(57)【要約】Ｐ．エルギノーサＸｅｎ５、Ｅ．コリＸｅｎ１４、Ｓ．チフィムリウムＸｅｎ２６、Ｓ．アウレウスＸｅｎ３６及びＫ．ニューモニエＸｅｎ３９などの細菌に対する細菌付着阻害特性を有するポリマー化合物（Ｉ）が記載されている。基Ｒは、アルキル鎖又はより好ましくは、オリゴ（エチレンオキシド）（（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｉ）などの親水性部分によってポリマー主鎖に連結する置換フラノンによって形成される。基Ｒは、ポリマー主鎖に沿って同じ又は異なっていてもよい。本発明はまた、上に定義されたポリマー化合物を含む、ナノファイバー及びコーティングを提供する。2015525817.tif 000020【選択図】  なし
2015525817.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2015525817.tif 000014
（式中、Ｒは、
【化２】
2015525817.tif 000015
から選択され、
式中、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４の少なくとも１つは、ポリマー主鎖に対する連結基であり、残りの置換基は、水素、ハロゲン化物、アルキル、又はアリールの１つ又は複数である）
を有する、細菌付着阻害特性を有するポリマー化合物。
【請求項２】
前記連結基が、アルキル鎖である、請求項１に記載のポリマー化合物。
【請求項３】
前記連結基が、オリゴ（エチレンオキシド）（（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｉ）部分である、請求項１に記載のポリマー化合物。
【請求項４】
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及び／又はＲ４が、ポリマー主鎖に対して外部二重結合を形成する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリマー化合物。
【請求項５】
Ｒ１及びＲ２が組み合わさって、フラノンＡにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となり、Ｒ３及びＲ４が組み合わさって、フラノンＢにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となる、請求項４に記載のポリマー化合物。
【請求項６】
それぞれのＲが、ポリマー主鎖に沿って同じ又は異なっている、請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリマー化合物。
【請求項７】
Ｒが、
【化３】
2015525817.tif 000016
から選択される、請求項１に記載のポリマー化合物。
【請求項８】
式
【化４】
2015525817.tif 000017
（式中、Ｒは、
【化５】
2015525817.tif 000018
から選択され、
式中、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４の少なくとも１つは、ポリマー主鎖に対する連結基であり、残りの置換基は、水素、ハロゲン化物、アルキル、又はアリールの１つ又は複数である）
を有する、細菌付着阻害特性を有するポリマー化合物を含むナノファイバー材料。
【請求項９】
前記連結基が、アルキル鎖である、請求項８に記載のナノファイバー材料。
【請求項１０】
前記連結基が、オリゴ（エチレンオキシド）（（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｉ）部分である、請求項８に記載のナノファイバー材料。
【請求項１１】
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及び／又はＲ４が、ポリマー主鎖に対して外部二重結合を形成する、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のナノファイバー材料。
【請求項１２】
Ｒ１及びＲ２が組み合わさって、フラノンＡにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となり、Ｒ３及びＲ４が組み合わさって、フラノンＢにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となる、請求項１１に記載のナノファイバー材料。
【請求項１３】
それぞれのＲが、ポリマー主鎖に沿って同じ又は異なっている、請求項８に記載のナノファイバー材料。
【請求項１４】
Ｒが、式
【化６】
2015525817.tif 000019
から選択される、請求項８に記載のナノファイバー材料。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、細菌付着阻害特性を有するポリマー化合物に関する。
【０００２】
［発明の背景］
膜濾過は有望な技術であるにもかかわらず、その大規模な産業上の適用性は、部分的には貧弱な固有の膜特性が原因であるが、主に膜の汚れが理由で、制限される。膜の生物付着を制御する塩素などの化学的殺生物剤の使用が、広がっている。しかし、これらの化学的殺生物剤のほとんどは、より高いｐＨ値で、あまり効果的でなく、溶解された化学物質と反応し、害を及ぼす副生産物を生成する。ピッギング、ブラッシング、スワッビング及びジェッティングのような膜を浄化する物理的手段が報告されてきたが、その他の生物膜除去方法に次ぐ方法として、最もよく機能するだけである。バクテリオファージ、電流及び栄養制御の使用もまた探求されてきたが、これらの方法は、宿主特異性であるか又は機能するのに時間がかかり得るかのいずれかであり、あまり対費用効果が高くない。
【０００３】
汚れを制御するための膜表面の改変に焦点が今や移っている。銀、銅、亜鉛、ニッケル、マンガン、鉄及びリチウムなどの、異なる酸化状態の種々の金属元素が、抗菌特性を持つと報告されてきた。これらの金属のいくつかは、ポリマーとブレンドされ、濾材、創傷被覆材及びその他の適用に使用するためのファイバーを作ってきた。
