(57)【要約】様々な癌の処置に有効な治療剤に連結基および／またはスペーサーを介して結合されたＤＲ５結合部分を有するリガンド薬物コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態において、リガンド薬物コンジュゲートは、式：Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ（式中、Ｌは、リガンドユニットであり、ＬＵは、リンカーユニットであり、Ｄは、薬物ユニット（または細胞傷害剤）である）を有する。下付き文字ｐは、１〜２０の整数である。したがって、前記リガンド薬物コンジュゲートは、少なくとも１つの薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。薬物ユニットは、直接またはリンカーユニット（−ＬＵ−）を介して共有結合され得る。リガンドユニットは、ＤＲ５結合剤、例えば、抗ＤＲ５抗体である。
2015516401.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＲ５を発現する標的細胞に対する特異性を有する式：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ        （Ｉ）
（式中、
Ｌは、（ａ）配列番号１１のアミノ残基１〜５からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸残基１〜１７からなるＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸残基１〜１３からなるＣＤＲ３を有する重鎖免疫グロブリンと；（ｂ）配列番号１４のアミノ残基１〜１６からなるＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸残基１〜７からなるＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸残基１〜９からなるＣＤＲ３を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む抗ＤＲ５抗体であるリガンドユニットであり；および
（ＬＵ−Ｄ）は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで、
ＬＵは、リンカーユニットであり、および
Ｄは、薬物ユニットであり、ここで、該薬物ユニットは、オーリスタチンであり；および
下付き文字ｐは、１〜２０の整数である）またはその薬学的に許容され得る塩を有するリガンド薬物コンジュゲート。
【請求項２】
前記オーリスタチンが、オーリスタチンＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦまたはＭＭＡＥである、請求項１に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
【請求項３】
式：
【化４６】
2015516401.tif 000059
（式中、
Ｓは、前記リガンドユニットの硫黄原子であり；
各Ｗは独立して、アミノ酸ユニットであり；
下付き文字ｗは、０〜１２の整数であり；
Ｙは、スペーサーユニットであり；および
下付き文字ｙは、０、１または２である）またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する、請求項１に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
【請求項４】
Ｗｗがバリン−シトルリンである、請求項３に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
【請求項５】
式：
【化４７】
2015516401.tif 000060
（式中、
ｍＡｂは、抗ＤＲ５抗体であり；
Ｓは、該抗体の硫黄原子であり；および
ｐは、１〜８の整数である）またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する、請求項１に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
【請求項６】
前記抗ＤＲ５抗体が、配列番号９のアミノ酸残基１〜１２２を含む重鎖可変領域と、配列番号１０のアミノ酸残基１〜１１４を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
【請求項７】
前記抗ＤＲ５抗体が、配列番号９のアミノ残基１〜４５２からなる重鎖と、配列番号１０のアミノ酸残基１〜２１９からなる軽鎖とを含む、請求項１に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
【請求項８】
前記抗ＤＲ５抗体が、配列番号９のアミノ残基１〜４５１からなる重鎖と、配列番号１０のアミノ酸残基１〜２１９からなる軽鎖とを含む、請求項１に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
【請求項９】
ｐが１〜８である、請求項１に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
【請求項１０】
薬学的に許容され得る賦形剤と混合された請求項１〜９のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲートを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
平均ｐ値が１〜２０である請求項１〜９のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲートの混合物を含む、組成物。
【請求項１２】
前記平均ｐ値が約３．５〜約４．５である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲートを有効成分として含む、抗腫瘍剤。
【請求項１４】
ＤＲ５タンパク質を発現する癌を処置する方法であって、有効量の請求項１〜９のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲートを、癌の処置を必要とする被験体に投与することを含む、方法。
【請求項１５】
ＤＲ５タンパク質を発現する前記癌が、メラノーマ、結腸直腸癌、非小細胞肺癌腫、子宮癌、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌および血液癌からなる群より選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＤＲ５タンパク質を発現する前記癌が膵臓癌である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＤＲ５タンパク質を発現する前記癌がメラノーマである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
ＤＲ５タンパク質を発現する前記癌が乳癌である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
ＤＲ５タンパク質を発現する前記癌が卵巣癌である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
ＤＲ５タンパク質を発現する前記癌が結腸直腸癌である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
ＤＲ５タンパク質を発現する前記癌が腎臓癌である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
ＤＲ５タンパク質を発現する前記癌が膠芽腫である、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１２年４月２４日に出願された米国仮特許出願第６１／６３７，８０８号の優先権の利益を主張し、この出願の内容は本明細書においてその全体がすべての目的のために参照として援用される。
【０００２】
連邦支援の研究および開発の下でなされた発明に対する権利についての陳述
適用なし。
【０００３】
ＡＳＣＩＩテキストファイルとして提出された「配列表」、表またはコンピュータープログラムリストの添付物についての言及
ファイル（−７５−１ＰＣ．ＴＸＴ、２０１３年４月２２日作成、２０，４８０バイト、マシンフォーマットＩＢＭ−ＰＣ、ＭＳ−Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）オペレーティングシステム）に記載されている配列表は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
アポトーシス誘導に関与する細胞表面受容体（例えば、デスドメイン含有受容体）は、リガンド結合により細胞膜上でマルチマー化し、細胞におけるアポトーシスシグナルの誘導を生物学的に引き起こす（Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，１０：６６−７５（２００３））。このような細胞表面受容体の例としては、腫瘍壊死因子（本明細書では以下、ＴＮＦと称される）関連アポトーシス誘導リガンド（本明細書では以下、ＴＲＡＩＬと称される）受容体ファミリーが挙げられる。ＴＲＡＩＬは、ＦａｓリガンドおよびＴＮＦ−αを含むＴＮＦタンパク質ファミリーのメンバーである（Ｗｉｌｅｙ  ＳＲら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９５  Ｄｅｃ；３（６）：６７３−８２）。これらのタンパク質は、強力なアポトーシス誘導因子である。
【０００５】
ＴＮＦタンパク質ファミリーの受容体は、細胞外ドメインにおけるシステインリッチ反復配列を特徴とする。これらの中で、Ｆａｓリガンドの受容体であるＦａｓ、およびＴＮＦ−αの受容体であるＴＮＦ受容体Ｉ（本明細書では以下、ＴＮＦＲＩと称される）は、デスドメイン含有受容体と総称される。これらの受容体はアポトーシスシグナル伝達に必須の細胞内ドメインを有しており、これはデスドメインと称され、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ自殺遺伝子であるｒｅａｐｅｒに相同である（Ｇｏｌｓｔｅｉｎ，Ｐ．ら、（１９９５）Ｃｅｌｌ．８１，１８５−１８６，Ｗｈｉｔｅ，Ｋら、（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４，６７７−６８３）。
【０００６】
５個のＴＲＡＩＬ受容体が同定されており、それらのうちの２個（ＤＲ４［ＴＲＡＩＬ−Ｒ１］およびＤＲ５［ＴＲＡＩＬ−Ｒ２］）はアポトーシスシグナル伝達を誘導し得るが、他の３個（ＤｃＲ１［ＴＲＡＩＬ−Ｒ３］、ＤｃＲ２［ＴＲＡＩＬ−Ｒ４］、およびオステオプロテゲリン［ＯＰＧ］）はアポトーシスシグナル伝達を誘導しない。ＦａｓおよびＴＮＦＲＩのように、ＤＲ４およびＤＲ５の両方の細胞内セグメントはデスドメインを含有し、Ｆａｓ関連デスドメインタンパク質（本明細書では以下、ＦＡＤＤと称される）およびカスパーゼ−８を含む経路によって、アポトーシスシグナル伝達を誘導する（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ＰＭら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７  Ｄｅｃ；７（６）：８２１−３０；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  Ｐら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７  Ｄｅｃ；７（６）：８３１−３６）。
【０００７】
上記Ｆａｓ、ＴＮＦＲＩ、ＤＲ４、およびＤＲ５に関して、これらの分子に対してそれぞれ結合するアゴニスト抗体は、表面上に標的分子を有する細胞に対してアポトーシス誘導活性を有する（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０９：１０２１−１０２８（２００６）；Ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ａｐｌ；２１（４）：８０５−８１２（２００７）；Ｂｌｏｏｄ，９９：１６６６−１６７５（２００２）；Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊａｎ；１５３（１）：１８４−１９３（１９９４））。これらのアゴニスト抗体の有効性は、二次抗体またはエフェクター細胞との架橋によって増強される（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４９：３１６６−３１７３（１９９２）；Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔ；２３（１０）：２６７６−２６８１（１９９３））。
【０００８】
アポトーシス誘導に関与する細胞表面受容体に結合する能力を有する抗ＤＲ５抗体は、現在、治療剤として臨床開発中であり、治療効果を示し、受容体を発現する細胞（癌細胞および免疫疾患関連細胞）を特異的かつ作動的に死滅させることが期待されている。この抗体の作用機構は、抗体分子を一緒に架橋して、抗体が受容体に結合する前または後にマルチマーを形成することによって媒介されると提唱されている。続いて、抗体のこのようなマルチマー化は、抗原受容体のマルチマー化（すなわち、アポトーシス誘導）を引き起こす。インビトロ実験では、抗体に対する二次抗体の追加による人工的な架橋が、抗体の活性を増強するのに必要とされ、インビボでは、免疫エフェクター細胞上のＦｃ受容体による架橋が、抗体の活性を生じさせるのに必要な作用機構であるようである。近年、抗体の構造を変化させることによって、抗体の元の機能をさらに増強しようとする試みがなされている。例えば、抗体上の特定の炭水化物構造を除去することにより、Ｆｃ受容体に対する親和性が改善されることが報告されている。このような作用機構は、細胞表面受容体に対する非インターナリゼーション抗体が好ましいことを示唆している。
しかしながら、ＤＲ５発現癌を処置する方法が依然として必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，１０：６６−７５（２００３）
【非特許文献２】Ｗｉｌｅｙ  ＳＲら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９５  Ｄｅｃ；３（６）：６７３−８２
【非特許文献３】Ｇｏｌｓｔｅｉｎ，Ｐ．ら、（１９９５）Ｃｅｌｌ．８１，１８５−１８６
【非特許文献４】Ｗｈｉｔｅ，Ｋら、（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４，６７７−６８３
【非特許文献５】Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ＰＭら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７  Ｄｅｃ；７（６）：８２１−３０
【非特許文献６】Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  Ｐら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７  Ｄｅｃ；７（６）：８３１−３６
【非特許文献７】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０９：１０２１−１０２８（２００６）
【非特許文献８】Ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ａｐｌ；２１（４）：８０５−８１２（２００７）
【非特許文献９】Ｂｌｏｏｄ，９９：１６６６−１６７５（２００２）
【非特許文献１０】Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊａｎ；１５３（１）：１８４−１９３（１９９４）
【非特許文献１１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４９：３１６６−３１７３（１９９２）
【非特許文献１２】Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔ；２３（１０）：２６７６−２６８１（１９９３）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の概要
本発明は、とりわけ、薬物をＤＲ５発現細胞に標的化送達するためのリガンド薬物コンジュゲートを提供する。本発明者らは広範囲な研究を行ったところ、細胞においてアポトーシスを誘導し得る抗体を含有する抗体−薬物コンジュゲートが、このような抗体単独よりも有意な癌治療効果を有することを見出した。本発明にしたがって抗体−薬物コンジュゲートを使用することによって、抗体それ自体がアポトーシス誘導効果を示し、抗体にコンジュゲートした薬物も治療効果を示す。これらの理由で、抗体−薬物コンジュゲートは、抗体単独では有効に処置できない患者に対して有効な治療効果を有する。本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートは、ＤＲ５を発現する細胞（例えば、ＤＲ５発現癌細胞）に対する強力な細胞傷害活性および／または細胞増殖抑制活性を有する。いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ        （Ｉ）
（式中、Ｌは、リガンドユニットであり、ＬＵは、リンカーユニットであり、Ｄは、薬物ユニット（または細胞傷害剤）である）を有する。下付き文字ｐは、１〜２０の整数である。したがって、リガンド薬物コンジュゲートは、少なくとも１個の薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。薬物ユニットは、直接的に、またはリンカーユニット（−ＬＵ−）を介して共有結合され得る。以下により詳細に記載されるリガンドユニットは、ＤＲ５結合剤（例えば、抗ＤＲ５抗体）である。したがって、本発明はまた、例えば、様々な癌の処置のための方法を提供する。これらの方法は、リガンドユニットが、ＤＲ５に特異的に結合する抗ＤＲ５結合剤であるリガンド薬物コンジュゲートの使用を包含する。ＤＲ５結合剤は、例えば、抗ＤＲ５抗体、抗ＤＲ５抗原結合断片、またはヒト化抗体重鎖および／もしくは軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む他のＤＲ５結合剤、またはそれらの誘導体であり得る。
【００１１】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、細胞傷害剤に共有結合したＤＲ５結合剤を含む。いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、ＤＲ５を発現する標的細胞に対する特異性を有する式：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ        （Ｉ）
（式中、
Ｌは、ＤＲ５結合剤であるリガンドユニットであり；および
（ＬＵ−Ｄ）は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで、ＬＵは、リンカーユニットであり、Ｄは、前記標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり；および
下付き文字ｐは、１〜２０の整数である）またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
【００１２】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）を有するリガンド薬物コンジュゲートは、式ＤＥまたはＤＦ：
【化１】
2015516401.tif 000003
（式中、各位置で独立して、
波線は、リガンド薬物コンジュゲートの残りの部分に対する結合点を示し；
Ｒ２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
Ｒ４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
Ｒ５は、−Ｈまたは−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
またはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｓ−（式中、ＲａおよびＲｂは独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルまたは−炭素環であり、ｓは、２、３、４、５または６である）を有し；
Ｒ６は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ７は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
各Ｒ８は独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルキニル）または−炭素環であり；
Ｒ９は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１９は、−アリール、−複素環または−炭素環であり；
Ｒ２０は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−炭素環、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルキニル）またはＯＲ１８であり、ここで、Ｒ１８は、−Ｈ、ヒドロキシル保護基であるか、またはＯＲ１８が＝Ｏを表す場合には直接結合であり；
Ｒ２１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環または−炭素環であり；
Ｒ１０は、−アリールまたは−複素環であり；
Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−ＮＲ１２−であり、ここで、Ｒ１２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり；
ｍは、０〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３は、−Ｃ２−Ｃ２０アルキレン、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレンまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレンであり；
Ｒ１４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
出現する各Ｒ１５は独立して、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
出現する各Ｒ１６は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；および
ｎは、０〜６の範囲の整数であり；ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン（ａｌｋｙｎｙｋｌｅｎｅ）、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）および複素環原子団（ｒａｄｉｃａｌ）は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される）を有する薬物ユニットまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式ＤＥまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＤＥである。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＤＦである。いくつかの実施形態では、
【００１４】
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式：を有する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式：
【化２】
2015516401.tif 000004
またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有し；ＤＲ５結合剤は、抗体の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合した抗ＤＲ５抗体であり；リンカーユニットは、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−部分を含み；下付き文字ｐは、１〜８の整数である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式：
【化３】
2015516401.tif 000005
またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有し；ＤＲ５結合剤は、抗体の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合した抗ＤＲ５抗体であり；リンカーユニットは、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−部分を含み；下付き文字ｐは、１〜８の整数である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式：
【化４】
2015516401.tif 000006
またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有し；ＤＲ５結合剤は、抗体の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合した抗ＤＲ５抗体であり；リンカーユニットは、−スクシンイミド−カプロン酸部分を含み；下付き文字ｐは、１〜８の整数である。
【００１８】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）を有するリガンド薬物コンジュゲートは、式：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−
（式中、
−Ａ−は、ストレッチャーユニットであり；
下付き文字ａは、０または１であり；
各Ｗは独立して、アミノ酸ユニットであり；
下付き文字ｗは、０〜１２の整数であり；
−Ｙ−は、スペーサーユニットであり；および
下付き文字ｙは、０、１または２である）を有するＬＵまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、式−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−を有するＬＵを含むリガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化５】
2015516401.tif 000007
（式中、
