経時的なＡｂ−Ａｇ複合体の分離を示す。
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
【０１００】
「Ｋｄ」および「平衡解離定数」という用語は、平衡状態での滴定測定においてまたは解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を結合速度定数（Ｋｏｎ）で割ることによって得られた値を意味する。会合速度定数、解離速度定数および平衡解離定数は、抗原への結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ）の結合親和性を表すために使用される。結合および解離速度定数を決定する方法は本分野において周知である。蛍光を基礎とする技術の使用は、高い感度を提供し、平衡状態で生理的緩衝液中の試料を調べることができる。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイなどの他の実験的アプローチおよび機器を使用することが可能である（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎから入手可能な機器）。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（動態排除アッセイ）アッセイも使用することが可能である。
【０１０１】
「バリアント」という用語は、アミノ酸の付加（例えば、挿入）、欠失または保存的置換によってアミノ酸配列中の所与のポリペプチドとは異なるが、所与のポリペプチドの生物活性を保持するポリペプチドを意味する（例えば、バリアントＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲとの結合について抗ＥＧＦＲ抗体と競合することができる。）。アミノ酸の保存的置換、すなわち特性が類似する（例えば、親水性ならびに荷電領域の程度および分布）異なるアミノ酸とのアミノ酸の置き換えは、微小変化が典型的に関与すると本分野で認識されている。これらの微小変化は、本分野で理解されているように、アミノ酸のヒドロパシーインデックスを考慮することにより部分的に特定することが可能である（例えば、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２参照）。アミノ酸のヒドロパシーインデックスは、この疎水性および荷電の考慮を基礎とする。タンパク質中のヒドロパシーインデックスの類似したアミノ酸を置換することが可能であり、このタンパク質はタンパク質の機能を依然として保持することが本分野において知られている。一態様において、±２のヒドロパシーインデックスを有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質となる置換を明らかにするために使用することも可能である。ペプチドとの関連でアミノ酸の親水性を考慮すると、抗原性および免疫原性とよく相関することが報告されている有用な尺度である、そのペプチドの最大の局所平均親水性の計算が可能となる（例えば、米国特許第４，５５４，１０１号参照）。本分野で理解されているように、類似した親水性値を有するアミノ酸の置換は、生物活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。一態様において、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸を用いて置換が行われる。アミノ酸のヒドロパシーインデックスと疎水性値はどちらもそのアミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。この観察に一致して、生物学的機能と適合するアミノ酸置換は、アミノ酸、特に、疎水性、親水性、荷電、サイズおよび他の特性によって明らかにされるこれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存することが理解されている。「バリアント」という用語は、タンパク質分解、リン酸化または他の翻訳後修飾などによって異なる形でプロセシングされているが、その生物活性または抗原反応性、例えばＥＧＦＲに結合する能力を保持するポリペプチドまたはその断片を含む。「バリアント」という用語は、他に定義がなければ、バリアントの断片を包含する。バリアントは、野生型配列に対して９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％または７５％同一であってもよい。
【０１０２】
Ｉ．結合タンパク質の生成
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なった受容体の２つの異なった（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる結合タンパク質およびそれを作製する方法が提供される。結合タンパク質は、様々な技術を用いて生成することができる。発現ベクター、宿主細胞および結合タンパク質を生成する方法が提供され、当該技術分野において周知である。
【０１０３】
Ａ．親モノクローナル抗体の作製
ＤＶＤ結合タンパク質の可変ドメインは、目的の抗原に結合することができるポリクローナルＡｂおよびｍＡｂなど、親抗体から取得することが可能である。これらの抗体は、天然に存在し得、または組換え技術によって作製され得る。当業者は、例えば、限定されないが、ハイブリドーマ技術の使用、選択されたリンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）、ファージ、酵母もしくはＲＮＡ−タンパク質融合ディスプレイまたは他のライブラリーの使用、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも一部を含む非ヒト動物の免疫化、ならびにキメラ抗体、ＣＤＲ移植された抗体およびヒト化された抗体の調製を含む、抗体を生成するための多数の方法に精通している。例えば、米国特許公開第２００９０３１１２５３  Ａ１参照。可変ドメインは、親和性成熟技術を用いて調製することができる。
【０１０４】
Ｂ．親モノクローナル抗体を選択するための基準
ＤＶＤ結合タンパク質分子において望まれる少なくとも１つ以上の特性を有する親抗体を選択することを含む実施形態が提供される。一実施形態において、所望の特性は、例えば、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用能、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合などの１つ以上の抗体パラメーターである。例えば、米国特許出願公報第２００９０３１１２５３号を参照されたい。
【０１０５】
Ｃ．結合タンパク質分子の構築
結合タンパク質は、２つの異なる親モノクローナル抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技術によって、直接または短いリンカーを介して直列に連結され、その後に軽鎖定常ドメインＣＬが続くように設計され得る。同様に、重鎖は、直接的にまたはリンカーを介して、タンデムに連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、その後に定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域を含む（図１Ａ）。
【０１０６】
可変ドメインは、本明細書に記載されている方法のいずれか１つによって作製された親抗体から得られた組換えＤＮＡ技術を用いて取得することが可能である。一実施形態において、可変ドメインは、マウス重鎖または軽鎖可変ドメインである。別の実施形態において、可変ドメインは、ＣＤＲ移植されたまたはヒト化された可変重鎖または軽鎖ドメインである。一実施形態において、可変ドメインは、ヒト重鎖または軽鎖可変ドメインである。
【０１０７】
リンカー配列は、単一のアミノ酸またはポリペプチド配列であり得る。一実施形態において、リンカー配列の選択は、いくつかのＦａｂ分子の結晶構造分析に基づいている。Ｆａｂまたは抗体分子構造中の可変ドメインとＣＨ１／ＣＬ定常ドメインの間には、天然の柔軟な連結が存在する。この天然の連結は、ＶドメインのＣ末端由来の４−６残基およびＣＬ／ＣＨ１ドメインのＮ末端由来の４−６残基によって構成される約１０から１２個のアミノ酸残基を含む。ＤＶＤ結合タンパク質は、それぞれ、軽鎖および重鎖中のリンカーとしてＣＬまたはＣＨ１のＮ末端の５から６アミノ酸残基、または１１から１２アミノ酸残基を用いて作製された。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基、特に最初の５から６個のアミノ酸残基は、強い二次構造なしにループ立体構造を採ることが可能であり、したがって、２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーとして作用することが可能である。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基は、それらがＩｇ配列の一部であるため、可変ドメインの天然の伸長である。したがって、それらの使用は、リンカーおよび接合分析物から潜在的に生じる任意の免疫原性を大幅に最小化する。
【０１０８】
さらなる実施形態において、重鎖、軽鎖、二本鎖または四本鎖の実施形態のいずれかは、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）；ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）；ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）；ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）；ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）；ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）；ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）；ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）；ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）；またはＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２７）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２８）；またはＧ／Ｓに基づく配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート；配列番号２９）を含む、少なくとも１つのリンカーを含む。一実施形態において、Ｘ２はＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｘ２はバリアントＦｃ領域である。
【０１０９】
他のリンカー配列は、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのあらゆる長さのあらゆる配列を含み得るが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのすべての残基は含まない。例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５から１２個のアミノ酸残基；軽鎖リンカーは、ＣκまたはＣλに由来することが可能であり；ならびに重鎖リンカーは、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、ＣεおよびＣμを含む、いずれかのアイソタイプのＣＨ１に由来することが可能である。リンカー配列は、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、Ｇ／Ｓを基礎とする配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート；配列番号２９）；ヒンジ領域に由来する配列および他のタンパク質から得られる他の天然配列などの他のタンパク質からも由来し得る。
【０１１０】
一実施形態において、定常ドメインは、組換えＤＮＡ技術を用いて、２つの連結された可変ドメインに連結されている。一実施形態において、連結された重鎖可変ドメインを含む配列は、重鎖定常ドメインに連結され、連結された軽鎖可変ドメインを含む配列は、軽鎖定常ドメインに連結される。一実施形態において、定常ドメインは、それぞれ、ヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインである。一実施形態において、ＤＶＤ重鎖は、Ｆｃ領域にさらに連結されている。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。別の実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｆｃ領域には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤから得られるＦｃ領域が含まれる。
【０１１１】
別の実施形態において、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドは組み合わされて、ＤＶＤ結合タンパク質を形成する。表１は、疾患の治療に有用な例示的な抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列を列挙している。一実施形態において、いずれかの配向における、表１に列挙されたＶＨおよび／またはＶＬ領域の少なくとも２つを含むＤＶＤが提供される。いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して選択される。よって、いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は同じ配列番号を含み、他の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は異なる配列番号を含む。以下に与えられるＶＨおよびＶＬドメイン配列は、当該技術分野において知られているまたは当該技術分野において知られている方法を用いて容易に識別され得る相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク配列を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のこれらのＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列は、同じ抗原に結合する、当該技術分野において知られている結合タンパク質由来の他のＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列によって、機能を損なうことなく置換される。
【０１１２】
【表１】
2015509704.tif 000003
2015509704.tif 000004
【０１１３】
特異的な標的に結合することができる特異的ＤＶＤ結合タンパク質およびこれを作製する方法の詳細な説明は、以下の実施例の部において提供される。
【０１１４】
Ｄ．結合タンパク質の作製
本明細書において提供される結合タンパク質は、本分野で公知の多数のいずれかによって作製され得る。例えば、宿主細胞からの発現において、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって、宿主細胞中に形質移入される。原核または真核宿主細胞のいずれの中でも、本明細書において提供されるＤＶＤ結合タンパク質を発現することは可能であるが、真核細胞（特に、哺乳動物細胞）は、原核細胞に比べて、適切に折り畳まれ、免疫学的に活性なＤＶＤ結合タンパク質を集合および分泌する傾向がより大きいので、ＤＶＤ結合タンパク質は真核細胞、例えば哺乳動物宿主細胞中で発現される。
【０１１５】
ＤＶＤタンパク質の組換え発現用の典型的なシステムにおいて、リン酸カルシウムによって媒介された形質移入によって、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞中に導入される。組換え発現ベクター内で、重鎖および軽鎖遺伝子は、遺伝子の転写の高いレベルを誘導するために、各々、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＰＬプロモーター制御要素へ作用可能に連結されている。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択／増幅を用いて、ベクターで形質移入されたＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も担持する。選択された形質転換体宿主細胞は、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖の発現を可能とするために培養され、完全な状態のＤＶＤ結合タンパク質が培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地からＤＶＤタンパク質を回収するために、標準的な分子生物学的技術が使用される。ＤＶＤタンパク質が合成されるまで、適切な培地中で、本明細書において提供される宿主細胞を培養することによって、本明細書において提供されるＤＶＤタンパク質を合成する方法も提供される。本方法は、培地からＤＶＤタンパク質を単離することをさらに含むことが可能である。
【０１１６】
ＤＶＤ結合タンパク質の重要な特徴は、ＤＶＤ結合タンパク質が、慣用の抗体として、類似の様式で産生および精製され得ることである。ＤＶＤ結合タンパク質の産生は、定常領域の配列修飾、または化学的修飾を必要とせずに、所望される二重特異的活性を有する均一な単一の主産物をもたらす。「二特異的」、「多重特異的」および「多重特異的多価」完全長結合タンパク質を作製するための他の以前に記載された方法は、集合した不活性な単一特異的、多重特異的、多価の完全長結合タンパク質と、異なる結合部位の組合せを有する多価完全長結合タンパク質との混合物の細胞内産生または分泌された産生をもたらし得る。
【０１１７】
驚くべきことに、本明細書において提供される「二重特異的多価完全長結合タンパク質」の設計は、主として、所望される「二重特異的多価完全長結合タンパク質」へ集合する二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖をもたらす。
【０１１８】
集合され、発現された二重可変ドメイン免疫グロブリン分子の少なくとも５０％、少なくとも７５％および少なくとも９０％が、所望の二重特異的四価タンパク質であり、したがって、増大した商用的有用性を有する。したがって、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現し、「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の単一の主要産物をもたらす方法が提供される。
【０１１９】
「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の「主要産物」をもたらす単一細胞において二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現させる方法であって、「主要産物」は、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての集合されたタンパク質の５０％超であり、例えば、７５％超および９０％超である方法が提供される。
【０１２０】
ＩＩ．結合タンパク質の使用
本明細書において提供される結合タンパク質は２つまたはそれ以上の抗原に結合することができるので、本発明の結合タンパク質は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学など慣用のイムノアッセイを用いて、（例えば、血清または血漿などの生物学的試料中で）抗原を検出するために使用することが可能である。結合タンパク質は、結合したまたは結合していない抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例は、ルミノールであり、適切な放射性材料の例には、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍが含まれる。
【０１２１】
一実施形態において、本明細書に提供される結合タンパク質はインビトロとインビボの両方においてそれらの抗原標的の活性を中和することができる。したがって、このような結合タンパク質は、例えば、抗原を含有する細胞培地中で、ヒト対象中で、本明細書において提供される結合タンパク質が交差反応する抗原を有するその他の哺乳動物対象中で、抗原活性を阻害するために使用することが可能である。別の実施形態において、抗原活性が有害である疾病または疾患に罹患している対象中の抗原活性を低下させる方法が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質は、治療目的のために、ヒト対象に投与することができる。
【０１２２】
「抗原活性が有害である障害」という用語は、障害に罹患している対象における抗原の存在が、障害の病態生理に関与しているまたは障害の悪化に寄与する因子のいずれかであるまたはそれが疑われることが示されている疾患および他の障害を含むことを意図する。したがって、抗原活性が有害である疾患は、抗原活性の低下が疾患の症候および／または進行を緩和することが予測される疾患である。このような疾患は、例えば、本疾患に罹患している患者の生物学的液体中の抗原濃度の増加（例えば、対象の血清、血漿、滑液中などの抗原の濃度の増加）によって明らかとされ得る。本明細書において提供される結合タンパク質で治療することが可能な疾患の非限定的な例には、以下に、および結合タンパク質の医薬組成物に関するセクションに論述されている疾患が含まれる。
【０１２３】
ＤＶＤ結合タンパク質は、効力／安全を増強し、および／または患者の対象範囲を増加させるために、２つの異なる標的を同時に遮断するための治療剤として有用である。
【０１２４】
さらに、本明細書において提供されるＤＶＤ結合タンパク質は、細胞内送達（内部移行受容体および細胞内分子を標的化すること）、脳内への送達（血液脳関門を横切るために、トランスフェリン受容体および中枢神経系疾患媒介物質を標的化すること）など、組織特異的な送達（増強された局所ＰＫにより、より高い効力および／またはより低い毒性を得るために、組織マーカーおよび疾病媒介物質を標的とすること）のために使用することが可能である。また、ＤＶＤ結合タンパク質は、その抗原の非中和エピトープへの結合を介して特異的な位置へ抗原を送達するための担体タンパク質としての役割も果たすことができ、さらに、抗原の半減期を増加させることもできる。さらに、ＤＶＤ結合タンパク質は、患者に植え込まれた医療デバイスに物理的に連結されまたはこれらの医療デバイスを標的とするように設計され得る（Ｂｕｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．、（２００６）Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５８（３）：４３７−４４６；Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、（２００６）Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００（２２−２３）：６３１８−６３２４；Ｄｒｕｇ／ｄｅｖｉｃｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ、Ｗｕ（２００６）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２７（１１）：２４５０−２４６７；Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  ｄｅｖｉｃｅｓ．、Ｍａｒｑｕｅｓ（２００５）Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒ．Ｒｅｇｅｎ．Ｍｅｄ．３７７−３９７参照）。要約すれば、医療用インプラントの部位へ、細胞の適切な種類を誘導することは、正常な組織機能の治癒および回復を促進し得る。あるいは、用具に連結されたＤＶＤ、または用具を標的とするＤＶＤ−Ｉｇによって、装置の植え込み時に放出される媒介物質（サイトカインが含まれるが、これに限定されない。）の阻害も提供される。
【０１２５】
Ａ．様々な疾病における結合タンパク質の使用
本明細書において提供される結合タンパク質分子は、様々な疾患を治療するための治療分子としても有用であり、例えば、結合タンパク質によって認識される標的は有害である。このような結合タンパク質は、特定の疾患に関与する１つ以上の標的に結合することができる。また、ＥＧＦＲ、ＲＯＮ、ＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３および／またはＨＥＲ２の阻害は、動物モデルにおいて抗腫瘍療法を増強することが示されており、原発性および転移性癌の治療に有益であり得る。
【０１２６】
開示を制限することなく、特定の疾患状態に関する追加情報が提供される。
【０１２７】
１．ヒト自己免疫および炎症性応答
膜貫通型受容体は、一般的な自己免疫および炎症反応に関与しており、例えば、喘息、アレルギー、アレルギー性肺疾患、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、線維症、嚢胞性線維症（ＣＦ）、線維性肺疾患、特発性肺線維症、肝線維症、狼瘡、Ｂ型肝炎関連肝疾患および線維症、敗血症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糸球体腎炎、炎症性皮膚疾患、乾癬、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症（ＯＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植拒絶反応、虚血性心疾患（ＩＨＤ）、セリアック病、接触過敏症、アルコール性肝疾患、ベーチェット病、アテローム硬化性血管疾患、眼球表面の炎症性疾患またはライム病などが挙げられる。
【０１２８】
本明細書において提供される結合タンパク質は、神経疾患を治療するために使用することができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、神経変性疾患ならびに神経再生および脊髄損傷を伴う状態を治療するために使用される。
【０１２９】
２．喘息
アレルギー性喘息は、好酸球増加症、杯細胞異形成、上皮細胞の変化、気道過敏症（ＡＨＲ）ならびにＴｈ２およびＴｈ１サイトカイン発現ならびに上昇した血清ＩｇＥレベルの存在によって特徴付けられる。コルチコステロイドは、今日、喘息に対する最も重要な抗炎症性治療であるが、それらの作用機序は非特異的であり、特に、若い患者集団では、安全性についての懸念が存在する。したがって、より特異的で、標的化された治療の開発が必要とされる。
【０１３０】
炎症およびＡＨＲをともに評価することができる、ＯＶＡによって誘導された喘息マウスモデルなどの動物モデルが本分野において公知であり、様々な結合タンパク質分子が喘息を治療する能力を測定するために使用し得る。喘息を研究するための動物モデルは、Ｃｏｆｆｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１（１２）：１８７５−１８７９；Ｌｌｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７７，２６３−２９５；Ｂｏｙｃｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１（１２）：１８６９−１８７３；およびＳｎｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｂｒｉｔ．Ｓｏｃ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５（２）：１４６−５２に開示されている。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｏｘｉｃｏｌ．９２（１−３）：２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．７７：９９−１０２；Ｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８（２）：２５０−２５７参照）。
【０１３１】
３．関節リウマチ
全身性疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の滑液中の慢性的炎症反応によって特徴付けられ、軟骨の変性と隣接する関節骨のただれを伴う。多くの炎症促進性サイトカイン、ケモカインおよび成長因子が、罹患した関節中に発現されている。結合タンパク質分子が関節リウマチの治療に対して有用であるかどうかは、コラーゲンによって誘導された関節炎マウスモデルなど、前臨床動物ＲＡモデルを用いて評価することが可能である。他の有用なモデルも本分野において周知である（Ｂｒａｎｄ（２００５）Ｃｏｍｐ．Ｍｅｄ．５５（２）：１１４−２２参照）。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＴＮＦ、ヒトおよびマウスＩＬ−１５などに対する反応性）を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスＣＩＡモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である；簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。
【０１３２】
４．全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
ＳＬＥの免疫病原性の特徴は、ポリクローナルＢ細胞活性化であり、これは、高グロブリン血症、自己抗体産生および免疫複合体形成をもたらす。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＣＤ２０、ヒトおよびマウスインターフェロンαなどに対する反応性）を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスループスモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である。簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。
【０１３３】
５．多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、主に病因が不明である複雑なヒト自己免疫型疾病である。神経系を通じたミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の免疫学的破壊が、多発性硬化症の主要な病因である。主に検討すべきであるのは、自己免疫の発達に寄与する免疫学的機序である。特に、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞などの他のＴ細胞のバランス／調節を補助する、抗原発現、サイトカインおよび白血病相互作用ならびに調節性Ｔ細胞は、治療標的の同定のための重要な領域である。ＭＳを治療するための結合タンパク質の有用性を評価するためのいくつかの動物モデルが、本分野において公知である（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１１）：５６５−７１；Ｌｕｂｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８（３）：１９７−２０８；Ｇｅｎａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７５（３）：１８７−９７；Ｔｕｏｈｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９（７）：１０３３−４２；Ｏｗｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｎｅｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．１３（１）：５１−７３；およびＨａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５（７）：４７６１−８参照）。ヒトおよび動物種オルソログに対する親抗体の交差反応性を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスＥＡＥモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である。簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。同じ概念は他の非げっ歯類種の動物モデルに当てはまり、「適合代理抗体」由来結合タンパク質は予期される薬理学および場合によると安全性研究のために選択される。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｏｘｉｃｏｌ．９２（１−３）：２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｄｅｖｅｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．７７：９９−１０２；Ｊｏｎｅｓ（２０００）ＩＤｒｕｇｓ  ３（４）：４４２−６）参照）。
【０１３４】
６．敗血症
圧倒的な炎症性応答および免疫応答は、敗血症性ショックの本質的な特徴であり、敗血症によって誘導される組織損傷、多臓器不全および死亡の病因において中心的な役割を果たす。サイトカインは、敗血症性ショックの媒介物質であることが示されている。これらのサイトカインは、組織に対して直接的な毒性効果を有しており、ホスホリパーゼＡ２も活性化させる。一実施形態は、敗血症に関与する１つ以上の標的に結合することができる結合タンパク質に関する。敗血症を治療するためのこのような結合タンパク質の有効性は、当該技術分野で公知の前臨床動物モデルにおいて評価することができる（Ｂｕｒａｓら（２００５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．４（１０）：８５４−６５およびＣａｌａｎｄｒａら（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６（２）：１６４−７０を参照されたい。）。
【０１３５】
７．神経疾患
ａ．神経変性疾患
神経変性疾患は、通常、それらが年齢依存性である場合においては慢性でありまたは急性（例えば、脳卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷など）である。それらは、神経機能の進行性の喪失（例えば、神経細胞死、軸索損失、神経炎性ジストロフィー、脱髄）、運動能力の喪失および記憶喪失によって特徴付けられる。これらの慢性神経変性疾患は、複数の細胞種および媒介物質の間で複雑な相互作用を示す。このような疾病に対する治療戦略は限られており、非特異的な抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＣＯＸ阻害剤）または神経細胞の喪失および／またはシナプス機能を抑制するための作用物質で炎症プロセスを遮断することが大部分を占める。これらの治療は、疾病の進行を停止させることができない。１を超える疾患媒介物を標的とする特定の治療は、単一の疾患メカニズムを標的にして観察されるものよりも、慢性神経変性疾患のさらにより良好な治療効果を提供することができる（Ｄｅａｎｅら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．９：９０７−１３；およびＭａｓｌｉａｈら（２００５）Ｎｅｕｒｏｎ．４６：８５７を参照されたい。）。
【０１３６】
本明細書において提供される結合タンパク質分子は、アルツハイマー病などの慢性神経変性疾患に関与する１つ以上の標的に結合することが可能である。結合タンパク質分子の効力は、アミロイド前駆体タンパク質またはＲＡＧＥを過剰発現し、アルツハイマー病様の症候を発症するトランスジェニックマウスなどの前臨床動物モデルで妥当性を確認することが可能である。さらに、結合タンパク質分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的結合タンパク質を選択することができる。結合タンパク質分子は、パーキンソン病などの他の神経変性疾患の治療のためにも使用することが可能である。
【０１３７】
ｂ．神経細胞の再生および脊髄損傷
病的機序の知見の増大にかかわらず、脊髄損傷（ＳＣＩ）は、なお、多大な損害を与える症状であり、高い医学的な要求を特徴とする医学的な適応症である。多くの脊髄損傷は、挫傷または圧迫傷害であり、通常、一次損傷に続いて、最初の損傷を悪化させ、病変部位の著しい拡大（特には、１０倍超）をもたらす二次的な損傷機序（炎症媒介物質、例えば、サイトカインおよびケモカイン）が起こる。結合タンパク質分子の効力は、脊髄損傷の前臨床動物モデルにおいて、妥当性を確認することが可能である。さらに、これらの結合タンパク質分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的結合タンパク質を選択することができる。一般に、抗体は、脳血液関門（ＢＢＢ）を効率的および適切な様式で横切らない。しかしながら、ある種の神経疾患（例えば、脳卒中、外傷性脳傷害、多発性硬化症など）では、ＢＢＢが損なわれる場合があり、結合タンパク質および抗体の脳内への増加した浸透を許容する。ＢＢＢの漏出が起こらない他の神経症状では、グルコースおよびアミノ酸担体などの担体媒介性輸送体ならびにＢＢＢの血管内皮における受容体媒介性トランスサイトーシス媒介細胞構造／受容体を含む内在性輸送系の標的化を使用することができ、これにより、結合タンパク質のトランスＢＢＢ輸送が可能になる。このような輸送を可能にするＢＢＢでの構造には、限定されないが、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＬＲＰおよびＲＡＧＥが含まれる。さらに、戦略は、低分子量の薬物、ナノ粒子および核酸を含む、ＣＮＳへ潜在的薬物を輸送するためのシャトルとして結合タンパク質を使用することも可能である（Ｃｏｌｏｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１７（３）：２６６−７４；Ｂｏａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１８（２）：４４７−５５）。
【０１３８】
８．腫瘍疾患
モノクローナル抗体療法が、癌に対する重要な治療法として登場している（ｖｏｎ  Ｍｅｈｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５４：３４３−６９）。２つの別個の腫瘍媒介物質を標的とする二重特異的抗体の使用は、単一特異的療法に比べて、さらなる有利さを与えるものと思われる。
【０１３９】
一実施形態において、本明細書において提供される組成物および方法を用いて治療または診断され得る疾患には、限定されないが、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱および尿路上皮を含む。）、女性生殖路（子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む。）、男性生殖路（前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む。）、内分泌腺（甲状腺、副腎および下垂体を含む。）および皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫（骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む。）、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍（星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む。）、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫の両方）を含む原発性および転移性の癌が挙げられる。
【０１４０】
一実施形態において、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療法および／もしくは他の化学療法剤と組み合わせて使用される場合、癌を治療するためにまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防において使用される。
【０１４１】
９．遺伝子治療
特定の実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質をコードする核酸配列または本明細書において提供される別の予防薬もしくは治療薬は、遺伝子治療を手段として、障害または１つ以上の症状を治療、予防、管理または改善するために投与される。遺伝子治療とは、発現されたまたは発現可能な核酸の対照への投与によって行われる治療を指す。この実施形態において、核酸は、予防効果または治療効果を媒介する本明細書において提供されるそれらによってコードされた抗体または予防薬もしくは治療薬を生成する。
【０１４２】
当該技術分野において利用可能である遺伝子治療のための方法のいずれかは、本明細書において提供される方法において使用され得る。遺伝子治療の方法に関する一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら（１９９３）  Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；ＷｕおよびＷｕ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；ＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；ならびにＭａｙ（１９９３）ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５を参照されたい。使用することができる組換えＤＮＡ技術の、当該技術分野において一般的に知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編集）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。遺伝子治療の様々な方法の詳細な説明は、米国特許出願公開第ＵＳ２００５００４２６６４号に開示されている。
【０１４３】
ＩＩＩ．医薬組成物
単独または予防薬、治療薬および／または医薬として許容される担体と組み合わせた、１つ以上の結合タンパク質を含む医薬組成物が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質を含む医薬組成物は、疾患を診断し、検出し、もしくはモニタリングし、疾患または１つもしくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、もしくは軽減する上で、および／または研究において使用されるが、これらに限定されない。単独または予防薬、治療薬および／または医薬として許容される担体と組み合わせた医薬組成物の製剤は、当業者に公知である（米国特許出願公開第２００９０３１１２５３Ａ１）。
【０１４４】
本明細書において提供される予防薬または治療薬を投与する方法には、限定されないが、非経口投与（例えば、皮内、筋内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与、粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路）および経肺投与（例えば、吸入器または噴霧器を用いて投与されるエアロゾル化化合物）が挙げられる。特定の投与経路のための医薬組成物の製剤ならびに投与の様々な方法に必要とされる材料および技術が利用可能であり、当業者に公知である（米国特許出願公開第２００９０３１１２５３Ａ１）。
【０１４５】
投与計画は、最適な所望の反応（例えば、治療的または予防的反応）を提供するように調整されてもよい。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、いくつかに分割した用量は経時的に投与さてもよく、または用量は比例的に減少されてもよくもしくは治療状況の緊急性によって示されるように増加されてもよい。投与の容易性および投与量の均一性のために投薬単位形態において非経口組成物を処方することが特に有利である。「投薬単位形態」という用語は、処置されるべき哺乳動物対象のための単位用量として適した物理的に別個の単位を指し；それぞれの単位は、必要とされる医薬的担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。本明細書において提供される投薬単位形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特性および達成されるべき特定の治療効果または予防効果および（ｂ）個体における感受性の処置のために、このような活性化合物の配合に関する当該技術分野における固有の制限、によって決定され、直接的に依存する。
【０１４６】
本明細書において提供される結合タンパク質の治療的または予防的な有効量についての例示的であり、非限定的な範囲は、０．１−２０ｍｇ／ｋｇであり、例えば、１−１０ｍｇ／ｋｇである。用量値は、緩和されるべき状態の種類および重症度によって変化し得ることに留意すべきである。いずれかの特定の対象について、特定の投薬処方は、個々の必要性および組成物を投与しまたは投与を管理している者の専門的な判断に従って、経時的に調整されてもよく、本明細書において記載されている用量範囲は、単に例示的であり、請求される組成物の範囲または実施を制限することを意図していないことはさらに理解されるべきである。
【０１４７】
ＩＶ．併用療法
本明細書において提供される結合タンパク質はまた、種々の疾患の治療に有用な１つ以上の追加の治療薬とともに投与することができ、追加の薬剤は、その意図される目的で当業者によって選択される。例えば、追加の薬剤は、本明細書において提供される抗体によって治療される疾患または状態の治療に有用であるとして当該技術分野において認識されている治療薬であり得る。組合せは、１を超える追加の薬剤、例えば、２つまたは３つの追加の薬剤を含むことができる。
【０１４８】
併用療法剤には、限定されないが、抗腫瘍剤、放射線療法、化学療法、例えばＤＮＡアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン剤、パクリタキセル、ドセタキセル、タキソール、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ジェムザール、アントラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、キナーゼ阻害剤およびｓｉＲＮＡが含まれる。
【０１４９】
