(57)【要約】      （修正有）【課題】  臭気物質に対する十分な脱臭効果および十分な整腸作用を有する酵母を含有する生菌剤、それを含む家畜飼料を提供する。【解決手段】  嫌気的条件下において２０℃以上で増殖できる酵母であって、嫌気的条件下において２０℃以上で臭気物質に対して脱臭効果を有する酵母を含有する生菌剤。特に、酵母がキャンディダ属、アルキシオザイマ属又はゲオソリカム属である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
嫌気的条件下において２０℃以上で増殖できる酵母であって、嫌気的条件下において２０℃以上で臭気物質に対して脱臭効果を有する酵母を含有する生菌剤。
【請求項２】
前記酵母が、３７℃、ｐＨ８．５以上の条件下で増殖できることを特徴とする請求項１に記載の生菌剤。
【請求項３】
前記酵母が、３７℃、ｐＨ２以下の条件下で０．５時間以上生存することができることを特徴とする請求項１または２に記載の生菌剤。
【請求項４】
前記酵母が、脂肪酸、アンモニアおよびアミンから選ばれる１種または２種以上の物質を資化することができることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の生菌剤。
【請求項５】
前記酵母が、キャンディダ属酵母、アルキシオザイマ属酵母またはゲオトリカム属酵母であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の生菌剤。
【請求項６】
前記酵母が、キャンディダ・ピントロペシイ、キャンディダ・シュードインターメディア、キャンディダ・インターメディア、アルキシオザイマ・テルリスおよびゲオトリカム・キャンディダムから選ばれる１種または２種以上の菌であることを特徴とする請求項５に記載の生菌剤。
【請求項７】
前記酵母が、キャンディダ・エスピーFERM P-19556であることを特徴とする請求項５に記載の生菌剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の生菌剤を含む家畜飼料。
【請求項９】
請求項８の家畜飼料を家畜に摂取させることを特徴とする家畜の飼育方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵母を含有する生菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の環境保護への関心の高まりから、有機性廃棄物を焼却処理するのではなく、土壌微生物等を用いた発酵処理を行うことにより、無害化したり、有機肥料として用いるために堆肥化したり、家畜のえさとして用いるために飼料化する試みが多くなされている。しかし、そのような発酵処理の過程で、脂肪酸、アンモニア、アミン等の悪臭物質が発生するため、悪臭公害として近隣住民に迷惑を及ぼすことがあった。そのため、有機性廃棄物を発酵処理する場合には、悪臭を低減させる対策が必須である。
そのような悪臭対策法として、燃焼法、洗浄法、吸着法、化学的分解法、生物脱臭法などがある。しかし、燃焼法は化石燃料を大量に要するなどの欠点があり、洗浄法は多量の水を要する上に排水処理が必要などの欠点があり、吸着法はそれに用いる活性炭やシリカゲル、ゼオライト等の再利用が困難でコスト高になるなどの欠点があったことから、臭気物質を化学的に分解する化学的分解法が比較的よく用いられていた。例えば、アンモニアやトリメチルアミンなどの塩基性の臭気物質を発生する廃棄物に対して、酸性物質を加えて塩基性の臭気物質と反応させ、臭気を発生しない塩を形成させる方法が知られる。そのような酸性物質として、無機酸と有機酸があるが、安価で生分解を受けない無機酸が古くから使用されている。無機酸としては、硫酸、塩酸およびリン酸等があるが、塩酸は揮発性が高く、リン酸は価格が高いことから、硫酸がよく用いられていた。しかし、硫酸は、腐食性や皮膚刺激性を有するなど危険性が高く、取り扱いに十分な注意が必要であった。また、処理する有機性廃棄物の量が多い場合は、薬品代がかさみ、コスト高となる欠点があった。
そのため、近年では、微生物を利用した生物脱臭法に注目が集まっている。例えば、硫化水素の脱臭剤として、シュードモナスを含むものが知られている（特許文献１参照）。しかし、この場合、脱臭可能な臭気物質が硫化水素に限定されているため、実際の有機性廃棄物から発せられる低級脂肪酸、アンモニア、トリメチルアミン等から成る複合臭気物質に対しては十分な効果が得られないという欠点があった。したがって、微生物を利用した脱臭剤であって、複合臭気物質に対して十分な効果を有するものが求められていた。
