(57)【要約】本発明は、認知障害及び／又は神経変性障害、特にアルツハイマー病の治療又は予防における使用のための、プロバイオティクス菌株ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５をポリフェノールと組み合わせて含む組成物に関する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
認知障害及び／又は神経変性障害の治療又は予防における使用のための、ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５をポリフェノールと組み合わせて含む組成物。
【請求項２】
障害が脳内のタンパク質凝集に関連付けられる、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
障害が、アルツハイマー病、クロイツフェルトヤコブ病、ハンチントン病及びパーキンソン病からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
ポリフェノールが、ロスマリン酸、チコリ酸及びカフタル酸、又はその組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
ポリフェノールが植物抽出物の形態で提供される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
ロスマリン酸が、ローズマリー抽出物の形態で提供される、請求項５に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
ポリフェノールが、薬学的に許容される塩の形態で提供される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５が、生細菌、非複製的な細菌の形態で及び／又は前記細菌が培養された培地若しくは培地の画分としてである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５を１０２〜１０１１ｃｆｕ／ｇ（組成物の乾燥質量）の量で、好ましくは、１０３〜１０９ｃｆｕ／ｇ（組成物の乾燥質量）の量で含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５がカプセル封入されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
ヒト又は愛玩動物、特に、５０歳を超えるヒトに投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
食品、動物用食品、医薬組成物、栄養製剤、栄養補助食品、飲料、食品サプリメント及び食品添加物からなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
水分活性が０．２よりも小さく、例えば、０．１９〜０．０５の範囲であり、好ましくは、０．１５よりも小さい、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
認知障害及び／又は神経変性障害を治療する若しくは予防するための医薬品の製造のための、ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５をポリフェノールと組み合わせて含む組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、認知障害及び／又は神経変性障害、特に、アルツハイマー病の治療又は予防における使用のための、プロバイオティクス菌株（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｓｔｒａｉｎ）ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５をポリフェノールと組み合わせて含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ほとんど全ての国において、年齢が６０歳を超える人の割合が、他のどの年齢のグループよりも速く増加している。これは少なくともある程度、平均寿命が延びていることに起因する。したがって、この人口の高齢化は、健康意識の高まり並びに公衆衛生上のケアの利用可能性及び性能の改善に関する成功談ととらえることができる。ＷＨＯによれば、世界の人口で６０歳を超える人の数は現在６億５０００万人である。「高齢者（ｇｒｅｙｉｎｇ）」人口は、２０５０年までに２０億人に達すると予測される。
【０００３】
しかしながら、加齢はいくつかの疾患を発症させるリスクを高め、人々が健康に年を重ねることができるようにすることは、依然として今日のわれわれの社会のねらいである。（特に、高齢化人口の）生活の質の核となるものは、適切な認知能力及びその維持である。
