(57)【要約】  限定されないが、心血管疾患、急性冠症候群、アテローム性動脈硬化症、不安定狭心症、及び心筋梗塞を含む疾患又は状態の予防的かつ／又は治療的処置において有効な固定投薬量でアポリポタンパク質製剤が提供される。より詳細には、固定投薬量アポリポタンパク質製剤は、体重調整された投薬量と比較して比較的減少した患者間変動性を示す。典型的には、アポリポタンパク質製剤は、ApoA1、１つ又はそれ以上の脂質（例えばホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン及び／又はホスファチジルグリセロール）及び場合により界面活性剤（例えば肝毒性を誘導しないレベルのコール酸塩）を含む再構成高密度リポタンパク質製剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
固定投薬量アポリポタンパク質製剤をヒトに投与し、それにより該ヒトにおいて疾患、障害又は状態を処置することを含む、ヒトにおいて疾患、障害又は状態を予防的又は治療的に処置する方法。
【請求項２】
ヒトにおいて疾患、障害又は状態を予防的又は治療的に処置する際の使用のための、固定投薬量アポリポタンパク質製剤。
【請求項３】
疾患、障害又は状態が、心血管疾患、高コレステロール血症又は低コレステロール血症を含む、請求項１に記載の方法又は請求項２に記載の使用のためのアポリポタンパク質製剤。
【請求項４】
疾患、障害又は状態が急性冠症候群（ＡＣＳ）、アテローム性動脈硬化症、不安定狭心症、及び心筋梗塞を含む、請求項３に記載の方法又は使用のためのアポリポタンパク質製剤。
【請求項５】
アポリポタンパク質製剤が、いずれかの体重、又は一定体重範囲内のいずれかの体重のヒトへの投与の際に治療的に有効である、請求項１、３、若しくは４のいずれか１項に記載の方法、又は請求項２、請求項３若しくは請求項４のいずれか１項に記載の固定投薬量アポリポタンパク質製剤。
【請求項６】
体重が６０〜１４０ｋｇの体重範囲内である、請求項５に記載の方法又は使用のためのアポリポタンパク質製剤。
【請求項７】
アポリポタンパク質製剤が、体重調整した投与計画を用いて観察されるか又は体重調整した投与計画に関連するであろう患者間変動性と比較して、該製剤のアポリポタンパク質への曝露の際に比較的減少した患者間変動性を示す、請求項１若しくは３〜６のいずれか１項に記載の方法、又は請求項２〜６のいずれか１項に記載の使用のためのアポリポタンパク質製剤。
【請求項８】
アポリポタンパク質への曝露の患者間変動性が、体重調整した投与計画を用いて観察されるか又は体重調整した投与計画に関連するであろう患者間変動性の９０％未満である、請求項７に記載の方法、又は使用のためのアポリポタンパク質製剤。
【請求項９】
固定投薬量が、アポリポタンパク質０．１〜１５ｇ；１〜１０ｇ；２〜９ｇ；３〜８ｇ；４〜７ｇ；及び５〜６ｇから選択される範囲内の量のアポリポタンパク質を含む、請求項１若しくは３〜８のいずれか１項に記載の方法、又は請求項２〜８のいずれか１項に記載の使用のためのアポリポタンパク質製剤。
【請求項１０】
固定投薬量がアポリポタンパク質を０．２５ｇ、０．５ｇ、１ｇ、１．７ｇ、２ｇ、３．４ｇ、４ｇ、５．１ｇ、６ｇ、６．８ｇ又は８ｇ含む、請求項９に記載の方法、又は使用のためのアポリポタンパク質製剤。
【請求項１１】
アポリポタンパク質がＡｐｏ−Ａ１又はそのフラグメントである、請求項１若しくは３〜１０のいずれか１項に記載の方法、又は請求項２〜１０のいずれか１項に記載の使用のための固定投薬量アポリポタンパク質製剤。
【請求項１２】
アポリポタンパク質製剤が再構成高密度アポリポタンパク質（ｒＨＤＬ）製剤である、請求項１若しくは３〜１１のいずれか１項に記載の方法、又は請求項２〜１１のいずれか１項に記載の使用のための固定投薬量アポリポタンパク質製剤。
【請求項１３】
ｒＨＤＬ製剤が、アポリポタンパク質、１つ又はそれ以上の脂質、及び場合により界面活性剤を含む、請求項１２に記載の方法、又は使用のための固定投薬量アポリポタンパク質製剤。
【請求項１４】
アポリポタンパク質が血漿から精製されたＡｐｏ  Ａ−Ｉであり、脂質がホスファチジルコリンであり、そしてｒＨＤＬ製剤がコール酸ナトリウム界面活性剤をさらに含む、請求項１３に記載の方法、又は使用のための固定投薬量アポリポタンパク質製剤。
【請求項１５】
アポリポタンパク質と脂質との間の比が１：４０〜１：７５（ｍｏｌ：ｍｏｌ）であり、そしてコール酸ナトリウムが０．５〜０．９ｇ／Ｌの濃度で存在する、請求項１４に記載の方法、又は使用のための固定投薬量アポリポタンパク質製剤。
【請求項１６】
アポリポタンパク質が組換えＡｐｏ  Ａ−Ｉであり、そして１つ又はそれ以上の脂質がスフィンゴミエリンとホスファチジルグリセロールとの混合物である、請求項１３に記載の方法、又は使用のための固定投薬量アポリポタンパク質製剤。
【請求項１７】
アポリポタンパク質と脂質との間の比が１：８０と１：１２０（ｍｏｌ：ｍｏｌ）との間であり、そしてスフィンゴミエリン及びホスファチジルグリセロールが９０：１０〜９９：１（質量：質量）の比で存在する、請求項１６に記載の方法、又は使用のための固定投薬量アポリポタンパク質製剤。
【請求項１８】
治療的に有効な固定投薬量でアポリポタンパク質又はそのフラグメントを含むアポリポタンパク質製剤。
【請求項１９】
治療的に有効な固定投薬量でアポリポタンパク質製剤を製造する工程を含む、アポリポタンパク質又はそのフラグメントを含む固定投薬量アポリポタンパク質製剤を製造する方法。
【請求項２０】
いずれかの体重、又は一定体重範囲内のいずれかの体重のヒトへの投与の際に治療的に有効であるアポリポタンパク質製剤の固定投薬量を決定する工程を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
体重が６０〜１４０ｋｇの体重範囲内にある、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の方法に従って製造されたアポリポタンパク質製剤。
【請求項２３】
いずれかの体重、又は一定体重範囲内のいずれかの体重のヒトへの投与の際に治療的に有効である、請求項１８又は請求項２２に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項２４】
体重が６０〜１４０ｋｇの体重範囲内にある、請求項２３に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項２５】
体重調整した投与計画を用いて観察されるか又は体重調整した投与計画に関連するであろう患者間変動性と比較して、製剤のアポリポタンパク質成分への曝露の際に比較的減少した患者間変動性を示す、請求項１８、又は請求項２２〜２４のいずれか１項に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項２６】
変動性が、体重調整した投与計画を用いて観察されるか又は体重調整した投与計画に関連するであろう変動性の９０％未満である、請求項２５に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項２７】
固定投薬量が、アポリポタンパク質０．１〜１５ｇ；１〜１０ｇ；２〜９ｇ；３〜８ｇ；４〜７ｇ；及び５〜６ｇから選択される範囲内の量のアポリポタンパク質を含む、請求項１８、又は請求項２２〜２６のいずれか１項に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項２８】
