(57)【要約】  本発明は、器官の生存可能性および／または寿命を改善するために使用される、修飾ｍＲＮＡ分子を製造し最適化する組成物と方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
器官または組織移植片、またはそれらの一部分の生存可能性、機能性または寿命を増加させる方法であって、前記器官または組織移植片、またはそれらの一部分を修飾ｍＲＮＡを含む組成物と接触させることを含む、方法。
【請求項２】
器官が、腎臓、心臓、肺、肝臓、膵臓、腸、脾臓、皮膚および眼からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
組織移植片が、心臓弁、骨、静脈、中耳、軟骨、腱および靭帯からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
修飾ｍＲＮＡ組成物が、製剤された修飾ｍＲＮＡを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
器官が心臓または肺であって、製剤が生理食塩水、脂質、リピドイド、ポリマー、リポソーム製剤、脂質ナノ粒子、速やかに排出される脂質ナノ粒子、ダイナミックポリコンジュゲート製剤、ａｔｕｐｌｅｘ、ＤＢＴＣ製剤、ＰＬＧＡポリマー、プロタミン系剤、細胞透過性ペプチド、糖コンジュゲートまたはステロイド、ヒドロゲル、シーラントおよび細胞ベースの担体系からなる群より選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
接触させることが、修飾ｍＲＮＡをホスト生物に投与することを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ホスト生物がドナー生物である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ドナー生物への投与が、心臓、肺または膵臓を摘出するあらゆる手順の前、または心臓、肺または膵臓の摘出中に生じる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ドナー生物が哺乳動物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
哺乳動物がヒトである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
投与が、心臓、肺または膵臓の摘出前に、ドナーの血液への送達により行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
投与が、心臓、肺または膵臓の摘出前に、ドナーから全採血後の前記ドナーの血液への送達により行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
投与が、心臓、肺または膵臓の摘出中に、ドナーの血液への送達により行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
投与が、心臓、肺または膵臓の摘出中に、ドナーの胸腔への送達により行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
血液への送達が、少なくとも部分的には、医療デバイス、システムまたはコンポーネントの使用により、またはそれらとの併用により促進される、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
医療デバイスがエックスビボ器官管理システムである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
接触させることが、修飾ｍＲＮＡをレシピエント生物に投与することを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１８】
レシピエント生物への投与が、ホストの心臓または肺を摘出するあらゆる手順の前、ホストの心臓摘出中、ホストの心臓摘出後であるが心臓または肺の移植前、心臓移植中または心臓もしくは肺移植後に生じる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
レシピエント生物への投与が、少なくとも部分的には、医療デバイス、システムまたはコンポーネントの使用により、またはそれらとの併用により促進される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
医療デバイスがエックスビボ器官管理システムである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
製剤された修飾ｍＲＮＡを含む医薬組成物であって、前記修飾ｍＲＮＡはラジカル捕捉剤として作用するポリペプチドをコードする、医薬組成物。
【請求項２２】
器官または組織移植片への再灌流による損傷を低減する方法であって、前記器官または組織移植片を、製剤された修飾ｍＲＮＡと接触させる、方法。
【請求項２３】
生物における移植拒絶反応を低減する方法であって、前記生物を、製剤された修飾ｍＲＮＡと接触させることを含み、前記修飾ｍＲＮＡは免疫抑制剤をコードする、方法。
【請求項２４】
製剤された修飾ｍＲＮＡが、タンパク質プロテインａ４β１、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ−１）、ＶＥＧＦ、ニューレグリン１（ＮＲＧ１）チモシンβ−４主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、ｂ細胞白血病／リンパ腫−２（ＢＣＬ−２）、一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）、インターロイキン−４、インターロイキン−１０、形質転換増殖因子β−１（ＴＧＦ−β１）、ヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１またはＨＭＯＸ１）、キラー細胞免疫グロブリン受容体（ＫＩＲ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤をコードする、請求項４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、修飾ｍＲＮＡを製造するための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
器官保存は、研究目的であれ将来の移植の機会に備えての生存可能性または寿命の延長の試みであれ、精力的に調査されている分野である。歴史的に、保存においては、器官または組織の損傷を減ずるためデバイスおよび組成物を用いての温度と虚血の制御に焦点が当てられてきた。細胞損傷を緩和しようと再灌流や保存液が用いられ、ある程度は成功している。エックスビボ器官管理システム（ｅｘ−ｖｉｖｏ  ｏｒｇａｎ  ｃａｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ）および携帯用器官チャンバなどのデバイスも、器官および組織の使用可能年数の延長に使用されている。
【０００３】
しかし、細胞と組織の生理を直接調節して器官の生存可能性を延長しつつ、そこで遊離基の損傷および免疫系の活性化などの破壊的反応系を回避する、より頑健なシステムが尚も必要とされている。
【０００４】
本発明は、タンパク質合成の改良により細胞生理を最適化するよう機能する修飾ＲＮＡ分子、特に修飾ｍＲＮＡ分子を提供する。最適化には、目的の翻訳可能転写物を送達するｍＲＮＡ分子に組み込まれる新規の化学物質の使用が含まれる。
【０００５】
天然のＲＮＡは、４種類の塩基性リボヌクレオチド、すなわちＡＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰおよびＧＴＰから合成されるが、転写後修飾ヌクレオチドを含み得る。さらに、およそ１００個の異なるヌクレオシド修飾がＲＮＡにおいて同定されている（非特許文献１）。
【０００６】
免疫賦活可能性、安定性およびＲＮＡの翻訳効率におけるヌクレオシド修飾の役割、およびその結果としてタンパク質発現を増大し、治療薬を産生し、器官の長寿化に便利なツールを提供する利点が本明細書に記載される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｒｏｚｅｎｓｋｉ，Ｊ，Ｃｒａｉｎ，Ｐ，および、ＭｃＣｌｏｓｋｅｙ，Ｊ．（１９９９）．  Ｔｈｅ  ＲＮＡ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｄａｔａｂａｓｅ：  １９９９  ｕｐｄａｔｅ．  Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７：  １９６−１９７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本明細書において、細胞生存可能性の向上に使用される修飾ｍＲＮＡ分子の製造および最適化のための組成物ならびに方法が記載される。特に、器官、組織、移植片またはそれらの部分の生存可能性または寿命を延長する方法が開示される。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
１つの実施形態では、前記器官または組織移植片、またはそれらの部分を修飾ＲＮＡ（たとえば修飾ｍＲＮＡ）を含む組成物と接触させることを含む、器官または組織移植片、またはそれらの部分の生存可能性または寿命を延長する方法が提供される。あらゆる器官、組織またはその部分が本発明の組成物で治療され得る。器官は、心臓、肺、脳、肝臓、基底核、脳幹髄質、中脳、脳橋、小脳、大脳皮質、視床下部、眼、下垂体、甲状腺、副甲
状腺、食道、胸腺、副腎、虫垂、膀胱、胆嚢、腸（たとえば大腸と小腸）、腎臓、膵臓、脾臓、胃、皮膚、前立腺、精巣、卵巣または子宮から選択され得る。組織は、心臓弁、骨、静脈、中耳、軟骨、腱または靭帯から選択され得る。
【００１０】
１つの実施形態では、修飾ＲＮＡ組成物は、製剤された修飾ｍＲＮＡを含み、製剤は、生理食塩水、脂質、リピドイド、リピドイド、ポリマー、リポソーム製剤、脂質ナノ粒子、速やかに排出される脂質ナノ粒子、ダイナミックポリコンジュゲート製剤、ａｔｕｐｌｅｘ、ＤＢＴＣ製剤、ＰＬＧＡポリマー、プロタミン系剤、細胞透過性ペプチド、糖コンジュゲート、ヒドロゲル、シーラント（たとえば、外科用シーラント）またはステロイドおよび細胞ベースの担体システムから選択され得る。
【００１１】
１つの実施形態では、修飾ｍＲＮＡはホスト生物に投与され得る。そのホスト生物は、ドナーまたはレシピエントホストであり得る。提供は、レシピエント生物がいることを必ずしも示唆しない。器官または組織の提供（または採取）は、レシピエントの非存在下で行われ得る。
【００１２】
１つの実施形態では、ドナー生物への投与は、器官または組織を摘出するための何らかの手順の前に、または摘出中に生じる。投与は、浸漬、接触、またはドナーまたはレシピエントの血中送達により行われ得る。さらに、投与は、少なくとも部分的には、エックスビボ器官管理システムなどの医療デバイス、システムまたはコンポーネントの使用またはそれらとの組合せにより促進され得る。
【００１３】
１つの実施形態では、投与される修飾ｍＲＮＡは、製剤された医薬組成物である。
１つの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、ラジカル捕捉剤または免疫抑制剤として作用するポリペプチドをコードする。
【００１４】
１つの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、プロテインａ４β１、ＶＣＡＭ−１、ＶＥＧＦ、ニューレグリン１またはチモシンβ−４などのタンパク質をコードする。
本発明の様々な実施形態の詳細を以下説明する。本発明の他の特徴、目的および利点はその説明、図面および特許請求の範囲から明らかになろう。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書において、細胞生存可能性の向上に使用される修飾ｍＲＮＡ分子の製造および最適化のための組成物ならびに方法が記載される。特に、修飾ＲＮＡ分子の使用により器官、組織またはそれらの移植片の生存可能性または寿命を延長する方法が開示される。
【００１６】
一般に、細胞に導入された外来性核酸、特にウイルス核酸は、インターフェロン（ＩＦＮ）の生成と細胞死をもたらす自然免疫反応を誘導する。しかし、治療薬、診断、試薬にとって、また、生物学的アッセイにとって、核酸の細胞内翻訳およびコードされたタンパク質の生成をもたらすように、核酸、例えばリボ核酸（ＲＮＡ）をインビボまたはエックスビボで細胞内に送達することは大きな関心事である。特に重要なのは、非組込み核酸の送達と機能であるが、これは、標的細胞への組込みにより特徴づけられる核酸は一般に発現レベルが不正確であり、子孫および近隣細胞に有害伝搬し、突然変異の大きなリスクの問題があるからである。
【００１７】
本明細書において、一部には、細胞の状態、機能および／または活性を調節することができるポリペプチドをコードする核酸分子と、これらの核酸とポリペプチドを作成し使用する方法が提供される。本明細書に記載され、同時係属および共有される出願である２０１１年８月５日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４６８６１号および２０１１年１０月３日に出願された同ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０５４６３６号（その全容が参
照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、これらの修飾核酸分子はこれらが導入される細胞集団の自然免疫活性を低下させることができるので、その細胞集団におけるタンパク質産生効率が上昇する。
【００１８】
修飾核酸分子（修飾ＲＮＡ）
本発明は、１または複数の修飾ヌクレオシドを含むｍＲＮＡなどのＲＮＡを含む核酸（「修飾核酸」または「修飾核酸分子」と呼ばれる）を提供し、核酸はそのｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫反応の実質的誘導の欠如を含む有用な特性を有する。これらの修飾核酸は、接触された細胞のタンパク質産生効率、核酸の細胞内保持および生存可能性を向上させ、ならびに低下した免疫原性を有するるので、これらの特性をもつこれらの核酸はここでは「高性能」核酸または修飾ＲＮＡと呼ばれる。
【００１９】
「核酸」という用語は、もっとも広義には、ホスホジエステル結合により連結されたヌクレオチドのポリマーを含む、あらゆる化合物および／または物質を含む。これらのポリマーはしばしばオリゴヌクレオチドと呼ばれる。
【００２０】
例となる核酸は、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）またはそれらのハイブリッドを含む。それらは、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒的ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、三重らせん体形成を誘導するＲＮＡ、アプタマー、ベクターなども含み得る。好ましい実施形態では、修飾核酸分子は、１または複数のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。修飾ｍＲＮＡは、ここでは「ｍｍＲＮＡ」とも呼ばれる。本明細書に記載されるように、本発明の核酸は、ｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫反応を実質的に誘導しない。
【００２１】
いくつかの実施形態では、核酸は翻訳可能である。
１つの翻訳可能領域と、１、２もしくは３以上の２つのヌクレオシド修飾を含む修飾核酸が提供される。いくつかの実施形態では、修飾核酸は、核酸が導入される細胞において、対応する非修飾核酸よりも低い分解率を示す。
【００２２】
別の態様では、本開示は、主溝相互作用たとえば結合パートナーの核酸との結合を攪乱し得るヌクレオチドを含む組成物を提供し、ここでヌクレオチドの主溝相互作用、たとえば結合パートナーへの結合親和性が低下している。
【００２３】
いくつかの実施形態では、化学修飾は、ヌクレオチドの糖部分に位置し得る。
いくつかの実施形態では、化学修飾は、ヌクレオチドのリン酸主鎖に位置し得る。
ある特定の実施形態では、たとえばタンパク質産生の正確なタイミングが望ましい場合、細胞に導入された修飾核酸分子を細胞内で分解することが望ましい。したがって、本発明は、細胞内で定方向の作用を受けることができる、分解ドメインを含む修飾核酸分子を提供する。
【００２４】
修飾
本発明の修飾核酸および修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）は、１、２、またはそれより多くの異なる修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、１、２、またはそれより多くの異なるヌクレオシドまたはヌクレオチド修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞に導入された修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡ（例えば１または複数のｍｍＲＮＡ分子を有する）は、非修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡと比べると、細胞内での分解率の低減を示す。
【００２５】
修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、あらゆる有用な修飾、例えば、糖、核酸塩基などへの修飾（例えば、核酸塩基の１または複数の修飾、例えば、ピリミジン核酸塩基の１個の原子を所望により置換アミノ、所望により置換チオール、所望により置換アルキル（例えば、メチルまたはエチル）、またはハロ（例えば、クロロまたはフルオロ）で置き換えまたは置換、またはヌクレオシド間結合（例えば、ホスホジエステル主鎖への１または複数の修飾）を含み得る。ある特定の実施形態では、修飾は、糖とヌクレオシド間結合の両方に存在する（例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）またはそれらのハイブリッドに存在するような１または修飾）。さらなる修飾が本明細書に記載される。
【００２６】
本明細書に記載されるように、本発明の修飾核酸分子とｍｍＲＮＡは、ｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫反応を実質的に誘導しない。ある特定の実施形態では、細胞に導入された修飾核酸分子または修飾ｍＲＮＡを細胞内で分解することが望ましい場合がある。例えば、タンパク質産生の精密なタイミングが望ましい場合は、修飾核酸分子または修飾ｍＲＮＡの分解が好ましい場合がある。したがって、いくつかの実施形態では、本発明は細胞内で定方向の作用を受けることができる、分解ドメインを含む修飾核酸分子を提供する。別の態様では、本開示は、主溝相互作用たとえば結合パートナーの核酸との結合を破壊し得るヌクレオシドまたはヌクレオチドを含む核酸を提供する（たとえば、修飾ヌクレオチドの主溝相互作用パートナーへの結合親和性が、非修飾ヌクレオチドと比べて低下している）。
【００２７】
修飾核酸分子とｍｍＲＮＡは、所望により、他の剤（例えば、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒的ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、三重らせん体形成を誘導するＲＮＡ、アプタマー、ベクターなど）を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、１または複数のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）と、１または複数の修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチド（例えば、ｍｍＲＮＡ分子）を含み得る。これらの修飾核酸分子とｍｍＲＮＡを以下に詳述する。
【００２８】
修飾核酸
本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードする連結ヌクレオシドの第１領域、第１領域の５’末端に位置する第１隣接領域、および第１領域の３’末端に位置する第２隣接領域を含み得る。
【００２９】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（Ｉａ）または式（Ｉａ−１）：
【００３０】
【化１】
2015510495.tif 000002
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここでｎｕは０から２の整数であり、各ＲＵは、独立して、Ｈ、ハロまたは所望により置換されているアルキルであり；
【００３１】
【化２】
2015510495.tif 000003
は、単結合かまたは存在せず；
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ２”、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４とＲ５はそれぞれ、存在する場合は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニルまたは不存在であり；ここでＲ３とＲ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”またはＲ５のうち１または複数との組合せ（例えばＲ１’とＲ３の組合せ、Ｒ１”とＲ３の組合せ、Ｒ２’とＲ３の組合せ、Ｒ２”とＲ３の組合せ、またはＲ５とＲ３の組合せ）は、一緒に、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンを形成し得、それらが結合している炭素とともに、所望により置換されているヘテロシクリル（例えば、二環、三環または四環ヘテロシクリル）を提供し；ここで、Ｒ５とＲ１’、Ｒ１”、Ｒ２’またはＲ２”のうち１または複数との組合せ（例えばＲ１’とＲ５の組合せ、Ｒ１”とＲ５の組合せ、Ｒ２’とＲ５の組合せ、またはＲ２”とＲ５の組合せ）は、一緒に、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンを形成し得、それらが結合している炭素とともに、所望により置換されているヘテロシクリル（例えば、二環、三環または四環ヘテロシクリル）を提供し；ここでＲ４とＲ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、Ｒ３またはＲ５のうち１または複数との組合せは、一緒に、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンを形成し得、それらが結合している炭素とともに、所望により置換されているヘテロシクリル（例えば、二環、三環または四環ヘテロシクリル）を提供し；
ｍ’とｍ’’はそれぞれ、独立して、０から３の整数（例えば、０から２、０から１、１から３または１から２）であり；
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンであり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアリールまたは不存在であり；
各Ｙ４は独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル（ｂｏｒａｎｙｌ）、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているチオアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシまたは所望により置換されているアミノであり；
各Ｙ５は独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、所望により置換されているアルキレン（例えば、メチレン）または所望により置換されているヘテロアルキレンであり；
ｎは１から１００，０００の整数であり；
Ｂは、核酸塩基（例えばプリン、ピリミジンまたはその誘導体）であり、ここでＢとＲ１’の組合せ、ＢとＲ２’の組合せ、ＢとＲ１”の組合せ、またはＢとＲ２”の組合せは、それらが結合している炭素とともに、所望により二環基（例えば二環ヘテロシクリル）を形成し得、またはここでＢ、Ｒ１”とＲ３の組合せ、またはＢ、Ｒ２”とＲ３の組合せは、所望により、本明細書の式（ＩＩｏ）〜（ＩＩｐ）などにある三環基または四環基（例えば三環または四環ヘテロシクリル）を形成し得る）。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは修飾リボースを含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（Ｉａ−２）〜（Ｉａ−５）を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含む。
【００３３】
【化３】
2015510495.tif 000004
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（Ｉｂ）または式（Ｉｂ−
１）：
【００３４】
【化４】
2015510495.tif 000005
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、ここで
Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここでｎｕは０から２の整数であり、各ＲＵは、独立して、Ｈ、ハロまたは所望により置換されているアルキルであり；
【００３５】
【化５】
2015510495.tif 000006
は、単結合かまたは存在せず；
Ｒ１、Ｒ３’、Ｒ３”およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニルまたは不存在であり；ここでＲ１とＲ３’の組合せまたはＲ１とＲ３”の組合せは、一緒に、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンを形成し得（例えばロックド核酸を産生する）；
各Ｒ５は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシまたは不存在であり；
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンであり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、または所望により置換されているアリールであり；
各Ｙ４は独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシまたは所望により置換されているアミノであり；
ｎは１から１００，０００の整数であり；
Ｂは核酸塩基である。
【００３６】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（Ｉｃ）：
【００３７】
【化６】
2015510495.tif 000007
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここでｎｕは０から２の整数であり、各ＲＵは、独立して、Ｈ、ハロまたは所望により置換されているアルキルであり；
【００３８】
【化７】
2015510495.tif 000008
は、単結合かまたは存在せず；
Ｂ１、Ｂ２およびＢ３はそれぞれ、独立して、核酸塩基（例えばプリン、ピリミジン、または本明細書に記載されるようなその誘導体）、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキニルであり、ここでＢ１、Ｂ２とＢ３のうち１つだけが核酸塩基であり；
Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒ３およびＲ５はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキニルであり；
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンであり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、または所望により置換されているアリールであり；
各Ｙ４は独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル
、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシまたは所望により置換されているアミノであり；
各Ｙ５は独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、所望により置換されているアルキレン（例えば、メチレン）または所望により置換されているヘテロアルキレンであり；
ｎは１から１００，０００の整数であり；
ここでＵを含む環は１または複数の二重結合を含み得る。
【００３９】
特定の実施形態では、Ｕを含む環は、Ｕ−ＣＢ３Ｒｂ３の間またはＣＢ３Ｒｂ３−ＣＢ２Ｒｂ２の間に二重結合をもたない。
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（Ｉｄ）：
【００４０】
【化８】
2015510495.tif 000009
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここでｎｕは０から２の整数であり、各ＲＵは、独立して、Ｈ、ハロまたは所望により置換されているアルキルであり；
各Ｒ３は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキニルであり；
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンであり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、または所望により置換されているアリールであり；
各Ｙ４は独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシまたは所望により置換されているアミノであり；
各Ｙ５は独立して、Ｏ、Ｓ、所望により置換されているアルキレン（例えば、メチレン）または所望により置換されているヘテロアルキレンであり；
ｎは１から１００，０００の整数であり；
Ｂは、核酸塩基（例えばプリン、ピリミジン、またはその誘導体）である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、修飾核酸分子または修飾ｍＲＮＡは、式（Ｉｅ）：
【００４２】
【化９】
2015510495.tif 000010
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｕ’とＵ”はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、またはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここでｎｕは０から２の整数であり、各ＲＵは、独立して、Ｈ、ハロまたは所望により置換されているアルキルであり；
各Ｒ６は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキニルであり；
各Ｙ５’は独立して、Ｏ、Ｓ、所望により置換されているアルキレン（例えば、メチレンまたはエチレン）であるか、または所望により置換されているヘテロアルキレンであり；
ｎは１から１００，０００の整数であり；
Ｂは、核酸塩基（例えばプリン、ピリミジン、またはその誘導体）である。
【００４３】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（Ｉｆ）または（Ｉｆ−１）：
【００４４】
【化１０】
2015510495.tif 000011
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｕ’とＵ”はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここでｎｕは０から２の整数であり、各ＲＵは、独立して、Ｈ、ハロまたは所望により置換されているアルキルであり（例えば、Ｕ’はＯでありＵ”はＮである）；
【００４５】
【化１１】
2015510495.tif 000012
は、単結合かまたは存在せず；
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ２”、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニルまたは不存在であり；ここでＲ１’とＲ３の組合せ、Ｒ１”とＲ３の組合せ、Ｒ２’とＲ３の組合せまたはＲ２”とＲ３の組合せは、一緒に、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンを形成し得（例えばロックド核酸を産生する）；ｍ’とｍ”はそれぞれ、独立して、０から３の整数（例えば、０から２、０から１、１から３または１から２）であり；
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンであり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアリールまたは不存在であり；
各Ｙ４は独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシまたは所望により置換されているアミノであり；
各Ｙ５は独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、所望により置換されているアルキレン（例えば、メチレン）または所望により置換されているヘテロアルキレンであり；
ｎは１から１００，０００の整数であり；
Ｂは、核酸塩基（例えばプリン、ピリミジン、またはその誘導体）である。
【００４６】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、Ｕを含む環は１つか２つの二重結合を有する。
【００４７】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、存在する場合は、Ｒ１、Ｒ１’およびＲ１”はそれぞれＨである。さらなる実施形態では、存在する場合は、Ｒ２、Ｒ２’およびＲ２”はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、所望により置換されているアルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシ）または所望により置換されているアルコキシアルコキシである。特定の実施形態では、アルコキシアルコキシは、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’であり、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６または１か
ら１０）であり、Ｒ’はＨまたはＣ１〜２０アルキルである）。いくつかの実施形態では、ｓ２は０であり、ｓ１は１または２であり、ｓ３は０または１であり、Ｒ’はＣ１〜６アルキルである。
【００４８】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、存在する場合は、Ｒ１、Ｒ１’およびＲ１”はそれぞれＨである。さらなる実施形態では、存在する場合は、Ｒ２、Ｒ２’およびＲ２”はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、所望により置換されているアルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシ）または所望により置換されているアルコキシアルコキシである。特定の実施形態では、アルコキシアルコキシは、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’であり、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６または１から１０）であり、Ｒ’はＨまたはＣ１〜２０アルキルである）。いくつかの実施形態では、ｓ２は０であり、ｓ１は１または２であり、ｓ３は０または１であり、Ｒ’はＣ１〜６アルキルである。
【００４９】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシ）または所望により置換されているアルコキシアルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＨであり、またはＲ３、Ｒ４およびＲ５は全てＨである。特定の実施形態では、Ｒ３はＣ１〜６アルキルであり、Ｒ４はＣ１〜６アルキルであり、Ｒ５はＣ１〜６アルキルであり、またはＲ３、Ｒ４およびＲ５は全てＣ１〜６アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ３とＲ４はいずれもＨであり、Ｒ５はＣ１〜６アルキルである。
【００５０】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、Ｒ３とＲ５は、一緒に、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンを形成し、それらが結合している炭素とともに、所望により置換されているヘテロシクリル（例えば、トランス−３’，４’類似体などの二環、三環または四環ヘテロシクリル）を与え、ここでＲ３とＲ５は、一緒に、ヘテロアルキレン（例えば、−（ＣＨ２）ｂ１Ｏ（ＣＨ２）ｂ２Ｏ（ＣＨ２）ｂ３−、ここでｂ１、ｂ２およびｂ３はそれぞれ、独立して、０から３の整数である）を形成する。
【００５１】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、Ｒ３とＲ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”またはＲ５のうちの１または複数が、一緒に、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンを形成し、それらが結合している炭素とともに、所望により置換されているヘテロシクリル（例えば、二環、三環または四環ヘテロシ
クリルを与え、Ｒ３とＲ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”またはＲ５のうちの１または複数が、一緒に、ヘテロアルキレン（例えば、−（ＣＨ２）ｂ１Ｏ（ＣＨ２）ｂ２Ｏ（ＣＨ２）ｂ３−、ここでｂ１、ｂ２およびｂ３はそれぞれ、独立して、０から３の整数である）を形成する。
【００５２】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、Ｒ５とＲ１’、Ｒ１”、Ｒ２’またはＲ２”のうちの１または複数が、一緒に、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンを形成し、それらが結合している炭素とともに、所望により置換されているヘテロシクリル（例えば、二環、三環または四環ヘテロシクリルを与え、Ｒ５とＲ１’、Ｒ１”、Ｒ２’またはＲ２”のうちの１または複数が、一緒に、ヘテロアルキレン（例えば、−（ＣＨ２）ｂ１Ｏ（ＣＨ２）ｂ２Ｏ（ＣＨ２）ｂ３−、ここでｂ１、ｂ２およびｂ３はそれぞれ、独立して、０から３の整数である）を形成する。
【００５３】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、各Ｙ２は、独立して、Ｏ、Ｓまたは−ＮＲＮ１−であり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニルまたは所望により置換されているアリールである。特定の実施形態では、Ｙ２はＮＲＮ１−であり、ここでＲＮ１はＨまたは所望により置換されているアルキルである（例えばメチル、エチル、イソプロピルまたはｎ−プロピルなどのＣ１〜６アルキル）。
【００５４】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、各Ｙ３は、独立して、ＯまたはＳである。
【００５５】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、Ｒ１はＨであり；各Ｒ２は、独立して、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、所望により置換されているアルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシ）または所望により置換されているアルコキシアルコキシ（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６、または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６、または１から１０）であり、Ｒ’はＨまたはＣ１〜２０アルキルであり、たとえばここでｓ２は０であり、ｓ１は１または２であり、ｓ３は０または１であり、Ｒ’はＣ１〜６アルキルである）；各Ｙ２は、独立して、Ｏまたは−ＮＲＮ１−であり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニルまたは所望により置換されているアリール（例えば、ここでＲＮ１はＨまたは所望により置換されているアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピルまたはｎ−プロピルなどのＣ１−６アルキル）である）であり；各Ｙ３は、独立して、ＯまたはＳ（例えば、Ｓ）である。さらなる実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシ）または所望により置換されているア
ルコキシアルコキシである。さらなる実施形態では、各Ｙ１は、独立して、Ｏまたは−ＮＲＮ１−であり、ここでＲＮ１は、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニルまたは所望により置換されているアリール（例えば，ここでＲＮ１はＨまたは所望により置換されているアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピルまたはｎ−プロピルなどのＣ１〜６アルキル）である）であり；各Ｙ４は、独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているチオアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシまたは所望により置換されているアミノである。
【００５６】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、各Ｒ１は、独立して、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、所望により置換されているアルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシ）または所望により置換されているアルコキシアルコキシ（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６、または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６、または１から１０）であり、Ｒ’はＨまたはＣ１〜２０アルキルであり、たとえばここでｓ２は０であり、ｓ１は１または２であり、ｓ３は０または１であり、Ｒ’はＣ１〜６アルキルである）；Ｒ２はＨであり；各Ｙ２は、独立して、Ｏまたは−ＮＲＮ１−であり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニルまたは所望により置換されているアリール（例えば、ここでＲＮ１はＨまたは所望により置換されているアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピルまたはｎ−プロピルなどのＣ１〜６アルキル）である）であり；各Ｙ３は、独立して、ＯまたはＳ（例えば、Ｓ）である。さらなる実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシ）または所望により置換されているアルコキシアルコキシである。さらなる実施形態では、各Ｙ１は、独立して、Ｏまたは−ＮＲＮ１−であり、ここでＲＮ１は、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニルまたは所望により置換されているアリール（例えば，ここでＲＮ１はＨまたは所望により置換されているアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピルまたはｎ−プロピルなどのＣ１〜６アルキル）である）であり；各Ｙ４は、独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているチオアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシまたは所望により置換されているアミノである。
【００５７】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、Ｕを含む環は、β−Ｄ（例えばβ−Ｄ−リボ）立体配置である。
【００５８】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、Ｕを含む環は、α−Ｌ（例えばα−Ｌ−リボ）立体配置である。
【００５９】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、１または複数のＢはシュードウリジン（ψ）または５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）ではない。いくつかの実施形態では、約１０％から約１００％のＢ核酸塩基がψまたはｍ５Ｃではない（例えば、Ｂのｎ数の１０％から２０％、１０％から３５％、１０％から５０％、１０％から６０％、１０％から７５％、１０％から９０％、１０％から９５％、１０％から９８％、１０％から９９％、２０％から３５％、２０％から５０％、２０％から６０％、２０％から７５％、２０％から９０％、２０％から９５％、２０％から９８％、２０％から９９％、２０％から１００％、５０％から６０％、５０％から７５％、５０％から９０％、５０％から９５％、５０％から９８％、５０％から９９％、５０％から１００％、７５％から９０％、７５％から９５％、７５％から９８％、７５％から９９％および７５％から１００％がψまたはｍ５Ｃではない）。いくつかの実施形態では、Ｂはψまたはｍ５Ｃではない。
【００６０】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））では、Ｂがシトシン、グアニン、ウラシルおよびアデンから選択された非修飾核酸塩基である場合、Ｙ１、Ｙ２またはＹ３の少なくとも１つはＯではない。
【００６１】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは修飾リボースを含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩａ）〜（ＩＩｃ）：
【００６２】
【化１２】
2015510495.tif 000013
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含む。特定の実施形態では、ＵはＯまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここでｎｕは０から２の整数であり、各ＲＵは、独立して、Ｈ、ハロまたは所望により置換されているアルキル（例えば、Ｕは−ＣＨ２−または−ＣＨ−である）である。別の本発明では、Ｒ１、Ｒ２
、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニルまたは存在せず（例えば、Ｒ１とＲ２はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキルまたは所望により置換されているアルコキシであり；Ｒ３とＲ４はそれぞれ、独立して、Ｈまたは所望により置換されているアルキルであり；Ｒ５はＨまたはヒドロキシである）、
【００６３】
【化１３】
2015510495.tif 000014
は単結合または二重結合である。
【００６４】
特定の実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩｂ−１）〜（ＩＩｂ−２）：
【００６５】
【化１４】
2015510495.tif 000015
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含む。いくつかの実施形態では、ＵはＯまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここでｎｕは０から２の整数であり、各ＲＵは、独立して、Ｈ、ハロまたは所望により置換されているアルキル（例えば、Ｕは−ＣＨ２−または−ＣＨ−である）である。他の実施形態では、Ｒ１とＲ２はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニルまたは存在しない（例えば、Ｒ１とＲ２はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキルまたは所望により置換されているアルコキシ、例えば、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、アルキルまたはアルコキシである）。特定の実施形態では、Ｒ２はヒドロキシまたは所望により置換されているアルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシまたは本明細書に記載されるいずれか）である。
【００６６】
特定の実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−４）：
【００６７】
【化１５】
2015510495.tif 000016
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含む。いくつかの実施形態では、ＵはＯまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここでｎｕは０から２の整数であり、各ＲＵは、独立して、Ｈ、ハロまたは所望により置換されているアルキル（例えば、Ｕは−ＣＨ２−または−ＣＨ−である）である。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているヒドロキシアルコキシ、所望により置換されているアミノ、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニルまたは存在しない（例えば、Ｒ１とＲ２はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキルまたは所望により置換されているアルコキシ、例えば、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、アルキルまたはアルコキシであり；各Ｒ３は、独立して、Ｈまたは所望により置換されているアルキルである））。特定の実施形態では、Ｒ２は、所望により置換されているアルコキシ（例えば、メトキシまたはエトキシまたは本明細書に記載されるいずれか）である。特定の実施形態では、Ｒ１は、所望により置換されているアルキルであり、Ｒ２はヒドロキシである。他の実施形態では、Ｒ１はヒドロキシであり、Ｒ２は所望により置換されているアルキルである。さらなる実施形態では、Ｒ３は所望により置換されているアルキルである。
【００６８】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、非環状修飾リボースを含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩｄ）〜（ＩＩｆ）：
【００６９】
【化１６】
2015510495.tif 000017
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、非環式修飾ヘキシトールを含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩｇ）〜（ＩＩｊ）：
【００７１】
【化１７】
2015510495.tif 000018
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含む。
【００７２】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、収縮または拡大リボース環を有する糖部分を含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩｋ）〜（ＩＩｍ）：
【００７３】
【化１８】
2015510495.tif 000019
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、ここでＲ１’、Ｒ１”、Ｒ２’およびＲ２”はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシまたは不存在であり；ここでＲ２’とＲ３の組合せまたはＲ２”とＲ３の組合せは、一緒に、所望により置換されているアルキレンまたは所望により置換されているヘテロアルキレンを形成し得る。
【００７４】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、ロックされた修飾リボースを含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩｎ）：
【００７５】
【化１９】
2015510495.tif 000020
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、ここでＲ３’はＯ、Ｓまたは−ＮＲＮ１−であり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニルまたは所望により置換されているアリールであり、Ｒ３”は所望により置換されているアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）または所望により置換されているヘテロアルキレン（例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２−である）（例えば、Ｒ３′はＯでありＲ３”は所望により置換されているアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）である）である。
【００７６】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩｎ−１）〜（ＩＩ−ｎ２）：
【００７７】
【化２０】
2015510495.tif 000021
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、ここでＲ３’はＯ、Ｓまたは−ＮＲＮ１−であり、ここでＲＮ１はＨ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニルまたは所望により置換されているアリールであり、Ｒ３”は所望により置換されているアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）または所望により置換されているヘテロアルキレン（例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２−）（例えば、Ｒ３’はＯであり、Ｒ３”は所望により置換されているアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）である）である。
【００７８】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、四環系ヘテロシクリルを形成するロックされた修飾リボースを含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩｏ）：
【００７９】
【化２１】
2015510495.tif 000022
を有するｎ個の連結ヌクレオシドまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、ここでＲ１２ａ、Ｒ１２ｃ、Ｔ１’、Ｔ１”、Ｔ２’、Ｔ２”、Ｖ１およびＶ３は、本明細書に記載されるとおりである。
【００８０】
修飾核酸またはｍｍＲＮＡの式はいずれも、本明細書に記載される１または複数の核酸塩基を含み得る（例えば式（ｂ１）〜（ｂ４３））。
１つの実施形態では、本発明は、少なくとも１つのヌクレオチド（例えばｍｍＲＮＡ分子）を含む修飾核酸またはｍｍＲＮＡを調製する方法を提供し、ここで修飾核酸は、ここで定義される式（Ｉａ）：
【００８１】
【化２２】
2015510495.tif 000023
を有するｎ個のヌクレオシドを含み、該方法は、ここで定義される式（ＩＩＩａ）：
【００８２】
【化２３】
2015510495.tif 000024
の化合物をＲＮＡポリメラーゼとｃＤＮＡ鋳型と反応させることを含む。
【００８３】
さらなる実施形態では、本発明は、少なくとも１つのヌクレオチド（例えばｍｍＲＮＡ分子）を含む修飾核酸またはｍｍＲＮＡを増幅する方法を提供し、該方法は、ここで定義される式（ＩＩＩａ）の化合物を、プライマー、ｃＤＮＡ鋳型およびＲＮＡポリメラーゼと反応させることを含む。
【００８４】
１つの実施形態では、本発明は、少なくとも１つのヌクレオチド（例えばｍｍＲＮＡ分子）を含む修飾核酸またはｍｍＲＮＡを調製する方法を提供し、ここで修飾核酸は、ここで定義される式（Ｉａ−１）：
【００８５】
【化２４】
2015510495.tif 000025
を有するｎ個のヌクレオシドを含み、該方法は、ここで定義される（ＩＩＩａ−１）：
【００８６】
【化２５】
2015510495.tif 000026
の化合物をＲＮＡポリメラーゼとｃＤＮＡ鋳型と反応させることを含む。
【００８７】
さらなる実施形態では、本発明は、少なくとも１つのヌクレオチド（例えばｍｍＲＮＡ分子）を含む修飾核酸またはｍｍＲＮＡを増幅する方法を提供し、該方法は、ここで定義される式（ＩＩＩａ−１）の化合物を、プライマー、ｃＤＮＡ鋳型およびＲＮＡポリメラーゼと反応させることを含む。
【００８８】
１つの実施形態では、本発明は、少なくとも１つのヌクレオチド（例えばｍｍＲＮＡ分子）を含む修飾ｍＲＮＡを調製する方法を提供し、ここでポリヌクレオチドは、ここで定義される式（Ｉａ−２）：
【００８９】
【化２６】
2015510495.tif 000027
を有するｎ個のヌクレオシドを含み、該方法は、ここで定義される式（ＩＩＩａ−２）：
【００９０】
【化２７】
2015510495.tif 000028
の化合物をＲＮＡポリメラーゼとｃＤＮＡ鋳型と反応させることを含む。
【００９１】
さらなる実施形態では、本発明は、少なくとも１つのヌクレオチド（例えばｍｍＲＮＡ分子）を含む修飾核酸またはｍＲＮＡを増幅する方法を提供し、該方法は、
ここで定義される式（ＩＩＩａ−２）の化合物を、プライマー、ｃＤＮＡ鋳型およびＲＮＡポリメラーゼと反応させることを含む。
【００９２】
いくつかの実施形態では、反応は１回から約７，０００回反復され得る。本明細書のどの実施形態でも、Ｂは式（ｂ１）〜（ｂ４３）の核酸塩基であり得る。
修飾核酸およびｍｍＲＮＡは、所望により、本明細書に記載される５’および／または３’隣接領域を含み得る。
【００９３】
修飾ＲＮＡ（例えばｍｍＲＮＡ）分子
本発明は、例えば、修飾リボヌクレオシド、修飾リボヌクレオチドなどの修飾ＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）分子の構成要素も含む。例えば、これらのｍｍＲＮＡは、本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡの調製に有用であり得る。
【００９４】
いくつかの実施形態では、構成要素分子は式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩａ−１）：
【００９５】
【化２８】
2015510495.tif 000029
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を有し、ここで置換基は本明細書に記載されるとおり（例えば式（Ｉａ）と（Ｉａ−１）の置換基）であり、ここでＢがシトシン、グアニン、ウラシルおよびアデニンから選択された非修飾核酸塩基である場合、Ｙ１、Ｙ２またはＹ３の少なくとも１つはＯではない。
【００９６】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、式（ＩＶａ）〜（ＩＶｂ）：
【００９７】
【化２９】
2015510495.tif 000030
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を有し、Ｂは本明細書に記載されるとおりである（例えば（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）は、修飾ウラシルと組み合わされる（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）または（ｂ３０））。特定の実施形態では、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）は、修飾シトシンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）および（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１０）または（ｂ３２））。特定の実施形態では、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）は、修飾グアニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）は、修飾アデニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）および（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。
【００９８】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）：
【００９９】
【化３０】
2015510495.tif 000031
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を有し、Ｂは本明細書に記載されるとおりである（例えば（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）のうち１つは、修飾ウラシルと組み合わされる（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）または（ｂ３０））。特定の実施形態では、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）のうち１つは、修飾シトシンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）および（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１０）または（ｂ３２））。特定の実施形態では
、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）のうち１つは、修飾グアニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）のうち１つは、修飾アデニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）および（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。
【０１００】
他の実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、式（Ｖａ）または（Ｖｂ）：
【０１０１】
【化３１】
2015510495.tif 000032
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を有し、Ｂは本明細書に記載されるとおりである（例えば（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。
【０１０２】
他の実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）：
【０１０３】
【化３２】
2015510495.tif 000033
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を有し、Ｂは本明細書に記載されるとおりである（例えば（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）のうち１つは、修飾ウラシルと組み合わされる（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）または（ｂ３０））。特定の実施形態では、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）のうち１つは、修飾シトシンと組み合わされる
（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）および（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１０）または（ｂ３２））。特定の実施形態では、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）のうち１つは、修飾グアニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）のうち１つは、修飾アデニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）および（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。
【０１０４】
他の実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）：
【０１０５】
【化３３】
2015510495.tif 000034
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を有し、Ｂは本明細書に記載されるとおりである（例えば（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）のうち１つは、修飾ウラシルと組み合わされる（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）または（ｂ３０））。特定の実施形態では、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）のうち１つは、修飾シトシンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）および（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１０）または（ｂ３２））。特定の実施形態では、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）のうち１つは、修飾グアニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）のうち１つは、修飾アデニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）および（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。
【０１０６】
他の実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）：
【０１０７】
【化３４】
2015510495.tif 000035
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を有し、Ｂは本明細書に記載されるとおりである（例えば（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）のうち１つは、修飾ウラシルと組み合わされる（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）または（ｂ３０））。特定の実施形態では、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）のうち１つは、修飾シトシンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）および（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１０）または（ｂ３２））。特定の実施形態では、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）のうち１つは、修飾グアニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）のうち１つは、修飾アデニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）および（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。
【０１０８】
他の実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）：
【０１０９】
【化３５】
2015510495.tif 000036
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を有し、ここでｒ１とｒ２はそれぞれ、独立して、０から５の整数（例えば、０から３、１から３または１から５）であり、Ｂは本明細書に記載されるとおりである（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）のうち１つは、修飾ウラシルと組み合わされる（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）または（ｂ３０））。特定の実施形態では、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）のうち１つは、修飾シトシンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）および（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、たとえば式（ｂ１０）または（ｂ３２））。特定の実施形態では、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）のうち１つは、修飾グアニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）。特定の実施形態では、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）のうち１つは、修飾アデニンと組み合わされる（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）および（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、
【０１１１】
【化３６】
2015510495.tif 000037
2015510495.tif 000038
からなる群またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体より選択され得、ここで各ｒは、独立して、０から５の整数（例えば、０から３、１から３または１から５）である。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、
【０１１３】
【化３７】
2015510495.tif 000039
2015510495.tif 000040
からなる群またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体より選択され得、ここで各ｒは、独立して、０から５の整数（例えば、０から３、１から３または１から５）であり、ｓ１は本明細書に記載されるとおりである。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、核酸（例えば、ＲＮＡ、ｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡ）に組み込まれ得る構成要素分子は、修飾ウリジン（例えば、
【０１１５】
【化３８】
2015510495.tif 000041
2015510495.tif 000042
2015510495.tif 000043
2015510495.tif 000044
2015510495.tif 000045
2015510495.tif 000046
2015510495.tif 000047
2015510495.tif 000048
2015510495.tif 000049
2015510495.tif 000050
2015510495.tif 000051
2015510495.tif 000052
2015510495.tif 000053
2015510495.tif 000054
2015510495.tif 000055
2015510495.tif 000056
2015510495.tif 000057
2015510495.tif 000058
2015510495.tif 000059
からなる群より選択される）またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体であり、ここでＹ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６およびｒは本明細書に記載されるとおりである（例えば、各ｒは、独立して、０から５の整数であり、たとえば０から３、１から３、または１から５である））。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、修飾シチジン（例えば、
【０１１７】
【化３９】
2015510495.tif 000060
2015510495.tif 000061
2015510495.tif 000062
2015510495.tif 000063
2015510495.tif 000064
からなる群より選択される）またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体であり、ここでＹ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６およびｒは本明細書に記載されるとおりである（例えば、各ｒは、独立して、０から５の整数であり、たとえば０から３、１から３、または１から５である））。たとえば、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、
【０１１８】
【化４０】
2015510495.tif 000065
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体であり得、ここで各ｒは、独立して、０から５の整数（例えば、０から３、１から３または１から５）である。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分
子は、修飾アデノシン（例えば、
【０１２０】
【化４１】
2015510495.tif 000066
2015510495.tif 000067
2015510495.tif 000068
2015510495.tif 000069
2015510495.tif 000070
2015510495.tif 000071
2015510495.tif 000072
2015510495.tif 000073
からなる群より選択される）またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体であり、ここでＹ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６およびｒは本明細書に記載されるとおりである（例えば、各ｒは、独立して、０から５の整数であり、たとえば０から３、１から３、または１から５である））。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、修飾グアノシン（例えば、
【０１２２】
【化４２】
2015510495.tif 000074
2015510495.tif 000075
2015510495.tif 000076
2015510495.tif 000077
2015510495.tif 000078
2015510495.tif 000079
からなる群より選択される）またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体であり、ここでＹ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６およびｒは本明細書に記載されるとおりである（例えば、各ｒは、独立して、０から５の整数であり、たとえば０から３、１から３，または１から５である））。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、化学修飾は、環のＣ−５のＣ基（例えば、シトシンまたはウラシルなどのピリミジンヌクレオシド）をＮで置換することを含み得る（例えば、Ｃ−５の＞ＣＨ基を＞ＮＲＮ１基で置換し、ここでＲＮ１はＨまたは所望により置換されているアルキルである）。例えば、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得るｍｍＲＮＡ分子は、
【０１２４】
【化４３】
2015510495.tif 000080
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体であり得、ここで各ｒは、独立して、０から５の整数（例えば、０から３、１から３または１から５）である。
【０１２５】
別の実施形態では、化学修飾は、シトシンのＣ−５の水素をハロ（例えば、Ｂｒ、Ｃｌ、ＦまたはＩ）または所望により置換されているアルキル（例えば、メチル）で置換することを含み得る。例えば、修飾核酸またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得るｍｍＲＮＡ分子は、
【０１２６】
【化４４】
2015510495.tif 000081
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体であり得、ここで各ｒは、独立して、０から５の整数（例えば、０から３、１から３または１から５）である。
【０１２７】
さらなる実施形態では、化学修飾は、Ｃ−４位のＮＨ２とＣ−５位の炭素原子で形成される縮合環を含み得る。例えば、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る構成要素分子は、
【０１２８】
【化４５】
2015510495.tif 000082
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体であり得、ここで各ｒは、独立して、０から５の整数（例えば、０から３、１から３または１から５）である。
【０１２９】
糖の修飾
核酸（例えば、本明細書に記載されるＲＮＡまたはｍＲＮＡ）に組み込まれ得る修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、リボ核酸の糖への修飾であり得る。例えば、２’ヒドロキシル基（ＯＨ）は、ある数の異なる「オキシ」または「デオキシ」置換基で修飾または置換され得る。２’位の例となる置換基は、限定ではなく、Ｈ、ハロ、所望により置換
されているＣ１〜６アルキル；所望により置換されているＣ１〜６アルコキシ；所望により置換されているＣ６〜１０アリールオキシ；所望により置換されているＣ３〜８シクロアルキル；所望により置換されているＣ３〜８シクロアルコキシ；所望により置換されているＣ６〜１０アリールオキシ；所望により置換されているＣ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ、所望により置換されているＣ１〜１２（ヘテロシクリル）オキシ；糖（例えば、リボース、ペントースまたは本明細書に記載されるいずれか）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ（ここでＲはＨまたは所望により置換されているアルキルであり、ｎは０から２０の整数（例えば、０から４、０から８、０から１０、０から１６、１から４、１から８、１から１０、１から１６、１から２０、２から４、２から８、２から１０、２から１６、２から２０、４から８、４から１０、４から１６および４から２０）である）；２’−ヒドロキシルがＣ１〜６アルキレンまたはＣ１〜６ヘテロアルキレン架橋により同じリボース糖の４’−炭素に結合している「ロックド」核酸（ＬＮＡ）（例示的架橋はメチレン、プロピレン、エーテルまたはアミノ架橋；ここで定義されるアミノアルキル；ここで定義されるアミノアルコキシ；ここで定義されるアミノ；およびここで定義されるアミノ酸を含んだ）を含む。
【０１３０】
一般に、ＲＮＡは、酸素を有する５員環である糖基リボースを含む。例示的非限定的な修飾ヌクレオチドは、リボース内の酸素の（例えばＳ、Ｓｅまたはメチレンまたはエチレンなどのアルキレンでの）置換；二重結合の付加（例えばリボースをシクロペンテニルまたはシクロヘキセニルで置換）；リボース環収縮（例えばシクロブタンまたはオキセタンの４員環を形成する）；リボース環拡大（例えば、アンヒドロヘキシトール、アルトリトール、マンニトール、シクロヘキサニル、シクロヘキセニルおよびホスホロアミデート主鎖も有するホルホリノなどの、追加の炭素またはヘテロ原子を有する６または７員環を形成する）；多環型（例えば、トリシクロ；および「非ロックド」型、たとえばグリコール核酸（ＧＮＡ）（例えば、Ｒ−ＧＮＡまたはＳ−ＧＮＡ、ここでリボースはホスホジエステル結合に結合したグリコール単位で置換されている）、トレオース核酸（ＴＮＡ、ここでリボースはα−Ｌ−スレオフラノシル−（３’→２’）で置換されている）およびペプチド核酸（ＰＮＡ、ここで２−アミノ−エチル−グリシン結合がリボースとホスホジエステル主鎖と置き換わっている）を含む。糖基は、リボース内の対応する炭素の立体構造とは反対の立体化学構造を有する１または複数の炭素も含み得る。したがって、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、例えば、糖としてアラビノースを含むヌクレオチドを含み得る。
【０１３１】
リン酸基主鎖の修飾
本明細書で記載されるような核酸、たとえばＲＮＡまたはｍＲＮＡに組み込まれ得る修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、リン酸基主鎖上の修飾であり得る。主鎖のリン酸基は、酸素原子の１または複数を異なる置換基で置換することで修飾され得る。さらに、修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、非置換リン酸部分の、本明細書に記載の修飾リン酸による大幅な置換を含み得る。修飾リン酸基の例には、限定ではなく、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート、ボラノリン酸、ボラノリン酸エステル、水素ホスホネート、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、アルキルまたはアリールホスホネートおよびホスホトリエステルが含まれる。ホスホロジチオエートは、非結合酸素がいずれも硫黄で置換されている。リン酸リンカーは、結合する酸素を窒素で置換することにより（架橋ホスホロアミデート）、硫黄で置換することにより（架橋ホスホロチオエート）、および炭素で置換することにより（架橋メチレン−ホスホネート）修飾されることもできる。
【０１３２】
核酸塩基の修飾
本開示は、修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドを提供する。ここでは「ヌクレオシド」は、５炭素糖分子（ペントースまたはリボース）またはその誘導体と有機塩基（プリンまたはピリミジン）またはその誘導体を含む化合物として定義される。ここでは「ヌクレオチド」はリン酸基からなるヌクレオシドとして定義される。修飾ヌクレオチド（例えば
修飾ｍＲＮＡ）は、本明細書に記載されるあらゆる便利な方法で合成され得る（例えば，化学的、酵素的または組替え的に１または複数の修飾または非天然ヌクレオシドを含む）。
【０１３３】
修飾ヌクレオチドの塩基の対合は、標準的なアデノシン−チミン、アデノシン−ウラシルまたはグアノシン−シトシン塩基対のみならず、非標準または修飾塩基を含むヌクレオチドおよび／または修飾ヌクレオチド間に形成されるものも包含し、ここで水素結合ドナーと水素結合アクセプターの配置は、非標準塩基と標準塩基間または２つの相補的非標準塩基構造間での水素結合を許容する。そのような非標準塩基の対合の一例は、修飾ヌクレオチドイノシンとアデニン、シトシンまたはウラシル間の塩基の対合である。
【０１３４】
本明細書に記載されるような核酸、たとえばＲＮＡまたはｍＲＮＡに組み込まれ得る修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、核酸塩基上で修飾され得る。ＲＮＡ中に見られる核酸塩基の例には、限定ではなく、アデニン、グアニン、シトシンおよびウラシルが含まれる。ＤＮＡ中に見られる核酸塩基の例には、限定ではなく、アデニン、グアニン、シトシンおよびチミンが含まれる。これらの核酸塩基は、強化された特性、例えば、主溝結合パートナーの結合を破壊することによるヌクレアーゼへの耐性を有する核酸を提供するために、修飾されるかまたは全体的に置換され得る。
【０１３５】
以下の表１は、各正準ヌクレオチドの化学的面を特定している。円は、各化学領域を構成する原子を特定している。
【０１３６】
表１
【表１】
2015510495.tif 000083
いくつかの実施形態では、Ｂは修飾ウラシルである。例示的修飾ウラシルは、式（ｂ１
）〜（ｂ５）：
【０１３７】
【化４６】
2015510495.tif 000084
を有するものまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、ここで
【０１３８】
【化４７】
2015510495.tif 000085
は単結合または二重結合であり；
Ｔ１’、Ｔ１”、Ｔ２’およびＴ２”はそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシまたは所望により置換されているチオアルコキシであり、またはＴ１’とＴ１”の組合せまたはＴ２’とＴ２”の組合せは一緒に（例えばＴ２のように）Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）またはＳｅ（セレノ）を形成し；
Ｖ１とＶ２はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｂ）ｎｖ、またはＣ（ＲＶｂ）ｎｖであり、ここでｎｖは０から２の整数であり、各ＲＶｂは、独立して、Ｈ、ハロ、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているハロアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアミノアルキル（例えば、本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換されている）、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているアシルアミノアルキル（例えば、本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換されている）、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルケニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキニルまたは所望により置換されているアルコキシカルボニルアルコキシ（例えば、所望により、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなどの、本明細書に記載されるいずれかの置換基で置換されている）であり；
Ｒ１０は、Ｈ、ハロ、所望により置換されているアミノ酸、ヒドロキシ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換さ
れているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルケニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルキルまたは所望により置換されているカルバモイルアルキルであり；
Ｒ１１はＨまたは所望により置換されているアルキルであり；
Ｒ１２ａは、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、または所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているカルボキシアルキル（例えば、所望によりヒドロキシで置換されている）、所望により置換されているカルボキシアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアミノアルキル、または所望により置換されているカルバモイルアルキルであり；
Ｒ１２ｃは、Ｈ、ハロ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているチオアルコキシ、所望により置換されているアミノ、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキニルである。
【０１３９】
他の例示的修飾ウラシルは、式（ｂ６）〜（ｂ９）：
【０１４０】
【化４８】
2015510495.tif 000086
を有するものまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
【０１４１】
【化４９】
2015510495.tif 000087
は単結合または二重結合であり；
Ｔ１’、Ｔ１”、Ｔ２’およびＴ２”はそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシまたは所望により置換されているチオアルコキシであるか、またはＴ１’とＴ１”の組合せは一緒に（例えばＴ１のように
）またはＴ２’とＴ２”の組合せは一緒に（例えばＴ２のように）Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、またはＳｅ（セレノ）を形成するか、またはＴ１とＴ２はそれぞれ、独立して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）またはＳｅ（セレノ）であり；
Ｗ１とＷ２はそれぞれ、独立して、Ｎ（ＲＷａ）ｎｗまたはＣ（ＲＷａ）ｎｗであり、ここでｎｗは０から２の整数であり、各ＲＷａは、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキルまたは所望により置換されているアルコキシであり；
各Ｖ３は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶａ）ｎｖまたはＣ（ＲＶａ）ｎｖであり、ここでｎｖは０から２の整数であり、各ＲＶａは、独立して、Ｈ、ハロ、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているヘテロシクリル、所望により置換されているアルケテロシクリル（ａｌｋｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、または所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルキル（例えば、本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルまたはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換されている）、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているアシルアミノアルキル（例えば、本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換されている）、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルケニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアシル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルキル（例えば、所望によりヒドロキシおよび／またはＯ−保護基で置換されている）、所望により置換されているカルボキシアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアミノアルキル、または所望により置換されているカルバモイルアルキル（例えば、所望により、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなどの本明細書に記載されるいずれかの置換基で置換されている）であり、ここでＲＶａとＲ１２ｃは、所望により、それらが結合している炭素原子と一緒に、所望により置換されているシクロアルキル、所望により置換されているアリールまたは所望により置換されているヘテロシクリル（例えば５または６員環）を形成し得；
