(57)【要約】  本発明は、ホスホジエステラーゼ阻害活性を有する新規[１,２,４]トリアゾロピリジン化合物、および、炎症性疾患および状態を処置する治療薬としてのその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式(Ｉ)：
【化１】
2015502381.tif 000022
[式中、Ｒは分枝ブチルである。]
の化合物、その何れかの立体異性体またはその何れかの立体異性体の混合物、または、その薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒが、１−メチルプロピル、２−メチルプロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルである、請求項１に記載の化合物、その何れかの立体異性体またはその何れかの立体異性体混合物、または、その薬学的に許容される塩。
【請求項３】
遊離塩基形の[(１Ｓ)−１−メチルプロピル] １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレートである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
遊離塩基形の[(１Ｒ)−１−メチルプロピル] １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレートである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
遊離塩基形の[２−メチルプロピル] １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレートである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
遊離塩基形のＴｅｒｔ−ブチル １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレートである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
薬学的に許容されるビークルまたは添加物、または、薬学的に許容される担体と共に、請求項１〜６の何れか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項８】
１種以上の治療活性な化合物をさらに含む、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
医薬組成物の製造における、請求項１〜６の何れか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
ＰＤＥ４阻害活性に応答性である疾患、障害または状態を処置または改善する医薬組成物の製造における、請求項９に記載された化合物の使用。
【請求項１１】
疾患、障害または状態が、皮膚疾患または状態である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
疾患、障害または状態が、増殖性および炎症性皮膚障害、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、接触皮膚炎、乾癬、癌、表皮の炎症、脱毛症、皮膚萎縮症、ステロイド誘発皮膚萎縮症、皮膚老化、皮膚光老化、ざ瘡、蕁麻疹、掻痒症および湿疹である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
医薬として使用するための、請求項１〜６の何れか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
ＰＤＥ４阻害活性に応答性である疾患、障害または状態の処置または改善に使用するための、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
皮膚疾患または状態の処置または改善に使用するための、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
増殖性および炎症性皮膚障害、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、接触皮膚炎、乾癬、癌、表皮の炎症、脱毛症、皮膚萎縮症、ステロイド誘発皮膚萎縮症、皮膚老化、皮膚光老化、ざ瘡、蕁麻疹、掻痒症および湿疹の処置に使用するための、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１７】
ＰＤＥ４阻害活性に応答性である疾患または障害または状態を処置または改善する方法であって、生きている動物に、治療有効量の請求項１〜６の何れか１項に記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項１８】
皮膚疾患または状態を処置または改善する方法であって、少なくとも１つの当該疾患に罹患しているヒトに、所望により薬学的に許容される担体または１種以上の添加物と共に、所望により他の治療活性化合物と組み合わせて、有効量の１種以上の請求項１〜６の何れか１項に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１９】
皮膚疾患または状態が、増殖性および炎症性皮膚障害、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、接触皮膚炎、乾癬、癌、表皮の炎症、脱毛症、皮膚萎縮症、ステロイド誘発皮膚萎縮症、皮膚老化、皮膚光老化、ざ瘡、蕁麻疹、掻痒症および湿疹からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野
本発明は、ホスホジエステラーゼ阻害活性を有する新規の[１,２,４]トリアゾロピリジン化合物、および、炎症性疾患および状態を処置する治療薬としてのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
ホスホジエステラーゼは、細胞中のサイクリックＡＭＰおよび／またはサイクリックＧＭＰをそれぞれ５−ＡＭＰおよび５−ＧＭＰに加水分解するのを触媒する酵素であり、それ自体、ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰレベルの細胞制御に必須である。今日までに１１種のホスホジエステラーゼが同定されており、ホスホジエステラーゼ(ＰＤＥ) ４、ＰＤＥ７およびＰＤＥ８がｃＡＭＰに選択的である。ＰＤＥ４は、免疫および炎症性細胞、例えば好中球、マクロファージおよびＴ−リンパ球で発現される最も重要なｃＡＭＰモジュレーターである(Z. Huang and J.A. Mancini, Current Med. Chem. 13, 2006, pp. 3253-3262)。ｃＡＭＰは炎症応答の調節における重要な第２メッセンジャーであるため、ＰＤＥ４は、炎症促進性サイトカイン、例えばＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＬＴＢ４を調節することによって、炎症性細胞の炎症応答を制御することが分かっている。従って、ＰＤＥ４の阻害は、炎症性疾患、例えば喘息、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、炎症性腸疾患、例えばクローン病などの魅力的な治療標的となっている(M.D. Houslay et al., Drug Discovery Today 10 (22), 2005, pp. 1503-1519)。アトピー性皮膚炎(ＡＤ)患者はＰＤＥ活性が増大しているため、ＰＤＥ４阻害は、ＡＤの実行可能な処置であるとも考えられる(Journal of Investigative Dermatology (1986), 87(3), 372-6)。
