(57)【要約】  本発明は、上皮性ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）遮断薬である３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルのコハク酸塩の新規の結晶形態、前記結晶形態を含む医薬組成物、前記結晶形態及び医薬組成物の使用、並びに前記結晶形態を調製する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
形態Ｃを含む化学式
【化６】
2015510925.tif 000013
の３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩の結晶形態。
【請求項２】
形態Ｃから本質的になる、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項３】
前記形態Ｃが、実質的に純粋な形態である、請求項１又は２に記載の結晶形態。
【請求項４】
２１〜２６℃の温度における７．０°±０．２、１０．６°±０．２、１４．３°±０．２，１８．２°±０．２、１８．６°±０．２、１９．２°±０．２、２１．２°±０．２、２１．８°±０．２、２４．７°±０．２、２９．０°±０．２及び３１．５°±０．２の群から選択される４つ以上の２シータ値を含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる、請求項１から３のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項５】
２１〜２６℃の温度における７．０°±０．２、１０．６°±０．２、１４．３°±０．２，１８．２°±０．２、１８．６°±０．２、１９．２°±０．２、２１．２°±０．２、２１．８°±０．２、２４．７°±０．２、２９．０°±０．２及び３１．５°±０．２の群から選択される６つ以上の２シータ値を含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる、請求項１から３のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項６】
粉末Ｘ線回折スペクトルが、図７に示された粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じである、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項７】
示差走査熱量測定サーモグラムが、図８に示されたものと実質的に同じである、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の結晶形態及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項９】
１種以上の追加の活性成分と組み合わせた、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
吸入可能な形態である、請求項８又は９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
嚢胞性線維症、原発性線毛運動障害、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、気管感染（急性及び慢性；ウイルス性及び細菌性）ならびに肺癌などの呼吸器疾患の治療における使用のための、請求項１から７のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項１２】
嚢胞性線維症、原発性線毛運動障害、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、気管感染（急性及び慢性；ウイルス性及び細菌性）ならびに肺癌などの呼吸器疾患の治療用の薬剤の製造における、請求項１から７のいずれか一項に記載の結晶形態の使用。
【請求項１３】
請求項１から７のいずれかに記載の結晶形態の有効量を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、嚢胞性線維症、原発性線毛運動障害、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、気管感染（急性及び慢性；ウイルス性及び細菌性）ならびに肺癌などの呼吸器疾患を治療する方法。
【請求項１４】
請求項１から７のいずれか一項に記載の結晶形態を含み、経肺投与によって、前記結晶形態を送達するよう適合された吸入器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、上皮性ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）遮断薬である３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルのコハク酸塩の新規の結晶形態、前記結晶形態を含む医薬組成物、前記結晶形態及び医薬組成物の使用、並びに前記結晶形態を調製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
国際特許出願公開ＷＯ２０１２／０３５１５８（ＰＣＴ／ＥＰ２０１１／０６６１５１）は、ＥＮａＣ遮断薬である３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル及びそのコハク酸塩を調製する方法を開示している。
【０００３】
上皮性ナトリウムチャネルの遮断によって仲介される疾患には、上皮膜を通過する液量の調節と関係する疾患が含まれる。例えば、気道表面の体液の量は、粘膜毛様体クリアランス及び肺の健康の維持の重要な調節因子である。上皮性ナトリウムチャネルの遮断は、気道上皮の粘膜側の液体貯留を促進し、それにより粘液クリアランスを促進し、呼吸組織（肺気道を含む）における粘液及び痰の貯留を防ぐ。このような疾患には、呼吸器疾患、例えば嚢胞性線維症、原発性線毛運動障害、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、気管感染（急性及び慢性；ウイルス性及び細菌性）及び肺癌が含まれる。上皮性ナトリウムチャネルの遮断によって仲介される疾患には、ことによるとそれらの表面上の保護表面液の異常な生理機能を含む、上皮を通過する異常な液体調節と関係する呼吸器疾患以外の疾患、例えば、口内乾燥（口渇）又は乾性角結膜炎（keratoconjunctivitis sire）（ドライアイ）も含まれる。さらに、腎臓における上皮性ナトリウムチャネルの遮断は、利尿を促進し、それにより血圧低下作用を誘導するために使用することができる。
【発明の概要】
【０００４】
実施形態の説明
ＥＮａＣ遮断薬である３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルのコハク酸塩（３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル：コハク酸＝１：１）の３つの多形形態（形態Ａ、Ｂ及びＣ）が開示される。形態Ａ及びＢを調製する方法は、国際特許出願公開ＷＯ２０１２／０３５１５８（ＰＣＴ／ＥＰ２０１１／０６６１５１）に記載されている。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】形態Ａ（実施例３）のために記録された粉末Ｘ線回折パターンであり、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用してＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録された。
【図２】形態Ａ（実施例３）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースであり、アルミニウムパン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、タイプＢＯ１４−３０１８）を備えたＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｄｉａｍｏｎｄ  ＤＳＣ装置（加熱速度２０Ｋ／分、温度範囲：３０から２５０℃）で記録された。
【図３】形態Ａ（実施例３）の赤外線スペクトルであり、減衰全反射（ＡＴＲ）モードにおけるＢｒｕｋｅｒ  Ａｌｐｈａ装置で記録された。測定パラメーターは次の通りであった。範囲４００〜４０００ｃｍ−１、分解能２ｃｍ−１、６４走査、速度７．５ｋＨｚ、アポディゼーション：ブラックマン−ハリス３項。
【図４】形態Ａ（実施例１、２）のために記録された粉末Ｘ線回折パターンであり、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用してＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録された。
【図５】形態Ａ（実施例１、２）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースであり、アルミニウムパン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、タイプＢＯ１４−３０１８）を備えたＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｄｉａｍｏｎｄ  ＤＳＣ装置（加熱速度２０Ｋ／分、温度範囲：３０から２５０℃）で記録された。
【図６】形態Ｂ（実施例４、５、６、７）のために記録された粉末Ｘ線回折パターンであり、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用してＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録された。
【図７】形態Ｃ（実施例１０）のために記録された粉末Ｘ線回折パターンであり、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用してＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録された。
【図８】形態Ｃ（実施例１０）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースであり、アルミニウムパン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、タイプＢＯ１４−３０１８）を備えたＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｄｉａｍｏｎｄ  ＤＳＣ装置（加熱速度２０Ｋ／分、温度範囲：３０から２５０℃）で記録された。
【図９】形態Ｃ（実施例１０）の赤外線スペクトルであり、減衰全反射（ＡＴＲ）モードにおけるＢｒｕｋｅｒ  Ａｌｐｈａ装置で記録された。測定パラメーターは次の通りであった。範囲４００〜４０００ｃｍ−１、分解能２ｃｍ−１、６４走査、速度７．５ｋＨｚ、アポディゼーション：ブラックマン−ハリス３項。
