(57)【要約】本発明は、タンパク質キナーゼ阻害剤の使用に関し、より特定すると、眼乾燥症候群を処置するための、タンパク質キナーゼであるｃ−Ｊｕｎアミノ末端キナーゼの阻害剤、ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド、キメラペプチド、またはこれらをコードする核酸のほか、これらを含有する医薬組成物の使用に関する。一実施形態において、眼乾燥症候群を処置するための医薬組成物を調製するための、１５０アミノ酸未満の長さを含むＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの使用が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼乾燥症候群を処置するための医薬組成物を調製するための、１５０アミノ酸未満の長さを含むＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項２】
前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、５〜１５０アミノ酸残基の範囲、より好ましくは１０〜１００アミノ酸残基の範囲、なおより好ましくは１０〜７５アミノ酸残基の範囲を含み、最も好ましくは１０〜５０アミノ酸残基の範囲を含む、請求項１に記載のＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項３】
前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）に結合する、請求項１または２のいずれかに記載のＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項４】
前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、ＪＮＫ発現細胞内に存在する場合に、前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、少なくとも１つのＪＮＫ標的化転写因子の活性化を阻害する、請求項１から３のいずれかに記載のＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項５】
前記ＪＮＫ標的化転写因子が、ｃ−Ｊｕｎ、ＡＴＦ２、およびＥｌｋ１からなる群より選択される、請求項１から４のいずれかに記載のＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項６】
前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、ＪＮＫ発現細胞内に存在する場合に、前記ペプチドが、ＪＮＫの効果を変化させる、請求項１から５のいずれかに記載のＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項７】
前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはこれら両方の組合せからなり、好ましくは、少なくとも１つなおまたは２つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸、好ましくは、少なくとも３つ、４つ、または５つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸、より好ましくは、少なくとも６つ、７つ、８つ、または９つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含み、なおより好ましくは、少なくとも１０もしくはそれより多いＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含むことが好ましく、前記Ｄ−アミノ酸および／または前記Ｌ−アミノ酸を、前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド内に、ブロック様の形で、非ブロック様の形で、または交互になった形で配置しうる、請求項１から６のいずれかに記載のＪＮＫ阻害剤配列の使用。
【請求項８】
前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、または配列番号１０５に従う配列のうちのいずれかにより規定またはコードされる、ヒトＩＢ１（ポリ）ペプチドまたはラットＩＢ１（ポリ）ペプチドの断片、改変体、またはこのような断片の改変体を含む、請求項１から７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
前記阻害剤の配列が、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う少なくとも１つのアミノ酸配列、またはその断片、誘導体、もしくは改変体を含むか、またはこれらからなる、請求項１から８のいずれかに記載のＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項１０】
眼乾燥症候群を処置するための医薬組成物を調製するための、共有結合により連結される、少なくとも１つの第１のドメインおよび少なくとも１つの第２のドメインを含む、キメラ（ポリ）ペプチドの使用であって、前記第１のドメインが、トラフィキング（ポリ）ペプチドを含み、前記第２のドメインが、請求項１から９のいずれかに記載のＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドを含む、使用。
【請求項１１】
前記キメラ（ポリ）ペプチドが、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはこれら両方の組合せからなり、好ましくは、少なくとも１つなおまたは２つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸、好ましくは、少なくとも３つ、４つ、または５つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸、より好ましくは、少なくとも６つ、７つ、８つ、または９つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含み、なおより好ましくは、少なくとも１０もしくはそれより多いＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含むことが好ましく、前記Ｄ−アミノ酸および／または前記Ｌ−アミノ酸を、前記キメラペプチド内に、ブロック様の形で、非ブロック様の形で、または交互になった形で配置しうる、請求項１０に記載のキメラ（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項１２】
前記トラフィキング（ポリ）ペプチドが、ヒト免疫不全ウイルスＴＡＴポリペプチドのアミノ酸配列を含む、請求項１０または１１に記載のキメラ（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項１３】
前記トラフィキング配列が、配列番号５、６、７、８、２１、または２２のアミノ酸配列からなるか、またはこれらを含む、請求項１０から１２のいずれかに記載のキメラ（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項１４】
前記トラフィキング（ポリ）ペプチドが、前記ペプチドの細胞への取込みを増進する、請求項１０から１３のいずれかに記載のキメラ（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項１５】
前記トラフィキング（ポリ）ペプチドが、前記ペプチドの核局在化を方向付ける、請求項１０から１４のいずれかに記載のキメラ（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項１６】
前記キメラ（ポリ）ペプチドが、配列番号９〜１２および２３〜３２のいずれかのアミノ酸配列、またはその断片もしくは改変体からなるか、またはこれらを含む、請求項１０から１５のいずれかに記載のキメラ（ポリ）ペプチドの使用。
【請求項１７】
前記キメラ（ポリ）ペプチドが、配列番号９または１１のアミノ酸配列からなるか、またはこれらを含む、請求項１０から１５のいずれかに記載のキメラペプチドの使用。
【請求項１８】
眼乾燥症候群を処置するための医薬組成物を調製するための、請求項１から９のいずれかに記載のＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド、または請求項１０から１７のいずれかに記載のキメラ（ポリ）ペプチドをコードする単離核酸の使用。
【請求項１９】
眼乾燥症候群を処置するための医薬組成物を調製するための、請求項１８に記載の核酸を含むベクターの使用。
【請求項２０】
眼乾燥症候群を処置するための医薬組成物を調製するための、請求項１９に記載のベクターを含む細胞の使用。
【請求項２１】
前記医薬組成物を、静脈内経路、筋内経路、皮下経路、皮内経路、経皮経路を含めた非経口経路、経口経路、直腸経路を含めた腸内経路、経鼻経路、鼻腔内経路を含めた外用経路、表皮送達またはパッチ送達を含めた他の経路、ならびに眼への局所投与、特に、硝子体内投与、結膜下投与、および／または滴注からなる群より選択される投与経路により投与する、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドおよび／または前記キメラ（ポリ）ペプチドの用量（体重１ｋｇ当たりの）が、最大で１０ｍｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは最大で１ｍｍｏｌ／ｋｇ、より好ましくは最大で１００μｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは最大で１０μｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは最大で１μｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは最大で１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、最も好ましくは最大で５０ｎｍｏｌ／ｋｇの範囲内にある、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドおよび／または前記キメラ（ポリ）ペプチドの用量が、約１ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約１ｍｍｏｌ／ｋｇ、約１０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約０．１ｍｍｏｌ／ｋｇ、約１０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約０．０１ｍｍｏｌ／ｋｇ、約５０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約１μｍｏｌ／ｋｇ、約１００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約５００ｎｍｏｌ／ｋｇ、約２００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約３００ｎｍｏｌ／ｋｇ、約３００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、約５００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、約７５０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約３０ｎｍｏｌ／ｋｇ、約２５０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約５ｎｍｏｌ／ｋｇ、約１ｎｍｏｌ／ｋｇ〜約１０ｎｍｏｌ／ｋｇ、または前記値のうちのいずれか２つの組合せの範囲内にある、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
前記ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、配列番号１１の配列からなり、滴注により投与されることが好ましい、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質キナーゼ阻害剤の使用に関し、より特定すると、眼乾燥症候群を処置するための、タンパク質キナーゼであるｃ−Ｊｕｎアミノ末端キナーゼの阻害剤、ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド、キメラペプチド、またはこれらをコードする核酸のほか、これらを含有する医薬組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
乾燥角膜炎、眼球乾燥症、乾性角結膜炎（ＫＣＳ）、または角膜乾燥症ともまた呼ばれる眼乾燥症候群（ＤＥＳ）は、眼の乾燥により引き起こされる眼疾患であり、眼の乾燥は、涙液産生の減少または涙液層蒸発の増大により引き起こされる。眼乾燥症候群の典型的な症状は、眼が乾燥し、ヒリヒリ、ザラザラ、ゴロゴロする刺激感である。眼乾燥症候群は、眼表面の炎症と関連することが多い。眼乾燥症候群が処置されないまま放置されるか、または重度化すると、眼損傷を引き起こしうる合併症がもたらされる可能性があり、その結果として視覚障害がもたらされる場合もあり、なおまたは失明がもたらされる場合もある。眼乾燥症候群が処置されないと、特に、眼上皮における病理学的症例である、扁平上皮化生、杯細胞の喪失、角膜表面の肥厚、角膜浸食、点状角膜症、上皮欠損、角膜の潰瘍化、角膜における血管新生、角膜の瘢痕化、角膜の薄層化がもたらされる場合があり、なお、角膜穿孔がもたらされる場合もある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、本発明の目的は、眼乾燥症候群および／または関連する病理学的効果、症状などの処置を可能とする医薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
この目的は、対象における眼乾燥症候群を処置するための医薬組成物を調製するための、１５０アミノ酸未満の長さを含むＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドを用いることにより達せられる。
【０００５】
本発明者らは驚くべきことに、ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、対象における眼乾燥症候群を処置するのに特に適することを見出した。当技術分野では、ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが一般に公知であるが、対象における眼乾燥症候群を処置するのに特に適することは明らかなことでもなく、先行技術により示唆されることでもなかった。
【０００６】
本発明の文脈では、ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドが、ヒトＩＢ１配列またはラットＩＢ１配列、好ましくは配列番号１０２（ラットに由来するＩＢ１  ｃＤＮＡ配列および予測されるそのアミノ酸配列を表示する）、配列番号１０３（ｒＩＢ１遺伝子スプライスドナーのエクソン−イントロン境界部分によりコードされる、ラットに由来するＩＢ１タンパク質配列を表示する）、配列番号１０４（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに由来するＩＢ１タンパク質配列を表示する）、または配列番号１０５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに由来するＩＢ１  ｃＤＮＡ配列を表示する）に従う配列のうちのいずれかにより規定またはコードされるアミノ酸配列、より好ましくは配列番号１０４（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに由来するＩＢ１タンパク質配列を表示する）、もしくは配列番号１０５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに由来するＩＢ１  ｃＤＮＡ配列を表示する）、またはその任意の断片もしくは改変体に従う配列のうちのいずれかにより規定またはコードされるアミノ酸配列に由来しうることが典型的でありうる。言い換えれば、ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、ヒトＩＢ１配列またはラットＩＢ１配列の断片、改変体、またはこのような断片の改変体を含む。ヒトＩＢ配列またはラットＩＢ配列は、それぞれ、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、または配列番号１０５に従う配列により規定またはコードされる。
【０００７】
本明細書で用いられるこのようなＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、１５０アミノ酸残基未満の全長、好ましくは５〜１５０アミノ酸残基の範囲、より好ましくは１０〜１００アミノ酸残基の範囲、なおより好ましくは１０〜７５アミノ酸残基の範囲を含み、最も好ましくは１０〜５０アミノ酸残基の範囲、例えば、１０〜３０、１０〜２０、または１０〜１５アミノ酸残基を含むことが好ましい。
【０００８】
このようなＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドおよび上記の範囲は、上記で言及された配列のうちのいずれか、なおより好ましくは配列番号１０４に従い規定されるアミノ酸配列または配列番号１０５によりコードされるアミノ酸配列、なおより好ましくは配列番号１０５のヌクレオチド４２０と９８０との間の領域内、または配列番号１０４のアミノ酸１０５と２９１との間の領域内から選択することができ、最も好ましくは配列番号１０５のヌクレオチド５６１と６４７との間の領域内、または配列番号１０４のアミノ酸１５２と１８０との間の領域内から選択しうることがより好ましい。
【０００９】
特定の実施形態によれば、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、ＪＮＫに結合し、かつ／または少なくとも１つのＪＮＫ活性化型転写因子、例えば、ｃ−ＪｕｎもしくはＡＴＦ２（例えば、それぞれ、配列番号１５および１６を参照されたい）またはＥｌｋ１の活性化を阻害することが典型的である。
【００１０】
同様に、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００のうちのいずれか１つに従う少なくとも１つのアミノ酸配列、またはそれらの断片、誘導体、もしくは改変体を含むか、またはこれらからなることが好ましい。本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従うアミノ酸配列、またはそれらの改変体、断片、もしくは誘導体の１つ、２つ、３つ、４つ、なおまたはこれを超えるコピーを含有しうることがより好ましい。複数のコピーで存在する場合、本明細書で用いられる、これらの配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従うアミノ酸配列、またはそれらの改変体、断片、もしくは誘導体は、任意のリンカー配列を伴わずに、互いと直接連結することもでき、１〜１０のアミノ酸、好ましくは１つ〜５つのアミノ酸を含むリンカー配列を介して連結することもできる。リンカー配列を形成するアミノ酸は、アミノ酸残基としてのグリシンまたはプロリンから選択されることが好ましい。本明細書で用いられる、これらの配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従うアミノ酸配列、またはそれらの断片、改変体、もしくは誘導体は、２つ、３つ以上のプロリン残基のヒンジにより互いに隔てうることがより好ましい。
【００１１】
本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはこれら両方の組合せからなりうる。本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、少なくとも１つなおまたは２つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸、好ましくは、少なくとも３つ、４つ、または５つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸、より好ましくは、少なくとも６つ、７つ、８つ、または９つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含み、なおより好ましくは、少なくとも１０もしくはそれより多いＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含み、Ｄ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤配列内に、ブロック様の形で、非ブロック様の形で、または交互になった形で配置しうることが好ましい。
【００１２】
好ましい一実施形態によれば、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、もっぱらＬ−アミノ酸からなりうる。このとき、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、配列番号１または３に従う少なくとも１つの「天然ＪＮＫ阻害剤配列」を含むか、またはこれからなる。この文脈では、「天然」または「天然ＪＮＫ阻害剤配列（複数可）」という用語が、本明細書で用いられる、配列番号１または３のうちのいずれかに従う、非改変ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド配列であって、完全にＬ−アミノ酸からなる配列を指す。
【００１３】
