(57)【要約】本発明は、脂質と少なくとも一つの有効成分を含み、少なくとも一つの脂質がカチオン性脂質であり; 該リポソームが、新鮮な採血中の単球に、新鮮な採血中の顆粒球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および／またはＮＫ細胞への接着に比べて優先的に接着する生理学的条件下にて、正味正電荷を示すリポソーム、該リポソームを含む脂質ベースの医薬組成物およびがん、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患またはアレルギーのような症状の単球に関連する予防、処置または改善におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂質と少なくとも一つの有効成分を含むリポソームであって、脂質の少なくとも一つがカチオン性脂質であり；該リポソームが、新鮮な採血中の単球に、新鮮な採血中の顆粒球、Ｔ−リンパ球、Ｂ−リンパ球および／またはＮＫ細胞への接着と比較して優先的に接着するような生理学的条件下にて正味正電荷を示す、リポソーム。
【請求項２】
１５〜８５％の相対ゼータ電位を有する、請求項１記載のリポソーム。
【請求項３】
静脈内投与に適当である、請求項１または２に記載のリポソーム。
【請求項４】
２０〜８０％の相対ゼータ電位を有する、請求項１〜３のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項５】
２５〜７５％の相対ゼータ電位を有する、請求項１〜４のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項６】
コレステロールを２０％未満、例えば１０未満、好ましくは５％未満、さらに好ましくは２％未満含む、最も好ましくはコレステロールを全く含まない、請求項１〜５のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項７】
少なくとも一部の脂質が、リン脂質、ステロールおよびステロール誘導体から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項８】
該脂質が、ホスファチジルコリン (PC)、ホスファチジルエタノールアミン (PE)、ホスファチジルセリン (PS)、ホスファチジルグリセロール (PG)、ホスファチジルイノシトール (PI)、ホスファチジン酸 (PA)、DPG (ビスホスファチジルグリセロール)、PEOH (ホスファチジルアルコール)、コレステロール、エルゴステロールおよびラノステロールからなる群から選択されるメンバーを含むか、または構成する、請求項１〜７のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項９】
該ホスファチジルコリンが、１,２-ジオレオイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルコリン、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルコリン、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルコリン、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルコリンおよび１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルコリンからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１０】
該ホスファチジルコリンが、１,２-ジオレオイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルコリン、および１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルコリンからなる群から選択され、好ましくは１,２-ジオレオイル-ホスファチジルコリンである、請求項１〜９のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１１】
該ホスファチジルエタノールアミンが、１,２-ジオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルエタノールアミン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルエタノールアミン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ-スクシニル-ジオレオイル-ホスファチジルエタノールアミンからなる群から選択され; 該ホスファチジルセリンが１,２-ジオレオイル-ホスファチジルセリン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルセリン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルセリン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルセリン、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルセリン、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルセリン、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルセリンおよび１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルセリンからなる群から選択され; 該ホスファチジルグリセロールが１,２-ジオレオイル-ホスファチジルグリセロール、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルグリセロール、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルグリセロール、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルグリセロール、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルグリセロール、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルグリセロール、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルグリセロールおよび１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルグリセロールからなる群から選択され; 該ホスファチジン酸がジ-パルミトイル-グリセロホスファチジン酸、ジ-ステアロイル-グリセロホスファチジン酸、ジ-ミロストイル-グリセロホスファチジン酸、ジ-オレオイル-グリセロホスファチジン酸、パルミトイル-オレオイル-グリセロホスファチジン酸からなる群から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１２】
脂質の少なくとも一部がカチオン性の脂質である、請求項１〜１１のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１３】
該カチオン性の脂質が、ステアリールアミン (ＳＡ)、ラウリルトリメチルアンモニウム ブロマイド; セチルトリメチル-アンモニウム ブロマイド、ミリスチルトリメチルアンモニウム ブロマイド、ジメチルジオクタデシルアンモニウム ブロマイド (ＤＤＡＢ)、３β-[Ｎ-(Ｎ’,Ｎ’-ジメチルアミノエタン)-カルバモイル]コレステロール (DC-コレステロール)、１,２-ジテトラデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン (ＤＭＴＡＰ)、１,２-ジオクタデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＴＡＰ)およびＤＯＴＡＰ誘導体、例えば１,２-ジ-(９Ｚ-オクタデセノイル)-３-トリメチルアンモニウム-プロパンおよび１,２-ジヘキサデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン、１,２-ジ-(９Ｚ-オクタデセノイル)-３-ジメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＤＡＰ)およびＤＯＤＡＰ誘導体、例えば１,２-ジテトラデカノイル-３-ジメチルアンモニウム-プロパン、１,２-ジヘキサデカノイル-３-ジメチルアンモニウム-プロパン、および１,２-ジオクタデカノイル-３-ジメチルアンモニウム-プロパン、１,２-ジ-Ｏ-オクタデセニル-３-トリメチルアンモニウム プロパン (ＤＯＴＭＡ)、１,２-ジオレオイル-ｃ-(４’-トリメチルアンモニウム)-ブタノイル-ｓｎ-グリセロール (ＤＯＴＢ)、ジオクタデシルアミド-グリシルスペルミン、ＳＡＩＮＴ-２、ポリカチオン性脂質 ２,３-ジオレイルオキシ-Ｎ-[２(スペルミン-カルボキサミド)エチル]-Ｎ,Ｎ-ジメチル-１-プロパンアミニウムトリフルオロアセテート (ＤＯＳＰＡ)、およびＧＬ６７ＴＭからなる群から選択される、請求項１２記載のリポソーム。
【請求項１４】
該カチオン性の脂質が、ステアリールアミン (ＳＡ)、１,２-ジオクタデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＴＡＰ)および１,２-ジ-(９Ｚ-オクタデセノイル)-３-ジメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＤＡＰ)からなる群から選択される、好ましくは、１,２-ジオクタデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＴＡＰ)である、請求項１３記載のリポソーム。
【請求項１５】
脂質の少なくとも一部が、脂質ポリアルギニン結合体、脂質TAT結合体、脂質ポリリジン結合体、またはカチオン性リポ多糖またはリポ多糖、例えば脂質キトサン結合体からなる群から選択される、カチオン性リポペプチドである、請求項１〜１４のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１６】
カチオン性脂質を、０.５〜５０%、好ましくは１〜２０%、例えば３〜１５％、例えば７.５〜１２.５% (mol/mol)含む、請求項１〜１５のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１７】
該脂質のアルキル鎖が、Ｃ８〜Ｃ２４、好ましくはＣ１０〜Ｃ２２、より好ましくはＣ１２〜Ｃ２０、好ましくはＣ１４〜Ｃ１８、最も好ましくはＣ１６〜Ｃ１８の飽和または不飽和鎖、好ましくは飽和鎖である、請求項１〜１６のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１８】
少なくとも一つのリポソームが大単ラメラ小胞(LUV)である、請求項１〜１７のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１９】
４０〜２０００nm、好ましくは８０〜１０００nm、より好ましくは１００〜５００nm、好ましくは５０〜２００nm、より好ましくは１００〜１５０nm、好ましくは１００〜４００nmの直径を有する、請求項１〜１８のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項２０】
少なくとも一つの有効成分が、細胞内蛋白質および／または受容体のリガンドである、免疫刺激性化合物である、請求項１〜１９のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項２１】
該細胞内蛋白質および／または受容体が、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ＮＯＤ５、ＮＡＬＰ１、ＮＡＬＰ２、ＮＡＬＰ３、ＮＡＬＰ１２、ＮＡＬＰ１４、ＩＰＡＦ、ＮＡＩＰ、ＣＩＩＴＡ、ＲＩＧ-I、ＭＤＡ５、およびＬＧＰ２からなる群、好ましくはＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、およびＮＯＤ２からなる群から選択される、より好ましくはＴＬＲ７である、請求項２０記載のリポソーム。
【請求項２２】
少なくとも一つの有効成分が、ポリイノシン：ポリシチジン酸 (ポリＩ:Ｃ)、ポリアデニル・ポリウリジン酸(ポリＡ:Ｕ)、ポリＩ:Ｃ-ポリ-Ｌ-リジン (ポリ-ＩＣＬＣ)、ポリ-ＩＣＲ、ＣＬ２６４、Ｎ-パルミトイル-Ｓ-[２,３-ビス(パルミトイルオキシ)-(２Ｒ,Ｓ)-プロピル]-(Ｒ)-システイン-(Ｓ)セリン-(Ｓ)リジン４ (Pam３Cys)、モノホスホリルリピドＡ (ＭＰＬＡ)および他のリポ多糖、アルファ−ガラクトシルセラミド(galactosylceremaide) (αGC)、プロピリミン (Propirimine)、イミキモド (R８３７)、レシキモド (R848)、ガーディキモド、R850 (3M Pharma)、R851 (3M Pharma)、852A (3M Pharma)、S-27610、3M-002 (CL075)、3M-003、3M-005、3M-006、3M-007、3M-012、3M-13、3M-031,3M-854 (3M Pharma)、CL097、CL264、IC-31、ロキソリビンおよび他のイミダゾキノリン、ssPolyU、ソチリモド (3M Pharma)、イサトリビン (Anadys)、ANA975 (Anadys/Novartis)、SM360320 (Sumitomo)、R1354 (Coley Pharmaceuticals)、一本鎖または二本鎖RNA、ORN 02 (５’-UUAUUAUUAUUAUUAUUAUU-３’)、ORN 06 ５’-UUGUUGUUGUUGUUGUUGUU-３’、CpG-ODN DSLIM (Mologen)、AVE 0675 (Coley Pharmaceuticals)、CpG B オリゴデオキシヌクレオチド (ODN) 1018 (Dynavax Technologies)、AZD 1419 (Dynavax)、ODN 1982、CpG B ODN 2006 (Coley Pharmaceuticals)、IMO 2125 (Idera Pharma)、CpG A ODN 2216、CpG A ODN 2336、CpG 2395、CpG ODN 7909 (Coley Pharmaceuticals)、CpG 10101 (Coley Pharmaceuticals)、CpG ODN AVE0675 (Coley Pharmaceuticals)、CpG ODN HYB2093 (Idera Pharmaceuticals/Novartis)、CpG ODN HYB2055 (Idera Pharmaceuticals)、CpG-ODN IMO-2125 (Idera Pharmaceuticals)、CpG C ODN M362、トラムバ (Tolamba) (CpGクラスB ODN 1018が共有結合した、Amb a１ブタクサアレルゲン)(Dynavax Technologies)、ヘプリサブ(Heplisav) (Dynavax Technologies)、10181SS (Dynavax Technologies)、IM02055 (Idera Pharmaceuticals)、IRS954 (Dynavax Technologies)、(フラゲリン、ムラミルジペプチド、サポニン、例えばQS21、リーシュマニア(Leishmania)伸張因子、SB-AS4、スレオニル-ムラミルジペプチド、L18-MDP、ミファムルチド (mifamurtid)、およびOM-174からなる群から選択される、免疫刺激性化合物である、請求項２１記載のリポソーム。
【請求項２３】
少なくとも一つの有効成分が、モノホスホリルリピドA (MPLA)、イミキモド (R837)、レシキモド (R848)、ガーディキモド、ロキソリビン、 ソチリモド (3M Pharma)、イサトリビン (Anadys)、SM360320 (Sumitomo)、CpG B オリゴデオキシヌクレオチド (ODN) 1018 (Dynavax Technologies)、AZD 1419 (Dynavax)、ODN 1982、CpG B ODN 2006 (Coley Pharmaceuticals)、IMO 2125 (Idera Pharma)、CpG A ODN 2216、CpG A ODN 2336、CpG 2395、CpG ODN 7909 (Coley Pharmaceuticals)、CpG 10101 (Coley Pharmaceuticals)、CpG ODN AVE0675 (Coley Pharmaceuticals)、CpG ODN HYB2093 (Idera Pharmaceuticals/Novartis)、CpG ODN HYB2055 (Idera Pharmaceuticals)、CpG-ODN IMO-2125 (Idera Pharmaceuticals)、CpG C ODN M362、トラムバ (Tolamba) (CpGクラスB ODN 1018が共有結合した、Amb a1ブタクサアレルゲン)(Dynavax Technologies)、ヘプリサブ(Heplisav) (Dynavax Technologies)、QS21、L18-MDP、ミファムルチド (mifamurtid)、およびOM-17４からなる群から選択される免疫刺激性化合物である、請求項２２記載のリポソーム。
【請求項２４】
少なくとも一つの有効成分が、ミファムルチド (Mifamurtid) (リン酸水素 ２-[(Ｎ-{(２Ｒ)-[(２-アセトアミド-２,３-ジデオキシ-Ｄ-グルコピラノース-３-イル)オキシ]-プロパノイル}-Ｌ-アラニル-Ｄ-イソグルタミニル-Ｌ-アラニル)アミノ]エチル (２Ｒ)-２,３-ビス(ヘキサデカノイルオキシ)プロピル)、L１８MDP (６-Ｏ-ステアロイル-Ｎ-アセチル-ムラミル-Ｌ-アラニル-Ｄ-イソグルタミン)からなる群から選択される免疫刺激性化合物であるか、または該免疫刺激性化合物のアシル化もしくはＣ１２〜２０飽和または不飽和、エステルまたはエーテル結合誘導体である、請求項２３記載のリポソーム。
【請求項２５】
少なくとも一つの有効成分が、２１-アセトキシプレフネノロン(prefnenolone)、アルクロメタゾン(Aalclometasone)、アルゲストン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、ヘミコハク酸ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン、クロベタゾール、ブロベスタソン（Blovetasone）、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、パルミチン酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、エノキソロン、フルアザコート(fluazacort)、フルクロロニド(flucloronide)、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルドロコルチゾン、フルオシノニド、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニジン (Fluprednidine)、フルプレドニゾロン、フルランドレノリド、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ハロプレドン、ヒドロコルタメート、ヒドロコルチゾン、リメタゾン (Limethasone)、マジプレドン、メドリソン(medrysone)、メプレドニゾン、メチオール(Methyol)プレドニゾロン、ヘミコハク酸メチオール(Methyol)プレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルベート(prednicarbate)、プレドニゾロン、パルミチン酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニバール、プレドニリデン、チキソコルタール (Tixocortal)、およびトリアムシノロンからなる群から選択される、ステロイドを含む免疫抑制性化合物である、請求項１〜１９のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項２６】
少なくとも一つの有効成分が、ヘミコハク酸ベタメタゾン、パルミチン酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、リメタゾン (Limethasone)、ヘミコハク酸メチルプレドニゾロン、パルミチン酸プレドニゾロン、およびリン酸プレドニゾロンからなる群から選択される、ステロイドを含む免疫抑制性化合物である、請求項２５記載のリポソーム。
【請求項２７】
少なくとも一つの有効成分が、ｃ-Ｆｍｓ、ＰＤＧＦＲα、Ａｂｌ、ＰＤＧＦＲβ、ＮＦκＢ、ＩκＢ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＧＳＫ３、ｐ３８ＭＡＰＫ、ＪＮＫ、ＫＩＴ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ４、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ＦＬＴ３、ＰＫＣβ、ＲＡＦ１、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＮＬＲＰ３、ＩＲＦ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ６、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、ＰＩ３Ｋ、ｍＴＯＲ、ＡＫＴ、ＤＮＡ-ＰＫ、ＡＴＭ、ＡＭＰＫ、ＰＤＫ-１、Ｓ６キナーゼ、ＲＩＰ２、ＴＲＩＦ、ＭＹＤ８８、ＴＡＫ１からなる群から選択される細胞内標的に作用する低分子阻害剤を含む、免疫抑制性化合物である、請求項１〜１９のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項２８】
少なくとも一つの有効成分が、インドメタシン、CLI-095 (Ｃ15Ｈ17ＣｌＦＮＯ4Ｓ、CAS#243984-11-4)、Bay11-7082 (Ｃ10Ｈ9ＮＯ2Ｓ、CAS#19542-67-7)、トリプトリド (PG 490)、CGP53716、SU9518、PD166326、セラストロール、トリプテリン、BIRB-796 (ドラマピモド(doramapimod))、SB 203580、SB202190、VX-702、NVP-BEZ235、GDC-0980 (RG7422)、リダフォロリムス (デフォロリムス、AP23573)、ニロチニブ (タシグナ、AMN107)、トシル酸ソラフェニブ (ネクサバール)、ダサチニブ (スプリセル、BMS-354825)、MLN518 (CT53518)、バタラニブ (PTK787 / ZK222584)、OSI-930、AZD2171、パゾパニブ (ヴォトリエント)、IPI-504 (レタスピマイシン)、デフォロリムス (リダフォロリムス)、GDC-0980 (RG7422、Ｃ２３Ｈ３０Ｎ８Ｏ３Ｓ、CAS#1032754-93-0)、パロミド (Palomid) 529 (Ｃ２４Ｈ２２Ｏ６ CAS#914913-88-5)、メシル酸イマチニブ (グリベック (Gleevec)/グリベック (Glivec))、エベロリムス (アフィニトール、RAD001)、シロリムス (ラパミューン、ラパマイシン)、テムシロリムス (トーリセル、CCI-779)、ボルテゾミブ (ベルケイド)、ゲフィチニブ (イレッサ)、カネルチニブ(canertinib) (CI-1033、CAS# 267243-28-7、Ｃ24Ｈ25ＣｌＦＮ5Ｏ3)、塩酸エルロチニブ(タルセバ)、ペリチニブ (EKB-569) (Ｃ２４Ｈ２３ＣｌＦＮ５Ｏ２、CAS#257933-82-7)、バンデタニブ (ザクティマ、ZD6474、Ｃ２２Ｈ２４ＢｒＦＮ４Ｏ２、CAS No.: 443913-73-3)、スニチニブ (スーテント、SU-11248、Ｃ２２Ｈ２７ＦＮ４Ｏ２.Ｃ４Ｈ６Ｏ５、CAS No.: 341031-54-7)、タンデュチニブ (MLN518)、Ｃ31Ｈ42Ｎ6Ｏ4、CAS No.: 387867-13-2、ロスコビチン (セリクシリブ (Selicilib))、Ｃ１９Ｈ２６Ｎ６Ｏ、CAS No.: 186692-46-6からなる群から選択される、細胞内標的に作用する低分子阻害剤を含む免疫抑制性化合物である、請求項２７記載のリポソーム。