固定投薬量が、アポリポタンパク質０．２５ｇ；０．５ｇ；１ｇ；１．７ｇ；２ｇ；３．４ｇ；４ｇ；５．１ｇ；６ｇ；６．８ｇ；及び８ｇから選択される量のアポリポタンパク質を含む、請求項２７に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項２９】
アポリポタンパク質がＡｐｏ−Ａ１又はそのフラグメントである、請求項１８、又は請求項２２〜２８のいずれか１項に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項３０】
アポリポタンパク質製剤が、再構成高密度リポタンパク質（ｒＨＤＬ）製剤である、請求項１８、又は請求項２２〜２９のいずれか１項に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項３１】
ｒＨＤＬ製剤中に、アポリポタンパク質、１つ又はそれ以上の脂質及び場合により界面活性剤を含む、請求項３０に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項３２】
ｒＨＤＬ製剤においてアポリポタンパク質は血漿から精製されたＡｐｏ  Ａ−Ｉであり、脂質はホスファチジルコリンであり、そしてｒＨＤＬ製剤はコール酸ナトリウム界面活性剤をさらに含む、請求項３１に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項３３】
アポリポタンパク質と脂質との間の比が１：４０〜１：７５（ｍｏｌ：ｍｏｌ）であり、コール酸ナトリウムが０．５〜０．９ｇ／Ｌの濃度で存在する、請求項３２に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項３４】
アポリポタンパク質が組換えＡｐｏ  Ａ−Ｉであり、そして１つ又はそれ以上の脂質がスフィンゴミエリンとホスファチジルグリセロールとの混合物である、請求項３１に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項３５】
アポリポタンパク質と脂質との間の比が１：８０と１：１２０との間（ｍｏｌ：ｍｏｌ）であり、そしてスフィンゴミエリン及びホスファチジルグリセロールが９０：１０〜９９：１（質量：質量）の比で存在する、請求項３４に記載のアポリポタンパク質製剤。
【請求項３６】
請求項１８又は請求項２２〜３０のいずれか１項に記載の固定投薬量アポリポタンパク質製剤の１又はそれ以上の単位用量；及び１つ又はそれ以上の他のキット構成要素を含む、キット。
【請求項３７】
前記１つ又はそれ以上の他のキット構成要素は、使用のための指示書；各単位用量を収容するバイアル、コンテナ若しくは他の貯蔵容器；針、カテーテル、シリンジ、管状部材などのような１つ若しくはそれ以上の送達デバイス；並びに／又はキットを安全かつ都合よく貯蔵及び／又は輸送するために適した包装材料を含む、請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
心血管疾患、高コレステロール血症又は低コレステロール血症を含む疾患、障害又は状態を治療的又は予防的に処置する際の使用のための、請求項３６又は請求項３７に記載のキット。
【請求項３９】
疾患、障害又は状態が、急性冠症候群（ＡＣＳ）、アテローム性動脈硬化症、不安定狭心症、及び心筋梗塞を含む、請求項３８に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アポリポタンパク質製剤の固定用量（ｆｉｘｅｄ  ｄｏｓｉｎｇ）に関する。より詳細には、本発明は、アポリポタンパク質の固定投薬量（ｆｉｘｅｄ  ｄｏｓａｇｅｓ）の送達、すなわち患者体重に依存しない量での送達に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）は、高密度（＞１．０６３ｇ／ｍＬ）及び小さいサイズ（ストークス径＝５〜１７ｎｍ）を特徴とする、脂質及びタンパク質を含む不均一リポタンパク質のクラスである。様々なＨＤＬサブクラスは、脂質、アポリポタンパク質、酵素及び脂質輸送タンパク質の量的及び質的な含有量が異なり、形状、密度、サイズ、電荷、及び抗原性の差異を生じる。アポリポタンパク質Ａ−Ｉ（Ａｐｏ−ＡＩ）は主なＨＤＬであるが、他のアポリポタンパク質、例えばＡｐｏ−ＡＩＩ及びＡｐｏ−Ｖが存在していてもよい。
【０００３】
疫学的及び臨床的研究は、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）のレベルと心血管疾患の危険性との間の逆相関を確立した（非特許文献１において概説される）。より詳細には、例えば再構成ＨＤＬ（ｒＨＤＬ）製剤の形態でのアポリポタンパク質製剤の臨床投与は、最近の急性冠症候群（ＡＣＳ）に罹患した高コレステロール血症患者に有益な効果をもたらすということが示されている。
【０００４】
アポリポタンパク質製剤、例えばｒＨＤＬ製剤の投薬量は、典型的には製剤を投与しようとする患者又は個体の体重に従って計算される。投薬量に対するこのアプローチは、患者の体重と、アポリポタンパク質製剤を分布及び排出するそれらの能力との間の直接的相関があるという仮説に基づく。従って、アポリポタンパク質製剤の体重に基づいた用量は、同じかまたは異なる体重の患者間での最小の変動性で各患者がアポリポタンパク質への同じ曝露を受けるということを生じるだろうと期待される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ａｓｓｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００４、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０９  ＩＩＩ−８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
要旨
本発明者らは、驚くべきことに、アポリポタンパク質製剤、例えば再構成ＨＤＬ（ｒＨＤＬ）製剤の典型的な投薬量が、特に患者の体重に従って調整又は計算された場合に、製剤で投与されたアポリポタンパク質（例えばａｐｏＡ−Ｉ）への曝露に関して患者間でかなりの変動性を示すということを発見した。より詳細には、患者の体重に基づいてかれらに投薬した場合にアポリポタンパク質への曝露の際の患者間変動性が、固定用量アプローチで観察された変動性よりも大きいということが本発明者らにより示された。
【０００７】
本発明の目的は、先行技術のアポリポタンパク質製剤の１つ又はそれ以上の欠陥を軽減するか又は回避する投薬量でアポリポタンパク質製剤を提供することである。
【０００８】
限定されないが心血管疾患を含む疾患又は状態の予防的及び／又は治療的処置において有効である投薬量でアポリポタンパク質製剤を提供することは本発明の好ましい目的である。
【０００９】
アポリポタンパク質製剤のアポリポタンパク質成分に対する患者の曝露により測定して、比較的減少した患者間変動性を示す投薬量でアポリポタンパク質製剤を提供することは本発明の別の好ましい目的である。
【００１０】
第一の局面において、本発明は、固定用量アポリポタンパク質製剤をヒトに投与して、それにより該ヒトにおける疾患、障害又は状態を処置する工程を含む、ヒトにおいて疾患、障害又は状態を予防的又は治療的に処置する方法を提供する。
【００１１】
第二の局面において、本発明は、ヒトにおいて疾患、障害又は状態を予防的又は治療的に処置する際の使用のための固定投薬量アポリポタンパク質製剤を提供する。
【００１２】
