(57)【要約】  それに付着した顆粒状漂白成分を有する水和可能な接着性フィルムを含み、該顆粒状漂白成分は過加水分解活性を有する酵素触媒によって用いられる過酸化水素を放出して、アシルドナー基質から有効量の過酸漂白剤を酵素的に生じさせる歯ホワイトニングストリップがここに記載される。歯ホワイトニングストリップを製造し、および使用する方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一の面および第二の面を備えた水和可能な接着性フィルムを含む歯ホワイトニングストリップであって、
該第一の面はそれに付着された顆粒状漂白成分を有し、ここで、該歯ホワイトニングストリップは、さらに、該フィルムの中または上に、または該フィルムの第一の面に付着された顆粒の形態中に；
ａ）過加水分解活性を有する酵素；および
ｂ）少なくとも１つのアシルドナー基質を含み、
ここで、該酵素は参照配列の配列番
号：１と整列する炭水化物エステラーゼファミリー７（ＣＥ−７）シグナチャーモチーフを有し、該シグナチャーモチーフは、
ｉ）配列番号：１の位置１１８〜１２０に対応する位置のＲＧＯモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の位置１８６〜１９０に対応する位置のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の位置３０３〜３０４に対応する位置のＨＥモチーフ
を含み；
該基質は、
ｉ）構造：
［Ｘ］ｍＲ５
［式中、Ｘ＝式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基、
Ｒ６＝所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分岐鎖状または環状ヒドロカルビル部位、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６＝Ｃ２〜Ｃ７についての１以上のエーテル結合を含んでいてもよく；
Ｒ５＝所望によりヒドロキシル基で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状、分岐鎖状、または環状ヒドロカルビル部位または５−員環状ヘテロ芳香族部位または６−員環状芳香族またはヘテロ芳香族部位；ここで、Ｒ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸基を含み；ここで、Ｒ５は、所望により、１以上のエーテル結合を含んでよく；
ｍは１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有するエステル、
ここで、該エステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；
ｉｉ）構造：
【化１】
2015502369.tif 000019
［式中、Ｒ１＝所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分岐鎖状アルキル、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有するグリセリド；
ｉｉｉ）式：
【化２】
2015502369.tif 000020
［式中、Ｒ１は、所望によりヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分岐鎖状アルキルであり、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分岐鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１以上のエステル；および
ｉｖ）アセチル化単糖、アセチル化二糖、およびアセチル化多糖からなる群より選択されるアセチル化糖類
からなる群より選択され；
ここで、該水和可能な接着性フィルムの水和に際して、過酸化水素が該顆粒状漂白成分から放出され、該酵素は有効量の過酸の形成を触媒することを特徴とする、歯ホワイトニングストリップ。
【請求項２】
過加水分解活性を有する該酵素が：
ａ）配列番号：１；および
ｂ）配列番号：１に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
より選択されるアミノ酸配列を含む請求項１に記載の歯ホワイントニングストリップ。
【請求項３】
過加水分解活性を有する該酵素が、さらに、該酵素のＮ−またはＣ−末端に融合した結合ドメインを含み、該結合ドメインは口腔組織に対して、または歯ホワイントニングストリップに対して親和性を有する請求項１に記載の歯ホワイントニングストリップ。
【請求項４】
口腔組織に対して親和性を有する該結合ドメインが、配列番号：２９〜１６３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む請求項３に記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項５】
過加水分解活性を有する該酵素が口腔組織に対して親和性を有し、
ａ）配列番号：２、および
ｂ）配列番号：２に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
より選択されるアミノ酸配列を含む請求項４に記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項６】
さらに、該水和可能な接着性フィルムの該第二の面に付着されたブロッキング層を含み、該ブロッキング層は該水和可能な接着性フィルムの溶解を阻害することができる前記請求項のいずれかに記載のホワイトニングストリップ。
【請求項７】
該顆粒状漂白成分が、水和に際して溶解することができる水溶性コーティングで被覆された前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項８】
該顆粒状漂白成分が固体過酸化物および固体過酸化物ドナーより選択される前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項９】
該顆粒状漂白成分が、過酸化物塩、過酸化物複合体、ペルオキシリン酸塩、ペルオキシ炭酸塩、過ホウ酸塩、ペルオキシケイ酸塩、過硫酸塩、ペルオキシリン酸カルシウム、過ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム過酸化水素化物、ペルオキシリン酸ナトリウム、過硫酸カリウム、次亜塩素酸塩、過酸化尿素、過酸化水素ポリマー複合体、過酸化水素−ポリビニルピロリドンポリマー複合体、金属過酸化物、過酸化亜鉛、過酸化カルシウム、およびそれらの組合せより選択される前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１０】
該顆粒状漂白成分が過酸化尿素、過炭酸ナトリウム、過酸化水素−ポリビニルピロリドンポリマー複合体、およびそれらの２以上の組合せより選択される前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１１】
該顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）が１０ミクロン〜３００ミクロンである前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１２】
該顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）が１００ミクロン〜２５０ミクロンである前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１３】
過加水分解活性を有する該酵素の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）が１００ミクロン〜２５０ミクロンである前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１４】
該ストリップが少なくとも約０．１ｗｔ％の過酸を生じる前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１５】
該水和可能な接着性フィルムの第一の面上の顆粒状漂白剤の量が０．００１ｍｇ／ｃｍ２〜１ｍｇ／ｃｍ２の範囲である前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１６】
該アシルドナー基質が１，２，３−トリアセトキシプロパンである前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１７】
該水和可能な接着性フィルムが、親水性セルロールエーテル、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ酢酸ビニル、カルボマー、多糖ガム、キサンタンガム、修飾された食品澱粉、ゼラチン、動物または魚類ベースのゼラチン、架橋されたカルボキシビニルコポリマー、架橋されたポリビニルピロリドン、ポリ酸化エチレン、ポリアクリル酸、ポリアクリレート、ポリビニルアルコール、アルジネート、カゼイン、プルラン、およびそれらの２以上の組合せより選択される１以上の水溶性ポリマーを含む前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１８】
該水和可能な接着性フィルムが、親水性セルロースエーテル、ポリビニルアルコール、カルボマー、およびそれらの２以上の組合せより選択される１以上の水溶性ポリマーを含む前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項１９】
該水和可能な接着性フィルムが、さらに、可塑剤を含む前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項２０】
該水和可能な接着性フィルムが、さらに、プロピレングリコールを含む前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項２１】
該顆粒状漂白成分が水和に際して溶解することができる水溶性コーティングで被覆された前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項２２】
有効量の過酸が、歯ホワイトニングストリップの表面にわたって実質的に均一な濃度で生じる前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【請求項２３】
ａ）前記請求項のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップを含むパッケージングシステムを準備し：
ｂ）該パッケージングシステムから該歯ホワイトニングストリップを取り出し：次いで、
ｃ）該歯ホワイトニングストリップを、歯を白くするのに十分な時間の間、歯と直接的に接触させることを含み、
ここで、該歯ホワイトニングストリップは、口腔中に、または歯の表面上に存在する水分によって水和されるか、または工程（ｂ）の後であるが工程（ｃ）に先立って水和されることを特徴とする、歯を白くする方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、ここに引用してその全体を援用する、２０１１年１２月１９日に出願された米国特許出願第６１／５７７,４９９号に対する優先権を主張する。
【０００２】
家庭で用いるのに適し、低下した総過酸化物値を有するが、増強されたホワイトニング活性を供するホワイトニングストリップに対する要望が存在する。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、炭水化物エステラーゼファミリー７の保存された構造モチーフを含む過加水分解活性（perhydrolytic activity）を有する酵素（「ペルヒドロラーゼ」）およびアシルドナーと組み合わせて顆粒状漂白成分を含み、その結果、使用に際して、配合物成分からの実質的希釈なくして、該顆粒状漂白成分によって放出された過酸化物がペルヒドロラーゼの存在下でアシルドナーと反応して、歯に直接近接して、過酸を形成し、それにより、かなりより低い全量の過酸化物での歯の増強された漂白を可能とするホワイトニングストリップを提供する。
【０００４】
該ストリップは、水または唾液で水和されると、十分に接着性となって、歯に固着する、単一層または多層（例えば、２層）いずれかの接着性フィルムを含む。顆粒状漂白成分はフィルムの面に付着されて、歯と接着して配置される。適用に際して、漂白成分は直接歯上に（すなわち、歯および接着性層の間に）置かれる。次いで、顆粒は水に迅速に溶解することによって過酸化物を放出する。漂白成分は、所望により、硫酸ナトリウム、コーンスターチまたはアラビアガムのような迅速に溶解する物質によって被覆することもできる。所望により、該ストリップは、暴露時間を延長するために存在させる第二の層をフィルム中に供してよい。この第二の層は、水に不溶性とすることができ、これは利用者が処置後に該ストリップを除去することを要求し、あるいはこの第二の層は水中で浸蝕性とすることができ、これは、該ストリップを十分な処置の後に溶解させるであろう。該ストリップは、さらに、該フィルムの表面に顆粒形態で供することもできるペルヒドロラーゼ（カルボン酸エステルおよび過酸化水素の反応を触媒して、過酸を形成することができる酵素）、および、例えば、カルボン酸およびアシル化合物、例えば、トリアセチンまたはソルビトールヘキサアセタートより選択されるアシルドナーを含み、ここで、該アシルドナーは、ペルヒドロラーゼの存在下で該ストリップ中の過酸化物源と反応して、過酸を形成し、これは該ストリップの漂白作用を高める。
【０００５】
本発明のいくつかの実施形態は、第一の面および第二の面を備えた水和可能な（hydratable）接着性フィルムを含む歯ホワイトニングストリップを提供し、該第一の面はそれに付着された顆粒状漂白成分を有し、ここで、該歯ホワイトニングストリップは、さらに、該フィルム中に、またはその上に、または該フィルムの第一の面に付着された顆粒の形態中に；
（ａ）過加水分解活性を有する酵素、該酵素は参照配列の配列番号：１と整列する炭水化物エステラーゼファミリー７（ＣＥ−７）シグナチャーモチーフを有し、該シグナチャーモチーフは：
ｉ）配列番号：１の位置１１８〜１２０に対応する位置のＲＧＱモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の位置１８６〜１９０に対応する位置のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の位置３０３〜３０４に対応する位置のＨＥモチーフ
を含み；および
ｂ）
ｉ）構造：
［Ｘ］ｍＲ５
［式中、Ｘ＝式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基、
Ｒ６＝所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分岐鎖状または環状ヒドロカルビル部位、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６＝Ｃ２〜Ｃ７についての１以上のエーテル結合を含んでよく；
Ｒ５＝所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状、分岐鎖状、または環状ヒドロカロビル部位、または５−員環状ヘテロ芳香族部位または６−員環状芳香族またはヘテロ芳香族部位；ここで、Ｒ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸基を含み；ここで、Ｒ５は、所望により、１以上のエーテル結合を含んでよく；
ｍは１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有するエステル、
ここで、該エステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；
ｉｉ）式：
【化１】
2015502369.tif 000002
［式中、Ｒ１＝所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分岐鎖状アルキル、およびＲ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有するグリセリド；
ｉｉｉ）式：
【化２】
2015502369.tif 000003
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分岐鎖状アルキルであって、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分岐鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
を有する１以上のエステル；および
ｉｖ）アセチル化単糖、アセチル化二糖、およびアセチル化多糖からなる群より選択されるアセチル化糖類；
からなる群より選択され；
を含み、
ここで、該水和可能な接着性フィルムの水和に際して、過酸化水素が該顆粒状漂白成分から放出され、該酵素は有効量の過酸の形成を触媒する。
【０００６】
本発明の他の実施形態は、いずれかの前記歯ホワイトニングストリップを含むパッケージングシステムを準備し；該歯ホワイトニングストリップを該パッケージングシステムから取り出し；該歯ホワイトニングストリップを、歯を白くするのに十分な時間の間、歯に直接接触させることを含む歯を白くする方法を提供し、ここで、該歯ホワイトニングストリップは口腔中または歯の表面上に存在する水分によって水和され、または工程（ｂ）の後であるが工程（ｃ）の前に水和される。
【０００７】
本発明の利用性のさらなる領域は、以下に提供される詳細な記載から明らかとなるであろう。詳細な記載および具体的な実施例は本発明の好ましい実施形態を示しつつ、説明のみを目的とすることが意図され、本発明の範囲を限定する意図ではないと理解されるべきである。
【０００８】
生物学的配列の簡単な説明
以下の配列は３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§１．８２１−１．８２５（「ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列の開示を含む特許出願についての要件−配列規則」）を満足しており、世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ）標準ＳＴ．２５（２００９）および欧州特許条約（ＥＰＣ）および特許協力条約（ＰＣＴ）規則５．２および４９．５（ａの２）、および実施細則の第２０８号および付属書Ｃの配列表の要件に合致する。ヌクレオチドおよびアミノ酸配列データで用いられる記号およびフォーマットは３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２に記載された規則を満足する。
