(57)【要約】  本出願は、ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の、薬物療法での併用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を含む組成物であって、
増殖性疾患の予防または治療での使用のための、
組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、
ＨＢ−ＥＧＦおよび／またはＥＧＦＲの発現と関連する過剰増殖性疾患の予防または治療での使用のための、
組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物であって、
前記過剰増殖性疾患は、乱れた、例えば病理学的に亢進した、増殖因子受容体の活性化と関連またはこれに伴うことを特徴とする、
組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の組成物であって、
前記の病理学的に亢進した増殖因子受容体の活性化は、Ｇタンパク質および／またはＧタンパク質共役受容体の活性の病理学的増大に関連または起因することを特徴とする、
組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物であって、
がんの予防または治療のためのものである、
組成物。
【請求項６】
請求項５に記載の組成物であって、
ＨＢ−ＥＧＦおよび／またはＥＧＦＲを発現または過剰発現するがんの予防または治療のためのものである、
組成物。
【請求項７】
請求項５または６に記載の組成物であって、
前記がんが、非小細胞肺がん、膵がん、乳がん、胃腸がん、前立腺がん、卵巣がん、胃がん、子宮内膜がん、唾液腺がん、肺がん、腎臓がん、大腸がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、膀胱がん、グリオーマ、メラノーマ、がん腫、特に上皮がん腫または扁平上皮がん腫および肝細胞がん腫、からなる群から選択されることを特徴とする、
組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤がエルロチニブまたはゲフィチニブであることを特徴とする、
組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、またはそれらの抗体フラグメントであることを特徴とする、
組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の組成物であって、
前記抗体フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、または単鎖抗体分子であることを特徴とする、
組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質がヒト抗体であることを特徴とする、
組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質がモノクローナル抗体であることを特徴とする、
組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型またはＩｇＧ４型であることを特徴とする、
組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質が、エフェクター基に結合していることを特徴とする、
組成物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の組成物であって、
前記エフェクター基が、放射性同位体、放射性核種、毒素、治療基、または化学療法基であることを特徴とする、
組成物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の組成物であって、
前記治療基または化学療法基が、カリケアマイシン、オーリスタチン−ＰＥ、ゲルダナマイシン、メイタンシン（ｍａｙｔａｎａｓｉｎｅ）、またはそれらの誘導体であることを特徴とする、
組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質は、以下：
Ａ）以下からなる群から選択される、１つまたは複数の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）：
（ｉ）配列番号９６〜１２４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１；
（ｉｉ）配列番号１２５〜１４０からなる群から選択されるＣＤＲＬ２；
（ｉｉｉ）配列番号１４１〜１８１からなる群から選択されるＣＤＲＬ３；および
（ｉｖ）１または複数で４以下の、アミノ酸置換、アミノ酸の欠失または挿入を含む、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のＣＤＲＬ；および／または
Ｂ）以下からなる群から選択される、１つまたは複数の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）：
（ｉ）配列番号１８２〜２０６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１；
（ｉｉ）配列番号２０７〜２３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ２；
（ｉｉｉ）配列番号２３９〜２７９からなる群から選択されるＣＤＲＨ３；および
（ｉｖ）１または複数で４以下の、アミノ酸置換、アミノ酸の欠失または挿入を含む、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のＣＤＲＨ
を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１８】
請求項１７に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質は、Ａ）のＣＤＲＬを少なくとも２つ、および／または、Ｂ）のＣＤＲＨを少なくとも２つ含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項１９】
請求項１７または１８に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質は、以下：
Ａ）配列番号９６〜１２４のＣＤＲＬ１、配列番号１２５〜１４０のＣＤＲＬ２、および、配列番号１４１〜１８１のＣＤＲＬ３、および／または、
Ｂ）配列番号１８２〜２０６のＣＤＲＨ１、配列番号２０７〜２３８のＣＤＲＨ２、および配列番号２３９〜２７９のＣＤＲＨ３
を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項２０】
請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質は、以下：
