(57)【要約】  本発明は、脂肪酸アシル化アミノ酸(FA-aa)を含む成長ホルモン組成物に関し、それは、成長ホルモンの経口投与のための医薬組成物などの医薬組成物で使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
a.成長ホルモン化合物と、
b.少なくとも1つの脂肪酸アミノ酸(FA-aa)またはその塩であって、前記FA-aaの脂肪酸部分が12〜18個の炭素原子を有する、脂肪酸アミノ酸(FA-aa)またはその塩と
を含む、医薬組成物。
【請求項２】
経口医薬組成物である、請求項1に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記少なくとも1つの脂肪酸アミノ酸(FA-aa)が、一般式:
【化１】
2015536314.tif 000031
［式中、
R1は、10〜18個の炭素原子を含む脂肪酸鎖であり、
R2はH(すなわち水素)、CH3(すなわちメチル基)であるか、またはR2がR4に共有結合するときは原子価結合であり、
R3は、Hであるかまたは存在せず、
R4は、R2に共有結合するとき、-(CH2)3-を含む、アミノ酸側鎖である］
のものである、
請求項1または2に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記FA-aaの脂肪酸部分が少なくとも14個の炭素原子を有する、請求項1から3のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記FA-aaの脂肪酸部分が最大で16個の炭素原子を有する、請求項1から4のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記脂肪酸部分がパルミチン酸から誘導されるパルミトイルである、請求項1から5のいずれか一項に記載の経口医薬組成物。
【請求項７】
前記FA-aaのアミノ酸残基が、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、サルコシン(Sarc)、グリシン(Gly)、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)およびトレオニン(Thr)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく、請求項1から6のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記アミノ酸残基がグルタミン、グルタミン酸またはサルコシンである、請求項7に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記脂肪酸アシル化アミノ酸がN-パルミトイル-グルタミン酸ナトリウムまたはN-パルミトイル-サルコシンナトリウムである、請求項1から8のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記成長ホルモン化合物が30分を超えるT1/2を有する、請求項1から9のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
成長ホルモン化合物の生物学的利用能を増加させる方法であって、前記成長ホルモン化合物の医薬組成物中にFA-aaを含める工程を含む、方法。
【請求項１２】
成長ホルモン化合物の血漿濃度を増加させる方法であって、成長ホルモン化合物およびFA-aaを含む医薬組成物に個体の消化管を曝露させて、前記個体において前記成長ホルモン化合物の血漿濃度の増加をもたらす工程を含む、方法。
【請求項１３】
成長ホルモン化合物の取り込みを増加させる方法であって、成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaに個体の消化管を曝露させ、それによって前記個体における前記成長ホルモンの血漿濃度が前記少なくとも1つのFA-aaを含まない曝露と比較して増加する工程を含む、方法。
【請求項１４】
成長ホルモン関連の疾患または障害の処置のための方法であって、成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaを含む医薬組成物を投与する工程を含む、方法。
【請求項１５】
前記医薬組成物が請求項1から10のいずれか一項によって記載される、請求項11から14に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の技術分野は、治療用成長ホルモン化合物の経口送達のための脂肪酸アシル化アミノ酸(FA-aa)およびそのようなFA-aaを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
特定の高分子(例えばタンパク質およびペプチド)の欠乏またはその生成の完全な不全による多くの病理的状態は、治療用高分子、例えば親水性のペプチドまたはタンパク質の侵襲性で不便な非経口投与で処置される。この1つの例は、成長ホルモンの欠乏症または疾患または障害の処置のためのヒト成長ホルモン(hGH)の投与であり、そこでは、患者は、通常hGHの1日1回の投与による循環成長ホルモン量の増加から恩恵を受ける。これに比較して、経口投与される医薬はその非侵襲性のために望ましく、薬剤投与に関連する患者の不快を減少させ、薬物コンプライアンスを増加させる大きな可能性を秘めている。しかし、消化(GI)管での酵素的分解、薬物流出ポンプ、腸管粘膜からの不十分で変動する吸収、ならびに肝臓における初回通過代謝などのいくつかの障害が存在し、これまで治療用親水性タンパク質の経口送達のための製品は市販されていない。
【０００３】
成長ホルモン(GH)は、哺乳動物の下垂体前葉によって分泌されるポリペプチドホルモンである。種によるが、GHはおよそ22kDaの分子量に相当するおよそ190アミノ酸残基で構成されるタンパク質である。GHは、細胞表面受容体、GH受容体(GHR)を通して結合し、シグナル伝達する。GHは、成長促進、正常な体組成の維持、同化作用および脂質代謝において鍵となる役割をする。GHは、中間代謝、例えばグルコース取り込みの減少、脂肪分解の増加、ならびにアミノ酸取り込みおよびタンパク質合成の増加に対して直接的影響も及ぼす。このホルモンは、脂肪組織、肝臓、腸、腎臓、骨格、結合組織および筋肉を含む他の組織に対する影響も及ぼす。組換えhGHは生産されており、例えば、Genotropin(商標)(Pharmacia Upjohn社)、Nutropin(商標)およびProtropin(商標)(Genentech社)、Humatrope(商標)(Eli Lilly社)、Serostim(商標)(Serono社)、Norditropin(Novo Nordisk社)、Omnitrope(Sandoz社)、Nutropin Depot(Genentech社およびAlkermes社)として市販されている。さらに、例えばSomatonorm(商標)(Pharmacia Upjohn/Pfizer)のように、N末端に追加のメチオニン残基を有する変異体も販売されている。
【０００４】
ヒト成長ホルモンは、胃(ペプシン)、腸管内腔(キモトリプシン、トリプシン、エラスターゼ、カルボキシペプチダーゼなど)、およびGI管の粘膜表面(アミノペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、エンテロペプチダーゼ、ジペプチジルペプチダーゼ、エンドペプチダーゼなど)で見出される様々な消化酵素によって分解される。
【０００５】
プロテアーゼ安定化ヒト成長ホルモン化合物を得るための様々な経路が探究され、そのような分子の例はWO2011/089250およびWO2011/089255に記載されている。経口治療薬を得るための以降の課題は、経口投与される化合物の生物学的利用能の増加である。
【０００６】
第2に、経口投与されるタンパク質化合物は、消化管を通行する過程で吸収されなければならない。空腸は十二指腸および回腸に接続し、粘膜の大きな表面積に助けられて、糖、アミノ酸および脂肪酸などの消化生成物の吸収を専門にする。
【０００７】
空腸および回腸の内側を覆っている上皮細胞は、栄養素の受動輸送ならびにアミノ酸、小ペプチド、ビタミンおよびグルコースの能動輸送を可能にする。したがって、上皮細胞によるペプチドおよび特定の大きなタンパク質分子の取り込みは、経口医薬組成物の生成に決定的である。
【０００８】
複数の技術が探究されており、本発明は、化粧品の既知の成分であり、経皮吸収を増加させるために主に使用されている、脂肪酸アシル化アミノ酸の使用に関する。
【０００９】
Fogerらは親水性ペプチド薬物の経口吸収に及ぼす分子量の影響を記載し、そのような親水性ペプチド薬物の分子量の増加に比例して透過性が減少することを示した
(Amino Acids (2008) 25: 233〜241頁、DOI 10.1007/s00726-007-0581-5)。
【００１０】
低い刺激作用の新しい界面活性剤の研究は、アミノ酸から誘導される異なる界面活性剤の開発につながった(Mitjansら、2003; Benavidesら、2004; Sanchezら、2006)。FA-aaは、アミノ酸をベースとした界面活性剤であり、したがって低い毒性の軽度生分解性界面活性剤である。
【００１１】
US2004147578(WO0207506)は、シクロスポリンなどの疎水性高分子を含む疎水性分子のための透過強化剤として使用される脂肪酸アシル化アミノ酸に関する。
【００１２】
WO2001035998は、親水性のペプチドまたはタンパク質などの高分子のための経皮および経粘膜吸収促進剤として使用されるアシル化アミノ酸に関する。
【００１３】
WO2004064758は、本来アミド化されない部位で活性ペプチドがアミド化されている、インスリン、成長ホルモンおよびGLP-1などの医薬用ペプチドを送達するための経口組成物に関する。組成物は吸収強化剤を含むことができ、そのようなアシルカルニチンはPTH1-34の製剤でのラウロイルカルニチンの使用によって例示される。
【００１４】
US2005282756は、インスリンおよび吸収強化剤を含む乾燥粉末組成物に関する。
【００１５】
WO2003030865は、イオン性界面活性剤などの界面活性剤を含み、トリグリセリドなどの油または脂質化合物も含有し、長鎖エステル化脂肪酸をさらに含む、インスリン組成物に関する。
【００１６】
WO2004064758は、アシルカルニチン、リン脂質および胆汁酸などの吸収強化剤を含む、医薬用ペプチドを送達するための経口医薬組成物に関する。
【００１７】
US2006093632は、水に注入すると沈殿物を形成して持続放出製剤になる、注射可能な組成物に関する。
【００１８】
EP0552405は、インドメタシンおよびアントラニル酸の誘導体などの化合物のための経皮吸収促進剤を開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】WO2011/089250
【特許文献２】WO2011/089255
【特許文献３】US2004147578(WO0207506)
【特許文献４】WO2001035998
【特許文献５】WO2004064758
【特許文献６】US2005282756
【特許文献７】WO2003030865
【特許文献８】US2006093632
【特許文献９】EP0552405
【特許文献１０】WO2010/084173
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Amino Acids (2008) 25: 233〜241頁、DOI 10.1007/s00726-007-0581-5
【非特許文献２】Remington: The Science and Practice of Pharmacy、19版、1995
【非特許文献３】Handbook of Pharmaceutical Excipients、Roweら編、4版、Pharmaceutical Press (2003)
【非特許文献４】Pharm Res. 2001;18(8):1138〜45頁
【非特許文献５】Pharm Res. 2007;24(7):1346〜56頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
経口投与経路は成長ホルモンなどの高分子量化合物にとって高度に複雑であり、成長ホルモン化合物の有効な生物学的利用能を有し、患者の処置のために適する許容可能な組成物を確立するために、さらなる改良が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
驚くべきことに、脂肪酸アミノ酸(FA-aa)、例えばNアシル化アミノ酸は、経口投与の後に成長ホルモン化合物の吸収を増加させることが見出された。
【００２３】
治療高分子、例えば親水性のペプチドまたはタンパク質の低い毒性および経口生物学的利用能に対する増進効果のために、本発明によるFA-aaは経口医薬組成物で価値ある成分である。本発明によるFA-aaは、成長ホルモン化合物を含む経口医薬組成物で特に貴重である。これは、治療高分子(例えば成長ホルモン)の長期投与を要求する疾患にとって興味があるが、薬物の最も非侵襲性で無毒の投与がいかなる処置においても一般に有利であるので、それに限定されずに治療薬の散発的または一括投与のためにも興味がある。
【００２４】
これまで、主にそのような化合物の酵素分解および非常に低い腸管透過性の大きな課題のために、成長ホルモン化合物は経口製剤として入手できない。
【００２５】
本発明の一態様は、それらのアルファアミノ基が8〜18個の炭素の脂肪酸でアシル化された特定のアミノ酸、および成長ホルモン化合物などの有効成分を含む医薬組成物である。生物学的利用能の増加が観察されるので、医薬組成物の組成はそれを経口投与に好適にする。
【００２６】
本発明は、成長ホルモン化合物の経口投与に適する透過強化剤として作用するFA-aaを含む医薬組成物に関する。
【００２７】
本発明は、例示的な実施形態の開示から明らかになる、さらなる問題を解決することもできる。本発明は、経口投与される医薬組成物にとって特に重要である、成長ホルモン化合物の吸収および/または生物学的利用能を増加させるのに適する、FA-aaを含む医薬組成物に関する。
【００２８】
本明細書の開示から明らかになるように、対象の化合物は(脂肪酸)アシル化アミノ酸もしくは脂肪酸N-アシル化アミノ酸と記載されるか、または、単に略して、ペプチド様結合の形成によってアルファアミノ基が脂肪酸でアシル化される、アミノ酸基本構造を有する化合物を記載するFA-aaと記載される。
【００２９】
本発明の一態様は、少なくとも1つの成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaを含む医薬組成物に関する。本明細書に記載されるFA-aaは、コア構造として脂肪酸部分およびアミノ酸骨格を含む。腸に投与されるとき、化合物は成長ホルモン化合物の生物学的利用能を増加させることが見出された。さらなる態様では、組成物は、脂肪酸部分が12、14または16個の炭素原子を有するFA-aaを含む。
【００３０】
ヒト成長ホルモンと比較した成長ホルモン化合物の安定性の増加は、経口的に、および/または十分な間隔で投与することができる製剤を得るのに有益である。さらなる態様では、組成物は、30分を超えるT1/2を有する成長ホルモン化合物を含む。
【００３１】
さらなる態様では、本発明は、成長ホルモン化合物の医薬組成物中にFA-aaを含める工程を含む、成長ホルモン化合物の生物学的利用能を増加させる方法に関する。本発明の他の方法は、成長ホルモン化合物の血漿濃度を増加させることを目指し、成長ホルモン化合物およびFA-aaを含む医薬組成物に個体の消化管を曝露させ、それによって、前記個体において前記成長ホルモン化合物の血漿濃度の増加が観察される工程を含む。組成物にFA-aaを含めることは、少なくとも1つのFA-aaを含めずに化合物を投与するときに観察される増加よりも大きな、投与される成長ホルモン化合物の生物学的利用能または血漿濃度の増加を可能にすることを考慮することも意味がある。
【００３２】
本発明の一態様は、成長ホルモン関連の疾患または障害の処置のための方法であって、成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaを含む医薬組成物を投与する工程を含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】実施例8および11に記載される手順に類似した、C16-Glu有り(ソリッドマーカー)および無し(オープンマーカー)の製剤を用いた、腸管内投与後の時間の関数としての成長ホルモン類似体GH-A2の平均血漿濃度を示す図である。
【図２】水性緩衝液で製剤化した化合物GH-A1の薬物動態学的プロファイルから判定した平均AUCを示す図である。比較した脂肪酸アシル化アミノ酸の濃度は、30mg/mlである。平均AUC値は、様々な数のin vivo研究に基づく:強化剤なし(69個の研究、n=6)、C約12-サルコシネート(2つの研究、n=6)およびC16-サルコシネート(14個の研究、n=6)。
【図３】水性緩衝液で製剤化した化合物GH-A2の薬物動態学的プロファイルから判定した平均AUCを示す図である。比較した脂肪酸アシル化アミノ酸の濃度は、30mg/mlである。平均AUC値は、様々な数のin vivo研究に基づく:強化剤なし(12個の研究、nは6〜12)、C10-Gly(1つの研究、n=12)、C12-His(1つの研究、n=12)、C12-Pro(1つの研究、n=12)、C16-サルコシネート(5つの研究、nは6〜12)およびC16-Glu(1つの研究、n=12)。
【図４】水性緩衝液で製剤化した化合物GH-A3の薬物動態学的プロファイルから判定した平均AUCを示す図である。比較した脂肪酸アシル化アミノ酸の濃度は、30mg/mlである。平均AUC値は、様々な数のin vivo研究に基づく:強化剤なし(2つの研究、n=6)、C8-His(2つの研究、n=6)、C8-サルコシネート(2つの研究、n=6)、C10-Asp(2つの研究、n=6)、C10-Gln(2つの研究、n=6)、C12-Trp(2つの研究、n=6)、C12-サルコシネート(2つの研究、n=6)、C12-Pro(2つの研究、n=6)、C16-サルコシネート(7つの研究、n=6)、C16-Glu(2つの研究、n=6)およびC18-サルコシネート(2つの研究、n=6)。
【図５】水性緩衝液で製剤化した化合物GH-A1の薬物動態学的プロファイルから判定した平均AUCを示す図である。緩衝液は、脂肪酸アシル化アミノ酸C16-サルコシネート(30mg/ml)の有る無し、およびダイズトリプシン阻害剤、SBTI(2%)の有る無しで調製される。平均AUC値は、様々な数のin vivo研究に基づく:強化剤なし(69個の研究、n=6)、C16-サルコシネート(14個の研究、n=6)、SBTI(1つの研究、n=6)およびC16-サルコシネート+SBTI(1つの研究、n=6)。