【０００４】
最もよく知られる精神障害は、主に、記憶プロセシング、知覚及び問題解決に影響を与える。最も直接的な認知障害は、健忘症、認知症及びせん妄である。アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の中で最も一般的な形態である。こうした、現在のところ治療が難しい、変性性の末期的な疾患については、アロイス・アルツハイマー（Ａｌｏｉｓ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ）が１９０６年に最初に記載した。一般に、アルツハイマーは、６５歳を超える人々において診断されるが、有病率がより低い早期発症型のアルツハイマー病は、はるかに早期に発症し得る。アルツハイマー病の罹患者は、２００６年において世界で推定２６６０万人であったが；この数字は、２０５０年までに４倍に増加し得る。
【０００５】
いくつかの年齢に関連する障害は、適切な栄養によって治療する又は予防することができる。しかしながら、認知障害に関しては、認知障害を予防するために行うことができる栄養上の手段に関しては、ほとんど知られていない。したがって、アミロイドプラーク形成に対して活性がある天然化合物を同定することは、アミロイドプラーク形成がアルツハイマー病における認知機能低下の進行に寄与する、可能性のある因子として同定されて以来、科学の一目的であった。
【０００６】
例えば、国際公開第２００６／１３８３４９号パンフレットでは、ローズマリー及びセージ中に存在する天然化合物が、強力な抗−βＡペプチド活性を示すことが開示されている。さらに、赤ワインから得られるレスベラトロル、緑茶カテキン及びウコン抽出物クルクミンは、ＡＤの潜在的な疾患予防又は治療のために特に注目されている。
【０００７】
しかしながら、適切な認知機能を保証し、認知障害及び／又は神経変性障害を治療する若しくは予防するために使用することができる新規の及びより良い組成物を見出すことが今なお大いに必要とされる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、本発明の目的は、現況技術を改善することであり、特に、認知機能を維持するため並びに認知障害及び／又は神経変性障害を予防するために使用することができる組成物を提供することであった。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らにとって、独立クレームの主題によって本目的を達成し得たことが分かったことは驚くべきことであった。
【００１０】
ＡＤ患者は、老人斑の形成を示す。老人斑は、不溶性の凝集体であるβ−アミロイド（βＡ）から主に構成される細胞外の沈着物である。これらのプラーク又はβＡ細線維沈着物は、それだけには限らないが、アルツハイマー病を含めて多くの神経変性疾患の病態の原因となることが考えられている。これらはまた、脳アミロイドアンギオパチー、ニューロンの喪失、及び大脳萎縮症にも関与し、認知症をもたらす。これら全ての障害は、本発明を使用することにより治療する及び／又は予防することができる。
【００１１】
本発明者らは、２つの異なるアッセイを実施して、Ａβ４２のアミロイド形成経路に沿って異なる状態を標的にする能力についての分子を試験した。本発明者らは、ポリフェノールと組み合わせたプロバイオティクス菌株ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５（Ｌａ１）が、相乗的なやり方で、Ａβオリゴマー形成及び／又は原線維形成を予防する及び／又は抑制することが可能であるということを見出し、したがって、例えば、ＡＤ関連神経病理、記憶喪失及び／又は認知機能低下を抑制する、遅延させる及び／又は後退させることができる食品グレードの組成物として、ポリフェノールと組み合わせたラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５（Ｌａ１）を同定している。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】実施されるアッセイの略図である。
【図２−１】アッセイ１（ＬＭＷ）及びアッセイ２（ＰＦ）におけるＴｈＴ蛍光測定の結果を示すグラフである。試験されたのは、市販のローズマリー抽出物（ＮＰ１）及びラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５（Ｌａ１）と組み合わせた市販のローズマリー抽出物（ＮＰ２）であった。明らかに、Ｌａ１は、ローズマリー抽出物の効果を増強することが可能である。