【０００３】
一方、酵母は、菌体を製剤化したものが整腸剤として商品化されている。酵母の死菌を用いた整腸剤は、よく知られている。死菌剤は、菌体の構成成分や酵素類が効果を発揮すると考えられている。また、整腸剤として、酵母の生菌を用いたものも知られる。生菌の場合、その機能を十分に発揮させるためには、酸素がほとんどない腸内で酵母を活動させる必要があり、嫌気条件下、動物の体温で増殖できる能力が必要である。しかし、酵母は一般に耐熱性が低く、動物の体温以上の温度条件で増殖できる種類は極めて限られる。さらに、嫌気的条件下で生育できる種類も限られている。従来の整腸剤に用いられている酵母の生菌は、これらの性質を有していないため、その期待する機能もあいまいな場合が多かった。
【特許文献１】特開平４−２６２７７８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は上記観点からなされたものであり、臭気物質に対する十分な脱臭効果および十分な整腸作用を有する酵母を含有する生菌剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、嫌気的条件下において２０℃以上で増殖できる酵母であって、臭気物質に対して脱臭効果を有する酵母を用いることにより、上記目的を達成し得ることを見い出し、これらの知見に基づいて、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
（１）嫌気的条件下において２０℃以上で増殖できる酵母であって、嫌気的条件下において２０℃以上で臭気物質に対して脱臭効果を有する酵母を含有する生菌剤。
（２）前記酵母が、３７℃、ｐＨ８．５以上の条件下で増殖できることを特徴とする（１）に記載の生菌剤。
（３）前記酵母が、３７℃、ｐＨ２以下の条件下で０．５時間以上生存することができることを特徴とする（１）または（２）に記載の生菌剤。
（４）前記酵母が、脂肪酸、アンモニアおよびアミンから選ばれる１種または２種以上の物質を資化することができることを特徴とする（１）〜（３）のいずれか１に記載の生菌剤。
（５）前記酵母が、キャンディダ属酵母、アルキシオザイマ属酵母またはゲオトリカム属酵母であることを特徴とする（１）〜（４）のいずれか１項に記載の生菌剤。
（６）前記酵母が、キャンディダ・ピントロペシイ、キャンディダ・シュードインターメディア、キャンディダ・インターメディア、アルキシオザイマ・テルリスおよびゲオトリカム・キャンディダムから選ばれる１種または２種以上の菌であることを特徴とする（５）に記載の生菌剤。
（７）前記酵母が、キャンディダ・エスピーFERM P-19556であることを特徴とする（５）に記載の生菌剤。
（８）（１）〜（７）のいずれか１項に記載の生菌剤を含む家畜飼料。
（９）（８）の家畜飼料を家畜に摂取させることを特徴とする家畜の飼育方法。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の酵母を含有する生菌剤は、臭気物質に対する脱臭効果および十分な整腸作用を有するという利点がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の生菌剤は、嫌気的条件下において２０℃以上で増殖できる酵母であって、嫌気的条件下において２０℃以上で臭気物質に対して脱臭効果を有する酵母を含有する生菌剤である。
【０００８】
本発明の酵母は、嫌気的条件下において２０℃以上で増殖できる酵母であって、嫌気的条件下において２０℃以上で臭気物質に対して脱臭効果を有するものであれば特に制限はない。
【０００９】
本発明の酵母は、脂肪酸、アンモニアおよびトリメチルアミンのいずれか１種または２種以上の臭気物質に対して脱臭効果を有するが、それ以外にも、アルキルメルカプタン等の硫黄化合物について同様の脱臭効果を有することが期待される。
【００１０】
本発明における「嫌気的条件」とは、たとえば、家畜の腸内に含まれる気体中の酸素濃度以下の条件を意味し、実験室的には、２０℃で測定した酸化還元電位が通常−１０ｍｖ以下、好ましくは−５０ｍｖ以下である条件をいう。
【００１１】
