(57)【要約】  本発明は、哺乳動物において腸管神経系の健常な発達及び／又は修復を促進するためのラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ  １７９３８、及びラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ  １７９３８を含む組成物に関する。ヒト又は動物、特に、胎児、早期若しくは正期産児、幼児、又は小児が本発明から恩恵を受け得る。本発明は、ＩＵＧＲを経験したことがある乳児、又は低出生体重若しくは極低出生体重を有する乳児、及び／又は子宮内、出生時、若しくは出生後のいずれかで腸管神経系成長遅延を患っている乳児に特に有益であり得る。ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ  １７９３８の投与は、正常且つ健常なニューロン及びグリア発生を促進する。それはまた、末梢神経系において健常なニューロン分化を保証する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
幼若哺乳動物において、腸管神経系の健常な発達及び／又は修復を促進するためのラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項２】
幼若哺乳動物が非ヒト動物又はペットである、請求項１に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項３】
幼若哺乳動物が、ヒト胎児、早期若しくは正期産児、幼児又は小児である、請求項１に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項４】
幼若哺乳動物が、ＩＵＧＲを経験した、若しくは経験中であり、及び／又は低出生体重、極低出生体重、若しくは超低出生体重を有した、若しくは有すると予想され、及び／又は子宮内、若しくは出生時、若しくは出生後のいずれかで腸管神経系成長遅延を患っている、若しくは患った、請求項１から３までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項５】
腸管神経系成長遅延が出生時の低酸素血−虚血による、請求項４に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項６】
胎児への投与が妊婦を介した投与である、請求項１から５までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項７】
妊婦への投与が、該妊婦が、妊娠１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、若しくは９ヶ月であるときに、又は妊娠している動物への投与については相当する時点で始まる、請求項６に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項８】
幼若哺乳動物への投与が、直接的、又は授乳中の母親を介して間接的である、請求項１から５までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項９】
胎児又は乳児への投与期間が、少なくとも１週間、好ましくは２週間、より好ましくは少なくとも１ヶ月間の継続期間を有する、請求項１から８までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１０】
幼児又は若年小児への投与期間が、少なくとも４週間、好ましくは２〜１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも１８ヶ月間の継続期間を有する、請求項１から９までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１１】
若年小児についての投与期間が、小児が４歳になるまで、好ましくは６歳になるまで、より好ましくは１０歳までである、請求項１から１０までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１２】
ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８が、その純粋な形で、又は水若しくは母乳中に希釈されて、食品サプリメントにおいて、又はミルク強化物、又は低栄養管理（ｔｒｏｐｈｉｃ  ｆｅｅｄｉｎｇ）中のミルクサポートを含む任意の経腸栄養において、乳児用フォーミュラにおいて、又は乳飲料において、乳児又は幼児に直接、投与される、請求項１から１１までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１３】
乳児用フォーミュラが、未熟児用のフォーミュラ、スターターフォーミュラ、若しくはフォローオンフォーミュラ、又は発育用ミルクである、請求項１２に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１４】
妊婦若しくは授乳中の母親、又は小児への投与が、経口で、好ましくは食品、飲料、食事サプリメント、又は薬学的組成物においてである、請求項１から１３までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１５】
前記ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８が、１×１０３ｃｆｕから１×１０１２ｃｆｕまで、好ましくは１×１０７ｃｆｕから１×１０１１ｃｆｕ（ｃｆｕ＝コロニー形成単位）の一日量として乳児、幼児又は小児に投与される、請求項１から３及び８から１２までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１６】
前記ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８が、１×１０３ｃｆｕ／ｇから１×１０１２ｃｆｕ／ｇの間の乾燥組成物を含む組成物として、妊婦若しくは授乳中の母親、又は赤ん坊、又は幼児又は小児へ投与される、請求項１から１５までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１７】
前記組成物が、好ましくは、イヌリン、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、短鎖フラクトオリゴ糖（短鎖ＩＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、及び牛乳オリゴ糖（ＣＭＯＳ）から選択される、さらなる成分又はプレバイオティックを含む、請求項１５に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１８】
組成物が、１つ又は複数の追加のプロバイオティックも含む、請求項１５、１６又は１７に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項１９】
１つ又は複数の追加のプロバイオティックが、好ましくは、ビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）ＢＢ５３６（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）（ＣＧＭＣＣ  １．３７２４）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｓ）（ＮＣＣ２８１８）、又はそれらの混合物から選択される、請求項１８に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項２０】
前記ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８が、それを非複製性にするように不活性化されている、請求項１から１９までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項２１】
腸管神経系の健常な発達及び／又は修復が、非処理対象と比較して増加した空腸及び結腸におけるニューロン刺激能力と相関する、請求項１から１８までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項２２】
腸管神経系の健常な発達及び／又は修復が、非処理対象と比較して増加したＳｏｘ１０の発現として現れる、請求項１から１９までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項２３】
腸管神経系の健常な発達及び／又は修復が、ＧＡＰ４３、Ｎｇｆｒａｐ１、Ｎｔｆ４、及びＳ１００ｂの正常遺伝子発現として現れる、請求項１から２０までのいずれか一項に記載のラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８。
【請求項２４】
幼若哺乳動物において、腸管神経系の健常な発達及び／又は修復を促進するための、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８を含む、組成物。
【請求項２５】
組成物が、食品サプリメント、ミルク強化物、スターター乳児用フォーミュラ、フォローオン乳児用フォーミュラ、又は発育用ミルクである、請求項２４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、ニューロンの健康、ニューロンの保護、及びニューロンの発生の分野に関する。本発明は、具体的には、乳児、特に、早期産児、及び低出生体重児における腸管神経系を促進する能力があるプロバイオティク細菌の投与に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経系は、ニューロン及びグリア細胞で構成される高度に複雑なネットワークである。それは、全ての哺乳類種に存在し、中枢神経系（脳及び脊髄）及び末梢神経系（体性神経系、自律神経系、及び腸管神経系）で構成される。
