(57)【要約】  ＮＭＤＡ受容体活性の調節において増大された力価を有する化合物を開示する。そのような化合物は、学習、認知活動および無痛などの疾患および疾病の治療、特に神経因性疼痛の緩和および／または軽減に使用されることが企図される。化合物の経口投与できる製剤および静脈内製剤を含む他の薬剤的に許容可能な送達形態も開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2015505296.tif 000090
（式中、
Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−３アルコキシおよびＣ１−３アルキル（所望により１、２または３つのハロゲンで置換されている）からなる群よりそれぞれ独立して選択され；
Ｘ１はＯＨかＮＨ２であり、
Ｘ２はＨかＯＨである）
で表される化合物ならびにその薬剤的に許容可能な塩、立体異性体および水和物。
【請求項２】
ハロゲンが、Ｃｌ、ＢｒおよびＦからなる群より各出現で独立して選択される、請求項１の化合物。
【請求項３】
化合物が、患者に経口投与されると、
【化２】
2015505296.tif 000091
で表されるペプチジル化合物の患者への経口投与よりも実質的に有効である、請求項１または２の化合物。
【請求項４】
Ｘ２がＯＨであり、Ｘ１がＮＨ２である、請求項１から３のいずれか一項の化合物。
【請求項５】
Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３がそれぞれＨである、請求項１から４のいずれか一項の化合物。
【請求項６】
Ｒ１１とＲ１３がＨであり、Ｒ１２がＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＦ３および−ＯＣＨ３からなる群より選択される、請求項１から５のいずれか一項の化合物。
【請求項７】
【化３】
2015505296.tif 000092
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素；ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよび−ＯＨからなる群よりそれぞれ独立して選択され；
Ｒ５はＨまたは−ＣＨ２−フェニル（ここでフェニルは、所望によりハロゲン、Ｃ１〜３アルコキシおよびＣ１〜３アルキル（所望により１、２または３つのハロゲンで置換されている）からなる群より選択される１、２または３つの置換基で置換されている））であり、ただしＲ１とＲ３が−ＯＨでありＲ２とＲ４がメチルである場合、Ｒ５は−ＣＨ２−フェニルであり； 
ＸはＯＲｘとＮＲｘＲｘからなる群より選択され、ここでＲＸは水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群より各出現で独立して選択される）
で表される化合物、その薬剤的に許容可能な塩、立体異性体および水和物。
【請求項８】
【化４】
2015505296.tif 000093
または
2015505296.tif 000094
で表される、請求項７の化合物。
【請求項９】
【化５】
2015505296.tif 000095
または
2015505296.tif 000096
で表される、請求項７の化合物。
【請求項１０】
【化６】
2015505296.tif 000097
で表される、請求項７の化合物。
【請求項１１】
【化７】
2015505296.tif 000098
、
2015505296.tif 000099
、
2015505296.tif 000100
、
2015505296.tif 000101
、
2015505296.tif 000102
、
2015505296.tif 000103
、
2015505296.tif 000104
、
2015505296.tif 000105
、
2015505296.tif 000106
、
2015505296.tif 000107
、
2015505296.tif 000108
、
2015505296.tif 000109
、
2015505296.tif 000110
、
2015505296.tif 000111
、
2015505296.tif 000112
、
2015505296.tif 000113
、
2015505296.tif 000114
、
2015505296.tif 000115
、
2015505296.tif 000116
、
2015505296.tif 000117
、
2015505296.tif 000118
、
2015505296.tif 000119
または
2015505296.tif 000120
で表される、請求項７の化合物。
【請求項１２】
治療有効量の請求項１から１１のいずれか一項の化合物および薬剤的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
注射に適している、請求項１１の医薬組成物。
【請求項１４】
治療を必要とする患者における、鬱病、アルツハイマー病、注意欠陥障害、ＡＤＨＤ、統合失調症または不安症を治療する方法であって、前記患者に薬剤的有効量の請求項１から１２のいずれか一項の化合物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１５】
治療を必要とする患者における、鬱病、アルツハイマー病、注意欠陥障害、ＡＤＨＤ、統合失調症または不安症を治療する方法であって、前記患者に薬剤的有効量の請求項１から６のいずれか一項の化合物を経口投与することを含む、前記方法。
【請求項１６】
治療を必要とする患者における、鬱病、アルツハイマー病、注意欠陥障害、ＡＤＨＤ、統合失調症または不安症を治療する方法であって、前記患者に薬剤的有効量の請求項８から１１のいずれか一項の化合物を皮下または静脈内投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互参照
本願は、２０１１年１０月２４日に出願された米国特許仮出願第６１／５５０，７８２号の優先権を主張し、その全容を参照としてここに組み込む。
【背景技術】
【０００２】
Ｎ−メチル−ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体は、シナプス後イオンチャネル型受容体であり、興奮性アミノ酸のグルタミン酸とグリシンおよび合成化合物のＮＭＤＡに対し特に応答性がある。ＮＭＤＡ受容体は、二価と一価のイオンの受容体関連チャネルを通ってシナプス後神経細胞への流れを制御する（Foster et al., Nature 1987, 329:395-396; Mayer et al., Trends in Pharmacol. Sci. 1990, 11:254-260）。ＮＭＤＡ受容体は、神経細胞構造とシナプス接続を特徴づける発達中に関与しており、経験依存性シナプス改変にも関与しているかもしれない。さらに、ＮＭＤＡ受容体は、長期増強および中枢神経系疾患にも関与すると考えられている。
【０００３】
ＮＭＤＡ受容体は、記憶の獲得、保持および学習などの多くの高次認知機能の根底にあるシナプス可塑性ならびに特定の認知経路および痛みの知覚において主要な役割を果たしている（Collingridge et al., The NMDA Receptor, Oxford University Press, 1994）。さらに、ＮＭＤＡ受容体の特定の特徴は、これらが意識そのものの根底にある脳の情報処理に関与し得ることを示している。
【０００４】
ＮＭＤＡ受容体は、広範なＣＮＳ疾患に関与すると考えられるため特別な関心をもたれている。例えば、脳卒中または外傷による脳虚血の間、大量の興奮性アミノ酸のグルタミン酸が損傷を受けたまたは酸素が欠乏した神経細胞から放出される。この過剰なグルタミン酸はリガンド開口型イオンチャネルを開いたＮＭＤＡ受容体に結合し、次にカルシウム流入により高濃度の細胞内カルシウムが産生され、これにより生化学カスケードが活性化してタンパク質分解と細胞死がもたらされる。興奮毒性として知られるこの現象は、低血糖症および心停止からてんかんまで、他の疾患に関連する神経傷害の原因であるとも考えれられている。さらに、ハンチントン病、パーキンソン病およびアルツハイマー病の慢性型神経変性への同様の関与を示唆する予備研究報告書がある。ＮＭＤＡ受容体の活性化は、脳卒中後の痙攣の原因であることが示されており、特定のてんかんモデルではＮＭＤＡ受容体の活性化が発作発生に必要であることが示されている。ＮＭＤＡ受容体の神経精神医学的な関与は、動物の麻酔性ＰＣＰ（フェンシクリジン）によるＮＭＤＡ受容体のＣａ＋＋チャネルの封鎖でヒトにおいて統合失調症に類似の精神病状態が生じることからも認識されている（Johnson, K. and Jones, S., 1990に概説）。さらに、ＮＭＤＡ受容体はある種類の空間的学習にも関与している。
【０００５】
ＮＭＤＡ受容体は、シナプス後膜に埋め込まれたいくつかのタンパク鎖からなると信じられている。これまでに発見されている最初の２つのタイプのサブユニットは大きな細胞外領域を形成し、おそらくは、アロステリックな結合部位のほとんどと、ループになり折り畳まれてＣａ＋＋が透過する孔またはチャネルを形成しているいくつかの膜貫通領域と、カルボキシ末端領域を含む。チャネルの開口と閉鎖は、細胞外表面に存在しているタンパク質のドメイン（アロステリック部位）への様々なリガンドの結合により調節される。リガンドの結合は、最終的にはチャネルの開口、部分的開口、部分的閉鎖、または閉鎖に反映されるタンパク質の全体的な構造の立体的変化に影響すると考えられている。
【０００６】
ＮＭＤＡ受容体化合物は、アロステリック部位を通じてＮＭＤＡ受容体に二重（アゴニスト／アンタゴニスト）作用を及ぼし得る。これらの化合物は、典型的には「部分アゴニスト」と呼ばれる。主要部位リガンドの存在下では、部分アゴニストはリガンドの一部を置換して受容体を通じてのＣａ＋＋流入を低下させる。主要部位リガンドの非存在下または低レベル下では、部分アゴニストは受容体チャネルを通じてＣａ＋＋流入を増加させる作用がある。
【０００７】
当分野では、ＮＭＤＡ受容体のグリシン結合部位に結合する能力があり、薬学的メリットのある新規のより特異的／強力な化合物が引き続き必要とされている。さらに、そのような化合物の経口投与可能な形態に対する医薬分野の必要性も依然として存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本明細書では、少なくとも一部には、ＮＭＤＡ調節剤、例えばＮＭＤＡの部分アゴニストである化合物を提供する。例えば、本明細書では、式：
【０００９】
【化１】
2015505296.tif 000002
（式中、
Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜３アルコキシおよびＣ１〜３アルキル（所望により１、２または３つのハロゲンで置換されている）からなる群よりそれぞれ独立して選択され；
Ｘ１はＯＨまたはＮＨ２であり；
Ｘ２はＨまたはＯＨである）
で表される化合物ならびにその薬剤的に許容可能な塩、立体異性体および水和物を開示する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、企図される化合物のハロゲンは、Ｃｌ、ＢｒおよびＦなる群より独立して選択され得る。いくつかの例では、上記構造式中のＸ２はＯＨであり得、上記構造式中のＸ１はＮＨ２であり得る。
【００１１】
いくつかの場合、上記構造式中のＲ１１、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれＨであり得る。あるいは、上記構造式中のＲ１１とＲ１３はＨであり得る。上記構造式中のＲ１２は、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜３アルコキシおよびＣ１〜３アルキル（所望により１、２または３つのハロゲンで置換されている）からなる群より選択され得る。例えば、上記構造式中のＲ１１とＲ１３はＨであり得、上記構造式中のＲ１２は、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＦ３、および−ＯＣＨ３からなる群より選択され得る。
【００１２】
ある実施形態では、企図される化合物は、経口投与されると、
【００１３】
【化２】
2015505296.tif 000003
よりも実質的に有効であり得る。
【００１４】
別の態様では、
【００１５】
【化３】
2015505296.tif 000004
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素；ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたは−ＯＨからなる群よりそれぞれ独立して選択され；
Ｒ５はＨまたは−ＣＨ２−フェニル（ここでフェニルは、所望によりハロゲン、Ｃ１〜３アルコキシおよびＣ１〜３アルキル（所望により１、２または３つのハロゲンで置換されている）からなる群より選択される１、２または３つの置換基で置換されている））であり、ただしＲ１とＲ３が−ＯＨでありＲ２とＲ４がメチルである場合、Ｒ５は−ＣＨ２−フェニルであり；
ＸはＯＲｘとＮＲｘＲｘからなる群より選択され、ここでＲＸは水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群より各出現で独立して選択される）
で表される化合物、その薬剤的に許容可能な塩、立体異性体および水和物が提供される。
【００１６】
例えば、企図される化合物は、
【００１７】
【化４】
2015505296.tif 000005
、
2015505296.tif 000006
、
2015505296.tif 000007
、
2015505296.tif 000008
または
2015505296.tif 000009
で表され得る。
【００１８】
他の例では、企図される化合物は、
【００１９】
【化５】
2015505296.tif 000010
、
2015505296.tif 000011
、
2015505296.tif 000012
、
2015505296.tif 000013
、
2015505296.tif 000014
、
2015505296.tif 000015
、
2015505296.tif 000016
、
2015505296.tif 000017
、
2015505296.tif 000018
、
2015505296.tif 000019
、
2015505296.tif 000020
、
2015505296.tif 000021
、
2015505296.tif 000022
、
2015505296.tif 000023
、
2015505296.tif 000024
、
2015505296.tif 000025
、
2015505296.tif 000026
、
2015505296.tif 000027
、
2015505296.tif 000028
、
2015505296.tif 000029
、
2015505296.tif 000030
、
2015505296.tif 000031
または
2015505296.tif 000032
で表され得る。
【００２０】
本明細書では、開示の化合物および薬剤的に許容可能な賦形剤を含む薬剤的に許容可能な組成物も提供される。例えば、そのような組成物は、患者への経口投与に適し得る。他の実施形態では、そのような組成物は、注射に適し得る。
【００２１】
別の態様では、鬱病、アルツハイマー病、注意欠陥障害、ＡＤＨＤ、統合失調症または不安症の治療を必要とする患者を治療する方法が提供され、前記患者に薬剤的有効量の企図される化合物を例えば経口的、静脈内または皮下投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】投与後時間の関数としてのＣＭ−４Ａの血漿濃度のプロットを示す。
【図２】企図される化合物のアゴニスト特徴を評価するための［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合アッセイの用量依存プロットを示す。
【図３】企図される化合物のアゴニスト特徴を評価するための［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合アッセイの用量依存プロットを示す。
【図４】企図される化合物のアゴニスト特徴を評価するための［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合アッセイの用量依存プロットを示す。
【図５】ＣＡ１錐体神経細胞で記録されたＣＭ−４Ａが単回ショックのシャッファー側枝誘起の薬理学的に単離されたＮＭＤＡ興奮性シナプス後電流（ＥＰＳＣ）に及ぼす影響の時間経過を表すプロットを示す。
【図６】ＣＡ１錐体神経細胞で記録されたＣＭ−４Ａ濃度がシャッファー側枝誘起ＮＭＤＡ  ＥＰＳＣの高周波刺激後長期増強に及ぼす影響を表すプロットを示す。
【図７】長期抑制（ＬＴＤ）に関するＣＭ−４Ａの用量−応答関係を表すプロットを示す。
【図８】企図される化合物の興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）の傾きの長期増強パーセントの棒グラフを示す。
【図９】ＣＭ−４Ａ濃度の関数としてのポーソルト試験の平均浮遊時間を表すプロットを示す。
【図１０】ＣＭ−４Ａと、ＣＭ−４ＡとＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロ−７−スルファモイル−ベンゾ［ｆ］キノキサリン−２，３−ジオン（ＮＢＱＸ）の併用のポーソルト試験の平均浮遊時間の棒グラフを示す。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、企図される化合物のポーソルト試験の結果を表す棒グラフを示す。
【図１２】図１２は、企図される化合物の１時間後と２４時間後のポーソルト試験の結果を表す棒グラフを示す。
【図１３】ＣＭ−４Ａのラット新奇性誘導型食欲不振（novelty-induced hypophagia）（ＮＩＨ）試験の結果を表す棒グラフを示す。
【図１４】図１４Ａと図１４Ｂは、ＣＭ−４Ａのラット超音波発声（ＵＳＶ）試験の結果を表す棒グラフを示す。図１４Ａは正の情動的学習を定量化し、図１４Ｂは快感と忌避ＵＳＶおよび報酬を定量化している。
【図１５】ＣＭ−４Ａのラットのオープンフィールド試験の結果を表す棒グラフを示す。
【図１６】ＣＭ−４Ａのラット加速ロータロッド試験の結果を表す棒グラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本開示は一般に、ＮＭＤＡを調節することができる化合物、例えばＮＭＤＡアンタゴニストまたは部分アゴニストと、開示の化合物を用いる組成物および／または方法に関する。
【００２４】
定義
いくつかの実施形態では、ここに記載される化合物は、任意の数の置換基または官能部分で置換されていてよい。一般に、「所望により」という用語に先行されようとされまいと「置換（された）」という用語、および式中の置換基は、所与の構造における水素遊離基を特定の置換基の遊離基で置き換えることを指す。
【００２５】
いくつかの例では、任意所与の構造式中の１以上の位置が特定の群より選択された１以上の置換基で置換され得る場合、該置換基はどの位置でも同じかまたは別であり得る。
【００２６】
本明細書では、「置換（された）」という用語は、有機化合物の全ての許容可能な置換基を含むことを企図する。広義な解釈では、許容可能な置換基は、有機化合物の、非環式および環式、分子および非分子の、炭素環およびヘテロ環の、芳香族および非芳香族の置換基を含む。いくつかの実施形態では、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基および／または該ヘテロ原子の原子価を満たすここに記載される有機化合物の任意の許容可能な置換基を有し得る。置換基の非限定的な例は、アシル；脂肪族；ヘテロ脂肪族；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；アルコキシ；シクロアルコキシ；ヘテロシクリルアルコキシ；ヘテロシクリルオキシ；ヘテロシクリルオキシアルキル；アルケニルオキシ；アルキニルオキシ；アリールオキシ；ヘテロアルコキシ；ヘテロアリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；ヘテロアリールチオ；オキソ；−Ｆ；−Ｃｌ；−Ｂｒ；−Ｉ；−ＯＨ；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；−ＳＲｘ；−ＣＦ３；−ＣＨ２ＣＦ３；−ＣＨＣｌ２；−ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＮＨ２；−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３；−ＯＲｘ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；−ＣＯ２（Ｒｘ）；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｃ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＯＣＯ２Ｒｘ；−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｎ（Ｒｘ）２；−ＳＯＲｘ；−Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＮＲｘＣ（Ｏ）ＯＲｘ；−ＮＲｘＣ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；および−Ｃ（Ｒｘ）３を含み、ここでＲｘは各出現で独立して、限定ではなく水素、ハロゲン、アシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルを含み、ここで上記のおよびここでの脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキル置換基はいずれも置換されているかまたは非置換、分子または非分子、環式または非環式であり得、ここで上記のおよびここでのアリールまたはヘテロアリール置換基はいずれも置換されているかまたは非置換であり得る。さらに、ここに記載される化合物は、有機化合物の許容可能な置換基にいかようにも制限される意図はない。いくつかの実施形態では、ここに記載される置換基と変数の組合せは、好ましくは安定化合物の形成をもたらすものであり得る。本明細書では、「安定」という用語は、製造を可能にする十分な安定性を有し、化合物の完全性を、検出される十分な期間、好ましくは本明細書で詳述される目的に有用である十分な期間に渡り維持する、化合物を指す。
【００２７】
本明細書では、「脂肪族」という用語は、飽和および不飽和の両方、直鎖（すなわち非分枝）、分枝、非環式、環式または多環式の脂肪族炭化水素を含み、それらは所望により１または複数の官能基で置換されている。当業者は理解しようが、本明細書では「脂肪族」は限定ではなくアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニルおよびシクロアルキニル部分を含むことを意図する。
【００２８】
本明細書では、「アリール」と「ヘテロアリール」という用語は、好ましくは３〜１４個の炭素原子を有し、各々置換されているか非置換であり得る、単環式または多環式不飽和部分を指す。ある実施形態では、「アリール」は、限定ではなくフェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニルなどを含む１または２つの芳香環を有する単環系または多環系を指す。ある実施形態では、「ヘテロアリール」は、１、２または３つの環原子がＳ、ＯおよびＮからなる群より独立して選択されたヘテロ原子であり、残りの環原子が炭素である、１または２つの芳香環を有する単環系または多環系を指す。ヘテロアリール基の非限定的な例は、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサアジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニルなどを含む。
【００２９】
本明細書では、「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分枝不飽和炭化水素、例えば２〜１２個、２〜１０個または２〜６個の炭素原子の基を指し、本明細書ではそれぞれＣ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニルおよびＣ２〜Ｃ６アルケニルと呼ばれる。例示的なアルケニル基は、限定ではなく、ビニル、アリル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、ヘキサジエニル、２−エチルヘキセニル、２−プロピル−２−ブテニル、４−（２−メチル−３−ブテン）−ペンテニルなどを含む。
【００３０】
本明細書では、「アルコキシ」という用語は、酸素に結合したアルキル基（−Ｏ−アルキル）を指す。例示的なアルコキシ基は、限定ではなく、１〜１２個、１〜８個または１〜６個の炭素原子のアルキル基を有する基を含み、本明細書ではそれぞれＣ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシと呼ばれる。例示的なアルコキシ基は限定ではなくメトキシ、エトキシなどを含む。同様に、例示的な「アルケノキシ」基は、限定ではなく、ビニルオキシ、アリルオキシ、ブテノキシなどを含む。
【００３１】
本明細書では、「アルコキシカルボニル」という用語は、酸素に結合し、カルボニル基に結合した直鎖または分枝アルキル基（アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−）を指す。例示的なアルコキシカルボニル基は、限定ではなく、１〜６個の炭素原子のアルコキシカルボニル基を含み、本明細書ではＣ１〜６アルコキシカルボニルと呼ばれる。例示的なアルコキシカルボニル基は、限定ではなく、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニルなどを含む。
【００３２】
本明細書では、「アルキニルオキシ」は、酸素に結合した、直鎖状または分枝アルキニル基を指す（アルキニル−Ｏ））。例示的なアルキニルオキシ基は、限定ではなく、プロピニルオキシを含む。
【００３３】
本明細書では、「アルキル」という用語は、直鎖または分枝飽和炭化水素、例えば１〜６個、１〜４個または１〜３個の炭素原子の直鎖または分枝基を指し、本明細書ではそれぞれＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ３アルキルと呼ばれる。例示的なアルキル基は、限定ではなく、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２−メチル−１−プロピル、２−メチル−２−プロピル、２−メチル−１−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−３−ブチル、２，２−ジメチル−１−プロピル、２−メチル−１−ペンチル、３−メチル−１−ペンチル、４−メチル−１−ペンチル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、２，２−ジメチル−１−ブチル、３，３−ジメチル−１−ブチル、２−エチル−１−ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどを含む。
【００３４】
本明細書では、「アルキルカルボニル」という用語は、酸素に結合し、カルボニル基に結合した直鎖または分枝アルキル基（アルキル−Ｃ（Ｏ）−）を指す。例示的なアルキルカルボニル基は、限定ではなく、１〜６個の炭素原子のアルキルカルボニル基を含み、本明細書ではＣ１〜Ｃ６アルキルカルボニル基と呼ばれる。例示的なアルキルカルボニル基は、限定ではなく、アセチル、プロパノイル、イソプロパノイル、ブタノイルなどを含む。
【００３５】
本明細書では、「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する不飽和の直鎖または分枝炭化水素、例えば２〜６個、３〜６個の炭素原子の直鎖または分枝基を指し、本明細書ではそれぞれＣ２〜Ｃ６アルキニルおよびＣ３〜Ｃ６アルキニルと呼ばれる。例示的なアルキニル基は、限定ではなく、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、メチルプロピニルなどを含む。
【００３６】
アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は、特に断らない限り、アルコキシ、アルキル、シクロアルキル、アミノ、ハロゲンおよび−Ｃ（Ｏ）アルキルから選択される１または複数の基で所望により置換され得る。ある実施形態では、アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は置換されていない、すなわち、非置換である。
【００３７】
本明細書では、「アミド（amideまたはamido）」という用語は、式−ＲａＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）−、−ＲａＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）Ｒｃ−または−Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲｃの遊離基を指し、式中、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは互いに独立してアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、水素、ヒドロキシル、ケトンおよびニトロから選択される。アミドは、炭素、窒素、Ｒｂ、ＲｃまたはＲａを通じて別の基に結合し得る。アミドは環式でもあり得、例えばＲｂとＲｃ、ＲａとＲｂまたはＲａとＲｃは結合して３〜１２員環、例えば３〜１０員環または５〜６員環を形成し得る。本明細書では、「カルボキサミド」は構造−Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲｃを指す。
【００３８】
本明細書では、「アミン」または「アミノ」という用語は、式−ＮＲｄＲｅ遊離基を指し、式中、ＲｄとＲｅは独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される。アミノは環式でもあり得、例えばＲｄとＲｅはＮと一緒に３〜１２員環、例えばモルホリノまたはピペリジニルを形成する。アミノという用語は、任意のアミノ基、例えば−［Ｎ（Ｒｄ）（Ｒｅ）（Ｒｆ）］＋の対応する四級アンモニウム塩も含む。例示的なアミノ基はアミノアルキル基を含み、ここで少なくともＲｄ、ＲｅまたはＲｆの１つがアルキル基である。ある実施形態では、ＲｄとＲｅは水素またはアルキルである。
【００３９】
本明細書では、「シクロアルキル」という用語は、例えば３〜６個または４〜６個の炭素の単環式の飽和または部分不飽和炭化水素基を指し、例えばＣ３〜６シクロアルキルまたはＣ４−６シクロアルキルとして言及され、シクロアルカンから派生する。例示的なシクロアルキル基は、限定ではなく、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロペンチル、シクロブチルまたはシクロプロピルを含む。
【００４０】
本明細書では、「ハロ」または「ハロゲン」または「Ｈａｌ」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを指す。本明細書では、「ハロアルキル」という用語は１または複数のハロゲン原子で置換されたアルキル基を指す。
【００４１】
「ヘテロシクリル」または「ヘテロシクリル基」は、当業者には認識されており、飽和または部分不飽和の３〜１０員環構造、あるいは３〜７員環を指し、その環構造は窒素、酸素および硫黄などの１〜４つのヘテロ原子を含む。ヘテロ環は、単環、二環または他の多環系でもよい。ヘテロ環は、１または複数のアリール、部分不飽和または飽和環と融合していてもよい。ヘテロシクリル基は、例えば、ビオチニル、クロメニル、ヒジドロフリル、ヒジドロインドール、ヒジドロピラニル、ヒジドロチエニル、ジチアゾリル、ホモピペリジニル、イミダゾリジニル、イソキノリル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オキソラニル、オキサゾリジニル、フェノキサンテニル（phenoxanthenyl）、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリジン−２−オニル、ピロリニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロイソキノリル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリル、チアゾリジニル、チオラニル、チオモルホリニル、チオピラニル、キサンテニル、ラクトン類、アゼチジノン類およびピロリジノン類などのラクタム類、スルタム類（sultams）、スルトン類などを含む。ヘテロ環は、１または複数の位置で、アルカノイル、アルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミジノ、アミノ、アリール、アリールアルキル、アジド、カルバメート、カルボン酸、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、イミノ、ケトン、ニトロ、リン酸、ホスホナト、ホスフィナト、硫酸、スルフィド、スルホンアミド、スルホニルおよびチオカルボニルなどの置換基で置換されていてよい。ある実施形態では、ヘテロ環基は置換されていない、すなわち、ヘテロ環基は非置換である。
【００４２】
本明細書では、「ヘテロシクリルアルコキシ」という用語はヘテロシクリル−アルキル−Ｏ−基を指す。
【００４３】
本明細書では、「ヘテロシクリルオキシ」という用語はヘテロシクリル−Ｏ−基を指す。
【００４４】
「ヘテロシクリルオキシアルキル」という用語は、ヘテロシクリル−Ｏ−アルキル−基を指す。
【００４５】
「ヒドロキシ」および「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨ遊離基を指す。
【００４６】
本明細書では、「オキソ」という用語は＝Ｏ遊離基を指す。
【００４７】
「薬剤的にまたは薬理学的に許容可能な」は、動物またはヒトに適切に投与した場合に有害な、アレルギー的な、または他の不都合な反応を生成しない分子的実体および組成物を含む。ヒトへの投与には、製剤は、ＦＤＡ生物学的製剤基準室（FDA Office of Biologics）の基準に定められる無菌性、発熱原性、一般的安全事項および純度基準を満たさねばならない。
【００４８】
本開示で使用される場合、「部分ＮＭＤＡ受容体アゴニスト」という用語は、ＮＭＤＡ受容体のグリシン結合部位に結合できる化合物として定義され、低濃度ではＮＭＤＡ受容体アゴニストは実質的にアゴニストとして作用し、高濃度では実質的にアンタゴニストとして作用する。これらの濃度は全ての「部分アゴニスト」について実験的に決定される。
【００４９】
ここでは「薬剤的に許容可能な担体」または「賦形剤」は生理学的適合性のある全ての溶媒、分散媒、被覆、抗細菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを包含する。一実施形態では、担体は非経口投与に適している。あるいは、担体は、静脈内、腹膜内、筋内、舌下または経口投与に適し得る。薬剤的に許容可能な担体には、無菌の注射液または分散液用の即時調合剤のための無菌水溶液または分散液および無菌散剤が含まれる。そのような薬剤的に活性な物質用の媒体および剤の使用は当技術分野では周知である。一般的な任意の媒体または剤が活性化合物に不適合ではないかぎり、本発明の医薬組成物におけるその使用が企図される。補助的活性化合物も組成物に組み込まれ得る。
【００５０】
本明細書では、「薬剤的に許容可能な塩（複数可）」という用語は、この組成物において使用される化合物中に存在し得る酸性基または塩基性基の塩を指す。この組成物中に含まれる塩基性の化合物は、様々な無機酸および有機酸と共に広範な種類の塩を形成することができる。そのような塩基性化合物の薬剤的に許容可能な酸付加塩を調製するのに使用され得る酸は、非毒性酸付加塩、すなわち薬理学的に許容可能な陰イオンを含む塩を形成するものであり、限定ではなく、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、酪酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシネート（gentisinate）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロネート（glucaronate）、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））塩を含む。この組成物中に含まれる、アミノ部分を含む化合物は、上述の酸に加えて、様々なアミノ酸と共に薬剤的に許容可能な塩を形成し得る。この組成物中に含まれる酸性の化合物は、様々な薬理学的に許容可能な陽イオンと共に塩基性塩を形成することができる。そのような塩の例には、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩が含まれ、具体的にはカルシウム、マグネシウム、ナトリウム、リチウム、亜鉛、カリウムおよび鉄の塩である。
【００５１】
本開示の化合物は、１または複数のキラル中心および／または二重結合を含み得るので、幾何異性体、エナンチオマーまたはジアステレオマーなどの立体異性体として存在し得る。本明細書では、「立体異性体」という用語は、全ての幾何異性体、エナンチオマーまたはジアステレオマーからなる。これらの化合物は、不斉炭素原子の周りの置換基の立体配置に応じて「Ｒ」または「Ｓ」の記号で表され得る。本発明は、これらの化合物の様々な立体異性体およびそれらの混合物を包含する。立体異性体には、エナンチオマーとジアステレオマーが含まれる。エナンチオマーまたはジアステレオマーの混合物は、命名法では「（±）」とされ得るが、当業者であれば構造がキラル中心を暗に表すことがあることを認識している。
【００５２】
本発明の化合物の個々の立体異性体は、非対称または不斉中心を含む市販の出発物質からの合成により、またはラセミ混合物の調製およびその後の当業者には周知の分割方法によって調製することができる。これらの分割方法は、（１）エナンチオマー混合物のキラル補助基への結合、再結晶またはクロマトグラフィーによる得られた混合物の分離、および光学的に純粋な生成物の補助基からの遊離、（２）光学活性な分割剤を使用しての塩形成または（３）キラルクロマトグラフカラム上の光学エナンチオマー混合物の直接分離により例示される。立体異性体混合物は、キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、化合物のキラル塩錯体への結晶化またはキラル溶媒中での化合物の結晶化などの周知の方法により、その成分の立体異性体にも分割することもできる。立体異性体は、周知の不斉合成方法により、立体異性体的に純粋な中間体、試薬および触媒から得ることもできる。
【００５３】
幾何異性体は、本発明の化合物中にも存在し得る。
【００５４】
【化６】
2015505296.tif 000033
の記号は、ここに記載される場合は一重結合、二重結合または三重結合であり得る。本発明は、炭素−炭素二重結合の周りへの置換基の配置または炭素環の周りへの置換基の配置によりもたらされる様々な幾何異性体およびそれらの混合物を包含する。炭素−炭素二重結合の周りの置換基は、「Ｚ」または「Ｅ」立体配置にあることが表され、ここで「Ｚ」と「Ｅ」という用語はＩＵＰＡＣ基準に従い使用される。特に断らない限り、二重構造を示す構造には「Ｚ」および「Ｅ」の両方が包含される。
【００５５】
あるいは、炭素−炭素二重結合の周りの置換基は、「シス」または「トランス」とも称され、「シス」は二重結合の同じ側の置換基を表し、「トランス」は二重結合の反対側の置換基を表す。炭素環の周りの置換基の配置は「シス」または「トランス」と称される。「シス」という用語は環の平面の同じ側の置換基を表し、「トランス」という用語は、環の平面の反対側の置換基を表す。置換基が環の平面の同じ側と反対側の両方に配置されている化合物の混合物は、「シス／トランス」と称される。
【００５６】
本明細書に開示の化合物は、非溶媒和形態のみならず、水、エタノールなどの薬剤的に許容可能な溶媒と共に溶媒和形態でも存在し得、本発明は溶媒和形態と非溶媒和形態の両方を包含することが意図される。１つの実施形態では、化合物は無定形である。１つの実施形態では、化合物は多形である。別の実施形態では、化合物は結晶形態である。
【００５７】
本発明は、１または複数の原子が、天然に通常見出される原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子で置換されている以外は、本明細書に記載のものと同一である、同位体標識した本発明の化合物も包含する。本発明の化合物に組み込まれ得る同位元素の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の元素が含まれ、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌである。
【００５８】
特定の同位体標識した開示の化合物（例えば、３Ｈおよび１４Ｃで標識されたもの）は、化合物および／または基質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム化（すなわち、３Ｈ）および炭素−１４（すなわち、１４Ｃ）同位元素は、それらの調製の容易さおよび検出性のために、特に好ましい。さらに、重水素（すなわち、２Ｈ）などのより重い同位元素との置換は、より大きな代謝的安定性（例えば、延長されたインビボ半減期または減少した必要用量）からもたらされるある治療上の利点を与える場合があり、従って、いくつかの状況においては好ましい場合がある。同位体標識した本発明の化合物は、一般に、同位体標識した試薬を同位体標識していない試薬と置換することによる、例えば本明細書の実施例に開示される手順に類似の手順に従い調製され得る。
【００５９】
本開示では、「ＮＭＤＡ」はＮ−メチル−ｄ−アスパラギン酸として定義される。
【００６０】
本明細書では、「治療有効量」という用語は、研究者、獣医師、医師または他の臨床医により探求されている、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を引き出す主題の化合物の量を意味する。本発明の化合物は、疾患を治療する治療有効量で投与される。あるいは、化合物の治療有効量は、行動（例えば、学習）の最大の増強、生理学的応答（例えばＬＴＰ誘発）または神経因性疼痛の阻害を得るのに必要な量として結果として定義されるような量などの、所望の治療および／または予防効果を得るのに必要な量である。
【００６１】
化合物
開示の化合物は、式：
【００６２】
【化７】
2015505296.tif 000034
で表されるものならびにその薬剤的に許容可能な塩、立体異性体、代謝産物および水和物を含む
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝ヘテロ脂肪族；置換または非置換アリール；置換または非置換ヘテロアリール；−ＯＲｘ；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；−ＳＲｘ；−Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；−ＣＯ２（Ｒｘ）；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｃ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＯＣＯ２Ｒｘ；−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｎ（Ｒｘ）２；−ＳＯＲｘ；−Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＮＲｘＣ（Ｏ）ＯＲｘ；−ＮＲｘＣ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；および−Ｃ（Ｒｘ）３からなる群より独立して選択され得；ここでＲｘは各出現で独立して水素；ハロゲン；アシル；所望により置換されている脂肪族；所望により置換されているヘテロ脂肪族；所望により置換されているアリール；および所望により置換されているヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ５とＲ６は、Ｒ５とＲ６のうち少なくとも１つが−Ｑ−Ａｒである場合、−Ｑ−Ａｒと水素からなる群より独立して選択され得；ここでＱは環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝ヘテロ脂肪族；および結合からなる群より独立して選択され；ここでＡｒは置換または非置換アリールと置換または非置換ヘテロアリールからなる群より選択され；またはＲ５とＲ６はそれらが結合している原子と一緒に置換または非置換４〜６員ヘテロ環またはシクロアルキル環を形成し；
Ｒ７とＲ８は、水素；ハロゲン；ヒドロキシル；置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル；置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ；および置換または非置換アリールからなる群より独立して選択され得；またはＲ７とＲ８はそれらが結合している原子と一緒に置換または非置換４〜６員ヘテロ環またはシクロアルキル環を形成し；
Ｒ９とＲ１０は、水素；所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているＣ２〜６アルケニル；所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているＣ２〜６アルキニル；所望によりＣ１~６アルキル、ハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているＣ３〜６シクロアルキル；所望によりＣ１~６アルキル；Ｃ１~６アルコキシ；ハロゲン；ヒドロキシル；−Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；−ＣＯ２（Ｒｘ）；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｃ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；および−Ｃ（Ｒｘ）３からなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているフェニルからなる群より独立して選択され得；ここでＲｘは各出現で独立して水素；ハロゲン；Ｃ１~６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；およびフェニルからなる群より選択され；またはＲ９とＲ１０はＮと一緒に所望によりＣ１~６アルキル、ハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されている４〜６員ヘテロ環を形成する）。
【００６３】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素；ハロゲン；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；フェニル；ナフチル；ヘテロアリール；ヘテロシクリル；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；フェニル−Ｃ１〜６アルキル−；ナフチル−Ｃ１〜６アルキル−；ヘテロアリール−Ｃ１〜６アルキル−；およびヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキル−；−ＯＲｘ；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；−ＳＲｘ；−Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；−ＣＯ２（Ｒｘ）；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｃ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＯＣＯ２Ｒｘ；−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｎ（Ｒｘ）２；−ＳＯＲｘ；−Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＮＲｘＣ（Ｏ）ＯＲｘ；−ＮＲｘＣ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；および−Ｃ（Ｒｘ）３からなる群より独立して選択され得；ここでヘテロアリールはそれぞれＮ、ＯまたはＳより独立して選択される１、２または３つのヘテロ原子を有する５〜６員環であり；ここでヘテロアリールは所望によりＲｂからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されていてよく；ここでヘテロシクリルはＲｃからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で所望により置換されている４〜７員環であり；ここでヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含む場合、その−ＮＨ−部分は所望によりＲｄで置換されており；ここでＣ２〜６アルケニルとＣ２〜６アルキニルは所望によりそれぞれ独立してＲｅからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ１〜６アルキルは所望によりＲｆからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ３〜６シクロアルキルは独立して所望によりＲｇからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；
Ｒｂは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ１〜６アルコキシ；Ｃ３〜６アルケニルオキシ；Ｃ３〜６アルキニルオキシ；Ｃ３〜６シクロアルコキシ；Ｃ１〜６アルキル−Ｓ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）；Ｃ１〜６アルキルＣ３〜６シクロアルキル−；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキルＮ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキル−Ｎ（Ｒａ）カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜６アルキル−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−からなる群より選択され得；
ＲａとＲａ’は、各出現で独立して、水素とＣ１〜６アルキルからなる群より選択され得、またはＲａとＲａ’は、それらが結合している窒素と一緒では４〜６員ヘテロ環を形成し、ここでＣ１〜６アルキルは所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており、ここでヘテロ環は所望によりハロゲン、アルキル、オキソまたはヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；
Ｒｃは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；オキソ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ１〜６アルコキシ；Ｃ３〜６アルケニルオキシ；Ｃ３〜６アルキニルオキシ；Ｃ３〜６シクロアルコキシ；Ｃ１〜６アルキル−Ｓ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）；Ｃ１〜６アルキルＣ３〜６シクロアルキル−；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキルＮ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキル−Ｎ（Ｒａ）カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜６アルキル−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−からなる群より選択され得；
Ｒｄは、各出現で独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキルカルボニルおよびＣ１〜６アルキルスルホニルからなる群より選択され得、ここでＣ１〜６アルキルは所望によりハロゲン、ヒドロキシルおよびＲａＲａ’Ｎ−からそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；
Ｒｅは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択され得；
Ｒｆは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択され得；
Ｒｇは、各出現で独立して、ハロゲン、ヒドロキシル、−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択され得；
