(57)【要約】  生体材料に関連する血栓イベントを阻害する方法は、生体材料の表面にＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを付着させることにより、生体材料に結合する血小板の数を減少させること又は血小板活性化を阻害することを含む。本発明の方法は、インプラント、医療デバイス、チューブ又は治療剤送達ビヒクルの表面上に存在する生体材料上又は近くでの血栓形成を阻害する。また、これらの方法を実施するためのキット、及び修飾された生体材料も提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体材料に関連する血栓イベントを阻害する方法であって、生体材料の表面にＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを付着させることによる、生体材料に結合する血小板の数を減少させることを含む、方法。
【請求項２】
前記生体材料に関連する血栓イベントが、生体材料上又は近くでの血栓形成を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記生体材料が、ポリマーを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリマーが、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリウレタン、ポリフルオロテトラエチレン若しくはポリビニル、又はこれらの混合物である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ポリマーが、ポリ塩化ビニルである、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリマーが、ポリウレタンである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記生体材料が、インプラントの表面上に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記生体材料が、医療デバイスの表面上に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記生体材料が、チューブの表面上に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記生体材料が、治療剤送達ビヒクルの表面上に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記インプラントが、前記生体材料を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記医療デバイスが、前記生体材料を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記チューブが、前記生体材料を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記治療剤送達ビヒクルが、前記生体材料を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記生体材料を含むデバイスが、ステント、カテーテル、心肺バイパス、人工心臓弁、及び血液導管からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記生体材料の表面が、少なくとも１つの連結分子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインが、前記連結分子と複合体を形成する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記血小板が、ＳＩＲＰ−αを発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記生体材料と結合する血小板の数が、対照の生体材料と比較して、約１０％〜約９５％減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記生体材料と結合する血小板の数が、対照の生体材料と比較して、約５０％〜約９０％減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記生体材料と結合する血小板の数が、対照の生体材料と比較して、約７０％〜約８０％減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
生体材料に関連する血栓イベントを阻害する方法であって、前記生体材料の表面にＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを付着させることにより、血小板活性化を阻害することを含む、方法。
【請求項２３】
