(57)【要約】  本発明は、１種以上の活性物質を送達するための組成物、特に、微生物を含むマトリクス材料を含む組成物、例えばビーズに関する。特に、本発明は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を含む組成物に関する。マトリクス材料はまた、界面活性剤を含んでよく、更にアジュバントを含んでよい。本発明は更に、そのような組成物の製造および使用に関し、他の対象に関する。
2015521997.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロゲル形成ポリマーを含むマトリクスと、
該マトリクス内に含まれる、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物、界面活性剤、並びにアジュバントと、
を含む組成物。
【請求項２】
・界面活性剤、
・生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物、
・アジュバント、及び
・前記界面活性剤、前記微生物及び前記アジュバントを含むヒドロゲル形成ポリマーを含む組成物であって、
水と混合したときに、界面活性剤及びアジュバントを含む自己組織体を放出可能である、組成物。
【請求項３】
前記アジュバントの少なくとも一部が、前記界面活性剤の少なくとも一部と結合している、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記微生物内容物の少なくとも一部が、前記界面活性剤の少なくとも一部と結合している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒドロゲル形成ポリマーに対する前記界面活性剤の重量比が、１：０．５〜１：２．５であり、１：０．５〜１：２、例えば１：１〜１：２．５又は１：１〜１：２であってもよい、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ヒドロゲル形成ポリマーに対する前記界面活性剤の重量比が、１：１．４〜１：１．８、例えば、１：１．６〜１：１．７である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、サーモトロピックヒドロゲル形成ポリマー、及びその組み合わせから選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、ゼラチン、寒天、アガロース、ペクチン、カラギーナン、及びキトサン、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、ゼラチンを含むか、又はゼラチンである、請求項７又は請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、組成物の乾燥重量に基づいて、少なくとも２５重量％、好適には少なくとも４０重量％、例えば２５〜７０重量％、場合によっては４０〜７０重量％のヒドロゲル形成ポリマーを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、可塑剤、例えばソルビトール又はグリセリンを更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記可塑剤が、組成物の乾燥重量の１０重量％以下で、例えば３〜８重量％で、又は好適には４重量％〜６重量％で組成物中に存在する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
キトサンを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記微生物が細菌であり、定着因子、例えば定着因子抗原Ｉ（ＣＡＦ／Ｉ）発現細菌であってもよい、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記微生物が、腸管毒素原性大腸菌である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記微生物がヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記微生物がビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏ  Ｃｈｏｌｅｒａｅ）である請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記微生物が、ウイルス又は真菌である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記微生物に加え、１種以上の抗原を更に含む、例えば、複数種の微生物、例えば、複数種の単細胞微生物を含み、複数種の細菌株を含んでいてもよい、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記アジュバントが、免疫賦活剤であるか、又は免疫賦活剤を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記免疫賦活剤が、Ｔ細胞活性化剤因子及び／又は抗原提示細胞若しくは他の免疫細胞の活性化因子である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記アジュバントが、セラミド、特にα−ＧａｌＣｅｒであるか、又はそれを含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記微生物が、１種以上の単細胞微生物からなり、単細胞微生物の総量に対するアジュバントの割合（１０１０細胞に対するアジュバントのｍｇ乾燥重量）が０．１〜１００ｍｇ：細胞１０１０個であり、０．１〜１０ｍｇ：細胞１０１０個、例えば０．２５〜５ｍｇ：細胞１０１０個、特に０．４〜５ｍｇ：細胞１０１０個であってもよい、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記界面活性剤が、１０以上、例えば１０〜１５のＨＬＢ値を有する、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記界面活性剤が、マクロゴールエステル、マクロゴールエーテル、ジブロックコポリマー、トリブロックコポリマー、及び両親媒性ポリマー、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記界面活性剤が、置換されていないか、又は１個のヒドロキシ基で置換されているアルキル鎖を含む、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記界面活性剤がＰＥＧ鎖を含む、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記界面活性剤が、ＰＥＧ化脂肪酸、例えばＰＥＧ化ヒドロキシ脂肪酸であるか、又はこれらを含み、前記ＰＥＧ化脂肪酸が、遊離ＰＥＧと併用されていてもよい、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記界面活性剤がマクロゴール−１５−ヒドロキシステアレートである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記界面活性剤が、組成物の乾燥重量に基づいて、２０〜５５重量％、例えば３０〜４５重量％、又は３０〜４０重量％で、組成物中に存在する、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
カチオン性脂質が更に含まれ、該カチオン性脂質が、ＤＯＴＡＰ及びＤＯＳＰＥＲから選択されてもよい、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記微生物が、１種以上の単細胞微生物からなり、単細胞微生物の総量に対する界面活性剤の割合（細胞１０１０個に対する界面活性剤のｍｇ乾燥重量）が１０〜２００ｍｇ：細胞１０１０個であり、２５〜１２５ｍｇ：細胞１０１０個、例えば２５〜１５０ｍｇ：細胞１０１０個、２５〜１００ｍｇ：細胞１０１０個、５０〜２００ｍｇ：細胞１０１０個、５０〜１００ｍｇ：細胞１０１０個又は６０〜９０ｍｇ：細胞１０１０個であってもよい、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
０．５ｍｍ〜５ｍｍの直径を有するビーズの形態である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ビーズが、１ｍｍ〜２ｍｍの直径を有する、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが実質的に乾燥しており、前記ビーズがコーティングを有している、請求項３４又は請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記コーティングが活性物質を含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記コーティングが即放性コーティングである、請求項３６又は請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記ビーズが、徐放性コーティング、例えば腸溶性コーティングを含む、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４０】
免疫増強栄養素、例えば、ビタミンＡ、Ｂ（例えばビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ナイアシン（ビタミンＢ３）、パントテン酸、リボフラビン（ビタミンＢ２）、チアミン（ビタミンＢ１）及び葉酸の１種又は組み合わせ）、ビタミンＣ、ビタミンＥ、カロテノイド、例えばβ−カロテン、鉄、マンガン、セレン及び亜鉛から選択される１種以上の栄養素を更に含み、例えば、前記組成物が、マトリクス（ヒドロゲル形成ポリマー）中、界面活性剤と共に、及び／又はコーティング中に栄養素を含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記微生物が、無傷及び断片化微生物細胞を組み合わせて含むか、又は無傷及び断片化微生物細胞を組み合わせたものであり、ホルマリンによって死滅していてもよい、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４２】
水性溶解媒質中においたときに、溶解媒質からの水が、ヒドロゲルポリマーに接触した場合に、前記組成物が界面活性剤を含む自己組織体（例えばミセル）を放出し、該自己組織体が、約０．５ｎｍ〜２００ｎｍ、例えば約１ｎｍ〜５０ｎｍ、又は約５ｎｍ〜２５ｎｍの動的光散乱を用いて測定した、流体力学的直径を有する、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
ｉ）界面活性剤、アジュバント、並びに生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、
ｉｉ）水及びヒドロゲル形成ポリマーを含む、水性液体予備混合物と、を混合すること、を含む、方法。
【請求項４４】
単一のオリフィスノズルを通して、前記ｉ）及びｉｉ）の混合物を排出して液滴を形成し、前記ヒドロゲル形成ポリマーを固化させるか、又は固化することを可能にし、それによって前記液滴がビーズを形成することを更に含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記界面活性剤予備混合物の温度が、ｉ）及びｉｉ）を混合する前には水性相の温度よりも低い、請求項４３又は請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記界面活性剤予備混合物の温度が、２つを一緒に混合する前には、水性液体予備混合物の温度よりも低く、ｉ）及びｉｉ）が、前記単一のオリフィスノズルと隣接して混合される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、サーモトロピックポリマー又はサーモトロピックポリマーの混合物であり、前記水性液体予備混合物が高温であり、前記界面活性剤予備混合物が周囲温度を超えない温度であり、前記２つの予備混合物が、それぞれの供給ラインを介して、前記２つの予備混合物が混合される混合装置に流入し、前記２つの予備混合物の少なくとも１つが、混合装置からノズルまでの移動において、混合物が移動するよりも長い距離を、その供給ラインを介して移動する、請求項４３又は４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記２つの予備混合物を、前記ノズルに並置された直列型混合装置によって混合する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
（ｉ）界面活性剤、（ｉｉ）生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物、及び（ｉｉｉ）アジュバントを混合することを含む方法。
【請求項５０】
疎水性賦形剤、例えば中鎖トリグリセリドを、前記界面活性剤、前記微生物及び前記アジュバントと混合する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
得られた界面活性剤混合物を、水及びヒドロゲル形成ポリマーを含む水性予備混合物と混合することを更に含み、前記界面活性剤が、自己組織体、例えばミセルを形成するのに十分な量で存在する、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５２】
水、ヒドロゲル形成ポリマー、界面活性剤、並びに生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される活性物質を含む材料を混合し、自己組織体、例えばミセルの分散体を、ヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相内で形成することを含む、方法。
【請求項５３】
方法が、自己組織体、例えばミセルの水性分散体を形成するためのものであり、
（ｉ）水及びヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相予備混合物を形成する工程；
（ｉｉ）請求項５１又は請求項５２に記載の方法を実施して、界面活性剤相予備混合物を形成する工程；及び
（ｉｉｉ）界面活性剤が自己組織体を形成するような比率で、前記水性相予備混合物と前記界面活性剤相予備混合物とを混合して、自己組織体の分散体を形成する工程を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記水性予備混合物及び前記界面活性剤予備混合物を混合して、マイクロエマルジョンを形成する、請求項４３〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
分散体を、成形単位、例えばビーズに形成することを更に含む、請求項４３〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記形成が、分散体を、単一のオリフィスノズルを通して排出し、水不混和性冷却液体中に落下させるか、又は落下させることを可能にする液滴を形成して該液滴を冷却してビーズを形成し、前記冷却液体から前記ビーズを分離することを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
１以上のコーティングを、前記成形単位に付着させることを更に含む、請求項５５又は請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記１以上のコーティングが、即放性コーティング及び徐放性コーティングから選択される少なくとも１つのコーティングを含み、例えば前記徐放性コーティングは腸溶性コーティングである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
請求項５〜３３、４０〜４２のいずれか１項において、又はそれらの従属項によって容認された前記請求項のあらゆる組み合わせにおいて記載された特徴を更に含む、請求項４３〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
請求項４３〜５９のいずれか１項に記載の方法により調製された組成物の特徴を有する組成物。
【請求項６１】
請求項３４〜４１のいずれか１項に記載のビーズの集団、又は請求項５５〜５８のいずれか１項によって得ることのできる成形単位の集団を含む経口剤形。
