(57)【要約】  本発明は、ＣＣＲ３の阻害によって、新生血管型ＡＭＤを治療および予防するために有用な組成物および方法を提供する。前記組成物および方法は、限定されるものではないが新生血管型ＡＭＤなどの疾患および障害を治療および予防するために有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体において新生血管形成に関連する眼障害または疾患を治療および／または予防する方法であって、新生血管形成に関連する眼疾患もしくは障害を有する、またはそれを発症するリスクのある被験体を特定すること、およびそれを必要とする被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害するための薬剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項２】
前記眼疾患または障害が新生血管型ＡＭＤである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
被験体において脈絡膜血管透過性の増大に関連する眼障害または疾患を治療および／または予防する方法であって、新生血管型ＡＭＤもしくは脈絡膜血管透過性の増大に関連する障害を有する、またはそれを発症するリスクのある被験体を特定すること、およびそれを必要とする被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害するための薬剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項４】
前記眼疾患または障害が乾燥型または地図状萎縮型ＡＭＤである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＡＭＤを有する、またはＡＭＤのリスクのある被験体において、ＡＭＤを治療および／または予防する方法であって、前記被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項６】
ＣＣＲ３タンパク質の阻害がＡＭＤの症状を軽減または停止する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＡＭＤを有する、またはＡＭＤのリスクのある被験体において、ＡＭＤを治療および／または予防する方法であって、前記被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与すること（ここで、ＣＣＲ３タンパク質の阻害はＡＭＤの症状を軽減または停止する）、およびさらに前記薬剤と組み合わせて抗ＶＥＧＦ阻害剤を投与することを含んでなる、方法。
【請求項８】
脈絡膜新生血管形成および／または続発する脈絡膜血管透過性の増大を発症するリスクのある被験体において、萎縮性網膜を背景とするＣＮＶ病変の発症を予防する方法であって、前記被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなり、ＣＣＲ３タンパク質の阻害がこのような病変の発症を予防し、前記薬剤は単独で、または抗ＶＥＧＦ阻害剤と組み合わせて投与することができる、方法。
【請求項９】
萎縮型・非血管型ＡＭＤから新生血管型ＡＭＤへの移行を予防する方法であって、被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなり、ＣＣＲ３タンパク質の阻害がこのような新生血管型ＡＭＤへの移行を予防し、前記薬剤は単独で、または抗ＶＥＧＦ阻害剤と組み合わせて投与することができる、方法。
【請求項１０】
前記薬剤が４−［［［［［［（２ｓ）−４−［（３，４−ジクロロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］メチル］−アミノ］カルボニル］−アミノ］メチル］ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩である、請求項１、３、５、７、８または９に記載の方法。
【請求項１１】
前記薬剤がＮ−［［（２Ｓ）−４−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］−メチル］−３−［（メチルスルホニル）アミノ］−ベンゼンアセトアミド、またはその薬学上許容される塩である、請求項１、３、５、７、８または９に記載の方法。
【請求項１２】
前記被験体が哺乳動物である、請求項１、３、５、７、８または９に記載の方法。
【請求項１３】
前記被験体がヒトである、請求項１、３、５、７、８または９に記載の方法。
【請求項１４】
前記被験体に付加的治療薬を投与することをさらに含んでなる、請求項１、３、５、７、８または９に記載の方法。
【請求項１５】
前記付加的治療薬が、パゾパニブ、ルセンティス（商標）、アバスチン（商標）、およびアフリバーセプト（商標）から選択される抗ＶＥＧＦ阻害剤である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＣＣＲ３を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与した後に、前記被験体の視力を測定することによって治療をモニタリングすることをさらに含んでなる、請求項１、３、５、７、８または９に記載の方法。
【請求項１７】
眼の新生血管型障害の治療および／または予防を目的とする医薬の調製のための、ＣＣＲ３タンパク質の発現および／または活性を阻害する薬剤の使用。
【請求項１８】
ＡＭＤの治療および／または予防を目的とする医薬の調製のための、ＣＣＲ３タンパク質の発現および／または活性を阻害する薬剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、ＣＣＲ３のまたはＶＥＧＦの発現および／または活性を阻害する薬剤、およびＶＥＧＦシグナル伝達阻害剤を単独でまたは組み合わせて使用する、眼疾患の治療および／または予防のための方法、より詳しくは、乾燥型（萎縮型）黄斑変性に続発する新生血管型加齢黄斑変性などの眼疾患の治療および／または予防に関する。
【背景技術】
【０００２】
新生血管形成（血管新生とも呼ばれる）は、新たな血管を形成するプロセスである。新生血管形成は通常の発生の過程で見られ、また、組織の損傷後の創傷治癒にも重要な役割を果たしている。しかしながら、新生血管形成はまた、例えば、癌、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、乾癬、ならびに糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫および新生血管型ＡＭＤを含む眼の疾患をはじめとするいくつかの病的状態の重要な原因として関連づけられている。血管漏出および／または新生血管形成に関連する眼疾患は、先進国において、大部分の視力障害および失明の原因となっている(Campochiaro (2004) Expert Opin. Bioi. Ther.4:1395-402)。眼の新生血管形成および血管透過性の増大に関連する眼障害は、視力低下および失明の主因である。
【０００３】
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、先進国における失明の主要な原因である。ＡＭＤには、萎縮型（乾燥型ＡＭＤ）と滲出型ＡＭＤの２つの主要な臨床像がある。萎縮型ＡＭＤは、網膜色素上皮（ＲＰＥ）と神経網膜の変性を特徴とする。初期の萎縮型ＡＭＤは、ＲＰＥ細胞層下のドルーゼンの形成を伴う。初期の萎縮型ＡＭＤは、ＲＰＥが完全に変性し黄斑部に境界鮮明なＲＰＥ萎縮領域を形成する末期疾患「地図状萎縮」へと進行し得る。この形態の疾患では、ＲＰＥの変性は黄斑の光受容器の二次的な死滅をもたらし、これらの場合、重篤な視力低下に至る。
【０００４】
乾燥型または地図状萎縮型ＡＭＤに罹患しているＡＭＤ患者のおよそ１０〜２０％が続発性の脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）を発症する。この疾患の形態は「滲出型ＡＭＤ」として知られ、最も重篤な視力低下の一部に関連すると思われる。滲出型ＡＭＤでは、脈絡膜内で新たな脈絡膜血管（新生血管）が増殖するか、またはブルッフ膜を突き破ってＲＰＥおよび神経網膜内およびその下方へと増殖する場合がある（例えば、Campochiaro et al. (1999) Mol. Vis. 5:34参照）。典型的な場合では、萎縮型ＡＭＤは、滲出型の発症前に眼内で発症するが、まれにではあるが、萎縮型の先行発症がなく新生血管型または滲出型が発症する場合がある。両形態の疾患とも、光受容細胞の死滅のために視力低下が起こるが、滲出型ＡＭＤでは、ＣＮＶ過程で形成された漏出性血管（血管透過性の増大）からの体液の漏出および場合によっては内出血もまた視力低下を引き起こす。
【０００５】
ＡＭＤについては、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）またはＶＥＧＦ受容体シグナル伝達経路のいずれかを阻害する様々な分子により、滲出型ＡＭＤのいくつかの側面、特に、ＣＮＶからの漏出性血管の出血の軽減に取り組むための新規な治療の開発が進められている。
【０００６】
ケモカインは、白血球の輸送および動員に関与する小タンパク質の大きなファミリーである（総説としては、Luster, New Eng. J. Med., 338, 436-445 (1998)参照）。ケモカインは広範な細胞により放出され、好酸球、好塩基球、好中球、マクロファージ、ＴおよびＢリンパ球をはじめとする種々の細胞種を誘引および活性化する働きをする。ケモカインには、ケモカインタンパク質のアミノ末端近傍の２個の保存されたシステイン残基の間隔に応じて分類される、ＣＸＣ−（α）ケモカインとＣＣ−（β）ケモカインという２つの主要なファミリーが存在する。ケモカインは、Ｇタンパク質共役７回膜貫通型ドメインタンパク質のファミリーに属する特異的な細胞表面受容体に結合する（総説としては、Luster, 1998参照）。ケモカイン受容体が活性化されると、いくつかの応答の中でも、細胞内カルシウムの増加、細胞形状の変化、細胞接着分子の発現の増加、脱顆粒、および細胞移動（走化性）の促進が起こる。
【０００７】
現在までのところ、９つのメンバーのＣＣケモカイン受容体が同定されている（ＣＣＲ−１〜９）。本発明に特に重要なのは、主として好酸球上で、さらにまた好塩基球、マスト細胞、およびＴｈ２細胞上でも発現されるＣＣケモカイン受容体３（ＣＣＲ−３）である(Luster, 1998)。ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−３、およびＭＣＰ−４のようにＣＣＲ−３に作用するケモカインは、好酸球を動員および活性化することが知られている。
【０００８】
ヒト微小血管内皮細胞はＣＣＲ３を発現すること(Salcedo et al., 2001)、およびＣＣＲ３受容体で活性なアゴニストは血管内皮に走化性物質として働き得ることがこれまでに示されている。このプロセスは、ニワトリ漿尿膜および大動脈輪の両方の血管内皮細胞に、この走化性作用を介して血管新生の促進をもたらし得る(Salcedo et al., 2001)。
【０００９】
これらの所見は次にＡＭＤの研究へと拡張され(Takeda et al., 2009)、抗ＣＣＲ３抗体、抗ＣＣＲ３アゴニスト抗体、またはＣＣＲ３の薬理学的阻害剤の硝子体内注射が、マウスにおけるレーザー誘導後のＣＮＶ程度の限定に有効であったことを示した。これらのデータは、ＣＣＲ３または特異的ＣＣＲ３アゴニスト遺伝子のいずれかに同型接合性の遺伝子欠損を有するレーザー処理マウスにおいて確認された。他のデータもまた、ＣＣＲ３アゴニストであるＣＣＬ１１およびＣＣＬ２４がＣＮＶのレーザー誘導の後に誘導されたことを示した(Takeda et al., 2009)。
【００１０】
これらの研究を、好酸球または肥満細胞（すなわちＣＣＲ３の発現に最も関連のある細胞）の産生に欠陥があるマウスに拡張したところ、これらのマウスはレーザー光凝固に応答してＣＮＶを生じる能力を保持し、この疾患の遮断において、硝子体内ＣＣＲ３拮抗作用に対してやはり感受性があったことが実証された。これらの研究は、レーザー誘導性のＣＮＶの発生の限定におけるＣＣＲ３の作用機序が全身の好酸球または肥満細胞に対する作用によるものではないことを強く示唆する。これらのモデルにおいて硝子体内抗ＣＣＲ３療法を用いて疾患を管理したという事実は、眼のより限局的な効果の裏付けともなる。抗ＣＣＲ３療法がレーザー誘導性のＣＮＶ病変へのマクロファージまたは好中球の動員を限定しないことを示唆する研究もある(Takeda et al., 2009)。
【００１１】
現在、さらなる独立したいくつかの研究がＣＮＶ  ＡＭＤのマウスモデルにおけるこれらの知見を確認しており、具体的には、ＹＭ−３４４０３１の経口投与がレーザー誘導性のＣＮＶ  ＡＭＤモデルに効果的であった(Mizutani et al., 2011)。しかしながら、ＣＣＲ３アンタゴニストが膜下腔に投与された場合、このような薬剤はマトリゲルの併用投与により誘導される血管新生を限定することができないが、抗ＶＥＧＦ治療薬はこのモデルで効果的であった(Li et al., 2010)。
【００１２】
他の研究において、抗ＣＣＲ３抗体を用いてＣＣＲ３を中和しても、レーザーに応答して眼で生成されたＶＥＧＦの量は変化しなかったが、このことは、ＣＮＶ  ＡＭＤの制御においてＣＣＲ３とＶＥＧＦの作用が非依存的であり得ることを示唆している。同様に、抗ＶＥＧＦ  ｍＡｂを中和する硝子体内注射は、脈絡膜内皮細胞上に存在するＣＣＲ３の発現に効果がなかったが、このことはさらに、齧歯類におけるＣＮＶの制御における非依存的作用というこの仮説を裏付ける(Takeda et al., 2009)。