本明細書において提供される結合タンパク質と組み合わせることができる化学療法剤の非制限的な例には、以下：１３−ｃｉｓ−レチノイン酸；２−ＣｄＡ；２−クロロデオキシアデノシン；５−アザシチジン；５−フルオロウラシル；５−ＦＵ；６−メルカプトプリン；６−ＭＰ；６−ＴＧ；６−チオグアニン；アブラキサン；Ａｃｃｕｔａｎｅ（登録商標）；アクチノマイシン−Ｄ；Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）；Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）；Ａｇｒｙｌｉｎ（登録商標）；Ａｌａ−Ｃｏｒｔ（登録商標）；アルデスロイキン；アレムツズマブ；ＡＬＩＭＴＡ；アリトレチノイン；Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）；Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）；オールトランスレチノイン酸；アルファインターフェロン；アルトレタミン；アメトプテリン；アミホスチン；アミノグルテチミド；アナグレリド；Ａｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）；アナストロゾール；アラビノシルシトシン；Ａｒａ−Ｃ  Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）；Ａｒｅｄｉａ（登録商標）；Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）；Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）；Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）；三酸化ヒ素；Ａｒｚｅｒｒａ（商標）；アスパラギナーゼ；ＡＴＲＡ；Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）；アザシチジン；ＢＣＧ；ＢＣＮＵ；ベンダムスチン；ベバシズマブ：ベキサロテン；ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）；ビカルタミド；ＢｉＣＮＵ；Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）；ブレオマイシン；ボルテゾミブ；ブスルファン；Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）；Ｃ２２５；カルシウムロイコボリン；Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）；Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）；Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ−１１；カペシタビン；Ｃａｒａｃ（商標）；カルボプラチン；カルムスチン；カルムスチンウエハー；Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）；ＣＣ−５０１３；ＣＣＩ−７７９；ＣＣＮＵ；ＣＤＤＰ；ＣｅｅＮＵ；Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標）；セツキシマブ；クロラムブシル；シスプラチン；シトロボラム因子；クラドリビン；コルチゾン；Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）；ＣＰＴ−１１；シクロフォスファミド；Ｃｙｔａｄｒｅｎ（登録商標）；シタラビン；シタラビンリポゾーマル；Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）；Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）；ダカルバジン；ダコゲン；ダクチノマイシン；ダルベポエチンアルファ；ダサチニブ；ダウノマイシン；ダウノルビシン；塩酸ダウノルビシン；ダウノルビシンリポゾーマル；ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）；デカドロン；デシタビン；Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）；Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）；デニロイキン；ジフチトクス；ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）；デキサメタゾン；酢酸デキサメタゾン；リン酸デキサメタゾンナトリウム；デキサゾン；デクスラゾキサン；ＤＨＡＤ；ＤＩＣ；ジオデックス；ドセタキセル；Ｄｏｘｉｌ（登録商標）；ドキソルビシン；ドキソルビシンリポゾーマル；Ｄｒｏｘｉａ（商標）；ＤＴＩＣ；ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）；Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）；Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）；Ｅｌｉｇａｒｄ（商標）；Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標）；Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）；Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）；Ｅｍｃｙｔ（登録商標）；エピルビシ���；エポエチンアルファ；エルビタックス；エルロチニブ；エルウィニア  Ｌ−アスパラギナーゼ；エストラムスチン；エチオール；Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）；エトポシド；リン酸エトポシド；Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標）；エベロリムス；Ｅｖｉｓｔａ（登録商標）；エキセメスタン；Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）；Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）；Ｆｅｍａｒａ（登録商標）；フィルグラスチム；フロクスウリジン；Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）；フルダラビン；Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）；フルオロウラシル；フルオロウラシル（クリーム）；フルオキシムエステロン；フルタミド；フォリン酸；ＦＵＤＲ（登録商標）；フルベストラント；ゲフィチニブ；ゲムシタビン；ゲムツズマブオゾガマイシン；ジェムザール；Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）；Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標）ウエハー；ＧＭ−ＣＳＦ；ゴセレリン；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Ｇ−ＭＣＳＦ）；Ｈａｌｏｔｅｓｔｉｎ（登録商標）；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；ヘキサドロール；Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）；ヘキサメチルメラミン；ＨＭＭ；Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）；Ｈｙｄｒｅａ（登録商標）；Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ  Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）；ヒドロコルチゾン；リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム；コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム；リン酸ハイドロコートン；ヒドロキシ尿素；イブリツモマブ；イブリツモマブチウキセタン；Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ  Ｉｆｅｘ（登録商標）；インターフェロン−アルファ；インターフェロン−アルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）；イホスファミド；インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）；インターロイキン−２（ＩＬ−２）；メシル酸イマチニブ；イミダゾールカルボキサミド；Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標）；Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）；イリノテカン；イソトレチノイン；イキサベピロン；Ｉｘｅｍｐｒａ（商標）；キドロラーゼ（ｔ）；Ｌａｎａｃｏｒｔ（登録商標）；ラパチニブ；Ｌ−アスパラギナーゼ；ＬＣＲ；レナリドミド；レトロゾール；ロイコボリン；リューケラン；Ｌｅｕｋｉｎｅ（商標）；ロイプロリド；ロイコクリスチン；Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（商標）；リポゾーマルＡｒａ−Ｃ；Ｌｉｑｕｉｄ  Ｐｒｅｄ（登録商標）；ロムスチン；Ｌ−ＰＡＭ；Ｌ−サルコリジン；Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標）；Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（登録商標）；Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標）；マキシデックス；メクロレタミン；塩酸メクロレタミン；Ｍｅｄｒａｌｏｎｅ（登録商標）；Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）；Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）；メゲストロール；酢酸メゲストロール；メルファラン；メルカプトプリン；メスナ；メスネックス（商標）；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メチルプレドニゾロン；Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）；マイトマイシン；マイトマイシン−Ｃ；ミトキサントロン；Ｍ−Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）；ＭＴＣ；ＭＴＸ；Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標）；ムスチン；Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標）；Ｍｙｌｏｃｅｌ（商標）；Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）；Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（���録商標）；ネララビン；Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）；Ｎｅｕｌａｓｔａ（商標）；Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）；Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）；Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標）；Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）；ニルタミド；Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標）；Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｎｏｖａｌｄｅｘ（登録商標）；Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）；エヌプレート；オクトレオチド；酢酸オクトレオチド；オフタツムマブ；Ｏｎｃｏｓｐａｒ（登録商標）；Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）；Ｏｎｔａｋ（登録商標）；Ｏｎｘａｌ（商標）；オプレルベキン；Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）；Ｏｒａｓｏｎｅ（登録商標）；オキサリプラチン；パクリタキセル；タンパク質に結合したパクリタキセル；パミドロネート；パニツムマブ；Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）；パゾパニブ；Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）；ＰＥＧインターフェロン；ペグアスパラガーゼ；ペグフィルグラスチム；ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（商標）；ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ；ペメトレキセド；ペントスタチン；フェニルアラニンマスタード；Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）；Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（登録商標）；プレドニゾロン；プレドニゾン；Ｐｒｅｌｏｎｅ（登録商標）；プロカルバジン；ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）；カルムスチンインプラントを伴うプロリフェプロスパン２０；Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標）；ラロキシフェン；Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）；Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標）；Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；リツキシマブ；Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ（登録商標）；ロミプロスチン；Ｒｕｂｅｘ（登録商標）；塩酸ルビドマイシン；Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（登録商標）；Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ＬＡＲ（登録商標）；サーグラモスティム；Ｓｏｌｕ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）；Ｓｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）；ソラフェニブ；ＳＰＲＩＣＥＬ（商標）；ＳＴＩ−５７１；ストレプトゾシン；ＳＵ１１２４８；スニチニブ；Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）；Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標）；Ｔａｘｏｌ（登録商標）；Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）；Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）；テモゾロマイド；テムシロリムス；テニポシド；ＴＥＳＰＡ；サリドマイド；Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）；ＴｈｅｒａＣｙｓ（登録商標）；チオグアニン；Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ  Ｔａｂｌｏｉｄ（登録商標）；チオホスファミドＴｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標）；チオテパ；ＴＩＣＥ（登録商標）；Ｔｏｐｏｓａｒ（登録商標）；トポテカン；トレミフェン；Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標）；トシツモマブ；トラスツズマブ；Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標）；トレチノイン；Ｔｒｅｘａｌｌ（商標）；Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）；ＴＳＰＡ；ＴＹＫＥＲＢ（商標）；ＶＣＲ；Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標）；Ｖｅｌｂａｎ（登録商標）；Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）；Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標）；Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標）；Ｖｉａｄｕｒ（商標）；Ｖｉｄａｚａ（登録商標）；ビンブラスチン；硫酸ビンブラスチン；ＶｉｎｃａｓａｒーＰｆｓ（登録商標）；ビンクリスチン；ビノレルビン；酒石酸ビノレルビン；ＶＬＢ；ＶＭ−２６；ボリノスタット；ヴォトリエント；ＶＰ−１６；Ｖｕｍｏｎ（登録商標）；Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）；Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標）；Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）；Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標）；Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）；ゾレドロン酸；ゾリンザ；またはＺｏｍｅｔａ（登録商標）が含まれる。
【０１５０】
自己免疫疾患および炎症性疾患を治療するための組合せは、イブプロフェンのような薬剤を含む、ＮＳＡＩＤＳとも称される非ステロイド性抗炎症薬（単数または複数）である。他の組合せは、プレドニゾロンなどのコルチコステロイドである；ステロイド使用の周知の副作用は、本明細書において提供される結合タンパク質と組み合わせて患者を治療するときに必要とされるステロイド用量を徐々に減らすことによって、低減することが可能でありまたは除去することさえ可能である。本明細書において提供される抗体またはその抗体結合部分とともに組み合わせることが可能な関節リウマチに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：サイトカイン抑制抗炎症薬（単数または複数）（ＣＳＡＩＤ）；他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡまたはＣＤ１５４を含むこれらのリガンド（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）などの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。
【０１５１】
治療剤の組合せは、異なる点で、自己免疫およびこれに続く炎症カスケードを干渉し得る。例には、本明細書において開示される結合タンパク質、ならびにキメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、可溶性ｐ５５もしくはｐ７５ＴＮＦ受容体、またはこれらの誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤のようなＴＮＦアンタゴニスト；またはＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）が挙げられる。他の組合せには、本明細書において開示される結合タンパク質およびインターロイキン１１が含まれる。さらに別の組合せには、ＩＬ−１２機能と平行して、ＩＬ−１２機能に依存してまたはＩＬ−１２と協調して作用し得る自己免疫応答の中心的プレーヤーが含まれる；特に、ＩＬ−１８抗体または可溶性ＩＬ−１８受容体またはＩＬ−１８結合タンパク質などのＩＬ−１８アンタゴニストが関連する。ＩＬ−１２およびＩＬ−１８は重複しているが、異なる機能を有しており、両者に対するアンタゴニストの組合せは、最も有効であり得ることが示されている。さらに別の組合せは、本明細書において開示される結合タンパク質と非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤である。さらに他の組合せには、本明細書において開示される結合タンパク質と、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含む、共同刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストが含まれる。
【０１５２】
本明細書において提供される結合タンパク質はまた、薬剤と併用されてもよく、例えば、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン（ｐｅｎｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、金チオリンゴ酸塩（筋内および経口）、アザチオプリン、コルヒチン（ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ）、コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）、β−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウム、オキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体または誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリムシノロン・アセトニド、プロポキシフェンナプシラート／ａｐａｐ、フォラート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、ヒドロコドン二酒石酸塩／ａｐａｐ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組み換え、塩酸トラマドール、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロナートナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８��１およびメソプラムなどの作用物質とも組み合わされ得る。組合せには、メトトレキサートまたはレフルノミドとシクロスポリンが含まれる。
【０１５３】
一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、関節リウマチの治療用の以下の薬剤の１つと併用して投与される：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤；メトトレキサート；プレドニゾン；セレコキシブ；葉酸；硫酸ヒドロキシクロロキン；ロフェコキシブ；エタネルセプト；インフリキシマブ；レフルノミド；ナプロキセン；バルデコキシブ；スルファサラジン；メチルプレドニゾロン；イブプロフェン；メロキシカム；酢酸メチルプレドニゾロン；金チオリンゴ酸ナトリウム；アスピリン；アザチオプリン；トリアムシノロンアセトニド；プロプキシフェンナプシラート／ａｐａｐ；フォラート；ナブメトン；ジクロフェナク；ピロキシカム；エトドラク；ジクロフェナクナトリウム；オキサプロジン；塩酸オキシコドン；重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ；ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール；フェンタニル；アナキンラ、ヒト組み換え；塩酸トラマドール；サルサラート；スリンダク；シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン；アセトアミノェン；アレンドロナートナトリウム；プレドニゾロン；硫酸モルヒネ；塩酸リドカイン；インドメタシン；硫酸グルコサミン／コンドロイチン；シクロスポリン；塩酸アミトリプチリン；スルファジアジン；塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン；塩酸オロパタジン；ミソプロストール；ナプロキセンナトリウム；オメプラゾール；ミコフェノラートモフェチル；シクロホスファミド；リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ；ＭＲＡ；ＣＴＬＡ４−ＩＧ；ＩＬ−１８ＢＰ；ＩＬ−１２／２３；抗ＩＬ−１８；抗ＩＬ−１５；ＢＩＲＢ−７９６；ＳＣＩＯ−４６９；ＶＸ−７０２；ＡＭＧ−５４８；ＶＸ−７４０；ロフルミラスト；ＩＣ−４８５；ＣＤＣ−８０１またはメソプラム。
【０１５４】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な炎症性腸疾患に対する治療剤の非限定的な例には、以下：ブデノシド；上皮細胞増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βｍＡｂ；抗ＩＬ−６ｍＡｂ；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）または炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３またはＴＧＦβ）またはｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤とも組み合わされ得る。
【０１５５】
結合タンパク質を組み合わせることが可能なクローン病に対する治療剤の例には、以下：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）またはｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））阻害剤またはＰＤＥ４阻害剤が含まれる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシドおよびデキサメタゾンと組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質またはこれらの抗原結合部分はまた、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸およびオルサラジンなどの薬剤、ならびにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成または作用を妨害する薬剤、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤またはＩＬ−１ｒａと組み合わされ得る。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤または６−メルカプトプリンとともに使用され得る。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシレート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、フォレート、シプロフロキサシン／デキストロース−水、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、テトラサイクリン塩酸塩、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム、リン酸コデイン／アセトアミノフェン（ａｐａｐ）、塩酸コレセベラム、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニソロン、ナタリズマブまたはインターフェロンガンマと組み合わせることができる。
【０１５６】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な多発性硬化症に対する治療剤の非限定的な例には、以下：コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロン−β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロン−β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンα−ｎ３）（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロン−β１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＥＧインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン；他のヒトサイトカインまたは成長因子およびこれらの受容体（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦ）に対する抗体もしくはアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノレート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）または炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３またはＴＧＦβ）またはｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤と組み合わされ得る。
【０１５７】
本明細書において提供される結合タンパク質を組み合わせることが可能な多発性硬化症のための治療剤の例には、インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ１ａおよびＩＦＮβ１ｂ；コパキソン、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤、例えばカスパーゼ−１の阻害剤、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤ならびにＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体が含まれる。
【０１５８】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な喘息に対する治療剤の非限定的な例には、以下：アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、イプラトロピウム臭化物、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アミノキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラナート、レボフロキサシン、吸入補助装置、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、塩酸マキシフロキサシン、ドキシサイクリン水和物（ｈｙｃｌａｔｅ）、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フロ酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナタート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニル、塩酸セチリジン／シュードエフェドリン、フェニレフリン／ｃｏｄ／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／シュードエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールが含まれる。
【０１５９】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能なＣＯＰＤに対する治療剤の非限定的な例には、以下：硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、イプラトロピウムブロミド、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アミノキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラナート、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロロフェニル、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、チオトロピウムブロミド、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストが含まれる。
【０１６０】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な乾癬に対する治療剤の非限定的な例には、以下：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、増強された（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ）二プロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フロ酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／皮膚軟化剤（ｅｍｏｌｌ）、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿処方、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス（ｂｉｓｍｕｔｈ  ｓｕｂｇａｌ）／酸化亜鉛（ｚｎｏｘ）／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アンスラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化剤、フルオシノニド／皮膚軟化剤、鉱物油／ひまし油／ｎａ  ｌａｃｔ、鉱物油／落花生油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、ソラーレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジンが含まれる。
【０１６１】
本明細書において提供される結合タンパク質を組み合わせることが可能なＳＬＥ（狼瘡）に対する治療剤の例には、以下：ＮＳＡＩＤ、例えば、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ；抗マラリア剤、例えば、ヒドロキシクロロキン；ステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン；細胞障害剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノラートモフェチル、メトトレキサート；ＰＤＥ４の阻害剤またはプリン合成阻害剤、例えば、Ｃｅｌｌｃｅｐｔが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、薬剤と併用されてもよく、例えば、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランならびにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成、産生または作用を妨害する作用物質、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤およびＩＬ−１ｒａのようなカスパーゼ阻害剤とも組み合わされ得る。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤；またはＴ細胞活性化分子を標的とする分子、例えば、ＣＴＬＡ−４−ＩｇＧまたは抗Ｂ７抗体ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体とともに使用され得る。本明細書において提供される結合タンパク質は、ＩＬ−１１または抗サイトカイン抗体、例えば、ホノトリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体）または抗受容体受容体抗体、例えば、抗ＩＬ−６受容体抗体およびＢ細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、ＬＪＰ３９４（アベチムス）、Ｂ細胞を枯渇させまたは不活化する薬剤、例えば、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンホスタット−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））およびｂｃｌ−２阻害剤（トランスジェニックマウスにおけるｂｃｌ−２過剰発現が狼瘡様表現型をもたらすことが実証されているためである（Ｍａｒｑｕｉｎａ参照）。）とともに使用され得る。
【０１６２】
本明細書において提供される医薬組成物は、本明細書において提供される結合タンパク質の「治療的有効量」または「予防的有効量」を含み得る。「治療的有効量」は、所望の治療的結果を達成するための投薬量で、および所望の治療的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。結合タンパク質の治療的有効量は、当業者によって決定され得、病状、年齢、性別および個体の体重ならびに結合タンパク質が個体内で所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。治療的有効量は、抗体または抗体部分のあらゆる毒性効果または有害効果が、治療的に有益な効果によって凌駕される量でもある。「予防的有効量」は、所望の予防的結果を達成するために必要な投薬量で、および所望の予防的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。典型的には、疾病のより初期段階の前にまたは疾病のより初期段階において、予防的投薬が患者に使用されるので、予防的有効量は、治療的有効量より少ない。
【０１６３】
Ｖ．診断
本明細書における開示はまた診断の適用例を提供し、限定されないが、診断アッセイ法、１つ以上の結合タンパク質を含む診断用キット、ならびに自動化および／または半自動化システムにおける使用のための方法およびキットの適応が含まれる。提供される方法、キットおよび適応は、個体における疾患または障害の検出、監視および／または治療に用いることができる。これは、以下でさらに明らかにされる。
【０１６４】
Ａ．アッセイの方法
本開示は、本明細書に記載されている少なくとも１つの結合タンパク質を使用して試験試料中の分析物またはその断片の存在、量または濃度を決定する方法も提供する。本分野において知られているあらゆる適切なアッセイは、この方法において使用することが可能である。例には、限定されないが、イムノアッセイおよび／または質量分析法を用いる方法が含まれる。
【０１６５】
本開示によって提供されるイムノアッセイは、とりわけ、サンドイッチイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、競合阻害イムノアッセイ、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、酵素増幅イムノアッセイ技術（ＥＭＩＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）および均一系化学発光アッセイを含む。
【０１６６】
化学発光微粒子イムノアッセイ、特にＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）を使用するものは、イムノアッセイの例である。
【０１６７】
質量分析法を用いる方法は、本開示によって提供され、限定されないが、ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化）またはＳＥＬＤＩ（表面増強レーザー脱離／イオン化）が含まれる。
【０１６８】
イムノアッセイおよび質量分析法を用いて生物学的試験試料を回収し、操作し、処理しおよび分析するための方法は、本開示の実施において提供される（ＵＳ２００９−０３１１２５３Ａ１）。
【０１６９】
Ｂ．キット
試験試料における分析物またはその断片の存在、量または濃度について試験試料をアッセイするためのキットも提供される。キットは、分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分および分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための説明書を含む。分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分は、場合によって、固相上に固定されている、本明細書に開示されている結合タンパク質および／または抗分析物結合タンパク質（またはその断片、バリアントまたはそのバリアントの断片）を含む組成物を含むことができる。
【０１７０】
場合によって、キットは、単離されたまたは精製された分析物を含み得る、較正因子または対照を含むことができる。キットは、イムノアッセイおよび／または質量分析法によって、分析物について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分を含むことができる。キット成分は、分析物、結合タンパク質および／または抗分析物結合タンパク質またはその断片を含み、場合によって、当該分野で公知の任意の検出可能な標識を用いて標識されてもよい。本開示の実施において提供される構築のための材料および方法は、当業者に公知である（米国２００９−０３１１２５３Ａ１）。
【０１７１】
Ｃ．キットおよび方法の適合
本明細書に記載されているイムノアッセイなどのアッセイによって試験試料における分析物の存在、量または濃度を決定するキット（またはその成分）ならびに方法は、例えば、米国特許第５，０８９，４２４号および第５，００６，３０９号に記載され、例えば、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）によってＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）として商業的に販売されている（固相が微粒子を含むものを含めて）様々な自動化システムおよび半自動化システムにおける使用に適合させることが可能である。
【０１７２】
Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能な他のプラットホームには、ＡｘＳＹＭ（登録商標）、ＩＭｘ（登録商標）（例えば、米国特許第５，２９４，４０４号を参照されたい、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）およびＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩならびに他のプラットホームが含まれるが、これらに限定されない。さらに、アッセイ、キットおよびキットの成分は、他のフォーマットにおいて、例えば、電気化学的または他の携帯もしくはポイントオブケアアッセイシステムで使用することが可能である。本開示は、例えば、サンドイッチイムノアッセイを行う商業的Ａｂｂｏｔｔ  Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）電気化学的イムノアッセイシステムに適用可能である。免疫センサーならびに単回使用試験装置におけるこれらの製造および操作方法は、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、第７，４１９，８２１号、および第７，６８２，８３３号；ならびに米国特許公開第２００４００１８５７７号、第２００６０１６０１６４号、およびＵＳ２００９０３１１２５３に記載されている。
【０１７３】
本明細書に記載されている本方法の他の適切な改変および適合が明白であり、本明細書に開示されている範囲または実施形態から逸脱することなく、適切な均等物を用いてこれらを行い得ることは、当業者に容易に明確になる。ここに、ある種の実施形態を詳細に記載してきたが、例示のみを目的とし、限定することを意図したものではない、下記の実施例を参照することによって、本発明がより明確に理解される。
【実施例】
【０１７４】
［実施例１］  二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質の生成および特徴付け
既知のアミノ酸配列を有する親抗体を用いた四本鎖二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、ＤＶＤ結合タンパク質の可変重鎖配列およびＤＶＤ結合タンパク質の可変軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド断片を合成し、当該技術分野において公知の方法に従って、ｐＨｙｂＣ−Ｄ２ベクターに断片をクローニングすることにより生成された。ＤＶＤ結合タンパク質構築物は、当該技術分野において既知の方法に従って、２９３細胞にクローニングされ、そこで発現させ、精製された。ＤＶＤ結合タンパク質についてのＤＶＤ  ＶＨ鎖およびＶＬ鎖を以下に提供する。
【０１７５】
ＤＶＤの構築に使用されるリンカーを表２に示す。
【０１７６】
【表２】
2015509704.tif 000005
【０１７７】
［実施例１．１］  同じ標的タンパク質の重複しないエピトープに対して指向されたＤＶＤ結合タンパク質
【０１７８】
【表３】
2015509704.tif 000006
2015509704.tif 000007
【０１７９】
［実施例１．２］  同じ細胞に発現した２つの異なる受容体に対して指向されたＤＶＤ結合タンパク質
【０１８０】
【表４】
2015509704.tif 000008
2015509704.tif 000009
2015509704.tif 000010
2015509704.tif 000011
【０１８１】
表５は、２９３細胞において、１リットルあたりのｍｇとして発現した親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質に関する収量データを含有する。
【０１８２】
【表５】
2015509704.tif 000012
2015509704.tif 000013
2015509704.tif 000014
【０１８３】
すべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は２９３細胞において十分に発現した。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、プロテインＡカラムを通して容易に精製することができた。大部分の場合において、５ｍｇ／Ｌを超える精製されたＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が、２９３細胞の上清から容易に得ることができた。
【０１８４】
［実施例２］  親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の機能的活性を決定するために使用されるアッセイ
【０１８５】
［実施例２．１］  ＢＩＡｃｏｒｅ技術を用いた親和性測定
【０１８６】
【表６】
2015509704.tif 000015
【０１８７】
ＢＩＡＣＯＲＥ法：
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）は、結合（ｏｎ−ｒａｔｅ）定数および解離（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）定数の反応速度測定を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの親和性を決定した。標的抗原（例えば、精製された組換え標的抗原）への抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）１０００または３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）により、２５℃で稼働しているＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．００５％サーファクタントＰ２０）を用いて表面プラズモン共鳴に基づく測定によって決定された。すべての化学物質は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）から入手し、または他には本明細書に記載される別の供給元から入手した。例えば、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中に希釈された、約５０００ＲＵのヤギ抗マウスＩｇＧ、（Ｆｃγ）、断片特異的なポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）は、製造業者の使用説明書に従って標準的なアミンカップリングキットおよび２５μｇ／ｍｌでの操作を用いてＣＭ５研究等級のバイオセンサーチップ全体に直接固定化された。バイオセンサー表面上の未反応部分をエタノールアミンを用いてブロックした。フローセル２および４において修飾されたカルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用した。フローセル１および３におけるヤギ抗マウスＩｇＧなしの未修飾のカルボキシメチルデキストランを基準表面として使用した。反応速度分析のために、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを用いて、８個すべての注入物の結合および解離相に対して、１：１ラングミュア（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合モデルから誘導された速度方程式を同時にフィッティングさせた（グローバルフィット分析を使用）。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面の全体で捕捉するために、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水中に、精製された抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質試料を希釈した。リガンドとして捕捉されるべき抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（２５μｇ／ｍｌ）を５μｌ／分の流速で反応マトリックス全体に注入した。結合速度定数および解離結合定数のｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１）およびｋｏｆｆ（ｓ−１）は、２５μｌ／分の連続的流速下で決定された。１０−２００ｎＭの範囲の異なる抗原濃度にて速度論結合測定を行うことによって速度定数を導いた。次に、以下の式：ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎによって、速度論的速度定数から抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質および標的抗原間の反応の平衡解離定数（Ｍ）を計算した。結合を時間の関数として記録し、速度論的速度定数を計算した。
【０１８８】
【表７】
2015509704.tif 000016
2015509704.tif 000017
2015509704.tif 000018
【０１８９】
表７において、「ＮＴ」は、試験されていないＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を示す。Ｂｉａｃｏｒｅ技術によって特徴付けられたすべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合能力は維持され、親抗体の結合能力に匹敵していた。
【０１９０】
［実施例２．２］  フローサイトメトリーによって評価されるヒト腫瘍細胞株の表面へのモノクローナル抗体の結合
目的の細胞表面抗原を過剰発現している安定な細胞株またはヒト腫瘍細胞株を組織培養フラスコから回収し、５％ウシ胎児血清を含むリン酸緩衝生理食塩水ＰＢＳ（ＰＢＳ／ＦＢＳ）に再懸濁した。染色前に、ヒト腫瘍細胞は、ＰＢＳ／ＦＣＳ中の５μｇ／ｍｌの（１００μｌ）ヒトＩｇＧとともに氷上でインキュベートされた。１−５×１０５個の細胞は、ＰＢＳ／ＦＢＳ中の抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ（２μｇ／ｍＬ）とともに３０−６０分間、氷上でインキュベートされた。細胞を２回洗浄し、１００μｌのＦ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ−フィコエリトリン（ＰＢＳ中に１：２００に希釈）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，Ｃａｔ．＃１０９−１１６−１７０）を添加した。氷上で３０分のインキュベーション後、細胞を２回洗浄し、ＰＢＳ／ＦＢＳに再懸濁した。Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて蛍光を測定した。
【０１９１】
表８は、ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質に関するＦＡＣＳデータを示す。幾何平均は、ｎ個の蛍光シグナルの乗算積（ａ１×ａ２×ａ３．．．．ａｎ）のｎ乗根である。対数変換されたデータを用いると、幾何平均は、データ分布の重み付けを標準化するために使用される。次の表は、親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のＦＡＣＳ幾何平均を含む。
【０１９２】
【表８】
2015509704.tif 000019
【０１９３】
すべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、それらの細胞表面標的への結合を示した。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のＮ−末端ドメインは、細胞表面上でそれらの標的に結合しならびに／または親抗体よりも良好であった。結合は、リンカーの長さを調整することによって回復または向上させることができる。
【０１９４】
［実施例２．３］  親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の機能的活性を決定するために使用される細胞増殖アッセイ
【０１９５】
細胞増殖アッセイ
液体窒素で保存した状態から細胞を解凍し、細胞が拡げられ適切な生存率に到達するまで培養され、予期された２倍時間（典型的には２週間）で分割された。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有する、表９に記載される細胞培地中で細胞を維持した。抗体の添加の２４時間前に、組織培養処理されたアッセイプレートにおいて、表９に記載される細胞密度（１５３６細胞／ウェル）にて、２％ＦＢＳを含有するスクリーニング培地に細胞を播種した。遠心分離によってアッセイプレート中で細胞を平衡化し、処置前の２４時間、３７℃にて投与モジュールに取り付けられたインキュベーターに入れた。投与中、指示した濃度（後述および表１０と１１中）にて抗体を用いて細胞を処置した。第３ｂ期に関して、単一薬剤データを８点の用量反応曲線において回収し、開始濃度は２０ｎＭであった。全６回の反復物がスクリーンのために回収された（２アッセイプレート全体）。処理されたアッセイプレートを９６時間抗体とともにインキュベートした。９６時間後、ＡＴＰＬｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて、評価項目分析についてプレートを発色させた。エンビジョンプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）上の超高感度発光を用いてプレートを読み取った。すべてのデータポイントは、自動化されたプロセスを介して回収された；品質管理され；Ｃｈａｌｉｃｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（商標）ソフトウェア（Ｚａｌｉｃｕｓ  Ｉｎｃ．）を用いて分析された。アッセイプレートが次の品質管理基準に合格した場合は、アッセイプレートを容認した：相対ルシフェラーゼ値は、実験全体を通じて一致し、Ｚ−因子スコアは０．６よりも大きく、未処理／ビヒクル対照はプレート上で一貫した反応を示す。
【０１９６】
【表９】
2015509704.tif 000020
【０１９７】
すべての細胞株を１０％ＦＢＳに維持した。抗体添加の２４時間前に、２％ＦＢＳを含有するスクリーニング培地に細胞を入れた。
【０１９８】
抗体調製
抗体は５００倍濃度で提供された。抗体は、１：５００のそれらの最も高い所望のスクリーニング濃度で３８４ウェルポリプロピレン「母プレート」に添加された。抗体は、クエン酸緩衝液（１０ｍＭクエン酸、１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、ｐＨ６．０）中で、連続して１：２に希釈された。投薬時まで母プレートを４℃で保存した。投与時に、母プレートは、音響分配（ａｃｏｕｓｔｉｃ  ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ）のために、「娘プレート」（ＬＤＶ  ＣＯＣ音響グレードプラスチック）に「スタンプ」された。すべてのプレートを使用前に室温に平衡化させた。
【０１９９】
【表１０】
2015509704.tif 000021
【０２００】
【表１１】
2015509704.tif 000022
【０２０１】
［実施例２．４］  親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の機能的活性を決定するために使用される分析法
【０２０２】
阻害割合
複製データは平均値で重ね合わせ、阻害割合は、細胞生存率の尺度として決定された。０％の阻害レベルは、治療によって細胞増殖が阻害されないことを表す。１００％の阻害は、処置ウィンドウ中の細胞数が倍加しないことを表す。両方の細胞増殖抑制および細胞毒性処置は、１００％の阻害割合を得ることができる。阻害割合は、以下のように計算される：Ｉ＝１−Ｔ／Ｕ、ここで、Ｔは処置済み、Ｕは未処置である。
【０２０３】
相乗効果スコア分析
相乗効果相互作用の強さを特徴付けるためのスカラー指標は、相乗効果スコアと呼ばれ、Ｌｏｅｗｅ加算性（Ｚａｌｉｃｕｓ）を超える組合せ効果を測定するために使用された。相乗効果スコアは次のように計算される：
【０２０４】
【数１】
2015509704.tif 000023
【０２０５】
行列中のそれぞれの成分薬剤と組合せポイントの分画阻害は、すべてのビヒクル処理された対照ウェルの中央値と比較して計算された。相乗効果スコア式は、加算性についてＬｏｅｗｅモデルを使用して、成分薬剤の活性から数値的に由来するモデル表面を超えて、行列のそれぞれの点で実験的に観察された活性ボリュームを統合した。相乗効果スコア式（上記）における追加の用語は、個々の薬剤について使用される様々な希釈係数を標準化し、実験全体にわたる相乗効果スコアの比較を可能にするために使用された。
【０２０６】
Ｚａｌｉｃｕｓ  ｃＨＴＳプラットフォームを使用して、２つの薬剤は、広範囲の濃度および比率を捕捉するために組み合わせてスクリーニングすることができる。併用効果は、効力シフトに帰し、または強化として最大効果に帰することができる。より高い活性レベルは、色のより明るい／より温かい行列を用いて表示される。任意の組合せの２つ単剤成分について回収されたデータを用いて、組合せの各成分間のゼロ相互作用について組合せ用量モデルを作成することができる（形状モデル）。このゼロ相互作用行列は、成分間に相互作用がない場合に予期されたものを超えて、活性値を同定するために、実験的に由来したデータ（データ表面）から減算される。この過剰のマトリックスボリュームは、相乗効果スコアを生じさせるために統合される（上記）。
【０２０７】
自己架橋分析
組合せスクリーン分析についてヒット基準を客観的に確立するために、自己架橋組合せは、追加の非相乗作用反応を経験的に決定するための手段として、細胞株パネル全体ですべての組合せについて回収された。これらのベースライン加算値に統計学的に優先した効果レベルが得られたこれらの薬物の組合せは相乗的であると考えられた。加算性ボリュームは、平均自己架橋＋３標準偏差（３  ）より大きい組合せは、相乗効果の候補と考えることができる。この戦略は細胞株中心であり、細胞株パネル活性のグローバル評価に対するそれぞれの細胞株における自己架橋挙動に着目した。
【０２０８】
観察された全体的な阻害活性ならびに組合せ効果の数は細胞株によって変化した。３σを超える相乗効果との組合せは、通常のエラーを想定し、−９９％の信頼の「個別に重要」である。各細胞株のための自己架橋相乗効果スコアを表１２および表１３に示す。それぞれの細胞株について閾値を上回る相乗効果スコアとのそれらの組合せを表１２および１３において強調した。