【図２−２】アッセイ１（ＬＭＷ）及びアッセイ２（ＰＦ）におけるＴｈＴ蛍光測定の結果を示すグラフである。試験されたのは、市販のローズマリー抽出物（ＮＰ１）及びラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５（Ｌａ１）と組み合わせた市販のローズマリー抽出物（ＮＰ２）であった。明らかに、Ｌａ１は、ローズマリー抽出物の効果を増強することが可能である。
【図３−１】アッセイ１（ＬＭＷ）及びアッセイ２（ＰＦ）におけるＴｈＴ蛍光測定の結果を示すグラフである。試験されたのは、チコリ酸（ＮＰ５）及びＬａ１と組み合わせたチコリ酸（ＮＰ６）であった。明らかに、Ｌａ１は、チコリ酸の効果を増強することが可能である。
【図３−２】アッセイ１（ＬＭＷ）及びアッセイ２（ＰＦ）におけるＴｈＴ蛍光測定の結果を示すグラフである。試験されたのは、チコリ酸（ＮＰ５）及びＬａ１と組み合わせたチコリ酸（ＮＰ６）であった。明らかに、Ｌａ１は、チコリ酸の効果を増強することが可能である。
【図４−１】アッセイ１（ＬＭＷ）及びアッセイ２（ＰＦ）におけるＴｈＴ蛍光測定の結果を示すグラフである。試験されたのは、カフタル酸（ＮＰ７）及びＬａ１と組み合わせたカフタル酸（ＮＰ８）であった。明らかに、Ｌａ１は、カフタル酸の効果を増強することが可能である。
【図４−２】アッセイ１（ＬＭＷ）及びアッセイ２（ＰＦ）におけるＴｈＴ蛍光測定の結果を示すグラフである。試験されたのは、カフタル酸（ＮＰ７）及びＬａ１と組み合わせたカフタル酸（ＮＰ８）であった。明らかに、Ｌａ１は、カフタル酸の効果を増強することが可能である。
【図５−１】アッセイ１（ＬＭＷ）及びアッセイ２（ＰＦ）におけるＴｈＴ蛍光測定の結果を示すグラフである。試験されたのは、異なる濃度のＬａ１であった。Ｌａ１は、それ自体で効果を示さない。
【図５−２】アッセイ１（ＬＭＷ）及びアッセイ２（ＰＦ）におけるＴｈＴ蛍光測定の結果を示すグラフである。試験されたのは、異なる濃度のＬａ１であった。Ｌａ１は、それ自体で効果を示さない。
【図５−３】アッセイ１（ＬＭＷ）及びアッセイ２（ＰＦ）におけるＴｈＴ蛍光測定の結果を示すグラフである。試験されたのは、異なる濃度のＬａ１であった。Ｌａ１は、それ自体で効果を示さない。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、認知障害及び／又は神経変性障害（特に、障害が脳内のタンパク質凝集に関連付けられる場合）の治療又は予防における使用のための、ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５をポリフェノールと組み合わせて含む組成物を提供する。
【００１４】
本発明者らは、プロバイオティクス、例えば、ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５（Ｌａ１）が、例えば、アミロイドプラーク形成など、タンパク質凝集に関連付けられる全ての障害を治療する又は予防するために用いられ得るということを見出した。タンパク質凝集に関連付けられる障害のリストは、Ｓｅｌｋｏｅ  ＤＪ．、Ｎａｔｕｒｅ．２００３年１２月１８日；４２６巻（６９６８号）：９００−４．Ｒｅｖｉｅｗ．Ｅｒｒａｔｕｍ  ｉｎ：Ｎａｔｕｒｅ．２００４年３月２５日；４２８巻（６９８１号）：４４５頁によって発表された。
【００１５】
タンパク質凝集に関連付けられる障害には、以下が含まれる。
原発性全身性アミロイドーシス、続発性全身性アミロイドーシス、家族性地中海熱、家族性アミロイドポリニューロパチー１、老人性全身性アミロイドーシス、家族性アミロイドポリニューロパチー２、血液透析−関連アミロイドーシス、フィンランド型遺伝性アミロイドーシス、リゾチームアミロイドーシス、インスリン関連アミロイド、及び／又はフィブリノーゲンα鎖アミロイドーシスなどの全身性細胞外アミロイドーシス；
アルツハイマー病、海綿状脳症、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、ＩＩ型糖尿病、甲状腺の髄様癌及び／又は心房性アミロイドーシスなどの臓器限局型細胞外アミロイドーシス；
アルツハイマー病、レヴィー小体を伴う前頭側頭型認知症、クロイツフェルトヤコブ病、ポリグルタミン伸長疾患（例えば、ハンチントン病脊髄小脳失調症）、及び／又は筋萎縮性側索硬化症など、タンパク質の累進的なミスフォールディング及び凝集を特徴とするヒトの脳疾患。
【００１６】
例えば、本発明の使用によって治療する又は予防することができる認知障害は、神経変性障害、認知機能低下及びそれらの組み合わせからなる群から選択することができる。典型的な神経変性障害は、上記を受けて、アルツハイマー病、クロイツフェルトヤコブ病、ハンチントン病及びパーキンソン病である。
【００１７】
さらに、ＡＤ、認知症及び／又は失認と共によく見られる障害は、本発明の使用により治療することができる。かかる障害には、例えば、睡眠障害、気分障害及び／又はうつ病が含まれる。
【００１８】