また、本発明における「嫌気的条件下において２０℃以上で酵母が増殖できる」とは、嫌気的条件下でなくかつ２０℃より低い温度条件下で酵母の生育に好適な培地を用いて、嫌気的条件下において２０℃以上で培養したときに増殖できることをいい、例えば、後述
の実施例１の組成を含む寒天培地（ｐＨ５〜１０）に菌体を塗布したときに、嫌気的条件下、２０℃以上で、５日以内にその酵母のコロニーが形成されることをいう。
また、本発明における「嫌気的条件下において２０℃以上で臭気物質に対して脱臭効果を有する」とは、嫌気的条件下において２０℃以上で、臭気物質である脂肪酸、アンモニアおよびトリメチルアミンのいずれか１種または２種以上の臭気物質を分解する能力を有していることをいう。
「脂肪酸を分解する能力を有する」とは、後述の実施例１の組成を持つ液体培地
（ｐＨ５〜１０）１Ｌ中で、５ｇ（乾燥重量）の酵母菌体を１０時間培養することにより、培地に含まれる３種の脂肪酸（酪酸、イソ吉草酸、ノルマルペンタン酸）から選ばれる１種または２種以上の脂肪酸について、培養前の培地に含まれる量（各５ｇ／Ｌ）に対して１０重量％以上、好ましくは２０重量％以上の脂肪酸を分解する能力を有することをいう。
また、「アンモニアを分解する能力を有する」とは、後述の実施例１の組成のうち、酵母エキスとポリペプトンを抜き、代わりに硫酸アンモニウムが２ｇである組成を持つ液体培地（ｐＨ５〜１０）１Ｌ中で、５ｇ（乾燥重量）の酵母菌体を１０時間培養することにより、培養前の培地に含まれるアンモニウムイオン全量に対して１０重量％以上、好ましくは２０重量％以上のアンモニウムイオンが分解されることをいう。
また、「トリメチルアミンを分解する能力を有する」とは、後述の実施例１の組成のうち、酵母エキスとポリペプトンを抜き、代わりにトリメチルアミンが２ｇである組成を持つ液体培地（ｐＨ５〜１０）１Ｌ中で、５ｇ（乾燥重量）の酵母菌体を１０時間培養することにより、培養前の培地に含まれるトリメチルアミン全量に対して１０重量％以上、好ましくは２０重量％以上のトリメチルアミンが分解されることをいう。
本発明の酵母は、嫌気的条件下において、通常２０℃以上、好ましくは、３７℃以上、より好ましくは４０℃以上で増殖することができる。
このような性質により、腐敗や発酵によって温度が上昇した有機性廃棄物中であっても、本発明の酵母は、臭気物質に対して脱臭効果を発揮することができる。さらに、家畜に摂取させた場合は、家畜の腸内であっても増殖し、十分な整腸作用を発揮すると共に、腸内で発生するアンモニア等の有害物質を中和・不揮発化する効果を発揮することができる。
【００１２】
本発明の酵母としては、キャンディダ（Candida）属酵母、アルキシオザイマ（Arxiozyma）属酵母、およびゲオトリカム(Geotrichum)属酵母等が挙げられる。キャンディダ属酵母としては、キャンディダ・ピントロペシイ (Candida pintolopesii)、キャンディダ・シュードインターメディア (Candida pseudointermedia)、キャンディダ・インターメディア(Candida intermedia) が好ましく、キャンディダ・ピントロペシイIFO1313、キャンディダ・エスピー(Candida sp.) FERM P-19556が特に好ましい。
【００１３】
また、アルキシオザイマ属酵母としては、アルキシオザイマ・テルリス (Arxiozyma telluris) が好ましく、アルキシオザイマ・テルリスIFO1331が特に好ましい。
また、ゲオトリカム属酵母としては、ゲオトリカム・キャンディダム(Geotrichum candidum)が好ましく、ゲオトリカム・キャンディダムIFO31810が特に好ましい。
キャンディダ・ピントロペシイIFO1313、アルキシオザイマ・テルリスIFO1331およびゲオトリカム・キャンディダムIFO31810は、生物遺伝資源センター（ＮＢＲＣ：千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）から入手でき、キャンディダ・エスピー(Candida sp.) FERM P-19556は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターから入手できる。
【００１４】
本発明に用いる酵母は、一種単独で用いてもよいし、複数種を同時に用いてもよい。
