(57)【要約】  本発明は、水溶性多糖類、エポキシ架橋剤、塩基性化合物および溶媒を混合するステップ；および、前記混合液を１〜３０℃において真空乾燥して溶媒を除去するステップ；を含む水不溶性ゲル組成物の製造方法および水不溶性ゲル組成物を提供する。
2015500895.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性多糖類、エポキシ架橋剤、塩基性化合物および溶媒を混合するステップ；および
前記混合液を１〜３０℃において真空乾燥して溶媒を除去するステップ；を含む水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項２】
前記真空乾燥は、１〜３０ｍｍＨｇ下で行われるものである、請求項１に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項３】
前記溶媒を除去するステップは、水溶性多糖類の濃度を５０〜９９重量％に濃縮するものである、請求項１に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項４】
前記水溶性多糖類は、分子量が５０万〜５００万ダルトンである、請求項１に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項５】
前記水溶性多糖類は、溶媒重量１００部に対して１〜１００重量部である、請求項１に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項６】
前記水溶性多糖類は、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒアルロン酸塩、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ‐γ‐ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリガンマグルタミン酸塩、寒天（ａｇａｒ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、アルギン酸塩（ａｌｇｉｎａｔｅ）、カラギーナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、ファーセレラン（ｆｕｒｃｅｌｌａｒａｎ）、ペクチン（ｐｅｃｔｉｎ）、アラビアガム（ａｒａｂｉｃ  ｇｕｍ）、カラヤガム（ｋａｒａｙａ  ｇｕｍ）、トラガカントガム（ｔｒａｇａｃａｎｔｈ  ｇｕｍ）、ガティガム（ｇｈａｔｔｉ  ｇｕｍ）、グアーガム（ｇｕａｒ  ｇｕｍ）、ローカストビーンガム（ｌｏｃｕｓｔ  ｂｅａｎ  ｇｕｍ）、サイリウムシードガム（ｐｓｙｌｌｉｕｍ  ｓｅｅｄ  ｇｕｍ）、ゼラチン（ｇｌｅａｔｉｎ）、キチン（ｃｈｉｔｉｎ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、キサンタンガム（ｘａｎｔｈａｎｅ  ｇｕｍ）、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）、コンドロイチン‐４‐硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ‐４‐ｓｕｌｆａｔｅ）、コンドロイチン‐６‐硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ‐６‐ｓｕｌｆａｔｅ）およびスターチ（ｓｔａｒｃｈ）からなる群より選択される１種以上である、請求項１に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項７】
前記エポキシ架橋剤は、水溶性多糖類内のヒドロキシ基１モルに対して０．０１〜６０モル部である、請求項１に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項８】
前記エポキシ架橋剤は、エピクロロヒドリン（ｅｐｉｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒｉｎ）、エピブロモヒドリン（ｅｐｉｂｒｏｍｏｈｙｄｒｉｎ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ヘキサンジオールジグリシジルエーテル（１，６‐ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、プロピレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリエチレングリコンジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリプロピレングリコールジグリシディルエーテル（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル（ｎｅｏｐｅｎｔｙｌ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ジグリセロールポリグリシジルシジルエーテル（ｄｉｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、グリセロールポリグリシジルエーテル（ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、トリメチルプロパンポリグリシジルエーテル（ｔｒｉｍｅｔｈｌｙｐｒｏｐａｎｅ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ビスエポキシプロポキシエチレン（１，２‐（ｂｉｓ（２，３‐ｅｐｏｘｙｐｒｏｐｏｘｙ）ｅｔｈｙｌｅｎｅ）、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル（ｐｅｎｔａｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）およびソルビトールポリグリシジルエーテル（ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）からなる群より選択される１種以上である、請求項１に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項９】
前記塩基性化合物は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、リチウムを含むアルカリ金属を含む化合物である、請求項１に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の製造方法により製造された水不溶性ゲル組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、水不溶性ゲルを、組成物の総重量に対して１〜２０重量％含むものである、請求項１０に記載の水不溶性ゲル組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、水不溶性ゲルの膨潤度が３０〜２００であれば透明、膨潤度が１０〜３０未満であれば半透明の乳白色、および膨潤度が２〜１０未満であれば不透明の白色である、請求項１０に記載の水不溶性ゲル組成物。
【請求項１３】
前記組成物をｐＨ６．５〜７．５のリン酸緩衝溶液に入れ、膨潤および加圧滅菌したとき、最初投入された組成物重量に対して７０〜９９重量％が水不溶性ゲルとして残存するものである、請求項１０に記載の水不溶性ゲル組成物。
【請求項１４】
前記組成物の膨潤重量は、加圧滅菌後に残存する水不溶性ゲルの乾燥重量の２〜２００倍であるものである、請求項１３に記載の水不溶性ゲル組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水不溶性ゲル組成物およびその製造方法に関し、より具体的に、水溶性多糖類、エポキシ架橋剤、塩基性化合物および溶媒を混合し、低温真空乾燥して水不溶性ゲル組成物を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多糖類は、糖類が構成する繰り返し単位である天然水溶性高分子であって、水溶液となったときに発現される高い粘度により、ローション、軟膏、クリーム、溶液等の組成物内に含まれる多糖類の含有量を高く維持することが難しい。高い粘度は、組成物内における混合物の混合均一性を確保しにくくする。また、生体組織内に移植される組成物の場合は、生分解性速度が非常に重要である。生体組織に移植される物質は、毒性がなければならず、要求される機能を完了した後は、生体内の代謝活動によって分解および排出されることが要求される。代表的な多糖類であるヒアルロン酸は、人体内において挿入または移植された後、ヒアルロン酸の分子量、組成物ヒアルロン酸の濃度に関わらず、長くとも３〜４日すれば、代謝後に排出されるものと知られている。こうしたヒアルロン酸の短い人体内の代謝期間は、数ヶ月以上の人体内維持期間が要求される生体修復用材料としてはもちろんのこと、７〜１０日程度の維持期間が要求される手術後の組織癒着防止剤としても不適である。
【０００３】
