(57)【要約】本発明は、アンドロゲン受容体シグナル伝達の目安として抗体ポリペプチドを用いて、腫瘍結合フリーＰＳＡ（「ｆＰＳＡ］）を監視および測定する方法を提供する。特定の実施形態では、本方法は、抗アンドロゲン処置および／または一般的な抗がん処置の効力を評価するのに使用することができる。本発明は、腫瘍結合または腫瘍内ｆＰＳＡに対して特異的である抗体に関連する様々な方法および組成物も提供する。例えば、本発明は、抗ｆＰＳＡ抗体、またはこれらの断片もしくは特徴的な部分を含む、医薬組成物を含む組成物を提供する。本発明はさらに、抗ｆＰＳＡ抗体および／または組成物を使用する様々な治療法および／または診断法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
前立腺がん処置または治療に対する応答をｉｎ  ｓｉｔｕで監視する方法であって、
ｆＰＳＡのエピトープに結合する抗体ポリペプチドを投与するステップと、
被験体の腫瘍または組織中のｆＰＳＡの発現または活性の処置前レベルを判定するステップと、
該被験体に前立腺がん処置または治療を投与するステップと、
ｆＰＳＡの該エピトープに結合する該抗体ポリペプチドを再投与するステップと、
該被験体の該腫瘍または組織中のｆＰＳＡの発現または活性の処置後レベルを判定するステップと、
該腫瘍または組織中のｆＰＳＡの発現または活性の該処置後レベルを該処置前レベルと比較するステップと、
該比較するステップに基づいて、ｉｎ  ｓｉｔｕのｆＰＳＡ活性または発現の減少によって実証して、該治療または処置が有効であるかどうかを判定するステップと
を含む方法。
【請求項２】
ｆＰＳＡの前記エピトープが、触媒クレフト内にあり、またはこれに隣接する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記前立腺がん処置または治療が抗アンドロゲン治療である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体ポリペプチドがポリクローナル抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記投与するステップの前に、前記抗体ポリペプチドを検出用実体と組み合わせるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記検出用実体が、ジルコニウム−８９（８９Ｚｒ）、ヨウ素−１２４（１２４Ｉ）、ヨウ素−１３１（１３１Ｉ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、ビスマス−２１２（２１２Ｂｉ）、ビスマス−２１３（２１３Ｂｉ）、アスタチン−２２１（２１１Ａｔ）、銅−６７（６７Ｃｕ）、銅−６４（６４Ｃｕ）、レニウム−１８６（１８６Ｒｅ）、レニウム−１８６（１８８Ｒｅ）、リン−３２（３２Ｐ）、サマリウム−１５３（１５３Ｓｍ）、ルテチウム−１７７（１１７Ｌｕ）、テクネチウム−９９ｍ（９９ｍＴｃ）、ガリウム−６７（６７Ｇａ）、インジウム−１１１（１１１Ｉｎ）、およびタリウム−２０１（２０１Ｔｌ）からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記判定するステップが、単一光子放出型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）による検出を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記前立腺がん処置または治療が、去勢、ＲＵ５８６４２、ＬＧ１２０９０７、ＬＧ１０５、ＲＤ１６２、ＭＤＶ３１００、ＢＭＳ−６４１９８８、ＣＨ５１３７２９１、アタル酸、Ｎ−ブチルベンゼンスルホンアミド、酢酸シプロテロン、ヒドロキシフルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、ペプチドアンタゴニスト、ＴＡＫ７００、ＡＲＮ−５０９、カボザンチミブ、イピリムマブ、クスチルセン、ＢＰＸ−１０１、アルファラディン、デノスマブ、およびＰｒｏｔｓｖａｃ−ＶＦを含む群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
効果的な処置が、ｆＰＳＡの発現または活性の前記処置前レベルに対するｆＰＳＡの発現または活性の前記処置後レベルの低減によって示される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
被験体においてアンドロゲン受容体シグナル伝達をｉｎ  ｓｉｔｕで監視する方法であって、
ＰＳＡの触媒クレフト内の、またはこれに隣接する少なくとも１つのエピトープに結合する抗体ポリペプチドを該被験体に投与するステップであって、該抗体ポリペプチドは、検出用実体と複合体化している、ステップと、
イメージングプロトコールによって、前立腺腫瘍またはその転移細胞における該検出用実体の存在を検出するステップと
を含み、
該検出用実体の該存在は、アンドロゲン受容体シグナル伝達と相関する
方法。
【請求項１１】
アンドロゲン受容体シグナル伝達がｉｎ  ｖｉｔｒｏで画像化される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
アンドロゲン受容体シグナル伝達がｉｎ  ｖｉｖｏで画像化される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記検出用実体の前記存在を定量化して、ｆＰＳＡ発現または活性の尺度を判定するステップであって、ｆＰＳＡ発現の該尺度は、アンドロゲン受容体シグナル伝達と定量的に相関する、ステップをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記イメージングプロトコールが、単一光子放出型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を含む群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
被験体における前立腺がんまたはその転移性疾患を処置する方法であって、抗アンドロゲン治療薬にコンジュゲートしたｆＰＳＡに特異的な抗体ポリペプチドを該被験体に投与するステップを含む、方法。
【請求項１６】
ｆＰＳＡに特異的なモノクローナル抗体またはその断片を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
アンドロゲン受容体シグナル伝達をｉｎ  ｓｉｔｕで監視するためのキットであって、
（ａ）ｆＰＳＡに対して特異的な抗体ポリペプチド、
（ｂ）ｆＰＳＡ発現または活性のレベルを検出することができる作用物質、
（ｃ）対照、ならびに
（ｄ）該キットによって組み立てられるアッセイを実行するため、およびそのアッセイに基づいてアンドロゲン受容体シグナル伝達の判定をするための指針を提供する指示
を含む、キット。
【請求項１８】
前立腺がん用医薬処置剤の製造における、ｆＰＳＡに対して特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用であって、該抗体またはその抗原結合断片は、抗がん剤と組み合わされ、またはこれにコンジュゲートされる、使用。
【請求項１９】
前記抗体またはその抗原結合断片がモノクローナル抗体である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記抗体またはその抗原結合断片がヒトモノクローナル抗体である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
前記抗体またはその抗原結合断片がマウスモノクローナル抗体である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２２】
前記抗体が５Ａ１０である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記抗がん剤が、光増感剤、核酸、放射線増感剤、放射性同位体、スーパー抗原、プロドラッグ、プロドラッグ活性化酵素、抗脈管形成剤、および抗アンドロゲン治療薬を含む群から選択される、請求項１８に記載の使用。
【請求項２４】
前記抗がん剤が、ＭＤＶ３１００、ＡＲＮ−５０９、およびドキソルビシンからなる群から選択される、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ｆＰＳＡの触媒クレフト内の、またはこれに隣接するエピトープに対して特異的である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２６】
前記ｆＰＳＡが、実質的に腫瘍内にあり、または前立腺がん細胞に結合している、請求項１８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１１年１０月２５日に出願された米国仮特許出願第６１／５５１，１９５号の利益を主張し、この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
背景
前立腺がんは、男性において最も頻繁に診断されるがんの１つであり、肺がんに次いで最も一般的ながん関連死の原因である。前立腺がんを発症するリスクは、とりわけ５０を過ぎた男性に関して、年齢ともに劇的に増大する。過去３０年に目立ってきた高齢化する人口および平均余命の延長に伴って、米国における前立腺がんの発病率は、６人の男性に１人に近づいている可能性がある。
【０００３】
前立腺がんの分子的原因が相当研究されているにもかかわらず、処置することが困難なままである。処置の現在のゴールドスタンダードは、手術、すなわち、一般に前立腺の除去、その後の放射線または化学療法処置である。しかし、これらの方法は、完全に有効ではなく、性機能を回復する個人の機会を損なう。さらに、前立腺がん細胞および転移性前立腺がん細胞は、アンドロゲン受容体の過剰発現、または活性化アンドロゲン受容体シグナル伝達を模倣する他の適応突然変異によって、処置で低減したアンドロゲンレベルを相殺し得る。さらに、現在の方法は、他の組織、例えば、リンパ節および骨に浸潤した転移性前立腺がん細胞を同定および処置するのに不十分である。転移性前立腺がん細胞が出ている前立腺腫瘍と同様に、転移性前立腺がん細胞は、アンドロゲン感受性のままであり、アンドロゲンが存在すると、転移性腫瘍増殖が推進される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
要旨
本発明の実施形態は、フリーＰＳＡ（「ｆＰＳＡ」）に特異的なモノクローナル抗体および抗体ポリペプチドが、腫瘍内ｆＰＳＡ、または前立腺腫瘍と他の方法で密接に結合したｆＰＳＡに結合することができるという意外な発見に基づく。腫瘍結合ｆＰＳＡレベルは、腫瘍自体のところでのアンドロゲン受容体シグナル伝達の高度に具体的および定量化可能な尺度をもたらすことができる。したがって、本発明によれば、モノクローナル抗体または抗体ポリペプチドの腫瘍結合ｆＰＳＡへの結合は、ｉｎ  ｓｉｔｕでのアンドロゲン受容体シグナル伝達の監視および／または可視化を促進し、抗がん処置の効力の優れた尺度をもたらす。
【０００５】
ｆＰＳＡを介してｉｎ  ｓｉｔｕでアンドロゲン受容体シグナル伝達を監視すると、慣例的な血清ＰＳＡ試験と比較して劇的に優れた結果がもたらされる。例えば、ｉｎ  ｓｉｔｕのｆＰＳＡレベルは、前立腺がん特異的であり、本明細書で実証するように、アンドロゲン応答性および治効と直接相関する。したがって、本明細書に開示の本発明の実施形態は、腫瘍結合ｆＰＳＡ発現を測定してＰＳＡ発現のアンドロゲン受容体主導変化をより明らかに反映する非侵襲的方法を提供する。さらに、モノクローナル抗体および抗体ポリペプチドは、びまん性疾患を有する患者における転移性病変部を検出することができ、悪性疾患と非悪性疾患を区別することができる。さらに、腫瘍結合ｆＰＳＡに対するモノクローナル抗体および抗体ポリペプチドの結合特異性は、前立腺腫瘍または転移部に直接、治療（例えば、化学療法、放射性同位体の送達、または遺伝療法）を標的化する機能を果たすことができる。
【０００６】
本発明の実施形態は、前立腺がん処置または治療に対する応答をｉｎ  ｓｉｔｕで監視するための方法を提供する。特定の実施形態では、本方法は、フリーＰＳＡ（「ｆＰＳＡ」）のエピトープに結合する抗体ポリペプチドを投与するステップと、被験体の腫瘍または組織中のｆＰＳＡの発現または活性の処置前レベルを判定するステップと、被験体に前立腺がん処置または治療を投与するステップと、ｆＰＳＡのエピトープに結合する抗体ポリペプチドを再投与するステップと、被験体の腫瘍または組織中のｆＰＳＡの発現または活性の処置後レベルを判定するステップと、腫瘍または組織中のｆＰＳＡの発現または活性の処置後レベルを処置前レベルと比較するステップと、比較するステップに基づいて、ｉｎ  ｓｉｔｕのｆＰＳＡ活性または発現の減少によって実証して、治療または処置が有効であるかどうかを判定するステップとを含む。特定の実施形態では、ｆＰＳＡのエピトープは、触媒クレフト内にあり、またはこれに隣接する。別の特定の実施形態では、前立腺がん処置または治療は、抗アンドロゲン治療である。
【０００７】
ある特定の実施形態では、抗体ポリペプチドは、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態は、投与するステップの前に、抗体ポリペプチドを検出用実体と組み合わせるステップをさらに含む。特定の実施形態では、検出用実体は、ジルコニウム−８９（８９Ｚｒ）、ヨウ素−１２４（１２４Ｉ）、ヨウ素−１３１（１３１Ｉ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、ビスマス−２１２（２１２Ｂｉ）、ビスマス−２１３（２１３Ｂｉ）、アスタチン−２２１（２１１Ａｔ）、銅−６７（６７Ｃｕ）、銅−６４（６４Ｃｕ）、レニウム−１８６（１８６Ｒｅ）、レニウム−１８６（１８８Ｒｅ）、リン−３２（３２Ｐ）、サマリウム−１５３（１５３Ｓｍ）、ルテチウム−１７７（１１７Ｌｕ）、テクネチウム−９９ｍ（９９ｍＴｃ）、ガリウム−６７（６７Ｇａ）、インジウム−１１１（１１１Ｉｎ）、およびタリウム−２０１（２０１Ｔｌ）からなる群から選択される。
【０００８】
いくつかの実施形態では、判定するステップは、単一光子放出型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、ポジトロン（Ｐｏｓｉｔｉｏｎ）放出断層撮影（ＰＥＴ）、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）による検出を含む。
【０００９】
特定の実施形態では、前立腺がん処置または治療は、去勢、ＲＵ５８６４２、ＬＧ１２０９０７、ＬＧ１０５、ＲＤ１６２、ＭＤＶ３１００、ＢＭＳ−６４１９８８、ＣＨ５１３７２９１、アタル酸（ａｔａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、Ｎ−ブチルベンゼンスルホンアミド、酢酸シプロテロン、ヒドロキシフルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、ペプチドアンタゴニスト、ＴＡＫ７００、ＡＲＮ−５０９（酢酸アビラテロン）、カボザンチミブ（ｃａｂｏｚａｎｔｉｍｉｂ）、イピリムマブ、クスチルセン、ＢＰＸ−１０１、アルファラディン、デノスマブ、およびＰｒｏｔｓｖａｃ−ＶＦを含む群から選択される。本発明の実施形態で使用するための追加の前立腺がん処置としては、塩化ラジウム−２２３、カボザンチニブ、およびビカルタミド（カソデックス）がある。ある特定の実施形態では、効果的な処置は、ｆＰＳＡの発現または活性の処置前レベルに対するｆＰＳＡの発現または活性の処置後レベルの低減によって示される。
【００１０】
本方法の追加の実施形態では、被験体においてアンドロゲン受容体シグナル伝達をｉｎ  ｓｉｔｕで監視する方法が提供される。特定の実施形態では、本方法は、ＰＳＡの触媒クレフト内の少なくとも１つのエピトープに結合する抗体ポリペプチドを被験体に投与するステップであって、抗体ポリペプチドは、検出用実体と複合体化している、ステップと、イメージングプロトコールによって、前立腺腫瘍またはその転移細胞における検出用実体の存在を検出するステップとを含み、検出用実体の存在は、アンドロゲン受容体シグナル伝達と相関する。特定の実施形態では、アンドロゲン受容体シグナル伝達は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで画像化される。別の実施形態では、アンドロゲン受容体シグナル伝達は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで画像化される。追加の実施形態は、検出用実体の存在を定量化して、ｆＰＳＡ発現または活性の尺度を判定するステップであって、ｆＰＳＡ発現の尺度は、アンドロゲン受容体シグナル伝達と定量的に相関する、ステップをさらに含む。特定の実施形態では、イメージングプロトコールは、単一光子放出型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を含む群から選択される。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態は、被験体における前立腺がんまたはその転移性疾患を処置する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、抗がん剤と組み合わせた、またはコンジュゲートしたｆＰＳＡに特異的な抗体ポリペプチドを含むターゲッティング用実体を被験体に投与するステップを含む。本願全体にわたって論じるように、ｆＰＳＡは、実質的に腫瘍内にあり、または前立腺がん細胞に結合している。いくつかの実施形態では、ｆＰＳＡに対して特異的な抗体またはその抗原結合断片は、前立腺がんの医薬処置剤または薬剤の製造において使用される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトまたはマウスモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は５Ａ１０である。例示的な抗がん剤は、光増感剤、核酸、放射線増感剤、放射性同位体、スーパー抗原、プロドラッグ、プロドラッグ活性化酵素、抗脈管形成剤、および抗アンドロゲン治療薬を含む群から選択することができる。いくつかの実施形態では、抗がん剤は、ＭＤＶ３１００、ＡＲＮ−５０９、およびドキソルビシンとすることができる。いくつかの実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体ポリペプチドは、ｆＰＳＡの触媒クレフト内の、またはこれに隣接するエピトープに対して特異的である。
【００１２】
本発明の追加の実施形態は、ｆＰＳＡに特異的なモノクローナル抗体またはその断片を含む医薬組成物を提供する。
【００１３】
本発明の別の実施形態では、アンドロゲン受容体シグナル伝達をｉｎ  ｓｉｔｕで監視するためのキットであって、ｆＰＳＡに対して特異的な抗体ポリペプチド；ｆＰＳＡ発現または活性のレベルを検出することができる作用物質；対照；ならびにキットによって組み立てられるアッセイを実行するため、およびそのアッセイに基づいてアンドロゲン受容体シグナル伝達の判定をするための指針を提供する指示を含む、キットが提供される。
【００１４】
図面を一緒に構成する以下に表した図は、例示目的のためだけであり、限定のためではない。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、粗製（灰色）および精製（黒色）８９Ｚｒ−５Ａ１０の一般的な放射性ＩＴＬＣクロマトグラムを表す図である。溶離液は、５０ｍＭのＤＴＰＡ、ｐＨ７であった。８９Ｚｒ−５Ａ１０は、ベースラインに残り（Ｒｆ＝０．０）、不純物は、溶媒先端とともに進む（Ｒｆ＝１．０）。
【００１６】
【図２】図２は、ｆＰＳＡに対する８９Ｚｒ−５Ａ１０の相対的親和性を判定するための競合的結合アッセイを表す図である。ｆＰＳＡに対する８９Ｚｒ−５Ａ１０の相対的親和性は、固定化されたｆＰＳＡで被覆されたウェル中で８９Ｚｒ−５Ａ１０および多様な濃度の非標識５Ａ１０をインキュベートすることによって求めた。インキュベーション後にウェル中に保持された活性は、８９Ｚｒ−５Ａ１０のｆＰＳＡへの特異的結合として解釈した。ＤＦＯおよび８９Ｚｒが５Ａ１０にコンジュゲートしてもｆＰＳＡに対するｍＡｂの親和性は変化しないという仮定で計算した理想（理論）値に対して実験値をプロットした。線形回帰を使用して線形性（ｙ＝ｘ）からの偏差を求めた。８９Ｚｒ−５Ａ１０の１つの標本からの代表的なデータが示されている。アッセイは、２つの独立した濃度範囲の５Ａ１０を使用して二通り行った（合計ｎ＝４）。
【００１７】
【図３】図３は、ＡＲ−およびｆＰＳＡ陽性前立腺がんの複数の前臨床モデルに特異的に局在化する８９Ｚｒ−５Ａ１０を表す図である。図３ａは、８９Ｚｒ−５Ａ１０のピーク腫瘍内取込みが２４時間で観察されることを示す複数時点における、ＬＮＣａＰＡＲ異種移植片を持つインタクトな雄マウスから選択された組織の生体内分布データを表す。経時的に、活性は、血液および心臓によって代表される血液プールから激減し、多くのモノクローナル抗体と同様に、持続的に高い取込みが肝臓内で観察された。図３ｂは、８９Ｚｒ−５Ａ１０の腫瘍（Ｔ）への局在化、およびマウス肝臓（Ｌ）内の取込みを示す、ＬＮＣａＰＡＲ異種移植片を持つインタクトな雄マウスの代表的な横断（Ｔｒａｎｓ．）ＰＥＴスライスおよび冠状ＰＥＴスライスを表す。図３ｃは、インタクトな雄マウスにおける、複数のｓ．ｃ．前立腺がんモデルおよびいくつかの処置条件での腫瘍結合８９Ｚｒ−５Ａ１０を示す生体内分布データを表す。８９Ｚｒ−５Ａ１０のＬＮＣａＰ−ＡＲへの局在化は、過剰の非標識５Ａ１０（１ｍｇの非標識ｍＡｂ）との同時注射によって完全に競合された。非特異的放射性トレーサー８９Ｚｒ−ＩｇＧは、ＬＮＣａＰ−ＡＲに局在化せず、８９Ｚｒ−５Ａ１０は、ＰＣ３、前立腺がんのＡＲ−およびＰＳＡヌルモデルに局在化しなかった。８９Ｚｒ−５Ａ１０のＣＷＲ２２Ｒｖ１異種移植片への中程度の局在化が観察され、ＬＮＣａＰ−ＡＲと比較して、このモデルにおけるＰＳＡのより低い基本的発現と一致した。すべての条件と比較して＊Ｐ＜０．０１。ＰＣ３と比較して”Ｐ＜０．０１。図３ｄは、ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持つ去勢マウスにｓ．ｃ．テストステロンペレットを外科的移植すると、腫瘍結合８９Ｚｒ−５Ａ１０が増加する一方、他の臓器内の取込みは未変化であることを表す。生体内分布データは、注射して２４時間後に取得した。処置なし（Ｎｏ  Ｔｘ）と比較して＊Ｐ＜０．０１。エラーバーは、平均からの標準偏差を表す。
【００１８】
【図４】図４は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射されたＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つインタクトな雄マウスの生体内分布プロットを表す図である。担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０で処置し、注射後の指定時間に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データは、平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告されている。
【００１９】
【図５】図５は、８９Ｚｒ−５Ａ１０および過剰の非標識５Ａ１０を注射されたＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つインタクトな雄マウスの生体内分布プロットを表す図である。担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０および過剰の５Ａ１０（１ｍｇ／マウス）で同時処置し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データは、平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告されている。トレーサー単独と比較して、非標識５Ａ１０を投与された動物における８９Ｚｒ−５Ａ１０の腫瘍内取込みについて＊Ｐ＜０．０１。
【００２０】
【図６】図６は、８９Ｚｒ−ＩｇＧを注射されたＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つインタクトな雄マウスの生体内分布プロットを表す図である。担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−ＩｇＧで処置し、注射後の指定時間に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データは、平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告されている。
【００２１】
【図７】図７は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射されたＬＮＣａＰ−ＡＲ、ＰＣ３、またはＣＷＲ２２Ｒｖ１異種移植片を持つインタクトな雄マウスの生体内分布プロットを表す図である。担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０で処置し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データは、平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告されている。
【００２２】
【図８】図８は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射された、皮下テストステロンペレットを有する、または有さない、ＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスの生体内分布プロットを表す図である。テストステロンペレットの外科的移植または操作なし（Ｔｘなし）の６日後に、担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０で処置し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データは、平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告されている。Ｎｏ  Ｔｘと比較して、テストステロンに曝露された動物における８９Ｚｒ−５Ａ１０の腫瘍内取込みについて＊Ｐ＜０．０１。
【００２３】
【図９】図９は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射された、皮下テストステロンペレットを有する、または有さない、ＣＷＲ２２Ｒｖ１異種移植片を持つ去勢雄マウスの生体内分布プロットを表す図である。テストステロンペレットの外科的移植または操作なし（Ｎｏ  Ｔｘ）の６日後に、担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０で処置し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データは、平均ｃｐｍ／ｇ±１標準偏差として報告されている。Ｎｏ  Ｔｘと比較して、テストステロンに曝露された動物における８９Ｚｒ−５Ａ１０の腫瘍内取込みについて＊Ｐ＜０．０５。
【００２４】
【図１０】図１０は、ｉｎ  ｖｉｖｏでアンドロゲン受容体（「ＡＲ」）の薬理学的阻害を検出する８９Ｚｒ−５Ａ１０を表す図である。図１０ａは、ＭＤＶ３１００が８９Ｚｒ−５Ａ１０の腫瘍への局在化を阻害することを示す、ＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスからの生体内分布データを表す。動物を７日間、ビヒクル、または指定用量のＭＤＶ３１００で処置し、このとき８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射し、注射して２４時間のｐ．ｉ．（２４  ｐ．ｉ．）に動物を回収し、生体内分布試験を行った。ビヒクルまたは１０ｍｇ／ｋｇのＭＤＶ３１００と比較して、ＭＤＶ３１００の４０ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇの用量について＊Ｐ＜０．０１。図１０ｂは、右側腹部にＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つインタクトな雄マウスの、ｓ．ｃ．テストステロンペレット、または７日間のビヒクルもしくはＭＤＶ３１００（８０ｍｇ／ｋｇ）の毎日の経口強制飼養で操作した後、２４時間のｐ．ｉ．に８９Ｚｒ−５Ａ１０で画像化した、代表的な横断（Ｔｒａｎｓ．）ＰＥＴおよび冠状ＰＥＴスライスを表す。腫瘍結合８９Ｚｒ−５Ａ１０の明らかな視覚的差異を群間で見ることができる。矢印は、腫瘍（Ｔ）およびマウス肝臓（Ｌ）の位置を示す。図１０ｃでは、ＰＥＴ試験からの腫瘍の対象領域の分析により、腫瘍結合８９Ｚｒ−５Ａ１０の統計的に有意な変化が示されている。ビヒクルと比較して＊Ｐ＜０．０１。ビヒクルと比較して”Ｐ＜０．０５。エラーバーは、平均からの標準偏差を表す。
【００２５】
【図１１】図１１は、ビヒクルまたはＭＤＶ３１００で処置され、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射されたＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスの生体内分布プロットを表す図である。担腫瘍去勢マウスをビヒクル、または指定用量のＭＤＶ３１００（毎日の経口強制飼養）で処置した。６日目に、マウスに８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データは、平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告されている。ビヒクルに対してＭＤＶ３１００  ４０ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇについて＊Ｐ＜０．０１。１０ｍｇ／ｋｇの用量のＭＤＶ３１００に対して４０ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇの用量についてＰ＜０．０５。
【００２６】
【図１２】図１２は、左脛骨にＬＮＣａＰ−ＡＲを接種したマウスの代表的な生物発光画像を表す図である。インタクトな雄マウスの脛骨にＬＮＣａＰ−ＡＲを接種し、経過を生物発光によって監視し、腫瘍発生をＭＲＩおよび血清ＰＳＡ分析によって確認した（本文を参照）。接種して５週間後の担腫瘍マウスのコホートの一般的な画像が示されている。これらの動物は、疾患が確認されていた。
【００２７】
【図１３】図１３は、骨の腫瘍病変を示す代表的なＭＲＩスライスを表す図である。インタクトな雄マウスの脛骨にＬＮＣａＰ−ＡＲを接種し、腫瘍発生をＭＲＩおよび血清ＰＳＡ分析で視覚的に確認した。腫瘍塊を示す左後肢（ＭＲＩスライスの右側に向いた）のコントラストの領域が赤で囲まれている。
【００２８】
【図１４】図１４は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの骨微小環境において前立腺がんを特異的に標的にする８９Ｚｒ−５Ａ１０を表す図である。図１４ａでは、同時登録した三次元の、ボリュームを与えるＰＥＴ／ＣＴ画像が、８９Ｚｒ−５Ａ１０は、インタクトな雄マウスの左脛骨に位置した骨ＬＮＣａＰ−ＡＲ移植片に局在化することを示す。青色−緑色の色スケールで与えたＰＥＴデータは、右の（正常な）脛骨と比較して、動物の左（担腫瘍）脛骨上により多い量の活性を示す。図１４ｂでは、同時登録したＰＥＴ／ＭＲＩ画像が、ＭＲＩによって検出された腫瘍関連コントラストとの８９Ｚｒ−５Ａ１０からのポジトロン放射の同時局在化を示す。図１４ｃでは、脛骨の骨折を受け、手術して１０日後のインタクトな雄マウスにおいて、骨再形成を１８Ｆ−ＮａＦで評価した。コントラストの明らかな領域が、ＰＥＴによって、骨折した脛骨において識別された。最初の画像の２日後に、動物に９９ｍＴｃ−ＭＤＰおよび８９Ｚｒ−５Ａ１０を同時注射した。ＳＰＥＣＴイメージングは、９９ｍＴｃ−ＭＤＰも、予期したように、治癒中の骨の領域に局在化することを示した。対照的に、ＰＥＴイメージングは、創傷部位で検出可能な８９Ｚｒ−５Ａ１０をまったく示さず、現代の臨床的放射性トレーサーと比較して、この試薬の前立腺がんに対する高い特異性を提示した。