また、本発明の酵母は、３７℃、ｐＨが８．５以上の条件下で増殖できなくてもよいが、そのような条件下で増殖できる酵母が好ましく、３７℃、ｐＨ９以上の条件下で増殖できる酵母がより好ましい。
【００１５】
家畜の排泄物等の有機性廃棄物が腐敗・発酵すると、アンモニア等の発生により、そのｐＨは８．５以上に高まることがあり、上記条件下で増殖できれば、そのような状況で十分な脱臭効果が期待できるからである。
【００１６】
「３７℃、ｐＨが８．５以上の条件下で増殖できる酵母」とは、ｐＨが８．５より低い条件下で酵母の生育に好適な培地において、そのｐＨを８．５以上にしたときにも増殖できる酵母をいい、例えば、後述の実施例１の組成物を含む培地（ｐＨ８．５以上に調製）に菌体を塗布したときに、３７℃で５日以内にその酵母のコロニーが形成されることをいう。
また、本発明の酵母は、３７℃、ｐＨ２以下の条件下で０．５時間以上生存することができなくてもよいが、家畜に摂取させた場合に、胃酸にさらされても死滅しないで腸内まで生菌が届くようにとの観点から、３７℃、ｐＨ２以下の条件下で０．５時間以上生存することができるものが好ましい。酵母が家畜の腸内まで生菌として到達すると、本発明の効果が家畜に対して十分に発揮されるからである。ここでいう「酵母が生存している」とは、酵母の生存率が０．１％以上、好ましくは１％以上であることをいう。
【００１７】
「３７℃、ｐＨ２以下の条件下で０．５時間以上生存することができる酵母」には、具体的には、後述の実施例１の組成物を含む液体培地（ｐＨ２以下に調製）中で、１気圧、３７℃の条件下で０．５時間以上生存することができる酵母が含まれる。胞子を形成した状態でのみ、そのような条件下で生存することができる酵母であってもよいが、栄養細胞の状態であってもそのような条件下で生存することができる酵母が好ましい。
【００１８】
本発明の酵母は、脂肪酸、アンモニアおよびアミンのいずれか１種または２種以上を分解することができさえすれば、それらを資化することができなくてもよいが、それらを資化することができるものが好ましい。
【００１９】
本発明に用いる酵母は、例えば、市販の生菌剤などに含まれているものを用いることもでき、また、市販の菌株を用いて培養したものを用いることもできる。
本発明に用いる酵母を培養する方法は特に限定されず、定法により行うことができる。例えば、往復動式振盪培養、ジャーファーメンター培養などによる液体培養法や、固体培養法により培養することができる。培養に用いる培地成分としては、特に制約はなく、例えば、炭素源としてグルコース、シュークロース、糖蜜などの糖類、クエン酸などの有機酸類、グリセリンなどのアルコール類、また窒素源としてアンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウムなどのアンモニウム塩や硝酸塩等が用いられる。また、固体培地としては、例えば、フスマ、米ぬか、麦、乳製品等を含む資材を用いることができる。
培養で得られた生菌は、そのまま用いることもできるが、酵母を培養した培養物を培地と共に粉砕または細断して用いてもよい。また、培養物中の培地から生菌をかき取って用いてもよいし、この培養物を遠心分離することにより生菌を分離して用いてもよい。さらに、上記のように回収した培養物の粉砕物や生菌は、そのまま用いることもできるが、生菌剤の製品としての保存性の観点から、自然乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥などにより、ある程度乾燥させて用いるのが好ましい。
本発明に用いる酵母は、酵母の生菌である。また、本発明に用いる酵母の生菌は、胞子でなくてもよいが、生菌剤の製品としての保存性の観点から、胞子であることが好ましい。酵母に胞子を形成させる場合は、培養の終期において、培地の組成、培地のｐＨ、培養温度、培養湿度、培養する際の酸素濃度などの培養条件を、その胞子形成条件に適合させるように調製することができる。また、本発明において酵母の胞子を用いる場合は、生菌剤の保存性の観点から、胞子の水分含有量を２０重量％以下とするのが好ましい。
本発明の生菌剤に含まれる酵母の量については、本発明の効果が発揮される限り特に制限はないが、本発明の生菌剤に含まれる酵母の濃度は、そのコロニー形成単位として、通常
１×１０3〜１×１０11cfu/g、好ましくは１×１０6〜１×１０10cfu/gとすることができる。
