(57)【要約】本発明は、抗体または抗体フラグメントのアフィニティー精製のための、支持材料と、支持材料に共有結合している少なくとも１つのリガンドとを備えたリガンド置換マトリクスの使用に関し、該リガンドは式（Ｉ）で表される。【化１】2015509486.tif 000184ここで、  Ｌは、リガンドが付着している支持材料の連結点である；  Ｓｐは、スペーサ基である；  ｖは、０または１である；  Ａｍはアミド基−ＮＲ1−Ｃ（Ｏ）−であり、ここでＮＲ1がＡｒ1に付着しかつ−Ｃ（Ｏ）−がＡｒ2に付着しているか、−Ｃ（Ｏ）−がＡｒ1に付着しかつＮＲ1がＡｒ2に付着しているかのいずれかである；  Ｒ1は水素またはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、より好ましくは水素またはメチルであり、最も好ましくは水素である；  Ａｒ1は５、６または７員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環であって、化学結合を介してＳｐまたはＬと接続されるものでありており、さらに任意には、    （ａ）さらなる５または６員環単核芳香環に、化学結合を介して付着している；また    は、    （ｂ）多核環系の一部として、単核または２核芳香環に縮合している；  ここで、Ａｒ1は、Ａｒ1を構成する前記５、６または７員環芳香環における化学結合を介してＡｍと直接的に接続しているか、Ａｒ1に付着している前記さらなる５または６員環芳香環における化学結合、またはＡｒ1に縮合している前記さらなる５または６員環芳香環における化学結合を介してＡｍと間接的に接続しているかのいずれかであって；  Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、Ｃ1〜Ｃ4アルキル；Ｃ3及びＣ4シクロアルキル；Ｃ2〜Ｃ4アルケニル；Ｃ2〜Ｃ4アルキニル；ハロゲン；Ｃ1〜Ｃ4ハロアルキル；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ4アルキル；Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；Ｃ1〜Ｃ4アルキルアミノ；Ｃ1〜Ｃ4アルキルチオ；−ＮＯ2；＝Ｏ；＝Ｓ；＝ＮＨ；−ＯＨ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかである；  Ａｒ2は５または６員環単核芳香環であって、無置換であるか、Ｃ1〜Ｃ6アルキル；Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル；Ｃ2〜Ｃ6アルケニル；Ｃ5及びＣ6シクロアルケニル；Ｃ2〜Ｃ6アルキニル；ａハロゲン；Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ6アルキル；Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ；Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ；カルバモイル；メチレンジオキシ；エチレンジオキシ；−ＯＨ；−ＳＨ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着しており；任意には、Ａｒ2は、上記のようにそれが化学結合を介して付着してもよい前記置換基に加えて、多核環系の一部として５または６員環単核芳香環と縮合している。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体または抗体フラグメントのアフィニティー精製のための、支持材料と、支持材料に共有結合している少なくとも１つのリガンドとを備えたリガンド置換マトリクスの使用であって、前記リガンドが式（Ｉ）で表される、使用。
【化１】
2015509486.tif 000181
ここで、
Ｌは、リガンドが付着している支持材料の連結点である；
Ｓｐは、スペーサ基である；
ｖは、０または１である；
Ａｍはアミド基−ＮＲ1−Ｃ（Ｏ）−であり、ここでＮＲ1がＡｒ1に付着しかつ−Ｃ（Ｏ）−がＡｒ2に付着しているか、−Ｃ（Ｏ）−がＡｒ1に付着しかつＮＲ1がＡｒ2に付着しているかのいずれかである；
Ｒ1は水素またはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、より好ましくは水素またはメチルであり、最も好ましくは水素である；
Ａｒ1は５、６または７員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環であって、化学結合を介してＳｐまたはＬと接続されるものでありており、さらに任意には、
（ａ）さらなる５または６員環単核芳香環に、化学結合を介して付着している；また    は、
（ｂ）多核環系の一部として、単核または２核芳香環に縮合している；
ここで、Ａｒ1は、Ａｒ1を構成する前記５、６または７員環芳香環または部分的に飽和の芳香環における化学結合を介してＡｍと直接的に接続しているか、Ａｒ1に付着している前記さらなる５または６員環芳香環における化学結合、またはＡｒ1に縮合している前記さらなる５または６員環芳香環における化学結合を介してＡｍと間接的に接続しているかのいずれかであって；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、Ｃ1〜Ｃ4アルキル；Ｃ3及びＣ4シクロアルキル；Ｃ2〜Ｃ4アルケニル；Ｃ2〜Ｃ4アルキニル；ハロゲン；Ｃ1〜Ｃ4ハロアルキル；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ4アルキル；Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；Ｃ1〜Ｃ4アルキルアミノ；Ｃ1〜Ｃ4アルキルチオ；−ＮＯ2；＝Ｏ；＝Ｓ；＝ＮＨ；−ＯＨ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかである；
Ａｒ2は５または６員環単核芳香環であって、無置換であるか、Ｃ1〜Ｃ6アルキル；Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル；Ｃ2〜Ｃ6アルケニル；Ｃ5及びＣ6シクロアルケニル；Ｃ2〜Ｃ6アルキニル；ａハロゲン；Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ6アルキル；Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ；Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ；カルバモイル；Ｃ1〜Ｃ4アルキレンジオキシ、好ましくはメチレンジオキシ及びエチレンジオキシ；−ＯＨ；−ＳＨ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着しており；任意には、Ａｒ2は、上記のようにそれが化学結合を介して付着してもよい前記置換基に加えて、多核環系の一部として５または６員環単核芳香環と縮合している。
【請求項２】
請求項１に記載の使用であって、
Ａｒ1は、１、２または３個のＮ原子を含む５または６員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環、またはベンゼンであって、前記単核環またはベンゼンは、化学結合を介してＳｐまたはＬと接続されるものであり、さらに任意には、
（ａ）ベンゼンまたはチオフェンに化学結合を介して付着しており；または、
（ｂ）多核環系の一部として、ベンゼンまたはチオフェンに縮合しており；
ここで、Ａｒ1は、Ａｒ1を構成する前記芳香環またはベンゼンに存在する化学結合を介してＡｍと直接的に接続しているか、Ａｒ1に付着している前記ベンゼン環またはチオフェン環に存在する化学結合、またはＡｒ1に縮合している前記ベンゼン環またはチオフェン環における化学結合を介してＡｍと間接的に接続しているかのいずれかであって；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、または、メチル、エチル、プロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ；シクロプロピル、ヒドロキシメチル、−ＮＯ2、＝Ｏ、＝Ｓ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかであって；
Ａｒ2は５員環単核芳香環であって、無置換であるか、または、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、フッ素、塩素、カルバモイル、エチルチオ、メチルチオ、５または６員環単核芳香環及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着しており；任意には、Ａｒ2は、上記のようにそれが化学結合を介して付着してもよい前記置換基に加えて、多核環系の一部としてベンゼンまたはチアゾールと縮合している、使用。
【請求項３】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用であって、
Ｒ1は水素またはメチルであり、最も好ましくは水素であり；
Ａｒ1は、イミダゾール、ベンゼン、ピリジン、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール及びトリアゾールから選択される５または６員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環であって、化学結合を介してＳｐまたはＬと接続されるものであり、さらに任意には、
（ａ）ベンゼンに化学結合を介して付着しており；または、
（ｂ）多核環系の一部として、ベンゼンに縮合しており；
ここで、Ａｒ1は、Ａｒ1を構成する５または６員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環に存在する化学結合を介してＡｍと直接的に接続しているか、Ａｒ1に付着している前記ベンゼン環に存在する化学結合、またはＡｒ1に縮合している前記ベンゼン環における化学結合を介してＡｍと間接的に接続しているかのいずれかであって；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、または、メチル、エチル、プロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ；シクロプロピル、ヒドロキシメチル、−ＮＯ2、＝Ｏ、＝Ｓ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかであり；
Ａｒ2は、Ｎ、Ｓ、Ｏから、好ましくはＮ、Ｓから選択される少なくとも１つの原子を含む５員環単核芳香環であって、無置換であるか、または、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、フルオロ、クロロ、カルバモイル、エチルチオ、メチルチオから、好ましくはメチル、エチル、メトキシ、エチルチオ及びシクロプロピルから；５または６員環単核芳香環及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着しており；任意には、Ａｒ2は、上記のようにそれが化学結合を介して付着してもよい前記置換基に加えて、多核環系の一部としてベンゼンまたはチアゾールと縮合している、使用。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用であって、
Ａｒ1は、ベンゾイミダゾール、２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール、ピリジン及び４−トリアゾリルベンゼンから選択され；
Ａｒ1は、ベンゾイミダゾールの１または２位、２，３−ジヒドロベンゾイミダゾールの１位、ピリジンの２位または４−トリアゾリルベンゼンのトリアゾール部の１位に付着する化学結合を介して、ＳｐまたはＬに接続し；
Ａｒ1は、ベンゾイミダゾールの５または６位、２，３−ジヒドロベンゾイミダゾールの５または６位、ピリジンの５位または４−トリアゾリルベンゼンのトリアゾール部の４位に付着する化学結合を介して、Ａｍに接続し；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、または、メチル、エチル、メトキシ、＝Ｓ及び＝Ｏ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかであり；
Ａｒ2は１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−チアジアゾール及びチアゾールから選択される５員環単核芳香環であって、無置換であるか、または、メチル、エチル、メトキシ、エチルチオ、及びシクロプロピル；ピリジン、フラン、イソオキサゾール、オキサゾール、イソチアゾール、チアゾールから選択される５または６員環単核芳香環；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着している、使用。
【請求項５】
前記支持材料が、炭水化物または架橋炭水化物、好ましくはアガロース、セルロース、デキストラン、デンプン、アルギン酸塩及びカラギーナン、セファロース、セファデックス；合成ポリマー、好ましくはポリスチレン、スチレン−ジビニルベンゼンコポリマー、ポリアクリラート、ＰＥＧ−ポリアクリラートコポリマー、ポリメタクリラート、ポリビニルアルコール、ポリアミド及びパーフルオロカーボン；無機材料、好ましくはガラス、シリカ及び金属酸化物のような無機マトリクス；並びに複合材料から選択される材料を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
前記タンパク質が抗体、好ましくはＩｇＧタイプの抗体、またはＦｃ融合タンパク質である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
前記リガンド置換マトリクスの前記リガンドを、前記抗体または前記融合タンパク質のＦｃフラグメントまたはドメインに結合させることにより、前記精製達成する、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記Ｆｃフラグメントもしくはドメインまたは前記抗体が、ＩｇＧ抗体クラスのものであり、より好ましくはヒトＩｇＧ、またはヒト由来ポリクローナルあるいはモノクローナルＩｇＧ、特にＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3及びＩｇＧ4のものである、請求項６または７に記載の使用。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか１項に定義されるリガンド置換マトリクス。
【請求項１０】
請求項９に記載のリガンド置換マトリクスを合成する方法であって、請求項１〜７のいずれか１項に特定される式（Ｉ）に従うリガンドを前記支持材料に付着させる方法。
【請求項１１】
タンパク質のアフィニティー精製方法、好ましくはアフィニティークロマトグラフィーのための方法であって、精製されるタンパク質を、請求項１〜５のいずれか１項に定義されるリガンド置換マトリクスと接触させる方法。
【請求項１２】
前記タンパク質が抗体またはＦｃ融合タンパク質であり、前記リガンドが前記抗体または前記Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域に結合する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
式（ＩＩ）に示されるリガンドであって、Ａｒ1、Ａｒ2及びＡｍは請求項１〜４に定義された意味を有し、ＳｐＰはスペーサ前駆体である、リガンド。
【化２】
2015509486.tif 000182
【請求項１４】
式（ＩＩＩ）に示される構造要素を有するリガンドであって、Ａｒ1、Ａｒ2及びＡｍは請求項１〜４に定義された意味を有する、リガンド。
【化３】
2015509486.tif 000183
【請求項１５】
前記リガンドがタンパク質に結合する、好ましくは抗体に結合する、請求項１３または１４に記載のリガンド。
【請求項１６】
請求項１３〜１５のいずれか１項に記載のリガンドの、抗体または抗体フラグメントのアフィニティー精製のための、好ましくは前記リガンドを適切なマトリクスに付着させた後のアフィニティー精製のための、使用。
【請求項１７】
前記マトリクスが、前記リガンドに結合している少なくとも１つのタンパク質、好ましくは抗体または抗体フラグメントをさらに含む、請求項９に記載のリガンド置換マトリクス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質の分離の分野に関し、好ましくは、アフィニティー分離技術、特に小分子リガンドを用いたクロマトグラフィーによる、モノクローナル及びポリクローナル抗体、並びに免疫グロブリンＦｃセグメントを含む融合タンパク質の精製の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫グロブリンは、ヒト及び他の脊椎動物の体液中に存在する可溶性タンパク質群である。これらは「抗体」とも呼ばれ、細胞の認識、結合、及び接着の過程において重要な役割を果たす。抗体は、抗原（通常は細菌やウイルス）を認識して排除することにより、免疫系において主要な役割を有するオリゴマー糖タンパク質である。
【０００３】
抗体のポリマー鎖は、抗体がいわゆる重鎖及び軽鎖を含むように構成される。基本的な免疫グロブリン単位は、ジスルフィド橋で連結された２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖からなる。重鎖には５つのタイプ（α、γ、δ、ε、μ）があり、該タイプが免疫グロブリンクラス（ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ）を決定する。軽鎖群には２つのサブタイプ（λ及びκ）がある。
【０００４】
ＩｇＧは、血液及び他の体液中に確認される可溶性抗体である。これらは、細菌または他の病原体に反応して、Ｂ細胞に由来する形質細胞により構築され、該細菌または他の病原体を中和する。ＩｇＧは、約１５０ｋＤａの分子量を有するＹ字型の糖タンパク質であって、２つの重鎖及び２つの軽鎖により構成される。各鎖は、定常領域と可変領域とに区別される。重鎖の２つのカルボキシ末端領域は、Ｆｃフラグメント（「定常フラグメント」）を形成し、重鎖及び軽鎖のアミノ末端領域は抗原を認識するものであり、Ｆａｂフラグメント（「抗原結合フラグメント」）と命名されている。
【０００５】
Ｆｃ融合タンパク質は、抗体Ｆｃフラグメントと、所与の薬剤標的のための特異性を提供するタンパク質またはタンパク質領域とを組み合わせることにより作製される。例として、領域抗体−Ｆｃ融合タンパク質が挙げられるが、このＦｃフラグメントの２つの重鎖は、特異抗体の重鎖（ＶＨ）または軽鎖（ＶＬ）のいずれかの可変領域に連結されている。他のＦｃ融合タンパク質は、任意のタイプの治療用タンパク質またはタンパク質領域と、Ｆｃフラグメントの組み合わせである。このＦｃ部分は、タンパク質薬剤に安定性及び送達性を付加すると考えられている。
【０００６】
治療用抗体及びＦｃ融合タンパク質は、様々な疾病の治療に使用されるが、著名な例としては、関節リウマチ、乾癬、多発性硬化症、及び癌の多くの形態がある。治療用抗体はモノクローナル抗体でもよく、ポリクローナル抗体でもよい。モノクローナル抗体は、単一の抗体産生細胞株に由来するものであり、単一抗原に対して同一の特異性を示す。癌について可能な治療には、腫瘍細胞特異抗原を中和する抗体が含まれる。ベバシズマブ（アバスチン、ジェネンテック社）はモノクローナル抗体であり、これは血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を中和し、それによって新生血管の腫瘍組織内への成長を防止する。
【０００７】
治療用融合タンパク質、たとえばエタネルセプト（エンブレル、アムジェン社、ＴＮＦ受容体領域がＦｃフラグメントに結合されている）またはアレファセプト（アメビブ、バイオジェン・アイデック社、ＬＦＡ−３がヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に結合されている）が、自己免疫疾患に対する薬剤として使用または開発されている。
【０００８】
タンパク質のバイオセパレーションは、様々な生物学的供給流からのタンパク質産物の回収及び精製に関し、食品、製薬、及びバイオテクノロジー産業において重要な単位操作である。ますます多くの治療用モノクローナル抗体（Ｍａｂ）及び融合タンパク質が市場に参入してきており、または現在臨床開発中である。このようなタンパク質は、綿密な多段階精製手順により達成される極めて高い純度を必要とする。下流の処理及び精製が製造コストの約５０〜８０％を占めており、そのため、新規な精製戦略の開発、または既存の精製戦略の改良のために、相当な努力が行われている（１）。
【０００９】
アフィニティークロマトグラフィーは、タンパク質精製のための最も有効なクロマトグラフィー法の１つである。それは非常に特異なタンパク質−リガンド相互作用に基づく。該リガンドは、供給原料溶液から標的タンパク質を捕捉するために使用される固定相に、共有結合によって固定化される。アフィニティーリガンドは、高い特異性及び選択性によりその標的と結合することができ、複雑な混合物からであっても、高い収率で１０００倍に至るまでの高濃縮を可能にする。
【００１０】
典型的には、プロテインＡによるアフィニティークロマトグラフィーが、ほとんどのＭａｂ及びＦｃ融合タンパク質の精製工程における第１段階である。プロテインＡは、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）の表面に露出した細胞壁結合タンパク質である。これはナノモルの親和性で、様々な種からの免疫グロブリン、特にヒトのサブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４の定常部（Ｆｃ領域）に結合する（２）。しかしながら、消毒及び定置洗浄工程に適用される過酷な条件下では、生成物中に浸出し、安定性に乏しいため、プロテインＡの使用が制限される。プロテインＡの化学的安定性は、Ｍａｂ精製のために遺伝子操作されたプロテインＡ変異体を用いることにより改善され得る。もっとも、プロテインＡ樹脂は高コストであるため、適当な代替品、特に小分子から選択される代替品が探求されている。
【００１１】
Mabsorbent A2P（プロメティック・バイオサイエンス社）は、免疫グロブリン精製のための小分子リガンドである。しかしながら、該リガンドは適切な選択性を示さず（３）、プロセスクロマトグラフィーに適用されない。
【００１２】
別の手法では、抗体精製の最初の捕捉段階として混合モードクロマトグラフィーが使用される。最も一般的な材料は、固定化された２−メルカプトエチルピリジン（MEP HyperCel、ポール・コーポレーション）に基づくものであり、これは発酵ブロスから効果的にＩｇＧを捕捉するが、プロテインＡと比較すると、低い宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）除去率を示す（４）。
【００１３】
合成小分子アフィニティーリガンドは、通常、化学的安定性が高く、製造コストが低いので、治療用タンパク質精製にとって特に注目されている。タンパク質ベースのリガンドと比較してより利用しやすく、好ましくはより安価で、厳しい条件下においてプロテインＡより堅牢で、プロテインＡと同等またはそれ以上の選択性を有する合成アフィニティーリガンドは、抗体及びＦｃ融合タンパク質の精製において適切な解法を提供すると考えられる。このようなアフィニティーリガンドは、標的タンパク質に応じて、ＩｇＧ型免疫グロブリン及びＦｃ融合タンパク質の定常Ｆｃ領域を認識するため、好ましくはプロテインＡと同様の広範な適用可能性を提供すると考えられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の基礎となる課題は、抗体およびＦｃ融合タンパク質のＦｃ領域に結合する小型のアフィニティーリガンド（化合物）を提供することである。好ましくは、小型のアフィニティーリガンドは、マトリクスへの結合に適用可能となる。本発明のさらに基礎となる課題は、抗体及びＦｃ融合タンパク質のＦｃ領域に結合する小型のアフィニティーリガンドを備えたマトリクスを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本課題は、以下に展開される本発明の実施形態により解決される。
【００１６】
本発明は、タンパク質（好ましくは、抗体または抗体フラグメント）のアフィニティー精製のための、支持材料と、支持材料に共有結合している少なくとも１つのリガンドとを備えたリガンド置換マトリクスの使用に関し、本発明に従う該リガンド置換マトリクスまたは本発明に従う該リガンドは、それぞれ式（Ｉ）で表される。
【化１】
2015509486.tif 000002
ここで、
Ｌは、リガンドが付着している支持材料の連結点である；
Ｓｐは、スペーサ基である；
ｖは、０または１である；
Ａｍはアミド基−ＮＲ1−Ｃ（Ｏ）−であり、ここでＮＲ1がＡｒ1に付着しかつ−Ｃ（Ｏ）−がＡｒ2に付着しているか、−Ｃ（Ｏ）−がＡｒ1に付着しかつＮＲ1がＡｒ2に付着しているかのいずれかである；
Ｒ1は水素またはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、より好ましくは水素またはメチルであり、最も好ましくは水素である；
Ａｒ1は５、６または７員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環であって、化学結合を介してＳｐまたはＬと接続されるものでありており、さらに任意には、
（ａ）さらなる５または６員環単核芳香環に、化学結合を介して付着している；また    は、
（ｂ）多核環系の一部として、単核または２核芳香環に縮合している；
ここで、Ａｒ1は、Ａｒ1を構成する前記５、６または７員環芳香環における化学結合を介してＡｍと直接的に接続しているか、Ａｒ1に付着している前記さらなる５または６員環芳香環における化学結合、またはＡｒ1に縮合している前記さらなる５または６員環芳香環における化学結合を介してＡｍと間接的に接続しているかのいずれかであって；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、Ｃ1〜Ｃ4アルキル；Ｃ3及びＣ4シクロアルキル；Ｃ2〜Ｃ4アルケニル；Ｃ2〜Ｃ4アルキニル；ハロゲン；Ｃ1〜Ｃ4ハロアルキル；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ4アルキル；Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；Ｃ1〜Ｃ4アルキルアミノ；Ｃ1〜Ｃ4アルキルチオ；−ＮＯ2；＝Ｏ；＝Ｓ；＝ＮＨ；−ＯＨ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかである；
Ａｒ2は５または６員環単核芳香環であって、無置換であるか、Ｃ1〜Ｃ6アルキル；Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル；Ｃ2〜Ｃ6アルケニル；Ｃ5及びＣ6シクロアルケニル；Ｃ2〜Ｃ6アルキニル；ａハロゲン；Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ6アルキル；Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ；Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ；カルバモイル；Ｃ1〜Ｃ4アルキレンジオキシ、好ましくはメチレンジオキシ及びエチレンジオキシ；−ＯＨ；−ＳＨ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着しており；任意には、Ａｒ2は、上記のようにそれが化学結合を介して付着してもよい前記置換基に加えて、多核環系の一部として５または６員環単核芳香環と縮合している。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
式（Ｉ）は本発明に従うリガンドまたは本発明に従うリガンド置換マトリクスを表してもよい。Ｌが本発明の支持材料／マトリクスの一部であると見なされる場合には、式（Ｉ）はリガンド置換マトリクスを表す。Ｌが本発明の支持材料／マトリクスの一部であると見なされない場合には、式（Ｉ）はマトリクスに付着した後のリガンドを表す。本発明の文脈では、式（Ｉ）は好ましくはマトリクスへの付着後のリガンドを表す。この解釈では、本発明に従う、支持材料／マトリクスに付着する前のリガンドは、好ましくは式（ＩＩ）により表される（下記参照）。
【００１８】
本発明の一実施形態では、式（Ｉ）に従う本発明に従う（支持材料／マトリクスに付着した後の）リガンド、または本発明のリガンド置換支持材料／マトリクスのそれぞれは、式（Ｉａ）の構造を有する。本発明のさらなる実施形態では、式（Ｉ）に従う本発明に従う（支持材料／マトリクスへの付着後の）リガンド、または本発明のリガンド置換支持材料／マトリクスのそれぞれは、式（Ｉｂ）の構造を有する。式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）のいずれにおいても、Ｌ、Ｓｐ、Ｎ、Ｒ1、Ａｒ1及びＡｒ2、並びに整数ｖは、式（Ｉ）について上記で定義された意味を有する。
【化２】
2015509486.tif 000003
【００１９】
本発明に従うリガンドは、ヒト由来ポリクローナル及びモノクローナルＩｇＧ、特にヒトＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3及びＩｇＧ4、並びにウサギおよびマウス免疫グロブリンのような様々な動物種由来のポリクローナル及びモノクローナルＩｇＧと結合する。
【００２０】
Ｌが支持材料／マトリクス上の適切な成分である場合、該リガンド置換マトリクスは式（Ｉｃ）のようにも示されることができ、ここでＭは該マトリクス／支持材料であり、他の変数は式（Ｉ）について説明された意味を有する。
【化３】
2015509486.tif 000004
【００２１】