第三の局面において、本発明は、治療的に有効な固定用量でアポリポタンパク質又はそのフラグメントを含む固定投薬量アポリポタンパク質製剤を提供する。
【００１３】
適切には、固定投薬量アポリポタンパク質製剤は、いずれかの体重、又は一定体重範囲内のいずれかの体重のヒトへの投与の際に治療的に有効である。
【００１４】
適切には、固定投薬量アポリポタンパク質製剤は、体重調整した投与計画を用いて観察されるか又は体重調整した投与計画に関連するであろう患者間変動性と比較して、該製剤のアポリポタンパク質への曝露の際に比較的減少した患者間変動性を示す。
【００１５】
第四の局面において、本発明は、治療的に有効な固定投薬量でアポリポタンパク質製剤を製造する工程を含む、アポリポタンパク質又はそのフラグメントを含む固定投薬量アポリポタンパク質製剤を製造する方法を提供する。
【００１６】
適切には、本方法は、いずれかの体重、又は一定体重範囲内のいずれかの体重のヒトへの投与の際に治療的に有効であるアポリポタンパク質製剤の固定投薬量を決定する工程を含む。好ましくは、固定投薬量は、同じ体重範囲にわたる患者に投与される体重調整された投薬量を用いて観察されるか又は体重調整された投薬量に関連するであろう患者間変動性と比較して、その投薬量でのアポリポタンパク質製剤のアポリポタンパク質成分への一定体重範囲の患者にわたる曝露の際にアポリポタンパク質製剤が比較的減少した患者間変動性を示すとして決定される。
【００１７】
第五の局面において、本発明は、ヒトにおける疾患、障害又は状態を予防的又は治療的に処置するための、第四の局面の方法に従って製造されたアポリポタンパク質製剤を提供する。
【００１８】
第六の局面において、本発明は、第二若しくは第三の局面に従う固定投薬量アポリポタンパク質製剤又は第四の局面に従って製造されたの１又はそれ以上の単位用量；及び１つ又はそれ以上の他のキット構成要素を含む、固定投薬量アポリポタンパク質キットを提供する。
【００１９】
好ましくは、疾患、障害又は状態は、急性冠症候群（ＡＣＳ）、アテローム性動脈硬化症、不安定狭心症、及び心筋梗塞を含めて、心血管疾患、高コレステロール血症又は低コレステロール血症を含む。
【００２０】
好ましい形態において、アポリポタンパク質はＡｐｏ−Ａ１又はそのフラグメントである。
【００２１】
適切には、アポリポタンパク質製剤は、アポリポタンパク質、脂質及び場合により界面活性剤を含む、再構成高密度リポタンパク質（ｒＨＤＬ）製剤である。
【００２２】
本明細書全体を通して、文脈がそれ以外を必要としなければ、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、示された整数又は整数の群を包含することを意味するが、いずれかの他の整数又は整数群排除することは意味しないと理解される。
【００２３】
本明細書以後に詳細に記載される本発明の非限定的実施態様の理解の助けとなる以下の図面が参照される。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】４週の用量投与の間の投薬計画（２時間注入期間のみ）による中央値シミュレート（ｍｅｄｉａｎ  ｓｉｍｕｌａｔｅｄ）ＡｐｏＡ−Ｉ血漿濃度対時間プロフィールを示す。
【図２】４週の用量投与の間の投薬計画（２時間注入期間のみ）による総ＡｐｏＡ−Ｉ血漿濃度予測分布対時間プロフィールを示す。線は中央値プロフィールを表し、網掛け領域は９５％予測区間（ＰＩ）を表す。
【図３】２時間の間注入された週１回投与計画の最後の用量についての外因性ＡｐｏＡ−Ｉ  ＡＵＣ0-72の分布を示す。白線は応答中央値を表し、暗青色網掛け領域は四分位間範囲を表し、そして淡青色網掛け領域は１００シミュレーションについての９５％ＰＩを表す。外側の赤い実線の横線は、右パネルの等価な固定用量（３．６ｇ）と比較した、左パネルにおける４０ｍｇ／ｋｇの用量についての曝露帯の境界幅を示す。内側の赤い実線は、それらの用量についての曝露中央値と交わる。灰色の破線は、左パネルにおける７０ｍｇ／ｋｇの用量及び右パネルにおける等価固定用量（６．３ｇ）についての比較曝露を示す。
【図４】２時間の間注入された週１回投与計画の最後の用量についての外因性ＡｐｏＡ−Ｉ  ＡＵＣ0-168の分布を示す。白線は応答中央値を表し、暗青色網掛け領域は四分位間範囲を表し、そして淡青色網掛け領域は１００シミュレーションについての９５％ＰＩを表す。外側の赤い実線の横線は、右パネルの等価な固定用量（３．６ｇ）と比較した、左パネルにおける４０ｍｇ／ｋｇの用量についての曝露帯の境界幅を示す。内側の赤い実線は、それらの用量についての曝露中央値と交わる。灰色の破線は、左パネルにおける７０ｍｇ／ｋｇの用量及び右パネルにおける等価固定用量（６．３ｇ）についての比較曝露を示す。
【図５】２時間の間注入された週１回投与計画の最後の用量についての外因性ＡｐｏＡ−Ｉ  Ｃmaxの分布を示す。白線は応答中央値を表し、暗青色網掛け領域は四分位間範囲を表し、そして淡青色網掛け領域は１００シミュレーションについての９５％ＰＩを表す。外側の赤い実線の横線は、右パネルの等価な固定用量（３．６ｇ）と比較した、左パネルにおける４０ｍｇ／ｋｇの用量についての曝露帯の境界幅を示す。内側の赤い実線は、それらの用量についての曝露中央値と交わる。灰色の破線は、左パネルにおける７０ｍｇ／ｋｇの用量及び右パネルにおける等価固定用量（６．３ｇ）についての比較曝露を示す。
【図６】図６は、外因性ＡｐｏＡ−Ｉ  ＡＵＣ0-72（２時間の間注入された週１回投与計画の最後の用量について）の間、固定用量と体重用量との間の関係示す。白線は応答中央値を表し、暗青色網掛け領域は四分位間範囲を表し、そして淡青色網掛け領域は１００シミュレーションについての９５％ＰＩを表す。
【図７】外因性ＡｐｏＡ−Ｉ  ＡＵＣ0-168（２時間の間注入された週１回投与計画の最後の用量について）と体重との間の関係を示す。白線は応答中央値を表し、暗青色網掛け領域は四分位間範囲を表し、そして淡青色網掛け領域は１００シミュレーションについての９５％ＰＩを表す。
【図８】外因性ＡｐｏＡ−Ｉ  Ｃmax（２時間の間注入された週１回投与計画の最後の用量について）と体重との間の関係を示す。白線は応答中央値を表し、暗青色網掛け領域は四分位間範囲を表し、そして淡青色網掛け領域は１００シミュレーションについての９５％ＰＩを表す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
詳細な説明
本発明は、アポリポタンパク質製剤（例えばｒＨＤＬ）についての固定用量投与計画が、患者の体重から独立して、一定範囲の患者体重にわたって、体重調整した用量を課したものよりも少ない影響をａｐｏＡ−Ｉ曝露に対して有するという予期せぬ発見に少なくとも部分的に起因する。従って、体重調整された投与家計画と比較して、特に極端なヒト患者体重範囲において、固定用量投与計画に関連してａｐｏ−ＡＩへの曝露においてより少ない患者間変動性がある。
【００２６】
１つの好ましい局面において、本発明は、いずれかの体重、又は一定体重範囲内のいずれかの体重のヒトへの投与の際に治療的に有効である投与量で固定投薬量アポリポタンパク質製剤を提供する。
【００２７】
別の好ましい局面において、本発明は、いずれかの体重、又は一定体重範囲内のいずれかの体重のヒトへの投与の際に治療的に有効である投与量でアポリポタンパク質製剤を製造する工程を含む、固定投薬量アポリポタンパク質製剤を製造する方法を提供する。
【００２８】
当然のことながら、本発明は、上記アポリポタンパク質製剤による治療に応答性の１つ又はそれ以上の疾患、障害又は状態を処置する際に治療的有効性を有するアポリポタンパク質製剤に関する。
