(57)【要約】  ここで、記載するものは、２つ又はそれ以上の密閉されたチャンバーを形成するように構成された変形可能な材料を含む、複数パートの歯のホワイトニング配合物を保存および分配するためのパッケージであり、例えばその第１チャンバーがペルヒドロリティック活性を有する酵素を含有する低粘度溶液を含み、およびその第２チャンバーが過酸化物源および少なくとも１つのアシルドナー基質を含むパッケージである。この原理を用いる特定の複数パートの歯のホワイトニング配合物およびその使用方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの密閉されたチャンバーを形成するよう構成された変形可能な材料を含むパッケージであって、
第１チャンバー；
第２チャンバー；および
場合により更なるチャンバーを含み、
ここで、該チャンバーは、壊れやすい又は易裂性の１つ又はそれ以上のバリアで隔てられており、
ここで、第１チャンバーが過加水分解活性を有する酵素を含有する低粘度溶液を含み、該酵素は参照配列の配列番号：１とアラインする炭水化物エステラーゼファミリー７（ＣＥ−７）シグナチャーモチーフを有し、該シグナチャーモチーフは以下：
ｉ）配列番号：１の１１８−１２０位に対応する部位のＲＧＱモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の１８６−１９０位に対応する部位のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の３０３−３０４位に対応する部位のＨＥモチーフ；
を含み、ならびに
第２チャンバーは少なくとも１つのアシルドナー基質を含み、該基質は以下：
ｉ）構造：
「Ｘ」ｍＲ５
［式中、Ｘは、式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり
Ｒ６は、所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分枝鎖状または環状ヒドロカルビル部分であり、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６がＣ２〜Ｃ７である場合、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
Ｒ５は、所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状、分枝鎖状、または環状ヒドロカルビル部分または５員環状ヘテロ芳香族部分または６員環状芳香族またはヘテロ芳香族部分であり；ここで、Ｒ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸を含み、ここで、Ｒ５は、所望により、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
ｍは、１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有するエステル、ここで、該エステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；
ｉｉ）構造：
【化１】
2015509080.tif 000018
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有するグリセリド；
ｉｉｉ）式：
【化２】
2015509080.tif 000019
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであって、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分枝鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１又はそれ以上のエステル；および
ｉｖ）アセチル化単糖、アセチル化二糖およびアセチル化多糖からなる群より選択されるアセチル化糖類
からなる群より選択され、
ここで、第１チャンバーを圧迫した際に該チャンバー間の１つ又はそれ以上のバリアが壊され、該低粘度溶液が過酸化物源およびアシルドナー基質と混ざり、過加水分解活性を有する該酵素が該過酸化物源から放出される過酸化物と該アシルドナー基質との反応を触媒して過酸を形成するように、第２チャンバーまたは所望による更なるチャンバーは過酸化物源を含み；ならびに
該パッケージは開封手段、例えば該パッケージの開封を可能にし、前記混合物を分配できる出口を与えることができる刻み目を付けた領域、キャップまたはプラグを有する、パッケージ。
【請求項２】
過加水分解活性を有する該酵素が、
ａ）配列番号：１；および
ｂ）配列番号：１と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１記載のパッケージ。
【請求項３】
過加水分解活性を有する該酵素が、該酵素のＮ末端もしくはＣ末端に融合された結合ドメインをさらに含み、該結合ドメインが口腔組織に対する親和性を有する、請求項１または２記載のパッケージ。
【請求項４】
口腔組織に対する親和性を有する該結合ドメインが、配列番号：１７８〜１９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、前記いずれかのパッケージ。
【請求項５】
過加水分解活性を有する該酵素が、口腔組織に対する親和性を有し、かつ配列番号：２および配列番号：２と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記いずれかのパッケージ。
【請求項６】
第２チャンバー中の物質が粉末形態である、前記請求項のいずれかに記載のパッケージ。
【請求項７】
過酸化物源が、過酸化尿素、ポリビニルピロリドン過酸化水素複合体、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウムおよび金属過酸化物、例えば過酸化亜鉛および過酸化カルシウムから選択される固体過酸化物である、前記請求項のいずれか記載のパッケージ。
【請求項８】
混合および過酸の形成の際に、過酸を含む押出可能なゲルが前記溶液およびゲル化剤により形成され、次いで押出可能な該ゲルが押出され、歯を白くするのに十分な時間歯の表面に適用されるように、第２チャンバーがゲル化剤を含む、前記請求項のいずれか記載のパッケージ。
【請求項９】
ゲル化剤が粉末形態である、前記請求項のいずれか記載のパッケージ。
【請求項１０】
ゲル化剤が、カルボマーゲル化剤、多糖類樹脂、加工食品用デンプン、動物もしくは魚ベースのゼラチン、シリカ、およびその２又はそれ以上の組合せから選択される、請求項９記載のパッケージ。
【請求項１１】
前記壊れやすいバリアを傷つけ、該２つのチャンバーの内容物を混合させたときに、過酸化物およびアセチル含有化合物がペルヒドロラーゼ活性を有する酵素の存在下で反応し、前記溶液および前記ゲル化剤により形成される押出可能なゲル中で過酸を形成するように、
ａ．該低粘度溶液が緩衝剤をさらに含み、および
ｂ．第２チャンバーがゲル化剤、過酸化物源およびアセチル含有化合物をすべて粉末形態で含む、前記請求項のいずれかに記載のパッケージ。
【請求項１２】
保管時に第２パートから物理的に隔てられ、使用直前に第２パートと合わされる第１パートを含む複数パートのオーラルケア組成物であって、第１パートが過加水分解活性を有する酵素を含み、該酵素は参照配列の配列番号：１とアラインする炭水化物エステラーゼファミリー７（ＣＥ−７）シグナチャーモチーフを有し、該シグナチャーモチーフは以下：
ｉ）配列番号：１の１１８−１２０位に対応する部位のＲＧＱモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の１８６−１９０位に対応する部位のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の３０３−３０４位に対応する部位のＨＥモチーフ；
を含み、ならびに
第２パートは過酸化物源および少なくとも１つのアシルドナー基質を含み、該基質は以下：
ｉ）構造：
「Ｘ」ｍＲ５
［式中、Ｘは、式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり
Ｒ６は、所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分枝鎖状または環状ヒドロカルビル部分であり、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６がＣ２〜Ｃ７である場合、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
Ｒ５は、所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状、分枝鎖状、または環状ヒドロカルビル部分または５員環状ヘテロ芳香族部分または６員環状芳香族またはヘテロ芳香族部分であり；ここでＲ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸を含み、ここで、Ｒ５は、所望により、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
ｍは、１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有するエステル、ここで、該エステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；
ｉｉ）構造：
【化３】
2015509080.tif 000020
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有するグリセリド；
ｉｉｉ）式：
【化４】
2015509080.tif 000021
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであって、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分枝鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１又はそれ以上のエステル；および
ｉｖ）アセチル化単糖、アセチル化二糖およびアセチル化多糖からなる群より選択されるアセチル化糖類
からなる群より選択され；ならびに
ここで、該過酸化物源および少なくとも１つの該アシルドナー基質は、過加水分解活性を有する該酵素の存在下で反応して過酸を形成する、オーラルケア組成物。
【請求項１３】
過酸化物源が、過酸化尿素、ポリビニルピロリドン過酸化水素複合体、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウムおよび金属過酸化物から選択される固体過酸化物源である請求項１２記載のオーラルケア組成物。
【請求項１４】
過酸化物源が、過酸化尿素またはポリビニルピロリドン過酸化水素複合体である、請求項１２または請求項１３記載のオーラルケア組成物。
【請求項１５】
ａ．請求項１記載のパッケージまたは請求項１２記載の複数パートのオーラルケア組成物を、前記異なるチャンバーまたはパートにおける物質をそれぞれ合わせることにより活性化すること；および
ｂ．かくして得られた混合物の有効量を、歯を白くするのに十分な時間、歯に適用することを含む、歯をホワイトニングする方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、ここに引用してその全体を援用する、２０１１年１２月１９日に出願された米国特許出願第６１／５７７,５２９号に対する優先権を主張する。
【０００２】
（背景技術）
成分を混合した場合、例えば長期の保存に対してあまりに不安定な場合があるため、使用前まで配合成分を隔てた状態に保つことが望ましいことがしばしばある。このような場合には、効率的で単純な方法により使用時に該配合成分を混合できることが望ましい。
【０００３】
配合物成分を隔てた状態に保つことが望ましい場合がある配合物の１つの例は、反応性成分、例えば過酸化物もしくはペルオキシ酸またはそれらの前駆体を含む歯のホワイトニング配合物である。例えば、ヒトは、Ａ＋ＢまたはＡ＋Ｂ＋Ｃを組合せて不安定な漂白剤Ｘを得ることを望み得るが、ＡおよびＢをその時点まで隔てた状態にする。使用時の混合は迅速でなければならず、漂白剤Ｘの歯牙表面への拡散は効率的でなければならない点で、困難が生じる。残念なことに、複数のゲルまたは他の中等度の粘着性物質を組み合わせることは、一般に、すばやく化学製品を混合する効率的なやり方でない；一般消費者が手で混合する場合、それは、よく混合された試料領域と十分に混合されていない試料領域をもたらすであろう。この課題は、ヒトが２つの収納された粘性塗料を手で単純に混合すると、容易に理解される：効率的な２色のブレンドというより、むしろ層流により隣接した縞に色が表れることとなる。直接的にこの課題を解消するためには、一般の使用者がそのタスクに費やすであろう時間と労力よりも多くの時間と混合の労力を要するが、反応種Ｘは数分以内に壊れ始めるような方法は役に立たないであろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
かくして、成分を使用時点で効率的かつ効果的に合することができる製品についての要求がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（概要）
本発明は、複数チャンバーシステムであって、１つのチャンバーが低粘度溶液を含み、他のチャンバーが液体、粉末または粉末の混合物を含み、該チャンバー（chambers）は壊れやすい又は易裂性のバリアにより隔てられ、それで１つのチャンバーを圧迫した（squeezing）際に、該バリアが壊れ、該チャンバー内の成分が混合され、溶液、エマルション、懸濁液または押出可能（extrudable）なゲルが形成されることとなり、それらは、第２のチャンバー中の出口を通じて分配でき、ここで、該低粘度溶液は炭水化物エステラーゼ（carbohydrate esterase）ファミリー７シグナチャーモチーフを含有するペルヒドロラーゼ活性を有するタンパク質を含み、および他のチャンバー（単独または複数）はアシルドナー、例えばカルボン酸エステルおよび過酸化物源を含有し、それで該チャンバーの内容物を混合する際に、ペルヒドロラーゼ活性を有するタンパク質が過酸化物源により放出された過酸化物とアシルドナーとの間の反応を触媒し、過酸を形成することとなる、複数チャンバーシステムを提供する。歯牙に適用すると、かかる過酸は歯牙を漂白するのに非常に効果的であり、効果的な漂白作用が短期間に低過酸レベルで達成され得る。
【０００６】
特定の実施形態において、１つのチャンバーは、過加水分解活性（perhydrolytic activity）を有するタンパク質（すなわち、ファミリー７炭水化物エステラーゼ）を含有する低粘度溶液を含み、および他のチャンバーはゲル化剤、過酸化物およびカルボン酸エステル化合物をすべて粉末形態で含み、これで前記バリアを壊して該チャンバーの内容物を混合可能としたときに、前記過酸化物およびカルボン酸エステルが反応でき、該反応はペルヒドロラーゼにより触媒され、該溶液およびゲル化剤によって形成される押出可能なゲル中で過酸を形成し、次いで、押出可能な該ゲルは押出されて、例えばトレイまたはストリップを用いて、歯牙を漂白するのに十分な時間、例えば１０〜３０分の間歯に適用できる。
【０００７】
本発明の応用性のさらなる領域は、以下に提供される詳しい説明から明らかとなるであろう。詳しい説明および具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すものであるが、単なる例示を目的とするものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではないことは理解されるべきである。
【０００８】
（生物学的配列の簡単な説明）
以下の配列は３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§１．８２１−１．８２５（「ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列の開示を含む特許出願についての要件−配列規則」）を満足しており、世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ）標準ＳＴ．２５（２００９）および欧州特許条約（ＥＰＣ）および特許協力条約（ＰＣＴ）規則５．２および４９．５（ａの２）、および実施細則の第２０８号および付属書Ｃの配列表の要件に合致する。ヌクレオチドおよびアミノ酸配列データで用いられる記号およびフォーマットは３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２に記載された規則を満足する。
【０００９】
配列番号：１は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  Ｃ２７７５バリアント・ペルヒドロラーゼのアミノ酸配列である。
【００１０】
配列番号：２は、（Ｂｕｔｔｅｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．に対する国際特許出願公開番号ＷＯ  ２０１２／０８７９７０Ａ２においては「ＥＺ−７」としても知られた）歯結合ドメインに結合されたＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  Ｃ２７７Ｓバリアント・ペルヒドロラーゼを含む融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【００１１】
配列番号：３は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭからのセファロスポリンＣデアセチラーゼをコードする核酸配列である。
