(57)【要約】  本発明は膣感染症の予防及び／又は治療、特に膣感染症における病原性膣バイオフィルムの予防及び／又は治療において使用するための両性界面活性剤、並びに活性成分として両性界面活性剤を含有する医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
膣感染症の予防及び／又は治療において使用するための両性界面活性剤。
【請求項２】
アンホアセテート、アンホジアセテート、アンホプロピオネート、アンホジプロピオネート、ヒドロキシスルタイン、又はこれらの任意の混合物である、請求項１に記載の両性界面活性剤。
【請求項３】
Ｃ６−Ｃ２４アルキルアンホアセテート、好ましくはココアンホアセテートもしくはラウロアンホアセテート、より好ましくはココアンホ酢酸ナトリウムもしくはラウロアンホ酢酸ナトリウム、Ｃ６−Ｃ２４アルキルアンホプロピオネート、好ましくはココアンホプロピオネート、より好ましくはココアンホプロピオン酸ナトリウム、Ｃ６−Ｃ２４アルキルアミドプロピルヒドロキシスルタイン、好ましくはココアミドプロピルヒドロキシスルタイン又はＣ６−Ｃ２４アンホジアセテート、好ましくはココアンホジアセテート、より好ましくはココアンホ二酢酸ナトリウムである、請求項１及び／又は２に記載の両性界面活性剤。
【請求項４】
膣感染症が、（病原性）膣バイオフィルムの存在により特徴付けられる、請求項１から３のいずれか一項に記載の両性界面活性剤。
【請求項５】
膣感染症が、外陰膣カンジダ症又は細菌性腟症である、請求項１から４のいずれか一項に記載の両性界面活性剤。
【請求項６】
膣バイオフィルムが、カンジダ・アルビカンス及びカンジダ種並びに／又はガードネレラ・バギナリス、アトポビウム・バギナエ、モビルンカス種、プレボテラ種、及びマイコプラズマ・ホミニスに起因する、請求項４及び／又は５に記載の両性界面活性剤。
【請求項７】
両性界面活性剤が、用量当たり０．０１から５００ｍｇ、好ましくは用量当たり０．１から２５０ｍｇ、より好ましくは用量当たり１から１００ｍｇの量で適用される、請求項１から６のいずれか一項に記載の両性界面活性剤。
【請求項８】
両性界面活性剤が、１日に１回から１週間に２回適用される、請求項１から７のいずれか一項に記載の両性界面活性剤。
【請求項９】
両性界面活性剤が、軟膏、クリーム、ジェル、錠剤、カプセル、オヴール、坐剤、溶液、懸濁液、フォーム、フィルムもしくはリポソーム組成物の形態又は膣リング、タンポン、坐剤、スポンジ、ピロー、パフ、又は浸透圧ポンプシステム内に含有されている形態で適用される、請求項１から８のいずれか一項に記載の両性界面活性剤。
【請求項１０】
両性界面活性剤が、膣及び／又は外陰部に局所的に適用される、請求項１から９のいずれか一項に記載の両性界面活性剤。
【請求項１１】
医薬組成物であって、
（ａ）膣感染症の予防及び／又は治療のための活性成分として、請求項１から１０のいずれか一項に記載の両性界面活性剤、及び
（ｂ）医薬として許容される賦形剤
を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
医薬組成物の総重量を基準として０．１から１５重量％の両性界面活性剤を含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
医薬として許容される賦形剤が、溶媒、ゲル化剤、緩衝剤、非両性界面活性剤、洗浄剤、オイル、アルコール、乳化剤、可溶化剤、湿潤剤、充填剤、担体及び生体接着性剤からなる群から選択される、請求項１１及び／又は１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
別の治療活性物質をさらに含む、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
別の治療活性物質が抗生物質であり、好ましくはメトロニダゾール、クリンダマイシン、モキシフロキサシンからなる群から選択される抗生物質、又はポビドンヨード、ヘキセチジン（ｈｅｘｉｔｉｄｉｎｅ）もしくはオクチニジン（ｏｃｔｉｎｉｄｉｎｅ）のような消毒剤である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は膣感染症を予防及び／又は治療するための、特に膣感染症における病原性膣バイオフィルムを予防及び／又は治療するための両性界面活性剤に関する。さらに、本発明は膣感染症を予防及び／又は治療するための少なくとも１種の両性界面活性剤、並びに医薬として許容される賦形剤を含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
膣感染症は婦人科医師により診断される最もありふれた疾患の１つである。膣感染症は、実質的に乳酸桿菌からなる健康な膣菌叢の不均衡によって発生する可能性がある。乳酸桿菌は膣の酸性環境並びに競合する病原体の成長を阻害する物質の産生に貢献する。外部もしくは内部的な要因に起因する、膣の通常の環境の変化により、病原体の増殖が可能となり膣感染症をもたらす。可能性のある病原体は桿菌、真菌あるいはウィルスである。
【０００３】
細菌性腟症（ＢＶ）は世界的に最もありふれた、膣菌叢の微生物学的障害である。ガードネレラ・バギナリス（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）などの嫌気性菌が、健康な乳酸桿菌主体の膣菌叢を圧倒して過成長する。この過成長が乳酸桿菌の量を減少させ、膣のｐＨを上昇させる。細菌性腟症は主として、生殖年齢の女性に見つけられる。有症率はコーカサス人女性において約５〜１５％、アフリカおよび米国黒人女性において４５〜５５％、及びアジア人女性において約２０〜３０％である。妊娠中の細菌性腟症は約１０〜２０％であり、しばしば早産もしくは流産のような有害妊娠結果を伴う。細菌性腟症はＨＩＶ及び性器ヘルペスのようなＳＴＩ（性感染症）に関する危険の増加を伴う。
【０００４】
細菌性腟症に罹患した女性のうち約５０％のみが症状を報告している。兆候性細菌性腟症を有する女性は不愉快な生臭さ及び水っぽい、均質性の灰色の膣分泌物に悩まされるが、膣は炎症の気配を見せない。細菌性腟症の診断については以下の４つのＡｍｓｅｌ基準のうち、３つに該当することが必要である：均質な灰白色膣分泌物、生臭さ、４．５を超える膣ｐＨ及び湿潤標本顕微鏡検査におけるクルーセル。さらに、膣液の顕微鏡検査が細菌性腟症の診断の補助となる。この目的のために膣液は染色することができるが、染色しなくとも使用することができる。膣液中に見られる乳酸桿菌、小グラム陰性ロッド及び湾曲グラム可変ロッド数を指すヌージェントスコアを決定するためにグラム染色を用いる。７から１０ポイントの間のヌージェントスコアが細菌性腟症を示唆する。既存の細菌性腟症の場合、新鮮な非染色膣液の顕微鏡検査は、白血球なしで又は副基体細胞の存在で顆粒状嫌気性フローラを示す（Ｄｏｎｄｅｒｓ，  ＣＭＥ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ａｒｔｉｃｌｅ  ２０１０，  Ｖｏｌ．  ６５，  Ｎｏ．７）。
