(57)【要約】  本発明は、金銀花精製抽出物の製造方法及びそれを含む敗血症及び敗血症性ショックの予防及び治療用組成物に関する。本発明による金銀花精製抽出物は、重症敗血症ＣＬＰモデルテスト、ＭＯＤＳへの影響、及びＴＮＦ‐α、ＩＬ‐１β、ＩＦＮ‐γ、ＨＭＧＢ‐１等の多様な炎症性サイトカインの抑制効果の面で強力な抗敗血症活性を見せ、また、広範囲抗生剤のような市販の抗敗血症剤とともに使用したとき、敗血症及び敗血症性ショックの治療に予想外の相乗効果を見せ、医薬品及び健康機能性食品として敗血症及び敗血症性ショックの治療及び予防に有効に使用することができる。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
乾燥状態の金銀花試料を抽出溶媒で抽出する第１段階；
抽出された抽出物を濾過法、遠心分離法またはこれらの組合せの少なくとも１つの方法で処理して金銀花の粗抽出物を得る第２段階；
前記粗抽出物に精製水を加えて懸濁溶液を製造した後、前記懸濁溶液を非極性溶媒可溶分画と極性溶媒可溶分画とに分画して非極性溶媒可溶物質を除去し、残渣を回収して１次精製抽出物を得る第３段階；
前記１次精製抽出物に精製水を入れ、前記精製水と同一重量の吸着性樹脂を用いた吸着クロマトグラフィー、イオンカラムクロマトグラフィーまたはこれらの組合せの少なくとも１つの精製工程を行った後、洗浄溶媒で数回洗浄して２次精製抽出物を得る第４段階；および、
前記２次精製抽出物を真空濃縮及び乾燥して多量の有効成分を含む金銀花精製抽出物を得る第５段階、を含むことを特徴とする金銀花精製抽出物の製造方法。
【請求項２】
前記第１段階の抽出溶媒が、金銀花試料重量（ｖ／ｗ）を基準に１〜１００倍体積の精製水、酒精、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ヘキサン、エチルアセテート、シクロヘキサン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、クロロホルム、及びメチレンクロライドからなる群より選択された少なくとも一つの溶媒を含むことを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記第１段階の抽出溶媒が、抽出効率を高めるため、金銀花試料重量（ｗ／ｗ）を基準に０．１〜５重量％のＮａＨＣＯ３、ＮａＣＯ３のような弱塩基を精製水に溶解した１〜１００倍体積の塩基性溶液を含むことを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
前記第１段階の抽出工程が、温水還流抽出、冷浸抽出、ソックスレー抽出、超音波抽出、またはこれらの組合せから選択される抽出方法で行われることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項５】
前記第２段階で金銀花の粗抽出物を得る処理が、濾過法、遠心分離法またはこれらの組合せの少なくとも１つで行われることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項６】
前記第３段階で１次精製抽出物を得る工程が、約０．００５〜５倍体積の精製水（ｖ／ｗ、粗抽出物の重量基準）を加えて懸濁溶液を製造した後、ヘキサン、メチレンクロライド、クロロホルム、エチルアセテートのような非極性溶媒を約０．１〜５０倍体積（ｖ／ｖ、懸濁溶液の体積基準）で添加し、前記溶液を非極性溶媒可溶分画と極性溶媒可溶分画とに分画して非極性可溶物質を除去することを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項７】
前記第４段階で金銀花の２次精製抽出物を得る工程が、前記１次精製抽出物に約１〜３０倍量の精製水（ｗ／ｗ、１次精製抽出物の重量基準）を入れ、ＳＰ２０７、ＨＰ２０ＳＳ、ダイヤイオンＨＰ２０、ＳＰ−８５０レジン、活性炭またはアンバーライトＸＡＤ‐２，４の少なくとも１つの樹脂、及び前記精製水と同一重量の吸着性樹脂を用いた吸着クロマトグラフィーにより追加的な精製を行うことを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項８】
前記第４段階で金銀花の２次精製抽出物を得る工程が、ＡＧ５０Ｗ−ｘ８、アンバーライトＩＲ−１２０、アンバーライトＩＲＡ−４００、ダウエックス５０Ｗ−ｘ８又はＳＫ１Ｂから選択される強酸性樹脂の少なくとも１つ；アンバーライトＩＲＣ−５０、バイオ−レックス７０、デュオライト−４３６またはＷＫ４０から選択される弱酸性樹脂の少なくとも１つ；若しくは、アンバーライトＩＲ−６７又はダウエックス３−ｘ４から選択される弱塩基性樹脂の少なくとも１つ；望ましくはアンバーライトＩＲ−１２０、アンバーライトＩＲＡ−４００又はＳＫ１Ｂから選択される強酸性樹脂の少なくとも１つ、及び前記精製水と同一重量のイオン性樹脂を用いたイオンカラムクロマトグラフィーを行うことを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項９】
前記第４段階で金銀花の２次精製抽出物を得る洗浄工程が、精製水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール又はこれらの混合溶媒から選択された少なくとも１つの洗浄溶媒で樹脂吸着物を洗浄することで行われることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記第４段階で金銀花の２次精製抽出物を得る洗浄工程が、第４段階の精製工程の外に、セファデックスＬＨ−２０レジン、セファデックスＧ１５レジン又はセファデックスＧ３５から選択された少なくとも１つのセファデックスレジンを使用したセファデックスカラムクロマトグラフィーをさらに行うことを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記第５段階で金銀花精製抽出物を得る真空濃縮及び乾燥工程が、前記抽出物を真空下、１０℃〜８０℃の温度範囲で濃縮した後、常温乾燥法、凍結乾燥法、熱風乾燥法又はこれらの組合せのいずれか１つの乾燥方法で乾燥して金銀花精製抽出物を製造することを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項１２】
敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを治療および予防するための、
乾燥精製抽出物の重量を基準にクロロゲン酸及びその誘導体を２．０〜３０．０％（ｗ／ｗ）で含み、乾燥状態の金銀花試料を抽出溶媒で抽出する第１段階；
抽出された抽出物を濾過法、遠心分離法またはこれらの組合せの少なくとも１つの方法で処理して金銀花の粗抽出物を得る第２段階；
前記粗抽出物に精製水を加えて懸濁溶液を製造した後、前記懸濁溶液を非極性溶媒可溶分画と極性溶媒可溶分画とに分画して非極性溶媒可溶物質を除去し、残渣を回収して１次精製抽出物を得る第３段階；
前記１次精製抽出物に精製水を入れ、前記精製水と同一重量の吸着性樹脂を用いた吸着クロマトグラフィー、イオンカラムクロマトグラフィーまたはこれらの組合せの少なくとも１つの精製工程を行った後、洗浄溶媒で数回洗浄して２次精製抽出物を得る第４段階；および、
前記２次精製抽出物を真空濃縮及び乾燥して多量の有効成分を含む金銀花精製抽出物を得る第５段階で製造される、金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物。
【請求項１３】
請求項１に記載された製造方法により得られた金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物を有効成分として含む、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックの治療および予防用薬学組成物。
【請求項１４】
前記敗血症が、軽度の敗血症、重症敗血症、火傷による感染症または敗血症、急性咽頭喉頭炎、潰瘍性大腸炎、ＩＢＳ（過敏性腸症候群）、リウマチ性関節炎、退行性関節炎、急性肝炎、慢性肝炎であることを特徴とする請求項１３に記載の薬学組成物。
【請求項１５】
前記ＭＯＤＳが、軽度の敗血症、重症敗血症、または火傷による感染症または敗血症に起因する肝臓、腎臓、心臓、肺、小腸、大腸、十二指腸、胃、膵臓、脾臓から選択される損傷した臓器で発生することを特徴とする請求項１３に記載の薬学組成物。
【請求項１６】
前記敗血症性ショックが、軽度の敗血症、重症敗血症、火傷による感染症または敗血症によって引き起こされる敗血症性ショックであることを特徴とする請求項１３に記載の薬学組成物。
【請求項１７】
請求項１に記載された製造方法により得られた金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組合せを有効成分として含む、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックの治療および予防用薬学組成物。
【請求項１８】
前記組合せが、（ａ）請求項１に記載された製造方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と（ｂ）市販の抗敗血症剤とが０．１〜１０：０．１〜１０（ｗ／ｗ）の混合比で混合されたものであることを特徴とする請求項１７に記載の薬学組成物。
