(57)【要約】  アクテオシドおよびイソアクテオシドを含む医薬組成物はアミロイドβペプチドの形成、蓄積、または集合の抑制する能力を有し、そのため、アミロイドβペプチド関連の疾患または症状を予防または治療するために使用することができる。イソアクテシオドのアクテシオドに対する重量比は４：１〜１：４の範囲である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アクテオシドおよびイソアクテオシドを有効成分として含み、前記イソアクテオシドの前記アクテオシドに対する重量比が約４：１〜約１：４である、アミロイドβペプチド関連の疾患または症状の予防または治療のための医薬組成物。
【請求項２】
前記イソアクテオシドの前記アクテオシドに対する重量比が約４：１〜約２：３である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
エキナコシドを含まない、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記アミロイドβペプチドの形成、蓄積、または集合を抑制する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記アミロイドβペプチドの細胞外の形成、蓄積、または集合を抑制する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記アミロイドβペプチドに起因する神経損傷またはアポトーシスを抑制し、これにより学習および記憶能力を維持、改善または回復する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記アミロイドβペプチド関連の疾患または症状は、アルツハイマー病、軽度認知障害、レビー小体認知症、ダウン症候群、遺伝性アミロイド性脳出血（ＨＣＨＷＡ）オランダ型、グアムのパーキンソニズム認知症複合、脳アミロイド血管症、封入体筋炎、前頭側頭認知症、加齢性黄斑変性症、またはピック病である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
アルツハイマー病の治療のための請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
生命体のアルツハイマー病罹患の予防または遅延のための請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ヒトへの前記医薬組成物の有効投与量が、１日に体重１ｋｇあたり、前記有効成分の０．２ｍｇ〜４．０ｍｇに相当する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記有効成分の源として植物から抽出したフェニルエタノイド配糖体の製剤を含み、前記製剤が前記イソアクテオシドおよび前記アクテオシドを主要なフェニルエタノイド配糖体として含み、前記イソアクテシオドの含有量が前記アクテオシドの含有量より大きい、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記製剤は、製剤重量を基準として、１２〜３２％のアクテオシドと２６〜４６％のイソアクテオシドとを含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記植物はカンカニクジュヨウである、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記製剤は、
ａ）前記カンカニクジュヨウの多肉質茎を第一の極性溶剤を用いて抽出する工程；
ｂ）工程ａ）から得られた抽出物を、濃縮後、疎水性マクロポーラスポリマービーズを充填したカラムに導入し、これによりフェニルエタノイド配糖体が前記ポリマービーズに吸着できるようにする工程；
ｃ）移動層洗浄液として第二の極性溶剤を用いて、前記カラムを洗浄し、前記フェニルエタノイド配糖体の大部分をポリマービーズ上に吸着させたまま遊離の化合物を除去する工程；
