(57)【要約】  ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼに関連する状態または障害の処置に使用するための式（Ｉ）の化合物。2015509969.tif 000021【選択図】  なし
2015509969.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
2015509969.tif 000020
［式中：
Ａは、５員−または６員−複素環または炭素環であり；
Ｂは、５員−または６員−単環式複素環または炭素環および９員−または１０員−二環式複素環または炭素環から選択され；
各Ｒ１は、独立してハロゲン、Ｒ４Ｏ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ４Ｓ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）ｑ、ＣＮ（ＣＨ２）ｑ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ３は、ハロゲン、Ｒ６Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｓ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９Ｎ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９ＮＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９ＮＳ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｗ、ＣＮ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ７（ＣＨ２）ｗ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、およびＣ２−Ｃ６アルキニルから選択され、それらのアルキル、アルケニルおよびアルキニルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ４は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ５は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、および５員−または６員−複素環または炭素環から選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニル、複素環および炭素環は所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ７は、５員−もしくは６員−単環式複素環もしくは炭素環または９員−もしくは１０員−二環式複素環もしくは炭素環から選択され、それらの複素環および炭素環は所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ８は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；
各Ｒ９は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；
ｍ、ｎ、ｐ、各ｑおよび各ｗは、独立して０、１、２および３から選択される］
またはその医薬的に許容できる塩であって、
内分泌障害、心血管障害、呼吸器障害、代謝障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症性および／または神経変性性の障害、腎疾患、生殖障害、眼および／または水晶体を冒す疾患、ならびに／あるいは内耳を冒す状態、炎症性障害、肝疾患、痛み、癌、たとえば肺癌、アレルギー性障害、外傷性障害、敗血症性、出血性およびアナフィラキシー性のショック、胃腸系の疾患または障害、血管新生、血管新生依存性状態、肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、脳血管偶発症候、ならびに線維性肺疾患から選択される、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼに関連する状態または障害の処置に使用するための化合物。
【請求項２】
Ａは、モノ不飽和５員−または６員−複素環または炭素環である、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項３】
Ｂは、５員−または６員−単環式複素環および９員−または１０員−二環式複素環から選択される、請求項１もしくは２に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項４】
Ｂは、５員−または６員−単環式複素環である、請求項３に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項５】
Ｂは、５員−または６員−単環式複素環または炭素環である、請求項１もしくは２に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項６】
各Ｒ１は、独立してハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項７】
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項８】
各Ｒ３は、ハロゲン、Ｒ６Ｏ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ６Ｓ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ、Ｒ７（ＣＨ２）ｑ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、およびＣ２−Ｃ６アルキニルから選択され、それらのアルキル、アルケニルおよびアルキニルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項９】
ｎは０または１である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１０】
ｎは１である、請求項９に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１１】
Ａは、５員−または６員−モノ不飽和複素環または炭素環であり；
Ｂは、５員−または６員−単環式複素環または炭素環および９員−または１０員−二環式複素環から選択され；
各Ｒ１は、独立してハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
Ｒ３は、ハロゲン、Ｒ６Ｏ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ６Ｓ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ、Ｒ７（ＣＨ２）ｑ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、およびＣ２−Ｃ６アルキニルから選択され、それらのアルキル、アルケニルおよびアルキニルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
ｎは０または１である、
請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１２】
２−（２−（４−ベンジルピペラジン−１−イル）アセトアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（２−（４−（フラン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセトアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
５，５−ジメチル−２−（２−フェニルアセトアミド）−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、および
２−（４−メトキシベンズアミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
から選択される、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１３】
障害または状態が糖尿病である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１４】
障害または状態が脳血管偶発症候である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１５】
療法に使用するための、
２−（２−（４−ベンジルピペラジン−１−イル）アセトアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（２−（４−（フラン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセトアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
５，５−ジメチル−２−（２−フェニルアセトアミド）−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、および
２−（４−メトキシベンズアミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
から選択される化合物またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１６】
２−（２−（４−ベンジルピペラジン−１−イル）アセトアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（２−（４−（フラン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセトアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
から選択される化合物またはその医薬的に許容できる塩、および所望により少なくとも１種類の医薬的に許容できる賦形剤を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼ（Ｎｏｘ）に関連する状態または障害の処置に使用するためのチオフェン誘導体に関する。より具体的には、本発明は、Ｎｏｘ活性の増大により起きるかまたは推進される種々の疾患の処置に使用するためのＮｏｘ阻害剤としてのチオフェン誘導体に関する。特に、本発明は、Ｎｏｘ４に対する選択性をもつ化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
酸化的ストレスの定義は、反応性酸素の形成と排出のインビボ平衡異常である。細胞または組織における正常な酸化還元状態が変化すると、細胞機構のＤＮＡ、タンパク質および脂質を含めた成分に損傷を与える可能性のある有害なラジカルが生成する可能性がある。細胞成分が遺伝子変化を引き起こす化学変化をすると、これは癌その他の重大な疾患の形成を促進すると一般に考えられてきた。
【０００３】
酸素ラジカルの供給源  −  潜在的に酸化的ストレスを引き起こす可能性のある酸素ラジカル（Ｏ２−、Ｈ２Ｏ２およびＯＨ−）のインビボ発生因子が多数同定されている：ミトコンドリア内の複合体ＩおよびＩＩＩ、ならびにＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、シトクロムＰ４５０、金属イオン（コバルト、バナジウム、クロム、銅および鉄）、ならびに酸化還元循環できるある種の有機化合物。
【０００４】
一般的な抗酸化性物質  −  内因性の細胞性抗酸化性物質も多数ある：たとえば、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ペルオキシレドキシン類およびスルフィレドキシン。食物により供給されるビタミン類も生物を有害な酸素ラジカルから保護する重要な部分とみなされ、多くの食物源中に存在する重要な抗酸化性物質の最近の発見により抗酸化性物質の集積が増加した。
【０００５】
療法剤としての抗酸化性物質  −  ある種の抗酸化性物質が疾患を予防しかつ健康を増進するのに有益となりうることはきわめて明瞭である。それよりはるかに明瞭でないのは、どのタイプの抗酸化性物質を使用できるかということである。天然食物中に存在する抗酸化性物質の多くが酸化還元活性をもつ。これらのタイプの酸化還元活性物質を単離して補助医薬として供給すれば、これは有益であるより有害な結果をもたらす可能性の方が大きい。酸素ラジカルを広範に捕捉する、抗酸化性物質の非ターゲティッド適用は、無効であるだけでなく有害な可能性すらあることが臨床試験により示された。これは、健常者および各種疾患を伴なう患者を含めた２３２，５５０人の参加者について６７のランダム化試験で行なわれた試験で示された(Bjelakovic G, Nikolova D, Simonetti RG, Gluud C. Cochrane Database Syst Rev. 2008 Jul 16; (3):CD004183. Epub 2008 Jul 16)。
【０００６】
したがって、酸化還元活性をもつ一般的な抗酸化性物質は、有害な酸化還元サイクルを仲介することによって実際には細胞損傷を付加する可能性がある。他の一般的な抗酸化性物質は、身体機能を維持するのに必要である正常な細胞インビボ活性を有害にブロックするであろう。
【０００７】
反応性酸素の供給源および役割  −  次第に明らかになってきたのは、炎症、２型糖尿病、糖尿病合併症、多嚢胞卵巣症候群、発作、神経損傷状態および癌など多数の病的状態において反応性酸素の過度の産生および蓄積を引き起こすのは、ミトコンドリア内の複合体ＩおよびＩＩＩなど一般的に酸素ラジカルを漏出しているものではなく、むしろ強力な酸素ラジカル産生因子（正常な細胞シグナル伝達系の一部）がアップレギュレートされたものであるということである。したがって、酸化的ストレスの定義は、必ずしもＤＮＡ、タンパク質および脂質を不可逆的に変化させる酸素ラジカルではなく、アップレギュレートされると“正常な”細胞シグナル伝達を次第に妨害するようになって細胞レベルで平衡異常を形成し、最終的に他の組織および全身機能を変化させる可能性のある酸素ラジカルである。これの代表例はメタボリックシンドロームであり、これは血管疾患、２型糖尿病、発作、腎障害、神経障害、心不全、およびインスリン抵抗性を開始因子とする発作に関係する(Reaven, “Role of insulin resistance in human disease”, Diabetes 37(12), 1988)。インスリン抵抗性自体は、適切な受容臓器にエネルギーを選択的に貯蔵するのを指令するツールとして正常な身体機能の一部でもある。しかし、栄養過剰、または他の障害、たとえば過度の成長ホルモン産生を伴なう肢端肥大症、またはｏｂ／ｏｂマウスの場合のような異常機能性レプチンなどの代謝変化が起きると、これはメタボリックシンドロームに関係する臓器不全の原因となる無制御インスリン抵抗性を伴なう有害な状態を誘発するであろう。無制御インスリン抵抗性の共通点は、局所的および全身的な酸素ラジカル過剰産生である(Houstis et al., Nature 440, 2006; Katakam et al., J cereb blood Flow Metab, 2012 Jan 11)。
【０００８】
この過剰産生について最も興味深い候補のひとつは、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ（Ｎｏｘ）と呼ばれる膜貫通タンパク質（酵素）のファミリーである。同定されたＮｏｘの７つのファミリーメンバーがあり（Ｎｏｘ１〜５およびＤｕｏｘ１〜２）、これらは反応性酸素の主要または鍵となる供給源として認識されることがきわめて多く、また下記を含めた多数の細胞事象において正常な細胞シグナル伝達系の一部として主要な役割を果たす：増殖(Brar et al., Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 282, 2002)、成長(Brar et al., Am J Physiol Cell Physiol, 282, 2002)、線維形成(Grewal et al., Am J Physiol, 276, 1999)、移動(Sundaresan et al., Science, 270, 1995)、アポトーシス(Lundqvist-Gustafsson et al., J Leukoc Biol, 65, 1999)、分化(Steinbeck et al., J Cell Physiol, 176, 1998)、細胞骨格再配列(Wu et al., J Virol, 78, 2004)、および収縮(Rueckschloss et al., Exp Gerontol, 45, 2010)。