【図６】水性緩衝液で製剤化した化合物GH-A2の薬物動態学的プロファイルから判定した平均AUCを示す図である。緩衝液は、脂肪酸アシル化アミノ酸C16-サルコシネート(30mg/ml)の有る無し、およびダイズトリプシン阻害剤、SBTI(2%)の有る無しで調製される。平均AUC値は、様々な数のin vivo研究に基づく:阻害剤なし(12個の研究、nは6〜12)、C16-サルコシネート(5つの研究、nは6〜12)、SBTI(3つの研究、nは6〜9)およびC16-サルコシネート+SBTI(5つの研究、nは6〜9)。
【図７】水性緩衝液で製剤化した化合物GH-A3の薬物動態学的プロファイルから判定した平均AUCを示す図である。緩衝液は、脂肪酸アシル化アミノ酸C16-サルコシネート(30mg/ml)の有る無し、およびダイズトリプシン阻害剤、SBTI(2%)の有る無しで調製される。平均AUC値は、様々な数のin vivo研究に基づく:阻害剤なし(2つの研究、n=6)、C16-サルコシネート(7個の研究、n=6)、SBTI(1つの研究、n=6)およびC16-サルコシネート+SBTI(1つの研究、n=6)。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
選択された定義
本明細書で用いられる用語「ポリペプチド」および「ペプチド」は、ペプチド結合によって接続される少なくとも2つのアミノ酸で構成される化合物を意味する。
【００３５】
用語「アミノ酸」は、本明細書において標準アミノ酸と呼ばれる、遺伝子コードによってコードされるアミノ酸の群を含む。遺伝子コードによってコードされない天然アミノ酸、ならびに合成アミノ酸がさらに含まれる。公知の天然アミノ酸には、γ-カルボキシグルタミン酸、ヒドロキシプロリン、オルニチン、サルコシンおよびホスホセリンが含まれる。公知の合成アミノ酸には、化学的合成によって製造されるアミノ酸、例えばAib(アルファアミノイソ酪酸)、Abu(アルファアミノ酪酸)、Tle(tert-ブチルグリシン)、β-アラニン、3-アミノメチル安息香酸、アントラニル酸が含まれる。
【００３６】
本明細書で用いられる用語「タンパク質」は、1つまたは複数のポリペプチドからなる生化学化合物を意味する。
【００３７】
本明細書で用いられるとき、用語「薬物」、「治療薬」、「医薬」または「薬」は、療法で使用することができる医薬組成物で使用される有効成分を指す。
【００３８】
天然で少なくとも300個のアミノ酸が記載されているが、これらのわずか20個がヒトペプチドおよびタンパク質の構成成分として一般的に見出される。
【００３９】
20個の標準アミノ酸は細胞によってペプチド生合成で使用され、これらは一般遺伝子コードによって規定される。20個の標準アミノ酸は、アラニン(Ala)、バリン(Val)、ロイシン(Leu)、イソロイシン(Ile)、フェニルアラニン(Phe)、トリプトファン(Trp)、メチオニン(Met)、プロリン(Pro)、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、グリシン(Gly)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)、システイン(Cys)、チロシン(Tyr)、アスパラギン(Asn)、グルタミン(Gln)、リシン(Lys)、アルギニン(Arg)およびヒスチジン(His)である。サルコシンは-Hと-CH3との交換によってグリシンから区別されるだけであり、以下に関して同様にアミノ酸とみなされる。
【００４０】
標準アミノ酸は、極性アミノ酸および無極性アミノ酸に分類することができる。極性アミノ酸は、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、リシン(Lys)、アルギニン(Arg)、ヒスチジン(His)、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)およびシステイン(Cys)であり、無極性アミノ酸はグリシン(Gly)、アラニン(Ala)、ロイシン(Leu)、バリン(Val)、イソロイシン(Ile)、メチオニン(Met)、プロリン(Pro)、チロシン(Tyr)、トリプトファン(Trp)およびフェニルアラニン(Phe)である。
【００４１】
極性アミノ酸は、非荷電極性アミノ酸[グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)およびシステイン(Cys)]および荷電極性アミノ酸[アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、リシン(Lys)、アルギニン(Arg)およびヒスチジン(His)]に細分化することができる。
【００４２】
無極性アミノ酸は疎水性によって分類することができ、その結果、無極性で疎水的に中性のアミノ酸はグリシンおよびアラニンであり、無極性で疎水性のアミノ酸はロイシン(Leu)、バリン(Val)、イソロイシン(Ile)、メチオニン(Met)、プロリン(Pro)、チロシン(Tyr)、トリプトファン(Trp)およびフェニルアラニン(Phe)である。
【００４３】
後者の群は、側鎖が脂肪族[ロイシン(Leu)、バリン(Val)、イソロイシン(Ile)、メチオニン(Met)およびプロリン(Pro)]または芳香族[チロシン(Tyr)、トリプトファン(Trp)、フェニルアラニン(Phe)]のいずれかであるかに基づいて分類することができる。
【００４４】
脂肪酸は、長い脂肪族テール(鎖)を有するカルボン酸である。
【００４５】
用語「脂肪酸アミノ酸」、「脂肪酸Nアシル化アミノ酸」または「アシル化アミノ酸」または「脂肪酸アシル化アミノ酸」は互換的に用いることができ、本明細書で用いる場合は、そのアルファアミノ基が脂肪酸でアシル化されるアミノ酸を指す。分子は、「FA-aa」と略して呼ばれる。
【００４６】
本明細書において用語「経口生物学的利用能」は、投与された薬物用量に対する、経口投与された後に全身の循環に到達する割合を意味する。定義上、医薬品が静脈内投与されるとき、その生物学的利用能は100%である。しかし、薬物が経口投与されるとき、分解、不完全な吸収および初回通過代謝のために有効成分の生物学的利用能は減少する。
【００４７】
用語「生物学的活性」は、関連する参照系での成長ホルモン化合物の活性を表すべきであり、例えば実施例1に記載されるBAFアッセイなどの当分野の技術者に公知である様々なアッセイで測定することができる。
【００４８】
本明細書で用いられる用語「界面活性剤」は、表面および界面、例えば限定されずに液体と空気、液体と液体、液体と容器または液体と任意の固体などの界面に吸着することができる任意の物質、特に洗浄剤を指す。
【００４９】
本明細書で用いられる用語「非イオン性界面活性剤」は、表面および界面、例えば液体と空気、液体と液体、液体と容器または液体と任意の固体などの界面に吸着することができ、その親水基(時には「ヘッド」と呼ばれる)に荷電基を有しない、任意の物質、特に洗浄剤を指す。非イオン性界面活性剤は、洗浄剤、例えばポリソルベート類、例えばポリソルベート-20、ポリソルベート-40、ポリソルベート-60、ポリソルベート-80、超精製ポリソルベート類(用語「超精製」は供給業者Crodaによってそれらの高純度Tween製品のために使用される)、ポロキサマー類、例えばポロキサマー188およびポロキサマー407、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン誘導体、例えばアルキル化およびアルコキシル化誘導体(Tween類、例えばTween-20またはTween-80)から選択することができる。
【００５０】
本明細書で用いる場合、用語「共界面活性剤」は、第1の界面活性剤が存在する場合、組成物または製剤に加えられる追加の界面活性剤を指す。
【００５１】
本明細書で用いる場合、用語「透過強化剤」は、薬物の吸収を促進する生物学的製剤または化学物質を指す。
【００５２】
用語「強化剤」は、所与のGH化合物のAUCを増加させるFA-aaの能力を試験するときに使用する。GH化合物のAUCは、試験化合物(強化剤)の存在下で測定され、強化剤(試験化合物)の非存在下で測定されるAUCと比較される。
【００５３】
本明細書で用いられる用語「保存剤」は、微生物活動(成長および代謝)を防止するか遅らせるために医薬組成物に加えられる化合物を指す。薬学的に許容される保存剤の例は、フェノール、m-クレゾールならびにフェノールおよびm-クレゾールの混合物である。
【００５４】
本明細書で用いるように、用語「マイクロエマルジョン前濃縮液（microemulsion pre-concentrate）」は、水性媒体で、例えば水または経口適用後の消化液で、マイクロエマルジョンまたはナノエマルジョン、例えば水中油型のマイクロエマルジョンまたはナノエマルジョン、膨張したミセル、ミセル溶液を自然発生的に形成する組成物を意味する。組成物は、例えば1:5、1:10、1:50、1:100またはそれ以上の希釈で水性媒体に希釈すると自己乳化する。一実施形態では、本発明による組成物は、直径100nm未満のサイズの粒子またはドメインを含むマイクロエマルジョンまたはナノエマルジョンを形成する。本明細書で用いられる用語「ドメインサイズ」または「粒径」は反復性の散乱単位を指し、例えば小角X線によって測定することができる。粒子/液滴サイズは、分散粒子または液滴の平均直径を推定する、動的光散乱(DLS)に基づくことができる。本発明の一実施形態では、ドメインサイズは150nm未満であり、別の実施形態では100nm未満、別の実施形態では50nm未満、別の実施形態では20nm未満、別の実施形態では15nm未満、例えば約12nmである。
【００５５】
本明細書において、「SEDDS」(自己乳化薬物送達系)は、親水性構成成分、界面活性剤、任意選択で共界面活性剤または脂質構成成分、および、GI管で遭遇するであろう弱い撹拌または消化運動の条件下で水性媒体に曝露したときに自然発生的に微細な水中油型エマルジョンを形成する、治療高分子の混合物と規定される。本明細書において、「SMEDDS」(自己微小乳化薬物送達系)は、親水性構成成分、界面活性剤、任意選択で共界面活性剤または脂質構成成分、および、GI管で遭遇するであろう弱い撹拌または消化運動の条件下で水性媒体に曝露したときに水中油型マイクロエマルジョンまたはナノエマルジョンを急速に形成する、治療高分子の等方性混合物と規定される。
【００５６】
本明細書において、「SNEDDS」(自己ナノ乳化薬物送達系)は、親水性構成成分、10を超えるHLBの少なくとも1つの界面活性剤、任意選択で共界面活性剤、および任意選択で脂質構成成分、および、GI管で遭遇するであろう弱い撹拌または消化運動の条件下で水性媒体に曝露したときにナノエマルジョン(例えばPCSまたはDLSで測定したときの直径が20nm未満の液滴サイズ)を急速に形成する、治療高分子の等方性混合物と規定される。
【００５７】
本明細書で用いるように、用語「エマルジョン」は、その構成成分を水性媒体と接触させたときに自然発生的に、または実質的に自然発生的に形成される、わずかに不透明であるか、乳白色であるか、または不透明なコロイド状粗大分散を指す。
【００５８】
本明細書で用いるように、用語「マイクロエマルジョン」は、その構成成分を水性媒体と接触させたときに自然発生的に、または実質的に自然発生的に形成される、クリアもしくは半透明であるか、わずかに不透明であるか、乳白色であるか、透明であるか、または実質的に透明であるコロイド分散を指す。
【００５９】
マイクロエマルジョンは動力学的に安定な系(時には熱力学的に安定な系と呼ばれる)であり、標準の光散乱技術によって、例えばWyatt DynaProプレートリーダーDLSまたはMALVERN ZETASIZER Nano ZSを用いて測定したときに150nm未満である平均径の、例えば固体または液体状態の均一に分散した粒子またはドメイン(例えば、液体脂質粒子または液滴)を含有する。一実施形態では、本発明による医薬組成物を水性媒体と接触させたとき、100nm未満、例えば50nm未満、40nm未満、および30nm未満の平均径の均一に分散した粒子またはドメインを含有するマイクロエマルジョンが形成される。したがって、用語「Z平均(nm)」は、前記マイクロエマルジョンの粒子またはドメインの粒径を指す。用語「PDI」は用語「多分散指数」の略記号であり、混合物中の分子または粒子のサイズの異質性の尺度である。
【００６０】
本明細書で用いるように、用語「ナノエマルジョン」は、その構成成分を水性媒体と接触させたときに自然発生的に、または実質的に自然発生的に形成される、直径が20nm未満(例えばDLSまたはPCSで測定したときに)の粒子または液滴サイズを有するクリアもしくは半透明であるか、わずかに不透明であるか、乳白色であるか、透明であるか、または実質的に透明であるコロイド分散を指す。一実施形態では、本発明による医薬組成物を水性媒体と接触させたとき、20nm未満、例えば15nm未満、10nm未満、および約2〜4nmを超える平均径の均一に分散した粒子またはドメインを含有するマイクロエマルジョンが形成される。
【００６１】
本明細書で用いるように、前濃縮液に言及するときの用語「自然発生的に分散する」は、本発明の組成物の構成成分を水性媒体と、例えば短時間、例えば10秒間、手で単に振盪することによって接触させたときに、水性媒体で希釈したときに、ナノエマルジョン、マイクロエマルジョン、エマルジョンおよび他のコロイド系などのコロイド状構造を生成することが可能である組成物を指す。一実施形態では、本発明による自然発生的に分散する濃縮液は、SEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSである。
【００６２】
脂肪酸アミノ酸を含む医薬組成物
本発明は、少なくとも1つの成長ホルモン化合物と、少なくとも1つの脂肪酸アミノ酸(FA-aa)とを含む医薬組成物に関する。市販されていない場合は、アミノ酸の遊離のアルファアミノ基と反応する当技術分野で公知のアシル化剤を使用するアミノ酸のアシル化によって、改変アミノ酸を容易に調製することができる。
【００６３】
本発明の一態様は、
a)少なくとも1つの成長ホルモン化合物と、
b)少なくとも1つの脂肪酸アミノ酸(FA-aa)またはその塩と
を含む医薬組成物に関する。
【００６４】
本発明の一実施形態では、組成物は、
a)少なくとも1つの成長ホルモン化合物と、
b)少なくとも1つの脂肪酸アミノ酸またはその塩と
を含む経口医薬組成物または経口投与のための組成物である。
【００６５】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は少なくとも1つの成長ホルモン化合物、および、天然、合成または標準のアミノ酸に基づく少なくとも1つのFA-aaを含む。FA-aaは、アミノ酸残基および脂肪酸の部分または鎖からなる。FA-aaは、それが基づくアミノ酸と同じ側鎖を含むとき、アミノ酸に基づくと言われる。非標準アミノ酸は、アミノ基の水素の代わりのメチルなどの追加の要素を含むことができ、FA-aaが非標準アミノ酸に基づくときにはそれも構造の一部とみなすことができる。
【００６６】
一実施形態では、本発明によるFA-aaのアミノ酸残基は、標準アミノ酸およびサルコシンの群から選択される。
【００６７】
理論によって縛られることなく、治療タンパク質の生物学的利用能を増加させるFA-aaの能力は、腸の細胞層の透過性を増加させるFA-aaの能力と関連づけることができる。HT29-MTX(E12)細胞に基づくin vitroアッセイは、実施例1Dおよび実施例20に記載される成長ホルモン化合物のために所与のFA-aaが細胞層の透過性を増加させるかどうか判定するのに使用することができる。
【００６８】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、HT29-MTX(E12)細胞を横切る成長ホルモン化合物の輸送を増加させる脂肪酸アミノ酸を含む。一実施形態では、脂肪酸アミノ酸は、成長ホルモン化合物の輸送を少なくとも1.5倍、例えば少なくとも1.8倍、例えば2倍増加させる。さらなる実施形態では、本発明の組成物に含まれる脂肪酸アミノ酸は、成長ホルモン化合物の輸送を少なくとも3倍、4倍または5倍増加させる。
【００６９】
一実施形態では、本発明によるFA-aaのアミノ酸残基は、アラニン、グリシン、プロリン、イソロイシン、バリン、メチオニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、ロイシンおよびフェニルアラニンを含む群から選択される。
【００７０】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は少なくとも1つの成長ホルモン化合物、および、極性または無極性のアミノ酸に基づく少なくとも1つのFA-aaを含む。
【００７１】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも1つの成長ホルモン化合物、ならびに、グリシン(Gly)、アラニン(Ala)、ロイシン(Leu)、バリン(Val)、イソロイシン(Ile)、メチオニン(Met)、プロリン(Pro)、チロシン(Tyr)、トリプトファン(Trp)、フェニルアラニン(Phe)およびサルコシンからなる群から選択される無極性アミノ酸に基づく、少なくとも1つのFA-aaを含む。
【００７２】
本発明の一実施形態では、無極性アミノ酸は、グリシン(Gly)、アラニン(Ala)およびサルコシン(Sarc)からなる無極性の疎水的に中性のアミノ酸の群から選択される。
【００７３】
本発明の一実施形態では、無極性アミノ酸は、ロイシン(Leu)、バリン(Val)、イソロイシン(Ile)、メチオニン(Met)、プロリン(Pro)、チロシン(Tyr)、トリプトファン(Trp)およびフェニルアラニン(Phe)からなる無極性の疎水性アミノ酸の群から選択される。
【００７４】
本発明の一実施形態では、無極性アミノ酸は、ロイシン(Leu)、バリン(Val)、イソロイシン(Ile)、メチオニン(Met)およびプロリン(Pro)からなる無極性の疎水性脂肪族アミノ酸の群から選択される。
【００７５】
本発明の一実施形態では、無極性アミノ酸は、チロシン(Tyr)、トリプトファン(Trp)およびフェニルアラニン(Phe)からなる無極性の疎水性芳香族アミノ酸の群から選択される。
