(57)【要約】本発明は、４０mg/ml〜２００mg/mlのＰ−セレクチンに対する抗体；０．０１％〜０．１％のポロキサマー；５mM〜００mMの緩衝液；および１００mM〜５００mMの少なくとも１つの安定化剤を含むｐＨ範囲４．５〜７．０の安定な液状の薬学的製剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
−  ４０mg/ml〜２００mg/mlのＰ−セレクチンに対する抗体；
−  ０．０１％〜０．１％のポロキサマー；
−  ５mM〜１００mMの緩衝液；
−  １００mM〜５００mMの少なくとも１つの安定化剤
を含む、ｐＨ範囲４．５〜７．０で安定な液状の薬学的製剤。
【請求項２】
前記Ｐ−セレクチンに対する抗体の濃度が、４０mg/ml〜１００mg/mlの範囲、特に５０mg/mlである、請求項１記載の薬学的製剤。
【請求項３】
前記ポロキサマーがポロキサマー１８８である、請求項１または２記載の薬学的製剤。
【請求項４】
前記ポロキサマーが、０．０１％〜０．０５％の範囲、特に０．０２％の濃度で存在する、請求項１〜３のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項５】
前記緩衝液がヒスチジン緩衝液、特にヒスチジン酢酸緩衝液である、請求項１〜４のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項６】
前記緩衝液が、１０〜３０mMの範囲、特に２０mMの濃度を有する、請求項１〜５のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項７】
前記製剤のｐＨが５．０〜６．０の範囲、特に５．５である、請求項１〜６のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項８】
前記少なくとも１つの安定化剤が糖またはアミノ酸から選択される、請求項１〜７のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項９】
前記少なくとも１つの安定化剤が、１４０〜２５０mMの範囲、特に２１０〜２３０mMの範囲の濃度で存在する、請求項１〜８のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項１０】
前記安定化剤が、トレハロース、スクロース、ソルビトールおよびアルギニン塩酸塩からなる群より選択される、請求項８または９記載の薬学的製剤。
【請求項１１】
前記Ｐ−セレクチンに対する抗体がヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項１〜１１のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項１２】
前記Ｐ−セレクチンに対する抗体が、
ｌ）配列番号２のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｍ）配列番号４のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号３のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｎ）配列番号６のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号５のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｏ）配列番号８のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号７のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｐ）配列番号１０のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号９のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｑ）配列番号１２のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１１のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｒ）配列番号１４のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１３のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｓ）配列番号１６のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１５のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｔ）配列番号１８のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１７のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｕ）配列番号２０のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１９のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｖ）配列番号２２のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号２１のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン
からなる群より独立して選択される可変領域を含む、請求項１〜１１のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項１３】
前記Ｐ−セレクチンに対する抗体の重鎖可変ドメインが配列番号４のアミノ酸配列を含み、そして該Ｐ−に対する抗体の軽鎖可変ドメインが配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１２のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項１４】
前記Ｐ−セレクチンに対する抗体が、配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、ヒト抗体である、請求項１〜１３のいずれか一項記載の薬学的製剤。
【請求項１５】
配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する５０mg/mlのヒト抗体と、
（ｉ）０．０２％のポロキサマー１８８、
２３０mMのトレハロース、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｉｉ）０．０２％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｉｉｉ）０．０２％のポロキサマー１８８、
１４５mMのアルギニン塩酸塩、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｉｖ）０．０２％のポロキサマー１８８、
２３０mMのソルビトール、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液かと
を含む、請求項１記載の安定な液状の薬学的製剤。
【請求項１６】
（ａ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する４０mg/mlのヒト抗体、
０．０１％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｂ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する６０mg/mlのヒト抗体、
０．０１％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｃ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する４０mg/mlのヒト抗体、
０．０３％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｄ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する６０mg/mlのヒト抗体、
０．０３％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｅ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する４０mg/mlのヒト抗体、
０．０１％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ６．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｆ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する６０mg/mlのヒト抗体、
０．０１％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ６．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｇ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する４０mg/mlのヒト抗体、
０．０３％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ６．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｈ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する６０mg/mlのヒト抗体、
０．０３％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ６．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か、
（ｉ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する５０mg/mlのヒト抗体、
０．０２％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液か
を含む、請求項１記載の安定な液状の薬学的製剤。
【請求項１７】