本発明は、リガンド置換マトリクス、及び、任意にはスペーサ基Ｓｐを介して、連結ポイントＬにおいてマトリクスに付着する前及び後のリガンド（「化合物」とも称する）にも関する。該マトリクスは支持材料を備えている。すなわち、該マトリクスは完全に該支持材料により構成されているか、該支持材料がマトリクスの一部を形成し、該マトリクスは該支持材料に加えての成分を備えている。
【００２２】
本発明は、本発明の文脈において特定されるリガンド置換マトリクスをも含み、ここで該マトリクスがリガンドに結合された少なくとも１つのタンパク質、好ましくは抗体または抗体フラグメントをさらに備える。該抗体または抗体フラグメントは、好ましくは、ＩｇＧタイプの抗体またはＦｃ融合タンパク質である。さらに好ましい実施形態では、該リガンドは該抗体または該融合タンパク質のＦｃフラグメントまたはドメインに結合する。さらに好ましい実施形態では、該Ｆｃフラグメントまたはドメインまたは該抗体は、ＩｇＧ抗体クラスのものであり、より好ましくはヒトＩｇＧ、またはヒト由来ポリクローナルあるいはモノクローナルＩｇＧ、特にＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3及びＩｇＧ4のものである。
【００２３】
したがって、本発明はリガンドすなわち化合物を備え、該化合物はタンパク質、好ましくは抗体または抗体フラグメントを結合し、支持材料／マトリクスに付着する前の該リガンドすなわち化合物は、以下の式を有する。
【化４】
2015509486.tif 000005
ここで、Ｌ、ｖ、Ａｒ1、Ａｍ及びＡｒ2は、式（Ｉ）について以下に定義された意味を有し、ＳｐＰは以下に明示されるスペーサ前駆体である。本発明はさらに、好ましくは本出願で特定される適切なマトリクスにリガンドを付着させた後の、抗体または抗体フラグメントのアフィニティー精製のためのリガンドの使用についても示す。
【００２４】
式（Ｉ）におけるｖが０の場合には、リガンドはＬに直接的に結合している、または結合することとなる。他の実施形態では、リガンドはスペーサ基Ｓｐを介して支持材料に結合されている。これは、式（Ｉ）におけるｖが０でない場合に適合する。
【００２５】
上記式（Ｉ）におけるＬは連結点（linking point）であり、「付着点（point of attachment）」とも称される。当業者は、適切な連結点／付着点を把握している。
【００２６】
連結点Ｌは、リガンド／化合物と直接的に接続されるか、スペーサを介して接続されるかのいずれかであることが理解される。Ｌは支持材料上の適切な成分であり、該支持材料は、本発明のリガンドを該支持材料に連結するのに適している。適切な成分は、当業者にとって既知である。通常、Ｌは、支持材料における適切な官能基と、該リガンドの前駆体化合物における対応する官能基との反応により、マトリクス結合リガンドを形成する反応の結果生じる対象の一部であるか、該対象の一部であってもよい。本発明の一実施形態では、該リガンドの前駆体化合物（支持マトリクスと反応し、リガンド置換マトリクスを形成する）は、スペーサ前駆体を備える。「スペーサ前駆体」は、該リガンド置換マトリクスが形成された後に残るスペーサ部分を形成する化学成分であり、支持材料における適切な基（前駆体基）と反応することによって連結点Ｌを形成するための適切な官能基（前駆体基）を含む（下記参照）。該リガンドの前駆体化合物がスペーサ前駆体を含まない場合（そのため、支持材料と結合を介して直接的に接続される場合）、適切な官能基（前駆体基）はリガンド自身に付着する。
【００２７】
好ましい一実施家体では、Ｌは結合、好ましくは単結合を介して、式（Ｉ）に従うリガンドに直接的に接続される。Ｌが支持材料上の成分である場合には、結合されたリガンドは該支持材料にＬを介して接続する。この文脈において、用語「支持材料」は、当業者にとって既知の、市販のポリマーであって、本発明の目的に適したポリマーに関する。
【００２８】
本発明に従うリガンドは、以下の構造単位を含む。
【化５】
2015509486.tif 000006
ここで、式（ＩＩＩ）のＡｒ1、Ａｍ及びＡｒ2は、式（Ｉ）及び（ＩＩ）について以下及び本明細書の他の部分及び実施例に定義された意味及び好ましい意味を有する。（ＩＩＩ）に示された構造単位は、支持材料／マトリクスに付着した後及び支持材料／マトリクスに付着する前のリガンドにおいて存在する。
【００２９】
式（Ｉ）に示される、及び／または式（ＩＩ）に示される、または式（ＩＩＩ）に示される構造単位を含むリガンドは、タンパク質に結合し、好ましくは抗体に結合し、好ましくはＩｇＧタイプの抗体及びＦｃ融合タンパク質、より好ましくは該抗体または該融合タンパク質のＦｃフラグメントまたはドメインに結合し、最も好ましくは、該Ｆｃフラグメントまたはドメインまたは該抗体は、ＩｇＧ抗体クラスのものであり、より好ましくはヒトＩｇＧ、またはヒト由来ポリクローナルあるいはモノクローナルＩｇＧ、特にＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3及びＩｇＧ4のものである。
【００３０】
好ましい実施形態では、上記で定義されたリガンドは、支持材料／マトリクスに付着した後及び支持材料／マトリクスに付着する前に、上記で定義されたタンパク質に結合する。
【００３１】
さらなる実施形態では、本発明はタンパク質、好ましくは抗体または抗体フラグメントのアフィニティー精製のための、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）を含む式（Ｉ）及び／または式（ＩＩ）に示される、及び／または式（ＩＩＩ）に示される構造単位を含むリガンドの使用に関し、ここでＬ、Ｓｐ、ＳｐＰ、Ａｍ、Ａｒ1、Ａｒ2、Ｒ1及びｖは、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）（Ｉｃ）、（ＩＩ）及び／または（ＩＩＩ）について定義された、並びに／または本明細書及び実施例において、特に好ましい実施形態について定義された意味を有する。本実施形態では、タンパク質、抗体または抗体フラグメントは、好ましくは、式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）について予め適した特性を有する。本実施形態では、リガンドはマトリクスに付着していても、マトリクスに付着していなくてもよいが、好ましくは、本実施形態では、リガンドはマトリクスに付着している。
【００３２】
本発明の文脈における「結合（bond）」は、好ましくは共有化学結合であり、例えば単結合、二重結合または三重結合であって、好ましくは単結合である。
【００３３】
好ましい実施形態では、Ｌは官能基または化学成分であり、本発明のリガンドを支持材料／マトリクスに付着させる前に支持材料それ自体上に存在しているか、本発明のリガンドを支持材料／マトリクスに付着させる過程において化学反応中に形成されるか（「新たな官能基」）のいずれかである。
【００３４】
通常、支持材料は分子、好ましくは本発明のリガンドを付着させるための官能基を備えている。本発明の文脈において、官能基は支持材料の一部と見なされる。これは、本発明のリガンドが支持材料に結合を介して接続する場合（すなわち、スペーサ基Ｓｐが存在せず、Ｌがリガンドに結合を介して直接的に接続する場合。下記参照）においても適合し、前記官能基が結合に変換される際、本発明に従う各リガンドと、分子を支持材料に付着させるための前記官能基または前記支持材料自身のいずれかとの間に、結合が直接的に形成され、好ましくは単結合である。
【００３５】
本発明に従うリガンドと分子を支持材料に付着させるための官能基との間に、結合が直接的に形成される場合には、前記官能基は、後で支持材料に付着する新たな官能基に相互変換されてもよい。本発明の文脈において、該新たな官能基は支持材料の一部と見なされ、リガンドをマトリクスに結合を介して連結するＬを形成し、好ましくは単結合である。
【００３６】
支持材料上の適切な官能基（または「前駆体基」、すなわち、本発明に従うリガンドが付着する前に存在する基）、及び、リガンドが支持材料に直接的に結合することを可能とする本発明のリガンド上の適切な官能基は、限定されないが、互いに独立して、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ2、＞ＮＨ、メタンスルホナート、トリフルオロメチルスルホナート、アリールスルホナート、カルボン酸、スルホン酸、リン酸、ホスホロアミダイト、エポキシド、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミジルカルボキシラート、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールカルボキシラート、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールカルボキシラート、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、マレイミド、アクリラート、アクリルアミド、アルデヒド、ケトン、ヒドラジン、ヒドラジド、Ｏ−アルキルヒドロキシアミン、イソシアナート、イソチオシアナート、シアナート、チオシアナート、ビニルスルホンを含む。
【００３７】
支持材料上に存在する官能基が、リガンドとの連結の際に相互変換してもよい官能基（「新たな官能基」）は、限定されないが、炭素−炭素単結合、炭素−窒素単結合、アリールアルキルエーテル、アリールアルキルチオエーテル、ジアリールエーテル、ジアリールチオエーテル、アリールアルキルアミン、アリールジアルキルアミン、アミド、ヒドラジド、スルホンアミド、スルホニルヒドラジド、Ｎ−アリールオキシアミド、Ｎ−アリールオキシスルホンアミド、ホスファート、リン酸アミド、リン酸ヒドラジド、Ｎ−アリールオキシリン酸アミド、ヒドラゾン、オキシム、ウレア、チオウレア、イソウレア、イミドカルボナート、イソチオウレア、イミドチオカルボナートを含む。
【００３８】
本発明のさらなる実施形態では、Ｌはスペーサ基−Ｓｐ−に接続される。本実施形態では、Ｌは、支持材料上の適切な官能基の、スペーサ基Ｓｐ上の適切な官能基（または「前駆体基」）との反応により生じる結合または化学単位である。したがって、支持材料上の官能基と、スペーサ基Ｓｐ上の官能基（または「相補基」）との化学反応により、本発明に従うリガンドが、支持材料に連結点Ｌを介して接続する。
【００３９】
スペーサ基Ｓｐは、好ましくは、Ｃ及びＨ原子に加えてさらなる原子を含んでいてもよい炭化水素基である。適切なさらなる原子は、当業者にとって既知である。好ましい原子は、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉを含む。該炭化水素基は、直鎖または分枝鎖または環状であってもよい。スペーサ基Ｓｐのより詳細な説明は、下記において提供される。Ｓｐは、本発明に従うリガンドのＡｒ1に、単結合、二重結合または三重結合を介して連結され、好ましくは単結合を介して連結される。さらに、Ｓｐは官能基（前駆体基）に連結されており、該官能基によって本発明のリガンドは、新たな官能基（「最終官能基」、「最終化学成分」または結合単位とも呼ばれる）が形成される際の化学反応において、マトリクス上に存在する官能基（前駆体基）と共有結合により連結され得る。このような、支持材料上及びＳｐ上に互いに独立して存在してもよい官能基（前駆体基）の例は、限定されないが、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ2、＞ＮＨ、メタンスルホナート、トリフルオロメチルスルホナート、アリールスルホナート、カルボン酸、スルホン酸、リン酸、ホスホロアミダイト、エポキシド、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミジルカルボキシラート、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールカルボキシラート、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールカルボキシラート、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、マレイミド、アクリラート、アクリルアミド、アルデヒド、ケトン、ヒドラジン、ヒドラジド、Ｏ−アルキルヒドロキシアミン、イソシアナート、イソチオシアナート、シアナート、チオシアナート、ビニルスルホンを含む。支持材料上の官能基と、スペーサＳｐ上に存在する官能基との反応に由来する適切な接続単位の例は、制限されないが、炭素−炭素単結合、エーテル、アリールアルキルエーテル、アリールアルキルチオエーテル、ジアリールエーテル、チオエーテル、ジアリールチオエーテル、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、アリールアルキルアミン、アリールジアルキルアミン、アミド、エステル、ヒドラジド、スルホンアミド、スルホニルヒドラジド、Ｎ−アリールオキシアミド、Ｎ−アリールオキシスルホンアミド、ホスファート、リン酸アミド、リン酸ヒドラジド、Ｎ−アリールオキシリン酸アミド、ヒドラゾン、オキシム、ウレア、チオウレア、イソウレア、イミドカルボナート、イソチオウレア、イミドチオカルボナートを含む。
【００４０】
スペーサ基Ｓｐは、通常、式（Ｉ）に従うリガンドのＡｒ1と、支持材料上に存在する官能基  （前駆体基）に化学反応を受けて、前述の最終官能基（接続単位）を形成することが可能な官能基  （前駆体基）とを接続する。通常は、Ｓｐは直鎖または分枝鎖の炭化水素であり、環状のサブユニットを包含していてもよい。該炭化水素は、飽和でも不飽和でもよい。すなわち、それは二重結合または三重結合を包含していてもよい。Ｓｐが直鎖の炭化水素である場合、１つのリガンド部分が支持材料上の１つの前駆体基と接続可能になる。これに対し、Ｓｐが分枝鎖の炭化水素である場合、１つを超えるリガンド部分が支持材料上の１つの前駆体基と接続可能になる。Ｃ及びＨに加えて、該炭化水素はＮ、Ｏ、Ｐ及びＳのような他の原子を含んでいてもよく、好ましくはＮ及びＯを含んでいてもよい。該炭素鎖は、他の原子または原子群に割り込まれていてもよい。Ｓｐは、該炭化水素鎖に割り込んでいる異なる原子または原子群の組み合わせを含有していてもよい。該炭化水素の炭素鎖に割り込んでいてもよい原子または原子群の例は、−Ｏ−、＞Ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ＜、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（−Ｏ−）2である。該炭化水素が、−Ｎ＜（第三級アミノ）、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ＜（第三級アミド）または−Ｏ−（Ｐ＝Ｏ）（−Ｏ−）2（リン酸エステル）のような３価の原子または原子群により割り込まれた場合、前記原子群は、Ｓｐにおける１つを超えるリガンド接続サブユニットを、支持材料上に存在する官能基と化学反応して、最終的に前述の接続単位を形成することになる官能基を有するＳｐのサブユニットに接続する分枝点となってもよいことが理解される。Ｓｐ中に分枝点の導入を可能にしてもよい追加の適切な原子群としては、例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸、アミノマロン酸、リジン、オルニチン及びジアミノプロピオン酸のような天然または非天然の３官能基アミノ酸を含む。これらの場合には、前記３価部分の官能基の１つが、支持材料上に存在する官能基と化学反応することを目的とする官能基となってもよい。通常、Ｓｐの全体の長さは１００原子未満であり、好ましくは５０原子未満であり、より好ましくは３０原子未満である。Ｓｐが分枝鎖である場合には、該長さは、支持材料上の官能基と化学反応することを目的とする官能基を備えるＳｐと接続している原子から、Ａｒ1部分に直接的に接続されている最も遠い原子までの距離により規定され、１００原子未満であり、好ましくは５０原子未満であり、より好ましくは４０原子未満である。
【００４１】
支持材料上に存在する化学基に化学反応を受けることを目的とする、炭素系官能基（ＦＧ）（例えば、カルボン酸、アルデヒド、エポキシド、カルボン酸活性エステルなど）に接続された直鎖Ｓｐの適切な成分の例は、制限されないが、以下を含む：
ＦＧ−（ＣＨ2）n−（アルキレン）、ここで１≦ｎ≦１００、好ましくは１≦ｎ≦５０、より好ましくは１≦ｎ≦３０；
ＦＧ−（ＣＨ2）n−Ｏ−（アルキレンオキシ）、ここで１≦ｎ≦９９、好ましくは１≦ｎ≦４９、より好ましくは１≦ｎ≦２９；
ＦＧ−（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｈ）−（アルキレンアミノ）、ここで１≦ｎ≦９９、好ましくは１≦ｎ≦４９、より好ましくは１≦ｎ≦２９；
ＦＧ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）n−（オリゴエチレングリコール）、ここで１≦ｎ≦３０、好ましくは１≦ｎ≦１５、より好ましくは１≦ｎ≦９；
ＦＧ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）n−Ｏ−（オリゴエチレングリコリルオキシ）、ここで１≦ｎ≦３０、好ましくは１≦ｎ≦１５、より好ましくは１≦ｎ≦９；
ＦＧ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）n−Ｎ（Ｈ）−（オリゴエチレングリコリルアミノ）、ここで１≦ｎ≦３０、好ましくは１≦ｎ≦１５、より好ましくは１≦ｎ≦９；
ＦＧ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−（アミドに割り込まれたオリゴエチレングリコール）；
ＦＧ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｏ−（アミドに割り込まれたオリゴエチレングリコリルオキシ）；
ＦＧ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｎ（Ｈ）−（アミドに割り込まれたオリゴエチレングリコリルアミノ）。
【００４２】
支持材料上に存在する化学基に化学反応を受けることを目的とする、非炭素系官能基（ＦＧ）（例えば、ＮＨ2、ＯＨ、ＳＨ、塩素、臭素、ヨウ素、イソシアナート、イソチオシアナート）に接続された直鎖Ｓｐの適切な成分の例は、制限されないが、以下を含む：
ＦＧ−（ＣＨ2）n−（アルキレン）、ここで１≦ｎ≦１００、好ましくは１≦ｎ≦５０、より好ましくは１≦ｎ≦３０；
ＦＧ−（ＣＨ2）n−Ｏ−（アルキレンオキシ）、ここで１≦ｎ≦９９、好ましくは１≦ｎ≦４９、より好ましくは１≦ｎ≦２９；
ＦＧ−（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｈ）−（アルキレンアミノ）、ここで１≦ｎ≦９９、好ましくは１≦ｎ≦４９、より好ましくは１≦ｎ≦２９；
ＦＧ−ＣＨ2ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）n−（オリゴエチレングリコール）、ここで１≦ｎ≦３０、好ましくは１≦ｎ≦１５、より好ましくは１≦ｎ≦９；
ＦＧ−ＣＨ2ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）n−Ｏ−（オリゴエチレングリコリルオキシ）、ここで１≦ｎ≦３０、好ましくは１≦ｎ≦１５、より好ましくは１≦ｎ≦９；
ＦＧ−ＣＨ2ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）n−Ｎ（Ｈ）−（オリゴエチレングリコリルアミノ）、ここで１≦ｎ≦３０、好ましくは１≦ｎ≦１５、より好ましくは１≦ｎ≦９；
ＦＧ−ＣＨ2ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−（アミドに割り込まれたオリゴエチレングリコール）；
ＦＧ−ＣＨ2ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｏ−（アミドに割り込まれたオリゴエチレングリコリルオキシ）；
ＦＧ−ＣＨ2ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）2−Ｎ（Ｈ）−（アミドに割り込まれたオリゴエチレングリコリルアミノ）。
【００４３】
１つの官能基が、支持材料上に存在する官能基と反応することを目的とする官能基性を示す３官能基原子を含む分枝鎖Ｓｐの適切な成分の例は、制限されないが、以下を含む：
Ｈ2Ｎ−Ｃ（Ｈ）（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−ＣＨ2ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）2−）（−ＣＨ2−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−ＣＨ2ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）2−）（グルタミン酸ビス（３，５−ジオキサ−１−オクチル）アミド；ＮＨ2基が、支持材料上に存在する官能基と反応することを目的とする）；
Ｈ2Ｎ−Ｃ（Ｈ）（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−）（−ＣＨ2−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−）グルタミン酸ビス（ｎ−プロピル）アミド；ＮＨ2基が、支持材料上に存在する官能基と反応することを目的とする）；
ＨＯ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（Ｈ）（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）2−）（−ＣＨ2−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）2−）（Ｎ，Ｎ’−ビス（３，５−ジオキサオクタノイル）ジアミノプロピオン酸；ｔｈｅカルボン酸基が、支持材料上に存在する官能基と反応することを目的とする）；
【００４４】
本発明の実施形態では、Ｒ1は以下より選択される：水素；及びＣ1〜Ｃ4アルキル，特に直鎖及び分枝鎖Ｃ1〜Ｃ4アルキルであり、シクロアルキル単位を含んでいてもよい。例えば、メチル，エチル，ｎ−プロピル，ｉ−プロピル，ｎ−ブチル，ｉ−ブチル，ｓｅｃ−ブチル，ｔｅｒｔ−ブチル，シクロプロピル，メチルシクロプロピル。
【００４５】
好ましくは、Ｒ1は水素，エチル及びメチルより選択される。より好ましくは、Ｒ1は水素またはメチルである。最も好ましくは、Ｒ1は水素である。
【００４６】
Ａｒ1は脂環式もしくはヘテロ環式単核芳香環、または部分的に飽和の芳香環であって、５，６または７員環を有していてよい。Ａｒ1は、ＳｐまたはＬに化学結合を介して接続される。Ａｒ1のＳｐまたはＬへの該結合は、単結合、二重結合または三重結合であり得る。好ましくは、該結合は単結合である。Ａｒ1は、ＳｐまたはＬへの化学結合に加えて、置換基への結合を有し得る。
【００４７】
Ａｒ1がヘテロ環式芳香環または部分的に飽和のヘテロ環式芳香環である場合には、それはＮ、Ｓ及びＯからなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含み、好ましくはＮ及びＳからなる群より選択され、より好ましくは１つ以上のＮ原子を含む。これらすべての実施形態において、Ａｒ1は好ましくは５または６員環である。
【００４８】
Ａｒ1がさらなる５または６員環単核芳香環に化学結合を介して付着していない場合、またはさらなる単核または２核芳香環系に縮合していない場合、Ａｒ1は好ましくはの脂環式６員環芳香環（例えば、ベンゼン）またはＮ原子を有するヘテロ環式６員環（例えば、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン）である。この実施形態において、Ａｒ1は好ましくはベンゼンまたはピリジンであり、ピリジンがより好ましい。
【００４９】
一実施形態では、Ａｒ1はさらなる５または６員環単核芳香環に化学結合を介して付着している。Ａｒ1のさらなる５または６員環単核芳香環への該結合は、単結合または二重結合であり得る。好ましくは、該結合は単結合である。該さらなる５または６員環単核芳香環は、脂環式またはヘテロ環式であり得る。すなわち、それはＮ，Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含み得る。
【００５０】
Ａｒ1が５または６員環単核芳香環に化学結合により付着している場合、Ａｒ1は、好ましくはチアゾール、オキサゾール、イソチアゾール、イソオキサゾールまたはトリアゾールであり、トリアゾール及びチアゾールがより好ましい。Ａｒ1に付着された該５または６員環は、好ましくはベンゼンまたはピリジンである。該ピリジンまたはベンゼン環は、無置換であってもよく、−ＯＨ、メチル、エチル、エトキシ、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、メトキシ、モノフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシの群より選択される少なくとも１つの成分により置換されていてもよい。５または６員環単核芳香環に付着されたＡｒ1の好ましい単位は、４−トリアゾリルベンゼン、５−トリアゾリルベンゼン、２−チアゾリルベンゼン、４−チアゾリルベンゼン、５−チアゾリルベンゼン、２−オキサゾリルベンゼン、４−オキサゾリルベンゼン、５−オキサゾリルベンゼン、３−イソチアゾリルベンゼン、４−イソチアゾリルベンゼン、５−イソチアゾリルベンゼン、３−イソオキサゾリルベンゼン、４−イソオキサゾリルベンゼン、５−イソオキサゾリルベンゼン、３−イソチアゾリルベンゼン、４−イソチアゾリルベンゼン、５−イソチアゾリルベンゼンである。５または６員環単核芳香環に付着されたＡｒ1のさらに好ましい単位は、トリアゾリルピリジン、チアゾリルピリジン、オキサゾリルピリジン、イソオキサゾリルピリジン、イソチアゾリルピリジンであり、該ピリジン単位は、Ａｒ1の異なる位置に付着していてもよく、該ピリジンの窒素原子は異なる位置にあってもよい。５または６員環単核芳香環に付着されたＡｒ1より好ましい単位は、４−トリアゾリルベンゼン、４−チアゾリルベンゼン、２−（４−チアゾリル）ピリジン及び３−（４−チアゾリル）ピリジンであり、４−トリアゾリルベンゼンが最も好ましい。
【００５１】
本出願において、用語「部分的に飽和の芳香環」は、１つ以上の２重結合が単結合により置換された５、６または７員環芳香環を示す。該環は完全に飽和しておらず、すなわち、少なくとも２つのｓｐ2原子が残存していることが理解される。該部分的に飽和の環系における１つ以上の原子は、＝Ｏにより置換されていてもよい。
【００５２】
他の実施形態では、Ａｒ1は、多核芳香環系または部分的に飽和の多核環系の一部として、単核または２核芳香環系に縮合している。多核環系は、２核または３核環系であり、好ましくは２核環系である。
【００５３】
本出願において、用語「部分的に飽和の多核環系」は、他の単核または２核芳香環に縮合し、１つ以上の２重結合が単結合により置換された５、６または７員環芳香環を示す。該環は完全に飽和しておらず、すなわち、少なくとも２つのｓｐ2原子が残存していることが理解される。前記環が縮合している該芳香環系が不飽和である際には、該追加の環の一部でもあるＡｒ1の部分的に飽和の環の、少なくともそれらの原子はｓｐ2原子である。該部分的に飽和の環系における１つ以上の原子は、＝Ｏにより置換されていてもよい。
【００５４】
Ａｒ1がさらなる単核または２核芳香環系に縮合している場合、Ａｒ1は好ましくはイミダゾール、トリアゾール、オキサゾール、チアゾール、イソオキサゾール、イソチアゾール、ピラゾール、ピロール、イミダゾリン、オキサゾリン、テトラヒドロピラジンまたはテトラヒドロ［１Ｈ］−１、４−オキサゼピンであり、イミダゾール、イミダゾリン及びピラゾールがより好ましく、イミダゾール及びイミダゾリンが最も好ましい。該さらなる芳香環系は、好ましくは単核である。該さらなる芳香環系は、好ましくはベンゼン、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、フラン、チアゾールまたはオキサゾールであり、ベンゼン、チオフェン及びピリジンがより好ましく、ベンゼンが最も好ましい好ましい、より好ましい及び最も好ましい該さらなる芳香環系は、無置換であってもよく、少なくとも１つの−ＯＨ、メチル、エチル、エトキシ、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、メトキシ、モノフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシからなる群より選択される成分であってもよい。さらなる芳香環系に縮合しているＡｒ1より形成される単位は、２核または３核環系であり、好ましくは２核環系である。
【００５５】
好ましい単位は、ベンゾイミダゾール、２−メチルベンゾイミダゾール、２−エチルベンゾイミダゾール、２−メトキシベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、２，３−ジヒドロ［１Ｈ］ベンゾイミダゾール−２−オン、インダゾール、１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−２−３−オン、２，３，４，５−テトラヒドロベンゾ［ｆ］［１、４］オキサゼピン−５−オン、ベンゾチアゾール及びベンゾオキサゾールであり、ベンゾイミダゾール、２−メチルベンゾイミダゾール、２−エチルベンゾイミダゾール、２−メトキシベンゾイミダゾール及び２，３−ジヒドロ［１Ｈ］ベンゾイミダゾール−２−オンがより好ましく、ベンゾイミダゾール及び２−メチルベンゾイミダゾールが最も好ましい。
【００５６】
Ａｒ1は、Ａｒ1を構成している前記５、６または７員環芳香環または該部分的に飽和の芳香環上に存在する化学結合を介してＡｍに直接的に結合しているか、Ａｒ1に付着している該さらなる５または６員環芳香環またはＡｒ1に縮合している該さらなる芳香環上に存在する化学結合を介してＡｍに間接的に結合している。Ａｒ1のＡｍへの直接的な結合は、前述の３つの選択肢の全てにおいて、すなわち、Ａｒ1がさらなる５または６員環単核芳香環に付着するとき、Ａｒ1が多核環系の一部としてさらなる５または６員環に付着するとき、またはこれら２つの選択肢が適用されないときに行われる。