Ｒｘは、水素；ハロゲン；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；フェニル；ナフチル；ヘテロアリール；ヘテロシクリル；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；フェニル−Ｃ１〜６アルキル−；ナフチル−Ｃ１〜６アルキル−；ヘテロアリール−Ｃ１〜６アルキル−；およびヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキル−からなる群より独立して選択され得；ここでヘテロアリールはそれぞれＮ、ＯまたはＳより独立して選択される１、２または３つのヘテロ原子を有する５〜６員環であり；ここでヘテロアリールは所望によりＲｂからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されていてよく；ここでヘテロシクリルはＲｃからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で所望により置換されている４〜７員環であり；ここでヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含む場合、その−ＮＨ−部分は所望によりＲｄで置換されており；ここでＣ２〜６アルケニルとＣ２〜６アルキニルは所望によりそれぞれ独立してＲｅからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ１〜６アルキルは所望によりＲｆからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ３〜６シクロアルキルは独立して所望によりＲｇからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されている。
【００６４】
ある実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうち少なくとも１つはヒドロキシルであり得る。
【００６５】
いくつかの例では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうち少なくとも１つはＣ１〜Ｃ６アルキルであり得、所望によりハロゲン、ヒドロキシル、−ＮＨ２およびシアノからなる群より独立して選択される１、２または３つの置換基で置換されている。
【００６６】
いくつかの実施形態では、Ｒ５とＲ６のうち少なくとも１つが−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−Ａｒであり得る。Ｒ５とＲ６のうち少なくとも１つは−ＣＨ２−Ａｒでもあり得る。いくつかの場合、Ｒ５とＲ６のうち少なくとも１つは−Ｑ−フェニルである。ある例では、Ｒ５とＲ６のうち１つは水素であり得る。
【００６７】
いくつかの場合、Ｒ７とＲ８は水素；ハロゲン；ヒドロキシル；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；フェニル；およびナフチルからなる群より独立して選択され得；またはＲ７とＲ８は、それらが結合している原子と一緒に４〜６員のヘテロ環またはシクロアルキル環を形成し；ここでＣ１〜Ｃ６アルキル、フェニル、ナフチル、シクロアルキル環およびヘテロ環はそれぞれハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択される１または複数の置換基で置換されていてもよく；ここでＲａとＲａ’は、各出現で独立して、水素とＣ１〜６アルキルからなる群より選択され得、またはＲａとＲａ’はそれらが結合している窒素と一緒では４〜６員ヘテロ環を形成し、ここでＣ１〜６アルキルは所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基により置換されており、ここでヘテロ環は所望によりハロゲン、アルキル、オキソまたはヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されている。
【００６８】
いくつかの場合、Ｒ７とＲ８は水素であり得る。
【００６９】
１つの例示的な実施形態では、化合物は、
【００７０】
【化８】
2015505296.tif 000035
により表され得る。
【００７１】
別の例示的な実施形態では、化合物は、
【００７２】
【化９】
2015505296.tif 000036
により表され得る。
【００７３】
さらに別の例示的な実施形態では、化合物は、
【００７４】
【化１０】
2015505296.tif 000037
により表され得る。
【００７５】
さらに別の例示的な実施形態では、化合物は、
【００７６】
【化１１】
2015505296.tif 000038
、
2015505296.tif 000039
、
2015505296.tif 000040
、
2015505296.tif 000041
、
2015505296.tif 000042
、
2015505296.tif 000043
、
2015505296.tif 000044
、
2015505296.tif 000045
、
2015505296.tif 000046
、
2015505296.tif 000047
、
2015505296.tif 000048
、
2015505296.tif 000049
、
2015505296.tif 000050
、
2015505296.tif 000051
、
2015505296.tif 000052
、
2015505296.tif 000053
、
2015505296.tif 000054
、
2015505296.tif 000055
、
2015505296.tif 000056
、
2015505296.tif 000057
、
2015505296.tif 000058
、
2015505296.tif 000059
または
2015505296.tif 000060
により表され得る。
【００７７】
開示の化合物は、式：
【００７８】
【化１２】
2015505296.tif 000061
で表されるものならびにその薬剤的に許容可能な塩、立体異性体、代謝産物および水和物も含む
（式中、
Ｒ１とＲ３は、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝ヘテロ脂肪族；置換または非置換アリール；置換または非置換ヘテロアリール；−ＯＲｘ；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；−ＳＲｘ；−Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；−ＣＯ２（Ｒｘ）；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｃ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＯＣＯ２Ｒｘ；−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｎ（Ｒｘ）２；−ＳＯＲｘ；−Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＮＲｘＣ（Ｏ）ＯＲｘ；−ＮＲｘＣ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；および−Ｃ（Ｒｘ）３からなる群より独立して選択され得；ここでＲｘは各出現で独立して水素；ハロゲン；アシル；所望により置換されている脂肪族；所望により置換されているヘテロ脂肪族；所望により置換されているアリール；および所望により置換されているヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ２とＲ４は、Ｒ２とＲ４のうち少なくとも１つが水素である場合、水素と−ＯＲｘからなる群より独立して選択され得、ここでＲｘは水素；ハロゲン；アシル；所望により置換されている脂肪族；所望により置換されているヘテロ脂肪族；所望により置換されているアリール；および所望により置換されているヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ５とＲ６は、−Ｑ−Ａｒと水素からなる群より独立して選択され得；ここでＱは環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝ヘテロ脂肪族；および結合からなる群より独立して選択され；ここでＡｒは置換または非置換アリールおよび置換または非置換ヘテロアリールからなる群より選択され；またはＲ５とＲ６はそれらが結合している原子と一緒に置換または非置換４〜６員ヘテロ環またはシクロアルキル環を形成し；
Ｒ７とＲ８は、水素；ハロゲン；ヒドロキシル；置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル；置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ；および置換または非置換アリールからなる群より独立して選択され；またはＲ７とＲ８は、それらが結合している原子と一緒に置換または非置換４〜６員ヘテロ環またはシクロアルキル環を形成し；
Ｒ９とＲ１０は、水素；所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル；所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているＣ２〜６アルケニル；所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているＣ２〜６アルキニル；所望によりＣ１〜６アルキル、ハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているＣ３〜６シクロアルキル；所望によりＣ１〜６アルキル；Ｃ１〜６アルコキシ；ハロゲン；ヒドロキシル；−Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；−ＣＯ２（Ｒｘ）；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｃ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；および−Ｃ（Ｒｘ）３からなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されているフェニルからなる群より独立して選択され得；ここでＲｘは各出現で独立して水素；ハロゲン；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；およびフェニルからなる群より選択され；またはＲ９とＲ１０はＮと一緒に所望によりＣ１〜６アルキル、ハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されている４〜６員ヘテロ環を形成する）。
【００７９】
いくつかの実施形態では、Ｒ１とＲ３は、水素；ハロゲン；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；フェニル；ナフチル；ヘテロアリール；ヘテロシクリル；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；フェニル−Ｃ１〜６アルキル−；ナフチル−Ｃ１〜６アルキル−；ヘテロアリール−Ｃ１〜６アルキル−；およびヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキル−；−ＯＲｘ；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；−ＳＲｘ；−Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；−ＣＯ２（Ｒｘ）；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｃ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＯＣＯ２Ｒｘ；−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−Ｎ（Ｒｘ）２；−ＳＯＲｘ；−Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｒｘ；−ＮＲｘＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘ）２；−ＮＲｘＣ（Ｏ）ＯＲｘ；−ＮＲｘＣ（ＮＲｘ）Ｎ（Ｒｘ）２；および−Ｃ（Ｒｘ）３からなる群より独立して選択され得；ここでヘテロアリールはそれぞれＮ、ＯまたはＳより独立して選択される１、２または３つのヘテロ原子を有する５〜６員環であり；ここでヘテロアリールは所望によりＲｂからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されていてよく；ここでヘテロシクリルはＲｃからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で所望により置換されている４〜７員環であり；ここでヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含む場合、その−ＮＨ−部分は所望によりＲｄで置換されており；ここでＣ２〜６アルケニルとＣ２〜６アルキニルは所望によりそれぞれ独立してＲｅからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ１〜６アルキルは所望によりＲｆからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ３〜６シクロアルキルは独立して所望によりＲｇからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；
Ｒｂは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ１〜６アルコキシ；Ｃ３〜６アルケニルオキシ；Ｃ３〜６アルキニルオキシ；Ｃ３〜６シクロアルコキシ；Ｃ１〜６アルキル−Ｓ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）；Ｃ１〜６アルキルＣ３〜６シクロアルキル−；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキルＮ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキル−Ｎ（Ｒａ）カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜６アルキル−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−からなる群より選択され得；
ＲａとＲａ’は、各出現で独立して、水素とＣ１〜６アルキルからなる群より選択され得、またはＲａとＲａ’は、それらが結合している窒素と一緒では４〜６員ヘテロ環を形成し、ここでＣ１〜６アルキルは所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており、ここでヘテロ環は所望によりハロゲン、アルキル、オキソまたはヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；
Ｒｃは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；オキソ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ１〜６アルコキシ；Ｃ３〜６アルケニルオキシ；Ｃ３〜６アルキニルオキシ；Ｃ３〜６シクロアルコキシ；Ｃ１〜６アルキル−Ｓ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）；Ｃ１〜６アルキルＣ３〜６シクロアルキル−；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキルＮ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキル−Ｎ（Ｒａ）カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜６アルキル−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−からなる群より選択され得；
Ｒｄは、各出現で独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキルカルボニルおよびＣ１〜６アルキルスルホニルからなる群より選択され得、ここでＣ１〜６アルキルは所望によりハロゲン、ヒドロキシルおよびＲａＲａ’Ｎ−からそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；
Ｒｅは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択され得；
Ｒｆは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択され得；
Ｒｇは、各出現で独立して、ハロゲン、ヒドロキシル、−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択され得；
Ｒｘは、水素；ハロゲン；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；フェニル；ナフチル；ヘテロアリール；ヘテロシクリル；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；フェニル−Ｃ１〜６アルキル−；ナフチル−Ｃ１〜６アルキル−；ヘテロアリール−Ｃ１〜６アルキル−；およびヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキル−からなる群より独立して選択され得；ここでヘテロアリールはそれぞれＮ、ＯまたはＳより独立して選択される１、２または３つのヘテロ原子を有する５〜６員環であり；ここでヘテロアリールは所望によりＲｂからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されていてよく；ここでヘテロシクリルはＲｃからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で所望により置換されている４〜７員環であり；ここでヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含む場合、その−ＮＨ−部分は所望によりＲｄで置換されており；ここでＣ２〜６アルケニルとＣ２〜６アルキニルは所望によりそれぞれ独立してＲｅからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ１〜６アルキルは所望によりＲｆからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ３〜６シクロアルキルは独立して所望によりＲｇからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されている。
【００８０】
いくつかの場合、Ｒ２とＲ４は、Ｒ２とＲ４のうち少なくとも１つが水素である場合、水素と−ＯＲｘからなる群より独立して選択され得、ここでＲｘは水素；ハロゲン；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；フェニル；ナフチル；ヘテロアリール；ヘテロシクリル；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；フェニル−Ｃ１〜６アルキル−；ナフチル−Ｃ１〜６アルキル−；ヘテロアリール−Ｃ１〜６アルキル−；およびヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキル−からなる群より選択され得；ここでヘテロアリールはそれぞれＮ、ＯまたはＳより独立して選択される１、２または３つのヘテロ原子を有する５〜６員環であり；ここでヘテロアリールは所望によりＲｂからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されていてよく；ここでヘテロシクリルはＲｃからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で所望により置換されている４〜７員環であり；ここでヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含む場合、その−ＮＨ−部分は所望によりＲｄで置換されており；ここでＣ２〜６アルケニルとＣ２〜６アルキニルは所望によりそれぞれ独立してＲｅからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ１〜６アルキルは所望によりＲｆからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；ここでＣ３〜６シクロアルキルは独立して所望によりＲｇからそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；
Ｒｂは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ１〜６アルコキシ；Ｃ３〜６アルケニルオキシ；Ｃ３〜６アルキニルオキシ；Ｃ３〜６シクロアルコキシ；Ｃ１〜６アルキル−Ｓ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）；Ｃ１〜６アルキルＣ３〜６シクロアルキル−；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキルＮ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキル−Ｎ（Ｒａ）カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜６アルキル−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−からなる群より選択され得；
ＲａとＲａ’は、各出現で独立して、水素とＣ１〜６アルキルからなる群より選択され得、またはＲａとＲａ’は、それらが結合している窒素と一緒では４〜６員ヘテロ環を形成し、ここでＣ１〜６アルキルは所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており、ここでヘテロ環は所望によりハロゲン、アルキル、オキソまたはヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；
Ｒｃは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；オキソ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ１〜６アルコキシ；Ｃ３〜６アルケニルオキシ；Ｃ３〜６アルキニルオキシ；Ｃ３〜６シクロアルコキシ；Ｃ１〜６アルキル−Ｓ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）；Ｃ１〜６アルキルＣ３〜６シクロアルキル−；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキルＮ（Ｒａ）−；Ｃ１〜６アルキル−Ｎ（Ｒａ）カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜６アルキル−カルボニル−Ｎ（Ｒａ）−からなる群より選択され得；
Ｒｄは、各出現で独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキルカルボニルおよびＣ１〜６アルキルスルホニルからなる群より選択され得、ここでＣ１〜６アルキルは所望によりハロゲン、ヒドロキシルおよびＲａＲａ’Ｎ−からそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており；
Ｒｅは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択され得；
Ｒｆは、各出現で独立して、ハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択され得；
Ｒｇは、各出現で独立して、ハロゲン、ヒドロキシル、−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択され得る。
【００８１】
ある実施形態では、Ｒ５とＲ６は、−Ｑ−Ａｒと水素からなる群より独立して選択され得；ここでＱは、Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜６シクロアルキル；ヘテロシクリル；Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜６アルキル−；ヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキル−；および結合からなる群より独立して選択され；ここでＡｒは、置換または非置換フェニル、ナフチルおよびヘテロアリールからなる群より選択され；またはＲ５とＲ６は、それらが結合している原子と一緒に、所望によりハロゲン、ヒドロキシル、−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されている、４〜６員ヘテロ環またはシクロアルキル環を形成し；
ここでＲａとＲａ’は、各出現で独立して、水素とＣ１〜６アルキルからなる群より選択され得、またはＲａとＲａ’は、それらが結合している窒素と一緒では４〜６員ヘテロ環を形成し、ここでＣ１〜６アルキルは所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されており、ここでヘテロ環は所望によりハロゲン、アルキル、オキソまたはヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されている。
【００８２】
ある実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうち少なくとも１つはヒドロキシルであり得る。
【００８３】
いくつかの例では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうち少なくとも１つはＣ１〜Ｃ６アルキルであり得、所望によりハロゲン、ヒドロキシル、−ＮＨ２およびシアノからなる群より独立して選択される１、２または３つの置換基で置換されている。
【００８４】
いくつかの実施形態では、Ｒ５とＲ６のうち少なくとも１つが−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−Ａｒであり得、例えば、Ｒ５とＲ６のうち１つは−ＣＨ２−Ａｒでもあり得る。いくつかの場合、Ｒ５とＲ６のうち少なくとも１つは−Ｑ−フェニルである。ある例では、Ｒ５とＲ６のうち１つは水素であり得る。
【００８５】
いくつかの場合、Ｒ７とＲ８は水素；ハロゲン；ヒドロキシル；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；フェニル；およびナフチルからなる群より独立して選択され得；またはＲ７とＲ８は、それらが結合している原子と一緒に４〜６員のヘテロ環またはシクロアルキル環を形成し；ここでＣ１〜Ｃ６アルキル、フェニル、ナフチル、シクロアルキル環およびヘテロ環はそれぞれハロゲン；ヒドロキシル；−ＮＯ２；−Ｎ３；−ＣＮ；−ＳＣＮ；Ｃ１〜４アルコキシ；Ｃ１〜４アルコキシカルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−；ＲａＲａ’Ｎ−カルボニル；ＲａＲａ’Ｎ−ＳＯ２−；およびＣ１〜４アルキルＳ（Ｏ）ｗ−（式中ｗは０、１または２である）からなる群より選択される１または複数の置換基で置換されていてもよく；ここでＲａとＲａ’は、各出現で独立して、水素とＣ１〜６アルキルからなる群より選択され得、またはＲａとＲａ’はそれらが結合している窒素と一緒では４〜６員ヘテロ環を形成し、ここでＣ１〜６アルキルは所望によりハロゲン、オキソおよびヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基により置換されており、ここでヘテロ環は所望によりハロゲン、アルキル、オキソまたはヒドロキシルからなる群よりそれぞれ独立して選択される１または複数の置換基で置換されている。
【００８６】
いくつかの場合、Ｒ７とＲ８は水素であり得る。
【００８７】
１つの例示的な実施形態では、化合物は、
【００８８】
【化１３】
2015505296.tif 000062
により表され得る。
【００８９】
別の例示的な実施形態では、化合物は、
【００９０】
【化１４】
2015505296.tif 000063
により表され得る。
【００９１】
さらに別の例示的な実施形態では、化合物は、
【００９２】
【化１５】
2015505296.tif 000064
により表され得る。
【００９３】
本開示の化合物とそれらの製剤は、複数のキラル中心を有し得る。キラル中心はそれぞれ独立してＲ、ＳであるかまたはＲとＳの任意の混合物であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、キラル中心のＲ：Ｓ比は約１００：０から約５０：５０、約１００：０から約７５：２５、約１００：０から約８５：１５、約１００：０から約９０：１０、約１００：０から約９５：５、約１００：０から約９８：２、約１００：０から約９９：１、約０：１００から約５０：５０、約０：１００から約２５：７５、約０：１００から約１５：８５、約０：１００から約１０：９０、約０：１００から約５：９５、約０：１００から約２：９８、約０：１００から約１：９９、約７５：２５から２５：７５および約５０：５０である。１または複数の異性体（すなわちＲおよび／またはＳ）のより大きい比率を含む開示の化合物の製剤は、開示の化合物または化合物の混合物のラセミ製剤よりも増大した治療特徴を有し得る。
【００９４】
開示の化合物は、ＮＭＤＡ受容体で高効率の陽イオンチャネル開口を提供し得、例えばＮＭＤＡ受容体のグルタミン酸部位に結合または会合して陽イオンチャネルの開口を補助し得る。開示の化合物は、アゴニストとしての作用を通じてＮＭＤＡ受容体を調節（活性化または不活化）するのに使用され得る。
【００９５】
ここに記載される化合物は、グリシン部位ＮＭＤＡ受容体部分アゴニストであり得る。この文脈で使用される場合、部分アゴニストは、低濃度ではその類似体がアゴニストとして作用し、高濃度ではその類似体がアンタゴニストとして作用することを意味すると理解される。グリシン結合は、グルタミン酸またはグルタミン酸の競合阻害剤により阻害されず、ＮＭＤＡ受容体上でグルタミン酸と同じ部位に結合することもない。ＮＭＤＡ受容体にはグリシンのための第２の別個の結合部位が存在する。したがって、ＮＭＤＡ受容体のリガンド開口型イオンチャネルは、少なくとも２つの異なるアロステリック部位の制御下にある。開示の化合物は、ＮＭＤＡ受容体のグリシン結合部位と結合または会合する能力があり得る。いくつかの実施形態では、開示の化合物は、既存のＮＭＤＡ受容体のグリシン部位の部分アゴニストの活性の１０倍以上の力価を有し得る。例えば、開示の化合物は、ＧＬＹＸ−１３の１０倍から２０倍増大した力価を有し得る。ＧＬＹＸ−１３は、
【００９６】
【化１６】
2015505296.tif 000065
により表される。
【００９７】
例えば、本明細書では、濃度５０ｎＭの海馬ＣＡ１錐体神経細胞の培地中、バースト活性化ＮＭＤＡ受容体開口型単回神経細胞コンダクタンス（burst activated NMDA receptor-gated single neuron conductance）（ＩＮＭＤＡ）により測定した場合、ＧＬＹＸ−１３の少なくとも約２０倍強力であり得る化合物が提供される。別の実施形態では、提供された化合物は、濃度１００ｎＭから１μＭの海馬ＣＡ１錐体神経細胞中、増大された単回ショック誘発性ＮＭＤＡ受容体開口型単回神経細胞コンダクタンス（single shock evoked NMDA receptor-gated single neuron conductance）（ＩＮＭＤＡ）を生成する能力があり得る。開示の化合物は、インビトロの海馬切片のシャッファー側枝−ＣＡ−１シナプスでの長期増強（ＬＴＰ）の強度（magnitude）で測定した場合、ＧＬＹＸ−１３よりも大きい力価を有し得る。
【００９８】
開示の化合物は、高治療指数を提示し得る。本明細書では、治療指数は、母集団の最小限の５０％有効量（すなわちＥＤ５０）に対する母集団の５０％毒性産生量（すなわち、ＴＤ５０）の比率を指す。したがって、治療指数＝（ＴＤ５０）：（ＥＤ５０）である。いくつかの実施形態では、開示の化合物は、少なくとも約１０：１少なくとも約５０：１、少なくとも約１００：１、少なくとも約２００：１、少なくとも約５００：１または少なくとも約１０００：１の治療指数を有し得る。
【００９９】
組成物
他の態様では、開示の化合物および所望により薬剤的に許容可能な賦形剤を含む製剤および組成物が提供される。いくつかの実施形態では、企図される製剤は、開示の化合物の１または複数のラセミ混合物を含む。
【０１００】
企図される製剤は、様々な使用形態で調製され得る。限定ではなく例として、化合物は、経口投与、皮下注射または医薬分野で既知の動物に活性薬剤を投与する他の方法に適した製剤として調製され得る。
【０１０１】
ここに記載される開示の化合物の製剤中の量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重などの要因により変化し得る。用量レジメンは、最適な治療反応を得るために調節してよい。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、時間をかけて複数分割用量を投与してもよく、または用量を治療状況の緊急事態に比例して増量または減量してもよい。投与しやすさと用量の均一性のため、用量単位形態での非経口性組成物の製剤は特に有利である。本明細書では、用量単位形態は、治療される哺乳動物対象の単位用量として適する物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な薬剤的担体と関連して所望の治療効果を生成するために計算された活性化合物の所定量を含む。
【０１０２】
本発明の容量単位形態の仕様は、（ａ）選択化合物の独自の特徴と得られる特定の治療効果と、（ｂ）個体における敏感性の治療にそのような活性化合物を配合することの当分野固有の限界に応じ、およびそれらに直接依存する。
【０１０３】
治療組成物は、典型的には製造および保存条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは他の薬物高濃度に適した定序構造として製剤され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、ポリプロピレングリコールおよびポリエチレングリコール液など）およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティングを使用して、分散液の場合は必要な粒径を維持して、および界面活性剤の使用により、維持され得る。多くの場合、等張剤、例えば糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコールまたは塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。注射組成物に吸収遅延剤、例えばモノステアレート塩およびゼラチンを含有させることで、組成物をゆっくりと吸収させることが可能になる。
【０１０４】
化合物は、徐放剤中、例えば徐放高分子を含む組成物において投与され得る。化合物は、徐放剤など、化合物を急速解放から保護する担体と共に調製してもよく、これにはインプラントやマイクロカプセル化送達系が含まれる。生分解可能な、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸（polylactic acidおよびpolylactic）、ポリグリコール共重合体（ＰＬＧ）などの生体適合性のある高分子も使用され得る。そのような製剤を調製する多くの方法は当業者には一般的に知られている。
【０１０５】
無菌注射液は、必要量の化合物を必要に応じて上記列挙した１種類または併用の成分を含む適切な溶媒に添加してから濾過滅菌して調製できる。一般に、分散溶液（dispersions）は活性化合物を基本の分散媒および上記列挙したうちの必要な他の成分を含む無菌ビヒクルに添加して調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分の粉末に加えて、既に滅菌濾過されたその溶液から任意追加の所望成分が得られる、真空乾燥と凍結乾燥である。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、ある開示の化合物は、患者に経口投与された場合有効量の化合物を送達できる。例えば、ある実施形態では、ある開示の化合物は、患者に経口投与されると、次式：
【０１０７】
【化１７】
2015505296.tif 000066
で表されるペプチジル化合物の患者への経口投与よりも有効である。
【０１０８】
本発明の代替の態様によると、化合物は、化合物の可溶性を増加させる１または複数の追加の化合物と共に製剤してよい。
【０１０９】
方法
認知障害を治療し学習を強化する方法が提供される。そのような方法は、開示の化合物の１または複数の薬剤的に許容可能な製剤を必要とする患者に投与することを含む。また、加齢、統合失調症、特別な学習障害、発作、脳卒中後の痙攣、脳虚血、低血糖症、心停止、てんかん、片頭痛ならびにハンチントン病、パーキンソン病およびアルツハイマー病に関連する記憶欠損に苦しむ患者を治療する方法も企図される。
【０１１０】
企図される他の方法は、脳虚血、脳卒中、頭部外傷、脳腫瘍、急性神経因性疼痛、慢性神経因性疼痛、睡眠障害、薬物中毒、鬱病、特定の視覚障害、エタノール離脱、不安症、記憶および学習障害、自閉症、てんかん、ＡＩＤＳ認知症、多系統委縮症、進行性核上麻痺、フリードライヒ運動失調症、ダウン症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、オリーブ橋小脳変性症、脳性麻痺、薬物誘発型視神経炎、末梢神経障害、脊髄症、虚血性網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障、心停止、行動障害、衝動制御障害、アルツハイマー病、アルツハイマー病初期に伴う記憶消失、注意欠陥障害、ＡＤＨＤ、統合失調症、アヘン剤、ニコチン中毒症の回復期、エタノール中毒、外傷性脳傷害、脊髄傷害、外傷後ストレス症候群およびハンチントン舞踏病の治療を含む。
【０１１１】
例えば、本明細書では、治療を必要とする患者の鬱病を治療する方法が提供され、開示の化合物の投与、例えば開示の化合物を急性的に投与することを含む。ある実施形態では、開示の化合物の投与前に少なくとも２種類の抗うつ剤治療を受けている治療抵抗性の患者が特定される。他の実施形態では、治療抵抗性の患者は、少なくとも１種類の抗うつ剤治療の副作用に気が進まないかまたは忍容不能な患者と特定される。
【０１１２】
もっとも一般的な鬱病の病状は、大鬱病性障害と気分変調性障害を含む。他の鬱病の病状は、個別の状況で進行する。そのような鬱病の病状には、限定ではなく、精神病性鬱病、産後鬱病、季節性感情障害（ＳＡＤ）、気分障害、癌や慢性痛などの慢性的医学的状態による鬱病、化学療法、慢性ストレス、外傷後ストレス障害および双極性障害（または躁鬱病）が含まれる。
【０１１３】
難治性鬱病は、三環系抗うつ薬、ＭＡＯＩ、ＳＳＲＩおよび二重、三重取り込み阻害剤および／または抗不安薬を含む標準的な薬学的治療ならびに精神療法、電撃療法、迷走神経刺激および／または経頭蓋磁気刺激などの非薬学的療法に抵抗性の鬱行患者において生じる。治療抵抗性の患者は、１または複数の標準的な薬学的または非薬学的治療を受けているにもかかわらず、鬱病の１または複数の症状（例えば、不安感や悲しい気分、無力感、無希望感、悲観の持続）の寛解を経験していない個人と特定され得る。ある実施形態では、治療抵抗性の患者は、２種類の異なる抗うつ剤の治療を受けているにもかかわらず鬱病の１または複数の症状を経験していない個人である。他の実施形態では、治療抵抗性の患者は、４種類の異なる抗うつ剤の治療を受けているにもかかわらず鬱病の１または複数の症状を経験していない個人である。治療抵抗性の患者は、１または複数の標準的な薬学的または非薬学的治療の副作用に気が進まないかまたは忍容不能な個人とも特定され得る。
【０１１４】
さらに別の態様では、除痛を増強し、動物に鎮痛剤を与える方法が提供される。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、統合失調症を治療する方法が提供される。例えば、妄想性統合失調症、解体型統合失調症（すなわち破瓜型分裂病）、緊張型統合失調症、未分化型（undifferentiated type）統合失調症、残遺型統合失調症、分裂病後抑鬱および単純型統合失調症が、本明細書に企図される方法と組成物を用いて治療され得る。統合失調症感情障害、妄想障害、短期精神障害、共有精神障害および妄想や幻覚を伴う精神障害などの精神障害も、本明細書に企図される組成物を用いて治療され得る。
【０１１６】
妄想性統合失調症は、妄想または聴覚的幻覚の存在を特徴とする場合があるが、思考障害または情動鈍麻は存在しない。妄想は、被害妄想および／または誇大妄想であり得るが、それらに加えて、嫉妬、狂信または身体化など他の主題も存在し得る。
【０１１７】
解体型統合失調症は、思考障害と情動鈍麻が共に存在することを特徴とする場合がある。
【０１１８】
緊張型統合失調症は、対象がほぼ動かないか激越性の無意味な動きを見せ得ることを特徴とする場合がある。症状には、緊張病性昏迷やろう屈症を含み得る。
【０１１９】
未分化型統合失調症は、精神病の症状は存在するが妄想型、解体型または緊張型の診断基準には合致していないことを特徴とする場合がある。
【０１２０】
残遺型統合失調症は、陽性症状が低強度で存在するのみであることを特徴とする場合がある。
【０１２１】
分裂病後抑鬱は、統合失調病後に鬱期が生じることを特徴とする場合があり、なんらかの低レベルの統合失調症状が残存し得る。
【０１２２】
単純型統合失調症は、精神病エピソードの履歴がなく、顕著な陰性症状の潜行性および進行性の発症により特徴づけられる場合がある。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、限定ではなく双極性障害、境界性人格障害、薬物中毒および薬物誘発型精神障害を含む他の精神障害に存在し得る精神病症状を治療する方法が提供される。
【０１２４】
別の実施形態では、例えば妄想障害に存在し得る妄想（例えば「奇異でない（non-bizarre）」）を治療する方法が提供される。
【０１２５】
限定ではなく社会不安障害、回避性人格障害および統合失調症型人格障害を含む病状における引きこもりを治療する方法も提供される。
【０１２６】
さらに、強迫症（ＯＣＤ）を治療する方法も提供される。
【実施例】
【０１２７】
以下の実施例は単なる例示的目的で提供され、本開示の範囲を制限する意図はない。
【０１２８】
実施例１  （Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパノイル）ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１）の合成。
次の反応順序（スキームＡ）を使用して、（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパノイル）ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１）を合成した。
スキームＡ  ＣＭ−１の合成
【０１２９】
【化１８】
2015505296.tif 000067
【０１３０】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（（Ｓ）−３−アセトキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−プロパノイル）−ピロリジン−２−カルボキシレート（２）の合成：
（Ｓ）−３−アセトキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−プロパン酸（１．５ｇ，５．３３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）に溶解させた。Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（０．６４ｍＬ，５．８７ｍｍｏｌ）とイソブチルクロロホルマート（ＩＢＣＦ）（０．７２ｍＬ，６．１２ｍｍｏｌ）を−１５℃で加え、不活性雰囲気下で３０分撹拌した。ＤＭＦ（５ｍＬ）中（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルピロリジン−２−カルボキシレート（１）（９９８ｍｇ，５．８７ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（０．６４ｍＬ，５．８７ｍｍｏｌ）の混合物を反応混合物に滴下して加え、室温でさらに３時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）、クエン酸溶液（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗った。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物２（１．６ｇ，６９．５％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 7.81-7.76 (d, J = 20.5 Hz, 1H), 7.35-7.30 (m, 5H), 5.03-4.97 (m, 2H), 4.61-4.55 (m, 1H), 4.32-4.16 (m, 2H), 4.08-3.87 (m, 2H), 3.65-3.59 (m, 1H), 2.21-2.11 (m, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.91-1.75 (m, 2H), 1.37 (s, 9H)。
質量m/z: 435.0 [M++1]。
【０１３１】
（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−アセトキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−プロパノイル）−ピロリジン−２−カルボン酸（３）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中化合物２（１ｇ，２．３０ｍｍｏｌ）の溶液に２０％ＴＦＡ−ＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１５ｍＬ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物３（８００ｍｇ，９２％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 12.58 (br s, 1H), 7.81-7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35-7.27 (m, 5H), 5.04-4.96 (m, 2H), 4.66-4.60 (m, 1H), 4.32-4.24 (m, 2H), 4.04-3.86 (m, 1H), 3.66-3.59 (t, J = 12.6 Hz, 2H), 2.17-2.07 (m, 3H), 1.98-1.80 (m, 4H)。
質量m/z: 379.0 [M++1]。
【０１３２】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル２−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−プロパノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）−３−ヒドロキシブタノエート（５）の合成：
化合物３（１．０ｇ，２．６４ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解させ、反応混合物にＮＭＭ（０．３２ｇ，３．１７ｍｍｏｌ）とＩＢＣＦ（０．４１ｇ，３．０４ｍｍｏｌ）を−１５℃で加えて不活性雰囲気下で３０分撹拌した。ＤＭＦ（３ｍＬ）中（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボキサミド）−ブタノエート（４）（０．７３ｇ，３．１７ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（０．３５ｍＬ）の混合物を反応混合物に−１５℃で滴下して加え、室温でさらに３時間撹拌を続けた。反応混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）、クエン酸溶液（２×２０ｍＬ）およびブライン（２×５０ｍＬ）で洗った。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで５％ＣＨ３ＯＨ／ＥｔＯＡｃで溶出して精製し、化合物（５）（０．２９ｇ，１９％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.83-7.81 (m, 1H), 7.72-7.70 (m, 1H), 7.36-7.35 (m, 5H), 5.07-5.01 (m, 2H), 4.99-4.93 (m, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.50-4.48 (m, 1H), 4.26-4.22 (m, 2H), 4.07-4.00 (m, 2H), 3.89-3.86 (m, 1H), 3.61-3.55 (m, 5H), 3.53 (s, 1H), 3.39 (s, 1H), 2.12 (s, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.94-1.83 (m, 4H), 1.81-1.80 (m, 3H), 1.05 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。
質量m/z: 591.0 [M++1]。
【０１３３】
ベンジル−（Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（アミノオキシ）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバモイル）−ピロリジン−１−カルボニル）−ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバメート（６）の合成：
メタノール性アンモニア溶液（３ｍＬ）を化合物５（０．２８ｇ，０．４７ｍｍｏｌ）に加え、室温で１８時間撹拌した。揮発成分を減圧下で蒸発させて化合物６（０．２１ｇ，８２．３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.38-7.31 (m, 5H), 7.26 (s, 1H), 7.10-7.03 (m, 2H), 6.65 (br s, 1H), 5.04-5.01 (m, 2H), 4.98-4.84 (m, 1H), 4.76-4.75 (m, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.38-4.31 (m, 2H), 4.02-4.00 (m, 2H), 3.77-3.74 (m, 1H), 3.67-3.56 (m, 3H), 3.44-3.37 (m, 2H), 2.14-1.86 (m, 8H), 1.01-1.00 (m, 3H)。
質量m/z: 550 [M++1]。
【０１３４】
（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１）の合成：
メタノール（５ｍＬ）中化合物６（０．２１ｇ，０．３９ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）を加え、反応混合物を水素雰囲気下で２時間撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、溶媒を真空蒸発させ、得られた未精製残渣をジエチルエーテルとともに研和してＣＭ−１（１３０ｍｇ，８３．３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.39 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.08-7.03 (m, 2H), 6.65 (br s, 1H), 4.89-4.85 (m, 1H), 1.61-1.59 (m, 1H), 4.39-4.38 (m, 1H), 4.02-4.00 (m, 2H), 3.68-3.52 (m, 4H), 3.43-3.36 (m, 2H), 3.22-3.10 (m, 2H), 2.19-2.13 (m, 1H), 2.07-1.98 (m, 1H), 1.93-1.81 (m, 5H), 1.75 (s, 2H), 1.01-1.00 (m, 3H)。
LCMS m/z: 400.2 [M++1]。
HPLC純度:99.27%。
【０１３５】
（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（８）の合成：
ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ，１：１）中（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボン酸（７）（２．０ｇ，１７．３９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（２．７６ｇ，２６．０８ｍｍｏｌ）とＣｂｚ−Ｃｌ（３．５４ｇ，２０．８０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で洗い、水性層を３ＮのＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物８（３．０ｇ，６９．７％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.62 (br s, 1H), 7.36-7.22 (m, 5H), 5.12-5.00 (m, 2H), 4.24-4.15 (dd, J = 5.0, 36.0 Hz, 1H), 3.46-3.31 (m, 2H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.94-1.79 (m, 3H)。
質量m/z: 250.0 [M++1]。
【０１３６】
（Ｓ）−ベンジル２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（９）の合成：
化合物８（５．０ｇ，２０．０８ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）に溶解させ、ＮＭＭ（２．４３ｍＬ，２２．０８ｍｍｏｌ）とＩＢＣＦ（２．７４ｍＬ，２３．０９ｍｍｏｌ）を加え、不活性雰囲気下−１５℃で３０分撹拌した。ＤＭＦ（１５ｍＬ）中（２Ｓ，３Ｒ）−メチル２−アミノ−３−ヒドロキシブタノエート（２．９３ｇ，２２．０８ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（２．４３ｍＬ，２２．０８ｍｍｏｌ）の混合物を−１５℃で滴下して加えた。得られた反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、有機層を水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し化合物９（３．１ｇ，４２％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6)(回転異性体): δ 7.98-7.94 (m, 1H), 7.35-7.27 (m, 5H), 5.09-4.94 (m, 3H), 4.44 (dd, J = 5.5, 8.5 Hz, 1H), 4.29-4.27 (m, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.44-3.30 (m, 2H), 2.20-2.08 (m, 1H), 1.87-1.78 (m, 3H), 1.08-0.94 (2d, 3H)。
質量m/z: 365.0 [M++1]。
【０１３７】
実施例２  （Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−２）の合成：
次の反応順序（スキームＢ）を使用して、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−２）を合成した。
スキームＢ  ＣＭ−２の合成。
【０１３８】
【化１９】
2015505296.tif 000068
【０１３９】
（Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−ピロリジン−２−カルボン酸（２）の合成：
ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（６０ｍＬ，１：１）中（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボン酸（１）（３．０ｇ，２６．０８ｍｍｏｌ）の氷冷撹拌溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（５．５２ｇ，５２．１６ｍｍｏｌ）とＢｏｃ２Ｏ（６．２５ｇ，２６．６９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗った。水性層を２ＮのＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して（Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−ピロリジン−２−カルボン酸（２）（４．８ｇ，８６％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.49 (br s, 1H), 4.08-4.03 (m, 1H), 3.36-3.24 (m, 2H), 2.22-2.11 (m, 1H), 1.87-1.76 (m, 3H), 1.39 (s, 9H)。
質量m/z: 216.0 [M++1]。
【０１４０】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（（Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）−ピロリジン−１−カルボキシレート（３）の合成：
化合物２（２．０ｇ，９．００ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解させ、−１５℃まで冷却し、ＮＭＭ（１．１２ｍＬ，１０．２ｍｍｏｌ）とＩＢＣＦ（１．２６ｍＬ，１．１５ｍｍｏｌ）を加えて０℃で２０分撹拌した。ＤＭＦ（３ｍＬ）中（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−ヒドロキシプロパノエート（１．５９ｇ，１０．２ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（１．１２ｍＬ）の混合物を−１５℃で滴下して加え、得られた反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＤＣＭ（２００ｍＬ）、水（５０ｍＬ）で希釈し、２ＮのＨＣｌ（２０ｍＬ）およびブライン（２×５０ｍＬ）で洗った。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（２．３ｇ）をシロップとして得た。
質量m/z: 317.0 [M++1].
【０１４１】
（Ｓ）−メチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボキサミド）プロピオネート（４）の合成：
（Ｓ）−Ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）−ピロリジン−１−カルボキシレート（３）（５００ｍｇ，１．５８ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（３ｍＬ）に溶解させ、ジオキサン中ＨＣｌの溶液（３．１６ｍＬ，３．１６ｍｍｏｌ）を加え室温で４時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させて化合物４（２８０ｍｇ）を固体として得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 9.99 (br s, 1H), 9.12-9.08 (m, 1H), 8.53 (br s, 1H), 5.48 (br s, 2H), 4.43-4.22 (m, 2H), 3.82-3.67 (m, 4H), 3.56 (s, 3H), 2.36-2.27 (m, 1H), 1.93-1.86 (m, 3H)。
質量m/z: 217.0 [M++1]。
【０１４２】
（Ｓ）−メチル２−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｓ）−３−アセトキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ブタノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−ピロリジン−２−カルボキサミド）−３−ヒドロキシプロパノエート（６）の合成：
（２Ｓ）−１−（（２Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−ブタノイル）−ピロリジン−２−カルボン酸（５）（１．３ｇ，２．６２ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）に溶解させ、ＮＭＭ（０．４３ｍＬ）とＩＢＣＦ（０．５１ｍＬ）を−１０℃で加え、不活性雰囲気下で３０分撹拌した。ＤＭＦ（５ｍＬ）中（Ｓ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボキサミド）−プロピオネート（４）（９９２ｍｇ，３．９３ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（０．４３ｍＬ）の混合物を反応混合物に滴下して加え、さらに室温で３時間撹拌を続けた。反応混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）、クエン酸溶液（２×２０ｍＬ）およびブライン（２×５０ｍＬ）で洗った。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで５％ＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物６（２７０ｍｇ，１７．５％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.13 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.38-7.31 (m, 5H), 5.08-4.96 (m, 3H), 4.85-4.82 (m, 1H), 4.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.44-4.42 (m, 2H), 4.27 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 10.5 Hz, 2H), 3.81-3.78 (m, 1H), 3.72-3.70 (m, 1H), 3.61-3.59 (m, 3H), 3.54-3.50 (m, 2H), 2.16-2.14 (m, 1H), 2.05-2.01 (m, 1H), 1.90 (s, 3H), 1.87-1.86 (m, 3H), 1.85-1.84 (m, 3H), 1.21-1.20 (d, J = 6.0 Hz, 3H)。
質量m/z: 591.0 [M++1]。
【０１４３】
ベンジル−（２Ｒ，３Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−（アミノオキシ）−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバメート（７）の合成：
ＣＨ３ＯＨ（２ｍＬ）中化合物６（２５０ｇ，０．４２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＭｅＯＨ−ＮＨ３（１０ｍＬ）を加え、室温で１６時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させて化合物７（１９０ｍｇ，８４％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.60 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.35-7.30 (m, 5H), 7.18 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 7.11-7.06 (m, 2H), 5.05-4.97 (m, 2H), 4.82-4.81 (m, 1H), 4.60-4.59 (m, 2H), 4.33-4.31 (m, 1H), 4.15-4.08 (m, 2H), 3.81-3.79 (m, 1H), 3.72-3.64 (m, 2H), 3.59-3.53 (m, 4H), 2.14 (s, 1H), 2.03 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 1.95-1.85 (m, 5H), 1.75 (s, 1H), 1.10 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。
質量m/z: 550.0 [M++1]。
【０１４４】
（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−２）の合成：
メタノール（５ｍＬ）中化合物７（１９０ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）を加え、反応混合物を水素雰囲気下で２時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、溶媒を真空蒸発させ、未精製物を塩基性アルミナカラムクロマトグラフィーで溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２中０〜５％ＣＨ３ＯＨを用いて精製し、ＣＭ−２（１３０ｍｇ，７３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.65-7.60 (m, 1H), 7.12-7.03 (m, 2H), 4.81 (br s, 1H), 4.58-4.57 (m, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.38-4.19 (m, 1H), 4.10-4.06 (m, 1H), 3.69-3.62 (m, 2H), 3.59-3.56 (m, 4H), 3.49-3.45 (m, 2H), 3.37-3.26 (m, 2H), 2.19-2.15 (m, 1H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.95-1.84 (m, 5H), 1.75 (s, 1H), 1.06 (d, J = 13.0 Hz, 3H)。
LCMS m/z: 400.8 [M++1]。
HPLC純度:97.71%。
【０１４５】
実施例３  （Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−プロパノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−３）の合成：
次の反応順序（スキームＣ）を使用して、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−プロパノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−３）を合成した。
スキームＣ  ＣＭ−３の合成。
【０１４６】
【化２０】
2015505296.tif 000069
【０１４７】
（Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−ピロリジン−２−カルボン酸（２）の合成：
ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（６０ｍＬ，１：１）中（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボン酸（３．０ｇ，２６．０８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に０℃でＮａ２ＣＯ３（５．５２ｇ，５２．１６ｍｍｏｌ）とＢｏｃ２Ｏ（６．２５ｇ，２６．６９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗った。水性層を２ＮのＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して（Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−ピロリジン−２−カルボン酸（２）（４．８ｇ，８５．７％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.49 (br s, 1H), 4.08-4.03 (m, 1H), 3.36-3.24 (m, 2H), 2.22-2.11 (m, 1H), 1.87-1.76 (m, 3H), 1.39 (s, 9H)。
質量m/z: 216.0 [M++1]。
【０１４８】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（（Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（３）の合成：
化合物２（２．０ｇ，９．００ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解させ、−１５℃まで冷却し、ＮＭＭ（１．１２ｍＬ，１０．２ｍｍｏｌ）とＩＢＣＦ（１．２６ｍＬ，１．１５ｍｍｏｌ）を加えて０℃で２０分撹拌した。ＤＭＦ（３ｍＬ）中（Ｓ）−メチル−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパノエート（１．５９ｇ，１０．２ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（１．１２ｍＬ）の混合物を−１５℃で滴下して加えた。得られた反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）と水（２５ｍＬ）で希釈し、２ＮのＨＣｌ（２０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗った。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（２．３ｇ）を固体として得た。
質量m/z: 317.0 [M++1]。
【０１４９】
（Ｓ）−メチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボキサミド）プロパノエート（４）の合成：
１，４−ジオキサン（３ｍＬ）中（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート３（５００ｍｇ，１．５８ｍｍｏｌ）の溶液にジオキサン中ＨＣｌの溶液（３．１６ｍＬ，３．１６ｍｍｏｌ）に加え、室温で４時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させて化合物４（２８０ｍｇ）を固体として得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 9.99 (br s, 1H), 9.12-9.08 (m, 1H), 8.53 (br s, 1H), 5.48 (br s, 2H), 4.43-4.22 (m, 2H), 3.82-3.67 (m, 4H), 3.56 (s, 3H), 2.36-2.27 (m, 1H), 1.93-1.86 (m, 3H)。
質量m/z: 217.0 [M++1]。
【０１５０】
（Ｓ）−メチル２−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシプロパノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−ピロリジン−２−カルボキサミド）−３−ヒドロキシプロパノエート（６）の合成：
（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−アセトキシ−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−プロパノイル）−ピロリジン−２−カルボン酸（５）（４００ｍｇ，１．０５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に溶解させ、ＮＭＭ（０．１３ｍＬ）とＩＢＣＦ（０．１４ｍＬ）を−１５℃で加え、不活性雰囲気下で３０分撹拌した。ＤＭＦ（２ｍＬ）中（Ｓ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボキサミド）−プロパノエートヒドロクロリド（４）（２９３ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（０．１３ｍＬ）の混合物を反応混合物に滴下して加え、さらに室温で３時間撹拌を続けた。反応混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗った。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで５％ＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物６（８０ｍｇ，１３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.09 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.36-7.31 (m, 6H), 5.07-4.99 (m, 3H), 4.59-4.58 (m, 2H), 4.41-4.40 (m, 1H), 4.29-4.24 (m, 3H), 3.86 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 3.72-3.68 (m, 1H), 3.64-3.57 (m, 3H), 3.40-3.38 (m, 3H), 2.14-2.01 (m, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.90-1.80 (m, 6H)。
質量m/z: 535.0 [M++1]。
【０１５１】
ベンジル−（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバメート（７）の合成：
ＭｅＯＨ中（Ｓ）−メチル−２−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシプロパノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−ピロリジン−２−カルボキサミド）−３−ヒドロキシプロパノエート（６）（６０ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ）の溶液にＭｅＯＨ−ＮＨ３（３ｍＬ）を加え、室温で１６時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させて化合物７（３０ｍｇ，５５％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.60 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.36-7.31 (m, 6H), 7.11-7.06 (m, 2H), 5.04-4.98 (m, 2H), 4.82-4.74 (m, 2H), 4.61-4.59 (m, 1H), 4.36-4.30 (m, 2H), 4.10-4.07 (m, 1H), 3.67-3.65 (m, 2H), 3.59-3.55 (m, 6H), 3.44-3.40 (m, 2H), 1.95-1.92 (m, 6H)。
質量m/z: 520.0 [M++1]。
【０１５２】
（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−プロパノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−３）の合成：
ベンジル−（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イルカルバメート７（３００ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）をメタノール（８ｍＬ）に溶解させ、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）を加えて反応混合物を水素雰囲気下で２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、ろ液を減圧下で濃縮してＣＭ−３（１５０ｍｇ，６８％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.62 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.24 (br s, 1H), 7.14-7.07 (m, 2H), 4.87-4.82 (m, 2H), 4.59-4.57 (m, 1H), 4.37-4.31 (m, 2H), 4.11-4.07 (m, 2H), 3.70-3.39 (m, 8H), 2.17-2.01 (m, 2H), 1.95-1.79 (m, 6H)。
LCMS m/z: 386.4 [M++1]。
HPLC純度:98.45%。
【０１５３】
実施例４  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−４Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−４Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＤ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−４Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−４Ｂ）を合成した。
スキームＤ  ＣＭ−４ＡおよびＣＭ−４Ｂの合成。
【０１５４】
【化２１】
2015505296.tif 000070
【０１５５】
１−ベンジル２−エチル２−ベンジルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中（Ｓ）−１−ベンジル２−エチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート１（１０ｇ，３６．１０ｍｍｏｌ）の溶液に不活性雰囲気下−２５℃でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（４３．３ｍＬ，４３．３ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。反応混合物に臭化ベンジル（５．１７ｍＬ，４３．２６ｍｍｏｌ）を−２５℃で滴下して加えた。室温に温まるまで放置し、２時間撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２ｘ２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物２（１３ｇ，７５％）を液体として得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 7.47-7.32 (m, 5H), 7.27-7.16 (m, 3H), 7.07-7.04 (m, 2H), 5.29-5.06 (m, 2H), 4.16-3.89 (m, 2H), 3.57-3.33 (m, 2H), 3.02-2.78 (m, 2H), 2.13-1.89 (m, 2H), 1.56-1.51 (m, 1H), 1.21-1.04 (m, 3H), 0.93-0.79 (m, 1H)。
質量m/z: 368.2 [M++1]。
【０１５６】
１−ベンジル２−エチル２−ベンジルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
ＣＨ３ＯＨ（２０ｍＬ）中化合物２（８．０ｇ，２１．７９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＫＯＨ水溶液（２０ｍＬ）を加え、１００℃まで加熱し、１６時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させた。得られた残渣を氷冷水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（５０ｍＬ）で洗った。水性層をｐＨ約２までＨＣｌ溶液を用いて酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物３（６ｇ，８１％）をオフホワイトの固体として得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 12.71 (br s, 1H), 7.40-7.30 (m, 5H), 7.25-7.19 (m, 3H), 7.07-7.00 (m, 2H), 5.27-5.02 (m, 2H), 3.59-3.32 (m, 2H), 3.02-2.83 (m, 2H), 2.13-1.91 (m, 2H), 1.58-1.49 (m, 1H), 0.90-0.77 (m, 1H)。
質量m/z: 340.1 [M++1]。
【０１５７】
ベンジル２−ベンジル−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（４）の合成：
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中２−ベンジル−１−（ベンジルオキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（１．０ｇ，２．９４ｍｍｏｌ）、Ｌ−スレオニンメチルエステル（４７１ｍｇ，３．５３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＨＡＴＵ（１．１２ｇ，２．９４ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１．５８ｍＬ，８．８４ｍｍｏｌ）を５℃で加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、水（２×３０ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として精製して化合物４（１．０ｇ，７４％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 7.62-7.59 (m, 1H), 7.44-7.31 (m, 5H), 7.21-7.18 (m, 3H), 7.06-6.99 (m, 2H), 5.25-5.24 (m, 1H), 5.12-4.94 (m, 2H), 4.30 (s, 1H), 4.15-4.08 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 3H), 3.63-3.49 (m, 2H), 3.14 (s, 1H), 2.89 (s, 1H), 2.09-2.02 (m, 2H), 1.56-1.51 (m, 1H), 1.09-0.98 (m, 4H)。
質量m/z: 455.1 [M++1], 477.3 [M+Na]。
【０１５８】
ベンジル２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバモイル）−２−ベンジルピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
２−ベンジル−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（３ｇ，６．６０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解させ、Ｅｔ３Ｎ（１．１１ｍＬ，７．９２ｍｍｏｌ）とＡｃ２Ｏ（７４２ｍｇ，７．２６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、希ＨＣｌで洗った。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として用いて精製し、化合物５（２．５ｇ，７６％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.15-7.71 (m, 1H), 7.42-7.04 (m, 10H), 5.30-5.19 (m, 2H), 5.11-5.09 (m, 1H), 4.99-4.93 (m, 1H), 4.67-4.62 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 3H), 3.55-3.46 (m, 2H), 3.38-3.35 (m, 1H), 2.88-2.69 (m, 1H), 2.17-2.00 (m, 2H), 1.98-1.92 (m, 3H), 1.56-1.46 (m, 1H), 1.23-1.17 (m, 3H), 1.02-0.86 (m, 1H)。
LCMS m/z: 497.4 [M++1]。
【０１５９】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（６）の合成：
エタノール（５０ｍＬ）中化合物５（４ｇ，８．０６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（１．２ｇ）を加え、反応混合物をＨ２雰囲気（バルーン圧）下４時間撹拌した。セライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物６（２．２ｇ，７５％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.22-8.17 (m, 1H), 7.24-7.16 (m, 5H), 5.17 (t, J = 11.5 Hz, 1H), 4.48-4.42 (m, 1H), 3.60-3.54 (s, 3H), 3.20 (t, J = 13.5 Hz, 1H), 3.06-2.97 (m, 1H), 2.82-2.68 (m, 3H), 2.08-2.02 (m, 1H), 1.89 (s, 3H), 1.72-1.51 (m, 3H), 1.10 (2d, 3H)。
LCMS m/z: 363 [M++1], 385 [M+Na]。
【０１６０】
（Ｓ）−ベンジル２−（２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバモイル）−２−ベンジルピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（７）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２：Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ，１：１）中化合物６（１ｇ，２．７６ｍｍｏｌ）とＮａ２ＣＯ３（７３２ｍｇ，６．９０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に酸塩化物溶液を加えた［ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（８２５ｍｇ，３．３１ｍｍｏｌ）の溶液にＳＯＣｌ２（０．６０ｍＬ）を０℃で滴下して加え、２時間還流した。減圧下で揮発成分を除去してＣＨ２Ｃｌ２中（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート］を得、反応混合物を室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、濾過し、ろ液を真空濃縮した。得られた未精製残渣をカラムクロマトグラフィーで６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として用いて精製し、化合物７（７５０ｍｇ，４５％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.36-7.23 (m, 8H), 7.15-7.12 (m, 3H), 5.21-5.15 (m, 2H), 5.04-4.92 (m, 1H), 4.57-4.50 (m, 2H), 3.88 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.54-3.46 (m, 3H), 3.21-3.13 (m, 1H), 3.02-2.90 (m, 2H), 2.19-2.02 (m, 4H), 1.97 (s, 3H), 1.89 (s, 1H), 1.77-1.65 (m, 1H), 1.17 (s, 2H), 1.06 (s, 2H)。
質量m/z: 594.1 [M++1]。
【０１６１】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−ベンジル−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（８）の合成：
ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）中化合物７（２００ｍｇ，０．３３６ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（４０ｍｇ）を不活性雰囲気下で加え、Ｈ２雰囲気（バルーン圧）下１２時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し減圧下で濃縮した。得られた残渣をエーテル（１０ｍＬ）とともに研和して化合物８（１２５ｍｇ，８１％）を固体として得た。
1H-NMR: (500 MHz, CDCl3) (回転異性体): δ 7.88-7.87 (d, 1H, J= 8.5), 7.30-7.26 (m, 2H), 7.24-7.21 (m, 1H), 7.13-7.12 (d, 2H, J = 7), 5.44-5.43 (m, 1H), 4.76-4.74 (m, 1H), 3.94-3.92 (m, 1H), 3.84-3.81 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.50 (m, 1H), 3.26-3.12 (m, 3H), 2.90-2.88 (m, 1H), 2.23-2.15 (m, 4H), 2.04 (s, 3H), 1.87-1.77 (m, 5H), 1.27-1.24 (m, 3H)。
質量m/z: 460(M+1)。
【０１６２】
ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート（１０）の合成：
ＤＭＦ（５０ｍＬ）中２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（３．０ｇ，１３．６９ｍｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（３．７３ｇ，２７．３９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。（ブロモメチル）ベンゼン（２．８１ｇ，１６．４３ｍｍｏｌ）を加えて室温で６時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で希釈した。合わせた有機抽出物をブライン（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として用いて精製し、ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート１０（２．８ｇ，６６％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.37-7.30 (m, 5H), 6.60 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.18-5.08 (m, 2H), 4.76 (d, J = 7 Hz, 1H), 4.08-4.00 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.09 (d, J = 6.0 Hz, 3H)。
質量m/z: 310.0 [M++1], 210 [M+-De Boc]。
【０１６３】
ベンジル３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート（１１）の合成：
ＴＨＦ（８０ｍＬ）中ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート（２．８ｇ，９．０６ｍｍｏｌ）の溶液にＡｃ２Ｏ（１．１ｇ，１０．８７ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（１．５１ｍＬ，１０．８７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２８０ｍｇ）を加え、室温で１５分撹拌した。減圧下で揮発成分を除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、冷たい０．５ＮのＨＣｌ溶液（２×２０ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート１１（２．８ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.35-7.34 (m, 5H), 7.27-7.25 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.18-5.06 (m, 3H), 4.34-4.32 (m, 1H), 1.90 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.16 (d, J = 3 Hz, 3H)。
質量m/z: 252 [M++1-De Boc]。
【０１６４】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸（１２）の合成：
ベンジル−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート１１（１．４ｇ，３．９８ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）に溶解させ、１０％Ｐｄ／Ｃ（６００ｍｇ）を加えて反応混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、溶媒を真空蒸発させ、未精製残渣をヘキサンとともに研和して（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸１２（０．７ｇ，７０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.78 (br s, 1H), 6.94 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.16-5.14 (m, 1H), 4.17-4.15 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.10 (d, J = 6.0 Hz, 3H)。
質量m/z: 260.0 [M-1]。
【０１６５】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−アミノ）ブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（１３）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中化合物（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸１２（１９９ｍｇ，０．７６ｍｍｏｌ）の溶液に不活性雰囲気下でＩＢＣＦ（１２５ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ）とＮＭＭ（１５４ｍｇ，１．５２ｍｍｏｌ）を−１５℃で加え、１時間撹拌した。ＤＭＦ（２ｍＬ）中（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−ベンジル−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート８（３５０ｍｇ，０．７６ｍｍｏｌ）の溶液を反応混合物に加え、−１５℃で１時間撹拌した。得られた反応混合物を室温に温まるまで放置し、１９時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、分離した有機層を水（２０ｍＬ）と、次いでブライン（２０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料を分取ＨＰＬＣで精製し、化合物１３（１００ｍｇ，２０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, CD3OD) (回転異性体): δ 7.30-7.24 (m, 3H), 7.15-7.13 (m, 2H), 4.62-4.55 (m, 2H), 4.29-3.97 (m, 1H), 3.98-3.79 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 3.62-3.22 (m, 2H), 3.23 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.00-2.95 (q, 1H), 2.37-2.31 (m, 1H), 2.23-2.10 (m, 2H), 2.02-1.88 (m, 3H), 1.46-1.28 (m, 2H), 0.97 (d, J = 7.0 Hz, 6H)。
【０１６６】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−ベンジルピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（ＮＴ−１３−１０）の合成。
メタノール性ＮＨ３（１０ｍＬ）中化合物１３（１００ｍｇ，０．１５３ｍｍｏｌ）の溶液を封管中室温で７２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をエーテル（２×２ｍＬ）で洗ってＮＴ−１３−１０（８５ｍｇ）を得た。
【０１６７】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−４Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−４Ｂ）の合成：
【０１６８】
ＮＴ−１３−１０（８５ｍｇ）をキラル分取ＨＰＬＣでさらに精製して２つの異性体を得、それらをジオキサンＨＣｌで処理し蒸発させてそれぞれ１５ｍｇのＣＭ−４ＡとＣＭ−４Ｂを得た。
1H-NMR: (500 MHz, CD3OD) (回転異性体): δ 7.33-7.26 (m, 3H), 7.16 (s, 2H), 4.55-4.54 (m, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.14 (s, 1H), 4.01-3.98 (m, 1H), 3.91-3.71 (m, 3H), 3.59 (s, 2H), 3.25-3.16 (m, 1H), 3.04-3.00 (m, 1H), 2.33-2.10 (m, 3H), 2.01-1.91 (m, 2H), 1.86-1.80 (m, 1H), 1.46-1.44 (m, 1H), 1.34-1.29 (m, 1H), 1.25-1.19 (m, 3H), 0.99-0.97 (d, J = 14.0 Hz, 3H)。
質量m/z: 503 [M+]
HPLC純度:98.1%。
【０１６９】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）−ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミドトリフルオロ酢酸塩（ＣＭ−４Ａ−ＴＦＡ）の合成：
メタノール中ＣＭ−４Ａの溶液に大量のトリフルオロ酢酸を加えた。得られた沈殿物を濾過して回収し、メタノールで洗い、真空乾燥してＣＭ−４Ａ−ＴＦＡを得た。
【０１７０】
実施例５  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−５Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−５Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＥ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−５Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−５Ｂ）を合成した。
【０１７１】
スキームＥ  ＣＭ−５ＡおよびＣＭ−５Ｂの合成：
【０１７２】
【化２２】
2015505296.tif 000071
【０１７３】
（Ｓ）−エチルピロリジン−２−カルボキシレートヒドロクロリド（１）の合成：
エタノール中Ｌ−プロリン（ＳＭ）（１１０ｇ，９５６．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に塩化チオニル（１４１ｍｌ，１９１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間還流した。反応混合物を室温化し、真空濃縮して化合物１を塩酸塩（１７０ｇ，９９％）として得た。
【０１７４】
（Ｓ）−１−ベンジル２−エチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２中化合物１（１７０ｇ，９４７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（３９８ｍｌ，２．８３ｍｏｌ）を加えた。３０分撹拌した後、Ｃｂｚ−Ｃｌ（１．１３６ｍｏｌ）を反応混合物に加えてさらに１２時間室温で撹拌を続けた。反応混合物を水で洗い、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２（２３０ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ7.42-7.31(m, 5H), 5.09 (m, 2H), 4.32-4.23(m, 1H), 4.08-3.98(m, 2H), 3.50-3.38 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.90-1.81(m, 3H), 1.10-1.04 (t, 3H)。
質量m/z: 278 [M++1]。
【０１７５】
１−ベンジル２−エチル２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
ＴＨＦ（４０ｍＬ）中化合物２（５ｇ，０．０１８ｍｏｌ）の撹拌溶液に不活性雰囲気下でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（３６ｍＬ，０．０３６ｍｏｌ）を−７８℃で加え、３０分撹拌した。これに４−メチルベンジルブロミド（５ｇ，０．０２７ｍｏｌ）を−３０℃で滴下して加え、室温に温まるまで放置し２時間撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（５．２ｇ，７６％）を液体として得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.47-7.32 (m, 5H), 7.17-7.12 (m, 1H), 7.05-7.01 (m, 1H), 6.95-6.90 (m, 2H), 5.25-5.00 (m, 2H), 4.16-4.12 (m, 1H), 4.00-3.89 (m, 1H), 3.52 (d, 1H), 3.38-3.33 (m, 1H), 2.99-2.89 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.12-1.90 (m, 1H), 1.56-1.51 (m, 1H), 1.05-1.01 (m, 3H), 1.00-0.97 (m, 1H), 0.92-0.89 (m, 1H)。
【０１７６】
１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボン酸（４）の合成：
メタノール（２５ｍＬ）と水（１５ｍＬ）中化合物３（５．２ｇ，０．０１３６ｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＮａＯＨ水溶液（２ｇ，０．０５２ｍｏｌ）を加え、４時間かけて８５℃に加熱した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣を氷冷水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（５０ｍＬ）で洗った。水性層をｐＨ約２まで２ＮのＨＣｌ溶液を用いて酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物４（４．３ｇ，８９％）をオフホワイトの固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 7.45-7.38 (m, 5H), 7.09-6.89 (m, 4H), 5.35-5.26 (m, 2H), 3.67-3.47 (m, 2H), 3.14-2.99 (m, 2H), 2.42-2.39 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.22-1.99 (m, 1H), 1.74-1.61 (m, 1H), 1.31-1.22 (m, 1H)。