炎症性疾患および血栓性疾患並びに炎症過程および／または血栓過程によってもたらされる血管疾患の病態の予防または治療、特に、アテローム血栓症および血管狭窄が根底にある血管疾患、例えば冠動脈疾患（ＣＡＤ）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）後の狭窄、冠静脈グラフト病変、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）後の再狭窄、透析シャント狭窄、透析シャント閉塞、並びに、動脈および深静脈の血栓症、および血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＰＰ）の予防または治療、心筋梗塞、脳虚血事象（例えば脳卒中）、腎梗塞、急性腎障害、臓器移植片拒絶および急性白血球媒介性肺損傷によって引き起こされる虚血後組織傷害の予防および治療、敗血症ショック、アレルギー症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、移植血管障害、急性膵炎、炎症性腸疾患、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、乾癬、鎌状赤血球症の治療、並びに腫瘍転移の予防に使用するための、請求項１〜１６のいずれか一項記載の安定な液状の薬学的製剤。
【請求項１８】
炎症性疾患および血栓性疾患並びに炎症過程および／または血栓過程によってもたらされる血管疾患の病態の予防または治療、特に、アテローム血栓症および血管狭窄が根底にある血管疾患、例えば冠動脈疾患（ＣＡＤ）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）後の狭窄、冠静脈グラフト病変、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）後の再狭窄、透析シャント狭窄、透析シャント閉塞、並びに、動脈および深静脈の血栓症、および血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＰＰ）の予防または治療、心筋梗塞、脳虚血事象（例えば脳卒中）、腎梗塞、急性腎障害、臓器移植片拒絶および急性白血球媒介性肺損傷によって引き起こされる虚血後組織傷害の予防および治療、敗血症ショック、アレルギー症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、移植血管障害、急性膵炎、炎症性腸疾患、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、乾癬、鎌状赤血球症の治療、並びに腫瘍転移の予防に使用するための医薬品の調製のための、請求項１〜１６のいずれか一項記載の安定な液状の薬学的製剤の使用。
【請求項１９】
炎症性疾患および血栓性疾患並びに炎症過程および／または血栓過程によってもたらされる血管疾患の病態の予防または治療、特に、アテローム血栓症および血管狭窄が根底にある血管疾患、例えば冠動脈疾患（ＣＡＤ）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）後の狭窄、冠静脈グラフト病変、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）後の再狭窄、透析シャント狭窄、透析シャント閉塞、並びに、動脈および深静脈の血栓症、および血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＰＰ）の予防または治療、心筋梗塞、脳虚血事象（例えば脳卒中）、腎梗塞、急性腎障害、臓器移植片拒絶および急性白血球媒介性肺損傷によって引き起こされる虚血後組織傷害の予防および治療、敗血症ショック、アレルギー症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、移植血管障害、急性膵炎、炎症性腸疾患、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、乾癬、鎌状赤血球症の治療、並びに腫瘍転移の予防に使用するための方法であって、前記方法は、請求項１〜１６のいずれか一項記載の安定な液状の薬学的製剤を投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、Ｐ−セレクチンに対する抗体分子の安定な液状の薬学的製剤、前記製剤の調製プロセス、および前記製剤の用途に関する。
【０００２】
背景
Ｐ−セレクチンに対する抗体は、特に、炎症性疾患および血栓性疾患および心臓血管疾病の治療および予防のための医薬品として治療上関心が持たれている。Ｐ−セレクチン（ＣＤ６２Ｐ、ＧＭＰ−１５０、ＰＡＤＧＥＭ、ＬＥＣＡＭ３）に対する抗体は、例えば、国際公開公報第２００５／１００４０２号に記載されている。これらの抗体は、接着アッセイにおいてＩＣ５０値０．０８〜０．５μg/mlでマイクロタイタープレート上に固定された精製Ｐ−セレクチンへの、白血球様のＨＬ６０細胞の接着を阻害する。
【０００３】
液体形、凍結乾燥形、または凍結乾燥形から再構成された液体形の低濃度の抗Ｐ−セレクチン抗体製剤（１５mg/mlの抗体）が国際公開公報第２０１０／０３１７２０号に開示されている。
【０００４】
タンパク質医薬群の一部としての抗体分子は、物理的および化学的分解を非常に受け易い。化学的分解は、結合の形成または切断を介してタンパク質が修飾されて新しい化学実体が生じる任意の過程を含む。種々の化学反応がタンパク質に影響を及ぼすことが知られている。これらの反応は、ペプチド結合の切断を含む加水分解、並びにアミド分解、異性体化、酸化および分解を含む場合がある。物理的分解は、より高次な構造の変化を指し、そして変性、表面への吸着、凝集および沈降を含む。タンパク質の安定性は、タンパク質それ自体の特徴、例えばアミノ酸配列、グリコシル化パターンによって、および外部の影響によって、例えば温度、溶媒のｐＨ、賦形剤、界面、またはずり速度によって影響を受ける。よって、製造中、保存中および投与中の分解反応に対してタンパク質を保護するための最適な製剤化条件を定義することが重要である（Manning, M. C., et al. (1989), "Stability of protein pharmaceuticals", Pharm Res 6(11), 903-918; Zheng, J. Y., Janis, L. J. (2005), "Influence of pH, buffer species, and storage temperature on physicochemical stability of a humanized monoclonal antibody LA298", Int. J. Pharmaceutics 308, 46-51）。安定な液状の治療抗体製剤は、前記製剤が高濃度の抗体を含むべきである場合には得るのが特に困難である。
【０００５】
それ故、本発明の目的は、所望の投薬を可能とし、そして患者への抗体の簡便な投与を可能とする、できるだけ少ない必要な賦形剤が含まれた高濃度で安定な抗Ｐ−セレクチン抗体の製剤を提供することである。
【０００６】
本発明の製剤は、２〜８℃の目的とする保存温度で眼に見える粒子の形成を伴うことなく、１８か月間の保存に対して良好な安定性を示し、これによりインラインフィルタを必要としない静脈内投与が可能となり、より簡便な投与が可能となる。振とうおよび複数回の凍結解凍工程を液状製剤にかけて、医薬品の製造または輸送中に起こる可能性のある物理的ストレス条件をシミュレーションした。本発明の製剤は、振とうおよび凍結解凍ストレスをかけた後にも良好な安定性を示す。
【０００７】
要約
１つの局面において、本発明は、
−  ４０mg/ml〜２００mg/mlのＰ−セレクチンに対する抗体；
−  ０．０１％〜０．１％のポロキサマー；
−  ５mM〜１００mMの緩衝液；
−  １００mM〜５００mMの少なくとも１つの安定化剤
を含むｐＨ範囲４．５〜７．０で安定な液状の薬学的製剤に関する。
【０００８】
１つの態様において、Ｐ−セレクチンに対する抗体の濃度は、４０mg/ml〜１００mg/mlの範囲、特に５０mg/mlである。
【０００９】
別の態様において、本発明は、ポロキサマーがポロキサマー１８８である薬学的製剤に関する。
【００１０】
さらなる態様において、ポロキサマーは０．０１％〜０．０５％の範囲、特に０．０２％の濃度で存在する。
【００１１】
１つの態様において、本発明は、緩衝液がヒスチジン緩衝液、特にヒスチジン酢酸緩衝液である薬学的製剤に関する。
【００１２】
さらなる態様において、緩衝液は、１０〜３０mMの範囲、特に２０mMの濃度を有する。
【００１３】
別の態様において、製剤のｐＨは５．０〜６．０の範囲、特に５．５である。
【００１４】
１つの態様において、本発明は、少なくとも１つの安定化剤が、糖、ポリオールおよびアミノ酸からなる群より選択された薬学的製剤に関する。より具体的には、本発明の安定な液状の製剤は、糖、ポリオールおよびアミノ酸からなる群より選択された１つの安定化剤を含む。
【００１５】
さらなる態様において、少なくとも１つの安定化剤は、１４０〜２５０mMの範囲、特に２１０〜２３０mMの範囲の濃度で存在する。
【００１６】
別の態様において、安定化剤は、トレハロース、スクロース、ソルビトールおよびアルギニン塩酸塩からなる群より選択される。
【００１７】
１つの態様において、本発明は、Ｐ−セレクチンに対する抗体がヒト抗体またはヒト化抗体である薬学的製剤に関する。
【００１８】
さらなる態様において、Ｐ−セレクチンに対する抗体は、
ａ）配列番号２のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号３のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｃ）配列番号６のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号５のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｄ）配列番号８のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号７のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号９のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１１のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｇ）配列番号１４のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１３のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｈ）配列番号１６のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１５のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１７のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｊ）配列番号２０のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号１９のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン；