Ａ）以下からなる群から選択される、１つまたは複数のＣＤＲＬ：
（ｉ）配列番号９６〜１２４と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＬ１；
（ｉｉ）配列番号１２５〜１４０と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＬ２；および
（ｉｉｉ）配列番号１４１〜１８１と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＬ３；
Ｂ）以下からなる群から選択される、１つまたは複数のＣＤＲＨ：
（ｉ）配列番号１８２〜２０６と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＨ１；
（ｉｉ）配列番号２０７〜２３８と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＨ２；および
（ｉｉｉ）配列番号２３９〜２７９と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＨ３；または
Ｃ）１つまたは複数のＡ）の軽鎖ＣＤＲＬ、および、１つまたは複数のＢ）の重鎖ＣＤＲＨ）
を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項２１】
請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の組成物であって、
前記抗原結合タンパク質は、配列番号３〜５０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）、および／または、配列番号５１〜９５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含むことを特徴とする、
組成物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の組成物であって、
前記ＶＬは、配列番号３〜５０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列相同性を有し、および／または、前記ＶＨは、配列番号５１〜９５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列相同性を有することを特徴とする、
組成物。
【請求項２３】
請求項２１に記載の組成物であって、
前記ＶＬは配列番号３〜５０からなる群から選択されて、および／または、前記ＶＨは、配列番号５１〜９５からなる群から選択されることを特徴とする、
組成物。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれか一項で定義されるＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を含む医薬組成物であって、
場合により、１つまたは複数の薬学的に許容できる添加剤と併用する、
医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の、薬物療法での併用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト上皮増殖因子受容体（ＨＥＲ）ファミリーは、ＨＥＲ１（またはｅｒｂＢ１）、ＨＥＲ２（またはｅｒｂＢ２）、ＨＥＲ３（またはｅｒｂＢ３）、およびＨＥＲ４（またはｅｒｂＢ４）と呼ばれる、４つの異なる受容体チロシンキナーゼを含む。また、ＨＥＲ１は、一般に、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）とも呼ばれる。ＨＥＲ３を除いて、これらの受容体は、ホスホアクセプター標的特異性の内因性タンパク質チロシンキナーゼ活性を有する。ＨＥＲファミリーのメンバーは、上皮細胞の大部分および多くの異なる腫瘍細胞種で発現している。例えば、ＨＥＲファミリーの受容体は、上皮起源および間葉起源の腫瘍細胞で発現している。さらに、ＨＥＲ受容体チロシンキナーゼは、細胞増殖および血管新生に関与し、がんなどの疾患と関連する。例えば、ＥＧＦＲは、乳がん、肝臓がん、腎臓がん、白血病、気管支がん、膵がんおよび胃腸がん、例えば大腸がん、直腸がんまたは胃がんにおいて、しばしば過剰発現され、または異常に活性化される。高レベルのＥＧＦ受容体もまた、予後不良および治療に対する反応と相関する（Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ６５：１１８−１２１）。したがって、これらのキナーゼからキナーゼへのシグナル伝達の破壊は、抗増殖効果、すなわち、多くのがんおよび腫瘍細胞種に対する治療効果を有する。
【０００３】
受容体チロシンキナーゼの酵素活性は、過剰発現および／またはリガンド仲介の二量体化により刺激することができる（Ｈｅｌｄｉｎ，１９９５，ｃｅｌｌ  ８０：２１３−２２３）。受容体のホモ二量体およびヘテロ二量体の活性化は、受容体上のチロシン残基のリン酸化をもたらし、細胞内タンパク質を含む他の分子のチロシン残基を次々にリン酸化する（Ｕｌｌｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｃｅｌｌ  ６１：２０３−２１２）。この後には、例えば、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）（Ｄｈｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２６：３２７９−３２９０）およびホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３キナーゼ）を含む、細胞内シグナリングパスウェイの活性化が続く。これらのパスウェイの活性化は、細胞増殖を増大してアポトーシスを阻害することが示されている一方で、小分子阻害剤またはモノクローナル抗体のいずれかによる、ＨＥＲファミリーメンバーにより仲介されるシグナリングの阻害は、細胞増殖を阻害してアポトーシスを促進することが示されている（Ｐｒｅｎｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  ８：１１−３１）。
【０００４】
