(57)【要約】【解決手段】対象動物の性能を改善するための、又は飼料中の原料の消化率（例えば、栄養素消化率、例としてアミノ酸消化率）を改善するための、又は窒素保持率を改善するための、又は食餌性リンの吸収率及び保持率を改善するための、又はフィターゼの効能を改善するための、又は壊死性腸炎に対する対象動物の耐性を改善するための、又は飼料要求率（ＦＣＲ）を改善するための、又は対象動物の体重増加量を改善するための、又は対象動物の飼料効率を改善するための、又は対象動物の免疫応答性を調整する（例えば、改善する）ための、又は対象動物の胃腸管内の病原菌の個体数を低減するための、又は糞尿への栄養素の排出を低減するための方法であって、前記方法が、フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を前記対象動物に投与することを含み、前記フィターゼが約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超の用量で前記対象動物に投与される、方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象動物の性能を改善するための、又は飼料中の原料の消化率（例えば、栄養素消化率、例としてアミノ酸消化率）を改善するための、又は窒素保持率を改善するための、又は食餌性リンの吸収率及び保持率を改善するための、又はフィターゼの効能を改善するための、又は壊死性腸炎に対する対象動物の耐性を改善するための、又は飼料要求率（ＦＣＲ）を改善するための、又は対象動物の体重増加量を改善するための、又は対象動物の飼料効率を改善するための、又は対象動物の免疫応答性を調整する（例えば、改善する）ための、又は対象動物の胃腸管内の病原菌の個体数を低減するための、又は糞尿への栄養素の排出を低減するための
方法であって、前記方法が、フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を前記対象動物に投与することを含み、前記フィターゼが約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超の用量で前記対象動物に投与される、方法。
【請求項２】
対象動物の性能を改善するために、又は飼料中の原料の消化率（例えば、栄養素消化率、例としてアミノ酸消化率）を改善するために、又は窒素保持率を改善するために、又は食餌性リンの吸収率及び保持率を改善するために、又はフィターゼの効能を改善するために、又は壊死性腸炎に対する対象動物の耐性を改善するために、又は飼料要求率（ＦＣＲ）を改善するために、又は対象動物の体重増加量を改善するために、又は対象動物の飼料効率を改善するために、又は対象動物の免疫応答性を調整する（例えば、改善する）ために、又は対象動物の胃腸管内の病原菌の個体数を低減するために、又は糞尿への栄養素の排出を低減するために
フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を使用する方法であって、前記フィターゼが約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超の用量で使用される方法。
【請求項３】
前記直接給与微生物が、抗病原体直接給与微生物である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記直接給与微生物が生菌である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記フィターゼが、約２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超の用量で前記対象動物に投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記フィターゼが、約３０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超の用量で前記対象動物に投与される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が、少なくとも３種の直接給与微生物を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記直接給与微生物が、病原性微生物（例えば、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）及び／又は大腸菌（Escherichia coli））の腸内増殖を阻害する菌株である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記直接給与微生物が、以下の属、即ちバチルス（Bacillus）、エンテロコッカス（Enterococcus）、ペディオコッカス（Pediococcus）、サッカロマイセス（Saccharomyces）、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）、プロピオニバクテリウム（Propionibacterium）、ラクトバチルス（Lactobacillus）、ラクトコッカス（Lactococcus）、アスペルギルス（Aspergillus）及びこれらの組み合わせのうちの１種以上に由来する細菌を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記直接給与微生物が、以下の菌種、即ちバチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）、バチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）、バチルス・セレウス（Bacillus cereus）、エンテロコッカス・ファエシウム（Enterococcus faecium）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、サッカロマイセス・セレビジエ（Saccharomyces cerevisiae）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種アニマリス（Bifidobacterium animalis spp animalis）、ラクトバシルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）、ラクトバシルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、ラクトバシルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバシルス・サリバリウス亜種サリバリウス（Lactobacillus salivarius ssp salivarius）、ラクトバシルス・ファルシミニス（Lactobacillus farciminis）、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）、ラクトバシルス・カセイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）、ラクトバシルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、クロストリジウム・ブチリカム（Clostridium butyricum）、アスペルギルス・オリゼ（Aspergillus Oryzae）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシ（Propionibacterium acidipropionici）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイ（Propionibacterium jensenii）、エンテロコッカス・ファエシウム（Enterococcus faecium）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）及びこれらの組み合わせのうちの１種以上に由来する細菌を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記直接給与微生物が、以下の菌株、即ちバチルス・サブチリスBS18（NRRL B-50633）、バチルス・サブチリスBS278（NRRL 50634）、バチルス・サブチリス4-7d（NRRL B-50505）、バチルス・サブチリス3-5h（NRRL B-50507）、バチルス・サブチリスAGTP BS3BP5（NRRL B-50510）、バチルス・サブチリスBS918（NRRL B-50508）、バチルス・サブチリスAGTP BS1013（NRRL-50509）、バチルス・サブチリスAGTP 944（NRRL B-50548）、バチルス・サブチリスAGTP BS442（NRRL B-50542）、バチルス・サブチリスAGTP BS1069（NRRL B-50544）、バチルス・サブチリスAGTP  BS521（NRRL B-50545）、バチルス・サブチリスBS2084（NRRL B-50013）、バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）、バチルス・サブチリスB27（NRRL B-50105）、バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）、バチルス・サブチリス15A-P4（PTA-6507）、バチルス・サブチリス22C-P1（PTA-6508）、バチルス・サブチリスBL21（NRRL B-50134）、バチルス・リケニフォルミスBL21（NRRL B-50134）、バチルス・リケニフォルミス 3-12a（NRRL B-50504）、バチルス・リケニフォルミス4-2a（NRRL B-50506）、バチルス・リケニフォルミス842（NRRL B-50516）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシ（Propionibacterium acidipropionici） P261（NRRL B-50131）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP179（NRRL B-50133）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP169（PTA 5271）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP170（PTA 5272）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイ（Propionibacterium jensenii ）P63（NRRL B-30979）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイP195（NRRL B-50132）、ラクトコッカス・ラクティスID7（PTA 6103）、ラクトコッカス・ラクティスJD19（PTA 6104）、ラクトバシルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus） A2020（NRRL B-30977）、ラクトバシルス・アシドフィラスA4000h（NRRL B-30978）、ラクトバシルス・アシドフィラスPIBc6（NRRL B-50103）、ラクトバシルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）LBR 1000（NRRL B-30982）、ラクトバシルス・カセイ（Lactobacillus casei） LC222（NRRL B-30983）、ラクトバシルス・ジョンソニイ（Lactobacillus johnsonii） PLCB6（NRRL B-50518）、ラクトバシルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius） o246i33w（NRRL B-50102）、ラクトバシルス・ブレビスAJ25（PTA-6099）、ラクトバシルス・ブレビスHE17（PTA-6100）、ラクトバシルス・ブレビス1E-1（PTA-6509）、ラクトバシラス・ラクティスCl15（PTA-6101）、ラクトバシラス・ラクティスDJ6（PTA-6102）、ラクトバシルス・ラムノサス（CNCM I-3698）、ラクトバシルス・ファルシミニス（CNCM I-3699）、エンテロコッカス・ファエシウムEF141（EN-1）（NRRL B-30981）、エンテロコッカス・ファエシウム2-1d（NRRL B-50519）、ペディオコッカス・アシディラクティシPIJe3（NRRL B-50101）、ペディオコッカス・アシディラクティシo246e42（NRRL B-50171）及びこれらの組み合わせのうちの１種以上である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記フィターゼが6-フィターゼ又は3-フィターゼである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記フィターゼが6-フィターゼである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記フィターゼが、大腸菌フィターゼ又はブティアウクセラ（Buttiauxella）フィターゼ又はシトロバクター（Citrobacter）フィターゼ又はハフニア（Hafnia）フィターゼ又はアスペルギルスフィターゼ又はペニシリウム（Penicillium）フィターゼ又はトリコデルマ（Trichoderma）フィターゼ又は大腸菌フィターゼ又はハンゼヌラ（Hansenula）フィターゼ又はペニフォラ（Peniphora）フィターゼである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＤＦＭが、３．７５×１０７ＣＦＵ／飼料添加用組成物ｇ及び1×１０１１ＣＦＵ／飼料添加用組成物ｇの用量で存在する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
臨床的又は無症状的な腸疾病への曝露が、対象動物に存在する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記臨床的又は無症状的な腸疾病への曝露が、病原菌、例えばウェルシュ菌又は大腸菌によって引き起こされる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を含む飼料添加用組成物であって、前記フィターゼが前記飼料添加用組成物中に
ａ．少なくとも５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約３０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｂ．少なくとも７５ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約２０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｃ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｄ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｅ．少なくとも１５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｆ．少なくとも２００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約７，５００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｇ．少なくとも３００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
存在し、かつ、前記直接給与微生物が前記飼料添加用組成物中に２．５×１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜６．７×１０６ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲で存在する、飼料添加用組成物。
【請求項１９】
前記直接給与微生物が、前記飼料添加用組成物中に３．８×１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜２．０×１０５ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲で存在する、請求項１８に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２０】
前記直接給与微生物が、抗病原体直接給与微生物である、請求項１８又は１９に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２１】
前記直接給与微生物が生菌である、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２２】
前記飼料添加用組成物が少なくとも３種の直接給与微生物を含む、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２３】
前記直接給与微生物が、病原性微生物（例えば、ウェルシュ菌及び／又は大腸菌及び／又はサルモネラ菌種（Salmonella）及び／又はカンピロバクター菌種（Campylobacter））の腸内増殖を阻害する菌株である、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２４】
前記直接給与微生物が、以下の属、即ちバチルス、エンテロコッカス、ペディオコッカス、サッカロマイセス、ビフィドバクテリウム、プロピオニバクテリウム、ラクトバチルス、ラクトコッカス、アスペルギルス及びこれらの組み合わせのうちの１種以上に由来する細菌を含む、請求項１８〜２３のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２５】
前記直接給与微生物が、以下の菌種、即ちバチルス・サブチリス、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・セレウス、エンテロコッカス・ファエシウム、ペディオコッカス・アシディラクティシ、サッカロマイセス・セレビジエ、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種アニマリス、ラクトバシルス・ロイテリ、ラクトバシルス・ラムノサス、ラクトバシルス・アシドフィラス、ラクトバシルス・ブレビス、ラクトバシルス・サリバリウス亜種サリバリウス、ラクトバシルス・ファルシミニス、ラクトコッカス・ラクティス、ラクトバシルス・カセイ、ラクトバシルス・サリバリウス、ラクトバシルス・ラムノサス、クロストリジウム・ブチリカム、アスペルギルス・オリゼ、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシ、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイ、エンテロコッカス・ファエシウム、ペディオコッカス・アシディラクティシ及びこれらの組み合わせのうちの１種以上に由来する細菌を含む、請求項１８〜２４のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２６】
前記直接給与微生物が、以下の菌株、即ちバチルス・サブチリスBS18（NRRL B-50633）、バチルス・サブチリスBS278（NRRL 50634）、バチルス・サブチリス4-7d（NRRL B-50505）、バチルス・サブチリス3-5h（NRRL B-50507）、バチルス・サブチリスAGTP BS3BP5（NRRL B-50510）、バチルス・サブチリスBS918（NRRL B-50508）、バチルス・サブチリスAGTP BS1013（NRRL-50509）、バチルス・サブチリスAGTP 944（NRRL B-50548）、バチルス・サブチリスAGTP BS442（NRRL B-50542）、バチルス・サブチリスAGTP BS1069（NRRL B-50544）、バチルス・サブチリスAGTP  BS521（NRRL B-50545）、バチルス・サブチリスBS2084（NRRL B-50013）、バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）、バチルス・サブチリスB27（NRRL B-50105）、バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）、バチルス・サブチリス15A-P4（PTA-6507）、バチルス・サブチリス22C-P1（PTA-6508）、バチルス・サブチリスBL21（NRRL B-50134）、バチルス・リケニフォルミスBL21（NRRL B-50134）、バチルス・リケニフォルミス 3-12a（NRRL B-50504）、バチルス・リケニフォルミス4-2a（NRRL B-50506）、バチルス・リケニフォルミス842（NRRL B-50516）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシ（Propionibacterium acidipropionici） P261（NRRL B-50131）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP179（NRRL B-50133）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP169（PTA 5271）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP170（PTA 5272）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイ（Propionibacterium jensenii ）P63（NRRL B-30979）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイP195（NRRL B-50132）、ラクトコッカス・ラクティスID7（PTA 6103）、ラクトコッカス・ラクティスJD19（PTA 6104）、ラクトバシルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus） A2020（NRRL B-30977）、ラクトバシルス・アシドフィラスA4000h（NRRL B-30978）、ラクトバシルス・アシドフィラスPIBc6（NRRL B-50103）、ラクトバシルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）LBR 1000（NRRL B-30982）、ラクトバシルス・カセイ（Lactobacillus casei） LC222（NRRL B-30983）、ラクトバシルス・ジョンソニイ（Lactobacillus johnsonii） PLCB6（NRRL B-50518）、ラクトバシルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius） o246i33w（NRRL B-50102）、ラクトバシルス・ブレビスAJ25（PTA-6099）、ラクトバシルス・ブレビスHE17（PTA-6100）、ラクトバシルス・ブレビス1E-1（PTA-6509）、ラクトバシラス・ラクティスCl15（PTA-6101）、ラクトバシラス・ラクティスDJ6（PTA-6102）、ラクトバシルス・ラムノサス（CNCM I-3698）、ラクトバシルス・ファルシミニス（CNCM I-3699）、エンテロコッカス・ファエシウムEF141（EN-1）（NRRL B-30981）、エンテロコッカス・ファエシウム2-1d（NRRL B-50519）、ペディオコッカス・アシディラクティシPIJe3（NRRL B-50101）、ペディオコッカス・アシディラクティシo246e42（NRRL B-50171）及びこれらの組み合わせのうちの１種以上である、請求項１８〜２５のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２７】
前記フィターゼが6-フィターゼ又は3-フィターゼである、請求項１８〜２６のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２８】
前記フィターゼが6-フィターゼである、請求項２７に記載の飼料添加用組成物。
【請求項２９】
前記フィターゼが、大腸菌フィターゼ又はブティアウクセラフィターゼ又はシトロバクターフィターゼ又はハフニアフィターゼ又はアスペルギルスフィターゼ又はペニシリウムフィターゼ又はトリコデルマフィターゼ又は大腸菌フィターゼ又はハンゼヌラフィターゼ又はペニフォラフィターゼである、請求項１８〜２８のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物。
【請求項３０】
請求項１８〜２９のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物及び投与のための取扱説明書を含むキット。
【請求項３１】
飼料添加用組成物を製造する方法であって、前記組成物中のフィターゼの用量が
ａ．少なくとも５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約３０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｂ．少なくとも７５ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約２０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｃ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｄ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｅ．少なくとも１５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｆ．少なくとも２００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約７，５００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｇ．少なくとも３００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
