(57)【要約】  本発明は、少なくとも８個の連続するアミノ酸を有し、次の式：Ｔｅｒ1−Ｘ1−Ｂ1−Ｘ2−Ｂ2−Ｘ3−Ｚ1−Ｚ2−Ｘ4−Ｔｅｒ2の配列を有する、新規抗菌性ペプチドに関する。このペプチドは、更に修飾された末端も有することができる。前記ペプチドは、微生物、例えば細菌又は真菌により引き起こされる炎症性及び感染性疾患の治療及び予防のために有効である。
2015510874.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗菌活性を有し、少なくとも８個で最大１２個の連続するアミノ酸からなりかつＣ末端及びＮ末端を有するペプチド又はその誘導体において、前記ペプチドは次の式Ｉ：
Ｔｅｒ1−Ｘ1−Ｂ1−Ｘ2−Ｂ2−Ｘ3−Ｚ1−Ｚ2−Ｘ4−Ｔｅｒ2  （式Ｉ）
［式中、
Ｔｅｒ1は、Ｎ末端アミノ酸Ｘ1の遊離Ｎ末端アミノ基であるか、又は修飾されたＮ末端アミノ基であり；
Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は、それぞれ同じ又は異なり、互いに独立して、塩基性側鎖を有するアミノ酸からそれぞれ選択され、好ましく次の：アルギニン、リジン、６−ヒドロキシリジン、ホモアルギニン、２，４−ジアミノ酪酸、［ベータ］−ホモアルギニン、Ｄ−アルギニン、アルギナール、２−アミノ−３−グアニジノプロピオン酸、ニトロアルギニン、Ｎ−メチル−アルギニン、［エプシロン］−Ｎ−メチルリジン、ａｌｌｏ−ヒドロキシリジン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，２′−ジアミノピメリン酸、オルニチン、ｓｙｍ−ジメチルアルギニン、ａｓｙｍ−ジメチルアルギニンの１つから選択され、
Ｂ1及びＢ2は、同じ又は異なり、それぞれ、脂肪族側鎖又は塩基性側鎖を有するアミノ酸であり、かつ好ましくはアラニン又はグリシンから選択されていて、
Ｚ1及びＺ2は、それぞれシステインであるか、又はシステインとアラニンであることができ、及び
Ｔｅｒ2は、Ｃ末端アミノ酸Ｘ4の遊離Ｃ末端カルボキシル基であるか、又は修飾されたＣ末端カルボキシル基である］の配列を有する、ペプチド又はその誘導体。
【請求項２】
請求項１に記載のペプチドにおいて、前記ペプチドは８個の連続するアミノ酸からなりかつ前記式Ｉの配列を有することを特徴とする、ペプチド。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のペプチド又はその誘導体において、前記ペプチドは配列番号１〜６の１つから選択されているか、又はその誘導体であり、前記誘導体は、少なくとも１つのアミノ酸がアミノ酸誘導体に交換されることにより形成されることを特徴とする、ペプチド又はその誘導体。
【請求項４】
請求項１から３までのいずれか１項に記載のペプチドにおいて、前記ペプチドはＤ−アミノ酸又はＬ−アミノ酸又はそれらの混合物からなることを特徴とする、ペプチド。
【請求項５】
請求項１から４までのいずれか１項に記載のペプチドにおいて、前記ペプチドはＣ末端及び／又はＮ末端が、アセチル化、アミド化、ホルミル化、ホスホリル化により修飾されていることを特徴とする、ペプチド。
【請求項６】
請求項１から５までのいずれか１項に記載のペプチドの、抗生物質としての、及び／又は殺菌剤又は洗浄剤中での使用。
【請求項７】
請求項６に記載の使用において、微生物により引き起こされる炎症性疾患又は感染性疾患の治療及び／又は予防のための使用。
【請求項８】
請求項７に記載の使用において、前記炎症性疾患又は感染性疾患は微生物により引き起こされ、前記微生物は細菌、ウイルス又は酵母菌であることを特徴とする、使用。
【請求項９】
請求項６から８までのいずれか１項に記載の使用において、前記炎症性疾患又は感染性疾患は、ビフィドバクテリウム種、ラクトバシラス種、大腸菌、ストレプトコッカス種、スタフィロコッカス種、バクテロイド種、カンジダ種、シュードモナス種、プロピオニバクテリウム種、トレポネーマ種から選択される微生物により引き起こされることを特徴とする、使用。
【請求項１０】
請求項６から９までのいずれか１項に記載の使用において、前記炎症性疾患又は感染性疾患は、慢性の炎症性腸疾患、口腔／咽頭腔の炎症性疾患、肺疾患、泌尿生殖系の疾患、膵臓の疾患、女性の生殖管の疾患、皮膚の疾患又は損傷又は火傷から選択されることを特徴とする、使用。
【請求項１１】
請求項１から５までのいずれか１項に記載の少なくとも１種のペプチド及び製剤学的に許容される付形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１から５までのいずれか１項記載のペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規抗菌性ペプチド及びその医薬における使用に関する。
【０００２】
抗菌性ペプチド、これは省略して「ＡＭＰ」ともいわれる、は先天的な免疫システムの一部であり、微生物の感染に対する上皮性防御のため生死にかかわるほど重要である。
【０００３】
健康なヒトの場合に、皮膚及び粘膜は、微生物による感染に対し物理的バリアを形成する。この物理的バリアは、健康な皮膚では角質層からなり、粘膜では粘液層からなり、ここでは落屑及び粘膜分泌が表面を常に更新し、同時に表面に付着した微生物を連続的に取り除く。皮膚中にさらに存在する脂質との相互作用で、この物理的バリアは、微生物が生きた表皮内に侵入することを防ぐ。
【０００４】
この物理的バリアを除いて、健康な皮膚及び粘膜の正常な感染防御のためには、更に他の要素が必要であり、この要素には、特に生体に特有の抗菌性ペプチドが含まれる。例えば、リゾチームは抗菌性ペプチドであり、これは鼻分泌物中に存在しかつ特にグラム陽性細菌を死滅させることができる。更に、腸粘膜ではデフェンシンが抗菌性ペプチドとして知られていて、このデフェンシンの存在は、特に腸上皮が極めて大量の細菌に曝されているという背景からも必然的である。微生物にとって通過するのが困難な粘液層の他に、腸粘膜中にはパネート細胞が存在し、このパネート細胞は、ヒトデフェンシン−５を分泌し、かつ特に腸粘膜を常に更新するために重要な幹細胞を保護する。
【０００５】
他の公知のＡＭＰは、プソリアシンとして公知のペプチド、並びにヒトの生体に特有の有効な広帯域抗生物質であるＲＮａｓｅ−７である。
【０００６】