【００２９】
【図１５】図１５は、脛骨中の腫瘍との８９Ｚｒ−５Ａ１０の同時整列を示す、同時登録したＰＥＴ／ＭＲＩスライスを表す図である。インタクトな雄マウスの脛骨にＬＮＣａＰ−ＡＲを接種し、腫瘍発生をＭＲＩおよび血清ＰＳＡ分析で視覚的に確認した。同時登録したＰＥＴ／ＭＲＩ画像は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射して２４時間後に取得した。右（正常な）後肢からの画像が比較のために提示されている。
【００３０】
【図１６】図１６は、８９Ｚｒ−５Ａ１０（左）および８９ＺｒＣｌ（右）で処置した骨ＬＮＣａＰ−ＡＲ移植片を持つマウスの組織構造および重ねたオートラジオグラフィーを表し、８９Ｚｒ−５Ａ１０は、腫瘍組織に局在化し、一方、８９ＺｒＣｌは、正常な骨に局在化することを示す図である。腫瘍組織は、組織診断の目視検査によって区別した（Ｈ＆Ｅ染色によって画定）。これは、４倍で、青色で囲まれており、１０倍で、矢印で強調されている。より高い拡大の図のために選択した組織の領域は、黄色で輪郭を描いてある。
【００３１】
【図１７】図１７は、ビヒクルまたはＭＤＶ３１００で処置され、８９Ｚｒ−Ｊ５９１を注射されたＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスの生体内分布プロットを表す図である。担腫瘍去勢マウスをビヒクル、または指定用量のＭＤＶ３１００（毎日の経口強制飼養）で処置した。６日目に、マウスに８９Ｚｒ−Ｊ５９１を注射し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データは、平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告されている。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
定義
動物：本明細書において、用語「動物」は、動物界の任意のメンバーを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、いずれかの性別の、任意の発達段階のヒトを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、任意の発達段階の非ヒト動物を指す。ある特定の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、および／またはブタ）である。いくつかの実施形態では、動物として、それだけに限らないが、哺乳動物、トリ、爬虫類、両生類、魚、昆虫、および／または虫が挙げられる。ある特定の実施形態では、動物は、ＨＣＶによる感染に感受性である。いくつかの実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、および／またはクローンとすることができる。
【００３３】
アンタゴニスト：本明細書において、用語「アンタゴニスト」は、ｉ）例えば、受容体を不活化する別の作用物質の効果を阻害し、減少させ、または低減し、かつ／あるいはｉｉ）１つまたは複数の生物学的イベント、例えば、１つもしくは複数の受容体の活性化、または１つもしくは複数の生物学的経路の刺激を阻害し、減少させ、低減し、または遅延させる作用物質を指す。特定の実施形態では、アンタゴニストは、１つまたは複数のアンドロゲン受容体の活性化および／または活性を阻害する。アンタゴニストは、例えば、小分子、ポリペプチド、核酸、炭水化物、脂質、金属、および／または妥当な阻害活性を示す任意の他の実体を含めた、任意の化学的クラスの作用物質であり得、またはこれらを含むことができる。アンタゴニストは、直接的（この場合、これは、受容体に直接その影響を発揮する）であっても、間接的（この場合、これは、受容体への結合以外、例えば、受容体の発現または翻訳の変更、受容体によって直接活性化されるシグナル伝達経路の変更、受容体のアゴニストの発現、翻訳、または活性の変更によってその影響を発揮する）であってもよい。特定の実施形態では、アンドロゲン受容体アンタゴニストは、小分子アンタゴニスト（例えば、ＲＵ５８６４２、ＬＧ１２０９０７、ＬＧ１０５、ＲＤ１６２、ＭＤＶ３１００、ＢＭＳ−６４１９８８、ＣＨ５１３７２９１、アタル酸、Ｎ−ブチルベンゼンスルホンアミド）、ステロイド化合物（例えば、酢酸シプロテロン）、非ステロイド化合物（例えば、ヒドロキシフルタミド、ビカルタミド、ニルタミド）、ペプチドアンタゴニスト、およびこれらの組合せからなる群から選択することができる。代替としてまたは追加的に、本発明の実施形態で使用するための抗アンドロゲン治療薬としては、それだけに限らないが、ＴＡＫ７００、ＡＲＮ−５０９、カボザンチミブ、イピリムマブ、クスチルセン、ＢＰＸ−１０１、アルファラディン、デノスマブ、Ｐｒｏｔｓｖａｃ−ＶＦ、およびこれらの組合せがある。
【００３４】
抗体ポリペプチド：本明細書において、用語「抗体ポリペプチド」または「抗体」または「その抗原結合断片」は、互換的に使用することができ、エピトープに結合することができるポリペプチド（複数可）を指す。いくつかの実施形態では、抗体ポリペプチドは、全長抗体であり、いくつかの実施形態では、全長未満であるが、少なくとも１つの結合部位（抗体「可変領域」の構造を有する少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、用語「抗体ポリペプチド」は、免疫グロブリン結合ドメインと相同であり、または大部分は相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質を包含する。特定の実施形態では、「抗体ポリペプチド」は、免疫グロブリン結合ドメインと少なくとも９９％の同一性を示す結合ドメインを有するポリペプチドを包含する。いくつかの実施形態では、「抗体ポリペプチド」は、免疫グロブリン（ｉｍｍｕｇｌｏｂｕｌｉｎ）結合ドメイン、例えば、参照免疫グロブリン結合ドメインと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を示す結合ドメインを有する任意のタンパク質である。含まれる「抗体ポリペプチド」は、天然源で見つかる抗体のものと同一のアミノ酸配列を有することができる。本発明による抗体ポリペプチドは、例えば、天然源もしくは抗体ライブラリーからの単離、宿主システム内での、もしくはこれを用いた組換え生産、化学合成など、またはこれらの組合せを含めた任意の利用可能な手段によって調製することができる。抗体ポリペプチドは、モノクローナルまたはポリクローナルとすることができる。抗体ポリペプチドは、ヒトクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥのいずれも含めた任意の免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。本明細書において、用語「抗体ポリペプチド」または「抗体の特徴的な部分」は、互換的に使用され、対象とするエピトープに結合するアビリティーを有する抗体の任意の誘導体を指す。ある特定の実施形態では、「抗体ポリペプチド」は、全長抗体の特異的結合アビリティーの少なくとも１つの重要部分を保持する抗体断片である。抗体断片の例としては、それだけに限らないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、およびＦｄ断片がある。代替としてまたは追加的に、抗体断片は、例えば、ジスルフィド連結によって一緒に連結された複数の鎖を含むことができる。いくつかの実施形態では、抗体ポリペプチドは、ヒト抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体ポリペプチドは、ヒト化であり得る。ヒト化抗体ポリペプチドは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、または抗体ポリペプチド（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、もしくは抗体の他の抗原結合性部分配列など）を含み、またはこれらであり得る。一般に、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、またはウサギなどのＣＤＲに由来する残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。特定の実施形態では、本発明によって使用するための抗体ポリペプチド（ｐｏｌｙｅｐｔｉｄｅｓ）は、ｆＰＳＡまたはＰＳＡの特定のエピトープ（例えば、触媒クレフト中）に結合し、いくつかの実施形態では、本発明によって使用するための抗体ポリペプチドは、ｆＰＳＡまたはＰＳＡの特定のエピトープ（例えば、触媒クレフト内、またはこれに隣接する）に対して特異的である。特定の例示的な抗体は、本明細書に参照により組み込まれている、Ｓｔｅｎｍａｎ  ＵＨら、「Ｓｕｍｍａｒｙ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＴＤ−３  ｗｏｒｋｓｈｏｐ：  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ８３  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ」、Ｔｕｍｏｕｒ  Ｂｉｏｌ．、１９９９年、２０巻：１〜１２頁に開示されている。いくつかの実施形態では、抗体ポリペプチドは、５Ａ１０もしくは４Ｇ１０モノクローナル抗体、またはその抗原結合断片である。
【００３５】
およそ：本明細書において、用語「およそ」または「約」は、対象とする１つまたは複数の値に適用する場合、述べた参照値と同様である値を指す。ある特定の実施形態では、用語「およそ」または「約」は、別段の記載のない限り、またはさもなければ脈絡から明白でない限り（このような数値が可能な値の１００％を超える場合を除いて）、述べた参照値のいずれかの方向（より大きい、またはより小さい）の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満内に入る一連の値を指す。
【００３６】
生物学的に活性な：本明細書において、語句「生物学的に活性な」は、生物系（例えば、細胞培養液、生物など）において活性を有する任意の物質の特性を指す。例えば、生物に投与されたとき、その生物に生物学的効果を有する物質は、生物学的に活性であるとみなされる。特定の実施形態では、タンパク質またはポリペプチドが生物学的に活性である場合、このタンパク質またはポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を共有するそのタンパク質またはポリペプチドの部分は、一般に、「生物学的に活性な」部分と呼ばれる。
【００３７】
特徴的な部分：本明細書において、物質の「特徴的な部分」という用語は、最も広い意味において、物質全体に対してある程度の配列同一性または構造的同一性を共有するものである。ある特定の実施形態では、特徴的な部分は、インタクトな物質と少なくとも１つの機能的特性を共有する。例えば、タンパク質またはポリペプチドの「特徴的な部分」は、合わせてタンパク質またはポリペプチドの特徴である、アミノ酸の１つの連続ストレッチ、またはアミノ酸の一連の連続ストレッチを含有するものである。いくつかの実施形態では、それぞれのこのような連続ストレッチは一般に、少なくとも２、５、１０、１５、２０、５０、またはそれ以上のアミノ酸を含有する。一般に、物質の（例えば、タンパク質、抗体などの）の特徴的な部分は、上記で指定した配列同一性および／または構造的同一性に加えて、関連したインタクトな物質と少なくとも１つの機能的特徴を共有するものであり、エピトープ結合特異性は、一例である。いくつかの実施形態では、特徴的な部分は、生物学的に活性であり得る。
【００３８】
併用療法：用語「併用療法」は、本明細書において、疾患を処置するための２種以上の異なる医薬品が、被験体が少なくとも２種の作用物質に同時に曝露されるように、重なったレジメンにおいて投与される局面を指す。いくつかの実施形態では、異なる作用物質は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、１つの作用物質の投与は、少なくとも１つの他の作用物質の投与と重なる。いくつかの実施形態では、異なる作用物質は、被験体内で同時に生物学的活性を有するように、順次投与される。
【００３９】
検出用実体：用語「検出用実体」は、本明細書において、それが接合されている作用物質（例えば、抗体）の検出を促進する任意の元素、分子、官能基、化合物、その断片、または部分を指す。検出用実体の例としては、それだけに限らないが、様々なリガンド、放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１８Ｆ、１９Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、１３５Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、６４Ｃｕ、１８７Ｒｅ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒなど）、蛍光色素（具体的な例示的蛍光色素については、以下を参照）、化学発光剤（例えば、アクリジニウム（ａｃｒｉｄｉｎｕｍ）エステル、安定化ジオキセタンなど）、生物発光剤、スペクトル的に分解可能な無機蛍光半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金など）、ナノクラスター、常磁性金属イオン、酵素（酵素の具体例については、以下を参照）、比色標識（例えば、色素、コロイド金など）、ビオチン、ジオキシゲニン（ｄｉｏｘｉｇｅｎｉｎ）、ハプテン、および抗血清またはモノクローナル抗体が利用可能であるタンパク質がある。
【００４０】
診断情報：本明細書において、診断情報あるいは診断で使用するための情報は、患者が疾患または容態を有するかどうかを判定することおよび／あるいは、疾患または容態を、表現型カテゴリー、または疾患もしくは容態の予後、もしくは疾患もしくは容態の処置（一般の処置もしくは任意の特定の処置）に対する予想される応答に関して有意性を有する任意のカテゴリーに分類することにおいて有用である任意の情報である。同様に、診断は、それだけに限らないが、被験体が疾患もしくは容態（前立腺がんなど）を有する可能性が高いかどうか、被験体に顕在化した疾患もしくは容態の状態、病期、もしくは特徴、腫瘍の性質もしくは分類に関する情報、予後に関する情報、および／または適切な処置の選択に有用な情報を含めた、任意のタイプの診断情報を提供することを指す。処置の選択として、特定の治療（例えば、化学療法）剤、もしくは他の処置モダリティー（ｍｏｄａｌｉｔｉｙ）、例えば、手術、放射線などのチョイス、治療を保留するか提供するかについてのチョイス、投薬レジメン（例えば、特定の治療剤または治療剤の組合せの１つまたは複数の投薬の頻度またはレベル）に関するチョイスなどを挙げることができる。
【００４１】
剤形：本明細書において、用語「剤形」および「単位剤形」は、被験体に投与されるべき治療用組成物の物理的に不連続な単位を指す。各単位は、所定量の活性材料（例えば、抗ｆＰＳＡ抗体などの治療剤）を含有する。いくつかの実施形態では、所定量は、投薬レジメンで一用量として投与されるときの所望の治療効果と相関しているものである。当業者は、特定の被験体に投与される治療用組成物または治療剤の総量は、１人または複数の主治医によって決定され、複数の剤形の投与を伴う場合があることを察するであろう。
【００４２】
投薬レジメン：「投薬レジメン」（または「治療レジメン」）は、その用語を本明細書で使用する場合、一般に時間の期間で区切られて、被験体に個々に投与される一連の単位投薬（一般に１つを超える）である。いくつかの実施形態では、所与の治療剤は、１回または複数の投薬を伴い得る推奨された投薬レジメンを有する。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、同じ長さの時間によって互いに区切られた複数の投薬を含み、いくつかの実施形態では、投薬レジームは、複数の投薬、および個々の投薬を区切る少なくとも２つの異なる時間を含む。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、患者の集団にわたって投与される場合、所望の治療転帰と相関し、または相関していたことがある。
【００４３】
発現：本明細書において、核酸配列の「発現」は、以下のイベント、すなわち、（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の生成（例えば、転写による）、（２）ＲＮＡ転写物の処理（例えば、スプライシング、エディティング、５’キャップ形成、および／もしくは３’終端形成による）、（３）ＲＮＡのポリペプチドもしくはタンパク質への翻訳、ならびに／または（４）ポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾のうちの１つまたは複数を指す。
【００４４】
フリーＰＳＡ：用語「フリーＰＳＡ」または「ｆＰＳＡ」は、本明細書において、例えば、アルファ１−抗キモトリプシンなどのプロテアーゼ阻害剤によって結合されておらず、前立腺がん細胞またはその転移性疾患にごく接近しており、またはこれに結合している（すなわち、血清マーカーでない）、任意の形態のＰＳＡまたはＰＳＡの前駆体を指す。
【００４５】
機能的な：本明細書において、「機能的な」生体分子は、それが特徴付けられる性質および／または活性を呈する形態の生体分子である。生体分子は、２つの機能（すなわち、二機能性）または多くの機能（すなわち、多機能性）を有し得る。
【００４６】
遺伝子：本明細書において、用語「遺伝子」は、当技術分野で理解されるその意味を有する。いくつかの実施形態では、用語「遺伝子」は、遺伝子制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）、および／またはイントロン配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、この用語は、タンパク質をコードするのではなく、むしろ機能的なＲＮＡ分子、例えば、ｔＲＮＡ、ＲＮＡｉ−誘発因子などをコードする核酸を指す。代替としてまたは追加的に、多くの実施形態では、用語「遺伝子」は、本願において、タンパク質をコードする核酸の部分を指す。この用語が他の配列（例えば、非コード配列、制御配列など）を包含するかどうかは、脈絡から当業者に明らかとなるであろう。
【００４７】
遺伝子産物または発現産物：本明細書において、用語「遺伝子産物」または「発現産物」は、一般に、遺伝子から転写されたＲＮＡ（処理前および／もしくは処理後）、または遺伝子から転写されたＲＮＡによってコードされるポリペプチド（修飾前および／もしくは修飾後）を指す。
【００４８】
相同性：本明細書において、用語「相同性」は、ポリマー分子同士間、例えば、ポリペプチド分子同士間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態では、抗体などのポリマー分子は、これらの配列が少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一である場合、互いに「相同」であるとみなされる。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、これらの配列が少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同様である場合、互いに「相同」であるとみなされる。
【００４９】
マーカー：マーカーは、本明細書において、その存在またはレベルが特定の腫瘍またはその転移性疾患の特徴である作用物質を指す。例えば、いくつかの実施形態では、この用語は、特定の腫瘍、腫瘍サブクラス、腫瘍の病期などの特徴である遺伝子発現産物を指す。代替としてまたは追加的に、いくつかの実施形態では、特定のマーカーの存在またはレベルは、例えば、腫瘍の特定のクラスの特徴であり得る特定のシグナル伝達経路の活性（または活性レベル）に相関する。マーカーの存在または非存在の統計的有意性は、特定のマーカーに応じて変化し得る。いくつかの実施形態では、マーカーの検出は、マーカーが、腫瘍が特定のサブクラスのものである高い確率を反映する点で高度に特異的である。このような特異性は、感度を犠牲にして達する場合がある（すなわち、腫瘍が、そのマーカーを発現すると予期される腫瘍であっても、負の結果が起こり得る）。反対に、高い程度の感度を有するマーカーは、より低い感度を有するものより低く特異的である場合がある。本発明によれば、有用なマーカーは、１００％の精度で特定のサブクラスの腫瘍を区別する必要はない。
【００５０】
患者：本明細書において、用語「患者」または「被験体」は、提供される組成物が、例えば、実験、診断、予防、美容、および／または治療目的で投与される、または投与することができる任意の生物を指す。一般的な患者には、動物（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、および／またはヒトなど）が含まれる。いくつかの実施形態では、患者はヒトである。いくつかの実施形態では、患者は、１つまたは複数の障害または容態を罹患しているか、またはこれらに感受性である。いくつかの実施形態では、患者は、障害または容態の１つまたは複数の症状を示す。いくつかの実施形態では、患者は、１つまたは複数の障害または容態と診断されたことがある。いくつかの実施形態では、障害または容態は、がんであり、もしくはこれを含み、または１つもしくは複数の腫瘍の存在であり、もしくはこれらを含む。いくつかの実施形態では、このようながんまたは腫瘍は、前立腺のがん、または前立腺の腫瘍であり、またはこれらを含む。いくつかの実施形態では、障害または容態は、転移性前立腺がんである。
【００５１】
ペプチド：用語「ペプチド」は、ペプチド結合または修飾ペプチド結合によって互いに接合された２個以上のアミノ酸を指す。特定の実施形態では、「ペプチド」は、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、または１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドを指す。
【００５２】
薬学的に許容される：用語「薬学的に許容される」は、本明細書において、適切な医学的判断の範囲内で、妥当な利益／リスク比に見合って、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わないで、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適した物質を指す。
【００５３】
ポリペプチド：本明細書において、「ポリペプチド」は、一般的に言えば、ペプチド結合によって互いにアタッチした少なくとも２個のアミノ酸のストリングである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、それぞれが少なくとも１つのペプチド結合によって他のものにアタッチした少なくとも３〜５個のアミノ酸を含み得る。当業者は、ポリペプチドは、任意選択により、それでもなおポリペプチド鎖中に一体化することができる「非天然」アミノ酸または他の実体を時に含むことを察するであろう。
【００５４】
予後情報および予兆情報：本明細書において、用語の予後情報および予兆情報は、処置の非存在下または存在下で、疾患または容態の過程の任意の側面を示すのに使用することができる任意の情報を指すのに互換的に使用される。このような情報として、それだけに限らないが、患者の平均余命、患者が、所与の量の時間（例えば、６カ月、１年、５年など）にわたって生存する可能性、患者の疾患が治癒される可能性、患者の疾患が特定の治療に応答する可能性（応答は、様々な方法のいずれでも定義され得る）を挙げることができる。予後情報および予兆情報は、診断情報の広いカテゴリー内に含まれる。
【００５５】
タンパク質：本明細書において、用語「タンパク質」は、ポリペプチド（すなわち、ペプチド結合によって互いに連結された少なくとも３〜５個のアミノ酸のストリング）を指す。タンパク質は、アミノ酸以外の部分を含んでもよく（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカンなどであってもよい）、かつ／または他の方法で処理または修飾されていてもよい。いくつかの実施形態では、「タンパク質」は、細胞によって生成され、かつ／または細胞内で活性な完全なポリペプチド（シグナル配列を含む、または含まない）であり得、いくつかの実施形態では、「タンパク質」は、細胞によって生成され、かつ／または細胞内で活性なポリペプチドなどの特徴的な部分であり、またはこれを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、１本超のポリペプチド鎖を含む。例えば、ポリペプチド鎖は、１つまたは複数のジスルフィド結合によって連結され、または他の手段によって会合され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質またはポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、もしくは両方を含有することができ、かつ／または当技術分野で公知の様々なアミノ酸修飾または類似体のいずれも含有することができる。有用な修飾としては、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などがある。いくつかの実施形態では、タンパク質またはポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、および／またはこれらの組合せを含み得る。いくつかの実施形態では、タンパク質は、抗体、抗体ポリペプチド、抗体断片、これらの生物学的活性部分、および／またはこれらの特徴的な部分であり、またはこれらを含む。
【００５６】
応答：本明細書において、処置に対する応答は、処置の結果して起こる、または処置と相関する被験体の容態の任意の有益な変化を指すことができる。このような変化として、容態の安定化（例えば、処置の非存在下で起こったはずである悪化の防止）、容態の症状の寛解および／または容態の治癒に対する展望の改善などを挙げることができる。これは、被験体の応答を指す場合があり、または腫瘍の応答を指す場合がある。腫瘍または被験体の応答は、臨床基準および客観的基準を含めた多種多様な基準によって測定することができる。応答を評価するための技法としては、それだけに限らないが、臨床検査、ポジトロン放出断層撮影（ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、胸部Ｘ線ＣＴスキャン、ＭＲＩ、超音波、内視鏡検査、腹腔鏡検査、被験体から得られる試料中の腫瘍マーカーの存在もしくはレベル、細胞学的検査、および／または組織診断がある。これらの技法の多くは、腫瘍のサイズを求めようと試み、またはさもなければ総腫瘍量を求めようと試みるものである。処置に対する応答を評価するための方法および指針は、Ｔｈｅｒａｓｓｅら、「Ｎｅｗ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ」、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｎａｄａ、Ｊ．  Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．、２０００年、９２巻（３号）：２０５〜２１６頁に論じられている。正確な応答基準は、任意の適切な様式で選択することができ、ただし、腫瘍および／または患者の群を比較するとき、比較されるべき群は、反応率を求めるための同じまたは同等の基準に基づいて評価される。当業者は、適切な基準を選択することができるであろう。
【００５７】
試料：本明細書において、被験体から得られる試料として、それだけに限らないが、以下のうちのいずれか、またはすべてを挙げることができる：１個または複数の細胞、組織の部分、血液、血清、腹水、尿、唾液、および他の体液、分泌物、または排泄物。用語「試料」は、このような試料を処理することによって由来する任意の材料も含む。由来試料として、試料から抽出され、またはｍＲＮＡの増幅もしくは逆転写などの技法に試料を付すことによって得られるヌクレオチド分子またはポリペプチドを挙げることができる。
【００５８】
特異的結合：本明細書において、用語「特異的結合」または「〜に対して特異的な」または「〜に特異的な」は、標的実体（例えば、標的タンパク質またはポリペプチド）と結合剤（例えば、提供される抗体などの抗体）との間の相互作用（一般に非共有結合性）を指す。当業者が理解することになるように、相互作用は、これが代替の相互作用の存在下で有利である場合、「特異的」とみなされる。多くの実施形態では、相互作用は一般に、結合分子によって認識される抗原決定基またはエピトープなどの標的分子の特定の構造的フィーチャの存在に依存する。例えば、抗体がエピトープＡに対して特異的である場合、フリー標識Ａおよびそれに対する抗体の両方を含有する反応物中に、エピトープＡを含有するポリペプチドが存在し、またはフリー非標識Ａが存在すると、抗体に結合する標識Ａの量が低減することになる。特異性は、完全である必要はないことが理解されるべきである。例えば、多数の抗体は、標的分子中に存在するものに加えて、他のエピトープと交差反応することが当技術分野で周知である。このような交差反応性は、抗体が使用される用途に応じて許容される場合がある。特定の実施形態では、ｆＰＳＡに対して特異的な抗体は、プロテアーゼ阻害剤（例えば、ＡＣＴ）に結合したＰＳＡと１０％未満の交差反応性を有する。当業者は、任意の所与の用途（例えば、標的分子を検出するため、治療目的のためなど）において適切に実施するのに十分な程度の特異性を有する抗体を選択することができるであろう。特異性は、結合分子の標的分子に対する親和性対結合分子の他の標的（例えば、競合相手）に対する親和性などの追加の要因に照らして評価することができる。結合分子が、検出することが望まれている標的分子に対して高い親和性、および非標的分子に対して低い親和性を呈する場合、抗体は、免疫診断目的に関して許容される試薬である可能性が高くなる。結合分子の特異性が１つまたは複数の状況において確立された後、その特異性を必ずしも再評価することなく、他の、好ましくは同様の状況においてこれを使用することができる。
【００５９】
がんの病期：本明細書において、用語「がんの病期」は、がんの増進のレベルの定性的または定量的評価を指す。がんの病期を判定するのに使用される基準としては、それだけに限らないが、腫瘍のサイズ、および転移の程度（例えば、局在的または遠位）がある。
【００６０】
実質的に：本明細書において、用語「実質的に」は、対象とする特徴または性質の総合的またはほぼ総合的な程度または度合いを呈する定性的条件を指す。生物学的技術分野の当業者は、生物学的および化学的現象は、まれに、もしあれば、完了まで進み、かつ／もしくは完全性まで進行し、または完全な結果を実現もしくは回避することを理解するであろう。したがって、用語「実質的に」は、多くの生物学的および化学的現象に固有の完全性の潜在的な欠如を取り込むのに本明細書で使用される。
【００６１】
罹患している：疾患、障害、または容態（前立腺がん）を「罹患している」個体は、疾患、障害、または容態の１つまたは複数の症状を診断されており、かつ／またはこれらを呈する。前立腺腫瘍は、しばしば無症候性である。いくつかの実施形態では、前立腺がんを罹患している個体は、腫瘍を患っているが、前立腺がんのいずれの症状も呈さず、かつ／または前立腺がんと診断されていない。いくつかの実施形態では、前立腺がんを罹患している個体は、前立腺がんを有していない個体と比べて、腫瘍結合または腫瘍内ｆＰＳＡまたはＰＳＡが増加している個体である。