【請求項１９】
前記市販の抗敗血症剤が、ペニシリン系、キノロン系、モノバクタム系、アミノグリコシド系、セファロスポリン系、テトラサイクリン系、グリコペプチド系、カルバペネム系などの抗生剤；メフェナム酸、インドメタシン、イブプロフェン、ピロキシカム、ジクロフェナクなどの抗炎症剤；アムホテリシンＢ、ナイスタチン、グリセオフルビン、アゾール系などの抗真菌剤；及びセチリジン、フェキソフェナジン、クロルフェニラミンなど抗アレルギー剤からなる群より選択された抗敗血症剤の少なくとも１つであることを特徴とする請求項１７に記載の薬学組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載された製造方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物を有効成分として含む、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックの緩和又は予防用健康機能性食品。
【請求項２１】
請求項１に記載された製造方法により得られた金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組合せを有効成分として含む、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックの緩和又は予防用健康機能性食品。
【請求項２２】
食品学的に許容可能な添加剤とともに、請求項１に記載された製造方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物を含む、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックの緩和又は予防用ヘルスケア食品。
【請求項２３】
食品学的に許容可能な添加剤とともに、請求項１に記載された製造方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組合せを含む、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックの緩和又は予防用ヘルスケア食品。
【請求項２４】
ヒトを含む哺乳動物における敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックの治療および予防用治療剤を製造するための、請求項１に記載された製造方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物の用途。
【請求項２５】
ヒトを含む哺乳動物における敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックの治療および予防用治療剤を製造するための、請求項１に記載された製造方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組合せの用途。
【請求項２６】
請求項１に記載された製造方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物の有効量を薬学的に受容可能な担体とともに投与することを含む、ヒトを含む哺乳動物における敗血症、敗血症性ショック又はＭＯＤＳを治療または予防する方法。
【請求項２７】
請求項１に記載された製造方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組合せの有効量を薬学的に受容可能な担体とともに投与することを含む、ヒトを含む哺乳動物における敗血症、敗血症性ショック又はＭＯＤＳを治療または予防する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、金銀花（Ｌｏｎｉｃｅｒａ Ｊａｐｏｎｉｃａ ＴＨＵＮＢＥＲＧ）精製抽出物の製造方法及びそれを含む敗血症、並びに、敗血症性ショックの予防及び治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
重症敗血症（ｓｅｖｅｒｅ ｓｅｐｓｉｓ）は、臓器の機能不全と低潅流を伴う敗血症状態であって、全身の酸素要求量と酸素供給との間の不均衡をもたらして敗血症性ショック（ｓｅｐｔｉｃ ｓｈｏｃｋ）や多臓器機能不全症侯群（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｒｇａｎ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ、以下、「ＭＯＤＳ」とも称する）に急速に進行し、高い死亡率を示す疾患である。発熱あるいは低体温症、心拍動増加、心拍出量の増加、全身の循環抵抗の減少、呼吸性アルカローシス及び白血球数の異常増加あるいは減少などが一般的症状であり、その進行は臓器損傷を速めてひいては死に至らせる。重症敗血症及び敗血症性ショックによる患者の死亡率は米国で２９％、欧州で２７％であり、集中治療室患者の主要な死亡原因である（非特許文献１）。米国の場合、毎年７５０，０００名以上の敗血症患者が発生し、そのうち毎年２１０，０００名以上が死亡する。欧州では、集中治療室患者の約３７％及び約１５％が重症敗血症及び敗血症性ショック患者であり、韓国では重症敗血症による死亡率が６５％に至る。
【０００３】
敗血症は、細菌、ウイルス、真菌のような感染性物質の以外にも、外傷のような非感染性過程を経てさらに悪化し得、敗血症性ショックや多臓器機能不全症侯群（ＭＯＤＳ）に進行する（非特許文献２）。敗血症の発病過程における最も顕著な特徴は、敗血症初期に体内の炎症係の過活性化、すなわち、細菌内毒素のような異物を認識して活性化されて炎症誘発サイトカインが過分泌されることであり、このような現象がサイトカインストーム（ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｔｏｒｍ）と呼ばれ、敗血症の発病から１０〜１２時間維持される。サイトカインのうちＴＮＦ‐αは、敗血症初期段階で最も先に血中から検出されるサイトカインであって、インターロイキン‐５（ＩＬ‐５）及びインターロイキン‐８（ＩＬ−８）のようなサイトカインの分泌を促進させるだけでなく、他のサイトカインとともに好中球と血管内皮細胞から細胞接着分子の発現を促進させることで、炎症反応を一層加速化させる（非特許文献３，４）。インターロイキン‐６（ＩＬ‐６）は、主にリンパ球と単球から分泌される炎症性サイトカインであって、敗血症が発病してから６時間で最高の血中濃度値を示す（非特許文献５）。
【０００４】
そこで、ＴＮＦ‐α、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１及びＩＬ‐８のように炎症を同伴するか又は促進する炎症仲介物質を抑制するＮＳＡＩＤＳのような抗炎症剤、または、サイトカインの放出を抑制する、例えば、武田薬品工業製のＴＡＫ−２４２(R)及びエーザイ株式会社製のＥｒｉｔｏｒａｎ(R)のようなＴＬＲ４選択的抑制剤などの研究が数多く行われてきたが、効果が制限的であるなどの短所がある。
【０００５】
近年、米国と欧州で承認されて重症敗血症治療剤として使用されている薬物は、Ｅｌｉ ｌｉｌｌｙ社製のＸｉｇｒｉｓ(R)が唯一である。しかし、これも適応症及び効能が制限的であることや、深刻な出血や脳卒中などの有害反応などの短所を有している（非特許文献６）。
【０００６】
したがって、強力な効能を有して毒性の低い新規な抗敗血症薬の開発が依然として求められており、韓国ではその非毒性のために頻繁に使用されている天然物から効果的な薬物を開発しようとする研究が行われている。
【０００７】
韓国に分布する金銀花は、ルテオリン（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、イノシトール（ｉｎｏｓｉｔｏｌ）、サポニン（ｓａｐｏｎｉｎ）、タンニン（ｔａｎｎｉｎ）、イソクロロゲン酸（ｉｓｏｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）、クロロゲン酸（ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）などの成分を含むことが知られている（非特許文献７）。
【０００８】
しかし、上記の文献のどこにも、金銀花精製抽出物の敗血症に対する治療効果又は改善された効果については言及も示唆もされていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｊｅａｎ−Ｌｏｕｉｓ Ｖｉｎｃｅｎｔ、Ｅｄｗａｒｄ Ａｂｒａｈａｍ、Ｔｈｅ Ｌａｓｔ １００ ｙｅａｒｓ ｏｆ Ｓｅｐｓｉｓ、Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ、２００６、１７３、２５６〜２６３頁
【非特許文献２】Ｄｅｉｔｃｈ、Ｅ．Ａ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｒｇａｎ ｆａｉｌｕｒｅ．Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｕｔｕｒｅ ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．、１９９２、２１６（２）、１１７〜１３４頁