生体に特異的な公知の抗菌性ペプチドの他に、先行技術では、その他に多数の抗生物質が公知であり、これらの中には生物由来の物質も、合成的に製造された物質も含まれ、これらはつまり本来の意味のように天然で生成された真菌又は細菌の低分子の代謝産物であるか又は化学的に合成された治療薬である。
【０００７】
特に、天然抗生物質及び合成抗生物質に対する耐性の出現が、微生物による感染疾患の治療をますます困難にするという背景から、定期的に、低い副作用、簡単な製造及び取り扱いに優れた新たな抗菌作用の必要性が生じる。
【０００８】
この背景から、本発明の課題は、微生物による感染性疾患の治療のために使用することができる新規抗菌性物質を提供することである。
【０００９】
本発明の場合に、前記課題は、抗菌活性を有し、少なくとも８個で最大１２個の連続するアミノ酸からなりかつＣ末端及びＮ末端を有するペプチドにおいて、このペプチドは次の式Ｉ：
Ｔｅｒ1−Ｘ1−Ｂ1−Ｘ2−Ｂ2−Ｘ3−Ｚ1−Ｚ2−Ｘ4−Ｔｅｒ2  （式Ｉ）
［式中、
Ｔｅｒ1は、Ｎ末端アミノ酸Ｘ1の遊離Ｎ末端アミノ基であるか、又は修飾されたＮ末端アミノ基であり；
Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は、それぞれ同じ又は異なり、互いに無関係に、塩基性側鎖を有するアミノ酸からそれぞれ選択され、好ましく次の：アルギニン、リジン、６−ヒドロキシリジン、ホモアルギニン、２，４−ジアミノ酪酸、［ベータ］−ホモアルギニン、Ｄ−アルギニン、アルギナール（Arginal）、２−アミノ−３−グアニジノプロピオン酸、ニトロアルギニン、Ｎ−メチル−アルギニン、［エプシロン］−Ｎ−メチルリジン、ａｌｌｏ−ヒドロキシリジン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，２′−ジアミノピメリン酸、オルニチン、ｓｙｍ−ジメチルアルギニン、ａｓｙｍ−ジメチルアルギニンの１つから選択され、
Ｂ1及びＢ2は、同じ又は異なり、互いに無関係に、脂肪族側鎖又は塩基性側鎖を有するアミノ酸からそれぞれ選択され、好ましくはアラニン又はグリシンから選択され、
Ｚ1及びＺ2は、それぞれシステインであるか、又はシステインとアラニンであることができ、及び
Ｔｅｒ2は、Ｃ末端アミノ酸Ｘ4の遊離Ｃ末端カルボキシル基であるか、又は修飾されたＣ末端カルボキシル基である］の配列を有するペプチドにより解決される。
【００１０】
その際、このペプチドが８個のアミノ酸からなり、式Ｉの配列を有する場合が好ましい。
【００１１】
Ｚ1及びＺ2は、上述のように、ここではそれぞれシステインであるか、又はシステインとアラニンであり、つまり、Ｚ1がシステインである場合にＺ2はアラニンであり、Ｚ1がアラニンである場合にＺ2はシステインである。
【００１２】
このペプチドは、ここでは、好ましくは合成により製造、組み換えにより製造、酵素分解により取得及び／又は単離されている。本発明によるペプチドは比較的短いペプチドであるので、本発明によるペプチドを合成により製造する場合が好ましく；合成による製造方法は、先行技術において十分に公知であり、かつ特に液相及び固相化学的合成方法を含む。例えば、概略文献／標準文献のKent, S.著, 「Chemical Synthesis of Peptides and Proteins」, Annual Review of Biochemistry 57:957-989 (1988)が参照される。該当する分野において、合成ペプチドを商業的に製造している現在多くの企業がある。
【００１３】
式Ｉの８個のアミノ酸の他に、本発明によるペプチドは、Ｎ末端にもＣ末端にも、更に本発明によるペプチドの作用及び安定性を損なわないか又は僅かにしか損なわない他のアミノ酸を有することができ；当業者には、本発明によるペプチドの構造を前提に出発して、この８個のアミノ酸からなるペプチドと同じ又は極めて類似の抗菌効果を達成するために、どのアミノ酸又はアミノ酸残基がＣ末端又はＮ末端に付加できるかは明らかである。
【００１４】
本発明によるペプチドは、発明者自身の試験において、一連の細菌及び真菌株に対して極めて有効であることが判明した。
【００１５】
本願明細書において「ペプチド」の概念は、それぞれペプチド結合を介して互いに結合されているアミノ酸配列であると解釈され、その際、これらのアミノ酸は好ましくは２０の天然由来のアミノ酸から選択されていて、かつアミノ酸はＬ配置又はＤ配置で存在することができる。このペプチドとは別に、及びこの作用機序及び構造から出発してペプチドミメティックを製造することができ、このペプチドミメティックは本発明の場合に本願発明にも含まれている。このペプチドミメティックは、本願明細書の定義に従って、主に構造的要素について本発明によるペプチドを模倣した低分子量の化合物である。本発明によるペプチドは、この場合、例えば単離するか、合成又は組み換えにより提供するか、又は相応する形態で準備することができる。
【００１６】
「抗菌性」の概念とは、本願明細書において、微生物の増殖能力又は感染性を低減することができるか又は微生物を死滅させるか又は微生物を失活させることができる特性であると解釈される。この場合、「微生物」とは、裸眼では大抵認識することができない微視的な小さな生物又はまとまりであると解釈され、本願明細書においてこれは、特に、他の生物、特にヒト又は他の哺乳動物の健康を損なう過程（疾患）の原因となる細菌、ウイルス及び真菌であると解釈される。
【００１７】
好ましい実施態様の場合に、本発明によるペプチドは、この場合、配列番号１〜６の１つから選択されるか、又はその誘導体であり、その際、この誘導体は、少なくとも１つのアミノ酸がアミノ酸誘導体に交換されることにより形成されている。この場合、特に次のペプチドが好ましい：配列RGKAKCCK（配列番号１）を有するペプチド、配列RGKAKCAK（配列番号２）を有するペプチド及び配列RGKAKACK（配列番号３）を有するペプチドが好ましく、詳細には修飾されていない形の、つまり修飾されていない末端を有する、又は修飾された形の、つまり少なくとも１つの修飾された（Ｃ又はＮ）末端を有する、又は修飾されたＮ末端及び修飾されたＣ末端を有する修飾された形のペプチド（配列番号４、５及び６参照）が好ましい。
【００１８】