【００６２】
症状が低減されている：本発明によれば、特定の疾患、障害、または容態の１つまたは複数の症状が、規模（例えば、強度、重症度など）および／または頻度において低減されているとき、「症状が低減されている」。明確にする目的で、特定の症状の開始の遅延は、その症状の頻度の低減の一形態とみなされる。より小さい腫瘍を有する多くの前立腺がん患者は、症状をまったく有さない。本発明は、症状が排除される場合のみに限定されることは意図されていない。本発明は、１つまたは複数の症状が、たとえ完全に排除されなくても、低減される（かつ被験体の容態がそれによって「改善される」）ような処置を特に企図する。
【００６３】
治療剤：本明細書において、語句「治療剤」は、被験体に投与されたとき、治療効果を有し、かつ／または所望の生物学的および／もしくは薬理学的効果を誘発する任意の作用物質を指す。
【００６４】
治療有効量：本明細書において、用語「治療有効量」は、任意の医療に対して適用可能な妥当な利益／リスク比で、処置される被験体に治療効果を付与する治療用タンパク質（例えば、ｆＰＳＡ抗体）の量を指す。治療効果は、客観的（すなわち、いくつかの試験またはマーカーによって測定可能）であっても、主観的（すなわち、被験体が効果の指摘を与え、または効果を感じる）であってもよい。特に、「治療有効量」は、疾患に関連する症状を寛解し、疾患の開始を防止し、もしくは遅延させ、かつ／または疾患の症状の重症度もしくは頻度を下げるなどによって、所望の疾患もしくは容態を処置、寛解、もしくは防止し、または検出可能な治療効果もしくは防止効果を呈するのに有効な治療用タンパク質または組成物の量を指す。治療有効量は一般に、複数の単位用量を含み得る投薬レジメンにおいて投与される。任意の特定の治療用タンパク質について、治療有効量（および／または有効な投薬レジメン内の適切な単位用量）は、例えば、投与経路、他の医薬品との組合せに応じて変化し得る。また、任意の特定の患者に対する具体的な治療有効量（および／または単位用量）は、処置される障害および障害の重症度；使用される具体的な医薬品の活性；使用される具体的な組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、性別、および食餌；投与の時間；投与経路；ならびに／または使用される具体的な融合タンパク質の排泄率もしくは代謝率；処置の継続時間；ならびに医術において周知である同様の要因を含めた様々な要因に依存し得る。
【００６５】
処置：本明細書において、用語「処置」（「処置する」または「処置すること」も）は、特定の疾患、障害、および／または容態（例えば、前立腺がん）の１つまたは複数の症状、フィーチャ、および／または原因を部分的に、もしくは完全に軽減し、寛解し、よみがえらせ、阻害し、これらの開始を遅延させ、これらの重症度を低減し、かつ／またはこれらの発病率を低減する物質（例えば、抗ｆＰＳＡ抗体またはＡＲアンタゴニスト）の任意の投与を指す。このような処置は、関連した疾患、障害、および／もしくは容態の徴候を呈さない被験体ならびに／または疾患、障害、および／もしくは容態のほんの早期の徴候を呈する被験体のものとすることができる。代替としてまたは追加的に、このような処置は、関連した疾患、障害、および／または容態の１つまたは複数の確立した徴候を呈する被験体のものとすることができる。いくつかの実施形態では、処置は、関連した疾患、障害、および／または容態を罹患していると診断された患者のものとすることができる。いくつかの実施形態では、処置は、関連した疾患、障害、および／または容態を発生するリスクの増大と統計的に相関する１つまたは複数の感受性因子を有すると分かっている被験体のものとすることができる。
【００６６】
特定の実施形態の詳細な説明
臨床マーカーは、前立腺がんの診断および治効の評価のために頻繁に使用される。前立腺がんの最も普及した臨床マーカーは、前立腺特異的抗原（「ＰＳＡ」）である。ＰＳＡは、セリンプロテアーゼであり、プロテアーゼの組織カリクレインファミリーのメンバーである。これは、前立腺導管上皮および前立腺腺房上皮によって主に生成され、管腔内に分泌され、この場合その機能は、精液凝塊中のセミノジェリンＩおよびＩＩを切断することである。しかし、がんおよびいくつかのより温和な容態はともに、前立腺のアーキテクチャを変化させ、ＰＳＡが血管周囲腔内に漏れ、血流中に逃れることを可能にする。
【００６７】
ＰＳＡは、前立腺組織内で豊富に発現されるが、健康な前立腺を有する男性の血清中でほとんど検出不可能である。上昇したＰＳＡレベルの存在は、前立腺の外傷または疾患を示唆することが多い。血清ＰＳＡは、２つの形態、すなわち、浮遊性触媒活性形態、および他のタンパク質と複合体化または結合した形態で存在する。標準的なＰＳＡ試験では、両形態の相対的または定性的な量が測定され、それは、ＰＳＡの上昇の原因が、前立腺がんであるか、何らかの他の容態であるかを区別するのに役立ち得る。血清ＰＳＡ試験では、血液中のフリーまたは非複合体化ＰＳＡ（「ｆＰＳＡ」）と総ＰＳＡ（フリー＋結合ＰＳＡ）との比が求められる。ｆＰＳＡと総ＰＳＡの比がより低いことは、個体が確かに実際に前立腺がんを有するより高い潜在性を示唆する。１０ｎｇ／ｍｌ超の総血清ＰＳＡレベルも、臨床実践ガイドラインによれば、前立腺がんの５０％超の確率を示唆する。４〜１０ｎｇ／ｍｌの間の血清ＰＳＡレベルは、がんが実際に存在するかどうかを検証するために前立腺生検の必要があるという臨床的示唆である。
【００６８】
それにもかかわらず、より洗練されたレベルの血清試験でさえ、とりわけ処置の効力の評価に関して、著しい制限を示す。バイオマーカーまたは抗原が処置の焦点（すなわち、腫瘍）からより移動すると、バイオマーカーまたは抗原のレベルの変動が、真に処置の結果であるのか、介入現象によって引き起こされたアーチファクトを代表するのかを評価することがより困難になる。手短に言えば、原因と効果の相関を判定することがより困難である。さらに、すべての血清マーカーは、疾患の起源から離れているので、定量化されたレベルと疾患の重症度または経過との相関が必然的に不完全である。さらに、病期、腫瘍特性、回復の可能性および治療評価に関する情報は一般に、高度なイメージングまたは侵襲性の生検のいずれかを必要とする。どの血清系マーカーも、腫瘍内診断から導出され得る、潜在的なモルフォロジーを含めた、具体的なリアルタイム情報を真に提供することができない。
【００６９】
ＰＳＡは、前立腺の管腔上皮細胞内で高レベルに発現され、他の組織内に存在しないか、非常に低いレベルで発現される。ＰＳＡ発現は、アンドロゲン反応性遺伝子制御エレメントを介してアンドロゲンによって増大し、前立腺がんの発生は、アンドロゲン、特にテストステロンによってとりわけ推進される。したがって、アンドロゲン生成組織の除去を含めた、アンドロゲンの効果に対抗する治療（すなわち、抗アンドロゲン治療）は、前立腺がんを処置するための魅力的なターゲットを代表する。伝統的な抗アンドロゲン治療剤は、アンドロゲン受容体に直接働いてアンドロゲンによる活性化を遮断する。
【００７０】
ＰＳＡは、前立腺がん用の完全な血清マーカーから遠い。これが、いくつかのより温和な容態に起因して血清中に存在し得るという事実は、偽陽性結果のリスクを有意に上昇させる。前立腺炎、感染、および良性前立腺肥大症（「ＢＰＨ」）はすべて、血清ＰＳＡのレベルを増大させ得る。言い換えれば、前立腺がんに対して実際に特異的である血清ＰＳＡの形態はまったくない。さらに、血清ＰＳＡレベルは、疾患および治療有効性と不完全に相関する。例えば、ＰＳＡレベルが処置の過程後に半減されるという事実は、体内の癌性細胞の数が半減されることと相関せず、それを示唆しない。血清中でＰＳＡを検出するアビリティーは、発現だけでなく、循環内への分泌およびリークも必要とし、これらは、十分に理解されていない２つのプロセスである。腫瘍生成ＰＳＡの非常に小さいパーセンテージのみが、血管周囲腔内に分泌され、血清循環への律速段階は未確定であるという事実から、追加の困難が生じる。
【００７１】
標準的な血清総ＰＳＡ試験も、早期腫瘍の大部分を検出するための感度および特異性を欠き、前立腺がん由来転移性腫瘍の検出に対して完全に不十分である。例えば、骨は、前立腺がんにおける転移拡散の最も一般的な部位であるが、ほとんどの検出技術（例えば、９９ｍＴｃ−ＭＤＰ、１８Ｆ−ＮａＦなどの核医学技術）は、転移性疾患を直接画像化するのではなく、むしろ近傍の正常な骨の修復を標的にするので、特徴付けるのがとりわけ難しい。したがって、既存の技術は、悪性疾患と非悪性疾患を区別することができない。さらに、抗アンドロゲン治療に対する応答は、効率的に評価することができず、その理由は、腫瘍誘導骨溶解の修復は、臨床反応を数カ月から数年遅らせ得るためである。
【００７２】
本発明の実施形態は、腫瘍結合または腫瘍内ｆＰＳＡを介したアンドロゲン受容体（「ＡＲ」）シグナル伝達の抗体ベース監視および定量化、ならびに治療用途（ａｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）のための腫瘍内ｆＰＳＡの抗体ベースターゲッティングに引き寄せられている。本明細書に開示の発明は、触媒クレフトＰＳＡに対して特異的な抗体および抗体ポリペプチドは、腫瘍結合および腫瘍内ｆＰＳＡを含めたｆＰＳＡに選択的に結合するという、かつ優先的に本明細書で最初に開示した意外な発見によって部分的に促進されている。触媒クレフト特異的抗体の、ｉｎ  ｓｉｔｕで腫瘍におけるｆＰＳＡに結合するアビリティーは、多数の診断用途および治療用途を可能にする。例えば、腫瘍結合ｆＰＳＡに定量的に結合する標識抗体は、ＰＳＡの血清レベルによって間接的にではなく、ｉｎ  ｓｉｔｕで抗アンドロゲン治療に対する応答を直接監視することができる。処置に成功すると、ＡＲシグナル伝達が低減し（例えば、受容体の活性化を遮断する医薬化合物によって）、それは、標識抗体のシグナルの検出可能な減少に反映され得る。本発明の実施形態は、アンドロゲン受容体を遮断し、またはアポトーシスを引き起こす任意の治療（例えば、化学療法）、およびＡＲレベルを直接または間接的に低減する任意の処置（すなわち、ｓｉＲＮＡ）に適用可能であることが当業者に明らかとなるであろう。
【００７３】
さらに、本明細書に開示の方法は、びまん性前立腺疾患、すなわち、前立腺由来がん細胞が体の他の臓器または組織に転移した転移性疾患を診断および処置するアビリティーを有する。上記に論じたように、転移性前立腺がんの検出、監視、および処置は、特に困難であることが判明している。転移リンパ節の外科的切除は、例えば、存在し得るがん性細胞のすべてを除去することにしばしば失敗し、再発の確率を大いに増大させる。さらに、骨転移の監視の現在の方法は、腫瘍を直接画像化するのではなく、近傍の正常な骨の修復を画像化し、ほとんどのスキャンは、悪性疾患と非悪性疾患（すなわち、骨再形成をもたらす他の疾患）を区別することができないことを意味するので、完全に不十分である。
【００７４】
血清中のＰＳＡは、大部分は血清プロテアーゼ阻害剤アルファ１−抗キモトリプシン（ＡＣＴ）に共有結合的にアタッチしており、複合体化ＰＳＡ（「ｃＰＳＡ」）と呼ばれる。かなり軽微な部分が非複合体化ｆＰＳＡとして存在する。しかし、はるかに大きい比率のｆＰＳＡが前立腺腫瘍にごく接近して、または腫瘍内にさえ結合していることが発見された。ｆＰＳＡは、異なる分子形態の活性および不活性ＰＳＡを含有する。本明細書で定義するｆＰＳＡのサブフォームには、ＢＰＳＡおよびｐｒｏ−ＰＳＡ（「ｐＰＳＡ」）が含まれる。ＢＰＳＡは、天然成熟ＰＳＡと同一であるが、Ｌｙｓ１８２およびＬｙｓ１４５で２つの内部ペプチド結合切断を有する。これは、前立腺の内側部分、または「転移ゾーン」内の結節性過形成に結合しており、一方、がんは一般に、外側部分、または「周辺ゾーン」内に発達する。ＢＰＳＡは、前立腺転移ゾーン内で増加させられ、病的ＢＰＨと結合している。ｐＰＳＡは、前立腺腫瘍自体に結合している。まとめると、これらの形態は、高度に疾患特異的なｆＰＳＡの個々の形態を代表する。
【００７５】
前立腺がんおよびびまん性疾患の評価および処置におけるｆＰＳＡの能力は、分子イメージングと併せて使用されるとき、特に明白である。腫瘍学における分子イメージングは、ヒト腫瘍生物学において基本的な重要分子および分子ベースイベントの非侵襲性イメージングである。これは、適切な治療経過、病期分類、再発、および治療に対する応答を示唆する検出、鑑別診断、腫瘍生物学検査に関する以前に入手不可能であった情報を提供することができる。核医学技法は特に、それ自体分子イメージングに役立つ。放射能検出器を介して、生体分子放射性トレーサーを使用して、腫瘍、がん性細胞、および分化正常組織のリアルタイム生化学を検出し、それによってヒトの腫瘍および組織についての定性的または定量的生化学的または機能的情報を提供することができる。
【００７６】
分子イメージングの進歩は、モノクローナル抗体技術の開発および改善によって促進されている。がん標的医薬品に関するこれらの認識された潜在性に加えて、モノクローナル抗体は、画像診断の疾患特異的造影剤として使用することができる。例えば、ポジトロン放出断層撮影（「ＰＥＴ」）カメラの高い感度および解像度をモノクローナル抗体の特異性と組み合わせることによって、免疫−ＰＥＴ、すなわち、ＰＥＴのモノクローナル抗体との組合せは、診断上の腫瘍特徴付けを改善するための魅力的な新規の選択肢である。しかし、本明細書に開示の概念は、いずれの単一のイメージング技術にも基づいていないことが察されるであろう。実際に、これは、ヒトの腫瘍および組織についての定性的または定量的生化学的または機能的情報を推測するためのほとんど任意のイメージングパラメータの使用に適合できる多彩な技術である。本開示が包含する分子イメージング法としては、γカメライメージング、単一光子放射型コンピュータ断層撮影、ポジトロン放出断層撮影、磁気共鳴分光法、磁気共鳴画像法、光学イメージング（巨視的スペクトルイメージング）、および超音波がある。
【００７７】
免疫−ＰＥＴは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの包括的な免疫組織化学的染色と等価であり、その目的のために、モノクローナル抗体は、ポジトロンエミッターで標識されて、ＰＥＴカメラでの可視化を可能にしなければならない。しかし、非腫瘍特異的、代謝的トレーサーの１８−フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（１８ＦＤＧ）が、すべてのＰＥＴイメージング手順の９０％超で現在使用されている、既存のＰＥＴトレーサーに加えて、新世代のモノクローナル抗体ベースイメージングプローブまたは新規放射性トレーサーの開発の必要性が残っている。
【００７８】
放射性トレーサーを慎重に操作して腫瘍において成功を収めることは難しいことが判明しており、診療所において新規放射性トレーサーの高い損耗率をもたらしている。放射性トレーサーの標的は、使用のその潜在的な状況を必然的に形づくり（すなわち、検出、応答インジケーター）、候補は、がんの上方制御を指摘する前臨床的証拠に基づいて選択されることが多い。この点において、標的上方制御の病理学的機構を完全に察知することなく、患者における新規放射性トレーサーを適切に評価することは難しい場合がある。
【００７９】
本発明の特定の実施形態は、前立腺特異的なアンドロゲン受容体制御遺伝子発現の変化、および得られる翻訳生成物を、腫瘍結合ｆＰＳＡに特異的な適切に標識された抗体に由来する新規放射性トレーサーを用いて非侵襲的に測定することができることを実証することによって、この点において成功を収めた。本明細書に開示の放射性トレーサーは、アンドロゲン受容体依存様式で前立腺がん細胞に対して高度に特異的であり、ｆＰＳＡ発現のアンドロゲン制御上昇を検出することができ、腫瘍内アンドロゲン受容体シグナル伝達を反映するこれらのアビリティーを実証する。当業者に公知のイメージング技術と併せて、本明細書に開示の新規放射性トレーサーは、アンドロゲン受容体の薬理学的阻害に応答したｆＰＳＡ合成の変化を介して、アンドロゲン受容体シグナル伝達のｉｎ  ｓｉｔｕでの定量化を可能にする。さらに、放射性トレーサーは、骨内の転移性前立腺がん腫瘍に対してユニークな特異性を有し、真の骨格前立腺がん病変と骨再形成を明確に区別することができる。
【００８０】
本発明の実施形態のアンドロゲン受容体シグナル伝達を監視および画像化するアビリティーは、広範囲の診断法で適用可能である。本発明の実施形態は、前立腺がん、ならびに前立腺がん細胞の転移（ｍｅｔａｓｔｉｓｉｓ）に関係する診断情報、ならびに予後情報および予兆情報を提供することができる。先述したように、腫瘍関連アンドロゲン受容体シグナル伝達を監視するアビリティーは、特に抗アンドロゲン処置が使用される場合、治療有効性の極めて正確な測定を促進する。この能力において、本発明の実施形態は、がん性細胞が、細胞をアンドロゲン受容体シグナル伝達に対して無応答性にする適応突然変異をいつ発生させたかを示唆することができる。さらに、本発明の実施形態を使用して、がんの病期を評価し、かつ／または処置の起こりそうな転帰に対する情報を提供することができる。本発明の実施形態は、治療の所与の過程が成功するかどうかを予測することもできる。例えば、ベースライン参照と比べたアンドロゲン受容体シグナル伝達のレベルの上昇は、抗アンドロゲン処置の特に積極的な過程を示唆し得る。
【００８１】
本明細書に開示の抗ｆＰＳＡ抗体および抗体ポリペプチドの腫瘍結合および腫瘍内特異性により、抗アンドロゲン処置および抗がん処置のｆＰＳＡを発現および／またはディスプレイする細胞への標的化が可能になることも察される。腫瘍結合ｆＰＳＡ抗体は、放射性元素、細胞傷害性核酸類似体、アポトーシス誘発因子、および細胞の特定の集団への正確な送達から利益を得ることができる現在公知の、または後に開発される潜在的に任意の治療とカップリングすることができる。血清中のＡＣＴによって遮断されるＰＳＡの触媒クレフトに単に結合することによって、本明細書に開示のｆＰＳＡ抗体および抗体ポリペプチドは、前立腺特異的腫瘍および前立腺がん細胞（例えば、前立腺がん由来転移性骨疾患）に治療を直接標的にするアビリティーを有する。いずれの特定の理論によっても束縛されることなく、ｆＰＳＡは、タンパク質分解的に活性な内在性膜タンパク質として一過性に存在し、次いで、触媒クレフト特異的抗体による認識を妨げる細胞外結合タンパク質（例えば、ＡＣＴ）によって隔離される前に、細胞周囲空間内に一過性に存在すると考えられる。
【００８２】
本発明の実施形態および本明細書に開示の方法は、ｆＰＳＡ、特に腫瘍結合ｆＰＳＡに特異的に結合することができる、現在公知の、または後に発見される任意の抗体を含むことができる。上述したように、本発明は、ｆＰＳＡに特異的に結合することができる抗体断片および抗体の特徴的な部分（例えば、５Ａ１０）も包含する。選択された抗体および抗体断片は、個々に、または組合せで使用することができる。組合せで使用する場合、選択された抗体および抗体断片は、同時に、または順次使用することができる。本発明の抗体および抗体断片は、投与後およそ約１２〜４８時間の間に、特定の実施形態では、投与後２０〜３０以内にピーク腫瘍結合を示す。具体的な実施形態では、ピーク腫瘍結合活性は、投与後およそ約２４時間に観察される。
【００８３】
本発明のいくつかの実施形態は、ＰＳＡが複合体化していない（例えば、ＡＣＴまたは他のタンパク質によって結合されていない）ときアクセス可能であるだけであるＰＳＡエピトープに特異的に結合することができるモノクローナルおよびポリクローナル抗体（またはその特徴的な断片）を利用する。本発明の実施形態で使用するための抗体は、任意の種、例えば、ヒト、マウス、ウサギなどに由来し得る。上述したように、触媒クレフト内、またはその近傍（例えば、それに隣接する）エピトープのアクセシビリティは、ｆＰＳＡ（特に、腫瘍内または細胞結合ｆＰＳＡ）と血清ＰＳＡとの間の重要な際立った特徴の通りである。本発明のいくつかの実施形態では、エピトープは、触媒クレフト内にある。本発明のいくつかの実施形態では、エピトープは、触媒クレフトに隣接する。本発明の実施形態で使用するための１つのこのような抗体は、５Ａ１０、すなわち、ｆＰＳＡの触媒クレフトに隣接するエピトープを特異的に認識するマウスモノクローナル抗体である。５Ａ１０は、精漿ＰＳＡに対して産生された。そのエピトープは、ＡＣＴと複合体化したほとんどアクセスできないＰＳＡである。例えば、Ｌｉｌｊａ，  Ｈ．ら、Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｍ．、１９９１年、３７巻：１６１８〜１６２５頁を参照。本発明のいくつかの実施形態では、抗体は４Ｇ１０である。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本発明で使用するための抗体は、いわゆるカリクレインループの一部を形成するｆＰＳＡ中のアミノ酸８０〜９１を含む線状エピトープに結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、ｆＰＳＡ配列ＳＷＧＳＥＰＣ（ＰＳＡ中のアミノ酸２０４〜２１０）に結合する。このＳＷＧ部位は、ｆＰＳＡに対して特異的なＭＡｂのエピトープの一部を形成する。アミノ酸２０４〜２０７（ＳＷＧＳ）は、グルーブの反対側上の領域８０〜９１と逆のＰＳＡの活性部位残基を含有するグルーブのエッジを形成する。いくつかの実施形態では、抗体は、アミノ酸２０４〜２０７に隣接して位置したｆＰＳＡ配列ＨＰＱＫＶ（ＰＳＡ中のアミノ酸１６４〜１６８）に結合し、ｆＰＳＡに対して特異的なモノクローナル抗体のエピトープの一部を形成することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、ｆＰＳＡ中のアミノ酸１６４〜１６８の領域内で結合する。特定の実施形態では、アミノ酸１６４〜１６８の領域内で結合する抗体は、５Ａ１０である。いくつかの実施形態では、抗体は、ｆＰＳＡの３つの異なるコンフォメーションループ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｌｏｏｐ）、すなわち、アミノ酸８０〜９１、１６４〜１６８、および２０４〜２０７の少なくとも１つ上の残基に特異的に結合する。Ｌｅｉｎｏｎｅｎ，  Ｊ．ら、Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｍ．、２００２年、４８巻（１２号）：２２０８〜２２１６頁を参照。
【００８５】
追加のｆＰＳＡ−特異的抗体を開発することは、以下で直ちに論じる公開されたＰＳＡエピトープ特徴付け／構造分析および方法に基づいて、当業者の能力の範囲内である。例示的なＰＳＡエピトープ特徴付けは、Ｌｉｌｊａ，  Ｈ．ら、Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｍ．、１９９１年、３７巻：１６１８〜１６２５頁；Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ，  Ｋ．ら、Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｍ．、１９９５年、４１巻：１４８０〜１４８８頁；Ｐｉｉｒｏｎｅｎ，  Ｔ．、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．、１９９８年、７巻：２５９〜２６９頁；およびＭｅｎｅｚ，  Ｒ．、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２００８年、３７６巻（４号）：１０２１〜１０３３頁；Ｌｅｉｎｏｎｅｎ，  Ｊ．ら、Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｍ．、２００２年、４８巻（１２号）：２２０８〜２２１６頁、およびＶｉｌｌｏｕｔｒｅｉｘ  Ｂ．Ｏ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．、１９９４年、３巻：２０３３〜２０４４頁に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
ヒト化抗体およびベニヤ化抗体
【００８６】
本発明の実施形態で使用するためのモノクローナル抗体は、当業者に周知の慣例的な手段によって開発することができる。しかし、ハイブリドーマ技術は、一例である。例えば、Ｇ．  ＫｏｈｌｅｒおよびＣ．  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、１９７５年、２５６巻：４９５〜４９７頁を参照。モノクローナル抗体、およびこれらを生成する細胞系を生成するためのプロトコールは、当技術分野で周知である。例えば、Ｇｅｒｈａｒｄら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、１９７８年、７５巻：１５１０頁；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｒ．  Ｋｅｎｎｅｔｔ、Ｔ．  ＭｃＫｅａｒｎ，  ＆  Ｋ．  Ｂｅｃｈｔｏｌ編、１９８０年）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ（Ｇ．  Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ、Ｕ．  Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，  ＆  Ｊ．  Ｋｅａｒｎｅｙ編、１９８１年）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、１９８２年、７９巻：６６５１頁；Ｊｏｎａｋら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９８３年、２巻：１２４頁；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓ（Ｒ．  Ｋｅｎｎｅｔｔ、Ｋ．  Ｂｅｃｈｔｏｌ，  ＆  Ｔ．  ＭｃＫｅａｒｎ編、１９８３年）；およびＳｈｕｌｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８２年、２７６巻：２６９〜２７０頁を参照。
【００８７】
ある特定の実施形態では、特に治療目的で抗ｆＰＳＡ抗体を使用する場合、ヒト化抗体またはベニヤ抗体を使用していずれの潜在的な免疫原性反応も低減することができる。一般に、ヒト化抗体またはベニヤ抗体は、ヒトレシピエントにおける非ヒト抗体の治療用途の継続時間および有効性を制限する望まれない免疫応答を最小限にする。
【００８８】
非ヒト抗体に由来する抗原結合部分を含むヒト化抗体を調製するためのいくつかの方法が、当技術分野で記載されている。特に、げっ歯類可変領域、およびヒト定常ドメインに融合したこれらの関連した相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する抗体が記載されている（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９１年、３４９巻：２９３頁；Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、１９８９年、８６巻：４２２０頁；Ｓｈａｗら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８７年、１３８巻：４５３４頁；およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１９８７年、４７巻：３５７７頁を参照）。適切なヒト抗体定常ドメインと融合する前に、ヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）内に移植されたげっ歯類ＣＤＲ（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８８年、３３２巻：３２３頁；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８８年、２３９巻：１５３４頁；およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８６年、３２１巻：５２２頁を参照）、および組換えでベニヤ化されたげっ歯類ＦＲによって支持されたげっ歯類ＣＤＲも記載されている（例えば、ＥＰＯ特許公開第５１９，５９６号を参照）。
【００８９】
完全ヒト抗体は、ヒト患者の治療処置にとって特に望ましい。このような抗体は、内在性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができないが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して生成することができる（例えば、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９５年、１３巻：６５〜９３頁、ならびに米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；および同第５，６６１，０１６号を参照）。
【００９０】
完全ヒト抗体またはこれらの抗原結合断片は、ヒト抗体ライブラリーから同定および単離することもできる。例えば、理論的な多様なヒト抗体（１０１２の異なる抗体）、またはこれらの物理的に実現可能なサブポーションを包含するポリヌクレオチドライブラリーの発現産物は、触媒クレフトの全体および／または抗原部分を用いてスクリーニングして、新規の相互作用する抗体または断片を同定することができる。例示的なライブラリーとしては、免疫された個体からのファージディスプレイライブラリー（例えば、Ｂａｒｂａｓら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、１９９３年、２３０巻：８１２〜８２３頁を参照）、生殖系列配列のライブラリー（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１９９４年、１３巻：３２４５〜３２６０頁）、またはナイーブＢ細胞レパートリー（Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１９９６年、１４巻：３０９〜３１４頁）がある。特定の実施形態では、前立腺がんを罹患しているドナーに由来するライブラリーを使用することができる。このようなライブラリーでは、ＰＳＡ抗原を刺激すると、Ｂ細胞内のｍＲＮＡ産生が増大し、それは、ＰＳＡ結合しやすい重鎖および軽鎖可変遺伝子の単離に寄与する。
【００９１】
生殖系列抗体遺伝子セグメント（ＶＨ、ＤＨ、およびＪＨ、またはＶκ／λ、およびＪκ／λ）が、完全なＶＨ鎖およびＶＬ鎖をコードする遺伝子を再構成するように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでクローン化およびコンビナトリアルに配列された合成ライブラリー（例えば、Ｗｉｎｔｅｒ、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９８年、４３０巻：９２〜９４頁）も使用することができる。例えば、ｄｅ  Ｋｒｕｉｆら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、１９９５年、２４８巻：９７〜１０５頁；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１９９４年、１３巻：３２４５〜３２６０頁；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、１９９２年、２２７巻：３８１〜３８８頁；およびＮｉｓｓｉｍら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１９９４年、１３巻：６９２〜６９８頁を参照。足場として１つまたは複数の抗体フレームワークを選択し、ＣＤＲループ内の配列をランダム化することによって生成される半合成ライブラリーも使用することができる。特定の（Ｐａｒｔｉｃｌａｒ）ライブラリーは、重鎖および／または軽鎖の完全または部分的にランダム化されたＣＤＲ３超可変領域を有することができる（例えば、Ｈｕｌｓら、Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１９９９年、１７巻：２７６〜２８１頁；Ｋｎａｐｐｉｋら（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２０００年、２９６巻：５７〜８６頁を参照）。一般に、Ｆｕｈ，  Ｇ．  Ｅｘｐｅｒｔ．  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．、２００７年、７巻（１号）：７３〜８７頁；Ｋｉｍら、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌｓ、２００５年、２０巻（１号）：１７〜２９頁を参照。ファージ、酵母、Ｅ．ｃｏｌｉ、およびリボソームディスプレイ技術を、ライブラリースクリーニングに使用することができる。
