(57)【要約】本開示は、植物種子油から２０−炭素脂肪酸を製造する方法であって、ａ）１８−炭素脂肪酸を含む脂肪酸を含む植物種子油を提供し；ｂ）２個の炭素原子によって脂肪酸を伸長させて、２０−炭素脂肪酸を含む組成物を製造することを含む、方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１８−炭素脂肪酸を含む植物種子油から２０−炭素脂肪酸を製造する方法であって、２個の炭素原子により、植物種子油中に存在する１８−炭素脂肪酸の少なくとも一部を伸長させて、２０−炭素脂肪酸を製造する、方法。
【請求項２】
前記伸長工程が１８−炭素脂肪酸を酵素と接触させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
酵素がエロンガーゼを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
２０−炭素脂肪酸の少なくとも一部をエステル化する工程をさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
１８−炭素脂肪酸が、複数の異なる１８−炭素脂肪酸を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
１８−炭素脂肪酸が、ＳＤＡ、ＧＬＡおよびＡＬＡのうち１以上を含み、２０−炭素脂肪酸が、ＥＴＡ、ＥＴＥおよびＤＧＬＡのうち１以上を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
伸長工程前に植物種子油から１８−炭素脂肪酸を抽出する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
１８−炭素脂肪酸が、有機溶媒抽出または超臨界流体抽出によって植物種子油から抽出される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
超臨界流体抽出がＣＯ２超臨界流体抽出（ＣＯ２−ＳＦＥ）を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
場合によっては尿素分画化、低温結晶化、クロマトグラフィー分離、ＨＰＬＣまたは蒸留によって２０−炭素脂肪酸を精製することをさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
２０−炭素脂肪酸を精製して、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも９０重量％または９０重量％を超える純度を有する２０−炭素脂肪酸を製造する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
植物種子油が、エキウム種子油、クロフサスグリ種子油、ルリジサ種子油、マツヨイグサ種子油、ハッケリア（ｈａｃｋｅｌｉａ）種子油、トリコデスマ（ｔｒｉｃｈｏｄｅｓｍａ）種子油、ブグロソイデス（Ｂｕｇｌｏｓｓｏｉｄｅｓ）種子油およびそれらの組み合わせを含む群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
場合によっては２０−炭素脂肪酸をシリカおよびチャコールの混合物と混合することによって、またはセライトフィルターに２０−炭素脂肪酸を通過させることによって、２０−炭素脂肪酸を脱臭することをさらに含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
場合によっては、ＤＧＬＡをアルコールおよび酸と接触することによって、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよび／またはＥＴＡエステルを製造する、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよび／またはＥＴＡをエステル化することをさらに含み、該エステルがアルキルエステル、ヘテロアルキルエステル、アリールエステル、ヘテロアリールエステル、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、イソブチルエステル、ｔ−ブチルエステルおよびそれらの組み合わせからなる群から場合によっては選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
製造される２０−炭素脂肪酸と植物種子油中の１８−炭素脂肪酸とのモル比が約１：１である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
製造される２０−炭素脂肪酸が、植物種子油中の１８−炭素脂肪酸のモル比よりも大きい、２０−炭素オメガ−６脂肪酸と２０−炭素オメガ−３脂肪酸とのモル比を有し、前記１８−炭素脂肪酸のモル比が１８−炭素オメガ−６脂肪酸と１８−炭素オメガ−３脂肪酸とのモル比により定義される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法によって製造される２０−炭素脂肪酸を含む組成物。
【請求項１８】
少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも９０重量％または９０重量％を超える、ＤＧＬＡ、ＥＴＡおよびＥＴＥの１以上を含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
植物種子油から１８−炭素脂肪酸を抽出し、２個の炭素原子によって脂肪酸を伸長させることを含む、植物種子油中の脂肪酸を伸長させるための方法。
【請求項２０】
植物種子油中の２以上の１８−炭素脂肪酸が同時に伸長させられる、請求項２または１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む組成物を製造する方法であって、ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡを含む植物種子油中のＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡを濃厚化し；２個の炭素原子によってＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡをそれぞれ同時に伸長させ、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを提供し；場合によってはＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む組成物を濃厚化することを含む、方法。
【請求項２２】
少なくとも５０重量％のＤＧＬＡ、ＥＴＥおよび／またはＥＴＡを含む、請求項２１に記載の方法によって製造される組成物。
【請求項２３】
約１：１０〜約１０：１のＤＧＬＡ：ＥＴＥ＋ＥＴＡのモル比を含む、請求項２１に記載の方法によって製造される組成物。
【請求項２４】
植物種子油中のＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡを濃厚化する工程が、（ｉ）アセトン、水およびヘプタンからなる溶媒系と植物種子油を接触させ、（ｉｉ）得られた混合物を結晶形成を誘導するのに十分な温度まで冷却し、（ｉｉｉ）植物種子油−溶媒系混合物から結晶を分離して、ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡが濃厚化された植物種子油を製造することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
２個の炭素原子によってＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡをそれぞれ同時に伸長させる工程が、
（ｉ）ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡをエステル化して、ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡエステルを形成すること；
（ｉｉ）ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡエステルを還元して、ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡ一級アルコールを形成さすること；
（ｉｉｉ）ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡ一級アルコールをメシル化して、ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡメシル化物を形成すること；
（ｉｖ）脱プロトン化マロン酸ジエステルであるＣ２−伸長ブロックとＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡメシル化物とを接触させて、伸長ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡジエステルを形成すること；
（ｖ）伸長ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡジエステルを加水分解して、伸長ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡ二酸を形成すること；ならびに
（ｖｉ）伸長ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡ二酸を脱炭酸化して、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを形成すること
を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを濃厚化する任意の工程が、（ｉ）ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む組成物とヘプタンを含む溶媒系とを接触させ、（ｉｉ）得られた混合物を結晶形成を誘導するのに十分な温度まで冷却し、（ｉｉｉ）組成物−溶媒系混合物から結晶を分離して、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む濃厚化組成物を製造することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
