(57)【要約】【課題】  ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物の新規な用途を提供すること。【解決手段】  本発明は、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物よりなるＩＬ−１２産生促進剤である。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物よりなるインターロイキン１２産生促進剤。
【請求項２】
ヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分１００重量部未満を含んでなる組成物よりなる請求項１記載のインターロイキン１２産生促進剤。
【請求項３】
実質的にスーパーオキシドジスムターゼを配合していない組成物よりなる請求項１または２記載のインターロイキン１２産生促進剤。
【請求項４】
ヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分２０重量部〜８０重量部を含んでなる組成物よりなる請求項１乃至３のいずれかに記載のインターロイキン１２産生促進剤。
【請求項５】
ヤマブシタケ成分がその菌糸体、子実体、菌糸体および／または子実体の抽出物から選ばれる少なくとも１つである請求項１乃至４のいずれかに記載のインターロイキン１２産生促進剤。
【請求項６】
メシマコブ成分がその菌糸体、子実体、菌糸体および／または子実体の抽出物から選ばれる少なくとも１つである請求項１乃至５のいずれかに記載のインターロイキン１２産生促進剤。
【請求項７】
ヤマブシタケ成分および／またはメシマコブ成分が酵素処理物である請求項１乃至６のいずれかに記載のインターロイキン１２産生促進剤。
【請求項８】
さらに酵母成分を含んでなる組成物よりなる請求項１乃至７のいずれかに記載のインターロイキン１２産生促進剤。
【請求項９】
ヤマブシタケ成分１００重量部に対して酵母成分２０重量部〜８０重量部を含んでなる組成物よりなる請求項８記載のインターロイキン１２産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物の新規な用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
サンゴハリタケ科サンゴハリタケ属の食用きのこであるヤマブシタケ（Ｈｅｒｉｃｉｕｍ  ｅｒｉｎａｃｅｕｍ）は、昨今、神経成長因子合成誘導促進作用、免疫賦活作用、抗腫瘍作用などに有効な成分を含んでいることが確認され、機能性成分が豊富なきのことして注目されている。また、メシマコブ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｌｉｎｔｅｕｓ）は、タバコウロコタケ科キコブタケ属の優れた抗腫瘍作用を有するきのことして知られている。
【０００３】
ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物としては、特許文献１に、これらを含有するβ−グルカン含有物と、酸素分子から生じる不安定な活性酸素（Ｏ2-）を不均化反応により除去する酵素であるスーパーオキシドジスムターゼ（以下、ＳＯＤと称する）と脂質と蛋白質を含有するＳＯＤ組成物とを有効成分として含有する免疫賦活組成物が開示されている。特許文献１には、この組成物が、食品として摂取した場合に、きのこ類が本来有する優れた免疫力調整効果をさらに安定して発現でき、特に免疫力低下時の向上効果に優れること、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分の配合比率は、メシマコブ成分１００重量部に対してヤマブシタケ成分５重量部〜１００重量部（メシマコブリッチ）が好ましいことが記載されている。しかしながら、特許文献１におけるヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物の機能解明は、必ずしも十分なものではない。
【特許文献１】特開２００３−１８３１７６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで本発明は、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物のさらなる機能解明に基づいて新規な用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記の点に鑑みて種々の検討を行った結果、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物が優れたインターロイキン１２（以下、ＩＬ−１２と称する）産生促進活性を有することを知見した。ＩＬ−１２は、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）の活性化と細胞性免疫の活性化を介して、非特異的な免疫と抗原特異的な細胞免疫の両方を賦活化するサイトカインであり、抗癌作用や抗ウイルス作用等を有することが知られている。例えば、特開平１０−１３９６７４号公報には、ある種の乳酸菌の菌体がＩＬ−１２産生促進活性を有することが記載されている。しかしながら、きのこ類よりなるＩＬ−１２産生促進剤については今だ報告はない。
【０００６】