多糖類を高濃度で含む組成物を作ろうとする場合に解決すべき問題として指摘されているのが、水に多糖類を溶かしたときに発生する高い粘度である。こうした問題を解決するために、多糖類の分子量を低くする方法、水溶液内浸透圧を高める方法、多糖類を微細な粉末状態にして分散させる方法、等が開発されてきた。
【０００４】
水溶性高分子である多糖類を水不溶性ゲルに転換するために開発された架橋技術は、架橋剤の新規発掘、多糖類の分子量調節、架橋反応溶液内の多糖類の濃度調節、架橋密度の調節、架橋密度の不均一性誘導、ならびに多糖類と架橋剤の間で生成される化学結合の種類を調節する技術に分類することができる。
【０００５】
ヒアルロン酸を水不溶性ゲルに転換するために使用される一般的な方法は、ヒアルロン酸とエポキシ系架橋剤を、ｐＨを１２以上に調節した水と混合し、４０〜６０℃程度の温度で数時間維持させることである。こうした架橋工程は、エポキシ系架橋剤とヒアルロン酸の反応を促進するという長所はあるが、強い塩基溶液と加熱によってヒアルロン酸の分子量が減少して、最終的に得られる水不溶性ゲルの機械的強度が非常に低くなるという短所がある。強塩基溶液と加熱によって発生するヒアルロン酸の分子量低下を補完するために、通常使用される１００万ダルトン水準のヒアルロン酸に代えて３００万ダルトン程度の高分子量ヒアルロン酸を適用したりもするため、経済性という側面において好ましくない。強塩基溶液と加熱によって発生する問題点を解決するための方法としては、ヒアルロン酸が溶けている溶液のｐＨを１２以下に下げたり、反応温度を４０℃より低くしたりするというものがある。しかし、ｐＨまたは反応温度を下げることになると、架橋反応に必要な時間が非常に長くなったり、架橋剤の使用量が増加したりするという短所が発生する。溶液相において進行されるヒアルロン酸架橋反応の短所を克服するために、固体状態であるヒアルロン酸を、エポキシ架橋剤を溶かした有機溶媒に含浸させる技術が開発されたりもしている。しかし、この技術を通じて得られる水不溶性ゲルの表面は架橋密度が高く、内部は架橋密度が低いか、または架橋がまったく行われないという短所がある。強塩基の溶液相において進行される架橋反応の短所であるヒアルロン酸といった多糖類の分子量低下を克服するための他の方法として、ｐＨ９以下の弱塩基性または蒸留水または酸性に調節された水にヒアルロン酸とエポキシ系架橋剤を溶解させた後、室温で乾燥させる技術が紹介されたりもしている。この技術を通じて、極少量の架橋剤だけでも乾燥重量に対して完全膨潤重量が２倍以下のヒアルロン酸ゲルを得ることができる。しかし、この技術を通じて得られた水不溶性のアルロン酸ゲルを生きているマウスの組織に移植した後、わずか７日で移植された水不溶性ゲルの３０％が分解された。こうした生分解特性は、数ヶ月以上の長期間、生体組織内において水不溶性ゲル状態を維持しなければならない分野には適用することが難しい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前記のような問題点を解決するために、本発明は、架橋工程中における多糖類の分子量低下を最小化するとともに、架橋密度は最大化する新規な水不溶性ゲル組成物の製造方法を提供することをその目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記のような目的を解決するために、本発明は、水溶性多糖類、エポキシ架橋剤、塩基性化合物および溶媒を混合するステップ；および
前記混合液を１〜３０℃において真空乾燥して溶媒を除去するステップ；を含む水不溶性ゲル組成物の製造方法を提供する。
【０００８】
本発明の一実施例において、前記真空乾燥は、１〜３０ｍｍＨｇ下で行われるものであってよい。
【０００９】
本発明の一実施例において、前記溶媒除去するステップは、水溶性多糖類の濃度を５０〜９９重量％に濃縮するものであってよい。
【００１０】
本発明の一実施例において、前記水溶性多糖類は、分子量が５０万〜５００万ダルトンであるものであってよい。
【００１１】
本発明の一実施例において、前記水溶性多糖類は、溶媒重量１００部に対して１〜１００重量部であるものであってよい。
【００１２】
本発明の一実施例において、前記水溶性多糖類は、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒアルロン酸塩、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ‐γ‐ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリガンマグルタミン酸塩、寒天（ａｇａｒ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、アルギン酸塩（ａｌｇｉｎａｔｅ）、カラギーナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、ファーセレラン（ｆｕｒｃｅｌｌａｒａｎ）、ペクチン（ｐｅｃｔｉｎ）、アラビアガム（ａｒａｂｉｃ  ｇｕｍ）、カラヤガム（ｋａｒａｙａ  ｇｕｍ）、トラガカントガム（ｔｒａｇａｃａｎｔｈ  ｇｕｍ）、ガティガム（ｇｈａｔｔｉ  ｇｕｍ）、グアーガム（ｇｕａｒ  ｇｕｍ）、ローカストビーンガム（ｌｏｃｕｓｔ  ｂｅａｎ  ｇｕｍ）、サイリウムシードガム（ｐｓｙｌｌｉｕｍ  ｓｅｅｄ  ｇｕｍ）、ゼラチン（ｇｌｅａｔｉｎ）、キチン（ｃｈｉｔｉｎ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、キサンタンガム（ｘａｎｔｈａｎｅ  ｇｕｍ）、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）、コンドロイチン‐４‐硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ‐４‐ｓｕｌｆａｔｅ）、コンドロイチン‐６‐硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ‐６‐  ｓｕｌｆａｔｅ）およびスターチ（ｓｔａｒｃｈ）からなる群より選択される１種以上であるものであってよい。
【００１３】
本発明の一実施例において、前記エポキシ架橋剤は、水溶性多糖類内のヒドロキシ基１モルに対して０．０１〜６０モル部であるものであってよい。
【００１４】
本発明の一実施例において、前記エポキシ架橋剤は、エピクロロヒドリン（ｅｐｉｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒｉｎ）、エピブロモヒドリン（ｅｐｉｂｒｏｍｏｈｙｄｒｉｎ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ヘキサンジオールジグリシジルエーテル（１，６‐ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、プロピレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリエチレングリコンジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル（ｎｅｏｐｅｎｔｙｌ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ジグリセロールポリグリシジルシジルエーテル（ｄｉｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、グリセロールポリグリシジルエーテル（ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、トリメチルプロパンポリグリシジルエーテル（ｔｒｉｍｅｔｈｌｙｐｒｏｐａｎｅ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ビスエポキシプロポキシエチレン（１，２‐（ｂｉｓ  （２，３‐ｅｐｏｘｙｐｒｏｐｏｘｙ）ｅｔｈｙｌｅｎｅ）、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル（ｐｅｎｔａｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）およびソルビトールポリグリシジルエーテル（ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）からなる群より選択される１種以上であるものであってよい。
【００１５】
本発明の一実施例において、前記塩基性化合物は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、リチウムを含むアルカリ金属を含む化合物であるものであってよい。
【００１６】
また、本発明は、水溶性多糖類、エポキシ架橋剤、塩基性化合物および溶媒を含む水不溶性ゲル組成物を提供する。
【００１７】
本発明の一実施例において、前記水溶性多糖類は、分子量が５０万〜５００万ダルトンであるものであってよい。
【００１８】
本発明の一実施例において、前記水溶性多糖類は、溶媒重量１００部に対して１〜１００重量部であるものであってよい。
【００１９】
本発明の一実施例において、前記エポキシ架橋剤は、水溶性多糖類内のヒドロキシ基を基準に０．０１〜６０モル部であるものであってよい。
【００２０】
本発明の一実施例において、前記組成物は、水不溶性ゲルを組成物の総重量に対して１〜２０重量％含むものであってよい。