【０００９】
ＮＡＤＰＨオキシダーゼと疾患−ＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性低下を伴なう幾つかの遺伝的状態が同定されている−Ｎｏｘ２欠損は、微生物を死滅させてその攻撃を中和するための免疫応答を低下させる（慢性肉芽腫性疾患）−内耳におけるＮｏｘ３欠損は重力知覚を欠損させ、また甲状腺における酵素活性が欠損した二重ＮＡＤ（Ｐ）ＨオキシダーゼＤｕｏｘ２は甲状腺機能低下を生じる。
【００１０】
しかし、Ｎｏｘ活性増大は多数の疾患の一部であるかまたは原因ですらあることの強力な証拠を証言するはるかに大きな刊行物リストがあり、それは指数的に増加しているようにも思われる(Lambeth JD, Review Article “Nox enzymes, ROS, and chronic disease: An example of antagonistic pleiotrpy”, Free Radical Biology & Medicine 43, 2007; Takac I et al., “The Nox Family of NADPH Oxidases: Friend or Foe of the Vascular System”, Curr Hypertens Rep. 2011 Nov 10; Montezano AC, “Novel Nox homologues in the vasculature: focusing on Nox4 and Nox5”, Clin Sci London 2011; Bedard K et al., “The Nox family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology” Physiol Rev. 2007; Camici M et al., “Obesity-related glomerulopathy and podocyte injury: a mini review”, Front Biosci 2012; Nabeebaccus A et al., “NADPH oxidases and cardiac remodeling” Heart Fai Rev. 2011; Kuroda J et al., “NADPH oxidase and cardiac failure”J Cardiovasc Transl Res. 2010; Kuroda J et al., “NADPH oxidase 4 is a major source of oxidative stress in the failing heart” Proc Natl Acad Sci USA 2010; Maejima Y et al., “Regulation of myocardial growth and death by NADPH oxidase” J Mol Cell Cardiol. 2011; Barnes JL et al., “Myofibroblst differentiation during fibrosis: role of NAD(P)H oxidases” Kidney international, 2011; Alison Cave “Selective targeting of NADPH oxidase for cardiovascular protection” Current Opinion in Pharmacology 2009; Albert van der Vliet “Nox enzymes in allergic airway inflammation” Biochimica et Biophysica Acta 1810, 2011; Pendyala S et al., “Redox regulation of Nox proteins” Respiratory Physiology & Neurobiology 174, 2010; Nair D et al., “Intermittent Hypoxia-Induced Cognitive Deficits Are Mediated by NADPH oxidase Activity in a Murine Model of Sleep Apnea” PLoS ONE, vol. 6, Issue 5, May 2011; Chia-Hung Hsieh et al., “NADPH oxidase Subunit 4-Mediated Reactive Oxygen species Contribute to Cycling Hypoxia-Promoted Tumor Progression in Glioblastoma Multiforme” PloS ONE, vol 6, issue 9, September 2011; Sedeek M et al., “Molecular mechanisms of hypertension: role of nox family NADPH oxidase” Current Opinion in Nephrology and Hypertension 2009; Augusto C et al., “Novel Nox homologues in the vasculature: focusing on Nox4 and Nox5” Clinical Science 2011; Briones AM et al., “Differential regulation of Nox1, Nox2 and Nox4 in vascular smooth muscle cells from WKY and SHR” Journal of the American Society of Hypertension 5:3, 2011)。
【００１１】
最近、Ｎｏｘ酵素、特にＮｏｘ４およびＮＡＤ（Ｐ）Ｈ−オキシダーゼは肺線維症に高度に関与することが示された。線維症における酸化的ストレスの機能は十分に認識されている(Kinnula VL, Fattman CL, Tan RJ, Oury TD (2005) Oxidative stress in pulmonary fibrosis: a possible role for redox modulatory therapy. Am J Respir Crit Care Med 172:417-422)；肺線維症および多臓器系における線維症の病態発生において酸化的ストレスが重要な役割を果たすことを示す実質的かつ増加しつつある一連の証拠があるからである(Kuwano K, Nakashima N, Inoshima I, Hagimoto N, Fujita M, Yoshimi M, Maeyama T, Hamada N, Watanabe K, Hara N (2003) Oxidative stress in lung epithelial cells from patients with idiopathic interstitial pneumonias. Eur Respir J 21:232-240)。したがって、Ｎｏｘ酵素、特にＮｏｘ４は、肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、線維性肺疾患、および肺癌にも関与すると思われる。
【００１２】
ＮＡＤＰＨオキシダーゼのイソ酵素、類似性、相異および機能  −  ＮＡＤＰＨオキシダーゼの７種類すべてのイソ酵素（同定されたもの）は、ＮＡＤＰＨおよびＦＡＤの結合部位ならびに６つの膜貫通ドメインをもつ様式において、またそれらが２つのヘム複合体を含むという点において、類似する。すべてのＮＡＤＰＨオキシダーゼ形態が同じ基本的機序を使って反応性酸素を発生するが、細胞内局在性および作用様式は著しく異なる。
【００１３】
酵素Ｎｏｘファミリーが産生する反応性酸素種は、スーパーオキシドＯ２−または過酸化水素Ｈ２Ｏ２のいずれかである。Ｎｏｘ１および２はｐ２２ｐｈｏｘに構成性結合し、この酵素複合体を活性化するために、他の成分、たとえばＲａｃ、ｐ４７ｐｈｏｘ、ｐ６７ｐｈｏｘが、完全なＮｏｘ１活性に必要である。Ｎｏｘ２は、完全活性化のためにＲａｃ、ｐ４０ｐｈｏｘ、ｐ４７ｐｈｏｘおよびｐ６７ｐｈｏｘを必要とする。Ｎｏｘ１および２は、活性化されるとＯ２−を発生する。Ｎｏｘ３も活性になるためには細胞質ゾルタンパク質をアセンブルする必要がある(Cheng et al., J Biol Chem, 279(33), 2004)。Ｎｏｘ４もｐ２２ｐｈｏｘと会合し、この形態で構成性活性である。しかし、Ｎｏｘ４活性はアセンブリーまたはリガンド活性化によってではなく発現によって調節され、これによりこのイソ型は他のイソ型と区別される(Serrander et al., Biochem J. 406, 2007)。Ｎｏｘ４は、誘導されると一般にＮｏｘ１および２より高いレベルで発現する(Ago et al., Circulation, 109, 2004)。Ｎｏｘ４は、他のＮｏｘバリアントのようなＯ２−ではなく主にＨ２Ｏ２を発生すると思われる(Takac et al., J. Biol. Chem. 286, 2011)。これがこのイソ型をユニークなものにしている；Ｈ２Ｏ２は膜を通過し、したがってきわめて短い半減期をもつＯ２−より遠く離れた場所で作用する能力をもつからである。Ｎｏｘ５、Ｄｏｕｘ１およびＤｏｕｘ２はＣａ２＋によって活性化される(De Deken, Wang et al., J.Biol Chem., 275(30), 2000)。
【００１４】
Ｎｏｘ４と疾患  −  他のイソ型と比較したＮｏｘ４の独自性は、療法ターゲットとしての独自性とも関係がある；それは過剰発現すると多種多様な疾患に関与すると思われるからである。
【００１５】
Ｎｏｘ４は、誘発されるまではきわめて低いレベルではあるが、多くの細胞タイプに広範に発現する。しかし、それは主に腎臓、内皮細胞、外膜線維芽細胞、胎盤、平滑筋細胞、破骨細胞にみられ、腫瘍において発現する主要なＮｏｘである(Chamseddine et al., Am J Physiol Heart Circ Physiol. 285, 2003; Ellmark et al., Cardiovasc Res. 65, 2005; Van Buul et al., Antioxid Redox Signal. 7, 2005; Kawahara et al., BMC Evol Biol. 7, 2007; Krause et al., Jpn J Infect is. 57(5), 2004; Griendling, Antioxid Redox Signal. 8(9), 2006)。Ｎｏｘ４は大部分の乳癌細胞系および原発性乳腺腫に過剰発現することが見出された。既にトランスフォームした乳腺腫細胞におけるＮｏｘ４の過剰発現は腫瘍形成性の増大を示し、Ｎｏｘ４がこの場合はミトコンドリアにおいて同定された。Ｎｏｘ４が乳癌を処置するためのターゲットとして示唆された(Graham et al., Cancer Biol Ther 10(3), 2010)。
【００１６】
Ｎｏｘ４は、脳血管内皮細胞においてＴＮＦ−ａにより引き起こされる酸化的ストレスおよびアポトーシスを仲介する(Basuroy et al., Am J Physiol Cell Physiol vol. 296, 2009)。虚血性発作に伴なうそれの有害作用は、動物モデルおよびヒトの組織で十分に立証されている。Ｎｏｘ４のノックダウン実験は、神経損傷の領域を劇的に低減した(Sedwick, PLos Biology, vol.8 issue 9, 2010; Kleinschnitz et al., vol. 8 issue 9, 2010)。
【００１７】
虚血性発作は発作の全症例の約８０％を占め、世界中で第２位の主な死因である。ＫＯマウスについて、Ｎｏｘ４は急性発作の効果的な療法ターゲットであることが示された。最近のレポート(Kleinschnitz et al, 前記参照)に、有意のＮｏｘ４活性増大が虚血性発作に際して起きる神経細胞死の主因であることを示す説得力のあるデータが公表された。虚血に際してマウスの脳と同様にヒトにおいてもＮｏｘ４活性の増大が誘発されることが示された。高特異的Ｎｏｘ４阻害剤は安全な薬物である可能性をもつ。Ｎｏｘ４の完全ノックアウトはマウスにおいて明らかな表現型を示さない。しかし、このＫＯは、誘発性虚血性発作において野生型と比較して７０％以上、神経細胞生存を劇的に改善する。発作患者の処置も出血性ショックなど他のタイプのリスクをいずれも伴なうことなく実施でき、したがってこの処置はＣＡＴスキャンなしで開始することができるであろう。
【００１８】
さらに、微小血管および臍帯静脈の両方の内皮細胞におけるノックダウン試験および過剰発現試験により、Ｎｏｘ４活性の増大は内皮細胞の増殖および移動に際して重要な役割を果たすことが立証された(Datla et al., Arterioscler Throm Vasc Biol. 27(11), 2007)。最初は、糖尿病における血管形成欠損にはＮｏｘ２が関与すると考えられたが、焦点はＮｏｘ４の方へよりシフトした(Zhang et al., PNAS, 107, 2010; Garriodo-Urbani et al., Plos One 2011; Takac et al., Curr Hypertens Rep, 14, 2012)。
【００１９】
Ｎｏｘ４は、肺線維症の発症に際し上皮細胞死において鍵となる役割を果たす(Camesecchi et al., Antiox Redox Signal. 1:15(3), 2011)。
【００２０】
ｓｉＲＮＡ仲介によるＮｏｘ４ノックダウンはＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性を有意に低下させることが、メサンギウム細胞および腎皮質から精製したミトコンドリアにおいて立証された。このノックダウンは、グルコース誘導によるミトコンドリアのスーパーオキシド産生をブロックした。Ｎｏｘ４は糖尿病においてミトコンドリア機能異常および細胞傷害をもたらす可能性がある酸化的ストレスに対する中心的なメディエーターとして作用することが示唆された(Block et al., PNAS vol. 106, no. 34, 2009)。Ｎｏｘ４はラットの食事誘発性肥満症で全身的にアップレギュレートされることが立証された(Jiang, redox rep, 16(6), 2011)。
【００２１】
Ｎｏｘ４は不全性心臓の病理に強く関係づけられてきた(Nabeebaccus A et al. “NADPH oxidases and cardiac remodeling” Heart Fai Rev. 2011; Kuroda J et al., “NADPH oxidase and cardiac failure Cardiovasc Transl Res. 2010; Kuroda J et al., “NADPH oxidase 4 is a major source of oxidative stress in the failing heart” Proc Natl Acad Sci USA 2010)。ミトコンドリアＮｏｘ４活性の増大と“老化性心臓”の機能障害との関係が示唆された(Tetsuro Ago et al., AGING, December 2010, vol.2 No 12)。
【００２２】
細胞外マトリックス蓄積は慢性腎疾患の病理に関与する。増殖因子ＩＧＦ−Ｉ活性がこのプロセスに関与する主な因子であり、Ｎｏｘ４はこのプロセスにおけるメディエーターである(New et al., Am J Physiol Cell Physiol. 302(1), 2012)。慢性的なレニン−アンギオテンシンの活性化と腎損傷システムの進行との関係が、このプロセスにおける協同作用因子としてのＮｏｘ４およびアンギオテンシンＩＩについて十分に確立されている(Chen et al., Mol Cell Biol. 2012)。
【００２３】