【図１０】形態Ｃ（実施例８、９）のために記録された粉末Ｘ線回折パターンであり、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用してＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録された。
【図１１】形態Ｃ（実施例８、９）のＤＳＣトレースであり、アルミニウムパン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、タイプＢＯ１４−３０１８）を備えたＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｄｉａｍｏｎｄ  ＤＳＣ装置（加熱速度２０Ｋ／分、温度範囲：３０から２５０℃）で記録された。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
従って、第１の態様において、本発明は、形態Ｃを含む化学式
【０００７】
【化１】
2015510925.tif 000002
の３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩の結晶形態を提供する。
【０００８】
第１の態様の一実施形態において、上記結晶形態は本質的に形態Ｃからなる。
【０００９】
第１の態様の別の実施形態において、上記結晶形態は、形態Ｃからなり、ここで、前記形態Ｃは実質的に純粋な形態をしている。
【００１０】
第１の態様の別の実施形態において、上記結晶形態は、２１〜２６℃℃の温度における７．０°±０．２、１０．６°±０．２、１４．３°±０．２，１８．２°±０．２、１８．６°±０．２、１９．２°±０．２、２１．２°±０．２、２１．８°±０．２、２４．７°±０．２、２９．０°±０．２及び３１．５°±０．２の群から選択される４つ以上の２シータ値を含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる。
【００１１】
第１の態様の別の実施形態において、上記結晶形態は、２１〜２６℃℃の温度における７．０°±０．２、１０．６°±０．２、１４．３°±０．２，１８．２°±０．２、１８．６°±０．２、１９．２°±０．２、２１．２°±０．２、２１．８°±０．２、２４．７°±０．２、２９．０°±０．２及び３１．５°±０．２の群から選択される６つ以上の２シータ値を含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる。
【００１２】
第１の態様の別の実施形態において、上記結晶形態は、図７に示された粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じである粉末Ｘ線回折スペクトルを有する。
【００１３】
第１の態様の別の実施形態において、上記結晶形態は、図８に示されたものと実質的に同じである示差走査熱量測定サーモグラムを有する。
【００１４】
本明細書で使用される場合、特定の多形形態に関する用語「実質的に純粋な」は、多形形態が、１０重量％未満、好ましくは５重量％未満、より好ましくは３重量％未満、最も好ましくは１重量％未満の化合物の任意の他の物理的形態（多形）を含むことを意味する。
【００１５】
本明細書で使用される「多形」は、同じ化学組成を有するが、結晶を形成している分子、原子、及び／又はイオンの異なる空間的配置を有する結晶形態を意味する。
【００１６】
本明細書を通して及び後続の特許請求の範囲において、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単語「含む（comprise）」、又は「含む（comprises）」若しくは「含むこと（comprising）」などの変形は、記載された整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群の排除を意味しないと理解されるべきである。
【００１７】
本明細書で使用される場合、用語「本発明の結晶形態」は、第１の態様又は第１の態様の任意の実施形態において定義された結晶形態を意味する。
【００１８】
第２の態様において、第１の態様又は第１の態様の任意の実施形態による結晶形態及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む医薬組成物が提供される。
【００１９】
第２の態様の一実施形態において、形態Ｃは実質的に純粋な形態である。
【００２０】
第２の態様の別の実施形態において、医薬組成物は吸入可能な形態である。
【００２１】
第３の態様において、１種以上の追加の活性成分と組み合わせた、第２の態様又は第２の態様の一実施形態による医薬組成物が提供される。
【００２２】
第４の態様において、呼吸器疾患、例えば嚢胞性線維症、原発性線毛運動障害、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、気管感染（急性及び慢性；ウイルス性及び細菌性）及び肺癌の治療における使用のための、第１の態様又は第１の態様の任意の実施形態による結晶形態及び第２の態様又は第２の態様の任意の実施形態による医薬組成物が提供される。
【００２３】
第５の態様において、呼吸器疾患、例えば嚢胞性線維症、原発性線毛運動障害、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、気管感染（急性及び慢性；ウイルス性及び細菌性）及び肺癌の治療用の薬剤の製造における、第１の態様若しくは第１の態様の任意の実施形態による結晶形態又は第２の態様若しくは第２の態様の任意の実施形態による組成物の使用が提供される。
【００２４】
第６の態様において、有効量の第１の態様若しくは第１の態様の任意の実施形態による結晶形態又は第２の態様若しくは第２の態様の任意の実施形態による医薬組成物を、それらを必要とする患者に投与するステップを含む、呼吸器疾患、例えば嚢胞性線維症、原発性線毛運動障害、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、気管感染（急性及び慢性；ウイルス性及び細菌性）及び肺癌を治療する方法が提供される。
【００２５】
第７の態様において、第１の態様又は第１の態様の任意の実施形態による結晶形態を含み、経肺投与によって、それを送達するよう適合された吸入器が提供される。特定の好ましい実施形態において、吸入器は、乾燥粉末吸入具、例えばＢＲＥＥＺＨＡＬＥＲ（登録商標）吸入器である。
【００２６】
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩の新規な多形形態Ｃは、形態Ａに比べて熱力学的により安定であることが示されている。
【００２７】
形態Ｂは、形態Ａの結晶化中に懸濁液中に過渡的な結晶形態として現れる同型の溶媒和物の一群である。形態Ｂは乾燥によって形態Ａに変形する。
【００２８】
本発明の薬剤は、任意の適切な経路で、例えば、経口で、例えば錠剤若しくはカプセルの形態で；非経口で、例えば静脈内に；皮膚に局所的に；鼻腔内に、例えばアレルギー性鼻炎の治療で；又は、好ましくは、吸入によって、特に閉塞性若しくは炎症性気道疾患の治療で投与することができる。特に、本発明の薬剤は、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症又は喘息の治療用の吸入可能な製剤として送達することができる。
【００２９】
医薬組成物は、経口投与、非経口投与、及び直腸投与などの特定の投与の経路のために製剤化することができる。加えて、本発明の医薬組成物は、固体形態（制限なくカプセル、錠剤、丸剤、顆粒、粉末若しくは坐剤を含む）に、又は液体形態（制限なく溶液、懸濁液若しくは乳濁液を含む）にすることができる。医薬組成物は、滅菌などの通常の製薬工程にかけることができ、且つ／又は通常の不活性希釈剤、滑沢剤、若しくは緩衝剤、並びにアジュバント、例えば保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤及び緩衝剤などを含むことができる。
【００３０】
一般的に、医薬組成物は、
ａ）希釈剤、例えば、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、セルロース及び／若しくはグリシン；
ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、滑石、ステアリン酸、そのマグネシウム若しくはカルシウム塩及び／若しくはポリエチレングリコール；錠剤用に同様に
ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプン糊、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及び／若しくはポリビニルピロリドン；必要に応じて
ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸若しくはそのナトリウム塩、若しくは発泡混合物；並びに／又は
ｅ）吸収剤、着色剤、香料及び甘味剤
と一緒に活性成分を含む錠剤又はゼラチンカプセルである。
【００３１】
錠剤は、当技術分野で知られている方法によってフィルムコーティング又は腸溶コーティングすることができる。経口投与に適した組成物は、錠剤、舐剤、水性若しくは油性懸濁液、分散性粉末若しくは顆粒、乳濁液、硬質若しくは軟質カプセル、又はシロップ若しくはエリキシル剤の形態で本発明の結晶形態の有効量を含む。経口使用を対象とする組成物は、医薬組成物の製造のための当技術分野で知られている任意の方法に従って調製され、このような組成物は、薬学的に上質で味のよい製剤を提供するために、甘味剤、着香料、着色剤及び保存剤からなる群から選択される１種以上の薬剤を含むことができる。錠剤は、錠剤の製造に適する非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合して活性成分を含むことができる。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウム；造粒剤及び崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、又はアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン又はアラビアゴム；並びに滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクである。錠剤は、コーティングされていないか、崩壊及び消化管における吸収を遅らせ、それにより長期間にわたって持続した作用を提供するための既知の技術によってコーティングされている。例えば、モノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を使用することができる。経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム若しくはカオリンと混合される硬質ゼラチンカプセルとして、又は活性成分が水若しくは油性媒体、例えば、ラッカセイ油、流動パラフィン若しくはオリーブ油と混合される軟質ゼラチンカプセルとして提供することができる。
