(57)【要約】  本発明は抗ＩＬ−１７抗体のための医薬製剤を提供する。これらの抗ＩＬ−１７抗体医薬製剤は、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎または多発性骨髄腫を治療するために使用され得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
約８０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度の抗ＩＬ−１７抗体、約２０ｍＭの濃度のクエン酸緩衝液、約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約０．０２％（ｗ／ｖ）〜約０．０３％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度のポリソルベート−８０、および約５．７のｐＨを含む医薬製剤であって、前記抗ＩＬ−１７抗体は軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を有する抗体を含み、前記ＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、前記ＨＣは配列番号５のアミノ酸配列である、医薬製剤。
【請求項２】
前記抗ＩＬ−１７抗体が２つの軽鎖（ＬＣ）および２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体を含み、各々のＬＣが配列番号４のアミノ酸配列であり、各々のＨＣが配列番号５のアミノ酸配列である、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記抗ＩＬ−１７抗体の濃度が約８０ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項４】
前記ポリソルベート−８０の濃度が約０．０３％（ｗ／ｖ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項５】
前記製剤が抗ＩＬ−１７抗体医薬溶液製剤である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項６】
約８０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＩＬ−１７抗体、約２０ｍＭの濃度のクエン酸緩衝液、約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約０．０３％の濃度のポリソルベート−８０、および約５．７のｐＨを含む医薬製剤であって、前記抗ＩＬ−１７抗体は２つの軽鎖（ＬＣ）および２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体を含み、各々のＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、各々のＨＣは配列番号５のアミノ酸配列である、医薬製剤。
【請求項７】
約８０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＩＬ−１７抗体、約２０ｍＭの濃度のクエン酸緩衝液、約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約０．０３％の濃度のポリソルベート−８０、および約５．７のｐＨを含む医薬溶液製剤であって、前記抗ＩＬ−１７抗体は２つの軽鎖（ＬＣ）および２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体を含み、各々のＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、各々のＨＣは配列番号５のアミノ酸配列である、医薬溶液製剤。
【請求項８】
有効量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬製剤を、それを必要とする患者に投与することを含む、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎または多発性骨髄腫を治療する方法。
【請求項９】
治療に使用するための請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎または多発性骨髄腫の治療に使用するための請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬の分野に関する。より特には、本発明は抗ＩＬ−１７抗体の医薬製剤に関する。この抗ＩＬ−１７抗体の医薬製剤は、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬（Ｐｓ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、乾癬性関節炎（ＰＡ）または多発性骨髄腫（ＭＭ）を治療するのに有用であると考えられる。
【背景技術】
【０００２】
抗ＩＬ−１７抗体の医薬製剤は、ＲＡ、Ｐｓ、ＡＳ、ＰＡまたはＭＭを有する患者の治療に必要とされる。抗体が患者に皮下に送達され得るように特定の濃度の抗ＩＬ−１７抗体が医薬製剤に必要とされる。特定の濃度の抗ＩＬ−１７抗体を有するこの医薬製剤は、送達時間および針または自動注射装置から必要とされる力を許容不可能に増加させ得る粘度を回避しながらも、抗ＩＬ−１７抗体の物理的および化学的安定性を維持しなければならない。
【０００３】
抗ＩＬ−１７抗体は特許文献１に開示されており、ヒトＩＬ−１７（配列番号１）に関連する生物活性を中和する。さらに、特許文献１は抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体の医薬組成物を開示している。ｍＡｂ１２６、特許文献１に開示されている抗ＩＬ−１７抗体についての特定の製剤に関して、３つの安定性の問題：液−液相分離；ゲル形成または固相変化；および化学的不安定性が、５０ｍｇ／ｍＬ以上の溶液中の濃度で存在することが本発明の一部として出願人により発見されている。したがって、抗ＩＬ−１７抗体の特定の濃度についての医薬製剤はこれらの観察される問題を回避することが必要とされる。代替の抗ＩＬ−１７抗体医薬製剤についての必要性が存在している。さらに、代替の抗ＩＬ−１７抗体医薬溶液製剤についての必要性が存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第０７／７０７５０号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