上記の知見に基づいてなされた本発明のＩＬ−１２産生促進剤は、請求項１記載の通り、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物よりなることを特徴とする。
また、請求項２記載のＩＬ−１２産生促進剤は、請求項１記載のＩＬ−１２産生促進剤において、ヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分１００重量部未満を含んでなる組成物よりなることを特徴とする。
また、請求項３記載のＩＬ−１２産生促進剤は、請求項１または２記載のＩＬ−１２産生促進剤において、実質的にＳＯＤを配合していない組成物よりなることを特徴とする。
また、請求項４記載のＩＬ−１２産生促進剤は、請求項１乃至３のいずれかに記載のＩＬ−１２産生促進剤において、ヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分２０重量部〜８０重量部を含んでなる組成物よりなることを特徴とする。
また、請求項５記載のＩＬ−１２産生促進剤は、請求項１乃至４のいずれかに記載のＩＬ−１２産生促進剤において、ヤマブシタケ成分がその菌糸体、子実体、菌糸体および／または子実体の抽出物から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする。
また、請求項６記載のＩＬ−１２産生促進剤は、請求項１乃至５のいずれかに記載のＩＬ−１２産生促進剤において、メシマコブ成分がその菌糸体、子実体、菌糸体および／または子実体の抽出物から選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする。
また、請求項７記載のＩＬ−１２産生促進剤は、請求項１乃至６のいずれかに記載のＩＬ−１２産生促進剤において、ヤマブシタケ成分および／またはメシマコブ成分が酵素処理物であることを特徴とする。
また、請求項８記載のＩＬ−１２産生促進剤は、請求項１乃至７のいずれかに記載のＩＬ−１２産生促進剤において、さらに酵母成分を含んでなる組成物よりなることを特徴とする。
また、請求項９記載のＩＬ−１２産生促進剤は、請求項８記載のＩＬ−１２産生促進剤において、ヤマブシタケ成分１００重量部に対して酵母成分２０重量部〜８０重量部を含んでなる組成物よりなることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物の新規な用途としてのＩＬ−１２産生促進剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明のＩＬ−１２産生促進剤は、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物よりなることを特徴とするものである。ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分の配合比率は、ヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分１００重量部未満が好ましく、２０重量部〜８０重量部がより好ましい。
【０００９】
ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分としては、各々その菌糸体、子実体、菌糸体および／または子実体の抽出物から選ばれる少なくとも１つを好ましく用いることができる。これらは自体公知の培養技術によって培養することで大量生産することができる。子実体は粉砕して粉末形態で用いることが好ましい。粉砕する方法は特に限定されず、通常の粉砕装置を用いて粒径が数十μｍ〜数千μｍになるように粉砕してもよいし、同体気流摩擦装置（トルネードミル）を用いて粒径が数μｍ〜数十μｍになるように微粉砕してもよい。ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分は、各々その菌糸体、子実体、菌糸体および／または子実体の抽出物から選ばれる少なくとも１つに、β−グルカンの含有量を高めることができるセルラーゼやヘミセルラーゼなどの糖質分解酵素、プロテアーゼなどを作用させて得られる酵素処理物であってもよい。
【００１０】
本発明のＩＬ−１２産生促進剤は、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分の他に、賦形剤となり得る添加物が含まれていてもよい。好ましい添加物としては、β−グルカンを豊富に含む酵母細胞壁などの酵母成分が挙げられる。ヤマブシタケ成分と酵母成分の配合比率は、ヤマブシタケ成分１００重量部に対して酵母成分２０重量部〜８０重量部が好ましい。
【００１１】
本発明のＩＬ−１２産生促進剤は、感染症、自己免疫疾患、炎症、腫瘍、ＡＩＤＳ等、多くの疾患の治療と予防に有効な手段になるものと期待され、顆粒や錠剤などに製剤化して、服用することができる。その服用量は、服用者の年齢、性別、体重、体調等に応じて適宜決定すればよい。なお、製剤化に際して、必要に応じて所定の添加剤を添加してもよいことはいうまでもない。
【００１２】
なお、ヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分１００重量部未満を含んでなる組成物は、ＳＯＤを組成物中に配合しなくても優れた抗酸化活性を有するので、ＩＬ−１２産生促進活性とともに健康の維持や回復に貢献する価値の高いものである。
【実施例】
