【手続補正書】
【提出日】平成22年10月4日(2010.10.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トウダイグサ科アカメガシワ（Mallotus japonicus Mueller-Arg）の抽出物からなる、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤を含有する、骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
【請求項２】
前記マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の対象とするマトリックスメタロプロテアーゼは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−９及びＭＭＰ−１３であることを特徴とする、請求項１に記載の骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
【請求項３】
前記植物の抽出物は、１５３ｍＵ／μｇ（酵素活性／植物抽出物）溶液において、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ９及びマトリックスメタロプロテアーゼ１３の３種のＭＭＰに４０％以上の阻害作用を有するものであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
【請求項４】
次の工程を経て製造されるものであることを特徴とする、請求項１〜３何れか１項に記載の骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
（工程１）トウダイグサ科アカメガシワ（Mallotus japonicus Mueller-Arg）の植物体に抽出溶媒を加え、抽出物を作製する。
（工程２）前記抽出物の１５３ｍＵ／μｇ（酵素活性／植物抽出物）溶液において、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ９及びマトリックスメタロプロテアーゼ１３の３種のＭＭＰに４０％以上の活性阻害が存したものをマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤として選択する。
（工程３）選択された前記マトリックスプロテアーゼ阻害剤を製剤化のための成分とともに骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物に加工する。
【請求項５】
食品であることを特徴とする、請求項１〜４何れか１項に記載の骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
一方、骨は生体の骨格としてその構造を維持する上で必要不可欠あると同時に、生体内でのカルシウムの貯蔵庫としての機能も合わせ持つ非常に重要な組織である。骨は骨芽細胞による骨形成と、破骨細胞による骨吸収とのバランスにたった、骨代謝を維持することにより、その強度を保つためのリモデリングとカルシウム供給を行っている。加齢やホルモンバランスの変化などにより骨代謝のバランスが崩れて、破骨細胞の行う骨吸収が優位となることにより骨量減少をきたし、骨強度が低下して骨粗しょう症などの疾病が発生することが知られている。骨基質の大部分はコラーゲンからなり、骨代謝の際のコラーゲン分解は重要な要素で、骨組織にもコラーゲナーゼ群として、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１３、ゼラチナーゼ群として、ＭＭＰ−２とＭＭＰ−９、ストロメライシン群としてＭＭＰ−３、さらに膜結合型のＭＴ１−ＭＭＰなどのマトリックスメタロプロテアーゼの存在が報告されている。中でも、骨吸収を司る破骨細胞ではＭＭＰ−９が強く発現しており（例えば、特許文献４、特許文献５、特許文献６を参照）、骨吸収の大きな要素としてＭＭＰ−９の活性の亢進が推定される。このＭＭＰ−９活性を阻害し、骨代謝のバランスを整えることにより、骨の老化（脆弱化）を防ぐことができると推定されているが、この様な機能を有する成分であって、日常摂取できるものはまだ見いだせていないのが現状である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
即ち、ＭＭＰ１、ＭＭＰ９及びＭＭＰ１３とを総合的に阻害する成分を見いだし、投与すれば、外観的老化と機能老化について、同時に抗うことが出来ると推定されるが、この様な特性を有する成分は今のところ見いだされていないのが現状である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明者らは、この様な状況に鑑みて、ＭＭＰ１、ＭＭＰ９及びＭＭＰ１３とを総合的に阻害し、総合的に老化に抗う手段を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、アカメガシワの抽出物からなる、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤がこの様な阻害効果を有していることを見いだし、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示すとおりである。
＜１＞  トウダイグサ科アカメガシワ（Mallotus japonicus Mueller-Arg）の抽出物からなる、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤を含有する、骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
＜２＞  前記マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の対象とするマトリックスメタロプロテアーゼは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−９及びＭＭＰ−１３であることを特徴とする、＜１＞に記載の骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
＜３＞  前記植物の抽出物は、１５３ｍＵ／μｇ（酵素活性／植物抽出物）溶液において、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ９及びマトリックスメタロプロテアーゼ１３の３種のＭＭＰに４０％以上の阻害作用を有するものである
ことを特徴とする、＜１＞又は＜２＞に記載の骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
＜４＞  次の工程を経て製造されるものであることを特徴とする、＜１＞〜＜３＞の何れかに記載の骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
（工程１）トウダイグサ科アカメガシワ（Mallotus japonicus Mueller-Arg）の植物体に抽出溶媒を加え、抽出物を作製する。
（工程２）前記抽出物の１５３ｍＵ／μｇ（酵素活性／植物抽出物）溶液において、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ９及びマトリックスメタロプロテアーゼ１３の３種のＭＭＰに４０％以上の活性阻害が存したものをマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤として選択する。
（工程３）選択された前記マトリックスプロテアーゼ阻害剤を製剤化のための成分とともに骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物に加工する。
＜５＞  食品であることを特徴とする、＜１＞〜＜４＞の何れかに記載の骨の老化防止、及び／又は関節の老化防止のための組成物。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、総合的な老化の予防又は改善のためのもの、即ち、皮膚の老化等の外観的な老化、関節炎などの関節部の老化、骨粗鬆症のような骨の老化など、機能的な老化を総合的に予防又は改善する為のものであって、トウダイグサ科アカメガシワ（Mallotus japonicus Mueller-Arg）の抽出物よりなることを特徴とする。抽出物の作製は、常法に従って行えば良く、植物体１質量部に対して、溶媒１〜１００質量部を加え、常温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、所望により濾過などで不溶物を取り除き、所望により減圧溜去、凍結乾燥等で溶媒を除去することも出来る。更に、これらの抽出物をカラムクロマトグラフィーや液液抽出などで分画精製することも出来る。カラムクロマトグラフィーとしては、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、「ダイアイオンＨＰ−２０」のようなイオン交換樹脂、ＯＤＳ等が好適に例示できる。勿論、植物体の一部又は全部を粉砕など加工しただけのものも本発明の抽出物に含まれる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
以下に示す処方に従って、皮膚外用剤を作製した。即ち、イ、ロの成分を８０℃に加温し、イを混練りしてゲルを形成させ、この中にハを加えて溶解させ、これに攪拌下徐々にロを加えて乳化し、攪拌冷却して油中水乳化剤形の皮膚外用剤１を得た。同様に操作して、抽出物１を水に置換したプラシーボ２も作製した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
＜試験例３＞
皮膚外用剤１とプラシーボ２とを、皮膚のハリ・弾力感の衰えで悩む４０〜５０歳の女性パネラー１０名を使用して、使用テストで評価した。１０名は平均年齢が同程度になるように、かたよりの無いように５名ずつ２群に群わけした。それぞれの群は、１日朝晩２回適量を塗布してもらい、これを６０日続けた。最後の投与の４８時間後に、肌の改善度合いを、スコア０：改善無し、スコア１：少し改善が感じられる、スコア２：改善したと感じる、スコア３：明瞭に改善した、スコア４：著しく改善した、の基準でスコアを賦してもらった。結果を表８に出現例数として示す。これより、改善実感とＭＭＰ１及びＭＭＰ９の抑制作用がリンクしていることが分かる。又、ＭＭＰ１３抑制作用も存することから、この皮膚外用剤は関節炎の際に関節付近の皮膚に投与し、関節炎を軽減することも出来る。