したがって、以上のことから、Ｎｏｘ酵素は生体において幾つかの機能をもつこと、およびそれらは種々の障害にも関与することが明らかである。そのような疾患および障害の例は、心血管障害、呼吸器障害、代謝障害、内分泌障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症性および／または神経変性性の障害、腎疾患、生殖障害、眼および／または水晶体を冒す疾患、ならびに／あるいは内耳を冒す状態、炎症性障害、肝疾患、痛み、癌、アレルギー性障害、外傷性障害、敗血症性、出血性およびアナフィラキシー性のショック、胃腸系の疾患または障害、血管新生、血管新生依存性状態である。特にＮｏｘ４がそのような障害に関与することが見出されたことも明らかである。結論として、Ｎｏｘを阻害しうる化合物、特にＮｏｘ４を選択的に阻害しうる化合物は、Ｎｏｘ酵素、特にＮｏｘ４が関与する疾患および障害の処置に使用するものとしてきわめて重要であると考えられる。
【００２４】
ＧｅｎＫｙｏＴｅｘ  ＳＡからの幾つかの特許出願は、Ｎｏｘ阻害剤として使用するための種々のピラゾロおよびピラゾリン誘導体に関する。たとえば、PCT出願WO 2010/035217, WO 2010/035219, WO 2010/035220, WO 2010/035221, WO 2011/036651, WO2011/101804およびWO2011/101805は、Ｎｏｘに関係する幾つかの状態および障害を記載し、その課題に関する種々の文献源を参照している。それらの出願およびそれらにおいて参照している文献に含まれる情報を本明細書に援用する。
【００２５】
国際特許出願WO 2005/033102, タイトル“Thiophene-based compounds exhibiting ATP-utilizing enzyme inhibitory activity, and compositions, and uses thereof”は、“ＡＴＰ利用酵素”、すなわちその出願では“リン酸基をＡＴＰ分子からタンパク質または炭水化物などの生体分子へ輸送する酵素”と定義される酵素、すなわちキナーゼに関連する種々の疾患および障害の処置に使用するためのチオフェン誘導体に関する。WO 2005/033102に述べられた化合物のうち若干は、本発明による一般式（Ｉ）の範囲に含まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２６】
【特許文献１】WO 2010/035217
【特許文献２】WO 2010/035219
【特許文献３】WO 2010/035220
【特許文献４】WO 2010/035221
【特許文献５】WO 2011/036651
【特許文献６】WO2011/101804
【特許文献７】WO2011/101805
【特許文献８】WO 2005/033102
【非特許文献】
【００２７】
【非特許文献１】Bjelakovic G, Nikolova D, Simonetti RG, Gluud C. Cochrane Database Syst Rev. 2008 Jul 16; (3):CD004183. Epub 2008 Jul 16
【非特許文献２】Reaven, “Role of insulin resistance in human disease”, Diabetes 37(12), 1988
【非特許文献３】Houstis et al., Nature 440, 2006
【非特許文献４】Katakam et al., J cereb blood Flow Metab, 2012 Jan 11
【非特許文献５】Brar et al., Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 282, 2002
【非特許文献６】Brar et al., Am J Physiol Cell Physiol, 282, 2002
【非特許文献７】Grewal et al., Am J Physiol, 276, 1999
【非特許文献８】Sundaresan et al., Science, 270, 1995
【非特許文献９】Lundqvist-Gustafsson et al., J Leukoc Biol, 65, 1999
【非特許文献１０】Steinbeck et al., J Cell Physiol, 176, 1998
【非特許文献１１】Wu et al., J Virol, 78, 2004
【非特許文献１２】Rueckschloss et al., Exp Gerontol, 45, 2010
【非特許文献１３】Lambeth JD, Review Article “Nox enzymes, ROS, and chronic disease: An example of antagonistic pleiotrpy”, Free Radical Biology & Medicine 43, 2007
【非特許文献１４】Takac I et al., “The Nox Family of NADPH Oxidases: Friend or Foe of the Vascular System”, Curr Hypertens Rep. 2011 Nov 10
【非特許文献１５】Montezano AC, “Novel Nox homologues in the vasculature: focusing on Nox4 and Nox5”, Clin Sci London 2011
【非特許文献１６】Bedard K et al., “The Nox family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology” Physiol Rev. 2007
【非特許文献１７】Camici M et al., “Obesity-related glomerulopathy and podocyte injury: a mini review”, Front Biosci 2012
【非特許文献１８】Nabeebaccus A et al., “NADPH oxidases and cardiac remodeling” Heart Fai Rev. 2011
【非特許文献１９】Kuroda J et al., “NADPH oxidase and cardiac failure”J Cardiovasc Transl Res. 2010
【非特許文献２０】Kuroda J et al., “NADPH oxidase 4 is a major source of oxidative stress in the failing heart” Proc Natl Acad Sci USA 2010
【非特許文献２１】Maejima Y et al., “Regulation of myocardial growth and death by NADPH oxidase” J Mol Cell Cardiol. 2011
【非特許文献２２】Barnes JL et al., “Myofibroblst differentiation during fibrosis: role of NAD(P)H oxidases” Kidney international, 2011
【非特許文献２３】Alison Cave “Selective targeting of NADPH oxidase for cardiovascular protection” Current Opinion in Pharmacology 2009
【非特許文献２４】Albert van der Vliet “Nox enzymes in allergic airway inflammation” Biochimica et Biophysica Acta 1810, 2011
【非特許文献２５】Pendyala S et al., “Redox regulation of Nox proteins” Respiratory Physiology & Neurobiology 174, 2010
【非特許文献２６】Nair D et al., “Intermittent Hypoxia-Induced Cognitive Deficits Are Mediated by NADPH oxidase Activity in a Murine Model of Sleep Apnea” PLoS ONE, vol. 6, Issue 5, May 2011
【非特許文献２７】Chia-Hung Hsieh et al., “NADPH oxidase Subunit 4-Mediated Reactive Oxygen species Contribute to Cycling Hypoxia-Promoted Tumor Progression in Glioblastoma Multiforme” PloS ONE, vol 6, issue 9, September 2011
【非特許文献２８】Sedeek M et al., “Molecular mechanisms of hypertension: role of nox family NADPH oxidase” Current Opinion in Nephrology and Hypertension 2009
【非特許文献２９】Augusto C et al., “Novel Nox homologues in the vasculature: focusing on Nox4 and Nox5” Clinical Science 2011
【非特許文献３０】Briones AM et al., “Differential regulation of Nox1, Nox2 and Nox4 in vascular smooth muscle cells from WKY and SHR” Journal of the American Society of Hypertension 5:3, 2011
【非特許文献３１】Kinnula VL, Fattman CL, Tan RJ, Oury TD (2005) Oxidative stress in pulmonary fibrosis: a possible role for redox modulatory therapy. Am J Respir Crit Care Med 172:417-422
【非特許文献３２】Kuwano K, Nakashima N, Inoshima I, Hagimoto N, Fujita M, Yoshimi M, Maeyama T, Hamada N, Watanabe K, Hara N (2003) Oxidative stress in lung epithelial cells from patients with idiopathic interstitial pneumonias. Eur Respir J 21:232-240
【非特許文献３３】Cheng et al., J Biol Chem, 279(33), 2004
【非特許文献３４】Serrander et al., Biochem J. 406, 2007
【非特許文献３５】Ago et al., Circulation, 109, 2004
【非特許文献３６】Takac et al., J. Biol. Chem. 286, 2011
【非特許文献３７】De Deken, Wang et al., J.Biol Chem., 275(30), 2000
【非特許文献３８】Chamseddine et al., Am J Physiol Heart Circ Physiol. 285, 2003
【非特許文献３９】Ellmark et al., Cardiovasc Res. 65, 2005
【非特許文献４０】Van Buul et al., Antioxid Redox Signal. 7, 2005
【非特許文献４１】Kawahara et al., BMC Evol Biol. 7, 2007
【非特許文献４２】Krause et al., Jpn J Infect is. 57(5), 2004
【非特許文献４３】Griendling, Antioxid Redox Signal. 8(9), 2006
【非特許文献４４】Graham et al., Cancer Biol Ther 10(3), 2010
【非特許文献４５】Basuroy et al., Am J Physiol Cell Physiol vol. 296, 2009
【非特許文献４６】Sedwick, PLos Biology, vol.8 issue 9, 2010
【非特許文献４７】Kleinschnitz et al., vol. 8 issue 9, 2010
【非特許文献４８】Datla et al., Arterioscler Throm Vasc Biol. 27(11), 2007
【非特許文献４９】Zhang et al., PNAS, 107, 2010
【非特許文献５０】Garriodo-Urbani et al., Plos One 2011
【非特許文献５１】Takac et al., Curr Hypertens Rep, 14, 2012
【非特許文献５２】Camesecchi et al., Antiox Redox Signal. 1:15(3), 2011
【非特許文献５３】Block et al., PNAS vol. 106, no. 34, 2009
【非特許文献５４】Jiang, redox rep, 16(6), 2011
【非特許文献５５】Tetsuro Ago et al., AGING, December 2010, vol.2 No 12
【非特許文献５６】New et al., Am J Physiol Cell Physiol. 302(1), 2012
【非特許文献５７】Chen et al., Mol Cell Biol. 2012
【発明の概要】
【００２８】
１観点によれば、療法に使用するための、Ｎｏｘ阻害剤である化合物が提供される。より具体的には、療法に使用するための、Ｎｏｘ４阻害剤である化合物が提供される。
【００２９】
他の観点によれば、Ｎｏｘ活性増大、より具体的にはＮｏｘ４活性増大と関連する、たとえばそれにより起きるかまたは推進される疾患の処置に有効な化合物が提供される。
【００３０】
さらに他の観点によれば、Ｎｏｘ活性増大、より具体的にはＮｏｘ４活性増大と関連する障害の処置に使用するための、Ｎｏｘ阻害剤、より具体的にはＮｏｘ４阻害剤である化合物が提供される。
【００３１】
したがって、本発明によれば式（Ｉ）の化合物
【００３２】
【化１】
2015509969.tif 000003
【００３３】
［式中：
Ａは、５員−または６員−複素環または炭素環であり；
Ｂは、５員−または６員−単環式複素環または炭素環および９員−または１０員−二環式複素環または炭素環から選択され；
各Ｒ１は、独立してハロゲン、Ｒ４Ｏ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ４Ｓ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）ｑ、ＣＮ（ＣＨ２）ｑ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ３は、独立してハロゲン、Ｒ６Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｓ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９Ｎ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９ＮＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９ＮＳ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｗ、ＣＮ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ７（ＣＨ２）ｗ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、およびＣ２−Ｃ６アルキニルから選択され、それらのアルキル、アルケニルおよびアルキニルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ４は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ５は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、および５員−または６員−複素環または炭素環から選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニル、複素環および炭素環は所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ７は、５員−もしくは６員−単環式複素環もしくは炭素環または９員−もしくは１０員−二環式複素環もしくは炭素環から選択され、それらの複素環および炭素環は所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ８は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；