【００２１】
本発明の一実施例において、前記組成物は、水不溶性ゲルの膨潤度が３０〜２００であれば透明、膨潤度が１０〜３０であれば半透明の乳白色、および膨潤度が２〜１０であれば不透明の白色であるものであってよい。
【００２２】
本発明の一実施例において、前記組成物をｐＨ６．５〜７．５のリン酸塩緩衝溶液に入れ、膨潤および加圧滅菌したとき、最初投入された組成物重量に対して７０〜９９重量％が水不溶性ゲルとして残存するものであってよい。
【００２３】
本発明の一実施例において、前記組成物の膨潤重量は、加圧滅菌後に残存する水不溶性ゲルの乾燥重量の２〜２００倍であるものであってよい。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の水不溶性ゲル組成物の製造方法によれば、少量の架橋剤を使用しつつ、かつ多糖類の分子量低下を最小化し、架橋密度は極大化するため、優れた強度および安定性を有する不溶性のゲルを得ることができ、かかる水不溶性ゲルを利用して組成物を製造する場合、組成物内の多糖類の含量を高めても、組成物の流れ性を確保することができる。したがって、化粧品、健康食品、医薬品において、多糖類を２〜３重量％以上のように多量混合した場合において発生する組成物の製造工程中の混合不均一、組成物の使用時に発生する流れ性消失による使用感低下を克服することができる。また、多糖類により構成された組成物を生体内に移植する場合は、最小１０日〜数ヶ月以上安定的に滞留できるようにするため、組織修復用組成物、手術後癒着防止剤、関節内滑液代替剤等の用途に使用することができる。また、生体内移植物として使用しようとする際に必ず経なければなら加圧滅菌にも安定であり、経済性にも優れる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本発明の一実施例に係るヒアルロン酸組成物の体積維持時間を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が本発明を容易に実施できるようにするために、本発明の好適な実施例について詳細に説明することとする。
【００２７】
本発明は、水溶性多糖類、エポキシ架橋剤、塩基性化合物および溶媒を混合するステップ；および、前記混合液を１〜３０℃において真空乾燥して溶媒を除去するステップ；を含む水不溶性ゲル組成物の製造方法を提供する。
【００２８】
以下、本発明の水不溶性ゲル組成物の製造方法をより具体的に説明する。
【００２９】
まず、水溶性多糖類、エポキシ架橋剤、塩基性化合物および溶媒を混合する。
【００３０】
本発明において、水溶性多糖類は、糖類を繰り返し単位とし、分子量が５０万ダルトン（ｄａｌｔｏｎ，Ｄａ）〜５００万ダルトンの水溶性高分子である。分子量が５０万ダルトン未満であると、水不溶性ゲルが形成されず、または形成されても加圧滅菌過程において水不溶性ゲルが消滅し、また５００万ダルトンを超えると、水溶性多糖類を溶かした溶液の粘度が高くなりすぎて混合均一性を得ることが難しい。水溶性多糖類は、熱、ｐＨおよび微生物汚染等によって分子量が減少しやすい特性を有する高分子である。したがって、架橋および洗浄、原料として投入された分子量、すなわち、初期分子量よりは、架橋のために遂行される工程が完了した後に確定される分子量、すなわち、最終分子量を変数として考慮しなければならない。したがって、本発明においては、架橋工程により水溶性多糖類の分子量が変化することを、粘度測定を通じて確認した。これについて、後述する実験例において確認することができる。
【００３１】
通常、高分子を架橋するにあたり、同一の架橋密度を付与する場合、高分子の分子量が増加すれば膨潤度は減少し、架橋されたゲルの機械的強度は増加する。多糖類の架橋反応もまた同一の結果を示す。したがって、同一の架橋密度を作り出す架橋工程に同一量の多糖類を使用する場合、分子量の高い多糖類を適用することが、水不溶性ゲルを高い収率で得る方法の一つである。
【００３２】
前記水溶性多糖類は、特に制限されるものではないが、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒアルロン酸塩、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ‐γ‐ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリガンマグルタミン酸塩、寒天（ａｇａｒ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、アルギン酸塩（ａｌｇｉｎａｔｅ）、カラギーナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、ファーセレラン（ｆｕｒｃｅｌｌａｒａｎ）、ペクチン（ｐｅｃｔｉｎ）、アラビアガム（ａｒａｂｉｃ  ｇｕｍ）、カラヤガム（ｋａｒａｙａ  ｇｕｍ）、トラガカントガム（ｔｒａｇａｃａｎｔｈ  ｇｕｍ）、ガティガム（ｇｈａｔｔｉ  ｇｕｍ）、グアーガム（ｇｕａｒ  ｇｕｍ）、ローカストビーンガム（ｌｏｃｕｓｔ  ｂｅａｎ  ｇｕｍ）、サイリウムシードガム（ｐｓｙｌｌｉｕｍ  ｓｅｅｄ  ｇｕｍ）、ゼラチン（ｇｌｅａｔｉｎ）、キチン（ｃｈｉｔｉｎ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、キサンタンガム（ｘａｎｔｈａｎｅ  ｇｕｍ）、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）、コンドロイチン‐４‐硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ‐４‐ｓｕｌｆａｔｅ）、コンドロイチン‐６‐硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ‐６‐  ｓｕｌｆａｔｅ）およびスターチ（ｓｔａｒｃｈ）からなる群より選択される１種以上であるものであってよい。特に、ヒアルロン酸であることが好ましい。
【００３３】
前記水溶性多糖類は、溶媒重量１００部に対して１〜１００重量部であることが好ましく、より好ましくは、５〜４０重量部であってよい。水溶性多糖類が１重量部未満で含まれると、真空条件において乾燥する際にバンピング（ｂｕｍｐｉｎｇ）が発生しやすいため産業的利用が難しく、１００重量部超えで含まれると、水溶性多糖類が溶けている溶液の粘度が高くなるため混合均一性を得ることが難しい。
【００３４】
本発明において、エポキシ架橋剤とは、エポキシ官能基を２つ以上含む化合物をいう。
【００３５】
前記エポキシ架橋剤は、特に制限されるものではないが、エピクロロヒドリン（ｅｐｉｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒｉｎ）、エピブロモヒドリン（ｅｐｉｂｒｏｍｏｈｙｄｒｉｎ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ヘキサンジオールジグリシジルエーテル（１，６‐ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、プロピレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリエチレングリコンジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル（ｎｅｏｐｅｎｔｙｌ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ジグリセロールポリグリシジルシジルエーテル（ｄｉｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、グリセロールポリグリシジルエーテル（ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、トリメチルプロパンポリグリシジルエーテル（ｔｒｉｍｅｔｈｌｙｐｒｏｐａｎｅ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ビスエポキシプロポキシエチレン（１，２‐（ｂｉｓ  （２，３‐ｅｐｏｘｙｐｒｏｐｏｘｙ）ｅｔｈｙｌｅｎｅ）、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル（ｐｅｎｔａｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）およびソルビトールポリグリシジルエーテル（ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）からなる群より選択される１種以上であってよい。特に、ブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ、ＢＤＤＥ）であることが好ましい。
【００３６】