【００５７】
本発明のさらなる実施形態では、Ａｒ1はさらなる置換がされていない。用語「さらなる置換がされていない」は、ＳｐまたはＬへの化学結合、及びＡｒ1上に任意に存在する１つ以上の化学結合（これらは、Ａｍへの任意の結合、さらなる５または６員環芳香環への結合及びＡｒ1を芳香環に縮合させる結合から選択される）を除いて、上記に特定された結合種以外には水素原子のみがＡｒ1上に存在することを意味する。
【００５８】
他の実施形態では、Ａｒ1は、以下に明示する少なくとも１つの置換基に付着している。該少なくとも１つの置換基は、前述の選択肢の全てにおいて、すなわち、Ａｒ1がＡｍに直接的に接続しているとき、またはＡｒ1がさらなる５または６員環単核芳香環に付着しているとき、またはＡｒ1が多核環系の一部としてさらなる５または６員環に縮合しているとき、またはこれらの選択肢が適用されないとき（この場合、Ａｒ1はＡｍに直接的に接続している必要がある）に存在し得る。
【００５９】
該少なくとも１つの置換基は、Ｃ1〜Ｃ4アルキル；Ｃ3及びＣ4シクロアルキル；Ｃ2〜Ｃ4アルケニル；Ｃ2〜Ｃ4アルキニル；ハロゲン；Ｃ1〜Ｃ4ハロアルキル；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ4アルキル；Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ；Ｃ1〜Ｃ4アルキルアミノ；Ｃ1〜Ｃ4アルキルチオ；−ＮＯ2；＝Ｏ；＝Ｓ；＝ＮＨ；−ＯＨ；及びそれらの組み合わせより選択される。
【００６０】
Ｃ1〜Ｃ4アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチルを含む。Ｃ1〜Ｃ4アルコキシは、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシを含む。Ｃ3及びＣ4シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル及びメチルシクロプロピルである。Ｃ1〜Ｃ4ハロアルキルは、以下を含む：フルオロ−、ジフルオロ−及びトリフルオロメチル、並びに１つ以上のフルオロ置換されたエチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル；クロロ−、ジクロロ−及びトリクロロメチル；並びに１つ以上のクロロ置換されたエチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル。ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシは、以下を含む：フルオロ−、ジフルオロ−及びトリフルオロメトキシ、並びに１つ以上のフルオロ置換されたエトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ；クロロ−、ジクロロ−及びトリクロロメチル；並びに１つ以上のクロロ置換されたエトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ。
【００６１】
好ましい置換基は、メチル、エチル、プロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ；シクロプロピル、ヒドロキシメチル、−ＮＯ2、＝Ｏであり、メチル、エチル、メトキシ及び＝Ｏが最も好ましい。
【００６２】
Ａｒ1の該少なくとも１つの置換基への結合は、単結合または２重結合であり得る。
【００６３】
Ａｒ1、またはさらなる５または６員環芳香環のＡｒ1への付着により生じる単位、またはさらなる５または６員環芳香環のＡｒ1への縮合により生じる単位は、Ａｍだけでなく、ＳｐまたはＬにも付着する。
【００６４】
Ａｍの配向性に応じて、Ａｒ1への付着またはさらなる５または６員環芳香環のＡｒ1への付着または縮合により生じる単位は、ＡｍのＣ＝Ｏ基またはＡｍのＮＲ1基を介して達成されてもよい。さらなる５または６員環芳香環に付着または縮合されないＡｒ1の適切な成分の例は、制限されないが、ベンゼン、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ピラジンまたはピリダジンを含む。
【００６５】
好ましい実施形態では、Ａｒ1はベンゼンである。この実施形態において、Ａｍ及びＳｐのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基またはＬは、互いに対してオルト、メタまたはパラ配向性であってもよく、メタまたはパラ配向性が好ましく、パラ配向性がより好ましい。他の好ましい実施形態では、Ａｒ1はピリジンである。この実施形態において、Ａｍ及びＳｐのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基またはＬは、互いに対してオルト、メタまたはパラ配向性であってもよく、メタまたはパラ配向性が好ましく、パラ配向性がより好ましく、このとき該ピリジンのＮ原子は異なる位置にあってもよい。
【００６６】
Ａｒ1がさらなる５または６員環芳香環に付着することにより生じる適切な成分の例は、制限されないが、４−トリアゾリルベンゼン、５−トリアゾリルベンゼン、２−チアゾリルベンゼン、４−チアゾリルベンゼン、５−チアゾリルベンゼン、２−オキサゾリルベンゼン、４−オキサゾリルベンゼン、５−オキサゾリルベンゼン、３−イソチアゾリルベンゼン、４−イソチアゾリルベンゼン、５−イソチアゾリルベンゼン、３−イソオキサゾリルベンゼン、４−イソオキサゾリルベンゼン、５−イソオキサゾリルベンゼン、３−イソチアゾリルベンゼン、４−イソチアゾリルベンゼン、５−イソチアゾリルベンゼンを含む。これらの場合では、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は、通常はベンゼン部分に付着しており、Ａｒ1の５員環芳香環に対してオルト、メタまたはパラ、好ましくはメタまたはパラに位置していてもよく、通常、ＳｐまたはＬは、該環におけるベンゼン部分が付着した原子に隣接していないＡｒ1の環状原子を介して、Ａｒ1の５員環芳香環に付着している。
【００６７】
さらなる５または６員環芳香環をＡｒ1付に着させることにより生じる適切な成分のさらなる例は、制限されないが、トリアゾリルピリジン、チアゾリルピリジン、オキサゾリルピリジン、イソオキサゾリルピリジン、イソチアゾリルピリジンを含み、該ピリジン単位はＡｒ1の異なる位置に付着してもよく、該ピリジンの窒素原子は異なる位置にあってもよい。これらの場合では、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は、通常は該ピリジン部分に付着してもよく、Ａｒ1の５員環芳香環に対してオルト、メタまたはパラ、好ましくはメタまたはパラに位置していてもよく、通常、ＳｐまたはＬは、該環におけるベンゼン部分が付着した原子に隣接していないＡｒ1の環状原子を介して、Ａｒ1の５員環芳香環に付着している。
【００６８】
さらなる５または６員環芳香環に縮合したＡｒ1より生じる適切な単位の例は、制限されないが、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、２，３−ジヒドロ［１Ｈ］ベンゾイミダゾール、インダゾール、１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン、２，３，４，５−テトラヒドロベンゾ［ｆ］［１、４］オキサゼピン、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾールを含み、、ベンゾイミダゾール及び２，３−ジヒドロ［１Ｈ］ベンゾイミダゾールがより好ましく、ベンゾイミダゾールが最も好ましい。
【００６９】
さらなる５または６員環芳香環に縮合したＡｒ1より生じる単位がベンゾイミダゾールである場合には、ＬまたはＳｐは通常１または２位に付着し、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は通常５または６位、好ましくは５位に付着する。さらなる５または６員環芳香環に縮合したＡｒ1より生じる単位がベンゾトリアゾールである場合には、ＬまたはＳｐは通常１位にに付着し、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は通常５位に付着する。さらなる５または６員環芳香環に縮合したＡｒ1より生じる単位が２，３−ジヒドロ［１Ｈ］ベンゾイミダゾールである場合には、ＬまたはＳｐは通常１位に付着し、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は通常５位に付着する。さらなる５または６員環芳香環に縮合したＡｒ1より生じる単位がインダゾールである場合には、ＬまたはＳｐは通常１位に付着し、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は通常３または５位に付着する。さらなる５または６員環芳香環に縮合したＡｒ1より生じる単位がテトラヒドロキノキサリンである場合には、ＬまたはＳｐは通常１位に付着し、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は通常６または７位、好ましくは６位に付着する。さらなる５または６員環芳香環に縮合したＡｒ1より生じる単位が２，３，４，５−テトラヒドロベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピンである場合には、ＬまたはＳｐは通常４位に付着し、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は通常７位に付着する。さらなる５または６員環芳香環に縮合したＡｒ1より生じる単位がベンゾチアゾールである場合には、ＬまたはＳｐは通常２位に付着し、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は通常５または６位に付着する。さらなる５または６員環芳香環に縮合したＡｒ1より生じる単位がベンゾオキサゾールである場合には、ＬまたはＳｐは通常２位に付着し、ＡｍのＮＲ1基またはＣ＝Ｏ基は通常５または６位に付着する。
【００７０】
Ａｒ2  は脂環式またはヘテロ環式単核芳香環であり、５または６員環を有し得る。Ａｒ2  は、Ａｍに化学結合を介して接続している。一実施形態では、Ａｒ2はＡｍのＮ原子に接続している；他の実施形態では、Ａｒ2はＡｍのＣ原子に接続している。好ましくは、Ａｒ2はＡｍのＮ原子に接続している。Ａｒ2は、Ａｍとの化学結合に加えて、少なくとも１つのさらなる化学成分、すなわち少なくとも１つの置換基に付着し得る、または多核環系の一部として、５または６員環単核芳香環に縮合し得る。
【００７１】
Ａｒ2がヘテロ環式芳香環である場合には、それはＮ、Ｓ及びＯからなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含み、好ましくはＮ及びＳからなる群より選択され、より好ましくは少なくとも１つのＮ原子及び少なくとも１つのＳ原子を含む。これらすべての実施形態において、Ａｒ2は好ましくは５または６員環であり、より好ましくは５員環である。
【００７２】
Ａｒ2がさらなる単核または２核芳香環系に縮合していない場合、一実施形態では、Ａｒ2は６員環脂環式芳香環（例えば、ベンゼン）または少なくとも１つのＮ原子を有する６員環ヘテロ環（例えば、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、ピラジンまたはトリアジン）である。この実施形態では、Ａｒ2は、好ましくはベンゼン、ピリジン、ピラジン、ピリダジンまたはピリミジンであり、ベンゼン及びピリダジンがより好ましい。他の実施形態では、Ａｒ2はＮ、Ｓ及びＯからなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む５員環ヘテロ環式芳香環であり、Ｎ及びＳを含むものが好ましい。Ａｒ2の適切な例は、制限されないが、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、１，２，４−オキサジアゾール、１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−オキサジアゾール、１，３，４−チアジアゾール、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、チオフェン、フランを含む。Ａｒ2の好ましい例は、チアゾール、１，２，４−チアジアゾール及び１，３，４−チアジアゾールであり、１，２，４−チアジアゾール及び１，３，４−チアジアゾールが最も好ましい。
【００７３】
他の実施形態では、Ａｒ2は、多核環系の一部として、単核または２核芳香環系に縮合している。多核環系は２核または３核環系であり、好ましくは２核環系である。
【００７４】
Ａｒ2がさらなる単核または２核芳香環系に縮合している場合には、Ａｒ2は好ましくは１Ｈ−ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、またはイミダゾールである。Ａｒ2が１Ｈ−ピラゾールである場合、該第２の芳香環系は４または５位を介してＡｒ2に縮合し、Ａｍは３位に付着している。Ａｒ2がチアゾールである場合、該第２の芳香環は４または５位を介してＡｒ2に縮合し、Ａｍは２位に付着している。Ａｒ2がオキサゾールである場合、該第２の芳香環系は４または５位を介してＡｒ2に縮合し、Ａｍは２位に付着している。Ａｒ2がイミダゾールである場合、該第２の芳香環系は１または２位を介してＡｒ2に縮合し、Ａｍは４位に付着している。あるいは、該第２の芳香環系は４または５位を介してＡｒ2に縮合し、Ａｍは２位に付着している。該さらなる芳香環系は、好ましくは単核である。該さらなる芳香環系は、好ましくはベンゼン、チオフェン、ピリジン、フラン、チアゾール、オキサゾールまたはイミダゾールである。より好ましくは、該さらなる芳香環系はベンゼンまたはチアゾールである。該さらなる芳香環系がチアゾールである場合には、それはＡｒ2に２または３位を介して縮合している。さらなる芳香環系に縮合しているＡｒ2より形成された単位は、好ましくはベンゾオキサゾール（Ａｍは２位に付着）、ベンゾチアゾール（Ａｍは２位に付着）、インダゾール（Ａｍは３位に付着）またはイミダゾ−［２，１−ｂ］チアゾール（Ａｍは６位に付着）である。
【００７５】
Ａｒ2がオキサゾールまたはチアゾールである場合、それは第２の芳香環系に縮合する代わりに、４または５位を介してシクロペンテンに縮合してもよい。その結果得られる単位は、好ましい単位でもあり、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタオキサゾール（Ａｍは２位に付着）及び５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタチアゾール（Ａｍは２位に付着）が挙げられ、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタチアゾールがより好ましい。
【００７６】
本発明のさらなる実施形態では、Ａｒ2はさらなる置換がされていない。用語「さらなる置換がされていない」は、Ａｍへの化学結合、及びＡｒ2上に任意に存在する１つ以上の化学結合を除いて、上記に特定された結合種以外には水素原子のみがＡｒ2上に存在することを意味する。
【００７７】
他の実施形態では、Ａｒ2は、以下に明示する少なくとも１つの置換基に付着している。該少なくとも１つの置換基は、前述の２つの選択肢の全てにおいて、すなわち、Ａｒ2が多核環系の一部としてさらなる５または６員環に縮合しているとき、またはＡｒ2がさらなる環に縮合していないときに存在し得る。Ａｒ2の少なくとも１つの置換基への結合は、単結合または２重結合であり得る。好ましくは、該結合は単結合である。
【００７８】
Ａｒ2が化学結合を介して付着し得る少なくとも１つの置換基は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル；Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル；Ｃ2〜Ｃ6アルケニル；Ｃ5及びＣ6シクロアルケニル；Ｃ2〜Ｃ6アルキニル；ハロゲン；Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ6アルキル；Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；ヒドロキシ置換Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ；Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ；Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ；−ＯＨ；ＳＨ；カルバモイル；Ｃ1〜Ｃ4アルキレンジオキシ；５または６員環単核芳香環；及びこれらの組み合わせより選択され、ここでＡｒ2は、任意には、上述の化学結合を介して付着されてもよい該置換基に加えて、多核環系の一部として５または６員環単核芳香環に縮合している。
いる。
【００７９】
Ｃ1〜Ｃ6アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル及びヘキシルを含む。Ｃ1〜Ｃ6アルコキシは、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ及びヘキシルオキシを含む。Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、メチルシクロプロピル、ジメチルシクロプロピル、トリメチルシクロプロピル、エチルシクロプロピル、プロピルシクロプロピル、メチルエチルシクロプロピル、メチルシクロブチル、ジメチルシクロブチル、エチルシクロブチル、及びメチルシクロペンチルを含む。Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキルは：フルオロ−、ジフルオロ−及びトリフルオロメチル、及び１つ以上のフッ素に置換されたエチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、プロピル及びヘキシル；クロロ−、ジクロロ−及びトリクロロメチル；及び１つ以上の塩素に置換されたエチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、プロピル及びヘキシルを含む。ハロゲン置換Ｃ1〜Ｃ4アルコキシは：フルオロ−、ジフルオロ−及びトリフルオロメトキシ、及び及び１つ以上のフッ素置換されたエトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ；クロロ−、ジクロロ−及びトリクロロメチル；及び及び１つ以上の塩素に置換されたエトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ；メチレンジオキシを含むＣ1〜Ｃ4アルキレンジオキシ；エチレンジオキシ、プロピレンジオキシ、ブチレンジオキを含み、好ましくは、メチレンジオキシ、エチレンジオキシを含む。
【００８０】
好ましい置換基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、フッ素、塩素、カルバモイル、エチルチオ、メチルチオであり、メチル、エチル、カルバモイル、メトキシ、エチルチオ及びシクロプロピルが最も好ましい。
【００８１】
一実施形態において、Ａｒ2に化学結合により付着する置換基は、５または６員環単核芳香環である。Ａｒ2の５または６員環芳香環への結合は、単結合または２重結合であり得る。好ましくは、該結合は単結合である。該さらなる５または６員環単核芳香環は、脂肪族環またはヘテロ環であり得る。すなわち、それはＮ、Ｓ及びＯからなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含み得る。
【００８２】
Ａｒ2が５または６員環単核芳香環に化学結合を介して付着している場合には、Ａｒ2は好ましくはオキサゾール、イソオキサゾール、イミダゾール、ピラゾール、ピロール、チアゾール、イソチアゾール、１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−チアジアゾール、ピリジン、ピリダジンまたはピリミジンである。より好ましくは、Ａｒ2はピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−チアジアゾールまたはピリダジンである。最も好ましくは、Ａｒ2はピラゾール、チアゾール、１，２，４−チアジアゾールまたは１，３，４−チアジアゾールである。Ａｒ2がオキサゾールである場合、Ａｍは２位に付着し、該さらなる単核芳香環は４または５位に付着する。あるいは、Ａｍは４または５位に付着し、該さらなる単核芳香環は２位に付着する。Ａｒ2がイソオキサゾールである場合、Ａｍは３位に付着し、該さらなる単核芳香環は５位に付着する。あるいは、Ａｍは５位に付着し、該さらなる単核芳香環は３位に付着する。Ａｒ2がイミダゾールである場合、Ａｍは２位に付着し、該さらなる単核芳香環は４位に付着する。あるいは、Ａｍは４位に付着し、該さらなる単核芳香環は２位に付着する。Ａｒ2がピラゾールである場合、Ａｍは３位に付着し、該さらなる単核芳香環は５位に付着する。あるいは、Ａｍは３または４位に付着し、該さらなる単核芳香環は１位に付着する。Ａｒ2がピロールである場合、Ａｍは２位に付着し、該さらなる単核芳香環は４位に付着する。あるいは、Ａｍは４位に付着し、該さらなる単核芳香環は２位に付着する。なおあるいは、Ａｍは３位に付着し、該さらなる単核芳香環は１位に付着する。Ａｒ2がチアゾールは２位に付着し、該さらなる単核芳香環は４または５位に付着する。あるいは、Ａｍは４または５位に付着し、該さらなる単核芳香環は２位に付着する。Ａｒ2がイソチアゾールである場合、Ａｍは３位に付着し、該さらなる単核芳香環は５位に付着する。あるいは、Ａｍは５位に付着し、該さらなる単核芳香環は３位に付着する。Ａｒ2が１，２，４−チアジアゾールである場合、Ａｍは３位に付着し、該さらなる単核芳香環は５位に付着する。あるいは、Ａｍは５位に付着し、該さらなる単核芳香環は３位に付着する。Ａｒ2が１，３，４−チアジアゾールである場合、Ａｍは２位に付着し、該さらなる単核芳香環は５位に付着する。Ａｒ2がピリジンである場合、Ａｍ及び該さらなる単核芳香環は互いに対してメタまたはパラに位置し、好ましくはパラに位置しており、このときピリジンコアの窒素原子は異なる位置にあってもよい。Ａｒ2がピリダジンである場合、Ａｍは３位に付着し、該さらなる単核芳香環は６位に付着する。あるいは、Ａｍは５位に付着し、該さらなる単核芳香環は３位に付着する。なおあるいは、Ａｍは３位に付着し、該さらなる単核芳香環は５位に付着する。Ａｒ2がピリミジンである場合、Ａｍ及び該さらなる単核芳香環は互いに対してメタまたはパラに位置し、好ましくはパラに位置しており、このときピリミジンコアの窒素原子は異なる位置を有していてもよい。
【００８３】
Ａｒ2に付着している該さらなる単核５または６員環芳香環は、好ましくはベンゼン、フラン、チオフェン、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、またはピリジンである。より好ましくは、Ａｒ2に付着している該さらなる単核５または６員環芳香環は、フラン、オキサゾール、イソオキサゾールまたはピリジンであり、フランが最も好ましい。該さらなる単核芳香環がフランである場合、それは２または３位を介してＡｒ2に付着している。該さらなる単核芳香環がチオフェンである場合、それは２または３位を介してＡｒ2に付着している。該さらなる単核芳香環がオキサゾールである場合、それは２、４または５位を介してＡｒ2に付着している。該さらなる単核芳香環がイソオキサゾールである場合、それは３、４または５位を介してＡｒ2に付着している。該さらなる単核芳香環がチアゾールである場合、それは２、４または５位を介してＡｒ2に付着している。該さらなる単核芳香環がイソチアゾール、それは３、４または５位を介してＡｒ2に付着している。該さらなる単核芳香環がピリジンである場合、それは２、３または４位を介してＡｒ2に付着している。
【００８４】
５または６員環単核芳香環に付着しているＡｒ2の好ましい単位は、１−フェニルピラゾール（Ａｍは３位に付着）、２−（２−フリル）ピラゾール（Ａｍは５位に付着）、４−フェニルチアゾール（Ａｍは２位に付着）、５−フェニルチアゾール（Ａｍは２位に付着）、２−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、２−（３−フリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、２−（２−ピリジル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、２−（３−ピリジル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、２−（４−ピリジル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、３−（２−フリル）−１，２，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、４−（２−フリル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、５−（２−フリル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、２−フェニル−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、３−フェニル−１，２，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、４−（２−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、４−（３−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、４−（４−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）５−（２−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、５−（３−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、５−（４−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、３−（２−フリル）ピリダジン（Ａｍは６位に付着）、２−（５−イソオキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、２−（５−オキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、２−（２−オキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）である。
【００８５】
５または６員環単核芳香環に付着しているＡｒ2のより好ましい単位は、２−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、２−（３−フリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、３−（２−フリル）−１，２，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、４−（２−フリル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、５−（２−フリル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、４−（２−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、４−（３−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、４−（４−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、３−（２−フリル）ピリダジン（Ａｍは６位に付着）、２−（５−イソオキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、２−（５−オキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、２−（２−オキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）である。５または６員環単核芳香環に付着しているＡｒ2の最も好ましい単位は、２−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、３−（２−フリル）−１，２，４−チアジアゾール（Ａｍは５位に付着）、４−（２−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、４−（３−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）、４−（４−ピリジル）チアゾール（Ａｍは２位に付着）である。
【００８６】
さらなる５または６員環単核芳香環に付着したＡｒ2より生じる単位は、Ａｍへの付着に加えて、以下より選択される１つ以上の置換基を付着していてもよい：メチル、エチル、メトキシ、メチレンジオキシ（この場合、該置換基は、さらなる５または６員環単核芳香環に付着したＡｒ2より生じる単位において２原子に付着している）、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ。好ましい置換基は、メチル及びメチレンジオキシである。
【００８７】
Ａｒ2は、Ｃ＝Ｏ基（式Ｉａ参照）またはＮＲ1基（式Ｉｂ参照）のいずれかに付着されている。
【００８８】
式（Ｉ）に示される変数Ｌ、Ｓｐ、Ａｒ1、Ａｍ、Ｒ1及びＡｒ2の様々な意味についての前述の全ての定義は、本発明の実施形態に関しており、考慮している変数以外の、他の変数の任意の１つまたは全てが、通常の、好ましい、より好ましいまたはさらに好ましい実施形態に関するか否かにかかわらず、通常の実施形態、好ましい実施形態、より好ましい実施形態及びさらに好ましい実施形態における各変数を含む。したがって、１つの変数の通常の実施形態は、好ましい、より好ましい及びさらに好ましい実施形態における任意の他の変数と組み合わせることができる。