【００２９】
好ましくは、アポリポタンパク質はＡｐｏ−Ａ１又はそのフラグメントである。本発明のアポリポタンパク質製剤は、脂質と共に製剤化されても（例えばｒＨＤＬ）、脂質を用いずに（例えば、脱脂アポリポタンパク質）製剤化されてもよい。
【００３０】
特定の実施態様において、アポリポタンパク質製剤はｒＨＤＬ製剤である。本明細書で使用される「再構成ＨＤＬ（ｒＨＤＬ）」製剤は、典型的に血漿中に存在する高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）と機能的に同様であるか、類似するか、相当するか、又は高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を模倣したいずれかの人工的に製造されたアポリポタンパク質製剤又は組成物であり得る。本明細書で使用されるｒＨＤＬ製剤はリポソーム製剤ではない。ｒＨＤＬ製剤は、それらの範囲内に「ＨＤＬ模倣物」及び「合成ＨＤＬ粒子」を含む。適切には、ｒＨＤＬ製剤はアポリポタンパク質、脂質及び場合により界面活性剤を含む。
【００３１】
限定されないがｒＨＤＬ製剤のようなアポリポタンパク質製剤は、コレステロールをさらに含み得る。アポリポタンパク質製剤は有機溶媒を使用して製造され得、これらはいくつかの場合において、米国特許第５，６５２，３３９号において記載されるように、製剤を製造する場合に脂質成分（例えばホスファチジルコリン）を溶解するために使用される。しかし、アポリポタンパク質製剤は有機溶媒を存在させずに製造されることが好ましい。
【００３２】
アポリポタンパク質は、天然に存在するＨＤＬ又は再構成高密度リポタンパク質（ｒＨＤＬ）の機能的な生物学的に活性な成分であるいずれかのアポリポタンパク質であり得る。典型的には、アポリポタンパク質は、血漿由来又は組換えのいずれかのアポリポタンパク質であり、例えばＡｐｏ−ＡＩ、Ａｐｏ−ＡＩＩ若しくはＡｐｏ−ＡＶ、ｐｒｏ−ａｐｏ−Ａ１又は変異体、例えばＡｐｏ−ＡＩ  Ｍｉｌａｎｏである。好ましくは、アポリポタンパク質はＡｐｏ−ＡＩである。アポリポタンパク質の生物学的に活性なフラグメントも考慮される。フラグメントは天然に存在していても、化学合成的でも組換えでもよい。例としてのみ、Ａｐｏ−ＡＩの生物学的に活性なフラグメントは、好ましくは、ｒＨＤＬ製剤で製剤化された場合のＡｐｏ−ＡＩのレシチン−コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）刺激活性の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは９５〜１００％を有し、又は１００％より高くさえある。
【００３３】
適切には、アポリポタンパク質は、約５〜１００ｇ／Ｌ、好ましくは１０〜５０ｇ／Ｌ又はより好ましくは２５〜４５ｇ／Ｌの濃度である。これには、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５及び１００ｇ／Ｌ、並びにこれらの量の間の任意の範囲が含まれる。他の実施態様において、アポリポタンパク質は約５〜２０ｇ／Ｌ、例えば約８〜１２ｇ／Ｌの濃度であり得る。
【００３４】
脂質は、天然に存在するＨＤＬ又は再構成高密度リポタンパク質（ｒＨＤＬ）の成分であるいずれかの脂質であり得る。このような脂質としては、リン脂質、コレステロール、コレステロール−エステル、脂肪酸、及び／又はトリグリセリドが挙げられる。好ましくは、脂質はリン脂質である。リン脂質の非限定的な例としては、ホスファチジルコリン（ＰＣ）（レシチン）、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）（ケファリン）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）及びスフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン−１リン酸又はその天然若しくは合成誘導体が挙げられる。天然誘導体としては、卵ＰＣ、卵ＰＧ、大豆ＰＣ、水素添加大豆ＰＣ、大豆ＰＧ、脳ＰＳ、スフィンゴ脂質、脳ＳＭ、ガラクトセレブロシド、ガングリオシド、セレブロシド、ケファリン、カルジオリピン、及びリン酸ジセチルが挙げられる。合成誘導体としては、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジデカノイルホスファチジルコリン（ＤＤＰＣ）、ジエルコイル（ｄｉｅｒｕｃｏｙｌ）ホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジラウリルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、パルミトイルステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジラウロイルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、ジパルミトイルスフィンゴミエリン（ＤＰＳＭ）及びジステアロイルスフィンゴミエリン（ＤＳＳＭ）が挙げられる。リン脂質は上記のリン脂質のいずれかの誘導体又は類縁体でもよい。
【００３５】
他の特定の実施態様において、脂質は、負に荷電したリン脂質、例えばホスファチジルグリセロール（例えば、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（ｌ−グリセロール））と組み合わせたスフィンゴミエリンであるか、又はそれらを含む。スフィンゴミエリンとホスファチジルグリセロール（特に、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（ｌ−グリセロール））との組み合わせは、脂質としての使用について具体的に構想される。これらの実施態様において、スフィンゴミエリン及びホスファチジルグリセロールは、いずれかの適切な比、例えば９０：１０〜９９：１（質量：質量）、典型的には９５：５〜９８：２、そして最も典型的には９７：３の比で存在し得る。
【００３６】
好ましくは、リン脂質は、単独又は１つ若しくはそれ以上の他のリン脂質と組み合わせたホスファチジルコリンであるか、又はそれらを含む。別のリン脂質の例はスフィンゴミエリンである。いくつかの実施態様において、アポリポタンパク質製剤は界面活性剤を含み得る。
【００３７】
排他的ではないが典型的には、脂質は１０〜１００ｇ／Ｌ又は好ましくは３０〜６０ｇ／Ｌの濃度で存在し得る。
【００３８】
界面活性剤は、胆汁酸及びその塩を含めて、アポリポタンパク質（例えば、ｒＨＤＬ）製剤における使用に適したいずれかのイオン性（例えば、カチオン性、アニオン性、双性イオン性）界面活性剤又は非イオン性界面活性剤であり得る。イオン性界面活性剤としては、胆汁酸及びその塩、ポリソルベート（例えばＰＳ８０）、ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯ、セチルトリメチル−アンモニウムブロミド、ラウロイルサルコシン、ｔｅｒｔ−オクチルフェニルプロパンスルホン酸及び４’−アミノ−７−ベンズアミド−タウロコール酸が挙げられ得る。
【００３９】
胆汁酸は、典型的にはジヒドロキシル化又はトリヒドロキシル化された２４炭素のステロイド類であり、これらとしては、コール酸、デオキシコール酸  ケノデオキシコール酸又はウルソデオキシコール酸が挙げられる。好ましくは、界面活性剤は、コール酸塩、デオキシコール酸塩、ケノデオキシコール酸塩又はウルソデオキシコール酸塩のような胆汁酸塩である。特に好ましい界面活性剤はコール酸ナトリウムである。
