(57)【要約】  本発明は、抗ＰＣＳＫ９抗体、製剤、投与レジメン、及びそれを使用する方法を提供する。
2015530867.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列、すなわち：
（ｉ）Ｘ１はＳ又はＴであり；Ｘ２はＧ、Ｒ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｔ又はＹであり；Ｘ４はＡ又はＴである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＨ（配列番号２８）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）ＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉｉ）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｉｖ）Ｘ１はＳ又はＴである、ＲＡＳＱＤＶＳＸ１ＡＶＡ（配列番号２
９）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｖ）Ｘ１はＦ又はＳである、ＳＡＳＸ１ＬＹＳ（配列番号３０）を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｖｉ）Ｘ１はＰ、Ｒ又はＴであり；Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｓ又はＴであり；Ｘ３はＬ、Ｐ又はＱであり；Ｘ４はＡ、Ｈ、Ｐ又はＳである、ＱＱＡＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む抗ＰＣＳＫ９抗体。
【請求項２】
（ａ）配列番号１、配列番号２又は配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を更に含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
（１）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号１７のＶＨ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
配列番号３４のＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項８】
配列番号１７のＶＨ、及び配列番号３４のＶＬを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項９】
モノクローナル抗体である、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
ヒト化されている、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
ヒト抗体である、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２】
Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ又は（Ｆａｂ’）２断片から選択される抗体断片である、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３】
フレームワーク配列の少なくとも一部分がヒトコンセンサスフレームワーク配列である、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４】
（ｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖、（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸１〜４５０を含む重鎖及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖、（ｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸１〜４４９を含む重鎖及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は（ｉｖ）配列番号３５のＰ４４９がアミド化されている、（ｉ）、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）のいずれか一つの重鎖及び軽鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１５】
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、抗ＰＣＳＫ９抗体。
【請求項１６】
配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＰＣＳＫ９抗体。
【請求項１７】
請求項１から１６のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体をコードする単離された核酸。
【請求項１８】
請求項１７に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１９】
発現ベクターである、請求項１８に記載のベクター。
【請求項２０】
請求項１８又は１９に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２１】
原核生物である、請求項２０に記載の宿主細胞。
【請求項２２】
真核生物である、請求項２０に記載の宿主細胞。
【請求項２３】
抗ＰＣＳＫ９抗体を作成するための方法であって、抗ＰＣＳＫ９抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で請求項２０に記載の宿主細胞を培養することを含む方法。
【請求項２４】
宿主細胞により産生される抗ＰＣＳＫ９抗体を回収することを更に含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＰＣＳＫ９抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で請求項２０に記載の宿主細胞を培養すること、及び宿主細胞によって産生された抗ＰＣＳＫ９抗体を回収することを含む方法により産生される、抗ＰＣＳＫ９抗体。
【請求項２６】
請求項１から１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、並びに薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項２７】
１５０から２２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、１０から３０ｍＭのヒスチジンアセテート、１５０から１７０ｍＭのアルギニンアセテート、０．０１％から０．０３％のポリソルベート、及び５．８から６．２のｐＨを含む、薬学的組成物。
【請求項２８】
組成物中の抗ＰＣＳＫ９抗体又は抗体断片は２００ｍｇ／ｍＬであり、組成物中のヒスチジンアセテートは２０ｍＭであり、組成物中のアルギニンアセテートは１６０ｍＭであり、及び組成物中のポリソルベート２０は０．０２％であり、ｐＨは６．０である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
皮下投与に適している、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物の粘度が２５℃で１０ｃＰである、請求項２７から２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
抗ＰＣＳＫ９抗体が、
（ｉ）Ｘ１はＳ又はＴであり；Ｘ２はＧ、Ｒ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｔ又はＹであり；Ｘ４はＡ又はＴである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＨ（配列番号２８）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）ＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉｉ）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｉｖ）Ｘ１はＳ又はＴである、ＲＡＳＱＤＶＳＸ１ＡＶＡ（配列番号２９）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｖ）Ｘ１はＦ又はＳである、ＳＡＳＸ１ＬＹＳ（配列番号３０）を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｖｉ）Ｘ１はＰ、Ｒ又はＴであり；Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｓ又はＴであり；Ｘ３はＬ、Ｐ又はＱであり；Ｘ４はＡ、Ｈ、Ｐ又はＳである、ＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３１）又はＱＱＡＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｌ３
からなる群から選択される、１、２、３、４、５、又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む可変ドメインを含む、請求項２７から３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
抗ＰＣＳＫ９抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列、すなわち：
（ｉ）Ｘ１はＳ又はＴであり；Ｘ２はＧ、Ｒ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｔ又はＹであり；Ｘ４はＡ又はＴである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＨ（配列番号２８）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）ＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉｉ）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｉｖ）Ｘ１はＳ又はＴである、ＲＡＳＱＤＶＳＸ１ＡＶＡ（配列番号２９）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｖ）Ｘ１はＦ又はＳである、ＳＡＳＸ１ＬＹＳ（配列番号３０）を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｖｉ）Ｘ１はＰ、Ｒ又はＴであり；Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｓ又はＴであり；Ｘ３はＬ、Ｐ又はＱであり；Ｘ４はＡ、Ｈ、Ｐ又はＳである、ＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３１）又はＱＱＡＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む、請求項２７から３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
抗体が、（ａ）配列番号１、配列番号２又は配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
抗体が、（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を更に含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
抗体が、（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
抗体が、
（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３７】
抗体が、
（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３８】
抗体が、
（１）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３９】
抗体が、
（１）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４０】
抗体が、
（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４１】
抗体が、
（１）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４２】
抗体が、配列番号１５、配列番号２７、配列番号１６又は配列番号１７のＶＨ配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４３】
抗体が、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３又は配列番号３４のＶＬ配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４４】
抗体が、配列番号１５のＶＨ配列、及び配列番号１８のＶＬ配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４５】
抗体が、配列番号１５のＶＨ配列、及び配列番号１９のＶＬ配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４６】
抗体が、配列番号２７のＶＨ配列、及び配列番号２０のＶＬ配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４７】
抗体が、配列番号１６のＶＨ配列、及び配列番号２１のＶＬ配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４８】
抗体が、配列番号１７のＶＨ配列、及び配列番号２２のＶＬ配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４９】
抗体が、配列番号２７のＶＨ配列、及び配列番号２３のＶＬ配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項５０】
抗体が、配列番号１７のＶＨ配列、及び配列番号３４のＶＬ配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項５１】
２００から１２００ｍｇの範囲で個体に固定用量の抗体を送達するための、請求項２６から５０のいずれか一項に記載の組成物を含む皮下投与デバイス。
【請求項５２】
プレフィルドシリンジである、請求項５１に記載のデバイス。
【請求項５３】
１−ｍＬプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度が２００ｍｇ／ｍＬである、請求項５１に記載のデバイス。
【請求項５４】
２．２５−ｍＬプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度が２００ｍｇ／ｍＬである、請求項５１に記載のデバイス。
【請求項５５】
被検体においてＬＤＬコレステロールのレベルを減少させる方法であって、請求項１から１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６から５０のいずれか一項に記載の組成物の有効量を被検体に投与することを含む方法。
【請求項５６】
被検体においてコレステロール関連疾患を治療する方法であって、請求項１から１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６から５０のいずれか一項に記載の組成物の有効量を被検体に投与することを含む方法。
【請求項５７】
被検体において高コレステロール血症を治療する方法であって、請求項１から１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６から５０のいずれか一項に記載の組成物の有効量を被検体に投与することを含む方法。
【請求項５８】
抗ＰＣＳＫ９抗体は、一回当たり２００ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、又は８００ｍｇの用量で、４週間ごと、６週間ごと、８週間ごと、１０週間ごと、又は１２週間ごとに皮下投与される、請求項５５から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
抗ＰＣＳＫ９抗体は２００ｍｇで皮下投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
抗ＰＣＳＫ９抗体は３８０ｍｇで皮下投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
抗ＰＣＳＫ９抗体は４００ｍｇで皮下投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
抗ＰＣＳＫ９抗体は６００ｍｇで皮下投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
抗ＰＣＳＫ９抗体は７６０ｍｇで皮下投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６４】
抗ＰＣＳＫ９抗体は８００ｍｇで皮下投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６５】
抗ＰＣＳＫ９抗体は４週間ごとに投与される、請求項５９から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
抗ＰＣＳＫ９抗体は６週間ごとに投与される、請求項５９から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
抗ＰＣＳＫ９抗体は８週間ごとに投与される、請求項５９から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
抗ＰＣＳＫ９抗体は１０週間ごとに投与される、請求項５９から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
抗ＰＣＳＫ９抗体は１２週間ごとにが投与される、請求項５９から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
第二の医薬の有効量を被検体に投与することを更に含み、抗ＰＣＳＫ９抗体が第一の医薬である、請求項５５から６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
第二の医薬がＬＤＬＲのレベルを上昇させる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
第二の医薬がＬＤＬコレステロールのレベルを減少させる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
第二の医薬はスタチンを含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
第二の医薬はＨＤＬコレステロールのレベルを上昇させる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
被検体においてＬＤＬＲに対するＰＣＳＫ９の結合を阻害する方法であって、請求項１から１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６から５０のいずれか一項に記載の組成物の有効量を被検体に投与することを含む方法。
【請求項７７】
被検体においてＬＤＬコレステロールのレベルを減少させる方法であって、有効量の抗ＰＣＳＫ９抗体を、一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量で、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに、被検体に皮下投与することを含む方法。
【請求項７８】
ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから少なくとも４５％減少し、最終投与後少なくとも１ヶ月間減少したレベルで維持される、請求項６７に記載の方法。
【請求項７９】
被検体においてコレステロール関連疾患を治療する方法であって、有効量の抗ＰＣＳＫ９抗体を、一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量で、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに被検体に皮下投与することを含む方法。
【請求項８０】
被検体において高コレステロール血症を治療する方法であって、有効量の抗ＰＣＳＫ９抗体を、一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量で、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに被検体に皮下投与することを含む方法。
【請求項８１】
被検体におけるＬＤＬコレステロールレベルを減少させるための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８２】
被検体におけるコレステロール関連疾患を治療するための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８３】
被検体における高コレステロール血症を治療するための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８４】
被検体におけるＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合を阻害するための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８５】
被検体におけるＬＤＬコレステロールレベルを減少させるための、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量の投与のための抗ＰＣＳＫ９抗体の皮下投与量。
【請求項８６】
被検体におけるコレステロール関連疾患を治療するための、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量の投与のための抗ＰＣＳＫ９抗体の皮下投与量。
【請求項８７】
被検体における高コレステロール血症を治療するための、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量の投与のための抗ＰＣＳＫ９抗体の皮下投与量。
【請求項８８】
被検体におけるＬＤＬコレステロールレベルを減少させるための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項８９】
被検体におけるコレステロール関連疾患を治療するための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項９０】
被検体における高コレステロール血症を治療するための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項９１】
被検体におけるＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合を阻害するための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項９２】
被検体におけるＬＤＬコレステロールレベルを減少させるための、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量の投与のための抗ＰＣＳＫ９抗体の皮下投与量の使用。
【請求項９３】
被検体におけるコレステロール関連疾患を治療するための、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量の投与のための抗ＰＣＳＫ９抗体の皮下投与量の使用。
【請求項９４】
被検体における高コレステロール血症を治療するための、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量の投与のための抗ＰＣＳＫ９抗体の皮下投与量の使用。
【請求項９５】
被検体におけるＬＤＬコレステロールレベルを減少させるための医薬の製造のための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項９６】
被検体におけるコレステロール関連疾患を治療するための医薬の製造のための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項９７】
被検体における高コレステロール血症を治療するための医薬の製造のための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項９８】
被検体におけるＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合を阻害するための医薬の製造のための、請求項１〜１６及び２５のいずれか一項に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体、又は請求項２６〜５０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項９９】
被検体におけるＬＤＬコレステロールレベルを減少させるための医薬の製造のための、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量の投与のための抗ＰＣＳＫ９抗体の皮下投与量の使用。
【請求項１００】
被検体におけるコレステロール関連疾患を治療するための医薬の製造のための、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量の投与のための抗ＰＣＳＫ９抗体の皮下投与量の使用。
【請求項１０１】
被検体における高コレステロール血症を治療するための医薬の製造のための、４週間から１２週間ごと又は１ヶ月から３ヶ月ごとに一回あたり４００ｍｇから１０００ｍｇの用量の投与のための抗ＰＣＳＫ９抗体の皮下投与量の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年６月１５日に出願された米国仮出願第６１／７８６，２８０号、及び２０１０年３月２４日に出願された米国仮出願第６１／６６０，６０５号の優先権利益を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、抗ＰＣＳＫ９抗体、抗体製剤、投薬レジメン及び同じものを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
プロタンパク質転換酵素のサブチリシン／ケキシン（Ｋｅｘｉｎ）のタイプ９（ＰＣＳＫ９）は、プロタンパク質転換酵素の哺乳類サブチリシンファミリーのメンバーである。ＰＣＳＫ９は、血流中を循環する低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子のレベルを制御することにより、コレステロール代謝に重要な役割を果たしている。ＰＣＳＫ９レベルの上昇は、肝臓におけるＬＤＬ受容体レベルを低減することが示されており、血漿中に高レベルのＬＤＬコレステロールを生じ、冠動脈疾患への感受性の増加をもたらす。(Petersonら、J Lipid Res. 49(7):1595-9(2008)).従って、様々な治療的状態においてＰＣＳＫ９の活性及びＰＣＳＫ９が果たす対応する役割を阻害又は拮抗する、治療に基づくＰＣＳＫ９のアンタゴニストを生産することは非常に有利であろう。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、ＰＣＳＫ９に対する様々な抗体に一部が基づいている。ＰＣＳＫ９は、重要で有利な治療標的として呈示され、本発明は、ＰＣＳＫ９の発現及び／又は活性に関連した病態を標的とすることにおいて使  用のための治療薬及び診断薬としての抗体を提供する。従って、本発明は、ＰＣＳＫ９に関連する方法、組成物、キット及び製造品を提供する。
【０００５】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（ｉ）Ｘ１はＳ又はＴであり；Ｘ２はＧ、Ｒ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｔ又はＹであり；Ｘ４はＡ又はＴである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＨ（配列番号２８）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）ＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉi）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｉｖ）Ｘ１はＳ又はＴである、ＲＡＳＱＤＶＳＸ１ＡＶＡ（配列番号２９）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｖ）Ｘ１はＦ又はＳである、ＳＡＳＸ１ＬＹＳ（配列番号３０）を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｖｉ）Ｘ１はＰ、Ｒ又はＴであり；Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｓ又はＴであり；Ｘ３はＬ、Ｐ又はＱであり；Ｘ４はＡ、Ｈ、Ｐ又はＳである、ＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３１）又はＱＱＡＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｌ３、からなる群から選択される少なくとも一、二、三、四、五、又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む可変ドメインを含む。
【０００６】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、次の６つのＨＶＲ配列を含む可変ドメインを含む：
（ｉ）Ｘ１はＳ又はＴであり；Ｘ２はＧ、Ｒ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｔ又はＹであり；Ｘ４はＡ又はＴである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＨ（配列番号２８）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）ＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉi）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｉｖ）Ｘ１はＳ又はＴである、ＲＡＳＱＤＶＳＸ１ＡＶＡ（配列番号２９）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｖ）Ｘ１はＦ又はＳである、ＳＡＳＸ１ＬＹＳ（配列番号３０）を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｖｉ）Ｘ１はＰ、Ｒ又はＴであり；Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｓ又はＴであり；Ｘ３はＬ、Ｐ又はＱであり；Ｘ４はＡ、Ｈ、Ｐ又はＳである、ＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３１）又はＱＱＡＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｌ３。
【０００７】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（ｉ）Ｘ１はＳ又はＴであり；Ｘ２はＧ、Ｒ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｔ又はＹであり；Ｘ４はＡ又はＴであり、Ｘ５はＨ又はＮである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＸ５（配列番号４５）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）ＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉi）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｉｖ）Ｘ１はＳ又はＴである、ＲＡＳＱＤＶＳＸ１ＡＶＡ（配列番号２９）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｖ）Ｘ１はＦ又はＳである、ＳＡＳＸ１ＬＹＳ（配列番号３０）を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｖｉ）Ｘ１はＰ、Ｒ又はＴであり；Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｓ又はＴであり；Ｘ３はＬ、Ｐ又はＱであり；Ｘ４はＡ、Ｈ、Ｐ又はＳである、ＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３１）又はＱＱＡＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｌ３、
からなる群から選択される少なくとも一、二、三、四、五、又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む可変ドメインを含む。
【０００８】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、次の６つのＨＶＲ配列を含む可変ドメインを含む：
（ｉ）Ｘ１はＳ又はＴであり；Ｘ２はＧ、Ｒ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｔ又はＹであり；Ｘ４はＡ又はＴであり、Ｘ５はＨ又はＮである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＸ５（配列番号４５）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）ＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉi）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｉｖ）Ｘ１はＳ又はＴである、ＲＡＳＱＤＶＳＸ１ＡＶＡ（配列番号２９）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｖ）Ｘ１はＦ又はＳである、ＳＡＳＸ１ＬＹＳ（配列番号３０）を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｖｉ）Ｘ１はＰ、Ｒ又はＴであり；Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｓ又はＴであり；Ｘ３はＬ、Ｐ又はＱであり；Ｘ４はＡ、Ｈ、Ｐ又はＳである、ＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３１）又はＱＱＡＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｌ３。
【０００９】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（ｉ）Ｘ１はＳ又はＴであり；Ｘ２はＧ、Ｒ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｔ又はＹであり；Ｘ４はＡ又はＴであり、Ｘ５はＨ又はＮである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＸ５（配列番号４５）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）ＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉｉ）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｉｖ）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号７）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｖ）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号８）を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｖｉ）Ｘ１はＰ、Ｒ又はＴであり；Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｓ又はＴであり；Ｘ３はＬ、Ｐ又はＱであり；Ｘ４はＡ、Ｈ、Ｐ又はＳである、ＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３１）又はＱＱＡＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｌ３、
からなる群から選択される少なくとも一、二、三、四、五、又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む可変ドメインを含む。
【００１０】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、次の６つのＨＶＲ配列を含む可変ドメインを含む：  
（ｉ）Ｘ１はＳ又はＴであり；Ｘ２はＧ、Ｒ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｔ又はＹであり；Ｘ４はＡ又はＴであり、Ｘ５はＨ又はＮである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＩＸ５（配列番号４５）を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｉｉ）ＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（ｉｉｉ）ＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹ（配列番号５）を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（ｉｖ）ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号７）を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｖ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号８）を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（ｖｉ）Ｘ１はＰ、Ｒ又はＴであり；Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｓ又はＴであり；Ｘ３はＬ、Ｐ又はＱであり；Ｘ４はＡ、Ｈ、Ｐ又はＳである、ＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３１）又はＱＱＡＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ（配列番号３７）を含むＨＶＲ−Ｌ３。
【００１１】
一実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。ある実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（ｃ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を更に含む。
【００１２】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（ｃ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１、配列番号２又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を更に含む。
【００１３】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。
【００１４】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。
【００１５】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。
【００１６】
別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。
【００１７】
別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（１）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。
【００１８】
別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（１）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。
【００１９】
別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（１）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。
【００２０】
別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（１）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。  
【００２１】
別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、ここで該抗体は、
（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；
（３）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；
（４）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（５）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び
（６）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。
【００２２】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、（ａ）配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号２７又は配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を持つＶＨ配列；又は（ｂ）配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号３４又は配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を持つＶＬ配列を含む。
【００２３】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号２７又は配列番号４３のＶＨ配列を含む。ある実施態様において、抗体は、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号３４又は配列番号４４のＶＬ配列を更に含む。
【００２４】
一実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号１８のＶＬ配列を含む。別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号４４のＶＬ配列を含む。別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列を含む。別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列を含む。別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号２０のＶＬ配列を含む。別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む。別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号４３のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む。別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号２２のＶＬ配列を含む。別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号２３のＶＬ配列を含む。別の実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号３４のＶＬ配列を含む。
【００２５】
ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、ＰＣＳＫ９の断片内のエピトープに結合する。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９又はその断片に結合する抗体又は抗体断片が提供され、該抗体は、配列番号２４のヒトＰＣＳＫ９アミノ酸配列のアミノ酸３７６から３７９を含む、ＰＣＳＫ９の断片内のエピトープに結合する。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｄ２３８を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ａ２３９を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｄ２３８及びＡ２３９を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｅ３６６を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｄ３６７を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｅ３６６及びＤ３６７を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｈ３９１を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｅ３６６、Ｄ３６７及びＨ３９１を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ａ２３９及びＨ３９１を含む。ある実施態様において、機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ａ２３９、Ａ３４１、Ｅ３６６、Ｄ３６７及びＨ３９１の1つ又は複数を含む。ある実施態様において、機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９のＡ２３９、Ａ３４１、Ｅ３６６、Ｄ３６７及びＨ３９１の近傍残基の1つ又は複数を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープは、ヒトＰＣＳＫ９の（ｉ）Ｒ１９４及びＥ１９５からなる群から選択される少なくとも一の残基、（ｉｉ）Ｄ２３８及びＡ２３９から選択される少なくとも一の残基、（ｉｉｉ）Ａ３４１及びＱ３４２から選択される少なくとも一の残基
、及び（ｉｖ）Ｅ３６６、Ｄ３６７、Ｉ３６９、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｃ３７８、Ｆ３７９、Ｓ３８１及びＨ３９１から選択される少なくとも一の残基を含む。ある実施態様において、機能的及び／又は構造的エピトープは、以下の残基：ヒトＰＣＳＫ９のＲ１９４、Ｅ１９５、Ｄ２３８、Ａ２３９、Ａ３４１、Ｑ３４２、Ｅ３６６、Ｄ３６７、Ｉ３６９、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｃ３７８、Ｆ３７９、Ｓ３８１及びＨ３９１の一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、又は全てを含む。
【００２６】
ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、モノクローナル抗体である。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、ヒト化されている。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、ヒト抗体である。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体のフレームワーク配列の少なくとも一部分は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列である。一実施態様において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又はＦ（ａｂ’）２断片から選択される抗体断片である。
【００２７】
一態様において、上記抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかをコードする核酸が提供される一実施態様において、核酸分子を含むベクターが提供される。一実施態様において、ベクターは発現ベクターである。一実施態様において、ベクターを含む宿主細胞が提供される。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物である。別の実施態様において、宿主細胞は、哺乳動物である。更に別の実施態様において、宿主細胞は、原核生物である。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体を作成する方法が提供され、該方法は、抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で宿主細胞を培養すること及び抗体を単離することを含む。ある実施態様において、本方法は、宿主細胞から抗ＰＣＳＫ９抗体を回収することを更に含む。ある実施態様において、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかを含む組成物が提供される。一実施態様において、組成物は、薬学的に許容される担体を更に含む。
【００２８】
一態様において、本明細書で提供される医薬組成物は、約１００から約２２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、約１８０から約２２０ｍＭのアルギニンコハク酸、約０．０１％から約０．０３％のポリソルベート、及び約５．２から約６．２までのｐＨを含む。ある実施態様において、組成物中の抗ＰＣＳＫ９抗体又は抗体断片は、約１５０ｍｇ／ｍＬであり、組成物中のアルギニンコハク酸は、約２００ｍＭであり、組成物中のポリソルベート２０は、約０．０２％であり、そしてｐＨは約５．５である。ある実施態様において、組成物は皮下投与に適している。ある実施態様において、組成物の粘度は２５℃で約１０ｃＰで未満である。本明細書において、当技術分野で周知の、又は記載される任意の抗ＰＣＳＫ９抗体は、組成物に製剤化してもよい。
【００２９】
一態様において、本明細書で提供される医薬組成物は、約１５０から約２２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、約１０から約３０ｍＭのヒスチジンアセテート、約１５０から約１７０ｍＭのアルギニンアセテート、約０．０１％から約０．０３％のポリソルベート、約５．８から約６．２のｐＨを含む。ある実施態様において、組成物中の抗ＰＣＳＫ９抗体又は抗体断片は約２００ｍｇ／ｍＬであり、組成物中のヒスチジンアセテートは約２０ｍＭであり、組成物中のアルギニンアセテートは約１６０ｍＭであり、及び組成物中のポリソルベート２０は約０．０２％であり、ｐＨは約６．０である。ある実施態様において、組成物は皮下投与に適している。ある実施態様において、組成物の粘度は２５℃で約１０ｃＰで未満である。本明細書において、当技術分野で周知の、又は記載される任意の抗ＰＣＳＫ９抗体は、組成物に製剤化してもよい。
【００３０】
一態様において、本明細書で提供されるのは、抗ＰＣＳＫ９抗体、又は本明細書に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体を含有する組成物を含む皮下投与デバイスである。特定の実施態様において、デバイスは、約２００から約１２００ｍｇの範囲で、抗体を個体に一定用量を提供するためのものである。特定の実施態様において、デバイスはプレフィルドシリンジである。（例えば、０．５−ｍＬ、１−ｍＬ、１．２５−ｍＬ、１．５−ｍＬ、１．７５−ｍＬ、２−ｍＬ、２．２５−ｍＬ、又は２．５−ｍＬのシリンジ）特定の実施態様において、デバイスは、１−ｍＬのプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度は約２００ｍｇ／ｍＬである。特定の実施態様において、デバイスは、１．５−ｍＬのプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度は約２００ｍｇ／ｍＬである。特定の実施態様において、デバイスは、２−ｍＬのプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度は約２００ｍｇ／ｍＬである。特定の実施態様において、デバイスは、２．２５−ｍＬのプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度は約２００ｍｇ／ｍＬである。特定の実施態様において、デバイスは、２．５−ｍＬのプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度は約２００ｍｇ／ｍＬである。
【００３１】
一態様において、本発明は、被験体においてＬＤＬ受容体（ＬＤＲＬ）に対するＰＣＳＫ９の結合を阻害する方法に関係し、該方法は、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかの有効量を被験体に投与することを含む。別の態様において、本発明は、被験体においてコレステロールのレベルを減少させる方法に関係し、該方法は、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかの有効量を被験体に投与することを含む。一実施態様では、コレステロールは、ＬＤＬコレステロールである。別の態様において、本発明は、被験体においてＬＤＬコレステロールのレベルを減少させる方法に関係し、該方法は、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかの有効量を被験体に投与することを含む。ある実施態様において、本発明は、被験体において血清ＬＤＬコレステロールのレベルを低下させる方法に関係し、該方法は、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかの有効量を被験体に投与することを含む。別の態様において、本発明は、被験体においてＬＤＬコレステロールのレベルの上昇に関連する病態を治療する方法に関係し、該方法は、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれか一の有効量を被験体に投与することを含む。
【００３２】
ある態様において、本発明は、コレステロール関連疾患を治療する方法に関する。意図されるコレステロール関連疾患の例示的かつ非限定的なリストは、本明細書の「組成物及び方法」で提供される。ある実施態様において、コレステロール関連疾患は、高コレステロール血症である。ある実施態様において、本発明は、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれか一の有効量を被験体に投与することを含む、高コレステロール血症を治療する方法に関する。ある実施態様において、本発明は、アテローム性動脈硬化症及び／又は循環器疾患を予防及び／又は治療する方法に関する。ある実施態様において、本発明は、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれか一の有効量を個体に投与することを含む、個体における再発性心血管イベントのリスクを低減する方法に関する。
【００３３】
一態様において、本発明は、ＰＣＳＫ９の活性を除去し、阻害し、又は低減することにより、改善し、寛解し、抑制又は予防することができる任意の疾患又は病態を治療するための方法に関する。ある実施態様において、スタチンの使用を介して治療可能又は予防可能のどちらかである疾患又は障害はまた、本明細書に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれか一を用いて治療することができる。ある実施態様において、コレステロール合成又はＬＤＬＲ発現の増加から利益を得ることが可能である障害又は疾患はまた、本明細書に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれか一を用いて治療することができる。
【００３４】
本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、２週間ごと、１ヶ月ごと、２ヶ月ごと、又は３ヶ月ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、１ヶ月ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、２ヶ月ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、３ヶ月ごとに皮下投与される。
【００３５】
本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、２週間ごと、１ヶ月ごと、２ヶ月ごと、又は３ヶ月ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、１ヶ月ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００
〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５  ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、２ヶ月ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、３ヶ月ごとに皮下投与される。
【００３６】
本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、２週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、８週間ごと、１０週間ごと、又は１２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、４週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、６週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、８週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、１０週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で、１２週間ごとに皮下投与される。
【００３７】
本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、２週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、８週間ごと、１０週間ごと、又は１２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、４週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ
、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、６週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、８週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、１０週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２００〜１２００ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、４００〜１２００ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜６００ｍｇ、６００〜１２００ｍｇ、６００〜１０００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、８００〜１２００ｍｇ、８００〜１０００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、７５０〜８５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、７７５〜８２５ｍｇ、３５０〜４５０ｍｇ、３７５〜４２５ｍｇ、又は３７５〜４００ｍｇの用量で、１２週間ごとに皮下投与される。
【００３８】
本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、６００ｍｇの用量で、８週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、８００ｍｇの用量で、８週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、８００ｍｇの用量で、１０週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、８００ｍｇの用量で、１２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、７６０ｍｇの用量で、用量で、８週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、７６０ｍｇの用量で、１０週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、７６０ｍｇの用量で、１２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの用量で、４週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの用量で、８週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの用量で、１２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの用量で、４週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの用量で、８週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの用量で、１２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２２０ｍｇの用量で、２週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２２０ｍｇの用量で、４週間ごとに皮下投与される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２２０ｍｇの用量で、８週間ごとに皮下投与される。
【００３９】
本明細書に記載される方法のある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体を投与された被検体は、ＬＤＬ−ｃレベルについてモニターされ、それらのレベルが、が２５又は１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、その後、それらの用量は、用量及び／又は投与頻度を変更することにより、初期投与量の約５０％又は２５％にまで調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を８００ｍｇの初期用量で８週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、２５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、８週間ごとの抗ＰＣＳＫ９抗体２００ｍｇに調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を８００ｍｇの初期用量で８週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、１５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、８週間ごとの２００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体に調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を７６０ｍｇの初期用量で８週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、２５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、８週間ごとの２００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体に調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を７６０ｍｇの初期用量で８週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、１５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、８週間ごとの２００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体に調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を７６０ｍｇの初期用量で８週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、２５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、８週間ごとの１９０ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体に調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を７６０ｍｇの初期用量で８週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、１５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、８週間ごとの１９０ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体に調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様にお
いて、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、２５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、４週間ごとの１００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体に調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、１５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、４週間ごとの１００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体に調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、２５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、４週間ごとの１００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体に調整される。本明細書に記載される方法のある実施態様において、被検体は抗ＰＣＳＫ９抗体を３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに投与され、被検体のＬＤＬ−ｃレベルはモニターされ、１５ｍｇ／ｄＬ未満にＬＤＬ−ｃレベルが低下した場合、その用量は、４週間ごとの１００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体に調整される。
【００４０】
ある実施態様において、前述の皮下用量のいずれかは、皮下投与デバイスを用いて投与される。ある実施態様において、デバイスは、プレフィルドシリンジである。（例えば、０．５−ｍＬ、１−ｍＬ、１．２５−ｍＬ、１．５−ｍＬ、１．７５−ｍＬ、２−ｍＬ、２．２５−ｍＬ、又は２．５−ｍＬのシリンジ）ある実施態様において、デバイスは、１−ｍＬプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度が約２００ｍｇ／ｍＬである。ある実施態様において、デバイスは、１．５−ｍＬプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度が約２００ｍｇ／ｍＬである。ある実施態様において、デバイスは、２−ｍＬプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度が約２００ｍｇ／ｍＬである。ある実施態様において、デバイスは、２．２５−ｍＬプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度が約２００ｍｇ／ｍＬである。ある実施態様において、デバイスは、２．５−ｍＬのプレフィルドシリンジであり、プレフィルドシリンジ内の抗体濃度が約２００ｍｇ／ｍＬである。ある実施態様において、フルフラットな用量（full flat dose）を得るために、複数のシリンジ、例えば、１筒のシリンジ、２筒のシリンジ、３筒のシリンジ、又は４筒のシリンジを用いてもよい。代替的な実施態様において、高用量、シングルユースの、皮下注入デバイスは、フルフラットな用量（full flat dose）、例えば、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ又は１０ｍＬを投与することができる用量を得るために、使用されてもよい。
【００４１】
ある実施態様において、用量が８００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体を含む２筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、８週間毎に投与する。ある実施態様において、用量が８００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む３筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて８週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が８００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む２筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、１０週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が８００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む３筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて１０週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が８００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む２筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、１２週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が８００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む３筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、１２週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が８００ｍｇであり、高容量、シングルユースの、２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体の４ｍＬを含む皮下注入デバイスを用いて、８週間ごとに投与する。
【００４２】
ある実施態様において、用量が７６０ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む２筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、８週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が７６０ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む２筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、１０週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が７６０ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む２筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、１２週間ごとに投与する。
【００４３】
ある実施態様において、用量が６００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む２筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、８週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が６００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む２筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、１２週間ごとに投与する。
【００４４】
ある実施態様において、用量が４００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む１筒の２．５ｍＬシリンジを用いて、４週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が４００ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む２筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、４週間ごとに投与する。ある実施態様において、用量が３８０ｍｇであり、２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む１筒の２．２５ｍＬシリンジを用いて、４週間ごとに投与する。
【００４５】
ある実施態様において、本明細書に記載される方法は、第二の医薬の有効量を被検体に投与することを更に含み、ここで抗ＰＣＳＫ９抗体が第一の医薬である。一実施態様において、第二の医薬はＬＤＬＲタンパク質のレベルを上昇させる。別の実施態様において、第二の医薬はＬＤＬコレステロールのレベルを減少させる。別の実施態様において。第二の医薬はスタチンを含む。別の実施態様において、スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、及びそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。別の実施態様において、第二の医薬はＨＤＬコレステロールのレベルを上昇させる。所定の実施態様において、被検体又は個体はヒトである。
【００４６】
一態様において、本発明は、ＰＣＳＫ９タンパク質を含むことが疑われるサンプル中でＰＣＳＫ９タンパク質を検出する方法に関し、該方法は、（ａ）本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体とサンプルを接触させ；（ｂ）抗ＰＣＳＫ９抗体とＰＣＳＫ９タンパク質の間の複合体の形成を検出することを含む。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は検出可能に標識されている。
【００４７】
本明細書に記載される任意の実施態様又はその組み合わせは、任意かつ全ての抗ＰＣＳＫ９抗体、本明細書に記載される発明の方法及び使用に適用する。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、抗ＰＣＳＫ９抗体の、重鎖ＨＶＲ配列、Ｈ１（出現順にそれぞれ、配列番号１、１、１１、１、２、４２、３、３、、１）、Ｈ２（配列番号４として全て開示）、及びＨ３（配列番号５として全て開示）、及び軽鎖ＨＶＲ配列、Ｌ１（出現順にそれぞれ、配列番号６、７、７、７、７、７、７、７７、及び７）、Ｌ２（出現順にそれぞれ、配列番号２６、８、８、８、８、８、８、８、８、及び８）及びＬ３（出現順にそれぞれ、配列番号９、９、１０、１０、１１、１２、１２、１３、３３、及び１４）を示す。
【図２Ａ−Ｂ】図２Ａ−Ｂは、抗ＰＣＳＫ９抗体の、（Ａ）重鎖可変ドメイン（出現順にそれぞれ、配列番号１５、２７、１５、２７、２７、１６、４３、１７、１７、及び２７）、及び（Ｂ）軽鎖可変ドメイン（出現順にそれぞれ、配列番号１８、４４、１９、１９、２０、２１、２１、２２、３４、及び２３）を示す。位置は、Ｋａｂａｔに従って番号付けえられ、超可変領域は囲まれている。
【図３Ａ−Ｄ】図３Ａ−Ｄは、（Ａ）ヒトＰＣＳＫ９、（Ｂ）マウスＰＣＳＫ９、（Ｃ）カニクイザルＰＣＳＫ９及びラットＰＣＳＫ９、及び（Ｄ）アカゲザルＰＣＳＫ９に対する抗ＰＣＳＫ９抗体（ＩｇＧ）の解離定数を示す。
【図４】抗ＰＣＳＫ９抗体は、競合結合ＥＬＩＳＡにおいてＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９結合を阻害する。ブランク（抗体なし、白四角）及びコントロール抗体（白丸）は破線で示されている。抗ＰＣＳＫ９抗体は実線で示されている。抗ＰＣＳＫ９抗体のＩＣ５０値が表に示されている。
【図５】抗ＰＣＳＫ９抗体の異なる濃度を１５μｇ／ｍｌのＰＣＳＫ９と共にインキュベートし、４時間ＨｅｐＧ２細胞に添加した。細胞は、表面ＬＤＬＲのＦＡＣＳ解析のために処理した。データは、抗ＰＣＳＫ９抗体がＬＤＬＲダウンレギュレーションを効果的に防いだことを示している。陽性コントロールはＰＣＳＫ９で処理されていない細胞である。
【図６】抗ＬＤＬＲ抗体を用いたウエスタンブロットは、マウス肝臓において１時間の３０μｇのＰＣＳＫ９がＬＤＬＲレベルを有意にダウンレギュレートしたことを示している。
【図７】抗ＬＤＬＲ抗体によるウエスタンブロットは、全５つの抗ＰＣＳＫ９抗体が、マウスの肝臓でＬＤＬＲダウンレギュレーションを防いだことを示している。下のイムノブロットの図は、治療群あたり４肝臓のプール（各肝臓からのタンパク質が１０μｇ）である。
【図８】図８は、単回Ｉ．Ｖ．注射後のＣ５７ＪＢＬ／６マウスの血清中の抗ＰＣＳＫ９抗体濃度を示す。示されるのは、投薬群０．５ｍｇ／ｋｇ；５ｍｇ／ｋｇ、及び２０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝３）の平均濃度である。
【図９】図９は、５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＣＳＫ９抗体のＩ．Ｖ．注射後のＣ５７ＪＢＬ／６野生型  及びＰＣＳＫ９−／−  マウスの血清中における抗ＰＣＳＫ９抗体の濃度を示す。各投薬群の平均濃度が示される（ｎ＝３）。
【図１０】図１０は、単回Ｉ．Ｖ．注射後の個々のカニクイザルの血清中の抗ＰＣＳＫ９抗体濃度を示す。３つの投薬群には、５ｍｇ／ｋｇ；２０ｍｇ／ｋｇ；及び６０ｍｇ／ｋｇが含まれている。
【図１１】図１１は、単回Ｉ．Ｖ．注射後のカニクイザルの血清中の抗ＰＣＳＫ９抗体濃度を示す。示されるのは、投薬群５ｍｇ／ｋｇ；２０ｍｇ／ｋｇ、及び６０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝３）の平均濃度である。
【図１２】図１２は、８つのコントロール（Ｃｒｔｌ）又は抗ＰＣＳＫ９抗体のどちらかの単回投薬（１０ｍｇ／ｋｇ体重）により治療されたマウスの血清中の総コレステロールのレベルを示す。コレステロールのレベルは図に示されるように異なる日に測定された。
【図１３】図１３は、コントロール又は抗ＰＣＳＫ９抗体のどちらかの単回投薬（１０ｍｇ／ｋｇ体重）により治療されたマウス由来の血清中の総コレステロールのレベルを示す。
【図１４】図１４は、コホートＡからＪを含む第Ｉ相試験のデザインの概略図を示す。各コホートは、活性剤で治療された患者６例、及びプラセボで治療された患者２例が含まれ、コホートあたりの患者は８例であり、合計で８０例の患者である。
【図１５】図１５は、ＡからＪの試験コホートについての薬物動態データを示している。単回投与コホートＡからＥ、及びＪの結果が左のパネルに示し、複数回投与コホートＦからＩからの結果は、右のパネルに示している。赤矢印は、薬剤投与のタイミングを示している。
【図１６】図１６は、単回投与コホートについて、ＬＤＬ−ｃ（ｍｇ／ｄＬ）レベルにおけるベースラインからの平均絶対変化を示している。
【図１７】図１７は、単回投与コホートについて、ＬＤＬ−ｃレベルにおけるベースラインからの平均変化率を示している。
【図１８】図１８は、複数回投与コホートについて、ＬＤＬ−ｃ（ｍｇ／ｄＬ）レベルでのベースラインからの平均絶対変化を示している。
【図１９】図１９は、複数回投与コホートについて、ＬＤＬ−ｃ値におけるベースラインからの平均変化率を示している。
【図２０】図２０は、２００ｍＭのアルギニンコハク酸、０．０２％のＰＳ２０、ｐＨ５．５の製剤中のタンパク質濃度の関数としての抗ＰＣＳＫ９の粘度を示す。
【図２１】図２１は、２ｃｃのガラスバイアル中のポリソルベート２０（ＰＳ２０）の種々の濃度を含む撹拌した抗ＰＣＳＫ９サンプル及びその対照について、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）（左のパネル）及び濁度（右のパネル）の分析を示している。
【図２２】図２２は、ペプチドマッピングによる様々な条件下で抗ＰＣＳＫ９中のメチオニン及びトリプトファン残基の酸化を示している。
【図２３】図２３は、ペプチドマッピングによる様々な条件下で、抗ＰＣＳＫ９のＣＤＲ中及び隣接するメチオニン及びトリプトファン残基の酸化を示している。
【図２４】図２４は、ｐＨ５．０〜６．５（２００ｍＭのアルギニンコハク酸、ｐＨ５．０〜６．０の０．０２％のＰＳ２０又は２０ｍＭのヒスチジンＨＣＬ、１６０ｍＭの塩酸アルギニン、ｐＨ６．５の０．０２％のＰＳ２０）の２００ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＳＫ９に対する、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）（左のパネル）及びＳＥＣ（右のパネル）のｐＨ速度プロフィールを示す。
【図２５】図２５は、ＨＣｌ製剤（２０ｍＭのヒスチジン塩酸塩、１６０ｍＭのアルギニン塩酸塩、０．０２％のＰＳ２０、ｐＨ６．０における、２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９））及びＡｃｅｔａｔｅ製剤（２０ｍＭのヒスチジンアセテート、１６０ｍＭのアルギニンアセテート、０．０２％のＰＳ２０、ｐＨ６．０における、２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９））において凍結保存中の抗ＰＣＳＫ９について、ＳＥＣによるメインピーク（左のパネル）（％）及び高分子量種（ＨＭＷＳ）（％）のデータを示している。
【図２６】図２６は、４０℃保存１ヶ月後のＣＥ−ＳＤＳ（上）、ＳＥＣ（中央）、及びＩＥＣ（下）による、ｐＨ６．０の２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９におけるカウンターイオンの影響を示している。
【図２７】図２７は、試験薬の用量コホートの概要、抗ＰＣＳＫ９抗体の投与レジメン、及び試験の各群の患者数を含む、第ＩＩ相臨床試験の試験デザインを示している。
【図２８】図２８は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者における、平均薬物動態（＋／−標準偏差）（左のパネル）及び、ＰＣＳＫ９の合計の平均（＋／−標準誤差）（右のパネル）を示している。
【図２９】図２９は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者で認められた直接法のＬＤＬコレステロールのベースラインからの絶対変化を示す。
【図３０】図３０は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者で認められた直接法のＬＤＬコレステロールのベースラインからの相対変化を示す。
【図３１】図３１は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者で認められた総コレステロールのベースラインからの絶対変化を示す。
【図３２】図３２は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者で認められた総コレステロールのベースラインからの相対変化を示す。
【図３３】図３３は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者における非ＨＤＬコレステロールのベースラインからの絶対変化を示す。
【図３４】図３４は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者における非ＨＤＬコレステロールのベースラインからの相対変化を示す。
【図３５】図３５は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者におけるアポリポタンパク質Ｂのベースラインからの絶対変化を示す。
【図３６】図３６は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者におけるアポリポタンパク質Ｂのベースラインからの相対変化を示す。
【図３７】図３７Ａは、少なくとも一回の来院で抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与した後、直接法のＬＤＬ−ｃ値が１５ｍｇ／ｄＬ以下の患者の割合を示し、図３７Ｂは、少なくとも一回の来院で抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された後、直接法のＬＤＬ−ｃ値が２５ｍｇ／ｄＬ以下の患者の割合を示している。
【００４９】
本発明の実施態様の詳細な記述
本明細書に記載され又は参照される技術及び手順は一般に良く理解され、かつ、当業者による従来の方法論、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd. edition(2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.  CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(F. M. Ausubel, et al. eds.,(2003)); the series METHODS IN ENZYMOLOGY(Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH(M. J. MacPherson, B. D. Hames and G. R. Taylor eds.(1995)), Harlow and Lane, eds.(1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE(R. I. Freshney, ed.(1987)); Oligonucleotide Synthesis(M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook(J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture(R. I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture(J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures(A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology(D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction,(Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology(J. E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons, 1999); Immunobiology(C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies(P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach(D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach(P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual(E. Harlow and D. Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies(M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); and Cancer: Principles and Practice of Oncology(V. T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)に記載される広く利用される方法論を使用して通常利用されている。
【００５０】
Ｉ．定義
別に規定されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を持つ。Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons(New York, N.Y. 1994), 及びMarch, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 4th ed., John Wiley & Sons(New York, N.Y. 1992)は、当業者に、本出願で使用される多くの用語に対する一般的な指針を提供する。本明細書に引用される全ての参考文献は、特許出願及び刊行物を含み、その全体が参考により援用される。
【００５１】
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、適切な場合はいつでも、単数で使用される用語はまたその逆も複数形を含む。本明細書で用いる用語は、特定の実施態様を説明するためのものであり、限定することを目的としていないことを理解すべきである。以下に記載される任意の定義が参照により本明細書に組み込まれる任意の文書との競合する場合には、以下に記載される定義が統制するべきである。
【００５２】
本明細書及び請求項を通じて、免疫グロブリン重鎖の残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.(1991)にあるＥＵインデックスのそれであり、参照により本明細書に明示的に援用される。
【００５３】