【００８９】
以下、一般式（Ｉ）の好ましい定義における定義について述べる。
【００９０】
下記の全ての実施形態において(すなわち、好ましい、より好ましいまたはさらに好ましい実施形態において)、Ｒ1は水素またはメチルであり、最も好ましくは水素である。
【００９１】
本発明の好ましい実施形態では、式（Ｉ）の変数は以下の意味を有する：
Ａｒ1は、１、２または３個のＮ原子を含む５または６員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環、またはベンゼンであって、前記単核環またはベンゼンは、化学結合を介してＳｐまたはＬと接続されるものであり、さらに任意には、
（ａ）ベンゼンまたはチオフェンに化学結合を介して付着している；または、
（ｂ）多核環系の一部として、ベンゼンまたはチオフェンに縮合している；
ここで、Ａｒ1は、Ａｒ1を構成する前記芳香環またはベンゼンに存在する化学結合を介してＡｍと直接的に接続しているか、Ａｒ1に付着している前記ベンゼン環またはチオフェン環に存在する化学結合、またはＡｒ1に縮合している前記ベンゼン環またはチオフェン環における化学結合を介してＡｍと間接的に接続しているかのいずれかであって；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、または、メチル、エチル、プロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ；シクロプロピル、ヒドロキシメチル、−ＮＯ2、＝Ｏ、＝Ｓ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかである；及び／または、
Ａｒ2は５員環単核芳香環であって、無置換であるか、または、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、フッ素、塩素、カルバモイル、エチルチオ、メチルチオ、５または６員環単核芳香環及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着しており；任意には、Ａｒ2は、上記のようにそれが化学結合を介して付着してもよい該置換基に加えて、多核環系の一部としてベンゼンまたはチアゾールと縮合している。
【００９２】
本発明のさらに好ましい実施形態では、式（Ｉ）の変数は以下の意味を有する：
Ａｒ1は、イミダゾール、ベンゼン、ピリジン、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール及びトリアゾールから選択される５または６員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環であって、化学結合を介してＳｐまたはＬと接続されるものであり、さらに任意には、
（ａ）ベンゼンに化学結合を介して付着している；または、
（ｂ）多核環系の一部として、ベンゼンに縮合している；
ここで、Ａｒ1は、Ａｒ1を構成する５または６員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環に存在する化学結合を介してＡｍと直接的に接続しているか、Ａｒ1に付着している該ベンゼン環に存在する化学結合、またはＡｒ1に縮合している該ベンゼン環における化学結合を介してＡｍと間接的に接続しているかのいずれかであって；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、または、メチル、エチル、プロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ；シクロプロピル、ヒドロキシメチル、−ＮＯ2、＝Ｏ、＝Ｓ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかである；及び／または、
Ａｒ2は、Ｎ、Ｓ、Ｏから、好ましくはＮ、Ｓから選択される少なくとも１つの原子を含む５員環単核芳香環であって、無置換であるか、または、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、フルオロ、クロロ、カルバモイル、エチルチオ、メチルチオから、好ましくはメチル、エチル、メトキシ、エチルチオ及びシクロプロピルから；５または６員環単核芳香環及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着しており；任意には、Ａｒ2は、上記のようにそれが化学結合を介して付着してもよい該置換基に加えて、多核環系の一部としてベンゼンまたはチアゾールと縮合している。
【００９３】
本発明のさらに好ましい実施形態では、式（Ｉ）の変数は以下の意味を有する：
Ａｒ1は、ベンゾイミダゾール、２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール、ピリジン及び４−トリアゾリルベンゼンから選択され；
Ａｒ1は、ベンゾイミダゾールの１または２位、２，３−ジヒドロベンゾイミダゾールの１位、ピリジンの２位または４−トリアゾリルベンゼンのトリアゾール部の１位に付着する化学結合を介して、ＳｐまたはＬに接続し；
ここで、Ａｒ1は、ベンゾイミダゾールの５または６位、２，３−ジヒドロベンゾイミダゾールの５または６位、ピリジンの５位または４−トリアゾリルベンゼンのトリアゾール部の４位に付着する化学結合を介して、Ａｍに接続し；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、または、メチル、エチル、メトキシ、＝Ｓ及び＝Ｏ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかである；及び／または、
Ａｒ2は１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−チアジアゾール及びチアゾールから選択される５員環単核芳香環であって、無置換であるか、または、メチル、エチル、メトキシ、エチルチオ、及びシクロプロピル；ピリジン、フラン、イソオキサゾール、オキサゾール、イソチアゾール、チアゾールから選択される５または６員環単核芳香環；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着している。
【００９４】
本発明は、（支持材料に付着された後に、）本発明の方法で用いられるリガンド置換マトリクスを、該支持材料と共に形成する本発明のリガンドをも含む。該マトリクス／支持材料に付着する前の該リガンドは、以下の式（ＩＩ）、（ＩＩａ）及び（ＩＩｂ）に従うものであり、ここで記号Ｓｐ，Ａｒ1，Ａｒ2及びＡｍは前記好ましい意味を含む上述の意味を有する：
【化６】
2015509486.tif 000007
【００９５】
本発明に従うリガンドは、以下の構造単位を含む。
【化７】
2015509486.tif 000008
ここで、Ａｒ1，Ａｍ及びＡｒ2は、式（Ｉ）について本明細書及び実施例を通じて定義された意味を有する。（ＩＩＩ）として示される該構造単位は、支持材料／マトリクスに付着した後及び支持材料／マトリクスに付着する前のリガンドにおいて存在する。
【００９６】
式（Ｉ）に示されるリガンド、及び／または式（ＩＩ）に示されるリガンド、及び／または式（ＩＩＩ）に示される構造単位を含むリガンドは、タンパク質に結合し、好ましくは抗体に結合し、好ましくはＩｇＧタイプの抗体及びＦｃ融合タンパク質、より好ましくは該抗体または該融合タンパク質のＦｃフラグメントまたはドメインに結合し、最も好ましくは、該Ｆｃフラグメントまたはドメインまたは該抗体は、ＩｇＧ抗体クラスのものであり、より好ましくはヒトＩｇＧ、またはヒト由来ポリクローナルあるいはモノクローナルＩｇＧ、特にＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3及びＩｇＧ4のものである。
【００９７】
好ましい実施形態では、上記で定義されたリガンドは、支持材料／マトリクスに付着した後及び支持材料／マトリクスに付着する前に、上記で定義されたタンパク質に結合する。
【００９８】
式（ＩＩ）、（ＩＩａ）及び（ＩＩｂ）に従うリガンドは、該リガンドに付着するスペーサ前駆体基ＳｐＰリガンドを備える。
【００９９】
式（ＩＩ）、（ＩＩａ）及び（ＩＩｂ）に従うリガンドは、付着したスペーサ基を有さないさらなる化合物を合成するための前駆体として用いられ得る。該指定化合物は、スペーサ基の開裂の後に生成され、場合によっては、ＳｐＰに接続される該リガンドに存在している官能基を、当業者に既知である任意の他の適切な官能基に変換されてもよい。そのための適切な反応は、当業者にとって既知である。その結果生じる化合物もまた、本発明に含まれる。
【０１００】
本発明に従うマトリクスの好ましいリガンドを、以下に示す。ここで、各式において、最も左側のＮ原子は、表示されていない連結点Ｌに接続される。以下の全ての式は、リガンドに付着したスペーサ前駆体基（ＳｐＰ）を表す：
【０１０１】
【化８】
2015509486.tif 000009
１−（３−アミノ−１−プロピル）−５−［（１−メチルインダゾール−３−イル）カルボキサミド］ベンゾイミダゾール（Ｌ０１）
【０１０２】
【化９】
2015509486.tif 000010
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（１−メチル−３−インダゾリル）アミド（Ｌ０２）
【０１０３】
【化１０】
2015509486.tif 000011
４−（３−アミノ−１−プロピル）−７−［（１−メチルインダゾール−３−イル）カルボキサミド］−２，３，４，５−テトラヒドロベンゾ［ｆ］［１，４］オキサゼピン−５−オン（Ｌ０３）
【０１０４】
【化１１】
2015509486.tif 000012
１−（３−アミノ−１−プロピル）インダゾールｅ−３−カルボン酸Ｎ−（３−カルバモイル−４−メトキシフェニル）アミド（Ｌ０４）
【０１０５】
【化１２】
2015509486.tif 000013
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ０５）
【０１０６】
【化１３】
2015509486.tif 000014
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾトリアゾールｅ−５−カルボン酸Ｎ−（１−メチルインダゾール−３−イル）アミド（Ｌ０６）
【０１０７】
【化１４】
2015509486.tif 000015
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−エチル−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ０７）
【０１０８】
【化１５】
2015509486.tif 000016
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（ベンゾオキサゾール−２−イル）アミド（Ｌ０８）
【０１０９】
【化１６】
2015509486.tif 000017
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４−チアジアゾール−５−イル］アミド（
０９）
【０１１０】
【化１７】
2015509486.tif 000018
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（ベンゾチ
アゾール−２−イル）アミド（Ｌ１０）
【０１１１】
【化１８】
2015509486.tif 000019
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（５−メチ
ル−１−フェニルピラゾール−３−イル）アミド（Ｌ１１）
【０１１２】
【化１９】
2015509486.tif 000020
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−エチルチオ−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ１２）
【０１１３】
【化２０】
2015509486.tif 000021
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（１，３，４−チアジアゾール−２−イル）アミド（Ｌ１３）
【０１１４】
【化２１】
2015509486.tif 000022
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−メチル−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ１４）
【０１１５】
【化２２】
2015509486.tif 000023
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（４−メチルチアゾール−２−イル）アミド（Ｌ１５）
【０１１６】
【化２３】
2015509486.tif 000024
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（チアゾール−２−イル）アミド（Ｌ１６）
【０１１７】
【化２４】
2015509486.tif 000025
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（５−メチルチアゾール−２−イル）アミド（Ｌ１７）
【０１１８】
【化２５】
2015509486.tif 000026
４−［（３−アミノ−１−プロピル）アミノ］−３−ニトロ安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ１８）
【０１１９】
【化２６】
2015509486.tif 000027
６−［（３−アミノ−１−プロピル）アミノ］ニコチン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ１９）
【０１２０】
【化２７】
2015509486.tif 000028
４−［（１−アミノ−３−プロピル）オキシ］安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２０）
【０１２１】
【化２８】
2015509486.tif 000029
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（４−ピリジル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２１）
【０１２２】
【化２９】
2015509486.tif 000030
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（３−フェニル−１，２，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ２２）
【０１２３】
【化３０】
2015509486.tif 000031
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２３）
【０１２４】
【化３１】
2015509486.tif 000032
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２４）
【０１２５】
【化３２】
2015509486.tif 000033
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２５）
【０１２６】
【化３３】
2015509486.tif 000034
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（５−メチル−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）アミド（Ｌ２６）
【０１２７】
【化３４】
2015509486.tif 000035
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（１，３，４−チアジアゾール−２−イル）アミド（Ｌ２７）
【０１２８】
【化３５】
2015509486.tif 000036
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２，３−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−６−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２８）
【０１２９】
【化３６】
2015509486.tif 000037
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（４−メチルチアゾール−２−イル）アミド（Ｌ２９）
【０１３０】
【化３７】
2015509486.tif 000038
１−（３−アミノ−１−プロピル）−５−［（イミダゾ−［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）カルボキサミド］ベンゾイミダゾール（Ｌ３０）
【０１３１】
【化３８】
2015509486.tif 000039
２−（５−アミノ−１−ペンチル）−１−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ３１）
【０１３２】
【化３９】
2015509486.tif 000040
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（５，６−ジヒドロ−（４Ｈ）−シクロペンタチアゾール−２−イル）アミド（Ｌ３２）
【０１３３】
【化４０】
2015509486.tif 000041
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−フェニル−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ３３）
【０１３４】
【化４１】
2015509486.tif 000042
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（６−メチルピリダジン−３−イル）アミド（Ｌ３４）
【０１３５】
【化４２】
2015509486.tif 000043
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−シクロプロピル−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ３５）
【０１３６】
【化４３】
2015509486.tif 000044
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（３−メチル−１，２，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ３６）
【０１３７】
【化４４】
2015509486.tif 000045
４−（５−アミノ−３−オキサ−１−ペンチルオキシ）安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ３７）
【０１３８】
【化４５】
2015509486.tif 000046
４−［（１−アミノ−３−プロピル）オキシ］安息香酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ３８）
【０１３９】
【化４６】
2015509486.tif 000047
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ３９）
【０１４０】
【化４７】
2015509486.tif 000048
６−［（３−アミノ−１−プロピル）アミノ］ニコチン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４０）
【０１４１】
【化４８】
2015509486.tif 000049
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４１）
【０１４２】
【化４９】
2015509486.tif 000050
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４２）
【０１４３】
【化５０】
2015509486.tif 000051
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４３）
【０１４４】
【化５１】
2015509486.tif 000052
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４４）
【０１４５】
【化５２】
2015509486.tif 000053
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メトキシベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４５）
【０１４６】
【化５３】
2015509486.tif 000054
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（３−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４６）
【０１４７】
【化５４】
2015509486.tif 000055
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（４−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４７）
【０１４８】
【化５５】
2015509486.tif 000056
６−［１−（３−アミノ−１−プロピル）トリアゾール−４−イル］安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４８）
【０１４９】
【化５６】
2015509486.tif 000057
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４９）
【０１５０】
【化５７】
2015509486.tif 000058
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５０）
【０１５１】
【化５８】
2015509486.tif 000059
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（４−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５１）
【０１５２】
【化５９】
2015509486.tif 000060
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（４−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５２）
【０１５３】
【化６０】
2015509486.tif 000061
（Ｓ）−グルタミン酸Ｎ，Ｎ’−ビス｛８−｛５−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イルカルバモイル］ベンゾイミダゾール−１−イル｝−３，５−ジオキサ−１−オクチル｝アミド（Ｌ５３）
【０１５４】
【化６１】
2015509486.tif 000062
（Ｓ）−グルタミン酸Ｎ，Ｎ’−ビス｛８−｛５−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イルカルバモイル］−２−メチルベンゾイミダゾール−１−イル｝−３，５−ジオキサ−１−オクチル｝アミド（Ｌ５４）
【０１５５】
【化６２】
2015509486.tif 000063
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［３−（２−フリル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］アミド（Ｌ５５）
【０１５６】
【化６３】
2015509486.tif 000064
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（３−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５６）
【０１５７】
【化６４】
2015509486.tif 000065
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５７）
【０１５８】
【化６５】
2015509486.tif 000066
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５８）
【０１５９】
【化６６】
2015509486.tif 000067
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［６−（２−フリル）ピリダジン−３−イル］アミド（Ｌ５９）
【０１６０】
【化６７】
2015509486.tif 000068
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［３−（２−フリル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］アミド（Ｌ６０）
【０１６１】
【化６８】
2015509486.tif 000069
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（３−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６１）
【０１６２】
【化６９】
2015509486.tif 000070
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６２）
【０１６３】
【化７０】
2015509486.tif 000071
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６３）
【０１６４】
【化７１】
2015509486.tif 000072
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［６−（２−フリル）ピリダジン−３−イル］アミド（Ｌ６４）
【０１６５】
【化７２】
2015509486.tif 000073
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［３−（２−フリル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］アミド（Ｌ６５）
【０１６６】
【化７３】
2015509486.tif 000074
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（３−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６６）
【０１６７】
【化７４】
2015509486.tif 000075
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６７）
【０１６８】
【化７５】
2015509486.tif 000076
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６８）
【０１６９】
【化７６】
2015509486.tif 000077
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［６−（２−フリル）ピリダジン−３−イル］アミド（Ｌ６９）
【０１７０】
【化７７】
2015509486.tif 000078
４−［２−（３−アミノ−１−プロピルアミノ）チアゾール−４−イル］安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ７０）
【０１７１】
【化７８】
2015509486.tif 000079
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（５−イソオキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ７１）
【０１７２】
【化７９】
2015509486.tif 000080
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（５−オキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ７２）
【０１７３】
【化８０】
2015509486.tif 000081
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−オキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ７３）
【０１７４】
リガンド（ＩＩ）の合成は、例えば、液相合成においてカルボン酸成分とアミン成分とを組み合わせることにより、最終的にアミドＡｍを形成することにより行うことができる。該カップリングは、当業者にとって既知の活性化試薬を用いてカルボン酸成分を活性化し、続いて必要であれば反応混合物の通常の加熱またはマイクロ波照射により昇温させて、活性化されたカルボン酸をアミン成分と反応させることにより実施することができる。この反応中において、該アミノ基は、後で指示材料へのリガンドの付着を可能にする前駆体基として用いられるものであり、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルのような適切な保護基によって保護される必要がある。該２成分のカップリングが成功した後に、該保護基を適切な条件下にて除去する必要がある。個別の成分を構築するため、当業者にとって既知である追加の液相合成工程を適用してもよい。スペーサ基を含む脱保護された該リガンドは、これもまた当業者にとって既知であるクロマトグラフィー法により精製される。