【０００５】
最近、世界的な医療的関心がバイオフィルムに関連した感染症に集められている。持続性の感染症および内在する医療装置(例えば、中心静脈カテーテル、導尿カテーテル、心臓弁）および胆石形成によって生じる、閉塞性肺疾患、炎症性大腸炎、細菌性心内膜炎、歯周病、感染症のような慢性的な疾患が微生物バイオフィルムにより誘発しもしくは悪化（発達及び持続）することが判明している（Ｄｏｎｌａｎ，  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  ２００１，  Ｖｏｌ．  ７，  Ｎｏ．  ２；  Ｒａｍａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  ２０１０，  ２３：  ５６０−５６５；  Ｓｗｉｄｓｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ＆  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １０６，  Ｎｏ．  ５，  Ｐａｒｔ  １，  ２００５）。
【０００６】
また、細菌性腟症において、（ポリ）微生物バイオフィルムが細菌性腟症の再発において役割を果たす可能性のあることが確認されている。これらのバイオフィルムは主にガードネレラ・バギナリスで構成されていると報告されている。１つの研究は、主としてガードネレラ（６０〜９５％）、アトポビウム（Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ）（１〜４０％）及び乳酸桿菌（１〜５％、バイオフィルム菌種の２０％のみ）で構成された多微生物性バイオフィルムが細菌性腟症を有する女性の９０％で確認され得ることを示した（Ｓｗｉｄｓｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ＆  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １０６，  Ｎｏ．  ５，  Ｐａｒｔ  １，  ２００５）。
【０００７】
バイオフィルムは当該技術分野において、細胞外ポリマー性物質（ＥＰＳ）マトリクスに埋め込まれた表面結合微生物群として定義されている。このマトリクスは保護バリアとして機能し、微生物細胞が互いに接着し、及び金属、石、プラスチック、大動脈弁又はカテーテル及びヒト組織などの表面に接着することができるようにする。バイオフィルムは、バイオフィルムを形成するのに必要な栄養、湿分及び微生物があれば、ほとんどあらゆる種類の表面上に見られる。
【０００８】
細菌の形態として、プランクトン様（浮遊）とバイオフィルム（固定）の間には顕著な違いがある。バイオフィルムに組織化される細菌腫は、プランクトン様に成長する同じ菌種と比べて、乾燥もしくはＵＶ照射のようなストレス因子に対して、特に抗生物質処置に対してより耐性である。
【０００９】
バイオフィルムは消すことが困難である。この現象に関する要因には幾つかの可能性がある。１つの説明は入手できる抗生物質の大部分は、プランクトン様に成長する細菌に対する殺傷活性だけが試験されている。従って、プランクトン様である細菌に対しては非常に効果的であるが、バイオフィルム形態にある細菌に対しては、大抵が効果的ではない。その他の要因は、バイオフィルム細菌の大きな多様性、あるいは代謝的に静止状態である「生残菌細胞」の形成であり得る。これらは抗生物質の標的であるタンパク質合成もしくはＤＮＡの複製を止めることができ、それ故、抗生物質に対して耐性である（Ｐｅｒｃｉｖａｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｗｏｕｎｄ  Ｒｅｐ  Ｒｅｇ  ２０１１，  １９：１−９）。これらの細胞は処置後に生き残り、存在するＥＰＳマトリクス並びに死亡する細胞により放出された分子及びＤＮＡ断片をリサイクルでき、これにより新しいバイオフィルムを組み立てることができる（Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，  Ｔｈｅ  Ｂｉｏｆｉｌｍ  Ｐｒｉｍｅｒ；  ２００７，  Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，
Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ２０１０, ６４：３５７：７２）。
【００１０】
細菌性腟症は通常、経膣的にもしくは経口的に適用されるメトロニダゾール又は経膣的に適用されるクリンダマイシンのような抗生物質を用いて治療される。正確な治療であって、初期的に９４％に及ぶ高い治癒率の治療後においても（Ｂｒａｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＪＯＧ  ２００８，  １４１：１５８−１６２）再発率は高い。３０〜５０％の女性が、メトロニダゾール又はクリンダマイシンを用いた治療後２カ月から３カ月以内に再発を経験している（Ｖｅｓｔｒａｅｌｅｎ  ａｎｄ  Ｖｅｒｈｅｌｓｔ，  Ａｎｔｉ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｔｈｅｒ，  ２００９，  ７（９），  １１０９−１１２４）。従ってこのような場合、抗生物質は細菌性腟症を引き起こす細菌をほんの少し抑えるだけである。例えば、ある研究において細菌性腟症を有する１８名の女性が７日間にわたりメトロニダゾールを経口投与する治療を受けた。追跡調査で細菌性バイオフィルムの存在および活性を決定した。治療後１週間の間、患者は症状（膣分泌物、悪臭、クルー細胞）を見せなかった。５週間後の追跡調査評価において、膣ｐＨ、ヌージェントスコア、バイオフィルム密度及びバイオフィルムアメナビリティー（ａｍｅｎａｂｉｌｉｔｙ）が経時的に増加を示した。バイオフィルム内に、比較的にメトロニダゾールが近づきにくい持続性ガードネレラ・バギナリス及びアトポビウム・バギナエ（Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ  ｖａｇｉｎａｅ）細胞が存在することが示された。それ故この研究において、膣バイオフィルムは一次的にはメトロニダゾールにより抑えられたが、治療のすぐ後にその活性が回復された（Ｓｗｉｄｗｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  ｏｆ．  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ＆  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  ２００８，  １９８：９７．