(57)【要約】  本発明は、フィダキソマイシンの固体状形態、該固体状形態を調製するための方法、ならびに、フィダキソマイシンの固体状形態の一つまたは複数を含む医薬組成物および製剤、ならびに、該医薬組成物および製剤を調製するための方法を提供する。本発明の固体状形態は、有利な特性、例えば、製造および加工における改善された信頼性および再現性、ならびに製剤における安定性を示す。【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィダキソマイシンの結晶性形態であって、
4.3°、8.2°および11.2°2θ±0.2°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図4に実質的に示されるような粉末X線回折パターンのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けられる、形態Z1と称される、フィダキソマイシンの結晶性形態；
4.1°、9.7°、10.2°、11.2°および15.6°2θ±0.2°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図8に実質的に示されるような粉末X線回折パターンのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けられるフィダキソマイシンの結晶性形態Z；または
6.8°、7.9°、10.0°、10.2°、12.2°、13.4°、14.6°、15.4°、16.4°、17.5°、18.4°および23.1°2θ±0.1°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図7に実質的に示されるような粉末X線回折パターンのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けられる、形態Cと称される、フィダキソマイシンの結晶性形態
である、結晶性形態。
【請求項２】
結晶性形態が、4.3°、8.2°および11.2°2θ±0.2°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図4に実質的に示されるような粉末X線回折パターンのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けられる請求項1に記載の形態Z1である、請求項1に記載のフィダキソマイシンの結晶性形態。
【請求項３】
前記結晶性形態Z1が、4.3°、8.2°および11.2°2θ±0.2°2θでのピークを有し、9.7°、10.2°、15.6°、18.8°および19.0°2θ±0.2°2θでのPXRDピークから選択される任意の一つ、二つ、三つ、四つまたは五つの追加のピークも有する粉末X線回折パターンによって特徴付けられる、請求項1または請求項2に記載の結晶性形態Z1。
【請求項４】
163.8、129.1、108.6、94.4および60.3±0.2ppmでの特徴的ピークを有する固体状13C NMRスペクトル；前記特徴的ピークと100.2±0.2ppmでのピークとの間の、それぞれ、63.6、28.9、8.4、-5.8および-39.9±0.1ppmという化学シフト差を有する固体状13C NMRスペクトル；図10に実質的に示されるような固体状13C NMRスペクトルのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによってさらに特徴付けられる、請求項2または請求項3に記載の結晶性形態Z1。
【請求項５】
2993、2974、1749、1721、1649、1594、1572、1451、1257および587±4cm-1での特徴的ピークを有するラマンスペクトル；図11に実質的に示されるようなラマンスペクトルのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにそれらの組み合わせによってさらに特徴付けられる、請求項2から4のいずれか一項に記載の結晶性形態Z1。
【請求項６】
図5に実質的に示されるようなDSCサーモグラム；約127〜130℃でのDSC吸熱ピーク、および約164℃でのDSC溶融開始；図6に実質的に示されるようなTGAサーモグラムのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによってさらに特徴付けられる、請求項2から5のいずれか一項に記載の結晶性形態Z1。
【請求項７】
3551、3437、1738および1721±4cm-1での特徴的なピークを有するFT-IRスペクトル；図9に実質的に示されるようなFT-IRスペクトルのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにそれらの組み合わせによってさらに特徴付けられる、請求項2から6のいずれか一項に記載の結晶性形態Z1。
【請求項８】
275Kの温度で、波長0.43046Åのシンクロトロン放射光によって決定されるような、パラメーターがa=14.2839Å、b=20.8214Å、c=9.5188Å、α=91.02°、β=90.55°、γ=100.59°であり、格子体積が2782.1Å3である単位格子を有する、フィダキソマイシンの二つの対称的な独立した分子を有する、三斜晶系空間群P1によって；または、室温で、Le-Bailフィッティングによって決定されるような、パラメーターがa=14.280Å、b=20.821Å、c=9.530Å、α=91.73°、β=90.39°、およびγ=100.46°である単位格子を有する、フィダキソマイシンの二つの対称的な独立した分子を有する、三斜晶系空間群P1によってさらに特徴付けられる、請求項2から7のいずれか一項に記載の結晶性形態Z1。
【請求項９】
前記結晶性形態Z1が、>95%、好ましくは>98%、またはさらには>99%という、HPLCによる化学的純度を有するフィダキソマイシンを含有する、請求項2から8のいずれか一項に記載の結晶性形態Z1。
【請求項１０】
前記結晶性形態Z1が、無水形態である、請求項2から9のいずれか一項に記載の結晶性形態Z1。
【請求項１１】
前記結晶性形態が、4.1°、9.7°、10.2°、11.2°および15.6°2θ±0.2°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図8に実質的に示されるような粉末X線回折パターンのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けられる形態Zである、請求項1に記載のフィダキソマイシンの結晶性形態。
【請求項１２】
前記結晶性形態Zが、4.1°、9.7°、10.2°、11.2°および15.6°2θ±0.2°2θでのピークを有し、7.8°、14.1°および18.7°±0.2°2θでのPXRDピークから選択される任意の一つ、二つまたは三つの追加のピークも有する粉末X線回折パターンから選択されるデータによって特徴付けられる、請求項11に記載の結晶性形態Z。
【請求項１３】
前記結晶性形態Zが、アセトン溶媒和物またはアセトニトリル溶媒和物である、請求項11または12に記載の結晶性形態Z。
【請求項１４】
前記結晶性形態Zが、少なくとも95%、好ましくは少なくとも98%という、HPLCによる化学的純度を有するフィダキソマイシンを含有する、請求項11から13のいずれか一項に記載の結晶性形態Z。
【請求項１５】
前記結晶性形態が、6.8°、7.9°、10.0°、10.2°、12.2°、13.4°、14.6°、15.4°、16.4°、17.5°、18.4°および23.1°2θ±0.1°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図7に実質的に示されるような粉末X線回折パターンのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けられる形態Cである、請求項1に記載のフィダキソマイシンの結晶性形態。
【請求項１６】
前記結晶性形態Cが、>98%、好ましくは>99%、または>99.3%という化学的純度(HPLCによる)を有するフィダキソマイシンを含有する、請求項15に記載の結晶性形態C。
【請求項１７】
前記結晶性形態Cが
a)メタノール中の、HPLCによる>95%または>98%という化学的純度を有するフィダキソマイシンの溶液を用意する工程と、
b)前記溶液を、約55℃から約60℃の温度まで加熱する工程と、
c)加熱された溶液に水を添加する工程と、
d)加熱された溶液の温度を、約55℃から約60℃に約1時間維持する工程と、
e)加熱された溶液を約15℃の温度に冷却して、結晶性形態Cを含む懸濁物を得る工程と、
