(57)【要約】  本発明は、個体における認知を強化するための二本鎖ＲＮＡ活性化プロテインキナーゼ（ＰＫＲ）の抑制に関する方法および組成物に関する。具体的な場合において、ＰＫＲの阻害剤が、例えば、記憶を強化することによることを含めて、認知が該阻害剤によって強化されるように個体に与えられる。キットが特定の実施形態において包含される。【選択図】図４
2015500805.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における認知を強化する方法であって、二本鎖ＲＮＡ−タンパク質依存性キナーゼの阻害剤の治療有効量を前記個体に与える段階を含む、方法。
【請求項２】
前記阻害剤が、タンパク質、核酸または小分子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記阻害剤が小分子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記個体が検出可能な認知機能障害を何ら有しない、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記個体が、アルツハイマー病、パーキンソン病を有するか、あるいは、高齢である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記阻害剤が、下記の一般式：
【化１】
2015500805.tif 000024
（式中、
Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
Ｚは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
Ｒは、Ｈ；Ｏ、ＮＨ２；またはＯＨであり、
Ｙは、ＣＨ２；ＣＨ、Ｎ、ＮＨ、ＣまたはＯであり、
Ｌは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
ｍは０または１であり、
ただし、Ｌが、Ｈ、ＯＨまたはＳＨであり、かつ、Ｘが、Ｈ、ＯＨまたはＳＨであるとき、Ｚ、ＹおよびＲは存在せず；
ただし、Ｘが、Ｈ、ＯＨまたはＳＨであり、かつ、Ｚが、Ｈ、ＯＨまたはＳＨであるとき、ＹおよびＲは存在せず；
ただし、ＸがＮまたはＣＨであるとき、ＸはＹとの二重結合を形成し；
ただし、Ｘが、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであるとき、ＸはＹとの単結合を形成し；
ただし、ＸがＹとの二重結合を形成するとき、ＺはＹとの単結合を形成し；
ただし、ＺがＹとの二重結合を形成するとき、ＸはＹとの単結合を形成し；
ただし、ＺがＮまたはＣＨであるとき、ＺはＹとの二重結合を形成し；
ただし、Ｚが、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであるとき、ＺはＹとの単結合を形成し；
ただし、ＹがＣであるとき、Ｒは、Ｈ、ＯＨまたはＮＨ２であり、あるいは、ＲはＯであり、かつ、Ｙとの二重結合を形成し；
Ａは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
Ｄは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
Ｅは、ＣＨ２、ＣＨ、Ｎ、ＮＨ、ＣまたはＯであり、
Ｇは、Ｈ；Ｏ、ＮＨ２；またはＯＨであり、
Ｊは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
Ｑは、ＣＨ２、ＣＨ、Ｎ、ＮＨまたはＯであり、
ｎは０または１であり、
ただし、Ｊが、Ｈ、ＯＨまたはＳＨであり、かつ、Ｄが、Ｈ、ＯＨまたはＳＨであるとき、Ａ、ＥおよびＧは存在せず；
ただし、Ｄが、Ｈ、ＯＨまたはＳＨであり、かつ、Ａが、Ｈ、ＯＨまたはＳＨであるとき、ＥおよびＧは存在せず；
ただし、ＤがＮまたはＣＨであるとき、ＤはＥとの二重結合を形成し；
ただし、Ｄが、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであるとき、ＤはＥとの単結合を形成し；
ただし、ＤがＥとの二重結合を形成するとき、ＡはＥとの単結合を形成し；
ただし、ＡがＥとの二重結合を形成するとき、ＤはＥとの単結合を形成し；
ただし、ＡがＮまたはＣＨであるとき、ＡはＥとの二重結合を形成し；
ただし、Ａが、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであるとき、ＡはＥとの単結合を形成し；
ただし、ＥがＣであるとき、Ｇは、Ｈ、ＯＨまたはＮＨ２であり、あるいは、ＧはＯであり、かつ、Ｅとの二重結合を形成する）
を有し、また、
前記組成物がその医薬的に許容され得る塩または水和物である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ｍが０であり、ＸがＮＨであり、ＹがＣであり、ＺがＮであり、かつ、ＲがＳＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ｍが０であり、ＸがＳであり、ＹがＣＨ２であり、ＺがＳである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
ｍが０であり、ＸがＮＨであり、ＹがＯであり、かつ、ＺがＣＨ２である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
ｍが０であり、ＸがＮＨであり、ＹがＣであり、ＲがＯであり、かつ、ＺがＮＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
ｍが０であり、ＸがＣ＝Ｏであり、ＹがＮＨであり、かつ、ＺがＣ＝Ｏである、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
ｍが０であり、ＸがＳであり、ＹがＮであり、かつ、ＺがＣＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
ｍが１であり、ＸがＮであり、ＹがＣＨであり、ＺがＣＨであり、かつ、ＬがＮである、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
ｍが１であり、ＸがＳであり、ＹがＣＨ２であり、ＺがＣＨ２であり、かつ、ＬがＮＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
ｎが０であり、ＱがＣＨであり、ＤがＳであり、ＥがＣＨであり、かつ、ＡがＮである、請求項６に記載の方法。
【請求項１６】
ｎが０であり、ＱがＣＨであり、ＤがＮであり、ＥがＣＨであり、かつ、ＡがＳである、請求項６に記載の方法。
【請求項１７】
ｎが０であり、ＱがＮであり、ＤがＯであり、ＥがＣＨであり、かつ、ＡがＣＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項１８】
ｎが０であり、ＱがＣＨであり、ＤがＮＨであり、ＥがＣであり、ＧがＯであり、かつ、ＡがＮＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項１９】
ｎが０であり、ＱがＣＨであり、ＤがＣＨであり、ＥがＣＨであり、かつ、ＡがＮＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項２０】
ｎが０であり、ＱがＣＨであり、ＤがＮＨであり、ＥがＣであり、かつ、ＡがＣである、請求項６に記載の方法。
【請求項２１】
ｎが１であり、ＱがＣＨ２であり、ＤがＯであり、ＥがＣＨ２であり、ＡがＣＨ２であり、かつ、ＪがＮＨである、請求項６に記載の方法。
【請求項２２】
ｎが１であり、ＱがＣＨであり、ＤがＣＨであり、ＥがＣＨであり、ＡがＣＨであり、かつ、ＪがＮである、請求項６に記載の方法。
【請求項２３】
前記組成物が、
【化２】
2015500805.tif 000025
および
【化３】
2015500805.tif 000026
またはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項２４】
認知の前記強化がさらに、記憶を前記個体において強化することとして定義される、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題の分野には、少なくとも、分子生物学、細胞生物学、生化学、遺伝学および医学が含まれる。具体的な局面において、本発明の主題の分野には、学習および記憶、長期増強、神経ネットワーク、ＧＡＢＡ作動性抑制、ならびに／あるいは、ネットワーク過同期性が含まれる。
【背景技術】
【０００２】
二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ活性化プロテインキナーゼ（ＰＫＲ）が脊椎動物に広く存在しており、その活性化により、いくつかの基質のリン酸化が引き起こされ、その主要な既知細胞質標的が翻訳開始因子ｅＩＦ２α□である（Ｄｅｖｅｒ他、２００７）。ＰＫＲが、様々な細胞ストレスに応答して、例えば、ウイルス感染（Ｇａｒｃｉａ他、２００７）、てんかん重積状態（Ｃａｒｎｅｖａｌｌｉ他、２００６）などに応答して、また、アルツハイマー病（Ｃｏｕｔｕｒｉｅｒ他、２０１０；Ｍｏｒｅｌ他、２００９；ＰｅｅｌおよびＢｒｅｄｅｓｅｎ、２００３）、パーキンソン病（Ｂａｎｄｏ他、２００５）、ハンチントン病（Ｂａｎｄｏ他、２００５；Ｐｅｅｌ他、２００１）およびクロイツフェルト・ヤコブ病（Ｐａｑｕｅｔ他、２００９）を含めて、いくつかの神経病理における変性しつつあるニューロンにおいて活性化されるにもかかわらず、正常なニューロン機能におけるその役割についてはほとんど知られていない。
【０００３】
脳の認知機能は、脳内に広く分布する非常に多数のニューロンの協調した相互作用に基づいている。最新の神経科学の基本的な、未だ解決していない疑問が、この精巧に協調した活動がいかにして達成されるかである。ネットワーク過同期性が過興奮性振動ネットワークによって駆動され得る（ＨｕｇｕｅｎａｒｄおよびＭｃＣｏｒｍｉｃｋ、２００７；ＭｃＣｏｒｍｉｃｋおよびＣｏｎｔｒｅｒａｓ、２００１；Ｓｔｅｒｉａｄｅ、２００５）にもかかわらず、ニューロン放電の一時的な同期化が記憶固定に関与すると提案されている（ＢｅｅｎｈａｋｋｅｒおよびＨｕｇｕｅｎａｒｄ、２００９；Ｂｕｚｓａｋｉ、２００６；Ｇｉｒａｒｄｅａｕ他、２００９；ＰａｕｌｓｅｎおよびＭｏｓｅｒ、１９９８）。ＧＡＢＡ作動性のシナプス伝達が、このバランスを維持することにおける極めて重要な役割を果たしていると考えられている：ＧＡＢＡ作動性の抑制性ニューロンが主細胞の活動を抑制するだけでなく、海馬ネットワークにおける振動の発生器としても働いており（Ｆｒｅｕｎｄ、２００３；ＫｌａｕｓｂｅｒｇｅｒおよびＳｏｍｏｇｙｉ、２００８；ＭａｎｎおよびＭｏｄｙ、２０１０；Ｓｏｈａｌ他、２００９）、これらの海馬ネットワークが記憶固定において決定的に関与しているようである（ＢｅｅｎｈａｋｋｅｒおよびＨｕｇｕｅｎａｒｄ、２００９；Ｂｕｚｓａｋｉ、２００６；Ｇｉｒａｒｄｅａｕ他、２００９；ＰａｕｌｓｅｎおよびＭｏｓｅｒ、１９９８）。さらに、ＧＡＢＡ作動性抑制はまた、これらの律動的事象の終結にも寄与しており、したがって、てんかん性ネットワーク活動中の暴走的興奮を防止している。しかしながら、記憶形成期間中におけるニューロン同期性の根底にある分子的機構についてはほとんど知られていない。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の実施形態において、本発明は、増大した脳律動性および高まった認知の両方を引き起こす二本鎖ＲＮＡ活性化プロテインキナーゼ（ＰＫＲ）の抑制に関する。
【０００５】
本発明の実施形態により、過同期性ネットワーク活動および強化された記憶の両方の最初の単遺伝子モデル（これまで研究されていない脳キナーゼ（ＰＫＲ）における欠損）が提供される。実施形態ではまた、小分子阻害剤（ＰＫＲｉ）、すなわち、ＰＫＲ活性を選択的に阻害し、Ｐｋｒ−／−の表現型を複製（表現型模写）し、シナプス結合（Ｌ−ＬＴＰ）の強さおよび長期記憶の強化ならびにネットワーク律動性の増大を特異的にもたらした小分子阻害剤（ＰＫＲｉ）が含まれる。本発明のある特定の局面において、ＰＫＲはこれらのプロセスをＧＡＢＡ作動性シナプス伝達の選択的制御により調節しており、したがって、このことにより、脳律動性、シナプス可塑性および記憶貯蔵を調節する新規なシグナル伝達経路が明らかにされる。
【０００６】
本発明の１つの実施形態において、個体における認知を強化する方法であって、二本鎖ＲＮＡ−タンパク質依存性キナーゼの阻害剤の治療有効量を前記個体に与える段階を含む方法が存在する。一部の場合において、前記阻害剤は、タンパク質、核酸または小分子を含む。
【０００７】
本発明のいくつかの実施形態において、個体は本発明の方法および／または組成物の対象となる。ある特定の場合において、前記個体は検出可能な認知機能障害を何ら有していない。いくつかの実施形態において、前記個体は、当該技術分野における常用的方法によって認知機能障害について検査される。例示的な方法には、認知障害スクリーニング検査（ＳＥＦＣＩ）、神経心理学的状態の評価のための反復可能バッテリー（ＢＲＡＮＳ）、Ｒａｏの簡便反復可能バッテリー（ＢＲＢ）、完全ＳＥＰ−５９質問票、選択的思い出し検査、記号数字モダリティー検査（ＳＤＭＴ）、類似性サブテスト、ＰＡＳＡＴ、ストループ検査、Ｍｅｙｅｒｓ−Ｂｒｉｇｇｓ類型指標、ミニメンタルステート検査および／またはＰＲＯＳＰＥＲ検査が含まれる。他の実施形態において、前記個体は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、ダウン症候群、精神遅滞、自閉症スペクトラム障害、外傷後ストレス障害、脳性麻痺、卒中、脳損傷、頭部外傷、脳疾患、第三期梅毒、肝臓疾患、腎臓疾患、アルコール依存症、甲状腺機能障害、筋ジストロフィー、重度栄養不良、精神病、薬物乱用、髄膜炎、脳炎、脳血液凝固、脳腫瘍、脳膿瘍、鉛中毒、重度低血糖、インスリン過量服用、神経系の変性疾患、代謝性疾患、多発梗塞性認知症、甲状腺機能低下症、正常圧水頭症、ビタミンＢ１２欠乏症、リソソーム蓄積病、化学療法、痙性四肢麻痺、脳炎、脳膿瘍、胎児性アルコール症候群を有するか、あるいは、高齢である。具体的な実施形態において、高齢者は、少なくとも４５歳〜５０歳である者である。ある特定の実施形態において、どのような年齢の個体であれ、個体は本発明の方法および／または組成物の対象となる。一部の場合において、個体には、上記阻害剤が、１時間またはそれ以上、１日またはそれ以上、１週間またはそれ以上、１ヶ月またはそれ以上あるいは１年またはそれ以上の間隔で反復投与される。
【０００８】
上記では、本発明の特徴および技術的利点が、下記の本発明の詳細な説明がより良く理解され得るためにかなり広く概説されている。本発明の請求項の主題を形成する本発明のさらなる特徴および利点が本明細書中下記において記載されるであろう。開示される概念および具体的な実施形態は、本発明の同じ目的を行うために他の構造を改変または設計するための基礎として容易に利用され得ることを、当業者は理解するべきである。そのような同等な構造は、添付された請求の範囲において示されるような本発明の精神および範囲から逸脱しないこともまた、当業者は認識するべきである。さらなる目的および利点と一緒に、本発明の構成および施行方法の両方に関して本発明に特徴的であると考えられる新規な特徴が、添付されている図に関連して検討されたとき、下記の説明からより良く理解されるであろう。しかしながら、図のそれぞれが例示および説明の目的のためだけに提供されており、本発明の限界を規定するものとして意図されないことを特に理解するべきである。
【０００９】
［関連出願に対する相互参照］
本出願は米国仮特許出願第６１／５６４，３７１号（２０１１年１１月２９日出願、この出願はその全体が参照によって本明細書中に組み込まれる）の優先権を主張する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
本発明のより完全な理解のために、次に、添付されている図面と関連付けながら下記の説明を参照する。
【００１１】
【図１】ＰＫＲの遺伝的欠失および薬理学的阻害はインビボにおける同期化された皮質ＥＥＧ活動を引き起こす。両側の皮質電極から得られる出力波形（左半球−参照＝Ｌ−ｒ；右半球−参照＝Ｒ−ｒ）は、短い波動放電が続く単発性の発作間スパイクを含めて、異常な自発性の同期的皮質活動を、（ａ）自由に行動するＰｋｒ−／−マウスにおいて示すが、ＷＴ型マウスでは示さない（ｂ）。ＰＫＲ阻害剤（ＰＫＲｉ；０．１ｍｇ／ｋｇ）の注射により、急性スパイク発生（ｄ）および律動的バースト（ｅ）が成体ＷＴ型マウスにおいて誘導される。校正：１ｓおよび２００μＶ。異常なＥＥＧ活動が、すべてのＷＴ型コントロールの記録では存在せず（ｎ＝６）、しかし、すべてのＰｋｒ−／−マウス（ｎ＝８）において、また、７匹中６匹のＰＫＲｉ注射マウスにおいて存在した（ＰＫＲｉ注射の１時間後に記録された場合）。フィッシャーの正確確率検定によって、ｐ値がそれぞれ、０．００１未満および０．０１未満であった。
【００１２】
【図２】ＰＫＲの遺伝的欠失または薬理学的阻害はスライスにおける同期化された海馬活動を引き起こす。集合スパイクを（矢印によって示される）０．０３Ｈｚでの半最大電気刺激によって生じさせた。ａ、ｂ、ｃにおける挿入図は、ビククリン適用前に記録される類似する平均化された出力波形を示す。低用量のビククリン（２μＭ）は、顕著な後放電を、ＷＴ型のスライス（Ａ）と比較して、Ｐｋｒ−／−のスライス（ｂ）において、または、ＰＫＲｉ（１μＭ）により処理されたＷＴ型のスライス（ｃ）において生じさせた。すべてのプロットが、少なくとも５回の連続する記録を表す。校正：挿入図については２ｍｓおよび３ｍＶ、遅い出力波形については１０ｍｓおよび５ｍＶ。これらの条件のもとで、誘発スパイクの数（ｄ）およびバーストの持続期間（ｅ）が、Ｐｋｒ−／−のスライス、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスにおいて増大した。要約データが図２ａ〜図２ｃに例示される。統計学的有意性；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【００１３】
【図３】Ｐｋｒ−／−マウス由来の海馬スライス、および、ＰＫＲ阻害剤（ＰＫＲｉ）により処理されたＷＴ型のスライスのＣＡ１における低下した抑制性シナプス応答。ａ）サンプル出力波形（上段）および要約データ（下段）は、Ｐｋｒ−／−マウス由来のＣＡ１ニューロンにおいて、［ＫＣｌ含有パッチピペットを用いて、かつ、広域グルタミン酸アンタゴニストのキヌレン酸（２ｍＭ）およびテトロドトキシン（ＴＴＸ、１μＭ）の存在下において−６０ｍＶの保持電位で記録される］ｍＩＰＳＣの低下した頻度、しかし、その振幅には変化がないことを示す。右側の出力波形（それぞれが、少なくとも１００個のｓＩＰＳＣの平均である）は、重ね合わされたＷＴ型ＩＰＳＣおよびＰｋｒ−／−ＩＰＳＣ（最下段）によって確認されるように、ＷＴ型のスライス（最上段）と、Ｐｋｒ−／−のスライス（中央）との間で異なっていない。ｂ）同様に、ＷＴ型のスライスにおいて、ＰＫＲｉはｍＩＰＳＣの頻度を低下させた（しかし、その振幅を低下させなかった）。要約データおよび個々の事象が、（ａ）でのように配置される。校正（ａ、ｂ）：遅い出力波形については１ｓおよび５０ｐＡ、速い出力波形については２０ｍｓおよび２０ｐＡ。ｃ）刺激強度の関数としての誘発ＩＰＳＣの振幅［ＡＰＶ（５０μＭ）、ＣＮＱＸ（１０μＭ）およびＣＧＰ（１０μＭ）の存在下において０ｍＶの保持電位で記録された場合］が重ね合わされて示され、入力／出力曲線としてプロットされる。校正：１００ｍｓおよび２００ｐＡ。ｄ）ペアーパルス刺激によって得られるＩＰＳＣが、５０ｍｓ、１００ｍｓ、２００ｍｓおよび４００ｍｓの刺激間間隔（ＩＳＩ）で記録されるペアー応答から最初のＩＰＳＣを引いた後で（左側に）重ね合わされる；および対応するプロット（右）：ＷＴ型のスライスと比較して、Ｐｋｒ−／−のスライス、および、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスにおける（５０ｍｓでの）低下したペアーパルス抑圧に留意すること。抑制性シナプス電流の比率（ＩＰＳＣ２／ＩＰＳＣ１）をＩＳＩの関数として測定した。データは平均±ＳＥＭである。統計学的有意性；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【００１４】
【図４】ＰＫＲｉは、単シナプスの誘発ＩＰＳＣを、Ｐｋｒ−／−マウスではなく、ＷＴ型マウスに由来するスライスにおいて阻害する。５０μＭのＡＰＶ、１０μＭのＣＮＱＸおよび１０μＭのＣＧＰ５５８４５の存在下で記録される薬理学的に隔離されたｅＩＰＳＣが半最大刺激によって誘発された。ＰＫＲｉのバス適用はＷＴ型のスライス（ａ）においてｅＩＰＳＣの振幅を低下させたが、Ｐｋｒ−／−のスライス（ｂ）では低下させなかった。膜電位を０ｍＶで保ち、ホールセル・パッチ記録をグルコン酸含有パッチピペットにより行った。水平の棒はＰＫＲｉ適用を示す；挿入図の出力波形（ａ、ｂ）を、プロットの下側に示される“ａ”および“ｂ”の時間で得た。校正：５０ｍｓおよび１００ｐＡ。
【００１５】