【請求項２９】
少なくとも一つの有効成分が、ビタミンＤ３ (１,２５-ジヒドロキシビタミンＤ３)およびレチノイン酸 (全てのｔｒａｎｓレチノイン酸および９-ｃｉｓレチノイン酸)およびその関連する、合成もしくは天然の類似体、およびヘミコハク酸ベタメタゾン、パルミチン酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、リメタゾン (Limethasone)、ヘミコハク酸メチルプレドニゾロン、パルミチン酸プレドニゾロン、およびリン酸プレドニゾロンからなる群から選択される、免疫寛容を誘発する化合物である、請求項１〜１９のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項３０】
少なくとも一つの有効成分が、リファンピシン、ジデオキシシチジン-５’-トリホスフェート、クラリスロマイシン、アシクロビル、シプロフロキサシン、フシジン (fusidin)、ゲンタマイシン、クロラムフェニコール、レボフロキサシン、オキシテトラサイクリン、トブラマイシン、クロモグリク酸ナトリウム (natriumcromoglicat)、アモキシシリン、アンピシリン、ピバンピシリン、エルタペネム、メロペネム、ドリペネム、セフォタキシム、セフタジジム、シプロフロキサシン、バラシクロビル、エファビレンツ、エムトリシタビン (emtricitabin)、テノフォビルジソプロキシル、リルピビリン、ペニシリン、トリメトプリム-スルファメトキサゾール、リファンピシン、エタンブトール、イソニアジド、ピラジンアミド、ボリコナゾール、アンホテリシンＢ、カスポファンギン、フルシトシン、イトラコナゾール、ドキシサイクリン、スルホンアミド、およびスルファメトキサゾールからなる群から選択される、抗炎症性化合物である、請求項１〜１９のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項３１】
有効成分として少なくとも一つの抗原をさらに含む、請求項１〜３０のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項３２】
少なくとも一つの抗原が、がん抗原、自己抗原もしくは自己免疫抗原、微生物抗原、アレルゲンおよび環境抗原からなる群から選択される、請求項３１記載のリポソーム。
【請求項３３】
新鮮な血液中の単球を標的とするための、脂質ベースの送達系であって、少なくとも一つの有効成分の、標的化した単球への送達および放出を提供し、
(I) 少なくとも一つのカチオン性の脂質を含む脂質; および
(II) 少なくとも一つの有効成分
を含み、
該脂質が、リポソームの形成を可能にし、該リポソームが、少なくとも一つの前記の有効成分を含み；該リポソームが、新鮮な採血中の顆粒球、Ｔ−リンパ球、Ｂ−リンパ球および／またはＮＫ細胞への接着と比較して、新鮮な採血中の単球に優先的に結合する生理学的条件下にて、正味正電荷を示す、
送達系。
【請求項３４】
少なくとも一つの有効成分の静脈内投与に適当な医薬製剤であって、リポソームを含み、該リポソームが前記の少なくとも一つの有効成分を含み、該リポソームの少なくとも一部が請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソームである、医薬製剤。
【請求項３５】
医薬として使用するための、請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソーム、請求項３３記載の脂質送達系または請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３６】
単球に関連のある予防、処置または改善に使用するための、請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソーム、請求項３３記載の脂質送達系または請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３７】
がん、感染性疾患、炎症性症状もしくは疾患、自己免疫疾患またはアレルギーの予防、処置または改善に用いるための、請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソーム、請求項３３記載の脂質送達系または請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３８】
単球に関連のある予防、処置または改善に用いるための、請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソーム、請求項３３記載の脂質送達系または請求項３４記載の医薬組成物の使用。
【請求項３９】
がん、感染性疾患、炎症性症状もしくは疾患、自己免疫性疾患またはアレルギーの予防、処置または改善に用いるための、請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソーム、請求項３３記載の脂質送達系または請求項３４記載の医薬組成物の使用。
【請求項４０】
試験管内の単球の活性化／阻害の方法であって、
i)  新鮮な血液を提供し;
ii)  請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソーム、請求項３３記載の脂質送達系または請求項３４記載の医薬組成物を前記の新鮮な血液に投与し;
iii)  該リポソーム、脂質送達系または医薬組成物を反応させる
工程を含む、方法。
【請求項４１】
生体内における、哺乳類の単球の活性化／阻害の方法であって、請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソーム、請求項３３記載の脂質送達系または請求項３４記載の医薬組成物を、単球を活性化／阻害するのに十分な量で該哺乳類に投与する工程を含む、方法。
【請求項４２】
生体内における、哺乳類の単球の活性化／阻害の方法であって、
i)  それを必要としている哺乳類から新鮮な血液を提供し;
ii)  請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソーム、請求項３３記載の脂質送達系または請求項３４記載の医薬組成物を前記の新鮮な血液に投与し;
iii)  該リポソーム、脂質送達系または医薬組成物を、新鮮な血液と反応させ;
iv)  該血液を該哺乳類の循環に再導入する、
工程を含む、方法。
【請求項４３】
がん、感染性疾患、炎症性症状または疾患、自己免疫性疾患またはアレルギーの予防的または治療的処置または改善の方法であって、それを必要とする対象に、請求項１〜３２のいずれかに記載のリポソーム、請求項３３記載の脂質送達系または請求項３４記載の医薬組成物を有効量投与することを含む、方法。
【請求項４４】
該がんが、Ｂ細胞リンパ腫、バーキット (非ホジキン) リンパ腫、神経膠腫、膀胱がん、胆道がん、脳がん、乳がん、頚部がん、結腸がん、結腸直腸がん、絨毛がん、上皮細胞がん、腎臓がん、ホジキンリンパ腫、胃がん、肝細胞がん、白血病、肺がん、黒色腫、骨髄腫、非小細胞肺がん、鼻咽頭がん、卵巣がん、中咽頭がん、前立腺がん、膵臓がん、腎臓がん、皮膚がん、頸部および食道の扁平上皮細胞がん、精巣がん、T細胞白血病および膣がんからなる群から選択される、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
該感染性疾患が、大腸菌 (E. Coli)、ブドウ球菌 (Staphylococcal)、クラミジア属 (Chlamydia)、連鎖球菌 (Streptococcal)、シュードモナス属 (Pseudomonas)、クロストリジウム・ディフィシル (Clostridium difficile)、レジオネラ属 (Legionella)、ネタノコッカス属 (Pnetanococcus)、ヘモフィルス属(Haemophilus)、クレブシエラ属(Klebsiella)、エンテロバクター属(Enterobacter)、シトロバクター属(Citrobacter)、ナイセリア属(Neisseria)、Ｂ株髄膜炎菌(Meningococcus B)、シゲラ属(Shigella)、サルモネラ属(Salmonella)、リステリア属(Listeria)、パスツレラ属(Pasteurella)、ストレプトバシラス属 (Streptobacillus)、スピリルム属(Spirillum)、トレポネーマ属(Treponema)、アクチノミセス属(Actinomyces)、ボレリア属(Borrelia)、コリネバクテリウム(Corynebacterium)、結核菌(Tuberculosis)、ノカルディア属(Norcardia)、ガードネレラ属(Gardnerella)、カンピロバクター属(Campylobacter)、スピロヘータ属(Spirochaeta)、プロテウス属(Proteus)、バクテロイデス属(Bacteriodes)、エルシニア・ペスティス (Yersenia pestis)、ヘリコバクター ピロリ (H. pylori)、炭疽菌、HIV、コロナウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、デングウイルス、エボラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトメタニューモニア(Metapneumonia)ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ロタウイルス、アデノウイルス、インフルエンザウイルス (ユニバーサル、Ｈ１Ｎ１ｖ、Ｈ７Ｎ１、Ｈ９Ｎ２)、肺炎球菌(Pneumococcus)、パラインフルエンザウイルス、ＲＳウイルス (ＲＳＶ)、水痘帯状疱疹ウイルス、天然痘、サル痘、西ナイルウイルス、ＳＡＲＳ、カンジダ症、白癬、ヒストプラスマ症、ブラストミセス症、パラコクシジオイデス症、クリプトコッカス症、アスペルギルス症、黒色真菌症、菌腫感染症、シュードアレシェリア症、癜風、アメーバ症、トリパノソーマ‐クルージ(trypanosome cruzi)、肝蛭症 (Fascioliasis)、リーシュマニア属 (Leishmanlasis)、マラリア原虫(Plasmodium)、オンコセルカ属 (Onchocercia)、肺吸虫 (Paragonimia)、トリパノソーマ・ブルセイ (Trypanosoma brucei)、ニューモシスティス属(Pneumocystis)、腟トリコモナス(Trichomonas vaginalis)、条虫類(Taenia)、膜様条虫 (Hymenolepsis)、エキノコックス属(Echinococcus)、住血吸虫属(Schistosoma)、神経嚢虫症(neurocysticercosis)、アメリカ鉤虫(Necator americanus)、および鞭虫 (Trichuris trichuria)からなる群から選択される感染により引き起こされる、請求項４３記載の方法。
【請求項４６】
該炎症性症状または疾患が、外傷、熱傷、外科手術、冠動脈疾患、冠血管アテローム性動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、梗塞炎症および心筋梗塞後の修復、心虚血性再灌流傷害、心筋炎症、心筋虚血、心血管疾患、脳梗塞、出血性ショック、再灌流病変、透析、ショックおよび／または細菌またはウイルス感染、体外膜型肺 (ECMO)、ショック、全身性炎症反応症候群 (SIRS)、敗血症、多臓器不全、臓器および／または人工関節等の移植の拒絶、心臓および肺バイパス手術、慢性炎症、喘息および／または肺におけるストレス関連性疾患、細菌感染、壊疽、軟部組織感染症、および創傷感染からなる群から選択される、請求項４３記載の方法。
【請求項４７】
該自己免疫疾患が、糖尿病、糖尿病(diabetes mellitus)、関節炎 (リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む)、多発性硬化症、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎 (アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む)、乾癬、シェーグレン症候群に次ぐ乾性角結膜炎を含むシェーグレン症候群、円形脱毛症、節足動物咬傷応答によるアレルギー性応答、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、喘息、アレルギー性喘息、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、ハンセン病リバーサル反応、癩性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性 両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、慢性赤芽球性貧血、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎 (pepatitis)、スティーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、クローン病、グレーブス眼症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、および間質性肺線維症からなる群から選択される、請求項４３記載の方法。
【請求項４８】
該アレルギーが、喘息、アレルギー性の咳、アレルギー性鼻炎および結膜炎、アトピー性湿疹、皮膚炎、薬物アレルギー、蕁麻疹(urticaria)、蕁麻疹(hives)、虫刺されアレルギー、食物性アレルギー、例えば魚、牛乳、小麦、ピーナッツ、リンゴ、ナッツアレルギーからなる群から選択される、請求項４３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カチオン性リポソームを用いた単球への特異的な送達に関する。より具体的には、本発明は、脂質と少なくとも一つの有効成分とを含むリポソームであって、少なくとも一つの脂質はカチオン性の脂質であり； 新鮮な採血中で該リポソームが優先的に単球に結合する生理学的条件下にて、正味の正電荷を示すリポソーム、該リポソームを含む脂質ベースの医薬組成物ならびに、単球に関連する予防、処置または改善におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
リポソームは、水性のコアを封入する脂質二重層膜から構成される脂質小胞である。これらの小胞は、いくつかの理由により薬物送達系として優れた可能性を持っていると考えられる； i) 様々な種類の薬物を送達できる; 親水性の薬物は水性コンパートメントに充填でき、または、疎水性の薬物は膜中に繋留できる、ii)治療上の有効性は、特定の組織を標的とすることにより亢進され、それにより、送達された薬物のバイオアベイラビリティが上昇する、iii) 罹患した組織のみが投与した薬物に暴露されるため、副作用が著しく減少する。結果として、例えばがん(１,２,３)、および炎症(４,５)を処置するための、また、脳、ミトコンドリア、眼表面および皮膚などの特定の組織を標的とする新規製剤を開発するために、リポソームは過去数十年間大規模に研究されてきた。
【０００３】
投与後の、単核食細胞系(ＭＰＳ)によるリポソームの取り込みは、標的部位に到達する薬物の量を低下させるものであり、早期のリポソーム性の薬物送達系の主要な欠点の一つと考えられていた。ＭＰＳは、血中の単球、骨髄中のその前駆細胞および組織マクロファージからなる。単球は、骨髄中の造血幹細胞から分化し、そこから血中に放出される。それらは数日間循環した後に、炎症性、代謝または免疫性の刺激の結果として、血管系から、組織へ移動し、マクロファージまたは樹状細胞に分化し得る。特に、肝臓、脾臓およびリンパ系で見られる組織マクロファージは貪食活性が高く、アポトーシス細胞の排除に寄与するが、投与したリポソームの排除にもまた寄与する。血中の単球もまた、貪食により、病原体およびアポトーシス性ホスト細胞の除去に重要な役割を果たす。
【０００４】
ＭＰＳの細胞の貪食能は、投与したリポソーム製剤の通常望ましくない取り込みを行う血液中の細胞：単球を標的とすることにより、利点に変換し得る。単球は、炎症または感染の部位に最初にリクルートされる細胞であり、そのため、防御ならびに疾患の制御の第一線の重要な構成要素となっている。単球、マクロファージおよび樹状細胞は、免疫系において、３つの主要な機能：貪食、抗原提示およびサイトカイン産生に作用する。それらは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６のような炎症性サイトカインの分泌により炎症状態を維持するため、急性および慢性炎症において中心的な役割を果たす。全身投与した抗炎症剤は、有害な副作用を示し、さらに、健康な組織に局在するかまたは急速に排出されるが、これは、特異的な薬剤送達系を用いることにより回避し得る問題である。したがって、単球への標的化薬剤送達は非常に重要である。
【０００５】
Karathanasis et al. (６) は、ＧＧＰとよばれる特異的な正電荷のペプチドを含むリポソーム製剤の取り込みについて研究した。彼らは、それらが好中球および単球を選択的に標的化できることだけでなく、同じ正電荷の非標的化対照ペプチドがリポソームの取り込みを亢進しなかったため、正の電荷ではなく、ペプチドの配列に依存していることを見出した。しかしながら、リポソームの電荷が、細胞のリポソームの取り込みに重要な効果を持つことが報告されている。Lee et al. (７)は、中性 対 負に電荷したリポソームの、ウシ胎仔血清の存在下の培地中で懸濁細胞または接地細胞として試験管内で培養したヒト単球細胞株に対する相互作用を調べた。彼らは、負に荷電したリポソームの取り込みは、単球の成熟状態に依存していることを発見した。細胞がマクロファージに分化している場合、負に荷電したリポソームの取り込みは５倍増加し、その一方、中性のリポソームの取り込みは一定のままであった。懸濁培養の単球細胞株では、両方の製剤の取り込みは同じであった。負に荷電したリポソームのヒトマクロファージ細胞株J774による取り込みは、以前にも報告されていた(８,９)。
【０００６】
カチオン性のリポソームは、そのＲＮＡ／ＤＮＡの濃縮能および、一般的に多くの種類の細胞に非選択的に吸収される、生じたリポプレックスの高い正電荷故に非ウイルス性トランスフェクション系においても調べられている(１, ２, ３, １０, １１, １２)。カチオン性のペプチドは、細胞に対して毒性であることが報告されているが、この効果は該リポソーム製剤に共脂質またはコポリマーを添加することにより回避し得る。
【０００７】
米国特許第６,１２０,７９９号は、脂質／ＤＮＡ複合体またはカチオン性リポソームにより選択的に標的とされた血管新生内皮細胞を開示している。
【０００８】
米国特許公開番号第２０１０/００６８２１２号は、病原性単球の標的化方法に関する。
【０００９】
米国特許公開番号第２００２/０１５５６０９号は、単球特異的な微粒子の送達ビヒクルを開示している。
【００１０】
米国特許公開番号第２００７/０２９２４９４号は、ＨＩＶのような感染因子に感染した、または感染した疑いのある貯蔵細胞(resercoir cell)に細胞内部に有効剤を送達するために、ＣＴＬ／ＣＴＬＤレクチンの細胞糖鎖認識ドメインを標的とした糖誘導体リポソームを開示している。
【００１１】
米国特許公開番号第２００５/０１４２１１４号は、薬物を骨髄およびリンパ性免疫細胞に送達するための、標的化脂質−薬物製剤に関する。
【００１２】
米国特許公開番号第２００９/０２３２７３１号は、リウマチ性関節炎の処置のためのカチオン性リポソーム製剤を開示している。
【００１３】
国際公開第２００７/１３４８１９号は、リウマチ性関節炎または関連障害の処置または診断のためのカチオン性リポソーム製剤の使用を開示している。
【００１４】
国際公開第２０１１/０９８５７８号は、有効医薬成分の持続性放出または遅延放出を可能にする、眼内投与用リポソームを開示している。
【００１５】
Zhou D. et al.,“The role of surface charge in monocyte activation and cell viability induced by cationic liposome”, ACTA BIOPHYSICA SINICA, vol. 26, no. 8, 20 Sep 2010, p. 726-734, XP002692700, USSB: 1000-6737には、様々な表面電荷のカチオン性リポソームの単球の活性化および生存率に対する効果が開示されている。
【００１６】
正電荷リポソームは、細胞毒性活性を示し得る(Lv J Control Release. 2006 Aug 10;114(1):100-9およびC. Kelly et al., J Drug Deliv. 2011:article ID 727241)。
【００１７】
カチオン性リポソームは、核酸、例えば遺伝子内の核酸の送達技術またはオリゴヌクレオチドベースのノックアウト技術に用いられている(１４)。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】米国特許第６,１２０,７９９号
【特許文献２】米国特許公開番号第２０１０/００６８２１２号
【特許文献３】米国特許公開番号第２００２/０１５５６０９号
【特許文献４】米国特許公開番号第２００７/０２９２４９４号
【特許文献５】米国特許公開番号第２００５/０１４２１１４号
【特許文献６】米国特許公開番号第２００９/０２３２７３１号
【特許文献７】国際公開第２００７/１３４８１９号
【特許文献８】国際公開第２０１１/０９８５７８号
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】Y. Zou, G. Zong, Y. H. Ling, and R. Perez-Soler. Development of cationic liposome formulations for intratracheal gene therapy of early lung cancer. Cancer Gene Ther, 7 (5): 683-696, May 2000.
【非特許文献２】Crispin R Dass and Peter F M Choong. Selevtive gene delivery for cancer therapy using cationic liposomes: in vivo proof of applicability. J Control Release, 113 (2): 155-163, Jun 2006.
