【手続補正書】
【提出日】平成22年7月20日(2010.7.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における卵巣癌の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
抗体と抗原決定基との結合を検出するために十分な条件下でかつそのために十分な時間にわたり、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有するＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの抗体と、被験体からの血液、血清、血漿、腹水および腹腔液からなる群から選択される生物学的試料とを接触させて、該試料中において可溶性形態で天然に存在し、かつ、該抗体と反応性がある抗原決定基を有する分子の、該生物学的試料中での存在を確定する工程、および
それから卵巣癌の存在を検出する工程
を含む方法。
【請求項２】
前記生物学的試料は血清である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記生物学的試料は血漿である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記生物学的試料は腹水である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体はポリクローナル抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体は親和性精製抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体はモノクローナル抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体は組換え抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体はキメラ抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体はヒト化抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体は単鎖抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出は放射性核種の検出を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出は蛍光体（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）の検出を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出がアビジン分子とビオチン分子の間の結合事象の検出を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出はストレプトアビジン分子とビオチン分子の間の結合事象の検出を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出は酵素反応の生成物の分光光度検出を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体は検出可能に標識される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体は検出可能に標識されず、抗体と抗原決定基の結合の検出が間接的である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
被験体における卵巣癌の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
抗体と抗原決定基との結合を検出するために十分な条件下でかつそのために十分な時間にわたり、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有するＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの抗体と、被験体からの細胞を含む血液、血清、血漿、腹水および腹腔液からなる群から選択される生物学的試料とを接触させて、該抗体と反応性がある抗原決定基を有する細胞表面分子の前記生物学的試料中での存在を確定する工程、および
それから卵巣癌の存在を検出する工程
を含む方法。
【請求項２０】
前記生物学的試料は血清である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記生物学的試料は血漿である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記生物学的試料は腹水である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体はポリクローナル抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体は親和性精製抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体はモノクローナル抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗体は組換え抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗体はキメラ抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗体はヒト化抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗体は単鎖抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出は放射性核種の検出を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出は蛍光体（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）の検出を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出がアビジン分子とビオチン分子の間の結合事象の検出を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出はストレプトアビジン分子とビオチン分子の間の結合事象の検出を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出は酵素反応の生成物の分光光度検出を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体は検出可能に標識される、請求項１９に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗体は検出可能に標識されず、抗体と抗原決定基の結合の検出が間接的である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３７】