【図５】興奮性シナプス伝達は、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライス、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスにおいて不変である。ＥＰＳＣのホールセル記録を、ピクロトキシン（１００μＭ）の存在下において−７０ｍＶの保持電位で、グルコン酸含有パッチピペットを用いて、ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスに由来するスライスにおいて行った。ａ）サンプル出力波形（上段）および要約データ（下段）は、ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスに由来するスライスにおいて自発性ＥＰＳＣ（ｓＥＰＳＣ）の類似する頻度および振幅を示す。ｂ）サンプル出力波形（上段）および要約データ（下段）は、ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスに由来するスライスにおいて［ピクロトキシン（１００μＭ）およびＴＴＸ（１μＭ）の存在下で記録される］縮小型ＥＰＳＣ（ｍＥＰＳＣ）の類似する頻度および振幅を示す。ｃ）ＰＫＲｉ（１μＭ）のバス適用は、ピクロトキシン（１００μＭ）の存在下で記録される誘発ＥＰＳＣに対する影響を何ら有していなかった。データは平均±ＳＥＭである。水平の棒はＰＫＲｉとのインキュベーションの期間を示している。校正（ａ、ｂ）：１ｓおよび２０ｐＡ；（ｃ）：１０ｍｓ、１００ｐＡ。
【００１６】
【図６】Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライス、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスにおける促進されたＬ−ＬＴＰ。ａ）ただ１回の高頻度連発刺激（１００Ｈｚ、１秒間）は、ＷＴ型のスライスにおいて、短時間持続する初期ＬＴＰ（Ｅ−ＬＴＰ）を生じさせ、しかし、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスでは持続した後期ＬＴＰ（Ｌ−ＬＴＰ）を生じさせる（２２０分において、ｐ＜０．００１）。ｂ）Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスにおける促進されたＬ−ＬＴＰがアニソマイシンによって抑制された（２２０分において、ｐ＜０．０１）。ｃ）ＰＫＲｉはＷＴ型のスライスにおいてＥ−ＬＴＰをＬ−ＬＴＰに変換する［２２０分において、ｐ＜０．００１］。低濃度のジアゼパム（１μＭ）は、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスにおけるＬ−ＬＴＰの誘導を妨げ［２２０分において、ｐ＜０．０５；ｄ）］、しかし、ＷＴ型のスライスにおける４回のテタニー性連発刺激によって誘導されるＬ−ＬＴＰを妨げなかった［２２０分において、ｐ＞０．０５；（ｅ）］。ｆ）ＷＴ型のスライスにおいて、高濃度のジアゼパム（５０μＭ）はＬ−ＬＴＰ誘導を１００Ｈｚでの４回の連発刺激によって阻止した（２２０分において、ｐ＜０．０５）。水平の棒は、ＰＫＲｉ、アニソマイシンまたはジアゼパムとのインキュベーションの期間を示す。データは平均±ＳＥＭである。校正：５ｍｓおよび３ｍＶ。
【００１７】
【図７】Ｐｋｒ−／−マウス、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型マウスにおける強化された空間記憶および恐怖記憶。ａ）Ｍｏｒｒｉｓ水迷路における訓練日の関数としての平均逃避潜時（１日あたり１回の試験）。ＷＴ型コントロールと比較した場合、Ｐｋｒ−／−マウスは７日目および８日目までに著しく低下した逃避潜時を示す（ＷＴ型マウスについてはｎ＝１４、Ｐｋｒ−／−マウスについてはｎ＝１２；＊ｐ＜０．０５）。ｂ）９日目に行われるプローブ試験では、Ｐｋｒ−／−マウスのみが標的四分円に対する好みを示した（＊＊ｐ＜０．０１）。ｃ）状況的恐怖条件づけを、立ちすくみ時間を条件づけ前（実験未使用；２分の期間中）に、また、その後、訓練後２４時間（３分の期間中）で測定することによって求めた。ｄ）聴覚的恐怖記憶を、音開始前（プレＣＳ、２分間）または音提示期間中（３分間）のどちらかで訓練後２４時間で立ちすくみ時間を測定することによって評価した。訓練後２４時間での高まった立ちすくみは、Ｐｋｒ−／−マウスにおけるより強い恐怖記憶を示している（ｃ、ｄ、ＷＴ型マウスについてはｎ＝１３、Ｐｋｒ−／−マウスについてはｎ＝１０；＊ｐ＜０．０５）。ｅ）Ｐｋｒ−／−マウスは、ＷＴ型同腹子と比較して、当該状況に対する応答における著しくより速い立ちすくみ消去を示した（ＷＴ型マウスについてはｎ＝８、Ｐｋｒ−／−マウスについてはｎ＝９；＊ｐ＜０．０５）。ＰＫＲｉ（０．１ｍｇ／ｋｇ）を訓練直後に注射することにより、状況的恐怖記憶（ｆ）および聴覚的恐怖記憶（ｇ）の両方が高まった（両方の群についてｎ＝８；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１）。ｈ）状況的恐怖訓練後における前初期遺伝子Ｅｇｒ−１の発現が、状況（ＣＳ）にさらされたＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスに由来するＣＡ１ニューロンにおいて類似していた（両方の群についてｎ＝６）。対照的に、訓練（ＣＳ＋ＵＳ）に対する応答において、著しくより多数のＥｇｒ−１陽性ニューロンが、ＷＴ型コントロールと比較して、Ｐｋｒ−／−マウス由来の領域ＣＡ１で存在した（＊＊ｐ＜０．０１）。
【００１８】
【図８】Ｐｋｒの欠如は脳の全体的形態学を変化させない。ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスに由来する水平での脳切片を、ニッスル染料（Ａ）、ならびに、抗ＧＡＤ６７抗体（Ｂ）、抗ＶＧＬＵＴ１抗体（Ｃ）、抗ＰＳＤ９５抗体（Ｄ）および抗ＰＫＲ抗体（Ｅ）により染色した。これらのマーカーはＷＴ型マウスとＰｋｒ−／−マウスとの間における大きな構造的差異を何ら示さない。ウエスタンブロッティング（Ｆ）により、Ｐｋｒ−／−マウス由来の海馬におけるＰＫＲの欠如が明らかにされる。
【００１９】
【図９】ＰＫＲの遺伝的欠失はインビボにおける同期化された皮質−海馬のＥＥＧ活動を引き起こす。ａ）両側の皮質電極および海馬電極から得られる出力波形（左半球−参照＝Ｌ−ｒ；右半球−参照＝Ｒ−ｒ）は、自由に行動するＰｋｒ−／−マウスにおけるニューロン過同期化の皮質−海馬の異常なパターンを示す。矢印は、皮質（上側）および海馬（下側）における発作を引き起こす異常な高頻度同期化の開始を示している。
【００２０】
【図１０】ｓＩＰＳＣおよび電気的に隔離されたｅＩＰＳＣが、Ｐｋｒ−／−マウス由来のＣＡ１海馬スライス、および、ＰＫＲ阻害剤（ＰＫＲｉ）により処理されたＷＴ型のスライスにおいて低下する。ａ）サンプル出力波形（上段）および要約データ（下段）は、Ｐｋｒ−／−のスライスにおいて、キヌレン酸（１ｍＭ）の存在下において−６０ｍＶの保持電位で記録されたｓＩＰＳＣの低下した頻度、しかし、その振幅には変化がないことを示す。右側の出力波形（それぞれが、少なくとも１００事象の平均である）は、重ね合わされたＷＴ型ｍＩＰＳＣおよびＰｋｒ−／−ｍＩＰＳＣ（最下段）によって確認されるように、ＷＴ型のスライス（最上段）と、Ｐｋｒ−／−のスライス（中央）との間で異なっていない。ｂ）同様に、ＷＴ型のスライスにおいて、ＰＫＲｉはｓＩＰＳＣの頻度を低下させるが、その振幅を低下させない。要約データおよび個々の事象が、ａでのように配置される。ｃ）ＷＴ型のスライスにおけるビククリンによるｓＩＰＳＣの可逆的除去により、ＧＡＢＡＡ受容体によるそれらの伝達が確認される。ｄ）Ｐｋｒ−／−のスライス、および、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスにおける低下した電気的に隔離されているｅＩＰＳＣ。ホールセル・パッチ記録を０ｍＶの保持電位においてグルコン酸含有ピペットにより行った。ｅＩＰＳＣを半最大刺激によってＣＡ１錐体ニューロンにおいて生じさせた。データを下側のヒストグラムによってまとめる。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【００２１】
【図１１】累積的抑制が、Ｐｋｒ−／−マウス、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型マウスに由来するスライスにおいて減少する。短い高頻度連発刺激（１００Ｈｚでの５回のパルス）は、集合スパイクの振幅における急速な減衰を、累積的なＧＡＢＡ作動性抑制（ａ）のためにＷＴ型のスライスにおいて引き起こすが、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライス（ｂ）、あるいは、ＧＡＢＡＡ受容体アンタゴニストのビククリン（ｃ）またはＰＫＲｉ（ｄ）どちらかにより処理されたＷＴ型のスライスでは引き起こしていない。これらのデータが（ｅ）にまとめられており、ＰＫＲがＧＡＢＡ作動性抑制を正に調節することを示している。
【００２２】
【図１２】ＰＫＲｉは、ＣＡ１においてただ１回の刺激によって生じさせられる集合スパイクを特異的に強化する。ＰＫＲｉはシナプス前求心性斉射またはＥＰＳＰの初期勾配を変化させなかった（ａ）；しかしながら、ＰＫＲｉはＷＴ型のスライス（ｂ）において集合スパイクの振幅を強化し、しかし、Ｐｋｒ−／−のスライス（ｃ）では強化しなかった。このことは、ＰＫＲｉの影響が、標的を外れた作用に起因しなかったことを明らかにする。（ｄ）ＧＡＢＡＡアンタゴニストのビククリンにより前処理されたＷＴ型のスライスにおいて、ＰＫＲｉは発火のさらなる増強を何ら引き起こさなかった。これらの結果は、ＰＫＲｉが、ＧＡＢＡ作動性抑制を低下させることによって集合スパイクを増大させたことを示している。
【００２３】
【図１３】Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスにおける正常な基礎的シナプス伝達。ａ）入力−出力データは、Ｐｋｒ−／−マウスおよびＷＴ型同腹子に由来するスライスにおける広範囲の様々な刺激強度にわたってシナプス前線維斉射の類似した振幅を示す。ｂ）シナプス前線維斉射サイズの関数としてのｆＥＰＳＰの入力−出力関係もまた、Ｐｋｒ−／−のスライスおよびＷＴ型のスライスについて類似していた。ｃ）（高まったシナプス伝達物質放出を反映する）ｆＥＰＳＰのペアーパルス促進が、ＷＴ型のスライスとＰｋｒ−／−のスライスとの間で異なっていなかった。プロットは、ペアー刺激の様々な間隔について、ｆＥＰＳＰ２／ｆＥＰＳＰ１の平均値（±ＳＥＭ）を示す。
【００２４】
【図１４】Ｌ−ＬＴＰが、ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスに由来するスライスにおいて類似しており、これに対して、ＰＫＲｉはＬ−ＬＴＰをＰｋｒ−／−マウス由来のスライスにおいてさらに強化することはなかった。ｂ）ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスに由来するスライスにおいて、１００Ｈｚでの４回のテタニー性連発刺激によって誘導されるＬ−ＬＴＰが類似している（２２０分において、ｐ＞０．０５）。ｂ）Ｐｋｒ−／−のスライスにおいて、ＰＫＲｉは、単回の１００Ｈｚ連発刺激（１ｓ）によって生じさせられるＬＴＰをさらに増強することはなかった（２２０分において、ｐ＜０．０５）。水平の棒はＰＫＲｉとのインキュベーションの期間を示している。データは平均±ＳＥＭである。校正：５ｍｓおよび３ｍＶ。
【００２５】
【図１５】Ｐｋｒ−／−は、高架式十字迷路およびオープンフィールドで試験されたとき、正常な不安様行動を示した。（あまり安全でない）開放アームにおける滞在時間（秒単位）（ａ）、開放アーム進入回数（ｂ）、および、開放アームにおける移動距離（ｃｍ単位）（ｃ）が、ＷＴ型マウスとＰｋｒ−／−マウスとの間で著しく異なることはなかった（ｐ＞０．０５）。ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスは、類似した合計移動距離（ｄ）および迷路中央滞在時間割合（ｅ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本明細書中において使用されるように、“ａ”または“ａｎ”は、１つまたは複数を意味する場合がある。本明細書中、請求項（複数も可）において使用されるように、“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”（含む）という語と併せて使用されるとき、“ａ”または“ａｎ”の語は、１つ以上を意味する場合がある。本明細書中で使用されるように、“ａｎｏｔｈｅｒ”（別の）は、少なくとも第２またはそれ以上のものを意味する場合がある。さらに、本明細書中で使用されるように、用語“ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ”（含む、包含する）、“ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ”（含有する）および“ｈａｖｉｎｇ”（有する）は、解釈において制約がなく、用語“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”と交換可能である。
【００２７】
Ｉ．定義
【００２８】
用語「認知」は、本明細書中で使用される場合、知覚、推理または直感を通して知識として知られるようになるプロセス（これに限定されない）を含めて、自覚、知覚、推理および判断などの様々な局面を含む、知るという精神的プロセスを示す。
【００２９】
用語「認知を強化する」は、本明細書中で使用される場合、当該技術分野における１つまたは複数の方法により測定することによって認知を検出可能に改善することを示す。
【００３０】
用語「記憶を強化する」は、本明細書中で使用される場合、当該技術分野における１つまたは複数の方法により測定することによって記憶を検出可能に改善することを示す。
【００３１】
用語「ＰＫＲ阻害剤」は、本明細書中で使用される場合、ＰＫＲの活性を少なくとも部分的に阻害するか、または、その発現を少なくとも部分的に阻害する化合物または当該化合物の混合物を示す。いくつかの実施形態において、本阻害剤は、少なくとも部分的ではあるが、ＰＫＲのキナーゼ活性を妨害する。キナーゼ活性は、例えば、ＰＫＲまたはその主要な下流側標的ｅＩＦ２αに対するリン酸化部位特異的抗体、および、インビトロキナーゼアッセイを含む、当該技術分野における任意の方法によって検出され得る。
【００３２】
化学基に関連して使用されるとき、「水素」は−Ｈを意味する；「ヒドロキシ」は−ＯＨを意味する；「オキソ」は＝Ｏを意味する：「ハロ」は、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを意味する；「アミノ」は−ＮＨ２を意味する（アミノの用語を含む基（例えば、アルキルアミノ）の定義については下記を参照のこと）；「ヒドロキシアミノ」は−ＮＨＯＨを意味する；「ニトロ」は−ＮＯ２を意味する；「イミノ」は＝ＮＨを意味する（イミノの用語を含む基（例えば、アルキルイミノ）の定義については下記を参照のこと）；「シアノ」は−ＣＮを意味する；「イソシアナート」は−Ｎ＝Ｃ＝Ｏを意味する；「アジド」は−Ｎ３を意味する；一価の状況において、「ホスファート」は−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２またはその脱プロトン化形態を意味する；二価の状況において、「ホスファート」は−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−またはその脱プロトン化形態を意味する；「メルカプト」は−ＳＨを意味する；「チオ」は＝Ｓを意味する；「チオエーテル」は−Ｓ−を意味する；「スルホンアミド」は−ＮＨＳ（Ｏ）２−を意味する（スルホンアミドの用語を含む基（例えば、アルキルスルホンアミド）の定義については下記を参照のこと）；「スルホニル」は−Ｓ（Ｏ）２−を意味する（スルホニルの用語を含む基（例えば、アルキルスルホニル）の定義については下記を参照のこと）；「スルフィニル」は−Ｓ（Ｏ）−を意味する（スルフィニルの用語を含む基（例えば、アルキルスルフィニル）の定義については下記を参照のこと）。
【００３３】
化学式に関連して、記号“−”は単結合を意味し、“＝”は二重結合を意味し、“≡”は三重結合を意味する。記号“−−−−”は、所望による結合を表し、これが存在するならば、単結合または二重結合のどちらかである。記号：
【化１】
2015500805.tif 000003
は単結合または二重結合を表す。したがって、例えば、構造：
【化２】
2015500805.tif 000004
は、下記の構造：
【化３】
2015500805.tif 000005
および
【化４】
2015500805.tif 000006
を含む。当業者によって理解されるであろうが、１つのそのような環原子はどれも、２つ以上の二重結合の一部を形成しない。記号：
【化５】
2015500805.tif 000007
は、結合を横切って直交して引かれるとき、基の結合点を示す。ただし、結合点を迅速かつ一義的に特定することにおいて読者を助けるために、結合点は典型的には、より大きな基についてはこのように特定されるだけであるものとする。記号：
【化６】
2015500805.tif 000008
は、くさびの厚手側端に結合する基が「当該頁から離れる」単結合を意味する。記号：
【化７】
2015500805.tif 000009
は、くさびの厚手側端に結合する基が「当該頁に向かう」単結合を意味する。記号：
【化８】
2015500805.tif 000010
は、立体配座（例えば、ＲまたはＳのどちらか）または幾何学的配置（例えば、ＥまたはＺのどちらか）が特定されていない単結合を意味する。
【００３４】
本願において示される構造の原子における未定義の結合価はどれも、当該原子に結合する水素原子を暗黙的に表す。基“Ｒ”が、環系における「浮動基」として、例えば、下記の式において示されるとき、
【００３５】
【化９】
2015500805.tif 000011
【００３６】
Ｒは、安定な構造が形成される限り、示された水素、暗示される水素または明示的に定義された水素を含めて、環原子のいずれかに結合するいずれかの水素原子に取って代わる場合がある。基“Ｒ”が、縮合環系における「浮動基」として、例えば、下記の式の場合のように示されるとき、
【００３７】
【化１０】
2015500805.tif 000012
【００３８】
Ｒは、別途指定される場合を除き、縮合している環のどちらかの環原子のいずれかに結合するいずれかの水素原子に取って代わる場合がある。置換可能な水素には、安定な構造が形成される限り、示された水素（例えば、上記式において窒素に結合する水素）、暗示される水素（例えば、示されていないが、存在すると理解される上記式の水素）、明示的に定義される水素、および、存在が環原子の正体に依存する必須的でない水素（例えば、Ｘが−ＣＨ−であるときには、基Ｘに結合する水素）が含まれる。示された例において、Ｒは、縮合環系の５員環または６員環のどちらにも存在する場合がある。上記の式において、括弧で囲まれた基“Ｒ”の直後の下付き文字“ｙ”は数値変数を表す。別途指定される場合を除き、この変数は、０、１、２、または、３以上の任意の整数（これは、環または環系の置換可能な水素原子の最大数によって制限されるだけである）であることが可能である。
【００３９】
下記の基およびクラスについて、下記の括弧内の下付きはさらに、基／クラスを下記のように規定する：“（Ｃｎ）”は、基／クラスにおける炭素原子の正確な数（ｎ）を規定する。“（Ｃ≦ｎ）”は、基／クラスにおいて可能である炭素原子の最大数（ｎ）を規定し、ただし、最小数は、問題としている基についてできる限り小さく、例えば、基「アルケニル（Ｃ≦８）」またはクラス「アルケン（Ｃ≦８）」における炭素原子の最小数は２であることが理解される。例えば、「アルコキシ（Ｃ≦１０）」は、１個〜１０個の炭素原子（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個、あるいは、そこで誘導され得るいずれかの範囲（例えば、３個〜１０個の炭素原子））を有するそのようなアルコキシ基を示す。（Ｃｎ−ｎ’）は、基における炭素原子の最小数（ｎ）および最大数（ｎ’）の両方を規定する。同様に、「アルキル（Ｃ２−１０）」は、２個〜１０個の炭素原子（例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個、あるいは、そこで誘導され得るいずれかの範囲（例えば、３個〜１０個の炭素原子））を有するそのようなアルキル基を示す。
【００４０】
用語「飽和（した）」は、本明細書中で使用される場合、下記で示されるような場合を除き、そのように修飾された化合物または基が、炭素−炭素の二重結合を有さず、かつ、炭素−炭素の三重結合を有しないことを意味する。この用語は、炭素−ヘテロ原子の多重結合、例えば、炭素・酸素二重結合または炭素・窒素二重結合を除外しない。そのうえ、この用語は、ケト−エノール互変異性またはイミン／エナミン互変異性の一部として存在する場合がある炭素−炭素の二重結合を除外しない。
【００４１】
用語「脂肪族」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、そのように修飾された化合物／基が、非環式または環式の、しかし、非芳香族の炭化水素化合物または炭化水素基であることを意味する。脂肪族の化合物／基において、炭素原子は、直鎖、分岐鎖または非芳香族環（脂環式）において連結することができる。脂肪族の化合物／基は、単結合によって連結される飽和型（アルカン／アルキル）、あるいは、１つもしくは複数の二重結合を有する不飽和型（アルケン／アルケニル）、または、１つもしくは複数の三重結合を有する不飽和型（アルキン／アルキニル）であることが可能である。用語「脂肪族」が、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、炭素原子および水素原子のみが存在する。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。
【００４２】