したがって、本発明は、約８０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度の抗ＩＬ−１７抗体、約２０ｍＭの濃度のクエン酸緩衝液、約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約０．０２％（ｗ／ｖ）〜約０．０３％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度のポリソルベート−８０、および約５．７のｐＨを含む医薬製剤であって、抗ＩＬ−１７抗体が軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を有する抗体を含み、前記ＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、前記ＨＣは配列番号５のアミノ酸配列である、医薬製剤を提供する。本発明はまた、約８０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＩＬ−１７抗体、約２０ｍＭの濃度のクエン酸緩衝液、約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、約０．０３％の濃度のポリソルベート−８０、および約５．７のｐＨを含む医薬製剤であって、抗ＩＬ−１７抗体が２つの軽鎖（ＬＣ）および２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体を含み、各々のＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、各々のＨＣは配列番号５のアミノ酸配列である、医薬製剤を提供する。
【０００６】
さらに、本発明は、有効量の本発明の医薬製剤を、それを必要とする患者に投与することを含む、ＲＡ、Ｐｓ、ＡＳ、ＰＡまたはＭＭを治療する方法を提供する。より特には、本発明は、有効量の本発明の医薬製剤を、それを必要とする患者に投与することを含む、Ｐｓを治療する方法を提供する。また、本発明は、有効量の本発明の医薬製剤を、それを必要とする患者に投与することを含む、ＲＡを治療する方法を提供する。また、本発明は、有効量の本発明の医薬製剤を、それを必要とする患者に投与することを含む、ＰＡを治療する方法を提供する。また、本発明は、有効量の本発明の医薬製剤を、それを必要とする患者に投与することを含む、ＡＳを治療する方法を提供する。
【０００７】
さらに、本発明は治療に使用するための本発明の医薬製剤を提供する。さらに、本発明は、ＲＡ、Ｐｓ、ＡＳ、ＰＡまたはＭＭの治療に使用するための本発明の医薬製剤を提供する。より特には、本発明は、Ｐｓの治療に使用するための本発明の医薬製剤を提供する。また、本発明は、ＲＡの治療に使用するための本発明の医薬製剤を提供する。また、本発明は、ＰＡの治療に使用するための本発明の医薬製剤を提供する。また、本発明は、ＡＳの治療に使用するための本発明の医薬製剤を提供する。
【０００８】
さらに、本発明は、ＲＡ、Ｐｓ、ＡＳ、ＰＡまたはＭＭを治療するための医薬の製造における本発明の医薬製剤の使用を提供する。より特には、本発明は、Ｐｓを治療するための医薬の製造における本発明の医薬製剤の使用を提供する。また、本発明は、ＲＡの治療のための医薬の製造における本発明の医薬製剤の使用を提供する。また、本発明は、ＰＡを治療するための医薬の製造における本発明の医薬製剤の使用を提供する。また、本発明は、ＡＳを治療するための医薬の製造における本発明の医薬製剤の使用を提供する。
【０００９】
特定の医薬製剤が好ましい。以下の列挙した選択はこのような好ましいクラスを記載する：
１．）抗ＩＬ−１７抗体は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを有する抗体を含み、前記ＬＣＶＲは配列番号２のアミノ酸配列であり、前記ＨＣＶＲは配列番号３のアミノ酸配列であり；軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を有する抗体を含み、前記ＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、前記ＨＣは配列番号５のアミノ酸配列であり；または２つの軽鎖（ＬＣ）および２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体を含み、各々のＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、各々のＨＣは配列番号５のアミノ酸配列であり；
２．）抗ＩＬ−１７抗体は、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を有する抗体を含み、前記ＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、前記ＨＣは配列番号５のアミノ酸配列であり；
３．）抗ＩＬ−１７抗体は、２つの軽鎖（ＬＣ）および２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体を含み、各々のＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、各々のＨＣは配列番号５のアミノ酸配列であり；
４．）約８０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度の抗ＩＬ−１７抗体；
５．）約８０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＩＬ−１７抗体；
６．）約０．０２％（ｗ／ｖ）〜約０．０３％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度のポリソルベート−８０；
７．）約０．０３％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート−８０。
【００１０】
特定の医薬溶液製剤が好ましい。以下の列挙された選択はこのような好ましいクラスを記載する：
１．）抗ＩＬ−１７抗体は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを有する抗体を含み、前記ＬＣＶＲは配列番号２のアミノ酸配列であり、前記ＨＣＶＲは配列番号３のアミノ酸配列であり；軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を有する抗体を含み、前記ＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、前記ＨＣは配列番号５のアミノ酸配列であり；または２つの軽鎖（ＬＣ）および２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体を含み、各々のＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、各々のＨＣは配列番号５のアミノ酸配列であり；
２．）抗ＩＬ−１７抗体は、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を有する抗体を含み、前記ＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、前記ＨＣは配列番号５のアミノ酸配列であり；
３．）抗ＩＬ−１７抗体は、２つの軽鎖（ＬＣ）および２つの重鎖（ＨＣ）を含む抗体を含み、各々のＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、各々のＨＣは配列番号５のアミノ酸配列であり；