【非特許文献３】Suk Hyun Jung, Soon Hwa Jung, Hasoo Seong, Sun Hang Cho, Kyu-Sung Jeong, and Byung Cheol Shin. Polyethylene glycol-complexed cationic liposome for enhanced cellular uptake and anticancer activity. Int J Pharm, 382 (1-2): 254-261, Dec 2009.
【非特許文献４】Rebecca Anderson, Angels Franch, Margarida Castell, Francisco J Perez-Cano, Rolf Brauer, Dirk Pohlers, Mieczyslaw Gajda, Alexandros P Siskos, Theodora Katsila, Constantin Tamvakopoulos, Una Rauchhaus, Steffen Panzner, and Raimund W Kinne. Liposomal encapsulation enhances and prolongs the anti-inflammatory effects of water-soluble dexemethazone phosphate in experimental adjuvant arthritis. Arthritis Res Ther, 12 (4): R147, 2010.
【非特許文献５】B. A. t Hart, D. G. Elferink, J. W. Drijfhout, G. Storm, L. van Blooijs, R. E. Bontrop, and R. R. de Vries. Liposome-mediated peptide loading of mhc-dr molecules in vivo. FEBS Lett, 409 (1): 91-95, Jun 1997.
【非特許文献６】Efstathios Karathanasis, Cissy M Geigerman, Charles A Parkos, Leslie Chan, Ravi V Bellamkonda, and David L Jaye. Selective targeting of nanocarriers to neutrophils and monocytes. Ann Biomed Eng, 37 (10): 1984-1992, Oct 2009.
【非特許文献７】K. D. Lee, S. Nir, and D. Papahadjopoulos. Quantitative analysis of liposome-cell interactions in vitro: rate constants of binding and endocytosis with suspension and adherent j774 cells and human monocytes. Biochemistry, 32 (3): 889-899, Jan 1993.
【非特許文献８】C. R. Miller, B. Bondurant, S. D. McLean, K. A. McGovern, and D. F. O’Brien. Liposome-cell interactions in vitro: effect of liposome surface charge on the binding and endocytosis of conventional and sterically stabilized liposomes. Biochemistry, 37 (37): 12875-12883, Sep 1998.
【非特許文献９】Keelung Hong Kyung-Dall Lee and Demitrios Papahadjopoulos. Recognition of liposomes by cells: in vitro binding and endocytosis mediated specific lipid headgroups and surface charge density. Biochim Biophys Acta, 1103: 185-197, 1992.
【非特許文献１０】P. Pires, S. Simoes, S. Nir, R. Gaspar, N. Duzgunes, and M. C. Pedroso de Lima. Interaction of cationic liposomes and their dna complexes with monocytic leukemia cells. Biochim Biophys Acta, 1418 (1): 71-84, Apr 1999.
【非特許文献１１】Mouldy Sioud and Dag R Sorensen. Cationic liposome-mediated delivery of sirnas in adult mice. Biochem Biophys Res Commun, 312 (4): 1220-1225, Dec 2003.
【非特許文献１２】Ikuko Yamane, Makiya Nishikawa, and Yoshinobu Takakura. Cellular uptake and activation characteristics of naked plasmid dna and its cationic liposome complex in human macrophages. Int J Pharm, 305 (1-2): 145-153, Nov 2005.
【非特許文献１３】Zhou D. et al.,“The role of surface charge in monocyte activation and cell viability induced by cationic liposome”, ACTA BIOPHYSICA SINICA, vol. 26, no. 8, 20 Sep 2010, p. 726-734, XP002692700, USSB: 1000-6737
【非特許文献１４】Lv J Control Release. 2006 Aug 10;114(1):100-9
【非特許文献１５】C. Kelly et al., J Drug Deliv. 2011:article ID 727241
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
リポソーム薬物送達系を免疫調節に用いる場合、製剤は、血中の他の細胞集団ではなく、単球によって取り込まれなければならない。本発明は、新鮮な全血中の単球によって選択的に取り込まれるリポソーム製剤を提供する。これを達成するために、様々なリポソーム製剤と血中の特定の細胞集団の間の相互作用を調べた。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
驚くべきことに、生理学的条件下にて正味正電荷を示すリポソームは、新鮮な全血中でインキュベーションした場合に単球を選択的に標的にできることが見出された。
【００２２】
第一の局面によれば、本発明は、脂質と少なくとも一つの有効成分とを含む、単球標的用のリポソームに関し、ここで、少なくとも一つの脂質は、カチオン性の脂質であり；リポソームが、新鮮な採血中の単球に、新鮮な採血中の顆粒球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および／またはＮＫ細胞に対する接着と比較して優先的に接着する生理学的条件下にて、該リポソームが正味正電荷を示し、それにより、血液または組織中に存在する単球の選択的な標的化およびそれらとの結合が可能になる。
【００２３】
正負荷リポソームは、細胞−膜結合、貪食またはエンドサイトーシスのいずれかにより、単球に対する優れた結合および単球への保持を示す。これらの機構は、新鮮なヒト血液中で活性であるが、血液、血漿および血清の保存または冷凍の間に不活化される補体系により誘導され得る。補体因子のいくつかは、数分の範囲の生物学的半減期を示す。
【００２４】
第二の局面によれば、本発明は、新鮮な血液中の単球を標的とするための脂質ベースの送達系に関し、ここで、かかる系は、少なくとも一つの有効物質の標的化した単球への送達および放出を提供し、かかる系は：
(I) 少なくとも一つのカチオン性脂質を含む脂質; および
(II) 少なくとも一つの有効物質;
を含み、該脂質は、リポソームの形成を可能にし、該リポソームは、少なくとも一つの有効成分の少なくとも一部を含み; 該リポソームは、リポソームが、新鮮な採血中の顆粒球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および／またはＮＫ細胞に対する接着と比較して、新鮮な採血中の単球に優先的に接着する生理学的条件下にて正味正電荷を示す。
【００２５】
第三の局面によれば、本発明は、本発明の第一の局面によるリポソームを含む医薬製剤に関する。
【００２６】
当業者は、該医薬製剤中に含まれる適当な賦形剤を把握している。しかし、以下の詳細な記述を参照する。
【００２７】
他の局面によれば、本発明は、医薬として用いるための、本発明の第一の局面によるリポソーム、本発明の第二の局面による脂質送達系、または本発明の第三の局面による医薬組成物に関する。
【００２８】
本発明によるリポソーム、脂質送達系または医薬組成物は、以下に詳述する多数の症状の予防、処置または改善のための医薬として使用し得る。
【００２９】
他の局面によれば、本発明は、単球に関連する予防、処置または改善に用いるための本発明の第一の局面によるリポソーム、本発明の第二の局面による脂質送達系または本発明の第三の局面による医薬組成物に関する。
【００３０】
したがって、免疫系において中心的な役割を果たす単球を標的とすることにより、薬物送達を、所望の作用部位に合わせることが可能になった。
【００３１】
他の局面によれば、本発明は、単球に関連する予防、処置または改善に用いるための医薬の製造のための、本発明の第一の局面のリポソーム、本発明の第二の局面の脂質送達系、または本発明の第三の局面の医薬組成物の使用に関する。
【００３２】
他の局面によれば、本発明は、試験管内の単球の活性化／阻害の方法であって、以下の工程:
i)  新鮮な血液を提供し;
ii)  請求項１〜２８のいずれかに記載するリポソーム、請求項２９に記載する脂質送達系または請求項３０に記載する医薬組成物をかかる新鮮な血液に投与し;
iii)  該リポソーム、脂質送達系または医薬組成物が反応することを可能にすること
を含む、方法に関する。
【００３３】
これによって、単球の機能の免疫刺激または免疫抑制のために単球画分を解析することが可能である。
【００３４】
他の局面によれば、本発明は、哺乳類において、単球を生体内で活性化／阻害する方法であって、本発明の第一の局面によるリポソーム、本発明の第二の局面による脂質送達系または本発明の第三の局面による医薬組成物を、該哺乳類に、該単球を活性化／阻害するのに十分な量で投与することを含む、方法に関する。
【００３５】
他の局面によれば、本発明は、哺乳類において、単球を生体内で活性化／阻害する方法であって、以下の工程:
i)  それを必要とする哺乳類から新鮮な血液を提供し;
ii)  本発明の第一の局面によるリポソーム、本発明の第二の局面による脂質送達系、または本発明の第三の局面による医薬組成物をかかる新鮮な血液に投与し;
iii)  該リポソーム、脂質送達系または医薬組成物がかかる新鮮な血液と反応することを可能にし;
iv)  該血液を該哺乳類の循環に再導入すること
を含む、方法に関する。
【００３６】
これによって、該哺乳類において、脂質送達系または医薬を直接哺乳類に投与せずに、免疫の誘導または抑制が単球を通して機能する。
【００３７】
他の局面によれば、本発明は、がん、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患またはアレルギーの予防的または治療的な処置または改善の方法であって、それを必要としている対象に、有効量の、本発明の第一の局面によるリポソーム、本発明の第二の局面による脂質送達系、または本発明の第三の局面による医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】リポソーム、リポソームのサイズおよび表面電荷の概観。(Ａ)１-パルミトイル-２-オレオイル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスホコリン (ＰＯＰＣ)、１-パルミトイル-２-オレオイル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスホグリセロール (ＰＯＰＧ) および１,２-ジオレオイル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスホエタノールアミン-Ｎ-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-２０００] (ＤＯＰＥ-ＰＥＧ２０００)で構成されるリポソームのリスト。リポソーム中の各構成要素の比率を表す。(Ｂ)リポソームの表面電荷(ｍＶ)。(Ｃ) ナノメーター単位で測定したリポソームのサイズ(nm)。ＢおよびＣのリポソーム組成物は、図１Ａの数字をさす。
【図２】負の脂質を添加したまたは添加していない (ＰＯＰＧ、製剤１および２)または正の脂質を添加したまたは添加していない (ＤＯＴＡＰ、製剤５および８)、ＰＯＰＣ(製剤３および４)を含むリポソーム製剤の取り込み。(Ａ) 全血試料中において、５つの異なる細胞集団のマーカーとして用いた抗体; ＣＤ１４ (単球マーカー)、ＣＤ１５ (顆粒球マーカー)、ＣＤ３ (Ｔリンパ球マーカー)、ＣＤ１９ (Ｂリンパ球マーカー)、およびＣＤ５６ (ＮＫ細胞マーカー)。(Ｂ) ＲｈＢを含む５つの異なるリポソーム製剤の取り込みのＦＡＣＳ解析 (それぞれ図１Ａの組成物 １〜４、８ｌおよび５)(ＰＯＰＣ:ＰＯＰＧ ９０:１０、ＰＯＰＣ:ＰＯＰＧ:ＤＯＰＥ-ＰＥＧ２０００ ９０:５:５、ＰＯＰＣ、ＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ:ＤＯＰＥ-ＰＥＧ２０００ ９０:５:５、ＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ ９０:１０、ＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ:ＤＯＰＥ-ＰＥＧ２０００ ８０:１５:５)。データは、ＲｈＢ陽性細胞の％を、平均±ＳＤとして表す。各群を一元配置ANOVAにより解析する。２つの値を比較する場合、両側ｔ検定を用いる (＊＊＊P＜０.００１、＊＊＊＊P＜０.０００１)。(Ｃ) ５つの細胞集団中の、陽性細胞のゲーティングを表すグラフ。
【図３】インキュベーションの０、５、１５および６０分後のリポソーム製剤３(Ａ)および８(Ｂ)の取り込みを示す。データは、ＲｈＢ陽性細胞の％を、平均±ＳＤとして表す。各群を一元配置ANOVAにより解析する(＊＊＊＊P＜０.０００１)。(Ｃ) ５つの細胞集団における陽性細胞のゲーティングを表すグラフ。
【図４】ＲｈＢを含むリポソーム製剤３(Ａ)および８(Ｂ)(図１Ａ)の０、５０、２５０、および５００mMの濃度における取り込み。データは、ＲｈＢ陽性細胞の％を平均±ＳＤとして表す。各群を一元配置ANOVAにより解析する (＊＊＊＊P＜０.０００１)。(Ｃ) ５つの細胞集団における陽性細胞のゲーティングを示すグラフ。
【図５】様々な細胞集団における正電荷の取り込みへの影響を解析した。(Ａ) ０〜５０ mol% ＤＯＴＡＰを含むリポソーム製剤 (図１Ａの組成物３および６〜１２)の取り込み。データは、ＲｈＢの陽性細胞の％を平均±ＳＤとして表す。各群を一元配置ANOVAにより解析する。２つの値を比較する場合、両側ｔ検定を用いる (＊＊＊P＜０.００１、＊＊＊＊P＜０.０００１、ns = 有意でない)。(Ｂ) ５つの細胞集団における陽性細胞のゲーティングを表すグラフ。
【図６】回転させながら血液を３７℃においてインキュベーションした０、２時間および４時間後におけるＲｈＢを含むリポソーム製剤３(Ａ)および８(Ｂ) (図１Ａ)の取り込み。データは、ＲｈＢに対する陽性細胞の％を平均±ＳＤとして表す。各群を、一元配置ANOVAにより解析する。２つの値を比較する場合、両側ｔ検定を用いる (＊P＜０.０５、＊＊＊P＜０.００１、＊＊＊＊P＜０.０００１)。(Ｃ) ５つの細胞集団における陽性細胞のゲーティングを表すグラフ。
【図７】リポソームの細胞毒性をヒト単球細胞株ＴＨＰ−１について、０〜５０% ＤＯＴＡＰを含むリポソーム (図１Ａの組成物３および６〜１２)を用いて測定した。４つの異なる濃度のリポソームを用いた: ５、５０、２５０および５００μM。(Ａ) インキュベーション６０分間後のＴＨＰ−１細胞におけるリポソームの取り込みのFACS解析。(Ｂ) 細胞培地で洗浄する前にリポソームを６０分間細胞とともにインキュベーションした。２４時間後、アネキシンVの細胞への結合をFACSにより測定した。アポトーシスの陽性対照としてスタウロスポリンを用いる。(Ｃ)アネキシンＶ陽性細胞のゲーティングを表すグラフ。(Ｄ) 細胞培地で洗浄する前に、リポソームを６０分間細胞とともにインキュベーションした。２４時間後、リポソーム誘導性の細胞毒性を、ＸＴＴを用いて４時間インキュベーションして測定した。(Ｅ) ＸＴＴインキュベーション後の細胞を示す位相差顕微鏡像。データは、リポソーム取り込みのＭＦＩ(Ａ)、アネキシンＶ陽性細胞の％(Ｂ)または吸光度(Ｄ)として、平均±ＳＤとして表す。各群を、一元配置ANOVAにより解析する。２つの値を比較する場合、両側t検定を用いる (＊＊＊P＜０.００１、＊＊＊＊P＜０.０００１、ns =有意でない)。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
定義
本発明の明細書および特許請求の範囲において、「リポソーム」は、少なくとも一つの脂質二重層から作られた人工の小胞をさす。
【００４０】
本明細書で用いる用語「優先的に接着する」は、本発明のリポソームが、新鮮な採血中の顆粒球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および／またはＮＫ細胞への接着よりも、少なくとも１.５倍、好ましくは少なくとも２倍、例えば少なくとも３倍、より好ましくは少なくとも４倍、例えば少なくとも５倍の程度で、新鮮な採血中の単球に接着することをさす。
【００４１】
本明細書において、用語「新鮮な採血」は、問題となる血液が、６０分以内、例えば３０分以内、好ましくは１５分以内、好ましくは１５分以内、１０分以内、例えば５分以内に哺乳類から採血したものであることをさす。
【００４２】
本明細書において、用語「ゼータ電位」は、溶液中のコロイド粒子の滑り面の位置における、界面からバルク液の地点に対する電位を表す。本明細書において、リポソームＸについての用語「相対的ゼータ電位」は、(Ｘのゼータ電位から図１のリポソーム６(５% ＤＯＴＡＰ) のゼータ電位を引いた値) を (図１のリポソーム１１(２０% ＤＯＴＡＰ)のゼータ電位から図１のリポソーム６(５% ＤＯＴＡＰ)のゼータ電位を引いた差異)で割った値x １００として定義され; 実施例２に詳述するのと同じ条件下にて、１０％スクロース緩衝液中にて測定する。
【００４３】
用語「免疫原性」は、免疫学的応答を誘発することができることをさす。
【００４４】
本明細書において用いる用語「免疫寛容原性」は、免疫学的応答を下方制御することができることをさす。
【００４５】
本明細書中において、用語「実質的な」／「実質的に」または「本質的な」／本質的に」を用いる場合、これらの用語により表される特徴が、本発明の特許請求の範囲に記載する発明の実行について関連のある技術的効果をもたらす量で存在するかまたはそのような影響を及ぼすことを意図する。例えば、組成物中の物質の「実質的な量」は、本発明の技術的効果をもたらす程度に、該物質が示す技術効果をもたらす量である。同様に、組成物が、特定の物質を「実質的に全く含まない」ことを意図する場合、これは、かかる量が組成物中の他の成分に何ら技術的な影響を及ぼさず、それ自体「差異をもたらさない」限り、該組成物が該物質を有意でない量含むことが許されていることをさす−または、言い換えれば、「実質的に全く含まない」および「本質的に全く含まない」ということは、例えば、それらが全体的に技術的に影響を及ぼさない限り、微量またはわずかな効果が存在していてもよいことを示す。