【００１２】
配列番号：４は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭからのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１３】
配列番号：５は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ｓｕｂｓｐ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ株１６８からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１４】
配列番号：６は、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）６６３３ＴＭからのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１５】
配列番号：７は、Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）１４５８０ＴＭからのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００１６】
配列番号：８は、Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ  ＰＳ２１３からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００１７】
配列番号：９は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ  ＡＴＣＣ（登録商標）２７４０５ＴＭからのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００１８】
配列番号：１０は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａからのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００１９】
配列番号：１１は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２０】
配列番号：１２は、Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．ＪＷ／ＳＬ  ＹＳ４８５からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００２１】
配列番号：１３は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈａｌｏｄｕｒａｎｓ  Ｃ−１２５からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００２２】
配列番号：１４は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ  ＫＳＭ−Ｋ１６からのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００２３】
配列番号：１５は、（ここに引用してその全体を援用する）米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からのＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａアセチルキシランエステラーゼ・バリアントのアミノ酸配列であり、ここで、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２４】
配列番号：１６は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からのＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８アセチルキシランエステラーゼ・バリアントのアミノ酸配列であり、ここで、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２５】
配列番号：１７は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からのＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｌｅｔｔｉｎｇａｅアセチルキシランエステラーゼ・バリアントの推定アミノ酸配列であり、ここで、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２６】
配列番号：１８は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からのＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｐｅｔｒｏｐｈｉｌａアセチルキシランエステラーゼ・バリアントのアミノ酸配列であり、ここで、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２７】
配列番号：１９は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からの「ＲＱ２（ａ）」に由来するＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．ＲＱ２アセチルキシランエステラーゼ・バリアントのアミノ酸配列であり、位置２７７におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２８】
配列番号：２０は、米国特許出願公開第２０１０−００８７５２９号からの「ＲＱ２（ｂ）」に由来するＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．ＲＱ２アセチルキシランエステラーゼ・バリアントのアミノ酸配列であり、位置２７８におけるＸａａ残基はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒである。
【００２９】
配列番号：２１は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｌｅｔｔｉｎｇａｅアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３０】
配列番号：２２は、Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｐｅｔｒｏｐｈｉｌａアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３１】
配列番号：２３は、「ＲＱ２（ａ）」として記載されたＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．ＲＱ２からの第一のアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３２】
配列番号：２４は、「ＲＱ２（ｂ）」として記載されたＴｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｓｐ．ＲＱ２からの第二のアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３３】
配列番号：２５は、Ｔｈｅｒｍｏａｎｅａｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｍセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列である。
【００３４】
配列番号：２６は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＡＢＸ７５６３４．１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３５】
配列番号：２７は、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｌｏｔｉ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＢＡＢ５３１７９．１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３６】
配列番号：２８は、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＡＡＦ７０２０２．１）からのアセチルキシランエステラーゼのアミノ酸配列である。
【００３７】
配列番号：２９〜１６３は、口腔表面に対して親和性を有するペプチドのアミノ酸配列である。
【００３８】
配列番号：１６４〜１７７は、ペプチドリンカー／スペーサーのアミノ酸配列である。配列番号：１７８〜１９７は、ペプチドリンカーを介して、口腔表面に対して親和性を有する結合ドメインに結合された過加水分解酵素を含む種々の標的化ペルヒドロラーゼ融合構築体のアミノ酸配列である（Ｂｕｔｔｅｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．に対する国際特許出願公開番号ＷＯ  ２０１２／０８７９７０Ａ２参照）。
【００３９】
本発明は、詳しい説明および添付する図面からより完全に理解されることとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、本発明に係る２つのチャンバーのパッケージであり、該パッケージは周辺部（１）まわりを加熱密閉されており、そして、壊れやすいシール（３）により隔てられた、液体成分を含む第１チャンバー（２）および粉末成分を含む第２チャンバー（４）を有し、これで第１チャンバー（２）を圧迫したときに、該壊れやすいシール（３）が破れ、該溶液が第２チャンバー（４）に流れて粉末と混合し、結果として得られる混合液が、次いで、刻み目が付けられたエッジ（５）を壊すことによって分配され、該混合液がノズル（６）から流れ出る又は絞り出されることが可能となる、本発明の１つの実施形態を表す。
【図２】図２は、図１で説明されるように、使用直前の成分の混合を可能とするが、製品を分配するために消費者により開封可能なノズルを有する３つのチャンバーのパッケージを利用する、本発明の他の実施形態を表す。この実施形態において、パッケージは、第１チャンバー（７）、第２チャンバー（８）、第３チャンバー（９）を含み、該チャンバーは壊れやすいシール（３）により隔てられ、および混合後の物質を分配するための離脱（break-away）チップ（６）を有するノズルを含む。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
（詳しい説明）
以下の好ましい実施形態（複数の実施形態）に関する説明は、性質上単なる例示であり、いかようにも本発明、その応用もしくは使用を限定することを意図するものではない。
【００４２】
本明細書中で用いるように、用語「基質」、「適当な基質」、「アシルドナー」、および「カルボン酸エステル基質」は、具体的には：
（ａ）構造：
「Ｘ」ｍＲ５
［式中、Ｘは式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり；
Ｒ６は、所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分枝鎖状または環状ヒドロカルビル部分であり、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６がＣ２〜Ｃ７である場合、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
Ｒ５は、所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状、分枝鎖状、または環状ヒドロカルビル部分または５員環状ヘテロ芳香族または６員環状芳香族またはヘテロ芳香族部分であり；ここでＲ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基を含み、ここで、Ｒ５は、所望により、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
ｍは、１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有する１又はそれ以上のエステル、
ここで、該１又はそれ以上のエステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；または
（ｂ）構造：
【化１】
2015509080.tif 000002
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有する１又はそれ以上のグリセリド；または
（ｃ）式：
【化２】
2015509080.tif 000003
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであって、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分枝鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１又はそれ以上のエステル；または
（ｄ）１又はそれ以上のアセチル化単糖、アセチル化二糖、またはアセチル化多糖；または
（ｃ）（ａ）〜（ｄ）のいずれかの組合せ
を相互交換に指す。
【００４３】
本明細書中で用いるように、用語「過酸」は、ペルオキシ酸、ペルオキシカルボン酸、ペルオキシ酸、ペルオキシカルボン酸およびペルオキソイック酸（ｐｅｒｏｘｏｉｃ  ａｃｉｄ）と同義である。
【００４４】
本明細書中で用いるように、用語「過酢酸」は「ＰＡＡ」と省略され、ペルオキシ酢酸、エタンペルオキシ酸およびＣＡＳ登録番号７９−２１−０の全ての他の同義語と同義である。
【００４５】
本明細書中で用いるように、用語「モノアセチン」は、グリセロールモノアセタート、グリセリンモノアセタート、およびグリセリルモノアセタートと同義である。
【００４６】
本明細書中で用いるように、用語「ジアセチン」はグリセロールジアセタート：グリセリンジアセタート、グリセリルジアセタートおよびＣＡＳ登録番号２５３９５−３１−７の全ての他の同義語と同義である。
【００４７】
本明細書中で用いるように、用語「トリアセチン」はグリセリントリアセタート：グリセロールトリアセタート、グリセリルトリアセタート、１，２，３−トリアセトキシプロパン；１，２，３−プロパントリオールトリアセタート、およびＣＡＳ登録番号１０２−７６−１の全ての他の同義語と同義である。
【００４８】
本明細書中で用いるように、用語「アセチル化糖」および「アセチル化糖類」とは、少なくとも１つのアセチル基を含む単糖、二糖および多糖を指す。例としては、限定されるものではないが、グルコースペンタアセタート；キシローステトラアセタート；アセチル化キシラン；アセチル化キシラン断片；β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセタート；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール；およびトリ−Ｏ−アセチル−グルカールが挙げられる。
【００４９】
本明細書中で用いるように、用語「ヒドロカルビル」、「ヒドロカルビル基」、および「ヒドロカルビル部分」は、一重、二重、または三重炭素間結合によって、および／またはエーテル結合によって連結され、かつ従って水素原子で置換された炭素原子の直鎖状、分枝鎖状または環状配置を意味する。そのようなヒドロカルビル基は脂肪族および／または芳香族であってよい。ヒドロカルビル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、ペンチル、シクロペンチル、メチルシクロペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、ベンジル、およびフェニルが挙げられる。好ましい実施形態において、ヒドロカルビル部分は、一重炭素間結合によって、および／またはエーテル結合によって連結され、かつ従って水素原子で置換された炭素原子の直鎖状、分枝鎖状または環状配置である。
【００５０】
本明細書中で用いられるように、１，２−エタンジオール；１，２−プロパンジオール；１，３−プロパンジオール；１，２−ブタンジオール；１，３−ブタンジオール；２，３−ブタンジオール；１，４−ブタンジオール；１，２−ペンタンジオール；２，５−ペンタンジオール；１，５−ペンタンジオール；１，６−ペンタンジオール；１，２−ヘキサンジオール；２，５−ヘキサンジオール；１，６−ヘキサンジオール；およびそれらの混合物の、用語「モノエステル」および「ジエステル」とは、ＲがＣ１〜Ｃ７直鎖状ヒドロカルビル部分である式ＲＣ（Ｏ）Ｏの少なくとも１つのエステル基を含む該化合物を指す。１つの実施形態において、カルボン酸エステル基質はプロピレングリコールジアセタート（ＰＧＤＡ）、エチレングリコールジアセタート（ＥＤＧＡ）、およびそれらの混合物からなる群より選択される。
【００５１】
本明細書中で用いるように、用語「プロピレングリコールジアセタート」は、１，２−ジアセトキシプロパン、プロピレンジアセタート、１，２−プロパンジオールジアセタートおよびＣＡＳ登録番号６２３−８４−7の他の全ての同義語と同義である。
【００５２】
本明細書中で用いるように、用語「エチレングリコールジアセタート」は、１，２−ジアセトキシエタン、エチレンジアセタート、グリコールジアセタートおよびＣＡＳ登録番号１１１−５５−７の全ての他の同義語と同義である。
【００５３】