４．）約８０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度の抗ＩＬ−１７抗体；
５．）約８０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＩＬ−１７抗体；
６．）約０．０２％（ｗ／ｖ）〜約０．０３％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度のポリソルベート−８０；
７．）約０．０３％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート−８０。
【００１１】
一実施形態において、本発明はまた、約８０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＩＬ−１７抗体を含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、６８ｍｇ／ｍＬ〜９２ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度の抗ＩＬ−１７抗体を含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、約８０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＩＬ−１７抗体を含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、約１２０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＩＬ−１７抗体を含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、約１５０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＩＬ−１７抗体を含む医薬製剤を提供する。
【００１２】
一実施形態において、本発明はまた、約１５ｍＭ〜約２５ｍＭの範囲のクエン酸緩衝液で緩衝化される医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、１５ｍＭ〜２５ｍＭの範囲のクエン酸緩衝液で緩衝化される医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、または約３０ｍＭの濃度のクエン酸緩衝液で緩衝化される医薬製剤を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、約２０ｍＭの濃度のクエン酸緩衝液で緩衝化される医薬製剤を提供する。
【００１３】
一実施形態において、本発明はまた、約２００ｍＭ〜約３００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、１７５ｍＭ〜２２５ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、または約３００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む医薬製剤を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、約２００ｍＭの濃度のＮａＣｌを含む医薬製剤を提供する。
【００１４】
一実施形態において、本発明はまた、約０．０１％〜約０．０４％の濃度のポリソルベート−８０またはポリソルベート−２０を含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、０．０２％〜０．０４％の濃度のポリソルベート−８０またはポリソルベート−２０を含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、または約０．０４％の濃度のポリソルベート−８０またはポリソルベート−２０を含む医薬製剤を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、約０．０３％の濃度のポリソルベート−８０またはポリソルベート−２０を含む医薬製剤を提供する。
【００１５】
一実施形態において、本発明はまた、約５．４〜約６．０のｐＨ範囲を含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、５．４〜６．０の範囲のｐＨを含む医薬製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、約５．４、約５．７、または約６．０のｐＨを含む医薬製剤を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、約５．７のｐＨを含む医薬製剤を提供する。
【００１６】
本発明の医薬製剤はクエン酸緩衝液を含む。クエン酸緩衝液は、クエン酸、クエン酸三ナトリウム二水和物、およびクエン酸一水和物；またはクエン酸一水和物、第二リン酸ナトリウム、およびクエン酸で作製されてもよい。また、クエン酸緩衝液は、クエン酸一ナトリウム、クエン酸三ナトリウム塩、またはクエン酸三ナトリウム水和物を含んで作製されてもよい。好ましくは、クエン酸緩衝液はクエン酸ナトリウム二水和物およびクエン酸で作製される。
【００１７】
ｍＡｂ１２６抗体は、２つの軽鎖（ＬＣ）および２つの重鎖（ＨＣ）からなる抗ＩＬ−１７抗体であり、各々のＬＣは配列番号４のアミノ酸配列であり、各々のＨＣは配列番号５のアミノ酸配列であり、ＨＣはジスルフィド結合によって架橋される。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
「抗体」の一般構造は当該技術分野において非常によく知られている。ＩｇＧ型の抗体について、鎖内および鎖間ジスルフィド結合により架橋される４つのアミノ酸鎖（２つの「重」鎖および２つの「軽」鎖）が存在する。特定の生物学系において発現される場合、非修飾ヒトＦｃ配列を有する抗体はＦｃ領域においてグリコシル化される。抗体は同様に他の位置においてグリコシル化されてもよい。当業者は、本発明の製剤に使用するための抗体がこのようなグリコシル化を含んでもよいことを理解する。抗体のサブユニット構造および３次元構成は当該技術分野において周知である。各々の重鎖はＮ末端重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」）および重鎖定常領域（「ＨＣＣＲ」）から構成される。重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＤ、およびＩｇＡについて３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）；ならびにＩｇＭおよびＩｇＥについて４つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）から構成される。各々の軽鎖は軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」）および軽鎖定常領域（「ＬＣＣＲ」）から構成される。各々の軽／重鎖対の可変領域は抗体結合部位を形成する。