「１つ又は複数のアミノ酸の誘導体」の概念とは、この場合、その都度のアミノ酸から例えば官能基の構造的変化によって得られる、その都度のアミノ酸から誘導される全てのアミノ酸残基であると解釈される。
【００１９】
「修飾されたＮ末端アミノ基」及び「修飾されたＣ末端カルボキシル基」の概念とは、本願明細書において、変えられたアミノ基又はカルボキシル基であると解釈される。Ｎ末端修飾の例は、アセチル化、ホルミル化又はグアニル化されたＮ末端である。Ｃ末端修飾の例は、アミド化されたＣ末端である。
【００２０】
この場合、ペプチドがその都度全体としてＤ−アミノ酸又はＬ−アミノ酸からなるか又はこの混合物からなる場合が特に好ましい。この場合、本願明細書において、「Ｄ−アミノ酸」又は「Ｌ−アミノ酸」は、使用されるべき天然のアミノ酸、非天然のアミノ酸又はアミノ酸誘導体（例えばイミノ酸）がＬ配置又はＤ配置で存在できることを意味する。
【００２１】
他の実施態様によると、ペプチドはＣ末端及び／又はＮ末端で修飾されている、特にアセチル化、アミド化、ホルミル化又はグアニル化により修飾されている場合が好ましい。
【００２２】
本発明によるペプチドのＣ末端及び／又はＮ末端の修飾は、ペプチドがこの修飾によりペプチダーゼ及びプロテアーゼによる分解に対してより安定であるという利点を有し、従って、本発明によるペプチドが、例えば血清中で高められた半値時間（Halbwertszeit）を有する。Ｎ末端及びＣ末端の修飾は、ペプチドの他の基、例えば他のアミノ酸配列又は他の生体分子への結合を可能にする。
【００２３】
本発明によるペプチドの他の実施態様の場合に、このペプチドは還元されているか又は酸化された状態で存在する。
【００２４】
本発明の場合に、このペプチドは、微生物により引き起こされる炎症性疾患又は感染性疾患の治療及び／又は予防のために使用される。
【００２５】
本発明の場合に、この使用は、従って、細菌、ウイルス又は真菌により引き起こされる炎症性疾患及び／又は感染性疾患の場合に行われる。
【００２６】
特に、ビフィドバクテリウム種、ラクトバシラス種、大腸菌、ストレプトコッカス種、スタフィロコッカス種、バクテロイド種、カンジダ種、シュードモナス種、プロピオニバクテリウム種、トレポネーマ種、エンテロバクター種、サルモネラ種、レジオネラ種から選択される微生物により引き起こされる炎症性疾患又は感染性疾患の際の本発明による使用が行われ、その際、この列挙は完結したものではなく、及びこのペプチドはここに列挙されていない細菌株及び／又は真菌株、特に一般にナイセリア科、腸内細菌科に属する細菌に対しても有効であると解釈される。
【００２７】
この場合、本発明によるペプチドの使用が、慢性の炎症性腸疾患、口−咽頭腔の炎症性疾患、例えばカリエス及び歯肉炎、肺疾患、泌尿生殖系の疾患、膵臓の疾患、女性の生殖管の疾患、皮膚の疾患及び／又は損傷（皮膚疾患）の際に行われる場合が特に好ましい。
【００２８】
従って、本発明は、少なくとも１種の本発明によるペプチドを有し、並びに場合により製剤学的に許容される付形剤及び先行技術において通常の他の調製剤及び助剤を有する医薬組成物、並びに、治療的に有効量の本発明によるペプチド又は本発明による医薬組成物を投与する、微生物により引き起こされる炎症性の感染性疾患を患う哺乳動物の治療方法にも関する。この場合、「治療的に有効」又は「治療的に有効量」とは、細菌及び／又は真菌の増殖及びコロニー形成を低減するか又は完全に抑制するか、又は測定可能な治療的又は予防的な効果を達成することができる少なくとも１種の本発明によるペプチド又は少なくとも１種の本発明によるペプチドを有する医薬組成物の量を意味する。主体に対しての正確な有効量は、そのサイズ及び健康状態、年齢及び疾患の程度、及び少なくとも１種のペプチド又は医薬組成物又は上述の複数の組み合わせに依存する。
【００２９】
本発明の調製物／医薬品は、in vitroでも又はin vivoでも適用することができる。
【００３０】
本発明による医薬組成物は、投与の選択された経路に適合する多様な形態で、つまり腸管外、経口、腹腔内、経皮などで患者に投与することができる。腸管外投与は、この場合次の経路での投与を含む：静脈内、筋肉内、間質内、動脈内、皮下、滑液内（intrasynovial）、経皮を含む経上皮、吸引による肺、点眼、舌下及びバッカル、眼、皮膚、眼科的、直腸を含めた局所、並びにインスフレーション（Insufflation）による鼻吸引。
【００３１】
この投与は、この場合、液剤、チンキ剤、軟膏、散剤、懸濁剤、クリーム、及び他の固形又は液状の調製剤の形で並びに錠剤、カプセル剤、スプレー剤として行うことができる。
【００３２】
本発明によるペプチド又は本発明によるペプチドを含む医薬品を用いて治療することができる皮膚疾患には、例えばニキビ、皮膚炎、火傷、微生物により引き起こされる他の皮膚疾患、又は微生物感染の危険がある皮膚の負傷の際が該当する。
【００３３】
好ましい実施態様の場合に、この医薬組成物は、皮膚を通して又は経由して投与され、この投与は非侵襲的でかつ患者に優しい投与であり、かつ経口投与と比較して、消化系における環境に留意する必要がないという利点を有する。皮膚を通した摂取は、例えば鼻、頬、舌下、歯肉又は膣内で可能である。相応する投与形態は、公知の技術によって達成することができ；点鼻、鼻スプレー、埋め込み、フィルム、プラスター、ゲル、坐剤、軟膏又は錠剤に加工することができる。好ましくは、皮膚を通した摂取のための医薬付形剤は、皮膚に付着し、かつそれにより投与剤形と投与される表面との接触時間を延長し、それにより吸収による摂取を向上させる１種又はそれ以上の成分を含む。よって、少なくとも１種の本発明によるペプチドは例えば、このペプチドの皮内への導入をサポートするリポソームの形に調製されていてもよい。
【００３４】
本発明によるペプチドは、更に口−咽頭腔の疾患の治療のために使用することができ、かつこの種の使用の際に、歯科用クリーム、マウスウォッシュ、ゲルの形で、及び／又は例えば歯科用フロス上で提供することができる。
【００３５】
医薬組成物は、既に上述したように、少なくとも１種の本発明によるペプチドの他に、本発明によるペプチドの２種又はそれ以上を含むことができる。更に、この医薬組成物は、少なくとも１種の本発明によるペプチドの他に、更に１種又はそれ以上の他の活性物質、例えば先行技術において公知の抗生物質（例えばストレプトマイシン、ペニシリン、テトラサイクリン）又は他の抗菌活性化合物、例えば殺真菌剤、例えばミコナゾール、又は感染に伴って通常現れる症状、例えば熱又は発疹を治療する他の物質を有することができる。