前記生体材料に関連する血栓イベントが、生体材料上又は近くでの血栓形成を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記生体材料が、ポリマーを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記ポリマーが、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリウレタン、ポリフルオロテトラエチレン若しくはポリビニル、又はこれらの混合物である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ポリマーが、ポリ塩化ビニルである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記ポリマーが、ポリウレタンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記生体材料が、インプラントの表面上に存在する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記生体材料が、医療デバイスの表面上に存在する、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記生体材料が、チューブの表面上に存在する、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
前記生体材料が、治療剤送達ビヒクルの表面上に存在する、請求項２２に記載の方法。
【請求項３２】
前記インプラントが、前記生体材料を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
前記医療デバイスが、前記生体材料を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
前記チューブが、前記生体材料を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記治療剤送達ビヒクルが、前記生体材料を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記生体材料を含むデバイスが、ステント、カテーテル、心肺バイパス、人工心臓弁及び血液導管からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項３７】
前記生体材料の表面が、少なくとも１つの連結分子を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインが、前記連結分子と複合体を形成する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記血小板がＳＩＲＰ−αを発現する、請求項２２に記載の方法。
【請求項４０】
前記生体材料により活性化される血小板の数が、対照の生体材料と比較して、約１０％〜約９５％減少する、請求項２２に記載の方法。
【請求項４１】
前記生体材料により活性化される血小板の数が、対照の生体材料と比較して、約２５％〜約７５％減少する、請求項２２に記載の方法。
【請求項４２】
前記生体材料により活性化される血小板の数が、対照の生体材料と比較して、約４０％〜約６０％減少する、請求項２２に記載の方法。
【請求項４３】
生体材料に関連する血栓イベントを阻害するためのキットであって、ＣＤ４７又はこれのＩｇドメイン、及び請求項１に記載の方法に従ってキットを用いるための使用説明書を含む、キット。
【請求項４４】
前記生体材料の表面に付着することができる連結分子をさらに含む、請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
前記生体材料に結合する血小板の数を減少させ、そして血小板の活性化を阻害するのに有効な量において、生体材料の表面に付着するＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを含む、生体材料。
【請求項４６】
前記生体材料の表面上に、少なくとも１つの連結分子をさらに含む、請求項４５に記載の生体材料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、一般的に血小板活性化及び続く血栓イベントを阻害することに関する。特定の実施形態によれば、本発明は、血栓形成から生体材料を保護するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
生体材料、例えば心血管デバイスの使用は、対象の循環器への外部表面の導入を意味する。血栓症は、体内に埋め込まれたデバイスが血液と接触した場合に、血栓又は血餅が形成されることにより、医療デバイスに関連してしばしば生ずる合併症である。血液細胞と生体材料との相互作用は、血小板活性化及び付着を含む、複雑な一連のイベントの引き金となり得る。
【０００３】