【００３２】
特定の注射用組成物は、水性等張溶液又は懸濁液であり、坐剤は、脂肪乳濁液又は懸濁液から有利に調製される。前記組成物は、滅菌することができ、且つ／又はアジュバント、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤若しくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩及び／若しくは緩衝剤を含むことができる。加えて、それらは、他の治療上有用な物質を含むこともできる。前記組成物は、それぞれ、通常の混合、造粒又はコーティング法によって調製され、約０．１〜７５％の活性成分を含み、又は約１〜５０％の活性成分を含む。
【００３３】
経皮適用に適する組成物は、好適な担体と共に本発明の結晶形態の有効量を含む。経皮送達に適した担体は、宿主の皮膚を通した通過を助けるための吸収可能な薬理学的に許容される溶媒を含む。例えば、経皮デバイスは、支持メンバー、場合によって担体と共に化合物を入れている溜め、場合によって長期間にわたって制御された所定の速度で宿主の皮膚に化合物を送達するための速度制御バリアー、及び皮膚にデバイスを固定する手段を含む包帯の形態をしている。
【００３４】
例えば、皮膚及び眼への局所適用に適する組成物には、水溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ゲル又は例えばエアゾールによる送達用のスプレー可能な製剤（sprayable formulation）などが含まれる。このような局所送達システムは、皮膚適用に、例えば、皮膚癌の治療用に、例えば、日焼け止めクリーム（sun cream）、ローション、スプレーなどにおける予防的使用に特に好適である。従って、それらは、当技術分野でよく知られている化粧品を含めた局所製剤における使用に特に適している。このようなものは、可溶化剤、安定剤、張性増強剤（tonicity enhancing agent）、緩衝剤及び保存剤を含むことができる。
【００３５】
本明細書で使用される局所適用は、吸入又は鼻腔内適用にも関係し得る。それらは、乾燥粉末吸入具からの乾燥粉末（単独で、混合物、例えば乳糖とのドライブレンド、若しくは、例えばリン脂質との混合成分粒子としてのいずれかで）又は好適な噴射剤を使用する若しくはそれを使用しない加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー若しくはネブライザーからのエアゾールスプレープレゼンテーション（aerosol spray presentation）の形態で好都合に送達することができる。
【００３６】
活性成分の吸入可能な形態が、エアゾール組成物である場合、吸入器は、定量、例えば１０から１００μｌ、例えば２５から５０μｌの組成物を送達するよう適合されたバルブがついたエアゾールバイアル、即ち、定量吸入具として知られている機器であってよい。好適なこのようなエアゾールバイアル及び圧力下でエアゾール組成物をそれらの中に入れるための手順は、吸入療法の当業者にはよく知られている。例えば、エアゾール組成物は、例えばＥＰ−Ａ−０６４２９９２に記載された塗装缶から投与することができる。活性成分の吸入可能な形態が、ネブライザーで噴霧可能な水性、有機若しくは水性／有機分散液である場合、吸入器は、例えば、１から５０ｍｌ、一般に１から１０ｍｌの分散液を入れることができる既知のネブライザー、例えばジェット式ネブライザー（airjet nebulizer）などの通常の空気圧式ネブライザー、若しくは超音波ネブライザー；又は時々ソフトミスト（soft mist）若しくはソフトスプレー（soft spray）吸入具と呼ばれる手持ち式ネブライザー、例えばＡＥＲｘ（Ａｒａｄｉｇｍ、米国）若しくはＡｅｒｏｄｏｓｅ（Ａｅｒｏｇｅｎ）などの電子制御デバイス、若しくは従来のネブライザーに比べて格段により小さい噴霧量、例えば１０から１００μｌを可能にするＲＥＳＰＩＭＡＴ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）ネブライザーなどの機械式デバイスであってよい。活性成分の吸入可能な形態が、微粉粒子形態である場合、吸入器は、例えば、（Ａ）及び／若しくは（Ｂ）の用量単位を含む乾燥粉末を入れたカプセル若しくはブリスターから乾燥粉末を送達するよう適合された乾燥粉末吸入器又は、例えば、一操作当たり（Ａ）及び／若しくは（Ｂ）の用量単位を含む３〜２５ｍｇの乾燥粉末を送達するよう適合された複数用量乾燥粉末吸入（ＭＤＰＩ）器であってよい。乾燥粉末組成物は、好ましくは希釈剤又は担体（例えば乳糖）及び水分による製品性能劣化を防ぐ助けとなる化合物（例えばステアリン酸マグネシウム）を含む。好適なこのような乾燥粉末吸入器には、ＵＳ３９９１７６１（ＡＥＲＯＬＩＺＥＲ（商標）デバイスを含む）、ＷＯ０５／１１３０４２（ＢＲＥＥＺＨＡＬＥＲ（商標）デバイスを含む）、ＷＯ９７／２０５８９（ＣＥＲＴＩＨＡＬＥＲ（商標）デバイスを含む）、ＷＯ９７／３０７４３（ＴＷＩＳＴＨＡＬＥＲ（商標）デバイスを含む）、ＷＯ０５／３７３５３（ＧＹＲＯＨＡＬＥＲ（商標）デバイスを含む）、ＵＳ６５３６４２７（ＤＩＳＫＵＳ（商標）デバイスを含む）、ＷＯ９７／２５０８６（ＤＩＳＫＨＡＬＥＲ（商標）デバイスを含む）、ＷＯ９５／１４０８９（ＧＥＭＩＮＩ（商標）デバイスを含む）、ＷＯ０３／７７９７９（ＰＲＯＨＡＬＥＲ（商標）デバイスを含む）に開示されたデバイス、及び同様にＷＯ０８／５１６２１、ＷＯ０９／１１７１１２及びＵＳ２００５／０１８３７２４に開示されたデバイスが含まれる。
【００３７】
本発明は、（Ａ）吸入可能な形態の本発明の結晶形態；（Ｂ）薬学的に許容される吸入可能な形態の担体と一緒に吸入可能な形態の本発明のこのような結晶形態を含む吸入可能な薬剤；（Ｃ）吸入器に関係する吸入可能な形態の本発明のこのような結晶形態を含む医薬品；及び（Ｄ）吸入可能な形態の本発明のこのような結晶形態を含む吸入器も含む。
【００３８】
本発明を実施する上で使用される本発明の薬剤の用量は、当然、例えば、治療すべき特定の状態、所望の効果及び投与の方式に応じて変わる。一般的に、吸入による投与に適した１日用量は、患者当たりほぼ０．０００１から３０ｍｇ／ｋｇ程度、一般的に０．０１から１０ｍｇであるが、経口投与に適した１日用量は、ほぼ０．０１から１００ｍｇ／ｋｇ程度である。
【００３９】
水が特定の化合物の分解を促進し得るので、本発明は、活性成分として本発明の結晶形態を含む無水医薬組成物及び剤形をさらに提供する。
【００４０】
本発明の無水医薬組成物及び剤形は、無水又は低水分含有成分及び低水分又は低湿度条件を使用して調製することができる。無水医薬組成物は、その無水性が保たれるように調製及び貯蔵することができる。従って、無水組成物は、それらが好適な処方キットに含まれ得るように水への暴露を防ぐことが知られている材料を使用して包装される。好適な包装の例には、限定はされないが、密封ホイル、プラスチック、単位用量容器（例えば、バイアル）、ブリスターパック、及びストリップパックが含まれる。
【００４１】
本発明は、活性成分としての本発明の結晶形態が分解する速度を減少させる１種以上の薬剤を含む医薬組成物及び剤形をさらに提供する。このような薬剤は、「安定剤」と本明細書で呼ばれるが、限定はされないが、アスコルビン酸などの抗酸化剤、ｐＨ緩衝剤、又は塩緩衝剤等を含む。
【００４２】
本発明の結晶形態は、１種以上の他の治療薬と同時に、又はその前に若しくはその後に投与することができる。本発明の結晶形態は、別々に、同じ若しくは異なる投与の経路で、又は他の薬剤と同じ医薬組成物で一緒に投与することができる。
【００４３】
一実施形態において、本発明は、治療における同時、個別又は逐次使用のための複合製剤としての本発明の結晶形態及び少なくとも１種の他の治療薬を含む製品を提供する。一実施形態において、治療は、上皮性ナトリウムチャネルの遮断によって仲介される疾患又は状態の治療である。複合製剤として提供される製品は、同じ医薬組成物中に一緒に本発明の結晶形態及び他の治療薬（複数可）を含む組成物、又は別々の形態で、例えばキットの形態で本発明の結晶形態及び他の治療薬（複数可）を含む。
【００４４】
一実施形態において、本発明は、本発明の結晶形態及び別の治療薬（複数可）を含む医薬組成物を提供する。場合によっては、医薬組成物は、上記のように、薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。
【００４５】
一実施形態において、本発明は、２種以上の別々の医薬組成物を含み、これらの医薬組成物の少なくとも１種が本発明の結晶形態を含むキットを提供する。一実施形態において、キットは、前記組成物を別々に保持するための手段、例えば容器、分割ボトル、又は分割ホイルパケットを含む。このようなキットの一例は、錠剤、カプセルなどの包装に一般的に使用されるブリスターパックである。
【００４６】
本発明のキットは、異なる剤形、例えば、経口及び非経口剤形を投与するために、異なる投薬間隔で別々の組成物を投与するために、又は別々の組成物を互いに滴定するために使用することができる。コンプライアンスを支援するために、本発明のキットは、一般的に投与のための説明書を含む。
【００４７】
特に、本発明の結晶形態は、ヒト血漿中で有利な安定性プロフィールを示す。ヒト血漿中の有利な安定性プロフィールを示す化合物を提供する上で、本発明は、改善された薬物動態で上皮性ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）を有効に遮断する化合物を提供する。
【００４８】
本発明の併用療法において、本発明の結晶形態及び他の治療薬は、同じ又は異なる製造者によって製造及び／又は製剤化され得る。さらに、本発明の結晶形態及び他の治療薬を、（ｉ）医師への複合製品の公開前に（例えば、本発明の結晶形態及び他の治療薬を含むキットの場合）；（ｉｉ）投与の直前に医師自身によって（又は医師の指導のもとに）；（ｉｉｉ）患者自身において、例えば本発明の化合物及び他の治療薬の逐次投与の間に、併用療法にまとめることができる。
【００４９】
従って、本発明は、上皮性ナトリウムチャネルの遮断によって仲介される疾患又は状態を治療するための本発明の結晶形態の使用を提供し、ここで、薬剤は、別の治療薬との投与のために調製される。本発明は、上皮性ナトリウムチャネルの遮断によって仲介される疾患又は状態を治療するための別の治療薬の使用も提供し、ここで、薬剤は、本発明の結晶形態と共に投与される。
【００５０】
本発明は、上皮性ナトリウムチャネルの遮断によって仲介される疾患又は状態を治療する方法における使用のための本発明の結晶形態も提供し、ここで、本発明の結晶形態は、別の治療薬との投与のために調製される。本発明は、上皮性ナトリウムチャネルの遮断によって仲介される疾患又は状態を治療する方法における使用のための別の治療薬も提供し、ここで、他の治療薬は、本発明の結晶形態との投与のために調製される。