【００１９】
本発明の製剤に使用するための抗ＩＬ−１７抗体は、当該技術分野において周知の技術、例えば組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、またはこのような技術もしくは当該技術分野において容易に知られている他の技術の組合せを使用して産生され得る。抗体および抗原結合断片を産生および精製する方法は当該技術分野において周知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，第５〜８章および１５章、ＩＳＢＮ０−８７９６９−３１４−２に見出され得る。
【００２０】
本発明の製剤に使用するための抗ＩＬ−１７抗体は、ヒトゲノム配列由来のフレームワークおよび定常領域と同一または実質的に同一（実質的にヒト）であるヒト起源のフレームワーク、ヒンジ領域、および定常領域を有するように設計される操作された抗体である。完全にヒトフレームワーク、ヒンジ領域、および定常領域は、これらのヒト生殖細胞配列および天然に存在する体細胞変異を有する配列および／または操作された変異を有する配列である。本発明の製剤に使用するための抗体は、その中に１つ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を含む完全なヒトフレームワーク、ヒンジ、または定常領域に由来するフレームワーク、ヒンジ、または定常領域を含んでもよい。さらに、本発明の製剤に使用するための抗体はヒトにおいて実質的に非免疫原性である。
【００２１】
溶液中の抗体の安定性は、抗体が可溶化する製剤中の抗体の化学的安定性および物理的安全性に依存する。酸化、脱アミド、および加水分解は、抗体が製剤中に有し得る化学的安定性の問題の例である。凝集およびゲル形成は、抗体が製剤中に有し得る物理的安定性の問題の例である。溶液製剤中の抗体に関する別の物理的安定性の問題は液−液相分離（ＬＬＰＳ）であり得；抗体溶液中のＬＬＰＳは典型的に最初に乳白色として現れ、続いて軽いおよび重い相に分離される。曇り点は、ＬＬＰＳが所与の条件について最初に観察される温度であり；曇り点は、従来的に相分離に関連する最終的に重いおよび軽い相に分解するマイクロ相の形成の結果として溶液が乳白色になる温度を測定する。
【００２２】
医薬製剤は、その中のタンパク質／抗体の分解、修飾、凝集、生物活性の損失などの程度が、許容可能に制御され、時間と共に不許容性が増加しない、安定な製剤である。安定性は、試料の光散乱の測定、見かけの光の減衰（吸光度、または光学密度）、サイズ（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による）、インビトロもしくはインビボ生物活性および／または示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定される特性を含む、当該技術分野において周知の方法によって評価され得る。安定性を評価するための他の方法は当該技術分野において周知であり、また、本発明に従って使用され得る。ＳＥＣによって測定される場合、抗ＩＬ−１７医薬製剤についてのモノマー％は、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、または好ましくは２年間、５℃での保存後、９０％超であるべきである。陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）によって測定される場合、全ての酸性バリアントのパーセントは、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、または好ましくは２年間、５℃での保存後、抗ＩＬ−１７医薬製剤について３０％を超えないべきである。還元ＣＥ−ＳＤＳによる純度の測定に関して、抗ＩＬ−１７医薬製剤は、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、または好ましくは２年間、５℃での保存後、８５％超の純度を有するべきである。好ましくは、抗ＩＬ−１７抗体医薬製剤は、２年間保存した溶液について５℃の温度での安定性についての上述の基準のうちの１つを満たす。より好ましくは、抗ＩＬ−１７抗体医薬製剤は、２年間保存した溶液について５℃の温度での安定性についての上述の基準の全てを満たす。
【００２３】
本発明の医薬製剤は、溶液、エマルション、または懸濁液の液体剤形であってもよい。好ましくは、本発明の医薬製剤は溶液の液体剤形である。
【００２４】
本発明の医薬製剤の投与は非経口投与によってもよい。非経口投与は、滅菌注射器または注入ポンプなどのいくつかの他の医療装置による身体内への剤形の注射として医学文献において一般に理解されている。非経口経路は、静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内の投与経路を含んでもよい。皮下投与が好ましい経路である。
【００２５】
本発明の医薬製剤は、ＲＡ、Ｐｓ、ＡＳ、ＰＡまたはＭＭを有する被験体を治療するために使用されてもよい。本発明の有効量の抗ＩＬ−１７抗体製剤は、高いＩＬ−１７レベルで被験体に投与される場合、許容されない副作用を引き起こさずに所望の治療および／または予防効果を生じる量の抗ＩＬ−１７抗体を送達する量である。
【実施例】
【００２６】
実施例１
ｍＡｂ  １２６製剤化
【表１】
2015510882.tif 000002
【００２７】
【表２】
2015510882.tif 000003
【００２８】
ｍＡｂ１２６についての抗ＩＬ−１７抗体医薬溶液製剤（表１）についての製造プロセスは、緩衝賦形剤組成（表２）の第１の配合、続いて最終薬品製剤の配合からなる。
【００２９】
緩衝賦形剤組成（表２）は、医薬品製剤配合のために調製、濾過、および保存される。２０＋／−５℃の温度での適切な量の水を、適切なサイズの釣り合いのとれた空の容器内で秤量する。適切な量のクエン酸ナトリウムを加え、混合し、次いで適切な量のクエン酸を加え、混合する。次いで適切な量の塩化ナトリウムを加え、混合する。ポリソルベート８０をガラス容器内で正確に計り分け、表２の濃度を得るために２０＋／−５℃の温度にて適切な量の水をガラス容器内に加え、溶液を混合する。ポリソルベート８０溶液の全含有物を他の賦形剤に加える。ポリソルベート８０溶液の容器を水でリンスして、全含有物が移されることを確実にする。ポリソルベート８０溶液の添加後、溶液を混合する。溶解および混合が完了した後、溶液のｐＨを５．７＋／−０．２内になるように調べ；必要な場合、ＨＣｌまたはＮａＯＨ溶液で調整する。バイオバーデン減少のために緩衝賦形剤組成をフィルター（ポリフッ化ビニリデン［ＰＶＤＦ］）に通過させる。
【００３０】
緩衝賦形剤組成に、最終薬品製剤と比較して活性医薬成分（ＡＰＩ）中の低い濃度（０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート−８０）を構成するために追加のポリソルベート８０を補足する。ＡＰＩ中のｍＡｂ  １２６の濃度は変化するので、希釈に必要な緩衝剤の量も変化する。このバリエーションは、ポリソルベート８０の濃度が各バッチでの緩衝賦形剤組成処方のために調整されることを必要とする。