であり、かつ、前記飼料添加用組成物中の直接給与微生物の用量が２．５×１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜６．７×１０６ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲であるように、少なくとも１種の前記直接給与微生物と該フィターゼとを混合する工程、及び
（任意的に）包装する工程
を含む方法。
【請求項３２】
前記飼料添加用組成物中の前記直接給与微生物が、３．８×１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜２．０×１０５ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１８〜２９のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物を含む飼料。
【請求項３４】
前記フィターゼが、１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜２０，０００ＦＴＵ／飼料ｋｇの用量で存在する、請求項３３に記載の飼料。
【請求項３５】
前記ＤＦＭが、７．５×１０４ＣＦＵ／飼料ｋｇ及び１×１０７ＣＦＵ／飼料ｋｇの用量で存在する、請求項３３又は３４に記載の飼料。
【請求項３６】
請求項１８〜２９のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物と飼料成分とを混合する工程を含む、家畜飼料を製造する方法。
【請求項３７】
フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を含む飼料添加用組成物を含むプレミックスであって、前記フィターゼが前記プレミックス中に
ａ．少なくとも５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約３０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｂ．少なくとも７５ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約２０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｃ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｄ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｅ．少なくとも１５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｆ．少なくとも２００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約７，５００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｇ．少なくとも３００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
で存在し、かつ、前記直接給与微生物が前記プレミックス中に２．５×１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜６．７×１０６ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲で存在する前記飼料添加用組成物と、少なくとも１種のミネラル及び／又は少なくとも１種のビタミンとを含む、プレミックス。
【請求項３８】
少なくとも１種のミネラル及び／又は少なくとも１種のビタミンと組み合わされて、請求項１８〜２９のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物を含むプレミックス。
【請求項３９】
対象動物におけるコクシジウム症及び／又は壊死性腸炎を予防し及び／又は処置するための、請求項１８〜２９のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物、又は請求項３７若しくは３８に記載のプレミックス、又は請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の飼料。
【請求項４０】
壊死性腸炎及び／又はコクシジウム症を予防し及び／又は処置する方法であって、請求項１８〜２９のいずれか１項に記載の飼料添加用組成物、又は請求項３７若しくは３８に記載のプレミックス、又は請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の飼料、の有効量が対象動物に投与される、方法。
【請求項４１】
本明細書に記載された図面及び実施例を参照して本明細書に全般的に規定された、飼料添加用組成物又は飼料又はキット又は方法又は使用する方法又はプレミックス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高用量フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を使用して飼料組成物を改善する方法、及び高用量フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を含む飼料添加用組成物に関する。本発明は、さらに使用方法及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
壊死性腸炎は、家禽種における経済的見地から見て重大な疾病である。これは病原性ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）感染の結果として発生し、多くの場合コクシジウム症（coccidiosis）伝染に付随する。それは、極端な場合には高率の斃死をもたらし、無症状的なレベルでは腸の損傷及び動物の性能に対する有害な影響をもたらす。家禽種における壊死性腸炎及び動物の性能に対するその有害な影響は、主として、飼料に混ぜた抗生物質の使用によって抑制されてきた。しかし、抗生物質を成長促進剤として飼料に混ぜて使用することの禁止及び食肉生産動物への抗生物質の施与を低減しようとする消費者圧力は、生産者がウェルシュ菌及び関連する無症状的又は臨床的壊死性腸炎から生じる損失を防ぐことをより困難にした。従って、ウェルシュ菌によって引き起こされる損害を限定する又は防止する解決策を提供する機会が存在する。
【０００３】
１つのそのような解決策は、プロバイオティクスを使用して健康な腸内ミクロフローラ及び安定した腸管生態系を増進することであった。しかし、プロテアーゼやカルボヒドラーゼのような酵素の補給によるさらなる利点が観察されている。ＤＦＭ（直接給与微生物）といくつかの酵素との併用は検討されているけれども、ＤＦＭと酵素との間の交互作用は十分には理解されていない。本発明は、動物の生産能力特性を驚くほど有意に改善する新規な特定の併用に関する。
【０００４】
単胃動物は、胃及び小腸内に内因性フィターゼを有しないか、又はごく少量の内因性フィターゼを有することが知られており、従って近位消化管内でのフィチン酸の加水分解を、補給される植物性及び／又は微生物性又は真菌性フィターゼに依存している（Pallauf, J.及びRimbach, G.、Arch. Anim. Nutr.、1997年、50巻、301-319頁）。追加のフィターゼが、単胃動物の飼料、例えば家禽や豚の飼料にしばしば加えられる。フィテートは穀物及び豆類の中のリンの主要な保存形態である。フィターゼの作用によって、一般にフィテートは加水分解されて低級のイノシトールリン酸エステル及び無機リン酸塩を与える。
【０００５】
本発明は、臨床的又は無症状的壊死性腸炎にかかった動物内でフィターゼ酵素の有益な効果が減少することに関連した問題のうちのいくつかを克服しようとするものである。
【０００６】
本発明はさらに、フィチン酸の栄養阻害作用、とりわけ臨床的又は無症状的壊死性腸炎にかかった動物内でのフィチン酸の栄養阻害作用に関連した問題を克服して、結果として、栄養素、ミネラル、ビタミン及びエネルギーの利用を改善し、従って単胃動物の生物物理学的特性を改善しようとするものである。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の画期的な成果は、本発明者らが、少なくとも１種のＤＦＭと高用量のフィターゼ（＞１５００ＦＴＵ（フィターゼ単位）／飼料ｋｇ）との併用に、思いがけない相乗効果が存在することを見い出し、この相乗効果によって、低い量のウェルシュ菌は有するが壊死性腸炎にはかかっていない陽性対照の性能よりも高い程度まで被検動物の性能が改善されることが証明されたということである。
【０００８】
本発明者らは、例えば、斃死率パーセント、体重増加量及びＦＣＲ（飼料要求率）を考察することによってこのことを実証した。この好ましい効果は全く予期し得ないことであった。
【０００９】
理論に拘束されることを望むわけではないが、本発明者らは、これらの効果は病原菌（例えば、ウェルシュ菌及び／又は大腸菌（Escherichia coli）への曝露）がもたらす腸の損傷の程度が、対照と比較して減少したためであろうと考えている。
【００１０】
動物の改善された性能は、腸内の有害細菌の増殖及び病変の防止によって説明されることができる。さらに、本発明の他の有益な効果は、フィテートの加水分解の増加を含み、これはタンパク質及びミネラルの回腸消化率の増加をもたらすと考えられる。対象動物の栄養素の利用を増加させる利益に加えて、このことはまた、腸後部に到達して細菌によって発酵される基質がより少なくなることとなり、腸内の病原体が増殖することをより困難にする可能性がある。
【００１１】
本発明の別の利益は、フィターゼが補給されないときと比較して、ムチンの生産が減少することである。その結果、内因性損失の程度が低くなり、ここでもまた腸内ミクロフローラによって発酵される基質が少なくなる。
【００１２】
とりわけ、本発明の画期的な成果は、高用量のフィターゼ（＞１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ）と組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物（ＤＦＭ）が、動物の性能に著しく有益な効果を与えることであり、例えば、飼料要求率（ＦＣＲ）、原料を消化する能力（例えば、栄養素消化率、例としてアミノ酸消化率）、窒素保持率、生存率、屠体収量、成長率、体重増加量、飼料効率、壊死性腸炎に対する動物の耐性、対象動物の免疫応答性のうちの１つ以上を改善する。
【００１３】
本発明の別の驚くべき効果は、本発明は、糞尿への栄養素の排出を低減する（例えば、対象動物の糞尿の窒素及びリン含有量を低減する）ことができるということである。
【００１４】
本発明のさらなる態様では、
ｉ）      対象動物の性能を改善するための、又は
ｉｉ）    飼料中の原料の消化率（例えば、栄養素消化率、例としてアミノ酸消化率）を改善するための、又は
ｉｉｉ）  リン（例えば、食餌性リン）の吸収率及び保持率を改善するための、又は
ｉｖ）    フィターゼの効能を改善するための、又は
ｖ）      窒素保持率を改善するための、又は
ｖｉ）    壊死性腸炎に対する対象動物の耐性を改善するための、又は
ｖｉｉ）  飼料要求率（ＦＣＲ）を改善するための、又は
ｖｉｉｉ）対象動物の体重増加量を改善するための、又は
ｉｘ）    対象動物の飼料効率を改善するための、又は
ｘ）      対象動物の免疫応答性を調整する（例えば、改善する）ための、又は
ｘｉ）    対象動物の胃腸管内の病原菌の個体数を低減するための、又は
ｘｉｉ）  糞尿への栄養素の排出を低減するための
方法が提供され、この方法は、フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を対象動物に投与することを含み、該フィターゼは約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超の用量で対象動物に投与される。
【００１５】
本発明の別の態様は、
ｉ）      対象動物の性能を改善するために、又は
ｉｉ）    飼料中の原料の消化率（例えば、栄養素消化率、例としてアミノ酸消化率）を改善するために、又は
ｉｉｉ）  窒素保持率を改善するために、又は
ｉｖ）    リン（例えば、食餌性リン）の吸収率及び保持率を改善するために、又は
ｖ）      フィターゼの効能を改善するために、又は
ｖｉ）    壊死性腸炎に対する対象動物の耐性を改善するために、又は
ｖｉｉ）  飼料要求率（ＦＣＲ）を改善するために、又は
ｖｉｉｉ）対象動物の体重増加量を改善するために、又は
ｉｘ）    対象動物の飼料効率を改善するために、又は
ｘ）      対象動物の免疫応答性を調整する（例えば、改善する）ために、又は
ｘｉ）    対象動物の胃腸管内の病原菌の個体数を低減するために、又は
ｘｉｉ）  糞尿への栄養素の排出を低減するために
フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を使用する方法であり、該フィターゼは約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超の用量で使用される。
【００１６】
本発明はまたさらに、フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を含む飼料添加用組成物を提供し、該フィターゼは該飼料添加用組成物中に
ａ．少なくとも５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約３０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｂ．少なくとも７５ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約２０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｃ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｄ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｅ．少なくとも１５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｆ．少なくとも２００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約７，５００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｇ．少なくとも３００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
存在し、かつ、該直接給与微生物は該飼料添加用組成物中に２．５×１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜６．７×１０６ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲で存在する。
【００１７】
本発明のさらなる態様では、本発明による飼料添加用組成物を含むキット及び投与のための取扱説明書が提供される。
【００１８】
さらなる態様では、本発明は、飼料添加用組成物を製造する方法を提供し、該方法は、該組成物中のフィターゼの用量が
ａ．少なくとも５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約３０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｂ．少なくとも７５ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約２０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｃ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｄ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｅ．少なくとも１５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｆ．少なくとも２００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約７，５００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｇ．少なくとも３００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
であり、かつ、該飼料添加用組成物中の直接給与微生物の用量が２．５×１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜６．７×１０６ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲であるように、少なくとも１種の該直接給与微生物と該フィターゼとを混合する工程、及び
（任意的に）包装する工程
を含む。
【００１９】
さらなる態様では、本発明は、本発明による飼料添加用組成物を含む飼料を提供する。
【００２０】
本発明はまたさらに、飼料成分と本発明による飼料添加用組成物とを混合する工程を含む、家畜飼料を製造する方法を提供する。
【００２１】
別の態様では、本発明はプレミックスを提供し、該プレミックスは、フィターゼと組み合わされた少なくとも１種の直接給与微生物を含む飼料添加用組成物であって、該フィターゼが該プレミックス中に
ａ．少なくとも５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約３０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｂ．少なくとも７５ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約２０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｃ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｄ．少なくとも１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｅ．少なくとも１５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約１０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｆ．少なくとも２００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約７，５００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
ｇ．少なくとも３００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）で飼料中に配合されるときは、約５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上
で存在し、かつ、該直接給与微生物が該プレミックス中に２．５×１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜６．７×１０６ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲で存在する飼料添加用組成物と、少なくとも１種のミネラル及び／又は少なくとも１種のビタミンと、を含む。
【００２２】
本発明はまた、本発明による飼料添加用組成物又は本発明によるプレミックス又は本発明による飼料添加用組成物（若しくはプレミックス）を含む飼料を、対象動物のコクシジウム症及び／又は壊死性腸炎を予防し及び／又は処置するために提供する。
【００２３】
本発明のまたさらなる態様では、壊死性腸炎及び／又はコクシジウム症を予防し及び／又は処置する方法が提供され、該方法では本発明による飼料添加用組成物又は本発明によるプレミックス又は本発明による飼料添加用組成物（若しくはプレミックス）を含む飼料、の有効量が、対象動物に投与される。
【００２４】
１つの広い態様では、本発明はまたさらに、
ｉ）      飼料中の原料の消化率（例えば、栄養素消化率、例としてアミノ酸消化率）を改善するための、又は
ｉｉ）    対象動物の性能を改善するための、又は
ｉｉｉ）  リン（例えば、食餌性リン）の吸収率及び保持率を改善するための、又は
ｉｖ）    フィターゼの効能を改善するための、又は
ｖ）      窒素保持率を改善するための、又は
ｖｉ）    壊死性腸炎に対する対象動物の耐性を改善するための、又は
ｖｉｉ）  飼料要求率（ＦＣＲ）を改善するための、又は
ｖｉｉｉ）対象動物の体重増加量を改善するための、又は
ｉｘ）    対象動物の飼料効率を改善するための、又は
ｘ）      対象動物の免疫応答性を調整する（例えば、改善する）ための、又は
ｘｉ）    対象動物の胃腸管内の病原菌の個体数を低減するための、又は
ｘｉｉ）  糞尿への栄養素の排出を低減するための
方法又は使用方法を提供し、
該方法は、対象動物の胃腸管（ＧＩＴ）内のｐＨを低減する化合物と一緒に高用量のホスフェートを対象動物に投与することを含む。
【００２５】
上記の広い態様では、好適には、該化合物は有機酸、精油又は抗生物質であることができる。有機酸は、クエン酸、フマル酸、ギ酸、プロピオン酸、乳酸及び安息香酸から成る群のうちの１つ以上から選ばれることができる。抗生物質は、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、オレアンドマイシン、スピラマイシン、バージニアマイシン、バシトラシン亜鉛、フラボフォスフォリポール、アビラマイシン及びアボパルシンから成る群のうちの１つ以上から選ばれることができる。精油（又は植物エキス）は、シンナムアルデヒド、チモール、カルバクロール、カプサイシン、オイゲノール及びアリシンから成る群のうちの１つ以上から選ばれることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】壊死性腸炎に曝露された下で４２日目まで飼育されたブロイラーの体重増加量に対するEnviva Pro及び高用量フィターゼ（３０００ＦＴＵ／Ｋｇ）の補給の効果を示す図である。
【図２】壊死性腸炎に曝露された下で４２日目まで飼育されたブロイラーのＦＣＲに対するEnviva Pro及び高用量フィターゼ（３０００ＦＴＵ／Ｋｇ）の補給の効果を示す図である。
【図３】壊死性腸炎に曝露された結果としての斃死率に対するEnviva Pro及び高用量フィターゼ（３０００ＦＴＵ／Ｋｇ）の効果を示す図である。
【図４】壊死性腸炎への曝露による腸の損傷の重症度に対するEnviva Pro及び高用量フィターゼ（３０００ＦＴＵ／Ｋｇ）の効果を示す図である。
【図５】壊死性腸炎に曝露された下で０〜２１日目のブロイラーのＦＣＲに対するEnviva Proの存在下又は不存在下での様々な用量のフィターゼの効果を示す図である。
【図６】６〜３５日目のブロイラーのＦＣＲに対する様々な用量のフィターゼの効果を示す図である。
【図７】壊死性腸炎に曝露された下で０〜２１日目のブロイラーのＦＣＲに対するEnviva Proあり又はなしでの様々な用量のHiPhos（商標）フィターゼの効果を示す図である。
【図８】壊死性腸炎に曝露された下で２１日目のブロイラーの脛骨灰分に対するEnviva Proあり又はなしでの様々な用量のHiPhos（商標）フィターゼの効果を示す図である。
【発明の詳細な説明】
【００２７】
好ましくは、本発明で使用される酵素の各々はＤＦＭに対して外来のものである。言い換えれば、該酵素は好ましくはＤＦＭに添加され、又はＤＦＭと混合される。
【００２８】
別段の定義がされない限り、本明細書で使用される技術的及び科学的用語は全て、この開示発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。「Singletonら、DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY、20版、米国、ニューヨーク州、John Wiley and Sons社刊、(1994年)」及び「Hale & Marham、THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY、米国、ニューヨーク州、Harper perennial社刊、(1991年)」は、当業者に本開示発明で使用される多くの用語の一般的な辞書の役割を提供する。
【００２９】
本開示発明は、本明細書に開示された例示的な方法及び材料によって限定されず、また、本明細書に記載されたものと類似又は等価の任意の方法及び材料が、本開示発明の実施態様の実施又は試験に使用されることができる。数値範囲は、その範囲を画定する数値を包含する。特段の指定がない限り、いずれの核酸配列も左から右に５’から３’の方向に、アミノ酸配列は左から右にアミノ末端からカルボキシ末端の方向に、各々記載される。
【００３０】
本明細書に提示される見出しは、本明細書全体を参照することによって把握されることができる本開示発明の様々な様相又は実施態様を限定するものではない。従って、これから直ぐ下に定義される用語は、本明細書全体を参照することによってより完全に定義される。
【００３１】
アミノ酸は、本明細書ではアミノ酸名、３文字略語又は１文字略語を使用して参照される。
【００３２】
本明細書で使用される用語「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド及びペプチドを包含する。
【００３３】
本明細書で使用される用語「アミノ酸配列」は、用語「ポリペプチド」及び／又は用語「タンパク質」と同義である。いくつかの例では、用語「アミノ酸配列」は、用語「ペプチド」と同義である。いくつかの例では、用語「アミノ酸配列」は、用語「酵素」と同義である。