Ｒ１７は、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）−、Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニレン）−、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニレン）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−アリーレン、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−アリーレン、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（カルボシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（カルボシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（カルボシクロ）、−（カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン、ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（ヘテロシクロ）−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−からなる群より選択されるメンバーであり、ここで、ｒは、１〜１０の整数であり、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン（ａｌｋｙｎｙｋｌｅｎｅ）、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）、カルボシクロ、ヘテロシクロおよびアリーレン原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される）またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、式−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−を有するＬＵを含むリガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化６】
2015516401.tif 000008
（式中、Ｓは、リガンドユニット（Ｌ）によって提供される硫黄原子である）またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、式−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−を有するＬＵを含むリガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化７】
2015516401.tif 000009
（式中、Ｓは、リガンドユニット（Ｌ）によって提供される硫黄原子である）またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、式−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−を有するＬＵを含むリガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化８】
2015516401.tif 000010
またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
【００２３】
いくつかの実施形態では、式−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−を有するＬＵを含むリガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化９】
2015516401.tif 000011
またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
【００２４】
いくつかの実施形態では、式−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−を有するＬＵを含むリガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化１０】
2015516401.tif 000012
またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、式−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−を有するＬＵを含むリガンド薬物コンジュゲートについて、ｗは、２〜１２の範囲の整数であり、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態では、ｗは、２であり、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態では、Ｗｗは、−バリン−シトルリン−であり、ｙは、１または２である。
【００２６】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式（Ｉ）（式中、Ｌは、抗ＤＲ５抗体である）の式を有する。いくつかの実施形態では、抗ＤＲ５抗体は、（ａ）配列番号１１のアミノ残基（ａｍｉｎｏ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ）１〜５からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸残基１〜１７からなるＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸残基１〜１３からなるＣＤＲ３を有する重鎖免疫グロブリンと；（ｂ）配列番号１４のアミノ残基１〜１６からなるＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸残基１〜７からなるＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸残基１〜９からなるＣＤＲ３を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、ＤＲ５を発現する標的細胞に対する特異性を有する式：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ        （Ｉ）
（式中、
Ｌは、（ａ）配列番号１１のアミノ残基１〜５からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸残基１〜１７からなるＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸残基１〜１３からなるＣＤＲ３を有する重鎖免疫グロブリンと；（ｂ）配列番号１４のアミノ残基１〜１６からなるＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸残基１〜７からなるＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸残基１〜９からなるＣＤＲ３を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む抗ＤＲ５抗体であるリガンドユニットであり；および
（ＬＵ−Ｄ）は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで、ＬＵは、リンカーユニットであり、Ｄは、薬物ユニットであり、ここで、該薬物ユニットは、オーリスタチンであり；および
下付き文字ｐは、１〜２０の整数である）またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
【００２８】
いくつかの実施形態では、オーリスタチンは、オーリスタチンＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦまたはＭＭＡＥである。いくつかの実施形態では、オーリスタチンは、ＭＭＡＦである。いくつかの実施形態では、オーリスタチンは、ＭＭＡＥである。
【００２９】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化１１】
2015516401.tif 000013
（式中、
Ｌは、（ａ）配列番号１１のアミノ残基１〜５からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸残基１〜１７からなるＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸残基１〜１３からなるＣＤＲ３を有する重鎖免疫グロブリンと；（ｂ）配列番号１４のアミノ残基１〜１６からなるＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸残基１〜７からなるＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸残基１〜９からなるＣＤＲ３を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む抗ＤＲ５抗体であるリガンドユニットであり；
Ｓは、該リガンドユニットの硫黄原子であり；
各Ｗは独立して、アミノ酸ユニットであり；
下付き文字ｗは、０〜１２の整数であり；
Ｙは、スペーサーユニットであり；および
下付き文字ｙは、０、１または２である）またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、Ｗｗは、バリン−シトルリンである。いくつかの実施形態では、アミノ酸ユニットは存在しない。いくつかの実施形態では、スペーサーユニットは存在しない。
【００３１】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、１〜２０のｐ値を有する。いくつかの実施形態では、ｐ値は、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０である。いくつかの実施形態では、ｐ値は、１〜８である。いくつかの実施形態では、ｐ値は、２〜８である。いくつかの実施形態では、ｐ値は、２、４、６または８である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、抗ＤＲ５抗体は、配列番号９のアミノ酸残基１〜１２２を含む重鎖可変領域と、配列番号１０のアミノ酸残基１〜１１４を含む軽鎖可変領域とを含む。
【００３３】
いくつかの実施形態では、抗ＤＲ５抗体は、配列番号９のアミノ残基１〜４５２からなる重鎖と、配列番号１０のアミノ酸残基１〜２１９からなる軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗ＤＲ５抗体は、配列番号９のアミノ残基１〜４５１からなる重鎖と、配列番号１０のアミノ酸残基１〜２１９からなる軽鎖とを含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化１２】
2015516401.tif 000014
（式中、ｍＡｂは、本明細書に記載される抗ＤＲ５抗体であり、Ｓは、該抗体の硫黄原子であり、ｐは、１〜８の整数である）またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。いくつかの実施形態では、ｐは、３〜５である。いくつかの実施形態では、ｐは、１〜３である。
【００３５】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化１３】
2015516401.tif 000015
（式中、ｍＡｂは、本明細書に記載される抗ＤＲ５抗体であり、Ｓは、該抗体の硫黄原子であり、ｐは、１〜８の整数である）またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。いくつかの実施形態では、ｐは、３〜５である。いくつかの実施形態では、ｐは、１〜３である。
【００３６】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式：
【化１４】
2015516401.tif 000016
（式中、ｍＡｂは、本明細書に記載される抗ＤＲ５抗体であり、Ｓは、該抗体の硫黄原子であり、ｐは、１〜８の整数である）またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。いくつかの実施形態では、ｐは、３〜５である。いくつかの実施形態では、ｐは、１〜３である。
【００３７】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートの混合物を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、１〜２０の平均ｐ値を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、１〜１０の平均ｐ値を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、約３．５〜約４．５の平均ｐ値を有する。
【００３８】
別の態様では、本発明は、薬学的に許容され得る賦形剤と混合された本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。
【００３９】
さらに別の態様では、本発明は、本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートを有効成分として含む抗腫瘍剤を提供する。
【００４０】
さらに別の態様では、本発明は、ＤＲ５タンパク質を発現するかまたはＤＲ５陽性癌である癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、有効量の本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートを、それを必要とする被験体に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＤＲ５陽性またはＤＲ５発現癌は、メラノーマ、膠芽腫、結腸直腸癌、非小細胞肺癌腫、子宮癌、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌および血液癌からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、癌は、膵臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は、メラノーマである。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は、卵巣癌である。いくつかの実施形態では、癌は、結腸直腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、腎臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は、膠芽腫である。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図２】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図３】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図４】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図５】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図６】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図７】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図８】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図９】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図１０】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図１１】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【図１２】図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を提供する。
【００４２】
【図１３】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図１４】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図１５】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図１６】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図１７】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図１８】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図１９】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図２０】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図２１】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図２２】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【図２３】図１３〜２３は、本発明のリガンド薬物コンジュゲートのインビボ結果を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
発明の詳細な説明
定義および略語
商標名が本明細書で使用される場合、商標名についての言及は、特に文脈上示されない限り、商標製品の製品製剤、ジェネリック薬、および活性薬剤成分を指す。
【００４４】
用語「ＤＲ５結合剤」および「抗ＤＲ５結合剤」は、本明細書で使用される場合、ＤＲ５に特異的に結合する分子（例えば、タンパク質）を指す。例としては、全長抗ＤＲ５抗体、全長抗ＤＲ５抗体の断片、または抗体重鎖および／もしくは軽鎖可変領域を含む他の作用物質、ならびにそれらの誘導体が挙げられ得る。
【００４５】
用語「阻害する」または「の阻害」は、本明細書で使用される場合、測定可能な量だけ減少させるか、または完全に妨げることを意味する。
【００４６】
用語「激減させる」は、ＤＲ５発現細胞に対するＤＲ５結合剤の効果との関連では、ＤＲ５発現細胞の数の減少またはＤＲ５発現細胞の排除を指す。
【００４７】
用語「化合物」は、化学化合物それ自体を指しかつこれを包含し、明示されているか否かにかかわらず、以下のものが除外されることが文脈上明らかではない限り、以下のものを指しかつこれを包含する：化合物の非晶形および結晶形、例えば多形体（この場合、これらの形態は混合物の一部でもよいし、または単離された状態でもよい）；化合物の遊離酸または遊離塩基形態（これは、典型的には、本明細書で提供される構造で示される形態である）；化合物の異性体（これは、光学異性体および互変異性体を指し、この場合、光学異性体としては、エナンチオマーおよびジアステレオマー、キラル異性体および非キラル異性体が挙げられ、光学異性体としては、単離された光学異性体および光学異性体の混合物、例えばラセミ混合物および非ラセミ混合物が挙げられる）；この場合、異性体は単離された形態でもよいし、または１つ以上の他の異性体との混合物でもよい；化合物の同位体、例えばジュウテリウムおよびトリチウム含有化合物、ならびに例えば放射性同位体（例えば、治療上および診断上有効な放射性同位体）含有化合物；化合物のマルチマー形態、例えばダイマー形態、トリマー形態など；化合物の塩、好ましくは薬学的に許容され得る塩、例えば酸付加塩および塩基付加塩、例えば有機対イオンおよび無機対イオンを有する塩、および例えば双極性イオン形態（この場合、化合物が２つ以上の対イオンと会合する場合には２つ以上の対イオンは同じものでもよいし、または異なるものでもよい）；ならびに化合物の溶媒和物、例えば半溶媒和物、一溶媒和物、二溶媒和物など、例えば有機溶媒和物および無機溶媒和物、水和物を含む前記無機溶媒和物（この場合、化合物が２つ以上の溶媒分子と会合する場合には２つ以上の溶媒分子は同じものでもよいし、または異なるものでもよい）。いくつかの場合において、本発明の化合物についての本明細書でなされる言及は、上記形態（例えば、塩および／または溶媒和物）のうちの１つ以上についての明確な言及を含むが、この言及は強調のためのものに過ぎず、上で特定した上記形態の他のものを排除すると解釈されるべきではない。
【００４８】
特に注記がない限り、用語「アルキル」は、約１〜約２０個の炭素原子（ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ）、好ましくは約１〜約８個の炭素原子を有する飽和直鎖状または分枝状炭化水素を指す。アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、２−メチル−２−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、３−メチル−２−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−１−ブチル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、３−メチル−３−ペンチル、２−メチル−３−ペンチル、２，３−ジメチル−２−ブチルおよび３，３−ジメチル−２−ブチルである。本明細書における構造では、当技術分野における従来のプラクティスにしたがって、標識のない結合をメチル基であるとする。
【００４９】
アルキル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、「置換された」と言及され得る。置換されたアルキル基は、１個以上の基、好ましくは１〜３個の基（およびハロゲンから選択される任意のさらなる置換基）、例えば限定されないが、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、＝Ｏ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮで置換されたアルキル基であり、ここで、各Ｒ’は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたは−アリールから選択され、前記−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルおよび−Ｃ２−Ｃ８アルキニル基は、１個以上の基、例えば限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各Ｒ”は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたは−アリールから選択される。
【００５０】
特に注記がない限り、用語「アルケニル」および「アルキニル」は、約２〜約２０個の炭素原子（ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ）、好ましくは約２〜約８個の炭素原子を有する直鎖状および分枝状炭素鎖を指す。アルケニル鎖は、鎖の中に少なくとも１個の二重結合を有し、アルキニル鎖は、鎖の中に少なくとも１個の三重結合を有する。アルケニル基の例としては、限定されないが、エチレンまたはビニル、アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニルおよび−２，３−ジメチル−２−ブテニルが挙げられる。アルキニル基の例としては、限定されないが、アセチレン（ａｃｅｔｙｌｅｎｉｃ）、プロパルギル、アセチレニル、プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニルおよび−３−メチル−１ブチニルが挙げられる。
【００５１】
アルキル基と同様に、アルケニルおよびアルキニル基は、置換されていてもよい。「置換された」アルケニルまたはアルキニル基は、１個以上の基、好ましくは１〜３個の基（およびハロゲンから選択される任意のさらなる置換基）、例えば限定されないが、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、＝Ｏ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮで置換されたものであり、ここで、各Ｒ’は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル（ａｌｋｙｅｎｌ）、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたはアリールから選択され、前記−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルおよび−Ｃ２−Ｃ８アルキニル基は、１個以上の置換基、例えば限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）（−Ｏ−（Ｃ２Ｃ８  ａｌｋｙｎｙｌ））、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各Ｒ”は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたは−アリールから選択される。
【００５２】
特に注記がない限り、用語「アルキレン」は、約１〜約２０個の炭素原子（ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ）、好ましくは約１〜約８個の炭素原子を有し、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって生じる２個の一価原子団中心を有する飽和分枝状または直鎖状炭化水素原子団を指す。典型的なアルキレンとしては、限定されないが、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、デカレンおよび１，４−シクロヘキシレンなどが挙げられる。アルキレン基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、１個以上の基、好ましくは１〜３個の基（およびハロゲンから選択される任意のさらなる基）、例えば限定されないが、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、＝Ｏ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮで場合により置換されていてもよく、ここで、各Ｒ’は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたは−アリールから選択され、前記−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルおよび−Ｃ２−Ｃ８アルキニル基は、１個以上の置換基、例えば限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、―ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各Ｒ”は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたは−アリールから選択される。