本明細書中で用いるように、用語「適当な酵素反応混合物」、「適当な反応成分」、「適当な水性反応混合物」、「反応混合物」、および「過酸−生成成分」とは、物質および水を指し、そこでは、反応体および過加水分解酵素触媒は接触する。過酸−生成成分は、少なくとも、当該過加水分解酵素が（所望により、体表面に標的化された融合タンパク質の形態である）少なくとも１つのＣＥ−７ペルヒドロラーゼ、少なくとも１つの適当なカルボン酸エステル基質、ペルオキシゲン（peroxygen）源および水を含むであろう。
【００５４】
本明細書中で用いるように、用語「過加水分解（perhydrolysis）」は、過酸を形成するための選択された基質と過酸化物との反応と定義される。典型的には、無機過酸化物は、触媒の存在下で選択された基質と反応して、ペルオキシカルボン酸を生じる。本明細書中で用いるように、用語「化学的過加水分解」は、基質（ペルオキシカルボン酸前駆体）が過酸化水素源と合わせられる過加水分解反応を含み、そこでは、ペルオキシカルボン酸は酵素触媒の不存在下で形成される。本明細書中で用いられるように、用語「酵素的過加水分解」は、カルボン酸エステル基質（酸前駆体；「アシルドナー」）が過酸化水素源および水と合わせられ、それにより、酵素触媒が過酸の形成を触媒する過加水分解反応を含む。
【００５５】
本明細書中で用いるように、用語「ペルヒドロラーゼ活性」とは、タンパク質の単位質量（例えば、ミリグラム）、乾燥細胞重量、または固定化酵素重量当たりの触媒活性を指す。
【００５６】
本明細書中で用いるように、「酵素活性の１単位」または「活性の１単位」または「Ｕ」は、特定の温度における分当たりの１μモルのペルオキシカルボン酸生成物の生成に必要なペルヒドロラーゼ活性の量と定義される。
本明細書中で用いるように、用語「酵素触媒」および「ペルヒドロラーゼ活性」とは、過加水分解活性を有する酵素を含む触媒を指し、それは、全微生物細胞、透過性微生物細胞、微生物細胞抽出物の１又はそれ以上の細胞成分、部分的に精製された酵素、または精製された酵素の形態であってよい。酵素触媒は（ＰＥＧ化によって、または架橋試薬との反応によるなどして）化学的に修飾されていてもよい。ペルヒドロラーゼ触媒は、当業者によく知られた方法を用いて可溶性または不溶性支持体に固定化されていてもよい；例えば、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｓ；編集者Ｇｏｒｄｏｎ  Ｆ．Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ；Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，ＵＳＡ；１９９７参照。
【００５７】
本明細書中で用いるように、「アセチルキシランエステラーゼ」とは、アセチル化キシランおよび他のアセチル化糖類の脱アセチル化を触媒する酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７２；ＡＸＥｓ）を指す。
【００５８】
本明細書中で用いるように、用語「セファロスポリンＣデアセチラーゼ」および「セファロスポリンＣアセチルヒドロラーゼ」とは、セファロスポリンＣおよび７−アミノセファロスポラニン酸のようなセファロスポリン類の脱アセチル化を触媒する酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．１．４１）を指す（Ｍｉｔｓｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６１（６）：２２２４−２２２９）。有意な過加水分解活性を有するいくつかのセファロスポリンＣデアセチラーゼのアミノ酸配列をここに提供する。
【００５９】
本明細書中で用いるように、用語「Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭ」とは、国際寄託アクセックョン番号ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭを有するＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された細菌細胞を指す。本明細書中に記載されるように、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＡＴＣＣ（登録商標）３１９５４ＴＭからの有意なペルヒドロラーゼ活性を有する酵素は配列番号：４として提供される（米国特許出願公開第２０１０−００４１７５２号参照）。
【００６０】
本明細書中で用いるように、用語「Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８」とは、アセチルキシランエステラーゼ活性を有すると報告されている細菌細胞を指す（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ＮＰ＿２２７８９３．１；米国特許出願公開第２００８−０１７６２９９号参照）。Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８からのペルヒドロラーゼ活性を有する酵素のアミノ酸配列は配列番号：１１として提供される。Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＭＳＢ８ペルヒドロラーゼのバリアントは、配列番号：１および１６として提供される。
【００６１】
本明細書中で用いるように、「単離核酸分子」、「単離ポリヌクレオチド」、および「単離核酸断片」は相互交換可能に用いられ、所望により、合成、非−天然または改変ヌクレオチド塩基を含有していてもよい一本鎖または二本鎖であるＲＮＡまたはＤＮＡのポリマーを指す。ＤＮＡのポリマーの形態である単離核酸分子は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたは合成ＤＮＡの１又はそれ以上のセグメントを含んでよい。
【００６２】
用語「アミノ酸」とは、タンパク質またはポリペプチドの塩基性化学構造単位を指す。以下の略語を特定のアミノ酸を確認するために本明細書中で用いる：
【数１】
2015509080.tif 000004
【００６３】
本明細書中で用いるように、「単離された核酸分子」、「単離されたポリヌクレオチド」および「単離された核酸断片」は相互交換可能に用いられ、また、ＲＮＡのポリマーまたは  を示す。本明細書中で用いるように、用語「シグナチャーモチーフ」および「診断モチーフ」とは、規定された活性を有する酵素のファミリー間に共有された保存された構造を指す。シグナチャーモチーフは、基質の規定されたファミリーに対して同様な酵素活性を有する構造的に関連する酵素のファミリーを定義および／または同定するのに用いることができる。シグナチャーモチーフは、単一の連続アミノ酸配列、またはシグナチャーモチーフを一緒に形成する不連続な保存されたモチーフのコレクションであり得る。典型的には保存されたモチーフはアミノ酸配列によって表される。１つの実施形態において、本発明の組成物および方法で用いられる過加水分解酵素は、ＣＥ−７炭水化物エステラーゼシグナチャーモチーフを含む。
【００６４】
本明細書中で用いるように、用語「配列分析ソフトウェア」とは、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列分析で有用ないずれのコンピュータアルゴリズムまたはソフトウェアプログラムも指す。「配列分析ソフトウェア」は商業的に入手可能であるかまたは独立して開発され得る。典型的な配列分析ソフトウェアとしては、限定されるものではないが、プログラムのＧＣＧスイート（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ９．０，Ａｃｃｅｌｒｙｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０））、およびＤＮＡＳＴＡＲ（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．１２８８Ｓ．Ｐａｒｋ  Ｓｔ．  Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ５３７１５  ＵＳＡ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ（例えば、バージョン１．８３；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２（２２）：４６７３−４６８０（１９９４））、およびＦＡＳＴＡプログラムを取り込んだＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．［Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐ．］（１９９４），Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｄａｔｅ  １９９２，１１１−２０．編集者：Ｓｕｈａｉ  Ｓａｎｄｏｒ．出版社：Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｂｅｔｈｅｓａｄａ，ＭＤ）およびＳｅｑｕｅｎｃｈｅｒ  ｖ．４．０５が挙げられるであろう。本出願との関係では、配列分析ソフトウェアが分析のために用いられる場合、分析の結果は、特記しない限り、参照されたプログラムの「デフォルト値」に基づくであろうことは理解されるであろう。本明細書中で用いるように、「デフォルト値」は、元来、最初に初期化された場合にソフトウェアにロードされるソフトウェア製造業者によって設定された値またはパラメータのいずれかの組を意味するであろう。
【００６５】
用語「体表面」とは、有益剤（benefit agnet）、例えば過酸有益剤に対して標的として働くことができるヒト身体のいずれの表面も指す。本発明の方法および組成物は、オーラルケア適用および製品に向けられる。それ自体、体表面は口腔物質／表面を含む。１つの実施形態において、口腔物質は歯のエナメル質を含む。
【００６６】
本明細書中で用いるように、用語「歯のホワイトニング」および「歯の漂白」は相互交換可能に用いられて、歯または複数の歯の白色度の改良（例えば、白くすること）を指す。
【００６７】
本明細書中で用いるように、歯における「固有の汚れ」とは、エナメル質およびその下に存在する象牙質内の色原体から得られた色を指す。ヒトの歯の固有の色は、エナメル質の薄化およびその下にある黄色い象牙質の暗色化のため、加齢と共により黄色くなる傾向がある。固有の汚れの除去は、通常、エナメル質に浸透し、固有の色原体を脱色する過酸化物または他の酸化性化学物質の使用を必要とする。
【００６８】
固有の汚れとは対照的に、外来性色素生成物質が、通常、歯を天然で被覆するペリクル内でエナメル質に結合すると、歯の表面に「外来性汚れ」が形成される。多くの人々は、自己の歯の上にある程度の見苦しい外来性汚れを経時的に蓄積する。この汚れプロセスは：（１）コーヒー、お茶、または赤ワインのようなタンニン−含有食品および飲料の摂取；（２）タバコ製品の使用；および／または（３）ある種のカチオン性物質（例えば、スズ、鉄、およびクロルヘキシジン）への暴露のような因子によって促進される。これらの物質はエナメル質のヒドロキシアパタイト構造に接着する傾向があり、これは、歯の変色および歯の白さの同時低下に導く。何年にもわたって、固有の汚れはエナメル質層に浸透でき、その結果、固有の汚れがもたらされる。
【００６９】
本明細書中で用いるように、用語「汚れ除去」または「汚れを除去する」とは、口腔表面から汚れを除去するプロセスを指す。汚れは、固有の汚れ、外来性汚れ、またはそれらの組合せであってよい。
【００７０】
本明細書中で用いるように、「ペルヒドロラーゼ酵素の有効量」とは、具体的な適用で必要とされる酵素活性を達成するのに必要なペルヒドロラーゼ酵素の量を指す。そのような有効量は、当業者によって容易に確認され、それは、用いる特定の酵素バリアントのような多くの因子に基づく。
【００７１】
本明細書中で用いるように、用語「ペルオキシゲン源」および「ペルオキシゲンの源」とは、限定されるものではないが、過酸化水素、過酸化水素アダクト（例えば、尿素−過酸化水素アダクト（過酸化カルバミド））、過ホウ酸塩、および過炭酸塩を含めた、水性溶液中にある場合、約１ｍＭ以上の濃度で過酸化水素を生じさせることができる化合物を指す。本明細書中に記載するように、本発明のホワイトニングストリップにおけるペルオキシゲン源は顆粒状粒子の形態であり、ここで、利用者は顆粒状過酸化物粒子を水和させて、有効量の過酸化水素を放出させる。本明細書中に記載されるように、水性反応配合物中のペルオキシゲン化合物によって供された過酸化水素の濃度は、最初、反応成分を合した際には、少なくとも０．１ｍＭ以上である。１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも０．５ｍＭである。１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも１ｍＭである。もう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも１０ｍＭである。もう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも１００ｍＭである。もう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも２００ｍＭである。もう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は少なくとも５００ｍＭ以上である。なおもう１つの実施形態において、水性反応配合物における過酸化水素濃度は１０００ｍＭ以上である。配合物中の酵素基質、例えば、トリグリセリドに対する過酸化水素のモル比率（Ｈ２Ｏ２：基質）は、約０．００２〜２０、好ましくは約０．１〜１０、最も好ましくは約０．１〜１であってよい。
【００７２】
本明細書中で用いるように、用語「オリゴ糖」とは、グリコシド結合によって連結された２および少なくとも２４の間の単糖単位を含有する化合物を指す。用語「単糖」とは、実験式（ＣＨ２Ｏ）ｎの化合物を指し、ここで、ｎ≧３であり、炭素骨格は分岐しておらず、１つを除いて各炭素原子はヒドロキシル基を含有し、残りの炭素原子は炭素原子１におけるアルデヒドまたはケトンである。用語「単糖」とは、細胞内環状ヘミアセタールまたはヘミケタール形態も指す。
【００７３】
本明細書中で用いるように、用語「水和可能な接着剤」とは、水和され得る接着性物質を指す。該水和可能な接着剤は、水和されるまでは、実質的に乾燥しており、かつ非−接着性である。水和に際して、水和可能な接着剤は歯の表面に結合するのに十分接着性となる。
【００７４】
本明細書中で用いるように、用語「有効量」とは、所望の効果を達成するのに必要な物質の量を指す。
【００７５】
本明細書中で用いるように、用語「水和するまで実質的に非−接着性である」とは、水和に先立って歯の表面に接着させるのに十分な接着強度の欠如を指す。
【００７６】
「配列同一性」とは、配列アライメント・プログラム、例えば、一般には、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ，Ｇｉｓｈ  Ｗ，Ｍｉｌｌｅｒ  Ｗ，Ｍｙｅｒｓ  ＥＷ，Ｌｉｐｍａｎ  ＤＪ，“Ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ”，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９９０）２１５（３）：４０３−４１０，およびＧｏｕｊｏｎ  Ｍ，ＭｃＷｉｌｌｉａｍ  Ｈ，Ｌｉ  Ｗ，Ｖａｌｅｎｔｉｎ  Ｆ，Ｓｑｕｉｚｚａｔｏ  Ｓ，Ｐａｅｒｎ  Ｊ，Ｌｏｐｅｚ  Ｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓａｅｒｃｈ（２０１０）３８  Ｓｕｐｐｌ：Ｗ６９５−９に記載された、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＷまたはＢＬＡＳＴを用いるアミノ酸同一性を意味する。
【００７７】
例えば、過酸化物との反応に際して過酸を形成するために本発明で用いられるアシルドナーは、（ｉ）所望により、ヒドロキシおよび／またはＣ１−４アルコキシで置換されていてもよい低級直鎖状または分枝鎖状アルキルカルボン酸を含めた、Ｃ２−１８カルボン酸、例えば、Ｃ２−６カルボン酸（例えば、酢酸）；（ｉｉ）それらの加水分解可能であって許容されるエステル（例えば、モノ−、ジ−、およびトリ−グリセリドおよびアシル化糖類）および（ｉｉｉ）それらの混合物の１又はそれ以上より選択される。例えば、アシルドナーとしては（時々、本明細書中においては、トリアセチンまたはグリセリントリアセタートと称される）１，２，３−トリアセトキシプロパンおよびアシル化糖類、例えば、アセチル化糖類が挙げられる。特定の実施形態においては、この使用のためのエステルは、例えば、２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有するエステルであってよい。
【００７８】
アシルドナーおよび／または酵素は、所望により、カプセル化されていてよい。天然および合成双方の、当該分野でよく知られた種々のカプセル化選択肢がある。加工デンプンおよびアラビアガムは特によく適している。というのは、それらは食品グレードであり、比較的安価であり、溶解するのが速く、かつかなり高いレベルの液状油を吸収できるからである。最終の粘度に対するいずれのインパクトも考慮される必要がある。
【００７９】