生体医療デバイスにより誘発されるトロンビン応答は、医療分野において深刻な懸念が残す。心血管デバイスには、特にトロンビン合併症の深刻なリスクが存在し、潜在的な致死性転帰を有する様々な種類の合併症、例えば動脈内ステント、カテーテル及び人工弁の障害、並びに心肺バイパス及び血管形成術の間の合併症を引き起すことが知られている。心血管デバイスに関連するトロンビン合併症は、抗血小板療法の使用にもかかわらず、生じ得る。心血管デバイスの血液適合性の改善における限定された成功、及び生体材料に関連する血栓症を阻害するための未だ十分に満たされていない医学における需要が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発明の概要
本発明は、全身的に血小板機能を損なうことなく、血小板が仲介する血栓イベントを阻害する全体的な目標とともに、血小板結合及び活性化を阻害するシグナル制御タンパク質アルファ（ＳＩＲＰ−α）を標的化するための方法を提供する。
【０００５】
本発明の実施形態は、生体材料に関連する血栓イベントを阻害するための方法であって、生体材料の表面にＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを付着させることにより、生体材料に結合する血小板の数を減少させること及び／又は血小板活性化を阻害することを含む、方法を提供する。例えば、本発明の方法は、インプラント、医療デバイス、チューブ又は治療送達ビヒクルの表面上に存在する生体材料上又は近くでの血栓形成を阻害する。
【０００６】
本発明の別の実施形態は、生体材料に結合する血小板の数を減少させ、そして血小板の活性化を阻害するのに有効な量において、生体材料の表面に付着するＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを含む、生体材料を提供する。本発明は、ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを含む、生体材料に関連する血栓イベントを阻害するためのキットも提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１Ａ】図１Ａ：抗ヒトＳＩＲＰ−α抗体（ＳＥ７Ｃ２）を用いたフローサイトメトリーにより実証される、ヒト血小板におけるＳＩＲＰ−α発現。
【図１Ｂ】図１Ｂ：ヒトＳＩＲＰ−αについての代表的な免疫染色は、血小板におけるＳＩＲＰ−α発現を確認する。
【図２Ａ】図２Ａ：チャンドラーループ装置（Chandler Loop Apparatus）を介した、ＣＤ４７修飾及び対照ＰＶＣ管類への３時間の曝露後に採取された全血から評価される血小板付着は、ＣＤ４７曝露の結果として、著しく減少した。
【図２Ｂ】図２Ｂ：非付着血小板の活性化は、血小板活性化表面マーカーＣＤ６２Ｐを検出するためにフローサイトメトリーを用い、ＣＤ４７修飾及び対照ＰＶＣ管類への３時間の曝露後に採取された全血から評価された（*は、ＰＶＣと比較したＰ＜０．０１を表す）。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
発明の詳細な説明
シグナル制御タンパク質アルファ（ＳＩＲＰ−α）は、骨髄起源の細胞、例えば単球由来マクロフファージ（ＭＤＭ）に発現する膜貫通タンパク質である。ＳＩＲＰ−αシグナル伝達は、細胞質尾部に位置するチロシン抑制性モチーフ（ＩＴＩＭ）により媒介される。ＳＩＲＰ  ＩＴＩＭは、Ｓｒｃ相同性領域２含有ホスファターゼ−１（ＳＨＰ−１）及び−２（ＳＨＰ−２）を活性化する。ＳＩＲＰ−αは、ＣＤ１７２Ａ、ＳＨＰＳ１、Ｐ８４、ＭＹＤ−Ｉ、ＢＩＴ、ＰＴＰＮＳ１又はＳＩＲＰ−１αとして同定され得る。
【０００９】
出願人らは、驚くべきことに、ＳＩＲＰ−αが、血小板の表面上に発現することを発見した。ＳＩＲＰ−αは、血小板においてこれまで調査されておらず、血小板におけるＳＩＲＰ−αの発現は、発表されていない。従って、ＳＩＲＰ−αを標的とすることは、全身的な血小板機能を損なうことなく、血小板が仲介する血栓イベントを阻害するという全体的な目標を併せもつ、血小板結合及び活性化を阻害するための新規の戦略である。本発明の実施形態は、生体材料関連血小板仲介血栓イベントを阻害する新規方法を提供する。一般的に、前記方法は、生体材料の表面にＣＤ４７又はこれのＩｇドメインが付着することにより、血小板付着及び／又は活性化を阻害することを含む。ＣＤ４７固定化表面は、血小板細胞付着及び活性化を予防する著しい治療的可能性を有する。
【００１０】
インテグリン関連タンパク質とも知られているＣＤ４７は、偏在的に発現される膜貫通タンパク質である。これは、そのＮ末端において１つの可変Ｉｇドメインを有する膜タンパク質の免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ４７のＩｇドメインは、ＳＩＲＰ−αのリガンドとして同定される（Brown, EJ et al. (2001) Trends Cell Biol 11 : 130-5; Vernon-Wilson, EF et al. (2000) Eur. J. Immunol. 30:2130-7; Takizawa, H et al. (2007) Nat. Immunol. 8: 1287-9; and Subramanian, S et al. (2006) Blood 107:2548-56）。以下により詳細に記載するように、出願人らは、生体材料の表面上のＳＩＲＰ−α及びＣＤ４７間の相互作用が、生体材料に付着する血小板の数を減少させることにより、そして血小板活性化を減少させることにより、生体材料への凝血抵抗性を与えることができることを実証する。