ｅ１−９７．ｅ６）。ＧａｒｄｎｅｒとＤｕｋｅｓは、単離されたガードネレラ・バギナリス菌の接種ではなく、細菌性腟症の特徴的な症状を持つ、ガードネレラ・バギナリス（当時はヘモフィリス・バギナリス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ））感染症を有する患者の膣から採取した物質の、健康な女性の膣への接種が、細菌性腟症（当時はＨ・バギナリス膣症）の臨床的特徴を引き起すことを、初めて示した（Ｇａｒｄｎｅｒ  ａｎｄ  Ｄｕｋｅｓ，  Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １９５５，  ６９（５）：９６２−７６）。より最近の研究においてガードネレラ・バギナリスの常在菌と病原性単離菌のゲノムが比較された。病原性単離菌はより高いバイオフィルム形成能力を見せた。従って、バイオフィルム生態のガードネレラ・バギナリスが、プランクトン様成長とは対照的に、細菌性腟症の病原性及び再発に重要であると思われる（Ｈａｒｗｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２０１０，  １１：３７５）。
【００１１】
ＵＳ２００９／０１８１１０６Ａ１は、ＥＤＴＡと組み合わせて、抗菌特性を有する薬剤としてホウ酸を用いる、バイオフィルムの治療用組成物を開示している。
【００１２】
ＵＳ２００６／０２２３７６５は、活性成分としてアルキルグリコシドなどの、糖類をベースとする非イオン性界面活性剤を使用する、膣における感染症を阻害及び／又は治療するための方法を開示している。
【００１３】
Ｃａｔａｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，  ２００５，  ４９（４），  １５０９−１５２０には、膣殺菌剤としてのＣ３１Ｇ（アルキルジメチルグリシンとアルキルジメチルアミンオキシドの等量混合物）の使用が開示されている。Ｂｉｒｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，  ２０００，  ４４（９），  ２５１４−２５１７及びＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ２００１，９０（９）には、抗菌作用能力に関する、種々の鎖長のアルキルベタインとアルキルジメチルアミンオキシドの混合物の評価が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００９／０１８１１０６号明細書
【特許文献１】米国特許出願公開第２００６／０２２３７６５号明細書
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】（Ｄｏｎｄｅｒｓ，  ＣＭＥ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ａｒｔｉｃｌｅ  ２０１０，  Ｖｏｌ．  ６５，  Ｎｏ．７）
【非特許文献２】Ｄｏｎｌａｎ，  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  ２００１，  Ｖｏｌ．  ７，  Ｎｏ．  ２
【非特許文献３】Ｒａｍａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  ２０１０，  ２３：  ５６０−５６５
【非特許文献４】Ｓｗｉｄｓｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ＆  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １０６，  Ｎｏ．  ５，  Ｐａｒｔ  １，  ２００５
【非特許文献５】Ｐｅｒｃｉｖａｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｗｏｕｎｄ  Ｒｅｐ  Ｒｅｇ  ２０１１，  １９：１−９
【非特許文献６】Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，  Ｔｈｅ  Ｂｉｏｆｉｌｍ  Ｐｒｉｍｅｒ；  ２００７
【非特許文献７】Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．， Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ２０１０, ６４：３５７：７２
【非特許文献８】Ｂｒａｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＪＯＧ  ２００８，  １４１：１５８−１６２
【非特許文献９】Ｖｅｓｔｒａｅｌｅｎ  ａｎｄ  Ｖｅｒｈｅｌｓｔ，  Ａｎｔｉ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｔｈｅｒ，  ２００９，  ７（９），  １１０９−１１２４
【非特許文献１０】Ｓｗｉｄｗｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  ｏｆ．  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ＆  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  ２００８，  １９８：９７．ｅ１−９７．ｅ６
【非特許文献１１】Ｇａｒｄｎｅｒ  ａｎｄ  Ｄｕｋｅｓ，  Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １９５５，  ６９（５）：９６２−７６
【非特許文献１２】Ｈａｒｗｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２０１０，  １１：３７５
【非特許文献１３】Ｃａｔａｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，  ２００５，  ４９（４），  １５０９−１５２０
【非特許文献１４】Ｂｉｒｎｉｅら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，  ２０００，  ４４（９），  ２５１４−２５１７
【非特許文献１５】Ｂｉｒｎｉｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ２００１，９０（９）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