Ｒ１２ａは、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているカルボキシアルキル（例えば、所望によりヒドロキシおよび／またはＯ−保護基で置換されている）、所望により置換されているカルボキシアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアミノアルキル、所望により置換されているカルバモイルアルキルまたは不存在であり；
Ｒ１２ｂは、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているアルカリール、所望により置換されているヘテロシクリル、所望により置換されているアルケテロシクリル（ａｌｋｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルコキシカルボニルアシル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルコキシ、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルケニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキニル、所望により置換されているアルコキ
シカルボニルアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルキル（例えば、所望によりヒドロキシおよび／またはＯ−保護基で置換されている）、所望により置換されているカルボキシアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアミノアルキルまたは所望により置換されているカルバモイルアルキルであり、
ここでＲ１２ｂとＴ１’の組合せまたはＲ１２ｂとＲ１２ｃの組合せは、一緒に、所望により置換されているヘテロシクリルを形成し得；
Ｒ１２ｃは、Ｈ、ハロ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているチオアルコキシ、所望により置換されているアミノ、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキニルである。
【０１４２】
さらなる例示的修飾ウラシルは、式（ｂ２８）〜（ｂ３１）：
【０１４３】
【化５０】
2015510495.tif 000088
を有するものまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｔ１とＴ２はそれぞれ、独立して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、またはＳｅ（セレノ）であり；
ＲＶｂ’とＲＶｂ”はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているハロアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルキル（例えば、本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルまたはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換されている）、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているアシルアミノアルキル（例えば，本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換されている）、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルケニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアシル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルキル（例えば、所望によりヒドロキシおよび／またはＯ−保護基で置換されている）、所望により置換されているカルボキシアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアミノアルキル、または所望により置換されているカルバモイルアルキル（例えば、所望により、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなどの本明細書に記載されるい
ずれかの置換基で置換されている）（例えば、ＲＶｂ’は、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキルであり、例えば、本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルまたはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換されている）であり；
Ｒ１２ａは、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているカルボキシアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルキル（例えば、本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルまたはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換されている）、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキニルであり；
Ｒ１２ｂは、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル（例えば，本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルまたはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換されている）、
所望により置換されているアルコキシカルボニルアシル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルコキシ、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルケニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルキルまたは所望により置換されているカルバモイルアルキルである。
【０１４４】
特定の実施形態では、Ｔ１はＯ（オキソ）であり、Ｔ２はＳ（チオ）またはＳｅ（セレノ）である。他の実施形態では、Ｔ１はＳ（チオ）であり、Ｔ２はＯ（オキソ）またはＳｅ（セレノ）である。いくつかの実施形態では、ＲＶｂ’は、Ｈ、所望により置換されているアルキルまたは所望により置換されているアルコキシである。
【０１４５】
他の実施形態では、Ｒ１２ａとＲ１２ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニルまたは所望により置換されているヒドロキシアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１２ａはＨである。他の実施形態では、Ｒ１２ａとＲ１２ｂはいずれもＨである。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、Ｒ１２ｂのＲＶｂ’は、それぞれ、独立して、所望により置換されているアミノアルキル（例えば、本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルまたはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換されている）、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニルまたは所望により置換されているアシルアミノアルキル（例えば、本明細書に記載されるいずれかの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換されている）である。いくつかの実施形態では、所望により置換されているアミノアルキルのアミノおよび／またはアルキルは、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているスルホアルキル、所望により置換されているカルボキシ（例えば、Ｏ−保護基で置換されている）、所望により置換されているヒドロキシ（例えば、Ｏ−保護基で置換されている）、所望により置換されているカルボキシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換されている）、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換されている）またはＮ−保護基のうち１または複数で置換されている。いくつかの実施形態では、所望により置換されているアミノアルキルは、所望により置換されているスルホアルキルまたは所望により置換されているアルケニルで置換されている。特定の実施形態では、Ｒ１２ａとＲＶｂ”はいずれもＨである。特定の実施形態では、Ｔ１はＯ（オキソ）であり、Ｔ２はＳ（チオ）またはＳｅ（セレノ）であ
る。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、ＲＶｂ’は、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキルまたは所望により置換されているカルバモイルアルキルである。
特定の実施形態では、Ｒ１２ａ、Ｒ１２ｂ、Ｒ１２ｃまたはＲＶａの所望による置換基は、ポリエチレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’であり、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６または１から１０）であり、Ｒ’はＨまたはＣ１−２０アルキルである）；またはアミノ−ポリエチレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１であり、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６または１から１０）であり、各ＲＮ１は、独立して、水素または所望により置換されているＣ１〜６アルキルである）である。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、Ｂは修飾シトシンである。例となる修飾シトシンは、化合物（ｂ１０）〜（ｂ１４）：
【０１４９】
【化５１】
2015510495.tif 000089
またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、ここで
Ｔ３’とＴ３”はそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシまたは所望により置換されているチオアルコキシであり、またはＴ３とＴ３”の組合せは、一緒に（例えばＴ３のように）、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）またはＳｅ（セレノ）を形成し；
各Ｖ４は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｃ）ｎｖまたはＣ（ＲＶｃ）ｎｖであり、ここでｎｖは０から２の整数であり、各ＲＶｃは、独立して、Ｈ、ハロ、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているヘテロシクリル、所望により置換されているアルケテロシクリル（ａｌｋｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）または所望により置換されているアルキニルオキシ（例えば、所望により、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなどの、本明細書に記載されるいずれかの置換基で置換されている）であり、ここでＲ１３ｂとＲＶｃは、一緒に、所望により置換されているヘテロシクリルを形成し得；
各Ｖ５は、独立して、Ｎ（ＲＶｄ）ｎｖまたはＣ（ＲＶｄ）ｎｖであり、ここでｎｖは
０から２の整数であり、各ＲＶｄは、独立して、Ｈ、ハロ、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているヘテロシクリル、所望により置換されているアルケテロシクリル（ａｌｋｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）または所望により置換されているアルキニルオキシ（例えば、所望により、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなどの、本明細書に記載されるいずれかの置換基で置換されている）であり（例えば、Ｖ５は−ＣＨまたはＮである）；
Ｒ１３ａとＲ１３ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアシル、所望により置換されているアシルオキシアルキル、所望により置換されているアルキルまたは所望により置換されているアルコキシであり、ここでＲ１３ｂとＲ１４の組合せは、一緒に、所望により置換されているヘテロシクリルを形成し得；
各Ｒ１４は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアシル、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているハロアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているヒドロキシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換されている）、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているアシルオキシアルキル、所望により置換されているアミノ（例えば、−ＮＨＲ、ここでＲはＨ、アルキル、アリールまたはホスホリルである）、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているヘテロシクリル、所望により置換されているアルケテロシクリル（ａｌｋｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキルであり；
Ｒ１５とＲ１６はそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニルまたは所望により置換されているアルキニルである。
【０１５０】
さらなる例示的修飾シトシンは、式（ｂ３２）〜（ｂ３５）：
【０１５１】
【化５２】
2015510495.tif 000090
を有するものまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｔ１とＴ３はそれぞれ、独立して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）またはＳｅ（セレノ）であり；
Ｒ１３ａとＲ１３ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアシル、所望により置換されているアシルオキシアルキル、所望により置換されているアルキルまた
は所望により置換されているアルコキシであり、ここでＲ１３ｂとＲ１４の組合せは、一緒に、所望により置換されているヘテロシクリルを形成し得；
各Ｒ１４は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアシル、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているハロアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているヒドロキシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換されている）、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているアシルオキシアルキル、所望により置換されているアミノ（例えば、−ＮＨＲ、ここでＲはＨ、アルキル、アリールまたはホスホリルである）、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているヘテロシクリル、所望により置換されているアルケテロシクリル（ａｌｋｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）、所望により置換されているアミノアルキル（例えば、ヒドロキシアルキル、アルキル、アルケニルまたはアルキニル）、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキニルであり；
Ｒ１５とＲ１６はそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニルまたは所望により置換されているアルキニル（例えば、Ｒ１５はＨであり、Ｒ１６はＨまたは所望により置換されているアルキルである）である。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、Ｒ１５はＨであり、Ｒ１６はＨまたは所望により置換されているアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１４はＨ、アシルまたはヒドロキシアルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１４はハロである。いくつかの実施形態では、Ｒ１４とＲ１５はいずれもＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ１５とＲ１６はいずれもＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ１４とＲ１５とＲ１６はそれぞれ、Ｈである。さらなる実施形態では、Ｒ１３ａとＲ１３ｂはそれぞれ、独立して、Ｈまたは所望により置換されているアルキルである。
【０１５３】
修飾シトシンのさらなる非限定的な例は、式（ｂ３６）：
【０１５４】
【化５３】
2015510495.tif 000091
の化合物またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
各Ｒ１３ｂは、独立して、Ｈ、所望により置換されているアシル、所望により置換されているアシルオキシアルキル、所望により置換されているアルキルまたは所望により置換されているアルコキシであり、ここでＲ１３ｂとＲ１４ｂの組合せは、一緒に、所望により置換されているヘテロシクリルを形成し得；
各Ｒ１４ａとＲ１４ｂは、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、所望により置換されているアシル、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているハロアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているヒドロキシアルキル
（例えば、Ｏ−保護基で置換されている）、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ、所望により置換されているアミノアルコキシ、所望により置換されているアルコキシアルコキシ、所望により置換されているアシルオキシアルキル、所望により置換されているアミノ（例えば、−ＮＨＲ、ここでＲはＨ、アルキル、アリール、ホスホリル、所望により置換されているアミノアルキルまたは所望により置換されているカルボキシアミノアルキルである）、アジド、所望により置換されているアリール、所望により置換されているヘテロシクリル、所望により置換されているアルケテロシクリル（ａｌｋｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニルまたは所望により置換されているアミノアルキニルであり；
Ｒ１５はそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニルまたは所望により置換されているアルキニルである。
【０１５５】
特定の実施形態では、Ｒ１４ｂは、所望により置換されているアミノ酸（例えば、所望により置換されているリジン）である。いくつかの実施形態では、Ｒ１４ａはＨである。
いくつかの実施形態では、Ｂは修飾グアニンである。例となる修飾グアニンは、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）：
【０１５６】
【化５４】
2015510495.tif 000092
の化合物またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｔ４’、Ｔ４”、Ｔ５’、Ｔ５”、Ｔ６’およびＴ６”はそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキルまたは所望により置換されているアルコキシであり、ここでＴ４’とＴ４”の組合せ（例えばＴ４のように）またはＴ５’とＴ５”の組合せ（例えば、Ｔ５のように）またはＴ６’とＴ６”の組合せは一緒に（例えば、Ｔ６のように）、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）またはＳｅ（セレノ）を形成し；
Ｖ５とＶ６はそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｄ）ｎｖまたはＣ（ＲＶｄ）ｎｖであり、ここでｎｖは０から２の整数であり、各ＲＶｄは、独立して、Ｈ、ハロ、チオール、所望により置換されているアミノ酸、シアノ、アミジン、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシ、所望により置換されているアルキニルオキシ（例えば、所望により、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなどの、本明細書に記載されるいずれかの置換基で置換されている）、所望により置換されているチオアルコキシまたは所望により置換されているアミノであり；
Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９ａ、Ｒ１９ｂ、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３およびＲ２４はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているチオアルコキシ、所望により置換されているアミノまたは所望により置換されているアミノ酸である。
【０１５７】
例となる修飾グアノシンは、式（ｂ３７）〜（ｂ４０）：
【０１５８】
【化５５】
2015510495.tif 000093
の化合物またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｔ４’はそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキルまたは所望により置換されているアルコキシであり、各Ｔ４は、独立して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）またはＳｅ（セレノ）であり；
Ｒ１８、Ｒ１９ａ、Ｒ１９ｂおよびＲ２１はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているチオアルコキシ、所望により置換されているアミノまたは所望により置換されているアミノ酸である。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、Ｒ１８はＨまたは所望により置換されているアルキルである。さらなる実施形態では、Ｔ４はオキソである。いくつかの実施形態では、Ｒ１９ａとＲ１９ｂはそれぞれ、独立して、Ｈまたは所望により置換されているアルキルである。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、Ｂは修飾アデニンである。例となる修飾アデニンは、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）：
【０１６１】
【化５６】
2015510495.tif 000094
の化合物またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
各Ｖ７は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｅ）ｎｖまたはＣ（ＲＶｅ）ｎｖであり、ここでｎｖは０から２の整数であり、各ＲＶｅは、独立して、Ｈ、ハロ、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルケニルオキシまたは所望により置換されているアルキニルオキシ（例えば、所望により、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなどの、本明細書に記載されるいずれかの置換基で置換されている）であり；
各Ｒ２５は、独立して、Ｈ、ハロ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているチオアルコキシまたは所望により置換されているアミノであり；
Ｒ２６ａとＲ２６ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアシル、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているカルバモイルアルキル、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアルコキシまたはポリエチレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６または１から１０）であり、Ｒ’はＨまたはＣ１〜２０アルキルである）；またはアミノ−ポリエチレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６または１から１０）であり、各ＲＮ１は、独立して、水素または所望により置換されているＣ１〜６アルキルである）であり；
各Ｒ２７は、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているチオアルコキシまたは所望により置換されているアミノであり；
各Ｒ２８は、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、または所望により置換されているアルキニルであり；
各Ｒ２９は、独立して、Ｈ、所望により置換されているアシル、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているカルバモイルアルキル、所望により置換されて
いるアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているアルコキシまたは所望により置換されているアミノである。
【０１６２】
例となる修飾アデニンは、式（ｂ４１）〜（ｂ４３）：
【０１６３】
【化５７】
2015510495.tif 000095
の化合物またはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体を含み、式中、
各Ｒ２５は、独立して、Ｈ、ハロ、チオール、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているチオアルコキシまたは所望により置換されているアミノであり；
Ｒ２６ａとＲ２６ｂはそれぞれ、独立して、Ｈ、所望により置換されているアシル、所望により置換されているアミノ酸、所望により置換されているカルバモイルアルキル、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているヒドロキシアルキル、所望により置換されているヒドロキシアルケニル、所望により置換されているヒドロキシアルキニル、所望により置換されているアルコキシまたはポリエチレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６または１から１０）であり、Ｒ’はＨまたはＣ１〜２０アルキルである）；またはアミノ−ポリエチレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６または１から１０）であり、各ＲＮ１は、独立して、水素または所望により置換されているＣ１〜６アルキルである）であり；
各Ｒ２７は、独立して、Ｈ、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているチオアルコキシまたは所望により置換されているアミノである。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａはＨであり、Ｒ２６ｂは所望により置換されているアルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａとＲ２６ｂはそれぞれ、独立して、所望により置換されているアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ２７は所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシまたは所望により置換されているチオアルコキシである。他の実施形態では、Ｒ２５は所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルコキシまたは所望により置換されているチオアルコキシである。
【０１６５】
特定の実施形態では、Ｒ２６ａ、Ｒ２６ｂまたはＲ２９の所望による置換基は、ポリエ
チレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、ここでｓ１は１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６，または１から１０）であり、Ｒ’はＨまたはＣ１−２０アルキルである）；またはアミノ−ポリエチレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１、ここでｓ１ｉｓ１から１０の整数（例えば、１から６または１から４）であり、ｓ２とｓ３はそれぞれ、独立して、０から１０の整数（例えば、０から４、０から６、１から４、１から６または１から１０）であり、各ＲＮ１は、独立して、水素または所望により置換されているＣ１〜６アルキルである）である。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、Ｂは式（ｂ２１）：
【０１６７】
【化５８】
2015510495.tif 000096
を有し得、式中Ｘ１２は、独立して、Ｏ、Ｓ、所望により置換されているアルキレン（例えば、メチレン）または所望により置換されているヘテロアルキレンであり、ｘａは０から３の整数であり、Ｒ１２ａとＴ２は本明細書に記載されるとおりである。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、Ｂは式（ｂ２２）：
【０１６９】
【化５９】
2015510495.tif 000097
を有し得、式中Ｒ１０’は、独立して、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアリール、所望により置換されているヘテロシクリル、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルケニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルキルまたは所望により置換されているカルバモイルアルキルであり、Ｒ１１、Ｒ１２ａ、Ｔ１およびＴ２は本明細書に記載されるとおりである。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、Ｂは式（ｂ２３）：
【０１７１】
【化６０】
2015510495.tif 000098
を有し得、式中Ｒ１０は所望により置換されているヘテロシクリル（例えば、所望により置換されているフリル、所望により置換されているチエニル、または所望により置換されているピロリル）、所望により置換されているアリール（例えば、所望により置換されているフェニルまたは所望により置換されているナフチル）、または本明細書に記載されるいずれかの置換基（例えばＲ１０について）であり；ここでＲ１１（例えば、Ｈまたは本明細書に記載されるいずれかの置換基）、Ｒ１２ａ（例えば、Ｈまたは本明細書に記載されるいずれかの置換基）、Ｔ１（例えば、オキソまたは本明細書に記載されるいずれかの置換基）およびＴ２（例えば、オキソまたは本明細書に記載されるいずれかの置換基）は本明細書に記載されるとおりである。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、Ｂは式（ｂ２４）：
【０１７３】
【化６１】
2015510495.tif 000099
を有し得、式中Ｒ１４’は、独立して、所望により置換されているアルキル、所望により置換されているアルケニル、所望により置換されているアルキニル、所望により置換されているアリール、所望により置換されているヘテロシクリル、所望により置換されているアルカリール、所望により置換されているアルケテロシクリル（ａｌｋｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）、所望により置換されているアミノアルキル、所望により置換されているアミノアルケニル、所望により置換されているアミノアルキニル、所望により置換されているアルコキシ、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルケニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルキニル、所望により置換されているアルコキシカルボニルアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルコキシ、所望により置換されているカルボキシアルキルまたは所望により置換されているカルバモイルアルキルであり、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、Ｒ１５およびＴ３は本明細書に記載されるとおりである。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、Ｂは式（ｂ２５）：
【０１７５】
【化６２】
2015510495.tif 000100
を有し得、式中Ｒ１４’は、所望により置換されているヘテロシクリル（例えば、所望により置換されているフリル、所望により置換されているチエニル、または所望により置換されているピロリル）、所望により置換されているアリール（例えば、所望により置換されているフェニルまたは所望により置換されているナフチル）または本明細書に記載されるいずれかの置換基（例えば、Ｒ１４またはＲ１４’について）であり；ここでＲ１３ａ（例えば、Ｈまたは本明細書に記載されるいずれかの置換基）、Ｒ１３ｂ（例えば、Ｈまたは本明細書に記載されるいずれかの置換基）、Ｒ１５（例えば、Ｈまたは本明細書に記載されるいずれかの置換基）およびＴ３（例えば、オキソまたは本明細書に記載されるいずれかの置換基）は本明細書に記載されるとおりである。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、Ｂは、シトシン、グアニン、アデニンおよびウラシルからなる群より選択される核酸塩基である。いくつかの実施形態では、Ｂは、
【０１７７】
【化６３】
2015510495.tif 000101
であり得る。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例となる核酸塩基およびヌクレオシドは、シュードウリジン（ψ）、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ウリジン（ｓ２Ｕ）、４−チオ−ウリジン（ｓ４Ｕ）、４−チオ−シュードウリジン、２−チオ−シュードウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５−アミノアリル−ウリジン、５−ハロ−ウリジン（例えば、５−ヨード−ウリジンまたは５−ブロモ−ウリジン）、３−メチル−ウリジン（ｍ３Ｕ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５−カルボキシメチル−ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５−アミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５−カルバモイルメチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチル
アミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−ウリジン（τｍ５Ｕ）、１−タウリノメチル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１−タウリノメチル−４−チオ−シュードウリジン、５−メチル−ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１ψ）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１−メチル−４−チオ−シュードウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、３−メチル−シュードウリジン（ｍ３ψ）、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６−ジヒドロウリジン、５−メチル−ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシ−ウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３ψ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α−チオ−ウリジン、２’−Ｏ−メチル−ウリジン（Ｕｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’−Ｏ−メチル−シュードウリジン（ψｍ）、２−チオ−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１−チオ−ウリジン、デオキシチミジン、２’‐Ｆ‐アラ‐ウリジン、２’‐Ｆ‐ウリジン、２’‐ＯＨ‐アラ‐ウリジン、５‐（２‐カルボメトキシビニル）ウリジンおよび５‐［３‐（１‐Ｅ‐プロペニルアミノ）ウリジンを含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例となる核酸塩基およびヌクレオシドは、５−アザ−シチジン、６−アザ−シチジン、シュードイソシチジン、３−メチル−シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−ホルミル−シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４−メチル−シチジン（ｍ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−シュードイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α−チオ−シチジン、２’−Ｏ−メチル−シチジン（Ｃｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５−ホルミル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１−チオ−シチジン、２’‐Ｆ‐アラ‐シチジン、２’‐Ｆ‐シチジンおよび２’‐ＯＨ‐アラ‐シチジンを含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例となる核酸塩基およびヌクレオシドは、２−アミノ−プリン、２、６−ジアミノプリン
、２−アミノ−６−ハロ−プリン（例えば、２−アミノ−６−クロロ−プリン）、６−ハロ−プリン（例えば、６−クロロ−プリン）、２−アミノ−６−メチル−プリン、８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｉ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６−グリシニルカルバモイル−アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６−メチル−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６−ジメチル−アデノシン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６−アセチル−アデノシン（ａｃ６Ａ）、７−メチル−アデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−メトキシ−アデニン、α−チオ−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−トリメチル−アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（リン酸）（Ａｒ（ｐ））、２−アミノ−Ｎ６−メチル−プリン、１−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、２’‐Ｆ‐アラ‐アデノシン、２’‐Ｆ‐アデノシン、２’‐ＯＨ‐アラ‐アデノシンおよびＮ６‐（１９‐アミノ‐ペンタオキサノナデシル）−アデノシンを含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例となる核酸塩基およびヌクレオシドは、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４−デメチル−ワイオシン（ｉｍＧ−１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯＨｙＷ）、未修飾ヒドロキシワイブトシン（ＯＨｙＷ＊）、７−デアザ−グアノシン、ケウオシン（Ｑ）、エポキシケウオシン（ｏＱ）、ガラクトシル−ケウオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル−ケウオシン（ｍａｎＱ）、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチル−イノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−グアノシン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２、Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、α−チオ−グアノシン、２’−Ｏ−メチル−グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’−Ｏ−メチル−イノシン（Ｉｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（リン酸）（Ｇｒ（ｐ））、１−チオ−グアノシン、Ｏ６−メチル−グアノシン、２’‐Ｆ‐アラ‐グアノシンおよび２’‐Ｆ‐グアノシンを含む。
【０１８２】
ヌクレオチドの核酸塩基は、プリン、ピリミジン、プリンまたはピリミジン類似体から独立して選択され得る。例えば、核酸塩基は、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシルまたはヒポキサンチンからそれぞれ独立して選択され得る。別の実施形態では、核酸塩基は、例えば、ピアゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチルおよび他のアデニンとグアニンのアルキル誘導体、２−プロピルおよび他のアデニンとグアニンのアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−プロピニルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ（例えば、８−ブロモ）、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、デアザグアニン、７−デアザグアニン、３−デアザグアニン、デアザアデニン、７−デアザアデニン、３−デアザアデニン、ピアゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、イミダゾ［１，５−ａ］１，３，５トリアジノン、９−デアザプリン、イミダゾ［４，５−ｄ］ピラジン、チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン、ピラジン−２−オン、１，２，４−トリアジン、ピリダジンおよび１，３，５トリアジンを含む、塩基の天然および合成の誘導体も含み得る。ヌクレオチドを省略表記のＡ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＵで表す場合、各文字は、それを示す塩基および／またはその誘導体を指し、例えば、Ａは、アデニンまたはアデニン類似体例えば、７−デアザアデニンを含む。
【０１８３】
ヌクレオシド間結合の修飾
修飾核酸またはｍｍＲＮＡ分子に組み込まれ得る修飾ヌクレオシドとヌクレオチドは、ヌクレオシド間結合（例えば、リン酸主鎖）上に修飾され得る。主鎖のリン酸基は、酸素原子の１または複数を異なる置換基で置換することで修飾され得る。さらに、修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、非置換リン酸部分の、本明細書に記載される修飾リン酸による大幅な置換を含み得る。修飾リン酸基の例には、限定ではなく、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート、ボラノリン酸、ボラノリン酸エステル、水素ホスホネート、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、アルキルまたはアリールホスホネートおよびホスホトリエステルが含まれる。ホスホロジチオエートは、非結合酸素がいずれも硫黄で置換されている。リン酸リンカーは、結合する酸素を窒素で置換することにより（架橋ホスホロアミデート）、硫黄で置換することにより（架橋ホスホロチオエート）、および炭素で置換することにより（架橋メチレン−ホスホネート）修飾されることもできる。
【０１８４】
非天然ホスホロチオエート主鎖結合を通じてα−チオ置換リン酸部分がＲＮＡとＤＮＡポリマーに安定性を供与するために与えられる。ホスホロチオエートＤＮＡおよびＲＮＡは、ヌクレアーゼ耐性が増加し、次いで細胞内環境での半減期が延長される。ホスホロチオエートが結合した修飾核酸またはｍｍＲＮＡ分子は、細胞の自然免疫分子の弱い結合／活性化を通じて、自然免疫反応を低下させることも期待される。
【０１８５】
特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−アデノシン、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−シチジン、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−グアノシン、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−ウリジンまたは５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−シュードウリジンである。
【０１８６】
【化６４】
2015510495.tif 000102
【０１８７】
【化６５】
2015510495.tif 000103
【０１８８】
【化６６】
2015510495.tif 000104
【０１８９】
【化６７】
2015510495.tif 000105
【０１９０】
【化６８】
2015510495.tif 000106
修飾糖、核酸塩基およびヌクレオシド間結合の組合せ
本発明の修飾核酸とｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩基および／またはヌクレオシド間結合への修飾の組合せを含み得る。これらの組合せは、本明細書に記載されるいずれかの１または複数の修飾を含み得る。例えば、本明細書に記載される式（Ｉａ）、（Ｉａ−１）〜（Ｉａ−３）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ）のいずれかのヌクレオチドを、本明細書に記載される核酸塩基（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ４３）のものまたはその他本明細書に記載されるいずれか）のいずれかと組み合わせることができる。
【０１９１】
修飾核酸とｍｍＲＮＡ分子の合成
本発明により使用する修飾核酸は、化学的合成、通常インビトロ転写と称される酵素的合成、長い前駆体の酵素的または化学的切断を含むがそれらに限定されないあらゆる使用可能な技法により調製され得る。ＲＮＡを合成する方法は、当技術分野で既知である（例えば、その全容が参照としていずれも本明細書に組み込まれるＧａｉｔ，  Ｍ．Ｊ．  （ｅｄ．）  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｏｘｆｏｒｄ  ［Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ］，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  ＤＣ：  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８４；  ａｎｄ  Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，  Ｐ．  （ｅｄ．）  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ    ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：
ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｖ．  ２８８  （Ｃｌｉｆｔｏｎ，  Ｎ．Ｊ．）  Ｔｏｔｏｗａ，  Ｎ．Ｊ．：  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  ２００５を参照）。
【０１９２】
本明細書に開示の修飾核酸は、容易に入手可能な出発材料から、以下の一般的な方法と手順を用いて、調製できる。典型的なまたは好ましい作業条件（すなわち、反応温度と時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）が整えば、特に断らない限り他の作業条件も使用され得ることが理解される。最適反応条件は、使用される反応物や溶媒により異なり得るが、そのような条件は当業者による日常的な最適化手順により決定され得る。
【０１９３】
本明細書に記載される工程は、当技術分野で既知の任意適切な方法にしたがいモニタリングされ得る。例えば、生成物の形成は、分光学的手段、例えば核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈまたは１３Ｃ）赤外線分光法、分光測定法（例えば、ＵＶ−可視）、質量分析、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または薄層クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーにより、モニタリングされ得る。
【０１９４】
ヌクレオシドとヌクレオチドの調製は、様々な化学基の保護と脱保護を含み得る。保護と脱保護の必要性と、適切な保護基の選択は、当業者には容易に決定され得る。保護基の化学については、例えば、その全容が参照として本明細書に組み込まれる、ＧｒｅｅｎｅらのＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
，  ２ｄ．  Ｅｄ．，  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  １９９１において見出され得る。
【０１９５】
本明細書に記載される工程の反応は、有機化学の当業者により容易に選択され得る適切な溶媒中で行われ得る。適切な溶媒は、反応が行われる温度、すなわち溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度の範囲であり得る温度で、出発材料（反応物）、中間体または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応が、１種類の溶媒または２種類以上の溶媒の混合物中で行われ得る。特定の反応ステップにより、特定の反応ステップに適した溶媒が選択され得る。
【０１９６】
修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドのラセミ混合物の分割が、当技術分野で既知の数々の方法のいずれかにより行われ得る。方法の例としては、光学活性な塩形成有機酸である「キラル分離酸」を用いての分別結晶が含まれる。分別結晶に適した分離剤は、例えば、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸または様々な光学活性カンファースルホン酸のＤおよびＬ型などの光学活性酸である。ラセミ混合物の分割は、光学活性分離剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）を充填したカラムで溶出して行われ得る。適切な溶離溶媒組成物は、当業者により決定され得る。
【０１９７】
修飾核酸は、それらの全容が参照として本明細書に組み込まれる、Ｏｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７４：２５８５−２５８８，  ２００９；  Ｐｕｒｍａｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２２（１）：  ７２−７８，  １９９４；  Ｆｕｋｕｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １（４）：  ５６３−５６８，  １９６２；  ａｎｄ  Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４８（９）：  １７２９−１７４０，  １９９２に記載の合成法にしたがい調製され得る。
修飾核酸は、分子の全長にわたり均等に修飾されていなくてもよい。修飾核酸分子は、分子の全長にわたり均等に修飾されていなくてもよい。異なる核酸修飾および／または主鎖構造が核酸の様々な位置に存在し得る。当業者であれば、ヌクレオチド類似体または他の修飾（複数可）が、核酸の機能が実質的に低下しないように、核酸のどの位置（複数可）に位置してもよいことを理解されよう。修飾は、５’または３’末端修飾でもよい。核酸は、最低限の１つの修飾ヌクレオチドおよび最大限の１００％の修飾ヌクレオチド、または少なくとも５％の修飾ヌクレオチド、少なくとも１０％の修飾ヌクレオチド、少なくとも２５％の修飾ヌクレオチド、少なくとも５０％の修飾ヌクレオチド、少なくとも８０％の修飾ヌクレオチドまたは少なくとも９０％の修飾ヌクレオチドなどのその間のあらゆるパーセンテージを含み得る。例えば、核酸は、ウラシルまたはシトシンなどの修飾ピリミジンを含み得る。いくつかの実施形態では、核酸中少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％のウラシルが修飾ウラシルで置換され得る。修飾ウラシルは、単一の独自構造を有する化合物で置換され得、または異なる構造（例えば、２、３、４つ以上の独自構造）を有する複数の化合物で置換され得る。いくつかの実施形態では、核酸中少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％のシトシンが修飾シトシンで置換され得る。修飾シトシンは、単一の独自構造を有する化合物で置換され得、または異なる構造（例えば、２、３、４つ以上の独自構造）を有する複数の化合物で置換され得る。
一般に、本明細書では「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれる本開示の修飾ｍＲＮＡの最短の長さは、ジペプチドをコードするのに十分であり得るｍＲＮＡ配列の長さであり得る。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、トリペプチドをコードするのに十分であり得る。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、テトラペプチドをコードするのに十分であり得る。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、ペンタペプチドをコードするのに十分であり得る。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、ヘキサペプチドをコードするのに十分
であり得る。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、ヘプタペプチドをコードするのに十分であり得る。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、オクタペプチドをコードするのに十分であり得る。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、ノナペプチドをコードするのに十分であり得る。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、デカペプチドをコードするのに十分であり得る。
【０１９８】
修飾核酸分子配列がコードできるジペプチドの例は、限定ではなく、カルノシンとアンセリンを含む。
一般に、本発明の修飾ｍＲＮＡの長さは、３０ヌクレオチド長よりも長い。別の実施形態では、ＲＮＡ分子は３５ヌクレオチドを超える長さであり得る。別の実施形態では、長さは少なくとも４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも４５ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも５５ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも９０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１２０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも２５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも３５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも４５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも７００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも９００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも２０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも２５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも３０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも４０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも５０００ヌクレオチドか、または５０００ヌクレオチドよりも長い。別の実施形態では、長さは少なくとも５０００ヌクレオチドか、または６０００ヌクレオチドよりも長い。別の実施形態では、長さは少なくとも７０００ヌクレオチドか、または７０００ヌクレオチドよりも長い。別の実施形態では、長さは少なくとも８０００ヌクレオチドか、または８０００ヌクレオチドよりも長い。別の実施形態では、長さは少なくとも９０００ヌクレオチドか、または９０００ヌクレオチドよりも長い。別の実施形態では、長さは少なくとも１０，０００ヌクレオチドか、または１０，０００ヌクレオチドよりも長い。
【０１９９】
異なるヌクレオチド修飾および／または主鎖構造が核酸の様々な位置に存在し得る。当業者であれば、ヌクレオチド類似体または他の修飾（複数可）が、核酸の機能が実質的に低下しないように、核酸のどの位置（複数可）に位置してもよいことを理解されよう。修飾は、５’または３’末端修飾でもよい。核酸は、最低１％および最大１００％の修飾ヌクレオチド、または少なくとも５％の修飾ヌクレオチド、少なくとも８０％の修飾ヌクレ
オチドまたは少なくとも９０％の修飾ヌクレオチドなどのその間のあらゆるパーセンテージを含み得る。例えば、１もしくは複数または全種のヌクレオチド（例えば、プリンまたはピリミジン、または、Ａ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれかの１もしくは複数または全て）は、本発明のポリヌクレオチドまたはその所与の配列領域で均等に修飾されていてもされていなくてもよい。いくつかの実施形態では，本発明のポリヌクレオチド（またはその所与の配列領域）の全ヌクレオチドＸは修飾されており、ここでＸは、Ａ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれかのヌクレオチドか、またはＡ＋Ｇ、Ａ＋Ｕ、Ａ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ、Ｇ＋Ｃ、Ｕ＋Ｃ、Ａ＋Ｇ＋Ｕ、Ａ＋Ｇ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ＋ＣまたはＡ＋Ｇ＋Ｃの組合せのいずれかであってよい。
【０２００】
異なる糖修飾、ヌクレオチド修飾および／またはヌクレオシド間結合（例えば、主鎖構造）が修飾核酸またはｍｍＲＮＡの様々な位置に存在し得る。当業者であれば、ヌクレオチド類似体または他の修飾（複数可）が、修飾核酸またはｍｍＲＮＡの機能が実質的に低下しないように、修飾核酸またはｍｍＲＮＡのどの位置（複数可）に位置してもよいことを理解されよう。修飾は、５’または３’末端修飾でもよい。修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、約１％から約１００％、またはその間のあらゆるパーセンテージ（例えば、１％から２０％、１％から２５％、１％から５０％、１％から６０％、１％から７０％、１％から８０％、１％から９０％、１％から９５％、１０％から２０％、１０％から２５％、１０％から５０％、１０％から６０％、１０％から７０％、１０％から８０％、１０％から９０％、１０％から９５％、１０％から１００％、２０％から２５％、２０％から５０％、２０％から６０％、２０％から７０％、２０％から８０％、２０％から９０％、２０％から９５％、２０％から１００％、５０％から６０％、５０％から７０％、５０％から８０％、５０％から９０％、５０％から９５％、５０％から１００％、７０％から８０％、７０％から９０％、７０％から９５％、７０％から１００％、８０％から９０％、８０％から９５％、８０％から１００％、９０％から９５％、９０％から１００％および９５％から１００％）の修飾ヌクレオチドを含み得る。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、修飾ピリミジン（例えば、修飾ウラシル／ウリジンまたは修飾シトシン／シチジン）を含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡ分子内のウラシルまたはウリジンは、約１％から約１００％の修飾ウラシルまたは修飾ウリジン（例えば、１％から２０％、１％から２５％、１％から５０％、１％から６０％、１％から７０％、１％から８０％、１％から９０％、１％から９５％、１０％から２０％、１０％から２５％、１０％から５０％、１０％から６０％、１０％から７０％、１０％から８０％、１０％から９０％、１０％から９５％、１０％から１００％、２０％から２５％、２０％から５０％、２０％から６０％、２０％から７０％、２０％から８０％、２０％から９０％、２０％から９５％、２０％から１００％、５０％から６０％、５０％から７０％、５０％から８０％、５０％から９０％、５０％から９５％、５０％から１００％、７０％から８０％、７０％から９０％、７０％から９５％、７０％から１００％、８０％から９０％、８０％から９５％、８０％から１００％、９０％から９５％、９０％から１００％、および９５％から１００％の修飾ウラシルまたは修飾ウリジン）で置換され得る。修飾ウラシルまたはウリジンは、単一の独自構造をもつ化合物または異なる構造（例えば，本明細書に記載されるような、２、３、４つ以上の独自構造）を有する複数の化合物で置換され得る。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡ分子中のシトシンまたはシチジンは、約１％から約１００％の修飾シトシンまたは修飾シチジン（例えば、１％から２０％、１％から２５％、１％から５０％、１％から６０％、１％から７０％、１％から８０％、１％から９０％、１％から９５％、１０％から２０％、１０％から２５％、１０％から５０％、１０％から６０％、１０％から７０％、１０％から８０％、１０％から９０％、１０％から９５％、１０％から１００％、２０％から２５％、２０％から５０％、２０％から６０％、２０％から７０％、２０％から８０％、２０％から９０％、２０％から９５％、２０％から１００％、５０％から６０％、５０％から７０％、５０％から８０％、５０％から９０％、５０％から９５％、５
０％から１００％、７０％から８０％、７０％から９０％、７０％から９５％、７０％から１００％、８０％から９０％、８０％から９５％、８０％から１００％、９０％から９５％、９０％から１００％および９５％から１００％の修飾シトシンまたは修飾シチジン）で置換され得る。修飾シトシンまたはシチジンは、単一の独自構造をもつ化合物または異なる構造（例えば，本明細書に記載されるような、２、３、４つ以上の独自構造）を有する複数の化合物で置換され得る。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、本開示は、式（Ｉａ−１）：
【０２０３】
【化６９】
2015510495.tif 000107
を有するｎ個の連結ヌクレオシドを含む修飾核酸またはｍｍＲＮＡを合成する方法を提供し、該方法は、
ａ）式（ＩＶ−１）：
【０２０４】
【化７０】
2015510495.tif 000108
のヌクレオチドを
式（Ｖ−１）：
【０２０５】
【化７１】
2015510495.tif 000109
のホスホロアミダイト化合物と反応させて、
（式中Ｙ９はＨ、ヒドロキシ、ホスホリル、ピロリン酸、硫酸、アミノ、チオール、所
望により置換されているアミノ酸またはペプチド（例えば、２から１２アミノ酸を含む）であり；各Ｐ１、Ｐ２とＰ３は、独立して、適切な保護基であり；
【０２０６】
【化７２】
2015510495.tif 000110
は固体支持体を意味する）
式（ＶＩ−１）：
【０２０７】
【化７３】
2015510495.tif 000111
の修飾核酸またはｍｍＲＮＡを得るステップと、
ｂ）式（Ｖ）の修飾核酸またはｍｍＲＮＡを酸化または硫化して式（ＶＩＩ−１）：
【０２０８】
【化７４】
2015510495.tif 000112
の修飾核酸またはｍｍＲＮＡを得るステップと、
ｃ）保護基を除去して式（Ｉａ）の修飾核酸またはｍｍＲＮＡを得るステップを含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、ステップａ）とｂ）は、１回から約１０，０００回反復される。いくつかの実施形態では、方法は、アデノシン、シトシン、グアノシン、およびウラシルからなる群より選択されるヌクレオチド（例えば、構成要素分子）をさらに含む。いくつかの実施形態では、核酸塩基は、ピリミジンまたはその誘導体であり得る。いくつかの実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは翻訳可能である。
【０２１０】
修飾核酸およびｍｍＲＮＡの他の成分は任意であり、いくつかの実施形態では有益である。例えば、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）および／または３’ＵＴＲが与えられ、ここで片方または両方が独立して、１または複数の異なるヌクレオシド修飾を含み得る。そのような実施形態では、ヌクレオシド修飾は、翻訳可能領域にも存在し得る。また、コザック配列を含む修飾核酸およびｍｍＲＮＡも提供される。
【０２１１】
さらに、核酸から切除され得る１または複数のイントロンヌクレオチド配列を含む核酸が提供される。
修飾核酸またはｍｍＲＮＡ、例えば、ＲＮＡまたはｍＲＮＡに組み込まれる修飾ヌクレオチドの例示的合成を、以下スキーム１から１１に示す。スキーム１は、修飾ヌクレオシドを含むヌクレオシドのリン酸化の一般的方法を示す。
【０２１２】
【化７５】
2015510495.tif 000113
様々な保護基を使用して反応が制御され得る。例えば、スキーム２は、ヒドロキシル基の２’および３’位ではなく糖の５’位のリン酸化を促進する複数の保護および脱保護ステップの使用を示す。
【０２１３】
【化７６】
2015510495.tif 000114
修飾ヌクレオチドは、あらゆる便利な方法で合成され得る。スキーム３、４および７は、修飾プリン核酸塩基を有する修飾ヌクレオチドを合成する例となる方法を示し、スキーム５と６は、修飾シュードウリジンまたはシュードイソシチジンを有する修飾ヌクレオチドを合成する例となる方法を示す。
【０２１４】
【化７７】
2015510495.tif 000115
【０２１５】
【化７８】
2015510495.tif 000116
【０２１６】
【化７９】
2015510495.tif 000117
【０２１７】
【化８０】
2015510495.tif 000118
【０２１８】
【化８１】
2015510495.tif 000119
スキーム８と９は、修飾ヌクレオチドの例示的合成を示す。スキーム１０は、ヌクレオチドを産生する非限定的な生体触媒的方法を示す。
【０２１９】
【化８２】
2015510495.tif 000120
【０２２０】
【化８３】
2015510495.tif 000121
【０２２１】
【化８４】
2015510495.tif 000122
スキーム１１は、修飾ウラシルの例示的合成を示し、ここでＮ１位が他で示したＲ１２ｂで修飾されており、リボースの５’位がリン酸化されている。Ｔ１、Ｔ２、Ｒ１２ａ、Ｒ１２ｂおよびｒは本明細書に示されているとおりである。この合成、ならびにその最適化バージョンは、他のピリミジン核酸塩基およびプリン核酸塩基の修飾（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ４３）を参照）および／または１または複数のリン酸基の導入（例えば、糖の５’位）にも使用できる。このアルキル化反応は、１または複数の所望により置換されているアルキル基を、本明細書に記載のあらゆる核酸塩基のあらゆる反応基（例えばアミノ基）に含めるのにも使用できる（例えば、シトシン、ウラシル、アデニンおよびグアニンのワトソン−クリック塩基対面のアミノ基）。
【０２２２】
【化８５】
2015510495.tif 000123
ｍｍＲＮＡにおけるヌクレオチドの組合せ
修飾ヌクレオチドと修飾ヌクレオチドの組合せのさらなる例を以下表２に示す。これらの修飾ヌクレオチドの組合せは、本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡを形成するのに使用され得る。特に断らない限り、修飾ヌクレオチドは、本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡの天然ヌクレオチドを完全に置き換えてよい。非限定的な例として、天然ヌクレオチドのウリジンは、本明細書に記載される修飾ヌクレオシドで置換されてよい。別の非限定的な例では、天然ヌクレオチドウリジンは、本明細書に開示される修飾ヌクレオシドの少なくとも１つで部分的に（例えば、約０．１％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９．９％）置換されていてよい。
【０２２３】
【表２】
2015510495.tif 000124
2015510495.tif 000125
修飾ヌクレオチドの組合せのさらなる例を以下表３に示す。これらの修飾ヌクレオチドの組合せは、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを形成するのに使用され得る。
【０２２４】
【表３】
2015510495.tif 000126
2015510495.tif 000127
いくつかの実施形態では、少なくとも２５％のシトシンが式（ｂ１０）〜（ｂ１４）の化合物で置換されている（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％）。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、少なくとも２５％のウラシルが式（ｂ１）〜（ｂ９）の化合物で置換されている（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％）。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、少なくとも２５％のシトシンが式（ｂ１０）〜（ｂ１４）の化合物で置換され、少なくとも２５％のウラシルが式（ｂ１）〜（ｂ９）の化合物で置換されている（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％）。
【０２２７】
末端構造の修飾：５’キャッピング
５’キャップ構造はｍＲＮＡキャップ結合タンパク質（ＣＢＰ）の結合を担うが、これはＣＢＰとポリ（Ａ）結合タンパク質の結合を通じて細胞内のｍＲＮＡ安定性と翻訳能力を担い、成熟環状ｍＲＮＡ種を形成する。キャップは、ｍＲＮＡのスライシングの間、５’近位イントロンの除去をさらに補助する。
【０２２８】
内因性メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は、成熟ｍＲＮＡ分子の５’末端に５’キャップ構造を含み得る。５’キャップは、最も５’側のヌクレオチドとグアニンヌクレオチドの間に５’−５’−三リン酸結合を含む。結合されたグアニンヌクレオチドは、メチル化されてＮ７−メチル−グアニル酸残基を生成し得る。ｍＲＮＡの５’末端の末端お
よび／または末端前（ａｎｔｅｔｅｒｍｉｎａｌ）の転写ヌクレオチドのリボース糖も所望により２’−Ｏ−メチル化されていてよい。グアニル酸キャップ構造の加水分解と切断による５’キャップ除去は、ｍＲＮＡ分子などの核酸分子を分解の標的にし得る。
本発明の修飾ｍＲＮＡに対する修飾は、キャップ除去を回避する加水分解抵抗性のキャップ構造を生成し得るので、ｍＲＮＡの半減期が延長される。キャップ構造の加水分解には５’−ｐｐｐ−５’ホスホロジエステル結合の切断が必要なので、キャッピング反応の間修飾ヌクレオチドが使用され得る。例えば、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社（マサチューセッツ州イプスウィッチ）のワクチニアキャッピング酵素をα−チオ−グアノシンヌクレオチドとともに製造者の指示に従い使用して、５’−ｐｐｐ−５’キャップ内にホスホロチオエート結合を形成してよい。α−メチル−ホスホネートおよびセレノ−リン酸ヌクレオチドなどの追加の修飾グアノシンヌクレオチドを使用してもよい。
【０２２９】
追加の修飾には、限定ではなく、糖環の２’−ヒドロキシル基のｍＲＮＡの５’末端および／または５’末端前のヌクレオチドのリボース糖の２’−Ｏ−メチル化（上述のとおり）が含まれる。複数の異なる５’キャップ構造が、合成ｍＲＮＡ分子の５’キャップを生成するのに使用され得る。
キャップ類似体は、本明細書では合成キャップ類似体、化学キャップ、化学キャップ類似体または構造的もしくは機能的キャップ類似体とも呼ばれ、キャップ機能を保持しながら、その化学構造は天然の（すなわち内因性、野生型または生理学的）５’キャップとは異なる。キャップ類似体は、化学的（すなわち非酵素的）または酵素的に合成され、および／または核酸分子に結合され得る。多くの化学的キャップ類似体が合成ｍＲＮＡ分子を同時転写的にキャップするのに使用される。
【０２３０】
例えば、アンチリバースキャップ類似体（ＡＲＣＡ）キャップは、５’−５’−三リン酸グアニン−グアニン連結を含み、一方のグアニンは３’−Ｏ−メチル基のほかにもＮ７メチル基を含む（すなわち、Ｎ７，３’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’−三リン酸−５’−グアノシン（ｍ７Ｇ−３’ｍｐｐｐ−Ｇ；同じく３’Ｏ−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇとも呼ばれる）。他方の非修飾グアニンの３’−Ｏ原子は、キャッピングされた核酸分子（例えばｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡ）の５’末端ヌクレオチドに連結される。Ｎ７−および３’−Ｏ−メチル化グアニンは、キャッピングされた核酸分子（例えばｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡ）の末端部分を与える。
別の例となるキャップはｍＣＡＰであり、ＡＲＣＡに似ているが、２’−Ｏ−メチル基をグアノシン上に有する（すなわち、Ｎ７，２’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’−三リン酸−５’−グアノシン、ｍ７Ｇｍ−ｐｐｐ−Ｇ）。
【０２３１】
キャップ類似体はインビトロ転写反応において核酸分子の同時キャッピングを可能にするが、転写物の最高２０％がキャッピングされていないままであり得る。このことと、内因性の細胞転写機構により産生された核酸の内因性５’キャップ構造とのキャップ類似体の構造的差異は、翻訳能力の低下と細胞安定性の低下につながり得る。
【０２３２】
本発明の修飾ｍＲＮＡは、より真正な５’キャップ構造を生成するために、転写後にも酵素を用いてキャッピングされ得る。ここでは「より真正」という語句は、構造的または機能的に内因性または野生型の特徴をよく反映または模倣した特徴を指す。つまり、「より真正」な特徴は、従来技術の合成の特徴または類似体などと比べて内因性、野生型、天然または生理学的な細胞機能および／または構造の良好な代表であるか、または１もしくは複数の点において対応する内因性、野生型、天然または生理学的な特徴よりも性能がよい。本発明のより真正な５’キャップ構造の非限定的な例は、とりわけ、当技術分野で既知の合成の５’キャップ構造（または野生型、天然または生理学的５’キャップ構造）と比べてキャップ結合タンパク質の結合の増加、半減期の延長、５’エンドヌクレアーゼに対する感受性低下および／または５’キャップ除去の低減を有するものである。例えば、
組換えワクチニアウイルスキャッピング酵素および組換え２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ酵素は、ｍＲＮＡの５’末端ヌクレオチドとグアニンキャップヌクレオチドの間に正準の５’−５’−三リン酸結合を生成でき、ここでキャップグアニンはＮ７メチル化を含み、ｍＲＮＡの５’末端ヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルを含んでいる。このような構造をキャップ１構造と称する。このキャップは、例えば当技術分野で既知の他の５’キャップ類似体と比べて、高度な翻訳能力と細胞安定性および細胞の炎症促進性サイトカインの活性化の低下をもたらす。キャップ構造は、限定ではなく、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ，ｐＮ２ｐ（キャップ０）、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ（キャップ１）および７ｍＧ（５’）−ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮ２ｍｐ（キャップ２）を含む。
【０２３３】
修飾ｍＲＮＡは転写後キャッピングされ得、また、このプロセスはより高効率なので、ほぼ１００％の修飾ｍＲＮＡがキャッピングされ得る。このことは、キャップ類似体がインビトロの転写反応の間にｍＲＮＡに連結される場合のおよそ８０％と対照的である。
【０２３４】
本発明によれば、５’末端キャップは内因性キャップまたはキャップ類似体を含み得る。本発明によれば、５’末端キャップは、グアニン類似体を含み得る。有用なグアニン類似体には、限定ではなく、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシンおよび２−アジド−グアノシンが含まれる。
【０２３５】
ＩＲＥＳ配列
さらに、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む核酸が提供される。ＩＲＥＳは、唯一のリボソーム結合部位として作用し得るか、またはｍＲＮＡの複数のリボソーム結合部位の１つとして働き得る。２以上の機能リボソーム結合部位を含む修飾ｍＲＮＡは、リボソームにより独立して翻訳されるいくつかのペプチドまたはポリペプチドをコードし得る（「複数シストロンｍＲＮＡ」）。核酸にＩＲＥＳが与えられると、さらに所望により第２翻訳可能領域が与えられる。本発明にしたがい使用され得るＩＲＥＳ配列の例には、限定ではなく、ピコナウイルス（例えばＦＭＤＶ）、ペストウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ブタコレラウイルス（ＣＳＦＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）またはコオロギ麻痺ウイルス（ｃｒｉｃｋｅｔ  ｐａｒａｌｙｓｉｓ  ｖｉｒｕｓｅｓ）（ＣｒＰＶ）由来のものが含まれる。
【０２３６】
末端構造修飾：ポリＡテール
ＲＮＡプロセスの間、分子の安定性を増加させるために、通常はアデニンヌクレオチドの長鎖（ポリＡテール）がメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子に付加され得る。転写直後、転写物の３’末端が切断され３’ヒドロキシルを離す。次いでポリＡポリメラーゼがアデニンヌクレオチドの鎖をＲＮＡに付加する。このプロセスはポリアデニル化と呼ばれ、１００から２５０残基長のポリＡテールを付加する。
【０２３７】
特定のポリＡテールの長さが本発明の修飾ＲＮＡに特定の利点を与えることが発見されている。
一般に、本発明のポリＡテールの長さは、３０ヌクレオチド長よりも長い。別の実施形態では、ポリＡテールの長さは３５ヌクレオチドを超える。別の実施形態では、長さは少なくとも４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも４５ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも５５ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも９０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１２０
ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも２５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも３５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも４５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも７００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも９００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは少なくとも１０００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、約３５から約３，０００のヌクレオチド（例えば、３５から５０、３５から１００、３５から２５０、３５から５００、３０から７５０、３５から１，０００、３５から１，５００、３５から２，０００、３５から２，５００、５０から１００、５０から２５０、５０から５００、５０から７５０、５０から１，０００、５０から１，５００、５０から２，０００、５０から２，５００、５０から３，０００、１００から５００、１００から７５０、１００から１，０００、１００から１，５００、１００から２，０００、１００から２，５００、１００から３，０００、５００から７５０、５００から１，０００、５００から１，５００、５００から２，０００、５００から２，５００、５００から３，０００、１，０００から１，５００、１，０００から２，０００、１，０００から２，５００、１，０００から３，０００、１，５００から２，０００、１，５００から２，５００、１，５００から３，０００、２，０００から３，０００、２，０００から２，５００および２，５００から３，０００）を含む。
【０２３８】
１つの実施形態では、ポリＡテールは、修飾ＲＮＡ分子全体の長さに対し設計される。この設計は、修飾ＲＮＡのコード領域の長さ、修飾ＲＮＡ（たとえばｍＲＮＡ）の特定の特徴または領域の長さまたは修飾ＲＮＡから発現される最終産物の長さに基づき得る。
【０２３９】
このコンテクストでは、ポリＡテールの長さは、修飾ＲＮＡまたはその特徴よりも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００％長くてよい。ポリＡテールは、それが属する修飾ＲＮＡの断片として設計してもよい。このコンテクストでは、ポリＡテールは、構築物の全長または構築物の全長からポリＡテールを引いたものの１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０％以上であり得る。さらに、ポリＡ結合タンパク質のための修飾ｍＲＮＡの操作結合部位とコンジュゲーションは、発現を増加させ得る。
さらに、複数の別個の修飾ｍＲＮＡが、ポリＡテールの３’末端の修飾ヌクレオチドを利用して、３’末端を介してＰＡＢＰ（ポリＡ結合タンパク質）に結合し得る。形質移入実験を、適切な細胞株において実施することができ、タンパク質産生はＥＬＩＳＡで形質移入後１２時間、２４時間、４８時間、７２時間および７日目にアッセイされ得る。
【０２４０】
１つの実施形態では、本発明の修飾ｍＲＮＡは、ポリＡ−Ｇカルテットを含むように設計されている。Ｇカルテットは、４つのグアニンヌクレオチドの環状水素結合アレイであり、ＤＮＡとＲＮＡの両方でＧリッチ配列により形成され得る。この実施形態では、ＧカルテットはポリＡテールの末端で組み込まれている。得られたｍｍＲＮＡ分子は、様々な時点で、安定性、タンパク質産生および半減期を含む他のパラメータについてアッセイされる。ポリＡ−Ｇカルテットは、１２０ヌクレオチドのポリＡテールのみを使用したものの少なくとも７５％に相当するタンパク質産生をもたらすことが見出されている。
【０２４１】
修飾ＲＮＡの使用
器官、組織または移植片の生存可能性および／または寿命の改善
本発明は、器官の救出および移植の分野で必要とされてきたニーズに対応する。新しく採取された器官と組織の傷害と損傷はしばしば急速であり不可逆的である。本明細書に記載される修飾ｍＲＮＡは、器官または組織移植片、またはそれらの一部分の生存可能性または寿命を延長するのに使用され得る。こうして、採取と移植、または採取と研究の間の時間が延長され得、遠距離の移植適合の可能性が増えよう。たとえば、器官と組織は、浸漬、注入、またはホストへの注入により、ラジカル捕捉剤として作用するタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡに接触され得る。こうして、器官の損傷は低減されより長時間の生存が可能になろう。修飾および／または製剤されたｍＲＮＡ自体がラジカル捕捉剤としても作用し得る。
【０２４２】
あらゆる器官、組織またはその部分（たとえば細胞）が本発明の組成物を投与され得る。器官は、心臓、肺、脳、肝臓、基底核、脳幹髄質、中脳、脳橋、小脳、大脳皮質、視床下部、眼、下垂体、甲状腺、副甲状腺、食道、胸腺、副腎、虫垂、膀胱、胆嚢、大腸、小腸、腎臓、膵臓、脾臓、胃、皮膚、前立腺、精巣、卵巣または子宮から選択され得る。組織は、限定ではなく軟骨（たとえば、食道軟骨、膝の軟骨、耳の軟骨、鼻の軟骨）などの結合組織、限定ではなく平滑筋や心筋（たとえば心臓弁）などの筋肉、腱、靭帯、骨（たとえば骨髄）、角膜、中耳および静脈などの、本明細書に記載されるあらゆる器官から選択され得る。器官または組織のあらゆる部分も本発明の組成物を投与され得る。非限定的な例として、角膜などの眼の一部が本発明の組成物を投与され得る。別の非限定的な例として、毛および／または毛包が、皮膚および／または毛包の移植前、移植中および／または移植後に本発明の組成物を投与され得る。
【０２４３】
１つの実施形態では、移植前に全器官や組織またはその部分が本発明の組成物を投与され得る。非限定的な例として、全器官、組織またはその部分は、移植前に、修飾ｍＲＮＡを含む本発明の組成物を投与され得る。別の非限定的な例として、器官、組織の一部またはその部分が、移植前に、修飾ｍＲＮＡを含む本発明の第１組成物を投与され得、器官、組織のその他の部分またはその一部が第２組成物を投与され得る。第１および第２組成物は、同じまたは異なる修飾ｍＲＮＡを含み得る。第１および第２組成物は、２種類以上の修飾ｍＲＮＡを含み得る。
【０２４４】
１つの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、２つ以上の器官、組織またはその部分に投与される。
１つの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、２つの器官、組織またはそれらの部分に投与され得る。非限定的な例として、腎臓と膵臓または心臓と腎臓、または心臓と肝臓または肺と腎臓または肺と肝臓、または心臓と肺が、単一のレシピエントへの移植前、移植中および／または移植後に、前述の組成物で処置され得る。各器官は同じまたは異なる組成物を投与され得る。
【０２４５】
１つの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、３つ以上の器官、組織またはそれらの部分に投与され得る。非限定的な例として、心臓、肝臓と腎臓または心臓、腎臓と膵臓または心臓、肺と肝臓が、単一のレシピエントへの移植前、移植中および／または移植後に、前述の組成物で処置され得る。各器官は同じまたは異なる組成物を投与され得る。
【０２４６】
１つの実施形態では、修飾ＲＮＡ組成物は、製剤された修飾ｍＲＮＡを含み、製剤は、脂質、リピドイド、リピドイド、ポリマー、リポソーム製剤、ナノ粒子、ダイナミックポリコンジュゲート製剤、ａｔｕｐｌｅｘ、ＤＢＴＣ製剤、ＰＬＧＡポリマー、プロタミン系剤、細胞透過性ペプチド、糖のコンジュゲートまたはステロイドおよび細胞ベースの担体システムを含む、本明細書に記載されるものから選択され得る。
【０２４７】
１つの実施形態では、修飾ｍＲＮＡはホスト生物に投与され得る。そのホスト生物は、ドナーまたはレシピエントホストであり得る。それは哺乳動物であり得、そのほ乳動物はヒトであり得る。組成物が獣医学的用途または器官生存可能性（たとえば完全性または長寿命）が望まれたあらゆる用途で有用であることも企図される。提供は、レシピエント生物がいることを必ずしも示唆しない。器官または組織の提供（または採取）は、レシピエントの非存在下で行われ得る。
【０２４８】
１つの実施形態では、ドナー生物への投与は、器官または組織を摘出するあらゆる手順の前、器官または組織の摘出の途中または後のいずれかで生じ得る。投与は、浸漬、接触、注入またはドナーもしくはレシピエントの血中送達により行われ得る。さらに、投与は、少なくとも部分的には、エックスビボ器官管理システムなどの医療デバイス、システムまたはコンポーネントの使用またはそれらとの組合せにより促進され得る。
【０２４９】
別の実施形態では、器官、組織またはその一部分は移植前に本発明の組成物を投与され、ホストは本発明の組成物を投与される。ホストに投与される組成物は、器官、組織またはその部分を処理する組成物と同じでも異なっていてもよい。ホストに投与される組成物と器官、組織またはその一部分に投与される組成物は、２種類以上の修飾ｍＲＮＡを含み得る。
【０２５０】
別の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、移植前、移植中および／または移植後に静脈（たとえば大腿静脈や伏在静脈）に投与され得る。
１つの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、器官、組織および／またはその部分に、ホストからの摘出前、摘出中および／または摘出後に注入され得る。本明細書に記載される組成物は、全器官、器官の一部分、全組織、組織の部分および／または少なくとも移植される１個の細胞に投与され得る。
【０２５１】
１つの実施形態では、移植中に使用される液体は、修飾ｍＲＮＡを含む組成物を含み得る。たとえば、修飾ｍＲＮＡは、移植に使用される液体、または移植過程において器官、組織またはその部分が接触し得る液体に添加され得る。
【０２５２】