したがって、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、少なくとも１つの（天然）アミノ酸配列であるＮＨ２−Ｘｎｂ−ＲＰＴＴＬＸＬＸＸＸＸＸＸＸＱＤ−Ｘｎａ−Ｘｎｂ−ＣＯＯＨ（Ｌ−ＩＢ  ｇｅｎｅｒｉｃ（ｓ））［配列番号３］および／またはＩＢ１のＪＮＫ結合ドメイン（ＪＢＤ）であるＸＲＰＴＴＬＸＬＸＸＸＸＸＸＸＱＤＳ／ＴＸ（Ｌ−ＩＢ（ｇｅｎｅｒｉｃ））［配列番号１９］を含みうるか、またはこれらからなりうる。この文脈では、各Ｘが、好ましくは任意の（天然）アミノ酸残基から選択されるアミノ酸残基を表すことが典型的である。Ｘｎａ［式中、ｎ（Ｘの反復の回数）は、０または１である］は、好ましくはセリンまたはトレオニンを除く任意のアミノ酸残基から選択される１つのアミノ酸残基を表すことが典型的である。さらに、各Ｘｎｂ［式中、この位置におけるセリンまたはトレオニンを回避するためには、Ｘｎａのｎ（Ｘの反復の回数）が０である場合に、直接隣接するＸｎｂは、そのＮ末端にセリンまたはトレオニンを含まないことが好ましいと仮定すると、ｎ（Ｘの反復の回数）は、０〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜３０以上である］は、任意のアミノ酸残基から個別に選択することができる。Ｘｎｂは、配列番号１または３に由来する連続的なペプチド残基の連なりを表すことが好ましい。ＸｎａおよびＸｎｂは、Ｄアミノ酸を表す場合もあり、Ｌアミノ酸を表す場合もある。加えて、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、ＩＢ１のＪＮＫ結合ドメインであるＤＴＹＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤＴ（Ｌ−ＩＢ１）［配列番号１７］を含む群より選択される少なくとも１つの（天然）アミノ酸配列を含みうるか、またはこれからなりうる。本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、少なくとも１つの（天然）アミノ酸配列であるＮＨ２−ＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ−ＣＯＯＨ（Ｌ−ＩＢ１（ｓ））［配列番号１］をさらに含みうるか、またはこれからなりうることがより好ましい。さらに、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、ＩＢ１のＪＮＫ結合ドメインであるＬ−ＩＢ１（ｓ１）（ＮＨ２−ＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ−ＣＯＯＨ、配列番号３３）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２）（ＮＨ２−ＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱ−ＣＯＯＨ、配列番号３４）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ３）（ＮＨ２−ＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳ−ＣＯＯＨ、配列番号３５）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ４）（ＮＨ２−ＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号３６）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ５）（ＮＨ２−ＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰ−ＣＯＯＨ、配列番号３７）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ６）（ＮＨ２−ＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶ−ＣＯＯＨ、配列番号３８）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ７）（ＮＨ２−ＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱ−ＣＯＯＨ、配列番号３９）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ８）（ＮＨ２−ＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ−ＣＯＯＨ、配列番号４０）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ９）（ＮＨ２−ＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱ−ＣＯＯＨ、配列番号４１）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ１０）（ＮＨ２−ＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳ−ＣＯＯＨ、配列番号４２）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ１１）（ＮＨ２−ＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号４３）；Ｌ−���Ｂ１（ｓ１２）（ＮＨ２−ＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰ−ＣＯＯＨ、配列番号４４）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ１３）（ＮＨ２−ＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶ−ＣＯＯＨ、配列番号４５）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ１４）（ＮＨ２−ＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱ−ＣＯＯＨ、配列番号４６）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ１５）（ＮＨ２−ＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰ−ＣＯＯＨ、配列番号４７）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ１６）（ＮＨ２−ＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ−ＣＯＯＨ、配列番号４８）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ１７）（ＮＨ２−ＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱ−ＣＯＯＨ、配列番号４９）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ１８）（ＮＨ２−ＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳ−ＣＯＯＨ、配列番号５０）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ１９）（ＮＨ２−ＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号５１）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２０）（ＮＨ２−ＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰ−ＣＯＯＨ、配列番号５２）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２１）（ＮＨ２−ＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶ−ＣＯＯＨ、配列番号５３）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２２）（ＮＨ２−ＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱ−ＣＯＯＨ、配列番号５４）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２３）（ＮＨ２−ＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰ−ＣＯＯＨ、配列番号５５）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２４）（ＮＨ２−ＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦ−ＣＯＯＨ、配列番号５６）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２５）（ＮＨ２−ＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ−ＣＯＯＨ、配列番号５７）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２６）（ＮＨ２−ＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱ−ＣＯＯＨ、配列番号５８）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２７）（ＮＨ２−ＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳ−ＣＯＯＨ、配列番号５９）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２８）（ＮＨ２−ＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号６０）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ２９）（ＮＨ２−ＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰ−ＣＯＯＨ、配列番号６１）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ３０）（ＮＨ２−ＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶ−ＣＯＯＨ、配列番号６２）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ３１）（ＮＨ２−ＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱ−ＣＯＯＨ、配列番号６３）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ３２）（ＮＨ２−ＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰ−ＣＯＯＨ、配列番号６４）；Ｌ−ＩＢ１（ｓ３３）（ＮＨ２−ＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦ−ＣＯＯＨ、配列番号６５）；およびＬ−ＩＢ１（ｓ３４）（ＮＨ２−ＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬ−ＣＯＯＨ、配列番号６６）を含む群より選択される少なくとも１つの（天然）アミノ酸配列を含みうるか、またはこれからなりうる。
【００１４】
加えて、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、ＩＢ１の（長い）ＪＮＫ結合ドメイン（ＪＢＤ）であるＰＧＴＧＣＧＤＴＹＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤＴ（ＩＢ１−ｌｏｎｇ）［配列番号１３］、ＩＢ２の（長い）ＪＮＫ結合ドメインであるＩＰＳＰＳＶＥＥＰＨＫＨＲＰＴＴＬＲＬＴＴＬＧＡＱＤＳ（ＩＢ２−ｌｏｎｇ）［配列番号１４］、ｃ−ＪｕｎのＪＮＫ結合ドメインであるＧＡＹＧＹＳＮＰＫＩＬＫＱＳＭＴＬＮＬＡＤＰＶＧＮＬＫＰＨ（ｃ−Ｊｕｎ）［配列番号１５］、ＡＴＦ２のＪＮＫ結合ドメインであるＴＮＥＤＨＬＡＶＨＫＨＫＨＥＭＴＬＫＦＧＰＡＲＮＤＳＶＩＶ（ＡＴＦ２）［配列番号１６］（例えば、図１Ａ〜１Ｃを参照されたい）を含む群より選択される少なくとも１つの（天然）アミノ酸配列を含みうるか、またはこれからなりうる。この文脈では、アライメントにより、部分的に保存された８つのアミノ酸配列（例えば、図１Ａを参照されたい）が明らかとなり、さらにＩＢ１のＪＢＤとＩＢ２のＪＢＤとの比較により、２つの配列の間で高度に保存的な７つのアミノ酸および３つのアミノ酸による２つのブロックが明らかとなった。
【００１５】
別の好ましい実施形態によれば、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、上記で規定したＤ−アミノ酸から部分的になる場合もあり、上記で規定したＤ−アミノ酸からもっぱらなる場合もある。Ｄ−アミノ酸からなるこれらのＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、上記の（天然）ＪＮＫ阻害剤配列の、非天然Ｄレトロインベルソ配列であることがより好ましい。「レトロインベルソ（ポリ）ペプチド」という用語は、配列方向が逆方向とされ、各アミノ酸残基のキラル性が反転された直鎖状ペプチド配列の異性体を指す（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻、７４４〜７４６頁（１９９４年）；Ｂｒａｄｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻、６９２〜６９３頁（１９９４年）を参照されたい）。Ｄ−光学異性体と逆合成とを組み合わせることの利点は、各アルファ炭素における側鎖基の位置は保持しながら、各アミド結合におけるカルボニル基の位置とアミノ基の位置とを交換することである。とりわけ別段に言明しない限りにおいて、本発明に従い用いられる所与の任意のＬ−アミノ酸配列またはペプチドは、対応する天然Ｌ−アミノ酸配列または天然Ｌ−アミノ酸ペプチドのリバース配列またはリバースペプチドを合成することにより、Ｄレトロインベルソ配列またはＤレトロインベルソペプチドへと転換しうることが仮定される。
【００１６】
本明細書で用いられる、上記で規定したＤレトロインベルソ（ポリ）ペプチドは、多様で有用な特性を有する。例えば、本明細書で用いられるＤレトロインベルソ（ポリ）ペプチドは、本明細書で用いられるＬ−アミノ酸配列と同程度に効率的に細胞に入り込む一方で、本明細書で用いられるＤレトロインベルソ配列は、対応するＬ−アミノ酸配列より安定的である。
【００１７】
したがって、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、アミノ酸配列であるＮＨ２−Ｘｎｂ−Ｘｎａ−ＤＱＸＸＸＸＸＸＸＬＸＬＴＴＰＲ−Ｘｎｂ−ＣＯＯＨ（Ｄ−ＩＢ１  ｇｅｎｅｒｉｃ（ｓ））［配列番号４］および／またはＸＳ／ＴＤＱＸＸＸＸＸＸＸＬＸＬＴＴＰＲＸ（Ｄ−ＩＢ（ｇｅｎｅｒｉｃ））［配列番号２０］に従う、少なくとも１つのＤレトロインベルソ配列を含みうるか、またはこれからなりうる。この文脈で用いられるＸ、Ｘｎａ、およびＸｎｂは、上記で規定した通りである（好ましくは、Ｄアミノ酸を表す）［式中、Ｘｎｂは、配列番号２または４に由来する残基の連続的な連なりを表すことが好ましい。Ｘｎａのｎが０である場合、直接隣接するＸｎｂは、そのＣ末端にセリンまたはトレオニンを含まないことが好ましい］。加えて、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、ＩＢ１のＪＮＫ結合ドメイン（ＪＢＤ）であるＴＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲＹＴＤ（Ｄ−ＩＢ１）［配列番号１８］を含むアミノ酸に従う、少なくとも１つのＤレトロインベルソ配列も含みうるか、またはこれからなりうる。本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、アミノ酸配列であるＮＨ２−ＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲ−ＣＯＯＨ（Ｄ−ＩＢ１（ｓ））［配列番号２］に従う、少なくとも１つのＤレトロインベルソ配列を含みうるか、またはこれからなりうることがより好ましい。さらに、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、ＩＢ１のＪＮＫ結合ドメイン（ＪＢＤ）であるＤ−ＩＢ１（ｓ１）（ＮＨ２−ＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号６７）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２）（ＮＨ２−ＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰ−ＣＯＯＨ、配列番号６８）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ３）（ＮＨ２−ＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫ−ＣＯＯＨ、配列番号６９）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ４）（ＮＨ２−ＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号７０）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ５）（ＮＨ２−ＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰ−ＣＯＯＨ、配列番号７１）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ６）（ＮＨ２−ＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴ−ＣＯＯＨ、配列番号７２）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ７）（ＮＨ２−ＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴ−ＣＯＯＨ、配列番号７３）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ８）（ＮＨ２−ＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号７４）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ９）（ＮＨ２−ＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰ−ＣＯＯＨ、配列番号７５）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ１０）（ＮＨ２−ＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫ−ＣＯＯＨ、配列番号７６）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ１１）（ＮＨ２−ＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号７７）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ１２）（ＮＨ２−ＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰ−ＣＯＯＨ、配列番号７８）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ１３）（ＮＨ２−ＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴ−ＣＯＯＨ、配列番号７９）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ１４）（ＮＨ２−ＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴ−ＣＯＯＨ、配列番号８０）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ１５）（ＮＨ２−ＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬ−ＣＯＯＨ、配列番号８１）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ１６）（ＮＨ２−ＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号８２）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ１７）（ＮＨ２−ＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰ−ＣＯＯＨ、配列番号８３）；Ｄ−ＩＢ１���ｓ１８）（ＮＨ２−ＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫ−ＣＯＯＨ、配列番号８４）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ１９）（ＮＨ２−ＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号８５）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２０）（ＮＨ２−ＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰ−ＣＯＯＨ、配列番号８６）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２１）（ＮＨ２−ＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴ−ＣＯＯＨ、配列番号８７）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２２）（ＮＨ２−ＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴ−ＣＯＯＨ、配列番号８８）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２３）（ＮＨ２−ＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬ−ＣＯＯＨ、配列番号８９）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２４）（ＮＨ２−ＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮ−ＣＯＯＨ、配列番号９０）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２５）（ＮＨ２−ＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬ−ＣＯＯＨ、配列番号９１）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２６）（ＮＨ２−ＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮ−ＣＯＯＨ、配列番号９２）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２７）（ＮＨ２−ＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬ−ＣＯＯＨ、配列番号９３）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２８）（ＮＨ２−ＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴ−ＣＯＯＨ、配列番号９４）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ２９）（ＮＨ２−ＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴ−ＣＯＯＨ、配列番号９５）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ３０）（ＮＨ２−ＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰ−ＣＯＯＨ、配列番号９６）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ３１）（ＮＨ２−ＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号９７）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ３２）（ＮＨ２−ＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫ−ＣＯＯＨ、配列番号９８）；Ｄ−ＩＢ１（ｓ３３）（ＮＨ２−ＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰ−ＣＯＯＨ、配列番号９９）；およびＤ−ＩＢ１（ｓ３４）（ＮＨ２−ＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲ−ＣＯＯＨ、配列番号１００）を含むアミノ酸配列に従う、少なくとも１つのＤレトロインベルソ配列を含みうるか、またはこれからなりうる。