上記の通り、先行技術においてなお存在する問題を考慮して、本発明の基本的な目的は、改善された膣感染症の治療／予防の提供である。特に、細菌性腟症を効果的に治療及び／又は予防すること、さらに特に細菌性腟症を再発する女性において、バイオフィルム（ガードネレラ・バギナリスバイフィルムなど）を消すことが目的である。望ましくない副作用を避けて再発率を顕著に減少させることがとりわけ望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
上記の問題は驚くべきことに、本発明によって解決された。即ち、驚くべきことに両性界面活性剤が膣感染症、特に（病原性の）バイオフィルムの形成を伴う細菌性腟症を効果的に治療及び／又は予防することできることが見出された。特に持続性の膣のガードネレラ・バギナリス（細菌性）バイオフィルムを効果的に消すことができるだけではなく予防することもできることが見出されている。従って、両性界面活性剤は、例えばガードネレラ・バギナリスバイオフィルムに起因する再発性の細菌性膣症を予防及び治療するために使用することができる。
【００１８】
メトロニダゾールもしくはクリンダマイシンのような抗生物質を用いるガイドラインに適合した治療でさえも、インビボ、バイオフィルムモデルのいずれにおいても効果的にバイオフィルムを除去しないという事実を考慮すると、バイオフィルム（ガードネレラ・バギナリスバイオフィルムなど）に対する両性界面活性剤の効果はなおさら注目に値する。同じように、５日間にわたり４００ｍｇのモキシフロキサシンを用いた細菌性腟症を有する女性の治療は、接着性の細菌を消すことなく、単に抑えたのみであった。
【００１９】
それ故に、本発明は膣感染症の予防及び／又は治療における使用のための両性界面活性剤、及び膣感染症の予防及び／又は治療のための活性成分としての該両性界面活性剤、及び医薬として許容される賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ココアンホ酢酸ナトリウムによるガードネレラ・バギナリスバイオフィルム形成及び生存能の阻害を示す図である。
【図２】ココアンホ酢酸ナトリウムがガードネレラ・バギナリス静止期バイオフィルム形成及び生存能を阻害することを示す図である。
【図３】成熟したガードネレラ・バギナリスバイオフィルムに添加した幾つかの両性界面活性剤の阻害効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
用語、界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）は、界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ−ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）の短縮形である。界面活性剤は両親媒性の分子であり、これらの分子が脂溶性の基及び水溶性の基、即ち親油性の部分および親水性の部分からなることを意味する。界面活性剤は、親水性の部分及びその電荷により非イオン性、カチオン性、アニオン性及び両性界面活性剤に分類される。非イオン性界面活性剤の親水性部分は荷電されていない。これらは解離性の官能基を一切含まないが、１つ以上の、エーテル、ケトン及びアルコールのような極性基を含む。よく使われる非イオン性界面活性剤の例は、ポリアルキレングリコールエーテルである。カチオン性界面活性剤は親水性部分が正に荷電されている。その大部分は、対イオンとしてハロゲン化物を有する四級アンモニウム化合物、例えばジステアリルジメチルアンモニウムクロリドである。アニオン性界面活性剤の親水性部分は負に荷電されている。これらは対イオンとしてのアルカリ原子を有するカルボキシ、アルコキシド、スルホナートもしくはスルファート基を有するものが多い。アニオン性界面活性剤の一例はラウリル硫酸ナトリウムである。
【００２２】
本発明は両性界面活性剤及び両性界面活性剤を活性成分として含む医薬組成物に関する。一般的に、両性界面活性剤の親水性部分は、ｐＨ値により、正に荷電されるもしくはされ得る少なくとも１つの基並びに負に荷電されるもしくはされ得る少なくとも１つの基を含有する。正に荷電されるもしくはされ得る基は、例えばアミンあるいはアンモニウム化合物である。負に荷電されるもしくはされ得る基は、例えばカルボキシ、カルボキシラート、スルホナートあるいはスルファート基である。
【００２３】
両性界面活性剤の有利な点は、その無害性である。これらの安全性はシャンプーやシャワージェルのような多くの化粧品への使用により証明されている。さらに、非イオン性及びアニオン性界面活性剤と比べて、両性界面活性剤はその穏やかさ、及び刺激作用がないことにより皮膚の耐容性がよい。
【００２４】
膣感染症の予防及び／又は治療において本発明によって使用することができる両性界面活性剤は、親油性部分、好ましくは長鎖（Ｃ６−Ｃ２４など）アルキルもしくはアシル基に加えて、少なくとも１つのアミンもしくはアンモニウム官能基と、内部塩を形成することができる−ＣＯＯＨ及び−ＳＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの基を含む。好ましい両性界面活性剤はアンホアセテート、アンホジアセテート、アンホプロピオネート、アンホジプロピオネート、スルホベタイン類、及びヒドロキシスルタインである（ＩＮＣＩ命名法：化粧品物質及び成分（ＣｏｓＩｎｇ）に関する情報を有する欧州委員会データベースに準拠）。
【００２５】
好ましい実施形態において、本発明の両性界面活性剤はアンホアセテート、アンホジアセテート、アンホプロピオネート、アンホジプロピオネート、ヒドロキシスルタイン、又はこれらの混合物である。これらの両性界面活性剤はとりわけ良好な耐容性を示し、皮膚刺激を与えないことを示しており、その特性は、膣粘膜が非常に敏感であることから膣障害を治療するために非常に重要である。
【００２６】
別の好ましい実施形態において、本発明の両性界面活性剤は、アルキルアンホアセテート、アルキルアンホジアセテート、アルキルアンホプロピオネート、アルキルアンホジプロピオネート及び／又はアルキルアミドプロピルヒドロキシスルタイン、好ましくはＣ６−Ｃ２４アルキルアンホアセテート、Ｃ６−Ｃ２４アルキルアンホジアセテート、Ｃ６−Ｃ２４アルキルアンホプロピオネート、Ｃ６−Ｃ２４アルキルアンホジプロピオネート及び／又はＣ６−Ｃ２４アルキルアミドプロピルヒドロキシスルタイン、より好ましくはＣ８−Ｃ１８アルキルアンホアセテート、Ｃ８−Ｃ１８アルキルアンホジアセテート、Ｃ８−Ｃ１８アルキルアンホプロピオネート、Ｃ８−Ｃ１８アルキルアンホジプロピオネート及び／又はＣ８−Ｃ１８アルキルアミドプロピルヒドロキシスルタインである。さらにより好ましくは本発明の両性界面活性剤は、ココアンホアセテート、ラウロアンホアセテート、カプロアンホアセテート、カプリルアンホアセテート、ステアロアンホアセテート、イソステアロアンホアセテート、ミリストアンホアセテート、ココアンホジアセテート、ラウロアンホジアセテート、カプロアンホジアセテート、カプリルアンホジアセテート、ステアロアンホジアセテート、イソステアロアンホジアセテート、ミリストアンホジアセテート、ココアンホプロピオネート、ラウロアンホプロピオネート、カプロアンホプロピオネート、カプリルアンホプロピオネート、ステアロアンホプロピオネート、イソステアロアンホプロピオネート、ミリストアンホプロピオネート、ココアンホジプロピオネート、ラウロアンホジプロピオネート、カプロアンホジプロピオネート、カプリルアンホジプロピオネート、ステアロアンホジプロピオネート、イソステアロアンホジプロピオネート、ミリストアンホジプロピオネート、ココアミドプロピルヒドロキシスルタイン、ラウロアミドプロピルヒドロキシスルタイン、カプラミドプロピルヒドロキシスルタイン、カプリルアミドプロピルヒドロキシスルタイン、ステアラミドプロピルヒドロキシスルタイン、イソステアラミドプロピルヒドロキシスルタイン、及びミリスタミドプロピルヒドロキシスルタインからなる群から選択される。本発明によれば、上記両性界面活性剤の任意の混合物も、同様に使用することができる。