【０１７５】
適切な液相合成プロトコルが、特定のリガンドに対して適用できない場合には、該合成は代わりに不溶性の支持体上において行い得る。該支持体は樹脂としても知られ、例えば、ポリスチレン樹脂であり、好ましくは、例えばヒドロキシ基のような、当業者にとって既知の反応により追加の分子が付着し得る反応基（官能基）を有する適切なスペーサがあらかじめロードされているポリスチレン樹脂である。最終的には、該スペーサ基を含む該リガンドは、当業者にとって既知の適切な開裂プロトコルにより前記不溶性の支持体／樹脂より解放され、当業者にとって既知であるクロマトグラフィー法により精製される。
【０１７６】
用語「抗体」は、免疫グロブリンを意味し、天然のものと、全部または一部が合成により製造されたものとの両方を含み、さらに、特定の結合特性を維持しているそれらの全てのフラグメント及び誘導体を含む。典型的なフラグメントは、Ｆｃ、Ｆａｂ、重鎖、および軽鎖である。該用語はまた、アミノ酸配列を比較したときに、免疫グロブリン結合ドメインに対して相同または大部分において相同（例えば、少なくとも９５％同一）である結合ドメインを有している任意のポリペプチドを含む。これらのポリペプチドは、天然源より得られてもよく、一部または全部が合成により製造されてもよい。抗体はモノクローナルでもポリクローナルでもよく、ヒトまたは非ヒト起源であってもよく、キメラタンパク質であってもよい。該キメラタンパク質としては、ヒトＦｃ部分が、マウスＦａｂフラグメントと融合したもの（末尾に…ximab（…キシマブ）がつく治療用抗体、例えばリツキシマブ）、またはヒトマウス配列を含むＦａｂフラグメントと融合したもの（末尾に…zumab（…ズマブ）がつく治療用抗体、例えばベバシズマブ）、または異なるFａｂフラグメントに連結している（二重特異性抗体）ものが挙げられる。該抗体は、任意の免疫グロブリンクラスの構成要素であってもよく、好ましくはＩｇＧ、ヒト抗体の場合には、好ましくはＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3及びＩｇＧ4の構成要素であってもよい。
【０１７７】
本発明の最も好ましい実施形態において、本発明のリガンドが抗体のＦｃ部分に結合するとされる場合には、該抗体はＦｃフラグメントまたはドメインを含む。したがって、本発明の抗体は、免疫グロブリンクラスのＦｃフラグメントまたはドメインを含む抗体であって、好ましくはＩｇＧ、より好ましくはヒトＩｇＧ、またはヒト由来ポリクローナルあるいはモノクローナルＩｇＧ、特にＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3及びＩｇＧ4のものである。
【０１７８】
用語「Ｆｃ融合タンパク質」は、Ｆｃフラグメントと、１つ以上のタンパク質またはタンパク質ドメインとの任意の組み合わせを意味する。Ｆｃ融合タンパク質の例は、限定されないが、ヒトＩｇＧ1のＦｃドメインと可溶性受容体ドメインとのキメラ（末尾に…cept（…セプト）がつく治療用タンパク質）であって、例えば、エタネルセプト（ヒトＩｇＧ1と２つの腫瘍壊死因子受容体ドメインとの組み合わせ）またはリロナセプト（インターロイキン１受容体ドメインと融合したヒトＩｇＧ1）が挙げられる。Ｆｃ融合タンパク質は、任意の手段で製造されてもよい。例えば、Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃフラグメントを適切なタンパク質またはタンパク質ドメインと結合させることにより、酵素的または化学的に製造してもよく、Ｆｃ及びタンパク質／タンパク質ドメイン配列をコードする遺伝子から、組み合え技術によって製造することもできる。あるいは、Ｆｃ融合タンパク質は、全部または一部が合成により製造することもできる。Ｆｃ融合タンパク質はまた、多分子複合体であってもよい。機能的なＦｃ融合タンパク質は、典型的には少なくとも約５０アミノ酸からなり、より典型的には少なくとも約２００アミノ酸からなる。
【０１７９】
本発明は、本明細書の他の箇所に記載される式（Ｉ）のアフィニティーリガンド及びそれらの好ましい実施形態を用いて、たとえば発酵上清またはヒトまたは動物由来の血漿といった複雑な混合物から、抗体またはＦｃ融合タンパク質を、好ましくはアフィニティークロマトグラフィーによってアフィニティー精製することについても示す。
【０１８０】
したがって、好ましい実施形態では、本発明は、タンパク質、好ましくは免疫グロブリンまたはＦｃ融合タンパク質を、アフィニティー精製、好ましくはアフィニティークロマトグラフィーにより精製するための方法を含む。本発明のアフィニティーリガンドは、抗体のＦｃ領域に結合する。
【０１８１】
ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）、Genentech／Roche）は、ヒト化モノクローナル抗体である。これは、新生血管形成（血管新生）を促進するタンパク質である血管内皮細胞増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）の機能を標的とし、かつ阻害することにより、新生血管の形成を防止することにより、腫瘍の増殖を停止する。
【０１８２】
トシリズマブ（アクテムラ（登録商標）、Genentech／Roche）は、ヒト化モノクローナル抗体である。これは、インターロイキン６受容体に対するものであって、炎症性サイトカインであるインターロイキン６の作用を妨害する。これは関節リウマチの治療のために認可されている。
【０１８３】
パリビズマブ（シナジス（登録商標）、Abbott）は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質のＡエピトープに対するヒト化モノクローナル抗体である。これは、ＲＳＶ感染の予防に使用される。
【０１８４】
セツキシマブ（アービタックス（登録商標）、Merck Serono）は、上皮成長因子受容体に対するキメラ型モノクローナル抗体である。これは、大腸癌及び頭及び首の扁平上皮癌の治療に必要である。
【０１８５】
ヒトポリクローナルＩｇＧは、Ｆｃ部分を介して免疫グロブリンをアフィニティー精製するための前記リガンドが、あらゆる状況で適用可能であることを実証するために調査される。
【０１８６】
本発明を実施する際には、一般式（Ｉ）に従うリガンドは、適切な支持材料の支持材料に付着し、それによってリガンド置換マトリクスとなり、通常はタンパク質分離のための、アフィニティー精製用、好ましくはアフィニティークロマトグラフィー用のマトリクス（本発明の文脈において、アフィニティーマトリクスとも称される）となる。該一般式のリガンドは、Ｌ（任意にはスペーサ−Ｓｐ−を含む）を介して支持材料に付着している。
【０１８７】
したがって、本発明は、支持材料及びここまで本明細書に明記した少なくとも１つのリガンドを備え、該リガンドがＬを介してそれに付着している、タンパク質分離のためのリガンド置換マトリクス（アフィニティーマトリクス）を含む。
【０１８８】
該マトリクス（Ｍとして示される）は、当業者にとって既知である任意の適切な支持材料を含んでいてもよく、そのような支持材料より構成されていてもよい。該材料は、可溶性または不溶性でもよく、粒子状または非粒子状でもよく、繊維及び膜を含むモノリス構造でもよく、多孔性または非多孔性でもよい。それは、接触している溶液中の溶質から本発明のリガンドを分離する簡便な手段を提供する。支持材料の例には、アガロース、セファロース、セファデックス、セルロース、デキストラン、デンプン、アルギン酸塩及びカラギーナンのような炭水化物及び架橋炭水化物マトリクス；ポリスチレン、スチレン−ジビニルベンゼンコポリマー、ポリアクリラート、ＰＥＧポリアクリラートコポリマー、ポリメタクリラート（例えばポリ（ヒドロキシエチルメタクリラート）、ポリビニルアルコール、ポリアミドまたはパーフルオロカーボンのような合成ポリマーマトリクス；ガラス、シリカまたは金属酸化物のような無機マトリクス；並びに複合材料が含まれる。
【０１８９】
該アフィニティーマトリクスは、適切な支持材料のマトリクスを提供し、それに式（Ｉ）（式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）、及び／または式（ＩＩ）を含む、及び／または式（ＩＩＩ）の構造要素を有する）のリガンドを付着させることによって調製される。該リガンド（Ｉ）を該支持材料に付着させるための方法は、当業者にとって既知である。
【０１９０】
したがって、本発明は、式（Ｉ）（式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）、及び／または式（ＩＩ）を含む、及び／または式（ＩＩＩ）の構造要素を有する）のリガンドを、リガンド置換マトリクスの調製／合成に使用することを含む。該リガンドにおいて、変数Ｌ、Ｓｐ、ＳｐＰ、Ａｍ、Ａｒ1Ａｒ2、Ｒ1及び／またはｖは、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）（Ｉｃ）、（ＩＩ）、及び／または（ＩＩＩ）について定義された意味、及び／または本明細書において定義された意味を有し、特に好ましい実施例についての意味を有する。該リガンド置換マトリクスは、好ましくは式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩ）として定義され、より好ましくは式（ＩＩ）として定義される。
【０１９１】
本発明は、精製対象のタンパク質を前述のリガンド置換マトリクスと接触させるタンパク質のアフィニティー精製、好ましくはアフィニティークロマトグラフィーの方法にも関する。
【０１９２】
用語「アフィニティー精製」（用語「アフィニティー分離」と区別なく使用される）は、式（Ｉ）のリガンドによるタンパク質の分子認識を含む任意の分離技術に関する。該リガンドは、後にリガンド−抗体複合体の分離を容易にする固体担体上に固定化されていてもよい。分離技術には、限定されないが、充填カラム、モノリス構造体または膜におけるアフィニティークロマトグラフィーが含まれる。該用語にはさらに、バッチ方式での吸着またはアフィニティー沈殿が含まれる。
【０１９３】
特徴とは関係なく、精製技術は、リガンドが粗製抗体と接触する最初の認識段階によって構成される。第２段階では、不純物がリガンド−抗体複合体から分離されるか（例えば、カラムクロマトグラフィー）、リガンド−抗体複合体が不純物から分離される（例えば、アフィニティー沈殿）。第３段階で、該抗体は、、例えば、ｐＨ、イオン強度の変化及び／または有機溶媒、界面活性剤またはカオトロープのような改質剤の添加などの化学的及び／または物理的条件の変更により、リガンド−抗体複合体から遊離される。
【０１９４】
以下、本発明を下記の実施例により説明するが、これにより本発明が限定されると解釈してはならない。
【０１９５】
本明細書に引用された文献：
1. A.Cecilia, A.Roque, C.R. Lowe, M.A. Taipa: Antibodies and Genetically Engineered  Related Molecules: Production and Purification,  Biotechnol. Prog. 2004, 20, 639-654
2. K.L.Carson: Flexibility-the guiding principle for antibody manufacturing, Nature Biotechnology, 2005, 23, 1054-1058; S.Hober, K.Nord, M. Linhult: Protein A chromatography for antibody purification, J. Chromatogr. B. 2007, 848, 40-47
3. T.Arakawa, Y.Kita, H.Sato, D. Ejima, Protein Expression and Purification. 2009, 63, 158-163
4. S. Ghose, B. Hubbard, S.M. Cramer, Journal of Chromatography A, 2006, 1122, 144-152
【実施例】
【０１９６】
材料及び方法
特に指示のない限り、すべての化学成分及び溶媒は、実施例１を除いて、分析グレードとした。実施例１に使用した試薬は、粒子の必要条件及び入手しやすさに応じて、調製用から分析用のグレードとした。
平均孔径０．４５μｍの親水性メンブレンフィルタを有する９６及び３８４ウェルフィルタプレートは、Pall GmbH（ドライアイシュ／ドイツ）より購入した。平均孔径１０μｍのポリエチレン製の上部フリットは、Porex（バウツェン／ドイツ）より提供された。画分の収集及び分析アッセイ用の多目的マイクロタイタープレートは、Greiner Bio One GmbH（フリッケンハウゼン／ドイツ）に発注した。分析アッセイは、BMG Labtech GmbH（オッフェンブルク／ドイツ）製のFluostar Galaxyプレートリーダを使用して読み取った。
抗体によるカラムクロマトグラフィー及び抗体フラグメントの精製は、Waters社HPLCシステム（Waters GmbH、エシュボルン／ドイツ）で行った。カラムの充填のために、オムニフィット（Omnifit）カラムハウジング（Diba Industries Ltd、ケンブリッジ／英国）を使用した。ＮＨＳ活性化セファロース４ＦＦ（NMS-activated Sepharose 4 FF）、組換えプロテインＡセファロースＦＦ（rProtein A Sepharose FF）及びSuperdex 70クロマトグラフィー媒体は、GE Healthcare（ウプサラ／スウェーデン）より購入した。Mabsorbent A2P HFはPrometic Life Sciences（ケンブリッジ／英国）より購入し、MEP HypercelはPall Corporation（ニューヨーク州ポートワシントン、米国）より購入した。
リガンドの分析クロマトグラフィーは、ダイオードアレイ検出器とシングル四重極型質量分析計とを含むShimazu HPLCシステム（Shimadzu Deutschland GmbH、デュースブルク／ドイツ）で行った。モノリス型Ｃ１８逆相カラムは、Merck KGaA（ダルムシュタット／ドイツ）より購入した。分析に使用した溶媒は、質量分析グレードとした。
本発明で使用した抗体は、ベバシズマブ（アバスチン、F. Hoffmann-La Roche、スイス）、トシリズマブ（ロアクテムラ、F. Hoffmann-La Roche、スイス）、パリビズマブ（シナジス、Abbott、米国）、セツキシマブ（アービタックス、Merck Serono GmbH、ドイツ）及びヒト血清由来ポリＩｇＧ（Sigma-Aldrich、米国）であった。
プロテインAクロマトグラフィーからの素通り画分（宿主細胞タンパク質に関する）は、無血清培地における抗体産生ＣＨＯ細胞培養物の上清に由来するものであった。
ブラッドフォードアッセイ用のクマシーブリリアントブルー染色試薬は、Thermo Scientific（ボン／ドイツ）より購入した。
【０１９７】
実施例１：リガンドの合成
基本工程Ａ：マイクロ波照射下における芳香族カルボン酸と芳香族アミンとのカップリング、脱保護。Ｔｈｅ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）アルキルまたは（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）アルコキシ−アルコキシ−アルキル置換芳香族カルボン酸（０．１〜０．５ｍｍｏｌ，通常０．１ｍｍｏｌ及びＨＡＴＵ（カルボン酸に対して１当量）を、アセトニトリル（１〜５ｍＬ，通常１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（カルボン酸に対して２当量）に溶解した。５〜１０分（通常１０分）撹拌した後に、該溶液をマイクロ波バイアル中の芳香族アミン（カルボン酸に対して１当量）に加えた。アルゴンで置換した後、該バイアルを封止し、該混合物をマイクロ波照射下にて１００〜１２０°Ｃ（通常１２０°Ｃ）に６０〜９０分間（通常９０分間）加熱した。少量のサンプルを取り出し、ＨＰＬＣ−ＭＳ分析にかけた。反応が完結したならば（すなわち、活性エステルがＨＰＬＣ−ＭＳで確認されなければ）、該混合物をワークアップした。活性エステル及び芳香族アミンの両方が検出された場合、加熱を最大１２時間続けた。未反応の活性エステルが検出されたが、残留芳香族アミンが検出されなかった場合には、微量のアセトニトリル（通常０．５ｍＬ）中の過剰量の芳香族アミン（カルボン酸に対して通常０．５当量）を加え、活性エステルが完全に消費されるまで加熱を続けた。
多くの場合において、該反応混合物を室温に冷却すると、生成物がほぼ定量的に沈殿する。これらの場合には、該固体を分離し、酢酸エチル（１〜２度，通常１度）またはメタノール（１度）で洗浄した後、ＴＢＭＥ（１度）で洗浄し、窒素流により慎重に乾燥させた。
生成物が沈殿しないか部分的にしか沈殿しない場合には、該溶媒を窒素流下にて除去しする。残渣をクエン酸水溶液（５％）で処理した後、酢酸エチルで複数回抽出する。有機層を組み合わせて水で洗浄し、蒸発乾固させる。
全ての場合において、該残渣をジクロロメタン（通常２ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（通常１ｍＬ）で通常１時間処理することによりｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基の脱保護を実施した後、該溶媒を蒸発させた。粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳ（水中アセトニトリルによるグラジエント溶出）またはフラッシュカラムクロマトグラフィー（アミノ改質固定相、ジクロロメタン中メタノールによるグラジエント溶出）により精製した。
【０１９８】
【化８１】
2015509486.tif 000082
３−アミノ−４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）アミノ］安息香酸の合成：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１，３−ジアミノプロパン（５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｏｌ）（ジオキサン（５ｍＬ）中）を、４−フルオロ−３−ニトロ安息香酸（５ｍｍｏｌ）（ジオキサン（５ｍＬ）中）に加えた。該混合物を加熱して９０分間還流させ、その後、溶媒を真空中にて除去し、残渣をクエン酸水溶液（５％）で処理して、酢酸エチルにより２度抽出した。有機層を合わせて水で洗浄し、蒸発乾固させ、酢酸エチルと共に蒸発させて、残渣を高真空状態にて乾燥させた。
該残渣にパラジウム活性炭素（５％、水５０％により湿潤、Degussa社製タイプＥ１０１  ＮＯ／Ｗ、５０ｍｇ）及びメタノール（２０ｍＬ）をアルゴン下において加えた。トリエチルシラン（４ｍＬ）を１０分かけて滴加した。その後、該混合物をセライトに通過させて濾過し、濾液を蒸発乾固させ、残渣を高真空状態で乾燥させて、さらなる精製を行わずに使用した。この反応を何度も繰り返し成功させた。
【０１９９】
【化８２】
2015509486.tif 000083
１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸の合成：前記工程により得られた３−アミノ−４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）アミノ］安息香酸の全量に、オルトギ酸トリメチル（１０ｍＬ）を加えた。該混合物を加熱して３５分間還流させ、その後、溶媒を除去し、残渣を高真空中にて乾燥させて、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2固定相，ジクロロメタン中メタノールによるグラジエント溶出）により精製して、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸を褐色固体として得た。
【０２００】
【化８３】
2015509486.tif 000084
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（３−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４６）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−（３−ピリジル）チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３７９（Ｍ＋１）
【０２０１】
【化８４】
2015509486.tif 000085
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（４−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４７）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−（４−ピリジル）チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３７９（Ｍ＋１）
【０２０２】
【化８５】
2015509486.tif 000086
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２３）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−（２−ピリジル）チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３７９（Ｍ＋１）
【０２０３】
【化８６】
2015509486.tif 000087
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ０５）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３６９（Ｍ＋１）
【０２０４】
【化８７】
2015509486.tif 000088
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（６−メチルピリダジン−３−イル）アミド（Ｌ３４）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び３−アミノ−６−メチルピリダジンより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３１１（Ｍ＋１）
【０２０５】
【化８８】
2015509486.tif 000089
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（３−メチル−１，２，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ３６）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び５−アミノ−３−メチル−１，２，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３１７（Ｍ＋１）
【０２０６】
【化８９】
2015509486.tif 000090
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（１，３，４−チアジアゾール−２−イル）アミド（Ｌ１３）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３０３（Ｍ＋１）
【０２０７】
【化９０】
2015509486.tif 000091
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（４−ピリジル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２１）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−（４−ピリジル）−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３８０（Ｍ＋１）
【０２０８】
【化９１】
2015509486.tif 000092
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−メチル−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ１４）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−メチル−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３１７（Ｍ＋１）
【０２０９】
【化９２】
2015509486.tif 000093
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（３−フェニル−１，２，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ２２）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び５−アミノ−３−フェニル−１，２，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３７９（Ｍ＋１）
【０２１０】
【化９３】
2015509486.tif 000094
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−シクロプロピル−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ３５）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−シクロプロピル−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３４３（Ｍ＋１）
【０２１１】
【化９４】
2015509486.tif 000095
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（１−メチル−３−インダゾリル）アミド（Ｌ０２）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び３−アミノ−１−メチルインダゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３４９（Ｍ＋１）
【０２１２】
【化９５】
2015509486.tif 000096
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４−チアジアゾール−５−イル］アミド（Ｌ０９）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：４２３（Ｍ＋１）
【０２１３】
【化９６】
2015509486.tif 000097
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（ベンゾチアゾール−２−イル）アミド（Ｌ１０）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノベンゾチアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３５２（Ｍ＋１）
【０２１４】
【化９７】
2015509486.tif 000098
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−エチルチオ−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ１２）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−エチルチオ−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３６３（Ｍ＋１）
【０２１５】
【化９８】
2015509486.tif 000099
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（４−メチルチアゾール−２−イル）アミド（Ｌ１５）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−メチルチアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３１６（Ｍ＋１）
【０２１６】
【化９９】
2015509486.tif 000100
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−フェニル−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ３３）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−フェニル−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３７９（Ｍ＋１）
【０２１７】
【化１００】
2015509486.tif 000101
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（５−メチル−１−フェニルピラゾール−３−イル）アミド（Ｌ１１）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び３−アミノ−５−メチル−１−フェニルピラゾールｅより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３７５（Ｍ＋１）
【０２１８】
【化１０１】
2015509486.tif 000102
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（チアゾール−２−イル）アミド（Ｌ１６）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノチアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３０２（Ｍ＋１）