【０２０９】
【表１２】
2015509704.tif 000024
2015509704.tif 000025
2015509704.tif 000026
【０２１０】
細胞増殖によって特徴付けられる多数のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、Ａ５４９、ＢＴ−５４９、ＢｘＰＣ−３、ＦａＤｕ、ＨＣＣ１３９５およびＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞株において相乗効果を示した。細胞増殖はまた、追加の細胞株において測定することができた。
【０２１１】
【表１３】
2015509704.tif 000027
2015509704.tif 000028
2015509704.tif 000029
【０２１２】
細胞増殖によって特徴付けられる多数のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＮＣＩ−Ｈ１６５０、ＮＣＩ−Ｈ１９７５、ＮＣＩ−Ｈ４４１、ＮＣＩ−Ｈ４６０およびＮＣＩ−ＳＮＵ−５細胞株において相乗効果を示した。細胞増殖はまた、追加の細胞株において測定することができた。
【０２１３】
相乗効果スコアが、低濃度で生じる組合せ効果に加重されるため、不十分な用量サンプリングに起因した乏しい単剤曲線フィッティングは、自己架橋スコアの人工的な増加に寄与する場合がある。さらに、実験ノイズ、急な用量遷移または長い細胞株倍加時間などの他の次善の因子が、自己架橋相乗効果スコアに不注意に影響を与え得る「部分的に発生した」表現効果に寄与する。相乗的相互作用の二つの異なる尺度にわたって統計的自己架橋分析を行うことにより、一つの尺度または他の統計的に起因するバイアスを正規化することができる。それぞれの自己架橋行列に自己架橋分析を通過できなかったものの組合せの手動による比較は、細胞株パネル全体に微妙であるが一貫性のある組合せ効果を明らかにするために有用であることがわかっている。
【０２１４】
［実施例３］  抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の特徴付け
機能的活性を阻害するための精製されたＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の能力は、例えば、実施例２に記載されるようにサイトカインバイオアッセイを用いて決定された。組換えヒト抗原に対するＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合親和性は、実施例２に記載されるように表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定を用いて決定された。抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のバイオアッセイからのＩＣ５０値および親和性を位置付けた。親ｍＡｂの活性を完全に維持するＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、将来の進行のための候補対象として選択された。上位２−３の最も有益なＤＶＤ−Ｉｇタンパク質をさらに特徴付けた。
【０２１５】
［実施例３．１］  ヒト化抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の薬物動態分析
薬物動態研究は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットおよびカニクイザルにおいて行われる。雄性および雌性のラットならびにカニクイザルは、４ｍｇ／ｋｇのｍＡｂまたはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の単回投薬で静脈内または皮下に投薬され、抗原捕捉ＥＬＩＳＡを用いて試料を分析し、薬物動態パラメーターを非コンパートメント分析によって決定する。要約すると、ヤギ抗ビオチン抗体（５ｍｇ／ｍｌ、４℃、一晩）を用いてＥＬＩＳＡプレートを被覆し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてブロックし、１０％ＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋのＴＴＢＳ中の５０ｎｇ／ｍｌのビオチン化ヒト抗原とともに室温で２時間インキュベートする。血清試料を連続的に希釈し（ＴＴＢＳ中の０．５％血清、１０％Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ）およびプレート上で３０分間、室温にてインキュベートする。ＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒト抗体を用いて検出を行い、４パラメーターのロジスティックフィットを用いて、標準曲線の助けにより濃度を決定する。薬物動態パラメーターに関する値は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を用いて、非コンパートメントモデルによって決定される。良好な薬物動態プロファイルを有するヒト化ｍＡｂ（Ｔ１／２は８−１３日またはそれより良好であり、低クリアランスおよび優れた生物学的利用率は５０−１００％である）を選択する。
【０２１６】
［実施例３．２］  ヒト化モノクローナル抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の物理化学的およびインビトロでの安定性分析
【０２１７】
サイズ排除クロマトグラフィー
水を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を２．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、２０ｍＬをＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ＃ｋ５５３９−０５ｋ）を用いてＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステム上で分析した。２１１ｍＭ硫酸ナトリウム、９２ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を用いて、流速０．３ｍＬ／分にて試料をカラムから溶出した。ＨＰＬＣシステムの操作条件は以下の通りである：
移動相：２１１ｍＭのＮａ２ＳＯ４、９２ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４＊７Ｈ２０、ｐＨ７．０
勾配：アイソクラチック
流速：０．３ｍＬ／分
検出波長：２８０ｎｍ
オートサンプラー冷却装置温度：４℃
カラムオーブン温度：周囲
実行時間：５０分
【０２１８】
表１３は、上記プロトコルにより測定したモノマー（予想される分子量を有する非凝集タンパク質）％として表される親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の純度データを含む。
【０２１９】
【表１４】
2015509704.tif 000030
2015509704.tif 000031
2015509704.tif 000032
【０２２０】
ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、大部分のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が９０％を超えるモノマーを示す優れたＳＥＣプロファイルを示した。このＤＶＤ−Ｉｇタンパク質プロファイルは、親抗体について観察されたものと類似していた。
【０２２１】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
還元条件下および非還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を分析する。Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）を対照として用いる。還元条件について、１００ｍＭのＤＴＴを含む２×トリスグリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＬＣ２６７６、ロット＃１３２３２０８）と１：１で試料を混合し、６０℃で３０分間加熱する。非還元条件について、試料緩衝液と１：１で試料を混合し、１００℃で５分間加熱する。還元試料（１０ｍｇ／レーン）を１２％プレキャストのトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＣ６００５ｂｏｘ、ロット＃６１１１０２１）上に装填し、非還元試料（１０ｍｇ／レーン）を８％−１６％プレキャストのトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＣ６０４５ｂｏｘ、ロット＃６１１１０２１）上に装填する。ＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ  ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＬＣ５９２５、ロット＃１３５１５４２）を分子量マーカーとして用いる。ゲルをＸＣｅｌｌ  ＳｕｒｅＬｏｃｋミニセルゲルボックス（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＩ０００１）に入れ、最初に、ゲル内の試料を積層するために電圧７５を加え、次にダイフロント（ｄｙｅ  ｆｒｏｎｔ）がゲルの底に到達するまで定電圧１２５にしてタンパク質を分離する。使用される泳動緩衝液は１×トリスグリシンＳＤＳ緩衝液であり、１０×トリスグリシンＳＤＳ緩衝液（ＡＢＣ、ＭＰＳ−７９−０８０１０６）から調製される。コロイド状青色染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃４６−７０１５、４６−７０１６）を用いてゲルを一晩染色し、バックグラウンドを除くためにＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染する。次に、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０、Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いて、染色されたゲルをスキャンする。
【０２２２】
沈降速度分析
３つの標準的な２セクターのカーボン・エポンセンターピースの各々の試料チャンバー内に抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を装填する。これらのセンターピースは１．２ｃｍの光路長を有し、サファイアウィンドウで構築される。基準緩衝液に関してはＰＢＳを使用し、各チャンバーは１４０μＬを含む。Ｂｅｃｋｍａｎ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＸＬ−Ｉ分析用超遠心分離機（シリアル＃ＰＬ１０６Ｃ０１）の４ホール（ＡＮ−６０Ｔｉ）ローターを用いて、すべての試料を同時に試験する。
【０２２３】
実行条件をプログラムし、ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ（ｖ５．６）を用いて遠心分離制御を行う。試料およびローターは、分析前の１時間（２０．０±０．１℃）熱平衡化させる。適切なセル装填の確認を３０００ｒｐｍで行い、１回のスキャンを各ウェルについて記録する。沈降速度条件は以下の通りである：
試料細胞体積：４２０ｍＬ
基準細胞体積：４２０ｍＬ
温度：２０℃
ローター速度：３５，０００ｒｐｍ
時間：８：００時間
ＵＶ波長：２８０ｎｍ
半径刻み幅：０．００３ｃｍ
データ回収：信号加算平均なしの１工程あたり１データポイント
スキャン総数：１００
【０２２４】
完全な抗体のＬＣ−ＭＳ分子量測定
完全な抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の分子量をＬＣ−ＭＳによって分析する。水を用いて各抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を約１ｍｇ／ｍＬに希釈する。タンパク質マイクロトラップ（Ｍｉｃｈｒｏｍ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ、カタログ＃００４／２５１０９／０３）を備えた１１００ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）システムを用いて、脱塩し、試料の５ｍｇをＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中の０．０８％ＴＦＡ、０．０２％ＴＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０８％ＦＡおよび０．０２％ＴＦＡ）を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は２０００から３５００の質量対電荷比である。
【０２２５】
抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の軽鎖および重鎖のＬＣ−ＭＳ分子量測定
抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の軽鎖（ＬＣ）、重鎖（ＨＣ）および脱グリコシル化されたＨＣの分子量測定をＬＣ−ＭＳによって分析する。水を用いて抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１ｍｇ／ｍＬに希釈し、試料は、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、３０分間、３７℃でＬＣおよびＨＣに還元される。抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を脱グリコシル化するために、１００ｍｇの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１００ｍＬの全体積中の２ｍＬのＰＮＧａｓｅ  Ｆ、５ｍＬの１０％Ｎ−オクチルグルコシドとともに、一晩３７℃にてインキュベートされる。脱グリコシル化後、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、試料を３０分間、３７℃にて還元する。Ｃ４カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１４ＴＰ５１１５、Ｓ／Ｎ０６０２０６５３７２０４０６９）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣシステムを用いて脱塩し、試料（５ｍｇ）をＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中の０．０８％ＦＡ、０．０２％ＴＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０８％ＦＡおよび０．０２％ＴＦＡ）を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は８００から３５００の質量対電荷比である。
【０２２６】
ペプチドマッピング
７５ｍＭ重炭酸アンモニウム中の最終濃度が６Ｍの塩酸グアニジンを用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１５分間、室温にて変性させる。変性試料は、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、３７℃、６０分間還元させ、次に、暗所にて３７℃、３０分間、５０ｍＭヨード酢酸（ＩＡＡ）を用いてアルキル化される。アルキル化後、４リットルの１０ｍＭ重炭酸アンモニウムに対して、一晩４℃で試料を透析する。透析された試料は、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム、ｐＨ７．８を用いて１ｍｇ／ｍＬに希釈され、１００ｍｇの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１：２０（ｗ／ｗ）トリプシン／Ｌｙｓ−Ｃ：抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の比でトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃Ｖ５１１１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ、カタログ＃１１  ０４７  ８２５  ００１）を用いて３７℃で４時間消化される。消化物は、１ＮのＨＣｌを１ｍＬ用いてクエンチされる。質量分析計検出を用いたペプチドマッピングについて、４０ｍＬの消化物は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣシステムを備えた、Ｃ１８カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１８ＴＰ５１、Ｓ／Ｎ  ＮＥ９６０６  １０．３．５）上で逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰＨＰＬＣ）によって分離される。ペプチドの分離は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ等級の水中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）を使用する勾配を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて実行する。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は８００から２５００の質量対電荷比である。
【０２２７】
ジスルフィド結合マッピング
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を変性するために、１００ｍＬの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１００ｍＭ重炭酸アンモニウム中の８ＭグアニジンＨＣｌの３００ｍＬと混合される。ｐＨをチェックして、ｐＨが７から８の間であることを確認し、最終濃度が６ＭのグアニジンＨＣｌ中で１５分間、室温にて試料を変性させる。一部の変性試料（１００ｍＬ）をＭｉｌｌｉ−Ｑ水で６００ｍＬに希釈し、最終のグアニジン−ＨＣｌ濃度を１Ｍとする。試料（２２０ｍｇ）は、１：５０のトリプシン：抗体もしくはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質または１：５０のＬｙｓ−Ｃ：抗体もしくはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（ｗ／ｗ）の比（４．４ｍｇ酵素：２２０ｍｇ試料）でトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃Ｖ５１１１、ロット＃２２２６５９０１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ、カタログ＃１１０４７８２５００１、ロット＃１２８０８０００）を用いて３７℃で約１６時間消化される。さらに５ｍｇのトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃを試料に添加し、消化をさらに２時間、３７℃で進行させる。各試料に１ｍＬのＴＦＡを添加することによって消化を停止させる。消化された試料は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣシステム上のＣ１８カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１８ＴＰ５１、Ｓ／Ｎ  ＮＥ０２０６３０−４−１Ａ）を用いてＲＰＨＰＬＣによって分離される。分離は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ等級の水中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）を用いて、ペプチドマッピングについて使用されたものと同じ勾配で５０ｍＬ／分の流速にて実行する。ＨＰＬＣの操作条件は、ペプチドマッピングについて使用された条件と同じである。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は８００から２５００の質量対電荷比である。ジスルフィド結合は、ペプチドの実測されたＭＷと、ジスルフィド結合によって連結されたトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃペプチドの予測されたＭＷとを合致させることによって割り当てられる。
【０２２８】
遊離スルフヒドリル決定
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質中の遊離システインを定量するために使用される方法は、特徴的な発色生成物である５−チオ−（２−ニトロ安息香酸）（ＴＮＢ）を生じさせる、エルマン試薬である５，５ｃ−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）とスルフヒドリル基（ＳＨ）の反応に基づいている。反応は、式：
ＤＴＮＢ  ＋  ＲＳＨ（Ｒ）ＲＳ−ＴＮＢ  ＋  ＴＮＢ−  ＋  Ｈ＋
において説明される。
【０２２９】
ＴＮＢ−の吸光度は、Ｃａｒｙ  ５０分光光度計を用いて、４１２ｎｍで測定される。吸光度曲線は、遊離ＳＨ標準として２メルカプトエタノール（ｂ−ＭＥ）の希釈を用いてプロットし、タンパク質中の遊離スルフヒドリル基の濃度は、試料の４１２ｎｍでの吸光度から決定される。
【０２３０】
ｂ−ＭＥ標準ストックは、最終濃度が０．１４２ｍＭになるように、ＨＰＬＣ等級の水を用いて１４．２Ｍのｂ−ＭＥを連続希釈することによって調製される。次に、各濃度について３点測定の標準を調製する。アミコンウルトラ１０，０００ＭＷＣＯ遠心フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ＃ＵＦＣ８０１０９６、ロット＃Ｌ３ＫＮ５２５１）を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、緩衝液をアダリムマブについて使用した処方緩衝液（５．５７ｍＭリン酸一水素ナトリウム、８．６９ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１０６．６９ｍＭのＮａＣｌ、１．０７ｍＭクエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭクエン酸、６６．６８ｍＭマンニトール、ｐＨ５．２、０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ）に交換する。試料をシェーカー上で室温にて２０分間混合する。次に、１８０ｍＬの１００ｍＭのＴｒｉｓ緩衝液、ｐＨ８．１を各試料に添加し、標準は、１０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ８．１中の２ｍＭのＤＴＮＢを３００ｍＬ添加する。完全に混合した後、Ｃａｒｙ  ５０分光光度計上で４１２ｎｍの吸光度について試料および標準を測定する。遊離ＳＨの量とｂ−ＭＥ標準のＯＤ４１２ｎｍをプロットすることによって、標準曲線を得る。試料の遊離ＳＨ含有量は、ブランクを差し引いた後、この曲線に基づいて計算される。
【０２３１】
弱い陽イオン交換クロマトグラフィー
１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１ｍｇ／ｍＬに希釈する。電荷異質性は、ＷＣＸ−１０  ＰｒｏＰａｃ分析用カラム（Ｄｉｏｎｅｘ、カタログ＃０５４９９３、Ｓ／Ｎ０２７２２）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムを用いて分析される。試料を８０％移動相Ａ（１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０）および２０％移動相Ｂ（１０ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０）においてカラムに充填し、１．０ｍＬ／分の流速で溶出する。
【０２３２】
オリゴ糖プロファイリング
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のＰＮＧａｓｅ  Ｆ処理後に放出されるオリゴ糖は、２−アミノベンズアミド（２−ＡＢ）標識試薬を用いて誘導される。蛍光標識されたオリゴ糖は、順相の高速液体クロマトグラフィー（ＮＰＨＰＬＣ）によって分離され、異なる形態のオリゴ糖は、保持時間に基づいて、既知の標準と比較して特徴付けられる。
【０２３３】
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を最初にＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて消化し、重鎖のＦｃ部分からＮ結合のオリゴ糖を切断する。２ｍＬのＰＮＧａｓｅ  Ｆおよび３ｍＬの１０％Ｎ−オクチルグルコシドとともに５００ｍＬエッペンドルフチューブに抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（２００ｍｇ）を入れる。リン酸緩衝生理食塩水を添加し、最終体積を６０ｍＬにする。７００ＲＰＭに設定したエッペンドルフのサーモミキサー中で一晩３７℃にて試料をインキュベートする。また、Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）を対照としてＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて消化する。
【０２３４】
ＰＮＧａｓｅ  Ｆ処理後、７５０ＲＰＭに設定されたエッペンドルフのサーモミキサー中で９５℃、５分間、試料をインキュベートしてタンパク質を沈殿させ、次に、２分間、１０，０００ＲＰＭでエッペンドルフの遠心分離機に試料を置き、沈殿したタンパク質を沈降させる。オリゴ糖を含む上清を５００ｍＬのエッペンドルフチューブに移し、スピード−ｖａｃ中、６５℃で乾燥させる。
【０２３５】
Ｐｒｏｚｙｍｅから購入される２ＡＢ標識キット（カタログ＃ＧＫＫ−４０４、ロット＃１３２０２６）を用いて、オリゴ糖を２ＡＢで標識する。製造業者の使用説明書に従って標識試薬を調製する。酢酸（１５０ｍＬ、キットにおいて提供される）をＤＭＳＯバイアル（キットにおいて提供される）に添加し、溶液を数回、上下にピペッティングすることによって混合する。酢酸／ＤＭＳＯ混合物（１００ｍＬ）を２−ＡＢ色素のバイアル（使用直前）に移し、色素が完全に溶解するまで混合する。次に、色素溶液を還元剤（キットにおいて提供される）のバイアルに添加し、十分に混合に混合する（標識試薬）。標識試薬（５ｍＬ）を各々乾燥させたオリゴ糖試料バイアルに添加し、完全に混合する。６５℃で７００−８００ＲＰＭに設定されたエッペンドルフのサーモミキサーに反応バイアルを置き、２時間反応させる。
【０２３６】
標識反応後、Ｐｒｏｚｙｍｅから入手されるＧｌｙｃｏＣｌｅａｎｓカートリッジ（カタログ＃ＧＫＩ−４７２６）を用いて過剰の蛍光色素を取り除く。試料を添加前、カートリッジを１ｍＬのｍｉｌｌｉ−Ｑ水で洗浄し、その後、１ｍＬの３０％酢酸溶液で５回洗浄する。試料を添加直前に、１ｍＬのアセトニトリル（Ｂｕｒｄｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ＃ＡＨ０１５−４）をカートリッジに添加する。
【０２３７】
すべてのアセトニトリルがカートリッジを通過した後、新たに洗浄したディスクの中心に試料をスポット状に置き、ディスク上に１０分間吸着させる。１ｍＬのアセトニトリルを用いてディスクを洗浄し、続いて、１ｍＬの９６％アセトニトリルで５回洗浄する。カートリッジを１．５ｍＬのエッペンドルフチューブ上に置き、２−ＡＢ標識されたオリゴ糖をｍｉｌｌｉ  Ｑ水の３回の洗浄（各洗浄あたり４００ｍＬ）により溶出させる。
【０２３８】
Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムに連結させたＧｌｙｃｏｓｅｐ  Ｎ  ＨＰＬＣ（カタログ＃ＧＫＩ−４７２８）カラムを用いてオリゴ糖を分離する。Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムは、システムコントローラー、脱気装置、二重ポンプ、試料冷却器を備えたオートサンプラーおよび蛍光検出器からなっていた。
【０２３９】
高温での安定性
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の緩衝液は、５．５７ｍＭリン酸一水素ナトリウム、８．６９ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１０６．６９ｍＭのＮａＣｌ、１．０７ｍＭクエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭクエン酸、６６．６８ｍＭマンニトール、０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ、ｐＨ５．２；または１０ｍＭヒスチジン、１０ｍＭメチオニン、４％マンニトール、ｐＨ５．９のいずれかであり、Ａｍｉｃｏｎ超遠心フィルターを用いる。適切な緩衝液を用いて、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の最終濃度を２ｍｇ／ｍＬに調整する。次に、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の溶液を濾過滅菌し、０．２５ｍＬのアリコートを無菌条件下で調製する。アリコートを−８０℃、５℃、２５℃または４０℃で１、２または３週間放置する。インキュベーション期間の終わりに、サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって試料を分析する。
【０２４０】
安定性試料は、還元条件下および非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析される。使用される手法は、本明細書に記載されたものと同じである。コロイド状青色染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃４６−７０１５、４６−７０１６）を用いてゲルを一晩染色させ、バックグラウンドが透明になるまでＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染される。次に、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０、Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いて、染色されたゲルをスキャンする。高い感度を得るために、銀染色キット（Ｏｗｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて同じゲルを銀染色し、製造業者によって提供される推奨の手順を用いる。
【０２４１】
参照による援用
本出願を通して引用されてもよい、すべての引用される参考資料（参考文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含む）の内容は、これによって、これらの参考資料がそこに記載されているかのように、いずれかの目的で参考資料の全体を参照することにより明確に援用される。本開示は、別段の記載がない限り、当該技術分野において周知である免疫学、分子生物学および細胞生物学の従来技術を使用する。
【０２４２】
本開示は、分子生物学および薬物送達の分野で周知の技術全体も、参照により組み込む。これらの技術には、以下の公報に記載されている技術が含まれるが、これに限定されるものではない。
【０２４３】
【表１５】
2015509704.tif 000033
【０２４４】
均等
本開示は、その精神または本質的な特徴から逸脱せずに他の具体的な形態で実施することができる。したがって、前述の実施形態は、本開示を限定するというよりはむしろ、すべての点において例示していると考えるべきである。よって、本開示の範囲は、前述の記載によるというよりはむしろ、添付される特許請求の範囲によって示され、したがって、特許請求の範囲の意味および均等の範囲内にあるすべての変更は本明細書に包含されることが意図される。
【図１】
2015509704.tif 000034
【配列表】
2015509704000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年8月27日(2014.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、２０１１年１２月３０日に出願した米国仮特許出願第６１／５８１，９６３号の優先権の利益を主張する。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介したＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含み、その全体が本明細書に参照として援用される。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１３年１月９日に作製され、０１０１６０ＷＯ．ｔｘｔと命名され、４０，６８０バイトのサイズである。
【０００３】
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの重複しないエピトープを標的とする多価および多重特異的結合タンパク質、製造方法、ならびに疾患の診断、予防および／または治療における使用が提供される。
【背景技術】
【０００４】
２つまたはそれ以上の抗原に結合することができる多重特異的結合タンパク質などの工学的に作製されたタンパク質が、本分野において公知である。このような多重特異的結合タンパク質は、細胞融合、化学的連結または組換えＤＮＡ技術を用いて作製することが可能である。当該技術分野において公知の多重特異的結合タンパク質の構造は様々に存在し、多数の構造および方法には明らかな不利益がある。
【０００５】
二特異的抗体は、クアドローマ技術を用いて作製されてきた。しかしながら、この技術における誤対合された副産物の存在および大幅に減少した産生率は、複雑な精製操作が必要とされることを意味している。二特異的抗体は、２つの異なるｍＡｂの化学的連結によっても生産することが可能である。しかしながら、このアプローチは、均一な調製を与えない。
【０００６】
以前に使用された他のアプローチは、ヘテロ−二官能性クロスリンカーを有する２つの親抗体のカップリング、タンデムな一本鎖Ｆｖ分子、ダイアボディ、二特異的ダイアボディ、一本鎖ダイアボディおよびジ−ダイアボディの製造を含む。しかしながら、これらのアプローチのそれぞれは不利益を有する。さらに、ＩｇＧの重鎖中に２つのＦａｂリピートを含み、４つの抗原分子に結合することができる多価の抗体構築物が記載されている（ＰＣＴ公開ＷＯ０１７７３４２およびＭｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（９）：４８５４−６１参照）。
【０００７】
リガンド−受容体系は、特異性を維持するために同時に進化してきた。それらの相互作用は、特定の生物活性に関して特定のシグナル伝達を活性化する。しかしながら、非リガンド−受容体結合タンパク質、例えば、単一特異性抗体、二重もしくは多重特異性結合タンパク質、非競合性抗体の組合せまたは受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対する他の受容体結合タンパク質は、受容体リガンド−結合部位と異なるエピトープを認識し得る。受容体のＥＣＤに対するこのような異なるエピトープへの結合は、新たな予期しないシグナル伝達カスケードを生じ得る細胞内ドメインに立体構造変化を形質導入することがある。
【０００８】
米国特許第７，６１２，１８１号は、二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）または二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））と呼ばれる、高親和性を有する２つ以上の抗原に結合することが可能な結合タンパク質の新規なファミリーを提供する。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、同じ分子または同時に２つの異なる分子上の２つの異なるエピトープに結合することができる四価の二重特異的Ｉｇ様タンパク質である。ＤＶＤ−Ｉｇは、二価抗体のＮ末端に融合した２つの可変ドメインから構成される固有の結合タンパク質である。可変ドメインは、互いに直接融合されてもよく、または各種の長さおよびアミノ酸組成を有する合成ペプチドリンカーを介して直接接続されてもよい。ＤＶＤ−Ｉｇは、完全であり、機能的なＦｃドメインを用いて遺伝子操作され得て、次に適切なエフェクター機能を媒介することができる。ＤＶＤ−Ｉｇフォーマットは、抗体対の最適な柔軟性、２つの抗原結合ドメインの配向およびこれらを連結するリンカーの長さに起因して、受容体の生物学のいくつかの固有の態様と、おそらく新たな治療法を明らかにすることができる。
【０００９】
種々の構造が当該技術分野において提供され、いくつかは利点と欠点を有するが、特定の構築物は、特定の標的に結合する特定の特性を有する多価結合タンパク質を調製するために必要とされる。さらに、新しい可変ドメイン配列は、結合タンパク質の特性をさらに改善することができる。具体的には、ある種の先行技術のＤＶＤ−Ｉｇ構築物を用いた場合、ある程度の立体障害は、これらの先行技術のＤＶＤ−Ｉｇ構築物への標的の結合に影響を与えている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２００１／０７７３４２号
【特許文献２】米国特許第７，６１２，１８１号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（９）：４８５４−６１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの重複しないエピトープに結合することができる、改良された多価結合タンパク質が、当該技術分野において必要とされている。同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの重複しないエピトープに結合する新規な結合タンパク質が提供され、ここで、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープを標的とすることができる結合タンパク質が提供される。一実施形態において、高親和性で、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる結合タンパク質が提供される。
【００１４】
一実施形態において、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合するポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸またはポリペプチドを表し、Ｘ２はＦｃ領域を表し、ｎは０または１である結合タンパク質が提供される。一実施形態において、結合タンパク質中のＶＤ１およびＶＤ２は、重鎖可変ドメインである。別の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同じ受容体の２つの重複しないエピトープに結合することができる。別の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同じ細胞上に発現した２つの異なる受容体に結合することができる。さらに別の実施形態において、Ｃは、重鎖定常ドメインである。例えば、Ｘ１はリンカーである（但し、Ｘ１はＣＨ１ではない。）。
【００１５】
一実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合するポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域である。一実施形態において、Ｘ１は、リンカーであり、但し、ＣＨ１ではない。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６からの３つのＣＤＲを独立して含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６を独立して含む。
【００１６】
一実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合するポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。一実施形態において、Ｘ１はリンカーであり、但し、ＣＬではない。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７からの３つのＣＤＲを独立して含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７を独立して含む。
【００１７】
別の実施形態において、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合し、２つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第一のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第一のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域である。）を含み、前記第二のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第二のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。）を含む、結合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態において、第一および第二のＸ１は同じである。他の実施形態において、第一および第二のＸ１は異なっている。いくつかの実施形態において、第一のＸ１はＣＨ１ドメインではなく、および／または第二のＸ１はＣＬドメインではない。一実施形態において、第一のＸ１および第二のＸ１は短い（例えば、６アミノ酸）リンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１および第二のＸ１は長い（例えば、６を超えるアミノ酸）リンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１は短いリンカーであり、第二のＸ１は長いリンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１は長いリンカーであり、第二のＸ１は短いリンカーである。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６からの３つのＣＤＲを独立して含み、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７からの３つのＣＤＲを独立して含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６を独立して含み、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７を独立して含む。
【００１８】
一実施形態において、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、４つのポリペプチド鎖を含み、第一の２つのポリペプチド鎖のそれぞれは、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第一のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域であり、第二の２つのポリペプチド鎖のそれぞれは、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第二のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。このようなＤＶＤ結合タンパク質は、４つの抗原結合部位を有している。いくつかの実施形態において、第一および第二のＸ１は同じである。他の実施形態において、第一および第二のＸ１は異なる。いくつかの実施形態において、第一のＸ１は、ＣＨ１ドメインでないおよび／または第二のＸ１はＣＬドメインでない。別の実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる。したがって、いくつかの実施形態において、結合タンパク質は、任意の配向で、同じ細胞に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる少なくとも２つの可変ドメイン配列（例えば、ＶＤ１およびＶＤ２）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して選択される。したがって、いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同一の配列番号を含み、他の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、異なる配列番号を含む。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６からの３つのＣＤＲを独立して含み、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７からの３つのＣＤＲを独立して含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、ＥＧＦＲとＥＧＦＲ、ＲＯＮとＲＯＮ、ＩＧＦ−１ＲとＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３とＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＨＥＲ２、ＥＧＦＲとＩＧＦ−１Ｒ、ＥＧＦＲとＥｒｂ−Ｂ３、ＥＧＦＲとＲＯＮ；ＲＯＮとＨＥＲ２；ＲＯＮとＥｒｂ−Ｂ３；ＲＯＮとＩＧＦ−１Ｒ；ＩＧＦ−１ＲとＥｒｂ−Ｂ３；ＩＧＦ−１ＲとＨＥＲ２；またはＨＥＲ２とＥｒｂ−Ｂ３を結合させることができる。一実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６を独立して含み、ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５または５７を独立して含む。
【００１９】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表１に示される重鎖および軽鎖配列を含む。
【００２０】
重鎖、軽鎖、二本鎖または四本鎖の実施形態のいずれかのさらなる実施形態は、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）；ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）；ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）；ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）；ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）；ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）；ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）；ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）；ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）；またはＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２７）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２８）；またはＧ／Ｓに基づく配列（例えば、Ｇ４ＳとＧ４Ｓリピート；配列番号２９として開示される「Ｇ４Ｓ」）を含む少なくとも１つのＸ１リンカーを含む。一実施形態において、Ｘ２はＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｘ２は可変Ｆｃ領域である。
【００２１】
さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域は、第一のポリペプチド中に存在する場合、天然配列Ｆｃ領域またはバリアント配列Ｆｃ領域である。さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１のＦｃ領域、ＩｇＧ２のＦｃ領域、ＩｇＧ３のＦｃ領域、ＩｇＧ４のＦｃ領域、ＩｇＡのＦｃ領域、ＩｇＭのＦｃ領域、ＩｇＥのＦｃ領域またはＩｇＤのＦｃ領域である。
【００２２】
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合する結合タンパク質を作製する方法が提供される。一実施形態において、同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合する結合タンパク質を作製する方法は、第一のエピトープまたは受容体に結合する第一の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程；ｂ）第二のエピトープまたは受容体に結合する第二の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程；ｃ）本明細書に記載されている結合タンパク質のいずれかをコードする構築物（単数または複数）を調製する工程；およびｄ）ポリペプチド鎖を発現させ、第一および第二のエピトープまたは受容体に結合する結合タンパク質を生じさせる工程を含む。
【００２３】
本明細書における実施形態のいずれかにおいて、存在する場合、ＶＤ１重鎖可変ドメイン、および存在する場合、軽鎖可変ドメインは、第一の親抗体またはその抗原結合部分由来であってもよく；存在する場合、ＶＤ２重鎖可変ドメイン、および存在する場合、軽鎖可変ドメインは、第二の親抗体またはその抗原結合部分由来であってもよい。第一および第二の親抗体は同じであってもよくまたは異なってもよい。
【００２４】
一実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は第一の抗原に結合し、第二の親抗体またはその抗原結合部分は第二の抗原に結合する。一実施形態において、第一および第二の抗原は同じ抗原である。別の実施形態において、親抗体は同じ抗原上の異なるエピトープに結合する。別の実施形態において、第一および第二の抗原は異なる抗原である。別の実施形態において、第一および第二の抗原は、同じ細胞上に発現した２つの異なる受容体由来である。別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する効力と異なる効力で第一の抗原に結合する。さらに別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する親和性と異なる親和性で第一の抗原に結合する。
【００２５】
別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分および第二の親抗体またはその抗原結合部分は、ヒト抗体、ＣＤＲ移植された抗体、ヒト化抗体および／または親和性成熟された抗体である。
【００２６】
別の実施形態において、結合タンパク質は、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分によって示される少なくとも１つの所望の特性を有する。あるいは、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分は、結合タンパク質によって示される少なくとも１つの所望の特性を有する。一実施形態において、所望の特性は、１つ以上の抗体パラメーターである。別の実施形態において、抗体パラメーターは、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合性である。一実施形態において、結合タンパク質は多価である。別の実施形態において、結合タンパク質は多重特異的である。本明細書に記載されている多価および／または多重特異的結合タンパク質は、特に治療的見地から望ましい特性を有する。例えば、多価および／または多重特異的結合タンパク質は、（１）抗体が結合する抗原を発現している細胞によって、二価抗体より速く内部に取り込まれる（および／または異化される）；（２）タンパク質に結合するアゴニストであり；および／または（３）多価結合タンパク質が結合することができる抗原を発現している細胞の細胞死および／またはアポトーシスを誘導し得る。多価および／または多重特異的結合タンパク質の少なくとも１つの抗原結合特異性を提供する「親抗体」は、抗体が結合する抗原を発現している細胞によって内部に取り込まれ（および／または異化される）抗体であり得、および／またはアゴニスト、細胞死誘導および／またはアポトーシス誘導抗体であり得、本明細書に記載されている多価および／または多重特異的結合タンパク質は、これらの特性の１つ以上の改善を示し得る。さらに、親抗体は、これらの特性の任意の１つ以上を欠損してもよいが、本明細書に記載されるように、多価結合タンパク質として構築された場合、これらの１つ以上を取得してもよい。
【００２７】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１のうちの１つ以上の標的への結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、約１０２Ｍ−１ｓ−１から約１０３Ｍ−１ｓ−１、約１０３Ｍ−１ｓ−１から約１０４Ｍ−１ｓ−１、約１０４Ｍ−１ｓ−１から約１０５Ｍ−１ｓ−１、または約１０５Ｍ−１ｓ−１から約１０６Ｍ−１ｓ−１の、１つ以上の標的に対する結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。