【００２７】
好ましい実施形態において、本発明の両性界面活性剤はＣ６−Ｃ２４アルキルアンホアセテートであり、好ましくはココアンホアセテート、ラウロアンホアセテート、カプロアンホアセテート、カプリルアンホアセテート、ステアロアンホアセテート、イソステアロアンホアセテート、及びミリストアンホアセテート、又はこれらの任意の混合物から選択される。
【００２８】
別の好ましい実施形態において、本発明の両性界面活性剤はＣ６−Ｃ２４アルキルアンホジアセテートであり、好ましくはココアンホジアセテート、ラウロアンホジアセテート、カプロアンホジアセテート、カプリルアンホジアセテート、ステアロアンホジアセテート、イソステアロアンホジアセテート、及びミリストアンホジアセテート、又はこれらの任意の混合物から選択される。
【００２９】
別の好ましい実施形態において、本発明の両性界面活性剤はＣ６−Ｃ２４アルキルアンホプロピオネートであり、好ましくはココアンホプロピオネート、ラウロアンホプロピオネート、カプロアンホプロピオネート、カプリルアンホプロピオネート、ステアロアンホプロピオネート、イソステアロアンホプロピオネート、及びミリストアンホプロピオネート、又はこれらの任意の混合物から選択される。
【００３０】
別の好ましい実施形態において、本発明の両性界面活性剤はＣ６−Ｃ２４アルキルアミドプロピルヒドロキシスルタインであり、好ましくはココアミドプロピルヒドロキシスルタイン、ラウラミドプロピルヒドロキシスルタイン、カプラミドプロピルヒドロキシスルタイン、カプリラミドプロピルヒドロキシスルタイン、ステアラミドプロピルヒドロキシスルタイン、イソステアラミドプロピルヒドロキシスルタイン、及びミリスタミドプロピルヒドロキシスルタイン、又はこれらの任意の混合物から選択される。
【００３１】
最も好ましくは本発明の両性界面活性剤はココアンホアセテートもしくはラウロアンホアセテート、好ましくはココアンホ酢酸ナトリウムもしくはラウロアンホ酢酸ナトリウム、ココアンホプロピオネート、好ましくはココアンホプロピオン酸ナトリウム、ココアンホジアセテート、好ましくはココアンホ二酢酸二ナトリウム、又はココアミドプロピルヒドロキシスルタインである。
【００３２】
とりわけ、ココアンホ酢酸ナトリウム、ラウロアンホ酢酸ナトリウム、ココアンホプロピオン酸ナトリウム、ココアンホ二酢酸二ナトリウム及びココアミドプロピルヒドロキシスルタインのそれぞれは、共に膣感染症を予防及び／又は治療（とりわけ、膣バイオフイルムを伴う膣感染症）において（ａ）卓越した結果を示すだけでなく、（ｂ）皮膚の耐容性に関して優れた特性（非刺激性作用）をも提供する。
【００３３】
本発明によれば上記の両性界面活性剤は膣感染症の予防及び／又は治療のための活性化合物として使用される。
【００３４】
本発明により定義される膣感染症は、任意の望ましくない特徴を有する膣の感染状態もしくは障害を含む。膣感染症は真菌（カンジダ・アルビカンス及びカンジダ種など）、又は細菌（ガードネレラ・バギナリス、アトポビウム・バギナエ、モビルンカス種、プレボテラ種、及びマイコプラズマ・ホミニス（Ｍｙｋｏｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｉｎｉｓ）など）により引き起こされる可能性がある。本発明により定義される膣感染症は好ましくは（病原性）膣バイオフィルムを伴う。「バイオフィルム」は本明細書において、細胞外ポリマー性物質（ＥＰＳ）マトリクスに埋め込まれた表面結合微生物群として定義される。「を伴う」は本明細書において、膣感染症に付随する膣バイオフィルムの出現を意味する。膣バイオフィルムが一般的な様式おいて膣感染症に固有なものではないことを認識することが重要である。全く対照的に膣バイオフィルムは特定の膣感染症にのみ付随して見出だされる。膣バイオフィルムは外陰膣カンジダ症又は細菌性腟症に観察されている。これらの疾患が膣バイオフィルムの存在を示すのであれば、本発明により治療および／又は予防されるのに好ましい状態である。本発明により特に好ましい状態は、ガードネレラ・バギナリスに起因する膣バイオフィルムを付随する細菌性腟症である。
【００３５】
驚くべきことに本発明により上記のような膣バイオフィルムが両性界面活性剤の適用によって、効果的に消されることが見出された。さらに、バイオフィルムが効果的に消されるだけでなくその形成速度が著しく低下される。従って、両性界面活性剤は膣感染症、とりわけ膣バイオフィルムを伴う膣感染症の治療に効果的なだけでなく、その予防についても効果的である。理論に縛られることなく、発明者らはバイオフィルムへの両性界面活性剤の添加がＥＰＳ構造を破壊し、バイオフィルム細菌をその保護的環境から切り離すと考える。無防備となった病原菌は、いまや、殺菌物質（医薬活性物質、抗生物質及び消毒剤物質もしくは両性界面活性剤も）の影響を受け易くなり、より容易に死滅させることができる。特に、生存可能であるが、培養可能な細胞ではない、静止状態の細胞は代謝活動を余儀なくされ、従って通常の抗生物質もしくは抗真菌剤処理を受けやすくなる。加えて、驚くべきことに界面活性剤はＥＰＳと相互作用して破壊するだけではなく、細胞膜の物質と直接的に相互作用し、病原体の生存能にさらに影響を与える。
【００３６】
本発明により治療及び／又は予防される膣感染症は好ましくは乳酸桿菌の減少を特徴とする。健康な膣環境では酸性の環境を保証するための十分な乳酸桿菌が存在し、好ましくない別の病原菌の成長を阻害する。乳酸桿菌に不利な内部的もしくは外部的影響によって膣環境のバランスが変化した場合、望ましくない病原菌、例えばガードネレラ・バギナリス、アトポビウム・バギナエ又はカンジダ種の無秩序な成長が起こり、結局膣感染症を引き起こすことになる。
【００３７】