【０００３】
ＰＤＥ４遺伝子ファミリーは、高い相同性を有する少なくとも４つの遺伝子Ａ、Ｂ、ＣおよびＤからなる(V. Boswell Smith and D. Spina, Curr. Opinion Investig. Drugs 6(11), 2006, pp. 1136-1141)。４つのＰＤＥ４アイソフォームは、種々の組織および細胞型で異なって発現される。例えば、ＰＤＥ４Ｂは、主に、単球および好中球で発現されるが、皮質や上皮では発現されず、一方、ＰＤＥ４Ｄは、肺、皮質、小脳およびＴ細胞で発現される(C. Kroegel and M. Foerster, Exp. Opinion Investig. Drugs 16(1), 2007, pp. 109-124)。脳内のＰＤＥ４Ｄ阻害は、ＰＤＥ４阻害剤を臨床的に投与したときに見られる有害作用、主に悪心および嘔吐に関連しており、一方、ＰＤＥ４Ｂの阻害は、抗炎症作用に関連していると考えられている(B. Lipworth, Lancet 365, 2005, pp. 167-175)。しかし、今日まで開発されたＰＤＥ阻害剤は、４つのＰＤＥ４アイソフォームのどれにも特異的ではないと考えられる。
【０００４】
多数のＰＤＥ４阻害剤が、炎症性疾患、主に喘息およびＣＯＰＤに対する治療効果について調べられている。
【０００５】
１つ目のテオフィリンは、呼吸器疾患、例えば喘息およびＣＯＰＤの処置に用いられる、弱い非選択的ホスホジエステラーゼ阻害剤である。しかし、テオフィリンによる処置は、軽度および重度の有害作用、例えば不整脈および痙攣を生じ得るため、テオフィリンの臨床有用性は限定的である(Kroegel and Foerster, supra)。ホスホジエステラーゼはなお抗炎症治療の魅力的な標的であるため、幾つかの他のより選択的なＰＤＥ４阻害剤が開発され、臨床の現場で調べられている。多くの第１世代ＰＤＥ４阻害剤、例えばロリプラムの臨床的開発は、用量制限的副作用、主に悪心および嘔吐のために中止された。しかし、ロフルミラストが、用量制限的副作用である悪心、下痢および頭痛を最少にした後、2010年に重度ＣＯＰＤと関連する慢性気管支炎に対して承認された。明らかに顕著な有害作用が少ない第２世代ＰＤＥ４阻害剤は、現在、臨床試験中である(Houslay, supra)。ＰＤＥ４阻害剤は、例えば、EP 0771794 および EP 0943613に開示されている。
【０００６】
WO 2008/125111 (LEO Pharma A/S)は、強力なＰＤＥ４阻害活性を有するトリアゾロピリジン化合物を開示している。これらの化合物は、二環式ヘテロ環式環系と単環式環系の間にカルボニル基を含むリンカーを含む。関連化合物であるピクラミスト(piclamilast)について、単環式環がＰＤＥ４酵素と相互作用して望ましい阻害効果を与える可能性のため、リンカーは、その位置決めに極めて重要であることが示されている(Card G.L., et al, “Structural basis for the activity of drugs that inhibit phosphodiesterases”, Structure 2004 Dec; 12(12); 2233-47)。
【０００７】
WO 2010/069322 (LEO Pharma A/S)は、二環式環系と単環式環系の間にカルボニルリンカーを有さないトリアゾロピリジン化合物を開示している。この化合物は、ＰＤＥ４阻害活性を示すことが分かっている。
【０００８】
より好ましい治療窓を有する、すなわち、有害作用作用が少ないが、治療的抗炎症効果を維持している新規ＰＤＥ４阻害剤の開発について継続した必要性がある。
【発明の概要】
【０００９】
本発明の概要
例えば局所投与後化合物の非常に低い全身曝露しか観察されないと考えられる生物学的組織中の安定性プロファイルを有する、強力なＰＤＥ４阻害剤である新規化合物を提供することが、本発明の目的である。より正確には、本発明の化合物は、ヒトの肝ミクロソームで高い排出能を有する。これらは、ヒト全血では急速に加水分解されるが、同時に、ヒトケラチノサイトでは酵素加水分解に対して安定性を示す。
【００１０】
一つの局面において、本発明は、式(Ｉ)：
【化１】
2015502381.tif 000002
[式中、Ｒは下に定義した通りである。]
の化合物を提供する。
【００１１】
他の局面において、本発明は、薬学的に許容されるビークルまたは添加物、または、薬学的に許容される担体と共に、所望により１種以上の他の治療活性化合物と共に、上で定義した一般式(Ｉ)の化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００１２】
他の局面において、本発明は、ＰＤＥ４阻害活性に応答性である疾患、障害または状態を予防、処置、阻止または改善する医薬組成物の製造における、本発明の化合物の使用を提供する。
【００１３】
また、他の局面において、本発明は、ＰＤＥ４阻害活性に応答性である疾患、障害または状態を予防、処置、阻止または改善する方法であって、動物に、治療有効量の本発明の式(Ｉ)の化合物を投与する過程を含む方法を提供する。
【００１４】
本発明の他の目的は、下記の詳細な説明および実施例から、当業者に明らかである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の詳細な説明
一つの局面において、本発明は、式(Ｉ)：
【化２】
2015502381.tif 000003
[式中、Ｒは分枝ブチルである。]
の化合物、その何れかの立体異性体またはその何れかの立体異性体の混合物、または、その薬学的に許容される塩を提供する。
【００１６】
本発明の一つの態様において、Ｒは、１−メチルプロピル、２−メチルプロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。
他の態様において、Ｒは、１−メチルプロピルである。
他の態様において、Ｒは、２−メチルプロピルである。
他の態様において、Ｒは、ｔｅｒｔ−ブチルである。
【００１７】
式(Ｉ)の化合物の具体例は、
[(１Ｓ)−１−メチルプロピル] １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレート；
[(１Ｒ)−１−メチルプロピル] １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレート；
[２−メチルプロピル] １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレート；
Ｔｅｒｔ−ブチル １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレート；または
それらの薬学的に許容される塩からなる群から選択され得る。
【００１８】
定義
本明細書および請求の範囲で用いられるとき、下記の用語は示された意味を有する：
用語“処置”は、本明細書で用いられるとき、疾患、障害または状態と戦う目的で、患者の管理および世話することを意味する。この用語は、疾患、障害または状態の進行の遅延、症状および合併症の緩和または軽減、および／または、疾患、障害または状態の治癒または排除を含むことを意図している。処置される患者は、好ましくは哺乳動物であり、特にヒトである。
【００１９】
用語“疾患”、“状態”および“障害”は、本明細書で用いられるとき、ヒトの正常な生理学的状態でない患者の状態を特定するために、交換可能に用いられる。
【００２０】
用語“医薬”は、本明細書で用いられるとき、薬学的に活性な化合物を患者に投与するのに適した医薬組成物を意味する。
【００２１】