【００１３】
角膜の病的血管新生を調べる研究でも、損傷／プロスタグランジンＥ２誘導性血管新生はＶＥＧＦに依存しなかったが、エオタキシンとは相関があったという所見が得られたが、このこともまた、エオタキシン／ＣＣＲ３軸が血管新生の制御においてＶＥＧＦに非依存的な機構であり得ることを示唆している(Liclican et al., 2010)。
【００１４】
抗ＶＥＧＦ治療薬は、ヒトおよび動物の両モデルで、血管新生に対する直接的作用というよりも、網膜に進入した新生脈絡膜血管の血管透過性を軽減することによってＣＮＶを制御することが一般に認知されている。ヒト冠動内皮細胞の培養系において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養物の透過性がＣＣＲ３のアゴニスト（エオタキシン）により増強され得ることを示唆した研究もあり(Jamaluddin et al., 2009)、これはＣＣＲ３拮抗作用が一般に眼の血管の血管透過性に影響を及ぼす可能性を示している。
【００１５】
Takeda et al., 2009による初期の研究では、ＣＣＲ３はヒトＣＮＶ網膜では発現されたが、ＣＮＶ疾患への進行の臨床エビデンスがない萎縮型ＡＭＤのみを持った網膜では発現されなかったことが示された。この発現は脈絡膜血管系のマーカーであるＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１）と共局在し、網膜線維症および黒色腫の両方では染色が存在しないことにより、ＣＮＶ  ＡＭＤにおける血管に対する特異性が確認された(Takeda et al., 2009)。天然ＣＣＲ３アゴニストであるエオタキシン−１（ＣＣＬ１１）、エオタキシン−２（ＣＣＬ２４）およびエオタキシン−３（ＣＣＬ２６）もまた総て、間質で発現され、外科的に摘出されたヒト脈絡膜新生血管型ＡＭＤ組織において血管と共局在することが判明した(Takeda et al., 2009)。マウスモデルと同様のモデルにおいて、これまでに、好酸球または肥満細胞がヒトＡＭＤに関連があるという証拠はなく、実際に、ヒトＣＮＶ  ＡＭＤ病変においてこのような細胞の位置決定する試みでも有意な知見は得られなかった(Takeda et al., 2009)。さらに、エオタキシンは、ヒトＡＭＤの可能性のある血清バイオマーカーと同定されており(Mo et al. 2010)、Ｉ型およびＩＩ型ＡＲＥＤＳ患者ならびに萎縮型ＡＭＤと有意に関連しているが（ｐ＜−０．０２〜ｐ＜０．００５）、興味深いことにＣＮＶ  ＡＭＤには関連がないことが判明したものの、この同じ研究で死後のヒトの眼を検査したところ、初期ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤおよびＣＮＶ  ＡＭＤとの相関が示唆され、ＣＮＶ  ＡＭＤの新生血管型内皮には最も強い染色が伴っていた。エオタキシンはまた、未熟児網膜症患者からの硝子体サンプルの比較において、血管活性疾患および血管不活性疾患と有意に関連することも判明し、網膜循環における血管新生の促進へのＣＣＲ３の関与の可能性が示唆された(Sato et al., 2009)。
【００１６】
従って、これまでに、ＡＭＤは機構的に血管新生と血管透過性という２つの異なる無関連の経路から発症することが証明されている。ＡＭＤは抗ＶＥＧＦ阻害剤で治療可能であることが示されている（ＷＯ２００７／０６４７５２号）。また、ＣＣＲ３アンタゴニストによる硝子体内処置がＣＮＶ病変の大きさに影響を及ぼし得ることも示されている(Takeda et al., 2009)。
【発明の概要】
【００１７】
驚くべきことに、本発明者らは、網膜ＶＥＧＦの異所産生により誘導されるまたは高圧酸素処置により誘導された新生網膜血管とは違って、特に脈絡膜新生血管に対する血管透過性および血管新生の軽減に効果を有し、従って、新生血管型ＡＭＤに関連する脈絡膜血管透過性の特異的治療／予防（その疾患および／またはその症状の進行の緩徐化を含む）に有用であることを見出した。
【００１８】
本発明者らは、この疾患の血管新生経路と透過性経路の両方の遮断はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて機能的奏功をもたらすことも見出した。よって、抗ＶＥＧＦ阻害剤とＣＣＲ３阻害剤の組合せによる処置は、新生血管型ＡＭＤの有効な併用治療および／または予防となり、両薬剤は非依存的に病変増長と血管透過性に作用し、相加作用をもたらす。
【００１９】
依然として、眼の新生血管型障害、特に、新生血管型ＡＭＤを治療する新規方法の必要がある。本発明はこのような必要に対するものである。  
【００２０】
発明の概要
本発明は、ＣＣＲ３の阻害、例えば、ＣＣＲ３タンパク質の発現および／または活性の阻害による眼疾患および障害の治療および／または予防のための方法に関する。特定の実施形態では、本発明の方法による治療および／または予防に従う眼疾患は、新生血管形成および血管透過性の増大と関連する。具体的には、このような疾患には、例えば、限定されるものではないが、加齢黄斑変性などが含まれる。
【００２１】
一実施形態では、本明細書に開示される方法は、眼疾患の治療および／または予防を必要とする被験体に、ＣＣＲ３を阻害する薬剤、例えば、ＣＣＲ３の発現および／またはＣＣＲ３タンパク質の活性を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる。本発明は前記疾患の特定の病期（例えば、初期または進行性）に限定されることを意図しない。
【００２２】
いくつかの実施形態では、本発明は、関連の酵素活性およびＣＣＲ３活性化の総ての下流エフェクターを遮断することによりＣＣＲ３を阻害する方法を提供する。
【００２３】
いくつかの実施形態では、脈絡膜新生血管透過性の予防および／または軽減は、新生血管型ＡＭＤに関連する症状の予防および／または軽減をもたらす（すなわち、その疾患の進行を予防する）。
【００２４】
別の実施形態では、本発明は、ＡＭＤを有する、またはＡＭＤのリスクのある被験体においてＡＭＤを治療および／または予防する方法であって、前記被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法を提供し、ここで、ＣＣＲ３タンパク質の阻害はＡＭＤの症状の進行を軽減するか、またはＡＭＤの症状を停止する。
【００２５】
別の実施形態では、本発明は、ＡＭＤを有する、またはＡＭＤのリスクのある被験体を治療および／または予防する方法であって、前記被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与すること（ここで、ＣＣＲ３タンパク質の阻害はＡＭＤの症状の進行を軽減するか、またはＡＭＤの症状を停止する）、およびさらに前記薬剤と組み合わせて抗ＶＥＧＦ阻害剤またはＶＥＧＦシグナル伝達阻害剤を投与することを含んでなる方法を提供する。
【００２６】
別の実施形態では、本発明は、乾燥型または地図状萎縮型ＡＭＤを有する被験体において、萎縮性網膜を背景とするＣＮＶ病変の発症を予防する方法であって、前記被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法を提供し、ここで、ＣＣＲ３タンパク質の阻害はこのような病変の発症を予防し、前記薬剤は単独で、または抗ＶＥＧＦ阻害剤と組み合わせて投与することができる。
【００２７】
別の実施形態では、本発明は、萎縮型および非血管型ＡＭＤから新生血管型ＡＭＤへの移行／進行を予防する方法であって、前記被験体に、ＣＣＲ３タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法を提供し、ここで、ＣＣＲ３タンパク質の阻害はこのような新生血管型ＡＭＤへの移行を予防し、前記薬剤は単独で、または抗ＶＥＧＦ阻害剤と組み合わせて投与することができる。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３を阻害する薬剤は、ＣＣＲ３の発現を阻害する、例えば、ＣＣＲ３タンパク質を生産するためにＣＣＲ３  ＲＮＡの翻訳を阻害することができる。別の実施形態では、ＣＣＲ３を阻害する薬剤は、ＣＣＲ３タンパク質活性を阻害することができる。いずれの薬剤も、本明細書に開示される方法に使用するために包含される。いくつかの実施形態では、前記薬剤は、小分子、核酸、核酸類似体、タンパク質、抗体、ペプチド、アプタマーまたは変異体もしくはそれらの断片であり得る。いくつかの実施形態では、前記薬剤は、核酸薬剤、例えば、ＲＮＡｉ薬剤、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡもしくはリボザイムまたはそれらの変異体である。
【００２９】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３のタンパク質活性を阻害する薬剤は、小分子、例えば、限定されるものではないが、ＣＣＲ３タンパク質の可逆的または不可逆的阻害剤である小分子である。いくつかの実施形態では、このような小分子は、モルホリン−アセトアミドに基づく化合物である。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３の小分子阻害剤は、例えば、限定されるものではないが、４−［［［［［［（２ｓ）−４−［（３，４−ジクロロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］メチル］−アミノ］カルボニル］−アミノ］メチル］ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩（ＣＣＲ３阻害剤‘９９４）である。米国特許第７，１５７，４５７号明細書および同第７，５３１，６５１号明細書参照。
【００３０】
別の実施形態では、このような小分子は、モルホリン尿素に基づく化合物である。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３の小分子阻害剤は、例えば、限定されるものではないが、Ｎ−［［（２Ｓ）−４−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］−メチル］−３−［（メチルスルホニル）アミノ］−ベンゼンアセトアミドまたはその薬学上許容される塩（ＣＣＲ３阻害剤‘５７５）である。米国特許第７，１０１，８８２号明細書参照。
【００３１】
被験体にＣＣＲ３の阻害剤を含んでなる医薬組成物が投与されるいくつかの実施形態では、本方法は、被験体に付加的治療薬、例えば、限定されるものではないが、ＡＭＤなどを含む眼疾患の治療に使用される治療薬を投与することをさらに含み得る。眼疾患を治療するための治療薬の投与は、特定の手法、例えば、限定されるものではないが、網膜局部レーザー光凝固、汎網膜光凝固、トリアムシノロンなどの硝子体内投与用ステロイド、フルオシノロンアセトニドを含有する硝子体内ステロイドインプラント、ならびにパゾパニブ、ルセンティス（商標）、アバスチン（商標）およびアフリバーセプト（商標）などの硝子体内投与用抗ＶＥＧＦ治療薬の適用を含み得ると理解される。
【００３２】
いくつかの実施形態では、新生血管型眼疾患または障害の治療および／または予防のための本明細書に開示される方法は、被験体、例えば、哺乳動物被験体に適用可能である。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３タンパク質の活性または発現を阻害する薬剤が投与される被験体はヒトである。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１はＧＷ７６６９９４による全身処置の後の、蛍光血管造影によるＣ５７Ｂｌ６マウスにおけるＣＮＶの群定量を示す。上のパネルは、９５％信頼限界に対応した一眼当たりの平均ＣＮＶ病変サイズを示す。下のパネルは、ＣＮＶのレーザー誘導から１週間後および２週間後にＣＣＲ３アンタゴニスト４−［［［［［［（２ｓ）−４−［（３，４−ジクロロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］メチル］−アミノ］カルボニル］−アミノ］メチル］ベンズアミド（ＣＣＲ３阻害剤‘９９４）（２〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ  ｐｏ）およびスペクトル選択的キナーゼ阻害剤パゾパニブ（５−［［４−［（２，３−ジメチル−２ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］−２−ピリミジニル］アミノ］−２−メチルベンゼンスルホンアミド）（２０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ  ｐｏ）によりマウスを処置した後の、マウス網膜の直接蛍光血管造影により評価した眼底検査画像の例を示す。
【図２】図２はＣＮＶのレーザー誘導から１週間後および２週間後にＣＣＲ３阻害剤‘９９４（８〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤおよび８ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ  ｐｏ）およびスペクトル選択的キナーゼ阻害剤パゾパニブ（２０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ  ｐｏ）によりマウスを処置した後の、蛍光血管造影によるＣ５７Ｂｌ６マウスにおける９５％信頼限界に対応した平均ＣＮＶの群定量を示す。