【００９２】
抗ｆＰＳＡ抗体のベニヤ化バージョンも、本発明の方法において使用することができる。ベニヤリングのプロセスでは、天然ＦＲタンパク質折り畳み構造の実質的にすべてを保持する抗原結合部分を含む抗体を提供するために、例えば、マウス重鎖または軽鎖可変領域に由来するＲＦ残基をヒトＦＲ残基と選択的に置き換える。ベニヤリング技法は、抗原結合特性が、抗原会合表面内の重鎖および軽鎖ＣＤＲセットの構造および相対的配置によって主に決定されるという理解に基づく（例えば、Ｄａｖｉｅｓら、Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９９０年、５９巻：４３９頁を参照）。したがって、抗原会合特異性は、ＣＤＲ構造、互いのこれらの相互作用、および可変領域ドメインの残りとのこれらの相互作用が、慎重に維持される場合のみ、ヒト化抗体内で保存され得る。ベニヤリング技法を使用することによって、免疫系が容易に遭遇する外部（例えば、溶媒アクセス可能な）ＦＲ残基が、ヒト残基と選択的に置き換えられて、弱免疫原性、または実質的に非免疫原性のベニヤ化表面を含むハイブリッド分子がもたらされる。
診断用途
【００９３】
いくつかの実施形態では、提供される抗体は、診断用途に使用される。本明細書に開示の抗体の腫瘍結合ｆＰＳＡ特異性によって、診断アッセイを使用して、血清ＰＳＡによる間接的とは対照的に、腫瘍の実際の位置で、ｉｎ  ｓｉｔｕでのアンドロゲン受容体シグナル伝達に対する様々な治療の効果を監視することができる。例えば、ＰＳＡ遺伝子産物の生成は、アンドロゲン受容体（「ＡＲ」）によって正に制御される。ＡＲは、細胞質内の男性ホルモンの結合によって活性化される核内受容体である。活性化ＡＲは、核内に場所を移し、そこでこれらは、標的遺伝子の制御領域内のアンドロゲン応答エレメントに結合することができる。したがって、アンドロゲンレベルまたはＡＲ活性化を遮断または低減する前立腺がん処置は、ｆＰＳＡなどのアンドロゲン制御遺伝子産物の対応する減少に反映される。本発明者らのいくつかの実施形態では、ｉｎ  ｓｉｔｕでこの効果を監視する。
【００９４】
診断用途も、例えば、肝臓、リンパ節、または骨における転移性前立腺がん疾患の存在または非存在を検出することができてもよい。一般に、本明細書に提供されるｆＰＳＡ特異的抗体を、任意の前立腺がん関連処置（例えば、抗アンドロゲン処置）の前、間、または後に投与して、被験体特異的なベースライン、または患者の集団に由来するベースラインと比べた、アンドロゲン受容体シグナル伝達に対する処置の効果を評価することができる。特定の実施形態では、集団由来ベースラインは、前立腺がんを罹患していない患者または被験体の群におけるｆＰＳＡ発現または活性のアンドロゲン受容体シグナル伝達レベルの平均値または中央値を含むことができる。
【００９５】
ある特定の実施形態では、結合は、以下のセクションで論じる、提供される抗体に検出用実体を付加することによって検出することができる。ある特定の実施形態では、本発明の検出技法は、陰性対照を含むことになり、それにより、対照試料（例えば、正常な非がん性組織からの）に試験を適用することができ、その結果、それによって得られるシグナルを、試験される試料から得られるシグナルと比較することができる。
【００９６】
本発明の実施形態で使用するための特定の診断技法としては、それだけに限らないが、酵素結合免疫吸着アッセイ（「ＥＬＩＳＡ」）、ポジトロン放出断層撮影、ウエスタンブロッティング、免疫組織化学検査、および磁気（ｍａｇｅｎｅｔｉｃ）共鳴画像法がある。
検出用実体
【００９７】
いくつかの実施形態では、抗ｆＰＳＡ特異的抗体は、検出用途のために、およびこれとともに使用される。本明細書に記載の提供される抗体に加えて、少なくとも１つの検出用実体を含む、本明細書に記載の多機能性剤を使用することができる。
【００９８】
検出用実体は、対象とする組織、例えば、前立腺がん細胞または骨内でｆＰＳＡに結合した後、ｆＰＳＡ抗体または抗体ポリペプチドの検出を可能にする任意の実体とすることができる。多種多様な検出可能な剤のいずれも、提供される抗体の多機能抗体薬中の検出用実体（例えば、標識化部分）として使用することができる。検出用実体は、直接的に検出可能であっても、間接的に検出可能であってもよい。検出用実体の例としては、それだけに限らないが、様々なリガンド、放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１８Ｆ、１９Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、１３５Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、６４Ｃｕ、１８７Ｒｅ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒなど）、蛍光色素（具体的な例示的蛍光色素については、以下を参照）、化学発光剤（例えば、アクリジニウムエステル、安定化ジオキセタンなど）、生物発光剤、スペクトル的に分解可能な無機蛍光半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金など）、ナノクラスター、常磁性金属イオン、酵素（酵素の具体例については、以下を参照）、比色標識（例えば、色素、コロイド金など）、ビオチン、ジオキシゲニン、ハプテン、および抗血清またはモノクローナル抗体が利用可能であるタンパク質がある。
【００９９】
ある特定の実施形態では、検出用実体は、蛍光標識を含む。多種多様な化学構造および物理的特性の多数の公知の蛍光標識部分が本発明で使用するのに適している。適当な蛍光色素としては、それだけに限らないが、フルオレセインおよびフルオレセイン色素（例えば、フルオレセインイソチオシアニンまたはＦＩＴＣ、ナフトフルオレセイン、４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン、βカルボキシフルオレセインまたはＦＡＭなど）、カルボシアニン、メロシアニン、スチリル色素、オキソノール色素、フィコエリトリン、エリトロシン、エオシン、ローダミン色素（例えば、カルボキシテトラメチル−ローダミンまたはＴＡＭＲＡ、カルボキシローダミン６Ｇ、カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、リサミンローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミングリーン、ローダミンレッド、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）など）、クマリンおよびクマリン色素（例えば、メトキシクマリン、ジアルキルアミノクマリン、ヒドロキシクマリン、アミノメチルクマリン（ＡＭＣＡ）など）、オレゴングリーン色素（例えば、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４など）、テキサスレッド、テキサスレッド−Ｘ、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｒｅｄ（商標）、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｇｒｅｅｎ（商標）、シアニン色素（例えば、Ｃｙ−３（商標）、Ｃｙ−５（商標）、Ｃｙ−３．５（商標）、Ｃｙ−５．５（商標）など）、アレキサフルオル色素（例えば、アレキサフルオル３５０、アレキサフルオル４８８、アレキサフルオル５３２、アレキサフルオル５４６、アレキサフルオル５６８、アレキサフルオル５９４、アレキサフルオル６３３、アレキサフルオル６６０、アレキサフルオル６８０など）、ＢＯＤＩＰＹ色素（例えば、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ  Ｒ６Ｇ、ＢＯＤＩＰＹ  ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ  ＴＲ、ＢＯＤＩＰＹ５３０／５５０、ＢＯＤＩＰＹ５５８／５６８、ＢＯＤＩＰＹ５６４／５７０、ＢＯＤＩＰＹ５７６／５８９、ＢＯＤＩＰＹ５８１／５９１、ＢＯＤＩＰＹ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ６５０／６６５など）、ＩＲＤｙｅｓ（例えば、ＩＲＤ４０、ＩＲＤ７００、ＩＲＤ８００など）などがある。適当な蛍光色素、ならびにタンパク質およびペプチドなどの他の化学実体に蛍光色素をカップリングするための方法のさらなる例については、例えば、「Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ」、９１１１版、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲを参照。
【０１００】
蛍光標識剤の好都合な性質としては、高モル吸収係数、高蛍光量子収率、および光安定性がある。ある特定の実施形態では、標識フルオロフォアは望ましくは、スペクトルの紫外範囲（すなわち、４００ｎｍ未満）ではなく、可視（すなわち、４００〜７５０ｎｍの間）で吸収波長および発光波長を呈することが望ましい。
【０１０１】
ある特定の実施形態では、検出用実体は、酵素を含む。適当な酵素の例としては、それだけに限らないが、ＥＬＩＳＡで使用されるもの、例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼなどがある。他の例には、β−グルクロニダーゼ、β−Ｄ−グルコシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼなどが含まれる。酵素は、リンカー基、例えば、カルボジイミド、ジイソシアネート、グルタルアルデヒドなどを使用して、ターゲッティング用実体（例えば、クロロトキシン部分）にコンジュゲートすることができる。適当なリンカーのより詳細な説明は、本明細書の他で提供する。
【０１０２】
ある特定の実施形態では、検出用実体は、単一光子放出型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）またはポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）によって検出可能である放射性同位体を含む。ＰＥＴの高分解能で定量的なイメージングは、本発明のある特定の実施形態に特に適している。このような放射性核種の例としては、それだけに限らないが、ジルコニウム−８９（８９Ｚｒ）、ヨウ素−１２４（１２４Ｉ）、ヨウ素−１３１（１３１Ｉ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、ビスマス−２１２（２１２Ｂｉ）、ビスマス−２１３（２１３Ｂｉ）、アスタチン−２２１（２１１Ａｔ）、銅−６７（６７Ｃｕ）、銅−６４（６４Ｃｕ）、レニウム−１８６（１８６Ｒｅ）、レニウム−１８６（１８８Ｒｅ）、リン−３２（３２Ｐ）、サマリウム−１５３（１５３Ｓｍ）、ルテチウム−１７７（１１７Ｌｕ）、テクネチウム−９９ｍ（９９ｍＴｃ）、ガリウム−６７（６７Ｇａ）、インジウム−１１１（１１１Ｉｎ）、およびタリウム−２０１（２０１Ｔｌ）がある。８９Ｚｒ−標識モノクローナル抗体の生成および使用のための特定の手順は、本明細書に参照により組み込まれている、Ｖｅｒｅｌ，  Ｉ．ら、「８９Ｚｒ−  Ｉｍｍｕｎｏ−ＰＥＴ：  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ８９Ｚｒ−Ｌａｂｅｌｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．、２００３年；４４巻：１２７１〜１２８１頁に開示されている。
【０１０３】
ある特定の実施形態では、標識部分は、ガンマカメラによって検出可能な放射性同位体を含む。このような放射性同位体の例としては、それだけに限らないが、ヨウ素−１３１（１３１Ｉ）、およびテクネチウム−９９ｍ（９９ｍＴｃ）がある。
【０１０４】
ある特定の実施形態では、検出用実体は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）において良好なコントラストエンハンサーである常磁性金属イオンを含む。このような常磁性金属イオンの例としては、それだけに限らないが、ガドリニウムＩＩＩ（Ｇｄ３＋）、クロムＩＩＩ（Ｃｒ３＋）、ジスプロシウムＩＩＩ（Ｄｙ３＋）、鉄ＩＩＩ（Ｆｅ３＋）、マンガンＩＩ（Ｍｎ２＋）、およびイッテルビウムＩＩＩ（Ｙｂ３＋）がある。ある特定の実施形態では、検出用実体は、ガドリニウムＩＩＩ（Ｇｄ３＋）を含む。ガドリニウムは、ＭＲＩ用にＦＤＡに認可された造影剤であり、これは、異常な組織内に蓄積し、磁気共鳴画像上でこれらの異常な範囲を非常に明るく（強調）させる。ガドリニウムは、体の異なる範囲、特に、脳内の正常組織と異常組織との間の大きいコントラストをもたらすことが公知である。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、標識部分は、核磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）によって検出可能な、安定な常磁性同位体を含む。適当な安定な常磁性同位体の例としては、それだけに限らないが、炭素−１３（１３Ｃ）およびフッ素−１９（１９Ｆ）がある。
医薬組成物
【０１０６】
本発明は、１種または複数の提供される抗体、これらの断片または特徴的な部分を含む組成物も提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、少なくとも１種の抗体、および少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を提供する。このような医薬組成物は、１種または複数の追加の治療的または生物学的に活性な物質を任意選択により含み、かつ／またはこれらと併用して投与することができる。いくつかの実施形態では、医学、または薬剤の製造において有用な医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、前立腺がんおよびその転移の処置または防止において、予防剤（すなわち、ワクチン）として有用である。いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、例えば、アンドロゲン受容体シグナル伝達を遮断する細胞毒性薬または化合物を特異的に標的にすることができるビヒクルとして、例えば、前立腺がんを罹患している個体における治療用途に有用である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、診断用途および治療用途において同時に有用である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ヒトに投与するために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に定義される抗がん剤と組み合わせた、またはこれにコンジュゲートした抗ｆＰＳＡ抗体を含む。
【０１０７】
例えば、医薬組成物は、滅菌注射用形態（例えば、皮下注射または静脈内注入に適した形態）で提供することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、注射に適した液体剤形で提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、任意選択により真空下で粉末（例えば、凍結乾燥および／または滅菌された）として提供され、これらは、注射の前に水性希釈剤（例えば、水、緩衝液、塩溶液など）で再構成される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、水、塩化ナトリウム溶液、酢酸ナトリウム溶液、ベンジルアルコール溶液、リン酸緩衝食塩水などで希釈および／または再構成される。いくつかの実施形態では、粉末は、水性希釈剤で穏やかに混合されるべきである（例えば、振盪されない）。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、１種または複数の薬学的に許容される賦形剤（例えば、防腐剤、不活性希釈剤、分散剤、表面活性剤、および／または乳化剤、緩衝剤など）を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１種または複数の防腐剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、防腐剤をまったく含まない。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、冷蔵および／または凍結することができる形態で提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、冷蔵および／または凍結することができない形態で提供される。いくつかの実施形態では、再構成された溶液および／または液体剤形は、再構成後のある特定の時間（例えば、２時間、１２時間、２４時間、２日、５日、７日、１０日、２週間、１カ月、２カ月、またはそれ以上）貯蔵することができる。いくつかの実施形態では、指定時間より長く抗体組成物を貯蔵すると、抗体が分解する。
【０１１０】
液体剤形および／または再構成された溶液は、投与する前に粒子状物質および／または変色を含む場合がある。いくつかの実施形態では、溶液は、変色し、もしくは曇っている場合、および／または濾過後に粒子状物質が残る場合、使用されるべきでない。
【０１１１】
本明細書に記載の医薬組成物は、薬理の技術分野で公知の、または今後開発される任意の方法によって調製することができる。いくつかの実施形態では、このような調製方法は、活性成分を、１種または複数の賦形剤および／または１種または複数の他の副成分と会合させるステップと、次いで、必要であり、かつ／または望ましい場合、所望の単回または複数回用量ユニット内に生成物を成形および／または包装するステップとを含む。
【０１１２】
本発明による医薬組成物は、バルクで、１つの単回単位用量として、かつ／または複数の単回単位用量として調製、包装、および／または販売することができる。本明細書において、「単位用量」は、所定の量の活性成分、例えば、抗ｆＰＳＡ抗体および抗アンドロゲン治療薬を含む医薬組成物の別個の量である。活性成分の量は一般に、被験体に投与される用量および／またはこのような用量の好都合な画分、例えば、このような用量の１／２または１／３などに等しい。
【０１１３】
本発明による医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容される賦形剤、および／または任意の追加成分の相対量は、治療される被験体の素性、サイズ、および／もしくは容態に応じて、かつ／または組成物が投与される経路に応じて変化し得る。例として、組成物は、０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の間の活性成分を含むことができる。
【０１１４】
本発明の医薬組成物は、望まれる特定の剤形に適している場合、本明細書において、溶媒、分散媒質、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散助剤もしくは懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、防腐剤、固体バインダー、滑剤などであり得、またはこれらを含むことができる、薬学的に許容される賦形剤をさらに含むことができる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’  ｓ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ａ．  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ、（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、２００６年）には、医薬組成物の製剤化に使用される様々な賦形剤、およびこれらを調製するための公知の技法が開示されている。任意の慣例的な賦形剤媒体が、任意の望ましくない生物学的効果を生じること、または医薬組成物の任意の他のコンポーネント（複数可）と有害な様式で他に相互作用することなどによって、１つの物質またはその誘導体と不適合である場合を除いて、その使用は、本発明の範囲内であることが企図されている。
一般のコンジュゲート
【０１１５】
本明細書に記載の多機能性剤は、それぞれが少なくとも１つの機能を有する複数の実体を含む（例えば、化学療法剤にコンジュゲートしたｆＰＳＡの触媒クレフト内またはその付近のエピトープに対して特異的なモノクローナル抗体）。企図された多機能性剤のある特定の実施形態は、ターゲッティング用実体、ならびに以下の実体、すなわち、検出用実体、治療用実体、および診断用実体の少なくとも１種を含む。いくつかの実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体を含む多機能性剤は、ターゲッティング用実体および治療用実体を含有するが、検出用実体を含有しない。いくつかの実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体を含む多機能性剤は、ターゲッティング用実体および検出用実体を含有するが、治療用実体を含有しない。いくつかの実施形態では、本発明の多機能性剤は、ターゲッティング用実体、治療用実体、および検出用実体を含有する。いくつかの実施形態では、一作用物質の実体は、互いにコンジュゲートすることができる。多機能性剤を形成するための様々な実体のコンジュゲーションは、コンジュゲーションの特定のモードに制限されない。例えば、２つの実体は、互いに直接的に、共有結合的にコンジュゲートすることができる。あるいは、２つの実体は、リンカー実体を介してなど、互いに間接的にコンジュゲートすることができる。いくつかの実施形態では、多機能性剤は、作用物質内で異なるタイプのコンジュゲーションを含むことができ、その結果、作用物質のいくつかの実体は、直接的なコンジュゲーションを介してコンジュゲートされ、一方、作用物質の他の実体は、１種または複数のリンカーを介して間接的にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、本発明の多機能性剤は、単一タイプのリンカー実体を含む。他の実施形態では、本発明の多機能性剤は、１つを超えるタイプのリンカー実体を含む。いくつかの実施形態では、多機能性剤は、単一タイプであるが、様々な長さのリンカー実体を含む。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、多機能性剤に含有される実体間またはこれらの中で共有結合性会合がある。当業者が察することになるように、部分は、直接または間接的に（例えば、以下に記載されるリンカーによって）互いにアタッチされ得る。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、多機能性剤の１つの実体（ターゲッティング用実体など）および第２実体が互いに直接的に、共有結合的に連結されている場合、このような直接的な共有結合性コンジュゲーションは、連結（例えば、リンカーまたは連結実体）、例えば、アミド、エステル、炭素−炭素、ジスルフィド、カルバメート、エーテル、チオエーテル、尿素、アミン、またはカーボネート連結などによるものであり得る。共有結合性コンジュゲーションは、多機能性剤の第１実体および／または第２実体上に存在する官能基を利用することによって実現することができる。あるいは、非重要アミノ酸を、連結目的で有用な基（アミノ、カルボキシ、またはスルフヒドリルなど）を導入することになる別のアミノ酸によって置き換えることができる。あるいは、追加のアミノ酸を、多機能性剤の実体の少なくとも１つに付加して、カップリング目的で有用な基（アミノ、カルボキシ、またはスルフヒドリルなど）を導入することができる。部分を一緒にアタッチするのに使用され得る適当な官能基としては、それだけに限らないが、アミン、無水物、ヒドロキシル基、カルボキシ基、チオールなどがある。カルボジイミドなどの活性化剤を使用して直接的な連結を形成することができる。多種多様な活性化剤が当技術分野で公知であり、１つの実体を第２実体にコンジュゲートするのに適している。
【０１１８】
他の実施形態では、本発明が採用する多機能性剤の実体は、リンカー基を介して互いに間接的に、共有結合的に連結される。このようなリンカー基は、リンカーまたは連結実体と呼ばれる場合もある。これは、ホモ機能性剤およびヘテロ機能性剤を含めた、当技術分野で周知である任意の数の安定な二機能性剤を使用することによって達成され得る（このような剤の例については、例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋを参照）。二機能性リンカーの使用は、活性化剤の使用と、前者が得られるコンジュゲート（作用物質）中に存在する連結部分をもたらし、一方、後者が反応に関与する２つの部分間の直接的なカップリングをもたらす点で異なる。二機能性リンカーの役割は、このリンカーがなければ不活性な２つの部分間で反応させることであり得る。代替としてまたは追加的に、反応生成物の一部となる二機能性リンカーは、これが抗ｆＰＳＡ抗体にある程度の立体構造的な柔軟性を付与するように選択することができる（例えば、二機能性リンカーは、いくつかの原子を含有するまっすぐなアルキル鎖、例えば、２〜１０の間の炭素原子を含有するまっすぐなアルキル鎖を含む）。代替としてまたは追加的に、二機能性リンカーは、提供される抗体と治療剤との間に形成される連結が、切断可能である、例えば、加水分解性であるように選択することができる（このようなリンカーの例については、例えば、そのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，７７３，００１号、同第５，７３９，１１６号、および同第５，８７７，２９６号を参照）。このようなリンカーは、例えば、ターゲッティング剤（例えば、提供されるｆＰＳＡ特異的抗体）などのある特定の実体および／または治療用実体のより高い活性が、コンジュゲートの加水分解後に観察される場合、使用することができる。実体が多機能性剤から切断され得る例示的な機構としては、リソソーム（ヒドラゾン、アセタール、およびｃｉｓ−アコニテート様アミド）の酸性ｐＨ中での加水分解、リソソーム酵素（カテプシン（ｃａｐｔｈｅｐｓｉｎｓ）および他のリソソーム酵素）によるペプチド切断、およびジスルフィドの還元がある。このような実体が多機能性剤から切断される別の機構には、細胞外または細胞内での生理的ｐＨでの加水分解が含まれる。この機構は、１つの実体を別の実体にカップリングするのに使用される架橋剤が、ポリデキストランなどの生分解性／生体内分解性コンポーネントであるとき当てはまる。
【０１１９】
例えば、ヒドラゾン含有多機能性剤は、所望の放出特性をもたらすカルボニル基を導入して作製することができる。多機能性剤は、一端にジスルフィド基および他端にヒドラジン誘導体を有するアルキル鎖を含むリンカーを用いて作製することもできる。ヒドラゾン以外の官能基を含有するリンカーも、リソソーム酸性環境中で切断される潜在性を有する。例えば、多機能性剤は、細胞内で切断可能なヒドラゾン以外の基、例えば、エステル、アミド、およびアセタール／ケタールなどを含有するチオール反応性リンカーから作製することができる。
【０１２０】
ｐＨ感受性リンカーのクラスの別の例は、アミド基に並置されたカルボン酸基を有するシス−アコニテートである。カルボン酸は、酸性リソソーム中でアミド加水分解を加速する。いくつかの他のタイプの構造で同様のタイプの加水分解速度加速を実現するリンカーも使用することができる。
【０１２１】
抗ｆＰＳＡ抗体のコンジュゲートに対する別の潜在的な放出法は、リソソーム酵素によるペプチドの酵素加水分解である。一例では、提供される抗体がアミド結合を介してパラ−アミノベンジルアルコールにアタッチされ、次いでベンジルアルコールと治療剤との間でカルバメートまたはカーボネートが作製される。ペプチドが切断されると、アミノベンジルカルバメートまたはカーボネートが崩壊し、治療剤が放出される。別の例では、カルバメートの代わりにリンカーの崩壊によってフェノールを切断することができる。別のバリエーションでは、パラ−メルカプトベンジルカルバメートまたはカーボネートの崩壊を開始するために、ジスルフィド還元が使用される。
【０１２２】
本明細書に提供される多機能性剤の連結実体として使用することができる有用なリンカーとしては、限定することなく、ポリエチレングリコール、エチレングリコールのコポリマー、ポリプロピレングリコール、プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸、デキストランｎ−ビニルピロリドン、ポリｎ−ビニルピロリドン、プロピレングリコールホモポリマー、プロピレンオキシドポリマー、エチレンオキシドポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、直鎖状または分枝状グリコシル化鎖、ポリアセタール、長鎖脂肪酸、長鎖疎水性脂肪族基がある。
【０１２３】
本発明のいくつかの実施形態は、少なくとも１つの非共有結合的に会合した実体を含む多機能性剤を利用する。非共有結合性相互作用の例としては、それだけに限らないが、疎水性相互作用、静電相互作用、双極子相互作用、ファンデルワールス相互作用、および水素結合がある。結合、相互作用、またはカップリングの性質に関係なく、第１実体と第２実体との間の会合は、いくつかの実施形態では、選択的、特異的で、十分強く、その結果、作用物質内に含有される第２実体は、標的への、かつ標的内への輸送／送達の前または間に第１実体から解離しない。したがって、多機能性剤の複数の実体の中の会合は、当業者に公知の任意の化学的、生化学的、酵素的、または遺伝的カップリングを使用して実現することができる。
治療用コンジュゲート
【０１２４】
本明細書に記載するように、抗ｆＰＳＡ抗体は、前立腺がんに関する治療的有用性を有する多機能性剤の一部を含むことができる。本開示の脈絡における治療的有用性の例としては、限定することなく、ターゲッティングに関連した有用性（例えば、ｆＰＳＡ特異的モノクローナル抗体）、治療効果（例えば、細胞傷害効果、および／または細胞静止作用、抗増殖作用、抗血管新生効果、症状の低減など）に関連した有用性、ならびに診断、検出、または標識に関連する有用性などがある。
【０１２５】