【００３４】
用語「タンパク質」及び「ポリペプチド」は、本明細書では互換的に使用される。本明細書及び特許請求の範囲では、アミノ酸残基を表す慣用的な１文字表記又は２文字表記が用いられる場合がある。アミノ酸の３文字表記は、IUPACIUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature(JCBN)に準拠して定義される通りのものである。遺伝子暗号の縮重の故に、ポリペプチドは２つ以上のヌクレオチド配列によりコードされる場合があることも理解されたい。
【００３５】
用語のこのほかの定義が、本明細書全体を通して現れることがある。典型的な実施態様をより詳細に説明する前に、本開示発明は記載された特定の実施態様に限定されるものではなく、また、いうまでもなくそれ自体が多岐にわたることは理解されるべきである。本開示発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で使用される専門用語は、特定の実施態様を記載するという目的でのみ使用されるものであり、限定を意図するものではないことも理解されるべきである。
【００３６】
数値の範囲が提示される場合、文脈が他様に指示しない限り、その範囲の上限及び下限の間にある各数値も下限の少数第１位の単位まで具体的に開示されていると理解されるべきである。規定の範囲中の任意の規定の数値又はその間にある数値と、その規定の範囲中の任意の他の規定の数値又はその間にある数値と、の間の各々のより小さい範囲も本開示発明に包含される。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、独立に、その範囲に包含させることができ、あるいは除外させることができ、また、その規定の範囲の任意の具体的に除外された上限又は下限に従って、そのより小さい範囲の上限及び下限の、いずれかを包含する、又はいずれも包含しない、又はいずれをも包含する各範囲も本開示発明に包含される。規定の範囲がその上限又は下限のいずれか又は両方を包含する場合、これらの包含される上限又は下限のいずれかを除外する範囲又はその両方を除外する範囲も本開示発明に含まれる。
【００３７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される単数を表す「a」、「an」、及び「the」は、文脈上明記されない限り複数の指示対象も含む。したがって、例えば、「酵素（an  enzyme）」の参照は、複数の候補となる剤を包含し、「飼料（the  feed）」の参照は、当業者に知られた１種以上の飼料及びその等価物を包含する等とされる。
【００３８】
本明細書で検討されている刊行物は、本出願の出願日よりも前の開示物であるという意味でのみ提示される。本明細書のいずれの記載も、このような刊行物が本明細書に添付の特許請求の範囲に対する先行技術に相当するものであると認めているものと解釈されてはならない。
【００３９】
本発明で使用される酵素は、固体培養又は液内培養のいずれかにより、例えばバッチ培養法、フェドバッチ培養法及び連続培養法によって製造されることができる。培養は、水性無機塩類培地、有機増殖因子、炭素供給源及びエネルギー供給源、分子状酸素、及び、いうまでもなくこれから用いる１種以上の特定の微生物種の初回接種材料、を含む、成長培地で実施される。
【００４０】
本発明で使用される直接給与微生物（ＤＦＭ）は、抗病原体直接給与微生物であることができる。本明細書で使用される「抗病原体ＤＦＭ」とは、病原性微生物（例えば、ウェルシュ菌及び／又は大腸菌及び／又はサルモネラ菌種（Salmonella）及び／又はカンピロバクター菌種（Campylobacter）、好ましくはウェルシュ菌及び／又は大腸菌）の腸内増殖を阻害する（例えば、減少する又は防止する）ＤＦＭを意味する。
以下に教示される「ＤＦＭ アッセイ」は、当該ＤＦＭが抗病原体ＤＦＭであるかどうかを判断するために使用されることができる。
【００４１】
１つの実施態様では、本発明で使用されるＤＦＭは、本明細書で教示された「ＤＦＭ アッセイ」で評価されたときに抑制菌株（又は抗病原体ＤＦＭ）であるとして選択される。
好適には、本発明で使用されるＤＦＭは、クロストリジウム菌種（Clostridium）、例えばウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）及び／又は大腸菌及び／又はサルモネラ菌種及び／又はカンピロバクター菌種の病原体のうちの１種（又はそれより多く）を抑制することができ、好ましくはウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ及び／又は大腸菌の病原体のうちの１種（又はそれより多く）を抑制することができる。
【００４２】
１つの実施態様では、本発明で使用されるＤＦＭは、ウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ及び／又は大腸菌、好ましくはウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ、より好ましくはウェルシュ菌、の病原体のうちの１種（又はそれより多く）を抑制することができる。
【００４３】
1つの実施態様では、対象動物は、クロストリジウム菌種（Clostridium）、例えばウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ及び／又は大腸菌及び／又はサルモネラ菌種及び／又はカンピロバクター菌種の病原体のうちの１つ以上に曝露されることがある。
【００４４】
1つの実施態様では、対象動物は、ウェルシュ菌及び／又は大腸菌に曝露されることがある。
本発明で使用されるＤＦＭは、好適には生菌である。
【００４５】
本発明は高フィターゼ投与に関する。
従来、フィターゼは、例えば、ブロイラー及び七面鳥に対しては約５００ＦＴＵ／飼料ｋｇの辺りで、また従来、産卵鶏に対しては約３００ＦＴＵ／飼料ｋｇの辺りで投与されていた。
【００４６】
対照的に、本発明では、フィターゼは、少なくとも１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ、好適には少なくとも２０００ＦＴＵ/飼料ｋｇ、好適には少なくとも３０００ＦＴＵ/飼料ｋｇ、好適には少なくとも５０００ＦＴＵ/飼料ｋｇ、例えば少なくとも１００００ＦＴＵ/飼料ｋｇのレベルで、家畜飼料の中に（又は家畜飼料とともに）配合される。
【００４７】
当業者によって理解されるように、飼料添加用組成物中のフィターゼの量は、該フィターゼが少なくとも１５００ＦＴＵ/飼料ｋｇ、好適には少なくとも２０００ＦＴＵ/飼料ｋｇ、好適には少なくとも３０００ＦＴＵ/飼料ｋｇ、好適には少なくとも５０００ＦＴＵ/飼料ｋｇ、例えば少なくとも１００００ＦＴＵ/飼料ｋｇの量で家畜飼料中に配合されることが可能とされるのに十分なものでなければならない。
【００４８】
本発明者らは、ＤＦＭと併用して高レベルのフィターゼを投与することによって顕著な利点を得ることができることを見出した。対照的に、フィターゼ投与量を単独で増加させても顕著な利点は生じない（例えば、飼料要求率等の顕著な改善はない）。これとの著しい対比として、少なくとも１種のＤＦＭ（特に、少なくとも抗病原体ＤＦＭ） と併用してフィターゼの投与量を増加すると、顕著な、かつ思いがけない利益が観察される。これは全く予期しないことであった。
好適には、本発明で使用されるＤＦＭは少なくとも２種のＤＦＭの混合物、好適には、少なくとも３種のＤＦＭの混合物である。
【００４９】
１つの実施態様では、本発明に使用されるＤＦＭは、以下の属、即ちバチルス（Bacillus）、エンテロコッカス（Enterococcus）、ペディオコッカス（Pediococcus）、サッカロマイセス（Saccharomyces）、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）、ラクトバチルス（Lactobacillus）、アスペルギルス（Aspergillus）及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上に由来する細菌を含む（又は、から本質的に成る、又は、から成る）。
【００５０】
本発明に使用されるＤＦＭは、以下の菌種、即ちバチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）、バチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）、バチルス・セレウス（Bacillus cereus）、エンテロコッカス・ファエシウム（Enterococcus faecium）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、サッカロマイセス・セレビジエ（Saccharomyces cerevisiae）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種アニマリス（Bifidobacterium animalis spp animalis）、ラクトバシルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）、ラクトバシルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、ラクトバシルス・サリバリウス亜種サリバリウス（Lactobacillus salivarius ssp salivarius）、ラクトバシルス・ファルシミニス（Lactobacillus farciminis）、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）、クロストリジウム・ブチリカム（Clostridium butyricum）、アスペルギルス・オリゼ（Aspergillus Oryzae）及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上に由来する細菌を含む（又は、から本質的に成る、又は、から成る）ことができる。
【００５１】
本発明に使用されるＤＦＭは、次の菌株、即ちバチルス・サブチリスBS18（NRRL B-50633）、バチルス・サブチリスBS278（NRRL 50634）、バチルス・サブチリス4-7d（NRRL B-50505）、バチルス・サブチリス3-5h（NRRL B-50507）、バチルス・サブチリスAGTP BS3BP5（NRRL B-50510）、バチルス・サブチリスBS918（NRRL B-50508）、バチルス・サブチリスAGTP BS1013（NRRL-50509）、バチルス・サブチリスAGTP 944（NRRL B-50548）、バチルス・サブチリスAGTP BS442（NRRL B-50542）、バチルス・サブチリスAGTP BS1069（NRRL B-50544）、バチルス・サブチリスAGTP  BS521（NRRL B-50545）、バチルス・サブチリスBS2084（NRRL B-50013）、バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）、バチルス・サブチリスB27（NRRL B-50105）、バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）、バチルス・サブチリス15A-P4（PTA-6507）、バチルス・サブチリス22C-P1（PTA-6508）、バチルス・サブチリスBL21（NRRL B-50134）、バチルス・リケニフォルミスBL21（NRRL B-50134）、バチルス・リケニフォルミス 3-12a（NRRL B-50504）、バチルス・リケニフォルミス4-2a（NRRL B-50506）、バチルス・リケニフォルミス842（NRRL B-50516）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシ（Propionibacterium acidipropionici） P261（NRRL B-50131）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP179（NRRL B-50133）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP169（PTA 5271）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP170（PTA 5272）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイ（Propionibacterium jensenii ）P63（NRRL B-30979）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイP195（NRRL B-50132）、ラクトコッカス・ラクティスID7（PTA 6103）、ラクトコッカス・ラクティスJD19（PTA 6104）、ラクトバシルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus） A2020（NRRL B-30977）、ラクトバシルス・アシドフィラスA4000h（NRRL B-30978）、ラクトバシルス・アシドフィラスPIBc6（NRRL B-50103）、ラクトバシルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）LBR 1000（NRRL B-30982）、ラクトバシルス・カセイ（Lactobacillus casei） LC222（NRRL B-30983）、ラクトバシルス・ジョンソニイ（Lactobacillus johnsonii） PLCB6（NRRL B-50518）、ラクトバシルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius） o246i33w（NRRL B-50102）、ラクトバシルス・ブレビスAJ25（PTA-6099）、ラクトバシルス・ブレビスHE17（PTA-6100）、ラクトバシルス・ブレビス1E-1（PTA-6509）、ラクトバシラス・ラクティスCl15（PTA-6101）、ラクトバシラス・ラクティスDJ6（PTA-6102）、ラクトバシルス・ラムノサス（CNCM I-3698）、ラクトバシルス・ファルシミニス（CNCM I-3699）、エンテロコッカス・ファエシウムEF141（EN-1）（NRRL B-30981）、エンテロコッカス・ファエシウム2-1d（NRRL B-50519）、ペディオコッカス・アシディラクティシPIJe3（NRRL B-50101）、ペディオコッカス・アシディラクティシo246e42（NRRL B-50171）及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む（又は、から本質的に成る、又は、から成る）ことができる。
【００５２】
本発明に使用されるＤＦＭは、１種より多くの、好適には２種より多くの、好適には少なくとも３種のバチルス菌種を含むことができる。
本発明に使用されるＤＦＭは、次の菌株、即ちバチルス・サブチリス菌株3A-P4（PTA-6506）、15A-P4（PTA-6507）、22C-P1（PTA-6508）、2084（NRRL B-500130）、LSSA01（NRRL B-50104）、BS27（NRRL B-50105）、BS18（NRRL B-50633）、BS278（NRRL 50634）及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む（又は、から本質的に成る、又は、から成る）ことができる。
【００５３】
１つの実施態様では、本発明に使用されるＤＦＭは、次の菌株、即ちバチルス・サブチリス菌株15A-P4（PTA-6507）、2084（NRRL B-500130）及びLSSA01（NRRL B-50104）のうちの１つ以上を含む（又は、から本質的に成る）ことができる。
【００５４】
１つの実施態様では、本発明に使用されるフィターゼは、６−フィターゼ又は３−フィターゼ、好ましくは６−フィターゼ)である。
１つの実施態様では、本発明に使用されるフィターゼは、大腸菌フィターゼ、ブティアウクセラ（Buttiauxella） フィターゼ、シトロバクター（Citrobacter） フィターゼ、ハフニア（Hafnia） フィターゼ、アスペルギルスフィターゼ、ペニシリウム（Penicillium）フィターゼ、トリコデルマ（Trichoderma）フィターゼ、大腸菌フィターゼ、ハンゼヌラ（Hansenula）フィターゼ、これらの組み合わせから成る群のうちの１つ以上から選ばれることができる。
１つの実施態様では、本発明に使用されるフィターゼは、大腸菌種、ブティアウクセラ菌種、シトロバクター菌種、例えばシトロバクター・ブラアキイ（Citrobacter braakii）、これらの組み合わせのうちの１つ以上に由来する６−フィターゼであることができる。
【００５５】
好適には、本発明に使用されるフィターゼは、Phyzyme XP（商標）、AxtraPhy（商標）、Ronozyme HiPhos（商標）、Quantum（商標）、Quantum  Blue（商標）のうちの１つ以上であることができる。
好適には、フィターゼは、フィターゼの混合物、２種以上のフィターゼ、例えば少なくとも２種又は少なくとも３種の フィターゼであることができる。
１つの実施態様では、好ましくは、本発明に使用されるフィターゼは、低ｐＨにおいて活性（例えば、ｐＨ２〜ｐＨ５．５において活性）である。
１つの実施態様では、好ましくは、本発明に使用されるフィターゼは、低ｐＨに至適ｐＨを有する（例えば、ｐＨ２〜ｐＨ５．５の範囲に至適ｐＨを有する）。
【００５６】
１つの実施態様では、臨床的又は無症状的な腸疾病への曝露が、対象動物に存在する。
１つの実施態様では、臨床的又は無症状的な腸疾病への曝露は、任意の病原体又は任意の病原菌、例えばウェルシュ菌若しくは大腸菌によっても引き起こされることがある。
【００５７】
１つの実施態様では、飼料添加用組成物への直接給与微生物の配合量は、３．８×１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜２．０×１０５ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲であることができる。
【００５８】
直接給与微生物（ＤＦＭ）
本明細書の用語「微生物（microbial）」は、「微生物（microorganism）」と互換的に使用される。
好ましくは、ＤＦＭは生菌を含む。好ましくは、ＤＦＭは生細菌又は生酵母又は生真菌を含む。
好ましくはＤＦＭは生細菌を含む。
用語「生細菌」は、代謝的に活性であるか、又は分化することのできる微生物を意味する。
【００５９】
１つの実施態様では、ＤＦＭは芽胞形成細菌であることができ、従って用語「ＤＦＭ」は、芽胞、例えば細菌芽胞から構成され、又はそれを含有することができる。従って、１つの実施態様では、本明細書で使用される用語「生細菌」は、微生物芽胞、例えば内生胞子又は分生子を含むことができる。
他の実施態様では、本発明に従う飼料添加用組成物中のＤＦＭは、微生物芽胞、例えば内生胞子又は分生子からは構成されず、又はそれを含有しない。
【００６０】
微生物は天然に生じる微生物であることができ、又は形質転換された微生物であってもよい。微生物は、適当な微生物の組み合わせであることもできる。
いくつかの態様では、本発明によるＤＦＭは、細菌、酵母、真菌のうちの１つ以上であることができる。
好ましくは、本発明によるＤＦＭはプロバイオティク微生物である。
【００６１】
本発明では、用語「直接給与微生物（ＤＦＭ）」は、直接給与細菌、直接給与酵母、直接給与真菌及びこれらの組み合わせを包含する。
好ましくは、ＤＦＭは、直接給与細菌である。
好ましくは、ＤＦＭは、２種以上の細菌、例えば、３種以上若しくは４種以上の細菌を含む組み合わせであり、又はＤＦＭは、２種以上の細菌株、例えば、３種以上若しくは４種以上の細菌株を含む組み合わせである。
好ましくは、これらの単独種又は複数種の細菌は、単離されたものである。
【００６２】
好適には、ＤＦＭは、次の属、即ち、ラクトバチルス（Lactobacillus）、ラクトコッカス（Lactococcus）、ストレプトコッカス（Streptococcus）、バチルス（Bacillus）、ペディオコッカス（Pediococcus）、エンテロコッカス（Enterococcus）、ロイコノストック（Leuconostoc）、カルノバクテリウム（Carnobacterium）、プロピオニバクテリウム（Propionibacterium）、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）、クロストリジウム（Clostridium）、メガスフェラ（Megasphaera）及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上に由来する細菌を含むことができる。
【００６３】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、以下のバチルス菌種、即ち、バチルス・サブチリス、バチルス・セレウス、バチルス・リケニフォルミス及びバチルス・アミロリケファシエンスから選択されることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭはバチルス菌株であることができる。
【００６４】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、バチルス・サブチリスBS18（NRRL B-50633）、バチルス・サブチリスBS278（NRRL 50634）、バチルス・サブチリス4-7d（NRRL B-50505）、バチルス・サブチリス3-5h（NRRL B-50507）、バチルス・サブチリスAGTP BS3BP5（NRRL B-50510）、バチルス・サブチリスBS918（NRRL B-50508）、バチルス・サブチリスAGTP  BS1013（NRRL-50509）、バチルス・サブチリスAGTP 944（NRRL B-50548）、バチルス・サブチリスAGTP BS442（NRRL B-50542）、バチルス・サブチリスAGTP BS1069（NRRL B-50542）、バチルス・サブチリスAGTP BS521（NRRL B-50545）、バチルス・サブチリスBS2084（NRRL B-50013）、バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）、バチルス・サブチリスB27（NRRL B-50105）、バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）、バチルス・サブチリス15A-P4（PTA-6507）、バチルス・サブチリス22C-P1（PTA-6508）、バチルス・サブチリスBL21（NRRL B-50134）及びこれらの組み合わせからなる群から選ばれることができる。
疑義を避けるために、バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）は、BS-8（バチルス・サブチリス８）菌株と呼ばれることもある。
【００６５】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、バチルス・プミルス（Bacillus pumilus）菌株AGTP BS1068（NRRL B-50543）、バチルス・プミルス（Bacillus pumilus）KX11-1（NRRL B-50546）及びこれらの組み合わせからなる群から選ばれることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、バチルス・リケニフォルミスBL21（NRRL B-50134）、バチルス・リケニフォルミス 3-12a（NRRL B-50504）、バチルス・リケニフォルミス4-2a（NRRL B-50506）及びバチルス・リケニフォルミス842（NRRL B-50516）からなる群から選ばれることができる。
【００６６】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、２種以上のバチルス菌株を含む組み合わせであることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、２種以上のバチルス・サブチリス菌株3A-P4（PTA-6506）、15A-P4（PTA-6507）、22C-P1（PTA-6508）、2084（NRRL B-500130）、LSSA01（NRRL B-50104）、B27（NRRL B-50105）、BS18（NRRL B-50633）及びBS278（NRRL 50634）の組み合わせであることができる。
【００６７】
好ましい実施態様では、ＤＦＭは、以下の組み合わせのうちの１つを含む（又はから本質的に成る又はから成る）ことができる。
・バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）＋バチルス・サブチリスBS18（NRR L B-50633）＋バチルス・サブチリス22C-P1（PTA-6508）、又は
・バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）＋バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）＋バチルス・サブチリスBS2084（NRRL B-50013）、又は
・バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）＋バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）＋バチルス・サブチリスBS2084（NRRL B-50013）＋バチルス・サブチリス15A-P4（PTA-6507）、又は
・バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）＋バチルス・サブチリス22C-P1（PTA-6508）＋バチルス・サブチリスＢＳ2084（NRRL B-50013）、又は
・バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）＋バチルス・サブチリス15A-P4（PTA-6507）＋バチルス・サブチリスBS2084（NRRL B-50013）、又は
・バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）＋バチルス・サブチリスBS18（NRRL B-50633）＋バチルス・サブチリス22C-P1（PTA-6508）、又は
・バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）＋バチルス・サブチリスBS2084（NRRL B-50013）＋バチルス・サブチリスBS278（NRRL 50634）。
【００６８】
菌株3A-P4（PTA-6506）、15A-P4（PTA-6507）及び22C-P1（PTA-6508）は、米国培養菌保存施設（ATCC）から一般に入手可能である。
菌株2084（NRRL B-500130）、LSSA01（NRRL-B-50104）及びBS27（NRRL B-50105）は、農業研究事業団菌株保存施設（NRRL）から一般に入手可能である。菌株バチルス・サブチリスLSSA01は、バチルス・サブチリス８と呼ばれることもある。
これらの菌株は、米国特許第7,754,469 B2号に教示されている。
【００６９】
米国、郵便番号53186、ウィスコンシン州、ウォーキシャ、ウェストマウンドドライブW227 N752 のDanisco USA社はまた、以下の寄託物をブダペスト条約に従って、米国、郵便番号61604、イリノイ州、ピオリア、ノースユニバーシティ通り、1815の農業研究事業団菌株保存施設（NRRL）に、下に詳述した最初の寄託日及び登録番号をもって寄託した。
2015530876.tif 000002
【００７０】
米国、郵便番号53186、ウィスコンシン州、ウォーキシャ、ウェストマウンドドライブ、W227 N752 のDanisco USA社は、デンマーク国、コペンハーゲンK、DK-1001、私書箱17、Langebrogade 1のDuPont Nutrition Bioscience社に、これらの寄託された生体物質の全てを本特許出願に記載することを許可し、かつ、これらの寄託された物質を一般に入手可能にすることに非留保かつ取消不能の同意を与えた。
【００７１】
いくつかの実施態様では、ＤＦＭは、下の表に詳述されたバチルス・サブチリス菌株を含む組み合わせであることができる。
2015530876.tif 000003
【００７２】
１つの実施態様では、ＤＦＭはラクトコッカス種から選ばれることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、ラクトコッカス種、即ち、ラクトコッカス・クレモリス（Lactococcus cremoris）及びラクトコッカス・ラクティス及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上から選ばれることができる。
【００７３】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、以下の菌株又はこれらの組み合わせから成る群から選ばれることができる。
2015530876.tif 000004
【００７４】
１つの実施態様では、ＤＦＭはラクトバシルス種であることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは以下のラクトバチルス種、即ちラクトバチルス・ブフネリ（Lactobacillus buchneri）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチルス・カセイ、ラクトバチルス・ケフィリ（Lactobacillus kefiri）、ラクトバチルス・ビフィダス（Lactobacillus bifidus）、ラクトバチルス・ブレビス、ラクトバシラス・へルベティカス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバチルス・パラカセイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバチルス・ラムノサス、ラクトバチルス・サリバリウス、ラクトバチルス・クルバタス（Lactobacillus curvatus）、ラクトバシラス・ブルガリカス（Lactobacillus bulgaricus）、ラクトバチルス・サケイ（Lactobacillus sakei）、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトバチルス・フェルメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Lactobacillus farciminis）、ラクトバチルス・ラクチス、ラクトバチルス・デルブリッキイ（Lactobacillus delbreuckii）、ラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・パラプランタルム（Lactobacillus paraplantarum）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Lactobacillus farciminis）、ラクトバチルス・ラムノサス、ラクトバチルス・クリスパータス（Lactobacillus crispatus）、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）、ラクトバチルス・ジョンソニイ、ラクトバチルス・ジェンセニイ及びこれらの任意の組み合わせから選ばれることができる。
【００７５】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、以下の菌株又はこれらの組み合わせから成る群から選ばれることができる。
2015530876.tif 000005
【００７６】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、以下の菌株、即ちラクトバチルス・ラムノサスCNCM I-3698及びラクトバチルス・ファルシミニスCNCM I-3699のうちの１つ以上から選ばれることができる。これらの菌株は、2006年12月8日に仏国、Allonnes、72700、Spray通りのSorbial社によって仏国、Cedex 15、パリ、F75724、Docteur Roux通り、25の国立微生物株寄託設備（CNCM）に寄託され、これらの寄託物の全ての権利、所有権及び利益はその後、仏国、パリ、75017、Brunel通り、20のDanisco France社に移転された。
Danisco France社は、デンマーク国、コペンハーゲンK、DK-1001、私書箱17、Langebrogade 1のDuPont Nutrition Bioscience社に、これらの寄託された生体物質を本特許出願に記載することを許可し、かつ、これらの寄託された物質を一般に入手可能にすることに非留保かつ取消不能の同意を与えた。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、Danisco Animal Nutrition社から入手可能なSorbiflore（商標）製品であることができる。
【００７７】
１つの実施態様では、ＤＦＭはペデイオコッカス属由来のものであることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは次のペデイオコッカス菌種、即ちペディオコッカス・アシディラクティシ、例えばペディオコッカス・アシディラクティシ菌株のPIJe3（NRRL B-50101）及びo246e42（NRRL B-50171）のうちの１つ以上に由来するものであることができる。
【００７８】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、以下のビフィドバクテリウム菌種、即ちビフィドバクテリウム・ラクティス（Bifidobacterium lactis）、ビフィドバクテリウム・ビフィジウム（Bifidobacterium bifidium）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）、ビフィドバクテリウム・ブレベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）、ビフィドバクテリウム・カテヌラタム（Bifidobacterium catenulatum）、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、ビフィドバクテリウム・アングラタム（Bifidobacterium angulatum）及びこれらのいずれかの組み合わせから選ばれることができる。
【００７９】
１つの実施態様では、ＤＦＭはエンテロコッカス菌種であることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭはエンテロコッカス・ファエシウム菌種由来のものであることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、エンテロコッカス・ファエシウムEF141（EN-1）（NRRL B-30981）、エンテロコッカス・ファエシウム2-1d（NRRL B-50519）及びこれらの組み合わせから成る群から選ばれることができる。
【００８０】
１つの実施態様では、ＤＦＭはプロプリオンバクテリウム（Proprionbacterium）属由来のものであることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、以下のプロプリオンバクテリウム菌種、即ちプロプリオンバクテリウム・アシジプロピオニシ（Proprionbacterium acidipropionici）、プロプリオンバクテリウム・ジェンセニイ（Propionibacterium jensenii）及びこれらの組み合わせから成る群から選ばれることができる。
【００８１】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、以下のプロプリオンバクテリウム菌種又はこれらの組み合わせから成る群から選ばれることができる。
2015530876.tif 000006
【００８２】
好適には、ＤＦＭは、以下の菌種、即ちバチルス・サブチリス、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・アミロリケファシエンス、エンテロコッカス・ファエシウム、エンテロコッカス菌種及びペディオコッカス菌種、ラクトバチルス菌種、ビフィドバクテリウム菌種、ラクトバチルス・アシドフィルス、ペディオコッカス・アシディラクティシ、ラクトコッカス・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、バチルス・サブチリス、プロピオニバクテリウム・ソエニイ（Propionibacterium thoenii）、ラクトバチルス・ファルシミニス、ラクトバチルス・ラムノサス、メガスフェラ・エルスデニイ（Megasphaera elsdenii）、クロストリジウム・ブチリカム、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種アニマリス、ラクトバチルス・ロイテリ、バチルス・セレウス、ラクトバチルス・サリバリウス亜種サリバリウス、プロピオニバクテリウム菌種及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上に由来する細菌を含むことができる。
【００８３】
本発明で使用される直接給与細菌は、同じタイプ（属、菌種及び菌株）のものであることができ、又は属、菌種及び／又は菌株の混合物を含むこともできる。
好適には、本発明によるＤＦＭは、下記の表にあるような製品に含まれている製品又は微生物のうちの１つ以上であることができる。
2015530876.tif 000007
2015530876.tif 000008
【００８４】
１つの実施態様では、好適には、ＤＦＭはEnviva Pro（商標）であることができる。
Enviva Pro（商標）は、Danisco社から商業的に入手でき、バチルス菌株2084登録番号NRRL B-50013、バチルス菌株LSSA01登録番号NRRL B-50104及びバチルス菌株15A-P4  ATCC登録番号PTA-6507の組合わせである（米国特許第7,754,469 Bで教示される通りである。この米国特許は参照によって本明細書に組込まれる。）。
【００８５】
１つの実施態様では、ＤＦＭはバチルス・リケニフォルミスBL21（NRRL B-50134）であることができる。
米国、郵便番号53186、ウィスコンシン州、ウォーキシャ、ウェストマウンドドライブW227  N752 のAgTech  Products社は、以下の生物寄託物をブダペスト条約に従って、農業研究事業団菌株保存施設（NRRL）に、下に詳述した最初の寄託日及び登録番号をもって寄託した。
2015530876.tif 000009
【００８６】
AgTech Products社は、デンマーク国、コペンハーゲンK、DK-1001、私書箱17、Langebrogade 1のDuPont  Nutrition  Biosciences社に、これらの寄託された生体物質の全てを本特許出願に記載することを許可し、かつ、これらの寄託された物質を一般に入手可能にすることに非留保かつ取消不能の同意を与えた。
米国、郵便番号53186、ウィスコンシン州、ウォーキシャ、ウェストマウンドドライブW227 N752 のAgTech  Products社は、以下の生物寄託物をブダペスト条約に従って、米国、郵便番号20110-2209、バージニア州、マナッサスの米国培養菌保存施設（ATCC）（PTA参照物）又は農業研究事業団菌株保存施設（NRRL参照物）に、下に詳述した最初の寄託日及び登録番号をもって寄託した。これらの菌株は、下の表に列挙された特許において引用されており、それ自体一般に入手可能な菌株である。
2015530876.tif 000010
【００８７】
１つの実施態様では、本発明で使用されるＤＦＭは、バチルス・サブチリスBS18（NRRL B-50633）、バチルス・サブチリスBS278（NRRL 50634）、バチルス・サブチリス4-7d（NRRL B-50505）、バチルス・サブチリス3-5h（NRRL B-50507）、バチルス・サブチリスAGTP BS3BP5（NRRL B-50510）、バチルス・サブチリスBS918（NRRL B-50508）、バチルス・サブチリスAGTP BS1013（NRRL-50509）、バチルス・サブチリスAGTP 944（NRRL B-50548）、バチルス・サブチリスAGTP BS442（NRRL B-50542）、バチルス・サブチリスAGTP BS1069（NRRL B-50544）、バチルス・サブチリスAGTP  BS521（NRRL B-50545）、バチルス・サブチリスBS2084（NRRL B-50013）、バチルス・サブチリスLSSA01（NRRL B-50104）、バチルス・サブチリスB27（NRRL B-50105）、バチルス・サブチリス3A-P4（PTA-6506）、バチルス・サブチリス15A-P4（PTA-6507）、バチルス・サブチリス22C-P1（PTA-6508）、バチルス・サブチリスBL21（NRRL B-50134）、バチルス・リケニフォルミスBL21（NRRL B-50134）、バチルス・リケニフォルミス 3-12a（NRRL B-50504）、バチルス・リケニフォルミス4-2a（NRRL B-50506）、バチルス・リケニフォルミス842（NRRL B-50516）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシ（Propionibacterium acidipropionici） P261（NRRL B-50131）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP179（NRRL B-50133）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP169（PTA 5271）、プロピオニバクテリウム・アシジプロピオニシP170（PTA 5272）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイ（Propionibacterium jensenii ）P63（NRRL B-30979）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニイP195（NRRL B-50132）、ラクトコッカス・ラクティスID7（PTA 6103）、ラクトコッカス・ラクティスJD19（PTA 6104）、ラクトバシルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus） A2020（NRRL B-30977）、ラクトバシルス・アシドフィラスA4000h（NRRL B-30978）、ラクトバシルス・アシドフィラスPIBc6（NRRL B-50103）、ラクトバシルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）LBR 1000（NRRL B-30982）、ラクトバシルス・カセイ（Lactobacillus casei） LC222（NRRL B-30983）、ラクトバシルス・ジョンソニイ（Lactobacillus johnsonii） PLCB6（NRRL B-50518）、ラクトバシルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius） o246i33w（NRRL B-50102）、ラクトバシルス・ブレビスAJ25（PTA-6099）、ラクトバシルス・ブレビスHE17（PTA-6100）、ラクトバシルス・ブレビス1E-1（PTA-6509）、ラクトバシラス・ラクティスCl15（PTA-6101）、ラクトバシラス・ラクティスDJ6（PTA-6102）、ラクトバシルス・ラムノサス（CNCM I-3698）、ラクトバシルス・ファルシミニス（CNCM I-3699）、エンテロコッカス・ファエシウムEF141（EN-1）（NRRL B-30981）、エンテロコッカス・ファエシウム2-1d（NRRL B-50519）、ペディオコッカス・アシディラクティシPIJe3（NRRL B-50101）、ペディオコッカス・アシディラクティシo246e42（NRRL B-50171）及びこれらの組み合わせから成る群から選ばれる。
【００８８】
好適には、ＤＦＭは、サッカロマイセス属由来の酵母を含むことができる。
【００８９】
好ましくは、本発明に従って使用されるべきＤＦＭは、安全なものとして一般に認識されている微生物であり、好ましくはＧＲＡＳ（米国安全食品認定）認証を受けたものである。
食品産業及び／又は農産業で使用され、一般に動物消費に適していると考えられている、本明細書に記載された属内からの微生物の特定の種及び／又は菌株に、当業者は容易に気付くだろう。
好ましくは、本発明に従って使用されるＤＦＭは、動物消費に適しているものである。
【００９０】
好都合であるためには、製品が飼料又は飼料添加用組成物である場合に、生菌ＤＦＭは、その飼料又は飼料添加用組成物が小売り業者によって販売のための申し出がされる、その製品の通常の「販売」期限又は「消費」期限を通して有効であり続けなければならないことである。所望の期間及び通常の保存可能期間は飼料ごとに変化するものであり、当業者は、保存可能期間が飼料のタイプ、飼料のサイズ、貯蔵温度、処理条件、包装材料及び包装装置によって変化することを認識することができる。
【００９１】
いくつかの実施態様では、ＤＦＭは熱に耐えること、即ち耐熱性であることが重要である。これは飼料がペレットにされた場合に特にそうである。従って、１つの実施態様では、ＤＦＭは耐熱性の微生物、例えば耐熱性細菌、例としてバチルス属であるとよい。
【００９２】
いくつかの実施態様では、ＤＦＭが胞子形成細菌、例えばバチルス属、例としてバチルス菌種であることが好ましいことがある。バチルス属は、増殖条件が不利なときに安定な芽胞を形成することができ、また、熱、ｐＨ、湿分及び殺菌剤に非常に耐性がある。
【００９３】
１つの実施態様では、好適には、ＤＦＭは、病原性微生物（例えば、ウェルシュ菌及び／又は大腸菌及び／又はサルモネラ菌種及び／又はカンピロバクター菌種、好ましくはウェルシュ菌及び／又は大腸菌）の腸内増殖を減少し又は防止することができる。
【００９４】
本発明によるＤＦＭは任意の適当なＤＦＭであることができる。１つの実施態様では、以下のアッセイ「ＤＦＭアッセイ」が、微生物がＤＦＭであるための好適度を測定するために使用されることができる。疑義を避けるためにいうと、１つの実施態様では、本明細書に教示された「ＤＦＭアッセイ」に従って、抑制菌株（又は抗病原体）として選択されたＤＦＭは、本発明に従って使用するのに、即ち、本発明による飼料添加用組成物に使用するのに適したＤＦＭである。
【００９５】
ＤＦＭアッセイ
各試験管に、代表的なクラスターからの代表的な病原体が接種された。
好気的又は嫌気的に増殖された潜在的なＤＦＭの上清が、上記の接種された試験管に添加され、温置された。
温置後、各病原体について、対照及び上清処理を行った試験管の吸光度（ＯＤ）が測定された。
対照と比較して低いＯＤを示した（潜在的ＤＦＭの）菌株のコロニーが、阻害株（又は抗病原体ＤＦＭ）と分類された。
【００９６】
本明細書で使用されるＤＦＭアッセイは、米国特許出願公開第2009／0280090号にさらに詳細に説明されており、同号の内容は参照により本明細書に取り込まれる。
好ましくは、アッセイに使用される代表的な病原体は、クロストリジウム属、例えばウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）及び／又は大腸菌及び／又はサルモネラ菌種（Salmonella spp）及び／又はカンピロバクター菌種（Campylobacter spp）のうちの１種以上である。
１つの好ましい実施態様では、該アッセイは、ウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ及び／又は大腸菌のうちの１つ以上、好ましくはウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ、より好ましくはウェルシュ菌を用いて実施される。
【００９７】
１つの実施態様では、本発明のＤＦＭは好ましくは抗病原体である。
本明細書で使用される用語「抗病原体」は、ＤＦＭが病原体の作用（例えば、負の作用）に対抗することを意味する。
【００９８】
ＤＦＭが、本発明に規定される抗病原体であるか否かを評価する１つの実施態様では、上記のＤＦＭアッセイが使用されることができる。上記のＤＦＭアッセイにおいて、ＤＦＭが阻害株であると分類されるならば、とりわけその病原体がウェルシュ菌であるときは、該ＤＦＭは、抗病原体又は抗病原体ＤＦＭであると見なされる。
【００９９】
１つの実施態様では、抗病原体ＤＦＭは、以下の細菌、即ちバチルス・サブチリス菌株2084登録番号 NRRL B-50013、バチルス・サブチリス菌株LSSA01登録番号 NRRL B-50104、バチルス・サブチリス菌株15A-P4 ATCC登録番号PTA-6507、バチルス・サブチリス菌株3A-P4 ATCC登録番号PTA-6506及びバチルス・サブチリス菌株BS27 ATCC登録番号NRRL B-50105のうちの１つ以上であることができる。疑義を避けるためにいうと、これらの菌株は入手可能なものであり、米国特許第7,754,459B号に引用されている。
【０１００】
１つの実施態様では、本発明に従って使用されるＤＦＭは、国際公開第2008／016214号に教示されたラクトバチルス・ガセリ菌（Lactobacillus gasseri）BNR 17株  登録番号KCTC 10902BPではない。
好ましくは、ＤＦＭは、不活性化された微生物ではない。
【０１０１】
１つの実施態様では、本明細書で使用されるＤＦＭは、本明細書に記載されたＤＦＭ微生物を１種以上含む組成物である。該組成物は、本発明の酵素をさらに含むことができる。
この組成物は、直接給与微生物（ＤＦＭ）として動物に給与されることができる。
１種以上の担体又はその他の成分がＤＦＭに添加されることもできる。
ＤＦＭは、様々な物理的形態で、例えばトップドレスとして、又は液体ドレンチ剤として使用するための若しくは代用乳、ゼラチンカプセル若しくはゲルに加えられる水溶性濃縮物として、提供されることができる。
【０１０２】
トップドレス形態の１つの実施態様では、凍結乾燥された発酵産物が担体に、例えば、乳清、マルトデキストリン、スクロース、デキストロース、石灰石（炭酸カルシウム）、もみ殻、酵母培養物、乾燥デンプン及び／又はアルミノ珪酸ナトリウムに添加される。液体ドレンチ剤用又は代用乳添加剤用の水溶性濃縮物の１つの実施態様では、凍結乾燥させた発酵産物が、水溶性担体に、例えば、乳清、マルトデキストリン、スクロース、デキストロース、乾燥デンプン、アルミノ珪酸ナトリウムに添加され、液体が加えられてドレンチ剤とされるか、又は該添加剤が乳又は代用乳に加えられる。
【０１０３】
ゼラチンカプセル形態の１つの実施態様では、凍結乾燥させた発酵産物は、担体に、例えば、乳清、マルトデキストリン、糖、石灰石（炭酸カルシウム）、もみ殻、酵母培養物、乾燥デンプン及び／又はアルミノ珪酸ナトリウムに加えられる。
１つの実施態様では、微生物及び担体は、分解性ゼラチンカプセルに封入される。ゲル形態の１つの実施態様では、凍結乾燥させた発酵産物が、担体に、例えば植物油、スクロース、二酸化ケイ素、ポリソルベート８０、プロピレングリコール、ブチル化ヒドロキシアニソール、クエン酸、エトキシキン及び／又は合成着色料に加えられて、ゲルを形成する。
【０１０４】
ＤＦＭは、任意的に添加剤の乾燥製剤と混合されることができ、この乾燥製剤としては、増殖基質、酵素、糖、炭水化物、抽出物、及び増殖促進用微量成分が挙げられるが、これらに限定されない。該糖としては、ラクトース、マルトース、デキストロース、マルトデキストリン、ブドウ糖、フルクトース、マンノース、タガトース、ソルボース、ラフィノース及びガラクトースが挙げられる。糖は、個別に又は組み合わせで５０〜９５％の範囲にある。該抽出物としては、５〜５０％の範囲の酵母又は乾燥酵母発酵可溶物が挙げられよう。該増殖基質としては、５〜２５％の範囲のトリプチケース、５〜３０％の範囲の乳酸ナトリウム及び１〜５％の範囲のTween 80が挙げられる。該炭水化物としては、マニトール、ソルビトール、アドニトール及びアラビトールが挙げられる。炭水化物は、個別に又は組み合わせで５〜５０％の範囲にある。該微量成分としては、０．５〜５．０％の範囲の炭酸カルシウム、０．５〜５．０％の範囲の塩化カルシウム、０．５〜５．０％の範囲のリン酸二カリウム、０．５〜５．０％の範囲のリン酸カルシウム、０．２５〜１．００％の範囲のマンガンプロテイン及び０．２５〜１．０％の範囲のマンガンが挙げられる。