ｋ）配列番号２２のアミノ酸配列によって定義される重鎖可変ドメイン、および配列番号２１のアミノ酸配列によって定義される軽鎖可変ドメイン
からなる群より独立して選択された可変領域を含む。
【００１９】
さらなる態様において、本発明は、Ｐ−セレクチンに対する抗体の重鎖可変ドメインが配列番号４のアミノ酸配列を含み、そしてＰ−に対する抗体の軽鎖可変ドメインが配列番号３のアミノ酸配列を含む、薬学的製剤に関する。
【００２０】
別の態様において、本発明は、Ｐ−セレクチンに対する抗体が、配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含むヒト抗体である薬学的製剤に関する。
【００２１】
本発明の別の局面は、
配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する５０mg/mlのヒト抗体；および
（ｉ）０．０２％のポロキサマー１８８、
２３０mMのトレハロース、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｉｉ）０．０２％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｉｉｉ）０．０２％のポロキサマー１８８、
１４５mMのアルギニン塩酸塩、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｉｖ）０．０２％のポロキサマー１８８、
２３０mMのソルビトール、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液
を含む安定な液状の薬学的製剤を提供する。
【００２２】
さらに別の態様において、本発明は、メチオニンが第２の安定化剤として、特に５〜２５mMの濃度で存在する、安定な液状の薬学的製剤に関する。
【００２３】
例えば、このような製剤は、
配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する５０mg/mlのヒト抗体；および
（ｖ）０．０２％のポロキサマー１８８、
２３０mMのトレハロース、
１０mMのメチオニン、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｖｉ）０．０２％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、
１０mMのメチオニン、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｖｉｉ）０．０２％のポロキサマー１８８、
１４５mMのアルギニン塩酸塩、
１０mMのメチオニン、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｖｉｉｉ）０．０２％のポロキサマー１８８、
２３０mMのソルビトール、
１０mMのメチオニン、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液
を含む場合がある。
【００２４】
さらなる局面において、本発明は、
（ａ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する４０mg/mlのヒト抗体、
０．０１％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｂ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する６０mg/mlのヒト抗体、
０．０１％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｃ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖を含む、Ｐ−セレクチンに対する４０mg/mlのヒト抗体、
０．０３％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｄ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する６０mg/mlのヒト抗体、
０．０３％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｅ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する４０mg/mlのヒト抗体、
０．０１％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ６．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｆ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する６０mg/mlのヒト抗体、
０．０１％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ６．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｇ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する４０mg/mlのヒト抗体、
０．０３％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ６．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｈ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する６０mg/mlのヒト抗体、
０．０３％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ６．０の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液；または
（ｉ）配列番号２４の重鎖アミノ酸配列および配列番号２３の軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐ−セレクチンに対する５０mg/mlのヒト抗体、
０．０２％のポロキサマー１８８、
２１０mMのスクロース、および
ｐＨ５．５の２０mMのヒスチジン酢酸緩衝液
を含む、安定な液状の薬学的製剤を提供する。
【００２５】
本発明の別の局面において、炎症性疾患および血栓性疾患並びに炎症過程および／または血栓過程によってもたらされる血管疾患の病態の予防または治療に使用するための、安定な液状の薬学的製剤が提供される。このような疾病は、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）後の狭窄、冠静脈グラフト病変、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）後の再狭窄、透析シャント狭窄、透析シャント閉塞、並びに、動脈および深静脈の血栓症、および血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＰＰ）のような、アテローム血栓症および血管狭窄が根底にある血管疾患を含む。他の適用疾患は、心筋梗塞、脳虚血事象（例えば脳卒中）、腎梗塞、急性腎障害、臓器移植片拒絶および急性白血球媒介性肺損傷によって引き起こされる虚血後組織傷害の予防および治療である。安定な液状のＰ−セレクチンに対する抗体の薬学的製剤はまた、敗血症ショック、アレルギー容態、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、移植血管障害、急性膵炎、炎症性腸疾患、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、乾癬、鎌状赤血球症の治療と、腫瘍転移の予防とに適している。
【００２６】
より具体的には、安定な液状のＰ−セレクチンに対する抗体の薬学的製剤は、急性冠症候群（ＡＣＳ）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）後の狭窄、冠静脈グラフト病変、血管形成術またはステント留置のような経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）後の再狭窄、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）および重症虚血肢（ＣＬＩ）の治療または予防に使用するためのものである。
【００２７】
本発明の別の局面は、炎症性疾患および血栓性疾患並びに炎症過程および／または血栓過程によってもたらされる血管疾患の病態の予防または治療に使用するための医薬品の調製のための安定な液状の薬学的製剤の使用である。このような疾病は、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）後の狭窄、冠静脈グラフト病変、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）後の再狭窄、透析シャント狭窄、透析シャント閉塞、並びに、動脈および深静脈の血栓症、および血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＰＰ）のように、アテローム血栓症および血管狭窄が根底にある血管疾患と、心筋梗塞、脳虚血事象（例えば脳卒中）、腎梗塞、急性腎障害、臓器移植片拒絶および急性白血球媒介性肺損傷によって引き起こされる虚血後組織傷害の予防および治療と、敗血症ショック、アレルギー容態、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、移植血管障害、急性膵炎、炎症性腸疾患、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、乾癬、鎌状赤血球症の治療と、腫瘍転移の予防とを含む。