【００１８】
本明細書で用いられる、上記で開示したＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドを、表１（配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００）に示す。表は、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド名／配列名のほか、それらの配列識別子番号、それらの長さ、およびアミノ酸配列も示す。さらに、表１は、配列のほか、それらの一般式、例えば、配列番号１、２、５、６、９、および１１、ならびに配列番号３、４、７、８、１０、および１２のそれぞれの一般式も示す。表１は、キメラ配列である配列番号９〜１２および２３〜３２（下記を参照されたい）、Ｌ−ＩＢ１配列である配列番号３３〜６６、ならびにＤ−ＩＢ１配列である配列番号６７〜１００もさらに開示する。
【００１９】
【表１−１】
2015500213.tif 000002
【００２０】
【表１−２】
2015500213.tif 000003
【００２１】
【表１−３】
2015500213.tif 000004
【００２２】
【表１−４】
2015500213.tif 000005
【００２３】
当業者は、もっぱらＤ−アミノ酸からなる、本明細書における所与の配列が、「Ｄ−名称」で識別されることを理解するであろう。例えば、配列番号１００の配列名／ペプチド名は、「Ｄ−ＩＢ１（ｓ３４）」である。所与のアミノ酸配列は、ＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲである。しかし、本明細書では、全てのアミノ酸がＤ−アミノ酸である。
【００２４】
当業者はまた、「完全にＬ−アミノ酸からなる」、「もっぱらＤ−アミノ酸からなる」、「完全にＤ−アミノ酸からなる」、および／または「もっぱらＤ−アミノ酸からなる」などの用語が、グリシン残基の存在を除外する必要のない（しかし、これを除外する場合もある）配列を指すことも理解するであろう。グリシンは、非キラルの唯一のアミノ酸である。したがって、「完全にＬ−アミノ酸からなる」、「もっぱらＤ−アミノ酸からなる」、「完全にＤ−アミノ酸からなる」、および／または「もっぱらＤ−アミノ酸からなる」という用語が意図することは、可能ならば、Ｌ−アミノ酸またはＤ−アミノ酸のそれぞれを用いるということを明確にすることである。にもかかわらず、アミノ酸配列内の所与の位置においてグリシンの存在が必要であるかまたは好ましい場合は、グリシンをその位置に存在させておく場合もある。良い例は、Ｌ−ＴＡＴ（配列番号５）である。本明細書で用いられる前記配列は、非キラルのグリシン残基を含む「が」、もっぱらＬ−アミノ酸からなると考えられる。同様に、本明細書で用いられるＤ−ＴＡＴ（配列番号６）は、非キラルのグリシン残基を含む「が」、もっぱらＤ−アミノ酸からなると考えることができる。
【００２５】
別の好ましい実施形態によれば、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、上記で規定した、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う、天然または非天然のアミノ酸配列の少なくとも１つの改変体、断片、および／または誘導体を含むか、またはこれらからなる。これらの改変体、断片、および／または誘導体は、上記で開示した、本明細書で用いられる、天然または非天然のＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの生物学的活性、特に、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う、天然または非天然のアミノ酸配列の生物学的活性、すなわち、ＪＮＫに結合し、かつ／または少なくとも１つのＪＮＫ活性化型転写因子、例えば、ｃ−Ｊｕｎ、ＡＴＦ２、もしくはＥｌｋ１の活性化を阻害する活性を保持することが好ましい。機能性は、多様な試験、例えば、ペプチドのその標的分子に対する結合についての試験により調べることもでき、生物物理学的方法、例えば、分光法、コンピュータモデリング、構造解析などにより調べることもできる。特に、上記で規定したＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド、またはその改変体、断片、および／もしくは誘導体は、ペプチドの疎水性領域および親水性領域を同定するのに使用しうる親水性解析（例えば、ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ、１９８１年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、７８巻：３８２４〜３８２８頁を参照されたい）により解析し、これにより、結合実験などにおける実験操作のための基質、または抗体合成のための基質をデザインする一助とすることができる。また、二次構造解析を実施して、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド、またはその改変体、断片、および／もしくは誘導体の領域であって、特定の構造的モチーフを帯びる領域を同定することもできる（例えば、ＣｈｏｕおよびＦａｓｍａｎ、１９７４年、Ｂｉｏｃｈｅｍ、１３巻：２２２〜２２３頁を参照されたい）。操作、翻訳、二次構造の予測、親水性および疎水性のプロファイル、オープンリーディングフレームの予測およびプロッティング、ならびに配列相同性の決定は、当技術分野で利用可能なコンピュータソフトウェアプログラムを用いて達成することができる。構造解析の他の方法には、例えば、Ｘ線結晶構造解析（例えば、Ｅｎｇｓｔｒｏｍ、１９７４年、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｅｘｐ  Ｂｉｏｌ、１１巻：７〜１３頁を参照されたい）、質量分析、およびガスクロマトグラフィー（例えば、ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ、１９９７年、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照されたい）が含まれるが、また、コンピュータモデリング（例えば、ＦｌｅｔｔｅｒｉｃｋおよびＺｏｌｌｅｒ編、１９８６年、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹを参照されたい）も使用することができる。
【００２６】
したがって、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う（天然または非天然の）アミノ酸配列の少なくとも１つの改変体を含みうるか、またはこれからなりうる。本発明の文脈では、「配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う（天然または非天然の）アミノ酸配列の改変体」が、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う配列のうちのいずれかに由来する配列であることが好ましく、改変体が、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従うアミノ酸配列のアミノ酸変化を含む。このような変化は、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従うアミノ酸の、１〜２０カ所、好ましくは１〜１０カ所の置換、付加、および／または欠失を含み、より好ましくは１〜５カ所の置換、付加、および／または欠失を含むことが典型的であり、改変体は、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う配列のうちのいずれかとの、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、なおまたは少なくとも約９９％の配列同一性を呈示する。
【００２７】
上記で規定した、本明細書で用いられる、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う（天然または非天然の）アミノ酸配列の改変体が、特定のアミノ酸を置換することにより得られる場合、このような置換は、保存的アミノ酸置換を含むことが好ましい。保存的アミノ酸置換では、群のメンバー間の置換が分子の生物学的活性を温存するように、十分に類似した物理化学的特性を有する同義語のアミノ酸残基を、群内に組み入れることができる（例えば、Ｇｒａｎｔｈａｍ，  Ｒ．（１９７４年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１８５巻、８６２〜８６４頁を参照されたい）。当業者にはまた、特に、挿入および／または欠失が少数のアミノ酸、例えば、２０未満のアミノ酸だけを伴い、好ましくは１０未満のアミノ酸だけを伴い、機能的活性にとってきわめて重要なアミノ酸を除去したり置きかえたりしない場合、それらの機能を変化させることなく、上記で規定した配列に、アミノ酸を挿入する場合もあり、かつ／または欠失させる場合もあることが明らかである。さらに、本明細書で用いられる改変体では、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドまたは本明細書でｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて用いられるキメラペプチドの不活化を回避するために、ホスホリラーゼ好ましくはキナーゼに結合可能なアミノ酸位置においてさらなるトレオニンをもたらす置換を回避するものとする。
【００２８】
同じ群へと分類され、保存的アミノ酸置換により交換可能であることが典型的な、同義語のアミノ酸残基は、表２で規定されることが好ましい。
【００２９】
【表２】
2015500213.tif 000006
【００３０】
本明細書で用いられる配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００の改変体の特定の形態は、本明細書で用いられる、配列番号１、１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う（天然または非天然の）アミノ酸配列の断片であって、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００と比較して、少なくとも１つの欠失により改変されていることが典型的な断片である。断片は、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００のうちのいずれかのうちの、これらの配列のうちのいずれかに由来するエピトープに対する特異的な認識を可能とするのに十分であることが典型的な長さである、少なくとも４つの連続アミノ酸を含むことが好ましい。断片は、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００のうちのいずれかの４〜１８の連続アミノ酸、４〜１５の連続アミノ酸を含むか、または、最も好ましくは４〜１０の連続アミノ酸を含むことがなおより好ましく、範囲の下限は、４つの連続アミノ酸、または５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、もしくは１０の連続アミノ酸でありうる。欠失させるアミノ酸は、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００の任意の位置で欠失させることができ、好ましくはＮ末端またはＣ末端で欠失させることができる。
【００３１】
さらに、上記で記載した、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う（天然または非天然の）アミノ酸配列の断片は、本明細書で用いられる配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う配列のうちのいずれかとの、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、なおまたは９９％の配列同一性を共有する配列としてとして規定することもできる。
【００３２】
本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド／配列は、上記で規定した、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う（天然または非天然の）アミノ酸配列の少なくとも１つの誘導体をさらに含みうるか、またはこれからなりうる。この文脈では、「配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う（天然または非天然の）アミノ酸配列の誘導体」が、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う配列のうちのいずれかに由来するアミノ酸配列であることが好ましく、誘導体は、少なくとも１つの修飾Ｌ−アミノ酸または修飾Ｄ−アミノ酸（非天然アミノ酸（複数可）を形成する）、好ましくは１〜２０の修飾Ｌ−アミノ酸または修飾Ｄ−アミノ酸、より好ましくは１〜１０の修飾Ｌ−アミノ酸または修飾Ｄ−アミノ酸を含み、なおより好ましくは１つ〜５つの修飾Ｌ−アミノ酸または修飾Ｄ−アミノ酸を含む。また、改変体または断片の誘導体も、本発明の範囲内に収まる。
【００３３】
この点における「修飾アミノ酸」は、例えば、多様な生物において異なるグリコシル化により改変された任意のアミノ酸の場合もあり、リン酸化により改変された任意のアミノ酸の場合もあり、特定のアミノ酸の標識化により改変された任意のアミノ酸の場合もある。標識化による改変の場合、このような標識は、
（ｉ）放射性標識、すなわち、放射性リン酸化、または硫黄、水素、炭素、窒素などを伴う放射性標識；
（ｉｉ）着色染料（例えば、ジゴキシゲニンなど）；
（ｉｉｉ）蛍光基（例えば、フルオレセインなど）；
（ｉｖ）化学発光基；
（ｖ）固相において固定化するための基  （例えば、Ｈｉｓタグ、ビオチン、ストレップタグ、フラッグタグ、抗体、抗原など）；および
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）の下で言及した標識のうちの２つ以上の標識の組合せ
を含む標識群より選択されることが典型的である。
【００３４】
上記の文脈では、本発明のクエリーアミノ酸配列に対して、少なくとも、例えば、９５％の「配列同一性を共有する」配列を有するアミノ酸配列が、対象アミノ酸配列に、クエリーアミノ酸配列の各１００アミノ酸当たり最大で５カ所のアミノ酸変化を組み入れうることを除き、対象アミノ酸の配列が、クエリー配列と同一であることを意味することを意図する。言い換えれば、クエリーアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一な配列を有するアミノ酸配列を得るには、対象配列内のアミノ酸残基のうちの最大で５％（１００残基のうちの５残基）を、挿入することもでき、別のアミノ酸で置換することもでき、欠失させることもできる。
【００３５】
正確な対応を伴わない配列でも、第１の配列の「同一性％」を、第２の配列に照らして決定することができる。一般に、配列の間の最大の相関をもたらすように、比較されるこれらの２つの配列を配列決定する。これは、一方または両方の配列に「ギャップ」を挿入して、アライメントの程度を増大させることを包含しうる。次いで、比較される配列の各々の全長にわたり同一性％を決定する（いわゆる、グローバルアライメント）こともでき（これは、同じであるかまたは類似した長さの配列に特に適する）、規定された短い長さにわたり、同一性％を決定する（いわゆる、ローカルアライメント）こともできる（これは、長さが等しくない配列により適する）。
【００３６】
当技術分野では、特に、本明細書で用いられる、２つ以上の配列の同一性および相同性を比較するための方法が周知である。したがって、例えば、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、ｖｅｒｓｉｏｎ  ９．１（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、１９８４年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１２巻、３８７〜３９５頁）において利用可能なプログラム、例えば、プログラムであるＢＥＳＴＦＩＴおよびＧＡＰを用いて、２つのポリヌクレオチドの間の同一性％、ならびに２つのポリペプチド配列の間の同一性％および相同性％を決定することができる。ＢＥＳＴＦＩＴでは、（ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１年）、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、１４７巻、１９５〜１９７頁）による「局所相同性」アルゴリズムが用いられ、２つの配列の間の最良で単一の類似性領域が見出される。当技術分野ではまた、配列の間の同一性および／または類似性を決定するための他のプログラム、例えば、インターネットのサイトであるｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖにおける、ＮＣＢＩのホームページを介してアクセス可能なＢＬＡＳＴファミリーのプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０年、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２１５巻、４０３〜４１０頁）、およびＦＡＳＴＡファミリーのプログラム（Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９０年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１８３巻、６３〜９８頁；ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．  Ｓ．  Ａ、８５巻、２４４４〜２４４８頁）も公知である。
【００３７】
本発明に従い用いられる、上記で規定したＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチド／配列は、当技術分野で周知の方法により、例えば、下記で論じられる化学合成または遺伝子操作法により、得るかまたは作製することができる。例えば、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤配列の一部であって、前記ＪＮＫ阻害剤配列の所望の領域を組み入れるか、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて所望の活性を媒介する配列の一部に対応するペプチドは、ペプチド合成器を用いることにより合成することができる。
【００３８】
本明細書で用いられる、上記で規定したＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、本明細書で用いられる、上記で規定したＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドを細胞へと効果的に輸送することを可能とするトラフィキング（ポリ）ペプチドにより、さらに修飾することもできる。このような修飾ＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、キメラ（ポリ）ペプチドとして提供され、用いられることが好ましい。
【００３９】
したがって、第２の態様によれば、本発明は、対象における眼乾燥症候群を処置するための医薬組成物を調製するための、少なくとも１つの第１のドメインおよび少なくとも１つの第２のドメインを組み入れたキメラ（ポリ）ペプチドの使用であって、キメラペプチドの第１のドメインが、トラフィキング配列を含む一方で、キメラ（ポリ）ペプチドの第２のドメインが、上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列、好ましくは、配列番号１〜４、１３〜２０、および３３〜１００に従う配列のうちのいずれかまたはそれらの誘導体もしくは断片によるＪＮＫ阻害剤配列を含む使用を提供する。