【００５１】
本発明は、上皮性ナトリウムチャネルの遮断によって仲介される疾患又は状態を治療するための本発明の結晶形態の使用も提供し、ここで、患者は、あらかじめ（例えば、２４時間以内）別の治療薬で治療されている。本発明は、上皮性ナトリウムチャネルの遮断によって仲介される疾患又は状態を治療するための別の治療薬の使用も提供し、ここで、患者は、あらかじめ（例えば、２４時間以内）本発明の結晶形態で治療されている。
【００５２】
一実施形態において、他の治療薬は、例えば、このような薬物の治療活性の増強剤（potentiator）として又はこのような薬物の必要な用量（dosaging）若しくは潜在的副作用を減少させる手段として、特に本明細書で先に言及されたものなどの嚢胞性線維症又は閉塞性若しくは炎症性気道疾患の治療において、抗炎症薬、気管支拡張薬（bronchodilatory）、抗ヒスタミン剤、充血除去剤及び鎮咳薬物質から選択される。
【００５３】
従って、本発明は、さらなる態様として、本発明の上皮性ナトリウムチャネル遮断薬と、浸透圧性薬剤（高張食塩水、デキストラン、マンニトール、キシリトール）、野生型及び変異体の両方のＣＦＴＲ機能の調節剤（中和剤及び増強剤）、例えば、ＷＯ２００７／０２１９８２、ＷＯ２００６／０９９２５６、ＷＯ２００６／１２７５８８、ＷＯ２００４／０８０９７２、ＷＯ２００５／０２６１３７、ＷＯ２００５／０３５５１４、ＷＯ２００５／０７５４３５、ＷＯ２００４／１１１０１４、ＷＯ２００６／１０１７４０、ＷＯ２００４／１１０３５２、ＷＯ２００５／１２０４９７及びＵＳ２００５／０１７６７６１、に記載されたもの、抗炎症薬、気管支拡張薬、抗ヒスタミン剤、鎮咳剤、抗生剤又はＤＮアーゼ製剤原料との組合せを含み、前記上皮性ナトリウムチャネル遮断薬及び前記製剤原料は、同じ又は異なる医薬組成物中に存在する。
【００５４】
ＣＦＴＲ機能の好適な調節剤には、ＣＦＴＲ増強剤、特に化学式
【００５５】
【化２】
2015510925.tif 000003
の化合物ＶＸ−７７０が含まれる。
【００５６】
好適な抗生剤には、マクロライド系抗生剤、例えば、トブラマイシン（ＴＯＢＩ（商標））が含まれる。
【００５７】
好適なＤＮアーゼ製剤原料には、ＤＮＡを選択的に開裂させるドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（商標））、組換えヒトデオキシリボヌクレアーゼＩ（ｒｈＤＮａｓｅ）の高度に純化された溶液が含まれる。ドルナーゼアルファは、嚢胞性線維症を治療するために使用される。
【００５８】
上皮性ナトリウムチャネル遮断薬の抗炎症薬との他の有用な組合せは、ケモカイン受容体、例えば、ＣＣＲ−１、ＣＣＲ−２、ＣＣＲ−３、ＣＣＲ−４、ＣＣＲ−５、ＣＣＲ−６、ＣＣＲ−７、ＣＣＲ−８、ＣＣＲ−９及びＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５のアンタゴニスト、特にＣＣＲ−５アンタゴニスト、例えばＳｃｈｅｒｉｎｇ−ＰｌｏｕｇｈアンタゴニストＳＣ−３５１１２５、ＳＣＨ−５５７００及びＳＣＨ−Ｄとのもの；Ｔａｋｅｄａアンタゴニスト、例えばＮ−［［４−［［［６，７−ジヒドロ−２−（４−メチル−フェニル）−５Ｈ−ベンゾ−シクロヘプテン−８−イル］カルボニル］アミノ］フェニル］−メチル］テトラヒドロ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２Ｈ−ピラン−４−アミン−イウムクロリド（ＴＡＫ−７７０）；並びにＵＳＰ６，１６６，０３７（特に請求項１８及び１９）、ＷＯ００／６６５５８（特に請求項８）、ＷＯ００／６６５５９（特に請求項９）、ＷＯ０４／０１８４２５及びＷＯ０４／０２６８７３に記載されたＣＣＲ−５アンタゴニストである。
【００５９】
好適な抗炎症薬には、ステロイド、特に、糖質ステロイド、例えばブデソニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、シクレソニド又はフロ酸モメタゾン、又はＷＯ０２／８８１６７、ＷＯ０２／１２２６６、ＷＯ０２／１００８７９、ＷＯ０２／００６７９（特に実施例３、１１、１４、１７、１９、２６、３４、３７、３９、５１、６０、６７、７２、７３、９０、９９及び１０１のもの）、ＷＯ０３／３５６６８、ＷＯ０３／４８１８１、ＷＯ０３／６２２５９、ＷＯ０３／６４４４５、ＷＯ０３／７２５９２、ＷＯ０４／３９８２７及びＷＯ０４／６６９２０に記載されたステロイド；非ステロイド性糖質コルチコイド受容体アゴニスト、例えばＤＥ１０２６１８７４、ＷＯ００／００５３１、ＷＯ０２／１０１４３、ＷＯ０３／８２２８０、ＷＯ０３／８２７８７、ＷＯ０３／８６２９４、ＷＯ０３／１０４１９５、ＷＯ０３／１０１９３２、ＷＯ０４／０５２２９、ＷＯ０４／１８４２９、ＷＯ０４／１９９３５及びＷＯ０４／２６２４８；に記載されたもの；ＬＴＤ４アンタゴニスト、例えばモンテルカスト及びザフィルルカスト；ＰＤＥ４阻害剤、例えばシロミラスト（Ａｒｉｆｌｏ（登録商標）ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ロフルミラスト（Ｂｙｋ  Ｇｕｌｄｅｎ）、Ｖ−１１２９４Ａ（Ｎａｐｐ）、ＢＡＹ１９−８００４（Ｂａｙｅｒ）、ＳＣＨ−３５１５９１（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、アロフィリン（Ａｌｍｉｒａｌｌ  Ｐｒｏｄｅｓｆａｒｍａ）、ＰＤ１８９６５９／ＰＤ１６８７８７（Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）、ＡＷＤ−１２−２８１（Ａｓｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）、ＣＤＣ−８０１（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＳｅｌＣＩＤ（商標）ＣＣ−１０００４（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＶＭ５５４／ＵＭ５６５（Ｖｅｒｎａｌｉｓ）、Ｔ−４４０（Ｔａｎａｂｅ）、ＫＷ−４４９０（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ）、及びＷＯ９２／１９５９４、ＷＯ９３／１９７４９、ＷＯ９３／１９７５０、ＷＯ９３／１９７５１、ＷＯ９８／１８７９６、ＷＯ９９／１６７６６、ＷＯ０１／１３９５３、ＷＯ０３／１０４２０４、ＷＯ０３／１０４２０５、ＷＯ０３／３９５４４、ＷＯ０４／０００８１４、ＷＯ０４／０００８３９、ＷＯ０４／００５２５８、ＷＯ０４／０１８４５０、ＷＯ０４／０１８４５１、ＷＯ０４／０１８４５７、ＷＯ０４／０１８４６５、ＷＯ０４／０１８４３１、ＷＯ０４／０１８４４９、ＷＯ０４／０１８４５０、ＷＯ０４／０１８４５１、ＷＯ０４／０１８４５７、ＷＯ０４／０１８４６５、ＷＯ０４／０１９９４４、ＷＯ０４／０１９９４５、ＷＯ０４／０４５６０７及びＷＯ０４／０３７８０５；に開示されたもの；ＷＯ０２／４２２９８に記載されたものなどのアデノシンＡ２Ｂ受容体アンタゴニスト；及びベータ−２アドレナリン受容体アゴニスト、例えばアルブテロール（サルブタモール）、メタプロテレノール、テルブタリン、サルメテロール、フェノテロール、プロカテロール、及び特に、フォルモテロール、カルモテロール及びそれらの薬学的に許容される塩、及びＷＯ００７５１１４の式（Ｉ）の化合物（遊離又は塩又は溶媒和物形態の）（この文献は参照により本明細書に組み込まれている）、好ましくはそれらの実施例の��合物、特にインダカテロール及び薬学的に許容されるそれらの塩に相当する化学式：
【００６０】
【化３】
2015510925.tif 000004
の化合物、及びＷＯ０４／１６６０１の式（Ｉ）の化合物（遊離又は塩又は溶媒和物形態の）、並びに同様にＥＰ１４４０９６６、ＪＰ０５０２５０４５、ＷＯ９３／１８００７、ＷＯ９９／６４０３５、ＵＳＰ２００２／００５５６５１、ＷＯ０１／４２１９３、ＷＯ０１／８３４６２、ＷＯ０２／６６４２２、ＷＯ０２／７０４９０、ＷＯ０２／７６９３３、ＷＯ０３／２４４３９、ＷＯ０３／４２１６０、ＷＯ０３／４２１６４、ＷＯ０３／７２５３９、ＷＯ０３／９１２０４、ＷＯ０３／９９７６４、ＷＯ０４／１６５７８、ＷＯ０４／２２５４７、ＷＯ０４／３２９２１、ＷＯ０４／３３４１２、ＷＯ０４／３７７６８、ＷＯ０４／３７７７３、ＷＯ０４／３７８０７、ＷＯ０４／３９７６２、ＷＯ０４／３９７６６、ＷＯ０４／４５６１８、ＷＯ０４／４６０８３、ＷＯ０４／８０９６４、ＷＯ０４／１０８７６５及びＷＯ０４／１０８６７６の化合物が含まれる。
【００６１】
好適な気管支拡張薬には、抗コリン剤又は抗ムスカリン様作用薬、特に、臭化イプラトロピウム、オキシトロピウム臭化物、チオトロピウム塩及びＣＨＦ  ４２２６（Ｃｈｉｅｓｉ）、及びグルコピロレートが含まれるが、同様にＥＰ４２４０２１、ＵＳＰ３，７１４，３５７、ＵＳＰ５，１７１，７４４、ＷＯ０１／０４１１８、ＷＯ０２／００６５２、ＷＯ０２／５１８４１、ＷＯ０２／５３５６４、ＷＯ０３／００８４０、ＷＯ０３／３３４９５、ＷＯ０３／５３９６６、ＷＯ０３／８７０９４、ＷＯ０４／０１８４２２及びＷＯ０４／０５２８５に記載されたものが含まれる。
【００６２】
好適な二重抗炎症及び気管支拡張薬には、ＵＳＰ２００４／０１６７１６７、ＷＯ０４／７４２４６及びＷＯ０４／７４８１２に開示されたものなどの二重ベータ−２アドレナリン受容体アゴニスト／ムスカリンアンタゴニストが含まれる。
【００６３】
好適な抗ヒスタミン製剤原料には、セチリジン塩酸塩、アセトアミノフェン、フマル酸クレマスチン、プロメタジン、ロラチジン、デスロラチジン、ジフェンヒドラミン及び塩酸フェキソフェナジン、アクチバスチン、アステミゾール、アゼラスチン、エバスチン、エピナスチン、ミゾラスチン及びテフェナジン、及びＪＰ２００４１０７２９９、ＷＯ０３／０９９８０７及びＷＯ０４／０２６８４１に開示されたものが含まれる。
【００６４】
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、当業者に知られているように、任意の全ての溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、着香料、染料など及びそれらの組合せを含む（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences、第18版、Mack Printing Company、1990年、1289-1329ページを参照されたい）。任意の通常の担体が活性成分と相溶性がない限りを除いて、治療又は医薬組成物におけるその使用が企図される。
【００６５】