【００２８】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約１０−３ｓ−１；最大約１０−４ｓ−１；最大約１０−５ｓ−１；または最大約１０−６ｓ−１のうちの１つ以上の標的への解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、約１０−３ｓ−１から約１０−４ｓ−１の、約１０−４ｓ−１から約１０−５ｓ−１の、または約１０−５ｓ−１から約１０−６ｓ−１の間の、１つ以上の標的に対する解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。
【００２９】
別の実施形態において、結合タンパク質は、最大約１０−７Ｍ；最大約１０−８Ｍ；最大約１０−９Ｍ；最大約１０−１０Ｍ；最大約１０−１１Ｍ；最大約１０−１２Ｍまたは最大約１０−１３Ｍのうちの１つ以上の標的への解離定数（Ｋｄ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、約１０−７Ｍから約１０−８Ｍの；約１０−８Ｍから約１０−９Ｍの；約１０−９Ｍから約１０−１０Ｍの；約１０−１０Ｍから約１０−１１Ｍの；約１０−１１Ｍから約１０−１２Ｍの；または約１０−１２Ｍから約１０−１３Ｍのその標的に対する解離定数（Ｋｄ）を有する。
【００３０】
別の実施形態において、結合タンパク質は、薬剤をさらに含むコンジュゲートである。一実施形態において、抗原は、免疫接着分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤である。一実施形態において、造影剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンである。別の実施形態において、放射性標識は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍである。さらに別の実施形態において、治療剤または細胞毒性剤は、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である。
【００３１】
別の実施形態において、結合タンパク質は結晶化された結合タンパク質であり、結晶として存在する。一実施形態において、この結晶は、無担体医薬徐放結晶である。別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は、この結合タンパク質の可溶性対応物より大きなインビボ半減期を有する。さらに別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は生物学的活性を保持する。
【００３２】
別の実施形態において、本明細書に記載されている結合タンパク質はグリコシル化される。例えば、グリコシル化パターンは、ヒトグリコシル化パターンである。
【００３３】
本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか１つをコードする単離された核酸も提供される。さらなる実施形態は、本明細書に開示されている単離された核酸を含むベクターを提供し、ベクターは、ｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３０（２）；ｐＴＴ３（追加の多重クローニング部位を有するｐＴＴ）；ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ、（１９９０年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：（１７）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ；ｐＥＦ６  ＴＯＰＯ；ｐＢＯＳ；ｐＨｙｂＥ；またはｐＢＪである。一実施形態において、ベクターは、米国特許公開第２００９０２３９２５９号に開示されているベクターである。
【００３４】
別の態様において、宿主細胞は、本明細書に開示されたベクターで形質転換される。一実施形態において、宿主細胞は原核細胞、例えば、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。別の実施形態において、宿主細胞は真核細胞、例えば、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞または真菌細胞である。一実施形態において、宿主細胞は、これらに限定されないが、ＣＨＯ、ＣＯＳ；ＮＳ０、ＳＰ２、ＰＥＲ．Ｃ６を含む哺乳動物細胞；またはサッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌細胞；またはＳｆ９などの昆虫細胞である。一実施形態において、異なる特異性を有する２つまたはそれ以上の結合タンパク質は、単一の組換え宿主細胞中で生産される。例えば、抗体の混合物の発現は、Ｏｌｉｇｏｃｌｏｎｉｃｓ（商標）（Ｍｅｒｕｓ  Ｂ．Ｖ．，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）米国特許第７，２６２，０２８号および第７，４２９，４８６号と呼ばれている。
【００３５】
結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、本明細書に開示されている宿主細胞のいずれか１つを培地中において培養することを含む、本明細書に開示されている結合タンパク質を生産する方法が提供される。一実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の５０％から７５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。別の実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の７５％から９０％が、二重特異的四価結合タンパク質である。別の実施形態において、生産された結合タンパク質の９０％から９５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。
【００３６】
一実施形態は、結合タンパク質の放出のための組成物を提供し、この組成物は、結晶化された結合タンパク質、成分、および少なくとも１つのポリマー性担体を含む。一実施形態において、ポリマー担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリラート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチラート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン、硫酸化多糖またはこれらの混和物および共重合体である。一実施形態において、成分は、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコールである。
【００３７】
別の実施形態は、本明細書に開示された組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む哺乳動物を治療する方法を提供する。
【００３８】
本明細書に開示された結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物が提供される。さらなる実施形態において、この医薬組成物は、疾患を治療するための少なくとも１つの追加の治療剤を含む。例えば、追加の薬剤は、治療剤、化学治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤（抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ−トラップが含まれるが、これらに限定されない。）、キナーゼ阻害剤（ＫＤＲおよびＴＩＥ−２阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）、共刺激分子遮断剤（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０が含まれるが、これらに限定されない。）、接着分子遮断剤（抗ＬＦＡ−１抗体、抗Ｅ／Ｌセレクチン抗体、小分子阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）、抗サイトカイン抗体またはその機能的断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦおよび抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体が含まれるが、これらに限定されない。）、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性薬剤、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸引用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストであり得る。
【００３９】
本明細書に開示されている結合部分によって結合され得る標的または複数の標的が有害である障害に罹患しているヒト対象を診断および／または治療する方法であって、標的または複数の標的の活性が、ヒト対象において阻害され、１以上の症状が緩和されまたは治療が達成されるように、本明細書に開示されている結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む方法が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質は、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱および尿路上皮を含む。）、女性生殖路（子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む。）、男性生殖路（前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む。）、内分泌腺（甲状腺、副腎および下垂体を含む。）および皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫（骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む。）、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍（星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む。）、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫の両方）を含む原発性および転移性の癌に罹患しているヒトを診断および／または治療するために使用することができる。
【００４０】
別の実施形態において、治療されるべき障害または状態は、例えば、ＨＩＶ、ヒトライノウイルス、エンテロウイルス、コロナウイルス、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルスまたはアデノウイルスによって引き起こされる、ヒトにおけるウイルス感染によって生じる症状を含む。
【００４１】
本明細書において提供される結合タンパク質は、神経障害を治療するために用いることができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、神経再生および脊髄損傷を含む神経変性疾患および状態を治療するために用いられる。
【００４２】
別の実施形態は、疾患または障害の治療における結合タンパク質の使用を提供し、前記疾患または障害は、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型および多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、アテローム性疾患／アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合���織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害、うつ病、統合失調症、Ｔｈ２型およびＴｈ１型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛、疼痛の様々な形態、癌、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、造血性悪性病変、白血病、リンパ腫、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）および動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失���症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎（Ａ型）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ．ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・デジェリーヌ−トーマス・シャイ−ドレーガーおよびマシャド−ジョセフ）、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフ��ラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ｃｉｓ）、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｊｕｎｔｉｖｉｔｉｓ  ｓｉｃｃａ）、クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ  ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多
内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）、原発性パーキンソニズム、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎）、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、坐骨神経痛、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性、もしくは創傷治癒である。
【００４３】
一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療剤および／または化学療法剤と組み合わせて用いる場合、癌を治療するために使用されまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防もしくは阻害において使用される。
【００４４】
一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質と組み合わせることができる化学療法剤は、以下：１３−ｃｉｓ−レチノイン酸；２−ＣｄＡ；２−クロロデオキシアデノシン；５−アザシチジン；５−フルオロウラシル；５−ＦＵ；６−メルカプトプリン；６−ＭＰ；６−ＴＧ；６−チオグアニン；アブラキサン；Ａｃｃｕｔａｎｅ（登録商標）；アクチノマイシン−Ｄ；Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）；Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）；Ａｇｒｙｌｉｎ（登録商標）；Ａｌａ−Ｃｏｒｔ（登録商標）；アルデスロイキン；アレムツズマブ；ＡＬＩＭＴＡ；アリトレチノイン；Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）；Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）；オールトランスレチノイン酸；アルファインターフェロン；アルトレタミン；アメトプテリン；アミホスチン；アミノグルテチミド；アナグレリド；Ａｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）；アナストロゾール；アラビノシルシトシン；Ａｒａ−Ｃ  Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）；Ａｒｅｄｉａ（登録商標）；Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）；Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）；Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）；三酸化ヒ素；Ａｒｚｅｒｒａ（商標）；アスパラギナーゼ；ＡＴＲＡ；Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）；アザシチジン；ＢＣＧ；ＢＣＮＵ；ベンダムスチン；ベバシズマブ：ベキサロテン；ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）；ビカルタミド；ＢｉＣＮＵ；Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）；ブレオマイシン；ボルテゾミブ；ブスルファン；Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）；Ｃ２２５；カルシウムロイコボリン；Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）；Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）；カンプトセシン−１１；カペシタビン；Ｃａｒａｃ（商標）；カルボプラチン；カルムスチン；カルムスチンウエハー；Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）；ＣＣ−５０１３；ＣＣＩ−７７９；ＣＣＮＵ；ＣＤＤＰ；ＣｅｅＮＵ；セルビジン；セツキシマブ；クロラムブシル；シスプラチン；シトロボラム因子；クラドリビン；コルチゾン；Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）；ＣＰＴ−１１；シクロフォスファミド；Ｃｙｔａｄｒｅｎ（登録商標）；シタラビン；シタラビンリポゾーマル；Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）；Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）；ダカルバジン；ダコゲン；ダクチノマイシン；ダルベポエチンアルファ；ダサチニブ；ダウノマイシン；ダウノルビシン；塩酸ダウノルビシン；ダウノルビシンリポゾーマル；ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）；デカドロン；デシタビン；Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）；Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）；デニロイキン；ジフチトクス；ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）；デキサメタゾン；酢酸デキサメタゾン；リン酸デキサメタゾンナトリウム；デキサゾン；デクスラゾキサン；ＤＨＡＤ；ＤＩＣ；ジオデックス；ドセタキセル；Ｄｏｘｉｌ（登録商標）；ドキソルビシン；ドキソルビシンリポゾーマル；Ｄｒｏｘｉａ（商標）；ＤＴＩＣ；ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）；Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）；Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）；Ｅｌｉｇａｒｄ（商標）；Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標）；Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）；Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）；Ｅｍｃｙｔ（登録商標）；エピルビシン；エポエチンアルファ；エル���タックス；エルロチニブ；エルウィニア  Ｌ−アスパラギナーゼ；エストラムスチン；エチオール；Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）；エトポシド；リン酸エトポシド；Ｅｕｌｅｘｉｎｅ（登録商標）；エベロリムス；Ｅｖｉｓｔａ（登録商標）；エキセメスタン；Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）；Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）；Ｆｅｍａｒａ（登録商標）；フィルグラスチム；フロクスウリジン；Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）；フルダラビン；Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）；フルオロウラシル；フルオロウラシル（クリーム）；フルオキシムエステロン；フルタミド；フォリン酸；ＦＵＤＲ（登録商標）；フルベストラント；ゲフィチニブ；ゲムシタビン；ゲムツズマブオゾガマイシン；ジェムザール；Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）；Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標）ウエハー；ＧＭ−ＣＳＦ；ゴセレリン；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Ｇ−ＭＣＳＦ）；Ｈａｌｏｔｅｓｔｉｎ（登録商標）；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；ヘキサドロール；Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）；ヘキサメチルメラミン；ＨＭＭ；Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）；Ｈｙｄｒｅａ（登録商標）；Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ  Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）；ヒドロコルチゾン；リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム；コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム；リン酸ハイドロコートン；ヒドロキシ尿素；イブリツモマブ；イブリツモマブチウキセタン；Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ  ｉｆｅｘ（登録商標）；インターフェロン−アルファ；インターフェロン−アルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）；イホスファミド；インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）；インターロイキン−２（ＩＬ−２）；メシル酸イマチニブ；イミダゾールカルボキサミド；Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標）；Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）；イリノテカン；イソトレチノイン；イキサベピロン；Ｉｘｅｍｐｒａ（商標）；キドロラーゼ（ｔ）；Ｌａｎａｃｏｒｔ（登録商標）；ラパチニブ；Ｌ−アスパラギナーゼ；ＬＣＲ；レナリドミド；レトロゾール；ロイコボリン；リューケラン；Ｌｅｕｋｉｎ（商標）；ロイプロリド；ロイコクリスチン；Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（商標）；リポゾーマルＡｒａ−Ｃ；Ｌｉｑｕｉｄ  Ｐｒｅｄ（登録商標）；ロムスチン；Ｌ−ＰＡＭ；Ｌ−サルコリジン；Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標）；Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（登録商標）；Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標）；マキシデックス；メクロレタミン；塩酸メクロレタミン；Ｍｅｄｒａｌｏｎｅ（登録商標）；Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）；Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）；メゲストロール；酢酸メゲストロール；メルファラン；メルカプトプリン；メスナ；Ｍｅｓｎｅｘ（商標）；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メチルプレドニゾロン；Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）；マイトマイシン；マイトマイシン−Ｃ；ミトキサントロン；Ｍ−Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）；ＭＴＣ；ＭＴＸ；Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標）；ムスチン；Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標）；Ｍｙｌｏｃｅｌ（商標）；Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）；Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）；ネララビン；Ｎｅ���ｓａｒ（登録商標）；Ｎｅｕｌａｓｔａ（商標）；Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）；Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）；Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標）；Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）；ニルタミド；Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標）；Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｎｏｖａｌｄｅｘ（登録商標）；Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）；エヌプレート；オクトレオチド；酢酸オクトレオチド；オフタツムマブ；Ｏｎｃｏｓｐａｒ（登録商標）；Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）；Ｏｎｔａｋ（登録商標）；Ｏｎｘａｌ（商標）；オプレルベキン；Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）；Ｏｒａｓｏｎｅ（登録商標）；オキサリプラチン；パクリタキセル；タンパク質に結合したパクリタキセル；パミドロネート；パニツムマブ；Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）；パゾパニブ；Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）；ＰＥＧインターフェロン；ペグアスパラガーゼ；ペグフィルグラスチム；ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（商標）；ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ；ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ；ペントスタチン；フェニルアラニンマスタード；Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）；Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（登録商標）；プレドニゾロン；プレドニゾン；Ｐｒｅｌｏｎｅ（登録商標）；プロカルバジン；ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）；カルムスチンインプラントを伴うＰｒｏｌｉｆｅｐｒｏｓｐａｎ  ２０；Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標）；ラロキシフェン；Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）；Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標）；Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；リツキシマブ；Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ（登録商標）；ロミプロスチン；Ｒｕｂｅｘ（登録商標）；塩酸ルビドマイシン；Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（登録商標）；Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ＬＡＲ（登録商標）；サーグラモスティム；Ｓｏｌｕ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）；Ｓｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）；ソラフェニブ；ＳＰＲＹＣＥＬ（商標）；ＳＴＩ−５７１；ストレプトゾシン；ＳＵ１１２４８；スニチニブ；Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）；Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標）；Ｔａｘｏｌ（登録商標）；Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）；Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）；テモゾロマイド；テムシロリムス；テニポシド；ＴＥＳＰＡ；サリドマイド；Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）；ＴｈｅｒａＣｙｓ（登録商標）；チオグアニン；Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ  Ｔａｂｌｏｉｄ（登録商標）；チオホスファミド；Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標）；チオテパ；ＴＩＣＥ（登録商標）；Ｔｏｐｏｓａｒ（登録商標）；トポテカン；トレミフェン；Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標）；トシツモマブ；トラスツズマブ；Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標）；トレチノイン；Ｔｒｅｘａｌｌ（商標）；Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）；ＴＳＰＡ；ＶＣＲ；Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標）；Ｖｅｌｂａｎ（登録商標）；Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）；Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標）；Ｖｅｓａｎｏｉｄ（商標）；Ｖｉａｄｕｒ（登録商標）；Ｖｉｄａｚａ（登録商標）；ビンブラスチン；硫酸ビンブラスチン；Ｖｉｎｃａｓａｒ  Ｐｆｓ（登録商標）；ビンクリスチン；ビノレルビン��酒石酸ビノレルビン；ＶＬＢ；ＶＭ−２６；ボリノスタット；ヴォトリエント；ＶＰ−１６；Ｖｕｍｏｎ（登録商標）；Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）；Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標）；Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）；Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標）；Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）；ゾレドロン酸；ゾリンザ；またはＺｏｍｅｔａ（登録商標）を含む。
【００４５】
別の態様において、本明細書に論述されているような第二の作用物質の投与前、投与と同時または投与後に、本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか１つを投与する工程を含む、疾患に罹患している患者を治療する方法が提供される。一実施形態において、第二の作用物質は、ブデノシド、上皮増殖因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチラート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１βｍＡｂ、抗ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体ｍＡｂ、増殖因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ−１９、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはこれらのリガンドに対する抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３またはＴＧＦβである。特定の実施形態において、本明細書に開示されている医薬組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮投与によって、患者に投与される。
【００４６】
また、本明細書に開示されている結合タンパク質に対する抗イディオタイプ抗体も提供される。抗イディオタイプ抗体は、本明細書において提供される結合タンパク質に組み込むことができる、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク領域または任意のその一部などの、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。
【００４７】
試験試料における１以上の抗原もしくはその断片の存在、量または濃度を決定する方法が提供され、１以上の抗原は、ＥＧＦＲ、ＲＯＮ、ＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｆｂ−Ｂ３および／またはＨＥＲ２である。この方法は、イムノアッセイによって、抗原またはその断片について試験試料をアッセイすることを含む。イムノアッセイは、（ｉ）少なくとも１つの結合タンパク質および少なくとも１つの検出可能な標識を使用し、（ｉｉ）試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的指標としての検出可能な標識によって生じるシグナルと、対照または較正因子における抗原またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的指標として生じるシグナルとを比較することを含む。較正因子は、場合によって、一連の較正因子の一部であり、この場合、較正因子のそれぞれは、抗原またはその断片の濃度によって、その一連の較正因子中の他の較正因子と異なっている。本方法は、（ｉ）捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を形成するために、試料を、抗原またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの捕捉剤と接触させること、（ｉｉ）捕捉剤／抗原またはその断片／検出剤の複合体を形成するために、捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を、検出可能な標識を含み、抗原またはその断片上のエピトープに結合し、捕捉剤に結合しない少なくとも１つの検出剤と接触させることおよび（ｉｉｉ）（ｉｉ）において形成された捕捉剤／抗原またはその断片／検出剤の複合体における検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度を決定することを含むことができ、少なくとも１つの捕捉剤および／または少なくとも１つの検出剤は少なくとも１つの結合タンパク質である。
【００４８】
あるいは、本方法は、（ｉ）捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を形成するために、試験試料と、抗原またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの捕捉剤とを接触させ、同時にまたはいずれかの順番で連続して、試験試料と、少なくとも１つの捕捉剤への結合に関して試験試料中の任意の抗原またはその断片と競合し得る、検出可能に標識された抗原またはその断片とを接触させ、試験試料中に存在する任意の抗原またはその断片および検出可能に標識された抗原は互いに競合し、それぞれ、捕捉剤／抗原またはその断片の複合体と捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体を形成することおよび（ｉｉ）（ｉｉ）において形成された捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体において検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度を決定することを含むことができ、少なくとも１つの捕捉剤は、少なくとも１つの結合タンパク質であり、捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体における検出可能な標識によって生じるシグナルは、試験試料中の抗原またはその断片の量または濃度に反比例する。
【００４９】
試験試料は、患者由来であり得、この場合、本方法は、患者の治療的／予防的処置の効力を診断、予後診断または評価する工程をさらに含み得る。本方法が、患者の治療的／予防的処置の効力を評価することをさらに含む場合、この方法は、場合によって、効力を改善するために必要な、患者の治療的／予防的処置の改変を加えることをさらに含む。本方法は、自動化システムまたは半自動化システムにおける使用に適合させることができる。したがって、本明細書に記載されている方法はまた、対象が、所与の疾患、障害または状態を有するまたはそれを発症する危険性があるか否かを判定するために使用することができる。具体的には、このような方法は、以下：
（ａ）対象由来の試験試料中の、分析物またはその断片の濃度または量を（例えば、本明細書に記載されている方法または当該技術分野において公知の方法を用いて）決定する工程；
（ｂ）工程（ａ）において決定された分析物またはその断片の濃度または量と、予め決定されたレベルとを比較する工程を含むことができ、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量が予め決定されたレベルと比較して好ましい場合、対象は、所定の疾患、障害または状態を有さないまたはその危険性がないと決定される。
しかしながら、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量が予め決定されたレベルと比較して好ましくない場合、対象は、所定の疾患、障害または状態を有するまたはその危険性があると決定される。
【００５０】
さらに、対象における疾患の進行を監視する方法が本明細書に提供される。場合によって、本方法は、以下：
（ａ）分析物の対象由来の試験試料中の濃度または量を決定する工程；
（ｂ）分析物の対象由来の後者の試験試料中の濃度または量を決定する工程；および
（ｃ）工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量と、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量とを比較することを含み、工程（ｂ）において決定された濃度または量が変化しない場合または工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して好ましくない場合、対象における疾患は継続し、進行しまたは悪化していると判断される。比較して、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量が、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して好ましい場合、対象における疾患は中断し、軽減しまたは改善されたと判断される。
【００５１】
場合によって、本方法は、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量と、例えば、予め決定されたレベルとを比較することをさらに含む。さらに、場合によって、例えば、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量が、予め決定されたレベルと比較して、不利に変更されたことを比較が示す場合、本方法は、ある期間、１以上の医薬組成物を用いて対象を治療することを含む。
【００５２】
また、１以上の抗原またはその断片について試験試料をアッセイするキットが提供され、１つ以上の抗原は、ＥＧＦＲ、ＲＯＮ、ＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３および／またはＨＥＲ２である。キットは、抗原またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分、抗原またはその断片について試験試料をアッセイするための指示書を含み、少なくとも１つの成分は、本明細書に開示されている結合タンパク質を含む少なくとも１つの組成物を含み、結合タンパク質は、場合によって、検出可能に標識されている。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質構築物の模式図であり、２つの親抗体からＤＶＤ結合タンパク質を作製するための戦略を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
同じ細胞上に発現する同じ受容体または２つの異なる受容体の２つの異なる（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる多価および／または多重特異的結合タンパク質が提供される。二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）または二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））およびこれらの医薬組成物ならびに核酸、組換え発現ベクターおよびこのようなＤＶＤ結合タンパク質を作製するための宿主細胞もまた提供される。インビトロまたはインビボのいずれかにおいて、特定の抗原を検出するＤＶＤ結合タンパク質を使用する方法もまた提供される。
【００５５】
本明細書に別段の定義がなければ、本明細書で使用される科学および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。何らかの曖昧さが伏在している場合には、本明細書中に付与されている定義は、すべての辞書または本明細書外の定義に優越する。文脈上別段の必要がなければ、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。「または」の使用は、別段の記載がなければ、「および／または」を意味する。「含んでいる」という用語ならびに「含む」および「含まれた」などのその他の形式の使用は、限定的なものではない。
【００５６】
一般的に、本明細書に記載されている細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリッド形成に関連して使用される命名法は、周知のものであり、本分野において一般的に使用されている。一般に、本明細書において提供される方法および技術は、別段の記載がなければ、本分野において周知の慣用方法に従い、ならびに本明細書を通じて引用および論述されている様々な一般的参考文献およびより具体的な参考文献中に記載されているように、実施することができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明書に従って、本分野で一般的に遂行されているように、または本明細書に記載されているように、実施される。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学に関して使用される命名法、ならびに本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学の実験室操作および技術は、周知のものであり、本分野で一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、調合、および送達、および患者の治療に対しては、標準的な技術を使用し得る。
【００５７】
本開示がより容易に理解し得るように、特定の用語を以下に定義する。
【００５８】
「抗体」という用語は、４つのポリペプチド鎖（２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖）から一般に構成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子またはＩｇ分子のエピトープ結合特性を保持した機能的断片、変異体、バリアントまたはこれらの誘導体を表すものとする。このような断片、変異体、バリアントまたは誘導体抗体のフォーマットは、本分野において公知である。完全長の抗体の一実施形態において、各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。ＣＨは、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＣＬは単一のＣＬドメインから構成される。ＶＨおよびＶＬは、より保存された領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。）が散在された超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される。）へ、さらに細分割することが可能である。一般に、各ＶＨおよびＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。免疫グロブリン分子は、あらゆる種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
【００５９】
「二特異的抗体」という用語は、その２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの一対）の１つの上に１つの抗原（またはエピトープ）を結合し、その第二の結合アーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）の上の異なる抗原（またはエピトープ）に結合する抗体を指す。二特異的抗体は、２つの異なる抗原結合アーム（特異性とＣＤＲ配列の両方における）を有し、それが結合するそれぞれの抗原について一価である。二特異的抗体には、クアドローマ技術（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ（１９８３年）Ｎａｔｕｒｅ  ３０５（５９３４）：５３７−４０）によって、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的コンジュゲーション（Ｓｔａｅｒｚｅｔ  ａｌ．（１９８５年）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４（６０１２）：６２８−３１）によってまたはノブ・イントゥ・ホールもしくはＦｃ領域中に突然変異を導入する同様のアプローチ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０（１４）：６４４４−６４４８）によって生成されるものが含まれる。
【００６０】
「親和性成熟された」抗体とは、変化を有しない親抗体と比べて、抗体の１つ以上のＣＤＲ中に、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす１つ以上の変化を有する抗体である。典型的な親和性成熟された抗体は、標的抗原に対してｎＭの親和性を有し、またはｐＭの親和性さえ有する。親和性成熟された抗体は、本分野において公知の操作によって産生される。「Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３」は、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載している。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基の無作為な突然変異導入は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）ＰｒｏｃＮａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６によって記載されており、活性増強アミノ酸残基による選択的突然変異導入位置、接触または過剰変異位置での突然変異は、米国特許第６，９１４，１２８号に記載されている。
【００６１】
「ＣＤＲ移植された抗体」という用語は、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域の１つ以上の配列が別の抗体のＣＤＲ配列で置換されている重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体を指す。例えば、２つの抗体は、マウスＣＤＲの１つ以上がヒトＣＤＲ配列で置換されているマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体などの異なる種由来であり得る。
【００６２】
「ヒト化抗体」という用語は、ヒト以外の種由来の、より「ヒト類似に」、すなわち、ヒト生殖系列配列により類似するように改変された抗体を表す。ヒト化抗体の１つの種類は、非ヒトＣＤＲ配列がヒトのＶＨおよびＶＬ配列中に導入されて、対応するヒトＣＤＲ配列が置換されているＣＤＲ移植された抗体である。「ヒト化抗体」はまた、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に（例えば、アミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性で）有するフレームワーク領域（ＦＲ）配列と、非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する少なくとも１つのＣＤＲを含む抗体またはそのバリアント、誘導体、類似体もしくは断片である。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列が非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）の配列に対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列がヒト免疫グロブリンの配列である、少なくとも１つの、典型的には２つ可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的にすべてを含んでもよい。ヒト化抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含んでもよい。一実施形態において、ヒト化抗体はまた、ヒト免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／または重鎖のヒト化可変ドメインのみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖、ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、重鎖、ならびに軽鎖の少なくとも可変ドメインを含有する。
【００６３】
「二重可変ドメイン結合タンパク質」および「二重可変ドメイン免疫グロブリン」という用語は、その２つの結合アーム（例えば、ＨＣ／ＬＣの一対）のそれぞれにおいて２つの可変ドメインを有する結合タンパク質を指し（ＰＣＴ出願公開第ＷＯ０２／０２７７３号参照）、それぞれが抗原に結合することができる。一実施形態において、それぞれの可変ドメインは、異なる抗原またはエピトープに結合する。別の実施形態において、それぞれの可変ドメインは、同じ抗原またはエピトープに結合する。別の実施形態において、二重可変ドメイン結合タンパク質は、同一の特異性と同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一の抗原結合アームを有し、それが結合するそれぞれの抗原に対して二価である。一実施形態において、ＤＶＤ結合タンパク質は、単一特異的であってもよく、すなわち、１つの抗原に結合することができまたは多重特異的であってもよく、すなわち、２つ以上の抗原に結合することができる。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）と呼ばれる。一実施形態において、４本鎖ＤＶＤ結合タンパク質の各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド、軽鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの抗原結合部位を含む。一実施形態において、それぞれの結合部位は、抗原結合部位あたりの抗原結合に関与する全６つのＣＤＲを有する重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。
【００６４】
「抗イディオタイプ抗体」という用語は、別の抗体の抗原結合部位のアミノ酸配列に対して惹起された抗体を指す。抗イディオタイプ抗体は、抗原に対する免疫応答を増強するために投与され得る。