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含有するフレームワークである。ヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又はそれはアミノ酸配列の変化を含み得る。幾つかの実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、Ｖはヒト免疫グロブリンのフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に、配列が同一である。
【００５４】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示であって典型的な実施態様は、以下で説明される。
【００５５】
「親和性成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる、その一又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）において一又は複数の改変を持つものである。
【００５６】
用語  「抗ＰＣＳＫ９抗体」、「抗ＰＣＳＫ９」、「ＰＣＳＫ９抗体」及び「ＰＣＳＫ９に結合する抗体」は、ＰＣＳＫ９を標的とし、診断薬剤及び／又は治療的薬剤として有用であるように十分な親和性でＰＣＳＫ９に結合することができる抗体を指す。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の、無関係な、非ＰＣＳＫ９タンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のＰＣＳＫ９への結合の約１０％未満である。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９へ結合する抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）を有する。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、異なる種由来のＰＣＳＫ９間で保存されているＰＣＳＫ９のエピトープに結合する。
【００５７】
用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
【００５８】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨは、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗体結合断片を生成し、その各々は単一の抗原結合部位を持ち、残りは容易に結晶化する能力を反映して「Ｆｃ」断片と命名される。パパイン処置は、２つの抗原結合部位を有し、なお抗原を架橋することが可能なＦ（ａｂ’）２断片を産生する。
【００５９】
参照抗体として「同一のエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて５０％以上、参照抗体のその抗原への結合をブロックする抗体、逆に競合アッセイにおいて５０％以上、その抗体のその抗原への結合をブロックするその参照抗体を指す。典型的な競合アッセイが、本明細書において提供される。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９に結合した抗ＰＣＳＫ９抗体Ｆａｂ断片の結晶構造に基づいてエピトープが決定される。
【００６０】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りが異なる起源又は種から由来する抗体を指す。
【００６１】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラスがあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、及びこれらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２に、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００６２】
本明細書で用いられる「細胞傷害性薬物」という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び／又は細胞破壊を生ずる物質を指す。細胞傷害性薬物は、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体）：化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、増殖阻害剤、酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素など、抗生物質、小分子毒素などの毒素、又は細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又はその変異体を含む）、及び以下に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗癌剤を包含する。
【００６３】
用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を持つ抗体断片を指し、その断片は、同一ポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。非常に短いために同一鎖上で２つのドメインの対形成ができないリンカーを使用して、ドメインを他の鎖の相補ドメインと強制的に対形成させ、２つの抗原結合部位を創製する。ダイアボディは二価でも二特異性であってもよい。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／１１１６１号；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134(2003);及びHollinger et al., PNAS USA 90: 6444-6448(1993) に更に詳細に記載されている。トリアボディ及びテトラボディもまた Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134(2003)に記載されている。
【００６４】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）；貪食、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション、及びＢ細胞の活性化を含む。
【００６５】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での有効な量を指す。
【００６６】
「Ｆａｂ」断片は、重鎖と軽鎖可変ドメインを含み、かつまた軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの1つ又は複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端で２〜３の付加残基を有する点がＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書において、Ｆａｂ’の一般名称であり、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を持つ。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生産された。また、抗体断片の他の化学結合も知られている。抗体断片の他の化学結合も知られている。
【００６７】
用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。その用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域を含む。ある実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在しているか、又は存在していない場合がある。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
【００６８】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に４つのＦＲのドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。従って、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般に  ＶＨ（又はＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００６９】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び  「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００７０】
「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部位を含む最小抗体断片である。一実施態様において、２本鎖「Ｆｖ」種は、一本の重鎖と一本の軽鎖の可変ドメインが、堅固な非共有結合をなした二量体からなる。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種では、柔軟なペプチドリンカーによって１の重鎖及び１の軽鎖可変ドメインは共有結合性に連結することができ、よって軽鎖及び重鎖は、二本鎖Ｆｖ種におけるものと類似の「二量体」構造に結合することができる。この配置において、各可変ドメインの３つのＨＶＲは相互作用し、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面に抗原結合部位を形成する。集合的に、６つのＨＶＲが抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に対して特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、全結合部位よりも親和性が低くなるが、抗原を認識して結合する能力を有している。
【００７１】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」は互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含める。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、継代の数に関係なく、それに由来する一次形質転換細胞及び子孫が含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一ではないかもしれないが、突然変異が含まれる場合がある。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異型子孫が本明細書において含まれる。
【００７２】
「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリー又は他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【００７３】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般的には、配列のサブグループは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD(1991), vols. 1-3にあるサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループＩＩＩである。
【００７４】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。所定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、全てまたは実質的にＦＲの全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
【００７５】
本明細書で使用される用語「高コレステロール血症」は、コレステロールのレベルが所望のレベルを超えて上昇した状態を指す。ある実施態様において、ＬＤＬコレステロールのレベルは所望のレベルを超えて上昇している。ある実施態様において、血清ＬＤＬコレステロールのレベルは所望のレベルを超えて上昇している。
【００７６】
本明細書で使用される用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変であるか、及び／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般的に、天然型４鎖抗体は、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つ、及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの６  つのＨＶＲＳを含む。ＨＶＲは、一般的に超可変ループ由来及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最高の配列可変性であり、及び／又は抗原認識に関与している。典型的な超可変ループはアミノ酸残基  ２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）で生じる。(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917(1987))。典型的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５、及びＨ３の９５−１０２に生じる。(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版、Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991))。ＶＨのＣＤＲ１の例外を除いて、ＣＤＲは一般的に超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原に接触する残基である「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、略称（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ−）ＣＤＲ、又はａ−ＣＤＲと呼ばれる、ＣＤＲの領域内に含まれている。典型的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８、及びＨ３の９５−１０２に生じる。(Almagro and Fransson, Front. Biosci.  13:1619-1633(2008)を参照のこと）特に断らない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、上掲のＫａｂａｔらに従い、本明細書において番号が付けられる。
【００７７】
「イムノコンジュゲート」は、1つ又は複数の異種分子にコンジュゲートした抗体であり、限定されないが、細胞傷害性薬物を含む。
【００７８】
「個体」又は「被検体」は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。所定の実施態様において、個体又は被検体はヒトである。
【００７９】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から分離されたものである。幾つかの実施態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定されるように、９５％以上または９９％の純度に精製される。抗体純度の評価法の総説としては、例えばFlatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87(2007)を参照のこと。
【００８０】
「単離された」核酸は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、しかし、その核酸分子は、染色体外又はその自然の染色体上の位置とは異なる染色体位置に存在している。
【００８１】
「抗ＰＣＳＫ９抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖及び軽鎖（又はその断片）をコードする1つ又は複数の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子、及び宿主細胞の1つ又は複数の位置に存在するそのような核酸分子を含む。      
【００８２】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、例えば、天然に生じる変異を含み、又はモノクローナル抗体製剤の製造時に発生し、一般的に少量で存在している変異体などの、可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を一般的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。従って、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作成され、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。    
【００８３】
「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
【００８４】
「天然型抗体」は、天然に生じる様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖から成る約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプのいずれかに割り当てることができる。
【００８５】
用語「パッケージ挿入物」は、効能、用法、用量、投与、併用療法、禁忌についての情報、及び／又はそのような治療用製品の使用に関する警告を含む、治療用製品の商用パッケージに慣習的に含まれている指示書を指すために使用される。  
【００８６】
「参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための適切なパラメーターを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用することによって生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作製され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２もまた、ジェネンテック社、サウスサンフランシスコ、カリフォルニアから公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸのＶ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸオペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメーターは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され変動しない。
【００８７】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（或いは、与えられたアミノ酸配列Ｂと、又はそれに対して所定の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一と一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限り、本明細書で使用されるすべての％アミノ酸配列同一性値が、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用し、直前の段落で説明したように、得られる。
【００８８】
用語「薬学的製剤」又は「薬学的組成物」は、その中に有効で含有される活性成分の生物学的活性を許容するような形態であって、製剤を投与する被検体にとって許容できない毒性である他の成分を含まない調製物を指す。
【００８９】
「薬学的に許容される担体」は、被検体に非毒性であり、有効成分以外の製剤処方中の成分を指す。薬学的に許容される担体は、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含む。
【００９０】
特に断らない限り、本明細書で使用する用語「プロタンパク質転換酵素サブチリシン  ケキシンタイプ９」「ＰＣＳＫ９」又は「ＮＡＲＣ１６−１」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の任意の天然型ＰＣＳＫ９を指す。その用語は、「完全長」、未処理のＰＣＳＫ９並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＰＣＳＫ９又はその断片を包含する。その用語はまた、天然に存在するＰＣＳＫ９の変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。
【００９１】
本明細書で使用される用語「ＰＣＳＫ９抗体」又はＰＣＳＫ９の「生物学的活性」は、ＰＣＳＫ９の任意の生物学的作用を包含する。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９の活性は、基質または受容体に相互作用するか又は結合するＰＣＳＫ９の機能が含まれる。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９の生物学的活性は、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）に結合するＰＣＳＫ９の機能である。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９はＬＤＬＲに結合し、ＬＤＬＲが関与する反応を触媒する。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９の活性は、ＬＤＬＲの利用能を減少させ又は低減するＰＣＳＫ９の機能が含まれる。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９の生物学的活性は、被検体においてＬＤＬの量を増加させるＰＣＳＫ９の機能を含む。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９の生物学的活性は、被検体においてＬＤＬに結合するために利用可能であるＬＤＬＲの量を減少させるＰＣＳＫ９の機能を含む。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９の生物学的活性は、ＬＤＬに結合するために利用可能であるＬＤＬＲの量を減少させるＰＣＳＫ９の機能を含む。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９の生物学的活性は、ＰＣＳＫ９のシグナル伝達から生じる任意の生物学的活性を含む。
【００９２】
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それはｓＦＶが抗原結合に望まれる構造を形成することを可能にする。ｓｃＦｖの総説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds.,(Springer-Verlag, New York, 1994),頁269-315を参照。
【００９３】
本明細書で用いられるように、「治療」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」など文法上の変形）は、治療されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程においてのいずれかで実行できる。治療の望ましい効果は、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的帰結の縮小、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含む。幾つかの実施態様において、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるか又は疾患の進行を遅くするために使用される。
【００９４】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の可変重鎖ドメイン及び軽鎖（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む各ドメインを持ち、一般的に似たような構造を有する。（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., 91頁(2007)を参照）。単一のＶＨ又はＶＬドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。更に、特定の抗原に結合する抗体は、相補的なＶＬ又はＶＨドメインのそれぞれのライブラリーをスクリーニングするために、抗原に特異的に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを用いて単離することができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887(1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628(1991)を参照。
【００９５】
本明細書で使用される、用語「ベクター」は、それがリンクされている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある種のベクターは、それらが動作可能なようにリンクされている核酸の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と言う。
【００９６】
本明細書で使用されるように、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に指示がない限り、複数への参照が含まれる。
【００９７】
本明細書で用いられる「約」という用語は、容易にこの技術分野における当業者に知られているそれぞれの値についての通常の誤差範囲を意味する。本明細書中の「およそ」の値又はパラメーターへの言及は、その値又はパラメーター自体に対する実施態様を含む（記載する）。
【００９８】
本明細書に記載される本発明の態様及び実施態様は、態様及び実施態様を「含む」及び／又は「から本質的になる」を含む。
【００９９】
Ｉ．組成物及び方法
一態様において、本発明は、抗ＰＣＳＫ９抗体で得られた実験結果に一部が基づいている。得られた結果は、抗ＰＣＳＫ９抗体によりＰＣＳＫ９の生物学的活性を遮断することは、ＬＤＬＲの減少の防止につながる。加えて、結果は、抗ＰＣＳＫ９抗体の投与が被検体における総ＬＤＬコレステロールのレベルを減少させることを実証している。従って、本発明のＰＣＳＫ９抗体は、本明細書に記載のように、ＰＣＳＫ９に関連する病態、例えばコレステロール関連疾患を標的にすることに使用のための、重要な治療薬及び診断薬を提供する。
【０１００】
ある実施態様において、「コレステロール関連疾患」は、高コレステロール血症、心臓病、メタボリックシンドローム、糖尿病、冠動脈心疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病、そして一般的に脂質代謝異常の任意の1つ又は複数を包含し、これらは、例えば、血清総コレステロールの上昇、ＬＤＬの上昇、トリグリセリドの上昇、ＶＬＤＬの上昇、及び／又はＨＤＬの低下によって明らかにすることができる。単独又は他の薬剤と併用のどちらかで抗ＰＣＳＫ９抗体を使用して治療可能な一次性及び二次性の脂質代謝異常の幾つかの非限定的な例は、メタボリックシンドローム、糖尿病、家族性複合型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症、ヘテロ接合性高コレステロール血症、ヘテロ接合性高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ａｐｏｐｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ−１００）を含む家族性高コレステロール血症；多遺伝子性高コレステロール血症；レムナントリムーバル疾患（ｒｅｍｎａｎｔ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）、肝性リパーゼ欠損症；以下の任意に対する二次性の脂質異常症：食傷、甲状腺機能低下症、エストロゲン及びプロゲスチン治療、βブロッカー、及びチアジド系利尿薬を含む薬物；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、糖原病、肝細胞腫、胆汁うっ滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、及びアルコール誘導性高トリグリセリド血症を包含する。本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体はまた動脈硬化性疾患、例えば、冠状動脈性心臓病、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳卒中（虚血性及び出血性）、狭心症又は脳血管疾患及び急性冠動脈症候群、心筋梗塞の予防又は治療において有用であり得る。ある実施態様において、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体は、非致死性心臓発作、致命的及び非致死性脳卒中、特定の種類の心臓手術、心不全による入院、心臓疾患の患者における胸痛、及び／又は心臓病、以前の心臓発作、以前の心臓手術などを理由とする心血管系イベント及び／又は動脈血栓の所見のある胸痛のリスクを低減することにおいて有用である。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体及び本明細書に記載される方法は、心血管系イベントのリスクを低減させるために使用することができる。
【０１０１】
Ａ．典型的な抗ＰＣＳＫ９抗体
一態様において、本発明は、ＰＣＳＫ９に結合する単離された抗体を提供する。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体はＰＣＳＫ９活性を調節する。
【０１０２】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１、配列番号２又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六つのＨＶＲを含む抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。
【０１０３】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４又は配列番号３３のアミノ酸配列を含む、六つのＨＶＲを含む抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。
【０１０４】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１、配列番号２又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ  ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ  ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１、配列番号２又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を更に含む。
【０１０５】
別の実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ  ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ  ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（ｃ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１０６】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１、配列番号２又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ  ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ  ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ  ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ  ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１０７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸
配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１０８】
ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、ヒト化されている。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、上記実施態様のいずれかにおけるＨＶＲを含み、更に、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。
【０１０９】
その他の態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７又は配列番号４３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含むＰＣＳＫ９抗体は、ＰＣＳＫ９へ結合する能力を保持する。所定の実施態様において、総計１から１０のアミノ酸が、配列番号１５、配列番号１７、配列番号２７又は配列番号４３において、置換され、挿入され、及び／又は欠失している。所定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号２７、配列番号２２又は配列番号４３のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含め、包含する。特定の実施態様において、ＶＨは、（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、から選択される一、二、又は三のＨＶＲを含む。
【０１１０】
その他の態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体が提供され、その抗体は、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２又は配列番号４４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含むＰＣＳＫ９抗体は、ＰＣＳＫ９へ結合する能力を保持する。所定の実施態様において、総計１から１０のアミノ酸が、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、又は配列番号２１のＶＨにおいて、又は配列番号２２、配列番号２３、配列番号３４、又は配列番号４４において、置換され、挿入され、及び／又は欠失している。所定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２又は配列番号４４のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含め、包含する。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、一、二、又は三のＨＶＲを含む。
【０１１１】
その他の態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様のいずれかにあるＶＨ、及び上記に与えられた実施態様のいずれかにあるＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号１５及び配列番号１８のＶＨとＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号２７及び配列番号４４のＶＨとＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号１５及び配列番号１９のＶＨとＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号２７及び配列番号１９のＶＨとＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号２７及び配列番号２０のＶＨとＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号１６及び配列番号２１のＶＨとＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号４３及び配列番号２１のＶＨとＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号１７及び配列番号２２のＶＨとＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号２７及び配列番号２３のＶＨとＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号１７及び配列番号３４のＶＨとＶＬを含む。
【０１１２】
その他の態様において、抗ＮＲＰ１抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含むＰＣＳＫ９抗体は、ＰＣＳＫ９へ結合する能力を保持する。ある実施態様において、配列番号３５において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。所定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７又は配列番号４３のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含め、包含する。ある実施態様において、重鎖は、（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、から選択される一、二、又は三のＨＶＲを含む。
【０１１３】
その他の態様において、配列番号３６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗ＮＲＰ１抗体が提供される。ある実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含むＰＣＳＫ９抗体は、ＰＣＳＫ９へ結合する能力を保持する。ある実施態様において、配列番号３６において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。所定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２又は配列番号４４のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含め、包含する。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、一、二、又は三のＨＶＲを含む。
【０１１４】
その他の態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様のいずれかにあるＶＨ、及び上記に与えられた実施態様のいずれかにあるＶＬを含む。一実施態様において、二重特異性抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含む第一の重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む第二の重鎖を含む。ある実施態様において、配列番号３５は、Ｃ末端で、例えば、Ｋ４５１、又はＧ４５０及びＫ４５１が含まれていないが、１つ又は２つのアミノ酸がトランケートされる。ある実施態様において、配列番号３５  におけるＰ４４９はアミド化されている。
抗体５０８．２０．３３ｂ重鎖アミノ酸配列（配列番号３５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＴＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＳＰＡＮＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＩＧＳＲＥＬＹＩＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
抗体５０８．２０．３３ｂ軽鎖アミノ酸配列（配列番号３６）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＹＰＡＬＨＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１１５】
ある実施態様において、配列番号３５は、Ｃ末端で、例えば、Ｋ４５１、又はＧ４５０及びＫ４５１が含まれていないが、１つ又は２つのアミノ酸がトランケートされる（例えば、配列番号３５のアミノ酸１〜４４９又は配列番号３５のアミノ酸１〜４５０を含む重鎖）。ある実施態様において、配列番号３５におけるＰ４４９はアミド化されている
【０１１６】
ある実施態様において、機能性エピトープは、コンビナトリアルアラニンスキャニングによってマッピングすることができる。このプロセスにおいて、コンビナトリアルアラニンスキャニング戦略は、抗ＰＣＳＫ９抗体との相互作用のために必要であるＰＣＳＫ９タンパク質中のアミノ酸を同定するために用いることができる。ある実施態様において、エピトープは立体構造をとり、ＰＣＳＫ９に結合した抗ＰＣＳＫ９抗体のＦａｂ断片の結晶構造がそのエピトープを同定するために用いられ得る。一態様において、本発明は、本明細書に与えられた抗ＰＣＳＫ９抗体と同一エピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある実施態様において、配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号２０のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号４３のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号２２のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号２３のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号３４のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１１７】
一態様において、本発明は、本明細書に記載される抗体のいずれか一と競合的にヒトＰＣＳＫ９に結合する抗ＰＣＳＫ９抗体、又はその抗原結合断片を提供する。ある実施態様において、競合的結合がＥＬＩＳＡアッセイを用いて決定され得る。例えば、ある実施態様において、配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と競合的にＰＣＳＫ９に結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と競合的にＰＣＳＫ９に結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号２０のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と競合的にＰＣＳＫ９に結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と競合的にＰＣＳＫ９に結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号４３のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と競合的にＰＣＳＫ９に結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号２２のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と競合的にＰＣＳＫ９に結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号２７のＶＨ配列及び配列番号２３のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と競合的にＰＣＳＫ９に結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号３４のＶＬ配列を含む抗ＰＣＳＫ９抗体と競合的にＰＣＳＫ９に結合する抗体が提供される。
【０１１８】
ある実施態様において、本明細書に記載されるＰＣＳＫ９の断片内のエピトープへ結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号２４のヒトＰＣＳＫ９アミノ酸配列のアミノ酸３７６から３７９を含む、ＰＣＳＫ９の断片内のエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｄ２３８を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ａ２３９を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｄ２３８及びＡ２３９を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｅ３６６を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｄ３６７を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｅ３６６及びＤ３６７を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｈ３９１を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ｅ３６６、Ｄ３６７及びＨ３９１を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ａ２３９及びＨ３９１を含む。ある実施態様において、機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９の残基Ａ２３９、Ａ３４１、Ｅ３６６、Ｄ３６７及びＨ３９１の1つ又は複数を含む。ある実施態様において、機能的及び／又は構造的エピトープはヒトＰＣＳＫ９のＡ２３９、Ａ３４１、Ｅ３６６、Ｄ３６７及びＨ３９１の近傍残基の1つ又は複数を含む。ある実施態様において、この発明による抗体の機能的及び／又は構造的エピトープは、ヒトＰＣＳＫ９の（ｉ）Ｒ１９４及びＥ１９５からなる群から選択される少なくとも一の残基、（ｉｉ）Ｄ２３８及びＡ２３９から選択される少なくとも一の残基、（ｉｉｉ）Ａ３４１及びＱ３４２から選択される少なくとも一の残基、及び（ｉｖ）Ｅ３６６、Ｄ３６７、Ｉ３６９、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｃ３７８、Ｆ３７９、Ｓ３