【００５３】
特に注記がない限り、用語「アルケニレン」は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含有する場合により置換されたアルキレン基を指す。例示的なアルケニレン基としては、例えば、エテニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）およびプロペニレン（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−）が挙げられる。
【００５４】
特に注記がない限り、用語「アルキニレン」は、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を含有する場合により置換されたアルキレン基を指す。例示的なアルキニレン基としては、例えば、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）および４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ−）が挙げられる。
【００５５】
特に注記がない限り、用語「アリール」は、親芳香族環系の単一の炭素原子から１個の炭素原子を除去することによって生じる６〜２０個の炭素原子（ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ）の一価芳香族炭化水素原子団を指す。いくつかのアリール基は、例示的な構造中で「Ａｒ」として表される。典型的なアリール基としては、限定されないが、ベンゼン、置換されたベンゼン、フェニル、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルなどから生じる原子団が挙げられる。
【００５６】
アリール基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、１個以上、好ましくは１〜５個またはさらに１〜２個の基、例えば限定されないが、−ハロゲン、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮで場合により置換されていてもよく、ここで、各Ｒ’は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたはアリールから選択され、前記−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）および−アリール基は、１個以上の置換基、例えば限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各Ｒ”は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたは−アリールから選択される。
【００５７】
特に注記がない限り、用語「アリーレン」は、二価の（すなわち、親芳香族環系の同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって生じる）場合により置換されたアリール基であって、例示的なアリール基としてフェニルを用いて以下の構造：
【化１５】
2015516401.tif 000017
（式中、アリール基（例えば、フェニル基）は置換されていなくてもよいし、または置換されていてもよい）において示されるように、オルト、メタまたはパラの配置をとり得る場合により置換されたアリール基を指す。いくつかの実施形態では、アリーレンは、限定されないが、最大４個の基、例えば限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮで置換された置換アリーレンであり；ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。
【００５８】
特に注記がない限り、用語「複素環」は、３〜１４個の環原子（環員とも称される）を有する単環式、二環式または多環式環系であって、少なくとも１個の環の中の少なくとも１個の環原子が、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳから選択されるヘテロ原子（ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子およびヘテロ原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ）である単環式、二環式または多環式環系を指す。複素環は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳから独立して選択される１〜４個の環ヘテロ原子を有し得る。複素環の中の１個以上のＮ、ＣまたはＳ原子は、酸化され得る。単環式複素環は、好ましくは、３〜７個の環員（例えば、２〜６個の炭素原子およびＮ、Ｏ、ＰまたはＳから独立して選択される１〜３個のヘテロ原子）を有し、二環式複素環は、好ましくは、５〜１０個の環員（例えば、４〜９個の炭素原子およびＮ、Ｏ、ＰまたはＳから独立して選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する。ヘテロ原子を含む環は芳香族でもよいし、または非芳香族でもよい。特に注記がない限り、複素環は、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子または炭素原子においてそのペンダント基に結合している。
【００５９】
複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に第１章、第３章、第４章、第６章、第７章および第９章；“Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０〜最新版）、特に、第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻および第２８巻；ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８２：５５６６（１９６０）に記載されている。
【００６０】
特に注記がない限り、用語「ヘテロシクロ」は、二価の（すなわち、親複素環式環系の同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって生じる）上で定義した場合により置換された複素環基を指す。
【００６１】
「複素環」基の例としては、例えば限定されないが、ピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４Ｈ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、オキシインドリル、ベンゾオキサゾリニルおよびイサチノイルが挙げられる。好ましい「複素環」基としては、限定されないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリルおよびテトラゾリルが挙げられる。
【００６２】
複素環基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、１個以上の基、好ましくは１〜２個の基、例えば限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮで場合により置換されていてもよく、ここで、各Ｒ’は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたは−アリールから選択され、前記−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルおよび−アリール基は、１個以上の置換基、例えば限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各Ｒ”は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたはアリールから選択される。
【００６３】
例として、限定されないが、炭素結合複素環は、以下の位置で結合され得る：ピリジンの２位、３位、４位、５位もしくは６位；ピリダジンの３位、４位、５位もしくは６位；ピリミジンの２位、４位、５位もしくは６位；ピラジンの２位、３位、５位もしくは６位；フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールもしくはテトラヒドロピロールの２位、３位、４位もしくは５位；オキサゾール、イミダゾールもしくはチアゾールの２位、４位もしくは５位；イソオキサゾール、ピラゾールもしくはイソチアゾールの３位、４位もしくは５位；アジリジンの２位もしくは３位；アゼチジンの２位、３位もしくは４位；キノリンの２位、３位、４位、５位、６位、７位もしくは８位；またはイソキノリンの１位、３位、４位、５位、６位、７位もしくは８位。さらにより典型的には、炭素結合複素環としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリルまたは５−チアゾリルが挙げられる。
【００６４】
例として、限定されないが、窒素結合複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリンまたは１Ｈ−インダゾールの１位；イソインドールまたはイソインドリンの２位；モルホリンの４位；およびカルバゾールまたはβ−カルボリンの９位で結合され得る。さらにより典型的には、窒素結合複素環としては、１−アジリジル、１−アゼテジル、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリルおよび１−ピペリジニルが挙げられる。
【００６５】
特に注記がない限り、用語「炭素環」は、３〜１４個の環原子（ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ）を有し、環原子のすべてが炭素原子である飽和または不飽和非芳香族単環式、二環式または多環式環系を指す。単環式炭素環は、好ましくは、３〜６個の環原子、さらにより好ましくは５個または６個の環原子を有する。二環式炭素環は、好ましくは、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］もしくは［６，６］系として配置される７〜１２個の環原子、またはビシクロ［５，６］もしくは［６，６］系として配置される９個もしくは１０個の環原子を有する。用語「炭素環」は、例えば、アリール環に縮合された単環式炭素環（例えば、ベンゼン環に縮合された単環式炭素環）を含む。炭素環は、好ましくは、３〜８個の炭素環原子を有する。
【００６６】
炭素環基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、例えば、１個以上の基、好ましくは１個または２個の基（およびハロゲンから選択される任意のさらなる置換基）、例えば限定されないが、−ハロゲン、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、＝Ｏ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮで場合により置換されていてもよく、ここで、各Ｒ’は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたは−アリールから選択され、前記−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）および−アリール基は、１個以上の置換基、例えば限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各Ｒ”は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニルまたは−アリールから選択される。
【００６７】
単環式炭素環置換基の例としては、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−１−シクロペンタ−１−エニル、−１−シクロペンタ−２−エニル、−１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、−１−シクロヘキサ−１−エニル、−１−シクロヘキサ−２−エニル、−１−シクロヘキサ−３−エニル、−シクロヘプチル、−シクロオクチル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニルおよび−シクロオクタジエニルが挙げられる。
【００６８】
「カルボシクロ」は、単独でまたは別の基の一部として使用されるかにかかわらず、二価の（すなわち、親炭素環式環系の同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって生じる）上で定義した場合により置換された炭素環基を指す。
【００６９】
特に文脈上示されない限り、ハイフン（−）は、ペンダント分子への結合点を示す。したがって、用語「−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）アリール」または「−Ｃ１−Ｃ８アルキレン（アリール）」は、本明細書で定義されるＣ１−Ｃ８アルキレン原子団であって、アルキレン原子団が、アルキレン原子団の炭素原子のいずれかにおいてペンダント分子に結合しており、アルキレン原子団の炭素原子に結合した水素原子の１個が、本明細書で定義されるアリール原子団で置き換えられたものを指す。典型的な「−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）アリール」、「−（Ｃ２−Ｃ８アルケニレン）アリール」および「−（Ｃ２−Ｃ８アルキニレン）アリール」基としては、限定されないが、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどが挙げられる。
【００７０】
特定の基が「置換されている」場合、その基は、置換基のリストから独立して選択される１個以上の置換基、好ましくは１〜５個の置換基、より好ましくは１〜３個の置換基、最も好ましくは１〜２個の置換基を有し得る。しかしながら、基は、一般に、ハロゲンから選択される任意の数の置換基を有し得る。置換される基は、そのように示される。
【００７１】
ある分子の特定の位置における任意の置換基または変数の定義は、その分子における他の場所におけるその定義とは無関係であることが意図される。当業者であれば、化学的に安定であり、当技術分野で公知の技術ならびに本明細書に記載される方法によって容易に合成され得る化合物を提供するために、本発明の化合物上の置換基および置換パターンを選択し得ると理解される。
【００７２】
保護基は、本明細書で使用される場合、多官能性化合物における１つの反応性部位を、一時的にまたは永久に、選択的に遮断する基を指す。本発明に使用するのに適切なヒドロキシ保護基は薬学的に許容され得るものであり、化合物が活性であるためには被験体への投与後に親化合物から切断される必要があるものでもよいし、またはその必要がないものでもよい。切断は、体内の通常の代謝プロセスを介するものである。ヒドロキシ保護基は、当技術分野で周知であり（ＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥ  ＧＲＯＵＰＳ  ＩＮ  ＯＲＧＡＮＩＣ  ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ  ｂｙ  Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆ｓｏｎｓ，３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ）（これは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、例えば、エーテル（例えば、アルキルエーテルおよびシリルエーテル（例えば、ジアルキルシリルエーテル、トリアルキルシリルエーテル、ジアルキルアルコキシシリルエーテル））、エステル、カーボネート、カルバメート、スルホネートおよびホスフェート保護基が挙げられる。ヒドロキシ保護基の例としては、限定されないが、メチルエーテル；メトキシメチルエーテル、メチルチオメチルエーテル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−ニトロベンジルオキシメチルエーテル、ｏ−ニトロベンジルオキシメチルエーテル、（４−メトキシフェノキシ）メチルエーテル、グアヤコールメチルエーテル、ｔ−ブトキシメチルエーテル、４−ペンテニルオキシメチルエーテル、シロキシメチルエーテル、２−メトキシエトキシメチルエーテル、２，２，２−トリクロロエトキシメチルエーテル、ビス（２−クロロエトキシ）メチルエーテル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルエーテル、メトキシ（ｍｅｎｔｈｏｘｙ）メチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、１−メトキシシクロヘキシルエーテル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルエーテル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルエーテルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ（ｃｈｏｒｏ）−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イルエーテル、１−（２−フルオロフェニル（ｆｌｕｏｒｏｐｈｎｅｙｌ））−４−メトキシピペリジン−４−イルエーテル、１，４−ジオキサン−２−イルエーテル、テトラヒドロフラニルエーテル、テトラヒドロチオフラニルエーテル；置換されたエチルエーテル、例えば、１−エトキシエチルエーテル、１−（２−クロロエトキシ）エチルエーテル、１−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］エチルエーテル、１−メチル−１−メトキシエチルエーテル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチルエーテル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチルエーテル、１−メチル−１フェノキシエチルエーテル、２−トリメチルシリルエーテル、ｔ−ブチルエーテル、アリルエーテル、プロパルギルエーテル、ｐ−クロロフェニルエーテル、ｐ−メトキシフェニルエーテル、ベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル、３，４−ジメトキシベンジルエーテル、トリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、トリプロピルシリルエーテル、ジメチルイソプロピルシリルエーテル、ジエチルイソプロピルシリルエーテル、ジメチルヘキシルシリルエーテル、ｔ−ブチルジメチルシリルエーテル、ジフェニルメチルシリルエーテル、ベンゾイルホルメートエステル、アセテートエステル、クロロアセテートエステル、ジクロロアセテートエステル、トリクロロアセテートエステル、トリフルオロアセテートエステル、メトキシアセテートエステル、トリフェニルメトキシアセテートエステル、フェニルアセテートエステル、ベンゾエートエステル、アルキルメチルカーボネート、アルキル９−フルオレニルメチルカーボネート、アルキルエチルカーボネート、アルキル２，２，２，−トリクロロエチルカーボネート、１，１，−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカーボネート、アルキルスルホネート、メタンスルホネート、ベンジルスルホネート、トシレート、メチレンアセタール、エチリデンアセタールおよびｔ−ブチルメチリデンケタールが挙げられる。好ましい保護基は、式−Ｒ、−Ｓｉ（Ｒ）（Ｒ）（Ｒ）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｒ）、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲ（式中、Ｒは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり、ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環および複素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される）によって表される。
【００７３】
略語「ＡＦＰ」は、ジメチルバリン−バリン−ドライソロイイン（ｄｏｌａｉｓｏｌｅｕｉｎｅ）−ドラプロイン（ｄｏｌａｐｒｏｉｎｅ）−フェニルアラニン−ｐ−フェニレンジアミンを指す（以下の式ＸＶＩＩＩを参照のこと）。
【００７４】
略語「ＭＭＡＥ」は、モノメチルオーリスタチンＥを指す（以下の式ＸＩＩＩを参照のこと）。
【００７５】
略語「ＡＥＢ」は、オーリスタチンＥと、パラアセチル安息香酸とを反応させることによって生成されるエステルを指す（以下の式ＸＸＩＩを参照のこと）。
【００７６】
略語「ＡＥＶＢ」は、オーリスタチンＥと、ベンゾイル吉草酸とを反応させることによって生成されるエステルを指す（以下の式ＸＸＩＩＩを参照のこと）。
【００７７】
略語「ＭＭＡＦ」は、ドバリン−バリン−ドライソロイイン−ドラプロイン−フェニルアラニンを指す（以下の式ＸＸＩを参照のこと）。
【００７８】
用語「薬学的に許容され得る」は、動物、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されていること、または米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されていることを意味する。用語「薬学的に適合性の成分」は、薬学的に許容され得る希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルであって、抗体または抗体誘導体と共に投与されるものを指す。
【００７９】
用語「動物」は、ヒト、非ヒト哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、シカなど）および非哺乳動物（例えば、トリなど）を指す。
【００８０】
全般
本明細書に記載される方法は、リガンドユニットが、ＤＲ５に特異的に結合する抗ＤＲ５結合剤であるリガンド薬物コンジュゲートの使用を包含する。ＤＲ５結合剤は、例えば、抗ＤＲ５抗体、抗ＤＲ５抗原結合断片、またはヒト化抗体重鎖および／もしくは軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む他のＤＲ５結合剤、またはそれらの誘導体であり得る。
【００８１】
リガンド薬物コンジュゲート
本発明は、とりわけ、薬物の標的化送達のためのリガンド薬物コンジュゲートを提供する。本発明者らは、リガンド薬物コンジュゲートが、ＤＲ５を発現する細胞に対する強力な細胞傷害活性および／または細胞増殖抑制活性を有することを発見した。リガンド薬物コンジュゲートは、少なくとも１個の薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。薬物ユニットは、直接的に、またはリンカーユニット（−ＬＵ−）を介して共有結合され得る。
【００８２】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、以下の式：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ        （Ｉ）
（式中、
Ｌは、リガンドユニット（すなわち、本発明のＤＲ５結合剤）であり、および
（ＬＵ−Ｄ）は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで：
ＬＵ−は、リンカーユニットであり、および
−Ｄは、標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり；および
ｐは、１〜２０である）またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
【００８３】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、１〜２０のｐ値（リガンド１個当たりの負荷される薬物ユニット数）を有する。いくつかの実施形態では、ｐは、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３または１〜２の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４または２〜３の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐ値は、２、４、６または８である。他の実施形態では、ｐは、１、２、３、４、５または６である。
【００８４】
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、以下の式：
Ｌ−（Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−Ｄ）ｐ        （ＩＩ）
（式中、
Ｌは、リガンドユニット（すなわち、ＤＲ５結合剤）であり；および
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−は、リンカーユニット（ＬＵ）であり、ここで：
−Ａ−は、ストレッチャーユニットであり、
ａは、０または１であり、
各−Ｗ−は独立して、アミノ酸ユニットであり、
ｗは、０〜１２の範囲の整数であり、
−Ｙ−は、自壊性スペーサーユニットであり、
ｙは、０、１または２であり；
−Ｄは、標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり；および
ｐは、１〜２０である）またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
【００８５】
いくつかの実施形態では、ａは、０または１であり、ｗは、０または１であり、ｙは、０、１または２である。いくつかの実施形態では、ａは、０または１であり、ｗは、０または１であり、ｙは、０または１である。いくつかの実施形態では、ｐは、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３または１〜２の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４または２〜３の範囲である。他の実施形態では、ｐは、１、２、３、４、５または６である。いくつかの実施形態では、ｗが０ではない場合、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態では、ｗが１〜１２である場合、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態では、ｗは、２〜１２であり、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態では、ａは、１であり、ｗおよびｙは、０である。
【００８６】