LCMS (ESI): 354 [M++1]。
【０１７７】
ベンジル２−（（（２Ｒ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中化合物４（４．３ｇ，１２．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ．ＨＣｌ（２．５ｇ，１３．４ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（１．８２ｇ，１３．４ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（６．４ｍＬ，３６．５ｍｍｏｌ）をゼロ℃で加えた。１０分撹拌した後、Ｌ−スレオニンメチルエステル（２．２ｇ，１３．４ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、室温でさらに４時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）で希釈し、水（２×３０ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し化合物５（４．１ｇ，７２％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, CDCl3): δ 7.44-7.31 (m, 5H), 7.09-6.85 (m, 5H), 5.32-5.25 (m, 1H), 5.05-4.94 (m, 2H), 4.25-4.20 (m, 1H), 4.15-4.08 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 2H), 3.45-3.41 (m, 2H), 3.14-3.09 (m, 1H), 2.89-2.84 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.05-2.02 (m, 2H), 1.55-1.51 (m, 1H), 1.09-0.98 (m, 4H)。
LCMS (ESI): 469 [M++1]。
【０１７８】
ベンジル２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（６）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中化合物５（４．１ｇ，８．７５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（３．０ｍＬ，２１．９ｍｍｏｌ）と、次いでＡｃ２Ｏ（１．０ｇ，１０．５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１時間撹拌した。これにＤＭＡＰ（２５ｍｇ、触媒性）を加えて室温で２時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物を水で希釈しＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して化合物６（４．２ｇ、未精製）を得た。これをさらなる精製なしに次ステップに直接使用した。
1H-NMR: (500 MHz, CDCl3): δ 7.42-7.30 (m, 5H), 7.09-6.85 (m, 5H), 5.25-5.21 (m, 2H), 5.11-5.09 (m, 1H), 4.67-4.62 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 2H), 3.55-3.46 (m, 3H), 3.15-3.10 (m, 1H), 2.92-2.85 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.05-1.95 (m, 5H), 1.56-1.46 (m, 1H), 1.15-1.11 (m, 4H)。
LCMS (ESI): 511 [M++1]。
【０１７９】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（７）の合成：
メタノール（３５ｍＬ）と水中化合物６（４．２ｇ，８．２２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮ２雰囲気下で１０％Ｐｄ／Ｃ（１．０ｇ）を加えた。反応混合物をＨ２雰囲気（バルーン圧）下で３時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をセライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物７（３．０ｇ，１００％）をシロップとして得た。
1H-NMR: (500 MHz, CDCl3): δ 8.22 (br s, 1H), 7.09-7.06 (m, 4H), 5.23-5.19 (m, 1H), 4.50-4.42 (m, 1H), 3.60 (d, 3H), 3.20 (m, 1H), 3.00-2.97 (m, 1H), 2.75-2.68 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.05-2.02 (m, 1H), 1.90 (d, 3H), 1.65-1.51 (m, 3H), 1.10 (dd, 3H)。
LCMS m/z: 377 [M++1]。
【０１８０】
（２Ｓ）−ベンジル２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（８）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）中化合物７（３．０ｇ，７．９７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａ２ＣＯ３（２．１ｇ，１９．９ｍｍｏｌ）を加え、０℃で５分撹拌した。これに酸塩化物［ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（２．３ｇ，９．５６ｍｍｏｌ）の溶液にＳＯＣｌ２（１．４ｍＬ）を０℃で滴下して加え、２時間還流した。揮発成分を減圧下で除去し］反応混合物を室温で２時間撹拌した。分離した有機層を真空濃縮し、得られた異性体をジエチルエーテル（２×２０ｍＬ）で洗って分離して化合物８−Ｆ１（１．６ｇ）と化合物８−Ｆ２（２．６ｇ）を得た。
化合物８−Ｆ１の分析データ：
1H-NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 7.39-7.28 (m, 5H), 7.15-6.85 (m, 5H), 5.21-5.05 (m, 2H), 5.04-4.92 (m, 1H), 4.65-4.50 (m, 1H), 4.53-4.45 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.54-3.46 (m, 4H), 3.21-3.13 (m, 2H), 2.25-2.16 (m, 4H), 2.05-2.00 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 4H), 1.56-1.51 (m, 2H), 1.15 (dd, 3H)。
LCMS m/z: 608 [M++1]。
UPLC(純度):97%。
化合物８−Ｆ２の分析データ：
1H-NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 8.50 (br s, 1H), 7.36-7.23 (m, 5H), 7.15-6.85 (m, 5H), 5.21-5.05 (m, 2H), 5.04-4.92 (m, 1H), 4.65-4.50 (m, 1H), 4.53-4.45 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.54-3.46 (m, 4H), 3.21-3.13 (m, 2H), 2.25-2.16 (m, 4H), 2.05-2.00 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 4H), 1.56-1.51 (m, 2H), 1.15 (dd, 3H)。
LCMS m/z: 608 [M++1]
UPLC(純度):96%。
【０１８１】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（（Ｒ）−２−（４−メチルベンジル）−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（９−Ｆ１）の合成：
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）中化合物８−Ｆ１（１．６ｇ，２．６３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ）を不活性雰囲気下で加え、Ｈ２雰囲気（バルーン圧）下４時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮して化合物９−Ｆ１（１．１ｇ，９２％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 8.23 (dd, 1H), 7.20-6.85 (m, 5H), 5.20-5.13 (m, 1H), 4.63-4.59 (m, 1H), 3.85-3.81 (m, 1H), 3.65-3.61 (m, 5H), 3.32-3.25 (m, 2H), 3.12-3.05 (m, 3H), 2.75-2.71 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.15-2.13 (m, 2H), 2.00 (d, 3H), 1.77 (m, 3H), 1.27 (dd, 4H)。
LCMS m/z: 474 [M++1]。
【０１８２】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（（Ｓ）−２−（４−メチルベンジル）−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（９−Ｆ２）の合成：
ＭｅＯＨ（２５ｍＬ）中化合物８−Ｆ２（２．６ｇ，４．２０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（１．０ｇ）を不活性雰囲気下で加え、Ｈ２雰囲気（バルーン圧）下３時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮して化合物９−Ｆ２（１．１ｇ，５５％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 8.23 (dd, 1H), 7.20-6.85 (m, 5H), 5.20-5.13 (m, 1H), 4.63-4.59 (m, 1H), 3.85-3.81 (m, 1H), 3.65-3.61 (m, 5H), 3.32-3.25 (m, 2H), 3.12-3.05 (m, 3H), 2.75-2.71 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.15-2.13 (m, 2H), 2.00 (d, 3H), 1.77 (m, 3H), 1.27 (dd, 4H)。
LCMS m/z: 474 [M++1]。
【０１８３】
ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート（Ａ）の合成：
ＤＭＦ（５００ｍＬ）中２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（５０ｇ，２２８．３ｍｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（６３ｇ，４５６．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。これに臭化ベンジル（４６．８３ｇ，２７３．９ｍｍｏｌ）を加えて室温で６時間撹拌した。反応混合物を水（５００ｍＬ）で希釈しＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエートＡ（５２ｇ，７３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.37-7.30 (m, 5H), 6.60 (d, 1H), 5.18-5.08 (m, 2H), 4.76 (d, 1H), 4.08-4.00 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.09 (d, 3H)。
質量m/z: 310.0 [M++1], 210 [M+-De Boc]。
【０１８４】
ベンジル３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート（Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中化合物Ａ（５２ｇ，１６８．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＡｃ２Ｏ（２０．５ｇ，２０１．９ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２５．４ｇ，２５２．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３．５ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）で希釈し、冷たい０．５ＮのＨＣｌ溶液（２×２００ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエートＢ（５２ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.35-7.34 (m, 5H), 7.27-7.25 (d, 1H), 5.18-5.06 (m, 3H), 4.34-4.32 (m, 1H), 1.90 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.16 (d, 3H)。
質量m/z: 252 [M++1-De Boc]
【０１８５】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸（Ｃ）の合成:
ＭｅＯＨ（１Ｌ）中化合物Ｂ（５２ｇ，１４８．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／ＣをＮ２雰囲気下で加え、反応混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、得られたろ液を真空蒸発させ、未精製残渣をヘキサンとともに研和して（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸Ｃ（３５ｇ，９０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.78 (br s, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.16-5.14 (m, 1H), 4.17-4.15 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.10 (d, 3H)。
質量m/z: 260.0 [M-1]。
【０１８６】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（（Ｒ）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（１０−Ｆ１）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中化合物Ｃ（０．６６ｇ，２．５５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ（０．４９ｇ，２．５５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．３４５ｇ，２．５５ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（１．２ｍＬ，６．９６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１０分撹拌した。これに化合物９−Ｆ１（１．１ｇ，２．３２ｍｍｏｌ）を加えて１５時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×７５ｍｌ）で抽出し、分離した有機層を水（２００ｍＬ）、次いでブライン（２００ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮した。未精製材料をカラムクロマトグラフィーで７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物１０−Ｆ１（１．６ｇ，１００％）をシロップとして得た。
1H-NMR: (500 MHz, CDCl3): δ 7.24-6.91 (m, 5H), 5.42-5.01 (m, 2H), 4.73-4.68 (m, 1H), 4.54-4.41 (m, 1H), 3.90-3.85 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.65-3.60 (m, 2H), 3.59-3.55 (m, 1H), 3.59-3.55 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.12-3.05 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.00-1.96 (m, 4H), 1.94-1.85 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.25 (d, 3H), 1.15 (d, 3H)。
LCMS (ESI): m/z 717 [M++1]。
【０１８７】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（１０−Ｆ２）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中化合物Ｃ（０．６６ｇ，２．５５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ．ＨＣｌ（０．４８ｇ，２．５５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．３４５ｇ，２．５５ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（１．２ｍＬ，６．９６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１０分撹拌した。これに化合物９−Ｆ２（１．１ｇ，２．３２ｍｍｏｌ）を加えて１５時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×７５ｍｌ）で抽出し、分離した有機層を水（２００ｍＬ）、次いでブライン（２００ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮した。未精製材料をカラムクロマトグラフィーで７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物１０−Ｆ２（０．８ｇ，５０％）をシロップとして得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.24-6.91 (m, 5H), 5.42-5.01 (m, 2H), 4.73-4.68 (m, 1H), 4.54-4.41 (m, 1H), 3.90-3.85 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.65-3.60 (m, 2H), 3.59-3.55 (m, 1H), 3.59-3.55 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.12-3.05 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.00-1.96 (m, 4H), 1.94-1.85 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.25 (d, 3H), 1.15 (d, 3H)。
LCMS (ESI): m/z 717 [M++1]。
【０１８８】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１１−Ｆ１）の合成：
化合物１０−Ｆ１（１．６ｇ，２．２０ｍｍｏｌ）とメタノール性ＮＨ３（２０ｍＬ）の混合物をオートクレーブに入れ、１６時間かけて７０℃に加熱した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物を減圧下で濃縮して化合物１１−Ｆ１（０．６ｇ，４６％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.32 (br s, 1H), 7.15-7.10 (m, 2H), 7.05-6.91 (m, 3H), 6.65 (br s, 1H), 4.75-4.59 (m, 2H), 4.24-3.45 (m, 8H), 3.35 (s, 1H), 3.05-3.00 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.26-1.85 (m, 6H), 1.75 (s, 6H), 1.60-1.55 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.15 (d, 3H)。
LCMS (ESI): m/z 618.5 [M++1]。
【０１８９】
Ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１１−Ｆ２）の合成：
化合物１０−Ｆ２（０．８ｇ，１．１１ｍｍｏｌ）とメタノール性ＮＨ３（２０ｍｌ）の混合物を室温で１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣとＬＣＭＳによる）消費後、反応混合物を減圧下で濃縮して化合物１１−Ｆ２（０．４ｇ，５８％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.32 (br s, 1H), 7.15-7.10 (m, 2H), 7.05-6.91 (m, 3H), 6.65 (br s, 1H), 4.75-4.59 (m, 2H), 4.24-3.45 (m, 8H), 3.35 (s, 1H), 3.05-3.00 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.26-1.85 (m, 6H), 1.75 (s, 6H), 1.60-1.55 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.15 (d, 3H)。
LCMS (ESI): m/z 618.5 [M++1]。
【０１９０】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−５Ａ）の合成：
１，４ジオキサン（７ｍＬ）中２Ｎ−ＨＣｌ中化合物１１−Ｆ１（０．２５ｇ，０．４０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を室温で２時間。反応混合物を減圧下で濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製してＣＭ−５Ａ（０．１ｇ，４４％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.35 (t, 2H), 7.25 (d, 2H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 3.94-3.89 (m, 1H), 3.87-3.78 (m, 2H), 3.63 (d, 1H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.25 (d, 1H), 2.56-2.34 (m, 5H), 2.28-2.20 (m, 4H), 1.75-1.71 (m, 1H), 1.56 (d, 3H), 1.32 (d, 3H), 1.15-1.11 (m, 1H)。
LCMS (ESI) m/z: 518 [M++1]。
UPLC純度:99%。
旋光度[α25D]:+30.51(水中C=1%)。
分取ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝７．５６分（ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＡ，２５０×４．６ｍｍ，５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
【０１９１】
（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−５Ｂ）の合成：
１，４ジオキサン（５ｍＬ）中２Ｎ−ＨＣｌ中化合物１１−Ｆ２（０．４ｇ，０．６４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を室温で２時間。反応混合物を減圧下で濃縮して未精製物を得、この未精製物をＥｔＯＡｃとｎ−ペンタンで洗ってＣＭ−５Ｂ（０．１５ｇ，４２％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.35 (t, 2H), 7.25 (d, 2H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 3.94-3.89 (m, 1H), 3.87-3.78 (m, 2H), 3.63 (d, 1H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.25 (d, 1H), 2.56-2.34 (m, 5H), 2.28-2.20 (m, 4H), 1.75-1.71 (m, 1H), 1.56 (d, 3H), 1.32 (d, 3H), 1.15-1.11 (m, 1H)。
LCMS (ESI) m/z: 518 [M++1]。
UPLC純度:96%。
旋光度[α25D]:-124.6(水中C=1%)。
分取ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝９．６８分（ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＡ，２５０×４．６ｍｍ，５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／ｍｉｎ）。
【０１９２】
実施例６  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−６Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−６Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＦ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−６Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−６Ｂ）を合成した：
【０１９３】
スキームＦ  ＣＭ−６ＡおよびＣＭ６Ｂの合成：
【０１９４】
【化２３】
2015505296.tif 000072
【０１９５】
（Ｓ）−エチルピロリジン−２−カルボキシレートヒドロクロリド（１）の合成：
エタノール中Ｌ−プロリン（ＳＭ）（１１０ｇ，９５６．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に塩化チオニル（１４１ｍｌ，１９１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間還流した。反応混合物を室温化し、真空濃縮して化合物１を塩酸塩（１７０ｇ，９９％）として得た。
【０１９６】
（Ｓ）−１−ベンジル２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２中化合物１（１７０ｇ，９４７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（３９８ｍｌ，２．８３ｍｏｌ）を加えた。３０分撹拌した後、Ｃｂｚ−Ｃｌ（１．１３６ｍｏｌ）を反応混合物に加えてさらに１２時間室温で撹拌を続けた。反応混合物を水で洗い、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２（２３０ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 7.42-7.31(m, 5H), 5.09 (m, 2H), 4.32-4.23(m, 1H), 4.08-3.98(m, 2H), 3.50-3.38 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.90-1.81(m, 3H), 1.10-1.04 (t, 3H)。
質量m/z: 278 [M++1]。
【０１９７】
１−ベンジル２−エチル２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中化合物２（１０ｇ，３６．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に不活性雰囲気下−２０℃でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（７２．１ｍＬ，７２．１ｍｍｏｌ）を加え１時間撹拌した。これに４−フルオロベンジルブロミド（５．３４ｍＬ，４３．２ｍｍｏｌ）を−２０℃で滴下して加え、室温に温まるまで放置して１時間撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（１０ｇ，７２％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.46-7.32 (m, 5H), 7.15-7.01 (m, 4H), 5.18-5.09 (m, 2H), 4.16-3.91 (m, 2H), 3.53 (d, 1H), 3.62 (d, 1H), 3.38-3.32 (m, 1H), 2.97-2.81 (m, 1H), 2.14-1.91 (m, 2H), 1.65-1.51 (m, 1H), 1.25 (t, 2H), 1.09 (t, 1H), 0.99-0.85 (m, 1H)。
LCMS (ESI): 386 [M++1]。
【０１９８】
１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボン酸（４）の合成：
メタノール（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）中化合物３（１０ｇ，２５．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＮａＯＨ水溶液（３．１１ｇ，７７．８ｍｍｏｌ）を加え、１６時間かけて７０℃に加熱した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣を氷冷水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（５０ｍＬ）で洗った。水性層をｐＨ約２までＨＣｌ水溶液を用いて酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して未精製物を得、この未精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し化合物４（９ｇ，９７％）を得た。
【０１９９】
ベンジル２−（４−フルオロベンジル）−２−（（（２Ｒ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（９５ｍＬ）中化合物４（９．５ｇ，２６．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮ２雰囲気下ゼロ℃でＥＤＣＩ．ＨＣｌ（７．６１ｇ，３９．８７ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（５．４２ｇ，３９．８７ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１４．６ｍＬ，７９．７ｍｍｏｌ）を加えた。１０分撹拌した後、Ｌ−スレオニンメチルエステルの塩酸塩（５．４ｇ，３１．８９ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、室温でさらに１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して未精製物を得、この未精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し化合物５（１３ｇ、未精製）を得た。
【０２００】
ベンジル２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（６）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１３０ｍＬ）中化合物５（１３ｇ，２７．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（９．５８ｍＬ，６８．７ｍｍｏｌ）、次いでＡｃ２Ｏ（４．１３ｍＬ，４１．２６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１時間撹拌した。これにＤＭＡＰ（０．１３ｇ）を加え、室温で１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して未精製物を得、この未精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し化合物６（１０ｇ，７１％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.22-7.14 (m, 5H), 7.11-6.98 (m, 4H), 5.26-5.21 (m, 2H), 5.09 (t, 1H), 4.67-4.63 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 3H), 3.69-3.65 (m, 2H), 3.19-3.16 (m, 1H), 2.92-2.85 (m, 1H), 2.10-2.02 (m, 1H), 2.98 (s, 4H), 1.56-1.46 (m, 1H), 1.20-1.14 (m, 3H), 1.12 (t, 1H)。
LCMS (ESI): 515 [M++1]。
質量m/z: 515 [M++1]。
【０２０１】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（７）の合成：
メタノール（１００ｍＬ）中化合物６（１０ｇ，１９．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に湿潤の１０％Ｐｄ／Ｃ（２ｇ）をＮ２雰囲気下で加えた。反応混合物をＨ２雰囲気（バルーン圧）下で４時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をセライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物７（６．７ｇ，９１％）を得た。
（２Ｓ）−ベンジル２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（８）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（６７ｍＬ）と水（６７ｍＬ）中化合物７（６．７ｇ，１７．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａ２ＣＯ３（４．６７ｇ，４４．０ｍｍｏｌ）を加え、０℃で５分撹拌した。これに酸塩化物［ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（２０．６ｇ，８２．８ｍｍｏｌ）の溶液にＳＯＣｌ２（３．１９ｍＬ，４４．０ｍｍｏｌ）を滴下して０℃で加え、２時間還流した。揮発成分を減圧下で除去して（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート］（５．２６ｇ，２１．１５ｍｍｏｌ）を得、反応混合物を室温で２時間撹拌した。分離した有機層を真空濃縮し、得られた未精製材料をカラムクロマトグラフィーで２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物８（８．９ｇ，８３％）を得た。
LCMS m/z: 612 [M++1]。
質量m/z: 612 [M++1]。
【０２０２】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−（４−フルオロベンジル）−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（９）の合成：
ＭｅＯＨ（１８０ｍＬ）中化合物８（８．９ｇ，１４．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に湿潤の１０％Ｐｄ／Ｃ（１．８ｇ）を不活性雰囲気下で加え、４時間Ｈ２雰囲気（バルーン圧）下で撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮して化合物９（６．９ｇ、未精製）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, CD3OD) (回転異性体): δ 7.22-7.14 (m, 2H), 7.03 (t, 2H), 5.39-5.34 (m, 1H), 4.52 (t, 1H), 3.78-3.72 (m, 2H), 3.74 (d, 3H), 3.35 (s, 2H), 3.29-3.24 (m, 1H), 3.18-3.12 (m, 1H), 2.85-2.83 (m, 1H), 2.31-2.25 (m, 2H), 2.18-2.15 (m, 1H), 2.06 (d, 3H), 1.89-1.75 (m, 3H), 1.71-1.65 (m, 1H), 1.52-1.40 (m, 1H), 1.29 (dd, 3H)。
質量m/z: 478 [M++1]。
【０２０３】
ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート（Ａ）の合成：
ＤＭＦ（５００ｍＬ）中２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（Ｂｏｃ−Ｔｈｒ）（５０ｇ，２２８．３ｍｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（６３ｇ，４５６．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。これに臭化ベンジル（４６．８３ｇ，２７３．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。反応混合物を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエートＡ（５２ｇ，７３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.37-7.30 (m, 5H), 6.60 (d, 1H), 5.18-5.08 (m, 2H), 4.76 (d, 1H), 4.08-4.00 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.09 (d, 3H)。
質量m/z: 310.0 [M++1], 210 [M+-De Boc]。
【０２０４】
ベンジル３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート（Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中化合物Ａ（５２ｇ，１６８．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＡｃ２Ｏ（２０．５ｇ，２０１．９ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２５．４ｇ，２５２．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３．５ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）で希釈し、冷たい０．５ＮのＨＣｌ溶液（２×２００ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエートＢ（５２ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.35-7.34 (m, 5H), 7.27-7.25 (d, 1H), 5.18-5.06 (m, 3H), 4.34-4.32 (m, 1H), 1.90 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.16 (d, 3H)。
質量m/z: 252 [M++1-De Boc]。
【０２０５】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸（Ｃ）の合成：
ＭｅＯＨ（１Ｌ）中化合物Ｂ（５２ｇ，１４８．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／ＣをＮ２雰囲気下で加え、反応混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、得られたろ液を真空蒸発させ、未精製残渣をヘキサンとともに研和して（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸Ｃ（３５ｇ，９０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.78 (br s, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.16-5.14 (m, 1H), 4.17-4.15 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.10 (d, 3H)。
質量m/z: 260.0 [M+-1]。
【０２０６】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（１０）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（６９ｍＬ）中化合物Ｃ（４．５３ｇ，１７．３５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ．ＨＣｌ（４．１４ｇ，２１．６９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．９５ｇ，２１．７ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（７．９９ｍＬ，４３．４ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１０分撹拌した。これに化合物９（６．９ｇ，１４．４６ｍｍｏｌ）を加えて１６時間撹拌した。反応混合物を水（７５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×７５ｍｌ）で抽出した。分離有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をカラムクロマトグラフィーで２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物１０（８．０ｇ，７７％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.35-7.29 (m, 1H), 7.23 (m, 1H), 7.13 (d, 2H), 7.08-7.05 (m, 1H), 5.30-5.12 (m, 2H), 4.67-4.34 (m, 3H), 3.98-3.70 (m, 3H), 3.65 (s, 1H), 3.49-3.45 (m, 1H), 3.25-3.10 (m, 1H), 2.32-1.96 (m, 8H), 1.75-1.62 (m, 2H), 1.49 (d, 9H), 1.32-1.29 (m, 3H), 1.25-1.20 (m, 3H)。
LCMS m/z: 621 [M++1]。
【０２０７】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（２Ｓ）−２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１１）の合成：
化合物１０（４ｇ，５．５５ｍｍｏｌ）とメタノール性ＮＨ３（２０ｍＬ）の撹拌混合物を封管に入れ、４８時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮して未精製物を得、この未精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物１１（１．６ｇ）を混合物として得た。この未精製材料をキラル分取精製用に提出した。
異性体のキラル分取ＨＰＬＣ：
化合物１１（１．６ｇ、未精製）の異性体をキラル分取ＨＰＬＣで分離して化合物１１−Ｆ１（０．６ｇ）と化合物１１−Ｆ２（０．２５ｇ）を得た。
化合物１１−Ｆ１の分析データ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.15 (br s, 1H), 7.39-7.35 (m, 2H), 7.24 (s, 1H), 7.11 (t, 2H), 7.04-7.00 (m, 1H), 6.79-6.74 (m, 2H), 4.75 (d, 1H), 4.21 (t, 2H), 4.02-3.95 (m, 1H), 3.81-3.75 (m, 2H), 3.69-3.56 (m, 2H), 3.53-3.49 (m, 1H), 3.27-3.09 (m, 2H), 2.29-2.10 (m, 1H), 2.05-1.91 (m, 5H), 1.69-1.51 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.19-1.11 (m, 6H), 0.92-0.84 (m, 1H)。
HPLC: 85%。
LCMS (ESI): m/z 622 [M++1]。
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１０．６９分（ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＡ，２５０×４．６ｍｍ，５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
化合物１１−Ｆ２の分析データ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.15 (br s, 1H), 7.39-7.35 (m, 2H), 7.24 (s, 1H), 7.11 (t, 2H), 7.04-7.00 (m, 1H), 6.79-6.74 (m, 2H), 4.75 (d, 1H), 4.21 (t, 2H), 4.02-3.95 (m, 1H), 3.81-3.75 (m, 2H), 3.69-3.56 (m, 2H), 3.53-3.49 (m, 1H), 3.27-3.09 (m, 2H), 2.29-2.10 (m, 1H), 2.05-1.91 (m, 5H), 1.69-1.51 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.19-1.11 (m, 6H), 0.92-0.84 (m, 1H)。
HPLC: 84%。
LCMS (ESI): m/z 622 [M++1]。
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１８．５５分（ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＡ，２５０×４．６ｍｍ，５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
【０２０８】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−６Ａ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）中化合物１１−Ｆ１（０．６ｇ，０．９６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１，４ジオキサン（６ｍＬ）中４Ｍ−ＨＣｌを０℃で加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮して未精製物を得、この未精製物をＥｔＯＡｃでさらに洗い、真空乾燥してＣＭ−６Ａ（０．２８ｇ，５２％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.41-7.32 (m, 2H), 7.21 (t, 2H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 3.94-3.62 (m, 5H), 3.27 (d, 1H), 2.56-2.50 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 1H), 2.14-2.05 (m, 4H), 1.81-1.75 (m, 1H), 1.35 (d, 3H), 1.32 (d, 3H), 1.19-1.11 (m, 1H)。
LCMS (ESI) m/z: 522 [M++1]。
UPLC純度:96%。
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝７．７３分（ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＡ，２５０×４．６ｍｍ，５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
旋光度[α20D]:+7.15(水中C=1%)。
【０２０９】
（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−６Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中化合物１１−Ｆ２（０．２５ｇ，０．４０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１，４ジオキサン（２．５ｍＬ）中４Ｍ−ＨＣｌを０℃で加え、室温で３時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮して未精製物を得、この未精製物をＥｔＯＡｃでさらに洗い、真空乾燥してＣＭ−６Ｂ（０．１ｇ，４５％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.41-7.32 (m, 2H), 7.21 (t, 2H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 3.94-3.62 (m, 5H), 3.27 (d, 1H), 2.56-2.50 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 1H), 2.14-2.05 (m, 4H), 1.81-1.75 (m, 1H), 1.35 (d, 3H), 1.32 (d, 3H), 1.19-1.11 (m, 1H)。
LCMS (ESI) m/z: 522 [M++1]。
UPLC純度:98.38%。
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１１．２８分（ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＡ，２５０×４．６ｍｍ，５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
旋光度[α20D]:-102.77(水中C=1%)。
【０２１０】
実施例７  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−７Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−７Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＧ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−７Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−７Ｂ）を合成した：
【０２１１】
スキームＧ  ＣＭ−７ＡとＣＭ−７Ｂの合成：
【０２１２】