【図３】図３はＣＣＲ３阻害剤‘９９４による全身処置後の蛍光血管造影によるＪＲ５５５８マウスにおける平均ＣＮＶの群定量を示す。上のパネルは、９５％信頼限界に対応した一眼当たりの総平均ＣＮＶ病変面積を示す。中央のパネルは、９５％信頼限界に対応した一眼当たりのＣＮＶ病変の総数を示し、下のパネルは、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４（２〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ）でマウスを処置した後の、マウス網膜の直接蛍光血管造影図を示す。化合物は、Ｐ１４〜Ｐ２６の１２日間投与した。
【図４】図４は８ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ＢＩＤによる全身処置後の、蛍光血管造影によるＪＲ５５５８マウスにおけるＣＮＶの群定量を示す。上のパネルは、９５％信頼限界に対応した一眼当たりの総平均ＣＮＶ病変面積を示す。中央のパネルは、９５％信頼限界に対応した一眼当たりのＣＮＶ病変の総数を示し、下のパネルは、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４（８ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ）によりマウスを処置した後の、マウス網膜の直接蛍光血管造影図を示す。化合物は、Ｐ１４〜Ｐ２６の１２日間投与した。
【図５】図５はＣＣＲ３阻害剤‘９９４（８〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ）によりマウスを処置した後の、イソレクチンＢ４染色によるＪＲ５５５８の脈絡膜（網膜除去）における血管ＣＮＶの組織化学的検出を示す。化合物は、Ｐ１４〜Ｐ２６の１２日間投与した。
【図６】図６はＣＣＲ３阻害剤‘９９４（８〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ）によりマウスを処置した後の、イソレクチンＢ４染色によるＪＲ５５５８の脈絡膜（網膜除去）における血管ＣＮＶの組織化学的検出を示す。化合物は、Ｐ１４〜Ｐ２６の１２日間投与した。
【図７】図７は両眼に５μｌの１〜１０ｍｇ／ｍｌ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ＢＩＤを投与した場合の蛍光血管造影局所処置によるＪＲ５５５８マウスにおけるＣＮＶの群定量、および８ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ｉ．ｐ．ＢＩＤを全身投与した場合との比較を示す。上のパネルは、９５％信頼限界に対応した一眼当たりの総平均ＣＮＶ病変面積を示す。下のパネルは、局所または全身のいずれかで適用するＣＣＲ３阻害剤‘９９４（８ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．ＢＩＤ）によりマウスを処置した後の、９５％信頼限界に対応した網膜当たりのＣＮＶ病変の総数を示す。化合物は、Ｐ１４〜Ｐ２６の１２日間投与した。
【図８】図８はビヒクル、１００μｇ  抗ＶＥＧＦＲ２  ｉ．ｐ．  ＱＤ、３０ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ｉ．ｐ．  ＱＤ、１００μｇ  抗ＶＥＧＦＲ２  ｉ．ｐ．  ＱＤと３０ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ｉ．ｐ  ＱＤ、および５０μｇ  抗ＶＥＧＦＲ２  ｉ．ｐ．  ＱＤと３０ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ｉ．ｐ．  ＱＤのいずれかを全身投与した後の、蛍光血管造影によるＪＲ５５５８マウスにおけるＣＮＶの群定量を示す。上のパネルは、９５％信頼限界に対応した網膜当たりの総ＣＮＶ病変面積を示す。下のパネルは、９５％信頼限界に対応した網膜当たりのＣＮＶ病変の総数を示す。ＣＣＲ３阻害剤‘９９４は、Ｐ１４〜Ｐ２６の１２日間投与した。抗ＶＥＧＦＲ２は、Ｐ１４から６日間、さらにＰ１９から５日間投与した。
【図９】図９はビヒクル、１００μｇ抗ＶＥＧＦＲ２  ｉ．ｐ．  ＱＤ、３０ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ｉ．ｐ．  ＱＤ、または１００μｇ抗ＶＥＧＦＲ２  ｉ．ｐ．  ＱＤと３０ｍｇ／ｋｇ  ＧＷ７６６９９４  ｉ．ｐ  ＱＤのいずれかを全身投与した後の、蛍光血管造影によるＪＲ５５５８マウスにおける個々のＣＮＶ病変の血管透過性の群定量を示す。ＣＣＲ３阻害剤‘９９４および抗ＶＥＧＲ２ならびに組合せをＰ２４〜Ｐ２６の間の２日間投与した。
【図１０】図１０はレーザー処置の１日前にビヒクル、２０ｍｇ／ｋｇ  ＧＷ７８２４１５Ｘ（（Ｓ）−１−（（４−（３，４−ジクロロベンジル）モルホリン−２−イル）メチル）−３−（（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）メチル）尿素）（以下、「‘４１５化合物」）  ｐｏ  ＴＩＤまたは３ｍｇ／ｋｇ  ＴＩＤ  ｐｏを１６、２４または３０日間投与した後にレーザー光凝固によりＣＮＶ誘導した後の、個々のカニクイザルの右眼および左眼のＩＶ期病変の分析を示す。
【図１１】図１１はカニクイザル全血における好酸球形状変化に対するエオタキシン−１の濃度反応曲線を示し、１０ｎＭおよび１００ｎＭの‘４１５化合物のプレインキュベーションの効果を付表１に示す。Ｓｃｈｉｌｄ分析によれば、カニクイザル全血におけるエオタキシン−１により刺激された好酸球の形状変化に対する‘４１５化合物の平均ｐＡ２値は７．８と決定された。
【図１２】図１２はＣ５７Ｂｌ６マウスを高圧酸素に曝した後（酸素誘導性網膜症モデル）の、網膜血管新生（新生血管形成）の群定量の効果および８ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．  ＢＩＤの効果を示す。
【図１３】図１３はＣ５７Ｂｌ６マウスを高圧酸素に曝した後（酸素誘導性網膜症モデル）の、網膜血管新生（新生血管形成）群定量の効果、ならびに一眼へのＢＩＤでの１０ｍｇ／ｍｌ局所投与およびＳＵ４３１２（５μｇ、５日ごと、眼周囲）の効果を示す。
【発明の具体的説明】
【００３４】
本発明者らは、ＣＣＲ３阻害剤が、眼疾患、特に、新生血管型ＡＭＤに関連する血管透過性の進行を含む治療および／または予防に使用可能であることを見出した。
【００３５】
本発明者らは、ＣＣＲ３阻害剤が、眼疾患、特に、ＡＭＤに関連する血管透過性の進行を含む、治療および／または予防のための抗ＶＥＧＦ治療薬およびＶＥＧＦシグナル伝達阻害剤と併用可能であることを見出した。
【００３６】
本発明者らはまた、ＣＣＲ３阻害剤が抗ＶＥＧＦ阻害剤と組み合わせて、眼疾患、特に、ＡＭＤに関連する脈絡膜新生血管形成（進行を含む）の治療および／または予防に特異的に使用可能であることを見出した。高圧酸素に曝した後に新生血管形成を受けている網膜血管（酸素誘導性網膜症）に対してはＣＣＲ３阻害剤の同様の効果は実証できないことから、これらの効果は、脈絡膜に特異的であると思われる。
【００３７】
本発明者らは、ＣＣＲ３阻害剤が、眼疾患、特に、萎縮性網膜を背景とする、例えば、乾燥型または地図状萎縮型(geographic trophy)関連ＡＭＤに罹患している患者における、脈絡膜新生血管形成（進行を含む）の治療および／または予防に使用可能であることを見出した。
【００３８】
本発明者らは、ＣＣＲ３阻害剤が、萎縮性網膜を背景とする、例えば、乾燥型または地図状萎縮型(geographic trophy)関連ＡＭＤに罹患している患者において、眼疾患、特に、脈絡膜新生血管形成（進行を含む）の治療および／または予防に、抗ＶＥＧＦ治療薬およびＶＥＧＦシグナル伝達阻害剤と併用可能であることを見出した。
【００３９】
定義
便宜のため、本出願全体（明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲を含む）に用いられている特定の用語を以下にまとめる。特に断りのない限り、本明細書に使用される総ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者が共通に理解しているものと同じ意味を有する。
【００４０】
用語「疾患」または「障害」は本明細書では互換的に使用され、器官、機能の性能を中断もしくは妨害する、および／または罹患者もしくは人と接触した者に不快、機能不全、苦痛、またはさらには死などの症状を引き起こす身体の、またはいくつかの器官の状態の任意の変化を意味する。疾患または障害はまた、不調(distemper)、病的状態(ailing)、病気(ailment)、病気(malady)、障害、病気(sickness)、病気(illness)、病訴(complaint)または詐病(affectation)にも関し得る。
【００４１】
用語「脈絡膜血管透過性」または「血管透過性」は一般に当業者により「漏出性血管」と呼ばれている。これらの用語は本明細書では、脈絡膜血管系の障害および血管透過性の増大を意味して互換的に使用される。
【００４２】
用語「薬剤」は、通常には存在しないか、またはそのレベルでは存在しない任意の実体が細胞内に投与されることを意味する。薬剤は、化学物質；小分子；核酸配列；核酸類似体；タンパク質；ペプチド；アプタマー；抗体；またはそれらの断片を含んでなる群から選択され得る。核酸配列はＲＮＡまたはＤＮＡであり得、一本鎖または二本鎖であり得、目的タンパク質をコードする核酸、オリゴヌクレオチド、核酸類似体、例えば、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）、偽相補的ＰＮＡ(pseudo-complementary PNA)（ｐｃ−ＰＮＡ）、ロックド核酸(locked nucleic acid)（ＬＮＡ）などを含んでなる群から選択され得る。このような核酸配列としては、例えば、限定されるものではないが、例えば、転写レプレッサー、アンチセンス分子、リボザイム、小阻害性核酸配列、例えば、限定されるものではないが、ＲＮＡｉ、ｓｈＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡｉ（ｍＲＮＡｉ）、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどとして働くタンパク質をコードする核酸配列が含まれる。タンパク質および／またはペプチドまたはその断片は、例えば、限定されるものではないが、変異型タンパク質；治療用タンパク質および末端切断型タンパク質などの、任意の目的タンパク質であり得、前記タンパク質は通常には細胞に存在しないか、または低レベルでしか発現されない。タンパク質はまた、変異型タンパク質、遺伝的に操作されたタンパク質、ペプチド、合成ペプチド、組換えタンパク質、キメラタンパク質、抗体、ミディボディー、ミニボディー、トリアボディー、ヒト化タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、修飾タンパク質およびそれらの断片を含んでなる群から選択され得る。あるいは、この薬剤は、核酸配列の細胞への導入およびその転写による細胞内でのＣＣＲ３の核酸および／またはタンパク質阻害剤の産生の結果として細胞内に存在することができる。いくつかの実施形態では、この薬剤は、限定されるものではないが合成および天然非タンパク質性実体を含む、任意の化学物質、実体または部分である。特定の実施形態では、この薬剤は、化学部分を有する小分子である。例えば、化学部分は、マクロライド、レプトマイシンおよび関連の天然物またはそれらの類似体を含む、非置換もしくは置換アルキル、芳香族、またはヘテロシクリル部分を含んだ。薬剤は所望の活性および／または特性を有することを知ることができるか、または多様な化合物のライブラリーから選択することができる。
【００４３】
本明細書で使用される用語「阻害する」は、ＣＣＲ３タンパク質またはその変異体もしくは同族体の発現または活性が所望の効果をもたらすのに十分な程度および／または時間に低減されることを意味し、例えば、ＣＣＲ３タンパク質の阻害は、血管透過性および／または脈絡膜新生血管形成などの症状を軽減または停止する。この活性の低減は、その触媒活性を含むＣＣＲ３の１以上の特徴に影響を及ぼすことによるか、またはＣＣＲ３の補因子を阻害することによるか、または転帰が眼の障害を治療または予防するというものであるような活性の程度でＣＣＲ３に結合することによるものであり得る。特に、ＣＣＲ３の阻害は、ＣＣＲ３阻害に関するアッセイを用いて、例えば、限定されるものではないが、本明細書に開示されるようなＣＣＲ３タンパク質に関するバイオアッセイを使用することによって測定することができる。
【００４４】
用語「患者」、「被験体」および「個体」は、本明細書では互換的に使用され、予防的処置を含む処置が与えられる動物、特にヒトを意味する。本発明で使用される用語「被験体」は、ヒトおよび非ヒト動物を意味する。用語「非ヒト動物」および「非ヒト哺乳動物」は、本明細書では互換的に使用され、総ての脊椎動物、例えば、哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類（特に、高等霊長類）、ヒツジ、イヌ、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）、モルモット、ヤギ、ブタ、ネコ、ウサギ、ウシ、および非哺乳動物、例えば、ニワトリ、両生類、爬虫類などを含む。一実施形態では、被験体はヒトである。別の実施形態では、被験体は、実験動物または疾患モデルとしての動物代替である。