【００２８】
より具体的には、本発明は、急性冠症候群（ＡＣＳ）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）後の狭窄、冠静脈グラフト病変、血管形成術またはステント留置などの経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）後の再狭窄、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、および重症虚血肢（ＣＬＩ）の予防または治療に使用するための医薬品の調製のための安定な液状のＰ−セレクチンに対する抗体の薬学的製剤の使用に関する。
【００２９】
本発明の別の局面は、炎症性疾患および血栓性疾患並びに炎症過程および／または血栓過程によってもたらされる血管疾患の病態の予防または治療のためと、特に、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）後の狭窄、冠静脈グラフト病変、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）後の再狭窄、透析シャント狭窄、透析シャント閉塞、並びに、動脈および深静脈の血栓症、および血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＰＰ）のような、アテローム血栓症および血管狭窄が根底にある血管疾患の予防または治療のためと、心筋梗塞、脳虚血事象（例えば脳卒中）、腎梗塞、急性腎障害、臓器移植片拒絶および急性白血球媒介性肺損傷によって引き起こされる虚血後組織傷害の予防および治療のためと、敗血症ショック、アレルギー容態、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、移植血管障害、急性膵炎、炎症性腸疾患、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、乾癬、鎌状赤血球症の治療のためと、腫瘍転移の予防のためとの方法であり、該方法は、本発明による安定な液状の薬学的製剤を投与することを含む。
【００３０】
発明の詳細な説明
本発明は、Ｐ−セレクチンに対する高濃度の抗体を含む、安定な液状の薬学的製剤に関する。
【００３１】
「薬学的製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が明らかに効果的であることを可能とするような剤形であり、そして前記製剤が投与される被験者にとって毒性である追加成分を全く含まない、調製物を指す。
【００３２】
本発明に記載の製剤に関連して本明細書において使用される「液状」という用語は、大気圧で少なくとも約２℃〜約８℃の温度で液体である製剤を示す。
【００３３】
「安定な」製剤は、その中に含まれるタンパク質、例えば抗体が、本質的に、保存時にその物理的および化学的安定性を保持し、従って、その生物学的活性を保持している製剤である。
【００３４】
「安定な液状の薬学的抗体製剤」は、冷蔵温度（２〜８℃）で少なくとも１２か月間、具体的には２年間、より具体的には３年間、有意な変化が全く観察されない、液状の抗体製剤である。安定性の基準は以下である：１０％以下、特に５％以下の抗体モノマーが、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）により測定したところ分解している。さらに、溶液は、目視分析により、無色または透明から僅かに乳白色である。製剤のタンパク質濃度は、＋／−１０％以下の変化を有する。１０％以下、特に５％以下の凝集が形成される。安定性は、紫外分光法、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥ−ＨＰＬＣ）、比濁法および目視検査などの当技術分野において公知の方法によって測定される。
【００３５】
「Ｐ−セレクチン」という用語は、Hsu-Lin et al., J Biol Chem 259: 9121 (1984)およびMc Ever et al., J Clin Invest 84:92 (1989)によって記載されているような、ヒト血小板および内皮細胞によって発現されている１４０ｋＤａのタンパク質を指す。このＩ型膜貫通糖タンパク質（スイスプロット配列Ｐ１６１０９）は、ＮＨ２末端のレクチンドメインと、これに続く上皮増殖因子（ＥＧＦ）様ドメインと、９個の共通リピートドメインとからなる。それは、単一の膜貫通ドメインによって膜に繋がれ、そして小さな細胞質側末端を含む。
【００３６】
「Ｐ−セレクチンに対する抗体」および「抗Ｐ−セレクチン抗体」という用語は、十分な親和性でＰ−セレクチンに結合することのできる抗体を指し、よって前記抗体は、Ｐ−セレクチンをターゲティングすることで診断剤および／または治療剤として有用である。本明細書において使用される「Ｐ−セレクチンへの結合」という用語は、ＢＩＡコアアッセイ（Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden）またはＥＬＩＳＡ（精製Ｐ−セレクチンまたはＰ−セレクチンＣＨＯトランスフェクション体のいずれかがマイクロタイタープレート上にコーティングされている）のいずれかにおける、Ｐ−セレクチンへの抗体の結合を意味する。
【００３７】
ＢＩＡコアアッセイにおいて、抗体は表面に結合し、そしてＰ−セレクチンへの結合は、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）によって測定される。結合の親和性は、ｋａ（抗体／抗原複合体から抗体が解離する速度定数）、ｋｄ（解離定数）およびＫＤ（ｋｄ／ｋａ）という項によって定義される。本発明に特に有用な抗体は、１０−８以下、特に約１０−１１〜１０−９ＭのＫＤを示す。
【００３８】
Ｐ−セレクチン特異的ＥＬＩＳＡでは、精製Ｐ−セレクチンを発現しているＣＨＯトランスフェクション体がマイクロタイタープレート上にコーティングされ、そしてＰ−セレクチンに対する抗体の結合を、ビオチニル化抗ヒトＩｇＧおよび通常のＥＬＩＳＡ工程を用いて検出する。このアッセイにおける本発明に特に有用である抗体のＥＣ５０値は、０．０１〜０．０８μg/ml、より具体的には０．０１〜０．０４μg/mlの範囲である。
【００３９】
「抗体」という用語は、完全抗体および抗体フラグメントを含むがそれらに限定されない、種々の形態の抗体構造を包含する。本発明による抗体は、本発明による特徴的な性質が保持されている限りにおいて、具体的には、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、抗体フラグメント、またはさらに遺伝子工学により改変された抗体である。より具体的には、抗体はヒト抗体またはヒト化モノクローナル抗体、特に組換えヒト抗体である。
【００４０】
「抗体フラグメント」は、完全長抗体の一部、好ましくはその可変ドメイン、またはその少なくとも抗原結合部位を含む。抗体フラグメントの例は、ディアボディ、一本鎖抗体分子、および抗体フラグメントから形成された多重特異的抗体を含む。ｓｃＦｖ抗体は、例えば、Houston, J.S., Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-96に記載されている。さらに、抗体フラグメントは、ＶＨドメインの特徴を有する、すなわちＶＬドメインと一緒に機能的抗原結合部位に結合して特性を与えることができる、またはＡβに結合するＶＬドメインの特徴を有する、すなわちＶＨドメインと一緒に機能的抗原結合部位に結合して特性を与えることができる、一本鎖ポリペプチドを含む。
【００４１】
本明細書において使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一のアミノ酸組成の抗体分子の調製物を指す。
【００４２】
「キメラ抗体」という用語は、通常、組換えＤＮＡ技術によって調製された、１つの起源または種に由来する可変領域、すなわち結合領域、および異なる起源または種に由来する定常領域の少なくとも一部を含む、抗体を指す。マウス可変領域およびヒト定常領域を含むキメラ抗体は特に関心が高い。本発明によって包含される他の形態の「キメラ抗体」は、定常領域が、特にＣ１ｑへの結合および／またはＦｃレセプター（ＦｃＲ）への結合に関して、元来の抗体から改変または変化されて、本発明による特性を生じるものである。このようなキメラ抗体はまた、「クラススイッチ抗体」と呼ばれる。キメラ抗体は、免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントおよび免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントを含む、免疫グロブリン遺伝子発現産物である。キメラ抗体の産生法は、従来の組換えＤＮＡ技術および遺伝子トランスフェクション技術を含み、これらは当技術分野において周知である。例えば、Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855；米国特許第５，２０２，２３８号および第５，２０４，２４４号を参照されたい。
【００４３】
「ヒト化抗体」という用語は、フレームワークまたは「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンと比較して異なる特異性の免疫グロブリンのＣＤＲを含むように改変された抗体を指す。好ましい態様において、マウスＣＤＲを、ヒト抗体のフレームワーク領域に移植して「ヒト化抗体」を調製する。例えば、Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327；およびNeuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270を参照されたい。特に好ましいＣＤＲは、キメラ抗体について上記した抗原を認識する配列を示すものに相当する。本発明によって包含される他の形態の「ヒト化抗体」は、定常領域が、特にＣ１ｑへの結合および／またはＦｃレセプター（ＦｃＲ）への結合に関して、元来の抗体からさらに改変または変化されて、本発明による特性を生じているものである。
【００４４】