【請求項６２】
前記ビーズ又は成形単位の第一集団と、該第一集団とは異なる前記ビーズ又は成形単位の第二集団とを含む、請求項６１に記載の剤形。
【請求項６３】
少なくとも１つの追加投与を含む、投与計画で使用するための、請求項６１又は請求項６２に記載の剤形。
【請求項６４】
分散された自己組織体を有するヒドロゲルを含む組成物を乾燥することによって得られた組成物の特徴を有する生成物であって、前記組成物が、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される抗原を含む第一活性物質と、アジュバントを含む第二活性物質とを更に含み、前記組成物が、請求項３〜４２のいずれか１項において、又はそれらの従属項によって容認された前記請求項のあらゆる組み合わせにおいて更に定義されたようにされていてもよい、生成物。
【請求項６５】
経口剤形、例えばゼラチンカプセルの製造における、請求項６４の生成物の使用。
【請求項６６】
生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される抗原を含む生成物を対象に経口投与することを含む、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を対象に投与するための方法であって、前記生成物が、請求項１〜４３のいずれか１項で定義された組成物、又は請求項６１〜６３のいずれか１項で定義された剤形、又は請求項６０若しくは６４で定義された生成物である、方法。
【請求項６７】
生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される抗原を含む生成物を対象に経口投与することを含む、微生物が原因の疾患に対して対象をワクチン接種するための方法であって、前記生成物が、請求項１〜４３のいずれか１項で定義された組成物、又は請求項６１〜６３のいずれか１項で定義された剤形、又は請求項６０若しくは６４で定義された生成物であり、不活化又は弱毒化形態で前記生成物に含まれる微生物が、前記疾患の原因である微生物に対する免疫応答を生じるための前記生成物の投与後に有効である、方法。
【請求項６８】
初回投与の後、例えば初回投与の後少なくとも１週間、前記生成物の投与を繰り返すことを含む、請求項６６又は請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記生成物の少なくとも２回の投与を繰り返すことを含み、各投与が互いに、例えば少なくとも１週間の期間離れている、請求項６６又は請求項６７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１種以上の活性物質を送達するための組成物、及びより具体的には微生物を含むマトリクス材料を含む組成物、例えばビーズに関する。特に、本発明は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を含む組成物に関する。マトリクス材料はまた、界面活性剤を含んでいてもよく、更にアジュバントを含んでいてもよい。本発明は更に、そのような組成物の製造及び使用、並びに他の対象物に関する。
【背景技術】
【０００２】
先行技術は、活性物質を含む複数のミニカプセル（「ビーズ」とも呼ばれる）を含む改善された放出投与生成物を開示している。ビーズは、互いに溶けないか、又は溶け難く、その一方がゼラチン又は別のゲル化剤を含む水性液体である、２種の異なる液体を混合することによって製造することができる。液体は混合され、得られた混合物は単一のオリフィスを有していてもよいノズルを通して排出される。ノズルは、混合物がそれを通して排出されるときに振動する場合がある。排出された混合物は実質的に球形の液滴になり、冷却気体（例えば空気）、又は冷却溶液若しくは硬化溶液内に落下し、それによってゲル化剤がゲル化し、液滴がミニカプセルとなる。水性相がゼラチンか別の水溶性ポリマーマトリクス材料を含む水中油型エマルジョンを、単一のオリフィスのノズルを通して排出することによって作製されたビーズが開示され、ビーズは活性物質を含み、乾燥の後、乾燥水中油型エマルジョンと呼ぶことができ、そこでは、乾燥した水性相がポリマーマトリクス材料を含む。例えば、すべてその全体が参照によって本明細書に組み込まれている、特許文献１、特許文献２及び特許文献３を参照のこと。そのような先行技術の水中油型エマルジョンの油滴の大きさは、先行技術において開示されていないが、測定すると、およそ１００ｎｍ、又は場合によって、約５０ｎｍ程度であることが分かった。
【０００３】
上記出願特許文献３のビーズのＸ線断層画像を図９に示す。本画像は、ビーズが高度に均一である性質、すなわち水性相の全域に渡り油相がほぼ普遍的に分散していることを示している。
【０００４】
体内で、樹状細胞は免疫システムにおいて重要な役割を果たしている。樹状細胞の主要な目的は、抗原物質を処理し、抗原を免疫システムの他の細胞に提示することである。腸内樹状細胞は、小腸及び大腸の粘膜固有層、単離リンパ小胞、パイヤー板及び腸間膜リンパ節を含む消化管関連リンパ組織中で見られる。樹状細胞は、２つの機能的に異なる状態、未成熟細胞及び成熟細胞にて存在する。未成熟樹状細胞は末梢組織中に存在し、主に食細胞であり、成熟樹状細胞はリンパ器官でみられ、抗原提示に特化している。成熟樹状細胞は、成熟過程を経て未成熟細胞から生じるが、その成熟過程は、炎症刺激によって誘導され、大量の樹状細胞の流入領域リンパ節への移動が起きる。（非特許文献１、２）。
【０００５】
炎症性腸疾患のヒト及びマウスモデルにおけるいくつかの知見により、樹状細胞が、病原性に関与していることが示唆される。機能障害を起こした樹状細胞は、リンパ組織中で、腸内フローラに対するＴ細胞の異常な反応を誘導し、Ｔ細胞との相互作用を通して、炎症粘膜内のＴ細胞反応性を持続させ、さらには、炎症性サイトカインを放出することで、エフェクター細胞として機能してしまう可能性がある（非特許文献３）。
【０００６】
樹状細胞は強力な免疫刺激細胞であり（非特許文献４）、腸内樹状細胞は、抗原サンプリングのために、突起を直接内腔に伸張することによって、腸上皮を通した抗原捕捉に積極的に参加する（非特許文献５）。これらの細胞は、経口及び経腸投与された抗原を取りこんで、ナイーブＴ細胞に対して抗原提示をすることができる（非特許文献６）。樹状細胞による抗原の効果的な捕捉及び提示が、免疫応答の誘導の中心であると考えられる（非特許文献７）。
【０００７】
セリアック病に見られるように、その抗原がすでに知られている場合には、樹状細胞の潜在性に基づく抗原特異的戦略として、樹状細胞が、耐性の主要なエフェクターである制御性T細胞を増殖、誘導でき、その制御性T細胞は、さらに、病原抗原を提示する他の樹状細胞を抑制することから、その能力を利用できる。（非特許文献８）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２００４／０８４８７０号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００８／１３２７１２号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２０１０／１３３６０９号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ，Ｎａｔｕｒｅ  ３９２：２４５−２５２
【非特許文献２】Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７  Ｓ５３−Ｓ６０
【非特許文献３】Ｒｅｓｃｉｇｎｏ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９：２４４１−２４５０
【非特許文献４】Ｓｔｅｉｎｍａｎ  １９９１
【非特許文献５】Ｒｅｓｃｉｇｎｏ，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３６１−３６７
【非特許文献６】Ｌｉｕ  ａｎｄ  ＭａｃＰｈｅｓｒｓｏｎ，１９９１
【非特許文献７】Ｃｏｌａｃｏ，１９９９
【非特許文献８】Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２９：３１９−３２４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の完全な範囲を、以下の明細書及び請求項において開示する。しかしながら、読者の役に立つように、簡単な、非限定概説を本段落に含める。本発明は、ゼラチン又は他のヒドロゲル形成ポリマーの水溶液と、ポリエトキシル化脂肪酸（例えばポリエトキシル化ヒドロキシ脂肪酸）又はポリエトキシル化脂肪アルコールであってもよい界面活性剤と、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、随意にアジュバントとを混合することによって得ることのできるビーズを（特に）提供する。アジュバントの少なくとも一部は、界面活性剤の少なくとも一部に結合していてもよい。混合物は、ヒドロゲル中で、界面活性剤自己組織体（例えばミセル）の分散を含むと考えられるビーズに変換される。その後、ビーズを乾燥させて、結果として、ポリマーマトリクス中に分散した、界面活性剤自己組織体（例えばミセル）、又は水との接触に際してそのような構造を放出するための前駆体とする。いずれにしても、本発明には、水との接触に際して、例えば消化管の水性媒質中（水性媒質は例えば、消化管から抽出されるか、又は合成的に製造されてもよい）、自己組織体（例えばミセル）を送達する、乾燥界面活性剤含有ビーズが含まれる。本発明は本段落の対象物に全く制限されないが、本段落で開示される生成物及び方法は本発明の一部であり、したがって、権利として主張することができる。
【００１１】
本発明は１つの様態において、（ｉ）界面活性剤と、（ｉｉ）活性物質と、を含む組成物を提供する。活性物質は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を含む。組成物はまた、アジュバントを含んでいてもよい。組成物は更に、ヒドロゲル形成ポリマー、特に、サーモトロピックヒドロゲル形成ポリマーから選択される１種以上の賦形剤を含んでいてもよい。組成物は、本質的に界面活性剤と、１種以上の活性物質とから構成されていてもよい。組成物は、本質的に界面活性剤と、１種以上の活性物質と水とから構成されていてもよい。界面活性剤は、非イオン性であってもよい。界面活性剤は、親水性鎖と疎水性鎖とを含んでいてもよい。また、イオン性、たとえばアニオン性界面活性剤も挙げられる。
【００１２】
本発明は、ヒドロゲル形成ポリマーを含むマトリクスと、マトリクス内に含まれる、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、界面活性剤と、アジュバントと、を含む組成物を含む。
【００１３】
本発明は、特定の実施形態において、（ｉ）界面活性剤と、（ｉｉ）生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、（ｉｉｉ）アジュバントと、（ｉｖ）その中に界面活性剤、微生物及びアジュバントが含まれる、ヒドロゲル形成ポリマーと、を含み、水と混合したときに、界面活性剤及びアジュバントを含む、自己組織体（例えばミセル）を放出可能な、組成物を提供する。前記水は例えば、胃、腸又は直腸液の形態であってもよく、又はそれらの疑似液であってもよい。界面活性剤は、親水性鎖と疎水性鎖を含んでいてもよいことが想起されるであろう。
【００１４】
本明細書に開示された全ての組成物について、アジュバントの少なくとも一部は、界面活性剤の少なくとも一部と結合していてもよい。
【００１５】
本明細書に開示された全ての組成物について、微生物内容物の少なくとも一部は、界面活性剤の少なくとも一部と結合していてもよい。
【００１６】
本発明は、ヒドロゲル形成ポリマーと、ポリマー内に分散した自己組織体（例えばミセル）と、微生物とを含む組成物をその範囲内に含む。ヒドロゲル形成ポリマーは、ゲル状又はゾル状にて水と混合してもよく、又はヒドロゲル形成ポリマーは乾燥していてもよい。更に本明細書で記述するように、組成物はコーティングされていてもよい。
【００１７】
微生物は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される。微生物は、アジュバントと共に、組成物内に含まれていてもよい。本発明において、微生物は、免疫原性であり、例えば、単独又はアジュバントとの組み合わせで、対象に投与したときに、免疫応答を引き起こしうる抗原性物質を（内側又は外側に）含み、又は発現し、又は放出する。例えば本段落に記載の組成物は、免疫原性利用のためである。特に、本発明は、ヒドロゲル形成ポリマーを含むマトリクスと、マトリクス内に含まれる、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、界面活性剤と、アジュバントとを含むマトリクスを含む組成物を提供する。
【００１８】
界面活性剤は、自己組織体（例えばミセル）の形態でよく、又は水と混合した時に自己組織体（例えばミセル）を形成可能なものであり、本明細書では、これらをしばしば、「自己組織化形成界面活性剤」又は「ミセル形成界面活性剤」と呼ぶ。（界面活性剤はもちろん、界面活性剤化合物を混合したものを含んでもよい。）
【００１９】
本発明の一実施形態は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、界面活性剤と、アジュバントとをマトリクス内に含む、乾燥ヒドロゲル形成ポリマーマトリクスとして記述可能である。乾燥ヒドロゲル形成ポリマーマトリクスはその中に、界面活性剤と、場合によってアジュバントとを含む、自己組織体（例えばミセル）の分散物を有していてもよい。本発明の一実施形態は、自己組織体形成物が、界面活性剤と、特に親水性鎖と疎水性鎖を含む化合物であるか、又はそれを含む、ヒドロゲル分散中乾燥自己組織体（例えばヒドロゲル分散中ミセル）として記述可能である。本発明の実施形態は、いくつかの実施形態において、自己組織体形成物が、親水性鎖と疎水性鎖を含む化合物であるか、又はそれを含む、ヒドロゲル分散中乾燥自己組織体として記述可能である。１つの実施形態において、組成物は、粉末ではない。別の実施形態において、組成物は、例えばビーズ、例えば球形ビーズ、又は他の成形単位形態で、成形及び／又は形成される。複数の実施形態において、本発明の組成物は、成形又は形成形態、例えばビーズ内の多数の自己組織体を含む。「球形」という用語は、ヒトの目に対して実質的に又は一般的に球形形状であると見えるビーズを意味し、数学的基準で球形である必要はない。言い換えれば、本明細書で記述するような「球形」ビーズは一般に、球に類似又は近似している意味で球形である。ただし、本開示物のビーズの集団は、製造工程からの結果である、時折非球形ビーズを含んでいてもよく、例えば多数のビーズ又はビーズの集団に対する本明細書での言及は、本明細書で記述したような球形（ｓｐｈｅｒｏｉｄａｌ）ビーズのみならず、非球形（すなわち、ｎｏｎ−ｓｐｈｅｒｏｉｄａｌ）ビーズも含むようなビーズの集団を包含する。
【００２０】
本発明の乾燥組成物中にある場合、自己組織体形成界面活性剤（例えばミセル形成界面活性剤）は、自己組織体前駆体（例えばミセル前駆体）の形態にあるものとして記述されてよい。
【００２１】
本発明は、乾燥組成物だけでなく、ヒドロゲル形成ポリマーが、ヒドロゲルの形態である「湿」組成物も含む。本発明は、ヒドロゲル形成ポリマーが、液体状態において、水との組み合わせである液体を含む。
【００２２】
先行技術から予測できない本発明の利点は、有利に経口で投与されうる効果的なワクチン調製物の提供である。特に、本発明は、「全細胞」ワクチンの送達の改善された調製物を提供し、そこで抗原性物質が生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物の形態で送達される。本発明者らは、経口投与した時に、（本明細書で生体内データによって明示されるような）強力な、抗原特異的抗体応答を誘導することが発見された、「全細胞」調製物を考案した。本発明による「全細胞」調製物の投与に続く抗体応答における観察された改善は、単なる「全細胞」溶液の投与と比較した時に有意であった。更に、意外なことには、全身及び局所腸応答に関して観察された改善は、試験された「サブユニット」調製物、例えばコレラ毒素Ｂサブユニット調製物（例えば実施例中、比較試験を参照のこと）と比べて、「全細胞」調製物の場合により大きかった。
【００２３】