ヘパリン結合上皮増殖因子様増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）は、２２ｋＤａのＯ−グリコシル化タンパク質である（Ｈｉｇａｈｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６７：６２０５−６２１２）。その成熟型では、ＨＢ−ＥＧＦは、ＥＧＦ受容体およびＨＥＲ４に結合して活性化する（Ｅｌｅｎｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，ＥＭＢＯ  １６：１２６８−１２７８）。ＨＢ−ＥＧＦは、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）が誘導する、三重膜通過シグナリング（ＴＭＰＳ）と呼ばれるプロセスを介した細胞増殖の、重要なメディエータ―である（Ｐｒｅｎｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ  ４０２：８８４−８８８，Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１：１２０３−１２０８においてレビュー）。ＨＢ−ＥＧＦは、細胞増殖および血管新生を促進することが示されている（Ｚｕｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ７３：９１７−９２３；Ａｂｒａｍｏｖｉｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＦＥＢＳ  ｌｅｔｔｅｒｓ  ４２５：４４１−４４７）。また、ＨＢ−ＥＧＦは、多くのがんにおいて重要な役割を果たすことが示されていて、すなわち、卵巣腫瘍の侵襲的な挙動（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｂｅｈａｖｉｏｒ）に関連付けられている（Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：４７８３−４７９２）。さらに、ＨＢ−ＥＧＦは、卵巣がん細胞株による異種移植片の腫瘍形成に必須である。ＨＢ−ＥＧＦ（野生型または分泌型）の過剰発現は、ＳＫＯＶ３およびＲＭＧ−１細胞での腫瘍形成を加速する。さらに、ｓｉＲＮＡを用いた内因性ＨＢ−ＥＧＦのノックダウンは、ＳＫＯＶ３およびＲＭＧ−１細胞による腫瘍形成を消滅または遅延させた。Ｍｉｙａｍｏｔｏ，２００４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：５７２０。上記の証拠により示唆されるように、ＨＢ−ＥＧＦの発現または活性の阻害は、腫瘍形成を阻害し得る。
【０００５】
同様に、ＨＢ−ＥＧＦは、ヒト膀胱がんを含む一部のがんにおける、予後不良のマーカーである（Ｔｈｏｇｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：６２２７−６２３３）。インビトロ試験は、ＨＢ−ＥＧＦ（野生型、可溶性のまたは非切断の）を発現するように改変されたヒトＥＪ膀胱細胞は、増殖、足場非依存性増殖、およびＶＥＧＦ産生が増大し、遊走が亢進することを示す。これらのＨＢ−ＥＧＦ発現ＥＪ膀胱細胞がヌードマウス内に移植されると、腫瘍の形成、サイズおよび血管密度が増大することが、これらの腫瘍において観察された（Ｏｎｇｕｓａｈａ，２００４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：５２８３−５２９０）。
【０００６】
ＷＯ２００９／０４０１３４は、ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質を開示する。開示のタンパク質は、ＨＢ−ＥＧＦ、特にヒトＨＢ−ＥＧＦの様々なエピトープに結合することが示されている。ＷＯ２００９／０４０１３４に示されるように、ＨＢ−ＥＧＦがその同種受容体に結合する能力は減少または阻害される。結果として、抗原結合タンパク質は、ＨＢ−ＥＧＦの活性を阻害することが可能である。さらに、ＷＯ２００９／０４０１３４は、様々なタイプのがんを含む増殖性疾患の診断および治療への、抗原結合特性の利用を示唆する。
【０００７】
ＨＢ−ＥＧＦは様々な腫瘍細胞により産生され、自己分泌腫瘍増殖因子として作用する。Ｄａｖｉｓ−Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ．３：２８８−２９９；Ｉｗａｍｏｔｏ&Ｍｅｋａｄａ，２０００，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．１１：３３５−３４４。ＨＢ−ＥＧＦは、ＨＢ−ＥＧＦの生物学的活性を高めることのできるヘパリンに対して、強い親和力を有する。ＨＢ−ＥＧＦは、膜貫通タンパク質として産生されて、メタロプロテイナーゼによりタンパク分解的に切断されて、増殖因子の成熟可溶型を生じさせる。
【０００８】
ＨＢ−ＥＧＦは、最初に、培養ヒトマクロファージの上清から可溶性の分泌型で同定された。ヒト細胞では、前駆体ｐｒｏＨＢ−ＥＧＦは、ジフテリア毒素受容体として作用する。上皮細胞、ケラチノサイト、単球、メサンギウム細胞、リンパ系細胞、および骨格筋細胞を含む様々な細胞種は、ＨＢ−ＥＧＦを産生する。それは、上皮細胞、線維芽細胞、平滑筋細胞および様々なヒトがん細胞のための強力な分裂促進因子および遊走因子である。
【０００９】
ＨＢ−ＥＧＦの膜貫通型は、ＥＧＦドメイン、ヘパリン結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインを含む２０８アミノ酸膜貫通前駆体（ｔｍ−ＨＢ−ＥＧＦ）として、多くの細胞腫により合成される。細胞外ドメインは、１２〜２２ｋＤａの可溶型ＨＢ−ＥＧＦ（ｓｏｌ−ＨＢ−ＥＧＦ）として、メタロプロテイナーゼの作用を介して放出され得て、異なるＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）または腫瘍プロモーター、例えばテトラデカノイルホルボールアセテート（ＴＰＡ）により制御される。典型的に、相当量の膜貫通ＨＢ−ＥＧＦ前駆体が、細胞表面上に切断されずに残る。
【００１０】
ｔｍ−ＨＢ−ＥＧＦおよびｓｏｌ−ＨＢ−ＥＧＦはいずれも、生物学的に活性である。ｓｏｌ−ＨＢ−ＥＧＦおよびｔｍ−ＨＢ−ＥＧＦの生物学的機能は、いずれも、ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ；ＨＥＲ１）およびＥｒｂＢ４（ＨＥＲ４）により仲介される。これらの受容体のこれらのタイプの活性化は、結果として、リガンド誘導性の受容体ホモまたはヘテロ二量体化を生じると考えられている。活性化されると、ＥＧＦ受容体は、細胞増殖を増大させ、細胞運動を増大させ、アポトーシスを阻害して、細胞の形質転換を増大させることが示されている。
【００１１】