ターゲッティング用実体は、対象とする標的と特異的に相互作用することによって作用部位に影響し、もしくは作用部位をコントロールし、または対象とする標的に対する親和性を有する作用物質内に含有され得る分子構造体である。一例として、標的は、細胞表面、例えば、ある特定の細胞型、組織などに存在する分子または分子複合体であり得る。本発明のいくつかの実施形態では、標的は、腫瘍結合または腫瘍内ｆＰＳＡであり、ターゲッティング用実体は、抗ｆＰＳＡ抗体である。本明細書に開示の抗ｆＰＳＡターゲッティング用実体は、非複合体化ＰＳＡ内でのみ利用可能なエピトープに対するこれらの親和性によって、ｆＰＳＡと特異的または優先的に相互作用することができる。治療剤などの作用物質のためにターゲッティング部分を使用することは、当技術分野で公知である。本願の脈絡では、原発性または転移性前立腺がん細胞が標的である。すなわち、分子レベルで、標的は、これが、接触すると特異的または優先的に抗ｆＰＳＡ抗体に結合することができるような、前立腺（ｐｒｏｓｔａｓｔｅ）がん細胞上に存在する（例えば、優先的に発現される）分子または細胞構成要素である。本発明の抗ｆＰＳＡ抗体は、これらの標的（例えば、前立腺がん細胞のｆＰＳＡ）に対して特異性を発揮し、標的に局在化および結合することができる。いくつかの実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体ターゲッティング用実体は、前立腺がん細胞に局在化し、ある時間にわたってこれらの会合を保持する。いくつかの実施形態では、ｆＰＳＡ標的は、腫瘍内および／または内在性膜タンパク質である。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体は、１種または複数の抗がん剤にコンジュゲートしたｆＰＳＡ特異的抗体またはその抗原結合断片から本質的なるｆＰＳＡターゲッティング用実体を含む多機能性剤である。したがって、このような実施形態では、多機能性剤は、抗体コンジュゲートである。前立腺がんの診断または評価、その処置、およびその薬剤の製造に使用することができる抗ｆＰＳＡ抗体の有用なコンジュゲートの限定されない実施形態を以下に示す。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体は、治療（例えば、抗がん）剤として有用である核酸分子にコンジュゲートされている。様々な化学型および構造形態の核酸が、このようなストラテジーに適していることができる。これらとしては、非限定例によって、一本鎖（ｓｓＤＮＡ）および二本鎖（ｄｓＤＮＡ）を含めたＤＮＡ；それだけに限らないが、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、酵素的ＲＮＡを含めたＲＮＡ；ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッド、三本鎖ＤＮＡ（例えば、短いオリゴヌクレオチドと会合したｄｓＤＮＡ）などがある。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、核酸剤は、約５〜２０００ヌクレオチドの間の長さである。いくつかの実施形態では、核酸剤は、少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、またはそれ以上のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、核酸剤は、約２０００、１９００、１８００、１７００、１６００、１５００、１４００、１３００、１２００、１１００、１０００、９００、８００、７００、６００、５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０未満、またはそれ以下のヌクレオチドの長さである。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、核酸剤は、転写を制御するプロモーターおよび／または他の配列を含む。このような実施形態は、例えば、アンドロゲン応答エレメント（例えば、ＰＳＡアンドロゲン応答エレメントＡＧＣＡＣＴ  ＴＧＣ  ＴＧＴＴＣＴ（配列番号１））に対応し、それによって活性化ＡＲに結合するデコイとて機能し得る、ヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、核酸剤は、複製起点および／または複製を制御する他の配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸剤は、プロモーターおよび／または複製起点を含まない。
【０１３０】
本発明の実践において使用するのに適した核酸抗がん剤は、腫瘍形成および細胞増殖または細胞形質転換に関連した遺伝子（例えば、細胞分裂を刺激するタンパク質をコードするプロトオンコジーン）、血管新生遺伝子／抗血管新生遺伝子、腫瘍抑制遺伝子（細胞分裂を抑制するタンパク質をコードする）、腫瘍増殖および／または腫瘍遊走に関連したタンパク質をコードする遺伝子、ならびに自殺遺伝子（アポトーシスまたは他の形態の細胞死を誘導する）、特に、急速に分裂する細胞内で最も活性である自殺遺伝子を標的にする作用物質を含む。
【０１３１】
腫瘍形成および／または細胞形質転換に関連した遺伝子の例としては、アンドロゲン受容体遺伝子、ＭＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、ＥＷＳ−ＦＬＩ１、ＴＬＳ−ＦＵＳ、ＰＡＸ３−ＦＫＨＲ、Ｂｃ１−２、ＡＭＬ１−ＥＴＯ、ＡＭＬ１−ＭＴＧ８、Ｒａｓ、Ｆｏｓ  ＰＤＧＦ、ＲＥＴ、ＡＰＣ、ＮＦ−１、Ｒｂ、ｐ５３、ＭＤＭ２など；多剤耐性遺伝子などの過剰発現遺伝子；サイクリン；β−カテニン；テロメラーゼ遺伝子；ｃ−ｍｙｃ、ｎ−ｍｙｃ、Ｂｃ１−２、Ｅｒｂ−Ｂ１、およびＥｒｂ−Ｂ２；ならびに突然変異遺伝子、例えば、Ｒａｓ、Ｍｏｓ、Ｒａｆ、およびＭｅｔなどがある。腫瘍抑制遺伝子の例としては、それだけに限らないが、ｐ５３、ｐ２１、ＲＢ１、ＷＴ１、ＮＦ１、ＶＨＬ、ＡＰＣ、ＤＡＰキナーゼ、ｐ１６、ＡＲＦ、ニューロフィブロミン、およびＰＴＥＮがある。抗がん治療で有用な核酸剤によって標的にされ得る遺伝子の例としては、腫瘍遊走に関連したタンパク質をコードする遺伝子、例えば、インテグリン、セレクチン、およびメタロプロテイナーゼなど；新しい血管の形成を促進するタンパク質をコードする抗血管新生遺伝子、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）またはＶＥＧＦｒなど；血管新生を阻害するタンパク質をコードする抗血管新生遺伝子、例えば、エンドスタチン、アンギオスタチン、およびＶＥＧＦ−Ｒ２など；ならびにタンパク質、例えば、インターロイキン、インターフェロン、線維芽細胞増殖因子（α−ＦＧＦおよび（β−ＦＧＦ）、インスリン様成長因子（例えば、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、トランスフォーミング増殖因子（例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、幹細胞因子およびその受容体ｃ−Ｋｉｔ（ＳＣＦ／ｃ−Ｋｉｔ）リガンド、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ４０、ＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１／ＬＦＡ−１、ヒアルリン（ｈｙａｌｕｒｉｎ）／ＣＤ４４などをコードする遺伝子などがある。
【０１３２】
抗ｆＰＳＡ抗体とのコンジュゲーションに適した核酸剤としては、例えば、抗がん剤または他の治療剤、プローブ、プライマーなどとしての使用を含めた、様々な使用のいずれも有することができる。核酸剤は、酵素活性（例えば、リボザイム活性）、遺伝子発現阻害活性（例えば、アンチセンス剤もしくはｓｉＲＮＡ剤などとして）、および／または他の活性を有することができる。核酸剤は、それ自体活性であり得、または活性核酸剤を送達する（例えば、送達される核酸の複製および／または転写によって）ベクターであり得る。本明細書の目的に関して、このようなベクター核酸は、これらが治療活性剤をコードし、または他の方法で送達する場合、これらがそれ自体治療活性を有していなくても、「治療剤」とみなされる。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体のコンジュゲートは、アンチセンス化合物を含み、またはコードする核酸治療剤を含む。用語「アンチセンス化合物またはアンチセンス剤」、「アンチセンスオリゴマー」、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、および「アンチセンスオリゴヌクレオチド類似体」は、互換的に本明細書で使用され、アンチセンス化合物をワトソン−クリック塩基対合によってＲＮＡ内の標的配列にハイブリダイズさせて、標的配列内でＲＮＡオリゴマーヘテロ二本鎖を形成する、ヌクレオチド塩基およびサブユニット間バックボーン（ｓｕｂｕｎｉｔ−ｔｏ−ｓｕｂｕｎｉｔ  ｂａｃｋｂｏｎｅ）の配列を指す。オリゴマーは、標的配列内で正確な配列相補性、または近い相補性を有する場合がある。このようなアンチセンスオリゴマーは、標的配列を含有するｍＲＮＡの翻訳を遮断もしくは阻害し、または遺伝子転写を阻害することができる。アンチセンスオリゴマーは、二本鎖または一本鎖配列に結合することができる。
【０１３４】
本発明の実践で使用するのに適したアンチセンスオリゴヌクレオチドの例としては、例えば、以下の総説で述べられているものがある：Ｒ．Ａ  Ｓｔａｈｅｌら、Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ、２００３年、４１巻：Ｓ８１〜Ｓ８８頁；Ｋ．Ｆ．  Ｐｉｒｏｌｌｏら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．、２００３年、９９巻：５５〜７７頁；Ａ．Ｃ．  ＳｔｅｐｈｅｎｓおよびＲ．Ｐ．  Ｒｉｖｅｒｓ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．、２００３年、５巻：１１８〜１２２頁；Ｎ．Ｍ．  ＤｅａｎおよびＣ．Ｆ．  Ｂｅｎｎｅｔｔ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２００３年、２２巻：９０８７〜９０９６頁；Ｎ．  Ｓｃｈｉａｖｏｎｅら、Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓ．、２００４年、１０巻：７６９〜７８４頁；Ｌ．  Ｖｉｄａｌら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ、２００５年、４１巻：２８１２〜２８１８頁；Ｔ．  Ａｂｏｕｌ−Ｆａｄｌ、Ｃｕｒｒ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、２００５年、１２巻：２１９３〜２２１４頁；Ｍ．Ｅ．  ＧｌｅａｖｅおよびＢ．Ｐ．  Ｍｏｎｉａ、Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ、２００５年、５巻：４６８〜４７９頁；Ｙ．Ｓ．  Ｃｈｏ−Ｃｈｕｎｇ、Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓ．、２００５年、１１巻：２８１１〜２８２３頁；Ｅ．  Ｒａｙｂｕｒｎら、Ｌｅｔｔ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｄｉｓｃｏｖ．、２００５年、２巻：１〜１８頁；Ｅ．Ｒ．  Ｒａｙｂｕｒｎら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｅｍｅｒｇ．  Ｄｒｕｇｓ、２００６年、１１巻：３３７〜３５２頁；Ｉ．  ＴａｍｍおよびＭ．  Ｗａｇｎｅｒ、Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２００６年、３３巻：２２１〜２３８頁（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）。
【０１３５】
適当なアンチセンスオリゴヌクレオチドの例としては、ＥＺＮ−４１７６、ＡＲ  ｍＲＮＡを下方制御する核酸べースアンチセンスオリゴヌクレオチド（Ｚｈａｎｇ，  Ｙ．ら、Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、２０１１年、１０巻：２３０９頁）；ＬＮＣａＰ前立腺（ｐｒｏｔａｔｅ）腫瘍細胞の細胞増殖を阻害するＡＲオリゴデオキシヌクレオチド（Ｅｄｅｒ，  Ｉ．Ｅ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２０００年、７巻（７号）：９９７〜１００８頁）；およびオブリメルセンナトリウム（Ｇ３１２３９としても公知、Ｇｅｎｔａ，Ｉｎｃ．、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＮＪによって開発された）、ｂｃ１−２  ｍＲＮＡの開始コドン領域を標的にしたホスホロチオエートオリゴマーがある。Ｂｃ１−２は、アポトーシスの強力な阻害剤であり、濾胞性リンパ腫、乳がん、大腸がん、前立腺がん、および中悪性度／高悪性度リンパ腫を含めた多くのがんで過剰発現される（Ｃ．Ａ．  Ｓｔｅｉｎら、Ｓｅｍｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００５年、３２巻：５６３〜５７３頁；Ｓ．Ｒ．  Ｆｒａｎｋｅｌ、Ｓｅｍｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００３年、３０巻：３００〜３０４頁）。他の適当なアンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、ｃＡＭＰ依存プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）に向けられた混合バックボーンオリゴヌクレオチドであるＧＥＭ−２３１（ＨＹＢ０１６５、Ｈｙｂｒｉｄｏｎ，Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）（Ｓ．  Ｇｏｅｌら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００３年、９巻：４０６９〜４０７６頁）；アフィニタク（ＩＳＩＳ  ３５２１またはアプリノカルセン、ＩＳＩＳ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ＰＫＣアルファのアンチセンス阻害剤；ＯＧＸ−０１１（Ｉｓｉｓ１１２９８９、Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、クラステリンに対する２’−メトキシエチル修飾アンチセンスオリゴヌクレオチド、細胞周期、組織リモデリング、脂質輸送、および細胞死の制御に関係づけられ、乳房、前立腺、および大腸のがん内で過剰発現される糖タンパク質；ＩＳＩＳ５１３２（Ｉｓｉｓ１１２９８９、Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ｃ−ｒａｆ−１  ｍＲＮＡの３’−非翻訳（ｕｎｓｔｒａｎｓｌａｔｅｄ）領域の配列に相補的なホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（Ｓ．Ｐ．  Ｈｅｎｒｙら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．、１９９７年、１２巻：４０９〜４２０頁；Ｂ．Ｐ．  Ｍｏｎｉａら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、１９９６年、９３巻：１５４８１〜１５４８４頁；Ｃ．Ｍ．  Ｒｕｄｉｎら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００１年、７巻：１２１４〜１２２０頁）；ＩＳＩＳ２５０３（Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ヒトＨ−ｒａｓ  ｍＲＮＡ発現のホスホロチオエートオリゴヌクレオチドアンチセンス阻害剤（Ｊ．  Ｋｕｒｒｅｃｋ、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００３年、２７０巻：１６２８〜１６４４頁）；ＧＥＭ６４０（ＡＥＧ３５１５６、Ａｅｇｅｒａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．およびＨｙｂｒｉｄｏｎ，Ｉｎｃ．）などのアポトーシス経路の相当な部分を���断するアポトーシスタンパク質のＸ連鎖阻害剤（ＸＩＡＰ）を標的にし、またはサバイビンを標的にするオリゴヌクレオチド、ＩＳＩＳ２３７２２（Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）などのアポトーシスタンパク質の阻害剤（ＩＡＰ）、２’−Ｏ−メトキシエチルキメラオリゴヌクレオチド；ＤＮＡメチルトランスフェラーゼを標的にするＭＧ９８；ならびにＧＴＩ−２０４０（Ｌｏｒｕｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、Ｔｏｒｏｎｔｏ、カナダ）、ヒトリボヌクレオチド還元酵素のＲ２小サブユニットコンポーネントのｍＲＮＡ内のコード領域に相補的な２０−ｍｅｒオリゴヌクレオチドがある。
【０１３６】
他の適当なアンチセンスオリゴヌクレオチドには、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ、ｃ−Ｍｙｂ、ｃ−Ｍｙｃ、およびｃ−Ｒａｆに対して開発されているアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる（例えば、Ａ．  Ｂｉｒｏｃｃｉｏら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２００３年、２２巻：６５７９〜６５８８頁；Ｙ．  Ｌｅｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００３年、６３巻：２８０２〜２８１１頁；Ｂ．  Ｌｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００４年、６４巻：２８４０〜２８４５頁；Ｋ．Ｆ．  Ｐｉｒｏｌｌｏら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．、２００３年、９９巻：５５〜７７頁；およびＡ．  Ｒａｉｔら、Ａｎｎ．  Ｎ．  Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、２００３年、１００２巻：７８〜８９頁を参照）。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体のコンジュゲートは、干渉ＲＮＡ分子を含み、またはコードする核酸抗がん剤を含む。用語「干渉ＲＮＡ」および「干渉ＲＮＡ分子」は、互換的に本明細書で使用され、例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介することによって、遺伝子発現を阻害もしくは下方制御し、または配列特異的様式で遺伝子をサイレンスすることができるＲＮＡ分子を指す。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、相補的な標的一本鎖ｍＲＮＡの分解および対応する翻訳配列の「サイレンシング」を誘導する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）によって誘発される、進化的に保存された配列特異的な機構である（ＭｃＭａｎｕｓおよびＳｈａｒｐ、２００２年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｅｔ．、２００２年、３巻：７３７頁）。ＲＮＡｉは、より長いｄｓＲＮＡ鎖を、長さが約２１〜２３ヌクレオチドの生物学的に活性な「低分子干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）配列にする酵素的切断によって機能する（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、２００１年、１５巻：１８８頁）。ＲＮＡ干渉は、がんの治療の有望な手法として台頭してきている。
【０１３８】
本発明の実践で使用するのに適した干渉ＲＮＡは、任意のいくつかの形態で提供することができる。例えば、干渉ＲＮＡは、単離低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）の１種または複数として提供することができる。
【０１３９】
本発明で使用するのに適した干渉ＲＮＡ分子の例としては、例えば、以下の総説で引用されたｉＲＮＡがある：Ｏ．  Ｍｉｌｈａｖｅｔら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｒｅｖ．、２００３年、５５巻：６２９〜６４８頁；Ｆ．  Ｂｉら、Ｃｕｒｒ．  Ｇｅｎｅ．  Ｔｈｅｒ．、２００３年、３巻：４１１〜４１７頁；Ｐ．Ｙ．  Ｌｕら、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．、２００３年、５巻：２２５〜２３４頁；Ｉ．  Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈら、Ｓｅｍｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．、２００４年、１４巻：２２３〜２３０頁；Ｍ．  Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．、２００５年、１２巻：２１７〜２２７頁；Ｐ．Ｙ．  Ｌｕら、Ａｄｖ．  Ｇｅｎｅｔ．、２００５年、５４巻：１１７〜１４２頁；Ｇ．Ｒ．  Ｄｅｖｉ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．、２００６年、１３巻：８１９〜８２９頁；Ｍ．Ａ．  Ｂｅｈｌｋｅ、Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．、２００６年、１３巻：６４４〜６７０頁；およびＬ．Ｎ．  Ｐｕｔｒａｌら、Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．、２００６年、１９巻：３１７〜３２４頁（これらのそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）。
【０１４０】
適当な干渉ＲＮＡ分子の他の例としては、それだけに限らないが、ｐ５３干渉ＲＮＡ（例えば、Ｔ．Ｒ．  Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００２年、２９６巻：５５０〜５５３頁；Ｍ．Ｔ．  Ｈｅｍｍａｎら、Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．、２００３年、３３巻：３９６〜４００頁）；オンコジーンを標的にする干渉ＲＮＡ、例えば、Ｒａｆ−１（Ｔ．Ｆ．  Ｌｏｕら、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、２００３年、１３巻：３１３〜３２４頁）、Ｋ−Ｒａｓ（Ｔ．Ｒ．  Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ、２００２年、２巻：２４３〜２４７頁）、およびｅｒｂＢ−２（Ｇ．  Ｙａｎｇら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２００４年、２７９巻：４３３９〜４３４５頁）などがある。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体のコンジュゲートは、リボザイムである核酸治療剤を含む。本明細書において、用語「リボザイム」は、標的特異的マーカー（ｍａｒｍｅｒ）中の他のＲＮＡ分子を切断することができる触媒ＲＮＡ分子を指す。リボザイムは、対象とする遺伝子の任意の望ましくない生成物の発現を下方制御するのに使用することができる。本発明の実践で使用することができるリボザイムの例としては、それだけに限らないが、アンドロゲン受容体ｍＲＮＡに対して特異的なものがある。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体のコンジュゲート内の実体または部分は、光線力学的治療（ＰＤＴ）で使用される光増感剤を含む。ＰＤＴでは、患者に光増感剤を局所投与または全身投与した後、処置される組織または臓器内で光増感剤によって吸収される光での照射が続く。光増感剤によって光が吸収されると、細胞に有害な反応種（例えば、ラジカル）が生成される。最大の効力のために、光増感剤は一般に、投与に適した形態であり、正常組織に対してある程度の選択性を多くの場合伴って、標的部位での細胞内在化を容易に起こすことができる形態でもある。
【０１４３】
光増感剤が結合した抗ｆＰＳＡ抗体のコンジュゲートは、ＰＤＴにおける新規送達システムとして使用することができる。光増感剤凝集を低減することに加えて、本発明による光増感剤の送達は、光増感剤の標的組織／臓器に対する特異性の増大、および細胞内在化などの他の利点を呈する。
【０１４４】
本発明で使用するのに適した光増感剤として、ＰＤＴにおいて有用な光増感特性を有する様々な合成分子および天然に存在する分子のいずれも挙げられる。ある特定の実施形態では、光増感剤の吸収スペクトルは、可視範囲内、一般に３５０ｎｍ〜１２００ｎｍの間、好ましくは、４００ｎｍ〜９００ｎｍの間、例えば、６００ｎｍ〜９００ｎｍの間である。本発明による毒素にカップリングすることができる適当な光増感剤としては、それだけに限らないが、ポルフィリンおよびポルフィリン誘導体（例えば、クロリン、バクテリオクロリン、イソバクテリオクロリン、フタロシアニン、およびナフタロシアニン）；金属ポルフィリン、金属フタロシアニン、アンゲリシン、カルコゲナピリリウム（ｃｈａｌｃｏｇｅｎａｐｙｒｒｉｌｌｉｕｍ）色素、クロロフィル、クマリン、アロキサジンおよびリボフラビンなどのフラビンおよび関連化合物、フラーレン、フェオホルビド、ピロフェオホルビド、シアニン（例えば、メロシアニン５４０）、フェオフィチン、サフィリン、テキサフィリン、プルプリン、ポルフィセン、フェノチアジニウム、メチレンブルー誘導体、ナフタルイミド、ナイルブルー誘導体、キノン、ペリレンキノン（例えば、ヒペリシン、ヒポクレリン、およびセルコスポリン）、ソラレン、キノン、レチノイド、ローダミン、チオフェン、ベルジン、キサンテン色素（例えば、エオシン、エリトロシン、ローズベンガル）、ポルフィリンの二量体形態およびオリゴマー形態、ならびに５−アミノレブリン酸などのプロドラッグ（Ｒ．Ｗ．  ＲｅｄｍｏｎｄおよびＪ．Ｎ．  Ｇａｍｌｉｎ、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、１９９９年、７０巻：３９１〜４７５頁）がある。
【０１４５】
本発明で使用するのに適した例示的な光増感剤としては、米国特許第５，１７１，７４１号、同第５，１７１，７４９号、同第５，１７３，５０４号、同第５，３０８，６０８号、同第５，４０５，９５７号、同第５，５１２，６７５号、同第５，７２６，３０４号、同第５，８３１，０８８号、同第５，９２９，１０５号、および同第５，８８０，１４５号に記載されたものがある（これらのそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）。
【０１４６】
ある特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ特異的抗体のコンジュゲートは、放射線増感剤を含む。本明細書において、用語「放射線増感剤」は、腫瘍細胞を放射線療法により感受性にする分子、化合物、または作用物質を指す。放射線療法を受けている患者に放射線増感剤を投与すると、一般に、放射線療法の効果が増強される。ターゲッティング用実体（例えば、腫瘍内ｆＰＳＡを標的にすることができる抗ｆＰＳＡ抗体）に放射線増感剤をカップリングすることの利点は、放射線増感剤（ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅ）が、標的細胞にのみ影響することである。使用の容易さのために、放射線増感剤はまた、これが全身投与されても、標的細胞を見つけることができるべきである。しかし、現在利用可能な放射線増感剤は一般に、腫瘍に対して選択的でなく、哺乳動物の体内に拡散によって分布される。本発明のｆＰＳＡ抗体コンジュゲートは、放射線増感剤に関する新規送達システムとして使用することができる。
【０１４７】
様々な放射線増感剤が当技術分野で公知である。本発明で使用するのに適した放射線増感剤の例としては、それだけに限らないが、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、カルボプラチン、シスプラチン、およびオキサリプラチン（Ａｍｏｒｉｎｏら、Ｒａｄｉａｔ．  Ｏｎｃｏｌ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．、１９９９年、７巻：３４３〜３５２頁；Ｃｈｏｙ、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１９９９年、１３巻：２２〜３８頁；Ｓａｆｒａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ．、２００１年、１９巻：１〜７頁；Ｄｉｏｎｅｔら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００２年、２２巻：７２１〜７２５頁；Ｃｉｖｉｄａｌｌｉら、Ｒａｄｉａｔ．  Ｏｎｃｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｐｈｙｓ．、２００２年、５２巻：１０９２〜１０９８頁）；ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））（Ｃｈｏｙ、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、２０００年、１４巻：７〜１４頁；ＭｏｒｎｅｘおよびＧｉｒａｒｄ、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、２００６年、１７巻：１７４３〜１７４７頁）；エタニダゾール（Ｎｉｔｒｏｌｍｉｄａｚｏｌｅ（登録商標））（Ｉｎａｎａｍｉら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｒａｄｉａｔ．  Ｂｉｏｌ．、２００２年、７８巻：２６７〜２７４頁）；ミソニダゾール（Ｔａｍｕｌｅｖｉｃｉｕｓら、Ｂｒ．  Ｊ．  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ、１９８１年、５４巻：３１８〜３２４頁；Ｐａｌｃｉｃら、Ｒａｄｉａｔ．  Ｒｅｓ．、１９８４年、１００巻：３４０〜３４７頁）、チラパザミン（Ｍａｓｕｎａｇａら、Ｂｒ．  Ｊ．  Ｒａｄｉｏｌ．、２００６年、７９巻：９９１〜９９８頁；Ｒｉｓｃｈｉｎら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００１年、１９巻：５３５〜５４２頁；Ｓｈｕｌｍａｎら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｒａｄｉａｔ．  Ｏｎｃｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｐｈｙｓ．、１９９９年、４４巻：３４９〜３５３頁）；ならびに核酸ベース誘導体、例えば、５−フルオロデオキシウリジンなどのハロゲン化プリンまたはピリミジン（Ｂｕｃｈｈｏｌｚら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｒａｄｉａｔ．  Ｏｎｃｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｐｈｙｓ．、１９９５年、３２巻：１０５３〜１０５８頁）がある。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体のコンジュゲートは、放射性同位体を含む。適当な放射性同位体の例としては、任意のα−、β−、またはγ−エミッターがあり、これらは、腫瘍部位に局在化すると、細胞を破壊する（Ｓ．Ｅ．  Ｏｒｄｅｒ、「Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｒｅｓｕｌｔｓ，  ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒ．Ｗ．  Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５年）。このような放射性同位体の例としては、それだけに限らないが、ヨウ素−１３１（１３１Ｉ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、ビスマス−２１２（２１２Ｂｉ）、ビスマス−２１３（２１３Ｂｉ）、アスタチン−２１１（２１１Ａｔ）、レニウム−１８６（１８６Ｒｅ）、レニウム−１８８（１８８Ｒｅ）、リン−３２（３２Ｐ）、イットリウム−９０（９０Ｙ）、サマリウム−１５３（１５３Ｓｍ）、およびルテチウム−１７７（１７７Ｌｕ）がある。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体のコンジュゲートは、スーパー抗原またはその生物学的活性部分を含む。スーパー抗原は、Ｔ細胞集団の大部分を活性化することにおいて極めて効率的である細菌タンパク質およびウイルスタンパク質の群を構成する。スーパー抗原は、処理されることなく主要組織適合複合体（ＭＨＣ）に直接結合する。実際に、スーパー抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ分子上の抗原結合溝の未処理の外側に結合し、それによって、慣例的なペプチド結合部位中の多型のほとんどを回避する。