用語“薬学的に許容される”は、本明細書で用いられるとき、通常の薬学的適応に適していること、すなわち、患者に有害事象を生じないことなどを意味する。
【００２２】
用語“薬学的に許容される塩”は、式Ｉの化合物を適当な無機または有機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、蟻酸、酢酸、２,２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、ガラクタル酸、乳酸、マレイン酸、Ｌ−リンゴ酸、フタル酸、クエン酸、プロピオン酸、安息香酸、グルタル酸、グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、メタンスルホン酸、サリチル酸、コハク酸、マロン酸、酒石酸、ベンゼンスルホン酸、エタン−１,２−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファミン酸またはフマル酸と反応させることによって製造される塩を示すことが意図される。
【００２３】
本発明の化合物は、有機溶媒から直接濃縮することによって、または、有機溶媒または当該溶媒と有機であっても無機であってもよい共溶媒、例えば水との混合物から結晶化または再結晶することによって、結晶形で得ることができる。結晶は、本質的に溶媒のない形態で、または溶媒和物、例えば水和物として単離され得る。本発明は、全ての結晶変態および結晶形およびその混合物を包含する。
【００２４】
式(Ｉ)の化合物は、異性体の形態、例えばエナンチオマーを生じさせる不斉に置換された(キラルな)炭素原子を含んでも含まなくてもよい。本発明は、全ての当該異性体の純粋な形態またはその混合物(ラセミ体)に関する。本発明の化合物および中間体の純粋な立体異性体の形態は、当技術分野で既知の手順の応用によって得られる。様々な異性体の形態は、物理的な分離方法によって、例えば選択的結晶化およびクロマトグラフ法、例えばキラル固相を用いた液体クロマトグラフィーによって分離され得る。当該純粋な立体異性体の形態はまた、立体選択的にまたは立体特異的に反応が起こる条件で、適切な出発物質の対応する純粋な立体異性体の形態から誘導され得る。好ましくは、具体的な立体異性体が望ましいならば、当該化合物は、立体選択的または立体特異的製造方法によって合成される。これらの方法は、好都合には、キラルな純粋な出発物質を用いる。
【００２５】
医学的使用
本発明の化合物がＰＤＥ４阻害活性を示すため、本化合物は、炎症性アレルギー性疾患、例えば気管支喘息、ＣＯＰＤ、アレルギー性鼻炎および腎炎；自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、多発性硬化症、クローン病および全身性エリテマトーデス；急性または慢性皮膚創傷障害；中枢神経系の疾患、例えば鬱病、健忘症および認知症；心不全によって起こる虚血性逆流、ショックおよび脳血管疾患などに関連する臓器障害；インスリン抵抗性糖尿病；創傷；ＡＩＤＳなどの治療薬として有用であり得る。
【００２６】
一つの態様において、本発明は、皮膚疾患または状態の処置、予防または軽減に有用であると考えられる。
【００２７】
他の態様において、本発明の化合物は、増殖性および炎症性皮膚障害、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、接触皮膚炎、乾癬、癌、表皮炎症、脱毛症、皮膚萎縮症、ステロイド誘発皮膚萎縮症、皮膚老化、皮膚光老化、ざ瘡、蕁麻疹、掻痒症および湿疹からなる群から選択される皮膚疾患または状態の処置、予防または軽減に有用であると考えられる。
【００２８】
他の態様において、本発明の化合物は、アトピー性皮膚炎の処置または軽減に有用であると考えられる。
他の態様において、本発明の化合物は、乾癬の処置または軽減に有用であると考えられる。
【００２９】
本発明の化合物は、所望により他の活性な化合物と組み合わせて、皮膚疾患または状態の処置に、特に増殖性および炎症性皮膚障害、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、接触皮膚炎、乾癬、癌、表皮の炎症、脱毛症、皮膚萎縮症、ステロイド誘発皮膚萎縮症、皮膚老化、皮膚光老化、ざ瘡、蕁麻疹、掻痒症および湿疹の処置に有用であり得る。
【００３０】
ヒトの処置に有用である上に、本発明の化合物はまた、哺乳動物、例えばウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌおよびネコを含む動物の獣医学的処置に有用であり得る。
【００３１】
治療に使用するために、本発明の化合物は、典型的に、医薬組成物の形態である。従って、本発明は、所望により１種以上の治療活性化合物と共に、薬学的に許容される添加物またはビークルと共に式(Ｉ)の化合物を含む医薬組成物に関する。添加物は、組成物の他の成分と混和可能であって、そのレシピエントに有害でないという意味で、“許容される”ものでなければならない。
【００３２】
投与単位の形態で、本化合物は、１日１回以上、適切な間隔で投与され得るが、いずれにしても患者の状態に常に依存し、かつ医師による処方に従う。好都合には、局所製剤の投与単位は、０.１mgから１０００mgの間の、好ましくは１mgから１００mgの間の、例えば５〜５０mgの式(Ｉ)の化合物を含む。
【００３３】
本発明の化合物の適当な投与量は、とりわけ、患者の年齢および状態、処置される疾患の重症度および医師に周知の他の要素に依存する。本化合物は、種々の投与スケジュールに従って、例えば１日または１週間間隔で、経口、非経腸または局所の何れで投与してもよい。一般的に、１回投与量は、０.００１〜１０mg/kg体重の範囲、例えば０.０１〜１mg/kg体重の範囲である。本化合物を、ボラスとして投与しても(すなわち１日投与量全部を１回で投与する)、分割投与で１日２回以上投与してもよい。
【００３４】
局所処置の文脈では、活性物質をそのままでまたは固体または液体の薬学的希釈剤または担体との混合物として含む物理的および化学的に安定な単位投与として残る、患者に投与でき、容易に取り扱いおよび包装され得るものである単位投与量、すなわち１回投与量を表す“使用単位”を言うのがより適切であり得る。“使用単位”は、皮膚平方センチメートル当たり０.１mg〜５０mg、好ましくは０.２mg〜５mgの当該最終製剤の塗布で、患者に局所に投与できる。
【００３５】
特定の処置レジメでは、長期間での投与、例えば隔日、毎週またはより長い間隔での投与が有益であると考えられる。
【００３６】
処置が他の治療上活性な化合物の投与を含むならば、当該化合物の有用な投与量についてはGoodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., J.G. Hardman and L.E. Limbird (Eds.), McGraw-Hill 1995を参考にすることが推奨される。
【００３７】
本発明の化合物と１種以上の他の活性化合物の投与は、同時であっても連続的であってもよい。
【００３８】
製剤は、例えば、経口(持続放出または徐放を含む)、直腸、非経腸(皮下、腹腔内、筋肉内、関節内および静脈内を含む)、経皮、眼、局所、皮膚、鼻または頬側投与に適した形態のものを含む。ここで請求する製剤の局所投与が特に適当である。
【００３９】
製剤は、好都合には、単位投与形で提供されてもよく、薬学業界で周知の何れかの方法によって、例えばRemington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed., 2000に開示された方法によって製造され得る。全ての方法は、１種以上の補助成分から構成される担体を有効成分と一緒にする工程を含む。一般的に、製剤は、液体担体または微粉化した固体担体またはその両方と有効成分を均一におよび緊密に一緒にして、必要であれば、生成物を望ましい製剤に成形することによって製造される。