【化２４】
2015505296.tif 000073
【０２１３】
（Ｓ）−エチルピロリジン−２−カルボキシレートヒドロクロリド（１）の合成：
エタノール中Ｌ−プロリン（ＳＭ）（１１０ｇ，９５６．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に塩化チオニル（１４１ｍｌ，１９１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間還流した。反応混合物を室温化し、真空濃縮して化合物１を塩酸塩（１７０ｇ，９９％）として得た。
【０２１４】
（Ｓ）−１−ベンジル２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２中化合物１（１７０ｇ，９４７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（３９８ｍｌ，２．８３ｍｏｌ）を加えた。３０分撹拌した後、Ｃｂｚ−Ｃｌ（１．１３６ｍｏｌ）を反応混合物に加えてさらに１２時間室温で撹拌を続けた。反応混合物を水で洗い、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し真空濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２（２３０ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 7.42-7.31(m, 5H), 5.09 (m, 2H), 4.32-4.23(m, 1H), 4.08-3.98(m, 2H), 3.50-3.38 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.90-1.81(m, 3H), 1.10-1.04 (t, 3H)。
質量m/z: 278 [M++1]。
【０２１５】
１−ベンジル２−エチル２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中化合物２（５ｇ，０．０１８ｍｏｌ）の撹拌溶液に不活性雰囲気下−７８℃でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（２７ｍＬ，０．０２６ｍｏｌ）を加え、３０分撹拌した。これに１−（ブロモメチル）−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（３．３ｍＬ，０．０２１ｍｏｌ）を−４０℃で滴下して加え、室温に温まるまで放置して３時間撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（６ｇ，７６％）を液体として得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.64-7.58 (m, 2H), 7.44-7.25 (m, 7H), 5.22-5.12 (m, 2H), 4.16-4.12 (m, 1H), 4.05-3.89 (m, 1H), 3.62 (d, 1H), 3.48-3.39 (m, 1H), 3.16-3.10 (m, 1H), 2.99-2.89 (m, 1H), 2.19-1.99 (m, 2H), 1.63-1.58 (m, 1H), 1.19 (t, 2H), 1.05 (t, 1H), 0.92-0.89 (m, 1H)。
【０２１６】
１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボン酸（４）の合成：
メタノール（５０ｍＬ）と水（１５ｍＬ）中化合物３（６ｇ，０．０１４ｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＮａＯＨ水溶液（１．１ｇ，０．０２７ｍｏｌ）を加え、３時間かけて７０℃に加熱した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣を氷冷水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（５０ｍＬ）で洗った。水性層をｐＨ約２まで２ＮのＨＣｌを用いて酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物４（４ｇ，７１％）をオフホワイトの固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.59-7.22 (m, 10H), 5.24-5.19 (m, 1H), 5.05-5.00 (m, 1H), 3.65 (d, 1H), 3.35-3.20 (m, 1H), 3.19 (t, 1H), 3.01-2.89 (m, 1H), 2.00-1.97 (m, 2H), 1.65-1.61 (m, 1H), 0.85-0.77 (m, 1H)。
LCMS (ESI): 406 [M+-1]。
質量m/z: 406 [M+-1]。
【０２１７】
ベンジル２−（（（２Ｒ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（４０）中化合物４（４ｇ，９．８０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ（２．８ｇ，１４．７ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（２．６ｇ，１９．６ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（３．５ｍＬ，１９．６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。１０分撹拌した後、Ｌ−スレオニンメチルエステルの塩酸塩（２ｇ，１１．８ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、室温でさらに１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液（２×３０ｍＬ）、次いでクエン酸（２×３０ｍＬ）で洗った。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して化合物５（５ｇ、未精製）を得た。
【０２１８】
ベンジル２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（６）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中化合物５（５ｇ，９．５７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（４ｍＬ，２８．７ｍｍｏｌ）、次いでＡｃ２Ｏ（２．７ｍＬ，２８．７ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１時間撹拌した。これにＤＭＡＰ（０．１ｇ）を加え室温で１６時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた未精製材料をカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物６（３．４ｇ，６３％）を淡黄色の液体として得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.62-7.50 (m, 2H), 7.43-7.24 (m, 7H), 5.27-5.21 (m, 2H), 5.11-5.09 (m, 1H), 4.67-4.62 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 4H), 3.55-3.46 (m, 2H), 2.92-2.85 (m, 2H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.56-1.46 (m, 1H), 1.15-1.11 (m, 4H)。
LCMS (ESI): 565 [M++1]。
【０２１９】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（７）の合成：
メタノール（２０ｍＬ）中化合物６（３．４ｇ，６．０２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に湿潤の１０％Ｐｄ／Ｃ（０．３４ｇ）をＮ２雰囲気下で加えた。反応混合物をＨ２雰囲気（バルーン圧）下で６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をセライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物７（２．１ｇ，７７％）を濃厚なシロップとして得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.22 (br s, 1H), 7.62-7.56 (m, 2H), 7.45-7.39 (m, 2H), 5.23-5.19 (m, 1H), 4.50-4.42 (m, 1H), 3.60 (d, 3H), 3.05-3.00 (m, 1H), 2.97-2.85 (m, 3H), 2.18-2.09 (m, 1H), 1.95 (d, 3H), 1.65-1.51 (m, 3H), 1.10 (d, 2H), 0.75 (d, 1H)。
LCMS m/z: 431 [M++1]。
【０２２０】
（２Ｓ）−ベンジル２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（８）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）と水（４０ｍＬ）中化合物７（４．５ｇ，１０．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａ２ＣＯ３（２．２ｇ，２０．９ｍｍｏｌ）を加え、０℃で５分撹拌した。（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（３．３ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。分離した有機層を真空濃縮し、得られた未精製材料をカラムクロマトグラフィーで５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物８（４．５ｇ，６５％）を黄色の液体として得た。（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートを以下のように合成した。ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（２０．６ｇ，８２．８ｍｍｏｌ）の溶液にＳＯＣｌ２（２０．５ｇ，１７２．６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して加え、２時間還流した。揮発成分を減圧下で除去して（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.50 (br s, 1H), 7.79-7.65 (m, 2H), 7.52-7.37 (m, 7H), 5.42-5.05 (m, 3H), 4.79-4.59 (m, 1H), 4.15 (q, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.69-3.50 (m, 3H), 3.21-3.13 (m, 1H), 2.45-2.16 (m, 2H), 2.10 (s, 6H), 2.05-2.00 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.44-1.19 (m, 6H)。
LCMS m/z: 662 [M++1]。
【０２２１】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（９）の合成：
ＭｅＯＨ（４５ｍＬ）中化合物８（４．５ｇ，６．８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に湿潤の１０％Ｐｄ／Ｃ（０．４５ｇ）を不活性雰囲気下で加え、１６時間Ｈ２雰囲気（バルーン圧）下で撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮して化合物９（３．５ｇ、未精製）を半固体として得た。
【０２２２】
ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート（Ａ）の合成：
ＤＭＦ（５００ｍＬ）中２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（Ｂｏｃ−Ｔｈｒ）（５０ｇ，２２８．３ｍｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（６３ｇ，４５６．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。これに臭化ベンジル（４６．８３ｇ，２７３．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。反応混合物を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエートＡ（５２ｇ，７３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.37-7.30 (m, 5H), 6.60 (d, 1H), 5.18-5.08 (m, 2H), 4.76 (d, 1H), 4.08-4.00 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.09 (d, 3H)。
質量m/z: 310.0 [M++1], 210 [M+-De Boc]。
【０２２３】
ベンジル３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート（Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中化合物Ａ（５２ｇ，１６８．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＡｃ２Ｏ（２０．５ｇ，２０１．９ｍｍｏｌ），Ｅｔ３Ｎ（２５．４ｇ，２５２．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３．５ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）で希釈し、冷たい０．５ＮのＨＣｌ溶液（２×２００ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエートＢ（５２ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.35-7.34 (m, 5H), 7.27-7.25 (d, 1H), 5.18-5.06 (m, 3H), 4.34-4.32 (m, 1H), 1.90 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.16 (d, 3H)。
質量m/z: 252 [M++1-De Boc]。
【０２２４】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸（Ｃ）の合成：
ＭｅＯＨ（１Ｌ）中化合物Ｂ（５２ｇ，１４８．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／ＣをＮ２雰囲気下で加え、反応混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、得られたろ液を真空蒸発させ、未精製残渣をヘキサンとともに研和して（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸Ｃ（３５ｇ，９０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.78 (br s, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.16-5.14 (m, 1H), 4.17-4.15 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.10 (d, 3H)。
質量m/z: 260.0 [M-1]。
【０２２５】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（１０）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中化合物Ｃ（１．７８ｇ，６．８３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ（１．６３ｇ，８．５３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．５３ｇ，１１．３８ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（２ｍＬ，１４．２ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１０分撹拌した。これに化合物９（３ｇ，５．６９ｍｍｏｌ）を加え、１６時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×７５ｍｌ）で抽出し、分離した有機層をＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）、クエン酸水溶液（１００ｍＬ）、次いでブライン（１００ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をカラムクロマトグラフィーで７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物１０（２．１ｇ，５１％）をオフホワイトの固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.71-7.55 (m, 3H), 7.34-7.05 (m, 2H), 5.35-5.20 (m, 1H), 5.09-5.01 (m, 1H), 4.78-4.35 (m, 3H), 3.90-3.85 (m, 2H), 3.67 (s, 4H), 3.39-3.25 (m, 1H), 3.25-3.05 (m, 1H), 2.21-1.96 (m, 12H), 1.39 (d, 9H), 1.35-1.25 (m, 8H), 0.85 (d, 1H)。
【０２２６】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（２Ｓ）−２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１１）の合成：
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中化合物１０（１ｇ，１．２９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にメタノール性ＮＨ３（２０ｍＬ）を０℃で加え、室温で２４時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、化合物１１（０．８７ｇ、未精製）をオフホワイトの固体として得た。
異性体のキラル分取ＨＰＬＣ：
化合物１１（０．３ｇ、未精製）の異性体をキラル分取ＨＰＬＣで分離して化合物１１（０．３ｇ）と化合物１１−Ｆ２（０．１５ｇ）を得た。
化合物１１の分析データ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.59-7.51 (m, 4H), 7.24 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.79-6.60 (m, 2H), 5.09 (d, 1H), 4.77-4.74 (m, 1H), 4.64-4.61 (m, 1H), 4.21 (t, 2H), 3.98 (dd, 1H), 3.85-3.80 (m, 2H), 3.71-3.60 (m, 3H), 3.25-3.19 (m, 2H), 2.21-1.85 (m, 5H), 1.75-1.70 (m, 1H), 1.44 (s, 10H), 1.21 (d, 3H), 1.09 (d, 3H), 0.91-0.85 (m, 1H)。
HPLC: 93%。
LCMS (ESI): m/z 671.6 [M++1]。
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１１．７０分（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ、２５０×４．６ｍｍ、５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
化合物  １１−Ｆ２の分析データ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.59-7.51 (m, 4H), 7.24 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.79-6.60 (m, 2H), 5.09 (d, 1H), 4.77-4.74 (m, 1H), 4.64-4.61 (m, 1H), 4.21 (t, 2H), 3.98 (dd, 1H), 3.85-3.80 (m, 2H), 3.71-3.60 (m, 3H), 3.25-3.19 (m, 2H), 2.21-1.85 (m, 5H), 1.75-1.70 (m, 1H), 1.44 (s, 10H), 1.21 (d, 3H), 1.09 (d, 3H), 0.91-0.85 (m, 1H)。
HPLC: 91%。
LCMS (ESI): m/z 671.6 [M++1]。
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１９．６８分（ＣｈｉｒａｌｐａｋＩＡ、２５０×４．６ｍｍ、５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
【０２２７】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−７Ａ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中化合物１１−Ｆ１（０．３ｇ，０．４５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１，４ジオキサン（１ｍＬ）中４Ｎ−ＨＣｌを０℃で加え、室温で３時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、ＣＭ−７Ａ（０．１５ｇ，５９％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.89 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 3.94-3.79 (m, 5H), 3.35 (q, 2H), 2.56-2.50 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 2H), 2.14-2.05 (m, 3H), 1.81-1.75 (m, 1H), 1.35 (d, 3H), 1.32 (d, 3H), 1.19-1.11 (m, 1H)。
LCMS (ESI) m/z: 572.6 [M++1]。
質量m/z: 572.4 [M++1]。
UPLC純度:97%。
旋光度[α20D]:+14.86(水中C=1%)。
【０２２８】
（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−７Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中化合物１１−Ｆ２（０．１５ｇ，０．２２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１，４ジオキサン（０．５ｍＬ）中４Ｎ−ＨＣｌを０℃で加え、室温で３時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、ＣＭ−７Ｂ（１４０ｍｇ，５９％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.89 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 3.94-3.79 (m, 5H), 3.35 (q, 2H), 2.56-2.50 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 2H), 2.14-2.05 (m, 3H), 1.81-1.75 (m, 1H), 1.35 (d, 3H), 1.32 (d, 3H), 1.19-1.11 (m, 1H)。
LCMS (ESI) m/z: 572.8 [M++1]。
質量m/z: 572.4 [M++1]。
UPLC純度:97.67%。
旋光度[α20D]:-105.51(水中C=1%)。
【０２２９】
実施例８  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−８Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−８Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＨ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−８Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−８Ｂ）を合成した：
【０２３０】
スキームＨ  ＣＭ−８ＡおよびＣＭ−８Ｂの合成：
【０２３１】
【化２５】
2015505296.tif 000074
【０２３２】
（Ｓ）−エチルピロリジン−２−カルボキシレートヒドロクロリド（１）の合成：
エタノール中Ｌ−プロリン（ＳＭ）（１１０ｇ，９５６．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に塩化チオニル（１４１ｍｌ，１９１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間還流した。反応混合物を室温化し、真空濃縮して化合物１を塩酸塩（１７０ｇ，９９％）として得た。
【０２３３】
（Ｓ）−１−ベンジル２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２中化合物１（１７０ｇ，９４７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（３９８ｍｌ，２．８３ｍｏｌ）を加えた。３０分撹拌した後、Ｃｂｚ−Ｃｌ（１．１３６ｍｏｌ）を反応混合物に加えてさらに１２時間室温で撹拌を続けた。反応混合物を水で洗い、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２（２３０ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ7.42-7.31(m, 5H), 5.09 (m, 2H), 4.32-4.23(m, 1H), 4.08-3.98(m, 2H), 3.50-3.38 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.90-1.81(m, 3H), 1.10-1.04 (t, 3H)。
質量m/z: 278 [M++1]。
【０２３４】
１−ベンジル２−エチル２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中化合物２（５ｇ，０．０１８ｍｏｌ）の撹拌溶液に不活性雰囲気下−７８℃でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（３７ｍＬ，０．０３６ｍｏｌ）を加え、３０分撹拌した。これに３−メチルベンジルブロミド（４ｇ，０．０２１ｍｏｌ）を−４０℃滴下して加え、室温に温まるまで放置して２時間撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（６ｇ，８７％）を液体として得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.47-7.32 (m, 5H), 7.17-7.12 (m, 1H), 7.05-7.01 (m, 1H), 6.95-6.90 (m, 2H), 5.25-5.00 (m, 2H), 4.16-4.12 (m, 1H), 4.00-3.89 (m, 1H), 3.52 (d, 1H), 3.38-3.33 (m, 1H), 2.99-2.89 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.12-1.90 (m, 1H), 1.56-1.51 (m, 1H), 1.05-1.01 (m, 3H), 1.00-0.97 (m, 1H), 0.92-0.89 (m, 1H)。
LCMS (ESI): 382 [M++1]。
HPLC(純度):99%。
【０２３５】
１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボン酸（４）の合成：
メタノール（３０ｍＬ）と水（１５ｍＬ）中化合物３（６ｇ，０．０１５ｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＮａＯＨ水溶液（２ｇ，０．０５２ｍｏｌ）を加え、６時間かけて８５℃に加熱した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣を氷冷水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（５０ｍＬ）で洗った。水性層をｐＨ約２まで２ＮのＨＣｌを用いて酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物４（３．３ｇ，７８％）をオフホワイトの固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.71 (br s, 1H), 7.40-7.30 (m, 5H), 7.15-7.11 (m, 1H), 7.07-7.00 (m, 1H), 6.97-6.85 (m, 2H), 5.27-5.20 (m, 1H), 5.05-5.00 (m, 1H), 3.65 (d, 1H), 3.35-3.20 (m, 1H), 3.00-2.85 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.00-1.97 (m, 2H), 1.65-1.61 (m, 1H), 0.85-0.77 (m, 1H)。
HPLC(純度):99.78%。
【０２３６】
ベンジル２−（（（２Ｒ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（３０）中化合物４（３．３ｇ，９．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ．ＨＣｌ（２．２ｇ，１１．４ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（１．８２ｇ，１３．５ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（６．１ｍＬ，２７．０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。１０分撹拌した後、Ｌ−スレオニンメチルエステルの塩酸塩（１．９５ｇ，１１．２ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、室温でさらに１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、水（２×３０ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し化合物５（３．１５ｇ，７３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.64 (br s, 1H), 7.44-7.31 (m, 5H), 7.12-7.00 (m, 2H), 6.95-6.85 (m, 2H), 5.32-5.25 (m, 1H), 5.05-4.94 (m, 2H), 4.25-4.20 (m, 1H), 4.15-4.08 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 2H), 3.45-3.41 (m, 2H), 3.14-3.09 (m, 1H), 2.89-2.84 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.05-2.02 (m, 2H), 1.55-1.51 (m, 1H), 1.09-0.98 (m, 4H)。
LCMS (ESI): 469 [M++1]。
【０２３７】
ベンジル２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（６）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中化合物５（３．１ｇ，６．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（１．４ｍＬ，５．６ｍｍｏｌ）、次いでＡｃ２Ｏ（０．８ｍＬ，８．４ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１時間撹拌した。これにＤＭＡＰ（０．１ｇ）を加え、室温で６時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた未精製材料をカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物６（３．１５ｇ，９２．５％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.25 (br s, 1H), 7.42-7.30 (m, 5H), 7.12-7.00 (m, 2H), 6.98-6.89 (m, 2H), 5.25-5.21 (m, 2H), 5.11-5.09 (m, 1H), 4.67-4.62 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 2H), 3.55-3.46 (m, 3H), 3.15-3.10 (m, 1H), 2.92-2.85 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.05-1.95 (m, 5H), 1.56-1.46 (m, 1H), 1.15-1.11 (m, 4H)。
LCMS (ESI): 511 [M++1]。
HPLC(純度):98%。
【０２３８】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（７）の合成：
メタノール（３０ｍＬ）中化合物６（３．１５ｇ，５．９７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に湿潤の１０％Ｐｄ／Ｃ（１．０ｇ）をＮ２雰囲気下で加えた。反応混合物をＨ２雰囲気（バルーン圧）下で４時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をセライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物７（２．３５ｇ，９９．５％）をシロップとして得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.22 (br s, 1H), 7.19-7.16 (m, 1H), 7.00-6.95 (m, 3H), 5.23-5.19 (m, 1H), 4.50-4.42 (m, 1H), 3.60 (d, 3H), 3.20 (m, 1H), 3.00-2.97 (m, 1H), 2.75-2.68 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.05-2.02 (m, 1H), 1.90 (d, 3H), 1.65-1.51 (m, 3H), 1.10 (dd, 3H)。
LCMS m/z: 377 [M++1]。
HPLC(純度):98.5%。
【０２３９】
（２Ｓ）−ベンジル２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（８）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）と水（４０ｍＬ）中化合物７（２．３５ｇ，６．３０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａ２ＣＯ３（２．０ｇ，１８．８ｍｍｏｌ）を加え、０℃で５分撹拌した。（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（２．１２ｇ，７．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。分離した有機層を真空濃縮し、得られた未精製材料をカラムクロマトグラフィーで３％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物８（２．５ｇ，６３％）を得た。（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートを以下のように合成した。ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（２０．６ｇ，８２．８ｍｍｏｌ）の溶液にＳＯＣｌ２（２０．５ｇ，１７２．６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して加え、２時間還流した。揮発成分を減圧下で除去して（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.50 (br s, 1H), 7.36-7.23 (m, 5H), 7.15-6.85 (m, 5H), 5.21-5.05 (m, 2H), 5.04-4.92 (m, 1H), 4.65-4.50 (m, 1H), 4.53-4.45 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.54-3.46 (m, 4H), 3.21-3.13 (m, 2H), 2.25-2.16 (m, 4H), 2.05-2.00 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 4H), 1.56-1.51 (m, 2H), 1.15 (dd, 3H).
LCMS m/z: 608 [M++1]。
HPLC (純度): 91.3%。
【０２４０】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−（３−メチルベンジル）−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（９）の合成：
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中化合物８（２．５ｇ，４．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に湿潤の１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ）を不活性雰囲気下で加え、４時間Ｈ２雰囲気（バルーン圧）下で撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮して化合物９（１．５６ｇ，７９．５％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.23 (dd, 1H), 7.20-6.85 (m, 5H), 5.20-5.13 (m, 1H), 4.63-4.59 (m, 1H), 3.85-3.81 (m, 1H), 3.65-3.61 (m, 5H), 3.32-3.25 (m, 2H), 3.12-3.05 (m, 3H), 2.75-2.71 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.15-2.13 (m, 2H), 2.00 (d, 3H), 1.77 (m, 3H), 1.27 (dd, 4H)。
LCMS m/z: 474 [M++1]。
HPLC (純度): 87.3%。
【０２４１】
ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート（Ａ）の合成：
ＤＭＦ（５００ｍＬ）中２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（Ｂｏｃ−Ｔｈｒ）（５０ｇ，２２８．３ｍｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（６３ｇ，４５６．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。これに臭化ベンジル（４６．８３ｇ，２７３．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。反応混合物を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で希釈した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエートＡ（５２ｇ，７３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.37-7.30 (m, 5H), 6.60 (d, 1H), 5.18-5.08 (m, 2H), 4.76 (d, 1H), 4.08-4.00 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.09 (d, 3H)。
質量m/z: 310.0 [M++1], 210 [M+-De Boc]。
【０２４２】
ベンジル３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート（Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中化合物Ａ（５２ｇ，１６８．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＡｃ２Ｏ（２０．５ｇ，２０１．９ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２５．４ｇ，２５２．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３．５ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）で希釈し、冷たい０．５ＮのＨＣｌ溶液（２×２００ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエートＢ（５２ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.35-7.34 (m, 5H), 7.27-7.25 (d, 1H), 5.18-5.06 (m, 3H), 4.34-4.32 (m, 1H), 1.90 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.16 (d, 3H)。
質量m/z: 252 [M++1-De Boc]。
【０２４３】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸（Ｃ）の合成：
ＭｅＯＨ（１Ｌ）中化合物Ｂ（５２ｇ，１４８．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／ＣをＮ２雰囲気下で加え、反応混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、得られたろ液を真空蒸発させ、未精製残渣をヘキサンとともに研和して（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸Ｃ（３５ｇ，９０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.78 (br s, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.16-5.14 (m, 1H), 4.17-4.15 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.10 (d, 3H)。
質量m/z: 260.0 [M-1]。
【０２４４】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（１０）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中化合物Ｃ（１０ｇ，０．０２ｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ（５ｇ，０．０２ｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（５ｇ，０．０４ｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（１０．６ｍＬ，０．０６ｍｏｌ）を０℃で加え、１０分撹拌した。これに化合物９（７ｇ，０．０２５ｍｏｌ）を加えて１５時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×７５ｍｌ）で抽出し、分離した有機層を水（２００ｍＬ）、次いでブライン（２００ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮した。未精製材料をカラムクロマトグラフィーで４％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物１０（１０ｇ，６７％）をシロップとして得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.24-6.91 (m, 5H), 5.42-5.01 (m, 2H), 4.73-4.68 (m, 1H), 4.54-4.41 (m, 1H), 3.90-3.85 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.65-3.60 (m, 2H), 3.59-3.55 (m, 1H), 3.59-3.55 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.12-3.05 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.00-1.96 (m, 4H), 1.94-1.85 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.25 (d, 3H), 1.15 (d, 3H)。
LCMS (ESI): m/z 675 [M++1]。
HPLC: 71%。
【０２４５】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（２Ｓ）−２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１１）の合成：
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中化合物１０（１０ｇ，０．０１４ｍｏｌ）の撹拌溶液にメタノール性ＮＨ３（１００ｍＬ）を加え、封管に入れた。反応混合物を室温で２０時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで４％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物１１（８．０ｇ，９９％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.32 (br s, 2H), 7.15-7.10 (m, 4H), 7.05-6.91 (m, 4H), 6.65 (br s, 2H), 4.75-4.59 (m, 2H), 4.24-3.45 (m, 8H), 3.35 (s, 1H), 3.05-3.00 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.26-1.85 (m, 6H), 1.75 (s, 6H), 1.60-1.55 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.15 (d, 3H), 1.05 (d, 3H)。
LCMS (ESI): m/z 618 [M++1]。
異性体のキラル分取ＨＰＬＣ：
化合物１１（８．０ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）の異性体をキラル分取ＨＰＬＣで分離して化合物１１−Ｆ１（０．４ｇ）と化合物１１−Ｆ２（０．２５ｇ）を得た。
化合物１１−Ｆ１の分析データ：
HPLC: 91.1%.
LCMS (ESI): m/z 618 [M++1].
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝９．２０分（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ、２５０×４．６ｍｍ、５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
化合物１１−Ｆ２の分析データ：
HPLC: 84%。
LCMS (ESI): m/z 618 [M++1]。
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１３．３９分（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ、２５０×４．６ｍｍ、５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
【０２４６】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−８Ａ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中化合物１２−Ｆ１（０．４ｇ，０．６０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１，４ジオキサン（２ｍＬ）中２Ｎ−ＨＣｌを０℃で加え、室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた材料をＥｔＯＡｃとともに研和し、真空乾燥してＣＭ−８Ａ（０．２２ｇ，６６％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.35 (t, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.15 (d, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 3.94-3.89 (m, 1H), 3.87-3.78 (m, 2H), 3.63 (d, 1H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.25 (d, 1H), 2.56-2.34 (m, 5H), 2.28-2.20 (m, 4H), 1.75-1.71 (m, 1H), 1.56 (d, 3H), 1.32 (d, 3H), 1.15-1.11 (m, 1H).
LCMS (ESI) m/z: 518 [M++1]。
ＨＰＬＣ純度: 97%。
旋光度[α25D]: +18.8 (水中Ｃ＝１％)。
【０２４７】
（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メチルベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−８Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中化合物１２−Ｆ２（０．２５ｇ，０．４０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１，４ジオキサン（２ｍＬ）中２Ｎ−ＨＣｌを０℃で加え、室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた材料をＥｔＯＡｃとともに研和し、真空乾燥してＣＭ−８Ｂ（１３０ｍｇ，６２％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.35-7.23 (m, 2H), 7.12-7.00 (m, 2H), 4.45-4.40 (m, 1H), 4.32-4.10 (m, 3H), 3.94-3.75 (m, 3H), 3.60 (d, 1H), 3.25 (d, 1H), 3.14-3.11 (m, 1H), 2.56-2.05 (m, 10H), 1.85-1.79 (m, 2H), 1.45 (d, 3H), 1.25 (d, 3H).