【０１５０】
スーパー抗原ベース腫瘍治療手法は、固形腫瘍を処置するために開発されている。この手法では、ターゲッティング部分（例えば、抗ｆＰＳＡ抗体またはその抗原結合断片）は、スーパー抗原にコンジュゲートされ、標的化スーパー抗原をもたらす。抗体または抗体断片が腫瘍関連抗原を認識する場合、細胞に結合した標的化スーパー抗原は、スーパー抗原依存細胞媒介性細胞傷害によって、スーパー抗原活性化細胞傷害性Ｔ細胞を誘発して腫瘍細胞を直接殺すことができる（例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｓｏｇａａｒｄら、（１９９６年）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ」、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２巻（３号）：１５１〜１６２頁を参照）。
【０１５１】
本発明の実施形態で使用するためのスーパー抗原の例としては、野生型ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）（それぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれているＧｉａｎｔｏｎｉｏら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、１９９７年、１５巻：１９９４〜２００７頁；Ａｌｐａｕｇｈら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１９９８年、４巻：１９０３〜１９１４頁；Ｃｈｅｎｇら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００４年、２２巻：６０２〜６０９頁）；エンテロトキシン遺伝子クラスター（ｅｇｃ）のブドウ球菌スーパー抗原（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｔｅｒｍａｎら、Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｓｔ  Ｍｅｄ．、２００６年、２７巻：３２１〜３２４頁）、およびブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｐｅｒａｂｏら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ、２００５年、１１５巻：５９１〜５９８頁）との融合タンパク質がある。スーパー抗原、またはその生物学的活性部分は、抗ｆＰＳＡ抗体に結合して、抗体およびスーパー抗原を含むコンジュゲートを形成することができる。本発明で使用するのに適したスーパー抗原の追加の例としては、それだけに限らないが、ブドウ球菌エンテロトキシンＥ（ＳＥＥ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ外毒素（ＳＰＥ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ毒素性ショック症候群毒素（ＴＳＳＴ−１）、連鎖球菌分裂促進性外毒素（ＳＭＥ）、および連鎖球菌スーパー抗原（ＳＳＡ）がある。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体のコンジュゲートは、指向性酵素プロドラッグ治療で使用することができる。指向性酵素プロドラッグ治療手法では、指向性／標的化酵素およびプロドラッグが被験体に投与され、標的化酵素が被験体の体の部分に特異的に局在化され、そこでこれがプロドラッグを活性薬剤に変換する。プロドラッグは、１ステップで（標的化酵素によって）、または１つを超えるステップで活性薬剤に変換され得る。例えば、プロドラッグは、標的化酵素によって活性薬剤の前駆体に変換され得る。次いで、前駆体は、例えば、被験体に投与される１種もしくは複数の追加の標的化酵素、１種もしくは複数の非標的化酵素、被験体内に、もしくは被験体内の標的部位に天然に存在する１種もしくは複数の酵素（例えば、プロテアーゼ、ホスファタゼ、キナーゼ、もしくはポリメラーゼ）の酵素活性によって、被験体に投与される作用物質によって、かつ／または酵素的に触媒されない化学過程（例えば、酸化、加水分解、異性化、エピマー化など）によって活性薬剤に変換され得る。
【０１５３】
本発明のいくつかの実施形態は、抗体−指向性酵素プロドラッグ治療（ＡＤＥＰＴ）を利用し、ここで抗ｆＰＳＡ抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｙ）は、酵素に連結され、被験体に注射され、酵素の腫瘍結合または転移性（ｍｅｔｓｔａｔｉｃ）ｆＰＳＡへの選択的結合をもたらす。上記に論じたように、本明細書に開示の抗ｆＰＳＡ抗体（例えば、５Ａ１０）は、腫瘍内ｆＰＳＡと血清ＰＳＡとを十分に判別することができる。引き続いて、プロドラッグが被験体に投与される。プロドラッグは、前立腺がん細胞内または近傍のみで、酵素によってその活性体に変換される。選択性は、抗ｆＰＳＡ抗体の特異性によって、かつ前立腺がんの酵素レベルと正常組織の酵素レベルとの間に大きな差があるまでプロドラッグ投与を遅延させることによって実現される。前立腺がん細胞は、プロドラッグ活性化酵素をコードする遺伝子で標的化することもできる。この手法は、ウイルス−指向性酵素プロドラッグ治療（ＶＤＥＰＴ）、またはより一般に、ＧＤＥＰＴ（遺伝子−指向性酵素プロドラッグ治療）と呼ばれており、研究室システムにおいて良好な結果を示している。指向性酵素プロドラッグ治療の他のバージョンとしては、ＰＤＥＰＴ（ポリマー−指向性酵素プロドラッグ治療）、ＬＥＡＰＴ（レクチン指向性酵素活性化プロドラッグ治療）、およびＣＤＥＰＴ（クロストリジウム指向性酵素プロドラッグ治療）がある。
【０１５４】
本発明で使用するのに適した酵素／プロドラッグ／活性薬剤の組合せの非限定例は、例えば、Ｂａｇｓｈａｗｅら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９９年、１１巻：５７９〜５８３頁；Ｗｉｌｍａｎ、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ、１４巻：３７５〜３８２頁、６１５ｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｂｅｌｆａｓｔ、１９８６年；Ｓｔｅｌｌａら、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：  Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  Ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，  ｉｎ「Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（編）、２４７〜２６７頁（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５年）に記載されている。酵素／プロドラッグ／活性抗がん剤の組合せの非限定例は、例えば、Ｒｏｏｓｅｂｏｏｍら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｒｅｖｉｅｗｓ、２００４年、５６巻：５３〜１０２頁に記載されている。
【０１５５】
プロドラッグ活性化酵素の例としては、それだけに限らないが、ニトロ還元酵素、チトクロムＰ４５０、プリン−ヌクレオシドホスホリラーゼ、チミジンキナーゼ、アルカリホスファターゼ、β−グルクロニダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、ペニシリンアミダーゼ、β−ラクタマーゼ、シトシンデアミナーゼ、およびメチオニンγ−リアーゼがある。
【０１５６】
プロドラッグ活性化酵素によるプロドラッグの活性化によってｉｎ  ｖｉｖｏで形成され得る抗がん剤の例としては、それだけに限らないが、５−（アジリジン−１−イル）−４−ヒドロキシル−アミノ−２−ニトロ−ベンズアミド、イソホスホルアミドマスタード、ホスホルアミドマスタード、２−フルオロアデニン、６−メチルプリン、ガンシクロビル−三リン酸ヌクレオチド、エトポシド、マイトマイシンＣ、ｐ−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ］フェノール（ＰＯＭ）、ドキソルビシン、オキサゾリジノン、９−アミノカンプトテシン、マスタード、メトトレキセート、安息香酸マスタード、アドリアマイシン、ダウノマイシン、カルミノマイシン、ブレオマイシン、エスペラマイシン、メルファラン、パリトキシン、４−デスアセチルビンブラスチン−３−カルボン酸ヒドラジド、フェニレンジアミンマスタード、４’−カルボキシフタラト（１，２−シクロヘキサン−ジアミン）白金、タキソール、５−フルオロウラシル、メチルセレノール、および二フッ化カルボノチオン酸（ｃａｒｂｏｎｏｔｈｉｏｎｉｃ  ｄｉｆｌｕｏｒｉｄｅ）がある。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、治療（例えば、抗がん）剤は、１種または複数の抗ｆＰＳＡ抗体および抗脈管形成剤のコンジュゲートを含む。本発明で使用するのに適した抗脈管形成剤は、血管新生のプロセス、または既存の血管から発達することによって新しい血管が形成するプロセスを遮断、阻害、減速、または低減する任意の分子、化合物、または因子を含む。このような分子、化合物、または因子は、（１）元の血管の膜の溶解、（２）内皮細胞の移動および増殖、ならびに（３）移動細胞による新しい血管系の形成のステップを含めた（それだけに限らないが）、血管新生に関与するステップのいずれかを遮断、阻害、減速、または低減することによって血管新生を遮断することができる。
【０１５８】
抗脈管形成剤の例としては、それだけに限らないが、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標））、エンドスタチン、サリドマイド、ＥＭＤ１２１９７４（シレンギチド）、ＴＮＰ−４７０、スクアラミン、コンブレタスタチンＡ４、インターフェロン−α、抗ＶＥＧＦ抗体、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＰＴＫ７８７／２Ｋ２２５８４、マリミスタール（Ｍａｒｉｍｉｓｔａｌ）、ＡＧ３３４０、ＣＯＬ−３、ネオバスタット、およびＢＭＳ−２７５２９１がある。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、治療剤は、１種または複数の抗ｆＰＳＡ抗体、およびアンドロゲン受容体（「ＡＲ」）アンタゴニストなどの抗アンドロゲン治療薬のコンジュゲートを含む。本発明のこれらの実施形態および他の実施形態で使用するためのＡＲアンタゴニストとしては、小分子アンタゴニスト（例えば、ＲＵ５８６４２、ＬＧ１２０９０７、ＬＧ１０５、ＲＤ１６２、ＭＤＶ３１００、ＢＭＳ−６４１９８８、ＣＨ５１３７２９１、アタル酸、Ｎ−ブチルベンゼンスルホンアミド）、ステロイド化合物（例えば、酢酸シプロテロン）、非ステロイド化合物（例えば、ヒドロキシフルタミド、ビカルタミド、ニルタミド）、およびペプチドアンタゴニストがある。本発明の実施形態で使用するための他の抗アンドロゲン治療薬には、ＴＡＫ７００、ＡＲＮ−５０９、カボザンチミブ、イピリムマブ、クスチルセン、ＢＰＸ−１０１、アルファラディン、デノスマブ、およびＰｒｏｔｓｖａｃ−ＶＦが含まれる。
【０１６０】
本発明の特定の実施形態で使用するための追加の前立腺がん治療剤（ａｇｅｎｓｔ）としては、塩化ラジウム−２２３、カボザンチニブ、抗ＯＸ４０抗体、およびビカルタミド（カソデックス）がある。
投与
【０１６１】
本発明のｆＰＳＡモノクローナル抗体および／または抗体ポリペプチド、ならびに本発明の医薬組成物は、任意の適切な経路およびレジメンによって投与することができる。いくつかの実施形態では、経路またはレジメンは、正の治療上の利益に相関しているものである。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、投与される正確な量は、医術において周知の１つまたは複数の要因に応じて、被験体によって変化し得る。このような要因として、例えば、被験体の種、年齢、一般的な容態、投与される特定の組成物、その投与モード、活性のそのモード、前立腺がんの重症度；使用される具体的なｆＰＳＡ抗体の活性；投与される具体的な医薬組成物；投与後の組成物の半減期；被験体の年齢、体重、全体的な健康、性別、および食餌；使用される具体的な化合物の投与の時間、投与経路、および排泄率；処置の継続時間；使用される具体的な化合物と組み合わせて、または同時に使用される薬剤などの１つまたは複数を挙げることができる。医薬組成物は、投与の容易さ、および投与量の均一性のために単位剤形（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ  ｆｏｒｍ）で製剤化することができる。しかし、本発明の組成物の総一日使用量は、適切な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることになることが理解されるであろう。
【０１６３】
本発明の組成物は、当業者が察することになるように、任意の経路によって投与することができる。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、経口（ＰＯ）、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、動脈内、髄内、クモ膜下、皮下（ＳＱ）、脳室内、経皮、皮膚間（ｉｎｔｅｒｄｅｒｍａｌ）、皮内、直腸（ＰＲ）、膣、腹腔内（ＩＰ）、胃内（ＩＧ）、局部的な（例えば、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション剤、および／もしくは滴剤による）、粘膜、鼻腔内、頬側、経腸、硝子体、舌下によって；気管内点滴注入、気管支点滴注入、および／もしくは吸入によって；経口スプレー、経鼻スプレー、および／もしくはエアロゾルとして、かつ／または門脈カテーテルによって投与される。
【０１６４】
具体的な実施形態では、本発明によるｆＰＳＡ抗体および／またはこれらの医薬組成物は、静脈内に、例えば、静脈内注入によって投与することができる。具体的な実施形態では、本発明によるｆＰＳＡ抗体および／またはこれらの医薬組成物は、筋肉内注射によって投与することができる。具体的な実施形態では、本発明によるｆＰＳＡ抗体および／またはこれらの医薬組成物は、前立腺内（ｉｎｔｒａｐｒｏｓｔａｔｅ）注射によって投与することができる。具体的な実施形態では、本発明によるｆＰＳＡ抗体および／またはこれらの医薬組成物は、皮下注射によって投与することができる。具体的な実施形態では、本発明によるｆＰＳＡ抗体および／またはこれらの医薬組成物は、門脈カテーテルを介して投与することができる。しかし、本発明は、薬物送達の科学の可能性のある進歩を考慮した任意の適切な経路による、本発明によるｆＰＳＡ抗体および／またはこれらの医薬組成物の送達を包含する。
【０１６５】
ある特定の実施形態では、本発明によるｆＰＳＡ抗体および／またはこれらの医薬組成物は、所望の治療効果を得るために、１日当たり、被験体の体重１ｋｇ当たり、約０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約４０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約３０ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ、または約１ｍｇ〜約２５ｍｇ送達するのに十分な投与量レベルで投与することができる。所望の投与量は、１日３回超、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日毎、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、２カ月毎、６カ月毎、または１２カ月毎に送達することができる。ある特定の実施形態では、所望の投与量は、複数の投与（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、またはそれ以上の投与）を使用して送達することができる。
予防的用途
【０１６６】
いくつかの実施形態では、本発明によるｆＰＳＡ抗体は、予防的用途に利用することができる。いくつかの実施形態では、予防的用途は、前立腺がん、および／または前立腺がんに感受性であり、かつ／もしくはその症状を示す個体における任意の他のｆＰＳＡ関連容態の防止、これらの進行の阻害、および／またはこれらの開始の遅延のためのシステムおよび方法を伴う。
併用療法
【０１６７】
本発明によるｆＰＳＡ抗体およびこれらの治療的に活性なコンジュゲート、ならびに／またはこれらの医薬組成物は、併用療法で使用して診断ならびに／または処置を支援することができることが察されるであろう。「併用で」は、作用物質が、同時に投与され、かつ／または一緒での送達用に製剤化されなければならないことを暗示するように意図されていないが、これらの送達方法は、本発明の範囲内である。組成物は、１種または複数の他の所望の治療剤または医療と同時、これらの前またはこれらに引き続いて投与することができる。併用で利用される治療活性剤は、単一の組成物中で一緒に投与しても、異なる組成物中で別個に投与してもよいことが察されるであろう。一般に、各作用物質は、その作用物質について決定された用量および／または時間スケジュールで投与されることになる。
【０１６８】
特定の実施形態では、本明細書に開示のｆＰＳＡ特異的抗体は、抗がん剤または抗アンドロゲン治療の前に、後に、またはこれらと併せて投与される。抗アンドロゲン治療としては、手術（例えば、去勢）、化学療法、放射線療法、およびアンドロゲン受容体（「ＡＲ」）アンタゴニストがある。本発明のこれらの実施形態および他の実施形態で使用するためのＡＲアンタゴニストとしては、小分子アンタゴニスト（例えば、ＲＵ５８６４２、ＬＧ１２０９０７、ＬＧ１０５、ＲＤ１６２、ＭＤＶ３１００、ＢＭＳ−６４１９８８、ＣＨ５１３７２９１、アタル酸、Ｎ−ブチルベンゼンスルホンアミド）、ステロイド化合物（例えば、酢酸シプロテロン）、非ステロイド化合物（例えば、ヒドロキシフルタミド、ビカルタミド、ニルタミド）、およびペプチドアンタゴニストがある。本発明の実施形態で使用するための他の抗アンドロゲン治療には、ＴＡＫ７００、ＡＲＮ−５０９（アビラテロン）、カボザンチミブ、イピリムマブ、クスチルセン、ＢＰＸ−１０１、アルファラディン、デノスマブ、およびＰｒｏｔｓｖａｃ−ＶＦが含まれる。本発明の特定の実施形態で使用するための追加の前立腺がん治療剤としては、塩化ラジウム−２２３、カボザンチニブ、抗ＯＸ４０抗体、およびビカルタミド（カソデックス）がある。
【０１６９】
併用レジメンで使用するための治療（例えば、治療剤または手順）の特定の組合せは、所望の治療剤および／または手順の適合性、ならびに実現されるべき所望の治療効果を考慮することになる。本明細書に開示の抗ｆＰＳＡ抗体の医薬組成物は、併用療法（例えば、併用化学療法の治療）で使用することができ、すなわち、医薬組成物を、１種または複数の他の所望の治療剤および／または化学療法手順と同時に、これらの前に、またはこれらに引き続いて投与することができることも察されるであろう。
【０１７０】
抗ｆＰＳＡ抗体、またはこれらの薬学的に許容される組成物は、原発性または転移性前立腺がんを処置するために化学療法剤と併用して投与することができる。いくつかの実施形態では、活性成分は、化学療法剤、例えば、それだけに限らないが、アドリアマイシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、トポテカン、タキソール、インターフェロン、白金誘導体、タキサン（例えば、パクリタキセル）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン）、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド）、シスプラチン、メトトレキセート、アクチノマイシンＤ、アクチノマイシンＤ、ドラスタチン１０、コルヒチン、エメチン、トリメトレキセート、メトプリン、シクロスポリン、ダウノルビシン、テニポシド、アンホテリシン、アルキル化剤（例えば、クロランブシル）、５−フルオロウラシル、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｈｏｔｈｅｃｉｎ）、シスプラチン、メトロニダゾール、イマチニブ、Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）、スニチニブ、およびＳｕｔｅｎｔ（登録商標）、ならびにこれらの組合せなどである。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体、これらのコンジュゲート、またはこれらの薬学的に許容される組成物は、アバレリクス、アルデスロイキン、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アザシチジン、ＢＣＧライブ、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）、アバスチン、フルオロウラシル、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、カンプトテシン、カルボプラチン、カルムスチン、セレコキシブ、セツキシマブ、クロランブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンα、ダウノルビシン、デニロイキン、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン（中性）、ドキソルビシン塩酸塩、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピルビシン、エポエチンα、エルロチニブ、エストラムスチン、リン酸エトポシド、エトポシド、エキセメスタン、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビン、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、酢酸ゴセレリン、酢酸ヒストレリン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブ、イダルビシン、イホスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、イリノテカン、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、酢酸ロイプロリド、レバミソール、ロムスチン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、６−ＭＰ、メスナ、メトトレキセート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、サルグラモスチム、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブマレエート、タルク、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、ＶＭ−２６、テストラクトン、チオグアニン、６−ＴＧ、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ＡＴＲＡ、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ゾレドロネート、またはゾレドロン酸の任意の１種または複数から選択される抗増殖剤または化学療法剤と併用して投与される。
【０１７２】
併用レジメンで使用するための治療（例えば、ドキソルビシン、ＡＲＮ−５０９、およびｆＰＳＡに対する治療抗体など）の特定の組合せは、一般に、所望の治療剤および／または手順の適合性、ならびに実現されるべき所望の治療効果を考慮することになる。使用される治療および／または化学療法剤は、同じ障害に対する所望の効果を実現することができ（例えば、本発明の抗原を、別の化学療法剤と同時に投与することができる）、または異なる効果を実現することができることも察されるであろう。使用される治療は、同じ目的に対する所望の効果を実現することができ（例えば、前立腺がんを処置し、防止し、かつ／もしくはその開始を遅延させるのに有用なｆＰＳＡ特異的抗体を、前立腺がんを処置し、防止し、かつ／もしくはその開始を遅延させるのに有用な別の作用物質と同時に投与することができる）、または異なる効果（例えば、任意の有害作用のコントロール）を実現することができることが察されるであろう。本発明は、医薬組成物の生物学的利用能を改善し、これらの代謝を低減および／もしくは修正し、これらの排泄を阻害し、かつ／または体内でのこれらの分布を修正することができる作用物質と併用した医薬組成物の送達を包含する。
【０１７３】
特定の実施形態では、抗ｆＰＳＡ抗体は、ＡＲＮ−５０９（アビラテロン）および／またはドキソルビシンと併用して投与され、またはこれらにコンジュゲートされる。本発明のこのような実施形態で使用するための追加の前立腺がん治療剤としては、塩化ラジウム−２２３、カボザンチニブ、抗ＯＸ４０抗体、およびビカルタミド（カソデックス）がある。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、併用して利用される作用物質は、これらが個々に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることになる。いくつかの実施形態では、併用で利用されるレベルは、個々に利用されるものより低いことになる。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、併用療法では、単一エピトープ（例えば、単一立体構造エピトープ）に向けられた複数の抗体を投与することができる。いくつかの実施形態では、併用療法では、別個のエピトープを認識する複数の抗体を含むことができる。
キット
【０１７６】
本発明は、本発明による方法を便利および／または有効に実行するための様々なキットを提供する。キットは一般に、本発明による１種または複数のｆＰＳＡ特異的（ｓｐｅｃｉｆｃ）抗体または抗体ポリペプチド（例えば、５Ａ１０）を含む。いくつかの実施形態では、キットは、異なる目的（例えば、診断、処置、および／または予防）のために使用される一連の異なるｆＰＳＡ特異的抗体を含む。一般にキットは、ユーザーが被験体（複数可）に複数の投与を実施し、かつ／または複数の実験を実施することが可能になるのに十分な量のｆＰＳＡ特異的抗体を含むことになる。いくつかの実施形態では、キットは、購入者が指定した１種または複数のｆＰＳＡ特異的抗体が供給されており、またはこれらを含む。
【０１７７】
ある特定の実施形態では、本発明によって使用するためのキットは、１種または複数の参照試料；指示（例えば、試料を処理するため、検査を実施するため、結果を解釈するため、ｆＰＳＡ特異的抗体を可溶化するため、ｆＰＳＡ特異的抗体を貯蔵するためなど）；緩衝液；および／または検査を実施するのに必要な他の試薬を含むことができる。ある特定の実施形態では、キットは、抗体のパネルを含むことができる。キットの他のコンポーネントとして、細胞、細胞培地、組織、および／または組織培地を挙げることができる。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、キットは、ｆＰＳＡ特異的抗体を含む医薬組成物のいくつかの単位投与量を含む。調剤を投与することができる処置スケジュールの日／時間を指定する、数字、文字、および／もしくは他の印の形態で、かつ／またはカレンダーインサートを伴ったメモリーエイドを提供することができる。調剤が毎日服用されるキットを提供するために、医薬組成物の調剤と同様の形態または別個の形態でのプラセボ調剤および／またはカルシウム栄養補助食品を含めることができる。
【０１７９】
キットは、ある特定の個々のコンポーネントまたは試薬を別個に収容することができるように、１つまたは複数の容器またはコンテナを含むことができる。キットは、商業販売用にかなり厳重に閉じ込めた状態で個々のコンテナを同封するための手段、例えば、指示、発泡スチロールなどの包装材などを同封することができるプラスチック箱を含むことができる。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、キットは、前立腺がんを罹患している被験体および／またはそれに感受性の被験体の処置、診断、および／または予防において使用される。いくつかの実施形態では、このようなキットは、（ｉ）少なくとも１種のｆＰＳＡ特異的抗体；（ｉｉ）被験体に少なくとも１種のｆＰＳＡ特異的抗体を投与するためのシリンジ、針、アプリケーターなど；ならびに（ｉｉｉ）使用するための指示を含む。
【０１８１】
本発明のこれらの態様および他の態様は、以下の実施例を考慮するとさらに正当に評価されるであろう。これらの実施例は、本発明のある特定の実施形態を例示するように意図されているが、特許請求の範囲によって定義されるその範囲を限定するように意図されていない。
【実施例】
【０１８２】
一般的な詳細