用語「アルキル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、結合点としての炭素原子、線状または分岐のシクロ構造、環式構造または非環式構造を有し、ならびに、炭素および水素以外の原子が存在しない一価の飽和脂肪族基を示す。したがって、本明細書中で使用される場合、シクロアルキルはアルキルのサブセットである。次に示す基、−ＣＨ３（Ｍｅ）、−ＣＨ２ＣＨ３（Ｅｔ）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３（ｎ−Ｐｒ）、−ＣＨ（ＣＨ３）２（ｉｓｏ−Ｐｒ）、−ＣＨ（ＣＨ２）２（シクロプロピル）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３（ｎ−Ｂｕ）、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３（ｓｅｃ−ブチル）、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２（ｉｓｏ−ブチル）、−Ｃ（ＣＨ３）３（ｔｅｒｔ−ブチル）、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３（ｎｅｏ−ペンチル）、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘキシルメチルは、アルキル基の限定されない例である。用語「アルカンジイル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、結合点（複数も可）としての１つまたは２つの飽和炭素原子、線状または分岐のシクロ構造、環式構造または非環式構造を有し、炭素−炭素の二重結合または三重結合が存在せず、ならびに、炭素および水素以外の原子が存在しない二価の飽和脂肪族基を示す。次に示す基、−ＣＨ２−（メチレン）、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−および
【化１１】
2015500805.tif 000013
が、アルカンジイル基の限定されない例である。用語「アルキリデン」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、ＲおよびＲ’が独立して、水素、アルキルであるか、または、ＲおよびＲ’が一緒になって、少なくとも２個の炭素原子を有するアルカンジイルを表す二価基＝ＣＲＲ’を示す。アルキリデン基の限定されない例には、＝ＣＨ２、＝ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）および＝Ｃ（ＣＨ３）２が含まれる。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。下記の基が、置換されたアルキル基の限定されない例である：−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＮ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２および−ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ。用語「フルオロアルキル」は、１つまたは複数の水素がフルオロ基により置換されており、かつ、炭素、水素およびフッ素を除いては他の原子が何ら存在しない置換されたアルキルのサブセットである。次に示す基、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ３および−ＣＨ２ＣＦ３が、フルオロアルキル基の限定されない例である。「アルカン」は、Ｒがアルキルである化合物Ｈ−Ｒを示す。
【００４３】
用語「アルケニル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、結合点としての炭素原子、線状または分岐のシクロ構造、環式構造または非環式構造、少なくとも１つの非芳香族性の炭素−炭素の二重結合を有し、炭素−炭素の三重結合が存在せず、ならびに、炭素および水素以外の原子が存在しない一価の不飽和脂肪族基を示す。アルケニル基の限定されない例には、−ＣＨ＝ＣＨ２（ビニル）、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２（アリル）、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３および−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ６Ｈ５が含まれる。用語「アルケンジイル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、結合点としての２つの炭素原子、線状または分岐のシクロ構造、環式構造または非環式構造、少なくとも１つの非芳香族性の炭素−炭素の二重結合を有し、炭素−炭素の三重結合が存在せず、ならびに、炭素および水素以外の原子が存在しない二価の不飽和脂肪族基を示す。次に示す基、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−および
【化１２】
2015500805.tif 000014
が、アルケンジイル基の限定されない例である。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。次に示す基、−ＣＨ＝ＣＨＦ、−ＣＨ＝ＣＨＣｌおよび−ＣＨ＝ＣＨＢｒが、置換されたアルケニル基の限定されない例である。「アルケン」は、Ｒがアルケニルである化合物Ｈ−Ｒを示す。
【００４４】
用語「アルキニル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、結合点としての炭素原子、線状または分岐のシクロ構造、環式構造または非環式構造、少なくとも１つの炭素−炭素の三重結合を有し、ならびに、炭素および水素以外の原子は存在しない一価の不飽和脂肪族基を示す。本明細書中で使用される場合、アルキニルの用語は、１つまたは複数の非芳香族性の炭素−炭素の二重結合の存在を除外しない。次に示す基、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡ＣＣＨ３および−ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ３が、アルキニル基の限定されない例である。用語「アルキンジイル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、結合点としての２つの炭素原子、線状または分岐のシクロ構造、環式構造または非環式構造、少なくとも１つの炭素−炭素の三重結合を有し、ならびに、炭素および水素以外の原子は存在しない二価の不飽和脂肪族基を示す。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。「アルキン」は、Ｒがアルキニルである化合物Ｈ−Ｒを示す。
【００４５】
用語「アリール」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、結合点としての芳香族炭素原子を有し、前記炭素原子が１つまたは複数の６員芳香族環構造の一部を形成する一価の不飽和芳香族基を示し、ただし、この場合、環原子はすべてが炭素であり、かつ、当該基は、炭素および水素以外の原子からはならない。２つ以上の環が存在するならば、これらの環は縮合していてもよく、または、非縮合であってもよい。本明細書中で使用される場合、この用語は、第１の芳香族環または存在するいずれかのさらなる芳香族環に結合する（炭素数制限が許す）１つまたは複数のアルキル基の存在を除外しない。アリール基の限定されない例には、フェニル（Ｐｈ）、メチルフェニル、（ジメチル）フェニル、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＣＨ３（エチルフェニル）、ナフチル、および、ビフェニル由来の一価基が含まれる。用語「アレーンジイル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、結合点としての２つの芳香族炭素原子を有し、前記炭素原子が１つまたは複数の６員芳香族環構造（複数も可）の一部を形成する二価の芳香族基を示し、ただし、この場合、環原子はすべてが炭素であり、かつ、当該一価基は、炭素および水素以外の原子からはならない。本明細書中で使用される場合、この用語は、第１の芳香族環または存在するいずれかのさらなる芳香族環に結合する（炭素数制限が許す）１つまたは複数のアルキル基の存在を除外しない。２つ以上の環が存在するならば、これらの環は縮合していてもよく、または、非縮合であってもよい。アレーンジイル基の限定されない例には、下記のものが含まれる：
【００４６】
【化１３】
2015500805.tif 000015
および
【化１４】
2015500805.tif 000016
【００４７】
用語「アリール」が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。「アレーン」は、Ｒがアリールである化合物Ｈ−Ｒを示す。
【００４８】
用語「アラルキル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、アルカンジイルおよびアリールの用語がそれぞれ、上記において提供された定義と一致する様式で使用される一価基のアルカンジイル−アリールを示す。アラルキルの限定されない例が、フェニルメチル（ベンジル、Ｂｎ）および２−フェニル−エチルである。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。置換されたアラルキルの限定されない例が（３−クロロフェニル）−メチルおよび２−クロロ−２−フェニル−エタ−１−イルである。
【００４９】
用語「ヘテロアリール」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、結合点としての芳香族の炭素原子または窒素原子を有し、前記炭素原子または窒素原子が芳香族環構造の一部を形成する一価の芳香族基を示し、ただし、この場合、環原子の少なくとも１つが、窒素、酸素または硫黄であり、かつ、当該基は、炭素、水素、芳香族窒素、芳香族酸素および芳香族硫黄以外の原子からはならない。本明細書中で使用される場合、この用語は、芳香族環または存在するいずれかのさらなる芳香族環に結合した（炭素数制限が許す）１つまたは複数のアルキル基の存在を除外しない。ヘテロアリール基の限定されない例には、フラニル、イミダゾリル、インドリル、インダゾリル（Ｉｍ）、メチルピリジル、オキサゾリル、ピリジル、ピロリル、ピリミジル、ピラジニル、キノリル、キナゾリル、キノキサリニル、チエニルおよびトリアジニルが含まれる。用語「ヘテロアレーンジイル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、２つの結合点としての２つの芳香族炭素原子、２つの芳香族窒素原子、または、１つの芳香族炭素原子および１つの芳香族窒素原子を有し、前記原子が１つまたは複数の芳香族環構造（複数も可）の一部を形成する二価の芳香族基を示し、ただし、この場合、環原子の少なくとも１つが、窒素、酸素または硫黄であり、かつ、当該二価基は、炭素、水素、芳香族窒素、芳香族酸素および芳香族硫黄以外の原子からはならない。本明細書中で使用される場合、この用語は、第１の芳香族環または存在するいずれかのさらなる芳香族環に結合した（炭素数制限が許す）１つまたは複数のアルキル基の存在を除外しない。２つ以上の環が存在するならば、これらの環は縮合していてもよく、または、非縮合であってもよい。ヘテロアレーンジイル基の限定されない例には、下記のものが含まれる：
【００５０】
【化１５】
2015500805.tif 000017
および
【化１６】
2015500805.tif 000018
【００５１】
当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。
【００５２】
用語「アシル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒが、水素、アルキル、アリール、アラルキルまたはヘテロアリールである基−Ｃ（Ｏ）Ｒを示し、そのような用語は上記で定義されている通りである。次に示す基、−ＣＨＯ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３（アセチル、Ａｃ）、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ２）２、−Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５、−Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ４ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ６Ｈ５、−Ｃ（Ｏ）（イミダゾリル）が、アシル基の限定されない例である。「チオアシル」が、基−Ｃ（Ｏ）Ｒの酸素原子が硫黄原子により置換されている（−Ｃ（Ｓ）Ｒ）ことを除いて、類似した様式で定義される。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。次に示す基、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＯ２Ｈ（カルボキシル）、−ＣＯ２ＣＨ３（メチルカルボキシル）、−ＣＯ２ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２（カルバモイル）および−ＣＯＮ（ＣＨ３）２が、置換されたアシル基の限定されない例である。
【００５３】
用語「アルコキシ」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒがアルキルである基−ＯＲを示し、そのような用語は上記で定義されている通りである。アルコキシ基の限定されない例には、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣＨ（ＣＨ２）２、−Ｏ−シクロペンチルおよび−Ｏ−シクロヘキシルが含まれる。用語「アルケニルオキシ」、「アルキニルオキシ」、「アリールオキシ」、「アラルコキシ」、「ヘテロアリールオキシ」および「アシルオキシ」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒがそれぞれ、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールおよびアシルである−ＯＲとして定義される基を示す。同様に、用語「アルキルチオ」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒがアルキルである基−ＳＲを示し、そのような用語は上記で定義されている通りである。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。用語「アルコール」は、水素原子の少なくとも１つがヒドロキシ基により置換されている上記で定義されるようなアルカンに対応する。
【００５４】
用語「アルキルアミノ」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒがアルキルである基−ＮＨＲを示し、そのような用語は上記で定義されている通りである。アルキルアミノ基の限定されない例には、−ＮＨＣＨ３および−ＮＨＣＨ２ＣＨ３が含まれる。用語「ジアルキルアミノ」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、ＲおよびＲ’が同じまたは異なるアルキル基であり得るか、あるいは、ＲおよびＲ’が一緒になって、アルカンジイルを表すことができる基−ＮＲＲ’を示す。ジアルキルアミノ基の限定されない例には、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）およびＮ−ピロリジニルが含まれる。用語「アルコキシアミノ」、「アルケニルアミノ」、「アルキニルアミノ」、「アリールアミノ」、「アラルキルアミノ」、「ヘテロアリールアミノ」および「アルキルスルホニルアミノ」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒがそれぞれ、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールおよびアルキルスルホニルである−ＮＨＲとして定義される基を示す。アリールアミノ基の限定されない一例が−ＮＨＣ６Ｈ５である。用語「アミド（アシルアミノ）」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒがアシルである基−ＮＨＲを示し、そのような用語は上記で定義されている通りである。アミド基の限定されない一例が−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３である。用語「アルキルイミノ」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒがアルキルである二価基＝ＮＲを示し、そのような用語は上記で定義されている通りである。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。次に示す基、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ３および−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ３が、置換されたアミド基の限定されない例である。
【００５５】
用語「アルキルホスファート」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒがアルキルである基−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＲ）を示し、そのような用語は上記で定義されている通りである。アルキルホスファート基の限定されない例には、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）が含まれる。用語「ジアルキルホスファート」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、ＲおよびＲ’が同じまたは異なるアルキル基であり得るか、あるいは、ＲおよびＲ’が一緒になって、アルカンジイルを表すことができる基−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ’）を示す。ジアルキルホスファート基の限定されない例には、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＭｅ）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）（ＯＭｅ）および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＥｔ）２が含まれる。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。
【００５６】
用語「アルキルスルホニル」および「アルキルスルフィニル」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、Ｒがアルキルである基−Ｓ（Ｏ）２Ｒおよび基−Ｓ（Ｏ）Ｒをそれぞれ示し、そのような用語は上記で定義されている通りである。用語「アルケニルスルホニル」、「アルキニルスルホニル」、「アリールスルホニル」、「アラルキルスルホニル」および「ヘテロアリールスルホニル」は、同様に定義される。当該用語が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｂ（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＣＨ３）２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。
【００５７】
用語「複素環式」または「複素環」は、「置換（された）」の修飾語を伴うことなく使用されるとき、少なくとも１つの環原子が炭素以外の元素である少なくとも１つの環を含むそのように修飾された化合物／基を意味する。非炭素の環原子の例には、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、ヒ素、アンチモン、ゲルマニウム、ビスマス、ケイ素および／またはスズが含まれるが、これらに限定されない。複素環式構造の例には、アジリジン、アジリン、オキシラン、エポキシド、オキシレン、チイラン、エピスルフィド、チイレン、ジアジリン、オキサジリジン、ジオキシラン、アゼチジン、アゼト、オキセタン、オキセト、チエタン、チエト、ジアゼチジン、ジオキセタン、ジオキセト、ジチエタン、ジチエト、ピロリジン、ピロール、オキソラン、フラン、チオラン、チオフェン、ボロラン、ボロール、ホスホラン、ホスホール、アルソラン、アルソール、スチボラン、スチボール、ビスモラン、ビスモール、シロラン、シロール、スタンノラン、スタンノール、イミダゾリジン、イミダゾール、ピラゾリジン、ピラゾール、イミダゾリン、ピラゾリン、オキサゾリジン、オキサゾール、オキサゾリン、イソオキサゾリジン、イソオキサゾール、チアゾリジン、チアゾール、チアゾリン、イソチアゾリジン、イソチアゾール、ジオキソラン、チチオラン、トリアゾール、フラザン、オキサジアゾール、チアジアゾール、ジチアゾール、テトラゾール、ピペリジン、ピリジン、オキサン、ピラン、チアン、チオピラン、サリナン、サリン、ゲルミナン、ゲルミン、スタンニナン、スタンニン、ボリナン、ボリニン、ホスフィナン、ホスフィニン、アルシナン、アルシニン、ピペラジン、ジアジン、モルホリン、オキサジン、チオモルホリン、チアジン、ジオキサン、ジオキシン、ジチアン、ジチイン、トリアジン、トリオキサン、テトラジン、アゼパン、アゼピン、オキセパン、オキセピン、チエパン、チエピン、ホモピペラジン、ジアゼピン、チアゼピン、オゾカン、アゾシン、オキセカンまたはチオカンが含まれるが、これらに限定されない。用語「複素環式」が、「置換（された）」の修飾語を伴って使用されるとき、１つまたは複数の水素原子が独立して、下記の例示的な限定されない官能基の１つによって置換されている：−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、「キラル補助基」は、反応の立体選択性に影響を与えることができる除去可能なキラル基を示す。当業者はそのような化合物を熟知しており、多くのものが市販されている。