各Ｒ９は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；
ｍ、ｎ、ｐ、各ｑおよび各ｗは、独立して０、１、２および３から選択される］
またはその医薬的に許容できる塩であって、Ｎｏｘ、好ましくはＮｏｘ４と関連する状態または障害の処置に使用するための化合物が提供される。
【００３４】
そのような状態および障害の例は、Ｎｏｘ、特にＮｏｘ４と関係するかまたはそれらにより仲介されるものとして本明細書中で前記に述べたもの、たとえば心血管障害、内分泌障害、呼吸器障害、代謝障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症性および／または神経変性性の障害、腎疾患、生殖障害、眼および／または水晶体を冒す疾患、ならびに／あるいは内耳を冒す状態、炎症性障害、肝疾患、痛み、癌、アレルギー性障害、外傷性障害、敗血症性、出血性およびアナフィラキシー性のショック、胃腸系の疾患または障害、血管新生、血管新生依存性状態、ならびに肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、線維性肺疾患、脳血管偶発症候、ならびに肺癌から選択される状態および障害である。
【００３５】
前記のように、WO 2005/033102に述べられた化合物のうち若干は、本発明による一般式（Ｉ）の範囲に含まれる。しかし、WO 2005/033102の化合物はキナーゼ阻害剤であると述べられている。この相異からみて、本発明の場合のようにＮｏｘ阻害剤を見出すという問題の解決を求める当業者は、WO 2005/033102を参考にする動機をもたなかったであろう。そうではあるが、ある態様において、式（Ｉ）の化合物は下記の化合物ではない：
２−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）ベンズアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸メチル、
２−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）ベンズアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（３，５−ジメトキシベンズアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（４−クロロベンズアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（２−フルオロベンズアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−ベンズアミド−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−（トリフルオロメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボキサミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−７−（トリフルオロメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボキサミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
６−メチル−２−（５−フェニル−７−（トリフルオロメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボキサミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（３−モルホリノプロパンアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸メチル、
６−メチル−２−（３−（４−メチルピペリジン−１−イル）プロパンアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］−チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（４−（ピペリジン−１−イルスルホニル）ベンズアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（２−（２，６−ジメチルモルホリノ）アセトアミド）−６−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］−チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（フラン−２−カルボキサミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸メチル、
２−（２−（２，４−ジクロロフェニル）−３−メチルキノリン−４−カルボキサミド）−６−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸プロピル、
５，５−ジメチル−２−（３−モルホリノプロパンアミド）−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
５，５−ジメチル−２−（２−フェニルアセトアミド）−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸、
２−（２−モルホリノアセトアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（２−（３，４−ジメトキシフェニル）アセトアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸イソプロピル、または
２−（ニコチンアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル；
これらはWO 2005/033102に述べられたものである。
【００３６】
１観点によれば、本明細書中で前記に定めた式（Ｉ）の化合物は、哺乳動物においてニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼ（Ｎｏｘ）、特にＮｏｘ４を阻害するために、Ｎｏｘ、特にＮｏｘ４の発現と関連する障害の処置に使用するものとして提供される。
【００３７】
１観点によれば、哺乳動物に本明細書中で前記に定めた式（Ｉ）の化合物を投与することにより、その必要がある哺乳動物において、Ｎｏｘ、特にＮｏｘ４の活性を阻害する方法が提供される。この方法は、本明細書中で前記に定めたＮｏｘ活性、特にＮｏｘ４活性と関連する障害の処置に有用である。
【００３８】
さらに他の観点によれば、本明細書中で前記に定めたＮｏｘ活性、特にＮｏｘ４活性と関連する障害の処置に使用する医薬を調製するための、前記に定めた化合物の使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、４種類の異なる本発明化合物について、被験化合物の２００μＭ溶液の１：３系列希釈により得られた１１種類の濃度での、Ｎｏｘ４トランスフェクションしたＴＲｅｘ−２９３細胞における用量応答曲線を示す：Ａ）２−（２−（４−ベンジルピペラジン−１−イル）アセトアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、Ｂ）２−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、Ｃ）２−（２−（４−（フラン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセトアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、およびＤ）５，５−ジメチル−２−（２−フェニルアセトアミド）−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル。
【図２】図２は、それぞれＡ）ＰＬＢ９８５細胞およびＢ）ＰＢＭＣ細胞において、指定濃度の５，５−ジメチル−２−（２−フェニルアセトアミド）−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチルの存在下で、Ｎｏｘ２からのＲＯＳ産生の尺度としてのイソルミノール依存性化学発光を示すグラフである；ＰＭＡ（３０ｎｇ／ｍｌ）対照（＝１００％）と比較した％。
【図３】図３は、それぞれＡ）ＰＬＢ９８５細胞およびＢ）ＰＢＭＣ細胞において、指定濃度の２−（４−メトキシベンズアミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチルの存在下で、Ｎｏｘ２からのＲＯＳ産生の尺度としてのイソルミノール依存性化学発光を示すグラフである；ＰＭＡ（３０ｎｇ／ｍｌ）対照（＝１００％）と比較した％。
【図４】図４は、発作のマウスモデルにおける梗塞体積（ｍｍ３）を示す棒グラフであり、その際、マウスを本発明化合物２−（２−（４−（フラン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセトアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル（“本発明”）またはビヒクル（“対照”）で処理した。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
一般に、本明細書中で用いる用語はいずれも、本発明が属する技術分野で受け入れられているそれの普通の意味をもつはずである。しかし、明瞭にするために、以下に若干の定義を示し、そうではないことが明記されない限り、または状況から明らかでない限り、それらを本明細書および特許請求の範囲の全体に適用する。
【００４１】
用語“内分泌障害”は、内分泌系の障害を表わし、内分泌腺の分泌減退および分泌過多、または内分泌腺の腫瘍であってもよい。糖尿病および多嚢胞卵巣症候群は内分泌障害の例である。
【００４２】
用語“心血管障害または疾患”は、アテローム性硬化症、特に内皮機能障害に関連する疾患または障害を含み、これには下記のものが含まれるが、それらに限定されない：高血圧症、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病の心血管合併症、内膜過形成、冠動脈性心疾患、脳、冠動脈または動脈の血管攣縮、内皮機能障害、うっ血性心不全を含む心不全、末梢動脈疾患、再狭窄、ステントにより起きた外傷、発作、虚血性発作、臓器移植後などの血管合併症、心筋梗塞、高血圧症、アテローム硬化班の形成、血小板凝集、狭心症、動脈瘤、大動脈剥離、虚血性心疾患、心肥大、肺塞栓症、深部静脈血栓症を含む血栓性事象、下記に際して虚血後に血流または酸素送達の復旧により起きた傷害：臓器移植、開心術、血管形成術、出血性ショック、心臓、脳、肝臓、腎臓、網膜および腸を含めた虚血臓器の血管形成術。
【００４３】
用語“脳血管偶発症候(cerebrovascular accident)”は、脳卒中、たとえば虚血性発作を含む。
【００４４】
用語“虚血性発作”は、塞栓性発作および血栓性発作を含む。
【００４５】
用語“呼吸器障害または疾患”は、気管支喘息、気管支炎、アレルギー性鼻炎、成人呼吸障害症候群、嚢胞性線維症、肺ウイルス感染症（インフルエンザ）、肺高血圧症、特発性肺線維症、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む。
【００４６】
用語“アレルギー性障害”は、枯草熱および喘息を含む。
【００４７】
用語“外傷性障害(traumatism)”は、多発性外傷性障害(polytraumatism)を含む。
【００４８】
用語“代謝に影響を及ぼす疾患または障害”は、肥満症、メタボリックシンドロームおよびＩＩ型糖尿病を含む。
【００４９】
用語“皮膚疾患または障害”は、乾癬、湿疹、皮膚炎、創傷治癒および瘢痕形成を含む。
【００５０】
用語“骨障害”は、骨粗鬆症、オステオポラシス(osteoporasis)、骨硬化症、歯周炎、および副甲状腺機能亢進症を含む。
【００５１】
用語“神経変性性疾患または障害”は、特にニューロンのレベルでの中枢神経系（ＣＮＰ）の変性または変化を特徴とする疾患または状態、たとえばアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、てんかん、および 筋ジストロフィーを含む。それはさらに神経炎症性および脱髄性の状態または疾患、たとえば白質脳症および白質ジストロフィーを含む。
【００５２】
用語“脱髄性”は、軸索周囲のミエリンの破壊を含むＣＮＳの状態または疾患を表わす。本発明の概念において、脱髄性疾患という用語は、細胞を脱髄するプロセスを含む状態、たとえば多発性硬化症、進行性多病巣性白質脳症（ＰＭＬ）、脊髄障害、ＣＮＳ内の自己反応性白血球が関与するいずれかの神経炎症状態、先天性代謝障害、異常なミエリン形成を伴なう神経障害、薬物誘発性脱髄、放射線照射誘発性脱髄、遺伝性脱髄状態、プリオン誘発性脱髄状態、脳炎誘発性脱髄、または脊髄傷害を含むものとする。好ましくは、この状態は多発性硬化症である。
【００５３】
用語“腎疾患または障害”は、糖尿病性腎障害、腎不全、腎炎、アミノグリコシドおよび白金化合物の腎毒性、ならびに過活動膀胱を含む。特定の態様において、本発明によるこの用語は、慢性腎疾患または障害を含む。
【００５４】
用語“生殖障害または疾患”は、勃起機能障害、受精能障害、前立腺肥大、および良性前立腺肥大を含む。
【００５５】
用語“眼および／または水晶体を冒す疾患または障害”は、糖尿病性白内障を含めた白内障、白内障手術後の水晶体の再混濁化、糖尿病性その他の形態の網膜障害を含む。
【００５６】
用語“内耳を冒す状態”は、老人性難聴、耳鳴り、メニエール病その他の平衡障害、卵形嚢結石症(utriculolithiasis)、前庭性片頭痛、ならびに騒音誘発性難聴および薬物誘発性難聴（聴器毒性）を含む。
【００５７】
用語“炎症性障害または疾患”は、下記のものを意味する：炎症性腸疾患、敗血症、敗血症性ショック、成人呼吸窮迫症候群、膵臓炎、外傷により誘発されたショック、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、リウマチ様関節炎、慢性リウマチ様関節炎、動脈硬化症、脳内出血、脳梗塞、心不全、心筋梗塞、乾癬、嚢胞性線維症、発作、急性気管支炎、慢性気管支炎、急性細気管支炎、慢性細気管支炎、骨関節炎、痛風、脊髄炎、強直性脊椎炎、ロイター(Reuter)症候群、乾癬性関節炎、脊椎関節炎、若年性関節炎または若年性強直性脊椎炎、反応性関節炎、感染性関節炎または感染後関節炎、淋菌性関節炎、梅毒性関節炎、ライム病、“血管炎症候群”により誘発された関節炎、多発性結節性動脈炎、アナフィラキシー性血管炎、リューゲネク(Luegenec)肉芽腫症、リウマチ様多発筋痛症、関節細胞リウマチ、カルシウム結晶沈着性関節炎、偽性痛風、非関節性リウマチ、滑液嚢炎、腱滑膜炎、外上顆炎（テニス肘）、手根管圧迫症候群、反復使用（タイピング）による障害、混合型関節炎、神経障害性関節障害、出血性関節炎、血管紫斑病、肥厚性骨関節症、多中心性細網内皮系組織球症、特定の疾患により誘発された関節炎、血液色素沈着、鎌状赤血球病その他のヘモグロビン異常、高リポ蛋白血症、異ガンマグロブリン血症、副甲状腺機能亢進症、肢端肥大症、家族性地中海熱、ベーチェット病、全身性自己免疫疾患、紅斑性狼瘡、多発性硬化症およびクローン病、または再発性多発性軟骨炎などの疾患、慢性炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、あるいはＮＡＤＰＨオキシダーゼを阻害するのに十分な用量で療法有効量の式（Ｉ）により表わされる化合物を哺乳動物に投与する必要がある関連疾患。
【００５８】
用語“肝疾患または障害”は、肝臓の線維症、アルコール誘発性線維症、脂肪症および非アルコール性脂肪肝炎を含む。
【００５９】