植物種子油から２０−炭素脂肪酸を製造する方法であって、
（ａ）リパーゼに植物種子油を曝露することによって、植物種子油中の１８−炭素脂肪酸トリグリセリドのグリセロールバックボーンを消化し、１８−炭素遊離脂肪酸を含む油を形成すること、
（ｂ）場合によっては油から１８−炭素遊離脂肪酸の１以上を濃縮すること、
（ｃ）油、または場合によって濃縮した１８−炭素遊離脂肪酸をエロンガーゼで処理して、２０−炭素脂肪酸を製造すること、
（ｄ）２０−炭素脂肪酸の少なくとも一部をエステル化すること、ならびに
（ｅ）場合によってはエステル化２０−炭素脂肪酸の少なくとも一部を濃縮すること、
を含む、方法。
【請求項２８】
約１：１０〜約１０：１のＤＧＬＡとＥＴＥ＋ＥＴＡとのモル比を有する、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む医薬組成物。
【請求項２９】
ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡがまとめて、組成物中に存在する全脂肪酸の少なくとも７０重量％、８０重量％または９０重量％を構成する、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
炎症、心血管系、呼吸器、神経性、癌、精神性または皮膚疾患の処置を必要とする対象における、炎症、心血管系、呼吸器、神経性、癌、精神性または皮膚疾患を処置する方法であって、請求項２８または２９に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は全般的に、２０−炭素脂肪酸を含む組成物ならびに製造および使用方法に関する。
【発明の概要】
【０００２】
本開示は、１８−炭素脂肪酸を含む油（植物種子油など）から２０−炭素脂肪酸を含む組成物を生成させるための工程を提供する。本工程は、全般的に、２個の炭素原子によって２以上の異なる１８−炭素脂肪酸を伸長させることを含み、１８−炭素脂肪酸から２０−炭素脂肪酸が生成される。いくつかの実施形態において、１回の反応（例えば単一容器反応）で２個の炭素原子によって複数の１８−炭素脂肪酸を伸長させる。いくつかの実施形態において、１８−炭素脂肪酸は、ステアリドン酸（「ＳＤＡ」）、αリノレン酸（「ＡＬＡ」）およびガモレン酸（ｇａｍｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）（γ−リノレン酸またはＧＬＡとも呼ばれる）を含む。いくつかの実施形態において、２０−炭素脂肪酸は、エイコサテトラエン酸（「ＥＴＡ」）、エイコサトリエン酸（「ＥＴＥ」）およびジホモ−γ−リネオール酸（ｌｉｎｅｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）（「ＤＧＬＡ」）を含む。
【０００３】
様々な実施形態において、本工程は、（ａ）１８−炭素脂肪酸および／または１８−炭素脂肪酸トリグリセリド（例えば、クロフサスグリ油などの植物種子油）を含む油を提供し、（ｂ）１８−炭素遊離脂肪酸を含む組成物を形成させるために、１８−炭素脂肪酸エステルおよび／または１８−炭素脂肪酸トリグリセリドをけん化し、（ｃ）場合によっては、１８−炭素脂肪酸の１以上を濃縮し、（ｄ）２０−炭素脂肪酸を含む組成物を生成させるために、１８−炭素遊離脂肪酸を伸長させ、（ｅ）場合によっては、２０−炭素脂肪酸を含む濃厚化組成物を生成させるために、２０−炭素脂肪酸の１以上を濃縮する、段階を含む。
【０００４】
いくつかの実施形態において、１８−炭素遊離脂肪酸を含む組成物は、少なくとも１つの結晶化段階を含む方法によって、段階（ｃ）で濃縮される。いくつかの実施形態において、段階（ｃ）は、（ｉ）第一の溶媒系を用いた第一の結晶化段階および（ｉｉ）第二の溶媒系を用いた第二の結晶化段階を含む。いくつかの実施形態において、第一および第二の溶媒系は同じである。いくつかの実施形態において、第一および第二の溶媒系は異なる。いくつかの実施形態において、第一の溶媒系は、アセトン、水および非極性非プロトン性溶媒、例えばヘプタンなどを含む。いくつかの実施形態において、第二の溶媒系は、非極性非プロトン性溶媒、例えばヘプタンなどを含む。いくつかの実施形態において、段階（ｃ）の後の組成物は、段階（ｃ）の前の組成物と比較して、より多くの１８−炭素脂肪酸化合物を含有する。いくつかの実施形態において、段階（ｃ）の後の組成物中の１８−炭素脂肪酸の量は、段階（ｃ）の前の組成物中の１８−炭素脂肪酸の量の約１．１倍から約１０倍である。いくつかの実施形態において、本組成物は、約１８％から約８０％、例えば約５０％以上の量、１８−炭素脂肪酸を含む。いくつかの実施形態において、本組成物中のリノール酸の量は、約２５％以上、例えば約５０％減少する。
【０００５】
いくつかの実施形態において、油中の脂肪酸は、オメガ−３およびオメガ−６脂肪酸の混合物を含む。
【０００６】
いくつかの実施形態において、油中の２以上の１８−炭素脂肪酸および／または１８−炭素脂肪酸トリグリセリドが同時に伸長させられる。
【０００７】
いくつかの実施形態において、段階（ｄ）での１８−炭素遊離脂肪酸の伸長は、（ｉ）１８−炭素脂肪酸エステルを形成させるための１８−炭素遊離脂肪酸のエステル化；（ｉｉ）１８−炭素脂肪酸一級アルコールを形成させるための１８−炭素脂肪酸エステルの還元；（ｉｉｉ）１８−炭素脂肪酸求電子試薬を形成させるための１８−炭素脂肪酸一級アルコールにおける一級アルコールモチーフの、一級脱離基（例えばメシル化物）への変換；（ｉｖ）得られた１８−炭素脂肪酸求電子試薬の、脱プロトン化マロン酸ジメチル（ＤＭＭ：−）などの求核試薬との反応；および（ｖ）求核試薬がＤＭＭ：−または類似の脱プロトン化ジエステルである場合、対応する二塩基酸を形成させるためのジエステルの加水分解と、それに続く、２０−炭素遊離脂肪酸を含む組成物を形成させるための脱炭酸化によって起こる。いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも約３５％の２０−炭素遊離酸、例えば約５０％を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、１８−炭素脂肪酸および／または１８−炭素脂肪酸トリグリセリドは、ＳＤＡ、ＧＬＡおよびＡＬＡのうち１以上を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態において、２０−炭素脂肪酸は、ＥＴＡ、ＥＴＥおよびＤＧＬＡののうち１以上を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本工程は、２個の炭素原子による脂肪酸の伸長前に油から１８−炭素脂肪酸の少なくとも一部を抽出することをさらに含む。いくつかの実施形態において、抽出する段階は、有機溶媒抽出またはＣＯ２超臨界流体抽出（ＣＯ２−ＳＦＥ）を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本工程は、２０−炭素脂肪酸を精製するかまたは濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態において、２０−炭素脂肪酸を精製する段階は、尿素分画化、低温結晶化、クロマトグラフィー分離、例えばＨＰＬＣなど、または蒸留を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、１８−炭素脂肪酸をエロンガーゼなどの酵素と接触させることにより、１８−炭素脂肪酸の少なくとも一部を２個の炭素原子によって伸長させる。
【００１３】
いくつかの実施形態において、例えば、１８−炭素脂肪酸を還元剤と接触させ、得られた一級アルコールを臭素化し、この臭化物をＣ２−伸長ブロック、例えば場合によっては置換オキサゾリンなどとカップリングし、２０−炭素脂肪酸を形成させるために伸長オキサゾリンを変換することによって、１８−炭素脂肪酸の少なくとも一部を２個の炭素原子により化学的に伸長させる。
【００１４】
いくつかの実施形態において、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または９０％を超える純度を有する２０−炭素脂肪酸を生成させるために、２０−炭素脂肪酸を濃縮するかまたは精製する。
【００１５】
いくつかの実施形態において、次に、精製２０−炭素脂肪酸を酵素１５−リポオキシゲナーゼと接触させるかまたはこれに曝露する。いくつかの実施形態において、１５−リポオキシゲナーゼとの接触またはこれへの曝露から生成される脂肪酸は、１５−ＨＥＴｒＥおよび／または１５−ＯＨ−ＥＴＡである。ある実施形態において、１５−リポオキシゲナーゼとの接触またはこれへの曝露により生成される１５−ＨＥＴｒＥと１５−ＯＨ−ＥＴＡとの比率は、約１０：１から約１：１０または５：１から約１：５である。
【００１６】
いくつかの実施形態において、１８−炭素脂肪酸および／または１８−炭素脂肪酸トリグリセリドを含む油は、エキウム種子油、クロフサスグリ種子油、ルリジサ種子油、マツヨイグサ種子油、ハッケリア（ｈａｃｋｅｌｉａ）種子油、トリコデスマ（ｔｒｉｃｈｏｄｅｓｍａ）種子油、ブグロソイデス（Ｂｕｇｌｏｓｓｏｉｄｅｓ）種子油およびそれらの組み合わせを含む群から選択される植物種子油である。
【００１７】
いくつかの実施形態において、本工程は、２０−炭素脂肪酸を脱臭することをさらに含む。いくつかの実施形態において、脱臭は、２０−炭素脂肪酸をシリカおよびチャコールの混合物と混合するか、またはセライトフィルターに２０−炭素脂肪酸を通過させることを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、本工程は、脂肪酸エステルを生成させるためにエステル化すること（例えば１８−または２０−炭素脂肪酸をアルコールおよび酸と接触させること）をさらに含む。ある実施形態において、前記のエステル化脂肪酸からエステル化２０−炭素脂肪酸を濃縮する。その他の実施形態において、ＤＧＬＡエステル、ＥＴＥエステル、ＥＴＡエステル、１５−ＨＥＴｒＥエステルおよび／または１５−ＯＨ−ＥＴＡエステルを前記のエステル化脂肪酸から濃縮する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、エステル化脂肪酸（例えばＤＧＬＡ、ＥＴＥ、ＥＴＡ、１５−ＨＥＴｒＥおよび１５−ＯＨ−ＥＴＡエステル）は、アルキルエステル、ヘテロアルキルエステル、アリールエステル、ヘテロアリールエステル、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、イソブチルエステル、ｔ−ブチルエステルおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２０】