【０００９】
配列番号：１は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  Ｃ２７７５変種ペルヒドロラーゼのアミノ酸配列である。
【００１０】
配列番号：２は、（Ｂｕｔｔｅｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．に対する国際特許出願公開番号ＷＯ  ２０１２／０８７９７０Ａ２においては「ＥＺ−７」としても知られた）歯結合ドメインに結合されたＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  Ｃ２７７Ｓ変種ペルヒドロラーゼを含む融合蛋白質のアミノ酸配列である。
【００１１】
配列番号：３は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭからのセファロスポリンＣデアセチラーゼをコードする核酸配列である。
【００１２】
配列番号：４は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭからのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１３】
配列番号：５は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ｓｕｂｓｐ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ株１６８からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１４】
配列番号：６は、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）６６３３ＴＭからのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１５】
配列番号：７は、Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）１４５８０ＴＭからのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１６】
配列番号：８は、Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ  ＰＳ２１３からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００１７】
配列番号：９は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ  ＡＴＣＣ（登録商標）２７４０５ＴＭからのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００１８】
配列番号：１０は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａからのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００１９】
配列番号：１１は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２０】
配列番号：１２は、Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．ＪＷ／ＳＬ  ＹＳ４８５からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２１】
配列番号：１３は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈａｌｏｄｕｒａｎｓ  Ｃ−１２５からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００２２】
配列番号：１４は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ  ＫＳＭ−Ｋ１６からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００２３】
配列番号：１５は、（ここに引用してその全体を援用する）米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からのＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａアセチルキシランエステラーゼ変種のアミノ酸配列であり、ここで、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２４】
配列番号：１６は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からのＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８アセチルキシランエステラーゼ変種のアミノ酸配列であり、ここで、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２５】
配列番号：１７は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からのＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｌｅｔｔｉｎｇａｅアセチルキシランエステラーゼ変種の推定アミノ酸配列であり、ここで、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２６】
配列番号：１８は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からのＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｐｅｔｒｏｐｈｉｌａアセチルキシランエステラーゼ変種のアミノ酸配列であり、ここで、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２７】
配列番号：１９は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からの「ＲＱ２（ａ）」に由来するＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．ＲＱ２アセチルキシランエステラーゼ変種のアミノ酸配列であり、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２８】
配列番号：２０は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からの「ＲＱ２（ｂ）」に由来するＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．ＲＱ２アセチルキシランエステラーゼ変種のアミノ酸配列であり、位置２７８におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２９】
配列番号：２１は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｌｅｔｔｉｎｇａｅアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３０】
配列番号：２２は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｐｅｔｒｏｐｈｉｌａアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３１】
配列番号：２３は、「ＲＱ２（ａ）」として記載されたＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．ＲＱ２からの第一のアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３２】
配列番号：２４は、「ＲＱ２（ｂ）」として記載されたＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．ＲＱ２からの第二のアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３３】
配列番号：２５は、Ｔｈｅｒｍｏａｎｅａｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｍセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００３４】
配列番号：２６は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＡＢＸ７５６３４．１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３５】
配列番号：２７は、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｌｏｔｉ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＢＡＢ５３１７９．１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３６】
配列番号：２８は、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＡＡＦ７０２０２．１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３７】
配列番号：２９〜１６３は、口腔表面に対して親和性を有するペプチドのアミノ酸配列である。
【００３８】
配列番号：１６４〜１７７は、ペプチドリンカー／スペーサーのアミノ酸配列である。配列番号：１７８〜１９７は、ペプチドリンカーを介して、口腔表面に対して親和性を有する結合ドメインに結合された過加水分解酵素を含む種々の標的化ペルヒドロラーゼ融合構築体のアミノ酸配列である（Ｂｕｔｔｅｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．に対する国際特許出願公開番号ＷＯ  ２０１２／０８７９７０Ａ２参照）。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
好ましい実施形態の以下の記載は、性質上、単に実例であって、断じて、発明、その適用、または使用を制限することは意図されない。
【００４０】
本明細書中で用いるように、本発明のエレメントまたは構成要素に先行する冠詞「ある（“ａ”または“ａｎ”）」および「該（ｔｈｅ）」は、エレメントまたは構成要素の場合の数（すなわち、出現）に関して非限定的であることが意図される。従って、「ある」および「該」は１または少なくとも１を含むと読むべきであり、エレメントまたは構成要素の単数語形態は、数が明らかに単数であることが意図されるのでなければ、複数も含む。
【００４１】
本明細書中で用いるように、用語「含む」は、特許請求の範囲において言及された、述べられた特徴、整数、工程、または構成要素の存在を意味するが、それは、１以上の他の特徴、整数、工程、構成要素またはそれらの群の存在または追加を排除しない。用語「含む」は、用語「より実質的になる」および「からなる」によって含まれる実施形態を含むことが意図される。同様に、用語「実質的になる」は、用語「からなる」によって含まれる実施形態を含むことが意図される。
【００４２】
本明細書中で用いるように、使用される成分または反応体の量を修飾する用語「約」とは、例えば、現実の世界で濃縮物または使用溶液を作製するのに用いられる典型的な測定および液体取扱い手順を通じて；これらの手順における偶然の誤差を通じて；組成物を作製し、または当該方法を行うのに使用される成分の製造、入手源、または純度の差等を通じて、起こり得る数量の変動を指す。用語「約」は、特定の最初の混合物に由来する組成物についての異なる平衡条件のため異なる量も含む。用語「約」によって修飾されているか否かに拘わらず、特許請求の範囲は量に対する同等体を含む。
【００４３】
存在する場合、全ての範囲は包括かつ組合せ可能である。例えば、「１〜５」の範囲が引用される場合、引用された範囲は、範囲「１〜４」、「１〜３」、「１〜２」、「１〜２および４〜５」、「１〜３および５」等を含むものと解釈されるべきである。
【００４４】
本明細書中で用いるように、用語「基質」、「適当な基質」、「アシルドナー」、および「カルボン酸エステル基質」は、具体的には：
（ａ）構造：
「Ｘ」ｍＲ５
［式中、Ｘは式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり；
Ｒ６は、所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分岐鎖状または環状ヒドロカルビル部位であり、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６がＣ２〜Ｃ７である場合、１以上のエーテル結合を含んでもよく；
Ｒ５は、所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状、分岐鎖状、または環状ヒドロカルビル部位または環状５−員ヘテロ芳香族または６員環状芳香族またはヘテロ芳香族部位であり；ここでＲ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基を含み、ここで、Ｒ５は、所望により、１以上のエーテル結合を含んでもよく；
ｍは、１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有する１以上のエステル、
ここで、該１以上のエステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；または
ｂ）式：
【化３】
2015502369.tif 000004
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分岐鎖状アルキルであり、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有する１以上のグリセリド；または
（ｃ）式：
【化４】
2015502369.tif 000005
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分岐鎖状アルキルであって、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分岐鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１以上のエステル；または
（ｄ）１以上のアセチル化単糖、アセチル化二糖、またはアセチル化多糖；または
（ｃ）（ａ）から（ｄ）の何れかの組合せ
を相互交換に指す。
【００４５】
本明細書中で用いるように、用語「過酸」は、ペルオキシ酸、ペルオキシカルボン酸、ペルオキシ酸、ペルオキシカルボン酸およびペルオキソイック酸（ｐｅｒｏｘｏｉｃ  ａｃｉｄ）と同義である。
【００４６】
本明細書中で用いるように、用語「過酢酸」は「ＰＡＡ」と省略され、ペルオキシ酢酸、エタンペルオキシ酸およびＣＡＳ登録番号７９−２１−０の全ての他の同義語と同義である。
【００４７】
本明細書中で用いるように、用語「モノアセチン」は、グリセロールモノアセタート、グリセリンモノアセタート、およびグリセリルモノアセタートと同義である。
【００４８】
本明細書中で用いるように、用語「ジアセチン」はグリセロールジアセタート：グリセリンジアセタート、グリセリルジアセタートおよびＣＡＳ登録番号２５３９５−３１−７の全ての他の同義語と同義である。
【００４９】
本明細書中で用いるように、用語「トリアセチン」はグリセリントリアセタート：グリセロールトリアセタート、グリセリルトリアセタート、１，２，３−トリアセトキシプロパン；１，２，３−プロパントリオールトリアセタート、およびＣＡＳ登録番号１０２−７６−１の全ての他の同義語と同義である。
【００５０】
本明細書中で用いるように、用語「アセチル化糖」および「アセチル化糖類」とは、少なくとも１つのアセチル基を含む単糖、二糖および多糖を指す。例としては、限定されるものではないが、グルコースペンタアセタート；キシローステトラアセタート；アセチル化キシラン；アセチル化キシラン断片；β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセタート；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール；およびトリ−Ｏ−アセチル−グルカールが挙げられる。
【００５１】
本明細書中で用いるように、用語「ヒドロカルビル」、「ヒドロカルビル基」、および「ヒドロカルビル部位」は、一重、二重、または三重炭素間結合によって、および／またはエーテル結合によって連結され、かつ従って水素原子で置換された炭素原子の直鎖状、分岐鎖状または環状配置を意味する。そのようなヒドロカルビル基は脂肪族および／または芳香族であってよい。ヒドロカルビル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、ペンチル、シクロペンチル、メチルシクロペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、ベンジル、およびフェニルが挙げられる。好ましい実施形態において、ヒドロカルビル部位は、一重炭素間結合によって、および／またはエーテル結合によって連結され、かつ従って水素原子で置換された炭素原子の直鎖状、分岐鎖状または環状配置である。
【００５２】