用語“関節炎”は、急性リウマチ性関節炎、慢性リウマチ様関節炎、クラミジア関節炎、慢性吸収性関節炎(absorptive arthritis)、強直性関節炎(anchylosus arthritis)、腸疾患に起因する関節炎、フィラリア性関節炎、淋菌性関節炎、痛風性関節炎、血友病性関節炎、肥厚性関節炎、若年性慢性関節炎、ライム関節炎、新生子ウマ関節炎(neonatal foal arthritis)、小結節性関節炎、アルカプトン尿性関節炎、乾癬性関節炎または化膿性関節炎、あるいはＮＡＤＰＨオキシダーゼを阻害するのに十分な用量で療法有効量の式（Ｉ）により表わされる化合物を哺乳動物に投与する必要がある関連疾患を含む。
【００６０】
用語“痛み”は、炎症性疼痛に関連する痛覚過敏症を含む。
【００６１】
用語“癌”は、癌腫（たとえば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、腎癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、膀胱癌、または上皮癌）、あるいはＮＡＤＰＨオキシダーゼを阻害するのに十分な用量で療法有効量の式（Ｉ）により表わされる化合物を哺乳動物に投与する必要がある関連疾患を意味する。
【００６２】
用語“胃腸系の疾患または障害”は、胃粘膜障害、虚血性腸疾患管理、腸炎／結腸炎、癌化学療法、または好中球減少症を含む。
【００６３】
用語“血管新生”は、発芽血管新生(sprouting angiogenesis)、嵌入血管新生(intussusceptive angiogenesis)、脈管形成、動脈形成、およびリンパ管形成を含む。血管新生は、既存の毛細管または後毛細管細静脈からの新たな血管の形成であり、癌、関節炎および炎症などの病的状態で起きる。血管新生刺激に際して血管が侵入できる皮膚、筋肉、腸、結合組織、関節、骨などの組織を含めた多種多様な組織または組織化された組織からなる臓器が、疾患状態における血管新生を支持することができる。本明細書中で用いる用語“血管新生依存性状態”は、血管新生または脈管形成のプロセスが病的状態を持続または補足する状態を意味するものとする。脈管形成は、内皮細胞前駆体である血管芽細胞から生じる新たな血管の形成の結果である。両プロセスとも結果的に新たな血管を形成し、血管新生依存性状態の意味に含まれる。本明細書中で用いる用語“血管新生”は、デノボ血管形成、たとえば脈管形成から生じるもの、ならびに既存の血管、毛細管および細静脈の分枝および発芽から生じるものを含むものとする。
【００６４】
用語“血管新生阻害（性の）”は、それが新生血管形成の程度、量または速度を低下させるのに有効であることを意味する。組織における内皮細胞の増殖または移動の程度、量または速度を低下させることは、血管新生阻害の具体例である。血管新生阻害活性はいずれの癌の処置にも特に有用である；それは腫瘍増殖プロセスをターゲットとし、腫瘍組織の新生血管形成がなければその腫瘍組織は必要な栄養素が得られず、増殖速度が低下し、さらなる増殖が停止し、退縮し、最終的に壊死状態になってその腫瘍が死滅するからである。さらに、血管新生阻害活性は転移形成に対して特に有効であるので、いずれの癌の処置にも特に有用である；転移癌細胞が原発性腫瘍から進出できるためには転移形成も原発性腫瘍の血管形成を必要とし、かつそれらが続発部位で樹立するには転移の増殖を支持するための血管新生が必要だからである。
【００６５】
本明細書中で用いる“処置(treatmentおよびtreating)”などは、一般に、希望する薬理学的および生理学的効果を得ることを意味する。この効果は、疾患、その症状もしくは状態を阻止もしくは部分的に防止するという点で予防的であってもよく、および／または疾患、その疾患に起因する状態、症状、もしくは有害作用を部分的もしくは完全に治癒させるという点で治療的であってもよい。本明細書中で用いる用語“処置”は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の何らかの処置を含み、それには下記のものが含まれる：（ａ）疾患に対する素因をもつ可能性があるけれどもまだそれを伴なうと診断されていない対象において、その疾患が発症するのを防止する；（ｂ）疾患を阻害する、すなわちそれの進展を阻止する；あるいは疾患を軽減する、すなわち疾患および／またはそれの症状または状態を退行させる。
【００６６】
本明細書中で用いる用語“対象”は、哺乳動物を表わす。たとえば、本発明により考慮される哺乳動物には、ヒト、霊長類、家畜、たとえばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなどが含まれる。
【００６７】
“有効量”は、処置された対象に療法効果を与える化合物量を表わす。療法効果は客観的（すなわち、ある検査またはマーカーにより測定可能）または主観的（すなわち、対象が効果を指摘するか、または感じる）であってよい。
【００６８】
本発明に関して用いる用語“阻害剤”は、Ｎｏｘ、特にＮｏｘ４の活性を完全もしくは部分的に阻害し、および／または反応性酸素種（ＲＯＳ）の発生を阻害もしくは低減する分子と定義される。
【００６９】
“医薬的に許容できる”は、一般に安全、無毒性であって生物学的にも他の形でも不都合でない医薬組成物の調製に有用であることを意味し、動物用およびヒトの医薬用として有用であることを含む。
【００７０】
用語“ヘテロ芳香環”は、少なくとも１個のヘテロ原子を環中に含む芳香環を表わす。本発明による５員−または６員−ヘテロ芳香環の例は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、フラン、チオフェン、オキサジアゾール、チアジアゾール、チアゾール，オキサゾール、トリアゾール、テトラゾール、イソオキサゾール、イソチアゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジンなどである。
【００７１】
用語“ヘテロアリール”は、ヘテロ芳香環の基を表わす。本発明による５員−または６員−ヘテロアリール部分の例は、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、フリル、チエニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニルなどである。
【００７２】
用語Ｃｎ（ｎは整数である）は、ある基または部分がｎ個の炭素原子を含むことを明記する。
【００７３】
用語Ｃｎ−Ｃｍ（ｍおよびｎは両方とも整数であり、ｍ＞ｎである）は、ｎ、ｎ＋１、ｎ＋２、・・・またはｍ個の炭素原子を含む基または部分を表わす。
【００７４】
したがって、用語Ｃ１−Ｃ６アルキルは、１、２、３、４、５または６個の炭素原子を含むことができるアルキル基を表わす。
【００７５】
用語Ｃ０アルキルは、共有結合を表わす。
【００７６】
本発明によるアルキル部分は、分枝状または線状であってもよく、たとえばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、および２，３−ジメチルブチルから選択される。
【００７７】
本発明によるＣ１−Ｃ６アルキルは、より特別にはＣ１−Ｃ５アルキルから、たとえばＣ１−Ｃ４アルキルから、Ｃ１−Ｃ３アルキルから、Ｃ１−Ｃ２アルキルから、またはメチルから選択できる。
【００７８】
用語“Ｃ２−Ｃ６アルケニル”は、鎖中に２〜６個の炭素原子をもつ直鎖または分枝鎖アルケニルを表わし、それはいずれか可能な個数の二重結合をいずれか可能な位置にもつことができる。二重結合の立体配置は（Ｅ）または（Ｚ）であってよい。例は、ビニル、アリル、イソプロペニル、１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−エチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル−３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、および５−ヘキセニルである。本発明によるＣ２−Ｃ６アルケニルは、より特別にはＣ２−Ｃ４アルケニルまたはＣ２−Ｃ３アルケニルであってもよい。
【００７９】
用語“Ｃ２−Ｃ６アルキニル”は、鎖中に２〜６個の炭素原子をもつ直鎖または分枝鎖アルキニルを表わし、それはいずれか可能な個数の三重結合をいずれか可能な位置にもつことができる。例は、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、２−ブチニル、および２−ペンテン−４−イニルである。本発明によるＣ２−Ｃ６アルキニルは、より特別にはＣ２−Ｃ４アルキニルまたはＣ２−Ｃ３アルキニルであってもよい。
【００８０】
用語“Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル”は、３〜６個の環炭素原子をもつ環状アルキル基、たとえばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルを表わす。
【００８１】
“少なくとも１個のハロゲンで置換された”とは、少なくとも１個の水素がハロゲン、たとえばＦで置換されていることを意味する。少なくとも１個のハロゲンで置換されたアルキルの例は、トリフルオロメチルである。
【００８２】
本明細書中で用いる用語“ハロゲン”（または“ハロ”）は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）またはヨウ素（Ｉ）を意味する。
【００８３】
本明細書中で用いる用語“炭素環”は炭素原子のみを含む環状部分を表わし、一方、用語“複素環”は、環構造内に炭素原子のみでなく少なくとも１個の他の原子、たとえば窒素、硫黄または酸素原子をも含む環状部分を表わす。
【００８４】
本明細書中でいずれかの炭素環または複素環に関して用いる単環式という用語は、１つの環のみを含む環状部分、たとえばフェニルまたはピリジルを表わす。二環式という用語は、互いに縮合した２つの環を含む環状部分、たとえばナフチルまたはキノリルを表わす。
【００８５】
そうではないことが指示されない限り、または状況から明らかでない限り、炭素環または複素環のいずれであっても、環は飽和または不飽和、および芳香族または非芳香族であってよい。したがって、たとえばシクロヘキシル、シクロヘキセニルおよびフェニルはすべて単環式Ｃ６炭素環の例である。
【００８６】
本明細書中で用いる用語“芳香族”は芳香族性をもつ不飽和環（炭素環または複素環）部分を表わし、一方、本明細書中で用いる用語“非芳香族”は不飽和であってもよいけれども芳香族性をもたない環状部分を表わす。
【００８７】
本明細書中で述べる二環式環系において、互いに縮合した２つの環は、両方とも飽和または両方とも不飽和、たとえば両方とも芳香族であってもよい。それらの環は異なる飽和度のものであってもよく、一方の環が芳香族であり、それに対し他方が非芳香族であってもよい。それらの環は異なる個数の原子を含んでもよく、たとえば一方の環が５員であり、他方の環が６員であって、合わせて９員二環式環系を形成していてもよい。
【００８８】
本明細書中で述べる二環式の複素環(heterocyclylまたはheterocycleまたはheterocyclic moietyなど)において、一方または両方の環が１個または数個、たとえば１、２、３または４個のヘテロ原子を含むことができる。本発明によるヘテロ原子とは、Ｎ、ＯおよびＳを意味する。たとえば、一方の環が１個または数個のヘテロ原子を含み、他方が炭素環であってもよい。
【００８９】
本明細書中で述べるｎ員環部分は、ｎ個の環原子（ringまたはcyclic atom）を含む。
【００９０】
本明細書中で用いる用語“モノ不飽和”は、二重結合を１つだけ含む部分を表わす。したがって、たとえばモノ不飽和５員炭素環はシクロペンテンであり、モノ不飽和６員炭素環はシクロヘキセンである。
【００９１】
本明細書中で前記に定めた式（Ｉ）の化合物において、環Ａ（本明細書中で単に“Ａ”と述べる）は、５員−複素環または炭素環である。
【００９２】
環Ａはモノ不飽和またはポリ不飽和であってよい。Ａはチオフェン環と縮合してこの後者の環と二重結合を共有するので、Ａは少なくともモノ不飽和であることを理解すべきである。環Ａはポリ不飽和であってもよく、この場合、芳香族または非芳香族であってよい。
【００９３】
ある態様において、Ａは非芳香族である。ある態様において、Ａはモノ不飽和であり、すなわちＡ中の唯一の二重結合はＡが縮合しているチオフェン環と共有しているものである。
【００９４】
ある態様において、Ａは５員−または６員−炭素環、たとえば５員−または６員−非芳香族炭素環、たとえばシクロペンテンまたはシクロヘキセンである。
【００９５】
ある態様において、Ａは５員−または６員−複素環、たとえば５員または６員−非芳香族複素環である。
【００９６】
Ａが複素環である場合、それは１〜３個のヘテロ原子、たとえば１もしくは２個のヘテロ原子、または１個のヘテロ原子を含むことができ、そのヘテロ原子（単数または複数）は、独立してＮ、ＯおよびＳから、たとえばＯおよびＳから、またはＯから選択される。
【００９７】
ある態様において、Ａは、環中にＯおよび所望により１個以上のさらに他のヘテロ原子を含む５員−または６員−複素環であり、たとえばＡはジヒドロ−２Ｈ−ピランであり、これには３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピランおよび３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピランが含まれる。
【００９８】
ある態様において、Ａは環中に１個のヘテロ原子を含む５員−もしくは６員−複素環、または５員−もしくは６員−炭素環である。たとえば、Ａは環中に１個のヘテロ原子を含むモノ不飽和５員−もしくは６員−複素環、またはモノ不飽和５員−もしくは６員−炭素環から選択できる。
【００９９】
ある態様において、Ａは５員−もしくは６員−酸素含有複素環または５員−もしくは６員−炭素環であり、たとえばＡはシクロペンテン、シクロヘキセンおよびジヒドロ−２Ｈ−ピランから、たとえばシクロペンテン、シクロヘキセンおよび３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピランから選択される。
【０１００】
ある態様において、Ａは前記に定めたものであるが、５員であって６員ではない。ある態様において、Ａは前記に定めたものであるが、６員であって５員ではない。
【０１０１】
環Ｂ（本明細書中で単に“Ｂ”と述べる）は、５員−または６員−単環式複素環または炭素環および９員−または１０員−二環式複素環または炭素環から選択される。
【０１０２】
ある態様において、Ｂは５員−または６員−単環式複素環、５員−または６員−単環式炭素環、および９員−または１０員−二環式複素環から選択される；たとえば、Ｂは５員−または６員−単環式複素環、９員−または１０員−二環式複素環、およびフェニルから選択できる。
【０１０３】
Ｂは飽和または不飽和であってよく、後者の場合は芳香族または非芳香族であってよい。
【０１０４】
Ｂが５員または６員である場合、Ｂはより特別には６員であってもよい。Ｂが９員−または１０員である場合、Ｂはより特別には９員であってもよい。
【０１０５】
ある態様において、Ｂは複素環であり、すなわちＢは５員−または６員−単環式複素環および９員−または１０員−二環式複素環から選択される。この場合、Ｂは、たとえば独立してＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子、たとえば１または２個のヘテロ原子を含むことができる。
【０１０６】
ある態様において、Ｂは９員−または１０員−二環式複素環から選択される。たとえば、Ｂは９員−または１０員−二環式複素環から選択でき、その際、一方の環は芳香族であり、他方の環は芳香族または非芳香族である。これらの態様のうちあるものにおいて、二環の一方の環はベンゼンである。たとえば、Ｂは、ベンゼン環が他の５員環または６員環（芳香族または非芳香族であってよい）に縮合したものを含む二環であってもよい。
【０１０７】
ある態様において、Ｂがベンゼン環と縮合した５員環または６員環を含む９員−または１０員−二環である場合、式（Ｉ）の化合物は式（Ｉａ）により表わすことができ、
【０１０８】
【化２】
2015509969.tif 000004
【０１０９】
式中、
Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍおよびｎは、本明細書中で前記に定めたものであり；
Ｑ１、Ｑ２およびＱ３は、独立してＣ、Ｎ、ＯおよびＳから選択され；
ｔは、１または２であり；
ｐ１およびｐ２は、ｐ１＋ｐ２が０〜３となるような０〜３の整数である。
【０１１０】
たとえば、ある態様において、Ｑ１およびＱ２のうち一方はヘテロ原子であり、Ｑ１およびＱ２のうち他方はＣであり；各Ｑ３はＣである。したがって、この化合物は式（Ｉｂ）により表わすことができ、
【０１１１】
【化３】
2015509969.tif 000005