【００４０】
経口投与に適した本発明の製剤は、予め決められた量の有効成分をそれぞれ含む、カプセル剤、サシェ剤、錠剤またはロゼンジ剤としての個別単位の形態；散剤または顆粒剤の形態；水性液体または非水性液体、例えばエタノールまたはグリセロール中の溶液または懸濁液の形態；または水中油型エマルジョンまたは油中水型エマルジョンの形態であり得る。このような油は、食用油、例えば綿実油、ごま油、ヤシ油または落花生油であり得る。水性懸濁液に適した分散剤または懸濁剤は、合成ゴムまたは天然ゴム、例えばトラガカントゴム、アルギン酸塩、アラビアゴム、デキストラン、カルボキシメチルセルロース ナトリウム、ゼラチン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーおよびポリビニルピロリドンを含む。有効成分はまた、ボラス、舐剤またはペーストの形態で投与され得る。
【００４１】
錠剤は、所望により１種以上の補助成分と共に、有効成分を圧縮または成形することによって作られ得る。圧縮錠剤は、所望により結合剤、例えば乳糖、ブドウ糖、澱粉、ゼラチン、アラビアゴム、トラガカントゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレン グリコール、蝋など；滑沢剤、例えばオレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなど；崩壊剤、例えば澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、クロスカルメロース ナトリウム、澱粉グリコール酸ナトリウム、クロスポビドンなど、または分散剤、例えばポリソルベート ８０と混合した、自由流動形、例えば粉末または顆粒の有効成分を、適当な機械で圧縮することによって製造され得る。成形錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末にした有効成分と適当な担体の混合物を、適当な機械で成形することによって作られ得る。
【００４２】
直腸投与用製剤は、本発明の化合物を、低温融解水溶性または水不溶性固体、例えばココアバター、水素化植物油、ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコールの脂肪酸エステルと混合した、坐剤の形態であってもよく、エリキシル剤は、パルミチン酸ミリスチルを用いて製造してもよい。
【００４３】
非経腸投与に適した製剤は、好都合には、有効成分の滅菌油性または水性製剤を含み、これは、好ましくはレシピエントの血液と等張性であり、例えば等張性食塩水、等張性ブドウ糖溶液または緩衝溶液である。製剤は、好都合には、例えば細菌保持フィルターでの濾過、製剤への滅菌剤の添加、製剤の放射線照射または製剤の加熱によって滅菌処理され得る。例えば Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol.9, 1994に開示されたリポソーム製剤もまた、非経腸投与に適している。
【００４４】
あるいは、式(Ｉ)の化合物は、滅菌処理された固体製剤、例えば、使用直前に滅菌処理された溶媒に容易に溶解する凍結乾燥粉末として提供されてもよい。
【００４５】
経皮製剤は、膏薬またはパッチ剤の形態であってもよい。
【００４６】
眼の投与に適した製剤は、微晶形の有効成分の滅菌処理された水性製剤の形態であってもよく、例えば水性微結晶性懸濁液である。リポソーム製剤または生体分解性ポリマー系、例えば Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol.2, 1989に開示されたものもまた、眼の投与用に有効成分を提供するために用いられ得る。
【００４７】
局所または眼の投与に適した製剤は、液体または半液体製剤、例えばリニメント剤、ローション剤、ゲル、塗布剤(applicant)、水中油型または油中水型エマルジョン、例えばクリーム剤、軟膏剤またはペースト剤；または、溶液剤または懸濁液剤、例えば滴剤を含む。眼の処置用組成物は、好ましくは、さらにシクロデキストリンを含んでもよい。
【００４８】
局所投与について、式(Ｉ)の化合物は、典型的には、組成物重量の０.０１〜５重量％、例えば０.０１重量％〜１重量％の量で提供され得る。
【００４９】
鼻または頬側投与に適した製剤は、粉末状自己推進スプレー製剤を含み、例えばエアロゾルおよびアトマイザーである。このような製剤は、例えば Modern Pharmaceutics, 2nd ed., G.S. Banker and C.T. Rhodes (Eds.), page 427-432, Marcel Dekker, New York; Modern Pharmaceutics, 3th ed., G.S. Banker and C.T. Rhodes (Eds.), page 618-619 and 718-721, Marcel Dekker, New York and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol. 10, J. Swarbrick and J.C. Boylan (Eds), page 191-221, Marcel Dekker, New Yorkにより詳細に開示されている。
【００５０】
上記成分に加えて、式(Ｉ)の化合物の製剤は、１種以上のさらなる成分、例えば希釈剤、緩衝剤、風味剤、着色料、界面活性剤、濃厚化剤、保存料(抗酸化剤を含む)、例えばヒドロキシ安息香酸メチル、乳化剤などを含んでもよい。
【００５１】
医薬組成物は、さらに、例えば、グルココルチコイド、ビタミンＤおよびビタミンＤアナログ、抗ヒスタミン剤、血小板活性化因子(ＰＡＦ)アンタゴニスト、抗コリン作用薬、メチルキサンチン、β−アドレナリン作用薬、ＣＯＸ−２阻害剤、サリチレート、インドメタシン、フルフェナム酸、ナプロキセン、チメガジン、金塩、ペニシラミン、血清コレステロール低下剤、レチノイド、亜鉛塩、サリチルアゾスルファピリジンおよびカルシニューリン阻害剤からなる群から選択される、皮膚疾患または状態の処置に好都合に用いられる１種以上の他の有効成分を含んでもよい。
【００５２】
製造方法
本発明の化合物は、合成分野の当業者に周知の幾つかの方法で製造できる。式(Ｉ)の化合物は、例えば、合成有機化学の分野で既知の方法と共に、下に略記した反応および方法または当業者に認識されるその変法を用いて製造され得る。好ましい方法は、下記の方法を含むが、これらに限定されない。反応は、用いられる反応材および物質に適切であって行われる変換に適した溶媒中で行われる。また、下記の合成方法において、溶媒、反応雰囲気、反応温度、実験の持続時間および後処理の手順の選択を含む全ての提案された反応条件は、反応に標準的な条件であるよう選択され、有機合成の分野の当業者によって容易に認識されるべきものであることが理解されるべきである。示されたクラスに含まれる全ての化合物が、幾つかの記載された方法で求められる幾つかの反応条件に適合性であるわけではない。反応条件と適合性である置換基へのこのような制限は、当業者に容易に明らかであり、別方法を用いることができる。
【００５３】
出発物質は、既知のまたは市販されている化合物であるか、または、当業者に周知の通例の合成方法によって製造できる。
【００５４】
ＬＣＭＳ方法“XE 方法7 CM”
Waters LCT Premier MS 装置およびWaters Aquity UPLCで質のチェックを行った。
カラム：Waters Aquity UPLC HSS T3 1.8μm, 2.1×50mm, 40℃。
溶媒：Ａ＝１０ｍＭ  酢酸アンモニウム＋０.１％ＨＣＯＯＨ, Ｂ＝ＭｅＣＮ＋０.１％ＨＣＯＯＨ。
