【手続補正書】
【提出日】平成22年4月1日(2010.4.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＩＧＦ−１を含む水溶液を、沈殿剤を含むリザーバ液と混合して混合物を形成し；
（ｂ）混合物を結晶化する：
段階を含んでなる、ＩＧＦ−１を結晶化する方法。
【請求項２】
ＩＧＦ−１が原核生物細胞から得られる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
段階（ａ）の水溶液が１−５０ｍｇ／ｍｌのＩＧＦ−１を含む請求項１の方法。
【請求項４】
段階（ａ）の水溶液が５−１５ｍｇ／ｍｌのＩＧＦ−１を含む請求項１の方法。
【請求項５】
沈殿剤が、ポリエチレングリコール、クエン酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、カコジル酸ナトリウム、又はそれらの混合物である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
沈殿剤が、クエン酸ナトリウム又はカコジル酸ナトリウムで緩衝化されたポリエチレングリコールである請求項１に記載の方法。
【請求項７】
沈殿剤が、ポリエチレングリコールの場合は２０−２５％、クエン酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、又はカコジル酸ナトリウムの場合は１−１０Ｍの量でリザーバ液中に存在する請求項５に記載の方法。
【請求項８】
リザーバ液が界面活性剤をさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項９】
界面活性剤が１０−５０ｍＭの量で存在する請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
界面活性剤がＮ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミンである請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
リザーバ液のｐＨが４−１０である請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ｐＨが６．５である請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
段階（ｂ）が、蒸気拡散結晶化、バッチ式結晶化、液橋結晶化、又は透析結晶化により実施される請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
段階（ｂ）が蒸気拡散結晶化により実施される請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
段階（ｂ）の後にＩＧＦ−１を再結晶化することをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
再結晶化がメチルペンタンジオールを用いて生じる請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
結晶化ＩＧＦ−１を単離することをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
水溶液を、０．１Ｍクエン酸ナトリウム又は０．１Ｍカコジル酸ナトリウムのいずれかによりｐＨ６．５に緩衝化された２４％ポリエチレングリコール及び１．４ｍＭのＮ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミン界面活性剤１μｌと混合し、この溶液を、結晶化粒が形成されるまで、０．１Ｍクエン酸ナトリウム又は０．１Ｍカコジル酸ナトリウムのいずれかによりｐＨ６．５に緩衝化された１ｍＬの２４％ポリエチレングリコールを用いた蒸気拡散結晶化により平衡化させ、２μｌの１００％メチルペンタンジオールを、一晩かけて結晶を溶解するために結晶化粒に添加して、新しい結晶を形成させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の方法により製造される結晶化ＩＧＦ−１。
【請求項２０】
請求項１９に記載の結晶と担体を含有する組成物。
【請求項２１】
ＩＧＦ−１が、再可溶化した場合に生物学的に活性である請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
アゴニスト障害を患っている哺乳動物を治療するための組成物であって、請求項２１に記載の組成物の有効量を含む組成物。
【請求項２３】
哺乳動物がヒトである請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
障害が、糖尿病、肥満症、心臓機能障害、ＡＩＤＳ関連消耗、腎臓障害、神経障害、全身成長障害、又は免疫学的障害である請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
（ａ）ＩＧＦＢＰ−１又は−３のＩＧＦ−１への結合を阻害するＮ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミンの能力とそのように結合を阻害するＩＧＦ−１に対する候補の間接的アゴニストの能力を比較し；
（ｂ）候補アゴニストが少なくともＮ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミンと同様にそのような結合を阻害するかどうか決定する：
段階を含んでなるＩＧＦ−１の間接的アゴニストを同定する方法。
【請求項２６】
比較が、Ｎ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミンと候補アゴニストとの間の競合アッセイにより達成される請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
結合の阻害が、Ｎ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミン又は候補アゴニストを、バクテリオファージ粒子上で発現させたＩＧＦ−１とプレインキュベートし、プレートベースのエライザアッセイにおいてＩＧＦＢＰ−１又はＩＧＦＢＰ−３へのＩＧＦ−１の残留結合性を測定することにより測定される請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