【００４０】
本明細書の以前に記載されるように、固定投薬量アポリポタンパク質製剤は、いずれかの体重、又は一定体重範囲内のいずれかの体重のヒト患者への投与の際に治療的に有効である投薬量である。従って、アポリポタンパク質製剤投薬量は、典型的に「体重調整用量」で起こるようにヒトの特定の体重に従って計算、決定又は選択されない。
【００４１】
固定投薬量アポリポタンパク質製剤はむしろ、いずれかの体重、又は一定体重範囲内のいずれかの体重のヒト患者に投与される際に、アポリポタンパク質製剤のアポリポタンパク質成分への曝露に関して比較的減少した患者間変動性を示すであろう投薬量として決定される。比較的減少した患者間変動性は、患者集団の体重調整した用量で観察されるか又は体重調整した用量に関連する患者間変動性と比較される。
【００４２】
曝露の変動性は、固定投薬量アポリポタンパク質製剤の投与後にアポリポタンパク質への患者の曝露の変動に関して表され得るか又は測定され得る。好ましくは、変動性は、固定投薬量の患者と同じ体重範囲にわたるヒト患者に投与された体重調整された投薬量について生じるであろう変動性と比較して、一定体重範囲にわたるヒト患者に固定投薬量アポリポタンパク質製剤が投与された場合に生じるであろう変動性である。いくつかの実施態様において、アポリポタンパク質への曝露は、平均曝露（例えば、曝露平均又は中央値）、総曝露（例えば、曝露時間にわたって積分された量）又は最大曝露レベル（例えばＣmax）として測定され得る。一般的には、体重又は体重範囲は、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０若しくは２００ｋｇ、又はこれらの値の間のいずれかの範囲である。好ましくは、体重又は体重範囲は、２０〜２００ｋｇ、２０〜６０ｋｇ、４０〜１６０ｋｇ、５０〜８０ｋｇ、６０〜１４０ｋｇ、７０〜８０ｋｇ、８０〜１２０ｋｇ、１００〜１８０ｋｇ又は１２０〜２００ｋｇである。
【００４３】
適切には、変動性は体重調整された用量で生じる変動性の１００％若しくは好ましくは９９％、９８％、９７％、９６％  ９５％、９４％、９３％、９２％、９１％未満、又は９０％、８５％若しくは８０％未満である。変動性は、当該分野で公知の統計的表現で計算されそして表され得、これらとしては、限定されないが、変動性の係数として（例えば％ＣＶ）、標準偏差、標準誤差などが挙げられる。
【００４４】
著しく異なる体重の患者への固定投薬量アポリポタンパク質製剤の投与にもかかわらず、アポリポタンパク質への患者の曝露は驚くほど均一である。従って、固定投薬量アポリポタンパク質製剤の治療有効量は体重調整された投薬量と比較して実質的に低下も減少もされないだろうということが提案される。
【００４５】
例のみとして、本発明者らは、６０〜１２０ｋｇの体重範囲内の患者への固定投薬量アポリポタンパク質製剤の投与の際にアポリポタンパク質への総曝露に差異が無いということを示した。さらに、アポリポタンパク質についてのＣmaxは、６０〜１２０ｋｇの体重範囲にわたって平均１６％減少した。
【００４６】
相対的に、同じアポリポタンパク質製剤を使用した体重調整された投与計画については、６０ｋｇから１２０ｋｇへの体重の倍増は、アポリポタンパク質の投薬量の倍増を必要とし、そしてａｐｏＡ−Ｉ曝露を増加させた。
【００４７】
固定投薬量アポリポタンパク質製剤は、毎日、週に２回、週に１回、２週間毎、又は毎月を含むいずれかの適切な頻度で複数回用量で投与され得る。固定投薬量アポリポタンパク質製剤は、当該分野で公知のいずれかの投与経路、例えば静脈内投与（例えば、ボーラスとして又は６０、９０、１２０若しくは１８０分にわたるような期間にわたる持続注入により）、筋内、腹腔内、冠動脈内への直接的なものを含む動脈内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、髄腔内、経口、局所、又は吸入の経路により投与され得る。典型的には、固定投薬量アポリポタンパク質製剤は、静脈内注入又は注射のように非経口投与される。
【００４８】
好ましい固定投薬量としては、アポリポタンパク質０．１〜１５ｇ、０．５〜１２ｇ、１〜１０ｇ、２〜９ｇ、３〜８ｇ、４〜７ｇ又は５〜６ｇが挙げられる。特に好ましい固定投薬量としては、アポリポタンパク質１〜２ｇ、３〜４ｇ、５〜６ｇ又は６〜７ｇが挙げられる。特定の固定投薬量の非限定的な例としては、アポリポタンパク質０．２５ｇ、０．５ｇ、１ｇ、１．７ｇ、２ｇ、３．４ｇ、４ｇ、５．１ｇ、６ｇ、６．８ｇ及び８ｇが挙げられる。
【００４９】
使用され得る固定投薬量投与計画の非限定的な具体例としては、週に１回９０分間にわたる静脈内注入による０．２５ｇ、０．５ｇ、１ｇ、１．７ｇ、２ｇ、３．４ｇ、４ｇ、５．１ｇ、６ｇ、６．８ｇ若しくは８ｇ、週に１回１２０分にわたる静脈内注入によるアポリポタンパク質０．２５ｇ、０．５ｇ、１ｇ、１．７ｇ、２ｇ、３．４ｇ、４ｇ、５．１ｇ、６ｇ、６．８ｇ若しくは８ｇ、又は週に２回の９０分若しくは１２０分にわたる静脈内注入によるアポリポタンパク質０．２５ｇ、０．５ｇ、１ｇ、１．７ｇ、２ｇ、３．４ｇ、４ｇ、５．１ｇ、６ｇ、６．８ｇ若しくは８ｇが挙げられる。
【００５０】
さらに別の局面において、本発明は、本明細書において開示されるアポリポタンパク質製剤をヒトに投与する工程を含む、ヒトにおいて疾患、障害又は状態を予防的又は治療的に処置する方法を提供する。
【００５１】
適切には、固定投薬量アポリポタンパク質製剤の予防的又は治療的投与に応答性の疾患、障害又は状態としては、限定されないが、心血管疾患（例えば急性冠症候群（ＡＣＳ）、アテローム性動脈硬化症、不安定狭心症、及び心筋梗塞）のような疾患、障害又は状態、ＡＣＳを生じやすくする糖尿病、脳卒中、腎機能不全、又は心筋梗塞のような疾患、障害又は状態、高コレステロール血症（例えば、上昇した血清コレステロール又は上昇したＬＤＬコレステロール）、及びタンジール病の症状を示すような高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の減少したレベルから生じる低コレステロール血症が挙げられる。
【００５２】
本発明はまた、本明細書に開示される固定投薬量アポリポタンパク質製剤の１又はそれ以上の単位用量及び１つ又はそれ以上の他のキット構成要素を含む、固定投薬量アポリポタンパク質キットを提供する。
【００５３】
適切には、キットは本明細書以前に記載されるようなヒトにおける疾患、障害又は状態を予防的又は治療的に処置するためのものである。
【００５４】
１つ又はそれ以上の他のキット構成要素の非限定的な例としては、使用のための指示書；単位用量のそれぞれを含有するバイアル、コンテナ又は他の貯蔵容器；送達デバイス、例えば、針、カテーテル、シリンジ、管状部材など；並びに／又はキットを安全かつ都合よく貯蔵及び／若しくは輸送するために適した包装材料が挙げられる。好ましくは、使用のための指示書はラベル又は添付文書であり、ここでラベル又は添付文書は、アポリポタンパク質製剤がそれを必要とするヒト被験体へ固定用量を投与することにより心血管疾患のような疾患又は状態を処置するために使用され得るということを示す。
【００５５】
「添付文書」は、アポリポタンパク質製剤の市販パッケージに含まれる指示書を指し、このようなアポリポタンパク質製剤の使用に関する適応症、用法、投薬量、投与、禁忌及び／又は警告についての情報を含む。
【００５６】