LCMS (ESI) m/z: 518 [M++1]。
ＨＰＬＣ純度: 92%。
旋光度[α25D]: -104.9 (水中Ｃ＝１％)。
【０２４８】
実施例８  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−９Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−９Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＩ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−９Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−９Ｂ）を合成した：
【０２４９】
スキームＩ  ＣＭ−９ＡとＣＭ−９Ｂの合成：
【０２５０】
【化２６】
2015505296.tif 000075
【０２５１】
（Ｓ）−エチルピロリジン−２−カルボキシレートヒドロクロリド（１）の合成：
エタノール中Ｌ−プロリン（ＳＭ）（１１０ｇ，９５６．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に塩化チオニル（１４１ｍｌ，１９１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間還流した。反応混合物を室温化し、真空濃縮して化合物１を塩酸塩（１７０ｇ，９９％）として得た。
【０２５２】
（Ｓ）−１−ベンジル２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２中化合物１（１７０ｇ，９４７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（３９８ｍｌ，２．８３ｍｏｌ）を加えた。３０分撹拌した後、Ｃｂｚ−Ｃｌ（１．１３６ｍｏｌ）を反応混合物に加えてさらに１２時間室温で撹拌を続けた。反応混合物を水で洗い、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２（２３０ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 7.42-7.31(m, 5H), 5.09 (m, 2H), 4.32-4.23(m, 1H), 4.08-3.98(m, 2H), 3.50-3.38 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.90-1.81(m, 3H), 1.10-1.04 (t, 3H)。
質量m/z: 278 [M++1]。
【０２５３】
１−ベンジル２−エチル２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中化合物２（１０ｇ，０．０１８ｍｏｌ）の撹拌溶液に不活性雰囲気下−７８℃でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（７６ｍＬ，０．０７６ｍｏｌ）を加え１時間撹拌した。これに３−フルオロベンジルブロミド（５．６ｍＬ，０．０４５ｍｏｌ）を−３０℃で滴下して加え、３時間撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで１２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（１１ｇ，７８％）を液体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.64-7.58 (m, 2H), 7.44-7.25 (m, 7H), 5.22-5.12 (m, 2H), 4.16-4.12 (m, 1H), 4.05-3.89 (m, 1H), 3.62 (d, 1H), 3.48-3.39 (m, 1H), 3.16-3.10 (m, 1H), 2.99-2.89 (m, 1H), 2.19-1.99 (m, 2H), 1.63-1.58 (m, 1H), 1.19 (t, 2H), 1.05 (t, 1H), 0.92-0.89 (m, 1H)。
LCMS (ESI): 372 [M++1]。
【０２５４】
１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボン酸（４）の合成：
メタノール（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）中化合物３（１１ｇ，０．０２９ｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＮａＯＨ水溶液（３．５ｇ，０．０８９ｍｏｌ）を加え、３時間かけて６０℃に加熱した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣を氷冷水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（５０ｍＬ）で洗った。水性層をｐＨ約２まで２ＮのＨＣｌを用いて酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物４（９．５ｇ，９０％）を液体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.59-7.22 (m, 10H), 5.24-5.19 (m, 1H), 5.05-5.00 (m, 1H), 3.65 (d, 1H), 3.35-3.20 (m, 1H), 3.19 (t, 1H), 3.01-2.89 (m, 1H), 2.00-1.97 (m, 2H), 1.65-1.61 (m, 1H), 0.85-0.77 (m, 1H)。
LCMS (ESI): 358 [M++1]。
【０２５５】
ベンジル２−（３−フルオロベンジル）−２−（（（２Ｒ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中化合物４（９．５ｇ，２６．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ．ＨＣｌ（６．１ｇ，３１．９ｍｍｏｌ）、次いでＨＯＢｔ（５．４ｇ，３９．９ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１４ｍＬ，７９．８ｍｍｏｌ）をゼロ℃で加えた。１０分撹拌した後、Ｌ−スレオニンメチルエステルの塩酸塩（４．９７ｇ，２９．２ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、室温でさらに１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）で希釈し、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮して化合物５（１３ｇ、未精製）を得た。
LCMS (ESI): 473.7 [M++1]。
【０２５６】
ベンジル２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（６）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中化合物５（１３ｇ，２７．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（５．８ｍＬ，４１．３ｍｍｏｌ）、次いでＡｃ２Ｏ（３．２３ｍＬ，３３．０ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１０分撹拌した。これにＤＭＡＰ（１．２ｇ）を加え室温で２時間撹拌した。反応混合物をクエン酸で洗い、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１５０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して未精製物を得、この未精製物をカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し化合物６（９．５ｇ，６７％）を淡黄色の液体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.39-7.23 (m, 6H), 7.05 (t, 1H), 6.95-6.78 (m, 2H), 5.27-5.21 (m, 2H), 5.11-5.09 (m, 1H), 4.67-4.62 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 4H), 3.55-3.46 (m, 2H), 2.92-2.85 (m, 2H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.56-1.46 (m, 1H), 1.15-1.11 (m, 4H)。
LCMS (ESI): 515 [M++1]。
【０２５７】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（７）の合成：
メタノール（１００ｍＬ）中化合物６（９．５ｇ，１８．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に湿潤の１０％Ｐｄ／Ｃ（１．２ｇ）をＮ２雰囲気下で加えた。反応混合物をＨ２雰囲気（バルーン圧）下で３時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をセライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物７（６．３ｇ，９０％）を液体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.22 (br s, 1H), 7.62-7.56 (m, 2H), 7.45-7.39 (m, 2H), 5.23-5.19 (m, 1H), 4.50-4.42 (m, 1H), 3.60 (d, 3H), 3.05-3.00 (m, 1H), 2.97-2.85 (m, 3H), 2.18-2.09 (m, 1H), 1.95 (d, 3H), 1.65-1.51 (m, 3H), 1.10 (d, 2H), 0.75 (d, 1H)。
LCMS m/z: 381 [M++1]。
【０２５８】
（２Ｓ）−ベンジル２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（８）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）中化合物７（６．２ｇ，１６．３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａ２ＣＯ３（４．３ｇ，４０．７ｍｍｏｌ）を加え、０℃で５分撹拌した。（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１７．９３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を水で洗い、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を真空濃縮し、得られた未精製材料をカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物８（７．３ｇ，７３％）を液体として得た。（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートを以下のように合成した。ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（４．８７ｇ，１９．５ｍｍｏｌ）の溶液にＳＯＣｌ２（３．０ｍＬ，４０．７ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して加え、２時間還流した。揮発成分を減圧下で除去して（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.50 (br s, 1H), 7.79-7.65 (m, 2H), 7.52-7.37 (m, 7H), 5.42-5.05 (m, 3H), 4.79-4.59 (m, 1H), 4.15 (q, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.69-3.50 (m, 2H), 3.21-3.13 (m, 1H), 2.45-2.16 (m, 2H), 2.10 (s, 6H), 2.05-2.00 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.44-1.19 (m, 6H)。
LCMS m/z: 612 [M++1], 613 [M++2]。
【０２５９】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−（３−フルオロベンジル）−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（９）の合成：
ＭｅＯＨ（８０ｍＬ）中化合物８（７．２ｇ，１１．７８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に湿潤の１０％Ｐｄ／Ｃ（１．２ｇ）を不活性雰囲気下で加え、１６時間Ｈ２雰囲気（バルーン圧）下で撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮して化合物９（５．２ｇ，９２％）を液体として得た。
【０２６０】
ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート（Ａ）の合成：
ＤＭＦ（５００ｍＬ）中２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（Ｂｏｃ−Ｔｈｒ）（５０ｇ，２２８．３ｍｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（６３ｇ，４５６．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。これに臭化ベンジル（４６．８３ｇ，２７３．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。反応混合物を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエートＡ（５２ｇ，７３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.37-7.30 (m, 5H), 6.60 (d, 1H), 5.18-5.08 (m, 2H), 4.76 (d, 1H), 4.08-4.00 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.09 (d, 3H)。
質量m/z: 310.0 [M++1], 210 [M+-De Boc]。
【０２６１】
ベンジル３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート（Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中化合物Ａ（５２ｇ，１６８．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＡｃ２Ｏ（２０．５ｇ，２０１．９ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２５．４ｇ，２５２．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３．５ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）で希釈し、冷たい０．５ＮのＨＣｌ溶液（２×２００ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエートＢ（５２ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.35-7.34 (m, 5H), 7.27-7.25 (d, 1H), 5.18-5.06 (m, 3H), 4.34-4.32 (m, 1H), 1.90 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.16 (d, 3H)。
質量m/z: 252 [M++1-De Boc]。
【０２６２】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸（Ｃ）の合成：
ＭｅＯＨ（１Ｌ）中化合物Ｂ（５２ｇ，１４８．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／ＣをＮ２雰囲気下で加え、反応混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、得られたろ液を真空蒸発させ、未精製残渣をヘキサンとともに研和して（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸Ｃ（３５ｇ，９０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.78 (br s, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.16-5.14 (m, 1H), 4.17-4.15 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.10 (d, 3H)。
質量m/z: 260.0 [M-1]。
【０２６３】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（１０）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中化合物Ｃ（３．４１ｇ，１３．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ（３．１２ｇ，１６．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．２ｇ，１６．３ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（５．７ｍＬ，３２．７ｍｍｏｌ）を０℃で加え、１０分撹拌した。これに化合物９（５．２ｇ，１０．９ｍｍｏｌ）を加え、１６時間撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×７５ｍｌ）で抽出し、分離した有機層をＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）、クエン酸水溶液（１００ｍＬ）、次いでブライン（１００ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をカラムクロマトグラフィーで２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物１０（６．０ｇ，７７％）を液体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.71-7.55 (m, 3H), 7.34-7.05 (m, 2H), 5.35-5.20 (m, 1H), 5.09-5.01 (m, 1H), 4.78-4.35 (m, 3H), 3.90-3.85 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.39-3.25 (m, 1H), 3.25-3.05 (m, 1H), 2.21-1.96 (m, 12H), 1.39 (d, 9H), 1.35-1.25 (m, 8H), 0.85 (d, 1H)。
LCMS (ESI): m/z 478.4 [M++1], 479.4 [M++2]。
【０２６４】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（２Ｓ）−２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１１）の合成：
メタノール性ＮＨ３（５０ｍＬ）中化合物１０（３ｇ，４．１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で４８時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮して未精製物を得、この未精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで４％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物１１（１．７ｇ、未精製）を白色固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.59-7.51 (m, 4H), 7.24 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.79-6.60 (m, 2H), 5.09 (d, 1H), 4.77-4.74 (m, 1H), 4.64-4.61 (m, 1H), 4.21 (t, 2H), 3.98 (dd, 1H), 3.85-3.80 (m, 2H), 3.71-3.60 (m, 3H), 3.25-3.19 (m, 2H), 2.21-1.85 (m, 5H), 1.75-1.70 (m, 1H), 1.44 (s, 10H), 1.21 (d, 3H), 1.09 (d, 3H), 0.91-0.85 (m, 1H)。
LCMS (ESI): m/z 622 [M++1]。
異性体のキラル分取ＨＰＬＣ：
化合物１１（１．７ｇ）の異性体をキラル分取ＨＰＬＣで分離して化合物１１（０．４ｇ）と化合物１１−Ｆ２（０．３ｇ）を得た。
化合物１１の分析データ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.59-7.51 (m, 4H), 7.24 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.79-6.60 (m, 2H), 5.09 (d, 1H), 4.77-4.74 (m, 1H), 4.64-4.61 (m, 1H), 4.21 (t, 2H), 3.98 (dd, 1H), 3.85-3.80 (m, 2H), 3.71-3.60 (m, 3H), 3.25-3.19 (m, 2H), 2.21-1.85 (m, 5H), 1.75-1.70 (m, 1H), 1.44 (s, 10H), 1.21 (d, 3H), 1.09 (d, 3H), 0.91-0.85 (m, 1H)。
UPLC: 87%。
LCMS (ESI): m/z 622 [M++1]。
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１０．３２分（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ、２５０×４．６ｍｍ、５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
化合物１１−Ｆ２の分析データ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.59-7.51 (m, 4H), 7.24 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.79-6.60 (m, 2H), 5.09 (d, 1H), 4.77-4.74 (m, 1H), 4.64-4.61 (m, 1H), 4.21 (t, 2H), 3.98 (dd, 1H), 3.85-3.80 (m, 2H), 3.71-3.60 (m, 3H), 3.25-3.19 (m, 2H), 2.21-1.85 (m, 5H), 1.75-1.70 (m, 1H), 1.44 (s, 10H), 1.21 (d, 3H), 1.09 (d, 3H), 0.91-0.85 (m, 1H)。
UPLC: 91%。
LCMS (ESI): m/z 622 [M++1]。
キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１５．３７分（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ、２５０×４．６ｍｍ、５μ；移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン中０．１％ＴＦＡ（Ｂ）ＥｔＯＨ（４／１）：Ａ：Ｂ（８０：２０）；流量：１．００ｍＬ／分）。
【０２６５】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−９Ａ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中化合物１１−Ｆ１（０．４ｇ，０．６４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１，４ジオキサン（２ｍＬ）中４Ｎ−ＨＣｌを０℃で加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮した。得られた未精製材料をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）、次いでｎ−ペンタン（２０ｍＬ）で洗い、真空乾燥してＣＭ−９Ａ（０．２ｇ，５９％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.89 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 3.94-3.79 (m, 5H), 3.35 (q, 2H), 2.56-2.50 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 2H), 2.14-2.05 (m, 3H), 1.81-1.75 (m, 1H), 1.35 (d, 3H), 1.32 (d, 3H), 1.19-1.11 (m, 1H)。
LCMS (ESI) m/z: 522 [M++1], 523 [M++2]。
UPLC純度: 97%。
キラルＨＰＬＣ純度: 99%。
旋光度[α20D]: +15.6 (水中Ｃ＝１％)。
【０２６６】
（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−フルオロベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−９Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中化合物１１−Ｆ２（０．２ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１，４ジオキサン（２ｍＬ）中４Ｎ−ＨＣｌを０℃で加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮した。得られた未精製材料をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）、次いでｎ−ペンタン（２０ｍＬ）で洗い、真空乾燥してＣＭ−９Ｂ（０．１ｇ，５９％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.89 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 4H), 3.94-3.79 (m, 5H), 3.35 (q, 2H), 2.56-2.50 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 2H), 2.14-2.05 (m, 3H), 1.81-1.75 (m, 1H), 1.35 (d, 3H), 1.32 (d, 3H), 1.19-1.11 (m, 1H)。
LCMS (ESI) m/z: 522 [M++1], 523 [M++2]。
UPLC 純度: 98%。
キラルＨＰＬＣ純度: 98%。
旋光度[α20D]: -101.46 (水中Ｃ＝１％)。
【０２６７】
実施例１０  Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１０）の合成：
次の反応順序（スキームＪ）を用いてＮ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１０）を合成した：
スキームＪ  ＣＭ−１０の合成
【０２６８】
【化２７】
2015505296.tif 000076
【０２６９】
（Ｓ）−エチルピロリジン−２−カルボキシレートヒドロクロリド（１）の合成：
エタノール中Ｌ−プロリン（ＳＭ）（１１０ｇ，９５６．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に塩化チオニル（１４１ｍｌ，１９１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間還流した。反応混合物を室温化し、真空濃縮して化合物１を塩酸塩（１７０ｇ，９９％）として得た。
【０２７０】
（Ｓ）−１−ベンジル２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２中化合物１（１７０ｇ，９４７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＴＥＡ（３９８ｍｌ，２．８３ｍｏｌ）を加え、３０分後にＣｂｚ−Ｃｌ（１．１３６ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を水で洗い、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空濃縮した。得られた未精製材料をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２（２３０ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ7.42-7.31(m, 5H), 5.09 (m, 2H), 4.32-4.23(m, 1H), 4.08-3.98(m, 2H), 3.50-3.38 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.90-1.81(m, 3H), 1.10-1.04 (t, 3H)。
質量m/z: 278 [M++1]。
【０２７１】
１−ベンジル２−エチル２−ベンジルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
ＴＨＦ（８００ｍＬ）中（Ｓ）−１−ベンジル２−エチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート２（８７ｇ，３１４ｍｍｏｌ）の溶液に不活性雰囲気下−２５℃でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（３５１ｍＬ，３５１ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。反応混合物に臭化ベンジル（４５ｍＬ，３７６ｍｍｏｌ）を−２５℃で滴下して加えた。室温に温まるまで放置し、２時間撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（８０ｇ，６９％）を液体として得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 7.47-7.32 (m, 5H), 7.27-7.16 (m, 3H), 7.07-7.04 (m, 2H), 5.29-5.06 (m, 2H), 4.16-3.89 (m, 2H), 3.57-3.33 (m, 2H), 3.02-2.78 (m, 2H), 2.13-1.89 (m, 2H), 1.56-1.51 (m, 1H), 1.21-1.04 (m, 3H), 0.93-0.79 (m, 1H)。
質量m/z: 368.2 [M++1]。
【０２７２】
１−ベンジル２−エチル２−ベンジルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（４）の合成：
ＣＨ３ＯＨ（７００ｍＬ）中化合物３（１２５ｇ，３４０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＮａＯＨ水溶液（６８０ｍｍｏｌ）を加え、１６時間かけて１００℃まで加熱した。減圧下で揮発成分を蒸発させた。得られた残渣を氷冷水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（５０ｍＬ）で洗った。水性層をｐＨ約２まで２ＮのＨＣｌを用いて酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物４（９０ｇ，７８％）をオフホワイトの固体として得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 12.71 (br s, 1H), 7.40-7.30 (m, 5H), 7.25-7.19 (m, 3H), 7.07-7.00 (m, 2H), 5.27-5.02 (m, 2H), 3.59-3.32 (m, 2H), 3.02-2.83 (m, 2H), 2.13-1.91 (m, 2H), 1.58-1.49 (m, 1H), 0.90-0.77 (m, 1H)。
質量m/z: 340.1 [M++1]。
【０２７３】
ベンジル２−ベンジル−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＤＣＭ（５００ｍＬ）中化合物４（５０ｇ，１４７．９ｍｍｏｌ）、Ｌ−スレオニンメチルエステル（２５ｇ，１４７．９ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液にＨＡＴＵ（５６．２ｇ，１４７．９ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（６４ｍＬ，３６．９８ｍｍｏｌ）を５℃で加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、水（２×３０ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として精製して化合物５（４９．６ｇ，７４％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ 7.62-7.59 (m, 1H), 7.44-7.31 (m, 5H), 7.21-7.18 (m, 3H), 7.06-6.99 (m, 2H), 5.25-5.24 (m, 1H), 5.12-4.94 (m, 2H), 4.30 (s, 1H), 4.15-4.08 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 3H), 3.63-3.49 (m, 2H), 3.14 (s, 1H), 2.89 (s, 1H), 2.09-2.02 (m, 2H), 1.56-1.51 (m, 1H), 1.09-0.98 (m, 4H)。
質量m/z: 455.1 [M++1], 477.3 [M+Na]。
【０２７４】
ベンジル２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバモイル）−２−ベンジルピロリジン−１−カルボキシレート（６）の合成：
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中化合物５（４９ｇ，１０７．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（２２．７ｍＬ，１６１．８ｍｍｏｌ）とＡｃ２Ｏ（１３．２ｇ，１２９．５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、希ＨＣｌで洗った。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製残渣をカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として用いて精製し、化合物６（４２ｇ，８０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.15-7.71 (m, 1H), 7.42-7.04 (m, 10H), 5.30-5.19 (m, 2H), 5.11-5.09 (m, 1H), 4.99-4.93 (m, 1H), 4.67-4.62 (m, 1H), 3.66-3.64 (m, 3H), 3.55-3.46 (m, 2H), 3.38-3.35 (m, 1H), 2.88-2.69 (m, 1H), 2.17-2.00 (m, 2H), 1.98-1.92 (m, 3H), 1.56-1.46 (m, 1H), 1.23-1.17 (m, 3H), 1.02-0.86 (m, 1H)。
LCMS m/z: 497.4 [M++1]。
【０２７５】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−３−アセトキシ−２−（２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド）−ブタノエート（７）の合成：
メタノール（１．５Ｌ）中化合物６（５０ｇ，１００．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮ２雰囲気下で１０％Ｐｄ／Ｃを加えた。反応混合物をＨ２雰囲気（バルーン圧）下で４時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をセライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物７（２８ｇ，７７％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.22-8.17 (m, 1H), 7.24-7.16 (m, 5H), 5.17 (t, 1H), 4.48-4.42 (m, 1H), 3.60-3.54 (s, 3H), 3.20 (t, 1H), 3.06-2.97 (m, 1H), 2.82-2.68 (m, 3H), 2.08-2.02 (m, 1H), 1.89 (s, 3H), 1.72-1.51 (m, 3H), 1.10 (2d, 3H)。
LCMS m/z: 363 [M++1], 385 [M+Na]。
【０２７６】
（Ｓ）−ベンジル２−（２−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イルカルバモイル）−２−ベンジルピロリジン−１−カルボニル）−ピロリジン−１−カルボキシレート（８）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２：Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ，１：１）中化合物７（２５ｇ，６９．１ｍｍｏｌ）とＮａ２ＣＯ３（１８．３ｇ，１７２．６ｍｍｏｌ）の撹拌混合液にＣＨ２Ｃｌ２中（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートの溶液を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、濾過し、ろ液を真空濃縮した。未精製残渣をカラムクロマトグラフィーで６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として用いて精製し、化合物８（３０ｇ，７３％）を得た。（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートを以下のように合成した。ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（２０．６ｇ，８２．８ｍｍｏｌ）の溶液にＳＯＣｌ２（２０．５ｇ，１７２．６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して加え、２時間還流した。揮発成分を減圧下で除去して（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.36-7.23 (m, 8H), 7.15-7.12 (m, 3H), 5.21-5.15 (m, 2H), 5.04-4.92 (m, 1H), 4.57-4.50 (m, 2H), 3.88 (d, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.54-3.46 (m, 3H), 3.21-3.13 (m, 1H), 3.02-2.90 (m, 2H), 2.19-2.02 (m, 4H), 1.97 (s, 3H), 1.89 (s, 1H), 1.77-1.65 (m, 1H), 1.17 (s, 2H), 1.06 (s, 2H)。
質量m/z: 594.1 [M++1]。
【０２７７】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−ベンジル−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（９）の合成：
ＭｅＯＨ（３００ｍＬ）中化合物８（３０ｇ，５０．０５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／Ｃを不活性雰囲気下で加え、１２時間Ｈ２雰囲気（バルーン圧）下で撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し減圧下で濃縮した。得られた残渣をエーテル（１０ｍＬ）とともに研和して化合物９（２１ｇ，９０％）を固体として得た。
1H-NMR: (500 MHz, CDCl3) (回転異性体): δ 7.88-7.87 (m, 1H), 7.30-7.26 (m, 2H), 7.24-7.21 (m, 1H), 7.13-7.12 (d, 2H), 5.44-5.43 (m, 1H), 4.76-4.74 (m, 1H), 3.94-3.92 (m, 1H), 3.84-3.81 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.50 (m, 1H), 3.26-3.12 (m, 3H), 2.90-2.88 (m, 1H), 2.23-2.15 (m, 4H), 2.04 (s, 3H), 1.87-1.77 (m, 5H), 1.27-1.24 (m, 3H)。
質量m/z: 460(M+1)。
【０２７８】
２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸（Ｂ）の合成：
ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（１Ｌ，１：１）中２−アミノブタン酸Ａ（５０ｇ，０．４７ｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａＨＣＯ３（８０ｇ，０．９５ｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。これにＢｏｃ無水物（１２４ｇ，０．５７ｍｏｌ）を滴下して加え、室温で１６時間放置した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応をエーテルで洗い、水性層をＨＣｌ水溶液（ｐＨ約４〜５）で中和してＥｔＯＡｃ（２×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空濃縮して化合物Ｂ（４０ｇ，４１％）を無色の濃厚なシロップとして得た。
【０２７９】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−ベンジル−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシプロパノイル）ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（１０）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中化合物９（０．６ｇ，１．３０ｍｍｏｌ）と化合物Ｂ（２６７ｍｇ，１．３０ｍｍｏｌ）の撹拌混合液にＥＤＣＩ（２４８ｍｇ，１．３０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３５１ｍｇ，２．６０ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（１６７ｍｇ，１．３０ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で加えた。得られた反応混合物を３時間撹拌し、さらに室温で１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１５０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物１０（０．５ｇ，５９％）をオフホワイトの固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.30-7.24 (m, 6H), 7.12-7.10 (m, 1H), 5.29-5.20 (m, 1H), 4.79-4.60 (m, 2H), 4.55 (t, 1H), 4.38-4.30 (m, 2H), 3.79-3.60 (m, 11H), 2.21-1.87 (m, 11H), 1.36 (s, 9H), 1.25-1.15 (m, 4H)。
LCMS (ESI): 647(M+1)。
【０２８０】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−ベンジルピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート（１１）の合成：
メタノール性ＮＨ３（５ｍＬ）中化合物１０（０．５ｇ，０．７７ｍｍｏｌ）の溶液を封管に入れ、２４時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物を減圧下で濃縮して未精製物を得た。得られた材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して精製し、化合物１１（２７５ｍｇ，６０％）をオフホワイトの固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 7.35-7.20 (m, 6H), 7.15 (d, 1H), 7.01-6.97 (m, 2H), 6.77 (d, 1H), 5.09 (d, 1H), 4.75 (t, 2H), 4.39-4.35 (m, 1H), 4.24-4.20 (m, 1H), 3.92 (dd, 1H), 3.74-3.49 (m, 6H), 3.21-3.11 (m, 2H), 2.23-1.91 (m, 6H), 1.80-1.56 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.09 (d, 3H), 0.89-0.80 (m, 1H)。
LCMS (ESI): 590(M+1)。
質量(m/z): 590(M+1)。
【０２８１】
Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１０）の合成：
ジオキサン（３ｍＬ）中化合物１１（１７５ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１，４ジオキサン（２ｍＬ）中４Ｎ−ＨＣｌをＮ２雰囲気下で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ジエチルエーテルで希釈し、さらに１５分撹拌した。エーテル層をデカントし、真空乾燥してＣＭ−１０（１０８ｍｇ，７４％）をオフホワイトの固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6) (回転異性体): δ 8.29 (br s, 3H), 7.39-7.20 (m, 7H), 7.07-7.01 (m, 1H), 5.45-5.40 (m, 1H), 5.06 (d, 1H), 4.79-4.76 (m, 1H), 4.27-4.20 (m, 2H), 4.01 (d, 1H), 3.91-3.85 (m, 4H), 3.69-3.55 (m, 5H), 3.29-3.21 (m, 2H), 2.10-1.87 (m, 6H), 1.08 (s, 3H)。
LCMS (ESI): 490(M+2)。
【０２８２】
実施例１１  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１１Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１１Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＫ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１１Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１１Ｂ）を合成した：
スキームＫ  ＣＭ−１１ＡとＣＭ−１１Ｂの合成
【０２８３】
【化２８】
2015505296.tif 000077
【０２８４】
（Ｓ）−エチルピロリジン−２−カルボキシレートヒドロクロリド（１）の合成：
エタノール中Ｌ−プロリン（ＳＭ）（１１０ｇ，９５６．５ｍｍｏｌ）の溶液に塩化チオニル（１４１ｍｌ，１９１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間還流した。反応混合物を室温化し、減圧下で濃縮して化合物１を塩酸塩（１７０ｇ，９９％）として得た。この材料をさらなる精製なしに次ステップに直接使用した。
【０２８５】
（Ｓ）−１−ベンジル２−エチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＤＣＭ中１（１７０ｇ，９４７ｍｍｏｌ）の溶液にＴＥＡ（３９８ｍｌ，２．８３ｍｏｌ）を加え、３０分後Ｃｂｚ−Ｃｌ（１．１３６ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を水で洗い、ＤＣＭで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２（２３０ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ7.42-7.31(m, 5H), 5.09 (m, 2H), 4.32-4.23(m, 1H), 4.08-3.98(m, 2H), 3.50-3.38 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.90-1.81(m, 3H), 1.10-1.04 (t, 3H)。
質量m/z: 278 [M++1]。
【０２８６】
１−ベンジル２−エチル２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中化合物２（１０ｇ，０．０３８ｍｏｌ）の溶液に不活性雰囲気下−２５℃でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（７６ｍＬ，０．０７６ｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。４−メトキシベンジルブロミド（１１．５ｇ，０．０５７ｍｏｌ）を−２５℃で滴下して加え、室温に温まるまで放置して２時間撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（１１ｇ，７５％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 7.44-7.29 (m, 6H), 7.01 (t, 2H), 6.81-6.79 (m, 2H), 5.32 (t, 1H), 5.15 (d, 1H), 3.82 (d, 5H), 3.55 (d, 1H), 3.50 (s, 2H), 3.02 (d, 2H), 2.14-1.99 (m, 2H), 1.65-1.62 (m, 1H), 1.09-0.95 (m, 1H)。
LCMS (m/z):384.3 [M++1]。
【０２８７】
１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボン酸（４）の合成：
ＣＨ３ＯＨ（５０ｍＬ）中化合物３（１ｇ，０．０２６ｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＮａＯＨ水溶液（２５ｍＬ）を加え、１６時間かけて１００℃まで加熱した。減圧下で揮発成分を蒸発させた。得られた残渣を氷冷水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（５０ｍＬ）で洗った。水性層をｐＨ約２まで２ＮのＨＣｌを用いて酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物４（１０ｇ，９４％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.55 (br s, 1H), 7.49-7.65 (m, 5H), 6.99 (t, 2H), 6.78-6.75 (m, 2H), 5.25 (d, 1H), 5.11 (t, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.51-3.42 (m, 3H), 2.99-2.95 (m, 2H), 2.15-2.09 (m, 2H), 1.62-1.57 (m, 1H), 0.98-0.94 (m, 1H)。
LCMS (m/z):368.3 [M+-1]
HPLC (純度): 95%。
【０２８８】
ベンジル２−（（（２Ｒ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中化合物４（１０ｇ，０．０２７ｍｏｌ）、Ｌ−スレオニンメチルエステル（４．５ｇ，０．０２７ｍｏｌ）の懸濁液にＨＡＴＵ（１０．２ｇ，０．０２７ｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１１．８ｍＬ，０．０６７ｍｏｌ）を５℃で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、水（２×３０ｍＬ）、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として用いて精製し、化合物５（７．８ｇ，５９％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.47-7.42 (m, 6H), 6.99-6.95 (m, 2H), 6.84-6.77 (m, 2H), 5.35-5.24 (m, 1H), 5.12-4.95 (m, 2H), 4.35-4.32 (m, 1H), 4.19-4.15 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.65 (d, 2H), 3.59-3.50 (m, 2H), 3.14-3.05 (m, 1H), 3.92-3.85 (m, 1H), 2.71 (s, 5H), 2.19-2.05 (m, 2H), 1.68-1.60 (m, 1H), 1.14-1.05 (m, 3H)。
LCMS (m/z):4858.3 [M++1]。
【０２８９】
ベンジル２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）−カルバモイル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−１−カルボキシレート（６）の合成：
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中化合物５（７．８ｇ，０．０１６ｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（３．３６ｍＬ，０．０２４ｍｏｌ）とＡｃ２Ｏ（１．９ｇ，０．０１９ｍｏｌ）を室温で加え、２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、希ＨＣｌで洗った。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製残渣をカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として用いて精製し、化合物６（７．６ｇ，９０％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.45-7.40 (m, 5H), 6.99-6.95 (m, 2H), 6.82-6.75 (m, 2H), 5.31-5.25 (m, 2H), 4.62-4.55 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.65 (t, 2H), 3.09-3.01 (m, 2H), 3.19-3.10 (m, 1H), 2.92-2.87 (m, 1H), 2.21-1.99 (m, 6H), 1.59-1.45 (m, 1H), 1.25-1.15 (m, 4H)。
LCMS (m/z):527.4 [M++1]。
【０２９０】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−ベンジルピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（７）の合成：
メタノール（１００ｍＬ）中化合物６（７．６ｇ，０．０１４ｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（１．５ｇ）を加え、反応混合物をＨ２雰囲気（バルーン圧）下で１２時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物７（４．５ｇ，８０％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.25 (br s, 1H), 6.81 (t, 2H), 5.2-5.17 (m, 1H), 4.52 (dd, 1H), 3.73 (d, 3H), 3.64 (d, 3H), 3.05 (br s, 1H), 2.86-2.80 (m, 2H), 2.12 (br s, 1H), 1.95 (d, 3H), 1.71-1.62 (br m, 3H), 1.12 (d, 1H), 0.82 (d, 1H)。
LCMS (m/z):393.3 [M++1]。
【０２９１】
（２Ｓ）−ベンジル２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−１−メトキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（８）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５４ｍＬ）とＨ２Ｏ（３６ｍＬ）中化合物７（４．５ｇ，１１．４ｍｍｏｌ）とＮａ２ＣＯ３（３．０ｇ，２８．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＣＨ２Ｃｌ２中酸塩化物（３．４ｇ，１３．０ｍｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、濾過し、ろ液を減圧下で濃縮した。未精製残渣をカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として用いて精製し、化合物８（７．０ｇ，９６％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.45-7.36 (m, 4H), 7.22-6.69 (m, 3H), 5.27-5.05 (m, 2H), 4.69-4.55 (m, 1H), 3.75-3.62 (m, 4H), 3.55-3.47 (m, 3H), 3.25-3.01 (m, 1H), 2.31-1.85 (m, 6H), 1.75-1.45 (m, 1H), 1.22-1.09 (m, 3H)。
【０２９２】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（２−（４−メトキシベンジル）−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（９）の合成：
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中化合物８（７．０ｇ，１１．２ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（２．０ｇ）を加え、Ｈ２雰囲気（バルーン圧）下で１２時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過した減圧下で濃縮して化合物９（５．４ｇ，９９％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.25 (br m, 1H), 8.01-7.85 (m, 1H), 7.11-6.99 (m, 2H), 6.85 (d, 2H), 5.29-5.22 (m, 1H), 4.65-4.60 (m, 1H), 4.44-4.22 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 3.49 (d, 3H), 3.39-3.30 (m, 5H), 3.15-3.09 (m, 3H), 2.25-2.20 (m, 1H), 2.02 (s, 9H), 1.65-1.60 (m, 2H), 1.21 (t, 3H)。
LCMS (m/z):490.4 [M++1]。
【０２９３】
(２Ｓ，３Ｒ）−メチル３−アセトキシ−２−（１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド）ブタノエート（１０）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中化合物９（５．４ｇ，８１．１ｍｍｏｌ）の溶液に不活性雰囲気下でＥＤＣＩ．ＨＣｌ（３．１ｇ，１６．０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．２ｇ，１６．０ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（４．２ｇ，３３．０ｍｍｏｌ）と化合物Ｃ（３．４ｇ，１３．０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温に１２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×７５ｍｌ）で抽出し、分離した有機層を水（２００ｍＬ）、次いでブライン（２００ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮した。未精製材料をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物１０（５．８ｇ，７２％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.22-7.01 (m, 2H), 6.85-6.82 (m, 1H), 5.25-5.05 (m, 1H), 4.65-4.20 (m, 2H), 3.85-3.42 (m, 7H), 3.22-3.12 (m, 1H), 2.22-1.85 (m, 8H), 1.52 (d, 6H), 1.29-1.10 (m, 5H)。
【０２９４】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（２Ｓ）−２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（４−メトキシベンジル）−ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１１）の合成：
メタノール性ＮＨ３（４０ｍＬ）中化合物１０（４ｇ，５．４５ｍｍｏｌ）の溶液を室温で３６時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーと、次いで分取精製により精製して化合物１１−Ｆｒ−１（２００ｍｇ）と化合物−１１−Ｆｒ−２（１５０ｍｇ）を得た。
【０２９５】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１１Ａ）の合成：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中化合物１１−Ｆｒ−１（０．２ｇ，０．３ｍｍｏｌ）の溶液に１，４ジオキサン（２ｍＬ）中４Ｎ−ＨＣｌを加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＣＭ−１１Ａ（０．１２ｇ，６６％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.32 (d, 2H), 7.05 (d, 2H), 4.99-4.95 (m, 2H), 4.42 (d, 1H), 4.37 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.74 (d, 1H), 3.72-3.65 (m, 1H), 3.62 (d, 1H), 3.35-3.30 (m, 1H), 3.29-3.25 (m, 1H), 3.22 (d, 1H), 2.51-2.50 (m, 1H), 2.35-2.30 (m, 1H), 2.19-2.05 (m, 4H), 1.75-1.72 (m, 1H), 1.55 (d, 3H), 1.25 (d, 3H), 1.21-1.15 (m, 1H)。
LCMS (m/z):534.5 [M++1]。
ＨＰＬＣ純度: 97%.
