【手続補正書】
【提出日】平成21年11月26日(2009.11.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＥＧＦＲ遺伝子の増幅を含む細胞上のＥＧＦＲに結合し得る単離された抗体またはその活性フラグメントであって、当該細胞がＥＧＦＲ遺伝子の複数のコピーを含み、ＥＧＦＲレセプターｄｅ２−７を発現し、当該単離された抗体またはその活性フラグメントが（ａ）ＥＧＦＲが増幅または過剰発現した場合にのみ細胞結合ヒト野生型ＥＧＦＲに結合し、（ｂ）アミノ酸配列ＬＥＥＫＫＧＮＹＶＶＴＤＨから成るｄｅ２−７ＥＧＦＲ接合部ペプチドを認識せず、（ｃ）ＦＡＣＳ分析によって決定されるネイティブＵ８７ＭＧ星状細胞腫細胞株と反応せず、（ｄ）免疫組織化学によって決定される正常肝組織に結合せず、（ｅ）ヒト野性型ＥＧＦＲの残基２７３−５０１の配列内のエピトープを認識することを特徴とする単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項２】
単離された抗体またはその活性フラグメントが、配列番号２の残基１１５−１２３のアミノ酸配列または１または２置換を含む当該アミノ酸配列を含むポリペプチド結合ドメインを含むことを特徴とする、請求項１に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項３】
前記ポリペプチド結合ドメインが更に、配列番号２の残基４４−５４および６８−８３のいずれか一方または両方のアミノ酸配列または１または２置換を含むこれら配列のいずれか一方または両方のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項２に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項４】
単離された抗体またはその活性フラグメントが、配列番号４の残基１０９−１１７のアミノ酸配列または当該配列内に１または２置換を含むアミノ酸配列を含むポリペプチド結合ドメインを含むことを特徴とする、請求項１に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項５】
配列番号４の残基１０９−１１７のアミノ酸配列または当該配列内に１または２置換を含むアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド結合ドメインを更に含む、請求項２または３に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項６】
前記第２のポリペプチド結合ドメインが更に、配列番号４の残基４４−５４および７０−７６の配列の一方または両方のアミノ酸配列または当該配列内に１または２置換を含む配列の一方または両方のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項４に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項７】
前記第２のポリペプチド結合ドメインが更に、配列番号４の残基４４−５４および７０−７６の配列の一方または両方のアミノ酸配列または当該配列内に１または２置換を含む配列の一方または両方のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項５に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項８】
単離された抗体またはその活性フラグメントが配列番号２および配列番号４の一方または両方のポリペプチド配列を含むことを特徴とする、請求項２乃至７のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項９】
前記ポリペプチド配列が配列番号２である請求項８に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項１０】
前記ポリペプチド配列が配列番号４である請求項８に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項１１】
ＥＧＦＲ遺伝子の増幅を含む腫瘍であって当該腫瘍の細胞がＥＧＦＲ遺伝子の複数のコピーを含む腫瘍上のＥＧＦＲおよびＥＧＦＲレセプターの短縮型ｄｅ２−７を発現する腫瘍上のＥＧＦＲに結合し得る単離された抗体またはその活性フラグメントであって、当該単離された抗体またはその活性フラグメントがアミノ酸配列ＬＥＥＫＫＧＮＹＶＶＴＤＨから成るｄｅ２−７ＥＧＦＲ接合部ペプチドと結合せず、当該単離された抗体またはその活性フラグメントが重鎖および軽鎖を含み、当該重鎖の可変領域がアミノ酸配列ＧＹＳＩＸａａ１ＳＤＦＡＷＮ（式中Ｘａａ１はＴまたはＳである）を有する第１のポリペプチド結合ドメイン領域、アミノ酸配列ＹＩＳＹＳＧＮＴＲＹＸａａ２ＰＳＬＫＳ（式中Ｘａａ２はＮまたはＱである）を有する第２のポリペプチド結合ドメイン領域、およびアミノ酸配列ＶＴＡＧＲＧＦＰＹを有する第３のポリペプチド結合ドメイン領域を含み、当該軽鎖の可変領域がアミノ酸配列ＨＳＳＱＤＩＮＳＮＩＧを有する第１のポリペプチド結合ドメイン領域、アミノ酸配列ＨＧＴＮＬＤＤを有する第２のポリペプチド結合ドメイン領域およびアミノ酸配列ＶＱＹＡＱＦＰＷＴを有する第３のポリペプチド結合ドメイン領域を含むことを特徴とする、前記単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項１２】