【０００３】
中枢神経系は認知機能（記憶、注意、知覚、行動等）を司る。末梢神経系と共に、中枢神経系は、行動のコントロールにおいて基本的役割を持つ。体性神経系は、身体の運動の（意識的なコントロール下で）協調に関与する。自律神経系は、意識的なコントロールなしに身体活動（心拍数など）における恒常性を維持する。最終的に後者の神経系の一部として、腸管神経系は直接胃腸管機能を制御する。これらの機能には、各種損傷からの腸の保護、消化の快適さに寄与する、胃腸管障壁や免疫機能、運動、吸収、消化及び外分泌／内分泌が含まれる［Ｎｅｕｎｌｉｓｔ，Ｍら（２００８）；炎症性腸疾患における神経−グリアのクロストーク（Ｎｅｕｒｏ-ｇｌｉａｌ ｃｒｏｓｓｔａｌｋ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、Ｊ  Ｉｎｔｅｍ，Ｍｅｄ，２６３：５７７−５８３］、［Ｂｕｒｎｓ，Ａ．Ｊ．ら（２００９）；胎児及び出生後初期の腸管神経系の発達並びに腸運動性におけるその役割（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｔｅｒｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｄｕｒｉｎｇ ｆｅｔａｌ ａｎｄ ｅａｒｌｙ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｓｔａｇｅｓ）、Ｓｅｍｉｎ，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．，１８：１９６−２０５］、［Ｔａｐｐｅｒ，Ｅ．Ｊ．（１９８３）ら；腸ニューロンによる腸内イオン輸送の局所的調節（Ｌｏｃａｌ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｉｏｎ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｂｙ ｅｎｔｅｒｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ）、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２４４：Ｇ４５７−６８］。
【０００４】
神経系は、妊娠期間中に発生し、その後、出生後期間中に成熟した機能性ネットワークにまで精緻化する。
【０００５】
未熟性
神経系の未熟さ又は成熟遅延は、それが制御する重要な生物学的機能の確立の遅延及び十分な働きをもたらす。特に、遅延した消化／吸収能、胃腸管逆流、腸輸送遅延／便秘につながる便の固化、胃腸管コロニー形成障害、感染及びアレルギーリスクを増加させる脆弱な腸管障壁機能、（これらは全て食物耐性につながり、結果として親による栄養サポートが必要となる）、最も重症なケースでは壊死性腸炎、及び胃腸管不快症状を含む産後の腸機能障害をもたらす。
【０００６】
これは、以下のような乳児において観察することができる：
−  早期産児、低出生体重児（＜２５００ｇ）、及び極低出生体重児（＜１５００ｇ）；Ｎｅｗ  Ｊ．；胃腸官発達及び未熟児の栄養必要性(Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｍｅｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｎｅｅｄｓ ｏｆ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｉｎｆａｎｔｓ）、Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  ２００７；８５（２）：６２９Ｓ−６３４Ｓ。
−  妊娠期間中、任意の有害な事象（母親の喫煙、母親の薬物療法、低い胎盤の質、胎盤位置異常、母親及び胎児の栄養不良、母親の過剰なストレス／不安など）後に起こった子宮内胎児発育遅延（ＩＵＧＲ）を経験している未熟児又は正期産児［Ｓｈａｎｋｌｉｎ Ｄ.Ｒ. 及び Ｃｏｏｋｅ Ｒ.Ｊ. (１９９３);ヒト胎児の腸の長さに対する子宮内成長の影響（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｎｔｒａｕｔｅｒｉｎｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｌｅｎｇｔｈ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｆｏｅｔｕｓ）、Ｂｉｏｌ Ｎｅｏｎａｔｅ, ６４:７６-８１], [Ｎｅｕ, Ｊ. (２００７); 胃腸官発達及び未熟児の栄養必要性(Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｍｅｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｎｅｅｄｓ ｏｆ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｉｎｆａｎｔｓ）、Ａｍ. Ｊ. Ｃｌｉｎ. Ｎｕｔｒ., ８５(２): ６２９Ｓ-６３４Ｓ], [Ｂｒａｎｄaｏａ, Ｍ.Ｃ.Ｓ. ら, (２００３);小腸の腸筋神経叢における出生前及び出生後タンパク質エネルギー喪失の影響:乳離れしたばかりのラットにおける形態計測的研究（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒｅ- ａｎｄ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｅｒｇｙ ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｍｙｅｎｔｅｒｉｃ ｐｌｅｘｕｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ: ａ ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｗｅａｎｌｉｎｇ ｒａｔｓ）、 Ｎｕｔｒ. Ｒｅｓ., ２３: ２１５-２２３]。  
【０００７】
−  例えば、出生時における低酸素血−虚血、又は任意の他の有害事象後の神経系成長遅延を示す新生児及び年少乳児［Ｔａｙｏｒ，Ｃ．Ｔ．及びＣｏｌｇａｎ  Ｓ．Ｐ．（２００７）；低酸素及び胃腸管疾患（Ｈｙｐｏｘｉａ  ａｎｄ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）、  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（Ｂｅｒｌ．）、８５：１２９５−３００］、［Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｒ．Ｄ．ら（２００７）；破壊及び再構築：低酸素及び発達中の脳（Ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ：ｈｙｐｏｘｉａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｂｒａｉｎ）、Ｂｉｒｔｈ  Ｄｅｆｅｃｔｓ  Ｒｅｓ．Ｃ．Ｅｍｂｒｙｏ  Ｔｏｄａｙ、８１：１６３〜７６］。
【０００８】
胃腸管機能障害（消化器疾患、運動障害、胃腸管逆流、胃腸管通過遅滞、経口摂食耐性）、ヒルシュスプリング病、及び胃腸管に影響する炎症（例えば壊死性全腸炎）及び障害性症状を示す新生児及び年少乳児［Ｂｕｒｎｓ  Ａ．Ｊ．ら（２００９）；腸管神経系の発達及び胎児及び出生後初期の段階での腸運動におけるその役割（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｔｅｒｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｄｕｒｉｎｇ ｆｅｔａｌ ａｎｄ ｅａｒｌｙ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｓｔａｇｅｓ）、Ｓｅｍｉｎ. Ｐｅｄｉａｔｒ Ｓｕｒｇ., １８(４):１９６-２０５]。
【０００９】
ヒトにおいて、腸管神経系が由来する神経堤細胞は、受胎後のごく初期の胎児（発育７．５週目から）において子宮内で発達することが知られている［Ｂｕｒｎｓ, Ａ. Ｊ.及び Ｔｈａｐａｒ, Ｎ. (２００６); 腸管神経系の個体発生における進歩（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｏｎｔｏｇｅｎｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｔｅｒｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ）、 Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ. Ｍｏｔｉｌ., １８, ８７６-８８７]。腸管神経系は誕生後６歳まで大きな変化を経て、１０歳までに、継続して発生するより小さい変化を経験する［Ｗｅｓｔｅｒ, Ｔ. ら. (１９９９); 正常ヒト腸の腸筋神経叢における顕著な出生後の変化（Ｎｏｔａｂｌｅ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｙｅｎｔｅｒｉｃ ｐｌｅｘｕｓ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｂｏｗｅｌ）, Ｇｕｔ、２２：６６６−６７４］。従って、胎児、新生児又は幼児が腸管神経系の発達遅延を経験したら、この遅延は、腸管神経系の発達が正常レベルに追いつくように、すぐに逆転するのが望ましい。未成熟又は損傷を受けた腸管神経系に伴う胃腸管の機能不全又は病状を、成長している胎児又は幼児が出来る限り経験しないように、腸管神経系への障害を出来る限り早く修復するのが望ましい