【非特許文献３】Ｗａｄａ Ｈ． ｅｔ ａｌ．、Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｌａｓｍａ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ‐６ ｉｎ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ、Ｂｌｏｏｄ Ｃｏａｇｕｌ． Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ、１９９３、４（４）；５８３〜５９０頁
【非特許文献４】Ｑｉｎ、Ｓ．ｅｔ ａｌ．、Ｒｏｌｅ ｏｆ ＨＭＧＢ１ ｉｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄｓｅｐｓｉｓ ｌｅｔｈａｌｉｔｙ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２００６、２０３（７）、１６３７〜１６４２頁
【非特許文献５】Ｈｏｔｃｈｋｉｓｓ、Ｒ．Ｓ．、ｅｔ ａｌ．、Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃａｓｐａｓｅｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｄｅａｔｈ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００６、６（１１）、８１３〜８２２頁
【非特許文献６】Ｒ．Ｐｈｉｌｌｉｐ Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｉｓｓｕｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ ｏｆ ｃｉｎｉｃａｌ ｔｒｉｌａｓ ｉｎ ｓｅｖｅｒｅ ｓｅｐｓｉｓ ａｓ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ．、２３ ４９３〜４９９頁、２００８；ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ．
【非特許文献７】Ｂ．Ｓ．ＣＨＵＮＧ ｅｔ ａｌ、Ｄｏｈａｅｈｙａｎｇｙａｋｄａｅｓａｊｅｏｎ、Ｙｏｕｎｇｒｉｍ ｐｒｅｓｓ、９３９〜９４０頁、１９９８
【非特許文献８】Ｄａｎｉｅｌ Ｒｉｔｔｉｒｓｃｈ、ｅｔ ａｌ．、Ｉｍｍｕｏｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｅｐｓｉｓ ｂｙ ｃｅｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｎｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｖｏｌ．４（１）、３１〜３６頁、２００９
【非特許文献９】Ｃｏｓｋｕｎ Ａ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．、Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ ｏｎ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ、ｌｉｖｅｒ、ｌｕｎｇｓ ａｎｄ ｋｉｄｎｅｙｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃｅｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｎｃｔｕｒｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｐｓｉｓ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ、２０１１、Ｖｏｌ １１、１３４１〜１３５６頁
【非特許文献１０】Ｍａｓａｍｉ Ｙａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔ Ｓｍａｌｌ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ＮＯ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｐｓｉｓ Ａｇｅｎｔｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ａｌｋｙｌ ６‐(Ｎ‐ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｓｕｌｆａｍｏｙｌ)ｃｙｃｌｏｈｅｘ‐1‐ｅｎｅ‐1‐ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ、Ｊ. Ｍｅｄ.Ｃｈｅｍ．、２００５、４８、７４５７〜７４６７頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明者らは、クロロゲン酸及びその誘導体のような有効成分を多量に含む金銀花精製抽出物を製造する新たな方法及び該金銀花精製抽出物の治療効果を研究するため、重症敗血症ＣＬＰモデルテスト、ＭＯＤＳへの影響、ＴＮＦ‐α、ＩＬ‐１β、ＩＦＮ‐γ、ＨＭＧＢ‐１等の多様な炎症性サイトカインの抑制効果などに対する幾つかの動物モデルテストと共に成分分析を行い、金銀花精製抽出物が多量の有効成分を含んで敗血症及び敗血症性ショックに強力な治療効果を有することを確認し、本発明の完成に至った。
【００１１】
本願発明の他の目的は、下記の詳細な説明によって明らかになるであろう。本発明は、乾燥状態の金銀花試料を抽出溶媒で抽出する第１段階；抽出された抽出物を濾過法、遠心分離法またはこれらの組合せの少なくとも１つ、望ましくは濾過法で処理して金銀花の粗抽出物を得る第２段階；前記粗抽出物に精製水を加えて懸濁溶液を製造した後、前記懸濁溶液を非極性溶媒可溶分画と極性溶媒可溶分画とに分画して非極性溶媒可溶物質を除去し、残渣を回収して１次精製抽出物を得る第３段階；前記１次精製抽出物に精製水を入れ、前記精製水と同一重量の吸着性樹脂（ｒｅｓｉｎ）を用いた吸着クロマトグラフィー、イオンカラムクロマトグラフィーまたはこれらの組合せの少なくとも１つの精製工程を行った後、洗浄溶媒で数回洗浄して２次精製抽出物を得る第４段階；前記２次精製抽出物を真空濃縮及び乾燥する第５段階を含む、金銀花精製抽出物の製造方法を提供する。ここで、製造された金銀花精製抽出物は、有効成分を多量に含み、特に、乾燥精製抽出物の重量を基準にクロロゲン酸及びその誘導体を２．０〜３０．０％（ｗ／ｗ）、望ましくは５．０〜２０．０％（ｗ／ｗ）、さらに望ましくは７．０〜１５．０％（ｗ／ｗ）の量で含む。
【００１２】
本発明による製造方法の第１段階において、前記抽出溶媒としては、金銀花試料重量の約１〜１００倍（ｖ／ｗ）、望ましくは約２〜２０倍（ｖ／ｗ）、さらに望ましくは５〜１５倍の体積（ｖ／ｗ）の精製水、酒精、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ヘキサン、エチルアセテート、シクロヘキサン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、クロロホルム、及びメチレンクロライドから選択された少なくとも一つの溶媒を使用することが望ましく、精製水、メタノール、エタノール、プロパノール、またはブタノールから選択された少なくとも一つの溶媒を使用することがより望ましく、精製水を使用することが最も望ましい。抽出溶媒として精製水を使用する場合、抽出効率を高めるために金銀花試料重量の０．１〜５重量％、望ましくは０．２〜２重量％の炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、炭酸ナトリウム（ＮａＣＯ３）などの弱塩基を精製水に添加することが最も望ましい。
【００１３】
また、本発明による製造方法の第１段階において、前記抽出方法としては、温水還流抽出、冷浸抽出、ソックスレー（Ｓｏｘｈｌｅｔ）抽出、超音波抽出、またはこれらの組合せの１つ以上を使用でき、特に、２０〜１２０℃、望ましくは３０〜１００℃の抽出温度で約１〜７２時間、望ましくは２〜１２時間の条件で温水還流抽出することが望ましい。
【００１４】
本発明による製造方法の第２段階において、濾過法、遠心分離法、またはこれらの組合せの１つ以上、望ましくは濾過法を用いて金銀花の粗抽出物を得ることが望ましい。
【００１５】
本発明による製造方法の第３段階において、約０．００５〜５倍、望ましくは０．０５〜３倍の体積（ｖ／ｗ、粗抽出物の重量基準）の精製水を加えて懸濁溶液を製造した後、ヘキサン、メチレンクロライド、クロロホルム、エチルアセテート、望ましくは、ヘキサン、メチレンクロライド、またはエチルアセテート、さらに望ましくは、ヘキサンまたはメチレンクロライドのような非極性溶媒を約０．１〜５０倍、望ましくは約０．５〜１０倍の体積（ｖ／ｖ、懸濁溶液の体積基準）で添加し、前記溶液を非極性溶媒可溶分画と極性溶媒可溶分画とに分画して非極性可溶物質を除去する。
【００１６】