【００３６】
その他に、この医薬品は、製剤学的に許容される付形剤、結合剤、添加剤又は佐剤を有することもできる。製剤学的付形剤、添加剤又は希釈剤の選択は、意図される投与経路及び標準化された製剤学的プラクティスを考慮して行うことができる。製剤学的に許容される付形剤として、それぞれの配量のために最善に適しかつ同時にこのペプチドと適合するかに応じて、溶剤、増量剤又は他の液状結合剤、例えば分散助剤又は懸濁助剤、表面活性剤、等張作用物質、増粘剤又は乳化剤、保存剤、被覆剤（カプセル化剤）、固形結合剤又は滑剤を使用することができる。この医薬組成物は、緩衝剤、希釈剤及び／又は添加物を有していてもよい。適切な緩衝剤は、例えばＴｒｉｓ−ＨＣｌ、グリシン及びホスファートを含み、適切な希釈剤は、例えばＮａＣｌ水溶液、ラクトン又はマンニトールを含む。適切な添加物は、例えば界面活性剤、溶剤、酸化防止剤及び保存剤及び保護コロイド、例えば同種アルブミン又は生体適合性ヒドロゲルを含む。このような付加的な内容物質についての概要は、例えばA. Kibbe著,：「Handbook of Pharmaceutical Excipients」,第３版, 2000, American Pharmaceutical Association and Pharmaceutical Pressに記載されている。
【００３７】
更に、本発明による医薬組成物は製剤学的に許容される塩、例えば鉱酸の塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩等；更に有機酸の塩、例えば酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩等も有することができる。
【００３８】
一般に、治療効果を有する１日の用量は、恐らく、治療されるべき主体の体重１ｋｇ当たり０．０１〜５０ｍｇ、好ましくは０．１〜２０ｍｇの範囲内である。同様に既に上述したように、この医薬品は錠剤又はカプセル剤の形で提供することができ、これらの錠剤又はカプセル剤は単独で又は２つ又はそれ以上を同時に投与することもできる。この医薬品は、遅延放出を伴う剤形の形で提供することもできる。
【００３９】
典型的には、医者が、患者の年齢、体重及び一般的な健康状態に依存して、特定の患者に適した実際の用量を決定する。
【００４０】
適用に応じて、この医薬品は、吸引により、坐剤又はペッサリーの形で、液剤、ローション剤、軟膏、クリーム又は散剤として局所に、皮膚プラスターを用いて、錠剤又はカプセル剤、エリキシル剤、液剤又は懸濁剤（これらは場合により芳香剤又は着色剤を含む）の形で経口で投与することができる。
【００４１】
感染を治療するための治療的使用の他に、少なくとも１種の本発明によるペプチドは、表面又は対象物の殺菌又は洗浄のために使用することができる殺菌剤又は洗浄剤中にも使用することができる。他の適用分野は、ペプチドを包装材料に結合させるか又はその包装材料中に組み込むことができる包装、又は微生物により容易に分解され得る他の材料のための保存剤である。
【００４２】
ヒト医学における本発明によるペプチドの使用の他に、獣医学における使用も可能である。
【００４３】
本発明は、更に、本発明によるペプチド、特に本発明による抗菌性、つまり抗細菌性又は抗真菌性ペプチド又はコードする核酸を表す配列番号１〜６のペプチドをコードする配列の単離された核酸分子（この場合、宿主細胞中での発現を制御する調節配列と作動的に結合している）にも関する。本発明の他の構成要素は、上述の核酸分子で形質導入又は形質転換されている宿主細胞である。
【００４４】
他の利点は、後述の記載及び添付の図面から明らかとなる。
【００４５】
上述の及び後述の詳説される特徴は、その都度記載された組み合わせで使用可能であるだけでなく、本発明の範囲を越えることなく他の組み合わせ又は単独での使用も可能であると解釈される。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】細菌Bifidobacterium adolescentis又はEscherichia coliに関する多様なペプチド（ヘプタペプチド（ａ）；オクタペプチド（ｂ）（ｃ））の抗菌作用の試験結果を示す。
【図２】多様な病原体に対する抗生物質としての本発明によるペプチドの多様な実施態様の試験を示す。
【図３】E. coli K12（ａ）又はBifidobacterium adolescentis（ｂ）に対するＤ−アミノ酸からなる本発明によるオクタペプチドの、Ｌアミノ酸からなるオクタペプチドと比較した試験の結果を示す。
【図４】ラジアルディフュージョンアッセイにおける病原性細菌及び真菌に対する多様な本発明によるオクタペプチドの活性についての他の試験結果を示す。
【図５】腸細胞系ＣａＣｏ−２に対するオクタペプチドの細胞毒性についての試験結果を示す。
【００４７】
本発明の実施例は図面で表されていて、次の記載において詳細に説明されている。
【００４８】
図１は、細菌のビフィドバクテリウム・アドレスセンチス（Bifidobacterium adolescentis）又は大腸菌（Escherichia coli）に関する多様なペプチド（ヘプタペプチド（ａ）；オクタペプチド（ｂ）（ｃ））の抗菌作用の試験結果を示す。この文字列は、アミノ酸を一文字記号で表す。ペプチドac-RGKAKCCK-NH2（配列番号４）は、アセチル化されたアミノ末端及びアミド化されたカルボキシ末端を有する。阻害領域の直径は抗菌活性を表す；この場合、２．５ｍｍの直径は、付形剤液体だけを有する（ネガティブコントロール）、寒天プレート中での空のエンボス加工されたウェルの直径である。この試験を少なくとも３回繰り返し、平均値＋標準偏差が示されている；
図２は、多様な病原体に対する抗生物質としての本発明によるペプチドの多様な実施態様の試験を表す：次のペプチド：修飾されたオクタペプチド（配列番号４）、野生型オクタペプチド（配列番号１）、アラニン突然変異したオクタペプチド（配列番号７）及びヘプタペプチド（配列番号８）（それぞれ５０μｇ／ｍｌ）を、大腸菌（Escherichia coli）、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）及びバクテロイデス・フラギリス（Bacteroides fragilis）に対して、フローサイトメトリーによる抗菌有効性アッセイで試験した。この文字列は、ここでもその都度のアミノ酸を一文字記号で表す。この試験は、二重バッチで２回繰り返し、平均値＋標準偏差で示されている；