ＥＧＦＲ遺伝子の増幅を含む腫瘍であって当該腫瘍の細胞がＥＧＦＲ遺伝子の複数のコピーを含む腫瘍上のＥＧＦＲおよびＥＧＦＲレセプターの短縮型ｄｅ２−７を発現する腫瘍上のＥＧＦＲに結合し得る単離された抗体またはその活性フラグメントであって、当該単離された抗体またはその活性フラグメントがアミノ酸配列ＬＥＥＫＫＧＮＹＶＶＴＤＨから成るｄｅ２−７ＥＧＦＲ接合部ペプチドと結合せず、当該単離された抗体またはその活性フラグメントが重鎖および軽鎖を含み、当該重鎖の可変領域が０または１アミノ酸が置換しているアミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＤＦＡＷＮ由来のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド結合ドメイン領域、０または１アミノ酸が置換しているアミノ酸配列ＹＩＳＹＳＧＮＴＲＹＮＰＳＬＫＳ由来のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド結合ドメイン領域およびアミノ酸配列ＶＴＡＧＲＧＦＰＹを有する第３のポリペプチド結合ドメイン領域を含み、当該軽鎖の可変領域がアミノ酸配列ＨＳＳＱＤＩＮＳＮＩＧを有する第１のポリペプチド結合ドメイン領域、アミノ酸配列ＨＧＴＮＬＤＤを有する第２のポリペプチド結合ドメイン領域およびアミノ酸配列ＶＱＹＡＱＦＰＷＴを有する第３のポリペプチド結合ドメイン領域を含むことを特徴とする、前記単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項１３】
ＥＧＦＲ遺伝子の増幅を含む腫瘍であって当該腫瘍の細胞がＥＧＦＲ遺伝子の複数のコピーを含む腫瘍上のＥＧＦＲおよびＥＧＦＲレセプターの短縮型ｄｅ２−７を発現する腫瘍上のＥＧＦＲに結合し得る単離された抗体またはその活性フラグメントであって、当該単離された抗体またはその活性フラグメントがアミノ酸配列ＬＥＥＫＫＧＮＹＶＶＴＤＨから成るｄｅ２−７ＥＧＦＲ接合部ペプチドと結合せず、当該単離された抗体またはその活性フラグメントが重鎖および軽鎖を含み、当該重鎖のポリペプチド配列がアミノ酸配列ＧＹＳＩＸａａ１ＳＤＦＡＷＮ（式中Ｘａａ１はＴまたはＳである）を有する第１のポリペプチド結合ドメイン領域、アミノ酸配列ＹＩＳＹＳＧＮＴＲＹＸａａ２ＰＳＬＫＳ（Ｘａａ２はＮまたはＱである）を有する第２のポリペプチド結合ドメイン領域およびアミノ酸配列ＶＴＡＧＲＧＦＰＹを有する第３のポリペプチド結合ドメイン領域を含む配列番号２由来の重鎖可変領域ポリペプチド配列を含み、当該軽鎖のポリペプチド配列がアミノ酸配列ＨＳＳＱＤＩＮＳＮＩＧを有する第１のポリペプチド結合ドメイン領域、アミノ酸配列ＨＧＴＮＬＤＤを有する第２のポリペプチド結合ドメイン領域およびアミノ酸配列ＶＱＹＡＱＦＰＷＴを有する第３のポリペプチド結合ドメイン領域を含む配列番号４由来の軽鎖可変領域ポリペプチド配列を含むことを特徴とする、前記単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項１４】
ＥＧＦＲ遺伝子の増幅を含む腫瘍であって当該腫瘍の細胞がＥＧＦＲ遺伝子の複数のコピーを含む腫瘍上のＥＧＦＲおよびＥＧＦＲレセプターの短縮型ｄｅ２−７を発現する腫瘍上のＥＧＦＲに結合し得る単離された抗体またはその活性フラグメントであって、当該単離された抗体またはその活性フラグメントがアミノ酸配列ＬＥＥＫＫＧＮＹＶＶＴＤＨから成るｄｅ２−７ＥＧＦＲ接合部ペプチドと結合せず、当該単離された抗体またはその活性フラグメントが重鎖および軽鎖を含み、当該重鎖の可変領域が０または１アミノ酸が置換しているアミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＤＦＡＷＮ由来のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド結合ドメイン領域、０または１アミノ酸が置換しているアミノ酸配列ＹＩＳＹＳＧＮＴＲＹＮＰＳＬＫＳ由来のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド結合ドメイン領域およびアミノ酸配列ＶＴＡＧＲＧＦＰＹを有する第３のポリペプチド結合ドメイン領域を含む配列番号２由来の重鎖可変領域ポリペプチド配列を含み、当該軽鎖のポリペプチド配列がアミノ酸配列ＨＳＳＱＤＩＮＳＮＩＧを有する第１のポリペプチド結合ドメイン領域、アミノ酸配列ＨＧＴＮＬＤＤを有する第２のポリペプチド結合ドメイン領域およびアミノ酸配列ＶＱＹＡＱＦＰＷＴを有する第３のポリペプチド結合ドメイン領域を含む配列番号４由来の軽鎖可変領域ポリペプチド配列を含むことを特徴とする、前記単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項１５】