【００４５】
本発明で使用する場合、用語「治療する」は、ＡＭＤに関連する病態、疾患または障害の少なくとも１つの有害な作用または症状の軽減、緩和または予防（その進行の予防を含む）を含む。ＡＭＤに関連する病態、疾患または障害の少なくとも１つの有害な作用または症状の進行の予防は、限定されるものではないが、脈絡膜新生血管形成および／もしくは続発性の脈絡膜血管透過性の増大を発症するリスクのある被験体における萎縮性網膜を背景とするＣＮＶ病変の発症の予防；ならびに／または萎縮型・非血管型ＡＭＤから新生血管型ＡＭＤへの移行の予防を含む。治療のプラスの転帰を測定するための方法としては、限定されるものではないが、光干渉断層撮影法により測定される網膜下浮腫の軽減もしくは維持、視力の低下の軽減もしくは視力の維持、または最良矯正視力により評価される視力の確保が含まれる。血管透過性および脈絡膜新生血管形成の増強は、眼底蛍光血管造影によっても測定される。
【００４６】
本明細書で使用される用語「有効量」は、疾患または障害の少なくとも１つの症状、例えば、ＡＭＤの一症状または障害を軽減、停止または予防するための、医薬組成物の治療薬の量を意味する。例えば、本明細書に開示される方法を用いた有効量は、疾患または障害の症状の軽減もしくは予防、例えば、ＯＣＴにより測定されるＡＭＤの完全もしくは部分消散および／もしくは維持、または最良矯正視力における５  ｌｅｔｔｅｒｓ（ＥＤＴＲＳ視力検査表により測定）を超える上昇および／もしくは維持、または眼底蛍光血管造影により測定される新生血管形成または新生血管型透過性サイズの縮小に十分な量と考えられる。本明細書で使用される有効量はまた、黄斑浮腫の発症、透過性の増大、ＣＮＶ病変サイズおよび関連の視力低下の予防または遅延に十分な量も含む。本明細書で使用される有効量はまた、疾患の症状の発症の予防もしくは遅延、疾患の症状の経過の変更（例えば、限定されるものではないが、疾患の症状の進行の緩徐化）、または疾患の症状の逆転に十分な量も含むと考えられる。
【００４７】
本明細書で使用される場合、脈絡膜新生血管形成および／または続発する脈絡膜血管透過性の増大を発症する「リスクのある被験体」においてＣＮＶ病変の発症を予防するまたは予防という用語は、例えば、乾燥型または地図状萎縮型ＡＭＤに罹患している患者に対して言及するものである。
【００４８】
本明細書で使用される場合、用語「投与する」および「導入する」は、互換的に使用され、本明細書に開示されるＣＣＲ３を阻害する薬剤を、所望の部位に前記薬剤の少なくとも部分的局在をもたらす方法または経路により、被験体内に置くことを意味する。本発明の化合物は、被験体に有効な治療をもたらすいずれの適当な経路によって投与することもできる。
【００４９】
冠詞「１つの(a)」および「１つの(an)」は、本明細書では、１または１を超える（すなわち、少なくとも１つの）この冠詞の文法的目的語を意味して使用される。例を挙げれば、「１つの(an)要素」は、１つの要素または１を超える要素を意味する。
【００５０】
ＣＣＲ３を阻害する薬剤
いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＣＲ３の阻害に関する。いくつかの実施形態では、阻害は、ＣＣＲ３をコードする核酸転写産物の阻害、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の阻害である。別の実施形態では、ＣＣＲ３の阻害は、ＣＣＲ３の遺伝子産物、例えば、ＣＣＲ３のポリペプチドもしくはタンパク質、またはそれらのアイソフォームの発現の阻害および／または活性の阻害である。本明細書で使用される場合、用語「遺伝子産物」は、遺伝子から転写されたＲＮＡ、または遺伝子によりコードされている、もしくはＲＮＡから翻訳されたポリペプチドを意味する。
【００５１】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３の阻害は薬剤によるものである。例えば、限定されるものではないが、核酸、核酸類似体、ペプチド、ファージ、ファージミド、ポリペプチド、ペプチド模倣薬、リボソーム、アプタマー、抗体、小型もしくは大型の有機もしくは無機分子、またはそれらの任意の組合せなどいずれの薬剤を使用することもできる。いくつかの実施形態では、本発明の方法において有用な薬剤としては、ＣＣＲ３発現の阻害剤、例えば、ＣＣＲ３をコードするｍＲＮＡの阻害剤として機能する薬剤が含まれる。
【００５２】
本明細書に開示される方法においてＣＣＲ３の阻害剤として有用な他の薬剤は、化学物質、小分子、大分子または実体または部分であり得、限定されるものではないが、合成および天然非タンパク質性実体を含む。特定の実施形態では、この薬剤は、本明細書に開示される化学部分を有する小分子である。
【００５３】
小分子
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３を阻害する薬剤は小分子である。ＣＣＲ３の不可逆的または可逆的阻害剤が本発明の方法において使用可能である。
【００５４】
ヒトにおいて有効なＣＣＲ３阻害剤は当業者により一般に知られており、評価中、例えば、前臨床評価および臨床評価（第ＩＩ相臨床試験を含む）中のものを含む。いくつかの特許出願がＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍとその後継のＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅにより出願および公開されている。ＣＣＲ３の不可逆的阻害剤は、具体的に、引用することによりその全内容が本明細書の一部とされ、とりわけ、ＣＣＲ３の阻害剤である様々な系統のモルホリン−アセトアミドおよびモルホリン尿素化合物を開示している、ＷＯ２００２／２６７２３Ａ１号、ＷＯ０３／０８２２９３号、米国特許第７，１０１，８８２号明細書、同第７，１５７，４５７号明細書、同第７，５３１，６５１号明細書および同第７，５６０，５４８号明細書に開示されている。
【００５５】
ヒトにおいて有効なＶＥＧＦ治療薬は当業者により一般に知られており、評価中、例えば、前臨床評価および臨床評価（第ＩＩ相臨床試験を含む）中のもの、ならびにパゾパニブ、ルセンティス（商標）、アバスチン（商標）、およびアフリバーセプト（商標）を含む販売中のものを含む。
【００５６】
化合物４−［［［［［［（２ｓ）−４−［（３，４−ジクロロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］メチル］−アミノ］カルボニル］−アミノ］メチル］ベンズアミド（ＣＣＲ３阻害剤‘９９４）、またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物は、特に有効なＣＣＲ３阻害剤であり、本発明において特に有用である。
【００５７】
化合物Ｎ−［［（２Ｓ）−４−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］−メチル］−３−［（メチルスルホニル）アミノ］−ベンゼンアセトアミド（ＣＣＲ３阻害剤‘５７５）またはその薬学上許容される塩もしくは溶媒和物は、特に有効なＣＣＲ３阻害剤であり、本発明において特に有用である。
【００５８】
本明細書に開示される方法において有用な他のＣＣＲ３阻害剤は、公開特許および出願ＷＯ２００２／２６７２３Ａ１号、ＷＯ０３／０８２２９３号、米国特許第７，１０１，８８２号明細書、同第７，１５７，４５７号明細書、同第７，５３１，６５１号明細書および同第７，５６０，５４８号明細書に記載されており、それらに記載されているＣＣＲ３阻害アッセイを用いて発見することができる。
【００５９】
上記段落に述べた特許出願は総て、引用することにより本明細書の一部とされる。これらの文献に開示されている化合物のいずれかまたは総ては、ＡＭＤの予防または治療に有用であると考えられる。実施例に例示されているような本明細書に記載のモデルは、開示されている化合物またはＣＣＲ３のその他の阻害剤、例えば、抗体、またはＲＮＡｉのいずれが、本明細書で特許請求される眼疾患または障害の治療または予防に有効であるか決定するために当業者が使用することができる。
【実施例】
【００６０】
本明細書に示される実施例は、ＣＣＲ３の阻害による眼の新生血管型障害などの予防および／または治療のための方法および組成物に関するものである。本出願を通じて、様々な刊行物が参照される。それらの刊行物およびそれらの刊行物内に引用されている参照文献の総ての開示はそれらの全内容が、本発明が属する技術の現状をより詳しく記載するために、引用することにより本明細書の一部とされる。以下の実施例は、本発明の特許請求の範囲を限定することを意図せず、特定の実施形態の例示を意図するものである。これらの例示されている方法における、当業者に思いつくいずれの変形形態も本発明の範囲内にあるものとする。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３を阻害する薬剤は、本明細書に開示されている動物モデルにおいて、レーザー誘導性ＣＮＶを軽減する効果に関して評価することができる。
【００６２】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３を阻害する薬剤は、動物モデル、例えば、本明細書に開示されている、カニクイザルにおけるレーザー誘導性脈絡膜新生血管型ＡＭＤ研究で評価することができる。
【００６３】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３を阻害する薬剤は、単独でまたは抗ＶＥＧＦ阻害剤と組み合わせて、動物モデルにおいて、例えば、ＣＮＶ  ＡＭＤのＪＲ５５５８自発的モデルにおけるＣＮＶの発症の限定を評価することができる。
【００６４】
実施例１
方法：
Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおけるレーザー誘導性ＣＮＶ
１２週齢の成体雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いて、レーザー誘導性ＣＮＶモデルを作出した。マウスを腹腔内塩酸ケタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）により麻酔し、それらの局所的トロピカミド１％により散瞳させた。レーザー光凝固は、直視下で、コンタクトレンズとしてハンドヘルドカバースライドを用い、ダイオードレーザー（６８０ｎｍ；電力２１０ｍＷ、持続時間１００ｍｓ、スポット径１００ｍ）にて行い、両眼の網膜後極部の２時、１０時、および６時の位置に配置した。これらのレーザー設定は一貫して、レーザーにより誘導されるブルッフ膜の破裂およびＣＮＶ誘導の成功と強い相関を示す網膜下気泡を発生させる。気泡が生成される病変のみを分析に含めた。ＣＮＶ誘導の１週間後および２週間後に、Ｋｏｗａ  Ｇｅｎｅｓｉｓ小動物眼底カメラを用いてフルオレセイン血管造影を行った。ＣＮＶ病変のサイズは、初期相（フルオレセイン注射の９０秒後）の病変当たりの過蛍光の平均面積のデジタル画像解析によって定量した。局所的トロピカミド１％により散瞳させ、フルオレセインナトリウム２％を腹腔内注射（０．２ｍｌ）により投与した。レーザーエネルギーの伝送または血管造影に影響を及ぼし得る顕著な白内障または角膜症が存在した場合にはその眼は除外した。
【００６５】
ＪＲ５５５８のＣＮＶおよび分析
ＪＲ５５５８マウスは自発的にＣＮＶ（萎縮型を背景とする）を発症し、出生からおよそ１２日後に最初にＣＮＶ病変が出現する。ＪＲ５５５８マウスの腹膜内に様々な量のラット抗マウスＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）−２阻止抗体（ＭＡＢ４４３１；  Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）または精製ラット非免疫アイソタイプ一致対照ＩｇＧ２α抗体（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を、Ｐ１４から開始して１１日間で合計１０用量として施し、Ｐ２５に最後の投与を行ってから２４時間後に、ＣＮＶの発症をフルオレセイン血管造影（ＦＡ）により分析した。ＣＣＲ３阻害剤‘９９４処置マウスについては、Ｐ１４から開始して合計１２日間、種々の濃度の薬物を腹膜内にまたは点眼剤により投与し、Ｐ２６に最後の投与を行ってから２４時間後に、ＣＮＶの発症をＦＡにより分析した。抗ＶＥＧＦＲ２抗体とＣＣＲ３阻害剤‘９９４の組合せ効果を検討するために、マウスの腹膜内に各材料を単独でまたは組合せ、Ｐ１４から開始して１１日間で合計１０用量を施し、Ｐ２５に最後の投与を行ってから２４時間後に、ＣＮＶの発症をＦＡにより分析した。確立されたＣＮＶ病変からの血管透過性に対するＶＥＧＦ−ＡおよびＣＣＲ３アンタゴニストの効果を探る実験では、ＪＲ５５５８マウスにＣＮＶ病変の発症後に２日間だけ投与を行い、Ｐ２４およびＰ２５に種々の量のＶＥＧＦＲ−２抗体もしくはＣＣＲ３阻害剤‘９９４、または組合せで処置した。フルオレセイン血管造影（ＦＡ）はＰ２６に行った。
【００６６】
フルオレセイン血管造影（ＦＡ）および画像解析