f)任意選択で、懸濁物を約15℃に約2時間維持する工程と
を含む方法によって得ることができる、請求項15または16に記載の結晶性形態C。
【請求項１８】
フィダキソマイシンの無水結晶性形態。
【請求項１９】
溶媒和物が、アセトン溶媒和物またはアセトニトリル溶媒和物である、結晶性フィダキソマイシンの溶媒和物。
【請求項２０】
医薬組成物の製造における、請求項1から19のいずれか一項に記載のフィダキソマイシンの結晶性形態の使用。
【請求項２１】
請求項1から19のいずれか一項に記載のフィダキソマイシンの一つまたは複数の結晶性形態を含む、医薬組成物。
【請求項２２】
請求項1から19のいずれか一項に記載のフィダキソマイシンの一つまたは複数の結晶性形態、または請求項21に記載の医薬組成物と、医薬として許容される少なくとも一種の賦形剤とを含む、医薬製剤。
【請求項２３】
請求項1から19のいずれか一項に記載のフィダキソマイシンの一つもしくは複数の結晶性形態、または請求項21に記載の医薬組成物と、医薬として許容される少なくとも一種の賦形剤とを組み合わせる工程を含む、医薬製剤を調製するための方法。
【請求項２４】
医薬品として使用するための、請求項1から19のいずれか一項に記載のフィダキソマイシンの結晶性形態、または請求項21もしくは22に記載の医薬組成物もしくは製剤。
【請求項２５】
クロストリジウム・ディフィシル感染症またはクロストリジウム・ディフィシル関連疾患を治療するのに使用するための、請求項1から19のいずれか一項に記載のフィダキソマイシンの結晶性形態、または請求項21もしくは22に記載の医薬組成物もしくは製剤。
【請求項２６】
治療有効量の、請求項1から19のいずれか一項に記載のフィダキソマイシンの一つもしくは複数の結晶性形態、または請求項21もしくは22に記載の医薬組成物もしくは製剤を投与する工程を含む、クロストリジウム・ディフィシル感染症またはクロストリジウム・ディフィシル関連疾患を患う人を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2012年5月10日に出願した米国仮出願第61/645214号；2012年6月21日に出願した米国仮出願第61/662542号；2012年8月27日に出願した米国仮出願第61/693445号；および2012年10月25日に出願した米国仮出願第61/718286号に基づく優先権を主張するものであり、それらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、フィダキソマイシン（Fidaxomycin）の固体状形態、該固体状形態を調製するための方法、および該固体状形態の一つまたは複数を含む製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
フィダキソマイシン、すなわち、3-(((6-デオキシ-4-O-(3,5-ジクロロ-2-エチル-4,6-ジヒドロキシベンゾイル)-2-O-メチル-β-D-マンノピラノシル)オキシ)-メチル)-12(R)-[(6-デオキシ-5-C-メチル-4-O-(2-メチル-1-オキソプロピル)-b-D-リキソ-ヘキソピラノシル)オキシ]-11(S)-エチル-8(S)-ヒドロキシ-18(S)-(1(R)-ヒドロキシエチル)-9,13,15-トリメチルオキサシクロオクタデカ-3,5,9,13,15-ペンタエン-2-オン(IUPAC)は、以下の化学構造を有する。
【０００４】
【化１】
2015516438.tif 000002
【０００５】
フィダキソマイシンは、OPT 80、PAR01、PAR101、R-チアクミシンB、チアクミシンB、リピアルミシン(Lipiarmicin)、リピアルマイシン、およびリピアルマイシンA3として以前は知られていたもので、天然に存在する18員環の大環状化合物であり、それは、ダクチロスポランギウム・アウランチアクム(Dactylosporangium aurantiacum)亜種ハムデネシス(hamdenesis)の発酵により得られる。
【０００６】
フィダキソマイシンは、Optimer Pharmaceuticalsにより、経口の狭域抗菌薬として開発されている。特に、フィダキソマイシンは、クロストリジウム・ディフィシル(Clostridium difficile)に対して活性を示す。
【０００７】
フィダキソマイシンおよびその調製方法は、Journal of Antibiotics、vol. XL、no. 5、575〜588頁(1987)に開示される。フィダキソマイシンならびに他のチアクミシンを含有する混合物のいくつかの固体状形態は、US7378508およびその対応欧州特許であるEP2125850B1に開示される。特に、(様々な量の構造類似体を含有する)「フィダキソマイシン」の形態Aおよび形態Bと称される二つの多形形態が記載され、出願人は、特許請求した水和した形態Aが、酢酸エチル溶媒和物の形態Bと比較して、異なる熱力学特性を示し、より安定していると出願経過の間に述べている。その中のフィダキソマイシンの固体状形態は、約3日から約14日を要する方法によって調製された。いずれにしても、これらの特許に記載されている多形形態は、フィダキソマイシンと15%までまたはそれ以上の他の構造上関連するチアクミシンとの混合物を含む。
【０００８】
多形性、すなわち、異なる結晶形態の存在は、一部の分子および分子複合体の特性である。フィダキソマイシンのような単一分子は、異なる結晶構造ならびに物理的特性、例えば、融点、熱挙動(例えば、熱重量分析(「TGA」)または示差走査熱量測定(「DSC」)により測定される)、粉末X線回折(PXRD)パターン、赤外吸収フィンガープリント、および固体NMRスペクトルを有する、様々な多形体を生じさせることができる。これらの技術の一つまたは複数を使用して、化合物の異なる多形形態を区別することができる。
【０００９】
活性医薬成分の異なる固体状形態(溶媒和形態を含む)は、異なる特性を有し得る。異なる固体状形態および溶媒和物の特性のそのような違いは、例えば、より良い加工性もしくは取り扱い性を容易にすること、溶解プロファイルを好ましい方向に変えること、または安定性(多形体ならびに化学的安定性)および保存性を高めることによって、製剤を改良する基礎を与え得る。異なる固体状形態の特性のこれらの違いはまた、例えば、それらが、生物学的利用能を向上させるのに役立つ場合、最終剤形を改善し得る。活性医薬成分の異なる固体状形態および溶媒和物はまた、様々な多形体または結晶形態を生じさせることができ、様々な多形体または結晶形態は、固体の活性医薬成分の特性および特徴の違いを評価するためのさらなる機会を与え得る。
【００１０】
医薬製品の新規の多形形態および溶媒和物の発見は、所望の加工特性、例えば、取り扱い容易性、加工容易性、低吸湿性、保存安定性および精製容易性を有する材料、または、他の多形形態への変換を容易にする所望の中間結晶形態としての材料をもたらし得る。医薬として有用な化合物またはその塩の新規の多形形態および溶媒和物はまた、医薬製品の性能特性(溶解プロファイル、生物学的利用能など)を改善する機会を与え得る。それは、例えば、製品に、異なる特性、例えば、異なる晶癖、より高い結晶性または多形安定性(それらは、より良い加工性もしくは取り扱い性、溶解プロファイルの改善、または保存性の向上をもたらし得る)を与えることによって、製剤最適化に利用可能な、製剤研究者が有する材料のレパートリーを拡大する。最後に、例えば、結晶性または多形純度の点で、他の形態と比較して、製造および加工における信頼性および再現性が改善された、新規の多形形態が調製され得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】US7378508
【特許文献２】EP2125850B1
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Journal of Antibiotics、vol. XL、no. 5、575〜588頁(1987)
【非特許文献２】欧州薬局方、chapter 5.11(「Hygroscopicity」)
【発明の概要】
【００１３】
本発明は、フィダキソマイシンの固体状形態、該固体状形態を調製するための方法、フィダキソマイシンの固体状形態の一つまたは複数を含む医薬組成物および製剤、ならびに該医薬組成物および製剤を調製するための方法を提供する。
【００１４】
本発明はまた、クロストリジウム・ディフィシル関連疾患(CDAD)としても知られるクロストリジウム・ディフィシル感染症(CDI)を治療するための方法であって、治療有効量の本発明のフィダキソマイシンの固体状形態の一つもしくは複数、または、本発明のフィダキソマイシンの固体状形態の一つもしくは複数と、任意選択で、医薬として許容される少なくとも一種の賦形剤とを含む治療有効量の医薬組成物を、それらを必要とする患者に投与することを含む方法も提供する。