【０１１２】
式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎ、ｐ１、ｐ２およびｔは、本明細書中で前記に定めたものであり；
Ｑ１およびＱ２のうち一方はヘテロ原子であり、他方はＣである。
【０１１３】
たとえば、ある態様において、Ｑ１はヘテロ原子であり、Ｑ２はＣであり、したがってこの化合物は式（Ｉｃ）により表わすことができ、
【０１１４】
【化４】
2015509969.tif 000006
【０１１５】
式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎ、ｐ１、ｐ２およびｔは、本明細書中で前記に定めたものであり；Ｑ１はヘテロ原子である。
【０１１６】
ある態様において、Ｑ１およびＱ２のうち一方はＯであり、他方はＣである。たとえば、Ｑ１がＯであり、Ｑ２がＣである場合、この化合物は式（Ｉｄ）により表わすことができ、
【０１１７】
【化５】
2015509969.tif 000007
【０１１８】
式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎ、ｐ１、ｐ２およびｔは、本明細書中で前記に定めたものである。
【０１１９】
式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）のいずれかにおいて、二環式環（Ｂ）への−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−の結合点はベンゼン環に、またはＱ１、Ｑ２、Ｑ３を含む環にある。ある態様において、結合点はＱ１、Ｑ２、Ｑ３を含む環にある。
【０１２０】
たとえば、式（Ｉｃ）の化合物のある態様において、結合点はＱ１に隣接する炭素原子にある。これらの態様において、化合物は式（Ｉｅ）により表わすことができ、
【０１２１】
【化６】
2015509969.tif 000008
【０１２２】
式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎ、ｐ１、ｐ２およびｔは、本明細書中で前記に定めたものである。
【０１２３】
同様に、式（Ｉｄ）の化合物のある態様において、結合点は酸素原子に隣接する炭素原子にある。これらの態様において、化合物は式（Ｉｆ）により表わすことができ、
【０１２４】
【化７】
2015509969.tif 000009
【０１２５】
式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎ、ｐ１、ｐ２およびｔは、本明細書中で前記に定めたものである。
【０１２６】
式（Ｉａ）〜（Ｉｆ）のいずれかにおいて、ｔは１または２である。ある態様において、ｔは１である。
【０１２７】
式（Ｉａ）〜（Ｉｆ）のいずれかにおいて、整数ｐ１およびｐ２は両方とも０から３まで変動できるが、ただしそれらの総和は０〜３である。ある態様において、ｐ１は０である。ある態様において、ｐ１およびｐ２は両方とも０である。
【０１２８】
環がヘテロ原子としてＮを含む場合、そのＮは隣接する２個の環原子に単結合により結合しており、そのＮは水素原子または置換基Ｒ３、たとえばＣ１−Ｃ６アルキルのいずれかをも保有するであろうということを留意すべきである。
【０１２９】
ある態様において、Ｂは、５員−または６員−単環式複素環または炭素環、たとえば非芳香族の５員−もしくは６員−単環式複素環もしくは炭素環、または芳香族の５員−もしくは６員−単環式複素環もしくは炭素環から選択される。
【０１３０】
たとえば、Ｂは、５員−または６員−芳香族または非芳香族単環式複素環およびフェニルから選択できる。
【０１３１】
ある態様において、Ｂは、５員−または６員−単環式複素環、たとえば非芳香族５員−または６員−単環式複素環、たとえば飽和５員−または６員−単環式複素環から選択される。
【０１３２】
ある態様において、Ｂは、たとえば１または２個の環ヘテロ原子を含む５員−または６員−単環式複素環、たとえば非芳香族５員−または６員−単環式複素環、たとえば飽和５員−または６員−単環式複素環である。
【０１３３】
ある特定の態様において、Ｂは、６員−単環式複素環、たとえば非芳香族６員−単環式複素環、たとえば飽和６員−単環式複素環、たとえば１または２個の環ヘテロ原子を含むものである。
【０１３４】
たとえば、Ｂは５員−または６員−単環式複素環であって、環Ｎを含み、それに−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−が結合し、所望により少なくとも１個のさらに他の環ヘテロ原子を含んでいてもよい。したがって、この化合物は式（Ｉｇ）により表わすことができ、
【０１３５】
【化８】
2015509969.tif 000010
【０１３６】
式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎおよびｐは本明細書中で前記に定めたものであり、Ｂ’は１個のさらに他の環ヘテロ原子を含んでいてもよい５員−または６員−複素環である。
【０１３７】
式（Ｉｇ）のある態様において、ｎは１である。
【０１３８】
ある態様において、Ｂはピペラジニルである。Ｂがピペラジニルである、ある態様において、この化合物は式（Ｉｈ）により表わすことができ、
【０１３９】
【化９】
2015509969.tif 000011
【０１４０】
式中、
Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍおよびｎは、本明細書中で前記に定めたものであり；
Ｒ１０は、ＨまたはＲ３であり；
Ｒ１０がＨである場合にはｐ３は０から３までの整数であり、Ｒ１０がＲ３である場合にはｐ３は０から２までの整数である。
【０１４１】
ある態様において、式（Ｉｈ）の化合物中、Ｒ１０は１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルおよびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、たとえばＲ１０はＣ１−Ｃ６アルキル、たとえばＣ１−Ｃ３アルキルである。
【０１４２】
ある態様において、特にＲ１０がＲ３である場合、ｐ３は０である。
【０１４３】
ある態様において、Ｂは５員−または６員−単環式炭素環、たとえばフェニルである。それらの態様において、この化合物は式（Ｉｉ）により表わすことができ、
【０１４４】
【化１０】
2015509969.tif 000012
【０１４５】
式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎおよびｐは前記に定めたものである。
【０１４６】
式（Ｉ）において、ｎは０から３までの整数である。好ましくは、ｎは０から２までであり、より好ましくはｎは０または１であり、たとえばｎは１である。
【０１４７】
環Ａは、所望により１、２または３個の部分Ｒ１、たとえば１または２個の部分Ｒ１で置換されていてもよく、各Ｒ１は、独立してハロゲン、Ｒ４Ｏ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ４Ｓ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）ｑ、ＣＮ（ＣＨ２）ｑ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。
【０１４８】
ある態様において、各Ｒ１は、独立してハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。たとえば、各Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ２−Ｃ３アルケニル、Ｃ２−Ｃ３アルキニル、およびＣ３−Ｃ５シクロアルキルから選択でき、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい；あるいは、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ２−Ｃ３アルケニル、Ｃ２−Ｃ３アルキニル、およびＣ３−Ｃ５シクロアルキルから選択でき、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。
【０１４９】
ある態様において、各Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、たとえばＣ１−Ｃ３アルキル、たとえばメチルから選択される。
【０１５０】
Ｒ１がＲ４Ｏ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ４Ｓ（ＣＨ２）ｑまたはＲ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）ｑである場合、Ｒ４は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；それらのアルキル、アルケニル、アルキニル  複素環および炭素環は所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。たとえば、Ｒ４は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ２−Ｃ３アルケニル、Ｃ２−Ｃ３アルキニル、およびＣ３−Ｃ５シクロアルキルから、またはＨおよびＣ１−Ｃ３アルキルから、たとえばＣ１−Ｃ３アルキル、たとえばメチルから選択できる。
【０１５１】
Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）ｑにおいて、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され；それらのアルキル、アルケニル、アルキニル  複素環および炭素環は所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。たとえば、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ２−Ｃ３アルケニル、Ｃ２−Ｃ３アルキニル、およびＣ３−Ｃ５シクロアルキルから、またはＨおよびＣ１−Ｃ３アルキルから、たとえばＣ１−Ｃ３アルキル、たとえばメチルから選択できる。
【０１５２】
Ｒ４Ｏ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ４Ｓ（ＣＨ２）ｑ、およびＲ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）ｑにおいて、ｑは０から３までの整数であり、たとえばｑは０または１であってもよい。ある態様において、ｑは０であり、すなわちＲ４Ｏ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ４Ｓ（ＣＨ２）ｑ、およびＲ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）ｑは、それぞれＲ４Ｏ、Ｒ４Ｓ、およびＲ４Ｒ５Ｎである。
【０１５３】
式（Ｉ）の化合物は基−ＣＯＯＲ２を含む。その基において、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。たとえば、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ２−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択でき、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい；あるいは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ２−Ｃ３アルケニル、Ｃ２−Ｃ３アルキニル、およびＣ３−Ｃ５シクロアルキルから選択でき、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。
【０１５４】
ある態様において、Ｒ２は前記に定めたものであるが、Ｈではない。ある他の態様において、Ｒ２は、ＨおよびＣ１−Ｃ６アルキルから、たとえばＨおよびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され、たとえばＲ２はエチルである。
【０１５５】
環Ｂは、所望により１、２または３個の部分Ｒ３で置換されていてもよく、各Ｒ３は、独立してハロゲン、Ｒ６Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｓ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ７（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９Ｎ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９ＮＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９ＮＳ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｗ、ＣＮ（ＣＨ２）ｗ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、およびＣ２−Ｃ６アルキニルから選択され、それらのアルキル、アルケニルおよびアルキニルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。
【０１５６】
ある態様において、各Ｒ３は、ハロゲン、Ｒ６Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｓ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ７（ＣＨ２）ｗ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、およびＣ２−Ｃ６アルキニルから選択され、それらのアルキル、アルケニルおよびアルキニルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。
【０１５７】
ある他の態様において、各Ｒ３は、Ｒ６Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、およびＲ７（ＣＨ２）ｗから選択される。
【０１５８】
各部分Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、および５員−または６員−複素環または炭素環から選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニル、複素環および炭素環は所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。ある態様において、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ２−Ｃ３アルケニル、Ｃ２−Ｃ３アルキニル、および５員−または６員−複素環または炭素環から選択される。たとえば、Ｒ６はＣ１−Ｃ３アルキルから選択される。
【０１５９】
ある態様において、Ｒ６は、５員−または６員−複素環または炭素環から選択される。Ｒ３がＲ７（ＣＨ２）ｗである場合、Ｒ７は、５員−もしくは６員−単環式複素環もしくは炭素環または９員−もしくは１０員−二環式複素環もしくは炭素環から選択され、それらの複素環および炭素環は所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。ある態様において、炭素環または複素環は芳香族である。
【０１６０】
ある態様において、Ｒ７は５員−または６員−単環式複素環または炭素環、たとえば芳香族複素環、たとえばフリル、または芳香族炭素環、たとえばフェニルから選択される。
【０１６１】
Ｒ８Ｒ９Ｎ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９ＮＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、およびＲ８Ｒ９ＮＳ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｗにおいて、Ｒ８およびＲ９は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択される；それらのアルキル、アルケニル、アルキニル  複素環および炭素環は所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよい。たとえば、Ｒ８およびＲ９は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ２−Ｃ３アルケニル、Ｃ２−Ｃ３アルキニル、およびＣ３−Ｃ５シクロアルキルから、またはＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキルから、たとえばＣ１−Ｃ３アルキル、たとえばメチルから選択できる。