ｄ）第三の極性溶剤を用いて、ポリマービーズから前記フェニルエタノイド配糖体を溶出させ、前記フェニルエタノイド配糖体を含む溶出液を得る工程、この際、前記第一の極性溶剤は、水、メタノール、エタノール、水とメタノールとの混合溶剤、または、水とエタノールとの混合溶剤であり；前記第二の極性溶剤は水であり；および前記第三の極性溶剤は、メタノール、エタノール、水とメタノールとの混合溶剤、または、水とエタノールとの混合溶剤であり、かつ前記第三の極性溶剤は前記第二の極性溶剤よりも極性が低い；
ｅ）工程ｂ）から得られた前記フェニルエタノイド配糖体を含む溶出液を濃縮し、再び水に溶解し、得られた水溶液をマクロポーラス樹脂と接触させて、前記フェニルエタノイド配糖体を前記マクロポーラス樹脂に吸着させる工程；および
ｆ）前記マクロポーラス樹脂を第四の極性溶剤と第五の極性溶剤とを用いて順に洗浄する工程、この際、前記第五の極性溶剤は前記第四の極性溶剤よりも極性が低く、その結果、前記第四の極性溶剤の洗浄から得られた溶出液はアクテオシドおよびイソアクテオシドを含まず、前記第四の極性溶剤の洗浄から得られた溶出液はアクテオシドおよびイソアクテオシドのみを含み、この際、前記第四の極性溶剤および前記第五の極性溶剤は、水とメタノールとの混合溶剤、または水とエタノールとの混合溶剤である；
を含む製造方法により得られる、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記第四の極性溶剤は２５〜３５％のエタノール水溶液であり、前記第五の極性溶剤は３５〜４５％のエタノール水溶液である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はアミロイドβペプチド関連の疾患または症状の予防または治療に用いられる医薬組成物に関し、当該医薬組成物はアミロイドβペプチドの形成、蓄積、または集合を抑制できる有効成分として、アクテオシドおよびイソアクテオシドを含む。
【背景技術】
【０００２】
米国特許第７，０８７，２５２  Ｂ２号明細書は、カンカニクジュヨウ（Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ  Ｔｕｂｕｌｏｓａ  （Ｓｃｈｅｎｋ）  Ｗｉｇｈｔ）から抽出されたフェニルエタノイド配糖体を含む医薬製剤であって、２５〜５０重量％のエキナコシドと５〜１５重量％のアクテオシドとを含む医薬製剤を開示し、当該医薬製剤が老年性認知症の治療に有用である、としている。イソアクテオシドおよび他のフェニルエタノイド配糖体が知られており、これらも前記医薬製剤に含まれている。
【０００３】
本願出願人は国際公開第２０１１／１５７０５９  Ａ１号においてイソアクテシオドまたはその薬学的に許容される塩をアミロイドβペプチド（Ａβ）の形成、蓄積、または集合の抑制に用いることおよびアミロイドβペプチド関連の疾患または症状の予防または治療用の薬剤の製造に用いることを開示する。
【０００４】
米国特許第７，０８７，２５２  Ｂ２号明細書および国際公開第２０１１／１５７０５９  Ａ１号の完全な開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００５】
本出願において発明者は国際公開第２０１１／１５７０５９号の研究を継続し、関連発明を完成させた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
アミロイドβペプチドおよびその集合体は生命体においてさまざまな疾患または症状を引き起こす可能性があるため、本発明の一目的は、アミロイドβペプチドの形成、蓄積、または集合を抑制するための医薬組成物を提供することであり、このような医薬組成物は食物、飲料、咀嚼物質、パッチ、スキンケア製品等における添加物として使用することができる。本発明の他の目的はアミロイドβペプチド関連の疾患または症状の予防または治療のための医薬組成物を提供することである。
【０００７】
本発明のさらに他の目的はアミロイドβペプチド関連の疾患または症状の予防または治療のための薬剤の製造における医薬組成物の使用を提供する。