【００４６】
本発明の特定の態様
本発明のさらなる態様を以下に示す。本発明の局面および／または態様は組み合わせてもよいことは、当業者には明らかなことである。
【００４７】
本発明の態様の一は、１５〜８５%の相対ゼータ電位を有するリポソームである。
【００４８】
本明細書中で報告する結果に示されるように、本発明のリポソームは、１５〜８５％の相対ゼータ電位にて、選択的に単球に接着する。
【００４９】
本発明の態様の一は、静脈内投与に適当であるリポソームである。
【００５０】
本発明の態様の一は、２０〜８０％の相対ゼータ電位を有するリポソームである。
【００５１】
本発明の態様の一は、２５〜７５％の相対ゼータ電位を有するリポソームである。
【００５２】
より具体的には、相対ゼータ電位は２０〜８０%の範囲、さらに具体的には２５〜７５%の範囲である。これらの範囲内において、他の血液の構成成分、例えば顆粒球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および／またはＮＫ細胞と比較して、単球に対する選択性はさらに促進される。
【００５３】
本発明の態様の一は、コレステロールを２０％未満、例えば１０％未満、好ましくは５％未満、より好ましくは２％含む、最も好ましくはコレステロールを実質的に全く含まない、リポソームである。
【００５４】
リポソーム構造および特性
本発明の態様の一は、脂質の少なくとも一部が、リン脂質、ステロールおよびステロール誘導体からなる群から選択される、リポソームである。
【００５５】
本発明の特定の態様の一は、脂質が、ホスファチジルコリン(ＰＣ)、ホスファチジルエタノールアミン(ＰＥ)、ホスファチジルセリン(ＰＳ)、ホスファチジルグリセロール(ＰＧ)、ホスファチジルイノシトール(ＰＩ)、ホスファチジン酸(ＰＡ)、ＤＰＧ(ビスホスファチジルグリセロール)、ＰＥＯＨ(ホスファチジルアルコール)、コレステロール、エルゴステロールおよびラノステロールからなる群から選択されるメンバーを含むかまたは構成する、リポソームである。
【００５６】
本発明の態様の一は、ホスファチジルコリンが、１,２-ジオレオイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルコリン、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルコリン、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルコリン、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルコリンおよび１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルコリンからなる群から選択される、リポソームである。
【００５７】
本発明の態様の一は、ホスファチジルコリンが、１,２-ジオレオイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルコリン、および１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルコリンからなる群から選択される、リポソームである。
【００５８】
本発明の特定の態様の一は、脂質が１,２-ジオレオイル-ホスファチジルコリンを含む、リポソームである。
【００５９】
本発明の他の態様は、ホスファチジルエタノールアミンが、１,２-ジオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルエタノールアミン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルエタノールアミン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ-スクシニル-ジオレオイル-ホスファチジルエタノールアミンからなる群から選択され; ホスファチジルセリンが１,２-ジオレオイル-ホスファチジルセリン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルセリン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルセリン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルセリン、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルセリン、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルセリン、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルセリンおよび１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルセリンからなる群から選択され; ホスファチジルグリセロールが１,２-ジオレオイル-ホスファチジルグリセロール、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルグリセロール、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルグリセロール、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルグリセロール、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルグリセロール、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルグリセロール、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルグリセロールおよび１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルグリセロールからなる群から選択され; ホスファチジン酸がジ-パルミトイル-グリセロホスファチジン酸、ジ-ステアロイル-グリセロホスファチジン酸、ジ-ミロストイル-グリセロホスファチジン酸、ジ-オレオイル-グリセロホスファチジン酸、パルミトイル-オレオイル-グリセロホスファチジン酸からなる群から選択される、リポソームである。
【００６０】
本発明の他の態様は、脂質が、以下を含むか、または構成するリポソームである： ホスファチジルグリセロール (PG)、ホスファチジルエタノールアミン (PE)、ホスファチジルセリン (PS)、ホスファチジルコリン (PC)、ホスファチジルイノシトール (PI)、ホスファチジン酸 (PA)、DPG (ビスホスファチジル グリセロール)、PEOH (ホスファチジル アルコール)、コレステロール、ホスファチジルコリン、例えば１,２-ジオレオイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルコリン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルコリン、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルコリン、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルコリン、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルコリンおよび１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルコリン; ホスファチジルエタノールアミン、例えば１,２-ジオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルエタノールアミン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルエタノールアミン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルエタノールアミン、１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ-スクシニル-ジオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン; ホスファチジルセリン、例えば１,２-ジオレオイル-ホスファチジルセリン、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルセリン、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルセリン、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルセリン、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルセリン、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルセリン、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルセリンおよび１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルセリン; ホスファチジルグリセロール、例えば１,２-ジオレオイル-ホスファチジルグリセロール、１,２-ジパルミトイル-ホスファチジルグリセロール、１,２-ジミリストイル-ホスファチジルグリセロール、１,２-ジステアロイル-ホスファチジルグリセロール、１-オレオイル-２-パルミトイル-ホスファチジルグリセロール、１-オレオイル-２-ステアロイル-ホスファチジルグリセロール、１-パルミトイル-２-オレオイル-ホスファチジルグリセロールおよび１-ステアロイル-２-オレオイル-ホスファチジルグリセロール; １,２-ジオクタデカノイル-ｓｎ-グリセロ-３-エチルホスホコリン (エチル PC); ペグ化脂質; ペグ化リン脂質、例えばホスファチジルエタノールアミン-Ｎ-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-１０００]、ホファチジル(phophatidyl)エタノールアミン-Ｎ-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-２０００]、ホファチジル(phophatidyl)エタノールアミン-Ｎ-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-３０００]、ホファチジル(phophatidyl)エタノールアミン-Ｎ-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-５０００]; ペグ化セラミド、例えばＮ-オクタノイル-スフィンゴシン-１-{スクシニル[メトキシ(ポリエチレングリコール)１０００]}、Ｎ-オクタノイル-スフィンゴシン-１-{スクシニル[メトキシ(ポリエチ��ングリコール)２０００]}、Ｎ-オクタノイル-スフィンゴシン-１-{スクシニル[メトキシ(ポリエチレングリコール)３０００]}、Ｎ-オクタノイル-スフィンゴシン-１-{スクシニル[メトキシ(ポリエチレングリコール)５０００]};リゾ-ホスファチジルコリン、リゾ-ホスファチジルエタノールアミン、リゾ-ホスファチジルグリセロール、リゾ-ホスファチジルセリン、セラミド; スフィンゴ脂質; 糖脂質、例えばガングリオシドGMl; グルコリピド; スルファチド; ホスファチジン酸、例えばジ-パルミトイル-グリセロホスファチジン酸; パルミチン脂肪酸; ステアリン脂肪酸; アラキドン脂肪酸; ラウリン脂肪酸; ミリスチン脂肪酸; ラウロレイン脂肪酸; フィセテリン脂肪酸; ミリストレイン脂肪酸; パルミトレイン脂肪酸; ペトロセリン脂肪酸; オレイン脂肪酸; イソラウリル脂肪酸; イソミリスチン脂肪酸; イソステアリン脂肪酸; ステロールおよびステロール誘導体、例えばコレステロール、コレステロールヘミコハク酸、コレステロール硫酸、およびコレステリル-(４-トリメチルアンモニオ)-ブタノエート、エルゴステロール、ラノステロール; ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびポリオキシエチレン脂肪酸アルコール; ポリオキシエチレン脂肪酸アルコールエーテル; ポリオキシエチル化ソルビタン脂肪酸エステル、グリセロール ポリエチレングリコールオキシ−ステアレート; グリセロールポリエチレングリコールリシノレート; エトキシル化ダイズステロール; エトキシル化ヒマシ油; ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン脂肪酸ポリマー; ポリオキシエチレン脂肪酸ステアレート; ジ-オレオイル-ｓｎ-グリセロール; ジパルミトイル-スクシニルグリセロール; １,３-ジパルミトイル-２-スクシニルグリセロール;１-アルキル-２-アシル-ホスファチジルコリン、例えば１-ヘキサデシル-２-パルミトイル-ホスファチジルコリン; １-アルキル-２-アシル-ホスファチジルエタノールアミン、例えば１-ヘキサデシル-２-パルミトイル-ホスファチジルエタノールアミン; １-アルキル-２-アシル-ホスファチジルセリン、例えば１-ヘキサデシル-２-パルミトイル-ホスファチジルセリン; １-アルキル-２-アシル-ホスファチジルグリセロール、例えば１-ヘキサデシル-２-パルミトイル-ホスファチジルグリセロール; １-アルキル-２-アルキル-ホスファチジルコリン、例えば１-ヘキサデシル-２-ヘキサデシル-ホスファチジルコリン; １-アルキル-２-アルキル-ホスファチジルエタノールアミン、例えば１-ヘキサデシル-２-ヘキサデシル-ホスファチジルエタノールアミン; １-アルキル-２-アルキル-ホスファチジルセリン、例えば１-ヘキサデシル-２-ヘキサデシル-ホスファチジルセリン; １-アルキル-２-アルキル-ホスファチジルグリセロール、例えば１-ヘキサデシル-２-ヘキサデシル-ホスファチジルグリセロール;およびＮ-スクシニル-ジオクタデシルアミン; パルミトイルホモシステイン。
【００６１】
本発明の態様の一は、脂質の少なくとも一部がカチオン性の脂質である、リポソームである。
【００６２】
このように、正味正電荷を有するリポソームは、顆粒球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および／またはＮＫ細胞への接着に比較して、優先的に単球に接着することがわかった。
【００６３】
本発明の態様の一において、正味正電荷を有するリポソームは、内皮細胞への接着と比較して、全血中の単球に優先的に接着することが期待される。
【００６４】
本発明の態様の一は、カチオン性脂質が以下からなる群から選択される、リポソームである： ステアリールアミン (ＳＡ)、ラウリルトリメチルアンモニウムブロマイド; セチルトリメチル-アンモニウムブロマイド、ミリスチル トリメチルアンモニウム ブロマイド、ジメチルジオクタデシルアンモニウム ブロマイド (ＤＤＡＢ)、３β-[Ｎ-(Ｎ’,Ｎ’-ジメチルアミノエタン)-カルバモイル]コレステロール (ＤＣ-コレステロール)、１,２-ジテトラデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン (ＤＭＴＡＰ)、１,２-ジオクタデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＴＡＰ)およびＤＯＴＡＰ誘導体、例えば１,２-ジ-(９Ｚ-オクタデセノイル)-３-トリメチルアンモニウム-プロパンおよび１,２-ジヘキサデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン、１,２-ジ-(９Ｚ-オクタデセノイル)-３-ジメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＤＡＰ)およびＤＯＤＡＰ誘導体、例えば１,２-ジテトラデカノイル-３-ジメチルアンモニウム-プロパン、１,２-ジヘキサデカノイル-３-ジメチルアンモニウム-プロパン、および１,２-ジオクタデカノイル-３-ジメチルアンモニウム-プロパン、１,２-ジ-Ｏ-オクタデセニル-３-トリメチルアンモニウム プロパン (ＤＯＴＭＡ)、１,２-ジオレオイル-ｃ-(４’-トリメチルアンモニウム)-ブタノイル-ｓｎ-グリセロール (ＤＯＴＢ)、ジオクタデシルアミド-グリシルスペルミン、ＳＡＩＮＴ-２、ポリカチオン性脂質 ２,３-ジオレイルオキシ-Ｎ-[２(スペルミン-カルボキサミド)エチル]-Ｎ，Ｎ-ジメチル-１-プロパンアミニウムトリフルオロアセテート (ＤＯＳＰＡ)、およびGL67TM。
【００６５】
本発明の特定の態様の一は、カチオン性脂質が、ステアリールアミン (ＳＡ)、１,２-ジオクタデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＴＡＰ)および１,２-ジ-(９Ｚ-オクタデセノイル)-３-ジメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＤＡＰ) からなる群から選択される、好ましくは１,２-ジオクタデカノイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＴＡＰ)である、リポソームである。
【００６６】
好ましいカチオン性脂質はＤＯＴＡＰおよびＤＯＴＡＰ誘導体である。カチオン性脂質および脂質の構成要素のさらなる例は、米国特許第４,８０４,５３９号に記載されているか、それにしたがって製造される。
【００６７】
本発明の態様の一は、脂質の少なくとも一部が、脂質ポリアルギニン結合体、脂質ＴＡＴ結合体、脂質ポリリジン結合体、またはカチオン性リポサッカライドまたはリポ多糖、例えば脂質キトサン結合体からなる群から選択されるカチオン性のリポペプチドである、リポソームである。
【００６８】
本発明の態様の一は、リポソームが、カチオン性の脂質を０.５〜５０%、好ましくは１〜２０%、例えば３〜１５、例えば７.５〜１２.５% (mol/mol)含むリポソームである。
【００６９】
本発明の態様の一は、カチオン性脂質を、０.５〜５０%、好ましくは１〜２０%、例えば３〜１５、例えば７.５〜１２.５% (mol/mol)含み、正味正荷電を有するリポソームが内皮細胞への接着に比較して、全血中の単球に優先的に接着する、リポソームである。
【００７０】
本明細書中に報告する結果から示されるように、上述の範囲のカチオン性脂質の範囲において、単球への選択性が得られる。
【００７１】
本発明の態様の一は、関連している場合、C８〜C２４、好ましくはC１０〜C２２、より好ましくはC１２〜C２０、好ましくはC１４〜C１８、最も好ましくはC１６〜C１８の飽和鎖または不飽和鎖、好ましくは飽和鎖である脂質のアルキル鎖を含む、リポソームである。
【００７２】
本発明の態様の一は、少なくとも一つのリポソームが大単ラメラ小胞(LUV)である、リポソームである。
【００７３】
本発明の好ましいリポソームは、大単ラメラ小胞(LUV)の形態であり、これは、LUVが、本発明のリポソームを含む医薬組成物の好ましい構成要素であることをさす。
【００７４】
本発明の態様の一は、直径が４０〜２０００nm、好ましくは８０〜１０００nm、より好ましくは１００〜５００nm、好ましくは５０〜２００nm、より好ましくは１００〜１５０nm、好ましくは１００〜４００nmである、リポソームである。
【００７５】
本発明のリポソームは、有効成分、典型的には薬剤物質または組成物を含む。典型的には、リポソームはかかる少なくとも一つの有効成分を実質的に全て含む。通常、内部の水性コンパートメント、疎水性二重層、リポソームの外葉と内葉の極性間相の中から選択されるコンパートメントの一つが、かかる少なくとも一つの有効成分を保有する。
【００７６】
通常、当業者は、有効成分の選択およびその正しい用量について精通している。
【００７７】
好ましい態様において、有効成分は、免疫刺激性化合物の形態、好ましくは自然免疫系を刺激できる、免疫刺激性化合物の形態である。
【００７８】
したがって、本発明の態様の一は、かかる少なくとも一つの有効成分が、細胞内部の蛋白質および／または受容体のリガンドである、免疫刺激性化合物である、リポソームである。
【００７９】