いくつかの実施形態において、顆粒は、神経を脱感作でき、または象牙質細管を閉塞できる抗感受性剤を含む。いくつかの実施形態において、抗感受性剤は、カリウムイオン源、シリケート、第一スズイオン源、塩基性アミノ酸、クレイ、およびそれらの組合せより選択される。いくつかの実施形態において、カリウムイオン源は経口的に許容されるカリウム塩であって、象牙質の感度を低下させるのに有効な量で存在させる。いくつかの実施形態において、カリウムイオン源は、塩化カリウム、硝酸カリウムおよびそれらの組合せより選択される。いくつかの実施形態において、塩基性アミノ酸はアルギニンである。いくつかの実施形態において、塩基性アミノ酸はアルギニンリン酸、重炭酸アルギニン、および塩酸アルギニンより選択される。いくつかの実施形態において、シリケートはケイ酸カルシウムである。
【００８０】
ＣＥ−７ペルヒドロラーゼ
本発明の組成物および方法は、酵素の炭水化物ファミリーエステラーゼファミリー７（ＣＥ−７ファミリー）のメンバーとして構造的に分類される過加水分解活性を有する酵素を含む（Ｃｏｕｔｉｎｈｏ，Ｐ．Ｍ．，Ｈｅｎｒｉｓｓａｔ，Ｂ．“Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ａｃｔｉｖｅ  ｅｎｚｙｎｅｓ：ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｄｅｔａｂａｓｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ”ｉｎ  Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｈ．Ｊ．Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｇ．Ｄａｖｉｅｓ，Ｂ．Ｈｅｎｒｉｓｓａｔ  ａｎｄ  Ｂ．Ｓｖｅｎｓｓｏｎ編，（１９９９）Ｔｈｅ  Ｒｏｙａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ｐｐ．３−１２参照）。酵素のＣＥ−７ファミリーは、ペルオキシゲンの源と合わせると、種々のカルボン酸エステル基質からペルオキシカルボン酸を生じさせるのに特に有効であることが示されている（各々、ここに引用して援用する、ＤｉＣｏｓｉｍｏ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第７，７９４，３７８号；第７，９５１，５６６号；第７，７２３，０８３号；および第７，９６４，３７８号および米国特許出願公開第２００８−０１７６２９９号、第２０１０−００８７５２９号、第２０１１−００８１６９３号、および第２０１１−０２３６３３５号）。
【００８１】
ＣＥ−７ファミリーのメンバーはセファロスポリンＣデアセチラーゼ（ＣＡＨｓ；Ｅ．Ｃ．３．１．１．４１）およびアセチルキシランエステラーゼ（ＡＸＥｓ；Ｅ．Ｃ．３．１．１．７２）を含む。ＣＥ−７エステラーゼファミリーのメンバーは保存されたシグナチャーモチーフを共有する（Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３３０：５９３−６０６（２００３））。ＣＥ−７シグナチャーモチーフ（「ＣＥ−７ペルヒドロラーゼ」）および／または実質的に同様な構造を含むペルヒドロラーゼは、本明細書中に記載された組成物および方法で用いるのに適している。実質的に同様な生物学的分子を同定するための手段は当該分野でよく知られている（例えば、配列アライメント・プロトコル、核酸ハイブリダイゼーションおよび／または保存されたシグナチャーモチーフの存在）。１つの態様において、ペルヒドロラーゼは、ＣＥ−７シグナチャーモチーフおよび本明細書中に提供された配列の１つに対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも３３％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも４２％、より好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を含む酵素を含む。
【００８２】
本明細書中で用いるように、フレーズ「酵素はＣＥ−７酵素として構造的に分類される」、「ＣＥ−７ペルヒドロラーゼ」または「炭水化物エステラーゼファミリー７酵素として構造的に分類される」は、構造的にＣＥ−７炭水化物エステラーゼとして分類される過加水分解活性を有する酵素を指すのに用いられるであろう。酵素のこのファミリーは、シグナチャーモチーフの存在によって定義することができる（Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，前掲）。ＣＥ−７エステラーゼに対するシグナチャーモチーフは、３つの保存されたモチーフ（参照配列の配列番号：１に対する残基位置ナンバリング；Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａペルヒドロラーゼのＣ２７７Ｓバリアント）を含む。
【化３】
2015509080.tif 000005
【００８３】
典型的には、アミノ酸残基位置１８７におけるＸａａはグリシン、アラニン、プロリン、トリプトファン、またはスレオニンである。触媒三塩基に属する３つのアミノ酸残基のうちの２つは太文字で示す。１つの実施形態において、アミノ酸残基位置１８７におけるＸａａはグリシン、アラニン、プロリン、トリプトファン、およびスレオニンからなる群より選択される。
【００８４】
ＣＥ−７炭水化物エステラーゼファミリー内の保存されたモチーフのさらなる分析は、ＣＥ−７炭水化物エステラーゼファミリーに属するペルヒドロラーゼをさらに定義するのに用いることができる追加の保存されたモチーフ（配列番号：１のアミノ酸位置２７２〜２７４におけるＬＸＤ）の存在を示す。さらなる実施形態において、先に定義されたシグナチャーモチーフは：
【化４】
2015509080.tif 000006
と定義される追加の（第四の）保存されたモチーフを含むことができる。アミノ酸残基位置２７３におけるＸａａは、典型的には、イソロイシン、バリン、またはメチオニンである。第四のモチーフは触媒三塩基に属するアスパラギン酸残基（太文字）
【化５】
2015509080.tif 000007
を含む。
【００８５】
ＣＥ−７ペルヒドロラーゼは、少なくとも１つの体表面に対して親和性を有する少なくとも１つのペプチド成分を有する融合タンパク質の形態であってよい。１つの実施形態において、標的化ペルヒドロラーゼ（融合タンパク質）がＣＥ−７シグナチャーモチーフを含むかを判断するのに用いられる全てのアライメントは、体表面に対して親和性を有するペプチド成分無しの過加水分解酵素のアミノ酸配列に基づくであろう。
【００８６】
多数のよく知られたグローバル・アライメントアルゴリズム（すなわち、配列分析ソフトウェア）を用いて、ペルヒドロラーゼ活性を有する酵素を表す２以上のアミノ酸配列をアライン（align）させて、酵素が本発明のシグナチャーモチーフを含むかを判断することができる。アラインされた配列を参照配列（配列番号：１）と比較して、シグナチャー配列の存在を判断する。１つの実施態様において、参照アミノ酸配列（本明細書中で用いるように、ペルヒドロラーゼ配列（配列番号：１））を用いる（ＣＬＵＳＴＡＬＷのような）ＣＬＵＳＴＡＬアライメントを用いて、ＣＥ−７エステラーゼファミリーに属するペルヒドロラーゼを同定する。保存されたアミノ酸残基の相対的ナンバリングは、アラインした配列内の小さな挿入または欠失（例えば、典型的には、５アミノ酸以下）を説明するための参照アミノ酸配列の残基ナンバリングに基づく。
【００８７】
（参照配列と比較した場合の）本発明のシグナチャーモチーフを含む配列を同定するのに用いることができる他の適当なアルゴリズムの例としては、限定されるものではないが、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３−４５３）（１９７０）；グローバル・アライメントツール）およびＳｍｉｔｈ―Ｗａｔｅｒｍａｎ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−１９７（１９８１）；ローカル・アライメントツール）が挙げられる。１つの実施形態において、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアライメントはデフォルトパラメータを用いて実施される。適当なデフォルトパラメータの例としては、ＧＡＰオープンペナルティ＝１０およびＧＡＰ延長ペナルティ＝０．５であるＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスの使用が挙げられる。
【００８８】
１つの実施形態において、適当なペルヒドロラーゼとしては、ＣＥ−７シグナチャーモチーフ、および配列番号：１に対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、３３％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を含む酵素が挙げられる。
【００８９】
過加水分解活性を有する適当なＣＥ−７炭水化物エステラーゼの例としては、限定されるものではないが、配列番号：１、および４〜２８のようなアミノ酸配列を有する酵素が挙げられる。１つの実施形態において、該酵素は、１、１０、１１、１５、および１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００９０】
本明細書中で用いるように、用語「ＣＥ−７バリアント」、「バリアント・ペルヒドロラーゼ」または「バリアント（変種）」とは、ＣＥ−７シグナチャーモチーフおよび関連過加水分解活性が維持される限り、それからバリアントが導かれる対応する酵素（典型的には、野生型酵素）と比較した場合に、少なくとも１つのアミノ酸の付加、欠失、および／または置換をもたらす遺伝的修飾を有するＣＥ−７ペルヒドロラーゼを指すであろう。ＣＥ−７バリアント・ペルヒドロラーゼは、本発明の組成物および方法で用いることもできる。ＣＥ−７バリアントの例は、配列番号：１、１５、１６、１７、１８、１９、および２０として提供される。１つの実施形態において、バリアントは配列番号：１および１６を含むことができる。
【００９１】
当業者であれば、（シグナチャーモチーフを保有する）実質的に同様なＣＥ−７ペルヒドロラーゼ配列を本発明の組成物および方法で用いることもできるのを認識する。１つの実施形態において、実質的に同様な配列は、本明細書中で例示された配列に関連する核酸分子と、高度にストリンジェントな条件下で、ハイブリダイズするそれらの能力によって定義される。もう１つの実施形態において、配列アライメントアルゴリズムを用いて、本明細書中で提供されるＤＮＡまたはアミノ酸配列に対するパーセント同一性に基づいて実質的に同様な酵素を定義することができる。
【００９２】
本明細書中で用いるように、核酸分子は、第一の分子の一本鎖が適当な温度および溶液イオン強度の条件下で他の分子にアニールすることができる場合、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはＲＮＡのようなもう１つの核酸分子に「ハイブリダイズ可能」である。ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件がよく知られており、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．およびＲｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．，Ｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第三版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（２００１）に例示されている。温度およびイオン強度の条件は、ハイブリダイゼーションの「ストリンジェンシー」を決定する。ストリンジェンシー条件を調整して、かすかに関連する生物からの相同配列のような中程度の同様な配列から、密接に関連する生物からの機能的酵素を複製する遺伝子のような高度に同様な分子についてスクリーニングすることができる。ハイブリダイゼーション後洗浄は、典型的には、ストリンジェンシー条件を決定する。好ましい条件の１つの組は、室温にて１５分間の６×  ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳで出発し、次いで、４５℃にて３０分間、２×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳで反復し、続いて、５０℃にて３０分間、０．２×  ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳで２回反復する一連の洗浄を用いる。条件のより好ましい組は、より高い温度を用い、そこでは、洗浄は、０．２×  ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ中の最後の２回の３０分間の洗浄の温度を６０℃まで上昇させる以外は前記と同一である。高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のもう１つの好ましい組は、０．１×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃、および２×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳでの洗浄、続いての０．１×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃の最後の洗浄である。
【００９３】
ハイブリダイゼーションは、２つの核酸が相補的な配列を含有することを要求するが、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに依存して、塩基の間のミスマッチが可能である。核酸をハイブリダイズさせるための適切なストリンジェンシーは、核酸の長さおよび相補性の程度、当該分野でよく知られた変数に依存する。２つのヌクレオチド配列の間の同様性または相同性の程度がより大きくなれば、それらの配列を有する核酸のハイブリッドについてのＴｍの値はより高くなる。核酸ハイブリダイゼーションの（より高いＴｍに対応する）相対的な安定性は以下の順序：ＲＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＤＮＡで減少する。長さが１００ヌクレオチドを超えるハイブリッドでは、Ｔｍを計算するための方程式が導かれている（ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ，前掲）。より短い核酸、すなわち、オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションでは、ミスマッチの位置はより重要となり、オリゴヌクレオチドの長さはその特異性を決定する（ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ，前掲）。１つの態様において、ハイブリダイズ可能な核酸についての長さは少なくとも約１０ヌクレオチドである。好ましくは、ハイブリダイズ可能な核酸についての最小長さは、長さが少なくとも約１５ヌクレオチドであり、より好ましくは長さが少なくとも約２０ヌクレオチドであり、なおより好ましくは長さが少なくとも３０ヌクレオチドであり、なおより好ましくは、長さが少なくとも３００ヌクレオチドであり、最も好ましくは長さが少なくとも８００ヌクレオチドである。さらに、当業者であれば、温度および洗浄溶液の塩濃度は、プローブの長さのような因子に従って、必要に応じて調整することができるのを認識するであろう。
【００９４】
本明細書中で用いるように、用語「パーセント同一性」は、配列を比較することによって決定された、２以上のポリペプチド配列または２以上のポリヌクレオチド配列の間の関係である。当該分野においては、「同一性」は、場合によっては、配列のストリング間のマッチによって決定された、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の間の配列関連性の程度も意味する。「同一性」および「同様性」は、限定されるものではないが：Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９３）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＪ（１９９４）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．編）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；およびＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編）Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９１）に記載されたものを含めた、公知の方法によって容易に計算することができる。同一性および同様性を決定するための方法は、公に入手可能なコンピュータプログラムに体系化されている。配列アライメントおよびパーセント同一性の計算は、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥバイオインフォマティクス計算スイートのメガライン（Ｍｅｇａｌｉｇｎ）プログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ  Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ  ｖ．７．０のＡｌｉｇｎＸプログラム（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）、またはＥＭＢＯＳＳ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅスイート（ＥＭＢＬ−ＥＢＩ；Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １６，（６）：２７６−２７７（２０００））を用いて行うことができる。配列のマルチ・アライメントは、デフォルトパラメータでの、欧州バイオインフォマティクス研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を介して欧州分子生物学研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）から入手可能な、アライメントの（ＣＬＵＳＴＡＬＷ；例えば、バージョン１．８３のような）ＣＬＵＳＴＡＬ方法（ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ，５：１５１−１５３（１９８９）；Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２：４６７３−４６８０（１９９４）；およびＣｈｅｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ３１（１３）：３４９７−５００（２００３））を用いて行うことができる。ＣＬＵＳＴＡＬＷプロテイン・アライメントについての適切なパラメータは、ＧＡＰ存在ペナルティ＝１５、ＧＡＰ延長＝０．２、マトリックス＝Ｇｏｎｎｅｔ（例えば、Ｇｏｎｎｅｔ２５０）、タンパク質Ｅ���ＤＧＡＰ＝−１、タンパク質ＧＡＰＤＩＳＴ＝４、およびＫＴＵＰＬＥ＝１を含む。１つの実施形態において、速いまたは遅いアライメントを、遅いアライメントが好ましいデフォルト設定と共に用いる。別法として、ＣＬＵＳＴＡＬＷ方法（例えば、バージョン１．８３）を用いるパラメータを修飾して、ＫＴＵＰＬＥ＝１、ＧＡＰ  ＰＥＮＡＬＴＹ＝１０、ＧＡＰ延長＝１、マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６４）、ＷＩＮＤＯＷ＝５、およびＴＯＰ  ＤＩＡＧＯＮＡＬＳ  ＳＡＶＥＤ＝５を用いることもできる。