本明細書における目的のために、「バイアル」はアポリポタンパク質製剤を保持する容器を指す。バイアルはシリンジにより穿孔可能なストッパにより密封され得る。一般的に、バイアルはガラス材料から形成される。従って、バイアルは好ましくはバイアルあたり０．２５ｇ、０．５ｇ、１ｇ、２ｇ、２．５ｇ、３ｇ、３．５ｇ、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、８ｇ又は１０ｇのタンパク質含有量を有する凍結乾燥されたｒＨＤＬ製剤を含む。より好ましくは、アポリポタンパク質含有量はバイアルあたり０．５ｇ、１ｇ、２ｇ、４ｇ、６ｇ、８ｇ又は１０ｇのいずれかである。
【００５７】
バイアル中のアポリポタンパク質製剤は、液体、凍結乾燥、凍結などを含む様々な状態であり得る。固定投薬量アポリポタンパク質製剤は好ましくは液体として安定である。安定性は当該分野で公知のいずれかの手段により測定され得るが、濁度は好ましい基準である。約１０、１５、２０、又は３０ＮＴＵ未満の濁度レベルは、一般的に安定な固定投薬量アポリポタンパク質製剤とみなされ得る。濁度測定は、室温又は３７℃のような貯蔵温度で０時間（ｈｒ）、２時間、４時間、６時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、７２時間、７日及び１４日のような期間にわたって固定投薬量アポリポタンパク質製剤をインキュベートすることにより取られ（ｔａｋｅｎ）得る。好ましくは、固定投薬量アポリポタンパク質製剤は、それを１４日間室温で貯蔵し、約１５ＮＴＵ未満の濁度を示した場合に液体として安定であるとみなされる。
【００５８】
キットは、医療従事者による固定投薬量アポリポタンパク質製剤の投与、又は患者若しくは介護人による自己投与を容易にし得る。
【００５９】
以前に記載されるように、本明細書に開示される固定投薬量アポリポタンパク質製剤は、いずれかのアポリポタンパク質製剤であり得る。好ましくは、アポリポタンパク質製剤は、アポリポタンパク質、脂質及び場合により界面活性剤を含むｒＨＤＬ製剤である。従って、固定投薬量アポリポタンパク質又はｒＨＤＬ製剤は、一般的には、通常は「体重調整」用量により投与されるであろういずれかのこのような製剤に適用し得る。ｒＨＤＬ製剤の非限定的な例としては、ＷＯ２００３／０９６９８３；ＵＳ２００４０２６６６６２；ＷＯ２００５／０４１８６６；ＷＯ２００６／１００５６７；ＷＯ０６／２００６９２４０；及びＷＯ２０１０／０９３９１８、ＷＯ２０１２／００００４８及びＷＯ２０１２／１０９１６２に記載されるものが挙げられる。
【００６０】
１つの特定の非限定的な例は、Ａｐｏ−Ａ１、並びにスフィンゴミエリンを含む１つ又はそれ以上のリン脂質及び１つ又はそれ以上の負に荷電したリン脂質、例えばホスファチジルイノシトール及びホスファチジルグリセロールを含むｒＨＤＬ製剤である。
【００６１】
いくつかの実施態様において、界面活性剤は固定投薬量ｒＨＤＬ製剤に存在しない。他の実施態様において、界面活性剤は固定投薬量ｒＨＤＬ製剤に存在する。１つの好ましい実施態様において、固定投薬量ｒＨＤＬ製剤は、毒性でないレベルで、又は少なくとも比較的低い毒性を示すレベルで界面活性剤を含む。この点についてＷＯ２０１２／００００４８が参照され、これはこの実施態様に従うｒＨＤＬ製剤に関する詳細な説明を提供する。
【００６２】
本発明に至る作業において、いくつかのｒＨＤＬ製剤は、異常な又は低下した肝機能により証明されるような、ｒＨＤＬ製剤のヒトへの投与の際に肝毒性を示すということが示された。異常であるか又は低下し得る肝機能の非限定的な例としては、上昇したアラニンアミノトランスフェラーゼ活性（ＡＬＴ）、上昇したアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）活性及び／又は上昇したビリルビンレベルが挙げられる。肝毒性を引き起こしたレベルでのｒＨＤＬ製剤の例は、Ｔａｒｄｉｆ  ｅｔ  ａｌ．、２００７、ＪＡＭＡ−Ｅｘｐ．２９７  Ｅ１に記載される。好ましくは、固定投薬量アポリポタンパク質製剤は肝毒性を示さない。
【００６３】
肝臓毒性は様々なインビトロ及びインビボモデルにより評価され得る。インビトロモデルの一例はＨＥＰ−Ｇ２細胞を使用する。これはＨＥＰ−Ｇ２細胞を対数期に増殖させることを含む。次いで細胞を培地から取り出し、そしてＰＢＳで洗浄した後トリプシン処理し、そして培地（９０％ＤＭＥＭ、１０％不活化ＦＣＳ、１％非必須アミノ酸、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）１０ｍＬに再懸濁する。細胞増殖及び生存能力は、Ｎｅｕｂａｕｅｒ血球計算器及びトリパンブルー染色を使用してモニタリングされる。続いて１０ｘ１０4Ｃ／ｍＬを含有する１００μＬのアリコートを９６ウェル平底プレートに播種し、そして終夜３７℃、５％ＣＯ2、９５％Ｈ2Ｏにてインキュベートした。試験品（例えばｒＨＤＬ製剤）を含有するサンプル（７００μＬ）を、培地を加えることにより調製した。ウェルの第一列からの培地を除去し、そして試験品溶液２００μＬを加えた。連続１：２希釈の組をプレート上にそろえた。次いでこれらのプレートを７２時間３７℃、５％ＣＯ2、９５％Ｈ2Ｏにてインキュベートした。この後、細胞生存能力を決定した。これは、３ｘニュートラルレッド溶液（１００ｍＬ  ＰＢＳ中７０ｍｇニュートラルレッド）５０μＬを各ウェルに加えることにより行われ得る。これらのプレートを２時間３７℃、５％ＣＯ2、９５％Ｈ2Ｏにてインキュベートし、そしてウェルを２００μＬ  ＰＢＳで１回洗浄した。この後、エタノール１００μＬを各プレートに加え、そしてプレートを２０分間震盪させた後、５４０ｎｍで読み取った。
【００６４】
インビボ肝毒性（ｈｅｐａｔｏｘｉｃｉｔｙ）モデルの例は、意識下（ｃｏｎｓｃｉｏｕｓ）ウサギモデルである。このモデルは、拘束デバイス（ウサギホルダー）に置かれ、そしてそれらの耳静脈中に静脈内（ｉ．ｖ．）カテーテルを挿入されたウサギを使用する。試験品を４０分静脈内注入として投与する。血液サンプルを耳動脈から採取し、そして血清にしてストレプトキナーゼ−血漿（５％）バイアル中に集める。血液サンプルを処理して血清にして−２０℃で保存し、そして血漿にして−８０℃で保存する。次いでサンプルは、市販の酵素光度試験キット（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ）を使用してＡＬＴ及びＡＳＴ活性のレベルを評価され得る。ヒトＡｐｏ  Ａ−Ｉレベルは比濁法アッセイを使用して決定され得る。好ましくは、固定投薬量アポリポタンパク質製剤中に存在する場合の界面活性剤レベルは、肝毒性を示すレベルの約５〜３５％である。この範囲には、例えば５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％及び３５％が含まれる。より好ましくは、界面活性剤のレベルは、肝毒性を示すレベルの約５〜２０％である。有利には、このレベルは、肝毒性を示すレベルの約５〜１０％である。好ましくは、これらのレベルは、界面活性剤の肝毒性を示す最小又は閾値レベルを単位として表される。
【００６５】
例として、肝毒性を引き起こすか、生じるか、又は少なくとも肝毒性と関連することを示された界面活性剤のレベルは、０．３ｇ／ｇ  Ａｐｏ−ＡＩ又は６ｇ／Ｌ  ｒＨＤＬ製剤（２０ｇ／Ｌ  Ａｐｏ−ＡＩにて）である。従って、界面活性剤のこのレベルの５〜１０％は０．０１５〜０．０３ｇ／ｇ  Ａｐｏ−ＡＩ又は０．５〜０．９ｇ／Ｌ  ｒＨＤＬ製剤（３０ｇ／Ｌ  Ａｐｏ−ＡＩにて）である。
【００６６】