【００５９】
第１の化合物の「異性体」は、それぞれの分子が、第１の化合物と同じ構成原子を含有するが、三次元におけるそれらの原子の立体配置が異なる別個の化合物である。
【００６０】
本明細書中で使用される場合、用語「患者」または用語「対象」は、生きている哺乳類生物（例えば、ヒト、サル、ウシ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、または、それらの遺伝子組換え種など）を示す。ある特定の実施形態において、患者または対象は霊長類である。ヒト対象の限定されない例が、成人、若年者、幼児および胎児である。
【００６１】
本明細書中で一般に使用されるように、「医薬的に許容され得る」は、正当な医学的判断の範囲内において、過度な毒性、刺激、アレルギー応答、あるいは、妥当な利益／危険比に相応する他の問題または合併症を伴うことなく、ヒトおよび動物の組織、臓器および／または体液との接触において使用するために好適である化合物、材料、組成物および／または投薬形態を示す。
【００６２】
「医薬的に許容され得る塩」は、上記で定義されるように医薬的に許容され得、かつ、所望される薬理学的活性を有する本発明の化合物の塩を意味する。そのような塩には、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸およびリン酸など）により形成される酸付加塩、または、有機酸（例えば、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、３−フェニルプロピオン酸、４，４’−メチレンビス（３−ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）、４−メチルビシクロ［２．２．２］オクタ−２−エン−１−カルボン酸、酢酸、脂肪族のモノカルボン酸およびジカルボン酸、脂肪族硫酸、芳香族硫酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクロペンタンプロピオン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、ヒドロキシナフトエ酸、乳酸、ラウリル硫酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、ｏ−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、シュウ酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸、フェニル置換アルカン酸、プロピオン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、第三級ブチル酢酸、トリメチル酢酸、トリフルオロ酢酸およびトリフルオルメチルスルホン酸（トリフリ酸）など）により形成される酸付加塩が含まれる。医薬的に許容され得る塩にはまた、存在する酸性プロトンが無機塩基または有機塩基と反応することができるときに形成される場合がある塩基付加塩が含まれる。許容可能な無機塩基には、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アルミニウムおよび水酸化カルシウムが含まれる。許容可能な有機塩基には、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミンおよびＮ−メチルグルカミンなどが含まれるが、これらに限定されない。本発明のいずれかの塩の一部を形成する特定のアニオンまたはカチオンは、塩が全体として薬理学的に許容され得る限り、重要ではないことを認識するべきである。医薬的に許容され得る塩のさらなる例ならびにそれらの調製方法および使用方法が、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄ  Ｕｓｅ（Ｐ．Ｈ．ＳｔａｈｌおよびＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ編、Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、２００２）において示される。
【００６３】
「防止」または「防止する」には、下記のことが含まれる：（１）疾患の危険性および／または疾患の素因を有するかもしれないが、疾患の病理または総体的症状のいずれかまたはすべてを未だ経験していないか、または示していない対象または患者における疾患の発症を抑制すること；ならびに／あるいは（２）疾患の危険性および／または疾患の素因を有するかもしれないが、疾患の病理または総体的症状のいずれかまたはすべてを未だ経験していないか、または示していない対象または患者における疾患の病理または総体的症状の発症を遅らせること。
【００６４】
「有効量」、「治療有効量」または「医薬有効量」は、疾患を処置するために対象または患者に投与されるとき、疾患のためのそのような処置を達成するために十分である量を意味する。
【００６５】
上記の定義は、参照によって本明細書中に組み込まれる参考文献のいずれかにおけるどのような定義であれ、矛盾する場合にはそれに取って代わる。しかしながら、ある特定の用語が定義されるという事実は、定義されていない用語はどれもが不明確であることを示すものとして見なすべきではない。むしろ、使用されるすべての用語が、当業者が本発明の範囲および実施を理解することができるような用語で発明を記載していると考えられる。
【００６６】
ＩＩ．一般的な実施形態
【００６７】
本発明のいくつかの実施形態において、個体が認知機能障害を有するか否かを問わず、個体における認知を増大させる方法および組成物が存在する。特に、ＰＫＲの阻害剤により、記憶（例えば、長期記憶および／または短期記憶など）を改善することを含めて、認知機能が改善される。具体的な実施形態において、改善は永続的である。他の実施形態において、改善は一時的であるが、阻害剤の継続的な投与により、改善が維持される。阻害剤は、例えば、毎日、週に１回、２週間に１回、月に１回、２ヶ月に１回、または、年に１回を含めて、ある特定の間隔で投与されることを必要とする場合がある。阻害剤は、ある特定の実施形態では経口投与される場合がある。
【００６８】
二本鎖ＲＮＡ活性化プロテインキナーゼ（ＰＫＲ）は最初、ウイルス感染の媒介因子として特定された。しかしながら、脳におけるその機能は依然として不明のままである。本発明は、ＰＫＲの欠如がネットワーク過同期性を引き起こし、それにもかかわらず、長続きするシナプス増強（Ｌ−ＬＴＰ）、記憶割当、ならびに、学習および記憶を強化する特異なマウス表現型を包含する。加えて、選択的ＰＫＲ阻害剤（ＰＫＲｉ）のＷＴ型マウスへの投与により、Ｐｋｒ−／−の表現型、すなわち、強化されたネットワーク律動性、Ｌ−ＬＴＰおよび記憶貯蔵が再現する。驚くべきことに、これらの効果がＧＡＢＡ作動性シナプス伝達における選択的低下によって引き起こされる。したがって、ＰＫＲは、病理学的振動を許すことなく学習期間中の所与のエピソードを保存しながら維持されなければならない精巧に調整されたネットワーク活動を制御する。ＰＫＲ活性がいくつかの神経学的障害において変化するので、ＰＫＲは、認知機能障害を処置するための有望な新しい標的である。
【００６９】
当業者は、ＰＫＲがまた、ＥＩＦ２ＡＫ１；ＭＧＣ１２６５２４；ＰＲＫＲ；ＯＴＴＨＵＭＰ０００００２０１３２０；Ｐ１／ｅＩＦ２αプロテインキナーゼ；二本鎖ＲＮＡ活性化プロテインキナーゼ；ｅＩＦ２αプロテインキナーゼ２；インターフェロン誘導二本鎖ＲＮＡ活性化プロテインキナーゼ；インターフェロン誘導性ＲＮＡ依存性プロテインキナーゼ；インターフェロン誘導性ｅＩＦ２αキナーゼ；ｐ６８キナーゼ；ＲＮＡ活性化されたプロテインキナーゼ；プロテインキナーゼ、インターフェロン誘導性二本鎖ＲＮＡ依存性型、または、真核生物翻訳開始因子２−アルファキナーゼ２として示される場合があることを認識している。１つの例示的な実例として、ＰＫＲのタンパク質配列が、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）において、ＮＰ＿００２７５０で提供され（これは参照によって本明細書中に組み込まれる）、ＰＫＲのｍＲＮＡ配列が、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）において、ＮＭ＿００２７５９で提供される。当業者は、本発明の阻害剤が、イソ型ＰＫＲ活性、すなわち、ｅＩＦ２αのリン酸化を直接に阻害するかもしれないこと、あるいは、ＰＫＲまたはｅＩＦ２αホスファターゼの活性を間接的に促進するかもしれないことを認識している。
【００７０】
ＩＩＩ．本発明の例示的な化合物
【００７１】
本開示の化合物は、下記方法を使用して製造され得る。これらの方法はさらに、当業者によって適用されるような有機化学の原理および技術を使用して変更および最適化され得る。そのような原理および技術が、例えば、Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（２００７）において教示される（これは参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【００７２】
本発明の方法において用いられる化合物は、１つまたは複数の非対称に置換された炭素原子または窒素原子を含有する場合があり、また、光学活性形態またはラセミ形態で単離される場合がある。したがって、ある構造体のすべてのキラル形態、ジアステレオマー形態、ラセミ形態、エピマー形態およびすべての幾何異性形態が、特定の立体化学または異性形態が具体的に示される場合を除き、意図される。化合物は、ラセミ体およびラセミ混合物、ただ１つのエナンチオマー、ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーとして存在し得る。いくつかの実施形態において、ただ１つのジアステレオマーが得られる。本発明の化合物のキラル中心はＳまたはＲの立体配置を有することができる。
【００７３】
本発明の化合物はまた、本明細書中に述べられる適応症における使用のためであろうと、または、他の場合のためであろうと、先行技術において知られている化合物よりも有効である、毒性が少ない、長く作用する、強力である、副作用の発生が少ない、容易に吸収される、および／または、良好な薬物動態学的プロフィル（例えば、高い経口生物学的利用能および／または低いクリアランス）を有する、ならびに／あるいは、先行技術において知られている化合物を上回る他の有用な薬理学的、物理的または化学的特性を有し得るいう利点を有し得る。
【００７４】
加えて、本発明の化合物を構成する原子は、そのような原子のすべての同位体形態を含むものとする。同位体には、本明細書中で使用される場合、同じ原子番号を有するが、異なる質量数を有する原子が含まれる。一般的な例として、また、限定されないが、水素の同位体には、トリチウムおよび重水素が含まれ、炭素の同位体には、１３Ｃおよび１４Ｃが含まれる。
【００７５】
本発明の化合物はまた、プロドラッグ形態で存在する場合がある。プロドラッグは、医薬品の数多くの望ましい性状（例えば、溶解性、生物学的利用能、製造性など）を高めることが知られているので、本発明のいくつかの方法において用いられる化合物は、所望されるならば、プロドラッグ形態で送達され得る。したがって、本発明では、本発明の化合物のプロドラッグおよびプロドラッグを送達する方法が意図される。本発明において用いられる化合物のプロドラッグは、化合物に存在する官能基を、常用的操作または生体内のどちらであれ、修飾が元の化合物に切断されるような様式で修飾することによって調製される場合がある。それによれば、プロドラッグには、例えば、ヒドロキシ、アミノまたはカルボキシ基が、どのような基であれ、プロドラッグが対象に投与されたときには開裂して、ヒドロキシ、アミノまたはカルボン酸をそれぞれ形成する基に結合させられる本明細書中に記載される化合物が含まれる。
【００７６】
本発明のいずれかの塩の一部を形成する特定のアニオンまたはカチオンは、塩が全体として薬理学的に許容され得る限り、重要ではないことを認識するべきである。医薬的に許容され得る塩のさらなる例ならびにそれらの調製方法および使用方法が、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄ  Ｕｓｅ（２００２）において示される（これは参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【００７７】
一般に、本明細書中に開示される化合物は、最初にイサチンＢを複素環アネル化（ａｎｎｅｌａｔｅｄ）アナリンＡから生成させることによって化学合成により生成される。得られたイサチンＢはその後、構造Ｃを生成するために、ホスフィン・イリド伝達反応によりさらなる複素環にカップリングされる。本明細書中に開示される化合物は下記のスキームに従って生成される。
【００７８】
【化１７】
2015500805.tif 000019
【００７９】
当業者は、本明細書中に開示される同じタイプの化合物に至る他の合成経路が存在することを容易に認識するであろう。上記の合成経路は限定的ではない。本開示では、本開示の精神および範囲からすべてが逸脱しない上記構造のそれぞれをもたらす代替的合成経路が意図される。
【００８０】
一般に、Ｘは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、水素（−Ｈ）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、メルカプト（−ＳＨ）、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、置換窒素原子、炭素原子、置換炭素またはカルボニル（Ｃ＝Ｏ）など。具体的な例において、Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏである。一般に、Ｚは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、水素（−Ｈ）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、メルカプト（−ＳＨ）、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、置換窒素原子、炭素原子、置換炭素またはカルボニル（Ｃ＝Ｏ）など。具体的な例において、Ｚは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏである。一般に、Ｌは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、水素（−Ｈ）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、メルカプト（−ＳＨ）、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、置換窒素原子、炭素原子、置換炭素またはカルボニル（Ｃ＝Ｏ）など。具体的な例において、Ｌは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏである。一般に、Ａは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、水素（−Ｈ）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、メルカプト（−ＳＨ）、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、置換窒素原子、炭素原子、置換炭素またはカルボニル（Ｃ＝Ｏ）など。具体的な例において、Ａは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏである。一般に、Ｄは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、水素（−Ｈ）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、メルカプト（−ＳＨ）、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、置換窒素原子、炭素原子、置換炭素またはカルボニル（Ｃ＝Ｏ）など。具体的な例において、Ｄは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏである。一般に、Ｊは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、水素（−Ｈ）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、メルカプト（−ＳＨ）、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、置換窒素原子、炭素原子、置換炭素またはカルボニル（Ｃ＝Ｏ）など。具体的な例において、Ｊは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＣＨ、ＣＨ２またはＣ＝Ｏである。一般に、Ｒは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、水素（−Ｈ）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、メルカプト（−ＳＨ）、酸素原子、窒素原子または置換窒素原子など。具体的な例において、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＯまたはＮＨ２である。一般に、Ｇは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、水素（−Ｈ）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、メルカプト（−ＳＨ）、酸素原子、窒素原子または置換窒素原子など。具体的な例において、Ｇは、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＯまたはＮＨ２である。
【００８１】
一般に、Ｙは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、酸素原子、窒素原子、置換窒素原子、炭素原子または置換炭素原子など。具体的な例において、Ｙは、ＣＨ２；ＣＨ、Ｎ、ＮＨ、ＣまたはＯである。一般に、Ｅは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、酸素原子、窒素原子、置換窒素原子、炭素原子または置換炭素原子など。具体的な例において、Ｅは、ＣＨ２；ＣＨ、Ｎ、ＮＨ、ＣまたはＯである。一般に、Ｑは、下記の官能基のいずれか１つから選択され得る：例えば、酸素原子、窒素原子、置換窒素原子、炭素原子または置換炭素原子など。具体的な例において、Ｑは、ＣＨ２；ＣＨ、Ｎ、ＮＨ、ＣまたはＯである。一般に、ｍは、５員環を形成する０であるか、または、ｍは、６員環を形成する１である。一般に、ｎは、５員環を形成する０であるか、または、ｎは、６員環を形成する１である。
【００８２】
下記のスキームに従って生成される化合物の具体的な限定されない例が下記の通りである：
【化１８】
2015500805.tif 000020
【００８３】
【化１９】
2015500805.tif 000021
および
【化２０】
2015500805.tif 000022
【００８４】
ＩＶ．医薬調製物
【００８５】
本発明の医薬組成物は、有効量の本発明の１つまたは複数の組成物を医薬的に許容され得るキャリアに溶解または分散させた形で含む。表現「医薬的または薬理学的に許容され得る」は、動物（例えば、ヒトなど）に適するように投与されたとき、有害反応、アレルギー反応または他の不都合な反応をもたらさない分子的実体および組成物を示す。本発明の少なくとも１つの組成物またはさらなる有効成分を含有する医薬組成物の調製が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０）（これは参照によって本明細書中に組み込まれる）によって例示されるように、本開示に照らして当業者には知られているであろう。そのうえ、動物（例えば、ヒト）への投与のために、調製物は、ＦＤＡの生物学的製剤基準部（Ｏｆｆｉｃｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）によって要求れるような無菌性基準、発熱性基準、一般的安全性基準および純度基準を満たすべきであることは言うまでもない。
【００８６】
本明細書中で使用される場合、「医薬的に許容され得るキャリア」には、当業者には知られているように、ありとあらゆる溶媒、分散媒質、コーティング、界面活性剤、酸化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物、薬物安定剤、ゲル、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑剤、甘味剤、矯味矯臭剤、色素、そのような同様の物質、および、それらの組合せが含まれる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０、１２８９頁〜１３２９頁）を参照のこと。これは参照によって本明細書中に組み込まれる）。どのような慣用的キャリアであれ、慣用的キャリアが有効成分と不適合である場合を除いて、医薬組成物におけるその使用が意図される。