【００１０】
従って、胎児、新生児、成長期の小児における腸管神経系の健常な発達により、腸障壁機能の正しい確立及び維持が制御され、その結果、腸管機能不全に伴う炎症性病理状態の予防並びに感染及びアレルギーのリスク軽減が促進される。
【００１１】
よって、出生前後の介入は腸管神経系の健常な発達を確実とする有望な方法となる。妊娠／授乳期の介入は、小児に直接介入するのに比較して利便性及びコンプライアンスの点においてかなりの利点を有する。
【００１２】
神経系が急激に成熟する際、妊娠期間のできるだけ早い時期及び新生児の初期に腸管神経系の健常な発達及び／又は修復を促進しサポートする必要がある。神経系は幼児期及び小児初期に（約１０歳まで）継続的に発達するので、この期間中持続したサポートが必要となる。
【００１３】
科学的文献は、新生児及び乳児の健康へ、特に、炎症を低下させること、感染から保護すること、並びに用便習慣及び胃腸運動へプラスの影響を及ぼすことに関して、プラスの影響を及ぼすためにプロバイオティックの使用について報告している。最近の一般的概論については、［Ｄｏｂｒｏｇｏｓｚ，Ｗ．Ｊ．、Ｐｅａｃｏｃｋ，Ｔ．Ｊ．及びＨａｓｓａｎ，Ｈ．Ｍ．（２０１０）；プロバイオティック概念の進化：医科学における構想から確証及び承認へ（Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  Ｃｏｎｃｅｐｔ：Ｆｒｏｍ  Ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｃｅｐｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、７２：１−４１］を参照。
【００１４】
ヒト由来ラクトバチルス・ロイテリは、ヒト胃腸管の内在性生物体としてみなされ、胃体部及び胃噴門、十二指腸、並びに回腸の粘膜に存在する［Ｒｅｕｔｅｒ，Ｇ．（２００１）；ヒト腸のラクトバチルス属及びビフィドバクテリウム属のミクロフローラ：組成及び遷移（Ｔｈｅ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｄ  Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ：ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｃｃｅｓｓｉｏｎ）、Ｃｕｒｒ．Ｉｓｓｕｅｓ  Ｉｎｔｅｓｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、２：４３〜５３］及び［Ｖａｌｅｕｒ，Ｎ．ら（２００４）；ヒト胃腸管におけるラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ  ５５７３０によるコロニー形成及び免疫調節（Ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ  ＡＴＣＣ  ５５７３０  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ）、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、７０：１１７６〜１１８１］。下痢性疾患［Ｓａａｖｅｄｒａ，Ｊ．（２０００）；Ａｍ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ、９５：Ｓ１６〜Ｓ１８］、乳児性疝痛［Ｓａｖｉｎｏ，Ｆ．ら（２００７）；乳児性疝痛の処置におけるラクトバチルス・ロイテリ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｓｔｒａｉｎ  ５５７３０）対シメチコン：前向き無作為化研究（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｓｔｒａｉｎ  ５５７３０）  ｖｅｒｓｕｓ  ｓｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆａｎｔｉｌｅ  ｃｏｌｉｃ：ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｓｔｕｄｙ）、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ、１１９：ｅ１２４〜ｅ１３０］、湿疹［Ａｂｒａｈａｍｓｓｏｎ，Ｔ．Ｒ．ら（２００７）；ＩｇＥ関連湿疹の予防におけるプロバイオティック：二重盲検無作為化プラセボ対照試験（Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩｇＥ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｅｃｚｅｍａ：ａ  ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ）、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１９：１１７４−１１８０］、及びＨ．ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）感染［Ｉｍａｓｅ，Ｋ．ら（２００７）；ラクトバチルス・ロイテリ錠剤はヘリコバクター・ピロリ感染を抑制する  −  二重盲検無作為化プラセボ対照クロスオーバー臨床研究（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ  ｔａｂｌｅｔｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  −  ａ  ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｃｒｏｓｓ−ｏｖｅｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ）、Ｋａｎｓｅｎｓｈｏｇａｋｕ  Ｚａｓｓｈｉ、８１：３８７〜３９３］を含む多くの異なる状態についての有望な治療としてのＬ．ロイテリの報告がある。４つのＬ．ロイテリ株、ＤＳＭ  １７９３８、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ  ４６５９、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ  ５２８９、及���ＡＴＣＣ  ＰＴＡ  ６４７５に関する最近の研究により、それらの菌株が、新生仔ラットの小腸上皮細胞及び回腸におけるリポ多糖誘導性炎症を異なって調節することが実証された。
【００１５】
２００８年に報告された、３０人の早産新生児に関して行われた二重盲検無作為化研究において［Ｉｎｄｒｉｏ，Ｆ．ら（２００８）；早産新生児における摂食耐性、用便習慣、及び胃腸運動へのプロバイオティックの効果（Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｏｎ  ｆｅｅｄｉｎｇ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ，ｂｏｗｅｌ  ｈａｂｉｔｓ，ａｎｄ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｐｒｅｔｅｒｍ  ｎｅｗｂｏｒｎｓ）、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．、１５２（６）：８０１〜６］、ラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ  ５５７３０を受けた新生児は、プラセボを与えられた新生児と比較して、弁閉鎖不全及び１日平均の泣く時間の有意な減少、並びにより多い回数の排便を示した。
【００１６】
今までに、新生児でのニューロン発達へのプロバイオティックの効果に関する報告はない。
【００１７】
したがって、これら最近の先行技術文献を参照すると、新生児の赤ん坊、幼若乳児、幼児、及び小児の健康を向上させるための方法としてプロバイオティック投与の分野においてさらなる進歩の必要性がある。
【００１８】
具体的には、特に新生児乳児、及び若年小児において、食事の変化、化学的（例えば薬剤）又は物理的（擦り傷）損傷、感染、炎症性／免疫性反応等の胃腸管攻撃に対して最良の状態で備えるため、並びにその後の一生における腸管神経系の成熟を強化するために、腸管神経系の健常な発達を援助する必要性がある。
【００１９】
本発明は、動物及びヒトを含む全ての哺乳動物に適用される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明は、新生児における腸管神経系の健常な発達及び／又は修復を促進するためのラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ  １７９３８に関する。ヒト又は動物、特に、胎児、早産又は正期産の乳児、幼児又は小児が、本発明から恩恵を受け得る。本発明は、特に、ＩＵＧＲを経験している乳児、又は低出生体重、若しくは極低出生体重を有する乳児、並びに／又は子宮内、若しくは出生時、若しくは出生後のいずれかでの腸管神経系成長遅延を患う乳児に有益であり得る。
