【手続補正書】
【提出日】平成22年5月11日(2010.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体培養条件下で分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することを特徴とするナトリアルバ（Natrialba）属に属する微生物。
【請求項２】
ＮａＣｌ濃度が１０〜３０％（ｗ／ｖ）の液体培養条件下で分子量が１３０万以上のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を生産することを特徴とする請求項１に記載の微生物。
【請求項３】
ＮａＣｌ濃度が１５〜３０％（ｗ／ｖ）の液体培養条件下で分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することを特徴とする請求項２に記載の微生物。
【請求項４】
ポリ−γ−L−グルタミン酸の分子量が２００万以上であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の微生物。
【請求項５】
ポリ−γ−L−グルタミン酸の分子量が３５０万以上であることを特徴とする請求項４に記載の微生物。
【請求項６】
ポリ−γ−L−グルタミン酸の生産能を有する微生物を変異処理して得られることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の微生物。
【請求項７】
変異処理に際して、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）もしくはエチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）を用いられたことを特徴とする請求項６に記載の微生物。
【請求項８】
ＮａＣｌ濃度が１０％（ｗ／ｖ）以下の固体培養条件下で、ムコイド状を呈するポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の微生物。
【請求項９】
ナトリアルバ  エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）であることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の微生物。
【請求項１０】
微生物が、ナトリアルバ  エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３０−８２株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０７４７）、ナトリアルバ  エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３０−２４３株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０７４８）およびナトリアルバ  エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３１−２６４株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０７４９）よりなる群から選択されたいずれかであることを特徴とする請求項９に記載の微生物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の微生物を培養し、その培養液より分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸を回収する事を特徴とする高分子量ポリ−γ−L−グルタミン酸の製造方法。
【請求項１２】
培養液中の塩濃度が５〜３０％（ｗ／ｖ）であることを特徴とする請求項１１に記載の分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸の製造方法。
【請求項１３】
請求項１１または１２に記載の製造方法より得られる分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸。
【請求項１４】
少なくとも下記の（ａ）〜（ｃ）の各工程を含むことを特徴とするポリ−γ−L−グルタミン酸生産変異株の選抜方法。
（ａ）ポリ−γ−L−グルタミン酸の生産能を有する微生物を変異処理する工程
（ｂ）変異処理した該微生物を、親株がムコイド状のコロニーを形成しない条件の固体培養条件下で培養し、ムコイド状を呈する変異株を選抜する工程
（ｃ）（ｂ）で選抜した変異株を液体培養条件下で培養し、親株と比較しポリ−γ−L−グルタミン酸の生産性がより高まった変異株をさらに選抜する工程
【請求項１５】
少なくとも下記の（ａ）〜（ｃ）の各工程を含むことを特徴とするポリ−γ−L−グルタミン酸生産変異株の選抜方法。
（ａ）ポリ−γ−L−グルタミン酸の生産能を有する微生物を変異処理する工程
（ｂ）変異処理した該微生物を、ＮａＣｌ濃度が１５％（ｗ／ｖ）以下の固体培養条件下で培養し、ムコイド状を呈する変異株を選抜する工程
（ｃ）（ｂ）で選抜した変異株を液体培養条件下で培養し、親株と比較しポリ−γ−L−グルタミン酸の生産性がより高まった変異株をさらに選抜する工程
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明者らは鋭意検討した結果、以下に示す手段により、上記課題を解決できることを見出し、本願発明に到達した。
すなわち、本願発明は、以下の構成からなる。
１．液体培養条件下で分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することを特徴とするナトリアルバ（Natrialba）属に属する微生物。
２．ＮａＣｌ濃度が１０〜３０％（ｗ／ｖ）の液体培養条件下で分子量が１３０万以上のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を生産することを特徴とする１の微生物。
３．ＮａＣｌ濃度が１５〜３０％（ｗ／ｖ）の液体培養条件下で分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することを特徴とする２の微生物。
４．ポリ−γ−L−グルタミン酸の分子量が２００万以上であることを特徴とする１〜３のいずれかの微生物。
５．ポリ−γ−L−グルタミン酸の分子量が３５０万以上であることを特徴とする４の微生物。
６．ポリ−γ−L−グルタミン酸の生産能を有する微生物を変異処理して得られることを特徴とする１〜５のいずれかの微生物。
７．変異処理に際して、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）もしくはエチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）を用いられたことを特徴とする６の微生物。
８．ＮａＣｌ濃度が１０％（ｗ／ｖ）以下の固体培養条件下で、ムコイド状を呈するポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することを特徴とする１〜７のいずれかの微生物。
９．ナトリアルバ  エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）であることを特徴とする１〜８のいずれかの微生物。
１０．微生物が、ナトリアルバ  エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３０−８２株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０７４７）、ナトリアルバ  エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３０−２４３株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０７４８）およびナトリアルバ  エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３１−２６４株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０７４９）よりなる群から選択されたいずれかであることを特徴とする９の微生物。
１１．１〜１０のいずれかの微生物を培養し、その培養液より分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸を回収する事を特徴とする高分子量ポリ−γ−L−グルタミン酸の製造方法。
１２．培養液中の塩濃度が５〜３０％（ｗ／ｖ）であることを特徴とする１１の分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸の製造方法。
１３．１１または１２の製造方法より得られる分子量が１３０万以上のポリ−γ−L−グルタミン酸。
１４．少なくとも下記の（ａ）〜（ｃ）の各工程を含むことを特徴とするポリ−γ−L−グルタミン酸生産変異株の選抜方法。
（ａ）ポリ−γ−L−グルタミン酸の生産能を有する微生物を変異処理する工程
（ｂ）変異処理した該微生物を、親株がムコイド状のコロニーを形成しない条件の固体培養条件下で培養し、ムコイド状を呈する変異株を選抜する工程
（ｃ）（ｂ）で選抜した変異株を液体培養条件下で培養し、親株と比較しポリ−γ−L−グルタミン酸の生産性がより高まった変異株をさらに選抜する工程
１５．少なくとも下記の（ａ）〜（ｃ）の各工程を含むことを特徴とするポリ−γ−L−グルタミン酸生産変異株の選抜方法。
（ａ）ポリ−γ−L−グルタミン酸の生産能を有する微生物を変異処理する工程
（ｂ）変異処理した該微生物を、ＮａＣｌ濃度が１５％（ｗ／ｖ）以下の固体培養条件下で培養し、ムコイド状を呈する変異株を選抜する工程
（ｃ）（ｂ）で選抜した変異株を液体培養条件下で培養し、親株と比較しポリ−γ−L−グルタミン酸の生産性がより高まった変異株をさらに選抜する工程