図３は、大腸菌（E. coli K12）（ａ）又はビフィドバクテリウム・アドレスセンチス（Bifidobacterium adolescentis）（ｂ）に対するＤ−アミノ酸からなる本発明によるオクタペプチドの、Ｌアミノ酸からなるオクタペプチドと比較した試験の結果を示す；
図４は、ラジアルディフュージョンアッセイにおける病原性細菌及び真菌に対する多様な本発明によるオクタペプチドの活性についての他の試験結果を示す；及び
図５は、腸細胞系ＣａＣｏ−２に対するオクタペプチドの細胞毒性についての試験結果を示す。
【００４９】
冒頭に記載されたように、抗菌性ペプチド（ＡＭＰ）はほとんど全ての生物で産生されていて、細菌感染に対する第１のバリアである。多くのＡＭＰは、グラム陽性細菌及びグラム陰性細菌、並びに真菌及び被膜を有するいくつかのウイルスに対して抗菌活性を示す。ヒトは、多様な種類のＡＭＰを産生し、その中の１つが、同様に既に上述したように、デフェンシンである。これは、その僅かなサイズ（３〜５ｋＤａ）、正味でのカチオンの電荷及び６つの保存されたシステイン基を特徴とし、このシステイン基は３つのジスルフィド架橋によって互いに結合している。この架橋の結合性に依存して、このデフェンシンはアルファ−デフェンシン及びベータ−デフェンシンに分類される。今日までに、４種のベータ−デフェンシン（ｈＢＤ−１〜ｈＢＤ−４）が、機能性について、特に抗生物に作用する候補として試験されただけであった。
【００５０】
しかしながら、今日まで、既に上述したように、３つの天然のジスルフィド架橋を有するベータ−デフェンシンの化学合成は、その製造方法のコストに関しても、製造方法の手間に関しても大きな挑戦である。
【００５１】
本発明によって初めて提供されたこのペプチドは、デフェンシンｈＢＤ−１のＣ末端のオクトペプチドであり、これは２つの遊離システインを含み、かつその抗菌活性は、ｈＢＤ−１と比較して、並びにｈＢＤ−１のＣ末端からのより短いペプチド配列と比較して、次に記載する試験に示すように優れていることが判明した。
【００５２】
細菌株及び真菌株
細菌株のビフィドバクテリウム・アドレスセンチス（Bifidobacterium adolescentis）Ｎｉ３、２９ｃ（臨床的に単離）、ビフィドバクテリウム・ブレベ（Bifidobacterium breve）ＰＺ１３４３、ビフィドバクテリウム・ロングム（Bifidobacterium longum）ＤＳＭ２０２１９Ｔ（臨床的に単離）、ラクトバシルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）ＰＺ１１３８（臨床的に単離）、ラクトバシルス・フェルメンツム（Lactobacillus fermentum）ＰＺ１１６２（臨床的に単離）及びストレプトコッカス・サリバリウス spp. テルモフィルス（Streptococcus salivarius spp. termophilus）ＤＳＭ２０６１７は、Ardeypharm（ドイツ国）から入手し、バクテリオイデス・ブルガツス（Bacteroides vulgatus）ＤＳＭ１４４７は、ＤＳＭＺ（ドイツ微生物細胞培養コレクション）から調達した。カンジダ・アルビカンス株５２６は、糞から単離され、実験医学研究所、アイヒェルト病院（Institut der Labormedizin, Klinik am Eichert）（ゲッピンゲン、ドイツ国）により提供された。アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）の対照株の大腸菌（Escherichia coli）ＡＴＣＣ２５９２２、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）ＡＴＣＣ２５９２３及びバクテリオイデス・フラギリス（Bacteroides fragilis）ＡＴＣＣ２５２８５は、実験医学研究所、アイヒェルト病院（Institut der Labormedizin, Klinik am Eichert）（ゲッピンゲン、ドイツ国）により提供された。更に、エンテロコッカス・ファエカリス株（Enterococcus faecalis）ＡＴＣＣ２９２１２、カンジダ・アルビカンス株（Candida albicans）ＡＴＣＦＣ  １０２３１及びシュードモナス・アエルギノサ株（Pseudomonas aeruginosa）ＡＴＣＣ２７８５３を試験し、これらは、上述のＡＴＣＣ番号のもとで、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手した。
【００５３】
ペプチド
ヒトベータ−デフェンシンは、ペプチド研究所（大阪、日本）から調達し；カルボキシ末端ヘプタペプチド及びオクタペプチド並びに還元ｈＢＤ−１は、化学的に合成した（EMC Micro Collections Tuebingen,ドイツ国）。
【００５４】
抗菌アッセイ
嫌気性細菌についての抗菌ラジアルディフュージョンアッセイは、上述のように実施した（Schroeder et al.著：「Reduction of disulfide bonds unmasks potent antimicrobial activity of human beta-defensin 1」, Nature, 469: 419-423 (2011)）。簡単に述べると、これらの細菌を嫌気性で培養し（Oxoid AnaeroGen TM, 英国）、詳しくはColumbia寒天プレート上で３７℃で２４時間培養し、引き続き液状ＴＳＢ（「Trypticase Soy Broth」）培地に摂取し、再び２４時間培養した。引き続き、この細菌性のカルチャーを成長させ、光学密度（ＯＤ620nm）＝０．１に希釈し、そこから１５０μｌを有効性アッセイのために使用した。７．４のｐＨ値を有し、０．３ｍｇ／ｍｌのＴＳＢ粉末及び０又は２ｍＭのジチオトレイトール（DTT, Sigma Aldrich）を有する１％（ｗ／Ｖ）のlow EEOアガロース（極めて低いEEO値を有するアガロース）（Appli-Chem）を有する１０ｍＭのリン酸ナトリウム１０ｍｌ中で、しかも嫌気性条件下で、合成の酸化されたｈＢＤ−１（ペプチド研究所, 日本）又は合成ペプチド１μｇと共に３時間にわたってインキュベーションを行った。このプレート上に、６％（ｗ／ｖ）のＴＳＢ粉末、１％のアガロース及びＤＴＴを有するか又は有しない１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ値７．４又は５．７）を有するオーバーコートゲルを加えた。３７℃で４８時間にわたるインキュベーションの後に、阻害領域の直径を測定した。この試験を少なくとも３回繰り返した。