【０１０５】
本明細書に記載されたＤＦＭを調製するためには、培養物及び担体（使用される場合）がリボンミキサー又はパドルミキサーに加えられ、約１５分混合されることができる。もっとも、混合時間は増減させてもよい。各成分は、培養物及び担体の均一混合物が得られるように混合される。最終生成物は、好ましくは流動性の乾燥粉末である。次に、ＤＦＭ又はこれを含む組成物が、（好ましくは、本発明の酵素とともに同時に）動物用飼料又は飼料プレミックスに添加され、又は動物用飲用水に添加され、又は当該技術分野で知られた他の方法で投与されることができる。動物用飼料は、本明細書に記載された１つ以上のＤＭＦを補給され、又は本明細書に記載された組成物を補給されることができる。
【０１０６】
「少なくとも２種の株の混合物」とは、２、３、４、５、６又はさらにそれより多くの株の混合物を意味する。株の混合物のいくつかの実施態様では、各成分の割合は１％〜９９％で変化することができる。株の混合物の他の実施態様は２５％〜７５％である。株の混合物のさらなる実施態様は、各株について約５０％である。混合物が３種以上の株を含む場合、これらの株は混合物中に実質的に同じ割合で又は異なる比率で存在することができる。
【０１０７】
１つの実施態様では、ＤＦＭは、単離形態若しくは半単離形態で使用される生菌又は生存不能菌である。ＤＦＭは、それが培養される成長培地とともに又は成長培地なしで使用されることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、適当な培地上で成長するとコロニー形成単位を産生する能力がある。適当な培地は飼料又は飼料成分を含むことができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、適当な培地上で成長してもコロニー形成単位を産生する能力がない。適当な培地は飼料又は飼料成分を含むことができる。
ＤＦＭが適当な培地上で成長するとコロニー形成単位を産生する能力があるか否かにかかわらず、その細胞は（例えば、たとえそれが分裂することができなくても）依然として代謝的に活性であることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、無効菌として投与されることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、生菌として投与されることができる。
【０１０８】
ＤＦＭは適切に投与されることができる。
飼料へのＤＦＭの好適な用量は、約１×１０３ＣＦＵ／飼料ｇ〜約１×１０９ＣＦＵ／飼料ｇ、好適には約１×１０４ＣＦＵ／飼料ｇ〜約１×１０８ＣＦＵ／飼料ｇ、好適には約７．５×１０４ＣＦＵ／飼料ｇ〜約１×１０７ＣＦＵ／飼料ｇであることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、飼料に約１×１０３ＣＦＵ／飼料ｇ超、好適には約１×１０４ＣＦＵ／飼料ｇ超、好適には約７．５×１０４ＣＦＵ／飼料ｇ超で配合される。
飼料添加用組成物へのＤＦＭの好適な用量は、約２×１０２ＣＦＵ／組成物ｇ〜約１×１０１０ＣＦＵ／組成物ｇ、好適には約１×１０３ＣＦＵ／組成物ｇ〜約１×１０１０ＣＦＵ／組成物ｇ、好適には約１×１０４ＣＦＵ／組成物ｇ〜約１×１０９ＣＦＵ／組成物ｇ、好適には約３．７５×１０４ＣＦＵ／組成物ｇ〜約３×１０８ＣＦＵ／組成物ｇであることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭは、飼料添加用組成物に約１×１０５ＣＦＵ／組成物ｇ超、好適には約１×１０６ＣＦＵ／組成物ｇ超、好適には約３．７５×１０７ＣＦＵ／組成物ｇ超で添加される。
本明細書で使用される用語「ＣＦＵ」とは、コロニー形成単位を意味し、単一の前駆細胞から分裂した細胞の凝集塊に相当するコロニー中の生菌数の尺度である。
【０１０９】
フィターゼ
本明細書で使用される用語「フィターゼ」とは、フィテート及びフィチン酸を包含するリン酸のエステルの加水分解を触媒して、無機リン酸塩を放出する酵素（即ち、フィターゼ活性を有するポリペプチド）をいう。
本発明で使用されるフィターゼは（E.C.3.1.3.26に分類される）６−フィターゼ又は（E.C.3.1.3.8に分類される）３−フィターゼに分類されることができる。
１つの実施態様では、フィターゼは（E.C.3.1.3.26に分類される）６−フィターゼであることができる。
【０１１０】
１つの好ましい実施態様では、本発明で使用されるフィターゼは、以下の商品の１つ以上におけるフィターゼの１種以上であることができる。
2015530876.tif 000011
【０１１１】
本明細書で使用される用語「コンセンサス遺伝子」とは、有機体を形質転換するために使用されるＤＮＡベクトルが、コンセンサス配列に基づいた合成フィターゼ遺伝子、非病原性酵母サッカロマイセス・セレビジエからのＵＲＡ遺伝子及び大腸菌プラスミドpBR322の複製起点を含むことを意味する。
【０１１２】
１つの実施態様では、フィターゼはシトロバクター・フィターゼであり、例えばシトロバクター・フロインディ（Citrobacter freundii）、好ましくはシトロバクター・フロインディNCIMB 41247及びその変異体、例えば、国際公開第2006/038062号（参照によって本明細書に取り込まれる。)及び国際公開第2006/038128号（参照によって本明細書に取り込まれる。)に開示されたようなもの、国際公開第2004/085638号に開示されたシトロバクター・ブラアキイYH-15、国際公開第2006/037328号（参照によって本明細書に取り込まれる。)に開示されたシトロバクター・ブラアキイATCC 51113、並びにこれらの変異体、例えば、国際公開第2007/112739号（参照によって本明細書に取り込まれる。)及び国際公開第2011/117396号（参照によって本明細書に取り込まれる。) に開示されたもの、シトロバクター・アマロナチカス（Citrobacter amalonaticus）、好ましくは国際公開第2006037327号（参照によって本明細書に取り込まれる。) に開示されたシトロバクター・アマロナチカスATCC 25405又はシトロバクター・アマロナチカスATCC 25407、シトロバクター・ギレニイ（Citrobacter gillenii）、好ましくは国際公開第2006037327号（参照によって本明細書に取り込まれる。) に開示されたシトロバクター・ギレニイDSM 13694、又はシトロバクター・インテルメディウス（Citrobacter intermedius）、シトロバクター・コセリ（Citrobacter koseri）、シトロバクター・ムルリニエ（Citrobacter murliniae）、シトロバクター・ローデンチウム（Citrobacter rodentium）、シトロバクター・セドラッキイ（Citrobacter sedlakii）、シトロバクター・ウェルクマニイ（Citrobacter werkmanii）、シトロバクター・ヤンガエ（Citrobacter youngae）、シトロバクター菌種ポリペプチド又はこれらの変異体に由来するものである。
【０１１３】
１つの実施態様では、フィターゼはシトロバクター由来のフィターゼ、例えばシトロバクター・フロインディ由来、例えば国際公開第2006/038128号に教示されたフィターゼ酵素であることができ、その内容は参照によって本明細書に取り込まれる。
好ましい実施態様では、フィターゼは、好ましくはDanisco社によってPhyzyme XP（商標）の名の下で販売された大腸菌フィターゼである。
【０１１４】
あるいは、フィターゼはブティアウクセラ・フィターゼ、例えばブティアウクセラ・アグレチス（Buttiauxella agrestis） フィターゼ、例として国際公開第2006/043178号、国際公開第2008/097619号、国際公開第2009/129489号、国際公開第2006/038128号、国際公開第2008/092901号、国際出願第PCT/US2009/41011号又は国際出願第PCT/IB2010/051804号に教示されたフィターゼ酵素であることができ、これらの内容の全ては参照によって本明細書に取り込まれる。
【０１１５】
１つの態様では、使用される酵素は、BP17又は配列番号１若しくは配列番号２若しくはこれらの変異体、例えばこれらと少なくとも７０％の同一性を有する、好ましくはこれらと少なくとも７５％の同一性を有する、好ましくはこれらと少なくとも８０％の同一性を有する、好ましくはこれらと少なくとも８５％の同一性を有する、好ましくはこれらと少なくとも９０％の同一性を有する、好ましくはこれらと少なくとも９５％の同一性を有する、好ましくはこれらと少なくとも９６％の同一性を有する、好ましくはこれらと少なくとも９７％の同一性を有する、好ましくはこれらと少なくとも９８％の同一性を有する、好ましくはこれらと少なくとも９９％の同一性を有する配列に示されたポリペプチドである。BP17はブティアウクセラ菌種フィターゼの酵素であり、例えば国際公開第2008/0976619号に記載されており、この内容は参照によって本明細書に取り込まれる。
【０１１６】
１つの実施態様では、使用される酵素はBP17であり、例えば国際公開第2008/0976619号に記載されている。BP17はブティアウクセラ菌種フィターゼの酵素変異体である。
BP17の配列（シグナルペプチドを除く。）は配列番号１として示される。シグナルペプチド（下線部）を含むBP17の配列は配列番号２として示される。
【０１１７】
配列番号１：
NDTPASGYQVEKVVILSRHGVRAPTKMTQTMRDVTPNTWPEWPVKLGYITPRGEHLISLMGGFYRQKFQQQGIL
SQGSCPTPNSIYVWTDVAQRTLKTGEAFLAGLAPQCGLTIHHQQNLEKADPLFHPVKAGICSMDKTQVQQAVEK
EAQTPIDNLNQHYIPSLALMNTTLNFSKSPWCQKHSADKSCDLGLSMPSKLSIKDNGNEVSLDGAIGLSSTLAEIFL
LEYAQGMPQAAWGNIHSEQEWALLLKLHNVYFDLMERTPYIARHKGTPLLQAISNALNPNATESKLPDISPDNKIL
FIAGHDTNIANIAGMLNMRWTLPGQPDNTPPGGALVFERLADKSGKQYVSVSMVYQTLEQLRSQTPLSLNQPAG
SVQLKIPGCNDQTAEGYCPLSTFTRVVSQSVEPGCQLQ
【０１１８】
配列番号２：
MTISAFNRKKLTLHPGLFVALSAIFSLGSTAYANDTPASGYQVEKVVILSRHGVRAPTKMTQTMRDVTPNTWPE
WPVKLGYITPRGEHLISLMGGFYRQKFQQQGILSQGSCPTPNSIYVWTDVAQRTLKTGEAFLAGLAPQCGLTIHH
QQNLEKADPLFHPVKAGICSMDKTQVQQAVEKEAQTPIDNLNQHYIPSLALMNTTLNFSKSPWCQKHSADKSCD
LGLSMPSKLSIKDNGNEVSLDGAIGLSSTLAEIFLLEYAQGMPQAAWGNIHSEQEWALLLKLHNVYFDLMERTPYI
ARHKGTPLLQAISNALNPNATESKLPDISPDNKILFIAGHDTNIANIAGMLNMRWTLPGQPDNTPPGGALVFERLAD
KSGKQYVSVSMVYQTLEQLRSQTPLSLNQPAGSVQLKIPGCNDQTAEGYCPLSTFTRVVSQSVEPGCQLQ
【０１１９】
１つの実施態様では、フィターゼはAxtraPHY（商標）である。
AxtraPHY（商標）フィターゼは、本明細書ではBP17 フィターゼとしても示されている。
１つの実施態様では、フィターゼはハフニア属（Hafnia）由来のフィターゼ、例えばハフニア・アルベイ（Hafnia alvei）由来のフィターゼ、例として米国特許出願公開第2008263688号に教示されたフィターゼ酵素であることができ、その内容は参照によって本明細書に取り込まれる。
１つの実施態様では、フィターゼはアスペルギルス属由来のフィターゼ、アスペルギルス・オリゼ由来のフィターゼであることができる。
１つの実施態様では、フィターゼはペニシリウム属由来のフィターゼ、例えばペニシリウム・フニクロサム由来のフィターゼであることができる。
【０１２０】
用語「フィターゼ」は、文脈から明らかに他様に指定されない限り、１種のフィターゼ又はフィターゼの組み合わせであることができる。
【０１２１】
好ましくは、フィターゼは、飼料中に約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約２００００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で、好適には約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約１００００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で、好適には約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約５０００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で、好適には約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約３０００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で、より好ましくは約２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約２００００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で、好適には約２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約１００００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で、好適には約２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約５０００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で、好適には約２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約３５００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で存在する。
【０１２２】
１つの実施態様では、フィターゼは、飼料中に約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超で、好適には約２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超で、好適には約３０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超で存在する。
１つの実施態様では、フィターゼは、飼料中に約１５０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ未満で、好適には約１２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ未満で存在する。
１つの実施態様では、フィターゼは、飼料中に約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約５０００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で存在する。
１つの実施態様では、フィターゼは、飼料中に約２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約５０００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で存在する。
【０１２３】
１つの好ましい実施態様では、フィターゼは、飼料中に約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約３０００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で存在する。
１つのはるかに好ましい実施態様では、フィターゼは、飼料中に約２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ〜約３０００ＦＴＵ／飼料ｋｇの範囲で存在する。
【０１２４】
１つの実施態様では、フィターゼは、飼料添加用組成物中に以下の量で存在することができる。
ａ．飼料中に配合される組成物が（例えば、メーカーの推奨配合量として）５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）以上であるときは、約３０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｂ．飼料中に配合される組成物が（例えば、メーカーの推奨配合量として）７５ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）以上であるときは、約２０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｃ．飼料中に配合される組成物が（例えば、メーカーの推奨配合量として）１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）以上であるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｄ．飼料中に配合される組成物が（例えば、メーカーの推奨配合量として）１００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）以上であるときは、約１５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｅ．飼料中に配合される組成物が（例えば、メーカーの推奨配合量として）１５０ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）以上であるときは、約１０，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、
ｆ．飼料中に配合される組成物が（例えば、メーカーの推奨配合量として）２００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）以上であるときは、約７，５００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で、及び
ｇ．飼料中に配合される組成物が（例えば、メーカーの推奨配合量として）３００ｇ／飼料メートルトン（ＭＴ）以上であるときは、約５，０００ＦＴＵ／組成物ｇ以上で。
【０１２５】
好適には、フィターゼが上に示された配合量で飼料添加用組成物中に存在するときは、直接供与微生物は、２．５ｘ１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜６．７ｘ１０６ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲で、好適には３．８ｘ１０３ＣＦＵ ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜２．０ｘ１０５ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲で飼料添加用組成物中に存在する。
【０１２６】
本明細書で使用される「１ＦＴＵ（フィターゼ単位）」とは、ISO 2009フィターゼアッセイ（フィターゼ活性及び１ＦＴＵを決定するための標準アッセイであり、国際基準ISO/DIS 30024: 1-17, 2009に見出すことができる。）に規定された反応条件の下で基質から１分間に１μmolのオルトリン酸塩を放出するのに必要な酵素の量として定義されることは理解されよう。
１つの実施態様では、好適には、酵素は上記のE.C.分類を使用して分類され、該E.C.分類は、１ＦＴＵを決定するために本明細書に教示された当該アッセイで試験されたときにその活性を有する酵素を指定する。
【０１２７】
利点
酵素とＤＦＭとの交互作用は複雑であり、理論によって拘束されることを望むわけではないが、本発明社らが壊死性腸炎に対する対象動物の耐性の改善を認めることができるのは非常に驚くべきことである。本発明以前には、ＤＦＭと高用量フィターゼとの特定の組み合わせ（例えば、本明細書で教示するようなもの）は、この特定の目的のために教示されたことはなかった。
上記に加えて又は上記とは別に、動物の性能、例えば飼料要求率の点においても、フィターゼが１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇを超えて投与されると、ＤＦＭ（例えば、抗病原体ＤＦＭ）とフィターゼとの組み合わせには相乗効果がある。
フィターゼが単独で補給されるときは、５００及び１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇでは、性能（即ち、ＦＣＲの減少）の増加があり、フィターゼ投与量が約１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇを超えるときは、性能の減少（即ち、ＦＣＲの増加）がある。これは、壊死性腸炎への曝露の状態では特にその通りである。
【０１２８】
しかし、ＤＦＭが、１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超のフィターゼとの併用で加えられると、フィターゼ単独の処理と比較して、一貫して性能の数値上の増加（即ち、ＦＣＲの減少）がある。３０００ＦＴＵ／飼料ｋｇから１０，０００ＦＴＵ／飼料ｋｇのレベルの間では、数値上の大きい減少があり、これは全ての処理群の中で最低のＦＣＲをもたらす。驚いたことに、ＤＦＭ（特に抗病原体ＤＦＭ）と１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超のフィターゼとの組み合わせは、組み合わせによる相乗効果をもたらす。
【０１２９】
本発明の利点は、ＤＦＭ（例えば抗病原体ＤＦＭ）と高用量フィターゼとの組み合わせが、フィターゼの効能を有意に改善して動物性能及び／又は対象動物のリン保持率を改善するということである。
本発明のさらなる利点は、ＤＦＭ（例えば抗病原体ＤＦＭ）と高用量フィターゼとの組み合わせが、対象動物のリン（例えば、食餌性リン）吸収率及び保持率を改善することである。この組み合わせの効果は、全く予想外のことであった。
本発明の１つの利点は、本発明による飼料添加用組成物が、壊死性腸炎の負の効果を回避することができ、又は対象動物の壊死性腸炎に対する耐性の改善のために使用されることができるということである。
【０１３０】
理論に束縛されることを望むわけではないが、フィターゼはフィテートの、即ち穀物及び豆類中のリンの主要な貯蔵形態の、より低度にリン酸化されたミオイノシトール誘導体にまでの逐次的加水分解を触媒して、同時に無機リン酸塩を放出するといえる。フィテートの加水分解は、腸管腔中のアミノ酸の内因性損失の減少を引き起こす。腸における内因性アミノ酸損失の減少は、細菌が増殖するための窒素の可用性を低減させ、これは、ウェルシュ菌及び他の病原菌の抑制に対するＤＦＭの活動を助ける。
【０１３１】
理論に束縛されることを望むわけではないが、フィターゼ酵素を添加しフィテートを加水分解することは、小腸（十二指腸、空腸及び／又は回腸)のｐＨの増加をもたらす可能性があるといえる。フィターゼは、実際には大腸菌及びウェルシュ菌の細菌量を増加させる可能性もある。このことは、より高いｐＨに関連しているのかも知れない。本発明者らは、ＤＦＭ（特に、抗病原体ＤＦＭ）とともに高用量のフィターゼを添加すると、病原性細菌の増加を相殺できる可能性があることを見出した。
【０１３２】
高用量のフィターゼは、動物の消化管内のフィチン酸の加水分解を増加させ、このことは、リン、カルシウム、エネルギー、タンパク質及び他の栄養素の消化率の増加並びに可能性としての動物性能の増加という利点を有することができる。しかしながら、驚いたことに、本発明者らは、臨床的又は無症状的な腸疾病への曝露、例えば、ブロイラーの壊死性腸炎（これは商業的な動物の生産においては普通に発生することである。）が存在するときは、高用量のフィターゼでは栄養素の消化率及び動物の性能への潜在的な改善を達成することができないことを見出した。抗病原性ＤＦＭと高用量のフィターゼとを組み合わせることによって、本発明者らは驚いたことに、非常に高用量のフィターゼ（例えば、１０，０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ）においてさえ、動物の性能がさらに高められることを見出した。
【０１３３】
ＤＦＭと高用量のフィターゼとの組み合わせは、驚くべきことに、標準的な(低い)フィターゼ投与量と組み合わされたＤＦＭ及び／又はＤＦＭ単独及び／又は酵素単独（高用量のフィターゼでさえ）と比較して、病原体の減小及び／又は壊死性腸炎に対する耐性及び／又は飼料要求率及び／又は体重増加量及び／又は対象動物の性能及び／又は糞尿への栄養素の排出の低減に関して著しい改善をもたらす。
【０１３４】
ＤＦＭと酵素との配合物
ＤＦＭと酵素とは、この配合物が生菌ＤＦＭ及び活性酵素を含むことを確実にするように、任意の適当な方法で配合されることができる。
１つの実施態様では、ＤＦＭ及び酵素は、液体、乾燥粉体又は顆粒として配合されることができる。
乾燥粉体又は顆粒は、当業者に知られた手段によって、例えばトップスプレー流動床コーターで、ボトムスプレーWurster式顆粒法で又はドラム顆粒法（例えば、高せん断顆粒法）によって、押出、パンコーティング又は微量成分ミキサーによって、調製されることができる。