複数のリガンド薬物コンジュゲートを含む組成物において、ｐは、リガンド１個当たりの薬物分子の平均数（平均薬物負荷とも称される）である。平均薬物負荷は、薬物（Ｄ）１〜約２０個／リガンドの範囲であり得る。いくつかの実施形態では、平均ｐ値（リガンド１個当たりの平均薬物負荷）は、約２〜約８である。いくつかの実施形態では、平均ｐ値（リガンド１個当たりの平均薬物負荷）は、約３．５〜約４．５である。いくつかの実施形態では、平均ｐ値（リガンド１個当たりの平均薬物負荷）は、約１、約２、約３、約４、約５または約６である。コンジュゲーション反応の準備におけるリガンド１個当たりの薬物の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイおよびＨＰＬＣなどの従来の手段によって特性決定され得る。ｐに関するリガンド薬物コンジュゲートの量的分布も決定され得る。いくつかの場合において、ｐが、他の薬物負荷を有するリガンド薬物コンジュゲートからの特定値である均質なリガンド薬物コンジュゲートの分離、精製および特性決定は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成され得る。
【００８７】
リガンド薬物コンジュゲートの作製は、当業者に公知の任意の技術によって達成され得る。簡潔に言えば、リガンド薬物コンジュゲートは、リガンドユニットとしてのＤＲ５結合剤、薬物、および場合により薬物と結合剤とを連結するリンカーを含む。多くの様々な反応が、結合剤への薬物および／またはリンカーの共有結合に利用可能である。これは、結合剤（例えば、抗体分子）のアミノ酸残基（リジンのアミン基、グルタミン酸およびアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、ならびに芳香族アミノ酸の様々な部分を含む）の反応によって達成されることが多い。最も一般に使用される非特異的な共有結合法のうちの１つは、化合物のカルボキシ（またはアミノ）基を、抗体のアミノ（またはカルボキシ）基に連結するためのカルボジイミド反応である。さらに、ジアルデヒドまたはイミドエステルなどの二官能性薬剤は、化合物のアミノ基を、抗体分子のアミノ基に連結するのに使用されている。シッフ塩基反応は、結合剤への薬物の結合にも利用可能である。この方法は、グリコールまたはヒドロキシル基を含有する薬物を過ヨウ素酸酸化してアルデヒドを形成し、次いで、これを結合剤と反応させることを含む。結合は、結合剤のアミノ基によるシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートはまた、結合剤に薬物を共有結合させるためのカップリング剤として使用され得る。他の技術は当業者に公知であり、本発明の範囲内である。
【００８８】
特定の実施形態では、リンカー前駆体である中間体を適切な条件下で薬物と反応させる。特定の実施形態では、反応性基は、薬物および／または中間体に対して使用される。続いて、薬物と中間体との間の反応の生成物または誘導体化薬物を適切な条件下でＤＲ５結合剤と反応させる。
【００８９】
リガンド薬物コンジュゲートの特定のユニットはそれぞれ、本明細書でより詳細に記載される。例示的なリンカーユニット、ストレッチャーユニット、アミノ酸ユニット、自壊性スペーサーユニットおよび薬物ユニットの合成および構造はまた、米国特許出願公開第２００３−００８３２６３号、米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号、米国特許出願公開第２００５−０００９７５１号、米国特許出願公開第２００６−００７４００８号および米国特許出願公開第２００９−００１０９４５号（これらはそれぞれ、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【００９０】
リンカーユニット
典型的には、リガンド薬物コンジュゲートは、薬物ユニットとリガンドユニットとの間にリンカー領域を含む。いくつかの実施形態では、リンカーが切断されると、細胞内環境においてリガンドから薬物ユニットを放出するように、リンカーは細胞内条件下で切断可能である。さらに他の実施形態では、リンカーユニットは切断可能ではなく、薬物は、例えば、抗体分解によって放出される。
【００９１】
いくつかの実施形態では、リンカーは、細胞内環境中（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ（ｃａｖｅｏｌｅａ）内）に存在する切断剤によって切断可能である。リンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素、例えば限定されないが、リソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼによって切断されるペプチジルリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチジルリンカーは、少なくとも２アミノ酸長または少なくとも３アミノ酸長である。切断剤としては、カテプシンＢおよびカテプシンＤならびにプラスミンが挙げられ得、これらはすべて、ジペプチド薬物誘導体を加水分解して標的細胞内で活性薬物を放出させることが公知である（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３を参照のこと）。ＤＲ５発現細胞中に存在する酵素によって切断可能なペプチジルリンカーが、最も典型的である。例えば、チオール依存性プロテアーゼであるカテプシン−Ｂ（これは、癌組織において高発現している）によって切断可能なペプチジルリンカーが使用され得る（例えば、Ｐｈｅ−ＬｅｕまたはＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２１）リンカー）。このようなリンカーの他の例は、例えば、米国特許第６，２１４，３４５号（これは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。具体的な実施形態では、細胞内プロテアーゼによって切断可能なペプチジルリンカーは、Ｖａｌ−ＣｉｔリンカーまたはＰｈｅ−Ｌｙｓリンカーである（例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔリンカーによるドキソルビシン合成が記載されている米国特許第６，２１４，３４５号を参照のこと）。治療剤の細胞内タンパク質分解性放出を使用することの１つの利点は、薬剤がコンジュゲートされると通常は弱力化され、コンジュゲートの血清安定性が通常は高いことである。
【００９２】
他の実施形態では、切断可能なリンカーは、ｐＨ感受性（すなわち、特定のｐＨ値で加水分解感受性）である。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解可能である。例えば、リソソームにおいて加水分解可能な酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ−アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）が使用され得る（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；米国特許第５，８２４，８０５号；米国特許第５，６２２，９２９号；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３；Ｎｅｖｉｌｌｅら、１９８９，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３−１４６６１を参照のこと）。このようなリンカーは、中性ｐＨ条件（例えば、血液中のｐＨ条件）下で比較的安定であるが、ｐＨ５．５または５．０未満（おおよそ、リソソームのｐＨ）では不安定である。特定の実施形態では、加水分解可能なリンカーは、チオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介して治療剤に結合したチオエーテル）である（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号を参照のこと）。
【００９３】
さらに他の実施形態では、リンカーは、還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。様々なジスルフィドリンカーが当技術分野で公知であり、例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）およびＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢおよびＳＭＰＴを使用して形成され得るものが挙げられる（例えば、Ｔｈｏｒｐｅら、１９８７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：５９２４−５９３１；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋら、Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ  ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７を参照のこと。米国特許第４，８８０，９３５号も参照のこと）。
【００９４】
さらに他の具体的な実施形態では、リンカーは、マロネートリンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎら、１９９５，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：１３８７−９３）、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕら、１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１２９９−１３０４）、マレイミドカプロイル（「ｍｃ」）リンカー（Ｄｏｒｏｎｉｎａら、２００６，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．１７：１１４−２４）または３’−Ｎ−アミドアナログ（Ｌａｕら、１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１３０５−１２）である。
【００９５】
さらに他の実施形態では、リンカーユニットは切断可能ではなく、薬物は、抗体分解によって放出される（例えば、米国特許出願公開第２００５０２３８６４９号（これは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【００９６】
典型的には、リンカーは、細胞外環境に対して実質的に感受性ではない。本明細書で使用される場合、リンカーとの関連で「細胞外環境に対して実質的に感受性ではない」は、リガンド薬物コンジュゲートが細胞外環境に（例えば、血漿中に）存在する場合に、リガンド薬物コンジュゲートの試料におけるリンカーの約２０％以下、典型的には約１５％以下、より典型的には約１０％以下、さらにより典型的には約５％以下、約３％以下または約１％以下が切断されることを意味する。リンカーが細胞外環境に対して実質的に感受性ではないかは、例えば、リガンド薬物コンジュゲートを血漿と共に所定の期間（例えば、２時間、４時間、８時間、１６時間または２４時間）インキュベートし、次いで、血漿中に存在する遊離薬物の量を定量することによって決定され得る。
【００９７】
他の非相互排他的な実施形態では、リンカーは、細胞インターナリゼーションを促進する。特定の実施形態では、リンカーは、治療剤にコンジュゲートされると（すなわち、本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートのリンカー−治療剤部分の状況で）細胞インターナリゼーションを促進する。さらに他の実施形態では、リンカーは、オーリスタチン化合物および抗ＤＲ５抗体の両方にコンジュゲートされると細胞インターナリゼーションを促進する。
【００９８】
本組成物および方法と共に使用され得る様々な例示的なリンカーは、国際公開第２００４／０１０９５７号、米国特許出願公開第２００６／００７４００８号、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号および米国特許出願公開第２００６／００２４３１７号（これらはそれぞれ、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【００９９】
「リンカーユニット」（ＬＵ）は、薬物ユニットおよびリガンドユニットを連結して、リガンド薬物コンジュゲートを形成するのに使用され得る二官能性化合物である。いくつかの実施形態では、リンカーユニットは、以下の式：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−
（式中、−Ａ−は、ストレッチャーユニットであり、
ａは、０または１であり、
各−Ｗ−は独立して、アミノ酸ユニットであり、
ｗは、０〜１２の範囲の整数であり、
−Ｙ−は、自壊性スペーサーユニットであり、および
ｙは、０、１または２である）を有する。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ａは、０または１であり、ｗは、０または１であり、ｙは、０、１または２である。いくつかの実施形態では、ａは、０または１であり、ｗは、０または１であり、ｙは、０または１である。いくつかの実施形態では、ｗが１〜１２である場合、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態では、ｗは、２〜１２であり、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態では、ａは、１であり、ｗおよびｙは、０である。
【０１０１】
ストレッチャーユニット
ストレッチャーユニット（Ａ）は、存在する場合、リガンドユニットをアミノ酸ユニット（−Ｗ−）（存在する場合）；スペーサーユニット（−Ｙ−）（存在する場合）；または薬物ユニット（−Ｄ）に連結し得る。ＤＲ５結合剤上に存在し得る有用な官能基（天然によるものまたは化学的操作によるもののいずれか）としては、限定されないが、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシル、炭水化物のアノマーヒドロキシル基およびカルボキシルが挙げられる。適切な官能基は、スルフヒドリルおよびアミノである。一例において、スルフヒドリル基は、抗ＤＲ５抗体の分子内ジスルフィド結合の還元によって生成され得る。別の実施形態では、スルフヒドリル基は、抗ＤＲ５抗体のリジン部分のアミノ基と、２−イミノチオラン（トラウト試薬）または他のスルフヒドリル生成試薬との反応によって生成され得る。特定の実施形態では、抗ＤＲ５抗体は組換え抗体であり、１個以上のリジンを有するように改変される。特定の他の実施形態では、組換え抗ＤＲ５抗体は、さらなるスルフヒドリル基（例えば、さらなるシステイン）を有するように改変される。
【０１０２】
一実施形態では、ストレッチャーユニットは、リガンドユニットの硫黄原子と結合を形成する。硫黄原子は、リガンドのスルフヒドリル基に由来し得る。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは、式ＩＩＩａおよび式ＩＩＩｂ（式中、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは、上で定義したとおりであり、
Ｒａは、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）−、Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニレン）−、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニレン）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−アリーレン、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−アリーレン、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（カルボシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（カルボシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（カルボシクロ）−、−（カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン、ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（ヘテロシクロ）−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−から選択され、ｒは、１〜１０の範囲の整数であり、ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）、カルボシクロ、ヘテロシクロおよびアリーレン原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される）の大括弧内に示される。いくつかの実施形態では、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）、カルボシクロ、ヘテロシクロおよびアリーレン原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、置換されていない。いくつかの実施形態では、Ｒａは、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（カルボシクロ）−、−（カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（ヘテロシクロ）−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−から選択され；ｒは、１〜１０の範囲の整数であり、ここで、前記アルキレン基は置換されておらず、基の残りの部分は、場合により置換される。
【０１０３】
明記されていない場合でも、１〜２０個の薬物部分がリガンドに連結され得る（ｐ＝１〜２０）ことを、すべての例示的な実施形態から理解するべきである。いくつかの実施形態では、２個、４個、６個または８個の薬物部分がリガンドに連結される（ｐ＝２、４、６または８）。
【化１６−１】
2015516401.tif 000018
【化１６−２】
2015516401.tif 000019
【０１０４】
例示的なストレッチャーユニットは、式ＩＩＩａ（式中、Ｒａは、−（ＣＨ２）５−である）のものである：
【化１７】
2015516401.tif 000020
【０１０５】
別の例示的なストレッチャーユニットは、式ＩＩＩａ（式中、Ｒａは、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−であり；ｒは、２である）のものである：
【化１８】
2015516401.tif 000021
【０１０６】
例示的なストレッチャーユニットは、式ＩＩＩａ（式中、Ｒａは、−アリーレン−またはアリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−である）のものである。いくつかの実施形態では、アリール基は、置換されていないフェニル基である。
【０１０７】
さらに別の例示的なストレッチャーユニットは、式ＩＩＩｂ（式中、Ｒａは、−（ＣＨ２）５−である）のものである：
【化１９】
2015516401.tif 000022
【０１０８】
特定の実施形態では、ストレッチャーユニットは、リガンドユニットの硫黄原子と、ストレッチャーユニットの硫黄原子との間のジスルフィド結合を介して、リガンドユニットに連結される。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは、式ＩＶ（式中、Ｒａ、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは、上で定義したとおりである）の大括弧内に示される。
【化２０】
2015516401.tif 000023
【０１０９】
本願全体を通して、特に文脈上示されない限り、以下の式におけるＳ部分は、リガンドユニットの硫黄原子を指すことに留意するべきである。
【化２１】
2015516401.tif 000024
【０１１０】
さらに他の実施形態では、ストレッチャーは、Ｌに結合する前に、リガンドの一級アミノ基または二級アミノ基との結合を形成し得る反応性部位を含有する。これらの反応性部位の例としては、限定されないが、活性化エステル、例えば、スクシンイミドエステル、４ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、スルホニルクロリド、イソシアネートおよびイソチオシアネートが挙げられる。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは、式Ｖａおよび式Ｖｂ（式中、−Ｒａ−、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは、上で定義したとおりである）の大括弧内に示される；
【化２２】
2015516401.tif 000025
【０１１１】
いくつかの実施形態では、ストレッチャーは、リガンド上に存在し得る改変された炭水化物（−ＣＨＯ）基に対して反応性である反応性部位を含有する。例えば、過ヨウ素酸ナトリウムなどの試薬を使用して炭水化物を穏やかに酸化し得、酸化炭水化物の得られた（−ＣＨＯ）ユニットを、官能基、例えばヒドラジド、オキシム、一級アミンまたは二級アミン、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレートおよびアリールヒドラジド、例えばＫａｎｅｋｏら、１９９１，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２：１３３−４１によって記載されているものを含有するストレッチャーと縮合し得る。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは、式ＶＩａ、式ＶＩｂおよび式ＶＩｃ（式中、−Ｒａ−、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは、上で定義したとおりである）の大括弧内に示される。
【化２３−１】
2015516401.tif 000026
【化２３−２】
2015516401.tif 000027
【０１１２】
アミノ酸ユニット
アミノ酸ユニット（−Ｗ−）は、存在する場合、ストレッチャーユニットをスペーサーユニットに連結し（スペーサーユニットが存在する場合）、ストレッチャーユニットを薬物部分に連結し（スペーサーユニットが存在しない場合）、リガンドユニットを薬物ユニットに連結する（ストレッチャーユニットおよびスペーサーユニットが存在しない場合）。
【０１１３】
Ｗｗ−は、例えば、モノペプチド、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドまたはドデカペプチドユニットであり得る。各−Ｗ−ユニットは独立して、以下の大括弧内に示される式を有し、ｗは、０〜１２の範囲の整数である：
【化２４】
2015516401.tif 000028
（式中、Ｒｂは、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメチル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチル−、フェニル、シクロヘキシル、
【化２５】
2015516401.tif 000029
である）。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、癌または腫瘍関連プロテアーゼを含む１つ以上の酵素によってアミノ酸ユニットが酵素的に切断されて薬物ユニット（−Ｄ）が遊離され得、一実施形態では、これが放出のときにインビボでプロトン化されて薬物（Ｄ）が提供される。
【０１１５】
特定の実施形態では、アミノ酸ユニットは、天然アミノ酸を含み得る。他の実施形態では、アミノ酸ユニットは、非天然アミノ酸を含み得る。例示的なＷｗユニットは、式（ＶＩＩ）〜（ＩＸ）によって表される：
【化２６】
2015516401.tif 000030
（式中、ＲｃおよびＲｄは、以下のとおりである）：
【化２７】
2015516401.tif 000031
【化２８】
2015516401.tif 000032
（式中、Ｒｃ、ＲｄおよびＲｅは、以下のとおりである）：
【化２９】
2015516401.tif 000033
【化３０】
2015516401.tif 000034
（式中、Ｒｃ、Ｒｄ、ＲｅおよびＲｆは、以下のとおりである）：
【化３１】
2015516401.tif 000035
【０１１６】
例示的なアミノ酸ユニットとしては、限定されないが、式ＶＩＩ（式中、Ｒｃは、ベンジルであり、Ｒｄは、−（ＣＨ２）４ＮＨ２であるか；Ｒｃは、イソプロピルであり、Ｒｄは、−（ＣＨ２）４ＮＨ２であるか；またはＲｃはイソプロピルであり、Ｒｄは、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２である）のユニットが挙げられる。別の例示的なアミノ酸ユニットは、式ＶＩＩＩ（式中、Ｒｃは、ベンジルであり、Ｒｄは、ベンジルであり、Ｒｅは、−（ＣＨ２）４ＮＨ２である）のユニットである。
【０１１７】
有用な−Ｗｗ−ユニットを設計して、特定の酵素（例えば、腫瘍関連プロテアーゼ）による酵素的切断に対するそれらの選択性を最適化し得る。一実施形態では、−Ｗｗ−ユニットは、その切断が、カテプシンＢ、ＣおよびＤまたはプラスミンプロテアーゼによって触媒されるものである。
【０１１８】
一実施形態では、−Ｗｗ−は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドである。Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、ＲｅまたはＲｆが水素以外である場合、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、ＲｅまたはＲｆが結合した炭素原子は、キラルである。
【０１１９】
Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、ＲｅまたはＲｆが結合した各炭素原子は独立して、（Ｓ）または（Ｒ）配置にある。
【０１２０】
アミノ酸ユニットの一態様では、アミノ酸ユニットは、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）である。別の態様では、アミノ酸ユニットは、フェニルアラニン−リジン（すなわち、ｆｋ）である。アミノ酸ユニットのさらに別の態様では、アミノ酸ユニットは、Ｎ−メチルバリン−シトルリンである。さらに別の態様では、アミノ酸ユニットは、５−アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニン−リジン、テトライソキノリンカルボキシレート−リジン、シクロヘキシルアラニン−リジン、イソニペコチン酸（ｉｓｏｎｅｐｅｃｏｔｉｃ  ａｃｉｄ）−リジン、β−アラニン−リジンまたはグリシン−セリン−バリン−グルタミン−イソニペコチン酸である。
【０１２１】
スペーサーユニット
スペーサーユニット（−Ｙ−）は、存在する場合、アミノ酸ユニットを薬物ユニットに連結する（アミノ酸ユニットが存在する場合）。あるいは、スペーサーユニットは、ストレッチャーユニットを薬物ユニットに連結する（アミノ酸ユニットが存在しない場合）。スペーサーユニットはまた、薬物ユニットをリガンドユニットに連結する（アミノ酸ユニットおよびストレッチャーユニットの両方が存在しない場合）。