いくつかの実施形態において、生成される２０−炭素脂肪酸と出発１８−炭素脂肪酸との比率は、出発油中での比率と実質的に同じままである。他の実施形態において、生成される２０−炭素脂肪酸と出発１８−炭素脂肪酸との比率は、約１：１０から約１０：１、約１：５から約５：１、約１：２から約２：１または約１：１である。ある実施形態において、ＤＧＬＡ：ＥＴＡの比率は、出発油中でのＧＬＡ：ＳＤＡの比率と実質的に同じままである。別の実施形態において、ＤＧＬＡ：ＥＴＥ：ＥＴＡの比率は、出発油中のＧＬＡ：ＡＬＡ：ＳＤＡの比率と実質的に同じままである。別の実施形態において、ＤＧＬＡとＥＴＥおよびＥＴＡの合計との比率は、出発油中のＧＬＡとＡＬＡおよびＳＤＡの合計との比率と実質的に同じままである。別の実施形態において、ＤＧＬＡとＥＴＥおよびＥＴＡの合計との比率は、出発油中のＧＬＡとＡＬＡおよびＳＤＡの合計との比率と比較した場合に上昇している。別の実施形態において、１５−ＨＥＴｒＥ：１５−ＯＨ−ＥＴＡの比率の比率は、出発油中のＧＬＡ：ＳＤＡの比率と実質的に同じままである。
【００２１】
本開示はまた、本明細書中で開示される工程の何れかにより生成された脂肪酸を含む組成物も提供する。いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または９０％を超えるＤＧＬＡを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または９０％を超えるＥＴＡを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または９０％を超えるＥＴＥを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または９０％を超える１５−ＨＥＴｒＥを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または９０％を超える１５−ＯＨ−ＥＴＡを含む。
【００２２】
ある実施形態において、本開示は、ＳＤＡおよびＧＬＡを含む脂肪酸を含む植物種子油を提供し；植物種子油からＳＤＡおよびＧＬＡから抽出し；ＳＤＡおよびＧＬＡを２個の炭素原子によって伸長させ（同じ時間に、実質的に同時にまたは同時に、同じ反応容器中で）、ＤＧＬＡおよびＥＴＡがＳＤＡおよびＧＬＡから生成され；ＤＧＬＡおよび／またはＥＴＡを精製および／または濃縮することによって、ＤＧＬＡおよびＥＴＡを含む組成物を生成させるための工程を提供する。
【００２３】
別の実施形態において、本開示は、ＡＬＡ、ＳＤＡおよびＧＬＡを含む脂肪酸を含む植物種子油を提供し；植物種子油からＡＬＡ、ＳＤＡおよびＧＬＡを抽出し；それぞれＥＴＥ、ＥＴＡおよびＤＧＬＡを生成させるために、ＡＬＡ、ＳＤＡおよびＧＬＡを２個の炭素原子によって伸長させ（同じ時間に、実質的に同時にまたは同時に、同じ反応容器中で）；ＤＧＬＡ、ＥＴＡおよび／またはＥＴＡを精製および／または濃縮することによって、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む組成物を生成させるための工程を提供する。
【００２４】
別の実施形態において、本開示は、ＳＤＡおよびＧＬＡを含む脂肪酸を含む植物種子油を提供し；植物種子油からＳＤＡおよびＧＬＡを抽出し；ＳＤＡおよびＧＬＡを２個の炭素原子によって伸長させ（同じ時間に、実質的に同時にまたは同時に、同じ反応容器中で）、ＤＧＬＡおよびＥＴＡがＳＤＡおよびＧＬＡから生成され；１５−ＨＥＴｒＥおよび／または１５−ＯＨ−ＥＴＡを形成させるためにＤＧＬＡおよびＥＴＡを１５−リポオキシゲナーゼと接触させるかまたはこれに曝露し、１５−ＨＥＴｒＥおよび／または１５−ＯＨ−ＥＴＡを精製／濃厚化することによって、１５−ＨＥＴｒＥおよび１５−ＯＨ−ＥＴＡを含む組成物を生成させるための工程を提供する。
【００２５】
本開示はまた、上述の工程によって生成される、化合物、組成物および医薬組成物も提供する。いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも５０重量％のＤＧＬＡ、ＥＴＥ、ＥＴＡまたはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、約１：８から約８：１、例えば約１：１の、ＤＧＬＡとＥＴＡとの比率を含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、約１：８から約８：１、例えば約１：１の、ＤＧＬＡとＥＴＥおよびＥＴＡの合計との比率を含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも５０重量％の１５−ＨＥＴｒＥ、１５−ＯＨ−ＥＴＡまたはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本組成物は、約１：８から約８：１、例えば約１：１の１５−ＨＥＴｒＥと１５−ＯＨ−ＥＴＡとの比率を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、１８−炭素脂肪酸および／または１８−炭素脂肪酸トリグリセリドを含む油から２０−炭素脂肪酸を生成させるための工程の、ある実施形態に対するフローダイヤグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本開示は様々な形で実施できるが、本開示を開示の一例と見なし、説明した特定の実施形態への開示を限定するものではないという理解の下で、以下のいくつかの実施形態が記載される。見出しは便宜上つけられているだけであり、いかなる点においても開示を限定するものと解釈されない。任意の見出しが付けられ説明されている実施形態は何れも、他の見出しが付けられ説明されている実施形態と一緒にされてよい。
【００２８】
本願で指定された様々な定量値における数値の使用は、別段の指示がない限り、指定の範囲内の最小値および最大値の両方の数値の前に単語「約」を付した場合と同様に、近似として述べられる。さらに、範囲の開示では最小値と最大値との間の列挙された全ての値を含む、連続的な範囲であることが意図され、そのような値により形成できる任意の範囲と同様である。開示した数値を何れかの他の開示した数値で除することによって形成できる任意の比が全て（およびそのような任意の比の範囲が）本明細書に開示される。したがって、当業者はこのような比、範囲および比の範囲の多くが、明確に本明細書にある数値に由来し得ること、および、全ての場合においてこのような比、範囲および比の範囲は、本開示の様々な実施形態を表わすことを認識するであろう。
【００２９】
シス−８，１１，１４−エイコサトリエン酸またはＣ２０：３ω６（「ＤＧＬＡ」）としても知られているジホモ−ガンマ−リノレン酸は、ガモレン酸（ｇａｍｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはＣ１８：３ω６（「ＧＬＡ」）とも呼ばれるガンマ−リノレン酸の伸長産物である。ＧＬＡは、様々な植物、例えば２、３例を挙げると、エキウム（Ｅｃｈｉｕｍ）、クロフサスグリ、ルリジサ、マツヨイグサ、ハッケリア（ｈａｃｋｅｌｉａ）、トリコデスマ（ｔｒｉｃｈｏｄｅｓｍａ）およびブグロソイデス（Ｂｕｇｌｏｓｓｏｉｄｅｓ）の植物からの天然油の構成要素である。本明細書で使用される場合、「ＧＬＡ」という用語は、ＧＬＡトリグリセリド、遊離酸（例えば、シス−６，９，１２−オクタデカトリエン酸）および／または医薬的に許容可能なそれらのエステル、誘導体、複合物もしくは塩または前述のものの何れかの混合物を指す。いくつかの実施形態において、ＧＬＡは、Ｃ１―４アルキルエステルの形態、例えばメチルエステルまたはエチルエステルの形態である。本明細書中で使用される場合、「ＤＧＬＡ」という用語は、ＤＧＬＡ遊離酸（例えば、シス−８，１１，１４−エイコサトリエン酸）および／または医薬的に許容可能なそれらのエステル、誘導体、複合物もしくは塩または前述のものの何れかの混合物を指す。いくつかの実施形態において、ＤＧＬＡは、Ｃ１―４アルキルエステルの形態、例えばメチルエステルまたはエチルエステルの形態である。
【００３０】
ステアリドン酸はまた、全−シス−６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸またはＣ１８：４ω３（「ＳＤＡ」）としても知られる。本明細書中で使用される場合、「ＳＤＡ」という用語は、ＳＤＡトリグリセリド、遊離酸および／または医薬的に許容可能なそれらのエステル、誘導体、複合物もしくは塩または前述のものの何れかの混合物を指す。いくつかの実施形態において、ＳＤＡは、Ｃ１−４アルキルエステルの形態、例えばメチルエステルまたはエチルエステルの形態である。
【００３１】
１５−ヒドロキシ−エイコサ−８（Ｚ），１１（Ｚ），１３（Ｅ）−トリエン酸（「１５−ＨＥＴｒＥ」）はＤＧＬＡの誘導体である。本明細書で使用される場合、「１５−ＨＥＴｒＥ」という用語は、遊離酸形態の１５−ＨＥＴｒＥ（例えば、１５−ヒドロキシ−エイコサ−８（Ｚ），１１（Ｚ），１３（Ｅ）−トリエン酸）および／または医薬的に許容可能なそれらのエステル、誘導体、複合物もしくは塩または前述の何れかのものの混合物を指す。
【００３２】
全−シス−８，１１，１４，１７−エイコサテトラエン酸または２０：４ω３としても知られるエイコサテトラエン酸（「ＥＴＡ」）は、ステアリドン酸の伸長産物である。本明細書中で使用される場合、「ＥＴＡ」という用語は、ＥＴＡ遊離酸および／または医薬的に許容可能なそれらのエステル、誘導体、複合物もしくは塩または前述の何れかの混合物を指す。いくつかの実施形態において、ＥＴＡは、Ｃ１−４アルキルエステルの形態、例えばメチルエステルまたはエチルエステルの形態などである。
【００３３】