前記第３段階を通じて、ヘキサデカン酸、メチルリノレート、リナロール、カルバクロール及びメチルパルミテートなどのような精油、及びβ‐シトステロールのようなステロール化合物などの非極性溶媒に可溶な非極性溶媒可溶物質を抽出物から除去することができる。
【００１７】
本発明による製造方法の第４段階において、前記１次精製抽出物に約１〜３０倍、望ましくは約５〜１５倍、さらに望ましくは約５〜１０倍の量（ｗ／ｗ、１次精製抽出物の重量基準）の精製水を入れ、前記精製水と同一重量のＳＰ２０７、ＨＰ２０ＳＳ、ダイヤイオン（Ｄｉａｉｏｎ）ＨＰ２０、ＳＰ−８５０レジン、活性炭またはアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ‐２，４の少なくとも１つ、望ましくは、ダイヤイオンＨＰ２０、ＳＰ−８５０レジンまたはアンバーライトＸＡＤ‐２，４の少なくとも１つの吸着性樹脂（ｒｅｓｉｎ）を用いた吸着クロマトグラフィーの方法を用いて追加的な精製工程を行うことが望ましい。
【００１８】
また、本発明による製造方法の第４段階において、吸着クロマトグラフィー法の外に、前記精製水と同一重量のＡＧ５０Ｗ−ｘ８、アンバーライトＩＲ−１２０、アンバーライトＩＲＡ−４００、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）５０Ｗ−ｘ８又はＳＫ１Ｂなどのような強酸性樹脂の少なくとも１つ；アンバーライトＩＲＣ−５０、バイオ−レックス（Ｂｉｏ−Ｒｅｘ）７０、デュオライト（Ｄｕｏｌｉｔｅ）−４３６またはＷＫ４０のような弱酸性樹脂の少なくとも１つ；若しくは、アンバーライトＩＲ−６７又はダウエックス３−ｘ４などのような弱塩基性樹脂の少なくとも１つ、望ましくは強酸性樹脂であるアンバーライトＩＲ−１２０、アンバーライトＩＲＡ−４００又はＳＫ１Ｂの少なくとも１つ、さらに望ましくは強酸性樹脂であるアンバーライトＩＲ−１２０又はアンバーライトＩＲＡ−４００の少なくとも１つのイオン性樹脂を用いたイオンカラムクロマトグラフィー法を用いて追加的な精製工程を行うこともできる。
【００１９】
また、本発明による製造方法の第４段階において、精製水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール又はこれらの混合溶媒、望ましくは精製水とメタノールとの混合溶媒を洗浄溶媒として用いて樹脂吸着物を数回洗浄することで、２次精製抽出物を得る洗浄工程を行うことができる。
【００２０】
前記第４段階を通じて、プロリンなどのアミノ酸、グルコース、スクロース、イノシトールなどの糖など、薬理活性を示さない不活性物質を抽出物から除去することができる。
【００２１】
代案的に、上述した第４段階の精製工程の外に、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ−２０レジン、セファデックスＧ１５レジン又はセファデックスＧ３５などのセファデックスを使用したセファデックスカラムクロマトグラフィー法を用いてさらに精製工程を行うことが望ましい。
【００２２】
また、本発明による製造方法の第５段階において、抽出物を真空下、１０℃〜８０℃、望ましくは６０℃以下の温度範囲で濃縮した後、常温乾燥法、凍結乾燥法、熱風乾燥法又はこれらの組合せのいずれか１つ、望ましくは凍結乾燥法の乾燥方法で乾燥することで、金銀花精製抽出物（以下、「ＨＳ−２３抽出物」とも称する）を製造することができる。
【００２３】
本発明者らは、前記精製工程を通して、上記の方法によって製造される金銀花精製抽出物が、多量の有効成分を含み、特に、クロロゲン酸収率の約５．８倍及びクロロゲン酸とその誘導体を含む総クロロゲン酸誘導体収率の約５．２倍、例えば、乾燥精製抽出物の重量を基準に、３，５‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸（ｃａｆｆｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、メチル３，５‐ジ‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸などを２．０〜３０．０％（ｗ／ｗ）、望ましくは５．０〜２０．０％（ｗ／ｗ）、さらに望ましくは７．０〜１５．０％（ｗ／ｗ）範囲で含み、これは当技術分野において金銀花精製抽出物を製造するための公知の抽出方法で製造する場合の５倍以上である。
【００２４】
さらに、前記ＨＳ−２３抽出物は、重症敗血症ＣＬＰモデルテスト、ＭＯＤＳへの影響、及びＴＮＦ‐α、ＩＬ‐１β、ＩＦＮ‐γ、ＨＭＧＢ‐１等の多様な炎症性サイトカインの抑制効果の面で強力な抗敗血症活性を見せ、また、広範囲抗生剤のような市販の抗敗血症剤とともに使用したとき、敗血症及び敗血症性ショックの治療に予想外の相乗効果を見せた（重症敗血症を誘発させた動物モデルにおいて単独治療群と比べて約１２０％の生存率）。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
したがって、本発明は、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを治療および予防するため、乾燥精製抽出物の重量を基準にクロロゲン酸及びその誘導体を２．０〜３０．０％（ｗ／ｗ）、望ましくは５．０〜２０．０％（ｗ／ｗ）、さらに望ましくは７．０〜１５．０％（ｗ／ｗ）で含み、乾燥状態の金銀花試料を抽出溶媒で抽出する第１段階；抽出された抽出物を濾過法、遠心分離法またはこれらの組合せの少なくとも１つ、望ましくは濾過法で処理して金銀花の粗抽出物を得る第２段階；前記粗抽出物に精製水を加えて懸濁溶液を製造した後、前記懸濁溶液を非極性溶媒可溶分画と極性溶媒可溶分画とに分画して非極性溶媒可溶物質を除去し、残渣を回収して１次精製抽出物を得る第３段階；前記１次精製抽出物に精製水を入れ、前記精製水と同一重量の吸着性樹脂（ｒｅｓｉｎ）を用いた吸着クロマトグラフィー、イオンカラムクロマトグラフィーまたはこれらの組合せの少なくとも１つの精製工程を行った後、洗浄溶媒で数回洗浄して２次精製抽出物を得る第４段階；前記２次精製抽出物を真空濃縮及び乾燥する段階で製造される金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物を提供することを目的とする。
【００２６】
また、本発明による製造方法で精製した金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物を有効成分として含む敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショック治療及び予防用薬学組成物を提供することを目的とする。
【００２７】
本発明による精製ＨＳ−２３抽出物は、乾燥精製抽出物の重量を基準に、クロロゲン酸及びその誘導体を２．０〜３０．０％（ｗ／ｗ）、望ましくは５．０〜２０．０％（ｗ／ｗ）、さらに望ましくは７．０〜１５．０％（ｗ／ｗ）で含み、従来の抽出方法で製造された抽出物より強力な薬理効果を有する。
【００２８】
本発明は、ヒトを含む哺乳動物における敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックの治療および予防のための治療剤を製造するため、上記の方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物の用途を提供することを目的とする。
【００２９】
また、本発明は、上述した方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物の有効量を薬学的に受容可能な担体とともに投与することを含む、ヒトを含む哺乳動物における敗血症、敗血症性ショック又はＭＯＤＳを治療または予防する方法を提供することを目的とする。
【００３０】
なお、本明細書において「敗血症」とは、様々な敗血症を含み、例えば、軽度の敗血症、重症敗血症、火傷による感染症または敗血症、急性咽頭喉頭炎、潰瘍性大腸炎、ＩＢＳ（過敏性腸症候群）、リウマチ性関節炎、退行性関節炎、急性肝炎、慢性肝炎、望ましくは、軽度の敗血症、重症敗血症、火傷による感染症または敗血症が上げられるが、これらに限定されることはない。
【００３１】
また、本明細書において「ＭＯＤＳ（多臓器機能不全症候群）」とは、様々なＭＯＤＳを含み、例えば、軽度の敗血症、重症敗血症、または火傷による感染症または敗血症、特に重症敗血症に起因する肝臓、腎臓、心臓、肺、小腸、大腸、十二指腸、胃、膵臓、脾臓などから選択される臓器の損傷が挙げられるが、これらに限定されることはない。
【００３２】
また、本明細書において「敗血症性ショック」とは、様々な敗血症性ショックを含み、例えば、軽度の敗血症、重症敗血症、火傷による感染症または敗血症によって引き起こされる敗血症性ショックが挙げられるが、これらに限定されることはない。
【００３３】
強力な抗敗血症活性を示す前記ＨＳ−２３抽出物は、敗血症、敗血症性ショック又はＭＯＤＳを治療及び防止するための相乗効果を得るため、市販の抗敗血症剤と共に使用することができる。
【００３４】
従って、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを治療及び予防するため、有効成分として上述した方法によって精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組合せを含む薬学組成物を提供することを目的とする。