【０００４】
クオラムセンシング（ＱＳ）は、細菌が情報交換し、生物膜形成の必須部分となる方法である。過去数年にかけて、細菌のＱＳに関して、多くの出版物及び大量のデータが取得可能になり、研究者らの間で、様々な取り組みを使用しＱＳを調節することへの関心が、高まってきた。ＱＳは、細菌生存のために必須というわけではないが、群生をベースとする細菌の挙動を統合するのに役立つ。したがって、ＱＳの阻害は、所望の表現型を妨げるだけである。生物膜は、抗生物質及び殺菌処理への高い抵抗性があり、この高い抵抗性は、持続的なヒトへの感染並びに工業環境における有害な腐食及び機器故障をもたらす。表面の改変及び新規の阻害剤の考案が、工業環境における生物膜形成の制御のために、検討されてきた。
【０００５】
濾過膜における生物膜形成は、膜技術に関連する大きな制限の一つである。これは、水質浄化装置において水の質及び量を減少させ、結果的に、より高い処理経費をもたらす。ＱＳへの干渉は、普遍的に有益な効果をもたらし得ないが、細菌を、伝統的な手段によって、より制御又は破壊しやすくする。
【０００６】
フラノン部分は、抗がん、強心、鎮痛、抗菌、抗ウイルス、抗真菌、及び抗炎症の特性など、種々の薬効成分を有することがわかってきた。微生物におけるＱＳを阻害するフラノン誘導体の使用は、新しい事象ではない。ＱＳの様々な経路を理解する生化学的研究が、実行されてきた。フラノン誘導体は、自然から単離され、また合成されてきた。これらのフラノン誘導体について特異なＱＳルートが、報告されてきた。フラノン化合物の臨床適用に関する研究が、広がっている。最近の論文において、フラノン部分によるＱＳの阻害によって、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）により引き起こされる軟腐病が、植物のタマネギを攻撃するのを防いだと報告された。Ｈｕｍｅらは、フラノンをポリスチレンと結合させて、融解成形を使用し、Ｓ．エピデルミデス（ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）の生物膜形成を８９％まで減少させた、表面にフラノン５〜８％を有するディスクを作った。Ｈｕｍｅらはまた、フラノンが、６５〜８５日の間に破損又は浸出して消失したことを示すインビボ試験のために、カテーテルを彼らのポリマーでコーティングした。
【０００７】
これは、フラノン仲介ＱＳ阻害の可能性及び広い適用性を示す。フラノンは、典型的な生物膜構造の成長に干渉するように見えるホモセリンラクトンの類似体であり、これらの生物体を殺生物剤によってより処理しやすくする。ＱＳを標的とすることはまた、深刻な制御問題を引き起こす細菌繁殖抵抗の危険性がないので、抗生物質の使用と比べて有利である。多くの天然物は、ラクトンとして分類される、３（２Ｈ）コアのフラノン構造を含有する。フラノン化合物の高い合成的及び生物学的重要性が理由で、それらの化学的性質は、過去２０年にわたって、かなり注目を浴びてきた。
【０００８】
［発明の概要］
本発明によれば、式
【化１】
2015525817.tif 000003
（式中、Ｒは、
【化２】
2015525817.tif 000004
から選択され、
式中、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４の少なくとも１つは、ポリマー主鎖に対する連結基、典型的にはアルキル鎖又はより好ましくは、オリゴ（エチレンオキシド）（（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｉ）などの親水性部分であり、残りの置換基は、水素、ハロゲン化物、アルキル、又はアリールの１つ又は複数である）
を有する、細菌付着阻害特性を有するポリマー化合物が提供される。
【０００９】
本発明のさらなる特徴は、ポリマー主鎖に対して外部二重結合を形成する置換基、好ましくは、組み合わさって、フラノンＡにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となるＲ１及びＲ２、並びに組み合わさって、フラノンＢにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となるＲ３及びＲ４を提供する。
【００１０】
本発明のなおさらなる特徴は、ポリマー主鎖に沿って同じ又は異なっている、それぞれのＲを提供する。
【００１１】
またさらなる特徴は、
【化３】
2015525817.tif 000005
から選択されるＲを提供する。
【００１２】
さらなる特徴は、その細菌に対する細菌付着阻害特性が、個別の及び混合細胞培養形態のＰ．エルギノーサＸｅｎ５、Ｅ．コリ（ｃｏｌｉ）Ｘｅｎ１４、Ｓ．チフィムリウム（ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）Ｘｅｎ２６、Ｓ．アウレウス（ａｕｒｅｕｓ）Ｘｅｎ３６及びＫ．ニューモニエ（ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｘｅｎ３９を含む、ポリマー化合物を提供する。
【００１３】
本発明はまた、上に定義されたポリマー化合物を含む、ナノファイバー及びコーティングを提供し、特に、式
【化４】
2015525817.tif 000006
（式中、Ｒは、
【化５】
2015525817.tif 000007
から選択され、
式中、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４の少なくとも１つは、ポリマー主鎖に対する連結基、典型的にはアルキル鎖又はより好ましくは、オリゴ（エチレンオキシド）（（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｉ）などの親水性部分であり、残りの置換基は、水素、ハロゲン化物、アルキル、又はアリールの１つ又は複数である）