本発明の別の利点は、界面活性剤によって形成された自己組織体の大きさから由来すると考えられる。特に、水性媒体中ミセル形成界面活性剤によって形成されたミセルが、国際公開第２０１０／１３３６０９号パンフレットの教示にしたがって得た油滴よりも、小さく、より多く数で存在することが観察されてきた。本明細書での開示にしたがって形成されたミセルは、概して１０〜３０ｎｍである。このより小さなサイズにより、先行技術のより大きな油滴よりもより大きな表面積生み出し、より多くの数なため、消化管で見られたような、水性媒体中の放出／形成に続いたミセルのより高度な分散及び分布が提供される。これらの特徴によって、結果として、上皮とのよりよい接触と、よりよい吸収がもたらされる。また、（少なくとも使用する組成物によって放出されたミセルに関して）本発明の実施形態において特徴付けられた界面活性剤ミセルが、サイズに関してより均一な集団を提供する、すなわちサイズについてより低い多分散性を有することに言及されるべきである。１０〜３０ｎｍ（など）のような小さなミセルのサイズは、本明細書中で記述される組成物に固有であると考えられるが、ミセルは、本範囲内のサイズを有するべき、又は主に（例えば、少なくともそれらの７５％、任意に少なくとも８０％又は少なくとも９０％）有するべきであるというのは必須ではなく、任意に選択できる。
【００２４】
本発明の特定の組成物は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、アジュバントとを含み、そのような組成物は有利に、両方の成分を同時に放出する。例えば、細胞の一部を断片化できる全細胞抗原性物質である腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）と、α−ＧａｌＣｅｒ（糖頭と脂肪酸及びスフィンゴイド鎖からなるセラミド部分とを有するので、疎水性及び親水性基両方を有する両親媒性糖脂質であるアジュバント）とを含む組成物が試験された。活性体ＥＴＥＣ及びα−ＧａｌＣｅｒが、自己組織体形成試薬、例えばミセル形成試薬として、コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５を含む組成物の形態にて、水と組み合わせた時に、自己組織体、例えばミセルを放出可能であると考えられる組成物中で投与された。コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５と一緒に、全細胞ビブリオ・コレラと、アジュバントとしてα−ＧａｌＣｅｒとを含む同様の組成物がまた調製され、水との接触に際して、自己組織体、例えばミセルを放出可能であると考えられた。製造中、これらの組成物は、（例えばゼラチンを含む）ヒドロゲル中に分散された（例えば、自己組織体形成界面活性剤としてコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５を含む）自己組織体を含むと考えられる。その後、これらの組成物を乾燥させ、保存及びその後の投与の前にコーティングしてもよい。組成物は、効果的に免疫原性及び免疫防御性であることがわかってきた。国際公開第２０１０／１４４６０９号パンフレットにて例示されたような先行技術のワクチン調製物は、タンパク質をベースとするものであり、乾燥ヒドロゲル中油型エマルジョンである。理論に束縛されるものではなく、本発明の組成物が両方の薬剤を一緒に放出し、それによって、抗原との接触前、又は同時に、アジュバントが適切な免疫細胞を予備刺激することを可能にすると推測される。また、理論に束縛されるものではなく、α−ＧａｌＣｅｒの少なくとも一部が、自己組織体形成界面活性剤（例えばコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５）の少なくとも一部と結合すると、例えば、それ自身をミセルの界面活性剤エンベロープ内に包含すると考えられる。またワクチンの関連で、ミセルは、マクロファージ、Ｂリンパ球及び樹状細胞のような、抗原提示細胞再取込に対して好ましい大きさであると考えられている。
【００２５】
したがって、本発明の様態は、ヒドロゲル形成ポリマーを含むマトリクスと、該マトリクス中に含まれる、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物（例えば、ＥＴＥＣ、又は例えばコレラ菌（Ｖ．Ｃｈｏｌｅｒａｅ））と、界面活性剤と、アジュバントと、を含む組成物を提供する。また、
・界面活性剤（例えば、マクロゴール−１５−ヒドロキシステアレート、特にコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５）と、
・生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物（例えばＥＴＥＣ、又は例えばコレラ菌））と、
・α−ＧａｌＣｅｒを含むアジュバントと、
・その中に、界面活性剤と、微生物と、アジュバント、α−ＧａｌＣｅｒとが含まれる、ヒドロゲル形成ポリマーと、
を含む組成物も提供され、本組成物は、水と混合したときに、自己組織体（例えばミセル）を放出可能である。特に、ポリマー中に分散され、水と混合したときに、自己組織体、例えばミセルを形成することのあるい界面活性剤は、マクロゴール−ヒドロキシ脂肪酸、特にマクロゴール−１５−ヒドロキシステアレートであり、例えばコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）、特にコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５である。特に、微生物はＥＴＥＣである。別の様態において、微生物は、コレラ菌である。
【００２６】
胃腸管の異なる部分による物質の吸収の程度は、特に、該当する物質の物理化学的特性に依存する。したがって、疎水性活性物質は、結腸よりも、小腸からよりよく吸収される。特定のＥＴＥＣ株のような、特定の微生物が、特にＣＡＦ／Ｉのような抗原性物質を過剰発現する。したがって、そのような株は疎水性表面を有する（更なる情報に関して、ＰＮＡＳ，２００９年６月３０日，ｖｏｌ．１０６，ｎｏ．２６，１０７９３−１０７９８及びＩｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．２００６年２月，ｐ．１０６２−１０７１を参照のこと）。具体的には特に、本発明は、定着因子、例えばＣＡＦ／Ｉを発現する微生物株を含む、本明細書で記述された実施形態の任意の１つにしたがった組成物を企図する。そのような株は、主要定着因子ＣＡＦ／Ｉ、ＣＡＦ／ＩＩ、ＣＡＦ／ＩＶを過剰発現している組換え体大腸菌、赤痢菌、サルモネラ又はコレラ菌株、及びＤＨ５αλｐｉｒ、ＳＹ３２７αλｐｉｒ、ＳＭ１０λｐｉｒ、ＷＳ−４４３７Ａ、ＷＳ−１８５８Ｂ、Ａ１８−３４、Ａ１８−３４Ａｐ、Ａ１８−３４ＡｐＴｐ、ＡＣＡＭ２０１０（ｐＳＴＲＥＰ）、Ｅ１３９２／７５、Ｅ１３９２／７５−２Ａ、ＰＴＬ００３を含む他の微生物から選択することができる。
【００２７】
活性物質、例えば本明細書で記述した微生物を含む調製物は、胃酸及び胃又は腸酵素からの保護等、一般的な分解から保護されることも望ましい。
【００２８】
調製物は、胃腸上皮バリアの表面、又は内に横たわる適切な免疫細胞によって簡単に取りこまれる、又は好ましい様式で接触する形状で、アジュバント及び抗原の同時放出が可能なように設計されるなら有利である。
【００２９】
ヒドロゲル形成ポリマーマトリクスは、１つの実施形態において、架橋されたヒドロゲル形成ポリマーを含み（乾燥分散の液相と呼ばれる）、これは、例えば、流体水性連続相の化学的、又は物理化学的（例えば乾燥）固化から得られ、マトリクス又は乾燥ミセル分散中に、水が実質的に存在せず、ミセルが不動化されるようなものである。したがって、本実施形態においては、乾燥水性相を、不動化マトリクスと呼ぶことができる。
【００３０】
界面活性剤相は、疎水性鎖と親水性鎖を含む界面活性剤を含んでいてもよく、又は疎水性鎖と親水性鎖を含む界面活性剤そのものであってよい。場合によって、界面活性剤相は、活性物質（例えば疎水性活性物質、両親媒性活性物質又は両方）を含んでいてもよい。界面活性剤相は、疎水性賦形剤、ならびに活性物質を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、界面活性剤相は、両親媒性賦形剤、並びに任意に疎水性賦形剤及び活性物質の1つ又は両方を含む。
【００３１】
自己組織体（例えばミセル）に関連した用語「放出された」は、自由な移動、放出、癒合、溶解又は（再）エマルジョン化を意味するが、実際の移動、放出、癒合、溶解又は（再）エマルジョン化は必要とされず、つまり、これらが起こらなくてもよく、むしろ意図的に起こらないように抑制する場合もあり、その例として、被膜若しくはコーティングがされている場合、及び／又はヒドロゲル形成ポリマーマトリクス内に、ある種の抑制性若しくは減速物質が取り込まれている場合がある。
【００３２】
「自己組織体」という用語は、任意の型のミセル、ベシクル、マイクロエマルジョン、リオトロピック・ラメラ相又は水性環境の存在下自発的に形成する他の自己組織体、又はこれらの組み合わせを意味する。公知であるように、そのような自己組織体は、例えば界面活性剤を含むか、又は界面活性剤からなる、自己組織体形成物質が、特定の臨界濃度超で存在する時に形成される。本用語には、例えば、ミセル、逆ミセル及びリポソーム、及びこれらの組み合わせが含まれる。本明細書中にて引用される自己組織体には、ミセルが含まれてもよく、ミセルであってよい。自己組織体に関する更なる情報は、その全てが参照によって本明細書に組み込まれている、ラオウル  ザナ（Ｒａｏｕｌ  Ｚａｎａ）による「Ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｉｅｓ  Ｍｉｃｅｌｌｅｓ，Ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，Ｖｅｓｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  Ｌｙｏｔｒｏｐｉｃ  Ｐｈａｓｅｓ」、特に第１章にて見ることができる。ビーズ又は他の組成物からの自己組織体の放出は、組成物を水と接触させ、動的光散乱のような好適な解析方法を用いて、自己組織体を観察することによって判定できる。
【００３３】
ある実施形態においては、自己組織体は、マイクロエマルジョンとして存在する。例えば,マイクロエマルジョンは、本発明の組成物の調製の際に、界面活性剤と、ヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相を混合（微生物及び／又はアジュバントと一緒であってもよい）することで形成される。マイクロエマルジョンはまた、組成物が、組成物の経口投与に続いて、溶解媒質、好適には水性媒体、例えば胃腸液にさらされる時に、組成物からの自己組織体の放出又は形成に際して形成されてよい。マイクロエマルジョンは、組成物が透明溶液の外見を有する（すなわち光学的に等方性である）非常に小さな自己組織体を含む、熱力学的に安定なシステムであるという点で、従来のエマルジョンとは異なる。マイクロエマルジョンに言及することで、組成物がマイクロエマルジョンの特性を有する形で自己組織体が存在するシステム、すなわち、光学的に等方（透明）な溶液を提供するのに充分小さい自己組織体が熱力学的に安定である分散状態を意図する。そのような構造は、界面活性剤を含み、更に例えばアジュバントを含んでいてもよい。
【００３４】
一般に、組成物内に存在するか、組成物から形成され、又は組成物から放出される自己組織体の大きさは、約０．５ｎｍ〜２００ｎｍ、例えば約１ｎｍ〜５０ｎｍ、又は約５ｎｍ〜２５ｎｍのオーダーである。組成物内に存在するか、又は組成物が水性溶解媒質にさらされる時に形成及び／若しくは放出される自己組織体の大きさは、光子相関分光法、動的光散乱又はＮＭＲ技術のような公知の技術を用いて測定することができる。組成物、例えばマイクロエマルジョンの光学的等方性は、偏光顕微鏡法のような光学方法を用いて判定することができる。マイクロエマルジョンの分析のためのこれらの、また他の方法がよく知られている（例えば、Ｎａｒａｎｇら、Ｉｎｔ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ３４５（２００７）９−２５を参照のこと）。（例えばミセルを含む）自己組織体を測定するための特定の方法は、動的光散乱である。
【００３５】
本発明の更なる特徴には、水性溶解媒質中においた時に、溶解媒質からの水がヒドロゲルポリマーと接触すると、組成物が界面活性剤を含む自己組織体（例えば、ミセル）を放出し；自己組織体が、動的光錯乱を用いて測定された、約０．５ｎｍ〜２００ｎｍ、例えば約１ｎｍ〜５０ｎｍ、又は例えば５ｎｍ〜２５ｎｍの流体力学的直径を有する、本明細書で記述された組成物が含まれる。自己組織体の大きさを測定するための好適な動的光錯乱装置はよく知られており、例えば、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  Ｓ（旧Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ）が挙げられる。Ｎａｎｏ  Ｓには、６３３ｎｍの波長にて操作される４ｍＷ  Ｈｅ−Ｎｅレーザーと、アバランシェフォトダイオード（ＡＰＤ）検出器が含まれる。動的光錯乱を用いた自己組織体（例えばミセル）の大きさに対する言及がある場合には、測定された拡散係数に相当する流体力学的直径を含むものとする。溶解媒質に接触する水への言及がある場合には、例えば、組成物上に存在できる放出制御型又は腸溶性コーティングのような任意のコーティングに浸透する水を含むものとする。水性溶解媒質の性質は重要であるとは考えられておらず、例えば、ｐＨ７．３〜７．４、３７℃での水であってもよい。あるいは、本明細書の以下で記述するように、ｐＨは、組成物上に存在する腸溶性コーティングを溶解させるために、したがって水が、ヒドロゲルポリマーに接触できるように、例えばｐＨ５．５以上まで上昇させてよい。あるいは、溶解媒質は、胃腸液又は疑似胃腸液であってもよい。本明細書で記述するように、自己組織構造体は、界面活性剤（又は界面活性剤の混合物）を含み、更に該構造体に結合したアジュバントを含んでいてもよい。
【００３６】
本方法はまた、本発明の組成物の調製中に形成された、ミセル又はその他の構造体のような、自己組織体の大きさを測定するために使用することもできる。例えば、本方法は、本明細書で記述するように、界面活性剤相を水性ヒドロゲル形成ポリマーと混合する結果として、マイクロエマルジョン又はマイクロエマルジョン様組成物が形成される時に、分散相の大きさの測定に使用することができる。
【００３７】
ある実施形態には、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物とアジュバントとが含まれる。好ましくは、アジュバントは、直接又は間接的な免疫刺激剤であり、例えば、免疫細胞活性化剤、例えば抗原提示細胞活性化剤及び／又はＴ細胞活性化剤である。代表的な抗原は、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）である。アジュバントの代表的且つ好ましい例は、α−ガラクトシルセラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）（例えば、ＫＲＮ７０００）又は他の糖脂質アジュバント、例えばα−ＧａｌＣｅｒ以外のグリコシルセラミド、又はグリコシルセラミド類似体である。グリコシルセラミド類似体はよく知られており、本明細書に記述されており、例えば参照によって本明細書にその全てが組み込まれている国際公開第２００４／０２８４７５号パンフレットにて教示された類似体である。α−ガラクトシルセラミドが特に好ましい。
【００３８】
ここで自己組織体形成界面活性剤を考慮すると、特に、非イオン性界面活性剤であってもよく、多くの実施形態において、ＰＥＧ部位を含み、ＰＥＧはまたポリ（オキシエチレン）としても知られる。界面活性剤は、アルキル及びアルケニル鎖から選択される疎水性鎖を含んでいてもよく、疎水性の特徴が維持されるという条件で、疎水性鎖は、置換、例えばヒドロキシによってモノ置換されていてもよい。ある実施形態において、自己組織体形成界面活性剤は、マクロゴールエステル類、マクロゴールエーテル類、ジブロックコポリマー類、トリブロックコポリマー類及び両親媒性ポリマー類、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される。好ましくは、界面活性剤はマクロゴールエステル類から選択される。
【００３９】
ある実施形態において、界面活性剤は、高い疎水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有し、例えば界面活性剤は、１０以上、例えば１０〜１５、好適には１０〜１４、例えば１２〜１４のＨＬＢ値を有する。