ＥＧＦＲ依存的シグナリングパスウェイは、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）が刺激されると転写活性化され得る。ＧＰＣＲとの相互作用によるリガンドのヘテロ三量体Ｇタンパク質活性化は、膜貫通メタロプロテイナーゼの細胞外活性を誘導する細胞内シグナルをもたらす。ＧＰＣＲパスウェイを活性化するリガンドは、ＬＰＡ（リゾホスファチジン酸）、トロンビン、カルバコール、ボンベシン、およびエンドセリンを含む。このような活性化は、膜貫通増殖因子前駆体の細胞外プロセッシングおよび成熟因子の放出につながり、直接的またはプロテオグリカンマトリックスを介してＥＧＦＲの外部ドメインと相互作用し、チロシンリン酸化を介してそれを活性化する。Ｐｒｅｎｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ  ４０２：８８４−８８８参照。したがって、ＨＢ−ＥＧＦは、ＧＰＣＲが膜結合型メタロプロテイナーゼを活性化する三重膜通過シグナル（ＴＭＰＳ）メカニズムの構成要素であり、ｐｒｏＨＢ−ＥＧＦを切断して可溶性増殖因子を放出し、続いてＥＧＦ受容体を活性化する。ＥＧＦＲトランス活性化は、様々な病状、例えば心臓肥大（Ｓｈａｈ  ＢＨ，Ｃａｔｔ  ＫＪ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．２００３  Ｍａｙ；２４（５）：２３９−２４４にてレビュー）、血管再構築（Ｅｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ．２００３  Ｄｅｃ；３１（Ｐｔ  ６）：１１９８−２０２にてレビュー）およびがん（Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，上記にてレビュー）と関連している。
【００１２】
ＨＢ−ＥＧＦタンパク質およびこれらのタンパク質をコードする核酸の配列は、当業者に利用可能である。例えば、そのようなＨＢ−ＥＧＦ配列は、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／参照）により提供されるデータベースで見出すことができる。ＨＢ−ＥＧＦの配列の一例は、ＮＣＢＩアクセッションナンバーＮＭ  ００１９４５およびＮＰ＿００１９３６（ｇｉ：４５０３４１３）におけるアミノ酸配列である。
【００１３】
ＨＢ−ＥＧＦは、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）と相互作用して、これを活性化する。ＥＧＦＲは、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通領域およびチロシンキナーゼ活性を有する細胞内ドメインからなる、１７０ｋＤａの膜貫通糖タンパク質である。ＥＧＦＲへの増殖因子の結合は、リガンド−受容体の複合体の内部移行、受容体および他のタンパク質基質の自己リン酸化をもたらし、最終的に、ＤＮＡ合成および細胞分裂に導く。外部リガンド結合ドメインは、ＨＢ−ＥＧＦによって刺激されるだけでなく、ＥＧＦ、ＴＧＦαおよびアンフィレギュリン（ＡＲ）によっても刺激される。
【００１４】
ＥＧＦＲの過剰発現は、しばしばＥＧＦ様増殖因子の共発現を伴い、増殖制御のための自己分泌パスウェイが腫瘍の進行において大きな役割を果たし得ることを示唆する。これは、腫瘍細胞が正常な生理学的制御を逃れることのできるメカニズムであると、現在広く考えられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本出願の目的は、増殖性疾患、特にがんの、より効果的な治療を提供することであった。本発明者らは、驚くべきことに、高いＨＢ−ＥＧＦ発現を示す様々なタイプの増殖性疾患が、同時にＥＧＦＲも発現することを見いだした。高いＥＧＦＲリガンド濃度、例えばＨＢ−ＥＧＦは、ヒト上皮増殖因子受容体の効果を回避できることが、これまでに示されている（ＨＥＲファミリー標的剤）（Ｒｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；Ｍｏｎｔｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００１６】
最近になって、セツキシマブ単剤療法中のＥＧＦ様リガンドの上方制御が、ＥＧＦＲ阻害を助けることが示唆されている（Ｔａｂｅｒｎｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。同様に、異なる抗ＨＥＲ治療を組み合わせることが、反応を亢進させて腫瘍での獲得耐性を克服することが示されている（Ｓｔｏｒｎｉｏｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ＨＥＲおよびＥＧＦのファミリーメンバー間の機能的協調が、抗ＨＥＲ治療に対する獲得耐性において重要な役割を果たすと考えられる（Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｍｏｔｏｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
これらの見解から始まり、本発明の発明者らは、増殖性疾患を治療するための新規の方法を開発した。本発明者らは、ＨＢ−ＥＧＦおよびＥＧＦＲを組み合わせによる阻害が、これらの適応症に用いられ得ることを見いだした。
【００１８】
したがって、本発明の第一実施態様は、増殖性疾患の予防または治療での使用のための、ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を含む組成物である。特に、前記組成物は、ＨＢ−ＥＧＦおよび／またはＥＧＦＲの発現と関連する過剰増殖性疾患の予防または治療での使用に適切である。特に、ＨＢ−ＥＧＦおよびＥＧＦＲの両方の発現と関連する過剰増殖性疾患の治療において有利であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】コントロール、Ｕ２−３９での単剤療法、およびＵ２−３９とエルロチニブでの併用療法について観察した腫瘍増殖の比較。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の組合せは、増殖性疾患、特に腫瘍、および、細胞増殖、血管新生および転移性がんの拡大と進行に関連する細胞遊走を制御するシグナリング事象を含む、他のがんの状態の、進行における様々なステップを攻撃する。このような多面的相互作用は、がんが進行するプロセスを制御および阻害するのに非常に有益である。さらに、任意の進行ステージにおけるがん（例えば、原発性がん、転移がん、および再発がん）を治療することができる。
【００２１】
例えば、特許請求の範囲に記載の組成物により治療することができるがんは、哺乳類の固形腫瘍および血液系悪性腫瘍を含む。哺乳類の固形腫瘍は小児がんなど、例えば、胚細胞腫瘍、軟組織肉腫、原発性脳腫瘍、神経芽細胞腫、腎芽腫およびがん腫、特に扁平上皮がん腫および上皮がん腫を含む。また、哺乳類の固形腫瘍は成人のがんなど、例えば、起源不明の腫瘍、成人原発性脳腫瘍、脳下垂体腫瘍、唇がん、口腔がん、鼻咽頭がん、喉頭がん、上顎洞がん、篩骨洞がん、唾液腺がん、甲状腺がん（副甲状腺がんおよびカルチノイドを含む）、食道がん、胃がん、膵臓がん、小腸がん、大腸がん、直腸がん、肛門管がん、肝臓がん、胆嚢がん、肝外胆管がん、ファーター膨大部の腫瘍、カルチノイド、胃腸肝臓系の内分泌腫瘍、褐色細胞腫および傍神経節腫、副腎がん、肺がん、胸膜がん、縦隔がん、胸腺がん、骨および軟組織の腫瘍、唇、眼瞼、外耳、他の顔の不特定部位、頭皮および首、胴体、上肢および肩、下肢および腰、外陰部、陰茎、陰嚢の皮膚腫瘍、乳がん、外陰部、膣、子宮頚部、子宮体部、卵巣、卵管の婦人科腫瘍、妊娠性および絨毛性腫瘍、陰茎、前立腺、精巣、腎臓、腎盂および尿管、膀胱、尿道、眼瞼、結膜、ブドウ膜、網膜、眼窩および涙腺の眼科的腫瘍を含んでよい。血液系悪性腫瘍は、小児期の、例えば、白血病およびリンパ腫、急性および慢性の白血病（ＡＭＬ、ＡＮＬＬ、ＡＬＬ、ＣＭＬ、ＭＤＳ）、ホジキン病、Ｂ細胞、Ｔ細胞、大細胞、小胞、リンパ性起源および皮膚性起源の無痛性／低度、侵襲性／高度のリンパ腫、形質細胞腫瘍およびＡＩＤＳと関連するがんを含む。