マウスを２．５％トロピカミド（Ｂａｕｓｃｈ  ＆  Ｌｏｍｂ、ロチェスター、ＮＹ）で散瞳させ、０．２ｍｌの２％フルオレセインナトリウム（Ｂａｕｓｃｈ  ＆  Ｌｏｍｂ）水希釈液を腹腔内注射により投与した。Ｋｏｗａ  Ｇｅｎｅｓｉｓ−Ｄｆ眼底カメラ（Ｋｏｗａ、東京、日本）を用いて、色素移行の初期相（フルオレセイン注射から９０秒後）および後期相（７分）のフルオレセインの血管造影図を得た。初期相では、ＣＮＶ組織の血管系は血管内フルオレセイン色素により鮮明に画定される。後期では、管外フルオレセインが過蛍光のパッチとして明確になる。ＣＮＶ面積を定量するために、Ｉｍａｇｅ  Ｊプログラムを用い、初期相からのＦＡ画像を用いて、各眼の過蛍光ＣＮＶのそれぞれのサイズを測定した。各ＣＮＶの透過性は、Ｉｍａｇｅ  Ｊを用い、後期相（フルオレセイン注射から７分後）のＦＡ画像の過蛍光面積から初期相（フルオレセイン注射から９０秒後）のＦＡ画像の過蛍光面積を差し引くことによって決定した。
【００６７】
ＣＮＶ病変に関する網膜ホールマウント染色
ＦＡから２４時間後に、眼球を摘出し、ＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で４℃にて３時間固定した。網膜を含むまたは含まない眼杯を取り出し、切断し、ＰＢＳ中０．３％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００および５％ＦＢＳを含有するバッファー（ブロッキングバッファー）中、室温で１時間ブロッキングし、ブロッキングバッファー中１：２００希釈の０．５％フルオレセイン−イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−イソレクチンＢ４（Ｖｅｃｔｏｒ、バーリンゲーム、ＣＡ）とともに４℃で一晩インキュベートした。５回洗浄した後、検体を、ＤＡＰＩ含有媒体を用いてマウントし、落射蛍光顕微鏡で観察した。
【００６８】
カニクイザルにおけるレーザー誘導性脈絡膜新生血管型ＡＭＤ研究
表Ａに示されるように、カニクイザルにビヒクルまたはＣＣＲ３アンタゴニストツール化合物としての‘４１５化合物を２９日間投与し、レーザーはレーザー１日後に光凝固を生じる。蛍光血管造影分析はレーザー処置の１４日、２１日および２８日後に行った。
【００６９】
【表１】
2015500221.tif 000002
【００７０】
各眼の黄斑に、スリットランプ伝送システムおよびＫａｕｆｍａｎ−Ｗａｌｌｏｗ（Ｏｃｕｌａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ、ベルビュー、ワシントン州）プラノ眼底コンタクトレンズを用いた５３２ｎｍダイオード緑色レーザー焼結（ＯｃｕＬｉｇｈｔ  ＧＬ、ＩＲＩＤＥＸ  Ｃｏｒｐ  Ｉｎｃ、マウンテンビュー、カリフォルニア州）にてレーザー処置を施した。動物を麻酔し、各眼の黄斑に９つの領域を左右対称に配置した。レーザーパラメーターは、スポットサイズ７５ミクロンおよび持続時間０．１秒を含んだ。使用電力設定は、水疱および小出血をもたらす能力によって評価した。最初のレーザー処置で出血が見られなければ、２番目のレーザースポットは（ワット数を調整する以外は）同じレーザー手法に従って最初のスポットの隣に配置する。眼窩に隣接しない領域については、最初の電力設定を５００ｍＷとし；２番目のスポットを配置する場合には、電力を６５０ｍＷに設定した。眼窩に隣接する領域については、電力設定を４００ｍＷ（最初の処置）および５５０ｍＷ（２回目の処置）とした。電力設定は、レーザー時の所見に基づき、網膜外科医の判断で調整した。
【００７１】
動物はフルオレセイン血管造影の前に少なくとも２時間絶食させ、その後、麻酔し、散瞳剤で散瞳させた。フルオレセイン注射後に嘔吐の可能性があるために動物に挿管した。その後、動物にフルオレセインの静注を行った。フルオレセイン注射の開始時と終了時に画像を採取した。フルオレセイン注射の後、右眼について後極部の高速連写（およそ色素出現から３５秒まで）の立体写真を撮影し、その後、左眼の後極部のステレオペアを撮影した。さらに、フルオレセイン注射からおよそ１〜２分後と５分後に両眼のステレオペアを撮影した。フルオレセイン注射からおよそ２分〜５分の間に、各眼の２つの中間周辺部視野（耳側と鼻側）の非双眼写真を撮影した。フルオレセイン血管造影のグレード評価は、表Ｂに示されている分類体系に従って画像評価をするための協力科学者によって行われた。グレードＩＶの病変が加齢黄斑変性を含む種々のヒト網膜障害で見られる古典的脈絡膜新生血管形成に最もよく似ていることから、これらを臨床上有意とみなした。グレードＩＶ病変の罹患率の群間比較を評価した。
【００７２】
【表２】
2015500221.tif 000003
【００７３】
カニクイザル全血のエオタキシン刺激好酸球形状変化アッセイ
カニクイザルから血液（１０ｍＬ）を採取し、１．１ｍｌの３．８％クエン酸ナトリウム溶液を加えた。アリコート（９０μｌ）を室温で１０分間アンタゴニストとともにインキュベートした後、アゴニスト（１０μｌ  ヒトエオタキシン（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ））を含有するＢＳＡコーティングｍｉｃｒｏｎｉｃチューブに移した。エオタキシンは０〜１０００ｎＭの終濃度で存在した。細胞を３７℃でさらに４分間インキュベートした後、２５０ｍｌの氷冷固定バッファー（１倍Ｃｅｌｌｆｉｘ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）の１／４希釈液）を加えた。最低２分後に、固定されたサンプルを２ｍｌの氷冷赤血球溶解バッファー（１５５ｍＭ  ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ  ＫＨＣＯ３）に移し、溶解が完了するまで（約３０分）氷上でインキュベートした。その後、好酸球集団の平均前方散乱をＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで測定した。
【００７４】
酸素誘導性網膜症
出生後日数（Ｐ）７〜Ｐ１２に７５％Ｏ２中に置いたＣ５７ＢＬ／６マウスを室内空気に戻し、化合物またはビヒクルで処置を開始した。Ｐ１７に、網膜表面の網膜ＮＶ面積を従前に記載されているように(Shen et al., 2007)測定した。簡単に述べると、Ｐ１７マウスに１μｌのラット抗マウス血小板内皮細胞接着分子−１（ＰＥＣＡＭ−１）抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、サンノゼ、ＣＡ、ＵＳＡ）の眼内注射を施し、１２時間後に、マウスを安楽死させ、眼をＰＢＳ緩衝ホルマリン中、室温で５時間固定した。網膜を切り取り、洗浄し、Ａｌｅｘａ  ４８８結合ヤギ抗ラットポリクローナル抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバッド、ＣＡ、ＵＳＡ）の１：５００希釈溶液とともに室温で４５分間インキュベートし、フラットマウントした。処置群を隠された観測者が画像解析により網膜当たりのＮＶ面積を測定した。
【００７５】
観測
マウスレーザーＣＮＶモデルにおけるＣＣＲ３阻害剤‘９９４の評価
ＣＣＲ３阻害剤‘９９４による全身的ＣＣＲ３拮抗作用はレーザー誘導性光凝固に続発するマウスのＣＮＶの発症を限定する
１２週齢の成体雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用い、レーザー光凝固とブルッフ膜穿刺を用いて、レーザー誘導性ＣＮＶ（マウス網膜当たり３つのＣＮＶ病変）モデルを作出した。これらのマウスにおける、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４をレーザー光凝固によるＣＮＶ誘導の当日に経口投与した場合の研究では、１週間の時点で３０ｍｇ  ｐｏ  ＱＤ用量で効果があるという有意な傾向を示したが（ｐ＝０．０５２５）、これは２週間の時点では持続していなかった（図Ｉ、上および下のパネル）および表１参照）。
【００７６】
【表３】
2015500221.tif 000004
【００７７】
同一用量での２回目の試験でも同様の効果が見られた（ｐ＝０．０５５２）（図２および表２参照）。
【００７８】
【表４】
2015500221.tif 000005
【００７９】
両試験において、ＶＥＧＦＲ１、２および３（ならびにＰＤＧＦ受容体およびｃ−ｋｉｔ）に対して活性なスペクトル特異的キナーゼ阻害剤である、比較対照としてのパゾパニブを２０ｍｇ／ｋｇ  ｐｏ  ＱＤで投与すると、ＣＮＶ病変サイズに有意な縮小がもたらされ、これはビヒクルとは異なっており、また、調べた総ての用量のＣＣＲ３阻害剤‘９９４とも異なっていた。ここで行った統計分析は、観測数が処置した動物数と関連があるという点でストリンジェントであるが、このレーザー誘導性モデルを用いた他のほとんどの試験では（広く文献で行われている）では、各病変（マウス網膜当たり３つのＣＮＶ病変）は独立した観測としてみなされている。各ＣＮＶ病変が独立としてみなされてデータが分析されるならば、両試験での３０ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４の効果は、それぞれ０．０３９５および０．０３９２のｐ値で病変サイズに対して有意な効果を持っていたと考えられたであろう。しかしながら、経口投与したパゾパニブの場合では、いずれの統計学的アプローチでもロバストな効果をもたらしたであろうことは明らかであり、または従って、このモデルにおけるＣＣＲ３阻害剤‘９９４の効果は経口投与されたパゾパニブよりも弱いと思われる。
【００８０】
マウスＪＲ５５５８  ＣＮＶモデルにおけるＣＣＲ３阻害剤‘９９４の評価
ＣＣＲ３阻害剤‘９９４による全身的ＣＣＲ３拮抗作用はＣＮＶ  ＡＭＤのＪＲ５５５８自発的モデルにおけるＣＮＶの発症を限定する
ＪＲ５５５８マウスは、最初の病変が出生後約１２日目に始まるという予測可能な経時的推移で両網膜に自発的ＣＮＶをマウスに発症させる未同定の遺伝子血管を有するマウス系統である。従って、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４による処置は１２日目に開始して１２日間続け、この時点で、動物を網膜蛍光血管造影により検査して総ＣＮＶ病変量および網膜に存在するＣＮＶ病変の総数を定量した。ＣＣＲ３阻害剤‘９９４による動物の処置は、８ｍｇ／ｋｇ  ＱＤまたは３０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤのいずれかをｉ．ｐ．投与した場合には、網膜に存在するＣＮＶ病変の総病変面積（図３、表３参照）および総数（図３、表４参照）の両方に抑制をもたらしたが、用量が２ｍｇ／ｋｇ  ＱＤであった場合にはそうではなかった。統計値は表３および表４に示す。
【００８１】
【表５】
2015500221.tif 000006
【００８２】
【表６】
2015500221.tif 000007
【００８３】
単離された眼杯（網膜除去）の免疫組織化学もまた、このモデルでの網膜血管病変の発症の限定におけるＣＣＲ３阻害剤‘９９４の効果を示す（図５）。ＣＣＲ３阻害剤‘９９４の８ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ投与はレーザーＣＮＶモデルにおいて統計学的にロバストな効果を示さなかったが、そのモデルでは、化合物は経口投与されており、これはＪＲ８８８５幼マウスモデルにおいて使用されたｉ．ｐ投与に比べて暴露が５分の１となる。
【００８４】
ＣＣＲ３阻害剤‘９９４がＱＤではなくＢＩＤ投与された場合にも、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４はまた総病変面積（図４、表５参照）および総ＣＮＶ数（図４、表６参照）の両方の限定に有意な効果をもたらした。この試験では、動物は蛍光血管造影の完了直後に犠牲し、眼を摘出し、固定液中に入れた。眼を完全に洗浄した後に定量的免疫組織化学により分析した。このような分析は、この分析方法が病変量に対する８ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ＢＩＤの治療効果の提示において実際の蛍光血管造影とよく相関していたが、このマウスモデルにおいて蛍光血管造影により評価した場合のＣＮＶ病変数とは相関していなかったことを示し（図６参照）、おそらくこのことは、これらの病変の一部がより小さく、蛍光血管造影により検出しやすかったことを示唆する。統計値は表５〜８に示す。
【００８５】
【表７】
2015500221.tif 000008
【００８６】
【表８】
2015500221.tif 000009
【００８７】
【表９】
2015500221.tif 000010
【００８８】
【表１０】
2015500221.tif 000011
【００８９】
マウスＪＲ５５５８  ＣＮＶモデルにおけるＣＣＲ３阻害剤‘９９４点眼剤の評価
ＣＣＲ３の拮抗作用はマウス自発的ＪＲ５５５８モデルにおいて局所適用された後にＣＮＶ  ＡＭＤを限定することができる
ＪＲ５５５８マウスの両眼への局所適用点眼剤５μｌとしてのＣＣＲ３阻害剤‘９９４のＢＩＤ投与は、Ｊ５５５８マウスの網膜に存在する自発的ＣＮＶの総病変量（図７、表９参照）と総数（図７、表１０参照）の両方に統計学的に有意な減少をもたらした。この効果の大きさは、本発明者らが従前にこのモデルにおいて病変量と総病変に効果的であることを示した８ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４の全身投与後に得られたものと同様の規模であった。この点眼剤投与計画は、従前の実験での、より多い薬物量である２ｍｇ／ｋｇ  ＱＤの全身用量でこのモデルにおいて有効性が証明できなかったという事実を考えれば、このモデルにおける対照ＣＮＶに対するＣＣＲ３阻害剤‘９９４の効果は局所的効果であり得るということを実証する。統計値は表９および表１０に示す。
【００９０】
【表１１】
2015500221.tif 000012
【００９１】
【表１２】