本発明の好ましい実施形態において、両性界面活性剤は、用量当たり０．０１から５００ｍｇの量で適用される。好ましくは、両性界面活性剤は、用量当たり０．１から２５０ｍｇ、特に１から１００ｍｇの量で適用される。上記の値よりも量が少ない場合、治療及び／又は予防の効果は非常に小さい。一方、上記の値よりも量が多い場合、皮膚刺激が観察される可能性がある。
【００３８】
本発明による両性界面活性剤は膣及び／又は外陰部に局所的に適用することができる。バイオフィルムが存在する場合には、両性界面活性剤を直接病原性バイオフィルムに接触さることが特に好ましい。さらに、本発明による両性界面活性剤は軟膏、クリーム、ジェル、錠剤、カプセル、オヴール（ｏｖｕｌｅ）、坐剤、溶液、懸濁液、フォーム、フィルム又はリポソーム組成物の形態で適用することができる。特に好ましい適用形態は軟膏、ジェル、クリーム及び坐剤である。
【００３９】
本発明により両性界面活性剤は膣リング、タンポン、ピロー、パフ、又は浸透圧ポンプシステムにより適用することも可能である。これらの目的のために、上記の製品は両性界面活性剤を含浸させるか又は両性界面活性剤を含有するクリーム又は軟膏に漬けることができる。
【００４０】
本発明はまた、膣感染症の治療及び／又は予防のための活性成分としての本明細書に定義される両性界面活性剤、及び医薬として許容される賦形剤を含有する医薬組成物に関する。両性界面活性剤及び膣感染症に関して上記に与えられた記述は医薬組成物にも適用される。本発明による両性界面活性剤が驚くべきことに膣感染症の治療及び／又は予防のための活性成分として見いだされたことを認識することが重要である。
【００４１】
好ましい実施形態において、医薬組成物は、医薬組成物の総重量を基準として０．１から１５重量％、好ましくは０．２５から１０重量％、より好ましくは０．５から７．５重量％の両性界面活性剤、又はその混合物を含有する。
【００４２】
本発明の医薬組成物は、適用当たり０．０１から５００ｍｇの両性界面活性剤が使用されるように適用されるのが好ましい。より好ましい実施形態において、適用当たり０．１から２５０ｍｇ、さらにより好ましくは１から１００ｍｇの両性界面活性剤が使用されるように適用される。
【００４３】
記載の通り、本発明の医薬組成物は、薬剤投与を適切な部位に行うことが容易／可能なように、さらに少なくとも１種の医薬として許容される賦形剤を含む。本発明により適切な医薬として許容される賦形剤は、当業者に公知のものであり、特に本質的に、既に両性界面活性剤自体について上記されたような適用／投与様式のためのものである。好ましくは１種以上の医薬として許容される賦形剤は溶媒、ゲル化剤、緩衝剤、非両性界面活性剤（例えばアニオン性、カチオン性、及び／又は非イオン性界面活性剤）、洗浄剤、オイル、アルコール、乳化剤、可溶化剤、湿潤剤、充填剤、担体及び生体接着性剤から選択される。
【００４４】
適切な賦形剤は局所及び膣投与、好ましくは膣及び／又は外陰部投与のための無機もしくは有機物質である。この部分は非常に敏感であるため賦形剤は皮膚にとりわけ優しいものでなければならない。特に好ましい賦形剤の例は、水、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレンアルコール／グリコール、ゼラチン、ダイズ、炭水化物（乳糖もしくはでんぷんなど）、レシチン、グリセロールトリアセタート及びその他の脂肪酸グリセリド、タルク及びセルロースである。適切な賦形剤としてのゲル化剤の例は、ペクチン、アガロース、ゼラチン及びカゼインなどの天然ゲル化剤又は、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース及びカルボキシメチルセルロースなどの改質天然ゲル化剤、又は、ポリビニルアルコール、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリアクリルアミド、ポリビニルピロリドン及びポリエチレングリコールなどの完全合成のゲル化剤である。
【００４５】
好ましくは、当業者に公知で任意の別の適切な医薬用賦形剤、例えば香料、防腐剤、着色剤などを添加してもよい。
【００４６】
好ましい実施形態において、医薬組成物はさらに、医薬組成物のｐＨを３から６の範囲、より好ましくは４から５の範囲に調節するための酸を含有する。本発明による医薬組成物に使用される酸は、好ましくは有機酸、例えば乳酸又はクエン酸である。特に乳酸が好ましい。酸は、本発明の医薬組成物中に、医薬組成物の総重量を基準として、０から５重量％、より好ましくは０．０１から０．５重量％存在させることができる。好ましくは、ｐＨ値が上記の範囲内にあることを確実にするために、緩衝剤も添加することができる。該緩衝剤は酢酸／アセテート緩衝剤であってよい。
【００４７】
より好ましくは、医薬組成物は１日１回から１週間に２回適用することができる。例えばガードネレラ・バギナリスバイオフィルムに起因する、急性の膣感染症を治療するために、医薬組成物は好ましくは１週間もしくは２週間の間、１日１回適用される。新たなバイオフィルムの形成を予防するために、医薬組成物を用いる治療を、例えば数カ月にわたって好ましくは１週間に２回、適用することができる。
【００４８】
好ましくは、本発明の医薬組成物／両性界面活性剤は他の医薬として活性な物質、例えば抗生物質又は消毒剤と同時投与することができる。好ましい抗生物質はメトロニダゾールもしくはクリンダマイシンである。両性界面活性剤は、膣感染症の治療および／又は予防をさらに改善するために、好ましくは抗生物質による治療と同時に、治療の前に及び／又は後に、投与することができる。好ましい実施形態において、両性界面活性剤及び別の医薬活性物質は互いに交互に投与される。医薬活性物質（抗生物質又は消毒剤など）が最初に与えられ、抗生物質又は消毒剤治療が終わった後に両性界面活性剤が投与されるか、あるいはその逆順で投与される。さらに、別の医薬活性物質と両性界面活性剤の両方を投与することによる相乗効果が予想される。まず、医薬活性物質（例えば抗生物質又は消毒剤など）が影響を受けやすい細菌を殺し、続いて両性界面活性剤がバイオフィルムのＥＰＳ構造を破壊する。他の医薬活性物質を近接して投与することで、保護するＥＰＳがなく、今やより影響を受けやすくなっている、残存する細菌が殺されることとなる。逆もまた同様であり、両性界面活性がまずバイオフィルムのＥＰＳ構造を破壊し、続いて医薬活性物質が、影響を受けやすくなった細菌を殺すこととなる。
【００４９】
従って、両性界面活性剤及び別の医薬活性物質の投与は別の治療法に分離することも可能であり：
ａ）例えば、それぞれの患者情報リーフレットの指示による医薬活性物質に応じて、適切な時間、まず別の医薬活性物質（抗生物質、又は消毒剤など）を投与し、別の医薬活性物質による治療が完了したら、両性界面活性剤の適用を続ける。両性界面活性剤は、１週間か２週間にわたり毎日１回、あるいは数カ月にわたり１週間に２回適用することができる。両性界面活性剤治療の完了後、例えば、それぞれの患者情報リーフレットに示されるように、適切な時間に、医薬物質（抗生物質、又は消毒剤など）による２番目の治療を続ける。