前記エポキシ架橋剤は、水溶性多糖類内のヒドロキシ（ｈｙｄｒｏｘｙ）基１モルに対して０．０１〜６０モル部であるものであってよく、好ましくは０．０５〜４０モル部、より好ましくは０．１〜２０モル部であってよい。すなわち、水溶性多糖類を構成する繰り返し単位内に存在する架橋可能なヒドロキシ官能基のモル数に対して含量が定められる。架橋反応を通じて確保される多糖類の水不溶性ゲルの物性を調節するためには、架橋反応を行うために投入されるエポキシ架橋剤の投入量よりは、架橋工程中にエポキシ架橋剤と多糖類間の実際反応量が重要である。どれだけ多くの架橋剤を投入するとしても、架橋反応に関与できないならば、未反応架橋剤を除去する洗浄工程を通じて除去されなければならない。したがって、前記範囲に該当する量の架橋剤を使用する場合、実際に架橋反応に関与する最適量の架橋剤を使用することができるようになる。
【００３７】
すなわち、エポキシ架橋剤が０．０１モル部未満で含まれると、架橋が十分に行われないため水不溶性ゲルを得ることが難しく、６０モル部超で含まれると、架橋を通じた水溶性多糖類の物性改善効果は高くならず、未反応架橋剤による危険性と洗浄費用増加による経済的損失のみが増加する。
【００３８】
本発明において、塩基性化合物は、ｐＨ調整剤であって、ｐＨを１２以上となるようにする通常の塩基性化合物である。前記塩基性化合物は、水溶性であり、水と混合した後、ｐＨ１２以上となる。多糖類とエポキシ系架橋剤が溶けている溶液のｐＨが４以下である場合は、ヒアルロン酸とエポキシ系架橋剤間にエステル（ｅｓｔｅｒ）結合が主に生成され、この溶液のｐＨが１２以上である場合は、ヒアルロン酸とエポキシ系架橋剤間のエーテル（ｅｔｈｅｒ）結合が主に生成され、この溶液のｐＨが４〜１２である場合は、ヒアルロン酸とエポキシ系架橋剤間でエステル結合とエーテル結合が混在した状態となるため、ｐＨを調節することにより架橋結合の種類を制御することができる。本発明の場合、塩基性状態において架橋結合を進行させるので、エーテル結合が生成される。後述する実験例において確認することができるように、エーテル架橋結合が加圧滅菌工程を経る場合、さらに安定的である。
【００３９】
前記塩基性化合物は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、リチウムを含むアルカリ金属を含む化合物であるものであってよい。たとえば、水酸化ナトリウムが好ましいが、これに限定されるものではない。
【００４０】
本発明においては、溶媒は、水であることが好ましい。
【００４１】
その後、前記混合液を１〜３０℃において真空乾燥して溶媒を除去する。
【００４２】
このステップは、混合液を低温真空乾燥するものであって、本発明において低温乾燥とは、水の沸点を考慮して圧力を調節した真空乾燥であり、乾燥物の温度が１〜３０℃となるように維持することが好ましく、１〜３０℃において水の沸点となる圧力、すなわち、１〜３０ｍｍＨｇ以内の圧力を維持し、乾燥を通じて架橋反応用混合物から蒸発される水を持続的に除去する工程である。前記溶媒を除去するステップを通じて、水溶性多糖類の濃度が５０〜９９重量％、好ましくは５０〜９０重量％に濃縮される。
【００４３】
温度が１℃未満であると、組成物が真空乾燥中に凍結して、乾燥工程が完了した後に得られる組成物は多孔性のスポンジ（ｓｐｏｎｇｅ）となるため、本発明において追求しようとする生分解抵抗性の改善を得ることができず、３０℃超であると、強塩基条件において発現される分子量低下が急激に速くなるため、本発明において追求しようとする生分解抵抗性の改善を確保することが難しい。
【００４４】
また、圧力が１ｍｍＨｇ未満であると、蒸発潜熱により乾燥される組成物の温度が氷点以下となって凍るようになり、結果的に多孔質のスポンジ構造となって生分解抵抗性の改善効果を得ることが難しく、また、３０ｍｍＨｇ超であると、水分除去速度が遅すぎて迅速な乾燥が行われず、工程時間が非常に長くなって経済的実益が少なくなる。
【００４５】
前記真空乾燥によって溶媒が除去されるとともに、水溶性多糖類およびエポキシ架橋剤間の架橋結合が起こるようになり、水不溶性ゲルが形成される。３０℃以下の低温真空乾燥工程を通じて、強塩基水溶液状態において発生する水溶性多糖類の分子量低下を抑制できることを確認した。
【００４６】
本発明において、水不溶性ゲルとは、線形構造、主鎖に枝の付いた枝構造、または放射状の構造を有する水溶性多糖類を架橋して３次元網目構造にしたものであって、水に対する溶解性はなく、水において膨潤のみなされるものである。こうした水不溶性ゲルの物性を左右する主要変数は、架橋反応に使用された高分子の分子構造と分子量、架橋密度、ならびに架橋結合の種類である。
【００４７】
本発明の製造方法によると、架橋工程中に発生する多糖類の分子量低下を最小化し、多糖類とエポキシ架橋剤間の架橋反応の反応効率を極大化し、架橋反応を通じて得られる水不溶性ゲルが緩衝溶液と混合されて加圧滅菌される条件においても安定的に水不溶性ゲル状態を維持することができるという特徴がある。
【００４８】
また、本発明は、水溶性多糖類、エポキシ架橋剤、塩基性化合物および溶媒を含む水不溶性ゲル組成物を提供する。
【００４９】
前記組成物は、水不溶性ゲルを、組成物の総重量に対して１〜２０重量％含むことが好ましい。水不溶性ゲルが１重量％未満であると、流れ性が大きすぎて、組織内に注入された後に組織内に固定されておらず実用性が低下し、２０重量％超であると、流れ性が悪すぎて、注射針等を利用して注入することが不可能である。
【００５０】
本発明に係る水不溶性ゲル組成物は、水不溶性ゲルの膨潤度が３０〜２００であれば透明、膨潤度が１０〜３０であれば半透明の乳白色、および膨潤度が２〜１０であれば不透明の白色であってよい。従来、商品化されて販売されているヒアルロン酸水不溶性ゲルを含む組成物は、通常、完全透明な状態である。しかし、本発明を通じて得られる水不溶性ゲルを含む組成物は、組成物内のヒアルロン酸水不溶性ゲルの膨潤度に応じて外観が異なって現れる。これは、膨潤度が低いほど、光の散乱度が変化して透明度が低くなることに起因する。
【００５１】
本発明に係る水不溶性ゲル組成物をｐＨ６．５〜７．５のリン酸緩衝溶液に入れ、膨潤および加圧滅菌した際に、最初投入された組成物重量に対して７０〜９９重量％が水不溶性ゲルとして残存するものであってよい。前記リン酸塩緩衝溶液は、リン酸濃度が０．００１Ｍ以上であることが好ましい。
【００５２】
本発明において、加圧滅菌は、一般的に知られている加圧滅菌であれば制限されるものではなく、たとえば、約１２１℃で２０分間の加圧滅菌を実施するものであってよい。
【００５３】
また、前記組成物の膨潤重量は、加圧滅菌後に残存する水不溶性ゲルの乾燥重量の２〜２００倍であるものであってよい。すなわち、加圧滅菌後に残存する水不溶性ゲルを等張液に入れ、膨潤させた膨潤重量が加圧滅菌後に残存する水不溶性ゲルの乾燥重量の２〜２００倍であるものである。膨潤重量が２倍未満であると、水不溶性ゲルの強度が強すぎて微細粒子に製造することが難しく、２００倍超であると、生分解抵抗性を改善するとした本発明の目的を達成することができない。
【００５４】
架橋剤に存在する架橋反応が可能な官能基のうちいずれか一つでも未反応状態、すなわち、不完全架橋反応状態となると、生体組織内に移植される組成物の原料として水不溶性ゲルを使用する場合、移植された組成物の安全性に否定的な影響を及ぼす。したがって、本発明においては、架橋反応後に得られる架橋された水不溶性ゲル内には、不完全架橋された架橋剤を最小化するために架橋工程を経た水不溶性ゲルを洗浄した後に再乾燥して、洗浄後に得られた水不溶性ゲルの膨潤度と再乾燥後に得られた水不溶性ゲルの膨潤度とを比較するものであって、不完全架橋された架橋剤が最小化される架橋条件を最適化した。
【００５５】
本発明に係る水不溶性ゲル組成物の製造方法および水不溶性ゲル組成物によれば、少量の架橋剤を利用して高分子量の水溶性多糖類が均一に混合された水不溶性ゲル組成物を得ることができ、かかる水不溶性ゲル組成物は、高含量の多糖類を含有しながらも、注射針を介して注射が可能な程度に流れ性に優れ、人体内挿入物として使用しようとする際に必ず経なければならない加圧滅菌にも安定であって、低い膨潤度を維持し、経済性および品質にもまた優れる。したがって、本発明の水不溶性ゲル組成物は、食品、化粧品、医薬品、医療機器用途として、安定化剤、保湿剤、分散補助剤、粘度調節剤、薬物送達用担体、組織修復用充填物、手術後癒着防止膜形成物等として使用することができる。より具体的には、注射薬物担体用組成物、粘膜および経皮吸収薬物担体用組成物、経口用薬物担体用組成物、生体組織修復用組成物、手術後生体組織癒着防止用組成物、成形用充填組成物、関節挿入用組成物、パッチ型傷治療ドレッシング用組成物、骨関節炎治療用組成物、眼球手術補助注射用組成物、ドライアイ治療用組成物、シワ治療注射用組成物、歯茎治療用組成物、鼓膜穿孔治療用組成物、健康食品組成物または化粧品組成物として使用されてよい。
【００５６】
以下の実施を通じて、本発明がさらに詳細に説明される。ただし、実施例は、本発明を例示するためのものであって、これらのみをもって本発明の範囲が限定されるものではない。
【００５７】
［比較例１］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、分子量１４０万のヒアルロン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ、以下ＨＡ‐Ｎａ）１ｇを入れ、ＰＢＳ７．０を加えてＨＡ‐Ｎａの濃度が０．５％となるようにした後、透明な溶液になるまで撹拌した。
【００５８】