本明細書において使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことを意味する。ヒト抗体は、当技術分野の最新技術において周知である（van Dijk, M.A.およびvan de Winkel, J.G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374）。ヒト抗体はまた、免疫化時に、内因性の免疫グロブリンの産生を伴うことなく、完全なレパートリーのまたは選択されたレパートリーのヒト抗体を産生することのできるトランスジェニック動物（例えばマウス）において産生される場合がある。このような生殖系突然変異マウスへのヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子アレイの導入により、抗原によるチャレンジ時にヒト抗体が産生される（例えば、Jakobovits, A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555; Jakobovits, A., et al., Nature 362 (1993) 255-258; Bruggemann, M., et al., Year Immunol. 7 (1993) 33-40参照）。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーで産生される場合がある（Hoogenboom, H.R.およびWinter, G., J. Mol. Biol. 227 (1992) 381-388; Marks, J.D., et al., J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597）。Cole et al.およびBoerner et al.の技術はまた、ヒトモノクローナル抗体の調製にも利用可能である（Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985);およびBoerner, P., et al., J. Immunol. 147 (1991) 86-95）。本発明によるキメラおよびヒト化抗体についてすでに記載したように、本明細書において使用される「ヒト抗体」という用語はまた、定常領域が、特にＣ１ｑへの結合および／またはＦｃＲへの結合に関して、例えば「クラススイッチ」によって、すなわちＦｃ部分の変化または突然変異（ＩｇＧ１からＩｇＧ４へ、および／またはＩｇＧ１／ＩｇＧ４の突然変異）によって改変されて、本発明による特性を生じているような抗体を含む。
【００４５】
本明細書において使用されるＰ−セレクチンに対するヒト抗体は、Ｐ−セレクチンｖｓＥ−およびＬ−セレクチンに対する高い選択性によって特徴付けられる。本発明によるこのような抗体は、Ｐ−セレクチン発現細胞に、０．０１〜０．０７μg/mlの範囲のＥＣ５０値で結合する。Ｅ−セレクチンおよびＬ−セレクチン発現細胞に対するＥＣ５０値は、好ましくは１００μg/mlを超える。
【００４６】
本明細書において使用される「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作製または単離された全てのヒト抗体、例えば、ＮＳ０細胞もしくはＣＨＯ細胞などの宿主細胞から、またはヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックである動物（例えばマウス）から単離された抗体、あるいは、宿主細胞にトランスフェクションされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体を含むことを意味する。このような組換えヒト抗体は、再編成された形態の可変領域および定常領域を有する。本発明による組換えヒト抗体は、in vivoにおける体細胞高頻度突然変異にかけられる。従って、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系ＶＨ配列およびＶＬ配列から誘導されそしてこれに関連しているが、in vivoにおいてヒト抗体生殖系レパートリーには天然に存在しないかもしれない配列である。
【００４７】
本明細書において使用される「可変領域」（軽鎖の可変領域（ＶＬ）、重鎖の可変領域（ＶＨ））または「可変ドメイン」は、抗原と抗体との結合に直接関与している軽鎖ドメインおよび重鎖ドメインの対の各々を示す。軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは、同じ一般的な構造を有し、そして各ドメインは、配列が広範囲に保存され、３つの「超可変領域」（すなわち相補性決定領域、ＣＤＲ）によって接続された、４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域は、β−シートコンフォメーションをとり、そしてＣＤＲはβ−シート構造を接続しているループを形成し得る。各鎖のＣＤＲはその３次元構造がフレームワーク領域によって保たれ、そして他の鎖に由来するＣＤＲと一緒に抗原結合部位を形成する。抗体の重鎖および軽鎖ＣＤＲ３領域は、本発明による抗体の結合特異性／親和性において特に重要な役割を果たす。「抗体の抗原結合部分」という用語は、本明細書において使用される場合、抗原との結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。抗体の抗原結合部分は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」領域は、本明細書において定義された超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。それ故、抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原との結合に最も寄与し、そして抗体の特性を規定する領域である。ＣＤＲおよびＦＲ領域、並びに／または「超可変ループ」に由来する残基は、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)の標準的な定義に従って決定される。
【００４８】
「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合することのできる任意のポリペプチド決定基を含む。特定の態様において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、そして特定の態様において、特異的な３次元構造の特徴、およびまたは特異的な荷電特徴を有し得る。エピトープは、抗体が結合する抗原の領域である。
【００４９】
本発明に特に有用な抗体は、特に、Ｐ−セレクチンフラグメントａａ６０〜７５（スイスプロット配列Ｐ１６１０９）の存在下でＰ−セレクチンに結合することができ、そして／または、ＡＴＣＣアクセッションナンバーＨＢ１１０４１と称される細胞株によって分泌される抗体と、Ｐ−セレクチンとの結合を競合的に阻害しない。
【００５０】
「定常領域」または「定常ドメイン」は、抗体と抗原の結合に直接関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に依存して、抗体または免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭのクラスに分類され、そしてこれらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）に、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分類される場合がある。本発明に使用される抗体は、特にＩｇＧ型であり、より具体的にはＩｇＧ１またはＩｇＧ４ヒトサブタイプである。
【００５１】
本発明に特に有用な抗体は、それがヒト起源に由来するＦｃ部分を含み、そしてそれは補因子Ｃ１ｑにも、エフェクター細胞上のＦｃγレセプターにも結合しないことを特徴とする。特に、抗体は、それが、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１および／またはＰ３２９に少なくとも１つの突然変異を含むヒトサブクラスＩｇＧ１の抗体であるか、あるいは、Ｌ２３５およびＳ２２８に少なくとも１つの突然変異を含むヒトサブクラスＩｇＧ４の抗体であることを特徴とする（ナンバリングはＥＵインデックスによる）。より具体的には、それは、Ｓ２２８がＰによって置換され、そしてＬ２３５がＥによって置換された（ＳＰＬＥ突然変異）ヒトサブクラスＩｇＧ４の抗体である。このような抗体は、ＩｇＧ４ｖ１と定義される（Ｓ２２８Ｐ；Ｌ２３５Ｅ）。特に関心があるさらなる抗体は、ＩｇＧ１ｖ１（ＰＶＡ−２３６；Ｅ２３３Ｐ；Ｌ２３４Ｖ；Ｌ２３５Ａ；デルタＧ２３６；Ａ３２７Ｇ；Ａ３３０Ｓ；Ｐ３３１Ｓによって特定されるＧＬＰＳＳ３３１）およびＩｇＧ１ｖ２（Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ）として定義されたものである。
【００５２】
薬学的製剤に含まれるＰ−セレクチンに対する抗体の濃度は、４０mg/ml〜２００mg/mlの範囲、特に４０mg/ml〜１００mg/mlの範囲、より具体的には４０mg/ml〜６０mg/mlの範囲、最も特定すると５０mg/mlである。
【００５３】
本発明の薬学的製剤は、抗体の凝集および粒子の形成を減少させるための界面活性剤としてのポロキサマーを含む。本明細書において使用される「ポロキサマー」という用語は、ＢＡＳＦ（Parsippany, N.J.）によって商標名プルロニック（登録商標）Ｆ６８で販売されているポロキサマー１８８として知られる、ポリオキシプロピレンの中心の疎水性鎖がポリオキシエチレンの２つの親水性鎖によってフランキングされている、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレントリブロックコポリマーを含む。本発明の製剤に使用される場合がある他のポロキサマーは、ポロキサマー４０３（プルロニック（登録商標）Ｐ１２３として販売）、ポロキサマー４０７（プルロニック（登録商標）Ｐ１２７として販売）、ポロキサマー４０２（プルロニック（登録商標）Ｐ１２２として販売）、ポロキサマー１８１（プルロニック（登録商標）Ｌ６１として販売）、ポロキサマー４０１（プルロニック（登録商標）Ｌ１２１として販売）、ポロキサマー１８５（プルロニック（登録商標）Ｐ６５として販売）およびポロキサマー３３８（プルロニック（登録商標）Ｆ１０８として販売）を含む。
【００５４】
本明細書において使用される「界面活性剤」という用語は、撹拌およびせん断のような機械的ストレスに対してタンパク質製剤を保護するために使用される薬学的に許容される賦形剤を示す。薬学的に許容される界面活性剤の例は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えば、登録商標Ｂｒｉｊ（商標）で販売されているもの）、およびポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロキサマー、プルロニック）を含む。ポリオキシエチレンソルビタン−脂肪酸エステルの例は、ポリソルベート２０（商標Ｔｗｅｅｎ２０（商標）で販売）およびポリソルベート８０（商標Ｔｗｅｅｎ８０（商標）で販売）である。