【００３１】
保存したｍＡｂ  １２６  ＡＰＩ容器（ｍＡｂ  １２６は細胞内で発現され、精製され、濃縮され；得られたＡＰＩは次いで約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約１６０ｍｇ／ｍＬにて凍結される、ｐＨ約５．７にて２０ｍＭクエン酸緩衝液、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０２％ポリソルベート−８０中のｍＡｂ１２６）を２０＋／−５℃の温度に平衡化する。次いでＡＰＩ溶液を適切な量の緩衝賦形剤溶液と混合して、８０％の理論的バッチサイズを達成する。溶液のｐＨを５．７＋／−０．２内になるように調べる。ｐＨ調整後、溶液を混合し、試料を処理中のＵＶアッセイのために取り、ｍＡｂ１２６濃度を決定する。適切な量の緩衝賦形剤溶液を、最終標的バッチ重量に到達するように加える。混合後、溶液のｐＨを５．７＋／−０．２内になるように調べ、溶液のオスモル濃度を３６０〜４８０ｍＯｓｍ／Ｋｇ内になるように調べる。ｍＡｂ  １２６医薬品溶液をバイオバーデン減少のためにＰＶＤＦフィルターに通し、５℃にて保存する。
【００３２】
実施例２
相分離
ｍＡｂ１２６は溶液中で０℃以下の状態で相分離に対する傾向を有することが見出される。液−液相分離（ＬＬＰＳ）は解決されることを必要とする。なぜなら、ｍＡｂ  １２６医薬品の保存は５℃であるからである。５℃での医薬品の保存は周期的な冷蔵庫の０℃以下の温度逸脱についての安定性を必要とする。ＮａＣｌ濃度の増加は、ＬＬＰＳがｍＡｂ  １２６製剤において発生する温度を低くすることが示され、クエン酸塩濃度の増加もまた、ＬＬＰＳがｍＡｂ  １２６製剤において発生する温度を低くすることが示される。
【００３３】
ＬＬＰＳ事象は、ｍＡｂ  １２６について現れる温度範囲（−１２から０℃の間で発生する相分離）について特異的に開発される技術に基づいて試験される。１０〜２００ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ  １２６の２ミリリットル（ｍＬ）試料を、表３に示したサイクルでＬｙｏＳｔａｒＩＩ（ＦＴＳ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）凍結乾燥単位中に入れる。圧力を実験のために大気圧に維持した。試料条件を少なくとも３回試験し、標準偏差は３連で測定した試料について約０．５℃である。試料を、バイアルの底部における曇り点（乳白色の概観）および濃い、タンパク質が豊富な層の形成を含む、相分離の徴候について凍結乾燥サイクルの間、視覚的にモニターする。試料は冷却の間、だんだんと乳白色を現すが、この効果は曇り点から容易に識別可能である。曇り点が発生する場合、試料は、バイアルの後の対象物が試料を通してまだ見える場合、徐々に乳白光へ変わり１秒未満で乳白色溶液になる。
【００３４】
【表３】
2015510882.tif 000004
【００３５】
表４に示されるように、ＮａＣｌ濃度の増加は曇り点温度を低下させるように示される。抗ＩＬ−１７抗体医薬製剤中のＮａＣｌ濃度の増加を制限する要因は高浸透圧および他の非相分離作用であり；２００ｍＭのＮａＣｌは、曇り点温度をさらに低下させながら、これらの問題を回避する。また、ｍＡｂ  １２６におけるＬＬＰＳは、３００ｍＭのＮａＣｌを除いて全てのＮａＣｌ濃度にて二相性であるように示され、ＬＬＰＳは、１００ｍｇ／ｍＬの濃度のｍＡｂ  １２６で最も強力になり、濃度が１００ｍｇ／ｍＬより高くまたは低く移動すると相分離作用は減少する。
【００３６】
【表４】
2015510882.tif 000005
【００３７】
ｍＡｂ  １２６溶液の曇り点に対するｐＨの効果を測定する。曇り点は、２つのｐＨ、ｐＨ４およびｐＨ６にて最小化されることを見出した。ｐＨ６は、ｍＡｂ  １２６についての製剤を選択する場合、ｐＨ４より最適であるとみなされるべきである。なぜなら、ｐＨ４におけるｍＡｂ  １２６の化学的不安定性はｐＨ４における低い曇り点を使用して起こらないようにするからである。ｍＡｂ  １２６の医薬製剤について実施例３に示したｐＨ６．３〜６．４におけるゲル形成を考慮して、ｐＨ５．７＋／−０．３が、医薬製剤の保存期間の間、安定なままであるｐＨ範囲を可能にするために、ｐＨ６＋／−０．３より好ましい。
【００３８】
液−液相分離に対する種々の一般に使用される緩衝液の効果が、ｍＡｂ  １２６についての最適緩衝系がどれであるかを理解するために調査されており（表５）、クエン酸緩衝液がＬＬＰＳを生じる温度を減少させるのに最も効果的であると見出される。これらの研究は１５０ｍＭのＮａＣｌを用いて行われる。酢酸緩衝液は曇り点に対する効果に関してｐＨ５でのクエン酸緩衝液に相当するが、ｐＨ５における化学不安定性により、このｐＨ条件はあまり有益ではない。
【００３９】
クエン酸塩の濃度はＬＬＰＳ後に良好であることが示される（表６）。クエン酸塩は５０ｍＭまで曇り点を減少させるが、クエン酸塩緩衝液はまた、注射に対してより多くの苦痛をもたらすことが報告されている。したがって、３０ｍＭより高いクエン酸塩濃度が患者のコンプライアンスの観点から許容不可能であるようである。
【００４０】
【表５】
2015510882.tif 000006
【００４１】
【表６】
2015510882.tif 000007
【００４２】
実施例３
ゲル形成
生物学的製剤を、製剤の保存期間の間、化学的および物理的分解を最小化するために５℃＋／−３℃に保存する。熱力学的固相変化またはゲル形成などの事象は典型的に、可逆的な場合でさえも、許容可能ではない。なぜなら、それらは安定性に悪影響を及ぼし得、使用前の試料の必要な目視検査を妨げるからである。
【００４３】
固相変化は、５℃にてｐＨ条件＜ｐＨ５および＞ｐＨ７においてｍＡｂ  １２６の高濃度の試料において観察される。この熱力学的事象は室温にてバイアルを平衡化することによって可逆的であることが示される。それ故、試料を種々のｐＨ条件にて試験し、相境界をより正確に見つけるために熱力学的変化についてモニターする。これらの試験は、相変化を誘導するために試料を５℃にてｐＨ７のクエン酸緩衝液内に透析することによって行う。次いで固体物質を対象の条件内で同じ温度にて透析して、試料が溶液状態に反転するかどうかを確認する。平衡試験方法は間欠的査察により長期間試料保存することが好ましい。なぜなら、特定の製剤は熱力学的に不安定であり得るが、固相変化の動力学は一部の場合、発生するのに数ヶ月必要とするからである。
【００４４】
０．１ｐＨ増分において２００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのクエン酸緩衝液にて１００ｍｇ／ｍＬまたは１５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ  １２６を用いて研究を行い、境界が固相形成のためであることを見出す。相間の遷移は５℃にてｐＨ６．３から６．４の間で見出される。相境界のために、ｍＡｂ  １２６形成のための標的ｐＨを、安定な貯蔵枠を確保するためにｐＨ６から５．７まで下げる。