【００１５】
本発明はまた、医薬組成物および製剤の製造における、フィダキソマイシンの前記固体状形態の使用も提供する。したがって、本発明はさらに、本発明のフィダキソマイシンの固体状形態の一つまたは複数を含む、医薬組成物を提供する。この医薬組成物は、医薬として許容される少なくとも一種の賦形剤をさらに含むことができ、それによって、例えば、そのような治療を必要とする患者に投与できる、医薬製剤が形成される。
【００１６】
本発明は、上述の医薬製剤を調製するための方法を含む。該方法は、本発明のフィダキソマイシンの固体状形態の一つもしくは複数、またはフィダキソマイシンの一つもしくは複数の前記固体状形態を含む医薬組成物を、医薬として許容される少なくとも一種の賦形剤と組み合わせることを含む。
【００１７】
本明細書で規定した固体状形態ならびにフィダキソマイシンの医薬組成物および製剤は、特に、クロストリジウム・ディフィシル関連疾患(CDAD)としても知られるクロストリジウム・ディフィシル感染症(CDI)を治療するための薬として使用することができる。
【００１８】
本発明はまた、クロストリジウム・ディフィシル関連疾患(CDAD)としても知られるクロストリジウム・ディフィシル感染症(CDI)を治療するための医薬品の製造における、フィダキソマイシンの固体状形態の使用、または本発明の上記の医薬組成物もしくは製剤の少なくとも一つの使用も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】結晶性フィダキソマイシンの形態Z(アセトン修飾)についての典型的なPXRDパターンを示す図である。
【図２】結晶性フィダキソマイシンの形態Z(アセトン修飾)についての典型的なDSC曲線を示す図である。
【図３】結晶性フィダキソマイシンの形態Z(アセトン修飾)についての典型的なTGA曲線を示す図である。
【図４】結晶性フィダキソマイシンの形態Z1についての典型的なPXRDパターンを示す図である。
【図５】結晶性フィダキソマイシンの形態Z1についての典型的なDSC曲線を示す図である。
【図６】結晶性フィダキソマイシンの形態Z1についての典型的なTGA曲線を示す図である。
【図７】結晶性フィダキソマイシンの形態Cについての典型的なPXRDパターンを示す図である。
【図８】結晶性フィダキソマイシンの形態Z(アセトニトリル修飾)についての典型的なPXRDパターンを示す図である。
【図９】フィダキソマイシンの形態Z1の典型的なFT-IRスペクトルを示す図である。
【図１０】フィダキソマイシンの形態Z1の典型的な固体C13NMRスペクトルを示す図である。
【図１１】フィダキソマイシンの形態Z1の典型的なラマンスペクトルを示す図である。
【図１２】結晶性フィダキソマイシンの形態Z1についての典型的なPXRDパターン(拡大)を示す図である。
【図１３】フィダキソマイシンの形態Z1の典型的なラマンスペクトル(拡大)を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、フィダキソマイシンの固体状形態、該固体状形態を調製するための方法、および該固体状形態の一つまたは複数を含む製剤、ならびに該製剤を調製するための方法を提供する。
【００２１】
形態Aおよび形態Bと称されるフィダキソマイシンの既知の固体状形態は、フィダキソマイシンのほか、15%までまたはそれ以上の他の構造上関連するチアクミシンの混合物を含有する混合物と説明されている。本発明は、多形的に純粋なだけでなく、化学的にも純粋な、フィダキソマイシンの固体状形態を提供する。
【００２２】
それらが比較される他の固体状形態がどれかに応じて、本発明の固体状形態は、化学的または多形純度、増加した結晶度、可溶性、溶解速度、生物学的利用能、モルフォロジーまたは晶癖、比表面および比重瓶(pycnometric)密度、安定性、例えば、化学的安定性ならびに多形変換に対する熱的および機械的安定性、脱水に対する安定性、および/または保存安定性、低い吸湿度、低い残留溶媒含有量、ならびに、有利な加工性および取り扱い性、例えば、圧縮性、流動性および嵩/タップ密度のうちの、少なくとも一つから選択される有利な特性を有し得る。
【００２３】
フィダキソマイシンの固体状形態は、フィダキソマイシンの結晶形態または結晶性形態を含む。本明細書で使用する場合、固体状形態、結晶形態、結晶性形態、多形体および多形形態を、同義的に使用する。
【００２４】
本明細書において、結晶形態を、図「に実質的に示されるような」図形データによって特徴付けられるものとして言及することがある。そのようなデータとしては、例えば、粉末X線回折図形および固体NMRスペクトルが挙げられる。図形データは、ピークの位置および/または相対強度についての数値の参照により必ずしもまたは簡単に表せるわけではない、各固体状形態をさらに定めるために、追加の技術的情報を潜在的に与える。いずれにしても、当業者は、データのそのような図形表示が、当業者に周知である、機器応答の変動ならびに試料濃度および純度の変動などの因子による、例えば、ピーク相対強度およびピーク位置の小さな変動に左右され得ることを理解する。それにもかかわらず、当業者は、本明細書の図における図形データを、未知の結晶形態について出された図形データと容易に比較することができ、二組の図形データが、同じ結晶形態または二つの異なる結晶形態を特徴付けるかどうかを確認する。
【００２５】
本明細書で使用する場合、特に断りがない限り、XRPD測定は、銅Kα線、波長1.5406Åを使用して行われるものである。
【００２６】
本明細書で使用する場合、「化学シフト差」という語句は、同じNMRスペクトルの基準シグナルと別のシグナルとの間の化学シフトの差を指す。これらの化学シフト差は、物質、例えば、本発明のフィダキソマイシンの結晶形態についての追加の分析測定値を与えるのに役立ち、追加の分析測定値は、固体NMR「フィンガープリント」のシフトが観察されるNMR分光法において起こり得る現象を埋め合わせることになる。NMRピークのそのようなシフトは、例えば、NMR分析に使用される機器、温度、または較正方法の変動の結果として起こり得る。ある位置で化学シフト共鳴を有する、固体NMR「フィンガープリント」のこのシフトは、信号の個々の化学シフトが動いたとしても、スペクトルのすべてのピークが、同じ量だけ移動するようなものであり、各シグナルおよび別のシグナルの化学シフト間の差が保持されるようなものである。したがって、このシフトを、分析される材料の信頼できる特徴付けとして使用することができる。
【００２７】
本特許出願において、化学シフト差は、100〜180ppmの範囲の固体状13C NMRスペクトルにおいて最も低い化学シフト(基準シグナル)を示すシグナルの化学シフト値を、0〜180ppmの範囲の同じ固体状13C NMRスペクトルにおける別の(観察された)シグナルの化学シフト値から引くことによって算出した。
【００２８】
本明細書において、固体状形態を、例えば、特定のピークの一群を有する粉末XRDパターンによる；もしくは回折図形を示す図に示されるような粉末XRDパターンによる、または「それらの一つの組み合わせ」(もしくは「それらの複数の組み合わせ」、もしくは「それらの任意の組み合わせ」、もしくは「これらのデータの複数の組み合わせ」)による、二つ以上の異なるデータ群から選択されるデータによって特徴付けられるものとして言及することがある。これらの語句、例えば、「それらの任意の組み合わせ」は、当業者が、挙げられた特徴的な分析データの任意の組み合わせを使用して、結晶形態を特徴付けることができることを企図するものである。例えば、当業者は、例えば、四つまたは五つの特徴的な粉末XRDピークの一群を使用して、結晶形態を特徴付けることができ、その特徴付けを、粉末X線回折図形において観察される一つまたは複数の追加の特徴、例えば、追加のピーク、特徴的なピーク形状、ピーク強度、または粉末XRDパターンのある位置でのピークの不存在で補うことができる。あるいは、当業者は、いくつかの場合においては、例えば、四つまたは五つの特徴的な粉末XRDピークの一群を使用して、結晶形態を特徴付けることができ、その特徴付けたデータを、別の分析方法、例えば、固体NMRスペクトルの一つもしくは複数の特徴的なピーク、または、特徴付けられている結晶形態のDSCサーモグラムの特徴を使用して観察される、一つまたは複数の追加の特徴で補うことができる。
【００２９】