【００６５】
「生物学的活性」という用語は、分子の１つ以上の固有の生物学的特性（インビボで見られるように天然に存在するものであっても、組換え手段によって提供される、または可能にされるものであっても）を表す。生物学的特性には、受容体に結合すること；細胞増殖の誘導、細胞増殖を阻害すること、他のサイトカインの誘導、アポトーシスの誘導および酵素活性が含まれるが、これらに限定されない。
【００６６】
「中和」という用語は、結合タンパク質が抗原に特異的に結合した場合、抗原の生物学的活性を相殺することを指す。一実施形態において、中和結合タンパク質は、抗原（例えば、サイトカイン）に結合し、少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれ以上にその生物学的活性を低下させる。
【００６７】
「特異性」とは、抗原に選択的に結合する結合タンパク質の能力を指す。
【００６８】
「親和性」は、結合タンパク質と抗原との間の相互作用の強さであり、結合タンパク質のＣＤＲの配列によって、ならびに抗原の性質、例えばそのサイズ、形状および／または電荷によって決定される。結合タンパク質は、負の副作用を最小限にしながら、所望の治療の評価項目を提供する親和性について選択することができる。親和性は、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて測定することができる。
【００６９】
「効力」という用語は、所望の効果を達成するための結合タンパク質の能力を意味し、その治療有効性の測定である。効力は、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて評価することができる。
【００７０】
「交差反応性」という用語は、惹起された標的以外の標的に結合する結合タンパク質の能力を指す。一般に、結合タンパク質は、適切に高い親和性でその標的組織（単数または複数）／抗原（単数または複数）に結合するが、非標的の正常組織に対して適切に低い親和性を示す。個々の結合タンパク質は、一般に、２つの基準を満たすように選択される。（１）抗体標的の既知の発現に適切な組織染色。（２）同じ臓器からのヒトとｔｏｘ種（マウスおよびカニクイザル）との間の類似した染色パターン。交差反応性を評価するためのこれらの方法および他の方法は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７１】
「生物学的機能」という用語は、結合タンパク質の特異的なインビトロまたはインビボにおける作用を意味する。結合タンパク質は、抗原のいくつかのクラスを対象とし、複数の作用機序を介して所望の治療結果を達成することができる。結合タンパク質は、可溶性タンパク質、細胞表面抗原ならびに細胞外タンパク質沈着物を対象にすることができる。結合タンパク質は、それらの標的の活性を作働させ、拮抗しまたは中和することができる。結合タンパク質は、それらが結合する標的のクリアランスを助けることができまたは細胞に結合したときに細胞毒性をもたらすことがある。２つ以上の抗体の部分は、単一の結合タンパク質分子において異なる機能を達成するために、多価フォーマットに組み込むことができる。生物学的機能を評価するために使用されるインビトロアッセイおよびインビボモデルは、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７２】
「安定な」結合タンパク質は、結合タンパク質が、保存時にその物理的安定性、化学的安定性および／または生物学的活性を本質的に保持しているものである。長期間にわたって、種々の温度にてインビトロで安定である多価結合タンパク質が望ましい。結合タンパク質を安定化し、種々の温度でそれらの安定性を評価する方法は、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７３】
「溶解性」という用語は、水性溶液中に分散させたままにするタンパク質の能力を意味する。水性製剤中のタンパク質の溶解性は、疎水性および親水性アミノ酸残基の適切な分布に依存し、したがって、溶解性は、正確に折り畳まれたタンパク質の生成と相関し得る。当業者は、日常的なＨＰＬＣ技術および当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて、結合タンパク質の可溶性の増加または減少を検出することができる。
【００７４】
結合タンパク質は、様々な宿主細胞を用いて生成されてもよく、またはインビトロで生成されてもよく、労力あたりの相対収率は「生成効率」を決定する。生成効率に影響を及ぼす因子には、限定されないが、宿主細胞型（原核生物または真核生物）、発現ベクターの選択、ヌクレオチド配列の選択および使用される方法が挙げられる。結合タンパク質生成に使用される材料および方法、ならびに生成効率の測定は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７５】
「免疫原性」という用語は、免疫応答を誘導する物質の能力を意味する。治療的結合タンパク質の投与は、免疫応答の特定の発生率をもたらし得る。多価形式の免疫原性を誘導し得る潜在的な要素は、親抗体の選択中に分析することができ、このような危険性を低下させるための工程は、多価結合タンパク質形式にそれらの配列を組み込む前に、親抗体を最適化するために採用することができる。抗体と結合タンパク質の免疫原性を減少させる方法は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７６】
「標識」および「検出可能な標識」という用語は、特異的結合対のメンバー間の反応（例えば、結合）を検出可能なものにするために、抗体またはその分析物などの特異的結合対のメンバーに結合させた部分を意味する。特異的結合対の標識された部分は、「検出可能に標識されている」と呼ばれる。したがって、「標識された結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の同定を与える標識が取り込まれたタンパク質を表す。一実施形態において、標識は、視覚または計測手段によって検出可能な信号を生成することができる、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識されたアミノ酸の取り込み、または印を付けたアビジン（例えば、光学的方法または比色分析法によって検出することができる、蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができるビオチン部分のポリペプチドへの付着である。ポリペプチド用の標識の例には、以下の放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍ）；色原体、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）；酵素的標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；およびガドリニウムキレートなどの磁気作用物質が含まれるが、これらに限定されない。イムノアッセイに一般に使用される標識の代表例には、光を生じる部分、例えばアクリジニウム化合物および蛍光を生じる部分、例えばフルオレセインが含まれる。この関連で、部分自体が検出可能に標識され得るが、さらに別の部分との反応後に検出可能にされ得る。
【００７７】
「連結体」という用語は、第二の化学部分（治療剤または細胞毒性剤など）に化学的に連結された抗体などの結合タンパク質を表す。「作用物質」という用語は、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子または生物由来物質から作製された抽出物を含む。一実施形態において、治療剤または細胞毒性剤には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらの類似体または相同体が含まれるが、これらに限定されるものではない。イムノアッセイとの関連において使用される場合、連結抗体は、検出抗体として使用される検出可能に標識された抗体であってよい。
【００７８】
「結晶」および「結晶化された」という用語は、結晶の形態で存在する結合タンパク質（例えば、抗体）またはその抗原結合部分を表す。結晶は、物質の固体状態の一形態であり、これは、非晶質の固体状態または液体の結晶状態などの他の形態とは異なる。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）または分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な反復する三次元配列から構成される。これらの三次元配列は、本分野においてよく理解されている特異的な数学的関係に従って整列されている。結晶中で反復されている基礎的単位または構築ブロックは、非対称単位と呼ばれる。所定の十分に整えられた結晶的対称性に合致する配置での非対称単位の反復は、結晶の「単位格子」を与える。すべての三次元中での規則的な転換による単位格子の反復は、結晶を与える。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）を参照されたい。
【００７９】
「ベクター」という用語は、核酸分子に連結されている別の核酸を輸送することができる該核酸分子を表す。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、その中にさらなるＤＮＡセグメントを連結し得る環状二本鎖ＤＮＡループを表す。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、ここで、追加のＤＮＡセグメントはウイルスゲノム中に連結され得る。他のベクターにはＲＮＡベクターが含まれる。ある種のベクターは、当該ベクターがその中に導入された宿主細胞中で自律的複製を行うことができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中へ導入されて、宿主細胞のゲノム中に組み込まれることが可能であり、これにより、宿主ゲノムとともに複製される。ある種のベクターは、それらが作用可能に連結されている遺伝子の発現を誘導することが可能である。このようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に、「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。プラスミドは、最も一般的に使用されるベクターの形態であるので、本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、発現ベクターの他の形態もまた含まれ、例えば、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）なども含まれる。一群のｐＨｙｂＥベクター（米国特許出願第６１／０２１，２８２号）は、親抗体およびＤＶＤ結合タンパク質のクローニングに使用された。ｐＪＰ１８３由来のＶ１；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇ１，ｚ，非Ｖ２は、抗体および野生型定常領域を有するＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１９１由来のＶ２；ｐＨｙｂＥ−ｈＣＫ  Ｖ３は、抗体およびカッパ定常領域を有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１９２由来のＶ３；ｐＨｙｂＥ−ｈＣＩ  Ｖ２は、抗体およびランダ定常領域を有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。Ｖ４は、ラムダシグナルペプチドおよびカッパ定常領域を用いて構築され、ラムダ−カッパハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。Ｖ５は、カッパシグナルペプチドおよびラムダ定常領域を用いて構築され、カッパ−ラムダハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１８３由来のＶ７；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇ１，ｚ，非Ｖ２は、抗体および（２３４、２３５ＡＡ）突然変異定常領域を有するＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用された。
【００８０】
「組換え宿主細胞」または「宿主細胞」という用語は、外来ＤＮＡがその中に導入されている細胞を表す。このような用語は、当該細胞を表すのみならず、このような細胞の子孫も表す。突然変異または環境的な影響のために、後続の世代中にある種の修飾が生じ得るので、このような子孫は、実際には親細胞と同一でないことがあり得るが、本明細書において使用される「宿主細胞」という用語の範囲になお含まれる。一実施形態において、宿主細胞には、原核および真核細胞が含まれる。一実施形態において、真核細胞には、原生生物、真菌、植物および動物細胞が含まれる。別の実施形態において、宿主細胞には、原核細胞株Ｅ．コリ；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３、ＣＯＳ、ＮＳ０、ＳＰ２およびＰＥＲ．Ｃ６；昆虫細胞株Ｓｆ９および真菌細胞サッカロミセス・セレビシアエが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００８１】
「トランスフェクション」という用語は、宿主細胞への外因性核酸（例えば、ＤＮＡ）を導入するために一般的に用いられる様々な技術を包含し、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどが挙げられる。
【００８２】
「サイトカイン」という用語は、細胞間媒介物質として別の細胞集団に作用する１つの細胞集団から放出されるタンパク質を指す。「サイトカイン」という用語には、天然源由来または組換え細胞培養物由来のタンパク質および天然配列のサイトカインの生物学的に活性な同等物が含まれる。
【００８３】
「生物学的試料」という用語は、生物または生物であったものから得られた物質の量を意味する。このような物質には、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が含まれるが、これらに限定されない。
【００８４】
「成分」という用語は、組成物の要素を指す。診断キットに関連して、例えば、成分は、試験試料のアッセイ用のキットに含めることができる、捕捉抗体、検出またはコンジュゲート抗体、対照、較正因子、一連の較正因子、感受性パネル、容器、緩衝液、希釈剤、塩、酵素、酵素の補因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液として）、停止液などであってもよい。したがって、「成分」は、例えば、抗分析物（例えば、抗ポリペプチド）抗体に結合させることによって、固体支持体上に固定されている、上記のポリペプチドまたは他の分析物を含めることができる。いくつかの成分は、溶液中にあってもよくまたはアッセイにおける使用として再構成するために凍結乾燥されてもよい。
【００８５】
「対照」は、分析物を含まない（「陰性対照」）または分析物を含む（「陽性対照」）ことが知られている組成物を表す。陽性対照は、既知の濃度の分析物を含み得る。「対照」、「陽性対照」および「較正物質」は、既知の濃度の分析物を含む組成物を表すために本明細書において互換的に使用され得る。「陽性対照」は、アッセイ性能特性を確立するために使用することが可能であり、試薬（例えば、分析物）の完全性の有用な指標である。
【００８６】
「所定のカットオフ」および「所定のレベル」は、所定のカットオフ／レベルに対してアッセイの結果を比較することにより診断／予後診断／治療的効力の結果を評価するために使用されるアッセイのカットオフ値を一般に表し、所定のカットオフ／レベルは様々な臨床的パラメーター（例えば、疾患の重症度、進行／非進行／改善など）にすでにつながっておりまたは関連している。本開示は例示的な所定のレベルを提供し得るが、カットオフ値はイムノアッセイの性質（例えば、使用される抗体など）に応じて様々となり得ることが周知である。さらに、本明細書における開示を他のイムノアッセイに適合させて、本開示を基礎とする他のイムノアッセイについてのイムノアッセイ特異的なカットオフ値を得ることは、当業者の通常の技術の範囲内に十分にある。所定のカットオフ／レベルの正確な値はアッセイ間で様々となり得るが、（もしあれば）本明細書に記載されている相関は一般に適用可能であるはずである。
【００８７】
本明細書に記載されている診断アッセイにおいて使用される「前処理試薬」、例えば、溶解、沈殿および／または可溶化試薬は、あらゆる細胞を溶解するものおよび／または試験試料中に存在するあらゆる分析物を可溶化するものである。前処理は、本明細書でさらに記載されるように、すべての試料に必要というわけでない。とりわけ、分析物（例えば、目的のポリペプチド）の可溶化は、試料中に存在するあらゆる内在性結合タンパク質からの分析物の放出を伴い得る。前処理試薬は均一（分離工程を必要としない）または不均一（分離工程を必要とする）であり得る。不均一前処理試薬を使用すると、アッセイの次の工程に進行する前に任意の沈殿した分析物結合タンパク質は試験試料から除去される。
【００８８】
本明細書に記載されているイムノアッセイおよびキットとの関連で「品質管理試薬」には、較正物質、対照および感受性パネルが含まれるが、これらに限定されない。「較正物質」または「標準物質」は、抗体または分析物などの分析物の濃度を内挿するための較正（標準）曲線を確立するために典型的に（例えば複数など、１つ以上）使用される。あるいは、所定の陽性／陰性カットオフ近くにある単一の較正物質を使用することが可能である。「感受性パネル」を含むように、複数の較正物質（すなわち、２つ以上の較正物質または様々な量の（複数の）較正物質）を組み合わせて使用することが可能である。
【００８９】
「特異的結合パートナー」という用語は、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学的または物理的な手段を介して互いに特異的に結合する２つの異なる分子を含む。したがって、抗原および抗体の特異的結合に加えて、他の特異的結合対は、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物およびレクチン、相補的なヌクレオチド配列、エフェクターおよび受容体分子、補因子および酵素、酵素阻害剤および酵素などを含み得る。さらに、特異的結合対は、元の特異的結合メンバーの類似体、例えば、分析物類似体であるメンバーを含み得る。免疫反応性特異的結合メンバーには、単離または組換えで産生された抗原、抗原断片およびモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む抗体ならびにその複合体、断片およびバリアント（バリアントの断片を含む）が含まれる。
【００９０】
「Ｆｃ領域」という用語は、無傷の抗体のパパイン消化によって生成され得る、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義する。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン（ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）を含み、場合によって、ＣＨ４ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変化させるために、Ｆｃ部分中のアミノ酸残基を置換することが、本分野において周知である（例えば、米国特許第５，６４８，２６０号および第５，６２４，８２１号）。Ｆｃ領域は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および抗体と抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。いくつかの場合において、これらのエフェクター機能は、治療用の免疫グロブリンに対して望ましいが、他の場合において、治療目的に応じて、不要であるまたは有害でさえあり得る。
【００９１】
結合タンパク質の「抗原結合部分」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する結合タンパク質（例えば、抗体）の１つ以上の断片を意味する。結合タンパク質の抗原結合部分は、完全長の抗体の断片、ならびに、２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する、二特異的、二重特異的または多重特異的フォーマットで行うことができる。結合タンパク質の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域において、ジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別個の遺伝子によってコードされているが、これらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子を形成している単一のタンパク質鎖として、これらの作製を可能とする合成リンカーによって、組換え法を用いて連結することが可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている。）。このような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものとする。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態も包含される。さらに、一本鎖抗体も、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒に、抗原結合領域の対を形成する直列Ｆｖセグメントの対を含む「直鎖抗体」（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。
【００９２】
「多価結合タンパク質」という用語は、２つまたはそれ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を意味する。一実施形態において、多価結合タンパク質は、３つまたはそれ以上の抗原結合部位を有するように工学的に作製され、天然に存在しない抗体である。「多重特異的結合タンパク質」という用語は、２つ以上の関連標的または非関連標的に結合することができる結合タンパク質を指す。一実施形態において、本明細書に提供される二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含み、四価または多価の結合タンパク質である。
【００９３】
「リンカー」という用語は、アミノ酸残基または２つのポリペプチド（例えば、２つのＶＨまたは２つのＶＬドメイン）に連結させて用いられるペプチド結合によって接続された２つ以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドを意味する。このようなリンカーポリペプチドは、本分野において周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。
【００９４】
「Ｋａｂａｔ番号」、「Ｋａｂａｔ定義」および「Ｋａｂａｔ標識」という用語は、本明細書において、互換的に使用される。本分野において認められているこれらの用語は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基に比べて、より可変的な（すなわち、超可変的な）アミノ酸残基に付番するシステムを表す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置３１から３５、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から６５およびＣＤＲ３に対するアミノ酸位置９５から１０２にわたる。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置２４から３４、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から５６およびＣＤＲ３に対するアミノ酸位置８９から９７にわたる。
【００９５】
「ＣＤＲ」という用語は、免疫グロブリン可変領域配列内の相補性決定領域を意味する。重鎖および軽鎖可変領域のそれぞれについて、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と命名されている、重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれにおいて３つのＣＤＲが存在する。「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる単一の可変領域中に生じる３つのＣＤＲ群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なる系に従って、異なって定義されてきた。Ｋａｂａｔによって記載された系（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））は、抗体のいずれの可変領域に対しても適用可能な明瞭な残基付番系を提供するのみならず、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界を提供する。これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲと称され得る。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３）は、ＫａｂａｔＣＤＲ内のある種の亜部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造を採ることを見出した。これらの亜部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３（「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ、軽鎖および重鎖領域を表記する。）と表記される。これらの領域は、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲと称される場合があり、これは、ＫａｂａｔＣＤＲと重複する境界を有する。ＫａｂａｔＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界が、Ｐａｄｌａｎ（１９９５）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２−４５によって記載されている。さらに別のＣＤＲ境界定義が、上記系の１つに厳格に従わない場合があり得るが、それにも関わらず、ＫａｂａｔＣＤＲと重複するが、これらは、特定の残基または残基の群またはさらにはＣＤＲ全体が、抗原結合に著しい影響を与えないという予測または実験的な発見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書に使用されている方法は、これらの系のいずれかに従って定義されたＣＤＲを使用し得るが、ある種の実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを使用する。
【００９６】
「エピトープ」という用語は、結合タンパク質、例えば、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる、ポリペプチドおよび／または他の決定因子によって結合される抗原の領域を意味する。ある種の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホリルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、ある種の実施形態において、特異的な三次元構造的特徴および／または特異的な電荷特徴を有し得る。一実施形態において、エピトープは、特異的結合パートナー上の相補的部位に結合することが知られている抗原（またはその断片）の領域のアミノ酸残基を含む。抗原断片は１を超えるエピトープを含むことができる。ある種の実施形態において、結合タンパク質が、タンパク質および／または高分子の複雑な混合物中で、その標的抗原を認識する場合に、抗体は抗原を特異的に結合する。抗体が交差競合する（一方が他方の結合または調節作用を妨げる）場合、結合タンパク質は「同じエピトープに結合する」。さらに、エピトープの構造上の定義（重複、類似、同一）は有益であり、機能上の定義は、構造上（結合）および機能上（調節、競合）のパラメーターを包含する。タンパク質の異なる領域は、異なる機能を果たすことができる。例えば、サイトカインの特定の領域は、受容体活性をもたらすそのサイトカイン受容体と相互作用し、一方、このタンパク質の他の領域は、サイトカインを安定化するために必要とされ得る。サイトカインシグナル伝達の負の影響を排除するために、サイトカインは、受容体相互作用領域（単数または複数）に特異的に結合する結合タンパク質を用いて標的化され得て、それによってその受容体の結合を阻止する。あるいは、結合タンパク質は、サイトカイン安定化に関与する領域を標的化され得て、それによって、分解のためのタンパク質を指定する。エピトープ認識を可視化し、モデル化する方法は、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００９７】
「薬物動態」とは、薬物が、生物によって、吸収され、分散され、代謝されおよび排泄されるプロセスを指す。所望の薬物動態プロファイルを有する多価結合タンパク質分子を生成するために、同様の所望の薬物動態プロファイルを有する親モノクローナル抗体が選択される。選択された親モノクローナル抗体のＰＫプロファイルは、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて、げっ歯類において容易に決定することができる。
【００９８】
「生物学的利用能」とは、投与後にその標的に到達する活性薬剤の量を指す。生物学的利用能は、安定性、溶解性、免疫原性および薬物動態を含む前述の特性のいくつかの関数であり、当業者に知られている方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて評価することができる。
【００９９】
「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの会社）、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムな生物特異的相互作用の分析を可能とする光学現象を意味する。さらなる記載については、Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６を参照されたい。「Ｋｏｎ」という用語は、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ／抗原複合体を形成する、結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ）と抗原の結合についての結合速度（ｏｎ  ｒａｔｅ）定数を意味する。「Ｋｏｎ」という用語はまた、本明細書において互換的に用いられ、「会合速度定数」または「ｋａ」を意味する。その標的抗原への結合タンパク質の結合速度または結合タンパク質、例えば抗体、と抗原との間の複合体形成の速度を示すこの値はまた、以下の式によって示される。
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ
【０１００】
「Ｋｏｆｆ」という用語は、結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ）の、例えば、本分野で知られているＤＶＤ−Ｉｇ／抗原複合体からの解離についての解離速度（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）定数または「解離速度（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）定数」を意味する。この値は、以下の式によって示されるように、結合タンパク質、例えば抗体、のその標的抗原からの解離速度または遊離抗体と抗原への経時的なＡｂ−Ａｇ複合体の分離を示す。
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
【０１０１】
「Ｋｄ」および「平衡解離定数」という用語は、平衡状態での滴定測定においてまたは解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を結合速度定数（Ｋｏｎ）で割ることによって得られた値を意味する。会合速度定数、解離速度定数および平衡解離定数は、抗原への結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ）の結合親和性を表すために使用される。結合および解離速度定数を決定する方法は本分野において周知である。蛍光を基礎とする技術の使用は、高い感度を提供し、平衡状態で生理的緩衝液中の試料を調べることができる。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイなどの他の実験的アプローチおよび機器を使用することが可能である（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎから入手可能な機器）。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（動態排除アッセイ）アッセイも使用することが可能である。
【０１０２】
「バリアント」という用語は、アミノ酸の付加（例えば、挿入）、欠失または保存的置換によってアミノ酸配列中の所与のポリペプチドとは異なるが、所与のポリペプチドの生物活性を保持するポリペプチドを意味する（例えば、バリアントＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲとの結合について抗ＥＧＦＲ抗体と競合することができる。）。アミノ酸の保存的置換、すなわち特性が類似する（例えば、親水性ならびに荷電領域の程度および分布）異なるアミノ酸とのアミノ酸の置き換えは、微小変化が典型的に関与すると本分野で認識されている。これらの微小変化は、本分野で理解されているように、アミノ酸のヒドロパシーインデックスを考慮することにより部分的に特定することが可能である（例えば、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２参照）。アミノ酸のヒドロパシーインデックスは、この疎水性および荷電の考慮を基礎とする。タンパク質中のヒドロパシーインデックスの類似したアミノ酸を置換することが可能であり、このタンパク質はタンパク質の機能を依然として保持することが本分野において知られている。一態様において、±２のヒドロパシーインデックスを有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質となる置換を明らかにするために使用することも可能である。ペプチドとの関連でアミノ酸の親水性を考慮すると、抗原性および免疫原性とよく相関することが報告されている有用な尺度である、そのペプチドの最大の局所平均親水性の計算が可能となる（例えば、米国特許第４，５５４，１０１号参照）。本分野で理解されているように、類似した親水性値を有するアミノ酸の置換は、生物活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。一態様において、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸を用いて置換が行われる。アミノ酸のヒドロパシーインデックスと疎水性値はどちらもそのアミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。この観察に一致して、生物学的機能と適合するアミノ酸置換は、アミノ酸、特に、疎水性、親水性、荷電、サイズおよび他の特性によって明らかにされるこれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存することが理解されている。「バリアント」という用語は、タンパク質分解、リン酸化または他の翻訳後修飾などによって異なる形でプロセシングされているが、その生物活性または抗原反応性、例えばＥＧＦＲに結合する能力を保持するポリペプチドまたはその断片を含む。「バリアント」という用語は、他に定義がなければ、バリアントの断片を包含する。バリアントは、野生型配列に対して９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％または７５％同一であってもよい。
【０１０３】
Ｉ．結合タンパク質の生成
同じ細胞上に発現した同じ受容体または２つの異なった受容体の２つの異なった（例えば、重複しない）エピトープに結合することができる結合タンパク質およびそれを作製する方法が提供される。結合タンパク質は、様々な技術を用いて生成することができる。発現ベクター、宿主細胞および結合タンパク質を生成する方法が提供され、当該技術分野において周知である。
【０１０４】
Ａ．親モノクローナル抗体の作製
ＤＶＤ結合タンパク質の可変ドメインは、目的の抗原に結合することができるポリクローナルＡｂおよびｍＡｂなど、親抗体から取得することが可能である。これらの抗体は、天然に存在し得、または組換え技術によって作製され得る。当業者は、例えば、限定されないが、ハイブリドーマ技術の使用、選択されたリンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）、ファージ、酵母もしくはＲＮＡ−タンパク質融合ディスプレイまたは他のライブラリーの使用、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも一部を含む非ヒト動物の免疫化、ならびにキメラ抗体、ＣＤＲ移植された抗体およびヒト化された抗体の調製を含む、抗体を生成するための多数の方法に精通している。例えば、米国特許公開第２００９０３１１２５３  Ａ１参照。可変ドメインは、親和性成熟技術を用いて調製することができる。
【０１０５】
Ｂ．親モノクローナル抗体を選択するための基準
ＤＶＤ結合タンパク質分子において望まれる少なくとも１つ以上の特性を有する親抗体を選択することを含む実施形態が提供される。一実施形態において、所望の特性は、例えば、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用能、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合などの１つ以上の抗体パラメーターである。例えば、米国特許出願公報第２００９０３１１２５３号を参照されたい。
【０１０６】
Ｃ．結合タンパク質分子の構築
結合タンパク質は、２つの異なる親モノクローナル抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技術によって、直接または短いリンカーを介して直列に連結され、その後に軽鎖定常ドメインＣＬが続くように設計され得る。同様に、重鎖は、直接的にまたはリンカーを介して、タンデムに連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、その後に定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域を含む（図１Ａ）。
【０１０７】
可変ドメインは、本明細書に記載されている方法のいずれか１つによって作製された親抗体から得られた組換えＤＮＡ技術を用いて取得することが可能である。一実施形態において、可変ドメインは、マウス重鎖または軽鎖可変ドメインである。別の実施形態において、可変ドメインは、ＣＤＲ移植されたまたはヒト化された可変重鎖または軽鎖ドメインである。一実施形態において、可変ドメインは、ヒト重鎖または軽鎖可変ドメインである。
【０１０８】
リンカー配列は、単一のアミノ酸またはポリペプチド配列であり得る。一実施形態において、リンカー配列の選択は、いくつかのＦａｂ分子の結晶構造分析に基づいている。Ｆａｂまたは抗体分子構造中の可変ドメインとＣＨ１／ＣＬ定常ドメインの間には、天然の柔軟な連結が存在する。この天然の連結は、ＶドメインのＣ末端由来の４−６残基およびＣＬ／ＣＨ１ドメインのＮ末端由来の４−６残基によって構成される約１０から１２個のアミノ酸残基を含む。ＤＶＤ結合タンパク質は、それぞれ、軽鎖および重鎖中のリンカーとしてＣＬまたはＣＨ１のＮ末端の５から６アミノ酸残基、または１１から１２アミノ酸残基を用いて作製された。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基、特に最初の５から６個のアミノ酸残基は、強い二次構造なしにループ立体構造を採ることが可能であり、したがって、２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーとして作用することが可能である。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基は、それらがＩｇ配列の一部であるため、可変ドメインの天然の伸長である。したがって、それらの使用は、リンカーおよび接合分析物から潜在的に生じる任意の免疫原性を大幅に最小化する。
【０１０９】
さらなる実施形態において、重鎖、軽鎖、二本鎖または四本鎖の実施形態のいずれかは、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）；ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）；ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）；ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）；ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）；ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）；ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）；ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）；ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）；またはＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２７）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２８）；またはＧ／Ｓに基づく配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート；配列番号２９）を含む、少なくとも１つのリンカーを含む。一実施形態において、Ｘ２はＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｘ２はバリアントＦｃ領域である。
【０１１０】
他のリンカー配列は、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのあらゆる長さのあらゆる配列を含み得るが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのすべての残基は含まない。例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５から１２個のアミノ酸残基；軽鎖リンカーは、ＣκまたはＣλに由来することが可能であり；ならびに重鎖リンカーは、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、ＣεおよびＣμを含む、いずれかのアイソタイプのＣＨ１に由来することが可能である。リンカー配列は、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、Ｇ／Ｓを基礎とする配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート；配列番号２９）；ヒンジ領域に由来する配列および他のタンパク質から得られる他の天然配列などの他のタンパク質からも由来し得る。
【０１１１】
一実施形態において、定常ドメインは、組換えＤＮＡ技術を用いて、２つの連結された可変ドメインに連結されている。一実施形態において、連結された重鎖可変ドメインを含む配列は、重鎖定常ドメインに連結され、連結された軽鎖可変ドメインを含む配列は、軽鎖定常ドメインに連結される。一実施形態において、定常ドメインは、それぞれ、ヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインである。一実施形態において、ＤＶＤ重鎖は、Ｆｃ領域にさらに連結されている。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。別の実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｆｃ領域には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤから得られるＦｃ領域が含まれる。
【０１１２】
別の実施形態において、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドは組み合わされて、ＤＶＤ結合タンパク質を形成する。表１は、疾患の治療に有用な例示的な抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列を列挙している。一実施形態において、いずれかの配向における、表１に列挙されたＶＨおよび／またはＶＬ領域の少なくとも２つを含むＤＶＤが提供される。いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して選択される。よって、いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は同じ配列番号を含み、他の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は異なる配列番号を含む。以下に与えられるＶＨおよびＶＬドメイン配列は、当該技術分野において知られているまたは当該技術分野において知られている方法を用いて容易に識別され得る相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク配列を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のこれらのＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列は、同じ抗原に結合する、当該技術分野において知られている結合タンパク質由来の他のＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列によって、機能を損なうことなく置換される。
【０１１３】
【表１】
2015509704.tif 000035
2015509704.tif 000036
【０１１４】
特異的な標的に結合することができる特異的ＤＶＤ結合タンパク質およびこれを作製する方法の詳細な説明は、以下の実施例の部において提供される。
【０１１５】
Ｄ．結合タンパク質の作製
本明細書において提供される結合タンパク質は、本分野で公知の多数のいずれかによって作製され得る。例えば、宿主細胞からの発現において、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって、宿主細胞中に形質移入される。原核または真核宿主細胞のいずれの中でも、本明細書において提供されるＤＶＤ結合タンパク質を発現することは可能であるが、真核細胞（特に、哺乳動物細胞）は、原核細胞に比べて、適切に折り畳まれ、免疫学的に活性なＤＶＤ結合タンパク質を集合および分泌する傾向がより大きいので、ＤＶＤ結合タンパク質は真核細胞、例えば哺乳動物宿主細胞中で発現される。
【０１１６】
ＤＶＤタンパク質の組換え発現用の典型的なシステムにおいて、リン酸カルシウムによって媒介された形質移入によって、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞中に導入される。組換え発現ベクター内で、重鎖および軽鎖遺伝子は、遺伝子の転写の高いレベルを誘導するために、各々、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＰＬプロモーター制御要素へ作用可能に連結されている。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択／増幅を用いて、ベクターで形質移入されたＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も担持する。選択された形質転換体宿主細胞は、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖の発現を可能とするために培養され、完全な状態のＤＶＤ結合タンパク質が培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地からＤＶＤタンパク質を回収するために、標準的な分子生物学的技術が使用される。ＤＶＤタンパク質が合成されるまで、適切な培地中で、本明細書において提供される宿主細胞を培養することによって、本明細書において提供されるＤＶＤタンパク質を合成する方法も提供される。本方法は、培地からＤＶＤタンパク質を単離することをさらに含むことが可能である。
【０１１７】
ＤＶＤ結合タンパク質の重要な特徴は、ＤＶＤ結合タンパク質が、慣用の抗体として、類似の様式で産生および精製され得ることである。ＤＶＤ結合タンパク質の産生は、定常領域の配列修飾、または化学的修飾を必要とせずに、所望される二重特異的活性を有する均一な単一の主産物をもたらす。「二特異的」、「多重特異的」および「多重特異的多価」完全長結合タンパク質を作製するための他の以前に記載された方法は、集合した不活性な単一特異的、多重特異的、多価の完全長結合タンパク質と、異なる結合部位の組合せを有する多価完全長結合タンパク質との混合物の細胞内産生または分泌された産生をもたらし得る。
【０１１８】
驚くべきことに、本明細書において提供される「二重特異的多価完全長結合タンパク質」の設計は、主として、所望される「二重特異的多価完全長結合タンパク質」へ集合する二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖をもたらす。
【０１１９】
集合され、発現された二重可変ドメイン免疫グロブリン分子の少なくとも５０％、少なくとも７５％および少なくとも９０％が、所望の二重特異的四価タンパク質であり、したがって、増大した商用的有用性を有する。したがって、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現し、「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の単一の主要産物をもたらす方法が提供される。
【０１２０】
「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の「主要産物」をもたらす単一細胞において二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現させる方法であって、「主要産物」は、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての集合されたタンパク質の５０％超であり、例えば、７５％超および９０％超である方法が提供される。
【０１２１】
ＩＩ．結合タンパク質の使用
本明細書において提供される結合タンパク質は２つまたはそれ以上の抗原に結合することができるので、本発明の結合タンパク質は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学など慣用のイムノアッセイを用いて、（例えば、血清または血漿などの生物学的試料中で）抗原を検出するために使用することが可能である。結合タンパク質は、結合したまたは結合していない抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例は、ルミノールであり、適切な放射性材料の例には、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍが含まれる。
【０１２２】
一実施形態において、本明細書に提供される結合タンパク質はインビトロとインビボの両方においてそれらの抗原標的の活性を中和することができる。したがって、このような結合タンパク質は、例えば、抗原を含有する細胞培地中で、ヒト対象中で、本明細書において提供される結合タンパク質が交差反応する抗原を有するその他の哺乳動物対象中で、抗原活性を阻害するために使用することが可能である。別の実施形態において、抗原活性が有害である疾病または疾患に罹患している対象中の抗原活性を低下させる方法が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質は、治療目的のために、ヒト対象に投与することができる。
【０１２３】
「抗原活性が有害である障害」という用語は、障害に罹患している対象における抗原の存在が、障害の病態生理に関与しているまたは障害の悪化に寄与する因子のいずれかであるまたはそれが疑われることが示されている疾患および他の障害を含むことを意図する。したがって、抗原活性が有害である疾患は、抗原活性の低下が疾患の症候および／または進行を緩和することが予測される疾患である。このような疾患は、例えば、本疾患に罹患している患者の生物学的液体中の抗原濃度の増加（例えば、対象の血清、血漿、滑液中などの抗原の濃度の増加）によって明らかとされ得る。本明細書において提供される結合タンパク質で治療することが可能な疾患の非限定的な例には、以下に、および結合タンパク質の医薬組成物に関するセクションに論述されている疾患が含まれる。
【０１２４】
ＤＶＤ結合タンパク質は、効力／安全を増強し、および／または患者の対象範囲を増加させるために、２つの異なる標的を同時に遮断するための治療剤として有用である。
【０１２５】