ポリフェノールには、４”−（３’’’−メトキシ−４’’’ヒドロキシフェニル）−２”−オキソ−３”−エンブタニル３−（３’−メトキシ−４’ヒドロキシフェニル）プロペノアート（カレビン（ｃａｌｅｂｉｎ）−Ａ）、１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１，４，６−ヘプタトリエン−３−オン、１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１，６−ヘプタジエン−３，５−ジオン（クルクミン）、１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−７−（４−ヒドロキシフェニル）−１，６−ヘプタジエン−３，５−ジオン（デメトキシクルクミン）、１，７−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−１，６−ヘプタジエン−３，５−ジオン（ビスデメトキシクルクミン）、１−ヒドロキシ−１，７−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−６−ヘプテン−３，５−ジオン、１，７−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−１−ヘプテン−３，５−ジオン、１，７−ビス（４−ヒドロキシフェニル）−１，４，６−ヘプタトリエン−３−オン、１，５−ビス（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１，４−ペンタジエン−３−オン、２−ショウガオール、４−ショウガオール、６−ショウガオール、８−ショウガオール、２−ジンゲロール、４−ジンゲロール、６−ジンゲロール、８−ジンゲロール、ギンコール酸、ロスマノール、イソロスマノール、ロスマジアール、カルノソール、カルノシン酸、エピロスマノール、ロスマリン酸、カフタル酸、チコリ酸、レスベラトロル、及び／又はカテキンからなる群から選択することができる。
【００１９】
しかしながら、本発明の好ましい実施形態において、ポリフェノールは、ロスマリン酸、カフタル酸及びチコリ酸、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２０】
これらのポリフェノールは、植物において全て天然に存在する化合物であるため、これらは、例えば、植物として又は植物抽出物の形態で提供してもよい。ポリフェノールを提供するために使用することができる典型的な植物は、例えば、クルクマ種（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｓｐ．）、ジンギベル種（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｓｐ．）、ギンゴ・ビロバ（Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ）、サルビア種（Ｓａｌｖｉａ  ｓｐ．）、ロスマリヌス種（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｓｐ．）、又はそれらの組み合わせとなり得る。
【００２１】
好ましい一実施形態では、ロスマリン酸は、ローズマリー抽出物の形態で提供される。
【００２２】
代替的な実施形態では、ポリフェノールは、薬学的に許容される塩の形態で提供される。
【００２３】
ラクトバチルス・ジョンソニー菌株Ｌａ１は、１９９２年６月３０日にＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ（ＣＮＣＭ）、Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｐａｓｔｅｕｒ、２８  ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ、Ｆ−７５７２４  Ｐａｒｉｓ  Ｃｅｄｅｘ  １５、Ｆｒａｎｃｅとのブダペスト条約に従ってＮｅｓｔｅｃ  Ｓ．Ａ．によって寄託され、寄託番号ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５を付された。この菌株は、欧州特許第０５７７９０４号に記載されており、一方、細菌の分類学の変更によりラクトバチルス・ジョンソニーとして再分類されている。
【００２４】