本発明の結晶形態の用語「治療有効量」は、対象の生物学的又は医学的反応、例えば、酵素若しくはタンパク質活性の低減若しくは阻害を誘発する、又は症状を改善する、状態を軽減する、疾患の進行を遅くする若しくは遅延する、又は疾患を予防する本発明の結晶形態の量を意味する。限定されない一実施形態において、用語「治療有効量」は、対象に投与された場合、（１）（ｉ）上皮性ナトリウムチャネルによって仲介された、若しくは（ｉｉ）上皮性ナトリウムチャネル活性と関係する、若しくは（ｉｉｉ）上皮性ナトリウムチャネルの活性（正常若しくは異常な）によって特徴付けられる状態、若しくは障害若しくは疾患を少なくとも部分的に軽減すること、阻害すること、予防すること及び／若しくは改善すること；又は（２）上皮性ナトリウムチャネルの活性を低減すること若しくは阻害することに有効である本発明の結晶形態の量を意味する。別の限定されない実施形態において、用語「治療有効量」は、細胞、又は組織、又は非細胞生体物質、又は媒体に投与された場合、上皮性ナトリウムチャネルの活性を少なくとも部分的に低減すること又は阻害することに有効である本発明の結晶形態の量を意味する。
【００６６】
本明細書で使用される場合、用語「対象」は動物を意味する。一般的に動物は哺乳類である。対象は、例えば、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚、トリなども意味する。特定の実施形態において、対象は霊長類である。さらに他の実施形態において、対象はヒトである。
【００６７】
本明細書で使用される場合、用語「阻害する」、「阻害」又は「阻害すること」は、所与の状態、症状、若しくは障害、若しくは疾患の低減若しくは抑制、又は生物活動若しくは過程の基本的活動における有意な減少を意味する。
【００６８】
本明細書で使用される場合、任意の疾患又は障害の用語「治療する」、「治療すること」又は「治療」は、一実施形態において、疾患又は障害を改善することを意味する（即ち、疾患又はその臨床症状の少なくとも１つの進展を遅らせること又は止めること又は低減すること）。別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」又は「治療」は、患者によって認識することができないものを含めた少なくとも１つの身体的パラメーターを軽減すること又は改善することを意味する。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」又は「治療」は、身体的に（例えば、認識できる症状の安定化）、生理的に（例えば、身体的パラメーターの安定化）、又は両方で疾患又は障害を調節することを意味する。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」又は「治療」は、疾患又は障害の発症又は進展又は進行を予防すること又は遅らせることを意味する。
【００６９】
本明細書で使用される場合、このような対象が、生物学的に、医学的に又は生活の質においてこのような治療から利益を得る場合、対象は、治療を「必要としている」。
【００７０】
本明細書で使用される場合、本発明との関連で（特に特許請求の範囲との関連で）使用される用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」及び類似の用語は、本明細書に他に指示がない限り又は明らかに文脈と矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を包含するものと解釈されるべきである。
【実施例】
【００７１】
実験
一般条件：
質量スペクトルを、エレクトロスプレーイオン化を使用するＬＣＭＳシステムで行った。これらは、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ／Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ、又はＡｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣ／Ａｇｉｌｅｎｔ  ６１３０  Ｑｕａｄｒｏｐｏｌｅ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ、又はＳＱＤ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣのいずれかであった。［Ｍ＋Ｈ］＋は、モノアイソトピック分子量を意味する。
ＮＭＲスペクトルは、ＩＣＯＮ−ＮＭＲを使用するオープンアクセスＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ４００  ＮＭＲ分光計で実施した。スペクトルを２９８Ｋで測定し、溶媒ピークを使用して参照した。それらの交換可能な共鳴の非常に広い性質のために、いくらかの陽子は、直接観察されなかった。
【００７２】
他に指示のない場合、分析ＨＰＬＣ条件は次の通りである。
（方法（ｉ））
カラム          Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８（迅速分離）３０×２．１ｍｍ、３．５Ａ
カラム温度      ３０℃
溶出液          Ｂ：Ｈ２Ｏ、Ｃ：アセトニトリル、両方とも０．１％ギ酸を含む
流速            ０．８ｍＬ／分
グラジエント    １分５％Ｃ；５分かけて５％から９５％Ｃ、３分９５％Ｃ
（方法（ｉｉ））
カラム          ＳＢ−Ｃ１８  ５０×４．６  ｍｍ、１．８Ｍ
カラム温度      ３０℃
溶出液          Ａ：Ｈ２Ｏ、Ｂ：アセトニトリル、両方とも０．１％ギ酸を含む
流速            １ｍＬ／分
グラジエント    １分２％Ｂ；４分かけて２％から７０％Ｂ、０．１分かけて７０％から９０％Ｂ、４．９分９５％Ｂ
（方法  ２ｍｉｎＬＣ＿ｖ００３）
カラム          Ｗａｔｅｒｓ  ＢＥＨ  Ｃ１８  ５０×２．１ｍｍ、１．７ｍ
カラム温度      ５０℃
溶出液          Ａ：Ｈ２Ｏ、Ｂ：アセトニトリル、両方とも０．１％ＴＦＡを含む
流速            ０．８ｍＬ／分
グラジエント    ０．２０分５％Ｂ；１．３０分かけて５％から９５％Ｂ、０．２５分９５％Ｂ
略語：
Ｂｒ              広い
ｄ                二重項
ＤＣＭ            ジクロロメタン
ＤＳＣ            示差走査熱量測定
ＤＭＦ            Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＩ            １，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン
ＤＭＳＯ          ジメチルスルホキシド
ＥＤＣＩ          Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド
ＥｔＯＡｃ        酢酸エチル
ｈ                時間（複数可）
ＨＯＢｔ          １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ          高圧液体クロマトグラフィー
ＬＣ−ＭＳ        液体クロマトグラフィー及び質量分析
ＭｅＯＨ          メタノール
ＭＳ              質量分析
ｍ                多重項
２−ｍｅＴＨＦ    ２−メチルテトラヒドロフラン
ｍｉｎ            分
ｍｌ              ミリリットル（複数可）
ｍ／ｍ            質量対質量比
ｍ／ｚ            質量対電荷比
ＮＭＲ            核磁気共鳴
ｉＰｒＯＨ        イソプロパノール
ｐｐｍ            １００万分の１
ＰＳ              ポリマー担持
ＰＥＡＸ          ＰＥ−陰イオン交換（例えばＢｉｏｔａｇｅ製Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）ＰＥ−ＡＸカラム）
Ｒｔ              保持時間
ｓ                一重項
ＳＣＸ−２        強力陽イオン交換（例えばＢｉｏｔａｇｅ製Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）ＳＣＸ−２カラム）
ｔ                三重項
ＴＥＡ            トリエチルアミン
ＴＦＡ            トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ            テトラヒドロフラン
【００７３】
調製１：３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル
【００７４】
【化４】
2015510925.tif 000005
表題化合物は方法Ａ又はＢのいずれかによって調製することができる。
【００７５】
方法Ａ：
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の３−（２−ジプロピルカルバモイルメトキシカルボニル−エチルスルファモイル）−安息香酸（調製２におけるように調製し得る；６．１ｇ、１２．６０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水（２５ｍｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（７ｍｌ、６３ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ水和物（２．９ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を連続して添加した。内部温度を≦２０℃に維持した。３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボン酸［１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカ−（２Ｅ）−イリデン］−アミド塩酸塩（ＷＯ０９／０７４５７５、実施例３８、１２３ページ）（６５％純度、６．３ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を添加し、透明な溶液が形成するまで撹拌した。ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（３．６ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で２４時間撹拌した。２−ＭｅＴＨＦ（２００ｍｌ）及び２％水性Ｎａ２ＣＯ３（１５０ｍｌ）を反応混合物に添加した。層を分離し、水相を追加の２−ＭｅＴＨＦ（１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を２％水性Ｎａ２ＣＯ３（２００ｍｌ）及び水（２×２００ｍｌ）で洗浄した。アセトニトリル（１００ｍｌ）を添加し、溶液を３０℃で７０ｍｌの体積に濃縮した。アセトニトリル（３００ｍｌ）を添加し、溶液を３０℃で１５０ｍｌの体積に再び濃縮した。溶液を５０℃に加熱し、マレイン酸（１．６２ｇ）を得られた溶液に添加した。オフホワイトの沈殿が即座に形成し、温度を１時間かけて室温に冷却した。固体を濾過によって集めてマレイン酸塩として３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルを得；ＤＣＭ（２００ｍｌ）及び２％水性Ｎａ２ＣＯ３（２００ｍｌ）を添加し、固体が完全に溶解するまで撹拌した。有機層を分離し、水（２×１００ｍｌ）で洗浄し、真空中で濃縮して表題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ  ７２２．１［Ｍ＋Ｈ］＋、方法（ｉ）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ9.12-7.57 (4H, br), 7.88 (1H, m), 7.77 (1H, m), 7.70 (1H, m), 7.68 (1H, m), 7.05-6.50 (2H, br s), 6.95-6.20 (1H, br s), 4.73 (2H, s), 3.81-3.39 (2H, m), 3.61-3.31 (2H, m), 3.43 (2H, br s), 3.15-3.11 (4H, m), 3.04 (2H, t), 2.51 (2H, t), 1.79-1.69 (m, 4H), 1.51-1.43 (4H, m), 0.84 (3H, t), 0.78 (3H, t)