【００３５】
本発明は、ヒトを含む哺乳動物における敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを治療及び予防するための治療剤を調製するため、上述した方法によって精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組合せの用途を提供することを目的とする。
【００３６】
また、本発明は、上述した方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組合せの有効量を薬学的に受容可能な担体とともに投与することを含む、ヒトを含む哺乳動物における敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを治療または予防する方法を提供することを目的とする。
【００３７】
また、本明細書において「上述した方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組合せ」とは、（ａ）上述した方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と（ｂ）市販の抗敗血症剤とが０．１〜１０：０．１〜１０（ｗ／ｗ）、望ましくは１〜１０：１〜１０、さらに望ましくは、１〜５：１〜５（ｗ／ｗ）の混合比で混合されたものを含む。
【００３８】
また、本明細書において「市販の抗敗血症剤」とは、様々な市販の抗敗血症剤を含み、例えば、ペニシリン系、キノロン系、モノバクタム系、アミノグリコシド系、セファロスポリン系、テトラサイクリン系、グリコペプチド系、カルバペネム系などの抗生剤；メフェナム酸、インドメタシン、イブプロフェン、ピロキシカム、ジクロフェナクなどの抗炎症剤；アムホテリシンＢ、ナイスタチン、グリセオフルビン、アゾール系などの抗真菌剤；及びセチリジン、フェキソフェナジン、クロルフェニラミンなど抗アレルギー剤からなる群より選択された抗敗血症剤、望ましくは、ペニシリン系、キノロン系、モノバクタム系、アミノグリコシド系、セファロスポリン系、テトラサイクリン系、グリコペプチド系、カルバペネム系などの抗生剤からなる群より選択された抗敗血症剤、さらに望ましくは、アモキシシリン、アンピシリン、バンコマイシン、アミカシン、イミペネムなどからなる群より選択された抗敗血症剤が挙げられるが、これらに限定されることはない。
【００３９】
本発明の薬学組成物は、組成物の総重量を基準に、前記抽出物を約０．０１〜５０重量％で含有することができる。
【００４０】
本発明の組成物は、当技術分野で周知の方法に従って、従来の担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含むことができる。このとき、前記担体は使用状況や適用方法に応じて適切な物質を使用することが望ましいが、それに限定されない。適切な希釈剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｃｏ、Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ）に記載されている。
【００４１】
下記の製剤方法および賦形剤は単なる例示であって、本発明を制限するものではない。
【００４２】
本発明の組成物を含有する医薬製剤は、任意の形態で調製することができ、例えば、凍結乾燥製剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、エリキシル丸剤、サシェなどの固体経口製剤、懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ、水薬などのような液体経口製剤などの経口剤形；クリーム、軟膏、ローション、ゲル、バーム、パッチ、ペースト、スプレー溶液、エアゾールなどの局所用製剤；又は滅菌溶液、懸濁液、凍結乾燥製剤、非水系注射、または水系注射など、望ましくは、無菌注射可能な製剤のような坐剤又は注射用製剤の非経口製剤が挙げられる。
【００４３】
本発明に係る組成物は、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、精製水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油などのような薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を含む薬学組成物として提供することができる。製剤は、さらに、溶媒、添加剤、希釈剤、緩衝剤、等張剤、安定剤、酸化防止剤、疼痛緩和剤、乳化剤、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香味剤、保存剤等を含むことができる。具体的には、前記溶媒、添加剤、または希釈剤は、滅菌蒸留水、生理食塩水、ｐＨ調整剤、アルブミン、塩化ナトリウム、マンニトール、リンガー液、ブドウ糖などを含む。粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、エリキシル丸薬、サシェなどの固体経口製剤は、少なくとも１つの賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを用いて本発明の抽出物を混合することで調製することができる。また、必要に応じて、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤などの追加的な添加剤も配合できる。懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ剤、水薬などの液体経口製剤は、水又は流動パラフィンのような一般的な希釈剤の外に、例えば、湿潤剤、香味剤、甘味料、防腐剤などの少なくとも一つの賦形剤と、本発明の抽出物を混合することによって調製することができる。非経口剤形の場合、滅菌溶液、懸濁液、凍結乾燥製剤、非水系注射、または水系の注射などの注射可能な製剤は、基材として例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エチルオレートのような注射可能なエステルを使用することができ、坐剤は、本発明において塩基としてウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイーン６１、カカオ脂、ラウリン油、グリセロール−ゼラチンなどを基材として使用することができる。
【００４４】
当技術分野で周知の方法を用いることにより、患者への投与後に有効成分の迅速な放出、持続的な放出または遅延放出を調節するため、本発明の組成物を製剤化することができる。
【００４５】
例えば、本発明の組成物は、オイル、プロピレングリコール、または一般に注射製造に使用される他の溶媒に溶解させることができる。担体の好適な例としては、生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物油、ミリスチン酸イソプロピルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。局所投与のために、本発明の抽出物は軟膏およびクリームの形態で製剤化することができる。本発明による組成物の医薬剤形は、その薬学的に許容可能な塩の形態で使用されても良く、単独で、または、関連する他の薬学的に活性な化合物と組み合わせて使用することができる。
【００４６】
本発明の抽出物または組成物の望ましい投与量は、症状及び投与の対象、重症度、薬物形態、投与の経路および期間によって多様であるが、当業者によって選択され得る。しかし、望ましい効果を得るためには、一般に１μｇ〜５ｍｇ／日の量で投与することが推奨され、８μｇ〜２ｍｇ／日が望ましく、１６μｇ〜１ｍｇ／日がさらに望ましい。投与量は、一回で投与されるか又は一日数回に分けて投与され得る。例えば、２日〜１週間の期間で一回のように定期的に投与することもできるが、それに限定するものではない。本発明の範囲は、全ての変形、投薬量と回数の変化、および当業者によって考えられ得る任意の投与経路をすべて含む。組成物の面において、本発明の抽出物の量は、組成物の総重量を基準に０．０１〜５０％であり得、０．５〜４０％が望ましい。
【００４７】
本発明の薬学組成物は、多様な経路を介して、哺乳動物（ラット、マウス、家畜又はヒト）などの対象動物に投与することができる。あらゆる投与方法が考えられ、例えば、経口投与、直腸投与、または静脈内、筋肉内、皮下、皮内、髄腔内、硬膜外または脳室内注射などの投与方法で投与することができる。
【００４８】
本発明の抽出物は、毒性及び副作用がなく、安全に使用することができる。
【００４９】
本発明は、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを緩和又は予防するための有効成分として、上記の方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物を含む健康機能性食品を提供する。
【００５０】