１５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（本明細書中で、「１５−ＯＨ−ＥＴＡ」と呼ばれる１５−ヒドロキシ−５，８，１１，１３−エイコサテトラエン酸）は、ＥＴＡの誘導体である。本明細書中で使用される場合、「１５−ＯＨ−ＥＴＡ」という用語は、１５−ＯＨ−ＥＴＡ遊離酸および／または医薬的に許容可能なそれらのエステル、誘導体、複合物もしくは塩または前述のものの何れかの混合物を指す。いくつかの実施形態において、１５−ＯＨ−ＥＴＡは、Ｃ１−４アルキルエステルの形態、例えばメチルエステルまたはエチルエステルの形態などである。
【００３４】
α−リノレン酸はまた、全−シス−９，１２，１５−オクタデカトリエン酸または１８：３ω３（「ＡＬＡ」）としても知られる。本明細書中で使用される場合、「ＡＬＡ」という用語は、ＡＬＡトリグリセリド、遊離酸および／または医薬的に許容可能なそれらのエステル、誘導体、複合物もしくは塩または前述の何れかの混合物を指す。いくつかの実施形態において、ＡＬＡは、Ｃ１−４アルキルエステルの形態、例えばメチルエステルまたはエチルエステルの形態などである。
【００３５】
全−シス−１１，１４，１７−エイコサトリエン酸または２０：３ω３としても知られるエイコサトリエン酸（「ＥＴＥ」）は、ＡＬＡの伸長産物である。本明細書中で使用される場合、「ＥＴＥ」という用語は、ＥＴＥ遊離酸および／または医薬的に許容可能なそれらのエステル、誘導体、複合物もしくは塩または前述の何れかの混合物を指す。いくつかの実施形態において、ＥＴＥは、Ｃ１−４アルキルエステルの形態、例えばメチルエステルまたはエチルエステルの形態などである。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、「ＤＧＬＡ誘導体」および「ＤＧＬＡの誘導体」という用語は、１５−ＨＥＴｒＥ、およびエステル、誘導体、複合物もしくはそれらの塩または前述の何れかの混合物を含むが限定されない、ＤＧＬＡの化学変換から形成される化合物を指す。当業者は、ある化合物がＤＧＬＡ誘導体であるか否かを化学構造および他の特性から容易に認識する。
【００３７】
本明細書中で開示される何れかの組成物の脂肪酸含量は、当技術分野で公知の何らかの適切な方法によって決定され得る。例えばおよび限定されないが、本明細書中で開示される組成物の脂肪酸含量は、ガスクロマトグラフィーにより決定され得る。ある実施形態において、組成物の脂肪酸含量を決定するための方法は、約１．０ｍＬ／分の流速の不活性担体ガス（例えばヘリウム）で、チャンバー／オーブン、３００℃に設定されたＦＩＤ検出器の内側に０．５ｍｍフィルム厚を有するＤＢ−ＦＦＡＰ  ３０ｍ  ｘ  ２５０μｍカラムを備えるガスクロマトグラフィー系への本組成物の試料の注入（例えば１μＬボーラス）を含む。カラムの温度は、適切な温度に維持され得るか、または時間とともに、例えば、数時間にわたり、約１８０℃の開始温度から最終的なより高い温度、例えば約２５０℃に数分間にわたり、（例えば「傾斜して」）上昇させ得る（例えば７分間にわたり７０℃の傾斜的上昇または約１０℃／分）。しかし、当業者は、本明細書中で開示される代表的条件が他のＧＣカラムおよび条件で容易に置き換え可能であることを認識するであろう。
【００３８】
ある実施形態において、ＤＧＬＡ、ＥＴＥ、ＥＴＡ、１５−ＯＨ−ＥＴＡおよび／または１５−ＨＥＴｒＥは、本明細書に開示されるような方法または組成物での使用の前に脱臭される。ある実施形態において、（１）ＤＧＬＡおよびＥＴＡを含有する油または（２）１５−ＨＥＴｒＥおよび１５−ＯＨ−ＥＴＡを含有する油または（３）ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含有する油をシリカおよびチャコールと混合する。ある実施形態において、シリカおよびチャコールは、約１：１から約５０：１、例えば約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１２：１、約１４：１、約１５：１、約１６：１、約１８：１、約２０：１、約２５：１、約３０：１、約３５：１、約４０：１、約４５：１または約５０：１の比率である。ある実施形態において、ＤＧＬＡ（または１５−ＯＨ−ＥＴＡまたは１５−ＨＥＴｒＥ）とシリカ／チャコールとの比率は、約１：１から約５０：１、例えば約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１２：１、約１４：１、約１５：１、約１６：１、約１８：１、約２０：１、約２５：１、約３０：１、約３５：１、約４０：１、約４５：１または約５０：１である。ある実施形態において、未精製ＤＧＬＡ、１５−ＯＨ−ＥＴＡおよび／または１５−ＨＥＴｒＥはセライトフィルター上でろ過することによって脱臭されている。別の実施形態において、レシチンが脂肪酸の脱臭において使用される。
【００３９】
１８−炭素脂肪酸の伸長
いくつかの実施形態において、１８−炭素脂肪酸をエロンガーゼなどの酵素と接触させることによって、１８−炭素脂肪酸の少なくとも一部を２個の炭素原子により伸長させる。
【００４０】
いくつかの実施形態において、例えば、一級アルコールを生成させるために１８−炭素脂肪酸を還元剤と接触させ、得られた一級アルコールを臭素化し、この臭化物をＣ２−伸長ブロック、例えば場合によっては置換されているオキサゾリンとカップリングし、２０−炭素脂肪酸を形成させるために伸長オキサゾリンを変換することによって、１８−炭素脂肪酸の少なくとも一部を２個の炭素原子により化学的に伸長させる。
【００４１】
あるこのような実施形態において、最初に、対応する１８−炭素一級アルコールを形成させるために、１８−炭素脂肪酸を水素化アルミニウムリチウムで処理する。次に、１８−炭素一級アルコールを二臭化トリフェニルホスフィン（Ｐｈ３ＰＢｒ２）で処理する。次に、ジメチルオキサゾリン−保護された２０−炭素脂肪酸を形成させるために、得られた臭化物を、２，４，４−トリメチル−２−オキサゾリンおよびｎ−ブチルリチウムの混合物での処理によって伸長させる。塩酸での処理によって、２０−炭素脂肪酸メチルエステルが得られる。ＫＯＨでの処理と続く酸性処理によるなど、従来からの加水分解法によって、対応する２０−炭素脂肪酸が形成され得る。
【００４２】
いくつかの実施形態において、例えば、１８−炭素脂肪酸をそれらの対応する１８−炭素脂肪酸エステルに変換し、一級アルコールを形成させるために１８−炭素脂肪酸エステルを還元剤と接触させ、メシル化物を形成させるために、得られた一級アルコールをメシル化し、２０−炭素α−置換脂肪酸誘導体を形成させるためにメシル化物をＣ２−伸長ブロック、例えばジアルキルマロン酸などとカップリングし、２０−炭素α−カルボキシル化脂肪酸誘導体を形成させるために２０−炭素α−置換脂肪酸誘導体を加水分解し、２０−炭素脂肪酸を形成させるために２０−炭素α−置換脂肪酸誘導体を脱炭酸化することによって、１８−炭素脂肪酸の少なくとも一部を２個の炭素原子により化学的に伸長させる。
【００４３】
あるこのような実施形態において、メチルエステルなどの１８−炭素脂肪酸エステルを形成させるために１８−炭素遊離脂肪酸をエステル化する。１８−炭素一級アルコールを形成させるためにエステルを水素化アルミニウムリチウムで処理し、次に、１８−炭素一級メシル化物を形成させるために、１８−炭素一級アルコールを塩化メタンスルホニル（塩化メシル）で処理する。次いで、２０−炭素ジエステルを形成させるために脱プロトン化マロン酸ジメチルを含有する溶液で１８−炭素一級メシル化物を処理する。２０−炭素ジエステルを加水分解し、次いで２０−炭素遊離脂肪酸を形成させるために脱炭酸化する。
【００４４】
１８−炭素脂肪酸の濃厚化
いくつかの実施形態において、濃厚化工程が行われる前よりも比較して多い１８−炭素脂肪酸を濃厚化油が含有するように、１８−炭素脂肪酸を含む油（例えば植物種子油）を濃厚化する。次に、２０−炭素脂肪酸を形成させるために濃厚化油中の１８−炭素脂肪酸を伸長させる。あるこのような実施形態において、油を濃厚化するための方法は、油から１８炭素より大きいかまたは小さい脂肪酸（例えばパルミチン酸）の少なくとも一部を分離することを含む。ある実施形態において、濃厚化前の油中のＧＬＡおよび／またはＳＤＡの量と比較した場合、濃厚化によって、油中の、（油中に存在する全脂肪酸に対する）ＧＬＡおよび／またはＳＤＡの相対量が向上する。
【００４５】
ある実施形態において、ＧＬＡおよびＳＤＡ以外の脂肪酸の少なくとも一部を選択的に結晶化し、第一の濃厚化油を形成させるために油から結晶化脂肪酸を分離することを含む方法によって、１８−炭素脂肪酸を含む油を濃厚化する。いくつかの実施形態において、本方法は、アセトンおよび場合によっては水を含む溶媒系と油を接触させることを含む。いくつかの実施形態において、本溶媒系は、約９９．９：０．１から約９０：１０、例えば約９９．９：０．１、約９９．８：０．２、約９９．７：０．３、約９９．６：０．４、約９９．５：０．５、約９９．４：０．６、約９９．３：０．７、約９９．２：０．８、約９９．１：０．９、約９９：１、約９８．５：１．５、約９８：２、約９７．５：２．５、約９７：３、約９６．５：３．５、約９６：４、約９５．５：４．５、約９５：５、約９４．５：５．５、約９４：６、約９３．５：６．５、約９３：７、約９２．５：７．５、約９２：８、約９１．５：８．５、約９１：９、約９０．５：９．５または約９０：１０の体積比でアセトンおよび水を含む。いくつかの実施形態において、本溶媒系は、約９２：４：４から約９９：０．５：０．５、例えば約９２：４：４、約９４：３：３、約９６：２：２、約９８：１：１、約９８．５：１：０．５または約９９：０．５：０．５の体積比でアセトン、水および非極性非プロトン性溶媒、例えばヘプタンなどを含む。
【００４６】
ある実施形態において、約１：９９から約５０：５０、例えば約１：９９、約２：９８、約３：９７、約４：９６、約５：９５、約６：９４、約７：９３、約８：９２、約９：９１、約１０：９０、約１５：８５、約２０：８０、約２５：７５、約３０：７０、約３５：６５、約４０：６０、約４５：５５または約５０：５０の油：溶媒系体積比で、油を溶媒系と接触させる。
【００４７】
油を第一の溶媒系と接触させた後、結晶化を引き起こすために十分な時間、混合物を静置する。場合によっては、混合物を−７８℃から約１０℃の温度、例えば約−７８℃、約−６５℃、約−６０℃、約−５５℃、約−５０℃、約−４５℃、約−４０℃、約−３５℃、約−３０℃、約−２５℃、約−２０℃、約−１５℃、約−１０℃、約−５℃、約０℃、約４℃、約５または約１０℃に冷却する。当業者にとって公知の何らかの適切な方法によって、結晶を濃厚化油から分離する（例えばろ過、低温ろ過など）。