【００４０】
ある実施形態において、界面活性剤は、ワックス様の性質を有していてもよい。界面活性剤は、脂肪酸のポリグリコールエステル、例えば脂肪酸（例えば、ステアリン酸及び／又は１２−ヒドロキシステアリン酸）のポリグリコールモノ及びジエステルを含んでよい。１つの実施形態において、脂肪酸は飽和している（例えばステアリン酸及び／又は１２−ヒドロキシステアリン酸）。別の実施形態において、脂肪酸は不飽和であるか、飽和及び不飽和脂肪酸の混合物である。特に、界面活性剤は、脂肪酸、好適には飽和脂肪酸（例えばステアリン酸及び／又は１２−ヒドロキシステアリン酸）のポリオキシエチレンエステルを含んでよい。そのような実施形態において、１２−ヒドロキシ基の小さな部分が、ポリエチレングリコールでエーテル化可能である。界面活性剤はまた、遊離ポリエチレングリコールを含んでいてもよい。
【００４１】
ある実施形態において、界面活性剤は、マクロゴールエステルマクロゴール−１５−ヒドロキシステアリン酸塩である。代表的なマクロゴール−１５−ヒドロキシステアリン酸塩は、ＢＡＳＦからコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５として販売されており、２００６年７月の、第６版にて発行された、欧州薬局方モノグラフ番号２０５２のマクロゴール−１５−ヒドロキシステアリン酸塩の要件に適合する。本発明で有用な界面活性剤の特定の分類はしたがって、２００６年７月の、第６版にて発行された、欧州薬局方モノグラフ番号２０５２のマクロゴール−１５−ヒドロキシステアリン酸塩の要件に適合する。本明細書において「コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）」に言及する場合、コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５が含まれる。コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５は、前記モノグラフ番号２０５２の要件をみたす他の界面活性剤で代替されてもよい。
【００４２】
ヒドロゲル形成ポリマーは、サーモトロピックヒドロゲル形成ポリマー、又はそのようなポリマーの組み合わせであってもよい。ヒドロゲル形成ポリマーはゼラチンであってもよい。
【００４３】
更に、本発明の組成物の製造に使用される、自己組織体分散体（及び特にミセル分散体）が提供され、この自己組織体分散体は、水とヒドロゲル形成ポリマーとを含む液体を含む水性相中に分散した界面活性剤を含む。分散体は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を含む抗原を含んでいてもよい。分散体はまた、疎水性及び／又は両親媒性活性物質、例えばアジュバント、特にアジュバントα−ＧａｌＣｅｒを含んでいてもよい。分散体は、親水性活性物質を含んでいてもよい。自己組織体分散体は、自己組織体分散体が更にかなりの量の水を含むことを除いて、本発明の組成物と同一の成分を有してよいと理解されるであろう。
【００４４】
他の様態において、本発明は、界面活性剤／活性物質（例えば微生物）予備混合物を製造するための方法を提供する。本発明の方法は、界面活性剤と、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を含む抗原と、任意にアジュバント、特にアジュバントα−ＧａｌＣｅｒとを混合することを含む。界面活性剤と抗原は更に、本明細書の他の箇所で説明されている。
【００４５】
本発明は、以下の方法と、直接又は間接的に、該方法によって得られる（該方法によって得られた組成物の特徴を有する）組成物を含む。該方法は、
ｉ）界面活性剤と、アジュバントと、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物とを含む界面活性剤予備混合物と、
ｉｉ）水とヒドロゲル形成ポリマーとを含む液体水性予備混合物と、
を混合することを含む。
【００４６】
先の段落の工程は更に、単一のオリフィスノズルを通してｉ）及びｉｉ）の混合物を排出して、液滴を形成することを含んでもよく、ヒドロゲル形成ポリマーは固相化されるか、又は固相化が可能になり、それによって液滴がビーズを形成する。ヒドロゲル形成ポリマーは、サーモトロピックポリマー又はサーモトロピックポリマーの混合物であり、水性予備混合物は高温であり、界面活性剤予備混合物は室温を超えない温度であり、２つの予備混合物は、それぞれの供給ラインを通して、２つの予備混合物が混合される混合装置へ流入し、２つの予備混合物の少なくとも１つが、混合装置からノズルまでの移動において、混合物が移動するよりも大きな距離を、その供給ラインを通して移動する。２つの予備混合物は、ノズルに並置された位置にて直列型で、例えば、ノズルに並置された直列型混合装置によって混合することができる。
【００４７】
本発明は更に、
（ｉ）水と、ヒドロゲル形成ポリマーと、界面活性剤と、活性物質（例えば、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、任意にアジュバント）とを含む材料を混合して、ヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相内に、自己組織体分散体（おそらくミセル分散体）を形成すること、
を含む方法を提供し、本方法は随意に更に、
（ｉｉ）（ｉ）の分散体を、単一のオリフィスノズルを通して排出して液滴を形成し、冷却媒質、例えば水不混和性の冷却液内に通過させて、該液滴を冷却して成形単位、例えばビーズを形成することを含む。本発明は、直接又は間接的に、本方法によって得ることのできる成形単位（例えばビーズ）を含み、すなわち、直接又は間接的に、本方法によって得られた成形単位の特徴を有する成形単位（例えばビーズ）を含む。
【００４８】
実施形態において、本発明は、水と、水溶性／分散性材料とを含む水性予備混合物と、界面活性剤と、界面活性剤可溶性／分散性材料とを含む（油を含んでいてもよい）界面活性剤予備混合物とを形成することと、２つの予備混合物を混合して、ヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相内に、自己組織体分散体（おそらくミセル分散体）を形成することと、を含む、本発明の組成物又は分散体を製造するための方法を含む。その後、先の段落にて記述したように、分散体をビーズに形成してもよい。特に、組成物の製造方法は、
（ｉ）水溶性成分（例えばヒドロゲル形成ポリマー、任意の水溶性賦形剤、任意の親水性活性物質（例えば、微生物は、例えば水性懸濁液として、水性相予備混合物に含まれうる）の水溶液を含むか、又は通常それらからなる水性相予備混合物を形成することと、
（ｉｉ）疎水性及び両親媒性成分の界面活性剤中の溶液を含む、又は通常それらからなる、界面活性剤相予備混合物を形成すること（例えば、微生物から選択される活性物質は、界面活性剤予備混合物中に直接含まれるか、界面活性剤予備混合物中の水性懸濁液として、例えば界面活性剤中水型エマルジョンの形態で含まれ得る）と、
（ｉｉｉ）２つの相を混合し、分散体を形成することと、を含み、
（ｉｖ）前記分散体を、ビーズ又は他の成形単位に調製すること、例えばそれを単一のオリフィスノズルを通して液滴を形成し、水不混和性の冷却液内に該液滴を落として該液滴が冷却されてビーズを形成し、ついで冷却液からビーズを分離することと、を随意に含んでいてもよい。
【００４９】
更に、（ｉ）界面活性剤及び（ｉｉ）微生物から選択される活性物質を混合する工程を含む方法が本発明によって提供され、混合には更に、疎水性賦形剤、例えば中鎖トリグリセリドと、界面活性剤と微生物とを混合することを含みうる。得られた界面活性剤混合物を、水及びヒドロゲル形成ポリマーを含む水性組成物と混合してもよく、界面活性剤は、自己組織体（例えばミセル）を形成するのに十分な量であり、混合により、自己組織体分散体が形成される。
【００５０】
本発明の別の方法は、（ｉ）水と、（ｉｉ）ヒドロゲル形成ポリマーと、（ｉｉｉ）界面活性剤と、（ｉｖ）活性物質と、を含む材料を混合して、前記ヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相内に自己組織体（例えばミセル）分散体を形成する方法である。
【００５１】
本開示の最終組成物の製造中に得られる中間生成物として、本発明は、自己組織体形成化合物を含む自己組織体（例えばミセル）が分散されたヒドロゲルを含む組成物を含み、該化合物は随意に、親水性鎖と疎水性鎖を有する化合物から選択され、該組成物は更に、本明細書で記述したような活性物質を含む。
【００５２】
本発明は更に、自己組織体（例えばミセル）形成化合物を含む自己組織体（例えばミセル）が分散されたヒドロゲルを含む組成物を乾燥することによって得られた組成物の特性を有する生成物を更に提供し、該化合物は随意に、親水性鎖と疎水性鎖を有する化合物から選択され、該組成物は更に活性物質を含む。
【００５３】
本明細書で記述した工程中、界面活性剤と共に油を含むことも、例えば製造の観点から、有利でありうる。したがって、界面活性剤相は更に、工程内に油を含み、生成物内の界面活性剤が、油と共存していてもよい。
【００５４】
任意に医薬に好適な油、又は食品使用（又は他の選択された応用）のために許容可能な油を、前記油として使用することができる。本発明の組成物の乾燥重量に関して、油は、１％〜８５％、例えば１〜５０％、任意に１％〜３０％、１％〜２０％、１％〜１０％又は１％〜５％の比率で含まれていてもよい。油は、５％〜３０％、５％〜２０％又は５％〜１０％含まれていてもよく、２０％〜３０％又は３５％〜４５％含まれていてもよい。「油」という用語は、室温又は室温に近い温度、例えば１０℃〜４０℃又は１５℃〜３５℃で全体的又は部分的に液体である、例えば、２５℃以下の温度にて液体であり、上記範囲の全体で液体であるかないかによらず、また疎水性であるが、少なくとも１つの有機溶媒中可溶性である任意の物質を意味する。油としては、植物油（例えばニーム油）、石油化学油及び揮発性エッセンシャルオイルが挙げられる。
【００５５】
含まれてもよい油としては、例えばオメガ−３油、例えば、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコソヘキサエン酸（ＤＨＡ）、α−リノール酸（ＡＬＡ）、共役リノール酸（ＣＬＡ）のような、ポリ不飽和脂肪酸が挙げられる。好ましくは超高純度ＥＰＡ、ＤＨＡ又はＡＬＡ又はＣＬＡが、例えば９８％まで、又はそれ以上の純度で使用される。オメガ油は、例えば任意の適切な植物、例えばｓａｃｈａ  ｉｎｃｈｉから供給することができる。そのような油は、単独で、例えばＥＰＡ又はＤＨＡ又はＡＬＡ又はＣＬＡで、又は任意の組み合わせで使用することができる。任意の比での、二つ、三つなどの組み合わせを含むそのような成分の組み合わせ、例えば商標Ｅｐａｘ６０００のもと市販されている、比１：５でのＥＰＡとＤＨＡの二つの混合物も意図される。
【００５６】
含まれてもよい油は、オリーブ油、セサミ油、ココナッツ油、パーム核油を含む、特に天然トリグリセリド系油が含まれ、又はこれらである。特に好ましい油としては、ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）（商標）８１０、８１２（カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド）、ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）（商標）８１８（カプリル酸／カプリン酸／リノール酸トリグリセリド）、ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）（商標）８２９（カプリル酸／カプリン酸／コハク酸トリグリセリド）、ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）（商標）８４０（プロピレングリコールジカプリル酸塩／ジカプリル酸塩）を含む様々なものが入手可能であり、それらから本発明の油相の１以上の成分を選択することができる商標ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）（商標）のもと供給されるような、飽和ココナッツ及びパーム核油由来カプリル及びカプリン脂肪酸及びグリセリンが挙げられる。ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）（商標）８１０／８１２は、Ｃ８／Ｃ１０比のみが異なり、その低Ｃ１０含量のために、ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）（商標）８１０の粘度と曇り点が低いことに留意されたい。  ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）（商標）の種類は、サソール・インダストリーズ（Ｓａｓｏｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）社から市販されている。以上に記したように、油相中に含まれてもよい油は、室温にて液体又は完全に液体である必要はない。本発明にしたがった油相中に含まれてよい代替又は追加の油は、例えば、ガッテフォッセ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）社によって製造されるラブラファック（Ｌａｂｒａｆａｃ）（商標）、リポフィル（Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ）、特に製品番号ＷＬ１３４９のような中鎖トリグリセリドである。
【００５７】
他の可能性のある（代替の、又は追加の）油としては、例えばラブラフィル（Ｌａｂｒａｆｉｌ）（例えばガッテフォッセ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）社による製品番号Ｍ２１２５ＣＳ）のようなリノレオイルマクロゴールグリセリド（ポリオキシルグリセリド）と、例えばガッテフォッセ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）社によるラブラソール（Ｌａｂｒａｓｏｌ）のような、カプリロカプロイルマクロゴールグリセリドが挙げられる。
【００５８】
他の実施形態において、組成物の調製において使用される界面活性剤相／混合物は、他の油を含まないか、又は実質的に含まない。そのような実施形態において、（ｉ）界面活性剤、（ｉｉ）活性物質（例えば、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物及び任意にアジュバント）を含む界面活性剤相／混合物は、他の油を、実質的に含まないか又は含まず、例えば界面活性剤相／混合物は、１０重量％未満、５重量％未満、１重量％未満、０．５重量％未満、０．１重量％未満又は０．００１重量％未満の油を含むか、他の油を含まない。次いで、界面活性剤相／予備混合物を、水とヒドロゲル形成ポリマーとを含む水性組成物と混合して、本明細書で記述するように、水性相内に自己組織体分散体（おそらくミセル分散体）を形成することができる。
【００５９】
冷却液から分離されたビーズを遠心分離して、過剰な油を取り除き、次いで、例えば室温（１５〜３０℃、例えば２０〜２５℃）で風乾してもよい。遠心分離は通常、風乾前に実施する。
【００６０】
本明細書中、より詳細に後に記述するように、本明細書で記述するように作製されたビーズは、その調製の後、１種類以上の層でコーティングされてもよい。
【００６１】
更なる様態において、本発明は、コーティングされていてもよい本発明のビーズの集団を含む剤形を提供する。剤形のビーズは、本明細書で記述したような活性物質を含む。剤形は、医薬使用に好適である。ある実施形態において、剤形は、少なくとも２つのビーズの集団を含んでいてもよい。
【００６２】
ある実施形態において、剤形は、例えばヒト又は動物への投与に好適な単位剤形中に、本発明の組成物（例えばビーズ又は成形単位、及び特に多数のビーズ又は成形単位）を含む。単位剤形は、カプセル、タブレット、スプリンクル、サシェ、座薬、ペッサリー又は他の好適な単位剤形から選択される。
【００６３】
代表的実施形態において、本発明の剤形は、少なくとも以下の材料、水、ヒドロゲル形成ポリマー、界面活性剤、活性物質を一緒に混合して、自己組織体（例えばミセル）分散体を形成すること、及び該分散体を、乾燥状態で分散を含むビーズを含む、（医薬使用のために好適な）剤形に調製すること、によって形成される。