【０１３５】
いくつかの実施態様の場合、ＤＦＭ及び／又は酵素は、コーテイングで被覆され、例えばカプセル封入されることができる。
好適には、ＤＦＭ及び酵素は、同じコーティング内に配合され又は同じカプセル内にカプセル封入されることができる。あるいは、酵素は１層のコーティング内に配合され又は１個のカプセル内にカプセル封入され、そしてＤＦＭが酵素とは別のコーティング内に配合されることができる。いくつかの実施態様では、例えばＤＦＭが内生胞子を産生することができる態様では、ＤＦＭは何らのコーティングも受けずに提供される。このような状況では、ＤＦＭ内生胞子は酵素と単に混合されることができる。後者の場合、酵素はコーテイングで被覆され、例えばカプセル封入されることができる。
１つの実施態様では、コーティングは熱から酵素を保護するので、熱保護体（thermoprotectant）とみなされることができる。
【０１３６】
１つの実施態様では、飼料添加用組成物は乾燥粉体又は顆粒に製剤され、例えば、国際公開第2007/044968号（ＴＰＴ顆粒と呼ばれている。）又は国際公開第1997/016076号若しくは国際公開第WO1992/012645号（これらの各々は参照によって本明細書に取り込まれる）に記載されている。
１つの実施態様では、飼料添加用組成物は、コア、活性剤及び少なくとも１層のコーティングを含む飼料組成物用の顆粒に製剤されることができ、該顆粒の活性剤は、ａ）飼料ペレット化工程、ｂ）スチーム加熱飼料前処理工程、ｃ）貯蔵、ｄ）非ペレット化混合物中の成分としての貯蔵、及びｅ）微量ミネラル、有機酸、還元糖、ビタミン、塩化コリンから選ばれた少なくとも１種の化合物及び酸性又は塩基性飼料ベースミックス又は飼料プレミックスをもたらす化合物を含む飼料ベースミックス又は飼料プレミックス中の成分としての貯蔵、のうちの１つ以上から選ばれた条件の後に少なくとも５０％の活性、少なくとも６０％の活性、少なくとも７０％の活性、少なくとも８０％の活性を保持する。  
【０１３７】
顆粒に関しては、少なくとも１層のコーティングは該顆粒の少なくとも５５重量％を構成する湿分水和物質を含むことができ、及び／又は少なくとも１層のコーティングは２層のコーティングを含むことができる。該２層のコーティングは、湿分水和コーティング及び防湿コーティングであることができる。いくつかの実施態様では、湿分水和コーティングは顆粒の２５重量％〜６０重量％であることができ、防湿コーティングは顆粒の２重量％〜１５重量％であることができる。湿分水和コーティングは無機塩、スクロース、デンプン及びマルトデキストリンから選ばれることができ、防湿コーティングはポリマー、ゴム、乳清及びデンプンから選ばれることができる。
【０１３８】
顆粒は、飼料ペレット化工程を使用して製造されることができ、また飼料前処理工程は、数分間７０℃〜９５℃で、例えば８５℃〜９５℃で実施されることができる。
１つの実施態様では、飼料添加用組成物は、コア、活性剤（該活性剤が成分であるときに、貯蔵後及びスチ−ム処理ペレット化工程後に少なくとも８０％の活性を保持する該顆粒の活性剤)、防湿コーティング、及び湿分水和コーティング（該顆粒の少なくとも２５重量％）を含む家畜飼料用の顆粒に製剤されることができ、この顆粒はスチ−ム処理ペレット化工程前に０．５未満の水分活性を有する。
【０１３９】
顆粒は、ポリマー又はゴムから選ばれた防湿コーティングを有することができ、湿分水和物質は無機塩であることができる。湿分水和コーティングは顆粒の２５重量％〜４５重量％であることができ、防湿コーティングは顆粒の２重量％〜１０重量％であることができる。
顆粒は、数分間８５℃〜９５℃で実施されることができるスチ−ム処理ペレット化工程を使用して製造されることができる。
【０１４０】
いくつかの実施態様では、ＤＦＭ（例えば、ＤＦＭ内生胞子）は、希釈剤、例えばデンプン粉、石灰石等を使用して希釈されることができる。
１つの実施態様では、この組成物は消費に適した液状配合物中にあり、好ましくはこのような液状配合物は、緩衝液、塩、ソルビトール及び／又はグリセリンのうちの１種以上を含有する。
【０１４１】
別の実施態様では、飼料添加用組成物は、酵素を担体基質、例えば粉末小麦上に施与すること、例えばスプレーすることによって処方されることができる。
１つの実施態様では、本発明による飼料添加用組成物は、プレミックスとして処方されてもよい。例としてのみ挙げると、プレミックスは１種以上の飼料成分、例えば１種以上のミネラル及び／又は１種以上のビタミンを含むことができる。
１つの実施態様では、本発明で使用されるＤＦＭ及び／又は酵素は、マルトデキストリン、石灰石（炭酸カルシウム）、シクロデキストリン、小麦又は小麦成分、スクロース、デンプン、Ｎａ２ＳＯ４、タルク、ＰＶＡ、ソルビトール、ベンゾエート、ソルブテート、グリセリン、スクロース、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、グルコース、パラベン、塩化ナトリウム、シトレート、アセテート、ホスフェート、ピロ亜硫酸カルシウム、フォーメート及びこれらの混合物のうちの少なくとも１種から選ばれた、少なくとも１種の生理学的に許容される担体を用いて処方される。
【０１４２】
包装
１つの実施態様では、本発明による飼料添加用組成物及び／又はプレミックス及び／又は飼料若しくは家畜飼料は包装される。
１つの好ましい実施態様では、飼料添加用組成物及び／又はプレミックス及び／又は飼料若しくは家畜飼料は、容器に密封されることができる。任意の適当な容器が使用されることができる。
【０１４３】
飼料又は家畜飼料
本発明の飼料添加用組成物は、飼料として又は飼料の調製に使用されることができる。
用語「飼料」は、本明細書では「家畜飼料」と同義に使用される。
飼料は、使用及び／又は施与の様式及び／又は投与の様式に応じて、溶液の形態で又は固体であることができる。
飼料、例えば機能的飼料として又はこれらの調製に使用されるとき、本発明の組成物は、栄養的に受け入れられる担体、栄養的に受け入れられる希釈剤、栄養的に受け入れられる賦形剤、栄養的に受け入れられる補助剤、栄養的な有効成分のうちの１種以上と共に使用されることができる。
【０１４４】
好ましい実施態様では、本発明の飼料添加用組成物は、飼料成分と混合されて家畜飼料を形成する。
本明細書で使用される用語「飼料成分」とは、家畜飼料の全て又は一部を意味する。家畜飼料の一部とは、家畜飼料の１成分又は家畜飼料の１より多い成分、例えば２つ、３つ又は４つの成分を意味ことができる。１つの実施態様では、用語「飼料成分」とは、プレミックス又はプレミックス成分を包含する。
好ましくは飼料は、かいば（fodder）又はそのプレミックス、配合飼料又はそのプレミックスであることができる。１つの実施態様では、本発明による飼料添加用組成物は、配合飼料、配合飼料成分と、又は配合飼料のプレミックス又はかいば、かいば成分又はかいばのプレミックスに、混合されることができる。
【０１４５】
本明細書で使用される用語「かいば（fodder）」とは、動物（自ら食料を探し回らなければならない動物ではなく）に提供される任意の食物を意味する。かいばは、伐採された植物を包含する。
用語「かいば」はサイレージ、圧縮及びペレット化された飼料、油及び混合飼料、並びに発芽穀物及び豆類も含む。
かいばは、大麦菜種（キャノーラ）、トウモロコシ、雑穀、オート麦、ソルガム、大豆、小麦及び豆類から選ばれた植物のうちの１種以上から得られることができる。
用語「配合飼料」とは、粗びき粉、ペレット、ナッツ、ケーキ又は砕いた飼料の形態をしている市販飼料を意味する。配合飼料は様々な原料及び添加物から混合されることができる。これらのブレンド物は、目標動物の特定の要求に従って配合される。
【０１４６】
配合飼料は、毎日要求される栄養素を全て提供する完全飼料、食料の一部（タンパク質、エネルギー）を提供する濃縮物、又は追加の微量栄養素、例えばミネラルおよびビタミンを提供するだけの栄養補助食品であることができる。
配合飼料に使用される主要成分は飼料用穀物であり、それはトウモロコシ、大豆、ソルガム、小麦、オート麦及び大麦を含む。
好適には、本明細書でいうプレミックスは、微量栄養素、例えばビタミン、ミネラル、化学防腐剤、抗生物質、発酵製品及び他の必須成分から構成される組成物であることができる。プレミックスは、通常、市販食品中にブレンドされるのに適した組成物である。
【０１４７】
本発明の任意の家畜飼料は、ａ）シリアル、例えば小粒穀物（例えば、小麦、大麦、ライ麦、オート麦及びこれらの組み合わせ）、及び／又は大粒穀物、例えばトウモロコシ又はソルガム、ｂ）シリアルからの副製品、例えばコーングルテンミール、ウェットケーキ（特に、コーンベースのウェットケーキ）、乾燥蒸留穀物残渣（Distillers Dried Grain）（DDG）（特に、コーンベースの乾燥蒸留穀物残渣（cDDG））、乾燥蒸留穀物残渣可溶分（Distillers Dried Grain Solubles）（DDGS）（特に、コーンベースの乾燥蒸留穀物残渣可溶分（cDDGS））、小麦ふすま、粗びき小麦粉、小麦ショート（wheat shorts）、小麦ふすま、粗びき小麦粉、小麦ショート（wheat shorts）、米ぬか、もみ殻、オーツ麦のもみ殻、パーム核、及び柑橘パルプ、ｃ）タンパク質、例えば大豆、ヒマワリ、落花生、ルピナス、エンドウ豆、ソラマメ、綿、セイヨウアブラナ、魚粉、乾燥血漿タンパク質、肉骨粉飼料、ポテトタンパク質、乳清、コプラ、ゴマの供給源から得られたもの、ｄ）油及び脂肪、例えば植物及び動物源から得られたもの、ｅ）ミネラル及びビタミン、を含む群から選ばれた１種以上の飼料材料を含むことができる。
【０１４８】
本発明の家畜飼料は、コーン及び大豆ミール、又はコーン及び高脂肪分大豆ミール、又は小麦ミール又はヒマワリミールを、少なくとも１０重量％、少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、又は少なくとも５０重量％含有することができる。
本発明の家畜飼料は、約０〜約４０％のトウモロコシＤＤＧＳを含有することができる。家畜飼料が何らかのトウモロコシＤＤＧＳを含有しているならば、それは約５〜約４０％のトウモロコシＤＤＧＳを含有することができる。家禽用には、トウモロコシＤＤＧＳが存在するときは、家畜飼料は平均して約７〜１５％のトウモロコシＤＤＧＳを含有することができる。豚用には、トウモロコシＤＤＧＳが存在するときは、家畜飼料は平均して５〜４０％のトウモロコシＤＤＧＳを含有することができる。
本発明の家畜飼料は、トウモロコシを単一の穀物として含有することができ、この場合には、家畜飼料は約３５％〜約８０％のトウモロコシを含むことができる。
【０１４９】
本発明では、飼料は、配合飼料又はプレミックス、ペレット、ナッツ又は（牛用）ケーキ；作物又は作物残渣；トウモロコシ、大豆、ソルガム、オーツ麦、大麦、コプラ、麦わら、サトウダイコン廃棄物；魚粉；肉骨粉飼料；糖蜜；油かす及び圧搾ケーキ；オリゴ糖；保存加工した飼料植物：サイレージ；海草；全粒、又は圧砕、製粉などを施した種子及び穀類；発芽粒及び豆類；酵母エキス、を含む配合飼料及びプレミックスのうちの１種以上であることができる。
【０１５０】
本発明における用語「飼料」は、いくつかの実施態様では、ペットフードも包含する。ペットフードとは、ペットによる消費を意図された植物又は動物材料、例えばドッグフード又はキャットフードである。ペットフード、例えばドッグフード又はキャットフードは、乾燥形態、例えば犬用の粗びきの穀物であるか、あるいは湿った缶詰め形態である。キャットフードはアミノ酸タウリンを含有することがある。
【０１５１】
本発明における用語「飼料」は、いくつかの実施態様では、魚用飼料も包含する。魚用飼料は一般に、飼育魚の健康を良好に保つのに必要な多量栄養素、微量栄養素及びビタミンを含有する。魚用飼料は、フレーク、ペレット又は錠剤の形態であることができる。ペレット形態飼料は、そのうちのあるものは迅速に沈降し、多くの場合大型魚又は底魚に使用される。魚用飼料のあるものは、観賞魚の色を人工的に高めるために添加剤、例えばβカロテン又は性ホルモンも含有する。
【０１５２】
本発明における用語「飼料」は、いくつかの実施態様では、鳥用飼料も包含する。鳥用飼料は、バードフィーダーに用いられ及びペットバードに給餌するための両方の飼料を含む。典型的には鳥用飼料は多様な種子を含むが、獣脂（牛脂又は羊脂）を含有することもある。
【０１５３】
本明細書で使用される用語「接触され」とは、本発明の組成物を製品（例えば、飼料）に間接的又は直接的に施与することをいう。使用されることができる施与方法の例は、飼料添加用組成物を含む材料中で製品を処理する方法、飼料添加用組成物と製品とを混合することによる直接施与、飼料添加用組成物を製品表面上にスプレーする方法又は飼料添加用組成物の製剤中に製品を浸漬する方法を含むが、これらに限定されない。
１つの実施態様では、本発明の飼料添加用組成物は好ましくは、製品（例えば、家畜飼料）と混合される。あるいは、飼料添加用組成物は、家畜飼料の乳液又は粗成分中に含められることができる。
【０１５４】
いくつかの施与の場合、作用を受けるべき／処理されるべき製品の表面上で又は表面へと、飼料添加用組成物が使用可能にされることが重要である。このことは、該組成物が以下の好ましい特性、即ち性能上の利点のうちの１つ以上を与えることを可能にする。
本発明の飼料添加用組成物は、制御された量のＤＦＭ及び酵素を、製品（例えば、家畜飼料又は家畜飼料の粗成分）に、散布し、それで被覆し及び／又は含漬させるために施与されることができる。
ＤＦＭ及び酵素は、同時に（例えば、これらが混合物中に一緒にあるとき、又はこれらが異なる経路によって供給されるときでさえも）又は逐次的に（例えば、これらが異なる経路によって供給される可能性があるとき）使用されることができる。１つの実施態様では、好ましくはＤＦＭ及び酵素は同時に施与される。好ましくは、ＤＦＭ及び酵素は、飼料に又は飼料の粗成分に供給される前に混合される。
【０１５５】
本発明による飼料添加用組成物中のＤＦＭは、適当な濃度で、例えば約２ｘ１０５ＣＦＵ〜約２ｘ１０１１ＣＦＵの、好適には約２ｘ１０６〜約１ｘ１０１０の、好適には約３．７５ｘ１０７ＣＦＵ〜約１ｘ１０１０ＣＦＵの１日用量を提供する、最終飼料製品中の濃度で加えられることができる。
【０１５６】
好ましくは、本発明の飼料添加用組成物は、約７０℃まで、約８５℃まで又は約９５℃までの熱処理に対して熱的に安定である。熱処理は、約１分までの間、約５分までの間、約１０分までの間、約３０分までの間、約６０分までの間実施されることができる。用語「熱的に安定な」とは、特定の温度まで加熱される前に添加物中で生存する／活性である酵素成分及び／又はＤＦＭの少なくとも約７５％が、それが室温まで冷却された後も依然として生存する／活性であることを意味する。好ましくは、特定の温度まで加熱される前に添加物中で生存しかつ活性である酵素成分及び／又はＤＦＭの少なくとも約８０％が、それが室温まで冷却された後も依然として生存しかつ活性である。
特に好ましい実施態様では、飼料添加用組成物は、粉体となるように均質化される。
それに代わる好ましい実施態様では、飼料添加用組成物は顆粒に製剤され、例えば国際公開第2007/044968号に記載されている（ＴＰＴ顆粒と呼ばれている）ように製剤され、この内容は参照によって本明細書に取り込まれる。
【０１５７】
別の好ましい実施態様では、飼料添加用組成物が顆粒に製剤される場合、該顆粒は、タンパク質のコア上にコーティングされた水和バリア塩を含む。
このような塩コーティングの利点は、改善された耐熱性、改善された貯蔵安定性、及び塩コーティングがなければ酵素及び／又はＤＦＭに悪影響を及ぼす他の飼料添加物に対する保護である。
好ましくは、塩コーティングに使用された塩は、０．２５より大きい水分活性又は２０℃で６０％より大きい一定の湿度を有する。
好ましくは、塩コーティングはＮａ2ＳＯ4を含む。
【０１５８】
飼料添加用組成物の製造法は、粉体をペレット化するさらなる工程を含むこともできる。粉体は、当該技術分野で知られた他の成分と混合されることができる。粉体又は粉体を含む混合物は、ダイから押出され、得られたストランドが様々な長さの適当なペレットに切断される。
任意的に、ペレット化工程は、ペレットの形成前にスチーム処理又は条件調整工程を含むこともできる。粉体を含む混合物は、条件調整室に、例えばスチーム注入装置を備えたミキサーに入れられることができる。混合物は調整室内で規定の温度、例えば６０〜１００℃まで加熱され、典型的な温度は７０℃、８０℃、８５℃、９０℃又は９５℃である。滞留時間は、数秒から数分及び数時間さえまでに変化させることができ、例えば５秒、１０秒、１５秒、３０秒、１分、２分、５分、１０分、１５分、３０分及び１時間である。
【０１５９】
本発明の飼料添加用組成物が任意の適当な飼料材料への追加に適していることは理解されるだろう。
本明細書で使用される用語「飼料材料」とは、動物によって消費されるべき基礎的な飼料材料をいう。これが、例えば少なくとも１種以上の未加工穀粒、並びに／又は加工植物及び/若しくは動物材料を、例えば大豆粕又は骨粉を含むこともまた理解されるだろう。
本明細書で使用される用語「家畜飼料」とは、１種以上の飼料添加用組成物が加えられた飼料材料をいう。
動物が飼育される目的に応じて、異なる動物は異なる飼料を要求し、同じ動物でさえ異なる飼料を要求することがあることは、当業者によって理解されるだろう。
【０１６０】
好ましくは、家畜飼料は、トウモロコシ（maize又はcorn）、小麦、大麦、ライ小麦、ライ麦、米、タピオカ、ソルガム及び／又はこれらの任意の副産物、並びに高タンパク質成分、例えば大豆ミール、ナタネミール、セイヨウアブラナミール、綿実ミール、ヒマワリ種子ミール、動物性残渣及びこれらの混合物を含む飼料材料を含むことができる。より好ましくは、家畜飼料は、動物性脂肪及び／又は植物油を含むことができる。
任意的に、家畜飼料はさらに追加のミネラル、例えばカルシウム及び／又は追加のビタミンを含むこともできる。
好ましくは、家畜飼料はトウモロコシ大豆ミールミックスである。
１つの実施態様では、好ましくは、飼料はペットフードではない。
【０１６１】
他の態様では、家畜飼料の製造方法が提供される。家畜飼料は、典型的には飼料ミル中で製造され、その中で最初に粗材料が適当な粒経に粉砕され、次に適当な添加剤と混合される。次に、家畜飼料はマッシュ又はペレットとして製造されることができ、後者の場合は、典型的には温度が目標レベルまで上げられ、次に飼料がダイから押出されて、特定の大きさのペレットが製造される方法を含む。ペレットは放置冷却される。引き続いて、液状添加物、たとえば脂肪及び酵素が添加されることができる。家畜飼料の製造は、ペレット化の前に押出又は膨張を含む追加工程を、特に少なくともスチームの使用を含んでもよい適当な技術によって含むこともできる。
家畜飼料は、単胃動物、例えば家禽（例えば、ブロイラー、産卵鶏、ブロイラー種鶏、七面鳥、鴨、ガチョウ、水鳥）、豚（全年齢種）、ペット（例えば、イヌ、ネコ）又は魚用の動物用飼料であることができ、好ましくは家畜飼料は家禽用である。
１つの実施態様では、家畜飼料は産卵鶏用ではない。
【０１６２】
例としてのみ挙げると、鶏、例えば、ブロイラー鶏用の家畜飼料は、下表に列挙された成分のうちの１つ以上から、例えば下表に示された日齢％で構成されることができる。
2015530876.tif 000012
【０１６３】
例としてのみ挙げると、鶏、たとえばブロイラー鶏用の飼料仕様は下表に掲げられたものであってもよい。
2015530876.tif 000013
【０１６４】
例としてのみ挙げると、産卵鶏用家畜飼料は、下表に列挙された成分のうちの１つ以上から、例えば下表に示された日齢％で構成されることができる。
2015530876.tif 000014
【０１６５】
例としてのみ挙げると、産卵鶏用の飼料仕様は下表に掲げられたとおりであってもよい。
2015530876.tif 000015
【０１６６】
例としてのみ挙げると、七面鳥用家畜飼料は、下表に列挙された成分のうちの１つ以上から、例えば下表に示された日齢％で構成されることができる。
2015530876.tif 000016
【０１６７】
例としてのみ挙げると、七面鳥用の飼料仕様は下表に掲げられたとおりであってもよい。
2015530876.tif 000017
【０１６８】
例としてのみ挙げると、子豚用家畜飼料は、下表に列挙された成分のうちの１つ以上から、例えば下表に示された日齢％で構成されることができる。
2015530876.tif 000018
【０１６９】
例としてのみ挙げると、子豚用の飼料仕様は下表に掲げられたとおりであってもよい。
2015530876.tif 000019
【０１７０】
例としてのみ挙げると、育成期／仕上げ期の豚用家畜飼料は、下表に列挙された成分のうちの１つ以上から、例えば下表に示された日齢％で構成されることができる。
2015530876.tif 000020
【０１７１】
例としてのみ挙げると、育成期／仕上げ期の豚の飼料仕様は下表に掲げられたとおりであってもよい。
2015530876.tif 000021
【０１７２】
形態
本発明の飼料添加用組成物及び他の成分並びに／又はこれらを含む家畜飼料は、任意の好適な形態で使用されることができる。
本発明の飼料添加用組成物は、固型又は液状製剤の形態で、又はこれらの代替形態で使用されることができる。固型製剤の例は、粉体、ペースト、ボーラス、カプセル、ペレット、錠剤、細粉、及び水和性であり噴霧乾燥された又は凍結乾燥されたものであってもよい顆粒、を含む。液状製剤の例は、水溶液、有機溶液、又は水性有機溶液、懸濁物及び乳液を含むが、これらに限定されない。
【０１７３】
いくつかの用途では、本発明のＤＦＭ又は飼料添加用組成物は、飼料と混合され又は飲用水に投与されることができる。１つの実施態様では、水に含有させる際の投与範囲は、約１×１０３ＣＦＵ／動物／日〜約１×１０１０ＣＦＵ／動物／日、より好ましくは約１×１０７ＣＦＵ／動物／日である。
好適な形態例は、粉体、ペースト、ボーラス、ペレット、錠剤、丸剤、カプセル、腔坐剤、溶液又は懸濁物のうちの１つ以上を含み、これらは、即効性の、徐放性の、修正された、持続性の、拍動性の又は放出制御された投与用の着香剤又は着色剤を含有することができる。
【０１７４】
例として、本発明の組成物が固形で、例えば、ペレット形態で使用されるならば、該組成物は、賦形剤、例えば微結晶セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム及びグリジン；崩壊剤、例えばデンプン（好ましくは、トウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム及びある種のケイ酸塩複合体など；造粒結合剤、例えばポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチン及びアカシア；潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル及びタルクのうちの１種以上を含有することもできる。
【０１７５】
これらの形態を調製するのに使用される栄養学的に許容される担体の例は、例えば水、塩溶液、アルコール、シリコーン、ワックス、ワセリン、植物油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、リポソーム、糖、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、界面活性剤、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸モノグリセリド及びジグリセリド、ペトロエスラル脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等を含む。
【０１７６】
これらの形態用の好ましい賦形剤は、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖又は高分子量ポリエチレングリコールを含む。
水性懸濁物及び／又はエリキシル剤の場合には、本発明の組成物は、様々な甘味料又は着香料、着色剤又は染料と、乳化剤及び／又は懸濁剤と、並びに希釈剤、例えば水、プロピレングリコール及びグリセリン及びこれらの組み合わせと、組み合わされることができる。
【０１７７】
非吸湿性乳清は、しばしばＤＦＭ（特に、細菌ＤＦＭ）用の担体として使用され、ＤＦＭの増殖を開始するのに良好な培地である。
ペーストを含有する細菌ＤＦＭは、植物油及び不活性なゲル化成分を配合されることができる。
真菌製品は、穀類副産物を担体として配合されることができる。
１つの実施態様では、本発明の飼料添加用組成物は好ましくは、微小粒子系、例えば国際公開第2005/123034号に教示された微小粒子の形態をしていない。
【０１７８】
投与
本発明のＤＦＭ及び／又は飼料添加用組成物は、単回給与として設計されることができ、又は毎日の給与を目的として設計されることができる。
本発明と組み合わされて使用される組成物（及び該組成物に含まれる各成分）の最適量は、処理される製品、及び／又は製品を該組成物に接触させる方法、及び／又は製品の使用目的に応じて異なる。
組成物に使用されるＤＦＭ及び酵素の量は、当該組成物を含有する飼料製品を給与される動物の性能を向上させるのに有効であり、かつその有効性を十分に保持するのに十分な量でなくてはならない。
この有効性の時間長さは、少なくとも製品（例えば、飼料添加用組成物又は飼料添加用組成物を含有する飼料）が使用される期間までの長さでなくてはならない。
【０１７９】
飼料中のＤＦＭと酵素との比は下記の範囲であることができる：
ＤＦＭ：フィターゼ（ＣＦＵ／ＦＴＵ）は、２．５×１０３ＣＦＵ  ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜６．７×１０６ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲、好ましくは３．８×１０３ＣＦＵ  ＤＦＭ：１ＦＴＵ酵素〜２．０×１０５ＣＦＵ：１ＦＴＵ酵素の範囲。
【０１８０】
１つの実施態様では、家畜飼料は好ましくは下記を含む：
（少なくとも）１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇのフィターゼ、及び
７.５×1０４ＣＦＵ／飼料ｇ〜３．０×１０５ＣＦＵ／飼料ｇのEnviva Pro（ＤＦＭ）。
１つの実施態様では、家畜飼料は好ましくは下記を含む：
（少なくとも）２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇのフィターゼ、及び
７.５×1０４ＣＦＵ／飼料ｇ〜３．０×１０５ＣＦＵ／飼料ｇのEnviva Pro（ＤＦＭ）。