【００４０】
本発明に従い用いられるキメラ（ポリ）ペプチドは、少なくとも２５アミノ酸残基、例えば、２５〜２５０アミノ酸残基、より好ましくは２５〜２００アミノ酸残基、なおより好ましくは２５〜１５０アミノ酸残基、２５〜１００アミノ酸残基であり、最も好ましくは２５〜５０アミノ酸残基の長さを有することが典型的である。
【００４１】
第１のドメインとして、本明細書で用いられるキメラ（ポリ）ペプチドは、トラフィキング配列を含むことが好ましく、トラフィキング配列は、ペプチド（トラフィキング配列がその中に存在する）を細胞内の所望の輸送先へと方向付けるアミノ酸の任意の配列から選択されることが典型的である。したがって、本明細書で用いられるトラフィキング配列は、ペプチドを、細胞膜を越えて、例えば、細胞の外側から、細胞膜を介して、細胞質へと方向付けることが典型的である。代替的に、または加えて、トラフィキング配列は、例えば、２つの成分（例えば、細胞透過性のための成分および核内局在化のための成分）を組み合わせることにより、または、例えば、細胞膜輸送および標的化された輸送、例えば、核内輸送の特性を有する単一の成分により、ペプチドを細胞内の所望の地点、例えば、核、リボソーム、小胞体（ＥＲ）、リソソーム、またはペルオキシソームへと方向付けることも可能である。トラフィキング配列は、細胞質成分もしくは他の任意の成分、または細胞内コンパートメント（例えば、小胞体、ミトコンドリア、ゴルジ（ｇｌｏｏｍ）装置、リソソーム小胞）に結合することが可能な別の成分もさらに含みうる。したがって、例えば、第１のドメインのトラフィキング配列および第２のドメインのＪＮＫ阻害剤配列を、細胞質または他の任意の細胞のコンパートメントに局在化させることができる。これは、キメラペプチドが取り込まれたときの細胞における局在化を決定することを可能とする。
【００４２】
トラフィキング配列（本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに組み入れられる）は、５〜１５０アミノ酸残基の長さを有することが好ましく、より好ましくは５〜１００アミノ酸の長さを有し、最も好ましくは５〜５０アミノ酸、５〜３０アミノ酸、なおまたは５〜１５アミノ酸の長さを有する。
【００４３】
トラフィキング配列（本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに含有される）は、第１のドメインにおける連続的なアミノ酸配列の連なりとして生じうることがより好ましい。代替的に、第１のドメインにおけるトラフィキング配列を、２つ以上の断片へと分断する場合もあり、この場合、トラフィキング配列それ自体が上記で開示したその担体特性を保持するという条件で、これらの断片の全てをトラフィキング配列の全体に酷似させ、互いから１〜１０アミノ酸、好ましくは１〜５アミノ酸隔てさせることができる。トラフィキング配列の断片を隔てるこれらのアミノ酸は、例えば、トラフィキング配列と異なるアミノ酸配列から選択することができる。代替的に、第１のドメインは、複数の成分からなるトラフィキング配列を含有することが可能であり、各成分は、カーゴである第２のドメインのＪＮＫ阻害剤配列を、例えば、特定の細胞内コンパートメントへと輸送するためのその固有の機能を伴う。
【００４４】
上記で規定したトラフィキング配列は、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはこれら両方の組合せからなりうる。トラフィキング配列（本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに組み入れられる）は、少なくとも１つなおまたは２つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸、好ましくは、少なくとも３つ、４つ、または５つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸、より好ましくは、少なくとも６つ、７つ、８つ、または９つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含み、なおより好ましくは、少なくとも１０もしくはそれより多いＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含むことが可能であり、Ｄ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を、ＪＮＫトラフィキング配列内に、ブロック様の形で、非ブロック様の形で、または交互になった形で配置しうることが好ましい。
【００４５】
代替的な一実施形態によれば、本明細書で用いられるキメラ（ポリ）ペプチドのトラフィキング配列は、もっぱらＬ−アミノ酸からなりうる。本明細書で用いられるキメラペプチドのトラフィキング配列は、上記で規定した、少なくとも１つの「天然」トラフィキング配列を含むか、またはこれからなることがより好ましい。この文脈では、「天然」という用語は、完全にＬ−アミノ酸からなる、非改変トラフィキング配列を指す。
【００４６】
別の代替的な実施形態によれば、本明細書で用いられるキメラ（ポリ）ペプチドのトラフィキング配列は、もっぱらＤ−アミノ酸からなりうる。本明細書で用いられるキメラペプチドのトラフィキング配列は、上記で提示された配列のＤレトロインベルソペプチドを含みうることがより好ましい。
【００４７】
本明細書で用いられるキメラ（ポリ）ペプチドの第１のドメインのトラフィキング配列は、自然発生の供給源から得ることもでき、遺伝子操作技法または化学合成を用いることにより作製することもできる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．、Ｆｒｉｔｓｃｈ，  Ｅ．  Ｆ．、Ｍａｎｉａｔｉｓ，  Ｔ．（１９８９年）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照されたい）。
【００４８】
例えば、ＴＡＴタンパク質（例えば、米国特許第５，８０４，６０４号、および同第５，６７４，９８０号において記載され、これらの参考文献の各々は、参照により本明細書に組み込まれる）、ＶＰ２２（例えば、ＷＯ９７／０５２６５；ＥｌｌｉｏｔｔおよびＯ’Ｈａｒｅ、Ｃｅｌｌ、８８巻：２２３〜２３３頁（１９９７年）において記載されている）、非ウイルス性タンパク質（Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８９巻：１０６９１〜１０６９５頁（１９９２年））、アンテナペディア（例えば、アンテナペディアの担体配列）に由来するトラフィキング配列、または塩基性ペプチド、例えば、５〜１５アミノ酸、好ましくは１０〜１２アミノ酸の長さを有し、少なくとも８０％、より好ましくは８５％、なおもしくは９０％の、例えば、アルギニン、リシン、および／もしくはヒスチジンなどの塩基性アミノ酸を含むペプチドに由来するトラフィキング配列などの、例えば、天然タンパク質を含め、第１のドメインのトラフィキング配列のための供給源を使用することができる。本明細書ではさらに、トラフィキング配列として用いられる天然タンパク質のうちの１つの改変体、断片、および誘導体も開示される。改変体、断片、および誘導体に関しては、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤配列について上記に示した規定を参照する。これに応じて、改変体、断片のほか、誘導体については、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤配列について上記で示した通りに規定する。特に、トラフィキング配列の文脈では、改変体もしくは断片または誘導体を、上記で規定したトラフィキング配列として用いられる天然タンパク質のうちの１つと、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、なおまたは９９％の配列同一性を共有する配列として規定することができる。
【００４９】
本明細書で用いられるキメラ（ポリ）ペプチドの好ましい実施形態では、第１のドメインのトラフィキング配列が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）１  ＴＡＴタンパク質、特に、ＴＡＴタンパク質を構成する８６アミノ酸の一部または全部に由来する配列を含むか、またはこれからなる。
【００５０】
トラフィキング配列（本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに組み入れられる）には、全長ＴＡＴタンパク質の部分配列であって、機能的に有効なＴＡＴタンパク質の断片、すなわち、細胞への移入および取込みを媒介する領域を組み入れたＴＡＴペプチドを形成する部分配列を用いることができる。このような配列が、機能的に有効なＴＡＴタンパク質の断片であるのかどうかについては、公知の技法を用いて決定することができる（例えば、Ｆｒａｎｋｅｄら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８６巻：７３９７〜７４０１頁（１９８９年）を参照されたい）。したがって、本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメイン内のトラフィキング配列は、ＴＡＴタンパク質配列の機能的に有効な断片または部分であって、８６未満のアミノ酸を含み、細胞への取込みを呈示し、場合によって、細胞内の核への取込みを呈示する断片または部分に由来しうる。キメラペプチドの、細胞膜を越える透過を媒介する担体として用いられるＴＡＴの部分配列（断片）は、全長ＴＡＴの塩基性領域（アミノ酸４８〜５７または４９〜５７）を含むことを意図することがより好ましい。
【００５１】
より好ましい実施形態によれば、トラフィキング配列（本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに組み入れられる）は、ＴＡＴ残基４８〜５７または４９〜５７を含有するアミノ酸配列を含みうるか、またはこれからなることが可能であり、最も好ましくは、ＴＡＴ配列の一般式であるＮＨ２−Ｘｎｂ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−Ｘｎｂ−ＣＯＯＨ（Ｌ−ｇｅｎｅｒｉｃ−ＴＡＴ（ｓ））［配列番号７］および／またはＸＸＸＸＲＫＫＲＲＱ  ＲＲＲＸＸＸＸ（Ｌ−ｇｅｎｅｒｉｃ−ＴＡＴ）［配列番号２１］［式中、ＸまたはＸｎｂは、上記で規定されている］を含みうるか、またはこれらからなりうる。さらに、配列番号８における「Ｘｎｂ」残基の数は、表示される数に限定されず、上記の通りに変化させうる。代替的に、本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに組み入れられるトラフィキング配列は、例えば、アミノ酸配列であるＮＨ２−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ＣＯＯＨ（Ｌ−ＴＡＴ）［配列番号５］を含有するペプチドを含みうるか、またはこれからなりうる。
【００５２】
別のより好ましい実施形態によれば、トラフィキング配列（本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに組み入れられる）は、上記で提示された配列のＤレトロインベルソペプチド、すなわち、配列ＮＨ２−Ｘｎｂ−ＲＲＲＱＲＲＫＫＲ−Ｘｎｂ−ＣＯＯＨ（Ｄ−ｇｅｎｅｒｉｃ−ＴＡＴ（ｓ））［配列番号８］および／またはＸＸＸＸＲＲＲＱＲＲＫＫＲＸＸＸＸ（Ｄ−ｇｅｎｅｒｉｃ−ＴＡＴ）［配列番号２２］を有するＴＡＴ配列の一般式のＤレトロインベルソ配列を含みうる。この配列でもまた、Ｘｎｂは、上記で規定した通りである（好ましくはＤアミノ酸を表す）。さらに、配列番号８における「Ｘｎｂ」残基の数も、表示される数に限定されず、上記の通りに変化させうる。本明細書で用いられるトラフィキング配列は、Ｄレトロインベルソ配列であるＮＨ２−ＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧ−ＣＯＯＨ（Ｄ−ＴＡＴ）［配列番号６］を含みうることが最も好ましい。
【００５３】
別の実施形態によれば、本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに組み入れられるトラフィキング配列は、上記で規定したトラフィキング配列の改変体を含みうるか、またはこれらからなりうる。「トラフィキング配列の改変体」は、上記で規定したトラフィキング配列に由来する配列であって、改変体が、上記で規定したトラフィキング配列内に存在する少なくとも１つのアミノ酸の修飾、例えば、付加、（内部）欠失（断片をもたらす）、および／または置換を含む配列であることが好ましい。このような修飾（複数可）は、１〜２０カ所、好ましくは１〜１０カ所のアミノ酸の置換、付加、および／または欠失を含み、より好ましくは１〜５カ所のアミノ酸の置換、付加、および／または欠失を含むことが典型的である。さらに、改変体は、上記で規定したトラフィキング配列との、より好ましくは配列番号５〜８または２１〜２２のうちのいずれかとの、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、なおまたは９９％の配列同一性を呈示することが好ましい。
【００５４】
本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに組み入れられるトラフィキング配列のこのような修飾は、安定性を増大または減少させたトラフィキング配列をもたらすことが好ましい。代替的に、トラフィキング配列の改変体は、本明細書で用いられるキメラペプチドの細胞への局在化を調節するようにデザインすることもできる。外因的に付加される場合、上記で規定したこのような改変体は、トラフィキング配列が細胞に入り込む能力を保持する（すなわち、トラフィキング配列の改変体の細胞への取込みが、トラフィキング配列として用いられる天然タンパク質の取込みと実質的に同様である）ようにデザインすることが典型的である。例えば、核局在化に重要であると考えられる塩基性領域の変化（例えば、ＤａｎｇおよびＬｅｅ、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６４巻：１８０１９〜１８０２３頁（１９８９年）；Ｈａｕｂｅｒら、Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．、６３巻：１１８１〜１１８７頁（１９８９年）；Ｒｕｂｅｎら、Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．、６３巻：１〜８頁（１９８９年）を参照されたい）は、トラフィキング配列の細胞質への局在化または細胞質への部分的な局在化を結果としてもたらす可能性があり、したがって、本明細書で用いられるキメラペプチドの成分としてのＪＮＫ阻害剤配列の、細胞質への局在化または細胞質への部分的な局在化を結果としてもたらす可能性がある。上記に加えて、例えば、例えば、コレステロールまたは他の脂質部分をトラフィキング配列へと連結して、膜における可溶性を増大させたトラフィキング配列を作製することにより、さらなる修飾を改変体へと導入することもできる。本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインに組み入れられるトラフィキング配列の、上記で開示した改変体のうちのいずれかは、当業者に典型的には公知の技法を用いて作製しうる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．、Ｆｒｉｔｓｃｈ，  Ｅ．  Ｆ．、Ｍａｎｉａｔｉｓ，  Ｔ．（１９８９年）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照されたい）。
【００５５】
第２のドメインとして、本明細書で用いられるキメラペプチドは、これらのＪＮＫ阻害剤配列の改変体、断片、および／または誘導体を含め、上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列のうちのいずれかから選択されるＪＮＫ阻害剤配列を含むことが典型的である。
【００５６】
本明細書で用いられるキメラペプチドの両方のドメイン、すなわち、第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とは、機能的単位を形成するように連結することができる。第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とを連結するための、当技術分野で一般に公知の任意の方法を適用することができる。
【００５７】
一実施形態によれば、本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とは、共有結合により連結することが好ましい。本明細書で規定される共有結合は、例えば、上記で規定したキメラペプチドを、融合タンパク質として発現させることにより得られるペプチド結合でありうる。本明細書で記載される融合タンパク質は、以下で記載される標準的な組換えＤＮＡ法と類似する方途、または標準的な組換えＤＮＡ法から容易に適合化可能な方途で形成し、用いることができる。しかしまた、両方のドメインを、側鎖を介して連結することもでき、化学的リンカー部分により連結することもできる。
【００５８】
本明細書で用いられるキメラペプチドの第１のドメインおよび／または第２のドメインは、前記キメラペプチド内に、１つまたは複数のコピーで生起させうる。両方のドメインを単一のコピー内に存在させる場合、第１のドメインは、第２のドメインのＮ末端またはＣ末端へと連結することができる。複数のコピー内に存在させる場合、第１のドメインおよび第２のドメイン（複数可）は、任意の可能な順序で配置することができる。例えば、第１のドメインは、本明細書で用いられるキメラペプチド内に、好ましくは連続的な順序で配置される複数のコピー数で、例えば、２つ、３つ以上のコピーで存在させることができる。この場合、第２のドメインは、第１のドメインを含む配列のＮ末端またはＣ末端において生起する単一のコピーで存在させることができる。代替的に、第２のドメインを、複数のコピー数、例えば、２つ、３つ以上のコピーで存在させ、第１のドメインを、単一のコピーで存在させることも可能である。いずれの代替法によっても、第１のドメインおよび第２のドメイン（複数可）は、連続的な配置において任意の場所を占めうる。例示的な配置を以下に示す：例えば、第１のドメイン−第１のドメイン−第１のドメイン−第２のドメイン；第１のドメイン−第１のドメイン−第２のドメイン−第１のドメイン；第１のドメイン−第２のドメイン−第１のドメイン−第１のドメイン；または例えば、第２のドメイン−第１のドメイン−第１のドメイン−第１のドメイン。当業者には、これらの例が、例示だけを目的とするものであり、本発明の範囲をこれらに限定するものではないものとすることが十分に理解されている。したがって、コピー数および配置は、最初に規定した通りに変化させることができる。
【００５９】
第１のドメインおよび第２のドメイン（複数可）は、リンカーを伴わずに互いと直接連結しうることが好ましい。代替的に、第１のドメインおよび第２のドメイン（複数可）は、１〜１０アミノ酸、好ましくは１〜５アミノ酸を含むリンカー配列を介して互いと連結することもできる。リンカー配列を形成するアミノ酸は、アミノ酸残基としてのグリシンまたはプロリンから選択されることが好ましい。第１のドメインおよび第２のドメイン（複数可）は、第１のドメインと第２のドメイン（複数可）との間で、２つ、３つ以上のプロリン残基のヒンジにより互いに隔てうることがより好ましい。
【００６０】
少なくとも１つの第１のドメインおよび少なくとも１つの第２のドメインを含む、上記で規定した、本明細書で用いられるキメラペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはこれら両方の組合せからなりうる。キメラペプチド内で、各ドメイン（ならびに用いられるリンカー）は、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはこれら両方の組合せ（例えば、Ｄ−ＴＡＴおよびＬ−ＩＢ１（ｓ）またはＬ−ＴＡＴおよび  Ｄ−ＩＢ１（ｓ）など）からなりうる。本明細書で用いられるキメラペプチドは、少なくとも１つなおまたは２つ、好ましくは、少なくとも３つ、４つ、または５つ、より好ましくは、少なくとも６つ、７つ、８つ、または９つのＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含み、なおより好ましくは、少なくとも１０もしくはそれより多いＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸を含み、Ｄ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸は、本明細書で用いられるキメラペプチド内に、ブロック様の形で、非ブロック様の形で、または交互になった形で配置しうることが好ましい。
【００６１】
特定の実施形態によれば、本明細書で用いられるキメラペプチドは、Ｌ−ＴＡＴ−ＩＢペプチドの一般式であるＮＨ２−Ｘｎｂ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−Ｘｎｂ−ＲＰＴＴＬＸＬＸＸＸＸＸＸＸＱＤ−Ｘｎａ−Ｘｎｂ−ＣＯＯＨ（Ｌ−ＴＡＴ−ＩＢ（ｇｅｎｅｒｉｃ）（ｓ））［配列番号１０］［式中、Ｘ、Ｘｎａ、およびＸｎｂは、上記で規定した通りであることが好ましい］に従うＬ−アミノ酸キメラペプチドを含むか、またはこれらからなる。本明細書で用いられるキメラペプチドは、Ｌ−アミノ酸キメラペプチドであるＮＨ２−ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ−ＣＯＯＨ（Ｌ−ＴＡＴ−ＩＢ１（ｓ））［配列番号９］を含むか、またはこれからなることがより好ましい。代替的に、または加えて、本明細書で用いられるキメラペプチドは、Ｌ−アミノ酸キメラペプチド配列であるＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ  ＰＰＤＴＹＲＰＫＲＰ  ＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰ  ＲＳＱＤＴ（Ｌ−ＴＡＴ−ＩＢ１）［配列番号２３］、またはＸＸＸＸＸＸＸＲＫＫ  ＲＲＱＲＲＲＸＸＸＸ  ＸＸＸＸＲＰＴＴＬＸ  ＬＸＸＸＸＸＸＸＱＤ  Ｓ／ＴＸ（Ｌ−ＴＡＴ−ＩＢ  ｇｅｎｅｒｉｃ）［配列番号２４］［式中、Ｘもまた、上記で規定した通りであることが好ましい］を含むか、またはこれらからなり、本明細書で用いられるキメラペプチドは、Ｌ−アミノ酸キメラペプチド配列であるＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ（Ｌ−ＴＡＴ−ＩＢ１（ｓ１））［配列番号２７］、ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＸｎｃＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ（Ｌ−ＴＡＴ−ＩＢ１（ｓ２））［配列番号２８］、またはＲＫＫＲＲＱＲＲＲＸｎｃＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ（Ｌ−ＴＡＴ−ＩＢ１（ｓ３））［配列番号２９］を含むか、またはこれらからなる。この文脈では、各Ｘが、上記で規定したアミノ酸残基を表すことが典型的であり、Ｘｎｃ［式中、ｎ（Ｘｎｃの反復の回数）は、０〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜３０、なおまたはこれを超える数であり、好ましくは０〜５または５〜１０であることが典型的である］が連続的なペプチド残基の連なりを表し、各Ｘが、互いから独立にグリシンまたはプロリン、例えば、単調なグリシンの連なりまたは単調なプロリンの連なりから選択されることがより好ましい。Ｘｎｃは、Ｄアミノ酸またはＬアミノ酸を表しうる。