【００１３】
以下、本発明を実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定して解釈されるものではない。
【００１４】
実施例１：
１−１：本発明のＩＬ−１２産生促進剤の製造（その１）
メシマコブ子実体乾燥物の殺菌粉末（ハンマーミルを用いて粒径を約２０μｍ〜約２００μｍとしたもの）５ｋｇに水３０Ｌを加え、ｐＨを４．０〜４．５に調整した後、ヘミセルラーゼ（ヘミセルラーゼＭ：田辺製薬社製）６０ｇを加えて５５℃で２時間酵素処理を行った。その後、処理液に対してエタノール抽出および熱水抽出を行い、得られた両抽出液と抽出残渣を混合し、混合懸濁液に酵母細胞壁５ｋｇを加えてスプレードライすることで、メシマコブ成分を原材料の子実体乾燥物に換算して５ｋｇ分含む酵母細胞壁添加メシマコブ酵素処理粉末とした。これにヤマブシタケ子実体乾燥物の殺菌粉末（ハンマーミルを用いて粒径を約２０μｍ〜約２００μｍとしたもの）１０ｋｇを混合して組成物とし、本発明のＩＬ−１２産生促進剤とした（ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分の配合比率はヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分５０重量部）。
【００１５】
１−２：本発明のＩＬ−１２産生促進剤の製造（その２）
上記の酵母細胞壁添加メシマコブ酵素処理粉末とヤマブシタケ子実体乾燥物の殺菌粉末を４：１の割合で混合して組成物とし、本発明のＩＬ−１２産生促進剤とした（ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分の配合比率はヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分２００重量部）。
【００１６】
１−３：本発明のＩＬ−１２産生促進剤の製造（その３）
上記の酵母細胞壁添加メシマコブ酵素処理粉末とヤマブシタケ子実体乾燥物の殺菌粉末を３：２の割合で混合して組成物とし、本発明のＩＬ−１２産生促進剤とした（ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分の配合比率はヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分７５重量部）。
【００１７】
１−４：本発明のＩＬ−１２産生促進剤の製造（その４）
上記の酵母細胞壁添加メシマコブ酵素処理粉末とヤマブシタケ子実体乾燥物の殺菌粉末を２：３の割合で混合して組成物とし、本発明のＩＬ−１２産生促進剤とした（ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分の配合比率はヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分３３重量部）。
【００１８】
１−５：本発明のＩＬ−１２産生促進剤の製造（その５）
上記の酵母細胞壁添加メシマコブ酵素処理粉末とヤマブシタケ子実体乾燥物の殺菌粉末を１：４の割合で混合して組成物とし、本発明のＩＬ−１２産生促進剤とした（ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分の配合比率はヤマブシタケ成分１００重量部に対してメシマコブ成分１３重量部）。
【００１９】
試験例１：本発明のＩＬ−１２産生促進剤のＩＬ−１２産生促進活性
Ａ．検体
１．対照区：Ｈａｎｋ’ｓ液（以下検体αと称する）
２．比較区：実施例１−１に記載の酵母細胞壁添加メシマコブ酵素処理粉末（以下、検体Ｘと称する）
３．試験区：実施例１−２で製造したＩＬ−１２産生促進剤（以下、検体Ａと称する）
４．試験区：実施例１−３で製造したＩＬ−１２産生促進剤（以下、検体Ｂと称する）
５．試験区：実施例１−４で製造したＩＬ−１２産生促進剤（以下、検体Ｃと称する）
６．試験区：実施例１−５で製造したＩＬ−１２産生促進剤（以下、検体Ｄと称する）
７．比較区：実施例１−１に記載のヤマブシタケ子実体乾燥物の殺菌粉末（以下、検体Ｙと称する）
【００２０】
Ｂ．試薬
・  ＩＬ−１２アッセイキット（和光純薬工業株式会社）
・  Ｈａｎｋ’ｓ液（ペニシリン、ストレプトマイシン含有）
・  １０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０溶液（ＲＰＭＩ１６４０（和光純薬工業株式会社）溶液と牛胎児血清（ＦＣＳ）とを容量比９：１で混合したもの）
・  リポポリサッカライド（ＬＰＳ：和光純薬工業株式会社）溶液（１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０溶液を用いて１００ｎｇ／ｍＬに調製したもの）
【００２１】
Ｃ．サンプル液
検体２００ｍｇを乳鉢で粉砕した後、Ｈａｎｋ’ｓ液１．８ｍＬに溶解した。これを１５ｍＬチューブに移し、室温にて１時間静置した。その後、１０００ｒｐｍで１０分間遠沈し、上清０．５ｍＬを回収した。回収した０．５ｍＬを原液とし、Ｈａｎｋ’ｓ液４ｍＬを加えサンプル液とした。なお、検体αについてはＨａｎｋ’ｓ液自体をサンプル液とした。
【００２２】
Ｄ．ＩＬ−１２産生促進活性の測定方法