８１及びＨ３９１から選択される少なくとも一の残基を含む。ある実施態様において、機能的及び／又は構造的エピトープは、以下の残基：ヒトＰＣＳＫ９のＲ１９４、Ｅ１９５、Ｄ２３８、Ａ２３９、Ａ３４１、Ｑ３４２、Ｅ３６６、Ｄ３６７、Ｉ３６９、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｃ３７８、Ｆ３７９、Ｓ３８１及びＨ３９１の一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、又は全てを含む。
【０１１９】
本発明の更なる態様では、上記実施態様のいずれかに記載の抗ＰＣＳＫ９抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。その他の態様において、抗体は、全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体、又は本明細書において定義された他の抗体クラス又はアイソタイプである。
【０１２０】
更なる態様にて、以下のセクション１−７で説明されるように、上記実施態様のいずれかに記載の抗ＰＣＳＫ９抗体は、単独または組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる：
【０１２１】
１．抗体親和性
所定の実施態様において、本明細書において与えられる抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８  Ｍ未満、例えば、１０−８  Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）である。
【０１２２】
一実施態様において、以下のアッセイにより説明されるように、Ｋｄは、目的の抗体のＦａｂ型とその抗原を用いて実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。非標識抗原の力価測定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原にてＦａｂを均衡化して、抗Ｆａｂ抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を測定する(例としてChen, et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照）。アッセイの条件を決めるために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を５μｇ／ｍｌの捕獲抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）にて一晩コートして、その後２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳにて室温（およそ２３℃）で２〜５時間、ブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ  ＃２６９６２０）に、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を段階希釈した所望のＦａｂと混合する（例えば、Presta等,(1997) Cancer Res. 57: 4593-4599の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。ついで目的のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでに長時間（例えばおよそ６５時間）かかるかもしれない。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温で（例えば１時間）インキュベートする。そして、溶液を取り除き、プレートを０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））を含むＰＢＳにて８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０  ＴＭ；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴＴＭγ計測器（Ｐａｃｋａｒｄ）にて１０分間計測する。最大結合の２０％か又はそれ以下濃度のＦａｂを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。
【０１２３】
他の実施態様によると、〜１０反応単位（ＲＵ）の固定した抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いる表面プラズモン共鳴アッセイを使用してＫｄを測定する。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ  Ｉｎｃ．）を、提供者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の応答単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入した。動力学的な測定のために、Ｆａｂの２倍の段階希釈（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５°Ｃで、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０ＴＭ）界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入する。会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデル（ｓｉｍｐｌｅ  ｏｎｅ−ｔｏ−ｏｎｅ  Ｌａｎｇｍｕｉｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｄｅｌ）（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を用いて、会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出した。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出した。例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによる結合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計（ｓｔｏｐ−ｆｌｏｗ  ｅｑｕｉｐｐｅｄ  ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｍｅｔｅｒ）（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズ  ＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、２５℃の、２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、帯域通過＝１６ｎｍ）における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。
【０１２４】
２．抗体断片
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ，及びｓｃＦｖ断片、及び下記の他の断片を含む。所定の抗体断片の総説については、Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134(2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds.,(Springer-Verlag, New York), pp. 269-315(1994)を参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５，５７１，８９４号及び  第５，５８７，４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
【０１２５】
ダイアボディは２価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／１１１６１号；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134(2003)；及びHollinger et al., PNAS USA 90: 6444-6448(1993)  に更に詳細に記載されている。トリアボディ及びテトラボディもまた  Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134(2003)に記載されている。
【０１２６】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。所定の実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，  Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６  Ｂ１号を参照）。
【０１２７】
抗体断片は様々な技術で作成することができ、限定されないが、本明細書に記載するように、インタクトな抗体の分解、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌やファージ）による生産を含む。
【０１２８】
３．キメラ及びヒト化抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。所定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855(1984))に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１２９】
所定の実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したまま、ヒト化されている。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体から由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、1つ又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部をも含む。所定の実施態様において、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基は、抗体特異性又は親和性を回復又は改善するめに、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。
【０１３０】
ヒト化抗体及びそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633(2008)に総説され、更に、Riechmann et al., Nature 332:323-329(1988); Queen et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 86:10029-10033(1989)；  米国特許第５，８２１，３３７、７，５２７，７９１、６，９８２，３２１，及び７，０８７，４０９；  Kashmiri et al., Methods 36:25-34(2005)（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記述）； Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498(1991)（「リサーフェシング」を記述）；Dall’Acqua et al., Methods 36:43-60(2005)（「ＦＲシャッフリング」を記述）；及びOsbourn et al., Methods 36:61-68(2005)及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260(2000)（ＦＲのシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記述）に記載されている。
【０１３１】
ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296(1993))；軽鎖または重鎖の可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285(1992)；及びＰresta et al.  J. Immunol., 151:2623(1993)を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633(2008)を参照）；及びＦＲライブラリースクリーニング由来のフレームワーク領域（例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684(1997)及び Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618(1996)を参照）を含む。
【０１３２】
４．ヒト抗体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は一般的にvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74(2001)及びＬonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459(2008)に記載されている。
【０１３３】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を持つ又はインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するか又は動物の染色体にランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125(2005)を参照。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ  技術を記載している、米国特許第６，０７５，１８１号及び６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７，０４１，８７０号及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第  ２００７／００６１９００号）を参照。このような動物で生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に改変される可能性がある。
【０１３４】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベース法によって作成することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ細胞株が記載されている。（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001(1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86(1991)を参照）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体はまた、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562(2006)に記載されている。更なる方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268(2006)（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されたものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937(2005) 及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91(2005)に記載される。
【０１３５】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成され得る。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術が、以下に説明される。
【０１３６】
５．ライブラリー由来の抗体
本発明の抗体は、所望の活性または活性（複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてのライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)に総説され、更に、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628(1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597(1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175(Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310(2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093(2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472(2004); 及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に記載されている。
【０１３７】
所定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により個別にクローニングされ、ファージライブラリーにランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455(1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、通常、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、またはＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫された起源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性を伴うことなく免疫原に高親和性抗体を提供する。代わりに、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734(1993)に記載されるように、ナイーブなレパートリーが、任意の免疫感作無しで、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対して、抗体の単一起源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブなライブラリーはまた、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388(1992)に記載されるように、非常に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を達成するために、幹細胞由来の未転位Ｖ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することにより合成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、２００５／０１１９４５５号、２００５／０２６６０００号、２００７／０１１７１２６号、２００７／０１６０５９８号、２００７／０２３７７６４号、２００７／０２９２９３６号及び２００９／０００２３６０を含む。
【０１３８】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書でヒト抗体又はヒト抗体の断片とみなされる。
【０１３９】
６．多重特異性抗体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある実施態様において、結合特異性の一つはＰＣＳＫ９に対してであり、他は、任意の他の抗原に対してである。ある実施態様において、二重特異性抗体は、ＰＣＳＫ９の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体はまたＰＣＳＫ９を発現する細胞に対して細胞傷害性薬物を局在化させるために用いることができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０１４０】
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現(Milstein and Cuello, Nature 305: 537(1983))、国際公開第93/08829号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655(1991)を参照)及び“knob-in-hole”エンジニアリング（例えば、米国特許第  ５，７３１，１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ２量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４，６７６，９８０号、及びBrennan et al., Science, 229: 81(1985)を参照)、二重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553(1992)を参照）、二重特異性抗体フラグメントを作製するため、「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448(1993)を参照）、単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368(1994)を参照)、及び、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60(1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。
【０１４１】
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまた本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照）。
【０１４２】
本明細書中の抗体又は断片はまた、ＰＣＳＫ９並びにその他の異なる抗原（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）に結合する抗原結合部位を含む、「２重作用（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む。
【０１４３】
７．抗体変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、又はペプチド合成によって調製することができる。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終構築物に到達させるために作成され得る。
【０１４４】
a）置換、挿入、及び欠失変異体
所定の実施態様において、1つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異の対象となる部位は、ＨＶＲとＦＲを含む。保存的置換は、表１の「保存的置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１の「例示的置換」の見出しの下に与えられ、アミノ酸側鎖のクラスを参照して以下に更に説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされた。
表Ａ
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【０１４５】
アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ．
【０１４６】
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。
【０１４７】
置換変異体の一つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体など）の1つ又は複数の高頻度可変領域残基の置換を含む。一般的には、さらなる研究のために選択され得られた変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性を減少）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。典型的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるファージディスプレイベースの親和性成熟技術を用いて、簡便に生成され得る。簡潔に言えば、1つ又は複数のＨＶＲ残基が変異し、変異体抗体は、ファージ上に表示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０１４８】
変更（例えば、置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲで行うことができる。このような変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンにコードされた残基で（例えばＣhowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196(2008)を参照)、及び/又はSDR(a-CDR)で行うことができ、得られた変異体VH又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーから構築し選択し直すことによる親和性成熟が、例えばHoogenboomらのMethods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ,(2001)に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様において、多様性が、種々の方法（例えば、変異性ＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）のいずれかにより、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作成される。次いで、ライブラリーは、所望の親和性を持つ抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するするもう一つの方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４から６残基）がランダム化されたＨＶＲ指向のアプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発、またはモデリングを用いて、特異的に同定され得る。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的にされる。
【０１４９】
所定の実施態様において、置換、挿入、または欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限りにおいて、1つ又は複数のＨＶＲ内で発生する可能性がある。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的改変（例えば本明細書で与えられる保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上記に与えられた変異体ＶＨ又はＶＬ配列の所定の実施態様において、各ＨＶＲは不変であるか、又はわずか１個、２個または３個のアミノ酸置換が含まれているかのいずれかである。
【０１５０】
突然変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham及びWells(1989) Science, 244:1081-1085により説明されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基またはグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）が同定され、抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを判断するために、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置換される。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入され得る。代わりに、又は更に、抗原抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基が、置換の候補として標的とされるか又は排除され得る。変異体はそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０１５１】
アミノ酸配列挿入は、一残基から百以上の残基を含有するポリペプチド長にわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体は、酵素に対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合（例えばＡＤＥＰＴの場合）、または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合を含む。
【０１５２】
ｂ）グリコシル化変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は抗体がグリコシル化される程度を増加または減少するように改変される。  抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、1つ又は複数のグリコシル化部位が作成または削除されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。
【０１５３】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって生成された天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により一般的に付着した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えばWrightらのTIBTECH 15:26-32(1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐糖鎖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びにフコースを含み得る。幾つかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は一定の改善された特性を有する抗体変異型を作成するために行われ得る。
【０１５４】
一実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）付着されたフコースを欠いた糖鎖構造を有して提供される。例えば、このような抗体のフコース量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、または２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に付着しているすべての糖構造の合計（例えば、コンプレックス、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）でおよそ２９７の位置に位置するアスパラギン残基を指し、しかし、Ａｓｎ２９７もまた位置２９７の上流または下流のおよそ±３アミノ酸に、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、位置２９４と３００の間に配置され得る。このようなフコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善させた可能性がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「フコース非修飾」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249(2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614(2004)が含まれる。非フコシル化抗体を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（RipkaらのArch. Biochem. Biophys. 249:533-545(1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８  Ａ１号，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２  Ａ１号，Adamsら、especially at Example 11)、及びノックアウト細胞株、アルファ−１、６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-OhnukiらのBiotech. Bioeng. 87: 614(2004); Kanda, Y. ら、Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688(2006); 及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
【０１５５】
抗体変異体が、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖とともに更に与えられる。このような抗体変異体はフコシル化を減少させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善している可能性がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。このような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１５６】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
所定の実施態様において、１つ又は複数のアミノ酸改変を、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入することができ、それによってＦｃ領域変異体を生成する。Ｆｃ領域の変異体は、１つ又は複数のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域の配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでもよい。
【０１５７】
所定の実施態様において、本発明は、インビボにおける抗体の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有する抗体変異体を意図している。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイでは、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃＲ結合を欠くが（それゆえ、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞、ＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみ、を発現するが、単球はＦｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch及びKinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492(1991)の464ページの表3に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Hellstrom, I. らのProc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063(1986)を参照）及びHellstrom, Iら、Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499-1502(1985); 5,821,337(Bruggemann, M. ら、J. Exp. Med. 166:1351-1361(1987)を参照）に説明される。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）  非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代わりに、又は更に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163(1996); Cragg, M.S. ら、Blood 101:1045-1052(2003);並びにCragg, M.S. 及びM.J. Glennie, Blood 103:2738-2743(2004)を参照)。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定もまた、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる（例えば、Petkova, S.B. ら、Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769(2006)を参照)。
【０１５８】
エフェクター機能が減少した抗体は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、３２９の1つ又は複数の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる、「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０１５９】
ＦｃＲへの改善又は減少させた結合を持つ特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShieldsら、J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604(2001)を参照)。
【０１６０】
所定の実施態様において、抗体変異体はＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４における置換（ＥＵの残基番号付け）を含む。
【０１６１】
幾つかの実施態様において、改変された（すなわち改善されたか減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる、Ｆｃ領域における改変がなされ、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅらのJ. Immunol. 164: 4178-4184(2000)に説明される。
【０１６２】
増加した半減期を持ち、胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体(Guyerら、J. Immunol. 117:587(1976) 及びKimら、J. Immunol. 24:249(1994))が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する1つ又は複数の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域の残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４の1つ又は複数の置換、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換を有するものが含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０１６３】
Duncan & Winter, Nature 322:738-40(1988); 米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及び、Ｆｃ領域の変異体の他の例に関しては国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
【０１６４】
ｄ）システイン操作抗体変異体
所定の実施態様において、抗体の1つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されている、システイン改変抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作成することが望まれ得る。特定の実施態様において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で起きる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書中でさらに記載されるように、イムノコンジュゲーを作成するために、例えば薬物部分またはリンカー−薬剤部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートするために使用することができる。所定の実施態様において、1つ又は複数の以下の残基がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔの番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載のように生成され得る。
【０１６５】
ｅ）抗体誘導体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で知られ、容易に入手されている追加の非タンパク質部分を含むように更に改変することができる。抗体の誘導体化に適した部分としては、限定されないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキソラン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（単独重合体又はランダム共重合体のいずれか）及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコール単独重合体、プロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物を包含する。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性のために製造上の利点を有し得る。ポリマーはいずれかの分子量のものであってよく、そして分枝鎖又は未分枝鎖であってよい。抗体に結合するポリマーの数は変動してよく、そして、１を超える重合体が結合する場合は、それらは同じか又は異なる分子であることができる。一般的に、誘導体化に使用するポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、向上させるべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が特定の条件下で治療に使用されるのか等を考慮しながら決定することができる。
【０１６６】
その他の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱されてもよい抗体と非タンパク質部分とのコンジュゲートが、提供される。一実施態様において、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605(2005)。放射線は、任意の波長であって良いが、限定されないものの、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質部分の近位細胞が死滅される温度に非タンパク質部分を加熱する波長が含まれる。
【０１６７】
Ｂ．組換え方法及び組成物
本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体は、例えば米国特許第４，８１６，５６７号で説明したように、組換えの方法及び組成物を用いて製造することができる。一実施態様において、本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９重鎖可変領域をコードする単離された核酸が提供され、その核酸は、配列番号３８又は配列番号３９の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含む。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９重鎖可変領域をコードする単離された核酸が提供され、核酸は、配列番号３８又は３９を含む。可変領域をコードする単離された核酸が提供され、その核酸は、配列番号４０又は配列番号４１の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含む。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９重鎖可変領域及び抗ＰＣＳＫ９軽鎖可変領域をコードする単離された核酸が提供され、重鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号３８又は配列番号３９の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号４０又は配列番号４１の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含む。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９重鎖可変領域をコードする単離された核酸が提供され、核酸は、配列番号３８又は３９を含む。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９軽鎖可変領域をコードする単離された核酸が提供され、核酸は、配列番号４０又は４１を含む。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードする単離された核酸が提供され、重鎖をコードする核酸は、配列番号３８を含み、軽鎖をコードする核酸は