【００７６】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は少なくとも1つの成長ホルモン化合物、および、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、リシン(Lys)、アルギニン(Arg)、ヒスチジン(His)、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)およびシステイン(Cys)からなる群から選択される極性アミノ酸に基づく少なくとも1つのFA-aaを含む。
【００７７】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は少なくとも1つの成長ホルモン化合物、および、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、リシン(Lys)、アルギニン(Arg)およびヒスチジン(His)からなる群から選択される荷電極性アミノ酸に基づく少なくとも1つのFA-aaを含む。
【００７８】
一実施形態では、FA'aaは、リシン(Lys)、アルギニン(Arg)およびヒスチジン(His)からなる群から選択される荷電極性アミノ酸に基づく。一実施形態では、FA'aaは、アスパラギン酸(Asp)およびグルタミン酸(Glu)からなる群から選択される荷電極性アミノ酸に基づく。
【００７９】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は少なくとも1つの成長ホルモン化合物、および、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)およびシステイン(Cys)からなる群から選択される非荷電極性アミノ酸に基づく少なくとも1つのFA-aaを含む。
【００８０】
一実施形態では、FA-aaは、グルタミン(Gln)およびアスパラギン(Asn)からなる群から選択される非荷電極性アミノ酸に基づく。
【００８１】
一実施形態では、FA-aaは、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)およびシステイン(Cys)からなる群から選択される非荷電極性アミノ酸に基づく。
【００８２】
一実施形態では、FA-aaは、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)およびトレオニン(Thr)からなる群から選択される非荷電極性アミノ酸に基づく。
【００８３】
さらなる一実施形態では、FA-aaは、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、サルコシン(Sarc)、グリシン(Gly)、リシン(Lys)、アルギニン(Arg)、ヒスチジン(His)、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)、チロシン(Tyr)およびシステイン(Cys)からなるアミノ酸の群から選択されるアミノ酸に基づく。
【００８４】
一実施形態では、FA-aaは、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、サルコシン(Sarc)、グリシン(Gly)、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)、チロシン(Tyr)およびシステイン(Cys)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく。
【００８５】
一実施形態では、FA-aaは、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、サルコシン(Sarc)、グリシン(Gly)、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)およびトレオニン(Thr)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく。
【００８６】
一実施形態では、FA-aaは、アスパラギン酸(Asp)、アスパラギン(Asn)、グルタミン酸(Glu)、サルコシン(Sarc)およびグルタミン(Gln)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく。
【００８７】
一実施形態では、FA-aaは、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン(Gln)、グルタミン酸(Glu)およびサルコシン(Sarc)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく。
【００８８】
一実施形態では、FA-aaは、グルタミン(Gln)、グルタミン酸(Glu)およびサルコシン(Sarc)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく。
【００８９】
本発明により、FA-aaはアミノ残基および、アミノ酸のアルファアミノ基に近隣の-C(=O)-基を与える、前記アミノ酸のアルファアミノ基のアシル化によってアミノ酸に付着する脂肪酸を含む。脂肪酸に由来するカルボニルおよび脂肪族鎖は、脂肪酸鎖または脂肪酸部分と総称される。
【００９０】
一実施形態では、アミノ酸残基のカルボキシル基は、カルボン酸(-COOH)の形、またはカルボキシレートイオン(COO-)の形であってもよい。カルボキシレートイオンは塩を通常形成し、そのような複合体のアミノ酸残基のカルボキシル基は、ヒスチジネート、トリプトファネートおよびサルコシネートなどのように通常「-エート」で表される。-COOH形はその遊離酸の形で呼ばれるが、一価のカチオンとの複合体のカルボキシレートイオンは塩の形である。
【００９１】
一実施形態では、本発明によるアミノ酸残基は、その遊離酸またはその塩の形である。
【００９２】
一実施形態では、本発明によるアミノ酸残基は、ナトリウム(Na+)塩またはカリウム(K+)塩の形である。
【００９３】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数8〜18の脂肪酸部分を含む。
【００９４】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数10〜18の脂肪酸部分を含む。
【００９５】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数12〜18の脂肪酸部分を含む。
【００９６】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数12〜16の脂肪酸部分を含む。
【００９７】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数14〜18の脂肪酸部分を含む。
【００９８】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数14〜16の脂肪酸部分を含む。
【００９９】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数10の脂肪酸部分を含む。
【０１００】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数12の脂肪酸部分を含む。
【０１０１】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数14の脂肪酸部分を含む。
【０１０２】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数16の脂肪酸部分を含む。
【０１０３】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、炭素原子数18の脂肪酸部分を含む。
【０１０４】
一実施形態では、脂肪酸部分は、飽和または不飽和の脂肪酸部分であってもよい。
【０１０５】
本発明によるFA-aaの一実施形態では、脂肪酸部分はアミノ酸のアルファアミノ基に位置する。
【０１０６】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、その遊離酸の形であるかその塩としてのアミノ酸残基を含む。本発明によるFA-aaは、一般式;
【０１０７】
【化１】
2015536314.tif 000002
【０１０８】
によって表すことができ、上式で、R1は8〜18個の炭素を含む脂肪酸鎖であり、R2はH(すなわち水素)またはCH3(すなわちメチル基)であり、R3はHであるかまたは存在せず、R4は上記の極性または無極性のアミノ酸のアミノ酸側鎖である。
【０１０９】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、一般式:
【０１１０】
【化２】
2015536314.tif 000003
【０１１１】
によって表すことができ、上式で、R1は8〜18個の炭素原子を含む脂肪酸鎖であり、R2はH(すなわち水素)またはCH3(すなわちメチル基)であり、R3はHであるかまたは存在せず、R4は上記の極性または無極性のアミノ酸のアミノ酸側鎖である。
【０１１２】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、一般式:
【０１１３】
【化３】
2015536314.tif 000004
【０１１４】
によって表すことができ、上式で、
R1は-C(=O)-(CH2)6〜16-CH3であり、
R2はH(すなわち水素)またはCH3(すなわちメチル基)であるか、またはR2がR4に共有結合するときは原子価結合であり、
R3はHであるかまたは存在せず、
R4は、プロリンと同様にR2に共有結合するとき、-(CH2)3-も含むアミノ酸側鎖である。
【０１１５】
一実施形態では、アミノ酸残基のカルボキシル基は、カルボン酸の形、またはカルボキシレートイオンの形であってもよく、これは、R3がH(カルボン酸)であるか、またはカルボキシレートイオンを記述する、存在しない構造に反映される。このイオンは、通常、例えば塩(最も広い定義ではその塩と呼ばれる)としてNa+などのカチオンとの複合体である。そのような複合体のアミノ酸残基のカルボキシル基は脱プロトン化され(COO-)、ヒスチジネート、トリプトファネートおよびサルコシネートなどのように通常「-エート」で表される。
【０１１６】
したがって本明細書の上に記載される脂肪酸アミノ酸(FA-aa)は、R1がアミノ酸のアミノ基へのアミド/ペプチド結合を通しての脂肪酸の連結によって得られるアミノ酸様構造を規定する。出発脂肪酸が8〜18個の炭素原子を含む飽和脂肪酸であるとき、これは-C(=O)-(CH2)6〜16-CH3構造の形成をもたらす。代替の実施形態では、出発脂肪酸が不飽和脂肪酸であるときは、具体的な構造は異なる。
【０１１７】
脂肪酸アミノ酸は、上式でR4と呼ばれるアミノ酸側鎖をさらに含む。天然アミノ酸のうち、プロリンは側鎖がアミノ基に共有結合しているので特殊な構造を有する。上の構造では、プロリン側鎖は、R4が-(CH2)3であるとき、R2がR4に共有結合している原子価結合であることによって規定される。
【０１１８】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、下に示す式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)または(t)からなる群から選択することができ、式中、R1は炭素数7〜17の脂肪族鎖であり、R2はH(すなわち水素)またはCH3(すなわちメチル基)であり、R3はHであるかまたは存在しない。
【０１１９】
一実施形態では、本発明によるFA-aaは、下に示す式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)または(t)からなる群から選択することができ、式中、R1は9〜15個の炭素原子を含む脂肪族鎖であり、R2はH(すなわち水素)またはCH3(すなわちメチル基)であり、R3はHであるかまたは存在しない。
【０１２０】
【化４】
2015536314.tif 000005
【化５】
2015536314.tif 000006
【化６】
2015536314.tif 000007
【化７】
2015536314.tif 000008
【０１２１】
上の一般式と対照的に、カルボニル基(-C(=O))は構造の一部であり、したがってR1の一部でない。
【０１２２】
天然アミノ酸側鎖に加えて、本発明によるFA-aaはサルコシンなどのアミノ酸変異体から誘導することができる。上の式に関し、サルコシンは、窒素原子に共有結合している追加のメチル基を有するグリシンアミノ酸残基、例えばR2=CH3およびR4=Hと見ることができ、そのように規定されるFA-aaのアミノ酸残基は、アミノ酸として本明細書に含まれるサルコシンの構造に等しい。
【０１２３】
一実施形態では、FA-aaは、以下からなる、脂肪酸部分に8つの炭素原子を含むFA-aaの群から選択することができる:カプリル酸アラニンナトリウム、N-オクタノイル-L-アラニン、カプリル酸イソロイシンナトリウム、N-オクタノイル-L-イソロイシン、カプリル酸ロイシンナトリウム、N-オクタノイル-L-ロイシン、カプリル酸メチオニンナトリウム、N-オクタノイル-L-メチオニン、カプリル酸フェニルアラニンナトリウム、N-オクタノイル-L-フェニルアラニン、カプリル酸プロリンナトリウム、N-オクタノイル-L-プロリン、カプリル酸トレオニンナトリウム、N-オクタノイル-L-トレオニン、カプリル酸セリンナトリウム、N-オクタノイル-L-セリン、カプリル酸トリプトファンナトリウム、N-オクタノイル-L-トリプトファン、カプリル酸バリンナトリウム、N-オクタノイル-L-バリン、カプリル酸サルコシンナトリウム、およびN-オクタノイル-L-サルコシン、カプリル酸チロシンナトリウム、N-オクタノイル-L-チロシン、カプリル酸グリシンナトリウム、N-オクタノイル-L-グリシン、カプリル酸グルタミンナトリウム、N-オクタノイル-L-グルタミン、カプリル酸アスパラギンナトリウム、N-オクタノイル-L-アスパラギン、カプリル酸アスパラギン酸ナトリウム、N-オクタノイル-L-アスパラギン酸、カプリル酸グルタミン酸ナトリウム、N-オクタノイル-L-グルタミン酸、カプリル酸システインナトリウム、N-オクタノイル-L-システイン、カプリル酸リシンナトリウム、N-オクタノイル-L-リシン、カプリル酸アルギニンナトリウム、N-オクタノイル-L-アルギニン、カプリル酸ヒスチジンナトリウム、N-オクタノイル-L-ヒスチジン。
【０１２４】
一実施形態では、FA-aaは、以下からなる、脂肪酸部分に10個の炭素原子を含むFA-aaの群から選択することができる:カプリン酸アラニンナトリウム、N-デカノイル-L-アラニン、カプリン酸イソロイシンナトリウム、N-デカノイル-L-イソロイシン、カプリン酸ロイシンナトリウム、N-デカノイル-L-ロイシン、カプリン酸メチオニンナトリウム、N-デカノイル-L-メチオニン、カプリン酸フェニルアラニンナトリウム、N-デカノイル-L-フェニルアラニン、カプリン酸プロリンナトリウム、N-デカノイル-L-プロリン、カプリン酸トレオニンナトリウム、N-デカノイル-L-トレオニン、カプリン酸セリンナトリウム、N-デカノイル-L-セリン、カプリン酸トリプトファンナトリウム、N-デカノイル-L-トリプトファン、カプリン酸バリンナトリウム、N-デカノイル-L-バリン、カプリン酸サルコシンナトリウムおよびN-デカノイル-L-サルコシン、カプリン酸チロシンナトリウム、N-デカノイル-L-チロシン、カプリン酸グリシンナトリウム、N-デカノイル-L-グリシン、カプリン酸グルタミンナトリウム、N-デカノイル-L-グルタミン、カプリン酸アスパラギンナトリウム、N-デカノイル-L-アスパラギン、カプリン酸アスパラギン酸ナトリウム、N-デカノイル-L-アスパラギン酸、カプリン酸グルタミン酸ナトリウム、N-デカノイル-L-グルタミン酸、カプリン酸システインナトリウム、N-デカノイル-L-システイン、カプリン酸リシンナトリウム、N-デカノイル-L-リシン、カプリン酸アルギニンナトリウム、N-デカノイル-L-アルギニン、カプリン酸ヒスチジンナトリウム、N-デカノイル-L-ヒスチジン。
【０１２５】
一実施形態では、FA-aaは、以下からなる、脂肪酸部分に12個の炭素原子を含むFA-aaの群から選択することができる:ラウロイルアラニンナトリウム、N-ドデカノイル-L-アラニン、ラウロイルイソロイシンナトリウム、N-ドデカノイル-L-イソロイシン、ラウロイルロイシンナトリウム、N-ドデカノイル-L-ロイシン、ラウロイルメチオニンナトリウム、N-ドデカノイル-L-メチオニン、ラウロイルフェニルアラニンナトリウム、N-ドデカノイル-L-フェニルアラニン、ラウロイルプロリンナトリウム、N-ドデカノイル-L-プロリン、ラウロイルトレオニンナトリウム、N-ドデカノイル-L-トレオニン、ラウロイルセリンナトリウム、N-ドデカノイル-L-セリン、ラウロイルトリプトファンナトリウム、N-ドデカノイル-L-トリプトファン、ラウロイルバリンナトリウム、N-ドデカノイル-L-バリン、ラウロイルサルコシンナトリウムおよびN-ドデカノイル-L-サルコシン、ラウロイルチロシンナトリウム、N-ドデカノイル-L-チロシン、ラウロイルグリシンナトリウム、N-ドデカノイル-L-グリシン、ラウロイルグルタミンナトリウム、N-ドデカノイル-L-グルタミン、ラウロイルアスパラギンナトリウム、N-ドデカノイル-L-アスパラギン、ラウロイルアスパラギン酸ナトリウム、N-ドデカノイル-L-アスパラギン酸、ラウロイルグルタミン酸ナトリウム、N-ドデカノイル-L-グルタミン酸、ラウロイルシステインナトリウム、N-ドデカノイル-L-システイン、ラウロイルリシンナトリウム、N-ドデカノイル-L-リシン、ラウロイルアルギニンナトリウム、N-ドデカノイル-L-アルギニン、ラウロイルヒスチジンナトリウム、N-ドデカノイル-L-ヒスチジン。
【０１２６】