【００７６】
方法Ｂ：
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の３−（２−ジプロピルカルバモイルメトキシカルボニル−エチルスルファモイル）−安息香酸（Ｉｎｔ．ＡＡ）（６．１ｇ、１２．６０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水（２５ｍｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（７ｍｌ、６３ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ水和物（２．９ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を連続して添加した。内部温度を≦２０℃に維持した。３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボン酸［１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカ−（２Ｅ）−イリデン］−アミド塩酸塩（ＷＯ０９０７４５７５、実施例３８、１２３ページ）（６５％純度、６．３ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を添加し、透明な溶液が形成するまで撹拌した。ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（３．６ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で２４時間撹拌した。２−ＭｅＴＨＦ（２００ｍｌ）及び２％水性Ｎａ２ＣＯ３（１５０ｍｌ）を反応混合物に添加した。層を分離し、水相を追加の２−ＭｅＴＨＦ（１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を２％水性Ｎａ２ＣＯ３（２００ｍｌ）及び水（２×２００ｍｌ）で洗浄した。アセトニトリル（１００ｍｌ）を添加し、溶液を３０℃で７０ｍｌの体積に濃縮した。アセトニトリル（３００ｍｌ）を添加し、溶液を３０℃で１５０ｍｌの体積に再び濃縮した。溶液を５０℃に加熱し、マレイン酸（１．６２ｇ）を得られた溶液に添加した。オフホワイトの沈殿が即座に形成し、温度を１時間かけて室温に冷却した。固体を濾過によって集めてマレイン酸塩として３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルを得；ＤＣＭ（２００ｍｌ）及び２％水性Ｎａ２ＣＯ３（２００ｍｌ）を添加し、固体が完全に溶解するまで撹拌した。有機層を分離し、水（２×１００ｍｌ）で洗浄し、真空中で濃縮して表題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ  ７２２．１［Ｍ＋Ｈ］＋、方法（ｉ）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ9.12-7.57 (4H, br), 7.88 (1H, m), 7.77 (1H, m), 7.70 (1H, m), 7.68 (1H, m), 7.05-6.50 (2H, br s), 6.95-6.20 (1H, br s), 4.73 (2H, s), 3.81-3.39 (2H, m), 3.61-3.31 (2H, m), 3.43 (2H, br s), 3.15-3.11 (4H, m), 3.04 (2H, t), 2.51 (2H, t), 1.79-1.69 (m, 4H), 1.51-1.43 (4H, m), 0.84 (3H, t), 0.78 (3H, t)
【００７７】
調製２：３−（２−ジプロピルカルバモイルメトキシカルボニル−エチルスルファモイル）−安息香酸
【００７８】
【化５】
2015510925.tif 000006
表題化合物は、方法Ａ又はＢのいずれかによって調製することができる。
【００７９】
方法Ａ：
ステップ１：３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル
ＤＭＦ（１５０ｍｌ）中のベンジルオキシカルボニルアミノ−プロピオン酸（２２．３ｇ、９９．９ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（１９．３ｇ、１３９．９ｍｍｏｌ）を添加した。２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジプロピル−アセトアミド（１７．７ｇ、９９．９ｍｍｏｌ）を３０分かけて添加し、反応混合物を６０℃に加熱し２．５時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、水（５００ｍｌ）で希釈し酢酸イソプロピル（合計５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を水（３×２００ｍｌ）で洗浄して、さらに単離しなかった酢酸イソプロピル中の３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルの溶液を得た。ＬＣ−ＭＳ；３６５．２［Ｍ＋Ｈ］＋方法（ｉ）
【００８０】
ステップ２：３−アミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルトリフルオロ酢酸塩
酢酸イソプロピル中の３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルの溶液（溶液の１２９．９ｇの合計質量中の３３．２ｇ、９１．０ｍｍｏｌ）を、内部温度を２０℃に保ちながらＴＦＡ（７．０５ｍｌ、９２．０ｍｍｏｌ）で処理し、次いで１０％Ｐｄ／Ｃ（３．３ｇ、５０％水湿潤品）で処理し、Ｈ２（３気圧）の雰囲気下で３．５時間撹拌して３−アミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルトリフルオロ酢酸塩を得た。この溶液を単離することなく次の反応に直接使用した。
【００８１】
ステップ３：３−（２−ジプロピルカルバモイルメトキシカルボニル−エチルスルファモイル）−安息香酸ベンジルエステル
酢酸イソプロピル中の３−アミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルトリフルオロ酢酸塩（２５．４ｇ、７３．８ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、Ｎ−メチルモルホリン（２６．３ｇ、２２１．５ｍｍｏｌ）、水（４０ｍｌ）及びＤＭＡＰ（９０．４ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）で処理した。酢酸イソプロピル（４４ｍｌ）中の３−クロロスルホニル−安息香酸ベンジルエステル（２４．１ｇ、７７．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を０〜５℃で２時間撹拌した。層を分離し、有機相を飽和水性ＮａＨＣＯ３（３×２６ｍｌ）で洗浄し、水（１０ｍｌ）で希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ溶液でｐＨを６に調節し、ブラインで洗浄した。得られた溶液を濃縮して、単離することなくさらなる反応に使用した酢酸イソプロピル中の３−（２−ジプロピルカルバモイルメトキシカルボニル−エチルスルファモイル）−安息香酸ベンジルエステルの溶液を得た。ＬＣ−ＭＳ；［Ｍ＋Ｈ］＋５０５．１  方法（ｉ）
【００８２】
ステップ４：３−（２−ジプロピルカルバモイルメトキシカルボニル−エチルスルファモイル）−安息香酸の合成
酢酸イソプロピル（８２ｍｌ）中の３−（２−ジプロピルカルバモイルメトキシカルボニル−エチルスルファモイル）−安息香酸ベンジルエステル（５ｇ、３３．２５ｍｍｏｌ）の溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．８４ｇ、５０％水湿潤品）で処理し、Ｈ２（３気圧）下で終夜撹拌した。触媒を濾過によって除去した。濾液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（１．６８ｇ、５０％水湿潤品）を添加し、反応物をＨ２（３気圧）下で１８時間撹拌した。触媒を濾過によって除去し、さらなる１０％Ｐｄ／Ｃ（１．６８ｇ、５０％水湿潤品）を添加し、反応物をＨ２（１気圧）下で１８時間撹拌した。触媒を濾過によって除去し、酢酸イソプロピル（２０ｍｌ）で洗浄した。合わせた濾液を真空中で濃縮し、溶液にヘプタンを添加し、室温で２時間、次いで−２℃で４時間撹拌した。形成した固体を濾過によって集め、４０℃において真空下で乾燥して表題化合物を得た；ＬＣ−ＭＳ；４１５．１［Ｍ＋Ｈ］＋、方法（ｉ）。
【００８３】
方法Ｂ：
ステップ１：３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル
Ｎ２下の６０℃におけるＤＭＦ（２００ｍｌ）中のＢｏｃ−Ｂｅｔａ−Ａｌａ−ＯＨ（４０．０ｇ、２１１ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、炭酸カリウム（４０．０ｇ、２８９ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物に、ＤＭＦ（７５ｍｌ）中の２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジプロピル−アセトアミド（３６．７ｇ、２０７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６０℃で終夜撹拌した。反応物を室温に冷却し、ＤＣＭ（４００ｍｌ）で、次いで水（５００ｍｌ）で希釈した。有機層を分離し、ブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して淡黄色の油を得た。この油にｎ−ヘプタン（５００ｍｌ）（ＤＭＦの共沸混合物）を添加し、真空中で濃縮して表題化合物を得た；ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ  １．１４分；３３１．３［Ｍ＋Ｈ］＋、方法  ２ｍｉｎＬＣ＿ｖ００３。
【００８４】
ステップ２：３−アミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル
Ｎ２下の無水ジオキサン中の３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（ステップ１）（３６．５ｇ、１１０ｍｍｏｌ）の冷却した撹拌溶液に、ジオキサン中の４Ｎ  ＨＣｌ（１８．１２ｍｌ、５９７ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加した。得られた混合物を室温に温め終夜撹拌した。溶媒を真空中で除去し、粗生成物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）中に懸濁し１時間、超音波処理した。得られた白色沈殿を濾過によって単離し、４０℃において真空下で１時間乾燥して淡黄色固体を得た。ＥｔＯＡｃからの再結晶化によって表題化合物が得られた；ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ  ０．７７分；２３１．２［Ｍ＋Ｈ］＋、方法  ２ｍｉｎＬＣ＿ｖ００３。
【００８５】
ステップ３：３−（２−ジプロピルカルバモイルメトキシカルボニル−エチルスルファモイル）−安息香酸
Ｎ２下の０℃におけるＤＣＭ（２４０ｍｌ）中の３−アミノ−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（ステップ２）（２０．１ｇ、７５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＡＰ（０．４６ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）を添加し、次いでＴＥＡ（３８．８ｍｌ、２７８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＤＣＭ（２００ｍｌ）中の３−クロロスルホニル安息香酸（１６．６ｇ、７５ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。この混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで１時間、室温に温めた。水（２００ｍｌ）を添加し、１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍｌ）でｐＨを調節した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。ＭｅＣＮ／水（１％ＨＣｌ）で溶出するＣ１８逆相クロマトグラフィーによる精製によって表題生成物を得た；ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ  １．０１分；４１５．２［Ｍ＋Ｈ］＋、方法  ２ｍｉｎＬＣ＿ｖ００３。
【００８６】
［実施例１］
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ａの調製
２．５ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（調製１におけるように調製し得る；３．４７ｍｍｏｌ）を、５０℃で２５ｍＬアセトニトリル及び１．５ｍＬ水に溶解した。４０９ｍｇのコハク酸（３．４７ｍｍｏｌ）を添加した。酸は即座に溶解し、透明な溶液を３０分かけて室温に冷却した。約３０℃で結晶化が起こった。次いで、スラリーを室温で約１６時間撹拌した。結晶を濾過によって集めた。濾過ケークを９ｍｌのアセトニトリル／水の９５：５ｖ／ｖで部分的に洗浄し、５０℃及び約１０ｍｂａｒで１６時間乾燥した。
【００８７】
［実施例２］
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ａの調製
コハク酸（０．５０ｇ、４．２３ｍｍｏｌ）及びアセトン（２０ｇ）を含む混合物を、透明な溶液が形成するまで４５℃に加熱し、次いで濾過（０．２μｍ  ＰＴＦＥフィルター）した。第２の反応器において、３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（調製１、方法Ｂ）（３．００ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）及びアセトン（３０ｇ）を、透明な溶液が形成するまで４５℃に加熱し、次いで濾過（０．２μｍ  ＰＴＦＥフィルター）した。アセトン（２０ｍｌ）中のコハク酸（０．５０ｇ、４．２３ｍｍｏｌ）の溶液を４５℃で１時間加熱し、１０分かけてアセトン中の３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルの溶液（１．６２ｇの溶液）の一部で処理した。得られた混合物を、アセトン（３００ｍｇ）中の３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩（実施例１の調製品を使用して調製した、２０ｍｇ）の種晶の懸濁液で処理し、４５℃で３０分間撹拌した。アセトン（３１．３８ｇ）中の３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルの残りの溶液を５時間かけて上記混合物に添加し、加熱を４５℃で１時間続けた。この懸濁液を１時間かけて２５℃に冷却し、さらに１時間撹拌した。この懸濁液をガラスフリットで濾過し、濾過ケークをアセトン（２×５ｇ）で洗浄した。濾過ケークを５０℃で乾燥して表題化合物を得た。ＨＰＬＣ  Ｒｔ  ４．０２分、方法ｉｉ；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ7.87 (1H, m), 7.78 (1H, m), 7.69 (1H, m), 7.68 (1H, m), 6.85 (2H, br s), 4.73 (2H, s), 3.84-3.20 (6H及び水, brハンプ), 3.17-3.09 (4H, m), 3.04 (2H, t), 2.53 (2H, DMSO中), 2.39 (4H, s), 1.80 (2H, br s), 1.70 (2H, br s), 1.55-1.37 (4H, m), 0.85 (3H, t), 0.78 (3H, t)
（注意されたい。２つの交換可能なコハク酸塩プロトン及び３〜４酸性ＮＨ共鳴は、交換可能な共鳴のいくつかの非常に広い性質のために直接観察されず；融点Ｔｍ（ＤＳＣ）＝１４９℃。）
【００８８】
［実施例３］
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ａの調製
３ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩（実施例１又は２に示された通り調製し得る）を、アンカースターラー（anchor stirrer）（１５０ｒｐｍ）、凝縮器、投与装置及び濁度プローブを備えた１００ｍｌ反応器に装入した。２０ｇのアセトン／水混合物（９２．５／７．５ｍ／ｍ）を添加し、全体を５０℃に加熱し、全てが溶解するまで撹拌した。次いで、反応混合物を４５℃に冷却した。３００ｍｇアセトン中に懸濁された３０ｍｇの種晶（実施例１又は２に示された通り調製し得る）を添加した。次いで、反応混合物を１時間かけて２５℃に冷却した。全体を３．５時間撹拌した。次いで、２８ｍｌのＥｔＯＡｃを２時間かけて添加した。反応混合物を１時間かけて０℃にさらに冷却し、次いで全体を終夜撹拌した。反応混合物を、ガラスフリットを通して濾過し、次いで、得られた固体を５ｍｌアセトンで２回洗浄し、４０℃及び１ｍｂａｒで２４時間乾燥した。
【００８９】
[実施例４]
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ｂの調製
３ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（調製１におけるように調製し得る）を、アンカースターラー（１５０ｒｐｍ）を備えた１００ｍＬガラス反応器中において５０℃で２２．７ｇのアセトンに溶解した。５ｍＬのコハク酸溶液（アセトン中の２．９４重量％）を反応器に添加した。１０ｍｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩、結晶形態Ａ（実施例１又は２におけるように調製し得る）を、０．２ｇのアセトン中に懸濁し、超音波処理して反応器に添加した。別の４０ｍＬのコハク酸溶液（アセトン中の２．９４重量％）を２０時間かけて反応器にゆっくりと添加した。後に、混合物を２０℃に冷却し、次いで、１９時間さらに撹拌した。得られる懸濁液を濾過し、濾過ケークを室温で２回１０ｇのアセトンで洗浄する。
【００９０】
[実施例５]
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ｂの調製
３ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（調製１におけるように調製し得る）及び０．５ｇコハク酸を、アンカースターラー（１５０ｒｐｍ）を備えた１００ｍＬガラス反応器中において５０℃で２８．５ｇアセトン及び１．５ｇ水の混合物に溶解した。後に、溶液を２０℃に冷却した。７ｍｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩、結晶形態Ａ（実施例１又は２におけるように調製し得る）を、０．１８ｇのアセトン／水の９５：５（ｖ／ｖ）に懸濁し、超音波処理し、反応器に添加した。混合物を２０℃で１５時間撹拌し、次いで１０分間０℃に冷却した。得られた懸濁液を濾過し、濾過ケークを室温で１０ｇのアセトン／水の９５：５（ｖ／ｖ）で洗浄した。
【００９１】
[実施例６]
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ｂの調製
０．５３６ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（調製１におけるように調製し得る）及び０．１２ｇのコハク酸を、磁気的に撹拌されているガラスバイアル中において５０℃で１５．２５ｇの２−プロパノールに溶解した。溶液を２０℃に冷却し、次いで、この温度で終夜撹拌した。得られた懸濁液を濾過した。
【００９２】
[実施例７]
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ｂの調製