［比較例２］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１３）９ｇに分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇを入れ、透明な溶液になるまで撹拌した。攪拌が完了すると、４０℃の水槽で４時間保管した後、ＰＢＳ７．０に２０倍希釈してＨＡ‐Ｎａの濃度が０．５％になるようにした。
【００５９】
［比較例３］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１３）９ｇに分子量が１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇを入れ、透明な溶液になるまで撹拌した。攪拌が完了すると、作製されたＨＡ‐Ｎａ溶液をポリエチレン板の上に載せ、厚さ２ｍｍになるように押し広げて４０℃に設定された加熱オーブンに入れ、２４時間乾燥させ、ＰＢＳ７．０に希釈してＨＡ‐Ｎａ濃度が０．５％になるようにした。
【００６０】
［比較例４］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１３）９ｇに分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇを入れ、透明な溶液になるまで撹拌した。攪拌が完了すると、作製されたＨＡ‐Ｎａ溶液をポリエチレン板の上に載せ、厚さ２ｍｍになるように押し広げて室温で４日間乾燥させ、ＰＢＳ７．０に希釈してＨＡ‐Ｎａ濃度が０．５％になるようにした。
【００６１】
［比較例５］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１３）９ｇに分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇを入れ、透明な溶液になるまで撹拌した。攪拌が完了すると、作製されたＨＡ‐Ｎａ溶液をポリエチレン板の上に載せ、厚さ２ｍｍになるように押し広げて４０℃に設定した真空オーブンに入れ、１０ｍｍＨｇ以下になるように圧力を調節して２４時間乾燥させた後、ＰＢＳ７．０に希釈してＨＡ‐Ｎａ濃度が０．５％になるようにした。
【００６２】
［実施例１］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１３）９ｇに分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇを入れ、透明な溶液になるまで撹拌した。攪拌が完了すると、製造されたＨＡ‐Ｎａ溶液をポリエチレン板の上にのせ、厚さ２ｍｍになるように押し広げて３０℃に設定した真空オーブンに入れ、１０ｍｍＨｇ以下になるように圧力を調節して２４時間乾燥させた後、ＰＢＳ７．０に希釈してＨＡ‐Ｎａ濃度が０．５％になるようにした。
【００６３】
［実験例１］ディスク粘度計を利用した粘度測定
前記比較例１〜５および実施例１による組成物の粘度を測定する実験を実施した。Ｂｒｏｏｋ  ｆｉｌｅｄディスク粘度計を利用して、０．０２Ｍリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．０、ＮａＣｌ０．８重量％、以下、ＰＢＳ７．０）に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量１４０万）の濃度が０．５重量％になるようにした溶液の粘度を測定した。粘度測定温度は２５℃、ディスク規格は＃６２、ディスク回転速度は３０ｒｐｍであった。
【００６４】
その結果を表１に示した。表１から見られるところのように、比較例１と比較例２〜５、実施例１を通じて、強塩基を適用する条件においてヒアルロン酸の分子量は急激に減少することを確認した。そして、強塩基水溶液状態において発生するヒアルロン酸の分子量低下を、３０℃以下の低温真空工程を通じて抑制することができることを確認した。
【００６５】
【表１】
2015500895.tif 000003
【００６６】
［比較例６］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１３）９ｇに分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇ、ＢＤＤＥ２００ｍｇを入れ、透明な溶液になるまで撹拌した。攪拌が完了すると、４０℃の水槽で４時間保管した後に、１ｍｍ目のサイズを有する篩を介して粉砕した。架橋反応を遂行し、粉砕された試料のうち１ｇを１０００ｇのＰＢＳ７．０に入れ、２４時間撹拌を実施した。
【００６７】
［実施例２］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１３）９ｇに分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇ、ＢＤＤＥ２００ｍｇを入れ、透明な溶液になるまで撹拌して架橋用混合物を製造した。準備された架橋用混合物に対し実施例１において実施した真空乾燥を２４時間実施した後、乾燥した架橋用混合物のうち０．１ｇを１ｋｇのＰＢＳ７．０に入れて２４時間撹拌した。
【００６８】
［実験例２］架橋反応率測定
前記比較例６および実施例２による組成物の架橋工程に基づいて投入された架橋剤が架橋反応に関与する割合、すなわち、架橋反応率を評価した。各組成物の攪拌を完了し、上澄液を取って未反応ＢＤＤＥを測定した。架橋反応工程を経た架橋用混合物をＰＢＳ７．０で洗浄した後、洗浄に使用されたＰＢＳ７．０に含まれているブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ、以下ＢＤＤＥ）を、ガスクロマトグラフィー（ｇａｓ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、以下ＧＣ）を通じて測定した。内部標準物質としては、ネオペンチルジグリシジルエーテル（ｎｅｏｐｅｎｔｙｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ、以下ＮＰＤＧＥ）を使用した。詳細な測定条件は、以下のとおりである。
【００６９】
＜未反応ＢＤＤＥ測定条件＞
１）装備：Ａｇｉｌｅｎｔ  ６８９０ＧＣ‐５９７５Ｂ  ＭＳＤ
２）ガスクロマトグラフィーパラメータ（ＧＣ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ）
（１）カラム（ｃｏｌｕｍｎ）：ＤＢ‐５ＭＳ（内径０．２５ｍｍ、長さ３０ｍ、コーティングフィルムの厚み０．２５μｍ）
（２）注入具温度（Ｉｎｊｅｃｔｏｒ  ｔｅｍｐ．）：２６０℃
（３）注入方式（Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｍｏｄｅ）：Ｈｅ，ｓｐｌｉｔｌｅｓｓ，ｐｕｒｇｅ  ｉｎ  １ｍｉｎ．
（４）移動相速度（Ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ）：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
（５）注入体積（Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｖｏｌｕｍｅ）：１μｌ
（６）オーブン温度（Ｏｖｅｎ  ｔｅｍｐ．）：８０℃、２分→１０℃／分で昇温→２００℃、０分→２５℃／分で昇温→２５０℃、０分
３）質量分析器パラメータ（ＭＳ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ）
（１）溶媒保持時間（Ｓｏｌｖｅｎｔ  ｄｅｌａｙ）：８分
（２）クワッド温度（Ｑｕａｄ  ｔｅｍｐ．）：１５０℃
（３）ソース温度（Ｓｏｕｒｃｅ  ｔｅｍｐ．）：２５０℃
【００７０】
【表２】
2015500895.tif 000004
【００７１】
測定結果を表３に示した。表３から見られるように、比較例６と実施例２を比較した結果、通常、多糖類架橋のために使用される溶液相架橋反応よりも、真空乾燥工程がより高い架橋反応率を示すということを確認した。架橋工程において架橋反応が高いということは、架橋剤の投入量を少なくしても、十分に架橋された水不溶性ゲルを得ることができるということを意味する。
【００７２】
【表３】
2015500895.tif 000005
【００７３】
［比較例７〜９］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）３つに、分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇずつをそれぞれ入れ、蒸留水、塩化水素を利用してｐＨを１に調整した塩化水素水溶液、ならびに水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１２に調整した水酸化ナトリウム水溶液をそれぞれ９ｇずつ入れた後、架橋剤としてブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ、以下ＢＤＤＥ）を５０ｍｇそれぞれ添加した。ＢＤＤＥを添加した後、透明な溶液になるまで撹拌して架橋用混合物を製造した。攪拌が完了した後、実施例１と同一の方法の真空乾燥を２４時間実施した。
【００７４】