、配列番号４０を含む。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードする単離された核酸が提供され、重鎖をコードする核酸は、配列番号３９を含み、軽鎖をコードする核酸は、配列番号４１を含む。
抗体５０８．２０．３３ｂの全長重鎖核酸配列（配列番号３８）
ＧＡＡ  ＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧ  ＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧ  ＣＧＧＴＧＧＣＣＴＧ  ＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧ  ＧＧＧＧＣＴＣＡＣＴ  ＣＣＧＴＴＴＧＴＣＣ  ＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴ  ＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣ  ＣＴＴＣＴＣＴＡＧＴ  ＡＣＴＧＣＴＡＴＴＣ  ＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧ  ＴＣＡＧＧＣＣＣＣＧ  ＧＧＴＡＡＧＧＧＣＣ  ＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴ  ＴＧＣＴＡＧＧＡＴＴ  ＴＣＴＣＣＴＧＣＴＡ  ＡＣＧＧＴＡＡＴＡＣ  ＴＡＡＣＴＡＴＧＣＣ  ＧＡＴＡＧＣＧＴＣＡ  ＡＧＧＧＣＣＧＴＴＴ  ＣＡＣＴＡＴＡＡＧＣ  ＧＣＡＧＡＣＡＣＡＴ  ＣＣＡＡＡＡＡＣＡＣ  ＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡ  ＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡ  ＧＣＴＴＡＡＧＡＧＣ  ＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴ  ＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴ  ＡＴＴＧＴＧＣＴＣＧ  ＴＴＧＧＡＴＣＧＧＧ  ＴＣＣＣＧＧＧＡＧＣ  ＴＧＴＡＣＡＴＴＡＴ  ＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣ  ＣＧＴＣＴＣＣＴＣＧ  ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡ  ＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣ  ＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣ  ＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴ  ＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧ  ＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧ  ＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧ  ＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧ  ＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣ  ＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴ  ＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧ  ＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧ  ＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧ  ＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣ  ＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴ  ＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡ  ＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴ  ＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧ  ＣＧＴＧＧＴＧＡＣＴ  ＧＴＧＣＣＣＴＣＴＡ  ＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧ  ＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣ  ＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡ  ＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡ  ＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣ  ＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧ  ＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡ  ＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣ  ＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧ  ＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡ  ＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡ  ＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧ  ＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴ  ＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡ  ＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴ  ＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣ  ＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣ  ＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣ  ＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣ  ＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴ  ＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴ  ＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴ  ＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣ  ＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣ  ＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡ  ＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧ  ＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧ  ＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴ  ＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣ  ＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣ  ＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡ  ＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣ  ＡＧＣＡＣＧ
ＴＡＣＣ  ＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧ  ＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣ  ＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣ  ＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴ  ＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧ  ＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴ  ＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣ  ＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣ  ＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣ  ＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡ  ＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣ  ＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧ  ＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧ  ＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧ  ＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣ  ＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣ  ＣＣＧＧＧＡＡＧＡＧ  ＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡ  ＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧ  ＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣ  ＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧ  ＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣ  ＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣ  ＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴ  ＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡ  ＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧ  ＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴ  ＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣ  ＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧ  ＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧ  ＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴ  ＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣ  ＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡ  ＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡ  ＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧ  ＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡ  ＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣ  ＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧ  ＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧ  ＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡ  ＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧ  ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣ  ＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣ  ＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ
抗体５０８．２０．３３ｂの重鎖可変領域核酸配列（配列番号３９）
ＧＡＡ  ＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧ  ＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧ  ＣＧＧＴＧＧＣＣＴＧ  ＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧ  ＧＧＧＧＣＴＣＡＣＴ  ＣＣＧＴＴＴＧＴＣＣ  ＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴ  ＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣ  ＣＴＴＣＴＣＴＡＧＴ  ＡＣＴＧＣＴＡＴＴＣ  ＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧ  ＴＣＡＧＧＣＣＣＣＧ  ＧＧＴＡＡＧＧＧＣＣ  ＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴ  ＴＧＣＴＡＧＧＡＴＴ  ＴＣＴＣＣＴＧＣＴＡ  ＡＣＧＧＴＡＡＴＡＣ  ＴＡＡＣＴＡＴＧＣＣ  ＧＡＴＡＧＣＧＴＣＡ  ＡＧＧＧＣＣＧＴＴＴ  ＣＡＣＴＡＴＡＡＧＣ  ＧＣＡＧＡＣＡＣＡＴ  ＣＣＡＡＡＡＡＣＡＣ  ＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡ  ＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡ  ＧＣＴＴＡＡＧＡＧＣ  ＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴ  ＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴ  ＡＴＴＧＴＧＣＴＣＧ  ＴＴＧＧＡＴＣＧＧＧ  ＴＣＣＣＧＧＧＡＧＣ  ＴＧＴＡＣＡＴＴＡＴ  ＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣ  ＣＧＴＣＴＣＣＴＣＧ
抗体５０８．２０．３３ｂの全長軽鎖核酸配列（配列番号４０）
ＧＡ  ＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧ  ＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣ  ＣＧＡＧＣＴＣＣＣＴ  ＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴ  ＧＴＧＧＧＣＧＡＴＡ  ＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴ  ＣＡＣＣＴＧＣＣＧＴ  ＧＣＣＡＧＴＣＡＧＧ  ＡＴＧＴＧＴＣＣＡＣ  ＴＧＣＴＧＴＡＧＣＣ  ＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣ  ＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧ  ＡＡＡＡＧＣＴＣＣＧ  ＡＡＧＣＴＴＣＴＧＡ  ＴＴＴＡＣＴＣＧＧＣ  ＡＴＣＣＴＴＣＣＴＣ  ＴＡＣＴＣＴＧＧＡＧ  ＴＣＣＣＴＴＣＴＣＧ  ＣＴＴＣＴＣＴＧＧＴ  ＡＧＣＧＧＴＴＣＣＧ  ＧＧＡＣＧＧＡＴＴＴ  ＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣ  ＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣ  ＴＧＣＡＧＣＣＧＧＡ  ＡＧＡＣＴＴＣＧＣＡ  ＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴ  ＧＴＣＡＧＣＡＡＧＣ  ＣＴＡＴＣＣＧＧＣＣ  ＣＴＡＣＡＣＡＣＧＴ  ＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧ  ＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧ  ＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣ  ＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣ  ＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴ  ＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴ  ＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣ  ＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧ  ＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧ  ＧＡＡＣＴＧＣＴＴＣ  ＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣ  ＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡ  ＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣ  ＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣ  ＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴ  ＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡ  ＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣ  ＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡ  ＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡ  ＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡ  ＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡ  ＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧ  ＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣ  ＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴ  ＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡ  ＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡ  ＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴ  ＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣ  ＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣ  ＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴ  ＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣ  ＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡ  ＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧ  ＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ  
抗体５０８．２０．３３ｂの軽鎖可変領域核酸配列（配列番号４１）
ＧＡ  ＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧ  ＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣ  ＣＧＡＧＣＴＣＣＣＴ  ＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴ  ＧＴＧＧＧＣＧＡＴＡ  ＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴ  ＣＡＣＣＴＧＣＣＧＴ  ＧＣＣＡＧＴＣＡＧＧ  ＡＴＧＴＧＴＣＣＡＣ  ＴＧＣＴＧＴＡＧＣＣ  ＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣ  ＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧ  ＡＡＡＡＧＣＴＣＣＧ  ＡＡＧＣＴＴＣＴＧＡ  ＴＴＴＡＣＴＣＧＧＣ  ＡＴＣＣＴＴＣＣＴＣ  ＴＡＣＴＣＴＧＧＡＧ  ＴＣＣＣＴＴＣＴＣＧ  ＣＴＴＣＴＣＴＧＧＴ  ＡＧＣＧＧＴＴＣＣＧ  ＧＧＡＣＧＧＡＴＴＴ  ＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣ  ＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣ  ＴＧＣＡＧＣＣＧＧＡ  ＡＧＡＣＴＴＣＧＣＡ  ＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴ  ＧＴＣＡＧＣＡＡＧＣ  ＣＴＡＴＣＣＧＧＣＣ  ＣＴＡＣＡＣＡＣＧＴ  ＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧ  ＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧ  ＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣ  ＧＡ
【０１６８】
更なる実施態様において、そのような核酸を含む1つ又は複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一実施態様において、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第ニベクター。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体を作る方法が提供され、その方法は、上記のように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含み、及び必要に応じて、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することを含む。
【０１６９】
抗ＰＣＳＫ９抗体の組換え生産のために、例えば上述したように、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／又は発現のために1つ又は複数のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離され、従来の手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
【０１７０】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞は、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞を含む。例えば、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ない場合には、抗体は、細菌で産生することができる。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、第５，７８９，１９９号及び第５，８４０，５２３号を参照。（また、大腸菌における抗体の発現を説明している、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248(B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254も参照。）発現の後、抗体は可溶性画分において細菌の細胞ペーストから単離され得、更に精製することができる。  
【０１７１】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、菌類や酵母菌株を含むポリペプチドをコードするベクターのための、適切なクローニング宿主又は発現宿主であり、そのグリコシル化経路が、「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414(2004)、及びLiら、Nat. Biotech. 24:210-215(2006)を参照。
【０１７２】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物と脊椎動物）から派生している。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定され、これらは特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる。
【０１７３】
植物細胞培養を宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物における抗体産生に関するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載）を参照。
【０１７４】
脊椎動物細胞もまた宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株(Grahamら、J. Gen Virol. 36:59(1977)に記載された２９３細胞又は２９３細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスのセルトリ細胞(Mather, Biol. Reprod. 23:243-251(1980)に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨｅＬａ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えばMatherら、Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68(1982)に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−  ＣＨＯ細胞(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216(1980))を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、及びＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞系の総説については、例えば、Yazaki及びWu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248(B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), 頁255-268(2003)を参照。
【０１７５】
Ｃ．アッセイ
本明細書で提供される抗ＰＣＳＫ９抗体は、同定され、当技術分野で公知の様々なアッセイによってその物理的／化学的性質及び／又は生物学的活性についてスクリーニングされ、または特徴づけることができる。
【０１７６】
１．結合アッセイとその他のアッセイ
一態様では、本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット法等の既知の方法により、そのＰＣＳＫ９結合活性について試験される。多数のタイプの競合結合アッセイを、抗ＰＣＳＫ９抗体が、例えば他の、固相の直接的又は間接的ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相の直接的又は間接的酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えばStahliら、1983, Methods in Enzymology 9:242-253を参照);固相直接ビオチン−アビジンEIA(例えばKirkland ら、1986, J. Immunol. 137:3614-3619を参照）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えばHarlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Pressを参照);固相直接標識RIA(例えば、Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15を参照); 固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Cheung,ら、1990, Virology 176:546-552を参照); 及び直接標識RIA(Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82)と競合するかどうかを決定するために使用することができる。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原、又は非標識化試験抗原結合タンパク質及び標識化参照抗原結合タンパク質のこれらのいずれかを有する細胞の使用を含む。競合的阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下で、固体表面又は細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験抗原結合タンパク質は、過剰に存在する。競合アッセイによって同定された抗原結合タンパク質（競合する抗原結合性タンパク質）は、参照抗原結合タンパク質と同じエピトープ結合する抗原結合タンパク質、及び参照抗原結合タンパク質が結合したエピトープに対して、立体障害が生じるように、十分に近接する隣接エピトープに結合する抗原結合タンパク質を含む。競合的結合を決定するための方法に関する更なる詳細は、本明細書の実施例に提供される。通常は、競合する抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合には、共通の抗原に対する参照抗原結合性タンパク質の特異的結合を、少なくとも４０−４５％、４５−５０％、５０−５５％、５５−６０％、６０−６５％、６５−７０％、７０−７５％又は７５％又はそれ以上阻害（例えば低減）する。ある実施態様において、結合は、少なくとも８０−８５％、８５−９０％、９０−９５％、９５−９７％，又は９７％又はそれ以上阻害される。
【０１７７】
本発明の一態様において、競合アッセイは、抗ＰＣＳＫ９抗体の  ５０８．２０．０４ａ、５０８．２０．０４ｂ、５０８．２０．０６、５０８．２０．２８ａ、５０８．２０．２８ｂ、５０８．２０．３３ａ、５０８．２０．３３ｂ又は５０８．２０．８４と、ＰＣＳＫ９に対する結合について競合する抗体を同定するために用いられ得る。ある実施態様において、そのような競合する抗体は抗ＰＣＳＫ９抗体の５０８．２０．０４ａ、５０８．２０．０４ｂ、５０８．２０．０６、５０８．２０．２８ａ、５０８．２０．２８ｂ、５０８．２０．３３ａ、５０８．２０．３３ｂ及び／又は５０８．２０．８４により結合される同一エピトープ（例えば、線状又は立体構造的エピトープ）に対して結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な典型的な方法が、Morris(1996) “Epitope Mapping Protocols,” in Methods in Molecular Biology vol. 66(Humana Press, Totowa, NJ)に提供されている。
【０１７８】
典型的な競合アッセイにおいて、固定化ＰＣＳＫ９は、ＰＣＳＫ９に結合する第一の標識された抗体（例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体の５０８．２０．０４ａ、５０８．２０．０４ｂ、５０８．２０．０６、５０８．２０．２８ａ、５０８．２０．２８ｂ、５０８．２０．３３ａ、５０８．２０．３３ｂ又は５０８．２０．８４）、及びＰＣＳＫ９への結合について第一の抗体と競合する能力について試験された第二の未標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第二抗体はハイブリドーマ上清中に存在してもよい。コントロールとして、固定化ＰＣＳＫ９が、第二の未標識の抗体でなく、第一の標識された抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第一の抗体のＰＣＳＫ９への結合を許容する条件下でインキュベートした後、過剰の未結合の抗体が除去され、固定化されたＰＣＳＫ９に結合した標識の量が測定される。もし、固定化ＰＣＳＫ９に結合した標識の量が、コントロールサンプルと比較して試験サンプル中で実質的に減少している場合、それは、第二抗体が、ＰＣＳＫ９への結合に対して、第一の抗体と競合していることを示している。Harlow and Lane(1988) Antibodies:  A Laboratory Manual ch.14(Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照。
【０１７９】
２．活性のアッセイ
一態様において、アッセイは、生物学的活性を有するそれらの抗ＰＣＳＫ９抗体を同定するために与えられる。抗ＰＣＳＫ９抗体の生物学的活性は、例えば、ＰＣＳＫ９の1つ又は複数の生物学的活性を遮断する、拮抗する、抑制する、干渉する、調節する及び／又は減少させることを含み得る。インビボ及び／又はインビトロでこのような生物学的活性を有する抗体が提供される。
【０１８０】
ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、ヒトＰＣＳＫ９に結合し、ＬＤＬＲとの相互作用を防止する。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、及び／又はヒトＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を少なくとも約２０％−４０％、４０−６０％、６０−８０％、８０−８５％又はそれ以上（例えば、インビトロでの競合結合アッセイにおいて結合を測定することにより）実質的に阻害する。ある実施態様において、本発明は、ＰＣＳＫ９に特異的に結合し、本明細書に開示されるＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲダウンレギュレーションアッセイを用いてインビトロで測定されるとき、ＬＤＬＲにおけるＰＣＳＫ９媒介性作用を拮抗する単離された抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。
【０１８１】
Ｄ．イムノコンジュゲート
本発明はまた、化学療法剤又は薬物、成長抑制剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片）、又は放射性同位元素など、1つ又は複数の細胞傷害性薬物にコンジュゲートした本明細書中の抗ＰＣＳＫ９抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。
【０１８２】
一実施態様において、イムノコンジュゲートは、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、そこでは抗体は、限定されないが、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号及び欧州特許ＥＰ０  ４２５２３５  Ｂ１を参照）；モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号及び５７８０５８８号及び７４９８２９８号を参照）などのアウリスタチン；ドラスタチン、カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、５７１４５８６号、５７３９１１６号、５７６７２８５号、５７７０７０１号、５７７０７１０号、５７７３００１号、及び５８７７２９６号を参照；Hinmanら、Cancer Res. 53:3336-3342(1993);及びLodeら、Cancer Res. 58:2925-2928(1998)); ダウノマイシン又はドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Kratzら、Current Med. Chem. 13:477-523(2006); Jeffreyら、Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362(2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721(2005); Nagyら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834(2000); Dubowchikら、Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532(2002); Kingら、J. Med. Chem. 45:4336-4343(2002)；及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照）；メトトレキサート、ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテセン；及びＣＣ１０６５を含む1つ又は複数の薬物とコンジュゲートしている。
【０１８３】
その他の実施態様において、イムノコンジュゲートは、酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートした、本明細書に記載の抗体を含み、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォーディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・チャランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）インヒビター、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｉｃｉｎａｌｉｓ）インヒビター、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が含まれる。
【０１８４】
その他の実施態様では、イムノコンジュゲートは、放射性コンジュゲートを形成するために放射性原子にコンジュゲートした本明細書に記載されるような抗体を含む。様々な放射性同位体が放射性コンジュゲートの生産のために入手可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２  及びＬｕの放射性同位体を含む。検出のために放射性複合体を使用するとき、それはシンチグラフィー試験のための放射性原子、例えばＴｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化ＭＲＩとしても知られている）のためのスピン標識、例えば再びヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでよい。
【０１８５】
抗体と細胞障害剤のコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステル類の二官能性誘導体（例えばジメチルアジピミダートＨＣＬ）、活性エステル類（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド類（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トリエン−２，６−ジイソシアネート）、及び二活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を使用して作製することができる。Vitetta et al., Science 238:1098(1987)に記載されるように、例えば、リシンイムノトキシンを調製することができる。カーボン−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体への抱合のためのキレート剤の例である。国際公開第９４／１１０２６号を参照。リンカーは、細胞中に細胞毒性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー(Chariら、Cancer Res. 52:127-131(1992)；米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
【０１８６】
本明細書において、イムノコンジュゲート又はＡＤＣは、限定されないが、市販の（例えばＰｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａからの）、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ  ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ＳＶＳＢ（スクシンイミジル（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むクロスリンカー試薬を用いて調製されるコンジュゲートを特に熟考する。
【０１８７】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある実施態様において、本明細書で提供される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかは、生物学的サンプル中のＰＣＳＫ９の存在を検出するのに有用である。本明細書で使用する「検出」という用語は、定量的または定性的検出を包含する。ある実施態様において、生物学的サンプルは、血液、血清又は生物起源の液体サンプルである。所定の実施態様において、生物学的サンプルは細胞又は組織を含む。  
【０１８８】
一実施態様において、診断又は検出の方法に使用される抗ＰＣＳＫ９抗体が提供される。更なる態様において、生物学的サンプル中のＰＣＳＫ９の存在を検出する方法が提供される。ある実施態様において、方法は生物学的サンプル中のＰＣＳＫ９タンパク質の存在を決定することを含む。ある実施態様において、ＰＣＳＫ９はヒトＰＣＳＫ９である。ある実施態様において、本方法は、抗ＰＣＳＫ９抗体のＰＣＳＫ９への結合を許容する条件下で、本明細書に記載のように抗ＰＣＳＫ９抗体と生物学的サンプルを接触させること、及び複合体が抗ＰＣＳＫ９抗体とＰＣＳＫ９との間に形成されているかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ又はインビボ法であり得る。一実施態様において、例えばＰＣＳＫ９又はＬＤＬ−コレステロールが患者の選択のためのバイオマーカーであるときなど、抗ＰＣＳＫ９抗体が抗ＰＣＳＫ９抗体による治療にふさわしい被検体を選択するために使用される。
【０１８９】