０．５３５ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（調製１におけるように調製し得る）及び０．１２ｇのコハク酸を、磁気的に撹拌されているガラスバイアル中において６０℃で７．２７ｇのメチルエチルケトンに溶解した。溶液を２０℃に冷却し、次いで、この温度で終夜撹拌した。得られた懸濁液を濾過した。
【００９３】
[実施例８]
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ｃの調製
３ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（調製１におけるように調製し得る）を、アンカースターラー（１５０ｒｐｍ）を備えた１００ｍＬガラス反応器中において６０℃で８０．３ｇエタノールに溶解した。２５ｍＬのコハク酸溶液（エタノール中２．９４重量％）を上記溶液に添加し、次いで２．５ｇの水を添加した。得られた混合物を３０℃に冷却した。３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩、形態Ａ（実施例１又は２の調製を使用して調製し得る）の種晶の５ｍｇを、０．１ｇエタノールに懸濁し、超音波処理し、反応器に添加した。得られた混合物を９６時間撹拌（１５０ｒｐｍ）した。後に、結晶を濾過によって集めた。濾過ケークを４０℃及び３０ｍｂａｒで２４時間乾燥した。
【００９４】
[実施例９]
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ｃの調製
１ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル（調製１におけるように調製し得る）及び０．１８ｇのコハク酸を、５０℃でガラスバイアル中において７．９７ｇメタノールに溶解した。溶液を０℃に冷却し、次いで、その温度で２４時間撹拌した。後に、結晶を濾過によって集め、６０℃及び１ｍｂａｒで３時間乾燥した。オフホワイトないし帯黄色の形態Ｃの結晶が得られた。
【００９５】
[実施例１０]
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩：結晶形態Ｃの調製
１０．１  種晶の調製：
アンカースターラー（１５０ｒｐｍ）、凝縮器、投与装置及び濁度プローブを備えた１００ｍｌ反応器中で、６ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩（実施例１又は２に示されたように調製し得る）を、２７ｇのアセトン／水混合物（９２．５／７．５ｍ／ｍ）に懸濁した。材料が溶解するまで、懸濁液を５０℃に加熱した。６００ｍｇアセトン中の４０ｍｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩（実施例９に示されたように調製された）を、５分間の超音波処理後に添加し、全体を６時間撹拌した。７６ｍｌのＥｔＯＡｃを４時間かけて添加し、次いで、反応混合物を２時間かけて２５℃に冷却した。沈殿を濾過し、１０ｍｌアセトンで２回洗浄し、次いで、１０ｍｂａｒ下で６０℃において終夜乾燥した。次いで、得られた固体を、５ｂａｒにおいてスパイラルジェットミルを使用して超微粉砕した。
【００９６】
１０．２  結晶形態Ｃの調製：
３ｇの３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩（実施例１又は２に示されたように調製し得る）を、アンカースターラー（１５０ｒｐｍ）、凝縮器、投与装置及び濁度プローブを備えた１００ｍｌ反応器中に装入した。２９．５ｇのアセトン／水の混合物（９２．５／７．５ｍ／ｍ）を添加し、全体を５０℃に加熱し、全てが溶解するまで撹拌した。３００ｍｇアセトン中に懸濁した９０ｍｇの種晶（１０．１を参照されたい）を添加し、全体を４時間撹拌した。３８ｍｌのＥｔＯＡｃを４時間かけて添加し、次いで、反応混合物を２時間撹拌し、次いで２時間かけて２５℃に冷却した。全体を終夜撹拌し、次いで、ガラスフリットを通して濾過した。次いで、得られた固体を５ｍｌアセトンで２回洗浄し、４０℃で１０ｍｂａｒにおいて２４時間乾燥した。
【００９７】
３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステルコハク酸塩の結晶形態の特徴付け：
全ての粉末Ｘ線回折パターンを反射モードで記録した。
形態Ａ：
ａ）粉末Ｘ線回折
ａ１）粉末Ｘ線回折パターンを、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用するＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録した。こうして測定された実施例３のＸ線回折パターンが、図１に示されており、最重要線の反射線ごとに下表１に示されている。２シータ角の誤差限界は±０．２°である。
【００９８】
【表１】
2015510925.tif 000007
【００９９】
ａ２）粉末Ｘ線回折パターンを、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用するＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録した。実施例１又は２についてこうして測定されたＸ線回折パターンが、図４に示されており、最重要線の反射線ごとに下表２に示されている。２シータ角の誤差限界は±０．２°である。
【０１００】
【表２】
2015510925.tif 000008
【０１０１】
ｂ）元素分析：
含水量（カール−フィッシャー滴定）：＜０．２％ｍ／ｍ
【０１０２】
【表３】
2015510925.tif 000009
実験データは、３−（３−｛２−［（Ｅ）−３，５−ジアミノ−６−クロロ−ピラジン−２−カルボニルイミノ］−１，３，８−トリアザ−スピロ［４．５］デカン−８−カルボニル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸ジプロピルカルバモイルメチルエステル及びコハク酸によって形成される１：１の塩の予測と一致する。
【０１０３】
ｃ）示差走査熱量測定（ＤＳＣ）：
ＤＳＣトレースを、アルミニウムパン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、タイプＢＯ１４−３０１８）を備えたＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｄｉａｍｏｎｄ  ＤＳＣ装置；加熱速度  ２０Ｋ／分、温度範囲：３０から２５０℃で記録した。
図２は、形態ＡのＤＳＣトレースを示している。溶融吸熱：Ｔｏｎｓｅｔ＝１５３．６℃、ΔＨ＝７６．８Ｊ／ｇ。
図５は、形態ＡのＤＳＣトレースを示している。溶融吸熱：Ｔｏｎｓｅｔ＝１５２．５℃、ΔＨ＝７４．５Ｊ／ｇ。
【０１０４】
ｃ）赤外分光法：
図３は、形態Ａ（実施例３）の赤外線スペクトルを示しており、全反射減衰（ＡＴＲ）モードにおいてＢｒｕｋｅｒ  Ａｌｐｈａ装置で記録された。測定パラメーターは、次の通りであった。範囲４００〜４０００ｃｍ−１、分解能２ｃｍ−１、６４走査、速度７．５ｋＨｚ、アポディゼーション：ブラックマン−ハリス３項。確認された主要なピークは、１６２１．５ｃｍ−１、１１５７．５ｃｍ−１及び１０８０．７ｃｍ−１である。
【０１０５】
形態Ｂ：
粉末Ｘ線回折：
粉末Ｘ線回折パターンを、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用するＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録した。こうして測定されたＸ線回折パターンが図６に示されており、最重要線の反射線ごとに下表４に示されている。２シータ角の誤差限界は±０．２°である。
【０１０６】
【表４】
2015510925.tif 000010
【０１０７】
形態Ｃ：
ａ）粉末Ｘ線回折：
ａ１）粉末Ｘ線回折パターンを、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用するＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録した。こうして測定されたＸ線回折パターンが図７に示されており、最重要線の反射線ごとに下表５に示されている。２シータ角の誤差限界は±０．２°である。
【０１０８】
【表５】
2015510925.tif 000011
【０１０９】
ａ２）粉末Ｘ線回折パターンを、ＣｕＫα放射線（λ＝１．５４１８Å）を使用するＢｒｕｋｅｒ（商標）Ｄ８回折計で記録した。実施例８又は９についてこうして測定されたＸ線回折パターンが図１０に示されており、最重要線の反射線ごとに下表６に示されている。２シータ角の誤差限界は±０．２°である。
【０１１０】
【表６】
2015510925.tif 000012
ＸＲＰＤデータの記録中の実験室中の温度は、２１及び２６℃の間で変動した。
【０１１１】
ｂ）示差走査熱量測定（ＤＳＣ）：
ＤＳＣトレースを、アルミニウムパン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、タイプＢＯ１４−３０１８）を備えたＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｄｉａｍｏｎｄ  ＤＳＣ装置；加熱速度  ２０Ｋ／分、温度範囲：３０から２５０℃で記録した。
図８は、形態Ｃ（実施例１０）のＤＳＣトレースを示している。溶融吸熱：Ｔｏｎｓｅｔ＝１６５．７℃、ΔＨ＝１０２．２Ｊ／ｇ。
図１１は、形態Ｃ（実施例８、９）のＤＳＣトレースを示している。溶融吸熱：Ｔｏｎｓｅｔ＝１５９．７℃、ΔＨ＝９１．８Ｊ／ｇ。
【０１１２】
ｃ）赤外分光法：
図９は、形態Ｃ（実施例１０）の赤外線スペクトルを示しており、全反射減衰（ＡＴＲ）モードにおいてＢｒｕｋｅｒ  Ａｌｐｈａ装置で記録された。測定パラメーターは、次の通りであった。範囲４００〜４０００ｃｍ−１、分解能２ｃｍ−１、６４走査、速度７．５ｋＨｚ、アポディゼーション：ブラックマン−ハリス３項。確認された主要なピークは、１６２６．５ｃｍ−１、１１５５ｃｍ−１及び１０８４．７ｃｍ−１である。
【図１】
2015510925.tif 000014
【図２】
2015510925.tif 000015
【図３】
2015510925.tif 000016
【図４】
2015510925.tif 000017
【図５】
2015510925.tif 000018
【図６】
2015510925.tif 000019
【図７】
2015510925.tif 000020
【図８】
2015510925.tif 000021
【図９】
2015510925.tif 000022
【図１０】
2015510925.tif 000023
【図１１】
2015510925.tif 000024
【国際調査報告】
2015510925.tif 000025
2015510925.tif 000026