被験体における卵巣癌の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
抗体と抗原決定基との結合を検出するために十分な条件下でかつそのために十分な時間にわたり、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な抗体と、被験体からの血液、血清、血漿、腹水および腹腔液からなる群から選択される生物学的試料を接触させて、（ｉ）該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子、ならびに
（ｉｉ）細胞表面分子
からなる群から選択される分子の該生物学的試料中での存在を確定する工程であって、該試料は被験体からの細胞を含み、該分子は該抗体と反応性がある抗原決定基を有し、ここで、該抗体は、ＨＥ４ａ抗原に免疫特異的に結合する、工程
それから卵巣癌の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項３８】
被験体における卵巣癌の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
固定された第一の抗体を、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有するＨＥ４ａ抗原ポリペプチドと特異的に結合させて、免疫複合体を形成するために十分な条件下でかつそのために十分な時間にわたり、該ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの固定された第一の抗体と、被験体からの血液、血清、血漿、腹水および腹腔液からなる群から選択される生物学的試料とを接触させて、該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子の該生物学的試料中での存在を確定する工程、
該固定された第一の抗体と特異的に結合しない試料の構成成分を除去する工程、および
第二の抗体と該ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドとの特異的結合を検出するために十分な条件下でかつそのために十分な時間にわたり、該免疫複合体をＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの第二の抗体と接触させる工程であって、該第二の抗体の抗原結合部位が該固定化された第一の抗体の抗原結合部位を競合的に抑制しない、工程、および、
それから卵巣癌の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項３９】
被験体における卵巣癌の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
抗体と抗原決定基との結合を検出するために十分な条件下でかつそのために十分な時間にわたり、
（ｉ）卵巣癌を有する疑いのある第一の被験体からの血液、血清、血漿、腹水および腹腔液からなる群から選択される第一の生物学的試料、ならびに
（ｉｉ）卵巣癌を有さないことが周知である第二の被験体からの血液、血清、血漿、腹水および腹腔液からなる群から選択される第二の生物学的試料
の各々を、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有するＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの抗体と接触させて、
（ｉ）該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子、および
（ｉｉ）細胞表面分子
からなる群から選択される分子の該第一および第二の生物学的試料の各々における存在を確定する工程であって、該第一および第二の生物学的試料は各々、該第一および第二の被験体からの細胞をそれぞれ含み、該分子は、該抗体と反応性がある抗原決定基を有する、工程、
第一の生物学的試料中の該抗体と該抗原決定基の検出可能な結合のレベルを、第二の生物学的試料中の該抗体と該抗原決定基の検出可能な結合のレベルと比較する工程、および
それから卵巣癌の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項４０】
被験体における卵巣癌の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
配列番号１１を含むアミノ酸配列を有するＨＥ４ａ抗原ポリペプチドと免疫特異的に結合する抗体の存在を被験体からの血液、血清、血漿、腹水および腹腔液からなる群から選択される生物学的試料中で検出する工程
を含む、方法。
【請求項４１】
被験体における卵巣癌の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
試料中の可溶性形態である天然の抗体の、配列番号１１を含むアミノ酸配列を有するＨＥ４ａポリペプチドとの結合を検出するために十分な条件下でかつそのために十分な時間にわたり、被験体からの血液、血清、血漿、腹水および腹腔液からなる群から選択される生物学的試料を検出可能に標識されたＨＥ４ａポリペプチドと接触させる工程、および
それから卵巣癌の存在を検出する工程
を含む方法。
【請求項４２】
中皮種関連抗原、癌胎児性抗原、ＣＡ１２５、シアリルＴＮ、扁平上皮細胞癌抗原、組織ポリペプチド抗原および胎盤アルカリ性ホスファターゼからなる群から選択される悪性症状の少なくとも１つの可溶性マーカーの前記試料中の存在を確定する工程をさらに含む、請求項１〜８、１９〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
配列番号１１を含むアミノ酸配列を有する単離されたＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項４４】
配列番号１１を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする適合性発現ベクターを哺乳動物細胞に発現させることによって作製された、請求項４３に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項４５】
細胞から発現されたポリペプチドを単離することによってさらに作製された、請求項４４に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項４６】
配列番号１０を含む核酸配列を有する適合性発現ベクターを細胞に発現させることによって作製された、請求項４３に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項４７】