本発明の抗体を用いて診断され得る疾患の例には、（「血清コレステロール関連疾患」を含む）コレステロール関連疾患を含み、例えば、血清総コレステロールの上昇、ＬＤＬの上昇、トリグリセリドの上昇、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の上昇、及び／又はＨＤＬの低下によって明らかにすることができる、高コレステロール血症、心臓病、メタボリックシンドローム、糖尿病、冠動脈心疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病、及び一般的な脂質代謝異常の任意の1つ又は複数が含まれる。一態様において、本発明は、高コレステロール血症、及び／又は脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患（ＣＶＤ）又は冠状動脈性心臓病の少なくとも１つの症状を治療または予防するための方法を、抗ＰＣＳＫ９抗体の有効量を個体に投与することを含み提供する。ある実施態様において、本発明は、被験体において、高コレステロール血症、及び／又は脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、ＣＶＤ又は冠状動脈性心臓病の少なくとも１つの症状の治療又は予防における使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体の有効量を提供する。本発明は、被験体において、高コレステロール血症、及び／又は脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、ＣＶＤ又は冠状動脈性心臓病の少なくとも１つの症状の治療又は予防するための医薬の製造において、細胞外又は循環するＰＣＳＫ９と拮抗する抗ＰＣＳＫ９抗体の有効量の使用を更に提供する。
ある実施態様において、標識された抗ＰＣＳＫ９抗体が提供される。標識は、限定されるものではないが、（例えば、蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、放射性標識など）直接検出される標識又は部分、並びに、例えば、酵素反応又は分子間相互作用を介して間接的に検出される酵素又はリガンドのような部分が含まれる。このような標識の例には、ラジオアイソトープ３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシェフェラーゼ、例えばホタルルシェフェラーゼ及び細菌ルシェフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシェフェリン、２，３−ジヒドロフタルジネジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘテロサイクリックオキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、色素前駆体、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定な遊離ラジカルなどを酸化する過酸化水素を利用する酵素とカップリングさせたもの、などが含まれる。
【０１９０】
Ｆ．薬学的処方物
本発明はまた、抗ＰＣＳＫ９抗体、及び抗ＰＣＳＫ９抗体をコードする配列を含んでなるポリヌクレオチドを含む薬学的製剤を含む組成物を包含する。ある実施態様において、組成物は、ＰＣＳＫ９に結合する1つ又は複数の抗体、及び／又はＰＣＳＫ９に結合する1つ又は複数の抗体をコードする配列を含む1つ又は複数のポリヌクレオチドを含む。これらの組成物は、適切な担体、例えば、当技術分野で周知である、緩衝液を含む薬学的に許容される賦形剤などを更に含み得る。
【０１９１】
本明細書に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するその抗体と任意の薬学的に許容される担体(Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.: Williams and Wilkins PA, USA(1980))とを、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、使用される投薬量及び濃度でレシピエントに毒性でなく、そしてこれには、限定しないが、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン；マンノサッカライド、ジサッカライド、及びグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書における典型的な薬学的に許容される担体は、介在性薬物分散剤、例えば、水溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒｈｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標））、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。所定の典型的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、ｒＨｕＰＨ２０を含み、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８に開示されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ又は複数の追加のグルコサミノグリカンと組み合わされる。
【０１９２】
典型的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性の抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０１９３】
本明細書の製剤はまた、治療を受けている特定の徴候のために必要な１を超える活性成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものが含まれる場合がある。例えば、スタチンを更に提供することが望まれ得る。このような活性成分は、意図した目的のために有効な量で組み合わされ適切に存在する。
【０１９４】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合法によって、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル）、コロイド薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロ・エマルジョンなどの調製されたマイクロカプセルに封入されてもよい。このような技術は、Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.(1980)に開示される。
【０１９５】
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリックスが成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形をしている。
【０１９６】
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより、達成することができる。
【０１９７】
一態様において、本発明は、約１００から約２２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９抗体、約１８０から約２２０ｍＭのアルギニンコハク酸、約０．０１％から約０．０３％のポリソルベート、及び約５．２から約５．８のｐＨを含む組成物を提供する。ある実施態様において、組成物は、皮下投与に適している。ある実施態様において、組成物の粘度は、２５℃で約２５ｃＰ未満、２５℃で約２０ｃＰ未満、２５℃で約１５ｃＰ未満、２５℃で約１２ｃＰ未満、又は２５℃で約１０ｃＰ未満である。ある実施態様において、組成物は、２〜８℃で、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５カ月間、又は少なくとも６ヶ月間安定である。幾つかの実施態様において、組成物は、０．５−ｍＬ、１−ｍＬ、１．２５−ｍＬ、１．５−ｍＬ、１．７５−ｍＬ、２−ｍＬ、２．２５−ｍＬ、又は２．５−ｍＬのプレフィルドシリンジである。ある実施態様において、組成物中の抗体は、約１１０、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、及び２２５ｍｇ／ｍＬのいずれかであり、、これらの濃度のいずれかの間の濃度を含む。ある実施態様において、組成物中のコハク酸アルギニンは、約１８０、１８５、１９０、２００、２１０及び２２０ｍＭのいずれかであり、これらの濃度のいずれかの間の濃度を含む。ある実施態様において、組成物中のポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）は、約０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、及び０．０３％のいずれかであり、これらの濃度のいずれかの間の濃度を含む。ある実施態様において、組成物は、５．０、５．２、５．４、５．５、５．６、５．８、５．９、６．０、６．１及び６．２のいずれのｐＨを有しており、これらの値のいずれかの間のｐＨを含む。ある実施態様において、組成物中の抗ＰＣＳＫ９抗体は、約１５０ｍｇ／ｍＬであり、組成物中のアルギニンコハク酸は、約２００ｍＭであり、組成物中のポリソルベート２０は、約０．０２％であり、ｐＨは約５．５である。
【０１９８】
一態様において、本発明は、約１５０から約２２５ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体／ｍＬ、約１０から約３０ｍＭのヒスチジンアセテート、約１５０から約１７０ｍＭのアルギニンアセテート、約０．０１％から約０．０３％のポリソルベート、及び約５．８から約６．２のｐＨの組成物を提供する。ある実施態様において、組成物は、皮下投与に適している。ある実施態様において、組成物の粘度は、２５℃で約２５ｃＰ未満、２５℃で約２０ｃＰ未満、２５℃で約１５ｃＰ未満、２５℃で約１２ｃＰ未満、２５℃で約１０ｃＰ未満である。ある実施態様において、組成物は、２〜８℃で、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５カ月間、又は少なくとも６ヶ月間安定である。幾つかの実施態様において、組成物は、０．５−ｍＬ、１−ｍＬ、１．２５−ｍＬ、１．５−ｍＬ、１．７５−ｍＬ、２−ｍＬ、２．２５−ｍＬ、または２．５−ｍＬのプレフィルドシリンジである。ある実施態様において、組成物中の抗体は、約１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、及び２２５ｍｇ／ｍＬのいずれかであり、これらの濃度のいずれかの間の濃度を含む。ある実施態様において、組成物中のヒスチジンアセテートは、約１０、１５、２０、２５、及び３０ｍＭのいずれかであり、これらの濃度の間の濃度を含む。ある実施態様において、組成物中のアルギニンアセテートは約１５０、１５５、１６０、１６５、及び１７０ｍＭのいずれかであり、これらの濃度のいずれかの間の濃度を含む。ある実施態様において、組成物中のポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）は、約０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、及び０．０３％のいずれかであり、これらの濃度のいずれかの間の濃度を含む。ある実施態様において、組成物は、５．８、５．９、６．０、６．１及び６．２のいずれかのｐＨを有しており、これらの値のいずれかの間のｐＨを含む。ある実施態様において、組成物中の抗ＰＣＳＫ９抗体は約２００ｍｇ／ｍＬであり、組成物中のヒスチジンアセテートは約２０ｍＭであり、組成物中のアルギニンアセテートは約１６０ｍＭであり、及び組成物中のポリソルベート２０は約０．０２％であり、ｐＨは約６．０である。
【０１９９】
また、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の組成物中の抗ＰＣＳＫ９抗体を含む、２００ｍｇから１２００ｍｇの範囲で個体に固定用量の抗体を送達するための、皮下投与デバイスである。一回の投与に用いる完全用量は、１つ又は複数のデバイスであってもよい。ある実施態様において、デバイス中の抗体の濃度は、約２００ｍｇ／ｍＬである。ある実施態様において、デバイスは、プレフィルドシリンジ（例えば、０．５−ｍＬシリンジ、１−ｍＬシリンジ、１．２５−ｍＬシリンジ、１．５−ｍＬシリンジ、１．７５−ｍＬシリンジ、２−ｍＬシリンジ、２．２５−ｍＬシリンジ、又は２．５−ｍＬのシリンジ）又は高用量、シングルユース、皮下注入デバイス（例えば、送達するための１−１０ｍＬ、２−８ｍＬ、３−６ｍＬ、４−５ｍＬ、又は４、５、６、７、８、９、又は１０ｍＬ）である。
【０２００】
Ｇ．治療的方法及び組成物
本明細書で提供される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかを、治療方法で使用することができる。
【０２０１】
一態様では、医薬として使用するための抗ＰＣＳＫ９抗体が提供される。別の態様において、コレステロール関連疾患と関連した状態の治療に使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体が提供される。ある実施態様において、ＬＤＬコレステロールの上昇したレベルと関連する状態の治療に使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体が提供される。ある実施態様において、治療の方法に使用される抗ＰＣＳＫ９抗体が提供される。ある実施態様において、本発明は、個体に抗ＰＣＳＫ９抗体の有効量を投与することを含む、ＬＤＬコレステロールの上昇したレベルと関連する状態を有する個体を治療する方法に使用される抗Ｋ１１ＰＣＳＫ９抗体を提供する。ある実施態様において、本明細書に記載される方法及び使用は、例えばスタチンなど、少なくとも１つのさらなる治療薬の有効量を個体に投与することを更に含む。ある実施態様において、本発明は、被検体においてＬＤＬコレステロールのレベルを減少させることに使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。更なる実施態様において、本発明は、被検体において血清ＬＤＬコレステロールのレベルを下げることに使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、被検体においてＬＤＬＲの利用可能性を増やすことに使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、被検体においてＬＤＬＲに対するＰＣＳＫ９の結合を阻害することに使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、ＬＤＬコレステロールのレベルを減少させるために個体に抗ＰＣＳＫ９抗体の有効量を投与することを含む、個体においてＬＤＬコレステロールのレベルを減少させる方法に使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、血清ＬＤＬコレステロールのレベルを下げるために個体に抗ＰＣＳＫ９抗体の有効量を投与することを含む、個体において血清ＬＤＬコレステロールのレベルを下げる方法に使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、ＬＤＬＲの利用可能性を増やすために個体に抗ＰＣＳＫ９抗体の有効量を投与することを含む、個体においてＬＤＬＲの利用可能性を増やす方法に使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、ＬＤＬＲに対するＰＣＳＫ９の結合を阻害するために個体に抗ＰＣＳＫ９
抗体の有効量を投与することを含む、個体においてＬＤＬＲに対するＰＣＳＫ９の結合を阻害する方法に使用のための抗ＰＣＳＫ９抗体を提供する。上記実施態様のいずれかに記載の「個体」又は「被検体」は、好ましくはヒトである。
【０２０２】
更なる態様にて、本発明は、医薬の製造又は調製における抗ＰＣＳＫ９抗体の使用を提供する。一実施態様において、本医薬はコレステロール関連疾患の治療のためのものである。ある実施態様において、コレステロール関連疾患は、高コレステロール血症である。別の実施態様において、本医薬は、高コレステロール血症を有する個体に、医薬の有効量を投与することを含む、高コレステロール血症を治療する方法で使用するためのものである。
【０２０３】
ある実施態様において、治療される疾患は、ＰＣＳＫ９の活性を除去し、阻害し、又は低減することにより、改善し、寛解し、抑制又は予防することができる任意の疾患又は病態である。ある実施態様において、スタチンの使用を通じて一般的に立ち向かうことが可能な（治療可能又は予防可能な）疾患又は障害もまた治療することができる。ある実施態様において、コレステロール合成又はＬＤＬＲ発現の増加から利益を得ることが可能である障害又は疾患はまた、本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体により治療することができる。ある実施態様において、本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体及び治療方法により治療可能な個体は、ＬＤＬアフェレーシス療法の治療に適応される個体、ＰＣＳＫ９活性化変異（機能変異の獲得、「ＧＯＦ」）を持つ個体、ヘテロ接合体家族性高コレステロール血症（ｈｅＦＨ）を有する個体、スタチン不耐症又はスタチンで制御されない一次性高コレステロール血症を持つ個体、及び予防可能に治療され得る高コレステロール血症を発症するリスクにある個体を包含する。他の適応症は、２型糖尿病、胆汁うっ滞性肝疾患（原発性胆汁性肝硬変）、ネフローゼ症候群、甲状腺機能低下症、肥満などの二次的原因と関連する脂質異常症、及びアテローム性動脈硬化症及び循環器疾患の予防と治療を包含する。ある実施態様において、本明細書に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体及び治療方法によって治療可能な個体には、９０から２５０ｍｇ／ｄＬのＬＤＬ−Ｃレベル及び冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）又は実施例１２に詳細に記載されているのと同等のＣＨＤリスクを有する個体を含む。
【０２０４】
ある実施態様において、本明細書に記載の方法は、冠状動脈性心臓病に罹患している個体へ抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含む。ある実施態様において、冠状動脈性心疾患を有する個体は、心筋梗塞の病歴を有していることが確認されている。ある実施態様において、冠動脈性心疾患を有する個体は、過去に冠動脈血管再生手術（例えば、経皮的冠動脈インターベンション又は冠動脈バイパス移植）を受けた個体を指す。ある実施態様において、冠状動脈性心臓病を有する個体は、≧５０％の直径狭窄（例えば、侵襲的冠動脈造影検査又は心臓コンピュータ断層撮影冠動脈造影検査などの冠動脈造影検査により決定される）の少なくとも一つの冠状動脈アテローム性動脈硬化病変を有する個体を指す。
【０２０５】
ある実施態様において、本明細書に記載の方法は、少なくとも一つのＣＨＤリスク相当の個体に、抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含む。特定の実施形態において、ＣＨＤリスク相当の個体は、例えば、末梢動脈疾患（例えば、足関節／上腕血圧指数＜０．８５、経皮的又は外科的末梢動脈血管再生術の既往、血管造影上の末梢動脈疾患の既往、又は≧５０％直径狭窄に起因する下肢の非外傷性切断の既往）、頸動脈疾患（例えば、≧５０％直径狭窄の頸動脈アテローム性動脈硬化症の病変、又は皮膚又は外科的頸動脈血行再生術の既往）、虚血性脳卒中の既往、又は腹部大動脈瘤などの臨床上のアテローム硬化性疾患の形態を1つ又は複数有する個体である。ある実施態様において、ＣＨＤリスク相当の個体は、ＩＩ型糖尿病を持つ個体である。ある実施態様において、ＣＨＤリスク相当の個体は、臓器障害（例えば、網膜症、神経障害、又は微量アルブミン尿を含む腎症）を合併したＩ型糖尿病を持つ個体である。ある実施態様において、ＣＨＤリスク相当の個体は、中度から重度の慢性腎疾患を有する個体である。
【０２０６】
特定の実施形態において、方法は、本明細書に記載される以下の危険因子の一つ又は複数を有する個体に、抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含む：年齢（男性４５歳以上、又は女性５５歳以上）、喫煙（１ヶ月以内）、高血圧（収縮期血圧が≧１４０ｍｍＨｇ、拡張期血圧が≧９０ｍｍＨｇ、又は降圧剤を服用）、低ＨＤＬコレステロール（４０ｍｇ／ｄＬ）、又は、早期ＣＨＤの家族歴。
【０２０７】
一実施態様において、本明細書に記載される方法及び使用は、例えばスタチンなど、少なくとも１つのさらなる治療薬の有効量を個体に投与することを更に含む。ある実施態様において、本発明は、アテローム性動脈硬化症及び／又は循環器疾患を予防及び／又は治療するためである。ある実施態様において、更なる治療薬は、心血管系イベントの再発のリスクを低減する方法で使用のためである。ある実施態様において、更なる治療薬は、被験体のＨＤＬ−コレステロールのレベルを上昇させるためのものである。
【０２０８】
更なる態様において、本発明は、例えば、上記の治療法のいずれかに使用される、本明細書で提供される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかを含む薬学的製剤を提供する。一実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれか、及び薬学的に許容される担体を含む。その他の実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかと、スタチンなど少なくとも１つの更なる治療剤を含む。
【０２０９】
本発明の抗体は、治療において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は少なくとも１つの更なる治療剤と同時投与され得る。ある実施態様において、そうした更なる治療薬はＬＤＬＲのレベルを上昇させる。ある実施態様において、更なる治療薬は、スタチン、例えば、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、又はそれらの任意の組み合わせ、例えば、Ｖｙｔｏｒｉｎ（登録商標）、ＡＤＶＩＣＯＲ（登録商標）又はＳＩＭＣＯＲ（登録商標）などのＬＤＬ−コレステロールを下げる薬剤である。所定の実施態様において、更なる治療薬は、ＨＤＬ−コレステロール上昇薬である。
【０２１０】
上記のこうした併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が、同一または別々の製剤に含まれている）、及び、本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体の投与が、追加の治療剤及び／又はアジュバントの投与の前、同時、及び／又はその後に起きうる分離投与を包含する。
【０２１１】
本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、任意の適切な手段によって投与することができ、経口、肺内、及び鼻腔内、及び局所治療が所望される場合、病巣内投与が含まれる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、様々な時間点にわたる、単一または複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投与スケジュールが本明細書で考えられている。
【０２１２】
本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体は良好な医療行為に合致した方法で処方され、投与され、投薬される。この観点において考慮すべき要因は、治療すべき特定の障害、治療すべき特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程及び医療従事者が知る他の要因を包含する。抗体は、必要ではないが任意で、問題となる障害の予防又は治療のために、現在使用中の一又は複数の薬剤ともに処方される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中に存在する抗体の量、障害又は治療の種類及び上記した他の要因に依存する。これらは一般的には本明細書に記載されるのと同じ用量及び投与経路において、又は、本明細書に記載された用量の１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路により使用される。
【０２１３】
疾患の予防又は治療のためには、本発明の抗体の適切な用量（単独で使用されるか、又は、1つ又は複数の更なる治療的薬剤との組み合わされる場合）は治療すべき疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体を予防又は治療目的のいずれにおいて投与するか、以前の治療、患者の臨床的履歴及び抗体に対する応答性、及び担当医の判断に依存する。抗体は、患者に対して、単回、又は一連の治療にわたって適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一回以上の別個の投与によるか、連続注入によるかに関わらず、抗体約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ）が患者への投与のための初期候補用量となり得る。１つの典型的な一日当たり用量は上記した要因に応じて約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲である。数日間以上に渡る反復投与の場合には、状態に応じて、治療は疾患症状の望まれる抑制が起こるまで持続するであろう。１つの例示される抗体用量は約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの1つ又は複数の用量（又はこれらのいずれかの組み合わせ）を患者に投与してよい。このような用量は断続的に、例えば毎週又は３週毎（例えば患者が約２から約２０、例えば抗体の約６投与量を受けるように）投与してよい。初期の高負荷用量の後、1つ又は複数の低用量を投与してよい。
【０２１４】
ある実施態様において、均一に固定した投薬計画が、個体に抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することに用いられる。疾患の種類や重症度に応じて、典型的な均一固定用量は、抗ＰＣＳＫ９抗体の１０から１２００ｍｇの範囲であり得る。抗体の１つの例示的な用量は、約１０ｍｇから約１０００ｍｇの範囲であろう。抗体の別の例示的な用量は、約６００ｍｇから約１００ｍｇの範囲であろう。抗体の別の例示的な用量は、約８００ｍｇから約２００ｍｇの範囲であろう。抗体の別の例示的な用量は、約４００ｍｇから約３５０ｍｇの範囲であろう。抗体の別の例示的な用量は、約８００ｍｇから約７５０ｍｇの範囲であろう。ある実施態様において、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２２０ｍｇ、３００ｍｇ、３８０ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、７６０ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１４０ｍｇ、又は１２００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体が、個体に投与される。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の固定用量は、２週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、８週間ごと、１０週間ごと、又は１２週間ごとに投与される。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の固定用量は、２週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、８週間ごと、１０週間ごと、又は１２週間ごとに一回を超えない頻度で投与される。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の固定用量は１ヶ月ごと、１．５ヶ月ごと、２ヶ月ごと、２．５ヶ月ごと、又は３ヶ月ごとに投与される。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の固定用量は１ヶ月ごと、１．５ヶ月ごと、２ヶ月ごと、２．５ヶ月ごと、又は３ヶ月ごとに一回を超えない頻度で投与される。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は皮下に投与される。しかしながら、他の用量用法も使用してよい。この治療法の進行は従来の手法及び試験により容易にモニタリングされる。
【０２１５】
ある実施態様において、投与されるべき、均一で、固定された、皮下投与量は、５ｍＬ、４．５ｍＬ、４ｍＬ、３．８ｍＬ、３．５ｍＬ、３ｍＬ、２．５ｍＬ、２ｍＬ、１．９ｍＬ、１．５ｍＬ、又は１ｍＬ以下の体積で提供される。ある実施態様において、均一で、固定された、皮下投与量は、４ｍＬ以下の総体積で８００ｍｇである。ある実施態様において、均一で、固定された、皮下投与量は、３．８ｍＬ以下の総体積で７６０ｍｇである。ある実施態様において、均一で、固定された、皮下投与量は、３ｍＬ以下の総体積で６００ｍｇである。ある実施態様において、均一で、固定された、皮下投与量は、２ｍＬ以下の総体積で４００ｍｇである。ある実施態様において、均一で、固定された、皮下投与量は、１．９ｍＬ以下の総体積で３８０ｍｇである。
【０２１６】
ある実施態様において、本明細書に記載の方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、又は少なくとも約６０％低下する。幾つかの実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、又は少なくとも約６０％低下し、最後の投与後の少なくとも２週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月又は３ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。幾つかの実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与の約１週間、約１０日間、又は約２週間以内にベースラインから少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、又は少なくとも約６０％低下する。幾つかの実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与の約１週間、約１０日間、又は約２週間以内にベースラインから少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、又は少なくとも約６０％低下し、最後の投与後の少なくとも２週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月又は３ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、少なくとも約４５％低下し、少なくとも約６週間、少なくとも約７週間、又は少なくとも約１．５ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与から約１週間以内に少なくとも約４５％低下し、少なくとも約６週間、少なくとも約７週間、又は少なくとも約１．５ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、少なくとも約５０％低下し、少なくとも約４週間又は少なくとも約１ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与から約１０日以内に、少なくとも約５０％低下し、少なくとも約４週
間又は少なくとも約１ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、少なくとも約５０％低下し、少なくとも約８週間、又は少なくとも約２ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与から約１０日以内に、少なくとも約５０％低下し、少なくとも約８週間又は少なくとも約２ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、少なくとも約５５％低下し、少なくとも約２週間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与の約２週間以内に少なくとも約５５％低下され、少なくとも約２週間にわたって低下したレベルで維持される。本明細書で使用する場合、個々の「ベースライン」レベル（ＬＤＬコレステロールレベルなどのベースラインレベル）は、個々に本明細書に記載の抗ＰＣＳＫ９抗体の投与前のレベルを指す。ある実施態様において、ベースラインは、抗ＰＣＳＫ９抗体の投与前に得られた平均値又は２つ以上の測定値の平均であってもよい。
【０２１７】
ある実施態様において、本明細書に記載の方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから、少なくとも約６０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｄＬ、又は少なくとも約９０ｍｇ／ｄＬ低下した。幾つかの実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから、少なくとも約６０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｄＬ、又は少なくとも約９０ｍｇ／ｄＬ低下し、最後の投与後、少なくとも２週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、又は３ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。幾つかの実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与の約１週間、約１０日間、又は約２週間以内に、ベースラインから少なくとも約６０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｄＬ、又は少なくとも約９０ｍｇ／ｄＬ低下する。幾つかの実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与の約１週間、約１０日間、又は約２週間以内に、ベースラインから少なくとも約６０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｄＬ、又は少なくとも約９０ｍｇ／ｄＬ低下し、最後の投与後、少なくとも２週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、又は３ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。幾つかの実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから少なくとも約６０ｍｇ／ｄＬ又は約７０ｍｇ／ｄＬ低下し、少なくとも約６週間、少なくとも約７週間又は少なくとも約１．５ヶ月間にわたって低下したレベルで維持された。幾つかの実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与から約１週間以内に、ベースラインから少なくとも約６０ｍｇ／ｄＬ又は約７０ｍｇ／ｄＬ低下し、少なくとも約６週間、少なくとも約７週間又は少なくとも約１．５ヶ月間にわたって低下したレベルで維持された。ある実施態様において
、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、少なくとも約８０ｍｇ／ｄＬ低下し、少なくとも約４週間又は少なくとも約１ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与から約１０日以内に、少なくとも約８０ｍｇ／ｄＬ低下し、少なくとも約４週間又は少なくとも約１ヶ月間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、少なくとも約９０ｍｇ／ｄＬ低下し、少なくとも約２週間にわたって低下したレベルで維持される。ある実施態様において、記載される方法により治療される個体におけるＬＤＬコレステロールレベルは、初回投与の約２週間以内に、少なくとも約９０ｍｇ／ｄＬ低下し、少なくとも約２週間にわたって低下したレベルで維持される。
【０２１８】
ある実施態様において、ＬＤＬコレステロールレベルの低下は、投薬の間、一定の範囲内に維持される。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、又は少なくとも約６０％の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前に、ベースラインより約４０％、４５％、５０％、５５％、又は６０％下のレベルを超えてで、増加しない。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから少なくとも約４５％の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約４０％又は４５％下のレベルを超えて増加しない。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから少なくとも約５０％の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約４０％、４５％又は５０％下のレベルを超えて増加しない。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから少なくとも約５５％の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約４０％、４５％、５０％、又は５５％下のレベルを超えて増加しない。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインから少なくとも約６０％の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約４０％、４５％、５０％、５５％、又は６０％下のレベルを超えて増加しない。
【０２１９】
ある実施態様において、ＬＤＬコレステロールレベルの低下は、投薬の間、一定の範囲内に維持される。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインより少なくとも約６０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約７５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｄＬ、又は少なくとも約９０ｍｇ／ｄＬ下、の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約５５ｍｇ／ｄＬ、６０ｍｇ／ｄＬ、６５ｍｇ／ｄＬ、７０ｍｇ／ｄＬ、７５ｍｇ／ｄＬ、８０ｍｇ／ｄＬ又は９０ｍｇ／ｄＬ下のレベルを超えて増加しない。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインより少なくとも約６０ｍｇ／ｄＬ下の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約５５ｍｇ／ｄＬ又は６０ｍｇ／ｄＬ下のレベルを超えて増加しない。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインより少なくとも約７０ｍｇ／ｄＬ下の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約５５ｍｇ／ｄＬ、６０ｍｇ／ｄＬ、６５ｍｇ／ｄＬ、又は７０ｍｇ／ｄＬ下のレベルを超えて増加しない。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインより少なくとも約７５ｍｇ／ｄＬ下の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約５５ｍｇ／ｄＬ、６０ｍｇ／ｄＬ、６５ｍｇ／ｄＬ、７０ｍｇ／ｄＬ、又は７５ｍｇ／ｄＬ下のレベルを超えて増加しない。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインより少なくとも約８０ｍｇ／ｄＬ下の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約５５ｍｇ／ｄＬ、６０ｍｇ／ｄＬ、６５ｍｇ／ｄＬ、７０ｍｇ／ｄＬ、７５ｍｇ／ｄＬ、又は８０ｍｇ／ｄＬ下のレベルを超えて増加しない。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を投与すると、ＬＤＬコレステロールレベルは、ベースラインより少なくとも約９０ｍｇ／ｄＬ下の最下点まで低下し、次の抗ＰＣＳＫ９抗体投与前、ベースラインより約５５ｍｇ／ｄＬ、６０ｍｇ／ｄＬ、６５ｍｇ／ｄＬ、７０ｍｇ／
ｄＬ、７５ｍｇ／ｄＬ、８０ｍｇ／ｄＬ又は９０ｍｇ／ｄＬ下のレベルを超えて増加しない。
【０２２０】
一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は８週間ごとに８００ｍｇの用量で被検体に投与され、被検体におけるＬＤＬコレステロールのレベルは、１０日以内にベースラインよりも少なくとも５０％低下し、次の投与前、ベースラインより４０％又は４５％下のレベルを超えて増加しない。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は８週間ごとに７６０ｍｇの用量で被検体に投与され、被検体におけるＬＤＬコレステロールのレベルは、１４日以内にベースラインよりも少なくとも４５％低下し、次の投与前、ベースラインより３５％又は４０％下のレベルを超えて増加しない。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は４週間ごとに４００ｍｇの用量で被検体に投与され、被検体におけるＬＤＬコレステロールのレベルは、１０日以内にベースラインよりも少なくとも５０％低下し、次の投与前、ベースラインより４５％又は５０％下のレベルを超えて増加しない。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は４週間ごとに３８０ｍｇの用量で被検体に投与され、被検体におけるＬＤＬコレステロールのレベルは、１０日以内にベースラインよりも少なくとも５０％低下し、次の投与前、ベースラインより４５％又は５０％下のレベルを超えて増加しない。
【０２２１】
ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体を受けた被検体は、ＬＤＬ−Ｃレベルについてモニターされ、そのレベルが、２５又は１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下する場合には、投与される抗体の総量を初期用量投与の約５０％又は２５％に減少させて、同じ注射の頻度を維持したり、投与される抗体の総量を維持しながらも、２倍又は４倍（例えば、４週間に一回から８週間又は１６週間に一回）に、又はそれらの組み合わせによって頻度を減少させたりすることにより（例えば、用量を減らし、投与頻度を変更することにより）、その後、それらの用量は、初期投与量の約５０％又は２５％にまで調整される。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体を８００ｍｇの初期用量で８週間ごとに被検体に投与する。被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５又は１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、その後、被検体は８週間ごとに４００ｍｇ、１６週間ごとに４００ｍｇ、８週間ごとに３８０ｍｇ、１６週間ごとに３８０ｍｇ、８週間ごとに２００ｍｇ、４週間ごとに２００ｍｇ、８週間ごとに１９０ｍｇ、４週間ごとに１９０ｍｇ、１６週間又は４ヶ月ごとに７６０ｍｇ、又は、２４週間又は６ヶ月ごとに７６０ｍｇ、１６週間又は４ヶ月ごとに８００ｍｇ、又は、２４週間又は６ヶ月ごとに８００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、８００ｍｇの初期用量で８週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに２００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体を８週間ごとに初期用量８００ｍｇで被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は、８週間ごとに２００ｍｇの投与量に切り替えられる。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体を７６０ｍｇの初期用量で８週間ごとに被検体に投与する。被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５又は１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに３８０ｍｇ、１６週間ごとに３８０ｍｇ、４週間ごとに２００ｍｇ、８週間ごとに２００ｍｇ、８週間ごとに１９０  ｍｇ、４週間ごとに１９０ｍｇ、１６週間又は４ヶ月ごとに７６０ｍｇ、又は７６０ｍｇごとに２４週間又は６ヶ月の投与量
に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、７６０ｍｇの初期用量で８週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに１９０ｍｇ又は２００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、７６０ｍｇの初期用量で８週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに１９０ｍｇ又は２００ｍｇの投与量に切り替えられる。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体を４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与する。被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５又は１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は４週間ごとに２００ｍｇ、８週間ごとに２００ｍｇ、４週間ごとに１００ｍｇ、８週間ごとに４００ｍｇ、１６週間又は３ヶ月ごとに４００ｍｇ、２週間ごとに５０ｍｇ、又は２週間ごとに２５ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は４週間ごとに１００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は４週間ごとに１００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに２００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに２００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体