さらに、本明細書において提供されるＤＶＤ結合タンパク質は、細胞内送達（内部移行受容体および細胞内分子を標的化すること）、脳内への送達（血液脳関門を横切るために、トランスフェリン受容体および中枢神経系疾患媒介物質を標的化すること）など、組織特異的な送達（増強された局所ＰＫにより、より高い効力および／またはより低い毒性を得るために、組織マーカーおよび疾病媒介物質を標的とすること）のために使用することが可能である。また、ＤＶＤ結合タンパク質は、その抗原の非中和エピトープへの結合を介して特異的な位置へ抗原を送達するための担体タンパク質としての役割も果たすことができ、さらに、抗原の半減期を増加させることもできる。さらに、ＤＶＤ結合タンパク質は、患者に植え込まれた医療デバイスに物理的に連結されまたはこれらの医療デバイスを標的とするように設計され得る（Ｂｕｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．、（２００６）Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５８（３）：４３７−４４６；Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、（２００６）Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００（２２−２３）：６３１８−６３２４；Ｄｒｕｇ／ｄｅｖｉｃｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ、Ｗｕ（２００６）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２７（１１）：２４５０−２４６７；Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  ｄｅｖｉｃｅｓ．、Ｍａｒｑｕｅｓ（２００５）Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒ．Ｒｅｇｅｎ．Ｍｅｄ．３７７−３９７参照）。要約すれば、医療用インプラントの部位へ、細胞の適切な種類を誘導することは、正常な組織機能の治癒および回復を促進し得る。あるいは、用具に連結されたＤＶＤ、または用具を標的とするＤＶＤ−Ｉｇによって、装置の植え込み時に放出される媒介物質（サイトカインが含まれるが、これに限定されない。）の阻害も提供される。
【０１２６】
Ａ．様々な疾病における結合タンパク質の使用
本明細書において提供される結合タンパク質分子は、様々な疾患を治療するための治療分子としても有用であり、例えば、結合タンパク質によって認識される標的は有害である。このような結合タンパク質は、特定の疾患に関与する１つ以上の標的に結合することができる。また、ＥＧＦＲ、ＲＯＮ、ＩＧＦ−１Ｒ、Ｅｒｂ−Ｂ３および／またはＨＥＲ２の阻害は、動物モデルにおいて抗腫瘍療法を増強することが示されており、原発性および転移性癌の治療に有益であり得る。
【０１２７】
開示を制限することなく、特定の疾患状態に関する追加情報が提供される。
【０１２８】
１．ヒト自己免疫および炎症性応答
膜貫通型受容体は、一般的な自己免疫および炎症反応に関与しており、例えば、喘息、アレルギー、アレルギー性肺疾患、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、線維症、嚢胞性線維症（ＣＦ）、線維性肺疾患、特発性肺線維症、肝線維症、狼瘡、Ｂ型肝炎関連肝疾患および線維症、敗血症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糸球体腎炎、炎症性皮膚疾患、乾癬、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症（ＯＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植拒絶反応、虚血性心疾患（ＩＨＤ）、セリアック病、接触過敏症、アルコール性肝疾患、ベーチェット病、アテローム硬化性血管疾患、眼球表面の炎症性疾患またはライム病などが挙げられる。
【０１２９】
本明細書において提供される結合タンパク質は、神経疾患を治療するために使用することができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、神経変性疾患ならびに神経再生および脊髄損傷を伴う状態を治療するために使用される。
【０１３０】
２．喘息
アレルギー性喘息は、好酸球増加症、杯細胞異形成、上皮細胞の変化、気道過敏症（ＡＨＲ）ならびにＴｈ２およびＴｈ１サイトカイン発現ならびに上昇した血清ＩｇＥレベルの存在によって特徴付けられる。コルチコステロイドは、今日、喘息に対する最も重要な抗炎症性治療であるが、それらの作用機序は非特異的であり、特に、若い患者集団では、安全性についての懸念が存在する。したがって、より特異的で、標的化された治療の開発が必要とされる。
【０１３１】
炎症およびＡＨＲをともに評価することができる、ＯＶＡによって誘導された喘息マウスモデルなどの動物モデルが本分野において公知であり、様々な結合タンパク質分子が喘息を治療する能力を測定するために使用し得る。喘息を研究するための動物モデルは、Ｃｏｆｆｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１（１２）：１８７５−１８７９；Ｌｌｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７７，２６３−２９５；Ｂｏｙｃｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１（１２）：１８６９−１８７３；およびＳｎｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｂｒｉｔ．Ｓｏｃ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５（２）：１４６−５２に開示されている。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｏｘｉｃｏｌ．９２（１−３）：２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．７７：９９−１０２；Ｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８（２）：２５０−２５７参照）。
【０１３２】
３．関節リウマチ
全身性疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の滑液中の慢性的炎症反応によって特徴付けられ、軟骨の変性と隣接する関節骨のただれを伴う。多くの炎症促進性サイトカイン、ケモカインおよび成長因子が、罹患した関節中に発現されている。結合タンパク質分子が関節リウマチの治療に対して有用であるかどうかは、コラーゲンによって誘導された関節炎マウスモデルなど、前臨床動物ＲＡモデルを用いて評価することが可能である。他の有用なモデルも本分野において周知である（Ｂｒａｎｄ（２００５）Ｃｏｍｐ．Ｍｅｄ．５５（２）：１１４−２２参照）。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＴＮＦ、ヒトおよびマウスＩＬ−１５などに対する反応性）を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスＣＩＡモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である；簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。
【０１３３】
４．全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
ＳＬＥの免疫病原性の特徴は、ポリクローナルＢ細胞活性化であり、これは、高グロブリン血症、自己抗体産生および免疫複合体形成をもたらす。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＣＤ２０、ヒトおよびマウスインターフェロンαなどに対する反応性）を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスループスモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である。簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。
【０１３４】
５．多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、主に病因が不明である複雑なヒト自己免疫型疾病である。神経系を通じたミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の免疫学的破壊が、多発性硬化症の主要な病因である。主に検討すべきであるのは、自己免疫の発達に寄与する免疫学的機序である。特に、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞などの他のＴ細胞のバランス／調節を補助する、抗原発現、サイトカインおよび白血病相互作用ならびに調節性Ｔ細胞は、治療標的の同定のための重要な領域である。ＭＳを治療するための結合タンパク質の有用性を評価するためのいくつかの動物モデルが、本分野において公知である（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１１）：５６５−７１；Ｌｕｂｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８（３）：１９７−２０８；Ｇｅｎａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７５（３）：１８７−９７；Ｔｕｏｈｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９（７）：１０３３−４２；Ｏｗｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｎｅｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．１３（１）：５１−７３；およびＨａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５（７）：４７６１−８参照）。ヒトおよび動物種オルソログに対する親抗体の交差反応性を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスＥＡＥモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である。簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。同じ概念は他の非げっ歯類種の動物モデルに当てはまり、「適合代理抗体」由来結合タンパク質は予期される薬理学および場合によると安全性研究のために選択される。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｏｘｉｃｏｌ．９２（１−３）：２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｄｅｖｅｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．７７：９９−１０２；Ｊｏｎｅｓ（２０００）ＩＤｒｕｇｓ  ３（４）：４４２−６）参照）。
【０１３５】
６．敗血症
圧倒的な炎症性応答および免疫応答は、敗血症性ショックの本質的な特徴であり、敗血症によって誘導される組織損傷、多臓器不全および死亡の病因において中心的な役割を果たす。サイトカインは、敗血症性ショックの媒介物質であることが示されている。これらのサイトカインは、組織に対して直接的な毒性効果を有しており、ホスホリパーゼＡ２も活性化させる。一実施形態は、敗血症に関与する１つ以上の標的に結合することができる結合タンパク質に関する。敗血症を治療するためのこのような結合タンパク質の有効性は、当該技術分野で公知の前臨床動物モデルにおいて評価することができる（Ｂｕｒａｓら（２００５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．４（１０）：８５４−６５およびＣａｌａｎｄｒａら（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６（２）：１６４−７０を参照されたい。）。
【０１３６】
７．神経疾患
ａ．神経変性疾患
神経変性疾患は、通常、それらが年齢依存性である場合においては慢性でありまたは急性（例えば、脳卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷など）である。それらは、神経機能の進行性の喪失（例えば、神経細胞死、軸索損失、神経炎性ジストロフィー、脱髄）、運動能力の喪失および記憶喪失によって特徴付けられる。これらの慢性神経変性疾患は、複数の細胞種および媒介物質の間で複雑な相互作用を示す。このような疾病に対する治療戦略は限られており、非特異的な抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＣＯＸ阻害剤）または神経細胞の喪失および／またはシナプス機能を抑制するための作用物質で炎症プロセスを遮断することが大部分を占める。これらの治療は、疾病の進行を停止させることができない。１を超える疾患媒介物を標的とする特定の治療は、単一の疾患メカニズムを標的にして観察されるものよりも、慢性神経変性疾患のさらにより良好な治療効果を提供することができる（Ｄｅａｎｅら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．９：９０７−１３；およびＭａｓｌｉａｈら（２００５）Ｎｅｕｒｏｎ．４６：８５７を参照されたい。）。
【０１３７】
本明細書において提供される結合タンパク質分子は、アルツハイマー病などの慢性神経変性疾患に関与する１つ以上の標的に結合することが可能である。結合タンパク質分子の効力は、アミロイド前駆体タンパク質またはＲＡＧＥを過剰発現し、アルツハイマー病様の症候を発症するトランスジェニックマウスなどの前臨床動物モデルで妥当性を確認することが可能である。さらに、結合タンパク質分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的結合タンパク質を選択することができる。結合タンパク質分子は、パーキンソン病などの他の神経変性疾患の治療のためにも使用することが可能である。
【０１３８】
ｂ．神経細胞の再生および脊髄損傷
病的機序の知見の増大にかかわらず、脊髄損傷（ＳＣＩ）は、なお、多大な損害を与える症状であり、高い医学的な要求を特徴とする医学的な適応症である。多くの脊髄損傷は、挫傷または圧迫傷害であり、通常、一次損傷に続いて、最初の損傷を悪化させ、病変部位の著しい拡大（特には、１０倍超）をもたらす二次的な損傷機序（炎症媒介物質、例えば、サイトカインおよびケモカイン）が起こる。結合タンパク質分子の効力は、脊髄損傷の前臨床動物モデルにおいて、妥当性を確認することが可能である。さらに、これらの結合タンパク質分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的結合タンパク質を選択することができる。一般に、抗体は、脳血液関門（ＢＢＢ）を効率的および適切な様式で横切らない。しかしながら、ある種の神経疾患（例えば、脳卒中、外傷性脳傷害、多発性硬化症など）では、ＢＢＢが損なわれる場合があり、結合タンパク質および抗体の脳内への増加した浸透を許容する。ＢＢＢの漏出が起こらない他の神経症状では、グルコースおよびアミノ酸担体などの担体媒介性輸送体ならびにＢＢＢの血管内皮における受容体媒介性トランスサイトーシス媒介細胞構造／受容体を含む内在性輸送系の標的化を使用することができ、これにより、結合タンパク質のトランスＢＢＢ輸送が可能になる。このような輸送を可能にするＢＢＢでの構造には、限定されないが、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＬＲＰおよびＲＡＧＥが含まれる。さらに、戦略は、低分子量の薬物、ナノ粒子および核酸を含む、ＣＮＳへ潜在的薬物を輸送するためのシャトルとして結合タンパク質を使用することも可能である（Ｃｏｌｏｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１７（３）：２６６−７４；Ｂｏａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１８（２）：４４７−５５）。
【０１３９】
８．腫瘍疾患
モノクローナル抗体療法が、癌に対する重要な治療法として登場している（ｖｏｎ  Ｍｅｈｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５４：３４３−６９）。２つの別個の腫瘍媒介物質を標的とする二重特異的抗体の使用は、単一特異的療法に比べて、さらなる有利さを与えるものと思われる。
【０１４０】
一実施形態において、本明細書において提供される組成物および方法を用いて治療または診断され得る疾患には、限定されないが、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱および尿路上皮を含む。）、女性生殖路（子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む。）、男性生殖路（前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む。）、内分泌腺（甲状腺、副腎および下垂体を含む。）および皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫（骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む。）、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍（星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む。）、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫の両方）を含む原発性および転移性の癌が挙げられる。
【０１４１】
一実施形態において、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療法および／もしくは他の化学療法剤と組み合わせて使用される場合、癌を治療するためにまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防において使用される。
【０１４２】
９．遺伝子治療
特定の実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質をコードする核酸配列または本明細書において提供される別の予防薬もしくは治療薬は、遺伝子治療を手段として、障害または１つ以上の症状を治療、予防、管理または改善するために投与される。遺伝子治療とは、発現されたまたは発現可能な核酸の対照への投与によって行われる治療を指す。この実施形態において、核酸は、予防効果または治療効果を媒介する本明細書において提供されるそれらによってコードされた抗体または予防薬もしくは治療薬を生成する。
【０１４３】
当該技術分野において利用可能である遺伝子治療のための方法のいずれかは、本明細書において提供される方法において使用され得る。遺伝子治療の方法に関する一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら（１９９３）  Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；ＷｕおよびＷｕ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；ＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；ならびにＭａｙ（１９９３）ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５を参照されたい。使用することができる組換えＤＮＡ技術の、当該技術分野において一般的に知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編集）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。遺伝子治療の様々な方法の詳細な説明は、米国特許出願公開第ＵＳ２００５００４２６６４号に開示されている。
【０１４４】
ＩＩＩ．医薬組成物
単独または予防薬、治療薬および／または医薬として許容される担体と組み合わせた、１つ以上の結合タンパク質を含む医薬組成物が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質を含む医薬組成物は、疾患を診断し、検出し、もしくはモニタリングし、疾患または１つもしくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、もしくは軽減する上で、および／または研究において使用されるが、これらに限定されない。単独または予防薬、治療薬および／または医薬として許容される担体と組み合わせた医薬組成物の製剤は、当業者に公知である（米国特許出願公開第２００９０３１１２５３Ａ１）。
【０１４５】
本明細書において提供される予防薬または治療薬を投与する方法には、限定されないが、非経口投与（例えば、皮内、筋内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与、粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路）および経肺投与（例えば、吸入器または噴霧器を用いて投与されるエアロゾル化化合物）が挙げられる。特定の投与経路のための医薬組成物の製剤ならびに投与の様々な方法に必要とされる材料および技術が利用可能であり、当業者に公知である（米国特許出願公開第２００９０３１１２５３Ａ１）。
【０１４６】
投与計画は、最適な所望の反応（例えば、治療的または予防的反応）を提供するように調整されてもよい。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、いくつかに分割した用量は経時的に投与さてもよく、または用量は比例的に減少されてもよくもしくは治療状況の緊急性によって示されるように増加されてもよい。投与の容易性および投与量の均一性のために投薬単位形態において非経口組成物を処方することが特に有利である。「投薬単位形態」という用語は、処置されるべき哺乳動物対象のための単位用量として適した物理的に別個の単位を指し；それぞれの単位は、必要とされる医薬的担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。本明細書において提供される投薬単位形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特性および達成されるべき特定の治療効果または予防効果および（ｂ）個体における感受性の処置のために、このような活性化合物の配合に関する当該技術分野における固有の制限、によって決定され、直接的に依存する。
【０１４７】
本明細書において提供される結合タンパク質の治療的または予防的な有効量についての例示的であり、非限定的な範囲は、０．１−２０ｍｇ／ｋｇであり、例えば、１−１０ｍｇ／ｋｇである。用量値は、緩和されるべき状態の種類および重症度によって変化し得ることに留意すべきである。いずれかの特定の対象について、特定の投薬処方は、個々の必要性および組成物を投与しまたは投与を管理している者の専門的な判断に従って、経時的に調整されてもよく、本明細書において記載されている用量範囲は、単に例示的であり、請求される組成物の範囲または実施を制限することを意図していないことはさらに理解されるべきである。
【０１４８】
ＩＶ．併用療法
本明細書において提供される結合タンパク質はまた、種々の疾患の治療に有用な１つ以上の追加の治療薬とともに投与することができ、追加の薬剤は、その意図される目的で当業者によって選択される。例えば、追加の薬剤は、本明細書において提供される抗体によって治療される疾患または状態の治療に有用であるとして当該技術分野において認識されている治療薬であり得る。組合せは、１を超える追加の薬剤、例えば、２つまたは３つの追加の薬剤を含むことができる。
【０１４９】
併用療法剤には、限定されないが、抗腫瘍剤、放射線療法、化学療法、例えばＤＮＡアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン剤、パクリタキセル、ドセタキセル、タキソール、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ジェムザール、アントラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、キナーゼ阻害剤およびｓｉＲＮＡが含まれる。
【０１５０】
本明細書において提供される結合タンパク質と組み合わせることができる化学療法剤の非制限的な例には、以下：１３−ｃｉｓ−レチノイン酸；２−ＣｄＡ；２−クロロデオキシアデノシン；５−アザシチジン；５−フルオロウラシル；５−ＦＵ；６−メルカプトプリン；６−ＭＰ；６−ＴＧ；６−チオグアニン；アブラキサン；Ａｃｃｕｔａｎｅ（登録商標）；アクチノマイシン−Ｄ；Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）；Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）；Ａｇｒｙｌｉｎ（登録商標）；Ａｌａ−Ｃｏｒｔ（登録商標）；アルデスロイキン；アレムツズマブ；ＡＬＩＭＴＡ；アリトレチノイン；Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）；Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）；オールトランスレチノイン酸；アルファインターフェロン；アルトレタミン；アメトプテリン；アミホスチン；アミノグルテチミド；アナグレリド；Ａｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）；アナストロゾール；アラビノシルシトシン；Ａｒａ−Ｃ  Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）；Ａｒｅｄｉａ（登録商標）；Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）；Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）；Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）；三酸化ヒ素；Ａｒｚｅｒｒａ（商標）；アスパラギナーゼ；ＡＴＲＡ；Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）；アザシチジン；ＢＣＧ；ＢＣＮＵ；ベンダムスチン；ベバシズマブ：ベキサロテン；ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）；ビカルタミド；ＢｉＣＮＵ；Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）；ブレオマイシン；ボルテゾミブ；ブスルファン；Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）；Ｃ２２５；カルシウムロイコボリン；Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）；Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）；Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ−１１；カペシタビン；Ｃａｒａｃ（商標）；カルボプラチン；カルムスチン；カルムスチンウエハー；Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）；ＣＣ−５０１３；ＣＣＩ−７７９；ＣＣＮＵ；ＣＤＤＰ；ＣｅｅＮＵ；Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標）；セツキシマブ；クロラムブシル；シスプラチン；シトロボラム因子；クラドリビン；コルチゾン；Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）；ＣＰＴ−１１；シクロフォスファミド；Ｃｙｔａｄｒｅｎ（登録商標）；シタラビン；シタラビンリポゾーマル；Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）；Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）；ダカルバジン；ダコゲン；ダクチノマイシン；ダルベポエチンアルファ；ダサチニブ；ダウノマイシン；ダウノルビシン；塩酸ダウノルビシン；ダウノルビシンリポゾーマル；ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）；デカドロン；デシタビン；Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）；Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）；デニロイキン；ジフチトクス；ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）；デキサメタゾン；酢酸デキサメタゾン；リン酸デキサメタゾンナトリウム；デキサゾン；デクスラゾキサン；ＤＨＡＤ；ＤＩＣ；ジオデックス；ドセタキセル；Ｄｏｘｉｌ（登録商標）；ドキソルビシン；ドキソルビシンリポゾーマル；Ｄｒｏｘｉａ（商標）；ＤＴＩＣ；ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）；Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）；Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）；Ｅｌｉｇａｒｄ（商標）；Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標）；Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）；Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）；Ｅｍｃｙｔ（登録商標）；エピルビシ���；エポエチンアルファ；エルビタックス；エルロチニブ；エルウィニア  Ｌ−アスパラギナーゼ；エストラムスチン；エチオール；Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）；エトポシド；リン酸エトポシド；Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標）；エベロリムス；Ｅｖｉｓｔａ（登録商標）；エキセメスタン；Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）；Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）；Ｆｅｍａｒａ（登録商標）；フィルグラスチム；フロクスウリジン；Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）；フルダラビン；Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）；フルオロウラシル；フルオロウラシル（クリーム）；フルオキシムエステロン；フルタミド；フォリン酸；ＦＵＤＲ（登録商標）；フルベストラント；ゲフィチニブ；ゲムシタビン；ゲムツズマブオゾガマイシン；ジェムザール；Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）；Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標）ウエハー；ＧＭ−ＣＳＦ；ゴセレリン；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Ｇ−ＭＣＳＦ）；Ｈａｌｏｔｅｓｔｉｎ（登録商標）；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；ヘキサドロール；Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）；ヘキサメチルメラミン；ＨＭＭ；Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）；Ｈｙｄｒｅａ（登録商標）；Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ  Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）；ヒドロコルチゾン；リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム；コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム；リン酸ハイドロコートン；ヒドロキシ尿素；イブリツモマブ；イブリツモマブチウキセタン；Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ  Ｉｆｅｘ（登録商標）；インターフェロン−アルファ；インターフェロン−アルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）；イホスファミド；インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）；インターロイキン−２（ＩＬ−２）；メシル酸イマチニブ；イミダゾールカルボキサミド；Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標）；Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）；イリノテカン；イソトレチノイン；イキサベピロン；Ｉｘｅｍｐｒａ（商標）；キドロラーゼ（ｔ）；Ｌａｎａｃｏｒｔ（登録商標）；ラパチニブ；Ｌ−アスパラギナーゼ；ＬＣＲ；レナリドミド；レトロゾール；ロイコボリン；リューケラン；Ｌｅｕｋｉｎｅ（商標）；ロイプロリド；ロイコクリスチン；Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（商標）；リポゾーマルＡｒａ−Ｃ；Ｌｉｑｕｉｄ  Ｐｒｅｄ（登録商標）；ロムスチン；Ｌ−ＰＡＭ；Ｌ−サルコリジン；Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標）；Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（登録商標）；Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標）；マキシデックス；メクロレタミン；塩酸メクロレタミン；Ｍｅｄｒａｌｏｎｅ（登録商標）；Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）；Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）；メゲストロール；酢酸メゲストロール；メルファラン；メルカプトプリン；メスナ；メスネックス（商標）；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メチルプレドニゾロン；Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）；マイトマイシン；マイトマイシン−Ｃ；ミトキサントロン；Ｍ−Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）；ＭＴＣ；ＭＴＸ；Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標）；ムスチン；Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標）；Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標）；Ｍｙｌｏｃｅｌ（商標）；Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）；Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（���録商標）；ネララビン；Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）；Ｎｅｕｌａｓｔａ（商標）；Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）；Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）；Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標）；Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）；ニルタミド；Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標）；Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｎｏｖａｌｄｅｘ（登録商標）；Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）；エヌプレート；オクトレオチド；酢酸オクトレオチド；オフタツムマブ；Ｏｎｃｏｓｐａｒ（登録商標）；Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）；Ｏｎｔａｋ（登録商標）；Ｏｎｘａｌ（商標）；オプレルベキン；Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）；Ｏｒａｓｏｎｅ（登録商標）；オキサリプラチン；パクリタキセル；タンパク質に結合したパクリタキセル；パミドロネート；パニツムマブ；Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）；パゾパニブ；Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）；ＰＥＧインターフェロン；ペグアスパラガーゼ；ペグフィルグラスチム；ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（商標）；ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ；ペメトレキセド；ペントスタチン；フェニルアラニンマスタード；Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）；Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（登録商標）；プレドニゾロン；プレドニゾン；Ｐｒｅｌｏｎｅ（登録商標）；プロカルバジン；ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）；カルムスチンインプラントを伴うプロリフェプロスパン２０；Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標）；ラロキシフェン；Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）；Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標）；Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；リツキシマブ；Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ（登録商標）；ロミプロスチン；Ｒｕｂｅｘ（登録商標）；塩酸ルビドマイシン；Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（登録商標）；Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ＬＡＲ（登録商標）；サーグラモスティム；Ｓｏｌｕ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）；Ｓｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）；ソラフェニブ；ＳＰＲＩＣＥＬ（商標）；ＳＴＩ−５７１；ストレプトゾシン；ＳＵ１１２４８；スニチニブ；Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）；Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標）；Ｔａｘｏｌ（登録商標）；Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）；Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）；テモゾロマイド；テムシロリムス；テニポシド；ＴＥＳＰＡ；サリドマイド；Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）；ＴｈｅｒａＣｙｓ（登録商標）；チオグアニン；Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ  Ｔａｂｌｏｉｄ（登録商標）；チオホスファミドＴｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標）；チオテパ；ＴＩＣＥ（登録商標）；Ｔｏｐｏｓａｒ（登録商標）；トポテカン；トレミフェン；Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標）；トシツモマブ；トラスツズマブ；Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標）；トレチノイン；Ｔｒｅｘａｌｌ（商標）；Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）；ＴＳＰＡ；ＴＹＫＥＲＢ（商標）；ＶＣＲ；Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標）；Ｖｅｌｂａｎ（登録商標）；Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）；Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標）；Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標）；Ｖｉａｄｕｒ（商標）；Ｖｉｄａｚａ（登録商標）；ビンブラスチン；硫酸ビンブラスチン；ＶｉｎｃａｓａｒーＰｆｓ（登録商標）；ビンクリスチン；ビノレルビン；酒石酸ビノレルビン；ＶＬＢ；ＶＭ−２６；ボリノスタット；ヴォトリエント；ＶＰ−１６；Ｖｕｍｏｎ（登録商標）；Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）；Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標）；Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）；Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標）；Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）；ゾレドロン酸；ゾリンザ；またはＺｏｍｅｔａ（登録商標）が含まれる。
【０１５１】
自己免疫疾患および炎症性疾患を治療するための組合せは、イブプロフェンのような薬剤を含む、ＮＳＡＩＤＳとも称される非ステロイド性抗炎症薬（単数または複数）である。他の組合せは、プレドニゾロンなどのコルチコステロイドである；ステロイド使用の周知の副作用は、本明細書において提供される結合タンパク質と組み合わせて患者を治療するときに必要とされるステロイド用量を徐々に減らすことによって、低減することが可能でありまたは除去することさえ可能である。本明細書において提供される抗体またはその抗体結合部分とともに組み合わせることが可能な関節リウマチに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：サイトカイン抑制抗炎症薬（単数または複数）（ＣＳＡＩＤ）；他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡまたはＣＤ１５４を含むこれらのリガンド（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）などの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。
【０１５２】
治療剤の組合せは、異なる点で、自己免疫およびこれに続く炎症カスケードを干渉し得る。例には、本明細書において開示される結合タンパク質、ならびにキメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、可溶性ｐ５５もしくはｐ７５ＴＮＦ受容体、またはこれらの誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤のようなＴＮＦアンタゴニスト；またはＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）が挙げられる。他の組合せには、本明細書において開示される結合タンパク質およびインターロイキン１１が含まれる。さらに別の組合せには、ＩＬ−１２機能と平行して、ＩＬ−１２機能に依存してまたはＩＬ−１２と協調して作用し得る自己免疫応答の中心的プレーヤーが含まれる；特に、ＩＬ−１８抗体または可溶性ＩＬ−１８受容体またはＩＬ−１８結合タンパク質などのＩＬ−１８アンタゴニストが関連する。ＩＬ−１２およびＩＬ−１８は重複しているが、異なる機能を有しており、両者に対するアンタゴニストの組合せは、最も有効であり得ることが示されている。さらに別の組合せは、本明細書において開示される結合タンパク質と非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤である。さらに他の組合せには、本明細書において開示される結合タンパク質と、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含む、共同刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストが含まれる。
【０１５３】
本明細書において提供される結合タンパク質はまた、薬剤と併用されてもよく、例えば、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン（ｐｅｎｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、金チオリンゴ酸塩（筋内および経口）、アザチオプリン、コルヒチン（ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ）、コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）、β−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウム、オキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体または誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリムシノロン・アセトニド、プロポキシフェンナプシラート／ａｐａｐ、フォラート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、ヒドロコドン二酒石酸塩／ａｐａｐ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組み換え、塩酸トラマドール、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロナートナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８��１およびメソプラムなどの作用物質とも組み合わされ得る。組合せには、メトトレキサートまたはレフルノミドとシクロスポリンが含まれる。
【０１５４】
一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、関節リウマチの治療用の以下の薬剤の１つと併用して投与される：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤；メトトレキサート；プレドニゾン；セレコキシブ；葉酸；硫酸ヒドロキシクロロキン；ロフェコキシブ；エタネルセプト；インフリキシマブ；レフルノミド；ナプロキセン；バルデコキシブ；スルファサラジン；メチルプレドニゾロン；イブプロフェン；メロキシカム；酢酸メチルプレドニゾロン；金チオリンゴ酸ナトリウム；アスピリン；アザチオプリン；トリアムシノロンアセトニド；プロプキシフェンナプシラート／ａｐａｐ；フォラート；ナブメトン；ジクロフェナク；ピロキシカム；エトドラク；ジクロフェナクナトリウム；オキサプロジン；塩酸オキシコドン；重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ；ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール；フェンタニル；アナキンラ、ヒト組み換え；塩酸トラマドール；サルサラート；スリンダク；シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン；アセトアミノェン；アレンドロナートナトリウム；プレドニゾロン；硫酸モルヒネ；塩酸リドカイン；インドメタシン；硫酸グルコサミン／コンドロイチン；シクロスポリン；塩酸アミトリプチリン；スルファジアジン；塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン；塩酸オロパタジン；ミソプロストール；ナプロキセンナトリウム；オメプラゾール；ミコフェノラートモフェチル；シクロホスファミド；リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ；ＭＲＡ；ＣＴＬＡ４−ＩＧ；ＩＬ−１８ＢＰ；ＩＬ−１２／２３；抗ＩＬ−１８；抗ＩＬ−１５；ＢＩＲＢ−７９６；ＳＣＩＯ−４６９；ＶＸ−７０２；ＡＭＧ−５４８；ＶＸ−７４０；ロフルミラスト；ＩＣ−４８５；ＣＤＣ−８０１またはメソプラム。
【０１５５】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な炎症性腸疾患に対する治療剤の非限定的な例には、以下：ブデノシド；上皮細胞増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βｍＡｂ；抗ＩＬ−６ｍＡｂ；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）または炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３またはＴＧＦβ）またはｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤とも組み合わされ得る。
【０１５６】
結合タンパク質を組み合わせることが可能なクローン病に対する治療剤の例には、以下：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）またはｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））阻害剤またはＰＤＥ４阻害剤が含まれる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシドおよびデキサメタゾンと組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質またはこれらの抗原結合部分はまた、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸およびオルサラジンなどの薬剤、ならびにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成または作用を妨害する薬剤、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤またはＩＬ−１ｒａと組み合わされ得る。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤または６−メルカプトプリンとともに使用され得る。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシレート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、フォレート、シプロフロキサシン／デキストロース−水、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、テトラサイクリン塩酸塩、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム、リン酸コデイン／アセトアミノフェン（ａｐａｐ）、塩酸コレセベラム、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニソロン、ナタリズマブまたはインターフェロンガンマと組み合わせることができる。
【０１５７】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な多発性硬化症に対する治療剤の非限定的な例には、以下：コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロン−β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロン−β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンα−ｎ３）（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロン−β１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＥＧインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン；他のヒトサイトカインまたは成長因子およびこれらの受容体（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦ）に対する抗体もしくはアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノレート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）または炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３またはＴＧＦβ）またはｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤と組み合わされ得る。