【００６４】
いくつかの実施形態において、剤形は、胃腸管（ＧＩＴ）中の１つ以上の特定部位で、1種以上の活性物質を放出するような方法で、適切に調製物化されている。特に、剤形は、少なくとも上部小腸中、微生物及び任意のアジュバントを放出するために調製され、したがって、剤形は腸溶性コーティングされていてもよい。剤形は、腸溶性コーティングビーズを含んでいてもよく、例えば剤形は、複数の腸溶性コーティングビーズを含むカプセル又は他の形態であってもよい。剤形は、他の場所での放出、例えば、回腸、結腸又は両方を標的にしてもよい。
【００６５】
本発明の剤形は特に、経口投与用である。
【００６６】
本発明は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を対象に投与する方法を含み、本明細書で開示した組成物又は剤形を対象に経口投与することを含むが、この組成物又は剤形は、次のような活性物質（例えば、（ｉ）生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物及び（ｉｉ）アジュバントの組み合わせ）を含む。
【００６７】
本発明はまた、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を含む活性医薬成分を対象に投与するための方法を含み、本方法は、ビーズの集団を含む剤形を投与することを含む。ビーズは、ヒドロゲル形成ポリマーを含むマトリクスを含み、マトリクス内に、界面活性剤と、任意のアジュバントと、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物とを含む。剤形は経口投与用である。剤形は、胃腸管中に活性物質を放出するように改変されていてもよい。
【００６８】
本発明は更に、自己組織体（例えばミセル）が分散したヒドロゲルを含む組成物を乾燥させて得られた組成物の特徴を有する生成物を提供するが、ここで、該組成物は更に、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、任意にアジュバントを含み、該生成物は経口剤形、例えばゼラチンカプセル、の製造に使用される。
【００６９】
本発明は、更に、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を対象に投与することを含み、（本明細書で開示した）活性物質を含む生成物を対象に経口投与することを含むが、ここで該生成物は、本明細書で記述したような組成物である。
【００７０】
本発明は、更に、開示されるような組成物又は剤形を提供し、この組成物又は剤形は、医薬品として使用される（本明細書で開示の）活性物質（例えば本明細書で開示の活性物質の併用）を含む。
【００７１】
さらに、本発明は、
ｉ．対象をワクチン接種すること、と
ｉｉ．例えばがん及び自己免疫疾患から選択される疾患を治療するため（例えば自己免疫疾患を制御するため）の、免疫治療応答の誘導であって、自己免疫疾患が、全身性、及び胃腸自己免疫疾患から選択される、誘導と、
ｉｉｉ．免疫を誘導又は制御するため、又はリンパ系中、転移性又はミクロ転移性細胞を局所で標的化するための、活性実体の投与と、
から選択される処置を実施するための方法が提供され、本方法には、本明細書で開示されるような組成物又は剤形を投与することが含まれ、組成物又は剤形は、引用された治療を達成するために適切な活性を有する（本明細書で開示したような）活性物質（例えば、本明細書で開示したような活性物質の併用）を含む。
【００７２】
本明細書で開示されるように、本発明によって提供される組成物又は剤形には、本明細書で記述した疾患又は病床の予防又は治療、例えば
ｉ．対象をワクチン接種すること、と
ｉｉ．例えばがん及び自己免疫疾患から選択される疾患を治療するため（例えば自己免疫疾患を制御するため）の、免疫治療応答の誘導であって、自己免疫疾患が、全身性、及び胃腸自己免疫疾患から選択される、誘導と、
ｉｉｉ．免疫を誘導又は制御するため、又はリンパ系中、転移性又はミクロ転移性細胞を局所で標的化するための、活性体の投与と、
から選択される治療のための医薬品の製造における使用のための、（本明細書で開示されたような）活性物質（例えば、本明細書で開示したような活性物質の併用）が含まれる。
【００７３】
本明細書の記述及び請求項のいたるところで、語句「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」と、これらの変形は、「含むが、これに限定されない」を意味し、これらは、他の分子、添加物、成分、完成物又は工程を排除する意図はない（排除しない）。本明細書の記述及び請求項のいたるところで、単数形は、文脈が他に要求しない限り、複数を含む。特に、不定冠詞が使われる場合、明細書は、文脈上異なる解釈を要する場合を除き、複数並びに単数を意図していると理解されるべきである。
【００７４】
本発明の特定の態様、実施形態又は実施例との組み合わせで記述される特性、完成物、特徴、化合物、化学的分子又は基は、それらと不適合でない限り、本明細書で記述された任意の他の様態、実施形態又は実施例に適用可能であると理解されるべきである。（任意に付随する請求項、要約及び図面を含む）本明細書で開示された特徴の全て、及び／又は同じく開示された任意の方法又は方法の段階の全てが、そのような特徴及び／又は段階の少なくとも一部が相互に排他的である組み合わせを除いて、任意の組み合わせで組み合わされてもよい。本発明は、上述のどのような実施形態の詳細にも制限されない。本発明は、（任意の付随する請求項、要約及び図面を含む）本明細書中に開示された特徴の、任意の新規な１つ、又は任意の新規な組み合わせ、又は同様に開示された任意の方法又は方法の段階の、任意の新規な１つ、又は任意の新規な組み合わせにも及ぶ。
【００７５】
本願と関連して、本明細書と同時又はそれ以前に提出し、及び本明細書とともに一般の公開閲覧が可能な全ての論文及び文書にも留意されたい。そのような論文及び文書の全ての内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００７６】
本明細書で、商標「ＳｍＰｉｌｌ」は、本発明の組成物、特に、実施例中で記述される本発明の組成物を意味する。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中のＥＴＥＣ及びα−ＧａｌＣｅｒを用いた免疫は、溶液中又は非アジュバント化ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中の抗原の送達よりも、有意により強力な粘膜抗体力価力価を誘導する。マウスを、溶液中のＥＴＥＣのみ、又はα−ＧａｌＣｅｒ若しくはＣＴを含むもの、あるいはＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中のＥＴＥＣのみ、又はα−ＧａｌＣｅｒを含むものを用いて、第０週の２連続日に免疫し、その後、第２週及び４週に、同じ一連の追加免疫を実施した。糞便ペレットを、追加免疫の１日前、最終免疫の１２日後に回収し、抗原特異的ＩｇＡ（ａ）及びＩｇＧ（ｂ）抗体力価を、ＥＬＩＳＡによって測定した。矢印は追加免疫を示している。＊＊＊、Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒ溶液、＋＋＋、Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣのＳｍＰｉｌｌ（登録商標））。
【図２】ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中、α−ＧａｌＣｅｒを含むＥＴＥＣの経口投与により、糞便ペレット中の強力な抗原特異的ＩｇＡ応答を誘導する。マウスを図１の説明文中で記述したように免疫した。糞便ペレットを、最終免疫の１２日後に回収し、抗原特異的ＩｇＡ力価力価と、総ＩｇＡ抗体濃度をＥＬＩＳＡによって評価した。結果を、ＣＦＡ／Ｉ特異的ＩｇＡ最終力価（ａ）、又は抗原特異的ＩｇＡ力価／総ＩｇＡ濃度（ｂ）として表す。＋＋＋Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣ溶液）、＊＊＊Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣのＳｍＰｉｌｌ（登録商標））。
【図３】ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中のＥＴＥＣとα−ＧａｌＣｅｒの経口免疫により、強力な抗原特異的全身抗体応答を誘導する。マウスを図１の説明文中で記述したように免疫した。抗原特異的ＩｇＡ及びＩｇＧ抗体応答を、追加免疫の１日前と、最終免疫の１２日後に回収した血清サンプルにて、ＥＬＩＳＡによって評価した。矢印は、追加免疫を表している。＊＊、Ｐ＜０．０１、＊＊＊、Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒ溶液）、＋＋、Ｐ＜０．０１、＋＋＋、Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣのＳｍＰｉｌｌ（登録商標））。
【図４】ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中、α−ＧａｌＣｅｒを含むＥＴＥＣの経口投与により、強力な抗原特異的ＩｇＡ応答を全身に誘導する。マウスを図１の説明文中で記述したように免疫した。血清サンプルを最終免疫の１２日後に回収し、抗原特異的ＩｇＡ力価（ａ）と、総ＩｇＡ抗体濃度（ｂ）をＥＬＩＳＡによって評価した。
【図５】ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中、ＥＴＥＣとα−ＧａｌＣｅｒでのマウスの経口免疫化により、顕著なＩｇＧ１抗体応答を全身に誘導される。マウスを図１の説明文中で記述したように免疫した。抗原特異的ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ抗体力価力価を、最終免疫の１２日後に回収した血清において、ＥＬＩＳＡによって評価した。結果を、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ又はＩｇＧ２ｂ最終力価として表す。
【図６】ＥＴＥＣと、アジュバントとしてα−ＧａｌＣｅｒとを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）を用いたマウスの経口免疫化により、腸内の局所で、ＩｇＧ抗体応答を誘導する。マウスを図１の説明文中で記述したように免疫した。抗原特異的ＩｇＧ抗体力価を、免疫の最終シリーズの２週間後に回収した、小腸及び大腸両方の洗浄液において、ＥＬＩＳＡによって測定した。＋Ｐ＜０．０５、＋＋＋Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣ溶液）、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣのＳｍＰｉｌｌ（登録商標））。
【図７】ＥＴＥＣと、アジュバントとしてα−ＧａｌＣｅｒとを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）でのマウスの経口免疫化により、腸内の局所で、有意なＩｇＡ抗体応答を誘導する。マウスを図１の説明文中で記述したように免疫した。抗原特異的ＩｇＡ抗体力価と、総ＩｇＡ抗体濃度を、免疫の最終シリーズの２週間後に回収した、小腸及び大腸抽出液両方のサポニン処理から得た上清において、ＥＬＩＳＡによって測定した。結果をＣＦＡ／Ｉ特異的ＩｇＡ最終力価（（ａ）及び（ｃ））又は抗原特異的ＩｇＡ力価／総ＩｇＡ濃度（（ｂ）及び（ｄ））として示す。＋＋＋Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣ溶液）、＊＊＊Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣのＳｍＰｉｌｌ（登録商標））。
【図８】ＥＴＥＣと、アジュバントとしてα−ＧａｌＣｅｒとを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）でのマウスの経口免疫化により、腸内の局所で、有意なＩｇＧ抗体応答を誘導する。マウスを図１の説明文中で記述したように免疫した。抗原特異的ＩｇＧ抗体力価を、免疫の最終シリーズの２週間後に回収した小腸及び大腸抽出液両方のサポニン処理から得た上清において、ＥＬＩＳＡによって測定した。＋＋＋Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣ溶液）、＊＊＊Ｐ＜０．００１（ＥＴＥＣ＋α−ＧａｌＣｅｒのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）対ＥＴＥＣのＳｍＰｉｌｌ（登録商標））。
【図９】図９は、国際公開第２０１０／１３３６０９号パンフレットにて記述されるビーズのＸ線断層画像を示す。
【図１０】図１０は、参照研究（１）の結果を示す。ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中のα−ＧａｌＣｅｒ及びコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５あり、又はなしでの、コレラ毒素サブユニットＢ（ＣＴＢ）のマウスへの経口投与により、抗原特異的ＩｇＧ応答を全身性誘導する。マウスを、図１の説明文と同様に免疫した。血清サンプルを、最終免疫化の１２日後に回収し、抗原特異的ＩｇＧ力価（ａ）をＥＬＩＳＡによって評価した。
【図１１】図１１は、参照研究（１）の結果を示す。ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中のα−ＧａｌＣｅｒ及びコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５あり、又はなしでの、コレラ毒素サブユニットＢ（ＣＴＢ）のマウスへの経口投与により、抗原特異的ＩｇＧ応答を全身性誘導する。マウスを、図１の説明文と同様に免疫した。血清サンプルを、最終免疫化の１２日後に回収し、抗原特異的ＩｇＡ力価（ａ）と、総ＩｇＡ抗体濃度（ｂ）とをＥＬＩＳＡによって評価した。
【図１２】図１２は、参照研究（２）の結果を示す。ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中のα−ＧａｌＣｅｒ及びコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５あり、又はなしでの、コレラ毒素サブユニットＢ（ＣＴＢ）のマウスへの経口投与により、抗原特異的ＩｇＧ及びＩｇＡ応答を局所的に腸に誘導する。マウスを、図１の説明文と同様に免疫した。
【図１３】図１３は、αＧａｌＣｅｒでアジュバント化したコレラ菌細菌ＪＳ１５６９のＳｍＰｉｌｌ（登録商標）調製物でのマウスの経口免疫化により、マウスにおける強力な糞便ペレット抗体応答を誘導する。マウスを、コレラ菌実施例１にて記述したように免疫し、糞便ペレットを解析した。図１３（ａ）免疫化の１ラウンド後、２ラウンド後（ｂ）及び３ラウンド後（ｃ）の糞便ペレットにて観察されたＩｇＡ力価。（ｅ）は、ＥＬＩＳＡによって測定された免疫３ラウンド後の糞便ペレット中のＩｇＧ力価を示す。図１３の結果は、各群の全マウスの平均値とＳＤを表している。
【図１４】図１４は、図１３にて記述した免疫の各ラウンド後のＩｇＡ応答の誘導動態の経時変化を図示している。
【図１５】αＧａｌＣｅｒでアジュバント化したコレラ菌細菌ＪＳ１５６９のＳｍＰｉｌｌ（登録商標）調製物でのマウスの経口免疫により、溶液での送達に比べて、より強力な組織特異的抗体応答を誘導する。マウスを、コレラ菌実験１中で記述したように経口ワクチン処理した。ワクチン接種の最終ラウンドの２週間後にマウスを安楽死させ、かん流して内蔵から血液を除去した。図１５は、小腸洗浄におけるＥＬＩＳＡによって測定された稲葉型特異的なＬＰＳのＩｇＡ（ａ）及びＩｇＧ（ｂ）力価を示している。結果は、各群中の全てのマウスの平均値とＳＤを表している。
【図１６】αＧａｌＣｅｒでアジュバント化したコレラ菌細菌ＪＳ１５６９のＳｍＰｉｌｌ（登録商標）調製物でのマウスの経口免疫化により、溶液中で送達された同一の調製物よりも、より強力な血清抗体応答が誘導される。マウスを、コレラ菌実験１中で記述したように経口ワクチン処理し、血清を尾血によって得た。図１６は、ＥＬＩＳＡによって測定された、稲葉型に特異的なＬＰＳのＩｇＡ（ａ）、ＩｇＧ（ｂ）及びＩｇＧ１（ｃ）力価を示す。結果は、各群中の全てのマウスの平均値とＳＤを表している。