は２週間ごとに５０ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は２週間ごとに５０ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は２週間ごとに２５ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、４００ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は２週間ごとに２５ｍｇの投与量に切り替えられる。ある実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体を３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与する。被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５又は１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は４週間ごとに２００ｍｇ、８週間ごとに２００ｍｇ、４週間ごとに１９０ｍｇ、４週間ごとに１００ｍｇ、４週間ごとに９０ｍｇ、８週間ごとに１００ｍｇ、１６週間又は３ヶ月ごとに４００ｍｇ、２週間ごとに５０ｍｇ、又は２週間ごとに２５ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は４週間ごとに１００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は４週間ごとに１００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに２００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベル
が１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに２００ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに１９０ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は８週間ごとに１９０ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は２週間ごとに５０ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は４週間ごとに５０ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが２５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は２週間ごとに２５ｍｇの投与量に切り替えられる。一実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３８０ｍｇの初期用量で４週間ごとに被検体に投与され、被検体はモニターされ、被検体のＬＤＬ−ｃレベルが１５ｍｇ／ｄＬ未満に低下した場合、被検体は２週間ごとに２５ｍｇの投与量に切り替えられる。
【０２２２】
上記の製剤または治療方法のいずれかが、抗ＰＣＳＫ９抗体の代わりか又は抗ＰＣＳＫ９抗体に加えて、本発明のイムノコンジュゲートを用いて行うことができることが理解される。
【０２２３】
Ｈ．製造品及びキット
本発明の他の実施態様において、上述した障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な材料を含む製造品又はキットが提供される。ある実施態様において、製造品又はキットは、本明細書に記載の複数の抗ＰＣＳＫ９抗体又は組成物を含む容器を含む。ある実施態様において、製造品又はキットは、容器と容器上ないしは容器に付随するラベルないしはパッケージ挿入物を具備する。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な物質から形成されうる。容器は、疾患の治療、予防、及び／又は診断に有効である、それ自体か、又はその他の組成物と併用される化合物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針による穴あきストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも一の活性剤は本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体である。ラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物が特定の症状の治療のために使用されることを示している。更に、製造品又はキットは、（ａ）組成物が本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体を包含する組成物を含む第一の容器；及び（ｂ）組成物が更なる細胞障害性又はその他の治療的薬剤を包含する組成物を含む第ニの容器を含み得る。ある実施態様において、第二の容器は第二の治療薬を含み、ここで第二の治療薬は「スタチン」クラスのコレステロール低下薬である。ある実施態様において、スタチンは、アトルバスタチン（例えば、ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）又はＴｏｒｖａｓｔ）、ロバスタチン（例えば、ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）、ＡＬＴＯＣＯＲＴＭ、又はＡＬＴＯＰＲＥＶ（登録商標））、メバスタチン（ピタバスタチン（例えば、ＬＩＶＡＬＯ（登録商標）又はＰＩＴＡＶＡ（登録商標））、プラバスタチン（例えば、Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（登録商標）、Ｓｅｌｅｋｔｉｎｅ（登録商標）、Ｌｉｐｏｓｔａｔ（登録商標））、ロスバスタチン（例えば、クレストール（登録商標））、シンバスタチン（例えば、Ｚｏｃｏｒ（登録商標）、Ｌｉｐｅｘ（登録商標））、又はそれらの任意の組み合わせ、例えば、ＶｙｔｏｒｉＮ（登録商標）、ＡＤＶＩＣＯＲ（登録商標）又はＳＩＭＣＯＲ（登録商標）である、及び／又は包含する。
【０２２４】
本発明の本実施態様における製造品又はキットは、組成物が特定の疾患を治療することに用いることができることを示すパッケージ挿入物をさらに含んでいてもよい。別法として、または加えて、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液を含む第二（または第三）の容器をさらに含んでもよい。これは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザーの立場から望まれる他の物質のさらに含んでもよい。
【０２２５】
上記の製造品又はキットのいずれかは、抗ＰＣＳＫ９抗体の代わりか又はそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを含み得ることが理解される。
【実施例】
【０２２６】
以下は本発明の方法及び組成物の例である。上記提供される一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施され得ることが理解される。
【０２２７】
実施例１：抗ＰＣＳＫ９抗体の生成
残基番号付けは、Kabat(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991).)に従う。
【０２２８】
抗ＰＣＳＫ９抗体を同定するためのライブラリー選別とスクリーニング
社内で生成されたビオチン化ヒトＰＣＳＫ９を、ライブラリー選別のための抗原として用いた。ファージライブラリーは溶液相におけるビオチン化ＰＣＳＫ９に対して５ラウンドを選別した。選別の第一ラウンドにおいて、２０μｇ／ｍＬのビオチン化ＰＣＳＫ９が、ファージブロッキング緩衝液ＰＢＳＴ（リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）及び１％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及び０．０５％（ｖ／  ｖ）のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０）で予めブロックされた、抗体ファージライブラリーのＶＨとＶＬドメイン（例えばLeeら、J. Immunol. Meth. 284:119-132, 2004を参照)とVH/VL(LIANG ET AL., JMB. 366: 815-829, 2007を参照）へと添加され、室温で一晩インキュベートされた。翌日、１２０μｌのＰＢＳＴ／ＢＳＡ事前吸収ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）ＭｙＯｎｅＴＭストレプトアビジンＴ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）を各ライブラリーに加え、室温で１時間インキュベートした。次いで、ビーズをＰＢＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄し、結合したファージを３０分間１ｍＬの５０ｍＭのＨＣｌ及び５００ｍＭのＮａＣｌで溶出させ、１Ｍのトリス塩基液（ｐＨ７．５）を４００μＬで中和した。回収されたファージを、大腸菌ＸＬ−１  Ｂｌｕｅ細胞中で増幅した。その後の選択ラウンドの間に、ビオチン化ＰＣＳＫ９を持つ抗体ファージのインキュベーションを２〜３時間に短縮し、ファージ結合した抗原は、ニュートラアビジンコーティング（カタログ＃８９８９０，  １０μｇ／ｍｌ，  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｗａｌｔｈａｍ，  ＭＡ）又はストレプトアビジンでコーティング（カタログ＃２１１２５，  １０μｇ／ｍｌ，  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｗａｌｔｈａｍ，  ＭＡ）されたＮｕｎｃ９６ウェルマキシソープＴＭイムノプレートで３０分間捕捉した。プレートの洗浄のストリンジェンシーを徐々に増加した。
【０２２９】
５ラウンドのパンニング（ｐａｎｎｉｎｇ）の後、有意な濃縮が観察された。９６クローンがＶＨ及びＶＨ／  ＶＬライブラリー選別からそれぞれ採取され、それらがヒトＰＣＳＫ９に結合したいるかどうかを決定した。これらのクローンの可変領域は、固有のシーケンスクローンを同定するためにＰＣＲ配列決定した。バックグラウンドより少なくとも５倍ヒトＰＣＳＫ９に結合する固有のファージ抗体が選択され、インビトロでの細胞アッセイにおける評価のために完全長ＩｇＧに再編成（ｒｅｆｏｒｍａｔｔｅｄ）された。
【０２３０】
目的のクローンは、個々のクローンのＶＬ及びＶＨ領域をそれぞれＬＰＧ３及びＬＰＧ４ベクターにクローニングし、哺乳動物ＣＨＯ細胞で一過性に発現させ、プロテインＡカラムで精製することにより、ＩｇＧに再編成された。
【０２３１】
ＶＨライブラリーに由来するクローンの親和性向上のためのライブラリー構築
全てＣＤＲ−Ｌ３の位置に終止コドン（ＴＡＡ）を含み、かつＭ１３バクテリオファージの表面に一価のＦａｂを表示する、ファージミドｐＷ０７０３（ファージミドｐＶ０３５０−２ｂ(Leeら、J. Mol. Biol 340, 1073-1093(2004))に由来する）が、親和性成熟のためにＶＨライブラリーから目的のクローンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を移植するためのライブラリーテンプレートとしての機能を果たした。ハード及びソフトの両方のランダム化戦略が、親和性成熟のために使用された。ハードランダム化のために、３つの軽鎖ＣＤＲの選択された位置を含む一つの軽鎖ライブラリーが、天然のヒト抗体を模倣するように設計されたアミノ酸を用いて無作為化され、その設計されたＤＮＡの縮退は、Leeらの(J. Mol. Biol 340, 1073-1093(2004))に記載されている。ソフトランダム化のために、ＣＤＲ−Ｌ３の９１−９６、ＣＤＲ−Ｈ１の３０−３３，  ３５、ＣＤＲ−Ｈ２の５０，  ５２，  ５３−５４，  ５６，  及び５８、ＣＤＲ−Ｈ３の９５−１００，  １００Ａ，及び１００Ｃが標的とされ；ＣＤＲループの３つの異なる組み合わせ、Ｈ１／Ｌ３，  Ｈ２／Ｌ３，及びＨ３／Ｌ３がランダム化のために選択された。ソフトランダム化条件を獲得するために、選択された位置で約５０％の突然変異率を導入し、変異原性ＤＮＡが、野生型ヌクレオチドを好む塩基の７０−１０−１０−１０混合物で合成された(Gallopら、Journal of Medicinal Chemistry 37:1233-1251(1994))。
【０２３２】
親和性の向上をもたらすためのファージ選別戦略
親和性向上選択のために、ファージライブラリーは、ストリンジェンシーを増加させた５ラウンドの溶液選別を受けた。溶液選別の第一ラウンドにおいて、１％  ＢＳＡ  及び０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０中で３Ｏ．Ｄ．／ｍｌのファージインプットが、１％のスーパーブロック（登録商標）（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有する１００μｌの緩衝液中で、１００ｎＭのビオチン化ＰＣＳＫ９と共に室温で２時間インキュベートされた。混合物は１％のスーパーブロック（登録商標）で１０Ｘに更に希釈され、１００μｌ／ウェルをニュートラアビジンでコーティングされたウェル（１０μｇ／ｍｌ）に室温で３０分間穏やかに振盪しながら適用した。ウェルをＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で１０回洗浄した。バックグラウンド結合を決定するために、ファージを含むコントロールウェルをニュートラアビジンでコーティングされたプレート上に捕獲した。結合ファージを５０ｍＭ  ＨＣｌ、５００ｍＭ  ＫＣｌの１５０μｌ／ウェルで溶出し、続いて１ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８）の５０μｌ／ウェルにより中和し、滴定し、次のラウンドのために増殖された。溶液選別の更なる４回のラウンドが、選別ストリンジェンシーの増加と合わせて実行された。最初の２〜３ラウンドは、ビオチン化標的タンパク質濃度を１００ｎＭから１ｎＭに減少させることによる会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）選択のためであり、最後の２回のラウンドは、室温で弱い結合剤を競合するため、過剰量の非ビオチン化標的タンパク質（３００から１０００倍以上）を加えることによる解離速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）選択のためのものであった。
【０２３３】
ハイスループット親和性スクリーニングＥＬＩＳＡ（単一スポットコンペティション）
コロニーが第５ラウンドのスクリーニングから採取された。コロニーを９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）中で１Ｅ１０／ｍｌ  ＫＯ７と５０μｇ／ｍｌのカルベニシリンを含む２ＹＴ培地の１５０μｌ／ウェルで、３７℃で一晩増殖させた。同じプレートから、ＸＬ−１に感染した親のファージのコロニーをコントロールとして取り上げた。９６ウェルＮｕｎｃマキシソープＴＭプレートを一晩４℃でＰＢＳ中の１００μｌ／ウェルのニュートラアビジン（１０μｇ／ｍｌ）でコーティングした。プレートは１時間、ＰＢＳ中で０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０及び１５０μｌの１％のＢＳＡでブロックした。
【０２３４】
３５μｌのファージ上清が、１５ｎＭのＰＣＳＫ９の有無によらず、３５μｌのＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）緩衝液（０．５％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＰＢＳ）で希釈され、Ｆプレート（ＮＵＮＣ）中で、室温で１時間インキュベートさせた。３μｇ／ｍｌのビオチン化ＰＣＳＫ９を３５μｌがその後各ウェルに添加され、室温で１５分間インキュベートした。混合物の９５μｌをニュートラアビジンでコーティングしたプレートに並べて移した。プレートを穏やかに１５分間振とうし、プレートにビオチン化ＰＣＳＫ９が結合したファージの捕捉を可能にした。プレートをＰＢＳ−０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０で１０回洗浄した。結合は、ＥＬＩＳＡ緩衝液（１：２５００）中で西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合抗Ｍ１３抗体を添加し、室温で３０分間インキュベートすることにより定量した。プレートをＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で１０回洗浄した。次に、３，３’、５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）ペルオキシダーゼ基質及びペルオキシダーゼ溶液Ｂ（Ｈ２Ｏ２）（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ-Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））の１：１の比の１００μｌ／ウェルをウェルに添加し、室温で５分間インキュベートした。反応を各ウェルに１００μｌの０．１Ｍリン酸（Ｈ３ＰＯ４）を添加することによって停止させ、室温で５分間インキュベートさせた。各ウェルの黄色のＯ．Ｄ．（光学密度）を４５０ｎｍで標準ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて測定した。Ｏ．Ｄ．減少（％）は次式により算出した：
ＯＤ４５０ｎｍ減少（％）＝［（競争相手を含むウェルのＯＤ４５０ｎｍ）／（競争相手を含まないウェルのＯＤ４５０ｎｍ）］＊１００
【０２３５】
親ファージのウェル（１００％）のＯＤ４５０ｎｍ減少（％）と比較して、５０％未満のＯＤ４５０ｎｍ減少（％）を有するクローンが配列解析用に選択された。ファージ調製のために、親のクローン（クローン５０８．２０ｂ）との比較によりＰＣＳＫ９に対する結合親和性（ファージＩＣ５０）を決定するために、ユニークなクローンが選択された。次いで、最も親和性が向上されたクローン（５０８．２０．０４ｂ、５０８．２０．０６、５０８．２０．２８ｂ、５０８．２０．３３ｂ及び５０８．２０．８４）は、抗体産生及び更なるビアコア（ＢＩＡｃｏｒｅ）結合動態解析及び他のインビトロ又はインビボアッセイのためヒトＩｇＧ１に再編成された。図１及び図２を参照。
【０２３６】
実施例２：ビアコアによる抗ＰＣＳＫ９抗体の特性評価
抗ＰＣＳＫ９抗体の結合親和性は、ビアコアＴＭ−３０００装置を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＲＰ）で測定した。抗ＰＣＳＫ９ヒト抗体は、ＣＭ５バイオセンサーチップ上にコーティングされたマウス抗ヒトＦｃ抗体（カタログ＃  ＢＲ−１００８−３９，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）によって捕捉され、約２００応答単位（ＲＵ）を達成した。動態測定のため、ヒト、マウス、アカゲザル及びカニクイザルＰＣＳＫ９の２倍連続希釈（５００ｎＭから．２４５ｎＭ）を、２５℃で３０μｌ／分の流量でＰＢＴ緩衝液（０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）  ２０を含むＰＢＳ）中に注入した。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は単純な一対一のラングミュア結合モデルを用いて計算した（ＢＩＡｃｏｒｅ評価用ソフトウェアのバージョン３．２）。平衡解離定数（ＫＤ）はｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として算出した。図３を参照。
【０２３７】
実施例３：ＬＤＬＲ−ＰＣＳＫ９結合アッセイ
競合結合ＥＬＩＳＡを、ＬＤＬＲに対するヒトＰＣＳＫ９結合の遮断における抗ＰＣＳＫ９抗体の活性を調べるために行った。簡潔には、可溶性ヒトＬＤＬＲ細胞外ドメイン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を１μｇ／ｍＬ、４℃で一晩３８４ウェルマキシソーププレート（ＮＡＬＧＥＮＥ（登録商標）ＮＵＮＣＴＭ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）上に塗布した。その後、抗ＰＣＳＫ９抗体とコントロール抗体を異なる濃度で事前に混合したビオチン化ヒトＰＣＳＫ９の０．２５μｇ／ｍＬがプレートに加えられ、室温で２時間インキュベートした。コーティングされたＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合が、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）ａ及び基質の３，３’、５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢＥ−１０００，Ｍｏｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｓａｄｅｎａ，ＭＤ）を添加することによって検出された。結合結果（ＯＤ）を、抗体濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値はＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈソフトウェアを使用して生成された。図４を参照。
【０２３８】
実施例４：抗体は、ＨｅｐＧ２細胞でＬＤＬＲダウンレギュレーションを防ぐ
ＨｅｐＧ２細胞を、４８ウェルプレートに１×１０  ５で播種した。翌日、培地を、１０％のリポタンパク質欠乏血清（ＬＰＤＳ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）に変更した。翌日、１５μｇ／ｍｌのＰＣＳＫ９プラス／マイナス抗ＰＣＳＫ９抗体を３７℃で４時間細胞に添加した。細胞をＰＢＳで洗浄し、２．５ｍＭのＥＤＴＡを用いて剥離した。細胞を、１５分間、１：２０の抗ＬＤＬＲ（Ｐｒｏｇｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｋ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とインキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、そして１５分間インビトロジェンからの１：２００ヤギ抗マウスＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）でインキュベートした。細胞を洗浄し、ＰＢＳ＋１０μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムに再懸濁した。次いで、サンプルをデュアルレーザーフローサイトメーターで分析した（ＦＡＣＳｃａｎＴＭ，Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）。データは、５つ全ての抗ＰＣＳＫ９抗体（５０８．２０．０４ｂ、５０８．２０．０６、５０８．２０．２８ｂ、５０８．２０．３３ｂ及び５０８．２０．８４）は、ＬＤＬＲのダウンレギュレーションを防ぐ示唆している。図５を参照。
【０２３９】
実施例５：マウス肝臓におけるＬＤＬＲのダウンレギュレーション
正常なＣ５７／ＢＬ６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）がＩ．Ｖ．注射による３、３０、又は６０μｇのＰＣＳＫ９により処置された。製造業者の指示に従ってカルビオケム（Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）からのプロテオエクストラクトネイティブ膜タンパク質抽出キット（ＰｒｏｔｅｏＥｘｔｒａｃｔ（登録商標）    Ｎａｔｉｖｅ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ）を使用し、各マウスからの肝臓を、ＰＣＳＫ９の  ＩＶ投与後、１５分、１時間又は４時間で回収し、タンパク質が抽出された。コントロールとして、５匹のマウスがビヒクルだけで処置され、各肝臓の溶解物の８μｇを分析のためにプールした。溶解物を８％トリス−グリシンゲル上でＳＤＳ−ＰＡＧＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）によって分析した。タンパク質はｉＢｌｏｔ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてニトロセルロース膜に移した。膜を１時間、５％脱脂乳でブロッキングした後、４℃で一晩、５％脱脂乳中で１：５００抗ＬＤＬＲ（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）と共にインキュベートした。翌日、膜を、ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄し、１時間１：５０００抗ウサギＨＲＰ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）と共にインキュベートし、ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄した。タンパク質はＥＣＬ−プラス（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して可視化し、ＸＡＲフィルム（Ｋｏｄａｋ（登録商標），Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に暴露した。一晩の曝露後、膜を、ＴＢＳ−Ｔで洗浄し、１時間、１：５００抗トランスフェリン受容体抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共にインキュベートし、ＴＢＳ−Ｔで洗浄し、１時間１：５０００抗マウスＨＲＰ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と共にインキュベートし、ＴＢＳ−Ｔで洗浄し、ＥＣＬ−Ｐｌｕｓで可視化した。抗ＬＤＬＲ抗体を用いたウエスタンブロットは、マウス肝臓において１時間の３０μｇのＰＣＳＫ９がＬＤＬＲレベルを有意にダウンレギュレートしたことを示している。図６を参照。
【０２４０】
実施例６：抗体は、肝ＬＤＬＲダウンレギュレーションを防ぐ
正常なＣ１７／ＢＬ６（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）マウスに、３０μｇのＰＣＳＫ９による処置の２４時間前に１時間、ビヒクル又は５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与した。各マウスからの肝臓を製造業者の指示に従ってプロテオエクストラクト（登録商標）ネイティブ膜タンパク質抽出キット（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を用いて回収した。溶解物を８％ビス−トリスゲル上でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した。タンパク質はｉＢｌｏｔ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてニトロセルロース膜に移した。膜を１時間、５％脱脂乳でブロッキングした後、４℃で一晩、５％脱脂乳中で１：５００抗ＬＤＬＲ（Ａｂｃａｍ）と共にインキュベートした。翌日、膜を、ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄し、１時間１：５０００抗ウサギＨＲＰ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と共にインキュベートし、ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄した。タンパク質はＥＣＬ−Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して可視化し、ＸＡＲフィルム（Ｋｏｄａｋ（登録商標））に曝露した。抗ＬＤＬＲ抗体によるウエスタンブロットは、すべての５つの抗ＰＣＳＫ９抗体（５０８．２０．８４、５０８．２０．３３ｂ、５０８．２００４ｂ、５０８．２０．２８ｂ、５０８．２０．０６）が、マウスの肝臓でＬＤＬＲダウンレギュレーションを防いだことを示している。図７を参照。
【０２４１】
実施例７：抗ＰＣＳＫ９抗体の薬物動態
マウスＰＫ試験サンプル中の抗ＰＣＳＫ９抗体濃度は、抗ヒトＩｇＧのＦｃ  ＥＬＩＳＡを用いて測定した。簡潔には、ロバ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）をアッセイプレートコーティングに使用し、ヤギ抗ヒトＩｇＧのＦｃ  ＨＲＰコンジュゲート（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を検出抗体として用いた。アッセイは、０．３１−２０  ｎｇの／ｍＬの測定範囲を持つマウス血清マトリクスの１０％まで、抗ＰＣＳＫ９抗体を測定することができた。図８及び図９を参照。
【０２４２】
カニクイザルのＰＫ研究サンプルの血清抗ＰＣＳＫ９抗体濃度を、捕獲抗体として組換えヒトＰＣＳＫ９（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．  Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を、そして検出抗体としてヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋  Ｌ）ＨＲＰを用いる抗ＰＣＳＫ９抗体ＥＬＩＳＡにより決定した。アッセイは、０．３１３−５０  ｎｇの／ｍＬの測定範囲を持つカニクイザル血清マトリクスの２％まで、抗ＰＣＳＫ９抗体を測定することができた。図１０及び図１１を参照。
【０２４３】
実施例８：抗体は、マウスにおける血清コレステロールレベルを下げる
８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスはジャクソン研究所から市販で購入した。マウスは、実験開始前まで保持室で一週間箱におかれていた。全てのマウスは麻酔下で事前に採血し、ＩＮＦＩＮＩＴＹＴＭコレステロール試薬（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｗｎ，ＶＡ）を使用して、マウスからの総コレステロールを測定した。マウスは、平均的なコレステロールレベルと同じレベル持つ６つのグループに無作化された。全てマウスは、コントロール抗体または抗ＰＣＳＫ９抗体のいずれかを１０ｍｇ／ｋｇ体重の単回投与を受けた。マウスは３日、７日、１０日、及び１５日に採血され血清総コレステロールレベルがＩＮＦＩＮＩＴＹＴＭコレステロール試薬（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｗｎ，ＶＡ）を使用して測定された。
【０２４４】
全抗ＰＣＳＫ９抗体（５０８．２０．０４ｂ、５０８．２０．０６、５０８．２０．２８ｂ、５０８．２０．３３ｂ、５０８．２０．８４）が１０ｍｇ／ｋｇの単回用量を投与されると、総コレステロールレベルの減少を示した。抗ＰＣＳＫ９抗体の投与は、コントロール抗体を受けるマウスに比較したとき、３日めに於いて及び最大１０日まで総コレステロールレベルの著しい減少を生じた。図１２を参照。
【０２４５】
実施例９：スタチンの有効性の増強
この実験は、抗ＰＣＳＫ９抗体とスタチンの併用は、抗ＰＣＳＫ９抗体単独またはスタチン単独の治療法に比べて総コレステロールレベルの大きな減少をもたらすことを実証している。例えば図１３を参照。８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスはジャクソン研究所から購入した。マウスは、２つの異なるグループに分類された。非スタチンマウスは、コントロールの食餌を受けたが、一方スタチンのグループは抗体投与前２週間、食餌に０．２％のロバスタチンを受けた。全てのマウスは事前に採血され、マウスは等しい平均コレステロールレベルに基づいて無作為化した。マウスは３日に採血され、血清総コレステロールレベルがＩＮＦＩＮＩＴＹＴＭコレステロール試薬（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｗｎ，ＶＡ）を使用してアッセイされた。
【０２４６】
抗ＰＣＳＫ９抗体は著しくコレステロールを下げる効果を示した。スタチン単独の治療では、非スタチン群に比べて、総コレステロール値の適度の減少をもたらした。スタチンプラス抗ＰＣＳＫ９抗体の組み合わせは、抗ＰＣＳＫ９単独に比べて、総コレステロール値の更なる低下をもたらした。図１３を参照。
【０２４７】
実施例１０：抗ＰＣＳＫ９抗体のＦａｂ断片に結合したＰＣＳＫ９のＸ線結晶構造
タンパク質の精製と結晶化
１０Ｌ大腸菌発現からの凍結細胞ペーストの２１０ｇを、１Ｌの溶解緩衝液（ＰＢＳ／２５ｍＭ  ＥＤＴＡ／１ｍＭ  ＰＭＳＦ）で解凍した。細胞をＴｉｓｓｕｅｍｉｚｅｒにより破壊し（３０秒）、得られたスラリーをマイクロフルイダイザーに２回通過させた。不溶物を遠心分離によりペレット化した。明白なライセート（一度に２５０ｍＬ）を５ｍＬ／分で、プロテインＧカラム（カタログ番号１７−０６１８−０５、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）にロードした。次いで、カラムを溶解緩衝液１００ｍＬで洗浄し、１５０ｍＬの溶出緩衝液（０．５８ｇ％酢酸）で抗ＰＣＳＫ９抗体の結合したＦａｂ断片を溶出した。２５ｍＬの画分を溶出中に収集した。抗ＰＣＳＫ９抗体のＦａｂ断片を含む画分をＳＤＳ  ＰＡＧＥ解析後にプールした。
【０２４８】
５ｍＬのプレパックＳＰＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，カタログ＃  １７−１１５２−０１）が５０ｍｌのバッファーＡ（２０ｍＭ  ＭＥＳ  ｐＨ５．５）で平衡化された。前の工程からのプール画分を３ｍＬ／分でカラムにロードした。カラムをバッファーＡでベースラインまで洗浄した。結合したＦａｂ断片は、２０カラム体積中で０％から１００％のバッファーＢ（２０ｍＭ  ＭＥＳ  ｐＨ  ５．５，１Ｍ  ＮａＣｌ）の勾配を用いてバッファーＢで溶出した。２ｍＬの画分を溶出中に収集した。（ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて決定された）タンパク質を含む画分を、プールし、５ｍＬまで濃縮し、サイジング緩衝液（２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ７．２，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）で事前平衡化した３２０ｍＬのＳ７５ゲル濾過カラムにロードした。２ｍＬの画分を集めながら、サイジング緩衝液は２２０分間１．５ｍＬ／分で連続的に流された。ピーク画分（Ａ２８０）を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて分析した。
【０２４９】
ヒスチジン（Ｈｉｓ）８Ｃ末端タグを含有するヒトＰＣＳＫ９相補デオキシリボ核酸（ｃＤＮＡ）（配列番号３２）を、標準的な分子生物学技術を用いて、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターと共に哺乳動物発現ベクター（ｐＲＫ５）に挿入した。タンパク質は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞の一過性トランスフェクションによって発現され、ニッケル−ニトリロ−アガロースカラム（Ｑｉａｇｅｎ）でのアフィニティークロマトグラフィーを用いて条件培地から精製され、その後セファクリル（登録商標）Ｓ−２００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でゲル濾過した。精製タンパク質の正確な質量は、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって確認し、アミノ酸配列の精度はＮ末端配列決定により確認した。
【０２５０】
抗ＰＣＳＫ９抗体の精製Ｆａｂ断片及び６．８ｍｇのＰＣＳＫ９タンパク質を、Ｆａｂ断片の２倍モル過剰で混合し、４℃で１時間インキュベートし、その後５ｍＬまで濃縮した。濃縮された混合物を、次いで、サイジング緩衝液で予め平衡化したスーパーデックス２００サイズ排除カラム（カタログ番号１７−１０７１−０１、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にロードした。２ｍＬの画分を集めながら、サイジング緩衝液は２２０分間１．５ｍＬ／分で連続的に流された。ＰＣＳＫ９及び抗ＰＣＳＫ９抗体のＦａｂ断片の両方を含むピーク画分（Ａ２８０）（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）をプールし、２０ミリグラム／ｍＬまで濃縮した。濃縮された複合体を結晶化試験を設定するために用いた。初期結晶は、タンパク質と、シッティングドロップを使用してｐＨ７で１．３  Ｍのリン酸カリウム／ナトリウムを含むリザーバーの間での１：１混合物から形成された。結晶は、ハンギングドロップ中でタンパク質：リザーバー比を変えることにより最適化した。選択された結晶は、２５％グリセロールを補充した母液で処理され液体窒素に貯蔵した。
【０２５１】
ＰＣＳＫ９：抗ＰＣＳＫ９抗体Ｆａｂ断片の複合体の構造決定
約３．５Åの分解能まで伸びた回折データは、シンクロトロンビームラインＳＳＲＬ７−１で収集され、積分され、空間群Ｉ２２２にスケールされた。近似位相は、ＰＣＳＫ９の以前に報告された構造(Hamptonら、PNAS 104:14609-9(2007)，ｐｄｂ  受託コード  ２ＱＴＷ）及び抗体のＦｖ断片の以前に報告された構造(Eigenbrotら、J Mol Biol 229:969-95(1993)，ｐｄｂ  受託コード  １ＦＶＣ）を用いて、分子置換法により得られた。抗ＰＣＳＫ９抗体のＦａｂ断片の定常領域は、部分的な精密化が位相を改善した後、以前に報告された相同構造の一部を用いて(Eigenbrot ら supra,  ｐｄｂ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｃｏｄｅ  １ＦＶＤ）剛体として配置した。最終の精密化構造は結晶学的Ｒ値が２５％及び３０％である。データ収集と精密化の統計値を以下の表１に示す。
表１
データ収集
空間群   Ｉ２２２
格子定数（Å）              ａ＝９２．２８３、ｂ＝１４２．５２３、
ｃ＝２５３．９８３  
ＶＭ（Å３／ダルトン）      ２．８
分解能（Å）                ４０−３．５（３．６３−３．５０）
Ｒｓｙｍａ，ｂ              ０．１８４（０．８０７）
測定された反射数            １５７５２６
独立な反射数                ２１５７９
完全性（％）ｂ              １００（１００）
Ｉ／σＩｂ                  １１（２．６）
ウィルソンＢ（Å２）        ５８
精密化
分解能                     （Å）４０−３．５
反射数                      ２０６４４
（Ｆ＞０σ（Ｆ））
最終のＲｃ、ＲＦＲＥＥ      ０．２４７，０．２９５
複合体／非対称単位          １
タンパク質残基              ９９４
溶媒分子                    ０
原子数                      ７４６３
平均Ｂ−ｆａｃｔｏｒ（Å２） ８６
Ｒｍｓｄ結合（Å）          ０．００７
Ｒｍｓｄ角度（°）          １．１
Ｒｍｓｄ結合したＢ（Å２）  ２．４／１．９
ＴＬＳグループの数          ４
ラマチャンドラン（％）      ８１．５／１６．８／０．６／１．１
ａＲｓｙｍ＝Σ｜｜Ｉ｜−｜＜Ｉ＞｜｜／Σ｜＜Ｉ＞｜、ここで、Ｉは単一観測の強度、＜Ｉ＞は対称による等価な観測の平均強度
ｂ括弧内、最高分解能のシェル。
ｃＲ＝Σ｜Ｆｏ−Ｆｃ｜／Σ｜Ｆｏ｜、ここで、Ｆｏ及びＦｃは、それぞれ観測された、及び計算される構造因子振幅。ＲＦＲＥＥは、精密化から隔離された反射をＲとして計算される。
【０２５２】
Ｘ線構造からのＰＣＳＫ９上のエピトープの決定
４Åの基準を、分子解析プログラムＰｙＭＯＬを用いて適用した。抗ＰＣＳＫ９抗体のＦａｂ断片の任意の部分の４Å以内ＰＣＳＫ９残基をエピトープとして決定した。解析に基づき、エピトープは、次の残基の1つ又は複数を含む：ヒトＰＣＳＫ９のＲ１９４、Ｅ１９５、Ｄ２３８、Ａ２３９、Ａ３４１、Ｑ３４２、Ｅ３６６、Ｄ３６７、Ｉ３６９、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｃ３７８、Ｆ３７９、Ｓ３８１及びＨ３９１。
【０２５３】
実施例１１：ヒト臨床試験、単回及び複数回投与の漸増用量
高血清で低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−ｃ）の濃度を有する健康なボランティアに、単回投与及び反復投与（４週間ごと）で皮下（ＳＣ）注射によって投与された試験薬（配列番号３５を伴う重鎖、及び配列番号３６を伴う軽鎖を有するヒトＩｇＧに再編成されたＹＷ５０８．２０．３３ｂ）の安全性及び忍容性を主に評価するため、無作為化二重盲検、プラセボ対照、単回投与及び反復投与試験を行った。高血清ＬＤＬ−ｃ濃度（１３０〜２２０ｍｇ／ｄＬ未満）の８０例の健康成人ボランティア（男女）を、それぞれ８例の被検体を含む１０のコホートに無作為化した。各コホートの被検体は、試験薬投与群又はプラセボ投与群（１つのコホートにつき、６例の活性剤及び２例のプラセボ剤の被検体）のいずれかに無作為に割り付けた。
【０２５４】
図１４及び表２に示すようにコホートに投与した。通常は、シリンジを使用して、全ての用量を腹部又は太ももに皮下投与した。薬物製品は、２００ｍＭのアルギニンコハク酸、０．０２％のポリソルベート２０、ｐＨ５．５で、１５０ｍｇ／ｍＬの抗体として製剤化された。複数回投与コホートの場合は、試験薬は、４週連続で１週間に一回投与した。スタチンコホート（Ｈ及びＩ）は、最初に、少なくとも７日間にわたって１日一回アトルバスタチン２０ｍｇを経口投与し、その後、安全性及び忍容性の評価を行った。２０ｍｇの用量で良好な耐容性があった場合、１日目の試験薬開始に先立って、投与量は１日あたり４０ｍｇまで増量し、２１日以上継続した。コホートＨ及びＩの被検体は、３５日目を含め、当日までアトルバスタチン（毎日４０ｍｇの経口投与）を継続した。試験中の任意の時点で、直接法のＬＤＬ−ｃ値が２５ｍｇ／ｄＬを下回った全ての被検体は、治療を中止した。
表２  試験薬の用量コホートの概要
2015530867.tif 000004
【０２５５】
被検体は、試験薬の投与開始後８週間から１６週間、頻繁に安全性、ＰＫ及びＰＤの評価についてフォローされた。以下のデータを評価した。：安全性転帰（有害事象、血液学的異常、臨床化学検査及び尿検査、並びに抗治療抗体の発生率、薬物動態（ＰＫ）プロフィール（最高血中濃度、見かけの血清総クリアランス（ＣＬ／Ｆ）、見かけの分布容積（Ｖ／Ｆ）、総曝露量（ＡＵＣ）、最高血中濃度到達時間、半減期、並びに用量比例性（ＡＵＣに基づく）を含める）、薬力学的転帰（単回投与コホートの１５日目及び複数回投与コホートの３６日目でのＬＤＬ−ｃにおける、ベースラインからの減少率並びに絶対的減少）、並びに、総コレステロール、ＬＤＬ−ｃ、ＨＤＬ−ｃ、非ＨＤＬ−ｃ、トリグリセリド、脂質粒子サブフラクションにおける、ベースラインからの経時的な減少率並びに絶対的減少。
【０２５６】
試験の初期の結果からは、薬物関連で、臨床的に有意な有害事象のパターンは確認されていない。重篤又は重度の有害事象、有害事象のための中止、用量制限毒性は認められなかった。試験の用量について、最大許容用量は定義されていない。中程度の有害事象が２例報告されている：頭痛１例（１０−ｍｇの単回投与コホートで試験薬を投与された被検体）及び橈骨骨折１例（試験６００−ｍｇ単回投与コホートで試験薬を投与された被検体）。試験薬治療被検体５例は、全て複数回投与コホートであり、アトルバスタチンを併用投与されていたが、ＬＤＬ−ｃ値が、プロトコールが指定した閾値の２５ｍｇ／ｄＬを下回ったため、試験薬治療を中止した。これらの被検体には関連する有害事象は認められなかった。
【０２５７】
図１５（左のパネル）に示すように、１０ｍｇから６００ｍｇまでの試験薬に対する暴露において用量依存的な増加があった。ＰＫにおいて、スタチン投与群と非処理群との間に差は認められなかった（図１５、右のパネル）。Ｋｍが５．９４ｕｇ／ｍＬのとき、試験薬の飽和クリアランスがあった。
【０２５８】
図１６〜１９並びに表３及び４に示すように、試験薬は、単独及びスタチンとの併用で、健康なボランティアにおいて臨床的に重要なＬＤＬ−ｃの削減をもたらした。薬力学的（ＰＤ）データはＬＤＬ−ｃの用量依存的な減少を見せ、１０ｍｇの単回投与コホートを除く全てのコホートにおいて、統計的に有意であった。ＬＤＬ−ｃは、最高用量群（単回投与コホートにおける３００〜８００ｍｇ）では、１６０〜１７０ｍｇ／ｄＬの平均ベースラインＬＤＬ−ｃから、８０〜９０ｍｇ／ｄＬ減少した。ＬＤＬ−ｃ値における同様の減少は、アトルバスタチン（コホートＨ及びＩ）と非スタチンコホート（コホートＦ及びＧ）との間で見られた（図１８及び１９並びに表３及び４参照）。コホートＩ及びＧ（１０日目）、並びにＦ及びＨ（３６日目）との間の差は統計的に有意ではない。図１６及び図１７に示すように、≧３００ｍｇの用量で、ＬＤＬ−ｃの効果が最大のように見えるが、効果の持続時間は延長する。データは、毎月又はそれより少ない頻度での投与をサポートしている。
表３  単回投与及び反復投与コホートにおける、ＬＤＬ−ｃ値のベースラインからの絶対変化
2015530867.tif 000005