すべての化学物質は、別段の記載のない限り、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入し、さらに精製することなく使用した。ｆＰＳＡ特異的５Ａ１０モノクローナル抗体は、Ｔｕｒｋｕ大学、フィンランドから購入し、さらに精製することなく使用した。水（２５℃で１８．２ＭΩ・ｃｍ超、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）は、１．０ｍＬ／分未満の流量で、キレックス樹脂の１０ｃｍカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を通過させることによって精製した。すべての計測器は、以前に報告された慣例的な品質管理手順に従って較正および維持した。放射能は、８９Ｚｒについて４６５の較正係数を用いてＣａｐｉｎｔｅｃ  ＣＲＣ−１５Ｒ  Ｄｏｓｅ  Ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ（Ｃａｐｉｎｔｅｃ、Ｒａｍｓｅｙ、ＮＪ）を使用することによって測定した。放射能を正確に定量化するために、８９Ｚｒ（９０９ｋｅＶの放射）について８００〜１０００ｋｅＶの動的エネルギーウィンドウを使用して、較正されたＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｗｉｚａｒｄ２  Ｇａｍｍａ  Ｃｏｕｎｔｅｒで１分間、実験試料をカウントした。８９Ｚｒ−放射標識反応は、シリカゲル含浸ガラス繊維インスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ−ＳＧ）ペーパー（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．、Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌｓ、ＮＹ）を使用することによって監視し、Ｗｉｎ−Ｓｃａｎ  Ｒａｄｉｏ−ＴＬＣソフトウェアバージョン２．２を使用して、Ｂｉｏｓｃａｎ  Ａｕｔｏｃｈａｎｇｅｒ  １０００（Ｂｉｏｓｃａｎ  Ｉｎｃ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、ＤＣにカップリングした放射性ＴＬＣプレートリーダー（Ｂｉｏｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ２００  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｃａｎｎｅｒで分析した。溶媒系は、水中のジエチレントリアミン５酢酸（ＤＴＰＡ、５０ｍＭ、ｐＨ７）およびリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含んでいた。ＭＤＶ３１００は、ＭＳＫＣＣのＯｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｃｏｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙが調製したものであり、さらに精製することなく、ＤＭＳＯ中で再構成した。テストステロンペレットは、Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓ．ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａから購入した。
（実施例１）
８９Ｚｒ−標識モノクローナルｆＰＳＡ抗体の生成
タンパク質コンジュゲーション
【０１８３】
免疫−ＰＥＴのための放射標識モノクローナル抗体に対する以前の研究；例えば、本明細書に参照により組み込まれている、Ｈｏｌｌａｎｄ，  Ｊ．Ｐ．ら、８９Ｚｒ−ＤＦＯ−Ｊ５９１  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏＰＥＴ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ、Ｊ  Ｎｕｃｌ，  Ｍｅｄ．、２０１０年、５１巻（８号）、１２９３〜１３００頁から導かれた手順を使用して、モノクローナル抗体５Ａ１０およびマウスＩｇＧ１をデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓｐｒｉｎｇ  Ｖａｌｌｅｙ、ＣＡ）にコンジュゲートし、８９Ｚｒ−オキサレートで放射標識して８９Ｚｒ−５Ａ１０を得た。標識抗体の純度は、放射性ＩＴＬＣによって評価した。図１は、粗製（赤色）および精製（青色）８９Ｚｒ−５Ａ１０の一般的な放射性ＩＴＬＣを例示する。溶離液は、５０ｍＭのＤＴＰＡ、ｐＨ７であった。８９Ｚｒ−５Ａ１０は、ベースラインに残り（Ｒｆ＝０．０）、不純物は、溶媒先端とともに進む（Ｒｆ＝１．０）。
タンパク質へのＤＦＯのコンジュゲーション
【０１８４】
ＤＦＯを以下のようにタンパク質にコンジュゲートした。５Ａ１０を遠心分離機バイアル（３ｍｇ／ｍＬ、１ｍＬ）に加え、１．０Ｍおよび０．１ＭのＮａ２ＣＯ３（水溶液）のアリコートを使用することによってｐＨを９．５〜１０．０に調整した。次いで、４当量の［Ｆｅ（Ｎ−ｓｕｃｃＤＦＯ−ＴＦＰ）］を添加し、自動ピペットを使用して溶液を穏やかに混合した。反応を、撹拌することなく室温で１時間進行させた後、０．２５ＭのＨ２ＳＯ４（水溶液）のアリコート１０μＬ未満を徐々に添加することによって、ｐＨを３．９〜４．２に調整した。次いで、［Ｆｅ（Ｎ−ｓｕｃｃＤＦＯ−ＴＦＰ）］に対して１０倍超過剰のエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩（ＥＤＴＡ２−．２Ｎａ＋（水溶液）、キレックス１００樹脂処理した脱イオン水中０．０６７４ｍｏｌ  ｄｍ−３）を添加した。反応物を水浴中で、３８℃で１時間インキュベートし、この時間の間に、溶液が透明な黄色から無色に変化した。サイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＧ−２５Ｍ、ＰＤ−１０カラム、３０ｋＤａ超、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；デッドボリューム＝２．５ｍＬ、単離タンパク質の１．８ｍＬの全体積に対して、滅菌生理食塩水２００μＬの画分で溶出）によって、ＤＦＯコンジュゲート５Ａ１０を精製した。ＤＦＯ−マウスＩｇＧを同じ手順を使用して調製した。
放射標識
【０１８５】
ジルコニウム−８９（Ｚｒ−８９）は、以前に報告された方法に従って、ＥＢＣＯ  ＴＲ１９／９可変ビームエネルギーサイクロトロン（Ｅｂｃｏ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ、カナダ）で、８９Ｙ（ｐ，ｎ）８９Ｚｒ核変換反応を介して生成した。８９Ｚｒ−オキサレートは、１９５〜４９７ＭＢｑ／μｇ（５．２７〜１３．３１ｍＣｉ／μｇ）の有効比活性を伴って、９９．９％超の高い放射性核種純度および放射化学的純度（ＲＣＰ）で単離した。
【０１８６】
８９Ｚｒ−５Ａ１０および８９Ｚｒ−ＩｇＧは、それぞれＤＦＯコンジュゲート５Ａ１０およびＩｇＧとの８９Ｚｒ−オキサレートの複合体化反応によって調製した。一般的な放射標識反応は、８９Ｚｒでモノクローナル抗体を標識するのに使用された、以前に報告された方法に従って行った。一例として、８９Ｚｒ−５Ａ１０を生成するのに使用される一般的な条件を提示する。同じ方法を、８９Ｚｒ−ＩｇＧを生成するのに使用した。簡単に言えば、１．０Ｍのシュウ酸（２５０μＬ）中の８９Ｚｒ−オキサレート（４２９ＭＢｑ、［１１．６ｍＣｉ］）を、１．０ＭのＮａ２ＣＯ３（水溶液）でｐＨ７．１〜７．７に調整した。注意事項：酸中和により、ＣＯ２（ガス）が放出されるので、微量遠心機バイアルから放射能がまったく漏れないことを保証するように注意を払うべきである。ＣＯ２発生が止まった後、ＤＦＯコンジュゲート５Ａ１０（５００μＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ［タンパク質１．０ｍｇ］、滅菌生理食塩水中）を添加し、ピペットで吸引することによって反応物を穏やかに混合した。反応物を室温で１〜２時間の間にわたってインキュベートし、複合体化の進行を、ＩＴＬＣ（ＤＴＰＡ、５０ｍＭ、ｐＨ７）によって時間に対して監視した。２時間後、粗製物の放射標識収率およびＲＣＰは、一般に８０〜９０％超であった。スピン−カラム遠心分離（４ｍＬの全体積、３０ｋＤａ超の粒子を保持、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ；滅菌生理食塩水４×３ｍＬで洗浄）を使用することによって、８９Ｚｒ−５Ａ１０を精製した。最終的な８９Ｚｒ−５Ａ１０（製剤：ｐＨ５．５〜６．０；５００μＬ未満；滅菌生理食塩水）の放射化学的純度（ＲＣＰ）は、ＩＴＬＣおよびサイズ排除クロマトグラフィーによって測定した。ＩＴＬＣ実験では、８９Ｚｒ−５Ａ１０、８９Ｚｒ−ＩｇＧ、および８９Ｚｒ−ＤＦＯは、ベースライン（Ｒｆ＝０．０）に残り、一方、８９Ｚｒ４＋（水溶液）イオンおよび複合体８９Ｚｒ−ＤＴＰＡは、溶媒先端とともに溶出する（Ｒｆ＝１．０）。精製８９Ｚｒ−５Ａ１０の最終的な放射化学的収率は、一般に７０％超であり、生成物を滅菌生理食塩水中で製剤化し、ＲＣＰは、９９％超（ｎ＝５）であり、タンパク質の比活性は、１９５．０±８．０ＭＢｑ／ｍｇ（５．２７±０．２ｍＣｉ／ｍｇ）であった。図１は、粗製および精製（製剤化）８９Ｚｒ−５Ａ１０の一般的な放射性ＩＴＬＣクロマトグラムを示す。
キレート数
【０１８７】
５Ａ１０またはＩｇＧにコンジュゲートしたアクセス可能なＤＦＯキレートの数は、当業者に公知の方法（例えば、Ｈｏｌｌａｎｄ，  Ｊ．Ｐ．ら、Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  Ｈｓｐ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｎ  ＨＥＲ２／ｎｅｕ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｕｓｉｎｇ  ８９Ｚｒ−ＤＦＯ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、２０１０年、５巻（１号）、ｅ８８５９頁；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｃ．Ｊ．ら、Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，  ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ  ｏｆ  ｃｏｐｐｅｒ−６４−ｌａｂｅｌｅｄ  ａｎｔｉ−ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  １Ａ３−Ｆ（ａｂ’）２、Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．、１９９５年、３６巻（５号）、８５０〜８５８頁）に従って、放射測定同位体希釈アッセイ（ｒａｄｉｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｓｏｔｏｐｉｃ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）によって測定した。原液から、８９Ｚｒ−クロリドのアリコート（５μＬ、３７０ｋＢｑ［１０μＣｉ］、ｐＨ７．７〜８．１、１．０ＭのＮａ２ＣＯ３を使用して調整したｐＨ］）を、非放射性ＺｒＣｌ４（水溶液）（５０μＬの画分；１０００〜０．５ｐｍｏｌ、ｐＨ７．７〜８．１）の１：２連続希釈液を含有する１２の溶液に添加した。混合物を３０秒間ボルテックスした後、５Ａ１０のアリコート（１．３６ｍｇ／ｍＬ、ｍＡｂ  ６．８μｇ、０．０４５ｎｍｏｌ；滅菌生理食塩水）５μＬを添加した。反応物を室温で２時間インキュベートした後、ＤＴＰＡ（２０μＬ、５０ｍＭ、ｐＨ７）でクエンチした。対照実験により、ＤＦＯコンジュゲートタンパク質への８９Ｚｒ複合体化が２時間未満以内に完了することを確認した。複合体化の程度は、ＩＴＬＣストリップ（ＤＴＰＡ、５０ｍＭ）を展開し、ベースラインおよび溶媒先端での活性をカウントすることによって評価した。８９Ｚｒ−放射標識タンパク質（Ａｂ）の画分を、添加した非放射性ＺｒＣｌ４の量に対してプロットした。キレートの数は、タンパク質の５０％のみが標識されたＺｒＣｌ４の濃度を測定し、２の係数を乗じ、次いで反応物中に存在するタンパク質のモルで除すことによって計算した。同位体希釈アッセイにより、タンパク質分子１個当たり平均で２〜３のアクセス可能なキレートが、それぞれ５Ａ１０およびＩｇＧ１について明らかになった。
８９Ｚｒ−標識５Ａ１０の親和性試験
【０１８８】
ｆＰＳＡに対する８９Ｚｒ−５Ａ１０の親和性を判定するために、競合結合アッセイを行った。ｆＰＳＡに対する８９Ｚｒ−５Ａ１０の相対的親和性を、固定化ｆＰＳＡで被覆されたウェル中で、８９Ｚｒ−５Ａ１０および多様な濃度の非標識５Ａ１０をインキュベートすることによって判定した。捕捉ｍＡｂは、低蛍光Ｍａｘｉｓｏｒｐストリップ（Ｎｕｎｃ、Ｒｏｓｋｉｌｄｅ、デンマーク）を使用することによる物理的吸着によって、マイクロタイタープレート上に固定化した。０．２ｍｏｌ／ＬのＮａＨ２ＰＯ４緩衝液を含有する緩衝液１００Ｌ中のｍＡｂＨ１１７  １μｇで、３５℃で一晩ウェルを被覆した。被覆済みウェルをＤＥＬＦＩＡ洗浄液で２回洗浄し、次いでジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）処理ＢＳＡ（１ｇ／Ｌ）、ソルビトール（６０ｇ／Ｌ）、Ｇｅｒｍａｌｌ  ＩＩ（１ｇ／Ｌ）、および５０ｍｍｏｌのＮａＨ２ＰＯ４を含有する溶液３００μＬで、室温（ＲＴ）で３時間飽和させた。飽和させた後、ウェルを吸引し、乾燥させ、使用するまで乾燥剤を含む密封ビニール袋中で、４℃で貯蔵した。
【０１８９】
８９Ｚｒ−５Ａ１０のフレッシュな試料を使用して、以前に準備したプレートからの各ウェルに、ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液１００μＬ中のｆＰＳＡの溶液（２５μＬ、４７．７ｎｇ／ｍＬ）を添加することによって、親和性アッセイを行った。室温で１時間インキュベートした後、溶液を吸引し、ウェルをアッセイ緩衝液で２回洗浄した。８９Ｚｒ−５Ａ１０  ２０μｇ、および非標識５Ａ１０  ０．０、０．００２、０．０２、０．２、０．５、１、２、４、６、８、または１０μｇを含有するアッセイ緩衝液のアリコート２００μＬを添加することで結合アッセイを開始した。すべての反応は、二通りに行った。反応物をゆっくり振盪しながら２時間インキュベートし、このときウェルを吸引し、ＤＥＬＦＩＡ洗浄液で４回すすいだ。結合活性をＮａＩ（Ｔｌ）−ウェルカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ２４８０  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｇａｍｍａ  Ｃｏｕｎｔｅｒ）で判定した。
【０１９０】
インキュベーション後にウェル中に保持された活性は、ｆＰＳＡへの８９Ｚｒ−５Ａ１０の特異的結合と解釈した。ＤＦＯおよび８９Ｚｒが５Ａ１０にコンジュゲートしても、ｆＰＳＡに対するｍＡｂの親和性はまったく変化しないという仮定で計算した理想（理論）値に対して実験値をプロットした。線形回帰を使用して線形性（ｙ＝ｘ）からの偏差を求めた。８９Ｚｒ−５Ａ１０の１つの調製からの代表的なデータを示す。アッセイは、５Ａ１０の２つの独立した濃度範囲（合計ｎ＝４）を使用して二通りに行った。図２中に提示した結果は、８９Ｚｒ−ＤＦＯが５Ａ１０にバイオコンジュゲートしても、精製ｆＰＳＡに対する親和性はまったく喪失せず、８９Ｚｒ−５Ａ１０は、ｆＰＳＡに対して特異的なままであることを実証する。
（実施例２）
ｉｎ  ｖｉｖｏでの８９Ｚｒ−５Ａ１０結合
【０１９１】
記載されているように（Ｃｈｅｎ，  Ｃ．Ｄ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  Ａｎｄｒｏｇｅｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．、２００４年、１０巻：３３〜３９頁）、野生型アンドロゲン受容体を過剰発現する親前立腺がん細胞に由来するＰＳＡ陽性ヒト前立腺がんモデルである、ＬＮＣａＰ−ＡＲの皮下（ｓ．ｃ．）異種移植片を接種されたインタクトな雄マウスに８９Ｚｒ−５Ａ１０を投与することによって、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験を行った。すべての動物実験は、施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）指針および実験動物の管理と使用に関する指針に従って行った。雄ＣＢ−１７ＳＣＩＤマウス（生後６〜８週）をＴａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ  Ｉｎｃ．（Ｈｕｄｓｏｎ、ＮＹ）から得、培地の再構成基底膜との１：１ｖ／ｖ混合物（ＢＤ  Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）、Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）の細胞懸濁液２００μＬ中の１．０×１０６細胞を皮下（ｓ．ｃ．）注射することによって、右側腹部にＬＮＣａＰ−ＡＲ、２２Ｒｖ１、およびＰＣ３腫瘍を接種した。３〜７週間の期間の後、触知可能な腫瘍（５０〜２５０ｍｍ３）が発達した。外科的去勢およびペレット移植を、イソフルランを用いた麻酔下で公知のプロトコールに従って実施した。以前に報告された方法（Ｈｏｌｌａｎｄ，  Ｊ．Ｐ．ら、Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  Ｈｓｐ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｎ  ＨＥＲ２／ｎｅｕ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｕｓｉｎｇ  ８９Ｚｒ−ＤＦＯ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、２０１０年、５巻（１号）、ｅ８８５９頁）に従って、外側ノギス測定によって腫瘍体積（Ｖ／ｍｍ３）を推定した。
【０１９２】
組織を注射後（ｐ．ｉ．）の複数時点で回収して、放射性トレーサー生体内分布の動態を求めた（図３ａ）。生体内分布試験を行って、ヒト前立腺がん異種移植片モデル内の８９Ｚｒ−５Ａ１０の取込みを評価した。マウスを加熱ランプで５分穏やかに加温した後、８９Ｚｒ−５Ａ１０（１．１１〜１．８５ＭＢｑ、［３０〜５０μＣｉ］、タンパク質５．７〜９．５μｇ、注射用滅菌生理食塩水２００μＬ中）を静脈内（ｉ．ｖ．）尾静脈注射（ｔ＝０時間）を介して投与した。動物（１群当たりｎ＝４〜５）を、注射して１、４、１２、２４、４８、７２、９６、および１２０時間後にＣＯ２（ガス）窒息によって安楽死させ、１６の組織（腫瘍を含む）を取り出し、水ですすぎ、空気中で５分間乾燥させ、秤量し、８９Ｚｒ−放射能の蓄積についてγカウンターでカウントした。各動物内に注射した８９Ｚｒ−５Ａ１０製剤の質量を測定し、公知の活性および質量の標準的なシリンジと比較することによってカウント（１分当たりのカウント［ｃ．ｐ．ｍ．］）の総数を求めるのに使用した。カウントデータをバックグラウンド補正および減衰補正し、各試料についての１グラム当たりの注射用量のパーセンテージの単位で測定した組織取込み（％ＩＤ／ｇ）を、注射した活性の総量に対して正規化することによって計算した。
【０１９３】
ピーク腫瘍関連活性が注射しておよそ２４時間後に観察され（１９．５９±４．９％ＩＤ／ｇ）、ほとんど例外なく、わずかな８９Ｚｒ−５Ａ１０蓄積が宿主組織内で観察された（図３ａ；図４）。図４に示したように、担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０で処置し、注射後の指定時間に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告する。表１は、右肩に皮下ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持つインタクトな雄ＳＣＩＤマウス内にｉ．ｖ．投与した後の複数時点における８９Ｚｒ−５Ａ１０のｅｘ  ｖｉｖｏ生体内分布データ（ｎ＝４）を示す。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として表現する。腫瘍対組織比および組織対筋肉比の誤差を、標準偏差の幾何平均として計算する。
【表１】
2015502339.tif 000002
【０１９４】
表２は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射された、ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持つインタクトな雄マウスにおける、ＥＬＩＳＡを介した腫瘍組織由来のＰＳＡ発現レベルの分析を示す。マウスに８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射し、注射後の指定時点で屠殺し、ＰＳＡ分析を行った。腫瘍組織を外科的に切り取った。ｆＰＳＡおよび総ＰＳＡ（「ｔＰＳＡ」）をＰＳＡ指向性ＥＬＩＳＡで求め、値を総タンパク質濃度に対して正規化した。ｆＰＳＡ濃度を平均ｎｇ／ｍｌとして報告し（ａ）、総ＰＳＡ（「ｔＰＳＡ」）濃度をｎｇ／ｍＬとして報告し（ｂ）、総タンパク質濃度をｎｇ／ｍｇとして報告する（ｃ）。血清および腫瘍組織中のＰＳＡ検出のために、ＥＬＩＳＡを以下の通り行った。製造者の推奨に従って、二重標識免疫蛍光アッセイ（ＤＥＬＦＩＡ  Ｐｒｏｓｔａｔｕｓ（商標）、フリーＰＳＡ（ＰＳＡ  Ｆｒｅｅ）／総ＰＳＡ；Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でｆＰＳＡおよびｔＰＳＡを測定した。このアッセイでは、等モル様式でｆＰＳＡおよび複合体化ＰＳＡ（ｃＰＳＡ）を測定し８、ｆＰＳＡに対するＰＳＡ−ＡＣＴの交差反応性は、０．２％未満であった９。検出の下限は、ｔＰＳＡについて０．０５μｇ／Ｌ（２．３２μｇ／ＬでＣＶ＝５．０％）であり、ｆＰＳＡについて０．０４μｇ／Ｌ（０．２５μｇ／ＬでＣＶ＝５．９％）であった。検出のために、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ製１２３５自動イムノアッセイシステムを使用した。ｃＰＳＡ濃度は、ｔＰＳＡからｆＰＳＡを減ずることによって計算した。
【表２】
2015502339.tif 000003
【０１９５】
ＰＥＴ試験では、生体内分布データを支持する、腫瘍におけるコントラストの領域が示された（図３ｂ）。図３ｂは、８９Ｚｒ−５Ａ１０の腫瘍（Ｔ）への局在化、およびマウス肝臓（Ｌ）内の取込みを示す、ＬＮＣａＰＡＲ異種移植片を持つインタクトな雄マウスの代表的な横断（Ｔｒａｎｓ．）ＰＥＴスライスおよび冠状ＰＥＴスライスを提供する。ＰＥＴイメージング実験は、ｍｉｃｒｏＰＥＴ  Ｆｏｃｕｓ  １２０スキャナー（Ｃｏｎｃｏｒｄｅ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）で行った。繰り返し試験（ｎ＝４）において、マウスに、８９Ｚｒ−５Ａ１０（１０．４〜１２．６ＭＢｑ、［２８０〜３４０μＣｉ］、タンパク質５３．１〜６４．５μｇ、注射用滅菌生理食塩水２００μＬ中）の製剤をｉ．ｖ．尾静脈注射（ｔ＝０時間）を介して投与した。ＰＥＴ画像を記録するおよそ５分前に、１〜２％のイソフルラン（Ｂａｘｔｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）／酸素ガス混合物の吸入によってマウスを麻酔し、スキャナーベッド上に置いた。ＰＥＴ画像は、注射後１〜１２０時間の間の様々な時点で記録した。リスト−モードデータは、３５０〜７５０ｋｅＶのγ線エネルギーウィンドウ、および６ｎｓのコインシデンスタイミングウィンドウを使用して１０〜３０分の間に取得した。すべての静的画像について、スキャン時間を調整して、最低２０００万の一致イベントが記録されるのを保証した。フーリエリビニングによってデータを選別して２次元ヒストグラムにし、横断画像をフィルタ補正逆投影（ＦＢＰ）によって再構築して１２８×１２８×６３（０．７２×０．７２×１．３ｍｍ）のマトリックスにした。８９Ｚｒの再構築された空間分解能は、視野（ＦＯＶ）の中心で１．９ｍｍの半値全幅（ＦＷＨＭ）であった。画像データを正規化してＰＥＴの応答の不均一性、デッドタイムカウントロス、ポジトロン分岐比、および注射の時間に対する物理的崩壊を補正したが、減衰、散乱、または部分的ボリューム平均化の補正はまったく適用しなかった。マウスについての経験的に求められるシステム較正係数（［ｍＣｉ／ｍＬ］／［ｃｐｓ／ボクセル］の単位での）を使用して、ボクセルカウント率を活性濃度に変換した。次いで得られた画像データを投与された活性に対して正規化して、％ＩＤ／ｇの観点から画像をパラメータ化した。手作業で描いた２次元対象領域（ＲＯＩ）または３次元対象ボリューム（ＶＯＩ）を使用して、様々な組織における最大および平均％ＩＤ／ｇ（注射の時間に対して補正した崩壊）を求めた。ＡＳＩＰｒｏ  ＶＭ（商標）ソフトウェア（Ｃｏｎｃｏｒｄｅ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して画像を分析した。
【０１９６】
８９Ｚｒ−５Ａ１０取込みを競うために１００倍過剰の非標識５Ａ１０を使用して、８９Ｚｒ−５Ａ１０とＬＮＣａＰ−ＡＲとの生物相互作用の特異性を確認した（図３ｃ、図５、表３、および表４）。担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０および過剰の５Ａ１０（１ｍｇ／マウス）で同時処置し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。図３ｃは、インタクトな雄マウスにおける、複数のｓ．ｃ．ＰＣａモデルおよびいくつかの処置条件での腫瘍結合８９Ｚｒ−５Ａ１０を示す生体内分布データを提供する。８９Ｚｒ−５Ａ１０のＬＮＣａＰＡＲへの局在化は、過剰の非標識５Ａ１０（１ｍｇの非標識ｍＡｂ）との同時注射によって完全に競合された。非特異的放射性トレーサー８９Ｚｒ−ＩｇＧは、ＬＮＣａＰ−ＡＲに局在化せず、８９Ｚｒ−５Ａ１０は、ＰＣ３、前立腺がんのＡＲ−およびＰＳＡヌルモデルに局在化しなかった。８９Ｚｒ−５Ａ１０のＣＷＲ２２Ｒｖ１異種移植片への中程度の局在化が観察され、ＬＮＣａＰ−ＡＲと比較して、このモデルにおけるＰＳＡのより低い基本的発現と一致した。すべての条件と比較して＊Ｐ＜０．０１。ＰＣ３と比較して”Ｐ＜０．０１。表３は、過剰の非標識５Ａ１０で同時注射された、ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持つインタクトなマウスにおける８９Ｚｒ−５Ａ１０取込みの生体内分布データを示す。右肩に皮下ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持つインタクトな雄ＳＣＩＤマウス内にｉ．ｖ．投与、および５Ａ１０  １ｍｇの同時注射をした後の複数時点における８９Ｚｒ−５Ａ１０のｅｘ  ｖｉｖｏ生体内分布データ（ｎ＝４）。データは、平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として表現する。比の誤差は、標準偏差の幾何平均として計算する。
【表３】
2015502339.tif 000004
【０１９７】
表４は、ＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持ち、８９Ｚｒ−５Ａ１０および過剰の非標識５Ａ１０を同時注射されたインタクトな雄マウス内のＰＳＡの腫瘍測定を含有する。マウスに８９Ｚｒ−５Ａ１０および過剰の非標識５Ａ１０（１ｍｇ）を注射し、注射後の指定時点で屠殺し、ＰＳＡ分析を行った。腫瘍組織を外科的に切り取った。ｆＰＳＡおよびｔＰＳＡを、ＰＳＡ指向性ＥＬＩＳＡ（上記の通り）を用いて求め、値を総タンパク質濃度に対して正規化した。ａｆＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍｌとして報告し、ｂ総ＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍＬとして報告し、ｃ総タンパク質濃度をｎｇ／ｍｇとして報告する。略語：ｆＰＳＡ、フリーＰＳＡ（ｆＰＳＡ）；ｔＰＳＡ、総ＰＳＡ。
【表４】
2015502339.tif 000005
【０１９８】
さらに、２４時間のｐ．ｉ．において、ＬＮＣａＰ−ＡＲ内に、非特異的放射性トレーサー８９Ｚｒ−標識マウスＩｇＧのわずかな取込みがあった（図３ｃ、図６、表５、および表６）。図６は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射された、ＬＮＣａＰ−ＡＲ、ＰＣ３、またはＣＷＲ２２Ｒｖ１異種移植片を持つインタクトな雄マウスの生体内分布プロットを示す。担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０で処置し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告する。表５は、ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持つインタクトなマウス内の８９Ｚｒ−ＩｇＧ取込みについての生体内分布データを示す。右肩に皮下ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持つインタクトな雄ＳＣＩＤマウス内にｉ．ｖ．投与した後の複数時点における８９Ｚｒ−ＩｇＧのｅｘ  ｖｉｖｏ生体内分布データ（ｎ＝４）。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として表現する。比の誤差を標準偏差の幾何平均として計算する。
【表５−１】
2015502339.tif 000006
【表５−２】
2015502339.tif 000007
【０１９９】
表６は、ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持ち、８９Ｚｒ−ＩｇＧを注射されたインタクトなマウスにおけるＥＬＩＳＡを介したＰＳＡ発現レベルの腫瘍分析を示す。マウスに８９Ｚｒ−ＩｇＧを注射し、注射後の指定時点で屠殺し、ＰＳＡ分析を行った。腫瘍組織を外科的に切り取った。ｆＰＳＡおよびｔＰＳＡを、ＰＳＡ指向性ＥＬＩＳＡ（上記の通り）を用いて求め、腫瘍内ＰＳＡの場合では、値を総タンパク質濃度に対して正規化した。ａｆＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍｌとして報告し、ｂ総ＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍＬとして報告し、ｃ総タンパク質濃度をｎｇ／ｍｇとして報告する。略語：ｆＰＳＡ、フリーＰＳＡ；ｔＰＳＡ、総ＰＳＡ。
【表６】
2015502339.tif 000008
【０２００】
予期したように、ＰＣ３異種移植片、ヒトＰＣａのＡＲ−およびＰＳＡ陰性モデルは、２４時間のｐ．ｉ．において、８９Ｚｒ−５Ａ１０に対するわずかなアビディティーを示した（図３ｃ、図７、および表７）。図７において、担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０で処置し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告する。
【０２０１】
表７は、ＰＣ３腫瘍を持つインタクトな雄マウス内の８９Ｚｒ−５Ａ１０取込みについての生体内分布データを示す。皮下ＰＣ３腫瘍を有するインタクトな雄マウス（ｎ＝４）内の８９Ｚｒ−５Ａ１０取込みについてのｅｘ  ｖｉｖｏ生体内分布データ。データは、ｉ．ｖ．投与して２４時間後に取得した。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として表現する。比の誤差を標準偏差の幾何平均として計算する。
【表７】
2015502339.tif 000009
【０２０２】
最後に、ｓ．ｃ．ＣＷＲ２２Ｒｖ１異種移植片は、８９Ｚｒ−５Ａ１０、別のＡＲ−およびＰＳＡ陽性ＰＣａモデルに貪欲であった（図３ｃ、図７、および表８）。表８は、ＣＷＲ２２Ｒｖ１腫瘍を持つインタクトな雄マウス内の８９Ｚｒ−５Ａ１０取込みについての生体内分布データを提供する。皮下ＣＷＲ２２Ｒｖ１腫瘍を持つインタクトな雄マウス（ｎ＝４）内の８９Ｚｒ−５Ａ１０取込みについてのｅｘ  ｖｉｖｏ生体内分布データ。データは、ｉ．ｖ．投与して２４時間後に取得した。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として表現する。比の誤差を標準偏差の幾何平均として計算する。
【表８】
2015502339.tif 000010
（実施例３）
ｆＰＳＡ発現のアンドロゲン制御上昇（Ａｎｄｒｏｇｅｎ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ）の８９Ｚｒ−５Ａ１０検出
【０２０３】