【００４５】
５℃にて８０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ  １２６を用いた２つの実験を、２０ｍＭのクエン酸緩衝液、２００ｎＭのＮａＣｌ、および０．０３％のポリソルベート−８０中で実施し、ｐＨ６．１以下でゲル形成は存在しないが、ｐＨ６．１超でゲル形成は発生する。これらの実験により、８０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ  １２６による製剤は、ゲル形成を回避するｐＨ５．７＋／−０．３のｐＨ単位幅の枠を有することが示される。
【００４６】
実施例４
化学的不安定性
安定性を達成する医薬製剤に関して、不安定性の物理的および化学的源の両方が製剤において扱われる必要がある。化学不安定性の結果、抗体の分解が生じ得る。
【００４７】
１００および１５０ｍｇ／ｍＬでのｍＡｂ  １２６の化学的安定性に対するｐＨの効果を評価するために、ｍＡｂ  １２６の試料を、クロマトグラフィーにより全ての酸性バリアントの％の増加について分析する。ｐＨ４〜７の範囲を半分のｐＨ単位増分において調べる。研究のための緩衝液は、１０ｍＭのクエン酸緩衝液、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．０２％のポリソルベート８０を含む。２ｍＬ溶液を、血清ストッパーを備える３ｍＬのガラスバイアルに保存する。これらのｐＨ環境における試料を、異なる形態の分解に対する温度効果をより正確にモデル化するために５℃、２５℃、および４０℃にて保存する。ｐＨ６  １０ｍＭのＢｉｓ  Ｔｒｉｓ  Ｐｒｏｐａｎｅ（移動相Ａ）およびｐＨ９．６  １０ｍＭのＢｉｓ  Ｔｒｉｓ  Ｐｒｏｐａｎｅ、５０ｍＭのＮａＣｌ（移動相Ｂ）を使用したＵＶ検出器およびＤｉｏｎｅｘ  ＰｒｏＰａｃ  ＷＣＸ−１０カラム（４×２５０ｍｍ）を使用した陽イオン交換（ＣＥＸ）ＨＰＬＣを使用して試料を分析する。
【００４８】
ＣＥＸによって、全ての酸性バリアント％（％ＡＶ）の増加はｍＡｂ  １２６の分解のより確実な指標である。２５℃にて保存したｍＡｂ  １２６のバイアルは、ＣＥＸにより、ｐＨ５〜６の間で最も安定であり、よりアルカリ性のｐＨ条件にて少なくとも安定であることが示される。試料を４０℃にて保存する場合、ｐＨ５および５．５は最も安定であり、ｐＨ６は高いｐＨ環境よりわずかに安定であるだけのようである。これらの結果により、ｍＡｂ  １２６についての医薬溶液製剤のｐＨはｐＨ５からｐＨ６の間であるべきことが示される。
【００４９】
実施例５
実験の設計（ＤＯＥ）研究
ＤＯＥ研究は、ｍＡｂ  １２６溶液製剤の物理的および化学的安定性を試験するために多変数アプローチを使用する。ｍＡｂ  １２６溶液製剤は表７に従って調製される。各変数は、入力変数間の出力応答パラメーターまたは相互作用に存在し得る任意の曲率を測定するために５つのレベルで調査される。実験のための中心点条件は、２０ｍＭのクエン酸塩、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ５．７、０．０２％ポリソルベート８０である。３つの中心点は設計を通して分散される。独立して３つの中心点を調製することにより、２連または３連で調製され、分析される条件の全てを必要とせずに解析データにおける確実性の推定が提供される。試料を４つの温度条件で保存する（５、２５、３０および４０℃）。この範囲の温度により、結果についての活性化エネルギーの推定が可能となる。さらに、より高い温度での保存により、最適な製剤条件の早期の予測が可能となる。
【００５０】
多くの分析技術が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）ＨＰＬＣ、ＨＩＡＣベースの粒子分析、マイクロフローイメージング（ＭＦＩ、２〜１００ｕｍのサイズ範囲を有するＰｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ／Ｂｒｉｇｈｔｗｅｌｌ  Ｍｏｄｅｌ  ＤＰＡ  ４２００）によるデジタル画像ベースの粒子分析、外観、還元および非還元バイオアナライザーＬａｂ−ｏｎ−ａ−Ｃｈｉｐ（Ｌｏｃ）、ｐＨ、粘度、およびＵＶ吸収（タンパク質含有量を測定するため）を含む化学的および物理的安定性をモニターするために選択される。
【００５１】
最初の３ヶ月間からの全ての温度からのデータを使用して、活性化エネルギー（Ｅａ）を、アレニウスの動力学モデルを利用して算出する（ゼロまたは一次）。全ての試行の非線形回帰を使用してエネルギーが見られる。次いでモデルを利用して、関連する市販の保存温度（５℃）にて２４ヶ月からの傾向を推定する。ゼロ次のアレニウスモデリングを、ＳＥＣ（モノマー、ポリマーＲｅｌ．Ｓｕｂ／Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ）、ＣＥＸ（酸性バリアント）、還元／非還元ＬｏＣ、およびＵＶ容量を使用する。ＣＥＸ塩基性バリアントについての最適な適合は一次モデルである。
【００５２】
【表７】
2015510882.tif 000008
【００５３】
サイズ排除クロマトグラフィー
ＳＥＣ結果に基づいたモノマーパーセントに対して最も強い効果を有する２つの可変物はｐＨおよびｍＡｂ  １２６濃度である。ｍＡｂ１２６濃度の効果は線形であり、タンパク質濃度を増加させると、モノマー純度の減少が生じる。
【００５４】
３つの入力可変物（ｐＨ、ＮａＣｌ濃度、および緩衝液濃度）は、モノマーパーセントに対するそれらの効果において曲率を示す。ＮａＣｌおよびクエン酸塩濃度に関して、中心点に近い値は最も安定である。より低いｐＨ濃度は中心点よりわずかに安定であるが、他の分解経路の結果は標的ｐＨを低下させ、より魅力の低いものにする。
【００５５】
ｐＨの効果とタンパク質濃度との間の相互作用は５．７以下のｐＨ条件で減少するタンパク質濃度の効果と共に生じる。研究の中心点条件におけるモノマー純度についての２年予測は９６．７％よりわずかに低い。ポリソルベート８０濃度は０．０２〜０．０４％の安定性に対してほとんど効果を有さない。
【００５６】
陽イオン交換クロマトグラフィー
ＣＥＸ分析は経時的に酸性種の増殖に焦点を当てている。ＣＥＸ％ＡＶの統計的モデリング（Ｅａは２３．７ｋｃａｌ／ｇ−ｍｏｌである）は、５℃での保存の２４ヶ月後、化学修飾がほとんど予測されないことを示す。酸性バリアント生成はｐＨについての中心点付近で最小化されるが、クエン酸塩濃度を増加すると増加する。ｍＡｂ１２６およびポリソルベート８０の濃度の傾向により、中心点が少なくとも最適位置に近いことが示唆されるが、ｙ軸スケールの大きさに基づいて、他の条件に安定である中心点における相違は本質的にわずかである。
【００５７】
還元バイオアナライザーＬｏＣ