を有する、細菌付着阻害特性を有するポリマー化合物を含むナノファイバー材料が提供される。
【００１４】
さらなる特徴は、ポリマー主鎖に対して外部二重結合を形成する置換基、好ましくは、組み合わさって、フラノンＡにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となるＲ１及びＲ２、並びに組み合わさって、フラノンＢにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となるＲ３及びＲ４を提供する。
【００１５】
なおさらなる特徴は、ポリマー主鎖に沿って同じ又は異なっている、それぞれのＲを提供する。
【００１６】
またさらなる特徴は、
【化６】
2015525817.tif 000008
から選択されるＲを提供する。
【００１７】
本発明は、以下の添付の図面に関連し、ほんの一例として、説明される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】ＳＭＡのフラノン含有バージョンへの転換を示す、ＳＭＡ及びＳＭＡ／フラノン１の重ね書きしたＡＴＲ−ＦＴＩＲの図である。
【図２】ＳＭＡ／フラノン１（Ａ）及びＳＭＡ／フラノン２（Ｂ）のナノファイバーの直径並びにＳＭＡ／フラノン１（Ｃ）及びＳＭＡ／フラノン２（Ｄ）のナノファイバーマットの孔径を示す図である。
【図３】３０分及び３６時間のそれぞれにわたる、ＳＭＡ／フラノン１のナノファイバーマットの抗菌（Ａ）及び細胞付着阻害（Ｂ）の可能性を示す図である。
【図４】３０分及び３６時間のそれぞれにわたる、ＳＭＡ／フラノン２のナノファイバーマットの抗菌（Ａ）及び細胞付着阻害（Ｂ）の可能性を示す図である。
【図５】混合菌株でのナノファイバーマットの抗菌（Ａ）及び付着阻害（Ｂ）の可能性を示す図である。
【図６】混合培養物の暴露の１０分後のフラノン改変ナノファイバーマットの抗菌有効性を図示する、インビボ画像である。
【図７】フラノン改変ナノファイバーマットの細胞付着阻害及び抗菌有効性を示す、蛍光顕微鏡画像である。
【図８】フラノン化合物がナノファイバーマットから濾水へ浸出しなかったことを示す、ＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
［図面に関連した詳細な説明］
細菌付着阻害特性を有するポリマー化合物が提供され、式
【化７】
2015525817.tif 000009
（Ｒは、
【化８】
2015525817.tif 000010
から選択され、
式中、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４の少なくとも１つは、ポリ（スチレン−ｃｏ−無水マレイン酸）によって形成されたポリマー主鎖に対する連結基を形成する）を有する。連結基は、典型的には、アルキル鎖又はより好ましくは、オリゴ（エチレンオキシド）（（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｉ）などの親水性部分である。残りの置換基は、水素、ハロゲン化物、アルキル、又はアリールの１つ又は複数である。
【００２０】
この置換基はまた、ポリマー主鎖に対して外部二重結合を形成し得る。この形態において、Ｒ１及びＲ２は、好ましくは、組み合わさって、フラノンＡにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となり、Ｒ３及びＲ４は、組み合わさって、フラノンＢにおいてフラノンに二重結合によって連結する１つの置換基となる。
【００２１】
それぞれのフラノン、Ｒは、ポリマー主鎖に沿って同じ又は異なり得る。
【００２２】
以下の例は、本発明による２つのフラノン修飾ポリ（スチレン−ｃｏ−無水マレイン酸）化合物を実証する。
【００２３】
材料
統計学的共重合体として約２８ｗｔ％の無水マレイン酸を含有する、商用品質のポリ（スチレン−ｃｏ−無水マレイン酸）（Ｍｗ１１０，０００）は、Ｐｏｌｙｓｃｏｐｅ、Ｇｅｌｅｅｎ、オランダによって供与された（等級、ＳＺ２８１１０）、２，５−ジメチル−４−ヒドロキシ−３（２Ｈ）−フラノン（ＤＭＨＦ、９８％）、ブタジエンモノオキシド（９８％）、塩化アクリロイル、２，２−（アミノエトキシ）エタノール（９８％）、ヨウ素（Ｉ２、９９％）及び水素化ナトリウム（ＮａＨ、９５％）を、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、南アフリカから取得し、さらに精製せずに使用した。Ｂｏｃオキシド（（Ｂｏｃ）２Ｏ、９８％）、グラブス（ＩＩ）触媒（９７％）、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３、９９．５％）及びチオ硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ３、９９％）を、Ｍｅｒｃｋ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓから取得した。この研究に使用した溶媒及び酸（テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）９９．９％、ジエチルエーテル（９８％）、酢酸エチル（９９．８％）、トリエチルアミン（９９．５％）、ジクロロメタン（ＤＣＭ、９９．８％）、ｐ−トルエンスルホン酸（９８％）、リン酸（Ｈ３ＰＯ４、９５％）及びトルエン（９９．８％））を全て、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。細菌株のＥ．コリＸｅｎ１４、Ｓ．チフィムリウムＸｅｎ２６、Ｐ．エルギノーサＸｅｎ５、Ｋ．ニューモニエＸｅｎ３９及びＳ．アウレウスＸｅｎ３６を、Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ  ＭＡ、ＵＳＡから取得した。細菌株は、酵素ルシフェラーゼを生成するフォトラブダス・ルミネッセンス  ルクスＡＢＣＤＥ（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ  ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｌｕｘＡＢＣＤＥ）オペロン（ルクス遺伝子）を含有し、ルシフェラーゼは、ＡＴＰ及び酸素の存在下で、光子を放射する。