一実施形態では、FA-aaは、以下からなる、脂肪酸部分に14個の炭素原子を含むFA-aaの群から選択することができる:ミリストイルアラニンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-アラニン、ミリストイルイソロイシンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-イソロイシン、ミリストイルロイシンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-ロイシン、ミリストイルメチオニンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-メチオニン、ミリストイルフェニルアラニンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-フェニルアラニン、ミリストイルプロリンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-プロリン、ミリストイルトレオニンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-トレオニン、ミリストイルセリンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-セリン、ミリストイルトリプトファンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-トリプトファン、ミリストイルバリンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-バリン、ミリストイルサルコシンナトリウムおよびN-テトラデカノイル-L-サルコシン、ミリストイルチロシンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-チロシン、ミリストイルグリシンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-グリシン、ミリストイルグルタミンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-グルタミン、ミリストイルアスパラギンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-アスパラギン、ミリストイルアスパラギン酸ナトリウム、N-テトラデカノイル-L-アスパラギン酸、ミリストイルグルタミン酸ナトリウム、N-テトラデカノイル-L-グルタミン酸、ミリストイルシステインナトリウム、N-テトラデカノイル-L-システイン、ミリストイルリシンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-リシン、ミリストイルアルギニンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-アルギニン、ミリストイルヒスチジンナトリウム、N-テトラデカノイル-L-ヒスチジン。
【０１２７】
一実施形態では、FA-aaは、以下からなる、脂肪酸部分に16個の炭素原子を含むFA-aaの群から選択することができる:パルミトイルアラニンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-アラニン、パルミトイルイソロイシンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-イソロイシン、パルミトイルロイシンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-ロイシン、パルミトイルメチオニンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-メチオニン、パルミトイルフェニルアラニンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-フェニルアラニン、パルミトイルプロリンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-プロリン、パルミトイルトレオニンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-トレオニン、パルミトイルセリンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-セリン、パルミトイルトリプトファンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-トリプトファン、パルミトイルバリンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-バリン、パルミトイルサルコシンナトリウムおよびN-ヘキサデカノイル-L-サルコシン、パルミトイルチロシンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-チロシン、パルミトイルグリシンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-グリシン、パルミトイルグルタミンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-グルタミン、パルミトイルアスパラギンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-アスパラギン、パルミトイルアスパラギン酸ナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-アスパラギン酸、パルミトイルグルタミン酸ナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-グルタミン酸、パルミトイルシステインナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-システイン、パルミトイルリシンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-リシン、パルミトイルアルギニンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-アルギニン、パルミトイルヒスチジンナトリウム、N-ヘキサデカノイル-L-ヒスチジン。
【０１２８】
一実施形態では、FA-aaは、脂肪酸部分がステアリン酸から誘導される、18個の炭素原子を含むFA-aaの群から選択することができる。したがって、FA'aaは以下からなる群から選択することができる:ステアロイルアラニンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-アラニン、ステアロイルイソロイシンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-イソロイシン、ステアロイルロイシンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-ロイシン、ステアロイルメチオニンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-メチオニン、ステアロイルフェニルアラニンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-フェニルアラニン、ステアロイルプロリンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-プロリン、ステアロイルトレオニンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-トレオニン、ステアロイルセリンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-セリン、ステアロイルトリプトファンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-トリプトファン、ステアロイルバリンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-バリン、ステアロイルサルコシンナトリウムおよびN-オクタデカノイル-L-サルコシン、ステアロイルチロシンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-チロシン、ステアロイルグリシンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-グリシン、ステアロイルグルタミンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-グルタミン、ステアロイルアスパラギンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-アスパラギン、ステアロイルアスパラギン酸ナトリウム、N-オクタデカノイル-L-アスパラギン酸、ステアロイルグルタミン酸ナトリウム、N-オクタデカノイル-L-グルタミン酸、ステアロイルシステインナトリウム、N-オクタデカノイル-L-システイン、ステアロイルリシンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-リシン、ステアロイルアルギニンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-アルギニン、ステアロイルヒスチジンナトリウム、N-オクタデカノイル-L-ヒスチジン。
【０１２９】
一実施形態では、FA-aaは、脂肪酸部分がオレイン酸から誘導される、18個の炭素原子を含むFA-aaの群から選択することができる。したがって、FA'aaは以下からなる群から選択することができる:オレオイルアラニンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-アラニン、オレオイルイソロイシンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-イソロイシン、オレオイルロイシンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-ロイシン、オレオイルメチオニンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-メチオニン、オレオイルフェニルアラニンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-フェニルアラニン、オレオイルプロリンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-プロリン、オレオイルトレオニンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-トレオニン、オレオイルセリンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-セリン、オレオイルトリプトファンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-トリプトファン、オレオイルバリンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-バリン、オレオイルサルコシンナトリウムおよびN-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-サルコシン、オレオイルチロシンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-チロシン、オレオイルグリシンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-グリシン、オレオイルグルタミンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-グルタミン、オレオイルアスパラギンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-アスパラギン、オレオイルアスパラギン酸ナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-アスパラギン酸、オレオイルグルタミン酸ナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-グルタミン酸、オレオイルシステインナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-システイン、オレオイルリシンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-リシン、オレオイルアルギニンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-アルギニン、オレオイルヒスチジンナトリウム、N-(E)-オクタデカ-9-エノイル-L-ヒスチジン。
【０１３０】
一実施形態では、FA-aaが脂肪酸部分に12個の炭素原子を有する場合は、FAaaは以下からなる群から選択されるアミノ酸に基づく:グルタミン(Gln)、グルタミン酸(Glu)、アスパラギン酸(Asp)、サルコシン(Sarc)、ロイシン(Leu)、バリン(Val)、チロシン(Tyr)およびトリプトファン(Trp)。
【０１３１】
一実施形態では、FA-aaが脂肪酸部分に14個の炭素原子を有する場合は、FAaaは以下からなる群から選択されるアミノ酸に基づく:グルタミン(Gln)、グルタミン酸(Glu)、D-グルタミン酸(D-Glu)、ロイシン(Leu)、バリン(Val)およびサルコシン(Sarc)。
【０１３２】
一実施形態では、FA-aaが脂肪酸部分に16個の炭素原子を有する場合は、FAaaは以下からなる群から選択されるアミノ酸に基づく:プロリン(Pro)、グルタミン(Gln)、グルタミン酸(Glu)、D-グルタミン酸(D-Glu)、アスパラギン酸(Asp)、D-アスパラギン酸(D-Asp)およびサルコシン(Sarc)。
【０１３３】
一実施形態では、FA-aaが脂肪酸部分に16個の炭素原子を有する場合は、FA-aaは以下からなる群から選択されるアミノ酸に基づく:アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)およびサルコシン(Sarc)。
【０１３４】
一実施形態では、FA-aaが脂肪酸部分に16個の炭素原子を有する場合は、FAaaは以下からなる群から選択されるアミノ酸に基づく:グルタミン(Gln)、グルタミン酸(Glu)およびサルコシン(Sarc)。
【０１３５】
一実施形態では、本発明によるFA-aaのアミノ酸残基は、遺伝子コードによってコードされないアミノ酸である。
【０１３６】
一実施形態では、本発明によるFA-aaのアミノ酸残基はサルコシンである。
【０１３７】
一実施形態では、本発明によるFA-aaのアミノ酸残基は、遺伝子コードによってコードされないアミノ酸の遊離酸または塩の形である。
【０１３８】
一実施形態では、本発明によるFA-aaのアミノ酸残基は、遊離酸サルコシンまたはサルコシネートの形の塩である。
【０１３９】
本発明の一実施形態では、経口医薬組成物は、少なくとも1つの成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaを含む。
【０１４０】
成長ホルモン化合物
本明細書で用いる用語「成長ホルモン化合物」は、配列番号1によって特定されるヒト成長ホルモンの機能性の少なくともいくつかを保持する成長ホルモン分子を意味し、この全体構造は、C53とC165およびC182とC189、または成長ホルモン変異体中の対応するアミノ酸残基を接続する2つの分子内ジスルフィド結合を含む。成長ホルモンタンパク質の構造は、3つのループ(L1〜3)によって接続される4つのヘリックス(ヘリックス1〜4)、およびC末端セグメントで構成される。ヒト成長ホルモンでは、ヘリックス1はAA残基6〜35で規定され、ヘリックス2はAA残基71〜98で規定され、ヘリックス3はAA残基107〜127で規定され、ヘリックス4はAA残基155〜184で規定される。
【０１４１】
成長ホルモンタンパク質または化合物の生物学的活性を判定するために、BAFアッセイが多用される(下記を参照)。
【０１４２】
本明細書で用いられる用語「成長ホルモン変異体」および「成長ホルモン類似体」は、天然に存在する成長ホルモンの構造、例えば配列番号1によって特定されるヒト成長ホルモンのそれから誘導されるアミノ酸配列を有する、成長ホルモンタンパク質を意味する。したがって、この用語は、成長ホルモン配列の1つまたは複数のアミノ酸残基が、他のアミノ酸残基によって置換されており、ならびに/または1つまたは複数のアミノ酸残基が成長ホルモンから削除されており、ならびに/または1つまたは複数のアミノ酸残基が成長ホルモンに付加および/もしくは挿入されている成長ホルモンタンパク質のために使用される。
【０１４３】
本明細書で用いられる用語「成長ホルモン誘導体」は、化学改変された成長ホルモンタンパク質またはその類似体を指し、そこにおいて、改変は、アミド、炭水化物、アルキル基、エステル、ペグ化等の付着の形である。
【０１４４】
本発明による成長ホルモン誘導体は、天然に存在する成長ホルモンであるか、あるいは、例えば成長ホルモン骨格の1つまたは複数の位置に側鎖を化学的に導入することによって、または成長ホルモンのアミノ酸残基の群を酸化もしくは還元することによって、または遊離のカルボキシル基をエステル基もしくはアミド基に変換することによって改変された成長ホルモン類似体である。成長ホルモン配列での単一のアミノ酸突然変異を通して導入される遊離のチオール基をアシル化することによって、他の誘導体が得られる。本明細書において、用語「アシル化された成長ホルモン」は、任意選択で成長ホルモンタンパク質へのリンカーを通す、1つまたは複数の親油性置換基の付着による成長ホルモンの改変をカバーする。
【０１４５】
本明細書において「親油性置換基」は、任意選択でリンカーを通して成長ホルモンタンパク質または類似体に付着している、脂肪酸または脂肪二酸からなる側鎖と理解される。
【０１４６】
したがって、成長ホルモン誘導体は、成長ホルモンまたは成長ホルモン変異体もしくは類似体の1つまたは複数のアミノ酸、例えば1つまたは複数のアミノ酸側鎖に付着している少なくとも1つの共有結合性改変を含む、ヒト成長ホルモンまたはヒト成長ホルモン類似体である。
【０１４７】
本明細書において用語「成長ホルモン融合」は、ペプチド結合によって第2のタンパク質配列に連結されている成長ホルモン配列を含むタンパク質分子に対して使用され、それは通常、前記成長ホルモン配列をコードするDNA配列と、任意選択でリンカー配列を含む前記第2のタンパク質をコードするDNA配列とを連結する組換え発現ベクターを使用する、融合タンパク質の発現によって得られる。成長ホルモン融合には、限定されずに、抗体Fc領域および/またはアルブミンタンパク質を含む融合が含まれる。
【０１４８】
本明細書で用いられる用語「成長ホルモン化合物」は、ヒト成長ホルモンの機能的特性を実質的に保持する成長ホルモン分子を総称する。したがって、本化合物は、成長ホルモン、成長ホルモン融合タンパク質、成長ホルモン変異体もしくは類似体、またはアシル化成長ホルモンも含む成長ホルモン誘導体であってもよい。