【００５５】
細菌及び真菌の膜脱分極を測定するフローサイトメトリーによる抗菌アッセイを、予め記載されたように実施した（Nuding et al.著、「A flow cytometric assay to monitor antimicrobiol activity of defensines and cationic tissure extracts」, Journal of Microbiological Methods, 65: 335-380(2006)参照）。簡単にいうと、１：６に希釈したSchaedler培地中で１ｍｌ当たり１．５×１０6個のセルをペプチドと一緒に５０μｌの最終体積で３７℃でインキュベーションした。デフェンシンを０．０１％の酢酸中に溶かし、記載された最終濃度の細菌／真菌懸濁液に添加した。溶剤（０．０１％の酢酸）と一緒にインキュベーションした細菌懸濁液又は真菌懸濁液を、この場合、生存能力についての対照として使用した。９０分後に、この懸濁液を、膜電位感受性の着色剤DiBAC4(3)（［ビス−（１，３−ジブチルバルビツール酸）トリメチンオキソノール］）（invitrogen, 米国）１ｍｇ／ｍｌと一緒に１０分間インキュベーションした。この懸濁液を遠心分離し、沈殿物を、リン酸塩で緩衝した食塩水３００ｍｌ中に再懸濁させる。この懸濁液中での脱分極された蛍光する細菌又は真菌のパーセンテージを、FACSCaliburフローサイトメーター（Becton-Dickinson, 米国）を用いて、Cell Questソフトウェア（Becton-Dickinson）を使用して測定した。この試験を２回、詳しくはそれぞれ複製して繰り返した。
【００５６】
ＨＰＬＣ分析
ＨＰＬＣ（「High Performance Liquid Chromatography」）による分析のために、このオクタペプチドをトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）０．１％（ｖ／ｖ）と混合し、Agilent 1200システム（Agilent）及び「Synergi reversed phase」（RP）カラム（２５０×４．６ｍｍ、４μｍ、Phenomenex, ドイツ国）を用いて分析した。勾配は、２５℃で０．８ｍｌ／ｍｉｎで、２４分間で０％Ｂ〜１２％Ｂの上昇を示した（溶剤Ａ、水＋０．１８％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ；溶剤Ｂ、アセトニトリル＋０．１５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ）。
【００５７】
イオン−阻害アッセイ
ペプチド又はデフェンシン０．２５μｇ／ｍｌを、４．５ｍＭのＮａＣｌ、塩化マグネシウムＭｇＣｌ2、塩化鉄ＦｅＣｌ2、塩化亜鉛ＺｎＣｌ2又は硫酸亜鉛ＺｎＳＯ4と一緒に室温で４５分間インキュベーションした。引き続き、この混合物をラジアルディフュージョンアッセイで、ビフィドバクテリウム・アドレスセンチス（Bifidobacterium adolescentis）及び大腸菌（Escherichia coli）に対するその抗菌活性について分析した。この試験を少なくとも３回繰り返した。
【００５８】
結果
Schroeder et al.著（「Reduction of disulfid bonds unmasks potent antimicrobial activity of human beta-defensine 1」, Nature, 469: 419-423 (2011)）は、簡潔に言うと、ヒトベータ−デフェンシン１が、還元性の条件下で高められた抗菌活性を示すことを記載している。
【００５９】
本発明では、ｈＢＤ−１又はその抗菌活性を更に試験した。このために、３種のヒトベータ−デフェンシンｈＢＤ−１、２及び３の抗菌活性を、ヒト腸内細菌叢の片利共生の細菌に対して、標準条件（ｐＨ７．４）及び軽度に酸性の条件（ｐＨ５．７）で試験し、この場合、両方の条件下で還元性の条件も、化学的還元剤のジチオトレイトール（ＤＴＴ）２ｍＭを成長培地に添加して試験した。この場合、（データは示されていない）大抵の細菌の場合に標準条件下でベータデフェンシンの活性が最高であったが、この条件下では十分に不活性であり、還元により活性になったｈＢＤ−１は例外であったことが明らかとなった。この活性化は、しかしながら５．７のｐＨ値では観察できなかった。これとは反対にｈＢＤ−２は還元により影響を受けず、それに対してｐＨ値の変化がその抗菌活性に極めて不利に作用したことが判明した。
【００６０】
ｈＢＤ−３は、たいていの場合に、他の２つのデフェンシンと比較して、試験した片利共生菌に対して最も強い活性を示した。
【００６１】
要約すると、周囲環境の要因、例えば酸化還元電位及びｐＨ値は、片利共生腸内細菌に対してベータ−デフェンシンの抗菌活性を調節できることがいえる。しかしながら、この調節は、個々のデフェンシン−細菌の関係に特異的であると考えられ、かつ細菌のグラム状態とも細菌の属とも相関しない。
【００６２】
既にビフィドバクテリウム・アドレスセンチス（Bifidobacterium adolescentis）に対する抗菌活性が示されているｈＢＤ−１の、７つの末端アミノ酸であるヘプタペプチドを用いた試験は、野生型のカルボニル末端のヘプタペプチドが、ビフィドバクテリウム・アドレスセンチスに対して最も高い活性を有し、それに対して逆のアミノ酸配列を有するペプチドはあまり活性がなかったことを示した。システイン基がアラニンに交換されることにより、この活性は完全になくなった。ｈＢＤ−１の単離されたアミノ末端は不活性であった。
【００６３】