界面活性の「レベル」は、界面活性剤の絶対量、界面活性剤の濃度（例えば、ｒＨＤＬ製剤の単位体積あたりの質量）及び／又はｒＨＤＬ製剤の成分の別の量若しくは濃度と比較した界面活性剤の量若しくは濃度の比であり得る。例のみとして、界面活性剤のレベルは、ｒＨＤＬ製剤中に存在するアポリポタンパク質（例えばＡｐｏ−ＡＩ）の総質量に関して表され得る。
【００６７】
３０ｇ／Ｌアポリポタンパク質を含むｒＨＤＬ製剤の約０．４５ｇ／Ｌ以上の界面活性剤濃度は、安定性及び非毒性の点から最適である。安定性は、当該分野で公知のずれかの手段により有利に測定され得るが、ｒＨＤＬ製剤の濁度が好ましい基準である。
【００６８】
さらに好ましい実施態様において、固定投薬量ｒＨＤＬ製剤は、肝毒性を引き起こさないレベルで脂質を含む。適切には、脂質のレベルは、肝毒性を引き起こすか又は肝毒性と関連するレベルの約２０〜７０％である。特定の実施態様において、脂質のレベルは、肝毒性を引き起こすか又は肝毒性と関連があるレベルの好ましくは約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％又は６５％、及びこれらの量の間のいずれかの範囲である。好ましくは、これらのレベルは、肝毒性を示す脂質の最小レベル又は閾値レベルを単位として表される。
【００６９】
例として、本発明に至る作業において示された、肝毒性を引き起こすか、生じるか、又は少なくとも肝毒性と関連がある脂質レベルは８４ｇ／Ｌである。従って、脂質は好ましくは約３０〜６０ｇ／Ｌの濃度である。これには３０、３５、４０、４５、５０、５５及び６０ｇ／Ｌ、並びにこれらの量の間のいずれかの範囲が含まれる。脂質の特に有利な濃度は約３０〜５０ｇ／Ｌであり、又は特定の実施態様では約３４若しくは４７ｇ／Ｌである。
【００７０】
脂質の「レベル」は、脂質の絶対量、脂質の濃度（例えば、ｒＨＤＬ製剤の単位体積あたりの質量）及び／又は固定投薬量アポリポタンパク質製剤の成分の別の量又は濃度と比較した脂質の量又は濃度の比であり得る。例のみとして、脂質のレベルは、固定投薬量ｒＨＤＬ製剤中に存在するアポリポタンパク質（例えばＡｐｏ−ＡＩ）のモル比を単位として表される。
【００７１】
１つの好ましい実施態様において、アポリポタンパク質：脂質のモル比は、１：２０〜１：１００の範囲である。この範囲には、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０及び１：９０のようなモル比が含まれる。より好ましくは、アポリポタンパク質：脂質のモル比は１：４０〜１：７５の範囲である。アポリポタンパク質の特に有利な比は約１：４０又は１：５５である。
【００７２】
他の実施態様において、アポリポタンパク質：脂質のモル比は、約１：８０〜約１：１２０の範囲である。例えば、この比は１：１００〜１：１１５、又は１：１０５〜１：１１０であり得る。これらの実施態様において、モル比は例えば１：８０〜１：９０、１：９０〜１：１００、又は１：１００〜１：１１０であり得る。
【００７３】
適切には、本明細書に開示される固定投薬量アポリポタンパク質製剤は安定剤をさらに含む。特に、安定剤は凍結乾燥の間のｒＨＤＬ製剤の安定性を維持する。適切には、安定剤は糖又は糖アルコールのような炭水化物である。適切な糖又は糖アルコールの例は、フルクトース、トレハロース、マンニトール及びソルビトールである。好ましくは、安定剤はスクロースのような二糖類である。スクロースの好ましい濃度は固定投薬量アポリポタンパク質製剤の約１０〜８５ｇ／Ｌ（約１．０〜８．５％質量／体積に相当）である。好ましくは、スクロースの濃度は約４６〜４８ｇ／Ｌ（約４．６〜４．８％質量／体積に相当）又は約７５ｇ／Ｌ（約７．５％質量／体積に相当）であり、これはＣＳＬ１１１のようなｒＨＤＬ製剤と比較して比較的減少している。この比較的減少したスクロースが本発明のｒＨＤＬ製剤のより速い注入速度を可能にし得るということが提案される。他の安定剤は、限定されないが、アミノ酸（例えば、グリシン、プロリン）、抗酸化剤、乳化剤、界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）、キレート剤、ゼラチン、合成油、多価アルコール、アルギネート又はいずれかの薬学的に許容しうる担体及び／若しくは添加剤であり得るか又はこれらを含み得る。これに関して、例として「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、Ｆｒｏｋｊａｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｔａｙｌｏｒ  ＆；Ｆｒａｎｃｉｓ（２０００）、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」、３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０００）及び国際公開ＷＯ２００９／０２５７５４が参照される。
【００７４】
界面活性剤の減少又は除去は、例えばろ過、疎水性吸着又は疎水性相互作用クロマトグラフィ、透析、イオン交換吸着及びイオン交換クロマトグラフィを含む当該分野で公知のいずれかの手段により行われ得る。
【００７５】
いくつかの実施態様において、非極性ポリスチレン樹脂が界面活性剤レベルを減少させるために適切であり得る。このような樹脂は好ましくは架橋コポリマー（例えば、架橋したスチレンとジビニルベンゼンのコポリマー）の形態である。非限定的な例としては、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ−２及びＢｉｏ  Ｂｅａｄｓ  ＳＭが挙げられる。
【００７６】
ろ過としては、限定されないが、当該分野でよく理解されているような、ゲルろ過、ゲル浸透、ダイアフィルトレーション及び限外ろ過が挙げられる。ゲル浸透の非限定的な例は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ樹脂のような多孔性架橋デキストランを利用し得る。
【００７７】
大規模製造に特に適している特定の好ましい実施態様において、界面活性剤レベルはダイアフィルトレーションにより減少される。
【００７８】
本発明の好ましい実施態様が十分に理解され得、そして効果が実現され得るように、以下の非限定的な実施例が参照される。
【実施例】
【００７９】
導入
再構成高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）は、ＨＤＬの主要タンパク質成分である精製されたヒトアポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ＡｐｏＡ−Ｉ）からなる。低い血漿ＨＤＬは、先進国における主な死亡原因の１つである冠動脈疾患の増加した危険性と関連がある。結果として、ＨＤＬはアテローム性動脈硬化症の保護になり得るということが仮定される。ＨＤＬがそのアテローム保護（ａｔｈｅｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）効果を発揮する機構は複雑で完全に理解されていないが、末梢細胞（動脈細胞を含む）から肝臓へのコレステロールの流出に関与する様々な段階において作用すると考えられている。
【００８０】
この実施例において記載されるｒＨＤＬ製剤は、内在性ＨＤＬを模倣した新規な治療剤である。概念実証は、ＥＲＡＳＥ試験（１８３人の患者における短期ＣＳＬ１１１注入のフェーズ２ａ研究）において再構成ＨＤＬのより古い製剤ＣＳＬ１１１について実証された。しかし、ＣＳＬ１１１の開発は肝毒性のために中止された（Ｔａｒｄｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．、２０１０（前出）及びＷＯ２０１２／００００４８にもより詳細に記載される）。