本発明の態様の一は、かかる細胞内部の蛋白質および／または受容体が、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ＮＯＤ５、ＮＡＬＰ１、ＮＡＬＰ２、ＮＡＬＰ３、ＮＡＬＰ１２、ＮＡＬＰ１４、ＩＰＡＦ、ＮＡＩＰ、ＣＩＩＴＡ、ＲＩＧ-I、ＭＤＡ５、およびＬＧＰ２からなる群から選択され、好ましくは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、およびＮＯＤ２から選択され、より好ましくはＴＬＲ７である、リポソームである。
【００８０】
本発明の態様の一は、かかる少なくとも一つの有効成分が、以下からなる群から選択される免疫刺激性化合物である、リポソームである：ポリイノシン・ポリシチジン酸(ポリＩ:Ｃ)、ポリアデニル・ポリウリジン酸 (ポリＡ:Ｕ)、ポリＩ:Ｃ-ポリ-Ｌ-リジン (ポリ-ＩＣＬＣ)、ポリ-ＩＣＲ、Ｃｌ２６４、Ｎ-パルミトイル-Ｓ-[２,３-ビス(パルミトイルオキシ)-(２Ｒ,Ｓ)-プロピル]-(Ｒ)-システイン-(Ｓ)セリン-(Ｓ)リジン４ (Pam３Cys)、モノホスホリルリピドＡ(ＭＰＬＡ)および他のリポ多糖、アルファ−ガラクトシルセラミド（galactosylceremaide） (αＧＣ)、プロピリミン (Propirimine)、イミキモド (R837)、レシキモド (R848)、ガーディキモド、R850 (3M Pharma)、R851 (3M Pharma)、852A (3M Pharma)、S-27610、3M-002 (CL075)、3M-003、3M-005、3M-006、3M-007、3M-012、3M-13、3M-031、3M-854 (3M Pharma)、CL097、CL264、IC-31、ロキソリビンおよび他のイミダゾキノリン、ssPolyU、ソチリモド (3M Pharma)、イサトリビン (Anadys)、ANA975 (Anadys/Novartis)、SM360320 (Sumitomo)、R1354 (Coley Pharmaceuticals)、一本鎖または二本鎖RNA、ORN 02 (５’-UUAUUAUUAUUAUUAUUAUU-３’)、ORN 06 ５’-UUGUUGUUGUUGUUGUUGUU-３’、CpG-ODN DSLIM (Mologen)、AVE 0675 (Coley Pharmaceuticals)、CpG B オリゴデオキシヌクレオチド (ODN) 1018 (Dynavax Technologies)、AZD 1419 (Dynavax)、ODN 1982、CpG B ODN 2006 (Coley Pharmaceuticals)、IMO 2125 (Idera Pharma)、CpG A ODN 2216、CpG A ODN 2336、CpG 2395、CpG ODN 7909 (Coley Pharmaceuticals)、CpG 10101 (Coley Pharmaceuticals)、CpG ODN AVE0675 (Coley Pharmaceuticals)、CpG ODN HYB2093 (Idera Pharmaceuticals/Novartis)、CpG ODN HYB2055 (Idera Pharmaceuticals)、CpG-ODN IMO-2125 (Idera Pharmaceuticals)、CpG C ODN M362、トラムバ (Tolamba) (CpGクラスB ODN 1018が共有結合した、Amb a１ブタクサアレルゲン)(Dynavax Technologies)、ヘプリサブ (Heplisav) (Dynavax Technologies)、10181SS (Dynavax Technologies)、IM02055 (Idera Pharmaceuticals)、IRS954 (Dynavax Technologies)、(フラゲリン、ムラミルジペプチド、サポニン、例えばQS21、リーシュマニア伸張因子 (Leishmania elongation factor)、SB-AS4、スレオニル-ムラミルジペプチド、L18-MDP、ミファムルチド (mifamurtid)、およびOM-174。本発明の態様の一は、少なくとも一つの有効成分が、以下からなる群から選択される免疫刺激性化合物であるリポソームである： モノホスホリルリピドＡ (ＭＰＬＡ)、イミキモド (R837)、レシキモド (R848)、ガーディキモド、ロキソリビン、ソチリモド (3M Pharma)、イサトリビン (Anadys)、SM360320 (Sumitomo)、CpG B オリゴデオキシヌクレオチド (ODN) 1018 (Dynavax Technologies)、AZD 1419 (Dynavax)、ODN 1982、CpG B ODN 2006 (Coley Pharmaceuticals)、IMO 2125 (Idera Pharma)、CpG A ODN 2216、CpG A ODN 2336、CpG 2395、CpG ODN 7909 (Coley Pharmaceuticals)、CpG 10101 (Coley Pharmaceuticals)、CpG ODN AVE0675 (Coley Pharmaceuticals)、CpG ODN HYB2093 (Idera Pharmaceuticals/Novartis)、CpG ODN HYB2055 (Idera Pharmaceuticals)、CpG-ODN IMO-2125 (Idera Pharmaceuticals)、CpG C ODN M362、トラムバ (Tolamba) (CpGクラスB ODN 1018が共有結合した、Amb a１ブタクサアレルゲン)(Dynavax Technologies)、ヘプリサブ(Heplisav) (Dynavax Technologies)、QS21、L18-MDP、ミファムルチド (mifamurtid)、およびOM-174。
【００８１】
本発明の態様の一は、かかる少なくとも一つの有効成分が、ミファムルチド (Mifamurtid) (リン酸水素 ２-[(Ｎ-{(２Ｒ)-[(２-アセトアミド-２,３-ジデオキシ-Ｄ-グルコピラノース-３-イル)オキシ]-プロパノイル}-Ｌ-アラニル-Ｄ-イソグルタミニル-Ｌ-アラニル)アミノ]エチル (２Ｒ)-２,３-ビス(ヘキサデオカノイルオキシ)プロピル)、Ｌ１８ＭＤＰ (６-Ｏ-ステアロイル-Ｎ-アセチル-ムラミル-Ｌ-アラニル-Ｄ-イソグルタミン)からなる群から選択される免疫刺激性化合物ならびに、上述の免疫刺激性化合物の、アシル化またはＣ１２〜２０飽和または不飽和のエステルまたはエーテル結合誘導体である、リポソームである。
【００８２】
本発明の態様の一は、かかる少なくとも一つの有効成分が、以下からなる群から選択されるステロイドを含む免疫抑制性化合物である、リポソームである： ２１-アセトキシプレフネノロン(prefnenolone)、アルクロメタゾン(Aalclometasone)、アルゲストン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、ヘミコハク酸ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン、クロベタゾール、ブロベスタソン（Blovetasone）、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、パルミチン酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、エノキソロン、フルアザコート(fluazacort)、フルクロロニド(flucloronide)、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルドロコルチゾン、フルオシノニド、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルプレドニジン (Fluprednidine)、フルプレドニゾロン、フルランドレノリド、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、ハロプレドン、ヒドロコルタメート、ヒドロコルチゾン、リメタゾン (Limethasone)、マジプレドン、メドリソン(medrysone)、メプレドニゾン、メチオール(Methyol)プレドニゾロン、ヘミコハク酸メチオールプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルベート(prednicarbate)、プレドニゾロン、パルミチン酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニバール、プレドニリデン、チキソコルタール (Tixocortal)およびトリアムシノロン。
【００８３】
本発明の態様の一は、かかる少なくとも一つの有効成分が、ヘミコハク酸ベタメタゾン、パルミチン酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、リメタゾン (Limethasone)、ヘミコハク酸メチオール(Methyol)プレドニゾロン、パルミチン酸プレドニゾロン、およびリン酸プレドニゾロンからなる群から選択されるステロイドを含む免疫抑制性化合物である、リポソームである。
【００８４】
本発明の態様の一は、かかる少なくとも一つの有効成分が、ｃ-Ｆｍｓ、ＰＤＧＦＲα、Ａｂｌ、ＰＤＧＦＲβ、ＮＦκＢ、ＩκＢ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＧＳＫ３、ｐ３８ＭＡＰＫ、ＪＮＫ、ＫＩＴ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ４、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ＦＬＴ３、ＰＫＣβ、ＲＡＦ１、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＮＬＲＰ３、ＩＲＦ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ６、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、ＰＩ３Ｋ、ｍＴＯＲ、ＡＫＴ、ＤＮＡ-ＰＫ、ＡＴＭ、ＡＭＰＫ、ＰＤＫ-１、Ｓ６キナーゼ、ＲＩＰ２、ＴＲＩＦ、ＭＹＤ８８、ＴＡＫ１からなる群から選択される細胞内標的に作用する低分子阻害剤を含む免疫抑制性化合物である、リポソームである。
【００８５】
本発明の態様の一は、かかる少なくとも一つの有効成分が、以下からなる群から選択される細胞内標的に作用する低分子阻害剤を含む免疫抑制性化合物である、リポソームである： インドメタシン、CLI-095 (Ｃ１５Ｈ１７ＣｌＦＮＯ４Ｓ、CAS#243984-11-4)、Bay11-7082 (Ｃ１０Ｈ９ＮＯ２Ｓ、CAS#19542-67-7)、トリプトリド (PG 490)、CGP53716、SU9518、PD166326、セラストロール、トリプテリン、BIRB-796 (ドラマピモド(doramapimod))、SB 203580、SB202190、VX-702、NVP-BEZ235、GDC-0980 (RG7422)、リダフォロリムス (デフォロリムス、AP23573)、ニロチニブ (タシグナ、AMN107)、トシル酸ソラフェニブ (ネクサバール)、ダサチニブ (スプリセル、BMS-354825)、MLN518 (CT53518)、バタラニブ (PTK787 / ZK222584)、OSI-930、AZD2171、パゾパニブ (ヴォトリエント)、IPI-504 (レタスピマイシン)、デフォロリムス (リダフォロリムス)、GDC-0980 (RG7422、Ｃ２３Ｈ３０Ｎ８Ｏ３Ｓ、CAS#1032754-93-0)、パロミド (Palomid) 529 (C24H22O6 CAS#914913-88-5)、メシル酸イマチニブ(グリベック (Gleevec)/グリベック (Glivec))、エベロリムス (アフィニトール、RAD001)、シロリムス (ラパミューン、ラパマイシン)、テムシロリムス (トーリセル、CCI-779)、ボルテゾミブ (ベルケイド)、ゲフィチニブ (イレッサ)、カネルチニブ(canertinib) (CI-1033、CAS# 267243-28-7、Ｃ２４Ｈ２５ＣｌＨＮ５Ｏ３)、塩酸エルロチニブ(タルセバ)、ペリチニブ (EKB-569) (Ｃ２４Ｈ２３ＣｌＦＮ５Ｏ２、CAS#257933-82-7)、バンデタニブ (ザクティマ、ZD6474、Ｃ２２Ｈ２４ＢｒＦＮ４Ｏ２、CAS No.: 443913-73-3)、スニチニブ (スーテント、SU-11248、Ｃ２２Ｈ２７ＦＮ４Ｏ２Ｃ４Ｈ６Ｏ５、CAS No.: 341031-54-7)、タンデュチニブ (MLN518)、Ｃ３１Ｈ４２Ｎ６Ｏ４、CAS No.: 387867-13-2、ロスコビチン (セリクシリブ (Selicilib))、Ｃ１９Ｈ２６Ｎ６Ｏ、CAS No.: 186692-46-6。
【００８６】
本発明の態様の一は、かかる少なくとも一つの有効成分が、以下からなる群から選択される抗炎症性化合物である、リポソームである： リファンピシン、ジデオキシシチジン-５’-トリホスフェート、クラリスロマイシン、アシクロビル、シプロフロキサシン、フシジン (fusidin)、ゲンタマイシン、クロラムフェニコール、レボフロキサシン、オキシテトラサイクリン、トブラマイシン、クロモグリク酸ナトリウム (natriumcromoglicat)、アモキシシリン、アンピシリン、ピバンピシリン、エルタペネム、メロペネム、ドリペネム、セフォタキシム、セフタジジム、シプロフロキサシン、バラシクロビル、エファビレンツ、エムトリシタビン (Emtricitabin)、テノフォビルジソプロキシル、リルピビリン、ペニシリン、トリメトプリム-スルファメトキサゾール、リファンピシン、エタンブトール、イソニアジド、ピラジンアミド、ボリコナゾール、アンホテリシンＢ、カスポファンギン、フルシトシン、イトラコナゾール、ドキシサイクリン、スルホンアミド、およびスルファメトキサゾール。
【００８７】
本発明の態様の一は、さらに少なくとも一つの抗原を有効成分として含む、リポソームである。
【００８８】
本発明の態様の一は、かかる少なくとも一つの抗原が、がん抗原、自己抗原もしくは自己免疫性抗原、微生物抗原、アレルゲン、または環境抗原からなる群から選択される、リポソームである。
【００８９】
薬物の単球特異的な標的化のためには、正電荷のリポソームは、単球に貪食される可能性が高く、該リポソームの中に封入された薬物が単球中に放出され、該薬物がその細胞内機能を発揮することが可能になる。免疫刺激性化合物、例えばパターン認識受容体(PRR)のような細胞内受容体に対する作動薬について、これらの分子は細胞内で一度放出され、関連受容体を活性化し、これにより、免疫刺激性の単球をもたらし得る。
【００９０】
単球標的化のためのリポソームの試験:
特異的な単球標的化のための好ましいリポソームは、MilliQ水中、３００mM グルコース、１０mM ＨＥＰＥＳ、１mM ＣａＣｌ２からなる緩衝液 (pH７.４) 中でZetaPALS zeta potential analyzer (Brookhaven Instruments Coorporation、Holtsville、NY)で測定した場合、０〜６０mV、２０〜５０mV、２３〜４５mV、３１〜４１mV、３２〜３８mVのゼータ電位を示す。さらに、特異的な単球標的化のための好ましいリポソームは、以下の試験系を用いて試験する:
新鮮なヒトの全血は、抗凝固剤としてＥＤＴＡを用いてBDvacutainers (Cat# ３６６４５０)により健康なドナーから採血する。体積１０μLのリポソーム (５ mM)を、１.５mlエッペンドルフチューブ内で、体積１９０μLの新鮮な血液に添加し (最終濃度２５０μM)、優しく回転させながら３７℃にて６０分間インキュベーションする。赤血球を、暗所、室温にて、BD血清 Vacutainers (Cat#３６７６１４)中で、BD Pharm lysis buffer ４mL中に溶解させ、２００gにて５分間遠心分離し、Pharm lysis buffer１ mLに再懸濁する。暗所、室温にて５分間インキュベーションした後、試料を２００ gにて５分間遠心分離し、FACS buffer (１%ＢＳＡを含むＰＢＳ) １mL中に再懸濁し、すぐに２００gにて５分間遠心分離し、FACS buffer ４００μLに再懸濁し、丸底９６ウェルプレート(Nunc、Roskilde、DK)に移す。非特異的な結合を、ヒトIgGにより、１０分間氷上でブロッキングした後、細胞を、一次プレコンジュゲート抗体またはアイソタイプ対照とともに、１００μＬ中で６０分間氷上にてインキュベーションし、５００g、４℃にて５分間遠心分離し、ＦＡＣＳ緩衝液２００μL中で２回洗浄する。細胞をＦＡＣＳ緩衝液１５０μLで再懸濁した後、フローサイトメトリー解析に付し、この解析は、BD FACSArray bioanalyzerにて行い得る。リポソームの細胞取り込みは、リポソーム膜に取り込まれたＤＯＰＥ-ローダミンＢ (ＲｈＢ)の蛍光に基づいて決定する。細胞に結合しているリポソームの総量(「取り込み」として示し、細胞膜に結合するリポソームと既に内部移行しているリポソームを含む)を、５３２nmにおける励起および５６４〜６０６nmにおける発光を用いて測定する。末梢血中の様々な細胞におけるリポソームの取り込みを、以下のマーカーに基づいて解析する: ＣＤ１４ (単球マーカー)、ＣＤ１５ (顆粒球マーカー)、ＣＤ３ (Ｔリンパ球マーカー)、ＣＤ１９ (Ｂリンパ球マーカー)およびＣＤ５６ (ＮＫ細胞マーカー)。データは、BD FACSDiva Software v５.０.２を用いて解析し得る。染色していない細胞を陰性対照として用い、対照細胞よりも蛍光が高い細胞を陽性とみなした。各実験において、全ての細胞集団の解析に同じゲーティングを用いた。
【００９１】
抗原
抗原は、がん抗原、自己抗原もしくは自己免疫性抗原、微生物抗原、アレルゲン、または環境抗原であってよいが、これらに限定されない。抗原は、天然のペプチド、脂質または糖であってよいが、これらに限定されない
【００９２】
がん抗原: がん抗原は、がん細胞に優先的に発現する抗原であり(すなわち、がん細胞において、非がん細胞よりも高いレベルで発現する)、いくつかの場合において、がん細胞においてのみ発現する。がん抗原は、がん細胞内またはがん細胞の表面に発現し得る。がん抗原は、ＭＡＲＴ-１/Ｍｅｌａｎ-Ａ、ｇｐ１００、アデノシンデアミナーゼ-結合蛋白質 (ＡＤＡｂｐ)、ＦＡＰ、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原 (ＣＲＣ) 0017-1Ａ/ＧＡ733、がん胎児性抗原 (ＣＥＡ)、ＣＡＰ-１、ＣＡＰ-２、ｅｔｖ６、ＡＭＬ１、前立腺特定抗原 (ＰＳＡ)、ＰＳＡ-１、ＰＳＡ-２、ＰＳＡ-３、前立腺特異的膜抗原 (ＰＳＭＡ)、Ｔ細胞受容体/ＣＤ３-ゼータ鎖、およびＭＡＧＥ-Ａ１、ＭＡＧＥ-Ａ２、ＭＡＧＥ-Ａ３、ＭＡＧＥ-Ａ４、ＭＡＧＥ-Ａ５、ＭＡＧＥ-Ａ６、ＭＡＧＥ-Ａ７、ＭＡＧＥ-Ａ８、ＭＡＧＥ-Ａ９、ＭＡＧＥ-Ａ１０、ＭＡＧＥ-Ａ１１、ＭＡＧＥ-Ａ１２、ＭＡＧＥ-Ｘｐ２、(ＭＡＧＥ-Ｂ２)、ＭＡＧＥ-Ｘｐ３ (ＭＡＧＥ-Ｂ３)、ＭＡＧＥ-Ｘｐ４ (ＭＡＧＥ-Ｂ４)、ＭＡＧＥ-Ｃ１、ＭＡＧＥ-Ｃ２、ＭＡＧＥ-Ｃ３、ＭＡＧＥ-Ｃ４、ＭＡＧＥ-Ｃ５、ＧＡＧＥ-１、ＧＡＧＥ-２、ＧＡＧＥ-３、ＧＡＧＥ-４、ＧＡＧＥ-５、ＧＡＧＥ-６、ＧＡＧＥ-７、ＧＡＧＥ-８、ＧＡＧＥ-９、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ-１、ＮＡＧ、ＧｎＴ-Ｖ、ＭＵＭ-１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２/ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α-フェトプロテイン、Ｅ-カドヘリン、α-カテニン、β-カテニン、γ-カテニン、ｐｌ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ-ＥＳＯ-１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症蛋白質 (ＡＰＣ)、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ-イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２ガングリオシド、ＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルス蛋白質、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、Ｉｍｐ-１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶ-コード核抗原 (ＥＢＮＡ)-１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ-１、ＳＳＡ-２ (ＨＯＭ-ＭＥＬ-４０)、ＳＳＸ-１、ＳＳＸ-４、ＳＳＸ-５、ＳＣＰ-１およびＣＴ-７、ＣＤ２０、およびｃ-ｅｒｂＢ-２ (Ａｍｌｌ:シクロフィリンｂ)、Ｂ細胞リンパ腫 (Ｉｇ-イディオタイプ); バーキット (非ホジキン) リンパ腫 (ＣＤ２０): 神経膠腫 (Ｅ-カドヘリン:α-カテニン、β-カテニン、γ-カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ)、膀胱がん (ｐ２１ｒａｓ)、胆道がん (ｐ２１ｒａｓ)、乳がん (ＭＵＣファミリー; ＨＥＲ２/ｎｅｕ; ｅ-ｅｒｂＢ２)、頚部がん (ｐ５３; ｐ２１ｒａｓ)、結腸がん (ｐ２１ｒａｓ; ＨＥＲ２/ｎｅｕ; ｃ-ｅｒｂＢ-２; ＭＵＣファミリー)、胃がん (ＨＥＲ２/ｎｅｕ; ｃ-ｅｒｂＢ-２; ｇａ７３３糖蛋白質)、肝細胞がん、黒色腫 (ｐ１５蛋白質、ｇｐ７５、がん胎児性抗原、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド)、骨髄腫 (ＭＵＣファミリー、ｐ２１ｒａｓ)、非小細胞肺がん (ＨＥＲ２/ｎｅｕ; ｃ-ｅｒｂＢ-２)、鼻咽頭がん (ｌｍｐ-１; ＥＢＮＡ-１)、卵巣がん (ＭＵＳファミリー;Ｈｅｒ２/ｎｅｕ; ｃ-ｅｒｂＢ-２)、頸部および食道の扁平上皮細胞がん(ウイルス生成物、例えばヒトパピローマウイルス蛋白質および非感染性粒子)、精巣がん (NY-ESO-１)、Ｔ細胞白血病 (ＨＴＬＶ-１エピトープ)であり得る。