【００２２】
加えて、また、本明細書に記載の組成物は、例えば、腺腫、腺管繊毛腺腫、絨毛腺腫、血管線維腫、非定型に増殖する粘液性腫瘍、ブレンナー腫瘍、カルチノイド、海綿状血管腫、細胞性平滑筋腫、血管腫（ｃｈｏｒａｎｇｉｏｍａ）、先天性中胚葉性腎腫、粘液性嚢胞腺腫、漿液性嚢腺腫、類皮腫、類腱腫、線維腺腫、維腺腫、莢膜線維腫（ｆｉｂｒｏｔｈｅｃｏｍａ）、小胞状腺腫、神経節細胞腫、巨細胞腫、顆粒細胞腫瘍、顆粒膜細胞腫、血管腫、管内乳頭腫、膵島細胞腫、平滑筋腫、脂肪腫、黄体腫、髄膜腫、ほくろ、骨髄脂肪腫、粘液腫、神経線維腫、母斑、骨軟骨腫、褐色細胞腫、ポリポーシス、神経鞘腫、漿液性嚢腺腫、卵巣甲状腺腫、滑膜軟骨腫、良性胸腺腫を含む、がんの状態または腫瘍性障害を治療するために用いてもよい。
【００２３】
本明細書に記載の組成物で治療することができるがんタイプのさらなる例は、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｏｒｇ）、または、Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１２ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｉｎｃ．に見ることができる。
【００２４】
したがって、本明細書に記載の組成物は、がん、がんの状態、腫瘍増殖、がん細胞転移、血管新生のプロセスおよび／または腫瘍性障害を、治療および／または予防するために用いることができる。したがって、これらの組成物は、対象でのがんを治療または予防する方法であって、当該対象に、ＨＢ−ＥＧＦに結合する１つまたは複数の抗原結合タンパク質、および、１つまたは複数のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を含む、有効量の組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【００２５】
固形腫瘍疾患の大部分は、腫瘍血管新生：増殖因子（すなわちＶＥＧＦ）および他の因子（すなわちＨＢ−ＥＧＦ）により仲介される腫瘍組織での（異常な）血管の過剰増殖、によってしばしば特徴付けられる。ＨＢ−ＥＧＦ特異的抗原結合タンパク質を介したＨＢ−ＥＧＦの標的化は、新しい血管の形成を防ぐことができ、したがって、存在する腫瘍の拡大および新しい腫瘍への拡大（すなわち転移）を制限する。
【００２６】
分裂促進的および侵襲誘導的リガンドとしてのその役割の他に、様々な研究が、がんでの血管新生プロセスの重要なレギュレーターとしてのＨＢ−ＥＧＦ像を実証している。したがって、本明細書に記載の組成物は、血管新生に関連または起因する疾患、例えば、がん性または非がん性疾患を治療するために用いることができる。
【００２７】
さらなる態様では、本明細書に記載の組成物は、乱れた、例えば病理学的に亢進した、増殖因子受容体の活性化と関連またはこれに伴う障害を治療するために用いることができる。別の態様では、この亢進された増殖因子受容体の活性化は、Ｇタンパク質および／またはＧタンパク質共役受容体の活性の病理学的増大に関連または起因し得る。乱れた、例えば病理学的に亢進した、増殖因子受容体の活性化と関連またはこれに伴う障害、および、Ｇタンパク質および／またはＧタンパク質共役受容体の活性の病理学的増大に関連または起因する障害が、Ｇタンパク質共役受容体を介した増殖因子受容体のトランス活性化が起こる増殖因子受容体の活性化の亢進された活性により特徴付けられる他の障害から区別され得ることは、注目すべきである。
【００２８】
本発明の最も好ましい実施態様によれば、ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を含む組成物は、ＨＢ−ＥＧＦおよびＥＧＦＲを発現または過剰発現するがんの予防または治療のために用いられる。前記のがんは、非小細胞肺がん、膵がん、乳がん、胃腸がん、前立腺がん、卵巣がん、胃がん、子宮内膜がん、唾液腺がん、肺がん、腎臓がん、大腸がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、膀胱がん、グリオーマ、メラノーマ、がん腫、特に上皮がん腫または扁平上皮がん腫および肝細胞がん腫の群から特に選択してよい。
【００２９】
本出願の発明者らは、彼らの研究の間に、驚くべきことに、ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質とエルロチニブの組合せについて、相乗効果が示され得ることを見いだした。この特定の組合せについて見ることのできる相乗効果は、全ての予想を超えていた。結果は、他のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との組合せの結果よりもはるかに良い。エルロチニブは、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼを特異的に標的とするＥＧＦＲ阻害剤である。それは、受容体のアデノシントリホスフェート（ＡＴＰ）結合部位に可逆的に結合する。ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質とゲフィチニブの組合せについても良い結果が得られた。
【００３０】
本明細書に記載の組成物に用いるための、ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質は、好ましくは抗体またはそのフラグメント、特に、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異的抗体またはそのフラグメントである。フラグメントは、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディまたは単鎖抗体分子であってよい。
【００３１】
好ましくは、抗原結合タンパク質は、ヒト抗体またはヒト化抗体である。これらのヒトまたはヒト化抗体の投与は、負の副作用の可能性を減らす。さらに、これらの抗体はインビボで安定であり、例えば、それらは通常のヒト産物として認識されるので、それにより、免疫系応答のリスクを最小限化する。さらに、これらの抗体はタンパク質分解による破壊を起こしにくく、それらの循環半減期を改善する。それ故に、本明細書に記載の組成物は、ヒトでの投与が比較的低頻度になるように、インビボで卓越した半減期を有する。このような持続時間の長い作用は、例えば皮下または筋肉内注入などの代替の非経口経路による、低頻度かつ、より便利な投与スケジュールを可能にし得る。