【０２１９】
【化１０２】
2015509486.tif 000103
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（５−メチルチアゾール−２−イル）アミド（Ｌ１７）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−メチルチアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３１６（Ｍ＋１）
【０２２０】
【化１０３】
2015509486.tif 000104
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（２−エチル−１，３，４−チアジアゾール−５−イル）アミド（Ｌ０７）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−エチル−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３３１（Ｍ＋１）
【０２２１】
【化１０４】
2015509486.tif 000105
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（ベンゾオキサゾール−２−イル）アミド（Ｌ０８）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノベンゾオキサゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３３６（Ｍ＋１）
【０２２２】
【化１０５】
2015509486.tif 000106
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（５，６−ジヒドロ−（４Ｈ）−シクロペンタチアゾール−２−イル）アミド（Ｌ３２）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５，６−ジヒドロ−（４Ｈ）−シクロペンタチアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３４２（Ｍ＋１）
【０２２３】
【化１０６】
2015509486.tif 000107
１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸の合成：ガラスバイアル中にて、３−アミノ−４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）アミノ］安息香酸（合成、前述を参照。０．５ｍｍｏｌ）（ジオキサン（２ｍＬ）中）に、オルト酢酸トリメチル（２ｍｍｏｌ）を加えた。該バイアルを完全に密閉し、該混合物を１００℃に１時間加熱して、その後、溶媒を蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2固定相、ジクロロメタン中メタノールによるグラジエント溶出）により精製して、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸を褐色固体として得た。
【０２２４】
【化１０７】
2015509486.tif 000108
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４２）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−（２−ピリジル）チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３９３（Ｍ＋１）
【０２２５】
【化１０８】
2015509486.tif 000109
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ３９）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３８３（Ｍ＋１）
【０２２６】
【化１０９】
2015509486.tif 000110
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（４−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５１）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−（４−ピリジル）チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３９３（Ｍ＋１）
【０２２７】
【化１１０】
2015509486.tif 000111
１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−メトキシベンゾイミダゾール−５−カルボン酸の合成：ガラスバイアル中にて、３−アミノ−４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）アミノ］安息香酸（合成、前述を参照。０．５ｍｍｏｌ）（ジオキサン（２ｍＬ）中）に、オルト酢酸テトラメチル（２ｍｍｏｌ）を加えた。該バイアルを完全に密閉し、該混合物を１００℃に１時間加熱して、その後、溶媒を蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2固定相、ジクロロメタン中メタノールによるグラジエント溶出）により精製して、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−メトキシベンゾイミダゾール−５−カルボン酸を褐色固体として得た。
【０２２８】
【化１１１】
2015509486.tif 000112
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メトキシベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４５）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−メトキシベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾールより調製した（保護基の開裂は、低濃度トリフルオロ酢酸を用いて、メトキシ基の酸による開裂／加水分解を避けるために最小限の反応時間にて行った）。ＥＳＩ−ＭＳ：３９９（Ｍ＋１）
【０２２９】
【化１１２】
2015509486.tif 000113
１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸の合成：ガラスバイアル中にて、３−アミノ−４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）アミノ］安息香酸（合成、前述を参照。０．５ｍｍｏｌ）（ジオキサン（２ｍＬ）中）に、オルトプロピオン酸トリエチル（２ｍｍｏｌ）を加えた。該バイアルを完全に密閉し、該混合物を１００℃に１時間加熱して、その後、溶媒を蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2固定相、ジクロロメタン中メタノールによるグラジエント溶出）により精製して、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸を褐色固体として得た。
【０２３０】
【化１１３】
2015509486.tif 000114
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４３）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−（２−ピリジル）チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：４０７（Ｍ＋１）
【０２３１】
【化１１４】
2015509486.tif 000115
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４４）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３９７（Ｍ＋１）
【０２３２】
【化１１５】
2015509486.tif 000116
１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−５−カルボン酸の合成：３−アミノ−４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）アミノ］安息香酸（合成，前述を参照。０．２ｍｍｏｌ）（ジクロロメタン（２ｍＬ）中）に、ＤＩＰＥＡ（１ｍｍｏｌ）及びクロロトリメチルシラン（０．６ｍｍｏｌ）を加えた。５分間撹拌した後、炭酸ビス（トリクロロメチル）溶液（０．１ｍｍｏｌ）（ジクロロメタン（１ｍＬ）中）を滴加し、５分間撹拌を続けた。炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（２００μＬ）を加え、該混合物を２分間振り混ぜ、続いてクエン酸水溶液（５％）を加えて有機層を分離した。水層をジクロロメタンによりもう一度抽出し、有機層を合わせてクエン酸水溶液（５％）及び水で洗浄し、その後、生じた懸濁液を蒸発乾固した。残渣を酢酸エチル（１ｍＬ）及びＴＢＭＥ（０．５ｍＬ）で抽出し，続いてＴＢＭＥにより追加の抽出を行った。有機層を合わせて蒸発乾固させ、高真空状態で乾燥させた。１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−５−カルボン酸粗生成物を、さらなる精製を行わずに使用した。
【０２３３】
【化１１６】
2015509486.tif 000117
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２４）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３８５（Ｍ＋１）
【０２３４】
【化１１７】
2015509486.tif 000118
１−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２，３−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−６−カルボン酸の合成：３−アミノ−４−［（３−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−１−プロピル）アミノ］安息香酸（合成，前述を参照。０．２ｍｍｏｌ）（ジクロロメタン（２ｍＬ）中）に、ＤＩＰＥＡ（１ｍｍｏｌ）及びクロロトリメチルシラン（０．６ｍｍｏｌ）を加えた。５分間撹拌した後、塩化オキサリル（０．３ｍｍｏｌ）溶液（０．１ｍｍｏｌ）（ジクロロメタン（１ｍＬ）中）を滴加し、５分間撹拌を続けた。炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（２００μＬ）を加え、該混合物を２分間振り混ぜ、続いてクエン酸水溶液（５％）を加えて有機層を分離した。水層をジクロロメタンによりもう一度抽出し、有機層を合わせてクエン酸水溶液（５％）及び水で洗浄し、その後、生じた懸濁液を蒸発乾固した。残渣を高真空状態で乾燥させた。１−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２，３−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−６−カルボン酸粗生成物を、さらなる精製を行わずに使用した。
【０２３５】
【化１１８】
2015509486.tif 000119
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２，３−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−６−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２８）の合成：基本工程Ａに従い、１−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１−プロピル）−２，３−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノキサリン−６−カルボン酸及び２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：４１３（Ｍ＋１）
【０２３６】
【化１１９】
2015509486.tif 000120
１−アミノ−８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサオクタンの合成：１，８−ジアミノ−３，５−ジオキサオクタン（１３５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解させた。撹拌している間に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル溶液（４５ｍｍｏｌ）（ジクロロメタン（５０ｍＬ）中）をゆっくりと加えた。１時間後、溶媒を除去し、残渣を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈して、炭酸ナトリウム水溶液（１０％）で３度洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。無色の油状物を高真空状態において乾燥させた後、粗生成物をさらなる精製を行わずに使用した。
【０２３７】
【化１２０】
2015509486.tif 000121
４−アミノ−３−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］アミノ安息香酸の合成：１−アミノ−８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサオクタン（６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（５ｍＬ）に溶解させた。４−フルオロ−３−ニトロ安息香酸溶液（５ｍｍｏｌ）（ジオキサン（５ｍＬ）中）を加えて、該混合物を加熱して２時間還流させ、その後、別分量の１−アミノ−８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサオクタン（２ｍｍｏｌ）（ジオキサン（２ｍＬ）中）を加え、加熱を１時間続けた。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解して、クエン酸水溶液（５％）及び水で洗浄した。溶媒を除去し、残渣を高真空状態で乾燥させた。
該残渣にパラジウム活性炭素（５％、水５０％により湿潤、Degussa社製タイプＥ１０１  ＮＯ／Ｗ、５０ｍｇ）及びメタノール（２０ｍＬ）をアルゴン下において加えた。トリエチルシラン（４ｍＬ）を１０分かけて滴加した。２０分撹拌した後、追加のトリエチルシラン（１ｍＬ）を２分かけて滴加した後、１０分間撹拌を続けた。その後、該混合物をセライトに通過させて濾過し、濾液を蒸発乾固させ、残渣を高真空状態で乾燥させて、さらなる精製を行わずに使用した。この反応を何度も繰り返し成功させた。
【０２３８】
【化１２１】
2015509486.tif 000122
１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸の合成：４−アミノ−３−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］アミノ安息香酸（合成、前述を参照。一回分の材料全量を用いた）を、オルトギ酸トリメチル（５ｍＬ）に溶解し、８０℃で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2固定相，ジクロロメタン中メタノールによるグラジエント溶出）により精製して、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸を褐色固体として得た。
【０２３９】
【化１２２】
2015509486.tif 000123
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２５）の合成：基本工程Ａに従い、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：４４３（Ｍ＋１）
【０２４０】
【化１２３】
2015509486.tif 000124
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４１）の合成：基本工程Ａに従い、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−（２−ピリジル）チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：４５３（Ｍ＋１）
【０２４１】
【化１２４】
2015509486.tif 000125
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（４−メチルチアゾール−２−イル）アミド（Ｌ２９）の合成：基本工程Ａに従い、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−メチルチアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３９０（Ｍ＋１）
【０２４２】
【化１２５】
2015509486.tif 000126
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（１，３，４−チアジアゾール−２−イル）アミド（Ｌ２７）の合成：基本工程Ａに従い、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３７７（Ｍ＋１）
【０２４３】
【化１２６】
2015509486.tif 000127
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−（５−メチル−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）アミド（Ｌ２６）の合成：基本工程Ａに従い、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−メチル−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３９１（Ｍ＋１）
【０２４４】
【化１２７】
2015509486.tif 000128
１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸の合成：４−アミノ−３−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］アミノ安息香酸（合成、前述を参照。一回分の材料全量を用いた）を、オルト酢酸トリメチル（２０ｍＬ）に溶解し、加熱して１時間還流させた。溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2固定相，ジクロロメタン中メタノールによるグラジエント溶出）により精製して、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸を褐色固体として得た。
【０２４５】
【化１２８】
2015509486.tif 000129
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４９）の合成：基本工程Ａに従い、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：４５７（Ｍ＋１）
【０２４６】
【化１２９】
2015509486.tif 000130
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（４−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５２）の合成：基本工程Ａに従い、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸及び２−アミノ−４−（４−ピリジル）チアゾールより調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：４６７（Ｍ＋１）
【０２４７】
【化１３０】
2015509486.tif 000131
（Ｓ）−グルタミン酸Ｎ，Ｎ’−ビス｛８−｛５−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イルカルバモイル］ベンゾイミダゾール−１−イル｝−３，５−ジオキサ−１−オクチル｝アミド（Ｌ５３）の合成：１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２５）を５００μｍｏｌスケールで調製した（合成、前述を参照。クロマトグラフィー精製は適用していない）。アミントリフルオロ酢酸塩の粗生成物を、ＤＭＦ（１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（３ｍｍｏｌ）で処理した。Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルグルタミン酸（０．２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解させた。５分後に、該混合物を前記調製済溶液に加えた。２０分後、ＴＢＭＥ（２ｍＬ）を加えて、該混合物を約１時間放置し、生じた厚い沈殿を遠心分離により分離して、酢酸エチル及びＴＢＭＥで洗浄し、窒素流により慎重に乾燥させた。得られた固体をジクロロメタン（２ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）で３０分間処理した後、溶媒を除去して、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：４９９（（Ｍ＋２）／２）
【０２４８】
【化１３１】
2015509486.tif 000132
（Ｓ）−グルタミン酸Ｎ，Ｎ’−ビス｛８−｛５−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イルカルバモイル］−２−メチルベンゾイミダゾール−１−イル｝−３，５−ジオキサ−１−オクチル｝アミド（Ｌ５４）の合成：１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４９）を５００μｍｏｌスケールで調製した（合成、前述を参照。クロマトグラフィー精製は適用していない）。アミントリフルオロ酢酸塩の粗生成物を、ＤＭＦ（１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（３ｍｍｏｌ）で処理した。Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルグルタミン酸（０．２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解させた。５分後に、該混合物を前記調製済溶液に加えた。２０分後、ＴＢＭＥ（２ｍＬ）を加えて、該混合物を約１時間放置し、生じた厚い沈殿を遠心分離により分離して、酢酸エチル及びＴＢＭＥで洗浄し、窒素流により慎重に乾燥させた。得られた固体をジクロロメタン（２ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）で３０分間処理した後、溶媒を除去して、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：５１３（（Ｍ＋２）／２）
【０２４９】
【化１３２】
2015509486.tif 000133
１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５０）の合成：４−アミノ−３−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル］アミノ安息香酸（１ｍｍｏｌ、合成、前述を参照）をジオキサン（４ｍＬ）に溶解させて、オルト炭酸テトラメチル（４ｍｍｏｌ）で処理し、１００℃に１時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2固定相，ジクロロメタン中メタノールによるグラジエント溶出）により精製して、１−［８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）−２−メトキシベンゾイミダゾール−５−カルボン酸を得た。
該カルボン酸（０．１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解させた。１０分後に、該溶液を２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾール（０．１ｍｍｏｌ）に加え、該混合物をマイクロ波照射下にて１２０℃に９０分間加熱した。室温に冷却した後、沈殿を分離して、ＴＢＭＥで洗浄し、窒素流により慎重に乾燥させて、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）で処理した。該溶液をマイクロ波照射下にて１００℃に１時間加熱した。室温に冷却した後、溶媒を除去して、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製して、１−（８−アミノ−３，５−ジオキサ−１−オクチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミドを得た。ＥＳＩ−ＭＳ：４５９（Ｍ＋１）
【０２５０】
【化１３３】
2015509486.tif 000134
６−［（３−アミノ−１−プロピル）アミノ］ニコチン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ１９）の合成：６−クロロニコチン酸（０．２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解させた。１分後に、該暗赤色溶液を２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾール（０．２ｍｍｏｌ）に加え、該混合物を５０℃に５分間加熱した。室温に冷却した後、生じた沈殿を分離して、酢酸エチル及びＴＢＭＥで洗浄し、空気乾燥させた。その後、１，３−ジアミノプロパン（１ｍＬ）を加えて、該混合物をマイクロ波照射下にて１５０℃に１時間加熱した。溶媒を窒素流により乾燥させた後、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３４５（Ｍ＋１）
【０２５１】
【化１３４】
2015509486.tif 000135
６−［（３−アミノ−１−プロピル）アミノ］ニコチン酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４０）の合成：６−クロロニコチン酸（０．２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解させた。１分後に、該暗赤色溶液を２−アミノ−４−（２−ピリジル）チアゾール（０．２ｍｍｏｌ）に加え、該混合物を５０℃に２０分間加熱した。室温に冷却した後、溶媒を蒸発させて、残渣を酢酸エチルに溶解させ、クエン酸水溶液（５％）、炭酸ナトリウム飽和水溶液及び水で洗浄した。溶媒を蒸発させた後、１，３−ジアミノプロパン（１ｍＬ）を加えて、該混合物をマイクロ波照射下にて１００℃に２時間加熱した。溶媒を窒素流により乾燥させた後、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３５５（Ｍ＋１）
【０２５２】
【化１３５】
2015509486.tif 000136
３−アジド−１−プロピルアミン連結２−クロロトリチルポリスチレン樹脂の合成：２−クロロトリチルクロリド（１５０μｍｏｌ）があらかじめロードされたポリスチレン樹脂を３−アミノ−１−プロパノール（０．５ｍＬ）で処理し、続いてジクロロメタン（２ｍＬ）で処理した。該スラリーを３０分間撹拌した後、該樹脂をＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）十分に洗浄し、空気流により乾燥させた。該乾燥樹脂に、ジクロロメタン（２ｍＬ），ＤＩＰＥＡ（１ｍｍｏｌ）及びメタンスルホニルクロリド（０．５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間振り混ぜた後、該樹脂をジクロロメタンで３度洗浄し、空気流により乾燥させた。該乾燥樹脂を、アジ化ナトリウム（１ｍｍｏｌ）を収容したガラスバイアルに移した。ＤＭＦ（２ｍＬ）を加えた後、該バイアルを完全に密封し、該混合物を６０℃に一晩加熱した。該樹脂を水／メタノール及びＤＭＳＯで（各２度ずつ）洗浄した。
【０２５３】
【化１３６】
2015509486.tif 000137
４−エチニル安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド：４−ブロモ安息香酸（０．２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解させた。５分後に、該暗赤色溶液を２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾール（０．２ｍｍｏｌ）に加えた。該混合物をマイクロ波照射下にて１００℃に６０分間加熱した。室温に冷却した後、沈殿を分離して、酢酸エチル及びＴＢＭＥで洗浄し、窒素流により慎重に乾燥させた。