【００４８】
いくつかの実施形態において、本方法は、第二の濃厚化油を生成させるために、第二の溶媒系で油または第一の濃厚化油を処理することを含む。いくつかの実施形態において、第二の溶媒系は、非極性非プロトン性溶媒、例えばヘプタンなどを含む。いくつかの実施形態において、約１：９９から約５０：５０、例えば約１：９９、約２：９８、約３：９７、約４：９６、約５：９５、約６：９４、約７：９３、約８：９２、約９：９１、約１０：９０、約１５：８５、約２０：８０、約２５：７５、約３０：７０、約３５：６５、約４０：６０、約４５：５５または約５０：５０の油：溶媒系体積比で、油または第一の濃厚化油を溶媒系と接触させる。
【００４９】
油または第一の濃厚化油を第二の溶媒系と接触させた後、結晶化を引き起こすために十分な時間、混合物を静置する。場合によっては、混合物を−７８℃から約１０℃、例えば約−７８℃、約−６５℃、約−６０℃、約−５５℃、約−５０℃、約−４５℃、約−４０℃、約−３５℃、約−３０℃、約−２５℃、約−２０℃、約−１５℃、約−１０℃、約−５℃、約０℃、約４℃、約５または約１０℃の温度に冷却する。当業者にとって公知の何らかの適切な方法によって、結晶を第二の濃厚化油から分離する（例えばろ過、低温ろ過など）。
【００５０】
ある実施形態において、
（ｉ）約９８．５：１：０．５の体積比のアセトン、水およびヘプタンを含む第一の溶媒系と油を約１０：９０の体積比で接触させ；
（ｉｉ）得られた混合物を約−６０℃の温度に冷却し；
（ｉｉｉ）前記の油よりも比較的多いＧＬＡおよびＳＤＡを有する第一の濃厚化油を生成させるために、得られた冷却混合物を低温ろ過し；
（ｉｖ）ヘプタンなどの非極性非プロトン性溶媒を含む第二の溶媒系と第一の濃厚化油を接触させ、第一の濃厚化油：溶媒系の体積比が約１０：９０であり；
（ｖ）得られた混合物を約−６０℃の温度に冷却し；
（ｖｉ）第二の濃厚化油を生成させるために、得られた冷却混合物を低温ろ過し、第二の濃厚化油中に、対応する第一の濃厚化油および前記の油よりも多い（組成物中の全脂肪酸に対する）量のＧＬＡおよびＳＤＡが存在すること、
を含む方法によって、１８−炭素脂肪酸化合物において油を濃厚化する。
【００５１】
いくつかの実施形態において、ＧＬＡの相対量は、約３％から約５００％、例えば約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％、約３２５％、約３５０％、約３７５％、約４００％、約４２５％、約４５０％、約４７５％または約５００％増加する。
【００５２】
いくつかの実施形態において、濃厚化油は、濃厚化油中に存在する全脂肪酸に対して、少なくとも約１５％のＧＬＡ、例えば濃厚化油中に存在する全脂肪酸の、少なくとも約１５％、少なくとも約１６％、少なくとも約１７％、少なくとも約１８％、少なくとも約１９％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約９５％超を含む。
【００５３】
いくつかの実施形態において、ＳＤＡの相対量は、約３％から約５００％、例えば約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１０５％、約１１０％、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２２５％、約２５０％、約２７５％、約３００％、約３２５％、約３５０％、約３７５％、約４００％、約４２５％、約４５０％、約４７５％または約５００％増加する。
【００５４】
いくつかの実施形態において、濃厚化油は、濃厚化油中に存在する全脂肪酸に対して、少なくとも約２％のＳＤＡ、例えば濃厚化油中に存在する全脂肪酸の、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、少なくとも約１０％、少なくとも約１１％、少なくとも約１２％、少なくとも約１３％、少なくとも約１４％、少なくとも約１５％、少なくとも約１６％、少なくとも約１７％、少なくとも約１８％、少なくとも約１９％、少なくとも約２０％、少なくとも約２１％、少なくとも約２２％、少なくとも約２３％、少なくとも約２４％、少なくとも約２５％または２５％超を含む。
【００５５】
いくつかの実施形態において、濃厚化油中のＧＬＡとＳＤＡとの比率（ＧＬＡ：ＳＤＡ）は、濃厚化が行われる前の油中でのＧＬＡとＳＤＡとの比率よりも低い、これとほぼ同等またはこれよりも高い。いくつかの実施形態において、濃厚化油は、約１：１から約２０：１、例えば約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１１：１、約１２：１、約１３：１、約１４：１、約１５：１、約１６：１、約１７：１、約１８：１、約１９：１または約２０：１のＧＬＡ：ＳＤＡ比率を有する。
【００５６】
２０−炭素脂肪酸の濃厚化
いくつかの実施形態において、１８−炭素脂肪酸を含む油（例えば植物種子油）を伸長工程に供し、次いで、濃厚化組成物が、濃厚化工程が行われる前よりも、比較して多い２０−炭素脂肪酸を含有するように、２０−炭素脂肪酸を含む得られた組成物を濃厚化する。１８−炭素脂肪酸および／または１８−炭素脂肪酸トリグリセリドを含む油が既に記載のように濃厚化されるか否かにかかわらず、２０−炭素脂肪酸組成物の濃厚化が起こり得る。
【００５７】
ある実施形態において、油から、２０炭素（例えばＧＬＡおよび／またはＳＤＡ）より多いかまたは少ない炭素を有する脂肪酸の少なくとも一部を分離することによって、２０−炭素脂肪酸を含む組成物を濃厚化する。ある実施形態において、濃厚化によって、濃厚化する前の組成物中のＤＧＬＡおよび／またはＥＴＡの量と比較した場合、組成物中に存在する全脂肪酸に対する油中のＤＧＬＡおよび／またはＥＴＡの相対量が増加する。
【００５８】
ある実施形態において、ヘプタンなどの非極性非プロトン性溶媒を含む溶媒系と組成物を接触させ、結晶を形成させるのに十分な時間にわたり約−７８℃から約１０℃の温度に、得られた混合物を冷却し、例えば低温ろ過を含む何らかの適切な方法によって２０−炭素脂肪酸を含む濃厚化組成物から結晶を分離することを含む方法に従い、２０−炭素脂肪酸を含む組成物を濃厚化する。
【００５９】
いくつかの実施形態において、濃厚化２０−炭素脂肪酸組成物をさらなる精製に供する。ある実施形態において、さらなる精製は、クロマトグラフィー分離（例えばシリカゲルおよび９８：２：１  シクロヘキサン：エーテル：酢酸で開始し、２０−炭素脂肪酸が溶出されるまで溶媒系中のエーテル量をゆっくりと増加させる溶媒系を用いた順相クロマトグラフィー）を含む。別の実施形態において、さらなる精製は、ヘプタンなどの非極性非プロトン性溶媒を含む第二の溶媒系と濃厚化された２０−炭素脂肪酸組成物を接触させ、得られた混合物を−７８℃から約１０℃の温度に冷却し、例えば低温ろ過を含む何らかの適切な方法によって、２０−炭素脂肪酸を含む濃厚化組成物から結晶を分離することを含む。
【００６０】
ある実施形態において、濃厚化２０−炭素脂肪酸組成物は、出発油中の１８−炭素オメガ−６脂肪酸と１８−炭素オメガ−３脂肪酸との比率よりも大きい、２０−炭素オメガ−６脂肪酸と２０−炭素オメガ−３脂肪酸との比率を有する。ある実施形態において、２０−炭素脂肪酸を含む組成物は、約１：１から約１０：１、例えば、約１：１、約１．５：１、約２：１、約２．５：１、約３：１、約３．５：１、約４：１、約４．５：１、約５：１、約５．５：１、約６：１、約６．５：１、約７：１、約７．５：１、約８：１、約８．５：１、約９：１、約９．５：１または約１０：１の、オメガ−６脂肪酸とオメガ−３脂肪酸との比率を有する。ある実施形態において、組成物中のオモエガ（ｏｍｏｅｇａ）−６脂肪酸とオメガ−３脂肪酸との比率は約５：１である。
【００６１】
したがって、図１により概略的に表されるある実施形態において、１％水が添加され、０．５％ヘプタンが添加されたアセトンからなる約９質量当量の溶媒系と油を接触させることによる脱ろう工程によって、ＧＬＡおよびＳＤＡ（例えば１８．１重量％）を含有する油を濃厚化し、混合物を−６０℃に冷却する。濃厚化油をヘプタンと接触させ、−６０℃に冷却し、２倍濃厚化油を回収することによる脱ろう段階において、得られた濃厚化油をさらに濃厚化する。図１の右側の経路で示されるある実施形態において、ＧＬＡおよびＳＤＡを含む精製組成物を提供するために、分取ＨＰＬＣによって２倍濃厚化油を精製する。次に、メチルエステルを形成させるためにこの物質をエステル化し、一級アルコールを形成させるために還元し、一級メシル化物を形成させるためにメシル化し、マロン酸ジエステルの添加によって伸長させ、対応する二塩基酸を形成させるために加水分解し、ＤＧＬＡおよびＥＴＡを含む組成物を形成させるために脱炭酸化する（およそ７０％脂肪酸）。
【００６２】
図１の左側の経路で示される代替的な実施形態において、ＤＧＬＡおよびＥＴＡを含む組成物を生成させるために、２倍濃厚化油をエステル化し、還元し、メシル化し、伸長させ、加水分解し、脱炭酸化する（７０％脂肪酸）。次に、ＤＧＬＡおよびＳＤＡを含む精製組成物を生成させるために、分取ＨＰＬＣによってこの組成物を精製する。
【００６３】
医薬組成物
様々な実施形態において、本発明は、ＤＧＬＡ、ＥＴＥ、ＥＴＡ、１５−ＯＨ−ＥＴＡ、１５−ＨＥＴｒＥまたはそれらの混合物を含む、医薬組成物、例えば経口送達可能な組成物を提供する。ある実施形態において、本組成物は、治療的有効量のＤＧＬＡ、ＥＴＥ、ＥＴＡ、１５−ＯＨ−ＥＴＡ、１５−ＨＥＴｒＥまたはそれらの組み合わせを含む。ある実施形態において、本医薬組成物は、約０．１％から約９９％、約１％から約９５％、約５％から約９０重量％の、ＤＧＬＡ、ＥＴＥ、ＥＴＡ、１５−ＯＨ−ＥＴＡ、１５−ＨＥＴｒＥまたはそれらの組み合わせを含む。
【００６４】
ある実施形態において、本医薬組成物は、約少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０重量％の、ＤＧＬＡ、ＥＴＥ、ＥＴＡ、１５−ＯＨ−ＥＴＡ、１５−ＨＥＴｒＥまたはそれらの組み合わせを含む。ある実施形態において、本医薬組成物は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０重量％の、ＤＧＬＡおよびＥＴＡを含む。別の実施形態において、本医薬組成物は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０重量％の、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む。ある実施形態において、本医薬組成物は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０重量％の、１５−ＯＨ−ＥＴＡおよび１５−ＨＥＴｒＥを含む。