ｂ）まず、両性界面活性剤を１週間もしくは２週間にわたり毎日１回、あるいは数カ月にわたり１週間に２回投与する。その後、例えば、それぞれの患者情報リーフレットに示されるように、医薬活性物質に応じて適切な時間に別の医薬物質（抗生物質、又は消毒剤など）を投与することができる。
【００５０】
さらに、本発明の医薬組成物を、他の抗生物質又は抗菌剤が感染症（ガードネレラ・バギナリスバイオフィルム感染症など）への対応に失敗している患者において使用することができる。
【実施例】
【００５１】
［実施例１］
形成中並びに十分に発達した後なお成長中のＧ．バギナリスバイオフィルムにおける、ココアンホ酢酸ナトリウムによるＧ．バギナリスバイオフィルム形成及び生存能の阻害
【００５２】
Ａ）実験方法
ガードネレラ・バギナリスバイオフィルムの形成に対する両性界面活性剤の阻害効果を、９６ウェル組織培養試験プレート中で成長したバイオフィルムにおいて試験した。バイフィルム実験を開始する前に、プランクトン様成長ガードネレラ・バギナリス培養物に関するココアンホ酢酸ナトリウムのＭＩＣ（最小阻害濃度）値を決定した。ガードネレラ・バギナリスに対するココアンホ酢酸ナトリウムのＭＩＣは今まで報告されたことがない。
【００５３】
ガードネレラ・バギナリス（ＡＴＣＣ１４０１８株）を、５％羊血液を補充したコロンビア寒天板上で成長させ、培養液を、３７℃の、２％（ｗ／ｖ）のゼラチン、０．５％の酵母抽出物、０．１％のでんぷん及び１％のＤ―（＋）−グルコースを補充したブレインハートインフュージョン培地中で、５％のＣＯ２を添加して成長させた。
【００５４】
前培養として、細菌をプレートもしくはグリセロールストックから接種し、一晩成長させた。この前培養物を使用して、新たに培養を開始した。これにより、培養を２００μＬの最終体積で、マイクロタイタープレートにおいて実施した。バイオフィルム形成（ｔ０）における物質を試験するために、物質はこの時点で添加した。２０時間の培養後、バイオフィルム細胞の質量及びバイオフィルム生存能を決定する測定を開始した。十分発達しさらに成長中のバイフィルム（ｔ２０ｍ）において物質を試験するために、２０時間の培養後、培地を静かに除去し、さらに成長するための新しい培地に化合物を添加した。温置をさらに２０時間実施した。
【００５５】
バイオフィルム形成及び生存能に関して、それぞれ培養の２０時間時点（ｔ０）、４０時間時点（ｔ２０ｍ）で測定を開始した。
【００５６】
バイオフィルム細胞の質量を決定するために、クリスタルバイオレット（ＣＶ）染色を用いた。この目的のために９６ウェル組織試験プレート中で成長したバイオフィルムを緩衝剤（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）で洗浄し、乾燥させて振とうしながらエタノール中２％のクリスタルバイオレットで染色した。緩衝剤で洗浄後、乾燥させて一晩エタノールで抽出し、プレートリーダー中で吸収（ＯＤ６２０）を測定し、バイオマス阻害のパーセンテージを計算した。
【００５７】
生存能を、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ  ＢａｃＬｉｇｈｔ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｓｔａｉｎｉｎｇにより決定した。この方法はＳＹＴＯ９緑色蛍光核酸染色剤及び赤色蛍光核酸染色剤、プロピジウムヨージドの混合物を使用する。これらの染色剤はそのスペクトル特性及び生存細菌細胞へ浸透する能力の双方が異なっている。単独で使用した場合、ＳＹＴＯ９染色剤は通常細菌集団の、無傷の膜を持つ細菌と、損傷した膜を持つ細菌のすべてを標識する。対照的に、プロピジウムヨージドは損傷した膜を持つ細菌のみに浸透し、両方の染色剤が存在する場合、ＳＹＴＯ９染色剤の蛍光を弱める要因となる。９６ウェルオプティカルプレートで成長したバイオフィルムを、０．８５％ＮａＣｌで丁寧に洗浄し、空気乾燥した。その後、１００μＬの染色剤溶液（０．８５％ＮａＣｌ中、６μＭのＳＹＴＯ９染色剤と３０μＭのプロピジウムヨージドを含有する）を添加した。暗所で１５分温置した後、赤色（６３０ｎｍ）及び緑色（５３０ｎｍ）蛍光をモニターするための検出器及びフィルターを具備したマイクロタイタープレートリーダーで蛍光を測定した。その後、生存能の低下パーセンテージを計算した。
【００５８】
Ｂ）両性界面活性剤によるガードネレラ・バギナリスバイオフィルム形成及び生存能の阻害
図１は、異なるバイオフィルム発達段階における、ガードネレラ・バギナリスバイオフィルム形成及び生存能に対する、ココアンホ酢酸ナトリウムの阻害効果を示す。
【００５９】
バイオフィルム培養の開始時（ｔ０）にココアンホ酢酸ナトリウムを添加した場合、バイオフィルム形成は０．２５ｍｇ／ｍＬ（ココアンホ酢酸ナトリウムｍｇ／培地ｍＬを意味する）以上の濃度で完全に阻害された。
【００６０】
十分に発達しなお成長中のガードネレラ・バギナリスバイオフィルムに両性界面活性剤を添加した場合（ｔ２０ｍ）、バイオフィルム形成を阻害するために必要な濃度はより高くなった。１ｍｇ／ｍＬから５ｍｇ／ｍＬの間の濃度で、３６％から７１％のバイオフィルム形成の低下が達成された。
【００６１】
バイオフィルム培養の開始時（ｔ０）におけるココアンホ酢酸ナトリウム（０．２５ｍｇ／ｍＬから１ｍｇ／ｍＬ）の添加により、細菌細胞の生存能は９０％低下した。十分に発達しなお成長中のバイオフィルムに添加した場合、１ｍｇ／ｍＬから５ｍｇ／ｍＬの間の濃度で、細菌細胞の生存能が３８％から６７％の減少を見せた。
【００６２】
驚くべきことに、これらの知見は発達中のガードネレラ・バギナリスバイオフィルムに対するココアンホ酢酸ナトリウムの添加が、細胞質量と生存能の大量の減少により、新しいバイオフィルムの形成を予防することを示す。ココアンホ酢酸ナトリウムは、予想外に、十分に発達しなお成長中のバイオフィルムにおいて、バイオフィルムの形成及び細胞生存能も阻害し、それ故、この両性界面活性剤を含有する医薬組成物は、ガードネレラ・バギナリス感染症、特に既に存在しているガードネレラ・バギナリスバイオフィルムが関与している／検出され得る感染症に対して可能な別の／追加的な治療として考慮すべきである。
【００６３】
［比較例］
参考として２００８年のＳｗｉｄｓｉｎｓｋｉらの研究（Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  ２００８；  １９８：９７．ｅ１−９７．ｅ６）が挙げられる。この研究において、確認された細菌性腟症を有する１８名の女性（全員４つのＡｍｓｅｌ基準を満たし、ヌージェントスコア中央値は９である）が、７日間、１日に２回５００ｍｇのメトロニダゾールを用いて経口的に治療された。治療中の３日目又は治療後の７、１４、２１、２８および３５日目に追跡調査来院を実施し、追跡調査来院の間に膣生検を採った。この研究の著者らはＦＩＳＨ（蛍光インサイツハイブリダイゼーション法）技術により膣バイオフィルムを可視化している。