【００１１】
血小板は、血液中を循環し、そして血餅（血栓とも称される）の形成に関与する。血栓症は、血管内部での血餅の形成であり、循環系を介して血流を障害する。血餅の形成（血栓症）は、血管を塞ぎ、脳卒中、心筋梗塞、肺塞栓症、身体の他の部分への血管の閉塞などのイベントを引き起し得る。
【００１２】
本発明の実施形態は、ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインが生体材料の表面に付着することにより、生体材料と結合する血小板の数を減少すること及び／又は血小板活性化を阻害すること（好ましくは両者）を含む生体材料に関連する血栓イベントを阻害する方法を含む。血栓イベントは、血栓症、又は血栓症により導かれる、血栓症に関する、血栓症により引き起される、あるいは血栓症により特徴付けられる、身体における任意の他のイベントを含んでもよい。生体材料に関連する血栓イベントの非限定的な例としては、生体材料上若しくは近くでの血小板の凝集、血液凝固、血栓形成（血栓症）、血管を介した血流障害及び／又は生体材料を含む医療デバイス（例えば、血液導管）、及び塞栓症が挙げられる。
【００１３】
生体材料に関連する血栓イベントを阻害することとは、生体材料に関連する血栓イベントの発症を完全に又は実質的に予防することを意味する。ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを含む生体材料に結合する血小板の数を減少させることとは、ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを含む生体材料に結合する血小板の数が、対照の生体材料（即ち、ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを含まない生体材料）に結合する血小板の数と比較して、減少することを意味する。例えば、生体材料に結合する血小板の数は、対照の生体材料と比較して、１００％まで、約１０％〜約９５％まで、約２５％〜約９０％まで、約５０％〜約８５％まで、又は約７０％〜約８０％まで減少し得る。ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを含む生体材料に結合する血小板の数は、長期又は短期に亘り測定され得る（例えば、生体材料の寿命にわたり、生体材料を対象の血流に導入した直後、又は生体材料を対象の血流に導入した数時間若しくは数日後、例えば約１時間、約３時間、約１２時間、約２４時間、又は約４８時間後）。生体材料に「結合」する血小板は、生体材料に結合、付着（attach）、付着（affix）又は接着（adhere）する血小板を含む。
【００１４】
同様に、ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを含む生体材料による血小板活性化を阻害することとは、対照の生体材料が用いられる場合に活性化する血小板の数と比較して、活性化する血小板の数が減少することを意味する。これは、例えばＣＤ６２Ｐ表面マーカー発現により評価されてもよい。ＣＤ６２Ｐ、即ち血小板顆粒膜タンパク質は、血小板活性化において、血小板表面により発現する。例えば、生体材料による血小板の活性化は、対照の生体材料と比較して、１００％、又は約１０％〜約９５％、約２５％〜約７５％、又は約４０％〜約６０％減少し得る。活性化した血小板の数は、上述のように、長期又は短期に亘り測定され得る。
【００１５】
本発明の実施形態は、生体材料に結合する血小板の数を減少させ、そして／あるいは血小板の活性化を阻害するために修飾された生体材料を提供する（好ましくは両者）。例えば、本発明の生体材料は、生体材料に結合する血小板の数を減少させ、そして／あるいは血小板の活性化を阻害するのに有効な量において、生体材料の表面に付着するＣＤ４７又はこれのＩｇドメインを含む、生体材料を含む。「有効量」とは、対照と比較して、生体材料に結合する血小板の数を減少させ、そして／あるいは血小板の活性化を阻害する任意の量を含む。
【００１６】