【００５５】
本明細書において使用される「緩衝液」という用語は、薬学的調製物のｐＨを安定化させる薬学的に許容される賦形剤を示す。適切な緩衝液は、当技術分野において周知であり、そして文献に見出すことができる。好ましい薬学的に許容される緩衝液は、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酢酸緩衝液、アルギニン緩衝液、リン酸緩衝液、またはその混合物を含むが、それらに限定されない。特に関心のある緩衝液は、Ｌ−ヒスチジン、または当技術分野において公知の酸もしくは塩基を用いてｐＨ調整されたＬ−ヒスチジンとＬ−ヒスチジン塩酸塩との混合物を含む。前記の緩衝液は、一般的に、約５mM〜約１００mM、特に約１０mM〜約３０mM、より具体的には約２０mMの量で使用される。使用される緩衝液とは別に、ｐＨを、当技術分野において公知の酸または塩基、例えば塩酸、酢酸、リン酸、硫酸およびクエン酸、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムを用いて、４．５〜７．０の範囲の数値、特に５．０〜６．０の範囲の数値、最も特定するとｐＨ５．５±０．０３に調整することができる。
【００５６】
「安定化剤」という用語は、製造中、保存中および適用中に、活性な薬学的成分および／または製剤を、化学的および／または物理的分解から保護する、薬学的に許容される賦形剤を示す。タンパク質医薬の化学的および物理的分解経路は、Cleland et al. (1993), Crit Rev Ther Drug Carrier Syst 10(4):307-77, Wang (1999) Int J Pharm 185(2):129-88, Wang (2000) Int J Pharm 203(1-2):1-60およびChi et al. (2003) Pharm Res 20(9):1325-36によって概説されている。安定化剤は、本明細書で以後に定義されているような、糖、アミノ酸、ポリオール、シクロデキストリン、例えばヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエチル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、ポリエチレングリコール、例えばＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ６０００、アルブミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、塩、例えば塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、キレート剤、例えばＥＤＴＡを含むが、それらに限定されない。本発明に特に使用される安定化剤は、糖、ポリオールおよびアミノ酸からなる群より選択される。より具体的には、安定化剤は、スクロース、トレハロース、ソルビトールおよびアルギニン塩酸塩からなる群より選択される。安定化剤は、製剤中に、約１００mM〜約５００mMの量で、特に約１４０mM〜約２５０mMの量で、より具体的には約２１０mM〜約２３０mMの量で存在し得る。より具体的には、スクロースまたはトレハロースは、安定化剤として、約２１０mM〜約２３０mMの量で使用される。
【００５７】
いくつかの態様において、本発明の安定な液状の薬学的製剤は、第２の安定化剤として抗酸化剤を含む。「抗酸化剤」は、活性な薬学的成分の酸化を防ぐ薬学的に許容される賦形剤である。抗酸化剤は、キレート剤、例えばＥＤＴＡ、クエン酸、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、亜硫酸ナトリウム、ｐ−アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、システイン、メチオニン、エタノール、ベンジルアルコール、およびｎ−アセチルシステインを含むが、それらに限定されない。抗酸化剤は、約０．０１〜約１００mMの量で、特に約５〜約５０mMの量で、より具体的には約５〜約２５mMの量で使用される場合がある。特に、約５〜約２５mMの濃度、より具体的には約１０mMの濃度のメチオニンが、第２の安定化剤として選択される。
【００５８】
本明細書において使用される「糖」という用語は、単糖またはオリゴ糖を示す。単糖は、単量体の炭水化物であり、これは酸によって加水分解不可能であり、これには単純な糖およびその誘導体、例えばアミノ糖が含まれる。単糖の例は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、ソルボース、リボース、デオキシリボース、ノイラミン酸を含む。オリゴ糖は、グリコシド結合を介して接続された１個を超える単糖単位からなる分岐状または直鎖状のいずれかの炭水化物である。オリゴ糖内の単糖単位は同一であっても異なっていてもよい。単糖単位の数に依存して、オリゴ糖は、二糖、三糖、四糖、五糖などである。多糖とは対照的に、単糖およびオリゴ糖は水溶性である。オリゴ糖の例は、スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトースおよびラフィノースを含む。特に、糖はスクロースおよびトレハロースから選択される。
【００５９】
本明細書において使用される「アミノ酸」という用語は、カルボン酸基に対してα位に位置するアミノ酸部分を有する薬学的に許容される有機分子を示す。アミノ酸の例は、アルギニン、グリシン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリンを含む。アミノ酸は、一般的に、約５〜５００mMの量で、特に約５〜約２００mMの量で、より具体的には約１００〜約１５０mMの量で使用される。
【００６０】
本明細書において使用される「ポリオール」という用語は、１つを超えるヒドロキシ基を有する薬学的に許容されるアルコールを示す。適切なポリオールは、マンニトール、ソルビトール、グリセリン、デキストラン、グリセロール、アラビトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、およびその組合せを含むが、それらに限定されない。ポリオールは、約１０mM〜約５００mMの量で、特に約１０〜約２５０mMの量で、より具体的には約２００〜約２５０mMの量で使用される場合がある。
【００６１】
「安定化剤」という用語は、リオプロテクタント（lyoprotectant）も含む。「リオプロテクタント」という用語は、不安定な活性成分（例えばタンパク質）を、凍結乾燥過程中、その後の保存中および再構成中に、不安定化条件から保護する、薬学的に許容される賦形剤を示す。リオプロテクタントは、糖、ポリオール（例えば糖アルコールなど）およびアミノ酸からなる群を含むがそれらに限定されない。特に、リオプロテクタントは、糖、例えばスクロース、トレハロース、ラクトース、グルコース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、ノイラミン酸、アミノ糖、例えばグルコサミン、ガラクトサミン、Ｎ−メチルグルコサミン（「メグルミン」）、ポリオール、例えばマンニトールおよびソルビトール、並びにアミノ酸、例えばアルギニンおよびグリシンまたはその混合物からなる群より選択される場合がある。リオプロテクタントは、一般的に、約１０〜約５００mMの量で、特に約１０〜約２５０mMの量で、より具体的には約１００〜約２５０mMの量で使用される。
【００６２】
薬学的製剤はまた等張化剤を含んでいてもよい。本明細書において使用される「等張化剤」という用語は、製剤の浸透圧を調節するために使用される薬学的に許容される等張化剤を示す。製剤は、低張性、等張性または高張性であり得る。一般的に等張性は、通常、ヒトの血清の浸透圧と比較した、溶液に関する浸透圧に関する。本発明による製剤は、低張性、等張性または高張性であり得るが、好ましくは等張性である。等張性製剤は、液体であるか、または固形から、例えば凍結乾燥形から再構成された液体であり、そして、それと比較するいくつかの他の溶液（生理学的塩溶液および血清など）と同じ浸透圧を有する溶液を示す。適切な等張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、および、アミノ酸、糖、特にグルコースの群からの任意の成分を含むが、それらに限定されない。等張化剤は、一般的に、約５mM〜約５００mMの量で使用される。安定化剤および等張化剤には、両方の様式で機能することのできる、すなわち、それらは同時に安定化剤であり、そして等張化剤であり得る化合物群が存在する。その例は、糖、アミノ酸、ポリオール、シクロデキストリン、ポリエチレングリコールおよび塩の群に見出し得る。同時に安定化剤でありそして等張化剤であり得る糖の例はトレハロースである。
【００６３】
薬学的製剤はまた、補助剤、例えば保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤を含む場合がある。微生物の存在の防御は、滅菌手順によって、並びに種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの包含の両方によって確実になされる場合がある。保存剤は、一般的に、約０．００１〜約２％（ｗ／ｖ）の量で使用される。保存剤は、エタノール、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クロロ−ｍ−クレゾール、メチルまたはプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウムを含むが、それらに限定されない。
【００６４】
本発明による安定な液状のＰ−セレクチンに対する抗体の薬学的製剤は、血栓性疾患および炎症性疾患の予防または治療、特に、血管狭窄、アテローム血栓症、動脈および深静脈の血栓症、急性冠症候群（ＡＣＳ）、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、冠動脈心疾患のような血管疾患からなる群より選択された疾患および疾病の予防または治療、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）または経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）で治療された患者におけるその後の心血管イベント、狭窄、血管形成術またはステント留置後の再狭窄、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、心筋梗塞によって引き起こされる虚血後の白血球によって媒介される組織傷害、脳虚血事象（例えば脳卒中）、血液透析シャント狭窄、透析シャント閉塞、腎梗塞、急性腎障害、敗血症、急性白血球媒介性肺損傷、喘息のようなアレルギー反応、移植血管障害の予防、臓器移植片拒絶、急性膵炎、炎症性腸疾患、関節リウマチのような自己免疫疾患、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＰＰ）、乾癬、鎌状赤血球症の予防、および、循環中癌細胞の接着を阻害することによる腫瘍転移の予防に使用することができる。