【００８７】
ＰＫＲ阻害剤は、固体形態、液体形態またはエアロゾル形態で投与されることになるかどうかにより、また、注入のような投与経路のために無菌であることを必要とするかどうかにより、種々のタイプのキャリアを含み得る。本発明は、当業者には知られているように、静脈内投与により、皮内投与により、経皮投与により、クモ膜下腔内投与により、動脈内投与により、腹腔内投与により、鼻腔内投与により、膣内投与により、直腸内投与により、局所投与により、筋肉内投与により、皮下投与により、粘膜投与により、経口投与により、局所投与により（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ、ｌｏｃａｌｌｙ）、吸入（例えば、エアロゾル吸入）により、注射により、注入により、持続注入により、標的細胞を直接に浸す局所的灌流により、カテーテルにより、洗浄（ｌａｖａｇｅ）により、クリームで、脂質組成物（例えば、リポソーム）で、あるいは、他の方法によって、または、前記の任意の組合せによってでも投与することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０）を参照のこと。これは参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【００８８】
ＰＫＲ阻害剤は、遊離塩基形態、中性形態または塩形態で組成物に配合され得る。医薬的に許容され得る塩には、酸付加塩が含まれ、例えば、タンパク質性組成物の遊離アミノ基により形成される酸付加塩、あるいは、無機酸（例えば、塩酸またはリン酸など）、または、酢酸、シュウ酸、酒石酸もしくはマンデル酸のような有機酸により形成される酸付加塩が含まれる。遊離カルボキシル基により形成される塩もまた、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化第二鉄など）、または、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジンもしくはプロカインのような有機塩基から誘導され得る。配合されると、溶液は、投薬配合物と適合する様式で、かつ、治療有効的であるような量で投与されるであろう。配合物は、様々な投薬形態で、例えば、非経口投与用に配合される投薬形態（例えば、注射液、または、肺への送達のためのエアロゾルなど）、または、消化系投与用に配合される投薬形態（例えば、薬物放出カプセルなど）などで容易に投与される。
【００８９】
さらに本発明によれば、投与に好適である本発明の組成物が、不活性希釈剤を伴って、または、不活性希釈剤を伴うことなく医薬的に許容され得るキャリアにおいて提供される。キャリアは同化性であるべきで、液体キャリア、半固体キャリア（すなわち、ペースト）または固体キャリアを含む。慣用的などのようなものであれ、慣用的な媒質、薬剤、希釈剤またはキャリアが、被投与者にとって、または、それらに含有される組成物の治療有効性にとって有害である場合を除いて、本発明の方法を実施する際に使用される投与可能な組成物におけるその使用が適切である。キャリアまたは希釈剤の例には、例えば、脂肪、油類、水、生理的食塩水、脂質、リポソーム、樹脂、結合剤およびフィラーなど、または、それらの組合せが含まれる。組成物はまた、１つまたは複数の成分の酸化を遅らせるために様々な酸化防止剤を含む場合がある。加えて、微生物の作用の防止を、様々な抗菌剤および抗真菌剤などの保存剤によってもたらすことができ、そのような保存剤には、パラベン類（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン）、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールまたはそれらの組合せが含まれるが、これらに限定されない。
【００９０】
本発明によれば、組成物は、任意の好都合かつ実用的な様式で、すなわち、溶解、懸濁、乳化、混合、カプセル化および吸収などによってキャリアと一緒にされる。そのような手順は当業者には常用的である。
【００９１】
本発明の具体的な実施形態において、組成物は半固体または固体のキャリアと組合わされ、または完全に混合される。混合を、任意の好都合な様式（例えば、粉砕など）で行うことができる。安定化剤もまた、組成物を治療活性の喪失から保護するために、すなわち、胃における変性から保護するために、混合プロセスにおいて加えることができる。組成物において使用される安定剤の例には、緩衝剤、アミノ酸（例えば、グリシンおよびリシンなど）、炭水化物（例えば、デキストロース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マルトース、ソルビトール、マンニトールなど）が含まれる。
【００９２】
さらなる実施形態において、本発明は、ＰＫＲ阻害剤、１つまたは複数の脂質および水性溶媒を含む医薬用脂質ビヒクル組成物の使用に関するものであり得る。本明細書中で使用される場合、用語「脂質」は、水には特徴的に不溶性であり、かつ、有機溶媒により抽出可能である広範囲の物質のいずれかを含むように定義されるであろう。この幅広いクラスの化合物が当業者に広く知られており、また、用語「脂質」が本明細書中で使用される場合、脂質は、どのような構造であれ、特定の構造に限定されない。例には、長鎖脂肪族炭化水素およびそれらの誘導体を含有する化合物が含まれる。脂質は、天然に存在するものまたは合成されたもの（すなわち、人によって設計または製造されるもの）であり得。しかしながら、脂質は通常の場合、生物学的物質である。生物学的脂質は当業界において広く知られており、これらには、例えば、中性脂肪、リン脂質、ホスホグリセリド、ステロイド、テルペン、リゾ脂質、スフィンゴ糖脂質、糖脂質、スルファチド、エーテル連結脂肪酸およびエステル連結脂肪酸を有する脂質、ならびに、重合可能な脂質、また、それらの組合せが含まれる。当然のことながら、当業者によって脂質として理解される、本明細書中に具体的に記載される化合物以外の化合物もまた、本発明の組成物および方法によって包含される。
【００９３】
当業者は、組成物を脂質ビヒクルに分散するために用いることができる様々な技術を熟知しているであろう。例えば、ＰＫＲ阻害剤は、当業者に知られている任意の手段によって、脂質を含有する溶液に分散され得、あるいは、脂質とともに溶解され得、あるいは、脂質とともに乳化され得、あるいは、脂質とともに混合され得、あるいは、脂質と組合わされ得、あるいは、脂質に共有結合され得、あるいは、脂質における懸濁物として含有され得、あるいは、ミセルまたはリポソームとともに含有または複合体化され得、あるいは、他の場合には、脂質または脂質構造と会合させられ得る。分散により、リポソームの形成がもたらされる場合があり、または、もたらされない場合がある。
【００９４】
動物患者に投与される本発明の組成物の実際の投薬量は、物理的要因および生理学的要因によって、例えば、体重、状態の重篤度、処置されている疾患のタイプ、以前の治療的介入または同時での治療的介入、患者の特発性疾患、および、投与経路などによって決定することができる。投薬量および投与経路に依存して、好ましい投薬量および／または有効量の投与回数が、対象の応答に従って変わる場合がある。投与に責任を有する医師は、どのような事象においても、組成物における有効成分（複数も可）の濃度および個々の対象のための適切な用量を決定するであろう。
【００９５】
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、例えば、少なくとも約０．１％の活性化合物を含む場合がある。他の実施形態において、活性化合物は、単位の重量の約２％〜約７５％の間、または、例えば、約２５％〜約６０％の間、およびそれらにおいて誘導可能な任意の範囲を構成し得る。当然のことではあるが、それぞれの治療上有用な組成物における活性化合物（複数も可）の量は、好適な投薬量が当該化合物の所与の単位用量において得られるような方法で調製され得る。溶解性、生物学的利用能、生物学的半減期、投与経路、製品の貯蔵寿命および他の薬理学的検討事項などの要因が、そのような医薬配合物を調製する技術分野の当業者によって熟慮されるであろうし、また、それ自体、様々な投薬量および処置療法が望ましい場合がある。
【００９６】
他の非限定的な例において、用量はまた、１投与あたり約１マイクログラム／ｋｇ／体重、約５マイクログラム／ｋｇ／体重、約１０マイクログラム／ｋｇ／体重、約５０マイクログラム／ｋｇ／体重、約１００マイクログラム／ｋｇ／体重、約２００マイクログラム／ｋｇ／体重、約３５０マイクログラム／ｋｇ／体重、約５００マイクログラム／ｋｇ／体重、約１ミリグラム／ｋｇ／体重、約５ミリグラム／ｋｇ／体重、約１０ミリグラム／ｋｇ／体重、約５０ミリグラム／ｋｇ／体重、約１００ミリグラム／ｋｇ／体重、約２００ミリグラム／ｋｇ／体重、約３５０ミリグラム／ｋｇ／体重、約５００ミリグラム／ｋｇ／体重から、約１０００ｍｇ／ｋｇ／体重またはそれ以上までを含む場合があり、また、それらにおいて得られる任意の範囲も含み得る。本明細書中に列挙された数字から誘導され得る範囲の非限定的な例において、約５ｍｇ／ｋｇ／体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ／体重の範囲、約５マイクログラム／ｋｇ／体重〜約５００ミリグラム／ｋｇ／体重の範囲などを、上記数字に基づいて投与することができる。
【００９７】
Ａ．消化系の組成物および配合物
本発明の好ましい実施形態において、組成物（複数も可）が、消化系経路により投与されるために配合される。消化系経路には、組成物が消化管と直接に接触しているすべての可能な投与経路が含まれる。具体的には、本明細書中に開示された医薬組成物は、経口投与、口腔投与、直腸投与または舌下投与により投与され得る。そのようなものとして、これらの組成物は、不活性な希釈剤とともに、または、同化性の食用キャリアとともに配合される場合があり、あるいは、これらの組成物は硬質外被ゼラチンカプセルまたは軟質外被ゼラチンカプセルに包まれる場合があり、あるいは、これらの組成物は錠剤に圧縮される場合があり、あるいは、これらの組成物は食餌療法の食物に直接組み込まれる場合がある。
【００９８】
ある特定の実施形態において、活性化合物が賦形剤とともに取り込まれ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁物、シロップおよびウエハなどの形態で使用される場合がある（Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ他、１９９７；Ｈｗａｎｇ他、１９９８；米国特許第５，６４１，５１５号、同第５，５８０，５７９号および同第５，７９２，４５１号、それぞれがその全体において参照によって本明細書中に特に組み込まれる）。そのような錠剤、トローチ、丸薬およびカプセルなどはまた、下記のものを含有する場合がある：結合剤、例えば、トラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチンまたはそれらの組合せなど；賦形剤、例えば、リン酸二カルシウム、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウムまたはそれらの組合せなど；崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸またはそれらの組合せなど；滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムなど；甘味剤、例えば、スクロース、ラクトース、サッカリンまたはそれらの組合せなど；矯味矯臭剤、例えば、ペパーミント、冬緑油、サクランボ香味剤、オレンジ香味剤など。投薬単位形態がカプセルであるとき、カプセルは、上記タイプの材料に加えて、液状キャリアを含有する場合がある。様々な他の材料が、コーティングとして、または、他の場合には投薬単位の物理的形態を改変するために存在する場合がある。例えば、錠剤、丸薬またはカプセルは、シェラック、糖または両方によりコーティングされる場合がある。投薬形態がカプセルであるとき、カプセルは、上記タイプの材料に加えて、キャリア（例えば、液状キャリアなど）を含有する場合がある。ゼラチンカプセル、錠剤または丸薬には、腸溶性コーティングが施される場合がある。腸溶性コーティングにより、ｐＨが酸性である胃または上部腸における組成物の変性が防止される。例えば、米国特許第５，６２９，００１号を参照のこと。小腸に達すると、小腸における塩基性ｐＨはコーティングを溶解させ、組成物を放出させ、特殊化細胞（例えば、上皮腸細胞およびパイエル板Ｍ細胞）によって吸収させ得る。エリキシル剤のシロップは、活性化合物、甘味剤としてのスクロース、保存剤としてのメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素および香味料（例えば、サクランボ香料またはオレンジ香料など）を含有する場合がある。当然のことながら、どのような投薬単位形態であれ、投薬単位形態を調製する際に使用される材料はどれも、医薬的に純粋であり、かつ、用いられる量において実質的に無毒性であるべきである。加えて、活性化合物は持続放出型の調製物および配合物に取り込まれる場合がある。
【００９９】
経口投与の場合、本発明の組成物は、別法として、口腔洗浄剤、歯磨き剤、バッカル錠、口腔スプレー剤または舌下用経口投与配合物の形態で１つまたは複数の賦形剤とともに配合される場合がある。例えば、口腔洗浄剤が、必要量での有効成分を適切な溶媒（例えば、ホウ酸ナトリウム溶液（ドーベル液）など）に取り込んで調製される場合がある。別法として、有効成分が、口腔用溶液（例えば、ホウ酸ナトリウム、グリセリンおよび重炭酸カリウムを含有する口腔用溶液など）に取り込まれる場合があり、あるいは、歯磨き剤に分散される場合があり、あるいは、水、結合剤、研磨剤、矯味矯臭剤、発泡剤および湿潤剤を含み得る組成物に治療有効量で加えられる場合がある。別法として、組成物は、舌の下側に置かれ得るか、他の形で口内で溶解され得る錠剤形態または溶液形態に作成される場合がある。
【０１００】
他の消化系投与方法に好適であるさらなる配合物には、坐薬が含まれる。坐薬は、直腸への挿入のための通常投薬される、様々な重量および形状を有する固体投薬形態である。挿入後、坐薬は軟化し、または融解し、または腔液に溶解する。一般に、坐薬の場合、慣用的キャリアには、例えば、ポリアルキレングリコール、トリグリセリドまたはそれらの組合せが含まれ得る。ある特定の実施形態において、坐薬が、例えば、有効成分を約０．５％〜約１０％の範囲で、好ましくは約１％〜約２％の範囲で含有する混合物から形成される場合がある。
【０１０１】
Ｂ．非経口組成物および配合物
さらなる実施形態において、組成物が非経口経路により投与される場合がある。本明細書中で使用される場合、用語「非経口（の）」には、消化管を迂回する経路が含まれる。具体的には、本明細書中に開示された医薬組成物は、例えば、限定されないが、静脈内、皮内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、皮下または腹腔内的に投与される場合がある（米国特許第６，７５３７，５１４号、同第６，６１３，３０８号、同第５，４６６，４６８号、同第５，５４３，１５８号、同第５，６４１，５１５号および同第５，３９９，３６３号（それぞれがその全体において参照によって本明細書中に特に組み込まれる））。
【０１０２】
遊離塩基または薬理学的に許容され得る塩としての活性化合物の溶液が、界面活性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロースなど）と好適に混合された水において調製される場合がある。分散物もまた、グリセロール、液状ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物において、また、油類において調製される場合がある。貯蔵および使用の通常的条件のもとで、これらの調製物は、微生物の成長を防止するための保存剤を含有する。注射剤使用に好適である医薬形態には、無菌の水溶液または水性分散物、および、無菌の注射可能な溶液または分散物の即時調製用の無菌の粉末が含まれる（米国特許第５，４６６，４６８号、これはその全体が参照によって本明細書中に特に組み込まれる）。すべての場合において、当該形態は無菌でなければならず、かつ、容易な注射可能性が存在する程度に液状でなければならない。当該形態は、製造および貯蔵の条件のもとで安定でなければならず、かつ、微生物（例えば、細菌および真菌など）の混入作用に対して保護されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（すなわち、グリセロール、プロピレングリコールおよび液状ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、および／または、植物油を含有する溶媒または分散媒質であり得る。適正な流動性が、例えば、コーティング（例えば、レシチンなど）の使用によって、また、分散物の場合には要求される粒子サイズの維持によって、また、界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤によって、例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸およびチメロサールなどによってもたらされ得る。多くの場合において、等張剤（例えば、糖または塩化ナトリウム）を含むことが好ましいであろう。注射可能な組成物の延長された吸収が、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を組成物において使用することによってもたらされ得る。
【０１０３】
水溶液での非経口投与の場合、例えば、溶液は、必要であるならば、好適に緩衝状態にされるべきであり、また、液体希釈剤は最初に、十分な生理的食塩水またはグルコースにより等張性にされるべきである。これらの特定の水溶液は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与および腹腔内投与に特に好適である。この関連において、用いることができる無菌の水性媒質が、本開示に照らして当業者に知られることになる。例えば、１回分の投薬量が等張性ＮａＣｌ溶液に溶解され、皮下注入液に加えられるか、または、提案された注入部位において注射され得る（例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”、第１５版、１０３５頁〜１０３８頁および１５７０頁〜１５８０頁を参照のこと）。投薬量における何らかの変動が必然的に、処置されている対象の状態によって生じるであろう。投与責任者は、どのような事象においても、個々の対象に適切な用量を決定するであろう。そのうえ、ヒトへの投与のために、調製物は、ＦＤＡの生物学的製剤基準部によって要求されるような無菌性基準、発熱性基準、一般的安全性基準および純度基準を満たすべきである。
【０１０４】
無菌の注射液が、必要量での活性化合物を、必要に応じて、上記で列挙される様々な他の成分とともに適切な溶媒に取り込み、その後、ろ過滅菌することによって調製される。一般に、分散物は、様々な滅菌された有効成分を、基礎となる分散媒質と、上記で列挙された成分から要求された他の成分とを含有する無菌ビヒクルに取り込むことによって調製される。無菌の注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法が、有効成分および任意の追加的な所望の成分の粉末を以前に滅菌ろ過されたその溶液から生じさせる真空乾燥技術および凍結乾燥技術である。粉末化された組成物が、安定化剤とともに、または、安定化剤を用いることなく、液体キャリア（例えば、水または生理的食塩水溶液など）と組合わされる。
【０１０５】
Ｃ．多岐にわたる医薬組成物および医薬配合物
本発明の他の好ましい実施形態において、活性化合物が、多岐にわたる様々な投与経路のために、例えば、局所（すなわち、経皮）投与、粘膜投与（鼻腔内、膣など）および／または吸入などのために配合される場合がある。
【０１０６】
局所投与用の医薬組成物は、薬用適用物（例えば、軟膏、ペースト、クリームまたは粉末など）のために配合された活性化合物を含む場合がある。軟膏には、局所適用のためのすべての油性の吸着型組成物、乳化型組成物および水溶性組成物が含まれ、一方、クリームおよびローションは、乳化基剤のみを含む組成物である。局所投与された医薬品は、皮膚を介した有効成分の吸着を促進させるための浸透強化剤を含有する場合がある。好適な浸透強化剤には、グリセリン、アルコール、アルキルメチルスルホキシド、ピロリドン類およびルアロカプラム（ｌｕａｒｏｃａｐｒａｍ）が含まれる。局所適用組成物のための可能な基剤には、ポリエチレングリコール、ラノリン、コールドクリームおよびペトロラタムおよび任意の他の好適な吸収基剤、乳化基剤または水溶性軟膏基剤が含まれる。局所用調製物はまた、乳化剤、ゲル化剤および抗菌性保存剤を、有効成分を保ち、かつ、均質な混合物を提供するために必要に応じて含む場合がある。本発明の経皮投与はまた、「パッチ」の使用を含む場合がある。例えば、パッチは、１つまたは複数の活性物質を、所定の速度で、かつ、継続した様式で一定の期間にわたって供給し得る。
【０１０７】