１つの実施形態では、本明細書に記載される修飾核酸は、電気穿孔（たとえばフロー電気穿孔）を用いて組織および／または器官の細胞内に負荷され得る。生存可能性を改善し導入遺伝子発現を増強するのにメチルトランスフェラーゼ阻害剤および／またはヌクレアーゼが使用され得る（たとえば、その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国出願公開第２００６０２０５０８１号、同第２００７００５９８３３号、国際公開第２００６０８９１５２号および同第２００７０３０６７４号を参照）。
【０２５３】
１つの実施形態では、組成物は投与される製剤された修飾ｍＲＮＡを含む。
１つの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、ラジカル捕捉剤または免疫抑制剤として作用するポリペプチドをコードする。
【０２５４】
１つの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、器官、組織および／またはそれらの部分への投与の前にヒドロゲルまたはシーラントに封入され得る。器官、組織および／またはそれらの部分は、移植手順の前、その途中および／またはその後、修飾ｍＲＮＡを含むシーラントを投与され得る。非限定的な例として、修飾ｍＲＮＡは、シーラントまたはヒドロゲル内で製剤された後、器官、組織および／またはその部分に移植前に投与され得る。別の非限定的な例として、目的のポリペプチドなどのタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡは、移植手順の前、その途中および／またはその後、シーラントまたはヒドロゲル内で製剤される。
【０２５５】
１つの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは目的のポリペプチドなどのタンパク質をコードする。本発明の目的のポリペプチドは、限定ではなくラジカル捕捉剤であるタンパク質、免疫抑制剤であるタンパク質、プロテインａ４β１、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ−１）、ＶＥＧＦ、ニューレグリン１（ＮＲＧ１）チモシンβ−４主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、Ｂ細胞白血病／リンパ腫−２（ＢＣＬ−２）、一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）、インターロイキン−４、インターロイキン−１０、形質転換増殖因子β−１（ＴＧＦ−β１）、ヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１またはＨＭＯＸ１）、キラー細胞免疫グロブリン受容体（ＫＩＲ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤および表４に挙げた標的を含み得る。
【０２５６】
標的選択
本発明によると、修飾核酸は、少なくとも１つの目的のポリペプチドをコードする連結ヌクレオシドの第１領域を少なくとも含む。本発明の目的のポリペプチドまたは「標的」の非限定的な例を表４に挙げる。表４には、目的のポリペプチドをコードする遺伝子の記述に加えて、国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）のヌクレオチドの参照ＩＤ（ＮＭ  Ｒｅｆ）とＮＣＢＩのペプチド参照ＩＤ（ＮＰ  Ｒｅｆ）を示す。どの遺伝子にも１または複数の変異体またはアイソフォームが存在し得る。これらが存在する場合は表中にも示す。当業者であれば、表に開示したものは可能なフランキング領域であることを理解しよう。これらはオープンリーディングフレームの５’（上流）または３’（下流）の核ヌクレオチド配列にコードされる。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド参照配列の教示により決定的かつ具体的に教示される。したがって、配列が教示するタンパク質をコードするフランキングは、フランキング領域であるとみなされる。１または複数の入手可能なデータベースまたはアルゴリズムを利用して５’および３’フランキング領域をさらに特徴づけることも可能である。データベースはＮＣＢＩ配列のフランキング領域に含まれる特徴に注釈をつけており、それらは当技術分野で入手可能である。
【０２５７】
【表４】
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細胞内自然免疫反応活性化の予防または軽減
本明細書に記載される修飾核酸分子、例えば、ｍｍＲＮＡは、細胞内の自然免疫反応を低下させる。「自然免疫反応」という用語は、一般にはウイルスまたは細菌由来の外因性単鎖核酸に対する細胞反応を含み、サイトカイン、特にインターフェロンの発現と放出、および細胞死を含む。タンパク質合成も自然細胞免疫反応中に低下する。細胞内の自然免疫反応を排除することは有利であるが、本発明は、そのような反応全てを除去することなく、インターフェロンシグナル伝達を含む免疫反応を大幅に低下させる修飾ｍＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、免疫反応は、対応する非修飾核酸に誘導される免疫反応と比べ、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％または９９．９％以上低下する。そのような低下は、インターフェロン１型の発現または活性レベル、またはＴｏｌｌ様受容体（例えば、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８）などのインターフェロンが調節する遺伝子の発現により測定され得る。自然免疫反応の低下は、細胞集団に対する修飾ＲＮＡの１回または複数の投与後の細胞死の低下によっても測定され得、たとえば、細胞死は、対応する非修飾核酸で観察されるよりも１０％、２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％または９５％以上少ない細胞死頻度である。さらに、細胞死は、修飾核酸が接触した細胞の５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％、０．１％よりも少ないか、０．０１％以下に、影響し得る。
【０２５８】
本開示は、標的細胞集団への、例えばインビトロ、エックスビボまたはインビボでの修飾核酸の頻回導入（例えば、形質移入）を提供する。細胞集団との接触ステップは、１回または複数回（たとえば２、３、４、５回または６回以上）繰り返してよい。いくつかの実施形態では、細胞集団を修飾核酸に接触させるステップは、その細胞集団において所定のタンパク質翻訳効率が得られるよう十分な回数繰り返される。核酸修飾により標的細胞集団の毒性が低下しているので、そのような頻回の形質移入は多様な細胞種において達成可能である。
【０２５９】
本明細書で教示される修飾の組合せを含む本発明の修飾核酸は、それらを治療様式としてより適切にする優れた特性を有し得る。
治療薬
本明細書に記載される修飾核酸（修飾ＲＮＡ）およびその修飾核酸から翻訳されたタンパク質は、治療薬として使用され得る。たとえば、本明細書に記載される修飾核酸は、対象に投与され得、修飾核酸はインビボで翻訳されて対象内で治療用ペプチドを産生する。ヒトおよび他の哺乳動物において疾患または病状を治療または予防する組成物、方法、キットおよび試薬が提供される。本発明の活性治療薬には、修飾核酸、修飾核酸または修飾
核酸から翻訳されたポリペプチドを含む細胞、および修飾核酸または修飾核酸から翻訳されたポリペプチドを含む細胞に接触された細胞が含まれる。
【０２６０】
ある特定の実施形態では、抗体依存性細胞傷害性を誘発するタンパク質とともに哺乳動物を追加免疫するタンパク質（単数または複数）をコードする翻訳可能領域を含む１または複数の修飾核酸を含む併用治療薬を提供する。たとえば、トラスツズマブと顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）をコードする１または複数の核酸を含む治療薬が提供される。特に、そのような併用治療薬は、トラスツズマブに対し誘導抵抗性を生じるＨｅｒ２＋乳癌患者において有用である。（たとえば、その全容が参照により本明細書に組み込まれるＡｌｂｒｅｃｈｔ，  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．  ２（６）：７９５−８  （２０１０）を参照。）
本明細書に記載される修飾核酸を用いて細胞集団における組換えポリペプチドの翻訳を誘導する方法が提供される。そのような翻訳は、インビボ、エックスビボ、培養液中またはインビトロで可能である。細胞集団は、少なくとも１つのヌクレオシド修飾と、組換えポリペプチドをコードする翻訳可能領域を有する核酸を含む、有効量の組成物に接触される。細胞集団は、核酸が細胞集団の１または複数の細胞に局在化し、組換えポリペプチドが細胞内で核酸から翻訳されるような条件下で接触される。
【０２６１】
有効量の組成物が、少なくとも部分的には、標的組織、標的細胞種、投与手段、核酸の物理的特徴（たとえば修飾ヌクレオシドのサイズと程度）および他の決定要因に基づき提供される。一般には、有効量の組成物は、細胞内で効率的なタンパク質産生を提供し、好ましくは対応する非修飾核酸を含む組成物よりも高効率である。効率の上昇が、高細胞形質移入率（すなわち核酸で形質移入された細胞のパーセンテージ）、核酸からの高タンパク質翻訳率、低核酸分解率（たとえば、修飾核酸からのタンパク質翻訳の持続時間が長くなることで示される）または宿主細胞の自然免疫反応の低下により示され得る。
【０２６２】
本発明の態様は、それを必要とする哺乳動物対象におけるインビボでの組換えポリペプチドの翻訳を誘導する方法に関する。ここで、少なくとも１つのヌクレオシド修飾と組換えポリペプチドをコードする翻訳可能領域を有する核酸を含む有効量の組成物が、本明細書に記載される送達方法を用いて対象に投与される。核酸は、核酸が対象の細胞内で局在化し、組換えポリペプチドが細胞内で核酸から翻訳されるような量と条件で提供される。核酸が局在化した細胞またはその細胞が存在する組織は、１回または複数回の核酸投与の対象になり得る。
【０２６３】
本発明の他の態様は、修飾核酸を含む細胞の哺乳動物対象への移植に関する。細胞の哺乳動物対象への投与は、局所性移植（たとえば、局所または皮下投与）、器官送達または全身注入（たとえば、静脈内注射または吸入）など、薬剤的に許容可能な担体中の細胞の製剤と同様当業者には既知である。修飾核酸を含有する組成物は、筋肉内、経動脈的、眼内、膣内、直腸内、腹腔内、静脈内、鼻腔内、皮下、内視鏡的、経皮的、筋肉内、脳室内、皮内、くも膜下腔内、局所的（たとえば粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローションおよび／または滴剤による）、粘膜、鼻腔、経腸的、腫瘍内、気管内注入、気管支内注入および／または吸入；鼻腔スプレーおよび／またはエアロゾル、および／または門脈カテーテルによる投与用に製剤される。いくつかの実施形態では、組成物は持続放出用に製剤される。特定の実施形態では、修飾核酸分子または複合体および／またはその薬剤的、予防用、診断用または画像診断用組成物は、修飾核酸分子または複合体が血液脳関門、血管関門または他の上皮性関門を突破できる方法で投与され得る。
【０２６４】
しかし、本開示は、修飾核酸分子または複合体および／またはその薬剤的、予防用、診断用または画像診断用組成物の、薬物送達科学における可能な進歩を考慮した任意適切な経路による送達を包含する。
【０２６５】
治療薬が投与される対象は、疾患、障害または有害な条件に苦しむかまたはそれらを発症する危険がある。これらに基づき患者を特定、診断および分類する方法が提供され、それには臨床的診断、バイオマーカーレベル、ゲノムワイド関連研究（ＧＷＡＳ）および他の当技術分野で既知の方法が含まれ得る。
【０２６６】
ある特定の実施形態では、投与される修飾核酸は、組換えポリペプチドが翻訳される細胞内には実質的に存在しない機能活性を与える１または複数の組換えポリペプチドの産生を指令する。たとえば、その存在しない機能活性は、酵素的、構造的または遺伝子調節的な性質であり得る。関連の実施形態では、投与される修飾核酸は、組換えポリペプチドが翻訳される細胞内に存在するものの実質的に欠乏している機能活性を（たとえば相乗的に）増加させる１または複数の組換えポリペプチドの産生を指令する。
他の実施形態では、投与される修飾核酸は、組換えポリペプチドが翻訳される細胞内には実質的に存在しないポリペプチド（１個または複数個）を置換する１または複数の組換えポリペプチドの産生を指令する。そのような不存在は、コードする遺伝子またはその調節経路の遺伝的変異により得る。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、細胞内の内因性タンパク質のレベルを所望のレベルに増加させ、そのような増加により内因性タンパク質のレベルは標準以下のレベルから標準レベルになり得るか、標準レベルから標準以上のレベルになり得る。
【０２６７】
あるいは、組換えポリペプチドは、細胞の内部や表面に存在するか細胞から分泌される内因性タンパク質の活性に拮抗する働きがある。通常、内因性タンパク質の活性は、たとえば内因性タンパク質の変異が活性の改変または局在化をもたらすため、対象にとって有害である。さらに、組換えポリペプチドは、細胞の内部や表面に存在するか細胞から分泌される生物学的部分の活性に直接または間接的に拮抗する。拮抗される生物学的部分の例としては、脂質（たとえば，コレステロール）、リポタンパク質（たとえば低密度リポタンパク質）、核酸、炭水化物、志賀毒素や破傷風毒素などのタンパク質毒素、またはボツリヌス毒素、コレラ毒素およびジフテリア毒素などの低分子毒素が挙げられる。さらに、拮抗される生物学的分子は、望まない活性、たとえば細胞障害性または細胞増殖抑制活性を示す内因性タンパク質であり得る。
【０２６８】
本明細書に記載される組換えタンパク質は、細胞内で、おそらくは核などの特定のコンパートメント内で局在化するよう設計されているか、細胞から分泌するかまたは細胞の細胞膜に転座するように設計されている。
【０２６９】
疾患および病状の治療薬
欠失したまたは異常なタンパク質活性により特徴づけられる疾患の症状を、欠失したタンパク質活性を置換するかまたは異常なタンパク質活性を克服することにより治療または予防する方法が提供される。本発明の化合物は、修飾ｍＲＮＡの導入後、ウイルスＤＮＡベクターよりも速くタンパク質産生が開始するので、急性疾患、たとえば敗血症や卒中、心筋梗塞などの治療に特に有利である。さらに、本発明の修飾ｍＲＮＡの転写調節の欠如は、タンパク質産生の正確な力価が得られるという点で有利である。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、ｃＤＮＡに由来し得る。
いくつかの実施形態では、本発明による修飾ｍＲＮＡとそれらにコードされたポリペプチドは、治療目的で使用され得る。いくつかの実施形態では、本発明による修飾ｍＲＮＡとそれらにコードされたポリペプチドは、限定ではないが次の１または複数を含む様々な疾患、障害および／または状態のいずれの治療にも使用され得る：自己免疫疾患（たとえば糖尿病、狼瘡、多発性硬化症、乾癬、リューマチ性関節炎）；炎症性疾患（たとえば関節炎、骨盤内炎症性疾患）；感染性疾患（たとえばウィルス感染症（たとえば、ＨＩＶ、
ＨＣＶ、ＲＳＶ）、細菌感染、真菌症、敗血症）；神経性疾患（たとえばアルツハイマー病、ハンチントン病；自閉症；デュシェンヌ型筋ジストロフィー）；心血管障害（たとえば粥状動脈硬化症、高コレステロール血症、血栓症、凝固障害、血管新生障害、たとえば黄斑変性）；増殖性障害（たとえば癌、良性新生物）；呼吸器系障害（たとえば慢性閉塞性肺疾患）；消化障害（たとえば炎症性腸疾患、潰瘍）；筋骨格障害（たとえば線維筋痛症、関節炎）；内分泌、代謝および栄養障害（たとえば糖尿病、骨粗鬆症）；泌尿器系障害（たとえば腎疾患）；心理学的障害（たとえば鬱、統合失調症）；皮膚疾患（たとえば創傷、湿疹）；血液およびリンパ障害（たとえば貧血症、血友病）；その他。
【０２７１】
機能障害性または異常なタンパク質活性を特徴とする疾患は、嚢胞性線維症、鎌状赤血球貧血、表皮水疱症、筋委縮性索硬化症およびブドウ糖−６−リン酸脱水素酵素欠乏を含む。本発明は、本明細書で提供される修飾核酸を含有する核酸または細胞ベースの治療薬を導入することで、対象におけるそのような状態や疾患を治療する方法を提供し、修飾核酸は、対象の細胞内に存在する異常なタンパク質活性に拮抗するかその他克服するタンパク質をコードする。機能障害性タンパク質の特定の例は、嚢胞性線維症膜貫通調節因子（ＣＦＴＲ）遺伝子のミスセンス変異変異体であり、嚢胞性線維症の原因となるＣＦＴＲタンパク質の機能障害性タンパク質変異体を産生する。
【０２７２】
欠如した（または実質的に消失し、適切なタンパク質機能が生じない）タンパク質活性を特徴とする疾患には、嚢胞性線維症、ニーマン・ピック病Ｃ型、β重症型サラセミア、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ハーラー症候群、ハンター症候群および血友病Ａが含まれる。そのようなタンパク質は、存在しないかまたは実質的に機能しないことがある。本発明は、本明細書で提供される修飾核酸を含有する核酸または細胞ベースの治療薬を導入することで、対象におけるそのような状態や疾患を治療する方法を提供し、修飾核酸は、対象の標的細胞に欠如するタンパク質活性を置換するタンパク質をコードする。機能障害性タンパク質の特定の例は、嚢胞性線維症膜貫通調節因子（ＣＦＴＲ）遺伝子のナンセンス変異変異体であり、嚢胞性線維症の原因となるＣＦＴＲタンパク質の非機能性タンパク質変異体を産生する。
【０２７３】
したがって、対象の細胞を、機能性ＣＦＴＲポリペプチドをコードする翻訳可能領域を有する修飾核酸と、有効量のＣＴＦＲポリペプチドが細胞内に存在するような条件下で接触させることで、哺乳動物対象における嚢胞性線維症を治療する方法を提供する。好ましい標的細胞は、上皮、内皮および肺などの中皮細胞であり、投与方法は、標的組織に鑑み決定される；すなわち、肺への送達ではＲＮＡ分子は吸入による投与用に製剤される。
【０２７４】
別の実施形態では、本発明は、対象の細胞集団に、ゲノム研究により最近特徴づけられたタンパク質であるソーティリン（Ｓｏｒｔｉｌｉｎ）をコードする修飾ｍＲＮＡ分子を導入することにより、対象における高脂血症を治療し、そうすることで対象における高脂血症を緩和する方法を提供する。ＳＯＲＴ１遺伝子は、ソーティリンと呼ばれるトランスゴルジ網（ＴＧＮ）膜貫通タンパク質をコードする遺伝子である。５人に１人が１つのヌクレオチドの多型、ｒｓ１２７４０３７４をＳＯＲＴ１遺伝子の１ｐ１３遺伝子座に有し、そのため低レベルの低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）と超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）を有しやすいことが、遺伝子研究から示されている。約３０％の人に存在するマイナーなアレルの各コピーは、ＬＤＬコレステロールを８ｍｇ／ｄＬ改変し、その集団の約５％に存在するマイナーなアレルの２つのコピーは、ＬＤＬコレステロールを１６ｍｇ／ｄＬ低下させる。マイナーなアレルの保有者は心筋梗塞のリスクが４０％低下することも示されている。マウスでの機能的なインビボでの研究は、マウス肝臓組織におけるＳＯＲＴ１の過剰発現が、８０％も低い、有意に低いＬＤＬ−コレステロールレベルをもたらし、ＳＯＲＴ１のサイレンシングによりＬＤＬコレステロールがおよそ２００％増加することを記述している（Ｍｕｓｕｎｕｒｕ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｒｏｍ  ｎｏｎｃｏｄｉｎ
ｇ  ｖａｒｉａｎｔ  ｔｏ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｖｉａ  ＳＯＲＴ１  ａｔ  ｔｈｅ  １ｐ１３  ｃｈｏｒｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｏｃｕｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ２０１０；  ４６６：  ７１４−７２１；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２７５】
細胞運命の調節
標的哺乳動物細胞における細胞運命の改変を誘導する方法が提供される。標的哺乳動物細胞は前駆細胞であり得、改変は、ある系列に分化させることや、そのような分化をブロックすることを含み得る。あるいは、標的哺乳動物細胞は、分化した細胞でもよく、細胞運命の改変は、癌細胞の癌幹細胞への脱分化などの、多能性前駆細胞に脱分化させることや、そのような脱分化をブロックすることを含み得る。細胞運命の変更が望ましい場合、細胞運命誘導ポリペプチドをコードする有効量のｍＲＮＡが、細胞運命の改変が誘導されるような条件下で標的細胞に導入される。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、細胞の亜集団を第１表現型から第２表現型に再プログラムするのに有用である。そのような再プログラミングは一時的か永久的であり得る。
【０２７６】
所望により、再プログラミングは標的細胞が中間表現型をとるように誘導する。
さらに、本発明の方法は、高効率の形質移入、細胞に再形質移入する能力および標的細胞内で産生された組換えポリペプチドの持続性により、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）の生成に特に有用である。さらに、本明細書に記載される方法を用いて生成したｉＰＳ細胞の使用によりテラトーマ形成率が低下することが期待される。
【０２７７】
標的細胞集団において細胞分化を低下させる方法も提供される。たとえば、１または複数の前駆細胞種を含む標的細胞集団が、ポリペプチドをコードする有効量の修飾ｍＲＮＡに、ポリペプチドが翻訳されて前駆細胞の分化を低下させるような条件下で接触される。非限定的な実施形態では、標的細胞集団は、哺乳動物対象における損傷組織または外科的手順の影響を受けた組織を含む。前駆細胞は、たとえば、間質前駆細胞、神経前駆細胞または間葉前駆細胞である。
【０２７８】
特定の実施形態では、１または複数の分化因子Ｇａｔａ４、Ｍｅｆ２ｃおよびＴｂｘ４をコードする修飾核酸が提供される。これらのｍＲＮＡ生成因子は繊維芽細胞に導入され、心筋細胞への再プログラミングを促進する。そのような再プログラミングは、インビボで、ｍＲＮＡ含有パッチまたは他の物質を損傷を受けた心組織に接触させて心臓再生を促進することで実行され得る。そのようなプロセスは、線維症に反し心筋細胞の発生を促進する。
【０２７９】
病原性生物の標的化；生物学的材料の精製
本明細書では、細胞増殖抑制性または細胞障害性ポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡを用いて細菌、酵母、原生動物、蠕虫などの病原性微生物を標的とする方法が提供される。好ましくは、標的病原性生物に導入されたｍＲＮＡは、修飾ヌクレオシドまたは他の核酸配列修飾を含み、ｍＲＮＡが標的病原性生物において排他的すなわち選択的に翻訳され、生じ得る治療の非特異的効果が低減する。そのような方法は、血液、精液、卵子を含む生物学的材料、および胚、組織および器官を含む移植材料から病原性生物を除去するのに有用である。
【０２８０】
罹患細胞の標的化
本明細書では、細胞増殖抑制性または細胞障害性ポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡを用いて病原性または罹患細胞、特に癌細胞を標的化する方法が提供される。好ましくは、標的病原性細胞に導入されたｍＲＮＡは、修飾ヌクレオシドまたは他の核酸配列修飾を含み、ｍＲＮＡが標的病原性細胞において排他的すなわち選択的に翻訳され、生じ得る治療の非特異的効果が低減する。あるいは、本発明は、修飾ｍＲＮＡが標的病原性細胞に
選択的に結合し侵入するように標的とすることができる標的部分を提供する。
【０２８１】
タンパク質産生
本明細書で提供される方法は、細胞培養プロセスにおけるタンパク質産生収率増加に有用である。複数の宿主細胞を含む細胞培地に本明細書に記載される修飾ｍＲＮＡを導入すると、対応する非修飾核酸よりも高いタンパク質産生効率が得られる。そのような増加したタンパク質産生効率は、たとえば細胞形質移入の増加、核酸からのタンパク質翻訳の増加、核酸分解の減少、および／または宿主細胞の自然免疫反応の低下を示すことで明らかにされ得る。タンパク質産生は、ＥＬＩＳＡにより測定され得、タンパク質活性は当技術分野で既知の様々な機能的アッセイにより測定され得る。タンパク質産生は、連続的または流加的哺乳動物プロセスで生じ得る。
【０２８２】
さらに、関心対象となり得る細胞株または細胞株集団における特定のポリペプチド、特に既知の活性を有する基準タンパク質のタンパク質変異体などの改変タンパク質の発現を最適化することが有用である。１つの実施形態では、複数の標的細胞種を与え、複数の標的細胞種を互いに独立して改変ポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡと接触させることにより、標的細胞において改変タンパク質の発現を最適化する方法が提供される。さらに、培養条件を改変してタンパク質産生効率を高め得る。続いて、複数の標的細胞種中の改変ポリペプチドの存在および／またはレベルが検出および／または定量され、効率的な標的細胞とそれに関する細胞培養条件の選択により改変ポリペプチド発現の最適化が可能になる。そのような方法は特に、改変ポリペプチドが１または複数の翻訳後修飾を含むかまたは実質的に三次構造、つまり高効率のタンパク質産生をしばしば複雑化する状況を有する場合に有用である。
【０２８３】
遺伝子のサイレンシング
本明細書に記載される修飾ｍＲＮＡは、細胞集団の１または複数の標的遺伝子の発現を停止させる（すなわち、防止するかまたは実質的に減ずる）のに有用である。配列特異的ヒストンＨ３のメチル化を指令できるポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡが、ポリペプチドが翻訳され、ヒストンＨ３のメチル化とその後のヘテロクロマチン形成を通じて標的遺伝子の遺伝子転写が低下するような条件下で、細胞集団の細胞内に導入される。いくつかの実施形態では、このサイレンシング機構は、哺乳動物対象中に存在する細胞集団に対し実行される。非限定的例として、有用な標的遺伝子は、変異したヤヌスキナーゼ−２ファミリーのメンバーであり、変異した標的遺伝子を発現する哺乳動物対象は、異常なキナーゼ活性による骨髄増殖性疾患に苦しんでいる。
【０２８４】
修飾ｍＲＮＡとｓｉＲＮＡの共投与も本明細書で提供される。酵母において示されるように、配列特異的トランスサイレンシングは、細胞機能を改変する効果的な機構である。分裂酵母は、ｓｉＲＮＡ媒介ヘテロクロマチン会合に２つのＲＮＡｉ複合体、すなわちＲＮＡ誘導転写サイレンシング（ＲＩＴＳ）複合体とＲＮＡ指令ＲＮＡポリメラーゼ複合体（ＲＤＲＣ）を要する（Ｍｏｔａｍｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｅｌｌ  ２００４，  １１９，  ７８９−８０２；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。分裂酵母において、ＲＩＴＳ複合体はｓｉＲＮＡ結合アルゴノートファミリーのタンパク質Ａｇｏ１、クロモドメインタンパク質Ｃｈｐ１およびＴａｓ３を含む。分裂酵母ＲＤＲＣ複合体は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼＲｄｐ１、仮想ＲＮＡヘリカーゼＨｒｒ１およびポリＡポリメラーゼファミリーのタンパク質Ｃｉｄ１２からなる。これらの２つの複合体は、活性のためにダイサーリボヌクレアーゼとＣｌｒ４ヒストンＨ３メチルトランスフェラーゼを要する。一緒に、Ａｇｏ１は、Ｒｄｐ１共転写で生じたｄｓＲＮＡ転写物のダイサー媒介開裂により生じたｓｉＲＮＡ分子と結合し、メチル化、ヒストン修飾に次いで転写を停止されたヘテロクロマチンへのコンパクションの運命にあるＤＮＡの領域へのＣｈｐ１、Ｔａｓ３、Ｈｒｒ１およびＣｌｒ４の配列特異的直接的結合を可能にする。この機構はＤ
ＮＡのセントロメア領域を含むシス−で機能するが、配列特異的トランスサイレンシングは、ＤＮＡの特異的領域の二本鎖ｓｉＲＮＡによる共形質移入と、付随するｓｉＲＮＡリボヌクレアーゼＥｒｉ１のＲＮＡｉ指令サイレンシングにより可能である（Ｂｕｈｌｅｒ
ｅｔ  ａｌ．  Ｃｅｌｌ  ２００６，  １２５，  ８７３−８８６；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２８５】
生物学的経路の調節
細胞に導入された修飾ｍＲＮＡの高速翻訳は、標的の生物学的経路を調節する望ましい機構を提供する。そのような調節は、所与の経路の拮抗と作動を含む。１つの実施形態では、細胞を、核酸が細胞内で局在化し組換えポリペプチドが細胞内で核酸から翻訳されることが可能であるような条件下で、組換えポリペプチドをコードする修飾核酸を含む有効量の組成物と接触させることにより、細胞内の生物学的経路に拮抗する方法が提供され、ここで組換えポリペプチドは生物学的経路におけるポリペプチドの機能的活性を阻害する。例となる生物学的経路は、自己免疫疾患または炎症性疾患、たとえば多発性硬化症、リューマチ性関節炎、乾癬、狼瘡エリテマトーデス、硬直性脊髄炎を伴う大腸炎またはクローン病において不完全なものであり、特に、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３シグナル経路の拮抗はとりわけ有用である。（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＫｉｋｌｙ
Ｋ，  Ｌｉｕ  Ｌ，  Ｎａ  Ｓ，  Ｓｅｄｇｗｉｃｋ  ＪＤ  （２００６）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（６）：  ６７０−５を参照。）
さらに、ケモカイン受容体のアンタゴニストをコードする修飾核酸が提供されるが、たとえばケモカイン受容体ＣＸＣＲ−４およびＣＣＲ−５はＨＩＶの宿主細胞への侵入に必要である（Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ，  （１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ．Ｏｃｔ  ３；３８３（６５９９）：４００；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２８６】
あるいは、細胞を、核酸が細胞内で局在化し組換えポリペプチドが細胞内で核酸から翻訳されることが可能であるような条件下で、組換えポリペプチドをコードする修飾核酸を含む有効量の組成物と接触させることにより、細胞内の生物学的経路を活性化する方法が提供され、組換えポリペプチドは生物学的経路におけるポリペプチドの機能的活性を誘導する。例となる活性化された（ａｇｏｎｉｚｅｄ）生物学的経路は細胞運命の決定を調節する経路を含む。そのような活性化（ａｇｏｎｉｚａｔｉｏｎ）は可逆的あるいは不可逆的である。
【０２８７】
細胞への核酸送達
本発明の方法は、細胞集団へのインビボ、エックスビボまたは培養液中での送達を増強する。たとえば、複数の宿主細胞（たとえば、酵母や哺乳動物細胞などの真核生物細胞）を含む細胞培養液を、少なくとも１つのヌクレオシド修飾と所望により翻訳可能領域を有する増強された核酸を含む組成物と接触させる。組成物は一般に、増強された核酸が宿主細胞に吸収される効率を高める形質移入試薬または他の化合物も含む。増強された核酸は、細胞集団において、対応する非修飾核酸に対し、高い保持率を示す。増強された核酸の保持率は、非修飾核酸の保持率よりも高い。いくつかの実施形態ではそれは非修飾核酸の保持率よりも少なくとも約５０％、７５％、９０％、９５％、１００％、１５０％、２００％または２００％以上高い。そのような保持率特長は、増強された核酸で１回形質移入することで、または複数回の形質移入後に、得られ得る。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、増強された核酸は、１または複数の追加の核酸とともに標的細胞集団に送達される。そのような送達は同時でもよいし、増強された核酸を送達してから１または複数の追加の核酸を送達してもよい。１または複数の追加の核酸は、修飾された核酸であっても、修飾されていない核酸であってもよい。増強された核酸が最初に存在することでは細胞集団の自然免疫反応は実質的に誘導されないということ、さらには、自
然免疫反応は非修飾核酸が後に存在することで活性化されないことを理解されたい。この点で、標的細胞集団に存在することが望ましいタンパク質が非修飾核酸から翻訳される場合、増強された核酸はそれ自体が翻訳可能領域を含まない可能性がある。
【０２８９】
細胞表面でのリガンドまたは受容体の発現
いくつかの態様および本明細書に記載の態様の実施形態では、修飾ＲＮＡを使用して、細胞表面にリガンドまたはリガンド受容体を発現することができる（例えばホーミング部分）。細胞表面にリガンドまたはリガンド受容体部分が結合すると、細胞は、組織または薬剤との間で所望の生物相互作用をインビボで有することが可能になる。リガンドは、抗体、抗体断片、アプタマー、ペプチド、ビタミン、炭水化物、タンパク質もしくはポリペプチド、受容体（例えば細胞表面受容体）、接着分子、糖タンパク質、糖残基、治療薬、薬剤、グリコサミノグリカン、またはこれらの組み合わせであり得る。例えば、リガンドは、癌細胞に特異的な抗原を認識することにより、細胞が腫瘍細胞と優先的に相互作用できるようにして、改変細胞の腫瘍特異的な局在化を可能にする抗体であり得る。好ましいリガンドは治療対象組織の外面にある標的分子と相互作用できるので、リガンドにより、細胞組成物は治療対象組織に蓄積できるようになる。他の組織に対しては限られた交差反応性を有するリガンドが、一般的に好ましい。
【０２９０】
いくつかの例では、リガンドは、細胞が特定組織を標的化すること、あるいは細胞が特定リガンドと相互作用することを可能にするホーミング部分として機能できる。このようなホーミング部分の例として、特定の結合ペアの任意のメンバー、抗体、モノクローナル抗体、またはこれらの誘導体もしくは類似体が挙げられ（ただしこれらに限定されない）、その具体例として、Ｆｖ断片、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単一ドメイン抗体、ラクダ化抗体（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）および抗体断片、ヒト化抗体および抗体断片、ならびに上記の多価バージョン；単一特異性抗体、二重特異性抗体を含む（ただしこれらに限定されない）多価の結合試薬、例えばジスルフィド安定化Ｆｖ断片、ｓｃＦｖタンデム（（ＳＣＦＶ）２断片）、典型的には共有結合その他の方法で安定化している（すなわちロイシンジッパーまたはヘリックスで安定化している）ｓｃＦｖ断片である二重特異性抗体、三重特異性抗体、または四重特異性抗体；その他のホーミング部分（例えばアプタマー、受容体、融合タンパク質）が挙げられる。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、ホーミング部分は、細胞標的化特異性の調整を可能にする表面結合抗体であってよい。所望される標的部位の関心のエピトープに対して特異性の高い抗体を産生させることができるので、表面結合抗体は特に有用である。一実施形態では、所望の標的に対してそれぞれ異なる特異性を有し得る複数の抗体が細胞表面に発現する。このような方法により、ホーミング相互作用の結合活性と特異性を高めることができる。
【０２９２】
当業者であれば、所望される局在化または細胞機能に基づいて任意のホーミング部分を選択できる。例えば、タモキシフェン等のエストロゲン受容体リガンドは、細胞表面のエストロゲン受容体が減少しているエストロゲン依存性乳癌細胞に細胞を標的化することができる。リガンド／受容体相互作用のその他の非限定的な例として、ＣＣＲＩ（例えば、関節リウマチにおける炎症性関節組織もしくは脳、および／または多発性硬化症の治療）、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８（例えば、リンパ節組織への標的化）、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０（例えば、腸組織への標的化）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ１０（例えば、皮膚への標的化）、ＣＸＣＲ４（例えば、全般的な血管外移動亢進）、ＨＣＥＬＬ（例えば、炎症、炎症性疾患、骨髄の治療）、α４β７（例えば、腸粘膜の標的化）、ＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１（例えば、内皮への標的化）が挙げられる。概して、標的化（例えば癌転移）に関与する任意の受容体を、本明細書に記載の方法および組成物に利用することができる。
【０２９３】
細胞死介在物質
一実施形態では、修飾核酸分子組成物を用いて、細胞死受容体、細胞死受容体のリガンド、またはこれらの組み合わせの発現を増加させることにより、細胞（例えば癌細胞）にアポトーシスを誘発することができる。この方法は、所望される任意の細胞に細胞死を誘発する目的で使用でき、細胞が自然のアポトーシスシグナルを回避する癌の治療において特に有用である。
【０２９４】
アポトーシスは、多くの独立シグナル経路により誘発でき、これらの独立シグナル経路は最終エフェクター機構に集結する。このエフェクター機能は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体／リガンドスーパーファミリーに属するいくつかの「死の受容体」とそのリガンド間の多くの相互作用からなる。最もよく特徴付けられている細胞死受容体は、ＣＤ９５（「Ｆａｓ」）、ＴＮＦＲＩ（ｐ５５）、細胞死受容体３（ＤＲ３またはＡｐｏ３／ＴＲＡＭＯ）、ＤＲ４、およびＤＲ５（ａｐｏ２−ＴＲＡＩＬ−Ｒ２）である。アポトーシスの最終エフェクター機構とは、カスパーゼと命名された一連のプロテイナーゼの活性化であり得る。このカスパーゼが活性化する結果、生命に必要な一連の細胞タンパク質が切断されて、細胞死が生じる。細胞死受容体／リガンドにより誘発されるアポトーシスの分子機構は、当技術分野で周知である。例えば、Ｆａｓ／ＦａｓＬが介在するアポトーシスは、３つのＦａｓＬ分子が結合することにより誘発される。この３つのＦａｓＬ分子は、Ｃ末端デスドメイン（ＤＤ）を介してＦａｓ受容体の三量体形成を誘発し、このＦａｓ受容体は、アダプタータンパク質ＦＡＤＤ（デスドメインを有するＦａｓ結合タンパク質）とカスパーゼ８を動員する。この三分子複合体Ｆａｓ／ＦＡＩＤＤ／カスパーゼ８がオリゴマーを形成する結果、酵素前駆体カスパーゼ８がタンパク質分解により活性カスパーゼ８へと切断し、この活性カスパーゼ８が、カスパーゼ３を含む他の下流カスパーゼをタンパク質分解で活性化することにより、アポトーシス処理を開始する。デスリガンドは一般に、三量体またはそれ以上の高次構造に形成された場合にアポトーシス性である。単量体としてのデスリガンドは、細胞死受容体との結合で三量体と競合することにより、抗アポトーシス剤として機能できる。
【０２９５】
一実施形態では、修飾核酸分子組成物は細胞死受容体（例えばＦａｓ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＭＯ、ＴＮＦＲ、ＴＬＲ等）をコードする。修飾ＲＮＡの形質移入により細胞死受容体を発現するようにされた細胞は、その受容体を活性化するリガンドが誘発する細胞死を受けやすくなる。同様に、（例えば細胞表面に）デスリガンドを発現するようにされた細胞は、トランフェクトされた細胞が標的細胞と接触したとき、受容体を用いて細胞死を誘発する。別の一実施形態では、修飾ＲＮＡ組成物は、細胞死受容体リガンド（例えばＦａｓＬ、ＴＮＦ等）をコードする。別の一実施形態では、修飾ＲＮＡ組成物はカスパーゼ（例えばカスパーゼ３、カスパーゼ８、カスパーゼ９等）をコードする。癌細胞が非増殖型または制御された増殖型へと適切に分化できないことを頻繁に示す場合、別の一実施形態では、合成の修飾ＲＮＡ組成物は、細胞死受容体とその適切な活性化リガンドの両方をコードする。別の一実施形態では、合成の修飾ＲＮＡ組成物は分化因子をコードする。この分化因子は、癌幹細胞等の癌細胞内で発現したとき、癌細胞が非病原性表現型または非自己再生表現型に分化するよう誘発し（例えば、細胞増殖速度の低下、細胞分裂の減少等）、または、癌細胞が休眠細胞期（例えばＧ０休止期）に入るよう誘発する。
【０２９６】
当業者であれば、アポトーシス誘発手法を使用する場合は、修飾核酸分子を適切に（例えば腫瘍細胞に）標的化して、細胞死が不要に広範に拡大するのを防止する必要があることを理解するであろう。したがって、修飾核酸分子が癌細胞だけに発現するようにするため、癌抗原を認識する送達メカニズム（例えば、リガンドまたは抗体の結合、リポソーム標的化等）を使用してよい。
【０２９７】
修飾核酸分子の例示的特性
主溝相互作用パートナー
本明細書に記載される修飾核酸分子、例えば、修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）は、ヌクレオチドまたは核酸の主溝面との相互作用、例えば結合を介してＲＮＡリガンドを検出し応答する認識受容体との相互作用を攪乱し得る。したがって、修飾ヌクレオチドまたは本明細書に記載される修飾ＲＮＡなどの修飾核酸を含むＲＮＡリガンドは、主溝結合パートナーとの相互作用を低下させ、したがって、自然免疫反応または炎症促進性サイトカインの発現と分泌、またはその両方を低下させる。
【０２９８】
主溝相互作用、例えば結合パートナーの例は、限定ではなく、以下のヌクレアーゼとヘリカーゼを含む。膜内で、ＴＬＲ（Ｔｏｌｌ様受容体）３，７および８は単鎖および二本鎖ＲＮＡに応答できる。細胞質内で、ＤＥＸ（Ｄ／Ｈ）ヘリカーゼのスーパーファミリー２のメンバーとＡＴＰアーゼは、ＲＮＡを検知し、抗ウイルス応答を開始できる。これらのヘリカーゼは、ＲＩＧ−Ｉ（レチノイン酸誘導遺伝子Ｉ）とＭＤＡ５（黒色腫分化関連性遺伝子５）を含む。他の例は、ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｏｆ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２（ＬＧＰ２）、タンパク質を含むＨＩＮ−２００ドメインまたはヘリカーゼ−ドメイン含有タンパク質を含む。
【０２９９】
ポリペプチド変異体
基準ポリペプチド配列と一定の同一性のある変異体ポリペプチドをコードする核酸が提供される。「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」という用語は、当技術分野で既知のように、２以上のペプチドの配列間でその配列を比較して決定される関係を指す。当技術分野では、「同一性」は、２以上のアミノ酸残基の鎖の整合の数により決定される、ペプチド間の配列関連性の程度も意味する。
【０３００】
同一性は、特定の数学モデルまたはコンピュータープログラム（すなわち「アルゴリズム」）に指定される、（存在する場合は）ギャップアラインメントを有する２以上の配列の小さい方の間の同一整合のパーセントを測る。関連ペプチドの同一性は、既知の方法で容易に計算できる。そのような方法は、限定ではなく、全てその全容が参照によりここに組み込まれるＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．，  ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８８；  Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｄ．  Ｗ．，  ｅｄ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９３；  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，  Ｐａｒｔ  １，  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ａ．  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ｈ．  Ｇ．，  ｅｄｓ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，  １９９４；  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，  Ｇ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８７；  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，  Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，  Ｍ．  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．，  ｅｄｓ．，  Ｍ．  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ＳＩＡＭ  Ｊ．  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．  ４８，  １０７３  （１９８８）に記載されるものを含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド変異体は、基準ポリペプチドと同じか類似の活性を有する。あるいは、変異体は、基準ポリペプチドと比べて改変された活性（例えば増加または減少）を有する。一般に、本発明の特定のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体は、ここに記載される当業者には既知の配列アラインメントプログラムおよびパラメータにより決定される場合、その特定の基準ポリヌクレオチドまたはポリペプチドと、少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９
８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有する。
【０３０２】
当業者ならば認識しようが、タンパク質断片、機能タンパク質ドメインおよび相同タンパク質も、本発明の範囲であるとみなされる。例えば、本明細書では、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００または１００を超えるアミノ酸長さの、基準タンパク質の任意のタンパク質断片（基準ポリペプチド配列よりも少なくとも１アミノ酸残基だけ短いが他は同一であるポリペプチド配列を意味する）が提供される。別の例では、ここに記載されるいずれかの配列と約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約１００％同一である、約２０、約３０、約４０、約５０または約１００個のアミノ酸伸長を含む任意のタンパク質が、本発明にしたがい利用され得る。特定の実施形態では、本発明にしたがい利用されるタンパク質配列は、本明細書に提供または参照されるいずれかの配列に示されるような、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１以上の突然変異（ｍｕｔａｔｉｏｎｓ）を含む。
【０３０３】
ポリペプチドライブラリー
ヌクレオシド修飾を含むポリヌクレオチドライブラリーも提供され、各ポリヌクレオチドは、当技術分野で既知の抗体、タンパク質結合パートナー、足場タンパク質および他のポリペプチドなどのポリペプチドをコードする第１核酸配列を含む。好ましくは、ポリヌクレオチドは標的細胞宿主に直接導入されるのに適した形態のｍＲＮＡであり、次いでコードされたポリペプチドがそこで合成される。
【０３０４】
ある特定の実施形態では、それぞれ異なるアミノ酸修飾（複数可）を有する複数のタンパク質変異体が産生され、試験を行って、薬物動態、安定性、生体適合性および／または生物学的活性、あるいは発現レベルなどの生物物理学的特性という点で最適な変異体が決定される。そのようなライブラリーは、１０、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９または１０９超の可能な変異体を含み得る（１または複数の残基の置換、欠失ならびに１または複数の残基の挿入を含む）。
【０３０５】
ポリペプチド−核酸複合体
適切なタンパク質翻訳は、ｍＲＮＡと会合するある数のポリペプチドと核酸の物理的な凝集を伴う。本発明は、１または複数のヌクレオシド修飾（たとえば少なくとも２種類の異なるヌクレオシド修飾）を有する翻訳可能なｍＲＮＡとｍＲＮＡに結合している１または複数のポリペプチドを含む核酸とタンパク質のコンジュゲートを含む複合体を提供する。一般には、タンパク質は、複合体が導入される細胞の自然免疫反応を回避または減ずる有効量で与えられる。
【０３０６】
標的化部分
本発明の実施形態では、修飾核酸は、細胞表面にタンパク質結合パートナーまたは受容体を発現させるために与えられ、インビボまたはインビトロで細胞を特定の組織スペースに標的化するかまたは特定の部分と相互作用する働きがある。適切なタンパク質結合パートナーは、抗体およびその機能的断片、足場タンパク質またはペプチドを含む。さらに、修飾核酸は、脂質、炭水化物または他の生物学的部分の合成と細胞外局在を指令するために使用され得る。
【０３０７】
本明細書に記載されるように、本発明の修飾核酸の有用な特徴は、外因性核酸に対する細胞の自然免疫反応を減ずる能力である。細胞または細胞集団において自然免疫反応の力価検定、低減または排除を行う方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、翻訳可能領域と少なくとも１つのヌクレオシド修飾を含む第１外因性核酸の第１用量を含む第１組成物に接触され、第１外因性核酸に対する細胞の自然免疫反応のレベルが決定される。次いで、細胞は、第１外因性核酸の第２用量を含む第２組成物に接触されるが、第２
用量は第１用量と比べて少量の第１外因性核酸を含んでいる。
【０３０８】
あるいは、細胞は、第２外因性核酸の第１用量に接触される。第２外因性核酸は、第１外因性核酸と同じか異なり得る１または複数の修飾ヌクレオシドを含むか、あるいは、第２外因性核酸は、修飾ヌクレオシドを含まない場合がある。細胞に第１組成物および／または第２組成物を接触させるステップは、１回または複数回反復してよい。
【０３０９】
さらに、細胞内でのタンパク質産生（たとえばタンパク質翻訳）の効率が所望により決定され、細胞は、標的のタンパク質産生効率が得られるまで、第１および／または第２組成物で繰り返し再形質移入され得る。
【０３１０】
本明細書に記載されるように、実質的に翻訳不可能な配列を有するｍＲＮＡが提供される。そのようなｍＲＮＡは、対象に投与されるとワクチンとして有効であり得る。ワクチンを投与される対象は、哺乳動物であり得、より好ましくはヒトであり、もっとも好ましくは患者であり得ることがさらに提供される。
【０３１１】
１または複数の非翻訳領域を含む修飾核酸も提供される。そのような修飾核酸は一般には翻訳されないが、１または複数の翻訳機構成分、たとえばリボソームタンパク質または転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）などに結合し捕捉する能力があるので、細胞内でのタンパク質発現を有効に低下させる。修飾核酸は、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏ−ＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはＰｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）を含み得る。
【０３１２】
免疫反応の活性化：ワクチン
本発明の１つの実施形態では、ｍＲＮＡ分子は生物の免疫反応を引き出すかまたは誘発するために使用され得る。送達されるｍＲＮＡ分子は、免疫原性ペプチドまたはポリペプチドをコードし得、２以上のそのようなペプチドまたはポリペプチドをコードし得る。
【０３１３】
さらに、特定の修飾ヌクレオシドまたはそれらの組合せは、本発明の修飾核酸に導入されると、自然免疫反応を活性化する。そのような活性化修飾核酸、たとえば修飾ＲＮＡは、ポリペプチドまたは他のワクチンと組み合わせるとアジュバントとして有用である。特定の実施形態では、活性化された修飾ｍＲＮＡは、ワクチンとして有用なポリペプチド配列をコードする翻訳可能領域を含み、したがって自己アジュバントとなる能力を提供する。
【０３１４】
１つの実施形態では、本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、免疫原をコードし得る。免疫原をコードする修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡの送達は、免疫反応を活性化し得る。非限定的な例として、免疫原をコードする修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、細胞に送達されて複数の自然反応経路をトリガーし得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２００６３７７号を参照）。別の非限定的な例として、免疫原をコードする本発明の修飾核酸分子とｍｍＲＮＡは、脊椎動物に、その脊椎動物の免疫原となるのに十分な量で、送達され得る（それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２００６３７２号と同第２０１２００６３６９号を参照）。
【０３１５】
本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、ワクチンのポリペプチド配列をコードし得、さらに阻害剤を含み得る。阻害剤は抗原提示を損ない得、および／または当技術分野で既知の様々な経路を阻害し得る。非限定的な例として、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、抗原提示を損ない得る阻害剤との組合せでワクチンに使用してよい（それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２０８９２２５号と
同第２０１２０８９３３８号を参照）。
【０３１６】
１つの実施形態では、本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、自己複製ＲＮＡであり得る。自己複製ＲＮＡ分子は、ＲＮＡ送達と封入された遺伝子産物の発現の効率を高め得る。１つの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、少なくとも１つの本明細書に記載されるおよび／または当技術分野で既知の修飾を含み得る。１つの実施形態では，自己複製ＲＮＡは、自己複製ＲＮＡが感染性ウイルス粒子の産生を誘発しないように設計され得る。非限定的な例として、自己複製ＲＮＡは、それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１１０３００２０５号と国際公開第２０１１００５７９９号に記載される方法で設計され得る。
１つの実施形態では、本発明の自己複製修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、免疫反応を生じ得るタンパク質をコードし得る。非限定的な例として、修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、少なくとも１つの抗原をコードし得る自己複製ｍＲＮＡであり得る（それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１１０３００２０５号と国際公開第２０１１００５７９９号を参照）。
【０３１７】
１つの実施形態では、本発明の自己複製修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、本明細書に記載されるまたは当技術分野で既知の方法を用いて製剤され得る。非限定的な例として、自己複製ＲＮＡは、Ｇｅａｌｌら（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＮｏｎｖｉｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｅｌｆ−ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ  ＲＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅｓ，  ＰＮＡＳ  ２０１２；  ＰＭＩＤ：  ２２９０８２９４）に記載される方法により送達用に製剤され得る。
【０３１８】
１つの実施形態では、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、両親媒性および／または免疫原性両親媒性ペプチドをコードし得る。
１つの実施形態では、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの製剤は、両親媒性および／または免疫原性両親媒性ペプチドをさらに含み得る。非限定的な例として、両親媒性および／または免疫原性両親媒性ペプチドを含む修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１１０２５０２３７号ならびに国際公開第２０１０００９２７７号および同第２０１０００９０６５号に記載されるように製剤され得る。
【０３１９】
１つの実施形態では、本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、免疫賦活性であり得る。非限定的な例として、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、プラス鎖またはマイナス鎖ＲＮＡウイルスゲノムの全部または一部をコードし得る（それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２０９２５６９号および米国出願公開第２０１２０１７７７０１号を参照）。別の非限定的な例では、本発明の免疫賦活性修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、本明細書に記載されるおよび／または当技術分野で既知の賦形剤とともに投与用に製剤され得る（それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２０６８２９５号および米国出願公開第２０１２０２１３８１２号を参照）。
【０３２０】
１つの実施形態では、本明細書に記載される方法で製剤されたワクチンの応答は、治療効果を誘発する様々な化合物を加えて増強され得る。非限定的な例として、ワクチン製剤は、ＭＨＣＩＩ結合ペプチドまたはＭＨＣＩＩ結合ペプチドに類似の配列を有するペプチドを含み得る（それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２０２７３６５号、同第２０１１０３１２９８号および米国出願公開第２０１２００７０４９３号、同第２０１１０１１０９６５を参照）。別の例として、ワクチン製剤は、対象におけるニコチン残基に対する抗体反応を生成し得る修飾ニコチン化合物を含み得る（それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２０６１
７１７号および米国出願公開第２０１２０１１４６７７号を参照）。
【０３２１】
医薬組成物
製剤、投与、送達および投薬
本発明は、修飾核酸およびｍｍＲＮＡ組成物ならびに１または複数の薬剤的に許容可能な賦形剤と組み合わせた複合体を提供する。医薬組成物は、１または複数の追加の活性物質、例えば治療的および／または予防的活性物質を所望により含んでよい。製剤および／または薬剤の製造における一般的考察は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２１ｓｔ  ｅｄ．，
Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  ２００５（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に見出され得る。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、組成物は、ヒト、ヒト患者または対象に投与される。本開示の目的では、「活性成分」という語句は、一般に、本明細書に記載されるような、送達される修飾核酸およびｍｍＲＮＡを指す。
【０３２３】
ここで提供される医薬組成物の説明は主としてヒトへの投与に適した医薬組成物に関するが、当業者であれば、そのような組成物は一般に、全種類の動物への投与に適していることを理解されよう。様々な動物への投与に適した組成物を得るための、ヒトへの投与に適した医薬組成物の修飾は、よく理解されており、通常の技術を有する獣医薬理学者であれば、せいぜい通常の実験をするだけでそのような修飾を設計および／または実施できる。医薬組成物の投与が企図される対象には、限定ではなく、ヒトおよび／または他の霊長類；家畜、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウスおよび／またはラットなどの商業関連の哺乳動物を含む哺乳動物；および／またはニワトリ、アヒル、ガチョウおよび／またはシチメンチョウなどの商業関連のトリを含む鳥類が含まれる。
【０３２４】
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、あらゆる既知のまたは今後薬理学分野で開発される方法で調製され得る。一般に、そのような調製方法は、活性成分を賦形剤および／または１または複数の他の副成分と結合させるステップ、次いで必要および／または所望される場合は、製品の分割、成形および／または所望の単回または反復投与単位に包装するステップを含む。
【０３２５】
本発明による医薬組成物は、単回単位用量としておよび／または複数の単回単位用量として調製され、包装され、および／または原体で販売され得る。ここでは「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別の量である。活性成分の量は、一般に、対象に投与され得る活性成分の用量に等しいおよび／またはそのような用量の好都合な画分、例えばそのような用量の半分または３分の１である。
【０３２６】
本発明は修飾核酸分子および他の送達可能部分と結合した修飾核酸を含む複合体を提供する。したがって、本発明は、１または複数の修飾核酸、または１または複数のそのような複合体および１または複数の薬剤的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、１または複数の追加の治療活性物質を所望により含み得る。いくつかの実施形態では、組成物はヒトに投与される。
【０３２７】
本発明による医薬組成物中の活性成分、薬剤的に許容可能な賦形剤および／または任意の追加成分の相対量は、治療対象が何であるか、そのサイズ、および／または状態により、またさらに組成物の投与経路により異なる。例として、組成物は、０．１％から１００％（ｗ／ｗ）、例えば、０．５から５０％、１〜３０％、５〜８０％、少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
【０３２８】
１つの実施形態では、修飾核酸が中に入る細胞の自然免疫反応を予防するように設計された、有効量の修飾核酸（たとえばｍＲＮＡ）を含有する製剤を提供する。修飾核酸は一般に、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３２９】
対象に投与されると、本明細書に記載される医薬組成物は、修飾ｍＲＮＡから生成されたタンパク質を提供し得る。医薬組成物は、１または複数の追加の治療活性物質を所望により含み得る。いくつかの実施形態によると、投与を必要とする対象に送達される１または複数のタンパク質を含む医薬組成物を投与する方法が提供される。いくつかの実施形態では、組成物はヒト対象に投与される。さらなる実施形態では、組成物は患者である対象に投与される。
【０３３０】
１つの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、１または複数の薬剤的に許容可能な担体を含み得る。
製剤
本発明の修飾核酸およびｍｍＲＮＡは、１または複数の賦形剤を用いて製剤され得、（１）安定性が増加する；（２）細胞形質移入が増加する；（３）（例えば、修飾核酸またはｍｍＲＮＡのデポー製剤からの）徐放性または遅効型放出を可能にする；（４）体内分布を変える（例えば、修飾核酸またはｍｍＲＮＡを特定の組織または細胞種に向ける）；（５）コードされたタンパク質のインビボでの翻訳を増加させる；および／または（６）コードされたタンパク質のインビボでの放出特性を変える。溶媒、分散媒、希釈物または他の液体ビヒクル、分散または懸濁補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘または乳化剤、保存料のいずれかまたは全てなどの従来からの賦形剤に加えて、本発明の賦形剤は、限定ではなく、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コアシェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、修飾核酸またはｍｍＲＮＡ形質移入された細胞（例えば対象への移植のため）、ヒアルロニダーゼ、ナノ粒子模倣体およびそれらの組合せを含み得る。したがって、本発明の製剤は、１または複数の賦形剤を、それぞれ、ともに修飾核酸またはｍｍＲＮＡの安定性を増加させ、修飾核酸またはｍｍＲＮＡによる細胞の形質移入を増加させ、修飾核酸またはｍｍＲＮＡにコードされるタンパク質の発現を増加させ、および／または修飾核酸またはｍｍＲＮＡにコードされるタンパク質の放出特性を変える量で、含み得る。さらに、本発明の修飾核酸およびｍｍＲＮＡは、自己組織化核酸ナノ粒子を用いて製剤してもよい。
【０３３１】
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、あらゆる既知のまたは今後薬理学分野で開発される方法で調製され得る。一般に、そのような調製方法は、活性成分を賦形剤および／または１または複数の他の副成分と結合させるステップを含む。
【０３３２】
本発明で使用され得る製剤は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／６８７１４号（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のように調製され得る。
本開示による医薬組成物は、単回単位用量としておよび／または複数の単回単位用量として調製され、包装され、および／または原体で販売され得る。ここでは「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別の量を指す。活性成分の量は、一般に、対象に投与され得る活性成分の用量に等しいおよび／またはそのような用量の好都合な画分、例えば、限定ではないが、そのような用量の半分または３分の１であり得る。
【０３３３】
本開示による医薬組成物中の活性成分、薬剤的に許容可能な賦形剤および／または任意の追加成分の相対量は、治療されている対象が何であるか、そのサイズ、および／または状態により、またさらに組成物の投与経路により異なり得る。例えば、組成物は、０．１％から９９％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される修飾ｍＲＮＡ製剤は、少なくとも１つ
の修飾ｍＲＮＡを含み得る。製剤は、１、２、３、４または５つの修飾ｍＲＮＡを含み得る。１つの実施形態では、製剤は、タンパク質をコードする少なくとも３つの修飾ｍＲＮＡを含む。１つの実施形態では、製剤は、タンパク質をコードする少なくとも５つの修飾ｍＲＮＡを含む。
【０３３５】
医薬製剤は、ここでは、限定ではなく、あらゆる全ての溶媒、分散媒、希釈物または他の液体ビヒクル、分散または懸濁補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘または乳化剤、保存料などを含む、所望される特定の剤形に適した、薬剤的に許容可能な賦形剤を追加で含み得る。医薬組成物を製剤する様々な賦形剤および組成物の調製技法は当技術分野で既知である（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ａ．  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  ＭＤ，  ２００６を参照）。一般的な賦形媒体の使用が、いずれの一般的な賦形媒体も、何等かの望ましくない生物学的効果を生じたり、それ以外にも医薬組成物のいずれかの他の成分（複数可）と有害な相互作用をするなど、物質またはその誘導体と不適合でないかぎり、本開示の範囲内に企図されている。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子の粒子サイズは増加および／または減少させてよい。粒子サイズの変化は、限定ではないが炎症などの生物学的反応を阻止するのを補助でき得るか、または哺乳動物に送達された修飾ｍＲＮＡの生物学的効果を増加させ得る。
【０３３７】
１つの実施形態では、本発明で使用される修飾ｍＲＮＡは、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／６９６１０号（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のように調製され得る。
【０３３８】
医薬組成物の製造に使用される薬剤的に許容可能な賦形剤は、限定ではなく、不活希釈物、界面活性剤および／または乳液、保存料、緩衝剤、滑沢剤および／または油を含む。そのような賦形剤は、本発明の医薬製剤に所望により含まれ得る。
【０３３９】
ある特定の実施形態では、製剤は、１または複数の細胞透過剤、たとえば形質移入剤を含む。特定の実施形態では、リボ核酸が形質移入剤（またはその混合物）と混合され（ｍｉｘｅｄ）または混合され（ａｄｍｉｘｅｄ）、得られた混合物は細胞の形質移入に使用される。好ましい形質移入剤は陽イオン性脂質組成物、特に一価および多価の陽イオン性脂質組成物であり、より具体的にはリポフェクチン（登録商標）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＣＥ、リポフェクタミン（登録商標）、セルフェクチン（登録商標）、ＤＭＲＩＥ−Ｃ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＳＰＡおよびＤＯＳＰＥＲ、および高密度星状（ｄｅｎｓｅ
ｓｔａｒ）デンドリマー、ＰＡＭＡＭデンドリマー、グラフトデンドリマーおよびデンドリグラフトおよび「スーパーフェクト（ＳＵＰＥＲＦＥＣＴ）」として知られるデンドリマーを含むデンドリマー組成物、特にＧ５〜Ｇ１０のデンドリマーである。第２の特定の形質移入法では、リボ核酸が核酸結合基、たとえばポリアミンおよびより具体的にはスペルミンに結合し、その後細胞に導入されるか、または形質移入剤（またはその混合物）と混合され、得られた混合物が細胞の形質移入に使用される。第３の特定の実施形態では、膜融合ペプチドもしくはタンパク質、輸送（ｔｒａｎｓｐｏｒｔ）もしくは輸送（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）ペプチドもしくはタンパク質、受容体−リガンドペプチドもしくはタンパク質または核局在化ペプチドもしくはタンパク質および／またはそれらの修飾類似体（たとえばスペルミン修飾ペプチドもしくはタンパク質）またはそれらの組合せを含む１または複数の形質移入促進ペプチド、タンパク質、またはタンパク質断片の混合物がリボ核酸と混合され、複合体化されて細胞に導入されるが、所望により形質移入剤と混合され、得られた混合物が細胞の形質移入に使用される。さらに、形質移入剤の一成分（たと
えば脂質、陽イオン性脂質またはデンドリマー）は、選択されたペプチド、タンパク質またはタンパク質断片に直接または結合もしくはスペーサー基を介し共有結合する。この実施形態で特に興味深いのは、膜融合性、膜浸透性、輸送（ｔｒａｎｓｐｏｒｔ）もしくは輸送（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）型のペプチドまたはタンパク質、またはその細胞を標的化する機能である。ペプチドまたはタンパク質形質移入剤複合体がリボ核酸と組み合わされ、形質移入に使用される。
【０３４０】
リピドイド
リピドイドの合成は広く記載されており、これらの化合物を含む製剤は特に修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの送達に適している（すべて全容が参照により本明細書に組み込まれるＭａｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．  ２０１０    ２１：１４４８−１４５４；  Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．  ２０１０  ２６７：９−２１；  Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００８  ２６：５６１−５６９；  Ｌｏｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２０１０  １０７：１８６４−１８６９；  Ｓｉｅｇｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２０１１  １０８：１２９９６−３００１を参照）。
【０３４１】
これらのリピドイドは、げっ歯類と非ヒト霊長類において２本鎖低分子干渉ＲＮＡ分子を効果的に送達するのに使用されているが（すべて全容が参照により本明細書に組み込まれるＡｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００８  ２６：５６１−５６９；  Ｆｒａｎｋ−Ｋａｍｅｎｅｔｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００８  １０５：１１９１５−１１９２０；  Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００９  １７：８７２−８７９；  Ｌｏｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２０１０  １０７：１８６４−１８６９；  Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０１１  ２９：１００５−１０１０を参照）、本開示は、それらの製剤と、１本鎖修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの送達における使用を記述する。複合体、ミセル、リポソームまたは粒子はこれらのリピドイドを含んで調製され得るので、局所および／または全身投与経路によるリピドイド製剤注入後のコードされたタンパク質の産生により判断すると、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡが効果的に送達される結果になる。修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡのリピドイド複合体は、限定ではなく、静脈内、筋肉内または皮下経路を含む様々な方法により投与され得る。
【０３４２】
核酸のインビボでの送達は、限定ではなく、製剤の組成、粒子のペグ化の性質、ロードの程度、オリゴヌクレオチドと脂質の比率および生物物理学的パラメータ、たとえば限定ではなく粒子サイズを含む多くのパラメータに影響され得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＡｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００９  １７：８７２−８７９）。一例として、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）脂質のアンカー鎖の長さのわずかな変化が、インビボでの有効性に大きな影響を及ぼし得る。限定ではなく、ペンタ［３−（１−ラウリルアミノプロピオニル）］−トリエチレンテトラミンヒドロクロリド（９８Ｎ１２−５として知られるＴＥＴＡ−５ＬＡＰ；その全容が参照により本明細書に組み込まれるＭｕｒｕｇａｉａｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ４０１：６１  （２０１０）を参照）、Ｃ１２−２００（誘導体と変異体を含む）およびＭＤ１を含む異なるリピドイドとの製剤のインビボ活性が試験され得る。
【０３４３】
本明細書で「９８Ｎ１２−５」と呼ばれるリピドイドは、Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００９  １７：８７２−８７９に開示されており、その全容が参照により本明細書に組み込まれる（図１参照）。
【０３４４】
本明細書で「Ｃ１２−２００」と呼ばれるリピドイドは、Ｌｏｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２０１０  １０７：１８６４−１８６９  およびＬｉｕ  ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．  ２０１０  ６６９−６７０に開示されており、いずれもその全容が参照により本明細書に組み込まれる。リピドイド製剤は、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに加えて３つか４つまたはそれより多くの成分を含む粒子を含み得る。一例として、特定のリピドイドを含む製剤は、限定ではなく９８Ｎ１２−５を含み、４２％リピドイド、４８％コレステロールおよび１０％ＰＥＧ（Ｃ１４アルキル鎖長）をさらに含み得る。別の例として、特定のリピドイドを含む製剤は、限定ではなくＣ１２−２００を含み、５０％リピドイド、１０％ジステロイルホスファチジルコリン、３８．５％コレステロールおよび１．５％ＰＥＧ−ＤＭＧを含み得る。
【０３４５】
１つの実施形態では、全身性静脈内投与用にリピドイドとともに製剤された修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、肝臓を標的にし得る。例えば、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを用いた、４２％９８Ｎ１２−５、４８％コレステロールおよび１０％ＰＥＧ−脂質の脂質モル濃度の組成を含み、約７．５対１の全脂質対修飾核酸またはｍｍＲＮＡの最終重量比を有し、ＰＥＧ脂質上のアルキル鎖長がＣ１４であり、平均粒子径がおよそ５０〜６０ｎｍである最終最適化された静脈内製剤は、製剤の分布が肝臓に９０％以上となる結果をもたらし得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＡｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００９  １７：８７２−８７９を参照）。別の例では、Ｃ１２−２００（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる米国特許仮出願第６１／１７５，７７０号および国際公開公報第２０１０１２９７０９号を参照）リピドイドを用いた静脈内製剤は、Ｃ１２−２００／ジステロイルホスファチジルコリン／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧのモル比５０／１０／３８．５／１．５を有し得、約７対１の全脂質対修飾核酸またはｍｍＲＮＡの重量比を有し得、平均粒子径が８０ｎｍであり、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを肝細胞に送達するのに有効であり得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＬｏｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２０１０  １０７：１８６４−１８６９を参照）。別の実施形態では、ＭＤ１リピドイド含有製剤は、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを肝細胞にインビボで有効送達するのに使用され得る。筋肉内または皮下経路の最適化リピドイド製剤の特徴は、標的の細胞種および製剤が細胞外マトリックスを通って血流に拡散する能力により大きく異なり得る。内皮窓のサイズにより、肝細胞への有効送達には１５０ｎｍ未満の粒子径が望ましい場合があるが（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＡｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００９  １７：８７２−８７９を参照）、限定ではなく、内皮細胞、骨髄系細胞および筋肉細胞を含む他の細胞種に製剤を送達する場合のリピドイド製剤修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの使用は、同様にサイズが限定されない可能性がある。ｓｉＲＮＡを骨髄系細胞および内皮などの他の非肝細胞にインビボで送達する場合のリピドイド製剤の使用が報告されている（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれるＡｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００８  ２６：５６１−５６９；  Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０１１  ２９：１００５−１０１０；  Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｄｖ．  Ｆｕｎｃｔ．  Ｍａｔｅｒ．  ２００９  １９：３１１２−３１１８；  ８ｔｈ
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｕｄａｈ  Ｆｏｌｋｍａｎ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＭＡ  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ８−９，  ２０１０を参照）。単球などの骨髄系細胞への有効送達、リピドイド製剤は同様の成分モル比を有し得る。リピドイドと、限定ではなくジステロイルホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ−ＤＭＧを含む他の成分の異なる比率が、限定ではなく肝細胞、骨髄系細胞、筋肉細胞などを含む異なる細胞種に送達される修飾核酸またはｍｍＲＮＡの製剤を最適化するのに使用され得る。例えば、成分モル比は、限定ではなく、５０％のＣ１２−２００、１０％のジ
ステロイルホスファチジルコリン、３８．５の％コレステロール、および％１．５のＰＥＧ−ＤＭＧを含み得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＬｅｕｓｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１１  ２９：１００５−１０１０を参照）。皮下または筋肉内送達による、細胞（限定ではなく、脂肪細胞および筋肉細胞など）への核酸の局所送達へのリピドイド製剤の使用は、全身送達に所望される全ての製剤成分を要しないことがあり、リピドイドと修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡだけを含み得る。
【０３４６】
異なるリピドイドの組合せは、リピドイドが修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡにより細胞の形質移入を増加させることができ得；および／またはコードされたタンパク質の翻訳を増加させることができ得るので、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡが指令するタンパク質産生の効率を向上させるのに使用され得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＷｈｉｔｅｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ２０１１，  １９：１６８８−１６９４を参照）。
【０３４７】
ある特定の実施形態では、製剤は、少なくとも１つの修飾核酸と送達剤を含み得る。いくつかの実施形態では、送達剤は、ｍｍＲＮＡの局所および全身送達のためのリピドイドベースの製剤を含み得る。
【０３４８】
本明細書に記載される医薬組成物は、ｍｍＲＮＡの局所および全身送達を可能にするリピドイドベースの製剤を含む。
リポソーム、リポプレックスおよび脂質ナノ粒子
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、１または複数のリポソーム、リポプレックスまたは脂質ナノ粒子を用いて製剤され得る。１つの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの医薬組成物は、リポソームを含む。リポソームは、人工的に調製される小胞で、主として脂質二重層で構成され得、栄養剤と医薬製剤の投与用の送達ビヒクルとして使用され得る。リポソームは異なる寸法であり得、例えば、限定ではなく、多ラメラ小胞（ＭＬＶ）は直径が数百ナノメートルであり得、狭い水性コンパートメントで分離された一連の同心二重層を含み得、小単細胞小胞（ＳＵＶ）は直径５０ｎｍ未満であり得、大単ラメラ小胞（ＬＵＶ）は直径５０〜５００ｎｍであり得る。リポソームの設計は、リポソームの不健康な組織への結合を向上させるか、または限定ではなく飲食作用などのイベントを活性化するため、限定ではなく、オプソニンまたはリガンドを含み得る。リポソームは、医薬製剤の送達を向上させるために低いかまたは高いｐＨを含み得る。
【０３４９】
リポソームの形成は、限定ではなく、封入される医薬製剤およびリポソーム成分、脂質小胞が分散される媒体の性質、封入される物質の有効濃度とその潜在的毒性、小胞の適用および／または送達中に関与するあらゆる追加の工程、最適化サイズ、多分散性および意図される適用での小胞の有効期間、ならびにバッチ間の再現性および安全かつ高効率のリポソーム製品の大規模生産の可能性などの物理化学的特徴により得る。
【０３５０】
１つの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、限定ではなく、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）リポソーム、Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社（ワシントン州ボセル）のＤｉＬａ２リポソーム、１，２−ジリノレイルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）およびＭＣ３（その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１００３２４１２０号）から形成されるようなリポソーム、および限定ではなくＪａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ社（ペンシルバニア州ホーシャム）のドキシル（登録商標）などの低分子薬物を送達し得るリポソームを含み得る。１つの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、限定ではなく、以前記述され、オリゴヌクレオチド
のインビトロとインビボでの送達に適していることが示されている安定化プラスミド−脂質粒子（ＳＰＬＰ）または安定化核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）の合成から形成されるものなどのリポソームを含み得る（その全容がすべて参照により本明細書に組み込まれるＷｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．  １９９９  ６：２７１−２８１；  Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．  １９９９  ６：１４３８−１４４７；  Ｊｅｆｆｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．  ２００５  ２２：３６２−３７２；  Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００５  ２：１００２−１００７；  Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ．  ２００６  ４４１：１１１−１１４；  Ｈｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ
Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．    ２００５  １０７：２７６−２８７；  Ｓｅｍｐｌｅ  ｅｔ
ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２０１０  ２８：１７２−１７６；  Ｊｕｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００９  １１９：６６１−６７３；  ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２００８  １９：１２５−１３２を参照）。Ｗｈｅｅｌｅｒらの元々の方法は、界面活性剤透析法であったが、後にＪｅｆｆｓらが改良を加え、自発小胞形成法と呼ばれている。リポソーム製剤は、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに加えて３〜４つの脂質成分で構成される。一例として、リポソームは、Ｊｅｆｆｓらに記述されるように、限定ではなく、５５％のコレステロール、２０％のジステロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、１０％のＰＥＧ−Ｓ−ＤＳＧおよび１５％の１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）を含み得る。別の例としては、特定のリポソーム製剤は、Ｈｅｙｅｓらに記述されるように、限定ではなく、４８％のコレステロール、２０％のＤＳＰＣ、２％のＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡおよび３０％の陽イオン性脂質を含み得、ここで陽イオン性脂質は１，２−ジステアルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（１，２−ｄｉｓｔｅａｒｌｏｘｙ−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅ）（ＤＳＤＭＡ）、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＤＭＡまたは１，２−ジリノレニルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）を含み得る。
【０３５１】
１つの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つの免疫原をコードし得るｍｍＲＮＡを送達するために形成され得るリポソームを含み得る。ｍｍＲＮＡはリポソームに囲包され得、および／または水性コアに含まれてからリポソームに囲包され得る（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２０３１０４６号、同第２０１２０３１０４３号、同第２０１２０３０９０１号および同第２０１２００６３７８号を参照）。別の実施形態では、免疫原をコードし得るｍｍＲＮＡは、陽イオン性の水中油の乳剤中で製剤され得、ここで乳剤粒子は油のコアとｍｍＲＮＡと相互作用できる陽イオン性脂質を含み、分子を乳剤粒子に固定する（その全容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２００６３８０号を参照）。さらに別の実施形態では、脂質製剤は、少なくとも形質移入を増強し得る脂質である陽イオン性脂質と、脂質部分に連結した親水性頭部基を含む少なくとも１種類の脂質を含み得る（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１０７６８０７号および米国出願公開第２０１１０２００５８２号を参照）。別の実施形態では、免疫原をコードする修飾ｍＲＮＡは、官能性脂質二重層間に架橋結合を有し得る脂質小胞内で製剤され得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１２０１７７７２４号を参照）。
【０３５２】
１つの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、官能性脂質二重層間に架橋結合を有し得る脂質小胞内で製剤され得る。
１つの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは脂質−ポリカチオン複合体内で製剤され得る。脂質−ポリカチオン複合体の形成は、当技術分野で既知の方法で達成され得、および／またはその全容が参照により本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１２０１７８７０２号に記載されるように達成され得る。非限定的な例として、ポリカチオンは、限定ではなく、ポリリジン、ポリオルニチンおよび／またはポリアルギニンなどの陽イオン性ペプチ
ドまたはポリペプチド、およびその全容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２０１３３２６号に記載される陽イオン性ペプチドを含み得る。別の実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、限定ではなく、コレステロールまたはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）などの中性脂質をさらに含み得る脂質−ポリカチオン複合体内で製剤され得る。