［実施例３〜５］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）３つに、分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇずつをそれぞれ入れ、水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１２．５、１３、１４に調整した水酸化ナトリウム水溶液をそれぞれ９ｇずつ入れた後、架橋剤としてＢＤＤＥを５０ｍｇずつそれぞれ添加した。ＢＤＤＥを添加した後、透明な溶液になるまで撹拌して架橋用混合物を完成した。攪拌が完了した後、架橋用混合物のｐＨを測定し、実施例１と同一の方法の真空乾燥を２４時間実施した。
【００７５】
［実験例３］加圧滅菌時の安定性測定
多糖類で構成された水不溶性ゲルを活用するにあたって必ず経なければなら加圧滅菌工程において安定的であるかどうかについて、前記比較例７〜９および実施例３〜５の組成物を通じて確認することとした。
【００７６】
乾燥した前記比較例７〜９および実施例３〜５の各組成物を２００ｇのＰＢＳ７．０に入れ、２４時間保管した後、ＰＢＳ７．０に浸漬された状態で、１２１℃において１５分間加圧滅菌した。加圧滅菌の際、水不溶性ゲルをリン酸塩緩衝溶液内で完全に膨潤させた後、加圧滅菌を実施した。水不溶性ゲルの安定性を確認するために、加圧滅菌された水不溶性ゲルを蒸留水で追加洗浄後、乾燥して重量を測定した。また、前記比較例７〜９および実施例３〜５の組成物のｐＨを、ｐＨメーターを利用して測定した。滅菌安定性は、下記式１を通じて計算した。その結果を表４に示した。
【００７７】
［数１］
滅菌安定性（％）＝（加圧滅菌後の水不溶性ゲル乾燥重量／加圧滅菌前の水不溶性ゲル乾燥重量）×１００
【００７８】
エポキシ系架橋剤は、多糖類が溶解された溶液のｐＨに応じて、ｐＨが酸性であればエステル（ｅｓｔｅｒ）、ｐＨが塩基性であればエーテル（ｅｔｈｅｒ）結合を架橋結合として生成する。表４から見られるように、加圧滅菌工程後にも水不溶性ゲルを維持するためには、多糖類とエポキシ架橋剤、蒸留水、ならびにｐＨ調節剤を混合して製造した架橋用混合物のｐＨが１２以上となって、エーテル（ｅｔｈｅｒ）結合を十分に生成しなければならないことを確認した。
【００７９】
【表４】
2015500895.tif 000006
【００８０】
［比較例１０および１１］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）２つに、分子量１４０万ダルトンのＨＡ‐Ｎａ１ｇずつをそれぞれ入れ、水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１３に調整した水酸化ナトリウム水溶液をそれぞれ９ｇずつ入れた後、架橋剤としてＢＤＤＥを０．１ｍｇ（０．０２モル％）、３００ｍｇ（６０モル％）それぞれ添加した。ＢＤＤＥを添加した後、透明な溶液になるまで撹拌して架橋用混合物を完成した。攪拌が完了した後、実施例１と同一の方法の真空乾燥を２４時間実施した。乾燥した架橋用混合物を２００ｇのＰＢＳ７．０に入れ、２４時間保管した後、水不溶性ゲルの存在有無を確認した。
【００８１】
［実施例６〜９］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）４つに、分子量１４０万ダルトンのＨＡ‐Ｎａ１ｇずつをそれぞれ入れ、水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１３に調整した水酸化ナトリウム水溶液をそれぞれ９ｇずつ入れた後、架橋剤としてＢＤＤＥを０．２５ｍｇ（０．０５モル％）、０．５ｍｇ（０．１モル％）、５０ｍｇ（１０モル％）、２００ｍｇ（４０モル％）をそれぞれ添加した。ＢＤＤＥを添加した後、透明な溶液になるまで撹拌して架橋用混合物を完成した。実施例１と同一の方法の真空乾燥を２４時間実施した。乾燥した架橋用混合物を２００ｇのＰＢＳ７．０に入れ、２４時間保管した後、ＰＢＳ７．０に入れておいた状態で、１２１℃において１５分間加圧滅菌した。水不溶性ゲルの安定性を確認するために、加圧滅菌された水不溶性ゲルを蒸留水で追加洗浄後、乾燥して重量を測定した。
【００８２】
［実験例４］架橋剤投入量に応じた物性測定
架橋剤投入量の下限および上限を確認するために、比較例１０および１１、実施例６〜９を比較した。架橋剤投入量およびゲル収率は、それぞれ下記式２および式３によって計算した。その結果を表５に示した。その結果、エポキシ系架橋剤は、架橋密度を基準として０．０５〜４０モル％投入することが、低温真空乾燥工程の実施に適するということを確認した。架橋剤の投入量増えるとともに、ゲル収率がむしろ減少し、水不溶性ゲルの機械的強度が低下することは、エポキシ系架橋剤が架橋結合を作ったりもするが、同時に多糖類の分子鎖を切断する効果があることを示している。
【００８３】
［数２］
架橋剤投入量（モル％）＝［（架橋剤内のエポキシ官能基数×架橋剤投入量（ｇ）／架橋剤分子量（ｇ／ｍｏｌ））／（水溶性高分子の繰り返し単位内の結合可能なヒドロキシ官能基数×多糖類投入量（ｇ）／多糖類繰り返し単位の分子量（ｇ／ｍｏｌ））］×１００
【００８４】
［数３］
ゲル収率（％）＝（投入された多糖類の重量／得られた水不溶性ゲル内の多糖類の重量）×１００
【００８５】
【表５】
2015500895.tif 000007
【００８６】
［比較例１２〜１５］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）４つに、分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇずつをそれぞれ入れ、水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１３に調整した水酸化ナトリウム水溶液９ｇと、架橋剤としてＢＤＤＥ１０ｍｇ（２モル％）を４つのチューブにそれぞれ入れ、透明な溶液になるまで撹拌して架橋用混合物を完成した。攪拌が完了した後、それぞれ異なるチューブに入れられた架橋用混合物それぞれについて、実施例１と同一の方法の真空乾燥を実施するが、乾燥開始から１時間単位で、乾燥中の架橋用混合物を一つずつ順に取り出して二つに分けた。一方は、水分含量測定用として使用し、他方は、５０ｇのＰＢＳ７．０に入れ、２４時間保管した。ＰＢＳ７．０に入れた試料を肉眼で観察して水不溶性ゲルが生成されたかを確認し、ＰＢＳ７．０に入れておいた状態で、１２１℃において１５分間加圧滅菌した。水不溶性ゲルの安定性を確認するために、加圧滅菌された水不溶性ゲルを蒸留水で追加洗浄後、乾燥して重量を測定した。
【００８７】
［実施例１０〜１５］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）６つに、分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇずつをそれぞれ入れ、水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１３に調整した水酸化ナトリウム水溶液９ｇと、架橋剤としてＢＤＤＥ１０ｍｇ（２モル％）を４つのチューブにそれぞれ入れ、透明な溶液になるまで撹拌して架橋用混合物を完成した。攪拌が完了した後、実施例１と同一の方法の真空乾燥を実施した。真空乾燥を実施するが、乾燥開始から５時間目から１時間単位で試料を一つずつ取り出して二つに分けた。一方は、水分含量測定用として使用し、他方は、５０ｇのＰＢＳ７．０に入れ、２４時間保管した。ＰＢＳ７．０に入れた試料を肉眼で観察して水不溶性ゲルが生成されたかを肉眼で確認し、ＰＢＳ７．０に入れておいた状態で、１２１℃において１５分間加圧滅菌した。水不溶性ゲルの安定性を確認するために、加圧滅菌された水不溶性ゲルを蒸留水で追加洗浄後、乾燥して重量を測定した。
【００８８】
［実験例５］乾燥時間に応じた水分含量測定
前記比較例１２〜１５および実施例１０〜１５による組成物を、低温真空乾燥を通じて架橋反応を遂行する際に、適した架橋時間を決定するために、架橋時間による架橋効率を評価した。このために、低温真空乾燥時間別に準備された試料を減熱・残量測定器に入れ、水分含量を測定した。測定は、１０５℃において３時間の間、５分間隔で重量変化を測定する条件で実施した。測定結果を表６に示した。
【００８９】
その結果、低温真空乾燥工程において、架橋時間よりは架橋用混合物内に含まれている水の含量がより重要な要素であることを確認し、水の含量が架橋用混合物内に２０％以下となって以降、１時間以上を維持することが適正であることを確認した。
【００９０】
【表６】
2015500895.tif 000008
【００９１】
［比較例１７および１８］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）２つに、水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１３に調整した水酸化ナトリウム水溶液４ｇを入れ、分子量が１４０万のＨＡ‐Ｎａをそれぞれ２０ｍｇ、６ｇずつ追加した。ＨＡ‐Ｎａが２０ｍｇ投入された方には架橋剤を投入せず、６ｇ混合された方（比較例１８）には架橋剤であるＢＤＤＥを６０ｍｇ（２モル％）投入し、攪拌した。ＨＡ‐Ｎａ６ｇを投入した場合、透明な溶液を得ることが不可能であった。攪拌が完了した後、実施例１と同一の方法の真空乾燥を実施し、真空乾燥後、ＰＢＳ７．０に入れ、２４時間保管した。