流速：０.７ml/分, 注入体積２μｌ, ＵＶ検出範囲２４０〜４００nm。
【表１】
2015502381.tif 000004
ＭＷ確認および純度を抽出してOpenLynxでチェックした。
【００５５】
１Ｈ核磁気共鳴(ＮＭＲ)スペクトルを、４００または６００MHzで測定した。化学シフト値(δ, ppm)を、特定の溶媒中で、テトラメチルシラン(δ＝0.00)またはクロロホルム(δ＝7.25)の内部標準に対して記載した。規定される(二重項(d)、三重項(t)、四重項(q))かまたは規定されない(m)多重項の値は、範囲を記載しない限り、およそ中間点で定義される。(bs)は、ブロードな一重項を示す。用いられる有機溶媒は、通常無水である。クロマトグラフィーは、Merck シリカゲル 60 (0.040〜0.063mm)で行った。示された溶媒比は、断りのない限りｖ：ｖで記載される。
【００５６】
下記の略号を全体を通して用いた。
【表２】
2015502381.tif 000005
【実施例】
【００５７】
一般的な方法
本発明の化合物は、例えば、下記の非限定的な一般的な方法および実施例に従って製造され得る。Ｒは、式(Ｉ)の化合物について前に定義した通りである。
【化３】
2015502381.tif 000006
【００５８】
製造例１
Ｔｅｒｔ−ブチル ヒドロキシカルバメート
【化４】
2015502381.tif 000007
ジエチルエーテル(９４０ml)および水(３０ml)中のヒドロキシルアミン・ＨＣｌ(１５０ｇ, ２.１７mol)およびＫ２ＣＯ３(１５０ｇ, １.０９mol)の懸濁液に、撹拌しながら、、０℃で、ジエチルエーテル(６００ml)中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネート(３０８ｇ, １.４１mmol)の溶液をゆっくりと１５分間加えた。添加後、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。得られた粗製の物質を、シクロヘキサン(５０ml×３)で洗浄し、乾燥し、表題化合物を得た(１５０ｇ, ５２％, 白色固体)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ=7.18 (br, 2H), 1.47 (s, 9H) ppm.
【００５９】
製造例２
Ｔｅｒｔ−ブチル ４−ニトロベンゾイルオキシカルバメート
【化５】
2015502381.tif 000008
ジクロロメタン(２Ｌ)中のｔｅｒｔ−ブチル ヒドロキシルカルバメート(１５０ｇ, １.１２８mol)の溶液に、撹拌しながら、０℃で、トリエチルアミン(１７４ml, １.２４mol)を加え、次に、塩化 ４−ニトロベンゾイル(２０５ｇ, １.１０５mol)を数回に分けて加えた。添加が完了した後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を水(５００ml)で反応停止させ、抽出した。分離したジクロロメタン層を塩水(２００ml)で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。得られた粗製の物質を、ヘキサン(１００ml×２)で洗浄し、乾燥し、表題化合物を得た(３００ｇ, ９４％, 黄色固体)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ=8.34-8.27 (m, 4H), 2.97-2.92 (m, 1H), 1.53 (s, 9H) ppm.
【００６０】
製造例３
Ｏ−(４−ニトロベンゾイル)ヒドロキシルアミン
【化６】
2015502381.tif 000009
ジクロロメタン(２Ｌ)中のｔｅｒｔ−ブチル ４−ニトロベンゾイルオキシカルバメート(３００ｇ, １.０６mol)の溶液に、撹拌しながら、０℃で、メタンスルホン酸(６９ml, １.０６mol)をゆっくりと加えた。添加が完了した後、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン(１Ｌ)で希釈し、１０％  ＮａＨＣＯ３水溶液(３００ml)、水(２００ml)、そして塩水(２００ml)で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。得られた粗製の物質をヘキサン(１００ml×２)で洗浄し、乾燥し、表題化合物を得た(１５０ｇ, ７７％, 薄黄色固体)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ=8.33-8.30 (m, 2H), 8.22-8.19 (m, 2H), 6.73 (brs, 2H) ppm.
【００６１】
製造例４
１−ヒドロキシメチル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル
【化７】
2015502381.tif 000010
ＴＨＦ(８０ml)中のジエチル シクロプロパン−１,１−ジカルボキシレート(２.１３ｇ, １１.４mmol)の溶液に、撹拌しながら、室温で、トリ−ｔｅｒｔ−ブトキシ水素化リチウムアルミニウム(３８.７６ml, ３８.７６mmol, ＴＨＦ中１.０Ｍの溶液)をゆっくりと加えた。添加が完了した後、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル(１００ml)で希釈し、１ＮのＨＣｌ水溶液(２０ml)、水(２０ml)、５％のＮａＨＣＯ３水溶液(２５ml)、そして塩水(２０ml)で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、表題化合物を得た(１.３ｇ, ７９％, 黄色油状物)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ=4.20-4.13(m, 2H), 3.62 (m, 2H), 2.61 (m, 1H), 1.29-1.24 (m, 5H), 0.88-0.85 (m, 2H) ppm.
【００６２】
製造例５
１−ホルミル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル
【化８】
2015502381.tif 000011
ジクロロメタン(４５ml)中の１−ヒドロキシメチル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル(１.１ｇ, ７.６３mmol)の溶液に、撹拌しながら、ＮａＨＣＯ３(２.５ｇ, ２９.７６mmol)およびデス・マーチン・ペルヨージナン(６.４６ｇ, １５.２３mmol)を加えた。懸濁液を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を、１０％のＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液および１０％のＮａＨＣＯ３水溶液の１：１溶液(２０ml)で反応停止させ、温度を２０℃未満に維持し、３０分間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン(１００ml)で希釈し、抽出した。有機層を塩水(３０ml)で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(溶出液として石油エーテル中０〜１０％  ＥｔＯＡｃ)、表題化合物を得た(８００mg, ７６％, 黄色油状物)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ=10.40 (s, 1H), 4.25 (m, 2H), 1.68-1.65 (m, 2H), 1.62-1.59 (m, 2H), 1.33-1.26 (m, 3H) ppm.