【００９３】
微生物抗原: 微生物抗原は、微生物種、例えば非限定的な例としては、細菌、ウイルス、真菌、寄生虫およびマイコバクテリア種より得られる抗原である。微生物抗原は、そのものとして、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、寄生虫性抗原およびマイコバクテリア抗原を含む。細菌、ウイルス、真菌、寄生虫およびマイコバクテリア種の例は、本明細書中に記載する。微生物抗原は、微生物種の一部であっても、または、微生物全体であってもよい。態様の一において、細菌抗原は、大腸菌(E. Coli)、ブドウ球菌 (Staphylococcal)、クラミジア属 (Chlamydia)、連鎖球菌 (Streptococcal)、シュードモナス属 (Pseudomonas)、クロストリジウム・ディフィシル (Clostridium difficile)、レジオネラ属 (Legionella)、ネタノコッカス属 (Pnetanococcus)、ヘモフィルス属(Haemophilus)、クレブシエラ属 (Klebsiella)、エンテロバクター属 (Enterobacter)、シトロバクター属 (Citrobacter)、ナイセリア属 (Neisseria)、B型髄膜炎菌 (Meningococcus B)、シゲラ属 (Shigella)、サルモネラ属 (Salmonella)、リステリア属 (Listeria)、パスツレラ属 (Pasteurella)、ストレプトバシラス属 (Streptobacillus)、スピリルム属 (Spirillum)、トレポネーマ属 (Treponema)、アクチノミセス属 (Actinomyces)、ボレリア属 (Borrelia)、コリネバクテリウム (Corynebacterium)、結核菌 (Tuberculosis)、ノカルディア属 (Norcardia)、ガードネレラ属 (Gardnerella)、カンピロバクター属 (Campylobacter)、スピロヘータ属 (Spirochaeta)、プロテウス属 (Proteus)、バクテロイデス属 (Bacteriodes)、エルシニア・ペスティス (Yersenia pestis)、ヘリコバクター ピロリ (H. pylori)、および炭疽菌からなる群から選択される細菌種より得られる。
【００９４】
他の態様において、ウイルス抗原は、ＨＩＶ、コロナウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、デングウイルス、エボラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ヒト パピローマウイルス、ヒトメタニューモニア(Metanpneumonia)ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ロタウイルス、アデノウイルス、インフルエンザウイルス (ユニバーサル、Ｈ１Ｎ１ｖ、Ｈ７Ｎ１、Ｈ９Ｎ２)、肺炎球菌 (Pneumococcus)、パラインフルエンザウイルス、ＲＳウイルス (ＲＳＶ)、水痘帯状疱疹ウイルス、天然痘、サル痘、西ナイルウイルスおよびＳＡＲＳからなる群から選択されるウイルス種より得られる。
【００９５】
さらに他の態様において、真菌抗原は、カンジダ症、白癬、ヒストプラスマ症、ブラストミセス症、パラコクシジオイデス症、クリプトコッカス症、アスペルギルス症、黒色真菌症、菌腫感染、シュードアレシェリア症、および癜風感染からなる群から選択される感染症を引き起こす真菌種より得られる。
【００９６】
さらに他の態様において、寄生虫性抗原は、アメーバ症、トリパノソーマ‐クルージ (trypanosome cruzi)、ファスキオラ属 (Fasciolia)、リーシュマニア属 (Leishmania)、マラリア原虫 (Plasmodium)、オンコセルカ属 (Onchocercia)、肺吸虫 (Paragonimia)、トリパノソーマ・ブルセイ (Trypanosoma brucei)、ニューモシスティス属(Pneumocystis)、膣トリコモナス (Trichomonas vaginalis)、条虫類 (Taenia)、膜様条虫 (Hymenolepsis)、エキノコックス属 (Echinococcus)、住血吸虫属 (Schistosoma)、神経嚢虫症 (neurocysticercosis)、アメリカ鉤虫 (Necator americanus)、および鞭虫 (Trichuris trichuria)からなる群から選択される寄生虫種より得られる。
【００９７】
マイコバクテリア抗原は、結核菌およびライ菌 (M. leprae)のようなマイコバクテリア種から得られてよいが、これらに限定されない。
【００９８】
アレルゲン:アレルゲンは、対象におけるアレルギー性または喘息性応答を誘発し得る作用剤である。アレルゲンには、花粉、昆虫の毒、動物鱗屑埃 (animal dander dust)、真菌胞子および薬物 (例えばペニシリン)が挙げられるが、これらに限定されない。天然、動物性および植物性アレルゲンの例としては以下の種類が挙げられるがこれらに限定されるものではない: イヌ (イヌ (Canis familiaris)); ヒョウヒダニ属 (Dermatophagoides)(例えばコナヒョウヒダニ (Dermatophagoides farina)); ネコ属 (Felis) (ネコ (Felis domesticus)); アンブローシア属 (Ambrosia)(ブタクサ (Ambrosia artemi isfolia); ロリウム属 (Lolium)(例えばホソムギ (Lolium perenne)またはネズミムギ (Lolium multiflorum)); スギ属 (Cryptomeria)(スギ (Cryptomeria japonica)): アルテルナリア属 (Alternaria)(葉上生息菌 (Alternaria alternate)); ハンノキ属 (Alder)、アルヌス属(Alnus)(アルヌス・グルティノサ (Alnus gultinoasa)); カバノキ属 (Betula)(オウシュウシラカンバ (Betula verrucosa)); カシ属 (Quercus) (アルバオーク (Quercus alba)); オリーブ属 (Olea) (オリーブ (Olea Europa)); ヨモギ属 (Artemisia) (オウシュウヨモギ (Artemisia vulgaris)): オオバコ属 (Plantago)(例えばヘラオオバコ (Plantago lanceolata)); ヒカゲミズ属 (Parietaria)(例えばカベイラクサ (Parietaria judaica)のパリエタリア・オフィチナリス (Parietaria officinalis); チャバネゴキブリ属 (Blattella) (例えばチャバネゴキブリ (Blattella germanica)); アピス属 (Apis)(例えばアピス・ムルチフロルム (Apis multiflorum)); イトスギ属 (Cupressus)(例えばホソイトスギ (Cupressus sempervires)、アリゾナイトスギ(Cupressus arizonica)およびモントレーイトスギ (Cupressus macrocarpa)); ジュニペルス属 (Juniperus) (例えばジュニペルス・サビノイデス (Juniperus sabinoides)、エンピツビャクシン (Juniperus virginiana)、セイヨウネズ (Juniperus communis)およびマウンテンシダー (Juniperus ashei)); ツジャ属 (Thuya) (例えばコノテガシワ (Thuya orientalis)); ヒノキ属 (Chamaecyparis)(例えばヒノキ (Chamaecyparis obtuse)); ゴキブリ属 (Periplaneta)(例えばワモンゴキブリ (Periplaneta Americana)); カモジグサ属 (Agropyron) (例えばシバムギ (Agropyron repens)); ライムギ属 (Secale) (例えばライムギ (Secale cereal)); コムギ属 (Triticum) (例えばコムギ (Triticum aestivum)); カモガヤ属 (Dactylis)(例えばオーチャードグラス (Dactylis glomerata)); ウシノケグサ属 (Festuca) (例えばヒロハウシノケグサ (Festuca elatior)); イチゴツナギ属 (Poa) (例えばコイチゴツナギ(Poa compressa) のケンタッキーブルーグラス(Poa pratensis)); カラスムギ属(Avena)(例えばエンバク (Avena sativa)); シラゲガヤ属 (Holcus) (例えばシラゲガヤ (Holcus lanatus)); ハルガヤ属 (Anthoxanthum) (例えばエンバク (Avena sativa)); シラゲガヤ属 (Holcus)(例えばシラゲガヤ (Holcus lanatus)); ハルガヤ属 (Anthoxanthum) (例えばハルガヤ (Anthoxanthum odoratum)); カラスムギ属 (Arrhenatherum) (例えばオオカニツリ (Arrhenatherum elatius)); コヌカグサ属 (Agrostis) (例えばコヌカグサ(Agrostis alba)); フレウム属 (Phleum) (例えばチモシー (Phleum pretense)); クサヨシ属 (Phalaris) (例えばリードカナリーグラス (Phalaris arundinacea)); スズメノヒエ属 (Paspalum) (例えばバヒアグラス (Paspalum notatum)); モロコシ属 (Sorghum) (例えばセイバンモロコシ (Sorghum halepensis));およびスズメノチャヒキ属(Bomus) (例えばスムース・ブロームグラス (Bromus inermis))。
【００９９】
例えば、以下の自己免疫疾患または障害の任意の一つ以上に関連する抗原を、本発明で用いてよい; 糖尿病、糖尿病 (diabetes mellitus)、関節炎 (リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む)、多発性硬化症、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎 (アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む)、乾癬、シェーグレン症候群に次ぐ乾性角結膜炎を含むシェーグレン症候群、円形脱毛症、節足動物咬傷応答によるアレルギー性応答、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、喘息、アレルギー性喘息、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、ハンセン病リバーサル反応、癩性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、アレルギー性鼻炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、慢性赤芽球性貧血、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎 (pepatitis)、スティーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、クローン病、グレーブス眼症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、および間質性肺線維症。自己免疫性疾患に関連する抗原の例としては、グルタミン酸脱炭酸酵素６５ (GAD６５)、天然のDNA、ミエリン塩基性蛋白質、ミエリンプロテオリピド蛋白質、アセチルコリン受容体構成成分、サイログロブリン、および甲状腺刺激ホルモン (TSH) 受容体が挙げられる。
【０１００】
本発明にて同様に想定している他の症状は、全身性の炎症および／または感染により特徴づけられ、かつ、以下と関連し得る： 外傷、熱傷、外科手術、冠動脈疾患、冠血管アテローム性動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、梗塞炎症および心筋梗塞後の修復、心虚血性再灌流傷害、心筋炎症、心筋虚血、心血管疾患、脳梗塞、出血性ショック、再灌流病変、透析、ショックおよび／または細菌またはウイルス感染、体外膜型肺(ECMO)、ショック、全身性炎症反応症候群 (SIRS)、敗血症、多臓器不全、臓器および／または人工関節等の移植の拒絶、心臓および肺バイパス手術、慢性炎症、喘息および／または肺におけるストレス関連性疾患、細菌感染、壊疽、軟部組織感染症、および創傷感染。
【０１０１】
本発明の医薬組成物
上述したように、本発明のリポソームは、本発明の医薬製剤の構成要素として有用である。哺乳類への静脈内投与に適した任意の形態が期待される。
【０１０２】
本発明の医薬製剤は、好ましくは、液剤、分散剤、懸濁剤、凍結乾燥物、または冷凍形態である。
【０１０３】
治療的使用または方法
また、本発明の一部は、医薬として使用するための、本発明のリポソームまたは脂質ベースの薬物送達系または医薬組成物である。具体的には、本発明のこれらの局面は、以下に挙げるような単球に関連する症状の予防的または治療的処置または改善のために使用するためのものであり得る:
敗血症:
敗血症ショックは、集中治療室において最も一般的な死因であり、死亡率は、２５〜５０%の範囲である(Kumar, V, et al., (2007). Robbins Basic Pathology (8th ed.)Saunders Elsevier. pp. 102-103)。単球の活性化は、患者の生存に重要な役割を果たし、ここで、単球は、疾患の進行に重要な分泌サイトカイン、主にＩＬ１β、ＩＬ−６およびＴＮＦαを含むサイトカインの主要な分泌源である。敗血症患者の生存は、敗血症の発症から最初の４８時間の間の、これらの患者の血清中に見られるＩＬ−６のレベルに相関する。診断から最初に４８時間以内に高いＩＬ−６が測定された患者(>１０００pg/mL)については、死亡率は５０%であり、その一方、低いＩＬ−６ (＜１０００ pg/mL) は高い生存率(２８日時点で生存率１００%)と相関する (Spittler A., et al., Clinical Infections Diseases, 2000, 31;1338-42)。低容量の糖質コルチコイド投与により、敗血症の患者の死亡率が低下し(Djillali A., et al. JAMA 2002, 288, no7, 862-872)、このことから、糖質コルチコイド処理、特に本明細書に記載するような、敗血症の主要なエフェクター細胞：単球に標的化した、標的化リポソーム糖質コルチコイド処理は、特に、診断および／または発症から最初の４８時間以内に、ＩＬ−６レベルが高い(＞１０００pg/mL)患者に投与した場合には、有望な治療機会であり得ることが示唆される。
【０１０４】
川崎病:
川崎病 (KD) は、中動脈の自己免疫性炎症である。該疾患は、多くの器官系、主に血管、皮膚、粘膜およびリンパ節を含む器官系に罹患し；最も深刻な影響は、心臓に対するものであり、その場合、未処置の子供において、致死的な冠動脈瘤を引き起こし得る。KDは主に小児科疾患であり、早期の感染により誘発されやすい。炎症は、動脈の周りに完全に広がり; 結果として、動脈の構造的な構成要素は、激しい損傷が起こり; 次いで、該動脈は拡張を始める。炎症細胞の浸潤は、該疾患の約２５日目まで続き、その後、炎症細胞は次第に数が減少する。KD動脈炎は、単球／マクロファージの重度の集積からなる肉芽腫性の炎症により特徴づけられる (Matsubara T., et al., Clin Exp Immunol, 141:381-387)。単球／マクロファージの異常な活性化は、血管病変の形成に関連していると考えられる。KDは、３〜４週間まで進行し、誘発されるＴＮＦα、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＮＯ合成酵素の増加を伴う、単球／マクロファージの活性化と関連する (Furukawa S, et al., Nihon Rinsho. 2008 Feb;66(2):258-64)。
冠動脈炎
冠動脈炎は、KDの発症から６〜８日後に発症する (Takahashi K, Clin Exp Immunol. 2011 May;164 Suppl 1:20-2)。免疫グロブリン補充療法 (IVIG)は、川崎病の標準的な処置であり、しばしば、２ヶ月まで投与されるアスピリンの補充が行われる。コルチコステロイドもまた、使用が成功しており、サイトカインレベルの低下において、特に、他の処置が失敗しているかまたは症候が再発している場合において、ＩＶＩＧに匹敵するかまたはＩＶＩＧよりもわずかに強力であるが、他の副作用を引き起こし得る(Miura M et al.、Eur J Pediatr. 2008 Oct;167(10):1119-23)。したがって、免疫抑制性のリポソームによってＫＤの単球にリポソームを標的化することにより、免疫抑制効果および疾患の進行を改善し得、同時に、遊離のコルチコステロイドの投与に見られる全身性の副作用を減少させ得る。
【０１０５】
サルコイドーシス
サルコイドーシスは、原因のわからない疾患であり、異常に集合した慢性炎症細胞(肉芽腫)が複数の器官において、節を形成する疾患である。患者の３０〜７０％は治療を必要としない。コルチコステロイド、最も一般的にはプレドニゾロンは、長い間、標準的処置であった。患者によっては、この処置により、該疾患の過程が遅延化または逆行し得るが、ステロイド治療に応答しない患者もいる。約１０%は、重症の身体障害を発症する。肺の瘢痕または感染は、呼吸不全および死を引き起こし得る(Chen ES. Et al,. Nat Rev Rheumatol. 2011 Jul 12;7(8):457-67)。ＴＬＲ２およびＮＯＤ２の組合せ刺激の後の、サルコイドーシスの患者の血液単核細胞におけるＴＬＲの発現上昇および炎症性サイトカインの分泌の亢進は、サルコイドーシスの病因と関連し得る。したがって、サルコイドーシスの患者における単球を標的とした、コルチコステロイドのような免疫抑制性の化合物とともに処方したカチオン性のリポソームは、サルコイドーシスの重症な場合に疾患の進行を改善し得る(Wiken M., et al,. J Clin Immunol. 2009 Jan;29(1):78-89)。
【０１０６】