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（♀６週齢、ｎ＝８）を１週間予備飼育した７週齢の実験マウスの腹腔内に、各サンプル液をそれぞれ０．５ｍＬ投与した。サンプル液の投与から１８時間後に腹腔内細胞を回収した。回収した細胞を１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０溶液にて洗浄し、溶血バッファーにて赤血球を除去した後、細胞数を算定し、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０溶液を用いて１×１０6ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製し、２４穴カルチャープレートにて培養した。その際に、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを１０μＬ加えた場合と加えなかった場合との２通りで培養した。ＬＰＳ添加から１８時間後に培養上清を回収し、ＩＬ−１２アッセイキットを用い、その製品プロトコールに準じてＩＬ−１２産生量を測定した。
【００２３】
Ｅ．測定結果
サンプル液を投与したマウスの細胞毎に、ＬＰＳを加えて培養した細胞におけるＩＬ−１２産生量と、ＬＰＳを加えずに培養した細胞におけるＩＬ−１２産生量の差を求め、その平均値を検体のＩＬ−１２産生量として図１に示した。図１から明らかなように、試験区（検体Ａ〜検体Ｄ）は比較区（検体Ｘと検体Ｙ）に比べて優れたＩＬ−１２産生促進活性を有しており、とりわけ、検体Ｂと検体Ｃの活性が優れていた。
【００２４】
参考例１：実施例１−１で製造した組成物のＳＯＤ様活性の測定
Ａ．方法（Ｎｉｔｒｉｔｅ法）
１．試薬
（ａ）基質
ヒポキサンチン（Ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ）１３．６ｍｇと、ヒドロキシルアミン−Ｏ−スルフォン酸１００ｍｇを、１００ｍＭのＫＨ2ＰＯ4・ほう酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．２：以下、単に緩衝液と略称する）１００ｍＬに溶解したものを用いた。
（ｂ）酵素液
キサンチンオキシダーゼ（Ｘａｎｔｈｉｎｅ  Ｏｘｉｄａｓｅ）１０μＬと、ＥＤＴＡ・２Ｎａ３７２ｍｇを緩衝液１００ｍＬに溶解した溶液０．５ｍＬと、緩衝液９．５ｍＬを混合したものを用いた。
（ｃ）発色液
スルファニル酸２２５ｍｇと、Ｎ−１−ナフチルエチレンジアミン・２ＨＣｌ５ｍＬと、酢酸１２５ｍＬを混合し、蒸留水で全量を５００ｍＬにしたものを用いた。
２．サンプル液
実施例１−１で製造した組成物（検体）１５０ｍｇを蒸留水３ｍＬに懸濁し、ボルテックスミキサーにて３０秒間混和した後、３０００ｒｐｍで１０分間遠沈し、上清を回収した。回収した上清を孔径０．４５μｍのフィルターにて濾過し、濾液をサンプル原液とした。このサンプル原液より希釈系列を調製し、サンプル液とした。
３．測定方法
試験管にサンプル液０．１ｍＬと蒸留水０．５ｍＬと基質０．２ｍＬを入れ、３７℃の温浴で５分間加熱した。その後、酵素液０．２ｍＬを加え、３７℃の温浴でさらに３０分間加熱した後、発色液２ｍＬを加え、室温で２時間放置してから５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールとして蒸留水を用い、各サンプル液の希釈倍率における発色阻害率（％）を｛(コントロール吸光度−サンプル液吸光度)／コントロール吸光度｝×１００から求めた。
発色阻害率が５０％であるサンプルの希釈倍率を求めて、その値を１ユニット（１  Ｎｉｔｒｉｔｅ  ｕｎｉｔ）とした。これに希釈倍率をかけてサンプル原液のユニット数を求めた。サンプル原液は検体５０ｍｇ／ｍＬで調製してあるので、サンプル原液のユニット数を２０倍して検体１ｇあたりのユニット数を求め、これをＳＯＤ様活性値とした。すなわち、例えば、原液を２倍希釈してなるサンプル液の阻害率が５０％であった場合、サンプル原液のユニット数は１（ユニット）×２（希釈率）＝２ユニットとなり、サンプル原液は検体５０ｍｇ／ｍＬで調製してあるので、サンプル原液のユニット数を２０倍して検体１ｇあたりのユニット数を求めると４０ユニットとなり、これをＳＯＤ様活性値とした。
Ｂ．結果
実施例１−１で製造した組成物の１ｇあたりのＳＯＤ様活性値を、酵母細胞壁添加メシマコブ酵素処理粉末とヤマブシタケ子実体乾燥物の殺菌粉末（いずれも実施例１−１に記載のもの）の１ｇあたりのＳＯＤ様活性値とともに図２に示す。図２から明らかなように、実施例１−１で製造した組成物は、酵母細胞壁添加メシマコブ酵素処理粉末単体とヤマブシタケ子実体乾燥物の殺菌粉末単体よりも遥かに高いＳＯＤ様活性値を有しており、相乗効果が認められた。
【００２５】
製造例１：錠剤品の製造
実施例１−１で製造した組成物を打錠機にて打錠し、ＩＬ−１２産生促進活性を有する錠剤品とした。
【産業上の利用可能性】
【００２６】
本発明は、ヤマブシタケ成分とメシマコブ成分を含んでなる組成物の新規な用途としてのＩＬ−１２産生促進剤を提供することができる点において、産業上の利用可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】試験例１におけるＩＬ−１２産生促進活性を示すグラフ。
【図２】参考例１におけるＳＯＤ様活性を示すグラフ。
【図１】
2005126354.tif 000003
【図２】
2005126354.tif 000004