【００６５】
ある実施形態において、本医薬組成物はさらに追加の活性剤を含む。ある実施形態において、本医薬組成物は、追加の活性剤を、その薬剤に対して一般に認知された治療的有効量未満である量、含む。ある実施形態において、本医薬組成物は、追加の活性剤を、その薬剤に対して一般に認知された治療的有効量と等しいかまたはそれを超えた量、含む。
【００６６】
本開示での使用のための組成物は、１以上の投与単位として処方され得る。本明細書中で「投与単位（ｄｏｓｅ  ｕｎｉｔ）」および「投与単位（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ）」という用語は、１回の投与で治療効果を得るために適切な治療剤の量を含有する医薬組成物の一部分を指す。このような投与単位は、１日当たり１回から複数回（つまり１から約１０回、１から８回、１から６回、１から４回または１から２回）、または治療反応を誘発するのに必要な回数だけ、投与し得る。
【００６７】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、経口により送達可能な剤形または投与単位の形態である。適切な剤形の非限定例としては、錠剤（例えば、縣濁錠剤（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ｔａｂｌｅｔ）、咀嚼縣濁錠剤（ｂｉｔｅ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ｔａｂｌｅｔ）、急速分散錠剤、チュアブル錠剤など）、カプレット、カプセル（例えば軟もしくは硬ゼラチンカプセルまたはＨＰＭＣカプセル）、薬用キャンディー、サシェ、カシェ、トローチ、ペレット、縣濁液、エリキシル、シロップまたは経口投与に合理的に適合させられる何らかの他の固体剤形が挙げられる。
【００６８】
あるいは、本発明の組成物はまた、直腸、局所または非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内および皮内または点滴）送達用にも処方され得る。
【００６９】
別の実施形態において、本発明の組成物は、１以上の医薬的に許容可能な賦形剤を含む。「医薬的に許容可能な賦形剤」という用語は、本明細書中で、対象への治療剤の送達のための担体またはビヒクルとして使用されるか、または、許容できない毒性または組成物中の他の成分との相互作用を生じさせない、その操作性もしくは保存特性を向上させるかまたは組成物の単位用量の形成を可能にするかまたは促進するために医薬組成物に添加される、それ自身は治療剤ではない何らかの物質を意味する。単なる例であるが、本開示による医薬組成物は、抗酸化剤、界面活性剤、保存料、香味剤、共溶媒、粘度調整剤、縣濁促進剤および脂溶相の１以上を含み得る。
【００７０】
ある実施形態において、本医薬組成物は、１以上の抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、パルミチン酸、アスコルビン酸パルミテート、α−トコフェロール、イデベノン、ユビキノン、フェルラ酸、コエンザイムＱ１０、リコピン、緑茶、カテキン、エピガロカテキン３−ガラート（ＥＧＣＧ）、緑茶ポリフェノール（ＧＴＰ）、シリマリン、コーヒーの実、レスベラトロール、ブドウ種子、ザクロエキス、ゲニステイン、ピクノジェノール、ナイアシンアミドなどを含む。ある実施形態において、本医薬組成物は、約０．０１重量％から約２重量％の抗酸化剤、例えば約０．０１重量％、約０．０２重量％、約０．０３重量％、約０．０４重量％、約０．０５重量％、約０．０６重量％、約０．０７重量％、約０．０８重量％、約０．０９重量％、約０．１重量％、約０．１１重量％、約０．１２重量％、約０．１３重量％、約０．１４重量％、約０．１５重量％、約０．１６重量％、約０．１７重量％、約０．１８重量％、約０．１９重量％、約０．２重量％、約０．２１重量％、約０．２２重量％、約０．２３重量％、約０．２４重量％、約０．２５重量％、約０．２６重量％、約０．２７重量％、約０．２８重量％、約０．２９重量％、約０．３重量％、約０．３１重量％、約０．３２重量％、約０．３３重量％、約０．３４重量％、約０．３５重量％、約０．３６重量％、約０．３７重量％、約０．３８重量％、約０．３９重量％、約０．４重量％、約０．４１重量％、約０．４２重量％、約０．４３重量％、約０．４４重量％、約０．４５重量％、約０．４６重量％、約０．４７重量％、約０．４８重量％、約０．４９重量％、約０．５重量％、約０．５１重量％、約０．５２重量％、約０．５３重量％、約０．５４重量％、約０．５５重量％、約０．５６重量％、約０．５７重量％、約０．５８重量％、約０．５９重量％、約０．６重量％、約０．６１重量％、約０．６２重量％、約０．６３重量％、約０．６４重量％、約０．６５重量％、約０．６６重量％、約０．６７重量％、約０．６８重量％、約０．６９重量％、約０．７重量％、約０．７１重量％、約０．７２重量％、約０．７３重量％、約０．７４重量％、約０．７５重量％、約０．７６重量％、約０．７７重量％、約０．７８重量％、約０．７９重量％、約０．８重量％、約０．８１重量％、約０．８２重量％、約０．８３重量％、約０．８４重量％、約０．８５重量％、約０．８６重量％、約０．８７重量％、約０．８８重量％、約０．８９重量％、約０．９重量％、約０．９１重量％、約０．９２重量％、約０．９３重量％、約０．９４重量％、約０．９５重量％、約０．９６重量％、約０．９７重量％、約０．９８重量％、約０．９９重量％、約１重量％、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％または約２重量％の１以上の抗酸化剤を含む。
【００７１】
本明細書中で開示される組成物および処方物は、炎症性疾患、心血管系疾患、呼吸器疾患、神経性疾患、癌、精神性疾患および皮膚疾患を含むが限定されない、疾患および／または障害の処置において使用され得る。ある実施形態において、本方法は、本明細書中で開示されるような医薬組成物を対象に、１日１回、１日２回、１日３回または１日３回を超えて投与することを含む。
【００７２】
本明細書中で使用される場合、疾患、障害または状態を「処置する」、またはそれらの「処置」は、少なくとも部分的に、（１）疾患、障害または状態を予防すること、つまり、疾患、障害または状態に罹患する危険がある、または罹患しやすいが、まだ疾患、障害または状態を経験していないかまたは示していない哺乳動物において、疾患、障害または状態の臨床症状を発症させないこと、（２）疾患、障害または状態を抑制すること、すなわち、疾患、障害もしくは状態またはその臨床症状の発症を妨げるかまたは遅延させること、または（３）疾患、障害または状態を軽減すること、すなわち、疾患、障害もしくは状態またはその臨床症状を回復させることを含む。ある疾患または障害に関する「予防」という用語は、まだ何も起こっていない場合には疾患の発現を予防すること、障害または疾患に罹患しやすい可能性があるが、まだ障害または疾患を有すると診断されていない対象において疾患または障害が生じるのを予防すること、および／または既に発症している場合には、疾患／障害のさらなる進行を予防することを意味する。
【００７３】
「有効量」とは、本明細書中で使用される場合、対象において治療効果を付与するのに要求される活性組成物の量を指す。「治療的有効量」とは、本明細書中で使用される場合、治療されている疾患、障害または状態の症状の１以上をある程度まで軽減するのに十分な、投与薬剤または化合物の量を指す。いくつかの実施形態において、その結果は、疾患の兆候、症状または原因の減少および／もしくは軽減、または生体系の何らかの他の所望の変化である。例えば、いくつかの実施形態において、治療用途に対する「有効量」は、過度に有害な副作用無く、疾患の症状の臨床的な著しい減少をもたらすのに必要とされる、本明細書で開示されるような化合物を含む組成物の量である。いくつかの実施形態において、何らかの個々のケースにおける適切な「有効量」は、用量漸増試験などの技術を使用して決定される。「治療的有効量」という用語は、例えば、予防的有効量を含む。その他の実施形態において、本明細書で開示される化合物、例えば式（Ａ）または式（Ｉ）の化合物などの「有効量」は、過度に有害な副作用無く、所望の薬理効果または治療的な改善を達成するのに有効な量である。その他の実施形態において、「有効量」または「治療的有効量」は、対象の代謝、年齢、体重および全身状態が異なること、治療されている症状、治療されている状態の重症度および処方医師の判断により、対象ごとに異なることが理解される。本文脈での「医薬的に許容可能な」という用語は、問題の物質が対象に許容できない毒性または組成物の他の構成要素との相互作用を生じさせないことを意味する。
【００７４】
追加の記載がなくとも、当業者は、上記の記載および以下に説明する例を使用して、本開示の薬剤を作製、利用し、特許請求された方法を実行するものと考えられる。以下の実施例は本開示の実行を容易にするために提供されるものであり、いかなる点においても以下の開示を限定するものとして解釈されるものではない。
【実施例】
【００７５】
実施例１．１８−炭素脂肪酸が濃厚化された組成物の調製
【００７６】
エタノール／水（１：１）中の３．７５Ｍ水酸化ナトリウムにおいて、５ｍＭエチレンジアミンテトラ酢酸２ナトリウムとともに６８℃で３時間、油を加熱することによって、１０ｇのクロフサスグリ種子油をけん化した。冷却後、３Ｍ塩酸で溶液をｐＨ〜２に酸性化した。有機成分をヘプタンで抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃厚化して、＞９０％の収率で遊離脂肪酸を提供した。ガスクロマトグラフィーにより分析した場合、クロフサスグリ種子油は、以下の表１に従う遊離脂肪酸からなることが分かった。出発油中の１８−炭素オメガ−６脂肪酸と１８−炭素オメガ−３脂肪酸との比率は、６３．６０：１４．７８または約４．３：１であった。
表１．クロフサスグリ種子油の組成
【表１】
2015500639.tif 000002
【００７７】