本明細書中で用いられるように、１，２−エタンジオール；１，２−プロパンジオール；１，３−プロパンジオール；１，２−ブタンジオール；１，３−ブタンジオール；２，３−ブタンジオール；１，４−ブタンジオール；１，２−ペンタンジオール；２，５−ペンタンジオール；１，５−ペンタンジオール；１，６−ペンタンジオール；１，２−ヘキサンジオール；２，５−ヘキサンジオール；１，６−ヘキサンジオール；およびそれらの混合物の、用語「モノエステル」および「ジエステル」とは、ＲがＣ１〜Ｃ７直鎖状ヒドロカルビル部位である式ＲＣ（Ｏ）Ｏの少なくとも１つのエステル基を含む該化合物を指す。１つの実施形態において、カルボン酸エステル基質はプロピレングリコールジアセタート（ＰＧＤＡ）、エチレングリコールジアセタート（ＥＤＧＡ）、およびそれらの混合物からなる群より選択される。
【００５３】
本明細書中で用いるように、用語「プロピレングリコールジアセタート」は、１，２−ジアセトキシプロパン、プロピレンジアセタート、１，２−プロパンジオールジアセタートおよびＣＡＳ登録番号６２３−８４−7の他の全ての同義語と同義である。
【００５４】
本明細書中で用いるように、用語「エチレングリコールジアセタート」は、１，２−ジアセトキシエタン、エチレンジアセタート、グリコールジアセタートおよびＣＡＳ登録番号１１１−５５−７の全ての他の同義語と同義である。
【００５５】
本明細書中で用いるように、用語「適当な酵素反応混合物」、「過酸の現場生成に適した成分」、「適当な反応成分」、「適当な水性反応混合物」、「反応混合物」、および「過酸−生成成分」とは、物質および（唾液からのおよび／または使用に先立って利用者によって水和可能な接着性フィルムに適用された）水を指し、そこでは、反応体および過加水分解酵素触媒は接触しない。過酸−生成成分は、好ましくは、少なくとも、当該過加水分解酵素が（所望により、体表面に標的化された融合蛋白質の形態である）少なくとも１つのＣＥ−７ペルヒドロラーゼ、少なくとも１つの適当なカルボン酸エステル基質、ペルオキシゲン源である過加水分解活性を有する酵素、および（唾液からのおよび／または使用に先立って利用者によって水和可能な接着性フィルムに適用された）水を含むであろう。
【００５６】
本明細書中で用いるように、用語「過加水分解（perhydrolytic）」は、過酸を形成するための選択された基質と過酸化物との反応と定義される。典型的には、無機過酸化物は、触媒の存在下で選択された基質と反応して、ペルオキシカルボン酸を生じる。本明細書中で用いるように、用語「化学的過加水分解」は、基質（ペルオキシカルボン酸前駆体）が過酸化水素源と合わせられる過加水分解反応を含み、そこでは、ペルオキシカルボン酸は酵素触媒の不存在下で形成される。本明細書中で用いられるように、用語「酵素的過加水分解」は、カルボン酸エステル基質（酸前駆体；「アシルドナー」）が過酸化水素源および水と合わせられ、それにより、酵素触媒が過酸の形成を触媒する過加水分解反応を含む。
【００５７】
本明細書中で用いるように、用語「ペルヒドロラーゼ活性」とは、蛋白質の単位質量（例えば、ミリグラム）、乾燥細胞重量、または固定化酵素重量当たりの触媒活性を指す。
【００５８】
本明細書中で用いるように、「酵素活性の１単位」または「活性の１単位」または「Ｕ」は、特定の温度における分当たりの１μモルのペルオキシカルボン酸生成物の生成に必要なペルヒドロラーゼ活性の量と定義される。
【００５９】
本明細書中で用いるように、用語「酵素触媒」および「ペルヒドロラーゼ活性」とは、過加水分解活性を有する酵素を含む触媒を指し、それは、全微生物細胞、透過性微生物細胞、微生物細胞抽出物の１以上の細胞成分、部分的に精製された酵素、または精製された酵素の形態であってよい。酵素触媒は（ＰＥＧ化によって、または架橋試薬との反応によるなどして）化学的に修飾されていてもよい。ペルヒドロラーゼ触媒は、当業者によく知られた方法を用いて可溶性または不溶性支持体に固定化されていてもよい；例えば、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｓ；編集者Ｇｏｒｄｏｎ  Ｆ．Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ；Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，ＵＳＡ；１９９７参照。１つの実施形態において、ペルヒドロラーゼ触媒は、オーラル・ケア・ストリップ（例えば、ホワイトニングストリップ）または歯科用トレイ中に、またはその上に非共有結合によって固定化されていてよい。さらなる実施形態において、該ストリップまたは歯科用トレイへの非共有結合固定化は、該ストリップまたはトレイ中のまたはその上の物質（例えば、任意のペプチドスペーサーを介してペプチド結合ドメインに結合された過加水分解酵素を含む融合蛋白質）に対して強い親和性を有するペプチド結合ドメインの使用を介するものであってよい。もう１つの実施形態において、歯科用トレイは変形性トレイである。なおさらなる実施形態において、ペルヒドロラーゼ触媒は、歯科印象の形成後に変形性トレイ中またはその上に固定化される。
【００６０】
本明細書中で用いるように、「アセチルキシランエステラーゼ」とは、アセチル化キシランおよび他のアセチル化糖類の脱アセチル化を触媒する酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７２；ＡＸＥｓ）を指す。
【００６１】
本明細書中で用いるように、用語「セファロスポリンＣデアセチラーゼ」および「セファロスポリンＣアセチルヒドロラーゼ」とは、セファロスポリンＣおよび７−アミノセファロスポラニン酸のようなセファロスポリン類の脱アセチル化を触媒する酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．１．４１）を指す（Ｍｉｔｓｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６１（６）：２２２４−２２２９）。有意な過加水分解活性を有するいくつかのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列をここに提供する。
【００６２】
本明細書中で用いるように、用語「Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭ」とは、国際寄託アクセックョン番号ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭを有するＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された細菌細胞を指す。本明細書中に記載されるように、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭからの有意なペルヒドロラーゼ活性を有する酵素は配列番号：４として提供される（米国特許出願公開第２０１０−００４１７５２号参照）。
【００６３】
本明細書中で用いるように、用語「Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８」とは、アセチルキシランエステラーゼ活性を有すると報告されている細菌細胞を指す（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ＮＰ＿２２７８９３．１；米国特許出願公開第２００８−０１７６２９９号参照）。Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８からのペルヒドロラーゼ活性を有する酵素のアミノ酸配列は配列番号：１１として提供される。Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８ペルヒドロラーゼの変種は、配列番号：１および１６として提供される。
【００６４】
本明細書中で用いるように、「単離核酸分子」、「単離ポリヌクレオチド」、および「単離核酸断片」は相互交換可能に用いられ、所望により、合成、非−天然または改変ヌクレオチド塩基を含有していてもよい一本鎖または二本鎖であるＲＮＡまたはＤＮＡのポリマーを指す。ＤＮＡのポリマーの形態である単離核酸分子は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたは合成ＤＮＡの１以上のセグメントを含んでよい。
【００６５】
用語「アミノ酸」とは、蛋白質またはポリペプチドの塩基性化学構造単位を指す。以下の略語を特定のアミノ酸を確認するために本明細書中で用いる：
【数１】
2015502369.tif 000006
【００６６】
本明細書中で用いるように、使用される成分または反応体の量を修飾する用語「約」とは、例えば、濃縮物を作製するのに用いられる典型的な測定および液体取扱い手順を介して起こり得る数量の変動を指す。本明細書中で用いるように、用語「シグナチャーモチーフ」および「診断モチーフ」とは、規定された活性を有する酵素のファミリー間に共有された保存された構造を指す。シグナチャーモチーフは、基質の規定されたファミリーに対して同様な酵素活性を有する構造的に関連する酵素のファミリーを定義および／または同定するのに用いることができる。シグナチャーモチーフは、単一の連続アミノ酸配列、またはシグナチャーモチーフを一緒に形成する不連続な保存されたモチーフのコレクションであり得る。典型的には保存されたモチーフはアミノ酸配列によって表される。１つの実施形態において、本発明の組成物および方法で用いられる過加水分解酵素は、ＣＥ−７炭水化物エステラーゼシグナチャーモチーフを含む。
【００６７】
本明細書中で用いるように、用語「配列分析ソフトウェア」とは、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列分析で有用ないずれのコンピュータアルゴリズムまたはソフトウェアプログラムも指す。「配列分析ソフトウェア」は商業的に入手可能であるかまたは独立して開発され得る。典型的な配列分析ソフトウェアとしては、限定されるものではないが、プログラムのＧＣＧスイート（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ９．０，Ａｃｃｅｌｒｙｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０））、およびＤＮＡＳＴＡＲ（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．１２８８Ｓ．Ｐａｒｋ  Ｓｔ．  Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ５３７１５  ＵＳＡ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ（例えば、バージョン１．８３；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２（２２）：４６７３−４６８０（１９９４））、およびＦＡＳＴＡプログラムを取り込んだＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．［Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐ．］（１９９４），Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｄａｔｅ  １９９２，１１１−２０．編集者：Ｓｕｈａｉ  Ｓａｎｄｏｒ．出版社：Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｂｅｔｈｅｓａｄａ，ＭＤ）およびＳｅｑｕｅｎｃｈｅｒ  ｖ．４．０５が挙げられるであろう。本出願との関係では、配列分析ソフトウェアが分析のために用いられる場合、分析の結果は、特記しない限り、参照されたプログラムの「デフォルト値」に基づくであろうことは理解されるであろう。本明細書中で用いるように、「デフォルト値」は、元来、最初に初期化された場合にソフトウェアにロードされるソフトウェア製造業者によって設定された値またはパラメータのいずれかの組を意味するであろう。
【００６８】
用語「体表面」とは、過酸有益剤のような、有益剤に対する標的として働くことができるヒト身体のいずれの表面も指す。本発明の方法および組成物は、オーラルケア適用および製品に向けられる。それ自体、体表面は口腔物質／表面を含む。１つの実施形態において、口腔物質は歯のエナメル質を含む。
【００６９】
本明細書中で用いるように、用語「歯のホワイトニング」および「歯の漂白」は相互交換可能に用いられて、歯または複数の歯の白色度の改良（例えば、白くすること）を指す。ホワイトニングストリップは、本明細書中においては、有効量の過酸を酵素により生じさせて、水和された場合に歯を白くするのに適した成分を含むと記載される。
【００７０】
本明細書中で用いるように、歯における「固有の汚れ」とは、エナメル質およびその下に存在する象牙質内の色原体から得られた色を指す。ヒトの歯の固有の色は、エナメル質の薄化およびその下にある黄色い象牙質の暗色化のため、加齢と共により黄色くなる傾向がある。固有の汚れの除去は、通常、エナメル質に浸透し、固有の色原体を脱色する過酸化物または他の酸化性化学物質の使用を必要とする。
【００７１】
固有の汚れとは対照的に、外来性色素生成物質が、通常、歯を天然で被覆するペリクル内でエナメル質に結合すると、歯の表面に「外来性汚れ」が形成される。多くの人々は、自己の歯の上にある程度の見苦しい外来性汚れを経時的に蓄積する。この汚れプロセスは：（１）コーヒー、お茶、または赤ワインのようなタンニン−含有食品および飲料の摂取；（２）タバコ製品の使用；および／または（３）ある種のカチオン性物質（例えば、スズ、鉄、およびクロルヘキシジン）への暴露のような因子によって促進される。これらの物質はエナメル質のヒドロキシアパタイト構造に接着する傾向があり、これは、歯の変色および歯の白さの同時低下に導く。何年にもわたって、固有の汚れはエナメル質層に浸透でき、その結果、固有の汚れがもたらされる。
【００７２】
本明細書中で用いるように、用語「汚れ除去」または「汚れを除去する」とは、口腔表面から汚れを除去するプロセスを指す。汚れは、固有の汚れ、外来性汚れ、またはそれらの組合せであってよい。
【００７３】
本明細書中で用いるように、「ペルヒドロラーゼ酵素の有効量」とは、具体的な適用で必要とされる酵素活性を達成するのに必要なペルヒドロラーゼ酵素の量を指す。そのような有効量は、当業者によって容易に確認され、それは、用いる特定の酵素変種のような多くの因子に基づく。
【００７４】
本明細書中で用いるように、用語「ペルオキシゲン源」および「ペルオキシゲンの源」とは、限定されるものではないが、過酸化水素、過酸化水素アダクト（例えば、尿素−過酸化水素アダクト（過酸化カルバミド））、過ホウ酸塩、および過炭酸塩を含めた、水性溶液中にある場合、約１ｍＭ以上の濃度で過酸化水素を生じさせることができる化合物を指す。本明細書中に記載するように、本発明のホワイトニングストリップにおけるペルオキシゲン源は顆粒状粒子の形態であり、ここで、利用者は顆粒状過酸化物粒子を水和させて、有効量の過酸化水素を放出させる。本明細書中に記載されるように、水性反応配合物中のペルオキシゲン化合物によって供された過酸化水素の濃度は、最初、反応成分を合した際には、少なくとも０．１ｍＭ以上である。１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも０．５ｍＭである。１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも１ｍＭである。もう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも１０ｍＭである。もう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも１００ｍＭである。もう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも２００ｍＭである。もう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも５００ｍＭ以上である。なおもう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は１０００ｍＭ以上である。配合物中の酵素基質、例えば、トリグリセリドに対する過酸化水素のモル比率（Ｈ２Ｏ２：基質）は、約０．００２〜２０、好ましくは約０．１〜１０、最も好ましくは約０．５〜５であってよい。
【００７５】
本明細書中で用いるように、用語「オリゴ糖」とは、グリコシド結合によって連結された２および少なくとも２４の間の単糖単位を含有する化合物を指す。用語「単糖」とは、実験式（ＣＨ２Ｏ）ｎの化合物を指し、ここで、ｎ≧３であり、炭素骨格は分岐しておらず、１つを除いて各炭素原子はヒドロキシル基を含有し、残りの炭素原子は炭素原子１におけるアルデヒドまたはケトンである。用語「単糖」とは、細胞内環状ヘミアセタールまたはヘミケタール形態も指す。
【００７６】
本明細書中で用いるように、用語「水和可能な接着剤」とは、水和され得る接着性物質を指す。該水和可能な接着剤は、水和されるまでは、実質的に乾燥しており、かつ非−接着性である。水和に際して、水和可能な接着剤は歯ホワイトニングストリップ／フィルムを歯の表面に結合させるのに十分接着性となる。水和可能な接着性フィルムは、顆粒状漂白成分も含み、それにより、水和に際して、有効量の過酸化水素が放出されて、過酸漂白剤の酵素による形成で用いられる。ホワイトニングストリップ／フィルムは、典型的には、薄い（典型的には、２ｍｍ未満の）形状であり、口腔内に適合するサイズであって、十分に柔軟性であり、その結果、フィルムが適用され、複数の歯と接触するように配置され、それにより、水和された接着剤がフィルム／ストリップを歯の表面に保持するのを助け、過酸漂白剤が歯を白くするのに十分な時間を供する。
【００７７】
本明細書中で用いるように、用語「有効量」とは、所望の効果を達成するのに必要な物質の量を指す。
【００７８】
本明細書中で用いるように、用語「水和するまで実質的に非−接着性である」とは、歯ホワイトニングフィルムを水和に先立って複数の歯の表面に接着させるのに十分な接着強度の欠如を指す。それ自体、水和可能な接着性フィルムは、利用者による適用／水和に先立って、取り扱い、操作するのが容易であろう。
【００７９】