【００３２】
本明細書に記載の組成物での使用には、モノクローナル抗体が好ましい。原理的には、抗体は、好ましいＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型またはＩｇＧ４型での任意のタイプであってよい。
【００３３】
特に、ＷＯ２００９／０４０１３４に記載の抗原結合タンパク質を、ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質として用いてよい。
【００３４】
分離される抗原結合タンパク質は、好ましくは、その相補性決定領域領域（ＣＤＲ）の観点から特徴付けられる。本発明の好ましい実施態様によれば、抗原結合タンパク質は、以下を含む：
Ａ）以下からなる群から選択される、１つまたは複数の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）：
（ｉ）配列番号９６〜１２４からなる群から選択されるＣＤＲＬ１；
（ｉｉ）配列番号１２５〜１４０からなる群から選択されるＣＤＲＬ２；
（ｉｉｉ）配列番号１４１〜１８１からなる群から選択されるＣＤＲＬ３；および
（ｉｖ）１または複数で４以下の、アミノ酸置換、アミノ酸の欠失または挿入を含む、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のＣＤＲＬ；および／または
Ｂ）以下からなる群から選択される、１つまたは複数の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）：
（ｉ）配列番号１８２〜２０６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１；
（ｉｉ）配列番号２０７〜２３８からなる群から選択されるＣＤＲＨ２；
（ｉｉｉ）配列番号２３９〜２７９からなる群から選択されるＣＤＲＨ３；および
（ｉｖ）１または複数で４以下の、アミノ酸置換、アミノ酸の欠失または挿入を含む、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のＣＤＲＨ。
【００３５】
好ましくは、抗原結合タンパク質は、Ａ）のＣＤＲＬを少なくとも２つ、および／または、Ｂ）のＣＤＲＨを少なくとも２つ含む。
【００３６】
特に好ましい実施態様では、抗原結合タンパク質は、以下を含む：
Ａ）配列番号９６〜１２４のＣＤＲＬ１、配列番号１２５〜１４０のＣＤＲＬ２、および、配列番号１４１〜１８１のＣＤＲＬ３、および／または
Ｂ）配列番号１８２〜２０６のＣＤＲＨ１、配列番号２０７〜２３８のＣＤＲＨ２、および、配列番号２３９〜２７９のＣＤＲＨ３。
【００３７】
あるいは、以下を含む抗原結合タンパク質を用いることも可能である。
Ａ）以下からなる群から選択される、１つまたは複数のＣＤＲＬ：
（ｉ）配列番号９６〜１２４と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＬ１；
（ｉｉ）配列番号１２５〜１４０と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＬ２；および
（ｉｉｉ）配列番号１４１〜１８１と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＬ３；
Ｂ）以下からなる群から選択される、１つまたは複数のＣＤＲＨ：
（ｉ）配列番号１８２〜２０６と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＨ１；
（ｉｉ）配列番号２０７〜２３８と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＨ２；および
（ｉｉｉ）配列番号２３９〜２７９と少なくとも９０％の配列相同性を有するＣＤＲＨ３；または
Ｃ）１つまたは複数のＡ）の軽鎖ＣＤＲＬ、および、１つまたは複数のＢ）の重鎖ＣＤＲＨ。
【００３８】
ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質を特徴付ける別の可能性は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域（ＶＬおよびＶＨ）によるものである。好ましくは、抗原結合タンパク質は、配列番号３〜５０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）、および／または、配列番号５１〜９５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。より高い配列相同性が、さらにより好ましい。例えば、ＨＢ−ＥＧＦＲに結合する好ましい抗原結合タンパク質は、配列番号３〜５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列相同性を有するＶＬ、および／または、配列番号５１〜９５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列相同性を有するＶＨを含む。最も好ましくは、ＶＬは、配列番号３〜５０からなる群から選択され、および／または、ＶＨは、配列番号５１〜９５からなる群から選択される。
【００３９】
本発明の好ましい実施態様によれば、ＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質は、エフェクター基に結合している。エフェクター基の例は、放射性同位体、放射性核種、毒素、治療基（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｇｒｏｕｐ）または化学療法基（ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｇｒｏｕｐ）である。治療基または化学療法基は、例えば、カリケアマイシン、オーリスタチン−ＰＥ、ゲルダナマイシン、メイタンシン（ｍａｙｔａｎａｓｉｎｅ）またはそれらの誘導体であってよい。
【００４０】
また、本発明の目的物は、上記のＨＢ−ＥＧＦに結合する抗原結合タンパク質およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の組合せを含む、医薬組成物である。治療組成物は、通常、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、流体力学（ｈｙｄｒｏｄｅｒｍｉｃ）注射針により刺すことができる、ストッパーなどの製剤回収が可能なアダプターを有する、静脈注射溶液バッグまたはバイアル内に入れられる。
【００４１】