【０１４９】
一実施形態では、本発明による成長ホルモン類似体は、ヒト成長ホルモンと比較して8つ未満の改変(置換、欠失、付加)を含む。
【０１５０】
一実施形態では、成長ホルモン類似体は、ヒト成長ホルモンと比較して7つ未満の改変(置換、欠失、付加)を含む。一実施形態では、成長ホルモン類似体は、ヒト成長ホルモンと比較して6つ未満の改変(置換、欠失、付加)を含む。
【０１５１】
一実施形態では、成長ホルモン類似体は、ヒト成長ホルモンと比較して5つ未満の改変(置換、欠失、付加)を含む。一実施形態では、成長ホルモン類似体は、ヒト成長ホルモンと比較して4つ未満の改変(置換、欠失、付加)を含む。一実施形態では、成長ホルモン類似体は、ヒト成長ホルモンと比較して3つ未満の改変(置換、欠失、付加)を含む。一実施形態では、成長ホルモン類似体は、ヒト成長ホルモンと比較して2つ未満の改変(置換、欠失、付加)を含む。
【０１５２】
一連の実施形態では、成長ホルモンの成長ホルモン類似体は、配列番号1によって特定されるヒト成長ホルモンと少なくとも95、96、97、98または99%同一である。
【０１５３】
成長ホルモン化合物は、wtヒト成長ホルモンと比較して増加した血漿T1/2を好ましくは有する。タンパク質を分解から安定させる点突然変異などの、当分野の技術者に公知である様々な手段によってそれを提供することができる。血清タンパク質への共有結合または非共有結合によって、成長ホルモン化合物の循環時間を得ることもできる。直接コンジュゲーション(リンカーを任意選択で含む)によって、または成長ホルモンもしくはその変異体とのタンパク質融合によって、血清アルブミンを使用することができる。あるいは、アルブミンとの化学的連結、ならびに抗体Fc領域との融合または連結を考慮してもよい。アルブミンへの非共有結合的付着は、成長ホルモンに共有結合で結合するアシル基などのアルブミン結合剤の使用を通して得ることができる。
【０１５４】
一実施形態では、成長ホルモン化合物は、ヒト成長ホルモンと比較して増加したT1/2を有し、そこで、T1/2は実施例1.Cに記載される通りラットへの静脈内(i.v.)または皮下(s.c.)投与の後に測定される。wtヒト成長ホルモンは、記載されるアッセイでおよそ12〜14分のT1/2を有すると指摘されている。一実施形態では、成長ホルモン化合物は、30分を超えるT1/2を有する。さらなる実施形態では、T1/2は60分または1時間を超え、例えば2時間、好ましくは4時間を超える。
【０１５５】
一実施形態では、成長ホルモン化合物は、成長ホルモンタンパク質の1つまたは複数のアミノ酸がアシル化される成長ホルモンまたはその変異体である、成長ホルモン誘導体である。
【０１５６】
一実施形態では、成長ホルモン化合物は、タンパク分解性劣化(特異的突然変異による)に対して安定化される成長ホルモン変異体であり、そのような変異体は、成長ホルモンタンパク質の1つまたは複数のアミノ酸がさらにアシル化されてもよい。
【０１５７】
タンパク分解性劣化(特異的突然変異による)に対して安定化される成長ホルモンタンパク質の非限定例は、例えばWO2010/084173およびWO2011/089250に見出すことができる。
【０１５８】
成長ホルモン化合物の安定化は、製剤にプロテアーゼ阻害剤を含めることによって得ることができることが下でさらに記され、記載されてもいる。
【０１５９】
プロテアーゼ安定化成長ホルモンタンパク質変異体には、追加のジスルフィド架橋が導入される変異体が含まれる。追加のジスルフィド架橋は、好ましくはL3とヘリックス2を接続する。これは、2つの余分のCys aa残基を導入することによって得ることができ、それらは好ましい実施形態では、配列番号1のH2のAA84またはAA85およびL3のAA143またはAA144に対応する位置でwt aa残基の代わりに置換される。したがって本発明により、成長ホルモン変異体は、好ましくは配列番号1のL73C/S132C、L73C/F139C、R77C/I138C、R77C/F139C、L81C/Q141C、L81C/Y143C、Q84C/Y143C、Q84C/S144C、S85C/Y143C、S85C/S144C、P89C/F146C、F92C/F146CまたはF92C/T148Cに対応する突然変異の対を含む。さらなる実施形態では、成長ホルモン変異体は、配列番号1のL81C/Y143C、Q84C/Y143C、S85C/Y143C、S85C/S144CまたはF92C/T148Cに対応する突然変異の対を含む。
【０１６０】
一実施形態では、成長ホルモン化合物は、上記のプロテアーゼ安定化成長ホルモン変異体などの、成長ホルモンタンパク質またはその変異体の内部アミノ酸残基に付着しているただ1つのアシル化基を有する単一置換化合物などの、成長ホルモン誘導体である。
【０１６１】
本発明の医薬組成物に適するアシル化成長ホルモン化合物の非限定リストは、例えばWO2011/089255に見出すことができる。
【０１６２】
測定されたT1/2を含む例示的化合物を、ここで下に列挙する。
【０１６３】
【表１Ａ】
2015536314.tif 000009
【０１６４】
【表１Ｂ】
2015536314.tif 000010
【０１６５】
本発明の一実施形態では、成長ホルモン化合物を溶解し、生じた溶液を凍結または噴霧乾燥させた後のpHを、成長ホルモン化合物のpHの1単位、あるいは2単位、あるいは2.5pH単位上か下である標的pH値の値に調整する。一実施形態では、前記pH調整は、不揮発性の酸または塩基で実施する。
【０１６６】
成長ホルモン化合物は、本発明による医薬組成物の量で、総医薬組成物の最大で約20%、例えば最大で約10重量%、または約0.1%以上、例えば約1%以上の量で存在してもよい。本発明の一実施形態では、成長ホルモン化合物は、総組成物の約0.1%から約20%の量、さらなる実施形態では約0.1%から15%、0.1%から10%、1%から8%、または約1%から5重量%の量で存在する。しかし、成長ホルモン化合物の特定のレベルの選択は、使用する溶媒、例えば水溶液、極性の有機溶媒、または任意選択の親水性の構成成分もしくは界面活性剤、またはその混合物での成長ホルモン化合物の溶解性、投与様式ならびに患者のサイズおよび状態を含む、医薬分野で周知の因子に従って実行されるものとする。
【０１６７】
各単位投薬量は、好適には1mgから200mgの成長ホルモン化合物、例えば約1mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、50mg、80mg、90mg、100mg、150mg、200mgの成長ホルモン化合物、例えば5mgから200mgの間の成長ホルモン化合物を含有する。本発明の一実施形態では、各単位投薬量は、10mgから200mgの間の成長ホルモン化合物を含有する。さらなる実施形態では、単位剤形は、10mgから100mgの間の成長ホルモン化合物を含有する。
【０１６８】
本発明の一実施形態では、単位剤形は、20mgから80mgの間の成長ホルモン化合物を含有する。本発明のさらなる実施形態では、単位剤形は、30mgから60mgの間の成長ホルモン化合物を含有する。
【０１６９】
本発明の一実施形態では、単位剤形は、30mgから50mgの間の成長ホルモン化合物を含有する。そのような単位剤形は、療法の特定の目的によって1日に1〜5回の投与に適する。
【０１７０】
成長ホルモンなどのポリペプチドおよびペプチドの生成は、当技術分野で周知である。成長ホルモンタンパク質は、(ポリ)ペプチドをコードするDNA配列を含有し、ペプチドの発現を許す条件下において適する栄養培地で(ポリ)ペプチドを発現することが可能な宿主細胞を培養する工程を含む方法によって通常生成される。非天然のアミノ酸残基を含む(ポリ)ペプチドのためには、例えばtRNA突然変異体の使用によって非天然のアミノ酸が(ポリ)ペプチドに組み込まれるように、組換え細胞を改変するべきである。
【０１７１】
医薬組成物の製剤
したがって、本発明の1つの目的は、治療的に活性な量で成長ホルモン化合物を含む医薬製剤を提供することである。濃度は、溶液では0.25mg/mlから250mg/ml、または固体剤形では2.5mg/gから250mg/gの範囲内であってよい。
【０１７２】
同様に、FA-aaの濃度は、同様に溶液では0.25mg/mlから250mg/ml、または固体剤形では2.5mg/gから250mg/gの範囲内であってよい。
【０１７３】
一実施形態では、成長ホルモン化合物およびFA-aaの相対量は、10:1から1:10(W:W)、例えば5:1から1:5(W:W)、2:1から1:2(W:W)、または例えばおよそ1:1(W:W)である。
【０１７４】
前記製剤は、pHが2.0から10.0であることが好ましい。製剤は、緩衝系、保存剤、張性剤、キレート化剤、安定剤および/または界面活性剤、ならびにその様々な組合せをさらに含むことができる。医薬組成物での保存剤、等張剤、キレート化剤、安定剤および界面活性剤の使用は、当業者に周知である。Remington: The Science and Practice of Pharmacy、19版、1995を参照することができる。
【０１７５】
一実施形態では、本発明による医薬組成物は液体である。
【０１７６】
一実施形態では、医薬製剤は水性の製剤である。そのような製剤は一般的に溶液または懸濁液であるが、コロイド、分散液、乳剤および多相材料を含むこともできる。用語「水性の製剤」は、少なくとも50w/w%の水を含む製剤と定義される。同様に、用語「水溶液」は、少なくとも50w/w%の水を含む溶液と定義され、用語「水性懸濁液」は、少なくとも50w/w%の水を含む懸濁液と定義される。
【０１７７】
別の実施形態では、医薬製剤は凍結乾燥製剤であり、医師または患者は使用前にそれに溶媒および/または希釈剤を加える。
【０１７８】
別の実施形態では、医薬製剤は、カプセルに充填される凍結乾燥製剤である。
【０１７９】
さらなる実施形態では、医薬製剤は半固体または固体の製剤であってもよい。
【０１８０】
一実施形態では、経口用の医薬組成物は液体である。それにもかかわらず、経口用の医薬組成物が消化器系の内部と接触する前に飲み込まれることを可能にするために、液体をカプセル化などしてもよい。これは、腸溶コーティングの形であってもよい。本明細書で用いるように、用語「腸溶コーティング」は、経口剤形の崩壊および放出を制御するポリマーコーティングを意味する。液体剤形の崩壊および放出の部位は、治療的タンパク質の吸収が望まれる標的領域のpHに従って設計されてもよい。したがって、耐酸性保護コーティングおよび腸溶特性を有する任意の他のコーティングも含まれる。
【０１８１】
本明細書で用いる場合、用語「腸溶性の軟質または硬質のカプセル技術」は、腸溶特性を有する少なくとも1つの要素、例えば腸溶コーティングの少なくとも1つの層を含む、軟質または硬質のカプセル技術を意味する。本明細書で用いられる用語「遅延放出コーティング」は、経口投与の後に遅延してAPIを放出するポリマーコーティングを意味する。遅延放出は、pH依存性またはpH非依存性のポリマーコーティングによって達成することができる。
【０１８２】
製剤タイプと関係なしに、プロテアーゼ阻害剤が組成物に含まれてもよい。プロテアーゼ阻害剤の例として、例にはSBTI、BBIおよびキモスタチンが含まれるが、医薬組成物として用いるために代替の阻害剤が望まれてもよい。
【０１８３】
一実施形態では、FA-aaを水性液体製剤で使用することができ、そのような液体製剤は有機溶媒を含まないか10%以下の有機溶媒を含む。そのような製剤は好ましくは緩衝処理された製剤であり、pHは約4.0〜10.0、例えば5.0〜9.0、例えば5.5〜8.5である。緩衝剤は、ヒスチジン、トリス、HEPES、リン酸、グリシンおよび炭酸緩衝剤、およびそれらの混合物から選択することができる。緩衝剤は、リン酸、グリシンおよび炭酸緩衝剤、およびそれらの混合物から選択することができる。
【０１８４】
さらなる実施形態では、製剤は、pHが約6.0〜8.0のリン酸緩衝水性液体であるか、pHが約8.0〜8.5のグリシン/炭酸水素ナトリウム緩衝水性液体であってもよい。
【０１８５】
緩衝剤の濃度は、使用する緩衝剤によって決めることができ、本発明によって製剤化される個々の化合物によって異なってもよい。リン酸緩衝液は、5〜100mM、例えば5〜25mMの濃度で使用することができる。本発明により、グリシンは、5〜50mg/ml、好ましくは20mg/mlの濃度で使用することができ、炭酸水素ナトリウムは、2.0〜50mg/ml、例えば2.0〜5.0mg/ml、好ましくは2.4mg/mlの濃度で使用される。
【０１８６】
一実施形態では、マンニトールが組成物に含まれる; D-マンニトールは、1〜10mg/ml、好ましくは約2mg/mlの濃度で使用することができる。
【０１８７】
本発明による経口用医薬組成物は、さらなる賦形剤を含むことができる。Remington: The Science and Practice of Pharmacy、19版、1995を参照することができる。
【０１８８】
一実施形態では、製剤は非水性であってもよく、その用語は、本明細書において医薬組成物の調製の過程で水が加えられない組成物を指すときに使用される。加水なしで調製された組成物は、医薬組成物の取扱いの過程で、環境から、例えば組成物を封入するために使用する軟質カプセルまたは硬質カプセルから少量の水を取り込むことができることが当分野の技術者に公知である。さらに、成長ホルモン化合物および/または医薬組成物中の賦形剤の1つまたは複数は、本発明による医薬組成物を調製する前にそれに結合している少量の水を有してもよい。したがって、本発明による非水性医薬組成物は、少量の水を含有することができる。一実施形態では、本発明による非水性医薬組成物は、10%(w/w)未満の水を含む。別の実施形態では、本発明による組成物は、5%(w/w)未満の水を含む。別の実施形態では、本発明による組成物は、4%(w/w)未満の水を含み、別の実施形態では3%(w/w)未満の水、別の実施形態では2%(w/w)未満の水、さらに別の実施形態では1%(w/w)未満の水を含む。一実施形態では、本発明による組成物は、0%(w/w)の水を含む。
【０１８９】
一実施形態では、製剤は「半非水性」であってもよく、そのことは、医薬組成物の調製の過程で少量の水が加えられること、例えば濃縮GH保存溶液が非水性製剤に加えられることを意味する。一実施形態では、本発明による「半非水性」医薬組成物は、50%未満の水を含む。別の実施形態では、本発明による組成物は、40%(w/w)未満の水を含む。別の実施形態では、本発明による組成物は、30%(w/w)未満の水を含む。別の実施形態では、本発明による組成物は、20%(w/w)未満の水を含む。別の実施形態では、本発明による組成物は、15%(w/w)未満の水を含む。別の実施形態では、本発明による組成物は、10%(w/w)未満の水を含む。
【０１９０】
医薬組成物は、ゴマ油などの植物油を含むことができる。
【０１９１】
さらなる実施形態により、医薬組成物は、Miglyol 810、Miglyol 829またはMiglyol 840などの中性油を含むことができる。
【０１９２】
ポリソルベート20、ポリソルベート80、ラウログリコール、カプリオールおよび/またはラブラゾルなどの界面活性剤をさらに含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
【０１９３】
一実施形態では、FA-aaは、油および界面活性剤をベースとした送達系で使用することができる。一実施形態では、FA-aaは、界面活性剤をベースとした製剤で使用することができる。製剤は、界面活性剤として、ポリソルベート20(Tween 20)、ポリソルベート80(Tween 80)、ラウログリコール、カプリオール、ラブラゾルおよび/またはSpan80を含むことができる。
【０１９４】
一実施形態では、FA-aaは、界面活性剤をベースとした送達系で使用することができる。一実施形態では、FA-aaは、液体または半固体液体の界面活性剤をベースとした送達系で使用することができる。一実施形態では、FA-aaは、固体の界面活性剤をベースとした送達系で使用することができる。一実施形態では、FA-aaは、固体の油および界面活性剤をベースとした送達系で使用することができる。
【０１９５】
一実施形態では、FA-aaは、SEDDS、SMEDDSまたはSNEDDS組成物とも呼ばれる自己乳化薬物送達系で使用することができる。
【０１９６】
一実施形態では、FA-aaは、液体、半固体または固体の界面活性剤をベースとした送達系、例えばSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSで使用することができる。
【０１９７】
本発明によるFA-aaを含む液体または半固体のSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSは、固体の経口医薬剤形をもたらす、任意の利用可能な軟質または硬質のカプセル技術で封入することができる。したがって、本明細書で用いられる用語「固体」は、軟質または硬質のカプセル技術で封入される液体組成物を指すが、錠剤および多粒子も指す。
【０１９８】
本発明によるFA-aaを含む液体または半固体のSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSは、多孔性微粒子に封入することができる。多孔性微粒子はカプセルに充填するか、錠剤に製剤化することができる。カプセルまたは錠剤は、制御された送達のために腸溶コーティングされてもよい。
【０１９９】
本発明によるFA-aaを含む液体または半固体のSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSは、固体の経口医薬剤形をもたらす、任意の利用可能な軟質または硬質のカプセル技術で封入することができる。本発明の一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも1つの成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaを含む、SEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSである。さらなる実施形態では、組成物は、プロピレングリコールおよび任意選択で追加の構成成分を含むことができる。一実施形態では、追加の構成成分は、少なくとも1つの脂質および/または少なくとも1つの界面活性剤であってもよい。
【０２００】
一実施形態では、FA-aaは、液体または半固体液体および/または界面活性剤をベースとした送達系、例えばSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSで使用することができる。