【０００８】
本発明に従って提供されるアミロイドβペプチド関連の疾患または症状の予防又は治療のための医薬組成物はアクテオシドおよびイソアクテオシドを有効成分として含有し、当該医薬組成物においてイソアクテオシドのアクテオシドに対する重量比は４：１〜１：４である。
【０００９】
好ましくは、前記医薬組成物中のイソアクテオシドのアクテオシドに対する重量比は４：１〜２：３である。
【００１０】
好ましくは、前記医薬組成物はエキナコシドを含まない。
【００１１】
好ましくは、前記医薬組成物はアミロイドβペプチドの形成、蓄積または集合を抑制することができる。
【００１２】
好ましくは、前記医薬組成物は前記アミロイドβペプチドの細胞外の形成、蓄積、または集合を抑制することができる。
【００１３】
好ましくは、前記医薬組成物は、前記アミロイドβペプチドに起因する神経損傷またはアポトーシスを抑制することができ、これにより学習および記憶能力を維持、改善または回復する。
【００１４】
好ましくは、前記アミロイドβペプチド関連の疾患または症状は、アルツハイマー病、軽度認知障害、レビー小体認知症、ダウン症候群、遺伝性アミロイド性脳出血（ＨＣＨＷＡ）オランダ型、グアムのパーキンソニズム認知症複合、脳アミロイド血管症、封入体筋炎、前頭側頭認知症、加齢性黄斑変性症、またはピック病である。
【００１５】
好ましくは、前記医薬組成物はアルツハイマー病の治療のためのものである。
【００１６】
好ましくは、前記医薬組成物は生命体のアルツハイマー病罹患の予防または遅延のためのものである。
【００１７】
好ましくは、ヒトへの前記医薬組成物の有効投与量が、１日に体重１ｋｇあたり、前記有効成分の０．２ｍｇ〜４．０ｍｇに相当する。
【００１８】
好ましくは、前記医薬組成物は前記有効成分の源として植物から抽出したフェニルエタノイド配糖体の製剤を含み、前記製剤は前記イソアクテオシドおよび前記アクテオシドを主要なフェニルエタノイド配糖体として含み、前記イソアクテシオドの含有量が前記アクテオシドの含有量より大きい。
【００１９】
好ましくは、前記製剤は、製剤重量を基準として、１２〜３２％のアクテオシドと２６〜４６％のイソアクテオシドとを含む。
【００２０】
好ましくは、前記植物はカンカニクジュヨウである。
【００２１】
好ましくは、前記製剤は以下の工程を含む製造方法により得られる：
ａ）カンカニクジュヨウの多肉質茎を第一の極性溶剤を用いて抽出する工程；
ｂ）工程ａ）から得られた抽出物を、濃縮後、疎水性マクロポーラスポリマービーズを充填したカラムに導入し、これによりフェニルエタノイド配糖体が前記ポリマービーズに吸着できるようにする工程；
ｃ）移動層洗浄液として第二の極性溶剤を用いて、前記カラムを洗浄し、前記フェニルエタノイド配糖体の大部分はポリマービーズ上に吸着させたまま遊離の化合物を除去する工程；
ｄ）第三の極性溶剤を用いて、ポリマービーズから前記フェニルエタノイド配糖体を溶出させ、前記フェニルエタノイド配糖体を含む溶出液を得る工程、この際、前記第一の極性溶剤は、水、メタノール、エタノール、水とメタノールとの混合溶剤、または、水とエタノールとの混合溶剤であり；前記第二の極性溶剤は水であり；および前記第三の極性溶剤は、メタノール、エタノール、水とメタノールとの混合溶剤、または、水とエタノールとの混合溶剤であり、かつ前記第三の極性溶剤は前記第二の極性溶剤よりも極性が低い；
ｅ）工程ｂ）から得られた前記フェニルエタノイド配糖体を含む溶出液を濃縮し、再び水に溶解し、得られた水溶液をマクロポーラス樹脂と接触させて、前記フェニルエタノイド配糖体を前記マクロポーラス樹脂に吸着させる工程；および
ｆ）前記マクロポーラス樹脂を第四の極性溶剤と第五の極性溶剤とを用いて順に洗浄する工程、この際、前記第五の極性溶剤は前記第四の極性溶剤よりも極性が低く、その結果、前記第四の極性溶剤の洗浄から得られた溶出液はアクテオシドおよびイソアクテオシドを含まず、前記第四の極性溶剤の洗浄から得られた溶出液はアクテオシドおよびイソアクテオシドのみを含み、この際、前記第四の極性溶剤および前記第五の極性溶剤は、水とメタノールとの混合溶剤、または水とエタノールとの混合溶剤である。