【００９５】
１つの態様において、適切な単離核酸分子は、本明細書中に報告されたアミノ酸配列に対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、３３％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。もう１つの態様において、適切な単離核酸分子は、本明細書中に報告されたアミノ酸配列に対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、３３％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。適切な核酸分子は前記相同性を有するのみならず、典型的には、長さが約２１０〜３４０アミノ酸、約３００〜約３４０アミノ酸、好ましくは約３１０〜約３３０アミノ酸、最も好ましくは長さが約３１８〜約３２５アミノ酸を有するポリペプチドをコードし、ここで、各ポリペプチドは、過加水分解活性を有するとして特徴付けられる。
【００９６】
標的化ペルヒドロラーゼ
本明細書中で用いるように、用語「標的化ペルヒドロラーゼ」および「過加水分解活性を有する標的化酵素」とは、標的表面、好ましくは標的化体表面に対して親和性を有する少なくとも１つのペプチド成分に融合／結合された少なくとも１つの加水分解酵素（野生型またはそのバリアント）を含む融合タンパク質を指すであろう。標的化ペルヒドロラーゼ内の過加水分解酵素は、過加水分解活性を有するいずれのＣＥ−７炭水化物エステラーゼであってもよい。ＣＥ−７ペルヒドロラーゼは、参照配列の配列番号：１とアラインするＣＥ−７シグナチャーモチーフの存在によって同定することができ、該シグナチャーモチーフは：
ｉ）配列番号：１の位置１１８〜１２０に対応する位置のＲＧＥモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の位置１８６〜１９０に対応する位置のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の位置３０３〜３０４に対応する位置のＨＥモチーフ
を含む。
【００９７】
本明細書中で用いられるように、核酸分子は、他の核酸分子、例えばｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはＲＮＡと、一本鎖の当該第１分子が適当な温度および溶液条件下で当該他の分子にアニーリングできる場合、「ハイブリダイズ可能」である。１つの実施形態において、過加水分解酵素は、本明細書中で報告されるアミノ酸配列（すなわち、配列番号：１、および４〜２８）のいずれかに対して少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、３３％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するものであってよい。
【００９８】
もう１つの実施形態において、融合タンパク質は、配列番号：１、および４〜２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する過加水分解酵素を含む。
【００９９】
本明細書中で用いるように、用語「ペプチド成分」、「口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分」、「口腔結合ドメイン」、および「ＯＣＢＤ」とは、ペプチド結合によって連結された２以上のアミノ酸の少なくとも１つのポリマーを含む過加水分解酵素の一部ではない融合タンパク質の成分を指し、ここで、該成分は標的口腔表面に対して親和性を有する。好ましい態様において、ＯＣＢＤは歯のエナメル質に対して親和性を有する。
【０１００】
１つの実施形態において、体表面に対して親和性を有するペプチド成分は、抗体、Ｆａｂ抗体断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）抗体、Ｃａｍｅｌｉｄａｅ抗体（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｓ．，Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００１）７４：２７７−３０２）、非−抗体足場表示タンパク質（種々の足場−援助アプローチのレビューについては、Ｈｏｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．（２００６）１５（１）：１４−２７およびＢｉｎｚ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３，１２５７−１２６８）または免疫グロブリン折畳みを欠如する一本鎖ポリペプチドであってよい。もう１つの態様において、（歯のエナメル質のような）口腔組織／表面に対して親和性を有するペプチド成分は、免疫グロブリン折畳みを欠如する一本鎖ペプチドである。
【０１０１】
口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分は、任意のペプチドリンカーによって過加水分解酵素から離すことができる。ある種のペプチドリンカー／スペーサーは、長さが１〜１００または１〜５０アミノ酸である。いくつかの実施形態において、ペプチドスペーサーは、長さが約１〜約２５、３〜約４０、または３〜約３０アミノ酸である。他の実施形態において、長さが約５〜約２０アミノ酸であるスペーサーである。多数のペプチドリンカーを用いることができる。１つの実施形態において、少なくとも１つのペプチドリンカーを存在させ、１０回まで反復することができる。
【０１０２】
１つの実施形態において、融合ペプチドは、配列番号：１７８〜１９７からなる群より選択される少なくとも１つの口腔表面結合ペプチドを含む。
【０１０３】
口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分は、任意のペプチドリンカーによってＣＥ−７ペルヒドロラーゼから離すことができる。ある種のペプチドリンカー／スペーサーは、長さが１〜１００または１〜５０アミノ酸である。いくつかの実施形態において、ペプチドスペーサーは、長さが約１〜約２５、３〜約４０、または３〜約３０アミノ酸である。他の実施形態において、長さが約５〜約２０アミノ酸であるスペーサーである。多数のペプチドリンカーを用いることができる。ペプチドリンカーの例は配列番号：１６４〜１７７として提供される。
【０１０４】
それ自体、標的化ＣＥ−７ペルヒドロラーゼの例としては、限定されるものではないが、口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分に結合された配列番号：１、および４〜２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＥ−７ペルヒドロラーゼのいずれも挙げることができる。好ましい実施形態において、標的化ペルヒドロラーゼの例としては、限定されるものではないが、（所望により、ペプチドスペーサーを介してもよい）口腔表面に対して親和性を有する１又はそれ以上の体表面結合ペプチドに結合された配列番号：１、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、および２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＥ−７ペルヒドロラーゼのいずれも挙げることができる。好ましい実施形態において、標的化ペルヒドロラーゼは、配列番号：１および１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＥ−７ペルヒドロラーゼを含む。
【０１０５】
１つの実施形態において、ペルヒドロラーゼは、以下の一般的構造：
ＰＡＨ−［Ｌ］ｙ−ＯＣＢＤまたはＯＣＢＤ−［Ｌ］ｙ−ＰＡＨ
［式中、ＰＡＨは、例えば、ＣＥ−７シグナチャーモチーフ、例えば、配列番号：１を有する過加水分解活性を有する酵素であり、ＯＣＢＤは口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分であり、Ｌは任意のリンカーであって、ｙは０〜１０の範囲の整数である］
を有する融合タンパク質の形態である。１つの実施形態において、リンカー（Ｌ）が存在し、それは、長さが１〜１００アミノ酸の範囲のペプチドリンカーである。
【０１０６】
例えば、配列番号：２は、口腔組織に対して親和性を持つＣ−末端標的化ドメインに結合された配列番号：１のペルヒドロラーゼ配列を有する融合タンパク質である。
【０１０７】
本発明の生成物および方法で用いられるペルヒドロラーゼは、遊離形態、保護された（例えば、アセチル化された）形態、または塩の形態であってよい。
【０１０８】
もう１つの実施形態において、標的表面は、パッケージングまたは口腔への送達の一部である材料である。ペプチド成分は、ポリマー、プラスチックおよびフィルムのような、用いられる材料または複数材料に対するその親和性で選択される。標的化ＣＥ−７ペルヒドロラーゼ融合タンパク質は、マウストレイまたはストリップのような取り外し可能なデバイス上にそれを維持することによって、ペルヒドロラーゼの制御された送達、およびペルヒドロラーゼの利用者からの除去を可能とする。
【０１０９】
結合親和性
口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分は、１０−５モル濃度（Ｍ）以下の口腔表面に対する結合親和性を含む。ある実施形態において、ペプチド成分は、歯のエナメル質に対して１０−５モル濃度（Ｍ）以下の結合親和性を有する１又はそれ以上の口腔表面結合ペプチドおよび／または結合性ドメインである。いくつかの実施形態において、結合ペプチドまたはドメインは、少なくとも約５０〜５００ｍＭ塩の存在下で、１０−５Ｍ以下の結合親和性値を有するであろう。用語「結合親和性」とは、結合ペプチドとその各基質との相互作用の強さを指す。結合親和性は、結合ペプチドの解離定数（「ＫＤ」）、または「ＭＢ５０」の換算で定義され、または測定することができる。
【０１１０】
「ＫＤ」は、標的上の結合部位が半分占められる、すなわち、ペプチドが結合した標的（結合した標的材料）の濃度がペプチド結合無しの標的の濃度と等しい場合のペプチドの濃度に対応する。解離定数がより小さくなると、ペプチドはより緊密に結合する。例えば、ナノモル濃度（ｎＭ）の解離定数を持つペプチドは、マイクロモル濃度（μＭ）の解離定数を持つペプチドよりもより緊密に結合する。本発明のある実施形態は、１０−５以下のＫＤ値を有するであろう。
【０１１１】
「ＭＢ５０」とは、ＥＬＩＳＡベースの結合アッセイで得られた最大シグナルの５０％であるシグナルを与える結合ペプチドの濃度を指す。例えば、ここに引用して援用する、米国特許出願公開第２００５／０２２６８３号の実施例３参照。ＭＢ５０は、複合体の成分の結合相互作用または親和性の強度の指標を提供する。ＭＢ５０の値がより低くなると、ペプチドとその対応する基質との相互作用はより強く、すなわち、「より良好」となる。例えば、ナノモル濃度（ｎＭ）のＭＢ５０を持つペプチドは、マイクロモル濃度（μＭ）のＭＢ５０を持つペプチドよりもより緊密に結合する。本発明のある実施形態は、１０−５Ｍ以下のＭＢ５０値を有するであろう。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、口腔表面に対して親和性を有するペプチド成分は、約１０−５Ｍ以下の、１０−６Ｍ以下の、１０−７Ｍ以下の、約１０−８Ｍ以下の、約１０−９Ｍ以下の、または１０−１０Ｍ以下の、ＫＤまたはＭＢ５０値によって測定された結合親和性を有することができる。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、口腔表面結合ペプチドおよび／または口腔表面結合ドメインは、約１０−５Ｍ以下の、約１０−６Ｍ以下の、約１０−７Ｍ以下の、約１０−８Ｍ以下の、約１０−９Ｍ以下の、または約１０−１０Ｍ以下の、ＫＤまたはＭＢ５０値によって測定された結合親和性を有することができる。
【０１１４】
本明細書中で用いるように、用語「強い親和性」とは、約１０−５Ｍ以下の、好ましくは約１０−６Ｍ以下の、より好ましくは約１０−７Ｍ以下の、より好ましくは約１０−８Ｍ以下の、約１０−９Ｍ以下の、または最も好ましくは約１０−１０Ｍ以下の、ＫＤまたはＭＢ５０値を有する結合親和性を指すであろう。
【０１１５】
酵素粉末
いくつかの実施形態において、パーソナルケア組成物は、安定化された酵素粉末の形態の酵素触媒を用いることができる。酵素粉末を含む配合物を作製し、安定化させるための方法は、米国特許出願公開第２０１０−００８６５３４号および第２０１０−００８６５３５号に記載されている。
【０１１６】
１つの実施形態において、酵素は、酵素粉末の乾燥重量に基づいて、約５重量パーセント（ｗｔ％）〜約７５ｗｔ％の範囲の量の酵素粉末であってよい。酵素粉末／噴霧乾燥混合物における酵素の好ましい重量パーセント範囲は約１０ｗｔ％〜５０ｗｔ％であり、酵素粉末／噴霧乾燥混合物における酵素のより好ましい重量パーセント範囲は、約２０ｗｔ％〜３３ｗｔ％である。
【０１１７】
１つの実施形態において、酵素粉末は、さらに、賦形剤を含んでよい。１つの態様において、賦形剤は、酵素粉末の乾燥重量に基づいて、約９５ｗｔ％〜約２５ｗｔ％の範囲の量で供される。酵素粉末における賦形剤の好ましいｗｔ％の範囲は、約９０ｗｔ％〜５０ｗｔ％であり、酵素粉末における賦形剤のより好ましいｗｔ％の範囲は約８０ｗｔ％〜６７ｗｔ％である。
【０１１８】
１つの実施形態において、酵素粉末を調製するのに用いられる賦形剤はオリゴ糖賦形剤であってよい。１つの実施形態において、オリゴ糖賦形剤は、少なくとも約１２５０の数平均分子量および少なくとも約９０００の重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態において、オリゴ糖賦形剤は、少なくとも約１７００の数平均分子量および少なくとも約１５０００の重量平均分子量を有する。具体的なオリゴ糖としては、限定されるものではないが、マルトデキストリン、キシラン、プルラン、マンナン、フコイダン、ガラクトマンナン、キトサン、ラフィノース、スタキオース、ペクチン、インスリン、レバン、グラミナン、アミロペクチン、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、ニゲロトリオース、マルトトリオース、メレチトース、マルトトリウロース、ラフィノース、ケストース、およびそれらの混合物を挙げることができる。好ましい実施形態において、オリゴ糖賦形剤はマルトデキストリンである。オリゴ糖ベースの賦形剤としては、限定されるものではないが、ヒドロキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびそれらの混合物のような水溶性非イオン性セルロースエーテルを挙げることもできる。なおさらなる実施形態において、賦形剤は、限定されるものではないが、以下の成分：トレハロース、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、グルコース、セロビオース、α−シクロデキストリン、プルラン、およびカルボキシメチルセルロースの１又はそれ以上より選択することができる。
【０１１９】
適当なエステル基質／アシルドナー
適当なカルボン酸エステル基質は、以下の式：
（ａ）式：
［Ｘ］ｍＲ５
［式中、Ｘは式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり；
Ｒ６は、所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分枝鎖状または環状ヒドロカルビル部分であり、ここで、Ｒ６は、Ｒ６がＣ２〜Ｃ７である場合、所望により、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでよく；