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、点眼剤、鼻腔内スプレー、吸入および／または他のエアロゾル送達ビヒクルによって送達される場合がある。組成物を鼻腔エアロゾルスプレーにより肺に直接送達するための方法が、例えば、米国特許第５，７５６，３５３号および同第５，８０４，２１２号に記載されている（これらはそれぞれがその全体において参照によって本明細書中に特に組み込まれる）。同様に、鼻腔内マイクロ粒子樹脂を使用する薬物の送達（Ｔａｋｅｎａｇａ他、１９９８）、および、リゾホスファチジル−グリセロール化合物を使用する薬物の送達（米国特許第５，７２５，８７１号、これはその全体が参照によって本明細書中に特に組み込まれる）もまた、製薬業界では広く知られている。同様に、ポリテトラフルオロエチレン担体マトリックス形態での経粘膜薬物送達が米国特許第５，７８０，０４５号に記載されている（これはその全体が参照によって本明細書中に特に組み込まれる）。
【０１０８】
エアロゾルの用語は、液化または加圧されたガス噴射剤に分散された液体粒子の微細分割固体のコロイド系を示す。吸入のための本発明の典型的なエアロゾルは、液体噴射剤、または、液体噴射剤および好適な溶媒の混合物における有効成分の懸濁物からなるであろう。好適な噴射剤には、炭化水素および炭化水素エーテルが含まれる。好適な容器は噴射剤の圧力要件に従って変化するであろう。エアロゾルの投与は、対象の年齢、体重および症状の重篤度および応答に従って変化するであろう。
【０１０９】
Ｖ．本発明のキット
【０１１０】
本明細書中に記載されている組成物はいずれもキットに含まれ得る。非限定的な一例において、ＰＫＲ阻害剤が、好適な容器手段においてキットに含まれる。
【０１１１】
キットの構成成分は、例えば、水性媒質中または凍結乾燥形態で包装され得る。キットの容器手段には一般に、構成成分が入れられ得る、好ましくは、構成成分が好適には等分されて入れられ得る少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、瓶、注射器または他の容器手段が含まれるであろう。２つ以上の構成成分がキットに存在する場合、キットはまた、さらなる構成成分が別個に入れられ得る第２、第３または他のさらなる容器を一般に含有するであろう。しかしながら、構成成分の様々な組合せがバイアルに含まれる場合がある。本発明のキットはまた、典型的には、ＰＫＲ阻害剤を含有するための手段および任意の他の試薬容器を市販用に密閉した状態で含むであろう。そのような容器には、所望されるバイアルが保持される射出成形されたプラスチック容器またはブロー成形されたプラスチック容器が含まれ得る。
【０１１２】
キットの構成成分が１つおよび／または複数の液体溶液において提供されるとき、液体溶液は水溶液であり、無菌の水溶液が特に好ましい。組成物はまた、注入可能な組成物に配合される場合がある。その場合、容器手段はそれ自体が、注射器、ピペットおよび／または他の同様な装置であり得、そのような容器手段から、配合物が身体の感染部位に適用される場合があり、動物に注射される場合があり、ならびに／あるいは、キットの他の構成成分に適用される場合さえあり、および／または、キットの他の構成成分と混合される場合がある。いくつかの実施形態において、キットの構成成分は乾燥された粉末（複数も可）として提供される場合がある。試薬および／または構成成分が乾燥粉末として提供されるとき、粉末は好適な溶媒の添加によって再構成することができる。溶媒もまた、別の容器手段において提供され得ることが想定される。
【実施例】
【０１１３】
下記の実施例が、本発明の好ましい実施形態を明らかにするために含まれる。下記の実施例において開示される技術は、本発明の実施において十分に機能することが本発明者によって発見された技術を表しており、したがって、その好ましい実施方法を構成すると見なされ得ることが当業者によって理解されるべきである。しかしながら、本開示に照らして、当業者は、多くの変化が、開示された具体的な実施形態においてなされ得ること、また、多くの変化により、同様な結果または類似した結果が依然として、本発明の精神および範囲から逸脱することなく得られ得ることを理解するべきである。
【０１１４】
実施例１
脳の全体的形態学がＰＫＲノックアウト（ＰＫＲ−／−）マウスにおいて改変されない
ＰＫＲノックアウト（Ｐｋｒ−／−）マウスは生存可能であり、繁殖能があり、正常なサイズであり、かつ、表現型がその野生型（ＷＴ）同腹子と区別することができない（Ａｂｒａｈａｍ他、２００８）。ニッスル染色、ならびに、小胞グルタミン酸輸送体１（ＶＧＬＵＴ１、シナプス前グルタミン酸作動性終末のマーカー）、シナプス後肥厚部タンパク質９５（ＰＳＤ９５、シナプス後終末のマーカー）およびグルタミン酸デカルボキシラーゼ６７（ＧＡＤ６７、ＧＡＢＡ作動性終末のマーカー）についてのシナプスマーカーは、Ｐｋｒ−／−マウスの脳における全体的な異常を何ら示さない（図８）。ＰＫＲは正常な状態では、海馬全体にわたって錐体細胞および介在ニューロンにおいて発現される（図８ｅ）。予想されるように、ＰＫＲタンパク質が、免疫組織化学およびウエスタンブロッティングによって求めたところ、Ｐｋｒ−／−の脳では検出不能である（図８ｅ、図８ｆ）。ＰＫＲは（他のｅＩＦ２αキナーゼと比較して（Ｃｏｓｔａ−Ｍａｔｔｉｏｌｉ他、２００９））哺乳動物の脳では量が比較的多くないので、ｅＩＦ２α□リン酸化がＰｋｒ−／−マウス由来の海馬において改変されていないこと（図８ｆ）は驚くことでない。
【０１１５】
実施例２
ＰＫＲの遺伝的欠失または薬理学的阻害はインビボおよびインビトロにおける同期性ネットワーク放電を引き起こす
予想外にも、自由に運動するＰｋｒ−／−マウスにおいてビデオ脳波記録法（ＥＥＧ）によってモニターされた自発性の海馬および皮質の脳律動により、明白な行動的発現が付随しなかった間欠性の異常なスパイク放電が明らかにされた（図１ａおよび図９ａ）。どちらの異常も、ＷＴ型マウスからの記録では現れなかった（図１ｂおよび図９ｂ）。発作間事象の非定型的な特徴が、単発性スパイクの代わりに、当該事象が、スパイク抑制後の欠損を示唆する反復する波後放電が続くスパイクからなったことであった。Ｐｋｒ−／−マウスにおけるこの興奮性不均衡が発達期間中に生じているかもしれないので、本発明者らは、ＰＫＲ活性を選択的ＰＫＲ阻害剤（ＰＫＲｉ）（Ｊａｍｍｉ他、２００３）の全身的注射によって成体のＷＴ型マウスにおいて抑制した。急性ＰＫＲｉ投与は発作間スパイク（図１ｄ）および異常なＥＥＧ律動性バースト活動（図１ｅ）の両方を誘導し、これらは、Ｐｋｒ−／−マウスにおいて自発的に発生するものと類似していた（図１ｅを図１ａと比較のこと）。これらの観察結果により、ニューロンネットワーク律動性の調節因子としてのこのキナーゼについての重要な新しい役割が明らかにされる。
【０１１６】
Ｐｋｒ−／−のスライス、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型マウスにおける同期性ネットワーク活動がインビトロで繰り返され得るかどうかを明らかにするために、本発明者らは、ＷＴ型マウス、Ｐｋｒ−／−マウスに由来する海馬スライス、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスにおける（ＣＡ１での）領域応答を記録した。放射状層に対する単回の電気刺激により、類似領域ＥＰＳＰおよび集合スパイクが、ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスに由来するスライスにおいて誘発された（図２ａ、図２ｂ；挿入図）。しかしながら、非常に低い濃度のビククリン（２μＭ）の存在下では、同じ刺激により、突出した後放電がＰｋｒ−／−マウス由来のスライスにおいてのみ誘発された（図２ａを図２ｂと比較のこと；図２ｄ、図２ｅもまた参照のこと）。このことから、Ｐｋｒ−／−のスライスにおける海馬ネットワークの潜在的な過興奮性が明らかにされた。さらに、類似した効果が、ＰＫＲｉがＷＴ型マウス由来のスライスに適用されたときに得られた（図２ｃ；図２ｄ、図２ｅもまた参照のこと）。このことは、同程度の潜在的な過興奮性がまた、ＰＫＲが薬理学的に阻害されたときにも誘導されたことを明らかにした。
【０１１７】
実施例３
ＰＫＲの遺伝的欠失または薬理学的阻害は、低下した抑制性シナプス伝達を引き起こす
損なわれた抑制がてんかんの遺伝学的モデルの共通した特徴である（Ｎｏｅｂｅｌｓ、２００３）ので、本発明者らは、Ｐｋｒ−／−マウスにおいて観測された過同期性活動がこれにより説明され得るかどうかを検討した。このことをさらに特徴づけるために、抑制性シナプス伝達を、ＷＴ型マウス、Ｐｋｒ−／−マウスおよびＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型マウス由来の海馬スライスに対する一連の実験で調べた。最初に、ＣＡ１ニューロンからのホールセル・パッチクランプ記録において、自発性および縮小型の両方の抑制性シナプス後電流（ｓＩＰＳＣおよびｍＩＰＳＣ）の（振幅ではなく）頻度が、Ｐｋｒ−／−のスライスにおいて（図３ａおよび図１０ａ）、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスにおいて（図３ｂおよび図１０ｂ）、著しく低下した。ｍＩＰＳＣ振幅における変化がないことは、ＰＫＲがシナプス放出ＧＡＢＡに対する錐体細胞の感受性に影響を与えていないことを強く示すものである；したがって、継続中のＧＡＢＡ作動性活動における低下（これはｍＩＰＳＣの低下した頻度によって示される）は、（図３ｄにおける結果によって裏付けられるように）ＧＡＢＡ放出の抑圧によって引き起こされる可能性が高い。第２に、Ｐｋｒ−／−マウス由来のＣＡ１ニューロンにおいて、また、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスにおいて、誘発されたＩＰＳＣ（これらは、電気的に［すなわち、膜電位を０ｍＶで保持して（図１０ｃ）］および／または薬理学的に（グルタミン酸伝達ＥＰＳＣを阻止することによって）そのどちらかで隔離されている）の振幅を広範囲の刺激強度にわたって記録した（図３ｃ）。そのうえ、ＷＴ型のスライスにおけるその効果とは対照的に、ＰＫＲｉは、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスにおいて誘発されたＩＰＳＣの振幅を変化させておらず（図４ａを図４ｂと比較のこと）、このことから、ＰＫＲｉの効果が、標的を外れた作用に起因しないことが確認された。第３に、ペアーパルス抑圧、すなわち、誘発されたＧＡＢＡ放出における変化の感受性指標（Ｔｈｏｍｓｏｎ、２０００）が、ＰＫＲを欠くスライスにおいて、同様にまた、ＰＫＲｉにより処理されたスライスにおいて著しく低下した（図３ｄ）。このことは、ＰＫＲがＧＡＢＡ放出確率を調節することを示していた。驚くべきことに、ＰＫＲは、シナプス後ではなく、むしろ、シナプス前で抑制性伝達を調節しているようである。これは、ｓＩＰＳＣおよびｍＩＰＳＣの立ち上がり時間定数または減衰時間定数における差異が、ＷＴ型マウス、Ｐｋｒ−／−マウスまたはＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型マウスに由来するスライスにおいて認められなかったからである（図３ａ、図３ｂ、図１０および表１）。このことは、シナプス後受容体関連機構における変化がないことと一致している。第４に、ＷＴ型マウス由来のスライスにおいて、ＣＡ１の集合スパイクの振幅が、高頻度刺激の短い連発刺激の期間中に急激に低下した（図１１ａ、図１１ｅ）。ＧＡＢＡＡアンタゴニストのビククリンはこの鋭い低下を大きく抑え、これは明らかに、累積的なシナプス抑制に起因するものであった（図１１ｂ、図１１ｅ）。対照的に、Ｐｋｒ−／−マウスまたはＰＫＲｉにより処置されたＷＴ型マウスに由来するスライスでは、高頻度刺激により誘導されたスパイク振幅の低下が最小限であったか、または、全くなかった（図１１ｃ〜図１１ｅ）。これらのデータは、ＰＫＲの機能が阻止されるとき、ＧＡＢＡ作動性抑制がそれほど効率的でないというさらなる証拠を提供している。第５に、ＰＫＲｉは、ＷＴ型のスライスにおける領域ＥＰＳＰの求心性斉射および初期勾配に対する効果を何ら有していなかった（図１２ａ）にもかかわらず、錐体ニューロンの興奮性が、抑制低下の結果として増大したならば予想されるように、ＰＫＲｉは集合スパイクの振幅を高めた（図１２ｂ）。加えて、ＰＫＲｉは、ＰＫＲｉの標的（ＰＫＲ）が存在しなかった場合（図１２ｃ）、または、ＧＡＢＡ作動性シナプス伝達が既に阻止されたとき（図１２ｄ）、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスにおける集合スパイクに対する効果を何ら有していなかった。まとめると、これらのデータは、ＰＫＲがＧＡＢＡ作動性シナプス伝達を選択的に強化するという強い遺伝的かつ薬理学的な証拠を提供している。
【０１１８】
表１．ＷＴ型のスライス、Ｐｋｒ−／−のスライス、および、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスに由来するＣＡ１ニューロンにおけるｓＩＰＳＣおよびｍＩＰＳＣの特性
【表１】
2015500805.tif 000023
【０１１９】
驚くべきことに、自発性の興奮性シナプス後電流（ｓＥＰＳＣ）、縮小型ＥＰＳＣ（ｍＥＰＳＣ）または誘起ＥＰＳＣ（ｅＥＰＳＣ）のいずれかの振幅または頻度が、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライス、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスでは著しく変化することはなかったので（図５）、ＰＫＲは抑制性シナプス伝達を特異的に調節する。
【０１２０】
実施例４
ＰＫＲの遺伝的欠失または薬理学的阻害はＬ−ＬＴＰを促進させる
長期増強（ＬＴＰ）の誘導がＧＡＢＡ緊張の低下によって促進される（Ａｂｒａｈａｍ他、１９８６；Ｄａｖｉｅｓ他、１９９１；ＷｉｇｓｔｒｏｍおよびＧｕｓｔａｆｓｓｏｎ、１９８３）ので、本発明者らは、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライス、または、ＰＫＲｉにより処理されたＷＴ型のスライスにおけるシナプス抑制の低下がＬＴＰの誘導を強化し得るかどうかを検討した。初期ＬＴＰ（Ｅ−ＬＴＰ）（これは典型的には、高頻度（テタニー性）刺激の単回の連発刺激によって誘導される）が１時間〜２時間だけ継続し、これは、既存のタンパク質の修飾に依存しており、一方、後期ＬＴＰ（Ｌ−ＬＴＰ）（これは一般に、５分〜１０分離した数回（典型的には４回）のテタニー性連発刺激によって誘導される）が何時間も持続し、これは新たなタンパク質合成を必要とする（Ｋａｎｄｅｌ、２００１）。ＷＴ型のスライスにおいて、単回の高頻度連発刺激（１００Ｈｚ、１秒間）はＥ−ＬＴＰの短期間のタンパク質合成非依存的増強のみを生じさせた（図６ａ）。それに反して、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスでは、同じ刺激により、長続きする後期ＬＴＰ（Ｌ−ＬＴＰ）が生じ（図６ａ）、この後期ＬＴＰ（Ｌ−ＬＴＰ）はタンパク質合成阻害剤のアニソマイシンによって阻止された（図６ｂ）。しかしながら、（１００Ｈｚでの）４回のテタニー性連発刺激は、ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスに由来するスライスにおいて、類似するＬ−ＬＴＰを生じさせた（図１４ａ）。Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスにおけるＬ−ＬＴＰの促進は、基礎的なシナプス伝達における変化に起因するとは考えられない。これは、（刺激強度の関数としての）領域ＥＰＳＰの入力・出力関係、ペアーパルス促進（ＰＰＦ）の大きさ、および、求心性線維斉射のサイズが、Ｐｋｒ−／−マウスおよびＷＴ型マウスに由来するスライスの間に著しい差異がなかったからである（図１３）。Ｐｋｒ−／−のスライスにおける知見と一致して、ＰＫＲｉとのインキュベーションは、ＷＴ型のスライスにおいて一過性Ｅ−ＬＴＰを持続型Ｌ−ＬＴＰに変換したが（図６ｃ）、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスではさらなる増強を誘導することはなく、このことから、ＰＫＲ阻害剤の特異性が確認された（図１４ｂ）。これらのデータは、ＰＫＲの遺伝的欠失または薬理学的阻害がＬ−ＬＴＰの誘導についての閾値を低下させることを明らかにした。
【０１２１】
Ｌ−ＬＴＰが、抑制低下のためにＰｋｒ−／−マウス由来のスライスにおいて促進されるならば、ＧＡＢＡ作動性緊張をこれらのスライスにおいて強化することは、単回の連発刺激の効果を長期間型から短期間型に変換するはずである。実際、低濃度（１μＭ）のジアゼパム（これはＧＡＢＡＡ作用を強化する（Ｈａｅｆｅｌｙ、１９９０））とのインキュベーションは、Ｌ−ＬＴＰをＰｋｒ−／−マウス由来のスライスにおいて顕著に低下させたが（図６ｄ）、ＷＴ型のスライスでは、４回のテタニー性連発刺激によって誘導されるＬ−ＬＴＰに対する効果を何ら有していなかった（図６ｅ）。はるかに高濃度のジアゼパム（５０μＭ）が、Ｌ−ＬＴＰをＷＴ型マウス由来のスライスにおいて防止するために要求された（図６ｆ）。これらのデータから、Ｐｋｒ−／−マウス由来のスライスにおける促進されたＬ−ＬＴＰが、低下したＧＡＢＡ作動性緊張の結果であるという本発明者らの仮説が確認される。
【０１２２】
実施例５
ＰＫＲの遺伝的欠失または薬理学的阻害は学習および記憶を強化する
ＧＡＢＡ作動性機能が、非常に重要な役割を記憶固定において果たしている（ＩｚｑｕｉｅｒｄｏおよびＭｅｄｉｎａ、１９９１；ＭｃＧａｕｇｈおよびＲｏｏｚｅｎｄａａｌ、２００９）。本発明者らは、学習および記憶が、海馬のＧＡＢＡ伝達抑制が低下しているＰｋｒ−／−マウスにおいて強化され得るかどうかを検討した。最初に、マウスをＭｏｒｒｉｓ水迷路における海馬依存的な空間記憶について試験した。この場合、動物は、円形プールにおける隠されたプラットホームを見つけるために視覚的合図を使用する（Ｍｏｒｒｉｓ他、１９８２）。弱いテタニー性刺激（１００Ｈｚでの１回の連発刺激）により、長続きするＬＴＰがＰｋｒ−／−マウス由来のスライスにおいて明らかにされたので、本発明者らは、８日間にわたる弱いプロトコル（１日あたり１回だけの訓練期間）を使用してマウスを訓練した。Ｐｋｒ−／−マウスは、ＷＴ型のコントロール同腹子が見出すよりも著しく速くプラットホームを見出した（図７ａ）；また、プラットホームが除かれた９日目に行われたプローブ試験では、Ｐｋｒ−／−マウスのみがプラットホームの場所（目標とされた四分円部分）を覚えていた（図７ｂ）。したがって、ＰＫＲの遺伝的欠失は長期空間記憶を高める。
【０１２３】
マウスをまた、２形態のパブロフ型恐怖条件づけで調べた。状況的恐怖条件づけを、状況（条件刺激；ＣＳ）を足ショック（非条件刺激；ＵＳ）と対にすることによって誘導し、これに対して、聴覚的恐怖条件づけでは、ＵＳを音提示（ＣＳ）と対にした。状況的恐怖条件づけでは海馬および扁桃体の両方が関与し、これに対して、聴覚的恐怖条件づけでは扁桃体のみが要求される（ＬｅＤｏｕｘ、２０００）。マウスが後続して、ＣＳにさらされたとき、恐怖応答（「立ちすくみ」）をＣＳ−ＵＣ連想の強さの指標として解釈した。実験未使用のＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスは、弱い訓練プロトコル（音が０．３５ｍＡの足ショックと対になった単回の組合せ）の前では類似した量の立ちすくみを示したが、Ｐｋｒ−／−マウスは、２４時間後に試験されたとき、ＷＴ型のコントロール同腹子が示すよりも多くの立ちすくみを示した（図７ｃ）。同様に、Ｐｋｒ−／−マウスは、強化された長続きする聴覚的恐怖記憶を示した（図７ｄ）。ベースライン立ちすくみ（図７ｃ、図７ｄ）、ならびに、高架式十字迷路およびオープンフィールドの両方における不安反映行動（図１５）がＰｋｒ−／−マウスについては正常であったので、Ｐｋｒ−／−マウスにおける恐怖に対する非特異的応答は可能性が低い。したがって、ＰＫＲの欠如により、聴覚的および状況的な長続きする恐怖記憶の両方が改善される。
【０１２４】
強化された認知にはまた、動物が足ショックともはや対になっていない試験状況に（数回の試験にわたって）再びさらされるときには迅速な記憶消去が伴う（ＬｅｅおよびＳｉｌｖａ、２００９）。したがって、Ｐｋｒ−／−マウスが、ＷＴ型コントロールが示すよりも速い消去を示した（図７ｅ）。
【０１２５】
ＰＫＲが認知プロセシングに関与するならば、ＰＫＲの急性薬理学的阻害はまた、長期恐怖記憶を増強するはずである。この予測を検証するために、ＷＴ型マウスに、ビヒクルまたはＰＫＲｉのどちらかをパブロフ型恐怖条件づけの直後に注射した。実際、状況的恐怖記憶および聴覚的恐怖記憶の両方が、訓練後２４時間で測定されたとき、ＰＫＲｉ処理マウスにおいて強化された（図７ｆ、図７ｇ）。
【０１２６】
ＰＫＲ欠損により、長期記憶貯蔵が強化されたので、記憶「割当」、すなわち、ニューロンまたはシナプスが学習期間中に神経回路において特異的に活性化される（または組み込まれる）プロセス（Ｓｉｌｖａ他、２００９）もまた、Ｐｋｒ−／−マウスにおいて強化されるかもしれない。選択的に活性化されたニューロン、したがって、恐怖学習のコード化に関与するニューロンを特定するために、本発明者らは前初期遺伝子Ｅｇｒ−１（これはＺｉｆ／２６８とも呼ばれる）の発現を分析した。Ｅｇｒ−１はこの目的のために広範囲にわたって使用されており（Ｆｒａｎｋｌａｎｄ他、２００４；Ｈａｌｌ他、２０００）、その欠失により、Ｌ−ＬＴＰおよび記憶固定が阻止される（Ｊｏｎｅｓ他、２００１）。ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスを弱い恐怖条件づけプロトコル（音が０．３５ｍＡの足ショックと対になった単回の組合せ）に供し、ＣＡ１領域におけるＥｇｒ−１の発現を以前の記載（Ｆｒａｎｋｌａｎｄ他、２００４）のように免疫組織化学によって定量化した。両方の遺伝子型の動物が上記状況に単独でさらされたとき、Ｅｇｒ−１の発現が著しく異なることはなかった。対照的に、弱い訓練パラダイムは、Ｅｇｒ−１のレベル（およびおそらくは記憶割当）をＰｋｒ−／−マウス由来のＣＡ１ニューロンにおいてだけ増大させ（図７ｈ）、また、より堅牢な長続きする記憶を、ＷＴ型同腹子と比較して、Ｐｋｒ−／−マウスにおいて引き起こした（図７ｃ）。したがって、ＰＫＲの欠如は、コード化プロセスへの海馬ニューロンの動員に有利に働く。