【００２２】
好ましくは、前記第四の極性溶剤は２５〜３５％のエタノール水溶液であり、前記第五の極性溶剤は３５〜４５％のエタノール水溶液である。
【００２３】
本発明の上記目的および他の目的、特徴、ならびに利点をよりよく理解するため、添付図面を参照して提示した実施例を用いて本発明を以下に詳述する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は薬剤Ａ（アクテシオド）、薬剤Ｉ（イソアクテオシド）、Ｃ（対照群、薬剤なし）、およびＡのＩに対する比率の異なる医薬組成物の、細胞外Ａβ１−４０の蓄積に対する効果を示す。
【図２】図２は薬剤Ａ（アクテオシド）、薬剤Ｉ（イソアクテオシド）、Ｃ（対照群、薬剤なし）、およびＡのＩに対する比率の異なる医薬組成物の、Ａβ１−４２のオリゴマー形成に対する効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
発明を実施するための最良の形態
アミロイドβペプチドに起因する多様な疾患は共通の特徴：アミロイドβペプチド集合体の形成を有している。このアミロイドβペプチド集合体は原線維または溶菌斑のような形状で存在し、生命体の系統、臓器、組織、または体液中に堆積して、多様な疾患または症状を引き起こす。したがって、アミロイドβペプチドの形成、蓄積、または集合の抑制をアミロイドβペプチド関連の疾患または症状の効果的な予防または治療へのアプローチとして用いることができると考えられる。
【００２６】
本明細書で使用される「予防」との語は、生命体における疾患または症状の発生を回避または遅延させることを意味する。本明細書で使用される「治療」との語は、疾患もしくは症状の進行を減速もしくは停止させること、または、個体を改善された状況もしくは正常な状況へと回復させることを意味する。
【００２７】
「アミロイドβペプチド関連の疾患または症状」との語は一般にアミロイドβペプチドの形成、蓄積、または集中に関連して発生する疾患または症状を指し、特にアミロイドβペプチドに起因する疾患または症状を指す。異常な形成、蓄積、または集中が特定の疾患または症状を有する特定割合の個体に見出される場合、当該疾患または症状がアミロイドβペプチドに関連すると判断することができる。また、特定の疾患または症状において影響を受ける病理学的特徴が発生しそうな場所にアミロイドβペプチドが集合する場合、その疾患または症状もアミロイドβペプチドと関連していると判断することができる。
【実施例】
【００２８】
以下の実施例では、表１で挙げた試験サンプルを用いてＡβ実験を行い、さらにいずれの試験サンプルも添加していない対照群（Ｖｅｈｉｃｌｅ）と比較した。
【００２９】
【表１】
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実施例１：神経芽腫細胞の培養
野生型ヒト神経芽腫細胞（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）をイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）／ハムＦ１２培地（１：１混合物）（１０％ＦＢＳ、１０ユニット／ｍｌのペニシリン、１０μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含有）で培養した。野生型マウス神経芽腫Ｎｅｕｒｏ−２ａ細胞を最小必須培地（ＭＥＭ）（１０％ＦＢＳ、１０ユニット／ｍｌのペニシリン、１０μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含有）で培養した。
【００３０】
実施例２：各試験サンプルに対するＡβ１−４０の細胞外蓄積測定