以下の実施例は、８９Ｚｒ−５Ａ１０がｆＰＳＡ発現のアンドロゲン制御上昇を検出することができることを実証する。去勢雄マウスにＬＮＣａＰ−ＡＲを接種し、腫瘍形成後、動物に操作をまったく行わないか、またはテストステロンペレットをｓ．ｃ．に外科的に移植した。８９Ｚｒ−５Ａ１０を、操作して７日後に投与し、生体内分布試験を２４時間のｐ．ｉ．に行った。８９Ｚｒ−５Ａ１０局在化は、対照と比較して、テストステロンに曝露されたＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片内で有意により高かった（図３ｄ、図８、および表９）。図８は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射された、皮下テストステロンペレットを有する、または有さないＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスの生体内分布プロットを示す。テストステロンペレットの外科的移植または操作なし（Ｎｏ  Ｔｘ）の６日後に、担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０で処置し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告する。Ｎｏ  Ｔｘと比較して、テストステロンに曝露された動物における８９Ｚｒ−５Ａ１０の腫瘍内取込みについて＊Ｐ＜０．０１。表９に示したように、ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持つ去勢雄マウス内の８９Ｚｒ−５Ａ１０生体内分布取込みは、アンドロゲン処置で有意に上昇した。ＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウス内の８９Ｚｒ−５Ａ１０の取込みを示すｅｘ  ｖｉｖｏ生体内分布データ。動物（ｎ＝４）に操作をしない（Ｎｏ  Ｔｘ）か、または皮下テストステロンペレット（Ｔｅｓｔ．）を投与した。７日後、動物に８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射し、生体内分布データを、放射性トレーサーをｉ．ｖ．投与して２４時間後に取得した。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として表現する。比の誤差を標準偏差の幾何平均として計算する。
【表９】
2015502339.tif 000011
【０２０４】
予期されたように、腫瘍内ＰＳＡレベルも増大した（表１０）。表１０は、操作されていないか、または皮下テストステロンペレットを投与されているＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウス内の腫瘍内ＰＳＡ濃度を提供する。ＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスに処置をせず（ＶＥＨ＃）、または皮下テストステロンペレットを投与し（ＴＥＳＴ＃）、操作して６日後に、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射した。注射して２４時間後に、マウスを屠殺して、ＰＳＡ分析を行った。腫瘍組織を外科的に切り取った。ｆＰＳＡおよびｔＰＳＡを、ＰＳＡ指向性ＥＬＩＳＡ（上記の通り）を用いて求め、腫瘍内ＰＳＡの場合では、値を総タンパク質濃度に対して正規化した。ａｆＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍｌとして報告し、ｂ総ＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍＬとして報告し、ｃ総タンパク質濃度をｎｇ／ｍｇとして報告する。略語：ｆＰＳＡ、フリーＰＳＡ；ｔＰＳＡ、総ＰＳＡ。
【表１０】
2015502339.tif 000012
【０２０５】
同様の結果がＣＷＲ２２Ｒｖ１異種移植片で観察された（図８、表１１、および表１２）。図８において、テストステロンペレットの外科的移植または操作なし（Ｎｏ  Ｔｘ）の６日後に、担腫瘍マウスを８９Ｚｒ−５Ａ１０で処置し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データを平均ｃｐｍ／ｇ＋１標準偏差として報告する。Ｎｏ  Ｔｘと比較して、テストステロンに曝露された動物における８９Ｚｒ−５Ａ１０の腫瘍内取込みについて＊Ｐ＜０．０５。表１１は、ＣＷＲ２２Ｒｖ１異種移植片を持つ去勢雄マウス内の８９Ｚｒ−５Ａ１０の取込みを示すｅｘ  ｖｉｖｏ生体内分布データを提供する。８９Ｚｒ−５Ａ１０を投与する７日前に、動物（ｎ＝４）に操作をしないか（Ｎｏ  Ｔｘ）、または皮下テストステロンペレットを投与した（Ｔｅｓｔ．）。生体内分布データは、放射性トレーサーをｉ．ｖ．投与して２４時間後に取得した。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として表現する。比の誤差を標準偏差の幾何平均として計算する。
【表１１】
2015502339.tif 000013
【０２０６】
表１２は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射された、２２Ｒｖ１腫瘍を持つ去勢雄マウスにおけるＥＬＩＳＡを介したＰＳＡ発現レベルの腫瘍分析を提供する。２２Ｒｖ１Ｒ異種移植片を持つ去勢雄マウスに処置をせず（ＶＥＨ＃）、または皮下テストステロンペレットを投与し（ＴＥＳＴ＃）、操作して６日後に、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射した。注射して２４時間後に、マウスを屠殺して、ＰＳＡ分析を行った。腫瘍組織を外科的に切り取った。ｆＰＳＡおよびｔＰＳＡを、ＰＳＡ指向性ＥＬＩＳＡ（上記の通り）を用いて求め、値を総タンパク質濃度に対して正規化した。ａｆＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍｌとして報告し、ｂ総ＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍＬとして報告し、ｃ総タンパク質濃度をｎｇ／ｍｇとして報告する。略語：ｆＰＳＡ、フリーＰＳＡ；ｔＰＳＡ、総ＰＳＡ。
【表１２】
2015502339.tif 000014
【０２０７】
まとめると、これらの結果は、８９Ｚｒ−５Ａ１０が腫瘍内ＡＲシグナル伝達を忠実に反映することができることを示した。
（実施例４）
８９Ｚｒ−５Ａ１０を用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのアンドロゲン受容体シグナル伝達のｉｎ  ｖｉｖｏ定量化
【０２０８】
以下の実施例では、ｆＰＳＡ特異的モノクローナル抗体の、ｉｎ  ｖｉｖｏでのアンドロゲン受容体シグナル伝達を定量化する能力を実証した。この特定の実施例では、臨床活性がＬＮＣａＰ−ＡＲモデルにおける応答と相関する抗アンドロゲンＭＤＶ３１００を使用して、８９Ｚｒ５Ａ１０  ＰＥＴを用いてｉｎ  ｖｉｖｏでＡＲの薬理的阻害を定量化した。
【０２０９】
動物に投与されたときの最終ＤＭＳＯ濃度が５％であるように、ＤＭＳＯ中にＭＤＶ３１００を溶解させた。ビヒクルの配合は、１％のカルボキシメチルセルロース、０．１％のＴｗｅｅｎ−８０、および５％のＤＭＳＯである。ＭＤＶ３１００またはビヒクルを、強制飼養を介して毎日投与した。以前に報告された方法（Ｈｏｌｌａｎｄ，  Ｊ．Ｐ．ら、Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  Ｈｓｐ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｎ  ＨＥＲ２／ｎｅｕ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｕｓｉｎｇ  ８９Ｚｒ−ＤＦＯ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、２０１０年、５巻（１号）、ｅ８８５９頁）に従って、外側ノギス測定によって腫瘍体積（Ｖ／ｍｍ３）を推定した。
【０２１０】
去勢雄マウスにｓ．ｃ．ＬＮＣａＰＡＲ異種移植片を接種し、担腫瘍マウスをランダム化して、ビヒクル、または１０、４０、もしくは８０ｍｇ／ｋｇのＭＤＶ３１００を毎日経口強制飼養される群にした。処置を開始して７日後に、８９Ｚｒ−５Ａ１０を投与し、生体内分布試験を２４時間のｐ．ｉに行った（図１０ａ、図１１、および表１３）。図１０ａにおいて、ＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスからの生体内分布データは、ＭＤＶ３１００は、８９Ｚｒ−５Ａ１０の腫瘍への局在化を阻害することを示す。ビヒクル、または指定用量のＭＤＶ３１００で７日間動物を処置し、このとき８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射し、２４時間のｐ．ｉ．に動物を回収し、生体内分布試験を行った。ビヒクルまたは１０ｍｇ／ｋｇのＭＤＶ３１００と比較して４０ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇの用量について＊Ｐ＜０．０１。図１１、すなわち、ビヒクルまたはＭＤＶ３１００で処置され、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射されたＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスの生体内分布プロットは、ＭＤＶ３１００が用量依存的様式で前立腺がんへの８９Ｚｒ−５Ａ１０局在化を阻害することを同様に示す。担腫瘍去勢マウスを、ビヒクル、または指定用量のＭＤＶ３１００（毎日の経口強制飼養）で処置した。６日目に、マウスに８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データを平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告する。ビヒクルに対するＭＤＶ３１００  ４０ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇについて＊Ｐ＜０．０１。１０ｍｇ／ｋｇの用量のＭＤＶ３１００に対する４０ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇの用量についてＰ＜０．０５。表１３は、ＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスにおける８９Ｚｒ−５Ａ１０の取込みを示すｅｘ  ｖｉｖｏ生体内分布データを示す。毎日の経口強制飼養を介して、ビヒクル、または指定用量のＭＤＶ３１００（ＭＤＶ）で動物（ｎ＝４）を処置した。６日目に、８９Ｚｒ−５Ａ１０をｉ．ｖ．投与した。生体内分布データは、放射性トレーサーをｉ．ｖ．投与して２４時間後に取得した。
【表１３】
2015502339.tif 000015
【０２１１】
予期されたように、各用量のＭＤＶ３１００は、ＡＲシグナル伝達およびｆＰＳＡ合成を阻害した（表１４）。表１４は、抗アンドロゲンで処置された、ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍を持つ去勢雄マウスにおけるＥＬＩＳＡを介したＰＳＡ発現レベルの腫瘍分析に関するデータを提供する。ＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスに、ビヒクル（ＶＥＨ＃）、１０ｍｇ／ｋｇ（ＭＤＶ１０＃）、４０ｍｇ／ｋｇ（ＭＤＶ４０＃）、または８０ｍｇ／ｋｇ（ＭＤＶ８０＃）を毎日経口強制飼養した。操作して６日後に、マウスに８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射した。注射して２４時間後に、マウスを屠殺し、ＰＳＡ分析を行った。腫瘍組織を外科的に切り取った。ｆＰＳＡおよびｔＰＳＡを、ＰＳＡ指向性ＥＬＩＳＡ（上記の通り）を用いて求め、腫瘍内ＰＳＡの場合では、値を総タンパク質濃度に対して正規化した。ａｆＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍｌとして報告し、ｂ総ＰＳＡ濃度をｎｇ／ｍＬとして報告し、ｃ総タンパク質濃度をｎｇ／ｍｇとして報告する。略語：ｆＰＳＡ、フリーＰＳＡ；ｔＰＳＡ、総ＰＳＡ。
【表１４】
2015502339.tif 000016
【０２１２】
したがって、腫瘍結合８９Ｚｒ−５Ａ１０は、４０ｍｇ／ｋｇおよび８０ｍｇ／ｋｇの用量のＭＤＶ３１００によって有意に減少した（図１０ａ）。
【０２１３】
注目すべきことに、本発明者らは、ビヒクルまたは８０ｍｇ／ｋｇのＭＤＶ３１００を毎日経口強制飼養される動物の群間で、ＰＥＴによる腫瘍結合８９Ｚｒ−５Ａ１０の統計的変化も観察した（図１０ｂおよび図１０ｃ、表１６）。図１０ｂは、右側腹部にＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つインタクトな雄マウスの、ｓ．ｃ．テストステロンペレット、または７日間のビヒクルもしくはＭＤＶ３１００（８０ｍｇ／ｋｇ）の毎日の経口強制飼養で操作した後、２４時間のｐ．ｉ．に８９Ｚｒ−５Ａ１０で画像化した、代表的な横断（Ｔｒａｎｓ．）ＰＥＴおよび冠状ＰＥＴスライスを示す。腫瘍結合８９Ｚｒ５Ａ１０の明らかな視覚的差異を群間で見ることができる。矢印は、腫瘍（Ｔ）およびマウス肝臓（Ｌ）の位置を示す。図１０ｃにおいて、ＰＥＴ試験からの腫瘍の対象領域の分析は、腫瘍結合８９Ｚｒ−５Ａ１０の統計的に有意な変化を示す。ビヒクルと比較して＊Ｐ＜０．０１。ビヒクルと比較して”Ｐ＜０．０５。エラーバーは、平均からの標準偏差を表す。表１６は、皮下ＬＮＣａＰ−ＡＲ腫瘍の対象領域の分析から求めたＳＵＶｍｅａｎ値のリストを提供する。
【表１６】
2015502339.tif 000017
【０２１４】
さらに、腫瘍結合８９Ｚｒ−５Ａ１０の有意な増加が、ｓ．ｃ．テストステロンペレットを投与されているマウスの別々の処置アームにおいて観察された。
【０２１５】
まとめると、これらの結果は、８９Ｚｒ−５Ａ１０の、腫瘍内ＡＲシグナル伝達の薬理学的に誘発される変化を測定するアビリティーを強調する。
（実施例５）
８９Ｚｒ−５Ａ１０は、骨格前立腺がん病変を区別することができる
【０２１６】
上記に論じたように、慣例的な前立腺がん診断の重要な限界は、真の骨格転移性疾患と、転移性疾患と無関係であるか、または分析が邪魔される程度に処理からの時間が離れている近傍の骨再形成とを区別することができないことである。本実施例では、ｆＰＳＡモノクローナル抗体は、真の骨格前立腺がん病変を区別するアビリティーを有することが実証された。
【０２１７】
以下の通り、インタクトな雄マウスの左後肢の脛骨にＬＮＣａＰ−ＡＲを注射することによって、骨腫瘍を設けた。手術の前に、去勢雄ＳＣＩＤマウスをケタミンで麻酔し、左後肢に切開を行った。骨錐を使用して脛骨を穿刺し、１×１０５細胞（２２Ｒｖ１またはＬＮＣａＰ−ＡＲ）を骨髄中に注射した。穿刺部を骨ろうで閉じ、切開を縫合し、動物に対症用量のカルプロフェン（５ｍｇ／ｋｇ）を、手術後３日間、毎日１回投与した。腫瘍発達を生物発光イメージングで追跡し、ＭＲＩで確認した。骨折モデルを、細胞の注射および骨ろうの塗布を除いて骨腫瘍モデルと同様に準備した。
【０２１８】
腫瘍発達は、７週間後にＭＲＩによって確認した（図１２および図１３）。図１２は、左脛骨にＬＮＣａＰ−ＡＲを接種されたマウスの代表的な生物発光画像を示す。インタクトな雄マウスの脛骨にＬＮＣａＰ−ＡＲを接種し、進行を生物発光によって監視し、腫瘍発達をＭＲＩおよび血清ＰＳＡ分析によって確認した。接種して５週間後の担腫瘍マウスのコホートの一般的な画像が示されている。これらの動物は、疾患および陽性生物発光が確認されていた。
【０２１９】
マウスの磁気共鳴画像は、２００ＭＨｚで稼働し、４００ｍＴ／ｍ  ＩＤ  １２ｃｍの傾斜磁場コイルを備えたＢｒｕｋｅｒ  ４．７Ｔ  Ｂｉｏｓｐｅｃスキャナー（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｂｉｏｓｐｉｎ  ＭＲＩ  ＧｍｂＨ、Ｅｔｔｌｉｎｇｅｎ、ドイツ）で取得した。ＩＤが３２ｍｍである特注の直交バードケージ共振器を、ＲＦの励起および取得に使用した（Ｓｔａｒｋ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  ＭＲＩ  Ｃｏｉｌｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｅｒｌａｎｇｅｎ、ドイツ）。酸素および１％のイソフルランガスでマウスを麻酔した。動物の呼吸は、小動物生理学的モニタリングシステム（ＳＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｓｔｏｎｙ  Ｂｒｏｏｋ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を使用することによって監視した。動物を適所配置するために、３つのオルソゴナル方向に沿ったＴ２重みづけスカウト画像を最初に取得した。Ｔ２重みづけ高速スピンエコーＲＡＲＥシーケンス（緩和増強による急速撮像）を使用して、スライス厚が０．８ｍｍであり、ＦＯＶが１１７×１３３μｍの空間分解能を伴った３０ｍｍ×３４ｍｍである、軸方向のマウス骨盤画像を取得した。以下の取得パラメータ、すなわち、ＴＲ＝４．５秒、ＴＥ＝４０ｍｓ、ＲＡＲＥ因子  ８、および２０分の収集時間を使用した。
【０２２０】
図１３は、骨の腫瘍浸潤を示す代表的なＭＲＩスライスを提示する。インタクトな雄マウスの脛骨にＬＮＣａＰ−ＡＲを接種し、腫瘍発達をＭＲＩおよび血清ＰＳＡ分析で視覚的に確認した。腫瘍塊を示す左後肢（ＭＲＩスライスの右側に向いた）のコントラストの領域が赤で囲まれている。
【０２２１】
ＰＥＴ／ＣＴ試験により、反対側の肢と比較して、担腫瘍後肢における高コントラストが示された（図１４ａ）。ＰＥＴ／ＣＴ試験について、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）画像は、軸方向８．５ｃｍ×横断方向５．０ｃｍのＦＯＶを有する小動物Ｓｉｅｍｅｎｓ／ＣＴＩ  ｍｉｃｒｏＣＡＴ  ＩＩ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＰＡ）スキャナーで取得した。同時登録したＰＥＴ／ＣＴ画像を、以前に報告された方法に従って、マトリックスに記録およびマッピングした。図１４ａでは、同時登録した三次元ボリュームを与えるＰＥＴ／ＣＴ画像が、８９Ｚｒ５Ａ１０は、インタクトな雄マウスの左脛骨に位置した骨ＬＮＣａＰ−ＡＲ移植片に局在化することを示す。青色−緑色の色スケールで与えたＰＥＴデータは、右の（正常な）脛骨と比較して、動物の左（担腫瘍）脛骨上により多い量の活性を示す。
【０２２２】
この観察と一致して、同時登録したＰＥＴ／ＭＲＩ画像は、脛骨におけるＰＥＴおよびＭＲＩコントラストの整列を示した。（図１４ｂおよび図１５）。図１４ｂでは、同時登録したＰＥＴ／ＭＲＩ画像が、ＭＲＩによって検出された腫瘍関連コントラストとの８９Ｚｒ−５Ａ１０からのポジトロン放射の同時局在化を示す。図１５は、脛骨中の腫瘍との８９Ｚｒ−５Ａ１０の同時整列を示す、同時登録したＰＥＴ／ＭＲＩスライスを示す。インタクトな雄マウスの脛骨にＬＮＣａＰ−ＡＲを接種し、腫瘍発生をＭＲＩおよび血清ＰＳＡ分析で視覚的に確認した。同時登録したＰＥＴ／ＭＲＩ画像は、８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射して２４時間後に取得した。右（正常な）後肢からの画像が比較のために提示されている。
【０２２３】
外科的に切り取った脛骨の死後オートラジオグラフィーは、８９Ｚｒ−５Ａ１０からのポジトロン放射が、組織診断によって画定された、ＬＮＣａＰ−ＡＲ病変部のトポグラフィーと同時整列することを示した（図１６）。手順は、以下の通り行った。マウスを屠殺した後、腫瘍を含む脛骨を外科的に切り取り、ＯＣＴ（Ｍｉｌｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｅｌｋｈａｒｔ、ＩＮ）中に包埋し、クライオモールド内のドライアイス上でスナップ凍結させた。１０枚の連続した厚さ５μｍの組織切片のセットを、Ｍｉｃｒｏｍ  ＨＭ５００クリオスタットミクロトーム（Ｍｉｃｒｏｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｗａｌｌｄｏｒｆ、ドイツ）を使用して切断し、ポリ−Ｌ−リシン被覆ガラス顕微鏡スライド上に配列した。組織切片を、１０％のホスフェート緩衝ホルマリン中で５分間固定し、２回洗浄し、空気乾燥させ、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。染色した組織切片を、Ｆｕｊｉ  ｆｉｌｍ  ＢＡＳ−ＭＳ２３２５イメージングプレート（Ｆｕｊｉ  Ｐｈｏｔｏ  Ｆｉｌｍ  Ｃｏ、東京、日本）に対するフィルムカセット内に置いて、デジタルオートラジオグラム（ＤＡＲ）を取得した。８９ＺｒＣｌまたは８９Ｚｒ−５Ａ１０を注射して約１６８時間後に、スライドを４８時間曝露した。５０μｍのピクセル寸法を有するデジタル画像を生成するＦｕｊｉｆｉｌｍ  ＢＡＳ−１８００ＩＩバイオイメージングアナライザー（Ｆｕｊｉ  Ｐｈｏｔｏ  Ｆｉｌｍ  Ｃｏ、東京、日本）によって、曝露した蛍光体プレートを読み取った。デジタル画像は、モーター駆動ステージ（Ｐｒｉｏｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ、Ｒｏｃｋｌａｎｄ、ＭＡ）を備えたＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ６０  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ）で得た。引き続いて、Ｈ＆Ｅ画像を、ＤＡＲデータと同じ解像度に取得した。剛体平面変換（ｒｉｇｉｄ  ｐｌａｎａｒ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍ）を使用して、ＤＡＲ画像をＨ＆Ｅ画像に手作業で整列させた。
【０２２４】
図１６では、８９Ｚｒ−５Ａ１０（左）および８９ＺｒＣｌ（右）で処置した骨ＬＮＣａＰ−ＡＲ移植片を持つマウスの組織構造および重ねたオートラジオグラフィーは、８９Ｚｒ−５Ａ１０は、腫瘍組織に局在化し、一方、８９ＺｒＣｌは、正常な骨に局在化することを示す。腫瘍組織は、組織診断の目視検査によって区別した（Ｈ＆Ｅ染色によって画定）。これは、４倍で、青色で囲まれており、１０倍で、矢印で強調されている。より高い拡大の図のために選択した組織の領域は、黄色で輪郭を描いてある。
【０２２５】
８９Ｚｒ−５Ａ１０が骨再形成と交差反応しないことをさらに確認するために、右後肢の脛骨の穿刺によってマウスの別々のコホート内で骨折を外科的に誘導した。１８ＦＮａＦおよび９９ｍＴｃ−ＭＤＰはともに、修復部位に容易に局在化した一方、８９Ｚｒ−５Ａ１０は局在化しなかった（図１４ｃ）。図１４ｃでは、脛骨の骨折を受け、手術して１０日後のインタクトな雄マウスにおいて、骨再形成を１８Ｆ−ＮａＦで評価した。コントラストの明らかな領域が、ＰＥＴによって、骨折した脛骨において識別された。最初の画像の２日後に、動物に９９ｍＴｃ−ＭＤＰおよび８９Ｚｒ−５Ａ１０を同時注射した。ＳＰＥＣＴイメージングは、９９ｍＴｃ−ＭＤＰも、予期したように、治癒している骨の領域に局在化することを示した。対照的に、ＰＥＴイメージングは、創傷部位で検出可能な８９Ｚｒ５Ａ１０をまったく示さず、現代の臨床的放射性トレーサーと比較して、この試薬のＰＣａに対する高い特異性を提示した。
【０２２６】
まとめると、これらの結果は、骨内の前立腺がん由来腫瘍に対する８９Ｚｒ−５Ａ１０のユニークな特異性を強調した。
（実施例６）
要約および比較データ
【０２２７】
アンドロゲン受容体制御前立腺特異的遺伝子産物であるＰＳＡの発現の変化は、ｆＰＳＡに対して特異的なモノクローナル抗体に連結した新規放射性トレーサーで非侵襲的に測定することができることが実証された。アンドロゲン受容体シグナル伝達の定量化の適性を支持して、８９Ｚｒ−５Ａ１０は、複数のアンドロゲン受容体陽性前立腺がんモデルおよびＰＳＡ陽性前立腺がんモデルに容易に局在化し、前立腺がんの臨床的に有効な異種移植片モデルにおいて、抗アンドロゲン治療によって誘導されるｆＰＳＡ合成の低下を定量的に測定した。８９Ｚｒ５Ａ１０は、骨のスキャンで、がんによって誘導される変化を模写する非悪性骨格病理ではなく、前立腺がん細胞を特異的に標的にするので、本発明の放射性トレーサーは、より正確な病期分類およびより良好な処置選択の機会を提供する。この点において、本発明の実施形態は、腫瘍生物学の我々の理解を改善するために、異種疾患における個々の病変部を試験する前例のない機会を提供する。
【０２２８】
発現がアンドロゲン受容体シグナル伝達によって抑制される細胞表面タンパク質である前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）の変化は、アンドロゲン受容体シグナル伝達のイメージング用非侵襲性マーカーとして機能を果たすこともできることが以前に報告されている。しかし、ＰＳＭＡ発現は、前立腺特異的でなく、アンドロゲン受容体指向性治療のＰＳＭＡ発現に対する臨床的インパクトは公知でない。また、ＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片の形式比較により、８９Ｚｒ−５Ａ１０  ＰＥＴは、まったく同様に標識されたＰＳＭＡに対するモノクローナル抗体（８９Ｚｒ−Ｊ５９１）より説得力のある治療後の腫瘍局在化の変化をもたらすことが示された（図１７）。図１７は、ビヒクルまたはＭＤＶ３１００で処置され、８９Ｚｒ−Ｊ５９１を注射されたＬＮＣａＰ−ＡＲ異種移植片を持つ去勢雄マウスの生体内分布プロットである。担腫瘍去勢マウスをビヒクル、または指定用量のＭＤＶ３１００（毎日の経口強制飼養）で処置した。６日目に、マウスに８９Ｚｒ−Ｊ５９１を注射し、注射して２４時間後に屠殺し、血液および組織を回収し、生体内分布試験を行った。データは、平均％ＩＤ／ｇ±１標準偏差として報告されている。図１７で明らかに分かるように、ＰＭＳＡに対するモノクローナル抗体は、治療後の腫瘍局在化のいずれの統計的に有意な差異も実証することができず、それによって、本発明の実施形態の優れた予期しない結果を実証する。
均等物および範囲
【０２２９】
当業者は、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識することになり、またはこれらを、単なる日常の実験を使用して確認することができるであろう。本発明の範囲は、上記記述を限定するように意図されていない。同様に、当業者は、前述したことは、本発明の単にある特定の好適な実施形態を代表することを容易に察するであろう。上述した手順および組成物に対する様々な変更および改変を、以下の特許請求の範囲で示される本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく行うことができる。
【０２３０】
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの冠詞は、反対の指示がない限り、またはさもなければ脈絡から明白でない限り、１つまたは１つを超える、を意味し得る。したがって、例えば、「ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ」への言及は、複数のこのような抗体を含み、「ｔｈｅ  ｃｅｌｌ」への言及は、当業者に公知の１つまたは複数の細胞への言及を含む、などである。群の１つまたは複数のメンバー間に「または」を含む請求項または記述は、反対の指示がない限り、またはさもなければ脈絡から明白でない限り、１つ、１つを超える、またはすべての群メンバーが、所与の生成物またはプロセス中に存在し、使用され、またはさもなければこれらに関連する場合、満たされるとみなされる。本発明は、群の正確に１つのメンバーが、所与の生成物またはプロセス中に存在し、使用され、またはさもなければこれらに関連する実施形態を含む。本発明は、１つを超える、またはすべての群メンバーが、所与の生成物またはプロセス中に存在し、使用され、またはさもなければこれらに関連する実施形態を含む。さらに、本発明は、列挙した請求項の１つまたは複数からの１つまたは複数の限定事項、要素、条項、記述用語などが別の請求項中に導入されるすべてのバリエーション、組合せ、および並び換えを包含することが理解されるべきである。例えば、別の請求項に従属している任意の請求項は、同じ基本請求項に従属している任意の他の請求項に見つかる１つまたは複数の限定事項を含むように改変することができる。さらに、請求項により組成物が列挙されている場合、別段の指定のない限り、または矛盾もしくは不一致が生じることが当業者に明白でない限り、本明細書に開示の目的のいずれか１つのためのその組成物を使用する方法が含まれ、本明細書に開示の作製方法または当技術分野で公知の他の方法のいずれかに従ってその組成物を作製する方法が含まれる。
【０２３１】
要素が、例えば、マーカッシュ群形式でリストとして提示されている場合、要素の各亜群も開示されており、任意の要素（複数可）をその群から除去することができることが理解されるべきである。一般に、本発明または本発明の態様が、特定の要素、フィーチャなどを含むように言及されている場合、本発明のある特定の実施形態または本発明の態様は、そのような要素、フィーチャなどからなり、またはこれらから本質的になることが理解されるべきである。単純にする目的で、これらの実施形態は、本明細書で、この通りの言葉で具体的に示されていない。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープンであることが意図され、追加の要素またはステップを含めることを可能にすることに留意されたい。
【０２３２】
範囲が与えられている場合、終点は含まれている。さらに、別段の指定のない限り、または脈絡および当業者の理解から別段に明白でない限り、範囲として表現されている値は、脈絡により別段に明確に要求されない限り、その範囲の下限の単位の１／１０まで、本発明の異なる実施形態において、述べた範囲（ｔｈｅ  ｓｔａｔｅ  ｒａｎｇｅｓ）内の任意の具体的な値またはサブ範囲を想定することができることが理解されるべきである。
【０２３３】
さらに、先行技術の中に入る本発明の任意の特定の実施形態は、特許請求の範囲の任意の１つまたは複数から明示的に除外され得ることが理解されるべきである。そのような実施形態は、当業者に公知であると考えられるので、これらは、除外することが本明細書で明示的に示されていなくても除外され得る。本発明の組成物の任意の特定の実施形態は、先行技術の存在に関係しているか否かを問わず、任意の理由で任意の１つまたは複数の請求項から除外され得る。
【０２３４】
上記および本文全体にわたって論じた刊行物は、もっぱら本願の出願日前のこれらの開示について提供されている。本明細書のいずれも、本発明者らが、事前開示によってそのような開示に先行する権利を与えられていないことを承認するように解釈されるべきでない。
【図１３】
2015502339.tif 000018
【図１６】
2015502339.tif 000019
【図１】
2015502339.tif 000020
【図２】
2015502339.tif 000021
【図３】
2015502339.tif 000022
【図４】
2015502339.tif 000023
【図５】
2015502339.tif 000024
【図６】
2015502339.tif 000025
【図７】
2015502339.tif 000026
【図８】
2015502339.tif 000027
【図９】
2015502339.tif 000028
【図１０】
2015502339.tif 000029
【図１１】
2015502339.tif 000030
【図１２】
2015502339.tif 000031
【図１４】
2015502339.tif 000032
【図１５】
2015502339.tif 000033
【図１７】
2015502339.tif 000034
【配列表】
2015502339000001.app
【国際調査報告】
2015502339.tif 000035