本発明は、ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５が、生細菌、非複製的な細菌の形態で及び／又は細菌が培養された培地若しくは培地の画分としてである組成物に関連する。そのため、本発明の一実施形態では、プロバイオティクスは、生きている微生物として使用される。本発明の他の実施形態では、プロバイオティクスは、複製しない微生物として使用される。例えば、組成物中に存在するプロバイオティクスの少なくとも９５％は、非複製となり得る。本発明のさらなる実施形態では、プロバイオティクスは、その培地中で培養されたラクトバチルス・ジョンソニーによって産生された代謝産物の少なくとも一部を含有する培地の抽出物として提供される。次いで、ラクトバチルス・ジョンソニー自体は、組成物を投与する前に除去することができる。そのため、ラクトバチルス・ジョンソニーをポリフェノールと一緒に使用しようとする場合、ポリフェノールは、ラクトバチルスを代謝活性させる培地中でラクトバチルスと組み合わせることができる。次いで、本発明に記載の組成物を調製するとき、ラクトバチルス・ジョンソニーは、培地から除去することができる。
【００２５】
治療用途では、組成物は、少なくとも部分的に治癒する又は障害及び／又はそれらの合併症の症状を停止させるのに十分な量で投与される。これを達成するのに適切な量は、「治療有効用量」として定義される。この目的のために有効な量は、障害の重症度並びに患者の体重及び全身状態などの当業者に公知の多くの因子に依存する。予防的な用途では、本発明による組成物を、障害を発症させるリスクを少なくとも部分的に低下させるのに十分な量で、ある特定の障害に感受性がある患者又はそのリスクがある患者に投与する。このような量は、「予防有効用量」と定義される。さらに、正確な量は、患者の健康状態及び体重など、患者特有のいくつかの因子に依存する。
【００２６】
したがって、ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５は、治療有効用量及び／又は予防有効用量で投与される。通常、ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５は、１０２〜１０１１ｃｆｕ／ｇ（組成物の乾燥質量）に相当する量で組成物中に存在し得る。この表現には、細菌が生きている、不活性化されている又は死滅している、さらには、ＤＮＡ若しくは細胞壁材料などの断片として存在する可能性が含まれる。言い換えれば、組成物が含有する細菌の物質量は、実際に、生きている、不活性化されている若しくは死滅している、断片化される又はこれらの状態のいずれか若しくは全ての混合物であるか否か関係なく、全ての細菌が生きているかのように、細菌のその物質量のコロニー形成能力に関して表される。ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５は、１０３〜１０９ｃｆｕ／ｇ（組成物の乾燥質量）に相当する量で存在することが好ましく、１０４〜１０８ｃｆｕ／ｇ（乾燥組成物）に相当する量がさらに好ましい。
【００２７】
同様に、ポリフェノールは、治療有効用量及び／又は予防有効用量で投与される。通常、ポリフェノールは、１〜１００ｍｇ／ｇ（組成物の乾燥質量）の範囲の量で組成物中に存在する。
【００２８】
さらなる実施形態では、ラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５がカプセル封入されている。さらなる実施形態では、ポリフェノールと組み合わせたラクトバチルス・ジョンソニーＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５がカプセル封入されている。カプセル封入技術は、当技術分野で周知であり、ラクトバチルス・ジョンソニー自体に又は本発明の組成物に全体としてここで適用され得る。治療を必要とする患者又は対象によって経口摂取された後、カプセル封入がその封じられた物質を放出するということが条件である。
【００２９】
本発明に記載の組成物は、愛玩動物及び例えば、雌ウシなどの農業用家畜に投与して、クロイツフェルトヤコブ病などのアミロイドプラーク関連障害を発症しないようにすることができる。
【００３０】
他の実施形態では、本組成物は、ヒトに投与されるものとする。アミロイドプラーク関連障害の症状を発症するリスクがあるヒトは、通常、６０歳を超える。そのため、本発明の一実施形態では、本組成物は、６０歳を超えるヒトに投与されるものとする。しかしながら、本発明に記載の組成物が認知障害を予防するために使用することもできるという事実を考慮し、且つ一方では、アミロイドプラーク関連疾患の最初の症状が現れる前に長期間アミロイドプラーク形成が始まる恐れがあるということが知られているということをさらに考慮すると、５０歳を超えるヒトに、さらに好ましくは４０歳を超えるヒトに本組成物を投与することが本発明のさらなる好ましい実施形態である。
【００３１】
本発明に記載の組成物は、食品、動物用食品、医薬組成物、栄養製剤、栄養補助食品、飲料、食品サプリメント又は食品添加物の形態となり得る。そのため、例えば、タンパク質の供給源、脂質の供給源、及び／又は炭水化物の供給源をさらに含み得る。例えば、本組成物が栄養処方である場合、３つの多量養素全てを含むことができる。本組成物は、経口若しくは経腸投与に適した形態であることが好ましい。