【００２１】
ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ  １７９３８の投与は、正常で健常なニューロン及びグリアの発生を促進する。そのことはまた、末梢神経系の健常なニューロン分化を保証する。
【００２２】
ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ  １７９３８は、その純粋な形で、又は水若しくは母乳中に希釈されて、食品サプリメントにおいて、又はミルク強化物、若しくは低栄養管理（ｔｒｏｐｈｉｃ  ｆｅｅｄｉｎｇ）中に使用される任意のミルクサポートにおいて、乳児用フォーミュラにおいて、又は乳飲料において、乳児又は幼児に直接、投与される。ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ  １７９３８は、１×１０３ｃｆｕから１×１０１２ｃｆｕまで、好ましくは１×１０７ｃｆｕから１×１０１１ｃｆｕ（ｃｆｕ＝コロニー形成単位）の一日量として乳児、幼児、又は小児に投与される。
【００２３】
本発明は、新生児における腸管神経系の健常な発達及び／又は修復を促進するためのラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ  １７９３８を含む組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】生体外（ｅｘ−ｖｉｖｏ）の収縮性応答の電場刺激（ＥＦＳ）：Ａ．空腸  産後１４日で屠殺したＣＴＲＬ−ｗ、ＰＲ−ｗ及びＰＲ−Ｌ．ロイテリ（ＤＳＭ１７９３８）仔における１０Ｈｚでの電場刺激に対する空腸の等尺性収縮性等尺性収縮により得られた張力（曲線下面積（ＡＵＣ））。結果は、中央値±ＳＥＭｅｄｉａｎであり、ｎ=５（ＣＴＲＬ-ＷとＰＲ-Ｗ）又は６（ＰＲ-Ｌ.ロイテリ）である。共通の文字を含まない中央値が異なる、Ｐ＜０．０５。Ｂ．結腸  産後１４日で屠殺したＣＴＲＬ−ｗ、ＰＲ−ｗ及びＰＲ−Ｌ．ロイテリ（ＤＳＭ１７９３８）仔における５Ｈｚでの電場刺激に対する結腸の等尺性収縮により得られた張力（曲線下面積（ＡＵＣ））。結果は、中央値±ＳＥＭｅｄｉａｎであり、ｎ=５（ＣＴＲＬ-ＷとＰＲ-Ｗ）又は６（ＰＲ-Ｌ.ロイテリ）である。共通の文字を含まない中央値が異なる、Ｐ＜０．０５。
【図２】生体外（ｅｘ−ｖｉｖｏ）収縮性応答のアセチルコリン刺激：Ａ．空腸  産後１４日で屠殺したＣＴＲＬ−ｗ、ＰＲ−ｗ及びＰＲ−Ｌ．ロイテリ（ＤＳＭ１７９３８）仔における１０−５Ｍ濃度のアセチルコリンに対する空腸の等尺性収縮により得られた張力（曲線下面積（ＡＵＣ））。結果は、中央値±ＳＥＭｅｄｉａｎであり、ｎ=５（ＰＲ-Ｗ）又は６（ＣＴＲＬ-ＷとＰＲ-Ｌ.ロイテリ）である。共通の文字を含まない中央値が異なる、Ｐ＜０．０５。Ｂ．結腸  産後１４日で屠殺したＣＴＲＬ−ｗ、ＰＲ−ｗ及びＰＲ−Ｌ．ロイテリ（ＤＳＭ１７９３８）仔における１０−５Ｍ濃度のアセチルコリンに対する結腸の等尺性収縮により得られた張力（曲線下面積（ＡＵＣ））。結果は、中央値±ＳＥＭｅｄｉａｎであり、ｎ=５（ＰＲ-Ｗ）又は６（ＣＴＲＬ-ＷとＰＲ-Ｌ.ロイテリ）である。共通の文字を含まない中央値が異なる、Ｐ＜０．０５。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
定義
本明細書において、以下の用語は以下の意味を有する：
【００２６】
「プロバイオティック」とは、宿主の健康又は幸せへの有益な効果を有する微生物細胞調製物又は微生物細胞の成分を意味する［Ｓａｌｍｉｎｅｎ，Ｓ．ら（１９９９）；プロバイオティクス：それらはどのように定義されるべきか（Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ：ｈｏｗ  ｓｈｏｕｌｄ  ｔｈｅｙ  ｂｅ  ｄｅｆｉｎｅｄ）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．、１０：１０７〜１０］。プロバイオティックのその定義が、一般的に認められ、ＷＨＯ定義と一致している。プロバイオティックは、ただ一つの微生物株、様々な株の混合物、並びに／又は様々な細菌種及び属の混合物を含むことができる。混合物の場合、単数形「プロバイオティック」でもなお、プロバイオティック混合物又は調製物を名付けるために用いることができる。本発明の目的のために、ラクトバチルス属の微生物は、プロバイオティックとしてみなされる。
【００２７】
「プレバイオティック」は、一般的に、宿主の腸に存在する微生物の成長及び／又は活動を選択的に刺激することにより宿主に有益に影響し、それに従って、宿主の健康を向上させようとする難消化性食物成分を意味する。
【００２８】
「早期産児」は、妊娠３７週間の前に生まれた乳児を意味する。
【００２９】
「正期産児」は、妊娠３７週間の後に生まれた乳児を意味する。
【００３０】
「幼児」は、歩き始めた頃から３歳までの小児を意味する。
【００３１】
「若年小児」は、３歳から１０歳までの小児を意味する。
【００３２】
本文を通じてＬ．ロイテリと呼ばれるラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＤＳＭ  １７９３８は、Ｂｉｏｇａｉａ  ＡＢ、Ｓｗｅｄｅｎに所有され、科学的菌株名ＤＳＭ  １７９３８を持ち、以前はＡＴＣＣ  ５５７３０であった、Ｌ．ロイテリ株である。ＤＳＭ同定は、ＤＳＭＺ  Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ  Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒ．７ｂ、Ｄ−３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙに委託する。ＤＳＭ  １７９３８。Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ  Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒ．７ｂ  Ｄ−３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ  −  Ｇｅｒｍａｎｙ。
【００３３】
本発明は、哺乳類の腸管神経系の健常な発達促進のためのプロバイオティック、ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ  １７９３８の投与による使用を提供する。
【００３４】
プロバイオティックの投与は、母親を介しての胎児へでもよい。それはまた、早期産児又は正期産児へ、直接的に、又は母親のミルクを通してであってもよい。投与は、一般的には１０歳までの若年小児へ、又は動物における相当する年齢へでもよい。
【００３５】
Ｌ．ロイテリの幼若哺乳動物（ヒト（胎児、乳児、幼児、又は若年小児）又は動物であってもよい）への投与により、腸管神経系の発達へプラス効果が生じ、系を正常に成熟及び発生させる。この効果は、例えば、妊娠期間中の任意の有害事象（例えば、母親の能動的又は受動的喫煙、母親の薬物療法、低い胎盤の質、胎盤位置異常、母親及び／又は胎児の栄養不良など）後に起こった可能性がある子宮内胎児発育遅延（ＩＵＧＲ）を経験しているものに特に有益である。
【００３６】
本発明者らは、本発明のＬ．ロイテリ及び／又はＬ．ロイテリ含有組成物が、これらの生物学的活性に関連しているタンパク質の発現の促進に示されるように、ニューロン細胞の発達、機能、生存、可塑性、及び分化を促進し、並びに変性に対するニューロン細胞を保護するために用いられ得ることを見出している。そのような変性は、例えば、上記で述べられたＩＵＧＲなどの（子宮内で）胎児に影響を及ぼすもの、若しくは新生児に影響を及ぼすもの（出生時の低酸素−虚血、酸素療法及び過酸素症、炎症、腸管外サポートの必要性など）などの任意のストレス状況、又は酸化ストレスをもたらす任意の原因の結果として起こり得る。Ｌ．ロイテリは、腸管ニューロン細胞のニューロンの生存を促進し、及び／又はニューロンの死を制限又は防止し、例えば発生過程において重要なニューロン成長を促進することが見出された。
【００３７】
乳児において、本発明のＬ．ロイテリ及び／又はＬ．ロイテリ含有組成物は、腸管神経系を、例えばニューロン発生期間中に起こる、任意のストレスから保護するために、並びに、それゆえに、ストレス誘導性ニューロン成長遅延及びストレス関連性腸管機能不全を制限及び／又は予防するために、用いられてもよい。
【００３８】
したがって、Ｌ．ロイテリは、本発明の関係において、腸管神経系の発達遅延がすでに観察されている場合に投与されてもよいし、又はそのような遅延が今までのところで観察されていない場合に、予防的に投与されてもよい。
【００３９】
本発明によるＬ．ロイテリを投与することにより、若年哺乳動物の腸内細菌叢が好都合に影響を受け、処置される対象の腸管神経系が健常に発達する。このように処置される乳児、又は幼児、若年小児が出生後の腸管機能不全に関連した病状を患うリスクは低下する。この病状には、遅延した消化／吸収能、胃腸管逆流、腸輸送遅延／便の固化及び便秘、胃腸管コロニー形成障害、及び脆弱な腸管障壁機能が含まれる。また出生後の腸管機能不全に関連した他の病状としては、壊死性腸炎、及び胃腸管不快症状が含まれる。哺乳動物の腸管神経系の健全な発達へのＬ．ロイテリの有益な効果は、下記の段落で詳述される。
【００４０】
プロバイオティックの用量