【００６３】
製造例６
３−メトキシ−ピリジン−２−イルアミン
【化９】
2015502381.tif 000012
エタノール(１Ｌ)中の３−メトキシ−２−ニトロピリジン(３０ｇ, １９４.８mmol)および１０％  Ｐｄ／Ｃ(１０ｇ)の懸濁液を、パール水素化装置(Ｈ２, 圧力４０psi)中で、室温で４時間水素化した。反応混合物をセライトで濾過し、濾液を濃縮し、表題化合物を得た(２２ｇ, ９１％, 褐色固体)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ=7.66 (d, J=5.2Hz; 1H), 6.91 (d, J=7.6Hz, 1H), 6.63-6.60 (m, 1H), 4.65 (br, 2H), 3.84 (s, 3H) ppm.
【００６４】
製造例７
４−ニトロ安息香酸の１,２−ジアミノ−３−メトキシ−ピリジニウム塩
【化１０】
2015502381.tif 000013
ジクロロメタン(４００ml)中の３−メトキシ−ピリジン−２−イルアミン(３０ｇ, １６４.８mmol)の撹拌した溶液に、Ｏ−(４−ニトロベンゾイル)ヒドロキシルアミン(１３.２ｇ, ２１４.２mmol)を１０℃で加えた。添加後、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、ジクロロメタン(２５ml×２)で洗浄し、乾燥し、表題化合物を得た(４０ｇ, ９１％, 褐色固体)(注意：塩は、熱に不安定である)。
1H NMR (400 MHz, DMSO):δ=8.53 (br, 2H), 8.12 (d, J=8Hz; 2H), 8.01 (d, J=8.8Hz; 2H), 7.73 (d, J=6.4Hz; 1H), 7.33 (d, J=7.2Hz; 1H), 7.17 (br, 2H), 6.77 (t, J=6.8Hz; 1H), 3.93 (s, 3H) ppm. 
【００６５】
製造例８
１−(８−メトキシ−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル)−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル
【化１１】
2015502381.tif 000014
エタノール(１０ml)中の４−ニトロ安息香酸のジアミノ−３−メトキシ−ピリジニウム塩(１ｇ, ７.１４mmol)の溶液に、撹拌しながら、０℃で、ＤＢＵ(２.１ml)を加え、続いて１−ホルミル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル(１.５ｇ, １０.７１mmol)を加えた。添加後、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ(１００ml)で希釈し、水(２０ml×２)、そして塩水(２０ml)で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製の物質を、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(溶出液としてＣＨ２Ｃｌ２中０〜１５％  ＥｔＯＡｃを使用)、表題化合物を得た(８００mg, ５３％, 白色固体)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ=8.18-8.16 (d, J=6.4Hz; 1H), 6.89 (t, J=7.2Hz, 1H), 6.76 (d, J=8Hz; 1H), 4.20-4.14 (m, 2H), 4.03 (s, 3H), 1.73-1.70 (m, 2H), 1.59-1.56 (m, 2H), 1.20 (t, J=6.8Hz; 3H) ppm.
【００６６】
製造例９
１−(５−ブロモ−８−メトキシ−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル)−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル
【化１２】
2015502381.tif 000015
アセトニトリル(３００ml)中の１−(８−メトキシ−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル)−シクロプロパン−カルボン酸エチルエステル(２５ｇ, ９５.７mmol)の溶液に、撹拌しながら、室温で、Ｎ−ブロモスクシンイミド(３４ｇ, １９１.５mmol)を少しずつ加えた。添加後、反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ(６００ml)で希釈し、水(１００ml×２)、そして塩水(５０ml)で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製の物質を、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(溶出液としてジクロロメタン中０〜１０％  ＥｔＯＡｃ)、表題化合物を得た(２５ｇ, ７７％, 無色固体)。
1H NMR (400 MHz, DMSO):δ=7.44 (d, J=8.4Hz; 1H), 7.07 (d, J=8Hz; 1H), 4.13-4.08 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 1.60-1.57 (m, 2H), 1.48-1.45 (m, 2H), 1.13 (t, J=7.4Hz; 3H) ppm.
【００６７】
製造例１０
１−(５−ブロモ−８−メトキシ−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル)シクロプロパンカルボン酸
【化１３】
2015502381.tif 000016
ＴＨＦ(２５ml)中の、エチル １−(５−ブロモ−８−メトキシ−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル)シクロ−プロパンカルボキシレート(３.００ｇ, ８.８２mmol)の溶液に、１ＭのＬｉＯＨ水溶液(２５ml)を加えた。混合物を８０℃で３０分間撹拌し、室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ(５０ml)および水(５０ml)で希釈した。有機相を０.１ＭのＮａＯＨ水溶液(２５ml)で抽出し、合わせた水相を濃塩酸でｐＨ  ０〜１まで酸性にし、ＤＣＭ(３０ml)で４回抽出した。合わせた有機層を蒸発乾固し、表題化合物を得た(２.５４ｇ, ９４％)。
1H NMR (DMSO, 400 MHz):δ=12.61 (s, 1H), 7.42 (d, 1H, J=8.3 Hz), 7.06 (d, 1H, J=8.3 Hz), 3.97 (s, 3H), 1.53 (q, 2H, J=3.9 Hz), 1.40 (q, 2H, J=3.9 Hz) ppm.
【００６８】
製造例１１
１−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボン酸
【化１４】
2015502381.tif 000017
１−(５−ブロモ−８−メトキシ−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル)シクロプロパンカルボン酸(１.００ｇ, ３.２０mmol)および５−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン(ボロネートの製造は、WO2011/134468に記載されている)(１.６７ｇ, ６.４０mmol)を、脱気したジオキサン(１６ml)に溶解した。Ｐｄ２(ｄｂａ)３(２９mg, ３２μｍｏｌ)、ＰＣｙ３(１８mg, ６４μｍｏｌ)およびＫ３ＰＯ４(２.３８ｇ, １１.２mmol)を、脱気した水(１０ml)中で混合した。２つの溶液を混合し、続いて、マイクロ波オーブン中、１１０℃で１０分間加熱し、室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ(４０ml)で希釈した。有機相を、水(２５ml)で、そして０.１ＭのＮａＯＨ水溶液(２５ml)で抽出し、合わせた水相を、濃塩酸で、ｐＨ  ０〜１まで酸性にして、ＤＣＭ(３０ml×４)で抽出した。合わせた有機層を蒸発させた後、表題化合物が析出した(７４６mg, ６４％)。
ＨＰＬＣ保持時間(XE 方法7 CM): 1.97分.
検出された“M+1”質量:  366.11. 計算された“M+1”質量: 366.11.