【００３２】
組成物が乾燥形態で、例えば、粉末として提供される場合、より長期の貯蔵期間を可能にする形態で組成物を提供することが望ましいこともある。水分活性が、例えば、０．２よりも小さく、例えば、０．１９〜０．０５の範囲で、好ましくは０．１５よりも小さい組成物を提供することにより、保存安定性（ｓｈｅｌｆ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ）が得られることが判明した。このような低い水分活性によって、例えば、生きているラクトバチルス微生物が、長期間生存可能なままであるということが可能になる。水分活性又はａｗは、ある系の水のエネルギー状態の測定値である。これは、同じ温度の純水の蒸気圧で割った水の蒸気圧として定義され；したがって、純粋な蒸留水は水分活性が正確なものである。
【００３３】
本発明の組成物は、例えば、０．３〜１０ｗｔ％の量で少なくとも１種のプレバイオティクスをさらに含むこともできる。「プレバイオティクス」は、腸内でプロバイオティクスの増殖を促進する食物物質を意味する。プレバイオティクスは、胃及び／又は腸の上部で分解されない又はこれらを消化するヒトのＧＩ管で吸収されないが、これらは胃腸のミクロフローラにより及び／又はプロバイオティクスにより発酵される。プレバイオティクスは、例えば、Ｇｌｅｎｎ  Ｒ．Ｇｉｂｓｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｅｌ  Ｂ．Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ、Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｅｐｔ  ｏｆ  Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１９９５年１２５巻：１４０１〜１４１２頁によって定義される。プレバイオティクスの例には、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）及びガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）など、いくつかのオリゴ糖が含まれる。プレバイオティクスの組み合わせは、ラフティロース（Ｒａｆｔｉｌｏｓｅ）（登録商標）という商標で販売されている製品などの１０％短鎖フルクト−オリゴ糖又はラフティリン（Ｒａｆｔｉｌｉｎｅ）（登録商標）という商標で販売されている製品などの１０％イヌリンと共に９０％ＧＯＳなどを使用することができる。
【００３４】
当業者は、本明細書に開示される本発明の全ての特徴を自由に組み合わせることができるということを理解している。本発明のさらなる利点及び特徴は、図及び例から明らかである。
【実施例】
【００３５】
実施例１：
本研究の目標は、ＡＤ関連神経病理、記憶喪失及び認知機能低下を阻害、遅延及び／又は後退させることができる生物学的活性の構成成分を同定することであった。本目標を達成するために、例えば、アルツハイマー病の病因に関係するアミロイドカスケードにおける個別のステップを乱し得る生物活性化合物を同定した。
【００３６】
より詳細には、Ａβオリゴマー形成及び／又は原線維形成の予防及び／又は阻害のために使用することができる化合物を同定した。異なる２つのアッセイを実施した。
【００３７】
アッセイ１：標的指向化単量体Ａβアッセイ（時間枠２４〜４８ｈｒｓ）（図１，１を参照のこと））：
本アッセイでは、サイズ排除の精製済み単量体Ａβ４２（ＬＭＷ）によって開始した。これを、対象の化合物（Ｃ）と共に３７℃でインキュベートした。次いで、凝集の程度をチオフラビンＴ（ＴｈＴ）蛍光によって２４及び４８ｈｒｓで評価した。ＴｈＴは、アミロイド細線維に結合後、蛍光の増強を示す疎水性染料である。ＴｈＴは、アミロイド細線維に特異的に結合するが、Ａβの単量体の形態に結合しない。本アッセイでは、ＴｈＴ蛍光が減少する又は存在しないことによって、試験される分子が、アミロイド細線維の形成を減じる及び／又は妨げることが示される。しかしながら、アミロイド形成経路に沿った時点で、化合物が作用する、すなわち、モノマーの前原線維（ｐｒｏｔｏｆｉｂｒｉｌ）への移行に干渉する又は前原線維の原線維への移行を遮断することを本アッセイのみから推測することは難しい。
【００３８】
アッセイ２：標的指向化前原線維Ａβアッセイ（時間枠２４〜４８ｈｒｓ）（図１、図２（図２−１、図２−２）を参照のこと））：