プロバイオティックは、一日量として、組成物の形で投与されてもよい。妊婦又は授乳期の母親へ投与されるＬ．ロイテリの一日量は、１×１０６ｃｆｕから１×１０１２ｃｆｕまで、好ましくは１×１０８から１×１０１１ｃｆｕ（ｃｆｕ＝コロニー形成単位）である。生まれたばかりの赤ん坊に適した一日量は、１×１０３ｃｆｕから１×１０１２ｃｆｕまで、好ましくは１×１０７から１×１０１１ｃｆｕの範囲である。
【００４１】
したがって、Ｌ．ロイテリは、それが、記載された有益な効果を送達するとの条件で、幅広いパーセンテージで組成物中に存在し得る。しかしながら、好ましくは、Ｌ．ロイテリは、１×１０３ｃｆｕ／ｇから１×１０１２ｃｆｕ／ｇの間の乾燥組成物に等価の量で組成物中に存在する。好ましくは、妊婦又は授乳中の母親への投与について、プロバイオティックは、１×１０４ｃｆｕ／ｇから１×１０１１ｃｆｕ／ｇの間の乾燥組成物に等価の量で存在する。新生児、幼児、及び小児への投与のための１グラムの乾燥組成物あたりに存在するプロバイオティックの量は、より少なく、好ましくは１×１０６から１×１０９であり、当然ながら、上記の一日量は遵守されるべきである。
【００４２】
上記の用量は、細菌が生きている可能性、不活性化され、若しくは死んでいる可能性、又はさらにＤＮＡ若しくは細胞壁物質などの断片として存在する可能性を含む。換言すれば、製剤が含有する細菌の量は、細菌が実際に、生きているか、不活性化され、若しくは死んでいるか、断片化されているか、又はこれらの状態のいずれか若しくは全部の混合物であるかに関係なく、あたかも全ての細菌が生きているかのように、その量の細菌のコロニー形成能力に関して表現される。
【００４３】
投与方法：
（ｉ）妊婦への投与
組成物は、組成物と女性の胃腸管との間の接触を誘導する限り、様々な方法によって妊婦に投与することができる。好ましくは、組成物は、妊婦の食品、飲料、又は食事サプリメントの一部として、経口投与される。組成物はまた、薬学的組成物において投与することができる。好ましくは、投与は経口である。しかしながら、病的状態において、又は別の方法として経腸栄養が用いられる場合、組成物の投与は、経腸栄養に加えることができる。
【００４４】
（ｉｉ）生まれたばかりの子孫への投与：
Ｌ．ロイテリはまた、単独で（純粋に、又は、例えば、水若しくは母乳に希釈して）、サプリメントとして（例えば、ヒトミルク強化物サプリメントとして）、又は薬学的若しくは栄養補助的組成物として、又は乳児用ミルクフォーミュラ中の成分として、子孫に直接的に経口投与することができる。そのようなフォーミュラは、その子孫が出産予定日より前に生まれ、又は低出生体重を有する場合には、「早期産児用フォーミュラ」、「スターターフォーミュラ」、又は「フォローオン（ｆｏｌｌｏｗ−ｏｎ）フォーミュラ」であり得る。フォーミュラはまた、牛乳タンパク質が加水分解されている低アレルゲン性（ＨＡ）フォーミュラであってもよい。そのようなスターターフォーミュラの例は例２に示されている。
【００４５】
（ｉｉｉ）幼児、及び若年小児への投与：
Ｌ．ロイテリはまた、薬学的又は栄養補助的組成物、発育用ミルク、乳飲料、食品サプリメント、ミルクを主成分とするヨーグルト、デザート及びプディング菓子、ビスケット及びシリアルバー、穀物及び果実を主成分とする飲料の形で、幼児、及び若年小児に経口で投与することができる。
【００４６】
（ｉｖ）動物への投与
Ｌ．ロイテリはまた、動物へ、単独で、又は水において、又は食品サプリメント、薬学的若しくは栄養補助的組成物、ミルク食品若しくはペットフードの形で、経口投与されてもよい。
【００４７】
他の化合物との投与
Ｌ．ロイテリは、単独で（純粋に、又は、例えば、水、若しくは母乳を含むミルクに希釈されて）、又は他の化合物（食事サプリメント、栄養サプリメント、医薬品、担体、香料、消化性又は難消化性成分など）との混合物において、投与することができる。ビタミン及びミネラルは、典型的な食事サプリメントの例である。好ましい実施形態において、Ｌ．ロイテリは、記載された、幼若哺乳動物への有益な効果を増強する他の化合物と共に、組成物、例えば、乳児用フォーミュラにおいて、投与される。そのような相乗的化合物は、Ｌ．ロイテリの腸管への送達を促進する担体若しくはマトリックスであってもよく、又はそれらは、子孫の腸管神経系へのその組成物の効果を別な形で増強してもよい。そのような化合物は、相乗的に、若しくは別々に、乳児における腸管神経系の発生に影響し、及び／又はプロバイオティックの効果を強化する他の活性化合物であり得る。そのような相乗的化合物の例はマルトデキストリンである。マルトデキストリンの効果の１つは、プロバイオティックについての担体を提供して、それの効果を増強すること、及び凝集を防止することである。
【００４８】
本発明の組成物、特に乳児用フォーミュラに含まれ得る相乗的化合物の他の例は、プレバイオティック化合物である。プレバイオティックは、結腸中の１つ又は限られた数の細菌の成長及び／活動を選択的に刺激することにより宿主に有益に影響し、それに従って、宿主の健康を向上させる難消化性食物成分である。そのような成分は、それらが、胃又は小腸において分解されず、吸収され、それゆえに、結腸へ無傷で通過するという意味で難消化性であり、その結腸において、それらは、有益細菌によって選択的に発酵する。プレバイオティックの例には、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、牛乳オリゴ糖（ＣＭＯＳ）、及びガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）などの特定のオリゴ糖が挙げられる。商標Ｒａｆｔｉｌｏｓｅ（登録商標）として販売される製品などの１０％短鎖フラクトオリゴ糖、又は商標Ｒａｆｔｉｌｉｎｅ（登録商標）として販売される製品などの１０％イヌリンと共に９０％ＧＯＳなどのプレバイオティックの組み合わせが用いられてもよい。本発明の関係において用いることができるプレバイオティックの他の例には、任意でシアル酸、フルクトース、フコース、ガラクトース、又はマンノースを含有する、ミルク又は他の源から得られるオリゴ糖群が挙げられる。好ましいプレバイオティックは、シアロオリゴ糖（ＳＯＳ）、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、イソマルトオリゴ糖（ＩＭＯ）、キシロオリゴ糖（ＸＯＳ）、アラビノキシロオリゴ糖（ＡＸＯＳ）、マンナンオリゴ糖（ＭＯＳ）、ダイズのオリゴ糖、グリコシルスクロース（ＧＳ）、ラクトスクロース（ＬＳ）、シアリルラクトース（ＳＬ）、フコシルラクトース（ＦＬ）、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース（ＬＮＮＴ）、ラクツロース（ＬＡ）、パラチノースオリゴ糖（ＰＡＯ）、マルトオリゴ糖、ガム及び／又はその加水分解産物、ペクチン、デンプン、及び／又はその加水分解産物である。本発明による乳児用フォーミュラは、好ましくは、乾燥組成物の総重量の０．３から１０％の量で少なくとも１つのプレバイオティックをさらに含有する。
【００４９】
Ｌ．ロイテリと共に投与される糖質及び全ての他の化合物の一日量は、公表された安全指針及び規制上の要求に常に従うべきである。これは、生まれたばかりの赤ん坊、とりわけ、低出生体重、又は極低出生体重で生まれた赤ん坊への投与に関して、特に重要である。
【００５０】
Ｌ．ロイテリを含有する組成物、例えば、乳児用フォーミュラは、最高４．０ｇ／１００ｋｃａｌまで、３．０ｇ／１００ｋｃａｌまで、又は２．０ｇ／１００ｋｃａｌまで、好ましくは１．８〜２．０ｇ／１００ｋｃａｌの量でタンパク質源を含有してもよい。タンパク質の型は、タンパク質源の重量で５０％より多くが乳清であることが好ましいが、必須アミノ酸含有量についての最小必要量が満たされ、且つ順調な成長が保証されるという条件ならば、本発明にとって重大な意味を持つとは思われない。一実施形態において、タンパク質含有量は、３０％から８０％の間の乳清タンパク質である。したがって、乳清、カゼイン、及びそれらの混合物に基づいたタンパク質源、並びにダイズに基づいたタンパク質源もまた用いられてもよい。乳清タンパク質に関する限り、タンパク質源は、酸性乳清若しくは甘い乳清又はそれらの混合物に基づいてもよく、いかなる割合が望まれるにせよ、α−ラクトアルブミン及びβ−ラクトグロブリンを含んでもよい。
【００５１】
タンパク質は、未変性でも、加水分解されていても、又は未変性タンパク質と加水分解されたタンパク質の混合物でもよい。例えば、牛乳アレルギーを発症するリスクがあることが考えられる乳児のために、部分的に加水分解されたタンパク質（２％から２０％の間の加水分解の程度）を供給することが望ましい場合がある。加水分解されたタンパク質が必要とされる場合には、加水分解工程が、要求通り、当技術分野において知られているように、実行されてもよい。例えば、乳清タンパク質加水分解産物は、１つ又は複数の段階において乳清画分を酵素的に加水分解することにより、調製され得る。出発材料として用いられる乳清画分が実質的にラクトースを含まない場合には、そのタンパク質は、加水分解過程中にリシン妨害をほとんど受けないことが見出されている。これにより、リシン妨害の程度を、総リシン重量の約１５％からリシン重量の約１０％未満まで、例えば、タンパク質源の栄養的品質を大いに向上させる、リシン重量の約７％まで、低下させることができる。
【００５２】
組成物はまた、糖質源及び／又は脂肪源を含んでもよい。乳児用フォーミュラは、脂質源を含有してもよい。脂質源は、乳児用フォーミュラに用いるのに適している任意の脂質又は脂肪であってよい。好ましい脂肪源には、パームオレイン、高オレイン酸サンフラワー油、及び高オレイン酸サフラワー油が挙げられる。必須脂肪酸である、リノール酸及びα−リノレン酸もまた、魚油又は微生物油などの多量のあらかじめ形成されたアラキドン酸及びドコサヘキサエン酸を含有する少量の油として加えられてもよい。総計で、脂肪含有量は、好ましくは、フォーミュラの総エネルギーの３０％から５５％の間に寄与するようにする。脂肪源は、好ましくは、約５：１〜約１５：１、例えば、約８：１〜約１０：１のｎ−６脂肪酸対ｎ−３脂肪酸の比を有する。