実施例１における野生型ヒト神経芽腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の培地を化学的に明確な培地（ＥＭＥＭ／Ｆ１２培地（Ｃａｔ．Ｎｏ．１２５００−０６２）、ヘペス（Ｈｅｐｅｓ）５ｍＭ、グルコース０．６％、ＮａＨＣＯ３３ｍＭ、グルタミン２．５ｍＭ、インスリン２５μｇ／ｍｌ、トランスフェリン１００μｇ／ｍｌ、プロゲステロン２０ｎＭ、プトレッシン６０μＭ、亜セレン酸ナトリウム３０ｎＭ、ヘパリン２μｇ／ｍｌ）に取り替えた。各ウェルは３００μｌの培養培地中に１ｘ１０５ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を含有していた。３０分後、各ウェルを表１に挙げられた試験サンプルを用いてそれぞれ総濃度５０μｇ／ｍｌで２４時間処理した。その後、各ウェルの培地中のＡβ１−４０のレベルをヒトＡβ１−４０免疫測定キット（カタログ＃  ＫＨＢ３４８２  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって分析した。
【００３１】
ヒト神経芽腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞はＡβの細胞外蓄積を引き起こす。図１は、いずれの試験サンプルでも処理されなかった溶媒対照群（Ｖｅｈｉｃｌｅ）（Ｃ）の培地中のＡβ１−４０の量を基準とした、試験サンプルで処理された各ＳＨ−ＳＹ５Ｙウェルの培地中のＡβ１−４０の割合を示す。結果を平均±標準偏差（ＳＤ）形式で示した。溶媒対照群と試験サンプルで処理した群との有意な差異を＊＊＊，Ｐ＜０．００１によって示した。
【００３２】
図１を参照すると、試験サンプルＡ（アクテオシド）は培地中のＡβ１−４０のレベルを約１０％低減し、試験サンプルＡ：Ｉ  ４０：１０（アクテオシド４０μｇ／ｍｌ＋イソアクテオシド１０μｇ／ｍｌ）は培地中のＡβ１−４０のレベルを約２２％低減し、残りの試験サンプルは培地中のＡβ１−４０のレベルを約８０％低減する。図１の結果は、アクテオシド＋イソアクテオシド＝３０μｇ／ｍｌ＋２０μｇ／ｍｌ；２０μｇ／ｍｌ＋３０μｇ／ｍｌ；および１０μｇ／ｍｌ＋４０μｇ／ｍｌのイソアクテオシド（Ｄ）試験サンプル、ならびにイソアクテオシド５０μｇ／ｍｌの試験サンプルが細胞外Ａβ１−４０蓄積の低減に有意な活性を有することを示す。
【００３３】
実施例３：各試験サンプルに対するＡβ１−４２オリゴマー化の実験
乾燥ヒトＡβ１−４２を冷蔵庫から取り出し、室温と平衡な状態とした。Ａβ１−４２を１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール（ＨＦＩＰ）に１ｍＭの濃度で溶解した後、室温で１時間放置した。Ａβ１−４２／ＨＦＩＰ溶液をハミルトンシリンジで等分した後に、窒素ガス流のもとで乾燥し、−２０℃の温度で保持した。ＨＦＩＰで処理したＡβ１−４２をＰＢＳ中に溶解し、各試験サンプルを５０μｇ／ｍｌの濃度かつ４℃で２４時間処理しながら振盪培養し、Ａβ１−４２オリゴマーを調製した。Ａβ１−４２オリゴマー形成のレベルをチオフラビンＴ蛍光発光（Ｅｘ＝４５０ｎｍ、Ｅｍ＝４８２ｎｍ）によって分析した。
【００３４】
図２は、表１の試験サンプルのそれぞれがＡβ１−４０オリゴマー化（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）に対する影響を示し、その結果を、いずれの試験サンプルでも処理されなかった対照群（Ｃ）に基づく割合で示す。図２の結果から、全ての試験サンプルがＡβ１−４２オリゴマー化の抑制活性を有することがわかった。ここで、アクテオシド＋イソアクテオシド＝３０μｇ／ｍｌ＋２０μｇ／ｍｌ；２０μｇ／ｍｌ＋３０μｇ／ｍｌ；および１０μｇ／ｍｌ＋４０μｇ／ｍｌイソアクテオシド（Ｄ）試験サンプル、ならびに、イソアクテオシド＝５０μｇ／ｍｌの試験サンプルはＡβ１−４２オリゴマー化の抑制において好適な活性を有し、原線維または老人斑を形成するＡβを抑制することができる。
【００３５】