【００６４】
経口的にメトロニダゾールを用いた７日間の治療期間後において、患者は臨床的に治癒された（膣分泌物、悪臭、クルー細胞がなく、ヌージェントスコアは７を下回る）ように見えるものの、生検には、接着性バイオフィルム内にガードネレラ・バギナリス及びアトポビウム・バギナエの集積が見られ、時間経過と共に成長し、目立つようになった。
【００６５】
この比較例は細菌性腟症に関する標準的な治療が、存在する膣バイオフィルムを消すことに失敗したことを明らかに示した。
【００６６】
［実施例２］
ココアンホ酢酸ナトリウムによる静止期ガードネレラ・バギナリスバイオフィルムの阻害
【００６７】
Ａ）実験方法
【００６８】
異なる濃度のココアンホ酢酸ナトリウムが静止期にある十分に形成されたバイオフィルムをどのように損傷するかを決定するために、ＰＢＳ緩衝剤中の化合物を２０時間齢バイオフィルムに添加し、さらに２０時間の培養後にバイオフィルムのバイオマス及び生存能を決定することにより分析した。
【００６９】
Ｂ）静止期にあるガードネレラ・バギナリスバイオフィルムの阻害
図２は静止期にあるガードネレラ・バギナリスバイオフィルムの形成及び生存能の双方に対するココアンホ酢酸ナトリウムの影響／阻害を示す。
【００７０】
静止期にある細菌性バイオフィルムは抗生物質治療に対する耐性が高いことが知られている。
【００７１】
静止期にあるガードネレラ・バギナリスバイオフィルムの形成及び生存能を阻害する能力についてもココアンホ酢酸ナトリウムを試験した。驚くべきことに、１ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの濃度のココアンホ酢酸ナトリウムの添加は、バイオフィルムの生存能を約７０％低下させ、さらにバイオフィルム形成において４４〜６５％の減少を達成した。
【００７２】
これらの知見は、静止期にあるガードネレラ・バギナリスバイオフィルムに対するココアンホ酢酸ナトリウムの添加が、静止期にあるＧ・バギナリスバイオフィルムの細胞生存能及び細胞質量を減少させるために、驚くべきほどに優れた方法であることを示す。
【００７３】
［実施例３］
別の両性界面活性剤によるガードネレラ・バギナリスバイオフィルムの阻害
【００７４】
試験される物質、即ちココアミドプロピルヒドロキシスルタイン、ココアンホ二酢酸二ナトリウム、ココアンホプロピオン酸ナトリウム及びラウロアンホ酢酸ナトリウムを新しい培地に溶解し、成熟したＧ・バギナリスバイオフィルムに添加した（ｔ２０ｍ、実施例１参照）。さらに２０時間の温置後、バイオフィルム生存能を上記の通り、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ  ｓｔａｉｎｉｎｇにより決定した。
【００７５】
使用した化合物は幾つかの濃度で添加されたが、図３には化合物当たり２つの異なる濃度のみを示した。
【００７６】
驚くべきことに、添加されたこれらの両性界面活性剤もまた、十分に発達しなお成長中のバイオフィルムにおいて、バイオフィルム形成及び細胞生存能を阻害することが見出された。特にココアミドプロピルヒドロキシスルタイン及びココアンホプロピオン酸ナトリウムは、低濃度（それぞれ、０．１４
ｍｇ／ｍＬ及び０．１６ ｍｇ／ｍＬ）においても９０％まで、バイオフィルム生存能を阻害することができるので、優れた候補である。
【００７７】
与えられたすべての実施例をまとめると、ココアンホ酢酸ナトリウム、ココアミドプロピルヒドロキシスルホベタイン、ココアンホ二酢酸二ナトリウム、ココアンホプロピオン酸ナトリウム及びラウロアンホ酢酸ナトリウムのような両性界面活性剤が、細胞質量を減少させることができ、および十分に発達しなお成長中のガードネレラ・バギナリスバイオフィルムの生存能を阻害することができるという、本発明の驚くべき知見が示される。別の研究（比較例参照）は、１日２回経口投与された５００ｍｇのメトロニダゾールが、ガードネレラ・バギナリスバイオフィルムを完全には消さなかったことを例示している。従って、ココアンホ酢酸ナトリウム、ココアミドプロピルヒドロキシスルタイン、ココアンホ二酢酸二ナトリウム、ココアンホプロピオン酸ナトリウム及びラウロアンホ酢酸ナトリウムなどの両性界面活性剤は膣バイオフィルムに起因する再発性の膣感染症の治療に関する有力な物質である。
【００７８】
実施例１から３は明らかに、本発明による両性界面活性剤の添加後の、成長及び静止期ガードネレラバイオフィルムの予想外の阻害を示す。
【００７９】
本発明による組成物／処方物に関する例：
軟膏：
ココアンホ酢酸ナトリウム（３０％）          ５．０ｇ
乳酸（９０％）                              ０．５ｇ
マクロゴール３００                        ４５．０ｇ
マクロゴール１５００                      ４９．５ｇ
坐剤／Ｏｖｕｌａ：
ココアンホ酢酸ナトリウム（３０％）          ０．１ｇ
乳酸（９０％）                              ０．０１ｇ
マクロゴール１５００                        ２．０ｇ
マクロゴール１０００                        ０．７ｇ
クリーム：
ココアンホ酢酸ナトリウム（３０％）          ５．０ｇ
乳酸（９０％）                              ０．５ｇ
セトステアリルアルコール                    ７．０ｇ
マクロゴール６セトステアリルエーテル        １．５ｇ
マクロゴール２５セトステアリルエーテル      １．５ｇ
液体パラフィン                            １２．０ｇ
パラベン                                    ０．２ｇ
プロピレングリコール                        ８．０ｇ
水                                        ６４．３ｇ
ジェル：
ココアンホ酢酸ナトリウム（３０％）          ５．０ｇ
乳酸（９０％）                              ０．５ｇ
フェノキシエタノール                        １．０ｇ
プロピレングリコール                        ３．０ｇ
メチルヒドロキシプロピルセルロース          ２．０ｇ
水                                        ８８．５ｇ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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