【０１２２】
スペーサーユニットは、一般的な２種類がある：非自壊性または自壊性。非自壊性スペーサーユニットは、リガンド−薬物コンジュゲートからアミノ酸ユニットが（特に、酵素的に）切断された後に、スペーサーユニットの一部または全部が薬物部分に依然として結合しているものである。非自壊性スペーサーユニットの例としては、限定されないが、（グリシン−グリシン）スペーサーユニットおよびグリシンスペーサーユニット（両方ともスキーム１に示される）（以下）が挙げられる。グリシン−グリシンスペーサーユニットまたはグリシンスペーサーユニットを含有するコンジュゲートが、酵素（例えば、腫瘍細胞関連プロテアーゼ、癌細胞関連プロテアーゼまたはリンパ球関連プロテアーゼ）による酵素的切断を受けると、グリシン−グリシン−薬物部分またはグリシン−薬物部分がＬ−Ａａ−Ｗｗ−から切断される。一実施形態では、独立した加水分解反応が標的細胞内で起こり、グリシン−薬物部分結合が切断されて薬物が遊離する。
スキーム１
【化３２】
2015516401.tif 000036
【０１２３】
いくつかの実施形態では、非自壊性スペーサーユニット（−Ｙ−）は、−Ｇｌｙ−である。いくつかの実施形態では、非自壊性スペーサーユニット（−Ｙ−）は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−である。
【０１２４】
一実施形態では、スペーサーユニットが存在しない（ｙ＝０）薬物−リンカーコンジュゲートまたはその薬学的に許容され得る塩が提供される。
【０１２５】
あるいは、自壊性スペーサーユニットを含有するコンジュゲートは、−Ｄを放出し得る。本明細書で使用される場合、用語「自壊性スペーサー」は、離れた２個の化学部分を安定な３部分分子（ｓｔａｂｌｅ  ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）に一緒になって共有結合し得る二官能性化学部分を指す。それは、第１の部分への結合が切断されると、第２の化学部分から自然発生的に分離する。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、−Ｙｙ−は、そのフェニレン部分がＱｍで置換されたｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）ユニット（スキーム２およびスキーム３を参照のこと）であり、ここで、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは、０〜４の範囲の整数である。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、−Ｙ−は、ＰＡＢ基であり、ＰＡＢ基は、ＰＡＢ基のアミノ窒素原子を介して−Ｗｗ−に連結され、カーボネート、カルバメートまたはエーテル基を介して−Ｄに直接結合される。いかなる特定の理論にも機構にも拘束されないが、スキーム２は、Ｔｏｋｉら、２００２，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２によって記載されるように、カルバメートまたはカーボネート基を介して−Ｄに直接結合したＰＡＢ基についての考えられる薬物放出機構を示す。
スキーム２
【化３３】
2015516401.tif 000037
【０１２８】
スキーム２において、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは、０〜４の範囲の整数であり；ｐは、１〜約２０の範囲である。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
【０１２９】
いかなる特定の理論にも機構にも拘束されないが、スキーム３は、エーテルまたはアミン結合を介して−Ｄに直接結合したＰＡＢ基についての考えられる薬物放出機構を示し、ここで、Ｄは、薬物ユニットの一部である酸素基または窒素基を含む：
スキーム３
【化３４】
2015516401.tif 000038
【０１３０】
スキーム３において、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは、０〜４の範囲の整数であり；ｐは、１〜約２０の範囲である。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
【０１３１】
自壊性スペーサーの他の例としては、限定されないが、ＰＡＢ基に電子的に類似している芳香族化合物、例えば、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（Ｈａｙら、１９９９，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）およびオルトまたはパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられる。アミド結合加水分解の際に環化を受けるスペーサー、例えば、置換されたおよび置換されていない４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら、１９９５，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍら、１９７２，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙら、１９９０，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）が使用され得る。グリシンのα位で置換されたアミン含有薬物の脱離（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙら、１９８４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）はまた、自壊性スペーサーの例である。
【０１３２】
一実施形態では、スペーサーユニットは、スキーム４に示されるように、分枝状ビス（ヒドロキシメチル）−スチレン（ＢＨＭＳ）ユニットであり、複数の薬物を組み込んで放出するのに使用され得る：
スキーム４
【化３５】
2015516401.tif 000039
【０１３３】
スキーム４において、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは、０〜４の範囲の整数であり；ｎは、０または１であり；ｐは、１〜約２０の整数である。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、−Ｄ部分は同じものである。さらに別の実施形態では、−Ｄ部分は異なるものである。
【０１３５】
一態様では、スペーサーユニット（−Ｙｙ−）は、式（Ｘ）〜（ＸＩＩ）：
【化３６】
2015516401.tif 000040
（式中、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは、０〜４の範囲の整数である）によって表される。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
【化３７−１】
2015516401.tif 000041
および
【化３７−２】
2015516401.tif 000042
【０１３６】
一群の選択された実施形態では、式ＩおよびＩＩのコンジュゲートは、以下のものである：
【化３８】
2015516401.tif 000043
（式中、ｗおよびｙはそれぞれ、０、１または２である）
および
【化３９】
2015516401.tif 000044
（式中、ｗおよびｙはそれぞれ、０である）
【化４０−１】
2015516401.tif 000045
【化４０−２】
2015516401.tif 000046
（式中、Ａａ、Ｗｗ、Ｙｙ、ＤおよびＬは、上に示されている意味を有する）。
【０１３７】
薬物ユニット
薬物部分（Ｄ）は、任意の細胞傷害剤もしくは薬物、細胞増殖抑制剤もしくは薬物または免疫調節（例えば、免疫抑制）剤もしくは薬物であり得る。Ｄは、スペーサーユニットと、またはアミノ酸ユニットと、またはストレッチャーユニットと、またはリガンドユニットと結合を形成し得る原子を有する薬物ユニット（部分）である。いくつかの実施形態では、薬物ユニットＤは、スペーサーユニットと結合を形成し得る窒素原子を有する。本明細書で使用される場合、用語「薬物ユニット」および「薬物部分」は同義であり、互換的に使用される。
【０１３８】
有用なクラスの細胞傷害剤または免疫調節剤としては、例えば、抗チューブリン剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤およびアルキル化剤が挙げられる。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、薬物は、オーリスタチン、例えば、オーリスタチンＥ（当技術分野ではドラスタチン−１０の誘導体として公知である）またはその誘導体である。オーリスタチンは、例えば、オーリスタチンＥとケト酸との間に形成されたエステルであり得る。例えば、オーリスタチンＥをパラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応させて、それぞれＡＥＢおよびＡＥＶＢを生成し得る。他の典型的なオーリスタチンとしては、ＡＦＰ、ＭＭＡＦおよびＭＭＡＥが挙げられる。例示的なオーリスタチンの合成および構造は、米国特許出願公開第２００３−００８３２６３号、米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号および米国特許出願公開第２００５−０００９７５１号；国際公開第０４／０１０９５７号、国際公開第０２／０８８１７２号および米国特許第６，３２３，３１５号；米国特許第６，２３９，１０４号；米国特許第６，０３４，０６５号；米国特許第５，７８０，５８８号；米国特許第５，６６５，８６０号；米国特許第５，６６３，１４９号；米国特許第５，６３５，４８３号；米国特許第５，５９９，９０２号；米国特許第５，５５４，７２５号；米国特許第５，５３０，０９７号；米国特許第５，５２１，２８４号；米国特許第５，５０４，１９１号；米国特許第５，４１０，０２４号；米国特許第５，１３８，０３６号；米国特許第５，０７６，９７３号；米国特許第４，９８６，９８８号；米国特許第４，９７８，７４４号；米国特許第４，８７９，２７８号；米国特許第４，８１６，４４４号；および米国特許第４，４８６，４１４号（これらはそれぞれ、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されていている。
【０１４０】
オーリスタチンは、微小管動態ならびに核分裂および細胞分裂に干渉し、抗癌活性を有することが示されている。本発明のオーリスタチンはチューブリンに結合し、ＤＲ５発現細胞系に対する細胞傷害効果または細胞増殖抑制効果を発揮し得る。当技術分野で公知の多くの様々なアッセイが存在し、これらは、オーリスタチンまたは得られた抗体−薬物コンジュゲートが、所望の細胞系に対する細胞増殖抑制効果または細胞傷害効果を発揮するかを決定するのに使用され得る。
【０１４１】
化合物がチューブリンに結合するかを決定するための方法は、当技術分野で公知である。例えば、Ｍｕｌｌｅｒら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ  ２００６，７８，４３９０−４３９７；Ｈａｍｅｌら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９５  ４７：９６５−９７６；およびＨａｍｅｌら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９０  ２６５：２８，１７１４１−１７１４９を参照のこと。本発明の目的のために、チューブリンに対する化合物の相対的親和性が決定され得る。いくつかの好ましい本発明のオーリスタチンは、チューブリンに対するＭＭＡＥの結合親和性より１０倍低い（より弱い親和性）から、チューブリンに対するＭＭＡＥの結合親和性より１０倍高い、２０倍高いまたはさらに１００倍高い（より高い親和性）までの範囲の親和性で、チューブリンに結合する。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、−Ｄは、式ＤＥまたは式ＤＦ：
【化４１】
2015516401.tif 000047
（式中、各位置で独立して：
波線は、結合を示し；
Ｒ２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
Ｒ４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
Ｒ５は、−Ｈまたは−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
またはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環式環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｓ−（式中、ＲａおよびＲｂは独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルまたは−炭素環であり、ｓは、２、３、４、５または６である）を有し、
Ｒ６は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ７は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
各Ｒ８は独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキニル）または−炭素環であり；
Ｒ９は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１９は、−アリール、−複素環または−炭素環であり；
Ｒ２０は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−炭素環、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルキニル）またはＯＲ１８であり、ここで、Ｒ１８は、−Ｈ、ヒドロキシル保護基であるか、またはＯＲ１８が＝Ｏを表す場合には直接結合であり；
Ｒ２１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環または−炭素環であり；
Ｒ１０は、−アリールまたは−複素環であり；
Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−ＮＲ１２−であり、ここで、Ｒ１２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；および
Ｒ１１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、
ｍは、１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３は、−Ｃ２−Ｃ２０アルキレン、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレンまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレンであり；
Ｒ１４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
出現する各Ｒ１５は独立して、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
出現する各Ｒ１６は独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；および
ｎは、０〜６の範囲の整数であり；ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン（ａｌｋｙｎｙｋｌｅｎｅ）、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）および複素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される）のオーリスタチンまたはその薬学的に許容され得る塩の形態である。
【０１４３】
式ＤＥのオーリスタチンは、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン（ａｌｋｙｎｙｋｌｅｎｅ）、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）および複素環原子団が置換されていないものを含む。
【０１４４】
式ＤＥのオーリスタチンは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９の基が置換されておらず、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１の基が本明細書に記載されるように場合により置換されているものを含む。
【０１４５】
式ＤＥのオーリスタチンは、
Ｒ２が、−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ７が独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）から選択され；ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、炭素環、アリールおよび複素環原子団は、場合により置換されており；
Ｒ５が、−水素であり；
Ｒ６が、−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
各Ｒ８が独立して、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）または−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルキニル）から選択され、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており；
Ｒ９が、−水素または−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１９が、場合により置換されたフェニルであり；
Ｒ２０が、ＯＲ１８であり；ここで、Ｒ１８は、Ｈ、ヒドロキシル保護基であるか、またはＯＲ１８が＝Ｏを表す場合には直接結合であり；
Ｒ２１が、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルまたは−炭素環から選択され；ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニルおよび炭素環原子団は、場合により置換されているものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【０１４６】
式ＤＥのオーリスタチンは、
Ｒ２が、メチルであり；
Ｒ３が、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニルであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており；
Ｒ４が、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環、−Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ８アルケニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ８アルキニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ１−Ｃ８アルキレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ８アルケニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ８アルキニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）であり；ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリールおよび炭素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されており；
Ｒ５が、Ｈであり；
Ｒ６が、メチルであり；
Ｒ７が、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニルであり；
各Ｒ８が、メトキシであり；
Ｒ９が、−水素または−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１９が、フェニルであり；
Ｒ２０が、ＯＲ１８であり；ここで、Ｒ１８は、−Ｈ、ヒドロキシル保護基であるか、またはＯＲ１８が＝Ｏを表す場合には直接結合であり；
Ｒ２１が、メチルであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【０１４７】
式ＤＥのオーリスタチンは、
Ｒ２が、メチルであり；Ｒ３が、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４が、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５が、Ｈであり；Ｒ６が、メチルであり；Ｒ７が、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり；Ｒ８が、メトキシであり；Ｒ９が、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１９が、フェニルであり；Ｒ２０が、ＯＲ１８であり；ここで、Ｒ１８は、Ｈ、ヒドロキシル保護基であるか、またはＯＲ１８が＝Ｏを表す場合には直接結合であり；Ｒ２１が、メチルであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【０１４８】
式ＤＥのオーリスタチンは、Ｒ２が、メチルまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ３が、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４が、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５が、Ｈであり；Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ７が、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ８が、Ｃ１−Ｃ３アルコキシであり；Ｒ９が、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１９が、フェニルであり；Ｒ２０が、ＯＲ１８であり；ここで、Ｒ１８は、Ｈ、ヒドロキシル保護基であるか、またはＯＲ１８が＝Ｏを表す場合には直接結合であり；Ｒ２１が、Ｃ１−Ｃ３アルキルであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【０１４９】
式ＤＦのオーリスタチンは、
Ｒ２が、メチルであり；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ７が独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）から選択され；ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）、アリールおよび複素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されており；
Ｒ５が、−Ｈであり；
Ｒ６が、メチルであり；
各Ｒ８が、メトキシであり；
Ｒ９が、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており；
Ｒ１０が、場合により置換されたアリールまたは場合により置換された複素環であり；
Ｚが、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−ＮＲ１２−であり、ここで、Ｒ１２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり、これらはそれぞれ、場合により置換されており；および
Ｒ１１が、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル（ａｌｋｙｎｙ）、アリールおよび複素環原子団は、場合により置換されており；
ｍが、１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３が、−Ｃ２−Ｃ２０アルキレン、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレンまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレンであり、これらはそれぞれ、場合により置換されており；
Ｒ１４が、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており；
出現する各Ｒ１５が独立して、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており；
出現する各Ｒ１６が独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団が、場合により置換されており；および
ｎが、０〜６の範囲の整数であるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【０１５０】
特定のこれらの実施形態では、Ｒ１０は、場合により置換されたフェニルである。
【０１５１】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９の基が置換されておらず、Ｒ１０およびＲ１１の基が本明細書に記載されるとおりであるものを含む。
【０１５２】
式ＤＦのオーリスタチンは、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン（ａｌｋｙｎｙｋｌｅｎｅ）、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）および複素環原子団が置換されていないものを含む。
【０１５３】
式ＤＦのオーリスタチンは、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ３が、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４が、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５が、Ｈであり；Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ７が、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ８が、Ｃ１−Ｃ３アルコキシであり；Ｒ９が、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１０が、場合により置換されたフェニルであり；Ｚが、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；Ｒ１１が、本明細書で定義されるとおりであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【０１５４】