「配列同一性」とは、配列整列プログラム、例えば、一般には、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ，Ｇｉｓｈ  Ｗ，Ｍｉｌｌｅｒ  Ｗ，Ｍｙｅｒｓ  ＥＷ，Ｌｉｐｍａｎ  ＤＪ，“Ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ”，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９９０）２１５（３）：４０３−４１０，およびＧｏｕｊｏｎ  Ｍ，ＭｃＷｉｌｌｉａｍ  Ｈ，Ｌｉ  Ｗ，Ｖａｌｅｎｔｉｎ  Ｆ，Ｓｑｕｉｚｚａｔｏ  Ｓ，Ｐａｅｒｎ  Ｊ，Ｌｏｐｅｚ  Ｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓａｅｒｃｈ（２０１０）３８  Ｓｕｐｐｌ：Ｗ６９５−９に記載された、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＷまたはＢＬＡＳＴを用いるアミノ酸同一性を意味する。
【００８０】
例えば、過酸化物との反応に際して過酸を形成するために本発明で用いられるアシルドナーは、（ｉ）所望により、ヒドロキシおよび／またはＣ１−４アルコキシで置換されていてもよい低級直鎖状または分岐鎖状アルキルカルボン酸を含めた、Ｃ２−１８カルボン酸、例えば、Ｃ２−６カルボン酸（例えば、酢酸）；（ｉｉ）それらの加水分解可能であって許容されるエステル（例えば、モノ−、ジ−、およびトリ−グリセリドおよびアシル化糖類）および（ｉｉｉ）それらの混合物の１以上より選択される。例えば、アシルドナーとしては（時々、本明細書中においては、トリアセチンまたはグリセリントリアセタートと称される）１，２，３−トリアセトキシプロパンおよびアシル化糖類、例えば、アセチル化糖類が挙げられる。特定の実施形態においては、この使用のためのエステルは、例えば、２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有するエステルであってよい。
【００８１】
アシルドナーおよび／または酵素は、所望により、カプセル化されていてよい。天然および合成双方の、当該分野でよく知られた種々のカプセル化選択肢がある。修飾された澱粉およびアラビアガムは特によく適している。というのは、それらは食品グレードであり、比較的安価であり、溶解するのが速く、かつかなり高いレベルの液状油を吸収できるからである。最終の粘度に対するいずれのインパクトも考慮される必要がある。
【００８２】
いくつかの実施形態において、顆粒は、神経を脱感作でき、または象牙質細管を閉塞できる抗感受性剤を含む。いくつかの実施形態において、抗感受性剤は、カリウムイオン源、シリケート、第一スズイオン源、塩基性アミノ酸、クレイ、およびそれらの組合せより選択される。いくつかの実施形態において、カリウムイオン源は経口的に許容されるカリウム塩であって、象牙質の感度を低下させるのに有効な量で存在させる。いくつかの実施形態において、カリウムイオン源は、塩化カリウム、硝酸カリウムおよびそれらの組合せより選択される。いくつかの実施形態において、塩基性アミノ酸はアルギニンである。いくつかの実施形態において、塩基性アミノ酸はアルギニンリン酸、重炭酸アルギニン、および塩酸アルギニンより選択される。いくつかの実施形態において、シリケートはケイ酸カルシウムである。
【００８３】
ＣＥ−７ペルヒドロラーゼ
本発明の組成物および方法は、酵素の炭水化物ファミリーエステラーゼファミリー７（ＣＥ−７ファミリー）のメンバーとして構造的に分類される過加水分解活性を有する酵素を含む（Ｃｏｕｔｉｎｈｏ，Ｐ．Ｍ．，Ｈｅｎｒｉｓｓａｔ，Ｂ．“Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ａｃｔｉｖｅ  ｅｎｚｙｎｅｓ：ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｄｅｔａｂａｓｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ”ｉｎ  Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｈ．Ｊ．Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｇ．Ｄａｖｉｅｓ，Ｂ．Ｈｅｎｒｉｓｓａｔ  ａｎｄ  Ｂ．Ｓｖｅｎｓｓｏｎ編，（１９９９）Ｔｈｅ  Ｒｏｙａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ｐｐ．３−１２参照）。酵素のＣＥ−７ファミリーは、ペルオキシゲンの源と合わせると、種々のカルボン酸エステル基質からペルオキシカルボン酸を生じさせるのに特に有効であることが示されている（各々、ここに引用して援用する、ＤｉＣｏｓｉｍｏ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第７，７９４，３７８号；第７，９５１，５６６号；第７，７２３，０８３号；および第７，９６４，３７８号および米国特許出願公開第２００８−０１７６２９９号、第２０１０−００８７５２９号、第２０１１−００８１６９３号、および第２０１１−０２３６３３５号）。
【００８４】
ＣＥ−７ファミリーのメンバーはセファロスポリンＣデアセチラーゼ（ＣＡＨｓ；Ｅ．Ｃ．３．１．１．４１）およびアセチルキシランエステラーゼ（ＡＸＥｓ；Ｅ．Ｃ．３．１．１．７２）を含む。ＣＥ−７エステラーゼファミリーのメンバーは保存されたシグナチャーモチーフを共有する（Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３３０：５９３−６０６（２００３））。ＣＥ−７シグナチャーモチーフ（「ＣＥ−７ペルヒドロラーゼ」）および／または実質的に同様な構造を含むペルヒドロラーゼは、本明細書中に記載された組成物および方法で用いるのに適している。実質的に同様な生物学的分子を同定するための手段は当該分野でよく知られている（例えば、配列整列プロトコル、核酸ハイブリダイゼーションおよび／または保存されたシグナチャーモチーフの存在）。１つの態様において、ペルヒドロラーゼは、ＣＥ−７シグナチャーモチーフおよび本明細書中に提供された配列の１つに対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも３３％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも４２％、より好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を含む酵素を含む。
【００８５】
本明細書中で用いるように、フレーズ「酵素はＣＥ−７酵素として構造的に分類される」、「ＣＥ−７ペルヒドロラーゼ」または「炭水化物エステラーゼファミリー７酵素として構造的に分類される」は、構造的にＣＥ−７炭水化物エステラーゼとして分類される過加水分解活性を有する酵素を指すのに用いられるであろう。酵素のこのファミリーは、シグナチャーモチーフの存在によって定義することができる（Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，前掲）。ＣＥ−７エステラーゼに対するシグナチャーモチーフは、３つの保存されたモチーフ（参照配列の配列番号：１に対する残基位置ナンバリング；Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａペルヒドロラーゼのＣ２７７Ｓ変種）を含む。
【化５】
2015502369.tif 000007
【００８６】
典型的には、アミノ酸残基位置１８７におけるＸａａはグリシン、アラニン、プロリン、トリプトファン、またはスレオニンである。触媒三塩基に属する３つのアミノ酸残基のうちの２つは太文字で示す。１つの実施形態において、アミノ酸残基位置１８７におけるＸａａはグリシン、アラニン、プロリン、トリプトファン、およびスレオニンからなる群より選択される。
【００８７】
ＣＥ−７炭水化物エステラーゼファミリー内の保存されたモチーフのさらなる分析は、ＣＥ−７炭水化物エステラーゼファミリーに属するペルヒドロラーゼをさらに定義するのに用いることができる追加の保存されたモチーフ（配列番号：１のアミノ酸位置２７２〜２７４におけるＬＸＤ）の存在を示す。さらなる実施形態において、先に定義されたシグナチャーモチーフは：
【化６】
2015502369.tif 000008
と定義される追加の（第四の）保存されたモチーフを含むことができる。アミノ酸残基位置２７３におけるＸａａは、典型的には、イソロイシン、バリン、またはメチオニンである。第四のモチーフは触媒三塩基に属するアスパラギン酸残基（太文字）
【化７】
2015502369.tif 000009
を含む。
【００８８】
ＣＥ−７ペルヒドロラーゼは、少なくとも１つの体表面に対して親和性を有する少なくとも１つのペプチド成分を有する融合蛋白質の形態であってよい。１つの実施形態において、標的化ペルヒドロラーゼ（融合蛋白質）がＣＥ−７シグナチャーモチーフを含むかを判断するのに用いられる全ての整列は、体表面に対して親和性を有するペプチド成分無しの過加水分解酵素のアミノ酸配列に基づくであろう。
【００８９】
多数のよく知られたグローバル整列アルゴリズム（すなわち、配列分析ソフトウェア）を用いて、ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素を表す２以上のアミノ酸配列を整列させて、酵素が本発明のシグナチャーモチーフを含むかを判断することができる。整列された配列を参照配列（配列番号：１）と比較して、シグナチャー配列の存在を判断する。１つの実施態様において、参照アミノ酸配列（本明細書中で用いるように、ペルヒドロラーゼ配列（配列番号：１））を用いる（ＣＬＵＳＴＡＬＷのような）ＣＬＵＳＴＡＬ整列を用いて、ＣＥ−７エステラーゼファミリーに属するペルヒドロラーゼを同定する。保存されたアミノ酸残基の相対的ナンバリングは、整列した配列内の小さな挿入または欠失（例えば、典型的には、５アミノ酸以下）を説明するための参照アミノ酸配列の残基ナンバリングに基づく。
【００９０】
（参照配列と比較した場合の）本発明のシグナチャーモチーフを含む配列を同定するのに用いることができる他の適当なアルゴリズムの例としては、限定されるものではないが、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３−４５３）（１９７０）；グローバル整列ツール）およびＳｍｉｔｈ―Ｗａｔｅｒｍａｎ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−１９７（１９８１）；局所的整列ツール）が挙げられる。１つの実施形態において、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ整列はデフォルトパラメータを用いて実施される。適当なデフォルトパラメータの例としては、ＧＡＰオープンペナルティ＝１０およびＧＡＰ延長ペナルティ＝０．５であるＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスの使用が挙げられる。
【００９１】
１つの実施形態において、適当なペルヒドロラーゼとしては、ＣＥ−７シグナチャーモチーフ、および配列番号：１に対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、３３％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を含む酵素が挙げられる。
【００９２】
過加水分解活性を有する適当なＣＥ−７炭水化物エステラーゼの例としては、限定されるものではないが、配列番号：１、および４〜２８のようなアミノ酸配列を有する酵素が挙げられる。１つの実施形態において、該酵素は、１、１０、１１、１５、および１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００９３】
本明細書中で用いるように、用語「ＣＥ−７変種」、「変種ペルヒドロラーゼ」または「変種」とは、ＣＥ−７シグナチャーモチーフおよび関連過加水分解活性が維持される限り、それから変種が導かれる対応する酵素（典型的には、野生型酵素）と比較した場合に、少なくとも１つのアミノ酸の付加、欠失、および／または置換をもたらす遺伝的修飾を有するＣＥ−７ペルヒドロラーゼを指すであろう。ＣＥ−７変種ペルヒドロラーゼは、本発明の組成物および方法で用いることもできる。ＣＥ−７変種の例は、配列番号：１、１５、１６、１７、１８、１９、および２０として提供される。１つの実施形態において、変種は配列番号：１および１６を含むことができる。
【００９４】
当業者であれば、（シグナチャーモチーフを保有する）実質的に同様なＣＥ−７ペルヒドロラーゼ配列を本発明の組成物および方法で用いることもできるのを認識する。１つの実施形態において、実質的に同様な配列は、本明細書中で例示された配列に関連する核酸分子と、高度にストリンジェントな条件下で、ハイブリダイズするそれらの能力によって定義される。もう１つの実施形態において、配列整列アルゴリズムを用いて、本明細書中で提供されるＤＮＡまたはアミノ酸配列に対するパーセント同一性に基づいて実質的に同様な酵素を定義することができる。
【００９５】
本明細書中で用いるように、核酸分子は、第一の分子の一本鎖が適当な温度および溶液イオン強度の条件下で他の分子にアニールすることができる場合、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはＲＮＡのようなもう１つの核酸分子に「ハイブリダイズ可能」である。ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件がよく知られており、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．およびＲｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．，Ｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第三版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（２００１）に例示されている。温度およびイオン強度の条件は、ハイブリダイゼーションの「ストリンジェンシー」を決定する。ストリンジェンシー条件を調整して、かすかに関連する生物からの相同配列のような中程度の同様な配列から、密接に関連する生物からの機能的酵素を複製する遺伝子のような高度に同様な分子についてスクリーニングすることができる。ハイブリダイゼーション後洗浄は、典型的には、ストリンジェンシー条件を決定する。好ましい条件の１つの組は、室温にて１５分間の６×  ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳで出発し、次いで、４５℃にて３０分間、２×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳで反復し、続いて、５０℃にて３０分間、０．２×  ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳで２回反復する一連の洗浄を用いる。条件のより好ましい組は、より高い温度を用い、そこでは、洗浄は、０．２×  ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ中の最後の２回の３０分間の洗浄の温度を６０℃まで上昇させる以外は前記と同一である。高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のもう１つの好ましい組は、０．１×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃、および２×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳでの洗浄、続いての０．１×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃の最後の洗浄である。
【００９６】
ハイブリダイゼーションは、２つの核酸が相補的な配列を含有することを要求するが、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに依存して、塩基の間のミスマッチが可能である。核酸をハイブリダイズさせるための適切なストリンジェンシーは、核酸の長さおよび相補性の程度、当該分野でよく知られた変数に依存する。２つのヌクレオチド配列の間の同様性または相同性の程度がより大きくなれば、それらの配列を有する核酸のハイブリッドについてのＴｍの値はより高くなる。核酸ハイブリダイゼーションの（より高いＴｍに対応する）相対的な安定性は以下の順序：ＲＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＤＮＡで減少する。長さが１００ヌクレオチドを超えるハイブリッドでは、Ｔｍを計算するための方程式が導かれている（ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ，前掲）。より短い核酸、すなわち、オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションでは、ミスマッチの位置はより重要となり、オリゴヌクレオチドの長さはその特異性を決定する（ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ，前掲）。１つの態様において、ハイブリダイズ可能な核酸についての長さは少なくとも約１０ヌクレオチドである。好ましくは、ハイブリダイズ可能な核酸についての最小長さは、長さが少なくとも約１５ヌクレオチドであり、より好ましくは長さが少なくとも約２０ヌクレオチドであり、なおより好ましくは長さが少なくとも３０ヌクレオチドであり、なおより好ましくは、長さが少なくとも３００ヌクレオチドであり、最も好ましくは長さが少なくとも８００ヌクレオチドである。さらに、当業者であれば、温度および洗浄溶液の塩濃度は、プローブの長さのような因子に従って、必要に応じて調整することができるのを認識するであろう。
【００９７】