旋光度[α20D]: 34.33 (水中Ｃ＝１％)。
【０２９６】
（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（４−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１１Ｂ）の合成：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中化合物１１−Ｆｒ−２（０．１５ｇ，０．２ｍｍｏｌ）の溶液に１，４ジオキサン（２ｍＬ）中４Ｎ−ＨＣｌを加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＣＭ−１１Ｂ（９０ｍｇ，６６％）を塩酸塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.32 (d, 2H), 7.05 (d, 2H), 4.99-4.95 (m, 2H), 4.42 (d, 1H), 4.37 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.74 (d, 1H), 3.72-3.65 (m, 1H), 3.62 (d, 1H), 3.35-3.30 (m, 1H), 3.29-3.25 (m, 1H), 3.22 (d, 1H), 2.51-2.50 (m, 1H), 2.35-2.30 (m, 1H), 2.19-2.05 (m, 4H), 1.75-1.72 (m, 1H), 1.55 (d, 3H), 1.25 (d, 3H), 1.21-1.15 (m, 1H)。
LCMS (m/z):534.5 [M++1]。
ＨＰＬＣ純度: 92%。
旋光度[α20D]: -108.63 (水中Ｃ＝１％)。
【０２９７】
ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート（Ａ）の合成：
ＤＭＦ（５００ｍＬ）中２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（Ｂｏｃ−Ｔｈｒ）（５０ｇ，２２８．３ｍｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（６３ｇ，４５６．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。臭化ベンジル（４６．８３ｇ，２７３．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。反応混合物を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料を２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離液として用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエートＡ（５２ｇ，７３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.37-7.30 (m, 5H), 6.60 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.18-5.08 (m, 2H), 4.76 (d, J = 7 Hz, 1H), 4.08-4.00 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.09 (d, J = 6.0 Hz, 3H)。
質量m/z: 310.0 [M++1], 210 [M+-De Boc]。
【０２９８】
ベンジル３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート（Ｂ）の合成：
ＤＣＭ（５００ｍＬ）中ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエートＡ（５２ｇ，１６８．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＡｃ２Ｏ（２０．５ｇ，２０１．９ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２５．４ｇ，２５２．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３．５ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）で希釈し、冷たい０．５ＮのＨＣｌ溶液（２×２００ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエートＢ（５２ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.35-7.34 (m, 5H), 7.27-7.25 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.18-5.06 (m, 3H), 4.34-4.32 (m, 1H), 1.90 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.16 (d, J = 3 Hz, 3H)。
質量m/z: 252 [M++1-De Boc]。
【０２９９】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸（Ｃ）の合成：
ベンジル−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエートＢ（５２ｇ，１４８．１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１Ｌ）に溶解させ、１０％Ｐｄ／Ｃを加えて反応混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させて未精製残渣をヘキサンとともに研和し、（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸Ｃ（３５ｇ，９０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.78 (br s, 1H), 6.94 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.16-5.14 (m, 1H), 4.17-4.15 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.10 (d, J = 6.0 Hz, 3H)。
質量m/z: 260.0 [M-1]。
【０３００】
実施例１２  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１２Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１２Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＬ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１２Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１２Ｂ）を合成した：
スキームＬ  ＣＭ−１２ＡとＣＭ−１２Ｂの合成：
【０３０１】
【化２９】
2015505296.tif 000078
【０３０２】
（Ｓ）−エチルピロリジン−２−カルボキシレート（１）の合成：
メタノール（８００ｍＬ）中ピロリジン−２−カルボン酸（ＳＭ）（１００ｇ，０．８７ｍｏｌ）の撹拌溶液に０℃で静かに塩化チオニル（７６．９ｍＬ，１．０４ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を加熱して１２時間還流した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を減圧下で濃縮し、化合物１（１４３．９ｇ，ＨＣｌ塩）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, CDCl3) (回転異性体): δ 3.89 (s, 3H), 3.68-3.62 (m, 2H), 3.59-3.47 (m, 2H), 2.49-2.37 (m, 1H), 2.27-2.05 (m, 3H)。
LCMS (m/z): 166 [M++1]。
【０３０３】
１−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１７５ｍＬ）中化合物１（３５ｇ，０．２２ｍｏｌ）の撹拌溶液にＥｔ３Ｎ（９０ｍＬ，０．６５ｍｏｌ）、次いでＢｏｃ無水物（５６．９ｍＬ，０．２６ｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を水、ブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。得られた未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで３０％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンで溶出して精製し、化合物２（４１ｇ，９５％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, CDCl3) (回転異性体): δ 4.25-4.21 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.57-3.26 (m, 2H), 2.29-2.10 (m, 1H), 1.99-1.75 (m, 3H), 1.45 (s, 9H)。
LCMS (m/z): 130 [(M++1)-Boc]。
【０３０４】
１−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中化合物２（１０ｇ，０．０４３ｍｏｌ）の撹拌溶液にＬｉＨＭＤＳ（６５．５ｍＬ，０．０６５ｍｏｌ）を−２５℃で加え、２時間撹拌した。これに３，５−ジブロモベンジルブロミド（１７．１ｇ，０．０５２ｍｏｌ）を−２５℃で滴下して加え、室温で２時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を０℃でＮＨ４Ｃｌでクエンチした。分離した有機層を水で洗い、ＥｔＯＡｃで抽出した。分離した有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し減圧下で濃縮して未精製生成物を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して化合物３（１０ｇ，５０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.72 (s, 1H), 7.41 (d, 2H), 3.69 (d, 3H), 3.37-3.35 (m, 2H), 3.07-3.01 (m, 1H), 2.89-2.81 (m, 1H), 2.08-2.01 (m, 2H), 1.68-1.62 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.19-1.12 (m, 1H)。
LCMS (m/z): 419.1 [(M++1)-Boc]。
【０３０５】
メチル２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−２−カルボキシレート（４）の合成：
メタノール（２０ｍＬ）中化合物３（１０ｇ，０．０１６ｍｏｌ）の撹拌溶液にＭｅＯＨ．ＨＣｌ（８０ｍＬ）をＮ２雰囲気下で加え、室温で８時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させて化合物４（８ｇ，９３％）を白色固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.95 (br s, 1H), 9.45 (br s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.65 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.55 (d, 1H), 3.39 (d, 1H), 3.22 (br s, 1H), 2.43 (t, 1H), 2.15-2.10 (m, 2H), 1.85-1.81 (m, 1H)。
LCMS (m/z): 378 [(M+-HCl]。
【０３０６】
（Ｓ）−１−（（アリルオキシ）カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（Ａ）の合成：
１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）と水（１００ｍＬ）中（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボン酸（ＳＭ）（５ｇ，０．０４３ｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａ２ＣＯ３（１１．５ｇ，０．１１ｍｏｌ）、次いでアリルクロロホルマート（６．２ｇ，０．０５２ｍｏｌ）を０℃で加え、１２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２ｘ７５ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して未精製物を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して化合物Ａ（３．２８ｇ，３７％）を得た。
【０３０７】
（Ｓ）−アリル２−（（Ｒ）−２−（３，５−ジブロモベンジル）−２−（メトキシカルボニル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＤＣＭ：Ｈ２Ｏ（１５０ｍＬ，３：２）中化合物４（８ｇ，０．０１９ｍｏｌ）とＮａ２ＣＯ３（５．１ｇ，０．０４８ｍｏｌ）の撹拌溶液に酸塩化物Ｂの溶液を加え、室温で２時間撹拌した。水性層をＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を水（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物５（８ｇ，７４％）を得た。酸塩化物Ｂを次のように調製した。ＤＣＭ中化合物Ａ（４．６ｇ，０．０２３ｍｏｌ）の溶液にＳＯＣｌ２（５．７ｇ，０．０４８ｍｏｌ）を０℃で滴下して加え、得られた溶液を２時間還流し、反応から溶媒を減圧下で除去した。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.75-7.42 (m, 2H), 7.37 (s, 1H), 5.95 (br s, 1H), 9.45 (br s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.65 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.55 (d, 1H), 3.39 (d, 1H), 3.22 (br s, 1H), 2.43 (t, 1H), 2.15-2.10 (m, 2H), 1.85-1.81 (m, 1H)。
LCMS (m/z): 559.3 [(M++1]。
【０３０８】
（Ｒ）−１−（（Ｓ）−１−（（アリルオキシ）カルボニル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−２−カルボン酸（６）の合成：
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中化合物５（８ｇ，０．０１４ｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＮａＯＨ溶液（１０ｍＬ）を加え、加熱して５時間還流した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣を水で希釈し、エーテルで洗った。水性層をｐＨ約２まで２ＮのＨＣｌ溶液を用いて酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して化合物６（７ｇ，９０％）を得た。この材料をさらなる精製なしに次ステップに直接使用した。
LCMS (m/z):543.3 [(M+-1]。
【０３０９】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル２−アミノ−３−ヒドロキシブタノエート（Ｃ）の合成：
メタノール（１．２Ｌ）中（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタン酸（２００ｇ，１．６８ｍｏｌ）の撹拌溶液にＳＯＣｌ２（２４４ｍＬ，３．３６ｍｏｌ）を０℃で滴下して加え、１時間撹拌した。得られた反応混合物を２４時間還流した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物を室温に温め、減圧下で濃縮し、ｎ−ヘキサン（２×５０ｍＬ）で洗った。残渣をＥｔＯＨ（１Ｌ）に溶解させ、Ｅｔ３Ｎ（４７１ｍＬ，３．３６ｍｏｌ）で中和し、再び２時間撹拌した。沈殿固体を濾過して取り除き、得られたろ液を減圧下で濃縮して化合物Ｃ（１９５ｇ，８０％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.51 (br s, 3H), 4.13-4.10 (m, 1H), 3.91 (br s, 1H), 1.20 (d, 3H)。
LCMS (m/z): 134.1 [M++1]。
【０３１０】
（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタンアミド（Ｄ）の合成：
ＩＰＡ（２Ｌ）中化合物Ｃ（１９０ｇ，１．３５ｍｏｌ）の溶液をオートクレーブに入れ、ＮＨ３ガス（７〜８ｋｇ）をパージして３５℃で２４時間撹拌した。次いでＮＨ３ガスを除去し、反応混合物を減圧下で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を加えて濾過した。得られた固体をＥｔＯＨ中７８℃で１時間還流した。反応塊を加熱条件下で濾過し、ろ液にｎ−ヘキサンを加えてさらに４時間再び撹拌した。得られた沈殿固体を濾過し、減圧下で乾燥して化合物Ｄ（１６０ｇ，４７％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.38 (br s, 1H), 7.02 (br s, 1H), 4.66 (br s, 1H), 3.77-3.70 (m, 1H), 2.93 (d, 1H), 2.72 (br m, 1H), 1.05 (d, 3H)。
LCMS (m/z): 119.1 [M++1]。
UPLC (ELSD純度): 99.9%。
【０３１１】
（Ｓ）−アリル２−（（Ｒ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（７）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中化合物６（５ｇ，９．１９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＨＯＢｔ（１．８ｇ，１３．７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（２．６ｇ，１３．７ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（３．５ｇ，２７．０ｍｍｏｌ）と化合物Ｄ（１．３ｇ，１１．０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物７（５ｇ，８４％）を得た。
【０３１２】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド（８）の合成：
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中化合物７（１ｇ，１．３５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＤＡＢＣＯ（１．３ｇ，１２．４ｍｍｏｌ）、次いでＰｄ（ＰＰｈ３）４（３５８ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）を室温で加え、３０分撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３溶液（７５ｍＬ）で希釈した。分離した有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物８（５６０ｍｇ，６４％）を得た。この材料をさらなる精製なしに次ステップに直接使用した。
【０３１３】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（９）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中化合物８（１．８ｇ，３．２０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ．ＨＣｌ（０．９１６ｇ，４．８０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．６５ｇ，４．８０ｍｍｏｌ）次いでＤＩＰＥＡ（１．７ｍＬ，９．６０ｍｍｏｌ）と（２Ｓ，３Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（０．８４ｇ，３．８０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１５０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して未精製生成物を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーでの精製に次いで分取ＨＰＬＣで精製して化合物９−Ｆｒ−１（１４０ｍｇ）と化合物９−Ｆｒ−２（１５０ｍｇ）を得た。
化合物９−Ｆｒ−１のキラルＨＰＬＣデータ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.71 (d, 3H), 7.21 (s, 1H), 6.99-6.75 (m, 2H), 6.59 (d, 1H), 5.01 (d, 1H), 4.65-4.60 (m, 2H), 4.19 (t, 2H), 3.99 (d, 1H), 3.89-3.85 (m, 2H), 3.65-3.61 (m, 2H), 3.44-3.39 (m, 3H), 2.25-2.15 (m, 1H), 2.02-1.95 (m, 5H), 1.75-1.72 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.25 (d, 3H), 1.19 (d, 3H), 0.99-0.95 (m, 1H)。
HPLC: 99.83%。
LCMS (m/z): 762.3 [M++1]。
化合物９−Ｆｒ−２のキラルＨＰＬＣデータ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.71 (d, 3H), 7.21 (s, 1H), 6.99-6.75 (m, 2H), 6.59 (d, 1H), 5.01 (d, 1H), 4.65-4.60 (m, 2H), 4.19 (t, 2H), 3.99 (d, 1H), 3.89-3.85 (m, 2H), 3.65-3.61 (m, 2H), 3.44-3.39 (m, 3H), 2.25-2.15 (m, 1H), 2.02-1.95 (m, 5H), 1.75-1.72 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.25 (d, 3H), 1.19 (d, 3H), 0.99-0.95 (m, 1H)。
HPLC: 92%。
LCMS (m/z):762.2 [M++1]。
【０３１４】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１２Ａ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中化合物９−Ｆｒ−１（１４０ｍｇ，０．１８３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にジオキサン．ＨＣｌ（２ｍＬ）を０℃でＮ２雰囲気下で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮してＣＭ−１２Ａ（１２０ｍｇ，９３％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.84 (s, 1H), 7.61 (s, 2H), 4.39 (d, 4H), 3.92-3.85 (m, 4H), 3.65-3.62 (m, 2H), 3.45 (d, 1H), 2.59-2.55 (m, 1H), 2.48-2.44 (m, 2H), 2.15-2.19 (m, 3H), 1.91-1.87 (m, 1H), 1.60 (s, 3H), 1.25 (s, 3H)。
LCMS (m/z):662 (M+1)。
HPLC: 97.55%。
旋光度[α20D]: +29.21 (水中Ｃ＝０．５％)。
【０３１５】
（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，５−ジブロモベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１２Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中化合物９−Ｆｒ−２（１５０ｍｇ，０．１９７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にジオキサン．ＨＣｌ（２ｍＬ）を０℃でＮ２雰囲気下で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮してＣＭ−１２Ｂ（１３０ｍｇ，９４％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 7.84 (s, 1H), 7.61 (s, 2H), 4.39 (d, 4H), 3.92-3.85 (m, 4H), 3.65-3.62 (m, 2H), 3.45 (d, 1H), 2.59-2.55 (m, 1H), 2.48-2.44 (m, 2H), 2.15-2.19 (m, 3H), 1.91-1.87 (m, 1H), 1.60 (s, 3H), 1.25 (s, 3H)。
LCMS (m/z):662 (M+1)。
HPLC: 92.11%。
旋光度[α20D]: -78.70 (水中Ｃ＝０．５％)。
【０３１６】
実施例１３  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１３Ａ）およびＮ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１３Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＭ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１３Ａ）およびＮ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１３Ｂ）を合成した：
スキームＭ  ＣＭ−１３ＡとＣＭ−１３Ｂの合成：
【０３１７】
【化３０】
2015505296.tif 000079
【０３１８】
（Ｓ）−１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（Ａ）の合成：
水（１Ｌ）中（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボン酸（２５０ｇ，２．１７ｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａ２ＣＯ３（５７６ｇ，５．４３ｍｏｌ）を加えて１時間撹拌した。０℃まで冷却した後、反応混合物にベンジルクロロホルマート（４４４ｇ，２．６１ｍｏｌ）を滴下して加え、再び１時間撹拌した。得られた反応混合物を室温に温め、さらに２４時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水（１Ｌ）とエーテル（１．５Ｌ）で希釈した。分離した水性層をＰｈＣＨ３（１．５Ｌ）で処理し、６ＮのＨＣｌを用いて酸性化した。水性層をＥｔＯＡｃ（３×１．５Ｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して化合物Ａ（４５０ｇ，８４％）を淡黄色のシロップとして得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.71 (br s, 1H), 7.40-7.30 (m, 5H), 5.19-5.01 (m, 2H), 4.25 (dd, 1H), 3.51-3.50 (m, 2H), 2.29-2.15 (m, 1H), 1.89-1.80 (m, 3H)。
LCMS (m/z): 250 [M++1]。
【０３１９】
（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中化合物Ａ（２．５ｇ，０．０１ｍｏｌ）の撹拌溶液にＳＯＣｌ２（２．７ｇ，０．０２ｍｏｌ）を０℃で加え、２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して化合物Ｂを未精製物として得た。この材料をさらなる精製なしに次ステップに直接使用した。
【０３２０】
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（Ｅ）の合成：
水（１Ｌ）中ＮａＨＣＯ３（５２９ｇ，６．３０ｍｏｌ）の撹拌溶液に（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタン酸（２５０ｇ，２．１０ｍｏｌ）を室温で加え、３０分撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、反応にＣｂｚ−Ｃｌ（８５０ｍＬ，２．５２ｍｏｌ，ＰｈＣＨ３の５０％）を滴下して加え、１時間撹拌した。得られた反応混合物を室温に温め、さらに２８時間撹拌した。これにＭＴＢＥ（１Ｌ）を加え、２０分撹拌した。分離した水性層をトルエンとともに撹拌し、２０分撹拌した。水性層を１ＮのＨＣｌで酸性化し（ｐＨ約１〜２）、ＥｔＯＡｃ（３×１．５ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をジシクロヘキシルアミン（８１９ｍＬ，４．２０ｍｏｌ）と共に４時間撹拌して白色固体を得、濾過して乾燥した。得られた固体をＥｔＯＡｃ（１．５Ｌ）で１時間還流してから濾過した。固体材料を水（１Ｌ）に溶解させ、希Ｈ２ＳＯ４で酸性化し、再び３０分撹拌した。水性層をＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）で抽出した。分離した有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた未精製材料をｎ−ヘキサンとともに２時間研和して白色固体を得た。得られた固体材料を濾過し、減圧下で乾燥して化合物Ｅ（２３０ｇ，４３％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.35-7.32 (m, 5H), 6.91 (d, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.13-4.09 (m, 1H), 3.99-3.95 (m, 1H), 1.02 (d, 3H)。
LCMS (m/z):254.1(M+1)。
UPLC (ELSD純度): 99.82%。
【０３２１】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル２−アミノ−３−ヒドロキシブタノエート（Ｃ）の合成：
メタノール（１．２Ｌ）中（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタン酸（２００ｇ，１．６８ｍｏｌ）の撹拌溶液にＳＯＣｌ２（２４４ｍＬ，３．３６ｍｏｌ）を０℃で滴下して加え、１時間撹拌した。得られた反応混合物を２４時間還流した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物を室温に温め、減圧下で濃縮し、ｎ−ヘキサン（２×５０ｍＬ）で洗った。残渣をＥｔＯＨ（１Ｌ）に溶解させ、Ｅｔ３Ｎ（４７１ｍＬ，３．３６ｍｏｌ）で中和し、再び２時間撹拌した。沈殿固体を濾過して取り除き、得られたろ液を減圧下で濃縮して化合物Ｃ（１９５ｇ，８０％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.51 (br s, 3H), 4.13-4.10 (m, 1H), 3.91 (br s, 1H), 1.20 (d, 3H)。
LCMS (m/z):134.1 [M++1]。
【０３２２】
（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタンアミド（Ｄ）の合成：
ＩＰＡ（２Ｌ）中化合物Ｆ（１９０ｇ，１．３５ｍｏｌ）の溶液をオートクレーブに入れ、ＮＨ３ガス（７〜８ｋｇ）をパージして３５℃で２４時間撹拌した。次いでＮＨ３ガスを除去し、反応混合物を減圧下で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を加えて濾過した。得られた固体をＥｔＯＨ中７８℃で１時間還流した。反応塊を加熱条件下で濾過し、ろ液にｎ−ヘキサンを加えてさらに４時間再び撹拌した。得られた沈殿固体を濾過し、減圧下で乾燥して化合物Ｄ（１６０ｇ，４７％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.38 (br s, 1H), 7.02 (br s, 1H), 4.66 (br s, 1H), 3.77-3.70 (m, 1H), 2.93 (d, 1H), 2.72 (br m, 1H), 1.05 (d, 3H)。
LCMS (m/z): 119.1 [M++1]。
UPLC (ELSD純度): 99.9%。
【０３２３】
（Ｓ）−エチルピロリジン−２−カルボキシレートヒドロクロリド（１）の合成：
エタノール中Ｌ−プロリン（ＳＭ）（１１０ｇ，９５６．５ｍｍｏｌ）の溶液に塩化チオニル（１４１ｍｌ，１９１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間還流した。反応混合物を室温化し、減圧下で濃縮して化合物１を塩酸塩（１７０ｇ，９９％）として得た。
【０３２４】
（Ｓ）−１−ベンジル２−エチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＤＣＭ中１（１７０ｇ，９４７ｍｍｏｌ）の溶液にＴＥＡ（３９８ｍｌ，２．８３ｍｏｌ）を加え、３０分後Ｃｂｚ−Ｃｌ（１．１３６ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を水で洗い、ＤＣＭで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２（２３０ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ7.42-7.31(m, 5H), 5.09 (m, 2H), 4.32-4.23(m, 1H), 4.08-3.98(m, 2H), 3.50-3.38 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.90-1.81(m, 3H), 1.10-1.04 (t, 3H)。
質量m/z: 278 [M++1]。
【０３２５】
１−ベンジル２−エチル２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中化合物２（１０ｇ，３７．９ｍｍｏｌ）の溶液に不活性雰囲気下−２５℃でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（７６ｍＬ，０．０７６ｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。３−メトキシベンジルブロミド（９．２１ｇ，４５．５９ｍｍｏｌ）を−２５℃で滴下して加え、室温に温まるまで放置して３０分撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（１０ｇ，６９％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, CDCl3): δ 7.41-7.32 (m, 5H), 7.19-7.09 (m, 1H), 6.80 (t, 1H), 6.65 (d, 2H), 5.30 (t, 1H), 5.19 (t, 1H), 3.79-3.70 (m, 5H), 3.55-3.52 (m, 2H), 3.10-3.07 (m, 2H), 2.15-2.08 (m, 1H), 1.79-1.72 (m, 1H), 1.10-0.99 (m, 1H)。
【０３２６】
メチル２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキシレート（４）の合成：
ＣＨ３ＯＨ（１００ｍＬ）中化合物３（１０ｇ，２６．１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＰｄ／Ｃ（３ｇ）を加え、Ｈ２雰囲気下室温で１０時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、ＭｅＯＨで洗った。得られたろ液を減圧下で濃縮して化合物４（５．３ｇ，８２％）を得た。この材料をさらなる精製なしに次ステップに直接使用した。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.15 (t, 1H), 6.59-6.55 (m, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 2.99 (d, 1H), 2.85-2.81 (m, 3H), 2.09-2.05 (m, 1H), 1.75-1.67 (m, 3H)。
LCMS (m/z):250.2 [M++1]。
【０３２７】
（２Ｓ）−ベンジル２−（２−（３−メトキシベンジル）−２−（メトキシカルボニル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＤＣＭ：Ｈ２Ｏ（７００ｍＬ，２：５）中化合物４（４．３ｇ，１７．４７ｍｍｏｌ）の懸濁液にＮａ２ＣＯ３（４．６ｇ，４３．６９ｍｍｏｌ）に次いでＤＣＭ中Ｉｎｔ−Ｂ（５．２ｇ，２０．９７ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加え、２時間撹拌した。有機層をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物５（７ｇ）を未精製物として得た。この材料をさらなる精製なしに次ステップに直接使用した。
【０３２８】
（Ｓ）−１−（１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボン酸（６）の合成：
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中化合物５（７ｇ，１４．５８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１ＮのＮａＯＨ溶液（１００ｍＬ）を加え、還流温度で５時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣を水で希釈し、飽和クエン酸溶液を用いてｐＨ約２に調節した。水性層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物６（７．６ｇ）を未精製物として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.45 (br s, 1H), 7.85-7.75 (m, 4H), 6.99-6.82 (m, 2H), 5.34-5.29 (m, 1H), 3.74 (d, 1H), 3.65-3.41 (m, 2H), 3.39-3.34 (m, 1H), 3.01 (t, 1H), 2.25-2.21 (m, 1H), 2.01-1.92 (m, 3H), 1.12 (t, 1H)。
LCMS (m/z):467 [M++1]。
【０３２９】
（Ｓ）−ベンジル２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（７）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中化合物６（２ｇ，４．２９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＥＤＣＩ．ＨＣｌ（１．２３ｇ，６．４３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（８６９ｍｇ，６．４３ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（１．６６ｇ，１２．８７ｍｍｏｌ）と化合物Ｄ（５０６ｍｇ，４．２９ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物７（１．５ｇ，６１％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.49-7.37 (m, 6H), 7.11-6.92 (m, 2H), 6.88-6.82 (m, 2H), 5.35-5.01 (m, 2H), 4.89-4.52 (m, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.01-3.84 (m, 1H), 3.72 (d, 2H), 3.62-3.55 (m, 4H), 3.22-3.18 (m, 1H), 2.22-1.75 (m, 5H), 1.09 (br s, 3H)。
【０３３０】
Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−２−（３−メトキシベンジル）−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキサミド（８）の合成：
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中化合物７（１．５ｇ，２．６５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（０．４ｇ）を加え、Ｈ２雰囲気下室温で６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物８（１ｇ，８７％）を白色固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.22-7.18 (m, 2H), 7.08-7.01 (m, 1H), 6.98 (br s, 1H), 6.84 (t, 1H), 6.75-6.71 (m, 2H), 5.05 (d, 1H), 4.23 (t, 1H), 5.09 (br s, 1H), 3.95 (d, 1H), 3.74 (s, 4H), 3.61 (t, 2H), 3.09-3.01 (m, 2H), 2.72-2.68 (m, 1H), 2.17-2.01 (m, 3H), 1.85-1.80 (m, 5H), 1.08 (d, 3H)。
LCMS (m/z): 433 [M++1]。
【０３３１】
ベンジル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−ｙｌ）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（９）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中化合物８（２ｇ，４．６２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＨＯＢｔ（９３７ｍｇ，６．９４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（１．３２ｇ，６．９３ｍｍｏｌ）に次いでＤＩＰＥＡ（１．７９ｇ，１３．８２ｍｍｏｌ）と化合物Ｅ（１．１７ｇ，４．６２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製してから分取ＨＰＬＣで精製して化合物９−Ｆｒ−１（０．５ｇ）と化合物９−Ｆｒ−２（０．１ｇ）を白色固体として得た。
化合物９−Ｆｒ−１のキラルＨＰＬＣデータ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.39 (s, 4H), 7.19-7.15 (m, 2H), 7.09-7.02 (m, 2H), 6.75-6.71 (m, 2H), 5.10-4.99 (m, 2H), 4.76-4.71 (m, 1H), 4.29-4.21 (m, 1H), 4.07-3.87 (m, 2H), 3.71 (d, 2H), 3.65-3.62 (m, 1H), 3.45 (d, 1H), 3.21-3.14 (m, 1H), 2.15-2.01 (m, 5H), 1.72 (br m, 1H), 1.22-1.15 (m, 2H), 1.05 (t, 2H)。
HPLC: 41.56%。
LCMS (m/z): 668 [M++1]。
化合物９−Ｆｒ−２のキラルＨＰＬＣデータ：
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.391 (s, 4H), 7.19-7.15 (m, 2H), 7.09-7.02 (m, 2H), 6.75-6.71 (m, 2H), 5.10-4.99 (m, 2H), 4.76-4.71 (m, 1H), 4.29-4.21 (m, 1H), 4.07-3.87 (m, 2H), 3.71 (d, 2H), 3.65-3.62 (m, 1H), 3.45 (d, 1H), 3.21-3.14 (m, 1H), 2.15-2.01 (m, 5H), 1.72 (br m, 1H), 1.22-1.15 (m, 2H), 1.05 (t, 2H)。
HPLC: 58.43%。
LCMS (m/z): 762.2 [M++1]。
【０３３２】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１３Ａ）の合成：
ＤＣＭ（２ｍＬ）中化合物９−Ｆｒ−１（０．５ｇ，０．０．０９ｍｏｌ）の溶液にエーテルＨＣｌ（２ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＣＭ−１３Ａ（４５ｍｇ，８４％）を白色固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.01 (br s, 3H), 7.35 (d, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.89 (d, 1H), 6.69 (s, 2H), 5.49 (br s, 1H), 4.69 (t, 1H), 4.35-4.31 (m, 1H), 4.15 (d, 1H), 4.09 (br m, 1H), 3.91-3.85 (m, 4H), 3.75-3.71 (m, 1H), 3.49 (d, 2H), 3.19 (s, 2H), 3.12 (d, 1H), 2.21-2.15 (m, 1H), 2.12-2.05 (m, 3H), 1.97-1.92 (m, 3H), 1.75-1.71 (m, 1H), 1.41 (d, 3H), 1.09 (d, 3H)。
LCMS (m/z): 534 [M++1]。
ＨＰＬＣ純度: 94%。
【０３３３】
Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３−メトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１３Ｂ）の合成：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中化合物９−Ｆｒ−２（０．１ｇ，０．１８７ｍｍｏｌ）の溶液にエーテルＨＣｌ（２ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＣＭ−１３Ｂ（８０ｍｇ，７５％）を白色固体として得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.01 (br s, 3H), 7.35 (d, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.89 (d, 1H), 6.69 (s, 2H), 5.49 (br s, 1H), 4.69 (t, 1H), 4.35-4.31 (m, 1H), 4.15 (d, 1H), 4.09 (br m, 1H), 3.91-3.85 (m, 4H), 3.75-3.71 (m, 1H), 3.49 (d, 2H), 3.19 (s, 2H), 3.12 (d, 1H), 2.21-2.15 (m, 1H), 2.12-2.05 (m, 3H), 1.97-1.92 (m, 3H), 1.75-1.71 (m, 1H), 1.41 (d, 3H), 1.09 (d, 3H)。
LCMS (m/z): 534 [M++1]。
ＨＰＬＣ純度: 92%。
【０３３４】
実施例１４  （Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１４Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１４Ｂ）の合成：