式ＤＦのオーリスタチンは、
Ｒ２が、メチルであり；Ｒ３が、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４が、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５が、Ｈであり；Ｒ６が、メチルであり；Ｒ７が、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり；Ｒ８が、メトキシであり；Ｒ９が、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１０が、場合により置換されたフェニルであり；Ｚが、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；Ｒ１１が、本明細書で定義されるとおりであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【０１５５】
式ＤＦのオーリスタチンは、
Ｒ２が、メチルであり；Ｒ３が、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４が、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５が、Ｈであり；Ｒ６が、メチルであり；Ｒ７が、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり；Ｒ８が、メトキシであり；Ｒ９が、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１０が、フェニルであり；Ｚが、ＯまたはＮＨであり、Ｒ１１が、本明細書で定義されるとおりであり、好ましくは水素であるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【０１５６】
式ＤＦのオーリスタチンは、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ３が、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４が、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５が、Ｈであり；Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ７が、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ８が、Ｃ１−Ｃ３アルコキシであり；Ｒ９が、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１０が、フェニルであり；Ｚが、ＯまたはＮＨであり、Ｒ１１が、本明細書で定義されるとおりであり、好ましくは水素であるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
【０１５７】
式ＤＥまたは式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７が独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５が−Ｈであるものを含む。例示的な実施形態では、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、イソプロピルであり、Ｒ５は、Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルである。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５８】
式ＤＥまたは式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ２およびＲ６がそれぞれ、メチルであり、Ｒ９がＨであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５９】
式ＤＥまたは式ＤＦのオーリスタチンは、出現する各Ｒ８が−ＯＣＨ３であるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６０】
式ＤＥまたは式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ、イソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６がそれぞれ、メチルであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ７がｓｅｃ−ブチルであり、出現する各Ｒ８が−ＯＣＨ３であり、Ｒ９がＨであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６１】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｚが−Ｏ−または−ＮＨ−であるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６２】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ１０がアリールであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６３】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ１０が−フェニルであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６４】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｚが−Ｏ−であり、Ｒ１１がＨ、メチルまたはｔ−ブチルであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６５】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１が、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、Ｒ１６は、−Ｃ１−Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６６】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１が−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６７】
好ましい実施形態では、Ｄが式ＤＥのオーリスタチンである場合、ｗは、１〜１２、好ましくは２〜１２の範囲の整数であり、ｙは、１または２であり、ａは、好ましくは１である。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、Ｄが式ＤＦのオーリスタチンである場合、ａは、１であり、ｗおよびｙは、０である。
【０１６９】
例示的な薬物ユニット（−Ｄ）は、以下の構造を有する薬物ユニットまたはその薬学的に許容され得る塩もしくは溶媒和物を含む：
【化４２−１】
2015516401.tif 000048
【化４２−２】
2015516401.tif 000049
【化４２−３】
2015516401.tif 000050
【０１７０】
一態様では、親水性基、例えば限定されないが、トリエチレングリコールエステル（ＴＥＧ）は、Ｒ１１において薬物ユニットに結合され得る。理論に拘束されないが、親水性基は、薬物ユニットのインターナリゼーションおよび非凝集形成を補助する。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、ＴＺＴ−１０２７ではない。いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、オーリスタチンＥでも、ドラスタチン１０でも、オーリスタチンＰＥでもない。
【０１７２】
例示的なリガンド薬物コンジュゲートは、以下の構造（式中、「ｍＡｂ」は、抗ＤＲ５抗体を表し、Ｓは、抗体の硫黄原子である）を有する。下付き文字ｐは、１〜約２０、好ましくは１〜約５の整数である。
【化４３−１】
2015516401.tif 000051
【化４３−２】
2015516401.tif 000052
またはその薬学的に許容され得る塩。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、カリチアマイシン、カンプトテシン、マイタンシノイドまたはアントラサイクリンである。いくつかの実施形態では、薬物は、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイドなどである。
【０１７４】
いくつかの典型的な実施形態では、適切な細胞傷害剤としては、例えば、ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、エンジインおよびレキシトロプシン、ＣＢＩ化合物；米国特許第６，１３０，２３７号も参照のこと）、デュオカルマイシン、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）、ピューロマイシンおよびビンカアルカロイドが挙げられる。他の細胞傷害剤としては、例えば、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、エキノマイシン、コンブレタスタチン、ネトロプシン、エポチロンＡおよびＢ、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、ディスコデルモリド、エリュテロビンおよびミトキサントロンが挙げられる。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、薬物は、抗チューブリン剤である。抗チューブリン剤の例としては、オーリスタチン、タキサン（例えば、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（ドセタキセル））、Ｔ６７（Ｔｕｌａｒｉｋ）およびビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）が挙げられる。他の抗チューブリン剤としては、例えば、バッカチン誘導体、タキサンアナログ（例えば、エポチロンＡおよびエポチロンＢ）、ノコダゾール、コルヒチンおよびコルセミド（ｃｏｌｃｉｍｉｄ）、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、コンブレタスタチン、ディスコデルモリドおよびエリュテロビンが挙げられる。
【０１７６】
特定の実施形態では、細胞傷害剤は、マイタンシノイド（別の群の抗チューブリン剤）である。例えば、具体的な実施形態では、マイタンシノイドは、マイタンシンまたはＤＭ−１（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ，Ｉｎｃ．；Ｃｈａｒｉら、１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１も参照のこと）である。
【０１７７】
特定の実施形態では、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、ドラスタチンである。特定の実施形態では、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、オーリスタチンクラスのものである。したがって、具体的な実施形態では、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、ＭＭＡＥ（式ＸＩＩＩ）である。別の具体的な実施形態では、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、ＡＦＰ（式ＸＶＩＩＩ）である。
【化４４】
2015516401.tif 000053
【０１７８】
特定の実施形態では、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、式ＸＩＶ〜ＸＸＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容され得る塩の形態である：
【化４５−１】
2015516401.tif 000054
【化４５−２】
2015516401.tif 000055
【化４５−３】
2015516401.tif 000056
【化４５−４】
2015516401.tif 000057
【０１７９】
リガンドユニット
本発明において、リガンド薬物コンジュゲートにおけるリガンドユニット（例えば、抗体）はＤＲ５に特異的に結合し、インターナリゼーションを介して細胞傷害活性を示す。リガンド薬物コンジュゲートは、リガンドユニット（例えば、抗体）がその標的として特異的に結合するＤＲ５を発現する癌組織に達する。その結果として、抗体にコンジュゲートした薬物ユニットは、標的細胞に対して選択的に作用することが可能になり得る。したがって、抗体−薬物コンジュゲートの有効性は、抗体単独のものより大いに増強され得る。デスドメイン含有受容体に結合する抗体（特に、抗ＤＲ５抗体）は、本発明の抗体−薬物コンジュゲートに含まれ得る抗体として選択され得る。
【０１８０】
ＤＲ５に結合する抗体
（１）ＤＲ５遺伝子
ヒトデス受容体５（ＤＲ５）遺伝子のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋにおいてＧＩ：２２５４７１１８（アクセッション番号ＮＭ＿１４７１８７）として登録されている。ＤＲ５アミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が置き換え、欠失または付加されたアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、ＤＲ５の生物活性と同等の生物活性を有するヌクレオチド配列もＤＲ５遺伝子のヌクレオチド配列に含まれる。さらに、ＤＲ５アミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が置き換え、欠失または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、ＤＲ５の生物活性と同等の生物活性を有するタンパク質もＤＲ５に含まれる。
【０１８１】
（２）ＤＲ５に対する抗体
本発明のＤＲ５に対する抗体は、通常の方法でＤＲ５またはＤＲ５アミノ酸配列から選択される任意のポリペプチドで動物を免疫することによって得られ得る。生体において産生されるこのような抗体を収集して精製し得る。
【０１８２】
さらに、モノクローナル抗体はまた、公知の方法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）２５６，ｐ．４９５−４９７；Ｋｅｎｎｅｔ，Ｒ．ｅｄ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｐ．３６５−３６７，Ｐｒｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８０））にしたがって、ＤＲ５に対する抗体を産生する抗体産生細胞を骨髄腫細胞と融合することによって樹立されたハイブリドーマから得られ得る。
【０１８３】
抗原としてのＤＲ５は、ＤＲ５遺伝子を発現する遺伝子操作された宿主細胞から得られ得る。
【０１８４】
より具体的には、ＤＲ５は、ＤＲ５遺伝子を発現し得るベクターを調製し、ベクターを宿主細胞に導入して遺伝子を発現させ、発現したＤＲ５を精製することによって得られ得る。
【０１８５】
さらに、ＤＲ５の細胞外領域を抗体の定常領域と融合した人工遺伝子を構築した後に、適切な遺伝子発現系において調製されたタンパク質を免疫原として使用することもできる。
【０１８６】
（３）他の抗体
上記ＤＲ５に対するモノクローナル抗体に加えて、本発明の抗体は、ヒトに対する異種抗原性を低下させるように人工的に改変された組換え抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体を含む。これらの抗体は、公知の方法によって生産され得る。
【０１８７】
このようなキメラ抗体としては、可変領域および定常領域が互いに異種である抗体が挙げられ、その例は、マウス由来の抗体の可変領域遺伝子を、ヒト定常領域遺伝子に結合することによって作製されるキメラ抗体である（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１，６８５１−６８５５（１９８４））。
【０１８８】
このようなヒト化抗体の例としては、相補性決定領域（ＣＤＲ）のみがヒト抗体に移入された抗体（Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３２１，ｐ．５２２−５２５）、ならびにＣＤＲ配列およびフレームワークの一部のアミノ酸残基がＣＤＲ移植によってヒト抗体に移植された抗体（国際公開第９０／０７８６１号）が挙げられる。
【０１８９】
さらに、ヒト抗体がある。用語「抗ヒトＤＲ５抗体」は、ヒト染色体由来の抗体の遺伝子配列をのみを有するヒト抗体を指す。抗ヒトＤＲ５抗体は、ヒト抗体のＨおよびＬ鎖遺伝子を含有する染色体断片を有するヒト抗体産生マウスを使用する方法によって得られ得る（Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９７）１６，ｐ．１３３−１４３；Ｋｕｒｏｉｗａ，Ｙら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（１９９８）２６，ｐ．３４４７−３４４８；Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｈら、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ａｓｐｅｃｔｓ  ｖｏｌ．１０，ｐ．６９−７３（Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｙ．，Ｍａｔｕｄａ，Ｔ．ａｎｄ  Ｉｉｊｉｍａ，Ｓ．ｅｄｓ．），Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９９；Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０００）９７，ｐ．７２２−７２７）。
【０１９０】
このようなトランスジェニック動物、またはより具体的には、非ヒト哺乳動物における内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子座が破壊されて代わりにヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子座が、酵母人工染色体（ＹＡＣ）ベクターなどを介してこのノックアウト動物に導入された遺伝子改変動物は、上記のようにノックアウト動物およびトランスジェニック動物を調製し、これらの動物を交配することによって生産することができる。
【０１９１】
抗体はまた、組換えＤＮＡ技術によってｃＤＮＡ（好ましくは、ヒト化抗体重鎖および軽鎖のそれぞれをコードするｃＤＮＡを含有するベクター）で真核細胞を形質転換し、組換えヒトモノクローナル抗体を産生する形質転換細胞を培養することによって生産される培養上清から得られ得る。
【０１９２】
ここで、宿主として使用され得る細胞の例としては、真核細胞、好ましくは哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞、リンパ球および骨髄腫が挙げられる。
【０１９３】
さらに、ヒト抗体ライブラリーからスクリーニングされたファージディスプレイ由来のヒト抗体を得る方法（Ｗｏｒｍｓｔｏｎｅ，Ｉ．Ｍら、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ＆Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００２）４３（７），ｐ．２３０１−２３０８；Ｃａｒｍｅｎ，Ｓら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（２００２），１（２），ｐ．１８９−２０３；Ｓｉｒｉｗａｒｄｅｎａ，Ｄら、Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（２００２）１０９（３），ｐ．４２７−４３１）も公知である。
【０１９４】
例えば、ヒト抗体重鎖および軽鎖可変領域を一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）としてファージ表面にディスプレイし、次いで、抗原結合ファージを選択する（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５），２３，（９），ｐ．１１０５−１１１６）。
【０１９５】
抗原結合ヒト抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列は、抗原結合によって選択されるファージの遺伝子を分析することによって決定され得る。
【０１９６】
抗原結合ｓｃＦＶのＤＮＡ配列が明らかになったら、その配列を有する発現ベクターを調製し、ベクターを適切な発現用宿主に導入することによって、ヒト抗体が得られ得る（例えば、国際公開第９２／０１０４７号、国際公開第９２／２０７９１号、国際公開第９３／０６２１３号、国際公開第９３／１１２３６号、国際公開第９３／１９１７２号、国際公開第９５／０１４３８号、国際公開第９５／１５３８８号；Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９４）１２，ｐ．４３３−４５５；Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３（９），ｐ．１１０５−１１１６を参照のこと）。
【０１９７】
抗体遺伝子を単離し、適切な宿主に導入して抗体を調製する場合、宿主および発現ベクターの適切な組み合わせが使用され得る。
【０１９８】
真核細胞を宿主として使用する場合、動物細胞、植物細胞または真核微生物が使用され得る。
【０１９９】
このような動物細胞の例としては、シミアンＣＯＳ細胞（Ｇｌｕｚｍａｎ，Ｙ．，Ｃｅｌｌ（１９８１）２３，ｐ．１７５−１８２，ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５０）、マウス線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ−１６５８）およびチャイニーズハムスター卵巣細胞のジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株（ＣＨＯ細胞、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−６１）（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，Ｌ．Ａ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９８０）７７，ｐ．４２１６−４２２０）が挙げられる。
【０２００】
使用され得る原核細胞の例としては、大腸菌および枯草菌が挙げられる。
【０２０１】
形質転換によって目的の抗体遺伝子をこれらの細胞に導入し、形質転換細胞をインビトロで培養することによって、抗体が得られ得る。
【０２０２】
本発明の抗体のアイソタイプは、任意のアイソタイプであり得る。その例としては、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ＩｇＤおよびＩｇＥが挙げられるが、ＩｇＧおよびＩｇＭが好ましい。
【０２０３】
さらに、本発明の抗体は、抗体の抗原結合部位を有する抗体断片、またはそれが抗原結合を維持している場合にはその改変バージョンであり得る。
【０２０４】
このような抗体の機能的断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２を還元することによって得られる一価可変領域断片Ｆａｂ’、Ｆｖ、適切なリンカーによって重鎖および軽鎖Ｆｖを連結することによって得られる一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ（複数のダイアボディ）、線状の抗体、および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、断片は、それらが抗原結合を維持している場合には上記断片に限定されない。上記抗体断片は、パパインまたはペプシンなどの酵素で全長抗体分子を処理することによって得られ得る。上記抗体断片はまた、上記抗体断片の重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を使用して、適切な遺伝子発現系が対応するタンパク質を生成することを可能にすることによって得られ得る。
【０２０５】
これらの抗体断片は、上記と同じ方法で遺伝子を入手および発現させて、対応するタンパク質を宿主に産生させることによって生産することができる。
【０２０６】
本発明の抗体は、ポリクローナル抗体（異なるアミノ酸配列を有するいくつかの抗ＤＲ５抗体の混合物）であり得る。このようなポリクローナル抗体の例は、異なるＣＤＲを有するいくつかの抗体の混合物である。このようなポリクローナル抗体として、異なる抗体を産生する細胞の混合物を培養し、培養物を精製することによって得られる抗体が使用され得る（国際公開第２００４／０６１１０４号）。
【０２０７】
得られた抗体を均一に精製し得る。抗体の分離および精製は、通常のタンパク質に使用される分離および精製方法によって行われ得る。
【０２０８】
例えば、抗体は、クロマトグラフィーカラム、フィルタ、限外ろ過、塩析、透析、分取ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動などを適切に選択および組み合わせることによって分離および精製され得る（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ，Ｄａｎｉｅｌ  Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋら、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．  Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８））が、分離および精製方法はこれらに限定されない。
【０２０９】
クロマトグラフィーの例としては、アフィニティクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲルろ過、逆相クロマトグラフィーおよび吸着クロマトグラフィーが挙げられる。これらの種類のクロマトグラフィーは、ＨＰＬＣおよびＦＰＬＣなどの液相クロマトグラフィーを使用することによって実施され得る。
【０２１０】
アフィニティクロマトグラフィーにおいて使用されるカラムの例としては、プロテインＡカラムおよびプロテインＧカラムが挙げられる。
【０２１１】
プロテインＡカラムの例としては、Ｈｙｐｅｒ  Ｄ、ＰＯＲＯＳおよびＳｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆ．Ｆ．（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）が挙げられる。