本明細書中で用いるように、用語「パーセント同一性」は、配列を比較することによって決定された、２以上のポリペプチド配列または２以上のポリヌクレオチド配列の間の関係である。当該分野においては、「同一性」は、場合によっては、配列のストリング間のマッチによって決定された、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の間の配列関連性の程度も意味する。「同一性」および「同様性」は、限定されるものではないが：Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９３）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＪ（１９９４）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．編）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；およびＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編）Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９１）に記載されたものを含めた、公知の方法によって容易に計算することができる。同一性および同様性を決定するための方法は、公に入手可能なコンピュータプログラムに体系化されている。配列整列およびパーセント同一性の計算は、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥバイオインフォマティクス計算スイートのメガライン（Ｍｅｇａｌｉｇｎ）プログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ  Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ  ｖ．７．０のＡｌｉｇｎＸプログラム（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）、またはＥＭＢＯＳＳ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅスイート（ＥＭＢＬ−ＥＢＩ；Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １６，（６）：２７６−２７７（２０００））を用いて行うことができる。配列の多数整列は、デフォルトパラメータでの、欧州バイオインフォマティクス研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を介して欧州分子生物学研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）から入手可能な、整列の（ＣＬＵＳＴＡＬＷ；例えば、バージョン１．８３のような）ＣＬＵＳＴＡＬ方法（ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ，５：１５１−１５３（１９８９）；Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２：４６７３−４６８０（１９９４）；およびＣｈｅｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ３１（１３）：３４９７−５００（２００３））を用いて行うことができる。ＣＬＵＳＴＡＬＷ蛋白質整列についての適切なパラメータは、ＧＡＰ存在ペナルティ＝１５、ＧＡＰ延長＝０．２、マトリックス＝Ｇｏｎｎｅｔ（例えば、Ｇｏｎｎｅｔ２５０）、蛋白質ＥＮＤＧＡＰ＝−１、蛋白質ＧＡＰＤＩＳＴ＝４、お���びＫＴＵＰＬＥ＝１を含む。１つの実施形態において、速いまたは遅い整列を、遅い整列が好ましいデフォルト設定と共に用いる。別法として、ＣＬＵＳＴＡＬＷ方法（例えば、バージョン１．８３）を用いるパラメータを修飾して、ＫＴＵＰＬＥ＝１、ＧＡＰ  ＰＥＮＡＬＴＹ＝１０、ＧＡＰ延長＝１、マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６４）、ＷＩＮＤＯＷ＝５、およびＴＯＰ  ＤＩＡＧＯＮＡＬＳ  ＳＡＶＥＤ＝５を用いることもできる。
【００９８】
１つの態様において、適切な単離核酸分子は、本明細書中に報告されたアミノ酸配列に対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、３３％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。もう１つの態様において、適切な単離核酸分子は、本明細書中に報告されたアミノ酸配列に対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、３３％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。適切な核酸分子は前記相同性を有するのみならず、典型的には、長さが約２１０〜３４０アミノ酸、約３００〜約３４０アミノ酸、好ましくは約３１０〜約３３０アミノ酸、最も好ましくは長さが約３１８〜約３２５アミノ酸を有するポリペプチドをコードし、ここで、各ポリペプチドは、過加水分解活性を有するとして特徴付けられる。
【００９９】
標的化ペルヒドロラーゼ
本明細書中で用いるように、用語「標的化ペルヒドロラーゼ」および「過加水分解活性を有する標的化酵素」とは、標的表面、好ましくは標的化体表面に対して親和性を有する少なくとも１つのペプチド成分に融合／結合された少なくとも１つの加水分解酵素（野生型またはその変種）を含む融合蛋白質を指すであろう。標的化ペルヒドロラーゼ内の過加水分解酵素は、過加水分解活性を有するいずれのＣＥ−７炭水化物エステラーゼであってもよい。ＣＥ−７ペルヒドロラーゼは、参照配列の配列番号：１と整列するＣＥ−７シグナチャーモチーフの存在によって同定することができ、該シグナチャーモチーフは：
ｉ）配列番号：１の位置１１８〜１２０に対応する位置のＲＧＥモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の位置１８６〜１９０に対応する位置のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の位置３０３〜３０４に対応する位置のＨＥモチーフ
を含む。
【０１００】
１つの実施形態において、過加水分解酵素は、本明細書中で報告されるアミノ酸配列（すなわち、配列番号：１、および４〜２８）のいずれかに対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、３３％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するものであってよい。
【０１０１】
もう１つの実施形態において、融合蛋白質は、配列番号：１、および４〜２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する過加水分解酵素を含む。
【０１０２】
本明細書中で用いるように、用語「ペプチド成分」、「口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分」、「口腔結合ドメイン」、および「ＯＣＢＤ」とは、ペプチド結合によって連結された２以上のアミノ酸の少なくとも１つのポリマーを含む過加水分解酵素の一部ではない融合蛋白質の成分を指し、ここで、該成分は標的口腔表面に対して親和性を有する。好ましい態様において、ＯＣＢＤは歯のエナメル質に対して親和性を有する。
【０１０３】
１つの実施形態において、体表面に対して親和性を有するペプチド成分は、抗体、Ｆａｂ抗体断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）抗体、Ｃａｍｅｌｉｄａｅ抗体（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｓ．，Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００１）７４：２７７−３０２）、非−抗体足場表示蛋白質（種々の足場−援助アプローチのレビューについては、Ｈｏｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．（２００６）１５（１）：１４−２７およびＢｉｎｚ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３，１２５７−１２６８）または免疫グロブリン折畳みを欠如する一本鎖ポリペプチドであってよい。もう１つの態様において、（歯のエナメル質のような）口腔組織／表面に対して親和性を有するペプチド成分は、免疫グロブリン折畳みを欠如する一本鎖ペプチドである。
【０１０４】
口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分は、任意のペプチドリンカーによって過加水分解酵素から離すことができる。ある種のペプチドリンカー／スペーサーは、長さが１〜１００または１〜５０アミノ酸である。いくつかの実施形態において、ペプチドスペーサーは、長さが約１〜約２５、３〜約４０、または３〜約３０アミノ酸である。他の実施形態において、長さが約５〜約２０アミノ酸であるスペーサーである。多数のペプチドリンカーを用いることができる。１つの実施形態において、少なくとも１つのペプチドリンカーを存在させ、１０回まで反復することができる。
【０１０５】
１つの実施形態において、融合ペプチドは、配列番号：１７８〜１９７からなる群より選択される少なくとも１つの口腔表面結合ペプチドを含む。
【０１０６】
もう１つの実施形態において、標的表面は、（水和可能な接着剤が適用されるポリマーブロッキング層を用いる場合は）ホワイトニングストリップまたはポリマーブロッキング層のようなパッケージングの一部である材料、および／または口腔への送達方法である。ペプチド成分は、ポリマー、プラスチックおよびフィルムのような用いる材料または複数材料に対するその親和性について選択される。標的化ペルヒドロラーゼ融合蛋白質の設計は、限定されるものではないが、マウストレイまたはストリップのような取り外し可能なデバイス上にそれを維持することによって、ペルヒドロラーゼの制御された送達およびペルヒドロラーゼの利用者からの除去を可能とする。
【０１０７】
口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分は、任意のペプチドリンカーによってＣＥ−７ペルヒドロラーゼから離すことができる。ある種のペプチドリンカー／スペーサーは、長さが１〜１００または１〜５０アミノ酸である。いくつかの実施形態において、ペプチドスペーサーは、長さが約１〜約２５、３〜約４０、または３〜約３０アミノ酸である。他の実施形態において、長さが約５〜約２０アミノ酸であるスペーサーである。多数のペプチドリンカーを用いることができる。ペプチドリンカーの例は配列番号：１６４〜１７７として提供される。
【０１０８】
それ自体、標的化ＣＥ−７ペルヒドロラーゼの例としては、限定されるものではないが、口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分に結合された配列番号：１、および４〜２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＥ−７ペルヒドロラーゼのいずれも挙げることができる。好ましい実施形態において、標的化ペルヒドロラーゼの例としては、限定されるものではないが、（所望により、ペプチドスペーサーを介してもよい）口腔表面に対して親和性を有する１以上の体表面結合ペプチドに結合された配列番号：１、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、および２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＥ−７ペルヒドロラーゼのいずれも挙げることができる。好ましい実施形態において、標的化ペルヒドロラーゼは、配列番号：１および１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＥ−７ペルヒドロラーゼを含む。
【０１０９】
１つの実施形態において、ペルヒドロラーゼは、以下の一般的構造：
ＰＡＨ−［Ｌ］ｙ−ＯＣＢＤまたはＯＣＢＤ−［Ｌ］ｙ−ＰＡＨ
［式中、ＰＡＨは、例えば、ＣＥ−７シグナチャーモチーフ、例えば、配列番号：１を有する過加水分解活性を有する酵素であり、ＯＣＢＤは口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分であり、Ｌは任意のリンカーであって、ｙは０〜１０の範囲の整数である］
を有する融合蛋白質の形態である。１つの実施形態において、リンカー（Ｌ）が存在し、それは、長さが１〜１００アミノ酸の範囲のペプチドリンカーである。
【０１１０】
例えば、配列番号：２は、口腔組織に対して親和性を持つＣ−末端標的化ドメインに結合された配列番号：１のペルヒドロラーゼ配列を有する融合蛋白質である。
【０１１１】
本発明の生成物および方法で用いられるペルヒドロラーゼは、遊離形態、保護された（例えば、アセチル化された）形態、または塩の形態であってよい。
【０１１２】
もう１つの実施形態において、標的表面は、パッケージングまたは口腔への送達の一部である材料である。ペプチド成分は、ポリマー、プラスチックおよびフィルムのような、用いられる材料または複数材料に対するその親和性で選択される。標的化ＣＥ−７ペルヒドロラーゼ融合蛋白質は、マウストレイまたはストリップのような取り外し可能なデバイス上にそれを維持することによって、ペルヒドロラーゼの制御された送達、およびペルヒドロラーゼの利用者からの除去を可能とする。
【０１１３】
結合親和性
口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分は、１０−５モル濃度（Ｍ）以下の口腔表面に対する結合親和性を含む。ある実施形態において、ペプチド成分は、歯のエナメル質に対して１０−５モル濃度（Ｍ）以下の結合親和性を有する１以上の口腔表面結合ペプチドおよび／または結合性ドメインである。いくつかの実施形態において、結合ペプチドまたはドメインは、少なくとも約５０〜５００ｍＭ塩の存在下で、１０−５Ｍ以下の結合親和性値を有するであろう。用語「結合親和性」とは、結合ペプチドとその各基質との相互作用の強さを指す。結合親和性は、結合ペプチドの解離定数（「ＫＤ」）、または「ＭＢ５０」の換算で定義され、または測定することができる。
【０１１４】
「ＫＤ」は、標的上の結合部位が半分占められる、すなわち、ペプチドが結合した標的（結合した標的材料）の濃度がペプチド結合無しの標的の濃度と等しい場合のペプチドの濃度に対応する。解離定数がより小さくなると、ペプチドはより緊密に結合する。例えば、ナノモル濃度（ｎＭ）の解離定数を持つペプチドは、マイクロモル濃度（μＭ）の解離定数を持つペプチドよりもより緊密に結合する。本発明のある実施形態は、１０−５以下のＫＤ値を有するであろう。
【０１１５】
「ＭＢ５０」とは、ＥＬＩＳＡベースの結合アッセイで得られた最大シグナルの５０％であるシグナルを与える結合ペプチドの濃度を指す。例えば、ここに引用して援用する、米国特許出願公開第２００５／０２２６８３号の実施例３参照。ＭＢ５０は、複合体の成分の結合相互作用または親和性の強度の指標を提供する。ＭＢ５０の値がより低くなると、ペプチドとその対応する基質との相互作用はより強く、すなわち、「より良好」となる。例えば、ナノモル濃度（ｎＭ）のＭＢ５０を持つペプチドは、マイクロモル濃度（μＭ）のＭＢ５０を持つペプチドよりもより緊密に結合する。本発明のある実施形態は、１０−５Ｍ以下のＭＢ５０値を有するであろう。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分は、約１０−５Ｍ以下の、１０−６Ｍ以下の、１０−７Ｍ以下の、約１０−８Ｍ以下の、約１０−９Ｍ以下の、または１０−１０Ｍ以下の、ＫＤまたはＭＢ５０値によって測定された結合親和性を有することができる。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、口腔表面結合ペプチドおよび／または口腔表面結合ドメインは、約１０−５Ｍ以下の、約１０−６Ｍ以下の、約１０−７Ｍ以下の、約１０−８Ｍ以下の、約１０−９Ｍ以下の、または約１０−１０Ｍ以下の、ＫＤまたはＭＢ５０値によって測定された結合親和性を有することができる。
【０１１８】
本明細書中で用いるように、用語「強い親和性」とは、約１０−５Ｍ以下の、好ましくは約１０−６Ｍ以下の、より好ましくは約１０−７Ｍ以下の、より好ましくは約１０−８Ｍ以下の、約１０−９Ｍ以下の、または最も好ましくは約１０−１０Ｍ以下の、ＫＤまたはＭＢ５０値を有する結合親和性を指すであろう。
【０１１９】
酵素粉末
いくつかの実施形態において、パーソナルケア組成物は、安定化された酵素粉末の形態の酵素触媒を用いることができる。酵素粉末を含む配合物を作製し、安定化させるための方法は、米国特許出願公開第２０１０−００８６５３４号および第２０１０−００８６５３５号に記載されている。
【０１２０】
１つの実施形態において、酵素は、酵素粉末の乾燥重量に基づいて、約０．５重量パーセント（ｗｔ％）〜約７５ｗｔ％、例えば、１ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の範囲の量の酵素粉末であってよい。酵素粉末／噴霧乾燥混合物における酵素の好ましい重量パーセント範囲は約１０ｗｔ％〜５０ｗｔ％であり、酵素粉末／噴霧乾燥混合物における酵素のより好ましい重量パーセント範囲は、約２０ｗｔ％〜３３ｗｔ％である。
【０１２１】
１つの実施形態において、酵素粉末は、さらに、賦形剤を含んでよい。１つの態様において、賦形剤は、酵素粉末の乾燥重量に基づいて、約９５ｗｔ％〜約２５ｗｔ％の範囲の量で供される。酵素粉末における賦形剤の好ましいｗｔ％の範囲は、約９０ｗｔ％〜５０ｗｔ％であり、酵素粉末における賦形剤のより好ましいｗｔ％の範囲は約８０ｗｔ％〜６７ｗｔ％である。
【０１２２】
１つの実施形態において、酵素粉末を調製するのに用いられる賦形剤はオリゴ糖賦形剤であってよい。１つの実施形態において、オリゴ糖賦形剤は、少なくとも約１２５０の数平均分子量および少なくとも約９０００の重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態において、オリゴ糖賦形剤は、少なくとも約１７００の数平均分子量および少なくとも約１５０００の重量平均分子量を有する。具体的なオリゴ糖としては、限定されるものではないが、マルトデキストリン、キシラン、マンナン、フコイダン、ガラクトマンナン、キトサン、ラフィノース、スタキオース、ペクチン、インスリン、レバン、グラミナン、アミロペクチン、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、ニゲロトリオース、マルトトリオース、メレチトース、マルトトリウロース、ラフィノース、ケストース、およびそれらの混合物を挙げることができる。好ましい実施形態において、オリゴ糖賦形剤はマルトデキストリンである。オリゴ糖ベースの賦形剤としては、限定されるものではないが、ヒドロキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびそれらの混合物のような水溶性非イオン性セルロースエーテルを挙げることもできる。なおさらなる実施形態において、賦形剤は、限定されるものではないが、以下の成分：トレハロース、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、グルコース、セロビオース、α−シクロデキストリン、およびカルボキシメチルセルロースの１以上より選択することができる。