ａ＝コホートＩ及びＧ（１０日目）とＦ及びＨ（３６日目）との間の差は統計的に有意ではない。ｂ＝Ａは、アトルバスタチンｃ＝コホートＩ（１５０ｍｇ×４＋アトルバスタチン）の複数の被検体は、プロトコルの閾値の２５ｍｇ／ｄＬを下回るＬＤＬ値のため、１０日後に中止された。
表４  単回投与及び反復投与コホートにおける、ベースラインからのＬＤＬ−ｃ値の変化率
2015530867.tif 000006
【０２５９】
実施例１２：冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）患者、又はＣＨＤのリスクが高い患者におけるヒト臨床試験
試験薬（配列番号３５を有する軽鎖、並びに配列番号３６を有する重鎖を持つヒトＩｇＧ１に再フォーマットされたＹＷ５０８．２０．３３ｂ）のランダム化プラセボ対照二重盲検試験は、ＬＤＬ−ｃ値が９０〜２５０ｍｇ／ｄＬの患者、並びに  冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）又はＣＨＤリスク相当の患者のいずれかにおいて、スタチンの標準治療（ＳＯＣ）に加えて試験薬の安全性と有効性を評価するために実施される。以下の表５に示すように、血清ＬＤＬ−Ｃ濃度が９０〜２５０ｍｇ／ｄＬの患者（成人男性および女性）約２２４例及びＣＨＤ又はＣＨＤリスク相当の患者のいずれかを、５つの試験群いずれかにランダム化し、試験薬又はプラセボを投与する。シリンジを使用して、全ての用量を皮下投与する。薬物製品は、２００ｍＭのアルギニンコハク酸、０．０２％のポリソルベート２０、ｐＨ５．５で、１５０ｍｇ／ｍＬの抗体として製剤化される。
表５試験薬の用量コホートの概要
2015530867.tif 000007
【０２６０】
本試験では、スクリーニングのための連続した期間（０４週間）、導入期間（０６週間、必要に応じて）、治療期間（２４週間、１日目〜１６９日目）、及びフォローアップ期間（１２週間）が含まれる。フォローアップ期間最終日（２５３日目）での試験完了の来院は、試験薬の最終投与（１４１日目）の１６週間後に発生する。スタチンへの忍容性がない場合を除き、全ての患者が、治療の割り当てに関係なく、スタチンを含むＳＯＣ治療を受ける。全ての患者は治療期間及びフォローアップ期間を通して、導入期間中及び登録時に受けていた同じ用量で、ＳＯＣスタチン療法を継続する。他の処方及び市販薬の（ＯＴＣ）脂質修飾療法が許可されていない。スクリーニングの時点で安定した用量のＳＯＣスタチン療法を受けており（又はスタチンなし及び２種類以上のスタチンに忍容性なしと診断された）、脂質修飾治療を少なくとも４週間（又はフィブラートの場合は６週間）受けていなかった患者は、導入期間を必要としない。
【０２６１】
患者は、１６９日目でのＬＤＬ−ｃの濃度のベースラインからの絶対変化に基づく有効性を決定するため、モニターされる。さらに、患者は、その群の最下点での各群のＬＤＬ−ｃ濃度のベースラインからの絶対変化；１６９日目までの、連続したＬＤＬ−ｃの測定値の間での、週数で加重した、各群のＬＤＬ−ｃの変化の経時的な平均値（ベースラインからの変化率及び絶対変化）；１６９日目での各群の最下点でのＬＤＬ−ｃ濃度のベースラインからの変化率（％）；他のすべての指定された時点でのＬＤＬ−ｃ濃度のベースラインからの変化率及び絶対変化；並びに、１６９日目及び各群の最下点での総コレステロール、非ＨＤＬ−ｃ、及びアポリポタンパク質Ｂにおける、ベースラインからの変化率及び絶対変化を含む有効性の副次的評価項目を決定するため、モニターされる。最終的に、患者はまた、発生率、性質、及び有害事象の重篤度；発生率及びバイタルサインの変化の性質、身体所見、並びに試験薬投与中及び投与後の臨床検査結果；並びに試験薬に対する抗治療抗体の発生率を含む安全性についてモニターされる。
【０２６２】
低ＬＤＬ−ｃ値の安全性は、盲検、探索試験において定期的に評価する。２回連続でＬＤＬ−ｃ値が１５ｍｇ／ｄＬの患者は、試験薬の投与は控える。これは有害事象とは見なさない。このような患者は、盲検法で、ＬＤＬ−ｃ≧５０ｍｇ／ｄＬに増加するまで、代わりにプラセボを投与し、その後、これらの患者は、最も低い用量（８週間ごとに２００ｍｇ）に切り替える。活性薬剤又はプラセボの全ての用量は、治験薬の投与スケジュールに従って投与される。すなわち、１日目、２９日目（±２日）、５７日目（±２日）、８５日目（±２日）、１１３日目（±４日）、及び１４１日目（±４日）のみである。
【０２６３】
有効性の主要評価項目は１６９日目でのＬＤＬ−ｃのベースラインからの変化量である。ベースラインＬＤＬ−ｃは試験薬の初回投与前に収集され、最後の２つの測定値の平均として定義される。治験薬投与の間及び治験薬とプラセボの投与量のそれぞれとの間の治療の比較は、２つの共変量、すなわち、ベースラインＬＤＬ−ｃの濃度（＜１２０ｍｇ／ｄＬ、≧１２０ｍｇ／ｄＬ）及び糖尿病状態（はい、いいえ）を調整した線形回帰モデルを通して実施される共分散の分析（ＡＮＣＯＶＡ）に基づく。信頼区間、並びにＡＮＣＯＶＡモデルからの最小二乗推定値は、試験結果の解釈を助けるために使用される。
【０２６４】
適格基準は、欧州心臓病学会（ＥＳＣ）／欧州動脈硬化学会（ＥＡＳ）及び全米コレステロール教育プログラム成人治療パネルＩＩＩ（ＮＣＥＰ  ＡＴＰ  ＩＩＩ）脂質低下のガイドラインリスクカテゴリに基づいて、心血管及びＣＨＤリスクの高い患者の母集団を定義する。本試験は、これらのガイドラインに従って、治療標的がＬＤＬ−ｃ値７０ｍｇ／ｄＬであるが、ＳＯＣのスタチン療法にもかかわらず、スタチンに忍容性がないか、又はＳＯＣが不十分であるかのいずれかのため、この目標を達成できなかった患者を有資格者として登録することを目的とする。これらの患者は、更なる安全かつ効果的なＬＤＬ−ｃ低下治療を必要としている。
【０２６５】
ＣＨＤとは心筋梗塞の病歴が確認されていること、すなわち、過去に冠動脈血管再生手術（経皮的冠動脈インターベンション又は冠動脈バイパス移植）を受けたか、又は過去に冠動脈造影検査（侵襲的冠動脈造影検査又は心臓コンピュータ断層撮影冠動脈造影検査）で少なくとも一つの≧５０％直径狭窄の冠動脈アテローム性動脈硬化病変を示したことを指す。
【０２６６】
ＣＨＤリスク相当の条件は、以下の少なくともいずれか１つである。
１．臨床的アテローム性動脈硬化症の１つ又は複数の形態：
ａ．末梢動脈疾患（足関節／上腕血圧指数０．８５の診断歴、経皮的又は外科的末梢動脈血管再生術の既往、末梢動脈疾患による下肢の非外傷性切断の既往、又は血管造影での≧５０％直径狭窄の既往）、
ｂ．頸動脈疾患（画像での≧５０％直径狭窄を有する頸動脈アテローム性動脈硬化病変の診断歴、又は皮膚又は外科頸動脈血行再生出術の既往、
ｃ．治験責任医師の意見において、心臓由来の塞栓症（例えば、心房細動、弁膜症、又は左室壁在血栓）に起因していない、ＣＴ又はＭＲＩ脳画像による虚血性脳卒中の診断歴、又は、
ｄ．外科的修復又は血管内修復に伴う腹部大動脈瘤の既往。
２．２型糖尿病。
３．標的臓器障害（治験責任医師によって診断された、網膜症、神経障害、又は微量アルブミン尿を含む腎症）を合併した１型糖尿病。
４．中等度から重度の慢性腎臓病（スクリーニング検査を含め、常にＭＤＲＤ式を使用して、少なくとも３ヶ月に及ぶ、少なくとも３回にわたる測定で、推算糸球体濾過量が１５６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を示した）、又は
５．下記の二つ以上のＣＨＤの危険因子、及びＣＨＤイベントの２０％の１０年絶対リスク（全米コレステロール教育プログラム成人治療パネルＩＩＩガイドライン改訂版のフラミンガムリスクスコアによって決定される）又は最初の致命的なアテローム性動脈硬化症のイベントの１０年リスク≧１０％（系統的冠動脈リスク評価によって決定される）のいずれか：
ａ．年齢  男性≧４５歳、又は女性≧５５歳、
ｂ．現在の喫煙（１ヶ月以内）、
ｃ．高血圧（スクリーニング時に収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ、拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ、又は高血圧症を治療するための降圧薬を服用していること。）
ｄ．低ＨＤＬコレステロール（４０ｍｇ／ｄＬ）、又は
ｅ．早期ＣＨＤの家族歴（一親等者が男性は５５歳、女性は６５歳で、心筋梗塞又は冠動脈血管再生手術歴あり）
【０２６７】
標準治療のスタチン治療は、以下の条件のいずれかを治療が満たすことを指す。（１）高用量のシンバスタチン（４０ｍｇを毎日）、アトルバスタチン（４０〜８０ｍｇを毎日）、又はロスバスタチン（２０〜４０ｍｇを毎日）、（２）低用量のシンバスタチン、アトルバスタチン、又はロスバスタチン及びそのスタチン又は他のスタチンに対する任意の用量、高用量に対して忍容性ありとの診断、（３）他のスタチン（任意の用量）及びシンバスタチン、アトルバスタチン、又はロスバスタチン（任意の用量）に対して忍容性ありとの診断、又は（４）スタチンなし、及び少なくとも２つのスタチン（任意のスタチン、任意の用量）に対して忍容性ありとの診断。
【０２６８】
糖尿病の状態は、患者の医療記録又は病歴、又は検査結果のスクリーニングに従い、次のいずれかの有無に基づいて決定する：（１）ＨｂＡ１ｃ＞６．５％、（２）空腹時血漿グルコース≧１２６ｍｇ／ｄＬ（７．０ｍｍｏｌ／Ｌ）、（３）経口ブドウ糖負荷試験中（試験は、世界保健機関によって記載されるように、水に溶解した無水グルコース７５ｇに相当するものを含むグルコース負荷を用いて行われるべきである）、２時間より前の血漿グルコース≧２００ｍｇ／ｄＬ（１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ）、又は、（４）現在、糖尿病を診断するための経口又は注射療法。
【０２６９】
実施例１３：安定した、高濃度の抗体配合剤の開発
ｐＨ５．５で、２００ｍＭのアルギニンコハク酸、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０において１５０ｍｇ／ｍＬ抗体で製剤化した抗ＰＣＳＫ９抗体の製剤（配列番号３５を有する軽鎖、並びに配列番号３６を有する重鎖を持つヒトＩｇＧ１に再フォーマットされたＹＷ５０８．２０．３３ｂ）を使用して、初期の臨床試験（実施例１１及び１２を参照のこと）を行った。しかし、毎月又はそれより少ない頻度で送達されうる、更に高い用量の皮下投与を容易にするため、更にタンパク質濃度が高く（≧２００ｍｇ／ｍＬ）、安定性が向上した製剤が望まれた。
【０２７０】
抗ＰＣＳＫ９製剤の粘度
２００ｍＭのコハク酸アルギニン、０．０２％のＰＳ２０（ｗ／ｖ）、ｐＨ５．５の抗ＰＣＳＫ９製剤の粘度は、様々なタンパク質濃度で評価した。粘度はレオメーター（アントンパール社のＰｈｙｓｉｃａ  ＭＣＲ５０１）を使用して、各タンパク質濃度で、１０００  １／ｓの剪断速度で、５、１５、２５及び４０℃で測定した。  
【０２７１】
粘度は、薬剤溶液の皮下投与の重要なパラメーターである。シリンジを使用した皮下投与に望ましい粘度限界は、周囲温度で、１０ｃＰ未満である。２００ｍＭのアルギニンコハク酸、０．０２％のＰＳ２０（ｗ／ｖ）、ｐＨ５．５の１００〜３００ｍｇ／ｍＬでの抗ＰＣＳＫ９の粘度は、表６に示されている。抗ＰＣＳＫ９については、粘度は、タンパク質濃度及び温度に依存する。タンパク質濃度が増加すると、粘度も増加する。しかし、各濃度で、粘度は温度を上昇させることによって低下させることができる。２００ｍｇ／ｍＬの上でタンパク質濃度を増加させることによって、抗ＰＣＳＫ９の粘度は指数関数的に増加した（図２０）。したがって、２００ｍｇ／ｍＬでの抗ＰＣＳＫ９を標的濃度として選択した。
表６  １００ｍｇ／ｍＬから３００ｍｇ／ｍＬまでの抗体濃度に対する抗ＰＣＳＫ９の粘度
2015530867.tif 000008
【０２７２】
撹拌試験
撹拌試験は、２００ｍＭのアルギニンコハク酸、ｐＨ５．５において、１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の凝集を防止又は最小化するために必要とされる界面活性剤の最小量を評価するために行った。ポリソルベート２０（ＰＳ２０）は、０．０１、０．０２、０．０４、０．０６、０．０８、０．１％（ｗ／ｖ）の濃度を達成するように製剤に添加された。全てのサンプルは滅菌濾過し、そして各サンプル０．５ｍＬを、２ｃｃのガラスバイアルに充填した。サンプルは、室温で２４時間（ＲＴ）、１１ｃｍのサンプル変位を５０サイクル／分に設定したＧｌａｓ−Ｃｏｌ社のベンチトップ型シェーカーを用いて撹拌した。対応する構成で適切なサンプルコントロール（撹拌なし）は、シェーカーの同じ近傍に配置した。全てのサンプルは、３４０〜３６０ｎｍの吸光度（ａｂｓ）でのＵＶ測定によるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、濁度によって分析した。
【０２７３】
結果を図２１に示す。製剤中のＰＳ２０がなければ、撹拌していないコントロールバイアルと比較した場合、２４時間（室温）撹拌したサンプルは、明白な変化がみられた。撹拌したサンプルは濁度の増加を伴う乳白色の外観を呈し、ＳＥＣのメインピークは６％減少した。≧０．０１％のＰＳ２０の製剤への追加によって、バイアル内でのコントロール（撹拌なし）と撹拌されたサンプルとの間で、ＳＥＣ及び濁度測定で差は認められなかった。これらの結果は、０．０１％のＰＳ２０の使用は、２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の撹拌によって誘導される凝集体の形成を防止するのに十分であったことを示唆している。しかし、０．０２％のＰＳ２０の濃度は、製品保存中の界面活性剤の潜在的劣化を考慮して目標濃度として選択した。  
【０２７４】
抗ＰＣＳＫ９製剤の酸化電位
抗ＰＣＳＫ９の酸化はトリプシンペプチドマップによって決定し、酸化の部位（単数又は複数）は、ＬＣ−ＭＳにより特徴付けた。抗ＰＣＳＫ９の酸化は、過酸化水素、２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）のような高温、光、酸化剤によって誘導した。酸化サンプルを調製するための劣化条件を表７にまとめる。これらの酸化された抗ＰＣＳＫ９サンプルはまた、実施例３に記載したように、低密度リポタンパク質受容体ドメインのＦｃ（ＬＤＬＲＤ−Ｆｃ）との融合タンパク質に結合するＰＣＳＫ９を阻害する能力を測定することにより、酸化による可能効力損失を評価した。
【０２７５】
ペプチドマッピングについては、サンプルを、１Ｍのジチオトレイトールで還元し、２．９Ｍのヨードアセトアミドでアルキル化し、そしてバッファは消化の前に交換した。トリプシンは、酵素：タンパク質比が１：２５の酵素を用いて、３７℃で１．５時間の消化に使用した。消化は、最終ｐＨが２〜３の１０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）でクエンチした。得られたペプチドの消化混合物は、ＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  ＸＬを用いて、逆相液体クロマトグラフィー／質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）により分析した。ペプチドマップは、５５℃に維持したＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ１８カラムと共に、０．２５ｍＬ／分で１６０分間にわたって、０から４０％のリニアグラデーションを使用した。移動相Ａ及びＢは、それぞれ０．１％ＴＦＡ水溶液、及び０．０９％  ＴＦＡアセトニトリル溶液からなる。ペプチドはまた、ＭＳ分析の前に２１４及び２８０ｎｍ  ａｂｓで検出された。ＬＣ−ＭＳのデータは、ペプチド及び抗ＰＣＳＫ９の各酸化部位を同定するためにＭａｓｃｏｔ社のソフトウェアによって処理した。Ｔｒｐ及びＭｅｔは、複数の酸化生成物及び／又は酸化状態を作り出すため、サンプル中の酸化量は、「部位ごとの全酸化」又は累積酸化として表した。
【０２７６】
メチオニン（Ｍｅｔ／Ｍ）及びトリプトファン（Ｔｒｐ／Ｗ）は、容易にタンパク質薬剤製品に酸化される、２つの一般的なアミノ酸残基である。Ｗ９９及びＭ１０８は、重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）ＩＩＩ、及びＣＤＲに隣接する３つのＴｒｐ残基（Ｗ３６、Ｗ１１１及びＷ４８６）に位置し、抗ＰＣＳＫ９の潜在的な酸化部位である。これらのアミノ酸残基の酸化は、それらがＣＤＲの近くであることにより、薬効が失われる可能性がある。劣化したサンプルのペプチドマッピング分析は、抗ＰＣＳＫ９の酸化は主にＭ２５６、Ｍ３６２、Ｍ４３２及びＦｃ部分のＭ４５５残基（図２２）で発生したことを明らかにした。抗ＰＣＳＫ９を光（室内又はＵＶ）に曝露し、Ｈ２Ｏ２及びＡＡＰＨなどの酸化剤によって劣化した場合、ＣＤＲ中又はＣＤＲに隣接するＭｅｔ又はＴｒｐの残基部位ごとの酸化の相対量は３％未満であり、効力に有意な影響はなかった（図２３）。したがって、抗ＰＳＣＫ９は酸化の影響を受けにくく、タンパク質製剤中での酸化防止剤の使用は必要ではないと考えられている。
表７  酸化分析についての抗ＰＣＳＫ９の劣化条件
2015530867.tif 000009
【０２７７】
ｐＨプロフィール及び賦形剤の試験
抗ＰＣＳＫ９における、２００ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度での製剤ｐＨ及び賦形剤の効果を  評価した。４０℃での加速安定性（表８を参照）並びに５℃及び２５℃での粘度（表９を参照）について、アルギニンコハク酸、緩衝種としてのヒスチジン塩酸塩又はヒスチジン酢酸、及び可溶化剤としてのアルギニン塩酸塩又はアルギニンアセテートを含む、ｐＨが５．０から６．５の範囲の製剤を評価した。以下のアッセイを評価に用いた。ＳＥＣ、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）、キャピラリー電気泳動−硫酸ドデシルナトリウム及び効力計７つの製剤を評価した。
【０２７８】
ＩＥＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣで実施し、移動相Ａ（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨは７．９）グラジエント１％〜３４％の移動相Ｂ（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨは７．９）で、０．９ｍＬ／分の流速で５０分間、Ｄｉｏｎｅｘ社ＰｒｏＰａｃＴＭ  ＷＣＸ−１０カラム（４×２５０ｍｍ）を使用した。カラムは３５℃に維持した。サンプル負荷は４０ｇであり、分離は２８０ｎｍ  ａｂｓでモニターした。
【０２７９】
ｐＨの影響
２００ｍｇ／ｍＬでの２００ｍＭのアルギニンコハク酸、０．０２％のＰＳ２０における抗ＰＣＳＫ９の安定性に対するｐＨの影響は、ｐＨ５．０、５．５及び６．０から評価した。ＳＥＣ、ＩＥＣ及びＣＥ−ＳＤＳで分析したように、５．０から６．０の製剤のｐＨを増加させることは、４０℃で１ヶ月後の抗ＰＣＳＫ９の安定性を増加させた。ｐＨは５．０及び５．５と比較すると、ＩＥＣによって決定されるようにｐＨ６．０での製剤は、より少ない酸性及び塩基性ピークの形成を示した。ｐＨ６．０の製剤はまた、ＳＥＣにより決定される高分子量種（ＨＭＷＳ）、ＳＥＣ及びＣＥ−ＳＤＳの両方によって決定される低分子量種において減少していた。ｐＨ６．５での製剤については、抗ＰＣＳＫ９は、２０ｍＭのヒスチジン塩酸塩、１６０ｍＭのアルギニン塩酸塩及び０．０２％のＰＳ２０において、２００ｍｇ／ｍＬで製剤化された。ｐＨ５．０から６．５での、全ての製剤について、４０℃での抗ＰＣＳＫ９の劣化速度は、表９に示されており、ＩＥＣ及びＳＥＣについてのｐＨ速度プロファイルは、図２４に示されている。ｐＨの速度プロファイル及び分解速度に基づいて、目的とするｐＨは６．０を選択した。
表８  様々な製剤における２００ｍｇ／ｍＬでの抗ＰＣＳＫ９の粘度
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【０２８０】
緩衝液の種類による影響
ｐＨ６．０での２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９の加速安定性に対する緩衝液の種類による影響について、以下の３つの緩衝液系を含有する製剤で評価した。（１）１６０ｍＭのアルギニンコハク酸、（２）２０ｍＭのヒスチジン塩酸塩及び１６０ｍＭのアルギニン塩酸塩、並びに（３）２０ｍＭのヒスチジンアセテート及び１６０ｍＭのアルギニンアセテート。３つ全ての製剤は、０．０２％のＰＳ２０を含んでいた。１ヶ月後４０℃で、抗ＰＣＳＫ９は、３つの緩衝液系の間で比較可能なＣＥ−ＳＤＳのプロファイルを有していた（図２６、上のパネル）。アルギニンコハク酸緩衝液の使用により、高分子量のピークのわずかな増加（図２６、中央のパネル）があったが、ヒスチジン塩酸塩／アルギニン塩酸塩及びヒスチジンアセテート／アルギニンアセテート緩衝剤系の間で、ＳＥＣによる差は認められなかった。ＩＥＣ分析により、製剤におけるヒスチジン塩酸塩／アルギニン塩酸塩緩衝液系の使用は、ヒスチジンアセテート／アルギニンアセテート緩衝液系及びアルギニンコハク酸緩衝液と比較した（図２６、下パネル）場合、より少ない酸性ピークの形成が認められた。しかし、ＳＥＣ、ＩＥＣ及びＣＥ−ＳＤＳによって測定された４０℃における抗ＰＣＳＫ９の全体的な分解速度は、ｐＨ６．０で３つ全ての緩衝液系で同等である（表９）。
表９  様々な製剤における４０℃での２００ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＫ９の分解速度
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【０２８１】
２つの製剤（ｐＨ６．０のヒスチジン塩酸塩、ｐＨ６．０のヒスチジンアセテート）における抗ＰＣＳＫ９の安定性について、１ｍＬシリンジにおいても評価した。
【０２８２】
５℃で、両方の製剤は、最長６ヶ月間安定していた（表１０及び１１）。加速ストレス条件において、酸性変異体及び凝集体の形成は、液体製剤における抗ＰＣＳＫ９の主な分解経路である。ＩＥＣにより測定した結果、３０℃／６５％の相対湿度（ＲＨ）及び４０℃／７５％のＲＨでは、タンパク質は、ｐＨ６．０でヒスチジン塩酸塩よりもヒスチジンアセテートにおいて速く劣化する（表１１）。同じ貯蔵条件下でのいずれの製剤について、ＳＥＣ及びＣＥ−ＳＤＳのよる凝集率の差は認められなかった（表１２）。５℃で最長６ヶ月間保存した場合、両方のリード製剤について、酸化の増加は認められなかった。３０℃／６５％ＲＨで６ヶ月後の両方の製剤でのＦｃ部分におけるＭｅｔ２５６の酸化のわずかな増加が（〜２％）があったが、他のＭｅｔ及びＴｒｐ残基では酸化の増加は認められなかった。効力の損失は、５℃及び３０℃／６５％ＲＨで、最大６ヶ月間、いずれの製剤で認められなかった。２．２５ｍＬシリンジを使用して同様の結果が得られた。
表１０  １ｍｌシリンジ内が２０ｍＭのヒスチジン塩酸塩、１６０ｍＭのアルギニン塩酸塩、０．０２％のＰＳ２０、ｐＨ６．０である抗ＰＣＳＫ９の２００ｍｇ／ｍＬの安定性データ
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表１１  １ｍＬシリンジ内の、ｐＨ６．０の２０ｍＭのヒスチジン塩酸塩、１６０ｍＭのアルギニン塩酸塩、０．０２％のＰＳ２０における２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９についての安定性データ
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表１２  加速安定条件での１ｍｌシリンジ中の抗ＰＣＳＫ９の劣化速度
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１ヒスチジン塩酸塩＝２０ｍＭのヒスチジン塩酸塩中に２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９、１６０ｍＭのアルギニン塩酸塩、０．０２％のＰＳ２０、ｐＨは６．０
２ヒスチジンアセテート＝２０ｍＭヒスチジンアセテート中に２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９、１６０ｍＭのアルギニンアセテート、０．０２％のＰＳ２０、ｐＨは６．０
【０２８３】
凍結安定性
以下の２つの製剤において、抗ＰＣＳＫ９は、２００ｍｇ／ｍＬで製剤化した：（１）２０ｍＭのヒスチジン塩酸塩、１６０ｍＭの、アルギニン塩酸塩０．０２％のＰＳ２０、ｐＨ６；及び（２）２０ｍＭのヒスチジンアセテート、１６０ｍＭのアルギニンアセテート、０．０２％のＰＳ２０、ｐＨ６．０。各製剤について、薬剤溶液２０ｍＬを２５−ｃｃの３１６Ｌステンレス鋼製ミニ缶に充填した。全てミニ缶はその後、安定性分析のため、６ヶ月まで−２０℃に置いた。
【０２８４】
ＩＥＣ、ＣＥ−ＳＤＳ及び効力で、−２０℃で６ヶ月まで、両製剤の間で差は認められなかった。しかし、同じ保存条件（図２５を参照）で、ヒスチジンアセテート製剤中の凝集体において、わずか０．５％の増加に対して、ヒスチジン塩酸塩において、凝集体は冷凍保存の６ヶ月後に１．４％増加した。凍結保存条件下でのヒスチジン塩酸塩製剤との凝集の速度が速いため、好適な緩衝剤としてヒスチジンアセテート製剤を選択した。
【０２８５】
凍結安定性に対するスクロースの影響
冷凍保存中の抗ＰＣＳＫ９の安定化への影響について、スクロースを評価した。ＬＣＧＣ１０カートリッジを備えたラボスケールＭｉｌｌｉｐｏｒｅ社タンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）システムを使用して、抗ＰＣＳＫ９を、以下の２つのスクロース含有製剤で試験した：（１）２０ｍＭのヒスチジン塩酸塩中２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９、１３０ｍＭのアルギニン塩酸塩、６０ｍＭのスクロース、０．０２％のＰＳ２０（ｗ／ｖ）、ｐＨ  ６．０。及び（２）２０ｍＭのヒスチジンアセテート中の２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９、１００ｍＭのアルギニンアセテート、６０ｍＭのスクロース、０．０２％のＰＳ２０（ｗ／ｖ）、ｐＨ  ６．０。２つの製剤中の抗ＰＣＳＫ９のサンプルは、最長３ヶ月にわたり−２０℃に置き、凝集についてＳＥＣによって分析した。
【０２８６】
スクロース（６０ｍＭ）の添加は、ヒスチジンアセテート製剤中のａＰＣＳＫ９の凝集を減少させることに影響を及ぼさなかったが、−２０℃で３ヶ月間にわたり、０．７％ヒスチジン塩酸塩製剤中の凝集を遅くするのに役立った。しかし、スクロースの添加はまた、両方の製剤を２５℃で７〜８ｃＰから１１〜１３ｃＰへ増粘させ、皮下製剤には望ましくなかった。そのため、スクロースは、製剤の安定剤として選択しなかった。
【０２８７】
以上の結果に基づいて、２０ｍＭのヒスチジンアセテート中の２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＣＳＫ９、１６０ｍＭのアルギニンアセテート、０．０２％のＰＳ２０（ｗ／ｖ）からなるｐＨ  ６．０の液体製剤を選択した。この製剤は、安定性が２〜８℃、保存が−２０℃で最適であり、ｐＨ５．５での最初の製剤と比較した場合、安定性が改善された。
【０２８８】
実施例１４：冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）患者、又はＣＨＤのリスクが高い患者におけるヒト臨床試験
本実施例は第ＩＩ相臨床試験について説明し、図２７〜３７は、少なくとも５０％の患者の１２週間目での中間結果を示している。本試験では、試験薬を投与される１８３例の患者、及びプラセボを投与される６４例の患者を含む、２４８例の患者を登録した。１例の患者が初回投与前に試験を脱落し、１３例の患者が試験８５日前に投与を中止した。２３４例の患者が、試験の少なくとも１２週間を完了した。  
【０２８９】
試験薬（配列番号３５を有する軽鎖、並びに配列番号３６を有する重鎖を持つヒトＩｇＧ１に再フォーマットされたＹＷ５０８．２０．３３ｂ）の約３：１ランダム化二重盲検プラセボ対照試験は、空腹時の血清ＬＤＬ−ｃ値（直接測定法）が９０〜２５０ｍｇ／ｄＬの患者、並びに、冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）又はＣＨＤリスク相当の患者のいずれかにおいて、スタチンの標準治療（ＳＯＣ）に加えて試験薬の安全性と有効性を評価するために実施された。追加の適格基準は、重量≧４５ｋｇ（１００ｌｂ）；ボディ・マス・インデックスが１８〜３７キロ／ｍ２；年齢が１８歳から８０歳の間であることが含まれた。ＬＤＬ−ｃ＞１２０ｍｇ／ｄＬ、糖尿病の状態によって層別ランダム化した。
【０２９０】
第ＩＩ相臨床試験のための適格基準は、欧州心臓病学会（ＥＳＣ）／欧州動脈硬化学会（ＥＡＳ）及び全米コレステロール教育プログラム成人治療パネルＩＩＩ（ＮＣＥＰ  ＡＴＰ  ＩＩＩ）脂質低下のガイドラインリスクカテゴリに基づいて、心血管及びＣＨＤリスクの高い患者の母集団を定義した。本試験は、これらのガイドラインに従って、治療標的がＬＤＬ−ｃ値７０ｍｇ／ｄＬであるが、安定したＳＯＣのスタチン療法にもかかわらず、スタチンに忍容性がないか、又はＳＯＣが不十分であるかのいずれかのため、この目標を達成できなかった患者を有資格者として登録した。
【０２９１】
簡単に述べると、ＣＨＤとは心筋梗塞の病歴が確認されていること、すなわち、過去に冠動脈血管再生手術（経皮的冠動脈インターベンション又は冠動脈バイパス移植）を受けたか、又は過去に冠動脈造影検査（侵襲的冠動脈造影検査又は心臓コンピュータ断層撮影冠動脈造影検査）で少なくとも一つの≧５０％直径狭窄の冠動脈アテローム性動脈硬化病変を示したことを指す。
【０２９２】
ＣＨＤリスク相当の状態を有する患者は、以下の少なくとも一つを有していた。
１．臨床的アテローム性動脈硬化症の１つ又は複数の形態：
ａ．末梢動脈疾患（足関節／上腕血圧指数０．８５の診断歴、経皮的又は外科的末梢動脈血管再生術の既往、末梢動脈疾患による下肢の非外傷性切断の既往、又は血管造影での≧５０％直径狭窄の既往）、
ｂ．頸動脈疾患（画像での≧５０％直径狭窄を有する頸動脈アテローム性動脈硬化病変の診断歴、又は皮膚又は外科頸動脈血行再生出術の既往、
ｃ．治験責任医師の意見において、心臓由来の塞栓症（例えば、心房細動、弁膜症、又は左室壁在血栓）に起因していない、ＣＴ又はＭＲＩ脳画像による虚血性脳卒中の診断歴、又は
ｄ．外科的修復又は血管内修復を伴う腹部大動脈瘤の既往。
２．２型糖尿病。
３．標的臓器障害（治験責任医師によって診断された、網膜症、神経障害、又は微量アルブミン尿を含む腎症）を合併した１型糖尿病。
４．中等度から重度の慢性腎臓病（スクリーニング検査を含め、常にＭＤＲＤ式を使用して、少なくとも３ヶ月に及ぶ、少なくとも３回にわたる測定で、推算糸球体濾過量が１５６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を示した）、又は
５．下記の二つ以上のＣＨＤの危険因子、及びＣＨＤイベントの２０％の１０年絶対リスク（全米コレステロール教育プログラム成人治療パネルＩＩＩガイドライン改訂版のフラミンガムリスクスコアによって決定される）又は最初の致命的なアテローム性動脈硬化症のイベントの１０年リスク≧１０％（系統的冠動脈リスク評価によって決定される）のいずれか：
ａ．年齢男性４５歳以上、又は女性５５歳以上、
ｂ．現在の喫煙（１ヶ月以内）、
ｃ．高血圧（スクリーニング時に収縮期血圧が≧１４０ｍｍＨｇ、拡張期血圧が≧９０ｍｍＨｇ、又は高血圧症を治療するための  降圧薬を服用していること。）
ｄ．低ＨＤＬコレステロール（４０ｍｇ／ｄＬ）、又は
ｅ．早期ＣＨＤの家族歴（一親等者が男性は５５歳、女性は６５歳で、心筋梗塞又は冠動脈血管再生手術歴あり）
【０２９３】
糖尿病の状態は、患者の医療記録又は病歴、又は検査結果のスクリーニングに従い、次のいずれかの有無に基づいて決定した：（１）ＨｂＡ１ｃ＞６．５％、（２）空腹時血漿グルコース≧１２６ｍｇ／ｄＬ（７．０ｍｍｏｌ／Ｌ）、（３）経口ブドウ糖負荷試験中（試験は、世界保健機関によって記載されるように、水に溶解した無水グルコース７５ｇに相当するものを含むグルコース負荷を用いて行われるべきである）、２時間より前の血漿グルコース≧２００ｍｇ／ｄＬ（１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ）、又は、（４）現在、糖尿病を診断するための経口又は注射療法。
【０２９４】
除外基準は以下を含んでいた：試験中に冠状動脈、頸動脈又は末梢動脈血管再生手術を計画；３ヶ月以内のプロトコール又はスクリーニングにおいて記載されているような、コントロールされていない臨床的に重要な医学的疾患；後天性又は先天性免疫抑制；角膜移植以外の臓器移植；治験責任医師の判断において、平均余命＜２年；空腹時血清トリグリセリドレベル≧４００ｍｇ／ｄＬ；アルコール依存症の既往又は１年のスクリーニングを伴う薬物中毒；３ヶ月のスクリーニングを伴う違法薬物の使用；妊娠又は非常に効果的な避妊法の使用を望んでいないこと；アナフィラキシー又はアナフィラキシー反応の既往。
【０２９５】
血清ＬＤＬ−Ｃ濃度が９０〜２５０ｍｇ／ｄＬの患者（成人男性および女性）２４８例及びＣＨＤ又はＣＨＤリスク相当の患者のいずれかを、５つの試験群いずれかにランダム化し、試験薬又はプラセボ（Ｆ群）を投与した。第一の試験群（Ａ群）の患者には、抗ＰＣＳＫ９抗体を４週間ごとに４００ｍｇ投与し；第二の試験群（Ｂ群）の患者には、抗ＰＣＳＫ９抗体を８週間ごとに２００ｍｇ投与し；第三の試験群（Ｃ群）の患者には、抗ＰＣＳＫ９抗体を８週間ごとに４００ｍｇ投与し；第四の試験群（Ｄ群）の患者には、抗ＰＣＳＫ９抗体を８週間ごとに８００ｍｇ投与し；第五の試験群（Ｅ群）の患者は、抗ＰＣＳＫ９抗体を１２週間ごとに８００ｍｇ投与した。試験薬の用量コホートの概要、試験薬投与レジメン、及び試験群ごとの患者数は、図２７に示した。シリンジを使用して、全ての用量を皮下投与した。薬物製品は、２００ｍＭのアルギニンコハク酸、０．０２％のポリソルベート２０、ｐＨ５．５で、１５０ｍｇ／ｍＬの抗体として製剤化される。
【０２９６】
下記のとおり、表１３において本試験の患者情報は、群によって差がないことを示している。下記のとおり、表１４において患者のベースライン時の情報は、群によって差がないことを示している。
表１３  患者背景
（特に記載のない限り、平均値（ＳＤ））
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表１４  ベースライン時の患者情報
（特に記載のない限り、平均値（ＳＤ））
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【０２９７】
図２７に示すように、本試験では、スクリーニングのための連続した期間（０４週間）、導入期間（０６週間、必要に応じて）、治療期間（２４週間、１日目〜１６９日目）、及びフォローアップ期間（１２週間）が含まれる。フォローアップ期間最終日（２５３日目）での試験完了の来院は、試験薬の最終投与（１４１日目）の１６週間後に発生する。スタチンへの忍容性がなかった場合を除き、全ての患者が、治療の割り当てに関係なく、スタチンを含む標準治療（ＳＯＣ）治療を受けた。ＳＯＣのスタチン治療は、以下の条件のいずれかを治療が満たすことを指す。（１）高用量のシンバスタチン（４０ｍｇを毎日）、アトルバスタチン（４０〜８０ｍｇを毎日）、又はロスバスタチン（２０〜４０ｍｇを毎日）、（２）低用量のシンバスタチン、アトルバスタチン、又はロスバスタチン及びそのスタチン又は他のスタチンに対する任意の用量、高用量に対して忍容性ありとの診断、（３）他のスタチン（任意の用量）及びシンバスタチン、アトルバスタチン、又はロスバスタチン（任意の用量）に対して忍容性ありとの診断、又は（４）スタチンなし、及び少なくとも２つのスタチン（任意のスタチン、任意の用量）に対して忍容性ありとの診断。全ての患者は、治療期間及びフォローアップ期間を通して、患者は導入期間中に、及び登録時に投与されていた同じ用量で、ＳＯＣスタチン療法を継続した。他の処方及び市販薬（ＯＴＣ）による脂質修飾治療（例えば、紅色酵母米、オメガ３脂肪酸サプリメントなど）は許可されていない。スクリーニングの時点で安定した用量のＳＯＣスタチン療法を受けており（又はスタチンなし及び２種類以上のスタチンに忍容性なしと診断された）、脂質修飾治療を少なくとも４週間（又はフィブラートの場合は６週間）受けていなかった患者は、導入期間を必要としなかった。
【０２９８】
活性薬剤又はプラセボの全ての用量は、治験薬の投与スケジュールに従って投与される。すなわち、１日目、２９日目（±２日）、５７日目（±２日）、８５日目（±２日）、１１３日目（±４日）、及び１４１日目（±４日）のみである。図２８を参照。患者は、１６９日目でのＬＤＬ−ｃの濃度のベースラインからの絶対変化に基づく有効性を決定するため、モニターされる。さらに、患者は、その群の最下点での各群のＬＤＬ−ｃ濃度のベースラインからの絶対変化；１６９日目までの、連続したＬＤＬ−ｃの測定値の間での、週数で加重した、各群のＬＤＬ−ｃの変化の経時的な平均値（ベースラインからの変化率及び絶対変化）；１６９日目での各群の最下点でのＬＤＬ−ｃ濃度のベースラインからの変化率（％）；他のすべての指定された時点でのＬＤＬ−ｃ濃度のベースラインからの変化率及び絶対変化；並びに、１６９日目及び各群の最下点での総コレステロール、非ＨＤＬ−ｃ、及びアポリポタンパク質Ｂにおける、ベースラインからの変化率及び絶対変化を含む有効性の副次的評価項目を決定するため、モニターされる。
【０２９９】
有効性の主要評価項目は１６９日目でのＬＤＬ−ｃのベースラインからの変化量を含む。ベースラインＬＤＬ−ｃは試験薬の初回投与前に収集され、最後の２つの測定値の平均として定義される。治験薬投与の間及び治験薬とプラセボの投与量のそれぞれとの間の治療の比較は、２つの共変量、すなわち、ベースラインＬＤＬ−ｃの濃度（＜１２０ｍｇ／ｄＬ、≧１２０ｍｇ／ｄＬ）及び糖尿病状態（はい、いいえ）を調整した線形回帰モデルを通して実施される共分散の分析（ＡＮＣＯＶＡ）に基づいた。信頼区間、並びにＡＮＣＯＶＡモデルからの最小二乗推定値は、試験結果の解釈を助けるために使用された。有効性の副次的評価項目の測定は、最下点及び全ての時点におけるＬＤＬ−ｃの絶対変化；１週間ごとのＬＤＬｃの変化量の加重平均；１６９日目、最下点及び全ての来院日でのベースラインからの変化率；１６９日目及び最下点での総コレステロール、非ＨＤＬ−ｃ、及びアポリポタンパク質Ｂにおける、絶対変化及び変化率を含む。
【０３００】
下記の表１５は、治療１２週間後の患者の治療状況を示す。
表１５  治療１２週間後の転帰
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【０３０１】
本試験の中間データを以下の表１６及び図２８〜３６に要約する。
表１６  ベースラインから最下点までで測定された患者の総コレステロール、非ＨＤＬ−ｃ、及びアポリポタンパク質Ｂ
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【０３０２】
図２８は、平均薬物動態（＋／−標準偏差）（左のパネル）及び、ＰＣＳＫ９の合計、例えば、薬剤が結合したＰＣＳＫ９と遊離ＰＣＳＫ９（＋／−標準誤差）の両方の平均（右のパネル）を示している。
【０３０３】
図２９は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者で認められた直接法のＬＤＬコレステロールのベースラインからの絶対変化を示す。
図３０は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者で認められた直接法のＬＤＬコレステロールのベースラインからの相対変化を示す。４週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体４００ｍｇの投与を受けている患者及び８週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体８００ｍｇの投与を受けている患者は、直接法のＬＤＬ−ｃで最も高い減少を示した。この効果は、治療１週間以内に認められた。１２週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体８００ｍｇを投与された患者は、直接法のＬＤＬ−ｃで最も低い減少を示した。
【０３０４】
図３１は、本試験に参加している患者で認められた総コレステロールのベースラインからの絶対変化を示す。
図３２は、抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された患者で認められた総コレステロールのベースラインからの相対変化を示す。４週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体４００ｍｇの投与を受けている患者及び８週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体８００ｍｇの投与を受けている患者は、総コレステロールで最も高い減少を示した。この効果は、治療１週間以内に認められた。１２週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体８００ｍｇを投与された患者は、総コレステロール値で最も低い減少を示した。
【０３０５】
図３３は、本試験に参加している患者における非ＨＤＬコレステロールのベースラインからの絶対変化を示す。
図３４は、本試験に参加している患者における非ＨＤＬコレステロールのベースラインからの相対変化を示す。４週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体４００ｍｇの投与を受けている患者及び８週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体８００ｍｇの投与を受けている患者は、非ＨＤＬコレステロールで最も高い減少を示した。この効果は、治療１週間以内に認められた。１２週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体８００ｍｇの投与を受けている患者は、非ＨＤＬコレステロールで最も高い減少を示した。
【０３０６】
図３５は、本試験に参加している患者におけるアポリポタンパク質Ｂのベースラインからの絶対変化を示す。
図３６は、本試験に参加している患者におけるアポリポタンパク質Ｂのベースラインからの相対変化を示す。４週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体４００ｍｇの投与を受けている患者及び８週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体８００ｍｇの投与を受けている患者は、アポリポタンパク質Ｂで最も高い減少を示した。この効果は、治療１週間以内に認められた。１２週間ごとに抗ＰＣＳＫ９抗体８００ｍｇの投与を受けている患者は、アポリポタンパク質Ｂで最も高い減少を示した。
【０３０７】
試験薬の有効性に関する結論はここに要約する。８５日目、最下点でのＬＤＬ−ｃ、及びＡＵＣにおける最も高い用量依存的減少が、４週間ごとに４００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与された患者、及び８週間ごとに８００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与された患者で認められた。８５日目の分析に基づいて、ＬＤＬ−ｃの中で最も小さい用量依存的減少は、１２週間ごとに８００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与された患者で認められた。最下点及びＡＵＣの分析に基づいて、ＬＤＬ−ｃの中で最も小さい用量依存的減少が、８週間ごとに２００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与された患者で認められた。この効果は、治療１週間以内に認められた。総コレステロール、非ＨＤＬ−ｃ、及びアポリポタンパク質Ｂの用量依存的減少は、８５日目及び最下点で認められ、その減少は、治療の１週間以内にも明らかであった。
【０３０８】
最終的に、患者はまた、発生率、性質、及び有害事象の重篤度；発生率及びバイタルサインの変化の性質、身体所見、並びに試験薬投与中及び投与後の臨床検査結果；並びに試験薬に対する抗治療抗体の発生率を含む安全性についてモニターされた。
【０３０９】
低ＬＤＬ−ｃ値の安全性は、盲検、探索試験において定期的に評価した。図３７Ａは、少なくとも一回の来院で抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与した後、直接法のＬＤＬ−ｃ値が１５ｍｇ／ｄＬ以下の患者の割合を示し、図３７Ｂは、少なくとも一回の来院で抗ＰＣＳＫ９抗体又はプラセボを投与された後、直接法のＬＤＬ−ｃ値が２５ｍｇ／ｄＬ以下の患者の割合を示している。ＬＤＬ−ｃ≦１５ｍｇ／ｄＬ又はＬＤＬ−ｃ≦２５ｍｇ／ｄＬの患者のうち、試験薬を４週間ごとに４００ｍｇ、又は８週間ごとに８００ｍｇのいずれかで投与を受けたものの割合が最も高かった。ＬＤＬ−ｃ≦２５ｍｇ／ｄＬの患者のうち、試験薬を８週間ごとに２００ｍｇで投与を受けたものの割合が最も低かった。２回連続でＬＤＬ−ｃ値が１５ｍｇ／ｄＬの患者は、試験薬の投与は控えた。これは有害事象とは見なさなかった。このような患者は、盲検法で、ＬＤＬ−ｃ≧５０ｍｇ／ｄＬに増加するまで、代わりにプラセボを投与し、その後、これらの患者は、最も低い用量（８週間ごとに２００ｍｇ）に切り替えた。
【０３１０】
試験薬の安全性に関する結論はここに要約する。簡単に言えば、抗ＰＣＳＫ９抗体は、３７から８０歳で、ＬＤＬ−ｃのベースラインが高く（９０〜２５０ｍｇ／ｄＬ）、ＣＨＤ又はＣＨＤリスクと同等と診断され、スタチンの安定した用量を服用していたか、又はスタチン不耐症の患者に対して、忍容性に優れていた。注射部位反応は、試験薬（２５％）対プラセボ（９％）を受けた患者の間でより一般的であった。中等度の注射部位反応がわずかに２例（プラセボ１例、試験薬１例）あったが、その他の重篤度は軽度であった。治療により発生したイベントのその他の臨床的に有意な不均衡は、試験薬投与群とプラセボ投与群の患者との間で認められなかった。臨床検査値の異常において、臨床的に意義のある不均衡は認められなかった。安全なシグナルは測定されなかった。死亡例は報告されず、新たな安全性の懸念は認められなかった。安全性の検査結果で検出されたパターンはなかった。
【０３１１】
前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示及び実施例によってある程度詳細に説明してきたが、説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。すべての特許及び本明細書に引用される科学文献の開示は、参照によりその全体が援用される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ−Ｂ】
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【図３Ｃ−Ｄ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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