以上の結果から、アクテオシドおよびイソアクテオシドの医薬組成物は、Ａβの形成、累積、または集合の有効成分とすることができ、当該医薬組成物は、Ａβに起因する神経損傷またはアポトーシスを抑制し、これにより学習および記憶能力を維持、改善または回復することが予測できる。また、以上の結果から、当該医薬組成物は、Ａβ関連の疾患または症状の予防または治療に用いることができる。
【００３６】
記載されているＡβ関連の疾患または症状は、アルツハイマー病、軽度認知障害、レビー小体認知症、ダウン症候群、遺伝性アミロイド性脳出血（ＨＣＨＷＡ）オランダ型、グアムのパーキンソニズム認知症複合、脳アミロイド血管症、封入体筋炎、前頭側頭認知症、加齢性黄斑変性症、ピック病、およびその他を含むが、これに限定されない。また、記載されているＡβはせいぜいＡβ１−４０または高度に原線維発生的なＡβ１−４２で例示したが、Ａβは他のペプチドフラグメントも含むことができる。
【００３７】
図１および図２の結果はイソアクテオシドが良好な活性を有することを示すが、サッカリド含有分子であるイソアクテオシドの応用を実現するには化学的な合成が困難である。植物源から高純度のイソアクテオシドを得るには非常にコストもかかる。経済的利益や薬物治療の有効性などの実用面を考慮すると、図１および図２の結果はアミロイドβペプチド抑制剤として純粋なイソアクテオシドに相当する活性を有するアクテオシドおよびイソアクテオシドの混合物がアミロイドβペプチド関連の疾患または症状の予防または治療において、精製アクテオシドの代替物として使用することができることを示す。
【００３８】
以下の実施例では、米国特許第７，０８７，２５２号に開示されるフェニルエタノイド配糖体含有製剤を製造する方法を採用し、当該方法は以下の工程：ａ）カンカニクジュヨウの地下部分（多肉質茎）を抽出する工程と；b)工程ａ）から得られた抽出物を、疎水性マクロポーラスポリマービーズを充填したカラムに導入し、これによりフェニルエタノイド配糖体が前記ポリマービーズに吸着できるようにする工程と；ｃ）移動層洗浄液として第二の極性溶剤を用いて前記カラムを溶出して、前記フェニルエタノイド配糖体の大部分を実質的にポリマービーズ上に吸着させたまま遊離の化合物を前記カラムから除去させる工程と；ｄ）フェニルエタノイド配糖体を含む溶出液を得るために第三の極性溶剤を用いて前記カラムを溶出する工程（この際、前記第三の極性溶剤は前記第二の極性溶剤よりも極性が低い）と；を含む。
【００３９】
工程ａ）における第一の極性溶剤は例えば、水、または、水とエタノールとの混合溶剤でありうる。工程ｃ）における第二の極性溶剤は水である。工程ｄ）における第三の極性溶剤は例えば、メタノール、エタノール、水とメタノールとの混合溶剤、または、水とエタノールとの混合溶剤でありうるが、ここでは第三の極性溶剤は水とエタノールとの混合溶剤である。
【００４０】
本発明は、さらにカンカニクジュヨウ（Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ  Ｔｕｂｕｌｏｓａ  （Ｓｃｈｅｎｋ）  Ｗｉｇｈｔ）由来の前記フェニルエタノイド配糖体の製剤を直接精製することによってそこに含まれる最適なフェニルエタノイド配糖体であるアクテオシドおよびイソアクテオシドを含む医薬組成物を得るための精製方法を提供する。さらなる精製方法は、ｅ）多様なフェニルエタノイド配糖体を含有するカンカニクジュヨウ（Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ  Ｔｕｂｕｌｏｓａ（Ｓｃｈｅｎｋ）Ｗｉｇｈｔ）由来の前記製剤をマクロポーラス樹脂を用いて精製する工程と；ｆ）前記マクロポーラス樹脂を第四の極性溶剤と第五の極性溶剤を用いて順に溶出し、その結果、前記第五の極性溶剤溶出から得られた溶出液は実質的にフェニルエタノイド配糖体のアクテオシドおよびイソアクテオシドのみを含む工程と；を含む。本発明の好ましい実施形態の一つにおいて、第四の極性溶剤は例えば２５〜３５％のエタノール水溶液であり、第五の極性溶剤は例えば３５〜４５％のエタノール水溶液でありうる。
【００４１】