本明細書に記載され、そして例証される方法は、任意の生体材料を保護するために適している。生体材料は、生物学、生物医学、又は医学的応用に好適な任意の材料を含む。生体材料の非限定的な例としては、織物、セラミック、ポリマー、熱可塑性物質、例えばポリアリールエーテルケトン及びポリエーテルケトンケトン、接着剤、骨セメント、金属等が挙げられる。ポリマーが最も好ましい。生体材料ポリマーとしては、限定することなく、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエステル、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリウレタン、ポリフルオロテトラエチレン、又はポリビニル（ポリ塩化ビニルを含む）、ポリエチレンイミン、ポリアミド、ポリアクリロニトリル、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリオルトエステル、ポリエーテル−エステル、ポリラクトン、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリエチレンビニルアセテート、ポリヒドロキシブチレート、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレンテレフタラート、ポリオキシエチレン等又はこれらの混合物が挙げられる。大変に好ましいポリマーは、ポリウレタン及びポリ塩化ビニルを含む。
【００１７】
生体材料は、様々な生物学、生物医学、又は医学的応用に用いられる。かかる応用は、組成物、製品、及びデバイス、例えば人工関節、インプラント、ステント、歯科インプラント、骨セメント、カテーテル、チューブ、人工腱及び靱帯、人工皮膚、人工心臓弁、治療剤のための送達ビヒクル、粒子等が挙げられる。好ましい態様において、前記方法は、これらの組成物、製品、及びデバイスを作製するために用いられる生体材料、並びに／又はこれらの組成物、製品、及びデバイスの表面上に被覆した生体材料を保護するために適用可能である。従って、好ましい態様において、前記方法は、生体材料を含む組成物、製品、及びデバイスを保護するために適用可能である。好ましくは、前記方法は、生体材料を含むインプラント、チューブ、カテーテル、及び治療剤送達ビヒクルを保護するために用いられる。例えば、前記方法は、ステント（例えば、動脈内ステント）、カテーテル、心肺バイパス、人工心臓弁、及び血液導管からなる群から選択される生体材料を含むデバイスを保護するために用いられてもよい。本発明の生体材料を含む組成物、製品、及びデバイスは、長期使用（例えば、永久的なインプラント）、短期使用（例えば一時的なインプラント）又は一時的使用、例えば手術（例えば血管形成術又は心肺バイパス）の間のためでもよい。
【００１８】
記載される発明は、ＣＤ４７又はこれらの任意の異性体を用いることができる。本発明の方法はまた、細胞外Ｉｇドメイン又はこれのサブドメインを含む、ＣＤ４７の任意の好適なサブドメインを用いることができる。ＣＤ４７又はこれのＩｇドメインの好適なサブドメインは、好ましくは、ＳＩＲＰ−αと結合、さもなければ相互作用することができるものである。ＣＤ４７、これのＩｇドメイン又はこれらの他のサブドメインは、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ネコ、イヌ、ヒト等の任意の種類に由来してもよい。ブタ、ウシ、及びヒトＣＤ４７は、特に好ましい。
【００１９】
本明細書に記載される方法は、インビトロで、例えば、細胞培養又は実験で一般的に用いられる生体材料において、生体材料に結合する血小板の数を減少させ、そして／あるいは血小板活性化を阻害するのに好適である。前記方法はまた、インビボで、例えば、永久的に又は一時的に埋め込まれる、投与される、挿入される、さもなければ動物の内部にある生体材料において、生体材料に結合する血小板の数を減少させ、そして／あるいは血小板活性化を阻害するのにも好適である。
【００２０】
ＣＤ４７、これのＩｇドメイン、又はこれらの好適なサブドメインは、当該技術分野において好適な任意の手段に従って、生体材料に付着させることができる。例えば、ＣＤ４７、これのＩｇドメイン、又はこれらの好適なサブドメインが、生体材料から生産される特定の組成物、製品又はデバイスの製造の表面上を含む、生体材料中に分散するように、ＣＤ４７、これのＩｇドメイン、又はこれらの好適なサブドメインは、生体材料を含む組成物、製品又はデバイスの製造において、生体材料と混合することができる。ＣＤ４７、これのＩｇドメイン、又はこれらの好適なサブドメインは、あるいは、製品又はデバイスの部分上、又は全体の上に被覆され得る。いくつかの態様によれば、ＣＤ４７、これのＩｇドメイン、又はこれらの好適なサブドメインは、例えば、生体材料とＣＤ４７、これのＩｇドメイン、又はこれらの好適なサブドメイン間の非共有結合的分子間引力により、又はイオン若しくは共有結合により、生体材料に付着することができる。
【００２１】
いくつかの好ましい態様によれば、ＣＤ４７、Ｉｇドメイン、又はこれらの好適なサブドメインは、連結分子により生体材料に付着することができる。連結分子は、生体材料及び／又はＣＤ４７、これのＩｇドメイン、若しくはこれらの好適なサブドメインと複合体化又は結合することができる。連結分子は、ＣＤ４７、Ｉｇドメイン、又はこれらの好適なサブドメインの生体材料への付着を仲介又は容易にすることができる任意の分子である。連結分子は、任意の有機又は無機化合物、タンパク質、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、多糖、脂質、チオール等でもよい。連結分子は、当該技術分野において知られており、実施者の必要に応じて選択することができる。連結分子対の非限定的ないくつかの例としては、アビジン又はストレプトアビジン及びビオチン、チオール及びスクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）又はスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキレート（ＳＭＣＣ）、又はこれらの好適な異形若しくは異性体、並びに葉酸及び葉酸受容体が挙げられる。