【図１７】αＧａｌＣｅｒとのコレラ菌細菌ＪＳ１５６９のより高いＳｍＰｉｌｌ（登録商標）用量は、マウスにおける糞ＩｇＡ応答を誘導する。マウスを、コレラ菌実験４にて記述したように経口ワクチン処理した。糞便ペレットサンプルを、ワクチン処理の各ラウンドの前日、及び最終ワクチン接種の２週間後に得、抗稲葉型ＬＰＳ−ＩｇＡ及びＩｇＧ応答を測定する。図１７は、ＥＬＩＳＡによって測定した、免疫化の１、２及び３ラウンド後に観察された種々のＩｇＡ力価を示している。結果は、サンプルの一連の希釈にわたる、ＯＤ４９２吸光度を表している。
【図１８】αＧａｌＣｅｒでアジュバント化したＳｍＰｉｌｌ（登録商標）コレラ菌細菌ＪＳ１５６９のより高い用量でのワクチン接種は、マウスにおける組織特異的ＩｇＡ応答を誘導する。マウスを、コレラ菌実験４にて記述したように経口ワクチン接種した。ワクチン接種の最終ラウンドの２週間後、マウスを安楽死させ、かん流して、内蔵から血液を除去した。小腸を切除し、取り出した上部の小さな部分をサポニン溶液内において、組織間抗体を抽出した。図１８は、ＥＬＩＳＡによって測定した、免疫化の３ラウンド後に観察された、種々の稲葉型ＬＰＳ特異的ＩｇＡ力価を示す。結果は、一連のサンプルの希釈にわたる、ＯＤ４９２吸光度を表す。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
「両親媒性の（ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ）」という用語は、「両親媒性の（ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ）」と同じ意味であり、親水性基と疎水性（親脂質）基両方を含むことを意味する。
【００７９】
「結合する」という用語には、混合されている、又はお互いに接点を有する、２つの物質の関係が含まれる。例えば、アジュバントが、ビーズ又は他の乾燥組成物中の界面活性剤と結合する場合、結合は、好適な解析技術を用いて、アジュバントと活性物質の共配置を確認することによって決定することができる。（共配置は、両方の物質が位置している少なくとも１つの場所の存在を意味する。）共配置を決定するための解析技術としては、ＴＯＦＦ、マッピングＲａｍａｎ分光法及び赤外線分光法が挙げられる。したがって、アジュバントの少なくとも一部が、界面活性剤の少なくとも一部と結合する組成物は、アジュバント及び界面活性剤が共配置する場所を含む組成物であってもよく、すべてのアジュバント（例えば実質的に全てのアジュバント）が、界面活性剤と共配置してもよい。
【００８０】
「医薬品として許容される」という語句は、一般に安全であると認識される分子実体及び組成物を意味する。特に、本発明の実施において使用される医薬品として許容される担体は、通常、生理学的に忍容可能であり、患者に投与したときに、アレルギー性、又は同様の有害な反応（例えば胃の不調、めまいなど）を生じない。好ましくは、本明細書で用いられる場合、「医薬品として許容される」という用語は、動物、特にヒトにおける使用のために、適切な行政機関によって承認されるか、又は米国薬局方若しくは他の一般に認識された薬局方に列記されていることを意味する。
【００８１】
「医薬品として許容される賦形剤」は、一般に安全で、非毒性で、生物学的に又はその他の意味において有害ではなく、医薬組成物を調製することにおいて有用である賦形剤を意味し、獣医療への使用並びにヒト医薬への使用のために許容可能な賦形剤を含む。本明細書中で使用するところの「医薬品として許容される賦形剤」は、１種及び１種よりも多いそのような賦形剤両方を含む。
【００８２】
特に、自己組織体（例えばミセル）に関連した、「放出する」という用語には、ポリマーマトリクス中にあらかじめ存在している自己組織体を放出することと、界面活性剤をポリマーマトリクス中の自己組織体形体に含まず、本発明の組成物の摂取後に、水と自己組織体が相互接触すると形成される、自己組織体を放出することとの両方の意味が含まれる。言い換えれば、本発明の組成物から放出された自己組織体は、組成物中前もって形成されるか、放出工程の一部として（全体的又は部分的に）形成されてもよい。
【００８３】
「治療すること」という用語には、（１）病状、疾病又は病態の恐れがあるか、かかりやすくなっているが、まだ、病状、疾病又は病態による臨床又は亜臨床症状を経験せず、その発現も見られない動物において、進行中の病状、疾病又は病態の臨床症状の出現を予防すること、又は遅延させることと、（２）病状、疾病又は病態を阻止すること（例えば、病状、疾病又は病態による臨床又は亜臨床症状の少なくとも一つによる病気の進行の抑制、低減又は遅延であり、維持療法の場合、その再発の抑制、低減又は遅延である）、及び／又は（３）病状を軽減すること（すなわち、病状、疾病又は病態、あるいは、病状、疾病又は病態による臨床又は亜臨床症状の少なくとも一つの回復を誘導すること）、とが含まれる。治療される患者の利点は、統計学的に有意であるか、少なくとも患者又は医師に認知されるかのいずれかであればよい。「治療的又は予防的」という用語は、同一の対象を包含する。
【００８４】
本明細書で定義される「ワクチン」は、抗原性物質、特に、改変生（弱毒生）又は不活化された感染因子や微生物を含む組成物として定義され、大体の場合はアジュバントとともに動物内に投与されるが、そのことで、能動免疫、耐性誘導、耐性破壊、自己免疫疾患の経過変化などの、免疫を介した効果が生じる。本発明の組成物は、ワクチン用組成物であってもよい。記載のない限り、用語「ワクチン用組成物」は、必ずしもワクチン接種に限らない免疫調節、例えば耐性又は他の免疫治療用を含む。
【００８５】
「対象」という用語には、鳥類、ヒト及び他の哺乳動物、並びに魚、例えば飼育動物（例えばイヌ及びネコ）が含まれる。「対象」という用語は特に、ヒトを意味する。
【００８６】
「有効量」は、所望の治療又は予防反応を得るために十分な量を意味する。治療又は予防反応は、使用者（例えば臨床医）が、治療に対する効果的な反応として認識しうる任意の反応であってもよい。更に、治療又は予防反応の評価に基づいて、適切な処置期間、適切な用量、及び任意の可能性のある組み合わせ処置を決定することは、当業者の技術の範囲内である。
【００８７】
開示物の組成物に適用される、「乾燥」及び「乾燥した」という用語は、それぞれ、５重量％未満の遊離水、例えば１重量％未満の遊離水を含む組成物に対して言及されてよい。しかしながら、主に、本開示物の組成物に適用される「乾燥」及び「乾燥した」は、初期固化組成物中に存在するヒドロゲルが、堅い組成物を形成するのに充分乾燥していることを意味する。
【００８８】
先に記述したように、本発明は、特に、（ｉ）ヒドロゲル形成ポリマーと、（ｉｉ）界面活性剤と、（ｉｉｉ）生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、を含む組成物を提供し、組成物は更に、（ｉ）界面活性剤の少なくとも一部が、ポリマー内に分散した自己組織体（例えばミセル）の形態であること、及び（ｉｉ）組成物は、水と混合したときに、自己組織体（例えばミセル）を放出可能であることから選択される特徴を含む。組成物にはまた、アジュバントが含まれていてもよい。前記水は例えば、胃、腸又は結腸液又はそれらの１つの疑似液であってもよい。本発明はまた、（ｉ）自己組織体形成剤（例えばミセル形成剤）、例えば親水性鎖と疎水性鎖を含む界面活性剤から選択される化合物を含む、その中に分散した自己組織体（例えばミセル）を有するヒドロゲルと、（ｉｉ）生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、を含む組成物、そのような組成物を乾燥することと、乾燥した組成物を提供する。組成物にはまたアジュバントが含まれていてもよい。
【００８９】
本発明はここで、本発明の組成物が含んでよい種々の成分に言及することによって詳細に記述されるであろう。「賦形剤」という用語は、有効成分以外の全て又は一部の組成物を記述するために時折使用されるが、賦形剤が活性を持つ場合や有効成分が賦形剤の性質を持つ場合があることを忘れてはならない。
【００９０】
特に断りのない限り、本発明の組成物の成分、構成要素、賦形剤などは、本明細書の他の箇所で議論される、一つあるいは複数の使用目的に好適であり、例えば化粧品として許容可能、環境的に許容可能な、医薬品として許容される、食品添加物として許容可能なものなどである。
【００９１】
疑義の生じるのを避けるために、「背景技術」の項で、本明細書中で以前に開示された情報は、本発明に関連し、本発明の開示の一部として読まれるべきであることを、ここで表明する。
【００９２】
活性物質
本発明の組成物は、活性物質として微生物を含む。本発明において、微生物は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物から選択される。組成物はまた、アジュバントを活性物質として含んでいてもよい。本発明は、活性物質として、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、アジュバントとを含むビーズを含むことが好ましい。
【００９３】
微生物は、単細胞微生物であってもよく、例えば細菌、単細胞真菌及び原生動物から選択することができる。細菌は、腸内病原体であってもよい。微生物は、鳥類又は哺乳動物、例えばヒトの病原体、例えば腸内病原体であってもよい。微生物は、ヒト腸内病原体であってもよい。微生物は、定着因子抗原Ｉ（ＣＡＦ／Ｉ）を発現している細菌であってもよく、ＣＡＦ／Ｉを発現しているヒト病原体であってもよい。微生物は、微生物、例えば本段落で前述したような微生物の組み合わせ、例えばＣＡＦ／Ｉを発現している微生物の組み合わせを含んでいてもよい。
【００９４】
微生物は、例えば、放射活性、例えば非イオン化放射、イオン化放射、ガンマ放射又は赤外線放射、超音波振動、熱不活性化、例えば湿潤加熱又は乾燥加熱、化学的不活性化、例えばホルマリン、アルコール、フェノール、エチレンオキシド、プロピオラクトン、エチレンイミン又は二酸化炭素の使用、抗生物質の使用、生理化学的方法、例えば蒸気−ホルムアルデヒド、外来宿主、例えば組織培養、孵化卵又は生体動物を通した弱毒化、又はこれらの組み合わせを含む当業者に公知の任意の方法によって死滅、弱毒化又は不活化することができる。死滅、弱毒化又は不活化の工程の間、又はまさに調製工程の間、生、死滅、弱毒化又は不活化微生物が部分的に断片化されてもよいことが理解されるべきである。したがって、当業者は、用語、生、死滅、弱毒化及び不活化細菌の使用が、不断片化（無傷）及び断片化微生物ユニットの混合を意味することを、理解するであろう。微生物は無傷であってもよいが、実際に、無傷の微生物の集団が、断片化微生物の小さな割合を含み得ることは当然であり、「無傷の微生物」という用語はそれに応じて解釈されるべきである。
【００９５】
微生物は、ホルマリン死滅させてもよい。ホルマリン死滅微生物は、全体的に、部分的に、又は大部分は断片化されていてもよく、したがって、「死滅微生物」という用語は、その範囲内で、無傷な死んだ微生物と断片化した死んだ微生物、及びそれらの組み合わせを含む。
【００９６】
当然ながら、「断片化微生物」という用語は、無傷の微生物の断片化によって得られる（によって得られた生成物の特徴を有する）生成物を意味し、したがって、微生物から精製又は単離されたサブユニット又は断片は（実質的に）微生物全体の残りの部分を含まないので、上記生成物から区別されるべきであり、それには含まれない。
【００９７】
疎水性活性物質は、非水性媒質中で部分的又は完全に可溶性であるか、水性媒質中で不溶性である化合物により決定される。疎水性活性物質は、非水性環境中で、部分的又は完全に可溶性である。
【００９８】
両親媒性活性物質は、化合物中に親水性及び疎水性領域の両方が存在することで決定される。したがって、この活性物質は、水性媒質及び非水性媒質の両方で、部分的に又は完全に可溶性である。
【００９９】
ある実施形態において、組成物には、親水性活性物質が含まれていてもよい。実施形態において、組成物は、更なる活性物質を含んでいてもよく、この更なる活性物質は、親水性活性物質である。親水性活性物質は、水性媒質中で部分的、又は完全に可溶性であり、非水性媒質中で不溶性である。
【０１００】
したがって、本発明の組成物は、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を含む１種以上の抗原を含む。更に、そのような組成物は、単一のアジュバントか又はそれを併用してアジュバントを含んでいてもよく、例えば、α−ＧａｌＣｅｒ又はその類似体のような、糖脂質アジュバントをアジュバントとして使用してもよい。本明細書で、「抗原」は、非ヒト動物又はヒト内に導入した時に、抗原に対する抗体の形成及び／又は細胞媒介性免疫を誘発する物質又は化合物として定義され、本開示の組成物の抗原内容は、微生物、例えば生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される単一の微生物又は微生物の組み合わせを含み、又はそれらからなる。本明細書の他の箇所に記載されているように、微生物は、無傷及び断片化微生物、及びそれらの組み合わせから選択される。
【０１０１】
抗原は市販されており、又は当業者がそれらを製造可能である。ワクチンに含まれる１以上の抗原性部分は、例えば改変生微生物又は死滅微生物（例えば化学的又は熱死滅）何れかを含む。
【０１０２】
本発明に従って使用可能な代表的抗原としては、ウイルス、細菌、真菌、寄生生物及び他の感染性因子、例えばプリオンから選択される、天然、組換え、又は合成産物が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。抗原は、例えば以下の感染性因子、赤痢アメーバ、バシルスセレウス及びバシルスサブチリス属を含むバシルス、ブラストシスチスホミニス、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）及びクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）定型及び非定型株、カンピロバクター・ジェジュニを含むカンピロバクター、ビブリオ・コレラを含むビブリオ、クロストリジウム・ボツリナム、クロストリジウム・ディフィシレ、クロストリジウム・ペルフリンゲン、クリプトスポリジウム、シクロスポラ・カイエタネンシス、大腸菌、腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、ヘリコバクター・ピロリ、リステリア・モノシトジーン、トリキネラ・スピラリス、クリプトスポリジウム、例えばクリプトスポリジウム・パルバム、シクロスポラ・カイエタネンシス、エンテロウイルス、ベロ毒素産出（ＶＴＥＣ）株などを含む大腸菌、ギアルディア・デュオデナリス、ギアルディア・ランブリア、ギアルディア・インテスティナリスを含むギアルディア、Ａ型肝炎ウイルス、リステリア・モノサイトジーン、海産の生物毒素、ノロウイルス類（ノーウォーク様ウイルス（ＮＬＶ）、小型球形ウイルス（ＳＲＳＶ））、ロタウイルス、アデノウイルス、サポウイルス、アストロウイルス、ポリオウイルス、サルモネラ・エンテリカ、血清型腸炎菌、ネズミチフス菌、チフス菌及びパラチフス菌を含むサルモネラ、シゲラ・ソネイ、シゲラ・ボイジ、シゲラ・ディセンテリア及びシゲラ・フレキシネリを含むシゲラ、黄色ブドウ球菌、寄生虫、寄生蠕虫、エルシニア属、例えば腸炎エルシニア及び仮性結核菌、又はこれらの組み合わせから選択される感染性因子であってもよい。
【０１０３】
真菌抗原は、例えば、カンジダ・アルビカンス、黒色アスペルギルス、アスペルギルス・フミガーツス、クリプトコッカス・ネオホルマンス、ニューモシスティス・カリニ、コクシジオイデス・ポサダシ、ピシウム・インシジオサム又はこれらの組み合わせであってもよい。
【０１０４】
組成物には、真菌と細菌、及び／又は同一又は異なる細菌種の２つ以上の株を組み合わせて含まれていてよい。本発明は、天然に存在する株、並びに例えば抗原性タンパク質を発現する、又は過剰発現する、組換え体又は合成微生物株に及ぶことを意図する。
【０１０５】
好ましい実施形態において、組成物は、活性物質としてＥＴＥＣを含む。そのような組成物は、アジュバント、例えばα−ＧａｌＣｅｒ又はその類似体のような、糖脂質アジュバントを含んでもよいことが思い起こされるであろう。
【０１０６】
また、活性物質として、ヘリコバクター・ピロリを含む本発明の組成物が言及される。そのような組成物はアジュバント、例えばα−ＧａｌＣｅｒ又はその類似体のような、糖脂質アジュバントを含んでよいことが思い起こされるであろう。
【０１０７】