【００６２】
代替的な特定の実施形態によれば、本明細書で用いられるキメラペプチドは、上記で開示したＬ−アミノ酸キメラペプチドのＤ−アミノ酸キメラペプチドを含むか、またはこれらからなる。本発明に従う、例示的なＤレトロインベルソキメラペプチドは、例えば、Ｄ−ＴＡＴ−ＩＢペプチドの一般式であるＮＨ２−Ｘｎｂ−Ｘｎａ−ＤＱＸＸＸＸＸＸＸＬＸＬＴＴＰＲ−Ｘｎｂ−ＲＲＲＱＲＲＫＫＲ−Ｘｎｂ−ＣＯＯＨ（Ｄ−ＴＡＴ−ＩＢ（ｇｅｎｅｒｉｃ）（ｓ））［配列番号１２］である。本明細書では、Ｘ、Ｘｎａ、およびＸｎｂが、上記で規定した通りである（好ましくはＤアミノ酸を表す）ことが好ましい。本明細書で用いられるキメラペプチドは、ＴＡＴ−ＩＢ１ペプチドであるＮＨ２−ＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧ−ＣＯＯＨ（Ｄ−ＴＡＴ−ＩＢ１（ｓ））［配列番号１１］に従うＤ−アミノ酸キメラペプチドを含むか、またはこれらからなることがより好ましい。代替的に、または加えて、本明細書で用いられるキメラペプチドは、Ｄ−アミノ酸キメラペプチド配列であるＴＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲＹＴＤＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧ（Ｄ−ＴＡＴ−ＩＢ１）［配列番号２５］、またはＸＴ／ＳＤＱＸＸＸＸＸＸＸＬＸＬＴＴＰＲＸＸＸＸＸＸＸＸＲＲＲＱＲＲＫＫＲＸＸＸＸＸＸＸ（Ｄ−ＴＡＴ−ＩＢ  ｇｅｎｅｒｉｃ）［配列番号２６］［式中、Ｘもまた、上記で規定した通りであることが好ましい］を含むか、またはこれらからなり、本明細書で用いられるキメラペプチドは、Ｄ−アミノ酸キメラペプチド配列であるＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲＰＰＲＲＲＱＲＲＫＫＲ（Ｄ−ＴＡＴ−ＩＢ１（ｓ１））［配列番号３０］、ＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲＸｎｃＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧ（Ｄ−ＴＡＴ−ＩＢ１（ｓ２））［配列番号３１］、またはＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲＸｎｃＲＲＲＱＲＲＫＫＲ（Ｄ−ＴＡＴ−ＩＢ１（ｓ３））［配列番号３２］を含むか、またはこれらからなる。Ｘｎｃは、上記で規定した通りでありうる。
【００６３】
上記で規定したキメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とは、当技術分野で公知の任意の適する形で実行される化学的カップリングまたは生化学的カップリングにより、例えば、第１のドメインと第２のドメイン（複数可）との間でペプチド結合を確立することにより互いと連結することもでき、例えば、第１のドメインおよび第２のドメイン（複数可）を融合タンパク質として発現させることにより互いと連結することもでき、例えば、上記で規定したキメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とを架橋することにより互いと連結することもできる。
【００６４】
上記で規定したキメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）との化学的架橋に適する多くの公知の方法は、非特異的である、すなわち、それらの方法は、カップリング点を、輸送ポリペプチド上またはカーゴである高分子上の任意の特定の部位へと方向付けない。結果として、非特異的な架橋剤の使用は、機能的部位を攻撃する場合もあり、活性部位を立体障害的に遮断する場合もあることから、コンジュゲートされたタンパク質は、生物学的に不活性とされうる。したがって、第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とのより特異的なカップリングを可能とするこのような架橋法を用いることが好ましい。
【００６５】
この文脈では、カップリングの特異性を増大させる１つの方途は、官能基への直接的な化学的カップリングを、架橋される第１のドメインおよび第２のドメイン（複数可）の一方または両方において、１回または少数の回数に限り存在させることである。例えば、チオール基を含有する唯一のタンパク質アミノ酸であるシステインは、多くのタンパク質において、少数の回数に限り生起させる。例えば、ポリペプチドがリシン残基を含有しない場合はまた、一級アミンに特異的な架橋試薬も、そのポリペプチドのアミノ末端に対して選択的であろう。カップリングの特異性を増大させるこの手法の使用を成功させるには、ポリペプチドが、適切な程度に希少で反応性である残基を、分子の生物学的活性を失わせることなく改変しうる分子エリアにおいて有することが要請される。システイン残基が、それらを置きかえなければ、それらの架橋反応への関与が、生物学的活性に干渉する可能性が高くなるポリペプチド配列の部分において生起する場合は、システイン残基を置きかえることができる。システイン残基を置きかえる場合は、ポリペプチドのフォールディングにおいて結果として生じる変化を最小化することが典型的に所望される。ポリペプチドのフォールディングの変化は、置きかえが、システインと化学的および立体障害的に類似する場合に最小化される。これらの理由で、システインの置きかえとしては、セリンが好ましい。下記の例で顕示される通り、システイン残基を、架橋を目的として、ポリペプチドのアミノ酸配列へと導入することができる。システイン残基を導入する場合は、アミノ末端もしくはカルボキシ末端における導入またはアミノ末端もしくはカルボキシ末端の近傍における導入が好ましい。このようなアミノ酸配列の修飾のためには、従来の方法が利用可能であり、対象のポリペプチドを、化学合成により、または組換えＤＮＡの発現を介して作製する。
【００６６】
上記で規定した、本明細書で用いられる、キメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とのカップリングはまた、カップリング剤またはコンジュゲート剤を介しても達成することができる。いくつかの分子間架橋試薬を使用することができる（例えば、ＭｅａｎｓおよびＦｅｅｎｅｙ、ＣＨＥＭＩＣＡＬ  ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ、Ｈｏｌｄｅｎ−Ｄａｙ、１９７４年、３９〜４３頁を参照されたい）。これらの試薬には、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）またはＮ，Ｎ’−（１，３−フェニレン）ビスマレイミド（これらのいずれも、スルフヒドリル基に対して高度に特異的であり、不可逆性の連結を形成する）；Ｎ，Ｎ’−エチレン−ビス−（ヨードアセトアミド）または６〜１１カ所の炭素メチレン架橋を有する他のこのような試薬（これらは、スルフヒドリル基に対して比較的特異的である）；および１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン（これは、アミノ基およびチロシン基と共に不可逆性の連結を形成する）がある。この目的に有用な他の架橋試薬には、ｐ，ｐ’−ジフルオロ−ｍ，ｍ’−ジニトロジフェニルスルホン（これは、アミノ基およびフェノール基と共に不可逆性の架橋を形成する）；アジプイミド酸ジメチル（これは、アミノ基に特異的である）；フェノール−１，４ジスルホニルクロリド（これは主に、アミノ基と反応する）；ヘキサメチレンジイソシアネートまたはヘキサメチレンジイソチオシアネート、またはアゾフェニル−ｐ−ジイソシアネート（これは主に、アミノ基と反応する）；グルタルアルデヒド（これは、いくつかの異なる側鎖と反応する）；およびジスジアゾベンジジン（これは主に、チロシンおよびヒスチジンと反応する）が含まれる。
【００６７】
上記で規定したキメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とを架橋するために用いられる架橋試薬は、ホモ二官能性でありうる、すなわち、同じ反応を経る２つの官能基を有しうる。好ましいホモ二官能性架橋試薬は、ビスマレイミドヘキサン（「ＢＭＨ」）である。ＢＭＨは、マイルドな条件（ｐＨ６．５〜７．７）下でスルフヒドリル含有化合物と特異的に反応する２つのマレイミド官能基を含有する。２つのマレイミド基は、炭化水素鎖で接合される。したがって、ＢＭＨは、システイン残基を含有するポリペプチドを不可逆的に架橋するのに有用である。
【００６８】
上記で規定したキメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とを架橋するために用いられる架橋試薬はまた、ヘテロ二官能性でもありうる。ヘテロ二官能性架橋剤は、２つの異なる官能基、例えば、それぞれ、遊離アミンおよび遊離チオールを有する２つのタンパク質を架橋する、アミン反応性基およびチオール反応性基を有する。ヘテロ二官能性架橋剤の例は、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（「ＳＭＣＣ」）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（「ＭＢＳ」）、およびスクシンイミド４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（「ＳＭＰＢ」）、ＭＢＳの伸長鎖類似体である。これらの架橋剤のスクシンイミジル基は、一級アミンと反応し、チオール反応性のマレイミド形態は、システイン残基のチオールと共有結合する。
【００６９】
上記で規定したキメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とを架橋するのに適する架橋試薬は、水中での可溶性が低いことが多い。したがって、スルホネート基などの親水性部分を、架橋試薬へと付加して、その水溶性を改良することができる。この点において、スルホ−ＭＢＳおよびスルホ−ＳＭＣＣは、本発明に従い用いうる、水溶性のための修飾架橋試薬の例である。
【００７０】
同様に、多くの架橋試薬は、細胞内条件下で本質的に切断不可能なコンジュゲートももたらす。しかし、特に、上記で規定したキメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）とを架橋するのに適する一部の架橋試薬は、細胞内条件下で切断可能なジスルフィド結合などの共有結合を含有する。例えば、トラウト試薬、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）（「ＤＳＰ」）、およびＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（「ＳＰＤＰ」）は、周知の切断可能な架橋剤である。切断可能な架橋試薬の使用は、カーゴ部分が、標的細胞への送達後に輸送ポリペプチドから分離することを可能とする。また、直接的なジスルフィド連結も有用でありうる。
【００７１】
上記で論じた架橋試薬を含め、多数の架橋試薬が、市販されている。それらの使用についての詳細な指示書は、販売元から容易に入手可能である。タンパク質の架橋およびコンジュゲートの調製についての一般的な参考文献は、Ｗｏｎｇ、ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＣＯＮＪＵＧＡＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＣＲＯＳＳＬＩＮＫＩＮＧ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１年）である。
【００７２】
上記で規定したキメラペプチドの第１のドメインと第２のドメイン（複数可）との化学的架橋は、スペーサーアームの使用を包含しうる。スペーサーアームは、分子間の可撓性をもたらすか、またはコンジュゲートされた部分の間の分子間の距離を調整し、これにより、生物学的活性を温存する一助となりうる。スペーサーアームは、スペーサーアミノ酸、例えば、プロリンを組み入れたポリペプチド部分の形態でありうる。代替的に、スペーサーアームは、「長鎖ＳＰＤＰ」（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ．、型番：２１６５１  Ｈ）内の部分など、架橋試薬の部分でもありうる。
【００７３】
さらに本明細書では、上記で開示したキメラペプチドのうちの１つの改変体、断片、または誘導体も用いることができる。断片および改変体に関しては一般に、ＪＮＫ阻害剤配列について上記に示した規定を参照する。
【００７４】
特に、本発明の文脈では、「キメラペプチドの改変体」が、配列番号９〜１２および２３〜３２に従う配列のうちのいずれかに由来する配列であり、キメラ改変体が、本明細書で用いられる配列番号９〜１２および２３〜３２に従うキメラペプチドのアミノ酸変化を含むことが好ましい。このような変化は、配列番号９〜１２および２３〜３２に従うアミノ酸の１〜２０カ所、好ましくは１〜１０カ所の置換、付加、および／または欠失を含むことが典型的であり、より好ましくは１〜５カ所の置換、付加、および／または欠失（断片をもたらす）を含み、本明細書で用いられる改変キメラペプチドは、配列番号９〜１２および２３〜３２に従う配列のうちのいずれかとの、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、または９５％、９８％、なおまたは９９％の配列同一性を呈示することが典型的である。これらの改変体は、本明細書で用いられるキメラペプチド内に含有される第１のドメインおよび第２のドメインの生物学的活性、すなわち、上記で開示した第１のドメインのトラフィキング活性、ならびに第２のドメインのＪＮＫに結合する活性および／または少なくとも１つのＪＮＫ活性化型転写因子の活性化を阻害する活性を保持することが好ましい。
【００７５】
したがって、本明細書で用いられるキメラペプチドはまた、前述で開示したキメラペプチド、特に、配列番号９〜１２および２３〜３２のうちのいずれかに従うキメラペプチド配列の断片も含む。したがって、本発明の文脈では、「キメラペプチドの断片」が、配列番号９〜１２および２３〜３２に従う配列のうちのいずれかに由来する配列であり、断片が、配列番号９〜１２および２３〜３２のうちのいずれかの少なくとも４つの連続アミノ酸を含むことが好ましい。この断片は、これらの配列のうちのいずれかに由来するエピトープに対する特異的な認識を可能とし、この配列を、細胞、核、またはさらなる好ましい地点へと輸送するのに十分な長さを含むことが好ましい。断片は、配列番号９〜１２および２３〜３２のうちのいずれかの４〜１８、４〜１５の連続アミノ酸を含むことがなおより好ましいか、または、４〜１０の連続アミノ酸を含むことが最も好ましい。さらに、本明細書で用いられるキメラペプチドの断片は、配列番号９９〜１２および２３〜３２のうちのいずれかに従う配列のうちのいずれかとの、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、または９５％、９８％、なおまたは９９％の配列同一性を共有する配列として規定することもできる。
【００７６】
最後に、本明細書で用いられるキメラペプチドはまた、前述で開示したキメラペプチド、特に、配列番号９〜１２および２３〜３２のうちのいずれかに従うキメラペプチド配列の誘導体も含む。
【００７７】
本発明の特に好ましい使用は、眼乾燥症候群を処置するための、配列番号１１のアミノ酸配列からなるか、もしくはこれらを含むか、または配列番号１１との、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９２％、なおもしくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列からなるか、もしくはこれらを含むＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの使用である。配列番号１１のアミノ酸配列からなるか、もしくはこれらを含むか、または配列番号１１との、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９２％、なおもしくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列からなるか、もしくはこれらを含むＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、例えば、眼へと局所投与することもでき、全身投与することもできる。
【００７８】
本発明は加えて、本明細書で規定される対象における眼乾燥症候群を処置するための医薬組成物を調製するための、上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、または全て上記で規定したそれらの断片、改変体、もしくは誘導体をコードする核酸配列の使用にも関する。本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤配列をコードする、好ましく適切な核酸は、ヒトＩＢ１核酸（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＦ０７４０９１）、ラットＩＢ１核酸（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＦ１０８９５９）、もしくはヒトＩＢ２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＦ２１８７７８）から選び出されるか、または上記で規定した配列のうちのいずれかをコードする任意の核酸配列、すなわち、配列番号１〜２６に従う任意の配列から選び出されることが典型的である。
【００７９】
本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤配列または本明細書で用いられるキメラペプチドをコードする核酸は、当技術分野で公知の任意の方法により（例えば、配列の３’末端および５’末端とハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いるＰＣＲ増幅により、かつ／または所与の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチド配列を用いるｃＤＮＡライブラリーもしくはゲノムライブラリーからのクローニングにより）得ることができる。
【００８０】
本明細書では加えて、厳密な条件下で、（天然）ＪＮＫ阻害剤配列または上記で規定したキメラペプチドをコードする適切な鎖とハイブリダイズする核酸配列も同様に開示される。このような核酸配列は、特異的なハイブリダイゼーションを可能とするのに十分な長さを有する少なくとも６つの（連続）核酸を含むことが好ましい。このような核酸配列は、６〜３８の（連続）核酸を含むことがより好ましく、６〜３０の（連続）核酸を含むことがなおより好ましく、６〜２０または６〜１０の（連続）核酸を含むことが最も好ましい。
【００８１】
「厳密な条件」は、配列依存的であり、異なる状況下では異なる。一般に、厳密な条件は、規定されたイオン強度およびｐＨにおける特異的な配列の熱融解点（ＴＭ）より約５℃低くなるように選択することができる。ＴＭとは、標的配列のうちの５０％が、完全にマッチしたプローブとハイブリダイズする温度（規定されたイオン強度下およびｐＨ下における）である。厳密な条件は、ｐＨ７における塩濃度が少なくとも約０．０２モルであり、温度が少なくとも約６０℃である条件となることが典型的である。他の因子（中でも、相補鎖の塩基組成およびサイズ、有機溶媒の存在ならびに塩基ミスマッチの程度を含めた）もハイブリダイゼーションの厳密性に影響を及ぼしうるので、パラメータの組合せが、任意の１つの因子の絶対的測定値より重要である。
【００８２】
「高度な厳密性の条件」は、以下、例えば、ステップ１：６倍濃度のＳＳＣ、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．０２％のＰＶＰ、０．０２％のＦｉｃｏｌｌ、０．０２％のＢＳＡ、および５００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡからなる緩衝液中、６５℃で８時間〜一晩にわたりＤＮＡを含有するフィルターを前処理するステップ；ステップ２：フィルターを、１００ｍｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ、および５〜２０×１０６ｃｐｍの３２Ｐ標識プローブを添加した上記の前ハイブリダイゼーション混合物中、６５℃で４８時間にわたりハイブリダイズさせるステップ；ステップ３：２倍濃度のＳＳＣ、０．０１％のＰＶＰ、０．０１％のＦｉｃｏｌｌ、および０．０１％のＢＳＡを含有する溶液中、３７℃で１時間にわたりフィルターを洗浄する（この後、０．１倍濃度のＳＳＣ中、５０℃で４５分間にわたる洗浄を行う）ステップ；ステップ４：フィルターをオートラジオグラフィーにかけるステップを含みうる。当技術分野で用いうる高度な厳密性の他の条件も周知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、１９９３年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、ＮＹ；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ、１９９０年、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹを参照されたい）。