本発明の場合、次に、本発明によるペプチドの、ｈＢＤ−１のカルボキシ末端の８個の末端アミノ酸を含むオクタペプチドを試験した：これは、予め試験されたヘプタペプチドよりも強い抗菌活性を示した（図１参照）。Ｃｙｓ6か又はＣｙｓ7が交換された場合には、ビフィドバクテリウム・アドレスセンチスに関する活性は、同程度で著しく弱まり、それに対して２つのシステインの交換はこの活性を完全に失った。予め試験されたヘプタペプチドとは反対に、このオクタペプチドは、大腸菌（Escherichia coli）に対しても抗菌活性を示した（図１ｂ参照）。意外にも、ここではＣｙｓ6又はＣｙｓ7のアラニンによる交換が、抗菌活性を増大させ、それに対して２つのシステインの交換は、ここでも抗菌活性をほぼ完全に失わせた。
【００６４】
このオクタペプチドの最適化のため又はプロテアーゼに対するこの安定性の改善のために、次の段階で、このオクタペプチドのアミノ末端をアセチル化によりかつカルボキシ末端をアミド化で安定化した。野生型ペプチドと比べて大腸菌に対する活性は明らかには異ならなかったが、ビフィドバクテリウム・アドレスセンチスに対する活性は著しく高まった（図１ｃ参照）。
【００６５】
新たに同定されかつ提供されたオクタペプチドによって、治療剤として使用することができる抗菌作用を有する、簡単でかつ適切に製造されるべきペプチドが提供される。従って、修飾されたペプチド並びに修飾されていないペプチドの、（日和見の）病原性微生物を殺傷する能力を試験した。このために、フローサイトメトリーによるアッセイを実施し（図２参照）、このアッセイから、野生型オクタペプチド並びにアラニンで突然変異したペプチドの及び野生型ヘプタペプチドの有効性は、たいていの場合に、単に下限に近い（marginal）ことが明らかになった。これに対して、修飾されたオクタペプチドは、病原性微生物のスタフィロコッカス・アウレウス及びカンジダ・アルビカンスに対して優れた活性を有するが、大腸菌及びバクテリオイデス・フラギルスについては優れた活性は示さなかった。
【００６６】
従って、末端の安定化により、片利共生の腸内細菌のビフィドバクテリウム・アドレスセンチスに対して抗菌活性が高められるだけでなく、臨床的に重要な少なくとも２つの病原性微生物に対しても抗菌性が高められることが示された。
【００６７】
他の試験において、試験されたペプチドの疎水性を調査する逆相ＨＰＬＣ分析を実施した。（データは示されていない）。この修飾されたオクタペプチドは、最後のものとしてカラムから溶出し、このことは最も高い疎水性を示唆していた；その前に、野生型ペプチド、一箇所アラニン−アミノ酸交換変異体及び二箇所アラニン−アミノ酸交換変異体の溶出が行われた（データは示されていない）。
【００６８】
電荷及びイオン相互作用の役割を更に調査するために、酸化された及び還元されたｈＢＤ−１並びに野生型及び一価又は二価のカチオンを有する修飾されたオクタペプチドをインキュベーションした（データは示されていない）。大腸菌（Escherichia coli）に関して、完全なデフェンシンの活性は、塩化マグネシウム又は塩化鉄との予備インキュベーションにより完全に降下した、それに対してカルボキシ末端ペプチドの活性は強く阻害されたが、この金属イオンとの予備インキュベーションの後でもなお検出可能であった。それに対して、ＮａＣｌは大腸菌（E. coli）に対する抗菌活性に影響を及ぼさなかった。
【００６９】
ビフィドバクテリウム・アドレスセンチスの試験の場合にもまた、塩化ナトリウムとの予備インキュベーションはこの活性に著しい効果を示さないが、それに対して塩化鉄、塩化亜鉛及び硫酸亜鉛はこの活性を完全に停止させるか又は著しく低下させることが明らかになった。大腸菌（E. coli）とは反対に、塩化マグネシウムとのインキュベーションは、ビフィドバクテリウムの抗菌活性に影響を及ぼさなかった。
【００７０】
他の試験において、Ｄ−アミノ酸（グリシンを除く）からなる配列RGKAKCCK（配列番号１）を有する本発明によるオクタペプチドは、Ｌ−アミノ酸からなる配列RGKAKCCK（配列番号１）を有するオクタペプチドと比較して、修飾された末端を有するか又は修飾されていない末端を有する配列について試験した（図３）。大腸菌（E. coli K12）について（図３ａ参照）、修飾された末端（Ｎ末端：アセチル化；Ｃ末端：アミド化）を有するＤ−アミノ酸からなるペプチドはより弱い活性を示すが、それに対して、このペプチドは、ビフィドバクテリウム・アドレスセンチスについて（図３ｂ参照）、修飾されていない形でも、修飾された形でも、Ｌ−アミノ酸からなるペプチドと比べて高められた活性を示した。
【００７１】
このデータは、つまり全体として、ペプチドとカチオンとの間の相互作用は正の電荷に基づくだけでなく、むしろ特別なイオンが特定の細菌に対する活性に影響を及ぼすことができることを示す。
【００７２】
本発明によるオクタペプチドの病原性細菌及び真菌に対する活性は、他のラジアルディフュージョンアッセイにおいても確認した：大腸菌（Escherichia coli 25922）株、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus 25923）株、エンテロコッカス・ファエカリス（Enterococcus faecalis 29212）株、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans 10231）株及びシュードモナス・アエルギノサ（Pseudomonas aeruginosa 27853）株に対する活性を試験した（図４参照）、一方で、Ｌ−アミノ酸（図４、グラフ中の左側の５つの棒グラフ参照）からなるか又はＤ−アミノ酸（グリシンを除く）（図４、グラフ中の右側の５つの棒グラフ参照）からなる配列RGKAKCCK（配列番号１）を有する本発明によるオクタペプチドを使用し、詳細にはそれぞれ一方は修飾された末端を有し及びもう一方は修飾されていない末端を有するオクタペプチド（Ｎ末端：アセチル化；Ｃ末端：アミド化）を使用した。この場合、大腸菌及びスタフィロコッカス・アウレウスに対する優れた活性の他に、特に試験されたオクタペプチドの全ての変異体のカンジダ・アルビカンスに対する傑出した活性も示された。
【００７３】