本明細書において、結晶形態(または多形体)を、純粋なもの、非常に純粋なもの、または任意の他の結晶性(もしくは多形)形態を実質的に含まないものとして言及することがある。この文脈において本明細書で使用する場合、「任意の他の形態を実質的に含まない」という語句は、結晶性形態が、例えば、PXRDによって測定される対象化合物の任意の他の形態を20%未満、10%未満、5%未満、2%未満または1%未満含有することを意味するものであると理解する。したがって、任意の他の多形形態を実質的に含まないと本明細書に記述する、フィダキソマイシンの多形体は、80%(w/w)超、90%(w/w)超、95%(w/w)超、98%(w/w)超または99%(w/w)超の、フィダキソマイシンの対象多形形態を含有するものであると理解する。したがって、本発明のいくつかの実施形態においては、記述したフィダキソマイシンの多形体は、フィダキソマイシンの一つまたは複数の他の結晶形態を、1%から20%(w/w)、5%から20%(w/w)、または5%から10%(w/w)含有し得る。
【００３０】
本明細書で使用する場合、「室温」という語句は、約20℃から約30℃の間の温度を指す。通常、室温は、約20℃から約25℃の範囲である。
【００３１】
本明細書で使用する場合、「一晩中」という用語は、約15時間から約20時間の間、典型的には、約16時間から約20時間の間の時間を指す。
【００３２】
本明細書で使用する場合、「湿潤結晶性形態」という語句は、残留溶媒を除去する任意の従来の技術を使用して乾燥させなかった多形体を指す。そのような従来の技術としては、それらに限定されないが、蒸発、真空乾燥、オーブン乾燥、窒素流下の乾燥などが挙げられる。
【００３３】
本明細書で使用する場合、「乾燥結晶性形態」という語句は、残留溶媒を除去する任意の従来の技術を使用して乾燥させた多形体を指す。そのような従来の技術としては、それらに限定されないが、蒸発、真空乾燥、オーブン乾燥、窒素流下の乾燥などが挙げられる。
【００３４】
本明細書で使用する場合、特に断りがない限り、結晶性フィダキソマイシンに関係する「無水」という用語は、TGAによって測定された1%(w/w)以下の水または有機溶媒を含有する、結晶性フィダキソマイシンに関する。本発明のフィダキソマイシンの固体状態の無水形態は、規定の化学量論量の結晶水(または他の溶媒)を結晶内に含有しない形態を指す。
【００３５】
本明細書で使用する場合、および別段の指示がない限り、結晶性フィダキソマイシンに関係する「非吸湿性」という用語は、Ph.Eur. chapter 5.11(「Hygroscopicity」)に従って決定した、結晶性フィダキソマイシンによる、水、例えば、大気水の0.5%未満、好ましくは0.2%(w/w)未満の吸収に関する。
【００３６】
本明細書で使用する場合、および別段の指示がない限り、「溶媒和物」という用語は、溶媒を結晶構造に組み込んだ結晶形態を指す。溶媒が水である場合、溶媒和物は、しばしば「水和物」と呼ばれる。溶媒和物中の溶媒は、化学量論量または非化学量論量で存在し得る。
【００３７】
本明細書で使用する場合、および特に断りがない限り、「粉末」または「粉末状」という用語は、流し込むことができる粒子または顆粒の形態の固体組成物を指す。好ましくは、粉末は、固体で、塊になっていない、乾燥した粒子である。
【００３８】
本明細書で使用する場合、および別段の指示がない限り、フィダキソマイシンの結晶形態に関係する「多形安定性」という用語は、PXRDによって測定された、特定の条件下での結晶性フィダキソマイシンからフィダキソマイシンの任意の他の固体状形態への変換が、20%、10%、5%、1%、0.5%または0.1%未満であることを指す。いくつかの実施形態においては、その変換は、0.5%〜20%、0.5%〜10%もしくは0.5%〜5%もしくは0.5%〜1%、または0.1%〜1%もしくは0.1%〜0.5%である。
【００３９】
本明細書で使用する場合、および別段の指示がない限り、「フィダキソマイシン」という用語は、実質的に化学的に純粋な式Iの分子を指す。本発明の文脈において、実質的に純粋とは、HPLCにより測定された(面積%、230nmで検出)、少なくとも95%、>98%、>98.5%、または>99%という化学的純度を意味する。
【００４０】
HPLC分析法は、一般に、任意の所与の時点で、検出器を通過する試料中の化合物の存在および量を記録するために、所与の波長のUV吸収を使用するように設計されている。例えば、標準の装置による任意のHPLC実行の主要なアウトプットは、UV検出クロマトグラムの各ピークの面積パーセント、すなわち曲線下面積(AUC)である。特に、所与の化合物の特定の吸光係数に関する任意の詳細な情報の非存在下で、HPLCによって得られる面積パーセント値は、一般的に、「質量%」と同等とみなされ、すなわち、いかなる補正係数も適用することはない。したがって、例えば、(ある保持時間に溶出する)単一ピークについてのAUCパーセント値は、試料における化合物の質量パーセント割合に相当する。
【００４１】
本明細書で使用する場合、「参照標準」という用語は、活性医薬成分の定量分析および定性分析の両方に使用できる化合物を指す。例えば、HPLCにおける化合物の保持時間は、相対保持時間の設定を可能にし、したがって、定性分析を可能にする。HPLCカラムに注入する前の、溶液における化合物の濃度は、HPLCクロマトグラムにおけるピーク下面積の比較を可能にし、したがって、定量分析を可能にする。
【００４２】
参照標準に関する当業者の知識の一部が、この時点までに一般用語で説明されているが、当業者はまた、検出器応答が、例えば、HPLCシステムの溶出からのUV検出もしくは屈折率検出によって、または、例えば、ガスクロマトグラフの溶出からの炎イオン化検出もしくは熱伝導度検出によって得られる、例えば、クロマトグラムのピーク高さまたは積分ピーク面積、または、他の検出器応答、例えば、蛍光TLCプレート上のスポットのUV吸光度であり得ることも理解する。参照標準の位置を使用して、化合物および他の不純物についての相対保持時間を算出することができる。
【００４３】
本明細書で使用する場合、および別段の指示がない限り、「vvm」という用語は、発酵過程の時間(分)の間に発酵ブロス(Kg-体積)に到達する空気の体積(Nm3/hrs)を指し、例えば、0,5vvmは、発酵ブロスが100kgである発酵過程の間の通気が、50Nl/分(3Nm3/時間)であることを意味する。
【００４４】
本発明は、形態Zと称される、フィダキソマイシンの結晶性形態を包含する。形態Zは、4.2°、7.7°、8.2°、11.2°および15.6°2θ±0.2°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図1に実質的に示されるような粉末X線回折パターンのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けることができる。
【００４５】
あるいは、形態Zは、4.1°、9.7°、10.2°、11.2°および15.6°2θ±0.2°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図8に実質的に示されるような粉末X線回折パターンのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせ特徴付けることができる。
【００４６】
形態Zはさらに、4.2°、7.7°、8.2°、11.2および15.6°2θ±0.2°2θでのピークを有し、9.8°、10.3°、14.3°および18.8°2θ±0.2°2θでのPXRDピークから選択される任意の一つ、二つ、三つまたは四つの追加のピークも有する粉末X線回折パターン；図2に実質的に示されるようなDSCサーモグラム；約115〜120℃でのDSC吸熱ピーク、および約160〜165℃でのDSC溶融開始；図3に実質的に示されるようなTGAサーモグラムから選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けることができる。上記のDSCおよびTGAデータは、形態Zをアセトンから生成したときに測定した。
【００４７】
あるいは、形態Zは、4.1°、9.7°、10.2°、11.2°および15.6°2θ±0.2°2θでのピークを有し、7.8°、14.1°、および18.7°2θ±0.2°2θでのPXRDピークから選択される任意の一つ、二つ、または三つの追加のピークも有する粉末X線回折パターンから選択されるデータによって特徴付けることができる。
【００４８】
形態Zは、上述のデータの任意の組み合わせによって特徴付けることができる。
【００４９】
形態Zは、アセトン溶媒和物またはアセトニトリル溶媒和物であり得る。
【００５０】
好ましくは、フィダキソマイシンの形態Zは、少なくとも95%、または少なくとも98%という化学的純度(HPLCによる)を有するフィダキソマイシンを含む。
【００５１】