2015500221.tif 000013
【００９２】
マウスＪＲ５５５８  ＣＮＶモデルにおけるＣＣＲ３阻害剤‘９９４および抗ＶＥＧＦ  Ａｂの評価
ＣＣＲ３の拮抗作用およびＶＥＧＦ経路の阻害はＪＲ５５５８自発的モデルにおいてＣＮＶの程度を限定するために相加的に働く
このモデルにおいて３０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４による全身処置はビヒクルに比べてＣＮＶ病変面積および総発生ＣＮＶ病変の両方に有意な減少をもたらした（図８、表１１および表１２参照）こと以外は従前に開示されたものと同様の実験における。このプロフィールは、５０〜１００μｇ抗血管内皮増殖因子受容体−１モノクローナル抗体（抗ＶＥＧＦＲ２）による全身処置と一致した（図８、表１１および表１２参照）。予想されたように５０〜１００μｇ抗ＶＥＧＦＲ２  ｉ．ｐ．  ＱＤと３０ｍｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ｉ．ｐ．  ＱＤの組合せもまた、ＣＮＶ病変面積とＣＮＶ病変数の両方の抑制をもたらした。３０ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ｉ．ｐ．  ＱＤまたは１００μｇ抗ＶＥＧＦＲ２  ｉ．ｐ．  ＱＤの単剤処置の効果に比べて併用効果を検討する場合、ＣＮＶ病変面積と病変総数の両方においてさらなる減少が見られた。これらの差は９５％信頼限界で統計学的に有意ではないものの、ＣＮＶ病変面積に対する効果を検討する場合、この組合せを抗ＶＥＧＦＲ２  ＱＤ単独（ｐ＝０．０６）（図８、表１１参照）または３０ｍｇ／ｋｇ  ＣＣＲ３阻害剤‘９９４  ＱＤ（ｐ＝０．０９）（図８、表１１参照）と比較した場合には強い傾向を示した。ＣＮＶ病変数に対する組合せの効果を単剤処置単独に対して検討した場合には、組合せの効果はさらに大きいものではないことが明らかであった（図８、表１２参照）。
【００９３】
【表１３】
2015500221.tif 000014
【００９４】
【表１４】
2015500221.tif 000015
【００９５】
マウスＪＲ５５５８ＣＮＶモデルにおけるＣＮＶ病変の透過性に対するＣＣＲ３阻害剤‘９９４の評価
ＣＣＲ３の拮抗作用は、ＪＲ５５５８マウスにおけるナトリウムフルオレセインに対する脈絡膜新生血管の血管透過性を限定する。
【００９６】
従前の文献は、ＣＣＲ３は血管内皮細胞培養物の透過性の変化を媒介し得ることを報告している(Jamaluddin et al., 2009)。しかしながら、このことはこれまでには、脈絡膜もしくは網膜内皮、または実際にｉｎ  ｖｉｖｏに対しては実証されていない。ＣＮＶ病変の透過性の変化は、初期相フルオレセイン漏出から後期相フルオレセイン漏出を差し引いて漏出率を計算して求める。その後、各個のＣＮＶ病変に関するこれらの値を用いて透過性を計算する。総ＣＮＶ病変量および病変総数の定量を目的とする実験とは対照的に、透過性に対する化合物の作用は、２日間だけ（Ｐ２４〜Ｐ２６）投与した後に決定されるので、ＣＮＶ病変は発症するに必要な時間を持っており、事前のＣＣＲ３アンタゴニスト暴露により発症から阻害されなかった。ＣＣＲ３阻害剤‘９９４（３０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ  ＱＤ．  Ｐ＝０．０３５１）および抗ＶＥＧＦ（１００μｇ  ｉ．ｐ．  ＱＤ、ｐ＝０．０１７６）の両方の投与は、フルオレセインに対するＣＮＶ病変の血管透過性の減少に対して独立した統計学的にロバストな効果をもたらした。抗ＶＥＧＦＲ２療法とＣＣＲ３阻害剤‘９９４との組合せは、ＣＮＶ病変血管透過性にさらなる減少をもたらし、これはビヒクルから有意であったが（ｐ＝０．０２５１、図９、表１３）、単独で投与した際のＣＣＲ３阻害剤‘９９４または抗ＶＥＧＦＲ２  ｍＡｂのいずれと比べた場合にも有意でなかった（図９、表１３参照）。
【００９７】
【表１５】
2015500221.tif 000016
【００９８】
カニクイザルレーザーＣＮＶモデルにおける‘４１５化合物の評価
ＣＣＲ３アンタゴニストＧＷ７８２４１５Ｘの経口投与はカニクイザルにおけるレーザー誘導性脈絡膜ＣＮＶを限定する
ＣＣＲ３アンタゴニストが高等哺乳動物でＣＮＶの誘導を抑制するかどうかを判定するため、ＣＣＲ３アンタゴニストツール分子‘４１５化合物を選択し、これはこの化合物がカニクイザルＣＣＲ３に対して良好な効力を持ち（ｐＡ２＝実験によって７〜８）、この霊長類において小さな動物間変動で合理的な暴露を示したためである。このモデルにおいて１５日間の２０ｍｇ／ｋｇ‘４１５化合物ＴＩＤ  ｐｏ投与の効果は、レーザー処置から１６日、２４日および３０日後に蛍光血管造影により評価した場合、このモデルにおいて総ての時点でグレードＩＶ病変の発生に対して統計学的にロバストな効果を示した（図１０、表１４参照）。より低用量の‘４１５化合物の効果としては病変数の減少を示したが、これは、この試験の検出力を考えれば、対照と有意に異ならなかった（図１０、表１４参照）。しかしながら、より低い９ｍｇ／ｋｇの‘４１５化合物ＴＩＤ用量によるグレードＩＶの抑制は、２０ｍｇ／ｋｇの‘４１５化合物用量とともに、このモデルにおける、試験した３つの時点の総てでグレードＩＶ  ＣＮＶの抑制に関して統計学的に有意な用量関係を証明するのに十分であり、これは対数用量漸増仮定または直線的用量漸増仮定に依存しなかった（表１５参照）。
【００９９】
【表１６】
2015500221.tif 000017
【０１００】
【表１７】
2015500221.tif 000018
【０１０１】
高圧酸素により誘導される網膜新生血管形成（酸素誘導性網膜症）に対する全身的および局所的ＣＣＲ３阻害剤‘９９４の効果の評価
局所投与（５μｌ  １０ｍｇ／ｍｌ  ＢＩＤ）または全身投与８ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ  ｉ．ｐ．（脈絡膜新生血管形成のモデルにおいて有効であった用量）のいずれかでのＣＣＲ３阻害剤‘９９４によるＣ５７Ｂｌ６マウスの処置は、高圧酸素による刺激の後の網膜血管の新生血管形成に効果がなかった（図１２および１３参照）。全身試験では、両眼を検査したところ、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４処置群とビヒクル処置群の間で有意な差は見られなかった。局所試験では、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４群とビヒクル群の間にも、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４処置群における処置眼と他眼の間にも有意な差は示されなかった。注目すべきは、受容体チロシンキナーゼ阻害剤ＳＵ４３１２は５μｇの用量で（５日ごとに眼周囲に投与）効果的な阻害剤であり、ＳＵ４３１２処置眼とビヒクル処置眼の間で（ｐ＜０．００３）、また実際に処置眼と他眼（非処置眼）の間で（ｐ＜０．００４）、網膜新生血管形成に有意に観測できる減少が見られた。結論として、ＳＵ４３１２は、脈絡膜新生血管形成の限定に効果的であった代替受容体チロシンキナーゼ阻害剤パゾパニブの場合と同等に網膜新生血管形成に作用する。このデータは、受容体チロシンキナーゼ（例えばＶＥＧＦ）の遮断が網膜および脈絡膜の両方の新生血管形成に適切であることを示すが、ＣＣＲ３の拮抗作用は脈絡膜の新生血管形成だけを限定すると思われ、従って、ＣＣＲ３の拮抗作用は脈絡膜に選択性があり、結果として、全般的に適用可能とは言えないまでも、眼球内であってもあらゆる血管床に適用可能な機構であることが強調される。
【０１０２】
齧歯類および霊長類モデルにおけるＣＮＶ  ＡＭＤのＰＫ／ＰＤ
ＣＣＲ３阻害剤‘９９４およびＪＲ５５５８マウスモデルにおける自発的ＣＮＶの発症
ＪＲ５５５８マウスにおける暴露効果を模倣するために幼マウスに８ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ  ＱＤのＣＣＲ３阻害剤‘９９４を投与した後、２４時間時点の血中濃度を２ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ、８ｍｇ．ｋｇ  ｉ．ｐおよび３０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ用量の場合でＰＫプロフィールの対数直線相を見積もることにより計算した。次に、血中薬物濃度を用い、ラングミュア吸着等温式とＣＣＲ３阻害剤‘９９４のｐＫｉ（マウス好酸球走化性アッセイにおいて評価）を使用して受容体占有率(fractional receptor occupancy)を求めた。受容体占有値は、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４のｐＫｉがバッファーおよび無血液中で決定されたことから、真の値の推定値を少し上回る。好酸球が主要なＣＣＲ３保持細胞集団であることから、このＣＣＲ３受容体占有率は、大方のところ、好酸球への結合によるものであると考えられる。このような受容体占有率の計算は、８時間の時点で、総ての用量が９７％を超えるＣＣＲ３受容体占有率をもたらすのに十分な暴露を得ていたが（２ｍｇ／ｋｇ＝９７．９５％、８ｍｇ／ｋｇ＝９９．４８％、３０ｍｇ／ｋｇ＝９９．８６％）、２４時間目のトラフ時点では、ＣＣＲ３受容体占有率値は異なっていた（２ｍｇ／ｋｇ＝３．１％、８ｍｇ／ｋｇ＝１１．３６、３０ｍｇ／ｋｇ＝３２．４５）ことを暗示する。８ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇのＣＣＲ３阻害剤‘９９４は両方の全身投与はこのモデルにおいて効果的であったことから、有効性のためには、トラフ時の全身占有率水準が３．１％〜１１．３６％の間であることが必要とされると思われる。しかしながら、いくつかの所見が、ＪＲ５５５８モデルにおけるＣＮＶの発生に対するＣＣＲ３阻害剤‘９９４の影響は、全体的なＣＣＲ３受容体占有率によって、またはこのモデルのＣＮＶ媒介におけるＣＣＲ３阻害剤‘９９４の全身的効果によって導かれるものではないことを示唆している。第一に、Takeda et al., 2009は、好酸球も肥満細胞も（主要なＣＣＲ３保持細胞）遺伝的に生成することができない動物で、レーザー誘導性ＣＮＶの緩和におけるＣＣＲ３阻害剤の効果を実証した。同グループはまた、マウスモデルにおいてレーザー誘導性ＣＮＶを限定するために極めて低用量の抗ＣＣＲ３抗体の硝子体内注射による投与を用いており、このような極めて低用量は、それらが体循環に接近できたとしても受容体占有率に極めて限定された影響しか持たないであろう。さらに、ＣＣＲ３阻害剤‘９９４の点眼剤形としての局所投与もＪＲ５５５８モデルに効果的であった。これらの所見を総て考え合わせると、ＣＮＶ疾患の限定におけるＣＣＲ３治療薬の効果は眼における局部的活性によるものであることが示唆される。しかしながら、全身投与は眼におけるＣＣＲ３アンタゴニスト暴露を、そして最終的には疾患に対する効果を促す可能性が極めて高く、この眼における暴露はおそらく全身暴露の複雑な関数であると思われ、従って、全身性療法のプロファイリングにおいては、有効性を促す全身薬物動態についての理解が重要であり得る。
【０１０３】
‘４１５化合物は、カニクイザル全血において、ヒトエオタキシン誘導性の好酸球形状変化に濃度依存的な、打破可能な阻害を引き起こした。これらのデータのＳｃｈｉｌｄ分析によれば、‘４１５化合物に関して７．８〜８．４の間の平均ｐＡ２が示された。カニクイザル全血における好酸球形状変化に対するエオタキシン−１の濃度反応曲線ならびに１０ｎＭおよび１００ｎＭの‘４１５化合物のプレインキュベーションの効果を図１１に示す。
【０１０４】
化合物がＴＩＤ投与される場合の、９ｍｇ／ｋｇ／日および６０ｍｇ／ｋｇ／日に関する８時間時点での‘４１５化合物暴露のトラフ値を用い、およびカニクイザル全血ＣＣＲ３におけるエオタキシンを介した好酸球形状変化アッセイで決定される効力値を用い、受容体占有率はトラフ時に＞９５％であると計算された。
【０１０５】