ＥＧＦＲ遺伝子の増幅を含む腫瘍であって当該腫瘍の細胞がＥＧＦＲ遺伝子の複数のコピーを含む腫瘍上のＥＧＦＲおよびＥＧＦＲレセプターの短縮型ｄｅ２−７を発現する腫瘍上のＥＧＦＲに結合し得る抗体であって、当該抗体がアミノ酸配列ＬＥＥＫＫＧＮＹＶＶＴＤＨから成るｄｅ２−７ＥＧＦＲ接合部ペプチドと結合せず、当該抗体が重鎖および軽鎖を含み、当該重鎖がアミノ酸配列ＶＴＡＧＲＧＦＰＹ由来のポリペプチド結合ドメインＣＤＲ３領域アミノ酸配列を含む可変領域配列を有することを特徴とする、前記抗体。
【請求項１６】
前記軽鎖が、アミノ酸配列ＶＱＹＡＱＦＰＷＴ由来のポリペプチド結合ドメインＣＤＲ３領域アミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
前記重鎖可変領域の配列が（ａ）アミノ酸ＧＹＳＩＴＳＤＦＡＷＮ、または（ｂ）アミノ酸ＹＩＳＹＳＧＮＴＲＹＮＰＳＬＫＳ由来のポリペプチド結合ドメインＣＤＲアミノ酸を有することを特徴とする請求項１５に記載の抗体。
【請求項１８】
前記軽鎖可変領域の配列が（ａ）アミノ酸ＨＧＴＮＬＤ、または（ｂ）アミノ酸ＶＱＹＡＱＦＰＷＴ由来のポリペプチド結合ドメインＣＤＲアミノ酸配列を更に含むことを特徴とする、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１９】
前記軽鎖がアミノ酸ＨＳＳＱＤＩＮＳＮＩＧ、ＨＧＴＮＬＤＤまたはＶＱＹＡＱＦＰＷＴ由来のポリペプチド結合ドメインＣＤＲアミノ酸配列を含む可変領域配列を有することを特徴とする、請求項１５に記載の抗体。
【請求項２０】
前記重鎖可変領域配列が、アミノ酸ＧＹＳＩＴＳＤＦＡＷＮまたはＹＩＳＹＳＧＮＴＲＹＮＰＳＬＫＳ由来のポリペプチド結合ドメインＣＤＲアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域配列がアミノ酸ＨＳＳＱＤＩＮＳＮＩＧ、ＨＧＴＮＬＤＤまたはＶＱＹＡＱＦＰＷＴ由来のポリペプチド結合ドメインＣＤＲアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項１５に記載の抗体。
【請求項２１】
ヒト野性型ＥＧＦＲの２８７−３０２残基の配列内のエピトープに結合する、請求項１乃至２０のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項２２】
完全ヒト抗体、ヒト化抗体もしくはキメラ抗体またはそれらの活性フラグメントである、請求項１乃至２１のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項２３】
前記結合ドメイン領域がヒト抗体フレームワーク内に存在する、請求項１乃至２２のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項２４】
前記ヒト抗体フレームワークがヒトＩｇＧ１抗体フレームワークである、請求項２３に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項２５】
請求項２３に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントであり、当該単離された抗体またはその活性フラグメントがキメラ抗体であり、当該単離された抗体またはその活性フラグメントが重鎖および軽鎖を含み、当該重鎖が配列番号２に示す抗体結合ドメインおよびヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含むことを特徴とする、単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項２６】
請求項２３に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントであり、当該単離された抗体またはその活性フラグメントがキメラ抗体またはその活性フラグメントであり、当該単離された抗体またはその活性フラグメントが重鎖および軽鎖を含み、当該軽鎖が配列番号４に示す抗体結合ドメインおよびヒトκ軽鎖定常領域を含むことを特徴とする、単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項２７】