１つの実施態様では、家畜飼料は好ましくは下記を含む：
（少なくとも）３０００ＦＴＵ／飼料ｋｇのフィターゼ、及び
７.５×1０４ＣＦＵ／飼料ｇ〜３．０×１０５ＣＦＵ／飼料ｇのEnviva Pro（ＤＦＭ）。
【０１８１】
１つの実施態様では、家畜飼料は好ましくは下記を含む：
（少なくとも）１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇのフィターゼ、及び
少なくとも５×1０４ＣＦＵ／飼料ｇ〜１×１０７ＣＦＵ／飼料ｇのＤＦＭ。
１つの実施態様では、家畜飼料は好ましくは下記を含む：
（少なくとも）２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇのフィターゼ、及び
少なくとも５×1０４ＣＦＵ／飼料ｇ〜１×１０７ＣＦＵ／飼料ｇのＤＦＭ。
１つの実施態様では、家畜飼料は好ましくは下記を含む：
（少なくとも）３０００ＦＴＵ／飼料ｋｇのフィターゼ、及び
少なくとも５×1０４ＣＦＵ／飼料ｇ〜１×１０７ＣＦＵ／飼料ｇのＤＦＭ。
【０１８２】
別の実施態様では、動物飼料は以下を含む。
好ましい実施態様では、飼料添加用組成物は、以下のとおり、動物飼料に投与するのに十分な量の酵素及びＤＦＭを含む：
（少なくとも）１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ（例えば、（少なくとも）２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ）のフィターゼ、及び
７５，０００ＣＦＵ／飼料ｇ〜１５０，０００ＣＦＵ／飼料ｇのEnviva Pro（ＤＦＭ）。
【０１８３】
好ましい実施態様では、飼料添加用組成物は、以下のとおり、動物飼料に投与するのに十分な量の酵素及びＤＦＭを含む：
（少なくとも）１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ（例えば、（少なくとも）２０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ）のフィターゼ、及び
３７，５００ＣＦＵ／飼料ｇ〜７５，０００ＣＦＵ／飼料ｇのEnviva Pro（ＤＦＭ）。
【０１８４】
他の成分との組み合わせ
本発明で使用されるＤＦＭ及び酵素は、他の成分と組み合わせて使用されることができる。従って、本発明は組み合わせ物にも関する。フィターゼと組み合わされたＤＦＭは、本明細書では「本発明の飼料添加用組成物」と呼ばれることがある。
本発明の組み合わせ物は、本発明の飼料添加用組成物（又はその成分のうちの１つ以上)と、動物による消費に適し、かつ消費動物に医学上又は生理学上の利益をもたらすことができる他の成分と、を含む。
１つの実施態様では、好ましくは「他の成分」はさらなる酵素又はさらなるＤＦＭではない。
【０１８５】
該他の成分はプレバイオティクスであることができる。典型的には、プレバイオティクスは、難消化性の炭水化物（オリゴ糖又は多糖）又は糖アルコールであり、これらは上部消化管内では分解されず又は吸収されない。市販品に使用され、かつ本発明に適合して有用な公知のプレバイオティクスは、イヌリン（フラクトオリゴ糖又はＦＯＳ）及びトランスガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ又はＴＯＳ）を含む。好適なプレバイオティクスは、パラチノースオリゴ糖、大豆オリゴ糖、アルギン酸塩、キサンタン、ペクチン、ローカストビーンガム（ＬＢＧ）、イヌリン、グアーガム、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、難消化性デンプン、ラクトサッカロース、ラクツロース、ラクチトール、マルチトール、マルトデキストリン、ポリデキストロース（即ち、Litesse（商標））、ラクチトール、ラクトスクロース、大豆オリゴ糖、パラチノース、イソマルトオリゴ糖、グルコオリゴ糖及びキシロオリゴ糖、ペクチン断片、食物繊維、マンナンオリゴ糖を含む。
【０１８６】
食物繊維は、非デンプン性多糖、例えばアラビノキシラン、セルロース及び多くの他の植物成分、例えば難消化性デキストリン、イヌリン、リグニン、ワックス、キチン、ペクチン、β−グルカン及びオリゴ糖を含むことができる。
１つの実施態様では、本発明は、本発明の飼料添加用組成物（又はそのうちの１つ以上の成分）とプレバイオティクスとの組み合わせに関する。他の実施態様では、本発明は、高用量フィターゼ及びプレバイオティクスと組み合わされたＤＦＭを含む（又はこれらから本質的になる、又はこれらからなる）飼料添加用組成物に関する。
【０１８７】
プレバイオティクスは、本発明の飼料添加用組成物（又はこの成分）と同時に（例えば、一緒に混合物として同時に、又は同一の若しくは異なる経路によって送達されて同時に）、又は逐次的に（例えば、同一の若しくは異なる経路によって逐次的に）投与されることができる。
本発明の組み合わせの他の成分は、ポリデキストロース、例えば、Litesse（商標）及び／又はマルトデキストリン及び／又はラクチトールを含む。これらの他の成分は任意的に、飼料添加用組成物に添加されて、乾燥加工を補助しかつＤＦＭの生存を助けることができる。
【０１８８】
他の好適な成分のさらなる例は、増粘剤、ゲル化剤、乳化剤、結合剤、結晶調整剤、甘味剤（人口甘味剤を包含する）、レオロジー改質剤、安定化剤、抗酸化剤、染料、酵素、担体、賦形剤、添加剤、希釈剤、潤滑剤、着香剤、着色剤、懸濁剤、崩壊剤、造粒結合剤等のうちの１つ以上を含む。これらの他の成分は天然素材であってもよい。これらの他の成分は化学的及び／又は酵素的手法を用いて調製されることができる。
【０１８９】
１つの好ましい実施態様では、本発明で使用されるＤＦＭ及び／又は酵素は、１種以上の脂質と組み合されて使用されることができる。
例えば、本発明で使用されるＤＦＭ及び／又は酵素は、１種以上の脂質ミセルと組み合わされて使用されることができる。脂質ミセルは、単純脂質ミセル又は複合脂質ミセルであることができる。
脂質ミセルは、両親媒性の物質、例えば脂質及び／又は油、の配向された分子の凝集体であることができる。
【０１９０】
本明細書で使用される用語「増粘剤又はゲル化剤」とは、不混和性液体の液滴、空気又は不溶性固体のうちのいずれかの粒子の移動を遅くさせ又は防止することによって分離を防ぐ製品をいう。増粘は、個々の水和分子の粘度が上昇し、分離が遅くなったときに生じる。ゲル化は、水和分子が結合して３次元の網状構造を形成して粒子を捕捉し、それによって粒子を不動化させるときに生じる。
【０１９１】
本明細書で使用される用語「安定化剤」は、経時変化から製品（例えば、飼料製品）を保護する成分又は成分の組み合わせと定義される。
本明細書で使用される用語「乳化剤」とは、エマルションの分離を防止する成分（例えば、飼料成分）をいう。エマルションは、２種の不混和性の物質であって、一方が液滴形態で存在し、他方の中に含まれている物質である。エマルションは、液滴又は分散相が油であり連続相が水である水中油型、又は水が分散相となり連続相が油である油中水型であることがある。液中気体の状態である発泡体、及び液中固体の状態である懸濁物は、乳化剤を使用して安定化されることもできる。
【０１９２】
本明細書で使用される用語「結合剤」とは、物理的又は化学的反応によって製品（例えば、飼料成分）を互いに結合させる成分をいう。例えば、「ゲル化」の間に水が吸収されて、結合効果が得られる。しかし、結合剤は、他の液体、例えば油を吸収し、製品中にそれを保持することができる。本発明の文脈において、結合剤は典型的には、固体又は低湿分製品に、例えばベーキング製品、ペストリー、ドーナツ、パン等に使用されることになる。
【０１９３】
「担体」又は「賦形剤」は、ＤＦＭ及び／又は酵素の投与に適した材料を意味し、当該技術分野で知られた任意のこのような材料、例えば任意の液体、ゲル、溶媒、希釈剤、可溶化剤等の任意の材料を含み、これらの材料は非毒性であり、かつ組成物の任意の成分と有害な様式で交互作用をしないものである。
【０１９４】
本発明は飼料添加用組成物の製造方法を提供し、該方法は、ＤＦＭ及びフィターゼを、マルトデキストリン、石灰岩（炭酸カルシウム）、シクロデキストリン、小麦又は小麦成分、スクロース、デンプン、Ｎａ２ＳＯ４、タルク、ＰＶＡ、ソルビトール、安息香酸塩、ソルビン酸塩、グリセロール、スクロース、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、ブドウ糖、パラベン、塩化ナトリウム、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、カルシウム、メタ亜硫酸水素塩、ギ酸塩、及びこれらの混合物のうちの少なくとも１つから選択された少なくとも１種の生理学的に許容される担体と混合する工程を含む。
【０１９５】
賦形剤の例は、微結晶セルロース及びその他のセルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム、グリシン、デンプン、乳糖及び高分子量ポリエチレングリコールのうちの１種以上を含む。
崩壊剤の例は、デンプン（好ましくは、トウモロコシ、ポテト又はタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム及び特定の珪酸塩錯体のうちの１つ以上を含む。
造粒結合剤の例は、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、マルトース、ゼラチン及びアカシアのうちの１つ以上を含む。
潤滑剤の例は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル及びタルクのうちの１つ以上を含む。
希釈剤の例は、水、エタノール、プロピレングリコール及びグリセリン並びにこれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む。
【０１９６】
他の成分は、同時に（例えば、これらの成分が一緒に混合されているときに、又はこれらの成分が異なる経路によって供給されるときでさえも）又は逐次的に（例えば、これらの成分が異なる経路によって供給されることがあるときに）使用されることができる。
好ましくは、本発明の飼料添加用組成物が他の成分と混合されるときに、ＤＦＭは生存活性を保持する。
１つの実施形態では、好ましくは、本発明の飼料添加用組成物はクロム又は有機クロムを含まない。
【０１９７】
濃縮物
本発明で使用されるＤＦＭは、濃縮物の形態であることができる。典型的には、これらの濃縮物は、実質的に高濃度のＤＦＭを含む。
本発明による飼料添加用組成物は、少なくとも１０４ＣＦＵ／ｇ（好適には少なくとも１０４ＣＦＵ／ｇ、例えば少なくとも１０５ＣＦＵ／ｇ、例えば少なくとも１０６ＣＦＵ／ｇ、例えば少なくとも１０７ＣＦＵ／ｇ、少なくとも１０８ＣＦＵ／ｇ）から約１０１０ＣＦＵ／ｇまで（又はさらには約１０１１ＣＦＵ／ｇ、若しくは約１０１２ＣＦＵ／ｇ）の範囲である含有量の生存細胞（コロニー形成単位、ＣＦＵ）を有することができる。
ＤＦＭが濃縮物の形態であるときは、本発明による飼料添加用組成物は、少なくとも１０９ＣＦＵ／ｇ〜約１０１２ＣＦＵ／ｇ、好ましくは少なくとも１０１０ＣＦＵ／ｇ〜約１０１２ＣＦＵ／ｇの範囲の含有量の生存細胞を有することができる。
【０１９８】
濃縮物の形態である、粉末、顆粒及び液状組成物は、水で希釈され、又は水若しくは他の適当な希釈剤、例えばミルク若しくは鉱物油若しくは植物油のような適当な増殖培地中に再懸濁されて、直ぐに使用できる組成物を与えることができる。
本発明のＤＦＭ若しくは飼料添加用組成物又は濃縮物の形態をした本発明の組み合わせ物は、当該技術分野で知られた方法によって製造されることができる。
本発明の１つの態様では、酵素又は飼料は、濃縮物形態をした組成物と接触させられる。
【０１９９】
本発明の組成物は、当該技術分野で知られた方法によって噴霧乾燥又は凍結乾燥されることができる。
噴霧乾燥方法を使用して粒子を製造する典型的なプロセスは、適当な溶媒に溶解された固形材料（例えば、発酵培地中のＤＦＭの培養物）を含む。別の方法としては、固形材料が非溶媒中に懸濁され又は乳化されて懸濁液又はエマルションを形成することもできる。他の成分（上記のような）又は抗菌剤、安定化剤、染料及び乾燥工程の助剤のような成分が、任意的にこの段階で添加されてもよい。
この溶液は次に霧化されて、液滴の微細な霧を形成する。この液滴は直ちに乾燥室に入れられ、乾燥ガスと接触される。溶媒は液滴から蒸発して乾燥ガスとなり、液滴を固化させ、それによって粒子を形成する。該粒子は次に乾燥ガスから分離され、収集される。
【０２００】
対象動物
本明細書で使用される用語「対象動物」とは、本発明による飼料添加用組成物、又は本発明による飼料添加用組成物を含む動物飼料を投与されることになる又は投与されている動物を意味する。
本明細書で使用される用語「対象」とは、動物を意味する。
１つの実施態様では、対象動物は哺乳類、鳥、魚、又は甲殻類であり、例えば家畜又は家庭に飼われた動物（例えば、ペット）を含む。
１つの実施態様では、「対象動物」は家畜である。
【０２０１】
本明細書で使用される用語「家畜」とは、任意の飼育された動物をいう。好ましくは、家畜は、反芻動物、例えば畜牛（例えば、雌牛又は雄牛（仔牛を含む））；単胃動物、例えば家禽（例えば、ブロイラー、鶏及び七面鳥）、豚（子豚を含む）、鳥；水性動物、例えば魚、無胃性魚、有胃魚、淡水魚（例えば、サーモン、タラ、トラウト及びコイ科の魚（例えば、鯉））、海水魚シーバス）；甲殻類、例えばエビ、イガイ、及びホタテ貝；馬（競走馬を含む）、羊（子羊を含む）のうちの１つ以上である。
他の実施形態では、「対象動物」は、家庭に飼われた動物又はペット又は動物園環境で飼育される動物である。
本明細書で使用される用語「家庭に飼われた動物又はペット又は動物園環境で飼育される動物」とは、イヌ科の動物（例えば、犬）、ネコ科の動物（例えば、猫）、げっ歯目（例えば、モルモット、ラット、マウス）、鳥類、魚類（淡水魚及び海水魚を含む）及び馬を含む任意の関連のある動物をいう。
【０２０２】
１つの実施態様では、対象動物は腸内病原菌に曝露されることがある。
例として、対象動物は、その腸又は消化管内に１種以上の腸内病原菌が存在させていることがある。例えば、対象動物は、その腸又は消化管内に１種以上の腸内病原菌を以下の程度に存在させていることがある：
ｉ）    該動物の性能が低下する程度、及び／又は
ｉｉ）  臨床的に意義のある程度、又は
ｉｉｉ）無症状の程度。
例えば、腸内病原菌はウェルシュ菌であることがある。
【０２０３】
性能
本明細書で使用される「動物性能」とは、その動物の飼料効率及び／又は体重増加量によって、及び／又は飼料要求率によって、及び／又は飼料中の栄養素の消化率（例えば、アミノ酸の消化率）によって、及び／又は飼料中の可消化エネルギー又は代謝エネルギーによって、及び／又は窒素保持率によって、及び／又は動物が壊死性腸炎の悪影響を回避する能力によって、及び／又は対象動物の免疫応答性によって測定されることができる。
好ましくは「動物性能」は、飼料効率及び／又はその動物の体重増加量によって、及び／又は飼料要求率によって測定される。
【０２０４】
「改善された動物性能」とは、本発明の飼料添加用組成物を含有していない飼料と比較して、本発明の飼料添加用組成物を飼料に使用することによってもたらされる、飼料効率の向上、及び／又は体重増加量の向上、及び／又は飼料要求率の減少、及び／又は飼料中の栄養素若しくはエネルギーの可消化率の向上、及び／又は窒素保持率の向上、及び／又は壊死性腸炎による悪影響を回避する能力の向上、及び／又は対象動物の免疫応答性の向上が存在することを意味する。
好ましくは、「改善された動物性能」とは、飼料効率の向上及び／又は体重増加量の向上及び／又は飼料要求率の減少を意味する。
【０２０５】
本明細書で使用される用語「飼料効率」とは、動物が、一定の期間に不断給餌で又は規定量の飼料を給与されたときに生じる体重増加量をいう。
「飼料効率の向上」とは、本発明による飼料添加用組成物の飼料への使用が、動物が当該飼料添加用組成物が存在することなく給餌された場合と比較して、飼料摂取単位量当たりの体重増加量の向上をもたらすことを意味する。
【０２０６】
飼料要求率(ＦＣＲ)
本明細書で使用される用語「飼料要求率」とは、動物の体重を特定量だけ増加させるためにその動物に給与された飼料の量をいう。
改善された飼料要求率とは、飼料要求率が低くなることを意味する。
「より低い飼料要求率」又は「改善された飼料要求率」とは、飼料添加用組成物の飼料への使用が、動物の体重を特定量だけ増加させるために動物に給餌する必要のある飼料量が、当該飼料添加用組成物を含有していないときに同じ量だけ動物の体重を増加させるのに必要な飼料量と比較して少なくなることを意味する。
【０２０７】
栄養素消化率
本明細書で使用される「栄養素消化率」とは、胃腸管又は胃腸管の特定の分節、例えば小腸から消失する栄養素の割合を意味する。栄養素消化率は、対象動物に投与されたものと対象動物から糞便の状態で出てくるものとの差、又は対象動物に投与されたものと胃腸管の特定の分節、例えば回腸にある消化物中に残存しているものとの差として測定されることができる。
【０２０８】
本明細書で使用される栄養素消化率は、一定期間の排泄物の総収集量を用いて、栄養素の摂取量と排泄された栄養素との差から測定されることができ、又は動物によって吸収されず、かつ全胃腸管又は胃腸管の分節において消失した栄養素の量を研究者が算出可能である不活性マーカーを用いて測定されることができる。このような不活性マーカーは、二酸化チタン、酸化クロム又は酸不溶性灰分であることができる。消化率は、飼料中の栄養素の割合（パーセント）として、又は飼料中の栄養素の質量単位あたりの可消化栄養素の質量単位として表されることができる。
本明細書で使用される栄養素消化率は、デンプン消化率、脂肪消化率、タンパク質消化率及びアミノ酸消化率を包含する。
【０２０９】
本明細書で使用される「エネルギー消化率」とは、飼料の総エネルギーから糞便の総エネルギーを減じたもの、又は消費された飼料の総エネルギーから動物の胃腸管の特定の分節、例えば回腸に残存している消化物の総エネルギーを減じたものを意味する。本明細書で使用される「代謝エネルギー」とは、見掛け代謝エネルギーをいい、消費された飼料の総エネルギーから、糞便、尿及び消化に由来するガス生成物に含まれる総エネルギーを減じたものを意味する。エネルギー消化率及び代謝エネルギーは、栄養素消化率を測定するのと同じ方法を用い、飼料の代謝エネルギーを算出するために窒素の排出について適切な補正を行って、総エネルギー摂取量と糞便に排泄された又は胃腸管の特定の分節に存在する消化物の総エネルギーとの差として測定されることができる。
【０２１０】
窒素保持率
本明細書で使用される「窒素保持率」とは、対象動物が、食物由来の窒素を体重として保持する能力を意味する。負の窒素バランスは、窒素の排出が日常摂取量を超過したときに生じ、筋肉が失われているときにしばしば認められる。正の窒素バランスは、多くの場合に筋肉の成長と関連付けられ、これは成長期の動物において顕著である。
窒素保持率は、一定期間の糞尿の総収集量を用いて、窒素摂取量と窒素排出量との差から測定されることができる。排出された窒素が、飼料由来の未消化タンパク質、内因性のタンパク質性分泌物、微生物タンパク質及び尿窒素を含むことは理解されるであろう。
【０２１１】
生存率
本明細書で使用される用語「生存率」とは、生存し続ける対象動物の数を意味する。用語「改善された生存率」は、「低減された斃死率」と言い換えられことができる。
【０２１２】
枝肉歩留まり及び精肉歩留まり
本明細書で使用される用語「枝肉歩留まり」とは、生存時の体重に対する割合としての、商業的又は試験的な屠殺処理後の枝肉の量を意味する。用語「枝肉」とは、頭部、尾部、肢部及び羽若しくは皮を取り除いた後の、屠殺処理された動物の肉体を意味する。本明細書で使用される用語「精肉歩留まり」とは、生存時の体重に対する割合としての食肉の量、又は生存時の体重に対する割合としての特定の切り出し肉の量を意味する。
【０２１３】
体重増加量
本発明はさらに、対象動物、例えば家禽又は豚の体重増加量を向上させる方法を提供し、該方法は、本発明による飼料添加用組成物を含む動物飼料を当該対象動物に給与する工程を含む。  
「体重増加量の向上」とは、飼料添加用組成物を含む飼料の給与を受けた際の体重増加量が、当該飼料添加用組成物を含まない飼料の給与を受けた動物と比較して向上している動物をいう。
【０２１４】
体重増加量の向上は、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１５％、少なくとも２０％又は少なくとも３０％であることができる。いくつかの実施態様では、この向上は少なくとも５０％又は少なくとも１００％であることができる。
体重増加量の向上は、使用された飼料がＤＦＭ及び高用量（即ち、１５００ＦＴＵ／飼料ｋｇ超）フィターゼを含まない対照と比較しての向上であることができる。別の態様では、体重増加量の向上は、フィターゼが低用量、例えば１０００ＦＴＵ／飼料ｋｇ未満で使用される別のフィターゼを含む飼料の使用と比較しての向上であってもよい。
【０２１５】
臨床的又は無症状的腸疾病への曝露
１つの実施態様では、臨床的又は無症状的腸疾病への曝露が対象動物に存在する。
１つの実施態様では、臨床的又は無症状的腸疾病への曝露は、任意の病原体又は任意の病原菌、例えばウェルシュ菌又は大腸菌によって引き起こされることがある。
用語「臨床的疾病」とは、疾病の認識しうる徴候及び症状を生じるのに十分な、解剖学的又は生理学的変化から始まる病理学的状態の病歴における段階を意味する。
用語「無症状的疾病」とは、徴候が最初に気付かれる前の疾病の経過における段階を意味する又はそれに関する。
【０２１６】
腸疾病は、対象動物が罹ることがある任意の腸感染症であることがある。
１つの実施態様では、腸疾病は、病原体、例えば病原菌によって引き起こされることがある。
１つの実施態様では、腸疾病は、病原性クロストリジウム菌種、例えばウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ菌、大腸菌及び／又はサルモネラ菌種及び／又はカンピロバクター菌種の有機体のうちの１つ以上によって引き起こされることがある。
１つの実施態様では、腸疾病は、ウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ菌及び／又は大腸菌、好ましくはウェルシュ菌及び／又はクロストリジウム・ディフィシレ、より好ましくはウェルシュ菌の病原体のうちの１つ以上によって引き起こされることがある。
【０２１７】
壊死性腸炎
壊死性腸炎は、ウェルシュ菌によって引き起こされる急性又は慢性の腸毒血症であり、世界的に鶏、七面鳥及びアヒルに見られる。多くの場合、壊死性腸炎は、普通には小腸中央部に生じる線維素壊死性腸炎によって特徴付けられる。斃死率は５〜５０％、通常約１０％である。感染は、糞口感染によって起きる。原因となる有機体の芽胞は高度に耐性である。素因は、コクシジウム症（coccidiosis/coccidiasis）、食餌（高タンパク質）、アヒルでは可能性として強いストレス、高粘度の食餌（しばしば、食餌中の高濃度ライ麦及び小麦に関係付けられる）、汚染された飼料及び／又は水、その他の衰弱性疾患を含む。
【０２１８】
本発明は、対象動物の壊死性腸炎に対する耐性を向上させることに関する。言い換えれば、本発明は、壊死性腸炎の悪影響を回避する又は減少させることに関する。
本明細書で使用される用語「に対する耐性」は、用語「への忍耐性」を包含することがある。従って、１つの実施形態では、対象動物は、壊死性腸炎に対する耐性がない場合でも、壊死性腸炎への忍耐性がある場合があり、この場合、その対象動物の性能に悪影響がない。
【０２１９】
１つの実施形態では、本発明は、対象動物の壊死性腸炎を処置し又は予防するための、本発明による飼料添加用組成物に関する。典型的には、対象動物は、ウェルシュ菌及び／又はエイメリア（Eimeria）菌種に曝露されている、又は曝露されることになるものである。このような曝露は、その環境に起因し、又は飼料若しくは飲用水中の生菌の施与、例えばコクシジウム生ワクチンが使用されたとき、に起因することがある。
他の実施形態では、本発明は、対象動物のコクシジウム症を予防及び／又は処置するための飼料添加用組成物に関する。
本発明は、本発明による飼料添加用組成物が対象動物に有効量で投与される、壊死性腸炎及び／又はコクシジウム症を予防し及び／又は処置する方法をさらに提供する。
【０２２０】
免疫応答
本明細書で使用される「免疫応答」とは、ＤＦＭが動物の免疫系、例えば抗体産生の増加、細胞介在性免疫の上方制御、炎症促進性サイトカインの上方制御及びトール様受容体シグナル伝達の増強、を調節する複数の経路のうちの１つを意味する。ＤＦＭによる胃腸管の免疫賦活は疾病から宿主を保護するのに有益であることがあり、及び胃腸管の免疫抑制は、より少ない栄養素及びエネルギーが免疫機能を支持するのに使用されることなることから、宿主に有益であることがあることは、理解されるであろう。
好ましくは、免疫応答は細胞性免疫応答である。
好ましくは、免疫応答は免疫マーカーの観察によって測定される。
【０２２１】
病原菌
本明細書で使用される用語「病原菌」とは、例えば毒素産生性のクロストリジウム属、例としてウェルシュ菌及び／又は大腸菌及び／又はサルモネラ菌種及び／又はカンピロバクター菌種を意味する。１つの実施態様では、病原菌は、トリ病原性大腸菌種であることがある。
本発明は、対象動物の胃腸管中の病原菌数を減少させることができる。
【０２２２】
栄養素の排出
１つの実施形態では、本発明は、糞尿への栄養素の排出の減少に関する。これは、環境災害の減少に正の効果を与える。例えば、好ましい実施形態では、本発明は、対象動物の糞尿中の窒素及び／又はリン含有量を減少させることに関する。従って、これは環境中の窒素及び／又はリンの量を減少させ、有益であるといえる。
【０２２３】
プロバイオティクス
いくつかの適用において、本発明の組成物中のＤＦＭは、プロバイオティクス培養効果を発揮することができると考えられている。本発明の組成物に、さらなるプロバイオティクス及び／又はプレバイオティクスを添加することも本発明の範囲内に含まれる。
本明細書において、「プレバイオティクス」とは、「１つ又は限定された数の有益な細菌の増殖及び／又は活性を選択的に刺激することによって、宿主に有効に作用する難消化性食品成分」である。
【０２２４】