【０２０１】
一実施形態では、FA-aaは、固体の界面活性剤をベースとした送達系、例えばSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSで使用することができる。
【０２０２】
一実施形態では、医薬組成物は、本発明によるFA-aaを含む液体または半固体のSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSであり、固体の経口医薬剤形をもたらす、任意の利用可能な軟質または硬質のカプセル技術で封入される。
【０２０３】
一実施形態では、本発明による組成物を封入するために使用する軟質カプセル技術は、無ゼラチンである。一実施形態では、Catalent(登録商標)からのVegicaps(登録商標)の名称で市場で知られている無ゼラチン軟質カプセル技術が、本発明による医薬組成物の封入のために使用される。
【０２０４】
一実施形態では、本発明による液体または半固体の製剤は、腸溶または遅延放出コーティングをさらに含む固体の経口医薬剤形をもたらす、任意の利用可能な軟質または硬質のカプセル技術で封入される。
【０２０５】
一実施形態では、本発明による液体または半固体の製剤は、固体の経口医薬投薬量をもたらす、任意の利用可能な腸溶性の軟質または硬質のカプセル技術で封入される。
【０２０６】
一実施形態では、本発明によるFA-aaを含む液体または半固体のSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSは、腸溶または遅延放出コーティングをさらに含む固体の経口医薬剤形をもたらす、任意の利用可能な軟質または硬質のカプセル技術で封入される。一実施形態では、本発明によるFA-aaを含む液体または半固体のSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSは、固体の経口医薬投薬量をもたらす、任意の利用可能な腸溶性の軟質または硬質のカプセル技術で封入される。
【０２０７】
一実施形態では、本発明によるFA-aaを含む液体または半固体のSEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSは、固体の経口医薬剤形をもたらす、任意の利用可能な軟質または硬質のカプセル技術で封入される。
【０２０８】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも1つの成長ホルモンタンパク質または化合物および少なくとも1つのFA-aaおよびプロピレングリコールを含む製剤である。
【０２０９】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも1つの成長ホルモンタンパク質または化合物および少なくとも1つのFA-aaおよびプロピレングリコールを含む。
【０２１０】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも1つのペプチドまたはタンパク質および少なくとも1つのFA-aa、プロピレングリコールを含む、SEDDS、SMEDDSまたはSNEDDSである。
【０２１１】
一実施形態では、経口医薬組成物は5から25%のプロピレングリコールを含む。
【０２１２】
一実施形態では、経口医薬組成物は、少なくとも1つのFA-aa、プロピレングリコール、および少なくとも1つの非イオン性界面活性剤を含む。
【０２１３】
一実施形態では、経口医薬組成物は、少なくとも1つのFA-aa、プロピレングリコール、ポリソルベート20および共界面活性剤を含む。ポリソルベート20は、その安定性および相対的非毒性が、いくつかの家庭用、科学的および薬理学的適用において洗浄剤および乳化剤として使用することを可能にする、ポリソルベート界面活性剤である。数字の20は、分子中に見出されるオキシエチレン-(CH2CH2O)-基の総数を指す。
【０２１４】
本発明の一実施形態では、経口医薬組成物は、少なくとも1つのFA-aa、プロピレングリコール、ポリソルベート20およびポリグリセリン脂肪酸エステルを含む。
【０２１５】
一実施形態では、経口医薬組成物は、少なくとも1つのFA-aa、プロピレングリコール、ポリソルベート20および共界面活性剤を含む。
【０２１６】
一実施形態では、経口医薬組成物は、少なくとも1つのFA-aa、プロピレングリコール、ポリソルベート20およびポリグリセリン脂肪酸エステル、例えばジグリセリンモノカプリレートを含む。
【０２１７】
本発明の特定の実施形態では、医薬組成物は医薬組成物で一般的に見出される追加の賦形剤を含むことができ、そのような賦形剤の例には、抗酸化剤、抗微生物剤、酵素阻害剤、安定剤、保存剤、フレーバー、甘味料、および、ここに参照により組み込まれる、Handbook of Pharmaceutical Excipients、Roweら編、4版、Pharmaceutical Press (2003)に記載される他の構成成分が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１８】
これらの追加の賦形剤は、総医薬組成物の約0.05〜5重量%の量であってもよい。抗酸化剤、抗微生物剤、酵素阻害剤、安定剤または保存剤は、総医薬組成物の最大で約0.05〜2.5重量%を一般的に提供する。甘味料または着香剤は、総医薬組成物の最大で約2.5重量%または5重量%を一般的に提供する。
【０２１９】
本発明による経口医薬組成物は、固体剤形として製剤化することができる。
【０２２０】
本発明による経口医薬組成物は固体剤形として製剤化することができ、カプセル剤、錠剤、糖衣剤、丸剤、ロゼンジ剤、散剤、押出品または射出成形剤および顆粒剤からなる群から選択することができる。
【０２２１】
本発明による経口医薬組成物は固体剤形として製剤化することができ、カプセル剤、錠剤、糖衣剤、丸剤、ロゼンジ剤、散剤および顆粒剤からなる群から選択することができる。
【０２２２】
本発明による経口医薬組成物は、多粒状剤形として製剤化することができる。
【０２２３】
本発明による経口医薬組成物は多粒状剤形として製剤化することができ、ペレット剤、微粒子剤、ナノ粒子剤、軟質または硬質のカプセル、腸溶コーティングされた軟質または硬質のカプセル中の液体または半固体充填製剤からなる群から選択することができる。
【０２２４】
一実施形態では、経口医薬組成物は腸溶コーティングなどの1つまたは複数のコーティングで調製することができるか、当技術分野で周知である方法によって遅延放出製剤として製剤化することができる。
【０２２５】
医薬組成物の使用
一実施形態では、本発明による医薬組成物は、医薬の調製のために使用される。
【０２２６】
一実施形態では、本発明による医薬組成物は、子供および大人の成長ホルモン欠乏の処置または予防のための医薬の調製のために使用される。循環成長ホルモンの濃度の増加が役に立つであろう他の疾患または障害も、本発明の医薬組成物を用いて処置または予防することができる。一実施形態では、本発明の医薬組成物は、循環成長ホルモンの量の増加の有益性が観察される疾患または状態の処置のためである。そのような疾患または状態には、成長ホルモン欠乏(GHD);ターナー症候群;プラーダー-ビリ症候群(PWS);ヌーナン症候群;ダウン症候群;慢性腎疾患、若年性関節リウマチ;嚢胞性線維症、HAART処置を受けている児童でのHIV感染症(HIV/HALS児童);妊娠期間のために低身長で産まれた低身長児童(SGA);超低出生体重(VLBW)で産まれたがSGAのない児童での低身長;骨格の異形成;低軟骨形成症;軟骨異形成;特発性の低身長(ISS);大人でのGHD;長骨、例えば脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手骨（matacarpea）、中足骨および指での、またはその骨折;海綿質骨、例えば頭蓋、手の基部および足の基部での、またはその骨折;例えば手、膝または肩での腱または靭帯手術の後の患者;仮骨延長術を有するか、それを受ける患者;腰または円板置換術、半月板修復、脊椎癒合術、または例えば膝、腰、肩、肘、手首または下顎での人工器官固定の後の患者;釘、ネジ、プレートなどの骨接合材料が固定された患者;骨折が未癒合または変形癒合の患者;例えば脛骨または第1足指の骨切断後の患者;移植片埋め込み後の患者;外傷または関節炎によって引き起こされる膝での関節軟骨変性;ターナー症候群患者での骨粗しょう症;男性での骨粗しょう症;長期透析中の成人患者(APCD);APCDでの栄養失調関連の心血管疾患;APCDでの悪液質の逆転;APCDでのがん;APCDでの慢性閉塞性肺疾患;APCDでのHIV;APCDの高齢者;APCDでの慢性肝疾患、APCDでの疲労症候群;クローン病;肝機能障害; HIV感染症の男性;短小腸症候群;中心性肥満; HIV関連のリポジストロフィ症候群(HALS);男性不妊性;大きな選択的手術、アルコール/薬物解毒または神経学的外傷の後の患者;加齢;虚弱な高齢者;骨関節炎;外傷を受けた軟骨;勃起不全;線維筋痛;記憶障害;うつ病;外傷性脳損傷;クモ膜下出血;超低出生体重;メタボリックシンドローム;糖質コルチコイド筋疾患;または児童での糖質コルチコイド処置による低身長が含まれる。成長ホルモンは、筋肉組織、神経組織または傷の治癒の加速;傷害を受けた組織への血液流の加速または向上;または傷害を受けた組織での感染率の減少のためにも使用されている。
【０２２７】
一実施形態では、本発明は、上で指摘した疾患または状態の処置方法に関し、そこにおいて、成長ホルモン化合物の活性は前記疾患または状態の処置で有益である。そのような化合物の投与は、患者での循環成長ホルモン化合物の量の増加と関連する治療有益性をもたらす。一実施形態では、前記方法は、成長ホルモン化合物の医薬組成物の有効量を患者に投与し、それによって前記患者の症状を改善する工程を含む。
【０２２８】
一実施形態では、本発明は、成長ホルモン化合物を含む本発明による医薬組成物の治療的有効量の有効量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む方法に関する。したがって、本発明は、本発明による医薬組成物中の成長ホルモン化合物の治療的有効量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、これらの疾患または状態を処置する方法を提供する。
【０２２９】
本明細書で用いられる本発明の化合物の「治療的有効量」は、所与の疾患およびその合併症の臨床症状を治療するか、軽減するか、部分的に停止するのに十分な量を意味する。これを達成するのに十分な量は、「治療的有効量」と定義される。各目的の有効量は、例えば、疾患または損傷の重症度、ならびに対象の体重、性別、年齢および一般状態に依存する。適当な投薬量の決定は、全て熟練医師または獣医の通常の技量の範囲内であるルーチン実験を使用して達成することができることが理解されよう。
【０２３０】
一実施形態では、本発明は、上述の疾患または状態の処置で使用する医薬の製造における、成長ホルモン化合物またはそのコンジュゲートの使用を提供する。
【０２３１】
さらなる態様で、本発明は、本明細書の上に記載される医薬組成物を含む方法に関する。医薬組成物の利点は、いかなるFA-aaも含まない成長ホルモン組成物を使用する取り込みと比較して、腸管壁を越える成長ホルモン化合物の取り込みの増加を可能にすることである。組成物は、腸の内部細胞層の透過性を増加させると考えられる。
【０２３２】
成長ホルモン化合物の血漿濃度を増加させる方法であって、本明細書の上に記載される経口医薬組成物に個体の消化管を曝露させて、前記個体において前記成長ホルモン化合物の血漿濃度の増加をもたらす工程を含む方法。上記のように、経口医薬組成物は、成長ホルモン化合物に加えて少なくとも1つのFA-aaを含む。
【０２３３】
成長ホルモン化合物の取り込みを増加させる方法であって、成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaに個体の消化管を曝露させ、それによって前記個体での前記成長ホルモンの血漿濃度が少なくとも1つのFA-aaを含まない曝露と比較して増加する工程を含む方法。
【０２３４】
本明細書に記載のように、曝露は、成長ホルモン化合物に加えて少なくとも1つのFA-aaを含む経口医薬組成物を投与することによって達成することができる。
【０２３５】
本発明のさらなる態様は、成長ホルモン化合物の生物学的利用能を増加させる方法に関する。
【０２３６】
本発明によるさらなる方法は、消化管の上皮細胞層を越える成長ホルモン化合物の取り込みを増加させる方法に関する。
【０２３７】
本発明によるさらなる方法は、個体の腸管壁を越える成長ホルモン化合物の取り込みを増加させる方法に関する。
【０２３８】
さらなる方法は、成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaを投与する上記工程を同様に含む、成長ホルモン化合物の吸収を増加させるためのものである。さらなる実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、記載される方法のいずれかで使用することができる。
【０２３９】
それらに限定されることなく、本発明は以下の実施形態によってさらに例示される。
1.  a.成長ホルモン化合物および
b.少なくとも1つの脂肪酸アミノ酸(FA-aa)またはその塩
を含む医薬組成物。
2.経口医薬組成物である、実施形態1による医薬組成物。
3.少なくとも1つの脂肪酸アミノ酸(FA-aa)が、一般式:
【０２４０】
【化８】
2015536314.tif 000011
【０２４１】
であり、上式で、
R1は、10〜18個の炭素原子を含む脂肪酸鎖であり、
R2はH(すなわち水素)、CH3(すなわちメチル基)であるか、またはR2がR4に共有結合するときは原子価結合であり、
R3は、Hであるかまたは存在せず、
R4は、R2に共有結合するとき、-(CH2)3-を含むアミノ酸側鎖である、
実施形態1および2による医薬組成物。
4.アミノ酸R4が、
i.極性アミノ酸側鎖、
ii.無極性アミノ酸側鎖
の群から選択される、実施形態3による医薬組成物。
5.前記FA-aaが塩の形である(R3は存在しない)、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
6.前記FA-aaがNa+またはK+などの一価のカチオンを有する塩の形である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
7.前記FA-aaがその遊離酸の形である(R3はHである)、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
8. FA-aaの脂肪酸部分が少なくとも12個の炭素原子を有する、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
9. FA-aaの脂肪酸部分が最大で18個の炭素原子を有する、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
10. FA-aaが炭素原子数12〜18の脂肪酸部分を含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
11.脂肪酸部分がパルミチン酸から誘導されるパルミトイルである、前の実施形態のいずれかによる経口医薬組成物。
12.前記FA-aaのアミノ酸残基が、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、サルコシン(Sarc)、グリシン(Gly)、リシン(Lys)、アルギニン(Arg)、ヒスチジン(His)、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)、チロシン(Tyr)およびシステイン(Cys)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
13.前記FA-aaのアミノ酸残基が、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、サルコシン(Sarc)、グリシン(Gly)、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)、セリン(Ser)およびトレオニン(Thr)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
14.前記FA-aaのアミノ酸残基が、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、サルコシン(Sarc)、グリシン(Gly)、グルタミン(Gln)およびアスパラギン(Asn)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
15.前記FA-aaのアミノ酸残基が、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸(Glu)、グルタミン(Gln)、アスパラギン(Asn)およびサルコシン(Sarc)からなる群から選択されるアミノ酸に基づく、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
16.アミノ酸側鎖R4が-H(グリシン)である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
17.アミノ酸残基がサルコシンである(R4=-H(グリシンのように)、およびR1=-CH3)、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
18.脂肪酸アミノ酸がN-パルミトイル-サルコシンナトリウム（N-palmitoyl-sarcosinate, sodium）である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
19.脂肪酸アミノ酸がHT29-MTX(E12)細胞の透過性を増加させる、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
20.タンパク質配列がヒト成長ホルモン(配列番号1)と少なくとも95%同一である、成長ホルモン化合物、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
21.成長ホルモン化合物が30分を超えるT1/2を有する、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
22.成長ホルモン化合物が追加のジスルフィド架橋を含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