本発明の生菌剤は、酵母の菌体の他に担体や増量剤など、本発明の効果を妨げないものであれば、他のいかなる物質を含んでいてもよい。
【００２０】
本発明の家畜飼料は、酵母の生菌のみを含んでいてもよいが、生菌の他に、例えば、通常家畜の飼料として用いられているものや増量剤など、本発明の効果を妨げないものであれば、他のいかなる物質を含んでいてもよい。
本発明の生菌剤または家畜飼料の剤形としては、特に制限はなく、粉状でもよいし、粒子状に製剤することにより、処理したい有機性廃棄物と混ざりやすい形態としてもよい。また、酵母の菌体に液体担体を加えて、液状の生菌剤または家畜飼料としてもよい。
液体担体としては、本発明の効果を妨げない限り特に制限はないが、水、大豆油、菜種油、コーン油などの植物油、液体動物油、ポリビニルアルコールやポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸などの水溶性高分子化合物が好適に用いられる。
本発明の生菌剤の使用方法については、特に制限はないが、有機性廃棄物が腐敗・発酵して悪臭が発生している場所又は発生しうる場所に散布して用いることができる。そのような場所として、例えば、食品廃棄物またはゴルフ場の刈り芝等を発酵させる場所などの有機性廃棄物を処理する場所、あるいは、牛、豚、鶏等の家畜の畜舎などが挙げられる。
また、本発明の生菌剤は、豚、牛、鶏、馬などの家畜に摂取させて用いることもできる。家畜に摂取させる場合は、菌体をそのまま与えてもよいし、菌体を飼料に混ぜて与えてもよいし、菌体を水などの液体に懸濁して与えてもよい。
【００２１】
本発明の生菌剤を散布して使用する場合の使用量については、本願発明の効果が得られる範囲であれば特に制限はないが、例えば、有機性廃棄物１ｋｇあたりの酵母の菌体が
１〜１０００ｍｇ（乾燥重量）となるような量を使用することができる。
【００２２】
また、本願の生菌剤を家畜に摂取させて用いる場合は、家畜の体重１０ｋｇにつき一日当たり、酵母の菌体を０．０５〜１０ｇ（乾燥重量）程度用いることができる。
本発明の生菌剤を散布して用いた場合は、本発明の生菌剤は脱臭効果を発揮すると共に、発酵を促進する効果も発揮する。
【００２３】
また、本発明の生菌剤を家畜に摂取させた場合は、十分な整腸作用を発揮すると共に、腸内で発生するアンモニア等の有害物質を中和・不揮発化し、それによって、家畜のストレス緩和、成長促進、乳量増加、採卵増加、免疫賦活化、死亡率低下等の効果が得られる。さらに、家畜の排泄物には酵母の菌体が含まれているので、酵母の生菌剤をその排泄物に改めて添加しなくても、その排泄物について脱臭効果、発酵促進効果が得られる。
【実施例１】
【００２４】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。
（培地の調製）
酵母の増殖条件の検討を行う際に用いる培地の調製を行った。この培地は、炭素源として、悪臭物質である低級脂肪酸を用いた寒天培地であって、以下に示す成分を含んでいる。培地のｐＨは、５規定のアンモニア水を用いて、表１に記載された数値にそれぞれ調製した。
無機低級脂肪酸培地の組成
MgSO4・7H2O：１．０ｇ；  (NH4)2SO4：１．０ｇ；  CaCl2・2H2O：５０ｍｇ；  NaMoO4：１ｍｇ；  FeSO4・7H2O：５００mｇ；  ZnSO4・7H2O：４００mｇ；  H3BO4：１５mｇ；
CoCl2・6H2O：５０mｇ；  MnCl2・4H2O：２０mｇ；  NiCl2・6H2O：１０mｇ；  CuSO4・5H2O：２００mｇ；  EDTA：２５０mｇ；  Na2HPO4・12H2O：４３ｇ；  KH2PO4：１５．６ｇ；  Fe-EDTA：２４０ｍｇ；  酵母エキス：０．５ｇ；  ポリペプトン：０．５ｇ；
酪酸：５ｇ；  イソ吉草酸：５ｇ；  ノルマルペンタン酸：５ｇ；  蒸留水：１Ｌ；  ｐＨ５〜１０（アンモニアで調製）
【実施例２】
【００２５】
（菌体の増殖条件の確認）
キャンディダ属酵母またはアルキシオザイマ属酵母が、低級脂肪酸を炭素源、アンモニアを窒素源として、好気的又は嫌気的条件下で増殖できるかを調べた。
実施例１の培地に、表１に記載された３種の菌株を塗布し、恒温槽を用いて表１に記載された温度に保ちながら、表１に記載された酸素条件下（好気的又は嫌気的条件下）で９６時間培養した。
嫌気的条件下での培養は、市販のガスパックを用いて行った。菌体の増殖の有無は、寒天培地上にコロニーが出現するか否かで判定した。