【００８３】
「中程度の厳密性の条件」は、以下：ステップ１：６倍濃度のＳＳＣ、５倍濃度のデンハルト溶液、０．５％のＳＤＳ、および１００ｍｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡを含有する溶液中、５５℃で６時間にわたりＤＮＡを含有するフィルターを前処理するステップ；ステップ２：フィルターを、５〜２０×１０６ｃｐｍの３２Ｐ標識プローブを添加した同じ溶液中、５５℃で１８〜２０時間にわたりハイブリダイズさせるステップ；ステップ３：２倍濃度のＳＳＣ、０．１％のＳＤＳを含有する溶液中、３７℃で１時間にわたりフィルターを洗浄し、次いで、１倍濃度のＳＳＣ、および０．１％のＳＤＳを含有する溶液中、６０℃で３０分間にわたり２回洗浄するステップ；ステップ４：フィルターを乾燥させてブロット処理し、オートラジオグラフィーのために露光するステップを包含しうる。当技術分野で用いうる中程度の厳密性の他の条件も周知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、１９９３年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、ＮＹ；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ、１９９０年、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹを参照されたい）。
【００８４】
最後に、「低度な厳密性の条件」は、ステップ１：３５％のホルムアミド、５倍濃度のＳＳＣ、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のＰＶＰ、０．１％のＦｉｃｏｌｌ、１％のＢＳＡ、および５００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡを含有する溶液中、４０℃で６時間にわたりＤＮＡを含有するフィルターを前処理するステップ；ステップ２：フィルターを、０．０２％のＰＶＰ、０．０２％のＦｉｃｏｌｌ、０．２％のＢＳＡ、１００μｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ、１０％（ｗｔ／ｖｏｌ）の硫酸デキストラン、および５〜２０×１０６ｃｐｍの３２Ｐ標識プローブを添加した同じ溶液中、４０℃で１８〜２０時間にわたりハイブリダイズさせるステップ；ステップ３：２倍濃度のＳＳＣ、２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭのＥＤＴＡ、および０．１％のＳＤＳを含有する溶液中、５５℃で１．５時間にわたりフィルターを洗浄する（洗浄溶液を、新鮮な溶液で置きかえ、６０℃でさらに１．５時間にわたりインキュベートする）ステップ；ステップ４：フィルターを乾燥させてブロット処理し、オートラジオグラフィーのために露光する（必要な場合は、フィルターを６５〜６８℃で３回目の洗浄にかけ、フィルムへと再露光する）ステップを包含しうる。当技術分野で用いうる低度な厳密性の他の条件も周知である（例えば、異種間ハイブリダイゼーションに用いられる）。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、１９９３年、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、ＮＹ；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ、１９９０年、ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＡＮＤ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹを参照されたい。
【００８５】
本発明に従う、上記で規定した核酸配列は、ペプチドを発現させるのに用いることができる、すなわち、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤配列または本明細書で用いられるキメラペプチドを、解析、特徴付け、または治療的使用のために、対応するペプチド（本明細書で用いられる）が優先的に発現する（構成的に、または組織分化もしくは組織発生の特定の段階において、または疾患状態において）組織についてのマーカーとして発現させるのに用いることができる。これらの核酸の他の使用には、例えば、核酸についてのゲル電気泳動ベースの解析における分子量マーカーが含まれる。
【００８６】
本発明のさらなる実施形態によれば、１つまたは複数のＪＮＫ阻害剤配列および／または上記で規定したキメラペプチドを組換え発現させる上記の目的のために、発現ベクターを用いることができる。本明細書では、「発現ベクター」という用語を用いて、二本鎖または一本鎖で、環状または直鎖状のＤＮＡまたはＲＮＡを指し示す。発現ベクターは、宿主細胞または単細胞もしくは多細胞の宿主生物へと導入される、上記で規定した少なくとも１つの核酸をさらに含む。本明細書で用いられる発現ベクターは、本明細書で用いられるＪＮＫ阻害剤配列またはその断片もしくは改変体、あるいは本明細書で用いられるキメラペプチド、またはその断片もしくは改変体をコードする、上記で規定した核酸を含むことが好ましい。加えて、本発明に従う発現ベクターは、ウイルス供給源、細菌供給源、植物供給源、哺乳動物供給源、および他の真核生物供給源に由来する、挿入されるポリヌクレオチドの、宿主細胞における発現を駆動するエンハンサー／プロモーターなど、インスレーター、境界エレメント、ＬＣＲ（例えば、ＢｌａｃｋｗｏｏｄおよびＫａｄｏｎａｇａ（１９９８年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８１巻、６１〜６３頁により記載される）、またはマトリックス／足場接合領域（例えば、Ｌｉ、Ｈａｒｊｕ、およびＰｅｔｅｒｓｏｎ、（１９９９年）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．、１５巻、４０３〜４０８頁により記載される）など、多様な制御エレメントを含めた、発現を支援するのに適するエレメントも含むことが好ましい。一部の実施形態では、制御エレメントが、異種エレメント（すなわち、天然の遺伝子プロモーターではない）である。代替的には、必要な転写シグナルおよび翻訳シグナルがまた、遺伝子および／またはそれらのフランキング領域に対する天然プロモーターによってももたらされる。
【００８７】
本明細書で用いられる「プロモーター」という用語は、上記で規定した１つまたは複数の核酸配列の転写を制御するように機能し、ＤＮＡ依存型ＲＮＡポリメラーゼの結合部位の存在およびプロモーターの機能を調節するように相互作用する、他のＤＮＡ配列の存在により構造的に同定されるＤＮＡの領域を指す。プロモーターの機能的な発現促進断片とは、プロモーターとしての活性を保持する、短縮型プロモーター配列または切断型プロモーター配列である。プロモーター活性は、当技術分野で公知（例えば、Ｗｏｏｄ、ｄｅ  Ｗｅｔ、Ｄｅｗｊｉ、およびＤｅＬｕｃａ、（１９８４年）、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、１２４巻、５９２〜５９６頁；ＳｅｌｉｇｅｒおよびＭｃＥｌｒｏｙ、（１９６０年）、Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．、８８巻、１３６〜１４１頁を参照されたい）であるか、またはＰｒｏｍｅｇａ（登録商標）から市販されている、任意のアッセイにより測定することができる。
【００８８】
本明細書で規定される発現ベクターにおいて用いられる「エンハンサー領域」は、１つまたは複数の遺伝子の転写を増大させるように機能するＤＮＡの領域を指すことが典型的である。より特定すると、本明細書で用いられる「エンハンサー」という用語は、遺伝子の発現を、発現させる遺伝子に照らしたその地点および配向にかかわらず増強、増進、改良、または改善するＤＮＡ制御エレメントであり、複数のプロモーターの発現も増強、増進、改良、または改善しうる。
【００８９】
本明細書で規定される発現ベクターにおいて用いられるプロモーター／エンハンサー配列には、植物、動物、昆虫、または真菌の調節配列を使用することができる。例えば、酵母および他の真菌に由来するプロモーター／エンハンサーエレメント（例えば、ＧＡＬ４プロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼプロモーター、アルカリホスファターゼプロモーター）を用いることができる。代替的に、または加えて、プロモーター／エンハンサーエレメントには、動物の転写制御領域、例えば、（ｉ）膵臓ベータ細胞内で活性なインスリン遺伝子制御領域（例えば、Ｈａｎａｈａｎら、１９８５年、Ｎａｔｕｒｅ、３１５巻：１１５〜１２２頁を参照されたい）；（ｉｉ）リンパ球様細胞内で活性な免疫グロブリン遺伝子制御領域（例えば、Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら、１９８４年、Ｃｅｌｌ、３８巻：６４７〜６５８頁を参照されたい）；（ｉｉｉ）肝臓内で活性なアルブミン遺伝子制御領域（例えば、Ｐｉｎｃｋｅｒｔら、１９８７年、Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖ、１巻：２６８〜２７６頁を参照されたい）；（ｉｖ）脳の希突起膠細胞内で活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（例えば、Ｒｅａｄｈｅａｄら、１９８７年、Ｃｅｌｌ、４８巻：７０３〜７１２頁を参照されたい）；および（ｖ）視床下部内で活性なゴナドトロピン放出ホルモン遺伝子制御領域（例えば、Ｍａｓｏｎら、１９８６年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３４巻：１３７２〜１３７８頁を参照されたい）なども含まれうる。
【００９０】
加えて、本明細書で規定される発現ベクターは、増幅マーカーも含みうる。この増幅マーカーは、例えば、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）、複数の薬物耐性遺伝子（ＭＤＲ）、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）、およびＮ−（ホスホンアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸耐性（ＣＡＤ）からなる群より選択されうる。
【００９１】
本発明に適する例示的な発現ベクターまたはそれらの誘導体には、特に、例えば、ヒトウイルスまたは動物ウイルス（例えば、牛痘ウイルスまたはアデノウイルス）；昆虫ウイルス（例えば、バキュロウイルス）；酵母ベクター；バクテリオファージベクター（例えば、ラムダファージ）；プラスミドベクターおよびコスミドベクターが含まれる。
【００９２】
本発明では加えて、上記で規定した核酸のペプチドコード配列（複数可）を発現させることが可能な、多様な宿主−ベクター系も使用することができる。これらには、（ｉ）牛痘ウイルス、アデノウイルスなどを感染させる哺乳動物細胞系；（ｉｉ）バキュロウイルスなどを感染させる昆虫細胞系；（ｉｉｉ）酵母を含有する酵母ベクター；または（ｉｖ）バクテリオファージ、ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡで形質転換される細菌が含まれるがこれらに限定されない。使用される宿主−ベクター系に応じて、多数の適する転写エレメントおよび翻訳エレメントのうちのいずれか１つを用いることができる。
【００９３】
挿入される対象の配列の発現を調節するか、または配列によりコードされる、発現させるペプチドを、所望の特異的な形で修飾もしくはプロセシングする、このような宿主−ベクター系に適する宿主細胞株を選択しうることが好ましい。加えて、特定のプロモーターからの発現は、選択される宿主株における特定の誘導剤の存在下で増強することができ、これにより、遺伝子操作されたペプチドの発現の制御が容易となる。さらに、異なる宿主細胞は、発現させるペプチドの翻訳および翻訳後プロセシングならびに修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化など）のための特徴的で特異的な機構を保有する。したがって、外来ペプチドに対する所望の修飾およびプロセシングが達成されることを確保するように、適切な細胞系または宿主系を選び出すことができる。例えば、細菌系内のペプチド発現を用いて、非グリコシル化コアペプチドを作製しうる一方で、哺乳動物細胞内の発現により、異種ペプチドの「天然」のグリコシル化が確保される。
【００９４】
本発明に従い規定されるＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、核酸、ベクター、および／または宿主細胞は、本明細書で規定される疾患のうちのいずれかの防止または処置において、特に、本明細書で規定される眼乾燥症候群の防止または処置において適用しうる医薬組成物中で調合することができる。本発明に従い用いられるこのような医薬組成物は、活性成分として、例えば、（ｉ）上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列および／もしくはキメラペプチド、ならびに／またはそれらの改変体、断片、もしくは誘導体、特に、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、ならびに／もしくは配列番号９〜１２および２３〜３２の配列のうちのいずれかに従うキメラペプチド、ならびに／もしくは配列番号５〜８および２１〜２２のうちのいずれかに従うトラフィキング配列を含む、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、または上記の規定内のそれらの改変体もしくは断片のうちの任意の１つまたは複数；ならびに／あるいは（ｉｉ）ＪＮＫ阻害剤配列および／もしくは上記で規定したキメラペプチド、ならびに／またはそれらの改変体もしくは断片をコードする核酸、ならびに／あるいは（ｉｉｉ）上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列および／もしくはキメラペプチド、ならびに／またはそれらの改変体、断片、もしくは誘導体のうちの任意の１つまたは複数を含む細胞、ならびに／あるいは（ｉｖ）上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列および／もしくはキメラペプチド、ならびに／またはそれらの改変体もしくは断片をコードするベクターおよび／または核酸をトランスフェクトした細胞を組み入れることが典型的である。
【００９５】
好ましい実施形態によれば、本発明に従い用いられるこのような医薬組成物は、安全有効量の、上記で規定した成分、好ましくは、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従う少なくとも１つのＪＮＫ阻害剤配列、ならびに／もしくは配列番号９〜１２および２３〜３２の配列のうちのいずれかに従う少なくとも１つのキメラペプチド、ならびに／もしくは配列番号５〜８および２１〜２２のうちのいずれかに従うトラフィキング配列を含む、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従う少なくとも１つのＪＮＫ阻害剤配列、または上記の規定内のそれらの改変体もしくは断片、あるいは上記で規定した、これらをコードする少なくとも１つの核酸、または少なくとも１つのベクター、または宿主細胞を含むことが典型的である。
【００９６】
対象に投与される医薬組成物中のＪＮＫ阻害剤配列およびキメラペプチドのそれぞれの量は、（それに限定せずに述べると）きわめて低用量でありうる。したがって、用量は、ＤＴＳ−１０８など、当技術分野で公知のペプチド薬の場合（Ｆｌｏｒｅｎｃｅ  Ｍｅｙｅｒ−Ｌｏｓｉｃら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００８年、２１４５〜５３頁）よりはるかに低量でありうる。これは、いくつかの肯定的な側面、例えば、潜在的な副反応の軽減および費用の低減を有する。
【００９７】
用量（体重１ｋｇ当たりの）は、最大で１０ｍｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは最大で１ｍｍｏｌ／ｋｇ、より好ましくは最大で１００μｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは最大で１０μｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは最大で１μｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは最大で１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、最も好ましくは最大で５０ｎｍｏｌ／ｋｇの範囲内にあることが好ましい。
【００９８】
したがって、用量範囲は、約１ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約１ｍｍｏｌ／ｋｇ、約１０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約０．１ｍｍｏｌ／ｋｇ、約１０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約０．０１ｍｍｏｌ／ｋｇ、約５０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約１μｍｏｌ／ｋｇ、約１００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約５００ｎｍｏｌ／ｋｇ、約２００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約３００ｎｍｏｌ／ｋｇ、約３００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、約５００ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、約７５０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約３０ｎｍｏｌ／ｋｇ、約２５０ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約５ｎｍｏｌ／ｋｇ、約１ｎｍｏｌ／ｋｇ〜約１０ｎｍｏｌ／ｋｇ、または前記値のうちのいずれか２つの組合せでありうることが好ましい。
【００９９】
配列番号３０に従うＪＮＫ阻害剤の例示的な用量は、例えば、約１０、５０、または１００μｇ／ｋｇでありうる。
【０１００】
この文脈では、上記の医薬組成物を用いる場合の処置の処方、例えば、投与量などについての決定は、医療従事者および他の医師の責任の範囲内にあることが典型的であり、処置される障害、個別の患者の状態、送達部位、投与法、および医療従事者に公知の他の因子を考慮に入れることが典型的である。上記で言及した技法およびプロトコールの例は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ、１６版、Ｏｓｏｌ，  Ａ．（編）、１９８０年において見出すことができる。したがって、本発明に従い用いられる医薬組成物の成分について上記で規定した「安全有効量」とは、眼乾燥症候群の肯定的な変容を著明に誘導するのに十分なこれらの成分の各々または全ての量を意味する。しかし、同時に、「安全有効量」は、重篤な副作用を回避する、すなわち、利点と危険性との間の妥当な関係を可能とするのに十分な少量でもある。これらの限界の決定は、妥当な治療的判断の範囲内にあることが典型的である。このような成分の「安全有効量」は、処置される特定の状態との関連で変化するであろうし、また、処置される患者の年齢および健康状態、状態の重症度、処置の持続期間、随伴する治療の性質、用いられる特定の薬学的に許容される担体の性質、ならびに主治医の知識および経験の範囲内にある類似した因子との関連でも変化するであろう。本発明に従う医薬組成物は、本発明に従い、ヒトのために用いることができ、また、獣医療目的を目的としても用いることができる。
【０１０１】
本発明に従い用いられる医薬組成物は、これらの物質のうちの１つに加えて、（適合性の）薬学的に許容される担体、賦形剤、緩衝剤、安定化剤、または当業者に周知の他の材料をさらに含みうる。
【０１０２】
この文脈では、「（適合性の）薬学的に許容される担体」という表現が、組成物の液体基剤または非液体基剤を包含することが好ましい。「適合性の」という用語は、本明細書で用いられる医薬組成物の構成物質を、上記で規定した医薬活性成分および別の成分と、通例の使用条件下で組成物の医薬としての有効性を実質的に減殺する相互作用が起こらない形で混合することが可能なことを意味する。薬学的に許容される担体は、当然ながら、それらを、処置される人への投与に適するものとするのに十分な程度に純度が高く、十分な程度に毒性が低くなければならない。
【０１０３】
本明細書で用いられる医薬組成物を、液体形態で提供する場合、薬学的に許容される担体は、１つまたは複数の（適合性の）薬学的に許容される液体の担体を含むことが典型的である。組成物は、（適合性の）薬学的に許容される液体の担体として、例えば、発熱物質非含有水；等張性生理食塩液または、例えば、リン酸緩衝溶液、クエン酸緩衝溶液などの（水性）緩衝溶液；例えば、ラッカセイ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、およびカカオに由来する油などの植物油；例えば、ポリプロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール；アルギン酸などを含みうる。特に、本明細書で用いられる医薬組成物を注射するには、緩衝液、好ましくは水性緩衝液を用いることができる。
【０１０４】
本明細書で用いられる医薬組成物を固体形態で提供する場合、薬学的に許容される担体は、１つまたは複数の（適合性の）薬学的に許容される固体担体を含むことが典型的であろう。組成物は、（適合性の）薬学的に許容される固体担体として、例えば、１つまたは複数の適合性の固体または液体の充填剤または希釈剤を含む場合もあり、また、人への投与に適する封入化合物を用いる場合もある。このような（適合性の）薬学的に許容される固体担体のいくつかの例は、例えば、例えば、ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖；例えば、トウモロコシデンプンまたはバレイショデンプンなどのデンプン；セルロースおよび、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロースなど、その誘導体；粉末化されたトラガント；麦芽；ゼラチン；獣脂；例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウムなど、固体の流動促進剤；硫酸カルシウムなどである。