本発明は、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを緩和又は予防するための有効成分として、上述した方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組み合わせを含む健康機能性食品を提供する。
【００５１】
また、本発明は、上記の方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物、および敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを緩和又は予防するための食品学的に許容可能な添加剤を含む健康機能性食品を提供する。
【００５２】
また、本発明は、上述した方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組み合わせ、及び敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを緩和又は予防するための食品学的に許容可能な添加剤を含む健康機能性食品を提供する。
【００５３】
本発明は、望ましい実施形態において、食品学的に許容可能な添加剤とともに、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを緩和又は予防するための上記の方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物を含むヘルスケア食品を提供することを他の目的とする。
【００５４】
また、本発明は、望ましい実施形態において、食品学的に許容可能な添加剤とともに、敗血症、ＭＯＤＳ又は敗血症性ショックを緩和又は予防するための上述した方法により精製された金銀花の精製ＨＳ−２３抽出物と市販の抗敗血症剤との組み合わせを含むヘルスケア食品を提供することを他の目的とする。
【００５５】
本発明の健康機能性食品またはヘルスケア食品の粗薬学組成物は、その粉末形、そこから抽出された形態、またはその乾燥抽出物の形態で使用される。
【００５６】
本明細書において「食品学的に許容可能な添加剤」とは、当技術分野で周知の入手可能な添加剤を含み、例えば、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）の食品添加物リストに公開されている（ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｆｏｏｄを参照）。
【００５７】
目的とする疾患を予防および改善するための健康機能性食品組成物は、組成物の総重量を基準に前記粗抽出物を０．０１〜９５ｗ／ｗ％、望ましくは０．５〜８０ｗ／ｗ％で含むことができる。
【００５８】
前記粗薬学組成物は、目的とする疾患を予防および改善するため、食品、添加物または飲料に添加することができる。目的とする疾患を予防及び改善するため、食品または飲料における前記粗薬学組成物の量は、一般に約０．１〜１５ｗ／ｗ％であり、健康食品組成物においては食品の全体重量に対して１〜１０ｗ／ｗ％であることが望ましく、健康飲料組成物１００ｍｌに対して１〜３０ｇ、好ましくは３〜１０ｇである。
【００５９】
本発明の健康飲料組成物は、提示された比率で必須成分として上述した抽出物を含有することの外に、他の成分には特に制限がなく、従来の飲料と同様に、種々の脱臭剤または天然炭水化物などを他の液体成分として含むことができる。前記天然炭水化物の例としては、グルコース、フルクトースなどの単糖類；マルトース、スクロースなどの二糖類；デキストリン、シクロデキストリンなどの通常の糖；キシリトール、エリスリトールなどの糖アルコールが挙げられる。上述した以外の消臭剤、例えば、タウマチン、ステビア抽出物（レバウディオサイドＡ、グリチルリチンなど）のような天然消臭剤；サッカリン、アスパルテームのような合成消臭剤を好適に使用することができる。前記天然炭水化物の量は、一般に飲料組成物１００ｍｌに対して約１〜２０ｇであり、望ましくは５〜１２ｇである。
【００６０】
本発明の組成物は、上述した成分の外に、様々な栄養剤、ビタミン、ミネラル又は電解質、及び合成香味剤、着色剤、およびチーズ、チョコレートなどの改良剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド状接着剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料等に使用する炭化剤を含むことができる。上述したものの外に本発明の組成物は、天然果汁、果汁飲料および野菜飲料を調製するための果実ジュースでもあり得、その構成要素は独立して又は組み合わせて使用することができる。成分の比率はあまり重要ではないが、一般に、本発明の組成物の１００ｗ／ｗ％当たり約０〜２０ｗ／ｗ％の範囲である。
【００６１】
本発明の要旨または範囲から逸脱することなく、本発明の組成物、用途及び製剤において様々な修正および変形が可能であることは当業者にとって明らかであろう。
【発明の効果】
【００６２】
本発明は、有効成分を多量に含む金銀花精製抽出物を調製するための方法を提供する。
【００６３】
本発明は、敗血症および敗血症性ショックを予防および治療するため、有効成分として有効な量の金銀花精製抽出物を含む薬学組成物を提供する。
【００６４】
本発明は、また、哺乳動物またはヒトにおける敗血症および敗血症性ショックを治療および予防するための薬学組成物を調製するための前記抽出物の用途を提供する。
【００６５】
本発明の上述した目的および他の目的、特徴および他の利点は、添付される図面及び後述される詳細な説明によってより明確に理解できるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】ＣＧＡ（Ａ）、ＨＳ−２３（ｂ）およびＳＬ−１０１（ｃ）のＨＰＬＣデータを示したグラフである（＊保持時間−１８分（ＣＧＡ）、９分及び２１分−ＣＧＡ誘導体）。
【図２】重症敗血症ＣＬＰモデルにおける、イミペネム投与群及びイミペネムとＨＳ−２３との併用投与群の生存率の変化を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
本発明の要旨または範囲から逸脱することなく、本発明の組成物、用途及び製剤において様々な修正および変形が可能であることは当業者にとって明らかであろう。
【００６８】
本発明は、有効成分を多量に含む金銀花精製抽出物を調製するための方法を提供する。
【００６９】
本発明は、敗血症および敗血症性ショックを予防および治療するため、有効成分として有効な量の金銀花精製抽出物を含む薬学組成物を提供する。
【００７０】
本発明は、また、哺乳動物またはヒトにおける敗血症および敗血症性ショックを治療および予防するための薬学組成物を調製するための前記抽出物の用途を提供する。
【００７１】
以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明する。しかし、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【実施例】
【００７２】
以下の参考例、実施例および実験例は、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明をより完全に説明するためのものである。
【００７３】
比較例１．従来の金銀花の粗抽出液の製造（ＳＬ−１０１）
金銀花の乾燥した花を１０倍量の精製水に添加し、１００℃で３時間、温水還流抽出法により抽出した。抽出液を濾過し、濾液を６０℃未満で真空濃縮装置（ＥＹＥＬＡ Ｎ−１０００、ＥＹＥＬＡ社製、日本）で濃縮した後、凍結乾燥機（ＦＤＣＦ−１２０１２、Ｏｐｅｒｏｎ社製、韓国）で乾燥し、金銀花の乾燥粗抽出物を得た（収率：４０．０％、以下、「ＳＬ−１０１」とする）。乾燥粉末を、比較試験試料として以下の実験にて用いた。
【００７４】
実施例１．金銀花精製抽出物の製造（ＨＳ−２３ａ、２３ｂ）
１−１．５倍量のＨＰ−２０樹脂使用（ＨＳ−２３ａ）
金銀花の乾燥した花を１０倍量の精製水に添加し、１００℃で３時間、温水還流抽出法により抽出した。抽出液を濾過し、濾液を６０℃未満で真空濃縮装置（ＥＹＥＬＡ Ｎ−１０００、ＥＹＥＬＡ社製、日本）で濃縮した後、凍結乾燥機（ＦＤＣＦ−１２０１２、Ｏｐｅｒｏｎ社製、韓国）で乾燥し、金銀花の乾燥粗抽出物を得た。得られた抽出物を１．５倍量の精製水（ｖ／ｗ、粗抽出物の重量基準）に懸濁した後、懸濁液を同量のエチルアセテートで三回分画してエチルアセテート可溶分画を除去し、１次精製抽出物を得た。そこに５倍量の精製水（ｗ／ｗ、１次精製抽出物の重量基準）を添加し、さらに同量のＨＰ−２樹脂（三菱化学製）を添加して５時間撹拌し、精製水可溶物質を除去した。洗浄溶媒として１０倍量の精製水および同量の３０％メタノールを残りの分画に添加し、５時間撹拌して２次精製抽出物を得た。吸着した吸着物を６０℃未満で真空濃縮装置（ＥＹＥＬＡ Ｎ−１０００、ＥＹＥＬＡ社製、日本）で濃縮した後、凍結乾燥機（ＦＤＣＦ−１２０１２、Ｏｐｅｒｏｎ社製、韓国）で乾燥し、金銀花精製抽出物を得た（最終収率：３．１％、以下、「ＨＳ−２３ａ」とする）。乾燥粉末を、試験試料として以下の実験にて用いた。
【００７５】
１−２．１０倍量のＨＰ−２０樹脂（ＨＳ−２３ｂ）使用