【００５３】
追加の糖質源は、栄養組成物に加えられてもよい。それは、好ましくは、栄養組成物のエネルギーの約４０％〜約８０％を提供する。任意の適切な糖質が用いられてもよく、例えば、スクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、コーンシロップ固形物、マルトデキストリン、又はそれらの混合物である。
【００５４】
追加の食物繊維もまた、必要に応じて、加えられてもよい。加えられる場合には、それは好ましくは、栄養組成物のエネルギーの最高約５％までを構成する。食物繊維は、例えば、ダイズ、エンドウ、エンバク、ペクチン、グアーガム、アカシアガム、フラクトオリゴ糖、又はそれらの混合物を含む、任意の適切な起源由来であってもよい。適切なビタミン及びミネラルは、適切な指針に合う量で栄養組成物中に含まれてもよい。
【００５５】
乳児用フォーミュラに任意で存在するミネラル、ビタミン、及び他の栄養素の例には、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、葉酸、イノシトール、ナイアシン、ビオチン、パントテン酸、コリン、カルシウム、亜リン酸、ヨウ素、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、マグネシウム、クロライド、カリウム、ナトリウム、セレニウム、クロム、モリブデン、タウリン、及びＬ−カルニチンが挙げられる。ミネラルは通常、塩の形で加えられる。特定のミネラル及び他のビタミンの存在及び量は、意図される乳児集団によって異なる。
【００５６】
乳児用フォーミュラは、任意で、繊維、ラクトフェリン、ヌクレオチド、ヌクレオシドなどの有益な効果を生じ得る他の物質を含有してもよい。
【００５７】
１つ又は複数の必須長鎖脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）が組成物中に含まれてもよい。加えられ得るＬＣ−ＰＵＦＡの例は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びアラキドン酸（ＡＡ）である。ＬＣ−ＰＵＦＡは、それらが、組成物中に存在する脂肪酸の０．０１％より多くを構成するような濃度で加えられてもよい。
【００５８】
１つ又は複数の食品グレードの乳化剤が、必要に応じて、栄養組成物中に含まれてもよい；例えば、モノグリセリド及びジグリセリドのジアセチル酒石酸エステル、レシチン、及びモノグリセリド若しくはジグリセリド、又はそれらの混合物。同様に、適切な塩及び／又は安定剤が含まれてもよい。香料が組成物に加えられ得る。
【００５９】
投与期間
投与の継続期間は様々であり得る。相対的に短い投与継続期間（例えば、新生児について１〜２週間の間の連日投与）でプラス効果が予想されるが、より長い継続期間が、増強された効果を与え、又は少なくとも、年長乳児において（例えば、３ヶ月間、５ヶ月間、８ヶ月間、又は１２ヶ月間の継続期間）若しくは若年小児において（例えば、４歳、又は６歳、又はさらに１０歳までの継続期間）その効果を維持すると考えられる。動物への投与について、対応する継続期間が適用される。
【００６０】
妊婦は、妊娠に気付くとすぐに、Ｌ．ロイテリを摂取し始めてもよい。しかしながら、投与期間はまた、例えば女性が妊娠するように試みている最中ならば、妊娠が始まる前に始めてもよい。投与は、妊娠が始まった後の任意の時点から始めてもよい。それは、妊娠中相対的に遅くに始めてもよく、好ましくは、ヒト妊娠の場合、妊娠３ヶ月目、４ヶ月目、５ヶ月目、６ヶ月目、７ヶ月目、若しくは８ヶ月目、又は他の哺乳動物については対応する期間において、又は出産予定日の２週間前までに始めてもよい。
【００６１】
投与期間は、連続（例えば、離乳までの授乳期を含む、それまで）又は不連続であり得る。連続投与は、より持続した効果にとって好ましい。しかしながら、不連続パターン（例えば、１ヶ月あたり１週間の間、又は隔週中の連日投与）が子孫にプラス効果を誘導することができると推測される。
【００６２】
投与は、妊娠期間の少なくとも一部、及び授乳期の少なくとも一部、又は新生児が母乳を与えられないならば、その相当する期間の少なくとも一部を網羅してもよい。好ましくは、妊婦への投与期間は、実質的に妊娠期間の全期間を網羅するが、これは、より短くてもよい。同様に、授乳中の母親についての投与期間は、好ましくは、実質的に授乳期の全期間を網羅するが、この場合もやはり、この期間はより短くてもよい。
【００６３】
好ましくは、母親への投与は、毎日摂取（１日に１回又は２回、摂取されること）又は毎週摂取（１週間につき１回又は２回、摂取されること）による。
【００６４】
Ｌ．ロイテリは、乳児に直接、投与されてもよい。これは、特に、母親が母乳で育てない場合、又は母親が母乳で育てることを中止した後の場合である。しかしながら、母乳で育てられている最中の乳児もまた、Ｌ．ロイテリを直接投与によって受けてもよい。
【００６５】
好ましくは、乳児への投与は、毎日摂取による。例えば、Ｌ．ロイテリが乳児用フォーミュラとして投与される場合には、投与は、摂食ごと、すなわち、歳未満の乳児については毎日約４回〜約６回であり、摂食の回数は年齢と共に低下する。１歳より上の乳児について、投与は、より少なく、１日に１回又は２回であってもよい。幼児及び若年小児について、投与は、毎日又は毎週（週あたり１回又は２回、摂取されること）であってもよい。
【００６６】
授乳を介してか、又は直接投与によるか、又は両方の方法によるかのいずれかでの乳児への投与は、生後６ヶ月、又はさらに１歳若しくはそれ以上まで継続されてもよい。したがって、Ｌ．ロイテリは、授乳が行われている場合には、授乳期間中、又は部分的若しくは完全離乳後、投与されてもよい。投与は、乳児に、幼児時期を通って、さらに１０歳まで、継続してもよい。腸管神経系はこの年齢まで小児において発達が続くことが知られている［Ｗｅｓｔｅｒ  Ｔら、（１９９９）；正常ヒト腸の腸筋神経叢における顕著な出生後の変化（Ｎｏｔａｂｌｅ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｙｅｎｔｅｒｉｃ ｐｌｅｘｕｓ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｂｏｗｅｌ）, Ｇｕｔ、２２：６６６−６７４］。従って、本願発明者らはＬ．ロイテリの投与がこの年齢に至るまでプラスの効果を継続してもたらすと推察する。
【００６７】
Ｌ．ロイテリ投与の効果：
新生児へ投与されるＬ．ロイテリは、腸管神経系の健常な発達を促進する。例１に詳述されたラットモデル実験において、Ｌ．ロイテリ投与の、ニューロン発達への効果を、評価した。
【００６８】
この実験において、母親の食餌によって誘導された子宮内胎児発育遅延を経験した仔（ＰＲ群）、及びＩＵＧＲを経験しなかった仔（ＣＴＲＬ）に、水（対照；すなわち、ＣＴＲＬ−ｗ及びＰＲ−ｗ）又はＬ．ロイテリ（ＰＲ−Ｌ．ロイテリ）を、出生後２日目から補給した。
【００６９】
出生から２週間後の屠殺時点において、ニューロン発生を、以下の２つの方法を用いて評価した：（ｉ）空腸における標的遺伝子発現プロファイリングアプローチ、並びに（ｉｉ）電場刺激（ＥＦＳ）に対する空腸及び結腸の生体外（ｅｘ−ｖｉｖｏ）収縮性応答の測定による方法。後者の方法は、腸管神経系によって引き起こされる収縮性応答、及びそれに従って、腸管神経系の成熟及び機能の程度を測定する。
【００７０】
アセチルコリンに対する空腸及び結腸の生体外（ｅｘ−ｖｉｖｏ）収縮性応答もまた評価し、これにより、腸筋収縮性応答自体を測定し、したがって、その腸筋収縮性応答は、腸筋の成熟及び機能の程度を反映する。後者の実験を、本発明者らがそれらの因子、すなわち、神経系と筋肉を分離し、測定された収縮性応答を照合することができるように、対照として実施した。
【００７１】
空腸及び結腸のＥＦＳに対する生体外（ｅｘ−ｖｉｖｏ）の収縮性応答：
タンパク質制限モデルにおいて、Ｌ．ロイテリ補給後、ニューロン成熟を評価するために、ＥＦＳに対する空腸及び結腸の収縮性応答（ニューロンネットワークの筋収縮を刺激する関わり合い／能力を測定する）を測定した。タンパク質制限による、又はＬ．ロイテリ補給後の任意の腸筋成熟の潜在的関わり合いを、アセチルコリンに対する空腸及び結腸の収縮性応答を測定することにより評価した。
【００７２】
ＥＦＳに対する空腸収縮性応答は、１０Ｈｚの周波数で、ＣＴＲＬ−ｗと比較して、ＰＲ−ｗにおいて低下した（Ｐ＝０．０５５）（図１Ａ）。アセチルコリンに対する空腸収縮性応答は、ＣＴＲＬ−ｗと比較して、ＰＲ−ｗにおいてわずかに低下したが、有意ではなかった（Ｐ＝０．３０）（図２Ａ）。総合すると、これは、タンパク質制限された仔の空腸における神経−筋肉相互作用の障害、特に、ニューロン成熟の障害を反映している。
【００７３】
Ｌ．ロイテリの補給は、１０Ｈｚにおける空腸の収縮性応答能力を、対照と統計学的に類似したレベルまで有意に（Ｐ＝０．０１７）増加させた（図１Ａ）。これは、Ｌ．ロイテリの、空腸におけるニューロン刺激能力への促進効果を示し、そのことは、新生児期間におけるニューロン発生及び機能の促進を反映する。アセチルコリンに対する空腸収縮性応答能力がＰＲ−ｗと比較して変化しないままであったため（図２Ａ）、実際、空腸筋コンパートメントの成熟は、Ｌ．ロイテリ補給後に有意には改変されなかった（Ｐ＝１．００）。
【００７４】