【０１６２】
ある態様において、Ｒ３は
【０１６３】
【化１１】
2015509969.tif 000013
【０１６４】
から選択される。
【０１６５】
Ｒ３が、Ｒ６Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｓ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９Ｎ（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９ＮＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｗ、Ｒ８Ｒ９ＮＳ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｗ、ＣＮ（ＣＨ２）ｗ、またはＲ７（ＣＨ２）ｗである場合、ｗは０から３まで、たとえば０から２までの整数、あるいは０または１である。
【０１６６】
式（Ｉ）の化合物のある態様において：
Ａは、５員−または６員−モノ不飽和複素環または炭素環であり；
Ｂは、５員−または６員−単環式複素環または炭素環および９員−または１０員−二環式複素環または炭素環から選択され；
各Ｒ１は、独立してハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ３−Ｃ６シクロアルキルから選択され、それらのアルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
Ｒ３は、ハロゲン、Ｒ６Ｏ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ６Ｓ（ＣＨ２）ｑ、Ｒ６Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ、Ｒ７（ＣＨ２）ｑ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、およびＣ２−Ｃ６アルキニルから選択され、それらのアルキル、アルケニルおよびアルキニルは所望により少なくとも１個のハロゲンで置換されていてもよく；
ｎは、０または１である。
【０１６７】
ある態様において、本明細書中で定める使用のための化合物は下記のものから選択される：
【０１６８】
【化１２】
2015509969.tif 000014
【０１６９】
２−（２−（４−ベンジルピペラジン−１−イル）アセトアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
【０１７０】
【化１３】
2015509969.tif 000015
【０１７１】
２−（２−（４−（フラン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセトアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
【０１７２】
【化１４】
2015509969.tif 000016
【０１７３】
２−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
【０１７４】
【化１５】
2015509969.tif 000017
【０１７５】
５，５−ジメチル−２−（２−フェニルアセトアミド）−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、および
【０１７６】
【化１６】
2015509969.tif 000018
【０１７７】
２−（４−メトキシベンズアミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
またはこれらのいずれかの医薬的に許容できる塩。
【０１７８】
前記化合物はこれまで療法に使用されていなかった。したがって、ある態様において、療法に使用するための下記のものから選択される化合物が提供される：
２−（２−（４−ベンジルピペラジン−１−イル）アセトアミド）−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（２−（４−（フラン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセトアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチル、
２−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
５，５−ジメチル−２−（２−フェニルアセトアミド）−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、および
２−（４−メトキシベンズアミド）−５，５−ジメチル−５，７−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−３−カルボン酸エチル、
またはこれらのいずれかの医薬的に許容できる塩。
【０１７９】
式（Ｉ）の化合物は、当技術分野で周知の方法により、容易に入手できる出発物質から、一般的な方法および手順を用いて製造できる。式（Ｉ）のある化合物は、たとえばVitas-M Laboratory, Ltd. Room 84, Hodynski blv.15, Moscow, 125252, Russiaから市販されている(http://www.vitamlab.com/)。
【０１８０】
プロセス条件に応じて、式（Ｉ）の化合物は中性または塩の形で得られる。遊離塩基および遊離酸の両方、ならびにこれらの目的生成物の塩類が、本発明の範囲に含まれる。本発明化合物の酸付加塩は、それ自体既知の方法で、塩基性作用剤、たとえばアルカリを用いて、またはイオン交換により、遊離塩基に変換できる。得られた遊離塩基は、有機酸または無機酸との塩類を形成することもできる。本発明化合物のアルカリ付加塩は、それ自体既知の方法で、酸性作用剤、たとえば酸を用いて、またはイオン交換により、遊離酸に変換できる。得られた遊離酸は、有機塩基または無機塩基との塩類を形成することもできる。
【０１８１】
酸付加塩または塩基付加塩の調製に際して、好ましくは医薬的に許容できる塩類を適切に形成する酸または塩基を用いる。そのような酸の例は、ハロゲン化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、脂肪族、脂環式、芳香族または複素環式カルボン酸またはスルホン酸、たとえばギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、エンボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ハロゲンベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはナフタレンスルホン酸である。塩基付加塩には、無機塩基、たとえばアンモニウムまたはアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩など、ならびに有機塩基、たとえばアルコキシド、アルキルアミド、アルキルアミンおよびアリールアミンなどから誘導されるものが含まれる。本発明の塩類を調製するのに有用な塩基の例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸カリウムなどが含まれる。
【０１８２】
鏡像異性体およびジアステレオマーを含めて、本発明化合物の幾つかの立体異性体が存在する可能性がある。鏡像異性体はそれらの純粋な形態で、または２種類の鏡像異性体のラセミ（等量）混合物もしくは非等量混合物として存在することができる。ジアステレオマーはそれらの純粋な形態で、またはジアステレオマーの混合物として存在することができる。ジアステレオマーには幾何異性体も含まれ、それらはそれらの純粋なシスもしくはトランス形態で、またはそれらの混合物として存在することができる。
【０１８３】
医薬配合物は、通常は、有効物質、すなわち本発明化合物またはその医薬的に許容できる塩を、一般的な医薬用賦形剤と混合することにより調製される。配合物はさらに、既知の方法、たとえば造粒、圧縮、マイクロカプセル化、スプレーコーティングなどにより調製できる。配合物は、常法により、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁液剤、坐剤または注射剤の剤形で調製できる。液体配合物は、有効物質を水その他の適切なビヒクルに溶解または懸濁することにより調製できる。錠剤および顆粒剤を常法によりコーティングしてもよい。
【０１８４】
臨床用には、本発明化合物を経口、直腸、非経口または他の投与様式のための医薬配合物中に配合する。これらの医薬製剤は、本発明のさらに他の目的である。
【０１８５】
通常は、有効化合物の有効量は製剤の０．１〜９５重量％、好ましくは非経口用製剤中には０．２〜２０重量％、好ましくは経口投与用製剤中には１〜５０重量％である。
【０１８６】
個々の化合物の投与レベルおよび投与頻度は、使用する個々の化合物の力価、その化合物の代謝安定性および作用期間、患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与の様式および時間、排出速度、薬物の組合わせ、処置すべき状態の重症度、ならびに療法を受ける患者を含めた、多様な要因に応じて異なるであろう。一日量は、たとえば体重キロ当たり約０．００１ｍｇから約１００ｍｇまでの範囲であってもよく、単回投与、またはたとえば約０．０１ｍｇ〜約２５ｍｇずつの量で多数回投与される。普通はそのような投与量を経口により投与するが、非経口投与も選択できる。
【０１８７】
本発明化合物を経口投与のための投与単位の形で含有する医薬配合物を調製する際、選択した化合物を固体、粉末状の成分、たとえば乳糖、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロース誘導体、ゼラチン、または他の適切な成分、ならびに崩壊剤および滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリルフマル酸ナトリウムおよびポリエチケングリコールワックスと混合することができる。この混合物を次いで顆粒剤または錠剤に加工する。
【０１８８】
ソフトゼラチンカプセル剤は、本発明の有効化合物（単数または複数）、植物油、脂肪、または他の適切なソフトゼラチン用ビヒクルの混合物を収容したカプセルを用いて調製できる。ハードゼラチンカプセル剤は、有効化合物の顆粒を収容することができる。ハードゼラチンカプセル剤は、有効化合物を固体、粉末状の成分、たとえば乳糖、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、バレイショデンプン、トウモロコシデンプン、アミロペクチン、セルロース誘導体、ゼラチンと組み合わせて収容することもできる。
【０１８９】
直腸投与用の投与単位は、（ｉ）有効物質を中性脂肪基剤と混合したものを含む坐剤の形態；（ｉｉ）有効物質を植物油、パラフィン油、もしくはゼラチン直腸カプセル用の他の適切なビヒクルとの混合物中に含有するゼラチン直腸カプセルの形態；（ｉｉｉ）調合済みマイクロ浣腸剤の形態；または（ｉｖ）投与直前に適切な溶剤中に再構成される乾燥マイクロ浣腸剤配合物の形態で調製できる。
【０１９０】
経口投与用の液体製剤は、シロップ剤または懸濁液剤の形態、たとえば０．２重量％から２０重量％までの有効成分を含有し、残部が糖または糖アルコール、ならびにエタノール、水、グリセロール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールの混合物からなる、液剤または懸濁液剤の形態で調製できる。所望により、そのような液体製剤は着色剤、矯味矯臭剤、サッカリン、およびカルボキシメチルセルロースまたは他の増粘剤を含有してもよい。経口投与用の液体製剤は、使用前に適切な溶剤で再構成される乾燥粉末の形態で調製することもできる。
【０１９１】
非経口、たとえば静脈内投与用の液剤は、医薬的に許容できる溶剤中の本発明化合物の溶液として、好ましくは０．１重量％から１０重量％までの濃度で調製できる。これらの液剤は、安定化成分および／または緩衝化成分を含有することもでき、アンプル剤またはバイアル剤の形態の単位剤形に分配される。非経口投与用の液剤は、使用前に必要に応じて適切な溶剤で再構成される乾燥製剤として調製することもできる。
【０１９２】
本発明化合物は１種類以上の追加の療法有効薬剤と組み合わせて使用または投与することもできる。それらの成分は、同時または逐次投与するために、同じ配合物中または別個の配合物中にあってもよい。
【０１９３】
したがって、本発明のさらに他の観点において、下記のものを含む組合わせ製剤が提供される：
（Ａ）本明細書に定める本発明化合物；および
（Ｂ）他の療法剤；
その際、（Ａ）および（Ｂ）を医薬的に許容できる賦形剤との混合物中に配合する。
【０１９４】
そのような組合わせ製剤は、本発明化合物を他の療法剤と組合わせた投与を提供し、したがって別個の配合物として供給でき、その際、それらの配合物のうち少なくとも１つは本発明化合物を含み、少なくとも１つは他の療法剤を含む；あるいは、組合わせ製剤として供給（すなわち、配合）できる（すなわち、本発明化合物と他の療法剤を含有する単一配合物として提供される）。
【０１９５】
したがって、さらに下記のものが提供される：
（１）前記に定めた本発明化合物、他の療法剤、および医薬的に許容できる賦形剤、たとえば佐剤、希釈剤またはキャリヤーを含有する、医薬配合物；ならびに
（２）構成要素として下記のものを含む部分のキット：
（ａ）前記に定めた本発明化合物を、医薬的に許容できる賦形剤、たとえば佐剤、希釈剤またはキャリヤーと混合したものを含有する、医薬配合物；ならびに
（ｂ）他の療法剤を、医薬的に許容できる賦形剤、たとえば佐剤、希釈剤またはキャリヤーと混合したものを含有する、医薬配合物；
それらの構成要素（ａ）および（ｂ）は、他方と組み合わせて投与するのに適した形態でそれぞれ提供される。
【０１９６】
本発明化合物は、他の処置様式、たとえば癌の処置のための放射線照射と組み合わせて使用または投与することもできる。
【０１９７】
本発明化合物はＮｏｘ阻害剤である。より具体的には、本発明化合物はＮｏｘ４阻害剤である。Ｎｏｘ４のように疾患に関与するだけでなく、Ｎｏｘイソ型は生体において重要な生物学的機能も備えているという事実からみて、主に１種類の特定のＮｏｘイソ型、すなわちＮｏｘ４を阻害する能力は、本発明化合物の重要な利点であると考えられる。したがって、１観点によれば、そのような阻害を必要とする哺乳動物患者においてＮｏｘを阻害するための、本明細書中で前記に定めた化合物が提供される。より具体的には、そのような阻害を必要とする哺乳動物患者においてＮｏｘ４を阻害するための、本明細書中で前記に定めた化合物が提供される。
【０１９８】
Ｎｏｘ活性を阻害することにより、本発明化合物はそのような活性に関連する本明細書中で前記に述べた障害および疾患の処置に有用である。したがって、本発明化合物はＮｏｘ、特にＮｏｘ４の発現（活性）に関連する障害に罹患している哺乳動物の処置に有用である。
【０１９９】
したがって、１観点によれば、患者に療法有効量の本明細書中で定めた式（Ｉ）の化合物を投与することにより、その必要がある患者において、Ｎｏｘ、特にＮｏｘ４の活性を阻害する方法が提供される。患者はいかなる哺乳動物であってもよいが、好ましくはヒトである。
【０２００】
処置すべき患者は、Ｎｏｘ、特にＮｏｘ４の活性増大に関連する状態もしくは障害に罹患している患者、またはそのような状態もしくは障害を発症するリスクをもつ患者であってよい。そのような状態および障害の例は下記のものである：心血管障害、呼吸器障害、代謝障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症性および／または神経変性性の障害、腎疾患、生殖障害、眼および／または水晶体を冒す疾患、ならびに／あるいは内耳を冒す状態、炎症性障害、肝疾患、痛み、癌、アレルギー性障害、外傷性障害、敗血症性、出血性およびアナフィラキシー性のショック、胃腸系の疾患または障害、血管新生、血管新生依存性状態、肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、線維性肺疾患、ならびに肺癌。