Ｒ５は、所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状、分枝鎖状または環状ヒドロカルビル部分または５員環状ヘテロ芳香族部分または６員環状芳香族またはヘテロ芳香族部分であり、ここで、Ｒ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸基を含み、ここで、Ｒ５は、所望により、１又はそれ以上の他の結合を含んでよく；
ｍは、１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有する１又はそれ以上のエステル、
ここで、該１又はそれ以上のエステルは、２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；または
（ｂ）構造：
【化６】
2015509080.tif 000008
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有する１又はそれ以上のグリセリド：または
（ｃ）式：
【化７】
2015509080.tif 000009
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分枝鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１又はそれ以上のエステル；または
（ｄ）１又はそれ以上のアセチル化単糖、アセチル化二糖、またはアセチル化多糖；または
（ｅ）（ａ）から（ｄ）のいずれかの組合せ
を有するエステルを含んでよい。
【０１２０】
適当な基質は、アシル化単糖、二糖および多糖からなる群より選択される１又はそれ以上のアシル化糖類を含んでもよい。もう１つの実施形態において、アシル化糖類は、アセチル化キシラン；アセチル化キシランの断片；（キシローステトラアセタートのような）アセチル化キシロース；（α−Ｄ−グルコースペンタアセタート；β−Ｄ−グルコースペンタアセタート；１−チオ−β−Ｄ−グルコース−２，３，４，６−テトラアセタートのような）アセチル化グルコース；β−Ｄ−ガラクトースペンタアセタート；ソルビトールヘキサアセタート；スクロースオクタアセタート；β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセタート；β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，４−テトラアセタート；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルカール；β−Ｄ−キシロフラノーステトラアセタート、β−Ｄ−グルコピラノースペンタアセタート；β−Ｄ−グルコピラノース−１，２，３，４−テトラアセタート；β−Ｄ−グルコピラノース−２，３，４，６−テトラアセタート；２−アセトアミド−２−デオキシ−１，３，４，６−テトラアセチル−β−Ｄ−グルコピラノース；２−アセトアミド−２−デオキシ−３，４，６−トリアセチル−１−クロライド−α−Ｄ−グルコピラノース；β−Ｄ−マンノピラノースペンタアセタート、およびアセチル化セルロースからなる群より選択される。好ましい実施形態において、アセチル化糖類は、β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセタート；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルカール；スクロースオクタアセタート；およびアセチル化セルロースからなる群より選択される。
【０１２１】
もう１つの実施形態において、追加の適当な基質としては、５−アセトキシメチル−２−フルアルデヒド；３，４−ジアセトキシ−１−ブテン；４−アセトキシ安息香酸；バニリンアセタート；プロピレングリコールメチルエーテルアセタート；メチルラクタート；エチルラクタート；メチルグルコラート；エチルグルコラート；メチルメトキシアセタート；エチルメトキシアセタート；メチル３−ヒドロキシブチラート；エチル３−ヒドロキシブチラート；およびトリエチル２−アセチルシトラートも挙げることができる。
【０１２２】
もう１つの実施形態において、適当な基質は、モノアセチン；ジアセチン；トリアセチン；モノプロピオニン；ジプロピオニン；トリプロピオニン；モノブチリン；ジブチリン；トリブチリン；グルコースペンタアセタート；キシローステトラアセタート；アセチル化キシラン；アセチル化キシラン断片；β−Ｄ−リボフラノース−１，２，３，５−テトラアセタート；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクタール；トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルカール；１，２−エタンジオール、１，２−プロパンジオール、１，３−プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、２，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、１，２−ペンタンジオール、２，５−ペンタンジオール、１，５−ペンタンジオール、１，６−ペンタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、２，５−ヘキサンジオール、１，６−ヘキサンジオールのモノエステルまたはジエステル；およびそれらの混合物からなる群より選択される。もう１つの実施形態において、基質は１又はそれ以上のエステル基を含むＣ１〜Ｃ６ポリオールである。好ましい実施形態において、Ｃ１〜Ｃ６ポリオール上のヒドロキシル基の１又はそれ以上は、（１，３−プロパンジオールジアセタート；１，２−プロパンジオールジアセタート；１，４−ブタンジオールジアセタート；１，５−ペンタンジオールジアセタート等のように）１又はそれ以上のアセトキシ基で置換されている。さらなる実施形態において、基質はプロピレングリコールジアセタート（ＰＧＤＡ）、エチレングリコールジアセタート（ＥＧＤＡ）、またはそれらの混合物である。
【０１２３】
さらなる実施形態において、適切な基質は、モノアセチン、ジアセチン、トリアセチン、モノプロピオニン、ジプロピオニン、トリプロピオニン、モノブチリン、ジブチリン、およびトリブチリンからなる群より選択される。なおもう１つの態様において、基質は、ジアセチンおよびトリアセチンからなる群より選択される。最も好ましい実施形態において、適切な基質はトリアセチンを含む。
【０１２４】
カルボン酸エステルは、酵素−触媒過加水分解に際して、所望の濃度のペルオキシカルボン酸を生じさせるのに十分な濃度で存在させる。カルボン酸エステルは反応配合物に完全に可溶性である必要はないが、ペルヒドロラーゼ触媒によるエステルの対応するペルオキシカルボン酸への変換を可能とするのに十分な溶解度を有する。カルボン酸エステルは、反応配合物の０．０５ｗｔ％〜４０ｗｔ％の濃度にて、好ましくは反応配合物の０．１ｗｔ％〜２０ｗｔ％の濃度にて、より好ましくは反応配合物の０．５ｗｔ％〜１０ｗｔ％の濃度で反応配合物に存在させる。
【０１２５】
ペルオキシゲン源は、顆粒として供され、過酸化水素アダクト（例えば、尿素−過酸化水素アダクト（過酸化カルバミド））、過ホウ酸塩、過炭酸塩および過酸化物塩を含むことができる。反応配合物中のペルオキシゲン化合物の濃度は、０．００３３ｗｔ％〜約５０ｗｔ％、より好ましくは０．０３３ｗｔ％〜約４０ｗｔ％、そしてより好ましくは０．１ｗｔ％〜約３０ｗｔ％の範囲とすることができる。
【０１２６】
多くのペルヒドロラーゼ触媒（全細胞、浸透性全細胞、および部分的に精製された全細胞抽出物）は、カタラーゼ活性（ＥＣ  １．１１．１．６）を有すると報告されている。カタラーゼは、過酸化水素の酸素および水への変換を触媒する。１つの態様において、過加水分解触媒はカタラーゼ活性を欠如する。もう１つの態様において、カタラーゼ阻害剤は反応配合物に加えることができる。当業者であれば、必要に応じて、カタラーゼ阻害剤の濃度を調整することができる。カタラーゼ阻害剤の濃度は、典型的には、０．１ｍＭ〜約１Ｍ、好ましくは約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、より好ましくは約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲である。
【０１２７】
もう１つの実施形態において、酵素触媒は有意なカタラーゼ活性を欠如し、またはカタラーゼ活性を減少させ、または排除するように作製することができる。宿主細胞におけるカタラーゼ活性は、限定されるものではないが、トランスポゾン突然変異誘発、ＲＮＡアンチセンス発現、標的化突然変異誘発、およびランダム突然変異誘発を含めたよく知られた技術を用いてカタラーゼ活性を担う遺伝子の発現を破壊することによってダウンレギュレートし、または排除することができる。
【０１２８】
少なくとも１つのカルボン酸エステルの過加水分解によって生じたペルオキシカルボン酸（例えば、過酢酸）の濃度は、過加水分解反応の開始から１０分以内の、好ましくは５分以内の過酸の少なくとも約０．１ｐｐｍ、好ましくは少なくとも０．５ｐｐｍ、１ｐｐｍ、５ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、２０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ、５００ｐｐｍ、７００ｐｐｍ、１０００ｐｐｍ、２０００ｐｐｍ、５０００ｐｐｍまたは１０，０００ｐｐｍである。明らかに、当業者であれば、反応成分を調整して、所望の過酸濃度を達成することができる。
【０１２９】
１つの態様において、過酸の所望の濃度を生じさせるのに必要な反応時間は、約２時間以下、好ましくは約３０分以下、より好ましくは約１０分以下、最も好ましくは約５分以下内である。
【０１３０】
ペルオキシカルボン酸および過酸化水素の濃度決定するためのＨＰＬＣアッセイ方法
限定されるものではないが、滴定、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、質量分析（ＭＳ）、毛細管電気泳動（ＣＥ）、Ｕ．Ｐｉｎｋｅｒｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６９（１７）：３６２３−３６２７（１９９７））によって記載された分析手順、および２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン）−６−スルホネート（ＡＢＴＳ）アッセイ（Ｕ．Ｐｉｎｋｅｒｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎａｌｙｓｔ，１２２：５６７−５７１（１９９７）およびＤｉｎｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｄｖ．Ｆｕｎｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２０：３９２−３９８（２０１０））を含めた種々の分析方法を用いて、本実施例に記載されたように、反応体および生成物を分析することができる。
【０１３１】
１つの実施態様において、本発明は、複数のチャンバーを含み、かつ各チャンバー内の成分を使用時点まで隔てた状態で反応しない状態に保つように設計されたオーラルケア製品のためのパッケージを提供する。例えば、本発明は、酵素触媒型の歯のホワイトニング製品が、該成分が互いに暴露され混合された後数ミリ秒で前定常状態キネティックスに達することを可能にする化学的に安定した構造のパッケージデザインを与える。該容器の内容物は、開封手段（opening means）、例えば取り外し可能なキャップまたはプラグ付きのノズルを介して分配されるか、または先に刻み目を付けたセクションを消費者が壊したときに機能的となり、きれい且つ好都合に成型したノズルを通じて製品の分配を可能にする。
【０１３２】
各チャンバーは、例えば０．１〜３０グラムの成分を保存する収容能力を有する。オーラルケア製品は、すべてのチャンバーから送達される製品の総量、例えば１．０〜５．０グラムの間、例えば１〜２グラムを、目的とする利益を与えるために提供する歯のホワイトニング品である。チャンバー容積は、特定の重さ例えば１．０〜１．１で、好ましくは特定の重さの範囲１．０２〜１．０５で、成分を収容するように設計される。
【０１３３】
１つの実施態様において、パッケージは、５０ミクロン〜５００ミクロンの厚み、好ましくは３００ミクロンの厚さの少なくとも２つの柔軟なフィルムの熱形成過程を用いて製造される。該２つのフィルムは、不透明、半透明または透明であってよく、熱形成過程でアセンブルされる場合、いずれかの組合せであってよい。両材料は、水蒸気バリアの特徴、例えば、３年の期間をかけて３％未満の湿気喪失、例えば同一期間をかけて１％未満の湿気喪失を与える。該フィルムはフレーバー・バリアも提供する。フレーバー喪失は、ガスクロマトグラフィーおよび官能評価の両方によって測定できる。
【０１３４】
該フィルムは、そこに含まれる物質に対して化学的に抵抗性である。例えば、１つの実施形態において、重量あたり０．１％〜１０％の過酸化水素水に対して、例えば重量あたり０．３％までの過酸化水素水に対して抵抗性である。
【０１３５】
１つの実施形態において、該２つの柔軟な材料のうちの一方は重合体ラミネートであり、該ラミネートの内部層を選択して第一の柔軟な材料により接着するが、壊れやすいシールを有する該チャンバーに手で圧力を加えたときに層間はく離する。該シールを壊すのに必要とされる力を手で加え、該力は２インチ−ｌｂｆ〜５インチ−ｌｂｆで変わり得る。
【０１３６】
区画間の壊れやすいシールが壊された後、各チャンバー中の成分は互いに密接に接触することとなる。消費者は、前定常状態キネティック速度またはバースト相（ｂｕｒｓｔ  ｐｈａｓｅ）を越えるためにある期間の間、個々の成分を混合することが可能である。前定常状態キネティックスまたはバースト相に関する時間はミリ秒あり得る。これは、酵素−基質中間体の定常状態濃度に達するまでに、酵素−基質中間体の形成および消費に十分な時間を与える。定常状態が達成された後、消費者は、複数のチャンバー容器の先に刻み目を付けたセクションを壊し、歯科用トレイへその混合物を分配することができる。該トレイを、１５分〜４５分の間、歯に適用し、効果的なホワイトニング利益を与える。
【０１３７】
かくして、本発明の例示的な実施形態は、例えばパッケージ、オーラルケア組成物および歯をホワイトニングする方法を含み、例えば：
１．  壊れやすい又は易裂性の１つ又はそれ以上のバリアで区切られた、第１チャンバー、第２チャンバーおよび場合により更なるチャンバーを有する少なくとも２つの密閉されたチャンバーを形成するよう構成された変形可能な材料を含むパッケージであって、
ここで、
第１チャンバーが、過加水分解活性（perhydrolytic activity）を有する酵素を含有する低粘度溶液を含み、該酵素は、参照配列の配列番号：１とアラインする炭水化物エステラーゼファミリー７（ＣＥ−７）シグナチャーモチーフを有し、該シグナチャーモチーフは以下：
ｉ）配列番号：１の１１８−１２０位に対応する部位のＲＧＱモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の１８６−１９０位に対応する部位のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の３０３−３０４位に対応する部位のＨＥモチーフ；
を含み、ならびに
第２チャンバーは、少なくとも１つのアシルドナー基質を含み、該基質は以下：
ｉ）構造：
「Ｘ」ｍＲ５
［式中、Ｘは式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり
Ｒ６＝所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分枝鎖状または環状ヒドロカルビル部分であり、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６＝Ｃ２〜Ｃ７である場合、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
Ｒ５＝所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状、分枝鎖状、または環状ヒドロカルビル部分または５員環状ヘテロ芳香族部分または６員環状芳香族またはヘテロ芳香族部分であり；ここでＲ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸を含み、ここで、Ｒ５は、所望により、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
ｍは、１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有する１又はそれ以上のエステル、ここで、該エステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；
ｉｉ）構造：
【化８】
2015509080.tif 000010
［式中、Ｒ１＝所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有するグリセリド；
ｉｉｉ）式：
【化９】
2015509080.tif 000011
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであって、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分枝鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１又はそれ以上のエステル；および
ｉｖ）アセチル化単糖、アセチル化二糖およびアセチル化多糖からなる群より選択されるアセチル化糖類