【００８１】
本実施例において記載されるｒＨＤＬ製剤は、ＨＤＬの主要タンパク質成分である精製ヒトアポリポタンパク質Ａ−１（ＡｐｏＡ−Ｉ）から構成される（本明細書以前に記載され、そしてＷＯ２０１２／００００４８にもより詳細に記載される）。
【００８２】
主要目的は、モデルベースのアプローチ及びモンテカルロシミュレーションを使用してｒＨＤＬ製剤についての適切な投薬戦略（体重調整又は固定用量）の正当化を提供することであった。
【００８３】
方法
全体的アプローチ
モンテカルロシミュレーションは、この解析において開発されたＡｐｏＡ−Ｉについての暫定集団（ｉｎｔｅｒｉｍ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）ＰＫモデルを使用して行われた。シミュレーションは、ＡｐｏＡ−Ｉ生体内分布（ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）に影響を及ぼすと決定された重要な共変量を含む薬物動態（ＰＫ）モデルの全ての構成要素を使用した。推定集団平均（標準値）及び被験体間変動性値を使用して、暫定ＰＫパラメーターについての分布を規定し、そしてシミュレーションはそれらの分布からの無作為サンプリングを使用した。このサンプリングプロセスにより記載されるランダムネスは、モデルパラメーターにおける被験体間変動性を反映していた。
【００８４】
無作為に生成されたＰＫパラメーターを使用して、シミュレーションにおいて各仮想患者についてのＡｐｏＡ−Ｉの血漿濃度をシミュレートした。ＰＫモデルからの残余誤差の見積もりを使用して、測定誤差を濃度予測に導入した。（今や被験体間変動性及び測定誤差の両方を組み入れた）濃度予測を使用して、選択されたＡｐｏＡ−Ｉ曝露測定基準を各仮想患者について計算した。
【００８５】
結果を図及び表形態でまとめる。
【００８６】
シミュレーション詳細
ＡｐｏＡ−Ｉ曝露を以下の投薬計画の各々について別々にシミュレートした：
・９０分及び１２０分にわたる静脈内注入（ＩＶＩ）による週に１回の４０、７０及び１００ｍｇ／ｋｇ
・９０分にわたるＩＶＩによる週に１回の１．７、３．４及び５．１ｇ並びに１２０分にわたるＩＶＩによる週に１回の１．７、３．４、５．１及び６．８ｇ
・９０分及び１２０分にわたるＩＶＩによる週に２回の１．７、３．４及び５．１ｇ
投薬は４週間の間継続されると仮定した。週に２回の投与計画については、週の２回目の用量は最初の用量投与の開始の７２時間後に投与された。
【００８７】
体重、クレアチニンクリアランス（ＣＬＣＲ）及び性別はＡｐｏＡ−Ｉについての被験体間変動性の重要な源として認識されたので、これらの患者共変量の臨床的に関連する範囲をシミュレーションに含めた：
・ＡｐｏＡ−Ｉについて体重：６０、８０、１００及び１２０ｋｇ
・ＣＬＣＲ：５０、８０及び１４０ｍｌ／分
・年齢：２０、６０及び８０歳
・等しい比率の男性及び女性。
【００８８】
各シミュレーションセットは、各患者共変量及び投与計画の組み合わせを含んでいた。従って、ＡｐｏＡ−Ｉシミュレーションセットには４５６の仮想被験体（すなわち、４体重値×３ＣＬＣＲ値×２性別×１９投与計画）があった。１００シミュレーションを行った。
【００８９】
血漿濃度測定は、週に１回の投薬計画の最初の用量の開始から０、１、２、４、８、１２、２４、４８、７２、９６、１２０及び１６８時間、並びに週に２回の投薬計画の最初の用量の開始から０、１、１．５、２、３、４、６、８、１２、１８、２４、３６、４８、７２、７３、７３．５、７４、７５、７６、７８、８０、９０、９６、１０８、１２０、１４４及び１６８時間に起こるように割り当てられる。サンプリングを投薬の第１週の間及び第四週の間に行った。
【００９０】
目的の終点は、総血漿濃度対時間のプロフィール及び外因性最大血漿濃度（Ｃmax）、各投薬計画後０から７２時間までの曲線下面積（ＡＵＣ0-72）及び０から１６８時間までの曲線下面積（ＡＵＣ0-168）であった。Ｃmax及びＡＵＣ0-72は最初の用量及び最後の用量について計算したが、ＡＵＣ0-168は投薬の最初の週及び最後の週について計算した。曝露決定のための外因性血漿濃度を、シミュレートしたベースライン血漿濃度を各時点でのシミュレートした総血漿濃度から差し引くことにより計算した。
【００９１】
結果
投薬計画により推定されたＡｐｏＡ−Ｉ曝露
ＡｐｏＡ−Ｉ血漿濃度対時間プロフィールの推定中央値（図１）及び分布（図２）を投薬計画により示す（２時間注入期間が示される）。９０ｋｇの体重中央値を考慮すると、４０ｍｇ／ｋｇ用量についての曝露中央値は３．６ｇ用量を示し、そして３．４ｇ固定用量に匹敵する（図１を参照のこと）。同様に、７０ｍｇ／ｋｇ用量についての曝露中央値は６．３ｇを示し、そして６．８ｇ固定用量にほぼ匹敵する。
【００９２】
表１は、投与計画による用量投与の第四週の間の推定ＡｐｏＡ−Ｉ曝露を要約する。４０ｍｇ／ｋｇ及び３．４ｇ投薬計画について並びに７０ｍｇ／ｋｇ及び６．８ｇ投薬計画についての同様の平均曝露にもかかわらず、固定用量週１回投与計画と比較して、注入期間にかかわらず、体重調整投薬計画に関連して（曝露測定基準で％ＣＶにより測定して）約８〜１０％大きい変動性があった。図３〜５は、週に１回２時間にわたって注入された、同等の固定用量（それぞれ３．６ｇ及び６．３ｇ）と比較して、４０ｍｇ／ｋｇ及び７０ｍｇ／ｋｇ体重調整投薬計画についてやや広い曝露帯を示す。
【００９３】
投薬計画によるＡｐｏＡ−Ｉ曝露に対する体重の効果
固定用量投与計画については、体重は総曝露（ＡＵＣ）に影響しなかったが、Ｃmaxは体重が６０ｋｇから１２０ｋｇに倍増するのに伴って平均１６％減少した（図６〜図８；右パネル）。これに対して、体重調整投薬計画については、６０ｋｇから１２０ｋｇへの体重の倍増は用量の倍増を生じ、そして線形薬物動態理論と一致して、曝露はそれに従って増加すると推測される（図６〜図８；左パネル）。従って、体重は体重調整用量により及ぼされるよりもＡｐｏＡ−Ｉ曝露に対して小さい影響を有し、これは体重範囲の極限においてより明白であった。
【００９４】
考察
シミュレーション解析の結果は、体重が、体重調整用量により及ぼされるよりも小さい影響をＡｐｏＡ−Ｉ曝露に対して有していたということを示唆する。従って、体重範囲の極限において体重調整投与計画と比較して、固定用量投与計画に関連する曝露ではより少ない変動性が期待される。
【００９５】
本明細書に記載されるモデリング及びシミュレーション結果は、広い体重範囲にわたってＡｐｏＡ−Ｉ曝露における変動性を減らすためのｒＨＤＬ製剤の固定用量投与計画の投与を支持する。
【００９６】
本明細書全体を通して、目的は、本発明をいずれか１つの実施態様又は特定の特徴の収集物に限定することなく、本発明の好ましい実施態様を記載することである。様々な変更及び改変が、本発明から逸脱することなく、記載され説明された実施態様に対して為され得る。
【００９７】
本明細書において言及される各特許及び特定の書類の開示、コンピュータプログラム並びにアルゴリズムは参照によりその全体が加入される。
【００９８】
【表１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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