本明細書で使用される用語「プロバイオティクス培養物」とは、例えば、必要な数だけ経口摂取又は局所適用されたときに宿主生物に有利に作用する、即ち、１つ以上の実証可能な健康利益を宿主生物に付与することによって有利に作用する、生微生物（例えば、細菌又は酵母等）であると定義される。プロバイオティクスは、１箇所以上の粘膜表面において微生物のバランスを改善することができる。例えば、該粘膜表面は、腸、尿路、気道又は皮膚であることがある。本明細書で使用される用語「プロバイオティクス」とは、免疫系の有効な分岐を刺激し、それと同時に、免疫表面、例えば腸の炎症応答を減少させることができ生菌も包含する。
プロバイオティクス摂取量の下限又は上限はないけれども、日用量として、少なくとも１０６〜１０１２、好ましくは少なくとも１０６〜１０１０、好ましくは１０８〜１０９ｃｆｕが、対象動物の有利な健康効果を得るのに有効であることが示唆されている。
【０２２５】
単離された
1つの態様では、好適には、本発明で使用される酵素又はＤＦＭは、単離された形態であることができる。用語「単離された」とは、酵素又はＤＦＭが、少なくとも１種のその他の成分と自然界で結び付いておりかつ自然界で見られるままである当該少なくとも１種のその他の成分から、少なくとも実質的に分離されていることを意味する。本発明の酵素又はＤＦＭは、本来であればこの物質が結び付いているかもしれない１つ以上の汚染物質から少なくとも実質的に分離されている形態で提供されることができる。従って、例えば、この物質は、潜在的に混入する１種以上のポリペプチド及び／又は核酸分子から実質的に分離されていることができる。
【０２２６】
精製された
1つの態様では、好ましくは本発明による酵素及び／又はＤＦＭは、精製された形態である。用語「精製された」とは、酵素及び／又はＤＦＭが高濃度で存在していることを意味する。酵素及び／又はＤＦＭは、望ましくは、組成物中に存在する主成分である。好ましくは、酵素及び／又はＤＦＭは、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％、又は少なくとも約９８％の濃度で存在し、この濃度は、問題にしている組成物の総量に対する乾燥重量／乾燥重量基準で決定される。
【０２２７】
本明細書に記載の任意の特徴を組み合わせて本発明の範囲内に包含されるように本発明の実施態様を組み合わせることは、本発明の範囲内であると見なされる。特に、細菌についての何らかの治療上の効果が付随して示されることができることも本発明の範囲内であると見なされる。
本発明は、以下の図面及び実施例を参照して、実施例としてのみの目的でこれから記載される。
【実施例１】
【０２２８】
方法
合計１６００羽の１日齢のＣｏｂｂ雄雛が、民間孵化場から購入される。試験の開始時に５０羽の雄を一集団として各処理区画に割り付ける。試験は次の処理から成る（表１）。
【０２２９】
［表１］実施例１の実験計画
【表１】
2015530876.tif 000022
1Phyzyme XPはDanisco社によって提供される大腸菌由来の６−フィターゼである。
2Enviva Pro（商標）は、Danisco社によって提供されるバチルス・サブチリス菌株Bs2084、LSSA01及び15AP4の組み合わせである。
【０２３０】
各区画の鳥の体重が、試験初日、２３日目、３５日目及び最終日（４２日目）に測定される。各区画が測定単位である。ブロイラー用の飼料は、粉砕物（開始期）又はペレット（育成期及び仕上げ期）として給与される。飼料は、ＮＲＣ基準を満たすか又は超えていた（表２）。ミキサーは、飼料間の相互混入を防止するためにフラッシングされる。全ての処理飼料は、Davis S-20ミキサーを使用して混合され、California Pellet Mill（冷ペレット温度６５〜７５℃）を使用してペレット化される。サンプルが、各バッチの開始時、中央時及び終了時に各処理飼料から収集され、一緒にブレンドされて、飼料中の酵素の活性及びEnviva Proの存在が確認される。
【０２３１】
［表２］実施例１の試験飼料組成
【表２】
2015530876.tif 000023
【０２３２】
鳥は、０日〜４２日の間、処理に適した不断給餌を受ける。酵素及びEnviva Proは、全ての試験処理群について適切な混合物及び濃度でDanisco社から提供される。各区画は、混入を避けるため直接的な接触が防止されるように施設内に配置される。開始期飼料から育成期飼料への変更が試験の２３日目に行われた。育成期飼料は、試験の３５日目に仕上げ期飼料に替えられる。各飼料の変更時に、給餌器が一集団としての各区画から取り出され、再秤量され、空にされ、そして適切な処理飼料が再充填される。試験の最終日に飼料が秤量される。各区画の斃死が毎日確認される。鳥が間引きされ又は斃死が発見されたときは、日付及び取り除かれた鶏の重量（ｋｇ）が記録される。全ての斃死又は間引きされた鶏に対して全体検視が実施されて、性別及び推定死因が判定される。壊死性腸炎の兆候が記録される。
【０２３３】
全ての区画は、松の新しいかんな屑で覆われた約４インチ（１０．２ｃｍ）の組み立て床敷を配置された。全ての鳥は、区画に配置される前に市販のコクシジウム症ワクチン（Coccivac-B）を噴霧接種される。２０、２１及び２２日目に、処理群１を除き全ての鳥は、ウェルシュ菌のブロス培地を投与される。ＮＥ（壊死性腸炎）を引き起こすことが分かっており商用ブロイラー事業に由来するウェルシュ菌の野生分離株が、曝露菌として使用される。新鮮な接種材料が、毎日使用される。滴定量は、約１．０×１０８〜９である。各区画は、同量の接種を受ける。接種材料は、チューブフィーダーの基部にある飼料中に混合によって投与される。２３日目に、各区画から５羽の鳥が選ばれ、安楽死され、一群秤量され、そして壊死性腸炎病変の存在の程度について調べられる。評点は０〜３点で行い、０点は正常であり、３点が最大重症度である（０点＝病変なし、１点＝軽度の病変、２＝中程度の病変、３＝顕著な／重症な病変；Hofacre et al．、２００３年、J．Appl．Poult．Res．、12巻、60〜64頁）。試験の間、併用薬剤治療は行わない。
平均値は、一対の標本によるｔ検定を使用して分離される。Ｐ値＜０．０５において有意差ありと認められる。区画が試験単位として使用される。
【０２３４】
結果
体重増加量は、２３日目から試験の終了までに示されるようにウェルシュ菌への曝露によって有意に減少する（図１）。Enviva Proを用いた補給は、各々のサンプル採取日において体重増加量を陽性対照のレベルまで有意に改善する。しかし、高用量フィターゼのさらなる補給（処理１０）は、１２、２３および３５日目に陽性対照よりも有意に大きいレベルまで、そして４２日目に数値的により大きいレベルまで体重増加量を改善する。
【０２３５】
飼料要求率（ＦＣＲ）は、２３日目から試験の終了までに示されるようにウェルシュ菌への曝露によって有意に増加する（図２）。飼料へのEnviva Proの添加は、陰性対照からのＦＣＲの有意の減少をもたらす。しかし、高用量フィターゼの補給は、陽性対照に認められるのと同じレベルまでＦＣＲを減少させる。
【０２３６】
Enviva Proの補給で斃死率の減少が観察され（図３）、これは高用量フィターゼの補給でさらに数値的に減少する。このことは、ウェルシュ菌曝露による重症度の減少によって説明されることができ、高用量フィターゼが補給されたときに認められる数値的に減少した病変の評点によって支持される（図４）。この評点は陽性対照の病変の評点と有意には異ならなかった。
【０２３７】
Enviva Proと組み合わせて高用量フィターゼ（３０００ＦＴＵ／ｋｇ）を使用することには明らかな利益があり、これは、標準用量のフィターゼ（５００ＦＴＵ／ｋｇ）とともにEnviva Proを使用することと比較して、減少したＦＣＲ及び向上した体重増加量によって実証される。これらの利益は腸損傷の減少によっ説明される。
【実施例２】
【０２３８】
飼料及び方法
合計１０４０羽の１日齢のＣｏｂｂ×Ｃｏｂｂ５００雄雛が民間孵化場から購入される。試験の開始時に１０羽の雄が、１集団として各々の飼料処理に従ってPetersimeバッテリーケージに無作為に割り付けられる。健康な鳥だけが試験に選ばれ、試験の過程全体を通して鳥が替えられることはない。試験は以下の処理から成る（表３）。
［表３］実施例２の実験計画
【表３】
2015530876.tif 000024
1EnvivaProは、Danisco社によって提供されるバチルス・サブチリス菌株Bs2084、LSSA01及び15AP4の組み合わせであり、75,000 CFU/飼料gで投与される。
2AxtraPhy（商標）は、Danisco社によって提供されるブティアウクセラ由来の6-フィターゼである。
【０２３９】
鳥の体重が、試験初日（０日目）、１３日目、２１日目及び最終日（２８日目）に記録される。各ケージが測定単位である。飼料はマッシュ形態で給与され、ＮＲＣ基準を満たすか又は超えるように配合される（表４）。ミキサーは、飼料間の相互混入を防止するためにフラッシングされる。サンプルが、各バッチの開始時、中央時及び終了時に各処理飼料から収集され、飼料中の酵素の活性及びＤＦＭの存在の分析のために一緒にブレンドされる。
［表４］実施例２の試験飼料組成
【表４】
2015530876.tif 000025
【０２４０】
全ての鳥は、９日目まで「商用様式」の飼料を給与され、１０日目から処理飼料が給与される。飼料の変更時に、給餌器が一集団としての各区画から取り出され、再秤量され、空にされ、そして適切な処理飼料が再充填される。試験の最終日に飼料が秤量される。各区画の斃死が毎日確認される。鳥が間引きされ又は斃死が発見されたときは、日付及び取り除かれた鶏の重量（ｋｇ）が記録される。全ての斃死又は間引きされた鶏に対して全体検視が実施されて、推定死因が判定される。壊死性腸炎の兆候が記録される。全ての鳥は、試験の全期間にわたって適切な処理飼料の不断給餌を受ける。
【０２４１】
疾病誘導は、試験施設の標準操作手順（ＳＯＰ）に従う。簡潔にいうと、１３日目に、全ての鳥がエイメリア・マキシマ（Eimeria  maxima）菌を経口接種され、この接種菌は鳥１羽当たり約５，０００の接合子嚢を含んでいる。 １８日目に、処理１及び３を給与されたものは別として、全ての鳥がほぼ１０８ｃｆｕ／ｍｌを含有するウェルシュ菌のブロス培養液を受ける。処理飼料を給与された区画は全て同じ量の接種菌を受ける。新鮮なウェルシュ接種菌は、給餌器の基部にある飼料中に混合されることによって、３日間（１８、１９及び２０日目）１日１回投与される。２１日目に、各区画から３羽の鳥が選ばれ、安楽死させられ、一群秤量され、そして壊死性腸炎病変の存在程度について調べられる。評点は０〜３点で行い、０点が正常であり、３点が最大重症度である（０点＝病変なし、１点＝軽度の病変、２＝中程度の病変、３＝顕著な／重症な病変；Hofacreら、２００３年、J．Appl．Poult．Res．、12巻、60〜64頁）。試験の間、併用薬剤治療は行われない。
【０２４２】
鳥の性能データについては、処理の効果がANOVAを使用して検定され、平均値はＪＭＰソフトウェアを用いる一対の標本によるｔ検定を使用して分離される。Ｐ値＜０．０５において有意差ありと認められる。各ケージが試験単位として使用される。ｐＨ及び臓器の重量データについては、各鳥が試験単位である。
交互作用分析をするために、一群の処理飼料の部分集合（処理４〜１３）が、フィターゼ及びEnviva Proの主効果とともにこれらの交互作用を含む要因配列を使用するANOVAを用いて分析される。
【０２４３】
結果
ウェルシュ菌への曝露は、２１日目及び２８日目の両方において、鳥の性能を体重増加量（ＢＷＧ）及び飼料要求率（ＦＣＲ）の両方について、曝露されない対照（処理１対処理２、処理３対処理４）と比較して有意に減少する（表５）。食餌性リンの減少は、２１日目と２８日目とのいずれでもウェルシュ菌への曝露がない状態ではＢＷＧに影響がない。しかし、ウェルシュ菌への曝露がある状態では高リン飼料と低リン飼料との間で、ＢＷＧの顕著な数値の減少がある。これらの観察はＦＣＲのデータと一貫性がある。
【０２４４】
フィターゼが単独で補給される場合、鳥の性能への効果にはばらつきがある。しかし、全ての場合に、病原菌に曝露された場合の低リン飼料（処理４）のレベルよりも高いレベルへの、２１日目のＢＷＧの数値上の向上がある。 得られた結果は、壊死性腸炎への曝露の条件下では高用量フィターゼが鳥の性能をさらに改善することはないことを示している。というのは、フィターゼ単独の飼料処理における最低のＢＷＧは、１０，０００ ＦＴＵのフィターゼ投与量（処理８）において認められ、この数値は病原菌に曝露された場合の低リン飼料（処理４）と有意には異ならないからである。同じ様に、フィターゼが単独で補給されるときの２８日目には、１５００ＦＴＵ超のフィターゼレベルにおいてＢＷＧの数値上の減少がある。
【０２４５】
Enviva Proが単独で補給された場合（処理９）、病原菌に曝露された場合の低リン飼料（処理４）から、２１日目にＢＷＧの有意の改善があり、さらに２８日目までには病原菌に曝露されない低リン飼料と有意には異ならない程度までさらに改善されている。ＦＣＲについては、Enviva Proを補給され病原菌に曝露された対照から有意の減少があるが、病原菌への曝露の負の効果を完全に打ち消すには十分ではない。
【０２４６】
高用量フィターゼとEnviva Proとを組み合わせると、ＢＷＧに関しては１日目及び２８日目の両方においてフィターゼが単独で補給されたときと比較して、より均一な応答が得られる。ＦＣＲについては、２１日目に当該組み合わせの相乗効果がある（図５）。
フィターゼが単独で補給された場合、壊死性腸炎への曝露の条件下では５００、１５００（処理７）及び３０００ＦＴＵ／ｋｇのレベルでは性能の改善（ＦＣＲの減少）がある一方で、フィターゼ用量がこれを超えると性能の低減がある。しかし、プロバイオティクスが併用された場合、３０００ＦＴＵを含んでそのレベルまでフィターゼのみの処理と比較してＦＣＲの数値上の減少が一貫してある（処理１２）。しかし、１０，０００ＦＴＵ（処理１３）では、大きな有意の減少があり、これは全ての処理群のうち最低のＦＣＲを与える。この併用（即ち、陽性対照の処理１、処理２と、処理３とを除いて)の効果を具体的に調べると、２１日目のＦＣＲに併用の有意の効果がある（Ｐ＝０．０３１９）（表６）。
【０２４７】
食餌性リン平均量の減少は、リンの生物学的利用能の指標である脛骨灰分の有意の減少を引き起こす(表５)。ウェルシュ菌への曝露は脛骨灰分の小さい数値上の減少をもたらし、これは恐らく当該感染によって引き起こされた腸の損傷が、栄養素を効率的に吸収する腸の能力を低下させたことによると思われる。フィターゼ単独の補給は、病原菌に曝露されない場合の高リン飼料（処理１）と有意には異ならないレベルまで脛骨灰分％の回復をもたらす。Enviva Proが単独で補給された場合（処理９）、病原菌に曝露されない場合の低リン飼料（処理３）より大きいレベルまで脛骨灰分％の数値上の増加があり、これは、脛骨灰分の減少に関してのウェルシュ菌への曝露の影響を打ち消す（これは腸機能の回復を示唆している可能性がある）本発明製品の能力を実証している。本発明による組み合わせが補給された場合、３０００ＦＴＵにおいて病原菌に曝露されない場合の高リン飼料（処理１）より大きいレベルに達するフィターゼの用量応答性があり、このような改善はフィターゼが単独で補給された場合には観察されない。
【０２４８】
［表５］性能変数（２１日目及び２８日目の飼料摂取量、体重増加量、飼料要求率及び骨灰分量％のデータ）に対する飼料処理の効果
【表５】
2015530876.tif 000026
【０２４９】
［表６］２１日目のＦＣＲに対する（フィターゼ ＋ Enviva Pro）の組み合わせの効果
【表６】
2015530876.tif 000027
【０２５０】
ウェルシュ菌への曝露は、斃死率及び病変評点に有意の効果を与える（表７）。曝露されない群における斃死無し及び病変評点零は、曝露された群と曝露されない群との間に汚染がないことを示す。病変の評点に関しては、どのフィターゼのレベルにおいてもフィターゼと（EnvivaPro + フィターゼ）との間に有意の差はない（処理４〜８対処理９〜１３）。しかし、１５００ＦＴＵ（処理６）及び３０００ＦＴＵ（処理７）のフィターゼ単独飼料において曝露された低リン飼料のレベルを超える斃死率の数値上の増加がある。Enviva Proの追加は、曝露された低リン飼料からの斃死率の有意の減少をもたらし、また、フィターゼ単独飼料と比較して併用されたフィターゼ投与の間の斃死率の変動を低減した。
【０２５１】
［表７］斃死率(%)及び壊死性腸炎(ＮＥ)病変評点に対する飼料処理の効果
【表７】
2015530876.tif 000028
【実施例３】
【０２５２】
方法
合計１０８０羽の１日齢の雛が、民間孵化場から購入される。試験の開始時に１５羽の雛が一集団として各処理区画に割り付けられる。試験は次の飼料処理から成り（表８）、１飼料処理当たり８個の正副処理区画がある。
【０２５３】
［表８］実験計画
【表８】
2015530876.tif 000029
1EnvivaProは、Danisco社によって提供されるバチルス・サブチリス菌株Bs2084、LSSA01及び15AP4の組み合わせである。
2Axtra Phyは、Danisco Animal Nutrition 社から入手可能なバティアウクセラ由来の6-フィターゼである。
【０２５４】
鳥の体重が、試験開始日（０日目）、６日目、２１日目及び最終日（３５日目）に記録される。各区画が測定単位である。飼料は、ＮＲＣ基準を満たすように配合される（表９）。全ての処理飼料は、Davis S-20ミキサーを使用して混合される。該ミキサーは、飼料間の相互混入を防止するために各飼料間でフラッシングされる。サンプルが、各バッチの開始時、中央時及び終了時に各処理飼料から収集され、一緒にされ、そして分析されて飼料中の酵素の活性及びＤＦＭの存在が確認される。飼料はマッシュ形態で給与される。
全ての区画は、松の新しいかんな屑で覆われた約４インチ（１０．２ｃｍ）の組み立て床敷を有する。全ての鳥は、区画に配置される前に市販のコクシジウム症ワクチンを経口接種される。
【０２５５】
［表９］試験用飼料組成
【表９】
2015530876.tif 000030
【０２５６】
全ての鳥は、０日目〜６日目までの間、商用様式の開始期飼料を給与される。処理に適切である育成期飼料が７日目から２１日目まで給与される。処理に適切である仕上げ期飼料が２１日目から試験の終了日（３５日目）まで給与される。飼料の変更時に、給餌器が各区画から取り出され、再秤量され、空にされ、そして適切な処理飼料が再充填される。試験の最終日に飼料が秤量される。各区画の斃死率が毎日確認される。鳥が間引きされ又は斃死が発見されたときは、日付及び取り除かれた重量（ｋｇ）が記録される。
性能データについては、平均値が一対の標本によるｔ検定を使用して分離される。Ｐ値＜０．０５において有意差ありと認められる。区画が実験単位として使用される。
【０２５７】
結果
フィターゼ単独の用量を増加しても、３５日齢において飼料要求率（ＦＣＲ）の有意の改善を引き起こさない（図６）。フィターゼの全てのレベルにおいてEnviva Proを追加するとＦＣＲが減少する。フィターゼ用量が増加するにつれてEnviva Proを加えることによる利益も増加する。最大レベルのフィターゼを含有させると、Enviva Proを含む飼料と含まない飼料との間でＦＣＲの最大の差が生じる。
【０２５８】
［表１０］性能の結果
【表１０】
2015530876.tif 000031
【０２５９】
より高用量のフィターゼでは、フィターゼが単独で補給されたときと比較してEnviva Proが補給されるときに体重増加量（ＢＷＧ）の数値上の増加がある（表１０）。この結果は、最低用量のフィターゼ（５００ＦＴＵ）では認められない。
【実施例４】
【０２６０】
飼料及び方法
１日齢のＣｏｂｂ雄雛が民間孵化場から購入される。試験の開始時に１０羽の雄雛が１集団として各バッテリーケージに無作為に割り付けられる。１飼料処理当たり８個の正副ケージがある。試験は以下の飼料処理から成る（表１１）。
【０２６１】
［表１１］実施例４の実験計画
【表１１】
2015530876.tif 000032
1Hi PhosはRonozyme Hi Phosであり、シトロバクター・ブラアキイ由来のフィターゼを含んでおり、DSM/Novozymes社から入手可能である。
2Enviva Pro（商標）は、Danisco社によって提供されるバチルス・サブチリス菌株Bs2084、LSSA01及び15AP4の組み合わせである。
【０２６２】
鳥の体重が、試験初日（０日目）、２１日目及び最終日（２８日目）に記録される。各ケージが測定単位である。飼料はＮＲＣ基準を満たすか又は超える（表１２）。全ての処理飼料はDavis S-20ミキサーを使用して混合される。ミキサーは、飼料間の相互混入を防止するために各飼料間にフラッシングされる。サンプルが各バッチの開始時、中央時及び終了時に各処理飼料から収集され、一緒にブレンドされて酵素活性及び飼料中のEnviva Proの存在が確認される。
【０２６３】
［表１２］実施例４の試験飼料組成
【表１２】
2015530876.tif 000033
【０２６４】
全ての鳥は、９日目まで商用の開始期前飼料を給与され、１０日目から処理飼料が給与される。飼料の変更時に、給餌器が、ケージから取り出され、再秤量され、空にされ、そして適切な処理飼料が再充填される。試験の最終日に飼料が秤量される。ケージは毎日斃死が確認される。鳥が間引きされ又は斃死が発見されたときは、日付及び取り除かれた鶏の重量（ｋｇ）が記録される。全ての斃死又は間引きされた鶏に対して全体検視が実施されて、推定死因が判定される。壊死性腸炎の兆候が記録される。全ての鳥は、試験の全期間にわたって適切な処理飼料の不断給餌を受ける。
【０２６５】
疾病誘導は、試験施設の標準操作手順（ＳＯＰ）に従う。簡潔にいうと、１３日目に、全ての鳥がエイメリア・マキシマ菌を経口接種され、この接種菌は鳥１羽当たり約５，０００の接合子嚢を含んでいる。１８日目に、飼料処理１及び３を給与されたものは別として、全ての鳥がほぼ１０８ｃｆｕ／ｍｌを含有するウェルシュ菌のブロス培養液を受ける。処理飼料を給与された区画は全て同じ量の接種菌を受ける。新鮮なウェルシュ接種菌は、給餌器の基部にある飼料中に混合されることによって、３日間（１８、１９及び２０日目）１日１回投与される。２１日目に、各区画から３羽の鳥が選ばれ、安楽死させられ、一群秤量され、そして壊死性腸炎病変の存在程度について調べられる。評点は０〜３点で行い、０点が正常であり、３点が最大重症度である（０点＝病変なし、１点＝軽度の病変、２＝中程度の病変、３＝顕著な／重症な病変；Hofacreら、２００３年、J．Appl．Poult．Res．、12巻、60〜64頁）。試験の間、併用薬剤治療は行われない。
【０２６６】
２１日目に１ケージ当たり２羽の鳥の回腸消化物のｐＨが測定される。該消化物のｐＨは、各々の鳥の部位中にｐＨ探子を刺し通すSensorex槍状先端を挿入することによって測定される。双方の鳥の砂嚢も取り出され、秤量される。２１日目に２羽の鳥の右脛骨が取り出され、１００℃で一晩乾燥され、秤量される。これらのサンプルは次に脂肪を抽出され、６００℃で１６時間マッフル炉中で燃焼されて、無脂肪骨灰分量が測定される。骨灰分パーセントが次に残留灰分重量と乾燥無脂肪骨重量との比に１００を乗じて計算される。
【０２６７】
統計分析
性能データについては、平均値が一対の標本によるｔ検定を使用して分離される。Ｐ値＜０．０５において有意差ありと認められる。ケージが実験単位として使用される。
【０２６８】
結果
壊死性腸炎に曝露された状況下でHi Phosの用量を増加すると、２１日齢における飼料要求率の増加（図７。即ち、単位体重増加量当たり、より多くの飼料）を引き起こす。飼料中のフィターゼ含有量の全てのレベルにおいてEnviva Proを追加すると、ＦＣＲの減少、即ちＦＣＲの改善が生じる。飼料中のフィターゼ含有量の最大レベル（３０００ＦＴＵ／ｋｇ）において、用量１５００ＦＴＵ／ｋｇの場合を超えるＦＣＲの増加が見られるが、これはEnviva Proの追加によって打ち消される。
【０２６９】
［表１３］実施例４による性能の結果
【表１３】
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【０２７０】
体重増加量に対するフィターゼにEnviva Proを追加する効果は、高フィターゼ用量（３０００ＦＴＵ／ｋｇ)においてより明白であり、この高フィターゼ用量（３０００ＦＴＵ／ｋｇ)は、体重増加量は曝露されない場合の対照処理と比較して有意には異ならなかったところである。
脛骨灰分パーセントに対するフィターゼの効果は、曝露された場合の陰性対照と有意には異ならず、このことは、フィターゼが高用量においてさえ、曝露された状況下では脛骨灰分に有意の効果を及ぼさないことを示唆している（図８）。しかし、Enviva Proの追加は、脛骨灰分パーセントを有意に改善する作用をして、表１４に示されたようにフィターゼの最大用量（３０００ＦＴＵ／ｋｇ)において、曝露されない場合の陽性対照に見られるレベルに近いところまで引き上げる。
【０２７１】
［表１４］実施例４による他の生理学的測定値
【表１４】
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【０２７２】
高レベルのフィターゼ（３０００ＦＴＵ／ｋｇ）は、２１日目の回腸ｐＨを関連対照よりも増加させ、Enviva Proの添加はそれを低減するように作用し、最低のｐＨがEnviva Pro単独の飼料処理で認められる。最低の砂嚢重量は、曝露された陰性対照及びHi Phosの最大用量（３０００ＦＴＵ／ｋｇ）において認められる。Enviva Proの追加は、３０００ＦＴＵ／ｋｇの用量において砂嚢重量を数値的に増加させるが、有意な量ではない。
病原菌への曝露は斃死率を有意に増加させるが、フィターゼの添加はそれを低減するように作用する。Enviva Proとの併用は斃死率をさらに低減した。
【０２７３】
ここまでの明細書中で言及された全ての刊行物は、参照によって本明細書に取り込まれる。本発明のここまでに記載された方法及び体系の様々な修正及び変化は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく当業者に明白である。本発明は特定の好ましい実施態様に関連して記載されてきたが、特許請求された本発明がそのような特定の実施態様に不当に限定されてはならないことは理解されなければならない。実際、生化学及びバイオテクノロジー又は関連する分野の当業者にとって明白な、本発明を実施するための記載された様式の様々な修正は、以下の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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