本発明の他の組成物には、コレラ菌（例えば、小川型及び稲葉型の血清型を含む、Ｏ１コレラ菌株、小川型及び稲葉型の血清型両方の抗原を含む細胞、例えば国際公開第２０１１／０３４４９５号パンフレットにて記述される細胞）が活性物質として含まれる。特定のコレラ菌株は、コレラ菌ＪＳ１５６９（株ＣＶＤ１０３のリファンピシン耐性誘導体、Ｊ．Ｂ．Ｋａｐｅｒ，Ｈ．Ｌｏｃｋｍａｎ，Ｍ．Ｍ．Ｂａｌｄｉｎｉ，Ｍ．Ｍ．Ｌｅｖｉｎｅ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２（１９８４），ｐｐ．３４５−３４９）、及びまた、稲葉型ＬＰＳポリペプチドを過剰発現するように遺伝子工学的に改変されたコレラ菌ＪＳ１５６９である。そのような組成物は、アジュバント、例えばα−ＧａｌＣｅｒ又はその類似体のような、糖脂質アジュバントを含んでいてもよい。
【０１０８】
したがって、本発明は、その範囲内に、
ヒドロゲル形成ポリマーを含むマトリクスと
マトリクス内に含まれる、（ｉ）腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、ヘリコバクター・ピロリ及びコレラ菌とから選択される生、死滅、弱毒化又は不活化した微生物と、（ｉｉ）界面活性剤と、（ｉｉｉ）アジュバントと、
を含む組成物を含む。例えば本実施形態において、生、死滅、弱毒化又は不活化した微生物は、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）及びヘリコバクター・ピロリから選択される。
【０１０９】
本発明はしたがって、更に、その範囲内に、
●界面活性剤と、
●腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、ヘリコバクター・ピロリ及びコレラ菌から選択される、例えば、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）及びヘリコバクター・ピロリから選択される、生、死滅、弱毒化又は不活化した微生物と、
●アジュバントと、
●その中に界面活性剤、微生物及びアジュバントが含まれる、ヒドロゲル形成ポリマーと、
を含む組成物を含む。
【０１１０】
本明細書の開示の全てが、先の２つの段落の組成物に適用可能であることを、読者は理解するであろう。したがって、２つの先の段落のいずれかの組成物は、細菌がＥＴＥＣである場合に、本明細書の他の箇所で、本発明の随意の（又は好ましい）特徴として、記載された随意の１つ以上の特徴を含んでいてもよい。したがって、２つの先の段落の何れかの組成物は、細菌が、Ｈ．ピロリである場合に、本発明の随意の（又は好ましい）特徴として、本明細書他の部分で記述された、随意の１つ以上の特徴を含んでいてもよい。したがって、 ２つの先の段落のいずれかの組成物は、細菌がコレラ菌である場合にも同様に、本発明の随意の（又は好ましい）特徴として本明細書他の場所で記述された随意の１つ以上の特徴を含んでいてもよい。
【０１１１】
本発明は、組成物が、免疫刺激剤、Ｔ細胞活性化剤、マクロファージ活性化剤、サポニン、サポニンの画分、サポニンの合成成分、ＩＳＣＯＭＳ、ムラミルジペプチド及び類似体、プルロニックポリオール、トレハロースジマイコレート、アミン含有化合物、サイトカイン類、リポ多糖類誘導体及びカチオン性トランスフェクション試薬（例えばＤＯＴＡＰ）からなる群より選択されるアジュバントである、活性物質を含む実施形態を含む。アジュバントは、例えば、セラミド（例えば、α−ＧａｌＣｅｒとしても公知のα−ガラクトシルセラミド）、キトサン、コレラ毒素、例えばｒＣＴＢ（コレラ毒素の組換え体Ｂサブユニット）、大腸菌易熱性エンテロトキシン、例えばｍＬＴ、オリゴヌクレオチド、例えば、誘導体化されるか、又はされない、ＣｐＧ（シトシンリン酸グアニン）及びＯＤＮ１ａ（デオキシイノシン／デオキシシトシン）のようなオリゴデオキシヌクレオチド、モノリン脂質（ＭＰＬ）、例えばＭＰＬＡ、ＢＣＧ、ＱＳ２１及びＱｕｉｌＡのようなシャボンノキ（キラヤ・サポナリア）から誘導されるものを含むサポニン、ポリＩ：Ｃ（ポリイノシン酸：ポリシチジル酸又はポリイノシン酸ポリシチジル酸ナトリウム塩）など、たとえばコレステロール関連又はコレステロール誘導油、例えばスクアレン（ＩＵＰＡＣ名：（６Ｅ，１０Ｅ，１４Ｅ，１８Ｅ）−２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサ−２，６，１０，１４，１８，２２０ヘキサエン油のような種々の油から選択されてよい。全ての先の物質の誘導体もまた、誘導体が特定の文脈中で言及されるか否かによらず含まれる。アジュバントとしてここで同定された物質は、本発明中他の役割を有するか、役割を果たしてもよく、又は同時に１つより多い役割を果たしてよい。例えば、ｒＣＴＢはまた、ある実施形態において、抗原の役割を果たしてもよい。
【０１１２】
海産の誘導体、海綿など及びそれらの誘導体も、アジュバントとして言及されてもよい。一般に、Ｔｏｌｌ様受容体リガンドがアジュバントとして含まれてもよく、ＬＰＳ、リポタンパク質、リポペプチド、フラゲリン、二本鎖ＲＮＡ、非メチル化ＣｐＧ島、及び細菌、並びにウイルスによって典型的に放出されたＤＮＡ及びＲＮＡの種々の他の形態が挙げられる。ＴＬＲ３及びＴＬＲ９リガンドが、１つの実施形態において好ましい。抗原提示細胞上のＣＤ１ｄタンパク質へ結合する物質が、ヤドリギ抽出物、特に脱毒性化ヤドリギ抽出物として実際に考慮される。考慮に入れる他のアジュバントとしては、その全てが参照によって本明細書に組み込まれる、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、２００９年４月，Ｖｏｌ．４，４号にてＷａｇｎｅｒらによって記述されたＮｏｄ様受容体（ＮＬＲ）リガンドが挙げられる。ムラミルジペプチドがまた、その全てが参照によって本明細書に組み込まれる、ＤＮＡ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７巻，８号，２００８年にてＬｉによって記述されたＫＬＫＬ５ＫＬＫと同様に予測される。その全てが参照によって本明細書に組み込まれる、Ｖａｃｃｉｎｅ  ２４（２００６）５４６１−５４７２にてＳｃｈｅｌｌａｃｋらによって記述されたような、ＯＤＮ１ａとの組み合わせでのＫＬＫＬ５ＫＬＫも意図される。
【０１１３】
本発明に含まれてもよい他のアジュバントとしては、非晶質性硫酸アルミニウムヒドロキシリン酸塩、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム及び他のアルミニウム化合物、Ａｌヒドロゲル、カチオン性リポソーム−ＤＮＡ複合体ＪＶＲＳ１００ＩＳＣＯＭ（ｓ）（登録商標）、リン酸カルシウム、フロインド（Ｆｒｅｕｎｄ）の完全アジュバント、フロインド（Ｆｒｅｕｎｄ）の非完全アジュバント、ＣｐＧ  ＤＮＡ、コレラ毒素Ｂサブユニット、リポソーム、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム、大腸菌非毒性Ｂサブユニット、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、インターロイキン−１β、インターロイキン−２、インターロイキン−７、大腸菌易熱性毒素、ＬＴＫ６３、ＬＴＫ７２、ＴｉｔｅｒＭａｘ  Ｇｏｌｄ、Ｒｉｂｉ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＲＡＳ）、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７２０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｓｅｐｐｉｃ、コリネバクテリア由来Ｐ４０、ＭＰＬ（商標）、Ａｌｕｍ及びリポ多糖類（ＬＰＳ）誘導モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）の組み合わせ（ＡＳ０４）、ＭＰＬ及びサポニン画分ＱＳ２１とのＭＦ５９水中油型エマルジョン（ＡＳ０２）、ＡＳ０３、バクテリアリポ多糖類（ＬＰＳ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、ＣＲＬ１００５コポリマー、死滅コリネバクテリアＰａｒｖｕｍ、モンタニドＩＳＡ  ５１、百日咳菌、カチオン性リポソーム、アダマンチルアミドジペプチド（ＡｄＤＰ）、Ａｒｌａｃｅｌ  Ａ、ＶＳＡ−３、ＰＯＬＹＧＥＮ（商標）、Ａｄｊｕｍｅｒ（商標）、Ａｌｇａｌ  Ｇｌｕｃａｎ、Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミドヒドロアセテート、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルイヌラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ−ＤＰＰ）、ステアリルチロシン、Ｓｐｅｃｏｌ、直鎖（非分岐）β−Ｄ−（２−１）ポリフルクトフラノシル−α−Ｄ−グルコース及びＡｌヒドロゲル（Ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ’，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミン、リン酸カルシウムゲル、ＣＴＡ１−ＤＤ遺伝子融合タンパク質、ＤＯＣ／Ａｌ（ＯＨ）３／ミネラルキャリア複合体、γ−イヌリン、Ｇｅｒｂｕアジュバント、顆粒球−マクロファージ定着刺激因子、Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン、組換え体ｈＩＦＮ−ガンマ／インターフェロン−ｇ、Ｓｃｌａｖｏペプチド、リヒドラゲルＬＶ、リヒドラゲルＨＰＡ、ロキソリビン、ＭＦ５９、ＭＴＰ−ＰＥリポソーム、ムラメチド、ムラパルミチン、Ｄ−ムラパルミチン、ノイラミニダーゼ−ガラクトースオキシダーゼ、非イオン性界面活性剤ベシクル（ＮＩＳＶ）、ポリメチルメタクリレート、タンパク質コクリエート、Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）ＱＳ−２１、ＳＰＴ（抗原用）、Ｑｕｉｌ−Ａ、２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］エチル−２−デオキシ−４−Ｏ−ホスホノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−テトラデカノイオキシテトラデカノイル］−２［（Ｒ）−３−テトラデ���ノイオキシテトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシドトリエチルアンモニウム塩（ＲＣ５２９）、ＬＴＲ１９２Ｇ、大腸菌易熱性毒素、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ、ＡＦ０３、Ｆｌａｇｅｌｌｉｎタンパク質、ＩＳＣＯＭＡＴＩＸ（登録商標）、Ａｂｉｓｃｏ−１００、アルブミン−ヘパリン微小粒子、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、デヒドロエピアンドロステロン、共刺激性分子に対する抗体を含む免疫リポソーム、ＳＡＦ−１、仙台ポロテオリポソーム、スレオニルムラミルジペプチド（ＴＭＤＰ）、Ｔｙ−ＶＬＰｓ、Ｂｕｐｉｖａｃａｉｎｅ、ポリエステルポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド）、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）＋スクアレン、コレラ毒素ｍＣＴ−Ｅ１１２Ｋの非毒性変異体Ｅ１１２Ｋ、Ｍａｔｒｉｘ−Ｓが挙げられる。
【０１１４】
好ましいアジュバントとしては、特異的にナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を刺激する、セラミド及び他の脂質分子（特に非イオン性脂質分子）が挙げられる。セラミドは、スフィンゴシンと脂肪酸を含み、スフィンゴミエリンを構成する成分脂質の１つ、脂質二重膜中の主要な脂質の１つである、細胞の細胞膜内に高濃度で見られる。セラミドは、シグナル伝達物質として機能することができ、例えば細胞の分化、増殖、プログラム細胞死（ＰＣＤ）及びアポトーシス（Ｉ型ＰＣＤ）を調節する。好ましいセラミドとしては、アゲラスフィン及び誘導体を含む、α−ガラクトシルセラミドが含まれる。特に好ましいα−ガラクトシルセラミドは、フナコシ株式会社より市販されており、キリン製薬会社、日本によってもともと合成された、ＫＲＮ７０００として公知の生成物である。また、ＫＲＮ７０００の誘導体も、本発明の組成物の成分として意図され、その両方の全てが、参照によって本明細書に組み込まれている、国際公開第２００４／０２８４７５号パンフレット及びＤｅｒｅら（２００８）、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ１０，Ｎｏ２０，ｐｐ４６４１−４６４４によって詳細に記述される。Ｄｅｒｅ  ｅｔ  ａｌによって記述される（グリコシド酸素原子が、硫黄原子によって置換された）α−ガラクトシルセラミドのチオール化誘導体が、その非常に関連した誘導体の、ラセミ体、エナンチオマー又はジアステレオアイソマーとして特に好ましい。
【０１１５】
本発明にてアジュバントとして使用されてもよい、α−ＧａｌＣｅｒの類似体を含むセラミド誘導体としては、α−ＧａｌＣｅｒの１，２，３−トリアゾール含有類似体、３−Ｏ−スルホ−α−ＧａｌＣｅｒ、４’−Ｏ−スルホ−α−ＧａｌＣｅｒ、６’−Ｏ−スルホ−α−ＧａｌＣｅｒ、α−ＧａｌＣｅｒの４−デオキシ及び３，４−ジデオキシ類似体、芳香族環を含むα−ＧａｌＣｅｒ類似体、α−ＧａｌＣｅｒのＣ−グルコシド類似体、Ｇａｌα１−６Ｇａｌα１−１’Ｃｅｒ、Ｇａｌα１−２Ｇａｌα１−１’Ｃｅｒ、Ｇａｌα１−４Ｇｌｃβ１−１’Ｃｅｒ、Ｇａｌα１−６Ｇｌｃα１−１’Ｃｅｒ、β１−３Ｇａｌα１−１’Ｃｅｒを含むα−ＧａｌＣｅｒのジサッカライド類似体、ガラクトシルセリン型セラミド、ＧａｌＡ−ＧＳＬ、Ｇａｌα１−２ＧａｌＣｅｒ、Ｇａｌα１−３ＧａｌＣｅｒ、Ｇａｌα１−６ＧａｌＣｅｒ糖脂質、α−ＧａｌＣｅｒのグリコシド類似体、ａ−ガラクトシルセラミドのペグ化誘導体（ａＧＣＰＥＧ）、スフィンゴモナスのグリコスフィンゴ脂質類、α−アノマー性ＧａｌＣｅｒ、α−Ｃ−ＧａｌＣｅｒを含むα−ＧａｌＣｅｒのＣ−グリコシド類似体、αマンノシルセラミド、α−ガラクトシル１，２−ジアシルｓｎ−グリセロール、α−ガラクトシルセラミド類似体８、α−ガラクトウラノシルセラミド（Ｇａｌ  Ａ−ＧＳＬ）、Ｃ２０：１シス／トランスＣ２０：２  α−ＧａｌＣｅｒ類似体を含む、脂肪アシル鎖中１つ以上の二重結合を有するα−ＧａｌＣｅｒ、脂肪アシル鎖として、６−フェニルヘキサノイル（Ｃ６Ｐｈ）、８−フェニルオクタノイル（Ｃ８Ｐｈ）又は１１−フェニルウンデカノイル基（Ｃ１１Ｐｈ）を有するα−ＧａｌＣｅｒ類似体、α−グルコシルセラミド（α−ＧｌｃＣｅｒ）、α−グルクロノシルセラミド、α結合マンノシルセラミド（α−ＭａｎＣｅｒ）、βアノマー性ＧａｌＣｅｒ、β−ＧａｌＣｅｒ、β−ＧｌｃＣｅｒ、硫酸セラミドジヘキソシル、硫酸セラミドトリヘキソシル、硫酸セラミドテトラヘキソシル、イソグロボトリヘキソシルセラミド、ＯＣＨ（短化スフィンゴシンテールを有するα−ＧａｌＣｅｒの誘導体）又はＰＢＳ−２５（８カルボニルアシル鎖を有するα−ＧａｌＣｅｒの類似体）が挙げられる。
【０１１６】
本発明で使用してもよい脂質アジュバントの更なる例としては、ボレリア糖脂質、グリコスフィンゴ脂質（ＧＳＬ）、ジホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、リソ−ＰＣ、リソ−ホスファチジルエタノールアミン、リソ−ホスファチジルセリン及びリソ−ホスファチジルイノシトールを含むリン脂質、イソフォームＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１Ｃ、ＣＤ１ｄを含むＣＤ１脂質が挙げられる。
【０１１７】
本発明の１つの実施形態において、アジュバントはα−ＧａｌＣｅｒではない。
【０１１８】
１つの実施形態において、１種より多くのアジュバントを本発明の組成物中への含有は、粘膜免疫応答の刺激を補助し得る。
【０１１９】
実施形態において、アジュバントは、組成物の乾燥重量に基づいて、０．０１重量％〜１重量％、例えば０．０５〜０．５重量％、又は０．１〜０．３重量％にて組成物中に存在する。
【０１２０】
好ましい実施形態において、活性物質は微生物であり、第二活性物質はアジュバントである。好ましくは、アジュバントは免疫刺激剤であり、例えばＴ細胞活性化因子及び／又は抗原提示細胞活性化因子である。アジュバントの代表的な例はα−ＧａｌＣｅｒである。