【０１０５】
（適合性の）薬学的に許容される担体または他の材料の正確な性質は、投与経路に依存しうる。したがって、（適合性の）薬学的に許容される担体の選び出しは、原則として、本発明に従い用いられる医薬組成物を投与する方式により決定することができる。本発明に従い用いられる医薬組成物は、例えば、全身投与することができる。投与経路には、例えば、静脈内経路、筋内経路、皮下経路、皮内経路、もしくは経皮経路などの非経口経路（例えば、注射を介する）、経口経路もしくは直腸内経路などの腸内経路、経鼻経路もしくは鼻腔内経路などの外用経路（ｔｏｐｉｃａｌ  ｒｏｕｔｅ）、または表皮経路もしくはパッチ送達などの他の経路が含まれる。また、眼／眼内局所投与、例えば、硝子体内投与、結膜下投与、および／または滴注も特に好ましい。特に、配列番号１１などのＪＮＫ阻害剤ペプチドを用いる場合、滴注は、本明細書で論じられるドライアイを処置するための最も好ましい投与経路である。
【０１０６】
さらなる態様では、本明細書で規定されるＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、または核酸配列、例えば、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、ならびに／もしくは配列番号９〜１２および２３〜３２の配列のうちのいずれかに従うキメラペプチド、ならびに／もしくは配列番号５〜８および２１〜２２のうちのいずれかに従うトラフィキング配列を含む、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、または上記の規定内のそれらの改変体もしくは断片は、例えば、眼手術または眼外傷後、特に、一般にレーザー眼内手術とだけ称するレーシック（ｌａｓｅｒ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｋｅｒａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓ）後における眼乾燥症候群の処置で使用することができる。
【０１０７】
ドライアイの標準的な処置は、人工涙液、シクロスポリン（特に、シクロスポリンＡ；例えば、Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標））；自己血清点眼剤；潤滑性涙液軟膏の投与；および／または例えば、滴注剤または眼軟膏の形態である（コルチコ）ステロイドの投与を伴いうる。したがって、本発明はまた、本明細書で規定されるＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、または核酸配列、例えば、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、ならびに／もしくは配列番号９〜１２および２３〜３２の配列のうちのいずれかに従うキメラペプチド、ならびに／もしくは配列番号５〜８および２１〜２２のうちのいずれかに従うトラフィキング配列を含む、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、または上記の規定内のそれらの改変体もしくは断片の、眼乾燥症候群の処置法における使用であって、眼乾燥症候群の処置法が、本明細書で規定されるＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、または核酸配列の、ドライアイのための標準的な処置、特に、上記で言及した処置のうちのいずれか１つと併せた組合せ投与を含む使用にも関する。シクロスポリンＡとの組合せが特に好ましく、人工涙液との組合せが最も好ましい。組合せ投与は、共時的投与および／または逐次的投与（まず、本明細書で記載されるＪＮＫ阻害剤を投与し、次いで、（コルチコ）ステロイドを投与するか、またはこの逆も成り立つ）を含む。当然ながら、また、逐次的投与と共時的投与とを組み合わせることもできる、例えば、処置を本明細書で記載されるＪＮＫ阻害剤により開始し、処置の経過における後の時点で（コルチコ）ステロイドを共時的に施すこともでき、これと逆の処置を施すこともできる。
【０１０８】
用いられる医薬組成物の適量は、動物モデルを伴う日常的な実験により決定することができる。このようなモデルには、限定を含意することなく述べると、ウサギモデル、ヒツジモデル、マウスモデル、ラットモデル、イヌモデル、および非ヒト霊長動物モデルが含まれる。注射に好ましい単位用量形態には、滅菌水溶液、生理食塩液、またはそれらの混合物が含まれる。このような溶液のｐＨは、約７．４へと調整されるものとする。注射に適する担体には、ハイドロゲル、制御放出または遅延放出のためのデバイス、ポリ乳酸マトリックスおよびコラーゲンマトリックスが含まれる。外用適用に適する、薬学的に許容される担体には、ローション、クリーム、ゲルなどにおいて用いるのに適する、薬学的に許容される担体が含まれる。化合物を経口投与する場合は、錠剤、カプセルなどが、好ましい単位用量形態である。先行技術では、経口投与に用いうる単位用量形態を調製するための、薬学的に許容される担体が周知である。それらの選び出しは、本発明の目的にはそれほど重要ではなく、当業者が困難を伴わずに行いうる、風味、費用、および保存可能性などの副次的検討に依存する。
【０１０９】
経口投与用の医薬組成物は、錠剤形態、カプセル形態、粉末形態、または液体形態でありうる。錠剤には、ゼラチンなど、上記で規定した固体担体が含まれる可能性があり、場合によって、アジュバントが含まれる可能性もある。液体の経口投与用の医薬組成物には一般に、水、石油、動物油または植物油、鉱物油または合成油など、上記で規定した液体の担体が含まれうる。生理食塩溶液、デキストロース、もしくは他の糖溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコールなどグリコールも含まれうる。
【０１１０】
例えば、静脈内注射、経皮注射、または皮下注射、罹患部位における注射、または、特に、眼における滴注のために、有効成分は、発熱物質非含有であり、適切なｐＨ、等張性、および安定性を有する、非経口的に許容される水溶液の形態にあることが好ましいであろう。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸加リンゲル注射液などの等張性ビヒクルを用いて、適切な溶液を調製することが十分に可能である。防腐剤、安定化剤、緩衝剤、抗酸化剤、および／または他の添加剤も要請に応じて組み入れることができる。それがポリペプチドであれ、ペプチドであれ、核酸分子であれ、個体へと施される、本発明に従う、他の薬学的に有用な化合物であれ、投与は、「予防有効量」または「治療有効量」（場合に応じて）であることが好ましく、これは、個体への利益を示すのに十分である。投与される実際の量、ならびに投与速度および投与の時間経過は、処置されつつある状態の性質および重症度に依存する。
【０１１１】
本明細書で規定される疾患の防止および／または処置は、上記で規定した医薬組成物の投与を包含することが典型的である。「〜を調節する」という用語は、上記の疾患のうちのいずれかにおいてそれが過剰発現する場合の、ＪＮＫの発現の抑制を包含する。「〜を調節する」という用語はまた、それに限定することなく述べると、例えば、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従う少なくとも１つのＪＮＫ阻害剤配列、ならびに／もしくは配列番号９〜１２および２３〜３２の配列のうちのいずれかに従う少なくとも１つのキメラペプチド、ならびに／もしくは配列番号５〜８および２１〜２２のうちのいずれかに従うトラフィキング配列を含む、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従う少なくとも１つのＪＮＫ阻害剤配列、または上記の規定内のそれらの改変体もしくは断片を、細胞内の天然のｃ−ｊｕｎ結合部位、ＡＴＦ２結合部位、およびＮＦＡＴ４結合部位に対する競合的阻害剤として用いることによる、上記の疾患のうちのいずれかにおける、ｃ−ｊｕｎ、ＡＴＦ２、またはＮＦＡＴ４のリン酸化の抑制も包含する。「〜を調節する」という用語はまた、それに限定することなく述べると、ｃ−ｊｕｎ、ＡＴＦ２、またはＮＦＡＴ４、ならびに、例えば、ｃ−ｊｕｎ、ＡＦＴ２、およびｃ−ｆｏｓから構成されるＡＰ−１複合体など、それらの類縁のパートナーから構成される転写因子のヘテロマー複合体およびホモマー複合体の抑制も包含する。次いで、「〜を調節する」は、場合によって、例えば、ＩＢペプチドのＪＮＫへの結合を遮断し、これにより、ＩＢ類縁ペプチドによるＪＮＫの阻害を防止するＩＢペプチド特異的抗体を用いることによる、ＪＮＫ発現の増大も包含する。
【０１１２】
上記で開示した医薬組成物による対象の防止および／または処置は、（「治療有効」）量の、前記医薬組成物を、対象に投与する（ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて）ことにより達成しうることが典型的であり、ここで、対象は、例えば、任意の哺乳動物、例えば、ヒト、霊長動物、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、またはブタでありうる。「治療的に有効な」という用語は、医薬組成物の活性成分が、眼乾燥症候群および／または関連する症状を改善するのに十分な量であることを意味する。
【０１１３】
したがって、上記で規定したペプチド、例えば、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従う少なくとも１つのＪＮＫ阻害剤配列、ならびに／もしくは配列番号９〜１２および２３〜３２の配列のうちのいずれかに従う少なくとも１つのキメラペプチド、ならびに／もしくは配列番号５〜８および２１〜２２のうちのいずれかに従うトラフィキング配列を含む、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従う少なくとも１つのＪＮＫ阻害剤配列、または上記の規定内のそれらの改変体もしくは断片を、眼乾燥症候群を処置するための本発明の特定の実施形態において使用することができる。
【０１１４】
上記で規定したペプチドおよび本発明の医薬組成物中に含有されるペプチドはまた、核酸にコードさせることもできる。これは特に、上記のペプチドを、遺伝子治療を目的として投与する場合に有利である。この文脈では、遺伝子治療が、対象に特異的な、上記で規定した核酸を投与することにより、例えば、上記で規定した医薬組成物により実施される治療を指し、この場合、核酸（複数可）は、もっぱらＬ−アミノ酸を含む。本発明のこの実施形態では、核酸により、それによりコードされるペプチド（複数可）が産生され、次いで、これが、疾患または障害の影響を調節することにより治療効果を及ぼすのに用いられる。本発明の実施における、当技術分野内で利用可能な遺伝子治療に関する方法のうちのいずれかを用いることができる（例えば、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９３年、Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍ、１２巻：４８８〜５０５頁を参照されたい）。
【０１１５】
好ましい実施形態では、上記で規定した核酸および遺伝子治療のために用いられる核酸が、適する宿主内で、上記で規定したＩＢ類縁ペプチドのうちの任意の１つまたは複数をコードし、発現させる、発現ベクターの部分、すなわち、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、ならびに／もしくは配列番号９〜１２および２３〜３２の配列のうちのいずれかに従うキメラペプチド、ならびに／もしくは配列番号５〜８および２１〜２２のうちのいずれかに従うトラフィキング配列を含む、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、または上記の規定内のそれらの改変体もしくは断片である。特定の実施形態では、このような発現ベクターが、ＪＮＫ阻害剤配列のコード領域（複数可）に作動可能に連結したプロモーターを保有する。プロモーターは、上記の通りに、例えば、誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターとして規定することができ、場合によって、組織特異的プロモーターとして規定することもできる。
【０１１６】
別の特定の実施形態では、上記で規定した核酸分子を、遺伝子治療のために用いるが、この場合は、上記で規定した核酸分子のコード配列（およびそれらの他の任意の所望の配列）を、ゲノム内の所望の部位において相同組換えを促進する領域で挟み、これにより、これらの核酸の染色体内発現をもたらす（例えば、ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ、１９８９年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、８６巻：８９３２〜８９３５頁を参照されたい）。
【０１１７】
上記で規定した、本発明に従う核酸の患者への、遺伝子治療を目的とする、特に、上記で規定した上述の眼乾燥症候群の文脈における送達は、直接的（すなわち、患者を、核酸または核酸含有ベクターへと直接曝露する）な場合もあり、間接的（すなわち、細胞をまずｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて核酸で形質転換し、次いで、患者へと移植する）な場合もある。これらの２つの手法は、それぞれ、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける遺伝子治療またはｅｘ  ｖｉｖｏにおける遺伝子治療として公知である。本発明の特定の実施形態では、核酸をｉｎ  ｖｉｖｏにおいて直接投与し、これを発現させて、コードされる産物を産生させる。これは、例えば、核酸を適切な核酸の発現ベクターの部分として構築し、これを、細胞内投与となるような形で投与する方法（例えば、欠損レトロウイルスベクターまたは弱毒化レトロウイルスベクターもまたは他のウイルスベクターを用いて感染させることによる；米国特許第４，９８０，２８６号を参照されたい）；ネイキッドＤＮＡを直接的に注射する方法；微粒子銃（例えば、「ＧｅｎｅＧｕｎ」；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、ＤｕＰｏｎｔ）を用いる方法；核酸を脂質でコーティングする方法；会合する細胞表面受容体／トランスフェクト剤を用いる方法；リポソーム、微粒子、もしくはマイクロカプセルへと封入する方法；核に移入することが公知のペプチドへと連結して投与する方法；または、対象の受容体を特異的に発現させる細胞型「を標的化する」のに用いうる、受容体介在型エンドサイトーシスに対する素因があるリガンドへと連結して投与する方法（例えば、ＷｕおよびＷｕ、１９８７年、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２６２巻：４４２９〜４４３２頁を参照されたい）などを含め、当技術分野で公知の多数の方法のうちのいずれかにより達成することができる。
【０１１８】
本発明の実施における遺伝子治療のためのさらなる手法は、上記で規定した核酸をｉｎ  ｖｉｔｒｏの組織培養物中の細胞へと、電気穿孔、リポフェクション、リン酸カルシウム介在型トランスフェクション、ウイルス感染などの方法により導入するステップを伴う。一般に、導入法は、選択マーカーの細胞への同時的導入を包含する。次いで、導入された遺伝子を取り込み、発現させる細胞の単離を容易にするように、細胞を選択圧（例えば、抗生剤耐性）下に置く。次いで、これらの細胞を患者へと送達する。特定の実施形態では、結果として得られる組換え細胞をｉｎ  ｖｉｖｏにおいて投与する前に、例えば、トランスフェクション、電気穿孔、マイクロインジェクション、対象の核酸配列を含有するウイルスベクターまたはバクテリオファージベクターによる感染、細胞融合、染色体介在型遺伝子導入、微小細胞介在型遺伝子導入、スフェロプラストフュージョン、ならびにレシピエント細胞の必要な発生的機能および生理学的機能が、導入により破壊されないことを確保する類似の方法を含め、当技術分野内で公知の任意の方法により、核酸を細胞へと導入する。例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ、１９９３年、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ、２１７巻：５９９〜６１８頁を参照されたい。選び出された技法は、核酸が細胞により発現可能となるように、核酸の細胞への安定的導入をもたらすものとする。導入される核酸は、子孫細胞により遺伝可能および発現可能であることが好ましい。
【０１１９】
本発明の好ましい実施形態では、結果として得られる組換え細胞を、例えば、上皮細胞への（例えば、皮下）注射、患者への皮膚移植片としての組換え皮膚細胞の適用、および組換え血液細胞（例えば、造血幹細胞または造血前駆細胞）の静脈内注射を含め、当技術分野内で公知の多様な方法により患者へと送達することができる。使用が想定される細胞の総量は、所望の効果、患者状態などに依存し、当業者により決定されうる。遺伝子治療を目的として核酸を導入しうる細胞は、任意の所望で利用可能な細胞型を包摂し、異種細胞の場合もあり、異種遺伝子型細胞の場合もあり、同系細胞の場合もあり、自家細胞の場合もある。細胞型には、上皮細胞、内皮細胞、角化細胞、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞、および血液細胞、または多様な幹細胞もしくは前駆細胞、特に、胎児由来心筋細胞、肝幹細胞（国際特許公開第ＷＯ９４／０８５９８号）、神経幹細胞（ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９９２年、Ｃｅｌｌ、７１巻：９７３〜９８５頁）、例えば、骨髄、臍帯血、末梢血、胎児由来肝臓などから得られる造血幹細胞または造血前駆細胞などの分化細胞が含まれるがこれらに限定されない。好ましい実施形態では、遺伝子治療に使用される細胞が、患者に対する自己細胞である。
【０１２０】
代替的におよび／または加えて、本明細書で言及される疾患を処置するためには、標的化治療を用いて、上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、および／または核酸を、より特定すると、特定の種類の細胞へと、（標的化）抗体または細胞特異的リガンドなどの標的化系を用いることにより送達することができる。標的化に用いられる抗体は、下記で規定する疾患のうちのいずれかと関連する細胞の細胞表面タンパク質に特異的なことが典型的である。例を目的として述べると、これらの抗体は、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ  ＤＲタンパク質、ＣＤ１８（ＬＦＡ−１ベータ鎖）、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４０、もしくはＢｇｐ９５、または例えば、ＣＤ２、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＣＤ７１、ＣＤ１３８などから選択される細胞表面タンパク質など、Ｂ細胞関連表面タンパク質などの細胞表面抗体を指向しうる。標的化構築物は、典型的に、本明細書で規定される、本発明に従うＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、および核酸を、細胞表面タンパク質に特異的な抗体へと共有結合的に結合させることにより調製することもでき、細胞特異的リガンドへと結合させることにより調製することもできる。タンパク質を、例えば、このような抗体へと結合させることもでき、ペプチド結合または化学的カップリング、架橋などによりこのような抗体へと接合することもできる。次いで、標的化構築物を、医薬としての有効量で、患者へと、下記で規定する投与経路、例えば、腹腔内経路、経鼻経路、静脈内経路、経口経路、およびパッチ送達経路のうちのいずれかを介して投与することにより、標的化治療を実行することができる。上記で規定した標的化抗体または細胞特異的リガンドへと接合された、本明細書で規定される、本発明に従うＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、または核酸は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、例えば、共有結合の加水分解により、ペプチダーゼにより、または他の任意の適する方法により放出されうることが好ましい。代替的に、本明細書で規定される、本発明に従うＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、または核酸を、小型の細胞特異的リガンドへと接合する場合は、リガンドの放出を実行しない場合もある。細胞表面に存在する場合、キメラペプチドは、そのトラフィキング配列が活性化すると、細胞に入り込むことが可能となる。標的化は、多様な理由で、例えば、本明細書で規定される、本発明に従うＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、および核酸が許容不可能な程度に毒性である場合、またはそうでなくとも、過度な高投与量を要請する場合に所望されうる。
【０１２１】
本明細書で規定される、本発明に従うＪＮＫ阻害剤配列および／またはキメラペプチドを直接投与する代わりに、例えば、投与されるウイルスベクターから細胞へと導入されるコード遺伝子から発現させることにより、それらを標的細胞内で産生させることもできよう。ウイルスベクターは、本明細書で規定される、本発明に従うＪＮＫ阻害剤配列および／またはキメラペプチドをコードすることが典型的である。ベクターは、処置される特定の細胞へと標的化されうるであろう。さらに、ベクターは、規定された調節時において、標的細胞により、多少とも選択的に切り替えられる制御エレメントも含有しうるであろう。この技法は、それらの前駆体形態の代わりに成熟タンパク質を使用する、ＶＤＥＰＴ法（ウイルス指向型酵素プロドラッグ療法）の変化形を表す。
【０１２２】
代替的に、本明細書で規定されるＪＮＫ阻害剤配列および／またはキメラペプチドは、抗体またはウイルスを用いることにより、前駆体形態でも投与しうるであろう。次いで、これらのＪＮＫ阻害剤配列および／またはキメラペプチドを、処置される細胞内で産生されるかまたは処置される細胞へと標的化される活性化薬剤により、活性形態へと転換することができる。この種の手法は、場合によって、ＡＤＥＰＴ（抗体指向型酵素プロドラッグ療法）または  ＶＤＥＰＴ（ウイルス指向型酵素プロドラッグ療法）として公知であり、前者が、細胞特異的抗体へのコンジュゲーションにより、活性化薬剤を細胞へと標的化するステップを伴うのに対し、後者は、活性化薬剤、例えば、ＪＮＫ阻害剤配列またはキメラペプチドを、ウイルスベクターにおけるコードＤＮＡからの発現により、ベクター内で産生させるステップを伴う（例えば、ＥＰ−Ａ−４１５７３１およびＷＯ９０／０７９３６を参照されたい）。