【０１５８】
本明細書において提供される結合タンパク質を組み合わせることが可能な多発性硬化症のための治療剤の例には、インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ１ａおよびＩＦＮβ１ｂ；コパキソン、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤、例えばカスパーゼ−１の阻害剤、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤ならびにＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体が含まれる。
【０１５９】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な喘息に対する治療剤の非限定的な例には、以下：アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、イプラトロピウム臭化物、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アミノキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラナート、レボフロキサシン、吸入補助装置、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、塩酸マキシフロキサシン、ドキシサイクリン水和物（ｈｙｃｌａｔｅ）、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フロ酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナタート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニル、塩酸セチリジン／シュードエフェドリン、フェニレフリン／ｃｏｄ／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／シュードエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールが含まれる。
【０１６０】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能なＣＯＰＤに対する治療剤の非限定的な例には、以下：硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、イプラトロピウムブロミド、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アミノキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラナート、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロロフェニル、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、チオトロピウムブロミド、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストが含まれる。
【０１６１】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な乾癬に対する治療剤の非限定的な例には、以下：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、増強された（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ）二プロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フロ酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／皮膚軟化剤（ｅｍｏｌｌ）、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿処方、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス（ｂｉｓｍｕｔｈ  ｓｕｂｇａｌ）／酸化亜鉛（ｚｎｏｘ）／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アンスラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化剤、フルオシノニド／皮膚軟化剤、鉱物油／ひまし油／ｎａ  ｌａｃｔ、鉱物油／落花生油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、ソラーレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジンが含まれる。
【０１６２】
本明細書において提供される結合タンパク質を組み合わせることが可能なＳＬＥ（狼瘡）に対する治療剤の例には、以下：ＮＳＡＩＤ、例えば、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ；抗マラリア剤、例えば、ヒドロキシクロロキン；ステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン；細胞障害剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノラートモフェチル、メトトレキサート；ＰＤＥ４の阻害剤またはプリン合成阻害剤、例えば、Ｃｅｌｌｃｅｐｔが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、薬剤と併用されてもよく、例えば、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランならびにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成、産生または作用を妨害する作用物質、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤およびＩＬ−１ｒａのようなカスパーゼ阻害剤とも組み合わされ得る。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤；またはＴ細胞活性化分子を標的とする分子、例えば、ＣＴＬＡ−４−ＩｇＧまたは抗Ｂ７抗体ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体とともに使用され得る。本明細書において提供される結合タンパク質は、ＩＬ−１１または抗サイトカイン抗体、例えば、ホノトリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体）または抗受容体受容体抗体、例えば、抗ＩＬ−６受容体抗体およびＢ細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、ＬＪＰ３９４（アベチムス）、Ｂ細胞を枯渇させまたは不活化する薬剤、例えば、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンホスタット−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））およびｂｃｌ−２阻害剤（トランスジェニックマウスにおけるｂｃｌ−２過剰発現が狼瘡様表現型をもたらすことが実証されているためである（Ｍａｒｑｕｉｎａ参照）。）とともに使用され得る。
【０１６３】
本明細書において提供される医薬組成物は、本明細書において提供される結合タンパク質の「治療的有効量」または「予防的有効量」を含み得る。「治療的有効量」は、所望の治療的結果を達成するための投薬量で、および所望の治療的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。結合タンパク質の治療的有効量は、当業者によって決定され得、病状、年齢、性別および個体の体重ならびに結合タンパク質が個体内で所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。治療的有効量は、抗体または抗体部分のあらゆる毒性効果または有害効果が、治療的に有益な効果によって凌駕される量でもある。「予防的有効量」は、所望の予防的結果を達成するために必要な投薬量で、および所望の予防的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。典型的には、疾病のより初期段階の前にまたは疾病のより初期段階において、予防的投薬が患者に使用されるので、予防的有効量は、治療的有効量より少ない。
【０１６４】
Ｖ．診断
本明細書における開示はまた診断の適用例を提供し、限定されないが、診断アッセイ法、１つ以上の結合タンパク質を含む診断用キット、ならびに自動化および／または半自動化システムにおける使用のための方法およびキットの適応が含まれる。提供される方法、キットおよび適応は、個体における疾患または障害の検出、監視および／または治療に用いることができる。これは、以下でさらに明らかにされる。
【０１６５】
Ａ．アッセイの方法
本開示は、本明細書に記載されている少なくとも１つの結合タンパク質を使用して試験試料中の分析物またはその断片の存在、量または濃度を決定する方法も提供する。本分野において知られているあらゆる適切なアッセイは、この方法において使用することが可能である。例には、限定されないが、イムノアッセイおよび／または質量分析法を用いる方法が含まれる。
【０１６６】
本開示によって提供されるイムノアッセイは、とりわけ、サンドイッチイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、競合阻害イムノアッセイ、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、酵素増幅イムノアッセイ技術（ＥＭＩＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）および均一系化学発光アッセイを含む。
【０１６７】
化学発光微粒子イムノアッセイ、特にＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）を使用するものは、イムノアッセイの例である。
【０１６８】
質量分析法を用いる方法は、本開示によって提供され、限定されないが、ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化）またはＳＥＬＤＩ（表面増強レーザー脱離／イオン化）が含まれる。
【０１６９】
イムノアッセイおよび質量分析法を用いて生物学的試験試料を回収し、操作し、処理しおよび分析するための方法は、本開示の実施において提供される（ＵＳ２００９−０３１１２５３Ａ１）。
【０１７０】
Ｂ．キット
試験試料における分析物またはその断片の存在、量または濃度について試験試料をアッセイするためのキットも提供される。キットは、分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分および分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための説明書を含む。分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分は、場合によって、固相上に固定されている、本明細書に開示されている結合タンパク質および／または抗分析物結合タンパク質（またはその断片、バリアントまたはそのバリアントの断片）を含む組成物を含むことができる。
【０１７１】
場合によって、キットは、単離されたまたは精製された分析物を含み得る、較正因子または対照を含むことができる。キットは、イムノアッセイおよび／または質量分析法によって、分析物について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分を含むことができる。キット成分は、分析物、結合タンパク質および／または抗分析物結合タンパク質またはその断片を含み、場合によって、当該分野で公知の任意の検出可能な標識を用いて標識されてもよい。本開示の実施において提供される構築のための材料および方法は、当業者に公知である（米国２００９−０３１１２５３Ａ１）。
【０１７２】
Ｃ．キットおよび方法の適合
本明細書に記載されているイムノアッセイなどのアッセイによって試験試料における分析物の存在、量または濃度を決定するキット（またはその成分）ならびに方法は、例えば、米国特許第５，０８９，４２４号および第５，００６，３０９号に記載され、例えば、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）によってＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）として商業的に販売されている（固相が微粒子を含むものを含めて）様々な自動化システムおよび半自動化システムにおける使用に適合させることが可能である。
【０１７３】
Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能な他のプラットホームには、ＡｘＳＹＭ（登録商標）、ＩＭｘ（登録商標）（例えば、米国特許第５，２９４，４０４号を参照されたい、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）およびＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩならびに他のプラットホームが含まれるが、これらに限定されない。さらに、アッセイ、キットおよびキットの成分は、他のフォーマットにおいて、例えば、電気化学的または他の携帯もしくはポイントオブケアアッセイシステムで使用することが可能である。本開示は、例えば、サンドイッチイムノアッセイを行う商業的Ａｂｂｏｔｔ  Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）電気化学的イムノアッセイシステムに適用可能である。免疫センサーならびに単回使用試験装置におけるこれらの製造および操作方法は、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、第７，４１９，８２１号、および第７，６８２，８３３号；ならびに米国特許公開第２００４００１８５７７号、第２００６０１６０１６４号、およびＵＳ２００９０３１１２５３に記載されている。
【０１７４】
本明細書に記載されている本方法の他の適切な改変および適合が明白であり、本明細書に開示されている範囲または実施形態から逸脱することなく、適切な均等物を用いてこれらを行い得ることは、当業者に容易に明確になる。ここに、ある種の実施形態を詳細に記載してきたが、例示のみを目的とし、限定することを意図したものではない、下記の実施例を参照することによって、本発明がより明確に理解される。
【実施例】
【０１７５】
［実施例１］  二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質の生成および特徴付け
既知のアミノ酸配列を有する親抗体を用いた四本鎖二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、ＤＶＤ結合タンパク質の可変重鎖配列およびＤＶＤ結合タンパク質の可変軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド断片を合成し、当該技術分野において公知の方法に従って、ｐＨｙｂＣ−Ｄ２ベクターに断片をクローニングすることにより生成された。ＤＶＤ結合タンパク質構築物は、当該技術分野において既知の方法に従って、２９３細胞にクローニングされ、そこで発現させ、精製された。ＤＶＤ結合タンパク質についてのＤＶＤ  ＶＨ鎖およびＶＬ鎖を以下に提供する。
【０１７６】
ＤＶＤの構築に使用されるリンカーを表２に示す。
【０１７７】
【表２】
2015509704.tif 000037
【０１７８】
［実施例１．１］  同じ標的タンパク質の重複しないエピトープに対して指向されたＤＶＤ結合タンパク質
【０１７９】
【表３】
2015509704.tif 000038
2015509704.tif 000039
【０１８０】
［実施例１．２］  同じ細胞に発現した２つの異なる受容体に対して指向されたＤＶＤ結合タンパク質
【０１８１】
【表４】
2015509704.tif 000040
2015509704.tif 000041
2015509704.tif 000042
2015509704.tif 000043
【０１８２】
表５は、２９３細胞において、１リットルあたりのｍｇとして発現した親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質に関する収量データを含有する。
【０１８３】
【表５】
2015509704.tif 000044
2015509704.tif 000045
2015509704.tif 000046
【０１８４】
すべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は２９３細胞において十分に発現した。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、プロテインＡカラムを通して容易に精製することができた。大部分の場合において、５ｍｇ／Ｌを超える精製されたＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が、２９３細胞の上清から容易に得ることができた。
【０１８５】
［実施例２］  親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の機能的活性を決定するために使用されるアッセイ
【０１８６】
［実施例２．１］  ＢＩＡｃｏｒｅ技術を用いた親和性測定
【０１８７】
【表６】
2015509704.tif 000047
【０１８８】
ＢＩＡＣＯＲＥ法：
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）は、結合（ｏｎ−ｒａｔｅ）定数および解離（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）定数の反応速度測定を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの親和性を決定した。標的抗原（例えば、精製された組換え標的抗原）への抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）１０００または３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）により、２５℃で稼働しているＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．００５％サーファクタントＰ２０）を用いて表面プラズモン共鳴に基づく測定によって決定された。すべての化学物質は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）から入手し、または他には本明細書に記載される別の供給元から入手した。例えば、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中に希釈された、約５０００ＲＵのヤギ抗マウスＩｇＧ、（Ｆｃγ）、断片特異的なポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）は、製造業者の使用説明書に従って標準的なアミンカップリングキットおよび２５μｇ／ｍｌでの操作を用いてＣＭ５研究等級のバイオセンサーチップ全体に直接固定化された。バイオセンサー表面上の未反応部分をエタノールアミンを用いてブロックした。フローセル２および４において修飾されたカルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用した。フローセル１および３におけるヤギ抗マウスＩｇＧなしの未修飾のカルボキシメチルデキストランを基準表面として使用した。反応速度分析のために、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを用いて、８個すべての注入物の結合および解離相に対して、１：１ラングミュア（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合モデルから誘導された速度方程式を同時にフィッティングさせた（グローバルフィット分析を使用）。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面の全体で捕捉するために、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水中に、精製された抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質試料を希釈した。リガンドとして捕捉されるべき抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（２５μｇ／ｍｌ）を５μｌ／分の流速で反応マトリックス全体に注入した。結合速度定数および解離結合定数のｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１）およびｋｏｆｆ（ｓ−１）は、２５μｌ／分の連続的流速下で決定された。１０−２００ｎＭの範囲の異なる抗原濃度にて速度論結合測定を行うことによって速度定数を導いた。次に、以下の式：ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎによって、速度論的速度定数から抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質および標的抗原間の反応の平衡解離定数（Ｍ）を計算した。結合を時間の関数として記録し、速度論的速度定数を計算した。
【０１８９】
【表７】
2015509704.tif 000048
2015509704.tif 000049
2015509704.tif 000050
【０１９０】
表７において、「ＮＴ」は、試験されていないＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を示す。Ｂｉａｃｏｒｅ技術によって特徴付けられたすべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合能力は維持され、親抗体の結合能力に匹敵していた。
【０１９１】
［実施例２．２］  フローサイトメトリーによって評価されるヒト腫瘍細胞株の表面へのモノクローナル抗体の結合
目的の細胞表面抗原を過剰発現している安定な細胞株またはヒト腫瘍細胞株を組織培養フラスコから回収し、５％ウシ胎児血清を含むリン酸緩衝生理食塩水ＰＢＳ（ＰＢＳ／ＦＢＳ）に再懸濁した。染色前に、ヒト腫瘍細胞は、ＰＢＳ／ＦＣＳ中の５μｇ／ｍｌの（１００μｌ）ヒトＩｇＧとともに氷上でインキュベートされた。１−５×１０５個の細胞は、ＰＢＳ／ＦＢＳ中の抗体またはＤＶＤ−Ｉｇ（２μｇ／ｍＬ）とともに３０−６０分間、氷上でインキュベートされた。細胞を２回洗浄し、１００μｌのＦ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ−フィコエリトリン（ＰＢＳ中に１：２００に希釈）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，Ｃａｔ．＃１０９−１１６−１７０）を添加した。氷上で３０分のインキュベーション後、細胞を２回洗浄し、ＰＢＳ／ＦＢＳに再懸濁した。Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて蛍光を測定した。
【０１９２】
表８は、ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質に関するＦＡＣＳデータを示す。幾何平均は、ｎ個の蛍光シグナルの乗算積（ａ１×ａ２×ａ３．．．．ａｎ）のｎ乗根である。対数変換されたデータを用いると、幾何平均は、データ分布の重み付けを標準化するために使用される。次の表は、親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のＦＡＣＳ幾何平均を含む。
【０１９３】
【表８】
2015509704.tif 000051
【０１９４】
すべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、それらの細胞表面標的への結合を示した。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のＮ−末端ドメインは、細胞表面上でそれらの標的に結合しならびに／または親抗体よりも良好であった。結合は、リンカーの長さを調整することによって回復または向上させることができる。
【０１９５】
［実施例２．３］  親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の機能的活性を決定するために使用される細胞増殖アッセイ
【０１９６】
細胞増殖アッセイ
液体窒素で保存した状態から細胞を解凍し、細胞が拡げられ適切な生存率に到達するまで培養され、予期された２倍時間（典型的には２週間）で分割された。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有する、表９に記載される細胞培地中で細胞を維持した。抗体の添加の２４時間前に、組織培養処理されたアッセイプレートにおいて、表９に記載される細胞密度（１５３６細胞／ウェル）にて、２％ＦＢＳを含有するスクリーニング培地に細胞を播種した。遠心分離によってアッセイプレート中で細胞を平衡化し、処置前の２４時間、３７℃にて投与モジュールに取り付けられたインキュベーターに入れた。投与中、指示した濃度（後述および表１０と１１中）にて抗体を用いて細胞を処置した。第３ｂ期に関して、単一薬剤データを８点の用量反応曲線において回収し、開始濃度は２０ｎＭであった。全６回の反復物がスクリーンのために回収された（２アッセイプレート全体）。処理されたアッセイプレートを９６時間抗体とともにインキュベートした。９６時間後、ＡＴＰＬｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて、評価項目分析についてプレートを発色させた。エンビジョンプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）上の超高感度発光を用いてプレートを読み取った。すべてのデータポイントは、自動化されたプロセスを介して回収された；品質管理され；Ｃｈａｌｉｃｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（商標）ソフトウェア（Ｚａｌｉｃｕｓ  Ｉｎｃ．）を用いて分析された。アッセイプレートが次の品質管理基準に合格した場合は、アッセイプレートを容認した：相対ルシフェラーゼ値は、実験全体を通じて一致し、Ｚ−因子スコアは０．６よりも大きく、未処理／ビヒクル対照はプレート上で一貫した反応を示す。
【０１９７】
【表９】
2015509704.tif 000052
【０１９８】
すべての細胞株を１０％ＦＢＳに維持した。抗体添加の２４時間前に、２％ＦＢＳを含有するスクリーニング培地に細胞を入れた。
【０１９９】
抗体調製
抗体は５００倍濃度で提供された。抗体は、１：５００のそれらの最も高い所望のスクリーニング濃度で３８４ウェルポリプロピレン「母プレート」に添加された。抗体は、クエン酸緩衝液（１０ｍＭクエン酸、１０ｍＭリン酸二水素ナトリウム、ｐＨ６．０）中で、連続して１：２に希釈された。投薬時まで母プレートを４℃で保存した。投与時に、母プレートは、音響分配（ａｃｏｕｓｔｉｃ  ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ）のために、「娘プレート」（ＬＤＶ  ＣＯＣ音響グレードプラスチック）に「スタンプ」された。すべてのプレートを使用前に室温に平衡化させた。
【０２００】
【表１０】
2015509704.tif 000053
【０２０１】
【表１１】
2015509704.tif 000054
【０２０２】
［実施例２．４］  親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の機能的活性を決定するために使用される分析法
【０２０３】
阻害割合
複製データは平均値で重ね合わせ、阻害割合は、細胞生存率の尺度として決定された。０％の阻害レベルは、治療によって細胞増殖が阻害されないことを表す。１００％の阻害は、処置ウィンドウ中の細胞数が倍加しないことを表す。両方の細胞増殖抑制および細胞毒性処置は、１００％の阻害割合を得ることができる。阻害割合は、以下のように計算される：Ｉ＝１−Ｔ／Ｕ、ここで、Ｔは処置済み、Ｕは未処置である。
【０２０４】
相乗効果スコア分析
相乗効果相互作用の強さを特徴付けるためのスカラー指標は、相乗効果スコアと呼ばれ、Ｌｏｅｗｅ加算性（Ｚａｌｉｃｕｓ）を超える組合せ効果を測定するために使用された。相乗効果スコアは次のように計算される：
【０２０５】
【数１】
2015509704.tif 000055
【０２０６】
行列中のそれぞれの成分薬剤と組合せポイントの分画阻害は、すべてのビヒクル処理された対照ウェルの中央値と比較して計算された。相乗効果スコア式は、加算性についてＬｏｅｗｅモデルを使用して、成分薬剤の活性から数値的に由来するモデル表面を超えて、行列のそれぞれの点で実験的に観察された活性ボリュームを統合した。相乗効果スコア式（上記）における追加の用語は、個々の薬剤について使用される様々な希釈係数を標準化し、実験全体にわたる相乗効果スコアの比較を可能にするために使用された。
【０２０７】
Ｚａｌｉｃｕｓ  ｃＨＴＳプラットフォームを使用して、２つの薬剤は、広範囲の濃度および比率を捕捉するために組み合わせてスクリーニングすることができる。併用効果は、効力シフトに帰し、または強化として最大効果に帰することができる。より高い活性レベルは、色のより明るい／より温かい行列を用いて表示される。任意の組合せの２つ単剤成分について回収されたデータを用いて、組合せの各成分間のゼロ相互作用について組合せ用量モデルを作成することができる（形状モデル）。このゼロ相互作用行列は、成分間に相互作用がない場合に予期されたものを超えて、活性値を同定するために、実験的に由来したデータ（データ表面）から減算される。この過剰のマトリックスボリュームは、相乗効果スコアを生じさせるために統合される（上記）。
【０２０８】
自己架橋分析
組合せスクリーン分析についてヒット基準を客観的に確立するために、自己架橋組合せは、追加の非相乗作用反応を経験的に決定するための手段として、細胞株パネル全体ですべての組合せについて回収された。これらのベースライン加算値に統計学的に優先した効果レベルが得られたこれらの薬物の組合せは相乗的であると考えられた。加算性ボリュームは、平均自己架橋＋３標準偏差（３  ）より大きい組合せは、相乗効果の候補と考えることができる。この戦略は細胞株中心であり、細胞株パネル活性のグローバル評価に対するそれぞれの細胞株における自己架橋挙動に着目した。
【０２０９】
観察された全体的な阻害活性ならびに組合せ効果の数は細胞株によって変化した。３σを超える相乗効果との組合せは、通常のエラーを想定し、−９９％の信頼の「個別に重要」である。各細胞株のための自己架橋相乗効果スコアを表１２および表１３に示す。それぞれの細胞株について閾値を上回る相乗効果スコアとのそれらの組合せを表１２および１３において強調した。
【０２１０】
【表１２】
2015509704.tif 000056
2015509704.tif 000057
2015509704.tif 000058
【０２１１】
細胞増殖によって特徴付けられる多数のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、Ａ５４９、ＢＴ−５４９、ＢｘＰＣ−３、ＦａＤｕ、ＨＣＣ１３９５およびＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞株において相乗効果を示した。細胞増殖はまた、追加の細胞株において測定することができた。
【０２１２】
【表１３】
2015509704.tif 000059
2015509704.tif 000060
2015509704.tif 000061
【０２１３】
細胞増殖によって特徴付けられる多数のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＮＣＩ−Ｈ１６５０、ＮＣＩ−Ｈ１９７５、ＮＣＩ−Ｈ４４１、ＮＣＩ−Ｈ４６０およびＮＣＩ−ＳＮＵ−５細胞株において相乗効果を示した。細胞増殖はまた、追加の細胞株において測定することができた。
【０２１４】
相乗効果スコアが、低濃度で生じる組合せ効果に加重されるため、不十分な用量サンプリングに起因した乏しい単剤曲線フィッティングは、自己架橋スコアの人工的な増加に寄与する場合がある。さらに、実験ノイズ、急な用量遷移または長い細胞株倍加時間などの他の次善の因子が、自己架橋相乗効果スコアに不注意に影響を与え得る「部分的に発生した」表現効果に寄与する。相乗的相互作用の二つの異なる尺度にわたって統計的自己架橋分析を行うことにより、一つの尺度または他の統計的に起因するバイアスを正規化することができる。それぞれの自己架橋行列に自己架橋分析を通過できなかったものの組合せの手動による比較は、細胞株パネル全体に微妙であるが一貫性のある組合せ効果を明らかにするために有用であることがわかっている。
【０２１５】
［実施例３］  抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の特徴付け
機能的活性を阻害するための精製されたＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の能力は、例えば、実施例２に記載されるようにサイトカインバイオアッセイを用いて決定された。組換えヒト抗原に対するＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合親和性は、実施例２に記載されるように表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定を用いて決定された。抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のバイオアッセイからのＩＣ５０値および親和性を位置付けた。親ｍＡｂの活性を完全に維持するＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、将来の進行のための候補対象として選択された。上位２−３の最も有益なＤＶＤ−Ｉｇタンパク質をさらに特徴付けた。
【０２１６】
［実施例３．１］  ヒト化抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の薬物動態分析
薬物動態研究は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットおよびカニクイザルにおいて行われる。雄性および雌性のラットならびにカニクイザルは、４ｍｇ／ｋｇのｍＡｂまたはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の単回投薬で静脈内または皮下に投薬され、抗原捕捉ＥＬＩＳＡを用いて試料を分析し、薬物動態パラメーターを非コンパートメント分析によって決定する。要約すると、ヤギ抗ビオチン抗体（５ｍｇ／ｍｌ、４℃、一晩）を用いてＥＬＩＳＡプレートを被覆し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてブロックし、１０％ＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋのＴＴＢＳ中の５０ｎｇ／ｍｌのビオチン化ヒト抗原とともに室温で２時間インキュベートする。血清試料を連続的に希釈し（ＴＴＢＳ中の０．５％血清、１０％Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ）およびプレート上で３０分間、室温にてインキュベートする。ＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒト抗体を用いて検出を行い、４パラメーターのロジスティックフィットを用いて、標準曲線の助けにより濃度を決定する。薬物動態パラメーターに関する値は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を用いて、非コンパートメントモデルによって決定される。良好な薬物動態プロファイルを有するヒト化ｍＡｂ（Ｔ１／２は８−１３日またはそれより良好であり、低クリアランスおよび優れた生物学的利用率は５０−１００％である）を選択する。
【０２１７】
［実施例３．２］  ヒト化モノクローナル抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の物理化学的およびインビトロでの安定性分析
【０２１８】
サイズ排除クロマトグラフィー
水を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を２．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、２０ｍＬをＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ＃ｋ５５３９−０５ｋ）を用いてＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステム上で分析した。２１１ｍＭ硫酸ナトリウム、９２ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を用いて、流速０．３ｍＬ／分にて試料をカラムから溶出した。ＨＰＬＣシステムの操作条件は以下の通りである：
移動相：２１１ｍＭのＮａ２ＳＯ４、９２ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４＊７Ｈ２０、ｐＨ７．０
勾配：アイソクラチック
流速：０．３ｍＬ／分
検出波長：２８０ｎｍ
オートサンプラー冷却装置温度：４℃
カラムオーブン温度：周囲
実行時間：５０分
【０２１９】
表１３は、上記プロトコルにより測定したモノマー（予想される分子量を有する非凝集タンパク質）％として表される親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の純度データを含む。
【０２２０】
【表１４】
2015509704.tif 000062
2015509704.tif 000063
2015509704.tif 000064
【０２２１】
ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、大部分のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が９０％を超えるモノマーを示す優れたＳＥＣプロファイルを示した。このＤＶＤ−Ｉｇタンパク質プロファイルは、親抗体について観察されたものと類似していた。
【０２２２】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
還元条件下および非還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を分析する。Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）を対照として用いる。還元条件について、１００ｍＭのＤＴＴを含む２×トリスグリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＬＣ２６７６、ロット＃１３２３２０８）と１：１で試料を混合し、６０℃で３０分間加熱する。非還元条件について、試料緩衝液と１：１で試料を混合し、１００℃で５分間加熱する。還元試料（１０ｍｇ／レーン）を１２％プレキャストのトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＣ６００５ｂｏｘ、ロット＃６１１１０２１）上に装填し、非還元試料（１０ｍｇ／レーン）を８％−１６％プレキャストのトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＣ６０４５ｂｏｘ、ロット＃６１１１０２１）上に装填する。ＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ  ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＬＣ５９２５、ロット＃１３５１５４２）を分子量マーカーとして用いる。ゲルをＸＣｅｌｌ  ＳｕｒｅＬｏｃｋミニセルゲルボックス（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＩ０００１）に入れ、最初に、ゲル内の試料を積層するために電圧７５を加え、次にダイフロント（ｄｙｅ  ｆｒｏｎｔ）がゲルの底に到達するまで定電圧１２５にしてタンパク質を分離する。使用される泳動緩衝液は１×トリスグリシンＳＤＳ緩衝液であり、１０×トリスグリシンＳＤＳ緩衝液（ＡＢＣ、ＭＰＳ−７９−０８０１０６）から調製される。コロイド状青色染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃４６−７０１５、４６−７０１６）を用いてゲルを一晩染色し、バックグラウンドを除くためにＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染する。次に、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０、Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いて、染色されたゲルをスキャンする。
【０２２３】
沈降速度分析
３つの標準的な２セクターのカーボン・エポンセンターピースの各々の試料チャンバー内に抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を装填する。これらのセンターピースは１．２ｃｍの光路長を有し、サファイアウィンドウで構築される。基準緩衝液に関してはＰＢＳを使用し、各チャンバーは１４０μＬを含む。Ｂｅｃｋｍａｎ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＸＬ−Ｉ分析用超遠心分離機（シリアル＃ＰＬ１０６Ｃ０１）の４ホール（ＡＮ−６０Ｔｉ）ローターを用いて、すべての試料を同時に試験する。
【０２２４】
実行条件をプログラムし、ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ（ｖ５．６）を用いて遠心分離制御を行う。試料およびローターは、分析前の１時間（２０．０±０．１℃）熱平衡化させる。適切なセル装填の確認を３０００ｒｐｍで行い、１回のスキャンを各ウェルについて記録する。沈降速度条件は以下の通りである：
試料細胞体積：４２０ｍＬ
基準細胞体積：４２０ｍＬ
温度：２０℃
ローター速度：３５，０００ｒｐｍ
時間：８：００時間
ＵＶ波長：２８０ｎｍ
半径刻み幅：０．００３ｃｍ
データ回収：信号加算平均なしの１工程あたり１データポイント
スキャン総数：１００
【０２２５】
完全な抗体のＬＣ−ＭＳ分子量測定
完全な抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の分子量をＬＣ−ＭＳによって分析する。水を用いて各抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を約１ｍｇ／ｍＬに希釈する。タンパク質マイクロトラップ（Ｍｉｃｈｒｏｍ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ、カタログ＃００４／２５１０９／０３）を備えた１１００ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）システムを用いて、脱塩し、試料の５ｍｇをＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中の０．０８％ＴＦＡ、０．０２％ＴＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０８％ＦＡおよび０．０２％ＴＦＡ）を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は２０００から３５００の質量対電荷比である。
【０２２６】
抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の軽鎖および重鎖のＬＣ−ＭＳ分子量測定
抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の軽鎖（ＬＣ）、重鎖（ＨＣ）および脱グリコシル化されたＨＣの分子量測定をＬＣ−ＭＳによって分析する。水を用いて抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１ｍｇ／ｍＬに希釈し、試料は、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、３０分間、３７℃でＬＣおよびＨＣに還元される。抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を脱グリコシル化するために、１００ｍｇの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１００ｍＬの全体積中の２ｍＬのＰＮＧａｓｅ  Ｆ、５ｍＬの１０％Ｎ−オクチルグルコシドとともに、一晩３７℃にてインキュベートされる。脱グリコシル化後、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、試料を３０分間、３７℃にて還元する。Ｃ４カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１４ＴＰ５１１５、Ｓ／Ｎ０６０２０６５３７２０４０６９）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣシステムを用いて脱塩し、試料（５ｍｇ）をＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中の０．０８％ＦＡ、０．０２％ＴＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０８％ＦＡおよび０．０２％ＴＦＡ）を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は８００から３５００の質量対電荷比である。
【０２２７】
ペプチドマッピング
７５ｍＭ重炭酸アンモニウム中の最終濃度が６Ｍの塩酸グアニジンを用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１５分間、室温にて変性させる。変性試料は、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、３７℃、６０分間還元させ、次に、暗所にて３７℃、３０分間、５０ｍＭヨード酢酸（ＩＡＡ）を用いてアルキル化される。アルキル化後、４リットルの１０ｍＭ重炭酸アンモニウムに対して、一晩４℃で試料を透析する。透析された試料は、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム、ｐＨ７．８を用いて１ｍｇ／ｍＬに希釈され、１００ｍｇの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１：２０（ｗ／ｗ）トリプシン／Ｌｙｓ−Ｃ：抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の比でトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃Ｖ５１１１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ、カタログ＃１１  ０４７  ８２５  ００１）を用いて３７℃で４時間消化される。消化物は、１ＮのＨＣｌを１ｍＬ用いてクエンチされる。質量分析計検出を用いたペプチドマッピングについて、４０ｍＬの消化物は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣシステムを備えた、Ｃ１８カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１８ＴＰ５１、Ｓ／Ｎ  ＮＥ９６０６  １０．３．５）上で逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰＨＰＬＣ）によって分離される。ペプチドの分離は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ等級の水中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）を使用する勾配を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて実行する。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は８００から２５００の質量対電荷比である。
【０２２８】
ジスルフィド結合マッピング
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を変性するために、１００ｍＬの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１００ｍＭ重炭酸アンモニウム中の８ＭグアニジンＨＣｌの３００ｍＬと混合される。ｐＨをチェックして、ｐＨが７から８の間であることを確認し、最終濃度が６ＭのグアニジンＨＣｌ中で１５分間、室温にて試料を変性させる。一部の変性試料（１００ｍＬ）をＭｉｌｌｉ−Ｑ水で６００ｍＬに希釈し、最終のグアニジン−ＨＣｌ濃度を１Ｍとする。試料（２２０ｍｇ）は、１：５０のトリプシン：抗体もしくはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質または１：５０のＬｙｓ−Ｃ：抗体もしくはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（ｗ／ｗ）の比（４．４ｍｇ酵素：２２０ｍｇ試料）でトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃Ｖ５１１１、ロット＃２２２６５９０１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ、カタログ＃１１０４７８２５００１、ロット＃１２８０８０００）を用いて３７℃で約１６時間消化される。さらに５ｍｇのトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃを試料に添加し、消化をさらに２時間、３７℃で進行させる。各試料に１ｍＬのＴＦＡを添加することによって消化を停止させる。消化された試料は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣシステム上のＣ１８カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１８ＴＰ５１、Ｓ／Ｎ  ＮＥ０２０６３０−４−１Ａ）を用いてＲＰＨＰＬＣによって分離される。分離は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ等級の水中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）を用いて、ペプチドマッピングについて使用されたものと同じ勾配で５０ｍＬ／分の流速にて実行する。ＨＰＬＣの操作条件は、ペプチドマッピングについて使用された条件と同じである。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は８００から２５００の質量対電荷比である。ジスルフィド結合は、ペプチドの実測されたＭＷと、ジスルフィド結合によって連結されたトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃペプチドの予測されたＭＷとを合致させることによって割り当てられる。
【０２２９】
遊離スルフヒドリル決定
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質中の遊離システインを定量するために使用される方法は、特徴的な発色生成物である５−チオ−（２−ニトロ安息香酸）（ＴＮＢ）を生じさせる、エルマン試薬である５，５ｃ−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）とスルフヒドリル基（ＳＨ）の反応に基づいている。反応は、式：
ＤＴＮＢ  ＋  ＲＳＨ（Ｒ）ＲＳ−ＴＮＢ  ＋  ＴＮＢ−  ＋  Ｈ＋
において説明される。
【０２３０】
ＴＮＢ−の吸光度は、Ｃａｒｙ  ５０分光光度計を用いて、４１２ｎｍで測定される。吸光度曲線は、遊離ＳＨ標準として２メルカプトエタノール（ｂ−ＭＥ）の希釈を用いてプロットし、タンパク質中の遊離スルフヒドリル基の濃度は、試料の４１２ｎｍでの吸光度から決定される。
【０２３１】
ｂ−ＭＥ標準ストックは、最終濃度が０．１４２ｍＭになるように、ＨＰＬＣ等級の水を用いて１４．２Ｍのｂ−ＭＥを連続希釈することによって調製される。次に、各濃度について３点測定の標準を調製する。アミコンウルトラ１０，０００ＭＷＣＯ遠心フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ＃ＵＦＣ８０１０９６、ロット＃Ｌ３ＫＮ５２５１）を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、緩衝液をアダリムマブについて使用した処方緩衝液（５．５７ｍＭリン酸一水素ナトリウム、８．６９ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１０６．６９ｍＭのＮａＣｌ、１．０７ｍＭクエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭクエン酸、６６．６８ｍＭマンニトール、ｐＨ５．２、０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ）に交換する。試料をシェーカー上で室温にて２０分間混合する。次に、１８０ｍＬの１００ｍＭのＴｒｉｓ緩衝液、ｐＨ８．１を各試料に添加し、標準は、１０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ８．１中の２ｍＭのＤＴＮＢを３００ｍＬ添加する。完全に混合した後、Ｃａｒｙ  ５０分光光度計上で４１２ｎｍの吸光度について試料および標準を測定する。遊離ＳＨの量とｂ−ＭＥ標準のＯＤ４１２ｎｍをプロットすることによって、標準曲線を得る。試料の遊離ＳＨ含有量は、ブランクを差し引いた後、この曲線に基づいて計算される。