ＥＦＳに対する結腸収縮性応答は、５Ｈｚで、ＣＴＲＬ−ｗと比較して、ＰＲ−ｗにおいて有意に低下した（図１Ｂ）。アセチルコリンに対する結腸収縮性応答は、ＣＴＲＬ−ｗと比較してＰＲ−ｗにおいて有意に低下した（Ｐ＝０．０４）（図２Ｂ）。総合すると、これは、タンパク質制限された仔の結腸における、ニューロン成熟と筋肉成熟の両方の障害と共に、神経−筋肉相互作用の障害を反映している。
【００７５】
Ｌ．ロイテリの補給は、５Ｈｚの周波数において、結腸の収縮性応答能力を増加させ（Ｐ＝０．００８）（図１Ｂ）、この場合もやはり、Ｌ．ロイテリの、結腸におけるニューロン発生及び機能への刺激性効果を示している。アセチルコリンに対する結腸の収縮性応答能力がＰＲ−ｗと比較して変化しないままであったため（図２Ｂ）、結腸筋コンパートメントの成熟は、実際、Ｌ．ロイテリ補給後、有意には改変されなかった（Ｐ＝０．４３）。
【００７６】
総合すると、これらのデータは、出生後期間中にニューロン発生及び機能を促進するＬ．ロイテリの有益な効果を明らかに示している。これらのデータに基づいて、Ｌ．ロイテリは、新生児期間中、腸管ニューロン発生を促進及び／又は加速するための新しい栄養溶液を構成する。
【００７７】
腸ニューロン発生に関与する遺伝子の発現
例１のラットモデル実験において、タンパク質制限、及びタンパク質制限に続いてのＬ．ロイテリ補給の、ニューロン発生生物学的経路に関与する主要な遺伝子の発現への効果を、遺伝子発現プロファイリングアプローチを用いて、空腸において研究した。研究された遺伝子は、表２に列挙され、データは表３に提示されている。
【００７８】
処理（タンパク質制限）とＬ．ロイテリの補給との間での発現レベルの有意な差が、有意なレベルで発現した遺伝子のうちの１１個について観察されたが、３個は、統計学的に有意ではなかった、異なる傾向を示した。有意に異なって発現した遺伝子は、ニューロン及びグリア細胞の成熟若しくは分化に主として関与する遺伝子であり、又はニューロン成長及び可塑性のマーカーである。
【００７９】
本発明者らは、タンパク質制限された仔（ＰＲ）において、代償機構が、小腸における細胞発生及びニューロン発生を促進するのを助けるように起こることを、以前示している（Ｃｅｔｔｏｕｒ  ａｎｄ  Ｆａｕｒｅ、出版準備中の原稿）。本データはこれらの所見を裏付けている。具体的には、ニューロン発生についてのマーカーである、Ｇｆｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体α１）、Ｎｔｆ４（ニューロトロフィン４）、Ｓ１００Ｂ（Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ｂ）、及びＧＡＰ４３（成長関連タンパク質−４３）などの神経栄養因子及びそれらの受容体の遺伝子発現が、ＣＴＲＬ−ｗと比較してＰＲ−ｗ群において有意に上方制御された。これは、その動物における不均衡及び「ストレス」状況を反映している可能性が高いが、それでもなお、ＥＦＳ刺激後の本発明者らの結果によって示されているように、ニューロン成熟を促進するには不十分なままである。
【００８０】
Ｌ．ロイテリの補給は、これらの重要な遺伝子の一部の発現レベルを、ＣＴＲＬ−ｗと類似したレベルまで有意に回復させた（表３参照）。影響された遺伝子は下に記載されている。
【００８１】
ＧＡＰ４３は、発生中のニューロン成長円錐において高度に発現するニューロン成長及び可塑性マーカーであり、したがって、ニューロン発生についてのマーカーである［Ｂｅｎｏｗｉｔｚ，Ｌ．Ｉ．及びＲｏｕｔｔｅｎｂｅｒｇ，Ａ．（１９９７）；ＧＡＰ−４３：ニューロン発生及び可塑性の内因性決定因子（ＧＡＰ−４３：ａｎ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２０（２）：８４〜９１］。［Ｃａｐｏｎｅ  Ｇ．Ｔ．ら（１９９１）；正常マウス及び異数体マウスの脳における成長関連タンパク質−４３（Ｇａｐ４３）をコードする遺伝子の発生過程での発現（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４３（Ｇａｐ４３）  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎｓ  ｏｆ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ａｎｅｕｐｌｏｉｄ  ｍｉｃｅ）、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．、２９（４）：４４９〜６０］。
【００８２】
ＴｒｋＣとしても知られたＮｔｒｋ３は、ニューロン分化及び生存などのいくつかの神経栄養因子の複数の効果を媒介する受容体であり、特に、新生児の腸管神経系発生中に特に重要であるニューロトロフィン−３を結合する［Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ  Ｐ．Ｃ．ら（１９９０）；ニューロトロフィン−３：ＮＧＦ及びＢＤＮＦに関係した神経栄養因子（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ−３：ａ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ＮＧＦ  ａｎｄ  ＢＤＮＦ）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３；２４７（４９４９  Ｐｔ  １）：１４４６〜５１］。
【００８３】
Ｓ１００は、発生中のニワトリニューロン及びシュワン細胞において存在し、インビボでの運動ニューロン生存を促進する。［Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ，Ａ．ら（１９９２）；強力な神経栄養因子Ｓ１００Ｂはまたグリア細胞発生についてのバイオマーカーでもある（Ｓ１００Ｂ，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ，ｉｓ  ａｌｓｏ  ａ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．、２３（４）：４５１〜６６］。
【００８４】
これらの後者の遺伝子についての遺伝子発現レベルの対照動物のそれのレベルへの回復は、Ｌ．ロイテリの補給が、その仔において正常且つ健常なニューロン及びグリアの発生活性を回復するのを助けることを示している。したがって、そのモデルは、Ｌ．ロイテリの投与が、ＩＵＧＲを患ったことがある動物が、ニューロン発生、機能性、生存、可塑性、及び分化に関して「正常な」又は「健常な」状態へ回復するのを助けることができることを実証している。
【００８５】
ＳＯＸ１０の遺伝子発現レベルは、Ｌ．ロイテリの補給後、有意に上方制御された。ＳＯＸ１０は、発生中の末梢神経系におけるニューロン分化にとって決定的に重要な転写因子をコードする。それは、胎児期及び初期生後発達期間において高度に存在するグリア前駆細胞及びニューロン前駆細胞についてのマーカーである［Ｗｅｇｎｅｒ  Ｍ．及びＳｔｏｌｔ，Ｃ．Ｃ．（２００５）；幹細胞からニューロン及びグリアへ：神経発生のＳｏｘファミリーの観点（Ｆｒｏｍ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ａｎｄ  ｇｌｉａ：ａ  Ｓｏｘｉｓｔ’ｓ  ｖｉｅｗ  ｏｆ  ｎｅｕｒａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２５（１１）：５８３〜８］及び［Ｙｏｕｎｇら（２００３）；マウス腸における神経堤由来細胞によるニューロン及びグリアのマーカーの獲得（Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ａｎｄ  ｇｌｉａｌ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｂｙ  ｎｅｕｒａｌ  ｃｒｅｓｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、４５６：１〜１１］。したがって、そのようなＬ．ロイテリ補給によるＳＯＸ１０発現の刺激は、ニューロンの分化及び機能性を加速及び／又は促進し、それに従って、ニューロンネットワークの迅速な確立を支持する可能性が高い。
【００８６】
表３において観察される遺伝子発現の改変は、図１においてＥＦＳに対するニューロン刺激性応答の観察される促進に寄与する可能性が高い。
【００８７】
Ｌ．ロイテリ株は、母乳で育てられた小児の糞便微生物叢から単離されるプロバイオティックである。したがって、母乳で育てられた小児の微生物叢をできる限り忠実に模倣しようと試みる健康促進ストラテジーに関して、特に母乳で育てられない小児への、Ｌ．ロイテリの投与は、母乳で育てられた小児に見出されない他の株に対する優位性を提供する可能性がある。
【実施例】
【００８８】
（例１）
動物研究（飼育及び屠殺）：
動物実験を、Ｏｆｆｉｃｅ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｉｒｅ  Ｃａｎｔｏｎａｌ、Ｅｔａｔ  ｄｅ  Ｖａｕｄによって承認された許可番号２１２０により行った。月齢２ヶ月の雌スプラーグドーリーラットを、Ｈａｒｌａｎ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａから妊娠１週間後に入手した。それらが到着した日、ラット雌親を、個々のケージに入れ、対照群（ＣＴＲＬ）か又はタンパク質制限群（ＰＲ）のいずれかに無作為に割り当てた。動物を、自由に食物及び水にアクセスさせ、１２時間の明／暗サイクルで維持した。
【００８９】