【０１２３】
適当なカルボン酸エステル基質は、式：
（ａ）式：
［Ｘ］ｍＲ５
［式中、Ｘは式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり；
Ｒ６は、所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分岐鎖状または環状ヒドロカルビル部位であり、ここで、Ｒ６は、Ｒ６がＣ２〜Ｃ７である場合、所望により、１以上のエーテル結合を含んでよく；
Ｒ５は、所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状、分岐鎖状または環状ヒドロカルビル部位または５−員環状ヘテロ芳香族部位または６−員環状芳香族またはヘテロ芳香族部位であり、ここで、Ｒ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸基を含み、ここで、Ｒ５は、所望により、１以上の他の結合を含んでよく；
ｍは、１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有する１以上のエステル、
ここで、該１以上のエステルは、２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；または
（ｂ）構造：
【化８】
2015502369.tif 000010
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分岐鎖状アルキルであり、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有する１以上のグリセリド：または
（ｃ）式：
【化９】
2015502369.tif 000011
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分岐鎖状アルキルであり、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分岐鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１以上のエステル；または
（ｄ）１以上のアセチル化単糖、アセチル化二糖、またはアセチル化多糖；または
（ｅ）（ａ）から（ｄ）のいずれかの組合せ
を有するエステルを含んでよい。
【０１２４】
適当な基質は、アシル化単糖、二糖および多糖からなる群より選択される１以上のアシル化糖類を含んでもよい。もう１つの実施形態において、アシル化糖類は、アセチル化キシラン；アセチル化キシランの断片；（キシローステトラアセタートのような）アセチル化キシロース；（α−Ｄ−グルコースペンタアセタート；β−Ｄ−グルコースペンタアセタート；１−チオ−β−Ｄ−グルコース−２，３，４，６−テトラアセタートのような）アセチル化グルコース；β−Ｄ−ガラクトースペンタアセタート；ソルビトールヘキサアセタート；スクロースオクタアセタート；β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセタート；β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，４−テトラアセタート；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルカール；β−Ｄ−キシロフラノーステトラアセタート、β−Ｄ−グルコピラノースペンタアセタート；β−Ｄ−グルコピラノース−１，２，３，４−テトラアセタート；β−Ｄ−グルコピラノース−２，３，４，６−テトラアセタート；２−アセトアミド−２−デオキシ−１，３，４，６−テトラアセチル−β−Ｄ−グルコピラノース；２−アセトアミド−２−デオキシ−３，４，６−トリアセチル−１−クロライド−α−Ｄ−グルコピラノース；β−Ｄ−マンノピラノースペンタアセタート、およびアセチル化セルロースからなる群より選択される。好ましい実施形態において、アセチル化糖類は、β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセタート；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルカール；スクロースオクタアセタート；およびアセチル化セルロースからなる群より選択される。
【０１２５】
もう１つの実施形態において、追加の適当な基質としては、５−アセトキシメチル−２−フルアルデヒド；３，４−ジアセトキシ−１−ブテン；４−アセトキシ安息香酸；バニリンアセタート；プロピレングリコールメチルエーテルアセタート；メチルラクタート；エチルラクタート；メチルグルコラート；エチルグルコラート；メチルメトキシアセタート；エチルメトキシアセタート；メチル３−ヒドロキシブチラート；エチル３−ヒドロキシブチラート；およびトリエチル２−アセチルシトラートも挙げることができる。
【０１２６】
もう１つの実施形態において、適当な基質は、モノアセチン；ジアセチン；トリアセチン；モノプロピオニン；ジプロピオニン；トリプロピオニン；モノブチリン；ジブチリン；トリブチリン；グルコースペンタアセタート；キシローステトラアセタート；アセチル化キシラン；アセチル化キシラン断片；β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセタート；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルカール；１，２−エタンジオール、１，２−プロパンジオール、１，３−プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、２，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、１，２−ペンタンジオール、２，５−ペンタンジオール、１，５−ペンタンジオール、１，６−ペンタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、２，５−ヘキサンジオール、１，６−ヘキサンジオールのモノエステルまたはジエステル；およびそれらの混合物からなる群より選択される。もう１つの実施形態において、基質は１以上のエステル基を含むＣ１〜Ｃ６ポリオールである。好ましい実施形態において、Ｃ１〜Ｃ６ポリオール上のヒドロキシル基の１以上は、（１，３−プロパンジオールジアセタート；１，２−プロパンジオールジアセタート；１，４−ブタンジオールジアセタート；１，５−ペンタンジオールジアセタート等のように）１以上のアセトキシ基で置換されている。さらなる実施形態において、基質はプロピレングリコールジアセタート（ＰＧＤＡ）、エチレングリコールジアセタート（ＥＧＤＡ）、またはそれらの混合物である。
【０１２７】
さらなる実施形態において、適切な基質は、モノアセチン、ジアセチン、トリアセチン、モノプロピオニン、ジプロピオニン、トリプロピオニン、モノブチリン、ジブチリン、およびトリブチリンからなる群より選択される。なおもう１つの態様において、基質は、ジアセチンおよびトリアセチンからなる群より選択される。最も好ましい実施形態において、適切な基質はトリアセチンを含む。
【０１２８】
カルボン酸エステルは、酵素−触媒過加水分解に際して、所望の濃度のペルオキシカルボン酸を生じさせるのに十分な濃度で存在させる。カルボン酸エステルは反応配合物に完全に可溶性である必要はないが、ペルヒドロラーゼ触媒によるエステルの対応するペルオキシカルボン酸への変換を可能とするのに十分な溶解度を有する。カルボン酸エステルは、反応配合物の０．０５ｗｔ％〜４０ｗｔ％の濃度にて、好ましくは反応配合物の０．１ｗｔ％〜２０ｗｔ％の濃度にて、より好ましくは反応配合物の０．５ｗｔ％〜１０ｗｔ％の濃度で反応配合物に存在させる。
【０１２９】
ペルオキシゲン源は、水和可能な接着性フィルムの中または上に沈積された顆粒として供され、過酸化水素アダクト（例えば、尿素−過酸化水素アダクト（過酸化カルバミド））、過ホウ酸塩、過炭酸塩および過酸化物塩を含むことができる。反応配合物中のペルオキシゲン化合物の濃度は、０．００３３ｗｔ％〜約５０ｗｔ％、好ましくは０．０３３ｗｔ％〜約４０ｗｔ％、より好ましくは０．１ｗｔ％〜約３０ｗｔ％の範囲とすることができる。
【０１３０】
多くのペルヒドロラーゼ触媒（全細胞、浸透性全細胞、および部分的に精製された全細胞抽出物）は、カタラーゼ活性（ＥＣ  １．１１．１．６）を有すると報告されている。カタラーゼは、過酸化水素の酸素および水への変換を触媒する。１つの態様において、過加水分解触媒はカタラーゼ活性を欠如する。もう１つの態様において、カタラーゼ阻害剤は反応配合物に加えることができる。当業者であれば、必要に応じて、カタラーゼ阻害剤の濃度を調整することができる。カタラーゼ阻害剤の濃度は、典型的には、０．１ｍＭ〜約１Ｍ、好ましくは約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、より好ましくは約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲である。
【０１３１】
もう１つの実施形態において、酵素触媒は有意なカタラーゼ活性を欠如し、またはカタラーゼ活性を減少させ、または排除するように作製することができる。宿主細胞におけるカタラーゼ活性は、限定されるものではないが、トランスポゾン突然変異誘発、ＲＮＡアンチセンス発現、標的化突然変異誘発、およびランダム突然変異誘発を含めたよく知られた技術を用いてカタラーゼ活性を担う遺伝子の発現を破壊することによってダウンレギュレートし、または排除することができる。
【０１３２】
少なくとも１つのカルボン酸エステルの過加水分解によって生じたペルオキシカルボン酸（例えば、過酢酸）の濃度は、過加水分解反応の開始から１０分以内の、好ましくは５分以内の過酸の少なくとも約０．１ｐｐｍ、好ましくは少なくとも０．５ｐｐｍ、１ｐｐｍ、５ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、２０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ、５００ｐｐｍ、７００ｐｐｍ、１０００ｐｐｍ、２０００ｐｐｍ、５０００ｐｐｍまたは１０，０００ｐｐｍである。明らかに、当業者であれば、反応成分を調整して、所望の過酸濃度を達成することができる。
【０１３３】
１つの態様において、過酸の所望の濃度を生じさせるのに必要な反応時間は、約２時間以下、好ましくは約３０分以下、より好ましくは約１０分以下、最も好ましくは約５分以下内である。他の態様において、口腔表面は、本明細書中に記載された方法に従って形成されたペルオキシカルボン酸と、反応成分の水和および結合から５分以内に接触させる。１つの実施形態において、歯のエナメル質は、本明細書中に記載された方法および組成にて生じさせたペルオキシカルボン酸と、ホワイトニングストリップ／フィルムの中または上に存在する該反応成分の（利用者の水和を介する）結合から約５分〜約２４時間内、または約５分〜２時間以内に接触させる。
【０１３４】
ペルオキシカルボン酸および過酸化水素の濃度決定するためのＨＰＬＣアッセイ方法
限定されるものではないが、滴定、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、質量分析（ＭＳ）、毛細管電気泳動（ＣＥ）、Ｕ．Ｐｉｎｋｅｒｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６９（１７）：３６２３−３６２７（１９９７））によって記載された分析手順、および２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン）−６−スルホネート（ＡＢＴＳ）アッセイ（Ｕ．Ｐｉｎｋｅｒｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎａｌｙｓｔ，１２２：５６７−５７１（１９９７）およびＤｉｎｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｄｖ．Ｆｕｎｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２０：３９２−３９８（２０１０））を含めた種々の分析方法を用いて、本実施例に記載されたように、反応体および生成物を分析することができる。
【０１３５】
実例となる実施形態：
実施形態１。第一の面および第二の面を備えた水和可能な接着性フィルムを含む歯ホワイトニングストリップであって、該第一の面はそれに付着された顆粒状漂白成分を有し、
ここで、該ストリップは、該フィルムの中または上に、または該フィルムの該第一の面に付着された顆粒中に、
（ｉ）炭水化物エステラーゼファミリー７のメンバーのシグナチャーモチーフを含有する過加水分解活性を有する蛋白質；
（ｉｉ）例えば、カルボン酸エステルおよびアシル化合物より選択されたアシルドナー
を含む歯ホワイトニングストリップ（ストリップ１）。
【０１３６】
実施形態２。ペルヒドロラーゼ活性を有する該蛋白質が：
ａ）  ＭＡＦＦＤＬＰＬＥＥＬＫＫＹＲＰＥＲＹＥＥＫＤＦＤＥＦＷＥＥＴＬＡＥＳＥＫＦＰＬＤＰＶＦＥＲＭＥＳＨＬＫＴＶＥＡＹＤＶＴＦＳＧＹＲＧＱＲＩＫＧＷＬＬＶＰＫＬＥＥＥＫＬＰＣＶＶＱＹＩＧＹＮＧＧＲＧＦＰＨＤＷＬＦＷＰＳＭＧＹＩＣＦＶＭＤＴＲＧＱＧＳＧＷＬＫＧＤＴＰＤＹＰＥＧＰＶＤＰＱＹＰＧＦＭＴＲＧＩＬＤＰＲＴＹＹＹＲＲＶＦＴＤＡＶＲＡＶＥＡＡＡＳＦＰＱＶＤＱＥＲＩＶＩＡＧＧＳＱＧＧＧＩＡＬＡＶＳＡＬＳＫＫＡＫＡＬＬＣＤＶＰＦＬＣＨＦＲＲＡＶＱＬＶＤＴＨＰＹＡＥＩＴＮＦＬＫＴＨＲＤＫＥＥＩＶＦＲＴＬＳＹＦＤＧＶＮＦＡＡＲＡＫＩＰＡＬＦＳＶＧＬＭＤＮＩＳＰＰＳＴＶＦＡＡＹＮＹＹＡＧＰＫＥＩＲＩＹＰＹＮＮＨＥＧＧＧＳＦＱＡＶＥＱＶＫＦＬＫＫＬＦＥＫＧ（配列番号：１）、
ｂ）ｉ）配列番号：１の位置１１８〜１２０に対応する位置のＲＧＱモチーフ；ｉｉ）配列番号：１の位置１８６〜１９０に対応する位置のＧＸＳＱＧモチーフ；およびｉｉｉ）配列番号：１の位置３０３〜３０４に対応する位置のＨＥモチーフを有するアミノ酸配列；および
ｃ）配列番号：１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列
より選択されるアミノ酸配列を含むストリップ１。
【０１３７】
実施形態３。過加水分解活性を有する該蛋白質が、例えば、口腔表面に結合し、または口腔表面とで複合体を形成する親和性を有し、または別法として、例えば、ホワイトニングストリップの１以上の成分に結合し、または該１以上の成分とで複合体を形成する親和性を有するアミノ酸配列を含む実施形態１または２。
【０１３８】
実施形態４。
ａ）  ＭＡＦＦＤＬＰＬＥＥＬＫＫＹＲＰＥＲＹＥＥＫＤＦＤＥＦＷＥＥＴＬＡＥＳＥＫＦＰＬＤＰＶＦＥＲＭＥＳＨＬＫＴＶＥＡＹＤＶＴＦＳＧＹＲＧＱＲＩＫＧＷＬＬＶＰＫＬＥＥＥＫＬＰＣＶＶＱＹＩＧＹＮＧＧＲＧＦＰＨＤＷＬＦＷＰＳＭＧＹＩＣＦＶＭＤＴＲＧＱＧＳＧＷＬＫＧＤＴＰＤＹＰＥＧＰＶＤＰＱＹＰＧＦＭＴＲＧＩＬＤＰＲＴＹＹＹＲＲＶＦＴＤＡＶＲＡＶＥＡＡＡＳＦＰＱＶＤＱＥＲＩＶＩＡＧＧＳＱＧＧＧＩＡＬＡＶＳＡＬＳＫＫＡＫＡＬＬＣＤＶＰＦＬＣＨＦＲＲＡＶＱＬＶＤＴＨＰＹＡＥＩＴＮＦＬＫＴＨＲＤＫＥＥＩＶＦＲＴＬＳＹＦＤＧＶＮＦＡＡＲＡＫＩＰＡＬＦＳＶＧＬＭＤＮＩＳＰＰＳＴＶＦＡＡＹＮＹＹＡＧＰＫＥＩＲＩＹＰＹＮＮＨＥＧＧＧＳＦＱＡＶＥＱＶＫＦＬＫＫＬＦＥＫＧＧＰＧＳＧＧＡＧＳＰＧＳＡＧＧＰＧＳＴＫＰＰＲＴＰＴＡＮＴＳＲＰＨＨＮＦＧＳＧＧＧＧＳＰＨＨＨＨＨＨ（配列番号：２）、および
ｂ）配列番号：２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列
より選択されるアミノ酸配列を含む、口腔表面（例えば、歯のペリクルまたはエナメル質）に結合する、またはそれとで複合体を形成するペルヒドロラーゼ活性を有する蛋白質を含む前記ストリップのいずれか。
【０１３９】
実施形態５。過加水分解活性を有する該蛋白質が該フィルムの第一の表面上に顆粒形態で供される前記ストリップのいずれか。
【０１４０】
実施形態６。該水和可能な接着性フィルムの第二の面が、該水和可能な接着性フィルムの溶解を阻害する層に付着された前記ストリップのいずれか。
【０１４１】
実施形態７。該顆粒状漂白成分が、コーンスターチ、硫酸ナトリウム、アラビアガム、およびそれらの組合せのような迅速に溶解する物質で被覆された前記ストリップのいずれか。
【０１４２】
実施形態８。該顆粒状漂白成分が、例えば、過酸化水素、過酸化尿素、過炭酸塩、過ホウ酸塩、ペルオキシモノリン酸塩、ペルオキシ二硫酸塩、ペルオキシ酸、および過酢酸より選択される有機および／または無機酸化剤を含む顆粒より選択される前記ストリップのいずれか。
【０１４３】
実施形態９。該顆粒状漂白成分が、例えば、（例えば、ペルオキシリン酸塩、ペルオキシ炭酸塩、過ホウ酸塩、ペルオキシケイ酸塩、または過硫酸塩；例えば、ペルオキシリン酸カルシウム、過ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム過酸化水素化物、ペルオキシリン酸ナトリウム、および過硫酸カリウムのような）過酸化物塩または複合体；次亜塩素酸塩；過酸化尿素；過酸化水素−ポリビニルピロリドンポリマー複合体のような過酸化水素ポリマー複合体；金属過酸化物、例えば、過酸化亜鉛および過酸化カルシウム；過酸、およびそれらの組合せより選択される固体過酸化物および固体過酸化物ドナーより選択される前記ストリップのいずれか。
【０１４４】
実施形態１０。該顆粒状漂白成分が、過酸化尿素、過酸化水素−ポリビニルピロリドンポリマー複合体、過炭酸ナトリウム、またはそれらの２以上の組合せを含む前記ストリップのいずれか。
【０１４５】
実施形態１１。該フィルムの第一の表面上の該顆粒、例えば、該顆粒状漂白成分、または顆粒形態のペルヒドロラーゼまたはアシルドナーの粒子サイズ（Ｄ５０）が０．１〜３００ミクロン、例えば、１０〜２７５ミクロン、例えば、１００〜２５０ミクロンである前記ストリップのいずれか。