【０１２７】
実施例６
本発明の特定の実施形態の意味
本発明は、ＰＫＲが、ＧＡＢＡ作動性シナプス伝達を増強することによって脳の律動性、シナプス可塑性および記憶貯蔵を負に調節するという新規な、遺伝学的、生理学的、薬理学的、行動学的かつ分子的な証拠を提供する。ＧＡＢＡ作動性抑制は、錐体細胞への興奮性シナプス入力の効力および可塑性を制御するだけでなく、主細胞の大きい集まりの発火をある特定の好ましい周波数で同期させる（ＭａｎｎおよびＰａｕｌｓｅｎ他、２００７）。遅いシータ振動およびより速いガンマ振動ならびにリップルが記憶プロセスに決定的に関与しているようである（Ｂｕｚｓａｋｉ、２００６；ＭａｕｒｅｒおよびＭｃＮａｕｇｈｔｏｎ、２００７）。いくつかの証拠が、シナプス可塑性のＧＡＢＡ作動性制御が記憶貯蔵の重要な機構であるという考えを裏付けている（ＰａｕｌｓｅｎおよびＭｏｓｅｒ、１９９８；ＭａｎｎおよびＰａｕｌｓｅｎ、２００７）。第１に、低下したＧＡＢＡ作動性伝達抑制により、ＬＴＰの誘導が促進される（Ａｂｒａｈａｍ、１９８６；Ｄａｖｉｅｓ他、１９９１；ＷｉｇｓｔｒｏｍおよびＧｕｓｔａｆｓｓｏｎ、１９８３）。第２に、ＣＡ１錐体ニューロンのサブセットの長期脱抑制が空間記憶の獲得と相関する（ＧｕｓｅｖおよびＡｌｋｏｎ、２００１）。第３に、ＧＡＢＡ作動性伝達の控え目な薬理学的低下により、記憶固定が強化される（ＩｚｑｕｉｅｒｄｏおよびＭｅｄｉｎａ、１９９１；ＭｃＧａｕｇｈおよびＲｏｏｚｅｎｄａａｌ、２００９）。最後に、内側中隔のＧＡＢＡ作動性ニューロンがシータ律動性を海馬ネットワークにおいて駆動させており（Ｈａｎｇｙａ他、２００９）、このことが海馬依存的な記憶プロセスに決定的に寄与している（Ｂｕｚｓａｋｉ、２００６）。
【０１２８】
ＰＫＲの欠如がどのように脳の律動性を促進させ、同時に、ＬＴＰおよび認知成績を強化し得るか。いくつかの実施形態において、両者が、増大した興奮性の結果である。ＰＫＲ活性が（遺伝的または薬理学的に）抑制されるとき、脱抑制は、おそらくは神経ネットワークにおける同期化された活動を介して、シナプス可塑性を強化し、かつ、長期記憶貯蔵を促進させる（ＢｅｅｎｈａｋｋｅｒおよびＨｕｇｕｅｎａｒｄ、２００９；Ｂｕｚｓａｋｉ、２００６；Ｇｉｒａｒｄｅａｕ他、２００９；Ｓｏｈａｌ他、２００９；ＭａｕｒｅｒおよびＭｃＮａｕｇｈｔｏｎ、２００７；Ｓｈｉｒｖａｌｋａｒ他、２０１０）。
【０１２９】
抑制の、適度であるにもかかわらず、この長期にわたる弱化の副産物が、特定の実施形態では、電気記録的発作の増大した危険性である。それにもかかわらず、Ｐｋｒ−／−の脳における脱抑制は、可塑性および記憶プロセスを損ない得る病理学的発作についての閾値よりも小さいままである。したがって、ＰＫＲは、限界を超えて異常な興奮または暴走した興奮に至ることなく、学習期間中の所与のエピソードを貯蔵するために最適化されなければならない精巧に調整されたネットワーク律動性を制御する。
【０１３０】
増大したニューロン興奮性は、ニューロンにおける記憶割当の重要な特徴であるようである。近年の報告によれば、ＣＲＥＢによるニューロン興奮性における選択的強化は杏仁孔における恐怖記憶の割当および貯蔵を反映する（Ｈａｎ他、２００７；Ｈａｎ他、２００９；Ｚｈｏｕ他、２００９）。Ｐｋｒ−／−マウス、または、ＰＫＲｉにより急性処理されたＷＴ型マウスにおいて記憶を特異的に強化する弱い訓練の期間中において（図７）、Ｐｋｒ−／−マウスのみが、選択的なニューロン活性化および記憶痕跡内への動員を示した（図７ｈ）。したがって、ＰＫＲが阻害されるとき、ニューロンの興奮性が強化され、次々と発火するニューロンが、学習パラダイム期間中の所与のエピソードを同期的にコード化する。
【０１３１】
結論として、これらのデータは、Ｐｋｒの欠如により、ネットワーク過同期性ならびに高まった長続きするシナプス可塑性および認知が共存するてんかんの新規な実験マウスがもたらされることを明らかにする。最後に、高次脳機能の最適化におけるＰＫＲの役割は、ＰＫＲを阻害する薬剤が、ＰＫＲ活性が異常に高まり（Ｃｏｕｔｕｒｉｅｒ他、２０１０；ＰｅｅｌおよびＢｒｅｄｅｓｅｎ、２００３；Ｃｈａｎｇ他、２００２）、ＧＡＢＡ作動性伝達が乱される（Ｐａｌｏｐ他、２００７）、記憶喪失を伴うヒト状態（例えば、アルツハイマー病など）の処置において治療的に有用であることを示している。
【０１３２】
実施例７
例示的な方法および材料
Ｐｋｒ−／−マウス
Ｐｋｒノックアウト（Ｐｋｒ−／−）マウス（Ａｂｒａｈａｍ他、１９９９）を、少なくとも８世代にわたって、１２９ＳｖＥｖマウスに対して戻し交配した。マウスを出生後第３週で離乳させ、ＰＣＲによって遺伝子型決定した。簡単に記載すると、変異型および対応するＷＴ型の対立遺伝子を、オリゴ−１（５’−ＧＧＡＡＣＴＴＴＧＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡ−３’）およびオリゴ−２（５’−ＴＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＡＡＡＴＣＴＡＡＡＡＣ−３’）が２２５塩基対フラグメントのＷＴ型バンドを与え、オリゴ−３（５’−ＴＧＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＡＴＣＡＧＧＧ−３’）およびオリゴ−４（５’−ＴＧＡＧＧＡＧＴＴＣＴＴＣＴＧＡＧＧＧ−３’）が、欠失対立遺伝子に由来する４３２塩基対のフラグメントを与える４プライマーのＰＣＲアッセイによって検出する。ｅＩＦ２α＋／Ｓ５１Ａマウスは以前に記載された（Ｃｏｓｔａ−Ｍａｔｔｉｏｌｉ他、２００７；Ｓｃｈｅｕｎｅｒ他、２００１）。すべての実験を８週齢〜１６週齢の雄で行った。マウスを１２時間の明暗サイクルで飼育し、行動実験を常に当該サイクルの明期の期間中に行った。マウスは、試験期間中を除いて、食物および水を自由に摂取した。動物管理および実験手順を、Ｂａｙｌｏｒ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅの動物管理委員会からの承認により行った。
【０１３３】
長期の脳波測定（ＥＥＧ）記録
ＥＥＧ記録を記載のように行った（Ｐｒｉｃｅ他、２００９）。ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウスを０．０２ｍｌ／ｇの用量でＡｖｅｒｔｉｎ（１．２５％トリブロモエタノール／アミルアルコール溶液、ｉ．ｐ．）により麻酔した。超小型コネクターにはんだ付けされたテフロン（登録商標）コーティングの銀線電極（１２０μｍの直径）を、前頭部皮質、中心部皮質、頭頂部皮質および後頭部皮質の上部において硬膜下腔に両側に埋め込んだ。デジタル化ＥＥＧデータを、２週間までの間毎日、長時間のランダムな２時間のサンプル記録の期間中に得た（Ｓｔｅｌｌａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｈａｒｍｏｎｉｅソフトウエアバージョン５．０ｂ）。
【０１３４】
ＰＫＲｉ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、サンディエゴ）、すなわち、ＰＫＲの自己リン酸化を阻止する、ＰＫＲの強力なＡＴＰ結合部位指向阻害剤（Ｊａｍｍｉ他、２００３；ＳｈｉｍａｚａｗａおよびＨａｒａ、２００６）を、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）における２０ｍＭのストック溶液として調製した。ＰＫＲｉを生理的食塩水に新たに溶解し、次いで０．１ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内（ｉ．ｐ．）注射し、ＥＥＧを注射後１時間で記録した。デジタルビデオカメラにより、ＥＥＧ記録期間中の行動を同時にモニターした。すべての記録を、試験ケージにおいて自由に運動するマウスに対して手術後少なくとも２４時間で行った。
【０１３５】
電気生理学
領域記録：記載の通り（Ｚｈｕ他、２００５）、水平での海馬スライス（３５０ｍｍ）を４℃の人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）においてＷＴ型同腹子または週齢一致のＰｋｒ−／−同腹子の脳から切断し、記録する前の少なくとも１時間、室温でＡＣＳＦにおいて保った。スライスを、下記の物質を下記のｍＭ単位で含有する酸素化ＡＣＳＦ（９５％Ｏ２および５％ＣＯ２）で灌流させた界面型チャンバーにおいて維持した：１２４  ＮａＣｌ、２．０  ＫＣｌ、１．３  ＭｇＳＯ４、２．５  ＣａＣｌ２、１．２  ＫＨ２ＰＯ４、２５  ＮａＨＣＯ３、および、１０  グルコース（２〜３ｍｌ／分）。双極性刺激電極を、Ｓｃｈａｆｆｅｒ側枝および交連線維を刺激するためにＣＡ１放射状層に設置した。領域電位を、２８℃〜２９℃で、ＡＣＳＦ充填マイクロピペットを使用して記録した。記録用電極を領域興奮性シナプス後電位（ｆＥＰＳＰ）のためには放射状層に設置し、集合スパイクのためには錐体細胞層に設置した。０．１ｍｓパルスの刺激強度を、ｆＥＰＳＰのためには最大応答の３０％〜３５％を誘発するように調節し、集合スパイクのためには最大応答の５０％を誘発するように調節した。応答の安定したベースラインを０．０３３Ｈｚで少なくとも３０分間にわたって確立した。テタニー性ＬＴＰを、単回の連発刺激として、または、５分間隔によって隔てられる４回の連発刺激としてそのどちらかで加えられる短い連発刺激（１００Ｈｚ、１秒）での高頻度刺激によって誘導した。短い連発刺激は５回の刺激（バースト内での１００Ｈｚ）からなった。示されるとき、ＡＣＳＦには、アニソマイシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カリフォルニア）、ＰＫＲｉ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カリフォルニア）、ビククリン（Ｔｏｃｒｉｓ）またはジアゼパム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）が補充された。本発明者らは、ＧＡＢＡＡ受容体に加えて、小コンダクタンス（ＳＫ）カルシウム活性化カリウムチャネルもまた阻止するビククリン−Ｍ（ビククリンメチオジド、メトブロミドまたはメトクロリド）（Ｄｅｂａｒｂｉｅｕｘ他、１９９８）よりもむしろ、ＧＡＢＡＡ受容体を阻止するだけのビククリンの遊離塩基を使用したことには留意するべきである。ＰＫＲｉを１μＭ（０．０１％ＤＭＳＯ）の最終濃度で使用した。この濃度は、ＰＫＲ活性をエクスビボで阻止することが知られている（Ｐａｇｅ他、２００６；Ｗａｎｇ他、２００７）。日毎の変動を小さくするために、可能なときは常に、（同じチャンバーにおける）同時記録を、Ｐｋｒ−／−マウス、および、薬物またはビヒクルにより処理されたＷＴ型同腹子に由来するスライスから得た。統計学的分析を、ｔ検定および二要因ＡＮＯＶＡを使用して行った。すべてのデータが平均±ＳＥＭとして表され、“ｎ”がスライスの数を示す。
【０１３６】
ホールセル記録：水平での海馬スライスを上記のように切断した。すべての記録について、慣用的パッチ−クランプ技術およびＡｘｏｐａｔｃｈ２００Ｂ増幅器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、ユニオンシティー、カリフォルニア）を使用し、２８℃〜２９℃であった。ＣＡ１ニューロンを正立顕微鏡（Ａｘｉｏｓｋｏｐｅ  ＦＳ２、Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ、オーバーコッヘン、ドイツ国）のステージでの赤外示差干渉コントラストビデオ顕微鏡法によって目視により同定した。パッチピペット（４ＭΩ〜６ＭΩの抵抗）を下記の物質（ｍＭ単位）により満たした：１１０  グルコン酸Ｋ、１０  ＫＣｌ、１０  ＨＥＰＥＳ、１０  Ｎａ２−ホスホクレアチン、２  Ｍｇ３−ＡＴＰ、０．２  Ｎａ３−ＧＴＰ；ｐＨを７．２に調節し、浸透圧モル濃度を、Ｗｅｓｃｏｒ５５００蒸気圧浸透圧計（Ｗｅｓｃｏｒ、ローガン、ユタ）を使用して２９０ｍＯｓｍに調節した。シナプス応答を、放射状線条体（ｓｔｒｉａｔｕｍ  ｒａｄｉａｔｕｍ）に配置された双極性刺激電極により誘発させた。グルコン酸塩を抑制性シナプス後電流（ｓＩＰＳＣ）のためにはＫＣｌで置き換えた。ｓＩＰＳＣを２ｍＭのキヌレン酸の存在下で記録し、一方で、縮小型ＩＰＳＣをキヌレン酸（２ｍＭ）およびテトロドトキシン（ＴＴＸ；１μＭ）の存在下で記録した。誘発されたＩＰＳＣを、Ｄ−ＡＰ５（５０μＭ）、ＣＮＱＸ（１０μＭ）およびＣＧＰ５５８４５（１０μＭ）の存在下または非存在下で記録した。興奮性シナプス後電流（ＥＰＳＣ）を１０μＭのビククリンまたは１００μＭのピクロトキシンの存在下で記録した。これらの電気シグナルは５ｋＨｚでオンラインでのフィルタリング処理に供され、１０ｋＨｚでデジタル化された。直列抵抗（Ｒｓ）および入力抵抗（Ｒｉ）を、−５ｍＶ×２５ｍｓの試験パルスを刺激前に加えることにより、記録期間中、継続して測定した。Ｒｓが±２０％を超えて変動していたならば、記録を中止し、データを破棄した。すべての薬物をＴｏｃｒｉｓ（エリスビル、ミズーリ）から得た。ＰＫＲｉを１μＭの最終濃度で使用した。
【０１３７】
状況的および聴覚的な恐怖条件づけ
実験者には、すべての行動試験について、遺伝子型が知らされなかった。恐怖条件づけを以前の記載のように行った（Ｃｏｓｔａ−Ｍａｔｔｉｏｌｉ他、２００７）。マウスを最初、３日間にわたって３分間〜５分間、手で触り、その後、さらに３日間にわたって２０分間、条件づけチャンバーに慣らした。訓練日に、条件づけチャンバーにおいて２分後、マウスは、音（２８００Ｈｚ、８５ｄＢ、３０秒）が同時終了の足ショック（０．３５ｍＡ、１秒）と対になった組合せを受け、その後で、マウスはチャンバー内にさらに２分間留まり、その後、それらのホームケージに戻された。マウスを、（マウスが条件づけされたことがなかったチャンバーにおいて）上記音に対する応答、および、訓練状況（訓練チャンバー）に対する応答における「立ちすくみ」（呼吸を除いた不動性）について訓練後２４時間で試験した。
【０１３８】
聴覚的恐怖条件づけのための試験期間中、マウスをチャンバーに入れ、立ちすくみ応答を、最初の２分（プレＣＳ期間）の期間中、および、音が与えられたときの最後の３分の期間中に記録した。マウスを、音が終わった３０秒後にそれらのホームケージに戻した。状況的恐怖条件づけを試験するために、マウスを条件づけチャンバーに５分間戻した。消去試験のために、条件状況に対する応答における立ちすくみを、訓練の２４時間、４８時間、７２時間および９６時間後５分間にわたって評価し、２４時間後に得られた立ちすくみの量に対して正規化した。すべての試験について、立ちすくみ行動を５分の期間中に５秒間隔で求めた。立ちすくんでいるマウスが過ごす時間の割合を学習および記憶の指標として解釈した。ＰＫＲｉを生理的食塩水に新たに溶解し、その後、海馬におけるＰＫＲ活性をインビボで阻止することが知られている（Ｉｎｇｒａｎｄ他、２００７）０．１ｍｇ／ｋｇの用量で、恐怖条件づけの直後にｉ．ｐ．注射した。統計学的分析は、反復測定によるＡＮＯＶＡ、および、チューキー検定による群間比較に基づいた。
【０１３９】
Ｍｏｒｒｉｓ水迷路
試験を、以前の記載（Ｍｏｒｉｓ他、１９８２）のように、不透明な水の円形プールにおいて行った。ＷＴ型同腹子およびＩ型同腹子を、比較的弱い訓練プロトコル（１日あたり１回の試験）（Ｃｏｓｔａ−Ｍａｔｔｉｏｌｉ他、２００７）を使用して訓練した。水から、隠された（水面下の）プラットホームに逃げる潜時を、自動化されたビデオ追跡システム（ＨＶＳ  Ｉｍａｇｅ、バッキンガム、英国）によってモニターした。プローブ試験のために、プラットホームをプールから除き、動物には６０秒間にわたって探索させた。プールの各四分円部分に滞在した時間（四分円占有）の％を記録した。遊泳速度における著しい差異は、ＷＴ型マウスとＰｋｒ−／−マウスとの間に何ら認められなかった。動物を、それらの動物の明期の期間中、同じ日時で訓練した。統計学的分析は、反復測定によるＡＮＯＶＡ、および、チューキー検定による群間比較に基づいた。
【０１４０】
高架式十字迷路試験
高架式十字迷路装置は、２つの開放アーム（３５×５ｃｍ）および同じサイズの２つの囲まれたアーム（１５ｃｍの高さの不透明な壁を有する）からなった。これらのアームおよび中央の正方形部分がプラスチック板から作製され、床から４０ｃｍ上方に上げられた。マウスを迷路の中央の正方形部分（５×５ｃｍ）に置いた。行動を５分の期間中に記録した。データの取得および分析をＡＮＹＭＡＺＥソフトウエアにより自動的に行った。
【０１４１】
免疫組織化学およびウエスタンブロッティング
海馬の細胞溶解物、ウエスタンブロッティングおよび免疫組織化学を以前の記載のように行った（Ｃｏｓｔａ−Ｍａｔｔｉｏｌｉ他、２００７）。マウスを深く麻酔し、冷ＰＢＳ、続いて、氷冷の０．１Ｍリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）における４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）により心臓内灌流した。脳を頭骨から取り出し、４％ＰＦＡ溶液において（４℃で）一晩貯蔵し、４０μｍの水平切片をミクロトーム（Ｌｅｉｃａ  ＶＴ１０００Ｓ、ドイツ国）上で切断した。浮遊法を、段階間でのすすぎを行いながら使用した。切片を最初、室温で１時間、ブロッキング溶液（リン酸塩緩衝生理的食塩水における５％ＢＳＡ、０．３％Ｔｒｉｔｏｎおよび４％正常ヤギ血清）に入れ、一次抗体［ＰＫＲ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カリフォルニア）、ＧＡＤ６７（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビレリカ、マサチューセッツ）、Ｖ−Ｇｌｕｔ１（Ｓｙｎａｐｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ゲッティンゲン、ドイツ国）およびＰＳＤ９５（ＮｅｕｒｏＭａｂ、カリフォルニア）］と一晩インキュベーションし、その後、ＰＢＳにより４回（２０分間）すすぎ、その後で二次抗体と（４時間）インキュベーションした。ＰＢＳによる４回の洗浄（それぞれが２０分間）の後、切片をＳｕｐｅｒｆｒｏｓｔ（登録商標）Ｐｌｕｓスライド（ＶＷＲ、ウエストチェスター、ペンシルバニア）に載せた。最後に、切片に対し、カバーガラスを、ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ（登録商標）Ｈａｒｄ  Ｓｅｔ封入材（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂ、バーリンゲーム、カリフォルニア）とともに被せた。デジタル写真を、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ５１０レーザー共焦点顕微鏡を用いて撮影した。
【０１４２】
Ｅｇｒ−１染色：状況的恐怖条件づけに先立って、ＷＴ型マウスおよびＰｋｒ−／−マウス（ｎ＝６、両群）を３日間連続して手で触った。その後、マウスを上記のように訓練した。コントロール群は、ショックを訓練期間中に受けなかったことを除いて上記状況にさらされた。訓練後９０分で、脳切片を上記のように切断し、ＰＢＳにおける０．３％のＨ２Ｏ２において前処理した。その後、切片をブロッキング溶液（ＰＢＳにおける１％ＢＳＡ、０．３％トリトンおよび４％正常ヤギ血清）において抗Ｅｇｒ−１（１：７５００）一次ウサギポリクローナル抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、デンバー、マサチューセッツ）と４８時間インキュベーションし、その後、ビオチン化ヤギ抗ウサギ抗体（１：５００；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、バーリンゲーム、カリフォルニア）と室温で６０分間インキュベーションし、続いて、アビジン−ビオチン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ；ＡＢＣキット；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、バーリンゲーム、カリフォルニア）とインキュベーションした。結合したペルオキシダーゼを、切片を０．１％の３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）および０．０２５％のＨ２Ｏ２において室温で５分間〜１０分間インキュベーションし、これにより、可視性基質を生じさせることによって突き止めた。免疫反応性ＣＡ１ニューロンを、以前の記載（Ｆｒａｎｋｌａｎｄ他、２００４；Ｈａｌｌ他、２００１）のように、所与の領域（０．０７ｍｍ２）内において計数した。
【０１４３】
参考文献
本明細書において言及されたすべての特許および刊行物は、本発明が関連する技術分野における当業者のレベルを示している。すべての特許および刊行物は、個々の各刊行物が、参照によって取り込まれていることが具体的かつ個々に示されているかのような場合と同じ程度に、それらの全体が参照によって本明細書中に組み込まれる。
【０１４４】
［刊行］
Abraham, N. et al. Characterization of transgenic mice with targeted disruption of the catalytic domain of the double-stranded RNA-dependent protein kinase, PKR. J Biol Chem 274, 5953-62 (1999).