【００２４】
フラノン１の合成
２−（２−（アミノエトキシ）エタノール２０．６７ｍＬ（１ｍｍｏｌ）と（Ｂｏｃ）２Ｏ、１０．５０ｇ（１ｍｍｏｌ）との磁気撹拌混合物に、室温、無溶媒条件下で、触媒量のヨウ素２．５３ｇ（１０ｍｏｌ％）を加えた。３時間、反応混合物を撹拌した後で、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（５％、５ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を、減圧下で蒸発させた。生成物を、溶媒系として酢酸エチル及びトリエチルアミン（７：１）によるシリカゲルクロマトグラフィーを使用し、さらに精製した。このステップに続いて、真空蒸発を行い、いずれの残留溶媒も除去し、所望のＢｏｃ保護２−（２−（アミノエトキシ）エタノール（１）を結果として得た。撹拌している間、ＴＨＦ２０ｍｌを、生成物１の６．８２ｇ（０．０３６ｍｏｌ）に徐々に加え、続いて、ＮａＨを１．０３ｇ（１．２当量）加えた。反応温度を、ＨＡＡＫＥ  Ｔｈｅｒｍｏ  ＤＣ５−Ｋ７５クライオスタットを使用し、−２０℃まで低下させた。温度が−２０℃に達し、水素ガスの発生が完了したとき、ブタジエンモノオキシド２．５０ｇ（０．０３６ｍｏｌ）を反応混合物に加え、さらに１時間撹拌した。次に、反応物を、室温でさらに１６時間撹拌した。Ｈ２発生が止まるまで、水（２０ｍＬ）を撹拌しながら、ゆっくり加えた。有機層を、ＣＨ２Ｃｌ２を使用し分離して、Ｈ２Ｏによって洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４を１０ｇ使用し乾燥し、２を６．１６ｇ（９０．３２％）得た。アルコール２（６ｇ、０．０２２ｍｏｌ）へ、塩化アクロリル２．３３ｇ（０．２６ｍｏｌ）及びエーテル５ｍＬを加えた。次に、混合物を水に注ぎ、有機層を分離した。過剰揮発物を、真空蒸発によって除去し、生成物３を５．８８ｇ（９８％）取得した。生成物３（５．５０ｇ、０．０１７ｍｏｌ）を、グラブスの第二世代触媒３．２９ｇ（０．０１ｍｏｌ）を加えることにより、メタセシスによって閉環させ、Ｂｏｃ保護５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）メチル）−２（５Ｈ）フラノン（４）を得て、トルエンの存在下のＨ３ＰＯ４による脱保護の後で、生成物（５）８４％を生成した。シリカ上でのカラムクロマトグラフィーによるさらなる精製は、これらに繰り返しカラムクロマトグラフィーを実施した場合、生成物収量が失われるので、退けられた。１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ＝３．４２（ｍ，２Ｈ），３．５８（ｍ，５Ｈ），３．８１（ｍ，２Ｈ），４．４２（ｓ，２Ｈ），４．９８（ｍ，１Ｈ），５．３５（ｍ＝１Ｈ），６．３２（ｓ＝２Ｈ）。
【００２５】
反応は、以下の図式にしたがって起こる。
【化９】
2015525817.tif 000011
【００２６】
フラノン２の合成
２−（２−アミノエトキシ）エタノールのアミン基を、前節に記載の通りＢｏｃ保護し、結果としてのＢｏｃ保護生成物（１）を、ｐ−トルエンスルホン酸（１００ｍｇ）及び無水エタノール（８０ｍＬ）の存在下、２５０ｍＬの丸底フラスコ内で、２，５−ジメチル−４−ヒドロキシ−３−（２Ｈ）−フラノン（２．０ｇ）と反応させた。乾燥管を環流冷却器の上部に接続し、混合物を６時間環流させた。次に、混合物を冷却して、固体ＮａＨＣＯ３（５ｇ）と振動させて、ＮａＨＣＯ３の２ｍｍ層を通して濾過し、酸触媒を除去した。生成物は、出発材料とＢｏｃ保護生成物との両方を含有したが、おそらくその理由は、ｐ−トルエンスルホン酸が、２−（２−アミノエトキシ）エタノールを脱保護したからである。カラムクロマトグラフィーを使用し、Ｂｏｃ保護４−（２−（２−アミノエトキシ）−２，５−ジメチル−３（２Ｈ）−フラノンを精製した。これに次いで、溶媒としてトルエンの存在下、Ｈ３ＰＯ４、４当量を使用して脱保護し、収率７８％を得た。
【００２７】
５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）メチル）−２（５Ｈ）フラノン及び４−（２−（２−アミノエトキシ）−２，５−ジメチル−３（２Ｈ）−フラノンのモル質量は、エレクトロスプレー質量分析法によって確認した。ＥＳ−ＭＳスペクトルは、５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）メチル）−２（５Ｈ）フラノン及び４−（２−（２−アミノエトキシ）−２，５−ジメチル−３（２Ｈ）−フラノンのモル質量を、それぞれ、ｍ／ｚ２１５．０１及びｍ／ｚ２０１．１であると確認した。これは、計算上のモル質量、５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）メチル）−２（５Ｈ）フラノンについて２１５．１０１ｇ及び４−（２−（２−アミノエトキシ）−２，５−ジメチル−３（２Ｈ）−フラノンについて２０１．１１０ｇに一致する。１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ＝１．２２（ｓ，３Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．９８（ｍ，２Ｈ），３．３２（ｍ，４Ｈ），３．６２（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｍ．１Ｈ），６．６７（ｓ，２Ｈ）。
【００２８】
反応は、以下の図式にしたがって起こる。
【化１０】
2015525817.tif 000012
【００２９】
フラノン化合物のＳＭＡへの固定化