【０３５３】
リポソーム製剤は、限定ではなく、陽イオン性脂質成分の選択、陽イオン性脂質の飽和度、ペグ化の性質、全成分比およびサイズなどの生物物理学的パラメータに影響され得る。Ｓｅｍｐｌｅら（Ｓｅｍｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２０１０  ２８：１７２−１７６；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）による１つの例では、リポソーム製剤は５７．１％の陽イオン性脂質、７．１％のジパルミトイルホスファチジルコリン、３４．３％のコレステロールおよび１．４％のＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡで構成された。別の例として、陽イオン性脂質の組成が変化すると、ｓｉＲＮＡを細胞を提示している様々な抗原により有効に送達できた（Ｂａｓｈａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１１  １９：２１８６−２２００；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤中のＰＥＧの比率は、増加もしくは減少し得、および／またはＰＥＧ脂質の炭素鎖の長さは、Ｃ１４からＣ１８まで修飾されてＬＮＰ製剤の薬物動態および／または生体分布を変更し得る。非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、陽イオン性脂質、ＤＳＰＣおよびコレステロールと比べて１〜５％の脂質モル比のＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを含み得る。別の実施形態では、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧは、限定ではなく、ＰＥＧ−ＤＳＧ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）またはＰＥＧ−ＤＰＧ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）などのＰＥＧ脂質で置換され得る。陽イオン性脂質は、限定ではなくＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、Ｃ１２−２００およびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡなどの当技術分野で既知の任意の脂質から選択され得る。
【０３５５】
１つの実施形態では、陽イオン性脂質は、限定ではなく国際公開第２０１２０４０１８４号、同第２０１１１５３１２０号、同第２０１１１４９７３３号、同第２０１１０９０９６５号、同第２０１１０４３９１３号、同第２０１１０２２４６０号、同第２０１２０６１２５９号、同第２０１２０５４３６５号、同第２０１２０４４６３８号、同第２０１００８０７２４号、同第２０１０２１８６５号および同第２００８１０３２７６号、米国特許第７，８９３，３０２号、同第７，４０４，９６９号および同第８，２８３，３３３号、ならびに米国出願公開第２０１０００３６１１５号および同第２０１２０２０２８７１号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載される陽イオン性脂質から選択され得る。別の実施形態では、陽イオン性脂質は、限定ではなく国際公開第２０１２０４０１８４号、同第２０１１１５３１２０号、同第２０１１１４９７３３号、同第２０１１０９０９６５号、同第２０１１０４３９１３号、同第２０１１０２２４６０号、同第２０１２０６１２５９号、同第２０１２０５４３６５号および同第２０１２０４４６３８号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載される式Ａから選択され得る。さらに別の実施形態では、陽イオン性脂質は、限定ではなく国際公開第２００８１０３２７６号の式ＣＬＩ〜ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，８９３，３０２号の式ＣＬＩ〜ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，４０４，９６９号の式ＣＬＩ〜ＣＬＸＸＸＸＩＩおよび米国出願公開第２０１０００３６１１５号の式Ｉ〜ＶＩ（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）から選択され得る。非限定的な例として、陽イオン性脂質は、（２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−２０，２３−ジエン−１０−アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７，２０−ジエン−９−アミン、（１Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ５Ｎ−ジメチルペンタコサ−ｌ６、１９−ジエン−８−
アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルドコサ−１３，１６−ジエン−５−アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘンイコサ−１２，１５−ジエン−４−アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリコサ−１４，１７−ジエン−６−アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルテトラコサ−１５，１８−ジエン−７−アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１８，２１−ジエン−１０−アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルテトラコサ−１５，１８−ジエン−５−アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリコサ−１４，１７−ジエン−４−アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタコサ−１９，２２−ジエン−９−アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１８，２１−ジエン−８−アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７，２０−ジエン−７−アミン、（１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタコサ−１６，１９−ジエン−６−アミン、（２２Ｚ，２５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘントリアコンタ−２２，２５−ジエン−１０−アミン、（２１Ｚ，２４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリアコンタ−２１，２４−ジエン−９−アミン、（１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１８−エン−１０−アミン、（１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７−エン−９−アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタコサ−１９，２２−ジエン−７−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサン−１０−アミン、（２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルノナコサ−２０，２３−ジエン−ｌ０−アミン、１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−ｌ−ノニルイコサ−１１，１４−ジエン−ｌ−ｙｌ］ピロリジン、（２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−２０−エン−ｌ０−アミン、（１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエプタコサ−１５−エン−ｌ０−アミン、（１４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−１４−エン−ｌ０−アミン、（１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−１７−エン−ｌ０−アミン、（２４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリトリアコンタ−２４−エン−ｌ０−アミン、（２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−２０−エン−ｌ０−アミン、（２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘントリアコンタ−２２−エン−ｌ０−アミン、（１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタコサ−１６−エン−８−アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ノニルヘンイコサ−１２，１５−ジエン−１−アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−ｌ３，１６−ジエン−ｌ−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｌ−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］エプタデカン−８−アミン、１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−ヘキシルシクロプロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナデカン−１０−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ノナデカン−１０−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２１−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘンイコサン−ｌ０−アミン，Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−｛［（ｌＲ，２Ｒ）−２−ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］ノナデカン−１０−アミン，Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘキサデカン−８−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−［（ｌＲ，２Ｓ）−２−ウンデシルシクロプロピル］テトラデカン−５−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−｛７−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘプチル｝ドデカン−１−アミン、１−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−ヘプチルシクロプロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタデカン−９−アミン、１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−デシルシクロプロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタデカン−６−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｌ−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ペンタデカン−８−アミン、Ｒ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、Ｓ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−｛２−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−１−［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝ピロリジン、（２Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−［（５Ｚ）−オクタ−５−エン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、１−｛２−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−１−［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝アゼチジン、（２Ｓ）
−１−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−（ヘプチルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（ノニルオキシ）−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン；（２Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２−トリエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（ペンチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−（ヘキシルオキシ）−３−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−［（１３Ｚ，１６Ｚ）−ドコサ−ｌ３，１６−ジエン−ｌ−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１３Ｚ，１６Ｚ）−ドコサ−１３，１６−ジエン−１−イルオキシ］−３−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１３Ｚ）−ドコサ−１３−エン−１−イルオキシ］−３−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、１−［（１３Ｚ）−ドコサ−１３−エン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−［（９Ｚ）−ヘキサデカ−９−エン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｒ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｈ（１−メトイルオクチル）オキシ］−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、（２Ｒ）−１−［（３，７−ジメチルオクチル）オキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（オクチルオキシ）−３−（｛８−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］オクチル｝オキシ）プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−｛［８−（２−オクリルシクロプロピル）オクチル］オキシ｝−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミンおよび（１ｌＥ，２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−ｌ１，２０，２−トリエン−１０−アミンまたはその薬剤的に許容可能な塩もしくは立体異性体から選択され得る。
【０３５６】
１つの実施形態では、陽イオン性脂質は、当技術分野で既知の方法で、および／または国際公開第２０１２０４０１８４号、同第２０１１１５３１２０号、同第２０１１１４９７３３号、同第２０１１０９０９６５号、同第２０１１０４３９１３号、同第２０１１０２２４６０号、同第２０１２０６１２５９号、同第２０１２０５４３６５号、同第２０１２０４４６３８号、同第２０１００８０７２４号および同第２０１０２１８６５号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載されるように合成され得る。
【０３５７】
１つの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを３％の脂質モル比で含有し得る。別の実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを１．５％の脂質モル比で含有し得る。
【０３５８】
１つの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ２０００（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００）を含有し得る。１つの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ２０００、当技術分野で既知の陽イオン性脂質および少なくとも１つの他の成分を含有し得る。別の実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ２０００、当技術分野で既知の陽イオン性脂質、ＤＳＰＣおよびコレステロールを含有し得る。非限定的な例として、
ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ２０００、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＳＰＣおよびコレステロールを含有し得る。別の非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ２０００、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＳＰＣおよびコレステロールをモル比２：４０：１０：４８で含有し得る（例えば、その全容が参照により本明細書に組み込まれるＧｅａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｏｎｖｉｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｅｌｆ−ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ  ＲＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅｓ，  ＰＮＡＳ  ２０１２；  ＰＭＩＤ：  ２２９０８２９４を参照）。
【０３５９】
１つの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１１２７２５５号または同第２００８１０３２７６号に記載される用法により製剤され得る。非限定的な例として、本明細書に記載される修飾ＲＮＡは、その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１１２７２５５号および／または同第２００８１０３２７６号に記載されるように、ＬＮＰ製剤中に囲包され得る。別の非限定的な例として、本明細書に記載される修飾ＲＮＡは、その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１２０２０７８４５号に記載されるような非経口経路で送達されるナノ粒子内で製剤され得る。
【０３６０】
１つの実施形態では、本明細書に記載されるＬＮＰ製剤は、ポリカチオン組成物を含み得る。非限定的な例として、ポリカチオン組成物は、その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国出願公開第２００５０２２２０６４号の式１〜６０から選択され得る。別の実施形態では、ポリカチオン組成物を含むＬＮＰ製剤は、本明細書に記載される修飾ＲＮＡのインビボおよび／またはインビトロの送達に使用され得る。
【０３６１】
１つの実施形態では、本明細書に記載されるＬＮＰ製剤は、透過促進分子を追加で含み得る。非限定的透過促進分子は、米国出願公開第２００５０２２２０６４号（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０３６２】
１つの実施形態では、医薬組成物は、限定ではなくＤｉＬａ２リポソーム（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社、ワシントン州ボセル）、ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社、ワシントン州ボセル）、中性ＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）ベースのリポソーム（例えば、卵巣癌のｓｉＲＮＡ送達（Ｌａｎｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２００６  ５（１２）１７０８−１７１３）；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）およびヒアルロナンでコーティングされたリポソーム（Ｑｕｉｅｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、イスラエル）などのリポソーム内で製剤され得る。
【０３６３】
ナノ粒子製剤は、炭水化物担体と修飾核酸分子（例えばｍｍＲＮＡ）を含む炭水化物ナノ粒子であり得る。非限定的な例として、炭水化物担体は、限定ではなく無水物−修飾フィトグリコーゲンまたはグリコーゲンタイプの材料、フィトグリコーゲン（ｐｈｔｏｇｌｙｃｏｇｅｎ）オクテニルサクシネート、フィトグリコーゲンβデキストリン、無水物−修飾フィトグリコーゲンβデキストリンを含み得る。（例えば、その全容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２１０９１２１号を参照）。
【０３６４】
脂質ナノ粒子製剤は、陽イオン性脂質を速やかに排出される脂質ナノ粒子（ｒｅＬＮＰ）として知られる生分解性陽イオン性脂質で置換することで、改良され得る。限定ではないがＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、およびＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡなどのイオン化できる陽イオン性脂質は、時間が経つと血漿および組織内に蓄積することが示されており、潜在的な毒性源であり得る。速やかに排出される脂質の迅速な代謝は、脂質ナノ粒子の忍容性および治療インデックスをラットにおける１ｍｇ／ｋｇ用量から１０ｍｇ／ｋｇ用量へと、一桁改良し得る。酵素分解されたエステル結合を含むことで、ｒｅＬ
ＮＰ製剤の活性は維持されたままで、陽イオン成分の分解および代謝プロファイルが向上し得る。エステル結合は、脂質鎖内部に位置しても、脂質鎖も末端で末端に位置してもよい。内部エステル結合は、脂質鎖のどの炭素も置換し得る。
【０３６５】
１つの実施形態では、内部エステル結合は、飽和炭素のどちら側に配置されてもよい。ｒｅＬＮＰの非限定的な例は、
【０３６６】
【化８６】
2015510495.tif 000142
を含む。
【０３６７】
１つの実施形態では、免疫反応は、ナノ種、ポリマーおよび免疫原を含み得る脂質ナノ粒子の送達により誘発され得る。（米国出願公開第２０１２０１８９７００号および国際公開第２０１２０９９８０５号；その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）。ポリマーは、ナノ種を囲包し得るか、または部分的にナノ種を囲包し得る。免疫原は、組換えタンパク質、本明細書に記載される修飾ＲＮＡであり得る。１つの実施形態では、脂質ナノ粒子は、限定ではないが病原体に対するワクチンでの使用のため製剤される。
【０３６８】
脂質ナノ粒子は、操作されて、脂質ナノ粒子が粘膜バリアを貫通できるように、粒子の表面特性を改変され得る。粘液は、限定ではないが口腔（例えば頬内および食道の膜および扁桃組織）、眼、消化器（例えば胃、小腸、大腸、結腸、直腸）、鼻腔、呼吸器（例えば鼻腔、咽頭、気管および気管支の膜）、生殖器（例えば膣、子宮頸部および尿道の膜）などの粘膜組織上に位置する。高薬物封入効率と多くの薬物を徐放性送達する能力に好ましい１０〜２００ｎｍよりも大きいナノ粒子は、粘膜バリアを通って速やかに拡散するには大きすぎると考えられている。粘液は絶えず分泌され、流れ、排出または消化され、回収されるので、捕捉された粒子のほとんどは数秒または数時間内に粘膜組織から除去され得る。低分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で密にコーティングされている大きい高分子ナノ粒子（直径２００ｎｍ〜５００ｎｍ）の粘液中の拡散率は、水中に拡散した同じ粒子の４〜６倍低いだけであった（Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  ２００７  １０４（５）：１４８２−４８７；  Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．  ２００９  ６１（２）：  １５８−１７１；その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）。ナノ粒子の輸送は、浸透速度および／または限定ではなく蛍光退色後回復測定（ＦＲＡＰ）および高解像度の多粒子追跡（ＭＰＴ）を含む蛍光顕微
鏡技法を用いて判定され得る。非限定的な例として、粘膜バリアを貫通できる組成物は、米国特許第８，２４１，６７０号（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように作製され得る。
【０３６９】
粘液を透過するように操作された脂質ナノ粒子は、高分子材料（すなわち高分子コア）および／またはポリマー−ビタミンコンジュゲートおよび／またはトリブロックｃｏ−ポリマーを含み得る。高分子材料は、限定ではなく、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリウレア、ポリカーボネート、ポリ（スチレン）、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリルおよびポリアクリレートを含み得る。高分子材料は、生分解性および／または生体適合性であり得る。高分子材料は、さらに照射され得る。非限定的な例として、高分子材料は、ガンマ照射され得る（例えば、その全容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２８２１６５号を参照）。特定のポリマーの非限定的な例は、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＥＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＰＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリアルキルシアノアクラレート、ポリウレタン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリエチレンおよびポリプロピレンなどのポリアルキレン、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）などのポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリ（エチレンテレフタレート）などのポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリ（ビニルアセテート）などのポリビニルエステル、ポリ（ビニルクロリド）（ＰＶＣ）などのポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリウレタン、誘導体化セルロース、例えばアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリル酸のポリマー、例えばポリ（メタクリル酸メチル）（ＰＭＭＡ）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸ブチル）、ポリ（メタクリル酸イソブチル）、ポリ（メタクリル酸ヘキシル）、ポリ（メタクリル酸イソデシル）、ポリ（メタクリル酸ラウリル）、ポリ（メタクリル酸フェニル）、ポリ（アクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸イソプロピル）、ポリ（アクリル酸イソブチル）、ポリ（アクリル酸オクタデシル）およびｃｏポリマーならびにそれらの混合物、ポリジオキサノンとそのｃｏポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロクサマー、ポリ（オルト）エステル、ポリ（ブチル酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、およびトリメチレンカルボネート、ポリビニルピロリドンを含む。脂質ナノ粒子は、限定ではなくブロックｃｏ−ポリマーおよび（ポリ（エチレングリコール））−（ポリ（酸化プロピレン））−（ポリ（エチレングリコール））トリブロックコポリマー（例えば、その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１２０１２１７１８号および米国出願公開第２０１００００３３３７号および米国特許第８，２６３，６６５号を参照）などのｃｏ−ポリマーでコーティングされるかまたは結合されていてよい。ｃｏ−ポリマーは、安全と認められる（ＧＲＡＳ）ポリマーであり得、脂質ナノ粒子の形成は、新規の化学成分が生成しないように行われ得る。例えば、脂質ナノ粒子は、新規の化学成分を生じることなく、尚もヒト粘液に速やかを透過すること
ができる、ＰＬＧＡナノ粒子をコーティングするポロクサマーを含み得る（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  ２０１１  ５０：２５９７−２６００；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０３７０】
ポリマー−ビタミンコンジュゲートのビタミンは、ビタミンＥであり得る。コンジュゲートのビタミン部分は、限定ではなくビタミンＡ、ビタミンＥ、他のビタミン類、コレステロール、疎水性部分または他の界面活性剤の疎水性成分（例えば、ステロール鎖、脂肪酸、炭化水素鎖およびアルキレンオキシド鎖）などの他の適切な成分で置換され得る。
【０３７１】
粘液を透過するように操作された脂質ナノ粒子は、限定ではなくｍｍＲＮＡ、陰イオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば陽イオン界面活性剤、例えばジメチルジオクタデシル−アンモニウムブロミド）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコールおよびポロクサマー）、粘液溶解薬（例えば、Ｎ−アセチルシステイン、ヨモギ、ブロメライン、パパイン、クサギ、アセチルシステイン、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルゾリン、チモシンβ４ドルナーゼアルファ、ネルテネキシン、エルドステイン）およびｒｈＤＮａｓｅを含む様々なＤＮａｓｅなどの表面改変剤を含み得る。表面改変剤は、粒子表面に埋め込まれるかまたは巻き込まれているか、または脂質ナノ粒子の表面に（例えばコーティング、吸収、共有結合または他のプロセスにより）配置され得る。（例えば、その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１００２１５５８０号および米国出願公開第２００８０１６６４１４号を参照）。
【０３７２】
粘液を透過する脂質ナノ粒子は、少なくとも１つの本明細書に記載されるｍｍＲＮＡを含み得る。ｍｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子に封入され得、および／または粒子表面に配置され得る。ｍｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子に共有結合され得る。粘液を透過する脂質ナノ粒子の製剤は、複数のナノ粒子を含み得る。さらに、製剤は、粘液と相互作用して周辺粘液の構造的および／または粘性の性質を改変し粘膜付着を低下させ得、粘膜組織への粘液を透過する脂質ナノ粒子の送達を増加させ得る粒子を含有し得る。
【０３７３】
１つの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、限定ではなくＡＴＵＰＬＥＸ（商標）系、ＤＡＣＣ系、ＤＢＴＣ系および他のＳｉｌｅｎｃｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社（英国ロンドン）のｓｉＲＮＡ−リポプレックス技術、ＳＴＥＭＧＥＮＴ（登録商標）のＳＴＥＭＦＥＣＴ（商標）（マサチューセッツ州ケンブリッジ）およびポリエチレンアミン（ＰＥＩ）またはプロタミンベースの核酸の標的化および非標的化送達の酸などのリポプレックスとして製剤される（Ａｌｅｋｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００８  ６８：９７８８−９７９８；  Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０１２  ５０：７６−７８；  Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００６  １３：１２２２−１２３４；  Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００６  １３：１３６０−１３７０；  Ｇｕｔｂｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｕｌｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ２０１０  ２３：３３４−３４４；  Ｋａｕｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ２０１０  ８０：２８６−２９３Ｗｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ２００９  ３２：４９８−５０７；  Ｗｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ２００８  ３１：１８０−１８８；  Ｐａｓｃｏｌｏ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ４：１２８５−１２９４；
Ｆｏｔｉｎ−Ｍｌｅｃｚｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３４：１−１５；  Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００５，  ２３：７０９−７１７；  Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  
Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００７  ６；１０４：４０９５−４１００；  ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２００８  １９：１２５−１３２；全てその全容が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０３７４】
１つの実施形態では、そのような製剤は、構築され得るかまたはインビボで受動的または能動的に限定ではなく肝細胞、免疫細胞、腫瘍細胞、内皮細胞、抗原提示細胞および白血球を含む異なる細胞種に向けられるように改変された組成物でもあり得る（Ａｋｉｎｃ
ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１０  １８：１３５７−１３６４；  Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００５  ２３：７０９−７１７；  Ｊｕｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００９  １１９：６６１−６７３；  Ｋａｕｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ
２０１０  ８０：２８６−２９３；  Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００６  １３：１２２２−１２３４；  Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００６  １３：１３６０−１３７０；  Ｇｕｔｂｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｕｌｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ２０１０  ２３：３３４−３４４；
Ｂａｓｈａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ２０１１  １９：２１８６−２２００；  Ｆｅｎｓｋｅ  ａｎｄ  Ｃｕｌｌｉｓ，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ
Ｄｅｌｉｖ．  ２００８  ５：２５−４４；  Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００８  ３１９：６２７−６３０；  Ｐｅｅｒ  ａｎｄ  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０１１  １８：１１２７−１１３３；全てその全容が参照により本明細書に組み込まれる）。製剤の肝臓細胞受動的標的化の１つの例は、アポリポプロテインＥに結合し、これらの製剤がインビボで肝細胞に結合し吸収されるのを促進することが示されている、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡおよびＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡベースの脂質ナノ粒子製剤を含む（Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１０  １８：１３５７−１３６４；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。製剤は、限定ではなく葉酸、トランスフェリン、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）および抗体標的化アプローチに例示されるように、それらの表面の異なるリガンドの発現を通じて選択的に標的化することもできる（Ｋｏｌｈａｔｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０１１  ８：１９７−２０６；  Ｍｕｓａｃｃｈｉｏ  ａｎｄ  Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，  Ｆｒｏｎｔ
Ｂｉｏｓｃｉ．  ２０１１  １６：１３８８−１４１２；  Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｍｅｍｂｒ  Ｂｉｏｌ．  ２０１０  ２７：２８６−２９８；  Ｐａｔｉｌ  ｅｔ
ａｌ．，  Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．  ２００８  ２５：１−６１；  Ｂｅｎｏｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．  ２０１１  １２：２７０８−２７１４；  Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  ２００８  ５：３０９−３１９；  Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１０  １８：１３５７−１３６４；  Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０１２  ８２０：１０５−１１６；  Ｂｅｎ−Ａｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０１２  ７５７：４９７−５０７；  Ｐｅｅｒ  ２０１０  Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ．  ２０：６３−６８；  Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００７  １０４：４０９５−４１００；  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０１１  ７２１：３３９−３５３；  Ｓｕｂｒａｍａｎｙａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１０  １８：２０２８−２０３７；  Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００５  ２３：７０９−７１７；  Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００８  ３１９：６２７−６３０；  Ｐｅｅｒ  ａｎｄ  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０１１  １８：１１２７−１１３３；全てその全容が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０３７５】
１つの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、固体脂質ナノ粒子として製剤される。固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）は、平均径が１０〜１０００ｎｍの球体であり得る。ＳＬＮは、親油性分子を溶解できる固体脂質コアマトリックスを有し、界面活性剤および／または乳液で安定化し得る。さらなる実施形態では、脂質ナノ粒子は、自己組織化脂質−ポリマーナノ粒子であり得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれるＺｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ＡＣＳ  Ｎａｎｏ，  ２００８，  ２  （８），  ｐｐ  １６９６−１７０２を参照）。
【０３７６】
リポソーム、リポプレックスまたは脂質ナノ粒子は、これらの製剤は修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡにより細胞形質移入を増加させることができ得、および／またはコードされたタンパク質の翻訳を増加させることができ得るので、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡが指令するタンパク質産生の効力を向上させるために使用され得る。そのような１つの例は、脂質封入を用いてポリプレックスプラスミドＤＮＡの有効な全身性送達を可能にすることに関する（Ｈｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００７  １５：７１３−７２０；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。リポソーム、リポプレックスまたは脂質ナノ粒子は、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの安定性を増加させるのにも使用され得る。
【０３７７】
１つの実施形態では、本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、放出制御および／または標的化送達用に製剤され得る。ここでは、「放出制御」は、特定の放出パターンにしたがい治療結果をもたらす医薬組成物または化合物の放出プロファイルを指す。１つの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、本明細書に記載されるおよび／または当技術分野で既知の送達剤に封入されて放出制御および／または標的化送達され得る。本明細書では「封入する」という用語は、囲包する、包囲するまたは包むことを意味する。本発明の化合物の製剤に関しては、封入は、実質的、完全または部分的であり得る。「実質的に封入された」という用語は、少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９％より多くの、または９９．９９９％より多くの本発明の医薬組成物または化合物が送達剤に囲包され、包囲され、または包まれ得ることを意味する。「部分的封入」は、１０、１０、２０、３０、４０、５０未満またはより少量の本発明の医薬組成物または化合物が送達剤に囲包され、包囲され、または包まれ得ることを意味する。有利にも、封入は、蛍光および／または電子顕微鏡像を用いて本発明の医薬組成物または化合物の漏れまたは活性を測定して決定され得る。例えば、少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９または９９．９９％より多くの本発明の医薬組成物または化合物が送達剤中に封入される。
【０３７８】
１つの実施形態では、放出制御製剤は、限定ではなくトリブロックｃｏ−ポリマーを含み得る。非限定的な例として、製剤は、２つの異なるタイプのトリブロックｃｏ−ポリマーを含み得る（国際公開第２０１２１３１１０４号および同第２０１２１３１１０６号；その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）。
【０３７９】
別の実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子または速やかに排出される脂質ナノ粒子中に封入され得、脂質ナノ粒子または速やかに排出される脂質ナノ粒子は次に本明細書に記載されるおよび／または当技術分野で既知のポリマー、ヒドロゲルおよび／または外科用シーラント中に封入され得る。非限定的な例として、ポリマー、ヒドロゲルまたは外科用シーラントは、ＰＬＧＡ、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、ポロクサマー、ＧＥＬＳＩＴＥ（登録商標）（Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  Ｉｎｃ．社、フロリダ州アラチュア）、ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）（Ｈａｌｏｚｙｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、カリフォルニア州サンディエゴ）、外科用シーラント、たとえばフィブリノゲンポリマー（Ｅｔｈｉｃｏｎ  Ｉｎｃ．社、ジョージア州コーネリア）
、ＴＩＳＳＥＬＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｉｎｃ社、イリノイ州ディアフィールド）、ＰＥＧベースのシーラントおよびＣＯＳＥＡＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｉｎｃ社、イリノイ州ディアフィールド）であり得る。
【０３８０】
別の実施形態では、脂質ナノ粒子は、対象に注入されるとゲルを形成し得る、当技術分野で既知の任意のポリマーに封入され得る。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、生分解性であり得るポリマーマトリックス中に封入され得る。
【０３８１】
１つの実施形態では、放出制御および／または標的化送達用の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡ製剤は、少なくとも１つの放出制御コーティングも含み得る。放出制御コーティングは、限定ではなく、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）、ポリビニルピロリドン／ビニルアセテートコポリマー、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ（登録商標）、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ（登録商標）およびエチルセルロース水性分散系（ＡＱＵＡＣＯＡＴ（登録商標）およびＳＵＲＥＬＥＡＳＥ（登録商標））などのセルロース誘導体を含む。
【０３８２】
１つの実施形態では、放出制御および／または標的化送達製剤は、少なくとも１つの、ポリカチオン側鎖を含み得る分解性ポリエステルを含み得る。分解性ポリエステルは、限定ではなく、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、およびそれらの組合せを含む。別の実施形態では、分解性ポリエステルは、ペグ化ポリマーを形成するＰＥＧコンジュゲーションを含み得る。
【０３８３】
１つの実施形態では、本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、治療用ナノ粒子中に封入され得る。治療用ナノ粒子は、本明細書に記載される当技術分野で既知の、限定ではなく国際公開第２０１０００５７４０号、同第２０１００３０７６３号、同第２０１０００５７２１号、同第２０１０００５７２３号、同第２０１２０５４９２３、米国出願公開第２０１１０２６２４９１号、同第２０１００１０４６４５号、同第２０１０００８７３３７号、同第２０１０００６８２８５号、同第２０１１０２７４７５９号、同第２０１０００６８２８６号および同第２０１２０２８８５４１号、および米国特許第８，２０６，７４７号、同第８，２９３，２７６号、同第８，３１８，２０８および同第８，３１８，２１１号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）などの方法で製剤され得る。別の実施形態では、治療用ポリマーナノ粒子は、米国出願公開第２０１２０１４０７９０号（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される方法により同定され得る。
【０３８４】
１つの実施形態では、治療用ナノ粒子は徐放用に製剤され得る。ここでは「徐放」は、特定の時間にわたりある放出速度にしたがう医薬組成物または化合物を指す。時間は、限定ではなく、時間、日、週、月および年を含み得る。非限定的な例として、徐放ナノ粒子は、限定ではなく、本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡなどのポリマーおよび治療薬を含み得る（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１００７５０７２号および米国出願公開第２０１００２１６８０４号および同第２０１１０２１７３７７号および同第２０１２０２０１８５９号を参照）。
【０３８５】
１つの実施形態では、治療用ナノ粒子は、標的に特異的であるように製剤され得る。非限定的な例として、治療用ナノ粒子は、コルチコステロイドを含み得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１１０８４５１８号を参照）。１つの実施形態では、本発明の治療用ナノ粒子は、癌に特異的であるように製剤され得る。非限
定的な例として、治療用ナノ粒子は、国際公開第２００８１２１９４９号、同第２０１０００５７２６号、同第２０１０００５７２５号、同第２０１１０８４５２１号および米国出願公開第２０１０００６９４２６号、同第２０１２０００４２９３号および同第２０１００１０４６５５号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載されるナノ粒子内に製剤され得る。
【０３８６】
１つの実施形態では、本発明のナノ粒子は、高分子マトリックスを含み得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、限定ではなくポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酸、フマル酸ポリプロピル（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｆｕｍｅｒａｔｅｓ）、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリウレア、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）またはそれらの組合せなどの２以上のポリマーを含み得る。
【０３８７】
１つの実施形態では、治療用ナノ粒子はジブロックコポリマーを含む。１つの実施形態では、ジブロックコポリマーは、ＰＥＧを、限定ではなく、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酸、フマル酸ポリプロピル（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｆｕｍｅｒａｔｅｓ）、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリウレア、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）またはそれらの組合せなどのポリマーと組み合せて含み得る。
【０３８８】
非限定的な例として、治療用ナノ粒子は、ＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマーを含む（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１２０００４２９３号および米国特許第８，２３６，３３０号を参照）。別の非限定的な例として、治療用ナノ粒子は、ＰＥＧとＰＬＡまたはＰＥＧとＰＬＧＡのジブロックコポリマーを含むステルスナノ粒子である（その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，２４６，９６８号を参照）。
【０３８９】
１つの実施形態では、治療用ナノ粒子は、マルチブロックコポリマー（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる、例えば米国特許第８，２６３，６６５号および同第８，２８７，９１０号を参照）を含み得る。
【０３９０】
１つの実施形態では、本明細書に記載されるブロックコポリマーは、非高分子ミセルとブロックコポリマーを含むポリイオン複合体中に含まれ得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれる、例えば米国出願公開第２０１２００７６８３６号を参照）。
【０３９１】
１つの実施形態では、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つのアクリルポリマーを含み得る。アクリルポリマーは、限定ではなく、アクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸とメタクリル酸のコポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノアクリレートおよびそれらの組合せを含む。
【０３９２】
１つの実施形態では、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つの本明細書に記載されるおよ
び／または当技術分野で既知の陽イオン性ポリマーを含み得る。
１つの実施形態では、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つの、限定ではなくポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（アミドアミン）デンドリマー、ポリ（β−アミノエステル）（例えばその全容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，２８７，８４９号を参照）およびそれらの組合せなどのアミン含有ポリマーを含み得る。
【０３９３】
１つの実施形態では、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つの、ポリカチオン側鎖を含み得る分解性ポリエステルを含み得る。分解性ポリエステルは、限定ではなく、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）およびそれらの組合せを含む。別の実施形態では、分解性ポリエステルは、ペグ化ポリマーを形成するＰＥＧコンジュゲーションを含み得る。
【０３９４】
別の実施形態では、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つの標的リガンドのコンジュゲーションを含み得る。標的リガンドは、限定ではないがモノクローナル抗体などの当技術分野で既知のいかなるリガンドでもよい。（Ｋｉｒｐｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００６  ６６：６７３２−６７４０；その全容が参照により本明細書に組み込まれる。）
１つの実施形態では、癌を標的とするのに使用され得る治療用ナノ粒子は、水溶液中で製剤され得る（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１０８４５１３号および米国出願公開第２０１１０２９４７１７号を参照）。
【０３９５】
１つの実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、合成ナノキャリアに封入され、結合されおよび／または会合し得る。合成ナノキャリアは、限定ではなく国際公開第２０１０００５７４０号、同第２０１００３０７６３号、同第２０１２１３５０１号、同第２０１２１４９２５２号、同第２０１２１４９２５５号、同第２０１２１４９２５９号、同第２０１２１４９２６５号、同第２０１２１４９２６８号、同第２０１２１４９２８２号、同第２０１２１４９３０１号、同第２０１２１４９３９３号、同第２０１２１４９４０５号、同第２０１２１４９４１１号および同第２０１２１４９４５４、および米国出願公開第２０１１０２６２４９１号、同第２０１００１０４６４５号、同第２０１０００８７３３７号および同第２０１２０２４４２２２号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載されるものを含む。合成ナノキャリアは、当技術分野で既知のおよび／または本明細書に記載される方法を用いて製剤され得る。非限定的な例として、合成ナノキャリアは、国際公開第２０１０００５７４０号、同第２０１００３０７６３号および同第２０１２１３５０１号、および米国出願公開第２０１１０２６２４９１号、同第２０１００１０４６４５号、同第２０１０００８７３３７号および同第２０１２０２４４２２２号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載される方法を用いて製剤され得る。別の実施形態では、合成ナノキャリア製剤は、国際公開第２０１１０７２２１８号および米国特許第８，２１１，４７３号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載される方法により凍結乾燥され得る。
【０３９６】
１つの実施形態では、合成ナノキャリアは、本明細書に記載される修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを放出するための反応基を有し得る（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２０９５２５５２号および米国出願公開第２０１２０１７１２２９号を参照）。
【０３９７】
１つの実施形態では、合成ナノキャリアは、免疫賦活剤を含んで合成ナノキャリアの送達から免疫反応を増強し得る。非限定的な例として、合成ナノキャリアは、免疫系のＴｈ１ベースの反応を増強し得るＴｈ１免疫賦活剤を含み得る（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０１２３５６９号および米国出願公開第２０１１０２２３２０１号を参照）。
【０３９８】
１つの実施形態では、合成ナノキャリアは、標的化放出用に製剤され得る。１つの実施形態では、合成ナノキャリアは、修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを特定のｐＨで、および／または所望の間隔をおいて放出するように製剤される。非限定的な例として、合成ナノ粒子は、修飾ｍＲＮＡ分子および／またはｍｍＲＮＡを２４時間後および／またはｐＨ４．５で放出するように製剤され得る（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０１３８１９３号および同第２０１０１３８１９４号および米国出願公開第２０１１００２０３８８号および同第２０１１００２７２１７号を参照）。
【０３９９】
１つの実施形態では、合成ナノキャリアは、本明細書に記載される修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡの徐放制御および／または徐放用に製剤され得る。非限定的な例として、徐放性の合成ナノキャリアは、当技術分野で既知の、本明細書に記載される方法により、および／または国際公開第２０１０１３８１９２号および米国出願公開第２０１００３０３８５０号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載されるように製剤され得る。
【０４００】
１つの実施形態では、合成ナノキャリアはワクチンとして使用されるように製剤され得る。１つの実施形態では、合成ナノキャリアは、少なくとも１つの抗原をコードする、少なくとも１つの修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを封入し得る。非限定的な例として、合成ナノキャリアは、少なくとも１つの抗原とワクチン剤形用の賦形剤を含み得る（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１１５０２６４号および米国出願公開第２０１１０２９３７２３号を参照）。別の非限定的な例として、ワクチン剤形は、同じまたは異なる抗原と賦形剤とともに少なくとも２つの合成ナノキャリアを含み得る（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１１５０２４９号および米国出願公開第２０１１０２９３７０１号を参照）。ワクチン剤形は、本明細書に記載される、当技術分野で既知の方法および／または国際公開第２０１１１５０２５８号および米国出願公開第２０１２００２７８０６号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載の方法により選択され得る。
【０４０１】
１つの実施形態では、合成ナノキャリアは、少なくとも１つのアジュバントをコードする、少なくとも１つの修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを含み得る。別の実施形態では、合成ナノキャリアは、少なくとも１つの修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡおよびアジュバントを含み得る。非限定的な例として、アジュバントを含む合成ナノキャリアは、国際公開第２０１１１５０２４０号および米国出願公開第２０１１０２９３７００号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載の方法により製剤され得る。
【０４０２】
１つの実施形態では、合成ナノキャリアは、ウイルス由来のペプチド、断片または領域をコードする少なくとも１つの修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを封入し得る。非限定的な例として、合成ナノキャリアは、限定ではなく国際公開第２０１２０２４６２１号、同第２０１２０２６２９号、同第２０１２０２４６３２号および米国出願公開第２０１２００６４１１０号、同第２０１２００５８１５３号および同第２０１２００５８１５４号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載のナノキャリアを含み得る。
【０４０３】
１つの実施形態では、ナノ粒子は、経口投与用に最適化され得る。ナノ粒子は、少なくとも１つの、限定ではなくキトサンまたはその誘導体などの陽イオン性バイオポリマーを含み得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、米国出願公開第２０１２０２８２３４３号（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法により製剤され得る。
【０４０４】
ポリマー、生分解性ナノ粒子およびコアシェルナノ粒子
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、天然および／または合成ポリマーを用いて製剤され得る。送達に使用され得るポリマーの非限定的な例は、限定ではなくＭＩＲＵＳ（登録商標）Ｂｉｏ社（ウィスコンシン州マディソン）およびＲｏｃｈｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ社（ウィスコンシン州マディソン）のＤＹＮＡＭＩＣ  ＰＯＬＹＣＯＮＪＵＧＡＴＥ（登録商標）（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐ．社、カリフォルニア州パサデナ）製剤、ＰＨＡＳＥＲＸ（商標）ポリマー製剤、たとえば限定ではなくＳＭＡＲＴＴ  ＰＯＬＹＭＥＲ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（商標）（ワシントン州シアトル）、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロクサマー、ＶＡＸＦＥＣＴＩＮ（登録商標）Ｖｉｃａｌ社（カリフォルニア州サンディエゴ）のアジュバント、キトサン、Ｃａｌａｎｄｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社（カリフォルニア州パサデナ）のシクロデキストリン、デンドリマーとポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）（ＰＬＧＡ）のポリマー、ＲＯＮＤＥＬ（商標）（ＲＮＡｉ／オリゴヌクレオチドナノ粒子送達）ポリマー（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社、カリフォルニア州パサデナ）および限定ではなく、ＰＨＡＳＥＲＸ（商標）（ワシントン州シアトル）などのｐＨ反応性ｃｏ−ブロックポリマーを含む。
【０４０５】
キトサン製剤の非限定的な例は、正電荷をもつキトサンのコアと、負電荷をもつ基質の外部分を含む（米国出願公開第２０１２０２５８１７６号；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。キトサンは、限定ではなくＮ−トリメチルキトサン、モノ−Ｎ−カルボキシメチルキトサン（ＭＣＣ）、Ｎ−パルミトイルキトサン（ＮＰＣＳ）、ＥＤＴＡ−キトサン、低分子量キトサン、キトサン誘導体、またはそれらの組合せを含む。
【０４０６】
１つの実施形態では、本発明で使用されるポリマーは、限定ではなく細菌などの不必要な物質のポリマー表面への結合を減ずるおよび／または阻害する処理を受けている。ポリマーは、既知の方法および／または当分野で記載される方法および／または国際公開第２０１２１５０４６７号（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法により処理され得る。
【０４０７】
ＰＬＧＡ製剤の非限定的な例は、限定ではなく、ＰＬＧＡを６６％Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）に溶解させて形成され、残りが水系溶媒とリュープロリドである、ＰＬＧＡ注射デポー（例えばＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））を含む。注入されると、ＰＬＧＡとリュープロリドペプチドは皮下スペースに沈降する。
【０４０８】
これらのポリマーアプローチの多くは、オリゴヌクレオチドを細胞質にインビボ送達するのに有効であることが示されている（ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ．  ２００８  １９：１２５−１３２に概説；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。この場合は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）での核酸のロバストなインビボ送達を得ている２つのポリマーアプローチは、ダイナミックポリコンジュゲートと、シクロデキストリンベースのナノ粒子である。これらの送達アプローチの第１は、ダイナミックポリコンジュゲートを用い、マウスのインビボでｓｉＲＮＡを有効送達して肝細胞中の内因性標的ｍＲＮＡの発現を停止させることが示されている（Ｒｏｚｅｍａ  ｅｔ
ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００７  １０４：１２９８２−１２８８７；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。この特定のアプローチは、マルチコンポーネント・ポリマーシステムであり、その主要な特徴は、核酸、この場合はｓｉＲＮＡが、ジスルフィド結合により共有結合する膜活性ポリマーを含み、ＰＥＧ（電荷マスキングのため）基とＮ−アセチルガラクトサミン基（肝細胞の標的化のため）の両方が、ｐＨ感受性結合により連結されている（Ｒｏｚｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００７  １０４：１
２９８２−１２８８７；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。肝細胞に結合してエンドソーム内に入ると、ポリマー複合体は低ｐＨ環境で分解してポリマーがその正電荷を露出し、エンドソーム脱出とポリマーからのｓｉＲＮＡの細胞質内放出がもたらされる。Ｎ−アセチルガラクトサミン基をマンノース基で置換することで、アシアログリコプロテイン受容体を発現する肝細胞から洞様内皮とクッパー細胞に標的を変えられることが示されている。別のポリマーアプローチは、トランスフェリンを標的とするシクロデキストリンを含有するポリカチオンナノ粒子の使用を含む。これらのナノ粒子は、トランスフェリン受容体を発現するユーイング肉腫腫瘍細胞においてＥＷＳ−ＦＬＩ１遺伝子産物の発現を標的化して停止させることが示されており（Ｈｕ−Ｌｉｅｓｋｏｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００５  ６５：  ８９８４−８９８２；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）、これらのナノ粒子内で製剤されたｓｉＲＮＡは非ヒト霊長類において良好に忍容された（Ｈｅｉｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００７  １０４：５７１５−２１；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。これらの送達戦略はいずれも標的化送達とエンドソーム脱出機構の両方を用いた論理的アプローチを組み込んでいる。
【０４０９】
ポリマー製剤は、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの徐放または放出遅延（例えば筋肉内または皮下注射後）を可能にする。修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの改変された放出プロファイルは、たとえば、コードされたタンパク質の長期間にわたる翻訳をもたらし得る。ポリマー製剤は、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの安定性を高めるためにも使用され得る。生分解性ポリマーは、以前はｍｍＲＮＡ以外の核酸を分解から保護するのに使用されており、インビボでのペイロードの徐放をもたらすことが示されている（Ｒｏｚｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００７  １０４：１２９８２−１２８８７；  Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  ２０１０  ７：１４３３−１４４６；  Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．  ２０１０  Ｏｃｔ
１；  Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃｃ  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ．  ２０１２  Ｊａｎ  １３；  Ｍａｎｇａｎｉｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．  ２０１２  ３３：２３０１−２３０９；  Ｂｅｎｏｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．  ２０１１  １２：２７０８−２７１４；  Ｓｉｎｇｈａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｔｈｅｒ．  ２０１１  ２：１３３−１４７；  ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２００８  １９：１２５−１３２；  Ｓｃｈａｆｆｅｒｔ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２００８  １６：１１３１−１１３８；  Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  ２０１１  ８：１４５５−１４６８；  Ｄａｖｉｓ，  Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ．  ２００９  ６：６５９−６６８；  Ｄａｖｉｓ，  Ｎａｔｕｒｅ  ２０１０  ４６４：１０６７−１０７０；その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）。
【０４１０】
１つの実施形態では、医薬組成物は、徐放製剤であり得る。さらなる実施形態では、徐放製剤は、皮下送達用であり得る。徐放製剤は、限定ではなくＰＬＧＡ、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、マイクロスフェア、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、ポロクサマー、ＧＥＬＳＩＴＥ（登録商標）（Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  Ｉｎｃ．社、フロリダ州アラチュア）、ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）（Ｈａｌｏｚｙｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、カリフォルニア州サンディエゴ）、外科用シーラント、たとえばフィブリノゲンポリマー（Ｅｔｈｉｃｏｎ  Ｉｎｃ．社、ジョージア州コーネリア）、ＴＩＳＳＥＬＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｉｎｃ社、イリノイ州ディアフィールド）、ＰＥＧベースのシーラントおよびＣＯＳＥＡＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｉｎｃ社、イリノイ州ディアフィールド）を含み得る。
【０４１１】
非限定的な例として、修飾ｍＲＮＡは、ＰＬＧＡマイクロスフェアを可変放出速度（例えば日および週）で、封入工程中修飾ｍＲＮＡの完全性を維持しながら修飾ｍＲＮＡをＰＬＧＡマイクロスフェア内に封入して調製することで、ＰＬＧＡマイクロスフェア内に製剤され得る。ＥＶＡｃは、非生分解性の生体適合性ポリマーであり、前臨床の徐放性埋め込み用途（例えば、持続放出製品の緑内障用ピロカルピン眼内インサートのオクサート（Ｏｃｕｓｅｒｔ）または徐放性プロゲステロン子宮内デバイスのプロゲスタサート（ｐｒｏｇｅｓｔａｓｅｒｔ）；経皮的送達システムのテストデルム（Ｔｅｓｔｏｄｅｒｍ）、デュラゲシク（Ｄｕｒａｇｅｓｉｃ）およびセレギリン；カテーテル）に広範に使用されている。ポロクサマーＦ−４０７ＮＦは親水性の非イオン性界面活性剤であり、５℃未満の温度で低粘度を有するポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンのトリブロックコポリマーであり、１５℃より高い温度で固体ゲルを形成する。ＰＥＧベースの外科用シーラントは、１分で調製され得、３分でシールし３０日以内に再吸収される送達デバイス中に混合された２つの合成ＰＥＧ成分を含む。ＧＥＬＳＩＴＥ（登録商標）と天然のポリマーは、投与部位でのインサイツのゲル化が可能である。それらは、タンパク質およびペプチド薬候補とイオン性相互作用により相互作用して安定化効果をもたらすことが示されている。
【０４１２】
ポリマー製剤は、限定ではないが葉酸、トランスフェリンおよびＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）に例示されるように、異なるリガンドの発現により選択的に標的化されることもできる（Ｂｅｎｏｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．  ２０１１  １２：２７０８−２７１４；  Ｒｏｚｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００７  １０４：１２９８２−１２８８７；  Ｄａｖｉｓ，  Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ．  ２００９  ６：６５９−６６８；
Ｄａｖｉｓ，  Ｎａｔｕｒｅ  ２０１０  ４６４：１０６７−１０７０；その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）。
【０４１３】
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、高分子化合物と一緒にまたはその中で製剤され得る。ポリマーは、限定ではなくポリエチレン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（ｌ−リジン）（ＰＬＬ）、ＰＬＬにグラフトされたＰＥＧ、陽イオン性リポポリマー、生分解性陽イオン性リポポリマー、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、架橋分枝ポリ（アルキレンイミン）、ポリアミン誘導体、修飾ポロクサマー、生分解性ポリマー、弾性生分解性ポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルブロックランダムコポリマー、マルチブロックコポリマー、線状生分解性コポリマー、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸）（ＰＡＧＡ）、生分解性架橋陽イオン性マルチブロックコポリマー、ポリカーボネート、ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酸、フマル酸ポリプロピル（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｆｕｍｅｒａｔｅｓ）、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリウレア、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、アクリルポリマー、アミン含有ポリマー、デキストランポリマー、デキストランポリマー誘導体またはそれらの組合せなどの少なくとも１つのポリマーを含み得る。
【０４１４】
非限定的な例として、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、米国特許第６，１７７，２７４号（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ＰＬＬでグラフトされたＰＥＧの高分子化合物を用いて製剤され得る。製剤は、細胞のイン
ビトロ形質移入または修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡのインビボ送達に使用され得る。別の例では、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、陽イオン性ポリマーを含む懸濁液または媒体中、乾燥医薬組成物中、または米国出願公開第２００９００４２８２９号および同第２００９００４２８２５号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に記載されるような乾燥させることが可能な水溶液中に懸濁され得る。
【０４１５】
別の非限定的な例として、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、ＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマー（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１２０００４２９３号および米国特許第８，２３６，３３０号を参照）またはＰＬＧＡ−ＰＥＧ−ＰＬＧＡブロックコポリマー（その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，００４，５７３号を参照）とともに製剤され得る。非限定的な例として、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、ＰＥＧとＰＬＡまたはＰＥＧとＰＬＧＡのジブロックコポリマーとともに製剤され得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，２４６，９６８号を参照）。
【０４１６】
ポリアミン誘導体が、核酸分子および／またはｍｍＲＮＡの送達、または疾患の治療および／または予防、または埋め込みまたは注射デバイスに含まれるように使用され得る（その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国出願公開第２０１００２６０８１７号）。非限定的な例として、医薬組成物は、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡおよび米国出願公開第２０１００２６０８１７号（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるポリアミン誘導体を含み得る。非限定的な例として、本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、限定ではなく炭水化物ジアジドモノマーとオリゴアミンを含むジルキン結合物（ｄｉｌｋｙｎｅｕｎｉｔｅ）を組み合わせて調製される１，３−双極子付加重合体を含むポリマーなどのポリアミドポリマーを用いて送達され得る（米国特許第８，２３６，２８０号；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０４１７】
本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、少なくとも１つのアクリルポリマーとともに製剤され得る。アクリルポリマーは、限定ではなくアクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸とメタクリル酸のコポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノアクリレートおよびそれらの組合せを含む。
【０４１８】
一実施形態では、本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、国際公開第２０１１１１５８６２号、国際公開第２０１２０８２５７４号、国際公開第２０１２０６８１８７、および米国特許出願公開第２０１２０２８３４２７号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている少なくとも１つのポリマーおよび／またはその誘導体と共に製剤化してよい。別の一実施形態では、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、国際公開第２０１１１１５８６２号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている式Ｚのポリマーと共に製剤化してよい。さらに別の一実施形態では、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、国際公開第２０１２０８２５７４号または国際公開第２０１２０６８１８７号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている式Ｚ、Ｚ’、またはＺ”のポリマーと共に製剤化してよい。本発明の修飾核酸および／または修飾ｍＲＮＡと共に製剤化されるポリマーは、国際公開第２０１２０８２５７４号または国際公開第２０１２０６８１８７号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている方法で合成してよい。
【０４１９】
本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡの製剤には、少なくとも１つのアミン含有ポリマーが含まれてよく、アミン含有ポリマーの例として、ポリリジン、ポリエチレ
ンイミン、ポリ（アミドアミン）デンドリマー、またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４２０】
例えば、本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、ポリ（アルキレンイミン）、生分解性カチオン性リポポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ポリマー、生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルポリマー、生分解性ポリエステルランダムコポリマー、直鎖状生分解性コポリマー、ＰＡＧＡ、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、またはこれらの組み合わせを含む医薬組成物の形で製剤化してよい。直鎖状生分解性コポリマーは、当技術分野で公知の方法および／または米国特許第６，６９６，０３８号、米国特許出願公開第２００３００７３６１９号および第２００４０１４２４７４号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で製造してよい。ポリ（アルキレンイミン）は、当技術分野で公知の方法および／または米国特許出願公開第２０１００００４３１５号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で製造してよい。生分解性ポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルポリマー、または生分解性ポリエステルランダムコポリマーは、当技術分野で公知の方法および／または米国特許第６，５１７，８６９号および第６，２６７，９８７号（参照により、これらの文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で製造してよい。直鎖状生分解性コポリマーは、当技術分野で公知の方法および／または米国特許第６，６５２，８８６号に記載の方法で製造してよい。ＰＡＧＡポリマーは、当技術分野で公知の方法および／または米国特許第６，２１７，９１２号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で製造してよい。ＰＡＧＡポリマーは、ポリマーと共重合してコポリマーまたはブロックコポリマーを形成してよく、その例としてポリ−Ｌ−リシン、ポリアルギン、ポリオルニチン、ヒストン、アビジン、プロタミン、ポリ乳酸、およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）が挙げられるが、これらに限定されない。生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、当技術分野で公知の方法および／または米国特許第８，０５７，８２１号または米国特許出願公開第２０１２００９１４５号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で製造してよい。例えば、マルチブロックコポリマーは、分枝状ポリエチレンイミンと比べて特徴的なパターンを有する直鎖状ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）ブロックを用いて合成してよい。さらに、組成物または医薬組成物は、当技術分野で公知の方法、本明細書に記載の方法、または米国特許出願公開第２０１００００４３１５号もしくは米国特許第６，２６７，９８７号および第６，２１７，９１２号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で製造してよい。
【０４２１】
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、少なくとも１つの分解性ポリエステルと共に製剤化してよく、この分解性ポリエステルはポリカチオン性側鎖を含有してよい。分解性ポリエステルの例として、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、およびこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。別の一実施形態では、分解性ポリエステルがＰＥＧコンジュゲートを含んでペグ化ポリマーを形成してよい。
【０４２２】
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡは、少なくとも１つの架橋性ポリエステルと共に製剤化してよい。架橋性ポリエステルには、当技術分野で公知の架橋性ポリエステル、および米国特許出願公開第２０１２０２６９７６１号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の架橋性ポリエステルが含まれる。
【０４２３】
一実施形態では、本明細書に記載のポリマーは、脂質終端ＰＥＧとコンジュゲートしてよい。非限定的な一例として、ＰＬＧＡは、脂質終端ＰＥＧとコンジュゲートしてＰＬＧ
Ａ−ＤＳＰＥ−ＰＥＧを形成してよい。別の非限定的な一例として、本発明で使用するＰＥＧコンジュゲートは、国際公開第２００８１０３２７６号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。ポリマーは、リガンドコンジュゲートを用いてコンジュゲートしてよく、リガンドコンジュゲートの例として、米国特許第８，２７３，３６３号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載のコンジュゲートが挙げられるが、これに限定されない。
【０４２４】
一実施形態では、本明細書に記載の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、別の化合物と共にコンジュゲートしてよい。コンジュゲートの非限定的な例は、米国特許第７，９６４，５７８号および第７，８３３，９９２号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。別の一実施形態では、本発明の修飾ＲＮＡは、米国特許第７，９６４，５７８号および第７，８３３，９９２号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の式１−１２２のコンジュゲートと共にコンジュゲートしてよい。本明細書に記載の修飾ＲＮＡは、金（ただし金に限定されない）等の金属と共にコンジュゲートしてよい（例えばＧｉｌｊｏｈａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎ．  Ａｍｅｒ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  ２００９  １３１（６）：  ２０７２−２０７３を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。別の一実施形態では、本明細書に記載の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、金ナノ粒子中にコンジュゲートおよび／または封入してよい（国際公開第２０１２１６２６９号および米国特許出願公開第２０１２０３０２９４０号；参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４２５】