【０１２３】
さらなる実施形態によれば、本明細書で規定されるＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、または核酸配列、例えば、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、ならびに／もしくは配列番号９〜１２および２３〜３２の配列のうちのいずれかに従うキメラペプチド、ならびに／もしくは配列番号５〜８および２１〜２２のうちのいずれかに従うトラフィキング配列を含む、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列、または上記の規定内のそれらの改変体もしくは断片を、（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）アッセイ（例えば、イムノアッセイ）において使用して、上記で規定した眼乾燥症候群を検出、予後診断、診断、またはモニタリングすることもでき、その処置をモニタリングすることもできる。イムノアッセイは、免疫特異的結合が生じ、その後、任意の免疫特異的結合の量を抗体により検出または測定しうるような条件下で、患者に由来する試料を、上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、または核酸配列に対する抗体と接触させるステップを含む方法により実施することができる。特定の実施形態では、ＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、または核酸配列に特異的な抗体を用いて、患者に由来する組織試料または血清試料を、ＪＮＫまたはＪＮＫ阻害剤配列の存在について解析することができ、この場合、異常なレベルのＪＮＫは、疾患状態を示す。使用しうるイムノアッセイには、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定アッセイ）、「サンドウィッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、プレシピチン反応、ゲル拡散プレシピチン反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、蛍光イムノアッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、およびプロテインＡイムノアッセイなどの技法を用いる競合的アッセイ系および非競合的アッセイ系が含まれるがこれらに限定されない。代替的に、（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）アッセイは、上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、核酸配列、またはＪＮＫ阻害剤配列もしくはキメラペプチドに対する抗体を、例えば、培養動物細胞、ヒト細胞、または微生物から選択されることが典型的である標的細胞へと送達し、当業者に公知であることが典型的な生物物理学的方法を介して細胞応答をモニタリングすることによっても実施しうる。アッセイにおいて用いられる標的細胞は、培養細胞（ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける）またはｉｎ  ｖｉｖｏ細胞、すなわち、生存動物もしくはヒトの器官もしくは組織、または生存動物もしくはヒトにおいて見出される微生物を構成する細胞であることが典型的である。
【０１２４】
本発明はさらに、診断または治療を目的とするキット、特に、上記で規定した眼乾燥症候群を処置、防止、またはモニタリングするためのキットであって、上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列、キメラペプチド、核酸配列、および／またはこれらのＪＮＫ阻害剤配列もしくはキメラペプチドに対する抗体、例えば、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列に対する抗ＪＮＫ阻害剤配列抗体、配列番号９〜１２および２３〜３２の配列のうちのいずれかに従うキメラペプチドに対する抗ＪＮＫ阻害剤配列抗体、配列番号５〜８および２１〜２２のうちのいずれかに従うトラフィキング配列を含む、配列番号１〜４、および１３〜２０、および３３〜１００の配列のうちのいずれかに従うＪＮＫ阻害剤配列に対する抗ＪＮＫ阻害剤配列抗体、または上記の規定内のそれらの改変体もしくは断片に対する抗ＪＮＫ阻害剤配列抗体、あるいはこのような抗ＪＮＫ阻害剤配列抗体を含有し、場合によって、抗体に対する標識した結合パートナーも含有する、１つまたは複数の容器を包含するキットの使用も提供する。これにより抗体へと組み込まれる標識には、化学発光部分、酵素部分、蛍光部分、比色部分、または放射性部分が含まれうるがこれらに限定されない。別の特定の実施形態では、眼乾燥症候群の処置、防止、またはモニタリングにおける診断的使用のためのキットであって、上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列および／またはキメラペプチドをコードするか、または代替的に、これに対する相補体である核酸を含有する１つまたは複数の容器を含むキットが提供され、場合によってまた、これらの核酸に対する、標識した結合パートナーも提供される。代替的な特定の実施形態では、キットを、上記の目的のために、１つまたは複数の容器と、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；例えば、Ｉｎｎｉｓら、１９９０年、ＰＣＲ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡを参照されたい）、リガーゼ連鎖反応、環状プローブ反応など、または上記で規定した核酸を伴う文脈において用いられる、当技術分野内で公知の他の方法のための増幅プライマーとして作用することが可能なオリゴヌクレオチドプライマーの対（例えば、各６〜３０ヌクレオチドの長さ）とを含むキットとして用いることもできる。キットは、場合によって、所定量の、精製された、上記で規定したＪＮＫ阻害剤配列、上記で規定したキメラペプチド、またはこれらをコードする核酸を、上記の目的のための診断法、基準物質、またはアッセイにおける対照としての使用のためにさらに含みうる。
【０１２５】
本発明は、本明細書で記載される特定の実施形態による範囲内に限定されるものではない。実際、当業者には、前出の記載および付属の図面から、本明細書で記載される改変に加えた、本発明の多様な改変が明らかとなろう。このような改変は、付属の特許請求の範囲の範囲内に収まる。
【０１２６】
本明細書では、それらの開示が参照によりそれらの全体において組み込まれる多様な刊行物が引用される。
【０１２７】
別段に規定されない限りにおいて、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で記載される方法および材料と同様または同等の方法および材料を、本発明を実施または検討するのに用いうるが、下記では、適切な方法および材料について記載する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によりそれらの全体において組み込まれる。利益相反の場合は、規定を含め、本明細書により管理する。加えて、材料、方法、および例は、例示的であるに過ぎず、限定を意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１２８】
【図１−１】図１は、ラットに由来するＩＢ１  ｃＤＮＡ配列および予測されるそのアミノ酸配列（配列番号１０２）を示す図である。
【図１−２】図１は、ラットに由来するＩＢ１  ｃＤＮＡ配列および予測されるそのアミノ酸配列（配列番号１０２）を示す図である。
【図２−１】図２は、ラットに由来するＩＢ１タンパク質配列であって、ｒＩＢ１遺伝子スプライスドナーのエクソン−イントロン境界部分によりコードされる配列（配列番号１０３）を示す図である。
【図２−２】図２は、ラットに由来するＩＢ１タンパク質配列であって、ｒＩＢ１遺伝子スプライスドナーのエクソン−イントロン境界部分によりコードされる配列（配列番号１０３）を示す図である。
【図２−３】図２は、ラットに由来するＩＢ１タンパク質配列であって、ｒＩＢ１遺伝子スプライスドナーのエクソン−イントロン境界部分によりコードされる配列（配列番号１０３）を示す図である。
【図３−１】図３は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに由来するＩＢ１タンパク質配列（配列番号１０４）を示す図である。
【図３−２】図３は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに由来するＩＢ１タンパク質配列（配列番号１０４）を示す図である。
【図３−３】図３は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに由来するＩＢ１タンパク質配列（配列番号１０４）を示す図である。
【図４−１】図４は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに由来するＩＢ１  ｃＤＮＡ配列（配列番号１０５）を示す図である。
【図４−２】図４は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに由来するＩＢ１  ｃＤＮＡ配列（配列番号１０５）を示す図である。
【図５】図５は、スコポラミン誘導眼乾燥症候群を伴う動物について計算された、平均ＴＢＵＴ  ＡＵＣ値を示す図である。ビヒクル、および３つの異なる濃度の、配列番号１１の配列を伴うａｌｌ−Ｄ−レトロインベルソＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドで処置された動物についての結果が示される。
【図６】図６は、スコポラミン誘導ドライアイを伴う動物について計算された平均ＰＲＴＴ  ＡＵＣ（７〜２１日目）を示す図である。ビヒクル、および３つの異なる濃度の、配列番号１１の配列を伴うａｌｌ−Ｄ−レトロインベルソＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドで処置された動物についての結果が示される。
【図７】図７は、スコポラミン誘導眼乾燥症候群を伴う動物の、組織学的角膜病変スコアの平均を示す図である。ビヒクル、および３つの異なる濃度の、配列番号１１の配列を伴うａｌｌ−Ｄ−レトロインベルソＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドで処置された動物についての結果が示される。
【発明を実施するための形態】
【０１２９】
実施例
（実施例１）
溶液および産物
配列番号１１のａｌｌ−Ｄ−レトロインベルソＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドは、Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｆｒａｎｃｅ）により作製され、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製された。識別については、質量分析で解析され、純度については、ＲＰ−ＨＰＬＣで解析された（Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｆｒａｎｃｅ）。凍結乾燥させたら、粉末を２〜８℃で保存した。
【０１３０】
（実施例２  スコポラミン誘導マウスドライアイモデルにおける３つの用量による、配列番号１１のａｌｌ−Ｄ−レトロインベルソＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの効果）
研究概念
本研究の目的は、配列番号１１のａｌｌ−Ｄ−レトロインベルソＪＮＫ阻害剤（ポリ）ペプチドの効果を、スコポラミン誘導ドライアイのマウスモデルにおける３つの用量レベルで評価することであった。
【０１３１】
配列番号１１のペプチドを、このドライアイのマウスモデルにおける有効性について調べた。ペプチドは、低用量、中程度用量、および高用量で調べた。配列番号１１のペプチドの低用量レベル、中程度用量レベル、および高用量レベルについて、処方物試料中で測定された濃度は、それぞれ、０．０６％（ｗ／ｖ）、０．２５％（ｗ／ｖ）、および０．６％（ｗ／ｖ）であった。陰性対照としてもまた用いられるビヒクルは、０．９％のＵＳＰグレード注射用塩化ナトリウムであった。
【０１３２】
本研究は、各群マウス１２匹の４群と、マウス４匹のさらなる群とを含む、合計５群の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスからなった。臭化水素酸スコポラミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）注射（皮下（ＳＣ）、１日４回、投薬１回当たり０．５ｍｇ、０〜２１日目）と、定常的な気流による乾燥環境へのマウスの曝露との組合せにより、両眼の短期ドライアイを誘導した。１日目に開始して、群１〜４のマウスを、１日３回（ＴＩＤ）ずつ２１日間にわたり、ビヒクル（０．９％の滅菌生理食塩液；陰性対照薬）または配列番号１１のペプチド（０．０６％、０．２５％、および０．６％）の両眼（ｂｉｌａｔｅｒａｌ  ｏｃｕｌａｒ（ｏｃｕｌｕｓ  ｕｔｅｒｑｕｅ；ＯＵ））外用投与（投薬１回当たり眼１つ当たり５μＬ）により処置した。群５のマウスは、非誘導の（ドライアイを来さない）非処置対照として維持した。
【０１３３】
存命（処置）期間中は、臨床的観察を１日１回記録し、角膜フルオレセイン染色、涙液層破壊時間試験（ＴＢＵＴ）、およびフェノールレッド綿糸検査（ＰＲＴＴ）を伴う細隙灯顕微鏡検査（ＳＬＥ）を毎週３回実施した。２２日目に剖検を実施し、眼、眼瞼、結膜、および涙腺を、各動物の両眼から採取した。右眼（ｒｉｇｈｔ  ｅｙｅｓ（ｏｃｕｌｕｓ  ｄｅｘｔｅｒ、ＯＤ））に由来する組織を固定し、次いで、顕微鏡により評価した。左眼（ｌｅｆｔ  ｅｙｅｓ（ｏｃｕｌｕｓ  ｓｉｎｉｓｔｅｒ；ＯＳ））に由来する組織を、液体窒素中で瞬時凍結させ、その後の可能な解析のために−８０℃で凍結保存した。
【０１３４】
【表３】
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【０１３５】
方法
１．投薬のための調製
配列番号１１の（ポリ）ペプチドは、３００．６５ｍｇの乾燥粉末を含有する１．５ｍＬの透明プラスチック製微量遠心用バイアルとして、Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｆｒａｎｃｅ）から得た。
【０１３６】
研究を開始する前に、配列番号１１の（ポリ）ペプチドを、滅菌生理食塩液（ビヒクル）中で調合した。各濃度の投薬用溶液を、０．２μｍのフィルターを用いて滅菌し、複数のあらかじめラベル付けされたバイアルへとアリコート分割し、−２０℃で凍結させた。処方物試料中で測定された濃度は、０．０６％、０．２５％、および０．６％へと四捨五入される０．０５８％、０．２５％、および０．６２４％であった。
【０１３７】
投薬の各日において、１セットの投薬用溶液を融解させ、その日の投薬の実施のために用いた。対照（ビヒクル）は、投薬準備ができた状態で用意され、投薬のための調製は不要であった。
【０１３８】
２．細隙灯顕微鏡検査（ＳＬＥ）
研究への登録の前に、各動物には、ＳＬＥおよび外用適用されたフルオレセインを用いる間接的眼検査を施した。ドレイズ眼評価スケールを用いて、眼についての所見を記録した。ＳＬＥおよびドレイズ評価は、存命期間中毎週３回繰り返した。
【０１３９】
３．涙液層破壊時間（ＴＢＵＴ）試験およびその後の角膜検査
ＴＢＵＴ試験は、角膜へのフルオレセインの適用後における完全な瞬きと、涙液層における最初のランダムな乾燥スポットの出現との間の経過時間を秒単位で測定することにより、毎週３回実行した。ＴＢＵＴを実施するために、０．１％の液体フルオレセインナトリウムを結膜嚢へと滴注し、眼瞼を手指で３回にわたり閉止し、次いで、眼瞼を開放させたまま保持し、連続的なフルオレセイン含有涙液層が角膜を覆うことを明らかにし、涙液層が破壊される（乾燥スポットまたは乾燥ストリークが出現する）のに要する時間（秒単位の）を記録した。少なくとも９０秒後、０．１％のフルオレセインのさらなる滴注を角膜へと再適用した後で、角膜上皮の損傷を、コバルトブルーフィルターを伴う細隙灯を用いてグレード付けし、次いで、ドレイズ眼スケールに従い、角膜をスコア付けした。
【０１４０】
４．フェノールレッド綿糸涙液試験（ＰＲＴＴ）
涙液の産生は、ＰＲＴＴ検査ストリップ（Ｚｏｎｅ−Ｑｕｉｃｋ；日本、名古屋、株式会社メニコン）を用いて、両眼において毎週３回測定した。１日の１回目の処置の前に、細隙灯生体顕微鏡法下で３０秒間にわたり、糸を、各眼の結膜円蓋の外眼角へと適用した。涙液の糸に沿った移動（すなわち、湿潤した綿糸の長さ）を、ミリメートル単位の定規を用いて測定した。
【０１４１】
５．剖検および病理学的解析
２２日目の剖検では、眼球、涙腺、眼瞼、および結膜を含めた、各動物に由来する両眼を摘出した。右眼および関連組織を、一晩にわたり改変ダビッドソン液中に浸漬することにより固定した後、１０％の中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）へと移した。固定された右眼の組織を脱水し、パラフィン中に包埋し、３〜５μｍの厚さで切片化し、スライドガラス処理された組織を、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。染色されたスライドガラスを、光学顕微鏡により評定した。各右眼について少なくとも２つの切片レベルを組織病理学的に検討して、眼の全ての部分に対する詳細で完全な組織病理学的評価を実行した。角膜、結膜および角膜の上皮（杯細胞を含めた）のほか、涙腺に対して特別の注意を払った。これらの組織は、傷害について、０を正常とし、１を最小限の傷害とし、２を軽度の傷害とし、３を中等度の傷害とし、４を重度の傷害とする０〜４のスケールに基づきスコア付けした。各角膜についてのスコアは、角膜上皮の厚さおよび角膜炎症に基づいた。結膜は、浸食および炎症のほか、杯細胞の存在または非存在についてスコア付けした。
【０１４２】
結果
１日４回のスコポラミンのＳＣ投与（投薬１回当たり０．５ｍｇ）により、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、眼を効果的に潤滑化および保護することが可能な、安定的な涙液層を維持する能力を低下させる、水性涙液産生容量の減少および涙液の生理化学的特性の変化によって特徴付けられる眼乾燥症候群を誘導した。
【０１４３】
１．涙液層破壊時間（ＴＢＵＴ）試験および角膜検査
ドライアイを誘導する前に、涙液層破壊時間試験（ＴＢＵＴ）を実施し、ドライアイの誘導後２、４、７、９、１１、１４、１６、１８、および２１日目にもまた実施した。スコポラミンの投薬開始（ドライアイの誘導）後、全ての動物において、ＴＢＵＴの平均値が減少し始めた。群３および４の、中程度用量および高用量の配列番号１１のペプチドで処置された動物のＴＢＵＴの平均が、投薬の開始後に低下し続けて、９日目には最低値に達したのに対し、低用量の群２では９日目に増大した。低用量、中程度用量、および高用量におけるＴＢＵＴの平均（それぞれ、群２、３、および４）は、ビヒクル群を上回った。低用量レベル、中程度用量レベル、および高用量レベルの配列番号１１のペプチドで処置された群（群２〜４）は一般に、ＴＢＵＴの用量依存的増大を示した。
【０１４４】
【表４】
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【０１４５】
２．フェノールレッド綿糸涙液試験（ＰＲＴＴ）
ドライアイを誘導する前に、ＰＲＴＴ試験を実施し、２、４、７、９、１１、１４、１６、１８、および２１日目にもまた実施した。０日目〜４日目のＰＲＴＴ値が、ドライアイを誘導された全てのマウスにおいて減少したことから、スコポラミンの投与および送風機により作り出される、気流を増大させた乾燥環境への曝露後における涙液産生の減少が示された。大半の群におけるＰＲＴＴの最低値は、ほぼ７日目に生じた。ビヒクル対照群（群１）では、ＰＲＴＴが減少を続け、１４日目に最低値に達した。全てのドライアイ群では、最低値の後で、増大が見られた。これらの所見は、スコポラミンによる処置の開始が、化合物による処置の開始より１日早ければ、眼乾燥症候群と関連する眼の生理学的変化を誘発するのに十分であったことを示す。
【０１４６】
低用量レベル、中程度用量レベル、および高用量レベル（０．０６％、０．２５％、および０．６％；それぞれ、群２、３、および４）の配列番号１１のペプチドで処置された群は一般に、ＰＲＴＴの用量依存的増大を示した。
【０１４７】
【表５】
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【０１４８】
３．組織病理学的解析
本研究では、組織学的変化が一般に、角膜に限定された。角膜における所見は、角膜上皮表面の角質化の増大、角膜上皮の厚さの増大、角膜上皮の細胞充実度の増大、上皮細胞回転の増大と符合する、上皮基底層の有糸分裂発生の微弱な増大からなった。これらの所見は、角膜の乾燥および角膜表面の刺激に対する生理学的適応応答を示唆する。本研究では、表面の潰瘍化、角膜間質の浮腫、および角膜への炎症性浸潤物が見られなかった。非処置群（正常マウス、スコポラミンによる処置を伴わない）である群５における眼は、正常限界内にあった。眼瞼の何らかの最小限の非化膿性炎症が、全ての群にわたり散見されたが、結膜、網膜、涙腺、および眼の他の部分は、正常限界内にあった。杯細胞は、全ての群において、限界内にあると考えられた。杯細胞とは、涙液がより強力でより付着性の涙液層を形成する一助となるムチンの主要な産生細胞である。
【０１４９】
軽度〜中程度の角膜変化が、非処置正常眼群（群５）を除く全ての群において注意され、ビヒクル処置群である群１、および低用量の配列番号１１のペプチドである群２では、他の処置群と比較して僅かにより重度であった。これらの所見は、涙液産生増大の角膜に対する肯定的で有益な効果と符合した。
【０１５０】
高用量の配列番号１１のペプチドは、このマウスドライアイモデルと関連する角膜変化を軽減／改善するのに最も有効であった。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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