前記細胞がヒト精巣上体細胞である、請求項４６に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項４８】
配列番号１２を含む核酸配列を有する適合性発現ベクターを細胞に発現させることによって作製された、請求項４３に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項４９】
前記細胞がヒト卵巣癌細胞である、請求項４６に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項５０】
前記アミノ酸配列が、付加的なポリペプチドをコードする第二の部分をさらに含む、請求項４３に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項５１】
前記付加的なポリペプチドが親和性タグポリペプチドである、請求項５０に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項５２】
前記付加的なポリペプチドが免疫グロブリン定常部である、請求項５０に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項５３】
前記付加的なポリペプチドが免疫グロブリンV領域である、請求項５０に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項５４】
前記付加的なポリペプチドが、特定の細胞局在化のためにＨＥ４ａポリペプチドを向かわせるポリペプチドである、請求項５０に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項５５】
前記アミノ酸配列が、プロテアーゼによって切断可能である融合配列をコードする第三の部分をさらに含み、該第三の部分が第二の部分と配列番号１１の間に配置される、請求項５０に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項５６】
検出可能に標識された請求項４３に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項５７】
請求項４３に記載の単離ＨＥ４ａポリペプチドおよび第二の可溶性腫瘍関連抗原を含む、悪性状態の存在をスクリーニングするためのキット。
【請求項５８】
前記第二の可溶性腫瘍関連抗原が、メソテリン、メソテリン関連抗原、ＣＥＡ、ＣＡ１２５、シアリルＴＮ、ＳＣＣ、ＴＰＳおよびＰＬＡＰからなる群から選択される、請求項５７に記載のキット。
【請求項５９】
配列番号１１の少なくとも20個の連続する残基を含むアミノ酸配列を有する、単離されたＨＥ４ａの免疫原性断片であって、該連続する残基が、
i）配列番号１１の71位、
ii）配列番号１１の72位および73位の両方、および
iii）配列番号１１の101位
の少なくとも1つを含む、単離されたＨＥ４ａの免疫原性断片。
【請求項６０】
前記アミノ酸配列が付加的なポリペプチドをさらに含む、請求項５９に記載の単離ＨＥ４ａ免疫原性断片。
【請求項６１】
前記付加的なポリペプチドが親和性タグポリペプチドである、請求項５９に記載の単離ＨＥ４ａ免疫原性断片。
【請求項６２】
前記付加的なポリペプチドが免疫グロブリン定常部である、請求項５９に記載の単離ＨＥ４ａ免疫原性断片。
【請求項６３】
配列番号１１を含むアミノ酸配列を有するＨＥ４ａポリペプチドをコードする適合性発現ベクターを細胞に発現させることによって作製された、翻訳後修飾されたＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項６４】
前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項６３に記載の翻訳後修飾ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項６５】
前記細胞がヒト卵巣癌細胞である、請求項６３に記載の翻訳後修飾ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項６６】
前記細胞がヒト精巣上体細胞である、請求項６３に記載の翻訳後修飾ＨＥ４ａポリペプチド。
【請求項６７】
配列番号１１に示す配列からなるアミノ酸配列を有するＨＥ４ａポリペプチドと特異的に結合する免疫グロブリン可変部を含む、ＨＥ４ａと特異的に結合するポリペプチドであって、該免疫グロブリン可変部が、配列番号９に示すアミノ酸配列からなるＨＥ４ポリペプチドとは特異的に結合しない、ポリペプチド。
【請求項６８】
免疫グロブリンFcドメインをさらに含む、請求項６７に記載のポリペプチド。
【請求項６９】
抗体である、請求項６７に記載のポリペプチド。
【請求項７０】
単鎖抗体である、請求項６９に記載のポリペプチド。
【請求項７１】
抗体のF(ab')2断片である、請求項６９に記載のポリペプチド。
【請求項７２】
前記抗体が組換え抗体である、請求項６９に記載のポリペプチド。
【請求項７３】
前記ポリペプチドがビオチニル化されている、請求項６９に記載のポリペプチド。
【請求項７４】
免疫グロブリン可変部と融合された検出可能なタンパク質ドメインをさらに含む、請求項６７に記載のポリペプチド。
【請求項７５】
前記検出可能なタンパク質ドメインがビオチン模倣配列を含む、請求項７４に記載のポリペプチド。
【請求項７６】
前記検出可能なタンパク質ドメインが、検出可能な標識部分と共有結合的に修飾可能な部位を含む、請求項７４に記載のポリペプチド。
【請求項７７】
前記検出可能な標識部分がビオチンである、請求項７６に記載のポリペプチド。
【請求項７８】
前記検出可能なタンパク質ドメインが検出可能な基質の酵素的修飾を示す、請求項７４に記載のポリペプチド。
【請求項７９】
前記検出可能なタンパク質ドメインが固相支持体に結合する、請求項７４に記載のポリペプチド。
【請求項８０】
前記検出可能なタンパク質ドメインが固相支持体に結合された、請求項７４に記載のポリペプチド。
【請求項８１】
請求項７９に記載のポリペプチドを含むモノクローナル抗体調製物。
【請求項８２】
請求項７９に記載のポリペプチドを分泌するハイブリドーマ。
【請求項８３】
請求項７６に記載のポリペプチドを産生する第一の酵母、および検出可能な標識部分により検出可能なタンパク質ドメインを共有結合的に修飾する酵素を産生する第二の酵母を含む、酵母二ハイブリッドシステム。
【請求項８４】
前記免疫グロブリン可変部が、１０５Ｍ−１以上のＫａでＨＥ４ａポリペプチドと結合する、請求項６７に記載のポリペプチド。
【請求項８５】
配列番号１１に示す配列を含むアミノ酸配列を有するＨＥ４ａポリペプチドと特異的に結合する抗体であって、配列番号９に示すアミノ酸配列を有するＨＥ４ポリペプチドとは特異的に結合しない、抗体。
【請求項８６】
前記抗体の可変部と融合された検出可能なタンパク質ドメインを有する、請求項８５に記載の抗体。
【請求項８７】
前記検出可能なタンパク質ドメインがビオチニル化されている、請求項８６に記載の抗体。