1H NMR (DMSO, 300 MHz):δ=8.25 - 8.20 (m, 1H), 8.13 (dd, 1H, J=8.2, 1.4 Hz), 8.00 (d, 1H, J=8.0 Hz), 7.40 (d, 1H, J=8.2 Hz), 7.24 (d, 1H, J=8.3 Hz), 5.51 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 1.58 - 1.48 (m, 2H), 1.48 - 1.39 (m, 2H) ppm.
【００６９】
実施例１
[(１Ｓ)−１−メチルプロピル] １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレート(化合物１)
【化１５】
2015502381.tif 000018
ＤＣＭ(０.５ml)中の１−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボン酸(１０mg, ２７μｍｏｌ)、(１Ｓ)−１−メチルプロパノール(１０μｌ, １０８μｍｏｌ)、ＤＭＡＰ(６.７mg, ５４μｍｏｌ)およびＥＤＣＩ・ＨＣｌ(１０.５mg, ５４μｍｏｌ)の混合物を、密封バイアル中、室温で一夜撹拌した後、さらに(１Ｓ)−１−メチルプロパノール(１０μｌ, １０８μｍｏｌ)およびＤＭＡＰ(６.７mg, ５４μｍｏｌ)を加え、混合物を５０℃で３時間加熱した。蒸発乾固し、酸性分取ＨＰＬＣ精製を行い、表題化合物を得た。
ＨＰＬＣ保持時間(XE 方法7 CM): 2.35分.
検出された“M+1”質量: 422.16. 計算された“M+1”質量: 422.17.
1H NMR (DMSO, 600 MHz):δ=8.25 - 8.21 (m, 1H), 8.14 (dd, 1H, J=8.0, 1.2 Hz), 8.01 - 7.97 (m, 1H), 7.41 (d, 1H, J=8.2 Hz), 7.23 (d, 1H, J=8.2 Hz), 5.51 (s, 2H), 4.78 (h, 1H, J=6.3 Hz), 4.04 (s, 3H), 1.61 - 1.40 (m, 6H), 1.13 (d, 3H, J=6.2 Hz), 0.78 (t, 3H, J=7.4 Hz) ppm.
【００７０】
実施例２
[(１Ｒ)−１−メチルプロピル] １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレート(化合物２)
【化１６】
2015502381.tif 000019
ＤＣＭ(１０ml)中の、１−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボン酸(４００mg, １.０９５mmol)、(２Ｒ)−ブタン−２−オール(１２２mg, １.６４mmol)、ＤＭＡＰ(１４７mg, １.２０mmol)およびＥＤＣＩ・ＨＣｌ(２３１mg, １.２０mmol)の混合物を、室温で一夜撹拌した後、それを蒸発乾固した。カラムクロマトグラフィーを行い(濃度勾配  ＤＣＭ中０〜５％のＭｅＯＨ)、続いてＥｔＯＨ中で再結晶し、凍結乾燥し、表題化合物を無色の粉末として得た(１３８mg, ３０％)。
ＨＰＬＣ保持時間(XE 方法7 CM): 2.33分.
検出された“M+1”質量:  422.15. 計算された“M+1”質量: 422.17.
1H NMR (DMSO, 400 MHz):δ=8.23 (br s, 1H), 8.14 (dd, 1H, J=8.0, 1.6 Hz), 7.99 (d, 1H, J=8.0 Hz), 7.41 (d, 1H, J=8.2 Hz), 7.24 (d, 1H, J=8.2 Hz), 5.51 (s, 2H), 4.78 (h, 1H, J=6.3 Hz), 4.04 (s, 3H), 1.62 - 1.38 (m, 6H), 1.13 (d, 3H, J=6.3 Hz), 0.78 (t, 3H, J=7.4 Hz) ppm.
【００７１】
実施例３
[２−メチルプロピル] １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレート(化合物３)
【化１７】
2015502381.tif 000020
ＤＣＭ(１４ml)中の、１−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボン酸(２５０mg, ６８５μｍｏｌ)、イソブタノール(１００μｌ, １.３７mmol)、ＤＭＡＰ(２５０mg, ２.０５mmol)およびＥＤＣＩ・ＨＣｌ(２６２mg, １.３７mmol)の混合物を、密封バイアル中、５０℃で２時間撹拌した後、それをＤＣＭ(８０ml)で希釈し、１ＭのＨＣｌ水溶液(４０ml)で洗浄し、蒸発乾固した。粗製の混合物をＭｅＣＮ(〜２ml)に再度溶解し、水(〜２ml)を添加した後、粗生成物を結晶化した。カラムクロマトグラフィーを行い(濃度勾配  石油エーテル中２０〜１００％  ＥｔＯＡｃ)、続いてＭｅＣＮおよび水中で再結晶し、表題化合物を無色の結晶として得た(１７８mg, ６２％)。
ＨＰＬＣ保持時間(XE 方法7 CM): 2.34分.
検出された“M+1”質量: 422.16. 計算された“M+1”質量: 422.17.
1H NMR (DMSO, 600 MHz):δ=8.22 (br s, 1H), 8.13 (dd, 1H, J=8.1 Hz, 1.5 Hz), 8.00 (d, 1H, J=8.0 Hz), 7.40 (d, 1H, J=8.2 Hz), 7.24 (d, 1H, J=8.2 Hz), 5.51 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.84 (d, 2H, J=6.5 Hz), 1.79 (m, 1H), 1.61 - 1.54 (m, 2H), 1.54 - 1.46 (m, 2H), 0.78 (d, 6H, J=6.7 Hz) ppm.
【００７２】
実施例４
Ｔｅｒｔ−ブチル １−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボキシレート(化合物４)
【化１８】
2015502381.tif 000021
ＤＭＦ(１.０ml)中の１−[８−メトキシ−５−(１−オキソ−３Ｈ−イソベンゾフラン−５−イル)−[１,２,４]トリアゾロ[１,５−ａ]ピリジン−２−イル]シクロプロパンカルボン酸(３０mg, ８３μｍｏｌ)および塩化 ベンジルトリエチルアンモニウム(１９mg, ８３μｍｏｌ)の懸濁液を、溶液になるまで穏やかに加熱した。臭化ｔｅｒｔ−ブチル(２９７μｌ, ２.６４mmol)およびＫ２ＣＯ３(１７１mg, １.２４mmol)を加え、混合物を５５℃で３日間撹拌した。さらに臭化 ｔｅｒｔ−ブチル(１３９μｌ, １.２４mmol)およびＫ２ＣＯ３(１７１mg, １.２４mmol)を加え、混合物を５５℃で１日以上撹拌した。ＰｒｅｐＨＰＬＣを行い、表題化合物を得た。
ＨＰＬＣ保持時間(XE 方法7 CM): 2.29分.