撹拌機を備えた三口丸底フラスコ内に、ＳＭＡを０．５ｇ（０．００２５ｍｏｌ  ＭＡｎｈ）を入れ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２０ｍＬ）を、溶媒として加えた。次に、溶液を７０℃で撹拌した。ＳＭＡを完全に溶解した後で、４−（２−（２−アミノエトキシ）−２，５−ジメチル−３（２Ｈ）−フラノン１ｇ（０．００５１ｍｏｌ）を、連続撹拌によって滴下した。これは、反応物のゲル化をもたらし、激しく撹拌し１５０℃まで温度を上昇させることで、透明で金色の溶液を結果として得た。次に、この溶液を、回転蒸発、続いて真空蒸発を使用し脱水し、いずれの残留溶媒も除去して、収率９１％で最終生成物を得た。５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）メチル）−２（５Ｈ）フラノンの場合、ＳＭＡを１．０６９ｇ（０．００５１ｍｏｌ  ＭＡｎｈ）及び５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）メチル）−２（５Ｈ）フラノンを１．０２６ｇ（０．００５１ｍｏｌ）使用した。
【００３０】
固定化は、以下の反応図式にしたがって起こる。
【化１１】
2015525817.tif 000013
【００３１】
ＮＭＲ分光法
１次元の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）中、２９３Ｋ、５ｍｍのブロードバンドプローブで、Ｖａｒｉａｎのユニティー・イノバ（Ｕｎｉｔｙ  Ｉｎｏｖａ）６００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光器によって、取得した。緩和遅延１秒及び周波数６００ＭＨｚを、１Ｈ  ＮＭＲのために使用した。スペクトルは、ＴＭＳを内部基準とした。全てのピークは、ＴＭＳの低磁場側ｐｐｍで報告される。
【００３２】
エレクトロスプレー質量分析法
ＥＳ−ＭＳを、ＷａｔｅｒｓのＵＰＬＣを備えたＷａｔｅｒｓのＡＰＩ  Ｑ−ＴＯＦウルティマ（Ｕｌｔｉｍａ）を使用し実行した。試料（３μＬ）を、キャピラリー電圧３．５ｋＶ、コーン電圧３５Ｖ及びＲＦＩ値５０で注入した。イオン源温度を８０℃及び脱溶媒和温度を３５０℃に維持した。脱溶媒和ガスを３５０Ｌ／時及びコーンガスを５０Ｌ／時に設定した。
【００３３】
ＡＴＲ／ＦＴＩＲ
フラノン化合物のＳＭＡへの固定化を確認するために、ＡＴＲ−ＦＴＩＲ分光法を実施した。ＦＴＩＲガス分析器を備えた、Ｎｉｃｏｌｅｔ  Ｔｈｅｒｍｏによって提供されたネクサス（Ｎｅｘｕｓ）ＦＴ−ＩＲを、ＡＴＲ−ＦＴＩＲ調査のために使用した。分光器に、ダイヤモンド結晶を装着し、解像度６ｃｍ−１、赤外領域６００ｃｍ−１〜４０００ｃｍ−１で測定した。スペクトルは、１試料につき全部で３２回のスキャンをベースとした。
【００３４】
エレクトロスピニング
改変ポリマー（ＳＭＡ／５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）メチル）−２（５Ｈ）フラノン（ＳＭＡ／フラノン１）及びＳＭＡ／４−（２−（２−アミノエトキシ）−２，５−ジメチル−３（２Ｈ）−フラノン（ＳＭＡ／フラノン２））を、エタノールとメタノールとの（１：１）混合物に溶解し、１０ｗｔ／ｖｏｌ％のエレクトロスピニング溶液を形成した。ＴＨＦに溶解された純粋なＳＭＡを、対照実験のために使用した。Ｇｕｌｅ及び共同研究者らによって詳細に説明されているバブルエレクトロスピニングを、ナノファイバー生成のために使用した。全てのポリマー溶液を、室温でエレクトロスピンした。使用したウィジェットコレクターの距離は、２０ｃｍであり、相対湿度は、連続ファイバー形成のために、４５〜６０％の間に維持した。使用した印加電圧は、４５〜５０ｋＶの間であった。ナノファイバーマットを、１５分間、１２０℃での熱処理によって、架橋させた。
【００３５】
抗菌及び細胞付着阻害の特性評価
ナノファイバーの抗菌効率を測定するために、基本的なプレートカウント法技術を採用した。これらの試験を、生物発光イメージング及びライブ／デッドバックライト（ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ  ＢａｃＬｉｇｈｔ）によって確認し、生きているが培養できない（ＶＢＮＣ）細胞に対する抗菌効率を測定した。これは、抗菌ファイバーと接触している間、休眠状態に入る細胞を数量化すること及びナノファイバーの抗菌効率を過大評価する可能性を排除するために行われた。
【００３６】
プレートカウント
クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）・ニューモニエＸｅｎ３９、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）・アウレウスＸｅｎ３６、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）・コリＸｅｎ１４、シュードモナス・エルギノーサＸｅｎ５及びサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）・チフィムリウムＸｅｎ２６を使用し、改変ポリマーの抗菌及び細胞付着阻害の特性を試験した。それぞれの病原体を、３７℃、回転ホイール上で、一晩、適切な抗生物質と一緒に、ブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）培地（Ｂｉｏｌａｂ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）１０ｍＬ中で培養した。それぞれの菌株について、細胞を、３０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によってペレット状にし、生理水で３回洗浄した。スパイクされた水試料は、それぞれの菌株１０６ＣＦＵ／ｍＬを無菌の生理水５００ｍＬに播種することによって、調製された。