【０１４６】
実施形態１２。該顆粒状漂白成分が、該水和可能な接着性フィルムおよびそれに付着された顆粒状漂白成分の合計重量の０．０１％よりも大、例えば、０．０１〜０．１％、例えば、０．０２〜０．０８％を含む前記ストリップのいずれか。
【０１４７】
実施形態１３。該水和可能な接着性フィルムの第一の面上の該顆粒状漂白剤の量が、０．００１〜１０ｍｇ／ｃｍ２、例えば、０．００１〜１ｍｇ／ｃｍ２、例えば、０．００５〜０．０１５ｍｇ／ｃｍ２である前記ストリップのいずれか。
【０１４８】
実施形態１４。該アシルドナーが、（ｉ）所望により、ヒドロキシおよび／またはＣ１−４アルコキシで置換されていてもよい、低級直鎖状または分岐鎖状アルキルカルボン酸エステルを含めた、１以上のＣ２−１８カルボン酸エステル、例えば、Ｃ２−６カルボン酸エステル（例えば、アセチルエステル）；（ｉｉ）１以上のアシル化グリセリド（例えば、モノ−、ジ−、およびトリ−グリセリド）、（ｉｉｉ）アシル化糖類、および（ｉｖ）それらの混合物より選択される前記ストリップのいずれか。
【０１４９】
実施形態１５。該アシルドナーが、（本明細書中においては、時々、トリアセチンまたはグリセリントリアセタートと称される）１，２，３−トリアセトキシプロパン、およびアシル化糖類、例えば、アシル化糖類より選択される前記ストリップのいずれか。
【０１５０】
実施形態１６。２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有するエステル化合物を含むアシルドナーを含む前記ストリップのいずれか。
【０１５１】
実施形態１７。過酸を含む、または使用に際して過酸を生じさせる前記ストリップのいずれか。
【０１５２】
実施形態１８。該成分が、混合に際して、歯を白くするのに効果的な量および濃度の漂白剤を供するのに十分な量で存在する前記ストリップのいずれか。
【０１５３】
実施形態１９。該水和可能な接着性フィルムが、親水性セルロースエーテル（例えば、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、ポリ酢酸ビニル、カルボマー（例えば、カルボポル（ＣＡＲＢＯＰＯＬ）（登録商標）９７１Ｐ）、多糖ガム（例えば、キサンタンガム）、修飾された食品澱粉、ゼラチン（例えば、動物または魚類ベースのゼラチン）、架橋されたカルボキシビニルコポリマー、架橋されたポリビニルピロリドン、ポリ酸化エチレン（例えば、ポリオックス（ＰＯＬＹＯＸ）（登録商標））、ポリアクリル酸およびポリアクリレート、ポリビニルアルコール、アルジネート、カゼイン、プルラン、およびそれらの組合せより選択される１以上の水溶性ポリマーを含む前記ストリップのいずれか。
【０１５４】
実施形態２０。該水和可能な接着性フィルムが、親水性セルロースエーテル（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルセルロース）、ポリ酸化エチレン、ポリ酢酸ビニル、およびカルボマー（例えば、ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）９７１Ｐ）；およびそれらの組合せより選択される１以上の水溶性ポリマーを含む前記ストリップのいずれか。
【０１５５】
実施形態２１。該水和可能な接着性フィルムがヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ酢酸ビニル、およびカルボマーを、例えば、１０〜２０ＨＰＭＣ：２〜１０ＰＶＡｃ：１カルボマーの乾燥重量比率で含む前記ストリップのいずれか。
【０１５６】
実施形態２２。該水和可能な接着性フィルムが、さらに、可塑剤、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールまたはトリアセチンを含む前記ストリップのいずれか。
【０１５７】
実施形態２３。該水和可能な接着性フィルムの第一の面が、使用に先立って保護カバーによって被覆されている前記ストリップのいずれか。
【０１５８】
実施形態２４。該水和可能な接着性フィルムが、活性化に際して、少なくとも１００，０００ｃｐｓの粘度、例えば、１００，０００〜２００，０００ｃｐｓの粘度を有する前記ストリップのいずれか。
【０１５９】
実施形態２５。該水和可能な接着性フィルムが、適用に先立って、実質的に乾燥している前記ストリップのいずれか。
【０１６０】
実施形態２６。該水和可能な接着性フィルムの厚みが０．１〜５ｍｍ、例えば、０．５〜５ｍｍである前記ストリップのいずれか。
【０１６１】
実施形態２７。近似的な総寸法が、２〜１０ｃｍの長さ×０．５〜２ｃｍの幅×０．１〜１０ｍｍの厚み、例えば、１〜１０ｍｍの厚みである前記ストリップのいずれか、例えば、片面の表面積が５〜２０ｃｍ２、例えば、約５〜１５ｃｍ２、例えば、約１０ｃｍ２であるストリップ。
【０１６２】
実施形態２８。トリアセチンが該フィルムに分散された、過酸化水素−ポリビニルピロリドンポリマー複合体、過酸化尿素および／または過炭酸ナトリウムの被覆された顆粒、および該フィルムの第一の表面上のペルヒドロラーゼの顆粒を含む前記ストリップのいずれか。
【０１６３】
実施形態２９。さらに、抗感受性剤、例えば、硝酸カリウムまたはアルギニンの顆粒を含む前記ストリップのいずれか。
【０１６４】
実施形態３０。前記したストリップ、例えば、ストリップ１等の第一の面を歯に直接的に適用し、それを、十分な時間、例えば、少なくとも５分、例えば、１０〜６０分、例えば、１０〜３０分の間放置して、歯を白くすることを含む、歯を白くする方法（方法２）。
【０１６５】
実施形態３１。例えば、前記した半乾燥状態の水和可能な接着性フィルムを準備し、例えば、そのフィルムは水から成型され、十分に乾燥されておらず、またはそのフィルムは湿らされており、例えば、前記した顆粒状漂白成分の顆粒をフィルムの１つの表面に加え、顆粒が１つの表面に加えられた該フィルムを乾燥することを含む、歯ホワイトニング用のストリップ、例えば、ストリップ１等による前記したストリップを製造する方法（方法３）。
【０１６６】
例えば、ストリップは、まず、慣用的な手段を用いて水和可能な接着性フィルムを製造し、次いで、顆粒化ホワイトニング成分を１つの表面に加えることによって製造することができる。水和可能な接着性フィルムストリップは、押出によって、またはそれから水が蒸発する、（例えば、１０〜３０％の固形物レベルの）水懸濁液の加熱されたベルト上への成型によるなどの、種々の当該分野で知られた方法で水から成型することができる。別法として、フィルムを乾燥するが、次いで、再度湿らせる。顆粒は、フィルムが半乾燥の間に、すなわち、粘着性であるのに丁度十分湿っている間に、このフィルムの表面に加えることができ、その結果、顆粒はフィルムの表面に固着する。一旦フィルムが十分に乾燥状態となり、室温まで冷却されたならば、顆粒は連続してフィルムの表面に接着されている。従って、使用に先立って、水和可能な接着性フィルムおよびストリップは全体として実質的に乾燥している。過酸化物はフィルムの表面のみに存在するため、表面において有効な濃度を供するのには比較的少量の顆粒が必要であるに過ぎない。
【０１６７】
好ましい実施形態：
唾液または（水道水のような）水の他の源に暴露されると、顆粒は溶解し、反応成分を放出して、所望の過酸を酵素的に生じさせる。水和可能な接着性層の水和はフィルムの粘着性を増加させ、ホワイトニングフィルム／ストリップが標的表面（すなわち、歯のエナメル質）に結合するのを可能とする。
【０１６８】
水和可能な接着性フィルムは、親水性セルロースエーテル（例えば、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、ポリ酢酸ビニル、カルボマー（例えば、ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）９７１Ｐ）、多糖ガム（例えば、キサンタンガム）、修飾された食品澱粉、ゼラチン（例えば、動物または魚類ベースのゼラチン）、架橋されたカルボキシビニルコポリマー、架橋されたポリビニルピロリドン、ポリ酸化エチレン（例えば、ＰＯＬＹＯＸＴＭ）、ポリアクリル酸およびポリアクリレート、ポリビニルアルコール、アルジネート、カゼイン、プルラン、およびそれらの組合せより選択される１以上の水溶性の経口的に許容されるポリマーを含む。歯ホワイトニング剤と共に用いられる接着性ゲル配合物は、例えば、各々が、ここに引用されて全体が援用される、米国特許第７，８６２，８０１号；第５，７４６，５９８号；第６，７３０，３１６号；および第７，１２８，８９９号に記載されているように当該分野で公知である。接着性フィルムは、過酸漂白剤が、長時間歯と接触し、柔軟組織を保護するのを可能とし、かくして、高い粘度、例えば、少なくとも１００，０００センチポイズ（ｃｐｓ）（約１００パスカル−秒（Ｐａ・ｓ））、好ましくは１００，０００〜２００，０００ｃｐｓ（１００〜２００Ｐａ・ｓ）の適用時の粘度を供するべきである。
【０１６９】
第二のフィルム層を用いて、水和可能な接着性フィルムを迅速な分解または溶解から保護する場合、担体またはブロッキング材料は、テキスタイル、布、木材複合材、樹脂、エラストマー、紙、エチルセルロースおよび酢酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ワックス、ＰＡＲＡＦＩＬＭＴＭ、ポリエチレン、ポリビニルアルコール、ＴＥＦＬＯＮＴＭ、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニルおよびそれらの誘導体のような不溶性または溶解しにくいセルロース誘導体から作製することができる。
【０１７０】
顆粒状漂白成分は、過酸化物塩または（ペルオキシリン酸塩、ペルオキシ炭酸塩、過ホウ酸塩、ペルオキシケイ酸塩、または過硫酸塩；例えば、ペルオキシリン酸カルシウム、過ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム過酸化水素化物、ペルオキシリン酸ナトリウム、および過硫酸カリウムのような）複合体、次亜塩素酸塩；過酸化尿素；過酸化水素−ポリビニルピロリドンポリマー複合体のような過酸化水素ポリマー複合体、および金属過酸化物、例えば、過酸化亜鉛および過酸化カルシウム；固体過酸；およびそれらの組合せより選択される固体過酸化物または固体過酸化物ドナーであってよい。特定の実施形態において、顆粒状漂白成分は過酸化尿素または過酸化水素ポリビニルピロリドンポリマー複合体である。顆粒状漂白成分は、所望により、被覆されて、改良された貯蔵安定性を供することができる（例えば、硫酸ナトリウム、コーンスターチまたはアラビアガムでの被覆）。
【０１７１】
好ましい実施形態のリスト：
好ましい実施形態１。第一の面および第二の面を備えた水和可能な接着性フィルムを含む歯ホワイトニングストリップであって、該第一の面はそれに付着された顆粒状漂白成分を有し、ここで、該歯ホワイトニングストリップは、さらに、該フィルムの中または上に、または該フィルムの第一の面に付着された顆粒の形態中に；
ａ）過加水分解活性を有する酵素、該酵素は参照配列の配列番号：１と整列する炭水化物エステラーゼファミリー７（ＣＥ−７）シグナチャーモチーフを有し、該シグナチャーモチーフは：
ｉ）配列番号：１の位置１１８〜１２０に対応する位置のＲＧＱモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の位置１８６〜１９０に対応する位置のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の位置３０３〜３０４に対応する位置のＨＥモチーフ
を含み；および
（ｂ）少なくとも１つのアシルドナー基質、該基質は：
ｉ）構造：
［Ｘ］ｍＲ５
［式中、Ｘ＝式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基、
Ｒ６＝所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分岐鎖状または環状ヒドロカルビル部位、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６＝Ｃ２〜Ｃ７のための１以上のエーテル結合を含んでよく；
Ｒ５＝所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状、分岐鎖状、または環状ヒドロカルビル部位または５−員環状ヘテロ芳香族部位または６−員環状芳香族またはヘテロ芳香族部位；ここで、Ｒ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸基を含み；ここで、Ｒ５は、所望により、１以上のエーテル結合を含み；
ｍは１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有するエステル、
ここで、該エステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有する；
ｉｉ）構造：
【化１０】
2015502369.tif 000012
［式中、Ｒ１＝所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖または分岐鎖アルキル、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有するグリセリド；
ｉｉｉ）式：
【化１１】
2015502369.tif 000013
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分岐鎖状アルキルであり、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分岐鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１以上のエステル；および
ｉｖ）アセチル化単糖、アセチル化二糖、およびアセチル化多糖からなる群より選択されるアセチル化糖類
からなる群より選択され；
を含み、
ここで、水和可能な接着性フィルムの水和に際して、過酸化水素が顆粒状漂白成分から放出され、該酵素は有効量の過酸の形成を触媒することを特徴とする歯ホワイトニングストリップ。
【０１７２】
好ましい実施形態２。過加水分解活性を有する該酵素が：
ａ）配列番号：１；および
ｂ）配列番号：１に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
より選択されるアミノ酸配列を含む、好ましい実施形態１記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１７３】
好ましい実施形態３。過加水分解活性を有する該酵素が、さらに、該酵素のＮ−またはＣ−末端に融合した結合ドメインを含み、該結合ドメインは口腔組織に対して、または歯ホワイトニングストリップに対して親和性を有する、好ましい実施形態１に記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１７４】
好ましい実施形態４。口腔組織に対して親和性を有する該結合ドメインが、配列番号：１７８〜１９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、好ましい実施形態３に記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１７５】
好ましい実施形態５。過加水分解活性を有する該酵素が口腔組織に対して親和性を有し、
ａ）配列番号：２、および
ｂ）配列番号：２に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
より選択されるアミノ酸配列を含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１７６】
好ましい実施形態６。さらに、該水和可能な接着性フィルムの該第二の面に付着されたブロッキング層を含み、該ブロッキング層は該水和可能な接着性フィルムの溶解を阻害することができる、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１７７】
好ましい実施形態７。該顆粒状漂白成分が、水和に際して、溶解することができる水溶性コーティングで被覆された、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１７８】
好ましい実施形態８。該顆粒状漂白成分が固体過酸化物および固体過酸化物ドナーより選択される、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１７９】
好ましい実施形態９。該顆粒状漂白成分が、過酸化物塩、過酸化物複合体、ペルオキシリン酸塩、ペルオキシ炭酸塩、過ホウ酸塩、ペルオキシケイ酸塩、過硫酸塩、ペルオキシリン酸カルシウム、過ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム過酸化水素化物、ペルオキシリン酸ナトリウム、過硫酸カリウム、次亜塩素酸塩、過酸化尿素、過酸化水素ポリマー複合体、過酸化水素−ポリビニルピロリドンポリマー複合体、金属過酸化物、過酸化亜鉛、過酸化カルシウム、およびそれらの組合せより選択される、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１８０】
好ましい実施形態１０。該顆粒状漂白成分が過酸化尿素を含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。いくつかの実施形態において、該顆粒状漂白成分は過酸化水素−ポリビニルピロリドンポリマー複合体を含む。いくつかの実施形態において、該過酸化水素−ポリビニルピロリドンポリマー複合体は、過酸化水素−架橋されたポリビニルピロリドンポリマー複合体である。
【０１８１】
好ましい実施形態１１。該顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）が１０ミクロン〜３００ミクロン、例えば、１０ミクロン〜２００ミクロンの範囲である、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１８２】
好ましい実施形態１２。該歯ホワイトニングストリップが約０．０１ｗｔ％〜約０．１ｗｔ％の過酸を含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。いくつかの実施形態において、該顆粒状漂白成分は、約０．１ｗｔ％〜約３０ｗｔ％のペルオキシゲン源を含む。