まとめると、データは、脈絡膜新生血管型病変の発症に対する全身的または局所的点眼剤送達により投与されたＣＣＲ３アンタゴニストの強い薬理学的効果を証明する３つのｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて得られる。齧歯類モデルでは、ＣＣＲ３アンタゴニストの投与のこれらの効果は、抗ＶＥＧＲ２の全身投与またはパゾパニブの経口投与の効果と同等の規模である。ＣＮＶ病変の増長に対する効果とともに、本発明者らはまた、抗ＶＥＧＦＲ２とＣＣＲ３アンタゴニストの両方が、ヒトにおける臨床疾患の顕著な特徴であるナトリウムフルオロセインに対する血管透過性の増大の軽減に有効であることも証明することができる。これまでの文献のデータも、ＣＮＶ発症の制御における抗ＶＥＧＦ戦略とＣＣＲ３アンタゴニストアプローチの両方の局所的効果を裏付けている(Takeda et al. , 2009)。少量の抗ＣＣＲ３  ｍＡｂの局所的硝子体内送達またはＣＣＲ３のリガンドを標的とするＭａｂの硝子体内投与という事実、および遺伝的に好酸球または肥満細胞を産生できないマウスでもレーザー誘導性のＣＮＶの発生がなお可能であるという事実は、このようなＣＣＲ３機構が局所的であって、循環好酸球に依存しないということを強く主張している(Takeda et al., 2009)。また、このような文献の研究によれば、抗ＶＥＧＦによる齧歯類のＣＮＶの制御が眼球内のＣＣＲ３保持細胞に影響を及ぼさなかった、また、レーザー誘導性ＣＮＶにおいて硝子体内抗ＣＣＲ３  ｍａｂを用いた試験はレーザー光凝固の後に誘導される硝子体のＶＥＧＦレベルに影響を及ぼさなかったという知見(Takeda et al., 2009)に基づけば、抗ＶＥＧＦ機構とＣＣＲ３機構は独立したものであったことが示唆される。本発明者らのデータは、ＣＣＲ３およびＶＥＧＦＲ２は両方とも単独でＣＮＶ病変体積、病変数およびＣＮＶ病変の血管透過性を限定することを証明し、これはこれまでに抗ＶＥＧＦ治療薬に関して開示されているが、ＣＣＲ３アンタゴニストに関して、ＣＮＶ数および血管透過性に対する特異的効果が記載されたことはない。さらに、ＣＮＶ病変体積、病変数およびＣＮＶ病変の血管透過性に対する抗ＶＥＧＦＲ２  ｍＡｂとＣＣＲ３アンタゴニストアプローチの増強された組合せ効果も本発明において証明される。これらの病変は萎縮性網膜を背景として生じる（非血管型ＡＭＤおよび地図状萎縮型ＡＭＤを有する眼で起こる罹患率の高いＣＮＶ疾患と類似）ので、その後の自発的ＪＲ５５５８モデルにおいて出現する病変の数に対するＣＣＲ３療法単独およびＶＥＧＦ治療薬との組合せの効果を述べておくことも重要である。乾燥型または地図状萎縮型ＡＭＤの存在は、眼が新生血管型ＡＭＤへと移行する見込みに著しいリスクを与える。特に、ＪＲ５５５８モデルは、ヒトにおける非血管型ＡＭＤの総ての特徴である網膜萎縮、網膜細胞のアポトーシス、および関連の炎症を示すとされている（データは示されていない）。硝子体内注射などの侵襲的処置が非血管型ＡＭＤから新生血管型ＡＭＤへの移行のリスクを防ぐための処置として適用可能であるとは考えにくいが、両眼を潜在的に保護すると思われる経口処置は全身適用または局所適用ＣＣＲ３アンタゴニストを用いて企図可能である。ＣＣＲ３アンタゴニストアプローチは、脈絡膜新生血管形成と血管透過性（これらは両方ともＣＮＶ病変の発生において重要な機構である）の制御において新規な特異的機構となり、この証拠の重みは、抗ＣＣＲ３治療薬の効果が眼に局在すること、およびこれらの効果はＶＥＧＦにより媒介される非依存的作用機序を介したものであることを示唆する。最近のデータでは、ＶＥＧＦおよびＣＣＲ３がヒト脈絡膜内皮細胞の、低分子ＧＴＰａｓｅ  ｒａｃ１などの類似のシグナル伝達経路を活性化し得ること、およびこれらの２つの薬剤の効果は相加的であり得ることが証明されたが、ＣＣＲ３経路とＶＥＧＦ経路の両方の同時遮断がＣＮＶの抑制に組合せ効果をもたらすということはまだ示されたことがない(Wang et al., 2011)。また、本発明者らは、ＣＣＲ３は、高圧酸素により誘導される網膜新生血管形成の抑制に活性が無いが、抗ＶＥＧＦ治療薬はこのモデルで極めて有効であることも実証し、ＣＣＲ３機構の組織選択性が存在し得ること指し示した。いくつかの組織における血管新生 (Salcedo et al., 2001)および心臓由来内皮細胞培養物における血管透過性(Jamaluddin et al., 2009)を媒介する上でのＣＣＲ３の全般的効果に最初に向けられた研究は、明らかに、総ての組織、実際には、眼の総ての組織、特に眼の血管新生部位および血管透過性増大部位に一般適用することができない。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ３を阻害する薬剤の最適用量は、ＣＣＲ３の活性および／もしくは発現を低減する、例えば、核酸、例えば、ＣＣＲ３遺伝子によりコードされているｍＲＮＡの発現を低減する、またはＣＣＲ３タンパク質の発現もしくは活性を低減する用量である。他の実施形態では、ＣＣＲ３を阻害する薬剤の最適用量は、例えば、限定されるものではないが、新生血管型加齢黄斑浮腫および乾燥型または萎縮型ＡＭＤに続発する新生血管型加齢黄斑浮腫を含む眼疾患または障害の予防において最大の保護効果を生じる用量である。
【０１０７】
組成物の処方
本明細書に開示される化合物、例えば、ＣＣＲ３を阻害する薬剤は、医薬として使用可能であるか、または本明細書に開示される１以上の有用性を有する医薬組成物を処方するために使用可能である。それらはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて培養細胞に、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて体内の細胞に、またはｅｘ  ｖｉｖｏにおいて個体外の細胞（この細胞は後に同じ個体または別の個体の体内に戻すことができる）に投与することができる。このような細胞は解離させることもきるし、または固体組織として提供することもできる。
【０１０８】
本明細書に開示される化合物、例えば、ＣＣＲ３を阻害する薬剤は、医薬または他の医薬組成物を作製するために使用することができる。薬学上許容される担体をさらに含んでなるＣＣＲ３を阻害する薬剤、および個体にその組成物を送達するために有用な成分をさらに含んでなる組成物の使用は当技術分野で公知である。本明細書で開示される薬剤へのこのような担体および他の成分の添加は、十分に当技術分野の技術水準の範囲内である。
【０１０９】
医薬組成物は、血液脳関門の通過または内皮との直接的接触に適合した処方物として投与することができる。いくつかの実施形態では、本組成物は、全身送達に適合した処方物として投与することができる。いくつかの実施形態では、本組成物は、特定の器官、例えば、限定されるものではないが、肝臓、骨髄への送達または全身送達に適合した処方物として投与することができる。
【０１１０】
あるいは、医薬組成物は、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて細胞の培養培地に添加することができる。活性化合物に加えて、このような組成物は、薬学上許容される担体および投与を助け、かつ／または取り込みを促進することが知られている他の成分（例えば、生理食塩水、ジメチルスルホキシド、脂質、ポリマー、親和性に基づく細胞特異的ターゲティング系）を含むことができる。本組成物は、ゲル、スポンジ、または他の浸透性マトリックス（例えば、ペレットまたはディスクとして形成されたもの）に組み込み、持続的局部的放出のために内皮に近接させることができる。本組成物は、単回用量で、または時間差で投与される複数用量で投与することができる。
【０１１１】
医薬組成物は任意の既知の経路によって投与することができる。例を挙げれば、本組成物は、粘膜経路、肺経路、局所経路、または他の限局的経路もしくは全身経路（例えば、経腸および非経口）により投与することができる。「非経口投与」および「非経口的に投与される」とは、本明細書で使用される場合、経腸および局所投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、脳室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内の、腹腔内、経気管、皮下、皮内、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、脳脊髄内、および胸骨内の、限定されるものではないが、注射、注入およびその他の注射もしくは注入技術を含む。「全身投与」、「全身投与される」、「末梢投与」および「末梢投与される」とは、本明細書で使用される場合、動物の系に入り、従って、代謝および他の同様のプロセスを受けるような、本明細書で開示される薬剤の投与、例えば、皮下投与を意味する。
【０１１２】
「薬学上許容される」とは、本明細書では、健全な医学的判断の範囲内で、過度な毒性、刺激作用、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症無く、妥当な利益／リスク比に見合って、ヒトおよび動物の組織との接触に使用するために好適な化合物、材料、組成物、および／または投与形を意味して用いられる。
【０１１３】
「薬学上許容される担体」とは、本明細書で使用される場合、ある器官または身体部分から別の器官または身体部分への対象薬剤の運搬または輸送に関与する、薬学上許容される材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体または固体増量剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入剤を意味する。各担体は、その処方物の他の成分と適合するという意味で「許容され」なければならず、例えば、担体は治療に対するその薬剤の影響を低下させない。言い換えれば、担体は、薬学的に不活性である。
【０１１４】
投与の量およびタイミング、処方、ならびに投与経路の好適な選択は、糖尿病性眼疾患またはそのリスクを有する被験体における好適な応答の達成（すなわち、有効性）、および毒性またはそれに対する他の害の回避（すなわち、安全性）を目的として行うことができる。従って、「有効な」とは、所望の効果を達成するための通常の条件操作を含むこのような選択を意味する。
【０１１５】
１日１回短時間で個体に投与される処方物のボーラスは、便宜な投与スケジュールである。あるいは、有効な一日用量は、投与の目的で複数回、例えば、１日当たり２〜１２回に分割することができる。医薬組成物中の有効成分の用量レベルはまた、化合物またはその誘導体の一時的または持続的濃度を達成するために、所望の治療奏功または保護をもたらすために変更可能である。しかし、所望の治療効果を達成するために必要なものよりも低いレベルで投与を開始すること、および所望の効果が達成されるまで用量を漸増させることもまた、当業者に技術の範囲内である。
【０１１６】
ＣＣＲ３を阻害する薬剤の投与量は、化合物の生物活性およびバイオアベイラビリティ（例えば、体内での半減期、安定性、および代謝）；化合物の化学特性（例えば、分子量、疎水性、および溶解度）；投与の経路および計画などの当業者に公知の因子によって決まる。また、任意の特定の個体に対して達成されるべき特定の用量レベルは、齢、性、健康状態、病歴、体重、１以上の他の薬物との組合せ、および疾患の重篤度を含む様々な因子によって決まり得ると理解される。
【０１１７】
ＡＭＤの治療に関して「治療」という用語は、とりわけ、被験体における、疾患の発症の予防、または疾患の経過の変更（例えば、限定されるものではないが、疾患の進行の緩徐化）、または疾患の症状の逆転、または１以上の症状および／もしくは１以上の生化学マーカーの低減、１以上の症状の増悪または進行からの回避、回復の促進もしくは予後の改善、および／または非罹患被験体における疾患の予防、ならびに既存の疾患の緩徐化もしくは軽減を意味する。ある被験体に関して、症状の改善、その増悪、退縮、または進行は他覚的または自覚的尺度によって判定することができる。
【０１１８】
予防的方法（例えば、再発の防止または再発率の低減）もまた治療と考えられる。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、治療はまた、他の既存の治療様式、例えば、糖尿病性眼疾患の治療のための既存の薬剤、例えば、抗ＶＥＧＦ治療薬（例えば、ルセンティス（商標）、アバスチン（商標）およびアフリバーセプト（商標））、ならびにステロイド類（例えば、トリアムシノロン）およびフルオシノロンアセトニドを含有するステロイドインプラントとの組合せを含み得る。
【０１２０】
よって、ＣＣＲ３を阻害する１以上の薬剤と１以上の他の医療行為との併用治療を実施することができる。
【０１２１】
さらに、治療はまた、ＣＣＲ３の発現または活性を阻害するための複数の薬剤を含んでなり得る。
【０１２２】
併用療法を用いる場合、これらの治療薬は一緒にまたは別個に投与してもよい。併用療法の２種類以上の治療薬には同じ投与手段を用いてもよいし、あるいは、併用療法の異なる治療薬は異なる手段によって投与してもよい。治療薬が別個に投与される場合、それらは同時に、または任意の順序で、密な時間間隔および離れた時間間隔の両方で、逐次に投与することができる。所望の組合せ治療薬効果を達成するために、ＣＣＲ３阻害化合物、および／または他の薬学上活性な１または複数の薬剤、例えば、抗ＶＥＧＦ治療薬の量、および投与の相対的タイミングが選択される。
【０１２３】
被験体に投与される量は好ましくは、その投与から得られる利点を上回る毒性作用を誘導しない量である。さらなる目的は、認知されている標準医療と比較して、個体における疾患の症状の数を少なくすること、重篤度を軽減すること、および／またはそうでなければそれらの症状からの苦痛を和らげることである。
【０１２４】
現行規制に従った化合物の製造は、政府当局（例えば、米国食品医薬品局）によって、優良試験所規範(good laboratory practices)（ＧＬＰ）および優良製造規範(good manufacturing practices)（ＧＭＰ）に関して規制される。これには正確かつ完全な記録管理ならびにＱＡ／ＱＣの監視が要求される。インフォームド・コンセントの取得を保証するために当局および施設内パネルによる患者プロトコールの監視も想定され；安全性、生物活性、適当用量、および製品の有効性が段階的に試験され；結果は統計学的に有意であり；倫理ガイドラインが遵守される。動物モデルを使用するプロトコール、ならびに毒性化学物質の使用に関する同様の監視、および規制遵守が求められる。
【０１２５】
ＣＣＲ３の発現および／または活性の阻害を目的とする用量、処方、投与容量、投与計画、および結果の分析方法は多様であり得る。従って、最小および最大有効用量は投与方法によって異なる。ＡＭＤに関連する臨床的および組織学的変化の抑制は特定の用量範囲内で起こり得るが、しかしながらこれはその用量を受容する生物、投与経路、ＣＣＲ３を阻害する薬剤が他の共刺激分子とともに投与されるかどうか、およびＣＣＲ３阻害剤の特定の投与計画によって異なる。例えば、一般に、鼻腔投与は、経口、経腸、直腸、または膣投与よりも低用量を要する。
【０１２６】