【０２０１】
本発明を以下の限定ではない実施例により説明する。
【実施例】
【０２０２】
実施例１
細胞ベースのアッセイおよび分析化学
１  細胞生存性
１．１  Ｃｅｌｌｔｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ細胞生存性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）
このアッセイは、生存性の尺度として細胞がレサズリン(resazurin)を還元してレゾルフィン(resorufin)にする能力に基づく。ＴＲＥｘ（商標）−２９３  Ｎｏｘ４細胞をＴ−２２５フラスコ内で培養し、トリプシン処理により採集し、細胞培地に再懸濁した。９０μｌ中２０，０００個の細胞を９６ウェルの細胞培養プレート（透明な底を備えた黒色のもの）に播種した。９０μｌの細胞培地のみを含むバックグラウンドプレートも１つ用意した。
【０２０３】
２４時間後、３７℃の細胞培地中に最終濃度の１０倍に希釈した化合物１０μｌを、細胞プレートおよびバックグラウンドプレートに添加した。化合物を１０μＭの最終濃度で二重に試験した。最終濃度１００μＭのクロルプロマジンを陽性対照として添加した。２４時間の処理後、２０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ試薬を添加し、プレートを３７℃で１２０分間インキュベートした。レゾルフィン蛍光をＶｉｃｔｏｒ２Ｖプレートリーダーで読み取った。すべての実験値をバックグラウンドに対して補正した後、細胞生存性の分析を行なった。
【０２０４】
１．２  ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）
このアッセイは、膜の統合性の尺度として周囲の細胞培地における乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性に基づく。膜の統合性はアポトーシス、ネクローシスまたは化学物質による影響を受ける可能性がある。ＴＲＥｘ（商標）−２９３  Ｎｏｘ４細胞をＴ−２２５フラスコ内で培養し、トリプシン処理により採集し、ＨＢＳＳに再懸濁して１００，０００個／ｍｌにした。９０μｌの細胞懸濁液をＶ底ポリプロピレン製９６ウェルプレートの各ウェルに添加した。ＨＢＳＳのみを含むバックグラウンドプレートを１つ用意した。化合物をＨＢＳＳに希釈して最終濃度の１０倍にし、１０μｌを各ウェルに添加した。化合物を１０μＭの最終濃度で二重に試験した。
【０２０５】
プレートを３７℃で３時間インキュベートした。インキュベーション時間が終了する４５分前に、１０μｌの細胞溶解用溶液（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）を総対照ウェルに添加して、細胞の総ＬＤＨ含量を推定した。自然なＬＤＨ漏出量を非処理細胞について測定した。
【０２０６】
細胞プレートを２５０×ｇで５分間遠心し、５０μｌの上清を９６ウェルＳｐｅｃｔｒａｐｌａｔｅへ移した。５０μｌの再構成した基質ミックスを添加し、プレートを室温で３０分間インキュベートした。５０μｌの停止溶液を添加し、プレートをＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）において４９０ｎｍの波長で読み取った。化合物特異的バックグラウンドを差し引き、細胞毒性％を下記に従って計算した：
[(実験量-自然量)/(総量-自然量)]*100%
上記２種類の細胞生存性アッセイで試験した場合、本発明化合物はいずれも有意の細胞毒性を示さなかった。
【０２０７】
２  用量応答曲線
Ａｍｐｌｅｘ（登録商標）Ｒｅｄベースのアッセイによる用量応答測定を下記に従って実施した：化合物の系列希釈を、リキッドハンドラーＪａｎｕｓ（登録商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）およびスケジューリングソフトウェアＯｖｅｒｌｏｒｄ（Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）に基づくシステムを用いて実施した。
【０２０８】
ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ化合物原液１５μｌを含む化合物プレートから出発して、１０μｌのＤＭＳＯを化合物プレートの各段に添加した（Ｆｌｅｘｄｒｏｐ）。５μｌの化合物溶液を１０μｌのＤＭＳＯに添加することにより系列希釈を行なって（１：３）、１１種類の濃度にした。化合物プレートの各ウェルに９０μｌのアッセイ用緩衝液を添加した。混合した後、１０μｌを化合物プレートの各ウェルからアッセイプレートのウェルへ移し、続いて２０μｌの検出ミックスおよび２０μｌのＴＲＥｘ（商標）−２９３  Ｎｏｘ４細胞懸濁液を添加した。次いでアッセイプレートを室温で４０〜６０分間インキュベートした。特注の計算テンプレートを用いてＡｃｔｉｖｉｔｙｂａｓｅ  ＸＥ（ＩＤＢＳ）でデータを解析した。組込み方程式を用いて生の蛍光データを阻害率％に換算した：
【０２０９】
【数１】
2015509969.tif 000019
【０２１０】
用量応答曲線に非線形回帰を用いて４パラメーター算定式を当てはめた。図１Ａ〜Ｃに、若干の本発明化合物についての用量応答曲線を示す。これらの化合物は約３μＭから約１１μＭまでの範囲のＩＣ５０値をもつ。
【０２１１】
３  同一性、純度および安定性（identity, purity, stability : ＩＰＳ）分析
ＤＭＳＯ溶液をＰＢＳ，ｐＨ７．４中に希釈して最終濃度１００μＭにした。２種類の試料を調製した：１つは即時分析用、２つ目は３７℃で２４時間の貯蔵用。ＵＶおよびＥＳＩ−ＭＳ検出を備えた逆相ＨＰＬＣシステムで分析を実施した。純度を２２０ｎｍにおける試料ピークの相対面積と定義した。同一性を試料クロマトグラムのＭＳにおける分子イオンの存在により判定した。安定性は、２４時間後の試料ピークと０時間目のクロマトグラムのものとの相対面積の比であった。純度および安定性の数値を切り捨てて１０％増分でレポートした（すなわち、９６％を９０％とレポートする）。ＩＰＳ分析において、被験化合物はプラスの同一性をもち、９０％以上の純度であり、８０％以上の安定性をもっていた。
【０２１２】
実施例２
Ｎｏｘ２に対する本発明化合物の活性
本発明化合物のＮｏｘ４特異性を評価するために、多数の本発明化合物をＮｏｘ２からの反応性酸素種（ＲＯＳ）産生に対するそれらの潜在阻害作用について試験した。
【０２１３】
１  試験計画
ＰＬＢ９８５細胞（ヒト急性骨髄性白血病細胞系）およびヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において、ホルボール１２−ミリステート  １３−アセテート（ＰＭＡ）（３０ｎｇ／ｍｌ）による刺激後のＮｏｘ２からのＲＯＳ産生阻害を、イソルミノール増強化学発光により評価した。本発明化合物およびジフェニレンヨードニウムクロリド（ＤＰＩ）を、２００μＭから０，０１μＭまでの３倍希釈シリーズにおいて力価判定した。すべての試料を二重試験として分析した。
【０２１４】
２  分析アッセイ
２．１  イソルミノールアッセイ
イソルミノール依存性化学発光(Dahlgren et al. 1999)を用いてＲＯＳを測定した。イソルミノールは、生体膜を通過できない疎水性色素である。したがって、この方法を用いて細胞外ＲＯＳが測定される。イソルミノールはＲＯＳによって励起され、励起された分子が基底状態に戻る際に放出ＲＯＳの量に比例して発する光を測定する。この反応はペルオキシダーゼにより触媒および増幅される。天然ペルオキシダーゼはこれを行なうことができるが、それの分泌は限られており、したがって追加のペルオキシダーゼ（この場合には西洋わさびペルオキシダーゼＩＩ）を添加する必要がある。
【０２１５】
２．２  データ収集および解析
ＦｌｕｏＳｔａｒ  Ｏｐｔｉｍａ（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）および白色９６ウェルプレートを用いて発光を検出した。測定は６７秒で２３サイクル、３７℃で振とうしながら行なわれた。これら２３サイクルから曲線下面積（ＡＵＣ）値を計算した。結果を阻害剤無添加のＰＭＡ刺激細胞と比較した変化率として評価した。非線形回帰およびＩＣ５０計算をＭａｃ  ＯＳ  Ｘ用のＰｒｉｓｍ  ５により実施した。
【０２１６】
３  材料および方法
３．１  ヒトＰＢＭＣ
人血を１日目のバフィーコートでKomponentlab, Sahlgrenska University hospital（スウェーデン、ゲーテボルグ）から購入した。
【０２１７】
３．１．１  ＰＢＭＣの単離
赤血球を全血からデキストラン沈降により除去した。無赤血球画分を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（０．７５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを補充）を用いて製造業者の指示に従って密度勾配により分離した。ＰＢＭＣを血漿とＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ試薬の界面から単離した。このＰＢＭＣを混在血小板が除去されるまでＨＢＳＳ中で洗浄した。細胞数および生存性をトリパンブルー排除により判定した。
【０２１８】
３．１．２  ＰＢＭＣの凍結保存
細胞をKreher et al. 2003に従って凍結保存した。要約すると、単離した細胞を２０×１０６個／ｍｌで室温の凍結用媒体Ａ（６０％のウシ胎仔血清，４０％のＲＰＭＩ  １６４０）に再懸濁した。等容量の室温の凍結用媒体Ｂ（２０％のＤＭＳＯ，８０％のウシ胎仔血清）を滴加した。１５×１０６個の細胞を凍結チューブに小分けし、予冷した（４℃）のＣｒｙｏｇｅｎｉｃ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−Ｒａｔｅ  Ｆｒｅｅｚｉｎｇ  Ｃｏｎｔａｉｎｅｒに入れて−８０℃に置いた。２４時間後、試料を長期保存用の−１５０℃のフリーザーへ移した。
【０２１９】
３．１．３  ＰＢＭＣの融解
細胞を３７℃の水浴内で迅速に融解し、室温のＨＢＳＳにピペットで装入し、遠心した（２５０×ｇ，２０℃，５分間）。ＨＢＳＳ中での洗浄（２×）後、細胞をＨＢＳＳに２×１０６個／ｍｌの濃度で再懸濁した。細胞数および生存性をトリパンブルー排除により判定した。アッセイプレート当たり１つのバイアルを用い、分析直前に融解および調製した。
【０２２０】
３．１．４  細胞数：ヒトＰＢＭＣ
総細胞数（バイアル当たり）：９〜９．７５×１０６個
生存性：９２〜９５％
アッセイ濃度生存細胞：２×１０６個／ｍｌ
３．２  ＰＬＢ９８５
ＰＬＢ９８５細胞を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）およびペニシリン／ストレプトマイシン１００Ｕ／ｍｌを補充したＲＰＭＩ  １６４０（＝完全増殖培地）中、３７℃、５％  ＣＯ２で培養した。細胞をほぼ週２回、継代した。好中球へ分化させるために、細胞を遠心沈降させ（２５０ｇ，５分間，室温）、１．２５％のＤＭＳＯを補充した完全増殖培地に５日間、再懸濁しておいた(Zhen et al.1993, Tucker et al.1987)。分析当日に、分化した細胞をペレット化し（２５０ｇ，５分間，室温）、ＨＢＳＳ中で２回洗浄し、ＨＢＳＳ中に２×１０６個／ｍｌで再懸濁した。細胞数および生存性をトリパンブルー排除により判定した。細胞を使用時まで室温に保存した。
【０２２１】
３．２．１  細胞数：ＰＬＢ９８５
総細胞数：９４×１０６個
生存性：９２％
アッセイ濃度生存細胞：２×１０６個／ｍｌ
３．３  試薬
アッセイプレート，白色９６ウェル(Nunc 236108)
デキストランＴ５００(Pharmacosmos 5510 0500 4006)
ＤＭＳＯ(Sigma: D5879)
ＤＰＩ
ウシ胎仔血清(VWR: LONZ14-801F)
Ficoll Paque Plus (GE Healthcare 71-7167-00)
ｆＭＬＦ(Sigma: F3506)
ＨＢＳＳ(自家調製: 5.4mM KCl, 0.3mM Na2HPO4×2H2O, 0.4mM KH2PO4, 4.2mM NaHCO3, 1.3mM CaCl2×2H2O, 0.5mM MgCl2×6H2O, 0.6mM MgSO4×7H2O, 137mM NaCl, 5.6mM D-グルコース)
ＨＲＰ画分ＩＩ(Sigma P8250)
イソルミノール(4-アミノフタルヒドラジド) (Sigma A8264)
ＰＭＡ(Sigma P8139)
ＲＰＭＩ  １６４０(VWR: LONZ12-702F/12)
３．４  被験化合物
本発明化合物の１００ｍＭ  ＤＭＳＯ原液を試験に用いた。
【０２２２】
３．５  イソルミノール緩衝液
イソルミノール緩衝液は、イソルミノール（０，０１７５ｍｇ／ｍｌ）およびＨＲＰ画分ＩＩ（１，７５Ｕ／ｍｌ）を含有する。この緩衝液は、これらの成分を４×作業濃度でＨＢＳＳ中に希釈することにより調製された。
【０２２３】
４  手順
４．１  物質調製
被験化合物をＤＭＳＯ中に１００×作業濃度で希釈し、最終濃度として２００μＭから０．０１μＭまでの３倍希釈系列で力価判定した。ＤＰＩを１００×作業濃度に希釈し、被験化合物と同じ希釈系列で力価判定した。ＤＰＩも１μＭの最終濃度ですべてのプレートに対照として用いた。その際、ＤＭＳＯ中に１００×作業濃度で希釈を行なった。ＰＭＡをイソルミノール緩衝液中に４×作業濃度で希釈した。
【０２２４】
４．２  イソルミノールアッセイ
イソルミノール緩衝液中に４×作業濃度に希釈した２５μｌのＰＭＡを各ウェルに添加した。非刺激対照ウェルにはイソルミノール緩衝液のみを添加した。その後、２４μｌのＨＢＳＳ、および１μｌの被験溶液またはＤＰＩ溶液を、試験プレートの各ウェルに添加した（最終ＤＭＳＯ濃度＝１．２５％）。最後に、５０μｌの細胞懸濁液（２×１０６個／ｍｌ）を各ウェルに添加し、続いて直ちに発光測定を開始した。
【０２２５】
５  結果
結果を、ＰＭＡの存在下での発光と比較した指定濃度の被験物質の存在下で得られた発光の％として表わす。図２ＡおよびＢならびに図３ＡおよびＢに、若干の本発明化合物についての結果を示す。
【０２２６】
実施例３
発作の処置における活性のインビボ試験
発作モデル
この例に用いた発作疾患モデルは、虚血発作のメカニズムを模倣するために一過性中大脳動脈閉塞(transient middle cerebral artery occlusion)（ｔＭＣＡＯ）を施したマウスであった。先の記載に従って体重２０ｇの雄マウスに６０分間のｔＭＣＡＯを施した(Elevers M et al., Sci. Signal 3: ra1, 2010; Bena_Erro A et al., Sci Signal 2: ra67)。擬似手術したマウスを対照として用いた。
【０２２７】
投与
この試験で行なった腹腔内投与のために、３．５ｍｇの２−（２−（４−（フラン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセトアミド）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸エチルを１ｍｌのＤＭＳＯおよび５ｍｌのＰＢＳ中２０％  Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬＰに溶解し、続いてＰＢＳを追加した。実験に用いた投与量は３．２ｍｇ／ｋｇであり、対照には同じ注射容量のビヒクルを用いた。投与を各マウスに２時間目および１２時間目に行なった。
【０２２８】
発作の分析
梗塞サイズおよびＮｏｘ４阻害剤の効果を判定するために、マウスをｔＣＭＣＡＯの２４時間後にと殺し、脳の病変体積を先に記載された方法に従って測定した(Kleinschnitz et al, 前記参照)。
【０２２９】
結果
本発明化合物で処置したグループのマウスは有意に低い脳病変体積を示した（図４）。
【図１Ａ】
2015509969.tif 000022
【図１Ｂ】
2015509969.tif 000023
【図１Ｃ】
2015509969.tif 000024
【図１Ｄ】
2015509969.tif 000025
【図２】
2015509969.tif 000026
【図３】
2015509969.tif 000027
【図４】
2015509969.tif 000028
【国際調査報告】
2015509969.tif 000029
2015509969.tif 000030
2015509969.tif 000031
2015509969.tif 000032