本発明において同様に直面する症状は、全身性の炎症および／または感染症により特徴付けられ、外傷、熱傷、外科手術、透析、ショックおよび／または細菌もしくはウイルス感染と関連し得る。本発明の好ましい態様において、全身性の症状は、以下からなる群から選択される疾患と関連する： 体外膜型肺 (ECMO)、ショック、冠動脈疾患、冠血管アテローム性動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、梗塞炎症および心筋梗塞後の修復、心虚血性再灌流傷害、心筋炎症、心筋虚血、心血管疾患、脳梗塞、出血性ショック、再灌流病変、全身性炎症反応症候群(SIRS)、敗血症、多臓器不全、臓器および／または人工関節等の移植の拒絶、心臓および肺バイパス手術、慢性炎症、喘息および／または肺におけるストレス関連性疾患、細菌感染、壊疽、軟部組織感染症および創傷感染、全身性炎症反応症候群、SLE、溶血性尿毒症症候群、血球貪食性リンパ組織球症、肺胞蛋白症、全身性硬化症、骨髄炎、臓器移植拒絶 (GVHD)、エリテマトーデス、シェーグレン症候群、糸球体腎炎、溶血性尿毒症症候群、丹毒、血球貪食性リンパ組織球症。
【０１０７】
さらに、本発明の局面は、局所的および／または慢性炎症、例えば以下の炎症の予防的または治療的処置または改善に使用するためのものであってよい:
【０１０８】
虚血再灌流障害と関連のある心筋梗塞:
心筋梗塞 (ＭＩ) は、心組織において壊死を引き起こす、一過性虚血を誘発し得る。壊死性組織は、ＭＩから最初の数日以内に除去されなければならず、これは、ＮＫ細胞、マクロファージおよび単球が該組織に移動し、蛋白質分解性酵素および炎症性サイトカインおよびケモカイン、例えばＩＬ-８、ＭＣＰ-１およびＣＣＬ５ならびに活性酸素種(ROS)を産生するときに起こる。ＭＩ後の最初の数日間、損傷した組織は、壊死組織の貪食に必要な炎症性単球により浸潤され、血管新生が引き起こされ、後に起こる、梗塞巣の組織治癒に重要な因子である、コラーゲンの合成が開始される。しかし、治癒している組織に炎症性単球が残留している場合、修復単球は組織に侵入し、組織を修復することはできない。したがって、ＭＩ後の治癒過程が成功するためには、炎症性単球と修復単球の間のバランスが重要である(Nahrendorf M, et al., Circulation, 2010, 121:2437-2445)。したがって、ＭＩ後の最初の過程において、炎症性単球のレベルが高いＭＩに罹患している患者は、糖質コルチコイドのような免疫抑制性化合物の、単球を標的としたリポソームにより益を得、これにより、傷害部位の炎症性サイトカイン、ケモカインおよび活性酸素種の産生が抑制され、それにより、炎症性単球からの心筋炎症および損傷効果が低下する。
アテローム性動脈硬化:
アテローム性動脈硬化は、動脈壁の炎症およびコレステロール、脂質および炎症性マクロファージの沈着を伴い、プラークを形成する動脈疾患である。該プラークは、破裂して血栓症、心筋梗塞および卒中を引き起こし得る。単球は、炎症部位に集積し、アテローム硬化性プラークに入り、そこで分化して細胞およびマクロファージを形成する傾向があることが報告されている(Wollard KJ,. Geissmann F., Nar Rev Cardiol., 2010;7(2):77)。さらに、単球由来のサイトカインである、ＩＬ−６およびＴＮＦαは、アテローム硬化性患者において上昇しており (Correa CR., et al. Journal of Inflammation, 2011, 8:23)、単球のプラークへのリクルートを阻害する治療が、プラーク形成を減少させる利用可能な戦略として提示されている(Potteaux S. et al., Journal of clinical investigation, 2011;5;121, 2025-2036)。糖質コルチコイドで処理した単球は、遊走および炎症内皮細胞への接着が低下し、このことは、同時に処方した糖質コルチコイドの単球標的化リポソームが、アテローム硬化性プラークを減少させるかまたは分解するのに優れた戦略であり得ることを示唆している。
【０１０９】
リウマチ性関節炎
リウマチ性関節炎 (RA) は、関節の炎症および変形を伴う自己免疫疾患である。単球、マクロファージ、ＴおよびＢ細胞は、それらが関節の破壊に重要な役割を果たす滑膜中に集積する。ＲＡの進行についての炎症性単球の関連は、単球が多量のＴＮＦαを分泌することによりはっきりと示され、このサイトカインの遮断は、ＲＡの最も有効な処置の一つであり、次に、単球の枯渇がＲＡ患者に対して有益な効果を示し (Sanmarti R. et al., Rheumatology. 2005 Sep;44(9):1140-4)、第三に、遊走マーカーＣＣＲ１、２、３、５および９を中和することによって単球の遊走を遮断することが、ＲＡ症候の軽減に有望な戦略であることが提示されている (Schmutz C. et al., Arthritis Research & Therapy, 2010, 12:R161)。したがって、糖質コルチコイドのような免疫抑制性化合物を送達することのできるリポソームは、１)輸送受容体の下方制御を通して炎症を起こしている関節への単球の遊走を減少させ、２)例えばＴＮＦαのような炎症性サイトカインの産生を低下させるための、有望な戦略であり得る。
【０１１０】
変形性関節症
変形性関節症 (ＯＡ)は、世界中で最も一般的な関節の障害であり、社会経済的に非常に多くの影響を及ぼす。変形性関節症 (ＯＡ)は関節の炎症を伴い、ＯＡにおける炎症はＲＡにおけるそれ程重症ではない。しかし、ＯＡの関節からの単球は、ＯＡの進行に主要な役割を果たすＩＬ−１およびＴＮＦαのような炎症性サイトカインを産生する(Femandes J.C. et al., Biorheology. 2002;39(1-2):237-46)。ＩＬ-１および／またはＴＮＦαの中和は、症候を、少なくとも動物モデルにおいては低下させるように思われる(Calich AL, Clin Rheumatol. 2010 May;29(5):451-5)。したがって、糖質コルチコイドのような免疫抑制性化合物を送達することのできるリポソームは、１)遊走受容体の下方制御を通して炎症状態のＯＡ関節への単球の遊走を減少させ、２)ＩＬ−１およびＴＮＦαのような炎症性サイトカインの産生を低下させるための、有望な戦略であり得る。
【０１１１】
さらに、本発明の局面は、以下の症状または疾患の予防的もしくは治療的処置または改善における使用のためのものであり得る:クローン病、アトピー性湿疹、肺線維症、皮膚の炎症、肺胞蛋白症、ＣＯＰＤ、糖尿病、糖尿病 (diabetes mellitus)、関節炎 (リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む)、多発性硬化症、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎 (アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む)、乾癬、シェーグレン症候群に次ぐ乾性角結膜炎を含むシェーグレン症候群、円形脱毛症、節足動物咬傷応答によるアレルギー性応答、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、喘息、アレルギー性喘息、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、ハンセン病リバーサル反応、癩性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、慢性赤芽球性貧血、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎 (pepatitis)、スティーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーブス眼症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、および間質性肺線維症。
【０１１２】
さらに、本発明の局面は、(がん固形腫瘍、がんおよび感染性疾患に対するワクチン)のような、免疫刺激が好ましい症状、例えばワクチンの投与または免疫刺激を必要とするがん、感染症または疾患の症状の予防的もしくは治療的処置または改善に使用し得る。
【０１１３】
免疫寛容原性ワクチン
さらに、本発明の局面は、抗原が封入されているか、または受動的もしくは能動的なリポソーム膜中へのローディングまたはリポソーム膜への繋留のいずれかによって、単球標的化リポソームに結合している、免疫寛容原性ワクチンにおける使用のためであり得る。さらに、免疫寛容原性リポソームは、ビタミンＤ３ (１,２５-ジヒドロキシビタミンＤ３)およびレチノイン酸 (全てのｔｒａｎｓレチノイン酸および９-ｃｉｓレチノイン酸)、ヘミコハク酸ベタメタゾン、パルミチン酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、リメタゾン (Limethasone)、ヘミコハク酸メチルプレドニゾロン、パルミチン酸プレドニゾロン、およびリン酸プレドニゾロンならびにその合成または天然の類似体からなる群から選択される、１つ以上の寛容誘発性化合物を含んでいてよい。静脈内投与された該製剤は、抗原特異的な寛容を誘発する単球を誘発し、該単球は、寛容誘発性のマクロファージまたは樹状細胞に分化し得る。寛容誘発性の単球を標的としたリポソームは、自己抗原(自己免疫疾患)もしくは外来性の抗原(アレルギー)を含む免疫障害の処置または軽減または過敏性応答に使用し得る。該疾患の例としては、自己免疫性症状、例えばクローン病、アトピー性湿疹、糖尿病、関節炎、多発性硬化症、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、乾癬が挙げられる。アレルギーの処置用の免疫寛容原性ワクチンには、喘息、アレルギー性の咳、アレルギー性鼻炎および結膜炎、アトピー性湿疹、皮膚炎、薬物アレルギー、蕁麻疹(urticaria)、蕁麻疹(hives)、虫刺されアレルギー、食物性アレルギー、例えば、魚、牛乳、コムギ、ピーナッツ、リンゴ、ナッツアレルギーが含まれる。
【０１１４】
引用する全ての文献はその全体が本明細書中に包含される。
【実施例】
【０１１５】
実施例１
リポソーム製造
単層の完全に水素化したリポソームは、１-パルミトイル-２-オレオイル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスホコリン (ＰＯＰＣ)、１-パルミトイル-２-オレオイル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスホグリセロール (ＰＯＰＧ)、１,２-ジオレオイル-３-トリメチルアンモニウム-プロパン (ＤＯＴＡＰ)および１,２-ジオレオイル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスホエタノールアミン-Ｎ-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-２０００] (ＤＯＰＥ-ＰＥＧ２０００)の混合物より製造した。生物システム中のリポソームの存在を測定するための蛍光マーカーとして、０.５% １,２-ジオレオイル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスホエタノールアミン-Ｎ-ローダミン (ＤＯＰＥ-ＲｈＢ) をトレーサーとして脂質と混合した。リポソーム中の各脂質のモル比を図１Ａに示す。全ての脂質はAvanti Polar lipidsより得た。端的には、ＰＯＰＣ、ＰＯＰＧ、ＤＯＴＡＰおよびＤＯＰＥ-ＰＥＧ２０００の適切な測定量をクロロホルムに溶解した。該溶媒を、Ｎ２の穏やかな流動により除去し、脂質フィルムは、微量の溶媒を取り除くために低圧化にて一晩乾燥させた。多層状の小胞を、乾燥させた脂質を、以下を含む緩衝溶液中に分散させることにより製造した： １５０mM ＫＣＬ、１０mM ＨＥＰＥＳ (pH = ７.５)、１mM ＮａＮ３、３０μM ＣａＣｌ２および１０μM EDTA。該多層小胞は、Mayer et al., Biochim. Biophys. Acta, 858, 161-168に記載する、２つ積み重ねた１００ｎｍの孔径のポリカーボネートフィルターを通して１０回押し出した。
【０１１６】
実施例２
組成に依存するリポソームのサイズおよび表面の電荷の性質決定
図１Ａに表すように製造したリポソームは、血液中の他の細胞ではなく、単球によって認識され、取り込まれるような性質を有するリポソームをデザインすることを目的として製造した。本願発明者は、０〜５０%正味正電荷を有するリポソーム(図１Ａの製剤６〜１２)を、負またはほとんど中性の電荷の対照リポソーム(図１Ａの製剤１〜５)とともにデザインした。該リポソームは実施例１に記載するように製造し、そのサイズは、MilliQ水中、３００mM グルコース、１０mM ＨＥＰＥＳ、１mM ＣａＣｌ２からなる緩衝液(pH ７.４)中で、Brookhaven InstrumentsのZetaPALS zeta potential analyzerにて動的光散乱法によりナノメートル(nm)で測定した。該リポソームは直径が１１０〜２０nmのサイズを示した(図１Ｂ)。リポソームの表面の電荷 (ゼータ電位) をmVで測定し、表面電荷が脂質組成物に依存することを示した(図１Ｃ)。負に荷電したＰＯＰＧ (１０mol%)をリポソームに添加することにより、−１３mV (図１Ｃ、組成物１)の負の表面電荷を示した。リポソーム中の中性脂質ＰＯＰＣの含有量が高い(１００mol%)ことにより、中性の電荷が示された(図１Ｃ、組成物３)。ＤＯＴＡＰの量を１０%まで増加させる (mol% ９０:１０)ことにより、約３８mVの正味正電荷を示し(図１Ｂ、組成物８)、ＤＯＴＡＰ量が最も高い５０mol% (モルパーセント ５０:５０) では、５２mVの正味正電荷を示した (図１Ｃ、組成物１２)。
【０１１７】
実施例３
リポソーム組成に依存する、単球へのリポソーム標的化
修飾ＰＯＰＣリポソーム製剤の細胞取り込みを、リポソーム膜に取り込まれるＲｈＢの蛍光に基づいて決定した。細胞に結合したリポソーム(「取り込み」として示され、細胞膜に結合したリポソームと既に内部移行しているリポソームを含む)の総量を５３２nmにおける励起および５６４〜６０６nmにおける発光を用いて評価した。全血中の５つの異なる細胞集団におけるリポソームの取り込みを解析した。かかる異なる細胞集団の区別に、以下のマーカーを用いた: ＣＤ１４ (単球マーカー)、ＣＤ１５ (顆粒球マーカー)、ＣＤ３ (Ｔリンパ球マーカー)、ＣＤ１９ (Ｂリンパ球マーカー)およびＣＤ５６ (ＮＫ細胞マーカー)。全血は、エチレンジアミン四酢酸(EDTA、３６６４５０)を含むBD Vacutainerに標準的な方法により、健康なボランティアから得た。端的には、リポソーム製剤(図１Ａ、製剤１〜５および８) １０μlを１.５mlエッペンドルフチューブ中で、新鮮な全血２００μlに添加した。試料を回転させながら３７℃にて１時間インキュベーションした。赤血球 (RBC) をBD血清Vacutainer (３６７６１４)中で、暗所、室温(RT)にてBD Pharm lysis buffer ４mlに１５分間溶解させ、２００gにて５分間遠心分離し、Pharm lysis buffer １mlに再懸濁した。暗所、室温にて５分間インキュベーションした後、試料を２００gにて５分間遠心分離し、FACS buffer (１% ＢＳＡを補充したＰＢＳ) １mlに再懸濁し、すぐに２００gにて５分間遠心分離し、FACS buffer４００μlに再懸濁し、丸底９６ウェルプレート (Nunc)に移した。非特異的な結合を、ヒトIgGを用いて氷上で１０分間ブロッキングした後、細胞をプレコンジュゲート一次抗体またはアイソタイプ対照(表１)とともに、１００μl中で、氷上にて６０分間インキュベーションし、６００g、４℃にて５分間遠心分離し、FACS buffer ２００μl中にて２回洗浄した。細胞をFACS buffer １５０μlに再懸濁した後、フローサイトメトリー解析に付し、これは、BD FACSArray bioanalyzerにて解析した。データはBD FACSDiva Software v５.０.２により行った。染色していない細胞を陰性対照として用い、対照細胞よりも高い蛍光を示す細胞を陽性と見なした。全ての細胞集団の解析に同じゲーティングを用いた。負に荷電したリポソームおよび中性のリポソームは細胞により取り込まれなかった(図２)。アニオン性および中性のリポソームは該細胞集団のいずれにも取り込まれなかった。ＤＯＴＡＰを含むカチオン性の製剤のＣＤ１４陽性の単球への取り込みは、他の細胞集団よりも、有意に高かった(ｐ＜０.０００１)。１０mol% ＰＥＧの添加により、ＣＤ１４陽性の単球中のカチオン性リポソームの取り込みが阻害された。この結果に基づき、後の実験では２種類の製剤 (ＰＯＰＣおよびＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ)のみを使用する。
【０１１８】
実施例４
リポソームインキュベーション時間に依存する、単球へのリポソームの標的化
全血を実施例３に記載するように、健康なボランティアより得た。端的には、リポソーム製剤 (図１Ａ、製剤３および８) １０μlを、１.５ml エッペンドルフチューブ中にて、新鮮な全血２００μlに添加した。試料を回転させながら、３７℃にて５分間、１５分間および１時間インキュベーションした。赤血球 (RBC)を溶解し、細胞を、実施例３に記載するように、ＦＡＣＳ解析用に準備した。データは、BD FACSDiva Software v５.０.２により解析した。染色していない細胞を陰性対照として用い、対照細胞よりも高い蛍光を示す細胞を陽性と見なした。全ての細胞集団の解析に同じゲーティングを用いた (図３)。リポソームに１０% ＤＯＴＡＰが含まれていた場合、時間依存的な細胞取り込みの増加が観察された(図３Ｂ)。単球への取り込みは、３つのタイムポイントの全てにおいて、他の４つの細胞集団への取り込みよりも有意に多かった (p＜０.０００１)。
【０１１９】
実施例５
リポソームの電荷の性質に依存した、単球へのリポソームの標的化
正電荷の細胞取り込みへの影響を、０〜５０mol% ＤＯＴＡＰを含むリポソーム製剤を用いて試験した (図５Ａ)。実施例３に記載するように、全血を健康なボランティアより得た。端的には、リポソーム製剤 (図１Ａの製剤３および６〜１２) １０μlを、１.５ml エッペンドルフチューブ中の、新鮮な全血２００μlに添加した。試料を回転させながら３７℃にて１時間インキュベーションした。赤血球(RBC)を溶解し、細胞を、実施例３に記載するように、ＦＡＣＳ解析用に準備した。データは、BD FACSDiva Software v５.０.２により解析した。染色していない細胞を陰性対照として用い、対照細胞よりも高い蛍光を示す細胞を陽性と見なした。全ての細胞集団の解析に同じゲーティングを用いた (図５)。ＰＯＰＣからなるリポソームおよび５mol% ＤＯＴＡＰを含むリポソームは、殆どが細胞に取り込まれなかった (ＲｈＢについて陽性な細胞＜５%)。７.５〜１２.５ mol% ＤＯＴＡＰを含むリポソームは、他の細胞集団よりも高い程度でＣＤ１４陽性単球に取り込まれた (ｐ＜０.０００１)。１５mol% ＤＯＴＡＰが膜に取り込まれた場合、より多くのＣＤ１９陽性Ｂリンパ球が該製剤の取り込みを始めた。ＣＤ１４細胞は、ＣＤ１９細胞 (ｐ＜０.００１) およびその他の３つの細胞集団(p＜０.０００１)の両方よりも、ＲｈＢについて陽性の細胞が有意に多かった。２０mol% ＤＯＴＡＰにおいては、ＲｈＢ陽性細胞が、ＣＤ１４細胞と、ＣＤ１９細胞で同じ量であり、ＣＤ３、ＣＤ１５およびＣＤ５６陽性細胞では、ＲｈＢ陽性細胞はそれより有意に少なかった。５０mol% ＤＯＴＡＰでは、全ての細胞集団のうちの８５〜１００%がリポソームを取り込んだ。このことにより、血液中のＣＤ１４陽性単球を特異的に標的とするための最適なＤＯＴＡＰの含有量は、７.５〜１２.５mol%ＤＯＴＡＰであることが示される。
【０１２０】
実施例６
血液の新鮮さに依存した、単球へのリポソームの標的化