ＨＰ−２１樹脂の使用量を精製水の１０倍量（ｗ／ｗ、１次精製抽出物の重量基準）にしたことを除いて、実施例１−１とすべて同じ精製工程によって金銀花精製抽出物を得た（最終収率：３．１％、以下、「ＨＳ−２３ｂ」とする）。乾燥粉末を、試験試料として以下の実験にて用いた。
【００７６】
実施例２．金銀花精製抽出物の製造（ＨＳ−２３ｃ）
金銀花の乾燥した花を１０倍量の精製水に添加し、１００℃で３時間、温水還流抽出法により抽出した。抽出液を濾過し、濾液を６０℃未満で真空濃縮装置（ＥＹＥＬＡ Ｎ−１０００、ＥＹＥＬＡ社製、日本）で濃縮した後、凍結乾燥機（ＦＤＣＦ−１２０１２、Ｏｐｅｒｏｎ社製、韓国）で乾燥し、金銀花の乾燥粗抽出物を得た。得られた抽出物を１．５倍量の精製水（ｖ／ｗ、粗抽出物の重量基準）に懸濁した後、懸濁液を同量のエチルアセテートで三回分画してエチルアセテート可溶分画を除去し、１次精製抽出物を得た。そこに１０倍量の精製水（ｗ／ｗ、１次精製抽出物の重量基準）を添加し、さらに同量のＳＰ−８５０樹脂（三菱化学製）を添加して５時間撹拌し、精製水可溶物質を除去した。残りの精製水可溶物質を確認しながら、洗浄溶媒として１０倍量の精製水を残りの分画に添加し、３倍量の１０％メタノールを残りの画分に添加して５時間撹拌し、３倍量の２０％メタノールを残りの樹脂に添加して同様の方法で濃縮および減圧乾燥した。３０％メタノールを用いて洗浄工程を繰り返し、１０％、２０％および３０％メタノールを用いた洗浄工程からの溶出液を回収した。回収された２次精製抽出物を６０℃未満で真空濃縮装置（ＥＹＥＬＡ Ｎ−１０００、ＥＹＥＬＡ社製、日本）で濃縮した後、濃縮物を３倍量の３０％メタノールに溶解した。溶解液をセファデックスＬＨ樹脂（ＧＥヘルスケア社製、米国）を用いてさらに精製し、２．５ｋＤ Ｍ．Ｗ．未満を有するステロイド、テルペノイド、脂質、ポリフェノール、アルカロイド、アミノ酸などの残りの非有効成分を除去した。３０％のメタノール溶媒を移動相として精製される残りの溶出液を６０℃未満で真空濃縮装置（ＥＹＥＬＡ Ｎ−１０００、ＥＹＥＬＡ社製、日本）で濃縮した後、凍結乾燥機（ＦＤＣＦ−１２０１２、Ｏｐｅｒｏｎ社製、韓国）で乾燥し、金銀花精製抽出物を得た（最終収率：１．６％、以下、「ＨＳ−２３ｃ」とする）。乾燥粉末を、試験試料として以下の実験にて用いた。
【００７７】
実施例３．金銀花精製抽出物の製造（ＨＳ−２３ｄ）
金銀花の乾燥した花を１０倍量の精製水に添加し、１００℃で３時間、温水還流抽出法により抽出した。抽出液を濾過し、濾液を６０℃未満で真空濃縮装置（ＥＹＥＬＡ Ｎ−１０００、ＥＹＥＬＡ社製、日本）で濃縮した後、凍結乾燥機（ＦＤＣＦ−１２０１２、Ｏｐｅｒｏｎ社製、韓国）で乾燥し、金銀花の乾燥粗抽出物を得た。得られた抽出物を１．５倍量の精製水（ｖ／ｗ、粗抽出物の重量基準）に懸濁した後、懸濁液を同量のエチルアセテートで三回分画してエチルアセテート可溶分画を除去し、１次精製抽出物を得た。そこに１０倍量の精製水（ｗ／ｗ、１次精製抽出物の重量基準）を添加し、さらに同量のアンバーライトＸＡＤ−２樹脂（ローム・アンド・ハース社製、米国）を添加して５時間撹拌し、精製水可溶物質を除去した。洗浄溶媒として１０倍量の精製水および同量の３０％メタノールを残りの分画に添加し、５時間撹拌して２次精製抽出物を得た。吸着した吸着物を６０℃未満で真空濃縮装置（ＥＹＥＬＡ Ｎ−１０００、ＥＹＥＬＡ社製、日本）で濃縮した後、凍結乾燥機（ＦＤＣＦ−１２０１２、Ｏｐｅｒｏｎ社製、韓国）で乾燥し、金銀花精製抽出物を得た（最終収率：２．８％、以下、「ＨＳ−２３ｄ」とする）。乾燥粉末を、試験試料として以下の実験にて用いた。
【００７８】
実施例４．成分分析
比較例および実施例で製造した抽出物の成分を、表１に示された条件でＨＰＬＣで分析した。その結果を表２に示した。
【００７９】
１−１．試薬
ＣＧＡ（クロロゲン酸＞９６％、アルドリッチＣ３８７８）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸、シグマアルドリッチ２９９５３７）、ＨＰ−２０樹脂（三菱化学）、アセトニトリル（バーディック＆ジャクソン、ＨＰＬＣ）、精製水（バーディック＆ジャクソン、ＨＰＬＣ）、およびエチルアセテート（純正化学）を実験に使用した。
【００８０】
１−２．試料の処理
比較例および実施例で調製した抽出物１００ｍｇを精製水７０ｍｌに溶解し、超音波抽出により抽出した。抽出物を濾過し、濾液に精製水を添加して１００ｍｌにした。成分パターンおよび有効成分の量を決定するため、各濾液の成分をＨＰＬＣで分析した。
【００８１】
【表１】
2015530968.tif 000003
【００８２】
１−３．結果
表２に示すように、従来の抽出方法（図１参照）によって製造したＳＬ−１０１の抽出物と比較して、ＨＳ−２３ｂ精製抽出物中の３，５‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸、メチル３，５‐ジ‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸などのクロロゲン酸（ＣＧＡ）及びその誘導体が、クロロゲン酸およびクロロゲン酸を含む総クロロゲン酸誘導体の収率に対してそれぞれ約５．８倍及び約５．２倍の収率と大幅に増加したことが確認された。
【００８３】
【表２】
2015530968.tif 000004
【００８４】
実験例１．重症敗血症ＣＬＰモデルにおける抗生剤との併用投与
重症敗血症ＣＬＰモデルにおける、実施例で製造した精製抽出物と抗生剤との併用投与の治療効果を測定するため、以下の文献に開示された方法を変形して実験を行った（非特許文献８）。
【００８５】
マウス（ＩＣＲメス、２３〜２５ｇ、８週齢、www.dhbiolink.com）に麻酔薬（塩酸ケタミン、１００ｍｇ／ｋｇ、Ｙｕｈａｎ ＰＨＡＲＭ社製）を腹腔内に注射し、ＣＬＰ（Ｃｅｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｎｃｔｕｒｅ）を用いて敗血症を誘導した。腹腔の中央部を切開した後、盲腸を外部に出して回盲弁の末端を絹縫合糸（ｓｉｌｋ ｓｕｔｕｒｅ、医療用縫合糸１号＆２号、www.lead-care.com)で結紮し、スレッドを用いて盲腸に２つの穴を穿孔して所定量の糞便を流出させた。糞便とともに盲腸を腹腔内に入れ、生理食塩水を皮下注射して敗血症を誘導した。実施例で製造したサンプル（ＨＳ−２３ｂ）を尾静脈に注射した。
【００８６】
特に、本実験例では、回盲弁末端の縫合位置を変更し、穿孔の回数を２以上にすることで、流出する糞便の量を増加させ、重症の敗血症ＣＬＰモデルを誘導した。
【００８７】
重症敗血症ＣＬＰモデルを誘導した直後及び２４時間後にＨＳ−２３（４０ｍｇ／ｋｇ）のみを投与した単独処置群の生存率、並びにＨＳ−２３（４０ｍｇ／ｋｇ）と抗生剤（イミペネム、Ｃａｔ．番号Ｉ０１６０、シグマアルドリッチ社製、２５ｍｇ／ｋｇ）とを１２時間毎に４日間投与した併用処置群の生存率を１０日間測定した。１０日後の最終的な生存率は、ＣＬＰ処置群（８％）、イミペネムの単独処置群（３３％）、およびＨＳ−３４とイミペネムとの併用処置群（５０％）であって、従来の広範囲抗生剤の単独処置に比べてＨＳ−３４とイミペネムとの併用処置群の生存率が１７％増加する効果を奏することが分かった（図２参照）。
【００８８】
生理食塩水及びＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）のみを投与したビヒクル処置群の場合、ＣＬＰ後、１日目、２日目、３日目、及び４日目〜１０日目の生存率がそれぞれ７５％、３３％、１７％、及び８％であった。
【００８９】
イミペネム（２５ｍｇ／ｋｇ）単独処置群では、ＣＬＰ後、１日目、２日目、３日目、及び４日目〜１０日目の生存率がそれぞれ８３％、５８％、５０％、及び４２％であった。
【００９０】
イミペネム（２５ｍｇ／ｋｇ）とＨＳ−３４（４０ｍｇ／ｋｇ）との併用処置群では、ＣＬＰ後、１日目、２日目、３日目、及び４日目〜１０日目の生存率がそれぞれ９２％、７５％、５８％、及び５０％であった。
【００９１】
実験例２．重症敗血症ＣＬＰモデルにおけるＭＯＤＳに対する有効性の評価
重症敗血症ＣＬＰモデルにおける、実施例で製造した精製抽出物のＭＯＤＳに対する治療効果を測定するため、以下の文献に開示された方法を変形して実験を行った（非特許文献９）。
【００９２】
肝臓、腎臓、心臓などの様々な臓器の機能損傷をＨ＆Ｅ１２染色法によって観察した。各臓器の機能を評価するためのそれぞれ指標のレベルとしては、肝機能にはＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、腎臓機能にはＢＵＮ（血中尿素窒素）とＣＲＥ（クレアチニン）、心臓機能にはＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）を自動化学分析装置（日立７６００、東京、日本）で測定して用いた。
【００９３】
ＣＬＰ後、１、３、６、１２、２４、および４８時間に血液を採集して血清を分離した。ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＲＥ及びＬＤＨのレベルを測定し、その結果を表３に示した。
【００９４】
表３に示したように、ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＲＥおよびＬＤＨの増加が急激に低下し、これは重症敗血症ＣＬＰモデルにおけるＭＯＤＳに対する実験サンプルの強力な阻害効果を意味する。