その培養の結果を表１に示す。
【００２６】
【表１】
2005126385.tif 000002
この結果から、実験で用いた３種の酵母は、表１に記載されたようなｐＨや、高い培養温度、又は、嫌気的条件下であっても、菌体が増殖することが確認された。
【実施例３】
【００２７】
（消臭効果の確認）
９６０ｍｌ容のポリカーボネート製蓋付き容器の底部に、１ｍｍメッシュの金属金網を底部から１ｃｍの高さに敷き、そこに内径５ｍｍのシリコンチューブを導いて、容器中に通気ができるように加工した。一方、その容器の上部の蓋には、中心部に直径６ｍｍの穴を空け、同じく内径５ｍｍのシリコンチューブを取り付け、排気管とした。この容器に排泄されて間もない豚糞５ｋｇと泥炭１ｋｇとを加え、よく混合した。この混合物の水分含
量は６３．９重量％であった。
【００２８】
一方、キャンディダ・ピントロレシー IFO1313を液体培地で培養し、それを遠心分離して集菌した。集菌した１ｇの生菌（水分含量８７．３重量％）を上記の６ｋｇの混合物に添加してよく混ぜ、そのうち１００ｇを上述のポリカーボネート容器内に入れた。その容器を、４０℃に維持している恒温室に設置し、飽和湿度の空気を毎分１０ｍｌの速度で通気した。１４日経過後に、その容器から排気される空気中のアンモニア濃度を測定した。
【００２９】
キャンディダ・ピントロレシー IFO1313を用いる代わりに、キャンディダ・エスピー FERM P-19556を用いて同様の操作を行い、容器から排出される気体中のアンモニア濃度を測定した。また、コントロールとして、酵母の生菌を加えずに同様の操作を行い、アンモニア濃度を測定した。その結果を表２に示す。
【００３０】
【表２】
2005126385.tif 000003
表２から分かる通り、酵母の生菌を加えたサンプルでは、それを加えなかったコントロールに比べてアンモニアの濃度が低減している。これにより、実験に用いた酵母が増殖する条件下で、それらの酵母は、悪臭物質の一つであるアンモニアに対して脱臭効果を発揮することが分かった。
【実施例４】
【００３１】
（堆肥化実験）
本願に用いる酵母の生菌が、堆肥ができる過程において発生する実際の臭気に対して、実際に堆肥ができる条件下で脱臭効果および発酵促進効果を発揮するかどうかを調べるため、以下の堆肥化実験を行った。
【００３２】
まず、排泄されて間もない豚糞２４ｋｇに、おがくず５．５ｋｇを加えてよく混合した（水分含量６７．１重量％）。この混合物７ｋｇに、キャンディダ・ピントロレシー IFO1313の生菌（水分含量８６．７重量％）を５ｇ添加してよく混ぜた。次に、底に金網が敷いてある１０Ｌ容の金属容器を用意し、生菌を含む上記混合物を全量入れた。この金属容器を、外部と断熱処理がしてある容器内に設置した。
【００３３】
その後、毎分１．５Ｌの速度でその金属容器に通気し、生菌を含む混合物を発酵させた。生菌を含む混合物の中心部の温度を経時的に測定し、発酵開始から始まる温度上昇が止まって定常状態となるまでの時間、および、中心部の最高温度を調べた。
キャンディダ・ピントロレシー IFO1313を用いる代わりに、キャンディダ・エスピー FERM P-19556を用いて同様の操作を行い、発酵開始から始まる温度上昇が止まって定常状態となるまでの時間、および、中心部の最高温度を調べた。また、コントロールとして、酵母の生菌を添加せずに、同様の操作を行い、発酵開始から始まる温度上昇が止まって定常状態となるまでの時間、および、中心部の最高温度を調べた。それらの結果を表３に示す。
【００３４】
【表３】
2005126385.tif 000004
この結果から、実験で用いた２種のキャンディダ属酵母は、発酵を促進する効果を有していることが示された。
次に、実験で用いた酵母が、脱臭効果を発揮しているかを調べるために、発酵開始から６０日経過後に、上記の金属容器から排出される気体中の低級脂肪酸を液体クロマトグラフィーにより定量した。
【００３５】
その結果を表４に示す。
【００３６】
【表４】
2005126385.tif 000005
数値の単位はｐｐｂ
ｎ−Ｃ３：プロピオン酸；  ｎ−Ｃ４：ｎ−酪酸；  ｎ−Ｃ５：ｎ−吉草酸；  ｉ−Ｃ５ｉ−吉草酸
この結果から、実験で用いた２種のキャンディダ属酵母は、堆肥ができる過程において発生する実際の臭気に対して、実際に堆肥ができる条件下で脱臭効果を示すことが分かった。