からなる群より選択され、
ここで、第２チャンバーまたは所望による更なるチャンバーは過酸化物源を含み、
該チャンバー間の１つ又はそれ以上のバリアが壊れたとき、例えば第１チャンバーを圧迫した際に、該低粘度溶液が、該過酸化物源およびアシルドナー基質と混ざり、過加水分解活性を有する該酵素が該過酸化物源から放出される過酸化物と該アシルドナー基質との間の反応を触媒し、過酸を形成することとなり；ならびに
該パッケージは開封手段、例えば該パッケージの開封を可能にし、該混合物を分配できる出口を与え得る刻み目を付けた領域、キャップまたはプラグを有する、パッケージ１。
【０１３８】
１．１．  過加水分解活性を有する該酵素が、
ａ）配列番号：１；および
ｂ）配列番号：１と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、パッケージ１。
過加水分解活性を有する該酵素が、該酵素のＮ末端もしくはＣ末端に融合された結合ドメインをさらに含み、該結合ドメインが、口腔組織または歯のホワイトニングストリップに対する親和性を有する、パッケージ１または１．１。
【０１３９】
１．２．  口腔組織に対する親和性を有する該結合ドメインが、配列番号：１７８〜１９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、前記パッケージのいずれか。
１．３．  過加水分解活性を有する該酵素が、口腔組織に対する親和性を有し、かつ配列番号：２および配列番号：２と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、前記パッケージのいずれか。
【０１４０】
１．４．  変形可能な材料がプラスチックまたはアルミニウムである、前記パッケージのいずれか。
１．５．  低粘度溶液が第２チャンバーの内容物との効率的な混合を確保するのに十分に低い粘度、例えば５，０００ｃｐｓ以下、例えば５００ｃｐｓ以下を有する、前記パッケージのいずれか。
１．６．  該低粘度溶液が緩衝剤を含む、前記パッケージのいずれか。
【０１４１】
１．７．  アシルドナー基質が、（ｉ）所望により、ヒドロキシおよび／またはＣ１−４アルコキシで置換されていてもよい低級直鎖状または分枝鎖状アルキルカルボン酸を含めた、Ｃ２−１８カルボン酸、例えば、Ｃ２−６カルボン酸（例えば、酢酸）；（ｉｉ）それらの加水分解可能であって許容される１又はそれ以上のエステル（例えば、モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドおよびアシル化糖類）および（ｉｉｉ）それらの混合物から選択される、前記パッケージのいずれか。
【０１４２】
１．８．  アシルドナー基質が、１，２，３−トリアセトキシプロパン（時々、本明細書中においてトリアセチンまたはグリセリントリアセタートと称される）およびアシル化糖類、例えばアセチル化糖類である、前記パッケージのいずれか。
１．９．  ２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有するエステル化合物を含有するアシルドナー基質を含む、前記パッケージのいずれか。
【０１４３】
１．１０．  過酸化物源が、固体過酸化物および固体過酸化物ドナーおよびそれらの混合物から選択される、例えば、過酸化物塩または複合体（例えば、過酸化リン酸塩（peroxyphosphate）、過酸化炭酸塩（peroxycarbonate）、過ホウ酸塩、過酸化ケイ酸塩（peroxysilicate）またはペルオキソ硫酸塩；例えばカルシウム過酸化リン酸塩（calcium peroxyphosphate）、過ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム過酸化物（sodium carbonate peroxide）、ナトリウム過酸化リン酸塩（sodium peroxyphosphate）、およびカリウム過硫酸塩（potassium persulfate））；ヒポクロリット;過酸化尿素;過酸化水素ポリマー（hydrogen peroxide polymer）複合体、例えば過酸化水素ポリビニルピロリドンポリマー複合体；金属過酸化物、例えば過酸化亜鉛および過酸化カルシウム;例えば、過酸化尿素、ポリビニルピロリドン過酸化水素複合体、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウムおよび金属過酸化物（例えば過酸化亜鉛および過酸化カルシウム）から選択される固体過酸化物から選択される、前記パッケージのいずれか。
【０１４４】
１．１１．  過酸化物供給源が過酸化尿素である、前記パッケージ。
１．１２．  過酸化物供給源が過酸化水素ポリビニルピロリドン複合体を含む、前記パッケージ。
１．１３．  該チャンバーの成分が、混合の際に、歯を白くするのに十分な量および濃度で漂白剤を与えるのに十分な量で存在する、前記パッケージのいずれか。
１．１４．  第２チャンバーが粉末形態のゲル化剤を含む、前記パッケージのいずれか。
【０１４５】
１．１５．  ゲル化剤が、カルボマーゲル化剤（例えば、カルボポール（Carbopol）９７１Ｐ）、多糖類樹脂、例えばキサンタンガム、加工食品用デンプン、動物もしくは魚ベースのゼラチンおよびシリカから選択される、前記パッケージのいずれか。
１．１６．  ゲル化剤がカルボマーゲル化剤である、前記パッケージのいずれか。
【０１４６】
１．１７．  第２チャンバーが、粉末形態のゲル化剤を、第１チャンバーの内容物との混合の際に、１００，０００〜１５０，０００ｃｐｓ、例えば約１２５，０００ｃｐｓの粘性を与える相対的な量（relative amount）で含み、例えば該ゲル化剤は第１チャンバーおよび第２チャンバーの内容物の最終混合物の重量あたり５％〜５０％の量で存在する、前記パッケージのいずれか。
【０１４７】
１．１８．  第１チャンバーが過加水分解活性を有する酵素および緩衝剤を含み、第２チャンバーがゲル化剤、過酸化物源およびアセチル含有化合物（acetyl-containing compound）をすべて粉末形態で含み、ここで、前記壊れやすいバリアを壊したときに、該２つのチャンバーの内容物の混合が可能であり、過酸化物およびアセチル含有化合物が反応でき、該反応がペルヒドロラーゼ活性を有するタンパク質によって触媒されて、該溶液および該ゲル化剤により形成される押出可能（extrudable）なゲル中で過酸が形成されることとなり、次いで、押出可能なゲルを押出し、例えばトレイまたはストリップを用いて歯を漂白することを可能にするのに十分な時間、例えば１０〜３０分間、歯に適用できる、前記パッケージのいずれか。
【０１４８】
１．１９．  第１チャンバーおよび第２チャンバーの内容物の混合物を歯に適用するためのアプリケーター器具、例えば歯科用トレイまたはストリップをさらに含む、前記パッケージのいずれか。
１．２０．  該混合物を分配するときに、該混合物がトレイに押出されるように、第２チャンバーからの開封が該トレイに直接取り付けられる、前記パッケージ。
【０１４９】
２．  保管時に第２パートから物理的に隔てられ、使用直前、例えば使用の１０分以内に第２パートと合わされる第１パートを含む複数パートのオーラルケア組成物であって、第１パートが前記パッケージのいずれかに記載される過加水分解活性を有する酵素を含み、第２パートが過酸化物源、およびカルボン酸およびアシル化合物から選択されるカルボキシドナーを含み、ここで、該過酸化物源およびカルボキシドナーがペルヒドロラーゼの存在下で反応し過酸を形成する、組成物２。
例えば前記パッケージのいずれかに記載される過酸化物源およびカルボキシルドナーは例えば、
【０１５０】
２．１．  カルボキシドナーがＣ２−１８カルボン酸（例えば、酢酸）および加水分解可能であって許容されるエステル類（例えばモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリド）およびそれらの混合物から選択される、前記組成物。
２．２．  カルボキシドナーが１，２，３−トリアセトキシプロパン（時々、本明細書中においてトリアセチンまたはグリセリントリアセテートと称される）である、前記組成物。
【０１５１】
２．３．  過酸化物源が、過酸化尿素、ポリビニルピロリドン過酸化水素複合体、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウムおよび金属過酸化物（例えば過酸化亜鉛および過酸化カルシウム）から選択される固体過酸化物である、前記組成物のいずれか。
２．４．  過酸化物源が過酸化尿素である前記組成物のいずれか。
２．５．  過酸化物源が過酸化水素ポリビニルピロリドン複合体を含む、前記組成物のいずれか。
２．６．  前記パッケージ、例えばパッケージ１（以下参照）に梱包されるときの、前記組成物のいずれか。
【０１５２】
３．  ２パートを合することにより前記２パートのオーラルケア組成物を活性化すること、かくして得られた混合物の有効量を、例えばアプリケーター、例えば歯科用トレイまたはストリップを用いて、歯を白くするのに十分な時間、例えば少なくとも１０分、例えば１０〜３０分間、歯に適用することを含む、歯をホワイトニングする方法（方法３）。
【０１５３】
ペルオキシカルボン酸（「過酸」）は、有効な抗菌物質および漂白剤として知られている。Ｖｉｓｃｉｏ，Ｄに対する米国特許第５，３０２，３７５号は、ビヒクル中に溶解された過酢酸を含むホワイトニング用口腔組成物であって、該過酢酸は水、アセチルサルチル酸および水溶性アルカリ金属過炭酸塩を合わせることによってその場（in situ）でビヒクル内に生成される、組成物を開示する。Ｃｈｕｒｃｈらに対する米国特許第５，２７９，８１６号は、着色または変色した歯を白くするための過酢酸を含む組成物の使用を開示する。Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｒ．に対する米国特許第６，２２１，３４１号および第７，１８９，３８５号は、歯を白くする方法での使用に適したペルオキシ酸の歯のホワイトニング組成物を開示する。より詳細には、過酢酸の組成物は、化学的加水分解を介して過酢酸を生成するために、過酸化水素前駆体、グリセリンの酢酸エステルおよび水を合わせることによって製造され得る。
【０１５４】
酵素的加水分解は、これらの文献には記載されていない。Ｃｏｎｃａｒらに対する米国特許出願公開第２００９−０３１１１９８号は、歯を漂白するための過加水分解活性を有するＭ．スメグマチス酵素を含むオーラル組成物を開示する。
【０１５５】
多くのヒドロラーゼおよびエステラーゼ、例えばリパーゼ、セリンヒドロラーゼおよび炭水化物エステラーゼ（carbohydrate esterase）は、加水分解を、カルボン酸および過酸化水素からの過酸の可逆的な形成を触媒する。ペルヒドロラーゼ、エステラーゼおよびリパーゼは、概してセリン（Ｓｅｒ）、グルタミン酸塩（Ｇｌｕ）またはアスパラギン酸塩（Ａｓｐ）、およびヒスチジン（Ｈｉｓ）からなる触媒三残基を含む。多くのペルヒドロラーゼ（例えば金属フリーのハロペルオキシダーゼ）は、Ｓｅｒ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ触媒三残基を含み、過酸化水素およびカルボン酸から過酸の可逆的な形成を触媒する。理論に拘泥されるものではないが、加水分解は、カルボン酸が活性部位のセリンと反応してアシル酵素中間体を形成し、次いで、それが過酸化水素と反応して過酸を形成するエステラーゼ様メカニズムにより、起こると考えられる。
【０１５６】
数多くのペルヒドロラーゼが当該分野で記載されている。過加水分解活性を有する特定のバリアント・サブチリシン・カールスバーグ（Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ）プロテアーゼのボディケア製品における含有は、Ｗｉｅｌａｎｄらに対する米国特許第７，５１０，８５９号に開示されている。特定のバリアント・プロテアーゼ以外の過加水分解酵素は記載されていないし、パーソナルケアの有益な剤として過酸の酵素的産生を実際に示す実施例はない。ＤｉＣｏｓｉｍｏらに対する米国特許出願公開第２００８−０１７６７８３Ａ１号；第２００８−０１７６２９９Ａ１号；第２００９−０００５５９０Ａ１号；および第２０１０−００４１７５２Ａ１号は、カルボン酸エステル基質を（過酸化水素などのペルオキシゲン（peroxygen）の適切な供給源の存在下で）殺菌剤および／または漂白剤としての使用に十分な濃度でペルオキシカルボン酸に変換することに関する有意な過加水分解活性によって特徴づけられる炭水化物エステラーゼ（carbohydrate esterase）（すなわち、セファロスポリンＣデアセチラーゼ［ＣＡＨ］およびアセチルキシランエステラーゼ［ＡＸＥｓ］）のＣＥ−７ファミリーメンバーと構造的に分類された酵素を開示する。炭水化物エステラーゼのＣＥ−７ファミリーメンバーの幾つかは、反応成分を混合して１分で、アルコール類、ジオールおよびグリセロールのアセチルエステル類から４０００〜５０００ｐｐｍの過酢酸を、５分〜３０分の間で最大９０００ｐｐｍの過酢酸を生成するのに十分な過加水分解活性を有すると実際に示された（ＤｉＣｏｓｉｍｏら、ＵＳ２００９−０００５５９０Ａ１）。米国本願公開第２０１０−００８７５２９Ａ１号は、改良された過加水分解活性を有するバリアントＣＥ−７酵素を記載する。
【０１５７】
１つの実施形態において、本発明は、過加水分解活性を有する炭水化物エステラーゼファミリー７（「ＣＥ−７ペルヒドロラーゼ」）のメンバーの触媒ドメインを含むペルヒドロラーゼを用いる。ＣＥ−７ペルヒドロラーゼは格別な過加水分解活性を有するが、化粧用パーソナルケア製品におけるそれらの使用は前記仮出願前には開示されていない。
【０１５８】
本発明におけるアシルドナーは、（ｉ）所望により、ヒドロキシおよび／またはＣ１−４アルコキシで置換されていてもよい低級直鎖状または分枝鎖状アルキルカルボン酸を含めた、１又はそれ以上のＣ２−１８カルボン酸エステル、例えばＣ２−６カルボン酸エステルおよび（ｉｉ）それらの混合物から選択される。例えば、アシルドナーとしては（時々、本明細書中においては、トリアセチンまたはグリセリントリアセタートと称される）１，２，３−トリアセトキシプロパンおよびアシル化糖類、例えば、アセチル化糖類が挙げられる。特定の実施形態においては、この使用のためのエステルは、例えば、２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有するエステルであってよい。
【０１５９】
アシルドナーまたは他の物質は、場合によりカプセル化されてよい。天然および合成の両方の当該分野で周知のカプセル化オプションが種々ある。加工デンプンおよびアラビアガムは特によく適している。というのは、それらは食品グレードであり、比較的安価であり、溶解するのが速く、かつかなり高いレベルの液状油を吸収できるからである。最終の粘度に対するいずれの影響も考慮する必要がある。
【０１６０】
上記したように、本発明は、ゲル化剤、例えばカルボマーゲル化剤（例えば、カルボポール９７１Ｐ）、多糖類樹脂、例えばキサンタンガム、加工食品用デンプン、動物もしくは魚ベースのゼラチンおよびシリカを含んでいてよい。歯のホワイトニング剤の利用のための粘着性ゲル配合物は、例えば米国特許第７，８６２，８０１号；第５，７４６，５９８号；第６，７３０，３１６号；第７，１２８，８９９号に記載されるように、当該分野で知られている。ゲル化剤は、ホワイトニング溶液が歯科用トレイ又は軟組織領域に流れ出さない程度に、ホワイトニング溶液にとろみをつけるのに有用である。これは、漂白剤を長期間歯と接触した状態にとどめ、そして軟組織を保護することを可能にする。歯科用トレイおよび粘性の漂白剤の使用は、患者に最小限のリスクでもって１〜２週間にわたってヒトの歯を効果的にホワイトニングするのに低濃度の漂白剤とすることを可能にする。この使用のためのゲル化剤は、適用時に１００，０００〜１５０，０００ｃｐｓ、例えば１２５，０００ｃｐｓの粘性を与えるように選択および調整されるべきである。
【０１６１】
特定の実施形態において、前記したパッケージまたは複数パートの組成物は、カルボマーゲル化剤、例えば改変ポリアクリル酸親水性のポリマー、例えばＬｕｂｒｉｚｏｌにより製造されるＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）を含む。カルボマーは、重量あたりわずか５％を上回る濃度で粘性ゲルを形成することができる。
【０１６２】
本明細書中で記載される配合物に使用するための成分はすべて経口上許容さるものでなければならない。「経口上許容される」により、本明細書中で該用語が用いられるように、口腔での使用に安全でない配合物とならない量および形態で、記載される配合物中に存在する成分を意味する。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、過加水分解活性を有する該酵素は、ａ）配列番号：１；およびｂ）配列番号１と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、過加水分解活性を有する該酵素は、該酵素のＮ末端またはＣ末端に融合された結合ドメインをさらに含み、該結合ドメインは口腔組織に対する親和性を有する。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、過加水分解活性を有する該酵素は、口腔組織に対する親和性を有し、かつａ）配列番号：２；およびｂ）配列番号２と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１６６】
いくつかの実施形態における、固定化酵素は不溶性物質に吸着されるか、不溶性ビーズに捕捉されるか、化学反応により不溶性物質に共有結合で結合されるか、不溶性物質に対する親和性を有するペプチドの結合ドメインにより付着されるか、または不溶性マトリックスに閉じ込められる。
【０１６７】