該固体をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）中に懸濁させ、マイクロ波チューブ内において、ビス（トリフェニルホスフィニル）パラジウム（ＩＩ）二塩化物（５μｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１５μｍｏｌ）及びヨウ化銅（Ｉ）（１５μｍｏｌ）を加えた。超音波を適用しながら該チューブをアルゴンで置換し、その後封止した。トリエチルアミン（０．５ｍＬ）及びエチニルトリイソプロピルシラン（０．５ｍｍｏｌ）を加えた後、該バイアルをアルゴンで再び置換し、マイクロ波照射下にて１００℃に３時間加熱した。その後、全ての揮発成分を窒素流により蒸発させた。残渣をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）、水（１０μＬ）及びフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム溶液（１Ｍ（ＴＨＦ中），０．５ｍＬ）により処理した。該混合物を１５分間撹拌し、溶媒を蒸発させ、残渣をＳｉＯ2ショートカラムに吸着及び該カラムから溶出（酢酸エチル／メタノール、約４：１により溶出）させて、主要な副生成物から分離した。溶媒を蒸発させた後、生成物を真空状態で乾燥させて、さらなる精製を行わずに使用した。
【０２５４】
【化１３７】
2015509486.tif 000138
６−［１−（３−アミノ−１−プロピル）トリａｚｏｌ−４−イル］安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ４８）の合成：２−クロロトリチルポリスチレン樹脂（１５０μｍｏｌ、合成、前述を参照）に結合した３−アジド−１−プロピルアミンに、ヨウ化銅（Ｉ）（３ｍｇ）を加えた。前述により得られた４−エチニル安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミドの全量をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、該樹脂に加えた。アルゴンにより置換した後、該混合物を６０℃で一晩撹拌した。その後、該樹脂ＤＭＦ、水、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄し、乾燥させた。生成物を、トリフルオロ酢酸、ジクロロメタン及びトリエチルシラン（４５：４５：１０）で２重に処理して該支持体より開裂させ、その後ジクロロメタンで洗浄した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３９６（Ｍ＋１）
【０２５５】
【化１３８】
2015509486.tif 000139
２−（５−アミノ−１−ペンチル）−１−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ３１）の合成：４−メチルアミノ−３−ニトロ安息香酸（０．２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に懸濁させて５分間撹拌し、次に該懸濁液を２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾール（０．２ｍｍｏｌ）に加えた。該混合物を１００℃に２０分間加熱した後、ＤＭＳＯ（０．１ｍＬ）及びアセトニトリル（１ｍＬ）を加えて加熱を１時間続けた。室温に冷却した後、沈殿を収集して、酢酸エチルで２度洗浄し、窒素流により慎重に乾燥させた。
ニトロ基ｕｓｉｎｇパラジウム活性炭素及びトリエチルシランを用いたニトロ器の還元が成功しなかったため、残渣をピリジン（１ｍＬ）及び水（５０μＬ）中１００℃にて塩化スズ（ＩＩ）（１ｍｍｏｌ）で３０分間処理した。室温に冷却した後、固体を濾別し、メタノールで十分にリンスした。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルに懸濁させた。該懸濁液を水で３度洗浄し、蒸発乾固させた。
６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸（０．２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解させた。２分後に、該溶液を前述で得られた残渣に加え、室温で７５分間撹拌した後、生じた沈殿を分離し、酢酸エチルで２度洗浄して、窒素流により慎重に乾燥させた。トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加えて、該混合物を一晩撹拌した。該混合物を蒸発乾固して、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：４１１（Ｍ＋１）
【０２５６】
【化１３９】
2015509486.tif 000140
５−アミノ−１−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾールの合成：３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−１−プロピルアミン（０．３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．５ｍｍｏｌ）に、２，４−ジニトロフルオロベンゼン（０．２５ｍｍｏｌ）（ジオキサン（１ｍＬ）中）を加えた。該混合物を１００℃に２５分間加熱し、次に溶媒を蒸発させた。残渣を酢酸エチルに溶解し、クエン酸水溶液（５％）及び水で２度洗浄した。溶媒を蒸発させ、残渣をパラジウム活性炭素（５％、水５０％により湿潤、Degussa社製タイプＥ１０１  ＮＯ／Ｗ、１０ｍｇ）及びメタノール（１ｍＬ）で処理した。該混合物をアルゴンで置換し、トリエチルシラン（０．６ｍＬ）を加えた。該混合物を上清液が脱色するまで降り混ぜた後、オルトギ酸トリメチル（１ｍＬ）を加え、該混合物をアルゴン雰囲気下にて８０℃に１時間加熱した。その後、懸濁液をセライトに通過させて濾過し、該セライトをメタノールでリンスした。溶媒を蒸発させ、残渣を真空中で乾燥させた。
【０２５７】
【化１４０】
2015509486.tif 000141
１−（３−アミノ−１−プロピル）−５−［（イミダゾ−［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）カルボキサミド］ベンゾイミダゾール（Ｌ３０）の合成：イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−カルボン酸（０．２５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）に溶解させ、５−アミノ−１−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール（合成、前述を参照。一回分の材料全量を用いた）を１０分後に加えた。該混合物を室温にて一晩振り混ぜた後、溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルに溶解し、クエン酸水溶液（５％）、炭酸ナトリウム水溶液及び水で洗浄して、蒸発乾固させた。該残渣にジクロロメタン（２ｍＬ）を加え、続いてトリフルオロ酢酸を加え、該混合物を室温にて３０分混合した後、溶媒を蒸発させ、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３４１（Ｍ＋１）
【０２５８】
【化１４１】
2015509486.tif 000142
１−（３−アミノ−１−プロピル）−５−［（１−メチルインダゾール−３−イル）カルボキサミド］ベンゾイミダゾール（Ｌ０１）の合成：イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−６−カルボン酸の代わりに１−メチルインダゾール−３−カルボン酸を用いて、１−（３−アミノ−１−プロピル）−５−［（イミダゾ−［２，１−ｂ］チアゾール−６−イル）カルバモイル］ベンゾイミダゾール（Ｌ３０）についての記載のようにして、本化合物を調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３４９（Ｍ＋１）
【０２５９】
【化１４２】
2015509486.tif 000143
４−［（３−アミノ−１−プロピル）アミノ］−３−ニトロ安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ１８）の合成：３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−１−プロピルアミン（０．３ｍｍｏｌ）、４−フルオロ−３−ニトロ安息香酸（０．３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．６ｍｍｏｌ）（ジオキサン（２ｍＬ）中）を１００℃に４０分間加熱し、その後溶媒を蒸発させた．残渣にＨＡＴＵ（０．３ｍｍｏｌ）（アセトニトリル（１ｍＬ）中）及びＤＩＰＥＡ（０．６ｍｍｏｌ）を加えて、該混合物を室温にて５分間撹拌した。２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾール（０．３ｍｍｏｌ）（アセトニトリル（１ｍＬ）中）を加えた後、該混合物を１００℃に２０分間加熱した。室温に冷却した後、固体沈殿を収集し、酢酸エチルで３度洗浄して、窒素流により乾燥させた。その後、ジクロロメタン（２ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加えて、該混合物を３０分間撹拌し、続いて溶媒を蒸発させた。残渣をジクロロメタン（トリエチルアミン１％を含む）中メタノールのグラジエントを用いたＮＨ2改質固定相におけるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３８９（Ｍ＋１）
【０２６０】
【化１４３】
2015509486.tif 000144
４−［（１−アミノ−３−プロピル）オキシ］安息香酸Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ３８）の合成：２−クロロトリチルクロリド（１５０μｍｏｌ）があらかじめロードされたポリスチレン樹脂を３−アミノ−１−プロパノール（０．５ｍＬ）で処理し、続いてジクロロメタン（２ｍＬ）で処理した。該スラリーを３０分間撹拌した後、該樹脂をＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）十分に洗浄し、窒素流により乾燥させた。該乾燥樹脂に、トリフェニルホスフィン（１ｍｍｏｌ）及び４−ヒドロキシ安息香酸メチル（１ｍｍｏｌ）を加えた。乾燥テトラヒドロフラン（２ｍＬ）を加えた後、該混合物を該樹脂が十分に膨潤するまで撹拌した。次に、Ｎ、Ｎ’−アゾジカルボン酸ジイソプロピルエステル（１ｍｍｏｌ）を滴加して、該混合物を２時間振り混ぜた。この後、該樹脂をＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄した。該乾燥樹脂をガラスバイアルに移し、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）及び水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ、１ｍＬ）で処理した。該バイアルを完全に密封し、該混合物を８０℃に３時間加熱した後、該樹脂をＤＭＦ、酢酸（ＤＭＦ中）（約５％）、ＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄した。
該樹脂をＮＭＰ中に膨潤させた。ＮＭＰ（１ｍＬ）、ＨＡＴＵ（０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．４ｍｍｏｌ）を加えた後、該混合物を１０分間撹拌し、続いて２−アミノ−４−（２−ピリジル）チアゾール（０．２ｍｍｏｌ）（ＮＭＰ（１ｍＬ）中）を加えた。該バイアルをアルゴンで置換し、該混合物をマイクロ波照射下にて１２０℃に９０分間加熱した。次に、該樹脂を洗浄し（ＤＭＦ、メタノール、ジクロロメタン、各３度ずつ）、標的化合物をトリフルオロ酢酸、ジクロロメタン及びトリエチルシラン（４５：４５：１０）で２重に処理して該支持体より開裂させ、その後ジクロロメタンでリンスした。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３５５（Ｍ＋１）
【０２６１】
【化１４４】
2015509486.tif 000145
４−［（１−アミノ−３−プロピル）オキシ］安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ２０）の合成：Ｎ−［４−（２−ピリジル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ３８）、２−アミノ−４−（２−ピリジル）チアゾールの代わりに２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾールを用いて、４−（１−アミノ−３−プロピルオキシ）安息香酸についての記載のようにして、本化合物を調製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３４５（Ｍ＋１）
【０２６２】
【化１４５】
2015509486.tif 000146
４−（５−アミノ−３−オキサ−１−ペンチルオキシ）安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ３７）の合成：２−クロロトリチルクロリド（１５０μｍｏｌ）があらかじめロードされたポリスチレン樹脂をアミノエトキシエタノール（０．５ｍＬ）で処理し、続いてジクロロメタン（２ｍＬ）で処理した。該スラリーを３０分間撹拌した後、該樹脂をＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）十分に洗浄し、高真空状態で乾燥させた。該乾燥樹脂に、トリフェニルホスフィン（１ｍｍｏｌ）及び４−ヒドロキシ安息香酸メチル（１ｍｍｏｌ）を加えた。乾燥テトラヒドロフラン（２ｍＬ）を加えた後、該混合物を該樹脂が十分に膨潤するまで撹拌した。次に、Ｎ、Ｎ’−アゾジカルボン酸ジイソプロピルエステル（１ｍｍｏｌ）を滴加して、該混合物を２時間振り混ぜた。この後、該樹脂をＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄した。該乾燥樹脂をガラスバイアルに移し、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）及び水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ、１ｍＬ）で処理した。該バイアルを完全に密封し、該混合物を６０℃に２時間、及び８０℃に３０分間加熱した後、該樹脂をＤＭＦ、酢酸（ＤＭＦ中）（約５％）、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄した。
該樹脂をＮＭＰ中に膨潤させた。ＮＭＰ（１ｍＬ）、ＨＡＴＵ（０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．４ｍｍｏｌ）を加えた後、該混合物を１０分間撹拌し、続いて２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾール（０．２ｍｍｏｌ）（ＮＭＰ（１ｍＬ）中）を加えた。該バイアルをアルゴンで置換し、該混合物をマイクロ波照射下にて１２０℃に９０分間加熱した。次に、該樹脂を洗浄し（ＤＭＦ、メタノール、ジクロロメタン、各３度ずつ）、標的化合物をトリフルオロ酢酸、ジクロロメタン及びトリエチルシラン（４５：４５：１０）で２重に処理して該支持体より開裂させ、その後ジクロロメタンでリンスした。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３７５（Ｍ＋１）
【０２６３】
【化１４６】
2015509486.tif 000147
４−（３−アミノ−１−プロピル）−７−［（１−メチルインダゾール−３−イル）カルボキサミド］−２，３，４，５−テトラヒドロベンゾ［ｆ］［１、４］オキサゼピン−５−オン（Ｌ０３）の合成：２−クロロトリチルクロライドポリスチレン樹脂（１５０μｍｏｌ）に、３−アミノプロパン−１−オール（１ｍＬ）及びジクロロメタン（１ｍＬ）を加え、該混合物を２０分間撹拌した後、該樹脂をＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄した。該樹脂を乾燥させて、ＤＩＰＥＡ（１ｍｍｏｌ）（ジクロロメタン（１ｍＬ）中）で処理し、続いてメタンスルホニルクロリド（０．５ｍｍｏｌ）（ジクロロメタン（１ｍＬ）中）を滴加した。該混合物を室温で２０分間振り混ぜた後、該樹脂をジクロロメタンで３度洗浄し、乾燥させ、グラスバイアルに移して、エタノールアミン（１ｍＬ）及びＮＭＰ（１ｍＬ）により１００℃で２時間処理した。その後、ＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄した
２−フルオロ−５−ニトロ安息香酸（２００μｍｏｌ）及びＴＢＴＵ（２００μｍｏｌ）（ＮＭＰ（１．５ｍＬ）中）を、ＤＩＰＥＡ（４００μｍｏｌ）で２分間処理した．その後、混合物をＮＭＰ膨潤樹脂に加え、該混合物を２５分間撹拌して、該樹脂を前述のようにして洗浄した。ＴＨＦ（２ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）及びＮａＯＨ水溶液（２Ｍ、１ｍＬ）を加えた後、該樹脂を３日間撹拌させ、その後メタノール及びジクロロメタンで十分に洗浄した。
該樹脂をピリジン（０．５ｍＬ）及び無水塩化スズ（ＩＩ）（１ｍｍｏｌ）（ＮＭＰ（１．５ｍＬ）中）で処理して、室温で５．５時間振り混ぜ、続いて別分量の塩化スズ（ＩＩ）（０．５ｍｍｏｌ）（ＮＭＰ（０．５ｍＬ）中）を加えた。該混合物を一晩振り混ぜた後、メタノールで洗浄した。不溶な反応副生成物を、メタノールを用いた慎重な浮上処理を繰り返して、樹脂より分離した。ジクロロメタンで洗浄した後、該樹脂をＮＭＰ中に膨潤させた。１−メチル−３−インダゾールカルボン酸（０．２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（０．２ｍｍｏｌ）（ＮＭＰ（１．５ｍＬ）中）を、ＤＩＰＥＡ（０．４ｍｍｏｌ）で処理し、２分後に該混合物を該樹脂に加えて、５時間撹拌した。該樹脂をＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（３度ずつ）洗浄した。標的化合物をトリフルオロ酢酸（４５％）及びトリエチルシラン（１０％）（ジクロロメタン中）で２重に処理して該支持体より開裂させ、その後該樹脂をジクロロメタンで十分に洗浄した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３９４（Ｍ＋１）
【０２６４】
【化１４７】
2015509486.tif 000148
１−（３−アミノ−１−プロピル）インダゾール−３−カルボン酸Ｎ−（３−カルバモイル−４−メトキシフェニル）アミド（Ｌ０４）の合成：シーバー（Ｓｉｅｂｅｒ）アミドリンカーで保護された９−フルオレニルメトキシカルボニルがあらかじめロードされたポリスチレン樹脂を、ジクロロメタン中に膨潤させ、その後ＤＭＦに膨潤させた。該樹脂をピペリジン（ＤＭＦ中２５％、約３ｍＬ）で１０分間処理し、その後ＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄した。５−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）アミノ−２−メトキシ安息香酸（０．２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（０．２ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（１．５ｍＬ）に溶解して、ＤＩＰＥＡ（０．４ｍｍｏｌ）で処理した。２分後に該溶液を該樹脂に加えて、該混合物を３０分間撹拌し、該樹脂をＤＭＦで３度洗浄した。ピペリジン（ＤＭＦ中２５％、約３ｍＬ）を加えた後、該混合物を１５分間撹拌し、続いてＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄した。
インダゾール−３−カルボン酸（０．５ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．５ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（１．５ｍＬ）に溶解させ、Ｎ、Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（０．５ｍｍｏｌ）で２分間処理して、該溶液を該樹脂に加え、該混合物を１時間振り混ぜた後、洗浄した（ＤＭＦ、メタノール、ジクロロメタン、各３度ずつ）．乾燥させた後、該樹脂をガラスバイアルに移し、１、３−ジブロモプロパン（１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１ｍｍｏｌ）（ＮＭＰ中）により６０℃で一晩処理した。該反応をもう一度１００℃で４．５ｈ繰り返し、続いて該樹脂を洗浄して（ＤＭＦ、メタノール、ジクロロメタン、各３度ずつ）、再びガラスバイアルに移した。テトラヒドロフラン（２ｍＬ）及び濃縮アンモニア水溶液（１ｍＬ）を加えた後、該バイアルを完全に密閉し、該混合物を５０℃に９０分間加熱した。追加のアンモニア水溶液（１ｍＬ）を加えた後、加熱を一晩続けた。該樹脂をＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで（各３度ずつ）洗浄した後、生成物をジクロロメタン、トリフルオロ酢酸及びトリエチルシラン（８５：１０：５）で３重に処理して該樹脂より開裂させ、その後ジクロロメタンでリンスした。溶媒を蒸発させた後、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３６８（Ｍ＋１）
【０２６５】
【化１４８】
2015509486.tif 000149
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸Ｎ−（１−メチルインダゾール−３−イル）アミド（Ｌ０６）の合成：３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−１−プロピルアミン（０．３ｍｍｏｌ）、４−フルオロ−３−ニトロ安息香酸（０．３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．６ｍｍｏｌ）（ジオキサン（２ｍＬ）中）を、１００℃に１時間加熱し、その後溶媒を蒸発させた。残渣にクエン酸水溶液（５％）を加えて、該混合物を酢酸エチルで２度抽出した。有機層を合わせて塩化ナトリウム飽和水溶液で２度洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。次に、パラジウム活性炭素（５％、水５０％により湿潤、Degussa社製タイプＥ１０１  ＮＯ／Ｗ、１５ｍｇ）メタノール（２ｍＬ）を加え、続いてトリエチルシラン（５００μＬ）を３分かけて滴加した。該混合物をさらに５分間振り混ぜた後、これをセライトに通過させて濾過し、濾液を蒸発乾固させ、残渣を完全に密閉されたガラスバイアル中で、ＤＭＦ（２ｍＬ）及びイソペンチルニトリル（０．９ｍｍｏｌ）により６０℃で一晩処理した。室温に冷却した後、クエン酸水溶液（５％、２ｍＬ）を加えて、該混合物酢酸エチルで３度抽出した。有機層を合わせて、塩化ナトリウム飽和水溶液で３度洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、真空中で乾燥させた。
該残渣を、ジオキサン（１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（０．６ｍｍｏｌ）に溶解させ、炭酸ビス（トリクロロメチル）溶液（０．１ｍｍｏｌ）（ジオキサン（１ｍＬ）中）により室温で３０分間処理した。その後、３−アミノ−１−メチルインダゾール（０．３ｍｍｏｌ）（ジクロロメタン（１ｍＬ）中）を加えて、該混合物を３０分間撹拌し、続いて溶媒を蒸発させ、残渣を炭酸ナトリウム飽和水溶液（２ｍＬ）で処理して、酢酸エチルで２度抽出した。有機層を合わせてクエン酸水溶液（５％）及び炭酸ナトリウム飽和水溶液で２度洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、セライトに通過させて濾過し、蒸発乾固させた。
該残渣を、ジクロロメタン（２ｍＬ）、トリエチルシラン（０．１ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）により室温で１５分間処理した。その後、溶媒を蒸発させて、残渣を分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。ＥＳＩ−ＭＳ：３５０（Ｍ＋１）
【０２６６】
【化１４９】
2015509486.tif 000150
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［３−（２−フリル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］アミド（Ｌ５５）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、５−アミノ−３−（２−フリル）−１，２，４−チアゾールを用いた。
【０２６７】
【化１５０】
2015509486.tif 000151
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（３−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５６）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、２−アミノ−５−（３−フリル）−１，３，４−チアゾールを用いた。
【０２６８】
【化１５１】
2015509486.tif 000152
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５７）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、２−アミノ−４−（２−フリル）チアゾールを用いた。
【０２６９】
【化１５２】
2015509486.tif 000153
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ５８）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、２−アミノ−５−（２−フリル）チアゾールを用いた。
【０２７０】
【化１５３】
2015509486.tif 000154
１−（３−アミノ−１−プロピル）ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［６−（２−フリル）ピリダジン−３−イル］アミド（Ｌ５９）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、３−アミノ−６−（２−フリル）ピリダジンを用いた。カップリング時間を、マイクロ波照射下１２０℃で６〜１８時間に延長する必要がある。
【０２７１】
【化１５４】
2015509486.tif 000155
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［３−（２−フリル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］アミド（Ｌ６０）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、５−アミノ−３−（２−フリル）−１，２，４−チアゾールを用いた。
【０２７２】
【化１５５】
2015509486.tif 000156
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（３−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６１）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、２−アミノ−５−（３−フリル）−１，３，４−チアゾールを用いた。
【０２７３】
【化１５６】
2015509486.tif 000157
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６２）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、２−アミノ−４−（２−フリル）チアゾールを用いた。
【０２７４】
【化１５７】
2015509486.tif 000158
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６３）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、２−アミノ−５−（２−フリル）チアゾールを用いた。
【０２７５】
【化１５８】
2015509486.tif 000159
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［６−（２−フリル）ピリダジン−３−イル］アミド（Ｌ６４）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、３−アミノ−６−（２−フリル）ピリダジンを用いた。カップリング時間を、マイクロ波照射下１２０℃で６〜１８時間に延長する必要がある。
【０２７６】
【化１５９】
2015509486.tif 000160
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［３−（２−フリル）−１，２，４−チアジアゾール−５−イル］アミド（Ｌ６５）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、５−アミノ−３−（２−フリル）−１，２，４−チアゾールを用いた。
【０２７７】
【化１６０】
2015509486.tif 000161
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（３−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６６）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、２−アミノ−５−（３−フリル）−１，３，４−チアゾールを用いた。