いくつかの対照（細胞生存率）実験（ここでは報告されていない）を実行し、浸透圧溶解の不在を検証したが、この浸透圧溶解は、細胞（特にグラム陰性）が、富栄養培地から生理水中へ除去される場合に、しばしば起こる。ＣＦＵ／ｍＬを、バイオラッドスマートスペック（Ｂｉｏｒａｄ  ｓｍａｒｔ  ｓｐｅｃ）（商標）及び分光光度計を使用し、測定した。次に、スパイクされた水を、純粋なＳＭＡ（対照）の又はフラノン改変のナノファイバーマットを通して濾過した。次に、ナノファイバーを、生理水１０ｍＬを使用し数回すすいで、全ての残存する細菌細胞を洗い落し、洗い落した水を、ＢＨＩ寒天プレート上にプレーティングし、生きている細胞を測定した。これは、特定の接触期間後に行われ、時間に応じて細胞の死を測定した。３７℃で一晩、プレートをインキュベートした後で、コロニーカウント法を使用し、フィルターの抗菌効果を測定した。実験を、それぞれの病原体及びそれぞれの特定の接触期間について、３回実施した。細菌種が共存する実生活の状況を再現するために、１０６ＣＦＵ／ｍＬのストックからのそれぞれの病原体２０μＬを、ＢＨＩ培地１０ｍＬを含有する同じ管に播種し、菌株のカクテルを作って、抗菌試験を、前に記載した通り行った。
【００３７】
細胞付着阻害の特性評価
フラノン改変ナノファイバーマットの細胞付着阻害能力を、実行した。これを行うために、計量された（１０ｍｇ）フラノン改変ナノファイバーマットを、Ｅ．コリＸｅｎ１４、Ｓ．チフィムリウムＸｅｎ２６、Ｐ．エルギノーサＸｅｎ５、Ｋ．ニューモニエＸｅｎ３９及びＳ．アウレウスＸｅｎ３６を含有するＢＨＩ（１０ｍＬ）培地中で、培養した。これらの菌株を一晩培養した後で、ナノファイバーマットを、培地から除去し生理水中ですすいで、付着していないコロニーを除去した。これに続いて、プレートカウント法、生物発光イメージング及び蛍光イメージングの技術を施し、フラノン誘導体による付着阻害の度合いを確かめた。実際の生物膜成長及び生物膜構築は、研究されなかった、そしてこれらのナノファイバーに関する将来の研究は、これらの詳細を探求することになる。
【００３８】
生物発光イメージング（ＢＬＩ）
生物発光イメージング（ＢＬＩ）は、比較的新規の開発物であり、小実験動物における分子イメージングのための道具として、遺伝子改変された生命有機体から放射される光を使用する。ＢＬＩは、感受性が高く無害であり、生細胞又は生存細胞が検出されるだけの方法を提供する。この技術は、細胞によって放射された全ての光子を数量化するによって、細胞生存率を測定する。抗菌性評価においてＢＬＩシステムを適用するために、Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ  ＭＡ、ＵＳＡ）から取得された、操作された細菌株を、この研究における評価のために使用した。細菌株は、フォトラブダス・ルミネッセンス  ルクスＡＢＣＤＥオペロン（ルクス遺伝子）を有し、酵素ルシフェラーゼを生成し、ルシフェラーゼは、ＡＴＰ及び酸素の存在下、光子を放射する。これらの光子は、病原体における代謝活性を示す。ＢＬＩでの研究は、相関効率約０．９８で、プレートカウント法のデータと一致する。前節に記載されたのと同じ手順を使用したが、フィルターを洗い、プレーティングする代わりに、フィルターを、Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅによって供給された、ゼノジェン・ビボ・ビジョン・インビボ・イメージング・ルミナシステム（ＸＥＮＯＧＥＮ  ＶＩＶＯ  ＶＩＳＩＯＮ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｌｕｍｉｎａ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＩＶＩＳ））に入れ、リビングイメージ（Ｌｉｖｉｎｇ  ｉｍａｇｅ）（登録商標）３．１ソフトウエア（３．１Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用し、処理した。フラノン改変ナノファイバーマットを通じてスパイクされた水を濾過した後すぐに、また１０分間暴露した後で、イメージングを実施し、菌株によって放射された生物発光のレベルをモニターした。
【００３９】
蛍光実験
フラノン改変の及び対照のナノファイバーマット（１０ｍｇ）を、３７℃、回転ホイール上で、一晩、適切な抗生物質と一緒に「プレートカウント」の節に記載されている病原体カクテルに暴露した。次に、これらのマットを、ピンセットを使用し培地から取り出し、生理水を使用し軽くすすいだ。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｉｎｃ．から購入した、ＳＹＴＯ９及びヨウ化プロピジウム蛍光染料付きのライブ／デッドバックライトキットを使用し、イメージングのために検体を染色した。ＳＹＴＯ９は、全ての細胞を緑色に染色し、一方、ヨウ化プロピジウムは、細胞膜が損傷した細胞に浸透し、赤色に染色する。生存カウント及び総カウントは、１つの染色ステップで取得できる。染色は、１０分間、室温で、染料６．５μＭによって、試料をインキュベートすることにより行われた。次に、これらの試料を、Ｆ−ビューＩＩ（Ｆ−ｖｉｅｗ−ＩＩ）冷却ＣＣＤカメラ（Ｓｏｆｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を備えたＩＸ−８１倒立蛍光顕微鏡に取り付けた、Ｏｌｙｍｐｕｓのセル（Ｃｅｌｌ）（登録商標）システム（ｓｙｓｔｅｍ）で観察した。光源としてキセノンアークバーナー（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＧＭＢＨ）を使用し、像を、４７２ｎｍ又は５７２ｎｍの励起フィルターによって励起させた。発光は、ＵＢＧトリプルバンドパス発光フィルターキューブを使用し収集した。画像フレーム取得のために、ＯｌｙｍｐｕｓのプランアポＮ６０ｘ／１．４油浸対物レンズ（Ｐｌａｎ  Ａｐｏ  Ｎ６０ｘ／１．４  Ｏｉｌ  ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ）及びセル（登録商標）イメージングソフトウエアを使用した。セル（登録商標）ソフトウエアを使用して、像を処理し、背景除去した。