【００９５】
【表３】
2015530968.tif 000005
【００９６】
実験例３．ＬＰＳ誘発炎症モデルにおける生存率と有効性の決定
ＬＰＳ誘発炎症モデルにおける、実施例で製造した精製抽出物の生存率及び有効性を評価するため、以下の文献に開示された方法を変形して実験を行った（非特許文献１０）。
【００９７】
マウス（Ｃ５７ＢＬ／６、メス、８週齢、ＫＲＩＢＢ）にＬＰＳ（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；Ｅ．Ｃｏｌｉ ０１１１：Ｂ４ シグマアルドリッチ、Ｌ４１３０）を腹腔内注射し、注射後１〜８時間以内にＨＳ−２３を静脈内に注射してマウスの生存率を評価した。
【００９８】
ＬＰＳ注射後１時間でＨＳ−２３を処置した群における生存率は、ＬＰＳ注射後１８時間で９０％、２１時間で８０％、２４〜７２時間で７０％であることが分かった（表４参照）。
【００９９】
ＬＰＳ注射後、毎時間毎に血液を遠心分離して得た血清から、ＥＬＩＳＡ法により様々な炎症誘発因子の発現レベルを測定し、その結果を表５〜表８に示した。
【０１００】
時間毎に測定した結果、ＴＮＦ‐αはＬＰＳ注射の１時間後、ＩＬ‐１βおよびＩＦＮ‐γは８時間後、ＨＭＧＢ−１は１９時間後に発現レベルが最大レベルに達することがわかった。
【０１０１】
【表４】
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【０１０２】
【表５】
2015530968.tif 000007
【０１０３】
【表６】
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【０１０４】
【表７】
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【０１０５】
【表８】
2015530968.tif 000010
【０１０６】
マウスにＨＳ−２３抽出物を静脈内注射すると同時にＬＰＳを腹腔内注射した後、ＴＮＦ‐α、ＩＬ‐１βとＩＦＮ‐γ、およびＨＭＧＢ‐１の炎症誘発因子のレベルのが最大レベルに達する時間をＥＬＩＳＡ法により測定した。
【０１０７】
その結果、表９に示すように、ＨＳ−２３処置群では炎症誘発因子の発現レベルの増加を強力に阻害していることが確認された。
【０１０８】
【表９】
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【０１０９】
実験例４．安定性テスト
実施例で調製した精製抽出物およびＨＳ−２３抽出物の凍結乾燥形態を含有する注射製剤の安定性を確認するため、韓国食品医薬品安全処の安定性ガイドラインに従って以下の実験を行った（www.kfda.go.kr）。
【０１１０】
４−１．試験方法
試験試料とＨＳ−２３抽出物の凍結乾燥形態を含有する注射製剤をもって、大韓薬典の規定及びガイドラインに従って２年間の冷蔵保管（５±３℃）条件で長期安定性テストを行った。
【０１１１】
４−２．試験結果
表１０および表１１に示したように、金銀花の指標物質の量、すなわち、クロロゲン酸（ＣＧＡ）の含量の変化が安定性試験期間中にほとんどなく、ガイドラインに適合するほど、試験試料が非常に薬学的に安定していることが確認された。
【０１１２】
【表１０】
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【０１１３】
【表１１】
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【０１１４】
実験例５．毒性テスト
実施例で調製した精製抽出物の毒性を確認するため、韓国食品医薬品安全処の毒性ガイドラインに従って以下の実験を行った（www.kfda.go.kr）。
【０１１５】
げっ歯類／非げっ歯類の単回投与毒性試験、安全性薬理試験、遺伝毒性試験、４週反復投与毒性試験などを含むすべての毒性試験は、ＧＬＰ認証機関で行った（www.biotoxtech.com）。
【０１１６】
表１２に示されたように、単回投与毒性試験における試験サンプルの致死量は５００ｍｇ／ｋｇ以上であり、４週反復投与毒性試験におけるＮＯＡＥＬ値は７５ｍｇ／ｋｇ以上であった。さらに、心血管系、呼吸器系、中枢神経系システムなどの安全性薬理試験においても、１００ｍｇ／ｋｇ及び３００ｍｇ／ｋｇ以上で安全であることが証明された。
【０１１７】
したがって、本発明の精製抽出物は、安全且つ非毒性であることが証明された。
【０１１８】
【表１２】
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【０１１９】
以下、賦形剤の処方方法および種類について説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。また、代表的な製剤例を以下に説明する。
【０１２０】
粉剤の製造
ＨＳ−２３ｂ ２０ｍｇの乾燥粉末
乳糖 １００ｍｇ
タルク １０ｍｇ
【０１２１】
上記の成分を混合し、密閉パッケージに充填して粉末を製造した。
【０１２２】
錠剤の製造
ＨＳ−２３ａ １０ｍｇの乾燥粉末
コーンスターチ １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
【０１２３】
上記の成分を混合し、打錠して錠剤を製造した。
【０１２４】
カプセル剤の製造
ＨＳ−２３ｃ １０ｍｇの乾燥粉末
コーンスターチ １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
【０１２５】
上記の成分を混合し、従来のゼラチン製造法によりゼラチンカプセルに充填することによりカプセル剤を製造した。
【０１２６】
注射剤の製造
ＨＳ−２３ｄ １０ｍｇの乾燥粉末
マンニトール １８０ｍｇ
注射用蒸留水 ２９７４ｍｇ
ｐＨ調整剤（Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２Ｏ） 適量
【０１２７】
有効成分を溶解してｐＨを約７．５に制御した後、全成分を２ｍｌアンプルに充填し、従来の注射剤製造方法によって滅菌して注射剤を製造した。
【０１２８】
液剤の製造
ＨＳ−２３ｂ ２０ｍｇの乾燥粉末
異性化糖 １０ｇ
マンニトール ５ｇ
蒸留水 適量
【０１２９】
適量のレモン香とともに上記の成分を蒸留水に溶解して混合し、褐色瓶に蒸留水で１００ｍｌに調整した後、従来の水薬製造方法によって滅菌して液剤を製造した。
【０１３０】
健康機能性食品の製造
ＨＳ−２３ａ １０００ｍｇの乾燥粉末
ビタミン混合物 適量
ビタミンＡアセテート ７０μｇ
ビタミンＥ １．０ｍｇ
ビタミンＢ１ ０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２ ０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６ ０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２ ０．２μｇ
ビタミンＣ １０ｍｇ
ビオチン １０μｇ
ニコチン酸アミド １．７ｍｇ
葉酸 ５０μｇ
パントテン酸カルシウム ０．５ｍｇ
ミネラル混合物 適量
硫酸第一鉄 １．７５ｍｇ
酸化亜鉛 ０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム ２５．３ｍｇ
リン酸一カリウム １５ｍｇ
リン酸二カルシウム ５５ｍｇ
クエン酸カリウム １００ｍｇ
塩化マグネシウム ２４．８ｍｇ
【０１３１】
上述したビタミンおよびミネラル混合物は多様に変更することができ、このような変更が本発明の要旨および範囲から逸脱するものとして解釈されてはならない。
【０１３２】
健康飲料の製造
ＨＳ−２３ｃ １００ｍｇの乾燥粉末
クエン酸 １０００ｍｇ
オリゴ糖 １００ｇ
濃縮アンズ ２ｇ
タウリン １ｇ
蒸留水 ９００ｍｌ
【０１３３】
有効成分を溶解して混合し、８５℃で１時間撹拌した後、濾過し、次いで２ｌの容器に全成分を充填し、従来の健康飲料製造方法によって滅菌して健康飲料を製造した。
【０１３４】
以上のように説明された本発明は多様に変更することができ、このような変更が本発明の要旨および範囲から逸脱するものとして見なされてはならない。また、全ての変更が本発明の特許請求範囲の範囲内に含まれることは当業者にとって自明であるだろう。
【産業上の利用可能性】
【０１３５】
本発明による、金銀花精製抽出物は、重症敗血症ＣＬＰモデルテスト、ＭＯＤＳへの影響、および、ＴＮＦ‐α、ＩＬ‐１β、ＩＦＮ‐γ、ＨＭＧＢ‐１などの様々な炎症性サイトカインの抑制効果において強力な抗敗血症活性を見せるだけでなく、当業界の広範囲抗生剤のような市販の抗敗血症剤とともに使用したとき、敗血症及び敗血症性ショックの治療に予想外の相乗効果を見せた。したがって、本発明は、薬剤及び健康機能性食品として敗血症および敗血症性ショックの治療および予防において有用に使用することができる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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