米国特許出願公開第２０１００００４３１３号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の通り、遺伝子送達組成物に、ヌクレオチド配列およびポロキサマーが含まれてよい。例えば、米国特許出願公開第２０１００００４３１３号に記載のポロキサマーを伴う遺伝子送達組成物に、本発明の修飾核酸およびｍｍＲＮＡを使用してよい。
【０４２６】
一実施形態では、本発明のポリマー製剤はカチオン性担体を含んでよく、コレステロール基およびポリエチレングリコール基と共有結合し得るカチオン性リポポリマーと接触させることにより、本発明のポリマー製剤を安定化させてよい。ポリマー製剤とカチオン性リポポリマーの接触は、米国特許出願公開第２００９００４２８２９号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で行うことができる。カチオン性担体の例として、ポリエチレンイミン、ポリ（トリメチレンイミン）、ポリ（テトラメチレンイミン）、ポリプロピレンイミン、アミノグリコシド−ポリアミン、ジデオキシ−ジアミノ−ｂ−シクロデキストリン、スペルミン、スペルミジン、ポリ（２−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート、ポリ（リジン）、ポリ（ヒスチジン）、ポリ（アルギニン）、カチオン化ゼラチン、デンドリマー、キトサン、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１−［２−（オレオイルオキシ）エチル］−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、３Ｂ−［Ｎ-（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモ
イル］コレステロールヒドロクロリド（ＤＣ−コレステロールＨＣｌ）ジヘプタデシルアミドグリシルスペルミジン（ＤＯＧＳ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４２７】
本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡは、１つ以上のポリマーで出来たポリプレックス中に製剤化されてよい（米国特許出願公開第２０１２０２３７５６５号および第２０１２０２７０９２７号；参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。一実施形態では、ポリプレックスは２つ以上のカチオン性ポリマーを含む。カチオン性ポリマーは、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）（例えば直鎖状ＰＥＩ）を含んでよい。
【０４２８】
ポリマー、脂質、および／または他の生分解性薬剤（例えばリン酸カルシウムが挙げられるが、これに限定されない）の組み合わせを用いて、本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡをナノ粒子として製剤化してもよい。構成成分をコアシェル、ハイブリッド、および／または多層の構造に組み合わせてよく、これによりナノ粒子の微調整を可能にし、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡの送達を亢進することができる（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｎａｔ  Ｍａｔｅｒ．  ２００６  ５：７９１−７９６；  Ｆｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．  ２００８  ２９：１５２６−１５３２；  ＤｅＫｏｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．  ２０１１  ６３：７４８−７６１；  Ｅｎｄｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．  ２０１１  ３２：７７２１−７７３１；  Ｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ．  ２０１１  Ｊｕｎ  ６；８（３）：７７４−８７（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる））。非限定的な例として、ナノ粒子は複数のポリマーを含んでよく、このポリマーの例として親水性−疎水性ポリマー（例えばＰＥＧ−ＰＬＧＡ）、疎水性ポリマー（例えばＰＥＧ）、および／または親水性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されない（国際公開第２０１２０２２５１２９号；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４２９】
脂質および／またはポリマーと組み合わされた生分解性リン酸カルシウムナノ粒子は、インビボで修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを送達することが示されている。一実施形態では、脂質をコーティングしたリン酸カルシウムナノ粒子（この粒子はアニスアミド等の標的リガンドを含有してもよい）を用いて、本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを送達してよい。例えば、マウス転移性肺モデルにおいて効果的にｓｉＲＮＡを送達する目的で、脂質をコーティングしたリン酸カルシウムナノ粒子が使われた（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｊ  Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．  ２０１０  １４２：  ４１６−４２１；  Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．  ２０１２  １５８：１０８−１１４；  Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１２  ２０：６０９−６１５。参照により、これらの文献の全体が本明細書に組み込まれる）。この送達システムは、ｓｉＲＮＡの送達を改善する目的で、標的化されるナノ粒子と、エンドソーム回避を亢進する成分であるリン酸カルシウムの両方を組み合わせたものである。
【０４３０】
一実施形態では、ＰＥＧ−ポリアニオンブロックコポリマーを伴うリン酸カルシウムを用いて、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを送達してよい（Ｋａｚｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．  ２００４  ９７：３４５−３５６；  Ｋａｚｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｏｎｔｒ  Ｒｅｌ．  ２００６  １１１：３６８−３７０；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４３１】
一実施形態では、ＰＥＧ電荷変換ポリマー（Ｐｉｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．  ２０１１  ３２：３１０６−３１１４）を用いてナノ粒子を形成し、本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡに送達してよい。ＰＥＧ電荷変換ポリマーは、酸性ｐＨで切断されてポリカチオンとなることにより、ＰＥＧ−ポリアニオンブロックコポリマーを改良でき、これによりエンドソーム回避を亢進できる。
【０４３２】
コアシェル型ナノ粒子の使用は、カチオン性架橋ナノゲルコアおよび種々のシェルを高速合成する方法に一層重点を置いている（Ｓｉｅｇｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ
Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２０１１  １０８：１２９９６−１３００１）。ナノ粒子のコア成分とシェル成分の両方の化学組成を変更することにより、ポリマーナノ粒子の複合体形成、送達、および内部移行を精密に制御できる。例えば、コアシェル型ナノ粒子は、コレステロールをナノ粒子に共有結合させた後、ｓｉＲＮＡを効率的にマウス肝細胞に送達することができる。
【０４３３】
一実施形態では、ＰＬＧＡ中間層とＰＥＧ含有中性脂質外層を含む中空脂質コアを用いて、本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを送達してよい。非限定的な一例として、ルシフェラーゼ発現腫瘍を有するマウスにおいて、脂質−ポリマー−脂質ハイブリッドナノ粒子は、従来のリポプレックスと比べて有意にルシフェラーゼ発現を抑制すると判定された（Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ，  Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ．  ２０１１  ５０：７０２７−７０３１；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４３４】
一実施形態では、脂質ナノ粒子は、本明細書に開示される修飾核酸分子で形成されたコアと、ポリマーシェルとを含んでよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載のポリマーおよび当技術分野で公知のポリマーのいずれで形成されてもよい。さらなる一実施形態では、ポリマーシェルを用いて、コア内の修飾核酸を保護することができる。
【０４３５】
本発明の修飾核酸分子で使用するコアシェル型ナノ粒子は、米国特許第８，３１３，７７７号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されており、同第８，３１３，７７７号に記載の方法で形成することができる。
【０４３６】
一実施形態では、コアシェル型ナノ粒子は、本明細書に開示される修飾核酸分子で形成されたコアと、ポリマーシェルとを含んでよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載のポリマーおよび当技術分野で公知のポリマーのいずれで形成されてもよい。さらなる一実施形態では、ポリマーシェルを用いて、コア内の修飾核酸分子を保護することができる。
【０４３７】
ペプチドおよびタンパク質
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡによる細胞の形質移入を増加させる目的で、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡをペプチドおよび／またはタンパク質と共に製剤化することができる。一実施形態では、例えば細胞透過性ペプチド（ただしこれに限定されない）等のペプチドと、細胞内送達を可能にするタンパク質およびペプチドを使用して、医薬製剤を送達してよい。本発明の医薬製剤で使用してよい細胞透過性ペプチドの非限定的な一例として、ポリカチオンと結合して細胞内空間への送達を促進する細胞透過性ペプチド（例えば、ＨＩＶ由来ＴＡＴペプチド、ペネトラチン、トランスポータン、またはｈＣＴ由来の細胞透過性ペプチド）が挙げられる（例えばＣａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ３（３）：３１０−８  （２００１）；  Ｌａｎｇｅｌ，  Ｃｅｌｌ−Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  （ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ  ＦＬ，  ２００２）；
Ｅｌ−Ａｎｄａｌｏｕｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓ．
１１（２８）：３５９７−６１１  （２００３）；およびＤｅｓｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ．  Ｍｏｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ６２（１６）：１８３９−４９  （２００５）を参照。これらの文献はすべて、参照により本明細書に組み込まれる）。細胞内空間への組成物の送達を亢進する細胞透過性剤（例えばリポソーム）を含むように、組成物を製剤化することもできる。細胞内送達を可能にする目的で、本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを、例えばＡｉｌｅｒｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（マサチューセッツ州ケンブリッジ）およびＰｅｒｍｅｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（マサチューセッツ州ケンブリッジ）が提供するペプチドおよび／またはタンパク質と結合させて複合体を形
成してよい（Ｃｒｏｎｉｃａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．  ２０１０  ５：７４７−７５２；  ＭｃＮａｕｇｈｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ２００９  １０６：６１１１−６１１６；
Ｓａｗｙｅｒ，  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．  ２００９  ７３：３−６；  Ｖｅｒｄｉｎｅ  ａｎｄ  Ｈｉｌｉｎｓｋｉ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．
２０１２；５０３：３−３３；これらの文献はすべて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０４３８】
一実施形態では、細胞透過性ポリペプチドは第１ドメインと第２ドメインを含んでよい。第１ドメインは、超荷電ポリペプチド（ｓｕｐｅｒｃｈａｒｇｅｄ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）を含んでよい。第２ドメインは、タンパク質結合パートナーを含んでよい。本明細書で使用する「タンパク質結合パートナー」という語は、抗体およびその機能性断片、足場タンパク質、またはペプチドを含むが、これらに限定されない。細胞透過性ポリペプチドは、タンパク質結合パートナーのための細胞内結合パートナーをさらに含んでよい。細胞透過性ポリペプチドは、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの導入先の細胞から分泌されることも可能である。
【０４３９】
ペプチドまたはタンパク質を含む製剤を使用することにより、修飾核酸分子もしくはｍｍＲＮＡによる細胞形質移入を増加させ、修飾核酸分子もしくはｍｍＲＮＡの生体内分布を（例えば特定の組織もしくは細胞型を標的化することにより）変化させ、かつ／またはコード化タンパク質の翻訳を増加させることができる（例えば国際公開第２０１２１１０６３６号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４４０】
細胞
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡをエキソビボで細胞にトランスフェクトし、続いてこの細胞を対象に移植することができる。非限定的な例として、医薬組成物には、修飾ＲＮＡを肝細胞および骨髄細胞に送達するための赤血球、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡをウイルス様粒子（ＶＬＰ）にして送達するためのビロソーム、修飾ＲＮＡを送達するために電気穿孔処理された細胞、例えばＭＡＸＣＹＴＥ（登録商標）（メリーランド州ゲーサーズバーグ）やＥＲＹＴＥＣＨ（登録商標）（フランス、リヨン）（これらに限定されない）から提供される細胞が含まれてよい。ｍｍＲＮＡ以外のペイロードを送達するための赤血球、ウイルス粒子、および電気穿孔処理された細胞の使用例が、文献に記載されている（Ｇｏｄｆｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１２  １２：１２７−１３３；  Ｆａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１２  １２：３８５−３８９；  Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２０１１  １０８：１０９８０−１０９８５；  Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．  ２０１０
２７：４００−４２０；  Ｈｕｃｋｒｉｅｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｒｅｓ．  ２００７；１７：３９−４７；  Ｃｕｓｉ，  Ｈｕｍ  Ｖａｃｃｉｎ．  ２００６  ２：１−７；  ｄｅ  Ｊｏｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２００６  １３：４００−４１１；これらの全文献の全体が参照により本明細書に組み込まれる）。国際公開第２０１１０８５２３１号および米国特許出願公開第２０１１０１７１２４８号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で合成された合成ＶＬＰの状態にして、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを送達してよい。
【０４４１】
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡの細胞系製剤を使用することにより、（例えば細胞担体における）細胞形質移入を保証し、修飾核酸分子もしくはｍｍＲＮＡの生体内分布を（例えば細胞担体を特定の組織もしくは細胞型に標的化することにより）変化させ、かつ／またはコード化タンパク質の翻訳を増加させることができる。
【０４４２】
細胞への導入
ウイルス介在性および非ウイルス介在性の手法をはじめ、種々の方法が当技術分野において公知であり、核酸を細胞に導入するのに適している。代表的な非ウイルス介在性手法の例として、電気穿孔法、リン酸カルシウム介在性移入、ヌクレオフェクション、ソノポレーション、熱ショック、マグネトフェクション、リポソーム介在性移入、マイクロインジェクション、微小噴出物介在性移入（ナノ粒子）、カチオン性ポリマー介在性移入（ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等）、または細胞融合が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４４３】
ソノポレーションすなわち細胞ソノポレーションの手法とは、細胞原形質膜の透過性を改変するために音響（例えば超音波周波数）を使用することである。ソノポレーション方法は当技術分野で公知であり、例えば米国特許出願公開第２０１００１９６９８３号では細菌との関連で教示され、例えば米国特許出願公開第２０１００００９４２４号では他の細胞型との関連で教示されている（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４４４】
電気穿孔手法も当技術分野で周知である。一実施形態では、実施例８に記載のように、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを電気穿孔法で送達してよい。
ヒアルロニダーゼ
本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを筋肉内または皮下に局所注射する場合、ヒアルロナンの加水分解を触媒するヒアルロニダーゼを含めてよい。ヒアルロナンの加水分解を触媒することにより、間質バリアの一成分であるヒドロゲナーゼがヒアルロナンの粘性を下げるので、組織の透過性が上昇する（Ｆｒｏｓｔ，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  （２００７）  ４：４２７−４４０；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。トランスフェクトされた細胞が産生するコード化タンパク質を急速に分散させ全身に分布させることは、有用である。あるいは、筋肉内または皮下に投与された本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに曝される細胞数を増加させる目的で、ヒアルロニダーゼを使用してもよい。
【０４４５】
ナノ粒子模倣体
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを、ナノ粒子模倣体内に封入し、かつ／またはナノ粒子模倣体に吸収させてよい。ナノ粒子模倣体は、送達機能する生体または粒子、例えば病原体、ウイルス、細菌、真菌、寄生体、プリオン、および細胞（ただしこれらに限定されない）を模倣することができる。非限定的な例として、本発明の修飾ｍＲＮＡを、ウイルスの送達機能を模倣できる非ウイルス性（ｎｏｎ−ｖｉｒｏｎ）粒子内に封入してよい（国際公開第２０１２００６３７６号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４４６】
ナノチューブ
本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを、少なくとも１つのナノチューブに付着等により結合させてよい。ナノチューブの例として、ロゼットナノチューブ、リンカーを伴うツインベースを有するロゼットナノチューブ、カーボンナノチューブ、および／または単一壁カーボンナノチューブが挙げられるが、これらに限定されない。修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡをナノチューブに結合するには、立体性、イオン性、共有結合性等の力（これらに限定されない）、および／または他の力を用いてよい。
【０４４７】
一実施形態では、ナノチューブは、１つ以上の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを細胞内に放出することができる。体内のナノチューブ間の相互作用を管理するように、かつ／または本明細書に開示される修飾核酸分子もしくはｍｍＲＮＡに付着もしくは結合させるよ
うに、少なくとも１つのナノチューブのサイズおよび／または表面構造を変更してよい。一実施形態では、ナノチューブの寸法および／または特性を調整する目的で、上記少なくとも１つのナノチューブの構成要素、または当該構成要素に結合する官能基を変更してよい。非限定的な例として、正常血管の壁にある穴は通過できないが、腫瘍組織の血管にある比較的大きな穴は通過できる程度に小さいナノチューブとなるように、ナノチューブの長さを変更してよい。
【０４４８】
一実施形態では、ポリマー（例えばポリエチレングリコールが挙げられるがこれに限定されない）を含む送達亢進化合物を、少なくとも１つのナノチューブにコーティングしてもよい。別の一実施形態では、少なくとも１つのナノチューブおよび／または修飾ｍＲＮＡを、薬剤的に許容可能な賦形剤および／または送達ビヒクルと混合してよい。
【０４４９】
一実施形態では、修飾ｍＲＮＡを、付着および／または他の方法により少なくとも１つのロゼットナノチューブに結合させる。ロゼットナノチューブは、当技術分野で公知の方法および／または国際公開第２０１２０９４３０４号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の工程により形成してよい。少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡを、国際公開第２０１２０９４３０４号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の工程により、付着および／または他の方法で少なくとも１つのロゼットナノチューブに結合させてよい。この工程では、少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡを付着または他の方法によりロゼットナノチューブに結合させることができる条件下で、ロゼットナノチューブまたはロゼットナノチューブを形成するモジュールを、少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡと水性媒体中で混合する。
【０４５０】
一実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを、付着および／または他の方法により少なくとも１つのカーボンナノチューブに結合させてよい。非限定的な一例として、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを連結剤に結合し、この連結剤をカーボンナノチューブに結合してよい（例えば米国特許第８，２４６，９９５号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。カーボンナノチューブは単一壁ナノチューブであってよい（例えば米国特許第８，２４６，９９５号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４５１】
コンジュゲート
本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡには、コンジュゲートが含まれ、例えば、担体もしくはターゲティンググループと共有結合している修飾核酸分子もしくはｍｍＲＮＡ、あるいは、一緒になって融合タンパク質を産生する２つのコード化領域を含む修飾核酸分子もしくはｍｍＲＮＡ（例えば、標的化グループと治療用タンパク質もしくはペプチドを有する）が含まれる。
【０４５２】
本発明のコンジュゲートには、天然の物質、例えばタンパク質（例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、グロブリン）；炭水化物（例えばデキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸）；または脂質が含まれる。リガンドは、組換え分子または合成ポリマー等の合成分子であってもよく、例えば合成ポリアミノ酸、オリゴヌクレオチド（例えばアプタマー）であってもよい。ポリアミノ酸の例として、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリＬ−グルタミン酸、スチレン−無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド（ｇｌｙｃｏｌｉｅｄ）コポリマー、ジビニルエーテル−無水マレイン酸コポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２−エチルアクリル酸）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドポリマー、またはポリホスファジン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｉｎ
ｅ）が挙げられる。ポリアミンの例として、ポリエチレンイミン、ポリリジン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、シュードペプチド−ポリアミン、ペプチド模倣ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第４級塩、αヘリカルペプチドが挙げられる。
【０４５３】
特にＲＮＡに対するポリヌクレオチドコンジュゲートの調製を教示している代表的な米国特許として、米国特許第４，８２８，９７９号、第４，９４８，８８２号、第５，２１８，１０５号、第５，５２５，４６５号、第５，５４１，３１３号、第５，５４５，７３０号、第５，５５２，５３８号、第５，５７８，７１７号、第５，５８０，７３１号、第５，５９１，５８４号、第５，１０９，１２４号、第５，１１８，８０２号、第５，１３８，０４５号、第５，４１４，０７７号、第５，４８６，６０３号、第５，５１２，４３９号、第５，５７８，７１８号、第５，６０８，０４６号、第４，５８７，０４４号、第４，６０５，７３５号、第４，６６７，０２５号、第４，７６２，７７９号、第４，７８９，７３７号、第４，８２４，９４１号、第４，８３５，２６３号、第４，８７６，３３５号、第４，９０４，５８２号、第４，９５８，０１３号、第５，０８２，８３０号、第５，１１２，９６３号、第５，２１４，１３６号、第５，０８２，８３０号、第５，１１２，９６３号、第５，２１４，１３６号、第５，２４５，０２２号、第５，２５４，４６９号、第５，２５８，５０６号、第５，２６２，５３６号、第５，２７２，２５０号、第５，２９２，８７３号、第５，３１７，０９８号、第５，３７１，２４１号、第５，３９１，７２３号、第５，４１６，２０３号、第５，４５１，４６３号、第５，５１０，４７５号、第５，５１２，６６７号、第５，５１４，７８５号、第５，５６５，５５２号、第５，５６７，８１０号、第５，５７４，１４２号、第５，５８５，４８１号、第５，５８７，３７１号、第５，５９５，７２６号、第５，５９７，６９６号、第５，５９９，９２３号、第５，５９９，９２８号、第５，６８８，９４１号、第６，２９４，６６４号、第６，３２０，０１７号、第６，５７６，７５２号、第６，７８３，９３１号、第６，９００，２９７号、第７，０３７，６４６号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４５４】
一実施形態では、本発明のコンジュゲートは、本発明の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡの担体として機能してよい。このコンジュゲートはカチオン性ポリマーを含んでよく、カチオン性ポリマーの例として、ポリアミン、ポリリジン、ポリアルキレンイミン、ポリエチレンイミン（ポリ（エチレングリコール）とグラフト可能）が挙げられる。非限定的な一例として、コンジュゲートはポリマーコンジュゲートと類似していてよく、このポリマーコンジュゲートの合成方法は米国特許第６，５８６，５２４号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０４５５】
コンジュゲートは、ターゲティンググループを含んでいてもよい。例えば、細胞もしくは組織のターゲティング薬剤（例えばレクチン、糖タンパク質、脂質）、またはタンパク質（例えば、腎細胞等の特定の細胞型と結合する抗体）を含んでいてもよい。ターゲティンググループは、サイロトロピン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、サーファクタントタンパク質Ａ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、フランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸、ビタミンＢ１２、ビオチン、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤペプチド模倣体、またはアプタマーであり得る。
【０４５６】
ターゲティンググループは、タンパク質（例えば糖タンパク質）、ペプチド（例えば共リガンド（ｃｏ−ｌｉｇａｎｄ）に対する特異的親和性を有する分子）、抗体（例えば癌
細胞、内皮細胞、骨細胞等の特定の細胞型に結合する抗体）であり得る。ターゲティンググループには、ホルモンおよびホルモン受容体も含まれ得る。ターゲティンググループには、非ペプチド性の種、例えば脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン多価マンノース、多価フコース、またはアプタマーも含まれ得る。リガンドは、例えばリポ多糖、またはｐ３８ＭＡＰキナーゼの活性化因子であり得る。
【０４５７】
ターゲティンググループは、特定の受容体をターゲティングできる任意のリガンドであってよい。例えば、葉酸、ＧａｌＮＡｃ、ガラクトース、マンノース、マンノース−６Ｐ、アプタマー、インテグリン受容体リガンド、ケモカイン受容体リガンド、トランスフェリン、ビオチン、セロトニン受容体リガンド、ＰＳＭＡ、エンドセリン、ＧＣＰＩＩ、ソマトスタチン、ＬＤＬ、およびＨＤＬリガンドが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ターゲティンググループはアプタマーである。アプタマーは非修飾であってよく、あるいは本明細書に開示される修飾の任意の組み合わせを有していてもよい。
【０４５８】
一実施形態では、本発明の医薬組成物には、化学修飾、例えば、ロックド核酸に類似した修飾（ただしこれに限定されない）が含まれていてよい。
サンタリスから提供されているロックド核酸（ＬＮＡ）等のＬＮＡの調製を教示している代表的な米国特許の例として、米国特許第６，２６８，４９０号、第６，６７０，４６１号、第６，７９４，４９９号、第６，９９８，４８４号、第７，０５３，２０７号、第７，０８４，１２５号、および第７，３９９，８４５号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４５９】
ＰＮＡ化合物の調製を教示している代表的な米国特許の例として、米国特許第５，５３９，０８２号、第５，７１４，３３１号、および第５，７１９，２６２号（参照により、これらの各文献は本明細書に組み込まれる）が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、例えばＮｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９９１，  ２５４，  １４９７−１５００に記載されている。
【０４６０】
本発明のいくつかの実施形態は、ホスホロチオエート主鎖を有する修飾核酸またはｍｍＲＮＡ、および他の修飾主鎖を有するオリゴヌクレオシド、特に、上記で参照している米国特許第５，４８９，６７７号の−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ主鎖と呼ばれる］、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、および−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２−［ここで、天然ホスホジエステル主鎖は−Ｏ-Ｐ（Ｏ
）２−Ｏ−ＣＨ２−で表される］、ならびに上記で参照している米国特許第５，６０２，２４０号のアミド主鎖を有するオリゴヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、上記で参照している米国特許第５，０３４，５０６号のモルホリノ主鎖構造を有する。
【０４６１】
２’位置の修飾も送達に役立ち得る。好ましくは、２’位置の修飾は、ポリペプチドコード配列内（すなわち翻訳可能領域内）に位置しない。２’位置の修飾は、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、および／またはテール領域に位置してよい。２’位置の修飾には、２’位置のＨ（すなわち２’−デオキシ）；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−、もしくはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ−、もしくはＮ−アルケニル；Ｏ−、Ｓ−、もしくはＮ−アルキニル；Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキルのうちの１つ以上が含まれてよい（ここで、アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル、またはＣ２〜Ｃ１０のアルケニルおよびアルキニルに置換されても置換されなくてもよい）。代表的な適切な修飾の例として、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）．ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎ
ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２が挙げられる（式中、ｎとｍは１〜約１０である）。他の実施形態では、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、２’位置に以下のうちの１つを含む：Ｃ１〜Ｃ１０の低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリルもしくはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、薬物動態特性を改良するための基、薬力学特性を改良するための基、類似の特性を有する他の置換基。いくつかの実施形態では、修飾には２’−メトキシエトキシ（２’−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、別名２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）または２’−ＭＯＥ（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｌｖ．  Ｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ，  １９９５，  ７８：４８６−５０４）すなわちアルコキシ−アルコキシ基が含まれる。別の代表的な修飾として、下記実施例に記載の２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわちＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基（下記実施例に記載の通り別名２’−ＤＭＡＯＥ、および２’−ジメチルアミノエトキシエトキシ（当技術分野で２’−Ｏ−ジメチルアミノエトキシエチル、２’−ＤＭＡＥＯＥとも呼ばれる）、すなわち、同様に下記実施例に記載の通り２’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ２）２が挙げられる。他の修飾として、２’−メトキシ（２’−ＯＣＨ３）、２’−アミノプロポキシ（２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、および２’−フルオロ（２’−Ｆ）が挙げられる。他の位置、特に、３’末端ヌクレオチド上または２’−５’連結ｄｓＲＮＡ内の糖の３’位置、および５’末端ヌクレオチドの５’位置に、類似の修飾を行ってもよい。本発明のポリヌクレオチドは、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分等の糖模倣体を有してもよい。そのような修飾糖構造の調製を教示している代表的な米国特許の例として、米国特許第４，９８１，９５７号、第５，１１８，８００号、第５，３１９，０８０号、第５，３５９，０４４号、第５，３９３，８７８号、第５，４４６，１３７号、第５，４６６，７８６号、第５，５１４，７８５号、第５，５１９，１３４号、第５，５６７，８１１号、第５，５７６，４２７号、第５，５９１，７２２号、第５，５９７，９０９号、第５，６１０，３００号、第５，６２７，０５３号、第５，６３９，８７３号、第５，６４６，２６５号、第５，６５８，８７３号、第５，６７０，６３３号、および第５，７００，９２０号が挙げられるが、これらに限定されない（参照により、これらの各文献が本明細書に組み込まれる）。
【０４６２】
さらに他の実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、細胞透過性ペプチドに共有結合的にコンジュゲートされる。細胞透過性ペプチドはシグナル配列を含んでいてもよい。安定性を高め、細胞形質移入を増加させ、かつ／または生体内分布を（例えば特定の組織もしくは細胞型に標的化することにより）変化させるように、本発明のコンジュゲートを設計することができる。
【０４６３】
自己組織化ナノ粒子
核酸の自己組織化ナノ粒子
自己組織化ナノ粒子のサイズは明確に定義されており、核酸の鎖は容易に再プログラムできるので、自己組織化ナノ粒子のサイズを精密に制御できる。例えば、癌標的化ナノ送達担体の最適粒子サイズは２０〜１００ｎｍであり、その理由は、２０ｎｍを超える直径は腎クリアランスを回避し、透過性および保持の亢進効果により特定の腫瘍への送達を亢進するからである。自己組織化核酸ナノ粒子を使用することにより、サイズおよび形状が均一な単一集団は、癌標的化リガンドの空間定位および密度が精密に制御され、送達が亢進される。非限定的な一例として、短いＤＮＡ断片および治療用ｓｉＲＮＡの再プログラム可能な自己組織化を用いて、オリゴヌクレオチドナノ粒子が調製された。これらのナノ粒子は分子的に同一であり、粒子サイズおよび標的リガンドの位置と密度が制御可能である。ＤＮＡ断片およびｓｉＲＮＡは自己組織化して１ステップの反応物となり、ＤＮＡ／
ｓｉＲＮＡ四面体ナノ粒子を生成してインビボの標的化送達に使用される（Ｌｅｅ  ｅｔ
ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０１２  ７：３８９−３９３；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４６４】
一実施形態では、本明細書に開示される修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを、自己組織化ナノ粒子として製剤化してよい。非限定的な一例では、核酸を使用してナノ粒子を製造でき、このナノ粒子を、本発明の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡの送達システムで使用してよい（例えば国際公開第２０１２１２５９８７号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４６５】
一実施形態では、核酸自己組織化ナノ粒子は、本明細書に開示される修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡで形成されたコアと、ポリマーシェルとを含んでよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載のポリマーおよび当技術分野で公知のポリマーのいずれで形成されてもよい。さらなる一実施形態では、ポリマーシェルを用いて、コア内の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを保護することができる。
【０４６６】
ポリマー系自己組織化ナノ粒子
ポリマーを用いて、ナノ粒子へと自己組織するシートを形成してよい。このようなナノ粒子を使用して、本発明の修飾核酸およびｍｍＲＮＡを送達してよい。一実施形態では、このような自己組織化ナノ粒子は、ＲＮＡヘアピンの長いポリマーで形成されたマイクロスポンジであってよい。このポリマーは、結晶性の「プリーツ」シートを形成してからマイクロスポンジへと自己組織化する。このようなマイクロスポンジは、密に充填されたスポンジ様のマイクロ粒子であり、効率的な担体として機能でき、細胞にカーゴ（積荷）を送達する能力を有し得る。マイクロスポンジの直径は１ｕｍ〜３００ｎｍであってよい。マイクロスポンジは、当技術分野で公知の他の薬剤と複合体を形成して、より大きなマイクロスポンジを形成してよい。非限定的な一例として、マイクロスポンジは、ポリカチオン性ポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｅ）（ＰＥＩ）等の薬剤と複合体を形成して外層を形成し、細胞取り込みを促進することができる。この複合体は、高温（１５０℃）時に安定状態を維持できる直径２５０ｎｍの粒子を形成できる（Ｇｒａｂｏｗ  ａｎｄ  Ｊａｅｇａｒ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２０１２，  １１：２６９−２６９；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。加えて、このようなマイクロスポンジは、リボヌクレアーゼよる分解に対して並外れた程度の保護を示すことができ得る。
【０４６７】
別の一実施形態では、マイクロスポンジ等（ただしこれに限定されない）のポリマー系自己組織化ナノ粒子は、完全にプログラム可能なナノ粒子であってよい。ナノ粒子の幾何学形状、サイズ、および化学量論を精密に制御することにより、修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡ等（ただしこれらに限定されない）のカーゴ（積荷）を送達するための最適なナノ粒子を作成できる。
【０４６８】
一実施形態では、ポリマー系ナノ粒子は、本明細書に開示される修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡで形成されたコアと、ポリマーシェルとを含んでよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載のポリマーおよび当技術分野で公知のポリマーのいずれで形成されてもよい。さらなる一実施形態では、ポリマーシェルを用いて、コア内の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡを保護することができる。
【０４６９】
無機ナノ粒子
本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを、無機ナノ粒子中に製剤化してよい（米国特許第８，２５７，７４５号；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。無機ナノ粒子には、水膨張性の粘土物質が含まれていてよい（ただしこれに限定されない
）。非限定的な一例として、無機ナノ粒子には、単純ケイ酸塩で作られた合成スメクタイト粘土が含まれていてよい（例えば、米国特許第５，５８５，１０８号および第８，２５７，７４５号を参照。参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４７０】
一実施形態では、無機ナノ粒子は、本明細書に開示される修飾核酸で形成されたコアと、ポリマーシェルとを含んでよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載のポリマーおよび当技術分野で公知のポリマーのいずれで形成されてもよい。さらなる一実施形態では、ポリマーシェルを用いて、コア内の修飾核酸を保護することができる。
【０４７１】
半導体性および金属製のナノ粒子
本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを、半導体性または金属製の材料を含む水分散性ナノ粒子中に製剤化してよく（米国特許出願公開第２０１２０２２８５６５号；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）、あるいは磁性ナノ粒子中に製剤化してよい（米国特許出願公開第２０１２０２６５００１号および第２０１２０２８３５０３号；参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。水分散性ナノ粒子は、疎水性ナノ粒子、親水性ナノ粒子のどちらであってもよい。
【０４７２】
一実施形態では、半導体性および／または金属性ナノ粒子は、本明細書に開示される修飾核酸で形成されたコアと、ポリマーシェルとを含んでよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載のポリマーおよび当技術分野で公知のポリマーのいずれで形成されてもよい。さらなる一実施形態では、ポリマーシェルを用いて、コア内の修飾核酸を保護することができる。
【０４７３】
ゲルおよびヒドロゲル
一実施形態では、本明細書に開示される修飾ｍＲＮＡを封入して、当技術分野で公知の、対象に注入されたときにゲルを形成できるヒドロゲルを形成してよい。ヒドロゲルとは、親水性ポリマー鎖が網状組織となったものであり、水を分散媒とするコロイド状ゲルの形で見られることもある。ヒドロゲルは、吸水性の高い（９９％超の水を含有できる）天然ポリマーまたは合成ポリマーである。ヒドロゲルは含水量が高いので、天然組織によく似た一定程度の柔軟性も有する。本明細書に記載のヒドロゲルを使用して、生体適合性、生分解性、および／または多孔性の脂質ナノ粒子を封入してよい。
【０４７４】
非限定的な一例として、ヒドロゲルは、アプタマーで官能化されたヒドロゲルであってよい。アプタマーで官能化されたヒドロゲルをプログラムすることにより、核酸ハイブリダイゼーションを用いて１つ以上の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを放出することができる。（Ｂａｔｔｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃｉｅｔｙ．  ２０１２  １３４：１２４１０−１２４１３；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４７５】
非限定的な別の一例として、ヒドロゲルは、逆オパールの形状にされてよい。オパールヒドロゲルは比較的高い膨張比を示し、膨張速度も一桁速い。オパールヒドロゲルの生産方法およびオパールヒドロゲルの説明は、国際公開第２０１２１４８６８４号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０４７６】
非限定的なさらに別の一例では、ヒドロゲルは、抗菌性ヒドロゲルであってよい。抗菌性ヒドロゲルは、薬剤的に許容可能な塩または有機物質を含んでよく、例えば、医薬品グレードおよび／または医療グレードの銀塩およびアロエベラゲルもしくは抽出物を含んでよい（ただしこれらに限定されない）（国際公開第２０１２１５１４３８号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４７７】
一実施形態では、修飾ｍＲＮＡを脂質ナノ粒子中に封入してから、この脂質ナノ粒子を封入してヒドロゲルにしてよい。
一実施形態では、本明細書に開示される修飾ｍＲＮＡを封入して、当技術分野で公知の任意のゲルにしてよい。非限定的な一例として、このゲルは、フルオロウラシル注入可能ゲルであってよく、あるいは、当技術分野で公知の化合物および／または薬剤を含有するフルオロウラシル注入可能ゲルであってよい。別の一例では、修飾ｍＲＮＡを、エピネフリン含有フルオロウラシルゲル内に封入してよい（例えば、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｔｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  １９９９  ４４（４）：２６７−２７４を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４７８】
一実施形態では、本明細書に開示される修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを封入してフィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル、またはフィブリン接着剤にしてよい。別の一実施形態では、修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを、脂質ナノ粒子または速やかに排出される脂質ナノ粒子中に製剤化してから、フィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル、またはフィブリン接着剤へと封入してよい。さらに別の一実施形態では、修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡをリポプレックスとして製剤化してから、フィブリンゲル、ヒドロゲル、またはフィブリン接着剤へと封入してよい。フィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル、およびフィブリン接着剤は、フィブリノゲン溶液と、カルシウムに富むトロンビン溶液という２つの成分を含む（例えば、Ｓｐｉｃｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｋｏｓ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１０．  １４８：  ４９−５５；  Ｋｉｄｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１２．  １５７：８０−８５を参照。参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。フィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル、および／またはフィブリン接着剤の成分の濃度を変更することにより、ゲル、ヒドロゲル、および／または接着剤の特性、網状組織メッシュサイズ、および／または分解特性を変化させることができる。例えば、フィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル、および／またはフィブリン接着剤の徐放特性を変えることができる（ただしこれに限定されない）（例えば、ｐｉｃｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｋｏｓ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１０．  １４８：  ４９−５５；  Ｋｉｄｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１２．  １５７：８０−８５；  Ｃａｔｅｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ２００８．  １４：１１９−１２８を参照。参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。本発明に開示される修飾ｍＲＮＡの送達に使用する場合、この特徴は有利であり得る（例えば、Ｋｉｄｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１２．  １５７：８０−８５；  Ｃａｔｅｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ２００８．  １４：１１９−１２８を参照。参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４７９】
陽イオンと陰イオン
本明細書に開示される修飾核酸分子の製剤は、陽イオンまたは陰イオンを含んでよい。一実施形態では、製剤は、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｕ２＋、Ｍｇ＋、およびこれらの組み合わせ等（ただしこれらに限定されない）の金属陽イオンを含む。非限定的な一例として、製剤は、ポリマーを含み、金属陽イオンと複合体を形成した修飾ｍＲＮＡを含む（例えば、米国特許第６，２６５，３８９号および第６，５５５，５２５号を参照。参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４８０】
成形されたナノ粒子およびマイクロ粒子
本明細書に開示される修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを、ナノ粒子および／またはマイクロ粒子中に製剤化してよい。このようなナノ粒子および／またはマイクロ粒子
は、任意のサイズ、形状、および化学構造に成形してよい。一例として、ＬＩＱＵＩＤＡ
ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ（登録商標）（ノースカロライナ州モリスビル）が提供するＰＲＩＮＴ（登録商標）技術を用いてナノ粒子および／またはマイクロ粒子を作製してよい（例えば、国際公開第２００７０２４３２３号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４８１】
一実施形態では、成形されたナノ粒子は、本明細書に開示される修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡで形成されたコアと、ポリマーシェルとを含んでよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載のポリマーおよび当技術分野で公知のポリマーのいずれで形成されてもよい。さらなる一実施形態では、ポリマーシェルを用いて、コア内の修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを保護することができる。
【０４８２】
ナノジャケットおよびナノリポソーム
本明細書に開示される修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡを、Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  Ｎａｎｏ（ペンシルベニア州ステートカレッジ）が提供するナノジャケットおよびナノリポソーム中に製剤化してよい。ナノジャケットは、体内で天然に存在する化合物（カルシウム、リン酸を含む）で作られ、少量のケイ酸塩を含むこともある。ナノジャケットのサイズは５〜５０ｎｍの範囲に及び、修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡ等（ただしこれらに限定されない）の親水性および疎水性化合物の送達に使用できる。
【０４８３】
ナノリポソームは、体内の天然の脂質等（ただしこれに限定されない）の脂質で作られる。ナノリポソームのサイズは６０〜８０ｎｍの範囲に及び、修飾核酸分子および／またはｍｍＲＮＡ等（ただしこれらに限定されない）の親水性および疎水性化合物の送達に使用できる。一態様では、本明細書に開示される修飾核酸を、セラミドナノリポソーム等（ただしこれに限定されない）のナノリポソーム中に製剤化する。
【０４８４】
賦形剤
医薬製剤は、薬剤的に許容可能な賦形剤を追加的に含んでよい。本明細書で使用する「賦形剤」には、所望される特定の剤形に適したすべての溶剤、分散媒、希釈剤、その他の液体ビヒクル、分散補助剤もしくは懸濁補助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤等が含まれるが、これらに限定されない。医薬組成物を製剤化するための種々の賦形剤、および医薬組成物の種々の調製手法が、当技術分野において公知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ａ．  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  ＭＤ，  ２００６を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。望ましくない生物学的効果が生じる等により、医薬組成物の他の成分と有害な方法で相互作用するなどして、従来の賦形剤媒体が物質またはその誘導体と不適合である場合を除き、従来の賦形剤媒体の使用は、本開示の範囲内で企図され得る。
【０４８５】
いくつかの実施形態では、薬剤的に許容可能な賦形剤の純度は少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％であってよい。いくつかの実施形態では、賦形剤は、ヒトでの使用および動物での使用に承認されたものであってよい。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬品局に承認されたものであってよい。いくつかの実施形態では、賦形剤は、医薬品グレードであってよい。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、ヨーロッパ薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、および／または国際薬局方の基準を満足したものであってよい。
【０４８６】
医薬製剤の製造において使われる薬剤的に許容可能な賦形剤の例として、不活性希釈剤
、分散剤および／または造粒剤、表面活性剤、および／または乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝剤、滑沢剤、および／または油が挙げられるが、これらに限定されない。このような賦形剤を、医薬製剤中に随意に含めてよい。加えて、医薬組成物にカカオバター、坐剤ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、風味剤、および／または香料等の賦形剤を含めてもよい。
【０４８７】
代表的な賦形剤として、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウムラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉末砂糖等、および／またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４８８】
代表的な造粒剤および／または分散剤の例として、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、粘土、アルギン酸、グアーガム、柑橘パルプ、カンテン、ベントナイト、セルロースおよび木材製品、海綿、陽イオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル−ピロリドン）（クロスポビドン）、カルボキシメチルスターチナトリウム（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（スターチ１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、四級アンモニウム化合物等、および／またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４８９】
代表的な表面活性剤および／または乳化剤の例として、天然乳化剤（例えばアカシア、カンテン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガント、コンドラクス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ロウ、レシチン）、コロイド粘土（例えばベントナイト［ケイ酸アルミニウム］、ＶＥＥＧＵＭ（登録商標）［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子アルコール（例えばステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、モノステアリン酸トリアセチン、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリル、モノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えばカルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、カルボキシビニルポリマー）、カラゲナン、セルロース誘導体（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアレート［ＳＰＡＮ（登録商標）６０］、ソルビタントリステアレート［ＳＰＡＮ（登録商標）６５］、グリセリルモノオレエート、ソルビタンモノオレエート［ＳＰＡＮ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えばポリオキシエチレンモノステアレート［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシ化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、ＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えばポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、
ＰＬＵＯＲＩＮＣ（登録商標）Ｆ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドクサートナトリウム等、および／またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９０】
代表的な結合剤の例として、デンプン（例えばコーンスターチ、デンプンのり）；ゼラチン；糖類（例えばスクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然ガムおよび合成ガム（例えばアカシア、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモス抽出物、パンワール（ｐａｎｗａｒ）ガム、ガッチ（ｇｈａｔｔｉ）ガム、イサポール皮（ｉｓａｐｏｌ  ｈｕｓｋ）の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、カラマツアラビノガラクタン（ａｒａｂｏｇａｌａｃｔａｎ））；アルギン酸塩；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリル酸；ロウ類；水；アルコール等；およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９１】
代表的な保存剤の例として、抗酸化剤、キレート化剤、抗菌性保存剤、抗真菌性保存剤、アルコール保存剤、酸性保存剤、および／または他の保存剤が挙げられるが、これらに限定されない。代表的な抗酸化剤の例として、αトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、および／または亜硫酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。代表的なキレート化剤の例として、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、および／またはエデト酸三ナトリウムが挙げられる。代表的な抗菌性保存剤の例として、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、イミド尿素ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、および／またはチメロサールが挙げられるが、これらに限定されない。代表的な抗真菌性保存剤の例として、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム  、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、および／またはソルビン酸が挙げられるが、これらに限定されない。代表的なアルコール保存剤の例として、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエート、および／またはフェニルエチルアルコールが挙げられるが、これらに限定されない。代表的な酸性保存剤の例として、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、βカロチン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、および／またはフィチン酸が挙げられるが、これらに限定されない。その他の保存剤の例として、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、および／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９２】
代表的な緩衝剤の例として、クエン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、リン酸緩衝溶液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロピオン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、二塩基性リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、水酸化リン酸カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、二塩基酸リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱物質を含まない水、等張食塩水、リンゲル液、エチルアルコール等、および／またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９３】
代表的な滑沢剤の例として、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｂｅｈａｎａｔｅ）、水素化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム等、およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９４】
代表的な油の例として、アーモンド油、杏仁油、アボカド油、ババス油、ベルガモット油、ブラックカラント種油、ルリヂサ油、ケード油、カモミール油、キャノーラ油、キャラウェー油、カルナバ油、ヒマシ油、シナモン油、ココアバター、ココナツ油、タラ肝油、コーヒーの油、トウモロコシ油、綿実油、エミュー油、ユーカリ油、月見草油、魚油、アマニ油、ゲラニオール油、ゴード（ｇｏｕｒｄ）油、グレープシード油、ヘーゼルナッツ油、ヒソップ油、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ油、ククイナッツ油、ラバンディン油、ラベンダー油、レモン油、リツェアクベバ油、マカデミアナッツ油、マロウ（ｍａｌｌｏｗ）油、マンゴー種子油、メドウフォームシード油、ミンク油、ナツメグ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラッフィー油、パーム油、パーム核油、桃仁油、ピーナッツ油、ケシの実油、カボチャ種子油、菜種油、米ぬか油、ローズマリー油、ベニバナ油、ビャクダン油、サザンカ（ｓａｓｑｕａｎａ）油、セイボリー油、シーバックソーン油、ゴマ油、シアバター、シリコーン油、大豆油、ヒマワリ油、ティーツリー油、アザミ油、ツバキ油、ベチバー油、クルミ油、および小麦胚種油が挙げられるが、これらに限定されない。代表的な油の例として、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱物油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、および／またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９５】
製剤者の判断に従って、ココアバター、坐剤用ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、風味剤、および／または香料等の賦形剤が組成物中に存在してよい。
送達
本開示は、治療、製薬、診断、または画像化の目的で、薬剤送達の科学研究において想定される進歩を考慮に入れた任意の経路を用いて修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを送達することを包含している。送達は、「裸」または製剤化した状態で実施してよい。
【０４９６】
「裸」の状態での送達
本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、裸の状態で細胞に送達してよい。本明細書で使用する「裸の状態」という語句は、形質移入を促進する薬剤がない状態で、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを送達することを指す。例えば、細胞に送達される修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、修飾をまったく含まなくてもよい。裸の状態の修飾核酸分子またはｍ
ｍＲＮＡは、当技術分野で公知の投与経路または本明細書に記載の投与経路を用いて細胞に送達してよい。
【０４９７】
製剤化された状態での送達
本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、本明細書に記載の方法を用いて製剤化してよい。製剤は、修飾核酸分子または修飾および／もしくは非修飾のｍｍＲＮＡを含有してよい。製剤には、細胞透過剤、薬剤的に許容可能な担体、送達剤、生分解性または生体適合性のポリマー、溶媒、および徐放性送達デポ剤（ただしこれらに限定されない）をさらに含んでよい。製剤化された状態の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、当技術分野で公知の投与経路または本明細書に記載の投与経路を用いて細胞に送達してよい。
【０４９８】
また、当技術分野におけるいくつかの方法のいずれかを用いて、器官または組織に直接送達するように組成物を製剤化してもよい。これらの方法の例として、直接浸漬もしくは直接浴、カテーテル、ゲル、粉末、軟膏、クリーム、ローション、および／または液滴による送達、組成物を被覆または含浸させた布または生分解性材料等の基質の使用等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９９】
投与
本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、治療上有効な結果をもたらす任意の経路で送達してよい。具体的な経路として、腸内、経胃腸、硬膜外、経口、経皮、硬膜外（硬膜上）、脳内（大脳に送達）、脳室内（脳室に送達）、皮膚上（皮膚に塗布）、皮内（皮膚自体に送達）、皮下（皮膚の下）、経鼻投与（鼻を通じて送達）、静脈内（静脈に送達）、動脈内（動脈に送達）、筋肉内（筋肉に送達）、心臓内（心臓に送達）、骨髄内注入（骨髄に送達）、髄腔内（脊柱管に送達）、腹腔内（腹膜に注入または注射）、膀胱腔内注入、硝子体内（眼を通じて送達）、陰茎海綿体注射（陰茎の底部に送達）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（表皮を通じて拡散させ全身に分配）、経粘膜（粘膜を通じて拡散）、ガス注入（吸飲）、舌下、唇下、浣腸、点眼（結膜に送達）、点耳が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、組成物が血液脳関門、血管関門、その他の上皮性関門を通過できる方法で組成物を投与してよい。本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡの非限定的な投与経路例を以下に示す。
【０５００】
非経口投与および注射剤投与
非経口投与用の液体剤形として、薬剤的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、液剤、懸濁液、シロップ剤、および／またはエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定されない。液体剤形は、活性成分に加えて、当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤を含んでもよい。この不活性希釈剤の例として、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタン脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物が挙げられる。経口組成物の場合、不活性希釈剤の他に、湿潤剤、乳化および懸濁剤、甘味剤、風味剤、および／または香料等のアジュバントを含んでいてもよい。非経口投与用の特定の実施形態では、組成物を、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、アルコール、油、改質油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、および／またはこれらの組み合わせ等の可溶化剤と混合する。
【０５０１】
例えば水性または油性の滅菌注射懸濁液等の注射用調製物を、公知の技術に従って、適切な分散剤、湿潤剤、および／または懸濁剤を用いて製剤化してよい。滅菌注射用調製物は、毒性がなく非経口用として許容可能な希釈剤および／または溶媒中の、滅菌した注射
用液剤、懸濁液、および／またはエマルションであってよい（例えば、１，３−ブタンジオール溶液）。許容可能なビヒクルおよび溶媒の中でも、特に、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張性塩化ナトリウム溶液を使用してよい。従来、溶媒または懸濁媒体として、滅菌不揮発性油が使われている。この目的で、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性不揮発油を使用してよい。オレイン酸等の脂肪酸を注射剤の調製に使用してよい。
【０５０２】
例えば、細菌保持フィルターに通してろ過することにより、および／または使用前に滅菌水もしくは他の滅菌注射媒体に溶解もしくは分散させることのできる滅菌性固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことにより、注射製剤を滅菌することができる。
【０５０３】
活性成分の効果を長期化させる目的で、皮下注射または筋肉注射された活性成分の吸収を遅らせることが望まれることが多い。このことは、難水溶性の結晶性材料または非晶質材料の懸濁液を用いることによって達成できる。この場合、薬剤の吸収速度は薬剤の溶解速度に依存し、薬剤の溶解速度は、結晶サイズおよび結晶形態に依存し得る。あるいは、油ビヒクル中に薬剤を溶解または懸濁させることにより、非経口投与剤形の吸収を遅らせることもできる。ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中で薬剤のマイクロ封入マトリクスを形成することにより、注射用デポ剤形が製造される。薬剤とポリマーの比率、および使用する特定ポリマーの性質に応じて、薬剤の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例として、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。注射用デポ製剤は、生体組織と適合するリポソームまたはマイクロエマルション中に薬剤を封入することにより調製される。
【０５０４】
直腸内および膣内投与
直腸内投与または膣内投与用の組成物は、典型的には坐剤である。この坐剤は、周囲温度では固体であるが体温時は液体となり、よって腸腔または膣腔で融解して活性成分を放出する適切な非刺激性賦形剤（例えばココアバター、ポリエチレングリコール、坐剤用ワックス）と、組成物とを混合することにより調製できる。
【０５０５】
経口投与
経口投与用の液体剤形として、薬剤的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、液剤、懸濁液、シロップ剤、および／またはエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定されない。液体剤形は、活性成分に加えて、当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤を含んでもよい。この不活性希釈剤の例として、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタン脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物が挙げられる。経口組成物の場合、不活性希釈剤の他に、湿潤剤、乳化および懸濁剤、甘味剤、風味剤、および／または香料等のアジュバントを含んでいてもよい。非経口投与用の特定の実施形態では、組成物を、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、アルコール、油、改質油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、および／またはこれらの組み合わせ等の可溶化剤と混合する。
【０５０６】
経口投与用の固体剤形として、カプセル、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒が挙げられる。このような固体剤形では、活性成分と、不活性かつ薬剤的に許容可能な少なくとも１つの賦形剤とを混合する。このような賦形剤の例として、クエン酸ナトリウムもしくは二リン酸カルシウムおよび／または充填材もしくは増量剤（例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ケイ酸）、結合剤（例えばカルボキシメチルセル
ロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、アカシア）、保湿剤（例えばグリセロール）、崩壊剤（例えばカンテン、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプン、タピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩、炭酸ナトリウム）、溶解遅延剤（例えばパラフィン）、吸収促進剤（例えば四級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えばセチルアルコール、グリセロールモノステアレート）、吸収剤（例えばカオリン、ベントナイト粘土）、滑沢剤（例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、およびこれらの混合物が挙げられる。カプセル、錠剤、丸剤の場合、剤形に緩衝剤を含めてよい。
【０５０７】
局所または経皮投与
本明細書に記載の通り、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを含有する組成物は、局所投与用に製剤化してよい。皮膚は容易にアクセスできるので、理想的な送達標的部位であり得る。遺伝子発現が皮膚に制限され、非特異的毒性を回避できる可能性があるだけでなく、皮膚内の特定の層および細胞型にも遺伝子発現が制限される。
【０５０８】
送達する組成物の皮膚発現の部位は、核酸の送達経路によって異なる。修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを皮膚に送達する際に一般に考慮される経路は、次の３つである。（ｉ）局所適用（例えば局所／局部治療用）；（ｉｉ）皮内注射（例えば局所／局部治療用）；（ｉｉｉ）全身送達（例えば、皮膚領域と真皮外領域の両方に影響する皮膚疾患の治療用）。修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、当技術分野で公知のいくつか異なるアプローチで皮膚に送達することができる。大部分の局所送達アプローチはＤＮＡ送達に有効であることが示されており、このような局所送達アプローチの例として、非カチオン性リポソーム−ＤＮＡ複合体、カチオン性リポソーム−ＤＮＡ複合体、粒子介在性（遺伝子銃）、穿刺介在性の遺伝子形質移入、およびウイルス送達アプローチの局所適用が挙げられるが、これらに限定されない。核酸の送達後、数種類の皮膚細胞型（基底角化細胞、皮脂腺細胞、皮膚線維芽細胞、真皮マクロファージが含まれるが、これらに限定されない）で遺伝子産物が検出されている。
【０５０９】
一実施形態では、本発明は、本発明の方法を簡便かつ／または効果的に実行するための種々の包帯（例えば創傷包帯）または絆創膏（例えばガーゼ付き絆創膏）を提供する。典型的には、包帯または絆創膏は、使用者が対象に対して複数の処置を実施できるように、十分な量の医薬組成物および／または本明細書に記載の修飾核酸分子もしくはｍｍＲＮＡを含んでよい。
【０５１０】
一実施形態では、本発明は、複数回の注射で送達される修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡ組成物を提供する。
一実施形態では、局所および／または経皮投与の前に、組織の少なくとも１つの領域（例えば皮膚）に、透過性を高めることのできる装置および／または溶液を供してよい。一実施形態では、皮膚の透過性を高めるため、組織を剥離装置（ａｂｒａｓｉｏｎ  ｄｅｖｉｃｅ）に供してよい（米国特許出願公開第２００８０２７５４６８号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。別の一実施形態では、組織を超音波強化装置に供してよい。超音波強化装置の例として、米国特許出願公開第２００４０２３６２６８号、ならびに米国特許第６，４９１，６５７号および第６，２３４，９９０号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の装置が挙げられるが、これらに限定されない。組織の透過性を増強する方法は、米国特許出願公開第２００４０１７１９８０号および第２００４０２３６２６８号、ならびに米国特許第６，１９０，３１５号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０５１１】
一実施形態では、本明細書に記載の修飾ｍＲＮＡの製剤を送達する前に、装置を用いて
組織の透過性を強化してよい。皮膚の透過性を測定するには、当技術分野で公知の方法および／または米国特許第６，１９０，３１５号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法を使用してよい。非限定的な一例として、米国特許第６，１９０，３１５号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の薬剤送達方法を用いて修飾ｍＲＮＡ製剤を送達してよい。
【０５１２】
別の非限定的一例では、透過性を強化できる装置に組織を供する前、最中、および／また後に、局所麻酔薬の共融混合物（ＥＭＬＡ）クリームで組織を処置してよい。Ｋａｔｚら（Ａｎｅｓｔｈ  Ａｎａｌｇ  （２００４）；  ９８：３７１−７６；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）が示したところによれば、ＥＭＬＡクリームと低エネルギーを併用すると、低エネルギー超音波を用いた前処置から５分後という早い時期に表在性皮膚痛覚脱失の発生が見られた。
【０５１３】
一実施形態では、組織に透過性強化処置を実施する前、最中、および／または後に、組織に亢進剤（ｅｎｈａｎｃｅｒ）を適用してよい。亢進剤の例として、輸送亢進剤、物理的亢進剤、空洞化亢進剤が挙げられるが、これらに限定されない。米国特許第６，１９０，３１５号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に、亢進剤の非限定的な例が記載されている。
【０５１４】
一実施形態では、本明細書に記載の修飾ｍＲＮＡの製剤であって、免疫応答を起こす物質をさらに含有し得る製剤を送達する前に、装置を用いて組織の透過性を強化してよい。別の非限定的一例では、免疫応答を起こす物質を含有する製剤を、米国特許出願公開第２００４０１７１９８０号および第２００４０２３６２６８号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で送達してよい。
【０５１５】
組成物の局所および／または経皮投与用の剤形には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤、および／またはパッチが含まれ得る。一般に、無菌条件下において、活性成分と、薬剤的に許容可能な賦形剤、および／または保存剤（必要な場合）、および／または緩衝剤（必要な場合）とを混合する。
【０５１６】
加えて、本発明は経皮パッチの使用を企図している。経皮パッチは、身体への化合物の送達を制御できるという追加の利点を有する場合が多い。このような剤形は、例えば化合物を適切な媒体に溶解および／または分配することにより調製できる。これに代替または追加して、速度制御膜を設け、かつ／または化合物をポリマーマトリクスおよび／もしくはゲル中に分配することにより、速度を制御してもよい。
【０５１７】
局所投与に適した製剤の例として、液体および／または半液体の調製物（例えばリニメント剤、ローション）、水中油および／または油中水エマルション（例えば、クリーム、軟膏、ペースト）、および／または溶液、および／または懸濁液が挙げられるが、これらに限定されない。局所投与可能な製剤は、例えば、約０．１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含んでよいが、活性成分の濃度は、溶媒中の活性成分の溶解限度と同じ高さの濃度であってもよい。局所投与用製剤は、本明細書に記載の追加成分の１つ以上をさらに含んでいてもよい。
【０５１８】
デポ剤の投与
本明細書に記載の通り、いくつかの実施形態では、持続放出するように組成物をデポ剤の形で製剤化する。一般に、ある特定の器官または組織（「標的組織」）を投与の標的とする。
【０５１９】
本発明のいくつかの態様では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを、標的組織の内部また
は至近位置に空間的に保持する。本明細書において、組成物を哺乳類対象の標的組織に提供する方法が提供される。この方法は、化合物、特に化合物の核酸成分が実質的に標的組織内に保持されるような条件下で、化合物と標的組織（１つ以上の標的細胞を含む組織）を接触させることにより行う。すなわち、組成物の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９％、または９９．９９％超が標的組織中に保持される。有利には、１つ以上の標的細胞に進入した組成物中に存在する核酸の量を測定することにより、保持率が決定される。例えば、投与後の一定期間、対象に投与した核酸の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９％、または９９．９９％超が細胞内に存在する。例えば、リボ核酸と形質移入試薬を含有する水性組成物を用いて哺乳類対象に筋肉内注射し、筋細胞内に存在するリボ核酸の量を測定することにより組成物の保持率を決定する。
【０５２０】
本発明のいくつかの態様は、哺乳類対象の標的組織に組成物を提供する方法を指向しており、この方法は、組成物が標的組織（１つ以上の標的細胞を含む組織）内に実質的に保持される条件下で、組成物を標的組織に接触させることにより行う。この組成物は、関心のポリペプチドが少なくとも１つの標的細胞内で産生されるように、有効量の核酸分子またはｍｍＲＮＡを含有する。一般に組成物は、細胞透過剤および薬剤的に許容可能な担体を含有するが、「裸」の核酸（例えば、細胞透過剤等の薬剤を伴わない核酸）も企図されている。ある特定の実施形態では、製剤は、有効量の核酸分子が細胞を含む標的組織内に実質的に保持されるようにする薬剤的に許容可能な担体を含む。
【０５２１】
いくつかの状況では、組織内で細胞が産生するタンパク質の量が増加することが好ましい。好ましくは、このタンパク質産生量の増加は、標的組織内の細胞に空間的に制限される。したがって、哺乳類対象の組織内で関心のタンパク質産生を増加させる方法が提供される。修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを含有する組成物が提供され、この場合、所定体積の標的組織内に含まれる相当な割合の細胞内で関心のポリペプチドが産生されるように、組成物の単位量が決定されていることを特徴とする。
【０５２２】
別の実施形態では、修飾核酸を含むインビボのデポーを生成するための組成物が提供される。たとえば、組成物は、生体内分解性、生体適合性ポリマー、ポリマーを可塑化しそれでゲルを形成する有効量で存在する溶媒およびリボ核酸修飾核酸を含む。ある特定の実施形態では、組成物は本明細書に記載されるような細胞透過剤も含む。他の実施形態では、組成物は、ポリマーと混合可能な、揺変性量のチキソトロピー液も含み、揺変性組成物を有効に形成する。別の組成物は、安定剤、増量剤、キレート剤または緩衝剤を含む。
【０５２３】
他の実施形態では、たとえば患者内の環境（つまり器官または組織部位）に修飾核酸を投与するための、徐放性送達デポーが提供される。そのようなデポーは一般にリボ核酸修飾核酸と柔軟な鎖状ポリマーを含み、リボ核酸修飾核酸と柔軟な鎖状ポリマーはいずれも架橋マトリックスタンパク質の多孔性マトリックス内に捕捉されている。通常、孔径は１ｍｍ未満であり、たとえば９００ｎｍ、８００ｎｍ、７００ｎｍ、６００ｎｍ、５００ｎｍ、４００ｎｍ、３００ｎｍ、２００ｎｍ、１００ｎｍ、または１００ｎｍ未満である。通常、柔軟な鎖状ポリマーは親水性である。通常、柔軟な鎖状ポリマーの分子量は、少なくとも５０ｋＤａであり、たとえば７５ｋＤａ、１００ｋＤａ、１５０ｋＤａ、２００ｋＤａ、２５０ｋＤａ、３００ｋＤａ、４００ｋＤａ、５００ｋＤａ、または５００ｋＤａ超である。通常、柔軟な鎖状ポリマーの持続長は、マトリックスタンパク質の持続長の１０％であり、たとえば９、８、７、６、５、４、３、２、１％または１％未満である。通常、柔軟な鎖状ポリマーは、マトリックスタンパク質と類似の電荷を有する。いくつかの実施形態では、柔軟な鎖状ポリマーは、架橋マトリックスタンパク質のマトリックスの有効孔径を、修飾核酸が侵入できる細胞を含む周辺組織へのマトリックスからの改変リボ核
酸の拡散を維持できるサイズに改変する。
【０５２４】
いくつかの実施形態では、組成物は複数の異なる修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを含み、この修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡの１つ以上が関心のポリペプチドをコードする。組成物の細胞内送達を補助する目的で、随意に組成物に細胞透過剤を含有させてもよい。（一般的には、所定体積の標的組織に隣接する組織、または遠位に位置する組織では、関心のポリペプチドの有意な産生を誘発せずに）所定体積の標的組織内に含まれる相当な割合の細胞内で関心のポリペプチドを産生させるように、組成物の必要用量を決定する。この決定に続いて、決定した用量を哺乳類対象の組織に直接導入する。