【００２２】
本発明の実施形態は、本明細書に記載及び実証する方法を用いて生体材料を保護するためのキットを含む。いくつかの態様によれば、キットは、ＣＤ４７、ＣＤ４７  Ｉｇドメイン、又はこれらのサブドメイン、及び生体材料を保護するための方法におけるキットを用いるための使用説明書を含む。いくつかの態様によれば、前記キットは、生体材料の表面に付着することができ、そして／あるいはＣＤ４７、ＣＤ４７  Ｉｇドメイン、又はこれらのサブドメインに付着することができる１又はそれ以上の連結分子をさらに含み、そして前記連結分子をＣＤ４７、Ｉｇドメイン、又はこれらのサブドメインに付着させるのに適した試薬をさらに含んでもよい。いくつかの態様によれば、ＣＤ４７、Ｉｇドメイン、又はこれらのサブドメインは連結分子と複合体を形成する。
【００２３】
以下の実施例は、本発明の実施形態をより詳細に説明するために提供され、そして限定することなく本発明を例証することを意図する。
【実施例】
【００２４】
実施例
実施例１．ＳＩＲＰ−αは、血小板において発現する。
以下の実験は、フローサイトメトリー及びウエスタンブロットを用いて、ヒト血小板におけるＳＩＲＰ−α発現を検証する。磁気的に精製された血小板を用いたフローサイトメトリーは、ＳＩＲＰ−αの細胞外ドメインと結合するＳ１ＲＰａ（ＳＥＣ７２）に対する抗体を用いて行なった。図１Ａに示すように、精製された血小板の９０％近くが、その表面にＳＩＲＰ−αを発現していた。
【００２５】
膜受容体は、血清に流すことができ、そして血小板により取り込まれるので、抗体を、細胞内ＳＩＲＰ−αドメインに対して試験した。精製された血小板を、界面活性剤を含むバッファに溶解し、ウエスタンブロットにより分析した。ＳＩＲＰ−α（Ｃ−２０）抗体は、細胞内ＳＩＲＰ−αを排他的に測定し、そしてＳＩＲＰ−αについての正確な分子量における強力なバンドを示した（図１Ｂ）。これらの発見は、血小板の大部分が、ＳＩＲＰ−αを発現することを示す。
【００２６】
実施例２．血小板活性化及び付着は、全血がＣＤ４７修飾表面に曝露される場合、減少する。
ヒト全血を、ビオチン化ＣＤ４７（ＣＤ４７Ｂ）又はリジンタグ化ＣＤ４７（ＣＤ４７Ｌ）で修飾したポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）に曝露した。ＣＤ４７修飾及び対照ＰＶＣ管類へのヒト全血の３時間の曝露後、付着した血液細胞をＥＤＴＡ−ＨＥＰＥＳバッファ溶液を用いて管腔表面から除去し（Tabuchi N, Shibamiya A, Koyama T, Fukuda T, Oeveren Wv W, Sunamori M. Activated leukocytes adsorbed on the surcace of an extracorporeal circuit. Artif Organs. 2003;27(6):591-4）、付着及び活性化された血小板の存在について評価した。図２Ａ及び２Ｂに示す管類のサンプルは、エチレンオキシド（ＥｔＯ）により滅菌した。図２Ａは、チャンドラーループ装置（Chandler Loop Apparatus）を介したＣＤ４７修飾ポリマーに曝露された全血からの血小板付着は、ＣＤ４７曝露の結果として、著しく減少したことを示す。同様に、ＣＤ６２Ｐ表面マーカー発現により評価されるので、未付着の血液細胞からの血小板活性化（図２Ｂ）も、著しく減少した。同様の結果は、エチレンオキシド曝露により滅菌されるＣＤ４７修飾血液導管についても指摘する。これらのデータは、ＣＤ４７修飾表面の血液適合性及び臨床適用のためのこれらの可能性を実証する。総合すると、上記の発見は、血小板の大部分がＳＩＲＰ−αを発現し、ＳＩＲＰ−αと修飾された生体材料表面上のＣＤ４７との相互作用が、修飾された血液導管に付着する血小板の数を減少させ得ることを示す。
【００２７】
本発明は、特定の実施形態に関連して記載されるので、特許請求の範囲に記載の本発明は、かかる特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことは理解されるべきである。実際、記載される本発明の組成物及び方法の様々な改変及びの変形は、当業者に明らかであり、添付の特許請求の範囲に記載の発明の範囲内であることを意図する。
【図１Ａ】
2015510828.tif 000003
【図１Ｂ】
2015510828.tif 000004
【図２Ａ】
2015510828.tif 000005
【図２Ｂ】
2015510828.tif 000006
【国際調査報告】
2015510828.tif 000007