【０１８３】
好ましい実施形態１３。該水和可能な接着性フィルムの第一の面上の顆粒状漂白剤の量が、０．００１ｍｇ／ｃｍ２〜１０ｍｇ／ｃｍ２、例えば、０．００１ｍｇ／ｃｍ２〜１ｍｇ／ｃｍ２の範囲にある、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１８４】
好ましい実施形態１４。該アシルドナー基質が１，２，３−トリアセトキシプロパンである、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１８５】
好ましい実施形態１５。該水和可能な接着性フィルムが、親水性セルロースエーテル、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ酢酸ビニル、カルボマー、多糖ガム、キサンタンガム、修飾された食品澱粉、ゼラチン、動物または魚類ベースのゼラチン、架橋されたカルボキシビニルコポリマー、架橋されたポリビニルピロリドン、ポリ酸化エチレン、ポリアクリル酸、ポリアクリレート、ポリビニルアルコール、アルジネート、カゼイン、プルラン、およびそれらの２以上の組合せより選択される１以上の水溶性ポリマーを含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１８６】
好ましい実施形態１６。該水和可能な接着性フィルムが、親水性セルロースエーテル、ポリ酢酸ビニル、カルボマー、およびそれらの２以上の組合せより選択される１以上の水溶性ポリマーを含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１８７】
好ましい実施形態１７。該水和可能な接着性フィルムが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリ酢酸ビニル（ＰＶＡｃ）、およびカルボマーを、１０〜２０：２〜１０：１のＨＭＰＣ：ＰＶＡｃ：カルボマーの乾燥重量比率で含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１８８】
好ましい実施形態１８。該水和可能な接着性フィルムが、さらに、可塑剤を含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１８９】
好ましい実施形態１９。さらに、プロピレングリコールを含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップ。
【０１９０】
好ましい実施形態２０。
ａ）前記好ましい実施形態のいずれかに記載の歯ホワイトニングストリップを含むパッケージングシステムを準備し；
ｂ）該パッケージングシステムから該歯ホワイトニングストリップを取り出し；次いで、
ｃ）該歯ホワイトニングストリップを、歯を白くするのに十分な時間の間、歯に直接的に接触させることを含み、
ここで、該歯ホワイトニングストリップは口腔中に、または歯表面上に存在する水分によって水和されるか、または工程（ｂ）の後であるが工程（ｃ）に先立って水和されることを特徴とする、歯を白くする方法。
【０１９１】
好ましい実施形態２１。該ホワイトニングストリップが、さらに、該水和可能な接着性フィルムの該第二の面に付着されたブロッキング層を含み、該ブロッキング層は該水和可能な接着性フィルムの溶解を阻害することができる好ましい実施形態２０に記載の方法。
【０１９２】
好ましい実施形態２２。該顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）が１０ミクロン〜２００ミクロンの範囲である、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。
【０１９３】
好ましい実施形態２３。該顆粒状漂白成分が、該水和可能な接着性フィルムおよびそれに付着した顆粒状漂白成分の合計重量の０．０１ｗｔ％よりも多く含まれる、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。いくつかの実施形態において、該顆粒状漂白成分は、該水和可能な接着性フィルムおよびそれに付着された顆粒状漂白成分の合計重量の０．０５ｗｔ％よりも多く含まれる。いくつかの実施形態において、該顆粒状漂白成分は、該水和可能な接着性フィルムおよびそれに付着された顆粒状漂白成分の合計重量の約０．０１ｗｔ％〜約０．１ｗｔ％含まれる。
【０１９４】
好ましい実施形態２４。該水和可能な接着性フィルムの第一の面上の顆粒状漂白剤の量が０．００１ｍｇ／ｃｍ２〜１ｍｇ／ｃｍ２の範囲にある、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。
【０１９５】
好ましい実施形態２５。該アシルドナー基質が１，２，３−トリアセトキシプロパンである、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。
【０１９６】
好ましい実施形態２６。該水和可能な接着性フィルムが、親水性セルロースエーテル、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ酢酸ビニル、カルボマー、多糖ガム、キサンタンガム、修飾された食品澱粉、ゼラチン、動物または魚類ベースのゼラチン、架橋されたカルボキシビニルコポリマー、架橋されたポリビニルピロリドン、ポリ酸化エチレン、ポリアクリル酸、ポリアクリレート、ポリビニルアルコール、アルジネート、カゼイン、プルラン、およびそれらの２以上の組合せより選択される１以上の水溶性ポリマーを含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。
【０１９７】
好ましい実施形態２７。該水和可能な接着性フィルムが、親水性セルロースエーテル、ポリ酢酸ビニル、カルボマー、およびそれらの２以上の組合せより選択される１以上の水溶性ポリマーを含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。
【０１９８】
好ましい実施形態２８。該水和可能な接着性フィルムが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリ酢酸ビニル（ＰＶＡｃ）、およびカルボマーを、１０〜２０：２〜１０：１のＨＭＰＣ：ＰＶＡｃ：カルボマーについての乾燥重量比率で含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。
【０１９９】
好ましい実施形態２９。該水和可能な接着性フィルムが、さらに、可塑剤を含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。
【０２００】
好ましい実施形態３０。該水和可能な接着性フィルムが、さらに、プロピレングリコールを含む、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。
【０２０１】
好ましい実施形態３１。該顆粒状漂白成分が、水和に際して、溶解することができる水溶性コーティングで被覆された、前記好ましい実施形態のいずれかに記載の方法。
【０２０２】
好ましい実施形態３２。
ａ）半乾燥状態の水和可能な接着性フィルムを準備し、
ｂ）顆粒状漂白成分の顆粒を該フィルムの１つの表面に適用し、それにより、該顆粒は該表面に接着し、次いで、
ｃ）該フィルムを乾燥する
ことを含む、歯ホワイトニングストリップを作製する方法。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は１０ミクロン〜３００ミクロンである。いくつかの実施形態において、顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は２５ミクロン〜２００ミクロンである。いくつかの実施形態において、顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は３５ミクロン〜１５０ミクロンである。いくつかの実施形態において、顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は５０ミクロン〜１２５ミクロンである。いくつかの実施形態において、顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は６０ミクロン〜１００ミクロンである。いくつかの実施形態において、顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は約６４ミクロンである。いくつかの実施形態において、顆粒状漂白成分の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は約９４ミクロンである。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、過加水分解活性を有する酵素の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は１００ミクロン〜３００ミクロンである。いくつかの実施形態において、過加水分解活性を有する酵素の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は１５０ミクロン〜２７５ミクロンである。いくつかの実施形態において、過加水分解活性を有する酵素の粒子サイズのメジアン直径（Ｄ５０）は１７５ミクロン〜２５０ミクロンである。
【０２０５】
本明細書中に記載されたストリップで用いられる全ての成分は経口的に許容されるべきである。用語としての「経口的に許容される」とは、本明細書中においては、ストリップを口腔での使用に安全でないようにはしない量および形態で記載された該ストリップに存在させる成分を意味する。
【０２０６】
全体を通じて用いられるように、範囲は、該範囲内にある各々のおよびあらゆる値を記載するための簡易表記法として用いられる。該範囲内のいずれの値も該範囲の目標として選択することができる。加えて、本明細書中で引用された全ての文献は、ここに引用してその全体を援用する。本開示における定義および引用された文献の定義がコンフリクトする場合、本開示が優先する。
【０２０７】
特記しない限り、本明細書中においてここにおよび他の箇所で表された全てのパーセンテージおよび量は、重量によるパーセンテージを指すと理解されるべきである。与えられた量は材料の有効重量に基づいている。
【実施例】
【０２０８】
以下の実施例は、本発明の好ましい態様を示すために提供される。実施例に開示された技術は、本発明の実施でよく機能する技術に従い、かくして、その実施のための好ましい形態を構成するものと考えることができるのは当業者に認識されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に徴して、現在開示された方法および例の精神および範囲から逸脱することなく、開示され、かつ同様なまたは類似の結果を依然として得る具体的な実施形態において多くの変形をなすことができるのを認識すべきである。
【０２０９】
全ての試薬および材料は、特記しない限り、ＤＩＦＣＯ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）、ＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ（Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＯＲ）、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）またはＳｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手した。
【０２１０】
明細書中の以下の略語は、以下のように、尺度、技術、特性、または化合物の単位に対応する：「ｓｅｃ」または「ｓ」は秒を意味し、「ｍｉｎ」は分を意味し、「ｈ」または「ｈｒ」は時間を意味し、「μＬ」はマイクロリットルを意味し、「ｍＬ」はミリリットルを意味し、「Ｌ」はリットルを意味し、「ｍＭ」はミリモル濃度を意味し、「Ｍ」はモル濃度を意味し、「ｍｍｏｌ」はミリモルを意味し、「ｐｐｍ」は１００万当たりの部を意味し、「ｗｔ」は重量を意味し、「ｗｔ％」は重量パーセントを意味し、「ｇ」はグラムを意味し、「ｍｇ」はミリグラムを意味し、「μｇ」はマイクログラムを意味し、および「ｎｇ」はナノグラムを意味する。
【０２１１】
実施例１
ストリップは前記したように調製され、水和可能な接着性フィルムを形成し、次いで、フィルムが依然として粘着性である間に、表１中の成分を用いて顆粒化ホワイトニング剤および顆粒化酵素を片面の表面に加える。該ストリップは、適用に際して、口の中でゆっくりと浸食され、従って、除去する必要はない。
【表１】
2015502369.tif 000014
【０２１２】
実施例１におけるストリップは、押出によって、またはそれから水が蒸発する加熱されたベルト上に、（例えば、１０〜３０％の固形物レベルの）水懸濁液から成型することによって、水から成型される。フィルムが半乾燥または乾燥しているが、依然として粘着性である間に、顆粒をこのフィルムの表面に加える。一旦室温まで冷却されると、顆粒はフィルムの表面に接着される。１０ｃｍ２の面積および１０ｍｇ／ｃｍ２の重量を持つストリップでは、この配合物は５ｍｇのトリアセチンを供給する。１．４ｍｇの漂白顆粒が０．３ｍｇの酵素顆粒と共にストリップ上に分布していると仮定し、この量は、歯の表面で直接的に十分な過酢酸を生じさせて、過酸化物のみのホワイトニングストリップよりも有意に優れるものとするのに十分である。（過酸化物のみのストリップは、典型的には、ほぼ３〜１０ｍｇの過酸化物の合計量を有する）。
【０２１３】
唾液または（水道水のような）他の水の源に暴露されると、顆粒は直ちに溶解し、活性となる。接着性層もまた活性化され、歯に効果的に固着する。実施例１は、経時的に口の中でゆっくりと浸食されるように設計され、従って、利用者はそれを除去する必要がない。
【０２１４】
実施例２
ストリップは前記したように調製され、水和可能な接着性フィルムを形成し、次いで、ストリップが依然として接着性である間に、表２中の成分を用いて顆粒化剤を一方の面に、および保護ブロッキング層を他方の面に加える。ブロッキング層は溶解しないため、利用者は、ホワイトニングが起こるのに十分な時間が経過した後に、典型的には、約１０〜３０分の後にそれを除くべきである。２つの層は、押出または溶媒ベースの成型によって同時に製造することもでき、次いで、顆粒化ホワイトニング剤を水和可能な接着性フィルムの表面に加えることができる。
【表２】
2015502369.tif 000015
【０２１５】
実施例３
過酸化水素−ポリビニルピロリドン複合体および過加水分解活性を有する酵素（「酵素」）の種々の粒子サイズを、均一に、トリアセチンを含有する水和可能な接着性ストリップの表面にわたって過酸を生じさせるそれらの能力について評価した。
【０２１６】
この生成物からの過酢酸の生成を評価するために、３／８”ディスクをフィルムから切り出した。各ディスクを２０μＬの５０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．２で水和させ、３７℃で１５分間インキュベートした。３８０μＬの０．１Ｍリン酸をフィルムに加えて、酵素反応を抑え、検出用の試料を希釈した。ＤｉＣｏｓｉｍｏ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第７，８２９，３１５号に従前に記載された方法を用い、溶液を過酢酸用のＨＰＬＣ分析で過酢酸について分析した。各評価のために、最小の３つの試料を、２４インチ長のフィルムにわたるストリップ製品から切り出した。
【０２１７】
酵素および過酸化水素−ポリビニルピロリドンコーティングを備えたストリップ試料を、まず、酵素をプルランポリマーフィルムに配合することによって作製した。酵素を含有する乾燥されたフィルムを粉砕し、６０〜８０メッシュの粒子サイズ（１７７μｍ〜２５０μｍ）に篩い分けた。次いで、酵素の粒状形態を過酸化水素−ポリビニルピロリドン（ＰＥＲＯＸＹＤＯＮＥＴＭ  ＸＬ−１０，Ａｓｈｌａｎｄ  Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）とブレンドした。このブレンドを、主としてポリ酸化エチレンおよびトリアセチンを含有する水和可能な接着性層および非溶解性の支持層を与えるポリビニルアルコールのブロッキング層を備えた二層フィルム構造上に沈積させた。２連続の試行に関する過酢酸生成の評価の結果を表３にリストする。試料は産生試行（production run）の最初および最後に評価し、過酢酸についての貧弱なコンシステンシーを実際に示す。
【表３】
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【０２１８】
ＰＥＲＯＸＹＤＯＮＥＴＭ  ＸＬ−１０をさらに処理して、エタノール高剪断顆粒化でより大きな粒子を形成した。顆粒化の後、試料を６０〜２００メッシュの粒子サイズ（７５μｍ〜２５０μｍ）に篩い分けた。このＰＥＲＯＸＹＤＯＮＥＴＭ  ＸＬ−１０の粒子サイズ分布を、表３に記載された試料を製造するのに用い、高剪断顆粒化および篩い分け後のＰＥＲＯＸＹＤＯＮＥＴＭ  ＸＬ−１０を表４に記載する。試料を、トルネード（Ｔｏｒｎａｄｏ）ドライフィーダーを備えたＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＬＳ１３３２０で測定した。粉末を、液体に分散させることなく、直接分析した。
【表４】
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【０２１９】
もう１つのストリップの産生試行は、まず、表３からの試料の２倍濃度でプルランマトリックスに導入（load）された酵素試料を調製することによって完了した。プルランフィルムを粉砕し、６０〜８０メッシュの粒子サイズ（１７７μｍ〜２５０μｍ）に篩い分け、次いで、顆粒化ＰＥＲＯＸＹＤＯＮＥＴＭ  ＸＬ−１０と合わせた。次いで、ブレンドを、前記した同様な二層フィルム構造上に被覆した。過酢酸の生成についてのこの試料の評価を表４に供し、産生試行の全体にわたって過酢酸のより高くかつより一貫した製造が実際に示された。
【表５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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