請求項１乃至２６のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントであって、当該単離された抗体またはそのフラグメントが抗体Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖフラグメント、ｄｉａｂｏｄｙ（二価抗体）、ｔｒｉａｂｏｄｙ  （三価抗体）またはｔｅｔｒａｂｏｄｙ（四価抗体）の形態である単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項２８】
請求項１乃至２６のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントであって、当該単離された抗体またはその活性フラグメントが免疫結合体であり治療または診断目的を有する１以上の他の分子または薬剤と共有結合または連結されていることを特徴とする、単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項２９】
請求項２８に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントであって、前記他の分子または薬剤が、他の抗体、抗体フラグメント、毒素、リガンド、放射性同位体および化学療法剤から選択されることを特徴とする、単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項３０】
請求項１乃至２７のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントであって、当該単離された抗体またはその活性フラグメントが検出可能標識または機能的標識と結合していることを特徴とする単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項３１】
前記標識が共有結合した薬剤または放射性標識である、請求項３０に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項３２】
前記放射性標識が３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、９０Ｙ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、２１１Ａｔ、１９８Ａｕ、６７Ｃｕ、２２５Ａｃ、２１３Ｂｉ、９９Ｔｃまたは１８６Ｒｅのいずれかである、請求項３１に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項３３】
ペグ化されている請求項１乃至２６のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項３４】
ヒトまたは動物体の治療または診断方法に使用するための、請求項１乃至３３のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメント。
【請求項３５】
画像診断に使用する医薬の製造における請求項１乃至３３のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントの使用。
【請求項３６】
哺乳動物の癌の治療または診断に使用する医薬の製造における、請求項１乃至３３のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントの使用。
【請求項３７】
癌が脳内に位置するかまたは脳に隣接して位置する、請求項３６に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントの使用。
【請求項３８】
前記癌が、グリア芽細胞種、髄芽細胞腫、髄膜腫、腫瘍性星状細胞種および腫瘍性動静脈先天異常から選択される脳内在性癌である、請求項３７に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントの使用。
【請求項３９】
癌が神経腫瘍である、請求項３６に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントの使用。
【請求項４０】
前記単離された抗体またはその活性フラグメントが全身投与されることを特徴とする、請求項３６乃至３９のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントの使用。
【請求項４１】
前記治療が放射免疫治療を含むことを特徴とする、請求項３６乃至４０のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントの使用。
【請求項４２】
前記単離された抗体またはその活性フラグメントが最初に投与され、その後に化学療法剤を含む組成物が投与されることを特徴とする、請求項３６乃至４０のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントの使用。