【０５２５】
一実施形態では、本発明は、複数回の注射または分割用量の注射で送達される修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを提供する。
一実施形態では、小さな使い捨て型の薬剤リザーバー、パッチポンプ、または浸透圧ポンプを用いて、本発明を標的組織の近くに保持してよい。パッチポンプの非限定的な例として、ＢＤ（登録商標）（ニュージャージー州フランクリンレイクス）、Ｉｎｓｕｌｅｔ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（マサチューセッツ州ベッドフォード）、ＳｔｅａｄｙＭｅｄ
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（カリフォルニア州サンフランシスコ）、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ（ミネソタ州ミネアポリス）（例えばＭｉｎｉＭｅｄ）、ＵｎｉＬｉｆｅ（ペンシルベニア州ヨーク）、Ｖａｌｅｒｉｔａｓ（ニュージャージー州ブリッジウォーター）、ＳｐｒｉｎｇＬｅａｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（マサチューセッツ州ボストン）が製造および／または販売しているパッチポンプが挙げられる。浸透圧ポンプの非限定的な例として、ＤＵＲＥＣＴ（登録商標）（カリフォルニア州クパチーノ）が製造している浸透圧ポンプ（例えばＤＵＲＯＳ（登録商標）、ＡＬＺＥＴ（登録商標））が挙げられる。
【０５２６】
肺内投与
頬側口腔を介する肺内投与に適した医薬組成物を調製し、包装し、かつ／または販売してよい。このような製剤は、活性成分を含む乾燥粉末を含んでよく、この乾燥粉末は、直径が約０．５ｎｍ〜約７ｎｍまたは約１ｎｍ〜約６ｎｍの範囲にある。このような組成物は、投与用に適切に乾燥粉末の形態にされる。投与するには、粉末を分配するために噴射剤流が向けられる乾燥粉末容器を備える装置を使用し、かつ／または、自己噴射する溶媒／粉末分配容器（例えば、密閉容器内の低沸点噴射剤に溶解および／または懸濁した活性成分を含む装置）を使用する。このような粉末は、粒子の少なくとも９８重量％が０．５ｎｍ超の直径を有し、粒子の少なくとも９５％の数が７ｍｎ未満の直径を有する粒子を含む。あるいは、粒子の少なくとも９５重量％が１ｎｍ超の直径を有し、粒子の少なくとも９０％の数が６ｍｎ未満の直径を有する粒子を含む。乾燥粉末組成物は、固体の微粉末希釈剤（例えば糖）を含んでよく、簡便には、単位用量形態で提供される。
【０５２７】
低沸点噴射剤は、一般に、大気圧時の沸点が６５°Ｆ未満の液体噴射剤を含む。一般に、噴射剤は組成物の５０％〜９９．９％（ｗ／ｗ）を構成してよく、活性成分は組成物の０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）を構成してよい。噴射剤は、追加的な成分、例えば液体非イオン性および／または固体陰イオン性表面活性剤、および／または固体の希釈剤をさらに含んでいてもよい（これらの追加的成分の粒子サイズは、活性成分を含む粒子と同じ桁のサイズであってよい）。
【０５２８】
非限定的な一例として、本明細書に記載の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを、米国特許第８，２５７，６８５号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法で肺内投与用に製剤化してよい。
【０５２９】
肺内送達用に製剤化された医薬組成物は、活性成分を溶液および／または懸濁液の液滴の形で提供してよい。このような製剤は、活性成分を含む水性および／または希アルコー
ル性の溶液および／または懸濁液として、かつ随意に滅菌状態にして、調製し、包装し、かつ／または販売してよく、簡便に、任意の噴霧装置および／または微粒化装置を用いて投与してよい。このような製剤は、１つ以上の追加的成分をさらに含んでよい。この追加的成分の例として、風味剤（例えばサッカリンナトリウム）、揮発油、緩衝剤、表面活性剤、および／または保存剤（例えばヒドロキシ安息香酸メチル）が挙げられるが、これらに限定されない。この投与経路で提供する液滴の平均直径は、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲にあってよい。
【０５３０】
鼻腔内、経鼻、および口腔投与
肺内投与に有用な本明細書に記載の製剤は、医薬組成物の鼻腔内送達に有用である。鼻腔内投与に適した別の製剤は、活性成分を含む粗粉末であり、この粗粉末の平均粒径は約０．２μｍ〜５００μｍである。このような製剤は、嗅ぎ薬を摂取する方法で投与する。すなわち、粉末容器を鼻に近づけ、鼻腔を通じて急速に吸入することにより投与される。
【０５３１】
経鼻投与に適した製剤は、例えば、わずか０．１％（ｗ／ｗ）から１００％（ｗ／ｗ）もの活性成分を含んでよく、本明細書に記載の追加的成分を１つ以上含んでよい。医薬組成物を口腔投与に適した製剤の形で調製し、包装し、かつ／または販売してよい。このような製剤は、例えば、従来の方法で製造された錠剤および／またはトローチ剤の形であってよく、例えば０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含んでよく、残りの成分は、口で溶解可能および／または分解可能な組成物を含み、さらに随意に、本明細書に記載の追加的成分の１つ以上を含んでいてもよい。あるいは、口腔投与に適した製剤は、活性成分を含む粉末、ならびに／またはエアロゾル化および／もしくは微粒化した溶液および／もしくは懸濁液を含んでよい。このような粉末化、エアロゾル化、および／またはエアロゾル化した製剤は、散布時点で約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍ範囲の平均の粒径および／または液滴直径を有してよく、本明細書に記載の追加的成分の１つ以上をさらに含んでよい。
【０５３２】
眼内投与
医薬組成物を眼内投与に適した製剤の形で調製し、包装し、かつ／または販売してよい。このような製剤は、例えば点眼薬の形態であってよく、例えば、水性または油性の液体賦形剤中、活性成分が０．１／１．０％（ｗ／ｗ）溶液および／または懸濁液である点眼薬であってよい。このような点眼薬は、緩衝剤、塩類、および／または本明細書に記載の他の追加的成分の１つ以上をさらに含んでよい。他の有用な眼内投与製剤の例として、微結晶形態および／またはリポソーム調製物の形で活性成分を含む製剤が挙げられる。点耳薬および／または点眼薬は、本発明の範囲内にあることが企図されている。眼および／または周囲組織に送達する医薬組成物を格納するための多層薄膜装置を作製してよい。
【０５３３】
ペイロード投与：検出可能剤および治療剤
本明細書に記載の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、生体標的に物質（「ペイロード」）を送達することが望まれる多数の異なるシナリオで使用できる。例えば、標的を検出するための検出可能物質の送達や、治療薬の送達に使用できる。検出方法の例として、インビトロ、インビボ両方の画像化、例えば、免疫組織化学検査、生物発光画像法（ＢＬＩ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、陽電子放射型断層撮影法（ＰＥＴ）、電子顕微鏡法、Ｘ線コンピュータ断層撮影、ラマンイメージング、光干渉断層法、吸収画像法、赤外線画像法、蛍光反射画像法、蛍光顕微鏡法、蛍光分子断層画像法、磁気共鳴画像法、Ｘ線画像法、超音波画像法、光音響画像法、実験室アッセイ、または、標識／染色／画像化が必要とされる任意の状況が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５３４】
修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡは、リンカーとペイロードの両方を任意の有用な向きで含むように設計することができる。１つの実施形態では、修飾核酸分子は、ペイロード、たとえば検出可能な剤または治療薬にあらゆる化学的に適切な位置で共有結合し得る。例
えば、２端を有するリンカーを用いて、一方の端をペイロードに結合し、他方の端を核酸塩基（例えば、デアザアデノシンもしくはデアザグアノシンのＣ−７もしくはＣ−８位置、またはシトシンもしくはウラシルのＮ−３もしくはＣ−５位置）に結合する。本発明のポリヌクレオチドは、１を超える数のペイロード（例えば標識と転写阻害剤）の他、切断可能リンカーを含むこともできる。
【０５３５】
一実施形態では、修飾ヌクレオチドは修飾７−デアザ−アデノシン三リン酸塩であり、切断可能リンカーの一方の端は７−デアザ−アデニンのＣ７位置に結合し、リンカーの他方の端は阻害剤（例えば、シチジン上の核酸塩基のＣ５位置）に結合し、標識（例えばＣｙ５）はリンカーの中心に結合する（例えば、米国特許第７，９９４，３０４号（参照によりこの文献は本明細書に組み込まれる）の図５にあるＡ＊ｐＣｐ  Ｃ５  Ｐａｒｇ  Ｃａｐｌｅｓｓの化合物１および第９欄と第１０欄を参照）。上記の修飾７−デアザ−アデノシン三リン酸塩がコード領域に取り込まれた時点で、得られるポリヌクレオチドは、標識と阻害剤（例えばポリメラーゼ阻害剤）に結合した切断可能リンカーを有している。（例えば、切断可能ジスルフィド部分を有するリンカーを還元するための還元条件により）リンカーが切断すると、標識と阻害剤が放出される。さらなるリンカーおよびペイロード（例えば治療剤、検出可能標識、細胞透過ペイロード）は、本明細書に記載されている。
【０５３６】
以下のスキーム１２に修飾ヌクレオチドを示す。ここでは、核酸塩基であるアデニンが、７−デアザアデニンのＣ−７炭素位置でリンカーと結合している。加えて、スキーム１２は、リンカーおよび、ｍＲＮＡの３’末端に取り込まれたペイロード（例えば検出可能剤）を有する修飾ヌクレオチドを示している。ジスルフィドの切断と、プロパルギルエステルに対するチオール基の１，２−付加反応により、検出可能剤が放出される。残りの構造（例えばスキーム１２でｐＡｐＣ５Ｐａｒｇと表示）は阻害剤である。係留された阻害剤はポリメラーゼの能力に立体的に干渉し第２塩基を組み込むので、修飾ヌクレオチドの構造は重要である。したがって重要なことは、係留が、この機能に影響するのに十分に長く、かつ阻害剤が、２番目以降のヌクレオチドがポリヌクレオチド鎖へと成長するのを阻害または禁止する化学立体定位にあることである。
【０５３７】
【化８７】
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2015510495.tif 000144
例えば、本明細書に記載の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを用いて、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）のリプログラミングを行うことができ、この場合、クラスター内の総細胞と比較して、トランスフェクトされた細胞を直接的に追跡できる。別の例では、リンカーを介して薬剤を修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡに結合でき、蛍光標識可能な薬剤を用いて、インビボ（例えば細胞内）で薬剤を追跡することができる。他の例として、細胞への可逆的な薬剤送達に修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを使用することが挙げられるが、これに限定されない。
【０５３８】
本明細書に記載の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを用いて、特定の小器官に対するペイロード（例えば、検出可能剤または治療剤）の細胞内標的化を行うことができる。代表的な細胞内標的の例として、先進のｍＲＮＡ処理のための核局在化、阻害剤を含有するｍＲＮＡに連結した核局在配列（ＮＬＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５３９】
加えて、本明細書に記載の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを用いて、（例えば生きた動物の）細胞または組織に治療剤を送達することができる。例えば、癌細胞を死滅させるため、本明細書に記載の修飾核酸またはｍｍＲＮＡを用いて、高極性の化学療法剤を送達することができる。リンカーを通じて治療剤に結合した修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡが膜透過を促進できるので、治療剤が細胞内に移動して、細胞内標的に到達することができる。
【０５４０】
一例では、リボース環の２’位置および／または修飾核酸分子もしくはｍｍＲＮＡの３’位置および／または５’位置でリンカーが結合する（例えば国際公開第２０１２０３０６８３号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。リンカーは、本明細書に開示される任意のリンカー、当技術分野で公知の任意のリンカー、および／または国際公開第２０１２０３０６８３号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている任意のリンカーであってよい。
【０５４１】
別の一例では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを、切断可能リンカー通じてウイルス阻害性ペプチド（ＶＩＰ）に結合することができる。この切断可能リンカーにより、ＶＩＰと色素を細胞内に放出することができる。別の一例では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを、いくつかの細菌毒素（例えばコレラ毒素、ジフテリア毒素、百日咳毒素）の作用に関与するＡＤＰ−リボシレートにリンカーを介して結合させることができる。これらの毒素タンパク質は、ヒト細胞内の標的タンパク質を修飾するＡＤＰリボシル基転移酵素である。例えばコレラ毒素ＡＤＰリボシレートＧタンパク質は、小腸の内面から大量の体液分泌を起こすことによりヒト細胞を修飾し、結果として生命に関わる下痢を起こす。
【０５４２】
いくつかの実施形態では、ペイロードは、細胞毒、放射性イオン、化学療法剤、その他の治療剤等の治療剤であってよい。細胞毒または細胞毒性薬には、細胞に有害であり得る任意の薬剤が含まれる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１-デヒドロ
テストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、マイタンシノイド、例えばマイタンシノール（米国特許第５，２０８，０２０号を参照。この文献の全体が本明細書に組み込まれる）、ＣＣ−１０６５（米国特許第５，４７５，０９２号、第５，５８５，４９９号、および第５，８４６，５４５号を参照。参照により、これらの全文献が本明細書に組み込まれる）、およびこれらの類似体または同族体が挙げられるが、これらに限定されない。放射性イオンの例として、ヨウ素（例えばヨウ素１２５、ヨウ素１３１）、ストロンチウム８９、リン、パラジウム、セシウム、イリジウム、ホスフェート、コバルト、イットリウム９０、サマリウム１５３、プラセオジムが挙げられるが、これらに限定されない。その他の治療剤の例として、代謝拮抗剤（例えばメトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルダカルバジン）、アルキル化剤（例えばメクロレタミン、チオエパクロランブシル（ｔｈｉｏｅｐａ  ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、ＣＣ−１０６５、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロソスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン系薬剤（例えばダウノルビシン（以前のダウノマイシン）、ドキソルビシン）、抗生剤（例えばダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ））、および有糸分裂阻害剤（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール、マイタンシノイド）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５４３】
いくつかの実施形態では、ペイロードは検出可能剤であってく、限定ではないが、例えば、種々の有機低分子、無機化合物、ナノ粒子、酵素もしくは酵素基質、蛍光物質、発光物質（例えばルミノール）、生物発光物質（例えばルシフェラーゼ、ルシフェリン、エクオリン）、化学発光物質、放射性物質（例えば１８Ｆ、６７Ｇａ、８１ｍＫｒ、８２Ｒｂ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ、２０１Ｔｌ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈ、９９ｍＴｃ（例えば過テクネチウム酸として（テクネチウム酸（ＶＩＩ）、ＴｃＯ４−）
）、造影剤（例えば金（例えば金ナノ粒子）、ガドリニウム（例えばキレートＧｄ）、酸化鉄（例えば超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、単結晶酸化鉄ナノ粒子（ＭＩＯＮ）、極小超常磁性酸化鉄（ＵＳＰＩＯ））、マンガンキレート剤（例えばＭｎ−ＤＰＤＰ）、硫酸バリウム、ヨウ化造影剤（イオヘキソール）、マイクロバブル、パーフルオロカーボン）である。上記の光学的に検出可能な標識の例として、４−アセトアミド−４’−イソチオシアナトスチルベン−２，２’ジスルホン酸；アクリジンおよび誘導体（例えばアクリジンおよびアクリジンイソチオシアネート）；５−（２’−アミノエチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）；４−アミノ−Ｎ−［３−ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド−３，５ジスルホネート；Ｎ−（４−アニリノ−ｌ−ナフチル）マレイミド；アントラニルアミド；ＢＯＤＩＰＹ；ブリリアントイエロー；クマリンおよび誘導体（例えばクマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ、クマリン１２０）、７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン（クマリン１５１））；シアニン色素；シアノシン；４’，６−ジアミニジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）；５’５”−ジブロモピロガロール−スルホナフタレイン（ブロモピロガロールレッド）；７−ジエチルアミノ−３−（４’−イソチオシアナトフェニル）−４−メチルクマリン；ジエチレントリアミン五酢酸塩；４，４’−ジイソチオシアナトジヒドロ−スチルベン−２，２’−ジスルホン酸；４，４’−ジイソチオシアナトスチルベン−２，２’−ジスルホン酸；５−［ジメチルアミノ］−ナフタレン−１−スルホニルクロリド（ＤＮＳ、ダンシルクロリド）；４−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−４’−イソチオシアン酸（ＤＡＢＩＴＣ）；エオシンおよび誘導体（例えば、エオシンおよびエオシンイソチオシアネート）；エリスロシンおよび誘導体（例えばエリスロシンＢおよびエリスロシンイソチオシアネート）；エチジウム；フルオレセインおよび誘導体（例えば５−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、５−（４，６−ジクロロトリアジン−２−イル）アミノフルオレセイン（ＤＴＡＦ）、２’，７’−ジメトキシ−４’５’−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、Ｘ−ローダミン−５−（および−６）−イソチオシアネート（ＱＦＩＴＣまたはＸＲＩＴＣ）、フルオレサミン）；２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−２Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−２−イリデン］エチリデン］−２−［４−（エトキシカルボニル）−１−ピペラジニル］−１−シクロペンテン−１−イル］エテニル］−１，１−ジメチル−３−（３−スルホルプロピル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウムヒドロキシド、内塩、ｎ，ｎ−ジエチルエタンアミン（１：１）を有する化合物（ＩＲ１４４）；５−クロロ−２−［２−［３−［（５−クロロ−３−エチル−２（３Ｈ）−ベンゾチアゾール−イリデン）エチリデン］−２−（ジフェニルアミノ）−１−シクロペンテン−１−イル］エテニル］−３−エチルベンゾチアゾリウムペルクロレート（ＩＲ１４０）；マラカイトグリーンイソチオシアネート；４−メチルウンベリフェロンオルトクレゾールフタレイン；ニトロチロシン；パラロザニリン；フェノールレッド；Ｂ−フィコエリトリン；ｏ−フタルジアルデヒド；ピレンおよび誘導体（例えばピレン、ピレンブチレート、スクシンイミジル１−ピレン）；酪酸量子ドット；リアクティブレッド４（Ｃｉｂａｃｒｏｎ（商標）ブリリアント・レッド３Ｂ−Ａ）；ローダミンおよび誘導体（例えば６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、６−カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、リサミンローダミンＢ、塩化スルホニルローダミン（Ｒｈｏｄ）、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミンＸイソチオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１の塩化スルホニル誘導体（テキサスレッド）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）テトラメチルローダミン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ））；リボフラビン；ロゾール酸；テルビウムキレート誘導体；シアニン−３（Ｃｙ３）；シアニン−５（Ｃｙ５）；シアニン−５．５（Ｃｙ５．５）、シアニン−７（Ｃｙ７）；ＩＲＤ７００；ＩＲＤ８００；Ａｌｅｘａ６４７；Ｌａ  Ｊｏｌｔａ  Ｂｌｕｅ；フタロシアニン；ならびにナフタロシアニンが挙げられる。いくつかの実施形態では、検出可能標識はＣｙ５やＣｙ３などの蛍光色素であり得る。
【０５４４】
いくつかの実施形態では、検出可能剤は、活性化時に検出可能となる検出不能前駆体であってよい（例えば蛍光発生テトラジン−フルオロフォア構築物（例えばテトラジン−ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、テトラジン−オレゴングリーン４８８、テトラジン−ＢＯＤＩＰＹ  ＴＭＲ−Ｘ）または酵素で活性化可能な蛍光発生薬剤（例えばＰＲＯＳＥＮＳＥ（登録商標）（ヴィスエンメディカル）））。酵素標識される組成物を使用できるインビトロのアッセイの例として、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光法、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、およびウエスタンブロット解析法が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５４５】
化合物がたとえば西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼまたはルシフェラーゼなどで酵素標識される場合、酵素標識は生成物の適切な基質の変換の判定により検出され得る。
【０５４６】
本明細書に記載されるもの以外の標識が本開示で企図され、限定ではなく他の光学検出標識を含む。標識は、切断可能なリンカーの切断後、結合されていた塩基から除去できるような標準的な化学的方法により、本開示の修飾ヌクレオチドのどの位置に結合されてもよい。
【０５４７】
併用
核酸分子またはｍｍＲＮＡは、１つ以上の他の治療薬、予防薬、診断薬、または造影剤と組み合わせて使用してよい。「〜と組み合わせて」という表現は、上記薬剤を同時に投与しなければならず、かつ／または、一緒に送達するように製剤化されなければならないことを意図していないが、このような送達方法は本開示の範囲内にある。１つ以上の他の所望される治療剤または医療手技と同時またはその前後に、組成物を投与してよい。一般に、各薬剤は、当該薬剤に対して決定される用量および／またはタイムスケジュールに基づいて投与される。いくつかの実施形態では、本開示は、医薬組成物、予防用組成物、診断用組成物、または画像化用組成物を、その生物学的利用能を改善でき、その代謝作用を低下および／または改変でき、その排出を阻害でき、かつ／またはその体内分布を改変できる薬剤と組み合わせて送達することを包含している。非限定的な一例として、核酸分子またはｍｍＲＮＡを、癌治療または過剰増殖細胞の制御のための医薬品と組み合わせて使用してよい。米国特許第７，９６４，５７１号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている固体原発腫瘍または転移腫瘍の併用療法では、インターロイキン−１２をコードするＤＮＡプラスミドを含む医薬組成物をリポポリマーと共に使用し、さらに少なくとも１つの抗癌剤または化学療法剤を投与する。さらに、抗増殖性分子をコードする本発明の核酸分子またはｍｍＲＮＡは、リポポリマーを有する医薬組成物中に存在してよく（例えば、抗増殖性分子をコードするＤＮＡプラスミドおよびリポポリマーを含む医薬組成物をクレームしている米国特許出願公開第２０１１０２１８２３１号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）、この組成物を、少なくとも１つの化学療法剤または抗癌剤と共に投与してよい。
【０５４８】
細胞透過性ペイロード
いくつかの実施形態では、例えばＲＮＡ、ｍＲＮＡ等の核酸に取り込まれる修飾ヌクレオチドおよび修飾核酸分子は、細胞透過性部分であり得るペイロードや、組成物の細胞内送達を亢進する薬剤を含むこともできる。例えば、組成物に含めてよいものの例として、細胞内空間への送達を促進する細胞透過性ペプチド配列、例えばＨＩＶ由来ＴＡＴペプチド、ペネトラチン、トランスポータン、またはｈＣＴ由来の細胞透過性ペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。例えばＣａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００１）  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ３（３）：３１０−８；  Ｌａｎｇｅｌ，  Ｃｅｌｌ−Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏ
ｎｓ  （ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ  ＦＬ  ２００２）；  Ｅｌ−Ａｎｄａｌｏｕｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００５）  Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．
１１（２８）：３５９７−６１１；  Ｄｅｓｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００５）  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ６２（１６）：１８３９−４９を参照（参照により、これらの全文献は本明細書に組み込まれる）。細胞内空間への組成物の送達を亢進する細胞透過性剤（例えばリポソーム）を含むように、組成物を製剤化することもできる。
【０５４９】
生物標的
例えばＲＮＡ、ｍＲＮＡ等の核酸に取り込まれる本明細書に記載の修飾ヌクレオチドおよび修飾核酸分子を用いて、特定のリガンドが存在するか特定のリガンドを生成可能な任意の生物標的にペイロードを送達することができる。リガンドは、共有結合または非共有結合により生物標的と結合できる。
【０５５０】
生物標的の例として、例えば抗体、核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ等）、タンパク質、酵素等のバイオポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質の例として、酵素、受容体、イオンチャンネルが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、標的は、組織型または細胞型に特異的なマーカーであってよく、例えば、選択された組織型または細胞型の上に特異的に発現するタンパク質であってよい。いくつかの実施形態では、標的は受容体であってよい。受容体の例として、原形質膜受容体および核内受容体が挙げられるが、これらに限定されない。さらに具体的な例として、Ｇタンパク質共役受容体、細胞孔タンパク質、輸送タンパク質、表面発現抗体、ＨＬＡタンパク質、ＭＨＣタンパク質、増殖因子受容体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５５１】
投薬
本発明は、本発明の修飾ｍＲＮＡおよびそのコード化タンパク質または複合体を、これを必要とする対象に投与することを含んでなる方法を提供する。核酸、タンパク質、もしくは複合体、またはその医薬組成物、画像化用組成物、診断用組成物、もしくは予防用組成物は、疾患、障害、および／または状態（例えば作業記憶欠損に関連する疾患、障害、および／または状態）を予防、治療、診断、または画像化する上で効果的な、任意の量および投与経路を用いて対象に投与してよい。正確な必要量は、対象の種、年齢、全般的状態、疾患の重症度、個々の組成物、その投与様式、その活性様式等に応じて、対象ごとに異なる。本発明の組成物は、投与を簡易化し用量を均一にする目的で、通常は単位投与剤形で製剤化される。しかし、本発明の組成物の１日の総使用量は、健全な医療判断の範囲内で主治医が決定することが理解されるであろう。ある特定の患者に対する具体的な治療有効投与量、予防有効投与量、または適切な画像化投与量のレベルは、様々な要因によって決まる。こうした様々な要因の例として、治療対象の障害、および障害の重症度；使用する特定の化合物の活性；使用する特定の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康状態、性別、および食事；使用する特定の化合物の投与時間、投与経路、および排出速度；治療期間；使用する特定の化合物と併用または同時使用する薬物；ならびに、医療分野でよく知られている同類の要因が挙げられる。
【０５５２】
ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、所望される治療効果、診断効果、予防効果、または画像化効果を得る目的で、１日に対象の体重１ｋｇあたり約０．０００１〜約１００ｍｇ、約０．００１〜約０．０５ｍｇ、約０．００５〜約０．０５ｍｇ、約０．００１〜約０．００５ｍｇ、約０．０５〜約０．５ｍｇ、約０．０１〜約５０ｍｇ、約０．１〜約４０ｍｇ、約０．５〜約３０ｍｇ、約０．０１〜約１０ｍｇ、約０．１〜約１０ｍｇ、または約１〜約２５ｍｇを送達するのに十分なレベルの投与量で、１日１回以上投与してよい。所望される投与量を、１日３回、１日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回送達してよい。あ
る特定の実施形態では、所望される投与量を、多回投与（例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、またはそれ以上の回数の投与）を用いて送達してよい。
【０５５３】
本発明によれば、ｍｍＲＮＡを分割用量投与計画で投与した場合に、哺乳類対象において比較的高いレベルのタンパク質が産生されることが発見されている。本明細書で使用する「分割用量」という語は、単回単位用量または総１日用量を２回以上の用量に分割することを指す（例えば、単回単位用量を２回以上の投与に分割する）。本明細書で使用する「単回単位用量」という語は、１用量／１回／単一経路／単一接点（すなわち単一の投与事象）において投与される治療剤の用量を指す。本明細書で使用する「総１日用量」という語は、２４時間の期間に投与または処方される量を指す。総１日用量を単回単位用量として投与してよい。一実施形態では、本発明のｍｍＲＮＡを分割用量で対象に投与する。ｍｍＲＮＡは、緩衝剤のみで製剤化してもよく、本明細書に記載の製剤形態で製剤化してもよい。
【０５５４】
剤形
本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載の剤形に製剤化してよい。例えば、局所投与、鼻腔内投与、気管支内投与、注射投与（例えば静脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、心臓内、腹腔内、皮下投与）用として製剤化してよい。
【０５５５】
液体剤形
非経口投与用の液体剤形として、薬剤的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、液剤、懸濁液、シロップ剤、および／またはエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定されない。液体剤形は、活性成分に加えて、当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤を含んでもよい。こうした不活性希釈剤の例として、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタン脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。非経口投与用のある特定の実施形態では、組成物を、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、アルコール、油、改質油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、および／またはこれらの組み合わせ等の可溶化剤と混合してよい。
【０５５６】
注射剤
例えば水性または油性の滅菌注射懸濁液等の注射用調製物を、公知の技術に従って製剤化してよく、この注射用調製物には、適切な分散剤、湿潤剤、および／または懸濁剤が含まれていてよい。滅菌注射用調製物は、毒性がなく非経口用として許容可能な希釈剤および／または溶媒中の、滅菌した注射用液剤、懸濁液、および／またはエマルションであってよい（例えば、１，３−ブタンジオール溶液）。許容可能なビヒクルおよび溶媒の中でも、特に、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張性塩化ナトリウム溶液（ただしこれらに限定されない）を使用してよい。従来、溶媒または懸濁媒体として、滅菌不揮発性油が使われている。この目的で、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性不揮発油を使用してよい。オレイン酸等の脂肪酸を注射剤の調製に使用してよい。
【０５５７】
例えば、細菌保持フィルターに通してろ過することにより、および／または使用前に滅菌水もしくは他の滅菌注射媒体に溶解もしくは分散させることのできる滅菌性固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことにより、注射製剤を滅菌することができる。
【０５５８】
活性成分の効果を長期化させる目的で、皮下注射または筋肉注射された活性成分の吸収を遅らせることが望まれる場合がある。このことは、難水溶性の結晶性材料または非晶質材料の懸濁液を用いることによって達成できる。この場合、修飾ｍＲＮＡの吸収速度は薬剤の溶解速度に依存し、薬剤の溶解速度は、結晶サイズおよび結晶形態に依存し得る。あるいは、油ビヒクル中に修飾ｍＲＮＡを溶解または懸濁させることにより、非経口投与される修飾ｍＲＮＡの吸収を遅らせることもできる。ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中で修飾ｍＲＮＡのマイクロ封入マトリクスを形成することにより、注射用デポ剤形が製造される。修飾ｍＲＮＡとポリマーの比率、および使用する特定ポリマーの性質に応じて、修飾ｍＲＮＡの放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例として、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられるが、これらに限定されない。注射用デポ製剤は、生体組織と適合するリポソームまたはマイクロエマルション中に修飾ｍＲＮＡを封入することにより調製してよい。
【０５５９】
肺投与剤
肺内投与に有用な本明細書に記載の製剤は、医薬組成物の鼻腔内送達にも使用してよい。鼻腔内投与に適した別の製剤は、活性成分を含む粗粉末であってよく、この粗粉末の平均粒径は約０．２μｍ〜５００μｍである。このような製剤は、嗅ぎ薬を摂取する方法で投与してよい。すなわち、粉末容器を鼻に近づけ、鼻腔を通じて急速に吸入することにより投与してよい。
【０５６０】
経鼻投与に適した製剤は、例えば、わずか０．１％（ｗ／ｗ）から１００％（ｗ／ｗ）もの活性成分を含んでよく、本明細書に記載の追加的成分を１つ以上含んでよい。医薬組成物を口腔投与に適した製剤の形で調製し、包装し、かつ／または販売してよい。このような製剤は、例えば、従来の方法で製造された錠剤および／またはトローチ剤の形であってよく、例えば０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含有してよく、残りの成分は、口で溶解可能および／または分解可能な組成物を含んでよく、さらに随意に、本明細書に記載の追加的成分の１つ以上を含んでいてもよい。あるいは、口腔投与に適した製剤は、活性成分を含む粉末、ならびに／またはエアロゾル化および／もしくは微粒化した溶液および／もしくは懸濁液を含んでよい。このような粉末化、エアロゾル化、および／またはエアロゾル化した製剤は、散布時点で約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍ範囲の平均の粒径および／または液滴直径を有してよく、本明細書に記載の追加的成分の１つ以上をさらに含んでよい。
【０５６１】
医薬品の製剤化および／または製造の一般的な考慮事項は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２１ｓｔ  ｅｄ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  ２００５（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０５６２】
コーティングまたはシェル
錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤という固体剤形は、コーティングおよびシェル（例えば腸溶コーティング、その他、医薬製剤分野で周知のコーティング）を用いて調製してよい。このような剤形は、随意に乳白剤を含んでもよく、活性成分だけを放出する組成にすることができ、優先的には、腸管の特定部位で、かつ随意に徐放的に、活性成分だけを放出する組成にすることができる。使用可能な包埋組成物の例として、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。ラクトース、乳糖や高分子ポリエチレングリコール等の賦形剤を使用して、類似タイプの固体組成物を軟ゼラチンカプセルおよび硬ゼラチンカプセルの充填材として用いてよい。
【０５６３】
医薬組成物の特性
本明細書に記載の医薬組成物は、下記の１つ以上の特性で特徴付けることができる。
生物学的利用能
修飾核酸分子は、本明細書に記載の送達剤を用いて組成物に製剤化した場合、本明細書に記載の送達剤がない組成物と比べて、生物学的利用能の上昇を示し得る。本明細書で使用する「生物学的利用能」という用語は、哺乳動物に投与された所定用量の修飾核酸分子の全身利用度を指す。生物学的利用能の評価は、曲線下面積（ＡＵＣ）を測定するか、哺乳動物に化合物を投与した後に形態が変化していない化合物の最大血清濃度または最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）を測定することにより行うことができる。ＡＵＣとは、横軸（Ｘ軸）に時間を示し縦軸（Ｙ軸）に化合物の血清濃度または血漿濃度を示したグラフの、曲線下の面積を測定するものである。一般に、特定の化合物のＡＵＣは、当業者に対して公知の方法を用いて計算でき、これらの方法はＧ．  Ｓ．  Ｂａｎｋｅｒ，  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ｖ．  ７２，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｉｎｃ．，  １９９６（参照により、この文献が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０５６４】
Ｃｍａｘ値とは、哺乳動物に化合物を投与した後、哺乳動物の血清中または血漿中で達成する化合物の最大濃度である。当業者に公知の方法を用いて、特定の化合物のＣｍａｘを測定することができる。本明細書で使用する「生物学的利用能の上昇」または「薬物動態の改善」という語句は、本明細書に記載の送達剤と同時投与された第１の修飾核酸分子の全身アベイラビリティをＡＵＣ、Ｃｍａｘ、またはＣｍｉｎで測定した値が、このような同時投与を行わない場合よりも高いことを意味する。いくつかの実施形態では、修飾核酸分子の生物学的利用能は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％の上昇を示し得る。
【０５６５】
治療濃度域
本発明の修飾核酸分子は、本明細書に記載の送達剤と共に組成物に製剤化された場合、本明細書に記載の送達剤がない修飾核酸分子組成物を投与後の治療濃度域と比べて、修飾核酸分子組成物の投与後の治療濃度域の拡大を示し得る。本明細書で使用する「治療濃度域」という用語は、高い確率で治療効果を誘発する作用部位における、血漿濃度範囲または治療的活性物質のレベルの範囲を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の送達剤と同時投与した場合の修飾核酸分子の治療濃度域は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％上昇し得る。
【０５６６】
分布容積
本発明の修飾核酸分子は、本明細書に記載の送達剤と共に組成物に製剤化された場合、本明細書に記載の送達剤がない修飾核酸分子組成物と比べて、分布容積（Ｖｄｉｓｔ）の改善（例えば減少または標的化）を示し得る。分布容積（Ｖｄｉｓｔ）とは、体内の薬物量を、血中または血漿中の薬物濃度と関連付けたものである。本明細書で使用する「分布容積」という用語は、体内の薬物濃度が血中濃度または血漿中濃度と同一であると仮定した場合に、体内薬物総量を含有するのに必要な液量を指す。すなわち、Ｖｄｉｓｔは、体内薬物量を薬物の血中または血漿中濃度で割った値に等しい。例えば、用量１０ｍｇで血
漿中濃度が１０ｍｇ／Ｌの場合、分布容積は１リットルとなる。分布容積は、血管外組織にどの程度薬物が存在するかを表す。分布容積が大量である場合、化合物が血漿タンパク結合よりも組織成分と結合する傾向があることを表す。臨床環境では、Ｖｄｉｓｔを使用することにより、定常状態の濃度を達成するための負荷投与量を決定することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の送達剤と同時投与した場合の修飾核酸分子の分布容積は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％低下し得る。
【０５６７】
生物学的効果
一実施形態では、動物におけるタンパク質発現を分析することにより、当該動物に送達した修飾ｍＲＮＡの生物学的効果を分類してよい。本発明の修飾ｍＲＮＡを投与した哺乳動物から生体試料を回収し、この試料を分析することにより、タンパク質発現を測定することができる。一実施形態では、哺乳動物に投与した修飾ｍＲＮＡでコードされる発現タンパク質が少なくとも５０ｐｇ／ｍｌであることが好適であり得る。例えば、哺乳動物に送達された修飾ｍＲＮＡがコードするタンパク質の発現が５０〜２００ｐｇ／ｍｌである場合、当該哺乳動物における治療有効量のタンパク質とみなすことができる。
【０５６８】
質量分析による修飾核酸の検出
質量分析法（ＭＳ）とは、イオンに変換した後の分子に関する構造情報および分子質量／濃度情報を提供できる分析手法である。分子が最初にイオン化されて正または負の電荷を得た後、質量分析器内を通過して、各々の質量電荷（ｍ／ｚ）比に応じて様々な分析器領域に到達する。
【０５６９】
質量分析を実施するには質量分析計を用いる。この質量分析計は、分画された試料をイオン化し、その後の分析用に荷電分子を生成するためのイオン源を備える。例えば、試料をイオン化する方法として、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）、光イオン化、電子衝撃イオン化、高速原子衝撃（ＦＡＢ）／液体二次イオン化（ＬＳＩＭＳ）、マトリクス支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）、電界イオン化、電界脱離、サーモスプレー／プラズマスプレーイオン化、およびパーティクルビームイオン化が挙げられる。当業者であれば、測定対象の分析物、試料の種類、検出器の種類、正モードか負モードかの選択等に基づいてイオン化方法の選択を決定できることを理解するであろう。
【０５７０】
試料をイオン化した後、それにより生成された正または負の電荷を持つイオンを分析することにより、質量電荷比（すなわちｍ／ｚ）を決定できる。質量電荷比を測定するのに適した分析計の例として、四重極型分析計、イオントラップ型分析計、および飛行時間型分析計が挙げられる。いくつかのモードを用いてイオンを検出できる。例えば、選択されたイオンを検出でき（すなわち、選択的イオンモニタリングモード（ＳＩＭ）を使用）、あるいは、スキャニングモードを用いて、例えば多重反応モニタリング（ＭＲＭ）または選択反応モニタリング（ＳＲＭ）を用いてイオンを検出することもできる。
【０５７１】
タンパク質を検証する方法として、ペプチド標準の安定同位体標識希釈を連結した液体クロマトグラフィー多重反応モニタリング（ＬＣ−ＭＳ／ＭＲＭ）が効果的な方法であることが実証されている（例えばＫｅｓｈｉｓｈｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２００９  ８：  ２３３９−２３４９；  Ｋｕｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ２００９  ５５：１１０８−１１１７；  Ｌｏｐｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ２０１０  ５６：２８１−２９０を参照。参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）。バイオマーカー発見試験で頻
繁に使われる非標的化質量分析と異なり、標的化ＭＳ法は、計測器の全分析能力を複合混合物中の選択された数十〜数百個のペプチドに集中させる、ペプチド配列をベースにしたＭＳモードである。検出および断片化の対象を関心のタンパク質に由来するペプチドに限定することにより、発見モードＭＳ法と比べて、感度と再現性が劇的に改善される。質量分析に基づくこの多重反応モニタリング（ＭＲＭ）法を用いたタンパク質定量化は、臨床試料の迅速、かつ標的化された多重のタンパク質発現プロファイリングを通じて、バイオマーカーの発見および定量化に劇的な影響を及ぼすことができる。
【０５７２】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡでコードされた少なくとも１つのタンパク質を含有し得る生体試料を、ＭＲＭ−ＭＳの方法を用いて分析してよい。生体試料の定量化のさらなる例として、内部標準としての同位体標識ペプチドまたはタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５７３】
本発明によれば、対象から取得した生体試料に対して酵素消化を行ってよい。本明細書で使用する「消化」という用語は、より短いペプチドに分断することを意味する。本明細書で使用する「試料を処理してタンパク質を消化する」という語句は、試料中のタンパク質を分解するように試料を操作することを意味する。このような酵素の例として、トリプシン、エンドプロテアーゼＧｌｕ−Ｃ、キモトリプシンが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、本発明の少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡでコードされた少なくとも１つのタンパク質を含有し得る生体試料を、酵素を用いて消化してよい。
【０５７４】
一実施形態では、本発明の修飾ｍＲＮＡでコードされたタンパク質を含有し得る生体試料のタンパク質を、エレクトロスプレーイオン化法を用いて分析してよい。エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）マススペクトロメトリー（ＥＳＩＭＳ）では、電気エネルギーを援用してイオンを溶液から気相に移行させてから、マススペクトロメトリーにより分析する。試料の分析には、当技術分野で公知の方法（例えばＨｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｒｅｖ．  ２００３  ２４（１）：３−１２；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）を用いてよい。溶液に含まれるイオン種を気相に移行させるには、帯電液滴の細かい霧を散布し、溶媒を蒸発させてイオンを耐電液滴から排出させて、高電荷液滴のミストを生成する方法で行ってよい。少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの質量分析計（例えば四重極型質量分析計が挙げられるが、これに限定されない）を使用して、高電荷液滴のミストを分析してよい。さらに、マススペクトロメトリー法に精製ステップが含まれていてもよい。非限定的な一例として、単一のｍ／ｚ比を選択するように第１の四極子を設定して、別のｍ／ｚ比を有する他の分子イオンを除去できるようにしてよい。これにより、ＭＳ分析前の複雑で時間を要する試料精製手順を排除することができる。
【０５７５】
一実施形態では、本発明の修飾ｍＲＮＡでコードされたタンパク質を含有し得る生体試料のタンパク質を、直列ＥＳＩＭＳシステム（例えばＭＳ／ＭＳ）で分析してよい。非限定的な例として、プロダクトスキャン（もしくはドータースキャン）、プレカーサースキャン（ペアレントスキャン）、ニュートラルロス、または多重反応モニタリングを用いて液滴を分析してよい。
【０５７６】
一実施形態では、本発明の修飾ｍＲＮＡでコードされたタンパク質を含有し得る生体試料を、マトリクス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）マススペクトロメトリー（ＭＡＬＤＩＭＳ）を用いて分析してよい。ＭＡＬＤＩにより、高分子、低分子の両方（例えばタンパク質）を非破壊的に蒸発させイオン化することができる。ＭＡＬＤＩ分析では、最初に、分析物を大型モル過剰マトリクス化合物と共結晶化する。また、このマトリクス化合物の例として紫外線吸収弱有機酸が挙げられるが、これに限定されない。ＭＡＬＤＩで使用されるマトリクスの非限定的な例は、α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸、３，
５−ジメトキシ−４−ヒドロキシケイ皮酸、および２，５−ジヒドロキシ安息香酸である。分析物−マトリクス混合物をレーザー照射すると、マトリクスと分析物が蒸発し得る。レーザー誘起脱離により、無傷の分析物のイオンが高収率で得られ、化合物の高精度な測定が可能になる。試料の分析には、当技術分野で公知の方法（例えばＬｅｗｉｓ，  Ｗｅｉ  ａｎｄ  Ｓｉｕｚｄａｋ，  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０００：５８８０−５８９４；参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）を用いてよい。ＭＡＬＤＩ分析で使われる質量分析計の非限定的な例として、線形飛行時間型（ＴＯＦ）質量分析計、ＴＯＦリフレクトロン型質量分析計、フーリエ変換型質量分析計が挙げられる。
【０５７７】
一実施形態では、乾燥液滴法（ｄｒｉｅｄ−ｄｒｏｐｌｅｔ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いて分析物−マトリクス混合物を形成してよい。生体試料をマトリクスと混合して、マトリクス対試料の比率が約５０００：１の飽和マトリクス溶液を生成する。次に、飽和マトリクス溶液の分注量（約０．５〜２．０μＬ）を静置して乾燥させ、分析物−マトリクス混合物を形成する。
【０５７８】
一実施形態では、薄膜層法（ｔｈｉｎ−ｌａｙｅｒ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いて分析物−マトリクス混合物を形成してよい。同種のマトリクス膜を最初に形成してから、試料に貼り付ける。マトリクスにより試料が吸収されて、分析物−マトリクス混合物を形成することができる。
【０５７９】
一実施形態では、厚膜層法（ｔｈｉｃｋ−ｌａｙｅｒ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いて分析物−マトリクス混合物を形成してよい。ニトロセルロースマトリクス添加剤を用いて、同種のマトリクス膜を形成する。均一なニトロセルロースマトリクス層が得られると、試料に貼り付け、試料をマトリクスに吸収させて分析物−マトリクス混合物を形成する。
【０５８０】
一実施形態では、サンドイッチ法（ｓａｎｄｗｉｃｈ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いて分析物−マトリクス混合物を形成してよい。薄膜層法でマトリクス結晶の薄層を作製した後、水性トリフルオロ酢酸の液滴、試料、およびマトリクスを添加する。次に、試料をマトリクスに吸収させて分析物−マトリクス混合物を形成する。
【０５８１】
キットおよび装置
キット
本発明は、本発明の方法を簡便および／または効果的に実施するための種々のキットを提供する。典型的には、キットは、使用者が対象の複数の治療を実施し、かつ／または複数の実験を実施するに足る、十分な量および／または数の構成要素を含む。
【０５８２】
一態様では、本発明は、翻訳可能領域を含む第１修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを含む、タンパク質産生用キットを提供する。キットは、包装と使用説明書および／または製剤組成物を形成する送達剤をさらに含み得る。送達剤は、生理食塩水、緩衝液、リピドイドまたは本明細書に開示したいずれかの送達剤を含み得る。
【０５８３】
一態様では、本発明は、翻訳可能領域および核酸修飾を含む第１単離核酸であって、第１単離核酸が導入され得る細胞の自然免疫反応を回避可能であり得る第１単離核酸と、包装と、使用説明書とを含む、タンパク質産生用キットを提供する。キットは、製剤組成物を形成する送達剤をさらに含み得る。送達剤は、リピドイドを含み得る。リピドイドは、Ｃ１２−２００、９８Ｎ１２−５およびＭＤ１からなる群より選択され得る。
【０５８４】
一実施形態では、緩衝液は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、リン酸、および／またはＥＤＴＡを含み得る。別の一実施形態では、緩衝液は、生理食塩水、２ｍＭカルシウム
を含む生理食塩水、５％スクロース、２ｍＭカルシウムを含む５％スクロース、５％マンニトール、２ｍＭカルシウムを含む５％マンニトール、乳酸リンゲル液、塩化ナトリウム、２ｍＭカルシウムを含む塩化ナトリウム、およびマンノースを含み得る（これらに限定されない）（例えば米国特許出願公開第２０１２０２５８０４６号を参照。参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）。さらなる一実施形態では、緩衝液は沈殿または凍結乾燥されていてよい。一定し再現可能な高濃度の生理食塩水または単純な緩衝液配合を実現できるように、各成分の量を変えてよい。また、一定期間中および／または種々の条件下で緩衝液中の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡの安定性が増すように、成分を変えてもよい。
【０５８５】
一態様では、本発明は、翻訳可能領域を含む第１単離核酸（その量は、標的細胞に導入された時点で、翻訳可能領域がコードする所望のタンパク質量を産生できる有効量である）と；阻害性核酸を含む第２核酸（その量は、細胞の自然免疫反応を実質的に阻害できる有効量である）と；包装および説明書と、を含むタンパク質産生用キットを提供する。
【０５８６】
一態様では、本発明は、翻訳可能領域を含む修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡと、包装および説明書とを含む、タンパク質産生用キットであって、この核酸は細胞ヌクレアーゼによる分解の減少を示す、タンパク質産生用キットを提供する。
【０５８７】
一態様では、本発明は、翻訳可能領域とヌクレオシド修飾を含む第１単離核酸であって、細胞ヌクレアーゼによる分解の減少を示す第１単離核酸と、包装と、使用説明書とを含むタンパク質産生用キットを提供する。
【０５８８】
一態様では、本発明は、翻訳可能領域と少なくとも２つのヌクレオシド修飾を含む第１単離核酸であって、細胞ヌクレアーゼによる分解の減少を示す第１単離核酸と、包装と、使用説明書とを含むタンパク質産生用キットを提供する。
【０５８９】
一態様では、本発明は、翻訳可能領域とヌクレオシド修飾を含む第１単離核酸であって、細胞ヌクレアーゼによる分解の減少を示す第１単離核酸と、阻害性核酸を含む第２核酸と、包装と、使用説明書とを含むタンパク質産生用キットを提供する。
【０５９０】
いくつかの実施形態では、第１単離核酸はメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオウリジン、４−チオ−シュードウリジン、２−チオ−シュードウリジン、５−ヒドロキシウリジン、３−メチルウリジン、５−カルボキシメチル−ウリジン、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチルウリジン、１−タウリノメチル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、５−メチル−ウリジン、１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロスードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロスードウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジンおよび４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジンからなる群より選択された少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
【０５９１】
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５−アザシチジン、シュードイソシチジン、３−メチル−シチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、１−メチル−シュードイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン、２−チオ−５−メチル
−シチジン、４−チオ−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−シュードイソシチジンおよび４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジンからなる群より選択された少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
【０５９２】
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２−アミノプリン、２、６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチルアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、７−メチルアデニン、２−メチルチオ−アデニンおよび２−メトキシ−アデニンからなる群より選択された少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
【０５９３】
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、イノシン、１−メチル−イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチリノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシンおよびＮ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシンからなる群より選択された少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
【０５９４】
別の態様では、本開示は、翻訳可能領域および核酸修飾を含む第１単離核酸であって、細胞ヌクレアーゼによる分解の減少を示す第１単離核酸と、第１核酸の翻訳可能領域の翻訳に適した哺乳動物細胞を含む。
【０５９５】
装置
本発明は、対象のタンパク質をコードするリボ核酸（ＲＮＡ）などの核酸に修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドを組み込む装置、特に携帯用装置を提供する。これらの装置は、必要とする対象（例えばヒト患者）に直ちに送達できる製剤の形で修飾ＲＮＡを合成するための、安定した製剤にされた試薬を収容する。目的のタンパク質の非限定的な例として、創傷治癒のための増殖因子および／または血管形成促進因子、感染制御を促進するためのペプチド抗生物質、および、新たに特定されたウイルスに対する免疫反応を急速に刺激するための抗原が挙げられる。
【０５９６】
いくつかの実施形態では、装置は自給式であり、所望により生成される核酸の合成および／または分析の指示をワイヤレス遠隔アクセスで獲得できる。装置は、少なくとも１種類の核酸の、および好ましくは無制限の数の異なる核酸配列のモバイル合成が可能である。ある特定の実施形態では、装置は１名または少人数による輸送が可能である。他の実施形態では、装置は実験台または机の上に収まるサイズにされている。他の実施形態では、装置はスーツケース、バックパックまたは同様の寸法の物体に収まるサイズにされている。さらなる実施形態では、デバイスは、車両たとえば自動車、トラックまたは救急車、または軍事車両たとえば戦車または人員運搬車などに取り付けられるサイズにされている。
目的のタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡを生成するのに必要な情報は、デバイス内にあるコンピューター可読媒体内に存在する。
【０５９７】
いくつかの実施形態では、この装置は、核酸およびポリペプチド配列のデータベースと通信する（例えば無線で通信する）能力を有する。この装置は、１つ以上の試料容器を挿入するための少なくとも１つの試料ブロックを格納する。このような試料容器は、液体または他の形態の任意の数の材料（例えば鋳型ＤＮＡ、ヌクレオチド、酵素、緩衝剤、その他の試薬）を収容することができる。また、この試料容器は、試料ブロックと接触することにより加熱および冷却することができる。この試料ブロックは通常、少なくとも１つの試料ブロック用の１つ以上の電子制御ユニットを用いて、装置のベースと連通している。好ましくは、この試料ブロックは加熱モジュールを格納し、この加熱分子（ｈｅａｔｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）は、約−２０Ｃ〜約＋１００℃の温度範囲で試料容器とその内容物を加熱および／または冷却することができる。装置のベースは、電圧源（例えば電池または外部電圧源）と連通している。この装置は、ＲＮＡ合成用材料を保存し分配する手段も格納する。
【０５９８】
この試料ブロックは、合成された核酸を分離するためのモジュールを随意に格納してもよい。あるいは、この装置は、試料ブロックと機能的に連結した分離モジュールを格納してもよい。好ましくは、この装置は、合成された核酸を分析する手段を格納する。上記の分析には、配列同一性（例えば、ハイブリダイゼーションにより実証）、所望されない配列の不存在、合成されたｍＲＮＡの完全性測定（例えば、微小流体粘度測定と分光測定法の併用による分析）、修飾ＲＮＡの濃度および／または効力（例えば、分光測定法による分析）が含まれる。
【０５９９】
ある特定の実施形態では、この装置は、対象から取得した生体材料中に存在する病原体を検出する手段（例えば微生物同定用ＩＢＩＳ  ＰＬＥＸ−ＩＤシステム（Ａｂｂｏｔｔ）と組み合わされる。  
【０６００】
本発明に記載の皮内投与医薬組成物の送達に適切な装置として、例えば米国特許第４，８８６，４９９号、第５，１９０，５２１号、第５，３２８，４８３号、第５，５２７，２８８号、第４，２７０，５３７号、第５，０１５，２３５号、第５，１４１，４９６号、および第５，４１７，６６２号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている短針（ショートニードル）装置が挙げられる。皮内投与組成物の投与は、針の有効な皮膚貫通長さを制限する装置（例えば、ＰＣＴ国際公開第９９／３４８５０号（参照により、この文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の装置およびその機能的均等物）により行ってよい。液体噴射式注射器を介して、かつ／または角質層を貫通して真皮に届く噴流を生成する針を介して液体組成物を真皮に送達する噴射式注射器が、好適である。噴射式注射器については、例えば、米国特許第５，４８０，３８１号、第５，５９９，３０２号、第５，３３４，１４４号、第５，９９３，４１２号、第５，６４９，９１２号、第５，５６９，１８９号、第５，７０４，９１１号、第５，３８３，８５１号、第５，８９３，３９７号、第５，４６６，２２０号、第５，３３９，１６３号、第５，３１２，３３５号、第５，５０３，６２７号、第５，０６４，４１３号、第５，５２０，６３９号、第４，５９６，５５６号、第４，７９０，８２４号、第４，９４１，８８０号、第４，９４０，４６０号、ならびにＰＣＴ国際公開第９７／３７７０５号および第９７／１３５３７号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。圧縮ガスを用いて粉末形態ワクチンの皮膚外層から真皮への送達を加速するバリスティック粉末／粒子送達装置が、好適である。上記に追加または代替して、古典的な皮内投与マントゥー法において従来の注射器を使用してもよい。
【０６０１】
いくつかの実施形態では、この装置はポンプであってよく、あるいは、血液脳関門を通
過して本発明の化合物または組成物を投与するためのカテーテルを含んでいてもよい。このような装置の例として、加圧嗅覚送達装置、イオン導入装置、多層微小流体装置等が挙げられるが、これらに限定されない。このような装置は、携帯式、固定式のどちらでもよい。このような装置は、植え込み型であるか、外部から身体に係留されるか、またはこれらの組み合わせであってよい。
【０６０２】
投与装置を使用して、本明細書で教示される単回投与、多回投与、または分割投与計画に従って、本発明の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを送達してよい。このような装置について、以下に記載する。
【０６０３】
本明細書に開示されている方法および組成物と併用される、細胞、器官、および組織に多回投与するための当技術分野で公知の方法および装置は、本発明の実施形態として企図されている。その例として、複数の針を備える方法および装置、例えばルーメンやカテーテルを使用するハイブリッド装置、熱、電流、または放射線で駆動される機構を利用した装置が挙げられる。
【０６０４】
本発明によれば、これらの多回投与装置を利用して、本明細書で企図される単一用量、多回用量、または分割用量を送達してよい。
治療剤を固形組織に送達する方法は、Ｂａｈｒａｍｉらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２０１１０２３０８３９号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｂａｈｒａｍｉによれば、規則的に並んだ針が装置に組み込まれ、各針の長さに沿って、上記固形組織の任意の場所に、実質的に均等量の流体が送達される。
【０６０５】
生物組織を通過して生体材料を送達する装置は、Ｋｏｄｇｕｌｅらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２０１１０１７２６１０号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｋｏｄｇｕｌｅによれば、一種以上の金属で製造され、外径が約２００ミクロン〜約３５０ミクロン、長さが少なくとも１００ミクロンの複数の中空マイクロ針が装置に組み込まれて、この装置からペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸分子、脂質、その他の薬剤的活性成分、またはこれらの組み合わせを送達する。
【０６０６】
治療剤を組織に送達するための送達プローブは、Ｇｕｎｄａｙらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２０１１０２７０１８４号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｇｕｎｄａｙによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置が付属カプセルを作動位置と非作動位置の間で移動させて、カプセルから針を通じて薬剤を排出させる。
【０６０７】
頻回注射医療器具は、Ａｓｓａｆにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２０１１０２１８４９７号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ａｓｓａｆによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置は、１本以上の針に接続したチャンバーを有し、各注射の後にチャンバーに医療流体を連続的に補充する手段を有する。
【０６０８】
一実施形態では、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡを、少なくとも３本の針を介して、同時または６０分以内に、３つの異なる部位（隣接部位でもよい）に皮下投与または筋肉内投与する（例えば、同時または６０分以内に、４、５、６、７、８、９、または１０の部位に投与する）。米国特許出願公開第２０１１０２３０８３９号および第２０１１０２１８４９７号（参照により、これらの各文献の全体が本明細書に組み込まれる）に記載の装置を使用すると、分割用量を隣接組織に同時に投与することができる。
【０６０９】
物質を患者の体内に注射するための少なくとも部分的に植え込み型のシステム、特に陰茎勃起刺激システムは、Ｆｏｒｓｅｌｌにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２０１１０１９６１９８号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｆｏｒｓｅｌｌによれば、複数の針が装置に組み込まれ、患者の左右の海綿体に隣接した位置に、この装置が１つ以上のハウジングと共に植え込まれる。針を通じて薬剤を供給するためのリザーバーとポンプも植え込まれる。
【０６１０】
治療有効量の鉄を経皮送達する方法は、Ｂｅｒｅｎｓｏｎにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２０１００１３０９１０号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｂｅｒｅｎｓｏｎによれば、複数の針を用いて角質層中に複数のマイクロチャンネルを作成でき、これにより、イオン注入パッチの鉄イオンの経皮送達を亢進することができる。
【０６１１】
生物組織を通過して生体材料を送達する方法は、Ｋｏｄｇｕｌｅらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２０１１０１９６３０８号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｋｏｄｇｕｌｅによれば、治療活性成分を含有する複数の生分解性マイクロ針が装置に組み込まれ、この装置から、タンパク質、炭水化物、核酸分子、脂質、その他の薬剤的活性成分、またはこれらの組み合わせが送達される。
【０６１２】
ボツリヌス毒素組成物を含む経皮パッチは、Ｄｏｎｏｖａｎにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００８０２２００２０号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｄｏｎｏｖａｎによれば、複数の針がパッチに組み込まれ、血管を破らずに皮膚角質層に突き出た針を通じて、装置から角質層下にボツリヌス毒素が送達される。
【０６１３】
約０．２〜１５ｍＬの液体製剤を保持できる小型の使い捨てリザーバーまたはパッチポンプを皮膚に配置して、小口径針（ｓｍａｌｌ  ｂｏｒｅ  ｎｅｅｄｅｄ）（例えば２６〜３４ゲージ）を用いて連続的に製剤を皮下送達できる。非限定的な例として、このパッチポンプは、３０〜３４ゲージ針を有するばね付き５０ｍｍ×７６ｍｍ×２０ｍｍ（ＢＤ（商標）Ｍｉｃｒｏｉｎｆｕｓｅｒ、ニュージャージー州フランクリンレイクス）、インスリン等の薬剤送達用の２ｍＬリザーバーを有する４１ｍｍ×６２ｍｍ×１７ｍｍ（ＯＭＮＩＰＯＤ（登録商標）、Ｉｎｓｕｌｅｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マサチューセッツ州ベッドフォード）、または０．５〜１０ｍＬリザーバーを有する４３〜６０ｍｍ径、１０ｍｍ厚さ（ＰＡＴＣＨＰＵＭＰ（登録商標）、ＳｔｅａｄｙＭｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、カリフォルニア州サンフランシスコ）であってよい。さらに、パッチポンプは電池式および／または充電式であってよい。
【０６１４】
極低温治療位置に活性薬剤を投与するための凍結探針は、Ｔｏｕｂｉａにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００８０１４００６１号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｔｏｕｂｉａによれば、活性薬剤をチャンバーへと受け取るプローブに複数の針が組み込まれ、このプローブから組織に薬剤が送達される。
【０６１５】
炎症を治療もしくは防止し、または健常な関節を促進する方法が、Ｓｔｏｃｋらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００９０１５５１８６号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｓｔｏｃｋによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置から、シグナル伝達調節因子化合物を含有する組成物が投与される。
【０６１６】
多部位注射システムが、Ｋｉｍｍｅｌｌらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２０１００２５６５９４号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｋｉｍｍｅｌｌによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置から針を通じて角質層に薬剤が送達される。
【０６１７】
インターフェロンを皮内区画に送達する方法が、Ｄｅｋｋｅｒらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００５０１８１０３３号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｄｅｋｋｅｒによれば、露出高さ０〜１ｍｍの出口を有する複数の針が装置に組み込まれ、この装置は、０．３ｍｍ〜２ｍｍの深さに物質を送達することにより薬物動態と生物学的利用能を改善する。
【０６１８】
遺伝子、酵素、および生物剤を組織細胞に送達する方法が、Ｄｅｓａｉにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００３００７３９０８号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｄｅｓａｉによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置が体内に挿入されて、これらの針を通じて薬剤流体が送達される。
【０６１９】
線維芽細胞で不整脈を治療する方法が、Ｌｅｅらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００４０００５２９５号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｌｅｅによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置から組織の局所領域に線維芽細胞が送達される。
【０６２０】
磁気的に制御されたポンプを用いて脳腫瘍を治療する方法が、Ｓｈａｃｈａｒらにより説明されており、例えば米国特許第７，７９９，０１２号（方法）および第７，７９９，０１６号（装置）（参照により、これらの文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｓｈａｃｈａｒによれば、複数の針がポンプに組み込まれ、このポンプから針を通じて制御部位に薬剤が押し出される。
【０６２１】
哺乳類の雌における膀胱の機能障害を治療する方法が、Ｖｅｒｓｉらにより説明されており、例えば米国特許第８，０２９，４９６号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｖｅｒｓｉによれば、規則的に並んだマイクロ針が装置に組み込まれ、この装置から針を通じて治療剤が膀胱三角に直接送達される。
【０６２２】
マイクロ針経皮輸送装置が、Ａｎｇｅｌらにより説明されており、例えば米国特許第７，３６４，５６８号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ａｎｇｅｌによれば、複数の針が装置に組み込まれ、様々な方向から体表に挿入された針を通じて、物質が体表内に運搬される。このマイクロ針経皮輸送装置は、中実、中空のどちらのマイクロ針システムでもよい。非限定的な一例として、中実のマイクロ針システムは、最大容量が０．５ｍｇで、薬剤を塗布した１５０〜７００μｍ高さの中実のマイクロ針を１ｃｍ２あたり３００〜１５００本有し得る。このマイクロ針は角質層を貫通して、短時間（例えば２０秒〜１５分）皮膚に残る。別の例では、中空のマイクロ針システムは最大３ｍＬの容量を有し、約９５０μｍ高さのマイクロ針１ｃｍ２あたり１５〜２０本を用いて液体製剤を送達する。このマイクロ針は皮膚を貫通して、液体製剤を装置から皮膚内に流入させる。この中空マイクロ針システムは、製剤の容積と粘度に応じて１〜３０分間装着してよい。
【０６２３】
皮下注入装置が、Ｄａｌｔｏｎらにより説明されており、例えば米国特許第７，１５０，７２６号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｄａｌｔｏｎによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置から針を通じて皮
下組織に流体が送達される。
【０６２４】
ワクチンおよび遺伝子治療剤をマイクロカニューレで皮内送達する装置および方法が、Ｍｉｋｓｚｔａらにより説明されており、例えば米国特許第７，４７３，２４７号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｍｉｔｓｚｔａによれば、少なくとも１本の中空マイクロ針が装置に組み込まれ、この装置から、対象の皮膚の０．０２５ｍｍ〜２ｍｍの深さにワクチンが送達される。
【０６２５】
インスリンを送達する方法が、Ｐｅｔｔｉｓらにより説明されており、例えば米国特許第７，７２２，５９５号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｐｅｔｔｉｓによれば、装置に組み込まれた２本の針の両方が、本質的に同時に皮膚に挿入される。このとき、第１の針は２．５ｍｍ未満の深さからインスリンを皮内区画に送達し、第２の針は２．５ｍｍ超５．０ｍｍ未満の深さからインスリンを皮下区画に送達する。
【０６２６】
吸引下の皮膚注射送達が、Ｋｏｃｈａｍｂａらにより説明されており、例えば米国特許第６，８９６，６６６号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｋｏｃｈａｍｂａによれば、互いに比較的近接している複数の針が装置に組み込まれ、この装置から皮膚層の下に流体を注射する。
【０６２７】
皮膚を通過して物質を回収または送達する装置が、Ｄｏｗｎらにより説明されており、例えば米国特許第６，６０７，５１３号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｄｏｗｎによれば、長さ約１００ミクロン〜約２０００ミクロン、約３０〜５０ゲージの複数の皮膚貫通部材が装置に組み込まれる。
【０６２８】
皮膚に物質を送達する装置が、Ｐａｌｍｅｒらにより説明されており、例えば米国特許第６，５３７，２４２号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｐａｌｍｅｒによれば、規則的に並んだマイクロ針が装置に組み込まれ、この装置は、伸張アセンブリを用いて針と皮膚の接触を亢進し、より均一な物質送達を提供する。
【０６２９】
局在性薬物送達用の潅流装置が、Ｚａｍｏｙｓｋｉにより説明されており、例えば米国特許第６，４６８，２４７号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｚａｍｏｙｓｋｉによれば、複数の皮下針が装置に組み込まれ、皮下注射器が退縮すると同時に、皮下注射器の内容物が組織に注射される。
【０６３０】
マイクロ針とヒト皮膚間の相互作用を改善することにより、薬剤および生体分子が組織を通過して輸送されるのを亢進する方法が、Ｐｒａｕｓｎｉｔｚらにより説明されており、例えば米国特許第６，７４３，２１１号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｐｒａｕｓｎｉｔｚによれば、マイクロ針の取り付け先表面の剛性を高め変形性を下げることのできる装置に、複数のマイクロ針を組み込む。
【０６３１】
薬剤を器官内投与するための装置が、Ｔｉｎｇらにより説明されており、例えば米国特許第６，０７７，２５１号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｔｉｎｇによれば、投与を亢進するためのサイド開口部を有する複数の針が装置に組み込まれ、これらの針が針チャンバーから伸張、退縮することにより、薬剤がリザーバーから針に排出され、標的器官に注射される。
【０６３２】
複数針のホルダーと皮下マルチチャンネル注入ポートが、Ｂｒｏｗｎにより説明されて
おり、例えば米国特許第４，６９５，２７３号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｂｒｏｗｎによれば、針ホルダーに設けられた複数の針が、注入ポートの隔壁を貫通して挿入され、注入ポート内の隔離チャンバーに通じる。
【０６３３】
デュアル皮下注射器が、Ｈｏｒｎにより説明されており、例えば米国特許第３，５５２，３９４号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｈｏｒｎによれば、スタイルと長さが異なってよい２本の針が６８ｍｍ未満の間隔を空けて装置に組み込まれ、深さの異なる注射を可能にする。
【０６３４】
複数の針と複数の流体コンパートメントを持つ注射器が、Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇにより説明されており、例えば米国特許第３，５７２，３３６号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇによれば、複数の流体コンパートメントを持つ注射器に複数の針が組み込まれ、１つの注射剤へと混合できない複数の不適合性薬剤を同時に投与することができる。
【０６３５】
流体を皮内注射するための手術器具が、Ｅｌｉｓｃｕらにより説明されており、例えば米国特許第２，５８８，６２３号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｅｌｉｓｃｕによれば、複数の針が手術器具に組み込まれ、この器具から流体が皮内に注射されて比較的広く分散する。
【０６３６】
物質を複数の乳管に同時送達するための器具が、Ｈｕｎｇにより説明されており、例えば欧州特許第１８１８０１７号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｈｕｎｇによれば、複数のルーメンが装置に組み込まれ、この装置が管ネットワークの開口部を通って挿入され、流体を管ネットワークに送達する。
【０６３７】
心臓その他の器官の組織に薬剤を導入するためのカテーテルが、Ｔｋｅｂｕｃｈａｖａにより説明されており、例えば国際公開第２００６１３８１０９号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｔｋｅｂｕｃｈａｖａによれば、組み込まれた２本の湾曲針が平らな軌道を描いて器官壁部に入る。
【０６３８】
薬剤を送達するための装置が、Ｍｃｋａｙらにより説明されており、例えば国際公開第２００６１１８８０４号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｍｃｋａｙによれば、各針に複数の開口部が設けられた複数の針が装置に組み込まれ、組織への局所的送達（脊椎円板の内部円板空間等）を促進する。
【０６３９】
免疫調節物質を哺乳動物皮膚の皮内空間に直接送達する方法が、Ｐｅｔｔｉｓにより説明されており、例えば国際公開第２００４０２００１４号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｐｅｔｔｉｓによれば、複数の針が装置に組み込まれ、針を通じて０．３ｍｍ〜２ｍｍの深さに物質が送達される。
【０６４０】
全身吸収および薬物動態の改善のため、皮膚内の少なくとも２つの区画に物質を投与する方法および装置が、Ｐｅｔｔｉｓらにより説明されており、例えば国際公開第２００３０９４９９５号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｐｅｔｔｉｓによれば、約３００μｍ〜約５ｍｍ長さの複数の針が装置に組み込まれ、この装置から皮内および皮下組織の複数の区画に同時に送達される。
【０６４１】
針とローラーを備えた薬剤送達装置が、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎらにより説明されており、例えば国際公開第２０１２００６２５９号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｚｉｍｍｅｒｍａｎによれば、ローラー内に配置さ
れた複数の中空針が装置に組み込まれ、ローラーの回転と当時にリザーバーの内容物が針を通って送達される。
【０６４２】
ステント等の薬剤送達装置は当技術分野で公知であり、例えば米国特許出願公開第２００６００２０３２９号、第２００４０１７２１２７号、および第２０１００１６１０３２号（参照により、これらの文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。本明細書に記載の修飾核酸分子およびｍｍＲＮＡの製剤は、ステントを用いて送達してよい。加えて、本明細書で使用するステントは、複数の修飾核酸分子および／または製剤を、同時または様々な送達速度で送達することが可能であり得る。ステント製造者の非限定的な例として、ＣＯＲＤＩＳ（登録商標）（フロリダ州マイアミ）（ＣＹＰＨＥＲ（登録商標））、Ｂｏｓｔｏｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社（マサチューセッツ州ネイティック）（ＴＡＸＵＳ（登録商標））、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ（ミネソタ州ミネアポリス）（ＥＮＤＥＡＶＯＵＲ（登録商標））、およびＡｂｂｏｔｔ（イリノイ州アボットパーク）（ＸＩＥＮＣＥ  Ｖ（登録商標））が挙げられる。
【０６４３】
器官、組織および／またはそれらの一部分のエックスビボの系を記述した方法およびデバイスは当技術分野で既知であり、Ｉｎｇｂｅｒらに記述され、たとえば国際公開第２０１２１６６９０３号に教示されており、その全容が参照により本明細書に組み込まれる。Ｉｎｇｂｅｒによると、１つの実施形態では、組織は、細胞でコロニー化したい対象にデバイスを埋め込み、埋め込みデバイスとデバイス内の組織を摘出し、組織に潅流液を供給することで、エックスビボで維持され得る。別の実施形態では、対象から摘出された組織は第２の対象に移植され得る。
【０６４４】
カテーテルおよび／またはルーメンを利用した方法および装置
カテーテルおよびルーメンを用いた方法および装置を使用して、本発明のｍｍＲＮＡを単回投与、多回投与、または分割投与スケジュールで投与してよい。このような方法および装置について、以下に記載する。
【０６４５】
損傷した心筋層へのカテーテルを用いた骨格筋芽細胞の送達が、Ｊａｃｏｂｙらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００６０２６３３３８号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｊａｃｏｂｙによれば、複数の針が装置に組み込まれ、装置の少なくとも一部分が血管に挿入されて、針を通じて対象の心臓の局所領域に細胞組成物が送達される。
【０６４６】
神経毒を用いて喘息を治療するための器具が、Ｄｅｅｍらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００６０２２５７４２号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｄｅｅｍによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置から針を通じて神経毒が気管支組織に送達される。
【０６４７】
多重成分治療剤を投与する方法が、Ｎａｙａｋにより説明されており、例えば米国特許第７，６９９，８０３号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｎａｙａｋによれば、複数の注射カニューレを装置に組み込んでよく、この装置に、治療剤が送達される組織の送達深さを制御するための深さスロットを含めてよい。
【０６４８】
チャンネルを除去して少なくとも１つの治療剤を所望の組織領域に送達するための外科装置が、ＭｃＩｎｔｙｒｅらにより説明されており、例えば米国特許第８，０１２，０９６号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。ＭｃＩｎｔｙｒｅによれば、複数の針が装置に組み込まれ、チャンネルを囲む組織領域に治療剤が分配される。この装置は、特に経心筋的血行再建術によく適している。
【０６４９】
哺乳類の雌における膀胱の機能障害を治療する方法が、Ｖｅｒｓｉらにより説明されており、例えば米国特許第８，０２９，４９６号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｖｅｒｓｉによれば、規則的に並んだマイクロ針が装置に組み込まれ、この装置から針を通じて治療剤が膀胱三角に直接送達される。
【０６５０】
可撓性の生体関門に流体を送達する装置および方法が、Ｙｅｓｈｕｒｕｎらにより説明されており、例えば米国特許第７，９９８，１１９号（装置）および第８，００７，４６６号（方法）（参照により、これらの文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｙｅｓｈｕｒｕｎによれば、装置に設けられたマイクロ針が可撓性生体関門を貫通して伸長し、中空マイクロ針の穴を通じて流体が注射される。
【０６５１】
心外膜面を有する心臓の組織領域に物質を心外膜注射し体幹内に配置する方法が、Ｂｏｎｎｅｒらにより説明されており、例えば米国特許第７，６２８，７８０号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｂｏｎｎｅｒによれば、装置には細長いシャフトと末端の注射ヘッドが設けられ、これにより、針を組織内へと動かし、針を通じて組織に薬剤を注射する。
【０６５２】