23.成長ホルモン化合物が成長ホルモン誘導体である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
24.成長ホルモン化合物が追加のジスルフィド架橋を含む化学改変された成長ホルモン変異体である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
25.成長ホルモン化合物が化学改変された成長ホルモンであり、前記誘導体は内部アミノ酸残基に連結する、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
26.成長ホルモン化合物がアシル誘導を含む化学改変された成長ホルモンである、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
27.液体である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
28.水性製剤である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
29. 10%(w/w)未満の水を含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
30.さらなる医薬用賦形剤を含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
31.プロピレングリコールをさらに含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
32.植物油または中性油などの油をさらに含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
33.油と界面活性剤の混合液をさらに含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
34.ポリソルベート20、ポリソルベート80、ラウログリコール、カプリオールまたはラブラゾルなどの界面活性剤をさらに含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
35.SEDDS、SMEDDSまたはSNEDDS製剤である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
36.半固体組成物である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
37.例えば錠剤またはカプセルの形の固体経口組成物である、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
38.腸溶性または遅延放出コーティングなどのコーティングをさらに含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
39.プロテアーゼ阻害剤をさらに含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
40.プロテアーゼ阻害剤をさらに含む、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
41.医薬として用いるための、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
42.成長ホルモン関連の疾患または障害の処置に用いるための、前の実施形態のいずれかによる医薬組成物。
43.個体に投与される成長ホルモン化合物の医薬組成物中にFA-aaを含める工程を含む、成長ホルモン化合物の生物学的利用能を増加させる方法。
44.成長ホルモン化合物の血漿濃度を増加させる方法であって、成長ホルモン化合物およびFA-aaを含む医薬組成物に個体の消化管を曝露させて、前記個体において前記成長ホルモン化合物の血漿濃度の増加をもたらす工程を含む方法。
45.前記曝露が前記医薬組成物の経口投与によって達成される、実施形態44の方法。
46.成長ホルモン化合物の取り込みを増加させる方法であって、成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaに個体の消化管を曝露させ、それによって前記個体での前記成長ホルモンの血漿濃度が少なくとも1つのFA-aaを含まない曝露と比較して増加する工程を含む方法。
47.成長ホルモン関連の疾患または障害の処置のための方法であって、成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaを含む医薬組成物を投与する工程を含む方法。
48.腸管壁を越える成長ホルモン化合物の取り込みを増加させる方法であって、成長ホルモン化合物および少なくとも1つのFA-aaを含む医薬組成物を個体に投与し、それによって、前記成長ホルモン組成物が少なくとも1つのFA-aaを含まないときに得られる前記成長ホルモン化合物の取り込みと比較して、前記成長ホルモン化合物の増加する取り込みが得られる工程を含む方法。
49.医薬組成物が実施形態2〜39のいずれか1つによって記載される、実施形態44〜48の方法。
【実施例】
【０２４２】
方法および実施例
(実施例1)
A. GH化合物を調製するための一般方法
成長ホルモンポリペプチドをコードする遺伝子を、組換えでプラスミドベクターに挿入する。プラスミドベクターを用いて、適する大腸菌(E. coli)株をその後形質転換する。hGHまたはGH変異体はN末端メチオニンで発現させることができるか、またはMEAE融合として発現させることができ、その後MEAE配列は切り離される。
【０２４３】
本明細書に記載される実施例のために、細胞保存液を25%グリセロールで調製して、-80℃で保存した。グリセロール保存株をLBプレートに接種し、その後37℃で一晩、インキュベートした。各プレートの内容物をLB培地で洗浄し、発現のために500mLのLB培地に希釈した。OD600 0.6に到達するまで、220rpmで振盪しながら培養物を37℃でインキュベートした。続く誘導は、0.2mM IPTGを用いて25℃で6時間実施した。最後に、遠心分離によって細胞を収集した。
【０２４４】
その後、0.05%のTween20、2.5mMのEDTA、10mMのシステアミンおよび4Mの尿素を含有する10mMのトリス-HCl、pH=9.0に細胞を懸濁し、細胞破壊器を30kPSIで用いて破壊した。上清を遠心分離によって収集し、クロマトグラフィー精製にその後かけた。
【０２４５】
精製はイオン交換クロマトグラフィーおよび疎水性相互作用を用いて実施し、続いて、CHO細胞から発現したヒトジペプチジルペプチダーゼI(hDPPI)を用いてペプチドタグを除去した。最終精製は、等沈殿およびイオン交換クロマトグラフィーによって達成した。
【０２４６】
精製は、それらに限定されないが、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、および当分野の技術者に公知である膜をベースとした分離技術を用いて達成することもできる。
【０２４７】
B. GH化合物の生物学的活性を試験するための一般方法(BAFアッセイ)
GH化合物の生物学的活性は、細胞をベースとした受容体力価増殖アッセイ、すなわちBAFアッセイで測定する。BAF-3細胞(骨髄から誘導されるマウスのプロ-Bリンパ細胞系)は、成長および生存のためにIL-3に依存する。IL-3は、刺激の結果hGHが活性化させる同じ媒介物である、JAK-2およびSTATを活性化させる。
【０２４８】
hGH受容体を含有するプラスミドでBAF-3細胞をトランスフェクトした。hGHによる刺激の結果増殖することができるクローンは、以下、BAF3-GHRと称するhGH依存性細胞系に変えられた。細胞系は用量関連の成長パターンで成長ホルモンに応答し、したがって、hGHと比較して異なるGH化合物の影響を増殖アッセイで評価するために使用することができる。
【０２４９】
BAF-3GHR細胞は、37℃、5%CO2で24時間、絶食培地(hGHのない培地)で増殖させる。細胞を遠心分離し、培地を除去し、細胞を絶食培地に2,22×105細胞数/mlで再懸濁する。細胞上清の90μlの分量を、マイクロタイタープレート(96ウェルNUNC-クローン)に播種する。所与の成長ホルモン化合物の異なる濃度を細胞に加え、プレートを37℃、5%CO2で72時間インキュベートする。
【０２５０】
AlamarBlue(商標)(BioSourceカタログ番号Dal 1025)はレドックス指示薬であり、それは細胞代謝に固有の反応によって還元され、したがって、生細胞数の間接的な尺度を提供する。AlamarBlue(商標)を6回希釈し(5μlのAlamarBlue(商標)+25μl絶食培地)、希釈したAlamarBlue(商標)の30μlを各ウェルに加える。次に、細胞をさらに4時間インキュベートする。最後に、544nMの励起フィルターおよび590nMの放射フィルターを用いた蛍光プレートリーダーで、細胞の代謝活性を測定する。所与の化合物の結果は、並行して実行する前記化合物のEC50とwt hGHのEC50の間の比で表す。
【０２５１】
C.成長ホルモン化合物の薬物動態パラメータを評価するための一般方法
静脈内(i.v.)および皮下(s.c.)の単一用量投与の後、実施例の化合物の薬物動態を雄Sprague Dawleyラットで調査する。
【０２５２】
グリシン20mg/mL、マンニトール2mg/mL、NaHCO3 2.5mg/mLからなる、pH8.2に調整した希釈緩衝液で、試験化合物を1mg/mLの最終濃度まで希釈する。
【０２５３】
250g重の雄SDラットで試験化合物を研究する。試験化合物は、0.1mlの容量に15nmol/ラット(濃度150nmol/ml)または60nmol/kg体重などの所定用量の、尾静脈にi.v.で、または頸部にs.c.で25G針による単一の注射で投与する。
【０２５４】
各試験化合物について、下の表2に示すスケジュールに従って血液試料採取を実行することができる。
【０２５５】
【表２】
2015536314.tif 000012
【０２５６】
表1の値は、投与前、0.08時間、0.5時間、1時間、2時間、4時間、7時間、18時間、24時間、48時間、72時間および96時間後の試料採取を含む代替血液試料採取スケジュールで得た。
【０２５７】
各試料採取時に、25G針を用いて0.25mlの血液を尾静脈から引き抜く。EDTAをコーティングした試験管に血液を採取し、4℃で10分間の1200×Gでの遠心分離まで氷上で保存する。血漿をMicronic管に移し、分析まで-20℃で保存する。
【０２５８】
試験化合物濃度は、キャッチャーとしてモルモット抗hGHポリクローナル抗体、および検出器としてビオチン化hGH結合タンパク質(ヒトGH受容体の可溶部分)を用いたサンドイッチELISAによって判定する。アッセイの検出限界は、0.2nMであった。
【０２５９】
WinNonlin Professional(Pharsight Inc.社、Mountain View、CA、USA)を用いて、非コンパートメント薬物動態分析を各試験化合物の平均濃度-時間プロファイルについて実施する。終端半減期(t1/2)および平均滞留時間(MRT)の薬物動態パラメータの推定値を計算する。
【０２６０】
D. E12細胞の単層を使用して、in vitroで成長ホルモン化合物の経上皮輸送を測定するための方法
細胞培養
10%ウシ胎仔血清(FBS)、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、1%L-グルタミンおよび1%非必須アミノ酸を追加したダルベッコの改変イーグル培地で、HT29-MTX(E12)細胞(Pharm Res. 2001;18(8):1138〜45頁およびPharm Res. 2007;24(7):1346〜56頁)を増殖させた。輸送アッセイのために、12ウェルTranswell(登録商標)プレート(1.13cm2、0.4μm孔径)中の組織培養処理ポリカーボネートフィルターの上に、E12細胞を1ウェルにつき細胞数105の密度で播種した。5% CO2の雰囲気で細胞を37℃で培養し、培地は1日おきに交換した。輸送実験は、培養で14〜18日後に実施した。
【０２６１】
経上皮輸送
ドナーチャンバー(先端側)からレシーバーチャンバー(基底側)に輸送されるGH化合物の量を測定した。
【０２６２】
実験の前に、上皮の両側で、E12細胞を輸送緩衝液で60分間平衡させる。次に緩衝液を除去し、ドナーチャンバーに試験溶液を加え、レシーバーチャンバーに対応する輸送緩衝液を加えることによって実験を開始する。ドナー試料(20μl)を、0分時および実験終了後にとる。レシーバー試料(200μl)を、15分ごとなどの一定間隔でとる。研究は、通常、振盪プレート(30rpm)の上で、37℃の5% CO2-95% O2の雰囲気で実施する。
【０２６３】
見かけ透過率(Papp)は、初期濃度および膜の面積に対して一定の期間に膜を越えて移動するGHの量として測定される(流量/面積*初期濃度)。GH化合物の濃度は、キャッチャーとしてモルモット抗hGHポリクローナル抗体、および検出器としてビオチン化hGH結合タンパク質(ヒトGH受容体の可溶部分)を用いたサンドイッチELISAによって判定することができる。アッセイの検出限界は、0.2nMアッセイであった。
【０２６４】
上皮の完全性を検証するために、シンチレーションカウンターを使用して傍細胞輸送のマーカー[3H]マンニトールの輸送を測定することができる。
【０２６５】
実験の前とその間に、細胞単層の経上皮電気抵抗(TEER)を監視する。チョップスティックに接続したEVOM(商標)上皮ボルトオームメーターで、TEERを測定する。
【０２６６】
(実施例2)
アルブミン結合剤の調製
4-(1H-テトラゾール-16-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)ブタノイル-OEG-ガンマGlu-ガンマGlu-OEG-Nε(C(O)CH2Br)Lys-OH
【０２６７】
【化９】
2015536314.tif 000013
【０２６８】
化合物I
ABI433合成装置で標準のFmoc-ペプチド化学を使用して、固体支持体の上で化合物Iを1mMスケールで合成した。Fmoc-OEG-OHおよびFmoc-Glu-OtBu保護アミノ酸を使用して、Fmoc-Lys(MTT)-Wang樹脂の上でペプチドを組み立てた。4-(16-1H-テトラゾール-5-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)酪酸を、2当量のDCM/NMP中のDIC/NHSと手動で一晩結合し、TNBS試験は、反応が完全であることを示した。次に、黄色が消滅するまで約20分、フロースルー配置で樹脂を50mL DCM/TFA/TIS/水(94:2:2:2)で処理し、続いてDIPEA/DMFで洗浄および中和した。DCM/NMP(1:1)中の臭化酢酸(4mM)を、HONSuおよびDICの1mM混合物で活性化させた。濾過し、さらなる1mMのDIPEAの添加で樹脂に加えた。1時間後に、反応は完了した。樹脂を80mLのTFA/TIS/水(95:2.5:2.5)で1時間処理した。N2流で蒸発させ、Et2Oの添加によって沈殿させ、Et2Oで洗浄し、乾燥させた。0.1%のTFA水溶液に対して30〜80%の0.1TFA/MeCNの勾配により、分取HPLC(2回実行)で粗生成物を精製した。分画を収集し、約50%のMeCNで凍結乾燥させて、化合物Iを与えた。
TOF-MS:質量1272.52(M+1)
【０２６９】
(実施例3)
アルブミン結合剤の調製
上の実施例2に記載の類似の方法で、Fmoc-Lys(Mtt)-OHおよびWang樹脂を使用して以下の化合物を調製した。
【０２７０】
【化１０】
2015536314.tif 000014
【０２７１】
化合物II
TOF-MS:質量983.01(M+1)
【０２７２】
(実施例4)
hGH(Q84C Y143C L101C)へのアルブミン結合剤(化合物II)のコンジュゲーション
室温で混合することによって、pH8.5の20mMトリエタノールアミン、0.1M NaCl中の4.9mg/mlのhGH(Q84C Y143C L101C)-システアミンの310ml溶液に、387mgのTSPP(トリス(3-スルホネートフェニル)ホスフィン水和物ナトリウム塩)を加えた。反応は、2時間進行させた。
【０２７３】
アルブミン結合剤化合物IIを20mMトリエタノールアミン、2mM EDTA pH8.5に溶解し、10mg/mlにした。溶解したアルブミン結合剤を、脱保護されたhGH[Q84C Y143C L101C]に3:1の比で加えた。0.4MのNaClの最終濃度を得るために、NaClを溶液に加えた。反応を2.5時間室温で実行し、その後、最終精製が実施されるまで一晩摂氏4度に置き、化合物GH-A3を与えた。
【０２７４】
(実施例5)
hGH(Q84C Y143C L101C)へのアルブミン結合剤(化合物I)のコンジュゲーションを実施例4に記載されるのと類似の方法で行って、化合物GH-A2を与えた。
【０２７５】
(実施例6)
その後、イオン交換クロマトグラフィー、およびダイアフィルトレーションとして実施した緩衝液交換を続いて用いて、コンジュゲートした化合物GH-A2およびGH-A3を精製した。精製は、それらに限定されないが、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、および当分野の技術者に公知である膜をベースとした分離技術を用いて達成することもできよう。
【０２７６】
成長ホルモン化合物1(GH-A1):GH(Q84C Y143C)
成長ホルモン化合物2(GH-A2):アルブミン結合剤を有するGH(Q84C Y143C L101C)
【０２７７】
【化１１】
2015536314.tif 000015
【０２７８】
GH-A2のアルブミン結合剤
R1=hGH(Q84C Y143C L101C)中のL101CのS
【０２７９】
成長ホルモン化合物3(GH-A3):アルブミン結合剤を有するGH(Q84C Y143C L101C)
【０２８０】
【化１２】
2015536314.tif 000016
【０２８１】
GH-A3のアルブミン結合剤
R1=hGH(Q84C Y143C L101C)中のL101CのS
【０２８２】
(実施例7)
精製された成長ホルモン化合物のタンパク質化学的特徴付け
MALDI-MSを使用して、無傷の精製タンパク質を分析した。観察された質量は、アミノ酸配列から推測された理論的質量に対応した。結鎖ジスルフィド結合は、トリプシンおよびAspN消化を用いたペプチドマッピングと、続くDTTによるジスルフィド結合の還元の前後の消化物のMALDI-MS分析によって実証することができる。
【０２８３】