検出された“M+1”質量: 422.18. 計算された“M+1”質量: 422.17.
1H NMR (DMSO, 300 MHz):δ=8.27 - 8.22 (m, 1H), 8.16 (dd, 1H, J=8.0, 1.5 Hz), 8.00 (d, 1H, J=8.2 Hz), 7.40 (d, 1H, J=8.2 Hz), 7.22 (d, 1H, J=8.3 Hz), 5.51 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 1.54 - 1.40 (m, 4H), 1.38 (s, 9H) ppm.
【００７３】
アッセイ
ＰＤＥ４アッセイ
ヒト組み換えＰＤＥ４(Genbank受託番号NM_006203)を、１０μＭまでの濃度の試験化合物と共に、少量(０.０２１MBq)の放射性標識ｃＡＭＰを含むｃＡＭＰ(１×１０−５Ｍ)と共に、１時間インキュベートした。インキュベーション終了時に、放射性トレーサーに結合したとき化学発光を生じるＳＰＡビーズへのＡＭＰ生成物の結合によって、基質の分解を評価した。ＡＭＰ生成物は、ビーズへの放射性トレーサーの結合を阻害し、化学発光シグナルと競合した。
【００７４】
コントロールサンプルと比較して基質分解の５０％阻害をもたらすモル濃度として結果を計算し、ＩＣ５０(ｎＭ)の範囲として表す。
【００７５】
本発明の化合物をＰＤＥ４アッセイで試験した。ＩＣ５０(ｎＭ)：化合物１, １０.６ｎＭ；化合物２, １３.０ｎＭ；化合物３, １２.３ｎＭ；化合物４, ２０.７ｎＭ(各化合物について２〜５回の試験の平均値に基づく)。
【００７６】
ＴＮＦ−α放出
ヒト末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)をバフィーコートから単離した。血液を１：１の比で食塩水と混合し、ＰＢＭＣを、Lymphoprep tubes(商標)(Nycomed, Norway)を用いて単離した。ＰＢＭＣを、０.５％ヒト血清アルブミン、pen/strepおよび２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ１６４０に、５×１０５c/mlの濃度で懸濁した。細胞を、試験化合物と共に、９６ウェル組織培養プレート中で３０分間プレインキュベートし、リポ多糖  １mg/ml(Sigma)で１８時間刺激した。上清のＴＮＦ−α濃度を、均一時間分解蛍光共鳴(ＴＲ−ＦＲＥＴ)を用いて測定した。アッセイを、６６５nm(ＴＮＦ−α濃度に比例)および６２０nm(コントロール)の蛍光を測定することによって定量した。
【００７７】
結果を、ＬＰＳ刺激ウェル中の分泌量を陽性コントロールとして、非刺激細胞中の分泌量を陰性コントロールとして用いた阻害曲線から計算されるＩＣ５０値(ｎＭ)として表す。
【００７８】
本発明の化合物をＴＮＦ−α放出アッセイで試験した。ＩＣ５０(ｎＭ)：化合物１, １２.８ｎＭ；化合物２, １５.７ｎＭ；化合物３, １４.６ｎＭ；化合物４, １５.３ｎＭ(各化合物について２〜５回の試験の平均値に基づく)。
【００７９】
ＨＬＭ(ヒト肝臓ミクロソーム)アッセイ
リン酸緩衝液(ｐＨ ７.４, ０.５μＭ)で希釈したＤＭＳＯ中の試験化合物のインキュベーションを、ヒト肝臓ミクロソーム(０.５mg/mL)と共に行った。インキュベーション中の有機溶媒のパーセンテージは１％であった。リン酸緩衝液中のヒト肝臓ミクロソーム懸濁液をＮＡＤＰＨ(１ｍＭ)と混合し、３７℃で予め加熱した後、試験化合物を加えた。０分、５分、１０分、２０分および３０分でアリコートを採取し、分析用内部標準(ＩＳ)を含むメタノールを添加することによって、反応を終了させた。
【００８０】
結果を、試験化合物消失速度定数(ｋ)(分−１)から計算される見かけの排出能(Ｃｌapp)(ml/分/kg)および肝臓除去率(Ｅｈ)(％)として表した。
【００８１】
本発明の化合物をＨＬＭアッセイで試験した。Ｅｈ(％)：化合物１, ＞９１％；化合物２, ＞９１％；化合物３, ＞９１％；化合物４, ＞９１％(各化合物について２〜３回の試験の平均値に基づく)。
【００８２】
ヒト全血(ＷＢ)アッセイ
リン酸緩衝液(ｐＨ ７.４, １μＭ)で希釈したＤＭＳＯ中の試験化合物のインキュベーションを、ヒト全血と共に行った。インキュベーション中の有機溶媒のパーセンテージは１％であった。インキュベーションを３７℃で行い、アリコートを０分、１５分、３０分、６０分および１２０分で採取し、分析用内部標準(ＩＳ)を含むメタノールを添加することによって、反応を終了させた。
【００８３】
結果を、試験化合物消失速度定数(ｋ)(分−１)から計算される半減期(Ｔ1/2)(分)として表した。
【００８４】
本発明の実施例をＷＢアッセイで試験した。Ｔ1/2(分)：化合物１, １０.７分；化合物２, １２.６分；化合物３, １６.６分；化合物４, ＜１１.２分(各化合物について２〜４回の試験の平均値に基づく)。
【００８５】
ケラチノサイト安定性(ＫＣ)アッセイ
平板培養したヒトのケラチノサイトを、成長培地(ｐＨ 約７.４, １μＭ)で希釈したＤＭＳＯ中の試験化合物と共にインキュベーションした。インキュベーション中の有機溶媒のパーセンテージは０.５％であった。インキュベーションを３７℃で行い、アリコートを０分、６０分、１２０分、２４０分および１４４０分で採取し、分析用内部標準(ＩＳ)を含むメタノールを添加することによって、反応を終了させた。
【００８６】
結果を、試験化合物消失速度定数(ｋ)(分−１)から計算される半減期(Ｔ1/2)(分)として表した。
【００８７】
本発明の実施例をＫＣアッセイで試験した。Ｔ1/2(分)：化合物１, ＞７２０分；化合物２, ＞７２０分；化合物３, ＞７２０分；化合物４, ＞７２０分(各化合物について２〜４回の試験の平均値に基づく)。
【国際調査報告】
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