先に検討した通り、フィダキソマイシンの形態Zは、有利な特性を有する。特に、本発明の結晶性フィダキソマイシンの形態Zは、本明細書にさらに記述した通りそれ自体が有利な特性を有する形態Z1の調製における良好な中間体であると考えられる。
【００５２】
本発明はまた、形態Z1と称される、フィダキソマイシンの結晶性形態も包含する。
【００５３】
本発明は、形態Z1と称される、フィダキソマイシンの結晶性形態を包含する。形態Z1は、4.3°、8.2°、および11.2°±0.2°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図4に実質的に示されるような粉末X線回折パターン；163.8、129.1、108.6、94.4および60.3±0.2ppmの特徴的ピークを有する固体状13C NMRスペクトル；前記特徴的ピークと100.2±0.2ppmのピークとの間の、それぞれ、63.6、28.9、8.4、-5.8および-39.9±0.1ppmという化学シフト差を有する固体状13C NMRスペクトル；図10に実質的に示されるような固体状13C NMRスペクトル；2993、2974、1749、1721、1649、1594、1572、1451、1257および587±4cm-1の特徴的ピークを有するラマンスペクトル；図11に実質的に示されるようなラマンスペクトル、ならびにそれら組み合わせから選択されるデータによって特徴付けることができる。
【００５４】
形態Z1は、4.3°、8.2°および11.2°2θ±0.2°2θでのピークを有し、9.7°、10.2°、15.6°、18.8°および19.0°2θ±0.2°2θでのPXRDピークから選択される任意の一つ、二つ、三つ、四つまたは五つの追加のピークも有する粉末X線回折パターンによって特徴付けることができる。
【００５５】
形態Z1はさらに、163.8、129.1、108.6、94.4および60.3±0.2ppmでの特徴的ピークを有する固体状13C NMRスペクトル；前記特徴的ピークと100.2±0.2ppmでのピークとの間の、それぞれ、63.6、28.9、8.4、-5.8および-39.9±0.1ppmという化学シフト差を有する固体状13C NMRスペクトル；図10に実質的に示されるような固体状13C NMRスペクトルのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けることができる。
【００５６】
形態Z1はさらに、2993、2974、1749、1721、1649、1594、1572、1451、1257および587±4cm-1での特徴的ピークを有するラマンスペクトル；図11に実質的に示されるようなラマンスペクトル、ならびにそれらの組み合わせのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって特徴付けることができる。
【００５７】
形態Z1はさらに、図5に実質的に示されるようなDSCサーモグラム；約127〜130℃でのDSC吸熱ピーク、および約164℃でのDSC溶融開始；図6に実質的に示されるようなTGAサーモグラム、ならびに、これらのデータの組み合わせのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって特徴付けることができる。
【００５８】
形態Z1はさらに、3551、3437、1738および1721±4cm-1での特徴的なピークを有するFT-IRスペクトル；図9に実質的に示されるようなFT-IRスペクトル、ならびにそれらの組み合わせのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって特徴付けることができる。
【００５９】
形態Z1の結晶はさらに、275Kの温度で、波長0.43046Åのシンクロトロン放射光によって決定されるような、パラメーターがa=14.2839Å、b=20.8214Å、c=9.5188Å、α=91.02°、β=90.55°、γ=100.59°であり、格子体積が2782.1Å3である単位格子を有する、フィダキソマイシンの二つの対称的な独立した分子を有する、三斜晶系空間群P1によって；または、周囲温度で、Le-Bailフィッティングによって決定されるような、パラメーターがa=14.280Å、b=20.821Å、c=9.530Å、α=91.73°、β=90.39°、およびγ=100.46°である単位格子を有する、フィダキソマイシンの二つの対称的な独立した分子を有する、三斜晶系空間群P1によって特徴付けることができる。
【００６０】
好ましくは、フィダキソマイシンの形態Z1は、>95%、>98%、またはさらには>99%という化学的純度(HPLCによる)を有するフィダキソマイシンを含む。
【００６１】
上記の形態Z1は、形態Zの脱溶媒和(desolvatation)によって得ることができる。
【００６２】
形態Z1は、上述のデータの任意の組み合わせによって特徴付けることができる。
【００６３】
形態Z1は、無水形態であり得る。
【００６４】
先に検討した通り、フィダキソマイシンの形態Z1は、有利な特性を有する。特に、本発明の結晶性フィダキソマイシンの形態Z1は、非吸湿性である。欧州薬局方5.11に従って、吸湿性試験を行ったとき、形態Z1の質量増加は、約0.2%未満であった。非吸湿性材料としての形態Z1の利点は、製剤化におけるフィダキソマイシンのより良好な加工性、例えば、低粘着性および造粒手順後の安定性を与える。
【００６５】
加えて、形態Z1は、製剤において優れた安定性を有する。無水多形体を保持する能力は、製剤の性能特性(例えば、溶解プロファイルおよび生物学的利用能)を改善する機会を与える。
【００６６】
本発明は、形態Cと称される、フィダキソマイシンの結晶性形態を包含する。フィダキソマイシンの形態Cは、6.8°、7.9°、10.0°、10.2°、12.2°、13.4°、14.6°、15.4°、16.4°、17.5°、18.4°および23.1°2θ±0.1°2θでのピークを有する粉末X線回折パターン；図7に実質的に示されるような粉末X線回折パターンのうちの一つまたは複数から選択されるデータによって；ならびにこれらのデータの組み合わせによって特徴付けることができる。
【００６７】
好ましくは、フィダキソマイシンの形態Cは、非常に化学的に純粋であり、非常に結晶性である。すなわち、フィダキソマイシンの形態Cは、>98%、>99%、またはさらには>99.3%という化学的純度(HPLCによる)を有するフィダキソマイシンを含む。
【００６８】
先に検討した通り、フィダキソマイシンの形態Cは、有利な特性を有する。特に、本発明のフィダキソマイシンの形態Cは、高品質に、すなわち、化学的および多形的に純粋に再現することができる。形態Cの粉末X線回折パターンは、比較的鋭い、明確なピークを有する高分解能PXRDパターンによって示される通り、高い結晶性で得られる。加えて、形態Cは、厳しい条件下で安定である。
【００６９】
上記のフィダキソマイシンの形態Cは、a)メタノール中の、HPLCによる>95%、好ましくは>98%という化学的純度を有するフィダキソマイシンの溶液を用意する工程と、b)前記溶液を、約55℃から約60℃の温度まで加熱する工程と、c)加熱された溶液に水を添加する工程と、d)加熱された溶液の温度を、約55℃から約60℃に約1時間維持する工程と、e)加熱された溶液を約15℃の温度に冷却して、結晶性形態Cを含む懸濁物を得る工程とを含む方法によって得ることができる。懸濁物は、さらに、15℃に約2時間維持されてもよい。
【００７０】
工程b)において添加する水は、ステップa)におけるメタノールと、それぞれ、約1：2から約1：3の比であり得る。
【００７１】
フィダキソマイシンの結晶性形態Cを調製するための上記の方法は、懸濁物からの前記結晶性形態Cの回収をさらに含むことができる。回収は、例えば、前記結晶性形態Cを含む懸濁物をろ過し、結晶性生成物を洗浄し、乾燥することによって、行うことができる。好ましくは、洗浄は、メタノール：水の混合物で行う。好ましくは、乾燥は、真空中で行う。好ましくは、乾燥は、約50℃の温度で行う。好ましくは、乾燥は、一晩中行う。
【００７２】
本発明はまた、結晶性無水フィダキソマイシンも包含する。
【００７３】
本発明は、結晶性フィダキソマイシンのアセトン溶媒和物を包含する。
【００７４】
本発明は、結晶性フィダキソマイシンのアセトニトリル溶媒和物を包含する。
【００７５】
上述のフィダキソマイシンの固体状形態は、医薬組成物および医薬製剤を調製するために使用することができる。
【００７６】