ＣＴＲＬ雌親及びＰＲ雌親の食餌は表１に詳述されている。ＣＴＲＬ雌親は、妊娠期間中の標準ラットタンパク質必要量（Ｒｅｅｖｅｓら、１９９３）に適合する２０％のタンパク質（カゼイン）を含有する対照食餌を受けた。ＰＲ雌親は、１０％のタンパク質（カゼイン）を含有するＰＲ食餌を受けた。両方の食餌は等カロリーであり、タンパク質不足は、コーンスターチの添加によって釣り合わされた。
【表１】
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【００９０】
ＣＴＲＬ雌親及びＰＲ雌親は、妊娠期間及び授乳期間の両方の間、屠殺の日（出産後１４日目（ＰＮＤ１４））まで、それらのそれぞれの食餌を受けた。
【００９１】
ＰＮＤ２において、仔を、同じ実験群からの雌親に無作為に割り当て、産仔数を、同腹仔あたり最小数の４〜５匹の雄を有する、雌親あたり９匹の仔に調整した。
【００９２】
ＰＮＤ２からＰＮＤ１４まで、水又はＬ．ロイテリ含有溶液の毎日の手／ピペットでの給餌補給を、対照群又は処置群にそれぞれ、投与した。補給の体積は、ラット仔の成長に見合うように徐々に適応させた（１５０μｌ／１００ｇ体重）。
【００９３】
群及び食餌は以下の通りであった：
１）ＣＴＲＬ−ｗ：水の補給を受ける、ＣＴＲＬ雌親から生まれたＣＴＲＬ仔
２）ＰＲ−ｗ：水の補給を受ける、ＰＲ雌親から生まれたＰＲ仔
３）ＰＲ−Ｌ．ロイテリ：凍結乾燥されたＬ．ロイテリＤＳＭ  １７９３８（１．１０９ｃｆｕ／日）の補給を受ける、ＰＲ雌親から生まれたＰＲ仔
【００９４】
ＰＮＤ１４において、ＣＴＲＬ群及びＰＲ群からの最大１０匹の仔の体重を測定し、その後、ハロタン麻酔後、斬首により屠殺した。
【００９５】
電場刺激（ＥＦＳ）に対する空腸及び結腸の生体外（ｅｘ−ｖｉｖｏ）の収縮性応答：
遠位空腸及び遠位結腸の約１ｃｍの長さのセグメントを、９５％Ｏ２／５％ＣＯ２であらかじめ酸素添加された冷たいクレブス液（ＣａＣｌ２（５ｍＭ）、ＭｇＣｌ２・６Ｈ２（１．２ｍＭ）、ＮａＣｌ（１２０ｍＭ）、ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ（１．２ｍＭ）、ＮａＨＣＯ３（１５．５ｍＭ）、ＫＣｌ（５．９ｍＭ）、フェノールレッド（０．００５ｍＭ）、及びグルコース（１１．５ｍＭ））中に入れた。９５％Ｏ２／５％ＣＯ２で酸素添加されたクレブス液で満たされた組織バス（５０ｍｌ容積）中に、３７℃で、腸セグメントを、それらの縦軸に沿って吊した。その筋肉の一端を、固定クランプに取り付けた。他端を、非弾性ワイヤーを介して等尺性力変換器に取り付けた。３０分間の安定化時間が設けられ、自発的収縮が得られた。その後、安静時において任意のさらなるストレッチが張力を増加させるように、組織を最初の長さまで伸ばした。遠位空腸及び結腸における等尺性収縮性を、アセチルコリン（Ａｃｈ、１０−５Ｍ）により、又は電場刺激（ＥＦＳ、５〜１０Ｈｚ）により誘導した。Ａｃｈを１分間、適用した。用量反応曲線の完成後、その条片を、それらが収縮する能力を維持していることを保証するために、８０ｍＭ  ＫＣｌで試験した。シグナルを、Ｐｏｗｅｒｌａｂ  Ｃｈａｒｔ  ３．４を用いてコンピュータ上にデジタル的に記録した。注意深くブロットし、組織断片の重量を測定した後、結果を、断面積によって標準化した。非線形フィッティングを、Ｐｒｉｓｍ  ４．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＵＳＡ）を用いて実施した。周波数を得るために、測定されたシグナルのパワー密度スペクトルの分析を行った。２Ｈｚ（１００Ｈｚのナイキスト周波数よりはるかに小さい）のカットオフ周波数を持つ高域フィルターを適用した。１、３秒間の重複を有するパワースペクトル密度の算出のためにウエルチ方法を用いて、低周波数離散化を課した：一連の周波数を、０Ｈｚから２Ｈｚの間に、０．０５Ｈｚの等間隔で規定した。パワースペクトル密度の計算を、Ｇｏｅｒｔｚｅｌアルゴリズムを用いて行った。２Ｈｚより下の３つの最も大きいパワー値に対応する３つの周波数を選択した。
【００９６】
遺伝子発現プロファイリング：
ＴｒｉＰｕｒｅ（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）試薬でのフェノール／クロロホルム方法を製造会社の使用説明書に従って用いて、ＰＲ仔及びＣＴＲＬ仔の空腸から全ＲＮＡを抽出した。簡単に述べれば、凍結組織試料（５０〜１００ｍｇ）を、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ  ＡＧ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて、１ｍｌのＴｒｉＰｕｒｅ（登録商標）中にホモジナイズした。ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ  ＲＮＡ定量化キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）及びＲＮＡ  ６０００  Ｎａｎｏ  ＬａｂＣｈｉｐキット（ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、それらのキットと共に提供された使用説明書に従って用いて、単離されたＲＮＡの量及び質を測定した。オリゴ（ｄＴ１５）プライマー（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）及びＩｍＰｒｏｍ−ＩＩ（ｔｍ）逆転写システム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、製造会社によって提供された使用説明書に従って用いて、１μｇの全ＲＮＡに関して、逆転写を実施した。
【表２】
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【００９７】
腸管神経系発生に関与する主要な遺伝子の発現レベル（表２参照）を、ＳｙｂｅｒｇｒｅｅｎによるＲＴ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ  ＰＣＲ  Ａｒｒａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＳＡＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いる２ステップ定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって評価した。
【００９８】
特定のセットのプライマー及び蛍光ＴＡＭＲＡプローブを用いて、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、バージョン２．２を使用する７６００ＨＴ  ＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でのＰＣＲ反応の対数線形相中、２連で測定を行った。製造会社によって特定のプライマー及びプローブを反応カードの３８４ウェルの各々へあらかじめ負荷された２μｌのウェル内で、ＰＣＲ反応は起きた。ＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡポリメラーゼ酵素（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、ヌクレオチド、及び受動負荷参照として用いられるＲＯＸ蛍光色素を含有するＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と、０．８ｎｇ／μｌの最終ｃＤＮＡ試料濃度を用いて、反応を実施した。用いられるプライマー及びプローブの配列は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによって設計及び確証され、Ａｓｓａｙ−ｏｎ−Ｄｅｍａｎｄラットライブラリーから取られた。各遺伝子の相対的発現レベルを、対照遺伝子（発現が、本発明者らの条件において、実験群にわたって統計学的に安定していた遺伝子）の幾何平均によって標準化した。
【表３】
2015508396.tif 000004
【００９９】
統計
タンパク質制限の効果を、ＰＲ群をＣＴＲＬ群と比較することにより、評価した。Ｌ．ロイテリ補給の効果を、ＰＲ−Ｌ．ロイテリ群をＰＲ群と比較することにより評価し、ＣＴＲＬレベルへの最終的な回復を、ＰＲ−Ｌ．ロイテリ群をＣＴＲＬ群と比較することにより評価した。
【０１００】
ノンパラメトリック方法を用いて、データを解析した（但し遺伝子発現は除く。以下を参照）。ウィルコクソン順位和検定を用いて、処置間の差を検定した。９５％信頼区間を有するペアワイズ処置差のホッジス・レーマン推定も得られた。遺伝子発現については、ｌｏｇ２値とみなして、生のサイクル閾値（Ｃｔ）数に基づき統計解析を実施した。一元配置分散分析法（ＡＮＯＶＡ）を遺伝子−対照遺伝子間の変化に適用し、計測ｐ-値は少なくとも一つの群が他の群と異なる確率を示す。計算は５個の潜在的ハウスキーピング遺伝子に対して、又は複数の平均値に対して実施し、少なくとも残留誤差の基準内で誤差の最も少ないものを用いた。
【０１０１】
（例２）
本発明により用いられる乳児用フォーミュラの組成の例は下記に示されている。この組成は、例示としてのみ示されている。タンパク質源は、通常の乳清タンパク質とカゼインの混合物である。
【表４−１】
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【表４−２】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【国際調査報告】
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