本発明とともに使用するための経口または経腸処方物に関して、錠剤は、当技術分野で周知の固体担体を使用する従来の手順に従って処方することができる。本発明の方法とともに使用される経口処方物用いられるカプセル剤は、ゼラチンまたはセルロース誘導体などの薬学上許容される任意の材料から製造することができる。米国特許第４，７０４，２９５号明細書，"Enteric Film-Coating Compositions,"（１９８７年１１月３日発行）；米国特許第４，５５６，５５２号明細書，"Enteric Film-Coating Compositions,"（１９８５年１２月３日発行）；米国特許第４，３０９，４０４号明細書，"Sustained Release Pharmaceutical Compositions,"（１９８２年１月５日発行）；および米国特許第４，３０９，４０６号明細書，"Sustained Release Pharmaceutical Compositions,"（１９８２年１月５日発行）に記載されているものなど、経口投与される投与形に関する徐放性経口送達系および／または腸溶コーティングも企図される。
【０１２７】
ＣＣＲ３阻害剤によるＡＭＤの治療はまた、局所的点眼剤、眼周囲注射（例えば、テノン嚢下）としての、または硝子体内注射による、またはイオン泳動、能動的もしくは受動的に薬物を送達することができる眼周囲デバイスを用いた局所投与であり得る。薬物の徐放性はまた、固体インプラント（生分解性であってもなくてもよい）または生分解性ポリマーマトリックス（例えば、微粒子）などの技術の使用によっても達成され得る。これらは眼周囲または硝子体内のいずれかに投与することができる。
【０１２８】
局所投与に適合した医薬製剤は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、散剤、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアゾールまたはオイルとして処方することができる。
【０１２９】
眼または他の外部組織、例えば、口腔および皮膚の治療には、これらの処方物を局所的軟膏またはクリームとして塗布することができる。軟膏として処方される場合、本有効成分はパラフィン基剤または水混和性軟膏基剤のいずれとともに使用してもよい。あるいは、本有効成分は、水中油型クリーム基剤または油中水型基剤基とともにクリームとして処方してもよい。
【０１３０】
眼への局所投与に適合した医薬製剤としては、有効成分が好適な担体、特に、水性溶媒に溶解または懸濁された点眼剤が含まれる。眼に投与される処方物は、眼科的に適合するｐＨおよびモル浸透圧濃度を有する。１以上の眼科的に許容されるｐＨ調整剤および／または緩衝剤が本発明の組成物が含まれてもよく、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸および塩酸などの酸；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および乳酸ナトリウムなどの塩基；ならびにクエン酸／デキストロース、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの緩衝剤が挙げられる。このような酸、塩基、および緩衝剤は、組成物のｐＨを眼科的に許容される範囲に維持するために必要とされる量で含むことができる。１以上の眼科的に許容される塩が、組成物のモル浸透圧濃度を眼科的に許容される範囲とするために十分な量で組成物に含まれてもよい。このような塩としては、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウム陽イオンと、塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、ホウ酸、リン酸、重炭酸、硫酸、チオ硫酸または重亜硫酸陰イオンを有するものが挙げられる。
【０１３１】
眼用送達デバイスは、複数の所定放出速度および持続的投与速度論・透過性を備えた１以上の治療薬制御放出向けに設計することができる。制御放出は、生分解性／生腐食性ポリマー（例えば、ポリ（エチレンビニル）アセテート（ＥＶＡ）、超加水分解(superhydrolyzed)ＰＶＡ）、ヒドロキシアルキルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリカプロラクトン、ポリ（グリコール）酸、ポリ（乳）酸、ポリ無水物、ポリマー分子量、ポリマー結晶度、コポリマー比、処理条件、表面仕上げ、幾何学、賦形剤の添加および薬物の拡散、腐食、溶解および浸透を促進するポリマーコーティングの種々の選択および特性を組み込んだポリマーマトリックスの設計によって得ることができる。
【０１３２】
眼用デバイスを用いる薬物送達のための処方は、示された投与経路に適当な１以上の活性薬剤とアジュバントを合わせればよい。例えば、活性薬剤は、任意の薬学上許容される賦形剤、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムおよびカルシウム塩、アラビアガム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリジン、および／またはポリビニルアルコールと混合し、従来の投与向けに打錠またはカプセル封入すればよい。あるいは、これらの化合物は、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、エタノール、トウモロコシ油、落花生油、綿実油、ゴマ油、トラガカントガム、および／または種々のバッファーに溶解させてもよい。これらの化合物はまた、生分解性および非生分解性の両方のポリマーの組成物、および遅延特性を有する担体または希釈剤と混合してもよい。生分解性組成物の代表例としては、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、多糖、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ヒドロキシ酪酸）、ポリ（アルキル炭酸）およびポリ（オルトエステル）ならびにそれらの混合物を含み得る。非生分解性ポリマーの代表例としては、ＥＶＡコポリマー、シリコーンゴムおよびポリ（メチルアクリル酸）、およびそれらの混合物を含み得る。
【０１３３】
眼送達用の医薬組成物はまた、ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化水性組成物も含む。このような組成物はゲル化剤を、眼または涙液と接触した際にゲル化を促進するために効果的な濃度で含んでなる。好適なゲル化剤としては、限定されるものではないが、熱硬化性ポリマーが挙げられる。用語「ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化」は、本明細書で使用される場合、眼または涙液と接触した際にゲルを形成する低粘度の液体を含むだけでなく、眼に投与した際に粘度またはゲル硬度の実質的増大を示す半流体およびチキソトロピーゲルなどのより粘稠な液体も含む。例えば、眼への薬物送達において使用するためのポリマーの例を教示する目的で引用することにより本明細書の一部とするLudwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57:1595-639を参照。
【０１３４】
参照文献
ここに、また本出願中に引用される参照文献は、引用することにより本明細書の一部とされる。
【０１３５】
【表１８】
2015500221.tif 000019
2015500221.tif 000020
【図１】
2015500221.tif 000021
【図２】
2015500221.tif 000022
【図３−１】
2015500221.tif 000023
【図３−２】
2015500221.tif 000024
【図４−１】
2015500221.tif 000025
【図４−２】
2015500221.tif 000026
【図５】
2015500221.tif 000027
【図６−１】
2015500221.tif 000028
【図６−２】
2015500221.tif 000029
【図７】
2015500221.tif 000030
【図８】
2015500221.tif 000031
【図９】
2015500221.tif 000032
【図１０】
2015500221.tif 000033
【図１１】
2015500221.tif 000034
【図１２】
2015500221.tif 000035
【図１３】
2015500221.tif 000036
【手続補正書】
【提出日】平成26年8月27日(2014.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼の新生血管型障害の治療および／または予防に用いるための、ＣＣＲ３タンパク質の発現および／または活性を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項２】
前記眼の新生血管型障害が新生血管型ＡＭＤである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ＡＭＤの治療および／または予防に用いるための、ＣＣＲ３タンパク質の発現および／または活性を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項４】
前記ＡＭＤが乾燥型または地図状萎縮型ＡＭＤである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ＣＣＲ３タンパク質の発現および／または活性の阻害がＡＭＤの症状を軽減または停止する、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＡＭＤの治療および／または予防に用いるためのＣＣＲ３タンパク質の発現および／または活性を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物であって、ＣＣＲ３タンパク質の阻害がＡＭＤの症状を軽減または停止し、さらに前記薬剤と抗ＶＥＧＦ阻害剤とを組み合わせて用いる、医薬組成物。
【請求項７】
前記薬剤が４−［［［［［［（２ｓ）−４−［（３，４−ジクロロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］メチル］−アミノ］カルボニル］−アミノ］メチル］ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記薬剤がＮ−［［（２Ｓ）−４−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］−メチル］−３−［（メチルスルホニル）アミノ］−ベンゼンアセトアミド、またはその薬学上許容される塩である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記薬剤とさらに付加的治療薬とを組合せて用いる、請求項１〜６に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記付加的治療薬が、パゾパニブ、ルセンティス（商標）、アバスチン（商標）、およびアフリバーセプト（商標）から選択される抗ＶＥＧＦ阻害剤である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
脈絡膜新生血管形成および／または続発する脈絡膜血管透過性の増大を発症するリスクのある被験体において、萎縮性網膜を背景とするＣＮＶ病変の発症の予防に用いるための、ＣＣＲ３タンパク質の発現および／または活性を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物であって、前記薬剤が単独で、または抗ＶＥＧＦ阻害剤と組み合わせて用いることができる、医薬組成物。
【請求項１２】
萎縮型・非血管型ＡＭＤから新生血管型ＡＭＤへの移行の予防に用いるための、ＣＣＲ３タンパク質の発現および／または活性を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物であって、前記薬剤が単独で、または抗ＶＥＧＦ阻害剤と組み合わせて用いることができる、医薬組成物。
【請求項１３】
前記薬剤が４−［［［［［［（２ｓ）−４−［（３，４−ジクロロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］メチル］−アミノ］カルボニル］−アミノ］メチル］ベンズアミドまたはその薬学上許容される塩である、請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記薬剤がＮ−［［（２Ｓ）−４−［（３，４−ジフルオロフェニル）メチル］−２−モルホリニル］−メチル］−３−［（メチルスルホニル）アミノ］−ベンゼンアセトアミド、またはその薬学上許容される塩である、請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記薬剤とさらに付加的治療薬とを組合せて用いる、請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記付加的治療薬が、パゾパニブ、ルセンティス（商標）、アバスチン（商標）、およびアフリバーセプト（商標）から選択される抗ＶＥＧＦ阻害剤である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2015500221.tif 000037
2015500221.tif 000038
2015500221.tif 000039