本アッセイでは、Ａβ４２（ＰＦ）のサイズ排除の精製済み前原線維混合物によって開始した。これを、対象の化合物（Ｃ）と共に３７℃でインキュベートした。次いで、凝集の程度をチオフラビンＴ（ＴｈＴ）蛍光によって２４及び４８ｈｒｓで評価した。前原線維のＴｈＴ蛍光シグナルの増加が減少する又は存在しないことによって、試験される分子が、アミロイド細線維の形成を減じる及び／又は妨げることが示される。これは、少なくとも２つの機序、すなわち、ｉ）前原線維の原線維への移行を遮断する又はｉｉ）前原線維の解離／脱凝集を誘発することによって起こり得る。前原線維のＴｈＴシグナルの減少は、前原線維の解離が起こっていることを示唆しており、不変のＴｈＴシグナルは、前原線維の安定化による原線維形成の阻害を示唆した。
【００３９】
Ａβ４２  ＬＭＷ及びＰＦを最終濃度１０μＭで使用し、単独で又は化合物と共に１：０．５若しくは１：２の比でインキュベートした。
【００４０】
以下の化合物を試験した。
ＮＰ１：ローズマリー抽出物
ＮＰ２：ローズマリー抽出物＋Ｌａ１
ＮＰ５：チコリ酸
ＮＰ６：チコリ酸＋Ｌａ１
ＮＰ７：カフタル酸
ＮＰ８：カフタル酸＋Ｌａ１
ＮＰ２７：Ｌａ１  １０ｍｇ／ｍｌ
ＮＰ２８：Ｌａ１  ９０ｍｇ／ｍｌ
ＮＰ２９：Ｌａ１  ６０ｍｇ／ｍｌ
【００４１】
これらを以下の通り調製した。
ＮＰ１：Ｒｏｂｅｒｔｅｔ（Ｆｒａｎｃｅ）製のローズマリー抽出物１０ｍｇ（Ｒｏｂｅｒｔｅｔ  Ｐ３１）を１ｍｌのリン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）に溶解し、混合物を３７℃で６ｈインキュベートした（サーモミキサー（ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ））
ＮＰ２：Ｒｏｂｅｒｔｅｔ（Ｆｒａｎｃｅ）製のローズマリー抽出物１０ｍｇ（Ｒｏｂｅｒｔｅｔ  Ｐ３１）を１ｍｌのリン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）に溶解した。この溶液に、噴霧乾燥したＬａ１の製剤１０ｍｇを加え、混合物を３７℃で６ｈインキュベートした（サーモミキサー）。これらの細胞を遠心（３０００ｇ、５分）により除去し、上澄みを試験した。
ＮＰ５：リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）中のチコリ酸（１０ｍＭ、有機合成により内部生成された）を、３７℃で２４ｈインキュベートした。
ＮＰ６：リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）中のチコリ酸（１０ｍＭ、有機合成により内部生成された）に、噴霧乾燥したＬａ１製剤６０ｍｇを加えた。次いで、混合物を３７℃で２４ｈインキュベートした（サーモミキサー）。これらの細胞を、遠心（３０００ｇ、５分）により除去し、上澄みを試験した。
ＮＰ７：リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）中のカフタル酸（１０ｍＭ、有機合成により内部生成された）を、３７℃で２４ｈインキュベートした。
ＮＰ８：リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）中のカフタル酸（１０ｍＭ、有機合成により内部生成された）に、噴霧乾燥したＬａ１製剤９０ｍｇを加えた。次いで、混合物を３７℃で２４ｈインキュベートした（サーモミキサー）。これらの細胞を、遠心（３０００ｇ、５分）により除去し、上澄みを試験した。
ＮＰ２７、ＮＰ２８及びＮＰ２９：噴霧乾燥したＬａ１製剤１０ｍｇ、９０ｍｇ又は６０ｍｇを１ｍｌのリン酸緩衝液（ｂｕｔｔｅｒ）（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）に溶解し、３７℃で２４ｈインキュベートした（サーモミキサー）。これらの細胞を遠心（３０００ｇ、５分）により除去し、上澄みを試験した。
【００４２】
これらの結果を図２〜５（図２−１、２−１、３−１、３−２、４−１、４−２、５−１、５−２、５−３）、並びに表１及び表２中に示す。
【表１−１】
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【表１−２】
2015521613.tif 000004
【表１−３】
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【表２】
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【図１】
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【図２−１】
2015521613.tif 000008
【図２−２】
2015521613.tif 000009
【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【国際調査報告】
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