穿刺を塞ぐ装置が、Ｎｉｅｌｓｅｎらにより説明されており、例えば米国特許第７，９７２，３５８号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｎｉｅｌｓｅｎによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置から穿刺路周辺組織に閉鎖剤が送達される。
【０６５３】
筋形成および血管形成の方法が、Ｃｈｉｕらにより説明されており、例えば米国特許第６，５５１，３３８号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｃｈｉｕによれば、少なくとも１．２５ｍｍの最大直径と、６〜２０ｍｍの穿刺深さを提供できる有効長さを有する５〜１５本の針を装置に組み込み、この装置を心筋近くに挿入する。この装置から、これらの針の少なくとも一部分にある導管を通じて、外来性の血管新生因子または筋原性因子を心筋に供給する。
【０６５４】
前立腺組織の治療方法が、Ｂｏｌｍｓｊらにより説明されており、例えば米国特許第６，５２４，２７０号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｂｏｌｍｓｊによれば、装置は、尿道に挿入されるカテーテルを含み、少なくとも１つの中空先端部を有し、この先端部は周辺の前立腺組織内に伸長可能である。この先端部を通じて、収斂薬と鎮痛剤が前立腺組織に投与される。
【０６５５】
骨内部位に流体を注入する方法が、Ｆｉｎｄｌａｙらにより説明されており、例えば米国特許第６，７６１，７２６号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｆｉｎｄｌａｙによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置は、軟質材層で覆われた硬い殻の物質を貫通でき、この硬い殻の物質より下の所定距離の位置に流体を送達する。
【０６５６】
薬剤を血管壁に注射する装置が、Ｖｉｇｉｌらにより説明されており、例えば米国特許第５，７１３，８６３号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｖｉｇｉｌによれば、装置内の各屈曲性チューブに複数の注射器が取り付けられ、この注射器から薬物流体がマルチルーメンカテーテルを通じて屈曲性チューブに導入され、注射器から血管壁に注入される。
【０６５７】
身体通路周辺の組織に治療剤および／または診断剤を送達するカテーテルが、Ｆａｘｏｎらにより説明されており、例えば米国特許第５，４６４，３９５号（参照により、この
文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｆａｘｏｎによれば、少なくとも１本のニードルカニューレがカテーテルに組み込まれ、カテーテルから外に突き出る針を通じて、所望の薬剤が組織に送達される。
【０６５８】
治療剤を送達するためのバルーンカテーテルが、Ｏｒｒらにより説明されており、例えば国際公開第２０１００２４８７１号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｏｒｒによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置から組織内の様々な深さに治療剤が送達される。別の一態様では、薬剤溶出バルーンを用いて本明細書に記載の薬剤を送達してよい。薬剤溶出バルーンは標的病変適用において使用してよい。その例として、ステント内再狭窄、蛇行血管内病変、分岐部病変、大腿／膝窩病変、および膝より下の病変の治療が挙げられるが、これらに限定されない。
【０６５９】
管腔付近に配置された組織に治療剤（例えば、修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡ）を送達する装置が、Ｐｅｒｒｙらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２０１００１２５２３９号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｐｅｒｒｙによれば、カテーテルに設けられるバルーンは、当技術分野で公知の治療剤またはＰｅｒｒｙに記載の治療剤が塗布されていてよい。バルーンが膨張すると、治療剤が周辺組織に接触する。さらに、バルーンに施されたコーティングの温度を変えて組織に治療剤を放出する目的で、この装置は熱源を有していてもよい。
【０６６０】
電流を利用した方法および装置
電流を利用した方法および装置を使用して、本発明のｍｍＲＮＡを、本明細書で教示される単回投与、多回投与、または分割投与計画に従って投与してよい。このような方法および装置について、以下に記載する。
【０６６１】
電気コラーゲン導入治療装置が、Ｍａｒｑｕｅｚにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００９０１３７９４５号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｍａｒｑｕｅｚによれば、複数の針が装置に組み込まれ、これらの針が皮膚を繰り返し突き刺し、先に皮膚に塗布された物質の一部分を皮膚内に導入する。
【０６６２】
動電システムが、Ｅｔｈｅｒｅｄｇｅらにより説明されており、例えば米国特許出願公開第２００７０１８５４３２号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｅｔｈｅｒｅｄｇｅによれば、いくつかのマイクロ針が装置に組み込まれ、この装置は、電流により針を通じて薬剤を標的治療部位に送り込む。
【０６６３】
イオン導入装置が、Ｍａｔｓｕｍｕｒａらにより説明されており、例えば米国特許第７，４３７，１８９号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｍａｔｓｕｍｕｒａによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置は、イオン化可能な薬剤を比較的高速または高効率に生体に送達することができる。
【０６６４】
無針注射および電気穿孔法による生物活性薬剤の皮内送達が、Ｈｏｆｆｍａｎｎらにより説明されており、例えば米国特許第７，１７１，２６４号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｈｏｆｆｍａｎｎによれば、１つ以上の無針注射器が電気穿孔装置に組み込まれ、無針注射と電気穿孔法の組み合わせで十分に皮膚内、筋肉内、または粘膜内の細胞に薬剤を導入することができる。
【０６６５】
電気透過処理が介在する細胞内送達の方法が、Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔらにより説明されており、例えば米国特許第６，６２５，４８６号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔによれば、一対の針電極を
カテーテルに組み込む。このカテーテルを体管腔内に配置した後、針電極を伸長させ、体管腔周辺の組織内に貫入させる。次に、この装置は、上記針電極の少なくとも一方を通じて薬剤を導入し、上記一対の針電極により電場をかける。これにより、薬剤が細胞膜を通過して治療部位の細胞に到達できる。
【０６６６】
経皮免疫化のための送達システムが、Ｌｅｖｉｎらにより説明されており、例えば国際公開第２００６００３６５９号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｌｅｖｉｎによれば、複数の電極が装置に組み込まれ、この装置が電極間に電気エネルギーをかける。これにより、皮膚内にマイクロチャンネルが生成され、経皮送達が促進される。
【０６６７】
ＲＦエネルギーを皮膚内に送達する方法が、Ｓｃｈｏｍａｃｋｅｒにより説明されており、例えば国際公開第２０１１１６３２６４号（参照により、この文献の内容全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｓｃｈｏｍａｃｋｅｒによれば、複数の針が装置に組み込まれ、この装置は、真空を施すことにより皮膚を引き込んでプレートと接触させる。これにより、プレートに設けられた穴を通って針が皮膚内に挿入され、ＲＦエネルギーが送達される。
【０６６８】
電気穿孔が、核酸を含む細胞、粒子または小胞をロードするのに使用され得る。フロー電気穿孔は、電場に供された懸濁液の流れを使用する。
フロー電気穿孔デバイス、方法および電気穿孔処理がＤｚｅｋｕｎｏｖらに記述されており、例えば米国特許第７，０２９，９１６号、同第７，７７１，９８４号、同第７１４１４２５号、国際公開第２００３０１８７５１号、同第２００５１１３８２０号、米国特許出願第２０１１００６５１７１号に教示され；Ｈｏｌａｄａｙらに記述されており、たとえば米国特許第６，７７３，６６９号、米国特許出願第２００５００１９３１１号に教示され；Ｍｅｓｅｒｏｌらに記述されており、たとえば米国特許第６，０７４，６０５号および同第５，７２０，９２１号に教示されており、それらの全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる。Ｄｚｅｋｕｎｏｖ、ＨｏｌａｄａｙおよびＭｅｓｅｒｏｌによると、電極を含むチャンバが試料（たとえば細胞や組織）の電気穿孔に使用され得る。その全容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願第２００８０１３８８７７号では、Ｄｚｅｋｕｎｏｖは、試料（たとえば電気穿孔される細胞の懸濁液）を含み得る電気穿孔チャンバを記述している。その全容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００７０２１９９３号のＤｚｅｋｕｎｏｖによると、電極は最適な電場を得るために異なる場所（たとえばらせん形状）に配置され得る。非限定的な例として、フロー電気穿孔デバイスが感染性ベクターの産生に使用され得る（たとえばその全容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，１８６，５５９号を参照）。
【０６６９】
電気穿孔を最適化する方法がＤｚｅｋｕｎｏｖにより記述され、たとえば国際公開第２０１０００９２５２号および米国特許出願第２０１２００８８８４２号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｄｚｅｋｕｎｏｖによると、電気パルスを他の電気穿孔パラメータとともに使用して電気穿孔媒体の導電性を高める。
【０６７０】
電気穿孔の流れの方法がＤｚｅｋｕｎｏｖらにより記述され、たとえば国際公開第２００４０３１３５３号および米国特許出願第２００４０１１５７８４号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｄｚｅｋｕｎｏｖによると、電気穿孔は、試料を電場ラインの間または大きさが実質的に一定の電場で変位させることで達成され得る。
【０６７１】
電気穿孔を用いて抗原を細胞にロードする方法がＬｉｕらにより記述され、たとえば米
国特許出願第２００４０２１４３３３号、同第２００６０１３４０６７号、国際公開第２００４０７４４５１号および同第２００７０２８０４１号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に教示されている。さらに、Ｌｉｕらは、国際公開第２００６０６３３０１号と米国特許出願第２００６１６５６６８号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に、電気穿孔を用いて癌細胞に遺伝子導入する方法も記述している。
【０６７２】
電気穿孔を用いて一時的に細胞を修飾する方法がＬｉらにより記述され、たとえば国際公開第２００９１２６７８９号および米国特許出願第２００９０２５７９９１号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に教示されている。
【０６７３】
電気穿孔中に電極を遮蔽する装置と方法がＬｉらにより記述され、たとえば国際公開第２００７０２１９９４号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｌｉによると、導電性の水透過性バリアなどのバリアを電極に対し機能的関係で使用してよい。
【０６７４】
コンピューター化された電気穿孔デバイスと方法がＤｚｅｋｕｎｏｖらにより記述され、たとえば国際公開第２００６０６０４０９号および米国特許第７，９９１，５５９号（その全容が参照によりそれぞれ本明細書に組み込まれる）に教示されている。Ｄｚｅｋｕｎｏｖによると、電気穿孔デバイスは、ユーザー指定のプロセシング制御のコンピューターで制御されるフロー電気穿孔デバイスであり得る。
【０６７５】
定義
本明細書の様々な箇所で、本発明の化合物の置換基が、群で、または範囲で開示されている。本開示は、そのような群および範囲の構成要素の個々の別の組み合わせの１つ１つを含むことが具体的に意図されている。たとえば、「Ｃ１−６アルキル」という用語は、メチル、エチル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキルおよびＣ６アルキルが個々に開示されることが具体的に意図される。
約：本明細書で使用する「約」という用語は、列挙された値の±１０％を意味する。
組み合わせて投与される：本明細書で使用する「組み合わせて投与される」または「併用投与」という用語は、２つ以上の剤（たとえば、本明細書に記述される抗微生物ポリペプチド等の抗微生物ポリペプチド（たとえば、抗細菌ポリペプチド）をコードする修飾核酸またはｍｍＲＮＡ、および抗微生物剤（たとえば、抗微生物ポリペプチドまたは本明細書に記述される小分子抗微生物化合物等））を、対象に同時に投与するか、または、患者に各剤の効果が重複しうるような間隔以内で投与することを意味する。いくつかの実施態様において、それらはお互いに約６０、３０、１５、１０、５または１分以内に投与される。いくつかの実施態様において、剤の投与は、組み合わせ効果（例えば相乗効果）が得るのに十分に近い間隔を互いに置く。
動物：本明細書で使用する「動物」という用語は、動物界の任意の構成員を指す。いくつかの実施形態において、「動物」とは、任意の発達段階にあるヒトを指す。いくつかの実施形態において、「動物」とは、任意の発達段階にある非ヒト動物を指す。ある特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳類（たとえば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類またはブタ等）である。いくつかの実施形態において、動物とは、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類および昆虫を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、動物は、遺伝子操作された動物であるトランスジェニック動物、またはクローンである。
対象抗原または所望の抗原：本明細書で使用する「対象の抗原」または「所望の抗原」という用語には、抗体および断片、突然変異体、変異体および本明細書に記述されるそれらの改変物に免疫特異的に結合される、本明細書に提示されるタンパク質および他の生体分子を含む。対象抗原の例としては、インスリン、インスリン様成長因子、ｈＧＨ、ｔＰＡ
、サイトカイン類（たとえば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８等のインターロイキン類（ＩＬ）、インターフェロン（ＩＦＮ）α、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮωまたはＩＦＮτ、ＴＮＦαおよびＴＮＦβ、ＴＮＦγ、ＴＲＡＩＬ等の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）；Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１およびＶＥＧＦ等）が挙げられるが、これらに限定されない。
およそ：本明細書で使用する対象の１つ以上の値へ適用させた「およそ」または「約」という用語は、規定された参照値に類似である値を指す。ある特定の実施形態において、「およそ」または「約」という用語は、他で定義または他で文脈上明らかでない限りは、規定された参照値いずれかの方向（大きいか、小さいか）で、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％または１％未満以内にある値の範囲を指す（そのような数値が可能値の１００％を超える場合を除く）。
関連する：本明細書で使用する「関連する」「結合される」「結び付けられる」「付着される」および「繋がれる」という用語は、２つ以上の部分に対して用いられる場合、その部分が物理的に他方と、直接的に関連もしくは結合し、または、結合剤として機能する１つ以上の追加の部分を介して関連もしくは結合し、十分に安定な構造を形成し、その構造が用いられる条件下（たとえば、生理学的条件下）で、物理的にそれら部分が関連したままでいることを意味する。「関連」は、必ずしも直接的な共有化学結合を厳密に介する必要性はない。また、「関連した」実体が物理的に関連したままの状態であるように、十分に安定な結合性に基づいたイオン結合または水素結合またはハイブリダイゼーションを意味してもよい。
二機能性：本明細書で使用する「二機能性」という用語は、少なくとも２つの機能を有する、または維持している任意の物質、分子または部分を指す。その機能は、同じ結果をもたらすものでも、異なる結果をもたらすものであってもよい。機能を生み出す構造は、同じであっても異なっていてもよい。たとえば、本発明の二機能性に修飾されたＲＮＡは、細胞毒性のペプチドをコードし（第一の機能）、一方で、コードＲＮＡを含有するそれらヌクレオチドは、それ自体で細胞毒性である（第二の機能）。この例において、二機能性に修飾されたＲＮＡの癌細胞への送達は、癌を改善もしくは治療しうるペプチドまたはタンパク質を生み出すだけでなく、ヌクレオチドの細胞毒性ペイロードを運搬し、修飾ＲＮＡの翻訳が無くとも、その細胞の分解は必ず発生する。
生体適合性：本明細書で使用する「生体適合性」という用語は、損傷、毒性または免疫システムによる拒絶をほとんどもたらさずに、または全くもたらさずに、生細胞、組織、器官またはシステムと適合可能であることを意味する。
生分解性：本明細書で使用する「生分解性」という用語は、生物の作用により、無害な産物に分解されることができることを意味する。
【０６７６】
生物活性のある：本明細書で使用する「生物活性のある」という文言は、生物学的システムおよび／または生命体の中で、活性を有する任意の物質の特性を指す。たとえば、生命体に投与された際に、その生命体に生物学的な影響を与える物質は、生物活性があるとみなされる。特定の実施態様において、本発明の核酸分子は、核酸分子の部分の一部分に生物活性があれば、または生物学的に関連があるとみなされている活性を模倣すれば、生物活性があるとみなされうる。
化学的用語：以下に、「アシル」〜「チオール」までの様々な化学用語の定義を提示する。
本明細書で使用する「アシル」という用語は、本明細書に定義されるカルボニル基を介して、元の分子群に付着する、本明細書に定義される水素またはアルキル基（たとえば、ハロアルキル基）を表し、ホルミル（すなわち、カルボキシアルデヒド基）、アセチル、プロピニル、ブタノイル等に例示される。例となる非置換アシル基は、１〜７炭素、１〜１
１炭素または１〜２１炭素を含む。いくつかの実施形態において、アルキル基はさらに、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基で置換される。
【０６７７】
本明細書で使用する「アシルアミノ」という用語は、本明細書に定義されるアミノ基を介して元の分子群に付着される（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）−Ｃ（Ｏ）−Ｒであり、ここで、ＲはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−６、Ｃ１−１０またはＣ１−２０アルキル基であり、ＲＮ１は本明細書に定義される）、本明細書に定義されるアシル基を表す。例となる非置換アシルアミノ基は、１〜４１炭素（たとえば、１〜７、１〜１３、１〜２１、２〜７、２〜１３、２〜２１または２〜４１炭素）を含む。いくつかの実施形態において、アルキル基はさらに、本明細書に記述されるように１、２、３または４の置換基で置換され、および／または、アミノ基は、−ＮＨ２または−ＮＨＲＮ１であり、ここで、ＲＮ１は、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキルまたはアリールであり、各ＲＮ２はＨ、アルキルまたはアリールであってもよい。
【０６７８】
本明細書で使用する「アシルオキシ」という用語は、酸素原子を介して元の分子群に付着される（すなわち、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒであり、ＲはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−６、Ｃ１−１０またはＣ１−２０アルキル基である）、本明細書に定義されるアシル基を表す。例となる非置換アシルオキシ基は、１〜２１炭素（たとえば、１〜７または１〜１１炭素）を含む。いくつかの実施形態において、アルキル基はさらに、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基で置換され、および／またはアミノ基は、−ＮＨ２または−ＮＨＲＮ１であり、ここで、ＲＮ１は、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキルまたはアリールであり、各ＲＮ２はＨ、アルキルまたはアリールであってもよい。
【０６７９】
本明細書で使用する「アルカリル」という用語は、本明細書に定義されるアルキレン基を介して元の分子群に付着される、本明細書に定義されるアリール基を表す。例となる非置換アルカリル基は、７〜３０炭素（たとえば、７〜１６または７〜２０炭素であり、たとえば、Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、Ｃ１−１０アルク−Ｃ６−１０アリール、またはＣ１−２０アルク−Ｃ６−１０アリール）である。いくつかの実施形態において、アルキレンおよびアリールはそれぞれ、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基で、各基がさらに置換されてもよい。接頭辞「アルク−（ａｌｋ−）」が先行する他の基も同様に定義され、「アルク」は、他で言及されない限り、Ｃ１−６アルキレンを指し、付着される化学構造は、本明細書に定義される。
【０６８０】
「アルクシクロアルキル」という用語は、本明細書に定義されるアルキレン基（たとえば、１〜４炭素、１〜６炭素、１〜１０炭素または１〜２０炭素のアルキレン基）を介して元の分子群に付着される、本明細書に定義されるシクロアルキル基を表す。いくつかの実施形態において、アルキレンおよびシクロアルキルはそれぞれ、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基で、各基がさらに置換されてもよい。
【０６８１】
本明細書で使用する「アルケニル」という用語は、他で特定されない限り、１つ以上の炭素−炭素二重結合を含有する２〜２０炭素（たとえば、２〜６炭素または２〜１０炭素）の一価直鎖基または一価分枝鎖基を表し、エチニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル等に例示される。アルケニル類は、シス異性体およびトランス異性体の両方を含む。アルケニル基は、本明細書に定義されるアミノ、アリール、シクロアルキルまたはヘテロシクリル（たとえば、ヘテロアリール）から独立して選択される置換基、または、本明細書に記述される例となるアルキル置換基の任意のものの１、２、３または４つと任意選択的に置換されてもよい。
【０６８２】
「アルケニルオキシ」という用語は、他で特定されない限り、式−ＯＲ（Ｒは、Ｃ２−２０アルケニル基（たとえば、Ｃ２−６またはＣ２−１０アルケニル）である）の化学置換基を表す。例となるアルケニルオキシ基は、エテニルオキシ、プロペニルオキシ等を含む。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基（たとえば、ヒドロキシ基等）でさらに置換されてもよい。
【０６８３】
「アルクヘテロアリール」という用語は、本明細書に定義されるアルキレン基を介して元の分子群に付着される、本明細書に定義されるヘテロアリール基を指す。例となる非置換アルクヘテロアリール基は、２〜３２炭素（たとえば、２〜２２炭素、２〜１８炭素、２〜１７炭素、２〜１６炭素、３〜１５炭素、２〜１４炭素、２〜１３炭素または２〜１２炭素であり、たとえば、Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロアリール、Ｃ１−１０アルク−Ｃ１−１２ヘテロアリール、またはＣ１−２０アルク−Ｃ１−１２ヘテロアリール）である。いくつかの実施形態において、アルキレンおよびヘテロアリールはそれぞれ、本明細書に各基に対して定義されるように、１、２、３または４の置換基で、さらに置換されてもよい。アルクヘテロアリール基は、アルクヘテロシクリル基のサブセットである。
【０６８４】
「アルクヘテロシクリル」という用語は、本明細書に定義されるアルキレン基を介して元の分子群に付着される、本明細書に定義されるヘテロシクリル基を表す。例となる非置換アルクヘテロシクリル基は、２〜３２炭素（たとえば、２〜２２炭素、２〜１８炭素、２〜１７炭素、２〜１６炭素、３〜１５炭素、２〜１４炭素、２〜１３炭素または２〜１２炭素であり、たとえば、Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル、Ｃ１−１０アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル、またはＣ１−２０アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル）である。いくつかの実施形態において、アルキレンおよびヘテロシクリルはそれぞれ、本明細書に各基に対して定義されるように、１、２、３または４の置換基で、さらに置換されてもよい。
【０６８５】
「アルコキシ」という用語は、式−ＯＲの化学置換基を表し、他で特定されない限り、Ｒは、Ｃ１−２０アルキル基（たとえば、Ｃ１−６またはＣ１−１０アルキル）である。例となるアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（たとえば、ｎ−プロポキシおよびイソプロポキシ等）、ｔ−ブトキシ等が挙げられる。いくつかの実施形態において、アルキル基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基（たとえば、ヒドロキシまたはアルコキシ）でさらに置換されてもよい。
【０６８６】
「アルコキシアルコキシ」という用語は、アルコキシ基で置換されたアルコキシ基を表す。例となる非置換アルコキシアルコキシ基は、２〜４０炭素（たとえば、２〜１２炭素または２〜２０炭素であり、たとえば、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−１０アルコキシ−Ｃ１−１０アルコキシ、またはＣ１−２０アルコキシ−Ｃ１−２０アルコキシ）を含む。いくつかの実施形態において、各アルコキシ基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されてもよい。
【０６８７】
「アルコキシルキル」という用語は、アルコキシ基で置換されたアルキル基を表す。例となる非置換アルコキシアルキル基は、２〜４０炭素（たとえば、２〜１２炭素または２〜２０炭素であり、たとえば、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ−Ｃ１−１０アルキル、またはＣ１−２０アルコキシ−Ｃ１−２０アルキル）を含む。いくつかの実施形態において、アルキルおよびアルコキシはそれぞれ、本明細書に各基に対して定義されるように、１、２、３または４の置換基で、さらに置換されてもよい。
【０６８８】
本明細書で使用する「アルコキシカルボニル」という用語は、カルボニル原子（たとえば、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲであり、ここで、Ｒは、Ｈまたは任意選択的に置換されたＣ１−６
、Ｃ１−１０またはＣ１−２０アルキル基である）を介して元の分子群に付着される、本明細書に定義されるアルコキシを表す。例となる非置換アルコキシカルボニルは、１〜２１炭素（たとえば、１〜１１炭素または１〜７炭素）を含む。いくつかの実施形態において、アルコキシ基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換される。
【０６８９】
本明細書で使用する「アルコキシカルボニルアルコキシ」という用語は、本明細書に定義されるアルコキシカルボニル基（たとえば、−Ｏ−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲであり、ここで、Ｒは、任意選択的に置換されたＣ１−６、Ｃ１−１０またはＣ１−２０アルキル基である）で置換される、本明細書に定義されるアルコキシ基を表す。例となる非置換アルコキシカルボニルアルコキシは、３〜４１炭素（たとえば、３〜１０炭素、３〜１３炭素、３〜１７炭素、３〜２１炭素、３〜３１炭素であり、たとえば、Ｃ１−６アルコキシカルボニル−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−１０アルコキシカルボニル−Ｃ１−１０アルコキシまたは、Ｃ１−２０アルコキシカルボニル−Ｃ１−２０アルコキシ等）を含む。いくつかの実施形態において、各アルコキシ基は、独立して、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基（たとえば、ヒドロキシ基）でさらに置換される。
【０６９０】
本明細書で使用する「アルコキシカルボニルアルキル」という用語は、本明細書に定義されるアルコキシカルボニル基（たとえば、−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲであり、ここで、Ｒは、任意選択的に、置換されたＣ１−２０、Ｃ１−１０またはＣ１−６アルキル基である）で置換される、本明細書に定義されるアルキル基を表す。例となる非置換アルコキシカルボニルアルキルは、３〜４１炭素（たとえば、３〜１０炭素、３〜１３炭素、３〜１７炭素、３〜２１炭素、３〜３１炭素であり、たとえば、Ｃ１−６アルコキシカルボニル−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−１０アルコキシカルボニル−Ｃ１−１０アルキルまたは、Ｃ１−２０アルコキシカルボニル−Ｃ１−２０アルキル等）を含む。いくつかの実施形態において、各アルキル基およびアルコキシ基は、独立して、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基（たとえば、ヒドロキシ基）でさらに置換される。
【０６９１】
本明細書で使用する「アルキル」という用語は、他で特定されない限り、１〜２０炭素（たとえば、１〜１０炭素または１〜６炭素）の直鎖飽和基および分枝飽和基の両方を含む。アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル等により例示され、任意選択的に、１、２、３、または２炭素以上のアルキル基の場合には、４の置換基で、置換されてもよく、当該置換基は、独立して、（１）Ｃ１−６アルコキシ；（２）Ｃ１−６アルキルスルフィニル；（３）本明細書に定義されるアミノ（たとえば、非置換アミノ（すなわち、−ＮＨ２）または置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２）であり、ここで、ＲＮ１は、アミノで定義されている）；（４）Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−６アルコキシ；（５）アジド；（６）ハロ；（７）（Ｃ２−９ヘテロシクリル）オキシ；（８）ヒドロキシ；（９）ニトロ；（１０）オキソ（たとえば、カルボキシアルデヒドまたはアシル）；（１１）Ｃ１−７スピロシクリル；（１２）チオアルコキシ；（１３）チオール；（１４）−ＣＯ２ＲＡ´であり、ＲＡ´は、（ａ）Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル）、（ｂ）Ｃ２−２０アルケニル（たとえば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）で、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、Ｒ´は、ＨまたはＣ１−２０アルキル、（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）であり、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立
して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、各ＲＮ１は、独立して、水素または任意選択的に置換されたＣ１−６アルキル、からなる群から選択される；（１５）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＢ’ＲＣ’であり、ＲＢ´およびＲＣ´のそれぞれは、独立して、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリールおよび（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から選択される；（１６）−ＳＯ２ＲＤ´であり、ＲＤ´は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）ヒドロキシ、からなる群から選択される；（１７）−ＳＯ２ＮＲＥ´ＲＦ´であり、ＲＥ´およびＲＦ´のそれぞれは、独立して、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリールおよび（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から選択される；（１８）−Ｃ（Ｏ）ＲＧ´であり、ここで、ＲＧ´は、（ａ）Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル）、（ｂ）Ｃ２−２０アルケニル（たとえば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）で、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、Ｒ´は、ＨまたはＣ１−２０アルキル、（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）であり、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、各ＲＮ１は、独立して、水素または任意選択的に置換Ｃ１−６アルキル、からなる群から選択される；（１９）−ＮＲＨ’Ｃ（Ｏ）ＲＩ’であり、ここで、ＲＨ´は、（ａ１）水素および（ｂ１）Ｃ１−６アルキルからなる群から選択され、ＲＩ´は、（ａ２）Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２−２０アルケニル（たとえば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６−１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ここで、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）で、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、Ｒ´は、ＨまたはＣ１−２０アルキル）、（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）であり、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４��０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、各ＲＮ１は、独立して、水素または任意選択的に置換されたＣ１−６アルキル、からなる群から選択される；（２０）ＮＲＪ´Ｃ（Ｏ）ＯＲＫ´であり、ここで、ＲＪ´は、（ａ１）水素および（ｂ１）Ｃ１−６アルキルからなる群から選択され、ＲＫ´は、（ａ２）Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２−２０アルケニル（たとえば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６−１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ここで、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）で、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、Ｒ´は、ＨまたはＣ１−２０アルキル）、（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）であり、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、各ＲＮ１は、独立して、水素または任意選択的に置換Ｃ１−６アルキル、からなる群から選択される；および、（２１
）アミジン、からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、これらの基のそれぞれは、本明細書に記述されるようにさらに置換されてもよい。たとえば、Ｃ１−アルカリルのアルキレン基は、オキソ基でさらに置換され、各アリーロイル（ａｒｙｌｏｙｌ）置換基を放出してもよい。
【０６９２】
本明細書で使用する「アルキレン」および接頭辞「アルク−」という用語は、２つの水素原子を除去することにより、直鎖飽和炭化水素または分枝鎖飽和炭化水素から得られる飽和二価炭化水素基を表し、メチレン、エチレン、イソプロピレン等に代表される。「Ｃｘ−ｙアルキレン」および接頭辞「Ｃｘ−ｙアルク−」という用語は、ｘ〜ｙの炭素を有するアルキレン基を表す。ｘ値の例としては、１、２、３、４、５および６であり、ｙ値の例としては、２、３、４、５、６、７、８、９，１０、１２、１４、１６、１８または２０（たとえば、Ｃ１−６、Ｃ１−１０、Ｃ２−２０、Ｃ２−６、Ｃ２−１０、またはＣ２−２０アルキレン）である。いくつかの実施形態において、アルキレンは、本明細書でアルキル基に対して定義されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されてもよい。
【０６９３】
本明細書で使用する「アルキルスルフィニル」という用語は、−Ｓ（Ｏ）−基を介して元の分子群に付着されるアルキル基を表す。例となる非置換アルキルスルフィニル基は、１〜６炭素、１〜１０炭素、または１〜２０炭素である。いくつかの実施形態において、アルキル基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されてもよい。
【０６９４】
本明細書で使用する「アルキルスルフィニルアルキル」という用語は、アルキルスルフィニル基により置換される、本明細書に定義されるアルキル基を表す。例となる非置換アルキルスルフィニルアルキル基は、２〜１２炭素、２〜２０炭素または、２〜４０炭素である。いくつかの実施形態において、各アルキル基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されてもよい。
【０６９５】
本明細書で使用する「アルキニル」という用語は、炭素−炭素三重結合を含有する、２〜２０炭素原子（たとえば、２〜４炭素、２〜６炭素または２〜１０炭素）の一価直鎖基または一価分枝鎖基を表し、エチニル、１−プロピニル等に代表される。アルキニル基は、独立して、本明細書に定義されるアリール、シクロアルキルもしくはヘテロシクリル（たとえばヘテロアリール）、または本明細書に記述される任意の例となるアルキル置換基から選択される１、２、３または４の置換基で任意選択的に置換されてもよい。
【０６９６】
「アルキニルオキシ」という用語は、式−ＯＲの化学置換基を表し、他で特定されない限り、Ｒは、Ｃ２−２０アルキニル基（たとえば、Ｃ２−６またはＣ２−１０アルキニル）である。例となるアルキニルオキシ基は、エチニルオキシ、プロピニルオキシ等を含む。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基（たとえば、ヒドロキシ基）でさらに置換されてもよい。
【０６９７】
本明細書で使用する「アミジン」という用語は、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２基を表す。
本明細書で使用する「アミノ」という用語は、−Ｎ（ＲＮ１）２を表し、ここで、各ＲＮ１は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＮＯ２、Ｎ（ＲＮ２）２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、Ｎ−保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アルカリル、シクロアルキル、アルクシクロアルキル、カルボキシアルキル、スルホアルキル、ヘテロシクリル（たとえば、ヘテロアリール）、またはアルクヘテロシクリル（たとえば、アルクヘテロアリール）であり、ここで、これら列挙されたＲＮ１基のそれぞれは、本明細書に定義されるように、各基を任意選択的に置換してもよく；または、２つのＲＮ１を結合させ、ヘテロシクリルまたはＮ−保護基を形成してもよく、および、各Ｒ
Ｎ２は、独立して、Ｈ、アルキルまたはアリールである。本発明のアミノ基は、非置換アミノ（すなわち、−ＮＨ２）または置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２）であってもよい。好ましい態様としては、アミノは、−ＮＨ２または、−ＮＨＲＮ１であり、ＲＮ１は、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキル、カルボキシアルキル、スルホアルキルまたはアリールであり、各ＲＮ２は、Ｈ、Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル）またはＣ６−１０アリールであってもよい。
【０６９８】
本明細書で使用する「アミノ酸」という用語は、側鎖、アミノ基および酸性基（たとえば、−ＣＯ２Ｈのカルボキシ基または−ＳＯ３Ｈのスルホ基）を有する分子を指し、ここで当該アミノ酸は側鎖、アミノ基、または酸性基（たとえば、側鎖）により元の分子群に付着される。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、カルボニル基により元の分子群に付着され、ここで、側鎖またはアミノ基は、カルボニル基に付着される。側鎖の例としては、任意選択的に置換されたアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルカリル、アルクヘテロシクリル、アミノアルキル、カルバモイルアルキルおよびカルボキシアルキルが挙げられる。例となるアミノ酸としては、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシノルバリン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ピロリシン、セレノシステイン、セリン、タウリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンが挙げられる。アミノ酸基は、１、２、３、または、２以上の炭素のアミノ酸基である場合には４つの置換基（（１）Ｃ１−６アルコキシ；（２）Ｃ１−６アルキルスルフィニル；（３）本明細書に定義されるアミノ（たとえば非置換アミノ（すなわち、−ＮＨ２）または置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２）で、ＲＮ１はアミノに対し定義されたもの）；（４）Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−６アルコキシ；（５）アジド；（６）ハロ；（７）（Ｃ２−９ヘテロシクリル）オキシ；（８）ヒドロキシ；（９）ニトロ；（１０）オキソ（たとえば、カルボキシアルデヒドまたはアシル）；（１１）Ｃ１−７スピロシクリル；（１２）チオアルコキシ；（１３）チオール；（１４）−ＣＯ２ＲＡ´（ＲＡ´は、（ａ）Ｃ１−２０アルキル（たとえばＣ１−６アルキル）、（ｂ）Ｃ２−２０アルケニル（たとえば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ここで、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）で、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、Ｒ´は、ＨまたはＣ１−２０アルキル）、および、（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）であり、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、各ＲＮ１は、独立して、水素または任意選択的に置換されたＣ１−６アルキル）からなる群から選択される）；（１５）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＢ´ＲＣ´（各ＲＢ´およびＲＣ´は、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリールおよび（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から独立して選択される）；（１６）−Ｓ���２ＲＤ´（ＲＤ´は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）ヒドロキシ、からなる群から選択される）；（１７）−ＳＯ２ＮＲＥ´ＲＦ´（ＲＥ´およびＲＦ´のそれぞれは、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリールおよび（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から独立して選択される）；（１８）−Ｃ（Ｏ）ＲＧ´（ＲＧ´は、（ａ）Ｃ１−２０アルキル（たとえばＣ１−６アルキル）、（ｂ）Ｃ２−２０アルケニル（たとえば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１−２
０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ここで、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）で、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、Ｒ´は、ＨまたはＣ１−２０アルキル）、および、（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）であり、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、各ＲＮ１は、独立して、水素または任意選択的に置換されたＣ１−６アルキル）からなる群から選択される）；（１９）−ＮＲＨ’Ｃ（Ｏ）ＲＩ’であり、ここで、ＲＨ´は、（ａ１）水素および（ｂ１）Ｃ１−６アルキルからなる群から選択され、ＲＩ´は、（ａ２）Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２−２０アルケニル（たとえば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６−１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ここで、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）で、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、Ｒ´は、ＨまたはＣ１−２０アルキル）、（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）であり、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、各ＲＮ１は、独立して、水素または任意選択的に置換Ｃ１−６アルキル、からなる群から選択される、からなる群から選択される；（２０）ＮＲＪ´Ｃ（Ｏ）ＯＲＫ´であり、ここで、ＲＪ´は、（ａ１）水素および（ｂ１）Ｃ１−６アルキルからなる群から選択され、ＲＫ´は、（ａ２）Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２−２０アルケニル（たとえば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６−１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（ここで、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）で、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、Ｒ´は、ＨまたはＣ１−２０アルキル）、（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコールであり、ｓ１は、１〜１０の整数（たとえば、１〜６または１〜４）であり、ｓ２およびｓ３のそれぞれは、独立して、０〜１０の整数（たとえば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６または１〜１０）であり、および、各ＲＮ１は、独立して、水素または任意選択的に置換されたＣ１−６アルキル、からなる群から選択される；（２１）アミジン、からなる群から独立して選択される置換基）で、任意選択的に置換されてもよい。いくつかの実施形態において、これらの基の各々は、本明細書に記述されるようにさらに置換されてもよい。
【０６９９】
本明細書で使用する「アミノアルコキシ」という用語は、本明細書に定義されるアミノ基で置換される、本明細書に定義されるアルコキシ基を表す。アルキルおよびアミノはそれぞれ、各基（たとえば、ＣＯ２ＲＡ´（ＲＡ´は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール（たとえば、カルボキシ）からなる群から選択される））に対して本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基で、さらに置換されてもよい。
【０７００】
本明細書で使用する「アミノアルキル」という用語は、本明細書に定義されるアミノ基で置換される、本明細書に定義されるアルキル基を表す。アルキルおよびアミノはそれぞ
れ、各基（たとえば、ＣＯ２ＲＡ´（ＲＡ´は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール（たとえば、カルボキシ）からなる群から選択される））に対して本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基で、さらに置換されてもよい。
【０７０１】
本明細書で使用する「アリール」という用語は、１または２つの芳香族環を有する単環、二環または多環の炭素環系を表し、フェニル、ナフチル、１，２−ジヒドロナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、アントラセニル（ａｎｔｈｒａｃｅｎｙｌ）、フェナントレニル、フルオレニル、インダニル、インデニル等に例示され、（１）Ｃ１−７アシル（たとえば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルフィニル−Ｃ１−６アルキル、アミノ−Ｃ１−６アルキル、アジド−Ｃ１−６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１−６アルキル（たとえば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、ニトロ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６チオアルコキシ−Ｃ１−６アルキル）；（３）Ｃ１−２０アルコキシ（たとえば、ペルフルオロアルコキシ等のＣ１−６アルコキシ）；（４）Ｃ１−６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６−１０アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３−８シクロアルキル；（１０）Ｃ１−６アルク−Ｃ３−８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１−１２ヘテロシクリル（たとえば、Ｃ１−１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１−１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１−２０チオアルコキシ（たとえば、Ｃ１−６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ´は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から選択される）；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ´ＲＣ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ´およびＲＣ´は、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から独立して選択される）；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ´は、（ａ）アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から選択される）；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ´ＲＦ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ´およびＲＦ´は、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から独立して選択される）；（２１）チオール；（２２）Ｃ６−１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３−８シクロアルコキシ；（２４）Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−６アルコキシ；（２５）Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル（たとえば、Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロアリール）；（２６）Ｃ２−２０アルケニル；および（２７）Ｃ２−２０アルキニル、からなる群から独立して選択される１、２、３、４または５の置換基で任意選択的に置換されてもよい。いくつかの実施形態において、これらの基のそれぞれは、本明細書に記述されるようにさらに置換されてもよい。たとえば、Ｃ１−アルカリルまたはＣ１−アルクヘテロシクリルのアルキレン基は、オキソ基でさらに置換されて、それぞれアリーロイルおよび（ヘテロシクリル）オイル置換基を放出してもよい。
【０７０２】
本明細書で使用する「アリールアルコキシ」という用語は、酸素原子を介して元の分子群に付着される、本明細書に定義されるアルカリル基を表す。非置換アルコキシルキル基の例としては、７〜３０炭素（たとえば、７〜１６炭素または７〜２０炭素で、たとえば、Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−１０アルコキシ、またはＣ６−１０アリール−Ｃ１−２０アルコキシ等）が挙げられる。いくつかの実施形態において、アリールアルコキシ基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基で置換されてもよい。
【０７０３】
「アリールオキシ」という用語は式−ＯＲ´の化学置換基を表し、ここで、Ｒ´は、他で特定されない限り、６〜１８炭素のアリール基である。いくつかの実施形態において、アリール基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基で置換されてもよい。
【０７０４】
本明細書で使用する「アリーロイル」という用語は、カルボニル基を介して元の分子群に付着される、本明細書に定義されるアリール基を表す。例となる非置換アリーロイル基は、７〜１１炭素である。いくつかの実施形態において、アリール基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基で置換されてもよい。
【０７０５】
「アジド」という用語は、−Ｎ３基を表し、また、−Ｎ＝Ｎ＝Ｎとしても表される。
本明細書で使用する「二環」という用語は、２つの環を有する構造を指し、当該環は、芳香族でも、非芳香族でも良い。二環構造としては、本明細書に定義されるスピロシクリル基、および１つ以上の架橋を共有する２つの環（そのような架橋は、１つの原子または鎖（２、３またはそれ以上の原子を含む）を含むことができる）が挙げられる。例となる二環基としては、二環炭素環基（第一と第二の環は、本明細書に定義される炭素環基である）；二環アリール基（第一と第二の環は、本明細書に定義されるアリール基）；二環ヘテロシクリル基（第一の環はヘテロシクリル基であり、第二の環は炭素環（たとえばアリール）またはヘテロシクリル（たとえばヘテロアリール）基である）；二環ヘテロアリール基（第一の環はヘテロアリール基であり、第二の環は炭素環（たとえばアリール）またはヘテロシクリル（たとえばヘテロアリール）基である）が挙げられる。いくつかの実施形態において、二環基は、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基およびアリール基に対して本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基で置換されていてもよい。
【０７０６】
本明細書で使用する「炭素環の」および「炭素環」という用語は、任意選択的に置換されたＣ３−１２単環、二環、または三環を指し、当該環は芳香族または非芳香族であってもよく、炭素原子により環が形成されている。炭素環構造としては、シクロアルキル基、シクロアルケニル基およびアリール基が挙げられる。
【０７０７】
本明細書で使用する「カルバモイル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲＮ１）２を表し、各ＲＮ１の意味は、本明細書に提示される「アミノ」の定義にある。
本明細書で使用する「カルバモイルアルキル」という用語は、本明細書に定義されるカルバモイル基で置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表す。アルキル基はさらに、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基で置換されていてもよい。
【０７０８】
本明細書で使用する「カルバミル」という用語は、−ＮＲＮ１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲまたは−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＮ１）２という構造を有するカルバミン酸基を指し、各ＲＮ１の意味は、本明細書に提示される「アミノ」の定義にあり、Ｒは、本明細書に定義されるアルキル、シクロアルキル、アルクシクロアルキル、アリール、アルカリル、ヘテロシクリル（たとえば、ヘテロアリール）またはアルクヘテロシクリル（たとえば、アルクヘテロアリール）である。
【０７０９】
本明細書で使用する「カルボニル」という用語は、Ｃ（Ｏ）基を表し、また、Ｃ＝Ｏとしても表される。
「カルボキシアルデヒド」という用語は、−ＣＨＯという構造を有するアシル基を表す。
【０７１０】
本明細書で使用する「カルボキシ」という用語は、−ＣＯ２Ｈを意味する。
本明細書で使用する「カルボキシアルコキシ」という用語は、本明細書に定義されるカ
ルボキシ基により置換された、本明細書に定義されるアルコキシ基を表す。アルコキシ基は、本明細書にアルキル基に対して記述されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されていてもよい。
【０７１１】
本明細書で使用する「カルボキシアルキル」という用語は、本明細書に定義されるカルボキシ基で置換された、本明細書に定義されるように、アルキル基を表す。アルキル基は、本明細書に記述される、１、２、３または４の置換基でさらに置換されていてもよい。
【０７１２】
本明細書で使用する「シアノ」という用語は、−ＣＮ基を表す。
「シクロアルコキシ」という用語は、式−ＯＲの化学置換基を表し、Ｒは、他で特定されない限り、本明細書に定義されるＣ３−８シクロアルキル基である。シクロアルキル基は、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されていてもよい。例となる非置換シクロアルコキシ基は、３〜８炭素である。
【０７１３】
本明細書で使用する「シクロアルキル」という用語は、他で特定されない限り、３〜８炭素の一価の飽和または不飽和の非芳香族環炭化水素基を表し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ビシクロ［２．２．１．］ヘプチル等に例示される。当該シクロアルキル基が１つの炭素−炭素二重結合を含む場合、当該シクロアルキル基は、「シクロアルケニル」基と呼称されてもよい。例となるシクロアルケニル基としては、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等が挙げられる。本発明のシクロアルキル基は、（１）Ｃ１−７アシル（たとえば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルフィニル−Ｃ１−６アルキル、アミノ−Ｃ１−６アルキル、アジド−Ｃ１−６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１−６アルキル（たとえば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、ニトロ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６チオアルコキシ−Ｃ１−６アルキル）；（３）Ｃ１−２０アルコキシ（たとえば、ペルフルオロアルコキシ等のＣ１−６アルコキシ）；（４）Ｃ１−６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６−１０アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３−８シクロアルキル；（１０）Ｃ１−６アルク−Ｃ３−８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１−１２ヘテロシクリル（たとえば、Ｃ１−１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１−１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１−２０チオアルコキシ（たとえば、Ｃ１−６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ´は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から選択される）；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ´ＲＣ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ´およびＲＣ´は、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ６−１０アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から独立して選択される）；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ´は、（ａ）Ｃ６−１０アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から選択される）；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ´ＲＦ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ´およびＲＦ´は、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ６−１０アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から独立して選択される）；（２１）チオール；（２２）Ｃ６−１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３−８シクロアルコキシ；（２４）Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−６アルコキシ；（２５）Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル（たとえば、Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロアリール）；（２６）オキソ；（２７）Ｃ２−２０アルケニル；および（２８）Ｃ２−２０アルキニル、で任意選択的に置換されてもよい。いくつかの実施形態において、これらの基のそれぞれは、本明細書に記述されるようにさらに置換されてもよい。たとえば、Ｃ１−アルカリルまたはＣ１−アルクヘテロシク
リルのアルキレン基は、オキソ基でさらに置換され、それぞれアリーロイルおよび（ヘテロシクリル）オイル置換基を放出してもよい。
【０７１４】
「ジアステレオマー」という用語は、互いに鏡像ではなく、および重ね合わせることができない立体異性体を意味する。
本明細書で使用する剤の「有効量」という用語は、有益なまたは所望された結果（たとえば、臨床結果）をもたらすのに十分な量であり、「有効量」は、それが適用される状況に依存する。たとえば、癌の治療剤の投与という状況では、剤の有効量は、その剤の投与が無い場合の反応性と比較して、本明細書に定義されるような癌の治療を得るのに十分な量である。
【０７１５】
本明細書で使用する「光学異性体」という用語は、本発明化合物のそれぞれ光学的に活性な形態を意味し、少なくとも８０％（すなわち、１つの光学異性体が少なくとも９０％で、他の光学異性体が最大で１０％である）、好ましくは少なくとも９０％、およびより好ましくは少なくとも９８％の鏡像体過剰率または光学純度（当分野の標準法で測定）を有する。
【０７１６】
本明細書で使用する「ハロ」という用語は、臭素、塩素、ヨウ素またはフッ素から選択されるハロゲンを表す。
本明細書で使用する「ハロアルコキシ」という用語は、ハロゲン基（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）で置換された、本明細書に定義されるアルコキシ基を表す。ハロアルコキシは、１つ、２つ、３つ、またはアルキル基が２以上の炭素の場合には、４つのハロゲンで置換されてもよい。ハロアルコキシ基としては、ペルフルオロアルコキシ類（たとえば、−ＯＣＦ３）、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨ２Ｆ、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、−ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ）ＣＨ３、および−ＯＣＨＩＣＨ３が挙げられる。いくつかの実施形態において、ハロアルコキシ基は、本明細書でアルキル基に対して記述されるように、１、２、３または４の置換基で、さらに置換されていてもよい。
【０７１７】
本明細書で使用する「ハロアルキル」という用語は、ハロゲン基（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）で置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表す。ハロアルキル基は、１つ、２つ、３つ、またはアルキル基が２以上の炭素である場合、４つのハロゲンで置換されてもよい。ハロアルキル基としては、ペルフルオロアルキル類（たとえば、−ＣＦ３）、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＣｌ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ）ＣＨ３および、−ＣＨＩＣＨ３が挙げられる。いくつかの実施形態において、ハロアルキル基は、本明細書でアルキル基に対して記述されるように、１、２、３または４の置換基で、さらに置換されていてもよい。
【０７１８】
本明細書で使用する「ヘテロアルキレン」という用語は、構成炭素原子のうちの１つまたは２つがそれぞれ、窒素、酸素または硫黄で置き換えられている、本明細書に定義されるアルキレン基を指す。いくつかの実施形態において、ヘテロアルキレン基は、本明細書でアルキレン基に対して定義されるように、１、２、３または４の置換基で、さらに置換されていてもよい。
【０７１９】
本明細書で使用する「ヘテロアリール」という用語は、本明細書に定義されるヘテロシクリルのサブセットを表し、それらは芳香族である（すなわち、４ｎ＋２パイ電子を単環または多環系内に含有する）。例となる非置換ヘテロアリールとしては、１〜１２炭素（たとえば、１〜１１、１〜１０、１〜９、２〜１２、２〜１１、２〜１０、２〜９）のものが挙げられる。いくつかの実施形態において、ヘテロアリールは、ヘテロシクリル基に対して定義されるように、１、２、３または４の置換基で置換されている。
【０７２０】
本明細書で使用する「ヘテロシクリル」という用語は、他で特定されない限り、５−、６−、または７−員環を表し、窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１、２、３または４のヘテロ原子を含有する。５員環は、０〜２の二重結合を有し、６員環および７員環は、０〜３の二重結合を有する。例となる非置換ヘテロシクリル基としては、１〜１２（たとえば、１〜１１、１〜１０、１〜９、２〜１２、２〜１１、２〜１０、２〜９）炭素のものが挙げられる。「ヘテロシクリル」という用語はまた、架橋された多環構造を有する複素環化合物を表し、１つ以上の炭素および／またはヘテロ原子が、単環の２つの非隣接員を架橋する（たとえば、キヌクリジニル基）。「ヘテロシクリル」という用語は、二環、三環および四環基を含み、上述の任意の複素環が、１、２、または３の炭素環に縮合されている（たとえば、アリール環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環、シクロペンタン環または他の単環複素環（たとえば、インドリル、キノリル、イソキノリル、テトラヒドロキノリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル等））。縮合複素環の例示としては、トロパン類および１，２，３，５，８，８ａ−ヘキサヒドロインドリジンが挙げられる。複素環としては、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ピラジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソキサゾリル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、インドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、キノキサリニル、ジヒドロキノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、フタラジニル、ベンジミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、フリル、チエニル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル（たとえば、１，２，３−オキサジアゾリル）、プリニル、チアジアゾリル（たとえば、１，２，３−チアジアゾリル）、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロインドリル、ジヒドロキノリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ジヒドロイソキノリル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾチエニル等（それらのジヒドロ体およびテトラヒドロ体を含み、１つ以上の二重結合が還元され、水素で置き換えられている）が挙げられる。さらに他の例となる複素環としては、２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−オキサゾリル；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−イミダゾリル；２，３，４，５−テトラヒドロ−５−オキソ−１Ｈ−ピラゾリル（たとえば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２−フェニル−５−オキソ−１Ｈ−ピラゾリル）；２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−１Ｈ−イミダゾリル（たとえば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−５−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−１，３，４−オキサジアゾリル（たとえば、２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾリル）；４，５−ジヒドロ−５−オキソ−１Ｈ−トリアゾリル（たとえば、４，５−ジヒドロ−３−メチル−４−アミノ５−オキソ−１Ｈ−トリアゾリル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリジニル（たとえば、１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３，３−ジエチルピリジニル）；２，６−ジオキソ−ピペリジニル（たとえば、２，６−ジオキソ−３−エチル−３−フェニルピペリジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソピリジミニル；１，６−ジヒドロ−４−オキソピリミジニル（たとえば、２−（メチルチオ）−１，６−ジヒドロ−４−オキソ−５−メチルピリミジン−１−イル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリミジニル（たとえば、１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３−エチルピリミジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソ−ピリダジニル（たとえば、１，６−ジヒドロ−６−オキソ−３−エチルピリダジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル（たとえば、１，６−ジヒドロ−５−イソプロピル−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリル（たとえば、３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリルおよび２，３−ジヒドロ−２−オキソ−３，３’−
スピロプロパン−１Ｈ−インドール−１−イル）；１，３−ジヒドロ−１−オキソ−２Ｈ−イソ−インドリル；１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソ−インドリル；１Ｈ−ベンゾピラゾリル（たとえば、１−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ベンゾピラゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンゾイミダゾリル（たとえば、３−エチル−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンゾイミダゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキ_−ベンゾキサゾリル（たとえば、５−クロロ−２，３−ジヒドロ−２−オキ
ソ−ベンゾキサゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−ベンゾキサゾリル；２−オキソ−２Ｈ−ベンゾピラニル；１，４−ベンゾジオキサニル；１，３−ベンゾジオキサニル；２，３−ジヒドロ−３−オキソ，４Ｈ−１，３−ベンゾチアジニル；３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル（たとえば、２−メチル−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３Ｈ−キナゾリル（たとえば、１−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３Ｈ−キナゾリル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジオキソ−７Ｈ−プリニル（たとえば、１，２，３，６−テトラヒドロ−１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−７Ｈ−プリニル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジオキソ−１Ｈ−プリニル（たとえば、１，２，３，６−テトラヒドロ−３，７−ジメチル−２，６−ジオキソ−１Ｈ−プリニル）；２−オキソベンズ［ｃ，ｄ］インドリル；１，１−ジオキソ−２Ｈ−ナフト［１，８−ｃ，ｄ］イソチアゾリル；および、１，８−ナフチレンジカルボキサミドが挙げられる。さらなる複素環としては、３，３ａ，４，５，６，６ａ−ヘキサヒドロ−ピロロ［３，４−ｂ］ピロール−（２Ｈ）−イルおよび、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル、ホモピペラジニル（または、ジアゼパニル）、テトラヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、オキセパニル、チエパニル、アゾカニル、オキセカニル、およびチオカニルが挙げられる。複素環基としてはまた、式：
【０７２１】
【化８８】
2015510495.tif 000145
（ここで、Ｅ´は、−Ｎ−および−ＣＨ−からなる群から選択され、Ｆ´は、−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２−、−Ｏ−、および−Ｓ−からなる群から選択され、Ｇ´は、−ＣＨ−および−Ｎ−からなる群から選択される）の基も挙げられる。本明細書に言及されるの任意の複素環基は、（１）Ｃ１−７アシル（たとえば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１−２０アルキル（たとえば、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルフィニル−Ｃ１−６アルキル、アミノ−Ｃ１−６アルキル、アジド−Ｃ１−６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１−６アルキル（たとえば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、ニトロ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６チオアルコキシ−Ｃ１−６アルキル）；（３）Ｃ１−２０アルコキシ（たとえば、ペルフルオロアルコキシ等のＣ１−６アルコキシ）；（４）Ｃ１−６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６−１０アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３−８シクロアルキル；（１０）Ｃ１−６アルク−Ｃ３−８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１−１２ヘテロシクリル（たとえば、Ｃ２−１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１−１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１−２０チオアルコキシ（たとえば、Ｃ１−６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ´は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリー
ル、（ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から選択される）；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ´ＲＣ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ´およびＲＣ´は、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から独立して選択される）；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ´は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から選択される）；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ´ＲＦ´（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ´およびＲＦ´はそれぞれ、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、からなる群から独立して選択される）；（２１）チオール；（２２）Ｃ６−１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３−８シクロアルコキシ；（２４）アリールアルコキシ；（２５）Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル（たとえば、Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロアリール）；（２６）オキソ；（２７）（Ｃ１−１２ヘテロシクリル）イミノ；（２８）Ｃ２−２０アルケニル；および（２９）Ｃ２−２０アルキニルからなる群から独立して選択される１、２、３、４または５の置換基で、任意選択的に置換されてもよい。いくつかの実施形態において、これらの基のそれぞれは、本明細書に記述されるようにさらに置換されてもよい。たとえば、Ｃ１−アルカリルまたはＣ１−アルクヘテロシクリルのアルキレン基は、オキソ基でさらに置換され、それぞれおアリーロイルおよび（ヘテロシクリル）オイル置換基を放出してもよい。
【０７２２】
本明細書で使用する「（ヘテロシクリル」イミノ」という用語は、イミノ基を介して元の分子群に付着された、本明細書に定義されるヘテロシクリル基を表す。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基で置換されてもよい。
【０７２３】
本明細書で使用する「（ヘテロシクリル）オキシ」という用語は、酸素原子を介して元の分子群に付着された、本明細書に定義されるヘテロシクリル基を表す。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基で置換されてもよい。
【０７２４】
本明細書で使用する「（ヘテロシクリル）オイル」という用語は、カルボニル基を介して元の分子群に付着された、本明細書に定義されるヘテロシクリル基を表す。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義されるように、１、２、３または４の置換基で置換されてもよい。
【０７２５】
本明細書で使用する「炭化水素」という用語は、炭素原子と水素原子のみからなる基を表す。
本明細書で使用する「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨ基を表す。
【０７２６】
本明細書で使用する「ヒドロキシアルケニル」という用語は、１〜３のヒドロキシ基で置換された、本明細書に定義されるアルケニル基を表すが、ただし、アルキル基の１つの炭素原子にヒドロキシ基は１つのみ付着し、ジヒドロキシプロペニル、ヒドロキシイソペンテニル等に例示される。
【０７２７】
本明細書で使用する「ヒドロキシアルキル」という用語は、１〜３のヒドロキシ基で置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表すが、ただし、アルキル基の１つの炭素原子にヒドロキシ基は１つのみ付着し、ヒドロキシメチル、ジヒドロキシプロピル等に例示される。
【０７２８】
本明細書で使用する「異性体」という用語は、本発明の任意の化合物の、任意の互変異
性体、立体異性体、光学異性体またはジアステレオマーを意味する。本発明の化合物は、１つ以上のキラル中心および／または二重結合を有し、ゆえに、立体異性体（たとえば、二重結合異性体（すなわち、幾何Ｅ／Ｚ異性体）またはジアステレオマー（たとえば、光学異性体（すなわち、（＋）または（−））またはシス／トランス異性体）等）として存在しうることが認識される。本発明に従い、本明細書に描写される化学構造および、ゆえに本発明の化合物は、すべての対応する立体異性体を包含し、すなわち、立体異性的に純粋な形態（たとえば、幾何異性体的に純粋、光学異性体的に純粋、またはジアステレオマー的に純粋）、および光学異性体および立体異性体の混合物（たとえば、ラセミ体）の両方を包含する。本発明の化合物の光学異性体および立体異性体の混合物は、たとえばキラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、キラル塩複合体としての化合物の結晶化、またはキラル溶媒中での化合物の結晶化等の公知の方法により、通常、光学異性体成分または立体異性体成分へと分解することができる。光学異性体および立体異性体はまた、公知の不斉合成方法により、立体異性的または光学異性体的に純粋な中間体、試薬および触媒から得ることができる。
【０７２９】
本明細書で使用する「Ｎ−保護アミノ」という用語は、本明細書に定義される、１つまたは２つのＮ−保護基が付着した、本明細書に定義されるアミノ基を指す。
本明細書で使用する「Ｎ−保護基」という用語は、合成手順の間、アミノ基を望ましくない反応から保護することを意図した基を表す。広く用いられているＮ−保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ，  “Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９９）（参照により本明細書に援用される）に開示されている。Ｎ−保護基としては、アシル基、アリーロイル基またはカルバミル基（たとえば、ホルミル）、アセチル、プロピニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイル、およびキラル補助基（たとえば、アラニン、ロイシン、フェニルアラニン等の保護もしくは非保護Ｄ、ＬまたはＤ、Ｌ−アミノ酸等）；スルホニル含有基（たとえば、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル等）；カルバマート形成基（たとえば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニルイル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニル等）、アルカリル基（たとえば、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル等）およびシリル基（たとえば、トリメチルシリル等）が挙げられる。好ましいＮ−保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、アラニル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。
【０７３０】
本明細書で使用する「ニトロ」という用語は、−ＮＯ２基を表す。
本明細書で使用する「オキソ」という用語は、＝Ｏを表す。
本明細書で使用する「ペルフルオロアルキル」という用語は、本明細書に定義されるアルキル基であって、アルキル基に結合された各水素ラジカルが、フッ化物ラジカルで置き換えられているアルキル基を表す。ペルフルオロアルキル基は、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル等に例示される。
【０７３１】
本明細書で使用する「ペルフルオロアルコキシ」という用語は、本明細書に定義されるアルコキシ基であって、アルコキシ基に結合された各水素ラジカルがフッ化物ラジカルで置き換えられているアルコキシ基を表す。ペルフルオロアルコキシ基は、トリフルオロメトキシ、ペンタフルオロエトキシ等で例示される。
【０７３２】
本明細書で使用する「スピロシクリル」という用語は、両末端が元の基の同じ炭素原子に結合し、スピロ環基を形成するＣ２−７アルキレンジラジカルを表し、および、両端が同じ原子に結合しているＣ１−６ヘテロアルキレンジラジカルもまた表す。スピロ環基を形成するヘテロアルキレンラジカルは、窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される１、２、３または４のヘテロ原子を含有することができる。いくつかの実施形態において、スピロ環基は、１〜７の炭素（ジラジカルが付着している炭素原子を除く）を含む。本発明のスピロ環基は、シクロアルキルおよび／またはヘテロシクリル基に対する任意選択的な置換基として本明細書に提示される１、２、３または４の置換基で、任意選択的に置換されてもよい。
【０７３３】
本明細書で使用する「立体異性体」という用語は、全ての可能性のある異なる異性体、ならびに化合物が有し得る立体配座型（たとえば、本明細書に記述される任意の化学式の化合物）を指し、特に、全ての可能性のある立体化学的異性体型および立体配座的異性体型、すべてのジアステレオマー、光学異性体および／または基本の分子構造の配座異性体を指す。本発明の一部の化合物は、異なる互変異性型で存在してもよく、後者のものはすべて本発明の範囲内に含まれる。
【０７３４】
本明細書で使用する「スルホアルキル」という用語は、−ＳＯ３Ｈのスルホ基で置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表す。いくつかの実施形態において、アルキル基は、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されてもよい。
【０７３５】
本明細書で使用する「スルホニル」という用語は、−Ｓ（Ｏ）２−基を表す。
本明細書で使用する「チオアルカリル」という用語は、化学式−ＳＲの化学置換基を表し、Ｒは、アルカリル基である。いくつかの実施形態において、アルカリル基は、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されてもよい。
【０７３６】
本明細書で使用する「チオアルクヘテロシクリル」という用語は、化学式−ＳＲの化学置換基を表し、Ｒは、アルクヘテロシクリル基である。いくつかの実施形態において、アルクヘテロシクリル基は、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されてもよい。
【０７３７】
本明細書で使用する「チオアルコキシ」という用語は、化学式−ＳＲの化学置換基を表し、Ｒは、本明細書に定義されるアルキル基である。いくつかの実施形態において、アルキル基は、本明細書に記述されるように、１、２、３または４の置換基でさらに置換されてもよい。
【０７３８】
「チオール」という用語は、−ＳＨ基を表す。
化合物：本明細書で使用する「化合物」という用語は、すべての立体異性体、幾何異性体、互変異性体および描写される構造の同位体を含むことが意図される。
【０７３９】
本明細書に記述される化合物は、非対称（たとえば、１以上の立体中心を有する）であってもよい。他で示唆されない限り、すべての立体異性体（たとえば光学異性体およびジアステレオマー等）が意図される。非対称で置換された炭素を含有する本開示の化合物は、光学的に活性な状態またはラセミ体で単離することができる。光学的に活性な開始材料から光学的に活性な型を調製する方法は、当分野で公知であり、たとえば、ラセミ混合物の分解または立体選択的合成などによるものがある。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合等の多くの幾何異性体もまた、本開示の化合物中に含まれ、そのような安定な異性体はすべて、本開示で予期されるものである。本開示化合物のシスおよびトランス幾何異性体が記述され、異性体の混合物として単離または、分離異性型として単離されてもよい。