本発明はさらに、1)本明細書に記述する固体状形態の一つまたは複数を含む医薬組成物；2)本明細書に記述する固体状形態の一つもしくは複数を含む医薬製剤、または本明細書に記述する固体状形態の一つもしくは複数と、医薬として許容される少なくとも一種の賦形剤とを含む医薬組成物；3)上記の固体状形態または医薬組成物を、医薬として許容される少なくとも一種の賦形剤と組み合わせることを含む、そのような製剤を調製するための方法；4)医薬組成物または製剤の製造における、本明細書に記述する固体状形態の一つまたは複数の使用；ならびに5)クロストリジウム・ディフィシル関連疾患(CDAD)としても知られるクロストリジウム・ディフィシル感染症(CDI)を治療するための方法を包含する。該医薬組成物は、医薬品を調製するのに有用であり得る。本発明はまた、医薬品として使用するための、本明細書に記述する結晶性形態または医薬組成物の使用も提供する。
【００７７】
本発明はまた、本発明による医薬組成物を含む製剤も包含する。製剤の例としては、クロストリジウム・ディフィシル関連疾患(CDAD)としても知られる、クロストリジウム・ディフィシル感染症(CDI)を患う人の治療に有用な、該医薬組成物を含む錠剤形態またはカプセル形態の医薬品が挙げられる。
【００７８】
ある特定の好ましい実施形態について言及しながら本発明を説明してきたが、本明細書を考慮すれば、他の実施形態が、当業者には明らかになる。本発明は、本発明の組成物の調製および使用の方法を詳細に説明している以下の実施例の参照することにより、さらに明確化する。材料および方法の両方に対する多くの改変を、本発明の範囲から逸脱することなく行うことができることは、当業者に明らかである。
【００７９】
粉末X線回折(PXRD)法
実施例の全体および以下の実施例で言及するPXRDピークは、Cu照射源=1.54056Å、Peltier検出器を備えたARL X線粉体回折装置(モデルX`TRA-030)を使用して得て、円形ゼロバックグラウンド石英プレートを有する円形標準アルミニウム試料ホルダーを使用した。走査パラメーター：範囲：2°〜40°2θ、連続的走査、速度：3°/分。ピーク位置の精度は、計測、試料調製などの実験的な差により、±0.2°と規定する。PXRDピークを、Si標準で補正した。
【００８０】
示差走査熱量測定(DSC)法
DSC 822e/722、Mettler Toledo、試料の質量：3〜5mg。
加熱速度：10℃/分、るつぼの穴の数：3
N2流：流速40ml/分。
走査範囲：30〜250℃、10℃/分の加熱速度。
【００８１】
熱重量分析(TGA)法
TGA/SDTA 851e、Mettler Toledo、試料の質量：7〜15mg。
加熱速度：10℃/分、N2流：流速=50ml/分。
走査範囲：30〜250℃。
【００８２】
GC分析を、Head Space7694およびFID検出器を備えたAGILENT6890N装置を使用して行った。
【００８３】
融点を、1℃/分の加熱速度で、BUCHI-B-545装置を使用して決定した。
【００８４】
FT-IR分光法
Perkin-Elmer Spectrum One Spectrometerを使用して、4000〜400cm-1の範囲で、4cm-1の分解能で、16スキャンで、データを収集した。試料を、KBrペレットにおいて分析した。バックグランドとして空のセルを使用して、スペクトルを記録した。
【００８５】
固体状13C NMR分光法
13C NMRスペクトルを、Bruker Avance II+500装置を使用して、125MHzで記録した。4mmのローターを使用したSBプローブ。マジック角を、KBrを使用して設定した。磁界の均一性を、アダマンタンを使用して調べた。交差分極についてのパラメーターを、グリシンを使用して最適化した。スペクトル基準を、外部標準としてのグリシン(低磁場カルボキシルシグナルについて176.03ppm)によって設定した。
走査パラメーター：マジック角回転速度；11kHz。
パルスプログラム：cpと、デカップリング中のtppm15。
遅延時間：5s。
走査数：1024。
【００８６】
単位格子パラメーター
フィダキソマイシンの形態Z1の粉末回折パターンを、275Kで、波長0.43046Åで、シンクロトロン放射光を使用して、非回折ガラス製の1.5mmキャピラリーにおいて測定した。指数化を、別に、DICVOLおよびN-TREORプログラムによって明らかにした。
【００８７】
実験室の粉末回折パターンのLe-Bailフィッティングは、周囲温度で、単位格子パラメーターを与えた。
【００８８】
ラマン分光法
粉末試料を、円錐形の試料ホルダーに詰め、ラマンスペクトルを、1064nmのNd：YVO4励起レーザー、CaF2ビームスプリッターおよびGe検出器を備えた、NXR FT-ラマンモジュールを有するNicolet 6700 FT-IR分光装置で記録した。
機器パラメーター
スペクトル範囲：4000〜155cm-1
分解能：4.0cm-1
走査数：128
試料取得：自動
光学的速度(optical velocity)：0.4747
口径：58.84
レーザー出力：1W
【００８９】
クロマトグラフィーの条件I：
カラム：Zorbax Eclipse XDB-C8、4.6×150mm、3.5μm
カラム温度：25℃
試料温度：15℃
移動相：A；水中0.1%酢酸
B：アセトニトリル中0.1%酢酸
流速：1.0ml/分
検出波長：230nm
注入体積：10μl
検出時間：25分
希釈剤：アセトニトリル
【００９０】
【表１】
2015516438.tif 000003
【００９１】
クロマトグラフィーの条件II；
カラム；Zorbax Eclipse XDB-C8、4.6×150mm、3.5μm
カラム温度：15℃
試料温度：15℃
移動相：A：pH=2.5のH3PO4溶液(pH最適化のためにcc.のH3PO4を使用する)
B：アセトニトリル中H3PO4(同体積の、溶出液Aとしてのcc.のH3PO4を添加する)
流速：1.0ml/分
検出波長：230nm
注入体積：10μl
検出時間：23分
希釈剤：アセトニトリル
【００９２】
【表２】
2015516438.tif 000004
【００９３】
標準の保存溶液：
約10.0mgのフィダキソマイシンの参照標準を正確に秤量して、20.0mlのメスフラスコに入れ、アセトニトリルで溶解し、アセトニトリルをその体積まで入れる。
【００９４】
標準溶液：
5.0mlの保存溶液を、ピペットで10.0mlのメスフラスコに入れ、アセトニトリルをその体積まで入れる。
【００９５】
試料の調製：
約10.0mgのフィダキソマイシンの試料を正確に秤量して、20.0mlのメスフラスコに入れ、アセトニトリルで溶解し、アセトニトリルをその体積まで入れる。
【００９６】
5.0mlの保存溶液を、ピペットで10.0mlのメスフラスコに入れ、アセトニトリルをその体積まで入れる。
【実施例】
【００９７】
(実施例1)
粗製フィダキソマイシンを調製するための一般的手順
フィダキソマイシンを、
i)栄養培地において、微生物を培養し、栄養培地においてフィダキソマイシンを蓄積すること；
ii)当分野の既知の方法によって、栄養培地から粗製フィダキソマイシンを単離すること；
iii)アセトニトリルと、水と、酢酸との混合物を溶出液として使用する逆相クロマトグラフィーによって、フィダキソマイシンを精製すること；および
iv)画分から精製フィダキソマイシンを単離すること
によって調製した。
【００９８】
培養の間、アクチノプラネス・デカネンシス(Actinoplanes deccanensis)を使用した。栄養溶媒は、質量ベースの以下の組み合わせ、すなわち、約0%から約5%のスクロース；約0%から約3%のデンプン；約0.1%から約1.0%の大豆ペプトン；約2%から約5%の綿実粕；約0.01%から約0.1%のリン酸二水素カリウム；約0.05%から約0.5%のリン酸水素二カリウム；約0.05%から約0.5%の消泡剤；約0%から約2%のAmberlite XAD-16N樹脂を含む。培養の好ましい温度は、28〜32℃であり、pHは、6.0〜8.0の間である。培養の間、C源を供給し続ける。
【００９９】
フィダキソマイシンの発酵生産は、以下の手順によって行うこともできる。
【０１００】
フィダキソマイシンの発酵生産は、以下の通り、接種の工程を含むことができ、それに発酵が続く。
【０１０１】
接種：アクチノプラネス・デカネンシス株を、シード培地に接種する。接種パラメーターを、調整し、接種材料を主な発酵に移すまで維持する。接種材料培地は、約0〜約5%のグルコース、約0〜約1%の酵母エキス、約0〜約1%の大豆ペプトン、約0〜約0.5%のCaCo3、約0〜約0.2%のMgSO4・7H2O、約0から約0.2%のK2HPO4、約0から約0.2%のKCl、約0〜約0.3%のポリプロピレングリコールを含む。塩酸および/または水酸化ナトリウム/カリウムを添加することによって、pHを調製する。
【０１０２】
【表３】
2015516438.tif 000005
【０１０３】