【０１４５】
Abraham, W.C., Gustafsson, B. & Wigstrom, H. Single high strength afferent volleys can produce long-term potentiation in the hippocampus in vitro. Neurosci Lett 70, 217-22 (1986).
【０１４６】
Bando, Y. et al. Double-strand RNA dependent protein kinase (PKR) is involved in the extrastriatal degeneration in Parkinson's disease and Huntington's disease. Neurochem Int 46, 11-8 (2005).
【０１４７】
Baron, R. et al. IFN-gamma enhances neurogenesis in wild-type mice and in a mouse model of Alzheimer's disease. FASEB J 22, 2843-52 (2008).
【０１４８】
Beenhakker, M.P. & Huguenard, J.R. Neurons that fire together also conspire together: is normal sleep circuitry hijacked to generate epilepsy? Neuron 62, 612-32 (2009).
【０１４９】
Ben-Asouli, Y., Banai, Y., Pel-Or, Y., Shir, A. & Kaempfer, R. Human interferon-gamma mRNA autoregulates its translation through a pseudoknot that activates the interferon-inducible protein kinase PKR. Cell 108, 221-32 (2002).
【０１５０】
Bryant, E. Genius and Epilepsy. Brief sketches of Great Men Who Had Both (Ye Old Depot Press, Concord, Massachusetts, 1953).
【０１５１】
Buzsaki, G. Rythms of the Brain, (Oxford University Press, New York, 2006).
【０１５２】
Carnevalli, L.S. et al. Phosphorylation of the alpha subunit of translation initiation factor-2 by PKR mediates protein synthesis inhibition in the mouse brain during status epilepticus. Biochem J 397, 187-94 (2006).
【０１５３】
Chang, R.C., Wong, A.K., Ng, H.K. & Hugon, J. Phosphorylation of eukaryotic initiation factor-2alpha (eIF2alpha) is associated with neuronal degeneration in Alzheimer's disease. Neuroreport 13, 2429-32 (2002).
【０１５４】
Cohen-Chalamish, S. et al. Dynamic refolding of IFN-gamma mRNA enables it to function as PKR activator and translation template. Nat Chem Biol 5, 896-903 (2009).
【０１５５】
Costa-Mattioli, M. et al. eIF2alpha phosphorylation bidirectionally regulates the switch from short- to long-term synaptic plasticity and memory. Cell 129, 195-206 (2007).
【０１５６】
Costa-Mattioli, M., Sossin, W.S., Klann, E. & Sonenberg, N. Translational Control of Long-Lasting Synaptic Plasticity and Memory. Neuron 61, 10-26 (2009).
【０１５７】
Couturier, J. et al. Interaction of double-stranded RNA-dependent protein kinase (PKR) with the death receptor signaling pathway in amyloid beta (Abeta)-treated cells and in APPSLPS1 knock-in mice. J Biol Chem 285, 1272-82 (2010).
【０１５８】
Davies, C.H., Starkey, S.J., Pozza, M.F. & Collingridge, G.L. GABA autoreceptors regulate the induction of LTP. Nature 349, 609-11 (1991).
【０１５９】
Debarbieux, F., Brunton, J. & Charpak, S. Effect of bicuculline on thalamic activity: a direct blockade of IAHP in reticularis neurons. J Neurophysiol 79, 2911-8 (1998).
【０１６０】
Dever, T.E., Dar, A.C. & Sicheri, F. The eIF2alpha kinases. in Translational Control in Biology and Medicine (eds. Mathews, M.B., Sonenberg, N. & Hershey, J.W.B.) 319-45 (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 2007).
【０１６１】
Frankland, P.W., Bontempi, B., Talton, L.E., Kaczmarek, L. & Silva, A.J. The involvement of the anterior cingulate cortex in remote contextual fear memory. Science 304, 881-3 (2004).
【０１６２】
Freund, T.F. Interneuron Diversity series: Rhythm and mood in perisomatic inhibition. Trends Neurosci 26, 489-95 (2003).
【０１６３】
Garcia, M.A., Meurs, E.F. & Esteban, M. The dsRNA protein kinase PKR: virus and cell control. Biochimie 89, 799-811 (2007).
【０１６４】
Getts, D.R. et al. Role of IFN-gamma in an experimental murine model of West Nile virus-induced seizures. J Neurochem 103, 1019-30 (2007).
【０１６５】
Girardeau, G., Benchenane, K., Wiener, S.I., Buzsaki, G. & Zugaro, M.B. Selective suppression of hippocampal ripples impairs spatial memory. Nat Neurosci 12, 1222-3 (2009).
【０１６６】
Grossberg, S.E. & Kawade, Y. The expression of potency of neutralizing antibodies for interferons and other cytokines. Biotherapy 10, 93-8 (1997).
【０１６７】
Gusev, P.A. & Alkon, D.L. Intracellular correlates of spatial memory acquisition in hippocampal slices: long-term disinhibition of CA1 pyramidal cells. J Neurophysiol 86, 881-99 (2001).
【０１６８】
Haefely, W. The GABA-benzodiazepine interaction fifteen years later. Neurochem Res 15, 169-74 (1990).
【０１６９】
Hall, J., Thomas, K.L. & Everitt, B.J. Rapid and selective induction of BDNF expression in the hippocampus during contextual learning. Nat Neurosci 3, 533-5 (2000).
【０１７０】
Hall, J., Thomas, K.L. & Everitt, B.J. Fear memory retrieval induces CREB phosphorylation and Fos expression within the amygdala. Eur J Neurosci 13, 1453-8 (2001).
【０１７１】
Han, J.H. et al. Neuronal competition and selection during memory formation. Science 316, 457-60 (2007).
【０１７２】
Han, J.H. et al. Selective erasure of a fear memory. Science 323, 1492-6 (2009).
【０１７３】
Hangya, B., Borhegyi, Z., Szilagyi, N., Freund, T.F. & Varga, V. GABAergic neurons of the medial septum lead the hippocampal network during theta activity. J Neurosci 29, 8094-102 (2009).
【０１７４】
Heaton, P. & Wallace, G.L. Annotation: the savant syndrome. J Child Psychol Psychiatry 45, 899-911 (2004).
【０１７５】
Holmes, G.L. & Lenck-Santini, P.P. Role of interictal epileptiform abnormalities in cognitive impairment. Epilepsy Behav 8, 504-15 (2006).
【０１７６】
Hughes, J.R. A review of Savant Syndrome and its possible relationship to epilepsy. Epilepsy Behav 17, 147-52 (2010).
【０１７７】
Huguenard, J.R. & McCormick, D.A. Thalamic synchrony and dynamic regulation of global forebrain oscillations. Trends Neurosci 30, 350-6 (2007).
【０１７８】
Ingrand, S. et al. The oxindole/imidazole derivative C16 reduces in vivo brain PKR activation. FEBS Lett 581, 4473-8 (2007).
【０１７９】
Izquierdo, I. & Medina, J.H. GABAA receptor modulation of memory: the role of endogenous benzodiazepines. Trends Pharmacol Sci 12, 260-5 (1991).
【０１８０】
Jammi, N.V., Whitby, L.R. & Beal, P.A. Small molecule inhibitors of the RNA-dependent protein kinase. Biochem Biophys Res Commun 308, 50-7 (2003).
【０１８１】
Jones, M.W. et al. A requirement for the immediate early gene Zif268 in the expression of late LTP and long-term memories. Nat Neurosci 4, 289-96 (2001).
【０１８２】
Kandel, E.R. The molecular biology of memory storage: a dialogue between genes and synapses. Science 294, 1030-8 (2001).
【０１８３】
Klausberger, T. & Somogyi, P. Neuronal diversity and temporal dynamics: the unity of hippocampal circuit operations. Science 321, 53-7 (2008).
【０１８４】
LeDoux, J.E. Emotion circuits in the brain. Annu Rev Neurosci 23, 155-84 (2000).
【０１８５】
Lee, Y.S. & Silva, A.J. The molecular and cellular biology of enhanced cognition. Nat Rev Neurosci 10, 126-40 (2009).
【０１８６】
Mann, E.O. & Mody, I. Control of hippocampal gamma oscillation frequency by tonic inhibition and excitation of interneurons. Nat Neurosci 13, 205-12 (2010).
【０１８７】
Mann, E.O. & Paulsen, O. Role of GABAergic inhibition in hippocampal network oscillations. Trends Neurosci 30, 343-9 (2007).
【０１８８】
Maurer, A.P. & McNaughton, B.L. Network and intrinsic cellular mechanisms underlying theta phase precession of hippocampal neurons. Trends Neurosci 30, 325-33 (2007).
【０１８９】
McCormick, D.A. & Contreras, D. On the cellular and network bases of epileptic seizures. Annu Rev Physiol 63, 815-46 (2001).
【０１９０】
McGaugh, J.L. & Roozendaal, B. Drug enhancement of memory consolidation: historical perspective and neurobiological implications. Psychopharmacology (Berl) 202, 3-14 (2009).
【０１９１】
Morel, M., Couturier, J., Lafay-Chebassier, C., Paccalin, M. & Page, G. PKR, the double stranded RNA-dependent protein kinase as a critical target in Alzheimer's disease. J Cell Mol Med 13, 1476-88 (2009).
【０１９２】
Morris, R.G., Garrud, P., Rawlins, J.N. & O'Keefe, J. Place navigation impaired in rats with hippocampal lesions. Nature 297, 681-3 (1982).
【０１９３】
Muller, M., Fontana, A., Zbinden, G. & Gahwiler, B.H. Effects of interferons and hydrogen peroxide on CA3 pyramidal cells in rat hippocampal slice cultures. Brain Res 619, 157-62 (1993).
【０１９４】
Niedermeyer, E. Epileptic seizure Disorders. in Electroengcephalography: Bacis principles, Clinical Application, And Related Fields, Vol. Fifth edition (ed. Niedermeyer, E.F.L.D.S.) 505-621 (Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, 2005).
【０１９５】
Noebels, J.L. The biology of epilepsy genes. Annu Rev Neurosci 26, 599-625 (2003).
【０１９６】
Page, G. et al. Activated double-stranded RNA-dependent protein kinase and neuronal death in models of Alzheimer's disease. Neuroscience 139, 1343-54 (2006).
【０１９７】
Palop, J.J. et al. Aberrant excitatory neuronal activity and compensatory remodeling of inhibitory hippocampal circuits in mouse models of Alzheimer's disease. Neuron 55, 697-711 (2007).
【０１９８】
Paquet, C. et al. Neuronal phosphorylated RNA-dependent protein kinase in Creutzfeldt-Jakob disease. J Neuropathol Exp Neurol 68, 190-8 (2009).
【０１９９】
Paulsen, O. & Moser, E.I. A model of hippocampal memory encoding and retrieval: GABAergic control of synaptic plasticity. Trends Neurosci 21, 273-8 (1998).
【０２００】
Peel, A.L. & Bredesen, D.E. Activation of the cell stress kinase PKR in Alzheimer's disease and human amyloid precursor protein transgenic mice. Neurobiol Dis 14, 52-62 (2003).
【０２０１】
Peel, A.L. et al. Double-stranded RNA-dependent protein kinase, PKR, binds preferentially to Huntington's disease (HD) transcripts and is activated in HD tissue. Hum Mol Genet 10, 1531-8 (2001).
【０２０２】
Price, M.G. et al. A triplet repeat expansion genetic mouse model of infantile spasms syndrome, Arx(GCG)10+7, with interneuronopathy, spasms in infancy, persistent seizures, and adult cognitive and behavioral impairment. J Neurosci 29, 8752-63 (2009).
【０２０３】
Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990.
【０２０４】
Renno, T. et al. Interferon-gamma in progression to chronic demyelination and neurological deficit following acute EAE. Mol Cell Neurosci 12, 376-89 (1998).
【０２０５】
Scheuner, D. et al. Translational control is required for the unfolded protein response and in vivo glucose homeostasis. Mol Cell 7, 1165-76 (2001).
【０２０６】
Shimazawa, M. & Hara, H. Inhibitor of double stranded RNA-dependent protein kinase protects against cell damage induced by ER stress. Neurosci Lett 409, 192-5 (2006).
【０２０７】
Shirvalkar, P.R., Rapp, P.R. & Shapiro, M.L. Bidirectional changes to hippocampal theta-gamma comodulation predict memory for recent spatial episodes. Proc Natl Acad Sci U S A 107, 7054-9.
【０２０８】
Silva, A.J., Zhou, Y., Rogerson, T., Shobe, J. & Balaji, J. Molecular and cellular approaches to memory allocation in neural circuits. Science 326, 391-5 (2009).
【０２０９】
Sohal, V.S., Zhang, F., Yizhar, O. & Deisseroth, K. Parvalbumin neurons and gamma rhythms enhance cortical circuit performance. Nature 459, 698-702 (2009).
【０２１０】
Steriade, M. Cellular substrates of brain rhythms. in Electroengcephalography: Bacis principles, Clinical Application, And Related Fields, Vol. Fifth edition (ed. Niedermeyer, E.F.L.D.S.) 505-621 (Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, 2005).
【０２１１】
Steriade, M. Neuronal substrates of Sleep and Epilepsy, (Cambridge University Press, Cambridge, 2003).
【０２１２】
Thomson, A.M. Facilitation, augmentation and potentiation at central synapses. Trends Neurosci 23, 305-12 (2000).
【０２１３】
Vingerhoets, G. Cognitive effects of seizures. Seizure 15, 221-6 (2006).
【０２１４】
Wang, X., Fan, Z., Wang, B., Luo, J. & Ke, Z.J. Activation of double-stranded RNA-activated protein kinase by mild impairment of oxidative metabolism in neurons. J Neurochem 103, 2380-90 (2007).
【０２１５】
Wigstrom, H. & Gustafsson, B. Facilitated induction of hippocampal long-lasting potentiation during blockade of inhibition. Nature 301, 603-4 (1983).
【０２１６】
Zhou, Y. et al. CREB regulates excitability and the allocation of memory to subsets of neurons in the amygdala. Nat Neurosci 12, 1438-43 (2009).
【０２１７】
Zhu, P.J., Stewart, R.R., McIntosh, J.M. & Weight, F.F. Activation of nicotinic acetylcholine receptors increases the frequency of spontaneous GABAergic IPSCs in rat basolateral amygdala neurons. J Neurophysiol 94, 3081-91 (2005).
【０２１８】
本発明およびその利点が詳しく記載されているが、様々な変化、置換および変更が、添付された請求項によって定義される本発明の精神および範囲から逸脱することなく本明細書中において行われ得ることを理解するべきである。そのうえ、本出願の範囲は、本明細書に記載されたプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法および段階の特定の実施形態に限定されないものとする。当業者は、本明細書中に記載された対応する実施形態が本発明に従って利用され得るのと実質的に同じ機能を果たすか、または実質的に同じ結果を達成するプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法または段階（現時点で存在するもの、または、後で開発されることになるもの）を本発明の開示から容易に理解するであろう。したがって、添付された請求項は、その範囲内に、そのようなプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法または段階を包含するものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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