他のＭＴＴ−（（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム  ブロミド；チアゾリルブルー）試験において、この末端安定化されたオクタペプチドの細胞毒性も調査し、詳細にはヒトセルラインＣａＣｏ−２（ATCC HTB-37）について、その都度のオクタペプチド（配列番号１；修飾された末端を有するＬ−アミノ酸又はＤ−アミノ酸（グリシンを除く）：Ｎ末端：アセチル化及びＣ末端：アミド化）の増大する濃度で、０．０１％の酢酸の増大する濃度と比較して調査した。これについての結果も、図５に示されていて、その際、この安定化されたオクタペプチドは、溶剤の０．０１％の酢酸の細胞毒性を越える細胞毒性は有していないことが示された。従って、本発明によるオクタペプチドは、臨床的な適用において使用することにも適している。
【００７４】
上述の結果及びデータは、しかしながら、本発明で初めて提供されたオクタペプチドが、詳細には野生型のオクタペプチド、アミノ酸交換したオクタペプチド及び／又は安定化された形のオクタペプチドが抗菌作用を有する優れた薬剤であることを明らかに示している。この結果は意外であり、今まで利用可能な先行技術に基づいて予測できなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年12月2日(2014.12.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗菌活性を有し、少なくとも８個で最大１２個の連続するアミノ酸からなりかつＣ末端及びＮ末端を有するペプチド又はその誘導体において、前記ペプチドは次の式Ｉ：
Ｔｅｒ1−Ｘ1−Ｂ1−Ｘ2−Ｂ2−Ｘ3−Ｚ1−Ｚ2−Ｘ4−Ｔｅｒ2  （式Ｉ）
［式中、
Ｔｅｒ1は、Ｎ末端アミノ酸Ｘ1の遊離Ｎ末端アミノ基であるか、又は修飾されたＮ末端アミノ基であり；
Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は、それぞれ同じ又は異なり、互いに独立して、塩基性側鎖を有するアミノ酸からそれぞれ選択され、
Ｂ1及びＢ2は、同じ又は異なり、それぞれ、脂肪族側鎖又は塩基性側鎖を有するアミノ酸であり、
Ｚ1及びＺ2は、それぞれシステインであるか、又はシステインとアラニンであり、及び
Ｔｅｒ2は、Ｃ末端アミノ酸Ｘ4の遊離Ｃ末端カルボキシル基であるか、又は修飾されたＣ末端カルボキシル基である］の配列を有する、ペプチド又はその誘導体。
【請求項２】
請求項１に記載のペプチド又はその誘導体において、前記式Ｉ中、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は、それぞれ同じ又は異なり、互いに独立して、次の：アルギニン、リジン、６−ヒドロキシリジン、ホモアルギニン、２，４−ジアミノ酪酸、［ベータ］−ホモアルギニン、Ｄ−アルギニン、アルギナール、２−アミノ−３−グアニジノプロピオン酸、ニトロアルギニン、Ｎ−メチル−アルギニン、［エプシロン］−Ｎ−メチルリジン、ａｌｌｏ−ヒドロキシリジン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，２′−ジアミノピメリン酸、オルニチン、ｓｙｍ−ジメチルアルギニン、ａｓｙｍ−ジメチルアルギニンの１つから選択される、ペプチド又はその誘導体。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のペプチド又はその誘導体において、前記式Ｉ中、Ｂ1及びＢ2は、同じ又は異なり、それぞれ、アラニン又はグリシンから選択される、ペプチド又はその誘導体。
【請求項４】
請求項１から３までのいずれか１項に記載のペプチド又はその誘導体において、前記ペプチドは８個の連続するアミノ酸からなりかつ前記式Ｉの配列を有することを特徴とする、ペプチド又はその誘導体。
【請求項５】
請求項１から４までのいずれか１項に記載のペプチド又はその誘導体において、前記ペプチドは配列番号１〜６の１つから選択されているか、又はその誘導体であり、前記誘導体は、少なくとも１つのアミノ酸がアミノ酸誘導体に交換されることにより形成されることを特徴とする、ペプチド又はその誘導体。
【請求項６】
請求項１から５までのいずれか１項に記載のペプチド又はその誘導体において、前記ペプチドはＤ−アミノ酸又はＬ−アミノ酸又はそれらの混合物からなることを特徴とする、ペプチド又はその誘導体。
【請求項７】
請求項１から６までのいずれか１項に記載のペプチド又はその誘導体において、前記ペプチドはＣ末端及び／又はＮ末端が、アセチル化、アミド化、ホルミル化、ホスホリル化により修飾されていることを特徴とする、ペプチド又はその誘導体。
【請求項８】
請求項１から７までのいずれか１項に記載のペプチド又はその誘導体の、抗生物質としての、及び／又は殺菌剤又は洗浄剤中での使用。
【請求項９】
請求項８に記載の使用において、微生物により引き起こされる炎症性疾患又は感染性疾患の治療及び／又は予防のための使用。
【請求項１０】
請求項９に記載の使用において、前記炎症性疾患又は感染性疾患は微生物により引き起こされ、前記微生物は細菌、ウイルス又は酵母菌であることを特徴とする、使用。
【請求項１１】
請求項８から１０までのいずれか１項に記載の使用において、前記炎症性疾患又は感染性疾患は、ビフィドバクテリウム種、ラクトバシラス種、大腸菌、ストレプトコッカス種、スタフィロコッカス種、バクテロイド種、カンジダ種、シュードモナス種、プロピオニバクテリウム種、トレポネーマ種から選択される微生物により引き起こされることを特徴とする、使用。
【請求項１２】
請求項８から１１までのいずれか１項に記載の使用において、前記炎症性疾患又は感染性疾患は、慢性の炎症性腸疾患、口腔／咽頭腔の炎症性疾患、肺疾患、泌尿生殖系の疾患、膵臓の疾患、女性の生殖管の疾患、皮膚の疾患又は損傷又は火傷から選択されることを特徴とする、使用。
【請求項１３】
請求項１から７までのいずれか１項に記載の少なくとも１種のペプチド又はその誘導体及び製剤学的に許容される付形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１から７までのいずれか１項記載のペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
【国際調査報告】
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