【０２１２】
さらに、抗体はまた、担体上に固定化された抗原へのその結合によって精製され得る。
【０２１３】
（４）抗ＤＲ５抗体の例
例えば、国際公開第９８／５１７９３号、国際公開第２００１／８３５６０号、国際公開第２００２／９４８８０号、国際公開第２００３／５４２１６号、国際公開第２００４／５０８９５号、国際公開第２００６／８３９７１号、国際公開第２００７／２２１５７および国際公開第２０１１／０３８１５９号に記載されているＤＲ５発現細胞でアポトーシスを誘導する抗ＤＲ５抗体は、本発明の抗体−薬物コンジュゲートの成分として使用され得る。さらに、レクサツムマブ、ＨＧＳ−ＴＲ２Ｊ、アポマブ（Ａｐｏｍａｂ）、ドロジツマブ、コナツムマブ（Ｃｏｎａｔｕｍｕｍａｂ）およびＬＢＹ１３５と称される抗ＤＲ５抗体ならびにそれらの変異体もまた、本発明の抗体−薬物コンジュゲートの成分として使用され得る。しかしながら、このような成分として使用され得る抗体は、このような抗体がＤＲ５タンパク質に対する結合能を有する場合には上記例に限定されない。
【０２１４】
本発明のリガンドユニットは、典型的には、ＤＲ５結合剤である。一群の実施形態では、リガンドユニットは、ヒト化Ｂ２７３に対応する重鎖アミノ酸配列（配列番号９）を含む。本明細書では、ヒト化Ｂ２７３は、ｈＢ２７３と略記される。ｈＢ２７３を生産する方法は、２０１１年１０月２７日に出願された（国際公開第２０１２／０５７２８８号として公開された）「Ａ  ｎｅｗ  ａｎｔｉ−ＤＲ５  ａｎｔｉｂｏｄｙ」という標題の国際特許出願第ＰＣＴ／ＪＰ２０１１／０７４８６６号（これは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。別の群の実施形態では、リガンドユニットは、カルボキシ末端リジン残基を欠くヒト化Ｂ２７３に対応する重鎖アミノ酸配列（すなわち、配列番号９のアミノ酸残基１〜４５１のアミノ酸配列を有する重鎖）を含む。カルボキシ末端からリジンまたはアルギニン残基を除去する翻訳後タンパク質プロセシングが、例えば、Ｈａｒｒｉｓ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（１９９５），７０５：１２９−１３４によって報告されている。別の群の実施形態では、リガンドユニットは、ヒト化Ｂ２７３に対応する軽鎖アミノ酸配列（配列番号１０）を含む。さらに別の実施形態では、リガンドユニットは、配列番号９および１０の重鎖および軽鎖アミノ酸配列の両方を含む。さらに別の実施形態では、リガンドユニットは、配列番号９のアミノ酸残基１〜４５１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列の両方を含む。さらに別の実施形態では、リガンドユニットは、（ａ）配列番号１１のアミノ残基１〜５からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸残基１〜１７からなるＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸残基１〜１３からなるＣＤＲ３を有する重鎖免疫グロブリンと；（ｂ）配列番号１４のアミノ残基１〜１６からなるＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸残基１〜７からなるＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸残基１〜９からなるＣＤＲ３を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む。別の実施形態では、リガンドユニットは、配列番号９のアミノ酸残基１〜１２２を含むｈＢ２７３の重鎖可変領域と、配列番号１０のアミノ酸残基１〜１１４を含むｈＢ２７３の軽鎖可変領域とを含む。
【０２１５】
さらに、リガンドユニット（Ｌ）は、リンカーユニットの官能基と結合を形成し得る少なくとも１個の官能基を有する。天然に、化学的操作によって、または人為的操作によってリガンドユニットに存在し得る有用な官能基としては、限定されないが、スルフヒドリル（−ＳＨ）、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシ、炭水化物のアノマーヒドロキシル基およびカルボキシルが挙げられる。いくつかの実施形態では、リガンドユニットの官能基は、スルフヒドリル基である。スルフヒドリル基は、典型的には、溶媒接触可能スルフヒドリル基、例えば、システイン残基上の溶媒接触可能スルフヒドリル基である。スルフヒドリル基は、リガンドの分子内または分子間ジスルフィド結合の還元によって生成され得る。スルフヒドリル基はまた、２−イミノチオラン（トラウト試薬）または別のスルフヒドリル生成試薬を使用して、リガンドのリジン部分のアミノ基の反応によって生成され得る。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、１個以上のスルフヒドリル基が、例えば、アミノ酸置換によってリガンドユニット内に人為的に作製される。例えば、スルフヒドリル基をリガンドユニット内に導入し得る。いくつかの実施形態では、セリンもしくはスレオニンをシステイン残基にアミノ酸置換することによって、および／またはシステイン残基をリガンドユニット内に付加することによって（人為的なシステイン残基）、スルフヒドリル基を導入する。いくつかの実施形態では、システイン残基は、内部システイン残基である（すなわち、リガンド部分のＮ末端にもＣ末端にも位置しない）。
【０２１７】
例示的な実施形態では、アミノ酸置換によって、システイン残基を（例えば、ダイアボディなどの抗体断片の）抗体重鎖可変領域または抗体軽鎖可変領域内に人為的に作製し得る。アミノ酸置換は、典型的には、フレームワーク領域内に導入され、可変領域のエピトープ結合面に対して遠位に位置する。例えば、アミノ酸置換は、エピトープ結合面またはＣＤＲから少なくとも１０Å、少なくとも２０Åまたは少なくとも２５Åであり得る。システイン残基の置換に適切な位置は、抗体可変領域の公知のまたは推定上の三次元構造物に基づいて決定され得る（一般には、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３（９）：１１２６−１１３６を参照のこと）。例示的な実施形態では、セリンからシステインへのアミノ酸置換は、ＶＨ領域のアミノ酸８４位および／またはＶＬ領域のアミノ酸１４位（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＮＩＨ）１９９１のナンバリングシステムに従う）に導入される。
【０２１８】
リガンドユニットに結合される薬物またはリンカーユニット−薬物ユニットの数を制御するために、アミノ酸置換によって、１個以上のシステイン残基を排除し得る。例えば、システインからセリン残基にアミノ酸置換することによって、免疫グロブリンヒンジ領域における溶媒接触可能システイン残基の数を減少させ得る。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、リガンドユニットは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個の、溶媒接触可能システイン残基を含有する。いくつかの実施形態では、リガンドユニットは、２個または４個の、溶媒接触可能システイン残基を含有する。
【０２２０】
アッセイ
薬物またはリガンド薬物コンジュゲートが、細胞に対する細胞増殖抑制効果および／または細胞傷害効果を発揮するかを決定するための方法は公知である。一般に、リガンド薬物コンジュゲートの細胞傷害活性または細胞増殖抑制活性は、リガンド薬物コンジュゲートの標的タンパク質を発現する哺乳動物細胞を細胞培養培地中に曝露すること；細胞を約６時間〜約５日間培養すること；および細胞生存率を測定することによって測定され得る。細胞ベースのインビトロアッセイは、リガンド薬物コンジュゲートに関する生存率（増殖）、細胞傷害性およびアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性化）を測定するのに使用され得る。
【０２２１】
リガンド薬物コンジュゲートが細胞増殖抑制効果を発揮するかを決定するために、チミジン組み込みアッセイを使用してもよい。例えば、標的抗原を発現する癌細胞を、９６ウェルプレートの１ウェル当たり細胞５，０００個の密度で７２時間培養し、７２時間のうちの最後８時間の間に０．５μＣｉの３Ｈ−チミジンに曝露し得る。培養物の細胞への３Ｈ−チミジンの組み込みを、リガンド薬物コンジュゲートの存在または非存在下で測定する。
【０２２２】
細胞傷害性を決定するために、壊死またはアポトーシス（プログラムされた細胞死）を測定し得る。壊死は、典型的には、原形質膜透過性の増加；細胞の膨張、および原形質膜の破裂を伴う。アポトーシスは、典型的には、膜小胞化（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｂｌｅｂｂｉｎｇ）、細胞質の凝集、および内因性エンドヌクレアーゼの活性化を特徴とする。癌細胞に対するこれらの効果のいずれかの決定は、リガンド薬物コンジュゲートが癌の処置に有用であることを示す。
【０２２３】
細胞生存率は、ニュートラルレッド、トリパンブルーまたはＡＬＡＭＡＲ（商標）ブルーなどの色素の細胞内取り込みを決定することによって測定され得る（例えば、Ｐａｇｅら、１９９３，Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３：４７３−４７６を参照のこと）。このようなアッセイでは、色素を含有する培地中で細胞をインキュベートし、細胞を洗浄し、残った色素（これは、色素の細胞取り込みを示す）を分光測光法で測定する。タンパク質結合色素であるスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）もまた、細胞傷害性を測定するのに使用され得る（Ｓｋｅｈａｎら、１９９０，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８２：１１０７−１２）。
【０２２４】
あるいは、死細胞ではなく生細胞を検出することによる哺乳動物細胞の生存および増殖についての定量的比色アッセイでは、ＭＴＴなどのテトラゾリウム塩を使用する（例えば、Ｍｏｓｍａｎｎ，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：５５−６３を参照のこと）。
【０２２５】
アポトーシスは、例えば、ＤＮＡ断片化を測定することによって定量され得る。ＤＮＡ断片化をインビトロで定量的に決定するための市販の測光法が利用可能である。ＴＵＮＥＬ（これは、断片化されたＤＮＡにおける標識ヌクレオチドの組み込みを検出する）およびＥＬＩＳＡベースのアッセイを含むこのようなアッセイの例は、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ，１９９９，ｎｏ．２，ｐｐ．３４−３７（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）に記載されている。
【０２２６】
アポトーシスはまた、細胞における形態的変化を測定することによって決定され得る。例えば、壊死と同様に、原形質膜の完全性の喪失は、特定の色素（例えば、蛍光色素、例えば、アクリジンオレンジまたはエチジウムブロミドなど）の取り込みを測定することによって決定され得る。アポトーシス細胞数を測定するための方法は、Ｄｕｋｅ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｏｌｉｇａｎら、ｅｄｓ．，１９９２，ｐｐ．３．１７．１−３．１７．１６）によって記載されている。また、ＤＮＡ色素（例えば、アクリジンオレンジ、エチジウムブロミドまたはヨウ化プロピジウム）で細胞を標識し、核内膜に沿ったクロマチン凝縮および辺縁化について細胞を観察し得る。アポトーシスを決定するために測定され得る他の形態的変化としては、例えば、細胞質凝集、膜小胞化の増大および細胞収縮が挙げられる。
【０２２７】
アポトーシス細胞の存在は、培養物の結合した区画および「浮遊」区画の両方で測定され得る。例えば、上清を除去し、結合した細胞をトリプシン処理し、遠心分離洗浄工程（例えば、２０００ｒｐｍで１０分間）後に調製物を合わせ、（例えば、ＤＮＡ断片化を測定することによって）アポトーシスを検出することによって、両区画を収集し得る（例えば、Ｐｉａｚｚａら、１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：３１１０−１６を参照のこと）。
【０２２８】
リガンド薬物コンジュゲートの効果は、動物モデルにおいて試験または確認され得る。癌の多くの確立された動物モデルは当業者に公知であり、これらのいずれかを使用して、リガンド薬物コンジュゲートの有効性をアッセイし得る。このようなモデルの非限定的な例は、以下に記載される。さらに、リガンド薬物コンジュゲートのインビボ有効性を試験するための小動物モデルは、ヒト腫瘍細胞系を適切な免疫欠損齧歯類系統（例えば、無胸腺ヌードマウスまたはＳＣＩＤマウス）に移植することによって作製され得る。
【０２２９】
組成物および投与方法
様々な送達システムが公知であり、リガンド−薬物コンジュゲートを投与するのに使用され得る。導入方法としては、限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下の経路が挙げられる。投与は、例えば、注入またはボーラス注射によるものであり得る。特定の好ましい実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートの投与は、注入によるものである。非経口的投与は、好ましい投与経路である。
【０２３０】
リガンド薬物コンジュゲートは、１つ以上の薬学的に適合性の成分を含む医薬組成物として投与され得る。例えば、医薬組成物は、典型的には、１つ以上の薬学的担体（例えば、滅菌液体、例えば、水および油、例えば、石油、動物、植物または合成起源の油、例えば、ラッカセイ油、大豆油、鉱油、ごま油など）を含む。医薬組成物が静脈内投与される場合、水がより典型的な担体である。食塩水溶液ならびにデキストロース水溶液およびグリセロール水溶液もまた、特に注射用溶液の液体担体として用いられ得る。適切な薬学的賦形剤は、当技術分野で公知である。組成物はまた、所望であれば、微量の湿潤剤もしくは乳化剤またはｐＨ緩衝剤を含有し得る。適切な薬学的担体の例は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載されている。製剤化は、投与様式に対応する。
【０２３１】
典型的な実施形態では、医薬組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合した医薬組成物として、ルーチンな手順にしたがって製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張水性緩衝液の溶液である。必要である場合、医薬はまた、可溶化剤および注射部位での疼痛を和らげるための局所麻酔剤、例えば、リグノカインを含み得る。一般に、これらの成分は別個にまたは一緒に混合して、単位剤形、例えば、凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、活性剤の量を示す密閉容器、例えば、アンプルまたはサシェで供給される。医薬が注入によって投与されるべきである場合、例えば、製薬グレードの滅菌水または滅菌食塩水を含有する注入ボトルで投薬され得る。医薬が注射によって投与される場合、注射用滅菌水または食塩水のアンプルは、例えば、成分が投与前に混合され得るように提供され得る。
【０２３２】
特定の障害または症状の処置に有効な化合物の量は、障害または症状の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定され得る。さらに、最適な投与量範囲を同定するのを支援するために、インビトロアッセイまたはインビボアッセイが場合により用いられ得る。組成物に用いられるべき正確な用量はまた、投与経路および疾患または障害の重症度に依存し、施術者の判断および各患者の状況にしたがって決定されるべきである。
【０２３３】
組成物は、適切な投与量が得られるように、有効量の化合物を含む。典型的には、この量は、組成物の重量に対して少なくとも約０．０１％の化合物である。
【０２３４】
静脈内投与のために、組成物は、動物の体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約１００ｍｇの化合物を含み得る。一態様では、組成物は、動物の体重１ｋｇ当たり約１〜約１００ｍｇの化合物を含み得る。別の態様では、投与される量は、体重１ｋｇ当たり約０．１〜約２５ｍｇの化合物の範囲である。
【０２３５】
一般に、患者に投与される化合物の投与量は、典型的には、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇである。いくつかの実施形態では、患者に投与される投与量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１５ｍｇである。いくつかの実施形態では、患者に投与される投与量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１５ｍｇである。いくつかの実施形態では、患者に投与される投与量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。いくつかの実施形態では、投与される投与量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約５ｍｇまたは約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇである。いくつかの実施形態では、投与される投与量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約１５ｍｇである。いくつかの実施形態では、投与される投与量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約１０ｍｇである。
【０２３６】
医薬組成物は、一般に、米国食品医薬品局のすべての製造管理および品質管理に関する基準（ＧＭＰ）の規制に全面的に遵守した実質的に等張性の滅菌物として製剤化される。
【０２３７】
リガンド薬物コンジュゲートを使用する治療方法
リガンド薬物コンジュゲートは、腫瘍細胞もしくは癌細胞の増大を阻害するために、または動物における癌を処置するために有用である。リガンド薬物コンジュゲートは、動物の癌を処置するために様々な状況に応じて使用され得る。
【０２３８】
リガンド薬物コンジュゲートで処置され得る特定の種類の癌としては、限定されないが、（１）固形腫瘍、例えば限定されないが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膵臓癌、骨癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、咽喉癌、扁平上皮癌腫、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、脂腺癌腫、乳頭状癌腫、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝癌、胆管癌腫、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、子宮癌、精巣癌、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、肺癌、上皮癌腫、神経膠腫、膠芽腫、多形性星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜腫、皮膚癌、メラノーマ、神経芽細胞腫および網膜芽腫；（２）血液由来の癌、例えば限定されないが、急性リンパ芽球性白血病「ＡＬＬ」、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病「ＡＭＬ」、急性前骨髄球性白血病「ＡＰＬ」、急性単芽球性白血病、急性赤白血病性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病、急性未分化型白血病、慢性骨髄性白血病「ＣＭＬ」、慢性リンパ性白血病「ＣＬＬ」、ヘアリー細胞白血病、多発性骨髄腫、急性および慢性の白血病、例えば、リンパ芽球性骨髄性白血病およびリンパ性骨髄性白血病；ならびに（３）リンパ腫、例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病および真性多血症挙げられる。いくつかの実施形態では、癌は、ＤＲ５陽性癌またはＤＲ５発現癌である。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、本発明は、癌を処置する方法であって、細胞傷害剤に共有結合したＤＲ５結合剤を含む有効量のリガンド薬物コンジュゲートまたはその医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、上記式Ｉを含む。有効量のリガンド薬物コンジュゲートは、処置される被験体、苦痛の重症度および投与様式に依存する。有効量の決定は、特に、本明細書で提供される詳細な開示に鑑みれば、当業者の能力の十分に範囲内である。一般に、低用量または少量を最初に投与し、次いで、毒性副作用が最小であるかまたは毒性副作用を伴わずに所望の治療効果が処置被験体で観察されるまで、投与される用量または投与量を徐々に増加させることによって、リガンド薬物コンジュゲートの効果的な量または有効量を決定する。本発明の投与に適切な用量および投与スケジュールを決定するための適用可能な方法は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１１ｔｈ  Ｅｄ．，Ｂｒｕｎｔｏｎ，Ｌａｚｏ  ａｎｄ  Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄｓ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ（２００６）、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００３）（これらは両方とも、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【実施例】
【０２４０】
ＤＲ５抗体薬物コンジュゲートのコンジュゲーション
ｈＢ２７３抗体薬物コンジュゲートを以下のように調製した。配列番号９のアミノ酸配列、またはカルボキシ末端リジン残基を欠く配列番号９のアミノ酸配列（すなわち、配列番号９のアミノ酸残基１〜４５１のアミノ酸配列）に対応する重鎖を含み、配列番号１０のアミノ酸配列に対応する軽鎖を含むｈＢ２７３抗体をリガンドユニットとして使用した。濃度範囲５〜２５ｍｇ／ｍＬのｈＢ２７３抗体溶液を３７℃で前平衡化し、次いで、５〜１５％（ｖ／ｖ）１Ｍリン酸カリウム（ｐＨ７．４）を追加してｐＨを７．５〜８．０に上げた。また、最終濃度１ｍＭでＤＴＰＡを追加した。抗体１モル当たり２〜３モル当量のＴＣＥＰを追加することによって、抗体を部分的に還元した。平均４個の遊離チオールを有する抗体を得るのに必要なＴＣＥＰの量は、グラムスケールの還元およびコンジュゲーションの前にスモールスケールの還元およびコンジュゲーション反応を数回行うことによって経験的に決定した。１〜２時間の還元期間の後、抗体溶液を２２℃に冷却し、次いで、１０〜２０ｍＭのＤＭＳＯ原液からの４〜６モル当量の薬物リンカー（例えば、ｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＦまたはｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥまたはｍｃ−ＭＭＡＦ）で処置した。薬物−リンカーストックを１５分間追加した。さらなるＤＭＳＯを入れて、混合物の総ＤＭＳＯを体積で１５％にした。薬物−リンカーの追加が終了した後、反応混合物をさらに３０分間撹拌してから、追加した薬物−リンカー１モル当たり５倍モル過剰のＮ−アセチルシステインで処置した。クエンチした後、１０ダイアボリューム（ｄｉａｖｏｌｕｍｅｓ）のＰＢＳを使用する一定体積のダイアフィルトレーションによって、残った遊離薬物および他の工程不純物を除去した。以下の抗体薬物コンジュゲートを作製した：ｈＢ２７３にｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート（「ｈＢ２７３−ｖｃ−ＭＭＡＥ」）およびｈＢ２７３にｍｃ−ＭＭＡＦがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート（「ｈＢ２７３−ｍｃ−ＭＭＡＦ」）。得られた抗体薬物コンジュゲートは、抗体１個当たり約３．５〜４．５個の薬物−リンカーユニットの平均薬物負荷を有していた（すなわち、約３．５〜４．５の平均ｐ値を有していた）。平均薬物負荷または平均ｐ値は、当技術分野で公知の方法にしたがって測定することができる。非限定的な例として、ｐ値は、Ｈａｍｂｌｅｔｔら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １０：７０６３−７０７０（２００４）（これは、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法にしたがって測定することができる。一方法では、疎水性相互作用クロマトグラフィー−高速液体クロマトグラフィーは、例えば、エーテル−５ＰＷカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を使用して、抗体薬物コンジュゲートを含む試料に対して実施される。抗体および薬物は異なる最大吸光度を有するので、ピークスペクトルを重ね合わせて平均薬物負荷を決定することによって、抗体１個当たりの薬物ユニット数を特定および定量することが可能である。別の方法では、抗体および薬物が異なる最大吸光度（λｍａｘ）を有する場合、ｐ値は、紫外可視吸収分��法（ＵＶ−ＶＩＳ）によって測定される。測定された全吸光度（薬物および抗体の吸光度）と、抗体および薬物の吸光係数とを使用することによって、抗体および薬物の濃度を決定することができ、この濃度から薬物と抗体とのモル比を計算することができる。
【０２４１】
上記プロトコールはまた、ｈＢ２７３にｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＦがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート（「ｈＢ２７３−ｖｃ−ＭＭＡＦ」）を作製するのに使用することができる。抗体１個当たり約２個の薬物−リンカーユニットの平均薬物負荷を有する（すなわち、約２の平均ｐ値を有する）抗体薬物コンジュゲートを調製するためには、ＴＣＥＰの量を５０％減少させることによって、上記プロトコールを修正する。薬物リンカーの量も５０％減少させる。対応する抗体薬物コンジュゲートをｈＢ２７３−ｖｃ−ＭＭＡＥ（２）、ｈＢ２７３−ｍｃ−ＭＭＡＦ（２）またはｈＢ２７３−ｖｃ−ＭＭＡＦ（２）と略記する。
【０２４２】