【００４０】
ガスクロマトグラフを連結した質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）
環境への化合物の浸出は、しばしば、健康及び汚染懸念を伴う。フラノン誘導体が、濾水に浸出していないかどうかを測定するために、ナノファイバーマットを通じて濾過された水を、ガスクロマトグラフを連結した質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）を使用し、フラノンの痕跡を求めてスクリーニングした。陽性対照として、５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）メチル）−２（５Ｈ）フラノン（フラノン１）０．０２Ｍによってスパイクされた蒸留水を分析し、蒸留水を陰性対照として使用した。ＧＣ−ＭＳを、ＣＴＣのコンビパルオートサンプラー（ＣｏｍｂｉＰＡＬ  Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ）を備えたＷａｔｅｒｓのＧＣＴ分光器を使用し、実施した。ＤＢ  ＸＬＢカラム（３０ｍ、ＩＤ  ０．２５ｍｍ、フィルムの厚さ０．１μｍ）を使用した。固相マイクロ抽出（ＳＰＭＥ）バイアル瓶を、分析に使用して、試料のヘッドスペースを、ＣＴＣのパルオートサンプラーを使用し分析した。
【００４１】
結果
【００４２】
フラノン化合物の合成及び特性評価
ＳＭＡ共重合体の重要性は、種々の目的のためのいくつかの領域における、それらの使用法に起因する。適用は、スチレン系ポリマー材料の特性を向上させるために使用する添加剤、コーティング添加剤、結合剤適用、建築材料のための添加剤、マイクロカプセル、ブレンド相溶化剤、金属へのポリオレフィンコーティングのための付着促進剤、並びに医療及び医薬適用を含む。ＳＭＡ共重合体はまた、官能性又は反応性ポリマーと考えられる。官能性は、共重合体の主鎖中の無水マレイン酸によってもたらされる。ＳＭＡの主鎖中の無水マレイン酸は、求核試薬（Ｈ２Ｏ、アルコール、チオール、アンモニア、アミン等）に対して反応性が高い。求核化合物の導入によって、新規の材料の合成が可能になる。ＳＭＡを、アミンと反応しやすいという理由で、これらの実験のために選択した。
【００４３】
フラノン１及びフラノン２と呼ばれる、懸垂しているアミンを有する２つのフラノン化合物（５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）メチル）−２（５Ｈ）フラノン及び４−（２−（２−アミノエトキシ）−２，５−ジメチル−３（２Ｈ）−フラノン）を合成した。
【００４４】
ＡＴＲ／ＦＴＩＲ分光法
ＡＴＲ／ＦＴＩＲ分光法を使用し、ＳＭＡ上のフラノン部分の固定化の成功を確認した。図１は、純粋なＳＭＡとフラノン１によって改変されたＳＭＡのＡＴＲ／ＦＴＩＲスペクトルを比較している。１１８５ｃｍ−１での吸収ピークは、アミド伸縮の特徴を示している。１６９４ｃｍ−１あたりの、形成されたイミド基は、イミド化ステップを確認し、非対称及び対称のＣ＝Ｏ伸縮振動の特徴を示している。１８５３ｃｍ−１でのピークの完全な消失は、無水物の環の完全な転換を示す。１５７６ｃｍ−１及びおよそ１５００ｃｍ−１あたりのシグナルは、それぞれ、芳香環の（Ｃ＝Ｃ）伸縮及び芳香環の（Ｃ−Ｈ）曲げ振動によって引き起こされる。９１６ｃｍ−１のバンドは、環状無水物基に起因する。
【００４５】
ナノファイバーの形態
ＳＭＡ／フラノン１とＳＭＡ／フラノン２の両方のナノファイバーは、溶媒のビーズ化がない、滑らかな形態を示した。これらのマット中の個々のファイバーは、平均１２０〜２２０ｎｍの間の直径を有した（図２Ａ及び２Ｂ）。フィルター適用におけるナノファイバー材料のための特定の直径範囲はないが、濾過理論によれば、より小さいファイバー直径が、よりよい濾過効率をもたらす。これは、より細いファイバーが、高い表面対体積の割合をもたらし、この高い割合が、濾過適用にとって有利だからである。これは、水濾過のための表面積を増加させたので、良い特性であった。これらのナノファイバーマットはまた、平均孔径１２０ｎｍ２未満を有した（図２Ｃ及び２Ｄ）。抗菌有効性を測定する際の精度のために、孔は、研究対象の細菌株のサイズより小さくなければならないので、マットの孔のサイズは、この研究にとって非常に重要である。記録された孔径は全て、２５０ｎｍ２未満であり、したがって、さらなる試験にとって適切であった。
【００４６】
本発明のナノファイバー材料は、例えば、当技術分野において既知のポリスチレン−フラノンポリマーから生成されたポリマーの融解成形によって形成された固体ディスクと比較して、高表面積の著しい有利性、並びに本発明のナノファイバー材料が、コーティング及び濾過適用において容易に使用できるという事実を提供する。
【００４７】
抗菌及び細胞付着阻害の測定
ＳＭＡ／フラノン１のナノファイバーは、暴露の３０分後、Ｐ．エルギノーサＸｅｎ５、Ｅ．コリＸｅｎ１４、Ｓ．チフィムリウムＸｅｎ２６、Ｓ．アウレウスＸｅｎ３６及びＫ．ニューモニエＸｅｎ３９の集団において、対数減少１．１までを示した（図３Ａ）。最初の１５分後のこれらのナノファイバーによって示された抗菌活性は、全ての菌株のための細菌集団において、対数減少０．５という結果になり、次第に増加し、したがって、暴露の３０分後、対数減少、少なくとも１を達成した。これらのナノファイバーはまた、３６時間後、対数少なくとも２．５まで、Ｐ．エルギノーサＸｅｎ５、Ｅ．コリＸｅｎ１４、Ｓ．チフィムリウムＸｅｎ２６、Ｓ．アウレウスＸｅｎ３６及びＫ．ニューモニエＸｅｎ３９の菌株による細胞付着を阻害した（図３Ｂ）。２（５Ｈ）コアを有する、遊離のフラノン誘導体は、細菌株に対して及び真菌類に対してすら抗菌活性を実証した。ゾーン阻害試験において、４−アミノ−５−ヒドロキシ−２（５Ｈ）−フラノンは、Ｅ．コリ、Ｓ．アウレウス、Ｐ．エルギノーサ、Ｋ．ニューモニエ及びエンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ）の平均１０ｍｍ阻害を実証した。Ｌｏｎｎ−Ｓｔｅｎｓｔｕｄ及び共同研究者らによって行われた研究はまた、フラノン化合物のこのクラスが、マウスにおけるＰ．エルギノーサ肺感染を、著しく減少させたことを示した。これらの研究は、抗菌及び細胞付着阻害効率を数量化する同様の技術を使用しなかったにもかかわらず、Ｌｏｎｎ−Ｓｔｅｎｓｔｕｄらは、２（５Ｈ）コアを有するフラノン誘導体が抗菌特性を有することを、説得力を持って示した。