組成物の投与経路は、公知の方法、例えば、静脈内、皮下、皮内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼球内、動脈内、髄腔内、膀胱内、空洞内、吸入、病巣内経路による、または後述の徐放システムによる、注射または注入に従う。一部の実施態様では、本明細書に記載の組成物は、注入により、またはボーラス注射により、連続的に投与される。
【００４２】
本明細書に記載の組成物は、薬学的に許容できる担体との混合物で調製してよい。この治療組成物は、静脈内または鼻または肺を通じて、好ましくは液体または粉末エアゾール（凍結乾燥）として、投与することができる。また、組成物は、所望のとおりに非経口的または皮下に投与してよい。全身的に投与される場合は、治療組成物は、滅菌されて、発熱物質フリーで、生理的に許容できるｐＨ値、等張性、および安定性を考慮した非経口的に許容できる溶液中にしなければならない。これらの条件は当業者に知られている。手短には、本明細書に記載の化合物の投与製剤は、保管または投与のために、所望の純度を有する化合物を、生理的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤とともに混合することにより調製される。このような物質は、用いられる用量および濃度ではレシピエントに対して非毒性であり、バッファー、例えばｔｒｉｓ  ＨＣｌ、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩および他の有機酸塩；抗酸化物質、例えばアスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満）ペプチド、例えばポリアルギニン、タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリジノン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、またはアルギニン；単糖類、二糖類、および、セルロースまたはその誘導体、グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトールまたはソルビトール；対イオン、例えばナトリウム、および／または、非イオン性界面活性剤、例えばツイーン、プルロニックまたはポリエチレングリコールを含む。
【００４３】
注射用の滅菌組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  （２０ｔｈ  ｅｄ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ&Ｗｉｌｋｅｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（２００３））に記載の従来の調剤プラクティスに従って製剤化することができる。例えば、水、または、ごま油、落花生油、または綿実油のような天然由来植物油などのビヒクル、または、オレイン酸エチルなどのような合成脂肪ビヒクル中の、活性化合物の溶解液または懸濁液が望ましいことがある。バッファー、防腐剤、抗酸化などを、承認された調剤プラクティスに従って取り入れることができる。
【００４４】
徐放性製剤の適切な例は、ポリペプチドを含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを含み、そのマトリックスは、成形品、フィルムまたはマイクロカプセルの形状である。徐放性マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７およびＬａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５により記載のポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、または、ポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．３，７７３，９１９、ＥＰ  ５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートの共重合体（Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６）、非分解性エチレン−ビニルアセテート（上記のＬａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）、分解性乳酸−グリコール酸共重合体、例えばＬＵＰＲＯＮ  Ｄｅｐｏｔ（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体およびリュープロリドアセテートからなる注射可能なミクロスフェア）、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ  １３３，９８８）を含む。
【００４５】
エチレン−ビニルアセテートおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーは１００日間を超えて分子を放出することが可能である一方で、特定のヒドロゲルは、より短い期間、タンパク質を放出する。被包されたタンパク質は、体内に長時間残存すると、３７℃で湿気に曝される結果として変性または凝集する場合があり、生物学的活性の喪失および免疫原性が変化する可能性をもたらす。関連するメカニズムに応じて、タンパク質の安定化のための合理的戦略を講ずることができる。例えば、凝集メカニズムが、ジスルフィド相互交換を介した分子内Ｓ−Ｓ結合の形成であることが見いだされれば、安定化は、スルフヒドリル基を修飾して、酸性溶液から凍結乾燥して、含水量を調節して、適切な添加剤を用いて、そして特定のポリマーマトリックス組成物を開発することにより達成され得る。
【００４６】
また、徐放性組成物は、懸濁液中に結晶を保持することが可能な適切な製剤中に懸濁された結晶製剤を含む。これらの製剤は、皮下または腹腔内に注入されると、徐放性効果を生じることができる。また、他の組成物は、リポソーム被覆抗体を含む。そのような抗体を含むリポソームは、それ自体が公知である方法により調製される：Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．ＤＥ  ３，２１８，１２１；Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８−３６９２；Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０−４０３４；ＥＰ  ５２，３２２；ＥＰ  ３６，６７６；ＥＰ  ８８，０４６；ＥＰ  １４３，９４９；１４２，６４１；日本特許出願８３−１１８００８；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．４，４８５，０４５および４，５４４，５４５；およびＥＰ  １０２，３２４。
【００４７】