還元ＬｏＣパーセント純度は重鎖および軽鎖の相対パーセントの組合せである。２４ヶ月予測に対して最も強い影響を有する２つの入力可変物はｐＨおよび濃度である。パーセント純度は２００ｍＭのＮａＣｌの中心点付近で最大化される。パーセント純度はｐＨを増加させると増加する。ＤＯＥ研究において試験した極度の製剤条件においてさえ、分子は＞９８％純度のままであり、多変量解析の範囲にわたってＬｏＣを還元させることによって測定した場合、抗体は安定であることが示される。Ｅａは２１．８ｋｃａｌ／ｇ−ｍｏｌである。
【００５８】
組み合わせたプロジェクション
この実験の間に研究した設計空間における全ての条件は、＜５％分解を予測する２年保存期間のプロジェクションを有する。しかしながら、他の物理的要因はｐＨ６．３を超えるｐＨ条件を不可能にし、したがって、製剤についての標的条件はこのｐＨの端付近ではなくするべきである。さらに、調査される入力可変物についての最適な全体の最大である標的を選択することは重要である。製造の考慮に基づいて、＞０．０１％のポリソルベート８０がポンプ作用に必要とされることが示され、ポリソルベート８０の標的は０．０３％である。この研究の結果に基づいて、最適な製造条件は、０．０３％のポリソルベート８０と共に２０ｍＭのクエン酸塩、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ５．７である。
【００５９】
実施例６
８０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１２６における安定性
０．０３％のポリソルベート８０と共に２０ｍＭのクエン酸塩、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ５．７における８０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１２６の安定性を２４ヶ月まで試験する。５℃における保存に関して、抗ＩＬ−１７抗体医薬製剤の安定性を、０、１、３、６、９、１２、１８、および２４ヶ月にて測定する。５℃が抗ＩＬ−１７抗体医薬製剤についての予測される保存温度である。２５℃における早まった安定性を１、３および６ヶ月間実施する。
【００６０】
多くの分析技術を、サイズ排除クロマトグラフィーＨＰＬＣ、陽イオン交換クロマトグラフィーＨＰＬＣ、外観、ｐＨ、およびＵＶ吸収を含む化学的および物理的安定性をモニターするために選択する。ＣＥ−ＳＤＳは、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＰＡ８００エンハンスドまたはプラスキャピラリー電気泳動（ＣＥ）機器を備えるＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＩｇＧ  Ｐｕｒｉｔｙ／Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙキットを利用して実施する。還元ＣＥ−ＳＤＳに関して、各々の試料の注入後、交換可能なゲルポリマーマトリクスを通す分子篩によって変性還元条件下で、裸溶融（ｂａｒｅ−ｆｕｓｅｄ）シリカキャピラリー中で試料を分析する。非還元ＣＥ−ＳＤＳに関して、試料を水中で約５ｍｇ／ｍＬに希釈し、続いて試料希釈物（１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１％ＳＤＳ中の２０ｍＭ  ＩＡＭ、ｐＨ９．０）中で約１ｍｇ／ｍＬに希釈する。その後、定電圧にて交換可能なゲルポリマーマトリックスを通す分子篩によって変性非還元条件下で裸溶融シリカキャピラリー中で試料を分析する。両方の方法に関して、ＵＶ検出を２１４ｎｍにて実施する。結果を表８に示す。
【００６１】
【表８】
2015510882.tif 000009
【００６２】
配列表
配列番号１（ヒトＩＬ−１７）
ＭＴＰＧＫＴＳＬＶＳ  ＬＬＬＬＬＳＬＥＡＩ  ＶＫＡＧＩＴＩＰＲＮ  ＰＧＣＰＮＳＥＤＫＮ  ＦＰＲＴＶＭＶＮＬＮ  ＩＨＮＲＮＴＮＴＮＰ  ＫＲＳＳＤＹＹＮＲＳ  ＴＳＰＷＮＬＨＲＮＥ  ＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷ  ＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩ  ＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭ  ＮＳＶＰＩＱＱＥＩＬ  ＶＬＲＲＥＰＰＨＣＰ  ＮＳＦＲＬＥＫＩＬＶ  ＳＶＧＣＴＣＶＴＰＩ  ＶＨＨＶＡ
配列番号２（ＬＣＶＲ）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳ  ＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳ  ＩＳＣＲＳＳＲＳＬＶ  ＨＳＲＧＮＴＹＬＨＷ  ＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱ  ＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ  ＩＧＶＰＤＲＦＳＧＳ  ＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩ  ＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶ  ＹＹＣＳＱＳＴＨＬＰ  ＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥ  ＩＫ
配列番号３（ＨＣＶＲ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ  ＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶ  ＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴ  ＤＹＨＩＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶ  ＩＮＰＭＹＧＴＴＤＹ  ＮＱＲＦＫＧＲＶＴＩ  ＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹ  ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＹＤ  ＹＦＴＧＴＧＶＹＷＧ  ＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４（軽鎖）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳ  ＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳ  ＩＳＣＲＳＳＲＳＬＶ  ＨＳＲＧＮＴＹＬＨＷ  ＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱ  ＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ  ＩＧＶＰＤＲＦＳＧＳ  ＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩ  ＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶ  ＹＹＣＳＱＳＴＨＬＰ  ＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥ  ＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶ  ＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬ  ＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬ  ＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫ  ＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱ  ＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥ  ＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬ  ＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤ  ＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥ  ＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶ  ＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号５（重鎖）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ  ＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶ  ＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴ  ＤＹＨＩＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶ  ＩＮＰＭＹＧＴＴＤＹ  ＮＱＲＦＫＧＲＶＴＩ  ＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹ  ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＹＤ  ＹＦＴＧＴＧＶＹＷＧ  ＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ  ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬ  ＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳ  ＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤ  ＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷ  ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨ  ＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧ  ＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶ  ＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹ  ＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮ  ＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫ  ＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡ  ＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦ  ＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬ  ＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣ  ＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰ  ＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧ  ＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰ  ＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲ  ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱ  ＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣ  ＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳ  ＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧ  ＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬ  ＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮ  ＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧ  ＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷ  ＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹ  ＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤ  ＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴ  ＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮ  ＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡ  ＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬ  ＳＬＳＬＧ
【配列表】
2015510882000001.app
【国際調査報告】
2015510882.tif 000010
2015510882.tif 000011
2015510882.tif 000012