次に、クロフサスグリ種子油脂肪酸組成物を、９８．５：１：０．５（ｖ／ｖ／ｖ）アセトン／水／ヘプタンの溶媒系で処理し、−６０℃に急速に冷却した。油と溶媒系との体積比は１０：９０であった。−６０℃で１から２時間後、スラリーを迅速に低温ろ過した。濃厚化油の組成は以下の表２で示されるとおりであった。１８−炭素オメガ−６脂肪酸と１８−炭素オメガ−３脂肪酸との比率は、約４．２：１から７０．５１：２２．５８または約３．１：１に低下した。
表２．濃厚化クロフサスグリ種子油の組成
【表２】
2015500639.tif 000003
【００７８】
全部で４ｇの濃厚化油を回収し；そのうち１．２７ｇはＧＬＡ（３１．７５重量％）であった。これは、原料のクロフサスグリ種子油と比較して、ＧＬＡの８５％収率に相当した。
【００７９】
結晶化固形物は、原料のクロフサスグリ種子油と比較した場合、パルミチン酸（１０．８％）、ステアリン酸（２．７３％）、オレイン酸（１４．９６％）、リノール酸（５５．３４％）および未知物質−２（１．４６％）が豊富であり、一方で、結晶化固形物は、未知物質−１（検出されず。）、ＧＬＡ（４．７３％）、ＡＬＡ（９．１４％）およびＳＤＡ（０．８４％）については比較的乏しかった。以下の表３のカラムＣで示されるように、比較すると、アセトンおよび水（９９：１  ｖ／ｖ）のみからなる溶媒系中での濃厚化では、３種類の物質からなる溶媒系よりも、除去されるパルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸および未知物質−２が少なかった。３種類の物質からなる溶媒系はまた、驚くべきことに、パルミチン酸、オレイン酸、未知物質−１、および未知物質−２レベルを除去することにおいて、アセトン／水（９９：１  ｖ／ｖ）濃厚化工程から得られるろ液を続いて純ヘプタンを用いた第二の濃厚化工程に対して処理する２段階工程よりも効果的であった（カラムＤ、表３）。
表３．ヘプタン共溶媒がある場合またはない場合の濃厚化の比較
【表３】
2015500639.tif 000004
【００８０】
次に、アセトン／水／ヘプタン（９８．５：１：０．５  ｖ／ｖ／ｖ）溶媒系を用いた結晶化によって濃厚化された２ｇの組成物を、ヘプタンと混合することによる第二の濃厚化工程に供した。混合物を−６０℃に急速に冷却し、１から２時間保持した。固形物をろ過し、得られた濃厚化油は、以下の表４で示される組成を有した。１８−炭素オメガ−６脂肪酸と１８−炭素オメガ−３脂肪酸との比率は、７３．４：１９．５１または約３．７５：１であった。この比率は、元のクロフサスグリ種子油中のオメガ−６とオメガ−３  １８−炭素脂肪酸との比率（約４．３：１）よりも小さいが、第一の濃厚化段階後の比率（約３．１：１）よりも大きい。
表４．最終濃厚化油の組成
【表４】
2015500639.tif 000005
【００８１】
全部で１．０２ｇの濃厚化油を回収した。これは、第一の濃厚化油と比較してＧＬＡの７７％収率に相当し、出発油と比較してＧＬＡの６５％収率に相当した。濃厚化組成物中のＧＬＡ：ＳＤＡの比率は、原料クロフサスグリ種子油中でのＧＬＡ：ＳＤＡの比率（約６．６：１）と比較して、約７．６：１に上昇した。ＧＬＡ：ＳＤＡ＋ＡＬＡの比率は、原料クロフサスグリ種子油中の約０．９５：１から濃厚化油中の約２．５：１に上昇した。
【００８２】
結晶化固形物は、オレイン酸（５．６３％）、リノール酸（５８．２５％）、ＧＬＡ（８．５９％）、ＡＬＡ（２６．０９％）、ＳＤＡ（１．１２％）および未知物質−２（０．３１％）からなった。
【００８３】
実施例２．２０−炭素脂肪酸中で濃厚化される組成物の調製
【００８４】
実施例１に従い調製される組成物をヘプタンで５倍希釈した。得られた溶液を、１００℃で２時間、メタノール中の大過剰の（〜１０当量）次亜塩素酸メチル（新たに調製）で処理した。得られた１８−炭素脂肪酸メチルエステルは、９２％収率で生成され、ＧＣ分析によって９７％の純度であった。
【００８５】
１８−炭素脂肪酸メチルエステルの混合物を０℃で滴下して添加した。無水ＭＴＢＥ中の水素化アルミニウムリチウムの２当量の混合物を３時間前に室温で撹拌した。メチルエステル混合物の添加終了後、スラリーを室温まで温め、その後、一晩撹拌した。氷上で湿潤亜硫酸ナトリウム（１ｍＬ水／ｇ亜硫酸ナトリウム）により反応を停止させ、続いて処理した後、得られた１８−炭素脂肪酸一級アルコールを８４％収率で回収し、ＧＣによって調べたところ９７％の純度であった。
【００８６】
１８−炭素脂肪酸一級アルコールの混合物をジクロロメタン中で希釈し、０℃に冷却した。１．５当量のトリエチルアミンを滴下して添加し、続いて１．１当量の塩化メタンスルホニルを添加した。混合物を０℃で一晩撹拌した。その後、水を添加し、得られたメシル化１８−炭素脂肪酸一級アルコールを９３％の収率で回収し、ＧＣにより測定したところ９３％の純度であった。
【００８７】
０℃のＴＨＦ中の１当量の水素化ナトリウムに滴下して添加することによって、マロン酸ジメチルを脱プロトン化した。６０℃に３時間加熱し、０℃に再冷却した後、１当量のメシル化１８−炭素脂肪酸一級アルコール混合物を添加した。８０℃で４０時間還流させた後、水で反応を停止させ、ＨＣｌでｐＨ〜２に酸性化した。ＴＨＦを蒸発させた後、有機分画をジクロロメタン中で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃厚化し、ＮＭＲで測定したところ８６％の純度を有する８８％の２０−炭素脂肪酸ジエステルの混合物を得た。
【００８８】
１：１エタノール：ＮａＯＨ（２Ｍ）溶液と合わせ、４０℃に加熱することによって、２０−炭素脂肪酸ジエステルの混合物を加水分解した。ＴＬＣにより調べた場合に反応が終了した後、反応混合物をクエン酸でｐＨ３から４に酸性化し、その後、エーテルで抽出した。酸性化前に有機（エーテル）洗浄を行うことによって、望ましい生成物が除去されることが分かった。次に、酸性化による処理でエーテル抽出した結果、ＧＣによって測定したところ、２０−炭素遊離脂肪二酸の混合物が８０％の収率で回収され、８４％の純度となった。
【００８９】
トルエン中の二塩基酸の混合物を溶解し、１４０℃で一晩還流させることによって、２０−炭素遊離脂肪二酸を望ましい２０−炭素遊離脂肪酸に変換した。室温に冷却した後、Ｃｅｌｉｔｅプラグを通じて混合物をろ過し、さらなる処理をせずに濃縮し、ＧＣによって測定したところ、７５％収率で７０％の純度で２０−炭素遊離脂肪酸を含む組成物を得た。本組成物中の遊離脂肪酸の分布を以下の表５で示す。
表５．伸長油中の脂肪酸
【表５】
2015500639.tif 000006
【００９０】
約２０％の最終組成物は、１８−炭素脂肪酸一級アルコールからなり、このことから、メシル化物誘導体の形成が不完全であるかまたはメシル化物が不安定であり、脱プロトン化マロン酸ジメチルによる伸長前に分解されたことが示される。
【００９１】
実施例３．２０−炭素脂肪酸組成物の精製
【００９２】
実施例２の工程に従い調製された３グラムの伸長脂肪酸組成物をヘプタンの添加によって精製し、−６０℃に冷却し、混合物を−６０℃に１から２時間保持し、次いで結晶を低温ろ過した。ＤＧＬＡおよびＥＴＡ中で、得られたろ液（２．１８ｇ）を濃厚化したが、一方で下記の表６で示されるように全ての他の遊離脂肪酸成分が減少した。
表５．伸長油中の脂肪酸
【表６】
2015500639.tif 000007
【００９３】
ろ過した固形物（０．８２ｇ）には、他の成分の中でも、２３％ＤＧＬＡおよび３％ＥＴＡが含まれていた。
【００９４】
シリカゲルクロマトグラフィーによって上記で調製した濃厚化油のさらなる精製を遂行した。遊離脂肪酸を個別の溶出物に分離するために適切である溶媒系は見つからなかった。しかし、徐々に非極性となる溶媒勾配を用いて不純物の一部を除去した。この実施例３の上記の２ｇの濃厚化組成物をシリカゲルプラグに載せた。９８：２：１のシクロヘキサン：エーテル：酢酸からなる３種類の物質からなる溶媒系で開始して、エーテルの相対量を遊離脂肪酸が溶出されるまでゆっくりと増加させた。過剰な１８−炭素遊離脂肪酸一級アルコールが共溶出されたものの、一部の精製分画を回収し、濃縮して０．１ｇの９０％純粋な（ＧＣによる。）２０−炭素遊離脂肪酸を得た。下記の表６で示されるように、この物質中に存在する脂肪酸のうち、５２．２２％がＤＧＬＡであり、５．０５％がＥＴＡであった。
【００９５】
２０−炭素遊離脂肪酸および残留１８−炭素脂肪酸一級アルコールを含有する別のセットの分画を回収し、濃縮して９８０ｍｇの化合物を得たが、そのうち８０％（ＧＣによる。）が２０−炭素遊離脂肪酸化合物であった。下記の表６で示されるように、この分画に存在する脂肪酸のうち５３．９％がＤＧＬＡであり、７．３％がＥＴＡであった。
【００９６】
純エーテルで残留化合物をシリカゲルプラグから洗い流し、合わせ、濃縮して９８０ｍｇの物質を得たが、このうち３５％が２０−炭素遊離脂肪酸であった。下記の表６で示されるように、この物質中に存在する脂肪酸のうち、４６．５６％がＤＧＬＡであり、５．１７％がＥＴＡであった。
表６．クロマトグラフィー分画の組成
【表７】
2015500639.tif 000008
【００９７】
ヘプタンと混合し、−６０℃に冷却し、１から２時間、−６０℃に混合物を保持し、次いで固形物（３３０ｍｇ）を低温ろ過して上清液（６６０ｍｇ）から除去することによって、上記の表６で示される第二の分画のさらなる精製を行った。下記の表７で示されるように、ＤＧＬＡおよびＥＴＡにおいてろ液を濃厚化し、一方でエイコセン酸、伸長された未知物質−１、エイコサジエン酸、ＥＴＥおよび伸長された未知物質−２の相対量が全て減少した。
表７．ヘプタンによる第二の分画の精製
【表８】
2015500639.tif 000009
【００９８】
ろ過された固形物には、幾分かの遊離脂肪酸化合物が含まれており、ガスクロマトグラフィーによって測定したところ、このうち３８％がＤＧＬＡであり、このうち４．８％がＥＴＡであった。
【００９９】
様々な具体的な材料、手順および例を参照して本明細書中で本開示を記載し、例示してきたが、本開示はその目的のため選択される材料および手順の特定の組み合わせに限定されないことが理解される。当業者によって認識されるように、このような細部の点には多数の変形があることが示唆され得る。明細書および実施例は、以下の特許請求の範囲により示される本開示の真の範囲および精神の例示としてのみ見なされることが意図されている。本願で言及された参考文献、特許、および特許出願は全て、それら全体において本明細書に参照により組み込まれる。
【０１００】