【００６５】
より具体的には、安定な液状のＰ−セレクチンに対する抗体の薬学的製剤は、急性冠症候群（ＡＣＳ）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）または経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）で治療された患者におけるその後の心血管イベント、狭窄、血管形成術またはステント留置後の再狭窄、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）および重症虚血肢（ＣＬＩ）の予防または治療に使用することができる。
【００６６】
本発明による安定な液状の薬学的製剤は、薬学的分野において公知であるような静脈内（i.v.）、皮下（s.c.）または任意の他の非経口投与手段によって投与することができる。
【００６７】
その高い安定性の観点から、本発明による薬学的製剤は、インラインフィルタを必要とすることなく投与することができ、従って、インラインフィルタを用いて投与することが必要とされる従来の製剤よりもはるかにより取扱いが簡便である。インラインフィルタ、例えばＳｔｅｒｉｆｉｘ（登録商標）は、静注用溶液またはライン中に存在し得るあらゆる粒子、空気または微生物の投与を防ぐために、静注用薬物の点滴ラインに設置されなければならない。５〜２０μmおよびそれ以上のサイズの粒子が、肺毛細血管を通る血流を妨害する可能性を有し、これにより肺塞栓症などの合併症が起こり得る。異物粒子はまた、注射部位で静脈炎を引き起こす可能性があり、そしてフィルタは静脈炎の発生率を減少させるのを助け得る。
【００６８】
In vivoにおける投与のために使用しようとする安定な製剤は無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。
【００６９】
本発明による安定な液状の薬学的製剤は、当技術分野において公知の方法によって、例えば限外濾過−ダイアフィルトレーション、透析、添加および混合、凍結乾燥、再構成、およびその組合せによって調製される場合がある。本発明による製剤の調製例は、本明細書において以後に見出される場合がある。
【００７０】
本発明による安定な液状の薬学的製剤はまた、凍結乾燥形で、または凍結乾燥形から再構成された液体形であり得る。「凍結乾燥形」は、当技術分野において公知の凍結乾燥法によって製造される。凍結乾燥物は、通常、約０．１〜５％（ｗ／ｗ）の残留湿気含量を有し、そして粉末または物理的に安定なケークとして存在する。「再構成形」は、再構成用媒体の添加後に急速に溶解させることによって凍結乾燥物から得ることができる。適切な再構成用媒体は、注射用水（ＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、塩化ナトリウム溶液（例えば０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ）、グルコース溶液（例えば５％（ｗ／ｖ）グルコース）、界面活性剤含有溶液（例えば０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０）およびｐＨ緩衝化溶液（例えばリン酸緩衝溶液）を含むが、それらに限定されない。
【００７１】
抗体の産生
本発明に特に有用なＰ−セレクチンに対する抗体は、ハイブリドーマ細胞株から、特に、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の下で２００４年３月３０日にドイツのDeutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ)に寄託され、そしてそれぞれ寄託番号ＤＳＭ ＡＣＣ２６４０、ＤＳＭ ＡＣＣ２６４１およびＤＳＭ ＡＣＣ２６４２が得られた、ハイブリドーマ細胞株ｈｕ−Ｍａｂ＜Ｐ−セレクチン＞ＬＣ１００４−００１（抗体ＨｕＭａｂ００１）、ｈｕ−Ｍａｂ＜Ｐ−セレクチン＞ＬＣ１００４−００２（抗体ＨｕＭａｂ００２）およびｈｕ−Ｍａｂ＜Ｐ−セレクチン＞ＬＣ１００４−０１７（抗体ＨｕＭａｂ０１７）から産生することができる。
【００７２】
特に、本発明に特に有用な抗体は、組換え手段によって産生される。このような方法は当技術分野の最新技術において広く知られており、そして例えば、Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202; Geisse, S., et al., Protein Expr. Purif. 8 (1996) 271-282; Kaufman, R.J., Mol. Biotechnol. 16 (2000) 151-161;またはWerner, R.G., Drug Res. 48 (1998) 870-880の概説論文に記載されている。前記方法は、原核細胞および真核細胞においてタンパク質を発現させ、続いて抗体ポリペプチドを単離し、そして通常、薬学的に許容される純度まで精製することを含む。タンパク質の発現のために、軽鎖および重鎖またはそのフラグメントをコードする核酸を発現ベクターに標準的な方法によって挿入する。ＤＮＡおよびＲＮＡをコードする抗体は、従来の手順を使用して容易に単離およびシークエンスされる。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡ源およびＲＮＡ源として作用することができる。このような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することのできるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離およびシークエンスされる場合がある。発現は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、またはＣＯＳ細胞のような適切な原核または真核宿主細胞において実施され、そして抗体は、細胞（上清または溶解後の細胞）から標準的な技術によって回収される。抗体は、培養培地から、例えばプロテインＡセファロースを用いてのカラムクロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティクロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって適切に分離される。
【００７３】
本出願に開示されたアミノ酸配列：
配列番号１  ＨｕＭａｂ００１の軽鎖可変ドメイン
配列番号２  ＨｕＭａｂ００１の重鎖可変ドメイン
配列番号３  ＨｕＭａｂ００２の軽鎖改変ドメイン
配列番号４  ＨｕＭａｂ００２の重鎖可変ドメイン
配列番号５  ＨｕＭａｂ００３の軽鎖可変ドメイン
配列番号６  ＨｕＭａｂ００３の重鎖可変ドメイン
配列番号７  ＨｕＭａｂ００４（Ｉ）の軽鎖（Ｉ）可変ドメイン
配列番号８  ＨｕＭａｂ００４の（Ｉ）の重鎖（Ｉ）可変ドメイン
配列番号９  ＨｕＭａｂ００４（ＩＩ）の軽鎖（ＩＩ）可変ドメイン
配列番号１０  ＨｕＭａｂ００４（ＩＩ）の重鎖（ＩＩ）可変ドメイン
配列番号１１  ＨｕＭａｂ００５の軽鎖可変ドメイン
配列番号１２  ＨｕＭａｂ００５の重鎖可変ドメイン
配列番号１３  ＨｕＭａｂ０１０（Ｉ）の軽鎖可変ドメイン
配列番号１４  ＨｕＭａｂ０１０（Ｉ）の重鎖可変ドメイン
配列番号１５  ＨｕＭａｂ０１０（ＩＩ）の軽鎖可変ドメイン
配列番号１６  ＨｕＭａｂ０１０（ＩＩ）の重鎖可変ドメイン
配列番号１７  ＨｕＭａｂ０１０（ＩＩＩ）の軽鎖可変ドメイン
配列番号１８  ＨｕＭａｂ０１０（ＩＩＩ）の重鎖可変ドメイン
配列番号１９  ＨｕＭａｂ０１１の軽鎖可変ドメイン
配列番号２０  ＨｕＭａｂ０１１の重鎖可変ドメイン
配列番号２１  ＨｕＭａｂ０１７の軽鎖可変ドメイン
配列番号２２  ＨｕＭａｂ０１７の重鎖可変ドメイン
配列番号２３  ＨｕＭａｂ００２ＩｇＧ４ｖ１の軽鎖
配列番号２４  ＨｕＭａｂ００２ＩｇＧ４ｖ１の重鎖
【００７４】
実施例
本発明による静脈内（i.v.）投与用の液状の医薬品製剤は、以下のように開発された。
【００７５】
実施例１：製剤の初回のスクリーニングのための液状製剤の調製
表１に列挙したｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン液状製剤Ｆ１〜Ｆ２４は、５０mg/mlのタンパク質濃度で調製された。
【００７６】
国際公開公報第２００５／１００４０２号に記載のように調製しそして得られたｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン抗体は、ｐＨ約５．５の２０mMヒスチジン緩衝液中、約２０mg/mLの濃度で提供された。実施例に使用されたｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン抗体は、配列番号２４の重鎖および配列番号２３の軽鎖を含むヒト抗体である。
【００７７】
液状製剤の調製のために、ｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチンを、予想される緩衝液組成を含むダイアフィルトレーション緩衝液に対して緩衝液交換をし、そして限外濾過によって約８０mg/mLの抗体濃度となるまで濃縮した。限外濾過操作の完了後、賦形剤（例えばトレハロース、メチオニン）をストック溶液として抗体溶液に加えた。その後、界面活性剤を１２５倍ストック溶液として加えた。最後に、タンパク質濃度を緩衝液を用いて調整して、約５０mg/mLのｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン最終濃度とした。
【００７８】
全ての製剤は、０．２２μmの低タンパク質結合フィルタを通して滅菌濾過し、そしてＥＴＦＥ（エチレンおよびテトラフルオロエチレンのコポリマー）被覆ゴム栓およびアルクリンプ（alucrimp）キャップで閉じた無菌６mLガラスバイアルに無菌的に充填した。充填容量は約２．４mLであった。これらの製剤を、種々の気候条件（５℃、２５℃および４０℃）で種々の時間間隔の間、保存し、そして振とう（５℃および２５℃で２００ｍｉｎ−１の振とう頻度で１週間）および凍結解凍ストレス法（−８０℃／＋５℃で５回のサイクル）によってストレスを与えた。