精製された成長ホルモン化合物の濃度判定
Vydac 218TP54 4.6mm×250mm 5μm C-18シリカカラム(The Separations Group、Hesperia)を使用して、Agilent 1100システムでRP-HPLC分析を実施した。検出は、214nmのUVによった。カラムを0.1%トリフルオロ酢酸/H2Oで平衡させ、0.1%トリフルオロ酢酸/H2Oに対して0〜90%のアセトニトリルの適する勾配によって試料を溶出した。hGH化合物試料の濃度を計算するために、既知濃度のhGH標準を用いた較正曲線を使用した。NanoDrop Nd-1000 UV-分光計を用いて280nmの吸光度を測定することによって、タンパク質濃度を推定した。
【０２８４】
TSK2000 SWXL 7.5×300mmカラム(Tosoh社)を使用して、Agilent 1100システムでサイズ排除クロマトグラフィーを実施した。検出は、215nmのUVによった。溶出緩衝液としても使用した、pH7.0(リン酸で調整)の3%イソプロパノール(1lの移動相に30ml)を含有する0.063Mリン酸緩衝液(1lの移動相に7.77g Na2HPO4 2H2Oおよび5.28g NaH2PO4 H20)で、カラムを平衡させた。試料につき、20μlをカラムに注入した。hGH化合物試料の濃度を計算するために、既知濃度のhGH標準を用いた較正曲線を使用した。単量体、二量体および多量体のタンパク質の量は、総曲線下面積の百分率として判定した。
【０２８５】
使用した化合物の短い名前、長い名前およびIUPAC名のリストを、下に提供する。
【０２８６】
【表３】
2015536314.tif 000017
【０２８７】
(実施例8)
ラットへのGH化合物の腸管内投与および血液試料の分析
実施例9〜19に従って成長ホルモン化合物(129/130、150または300nmol/ラット)を製剤化し、結果を表A〜Kおよび図1〜7に示した。各組成物を100μl投薬量として調製し、完全麻酔下の一晩絶食させたSDラット(n=6、9または18)の空腸中央に注入する。FA-aaに対するGHの濃度を約1:1(W:W)に調整したが、6:1から1:2までの変動が含まれる。
【０２８８】
各試料採取時に、25G針を用いて0.25mlの血液を尾静脈から引き抜く。試料採取時間は:投与前ならびに投与の0.25、0.5、1、2、4および6時間後である。EDTAをコーティングした試験管に血液を採取し、4℃で10分間の1200×Gでの遠心分離まで氷上で保存する。血漿をMicronic管に移し、分析まで-20℃で保存する。
【０２８９】
試験化合物濃度は、キャッチャーとしてモルモット抗hGHポリクローナル抗体、および検出器としてビオチン化hGH結合タンパク質(ヒトGH受容体の可溶部分)を用いたサンドイッチELISAによって判定する。アッセイの検出限界は、0.2nMであった。
【０２９０】
WinNonlin Professional(Pharsight Inc.社、Mountain View、CA、USA)を用いて、非コンパートメント薬物動態分析を各試験化合物の平均濃度-時間プロファイルについて実施する。終端半減期(t1/2)および平均滞留時間(MRT)の薬物動態パラメータの推定値を計算する。
【０２９１】
均質ビーズに基づくアッセイであるLuminescence Oxygen Channeling Immunoassay (LOCI)を用いて、試料を分析した。LOCI試薬は、2つのラテックスビーズ試薬、およびサンドイッチの1部分であるビオチン化GH結合タンパク質を含む。ビーズ試薬の1つは一般的な試薬(ドナービーズ)であり、ストレプトアビジンでコーティングされ、感光性色素を含有する。第2のビーズ試薬(アクセプタービーズ)は、サンドイッチを構成する抗体でコーティングされる。アッセイの間、3つの反応体が分析物と合わさってビーズ-凝集体免疫複合体を形成する。複合体の照射は、アクセプタービーズに流れて、Envisionプレートリーダーで測定される化学発光を誘発する一重項酸素をドナービーズから放出させる。生成される光の量は、hGH誘導体の濃度に比例する。薬物動態プロファイルは、生じた記録から取り出された。
【０２９２】
そのような薬物動態プロファイルの例を、図1に示す。示す例で試験された強化剤はC16-Gluであり、成長ホルモン化合物2(GH-A2)の血漿濃度は、上記強化剤の有り無しによる投与の後に測定した。
【０２９３】
GH吸収の程度は、薬物動態プロファイルに基づくAUC(曲線下面積)として数量化する。以下の実施例では、強化の程度は、強化製剤の存在下でのAUCを強化製剤の非存在下でのAUCで割ったものとして計算した。図1に示すC16-Gluの影響も、実施例11によってカバーされる。
【０２９４】
(実施例9)
脂肪酸アシル化アミノ酸を含有する成長ホルモンの水性製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸の存在下で10mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5に溶解させた、成長ホルモン化合物1(GH-A1)(300nmol/ラット)。麻酔下の一晩絶食させたSDラット(n=6)の空腸中央に組成物を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。結果を、表Aに示す。
【０２９５】
【表４】
2015536314.tif 000018
【０２９６】
(実施例10)
脂肪酸アシル化アミノ酸を含有する成長ホルモンの水性製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸の存在下で緩衝液:20mg/mlのグリシン、2mg/mlのD-マンニトール、2.4mg/mlの炭酸水素ナトリウム、pH=8.2、に溶解した成長ホルモン化合物GH-A1(300nmol/ラット)。麻酔下の一晩絶食させたSDラット(n=6)の空腸中央に組成物を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。結果を、表Bに示す。(例えば20mg/mlグリシン、2mg/ml D-マンニトール、2.4mg/ml炭酸水素ナトリウム、pH=8.2;50mMリン酸ナトリウム緩衝液pH7.5;10mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5および50mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6)を含む代替緩衝液を用い、同じFA-aaおよびGH化合物を用いて追加の研究を実施した。得られた結果の平均を、図2に示す。
【０２９７】
【表５】
2015536314.tif 000019
【０２９８】
(実施例11)
脂肪酸アシル化アミノ酸を含有する成長ホルモンの水性製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸の存在下で緩衝液:20mg/mlのグリシン、2mg/mlのD-マンニトール、2.4mg/mlの炭酸水素ナトリウム、pH=8.2、に溶解した成長ホルモン化合物GH-A2(150nmol/ラット)。麻酔下の一晩絶食させたSDラット(n=6)の空腸中央に組成物を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。結果を、表Cに示す。(例えば20mg/mlグリシン、2mg/ml D-マンニトール、2.4mg/ml炭酸水素ナトリウム、pH=8.2および10mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5)を含む代替緩衝液を用い、同じFA-aaおよびGH化合物を用いて追加の研究を実施した。得られた結果の平均を図3に示し、図1はn=18の反復実験からのデータを含む。
【０２９９】
【表６】
2015536314.tif 000020
【０３００】
(実施例12)
脂肪酸アシル化アミノ酸を含有する成長ホルモンの水性製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸の存在下で緩衝液:20mg/mlのグリシン、2mg/mlのD-マンニトール、2.4mg/mlの炭酸水素ナトリウム、pH=8.2、に溶解した成長ホルモン化合物GH-A3(300nmol/ラット)。麻酔下の一晩絶食させたSDラット(n=6)の空腸中央に組成物を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。結果を表Dに示す。代替緩衝液を用い、同じFA-aaおよびGH化合物を用いて、追加の研究を実施した。得られた結果の平均を、に示す。20mg/mlグリシン、2mg/ml D-マンニトール、2.4mg/ml炭酸水素ナトリウム、pH=8.2;50mMリン酸ナトリウム、50mMのNaCl、pH8;および10mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5を含む代替緩衝液を用い、同じFA-aaおよびGH化合物を用いて追加の研究を実施した。得られた結果の平均を図4に示す。
【０３０１】
【表７】
2015536314.tif 000021
【０３０２】
実施例9〜12からのin vivoデータは、強化剤の非存在下で測定したGH化合物のAUCと比較して、全ての強化剤がGH化合物のAUCを増加させることを実証する。データは、GH化合物吸着の程度が脂肪酸アシル化アミノ酸のアイデンティティによって影響されることをさらに示唆する。最も強力な影響はより長い脂肪酸鎖のFA-aaで観察され、影響は、ある程度、特定のアミノ酸にさらに依存する。
【０３０３】
(実施例13)
脂肪酸アシル化アミノ酸およびプロテアーゼ阻害剤を含有する成長ホルモンの水性製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸およびダイズトリプシン阻害剤(SBTI)2%の存在下で10mMリン酸ナトリウム緩衝液pH8.2に、成長ホルモン化合物GH-A2(150nmol/ラット)を溶解させた。麻酔下の一晩絶食させたSDラット(n=12)の空腸中央に組成物を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。結果を、表Eに示す。
【０３０４】
【表８】
2015536314.tif 000022
【０３０５】
(実施例14)
脂肪酸アシル化アミノ酸およびプロテアーゼ阻害剤を含有する成長ホルモンの水性製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸およびダイズトリプシン阻害剤(SBTI)2%の存在下で10mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5に溶解させた、成長ホルモン化合物GH-A1、GH-A2およびGH-A3(150nmol/ラット)。麻酔下の一晩絶食させたSDラット(n=6〜12)の空腸中央に組成物を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。結果を、表Fに示す。代替緩衝液を用い、同じFA-aaおよびGH化合物を用いて、追加の研究を実施した。試験した水性緩衝液には、20mg/mlグリシン、2mg/ml D-マンニトール、2.4mg/ml炭酸水素ナトリウム、pH=8.2;10mMリン酸ナトリウム、pH8.2、および10mMリン酸ナトリウム、pH6.5が含まれる。GH-A1、GH-A2およびGH-A3、FA-aaおよび阻害剤を使用して得られた結果の平均を、図5、図6および図7にそれぞれ示す。
【０３０６】
【表９】
2015536314.tif 000023
【０３０７】
in vivoデータは、脂肪酸アシル化アミノ酸(ここではC16-サルコシネート)のGH吸着強化作用が、酵素阻害剤の存在によって有意に向上することを示唆する。図5、図6および図7に見られるように、FA-aa強化剤と一緒にプロテイナーゼ阻害剤(SBTI)を加えることの影響は、3つ全ての成長ホルモン化合物について相加的以上である。
【０３０８】
(実施例15)
脂肪酸アシル化アミノ酸を含有する成長ホルモンの非水性製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸の存在下での成長ホルモン化合物2のための溶媒として、重量比が30〜50重量%の油および50〜70重量%の界面活性剤の植物油および界面活性剤の混合物を使用する。麻酔下の一晩絶食させたSDラット(n=8)の空腸中央に組成物(150nmol/ラット)を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。結果を、表Gに示す。
【０３０９】
【表１０】
2015536314.tif 000024
【０３１０】
結論として、FA-aaは、非水性製剤においてもGHの吸収強化剤として機能的である。
【０３１１】
(実施例16)
脂肪酸アシル化アミノ酸およびプロテアーゼ阻害剤を含有する成長ホルモンの非水性製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸およびプロテアーゼ阻害剤の存在下での成長ホルモン化合物2のための溶媒として、ジグリセリンモノカプリレート、Tween20およびプロピレングリコールの混合物(45重量%、30重量%、15重量%、10%水)を使用する。麻酔下の一晩絶食させたSDラット(n=9)の空腸中央に組成物(150nmol/ラット)を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。結果を表Hに示す。
【０３１２】
【表１１】
2015536314.tif 000025
【０３１３】
データは、FA-aaの作用の強化においてSBTI以外のプロテアーゼ阻害剤が効果を示すことができることを実証する。
【０３１４】
(実施例17)
脂肪酸アシル化アミノ酸を含有する水性成長ホルモン製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸の存在下で10mMリン酸ナトリウム緩衝液pH8.2に溶解させた、成長ホルモン化合物GH-A2(129nmol/ラット)。麻酔下の一晩絶食させたSDラットの空腸中央に組成物を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。AUC値は、全ての試験動物の平均値である。結果を、表Iに示す。
【０３１５】
【表１２】
2015536314.tif 000026
【０３１６】
(実施例18)
脂肪酸アシル化アミノ酸およびプロテアーゼ阻害剤を含有する水性成長ホルモン製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸の存在下で100mMリン酸カリウム緩衝液pH8.2に溶解させた、成長ホルモン化合物GH-A2(129nmol/ラット)。麻酔下の一晩絶食させたSDラットの空腸中央に組成物を注射し、実施例8に記載の通りに薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。AUC値は、全ての試験動物の平均値である。結果を、表Jに示す。
【０３１７】
【表１３】
2015536314.tif 000027
【０３１８】
(実施例19)
脂肪酸アシル化アミノ酸を含有し、プロテアーゼ阻害剤を含有するかしない水性製剤を試験した。脂肪酸アシル化アミノ酸の存在下で100mMリン酸カリウム緩衝液pH8.2に、ヒト成長ホルモン(129nmol/ラット)を溶解させた。麻酔下の一晩絶食させたSDラットの空腸中央に、阻害剤の有り無しで組成物を注射し、薬物動態プロファイルを取り出し、強化の程度を計算した。結果を表Kに示す。AUC値は、全ての試験動物の平均値である。
【０３１９】
【表１４】
2015536314.tif 000028
【０３２０】
(実施例20)
脂肪酸アシル化アミノ酸を含有する水性製剤で、GH化合物の経上皮輸送をE12単層アッセイで測定した。
【０３２１】
一般方法D(実施例1)に記載されている通りに輸送研究を実施した。400μlの試験液(輸送緩衝液に100μMのGH A1化合物、0.5mMの脂肪酸アシル化アミノ酸および0.4μCi/μlの[3H]マンニトール)をドナーチャンバーに加え、1000μlの輸送緩衝液をレシーバーチャンバーに加えることによって試験を開始した。10mM HEPES、0.1%を含有するハンクの平衡食塩溶液からなる輸送緩衝液を、GH-A1またはGH-A2化合物の添加後にpH7.4に調整した。異なるFA-aaの存在下での成長ホルモン化合物の透過(Papp)を測定し、成長ホルモン化合物単独と比較した増加(または、減少)倍率を計算した。
【０３２２】
表Lは、GH-A1と様々な脂肪酸アシル化アミノ酸の試験した組合せの結果を含む。
【０３２３】
【表１５】
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【０３２４】
GH A1単独と比較した増加倍率に基づいて、C16-GlnまたはC16-Gluとの組合せはGH A1輸送に最大の影響を及ぼすことが示されたが、C14-aaおよびC12 FA-aaの使用は中間の影響を及ぼす。
【０３２５】
さらなる一連の透過実験では、上記と同じ手順を用いてGH-A2の輸送を評価した。表Mは、GH A2単独と比較した増加倍率を示す、GH-A2と様々な脂肪酸アシル化アミノ酸の試験した組合せの結果を含む。
【０３２６】
【表１６】
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【０３２７】
上記のように、C16-GlnまたはC16-Gluとの組合せは最大の影響を及ぼすことが示されたが、C14-およびC12 FA-aaは中等度の影響を及ぼし、C10-およびC12 FA-aaはGH A2の輸送に対してほとんど影響を及ぼさない。
【０３２８】
したがって、結果はGH-A1およびGH-A2について類似しており、C16-GluおよびC16-Glnは成長ホルモン化合物の透過に優れた影響を及ぼすことを実証している。C14およびC12脂肪酸アミノ酸は成長ホルモン化合物に対して中間の影響を及ぼすが、C8およびC10は、成長ホルモン化合物の経上皮輸送に対してあるとしても非常に軽い影響を及ぼす。
【０３２９】
in vitroデータはin vivoデータとかなり一貫していることが見出され、透過の強化が脂肪酸の鎖長に依存し、ある程度は脂肪酸アミノ酸のアミノ酸残基に依存することを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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