接種時間：40〜48±24時間。
【０１０４】
接種の最後に、接種材料(またはその一部)を、8〜15±5%の割合で、滅菌した発酵培地に移す。
【０１０５】
発酵：発酵培地は、約0〜約10%のスクロース/加水分解デンプン、約0〜約1%の大豆ペプトン、約0〜約5%の綿実粕、約0〜約0.3%のK2HPO4、約0〜約0.2%のKH2PO4、約0〜約1%のKCl、約0〜約0.5%のポリプロピレングリコール(PPG)を含む。塩酸および/または水酸化ナトリウム/カリウムを添加することによって、pHを調製する。
【０１０６】
滅菌した発酵培地に、接種材料を播種する。
【０１０７】
供給：
C源を、発酵の間に供給する。C源の供給のために、スクロースまたは加水分解デンプンを適用することができる。供給したC源の総量は、最初の体積に対して0〜15%である。
【０１０８】
【表４】
2015516438.tif 000006
【０１０９】
泡が生じた場合、滅菌した消泡剤を添加すべきである。
【０１１０】
発酵時間：168〜192±24時間。
【０１１１】
接種/発酵培地は、約0〜約2%のAmberlite XAD-16N樹脂を含むこともできる。
【０１１２】
発酵の終了時に、フィダキソマイシンを、有機溶媒、例えば、酢酸エチル、酢酸イソブチルまたはイソブタノールで、発酵ブロスから抽出する。有機相を濃縮して、例えば、n-ヘキサンなどの貧溶媒(antisolvent)を添加することにより、フィダキソマイシンを析出させる。任意選択で、析出物を、第二の貧溶媒に懸濁させることができる。ろ過および乾燥後、粗製フィダキソマイシンが得られる。
【０１１３】
(実施例2)
フィダキソマイシンの形態Zを調製するための手順
実施例10に記述する同じ手順によって得られた、フィダキソマイシン(253.5mg、アッセイ：89.1%、純度：94.9%、非晶質)、および1mlのアセトン/水(3/1)混合物を、試験管に装入した。試験管に蓋をし、50℃の水浴に入れた。フィダキソマイシンを溶解した後、溶液を、室温で4日間放置し、結晶性の析出物を生じさせた。ろ過によって、結晶を、溶液から分け、アセトン/水(3/1)で洗浄した。生成物を、真空オーブン内で、50℃で一晩中乾燥し、次いで、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、>99%および98.7%であった。PXRD分析に基づくと、生成物は、形態Zである。
【０１１４】
(実施例3)
フィダキソマイシンの形態Zを調製するための手順
実施例2または10に記述する同じ精製手順によって得られた、フィダキソマイシン(496.2mg、アッセイ：85.7%、純度：96.4%、非晶質)、および2mlのアセトン/水(3/1)混合物を、試験管に装入した。試験管に蓋をし、55℃の水浴に入れた。フィダキソマイシンを溶解した後、試験管を氷水に浸すことによって、溶液をすぐに冷却した。次いで溶液を、室温で7日間放置した。結晶を形成させ、ろ過によって分け、真空オーブン内で、50℃で一晩中乾燥した。HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、89.4%および96.4%であった。PXRD分析に基づくと、得られた形態は、形態Zである。
【０１１５】
(実施例4)
フィダキソマイシンの形態Zを調製するための手順
実施例2に記述する同じ精製手順によって得られた、または他の結晶化実験によって回収されたフィダキソマイシン(0.4g、アッセイ：94.0%、純度：95.3%)、4.8mlのアセトン、および0.5mlの脱イオン水を、試験管に装入した。試験管に蓋をし、55℃の水浴に入れた。フィダキソマイシンを溶解した後、追加の2.7mlの脱イオン水を添加し、溶液を、55℃の水浴の中で撹拌した。60分間の撹拌後、第一の結晶が出てきた。懸濁物を、さらに165分間撹拌し、結晶をろ過して分け、真空オーブン内で、50℃で一晩中乾燥した。乾燥結晶を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、97.6%および98.3%であった。PXRD分析に基づくと、得られた形態は、形態Zである。
【０１１６】
(実施例5)
フィダキソマイシンの形態Zを調製するための手順
実施例11に記述する同じ精製手順によって得られた、フィダキソマイシン(7.5g、アッセイ：95.5%、純度：98.4%)、72mlのアセトン、および8mlの脱イオン水を、丸底フラスコに装入し、それを、55℃の水浴で加熱した。フィダキソマイシンを溶解した後、追加の40mlの脱イオン水を、55℃の水浴の中で、撹拌しながら溶液に滴加した。130分後、結晶は形成しなかった。いくつかの湿ったフィダキソマイシンの結晶(実施例2または3の手順に記述したアセトン/水(60/40)混合物から調製した)を、溶液に添加し、得られた混合物を、さらに3時間撹拌した。結晶を形成させ、ろ過して分け、20mlのアセトン/水(60/40)混合物で洗浄し、真空オーブン内で、50℃で約6時間乾燥した。乾燥結晶(3.07g)を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、94.9%および99.4%であった。PXRDに基づくと、得られた形態は、形態Z1との混合物における形態Z(アセトン溶媒和物)である(図1)。
【０１１７】
(実施例6)
フィダキソマイシンの形態Z1を調製するための手順
実施例5または11に記述する同じ精製手順に従って得られた、フィダキソマイシン(5.0g、アッセイ：97.7%、および純度：98.3%)を、45mlのアセトンおよび5mlの脱イオン水と共に、丸底フラスコに添加した。フラスコを、55℃の水浴で加熱した。フィダキソマイシンを溶解した後、追加の40mlの脱イオン水を、55℃の水浴の中で、撹拌しながら滴加した。36.5mlの水を添加した後、第一の結晶が出てきた。得られた懸濁物を、(50℃の水浴の中で)さらに2時間撹拌し、その後、ろ過した。収集した結晶を、15mlのアセトン/水(50/50)混合物で洗浄した。次いで、結晶を、真空中で、50℃で40時間、60℃で48時間、80℃で48時間、最後に、100℃で24時間乾燥した。乾燥結晶を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、>99%および99.4%であった。PXRD分析に基づくと、生成物は、形態Z1である。
【０１１８】
(実施例7)
フィダキソマイシンの形態Z1を調製するための手順
実施例6または11に記述する同じ精製手順によって得られた、フィダキソマイシン(10.0g、アッセイ：97.7%、純度：98.3%)を、90mlのアセトンおよび10mlの脱イオン水と共に、丸底フラスコに添加した。フラスコを、55℃の水浴で加熱した。フィダキソマイシンを溶解した後、追加の80mlの脱イオン水を、55℃の水浴の中で、撹拌しながら滴加した。72mlの水を添加した後、第一の結晶が出てきた。得られた懸濁物を、さらに2時間撹拌し(温度?)、その後、ろ過した。収集した結晶を、30mlアセトン/水(50/50)混合物で洗浄した。次いで、結晶を、真空中で、60℃で4時間で乾燥すると、8.59gのフィダキソマイシンがもたらされた。この材料の一部(7.96g)を、100℃で16時間さらに乾燥した。乾燥結晶(7.92g)を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、>99%および99.6%であった。PXRD分析に基づくと、生成物は、形態Z1である。
【０１１９】
(実施例8)
フィダキソマイシンの形態Z1を調製するための手順
400gのDiasogel SP-100-15-ODS-Pを詰め、アセトニトリル/H2O/AcOH(45/55/0.055)またはアセトニトリル/H2O/AcOH (50/50/0.05)で溶出するカラムを使用して、粗製フィダキソマイシンを、小分けに、逆相クロマトグラフィーによって精製した。収集した画分を合わせて、元々の体積の半分に濃縮し、析出物を生じさせた。析出物をろ過し、水で洗浄し、高真空下で乾燥した。オフホワイトの粉末のHPLC分析は、アッセイが、96.7%で、純度が98.9%であることを示した。このフィダキソマイシンを1.0g、および10mlのアセトニトリル/水(9/1)混合物を、試験管に添加した。数分間撹拌した後、フィダキソマイシンを、溶解し、その結果、乳白色の溶液がもたらされた。フィダキソマイシンをさらに0.5g添加し、得られた懸濁物を、周囲温度で一晩中そのままにした。結晶を形成させ、ろ過し、5mlのアセトニトリル/水(9/1)混合物で洗浄した。次いで、結晶を、真空中で、50℃で1時間乾燥した。乾燥した結晶(1.0g)を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、>99%および99.2%であった。PXRD分析に基づくと、得られた形態は、形態Z1である。