好ましくは、当該疎水性マクロポーラスポリマービーズは、架橋された多環芳香族類であり、より好ましくは架橋ポリスチレンまたはスチレンおよびジビニルベンゼンの架橋共重合体（例えば、Ｄ−１０１タイプまたはＡＢ−８タイプの材料）である。
【００４２】
フェニルエタノイド配糖体のアクテオシドおよびイソアクテオシドのみを実質的に含有する医薬組成物は、第五の極性溶剤溶出から得られる溶出液を濃縮または乾燥することにより直接的に得ることができる。
【００４３】
実施例４：フェニルエタノイド配糖体のアクテオシドおよびイソアクテオシドのみを含む医薬組成物
カンカニクジュヨウ（Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ  Ｔｕｂｕｌｏｓａ  （Ｓｃｈｅｎｋ）  Ｗｉｇｈｔ）の多肉質茎のフレーク１０ｋｇをフレークの８倍量の水に浸漬した。フレークを１時間水に浸漬した後、水で２時間煮出した。煮出された混合物をろ過して第一のろ液を得た。その後、残渣を当該残渣の６倍量の水で煮出して、煮出された混合物をろ過して第二のろ液を得た。第三のろ液も第二のろ液と同じ手順で得た。第三のろ液を回収し、真空濃縮し、比重は１．１０（５０℃）であった。濃縮形態のろ液をエタノールと混合し、６０％のエタノールを含む混合物を形成した後、１２時間冷蔵した。その後、冷却された混合物から上澄みを採取する一方、残留物をろ過してろ液を得、これを上澄みと混合して真空濃縮し、比重が１．１０（５０℃）である目的抽出物を得た。
【００４４】
６ｋｇの目的抽出物を加熱しながら、目的抽出物と同量の水に加熱溶解し、その後、徐々に処理済みのマクロポーラス樹脂カラムに導入した。最初に水で洗浄し、薬剤の４倍量の水溶出液を収集準備し；４０％エタノールで再び洗浄し、薬剤の５倍量の４０％エタノール溶出液を収集準備した。水溶出液を再びマクロポーラス付着カラム中に注入し、まず、薬剤の３倍量の水で洗浄し、水溶出液を廃棄し；次に４０％エタノールで洗浄し、薬剤の４倍量の０％エタノール溶出液を収集準備した。二回の４０％エタノール溶出液を混合し、濃縮し、乾燥して、フェニルエタノイド配糖体の製剤１１０７ｇを得た。
【００４５】
高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した、溶剤Ａ：０．１％ギ酸を含むアセトニトリル（ＣＡＮ）、溶剤Ｂ：０．１％ギ酸を含むＭＱ−Ｈ２Ｏ、カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８カラム、２．１×１５０ｍｍ、５μｍ；流速：０．３ｍｌ／分；ＵＶ波長：３３３ｎｍ。上述のフェニルエタノイド配糖体を含む製剤のエキナコシド、アクテオシド、およびイソアクテオシドの含有量を測定し、それぞれ３３．６重量％、３．６５重量％、および６．０５重量％であると算出された。
【００４６】
フェニルエタノイド配糖体を含む製剤２００ｇを水８００ｇに溶解し、得られた溶液をマクロポーラス樹脂に導入して精製し、これを３０％のエタノール水溶液と４０％のエタノール水溶液とを用いて順に溶出した。薄層クロマトグラフィー（ポリアミド）をＵＶ３６５ｎｍで実施し、各溶出液を分析した。ここで、３０％エタノール水溶液から収集した溶出液はアクテオシドおよびイソアクテオシドを含有せず、４０％エタノール水溶液から収集された溶出液は２３．６ｇのフェニルエタノイド配糖体のアクテオシドおよびアクテオシドのみを含有する。この実施例では、溶出液中のアクテオシドは２２．５重量％であり、溶出液中のイソアクテオシドは３６．４重量％である。
【００４７】
上記のいくつかの好ましい実施形態によって本発明を開示したが、これらは本発明を限定するためのものではない。本発明の精神から逸脱することなく当業者により実施される多様な等価な置換や変更もさらに添付の特許請求の範囲の範囲内にある。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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