【００７９】
【表１】
2015510873.tif 000002
【００８０】
試料を、ストレス試験をかける前後、並びに、保存後に、以下の分析法によって分析した：
・紫外分光法
・サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
・イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）
・溶液の透明度および乳白度
・定性プロテインＡクロマトグラフィー
・目視検査
【００８１】
タンパク質含有量の決定のために使用される紫外分光法は、パーキンエルマーλ３５紫外分光器で２４０nm〜４００nmの波長範囲で実施された。ニートタンパク質試料を、対応する製剤緩衝液を用いて約０．５mg/mLまで希釈した。タンパク質濃度を、式１に従って計算した。
【００８２】
【数１】
2015510873.tif 000003
【００８３】
２８０nmにおける紫外光吸収を、３２０nmでの光散乱に対して修正し、そしてニート試料と希釈緩衝液の秤量した質量と密度から決定された希釈係数を乗じた。分子を、キュベット経路長ｄと吸光係数εの積で除した。
【００８４】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して、製剤中の可溶性の高分子量種（凝集体）および低分子量の加水分解産物（ＬＭＷ）を検出した。前記方法は、Waters W2487 Dual Absorbance Detectorを有し、そしてTosoHaas TSK-Gel G3000SWXLカラムを備えた、Waters Alliance 2695 HPLC機器で実施された。インタクトなモノマー、凝集体および加水分解産物を、０．２Ｍ Ｋ２ＨＰＯ４／０．２５Ｍ ＫＣＬ、ｐＨ７．０を移動相として使用して定組成溶離プロファイルによって分離し、そして２８０nmの波長で検出した。
【００８５】
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）を実施して、製剤中のｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチンの正味荷電を変化させる化学的分解産物を検出した。前記方法は、Waters W2487 Dual Absorbance Detectorを有し（検出波長２８０nm）、そしてDionex ProPac WCX-10, 4mm x 250mmカラムを備えた、Waters Alliance 2695 HPLC機器を使用した。１０mMの酢酸ナトリウム（ｐＨ５．８〜５．９）および１Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．８〜５．９）を流速１．０mL/分で、それぞれ、移動相ＡおよびＢとして使用する。
【００８６】
勾配プログラム：
【表２】
2015510873.tif 000004
【００８７】
透明度および乳白度は、比濁法によってホルマジン濁度単位（ＦＴＵ）として測定された。ニート試料を直径１１mmの透明なガラス管に移し、そしてＨＡＣＨ２１００ＡＮ濁度計に入れた。
【００８８】
定性プロテインＡクロマトグラフィーを実施して、ｈｕＭａｂ Ｐ−セレクチンのＦｃ部分における４つの保存されたメチオニン側鎖の酸化状態をモニタリングした。前記方法は、Waters W2487 Dual Absorbance Detectorを有し（検出波長２８０nm）、Applied Biosystems,USAのPoros A/20 4.6 mm x50 mmカラムを備えた、Waters Alliance 2695 HPLC機器で実施された。Gibco, InvitrogenのＰＢＳ、および０．１Ｍ酢酸、０．１５Ｍ塩化ナトリウム（ｐＨ２．９）を流速２．０mL/分で、それぞれ移動相ＡおよびＢとして使用した。
【００８９】
勾配プログラム：
【表３】
2015510873.tif 000005
【００９０】
試料を、Seidenader V90-T目視検査器を使用することによって眼に見える粒子の存在について検査した。
【００９１】
【表４】
2015510873.tif 000006
【００９２】
実施例１：本発明による液状のｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン医薬品製剤の組成および安定性のデータ
【００９３】
【表５】
2015510873.tif 000007
【００９４】
【表６】
2015510873.tif 000008
【００９５】
【表７】
2015510873.tif 000009
【００９６】
【表８】
2015510873.tif 000010
【００９７】
【表９】
2015510873.tif 000011
【００９８】
【表１０】
2015510873.tif 000012
【００９９】
【表１１】
2015510873.tif 000013
【０１００】
【表１２】
2015510873.tif 000014
【０１０１】
【表１３】
2015510873.tif 000015
【０１０２】
【表１４】
2015510873.tif 000016
【０１０３】
【表１５】
2015510873.tif 000017
【０１０４】
【表１６】
2015510873.tif 000018
【０１０５】
【表１７】
2015510873.tif 000019
【０１０６】
【表１８】
2015510873.tif 000020
【０１０７】
【表１９】
2015510873.tif 000021
【０１０８】
【表２０】
2015510873.tif 000022
【０１０９】
【表２１】
2015510873.tif 000023
【０１１０】
【表２２】
2015510873.tif 000024
【０１１１】
【表２３】
2015510873.tif 000025
【０１１２】
【表２４】
2015510873.tif 000026
【０１１３】
【表２５】
2015510873.tif 000027
【０１１４】
【表２６】
2015510873.tif 000028
【０１１５】
【表２７】
2015510873.tif 000029
【０１１６】
【表２８】
2015510873.tif 000030
【０１１７】
実施例２：詳しい製剤のスクリーニングのための液状製剤の調製
表２で示される以下のｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン液状製剤Ｆ２５ないしＦ３４は、４０mg/mL〜６０mg/mlの範囲のタンパク質濃度で調製された：
【０１１８】
【表２９】
2015510873.tif 000031
【０１１９】
国際公開公報第２００５／１００４０２号に記載のとおり調製しそして得られたｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン抗体は、ｐＨ約５．５の２０mMヒスチジン緩衝液中、約２０mg/mLの濃度で提供された。実施例に使用されたｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン抗体は、配列番号２４の重鎖および配列番号２３の軽鎖を含むヒト抗体である。
【０１２０】
液状製剤の調製のために、ｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチンを、予想される緩衝液組成を含むダイアフィルトレーション緩衝液に対して緩衝液交換をし、そして限外濾過によって約８０mg/mLの抗体濃度となるまで濃縮した。限外濾過操作の完了後、賦形剤（例えばトレハロース、メチオニン）をストック溶液として抗体溶液に加えた。その後、界面活性剤を１２５倍ストック溶液として加えた。最後に、タンパク質濃度を緩衝液を用いて調整して、約４０mg/mL〜６０mg/mLの範囲のｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン最終濃度とした。
【０１２１】
全ての製剤は、０．２２μmの低タンパク質結合フィルタを通して滅菌濾過し、そしてＥＴＦＥ（エチレンおよびテトラフルオロエチレンのコポリマー）被覆ゴム栓およびアルクリンプキャップで閉じた無菌６mLガラスバイアルに無菌的に充填した。充填容量は約２．４mLであった。これらの製剤を、種々の気候条件（５℃、２５℃および４０℃）で種々の時間間隔の間、保存し、そして振とう（５℃および２５℃で２００ｍｉｎ−１の振とう頻度で１週間）および凍結解凍ストレス法（−８０℃／＋５℃で５回のサイクル）によってストレスを与えた。試料を、ストレス試験をかける前後、並びに、保存後に、実施例１に前記されているような紫外分光法、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）、溶液の透明度および乳白度、定性プロテインＡクロマトグラフィー、並びに目視検査によって分析した。
【０１２２】
前記したように、試料を、Seidenader V90-T目視検査機を使用することによって眼に見える粒子の存在について検査した。
【０１２３】
【表３０】
2015510873.tif 000032
【０１２４】
実施例２：本発明による液状のｈｕＭＡｂ Ｐ−セレクチン医薬品製剤の組成および安定性のデータ
【０１２５】
【表３１】
2015510873.tif 000033
【０１２６】
【表３２】
2015510873.tif 000034
【０１２７】
【表３３】
2015510873.tif 000035
【０１２８】
【表３４】
2015510873.tif 000036
【０１２９】
【表３５】
2015510873.tif 000037
【０１３０】
【表３６】
2015510873.tif 000038
【０１３１】
【表３７】
2015510873.tif 000039
【０１３２】
【表３８】
2015510873.tif 000040
【０１３３】
【表３９】
2015510873.tif 000041
【０１３４】
【表４０】
2015510873.tif 000042
【０１３５】
上に提示した安定性のデータは、ポロキサマー１８８を含有する製剤が、安定化剤のメチオニンの存在下および非存在下において良好な安定性を有し、一方、ポリソルベート製剤は、安定化剤のメチオニンの存在下のみにおいて良好な安定性のデータを示すことを示す。
【配列表】
2015510873000001.app
【国際調査報告】
2015510873.tif 000043
2015510873.tif 000044