【００４８】
ＳＭＡ／フラノン２から作られたナノファイバーは、Ｐ．エルギノーサＸｅｎ５の集団において、対数減少４までを示し、すぐに続いて、Ｓ．チフィムリウムＸｅｎ２６は、暴露の３０分後、対数３．４まで減少した（図７Ａ）。Ｅ．コリＸｅｎ１４、Ｓ．アウレウスＸｅｎ３６及びＫ．ニューモニエＸｅｎ３９は全て、暴露の３０分後、対数少なくとも２．５まで減少した。全ての菌株は、最初の５分後に、対数２超まで減少した。ＳＭＡ／フラノン２のナノファイバーはまた、暴露の３６時間にわたって、全ての菌株について対数３まで細胞付着を阻害した（図４Ｂ）。多くの研究が、３（２Ｈ）コアを有する、合成及び天然のフラノン誘導体の抗菌効率に関して行われた。最も興味深い報告の一つが、Ｋａｔａｏｋａによって公表され、この報告においてＫａｔａｏｋａは、日本の醤油の組成を検討し、醤油は、数ある特性の中でも特に、抗菌及び抗がん性であることがわかった。この醤油は、４−ヒドロキシ−２（又は５）−エチル−５（又は２）−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（ＨＥＭＦ）、２，５−ジメチル−４−ヒドロキシ−３（２Ｈ）−フラノン（ＤＭＨＦ）及び４−ヒドロキシ−５−メチル−３（２Ｈ）−フラノン（ＨＭＦ）を含有することがわかった。この醤油は、４〜６時間以内の接触で、菌株のＳ．アウレウス、シゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｐ）、ビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ）、サルモネラ属、及びＥ．コリの対数減少３までを実証した。同様の研究はまた、クレブシエラ・ニューモニエＸｅｎ３９、スタフィロコッカス・アウレウスＸｅｎ３６、エシェリキア・コリＸｅｎ１４、シュードモナス・エルギノーサＸｅｎ５及びサルモネラ・チフィムリウムＸｅｎ２６の集団において、対数減少４．５までを実証した。Ｓｕｎｇ及び共同研究者らはまた、Ｐ．エルギノーサ、Ｓ．アウレウス、Ｅ．コリ及びエンテロコッキ（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）の菌株に対するＤＭＨＦの並はずれた抗菌有効性を報告した。
【００４９】
フラノン２を含有するＳＭＡナノファイバーは、暴露の３０分後に、Ｐ．エルギノーサＸｅｎ５、Ｅ．コリＸｅｎ１４、Ｓ．チフィムリウムＸｅｎ２６、Ｓ．アウレウスＸｅｎ３６及びＫ．ニューモニエＸｅｎ３９細胞を含有する混合菌株培養物に対して、対数３．７５までの抗菌活性を達成した（図８Ａ）。一方、フラノン１で改変されたものは、対数減少約２を達成した。図５Ｂは、フラノン２改変ＳＭＡに由来するナノファイバーが、対数１．２の阻害を実証したフラノン１によって改変されたものと比較して、より高い細胞付着阻害効率（対数３）を示したことを図示している。
【００５０】
生物発光イメージング
Ｐ．エルギノーサＸｅｎ５、Ｅ．コリＸｅｎ１４、Ｓ．チフィムリウムＸｅｎ２６、Ｓ．アウレウスＸｅｎ３６及びＫ．ニューモニエＸｅｎ３９の混合菌株培養物への暴露後のナノファイバーマットのインビボイメージングを実行し、プレートカウント法から取得された結果を確認した。ＳＭＡ／フラノン２から作られたナノファイバーマットは、ＳＭＡ／フラノン１から作られたものと比較して、高い抗菌の可能性を実証した（図６）。
【００５１】
蛍光顕微鏡法
図１０において、生存／死亡細胞に対する染色後の蛍光顕微鏡法の結果を示す。対照ＳＭＡ画像は、付着したコロニーが、細胞の死を示し得るヨウ化プロピジウム（赤色）染料を吸収しなかった点で、抗菌又は細胞付着阻害能力がないことを示した（図７Ａ１及び７Ａ２）。フラノン改変ナノファイバーは、コロニー形成が見られなかった点で、細胞付着の阻害を実証した（図７Ｂ及び７Ｃ）。これらの結果はまた、細胞の非活性化を確認した、そしてこれは、ナノファイバーに何とか付着したが、非活性化された（細胞の死を示す赤色染料を吸収した）コロニーによって示されている（図７Ｂ２）。
【００５２】
浸出法
ＧＣ−ＭＳ実験を実行し、ファイバーからのフラノン誘導体の浸出を検討した。共有結合化合物について期待された通り、ＧＣ−ＭＳの結果は、フラノン化合物が、濾水中へ浸出しなかったことを示した。陽性対照（フラノン誘導体によってスパイクされた）において、１１．５９分で観察された特徴的なシグナルは、全ての浸出実験において不在であった（図８）。
【００５３】
これらの結果は、先行のポリマー化合物に鑑みて有望であり、先行のポリマー化合物において、フラノン分子はポリスチレンの背に結合され、６５〜８５日の間にフラノン分子の浸出を示した。
【００５４】
フラノン改変ＳＭＡが、Ｐ．エルギノーサＸｅｎ５、Ｅ．コリＸｅｎ１４、Ｓ．チフィムリウムＸｅｎ２６、Ｓ．アウレウスＸｅｎ３６及びＫ．ニューモニエＸｅｎ３９の個別の及び混合細胞培養形態に対して、良好な抗菌及び細胞付着阻害効率を実証することが、上記から明らかである。
【００５５】
本発明の範囲内に入るその他の化合物が存在することがわかる。また、本発明の化合物を有するナノファイバーを紡ぐ必要はなく、ナノファイバーは、表面コーティング、浸漬等などを含む、いずれかの適切な方法で使用し得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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