ヒト血液細胞におけるリポソームの取り込みを研究できるようにするためには、試験管内モデルを用いなければならない。新鮮な血液は、生体内の条件に最も近い可能性が高いため、全ての実験は、血液をドナーから採取してすぐに(１０分以内)、全血において行う。試験管内の条件における、この面の重要さを調べるために、血液を３７℃にて、回転させながら２時間および４時間静置した後に、リポソーム取り込み試験を行った(図６)。全血を実施例３に記載したように健康なボランティアより得た。端的には、血液を３７℃にて回転させながら０時間、２時間および４時間インキュベーションした後、リポソーム製剤１０μl (図１Ａの製剤３および８)を、１.５mlエッペンドルフチューブ中で新鮮な全血２００μlに添加した。試料を回転させながら３７℃にて１時間インキュベーションした。赤血球 (RBC)を溶解し、細胞を、実施例３に記載するように、ＦＡＣＳ解析用に準備した。データは、BD FACSDiva Software v５.０.２により解析した。染色していない細胞を陰性対照として用い、対照細胞よりも高い蛍光を示す細胞を陽性と見なした。全ての細胞集団の解析に同じゲーティングを用いた。t=０の時間において、上述したように(実施例３、製剤３および８)、ＣＤ１４陽性細胞への取り込みは、その他の４つの細胞集団と比較して、有意に高かった。２時間後では１０% ＤＯＴＡＰを取り込んだＣＤ１４陽性細胞のパーセンテージは、t=０時間におけるＣＤ１４陽性細胞と比較すると著しく低下し、同時に、ＣＤ１９陽性Ｂリンパ球が、t=０時間の時点のＣＤ１９細胞と比較して、有意に多くの細胞がリポソームを取り込んだ。t=２時間およびt=４時間の時点では、ＣＤ１４陽性細胞とＣＤ１９陽性細胞の間で、取りこみに有意な差は全くみられない。ＣＤ１４単球細胞における取り込みは、t=４時間においてさらに減少した。これらの結果から、生体内条件を模倣するためには、試験管内条件の血液が新鮮であることの重要さが示される。
【０１２１】
実施例７
単球細胞株ＴＨＰ−１に対するカチオン性リポソームの細胞毒性活性
カチオン性リポソームが細胞毒性効果を示す可能性を調べるために、毒性アッセイを行った (図７)。リポソームの細胞毒性を、図５Ａの製剤(図１Ａ、組成物３＋６、８、１０、１１、１２)を用いてヒト単球細胞株ＴＨＰ−１において測定した。リポソーム製剤(１０μl)を、１．５mlエッペンドルフチューブ中で細胞懸濁液２００μl (細胞数１０６個/ml)に添加した。該細胞を様々な濃度(０、５、５０、２５０および５００μM)のリポソームとともに、回転させながら３７℃にて１時間インキュベーションした後、新鮮な培地で２回洗浄した。ＴＨＰ−１細胞による取り込みをすぐにFACSで解析した (図７Ａ)。２４時間新鮮な培地中でインキュベーションした後、誘発されたアポトーシスを、アネキシンＶの細胞への結合の解析により測定した。アネキシンＶは、アポトーシスが誘発された直後に細胞膜の内葉から細胞表面に局在変化するホスファチジルセリンに特異的な親和性を示す(G. Koopman, et al., Blood, 84 (5): 1415-1420, Sep 1994)。細胞を９６ウェルプレート中で、５% ＣＯ２の存在下で、３７℃、加湿空気雰囲気下にて２４時間インキュベーションした。スタウロスポリン１０-６M (０.２６g/μl)を、細胞の入っている１つのウェルに添加し、アポトーシスの陽性対照として用いた。細胞を回収し、冷ＰＢＳで２回洗浄して、binding bufferで、１０６個/mlの濃度にて再懸濁した。合計量１００μlの細胞懸濁液にAnnexin V １μlを添加し、優しく混合して、室温、暗所にて１５分間インキュベーションし、直ちにＦＡＣＳにより解析した。２０mol%までのＤＯＴＡＰを含むカチオン性リポソームは、未処理の細胞と比較して、有意な細胞毒性を全く示さなかった(図７Ｂおよび７Ｃ)。５０mol% ＤＯＴＡＰにおいて、該リポソームは、高い濃度(２５０および５００μM)で存在する場合に、細胞に対して毒性を示し、これは、対照および他の製剤と比較して、アネキシンＶの結合量が有意に高くなっていることにより検出された(P＜０.００１)。リポソーム処理した細胞の生存率を解析するために、２４時間インキュベーションした後の細胞について、増殖アッセイも行った。リポソーム誘発性の細胞毒性を、細胞の、テトラゾリウム試薬２,３-ビス(２-メトキシ-４-ニトロ-５-スルホフェニル)-５-[(フェニルアミノ)カルボニル]-２Ｈ-テトラゾリウム ヒドロキシド (XTT)の水溶性ホルマザン生成物への変換能に基づいて評価した。リポソーム製剤 (１０μl)を１.５mlエッペンドルフチューブ中で細胞懸濁液２００μl (１０６個/ml) に添加した。試料を回転させながら３７℃にて１時間インキュベーションした。１ウェルあたり１０５個の細胞を培養培地１００μl中で９６ウェルタイタープレートに播種し、３７℃にて２４時間インキュベーションした。XTT標識混合物(２０μl)を添加し、細胞をさらに４時間インキュベーションした。試料の吸光度を、Infinite ２００ microplate reader (Tecan, Mannedorf, Switzerland) を用いて４５０nmにて測定し、製造者が推奨するように、６９０nmにおける吸光度を差し引いた。アネキシンV結合と同様に、５０mol%ＤＯＴＡＰを含むリポソームは、高い濃度において細胞に対して毒性であることが、変換ＸＴＴの量の低下により検出された。
【０１２２】
実施例８
動物モデルにおける単球によるリポソームの特異的な取り込みの試験
ＲｈＢ標識した、ＰＯＰＣ (１００) (陰性対照)およびＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ (９０:１０)から構成され、０,２〜０,５mol % ＤＯＰＥ-ローダミンＢおよび/またはトリチウム標識したＰＯＰＣ (１〜２mol%)を含むリポソームを、齧歯類(例えばラットまたはウサギ)の尾静脈に注入する。５分、１５分および１時間後、実施例３に記載するように、血液試料を採取し、RBCを溶解させ、様々な細胞集団におけるリポソームの取り込みをローダミンＢの検出により、ＦＡＣＳで解析する。器官、例えば、肝臓、脾臓、心臓および肺に集積するリポソームの総量を、動物を屠殺し、大量の血液試料を採取し、器官を取り、組織をホモジナイズして、これらの器官中のトリチウムの量を検出することにより解析する。免疫細胞の豊富な器官、例えば血液、肝臓および脾臓は、例えば心臓に比べて比較的高いトリチウムレベルを示すことが期待される。
【０１２３】
実施例９
敗血症の処置のための、単球標的化の治療上の効果の解析
敗血症は、細菌またはその毒性の生成物が血液により広がる、生命を脅かす可能性のある症状である。免疫系は、元来の感染からは離れた器官を損傷し得る。例えば、ともにＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ (９０:１０)からなるリポソームに、いずれも能動的に充填してよい(Avnir et al., PLoS ONE, Oct 2011, vol 6, issue 10, e25721)、リン酸デキサメタゾンまたはコハク酸メチルプレドニゾロンのような糖質コルチコイドで構成される、ＲｈＢ標識リポソームを急性炎症のラットモデルの尾静脈に注入する。実験的な敗血症の関連モデルとしては、腸管穿孔モデル(ＣＬＰ)またはＬＰＳ誘発性の実験モデルが挙げられる。好ましくは、糖質コルチコイドリポソームは、該モデルの開始日かまたはその次の日に、一度または毎日静脈内に注入する。単球抑制の効果を測定するために、特定の間隔で、血液中の炎症マーカーを測定し、典型的には、血中のＴＮＦ−αおよびＩＬ-６のようなサイトカインをモニターする。
【０１２４】
実施例１０
リステリア菌 (Listeria monocytogenes) 感染の処置のための、単球標的化の治療上の効果の解析
リステリア症は、リステリア菌 (Listeria monocytogenes)により引き起こされる深刻な感染症である。該細菌は成長し、血液細胞の細胞内で分裂する(Stavru F. et al., Immunol Rev, 240 (1): 160-184, Mar 2011)。リステリア菌は、非貪食性の種類の細胞への進入にInlAおよびIlnBを用いるため、血液の全ての種類の細胞で見られる。アンピシリンを、ＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ (９０:１０)から構成される、ＲｈＢ標識したリポソーム中に封入し、リステリア菌のラットモデルの尾静脈に注入する。肝臓、脾臓および血液から回収した、リステリア菌の生細胞の数を、リステリア菌感染の処置のための治療上有効性のパラメーターとして用いる。
【０１２５】
実施例１１
アテローム性動脈硬化の処置のための単球標的化の治療上の効果の解析
アテローム性動脈硬化は、内皮機能障害の結果として動脈壁が肥厚する症状であり、内皮下のリポ蛋白質の集積および白血球、例えば単球およびＴリンパ球の接着を引き起こす。該疾患の発達の重要な工程は、損傷内皮における単球のマクロファージへの分化ならびにそれに続く、泡沫細胞への変化を引き起こす脂質の摂取である。正常およびアテローム生成的なマウスをYamaguchi et al. (１９９３)の方法により準備する。例えば、ＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ (９０:１０)に組み込んだリン酸デキサメタゾンまたはコハク酸メチルプレドニゾロンから構成される、ＲｈＢ標識リポソームを尾静脈に注入する。アテローム生成マウスにおけるアテローム硬化性病変の形成を、大動脈のコレステロールエステル(CE)レベルをモニターすることにより調べる。
【０１２６】
実施例１２
免疫抑制性のリポソーム(非抗原特異的)を用いた関節炎の哺乳類の処置
関節炎は、ＴＮＦαおよびＩＬ−６のような炎症性サイトカインの産生、炎症細胞の関節内の存在および関節への遊走、自己抗原に反応する自己抗原抗体の存在を伴う炎症を含む関節の自己免疫症状である。関節炎の発達に関連する主要な細胞の種類はマクロファージおよび樹状細胞であり、これらは末梢から炎症状態の関節に遊走する単球から分化し、そこでさらに炎症状態を促進する。したがって、単球を標的とした免疫抑制性のリポソームを用いて末梢の単球を抑制することにより、遊走する単球は、炎症症状を活性的に促進しないマクロファージおよび樹状細胞をもたらし得る。関節炎の炎症を処置するかまたは消滅させるために、リポソームを、実施例１に記載のようにＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ (９０:１０)を用いて、両親媒性の弱酸プロドラッグであるヘミコハク酸メチルプレドニゾロン(ＭＰＳ)を遠隔充填して製造し、ここで、ＭＰＳは、Avnir et al., Arthritis & Rheumatism, vol 58, no1, 2008, pp119-129による方法に記載されているように、酢酸カルシウムの勾配を用いてリポソームに能動的に充填する。端的には、[酢酸Ca]リポソーム−[酢酸Ca]媒体の膜貫通勾配を、両親媒性の弱酸性ＧＣプロドラッグの遠隔充填の駆動力として用いる。該勾配は、膜透過性の酢酸よりも膜不透過性のCa２-イオンが過剰であることにより特徴付けられる。該リポソームにおいて、そのプロトン化(変化していない)形態におけるＭＰＳは、脂質二重層を通って拡散することにより、わずかにアルカリ性のリポソーム内の水相中に「ポンピング」により注入される。そこで、そのプロトンを失い、負に荷電して、難溶性のＭＰＳ−カルシウム塩を形成し、これは、リポソーム内部の水相で沈殿する。該リポソームはリウマチ性関節炎に罹患している患者に、等張性の緩衝液、例えば生理食塩水および／またはスクロース中にて投与される。該ＭＰＳ−リポソームは、内皮細胞による接着および取り込みを減少させるために、大きい静脈の一つにゆっくりと投与することが好ましい。ＭＰＳ−リポソームはこのように、末梢の単球と接着および結合し、該単球がＭＰＳ−リポソームを貪食する。この過程の間に、単球が関節炎の環境下に近づくと、ＭＰＳはリポソームから放出され、続く単球活性化を抑制する核糖質コルチコイド受容体をある程度活性化させる。このように、単球のマクロファージおよび樹状細胞への分化は、抑制されるかまたは表現型が免疫寛容原性になるように変えられ、単球の炎症状態の関節への遊走が減少する可能性がある。
【０１２７】
実施例１３
免疫寛容原性ワクチンの例として免疫抑制性(抗原特異性)リポソームを用いた関節炎の哺乳類の処置
自己免疫症状、例えばリウマチ性関節炎において、抗原特異的な免疫寛容原性応答を得るために、リポソームを、ほとんど実施例１２の記載と同じように製造する。しかし、該リポソームは、ＭＰＳまたは他の寛容誘発性の化合物、例えばビタミンＤ３またはレチノイド、または免疫寛容を誘発することが知られている、その強力な類似体を充填してよい。免疫抑制性化合物を充填する前に、リポソームを実施例１にしたがって製造し、リウマチ性関節炎に関連のある抗原を、該抗原の性質によって、能動または受動充填により充填する。関連する抗原としては、ＩＩ型コラーゲン、ヒト軟骨細胞糖蛋白質３９、アグレカン (プロテオグリカン由来)、熱ショック蛋白質、シトルリン化フィラグリンまたは他の関連抗原が挙げられる。該リポソームは、Copland et al., vaccine 21, 2003, pp 883-890にほとんどしたがって充填される。端的には、ＰＯＰＣおよびＤＯＴＡＰ (９０:１０)を有機溶媒中で混合し、真空下で乾燥させて薄い脂質フィルムを作製する。特定の体積、典型的には２mlの、可溶化させた抗原を含むＨＥＰＥＳ緩衝液(pH７.４)を添加し、振盪により多層膜の小胞を製造する。該リポソームを、実施例１に概説するように、押し出しにより均質化する。封入した抗原に対して抗原特異的に免疫寛容原性を特異的に示す樹状細胞へ単球を分化させる目的で、該リポソームを、リウマチ性関節炎に罹患する患者に静脈内投与する。標的化単球を、免疫寛容原性抗原特異的な樹状細胞に分化させるためには、少量の免疫刺激性化合物、例えばＬ１８-ＭＤＰまたはＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８もしくはＴＬＲ９作動薬を含むことが有利であり得る。
【０１２８】
実施例１４
免疫刺激性(非抗原特異性)のリポソームを用いたがんの哺乳類の処置
がんの処置に適当な免疫刺激性のリポソームを得るために、単球を標的化したリポソームを、例えばＰＯＰＣおよびＤＯＴＡＰ (９０:１０)を用いて、ＴＬＲ３、７、８、９またはＮＯＤ２であり得る細胞内受容体を介して作用する適当な免疫刺激性化合物を添加して製造する。この実施例において、免疫刺激性化合物ミファムルチド(Mifamurtid) (リン酸水素 ２-[(Ｎ-{(２Ｒ)-[(２-アセトアミド-２,３-ジデオキシ-Ｄ-グルコピラノース-３-イル)オキシ]-プロパノイル}-Ｌ-アラニル-Ｄ-イソグルタミニル-Ｌ-アラニル)アミノ]エチル (２Ｒ)-２,３-ビス(ヘキサデカノイルオキシ)プロピル)をＰＯＰＣおよびＤＯＴＡＰとともに製剤し、乾燥させて脂質フィルムとする。このフィルムを静脈内投与に適当な緩衝液、例えば生理食塩水およびグルコース中で水和する。該ミファムルチド (mifamurtid)−リポソームを、例えば骨肉腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫または黒色腫に罹患しているがん患者に、１〜２週間以内の間隔で静脈内投与する。単球は大部分ががん環境に遊走することが知られており、そのため、適した環境下で抗腫瘍免疫応答を亢進するのに適当である。しかし、腫瘍の発達について知られている現象の一つは、サイトカインおよび制御性Ｔ細胞のような、免疫抑制物質の産生であり、インタクトな免疫系がこれを克服することは困難であり得る。したがって、免疫応答をブーストするために、ミファムルチド-リポソームを貪食する末梢単球を刺激し、よりよい抵抗性を示し、がんおよび腫瘍領域に関連する環境を誘発する免疫寛容を克服し、それにより、ミファムルチド-リポソーム標的化単球が、抗がん免疫応答を刺激し得る。
【０１２９】
実施例１５
免疫刺激性(抗原特異的)リポソームを用いたがんの哺乳類の処置
抗原特異的な免疫応答を得るために、リポソームを実施例１４に記載されている通りに製造するが、リポソームの水和に用いる緩衝液は、がんに関連のある、関心のある抗原を含む(受動充填)。該抗原は、これに適当な方法を用いて能動的に充填してもよい。該抗原は、例えば、黒色腫の処置のためのＭＡＧＥ抗原、前立腺がんの処置のためのＰＳＡまたは第三の抗原であってよい。ミファムルチドまたはＴＬＲ３、-７、-８および-９作動薬であってよい免疫刺激性化合物とともに、単独または組合せで、該充填抗原に相当するがん患者に静脈内投与する。該リポソームは、抗原特異的な応答をブーストするために、多数回、好ましくは１〜２週間の間隔で同じ患者に投与する。
【０１３０】
実施例１６
免疫刺激性(非抗原特異的)リポソームを用いた感染症疾患(例えばリステリア菌 (Listeria monocytogenes))の哺乳類の処置
グラム陽性細菌であるリステリア菌の感染は、最も毒性のある食物由来の病原の一つであり、臨床的な感染の２０〜３０％が死を引き起こし、これはサルモネラおよびクロストリジウム・ボツリヌム (Clostridium botulinum)のどちらよりも高い致死率である。例えば、単球およびマクロファージに影響を与える細胞内病原である、リステリア菌のヒトへの感染のような感染性疾患の処置のための適当なリポソームを得るために、リポソームを例えばＰＯＰＣおよびＤＯＴＡＰ (９０:１０)を用いて製造する。リステリア症の処置のために、ペニシリン、アンピシリンまたはトリメトプリム-スルファメトキサゾールを含む３つの抗生物質のうちの一つを用いる。これらの抗生物質は、実施例１３に記載するような受動充填、または実施例１２に記載のＭＰＳの充填と同様の能動充填のいずれかによりリポソーム中に製剤する。抗生物質を充填したリポソームを等張緩衝液中で製造し、リステリア症に罹患する患者に長期間、静脈内投与する。抗生物質を充填したカチオン性リポソームは単球に接着し、貪食され、細菌が生存および分裂している、細胞内空間にて該抗生物質を放出する。このようにして、該抗生物質は細胞内の細菌を殺し、単球およびマクロファージ内でのさらなる細菌分裂を遮断し、それにより、該感染の患者へのさらなる拡散を防ぐ。
【０１３１】
実施例１７
抗原特異的な免疫刺激性リポソームを用いた感染性疾患(例えばインフルエンザウイルス)の予防のためのワクチン
例えばインフルエンザ感染のような感染性疾患の処置のために適当な抗原特異的な免疫応答を得るために、リポソームを、例えばＰＯＰＣおよびＤＯＴＡＰ (９０:１０)を用いて製造する。リポソームは実施例１３に記載するように製造するが、該リポソームの水和に用いる緩衝液は、インフルエンザウイルスのための抗原を含んでいる(受動充填)か、または、適当な勾配を用いて能動的に充填する。該抗原は、ミファムルチド (mifamurtid)またはＴＬＲ３、−７、−８および−９作動薬であってもよい免疫刺激性化合物とともに、単独または組合せで、将来のインフルエンザ感染の危険性を低下させることを望むヒトに静脈内投与する。該リポソームは、抗原特異的な免疫応答をブーストするために、多数回、好ましくは２〜３週間の間隔で同じ患者に投与する。このワクチンはまたは、皮下投与または筋肉内投与に用いてもよい。
【０１３２】
実施例１８
免疫抑制性リポソームを用いた敗血症の哺乳類の処置
敗血症は、炎症性サイトカイン、特にＴＮＦα、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６の早期の産生を伴う、生命を脅かす可能性のある全身性の炎症である。これらのサイトカインは、種々の種類の細胞、特に単球から産生される。これらの炎症性サイトカインの、単球による産生を、敗血症の発症および診断の早期に抑制することによって、炎症性サイトカイン、特に、患者の後の死亡の強力な予測因子であるＩＬ−６の産生を低下させ得る。したがって、単球を標的化した免疫抑制性のリポソームは、単球を標的とし、その免疫活性化を低下させることにより、敗血症の患者に強い影響を与える。
【０１３３】
単球の活性化および全身性の炎症を処置または消滅させるために、リポソームを実施例１に記載するように、ＰＯＰＣ:ＤＯＴＡＰ (９０:１０)を用いて製造し、例えば、実施例１２に概説するようにヘミコハク酸メチルプレドニゾロンを遠隔充填する。
【０１３４】
該リポソームは、診断の段階で(典型的には入院時またはその直後)、敗血症に罹患している患者に投与する。該ＭＰＳ-リポソームは、内皮細胞による接着および取り込みを減少させるために、好ましくは大きい静脈の一つにゆっくりと投与する。該ＭＰＳ-リポソームはこのように、末梢単球に接着して結合し、該単球はＭＰＳ−リポソームを貪食する。この過程の間に、ＭＰＳはリポソームから放出され、単球のさらなる活性化を抑制する。該患者は全身のＩＬ−６レベルをモニターし、ＩＬ−６レベルが５００〜１０００ pg/mlを超えている場合、ＭＰＳ−リポソームでさらに処置してよい。
【０１３５】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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