ＩＧＦ−１の間接的アゴニストの同定の方法において、ＩＧＦ−１の候補間接アゴニストとＩＧＦ−１とを共結晶化させて共結晶構造を形成し、候補アゴニストがＩＧＦ−１上の２つパッチの一又は二と結合するかどうかを決定することを含み、一のパッチがアミノ酸残基Ｇｌｕ３，Ｔｈｒ４，Ｌｅｕ５，Ａｓｐ１２，Ａｌａ１３，Ｐｈｅ１６，Ｖａｌ１７，Ｃｙｓ４７，Ｓｅｒ５１，Ｃｙｓ５２，Ａｓｐ５３，Ｌｅｕ５４，及びＬｅｕ５７を有し、第二のパッチがアミノ酸残基Ｖａｌ１１，Ｇｌｎ１５，Ｐｈｅ２３，Ｐｈｅ２５，Ａｓｎ２６，Ｖａｌ４４，Ｐｈｅ４９，及びＡｒｇ５５を有し、共結晶構造中で任意のパッチの列挙された各アミノ酸残基と候補アゴニストとの間に６オングストローム以下の少なくとも１つの接触が存在する場合に結合が生じる方法。
【請求項２９】
候補アゴニストが、少なくともＮ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミンと同様にＩＧＦ−１に対するＩＧＦＢＰ−１又は−３の結合を阻害する請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
結合の阻害が、Ｎ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミン及び候補アゴニスト間の競合アッセイを用いて測定される請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
結合の阻害が、Ｎ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミン又は候補アゴニストを、バクテリオファージ粒子上で発現されたＩＧＦ−１とプレインキュベーションし、プレートベースのエライザアッセイにおいてＩＧＦＢＰ−１又はＩＧＦＢＰ−３へのＩＧＦ−１の残留結合性を測定することにより測定される請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＩＧＦ−１とＮ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミンの共結晶複合体。
【請求項３３】
ＩＧＦ−１の３次元構造を決定する方法において、
（ａ）請求項１に記載の方法を用いてＩＧＦ−１を結晶化させ；
（ｂ）結晶化ＩＧＦ−１に照射して、結晶化ＩＧＦ−１の回折パターン特性を取得し；
（ｃ）回折パターンをＩＧＦ−１の３次元構造へ変換する：
ことを含んでなる方法。
【請求項３４】
ＩＧＦ−１の３次元表面構造を模倣する化合物を設計する方法において、
（ａ）ＩＧＦ−１の３次元構造を決定し；
（ｂ）ＩＧＦ−１の３次元表面構造を模倣する化合物を設計する；
段階を含んでなる方法。
【請求項３５】
ＩＧＦ−１と結合し、ＩＧＦＢＰ、又はＩＧＦ−１と結合するレセプター、の結合をブロックするペプチドミメティックを同定する方法であって：
（ａ）別表１に与えられた構造パラメーター又は構造座標を持つ分子構造データベースを検索し；
（ｂ）該データベースからＩＧＦ−１の構造パラメータ又は構造座標を模倣する分子を選択する；
段階を含んでなる方法。
【請求項３６】
分子複合体の３次元構造の少なくとも一部を決定する方法であって、前記複合体がＩＧＦ−１を含み、前記方法が：
（ａ）ＩＧＦ−１の結晶の構造座標を決定し；
（ｂ）構造座標から位相を計算し；
（ｃ）段階（ｂ）において得られた位相から電子密度地図を計算し；
（ｄ）前記電子密度地図に基づいて複合体の少なくとも一部の構造を決定する；
段階を含んでなる方法。
【請求項３７】
段階（ａ）で用いられる構造座標が、別表１に記述されたものと実質的に同一であるか、別表１の座標と実質的に同じ結晶を記述する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ＩＧＦ−１又はそれらの複合体、と会合する化学物質の能力を評価する方法であって、該方法が：
（ａ）化学物質と、ＩＧＦ−１又はそれらの複合体間の適合操作を実施するためにコンピュータ又は実験による手段を用い、それにより該会合に関連したデータを取得し；
（ｂ）段階（ａ）で得られたデータを解析して、化学物質とＩＧＦ−１又はそれらの複合体間の会合の特性を決定する；
段階を含んでなる方法。
【請求項３９】
化学物質がＩＧＦ−１及びそのレセプター間、又はＩＧＦ−１及びその結合タンパク質の少なくとも１つとの間のインビボ又はインビトロでの会合を妨害するか、あるいはＩＧＦ−１上の結合部位と会合する、請求項３８に記載の方法により同定される化学物質。
【請求項４０】
配列番号：１に記載のヒトインスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）とＮ，Ｎ−ビス（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミンとを溶液中に含む組成物。
【請求項４１】
疾患が、高血糖疾患、肥満、脂肪量対除脂肪比率の上昇、心臓機能不全、消耗、腎疾患、肺疾患、神経性疾患、神経筋性疾患、ＧＨ−不全、全身成長疾患、ターナー症候群、及び免疫学的疾患からなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項４２】
高血糖疾患が、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、重篤なインシュリン耐性、高インシュリン血症、高脂血症、インシュリン耐性糖尿病、マンデンホール症候群、ヴェルナー症候群、妖精症、脂肪組織萎縮性糖尿病、及び他の脂肪組織萎縮症からなる群から選択される、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
腎疾患が、急性及び慢性腎不全、末期慢性腎不全、糸球体腎炎、間質性腎炎、腎盂腎炎、糸球体硬化症、例えば、糖尿病患者におけるキンメルスティール‐ウィルソン及び腎臓移植後の腎不全からなる群から選択される、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
免疫学的疾患が、免疫不全、ＣＤ４数の減少、免疫寛容の低下、及び化学治療誘発性組織傷害からなる群から選択される、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４５】
神経性疾患あるいは神経筋性疾患が、末梢神経障害、多発性硬化症、筋ジストロフィー、筋緊張性ジストロフィー、消耗に関連する異化状態からなる群から選択される、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４６】
全身成長疾患が、短身及びラロン症候群からなる群から選択される、請求項４１に記載の組成物。