ｈＴＲＡ−８にｍｃ−ＭＭＡＦがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート（「ｈＴＲＡ−８−ｍｃ−ＭＭＡＦ」）を以下のように調製した。配列番号１のアミノ酸配列、またはカルボキシ末端リジン残基を欠く配列番号１のアミノ酸配列（すなわち、配列番号１のアミノ酸残基１〜４４８のアミノ酸配列）に対応する重鎖を含み、配列番号２のアミノ酸配列に対応する軽鎖を含むｈＴＲＡ−８抗体をリガンドユニットとして使用した。このｈＴＲＡ−８抗体は、ティガツズマブと称される。７．６ｍｇ／ｍＬのｈＴＲＡ−８抗体溶液を３７℃で前平衡化し、次いで、１５％体積の５００ｍＭホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．０）を追加して、ｐＨを７．５〜８．０に上げる。この溶液はまた、１ｍＭ  ＤＴＰＡを含有する。抗体１モル当たり２．６当量のＴＣＥＰを追加し、３７℃で撹拌することによって、抗体を部分的に還元する。２８分後、還元した抗体の溶液を氷上に置き、次いで、２０．５ｍＭ  ＤＭＳＯ溶液として４．８〜４．９モル当量（抗体に対して）の薬物リンカー（例えば、ｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＦまたはｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥまたはｍｃ−ＭＭＡＦ）で迅速に処置する。さらなるＤＭＳＯを入れて、混合物のＤＭＳＯを体積で１０％にする。反応混合物を氷上で約９０分間撹拌してから、５倍モル過剰のＮ−アセチルシステイン（ｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＦに対して）で処置する。タンジェント流ろ過（最初に約１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、次いで、約１０ダイアボリュームのＰＢＳでダイアフィルトレーションする）によって、コンジュゲートを単離する。得られた抗体薬物コンジュゲートは、抗体１個当たり約４個の薬物−リンカーユニットの平均薬物負荷を有していた。
【０２４３】
いくつかの腫瘍細胞系に対するｈＢ２７３  ＡＤＣのインビトロ細胞傷害活性
ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを培養培地で希釈して２０００ｎｇ／ｍＬとし、これに４０００ｎｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を入れた。これらの溶液を培養培地で系列希釈し、５０μＬ／ウェルで９６ウェルマイクロプレートに二連で追加した。インビトロ研究で使用した細胞系は、Ａ３７５（ヒトメラノーマ）、ＮＣＩ−Ｈ２１２２（ヒト肺腺癌）、ＨＣＴ１５（ヒト結腸直腸腺癌）、ＳＫ−ＯＶ−３（ヒト卵巣腺癌）、ＬｏＶｏ（ヒト結腸直腸腺癌）、Ａ２７８０（ヒト卵巣癌腫）、Ａ５４９（ヒト肺腺癌）Ｃａｋｉ−２（ヒト腎細胞癌腫）、ＨＣＴ１１６（ヒト結腸直腸腺癌）、ＮＣＩ−Ｈ１９７５（ヒト肺腺癌）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ヒト乳腺癌）およびＵ−８７ＭＧ（ヒト膠芽腫）であった。培養培地を用いて、細胞懸濁液を生細胞４．０×１０４個／ｍＬに調整し、５０μＬ／ウェル（＝生細胞２×１０３個／ウェル）でウェルに追加した。ブランクウェルには細胞を播種しなかった。ＣＯ２インキュベーターで７２時間インキュベートした後、製造業者の説明書にしたがってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって、ＡＴＰの量を検出した。マイクロプレートリーダー（Ｍｉｔｈｒａｓ  ＬＢ９４０，Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって、発光を測定した。以下の式：
生存率（％）＝１００×（Ｔ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ）
Ｔ：試験ウェルの発光
Ｃ：未処置細胞を含むウェルの平均発光
Ｂ：ブランクウェルの平均発光
にしたがって、各ウェルの細胞生存率を計算した。
【０２４４】
図１〜１２は、本発明のｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した１２種の細胞系の結果を示す。図に示されているように、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥおよびｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦは、ＬｏＶｏ（図５）、Ａ５４９（図７）およびＣａｋｉ−２（図８）などのいくつかのヒト腫瘍細胞系に対してｈＢ２７３よりも強力な細胞傷害活性を示した。さらに、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥおよびｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦは、このアッセイに使用したすべての腫瘍細胞系に対してｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦよりも強力な細胞傷害活性を示した。
【０２４５】
ＢＩＡＣｏｒｅによる抗ＤＲ５  ＡＤＣの結合親和性の決定
ＤＲ５細胞外ドメインタンパク質発現ベクターの生産：配列番号１７のヒトＤＲ５配列のアミノ酸残基１〜１３０からなるＤＲ５の領域を発現するベクター（本明細書では以下、「ｓＤＲ５」と称される）を構築するために、ｓＤＲ５を増幅するためのプライマーセット：
ＤＲ５  Ｎｄｅｆｗ：５’−ｇｔｇｇｃａｔａｔｇｇｃｔｃｔｇａｔｃａｃｃｃａａｃａａ−３’（配列番号１８）および
ＤＲ５  Ｘｈｏｒｖ：５’−ｃｇｃｃｔｃｇａｇｔｇａｔｔｃｔｔｔｇｔｇｇａｃａｃａ−３’（配列番号１９）
を使用して、ヒトＤＲ５細胞外ドメインをコードするｃＤＮＡを鋳型として使用して、ＰＣＲ反応を実施した。得られたＰＣＲ産物をＮｄｅＩおよびＸｈｏＩで切断し、ｐＥＴ２１ｂ（＋）（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｉｎｃ．製）のＮｄｅＩ／ＸｈｏＩ部位にクローニングした（本明細書では以下、「ｐＥＴ２１ｂ（＋）−ｓＤＲ５」と略記する）。「ｐＥＴ２１ｂ（＋）−ｓＤＲ５」によって発現された組換えＤＲ５タンパク質は、本明細書では「ｒｓＤＲ５」（配列番号２０）と称される。
【０２４６】
ＤＲ５細胞外ドメインタンパク質（ｒｓＤＲ５）の生産：発現プラスミドｐＥＴ２１ｂ（＋）−ｓＤＲ５でＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｏｒｉｇａｍｉ  Ｂ（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｉｎｃ．製）を形質転換し、１００μｇ／ｍｌアンピシリン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．製）および１５μｇ／ｍｌカナマイシン（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．製）を補充した２−ＹＴ培地中で培養し、０．５ｍＭ  ＩＰＴＧを追加することによってＤＲ５の部分タンパク質の発現を誘導した。６０００ｒｐｍで２０分間遠心分離することによって細胞を収集し、結合緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、３００ｍＭ  ＮａＣｌ）に懸濁し、続いて氷上で超音波均質化した。得られたホモジネートを２５，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清を回収し、Ｎｉ−ＮＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．製）に適用した。結合緩衝液で試料を洗浄した後、溶出緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、３００ｍＭ  ＮａＣｌおよび３００ｍＭイミダゾール）を用いて、溶出を実施した。透析緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．０、２０ｍＭ  ＮａＣｌ）を用いて溶出試料を透析し、ＭＯＮＯ  Ｑに適用し、溶出緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．０、１Ｍ  ＮａＣｌ）を用いて勾配溶出を実施した。ＰＢＳを溶媒として使用してゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．製のＳｕｐｅｒｄｅｘ７５  １６／６０）によって、溶出試料をさらに精製した。この方法によって得られた組換えタンパク質の濃度をＵＶ２８０ｎｍで測定した（モル吸光定数：１４８５５）。
【０２４７】
Ｂｉａｃｏｒｅを使用した結合活性の測定：ＢＩＡｃｏｒｅ３０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ）を使用して、捕捉ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃ−ＭＭＡＥまたはｈＢ２７３−ｍｃ−ＭＭＡＦに結合する系列希釈の組換え可溶性ＤＲ５タンパク質（ｒｓＤＲ５）を用いて、速度定数ｋｏｎおよびｋｏｆｆを決定した。ヒト抗体捕捉キット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡＢ）を使用して、標準的なＥＤＣ−ＮＨＳアミンカップリング化学反応によってＣＭ５センサーチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ）上に共有結合的に固定化された抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体によって、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃ−ＭＭＡＥまたはｈＢ２７３−ｍｃ−ＭＭＡＦを捕捉した。抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）を直接カップリングする場合、約１５００〜２０００ＲＵのＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡおよび０．０５％界面活性剤Ｐ２０）を用いて、ＣＭ５センサーチップおよび参照フローセルをコーティングした。ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃ−ＭＭＡＥまたはｈＢ２７３−ｍｃ−ＭＭＡＦ（０．５〜１μｇ／ｍｌ）を流量１０μｌ／分で１分間ロードし、次いで、濃度範囲０．３〜８５ｎＭのｒｓＤＲ５を使用して流量３０μｌ／分で５分間、続いて５分間の解離期を行うことによって、反応速度測定を実施した。再生のために、３Ｍ  ＭｇＣｌ２を流量１０μｌ／分で３０秒間ロードした。ＢＩＡ評価ソフトウェア３．１（Ｂｉａｃｏｒｅ）を使用してすべてのセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｇｒａｍ）をグローバルフィッティングして、解離定数ＫＤ（ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を決定した。結果を以下の表１に示す：
【表１】
2015516401.tif 000058
【０２４８】
インビボ抗腫瘍効果−方法
５〜６週齢の特定病原体不在雌性および雄性ＣＡｎＮ．Ｃｇ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ／ＣｒｌＣｒｌｊマウス（ヌードマウス）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｊａｐａｎ  Ｉｎｃ．から購入し、それらが６〜８週齢に達したら使用した。４〜６匹のマウスを滅菌ケージに一緒に収容し、特定病原体不在条件下で維持した。実験室において、環境条件を人工照明１２時間（８：００〜２０：００）の温度２３℃および湿度５５％に設定した。ＦＲ−２飼料（Ｆｕｎａｂａｓｈｉ  Ｆａｒｍ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）をマウスに給餌し、塩素（５〜１５ｐｐｍ）を含む水を自由に摂取させた。
【０２４９】
すべての研究において、担腫瘍マウスを選択し、腫瘍体積に基づいて実験群に分けた。ヌードマウスで腫瘍を確立した後、デジタルキャリパー（ＣＤ１５−ＣＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ  Ｃｏｒｐ．）を用いて、すべての担腫瘍マウスにおける腫瘍の長さおよび幅（ｍｍ）を小数第二位まで測定した。動物実験データのためのＳａｎｋｙｏマネジメントシステム（ＳＭＡＤ，ＪＭＡＣＳＯＦＴ  Ｃｏｒｐ．）において、データを自動的に記録した。以下の式にしたがって、ＳＭＡＤにおいて各マウスの腫瘍体積を自動的に計算した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×長さ×幅２
【０２５０】
腫瘍体積を丸めて整数にし、丸めた腫瘍体積をさらなる分析に使用した。腫瘍体積に基づいて、スチューデント化残差が絶対値で最大のマウスを除外することによって、一定数の担腫瘍マウスを選択した。腫瘍体積を使用した乱塊法によるＳＭＡＤを用いて、選択したマウスを実験群に分けた。グルーピングの後、デジタルキャリパーを用いて、各マウスにおける腫瘍の長さおよび幅を週１回または２回測定した。各群の平均腫瘍体積および標準誤差（ＳＥ）を計算し、丸めて整数にし、各マウスの丸めた腫瘍体積をＳＭＡＤで使用した。また、丸めた腫瘍体積を使用したＳＭＡＤでは、以下の式にしたがって各測定日の腫瘍成長阻害（ＴＧＩ、％）を計算し、丸めて整数にした。
ＴＧＩ（％）＝（１−Ｔ／Ｃ）×１００
Ｔ：薬物処置群の平均腫瘍体積（ｍｍ３）
Ｃ：未処置群の平均腫瘍体積（ｍｍ３）
【０２５１】
ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを食塩水で希釈し、マウスの体重１ｋｇ当たり１０ｍＬの体積で担腫瘍ヌードマウスに投与した。
【０２５２】
各ヒト腫瘍異種移植研究の詳細な手順は以下のとおりである：
【０２５３】
Ａ３７５
ヒトメラノーマ細胞系Ａ３７５は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、５×１０６個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。１４日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝６）。１４日目、２１日目および２８日目に、３ｍｇ／ｋｇのｈＢ２７３および１ｍｇ／ｋｇのｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦをマウスに静脈内投与した。
【０２５４】
Ａ２７８０
ヒト卵巣癌腫細胞系Ａ２７８０は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、５×１０６個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。１１日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝６）。１１日目、１８日目および２５日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを３ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２５５】
Ｃａｋｉ−２
ヒト腎細胞癌腫細胞系Ｃａｋｉ−２は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、固形腫瘍片（５×５×５ｍｍ３）を雄性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。１８日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝８）。１８日目、２５日目および３２日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを３ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２５６】
ＨＣＴ−１１６
ヒト結腸直腸腺癌細胞系ＨＣＴ−１１６は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、６×１０６個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。１１日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝６）。１１日目、１８日目および２５日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを３ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２５７】
ＨＣＴ−１５
ヒト結腸直腸腺癌細胞系ＨＣＴ−１５は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、６×１０６個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。９日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝６）。９日目、１６日目および２３日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを３ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２５８】
ＬｏＶｏ
ヒト結腸直腸腺癌細胞系ＬｏＶｏは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、固形腫瘍片（５×５×５ｍｍ３）を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。１０日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝８）。１０日目、１７日目および２４日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを３ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２５９】
ＮＣＩ−Ｈ１２９９
ヒト肺癌腫細胞系ＮＣＩ−Ｈ１２９９は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、４×１０６個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。１４日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝６）。１４日目、２１日目および２８日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを３ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２６０】
ＮＣＩ−Ｈ１９７５
ヒト肺腺癌細胞系ＮＣＩ−Ｈ９７５は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、３×１０６個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。１３日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝６）。１３日目、２０日目および２７日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを３ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２６１】
ＮＣＩ−Ｈ２１２２
ヒト肺腺癌細胞系ＮＣＩ−Ｈ２１２２は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、３×１０６個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。１５日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝６）。１５日目、２２日目および２９日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを１ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２６２】
ＳＫ−ＯＶ−３
ヒト卵巣腺癌細胞系ＳＫ−ＯＶ−３は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、固形腫瘍片（５×５×５ｍｍ３）を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。１４日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝１０）。１４日目、２１日目および２８日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを３ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２６３】
Ｕ−８７ＭＧ
ヒト膠芽腫細胞系Ｕ−８７ＭＧは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、５×１０６個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。７日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた（ｎ＝６または７）。７日目、１４日目および２１日目に、ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを３ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈内投与した。
【０２６４】
インビボ抗腫瘍効果−結果
Ｃａｋｉ−２異種移植モデル（図１５）では、抗体（ｈＢ２７３、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦ）はいずれも、いかなる抗腫瘍活性も示さなかった。Ａ３７５（図１３）、Ａ２７８０（図１４）、ＨＣＴ１１６（図１６）、ＬｏＶｏ（図１８）、ＮＣＩ−Ｈ１２９９（図１９）、ＮＣＩ−Ｈ１９７５（図２０）、ＳＫ−ＯＶ−３（図２２）およびＵ−８７ＭＧ（図２３）の異種移植モデルでは、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥおよびｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦの両方が、ｈＢ２７３よりも強力な抗腫瘍効果を示した。ＨＣＴ−１５（図１７）およびＮＣＩ−Ｈ２１２２（図２１）異種移植モデルでは、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦの抗腫瘍活性はｈＢ２７３のものと同程度に有効であったのに対して、これらのモデルでは、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥの抗腫瘍活性はｈＢ２７３のものよりも有効性が低かった。これらの結果は、ｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートがｈＢ２７３よりも強力な抗腫瘍効果を有することを実証している。
【０２６５】
Ａ２７８０（図１４）、ＨＣＴ１１６（図１６）、ＬｏＶｏ（図１８）、ＮＣＩ−Ｈ１２９９（図１９）、ＮＣＩ−Ｈ１９７５（図２０）、ＮＣＩ−Ｈ２１２２（図２１）、ＳＫ−ＯＶ−３（図２２）およびＵ−８７ＭＧ（図２３）の異種移植モデルでは、ｈＢ２７３−ｖｃＭＭＡＥおよびｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦの両方が、ｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦよりも強力な抗腫瘍効果を示した。Ａ３７５（図１３）およびＨＣＴ−１５（図１７）異種移植モデルでは、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦはｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦよりも有効であった。Ａ３７５異種移植モデル（図１３）では、ｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦで処置した６匹のマウスうちの１匹が４８日目において触知可能な腫瘍を有していなかったのに対して、ｈＢ２７３−ｍｃＭＭＡＦで処置したマウスはすべて（ｎ＝６）４８日目において触知可能な腫瘍を有していなかった。これらの結果は、ｈＢ２７３リガンド薬物コンジュゲートがｈＴＲＡ−８リガンド薬物コンジュゲートよりも強力な抗腫瘍効果を有することを実証している。
【０２６６】
本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されるものではない。当業者であれば、本明細書に記載したものに加えて本発明の様々な改変が前述の説明および添付の図面から明らかになる。このような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることを意図する。特に文脈上明らかではない限り、本発明の任意の工程、要素、実施形態、特徴または態様を任意の他のものと組み合わせて使用することができる。本出願で言及されているすべての特許出願、科学刊行物、アクセッション番号などは、まるで個々に示されているのと同程度に、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
2015516401.tif 000061
【図２】
2015516401.tif 000062
【図３】
2015516401.tif 000063
【図４】
2015516401.tif 000064
【図５】
2015516401.tif 000065
【図６】
2015516401.tif 000066
【図７】
2015516401.tif 000067
【図８】
2015516401.tif 000068
【図９】
2015516401.tif 000069
【図１０】
2015516401.tif 000070
【図１１】
2015516401.tif 000071
【図１２】
2015516401.tif 000072
【図１３】
2015516401.tif 000073
【図１４】
2015516401.tif 000074
【図１５】
2015516401.tif 000075
【図１６】
2015516401.tif 000076
【図１７】
2015516401.tif 000077
【図１８】
2015516401.tif 000078
【図１９】
2015516401.tif 000079
【図２０】
2015516401.tif 000080
【図２１】
2015516401.tif 000081
【図２２】
2015516401.tif 000082
【図２３】
2015516401.tif 000083
【配列表】
2015516401000001.app
【国際調査報告】
2015516401.tif 000084
2015516401.tif 000085