所定の患者に対する製剤の用量は、重症度および疾患の種類、体重、性別、食事、投与の時間および経路、他の薬剤および他の関連のある臨床因子を含む、薬の作用を変えることが知られている様々な因子を考慮して、主治医により決定される。治療的に効果的な用量は、インビトロまたはインビボのいずれかの方法により決定してよい。
【００４８】
治療的に用いられる本明細書に記載の組成物の有効量は、例えば、治療目的、投与経路、および患者の状態に依存する。したがって、治療を行なう者は、用量を滴定して、最適な治療効果が得られるように投与経路を修正することが好ましい。典型的な１日の用量は、上述の因子に応じて、約０．００１ｍｇ／ｋｇから、最大で１００ｍｇ／ｋｇまたはそれを超える範囲であってよい。典型的に、臨床医は、所望の効果を達成する用量に到達するまで組成物を投与する。この治療の進行は、従来の分析または本明細書の記載のとおりに容易にモニターされる。
【００４９】
本明細書の組成物および方法に従った治療物質の投与は、適切な担体、賦形剤、および製剤中に加えられる他の薬剤とともに投与されて、輸送、送達、許容性などの改善をもたらすことが理解されよう。これらの製剤は、例えば、粉、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、ベシクル（例えばリポフェクチン（商標））を含む脂質（カチオン性またはアニオン性）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油および油中水エマルション、エマルションカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、および、カーボワックスを含む半固体混合物を含む。前述の混合物は、いずれも、製剤中の有効成分が製剤化により不活化されず、製剤が生理的に適合して投与経路に許容であれば、本明細書に記載の組成物を含む処置および治療において適切であり得る。また、Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．"Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ，"２０００，Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２：２１０−２１８；Ｗａｎｇ，"Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，"２０００，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３：１−６０；Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ  "Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，  ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ，"Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８９：９６７−９７８；Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，"Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，"ＰＤＡ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１、および、本明細書中の引用文献も、薬剤師に公知の製剤化、賦形剤および担体に関するさらなる情報のために参照のこと。
【００５０】
実施した実験および得られた結果を含む以下の図および実施例は、説明する目的のためにのみ提供され、本発明の教示を制限するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【００５１】
（実施例１）Ｕ２−３９とエルロチニブの併用療法―インビボ卵巣異種移植片モデル
Ｕ２−３９は、配列番号１１４を有するＣＤＲＬ１、配列番号１３２を有するＣＤＲＬ２、配列番号１６４を有するＣＤＲＬ３、配列番号１９９を有するＣＤＲＨ１、配列番号２３０を有するＣＤＲＨ２、および配列番号２６８を有するＣＤＲＨ３を含む、抗ＨＢ−ＥＧＦ抗体である。Ｕ２−３９の軽鎖可変領域は配列番号３０であり、Ｕ２−３９の重鎖可変領域ＶＨは配列番号８１である。軽鎖の全アミノ酸配列を配列番号１に示し、重鎖の全アミノ酸配列を配列番号２に示す。
【００５２】
単剤療法として、またはエルロチニブと組み合わせて投与される、本発明の抗体の抗腫瘍の有効性を評価するために、卵巣がん異種移植片の試験を行なった。
【００５３】
ヒト卵巣腺がん細胞株ＥＦＯ２７を遺伝子改変してＨＢ−ＥＧＦを過剰発現させた。クローンＥＦＯ２７−Ｃｌ５８を、ＳＣＩＤマウスでの異種移植片試験のために選択した。１００μｌのＰＢＳ／マトリゲル（１：１）中、３×１０６のＥＦＯ２７−Ｃｌ５８細胞を、７〜８週齢のメスＣＢ−１７  ＳＣＩＤマウス（重さ約３０ｇ）の左脇腹に皮下注入した。１６日目に、平均腫瘍体積がおよそ５５０ｍｍ３に到達した後、６０匹のマウスを、無作為に１２匹ずつの５グループに分けた。１７日目に、Ｕ２−３９、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、ビヒクルコントロール、ＰＢＳ、またはＵ２−３９とエルロチニブの組合せでの治療を開始した。ＰＢＳ（１０ｍｌ／ｋｇ）、Ｕ２−３９（２５ｍｇ／ｋｇ）およびセツキシマブ（２５ｍｇ／ｋｇ）を、１７日目、２０日目および２３日目（無作為化の１日後、４日後、および７日後）に静脈内（ｉ．ｖ．）に投与して、一方で、エルロチニブ（６０ｍｇ／ｋｇ）を、１７日目〜２４日目に、単独またはＵ２−３９との組合せのいずれかで、１日１回、経口（ｐ．ｏ．）で投与した。１７日目、２０日目および２３日目の各処置の前に、腫瘍体積をキャリパー測定により決定した。キャリパー測定に続いて、腫瘍サイズを、式：Ｗ２×Ｌ／２（Ｌ＝腫瘍の長さ、Ｗ＝腫瘍の垂直幅）により計算した。
【００５４】
図１は、単剤療法での３回投与のＵ２−３９は、平均腫瘍体積が大容積（約５５０ｍｍ３）に既に達した後に腫瘍の治療を開始したにもかかわらず、ビヒクルコントロールおよびセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））の単剤療法と比較して、有意にＥＦＯ２７−ＣＬ５８腫瘍増殖を減少させることを示す。
【００５５】
また、Ｕ２−３９とエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））の組合せは、投与期間中に、エルロチニブ単独での治療よりも強い腫瘍低減を導くことも示された。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2015509492.tif 000004
2015509492.tif 000005