【０１２０】
(実施例9)
結晶性フィダキソマイシンの形態Cのための手順
実施例6または11に記述する同じ精製手順によって得られた、フィダキソマイシン(22.0g、アッセイ：95.8、HPLC純度：98.1%)を、130mlのメタノールに溶解した。溶液を、55℃に加熱し、60mlの脱イオン水を、20分かけて添加した、混合物を55℃に1時間保ち、その後、150分かけて15℃に冷却した。形成した懸濁物を、さらに2時間、15℃に保った。結晶を形成させ、ろ過し、26mlのメタノールと、12mlの脱イオン水との混合物で洗浄した。次いで、結晶を、真空中で、50℃で一晩中乾燥した。得られた材料(19.3g)を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、99.5%および99.1%であった。
【０１２１】
(実施例10)
フィダキソマイシンを精製するための手順
Merck LiChroprep RP-18(15〜25u)を詰め、アセトニトリル/H2O/AcOH(45/55/0.055)で溶出するカラムを使用して、粗製フィダキソマイシンを、小分けに、逆相クロマトグラフィーによって精製した。>90%のフィダキソマイシンを含有する収集した画分を合わせ、アセトニトリルを室温で蒸発させ、残りの懸濁物を、半分の体積の酢酸エチルで3回抽出した。上部層を合わせて、酢酸エチルを蒸発させた。残留物、すなわち、オフホワイトの粉末を、高真空中下で乾燥した。合わせた粉末のHPLC分析は、アッセイが89.1%、および純度が94.9%であることを示した。PXRD分析は、その粉末が非晶質であることを示している。
【０１２２】
(実施例11)
フィダキソマイシンを精製するための手順
Diasogel SP-100-15-ODS-Pを詰め、アセトニトリル/H2O/AcOH(50/50/0.05)で溶出する8Lカラムを使用して、粗製フィダキソマイシンを、逆相クロマトグラフィーによって精製した。>93%のフィダキソマイシンを含有する収集した画分を合わせて、元々の体積の約半分に濃縮し、析出物を生じさせた。析出物をろ過し、水で洗浄し、高真空下で乾燥した。オフホワイトの粉末のHPLC分析は、アッセイが、95.5%で、純度が98.4%であることを示した。
【０１２３】
(実施例12)
フィダキソマイシンの形態ZおよびZ1を調製するための手順
実施例11に記述する同じ精製手順によって得られた、フィダキソマイシン(10.0g、アッセイ：95.6%、純度：95.2%)を、室温で、アセトニトリル/水(10/4、v/v)混合物に懸濁させ、一晩中テーブルの上に放置した。翌朝、それを、25mlアセトニトリル/水(10/4、v/v)混合物で希釈し、結晶をろ過して分け、25mlアセトニトリル/水(10/4、v/v)混合物で洗浄した。湿った生成物を試料にし、PXRDによって分析し、この分析に基づくと、その湿った生成物は、形態Zであった(図8)。次いで、結晶を、真空中で、60℃で6時間乾燥した。乾燥結晶(7.35g)を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、>99%および98.3%であった。PXRD分析に基づくと、乾燥生成物は、形態Z1である。
【０１２４】
(実施例13)
フィダキソマイシンの形態Z1を調製するための手順
逆相クロマトグラフィーによって精製された、フィダキソマイシンのバッチ(770g、アッセイ：97.1%、純度：99.7%、および362.3g、アッセイ：95.1%、純度：99.7%)(実施例11に記述する同じ精製手順によって得られた：4Lのカラムを使用した実施例11で記述した逆相クロマトグラフィーおよび>98%のフィダキソマイシンを含有する画分の組み合わせの後、約20gのバッチを合わせた)を、9Lのアセトン/水(9/1、v/v)混合物に溶解した。溶液をろ過し、ろ紙を、1Lのアセトン/水(9/1)混合物で洗浄した。溶液を、50℃までに加熱し、8.95Lの脱イオン水を添加した。7.3Lの水を添加した後、第一の結晶が出てきた。得られた懸濁物を、さらに2時間撹拌し、その後、ろ過した。収集した結晶を、3Lのアセトン/水(50/50)混合物で洗浄した。次いで、結晶を、真空中で、60℃で2時間、および100℃で40時間乾燥した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、99.1%および99.5%であった。PXRD分析に基づくと、生成物は、形態Z1である。
【０１２５】
(実施例14)
結晶性フィダキソマイシンの形態Cのための手順
逆相クロマトグラフィーによって精製された、フィダキソマイシンのバッチ(742g、アッセイ：95.9%、純度：99.7%、および388.3g、アッセイ：95.1%、純度：99.7%)(実施例11に記述する同じ精製手順によって得られた：4Lのカラムを使用した、実施例11で記述した逆相クロマトグラフィー、および、>98%のフィダキソマイシンを含有する画分を合わせた後、バッチを、約20gの割合で合わせた)を、40℃で、5.5Lのメタノールに溶解した。溶液をろ過し、ろ紙を、1.1Lのメタノールで洗浄した。溶液を、55℃に加熱し、2750mlの脱イオン水を、25分かけて添加した。混合物を1時間55℃に保ち、その後、145分かけて15℃に冷却した。形成した懸濁物を、さらに2時間15℃に保った。結晶を形成させ、ろ過し、880mlのメタノールと420mlの脱イオン水との混合物で洗浄した。次いで、結晶を、真空中で、60℃で16.5時間乾燥した。得られた材料(1066g)を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、98.0%および99.7%であった。
【０１２６】
(実施例15)
フィダキソマイシンの形態Z1を調製するための手順
逆相クロマトグラフィーによって精製された、フィダキソマイシン(80.74g、アッセイ：>99%、純度：99.6%)(実施例11に記述する同じ精製手順によって得られた：4Lのカラムを使用した実施例11で記述した逆相クロマトグラフィーおよび>98%のフィダキソマイシンを含有する画分の組み合わせの後、約20gのバッチを合わせた)を、60℃で、800mlのアセトニトリルおよび200mlの水に溶解した。溶液をろ過し、600mlの脱イオン水を、20分かけて添加した。450mlの水を添加した後、第一の結晶が出てきた。スラリーを2時間撹拌し、その後、結晶をろ過して分け、真空中で、60℃で16時間乾燥した。得られた材料を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、99.4%および99.8%であった。PXRD分析に基づくと、生成物は、形態Z1である。
【０１２７】
(実施例16)
フィダキソマイシンの形態Z1を調製するための手順
逆相クロマトグラフィーによって精製された、フィダキソマイシンのバッチ(402g、アッセイ：97.7%、純度：99.6%、および884.6g、アッセイ：99.2%、純度：99.1%)(実施例11に記述する同じ精製手順によって得られた：4Lのカラムを使用した、実施例11で記述した逆相クロマトグラフィー、および、>98%のフィダキソマイシンを含有する画分を合わせた後、バッチを、約20gの割合で合わせた)を、60℃で、16Lのアセトニトリル/水(4/1、v/v)混合物に溶解した。溶液をろ過し、ろ紙を、1Lのアセトニトリル/水(4/1、v/v)混合物で洗浄し、前もって35℃に加熱した10Lの脱イオン水を添加した。混合物を、4時間35℃に保ち、その後、結晶をろ過して分けた。結晶を、1Lのアセトニトリルと1Lの脱イオン水との混合物で洗浄する。次いで、結晶を、真空中で、60℃で18時間乾燥した。得られた材料を、HPLCによって分析した。アッセイおよびHPLC純度は、それぞれ、98.7%および99.5%であった。PXRD分析に基づくと、生成物は、形態Z1である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2015516438.tif 000015
【図１０】
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【図１１】
2015516438.tif 000017
【図１２】
2015516438.tif 000018
【図１３】
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【国際調査報告】
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