【００９２】
［実施例１６および２２］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）7つに、水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１３に調整した水酸化ナトリウム水溶液４ｇを入れ、分子量が１４０万のＨＡ‐Ｎａをそれぞれ４０ｍｇ、２００ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ、１．６ｇ、ならびに４ｇを追加した後、攪拌した。攪拌が完了した後、実施例１と同一の方法の真空乾燥を実施し、真空乾燥後、ＰＢＳ７．０に入れてＨＡ‐Ｎａの濃度が０．５重量％となるようにした後、ＨＡ‐Ｎａが完全に溶けたら、粘度測定をディスク粘度計を利用して実施した。実施例２２は、乾燥が完了した後、ＰＢＳ７．０に入れ、２４時間攪拌を実施した後、１２１℃において１５分間加圧滅菌し、再び蒸留水で洗浄して再乾燥した。
【００９３】
［実験例６］水溶性多糖類の投入量に応じた物性測定
前記比較例１７および１８ならびに実施例１６〜２２による組成物の水溶性多糖類投入量を測定した。多糖類を架橋して水不溶性ゲルを得る工程において、多糖類の濃度を初期から高く維持すれば、架橋用混合物内の水分含量を減らすことができるため、架橋反応速度を増大することができる。
【００９４】
結果を下記表７に示した。比較例１８から見られるように、架橋用混合物内の多糖類含量を極端に高めると、水不溶性ゲル収率がむしろ低くなることが分かる。こうした結果は、高すぎる濃度の多糖類を混合して、架橋用混合物内の多糖類と架橋剤の混合均一性が悪くなるとともに示される結果と見られる。これに対し、混合物の均一性を容易にするために、架橋用混合物内の多糖類の濃度を低くすることもやはり短所があった。比較例１７から見られるように、低粘度の架橋用混合物を得ようとして多糖類添加量を極端に低くすると、通常使用する溶液相架橋工程を通じて示されるＨＡ‐Ｎａ分子量低下と類似した結果を示した。実施例１６〜２２のように、多糖類の反応時には、多糖類を溶解するための溶媒である強塩基水溶液の重量１００部に対して、多糖類が１〜１００重量部、実質的には５〜６６重量部が適するということを確認した。
【００９５】
【表７】
2015500895.tif 000009
【００９６】
［比較例１９〜２３］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、分子量が数平均分子量を基準として７，１００Ｄａ、８３，０００Ｄａ、４２万Ｄａ、ならびに１４０万ＤａのＨＡ‐Ｎａを下記表８のとおり入れ、水酸化ナトリウム１ｇを利用してｐＨを１３に調整した水酸化ナトリウム水溶液９ｇ、ＢＤＤＥ１０ｍｇ（２モル％）を混合および攪拌した。攪拌が完了した後、架橋用混合物が完全に透明な状態になると、実施例１と同一の方法の真空乾燥を２４時間実施し、真空乾燥した後、ＰＢＳ７．０に入れて２４時間撹拌した。２４時間ＰＢＳ７．０洗浄後、水不溶性ゲルが存在するかを肉眼で確認し、１２１℃において１５分間加圧滅菌し、再び蒸留水で洗浄して再乾燥した。
【００９７】
［実施例２３］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、分子量が数平均分子量を基準として４２万ＤａのＨＡ‐Ｎａ０．５ｇ、ならびに１４０万ＤａのＨＡ‐Ｎａ０．５ｇ、水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１３に調整した水酸化ナトリウム水溶液９ｇ、ＢＤＤＥ１０ｍｇ（２モル％）を混合し、攪拌した。架橋用混合物が完全に透明な状態になると、実施例１と同一の方法の真空乾燥を実施し、乾燥が完了した後、完全に透明になるまで攪拌した。攪拌が完了した後、架橋用混合物が完全に透明な状態になると、実施例１と同一の方法の真空乾燥を２４時間実施し、真空乾燥後、ＰＢＳ７．０に入れて２４時間撹拌した。２４時間ＰＢＳ７．０洗浄後、水不溶性ゲルが存在するかを肉眼で確認し、１２１℃において１５分間加圧滅菌し、再び蒸留水で洗浄して再乾燥した。
【００９８】
［実験例７］水溶性多糖類の分子量に応じた物性測定
前記比較例１９〜２３および実施例２３による組成物の、分子量の異なる多糖類に対するゲル収率を測定した。
【００９９】
ヒアルロン酸の場合、分子量が百万Ｄａ程度であるものを架橋反応に適用することが一般的であるが、架橋工程中に発生する分子量低下に対応するために、数百万Ｄａ以上の分子量を有するヒアルロン酸を架橋反応に適用したりもする。しかし、こうした方法は、費用増加とともに、架橋用混合物製造時における高い粘度による混合均一性確保の問題が発生する。
【０１００】
これに対し、低い分子量の多糖類に対しては、水不溶性ゲルを得るのに適した分子量の範囲が明らかにされていない。本発明においては、比較例１９、２３と実施例２３を通じて、架橋用混合物を製造する際に、ＨＡ‐Ｎａは、数平均分子量を基準として４２万Ｄａ以下であれば、架橋反応を経ても水不溶性ゲルを得ることができないか、または加圧滅菌過程中に水不溶性ゲルが消滅して、使用範囲が制限的であることが分かった。したがって、低温真空乾燥工程を使用して多糖類を架橋する場合、多糖類の数平均分子量が５０万Ｄａ以上とならなければならないことを確認した。
【０１０１】
【表８】
2015500895.tif 000010
【０１０２】
［実験例８］水溶性多糖類の分子量に応じた物性測定
前記実施例１１による組成物を使用するが、低温真空乾燥工程後、ＰＢＳ７．０と蒸留水を利用して未反応架橋剤とＮａＯＨを除去し、再乾燥した。比較のための比較例として、既存製品であるヒアルロン酸架橋物を含有した製品である、Ｑ‐ｍｅｄ社のＰｅｒｌａｎｅ［既存製品１（Ｐ）］、Ａｌｌｅｒｇａｎｅ社のＪｕｖｅｄｅｒｍ‐Ｕｌｔｒａ［既存製品２（Ｊ‐Ｕ）］、Ａｎｔｈｅｉｓ社のＥｓｔｈｅｌｉｓ  Ｂａｓｉｃ［既存の製品３（Ｅ‐Ｂ）］、ＰＦＤＣ社のＧｌｙｔｏｎｅ‐２［既存製品４（Ｇ‐２）］を使用し、各製品は研究用として病院から購入して使用した。
【０１０３】
再乾燥された水不溶性ゲルを粉砕して、１００μｍ以下の粉末にした。粉末に製造された水不溶性ゲルとＰＢＳ７．０を混合して、水不溶性ゲルの含量が５ｗ／ｖ％になるようにした。内部容積１ｍｌのガラス材質の注射器（ｐｒｅｆｉｌｌｅｄ  ｓｙｒｉｎｇｅ）に、ＰＢＳ７．０と水不溶性ゲルを混合した組成物を入れ、ゴム製の吸子（ｓｔｏｐｐｅｒ）で密封した後、１２１℃において１５分間加圧滅菌を実施した。加圧滅菌された組成物を、２７  １／２Ｇの規格を有する注射針を介して射出したときに掛かる圧力と、滅菌後の酵素分解抵抗性を観察した。
【０１０４】
８‐１．注射性能の測定
引張力測定器を、圧縮強度測定モード（ｍｏｄｅ）に設定してから、注射性能を測定した。ヒアルロン酸ゲルを含む組成物を内容物として入れた注射器の栓（ｃａｐ）を除去し、２７  １／２Ｇの規格を有する注射針を装着した後、注射器を引張力測定器の測定板に、注射針が下側になるように垂直に固定した。引張力測定器を稼働して、１ｍｍ／ｓｅｃの速度で注射器に装着された押子（ｐｌｕｎｇｅｒ）を押しながら、射器内に入った内容物が完全に空になるまでに圧縮に伴う力を測定した。
【０１０５】
８‐２．酵素分解抵抗性の測定
加圧滅菌されたヒアルロン酸組成物を、ヒアルロン酸として５ｍｇとヒアルロニダーゼを２００ＩＵ／ｍｌ溶かした溶液０．５ｍｌを混合して、ヒアルロン酸１ｍｇ当たりヒアルロニダーゼ（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ）２０ＩＵが混合されるようにした。ヒアルロン酸とヒアルロニダーゼを混合した後、３７℃で８時間保管した。８時間後、酵素反応を中断させるために、０．１ＮのＨＣｌ溶液４ｍｌを追加して強く撹拌した後、蒸留水を加えて合計１０ｍｌになるようにした。一日間攪拌して、架橋されていないヒアルロン酸が溶け出てくるようにした後、３０００ｒｐｍにおいて２０分間遠心分離して上澄液を取った。上澄液内に含まれているヒアルロン酸を定量して、酵素分解によって分解される程度を下記式４によって計算して確認した。
【０１０６】
［数４］
酵素分解抵抗性（％）＝｛（酵素投入前に架橋されたヒアルロン酸ゲル含量（ｍｇ）−酵素投入後に測定された上澄液内のヒアルロン酸濃度（ｍｇ／ｍｌ）×１０（ｍｌ））／酵素投入前に架橋されたヒアルロン酸ゲル含量（ｍｇ）｝×１００
【０１０７】
その結果を下記表９に示した。表９から見られるように、既存製品のヒアルロン酸含有量が２％であるのに対し、本発明において提示する組成物は、ヒアルロン酸含量が５％で２．５倍高いが、注射性能は同等またはより優れることが分かる。また、酵素分解実験においても、酵素分解抵抗性に優れるため、生体組織に移植された後、生体組織内における滞留時間がより長くなる可能性を確認した。
【０１０８】
【表９】
2015500895.tif 000011
【０１０９】
［実験例９］ヒアルロン酸水不溶性ゲルの生体組織内維持能力
前記実験例８と同一の組成を有し、無毛マウスの背中部位に注入後、体積維持期間を観察した。無毛マウスの背中部位に加圧滅菌されたヒアルロン酸水不溶性ゲル組成物を０．２ｍｌずつ注入し、３ヶ月間の体積変化を観察した。その結果を図１に示した。図１から見られるように、本発明を通じて得られた組成物を無毛マウスの背中部位に注入した結果、既存製品に比べて改善された体積維持効果があることを確認した。