【請求項４３】
請求項１乃至３４のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントをコードする配列を含む単離された核酸。
【請求項４４】
単離された抗体またはその活性フラグメントが発現する条件下で請求項４３に記載の核酸を発現させること、および当該単離された抗体またはその活性フラグメントを回収することを含む、単離された抗体またはその活性フラグメントの調製方法。
【請求項４５】
ＥＤＦＲが増幅しているかまたは過剰発現している腫瘍またはＥＧＦＲが短縮型（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）タンパク質の形態で発現している腫瘍の診断用キットであって、請求項１乃至３４のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントを含み、更に試薬および／または使用説明書を含んでいてもよい前記診断用キット。
【請求項４６】
請求項１乃至３４のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントを含み、更に医薬上許容されるベヒクル、キャリアまたは希釈剤を含んでいてもよい医薬組成物。
【請求項４７】
請求項４６の医薬組成物の医薬投与形態および化学療法剤、抗ＥＧＦＲ抗体、放射免疫治療剤およびこれらの組合わせから選択される追加の抗癌剤を含む別個の医薬投与形態を含む、ヒト患者の腫瘍治療のためのキット。
【請求項４８】
前記化学治療剤がチロシンキナーゼインヒビター、リン酸カスケードインヒビター、翻訳後修飾因子、細胞増殖インヒビターまたは分裂インヒビター（例えば、抗有糸分裂薬）、シグナル伝達インヒビターおよびこれらの組合わせからなる群より選択されることを特徴とする、請求項４７に記載のキット。
【請求項４９】
前記チロシンキナーゼインヒビターがＡＧ１４７８、ＺＤ１８３９、ＳＴＩ５７１、ＯＳＩ−７７４、ＳＵ−６６６８およびこれらの組合わせからなる群より選択させることを特徴とする請求項４８に記載のキット。
【請求項５０】
前記抗ＥＧＦＲ抗体が抗ＥＧＦＲ抗体５２８、２２５、ＳＣ−０３、ＤＨ８．３、Ｌ８Ａ４、Ｙ１０、ＩＣＲ６２、ＡＢＸ−ＥＧＦおよびこれらの組合わせからなる群より選択されることを特徴とする、請求項４７に記載のキット。
【請求項５１】
ＤＮＡ配列またはその縮重改変体を含む組換えＤＮＡ分子で形質転換された単細胞宿主であって、当該ＤＮＡ配列は請求項１乃至３４のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントをコードし、
（Ａ）配列番号１のＤＮＡ配列、
（Ｂ）配列番号３のＤＮＡ配列、
（Ｃ）配列番号１のＤＮＡ配列および配列番号３のＤＮＡ配列
（Ｄ）配列番号８に記載の定常ＩｇＧ１配列を有する配列番号１のＤＮＡ配列および配列番号７に記載の定常κ配列を有する配列番号３のＤＮＡ配列、
（Ｅ）標準的なハイブリダイゼーション条件下で前出のＤＮＡ配列のうちのいずれかにハイブリダイズするＤＮＡ配列、および
（Ｆ）前出のＤＮＡ配列のうちのいずれかによってコードされるアミノ酸配列の発現をコードするＤＮＡ配列、
からなる群から選択され、ここで該ＤＮＡ配列は、発現制御配列に作動可能に連結されることを特徴とする、前記単細胞宿主。
【請求項５２】
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、酵母、ＣＨＯ細胞、ＹＢ／２０細胞、ＮＳＯ細胞、ＳＰ２／０細胞、Ｒ１．１細胞、Ｂ−Ｗ細胞、Ｌ−Ｍ細胞、ＣＯＳ１細胞、ＣＯＳ７細胞、ＢＳＣ１細胞、ＢＳＣ４０細胞、およびＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、および組織培養物中のヒト細胞からなる群から選択される、請求項５１に記載の単細胞宿主。
【請求項５３】
増幅しているかもしくは過剰発現しているＥＧＦＲまたはｄｅ２−７ＥＧＦＲの存在を検出する方法であって、当該ＥＧＦＲを
（ａ）増幅しているかもしくは過剰発現しているＥＧＦＲまたはｄｅ２−７ＥＧＦＲの存在が推測される哺乳動物由来の生体サンプルを、請求項１乃至３４のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその活性フラグメントへの当該ＥＧＦＲの結合が生じる条件下で当該単離された抗体またはその活性フラグメントと接触させること、および
（ｂ）当該生体サンプル由来のＥＧＦＲと当該単離された抗体またはその活性フラグメントとの間で結合が生じたか否かを検出することを含み、当該結合の検出がサンプル中におけるＥＧＦＲの存在を示すことを特徴とする前記方法。
【請求項５４】
請求項５３の方法によってＥＧＦＲの存在を検出することを含む哺乳動物における癌の検出方法であって、ＥＧＦＲの存在の検出が当該哺乳動物における腫瘍または癌の存在を示すことを特徴とする前記方法。