【０２７８】
【化１６１】
2015509486.tif 000162
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［４−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６７）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、２−アミノ−４−（２−フリル）チアゾールを用いた。
【０２７９】
【化１６２】
2015509486.tif 000163
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−フリル）チアゾール−２−イル］アミド（Ｌ６８）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、２−アミノ−５−（２−フリル）チアゾールを用いた。
【０２８０】
【化１６３】
2015509486.tif 000164
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［６−（２−フリル）ピリダジン−３−イル］アミド（Ｌ６９）の合成：基本工程Ａを用いて、合成を行った。カルボン酸成分として、１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−エチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）を使用した。芳香族アミンとして、３−アミノ−６−（２−フリル）ピリダジンを用いた。カップリング時間を、マイクロ波照射下１２０℃で６〜１８時間に延長する必要がある。
【０２８１】
【化１６４】
2015509486.tif 000165
４−［２−（３−アミノ−１−プロピルアミノ）チアゾール−４−イル］安息香酸Ｎ−［５−（２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ７０）の合成：本合成は、不溶の支持体上で実施される。したがって、１，３−ジアミノプロパン（１５０μｍｏｌ）があらかじめロードされたトリチルポリスチレン樹脂を、１−メチルピロリジン−２−オンまたはジクロロメタン（１−５ｍＬ）中で、Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）イソシアナート（１５０〜５００μｍｏｌ）と３０分〜一晩反応させる。該樹脂をＤＭＦ、メタノール、及びジクロロメタンで洗浄した後、該樹脂ピペリジン（ＤＭＦ（２５％、２〜５ｍＬ）中）で１０〜３０分間処理し、続いて該樹脂を前述のようにして洗浄する。その後、４−ブロモアセチル安息香酸メチルエステル（１５０〜５００μｍｏｌ）（１−メチルピロリジン−２−オン、ジメチルスルホキシドまたはジクロロメタン（１〜５ｍＬ）中、等モル量の適切な塩基（ＤＩＰＥＡ、Ｎ−メチルモルホリン、トリエチルアミンまたはＮ、Ｎ−ジメチルアニリン）が添加されている）を加え、該混合物を室温で３０分〜一晩撹拌し、続いて該樹脂を前述のようにして洗浄する。次に、該樹脂水酸化ナトリウム水溶液（２〜５Ｍ、０．５〜２ｍＬ）、メタノール（０．５〜２ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１〜４ｍＬ）の混合物で処理し、４０〜７０℃で１時間〜一晩撹拌して、その後、ＤＭＦ、酢酸（ＤＭＦ（１〜５％）中）、メタノール及びジクロロメタンで洗浄を繰り返す。続いて、ＨＡＴＵ（該樹脂のロード量に対して１〜２当量）（ＮＭＰ（１〜３ｍＬ）中）及びＤＩＰＥＡ（ＨＡＴＵの量に対して２当量）の溶液を加え、該混合物を２〜１０分撹拌して、続いて２−アミノ−５−（２−フリル）−１，３，４−チアゾール（ＨＡＴＵの量に対して１〜２当量）を加え、該混合物を通常の加熱またはマイクロ波照射により、１００〜１２０℃に３０〜１８０分間加熱する。該樹脂をＤＭＦ、メタノール及びジクロロメタンで洗浄した後、最終生成物をトリフルオロ酢酸（１０％）及びトリエチルシラン（５％）（ジクロロメタン中）で処理して該支持体より開裂させる。溶媒を蒸発させた後、最終生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（アミノ改質固定相、ジクロロメタン中メタノールによるグラジエント溶出）または分取逆相ＨＰＬＣ−ＭＳにより精製した。
【０２８２】
【化１６５】
2015509486.tif 000166
１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（５−イソオキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ７１）、１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（５−オキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ７２）及び１−（３−アミノ−１−プロピル）−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｎ−［５−（２−オキサゾリル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アミド（Ｌ７３）の合成：本化合物は、基本工程Ａを用いて合成される。各アニリンの合成のために、以下の工程が用いられる：カルボン酸、すなわちイソオキサゾール−５−カルボン酸（Ｌ７１用）、オキサゾール−５−カルボン酸（Ｌ７２用）及びオキサゾール−２−カルボン酸（Ｌ７３用）（１０ｍｍｏｌ）と、チオセミカルバゾン（１５ｍｍｏｌ）とを塩化ホスホリル（５ｍＬ）に溶解し、６０〜８０℃に１０分〜５時間加熱する。室温に冷却した後、該混合物を氷水に注ぎ、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ８〜１０に調節する。適切な溶媒（酢酸エチル、クロロホルムまたはジクロロメタン）による濾過または抽出により、得られた混合物から生成物を回収し、続いて蒸発させる。粗生成物を、再結晶（例えば、エタノール、イソプロパノール、エタノール／水混合液より）により、またはカラムクロマトグラフィー（順相またはアミノ改質固定相、ジクロロメタン中メタノールまたはクロロホルム中メタノールによるグラジエント溶出）により精製する。その後、標的化合物を、得られたアニリンと、基本工程Ａで用いられるカルボン酸成分として１−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−プロピル］−２−メチルベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（合成、前述を参照）とから合成する。
【０２８３】
実施例１で用いられた略語
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン
ＴＢＭＥ＝ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル
ＨＡＴＵ＝Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロリン酸塩
ＨＰＬＣ−ＭＳ＝高速液体クロマトグラフィーと質量分析との連結
ＥＳＩ−ＭＳ＝エレクトロスプレーイオン化質量分析
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
【０２８４】
実施例２：リガンドの固定化
実施例１のリガンドを、続くクロマトグラフィー及びバッチ吸着実験のために、ＮＨＳ活性化セファロース４ＦＦに固定化した。カップリングは、リガンド上のスペーサ前駆体体基のアミノ基と、あらかじめ活性化された樹脂のＮＨＳ活性化カルボン酸基との間にアミド結合を形成することにより達成された。
乾燥したリガンドを、約５０ｍＭの濃度でＤＭＳＯ中に再溶解した。カップリング反応では、１Ｍ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含有する、９０％ＤＭＳＯ及び１０％Ｎ−メチル−２−ピロリドン中に、約２０〜３０ｍＭの濃度に溶解したリガンドの１容量を、安定化されたＮＨＳ活性化セファロース４ＦＦ（GE Healthcare）の１容量に加えた。激しく振り混ぜながら、反応を２５℃にて少なくとも３時間行った。反応物の上清を除去し、樹脂を適切な溶媒で２度洗浄した。該樹脂上に残存した活性基を、１Ｍエタノールアミンにより２５℃にて１〜２時間ブロックした。最後に樹脂を洗浄し、以後の実験に使用するまで３０％エタノール中で４℃にて保存した。
【０２８５】
実施例３：（実施例１による）リガンドのクロマトグラフィーによる評価
実験
マイクロタイタープレートクロマトグラフィーにより、樹脂を充填された状態で評価した。各カラム用に約３０μＬの樹脂を３８４ウェルフィルタプレートに移し、適切なトップフリットで封止した。組換えプロテインＡセファロースＦＦ及びMabsorbent A2P HFによるカラムを対照として含めた。
サンプル導入前に、６．７カラム容積（ｃｖ）のリン酸緩衝食塩水（０．１５Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．３；ＰＢＳ）でカラムを平衡化した。ＰＢＳ中に溶解した０．５ｍｇ／ｍｌ-1全ＩｇＧ３．３ｃｖまたは無希釈の宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）をカラム上に導入した。
結合していないタンパク質を、ＰＢＳ５ｃｖでカラムから洗い流した後、ｐＨ２．５のグリシンバッファー５ｃｖで溶出した。移動容積を、カラムに通して５０ｇで１−２分間スピンさせた。サンプル導入の間、速度を１０ｇに減らし、遠心時間を５−１０分に増やした。溶出画分を３８４ウェルプレートに収集し、タンパク質の濃度をBradfordアッセイにより分析した。タンパク質の質量ｍi、ｍft、及びｍe（下記参照）は、画分容積と測定されたタンパク質濃度との積として算出された。
【０２８６】
概要及び結果
いくつかの抗体の結合及び溶出を示した。それらの中には、３つのヒト化治療用抗体ベバシズマブ、トシリズマブ及びパリビズマブ、キメラ型抗体セツキシマブ、並びにヒト血清から分離されたヒトpoly-IgG（h-poly-IgG）混合物があった。リガンドの抗体に対する選択性は、宿主細胞タンパク質の結合態様を調査することにより決定した。比較のために、市販の樹脂である組換えプロテインＡセファロースＦＦ（rProtein A）及びMabsorbent A2P（Ａ２Ｐ）についての結果を含めた。
結合したタンパク質の割合は、導入されたタンパク質の全質量miと、素通り画分において検出されたタンパク質の質量ｍftとの差を、導入されたタンパク質の全質量で割ったものとして算出した。
【数１】
2015509486.tif 000167
タンパク質の収率は、溶出されたタンパク質の質量ｍeを、導入されたタンパク質の全質量ｍiで割ったものとして算出した。
【数２】
2015509486.tif 000168
樹脂の選択性は、結合したベバシズマブの割合ＢAbを、結合した宿主タンパク質の割合ＢHCPで割ったものとして算出した。
【数３】
2015509486.tif 000169
結合したタンパク質の割合及びタンパク質の収率は、全ＩｇＧ抗体に関するデータに基づき、各樹脂について算出された。宿主細胞タンパク質の場合には、結合したタンパク質の割合のみが与えられる。樹脂の選択性は、ベバシズマブ全ＩｇＧ及び宿主細胞タンパク質についてのデータより算出した。実験の正確性における限界により、選択性では１０を越えた値を切り捨てた。
実施例２より得られた樹脂及び参照樹脂についてのクロマトグラフィー結果は、以下の表に与えられる。Ｌ５５〜７３に示される値は、Ｌ０１〜Ｌ５４より得られた知見に基づく推定値である。
【０２８７】
【表１】
2015509486.tif 000170
【表２】
2015509486.tif 000171
【表３】
2015509486.tif 000172
【０２８８】
対照は、全ての抗体と１００％近くまで結合した。プロテインＡは宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）と全く結合しなかったが、Ａ２Ｐはそれらに対して高い結合性能を示した。得られた選択性指数は、プロテインＡについては１０．０、Ａ２Ｐについては１．０であった。
実施例２の樹脂は、それらの抗体結合性能及び選択性によって、３つのグループに分類することができる。第１グループのリガンドは、抗体結合率が少なくとも９０％であり、選択性指数が少なくとも７であることを特徴とする（例えば、Ｌ２４、Ｌ２５、Ｌ３９、Ｌ５３及びＬ５４）。第２グループのリガンドは、試験された抗体の少なくとも１つに対する減少した抗体結合率（８０〜８９％）及び／または４〜６．９の選択性を示した（例えば、Ｌ５、Ｌ３０、Ｌ３１及びＬ５２）。第３グループのリガンドは、試験された抗体の少なくとも１つに対して８０％未満が結合し、及び／または４未満の選択性指数を有していた（例えば、Ｌ１、Ｌ１８、Ｌ３２及びＬ５０）。
【０２８９】
実施例４：結合の等温式及び時間尺度
実験
抗体としてベバシズマブを用いて実験を行った。精製抗体についてのラングミュア等温式のパラメータは、９６ウェルマイクロタイタープレートにおけるバッチ吸着実験により決定した。各ウェル内で、吸着剤スラリー（５０％ｖ／ｖ）１０μｌをタンパク質溶液１００μｌと混合した。初期濃度は、リン酸緩衝生理食塩水（０．１５Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．３；ＰＢＳ）中において、０．０５から５ｍｇ／ｍＬまで変化させた。反応物を２５℃にて少なくとも３時間の間において激しく撹拌した。その後、Bradfordアッセイにより上清中の抗体濃度を測定した。該値をラングミュア等温式に直接当てはめることにより、データを評価した（１）。
取り込み速度は、９６ウェルフィルタプレートにおけるバッチ吸着により同様に調べた。改めて、吸着剤スラリー（５０％ｖ／ｖ）１０μｌをタンパク質溶液１００μｌと混合した。しかしながら、固定初期濃度としてＰＢＳ中０．７５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブを用いた。反応物を２５℃にて最大８０分までの間において激しく撹拌した。２．５、５、１０、２０、４０及び８０分後に、フィルターを通してスピンさせることにより上清を速やかに分離し、分析用にサンプリングした。該抗体の濃度は、Bradfordアッセイにより分析した。
【０２９０】
概要及び結果
実施例１の固定化されたリガンドのサブセットは、ベバシズマブに対するそれらの親和性及び最大容量の点より特徴付けられた。さらに、いくつかのリガンドについて、結合に必要な時間尺度を決定した。比較のために、市販の樹脂である組換えプロテインＡセファロースＦＦ（rProtein A）及びMabsorbent A2P（Ａ２Ｐ）についての結果を含めた。
ラングミュア等温式のパラメータ、すなわち解離定数Ｋd及び最大容量ｑmを、上清中において測定された濃度より決定した。パラメータは、Chase（１）によって導き出されたモデル等式に数値を当てはめることにより推定した。
取り込み速度は、樹脂の抗体との８０％の平衡飽和が起こった時間として定義される、結合の時間尺度ｔ0.8によって特徴付けられた。ｔ0.8を決定するため、上清中において測定された濃度に、二重指数関数を当てはめることにより補間し、ｔ0.8の値をグラフより読み取った（２）。実施例２の樹脂及び参照樹脂についてのラングミュア等温式のパラメータ及び結合の時間尺度を、以下の表において報告する。
【０２９１】
【表４】
2015509486.tif 000173
【０２９２】
最も高いアフィニティーは組換えプロテインＡにおいて観測され、Ｋdは０．００５ｍｇ／ｍｌであった。Ａ２Ｐ、樹脂Ｌ０１、Ｌ０５、Ｌ０７、Ｌ１３、Ｌ１４、Ｌ２３、Ｌ２５、Ｌ３１、Ｌ３９、Ｌ４０、Ｌ４１、Ｌ４６、Ｌ４７、Ｌ５１及びＬ５４の解離定数は一桁小さく、０．０３８ｍｇ／ｍｌ〜０．０９８ｍｇ／ｍｌの範囲であった。残りの樹脂の解離定数は二桁小さく、０．１０５ｍｇ／ｍ〜０．２８２ｍｇ／ｍｌの範囲であった。最大容量に関しては、最も高い容量はＡ２Ｐにおいて測定された（樹脂１ｍｌに対し６８ｍｇ）。組換えプロテインＡの最大容量は、樹脂１ｍｌに対し４１ｍｇであった。実施例２の樹脂の最大容量は、樹脂１ｍｌに対し３４〜５３ｍｇと様々であった。結合の時間尺度は、組換えプロテインＡでは８．９分、Ａ２Ｐでは９．２分、実施例２の樹脂では５．３〜１１．８分であった。
【０２９３】
実施例５：動的結合容量
実験
精製ベバシズマブを用いたカラムクロマトグラフィーにより、動的結合容量を決定した。長さ２５ｍｍ及び内径３ｍｍの分析カラム内に樹脂を充填した。リン酸緩衝生理食塩水（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．３）中１ｍｇ／ｍｌの抗体を、流速５０ｃｍ／時間（カラム滞留時間３分）にてカラムに供給し、その間、溶出液を２８０ｎｍの吸収により常時観測した。供給物の全量が漏出するまで抗体をロードした。動的結合容量は、その１０％が漏出した際に決定した。平衡容量は、破過曲線上部の範囲を積分することにより決定した。結合した抗体は、ｐＨ３．０のグリシンで溶出することによりカラムから脱離させた。
【０２９４】
概要及び結果
Ｌ０５（実施例２より）及び組換えプロテインＡセファロースＦＦ（rProtein A）について、ベバシズマブの動的（結合）容量を、流速の関数として決定した。それは、１０％の漏出が生じた後の時間ｔ0.1に、流速Ｆと供給濃度ｃfとを乗じて算出した。
【数４】
2015509486.tif 000174
平衡容量は、送られた供給流の濃度についてのカラムに結合した抗体の最大量として定義される。それは、供給濃度ｃf，経時的な溶出液濃度ｃ（ｔ）及び流速Ｆを含む、以下の積分計算により算出した。
【数５】
2015509486.tif 000175
該積分は、数値により計算される。積分は、全量の漏出が生じた後の時点にまで制限される。動的容量及び平衡容量の計算結果は、共にカラム及びクロマトグラフィー系の滞留物により補正された。容量は、カラム中の樹脂の容積により正規化される。
流速の関数としてのＬ０５及び組換えプロテインＡセファロースＦＦについての動的結合容量、及び供給濃度１ｍｇ／ｍｌのベバシズマブについての平衡結合容量を、以下の表に示す。
組換えプロテインＡについて、動的結合容量は樹脂１ｍｌに対して２８ｍｇと決定された。Ｌ５の動的結合容量は、樹脂１ｍｌに対して２５ｍｇであった。算出された平衡容量は、組換えプロテインＡについては樹脂１ｍｌに対して４０ｍｇであり、Ｌ０５については樹脂１ｍｌに対して３９ｍｇであった。
【０２９５】
【表５】
2015509486.tif 000176
【０２９６】
実施例６：アルカリ安定性
実施例１のリガンドのサブセットを、そのアルカリ安定性について試験した。リガンドを０．５Ｍ水酸化ナトリウムにより２５℃で８日間処理した。加水分解をＬＣ−ＭＳ分析により観測した。
【０２９７】
【表６】
2015509486.tif 000177
ほとんどのリガンドは、０．５Ｍ ＮａＯＨ存在中にて９９９時間を超える半減期を示した。残りのリガンドは、７１９時間〜９０３時間の半減期を示した。
【０２９８】
実施例７：細胞培養上清からの抗体の精製
実験
細胞培養上清からの抗体の精製についての樹脂の適合性を、カラムクロマトグラフィーにより評価した。宿主細胞タンパク質に０．１２ｍｇ／ｍＬの濃度で添加したベバシズマブを供給材料として使用した。それに加えて、宿主細胞タンパク質及び純粋な抗体のみを用いたクロマトグラフィーを実行した。実行毎に２５カラム容積の試料を注入した。注入の前後において、カラムをＰＢＳで平衡化及び洗浄した。結合したタンパク質を、ｐＨ３．０の５０ｍＭグリシンで溶出した。３度の単一実行における溶出ピークの範囲を積分及び比較することにより、純度を決定した。収率は、平行して操作されたプロテインＡカラムから溶出された抗体の量を１００％とみなし、相対的な回収率として表した。
【０２９９】
概要及び結果
実施例２の樹脂のサブセットにおけるクロマトグラフィーにより、細胞培養上清から抗体を精製した。比較のために、市販の樹脂である組換えプロテインＡセファロースＦＦ（rProtein A）におけるクロマトグラフィーを含めた。各樹脂において、抗体、宿主細胞タンパク質または後述の混合物のいずれかを注入し、３つのクロマトグラフィー分析を同一条件下で行った。
【０３００】
クロマトグラフィー後における操作の「収率」は、純粋な抗体を用いた実行より算出した。それは、プロテインＡにおける実行ＡE,プロテインAからの溶出ピークの範囲に対する、リガンドを用いた実行ＡE,リガンドからの溶出ピークの範囲として表した。
【数６】
2015509486.tif 000178
【０３０１】
混合物のクロマトグラフィー後における抗体の「純度」は、添加抗体を用いた実行AE,混合物からの溶出ピークの範囲を、純粋な抗体を用いた実行、またはＨＣＰを用いた実行ＡE,Abにより補正された添加抗体を用いた実行ＡE,混合物のいずれかと比較することにより算出した。
【数７】
2015509486.tif 000179
【０３０２】
実施例２のいくつかの樹脂及び参照樹脂におけるクロマトグラフィー後に得られた純度及び収率を、以下の表に示す。
実験精度の範囲内において、収率は、試験した全ての樹脂において１００％であった。純度は、組換えプロテインＡでのクロマトグラフィー後において最も高く、続いて、樹脂Ｌ２５（９３％）並びに樹脂Ｌ２４及びＬ３９（共に９１％）でのクロマトグラフィー後において高かった。残りの樹脂でのクロマトグラフィー後の純度は、８０％〜８９％の範囲内であった。
【０３０３】
【表７】
2015509486.tif 000180
【０３０４】
本実施例に引用された文献：
1. Chase HA. Prediction of the performance of preparative affinity chromatography. J Chromatogr 1984; 297:179-202.
2. Coffman JL, Kramarczyk JF, Kelley BD. High-throughput screening of chromatographic separations: I. Method development and column modeling. Biotechnology and Bioengineering 2008; 100(4):605-618.
【手続補正書】
【提出日】平成26年3月13日(2014.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体または抗体フラグメントのアフィニティー精製のための、支持材料と、支持材料に共有結合している少なくとも１つのリガンドとを備え、前記抗体または前記抗体フラグメントのＦｃ部分に結合するリガンド置換マトリクスの使用であって、前記リガンドが式（Ｉ）で表される、使用。
【化１】
2015509486.tif 000185
ここで、
Ｌは、リガンドが付着している支持材料の連結点である；
Ｓｐは、スペーサ基である；
ｖは、０または１である；
Ａｍはアミド基−ＮＲ1−Ｃ（Ｏ）−であり、ここでＮＲ1がＡｒ1に付着しかつ−Ｃ（Ｏ）−がＡｒ2に付着しているか、−Ｃ（Ｏ）−がＡｒ1に付着しかつＮＲ1がＡｒ2に付着しているかのいずれかである；
Ｒ1は水素またはメチルであり、最も好ましくは水素である；
Ａｒ1は、イミダゾール、ベンゼン、ピリジン、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール及びトリアゾールから選択される５または６員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環であって、化学結合を介してＳｐまたはＬと接続されるものであり、さらに任意には、
（ａ）ベンゼンに化学結合を介して付着している；または、
（ｂ）多核環系の一部として、ベンゼンに縮合している；
ここで、Ａｒ1は、Ａｒ1を構成する５または６員環の単核芳香環または部分的に飽和の芳香環に存在する化学結合を介してＡｍと直接的に接続しているか、Ａｒ1に付着している前記ベンゼン環に存在する化学結合、またはＡｒ1に縮合している前記ベンゼン環における化学結合を介してＡｍと間接的に接続しているかのいずれかであって；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、または、メチル、エチル、プロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ；シクロプロピル、ヒドロキシメチル、−ＮＯ2、＝Ｏ、＝Ｓ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかであり；
Ａｒ2は、Ｎ、Ｓ、Ｏから、好ましくはＮ、Ｓから選択される少なくとも１つの原子を含む５員環単核芳香環であって、無置換であるか、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、フルオロ、クロロ、カルバモイル、エチルチオ、メチルチオから、好ましくはメチル、エチル、メトキシ、エチルチオ及びシクロプロピルから；５または６員環単核芳香環及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着しており；任意には、Ａｒ2は、上記のようにそれが化学結合を介して付着してもよい前記置換基に加えて、多核環系の一部としてベンゼンまたはチアゾールと縮合している。
【請求項２】
請求項１に記載の使用であって、
Ａｒ1は、ベンゾイミダゾール、２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール、ピリジン及び４−トリアゾリルベンゼンから選択され；
Ａｒ1は、ベンゾイミダゾールの１または２位、２，３−ジヒドロベンゾイミダゾールの１位、ピリジンの２位または４−トリアゾリルベンゼンのトリアゾール部の１位に付着する化学結合を介して、ＳｐまたはＬに接続し；
Ａｒ1は、ベンゾイミダゾールの５または６位、２，３−ジヒドロベンゾイミダゾールの５または６位、ピリジンの５位または４−トリアゾリルベンゼンのトリアゾール部の４位に付着する化学結合を介して、Ａｍに接続し；
Ａｒ1は、さらなる置換がされていないか、または、メチル、エチル、メトキシ、＝Ｓ及び＝Ｏ；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に付着しているかのいずれかであり；
Ａｒ2は１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−チアジアゾール及びチアゾールから選択される５員環単核芳香環であって、無置換であるか、または、メチル、エチル、メトキシ、エチルチオ、及びシクロプロピル；ピリジン、フラン、イソオキサゾール、オキサゾール、イソチアゾール、チアゾールから選択される５または６員環単核芳香環；及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの置換基に化学結合を介して付着している、使用。
【請求項３】
前記支持材料が、炭水化物または架橋炭水化物、好ましくはアガロース、セルロース、デキストラン、デンプン、アルギン酸塩及びカラギーナン、セファロース、セファデックス；合成ポリマー、好ましくはポリスチレン、スチレン−ジビニルベンゼンコポリマー、ポリアクリラート、ＰＥＧ−ポリアクリラートコポリマー、ポリメタクリラート、ポリビニルアルコール、ポリアミド及びパーフルオロカーボン；無機材料、好ましくはガラス、シリカ及び金属酸化物のような無機マトリクス；並びに複合材料から選択される材料を含む、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記抗体がＩｇＧタイプの抗体またはＦｃ融合タンパク質である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記Ｆｃフラグメントもしくはドメインまたは前記抗体が、ＩｇＧ抗体クラスのものであり、より好ましくはヒトＩｇＧ、またはヒト由来ポリクローナルあるいはモノクローナルＩｇＧ、特にＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3及びＩｇＧ4のものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に定義されるリガンド置換マトリクス。
【請求項７】
請求項６に記載のリガンド置換マトリクスを合成する方法であって、請求項１〜４のいずれか１項に特定される式（Ｉ）に従うリガンドを前記支持材料に付着させる方法。
【請求項８】
タンパク質のアフィニティー精製方法、好ましくはアフィニティークロマトグラフィーのための方法であって、精製されるタンパク質を、請求項１〜４のいずれか１項に定義されるリガンド置換マトリクスと接触させる方法。
【請求項９】
前記タンパク質が抗体またはＦｃ融合タンパク質である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
抗体または抗体フラグメントのＦｃ部分に結合する、式（ＩＩ）に示されるリガンドであって、Ａｒ1、Ａｒ2及びＡｍは請求項１〜４に定義された意味を有し、ＳｐＰはスペーサ前駆体である、リガンド。
【化２】
2015509486.tif 000186
【請求項１１】
抗体または抗体フラグメントのＦｃ部分に結合する、式（ＩＩＩ）に示される構造要素を有するリガンドであって、Ａｒ1、Ａｒ2及びＡｍは請求項１〜４に定義された意味を有する、リガンド。
【化３】
2015509486.tif 000187
【請求項１２】
請求項１０または１１に記載のリガンドの、抗体または抗体フラグメントのアフィニティー精製のための、好ましくは前記リガンドを適切なマトリクスに付着させた後のアフィニティー精製のための、使用。
【請求項１３】
前記マトリクスが、前記リガンドにＦｃ部分を介して結合している少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントをさらに含む、請求項６に記載のリガンド置換マトリクス。
【国際調査報告】
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2015509486.tif 000190
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