【０２３２】
弱い陽イオン交換クロマトグラフィー
１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１ｍｇ／ｍＬに希釈する。電荷異質性は、ＷＣＸ−１０  ＰｒｏＰａｃ分析用カラム（Ｄｉｏｎｅｘ、カタログ＃０５４９９３、Ｓ／Ｎ０２７２２）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムを用いて分析される。試料を８０％移動相Ａ（１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０）および２０％移動相Ｂ（１０ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０）においてカラムに充填し、１．０ｍＬ／分の流速で溶出する。
【０２３３】
オリゴ糖プロファイリング
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のＰＮＧａｓｅ  Ｆ処理後に放出されるオリゴ糖は、２−アミノベンズアミド（２−ＡＢ）標識試薬を用いて誘導される。蛍光標識されたオリゴ糖は、順相の高速液体クロマトグラフィー（ＮＰＨＰＬＣ）によって分離され、異なる形態のオリゴ糖は、保持時間に基づいて、既知の標準と比較して特徴付けられる。
【０２３４】
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を最初にＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて消化し、重鎖のＦｃ部分からＮ結合のオリゴ糖を切断する。２ｍＬのＰＮＧａｓｅ  Ｆおよび３ｍＬの１０％Ｎ−オクチルグルコシドとともに５００ｍＬエッペンドルフチューブに抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（２００ｍｇ）を入れる。リン酸緩衝生理食塩水を添加し、最終体積を６０ｍＬにする。７００ＲＰＭに設定したエッペンドルフのサーモミキサー中で一晩３７℃にて試料をインキュベートする。また、Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）を対照としてＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて消化する。
【０２３５】
ＰＮＧａｓｅ  Ｆ処理後、７５０ＲＰＭに設定されたエッペンドルフのサーモミキサー中で９５℃、５分間、試料をインキュベートしてタンパク質を沈殿させ、次に、２分間、１０，０００ＲＰＭでエッペンドルフの遠心分離機に試料を置き、沈殿したタンパク質を沈降させる。オリゴ糖を含む上清を５００ｍＬのエッペンドルフチューブに移し、スピード−ｖａｃ中、６５℃で乾燥させる。
【０２３６】
Ｐｒｏｚｙｍｅから購入される２ＡＢ標識キット（カタログ＃ＧＫＫ−４０４、ロット＃１３２０２６）を用いて、オリゴ糖を２ＡＢで標識する。製造業者の使用説明書に従って標識試薬を調製する。酢酸（１５０ｍＬ、キットにおいて提供される）をＤＭＳＯバイアル（キットにおいて提供される）に添加し、溶液を数回、上下にピペッティングすることによって混合する。酢酸／ＤＭＳＯ混合物（１００ｍＬ）を２−ＡＢ色素のバイアル（使用直前）に移し、色素が完全に溶解するまで混合する。次に、色素溶液を還元剤（キットにおいて提供される）のバイアルに添加し、十分に混合に混合する（標識試薬）。標識試薬（５ｍＬ）を各々乾燥させたオリゴ糖試料バイアルに添加し、完全に混合する。６５℃で７００−８００ＲＰＭに設定されたエッペンドルフのサーモミキサーに反応バイアルを置き、２時間反応させる。
【０２３７】
標識反応後、Ｐｒｏｚｙｍｅから入手されるＧｌｙｃｏＣｌｅａｎｓカートリッジ（カタログ＃ＧＫＩ−４７２６）を用いて過剰の蛍光色素を取り除く。試料を添加前、カートリッジを１ｍＬのｍｉｌｌｉ−Ｑ水で洗浄し、その後、１ｍＬの３０％酢酸溶液で５回洗浄する。試料を添加直前に、１ｍＬのアセトニトリル（Ｂｕｒｄｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ＃ＡＨ０１５−４）をカートリッジに添加する。
【０２３８】
すべてのアセトニトリルがカートリッジを通過した後、新たに洗浄したディスクの中心に試料をスポット状に置き、ディスク上に１０分間吸着させる。１ｍＬのアセトニトリルを用いてディスクを洗浄し、続いて、１ｍＬの９６％アセトニトリルで５回洗浄する。カートリッジを１．５ｍＬのエッペンドルフチューブ上に置き、２−ＡＢ標識されたオリゴ糖をｍｉｌｌｉ  Ｑ水の３回の洗浄（各洗浄あたり４００ｍＬ）により溶出させる。
【０２３９】
Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムに連結させたＧｌｙｃｏｓｅｐ  Ｎ  ＨＰＬＣ（カタログ＃ＧＫＩ−４７２８）カラムを用いてオリゴ糖を分離する。Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムは、システムコントローラー、脱気装置、二重ポンプ、試料冷却器を備えたオートサンプラーおよび蛍光検出器からなっていた。
【０２４０】
高温での安定性
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の緩衝液は、５．５７ｍＭリン酸一水素ナトリウム、８．６９ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１０６．６９ｍＭのＮａＣｌ、１．０７ｍＭクエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭクエン酸、６６．６８ｍＭマンニトール、０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ、ｐＨ５．２；または１０ｍＭヒスチジン、１０ｍＭメチオニン、４％マンニトール、ｐＨ５．９のいずれかであり、Ａｍｉｃｏｎ超遠心フィルターを用いる。適切な緩衝液を用いて、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の最終濃度を２ｍｇ／ｍＬに調整する。次に、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の溶液を濾過滅菌し、０．２５ｍＬのアリコートを無菌条件下で調製する。アリコートを−８０℃、５℃、２５℃または４０℃で１、２または３週間放置する。インキュベーション期間の終わりに、サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって試料を分析する。
【０２４１】
安定性試料は、還元条件下および非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析される。使用される手法は、本明細書に記載されたものと同じである。コロイド状青色染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃４６−７０１５、４６−７０１６）を用いてゲルを一晩染色させ、バックグラウンドが透明になるまでＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染される。次に、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０、Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いて、染色されたゲルをスキャンする。高い感度を得るために、銀染色キット（Ｏｗｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて同じゲルを銀染色し、製造業者によって提供される推奨の手順を用いる。
【０２４２】
参照による援用
本出願を通して引用されてもよい、すべての引用される参考資料（参考文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含む）の内容は、これによって、これらの参考資料がそこに記載されているかのように、いずれかの目的で参考資料の全体を参照することにより明確に援用される。本開示は、別段の記載がない限り、当該技術分野において周知である免疫学、分子生物学および細胞生物学の従来技術を使用する。
【０２４３】
本開示は、分子生物学および薬物送達の分野で周知の技術全体も、参照により組み込む。これらの技術には、以下の公報に記載されている技術が含まれるが、これに限定されるものではない。
【０２４４】
【表１５】
2015509704.tif 000065
【０２４５】
均等
本開示は、その精神または本質的な特徴から逸脱せずに他の具体的な形態で実施することができる。したがって、前述の実施形態は、本開示を限定するというよりはむしろ、すべての点において例示していると考えるべきである。よって、本開示の範囲は、前述の記載によるというよりはむしろ、添付される特許請求の範囲によって示され、したがって、特許請求の範囲の意味および均等の範囲内にあるすべての変更は本明細書に包含されることが意図される。
【手続補正書】
【提出日】平成26年10月3日(2014.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一および第二のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、各々のポリペプチド鎖が、独立して、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ〔式中、
ＶＤ１は、第一の可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、
ｎは、０または１である〕を含み、
第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ１ドメインが、第一の機能的標的結合部位を形成し、第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ２ドメインが、第二の機能的標的結合部位を形成する、並びに、
（ａ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＥＧＦＲを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲおよび配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲおよび配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲおよび配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲおよび配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を独立して含み、
（ｂ）結合タンパク質がＲＯＮおよびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲおよび配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲおよび配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を独立して含み、
（ｃ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＩＧＦ−１Ｒを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲおよび配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲおよび配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲおよび配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を独立して含み、
（ｄ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３およびＥｒｂ−Ｂ３を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲおよび配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲおよび配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲおよび配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を独立して含み、
（ｅ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＨＥＲ２を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲおよび配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲおよび配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲおよび配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲおよび配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を含み、および
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４からの３つのＣＤＲおよび配列番号４５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４６からの３つのＣＤＲおよび配列番号４７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｆ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＩＧＦ−１Ｒを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲおよび配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲおよび配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲおよび配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲおよび配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を含み、および
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲおよび配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲおよび配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲおよび配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｇ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＥｒｂ−Ｂ３を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲおよび配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲおよび配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲおよび配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲおよび配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を含み、および
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲおよび配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲおよび配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲおよび配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｈ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲおよび配列番号３１からの３つのＣＤＲ；
配列番号３２からの３つのＣＤＲおよび配列番号３３からの３つのＣＤＲ；
配列番号３４からの３つのＣＤＲおよび配列番号３５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号３６からの３つのＣＤＲおよび配列番号３７からの３つのＣＤＲ
を含み、および
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲおよび配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲおよび配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｉ）結合タンパク質がＨＥＲ２およびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４からの３つのＣＤＲおよび配列番号４５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４６からの３つのＣＤＲおよび配列番号４７からの３つのＣＤＲ
を含み、および
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲおよび配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲおよび配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｊ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３およびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲおよび配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲおよび配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲおよび配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を含み、および
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲおよび配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲおよび配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｋ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲおよび配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲおよび配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲおよび配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を含み、および
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４からの３つのＣＤＲおよび配列番号５５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５６からの３つのＣＤＲおよび配列番号５７からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｌ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＥｒｂ−Ｂ３を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲおよび配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲおよび配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲおよび配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を含み、および
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲおよび配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲおよび配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲおよび配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｍ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＨＥＲ２を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８からの３つのＣＤＲおよび配列番号４９からの３つのＣＤＲ；
配列番号５０からの３つのＣＤＲおよび配列番号５１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号５２からの３つのＣＤＲおよび配列番号５３からの３つのＣＤＲ
を含み、および
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４からの３つのＣＤＲおよび配列番号４５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４６からの３つのＣＤＲおよび配列番号４７からの３つのＣＤＲ
を含み、
或いは
（ｎ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３およびＨＥＲ２を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８からの３つのＣＤＲおよび配列番号３９からの３つのＣＤＲ；
配列番号４０からの３つのＣＤＲおよび配列番号４１からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４２からの３つのＣＤＲおよび配列番号４３からの３つのＣＤＲ
を含み、および
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４からの３つのＣＤＲおよび配列番号４５からの３つのＣＤＲ；もしくは
配列番号４６からの３つのＣＤＲおよび配列番号４７からの３つのＣＤＲ
を含む、
結合タンパク質。
【請求項２】
２つの第一のポリペプチド鎖および２つの第二のポリペプチド鎖、並びに４つの機能的標的結合部位を含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３】
請求項１または２に記載の結合タンパク質であって、
第一のポリペプチド鎖が、第一のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ〔式中、
ＶＤ１は、第一の重鎖可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の重鎖可変ドメインであり、
Ｃは、重鎖定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、
ｎは、０または１である〕を含み、並びに
第二のポリペプチド鎖が、第二のＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ〔式中、
ＶＤ１は、第一の軽鎖可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の軽鎖可変ドメインであり、
Ｃは、軽鎖定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、
ｎは、（Ｘ１）ｎについて０または１であり、および
ｎは、（Ｘ２）ｎについて０である〕を含み、
第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ１ドメインが、第一の機能的標的結合部位を形成し、第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ２ドメインが、第二の機能的標的結合部位を形成する、
結合タンパク質。
【請求項４】
（ａ）Ｘ１が、配列番号１−２７のいずれか１つであり、
（ｂ）Ｘ１が、ＣＨ１またはＣＬでなく、
（ｃ）Ｆｃ領域が、可変配列Ｆｃ領域であり、
（ｄ）Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥもしくはＩｇＤ由来のＦｃ領域であり、ならびに／あるいは
（ｅ）結合タンパク質が、結晶化された結合タンパク質である、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の結合タンパク質であって、
（ａ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＥＧＦＲを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０および配列番号３１；
配列番号３２および配列番号３３；
配列番号３４および配列番号３５；もしくは
配列番号３６および配列番号３７
を独立して含み、
（ｂ）結合タンパク質がＲＯＮおよびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４および配列番号５５；もしくは
配列番号５６および配列番号５７
を独立して含み、
（ｃ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＩＧＦ−１Ｒを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８および配列番号４９；
配列番号５０および配列番号５１；もしくは
配列番号５２および配列番号５３
を独立して含み、
（ｄ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３およびＥｒｂ−Ｂ３を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８および配列番号３９；
配列番号４０および配列番号４１；もしくは
配列番号４２および配列番号４３
を独立して含み、
（ｅ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＨＥＲ２を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０および配列番号３１；
配列番号３２および配列番号３３；
配列番号３４および配列番号３５；もしくは
配列番号３６および配列番号３７
を含み、および
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４および配列番号４５；もしくは
配列番号４６および配列番号４７
を含み、
（ｆ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＩＧＦ−１Ｒを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０および配列番号３１；
配列番号３２および配列番号３３；
配列番号３４および配列番号３５；もしくは
配列番号３６および配列番号３７
を含み、および
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８および配列番号４９；
配列番号５０および配列番号５１；もしくは
配列番号５２および配列番号５３
を含み、
（ｇ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＥｒｂ−Ｂ３を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０および配列番号３１；
配列番号３２および配列番号３３；
配列番号３４および配列番号３５；もしくは
配列番号３６および配列番号３７
を含み、および
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８および配列番号３９；
配列番号４０および配列番号４１；もしくは
配列番号４２および配列番号４３
を含み、
（ｈ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＥＧＦＲの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０および配列番号３１；
配列番号３２および配列番号３３；
配列番号３４および配列番号３５；もしくは
配列番号３６および配列番号３７
を含み、および
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４および配列番号５５；もしくは
配列番号５６および配列番号５７
を含み、
（ｉ）結合タンパク質がＨＥＲ２およびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４および配列番号４５；もしくは
配列番号４６および配列番号４７
を含み、および
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４および配列番号５５；もしくは
配列番号５６および配列番号５７
を含み、
（ｊ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３およびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８および配列番号３９；
配列番号４０および配列番号４１；もしくは
配列番号４２および配列番号４３
を含み、および
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４および配列番号５５；もしくは
配列番号５６および配列番号５７
を含み、
（ｋ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８および配列番号４９；
配列番号５０および配列番号５１；もしくは
配列番号５２および配列番号５３
を含み、および
ＲＯＮの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号５４および配列番号５５；もしくは
配列番号５６および配列番号５７
を含み、
（ｌ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＥｒｂ−Ｂ３を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８および配列番号４９；
配列番号５０および配列番号５１；もしくは
配列番号５２および配列番号５３
を含み、および
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８および配列番号３９；
配列番号４０および配列番号４１；もしくは
配列番号４２および配列番号４３
を含み、
（ｍ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＨＥＲ２を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
ＩＧＦ−１Ｒの機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４８および配列番号４９；
配列番号５０および配列番号５１；もしくは
配列番号５２および配列番号５３
を含み、および
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４および配列番号４５；もしくは
配列番号４６および配列番号４７
を含み、
或いは
（ｎ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３およびＨＥＲ２を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、ここで、
Ｅｒｂ−Ｂ３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３８および配列番号３９；
配列番号４０および配列番号４１；もしくは
配列番号４２および配列番号４３
を含み、および
ＨＥＲ２の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号４４および配列番号４５；もしくは
配列番号４６および配列番号４７
を含む、
結合タンパク質。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の結合タンパク質であって、
（ａ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＥＧＦＲを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２０２（配列番号５８および配列番号５９を含む）；
ＤＶＤ２２０３（配列番号６０および配列番号６１を含む）；
ＤＶＤ２２０４（配列番号６２および配列番号６３を含む）；
ＤＶＤ２２０５（配列番号６４および配列番号６５を含む）；
ＤＶＤ２２０６（配列番号６７および配列番号６８を含む）；
ＤＶＤ２２０７（配列番号６９および配列番号７０を含む）；
ＤＶＤ２２９０（配列番号１７９および配列番号１８０を含む）；
ＤＶＤ２２９１（配列番号１８１および配列番号１８２を含む）；
ＤＶＤ２３４８（配列番号２８７および配列番号２８８を含む）；および
ＤＶＤ２３４９（配列番号２８９および配列番号２９０を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｂ）結合タンパク質がＲＯＮおよびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２０８（配列番号７１および配列番号７２を含む）；
ＤＶＤ２２０９（配列番号７３および配列番号７４を含む）；
ＤＶＤ２２１０（配列番号７５および配列番号７６を含む）；
ＤＶＤ２２１１（配列番号７７および配列番号７８を含む）；
ＤＶＤ２２１２（配列番号７９および配列番号８０を含む）；および
ＤＶＤ２２１３（配列番号８１および配列番号８２を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｃ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＩＧＦ−１Ｒを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２１４（配列番号８３および配列番号８４を含む）；
ＤＶＤ２２１５（配列番号８５および配列番号８６を含む）；
ＤＶＤ２２１６（配列番号８７および配列番号８８を含む）；
ＤＶＤ２２１７（配列番号８９および配列番号９０を含む）；
ＤＶＤ２２１８（配列番号９１および配列番号９２を含む）；
ＤＶＤ２２１９（配列番号９３および配列番号９４を含む）；
ＤＶＤ２２２６（配列番号９５および配列番号９６を含む）；
ＤＶＤ２２２７（配列番号９７および配列番号９８を含む）；
ＤＶＤ２２２８（配列番号９９および配列番号１００を含む）；
ＤＶＤ２２２９（配列番号１０１および配列番号１０２を含む）；
ＤＶＤ２２３０（配列番号１０３および配列番号１０４を含む）；および
ＤＶＤ２２３１（配列番号１０５および配列番号１０６を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｄ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３およびＥｒｂ−Ｂ３を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２３８（配列番号１０７および配列番号１０８を含む）；
ＤＶＤ２２３９（配列番号１０９および配列番号１１０を含む）；
ＤＶＤ２２４０（配列番号１１１および配列番号１１２を含む）；
ＤＶＤ２２４１（配列番号１１３および配列番号１１４を含む）；
ＤＶＤ２２４２（配列番号１１５および配列番号１１６を含む）；
ＤＶＤ２２４３（配列番号１１７および配列番号１１８を含む）；
ＤＶＤ２２４４（配列番号１１９および配列番号１２０を含む）；
ＤＶＤ２２４５（配列番号１２１および配列番号１２２を含む）；
ＤＶＤ２２４６（配列番号１２３および配列番号１２４を含む）；
ＤＶＤ２２４７（配列番号１２５および配列番号１２６を含む）；
ＤＶＤ２２４８（配列番号１２７および配列番号１２８を含む）；および
ＤＶＤ２２４９（配列番号１２９および配列番号１３０を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｅ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＨＥＲ２を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２６６（配列番号１３１および配列番号１３２を含む）；
ＤＶＤ２２６７（配列番号１３３および配列番号１３４を含む）；
ＤＶＤ２２６８（配列番号１３５および配列番号１３６を含む）；
ＤＶＤ２２６９（配列番号１３７および配列番号１３８を含む）；
ＤＶＤ２３００（配列番号１９９および配列番号２００を含む）；
ＤＶＤ２３０１（配列番号２０１および配列番号２０２を含む）；
ＤＶＤ２３０２（配列番号２０３および配列番号２０４を含む）；
ＤＶＤ２３０３（配列番号２０５および配列番号２０６を含む）；
ＤＶＤ２３４２（配列番号２７９および配列番号２８０を含む）；および
ＤＶＤ２３４３（配列番号２８１および配列番号２８２を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｆ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＩＧＦ−１Ｒを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２７６（配列番号１５１および配列番号１５２を含む）；
ＤＶＤ２２７７（配列番号１５３および配列番号１５４を含む）；
ＤＶＤ２２８４（配列番号１６７および配列番号１６８を含む）；
ＤＶＤ２２８５（配列番号１６９および配列番号１７０を含む）；
ＤＶＤ２３０４（配列番号２０７および配列番号２０８を含む）；
ＤＶＤ２３０５（配列番号２０９および配列番号２１０を含む）；
ＤＶＤ２３０６（配列番号２１１および配列番号２１２を含む）；
ＤＶＤ２３０７（配列番号２１３および配列番号２１４を含む）；
ＤＶＤ２３４６（配列番号２８３および配列番号２８４を含む）；および
ＤＶＤ２３４７（配列番号２８５および配列番号２８６を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｇ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＥｒｂ−Ｂ３を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２９２（配列番号１８３および配列番号１８４を含む）；
ＤＶＤ２２９３（配列番号１８５および配列番号１８６を含む）；
ＤＶＤ２２９４（配列番号１８７および配列番号１８８を含む）；
ＤＶＤ２２９５（配列番号１８９および配列番号１９０を含む）；
ＤＶＤ２２９６（配列番号１９１および配列番号１９２を含む）；および
ＤＶＤ２２９７（配列番号１９３および配列番号１９４を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｈ）結合タンパク質がＥＧＦＲおよびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２９８（配列番号１９５および配列番号１９６を含む）；
ＤＶＤ２２９９（配列番号１９７および配列番号１９８を含む）；
ＤＶＤ２３３８（配列番号２７１および配列番号２７２を含む）；および
ＤＶＤ２３３９（配列番号２７３および配列番号２７４を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｉ）結合タンパク質がＨＥＲ２およびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２３０８（配列番号２１５および配列番号２１６を含む）；
ＤＶＤ２３０９（配列番号２１７および配列番号２１８を含む）；
ＤＶＤ２３１０（配列番号２１９および配列番号２２０を含む）；
ＤＶＤ２３１１（配列番号２２１および配列番号２２２を含む）；
ＤＶＤ２３１６（配列番号２２７および配列番号２２８を含む）；
ＤＶＤ２３１７（配列番号２２９および配列番号２３０を含む）；
ＤＶＤ２３２８（配列番号２５１および配列番号２５２を含む）；および
ＤＶＤ２３２９（配列番号２５３および配列番号２５４を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｊ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３およびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２３１８（配列番号２３１および配列番号２３２を含む）；
ＤＶＤ２３１９（配列番号２３３および配列番号２３４を含む）；
ＤＶＤ２３２０（配列番号２３５および配列番号２３６を含む）；
ＤＶＤ２３２１（配列番号２３７および配列番号２３８を含む）；
ＤＶＤ２３２２（配列番号２３９および配列番号２４０を含む）；
ＤＶＤ２３２３（配列番号２４１および配列番号２４２を含む）；
ＤＶＤ２３３０（配列番号２５５および配列番号２５６を含む）；
ＤＶＤ２３３１（配列番号２５７および配列番号２５８を含む）；
ＤＶＤ２３３２（配列番号２５９および配列番号２６０を含む）；
ＤＶＤ２３３３（配列番号２６１および配列番号２６２を含む）；
ＤＶＤ２３３４（配列番号２６３および配列番号２６４を含む）；および
ＤＶＤ２３３５（配列番号２６５および配列番号２６６を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｋ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＲＯＮを、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２３２４（配列番号２４３および配列番号２４４を含む）；
ＤＶＤ２３２５（配列番号２４５および配列番号２４６を含む）；
ＤＶＤ２３２６（配列番号２４７および配列番号２４８を含む）；
ＤＶＤ２３２７（配列番号２４９および配列番号２５０を含む）；
ＤＶＤ２３３６（配列番号２６７および配列番号２６８を含む）；
ＤＶＤ２３３７（配列番号２６９および配列番号２７０を含む）；
ＤＶＤ２３４０（配列番号２７５および配列番号２７６を含む）；および
ＤＶＤ２３４１（配列番号２７７および配列番号２７８を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｌ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＥｒｂ−Ｂ３を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２７８（配列番号１５５および配列番号１５６を含む）；
ＤＶＤ２２７９（配列番号１５７および配列番号１５８を含む）；
ＤＶＤ２２８０（配列番号１５９および配列番号１６０を含む）；
ＤＶＤ２２８１（配列番号１６１および配列番号１６２を含む）；
ＤＶＤ２２８２（配列番号１６３および配列番号１６４を含む）；および
ＤＶＤ２２８３（配列番号１６５および配列番号１６６を含む）；
のいずれか１つを含む、
（ｍ）結合タンパク質がＩＧＦ−１ＲおよびＨＥＲ２を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２８６（配列番号１７１および配列番号１７２を含む）；
ＤＶＤ２２８７（配列番号１７３および配列番号１７４を含む）；
ＤＶＤ２２８８（配列番号１７５および配列番号１７６を含む）；
ＤＶＤ２２８９（配列番号１７７および配列番号１７８を含む）；
ＤＶＤ２３１４（配列番号２２３および配列番号２２４を含む）；および
ＤＶＤ２３１５（配列番号２２５および配列番号２２６を含む）；
のいずれか１つを含む、
或いは
（ｎ）結合タンパク質がＥｒｂ−Ｂ３およびＨＥＲ２を、第一および第二の機能的標的結合部位で結合させることができ、並びに以下：
ＤＶＤ２２７０（配列番号１３９および配列番号１４０を含む）；
ＤＶＤ２２７１（配列番号１４１および配列番号１４２を含む）；
ＤＶＤ２２７２（配列番号１４３および配列番号１４４を含む）；
ＤＶＤ２２７３（配列番号１４５および配列番号１４６を含む）；
ＤＶＤ２２７４（配列番号１４７および配列番号１４８を含む）；および
ＤＶＤ２２７５（配列番号１４９および配列番号１５０を含む）；
のいずれか１つを含む、
結合タンパク質。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含む、結合タンパク質コンジュゲートであって、
さらに、免疫接着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｎｓｉｏｎ）分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤を含み、
前記造影剤が、場合によって、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンであり、
前記放射性標識が、場合によって、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍであり、或いは
前記治療剤または細胞毒性剤が、場合によって、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である、
結合タンパク質コンジュゲート。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の結合タンパク質をコードする、単離された核酸。
【請求項９】
請求項８に記載の単離された核酸を含むベクターであって、場合によって、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ、ｐＥＦ６、ｐＨｙｂＥ、ＴＯＰＯまたはｐＢＪである、ベクター。
【請求項１０】
請求項９に記載のベクターを含む宿主細胞であって、場合によって、原核細胞、エシュリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、真核細胞、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞、Ｓｆ９細胞、哺乳動物細胞、鳥類の細胞、昆虫細胞、ＣＨＯ細胞またはＣＯＳ細胞である、宿主細胞。
【請求項１１】
結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、請求項１０に記載の宿主細胞を培地中で培養することを含む、結合タンパク質を生産する方法。
【請求項１２】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の結合タンパク質と、医薬として許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１３】
さらに、少なくとも１つの追加の治療剤を含む、請求項１２に記載の医薬組成物であって、
前記追加の治療剤が、場合によって、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断剤；接着分子遮断剤；抗サイトカイン抗体またはその機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストである、医薬組成物。
【請求項１４】
結合タンパク質を対象に投与することによって、疾患または障害について対象を治療するための医薬の製造における、請求項１〜６のいずれか一項に記載の結合タンパク質の使用。
【請求項１５】
請求項１４に記載の使用であって、前記障害が、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型および多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患／アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に���発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病および統合失調症）、Ｔｈ２型およびＴｈ１型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛（疼痛の異なる形態）、ならびに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および腎臓癌および造血性悪性病変（白血病およびリンパ腫）などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）および動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的���腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、Ａ型肝炎、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ．ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・デジェリーヌ−トーマス・シャイ−ドレーガーおよびマシャド−ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血��系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ｃｉｓ）、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ  ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節
性ＪＲＡ、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌および直腸癌および造血性悪性病変（白血病およびリンパ腫）、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性または創傷治癒である、使用。
【請求項１６】
医薬が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮投与のために製剤化される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１７】
試験試料中の少なくとも１つの標的またはその断片の存在、量もしくは濃度を、イムノアッセイによって決定するためのインビトロ方法であって、
前記イムノアッセイは、前記試験試料を、少なくとも１つの結合タンパク質および少なくとも１つの検出可能な標識と接触させることを含み、および
前記少なくとも１つの結合タンパク質は、請求項１〜６のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含む、
インビトロ方法。
【請求項１８】
さらに、
（ｉ）試験試料を、標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの結合タンパク質と接触させて、第一の複合体を形成すること、
（ｉｉ）前記複合体を、結合タンパク質に結合するか或いは結合タンパク質によっては結合されない標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの検出可能な標識を接触させて、第二の複合体を形成すること、および
（ｉｉｉ）第二の複合体における検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、試験試料中の標的またはその断片の存在、量もしくは濃度を検出すること
を含み、
標的またはその断片の存在、量もしくは濃度が、検出可能な標識によって発生したシグナルと直接的に相関する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
さらに、
（ｉ）試験試料を、標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの結合タンパク質と接触させて、第一の複合体を形成すること、
（ｉｉ）前記複合体を、結合タンパク質への結合について標的またはその断片と競合する少なくとも１つの検出可能な標識と接触させて、第二の複合体を形成すること、および
（ｉｉｉ）第二の複合体における検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、試験試料中の標的またはその断片の存在、量もしくは濃度を検出すること
を含み、
標的またはその断片の存在、量もしくは濃度が、検出可能な標識によって発生したシグナルに間接的に相関する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
インビトロ試験試料を、標的またはその断片の存在、量もしくは濃度についてアッセイするためのキットであって、
（ａ）標的またはその断片について試験試料をアッセイするための説明書、および
（ｂ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の結合タンパクを含む少なくとも１つの結合タンパク質
を含む、キット。
【国際調査報告】
2015509704.tif 000066
2015509704.tif 000067
2015509704.tif 000068
2015509704.tif 000069
2015509704.tif 000070
2015509704.tif 000071
2015509704.tif 000072
2015509704.tif 000073
2015509704.tif 000074