段落［０１０１から［０１２６］で記される実施形態も本発明によって提供される。
【０１０１】
ａ．）１８−炭素脂肪酸を含む脂肪酸を含む植物種子油を提供し；
ｂ．）脂肪酸を、場合によってはエロンガーゼからなる群から選択される酵素と場合によっては接触させることによって、２０−炭素脂肪酸を生成させるために２個の炭素原子によって１８−炭素脂肪酸の少なくとも一部を伸長させ；
ｃ．）場合によっては、２０−炭素脂肪酸の少なくとも一部をエステル化すること
を含む、植物種子油から２０−炭素脂肪酸を生成させるための工程。
【０１０２】
植物種子油中の１８−炭素脂肪酸が複数の１８−炭素脂肪酸を含む、段落［０１０１］の工程。
【０１０３】
１８−炭素脂肪酸が、ＳＤＡ、ＧＬＡおよびＡＬＡのうち１以上を含み、２０−炭素脂肪酸が、ＥＴＡ、ＥＴＥおよびＤＧＬＡのうち１以上を含む、段落［０１０１］の工程。
【０１０４】
段階ｂ．）の前に、場合によっては有機溶媒抽出またはＣＯ２超臨界流体抽出（ＣＯ２−ＳＦＥ）を用いて、植物種子油から１８−炭素脂肪酸を抽出することをさらに含む、段落［０１０１］の工程。
【０１０５】
場合によっては、尿素分画化、低温結晶化、クロマトグラフィー分離、ＨＰＬＣまたは蒸留によって２０−炭素脂肪酸を精製することをさらに含む、段落［０１０１］の工程。
【０１０６】
少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または９０％を超える純度を有する２０−炭素脂肪酸を生成させるために２０−炭素脂肪酸が精製される、段落［０１０１］の工程。
【０１０７】
植物種子油が、エキウム種子油、クロフサスグリ種子油、ルリジサ種子油、マツヨイグサ種子油、ハッケリア（ｈａｃｋｅｌｉａ）種子油、トリコデスマ（ｔｒｉｃｈｏｄｅｓｍａ）種子油、ブグロソイデス（Ｂｕｇｌｏｓｓｏｉｄｅｓ）種子油およびそれらの組み合わせを含む群から選択される、段落［０１０１］の工程。
【０１０８】
場合によっては２０−炭素脂肪酸をシリカおよびチャコールの混合物と混合することによって、またはセライトフィルターに２０−炭素脂肪酸を通過させることによって、２０−炭素脂肪酸を脱臭することをさらに含む、段落［０１０１］の工程。
【０１０９】
ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよび／またはＥＴＡエステルを生成させるために、場合によってはアルコールおよび酸とＤＧＬＡを接触させてＤＧＬＡエステルを生成させることによって、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよび／またはＥＴＡをエステル化することをさらに含み、このエステルが、場合によっては、アルキルエステル、ヘテロアルキルエステル、アリールエステル、ヘテロアリールエステル、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、イソブチルエステル、ｔ−ブチルエステルおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落［０１０４］の工程。
【０１１０】
生成される２０−炭素脂肪酸と出発１８−炭素脂肪酸との比が約１：１である、段落［０１０１］の工程。
【０１１１】
段階ｂ．）で生成される２０−炭素脂肪酸が、１８−炭素オメガ−６脂肪酸と１８−炭素オメガ−３脂肪酸とのモル比により定義される、段階ａ．）の植物種子油と関連する１８−炭素脂肪酸モル比および１８−炭素脂肪酸モル比よりも大きい２０−炭素オメガ−６脂肪酸と２０−炭素オメガ−３脂肪酸とのモル比を有する、段落［０１０１］の工程。
【０１１２】
植物種子油中の２以上の１８−炭素脂肪酸が同時に伸長させられる、段落［０１０２］の工程。
【０１１３】
段落［０１０１］の工程により生成される脂肪酸を含む組成物。
【０１１４】
少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または９０％を超える、ＤＧＬＡ、ＥＴＡ、およびＥＴＥの１以上を含む、段落［０１１３］の組成物。
【０１１５】
ａ．）１８−炭素脂肪酸を含む脂肪酸を含む植物種子油を提供し；
ｂ．）場合によっては１８−炭素脂肪酸を抽出し；
ｃ．）２個の炭素原子によって脂肪酸を伸長させること
を含む、植物種子油中の脂肪酸を伸長させるための方法。
【０１１６】
植物種子油中の２以上の１８−炭素脂肪酸が同時に伸長させられる、段落［０１１５］の方法。
【０１１７】
ａ．）ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡを含む脂肪酸を含む植物種子油を提供し；
ｂ．）植物種子油中のＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡを濃厚化し；
ｃ．）２個の炭素原子によってＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡを同時に伸長させ、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む組成物がＳＤＡ、ＥＴＥおよびＧＬＡから生成され；
ｄ．）場合によっては、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む組成物を濃厚化すること
を含む、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む組成物を生成させるための工程。
【０１１８】
少なくとも５０重量％のＤＧＬＡ、ＥＴＥ、ＥＴＡまたはそれらの組み合わせを含む、段落［０１１７］の工程によって生成される組成物。
【０１１９】
約１：１０から約１０：１のＤＧＬＡとＥＴＥおよびＥＴＡとの比を含む、段落［０１１７］の工程によって生成される組成物。
【０１２０】
段階ｂ．）が、（ｉ）アセトン、水およびヘプタンからなる溶媒系と植物種子油を接触させ、（ｉｉ）得られた混合物を結晶形成を誘導するのに十分な温度まで冷却し、（ｉｉｉ）ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡにおいて濃厚化される植物種子油を生成させるために、植物種子油−溶媒系混合物から結晶を分離することを含む、段落［０１１７］の方法。
【０１２１】
段階ｃ．）が、
（ｉ）ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡエステルを形成させるために、ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡをエステル化し；
（ｉｉ）ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡ一級アルコールを形成させるために、ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡエステルを還元し；
（ｉｉｉ）ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡメシル化物を形成させるために、ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡ一級アルコールをメシル化し；
（ｉｖ）伸長ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡジエステルを形成させるために、脱プロトン化マロン酸ジエステルであるＣ２−伸長ブロックとＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡメシル化物を接触させ；
（ｖ）伸長ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡ二塩基酸を形成させるために、伸長ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡジエステルを加水分解し；
（ｖｉ）ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを形成させるために、伸長ＳＤＡ、ＡＬＡおよびＧＬＡ二塩基酸を脱炭酸化すること
を含む、段落［０１１７］の工程。
【０１２２】
段階ｄ．）が、（ｉ）ヘプタンを含む溶媒系とＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む組成物を接触させ、（ｉｉ）結晶形成を誘導するのに十分な温度に、得られた混合物を冷却し、（ｉｉｉ）ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む濃厚化組成物を生成させるために、組成物−溶媒系混合物から結晶を分離することを含む、段落［０１１７］の方法。
【０１２３】
（ａ）１８−炭素脂肪酸トリグリセリドを含有する植物種子油を提供し、
（ｂ）１８−炭素遊離脂肪酸を含む油を形成させるために、リパーゼに植物種子油を曝露することによって、１８−炭素脂肪酸トリグリセリドのグリセロールバックボーンを消化し、
（ｃ）場合によっては油から１８−炭素遊離脂肪酸の１以上を濃厚化し、
（ｄ）２０−炭素脂肪酸を生成させるために、エロンガーゼによって、油または場合によっては濃縮されている１８−炭素遊離脂肪酸を処理し、
（ｅ）２０−炭素脂肪酸の少なくとも一部をエステル化し、
（ｆ）場合によってはエステル化２０−炭素脂肪酸の少なくとも一部を濃縮すること、
を含む、植物種子油から２０−炭素脂肪酸を生成させるための工程。
【０１２４】
ＤＧＬＡとＥＴＥおよびＥＴＡとの比が約１：１０から約１０：１である、ＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡを含む医薬組成物。
【０１２５】
合わせたＤＧＬＡ、ＥＴＥおよびＥＴＡが、少なくとも７０％、８０％または９０重量％の本組成物の全脂肪酸成分を含む、段落［０１２４］の医薬組成物。
【０１２６】
炎症、心血管系、呼吸器、神経性、癌、精神性または皮膚疾患の処置を必要とする対象に、段落［０１２４］の医薬組成物を投与することを含む、その対象において炎症、心血管系、呼吸器、神経性、癌、精神性または皮膚疾患を処置する方法。
【図１】
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【国際調査報告】
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