次の反応順序（スキームＮ）を用いて（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１４Ａ）および（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１４Ｂ）を合成した：
スキームＮ  ＣＭ−１４ＡとＣＭ−１４Ｂの合成：
【０３３５】
【化３１】
2015505296.tif 000080
【０３３６】
（Ｓ）−１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（Ａ）の合成：
水（１Ｌ）中（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボン酸（２５０ｇ，２．１７ｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａ２ＣＯ３（５７６ｇ，５．４３ｍｏｌ）を加えて１時間撹拌した。０℃まで冷却した後、反応混合物にベンジルクロロホルマート（４４４ｇ，２．６１ｍｏｌ）を滴下して加え、再び１時間撹拌した。得られた反応混合物を室温に温め、さらに２４時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水（１Ｌ）とエーテル（１．５Ｌ）で希釈した。分離した水性層をＰｈＣＨ３（１．５Ｌ）で処理し、６ＮのＨＣｌを用いて酸性化した。水性層をＥｔＯＡｃ（３×１．５Ｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して化合物Ａ（４５０ｇ，８４％）を淡黄色のシロップとして得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.71 (br s, 1H), 7.40-7.30 (m, 5H), 5.19-5.01 (m, 2H), 4.25 (dd, 1H), 3.51-3.50 (m, 2H), 2.29-2.15 (m, 1H), 1.89-1.80 (m, 3H)。
LCMS (m/z): 250 [M++1]。
【０３３７】
（Ｓ）−ベンジル２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（Ｂ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中化合物Ａ（２．５ｇ，０．０１ｍｏｌ）の撹拌溶液にＳＯＣｌ２（２．７ｇ，０．０２ｍｏｌ）を０℃で加え、２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して化合物Ｂを未精製物として得た。この材料をさらなる精製なしに次ステップに直接使用した。
【０３３８】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル２−アミノ−３−ヒドロキシブタノエート（Ｃ）の合成：
メタノール（１．２Ｌ）中（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタン酸（２００ｇ，１．６８ｍｏｌ）の撹拌溶液にＳＯＣｌ２（２４４ｍＬ，３．３６ｍｏｌ）を０℃で滴下して加え、１時間撹拌した。得られた反応混合物を２４時間還流した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物を室温に温め、減圧下で濃縮し、ｎ−ヘキサン（２×５０ｍＬ）でデカントした。残渣をＥｔＯＨ（１Ｌ）に溶解させ、Ｅｔ３Ｎ（４７１ｍＬ，３．３６ｍｏｌ）で中和し、再び２時間撹拌した。沈殿固体を濾過して取り除き、得られたろ液を減圧下で濃縮して化合物Ｃ（１９５ｇ，８０％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.51 (br s, 3H), 4.13-4.10 (m, 1H), 3.91 (br s, 1H), 1.20 (d, 3H)。
LCMS (m/z):134.1 [M++1]。
【０３３９】
（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタンアミド（Ｄ）の合成：
ＩＰＡ（２Ｌ）中化合物Ｆ（１９０ｇ，１．３５ｍｏｌ）の溶液をオートクレーブに入れ、ＮＨ３ガス（７〜８ｋｇ）をパージして３５℃で２４時間撹拌した。次いでＮＨ３ガスを除去し、反応混合物を減圧下で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を加えて濾過した。得られた固体をＥｔＯＨ中７８℃で１時間還流した。反応塊を加熱条件下で濾過し、ろ液にｎ−ヘキサンを加えてさらに４時間再び撹拌した。得られた沈殿固体を濾過し、減圧下で乾燥して化合物Ｄ（１６０ｇ，４７％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.38 (br s, 1H), 7.02 (br s, 1H), 4.66 (br s, 1H), 3.77-3.70 (m, 1H), 2.93 (d, 1H), 2.72 (br m, 1H), 1.05 (d, 3H)。
LCMS (m/z): 119.1 [M++1]。
UPLC (ELSD純度): 99.9%。
【０３４０】
ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエート（Ｅ）の合成：
ＤＭＦ（５００ｍＬ）中２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタン酸（５０ｇ，２２８．３ｍｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（６３ｇ，４５６．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分撹拌した。これに臭化ベンジル（４６．８３ｇ，２７３．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。反応混合物を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、ベンジル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシブタノエートＥ（５２ｇ，７３％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.37-7.30 (m, 5H), 6.60 (d, 1H), 5.18-5.08 (m, 2H), 4.76 (d, 1H), 4.08-4.00 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.09 (d, 3H)。
質量m/z: 310.0 [M++1], 210 [M+-De Boc]。
【０３４１】
ベンジル３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエート（Ｆ）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中化合物Ｅ（５２ｇ，１６８．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＡｃ２Ｏ（２０．５ｇ，２０１．９ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２５．４ｇ，２５２．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３．５ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。減圧下で揮発成分を除去した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）で希釈し、冷たい０．５ＮのＨＣｌ溶液（２×２００ｍＬ）で洗った。有機層をブラインで洗い、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタノエートＦ（５２ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.35-7.34 (m, 5H), 7.27-7.25 (d, 1H), 5.18-5.06 (m, 3H), 4.34-4.32 (m, 1H), 1.90 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.16 (d, 3H)。
質量m/z: 252 [M++1-De Boc]。
【０３４２】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸（Ｇ）の合成：
ＭｅＯＨ（１Ｌ）中化合物Ｆ（５２ｇ，１４８．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に１０％Ｐｄ／ＣをＮ２雰囲気下で加え、反応混合物を水素雰囲気下で１６時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、得られたろ液を真空蒸発させ、未精製残渣をヘキサンとともに研和して（２Ｓ，３Ｒ）−３−アセトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブタン酸Ｇ（３５ｇ，９０％）を得た。
1H-NMR: (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.78 (br s, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.16-5.14 (m, 1H), 4.17-4.15 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.10 (d, 3H)。
質量m/z: 260.0 [M-1]。
【０３４３】
（Ｓ）−メチルピロリジン−２−カルボキシレートヒドロクロリド（１）の合成：
メタノール中Ｌ−プロリン（ＳＭ）（１１０ｇ，９５６．５ｍｍｏｌ）の溶液に塩化チオニル（１４１ｍｌ，１９１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１６時間還流した。反応混合物を室温化し、減圧下で濃縮して化合物１を塩酸塩（１７０ｇ，９９％）として得た。
【０３４４】
（Ｓ）−１−ベンジル２−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２）の合成：
ＤＣＭ中１（１７０ｇ，９４７ｍｍｏｌ）の溶液にＴＥＡ（３９８ｍｌ，２．８３ｍｏｌ）を加え、３０分後Ｃｂｚ−Ｃｌ（１．１３６ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を水で洗い、ＤＣＭで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物２（２３０ｇ，８８％）を得た。
1H-NMR: (200 MHz, DMSO-d6): δ7.42-7.31(m, 5H), 5.09 (m, 2H), 4.32-4.23(m, 1H), 4.08-3.98(m, 2H), 3.50-3.38 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.90-1.81(m, 3H), 1.10-1.04 (t, 3H)。
質量m/z: 278 [M++1]。
【０３４５】
１−ベンジル２−メチル２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３）の合成：
乾燥ＴＨＦ（６０ｍＬ）中化合物２（３．４ｇ，１２．９ｍｍｏｌ）の溶液に不活性雰囲気下−２５℃でＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（２５ｍＬ，２５．０ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。反応混合物に５−（ブロモメチル）−１，２，３−トリメトキシベンゼン（４ｇ，１５．５ｍｍｏｌ）を−２５℃で滴下して加えた。室温に温まるまで放置し、２時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、水性層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた未精製残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製し、化合物３（４．８ｇ，８４％）を得た。
LCMS (m/z):444.4 [M++1]。
HPLC: 92%。
【０３４６】
メチル２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキシレート（４）の合成：
ＣＨ３ＯＨ（４０ｍＬ）中化合物３（４．８ｇ，１０．８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＰｄ／Ｃ（１．５ｇ）を加え、Ｈ２雰囲気下室温で１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、ＭｅＯＨで洗った。得られたろ液を減圧下で濃縮して化合物４（３．０ｇ，９０％）を得た。
1H-NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.49 (s, 2H), 3.72 (s, 6H), 3.61 (s, 6H), 2.99 (d, 1H), 2.85-2.81 (m, 2H), 2.78 (d, 1H), 2.12-2.07 (m, 1H), 1.79-1.71 (m, 3H)。
LCMS (m/z): 310.2 [M++1]。
【０３４７】
（２Ｓ）−ベンジル２−（２−（メトキシカルボニル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）−ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（５）の合成：
ＤＣＭ：Ｈ２Ｏ（４５ｍＬ，５：４）中化合物５（３ｇ，９．７０ｍｍｏｌ）の懸濁液にＮａ２ＣＯ３（２．５ｇ，２４．２０ｍｍｏｌ）に次いでＤＣＭ中Ｉｎｔ−Ｂ（３．２ｇ，１１．６０ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加え、２時間撹拌した。有機層をブラインで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物５（４．６ｇ）を未精製物として得た。この材料をさらなる精製なしに次ステップに直接使用した。
LCMS (m/z):541.3 [M++1]。
【０３４８】
（Ｓ）−１−（１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボン酸（６）の合成：
ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中化合物５（４．６ｇ，８．８０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に２ＮのＮａＯＨ溶液（１０ｍＬ）を加え、還流温度で１６時間撹拌した。減圧下で揮発成分を蒸発させ、得られた残渣を水で希釈し、１ＮのＨＣｌ溶液を用いてｐＨ約２に調節した。水性層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して化合物６（４ｇ）を未精製物として得た。
【０３４９】
（Ｓ）−ベンジル２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート（７）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中化合物６（４ｇ，７．６０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＨＯＢｔ（１．５ｇ，１１．４０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（２．１０ｇ，１１．４０ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（４．１ｍＬ，２２．８ｍｍｏｌ）と化合物Ｄ（９８７ｍｇ，８．００ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し減圧下で濃縮して未精製生成物を得、これをカラムクロマトグラフィーで精製して化合物７（３ｇ，６３％）を得た。
LCMS (m/z):625.6 [M+-1]。
【０３５０】
Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（８）の合成：
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中化合物７（３ｇ，４．７９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮ２雰囲気下で１０％Ｐｄ／Ｃ（０．７ｇ）を加えた。反応混合物をＨ２雰囲気下室温で１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、ろ液を減圧下で濃縮して化合物８（２．１ｇ，９１％）を白色固体として得た。
【０３５１】
ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（Ｓ）−２−（２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−１−カルボニル）ピロリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（９）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中化合物８（２ｇ，４．００ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＨＯＢｔ（８２３ｍｇ，６．００ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（１．１６ｇ，６．００ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（２．２ｍＬ，１１．６ｍｍｏｌ）と化合物Ｇ（１．０６８ｇ，４．８０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。出発物質の（ＴＬＣによる）消費後、反応を水でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。未精製物をカラムクロマトグラフィーで精製してから分取ＨＰＬＣで精製して化合物９−Ｆｒ−１（０．１２ｇ）と化合物９−Ｆｒ−２（０．２ｇ）を白色固体として得た。
化合物９−Ｆｒ−１のキラルＨＰＬＣデータ：
LCMS (m/z): 594.5 [(M++1)-Boc]。
HPLC: 94%。
化合物９−Ｆｒ−２のキラルＨＰＬＣデータ：
LCMS (m/z):594.5 [(M++1)-Boc]。
HPLC: 95%。
【０３５２】
（Ｒ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１４Ａ）の合成：
ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中化合物９−Ｆｒ−１（０．１２ｇ，０．１７ｍｍｏｌ）の溶液に１，４−ジオキサンＨＣｌ（２．５ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＣＭ−１４Ａ（８０ｍｇ）をＨＣｌ塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 6.89 (s, 2H), 4.99 (t, 1H), 4.45-4.40 (m, 4H), 3.98 (s, 6H), 3.85 (s, 4H), 3.71-3.65 (m, 4H), 3.51 (d, 1H), 3.39 (d, 1H), 2.62-2.55 (m, 1H), 2.44-2.37 (m, 1H), 2.24-2.20 (m, 4H), 1.84-1.82 (m, 1H), 1.51 (d, 3H), 1.27 (d, 3H), 1.15-1.09 (m, 1H)。
LCMS (m/z):594.5 [M++1]
ＨＰＬＣ純度: 93%。
旋光度[α19.9D]: +21.91 (水中C=0.5%)。
【０３５３】
（Ｓ）−Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−（（Ｓ）−１−（（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル）ピロリジン−２−カルボニル）−２−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ＣＭ−１４Ｂ）の合成：
ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中化合物９−Ｆｒ−２（０．２ｇ，０．２０ｍｍｏｌ）の溶液に１，４−ジオキサンＨＣｌ（２．５ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＣＭ−１４Ｂ（１７０ｍｇ）をＨＣｌ塩として得た。
1H-NMR: (400 MHz, D2O): δ 6.89 (s, 2H), 4.99 (t, 1H), 4.45-4.40 (m, 4H), 3.98 (s, 6H), 3.85 (s, 4H), 3.71-3.65 (m, 4H), 3.51 (d, 1H), 3.39 (d, 1H), 2.62-2.55 (m, 1H), 2.44-2.37 (m, 1H), 2.24-2.20 (m, 4H), 1.84-1.82 (m, 1H), 1.51 (d, 3H), 1.27 (d, 3H), 1.15-1.09 (m, 1H)。
LCMS (m/z):594.5 [M++1]
ＨＰＬＣ純度: 95%。
旋光度[α19.9D]: -92.57(水中C=0.5%)。
【０３５４】
実施例１５  薬物代謝と薬物動態
この実施例は試験化合物の薬物代謝および薬物動態特性を示す。
【０３５５】
化合物ＣＭ−５Ａ、ＣＭ−６Ａ、ＣＭ−７Ａ、ＣＭ−８ＡおよびＣＭ−９Ａをインビトロ水溶性、ＭＤＣＫ浸透性および代謝安定性アッセイにおいて試験した。化合物ＣＭ−５Ａ、ＣＭ−６ＡおよびＣＭ−７Ａはラット薬物動態においても試験した。簡潔な手順、結果および結論を以下に要約する。
【０３５６】
水溶性：
手順  動態学的水溶性（ｐＩＯＮ法）を以下のパラメータを用いて評価した：
原液調製：ＤＭＳＯ
緩衝液：無リン酸緩衝液
ｐＨ条件：ｐＨ７．４
試験濃度：１％ＤＭＳＯで２００μＭ（ｎ＝３）
培養時間：１６時間
濾過：０．２２μフィルタープレート
分析：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ
【０３５７】
結果  以下は溶解度アッセイの結果である：
【０３５８】
【表１】
2015505296.tif 000081
【０３５９】
結論  結果では、試験化合物はｐＨ７．４で良好な水溶性を有することが示されている。
【０３６０】
代謝安定性:
代謝安定性はいくつかの化合物を用いて肝臓ミクロソームならびに肝細胞において評価した。
【０３６１】
ミクロソーム安定性の手順：
種：ラットとヒト
試験濃度：１μＭ（ｎ＝２）
タンパク質濃度：０．１２５ｍｇ／ｍＬ
時点：０、５、１５、３０および６０分
対照：マイナスＮＡＤＰＨおよび緩衝液
分析：親化合物モニタリングＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ピーク面積比率）
【０３６２】
肝細胞安定性の手順：
原液調製：ＤＭＳＯ
緩衝液：Ｋｒｅｂｓ  Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液
全培養量：１０００μＬ
細胞密度：１００万個／ｍＬ
試験濃度：０．５％ＤＭＳＯで１０μＭ（ｎ＝２）
時点：０分と６０分
分析：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ
【０３６３】
結果：
【０３６４】
【表２】
2015505296.tif 000082
（Ｈ）：肝細胞；（Ｍ）：ミクロソーム
【０３６５】
代謝安定性分類は以下の基準に基づいた。
【０３６６】
【表３】
2015505296.tif 000083
【０３６７】
結論  結果では、ミクロソーム／肝細胞において試験化合物が中程度から高安定性を有することが示されている。
【０３６８】
ＭＤＣＫ浸透性：
手順  試験化合物の浸透性をＭＤＣＫ（メイディン・ダービー・イヌ腎臓細胞）を使用して以下のパラメータを用いて評価した。
試験濃度：５μＭ（ｎ＝３）
緩衝液：ＨＢＳＳｐＨ７．４
時点：０、１５、３０、６０および９０分
分析：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いての親化合物モニタリング
【０３６９】
結果  以下はＭＤＣＫ浸透性アッセイの結果である：
【０３７０】
【表４】
2015505296.tif 000084
【０３７１】
結論  結果では、試験化合物はＭＤＣＫ細胞に対し不良な／低い浸透性を有することが示されている。ＭＤＣＫ浸透性分類は以下の基準に基づいた。
【０３７２】
【表５】
2015505296.tif 000085
【０３７３】
ＣＭ−４Ａの生物学的利用能
手順  ２〜３月齢の雄（１ｍｇ／ｋｇ静脈内と１０ｍｇ／ｋｇ経口）および雄と雌（０．１および１ｍｇ／ｋｇ経口）のスプラーグドーリーラットに無菌食塩水ビヒクル中ＣＭ−４Ａ（１ｍｇ／ｋｇ［尾静脈内］または０．１、１または１０ｍｇ／ｋｇ経口［胃管栄養法］；ｎ＝５〜６／群）を投与し、外側尾静脈採血またはＫ２−ＥＤＴＡ処置シリンジを用いての心臓穿刺により様々な時点で採血を繰り返した。性別による差異が見られないとして雄と雌の１ｍｇ／ｋｇ経口投与のデータをまとめた。血漿を遠心分離し（１，０００×Ｇで１０分４℃）血漿試料をアッセイ時まで−８０℃で保存した。試料をアッセイ時まで−８０℃で保存した。アッセイ当日、試料とスパイク血漿標準物を４℃で解凍し、３倍体積の氷冷アセトニトリルに抽出し、２５，０００×Ｇで１０分４℃で遠心分離し、上清をオートサンプラーバイアルにロードした（４℃）。試料をＡｇｉｌｅｎｔ  ＱＱＱＬＣ／ＭＳ／ＭＳ機器を用いて複数の反応モニタリングモードで分析し（５０４．３−＞１７１．１，１９９．１，３８６．１ｍ／ｚ）、ＣＭ−４Ａの保持時間は９．３分であり、約１０秒の対称的なピークがあった。
【０３７４】
図１に示すように、ＣＭ−４Ａの経口生物学的利用能は０．１から１０ｍｇ／ｋｇまで本質的に線形である。
【０３７５】
実施例１６  ［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合アッセイ
この実施例は、候補ＮＭＤＡ受容体調節剤のアゴニスト的および／またはアゴニスト的特性の評価に使用され得る［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合アッセイを示す。
【０３７６】
粗シナプス膜をMoskal et al. (2001), “The use of antibody engineering to create novel drugs that target N-methyl-D-aspartate receptors,” Curr. Drug Targets, 2:331-45に記載のようにラットの前脳から調製した。雄の２〜３月齢のラットを麻酔なしでギロチンにより断頭し、迅速に脳を除去し（約９０秒）、全皮質と海馬を氷冷プラットフォーム上で解剖し、ドライアイスで冷凍し、−８０℃で保存した。試料をＢｒｉｎｋｍａｎ  Ｐｏｌｙｔｒｏｎにより２０倍体積の氷冷５ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）中にホモジナイズし、４８，０００×ｇで２０分４℃でペレット化し、上述の追加の３倍量で洗った。次に膜を５ｍＭのＥＤＴＡと１５ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）に再懸濁し、３７℃で１時間培養し、膜を４８，０００×ｇで２０分４℃でペレット化し、液体窒素中で急速冷凍し、−８０℃で保存した。実験当日、膜を室温解凍し、上述の追加の７倍量の氷冷５ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）中で洗った。最終洗浄後、膜をアッセイ緩衝液（５ｍＭのトリス−酢酸  ｐＨ７．４）に懸濁し、タンパク質成分をＢＣＡアッセイで決定した。
【０３７７】
［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合アッセイをUrwyler et al. (2009), “Drug design, in vitro pharmacology, and structure-activity relationships of 3-acylamino-2-aminopropionic acid derivatives, a novel class of partial agonists at the glycine site on the N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor complex,” J. Med. Chem., 52:5093-10に記載のように実施した。膜タンパク質（２００μｇ）を様々な濃度の試験化合物（１０−３〜１０−１７Ｍ）とともに５０μＭのグルタミン酸と一緒に１５分２３℃で培養した。次にアッセイチューブを非平衡条件下で［３Ｈ］ＭＫ−８０１（５ｎＭ；２２．５Ｃｉ／ｍｍｏｌ）とともに１５分２３℃で培養してからＢｒａｎｄｅｌ  Ｍ−２４Ｒ  Ｃｅｌｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを用いてＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｂフィルターで濾過した。次にチューブをアッセイ緩衝液（５ｍＭのトリス−酢酸  ＰＨ７．４）で３回洗い、液体シンチレーションでフィルターを分析して壊変毎分（ＤＰＭ）を計算した。ゼロレベルは一切のグリシンリガンドの非存在下および３０μＭの５，７−ジクロロキヌレン酸（５，７−ＤＣＫＡ）の存在下で決定した。最大刺激は１ｍＭのグリシンの存在下で測定した。５０μＭのグルタミン酸が全試料中に存在した。
【０３７８】
各データポイント（すなわち試験化合物の単一濃度）につき最大［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合％を次式で計算した。
【０３７９】
最大［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合％＝（（ＤＰＭ（試験化合物）−ＤＰＭ５，７−ＤＣＫＡ）／（ＤＰＭ１ｍＭグリシン−ＤＰＭ５，７−ＤＣＫＡ））×１００％
【０３８０】
［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合％の増加として表された各化合物の有効性を、データを「対数（アゴニスト）対応答（３パラメータ）」の式にＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて当てはめることで計算し、各試験化合物の力価（ＥＣ５０、ｐＭで表す）と最大活性（最大刺激％）をその試験化合物の有効性を最適最高値として計算した（図２〜４）。
【０３８１】
【表６】
2015505296.tif 000086
【０３８２】
実施例１７  ＮＭＤＡ受容体（ＮＭＤＡＲ）電流
この実施例では、試験化合物がＮＭＤＡＲ電流に及ぼす影響を決定するアッセイを示す。
【０３８３】
１４〜１８日齢のスプラーグドーリーラット由来の海馬切片に対しZhang et al. (2008) “A NMDA receptor glycine site partial agonist, GLYX-13 (“GLYX”), simultaneously enhances LTP and reduces LTD at Schaffer collateral-CA1 synapses in hippocampus,” Neuropharmacology, 55:1238-50に記載されるように実験を行った。全細胞の記録が、０ｍＭ［Ｍｇ２＋］および３ｍＭ［Ｃａ２＋］ならびに薬理学的にＮＭＤＡＲ依存性興奮性シナプス後電流（ＥＰＳＣ）を単離するための１０μＭのビククリンと２０μＭのＣＮＱＸを含む人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）で灌流された切片において、−６０ｍＶで電位固定したＣＡ１錐体神経細胞から得られた。様々な濃度の試験化合物（１０ｎＭから１μＭ）を灌流液中投与してシャッファー側枝線維を３０秒おきに単回電気パルス（持続時間８０μｓ）で刺激した。ＮＭＤＡＲ  ＥＰＳＣは、長い上昇と減衰時間で特徴づけられ、各実験の終わりにＮＭＤＡＲ特異的アンタゴニストのＤ−２−アミノ−５−ホスホノペンタン酸（Ｄ−ＡＰ５；５０μＭ）の灌流液中投与により完全にブロックされた。試験化合物の有効性は、ベースラインからのＮＭＤＡＲ電流の増加％として計算した。ベースラインは試験化合物投与前のＮＭＤＡＲ電流として測定した。
【０３８４】
【表７】
2015505296.tif 000087
ＮＴ＝試験せず。
【０３８５】
図５は、ＣＡ１錐体神経細胞（ｎ＝５）において記録された、ＣＭ−４Ａ（１μＭ）が単回ショックのシャッファー側枝誘起の薬理学的に単離されたＮＭＤＡ  ＥＰＳＣに及ぼす影響の時間経過を示す。（各ポイントは、ｎ個の錐体神経細胞のＥＰＳＣピーク振幅または興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）の平均±標準誤差である。）
【０３８６】
実施例１８  長期増強（ＬＴＰ）アッセイ手順１
この実施例では、試験化合物がＬＴＰに及ぼす影響を決定するアッセイを示す。
【０３８７】
１４〜１８日齢のスプラーグドーリーラット由来の海馬切片をインターフェース記録チャンバに移し、酸素を含ませた３ｍｌ／分ＡＣＳＦで３２±０．５℃で連続的に灌流した。低抵抗導出電極を薄肉ホウケイ酸ガラス（ＡＣＳＦ充填後１〜２ＭΩ）で作製し、ＣＡ１領域の放射状層におけるシャッファー側枝末端野の先端樹状突起領域に挿入して興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）を記録した。双極ステンレス鋼刺激電極（FHC Co.社）をＣＡ３放射状層のシャッファー側枝−交連線維に配置し、定電流刺激の強度を３０秒に一度およそ最大半量のｆＥＰＳＰを誘発するように調節した（５０〜１００ｐＡ；持続時間１００ｍｓ）。ｆＥＰＳＰの傾きを最大の陰性のふれの２０％〜８０％の線形補間により測定し、傾きは実験開始の少なくとも１０分前は±１０％以内で安定していることを確認した。長期増強（ＬＴＰ）を対照（ビヒクル）、無処置切片または試験化合物で前処置した切片（１０ｎＭから１００μＭ）のシャッファー側枝−ＣＡ１シナプスの高周波刺激トレイン（３×１００Ｈｚ／５００ｍｓ；矢印）により誘導した。長期増強信号をＭｕｌｔｉｃｌａｍｐ  ７００Ｂ増幅器を用いて記録し、Ｄｉｇｉｄａｔａ  １３２２（Axon Instruments社、カリフォルニア州フォスターシティ）を用いてデジタル処理した。データはＩＢＭ互換性パーソナルコンピュータでｐＣｌａｍｐソフトウェア（Axon Instruments社バージョン９）を用いて分析した。有効性は、ビヒクルの切片と試験化合物で前処理した切片を測定して比較した長期増強の増加％として計算した。
【０３８８】
【表８】
2015505296.tif 000088
ＮＴ＝試験せず。
【０３８９】
図６は、ＣＭ−２、ＣＭ−１およびＣＭ−４Ａの、ＬＴＰに及ぼす効果の用量−応答関係を示す。
【０３９０】
ＦＩＧ．７は、ＧＬＹＸ−１３（「ＧＬＹＸ」）対ＣＭ−４Ａの長期抑圧（ＬＴＤ）に及ぼす効果の用量−応答関係を示す。１μＭのＧＬＹＸ−１３とＣＭ−４ＡはいずれもＬＴＤの強度を有意に減じたが、低濃度では変化の強度はより小さかった。（０．００１μＭは薬物追加なしを表すことに注意；各ポイントは８〜１０切片の平均±標準誤差）。
【０３９１】
実施例１９  長期増強（ＬＴＰ）アッセイ手順２
この実施例では、試験化合物がＬＴＰに及ぼす影響を決定するアッセイを示す。
【０３９２】
Zhang et al. (2008)に記載されるようにアッセイを行った。スプラーグドーリーラット（１２〜１８日齢；Taconic Farms社）をイソフルランで深麻酔して断頭した。脳を速やかに除去し、１２４ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＫＣｌ、２ｍＭのＭｇＳＯ４、２ｍＭのＣａＣｌ２、１．２５ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、２６ｍＭのＮａＨＣＯ３、１０ｍＭのブドウ糖を含む氷冷人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ、２〜４℃）（ｐＨ７．４）に浸漬し、９５％Ｏ２／５％ＣＯ２ガスを連続的に供給した。脳を片側切断し、前頭葉を切り落とし、個々の半球をステージにシアノアクリレート接着剤を用いて糊付けし、スライシング中は氷冷ＡＣＳＦに浸漬し連続的に９５％Ｏ２／５％ＣＯ２ガスを供給した。厚み４００μｍの冠状切片をＶｉｂｒａｔｏｍｅ（Leica VT1200S）を用いて切りだし、インターフェース保持チャンバに移して室温で最低１時間インキュベートしてから、Ｈａａｓスタイルのインターフェース記録チャンバに移し、酸素を含ませた３ｍｌ／分ＡＣＳＦで３２±０．５℃で連続的に灌流した。低抵抗導出電極を薄肉ホウケイ酸ガラス（ＡＣＳＦ充填後１〜２ＭΩ）で作製し、ＣＡ１野領域の放射状層におけるシャッファー側枝末端野の先端樹状突起領域に挿入して興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）を記録した。双極ステンレス鋼刺激電極（FHC Co.社）をＣＡ３放射状層のシャッファー側枝−交連線維に配置し、定電流刺激の強度を３０秒に一度およそ最大半量のｆＥＰＳＰを誘発するように調節した（５０〜１００ｐＡ；持続時間１００μｓ）。ｆＥＰＳＰの傾きを最大の陰性のふれの２０％〜８０％の線形補間によりＬＴＰ誘導前と後に測定し、傾きは実験開始の少なくとも１５分前は±１０％以内で安定していることを確認した。試験化合物（１μＭ）の灌流液中投与をシャッファー側枝刺激トレインの投与の３０分前に行い、ＬＴＰを誘発した。ＬＴＰは、２００ｍｓのバースト間隔で投与される各１０×１００Ｈｚ／５パルスバーストの４つの高周波θバースト刺激トレインでシャッファー側枝軸索を刺激して誘導した。各トレインの持続時間は２秒で、トレインは１５秒間隔で投与した。信号をＭｕｌｔｉｃｌａｍｐ  ７００Ｂ増幅器を用いて記録し、Ｄｉｇｉｄａｔａ  １３２２（Axon Instruments社、カリフォルニア州フォスターシティ）を用いてデジタル処理した。データはＩＢＭ互換性パーソナルコンピュータでｐＣｌａｍｐソフトウェア（Axon Instruments社  バージョン９）を用いて分析した。
【０３９３】
図８に示すように、ＣＭ−６Ａ、ＣＭ−７Ａ、ＣＭ−８ＡおよびＣＭ−９Ａ（１μＭ）は、ＣＡ１錐体神経細胞で記録されるラットのシャッファー側枝誘起のＮＭＤＡ  ＥＰＳＣの高周波刺激後の長期増強を増大させた。＊Ｐ＜０．０５。
【０３９４】
実施例２０  ポーソルト試験手順１
この実施例は、試験化合物の抗鬱剤活性を評価するポーソルト試験を示す。
【０３９５】
実験は、Burgdorf et al. (2009) “The effect of selective breeding for differential rates of 50-kHz ultrasonic vocalizations on emotional behavior in rats,” Devel. Psychobiol., 51:34-46に記載のように行った。雄のスプラーグドーリーラット（２〜３月齢）に試験化合物（０．３から３０ｍｇ／ｋｇ；尾静脈注入による静脈内または胃管栄養法によりそれ自体）またはビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ無菌食塩水または２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−１−オンの１ｍｌ／ｋｇＤＭＳＯ）を盲検的に試験の１時間前に投与した。試験の日に、動物を、水道水を３０ｃｍまで入れた高さ４６ｃｍ×直径２０ｃｍの透明ガラスチューブに室温（２３°Ｃ±０．５°Ｃ）で５分間入れた。全ての動物は、各水泳セッション後、実験者がタオル乾燥した。２匹に１度水を換えた。動物をビデオ録画し、（動物の頭部を水上に維持するための最小限の動きと定義される）浮遊行動の全持続時間（秒）を盲検実験者が定量化した。
【０３９６】
【表９】
2015505296.tif 000089
ＮＴ＝試験せず。
【０３９７】
図９は、ＣＭ−４Ａ（０．１から１０ｍｇ／ｋｇ経口胃管栄養法）または無菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ経口）を最初の試験セッションの１時間前に投与した２〜３月齢の雄のＳＤラットにおけるラットポーソルト試験の平均±標準誤差浮遊時間を示す。動物は、最初の５分間のポーソルト試験の前日に単回の１５分間のポーソルト習慣化セッションを受けた。Ｎ＝９〜１０匹／群。結果は、用量と時間依存性の抗鬱剤効果を示す。
【０３９８】
図１０は、試験の１時間前に、ＣＭ−４Ａ（１ｍｇ／ｋｇ経口）または無菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ経口胃管栄養法）を投与される１０分前にＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロ−７−スルファモイル−ベンゾ［ｆ］キノキサリン−２，３−ジオン（ＮＢＱＸ）（１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内）または蒸溜水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ）を投与された２〜３月齢の雄のＳＤラットにおけるラットポーソルト試験の平均±標準誤差浮遊時間を示す。動物は、最初の５分間のポーソルト試験の前日に単回の１５分間のポーソルト習慣化セッションを受けた。Ｎ＝６匹／群。＊Ｐ＜０．０５フィッシャーのＰＬＳＤ事後検定対他の全群。結果から、ＡＭＰＡアンタゴニストＮＢＱＸがＣＭ−４Ａの抗鬱剤様効果をブロックすることが示される。
【０３９９】
実施例２１  ポーソルト試験手順２
この実施例は、試験化合物の抗鬱剤活性を評価するポーソルト試験を示す。
【０４００】
試験化合物の抗鬱剤様効果をPage et al. (1999)およびBurgdorf et al. (2009)に記載されるようにラットポーソルト試験で検証した。この試験には雄スプラーグドーリーラット（２〜３月齢）を使用した。単回試験セッションの１時間前に動物に試験化合物（０．３ｍｇ／ｋｇ静脈内）または無菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ尾静脈内）を投与した。雄スプラーグドーリーラット（２〜３月齢）の第２群に、初回試験セッションの１時間前に試験化合物（０．１ｍｇ／ｋｇ経口）または無菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ経口胃管栄養法）を投与し、投与後２４時間で再度試験した。投与１日前に水道水を３０ｃｍまで入れた高さ４６ｃｍ×直径２０ｃｍの透明プラスチックチューブに室温（２２〜２３℃）で動物を１５分間入れ（習慣化）、以後の試験日（複数可）は５分間入れた。２匹に１度水を換えた。動物をビデオ録画し、浮遊行動の全持続時間（秒）を盲検実験者が定量化した。ポーソルト試験ではＣＭ−６Ａ、ＣＭ−７Ａ、ＣＭ−８ＡおよびＣＭ−９Ａを試験した。ポーソルト試験ではＣＭ−５Ａは試験しなかった。
【０４０１】
図１１Ａに示すように、ＣＭ−６Ａ、ＣＭ−７Ａ、ＣＭ−８ＡおよびＣＭ−９Ａは、ＡＮＯＶＡ（分散分析）での有意な薬物効果（Ｆ（２，２４）＝１７．５，Ｐ＜０．０００１）と、次いでそれぞれの試験化合物対ビヒクル群の有意なフィッシャーのＰＬＳＤ事後検定（＊全てＰ＜０．０００１）により示されるように、ビヒクルと比べて単回投与（０．３ｍｇ／ｋｇ静脈内）後の投与後１時間の浮遊時間の減少により示される抗鬱剤様効果をポーソルト試験において生じた。Ｎ＝５〜６ラット／群。
【０４０２】
図１１Ｂと図１１Ｃに示すように、ＣＭ−６Ａ、ＣＭ−７Ａ、ＣＭ−８ＡおよびＣＭ−９Ａは、反復測定ＡＮＯＶＡでの有意な薬物効果（Ｆ（４，２５）＝５８．２，Ｐ＜０．０００１）と、次いで各時点での試験化合物対各ビヒクル群の有意なフィッシャーＰＬＳＤ事後検定（＊全てＰ＜０．０００１）により示されるように、ビヒクルと比べて単回投与（０．３ｍｇ／ｋｇ静脈内）の１時間後（図１１Ｂ）と２４時間後（図１１Ｃ）の浮遊時間の減少により示される抗鬱剤様効果をポーソルト試験において生じた。ｎ＝６ラット／群。
【０４０３】
図１２に示すように、陽性対照ＣＭ−４Ａ（１ｍｇ／ｋｇ、経口）、試験化合物（０．１ｍｇ／ｋｇ、経口）または無菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ、経口胃管栄養法）を投与された２〜３月齢の雄ＳＤラットのラットポーソルト試験において試験の１時間前と投与後２４時間の、ラットポーソルト試験の平均±標準誤差浮遊時間において頑健な抗鬱剤様効果が観察された。動物は、最初の５分間のポーソルト試験の前日に単回の１５分間のポーソルト習慣化セッションを受けた。Ｎ＝６匹／群。＊Ｐ＜０．０５  フィッシャーのＰＬＳＤ事後検定対ビヒクル。
【０４０４】
実施例２２  ラット新奇性誘導型食欲不振（novelty-induced hypophagia）（ＮＩＨ）試験
ラットＮＩＨ試験は以下のように実施した。動物を試験前夜に絶食させ、食餌（ｌａｂ  ｃｈｏｗ）をオープンフィールドの中央チャンバに配置した。ＮＩＨ試験後、動物のホームケージ内での摂食潜時を対照とした。即効性の抗鬱剤ならびに即効性ではない長時間作用性のＳＳＲＩ処置は、新奇ケージ内では摂食潜時を減少させたが、動物のホームケージでは減少しなかった。図１３は、単回１０分の試験セッションの１時間前にＣＭ−４Ａ（１ｍｇ／ｋｇ経口）または無菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ経口）で処置された２−３月齢の雄ＳＤラットのＮＩＨ試験における平均±標準誤差ライン接触潜時を示す。Ｎ＝１２匹／群。＊Ｐ＜０．０５。ＣＭ−４Ａ（１ｍｇ／ｋｇ経口）は、ラットＮＩＨ試験において、抗鬱剤／抗不安剤様の効果を生じる。
【０４０５】
実施例２３  ラット超音波発声（ＵＳＶ）試験
図１４Ａと１４Ｂは、ラットＵＳＶ試験の結果を示す。正の情動的学習をくすぐり無条件刺激（ＵＣＳ）トライアル前の条件刺激（ＣＳ）の間測定した（図１４Ａ）。動物は各６ＣＳと６ＵＣＳトライアルからなる１５秒のトライアル（全３分）を受けた。３分のセッションの終わりに、動物が自己投与的くすぐりに走る速度も測定した。図１４Ｂは、試験１時間前にＣＭ−４Ａ（１ｍｇ／ｋｇ経口）または無菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ経口）で処置した２〜３月齢の雄ＳＤラットのラットＵＳＶ試験における平均値±標準誤差快感と忌避ＵＳＶを示す。Ｎ＝７〜８匹。＊Ｐ＜０．０５。結果は、ラットＵＳＶ試験においてＣＭ−４Ａが正の情動的学習を増加させ、忌避２０−ｋＨｚＵＳＶを減少させることを示し、抗鬱剤効果が示唆される。
【０４０６】
実施例２４  ラットのオープンフィールド試験
図１５は、単回１０分セッションの１時間前にＣＭ−４Ａ（１ｍｇ／ｋｇ経口）または無菌食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ経口）で処置した２〜３月齢の雄ＳＤラットの、オープンフィールドでの平均±標準誤差ライン横断、中央コンパートメント横断および中央コンパートメント時間を示す。Ｎ＝７〜８匹。＊Ｐ＜０．０５。結果は、ＣＭ−４Ａが、歩行運動行動をもたらすことなしに、ラットオープンフィールド試験において抗不安剤様効果を生じることを示す。
【０４０７】
実施例２４  ラット加速ロータロッド試験
図１６は、食塩水ビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ経口）、ＣＭ−４Ａ（１、１０または１００ｍｇ／ｋｇ経口）または陽性対照ケタミン（３０ｍｇ／ｋｇ皮下）で前処置した２〜３月齢の雄ＳＤラットにおける加速ロータロッド試験（３００秒で４〜４０ＲＰＭ）の平均±標準誤差落下潜時（秒）を示す。動物を、対象内計画を用いて投与の直前（０分）、投与後３０分および投与後６０分で試験した。試験の１日前、動物は各セッションの間隔が少なくとも３０分で３回のロータロッド習慣化セッションを受け、最終習慣化セッションのロータロッドの成績は試験中０分時点との有意差がなかった。ビヒクルとＣＭ−４Ａ投与Ｎ＝５匹、ケタミンはＮ＝３匹。＊Ｐ＜０．０５。結果は、ラット加速ロータロッド試験においてＣＭ−４Ａ（１０−１００ｍｇ／ｋｇ経口）は、鎮静剤／運動失調様の効果を生じないことを示す。
【０４０８】
等価物
当業者であれば、ルーチンの実験を用いるだけでもここに記載される本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識するかまたは確認できよう。そのような等価物は以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【０４０９】
参照による組込み
全ての特許、公開特許出願、ウェブサイトおよび本明細書で引用したその他の参考文献の全容を、特に参照としてここに組み込む。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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