【０１１０】
［実施例２４〜２９］
栓の付いた５０ｍｌチューブ（ｔｕｂｅ）に、分子量１４０万のＨＡ‐Ｎａ１ｇずつをそれぞれ入れ、水酸化ナトリウムを利用してｐＨを１３に調整した水酸化ナトリウム水溶液９ｇと、架橋剤としてＢＤＤＥを表１０のとおり投入してから、透明な溶液になるまで撹拌して架橋用混合物を完成した。攪拌が完了した後、実施例１と同一の方法の真空乾燥を行った。乾燥された架橋用混合物をＰＢＳ７．０に入れ、２４時間撹拌した後、再度蒸留水に入れ、撹拌する方法で洗浄後、再乾燥を実施した。
【０１１１】
［実験例１０］組成物の外観
前記実施例１１および実施例２３〜２９の組成物に関して透明性を観察した。水不溶性ゲルを乾燥した状態で粉砕し、１００μｍ以下になるようした後、ＰＢＳ７．０と混合して完全膨潤状態になるようにした後、遠心分離して上澄液を除去し、残った水不溶性ゲルを１ｍｌのガラス注射管に充填して加圧滅菌した後、外観を肉眼で観察した。その結果を下記表１０に示した。
【０１１２】
【表１０】
2015500895.tif 000012
【図１】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年5月26日(2014.5.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性多糖類、エポキシ架橋剤、塩基性化合物および溶媒を混合するステップ；および
前記混合液を１〜３０℃において真空乾燥して溶媒を除去するステップ；を含む水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項２】
前記真空乾燥は、１〜３０ｍｍＨｇ下で行われるものである、請求項１に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項３】
JP
前記溶媒を除去するステップは、水溶性多糖類の濃度を５０〜９９重量％に濃縮するものである、請求項１又２に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項４】
前記水溶性多糖類は、分子量が５０万〜５００万ダルトンである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項５】
前記水溶性多糖類は、溶媒重量１００部に対して１〜１００重量部である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項６】
前記水溶性多糖類は、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒアルロン酸塩、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ‐γ‐ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリガンマグルタミン酸塩、寒天（ａｇａｒ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、アルギン酸塩（ａｌｇｉｎａｔｅ）、カラギーナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、ファーセレラン（ｆｕｒｃｅｌｌａｒａｎ）、ペクチン（ｐｅｃｔｉｎ）、アラビアガム（ａｒａｂｉｃ  ｇｕｍ）、カラヤガム（ｋａｒａｙａ  ｇｕｍ）、トラガカントガム（ｔｒａｇａｃａｎｔｈ  ｇｕｍ）、ガティガム（ｇｈａｔｔｉ  ｇｕｍ）、グアーガム（ｇｕａｒ  ｇｕｍ）、ローカストビーンガム（ｌｏｃｕｓｔ  ｂｅａｎ  ｇｕｍ）、サイリウムシードガム（ｐｓｙｌｌｉｕｍ  ｓｅｅｄ  ｇｕｍ）、ゼラチン（ｇｌｅａｔｉｎ）、キチン（ｃｈｉｔｉｎ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、キサンタンガム（ｘａｎｔｈａｎｅ  ｇｕｍ）、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）、コンドロイチン‐４‐硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ‐４‐ｓｕｌｆａｔｅ）、コンドロイチン‐６‐硫酸（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ‐６‐ｓｕｌｆａｔｅ）およびスターチ（ｓｔａｒｃｈ）からなる群より選択される１種以上である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項７】
前記エポキシ架橋剤は、水溶性多糖類内のヒドロキシ基１モルに対して０．０１〜６０モル部である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項８】
前記エポキシ架橋剤は、エピクロロヒドリン（ｅｐｉｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒｉｎ）、エピブロモヒドリン（ｅｐｉｂｒｏｍｏｈｙｄｒｉｎ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ヘキサンジオールジグリシジルエーテル（１，６‐ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、プロピレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリエチレングリコンジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリプロピレングリコールジグリシディルエーテル（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル（ｎｅｏｐｅｎｔｙｌ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ジグリセロールポリグリシジルシジルエーテル（ｄｉｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、グリセロールポリグリシジルエーテル（ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、トリメチルプロパンポリグリシジルエーテル（ｔｒｉｍｅｔｈｌｙｐｒｏｐａｎｅ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ビスエポキシプロポキシエチレン（１，２‐（ｂｉｓ（２，３‐ｅｐｏｘｙｐｒｏｐｏｘｙ）ｅｔｈｙｌｅｎｅ）、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル（ｐｅｎｔａｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）およびソルビトールポリグリシジルエーテル（ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ）からなる群より選択される１種以上である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項９】
前記塩基性化合物は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、リチウムを含むアルカリ金属を含む化合物である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の水不溶性ゲル組成物の製造方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の製造方法により製造された水不溶性ゲル組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、水不溶性ゲルを、組成物の総重量に対して１〜２０重量％含むものである、請求項１０に記載の水不溶性ゲル組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、水不溶性ゲルの膨潤度が３０〜２００であれば透明、膨潤度が１０〜３０未満であれば半透明の乳白色、および膨潤度が２〜１０未満であれば不透明の白色である、請求項１０又１１に記載の水不溶性ゲル組成物。
【請求項１３】
前記組成物をｐＨ６．５〜７．５のリン酸緩衝溶液に入れ、膨潤および加圧滅菌したとき、最初投入された組成物重量に対して７０〜９９重量％が水不溶性ゲルとして残存するものである、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の水不溶性ゲル組成物。
【請求項１４】
前記組成物の膨潤重量は、加圧滅菌後に残存する水不溶性ゲルの乾燥重量の２〜２００倍であるものである、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の水不溶性ゲル組成物。
【国際調査報告】
2015500895.tif 000014
2015500895.tif 000015
2015500895.tif 000016
2015500895.tif 000017