いくつかの実施形態は、前記請求項の方法に関するホワイトニング剤を含む液体を調製すること、および該液体を口腔に、例えば該液体を用いて１５秒〜１分の間口をゆすぎ、次いで該液体を吐き出すことにより、投与することを含む、歯をホワイトニングする方法、または歯肉炎、歯牙プラークもしくは口臭を処置する方法を提供する。
【０１６８】
いくつかの実施形態における、製品は、マウスウォッシュ中の漂白剤を送達し、ここで、該漂白剤は過酸化水素およびトリアセチンの酵素触媒反応によって産生される過酸である。いくつかの実施形態における、２つの組成物  −一方は過酸化水素を含み、他方はトリアセチンを含む−  は、マウスウォッシュボトル（第１区画）内で維持される。いくつかの実施形態は  −ボトル上部に−  例えば挿入型もしくはネジ型のジョイントを用いて連結された第２区画を含む。いくつかの実施形態において、第２区画は、運搬される物質、例えばヒドロキシアパタイトまたはセルロール粒子表面上に固定化された過加水分解活性を有する酵素を含む、例えばフロースルー・カートリッジである。いくつかの実施形態において、第２区画はマウスウォッシュの活性成分として役立つ。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、過酸化水素およびトリアセチンは、過加水分解活性を有する酵素から隔てられる。いくつかの実施形態において、使用の間、該混合物はカートリッジを通じて流れ出て、該表面上のペルヒドリティック活性を有する酵素と接触し、そして、その反応は触媒され、すばやく過酸を産生する。いくつかの実施形態において  −使用の後−  該混合物は酵素から再び隔てられる。
【０１７０】
本明細書を通じて用いられるように、範囲はその範囲内にある各数値それぞれを表す短縮形として用いられる。該範囲内にある値はいずれも、該範囲の上限下限として選択され得る。加えて、本明細書中で引用されるすべての参考文献は、引用によりその完全な内容でここに含まれる。本開示の定義と引用の定義とに齟齬がある場合、本開示により調整される。
【０１７１】
特に明記しない限り、ここに、および本明細書中の他の箇所に示されるパーセンテージおよび量はすべて、重量パーセントを意味すると理解されるべきである。所定の量は、物質の有効重量（active weight）に基づく。
【実施例】
【０１７２】
実施例１
２チャンバーパッケージにおいて、０．０４ｍｇのペルヒドロラーゼ酵素（perhydrolase enzyme）を含有する１０ｍＬのリン酸緩衝液（ｐＨ７）を、複数成分の粉末と別々に保管する。複数成分粉末を表１Ａ、１Ｂおよび１Ｃに示し、カプセル化トリアセチンとフレーバー、顆粒状過酸化尿素、およびカルボマーゲル化剤を含む。よく混合した粉末の比率、１Ａ：１Ｂ：１Ｃは、本実施例において、９２．３：１．７：６である。２つのチャンバーは、パッケージ周辺の外部シールより強くない水不透過性加熱密閉バリアにより隔てられる（例えば図１を参照のこと）。使用のための準備として、消費者は、緩衝液／酵素チャンバーに対して圧力を加え、壊れやすい内部シールを壊し、該緩衝液／酵素を粉末チャンバーへと押し出す。該粉末は該液体と迅速に混ざり、吸着されたトリアセチンとフレーバーと共に過酸化物源、デンプンを溶解し、そしてゆっくりと該ゲル化剤を水和する。これらの成分の混合の数秒後に、ゲルが効率的に形成され、トレイに適用する準備ができる。約０．５グラムの新たに形成されたゲルをデリバリー器具の上辺と下辺の両方に適用し、４．３ｍｇの過酸化尿素（１．５ｍｇの過酸化水素に相当する）、１０ｍｇのトリアセチンおよび０．０１ｍｇのヒドロラーゼ酵素の投薬量を与える。
【０１７３】
パッケージ中に穴を開け、予め刻み目をつけた開封（図１を参照のこと）を介して、使用者は該ゲルをトレイに適用でき、次いで、該トレイにて２０〜３０分つけることができる。あるいは、該ゲルを、柔軟なストリップ、例えば非多孔性の柔軟なポリエチレン、またはゆっくり溶解するフィルムに適用してもよい。
【０１７４】
【表１−Ａ】
2015509080.tif 000012
【０１７５】
【表１−Ｂ】
2015509080.tif 000013
【０１７６】
【表１−Ｃ】
2015509080.tif 000014
【０１７７】
実施例２
例示的な過加水分解酵素を固体浸透性マトリックス上に固定化した。該マトリックスを注射器中にロードし、過酸加水素およびトリアセチンを含む溶液を、該マトリックスを通じて圧入（press）して、過酢酸（ＰＡＡ）を生成および分注した。
【０１７８】
プロトタイプの酵素マトリックスは以下のように調製した：  ０．１ｇのヒドロキシアパタイト粉末を、１０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）中の１５００マイクロリットルの５マイクロモーラーの過加水分解領域およびヒドロキシアパタイト結合ドメインを有する酵素と共に、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、該粉末を、１ｍｌの１０ｍＭリン酸緩衝液で３回洗浄し、毎回スピンダウンし、液体にピペッティングし、緩衝液に再懸濁し、これを繰り返した。次いで、該粉末を、５００マイクロリットルの１０ｍＭ  リン酸緩衝液に再懸濁し、３ｍｌの注射器に２５  ｍシリンジフィルターチップ（５ミクロンメンブレン）を用いてロードし、過剰量の液体をフィルターを通じて分注した。
【０１７９】
１００ｍＭのリン酸緩衝液、１００ｍＭのトリアセチンおよび１００ｍＭの過酸化水素を含む反応緩衝液５００マイクロリットルを注射器にロードし、フィルターを通じて分注し、回収した。９０マイクロリットルの生成物を回収し、次いで、該反応を４０マイクロリットルの１．３Ｍ  Ｈ３ＰＯ４により停止させた。結果的に得られた混合物を、次いで、リン酸緩衝液中で１：１０に希釈し、検出試薬に加え、１０分間インキュベートして、Ａ４０５ｎｍにて読み取った。生成されたＰＡＡ量を測定した。次いで、該手順を酵素を用いずに繰り返し、対照とした。
【０１８０】
ペルヒドロラーゼ酵素を用いない場合の３２ｐｐｍと比較して、本方法により約９００ｐｐｍのＰＡＡが生成された。この反応物は、固定化した酵素を用いた６０秒未満の場合と対照的であった。
【表２−Ａ】
2015509080.tif 000015
【０１８１】
本実験を酵素を用いて３回、酵素を用いずに３回繰り返し；酵素との接触は１５秒を超えなかった。酵素を用いた場合は約３００〜３５０ｐｐｍ、酵素を用いない場合には約６５ｐｐｍのＰＡＡが一貫して産生された。この結果を以下の表２Ｂに示す。
【表２−Ｂ】
2015509080.tif 000016
【０１８２】
同様の結果が、より大きな注射器（１０ｍｌ）を用いても得られた：
【表２−Ｃ】
2015509080.tif 000017
【０１８３】
かくして、固定化酵素の存在下での反応は、再現性よく、迅速かつ効率的に進行し、何度も細菌を殺すのに必要とされる濃度を与え、歯を白くするのに十分であろうＰＡＡレベルを与えた。
【図１】
2015509080.tif 000022
【図２】
2015509080.tif 000023
【配列表】
2015509080000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年10月8日(2014.10.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの密閉されたチャンバーを形成するよう構成された変形可能な材料を含むパッケージであって、
第１チャンバー；
第２チャンバー；および
場合により更なるチャンバーを含み、
ここで、該チャンバーは、壊れやすい又は易裂性の１つ又はそれ以上のバリアで隔てられており、
ここで、第１チャンバーが過加水分解活性を有する酵素を含有する低粘度溶液を含み、該酵素は参照配列の配列番号：１とアラインする炭水化物エステラーゼファミリー７（ＣＥ−７）シグナチャーモチーフを有し、該シグナチャーモチーフは以下：
ｉ）配列番号：１の１１８−１２０位に対応する部位のＲＧＱモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の１８６−１９０位に対応する部位のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の３０３−３０４位に対応する部位のＨＥモチーフ；
を含み、ならびに
第２チャンバーは少なくとも１つのアシルドナー基質を含み、該基質は以下：
ｉ）構造：
「Ｘ」ｍＲ５
［式中、Ｘは、式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり
Ｒ６は、所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分枝鎖状または環状ヒドロカルビル部分であり、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６がＣ２〜Ｃ７である場合、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
Ｒ５は、所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状、分枝鎖状、または環状ヒドロカルビル部分または５員環状ヘテロ芳香族部分または６員環状芳香族またはヘテロ芳香族部分であり；ここで、Ｒ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸を含み、ここで、Ｒ５は、所望により、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
ｍは、１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有するエステル、ここで、該エステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；
ｉｉ）構造：
【化１】
2015509080.tif 000024
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有するグリセリド；
ｉｉｉ）式：
【化２】
2015509080.tif 000025
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであって、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分枝鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１又はそれ以上のエステル；および
ｉｖ）アセチル化単糖、アセチル化二糖およびアセチル化多糖からなる群より選択されるアセチル化糖類
からなる群より選択され、
ここで、第１チャンバーを圧迫した際に該チャンバー間の１つ又はそれ以上のバリアが壊され、該低粘度溶液が過酸化物源およびアシルドナー基質と混ざり、過加水分解活性を有する該酵素が該過酸化物源から放出される過酸化物と該アシルドナー基質との反応を触媒して過酸を形成するように、第２チャンバーまたは所望による更なるチャンバーは過酸化物源およびゲル化剤を含み、
ここで、混合および過酸の形成の際に、過酸を含む押出可能なゲルが前記溶液およびゲル化剤により形成され、押出可能な該ゲルは、押し出しに、及び歯を白くするのに十分な時間歯の表面に適用するのに適切であり、
該ゲル化剤、過酸化物およびカルボン酸エステル化合物はすべて粉末形態であり、ならびに
該パッケージは開封手段、所望により該パッケージの開封を可能にし、前記混合物を分配できる出口を与えることができる刻み目を付けた領域、キャップまたはプラグを有する、パッケージ。
【請求項２】
過加水分解活性を有する該酵素が、
ａ）配列番号：１；および
ｂ）配列番号：１と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１記載のパッケージ。
【請求項３】
過加水分解活性を有する該酵素が、該酵素のＮ末端もしくはＣ末端に融合された結合ドメインをさらに含み、該結合ドメインが口腔組織に対する親和性を有する、請求項１または２記載のパッケージ。
【請求項４】
口腔組織に対する親和性を有する該結合ドメインが、配列番号：１７８〜１９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、前記いずれかのパッケージ。
【請求項５】
過加水分解活性を有する該酵素が、口腔組織に対する親和性を有し、かつ配列番号：２および配列番号：２と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記いずれかのパッケージ。
【請求項６】
過酸化物源が、過酸化尿素、ポリビニルピロリドン過酸化水素複合体、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウムおよび金属過酸化物、例えば過酸化亜鉛および過酸化カルシウムから選択される固体過酸化物である、前記請求項のいずれか記載のパッケージ。
【請求項７】
ゲル化剤が、カルボマーゲル化剤、多糖類樹脂、加工食品用デンプン、動物もしくは魚ベースのゼラチン、シリカ、およびその２又はそれ以上の組合せから選択される、前記請求項のいずれか記載のパッケージ。
【請求項８】
該低粘度溶液が緩衝剤をさらに含む、前記請求項のいずれかに記載のパッケージ。
【請求項９】
保管時に第２パートから物理的に隔てられ、使用直前に第２パートと合わされる第１パートを含む複数パートのオーラルケア組成物であって、第１パートが過加水分解活性を有する酵素を含み、該酵素は参照配列の配列番号：１とアラインする炭水化物エステラーゼファミリー７（ＣＥ−７）シグナチャーモチーフを有し、該シグナチャーモチーフは以下：
ｉ）配列番号：１の１１８−１２０位に対応する部位のＲＧＱモチーフ；
ｉｉ）配列番号：１の１８６−１９０位に対応する部位のＧＸＳＱＧモチーフ；および
ｉｉｉ）配列番号：１の３０３−３０４位に対応する部位のＨＥモチーフ；
を含み、ならびに
第２パートは過酸化物源、ゲル化剤および少なくとも１つのアシルドナー基質を含み、該基質は以下：
ｉ）構造：
「Ｘ」ｍＲ５
［式中、Ｘは、式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり
Ｒ６は、所望により、ヒドロキシル基またはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状、分枝鎖状または環状ヒドロカルビル部分であり、ここで、Ｒ６は、所望により、Ｒ６がＣ２〜Ｃ７である場合、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
Ｒ５は、所望により、ヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状、分枝鎖状、または環状ヒドロカルビル部分または５員環状ヘテロ芳香族部分または６員環状芳香族またはヘテロ芳香族部分であり；ここでＲ５中の各炭素原子は、個々に、１以下のヒドロキシル基または１以下のエステル基またはカルボン酸を含み、ここで、Ｒ５は、所望により、１又はそれ以上のエーテル結合を含んでもよく；
ｍは、１〜Ｒ５中の炭素原子の数の範囲の整数である］
を有するエステル、ここで、該エステルは２５℃において少なくとも５ｐｐｍの水への溶解度を有し；
ｉｉ）構造：
【化３】
2015509080.tif 000026
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ３およびＲ４は、個々に、ＨまたはＲ１Ｃ（Ｏ）である］
を有するグリセリド；
ｉｉｉ）式：
【化４】
2015509080.tif 000027
［式中、Ｒ１は、所望により、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状または分枝鎖状アルキルであって、Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０直鎖状または分枝鎖状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリール、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ、または（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ）ｎＨであって、ｎは１〜１０である］
の１又はそれ以上のエステル；および
ｉｖ）アセチル化単糖、アセチル化二糖およびアセチル化多糖からなる群より選択されるアセチル化糖類
からなる群より選択され；ならびに
ここで、該過酸化物源および少なくとも１つの該アシルドナー基質は、過加水分解活性を有する該酵素の存在下で反応して過酸を形成し、ならびに
該ゲル化剤、該ゲル化剤、過酸化物およびカルボン酸エステル化合物はすべて粉末形態である、オーラルケア組成物。
【請求項１０】
過酸化物源が、過酸化尿素、ポリビニルピロリドン過酸化水素複合体、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウムおよび金属過酸化物から選択される固体過酸化物源である請求項９記載のオーラルケア組成物。
【請求項１１】
過酸化物源が、過酸化尿素またはポリビニルピロリドン過酸化水素複合体である、請求項９または請求項１０記載のオーラルケア組成物。
【請求項１２】
ａ．請求項１記載のパッケージまたは請求項９記載の複数パートのオーラルケア組成物を、前記異なるチャンバーまたはパートにおける物質をそれぞれ合わせることにより活性化すること；および
ｂ．かくして得られた混合物の有効量を、歯を白くするのに十分な時間、歯に適用することを含む、歯をホワイトニングする方法。
【国際調査報告】
2015509080.tif 000028
2015509080.tif 000029
2015509080.tif 000030
2015509080.tif 000031