【０７４０】
本開示の化合物には、互変異性型もまた含まれる。互変異性型は、一重結合と隣接する二重結合とを交換する（プロトンの移動が伴う）ことにより得ることができる。互変異性型は、同じ実験式および総荷電を有する異性体プロトン化状態である、プロトトロピー互変異性体（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｉｃ  ｔａｕｔｏｍｅｒ）を含む。プロトトロピー互変異性体としては、ケトン−エノール対、アミド−イミド酸対、ラクタム−ラクチム対、アミド−イミド酸対、エナミン−イミン対、およびプロトンが複素環の２つ以上の位置を占める場合（たとえば、１Ｈ−および３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−および４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−および２Ｈ−イソインドール、ならびに、１Ｈ−および２Ｈ−ピラゾール等）の環状形態を含む。互変異性型は、平衡状態にあってもよく、または適切な置換により、１つの形態に立体的に固定されていてもよい。
【０７４１】
本開示の化合物にはまた、中間体または最終化合物に発生する原子の同位体のすべてが含まれる。「同位体」とは、同じ原子番号を有するが、核の中性子数が異なるために、異なる質量数を有する原子を指す。たとえば、水素の同位体として、トリチウムと重水素が挙げられる。
【０７４２】
本開示の化合物および塩は、常法により溶媒または水分子との組み合わせで調製され、溶媒和物および水和物を形成することができる。
保存された：本明細書で使用する「保存された」という用語は、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸のそれぞれで、比較される２以上の配列の同じ位置で変化せずに存在するものである。相対的に保存されたヌクレオチドまたはアミノ酸とは、配列の他の場所に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも、多くの関連配列中で保存されているものである。
【０７４３】
いくつかの実施形態において、もし２以上の配列が互いに１００％同一である場合、それらは「完全に保存された」と言われる。いくつかの実施形態において、２以上の配列が互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、それらは「高度に保存された」と言われる。いくつかの実施形態において、２以上の配列が、互いに約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、または約９９％同一である場合、「高度に保存された」と言われる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列が、互いに少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合、「保存された」と言われる。いくつかの実施形態において、２以上の配列が、互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、または約９９％同一である場合、「保存された」と言われる。配列の保存は、オリゴヌクレオチドもしくはポリペプチドの全体の長さに対して適用してもよく、またはそれらの部分、領域もしくは特性に対して適用してもよい。
【０７４４】
放出制御：本明細書で使用する「放出制御」とは、特定の放出パターンに従い、治療結果をもたらす医薬組成物または化合物の放出プロファイルを指す。
環状の、または環化：本明細書で使用する「環状の」という用語は、連続的なループの存在を指す。環状分子は、ただ連結し、サブユニットの切れ目のない鎖を形成するものであり、必ずしも円形である必要は無い。たとえば本発明の操作されたＲＮＡまたはｍＲＮＡ等の環状分子は、単一ユニットもしくは多量体であってもよく、または１つ以上の成分の複合体または高次構造を含有してもよい。
【０７４５】
細胞増殖抑制：本明細書で使用する「細胞増殖抑制」とは、細胞（たとえば、哺乳類細胞（たとえば、ヒト細胞））、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生虫、プリオンまたはそれらの組み合わせの増殖、分裂または繁殖を阻害、減少、抑制することを指す。
【０７４６】
細胞毒性：本明細書で使用する「細胞毒性」とは、細胞（たとえば、哺乳類細胞（たとえば、ヒト細胞））、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生虫、プリオンまたはそれらの組み合わせに対する、殺傷効果もしくは有害作用、毒性効果もしくは死に至る作用を指す。
【０７４７】
送達：本明細書で使用する「送達」とは、化合物、物質、実体、部分、カーゴ（積荷）、またはペイロードを送達させる作用または方法を指す。
送達剤：本明細書で使用する「送達剤」とは、核酸分子の標的細胞へのインビボ送達を、少なくとも部分的に促進する任意の物質を指す。
【０７４８】
不安定化：本明細書で使用する「不安定な」「不安定にする」または「不安定化領域」という用語は、開始時、野生型または同じ領域もしくは分子の天然型よりも安定性に欠ける領域または分子を意味する。
【０７４９】
検出可能標識：本明細書で使用する「検出可能標識」とは、当分野公知の方法（Ｘ線撮影、蛍光、化学発光、酵素活性、吸光等を含む）により容易に検出可能な、他の実体に付着される、組み込まれる、もしくは結合される、１以上のマーカー、シグナルまたは部分を指す。検出可能標識としては、放射性同位体、フルオロフォア、クロモフォア、酵素、色素、金属イオン、リガンド（たとえば、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンおよびハプテン等）、量子ドット等が挙げられる。検出可能標識は、本明細書に記述されるペプチドまたはタンパク質の任意の部位に位置してもよい。それらは、アミノ酸、ペプチドもしくはタンパク質内、または、Ｎ末端もしくはＣ末端に位置してもよい。
【０７５０】
消化：本明細書で使用する「消化」という用語は、小さな小片または成分にバラバラに壊すことを意味する。ポリペプチドまたはタンパク質に関する場合、消化により、ペプチドがもたらされる。
【０７５１】
遠位：本明細書で使用する「遠位」という用語は、対象の点または領域から離れた位置、または中心から離れた位置を意味する。
用量分割因子（ＤＳＦ）：総１日用量または単回単位用量のＰＵＤで割られた、用量分割処置のＰＵＤの比率。値は、投与レジメン群の比較から得られる。
【０７５２】
封入：本明細書で使用する「封入」とは、囲包する、囲む、包み込むことを意味する。
操作された：本明細書において、本発明の実施態様が、開始時点、野生型もしくは天然型分子から変化した特性または性質（構造的または化学的のいずれでも）を有する様に設計される場合、それらは「操作されている」。
【０７５３】
エキソソーム：本明細書で使用する「エキソソーム」は、哺乳類細胞から分泌される小胞である。
発現：本明細書において、核酸配列の「発現」とは、以下の事象の１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型産生（たとえば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセッシング（たとえば、スプライシング、エディティング、５´キャップの形成および／または３´末端のプロセッシング等）；（３）ポリペプチドまたはタンパク質へのＲＮＡの翻訳；および（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。
【０７５４】
特性：本明細書で使用する「特性」とは、特徴、性質または独特の要素を指す。
製剤：本明細書で使用する「製剤」には、少なくとも修飾核酸またはｍｍＲＮＡおよび送達剤が含まれる。
【０７５５】
断片：本明細書で使用する「断片」とは、部分を指す。たとえば、タンパク質の断片には、培養細胞から単離された全長タンパク質の消化により得られたポリペプチドが含有されてもよい。
【０７５６】
機能的：本明細書で使用する「機能的」な生体分子は、それが特徴付けられる特性および／または活性を示す形態にある生体分子である。
相同性：本明細書で使用する「相同性」という用語は、高分子の間（たとえば、核酸分子（たとえば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）の間、および／または、ポリペプチド分子の間）の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態において、複数の高分子配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一または類似である場合、それらは互いに「相同性である」とみなされる。「相同性である」という用語は、必然的に、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列）の間の比較を指す。本発明に基づくと、ポリヌクレオチドがコードするポリペプチドが、少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１つの連続配列に対し、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはさらに９９％である場合、２つのポリヌクレオチド配列は、相同性であるとみなされる。いくつかの実施形態において、相同なポリヌクレオチド配列は、少なくとも４〜５の独自の特定アミノ酸の連続配列をコードする能力により特徴付けられる。６０ヌクレオチド未満の長さのポリヌクレオチド配列に対しては、相同性は、少なくとも４〜５の独自の特定アミノ酸の連続配列をコードする能力により決定づけられる。本発明に基づくと、２つのタンパク質が少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１つの連続配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％または９０％同一である場合、その２つのタンパク質配列は、相同であるとみなされる。
【０７５７】
同一性：本明細書で使用する「同一性」という用語は、高分子の間（たとえば、オリゴヌクレオチド分子（たとえば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）の間、および／または、ポリペプチド分子の間）の全体的な関連性を指す。２つのポリヌクレオチド配列の同一性パーセントの算出は、たとえば、最適比較の目的で２つの配列を並べることにより行うことができる（最適並列のために、たとえば、ギャップを第一および第二の核酸配列のうちの１つまたは両方に導入することができ、非同一の配列は、比較対象に対し無視することができる）。ある特定の実施形態において、比較目的のために並べられた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％である。次いで、対応するヌクレオチドの位置でヌクレオチドが比較される。第一の配列の位置が、第二の配列の対応する位置と同じヌクレオチドで占められている場合、その分子はその位置で同一である。２つの配列の間の同一性パーセントは、配列により共有されている同一の位置数の関数であり、２つの配列の最適配列のために導入する必要のあった各ギャップの長さ、およびギャップの数を考慮している。配列の比較
および２つの配列の間の同一性パーセントの決定は、数学アルゴリズムを用いて得ることができる。たとえば、２つのヌクレオチド配列の間の同一性パーセントは、たとえばＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．，  ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｄ．  Ｗ．，  ｅｄ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９３；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，  Ｇ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８７；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，  Ｐａｒｔ  Ｉ，  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ａ．  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ｈ．  Ｇ．，  ｅｄｓ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，  １９９４；および、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，  Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，  Ｍ．  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．，
ｅｄｓ．，  Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９１（これらはそれぞれ参照により本明細書に援用される）に記述されている方法を用いて決定することができる。たとえば、２つのヌクレオチド配列の間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０残基重量表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティ（ｇａｐ  ｌｅｎｇｔｈ  ｐｅｎａｌｔｙ）および４のギャップペナルティを用いたＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＭｅｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ，  １９８９，  ４：１１−１７）を用いて決定することができる。あるいは、２つのヌクレオチド配列の間の同一性パーセントを、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ  ｍａｔｒｉｘを用いたＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを用いて決定することができる。配列間の同一性パーセントを決定するために普遍的に用いられている方法としては、Ｃａｒｉｌｌｏ，  Ｈ．，  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，  Ｄ．，  ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，  ４８：１０７３  （１９８８）（参照により本明細書に援用される）に開示されている方法が挙げられるが、これに限定されない。
【０７５８】
同一性決定の技術は、公的に利用可能なコンピュータープログラムにおいて体系化されている。２つの配列の間の相同性を決定するための例となるコンピューターソフトウェアの例としては、限定ではなく、ＧＣＧ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｐａｃｋａｇｅ，  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
１２（１），  ３８７  （１９８４）（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよび、ＦＡＳＴＡ  Ａｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌｅｃ．  Ｂｉｏｌ．，  ２１５，  ４０３  （１９９０）（その全容が参照により本明細書に組み込まれる）が挙げられる
遺伝子の発現阻害：本明細書で使用する「遺伝子の発現阻害」という文言は、遺伝子の発現産物の量の減少をもたらすことを意味する。発現産物は、遺伝子から転写されたＲＮＡ（たとえば、ｍＲＮＡ）または遺伝子から転写されたｍＲＮＡから翻訳されたポリペプチドであってもよい。典型的には、ｍＲＮＡレベルの減少により、それらから翻訳されるポリペプチドレベルの減少ももたらされる。発現レベルは、ｍＲＮＡまたはタンパク質を測定する標準的な技術を用いて決定されてもよい。
【０７５９】
インビトロ：本明細書で使用する「インビトロ」という用語は、生物体（動物、植物、微生物）内ではなく、たとえば、試験管中または反応槽中、細胞培養中、ペトリ皿の中等、人工的な環境で発生する事象を指す。
【０７６０】
インビボ：本明細書で使用する「インビボ」という用語は、生物体（たとえば、動物、植物もしくは微生物またはそれらの細胞もしくは組織）内で発生する事象を指す。
単離された：本明細書で使用する「単離された」という用語は、関連構成要素（天然ま
たは実験上の設定のいずれでも）の少なくとも一部から分離された物質または実体を指す。単離された物質は、それらが関連していた物質に対して、純度レベルが変化していてもよい。単離された物質および／または実体は、それらが当初関連していた他の構成要素の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％かそれ以上から分離されてもよい。いくつかの実施形態において、単離された剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超の純度である。本明細書において、実質的に他の成分が無い場合、その物質は、「純粋」である。実質的に単離された：「実質的に単離された」とは、成分が、それが形成された、または検出された環境から実質的に分離されていることを意味する。部分的分離には、たとえば、本開示の化合物が富化された組成物を含むことができる。実質的な分離には、本開示の化合物、またはその塩を少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、少なくとも約９９重量％含有する組成物を含むことができる。化合物およびその塩を単離する方法は当分野の日常的な作業である。
【０７６１】
リンカー：本明細書において、リンカーは、たとえば１０〜１，０００原子の原子群を指し、原子または群（たとえば、限定されないが、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニルおよびイミン等）から構成されることができる。リンカーは、第一の末端で核酸塩基もしくは糖鎖部分上の修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチドに付着することができ、第二の末端で検出可能な剤または治療剤等のペイロードに付着することができる。リンカーは、核酸配列への組み込みに干渉しないような長さのものであってもよい。リンカーは、たとえばｍｍＲＮＡ多量体の形成（たとえば、２以上の修飾核酸分子またはｍｍＲＮＡ分子の結合を介する）、またはｍｍＲＮＡの形成、ならびに本明細書に記述されるペイロードの投与等の任意の有用な目的のために用いられてもよい。リンカーに組み込むことができる化学基の例としては、限定されないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリールまたはヘテロシクリル（それらは各々、本明細書に記述されるように任意選択的に置換されることができる）が挙げられる。リンカーの例としては、限定されないが、不飽和アルカン類、ポリエチレングリコール類（たとえば、エチレンまたはプロピレングリコール単量体（たとえば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、またはテトラエチレングリコール等））、およびデキストランポリマー類ならびにそれらの誘導体が挙げられる。他の例としては、限定されないが、リンカー内の開裂可能な部分（たとえば、ジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）またはアゾ結合（−Ｎ＝Ｎ−）（それらは、還元剤または光分解により開裂することができる））が挙げられる。選択的開裂可能な結合の非限定的な例示としては、たとえばトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）または他の還元剤および／もしくは光分解の使用により開裂することができるアミド結合、ならびに、たとえば酸性加水分解または塩基性加水分解により開裂することができるエステル結合が挙げられる。
【０７６２】
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位：本明細書において、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位は、少なくともｍｉＲＮＡの「シード」領域に結合する核酸転写物のヌクレオチド位置または領域を表す。
【０７６３】
修飾された：本明細書で使用する「修飾された」とは、変化した本発明の分子構造または状態を指す。分子は、化学的、構造的および機能的を含む、様々な状態で修飾されうる。一実施態様において、本発明のｍＲＮＡ分子は、非天然ヌクレオシドおよび／またはヌクレオチドの導入により修飾されている。
【０７６４】
粘液：本明細書で使用する「粘液」とは、粘性で、ムチン糖タンパク質を含有する天然物質を指す。
【０７６５】
天然の：本明細書で使用する「天然の」とは、人工的な補助無しに、自然に存在していることを意味する。
非ヒト脊椎動物：本明細書で使用する「非ヒト脊椎動物」には、ホモサピエンスを除くすべての脊椎動物が含まれる（野生種および家畜化された種も含まれる）。非ヒト脊椎動物の例としては、限定されないが、たとえば、アルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、イヌ、ロバ、ガヤル、ヤギ、モルモット、ウマ、リャマ、ラバ、ブタ、ウサギ、トナカイ、ヒツジ、水牛およびヤク等の哺乳類が挙げられる。
【０７６６】
オフ−ターゲット：本明細書で使用する「オフ−ターゲット」とは、任意の１つ以上の標的、遺伝子、または細胞転写物に対する任意の意図されない効果を指す。
【０７６７】
オープンリーディングフレーム：本明細書で使用する「オープンリーディングフレーム」または「ＯＲＦ」とは、所与のリーディングフレーム中に、終止コドンを含まない配列を指す。
【０７６８】
操作可能に結合された：本明細書で使用する「操作可能に結合された」という文言は、２以上の分子、構築物、転写物、実体、部分等の間の機能的な結合を指す。
パラトープ：本明細書で使用する「パラトープ」とは、抗体の抗原結合部位を指す。
【０７６９】
患者：本明細書で使用する「患者」とは、治療を必要とする可能性のある、もしくは治療を求める可能性のある対象、治療を必要とする対象、治療を受けている対象、治療を受けるであろう対象、または特定の疾患または状態に対して訓練された専門家によるケアを受けている対象を指す。
【０７７０】
ペプチド：本明細書で使用する「ペプチド」は、５０の長さ以下のアミノ酸（たとえば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０の長さのアミノ酸）である。
【０７７１】
薬剤的に許容可能な：「薬剤的に許容可能な」という文言は、本明細書において、妥当な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、合理的な利益／リスク比に見合った、ヒトおよび動物の組織に接触する使用に適した化合物、物質、組成物および／または剤型を指すために用いられる。
【０７７２】
薬剤的に許容可能な賦形剤：本明細書で使用する「薬剤的に許容可能な賦形剤」とは、本明細書に記述される化合物以外の任意の構成要素（たとえば、活性化合物を懸濁または溶解することができる媒体）を指し、患者に実質的に非毒性および非炎症性である特性を有する。賦形剤としては、たとえば、抗接着剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング剤、圧縮補助剤、崩壊剤、色素（染料）、皮膚軟化剤、乳化剤、増量剤（希釈剤）、塗膜形成剤またはコーティング剤、香味料、香料、流動促進剤（流量増強剤）、潤滑剤、保存料、印刷用インク、吸着剤、懸濁剤または溶解剤、甘味料および水和水を含めてもよい。例となる賦形剤としては、限定されないが、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微晶質セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、α化澱粉、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、セラッ
ク、二酸化シリコン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、澱粉（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、滑石、二酸化チタニウム、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣおよびキシリトールが挙げられる。
【０７７３】
薬剤的に許容可能な塩：本発明には、本明細書に開示される化合物の薬剤的に許容可能な塩もまた含まれる。本明細書で使用する「薬剤的に許容可能な塩」とは、本開示化合物の誘導体を指し、既存の酸または塩基部分が塩の形態に転換されることにより（たとえば、遊離塩基と適切な有機酸を反応させることにより）、元の化合物が修飾されている。薬剤的に許容可能な塩としては、限定されないが、アミン等の塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩、カルボン酸等の酸性残基のアルカリ塩または有機塩等が例示される。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトネート、ヘキサノエート、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカノエート、吉草酸塩等が挙げられる。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等、ならびに、非毒性のアンモニウム、４級アンモニウムおよびアミンカチオン（限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミン等が挙げられる）が挙げられる。本開示の薬剤的に許容可能な塩としては、たとえば、非毒性の無機酸または有機酸から形成された、元の化合物の従来的な非毒性塩が挙げられる。本開示の薬剤的に許容可能な塩は、従来的な化学法により、塩基性部分または酸性部分を含有する元の化合物から合成することができる。一般的に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸型または遊離塩基型と、水もしくは有機溶媒またはその２つの混合物（通常、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリル等の非水性溶媒が好ましい）に溶解した適切な塩基または酸の化学量論量とを反応させることにより調製することができる。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １７ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．，  １９８５，  ｐ．  １４１８，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｕｓｅ，  Ｐ．Ｈ．  Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．Ｇ．  Ｗｅｒｍｕｔｈ  （ｅｄｓ．），  Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，  ２００８、および、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ６６，  １−１９  （１９７７）に記載されている（これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に援用される）。
【０７７４】
薬剤的に許容可能な溶媒和物：本明細書で使用する「薬剤的に許容可能な溶媒和物」という用語は、適切な溶媒分子が結晶格子中に組み込まれている本発明の化合物を意味する。適切な溶媒は、投与される用量で生理学的に耐容できるものである。たとえば、溶媒和物は、結晶化、再結晶化、または、有機溶媒、水もしくはそれらの混合物を含む溶液からの沈殿により調製されてもよい。適切な溶媒の例としては、エタノール、水（たとえば、モノ−、ジ−、およびトリ−水和物）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ´−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ´−ジメチ
ルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２−（１Ｈ）−ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２−ピロリドン、安息香酸ベンジル等が挙げられる。水が溶媒の場合、溶媒和物は、「水和物」と呼称される。
【０７７５】
薬物動態：本明細書で使用する「薬物動態」とは、生物体へと投与された物質の運命の決定に関連する、分子または化合物の任意の１つ以上の特性を指す。薬物動態は、吸収、分布、代謝および排出の比率および程度を含む、数種の領域に分けられる。これは通常、ＡＤＭＥと呼ばれており、（Ａ）吸収は、血液循環に入る物質のプロセスである；（Ｄ）分布は、身体の組織および体液を巡る物質の分散または伝達である；（Ｍ）代謝（または、生体内変化）は、親となる化合物の、娘の化合物への不可逆的な変化である；（Ｅ）排出（または除去）は、身体からの物質の除去、を指す。稀なケースとして、一部の薬物は、身体組織中に不可逆的に蓄積する。
【０７７６】
薬理作用：本明細書で使用する「薬理作用」は、外因的な物質に生命体またはシステムが接触または曝された後に発生する、生命体またはシステムの中の、計測可能な生物学的な現象である。薬理作用は、たとえば、治療、１つ以上の症状の改善、診断、予防、および疾患、障害、疾病もしくは感染の発生の遅延等の、治療上有効な結果をもたらすものであってもよい。そのような生物学的な現象の測定は、定量的、定性的、または他の生物学的現象と相対的なものであってもよい。定量的測定は、統計的に有意なものであってもよい。定量的な測定は、程度または種類によるものであってもよく、少なくとも、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上の差であってもよい。それらは存在または非存在、より良いまたはより悪い、多いまたは少ない、として観察可能なものであってもよい。薬理作用に言及する場合の外因的な物質とは、生命体またはシステムに対して、全体的または部分的のいずれでも、異物である物質である。たとえば、野生型の生体分子に対する修飾は、構造的なものであれ化学的なものであれ、外因的な物質を生み出すであろう。同様に、天然には生命体またはシステム中に見出されない化合物、分子または物質中への野生型分子への組み込み（もしくは野生型分子との組み合わせ）もまた、外因的な物質を生み出すであろう。本発明の修飾ｍＲＮＡは、外因的な物質を含有する。薬理作用の例としては、限定されないが、好中球、網状赤血球、顆粒球、赤血球（赤色血液細胞）、巨核球、血小板、単球、結合組織マクロファージ、表皮ランゲルハンス細胞、破骨細胞、樹状細胞、ミクログリア細胞、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞もしくは網状赤血球の増加または減少等の、細胞数の変化が挙げられる。薬理作用には、血液化学所見、ｐＨ、ヘモグロビン、ヘマトクリット、酵素（たとえば、限定されないが肝臓酵素のＡＳＴおよびＡＬＴ）のレベルの変化、脂質プロファイルの変化、電解質、代謝マーカー、ホルモンまたは、当業者に公知の他のマーカーもしくはプロファイルにおける変化も含まれる。
【０７７７】
物理化学：本明細書で使用する「物理化学」は、物理的な、および／または化学的な特性に関連すること、またはそのような特性を意味する。
予防：本明細書で使用する「予防」という用語は、感染、疾病、障害および／または疾患の発生の部分的または完全な遅延；特定の感染、疾病、および／または疾患の１つ以上の兆候、特性または臨床症状の発生の部分的または完全な遅延；特定の感染、疾病、障害および／もしくは疾患の１つ以上の兆候、特性または症状の発生の部分的または完全な遅延；ならびに／または、感染、疾病、障害および／もしくは疾患に関連した症状発生リスクの減少を指す。
【０７７８】
プロドラッグ：本開示には、本明細書に記述される化合物のプロドラッグもまた含まれ
る。本明細書で使用する「プロドラッグ」とは、化学的または物理的変化により治療剤として振る舞う物質、分子または実体の基礎となる形態にある任意の物質、分子または実体を指す。プロドラッグは、何らかの方法で共有結合または隔離されていてもよく、および哺乳類対象への投与の前に、投与により、または投与の後に、活性薬剤部分を放出、または活性薬剤部分へと変化するものであってもよい。プロドラッグは、化合物中に存在する官能基を修飾することにより調製されてもよく、その修飾物は、日常的な操作またはインビボのいずれかで、元の化合物へと開裂される。プロドラッグには、ヒドロキシル基、アミノ基、スルフヒドリル基またはカルボキシル基が、哺乳類対象に投与された際に、それぞれ遊離ヒドロキシル基、遊離アミノ基、遊離スルフヒドリル基または遊離カルボキシル基を形成するように開裂する任意の基に結合している化合物が含まれる。プロドラッグの調製および使用については、Ｔ．  Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．  Ｓｔｅｌｌａ，  “Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”  Ｖｏｌ．  １４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ、および、Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，  ｅｄ．  Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．  Ｒｏｃｈｅ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８７（それら両方とも、参照により、その全体で本明細書に援用される）において考察がなされている。
【０７７９】
増殖：本明細書で使用する「増殖」という用語は、速やかに成長、拡大もしくは増加する、または、成長、拡大もしくは増加をもたらすことを意味する。「増殖性」とは、増殖することが出来る能力を有することを意味する。「抗増殖性」とは、増殖特性とは逆または、増殖特性とは適合しない特性を有することを意味する。
【０７８０】
対象のタンパク質：本明細書で使用する「対象のタンパク質」または「所望のタンパク質」という用語には、本明細書に提示されるもの、ならびに、それらの断片、変異体、突然変異体および変化物が含まれる。
【０７８１】
隣接：本明細書で使用する「隣接」という用語は、対象の点または領域に対して、または対象の中心に対してより近い場所に位置づくことを意味する。
シュードウリジン：本明細書において、シュードウリジンは、ウリジンヌクレオシドのＣ−グリコシド異性体を指す。「シュードウリジン類似体」は、シュードウリジンの任意の修飾体、変異体、異性体または誘導体である。たとえば、シュードウリジン類似体には、限定されないが、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、１−タウリノメチル−シュードウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−シュードウリジン、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１Ψ）、１−メチル−４−チオ−シュードウリジン（ｍ１ｓ４Ψ）、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、３−メチル−シュードウリジン（ｍ３Ψ）、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３Ψ）、および２´−Ｏ−メチル−シュードウリジン（Ψｍ）が含まれる。
【０７８２】
精製された：本明細書で使用する「精製する」、「精製された」、「精製」は、不用な構成要素、汚染物質、混合物または欠陥物から実質的に純粋にする、またはそれらを清浄化することを意味する。
【０７８３】
試料：本明細書で使用する「試料」という用語は、その組織、細胞または構成成分（た
とえば、限定されないが、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、羊水、臍帯血、尿、膣液、および精液を含む体液等）のサブセットを指す。試料はさらに、生命体全体、またはその組織、細胞もしくは構成成分、またはその分画もしくは部分（限定されないが、たとえば、血漿、血清、髄液、ならびに、リンパ液、皮膚、呼吸器、腸管および尿生殖器の外部断片、涙、唾液、乳、血液細胞、腫瘍、器官等を含む）から調製された、ホモジネート、溶解物または抽出物を含んでも良い。さらに、試料は、たとえば栄養成分を含む培養液（ｂｒｏｔｈ）またはゲル（たとえばタンパク質または核酸等の細胞成分を含有してもよい）等の培地を指す。
【０７８４】
シグナル配列：本明細書で使用する「シグナル配列」という文言は、タンパク質の運搬または局在性を指示することができる配列を指す。
単回単位用量：本明細書で使用する「単回単位用量」という語は、１用量／１回／単一経路／単一接点（すなわち単一の投与事象）において投与される治療剤の用量を指す。
【０７８５】
類似性：本明細書で使用する「類似性」という用語は、高分子の間（たとえば、ポリヌクレオチド分子（たとえば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）の間、および／または、ポリペプチド分子の間）の全体的な関連性を指す。高分子の、他の高分子に対する類似性パーセントの算出は、同一性パーセントの算出と同じような方法で行うことができる（当分野で理解される、保存的置換を考慮する類似性パーセントの算出は除く）。
【０７８６】
分割用量：本明細書で使用する「分割用量」という語は、単回単位用量または総１日用量を２回以上の用量に分割することを指す
安定：本明細書で使用する「安定」とは、有用な程度の純度までの、反応混合物からの単離の間、存在し続けるのに十分に頑健である化合物、および、好ましくは有効な治療剤へと製剤化することができる化合物を指す。
【０７８７】
安定化した：本明細書で使用する「安定化する」、「安定化した」、「安定化領域」という用語は、安定にする、または安定になることを意味する。
対象：本明細書で使用する「対象」または「患者」という用語は、たとえば実験目的で、診断目的で、予防目的で、および／または治療目的で、本発明に従う組成物が投与されうる任意の生物体を指す。典型的な対象としては、動物（たとえば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類およびヒト等）および／または植物が挙げられる。
【０７８８】
実質的に：本明細書で使用する「実質的に」という用語は、対象の特徴または特性を、全てもしくはほぼ全ての程度または範囲で示す定性的な状態を指す。生物学分野の当業者であれば、生物学的現象および化学的現象は、あったとしても、めったに完了までいかない、および／または、完了もしくは達成にまでは進展しない、または、完全な結果を回避することを理解するであろう。それゆえ、「実質的に」という用語は、本明細書において、多くの生物学的現象および化学的現象において、本来的に、完全性が欠落している可能性を捉えるために用いられる。
【０７８９】
実質的に同等：本明細書においては、投与の間の時間差に関しており、この用語は、＋／−  ２％を意味する。
実質的に等しい：本明細書において、複数回投与に関連しており、この用語は２秒以内を意味する。
【０７９０】
罹患している：疾病、障害および／または疾患に「罹患」している個々人は、疾病、障害および／または疾患の１つ以上の兆候を示しているか、またはそれにより診断される。
罹患しやすい：疾病、障害および／または疾患に対して「罹患しやすい」個々人は、疾病、障害および／または疾患の兆候を示していない、および／または、それで診断されて
いないが、疾患またはその兆候を発現する傾向を有している。いくつかの実施形態において、疾病、障害および／または疾患（たとえば、癌）に罹患しやすい個々人は、以下の１つ以上で特徴づけられてもよい：（１）疾病、障害および／または疾患の発現に関連した遺伝的変異；（２）疾病、障害および／または疾患の発現に関連した遺伝的ポリモルフィズム；（３）疾病、障害および／または疾患の発現に関連した、タンパク質および／もしくは核酸の発現ならびに／または活性の増加ならびに／または減少；（４）疾病、障害および／または疾患の発現に関連したライフスタイルおよび／または習慣；（５）疾病、障害および／または疾患の家族歴；（６）疾病、障害および／または疾患の発現に関連した微生物への露出および／または感染。いくつかの実施形態において、疾病、障害および／または疾患に罹患しやすい個々人は、疾病、障害および／または疾患を発症する。いくつかの実施形態において、疾病、障害および／または疾患に罹患しやすい個々人は、疾病、障害および／または疾患を発症しない。
徐放：本明細書で使用する「徐放」という用語は、特定の期間にわたる放出率に従う医薬組成物または化合物の放出プロファイルを指す。
合成：本明細書で使用する「合成」という用語は、ヒトの手により生産、調整および／または製造されたことを意味する。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドまたは他の分子の合成は、化学的または酵素的であってもよい。
標的細胞：本明細書で使用する「標的細胞」とは、対象の１つ以上の任意の細胞を指す。細胞は、インビトロ、インビボ、インサイツまたは生命体の組織または器官中で見いだされてもよい。生命体は、動物であってもよく、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒト、最も好ましくは患者であってもよい。
治療剤：「治療剤」という用語は、対象に投与された際に、治療的効果、診断的効果および／もしくは予防的効果を有する任意の剤、ならびに／または、望ましい生物学的作用および／もしくは薬理学的作用を引き起こす任意の剤を指す。
【０７９１】
治療有効量：本明細書で使用する「治療有効量」という用語は、疾病、障害および／または疾患に罹患した、または罹患しやすい対象に投与された際に、疾病、障害および／もしくは疾患の症状を、治療ならびに／または改善する、ならびに／または、疾病、障害および／もしくは疾患の発現を診断する、予防する、ならびに／または遅延させるために十分である、送達される剤（たとえば、核酸、薬剤、治療剤、診断剤、予防剤等）の量を意味する。
【０７９２】
治療上有効な結果：本明細書で使用する「治療上有効な結果」は、疾病、障害および／または疾患に罹患している、または罹患しやすい対象において、疾病、障害および／もしく疾患の症状を、治療ならびに／または改善する、ならびに／または、疾病、障害および／もしくは疾患の発現を診断する、予防する、ならびに／または遅延させるために十分である結果を意味する。
【０７９３】
総１日用量：本明細書で使用する「総１日用量」という語は、２４時間の期間に投与または処方される量を指す。総１日用量を単回単位用量として投与してよい。
転写因子：本明細書で使用する「転写因子」という用語は、たとえば転写の活性化または抑制によって、ＤＮＡのＲＮＡへの転写を制御するＤＮＡ結合タンパク質を指す。一部の転写因子は、単独で転写制御に作用する一方で、他は、他のタンパク質と協調して作用する。一部の転写因子は、ある条件下で、転写活性化または転写抑制の両方を行うことができる。通常、転写因子は、標的遺伝子の制御領域中の特定のコンセンサス配列に高度に類似した配列、または特定の標的配列に結合する。転写因子は、単独で、または他の分子と複合体化して、標的遺伝子の転写を制御してもよい。
【０７９４】
治療：本明細書で使用する「治療」という用語は、完全にまたは部分的に、特定の疾病、障害および／または疾患の１つ以上の症状または特性の発生を減少させること、それら
の重篤度を減少させること、それらの進行を阻害すること、ならびに／または、それらの発現を緩和、改善、好転、軽減および／もしくは遅延させること、を指す。たとえば、癌の「治療」は、腫瘍の存続、増殖および／または核酸を阻害することを指し得る。治療は、疾病、障害および／または疾患と関連した病理の発現リスクを減少させる目的で、疾病、障害および／または疾患の兆候を示していない対象に投与されてもよく、および／または、疾病、障害および／もしくは疾患の早期兆候のみを示している対象に投与されてもよい。
【０７９５】
非修飾：本明細書で使用する「非修飾」とは、形はどうあれ、変化する前の任意の物質、化合物または分子を指す。常にではないが、非修飾とは、野生型または天然型の生体分子を指す。分子は、一連の修飾を受けるかもしれず、それによって、各修飾分子は、次なる修飾のための「非修飾」開始分子として供される可能性もある。
【０７９６】
生存可能性：本明細書では、「生存可能性」という用語は、もの（生物、人工システム、器官、組織、移植片など）が自体を維持するかまたはその可能性を回復する能力を指す。本発明のコンテクストでは、器官の生存可能性は修飾ｍＲＮＡを使用することで改善され得る。器官または組織または移植片の「生存可能性を延長する」とは、器官、組織または移植片の有用性または完全性を改善することを指す。器官または組織または移植片の「寿命を延長する」とは、時間関数として、器官、組織または移植片が所望の状態を維持するかまたは所望の状態を回復する能力を延長させることを指す。本明細書では、器官、組織または移植片の「状態」は、生命体の生理学的、物理的または化学的状態を指す。「使用可能な状態」は、器官、組織または移植片が、所望の研究、実験、調査、試験または他の診査事案において使用可能である場合である。器官、組織または移植片の「機能性を増大する」とは、器官、組織または移植片が通常どおりに機能する能力を維持または改善することを意味する。
【０７９７】
等価物および範囲
当業者であれば、日常的な実験を超えることなく、本明細書に記述される本発明に従う特定の実施態様に対する多くの均等物を認識または確認するであろう。本発明の範囲は、上記の記述に限定される意図は無く、添付のクレームに明記される。
【０７９８】
クレームにおいて、たとえば、「１つの（ａ、ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」等の冠詞が、逆のことが示唆されない限り、または文脈から明らかでない限り、１つ以上を意味し得る。群の１つ以上のメンバーの間に「または」を含むクレームまたは明細書は、逆のことが示されない限り、または文脈から明らかでない限り、群のメンバーの１つ、１つ以上、またはすべてが、所与の産物もしくはプロセス中に存在、または用いられ、または関連する場合、条件を満たしたとみなされる。本発明は、正確に群の１つのメンバーが所与の産物またはプロセスに存在、用いられ、または関連する実施態様を含む。本発明は、群のメンバーの２つ以上またはすべてが、所与の産物またはプロセスに存在、用いられ、または関連する実施態様を含む。
【０７９９】
「含有する」という用語は、開かれた表現であることが意図されており、追加の要素または工程が含有されてもよいこともまた、注意されたい。
範囲が与えられる場合、端点が含まれる。さらに、他で示されるか、または文脈および当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表される値は、任意の特定の値または、本発明の異なる実施態様で述べられた範囲内の副次的な値を、文脈上、他で明確に規定されない限り、範囲の低限の単位の１０分の１まで取ることが可能である。
【０８００】
さらに、先行技術の範囲内にある本発明の任意の特定の実施態様は、任意のクレームの１つ以上から明確に除外され得る。たとえ本明細書において除外を明確に説明していなく
とも、そのような実施態様は当業者に対し公知であると判断され、それらは除外されうる。本発明の組成物の任意の特定の実施態様（たとえば、任意の核酸またはそれによりコードされるタンパク質；任意の製造方法；任意の使用方法等）は、先行技術の存在と関連しようがしまいが、何らかの理由により、任意のクレームの１つ以上から除外することができる。
【０８０１】
すべての引用の出展元（たとえば、参考文献、公表文献、データベース、データベースの登録物）および本明細書に引用された技術は、たとえ明白に引用中に述べられていなくとも、参照により本出願に援用される。引用の出展元と本出願の記述が矛盾する場合、本出願の記述が優先される。
（実施例）
実施例１  修飾ｍＲＮＡの産生
本発明による修飾ｍＲＮＡは標準的な検査法および材料を用いて作製される。
【０８０２】
上流または下流に様々付加（βグロブリン、タグなど）したオープンリーディングフレームをＤＮＡ２．０（カリフォルニア州メンローパーク）に注文し、典型的にはＸｂａＩを識別する複数のクローン化部位を含む。コンストラクトを受領後、再構築し、形質転換して化学的にコンピテントな大腸菌にする。本発明のために、ＮＥＢ  ＤＨ５−αコンピテント大腸菌（ＮＥＢ  ＤＨ５−ａｌｐｈａ  Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ  Ｅ．  ｃｏｌｉ）を使用した。ＮＥＢの指示書に従い１００ｎｇのプラスミドを用いて形質転換する。プロトコルは以下のとおりである：
１．氷上で１０分間、ＮＥＢ  ５−α  コンピテント大腸菌のチューブを溶かす。
２．１ｐｇ〜１００ｎｇのプラスミドＤＮＡを含有する１〜５μｌを、細胞混合物に添加する。注意深くチューブを４〜５回弾き、細胞とＤＮＡを混合する。ボルテックスを行ってはいけない。
３．混合物を氷上に３０分間静置する。混合してはいけない。
４．正確に３０秒間、４２℃でヒートショックを与える。混合してはいけない。
５．氷上に５分間、静置する。混合してはいけない。
６．９５０μｌの室温のＳＯＣをピペットで取り、混合物に入れる。
７．６０分間、３７℃で静置する。強く揺する（２５０ｒｐｍ）か、回転させる。
８．選択プレートを３７℃まで温める。
９．チューブを弾き、転倒混和することで完全に細胞を混合する。
【０８０３】
各希釈の５０〜１００μｌを選択プレート上に撒き、３７℃で一晩、インキュベートする。あるいは、２４〜３６時間、３０℃でインキュベートするか、または４８時間、２５℃でインキュベートする。
【０８０４】
次いで、シングルコロニーを用いて、適切な抗生物質を用いたＬＢ増殖培地５ｍｌに接種し、次いで、５時間、増殖させる（２５０ＲＰＭ、３７℃）。次いで、これを用いて、２００ｍｌの培養培地に接種し、同一条件下で一晩、増殖させる。
【０８０５】
プラスミドを単離するために（８５０μｇまで）、メーカーの説明書に従いＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｐｕｒｅｌｉｎｋ（商標）ＨｉＰｕｒｅ  Ｍａｘｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（カリフォルニア州カールスバッド）を用いて、マキシプレップ（ｍａｘｉ  ｐｒｅｐ）を行う。
【０８０６】
インビトロ転写（ＩＶＴ）のｃＤＮＡ生成のために、プラスミドを、たとえばＸｂａＩ等の制限酵素を用いて、最初に直線化する。典型的なＸｂａＩを用いる制限酵素消化は、以下を含有する：プラスミド１．０μｇ；１０×緩衝液１．０μｌ；ＸｂａＩ  １．５μｌ；ｄＨ２０で１０μｌにする；１時間、３７℃でインキュベート。実験規模（＜５μｇ
）で実施する場合、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＰｕｒｅｌｉｎｋ（商標）ＰＣＲ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ（カリフォルニア州カールスバッド）を、メーカーの説明書に依って用いて、反応物をクリーンアップする。より大きな規模での精製は、より大きな負荷容量を有する、たとえばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎの標準Ｐｕｒｅｌｉｎｋ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（カリフォルニア州カールスバッド）等の製品で行う必要がある可能性がある。クリーンアップの後、直線化したベクターは、ＮａｎｏＤｒｏｐを用いて定量し、アガロースゲル電気泳動を用いて直線化を分析して確認する。
【０８０７】
非限定的な例として、Ｇ−ＣＳＦは目的のポリペプチドを表し得る。実施例１〜５で概説したステップに使用した配列を表５に示す。表５では開始コドン（ＡＴＧまたはＡＵＧ）に下線が引かれていることに注意されたい。
【０８０８】
【表５】
2015510495.tif 000146
2015510495.tif 000147
2015510495.tif 000148
実施例２：ｃＤＮＡ産生のためのＰＣＲ
ｃＤＮＡ調製のためのＰＣＲ手順は、Ｋａｐａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（マサチューセッツ州ウォーバーン）の２×ＫＡＰＡ  ＨｉＦｉ（商標）ＨｏｔＳｔａｒｔ  ＲｅａｄｙＭｉｘを用いて行う。このシステムには、２×ＫＡＰＡ  ＲｅａｄｙＭｉｘは１２．５μｌ；フォワードプライマー（１０ｕＭ）は０．７５μｌ；リバースプライマー（１０ｕＭ）は０．７５μｌ；鋳型ｃＤＮＡは１００ｎｇ含まれ、ｄＨ２０で２５．０μｌに希釈される。反応条件は、９５℃で５分、および９８℃で２０秒、次いで５８℃で１５秒、次いで７２℃で４５秒を２５サイクル、そして７２℃で５分、そして４℃で終了である。
【０８０９】
本発明のリバースプライマーには、ｍＲＮＡ中のｐｏｌｙ−Ａ１２０に対するｐｏｌｙ−Ｔ１２０が組み込まれている。より長い、またはより短いｐｏｌｙ（Ｔ）系を有する他のリバースプライマーを用いて、ｍＲＮＡのポリ（Ａ）テールの長さを調製することもできる。
【０８１０】
反応物は、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＰｕｒｅＬｉｎｋ（商標）ＰＣＲ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ（カリフォルニア州カールスバッド）（５μｇまで）を、メーカーの説明書に従い用いて、クリーンアップする。より多量の反応物には、より大きな容量の製品を用いてクリーンアップする必要がある。クリーンアップの後、ｃＤＮＡを、ＮａｎｏＤｒｏｐを用いて定量し、アガロースゲル電気泳動で分析して、ｃＤＮＡが予測サイズであることを確認する。次いで、インビトロの転写反応へと進む前に、ｃＤＮＡの配列解析を行う。
【０８１１】
実施例３．インビトロ転写
インビトロ転写反応により、修飾ヌクレオチドまたは修飾ＲＮＡを含有するｍＲＮＡが生成される。入力ヌクレオチド三リン酸（ＮＴＰ）混合物を、天然ＮＴＰおよび非天然ＮＴＰを用いて組織内で作製する。
【０８１２】
典型的なインビトロ転写反応は以下を含む：
１．鋳型ｃＤＮＡ  １．０μｇ
２．１０×転写緩衝液（４００ｍＭのトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．０、１９０ｍＭのＭｇＣｌ２、５０ｍＭのＤＴＴ、１０ｍＭスペルミジン）  ２．０μｌ
３．カスタムＮＴＰ（各２５ｍＭ）  ７．２μｌ
４．ＲＮａｓｅ阻害剤  ２０Ｕ
５．Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ  ３０００Ｕ
６．ｄＨ２０  ２０．０μｌまで
７．３７℃で３〜５時間インキュベーション
粗ＩＶＴ混合物を、翌日のクリーンアップのために、４℃で一晩保存してもよい。次いで、１ＵのＲＮａｓｅフリーのＤＮａｓｅを用いて、元のテンプレートを消化する。３７℃、１５分間のインキュベーションの後、ｍＲＮＡを、ＡｍｂｉｏｎのＭＥＧＡｃｌｅａｒ（商標）Ｋｉｔ（テキサス州オースティン）を用いてメーカーの説明書に従い精製する。このキットは、５００μｇまでのＲＮＡを精製することができる。クリーンアップの後、ＲＮＡを、ＮａｎｏＤｒｏｐを用いて定量し、アガロースゲル電気泳動により分析して、ＲＮＡが適正なサイズであり、ＲＮＡの分解が発生していないことを確認する。
【０８１３】
実施例４．ｍＲＮＡの酵素的キャッピング
ｍＲＮＡのキャッピングは、以下のように実施し、混合物はＩＶＴ  ＲＮＡ６０μｇ〜１８０μｇおよびｄＨ２０を最高７２μｌを含む。混合物を６５℃で５分間インキュベートしてＲＮＡを変性させた後直ちに氷中に移す。
【０８１４】
次いで、プロトコルは、１０×キャッピング緩衝液（０．５Ｍのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、６０ｍＭのＫＣｌ、１２．５ｍＭのＭｇＣｌ２）（１０．０μｌ）；２０ｍＭのＧＴＰ（５．０μｌ）；２０ｍＭのＳ−アデノシルメチオニン（２．５μｌ）；ＲＮａｓｅ阻害剤（１００Ｕ）；２′−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（４００Ｕ）；ワクシニアキャッピング酵素（グアニリルトランスフェラーゼ）（４０Ｕ）；ｄＨ２０（２８μｌまで）の混合、およびＲＮＡ６０μｇを３７℃で３０分間インキュベーション、またはＲＮＡ１８０μｇを最長２時間インキュベーション、を含む。
【０８１５】
次いで、ｍＲＮＡをＡｍｂｉｏｎのＭＥＧＡｃｌｅａｒ（商標）Ｋｉｔ（テキサス州オースティン）を用いてメーカーの説明書に従い精製する。クリーンアップの後、ＲＮＡを、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、マサチューセッツ州ウォルサム）を用いて定量し、アガロースゲル電気泳動により分析して、ＲＮＡが適正なサイズであり、ＲＮＡの分解が発生していないことを確認する。ＲＮＡ産物はまた、逆転写ＰＣＲを実行し、配列解析のためのｃＤＮＡを生成することにより、配列解析されてもよい。
【０８１６】
実施例５．ポリＡテール反応
ｃＤＮＡにはポリＴが無いので、最終産物精製の前にポリＡテーリング反応を必ず実施しなければならない。これは、キャップ化ＩＶＴ  ＲＮＡ（１００μｌ）；ＲＮａｓｅ阻害剤（２０Ｕ）；１０×テーリング緩衝液（０．５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ８．０）、２．５Ｍ  ＮａＣｌ、１００ｍＭ  ＭｇＣｌ２）（１２．０μｌ）；２０ｍＭ  ＡＴＰ（６．０μｌ）；ポリＡポリメラーゼ（２０Ｕ）；ｄＨ２０（１２３．５μｌまで）を混合し、３７℃で３０分間インキュベートすることにより行う。ポリＡテールがすでに転写物に存在する場合、テーリング反応は飛ばして、ＡｍｂｉｏｎのＭＥＧＡｃｌｅａｒ（商標）キット（５００μｇまで）でのクリーンアップに直接進んでも良い。ポリＡポリメラーゼは、酵母で発現された組換え酵素が好ましい。
【０８１７】
実施例６．酵素キャップ対化学キャップ
例示的キャッピング構造
修飾ＲＮＡの５´キャッピングは、５´−グアノシンキャップを生成するための以下の化学的ＲＮＡキャップ類似体をメーカーのプロトコルに従い用いて、インビトロ転写反応の間に同時に完了させてもよい：３´−Ｏ−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ；Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ；Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ；ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ；ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ、マサチューセッツ州イプスウィッチ）。修飾ＲＮＡの５´−キャッピングは、「キャップ０」構造：ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ、マサチューセッツ州イプスウィッチ）を生成するためのワクシニアウイルスキャッピング酵素を用いて、転写の後で完了させてもよい。キャップ１構造は、ワクシニアウイルスキャッピング酵素および、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ−２’−Ｏ−メチルを生成するための２’−Ｏメチルトランスフェラーゼの両方を用いて生成してもよい。キャップ２構造は、２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼを用いた５’−終わりから３番目のヌクレオチドの２’−Ｏ−メチル化により、キャップ１構造から生成されてもよい。キャップ３構造は、２’−Ｏメチルトランスフェラーゼを用いた５’−終わりから４番目のヌクレオチドの２’−Ｏ−メチル化により、キャップ２構造から生成されてもよい。酵素は、組換え物質由来のものが好ましい。
【０８１８】
哺乳類細胞への形質移入の場合は、修飾ｍＲＮＡは、１２〜１８時間または１８時間超（たとえば、２４、３６、４８、６０、７２時間か７２時間以上）の間の安定性を有し得る。
【０８１９】
実施例７．化学キャップ対酵素由来キャップタンパク質発現アッセイ
ＡＲＣＡキャップ類似体またはキャップ１構造を含むヒトＧ−ＣＳＦをコードする合成ｍＲＮＡが、ヒト初代角化細胞に等しい濃度で形質移入され得る。形質移入の６、１２、２４および３６時間後、培地中に分泌されたＧ−ＣＳＦの量がＥＬＩＳＡ測定され得る。培地中に高レベルのＧ−ＣＳＦを分泌する合成ｍＲＮＡは、高度に翻訳的に有能なキャップ構造を有する合成ｍＲＮＡに対応する。
【０８２０】
実施例８．化学キャップ対酵素由来キャップ純度分析
ＡＲＣＡキャップ類似体またはキャップ１構造粗合成産物を含むヒトＧ−ＣＳＦをコードする合成ｍＲＮＡは、変性アガロース−尿素ゲル電気泳動またはＨＰＬＣ分析を用いて、純度を比較することができる。電気泳動で、単一の、確固としたバンドを有する合成ｍＲＮＡは、複数のバンドまたは縞状のバンドを有する合成ｍＲＮＡと比較して、高純度の産物に対応する。単一のＨＰＬＣピークを有する合成ｍＲＮＡもまた、高純度の産物に対応する。高効率でのキャッピング反応により、より純粋なｍＲＮＡ群がもたらされる。
【０８２１】
実施例９．化学キャップ対酵素由来キャップサイトカイン分析
ＡＲＣＡキャップ類似体またはキャップ１構造を含むヒトＧ−ＣＳＦをコードする合成ｍＲＮＡは、複数の濃度で、ヒト初代角化細胞へと形質移入することができる。形質移入後、６、１２、２４、３６時間で、たとえばＴＮＦαおよびＩＦＮβ等の培養培地中へと分泌された炎症性サイトカインの量を、ＥＬＩＳＡにより分析することができる。培地中へ高レベルの炎症性サイトカインを分泌する合成ｍＲＮＡは、免疫活性化キャップ構造を含有する合成ｍＲＮＡに対応する。
【０８２２】
実施例１０．化学キャップ対酵素由来キャップキャッピング反応効率
ＡＲＣＡキャップ類似体またはキャップ１構造を含むヒトＧ−ＣＳＦをコードする合成ｍＲＮＡは、キャップ化ｍＲＮＡヌクレアーゼ処置の後、ＬＣ−ＭＳによりキャッピング反応効率を分析することができる。キャップ化ｍＲＮＡのヌクレアーゼ処置により、ＬＣ−ＭＳで検出可能な、ヌクレオチドの無い、そしてキャップ化５´−５−三リン酸キャッ
プ構造の混合物が得られる。ＬＣ−ＭＳスペクトル上で、キャップ化産物の量は、反応物由来の総ｍＲＮＡのパーセントとして表され、キャッピング反応効率に相当する。より高いキャッピング反応効率を伴うキャップ構造は、ＬＣ−ＭＳによるキャップ化産物をより多量に有する。
【０８２３】
実施例１１．修飾ＲＮＡまたはＲＴ  ＰＣＲ産物のアガロースゲル電気泳動
個々のｍｏｄＲＮＡ（２０μｌ体積中２００〜４００ｎｇ）または逆転写ＰＣＲ産物（２００〜４００ｎｇ）を、ウェル内の非変性１．２％アガロースＥ−ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）上にロードし、メーカーのプロトコルに従い、１２〜１５分間泳動させる。
【０８２４】
実施例１２．ナノドロップ修飾ＲＮＡ定量化およびＵＶスペクトルデータ：
ＴＥ  緩衝液（１μｌ）中修飾ＲＮＡをナノドロップＵＶ吸光度リーディングに用い、インビトロの転写反応からの各修飾ＲＮＡの収量を定量する。
【０８２５】
実施例１３  リピドイドを用いての修飾ｍＲＮＡの製剤
修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）を、ヌクレオチド混合物が修飾ヌクレオチドを含むことを除き、インビトロ転写の標準的な検査方法および材料を用いて作製した。目的の遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、強力なコザック翻訳開始シグナルを含む５’非翻訳領域（ＵＴＲ）と、アデノシン類似体を含まないｍｍＲＮＡのポリＡテールの鋳型による追加のためのオリゴ（ｄＴ）配列で終わっているαグロブリン３’ＵＴＲに挟まれている。アデノシンを含むｍｍＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）配列なしで合成し、転写後ポリ（Ａ）ポリメラーゼのポリ（Ａ）テーリングを可能にした。場合によっては、ｍｍＲＮＡを、インビトロでの転写中に表２に挙げたリストの化学的に修飾されたヌクレオチドの組込みにより修飾し、対応する天然ヌクレオチドが１００％置換されたかまたは対応する天然ヌクレオチドが指示されたパーセンテージで部分的に置換した。
【０８２６】
修飾ｍＲＮＡは、インビトロでの実験用に、細胞に添加する前に所定の割合でｍｍＲＮＡとリピドイドを混合して製剤する。インビボの製剤は、体内での循環を促進するため追加の他の成分を必要とする。これらのリピドイドがインビボの作用に適した粒子を形成する能力を試験するために、ｓｉＲＮＡ−リピドイド製剤に使用される標準的な製剤方法を開始点として使用した。最初のｍｍＲＮＡ−リピドイド製剤は、４２％リピドイド、４８％コレステロールおよび１０％ＰＥＧからなる粒子からなり得、さらなる割合の最適化が可能である。粒子形成後、ｍｍＲＮＡを加え、複合体に組み込んだ。封入効率は標準的な色素排除アッセイを用いて決定された。
【０８２７】
実施例１４  リピドイド製剤を使用してのヒト細胞における修飾ＲＮＡにコードされるタンパク質のインビトロでの発現
ＲＮＡ形質移入は限定ではなく９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００およびＭＤ１を含む多様なリピドイドを使用して実施され得る。９８Ｎ１２−５（Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００８  ２６：５６１−５６９；  Ｆｒａｎｋ−Ｋａｍｅｎｅｔｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００８  １０５：１１９１５−１１９２０；  Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００９  １７：８７２−８７９；その全容が参照により本明細書に組み込まれる）、Ｃ１２−２００（Ｌｏｖｅ  ｅｔ  ａｔ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２０１０  １０７：１８６４−１８６９）およびＭＤ１（Ａｌｎｙｌａｍ  Ｏｌｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２０１１  ポスター発表，  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｌｎｙｌａｍ．ｃｏｍ／ｃａｐｅｌｌａ／ｗｐ−ｃｏｎｔｅｎｔ／ｕｐｌｏａｄｓ／２０１１／０９／ＡＬＮＹ−ＯＴＳ−ＮｅｘｔＧｅｎＬＮＰｓ−Ｓｅｐ２０１１１．ｐｄｆ；その全容が参照によ
り本明細書に組み込まれる）は、ｓｉＲＮＡ送達に有効であることが示されているが、単鎖ｍｍＲＮＡを用いては試験されていない。
【０８２８】
インビトロ形質移入の試験に使用されるｍｍＲＮＡのリピドイドに対する比率は、異なるリピドイド：ｍｍＲＮＡの比率で実験的に試験される。ｓｉＲＮＡとリピドイドを用いた以前の研究では、２．５：１、５：１、１０：１および１５：１のリピドイド：ｓｉＲＮＡの重量：重量比を利用した。ｍｍＲＮＡの長さがｓｉＲＮＡに対し長い場合、リピドイドとｍｍＲＮＡの重量：重量比は低い方が有効であり得る。さらに、比較のために、ｍｍＲＮＡは、ＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）またはＴＲＡＮＳＩＴ−ｍＲＮＡ（Ｍｉｒｕｓ  Ｂｉｏ社）陽イオン性脂質送達ビヒクルを用いても製剤された。リピドイド製剤されたルシフェラーゼ、ＧＦＰ、Ｇ−ＣＳＦおよびＥＰＯ  ｍｍＲＮＡが所望のタンパク質生成物を発現する能力は、ルシフェラーゼ発現は蛍光で、ＧＦＰ発現はフローサイトメトリーで、Ｇ−ＣＳＦとエリスロポエチン（ＥＰＯ）分泌はＥＬＩＳＡで確認できる。
【０８２９】
実施例１５  リピドイド製剤を使用しての静脈内注射後の修飾ＲＮＡにコードされるタンパク質のインビボでの発現
製剤の全身性静脈内投与が、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００およびＭＤ１を含む多様なリピドイドを用いて実施され得る。９８Ｎ１２−５（Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００８  ２６：５６１−５６９；  Ｆｒａｎｋ−Ｋａｍｅｎｅｔｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００８  １０５：１１９１５−１１９２０；  Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００９  １７：８７２−８７９）、Ｃ１２−２０（Ｌｏｖｅ  ｅｔ
ａｔ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２０１０  １０７：１８６４−１８６９；  Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１１  ２９：１００５−１０１０）およびＭＤ１（Ａｌｎｙｌａｍ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２０１１  ポスター発表，  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｌｎｙｌａｍ．ｃｏｍ／ｃａｐｅｌｌａ／ｗｐ−ｃｏｎｔｅｎｔ／ｕｐｌｏａｄｓ／２０１１／０９／ＡＬＮＹ−ＯＴＳ−ＮｅｘｔＧｅｎＬＮＰｓ−Ｓｅｐ２０１１１．ｐｄｆ）はいずれもｓｉＲＮＡのインビボ送達とｍＲＮＡのサイレンシングに有効であることが示されているが、単鎖ｍｍＲＮＡを用いては試験されていない。
【０８３０】
ｍｍＲＮＡを含むリピドイド製剤は、動物の静脈内に注入され得る。ｍｍＲＮＡにコードされるタンパク質の発現が、動物から回収された血液試料や肝臓や脾臓などのその他器官の試料において評価され得る。単回用量の静脈内試験を実施することで、所望の生成物の効果の大きさ、投与応答性および寿命の評価も可能になる。ある実験では、リピドイド系の製剤９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＭＤ１および他のリピドイド系の製剤が、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ヒトＧ−ＣＳＦまたはヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）ｍｍＲＮＡを動物に送達するのに使用され得る。リピドイド製剤を含むｍｍＲＮＡを前述のとおり製剤した後、動物を、生理食塩水の製剤またはルシフェラーゼ、ＧＦＰ、ヒトＧ−ＣＳＦおよびヒトＥＰＯの異なる４種類のｍｍＲＮＡから選択される１種類を含むリピドイド製剤のいずれかを受ける群に分ける。動物に注入する前に、ｍｍＲＮＡ含有リピドイド製剤をＰＢＳ中に希釈する。次に動物に、動物の体重当たり注入されるｍｍＲＮＡの量に応じて、１０ｍｇ／ｋｇからわずか１ｎｇ／ｋｇの範囲の用量で、好ましい範囲は１０ｍｇ／ｋｇから１００ｎｇ／ｋｇで、単回用量の製剤ｍｍＲＮＡを投与する。動物がマウスの場合は、リピドイド製剤の静脈内注入量は、２０グラムのマウスに対し最高０．２ｍｌである。ｍｍＲＮＡ−リピドイドの投与後様々な時点で、血清、組織および組織溶解物が得られ、ｍｍＲＮＡにコードされる生成物のレベルが決定され得る。リピドイド製剤されたルシフェラーゼ、ＧＦＰ、Ｇ−ＣＳＦおよびＥＰＯｍｍＲＮＡが所
望のタンパク質生成物を発現する能力は、ルシフェラーゼ発現は蛍光で、ＧＦＰ発現はフローサイトメトリーで、Ｇ−ＣＳＦとエリスロポエチン（ＥＰＯ）分泌はＥＬＩＳＡで確認できる。
【０８３１】
反復投与レジメンの追加研究も、ｍｍＲＮＡを用いての最大発現を評価し、（対照と活性ｍｍＲＮＡ製剤を並列または順次与えることで達成される）ｍｍＲＮＡ由来の発現の飽和度を評価し、（ｍｍＲＮＡを週または月に分けて投与した後発現レベルが免疫原性などの要因に影響を受けるか評価することで）反復薬物投与の実行可能性を判定するために実施され得る。発現されたタンパク質生成物の検出に加えて、タンパク質の生理学的機能、たとえばＧ−ＣＳＦやＥＰＯの評価も、被験動物由来の試料を分析して顆粒球数や赤血球数の各増加を検出することで決定され得る。
【０８３２】
実施例１６  リピドイド製剤を使用しての筋肉内および／または皮下注射後の修飾ＲＮＡにコードされるタンパク質のインビボでの発現
筋肉内注射経路または皮下注射経路による、ｓｉＲＮＡを含むオリゴヌクレオチドを送達するためのリピドイド製剤の使用は、これまで報告されていないので評価が必要である。ｍｍＲＮＡ含有リピドイド製剤の筋肉内注射および／または皮下注射は評価され、所望のタンパク質を局所と全身の両方で発現する能力があるかどうかが決定される。
【０８３３】
ｍｍＲＮＡを含むリピドイド製剤が、動物に筋肉内注射および／または皮下注射され得る。ｍｍＲＮＡにコードされるタンパク質の発現は、筋肉または皮下組織内において、また、血管および肝臓や脾臓などのその他の器官での全身的に評価され得る。９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００およびＭＤ１系の各リピドイド製剤ならびにおそらくは他のリピドイド系製剤がルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ヒトＧ−ＣＳＦまたはヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）ｍｍＲＮＡのいずれかを送達する能力を評価する。単回用量の試験を実施することで、所望の生成物の効果の大きさ、投与応答性および寿命の評価も可能になる。リピドイド製剤を含むｍｍＲＮＡを前述のとおり製剤した後、動物を、生理食塩水の製剤またはルシフェラーゼ、ＧＦＰ、ヒトＧ−ＣＳＦおよびヒトＥＰＯの異なる４種類のｍｍＲＮＡから選択される１種類を含むリピドイド製剤のいずれかを受ける群に分ける。動物に注入する前に、ｍｍＲＮＡ含有リピドイド製剤をＰＢＳ中に希釈し、動物に、５０ｍｇ／ｋｇからわずか１ｎｇ／ｋｇの範囲の用量で、好ましい範囲は１０ｍｇ／ｋｇから１００ｎｇ／ｋｇで、単回の筋肉内用量の製剤ｍｍＲＮＡを投与する。被験動物がマウスの場合、最大用量は、だいたい１ｍｇのｍｍＲＮＡか、後肢に一度に投与するならばわずか０．０２ｎｇのｍｍＲＮＡである。同様に、皮下投与では、ｍｍＲＮＡ含有リピドイド製剤をＰＢＳ中に希釈してから、４００ｍｇ／ｋｇからわずか１ｎｇ／ｋｇの範囲で動物に単回皮下用量の製剤されたｍｍＲＮＡが投与される。好ましい用量範囲は、８０ｍｇ／ｋｇから１００ｎｇ／ｋｇであり得る。被験動物がマウスの場合、投与される最大用量はだいたい８ｍｇのｍｍＲＮＡか、用量を皮下に一度に投与するならばわずか０．０２ｎｇのｍｍＲＮＡであり得る。
【０８３４】
２０グラムのマウスでは、単回の筋肉内注射の量は最高０．０２５ｍｌであり、単回の皮下注射の量は最高０．２ｍｌであるのが好ましい。動物に投与されるｍｍＲＮＡの用量は、動物の体重に応じて計算される。ｍｍＲＮＡ−リピドイドの投与後様々な時点で、血清、組織および組織溶解物を得ることができ、ｍｍＲＮＡにコードされる生成物のレベルが決定される。リピドイド製剤されたルシフェラーゼ、ＧＦＰ、Ｇ−ＣＳＦおよびＥＰＯ
ｍｍＲＮＡが所望のタンパク質を発現する能力は、ルシフェラーゼ発現は蛍光で、ＧＦＰ発現はフローサイトメトリーで、Ｇ−ＣＳＦとエリスロポエチン（ＥＰＯ）分泌はＥＬＩＳＡで確認できる。
反復投与レジメンの追加研究も、ｍｍＲＮＡを用いての最大発現を評価し、（対照と活性ｍｍＲＮＡ製剤を並列または順次与えることで達成される）ｍｍＲＮＡ由来の発現の飽和
度を評価し、（ｍｍＲＮＡを週または月に分けて投与した後発現レベルが免疫原性などの要因に影響を受けるか評価することで）反復薬物投与の実行可能性を判定するために実施され得る。１つの時点で複数の皮下または筋肉内注射部位を用いる研究は、ｍｍＲＮＡ薬物への曝露をさらに増加しタンパク質産生を増加するのにも使用され得る。発現されたタンパク質生成物の検出に加えて、タンパク質の生理学的機能、たとえばＧ−ＣＳＦやＥＰＯの評価も、被験動物由来の試料を分析して顆粒球数や赤血球数の各増加を検出することで決定される。
【０８３５】
実施例１７．インビトロのＶＥＧＦ−Ａの形質移入
ヒト血管内皮増殖因子アイソフォームＡ（ＶＥＧＦ−Ａ）修飾ｍＲＮＡ（配列番号２５７にｍＲＮＡ配列を示す。およそ１６０ヌクレオチドのポリＡテールは配列中に示していない；５´キャップ、キャップ１）を、逆向き形質移入を介して、２４マルチウェルプレート中のヒト角化細胞に形質移入した。ヒト角化細胞は、５０〜７０％コンフルエンスに達するまで、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カリフォルニア州カールスバッド）から入手されるＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｓ７を入れたＥＰＩＬＩＦＥ（登録商標）培地中で増殖させた。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カリフォルニア州カールスバッド）から入手されるＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と複合体化されたＶＥＧＦ−Ａをコードする修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）の０、４６．８７５、９３．７５、１８７．５、３７５、７５０、および１５００ｎｇを、細胞に形質移入させた。ＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）複合体は、第一に、室温で１０分間、５×体積希釈でサプリメントフリーのＥＰＩＬＩＦＥ（商標）培地でＲＮＡをインキュベートすることによって形成された。第二のバイアル中で、ＲＮＡＩＭＡＸ（登録商標）試薬を、室温で１０分間、１０×体積希釈でサプリメントフリーのＥＰＩＬＩＦＥ（商標）培地とインキュベートした。次いで、ＲＮＡバイアルを、ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）バイアルと混合し、細胞を滴下させて加える前に、室温で２０〜３０分間、インキュベートさせた。
【０８３６】
ヒト角化細胞に形質移入されたＶＥＧＦ−Ａをコードする完全最適化ｍＲＮＡは、翻訳の間に、たとえば天然ヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）、各ウリジン部位でシュードウリジンおよび各シトシン部位で５−メチルシトシン（シュードＵ／５ｍＣ）、および各ウリジン部位でＮ１−メチル−シュードウリジンおよび各シトシン部位で５−メチルシトシン（Ｎ１−メチル−シュードＵ／５ｍＣ）等の修飾を含んでいた。細胞は、ＶＥＧＦ−ＡをコードするｍｍＲＮＡで形質移入され、培養培地中の分泌されたＶＥＧＦ−Ａ濃度（ｐｇ／ｍｌ）を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カリフォルニア州カールスバッド）から入手したＥＬＩＳＡキットを用いて、メーカーの推奨する説明書に従い、形質移入後６、１２、２４、および４８時間後に各濃度を計測した。表６に示されるこれらのデータより、ＶＥＧＦ−Ａをコードする修飾ｍＲＮＡは、ヒト角化細胞において翻訳されることができ、ＶＥＧＦ−Ａは、細胞の外へ移送され、細胞外環境へと放出されることが示される。
【０８３７】
【表６】
2015510495.tif 000149
実施例１８  ＶＥＧＦ修飾ｍＲＮＡのインビトロでの発現
ＨＥＫ２９３細胞を、修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）ＶＥＧＦ−Ａ（配列番号２５７にｍＲＮＡ配列を示す；およそ１６０ヌクレオチドのポリＡテールは配列中に示していない；５´キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）（表７に示される濃度で、Ｌｉｐｏｆｅａｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カリフォルニア州カールスバッド）より入手）で複合体化されている）で形質移入した。タンパク質発現をＥＬＩＳＡにより検出し、タンパク質（ｐｇ／ｍｌ）を表７に示す。
【０８３８】
【表７】
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実施例１９  シュードウリジンとＮ１−メチルシュードウリジンの指令されたＳＡＲ
近年、ピリミジンヌクレオシドシュードウリジンに注目が集まり、シュードウリジンまたはＮ１−メチルシュードウリジンへの修飾を含有するｍＲＮＡを調べるための一連の構造活性試験が設計されている。
【０８３９】
その試験は、修飾がＮ１位、Ｃ６位、２位、４位およびリン酸主鎖上になされた場合の鎖長、脂溶性増加、環構造の存在および疎水性または親水性相互作用の変化の影響を研究するよう設計された。安定性も調査される。
この目的のために、アルカリ化、シクロアルカリ化、アルキル−シクロアルキル化、アリール化、アルキル−アリール化、アミノ基を伴うアルキル化部分、カルボキシル酸基を有するアルキル化部分、およびアミノ酸電荷部分を含有するアルキル化部分を含む修飾が調査される。アルキル化の程度は、通常、Ｃ１〜Ｃ６である。化学的修飾の例を、表８および表９に挙げる。
【０８４０】
【表８】
2015510495.tif 000151
2015510495.tif 000152
【０８４１】
【表９】
2015510495.tif 000153
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実施例２０．天然および非天然のヌクレオシドの組み込み
天然および非天然のヌクレオシドを、目的のポリペプチドをコードしているｍＲＮＡに組み込む。これらの例を表１０と１１に示す。ある市販のヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）を本発明のポリヌクレオチドにおいて調査する。これらの選択を表１１に示す。次いで、得られたｍＲＮＡのタンパク質産生、サイトカイン誘導および／または治療効果を生み出す能力を検証する。
【０８４２】
【表１０】
2015510495.tif 000157
【０８４３】
【表１１】
2015510495.tif 000158
実施例２１．核酸塩基および炭水化物（糖）への修飾の組み込み
天然および非天然のヌクレオシドを、目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡに組み込む。核酸塩基および炭水化物（糖）の両方への修飾を有する市販のヌクレオシドおよびＮＴＰの、ｍＲＮＡに組み込まれる能力、タンパク質を産生する能力、サイトカインを誘導する能力および／または治療効果を生み出す能力を検証する。これらのヌクレオシドの例を表２２および表２３に示す。
【０８４４】
【表１２】
2015510495.tif 000159
【０８４５】
【表１３】
2015510495.tif 000160
表中、「ＵＴＰ」はウリジン三リン酸を表し、「ＧＴＰ」はグアノシン三リン酸を表し、「ＡＴＰ」はアデノシン三リン酸を表し、「ＣＴＰ」はシトシン三リン酸を表し、「ＴＰ」は三リン酸を表し、「Ｂｚ」はベンジルを表す。
【０８４６】
実施例２２  インビトロのＶＥＧＦ  ＰＢＭＣ研究
５−メチルシトシンとシュードウリジン（ＶＥＧＦ５ｍＣ／ｐＵ）で完全修飾された、５−メチルシトシンとＮ１−メチルシュードウリジン（ＶＥＧＦ５ｍＣ／Ｎ１ｍｐＵ）で完全修飾された、または非修飾（ＶＥＧＦ  ｕｎｍｏｄ）の、５００ｎｇのＶＥＧＦｍＲＮＡ（配列番号２５７  配列内にはおよそ１６０ヌクレオチドのポリＡテールは示されていない；５’キャップ、キャップ１）を０．４ｕＬのリポフェクタミン２０００を用いて
健常な３名の供血者（Ｄ１、Ｄ２およびＤ３）由来の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）に形質移入した。各供血者の細胞は対照として未処理の細胞も用意した。上清を採取し、形質移入後ＥＬＩＳＡに２２時間供してタンパク質発現とサイトカイン誘導を決定した。ＶＥＧＦの発現とＩＦＮ−αの誘導を表２４に示す。
【０８４７】
【表１４】
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実施例２３  インビトロの修飾ｍＲＮＡの発現
ＨＥＫ２９３細胞をＶＥＧＦ−Ａ修飾ｍＲＮＡ（配列番号２５７に示されるｍＲＮＡ配列；配列内にはおよそ１６０ヌクレオチドのポリＡテールは示されていない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンとシュードウリジンで完全修飾されている）で形質移入し、ＨｅＬａ細胞をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社（カリフォルニア州カールスバッド）のリポフェクタミン２０００と表２５および２６に示す濃度で既に複合体化されたトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列２５８；配列内にはおよそ１６０ヌクレオチドのポリＡテールは示されていない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンとシュードウリジンで完全修飾されている）を用いてフォワードトランスフェクトした。タンパク質発現をＥＬＩＳＡで検出し、タンパク質（ｐｇ／ｍｌ）は表２５および２６にも示されている。ＴＧＦ−βは、未処理細胞の対照とリポフェクタミン２０００の偽形質移入も試験した。
【０８４８】
【表１５】
2015510495.tif 000162
【０８４９】
【表１６】
2015510495.tif 000163
用いられている文言は、制限ではなく記述のための文言であり、そして、より広い解釈
にある本発明の真の範囲および精神から逸脱することなく、添付のクレームの範囲内で変更がありうることが理解される。
【０８５０】
本発明が記述されるいくつかの実施態様に関して、ある程度詳細に、およびある具体性で記述されているが、本発明は、任意のそのような詳細事項もしくは実施態様、または特定の実施態様に限定される意図はなく、先行技術を考慮して、最も広く、可能性のある解釈を提示し、本発明の意図される範囲を有効に包含する、添付のクレームに本発明は準拠するとみなされる。
【０８５１】
本明細書において言及されるすべての公表文献、特許出願、特許および他の参考文献は、その全体が参照により援用される。矛盾が生じる場合、本明細書（定義を含む）が優先される。さらに、項目の表題、材料、方法および実施例は、例示説明のみを目的としており、限定の意図は無い。
【配列表】
2015510495000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年8月19日(2014.8.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
器官または組織移植片、またはそれらの一部分の生存可能性、機能性または寿命を増加させるために使用するための医薬組成物であって、
修飾ｍＲＮＡを含み、該医薬組成物は、前記器官または組織移植片、またはそれらの一部分と接触させられる、医薬組成物。
【請求項２】
器官が、腎臓、心臓、肺、肝臓、膵臓、腸、脾臓、皮膚および眼からなる群より選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
組織移植片が、心臓弁、骨、静脈、中耳、軟骨、腱および靭帯からなる群より選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
修飾ｍＲＮＡを含む該医薬組成物が、製剤された修飾ｍＲＮＡを含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
器官が心臓または肺であって、製剤が生理食塩水、脂質、リピドイド、ポリマー、リポソーム製剤、脂質ナノ粒子、速やかに排出される脂質ナノ粒子、ダイナミックポリコンジュゲート製剤、ａｔｕｐｌｅｘ、ＤＢＴＣ製剤、ＰＬＧＡポリマー、プロタミン系剤、細胞透過性ペプチド、糖コンジュゲートまたはステロイド、ヒドロゲル、シーラントおよび細胞ベースの担体系からなる群より選択される、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記接触が、ホスト生物への前記医薬組成物の投与を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ホスト生物がドナー生物である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ドナー生物への投与が、心臓、肺または膵臓を摘出するあらゆる手順の前、または心臓、肺または膵臓の摘出中に生じる、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ドナー生物が哺乳動物である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
哺乳動物がヒトである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
投与が、心臓、肺または膵臓の摘出前に、ドナーの血液への送達により行われる、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
投与が、心臓、肺または膵臓の摘出前に、ドナーから全採血後の前記ドナーの血液への送達により行われる、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
投与が、心臓、肺または膵臓の摘出中に、ドナーの血液への送達により行われる、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
投与が、心臓、肺または膵臓の摘出中に、ドナーの胸腔への送達により行われる、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
血液への送達が、少なくとも部分的には、医療デバイス、システムまたはコンポーネントの使用により、またはそれらとの併用により促進される、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
医療デバイスがエックスビボ器官管理システムである、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記接触が、レシピエント生物への前記医薬組成物の投与を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
レシピエント生物への投与が、ホストの心臓または肺を摘出するあらゆる手順の前、ホストの心臓摘出中、ホストの心臓摘出後であるが心臓または肺の移植前、心臓移植中または心臓もしくは肺移植後に生じる、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
レシピエント生物への投与が、少なくとも部分的には、医療デバイス、システムまたはコンポーネントの使用により、またはそれらとの併用により促進される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
医療デバイスがエックスビボ器官管理システムである、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
製剤された修飾ｍＲＮＡを含む医薬組成物であって、前記修飾ｍＲＮＡはラジカル捕捉剤として作用するポリペプチドをコードする、医薬組成物。
【請求項２２】
器官または組織移植片への再灌流による損傷を低減させるために使用するための医薬組成物であって、
製剤された修飾ｍＲＮＡを含み、該医薬組成物は、前記器官または組織移植片と接触させられる、医薬組成物。
【請求項２３】
生物における移植拒絶反応を低減させるために使用するための医薬組成物であって、
製剤された、免疫抑制剤をコードする修飾ｍＲＮＡを含み、該医薬組成物は、前記生物と接触させられる、医薬組成物。
【請求項２４】
製剤された修飾ｍＲＮＡが、タンパク質プロテインａ４β１、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ−１）、ＶＥＧＦ、ニューレグリン１（ＮＲＧ１）チモシンβ−４主要組織適合遺
伝子複合体（ＭＨＣ）、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、ｂ細胞白血病／リンパ腫−２（ＢＣＬ−２）、一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）、インターロイキン−４、インターロイキン−１０、形質転換増殖因子β−１（ＴＧＦ−β１）、ヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１またはＨＭＯＸ１）、キラー細胞免疫グロブリン受容体（ＫＩＲ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤をコードする、請求項４に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2015510495.tif 000164