【０１２１】
ある実施形態において、アジュバント：微生物の重量比は、１：１〜１：１０、任意に１：３〜１：５、例えば１：１．３５〜１：１．４５である。微生物は、１つ以上の単細胞微生物からなっていてもよい。本実施形態において、アジュバントの、単細胞微生物の総量に対する比（細胞１０１０個に対するアジュバントのｍｇ乾燥重量）は０．１〜１００ｍｇ：細胞１０１０個、例えば０．１〜１０ｍｇ：細胞１０１０個、例えば０．２５〜５ｍｇ：細胞１０１０個、特に０．４〜５ｍｇ：細胞１０１０個であってもよい。
【０１２２】
微生物が１種以上の単細胞微生物からなる、ある実施形態において、界面活性剤の、単細胞微生物の総量に対する比（細胞１０１０個に対する界面活性剤のｍｇ乾燥重量）は、１０〜２００ｍｇ：細胞１０１０個、任意に２５〜１２５ｍｇ：細胞１０１０個、例えば２５〜１５０ｍｇ：細胞１０１０個、２５〜１００ｍｇ：細胞１０１０個、５０〜２００ｍｇ：細胞１０１０個、５０〜１００ｍｇ：細胞１０１０個又は６０〜９０ｍｇ：細胞１０１０個であってもよい。
【０１２３】
組成物の任意の成分が温度感受性である（例えば微生物、アジュバントなど）実施形態においては（以下で記述するような）温度不安定成分に対応する製造方法を使用することが好ましい。
【０１２４】
本発明の組成物は、抗原を、直接又は吸収後、消化管関連リンパ組織（ＧＡＬＴ）に接触するようにするために使用することができる。本発明の組成物は、１つの実施形態において、抗原及び／又はアジュバントが、ＧＡＬＴ中、それらのＴ細胞と相互作用するか、又は相互作用を促進することを許容することを意図する。１つの実施形態において、この相互作用が発生する消化管の領域は、直腸及び／又は結腸である。他の実施形態において、領域は十二指腸又は免疫誘導性部位をほとんど全く有さない他の部位である。本発明の組成物は、組成物が胃を通過した後に、特に上部小腸中、微生物及びアジュバントを放出するように適応させてもよく、したがって、組成物は腸溶性コーティングしてもよい。
【０１２５】
本発明は、必須抗原性ペプチドを含む組成物及び／又は調製物を提供する（任意の共有結合又は非共有結合により改変されたペプチドを含む）が、これらのペプチドは、アジュバント及び任意に本明細書の他の箇所で記載された他の成分の存在下、又は非存在下で調製される。このような他の成分、例えば透過性促進剤は、本発明の組成物とともに、（例えば）ポリマーの単一又は多重層により任意に封入（例えばコート）されるが、ここでの層やポリマーコートは、腸又は結腸／直腸の最も適切な位置にて活性物質の放出を可能にするように改変されている。
【０１２６】
したがって、本発明は、哺乳動物、例えばヒト中の免疫応答を誘導する方法を含み、この方法は、
哺乳動物の消化管中に、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を放出するために改良された本開示物の組成物を投与すること、及び／又は
哺乳動物に、更にアジュバントを含む、本開示物の組成物を投与すること、を含む 。
【０１２７】
例えばワクチンとして、又は免疫療法薬剤として、免疫応答を誘導するために使用する際に、微生物とワクチンの用量は、通常、使用する特定の微生物と、組成物の使用の性質とに依存して変更される必要があろう。好適には、組成物は、細胞１０８〜１０１４個の用量を提供する。必要な用量の大きさは、よく知られた方法を用いて、当業者によって決定することができる。用量は、１回投与として、又は分割して投与されてもよい。投与は、望む免疫応答を提供する必要に応じて、繰り返すことができる。例えば、本発明の組成物の投与繰り返しは、初回投与後、１週間未満で実施することができる。あるいは、投与は、少なくとも１週間の期間の後に繰り返してよい。任意に更なる投与を実施可能であるが、各投与は互いに間隔が開けられ、例えば各投与は少なくとも１週間まで開けられる。繰り返し投与が投与される場合、各用量は、初回用量と同一であるか、又は異なっていてもよい。
【０１２８】
結腸又は直腸中の放出のための適合は以下のように例示される。
・組成物を座薬として調製すること
・組成物を経口投与のために調整し、放出制御薬剤を含む。
【０１２９】
放出制御薬剤の例として、組成物は、結腸にて細菌の酵素によって分解されるポリマーを含んでよく、このポリマーは、また、組成物が結腸に到達するまでのバリアの役割を果たす（例えば結腸の条件下、溶解又は分解される）。消化管を下に進む間に分解又は浸食される減速物質ポリマーを使用してもよく、及び／又は結腸の条件下で溶解又は分解される造孔剤を含む、ｐＨ非依存ポリマーを使用してもよい。組成物が小腸に入ったときにのみ、更なる溶解、浸食又は分解にさらされるように、胃内の分解を防止するために、組成物が腸溶性ポリマーを含んでいてもよい。本段落において言及したポリマーが、マトリクス内に含まれていてもよく、及び／又は１つまたは複数のコーティングを形成するか、その中に含まれていてもよい。
【０１３０】
本明細書の他の箇所で議論するように、ｐＨ非依存コーティングポリマー、例えばエチルセルロースを使用してもよい。したがって、エチルセルロース（例えばシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（商標））や他のｐＨ非依存コーティングに、細菌酵素による分解を受けやすいが、消化酵素、例えばヒト消化を受けにくい第二のポリマー（例えば多糖類、特にヘテロ多糖類）を添加することで、コーティングのバリア機能が、末端回腸及び／又は結腸中の細菌酵素の作用によって破壊されることを保証し、このことで、回腸及び／又は結腸中へ活性物質の放出が保証される。エチルセルロースのようなｐＨ非依存コーティング中に、このような細菌酵素分解性ポリマーを含有させることで、本発明のビーズに加えるポリマーの量を調節することにおいて柔軟性が得られ、最適な溶解プロファイルが達成できる。したがって、一般的に、本開示は、徐放材料、例えば浸食され得るポリマー、例えばエチルセルロースと、結腸中の細菌酵素による分解を受けやすいポリマー、例えば多糖類と、特に水溶性多糖類、特にペクチンの組み合わせを含むコーティングを含む、本明細書で記述したような調製物を含む。しかし、標的化結腸放出の場合でさえも、エチルセルロース又は他のｐＨ非依存コーティングポリマーを、細菌酵素による分解を受けやすいポリマーと混合することは必須でない。
【０１３１】
栄養素
本発明の組成物は更に、免疫増強栄養素、例えば、ビタミンＡ、Ｂ（例えばビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ナイアシン（ビタミンＢ３）、パントテン酸、リボフラビン（ビタミンＢ２）、チアミン（ビタミンＢ１）及び葉酸の１種又は組み合わせ）、ビタミンＣ、ビタミンＥ、カロテノイド、例えばβ−カロテン、鉄、マンガン、セレン及び亜鉛から選択される１つ以上の栄養素を含んでいてもよい。組成物は、（ヒドロゲル形成ポリマー内に含まれる）マトリクス中に、栄養素、例えば栄養素の組み合わせを含んでいてもよく、組成物は、界面活性剤と結合した、栄養素、例えば栄養素の組み合わせを含んでいてもよく、組成物は、コーティング内に栄養素、例えば栄養素の組み合わせを含んでいてもよく、組成物は、２又は３つの上記位置のそれぞれに、栄養素（例えば栄養素の組み合わせ）を含んでいてもよい。水溶性栄養素が、マトリクス（乾燥水性相）内の含有のために好適であり得、界面活性剤可溶性栄養素が、界面活性剤との結合、例えばその中に含有含有させるために好適でありうるが、本発明はこれらの可能性に限定はされない。
【０１３２】
ポリマーマトリクス
本開示は、界面活性剤相及び連続相又はマトリクス相を含む調製物を含み、機械的強度が得られる。連続相又はマトリクス相には、ヒドロゲル形成ポリマーが含まれる。したがって、そのような調製物はポリマーマトリクスを含む。
【０１３３】
ヒドロゲル形成ポリマーは、ヒドロゲルを形成することが可能なポリマーである。ヒドロゲルは、静止状態では流動性を示さない固体又は半固体材料として記述されてもよく、中に水性液体媒質の容量中に広がる親水性ポリマー鎖のネットワーク（マトリクス）を含む 。
【０１３４】
組成物は、ゼラチン、寒天、アガロース、ペクチン、カラゲーナン、キトサン、アルギン酸、デンプン、キサンタンゴム、アラビックゴム、グアーゴム、ローカストビーンガム、ポリウレタン、ポリエーテルポリウレタン、セルロース、セルロースエステル、セルロースアセテート、セルローストリアセテート、架橋ポリビニルアルコール、アクリル酸のポリマー又はコポリマー、ヒドロキシアルキルアクリレート、ヒドロキシエチルアクリレート、ジエチレングリコールモノアクリレート、２−ヒドロキシプロピルアクリレート、３−ヒドロキシプロピルアクリレート、メタアクリル酸のポリマー及びコポリマー、ヒドロキシエチルメタクリレート、ジエチレングリコールモノメタクリレート、２−ヒドロキシプロピルメタクリレート、３−ヒドロキシプロピルメタクリレート、ジプロピレングリコールモノメチルアクリレート、ビニルピロリドン、アクリルアミドポリマー及びコポリマー、Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ−プロピルアクリルアミド、メタクリルアミドポリマー及びコポリマー、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド、Ｎ−２−ヒドロキシエチルメタクリルアミド及びビニルピロリドン、及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるヒドロゲル形成ポリマーを含んでよい。特別な実施形態において、以上の物質の任意の２種又は３種等の組み合わせが予定される。
【０１３５】
ヒドロゲル形成ポリマーはまた、親水コロイドと呼ばれ、それは、すなわち、コロイド粒子が水中に分散し、使用可能な水の量に応じてゲルが形成されるコロイドシステムである。実施形態において、不可逆性（単一状態）親水コロイドとは反対に、可逆性親水コロイド、好ましくは温度可逆性親水コロイド（例えば寒天、アガロース、ゼラチンなど）を使用することが好ましい。温度可逆性親水コロイドは、ゲル及びゾル状態で存在可能であり、熱の添加又は除去にて、状態間で変わる。ゼラチン、寒天及びアガロースが、熱可逆性、再水和可能コロイドであり、特に好ましい。例えば、コハク酸化又はフタル酸化ゼラチンのような、ゼラチン誘導体がまた考慮される。本発明において使用できる熱可逆性親水コロイドとしては、例えば（海草から抽出された）カラギーナン、（ウシ、ブタ、魚又は植物供給源から抽出された）ゼラチン、（海草からの）寒天、アガロース（寒天から得た多糖類）及び（シトラスピール、リンゴ及び他の果物から抽出した）ペクチンのような天然の供給源から由来したものが挙げられる。非動物に基づく親水コロイドが、特定の目的、例えば、ベジタリアン、又は宗教又は健康の理由で動物生成物を摂取することを望まない個人への投与のために好ましい可能性がある。カラギーナンの使用に関して、 参照によってその全てが本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第２００６／００２９６６０  Ａ１号明細書（Ｆｏｎｋｗｅら）が言及される。ヒドロゲル形成ポリマーは、１つ以上の他の熱可逆性親水コロイド、例えば、１つ以上の他の列記した熱可逆性親水コロイドとの、ゼラチンの組み合わせを含み、組み合わせであってもよい。ヒドロゲル形成ポリマーは、寒天とのゼラチンの組み合わせを含んでもよく、又は組み合わせであってもよく、任意に少なくとも１つの更なる熱可逆性親水コロイド、例えば列記した１つが、組み合わせ内に含まれていてもよい。
【０１３６】
熱可逆性コロイドは、他のヒドロゲル形成ポリマーに比べて利点がある。熱可逆性コロイドのゲル化又は硬化が、例えば液体冷却槽中、又は空気の流れによって、コロイドを冷却することによって発生する。他のヒドロゲル形成ポリマーのゲル化は化学的に促進され、硬化工程に時間がかかる可能性があるため、組成物成分のゲル化媒体への漏出が起こる可能性がある。組成物の成分の漏出は、組成物内の活性物質の不正確な量をもたらす可能性がある。熱可逆性コロイドはまた、熱可逆性ゲルとしても公知であり、したがって、ヒドロゲル形成剤は、熱可逆性ゲル化剤であることが好ましい。
【０１３７】
有利であるヒドロゲル形成剤に適用することができる他の用語は、「サーモトロピック」である。（読者は、本発明で使用したヒドロゲル形成剤として好ましいと推測するであろう）サーモトロピックゲル化剤は、温度の変化によってゲルになるものであり、そのようなゲル化剤は、そのゲル化が化学的に誘導された、例えばそのゲル化がイオンによって誘導されるもの、例えばイオノトロピックゲル化剤、例えばキトサンよりも、より迅速にゲル化可能である。したがって、本発明の実施形態において、ヒドロゲル形成剤が、サーモトロピックゲル形成ポリマー又はそのようなポリマーの組み合わせである。
【０１３８】
組成物の製造では、ヒドロゲル形成ポリマーが溶液として存在すること、好ましくは水性溶液であることが必要とされるであろう。ヒドロゲル形成ポリマーは、製造中、水性相の重量あたり、５％〜５０％、好ましくは１０〜３０％、またより好ましくは１５％〜２０％を示す。
【０１３９】
実施形態において、組成物は、ヒドロゲル形成ポリマーの組成物の乾燥重量あたり、少なくとも２５％、好適には少なくとも４０％を含む。例えば、ヒドロゲル形成ポリマーは、存在して組成物の２５〜７０％、例えば４０〜７０％、好適には４５〜６０％を形成し、ここで％は、組成物の乾燥重量に基づいた重量による。
【０１４０】
実施形態において、ヒドロゲル形成ポリマーは、医薬品として許容されるポリマーである。
【０１４１】
ある実施形態において、ヒドロゲル形成ポリマーはゼラチンである。ある実施形態において、ヒドロゲル形成ポリマーはゼラチンを含む。ある実施形態において、ゼラチンは、組成物の少なくとも４０％、例えば４０〜７０％、好適には４５〜６０％を含み、ここで％は、組成物の乾燥重量に基づいた重量による。
【０１４２】
ヒドロゲル形成ポリマーは、任意に可塑剤、例えばソルビトール又はグリセリン、又はこれらの組み合わせを含んでよい。特に、１種類もしくはそれ以上の可塑剤が、ゼラチンと混合されてよい。
【０１４３】
ゼラチンが本発明のポリマーマトリクスである実施形態において、ここで「ブルーム値」について言及する。ブルーム値とは、Ｏ．Ｔ．ブルーム（Ｂｌｏｏｍ）によって１９２５年に確立されたゲル又はゼラチンの強度の尺度である。該試験では、プローブ（通常は、直径１．２５ｃｍ（０．５インチ））を用いてゲルの表面を押したときに、ゲルを崩すことなく４ｍｍ歪めるのに必要な荷量（ｇ）を測定する。結果はブルーム（グレード）で表し、通常、値の範囲は３０〜３００ブルームである。ゼラチンに対するブルーム試験では、６．６７％のゼラチン溶液を１０℃で１７〜１８時間保存した後に行う。
【０１４４】
ヒドロゲル形成ポリマーが、ゼラチンを含むか、又はゼラチンである場合、ゼラチンのブルーム値は、１２５ブルーム〜３００ブルーム、２００ブルーム〜３００ブルーム、好ましくは２５０ブルーム〜３００ブルームの範囲内であってよい。当然のことながら、より高いブルーム値ゼラチンが、より高い濃度にて、より低いブルーム値ゼラチンによって置換可能である
【０１４５】
本発明によれば、水溶性ポリマーマトリクス材料がゼラチンを含むか、又はゼラチンである実施形態において、ゼラチンは、種々の手段によって供給されてよい。例えば、動物の皮膚、白色結合組織又は骨のような、コラーゲン材料の部分加水分解によって得ることが可能である。Ａ型ゼラチンは主に、酸処理によってブタ皮膚より由来し、ｐＨ７〜ｐＨ９の間で等電点を示す一方、Ｂ型ゼラチンは、骨及び動物（ウシ）皮膚のアルカリ処理から由来して、ｐＨ４．７〜ｐＨ５．２の間で等電点を示す。Ａ型ゼラチンが幾分好ましい。本発明における使用のためのゼラチンはまた、冷水魚の皮膚から由来してもよい。Ａ型及びＢ型ゼラチンのブレンドは、ビーズ製造のために必須の粘度及びブルーム値特性を有するゼラチンを得るために本発明において使用可能である。
【０１４６】
低温にて固化可能な低温ゼラチン（又はゼラチン誘導体、又は融点低下剤とのゼラチンの混合物）、又は他のポリマーマトリクス（例えばアルギン酸ナトリウム）は、例えば本発明の組成物中に組み込まれるべき活性物質が温度不安定であるか、その活性が、高温にさらされることによって影響をうけうる場合に、好適である。したがって、低温ゼラチンを含むか、又は低温ゼラチンであるポリマーが、本発明において好ましいマトリクスポリマーであると考えられる。
【０１４７】
本発明にしたがって、ポリマーがゼラチンを含むか、又はゼラチンである実施形態において、出発ゼラチン材料は、本発明の組成物の堅さを調節するために、可塑剤又は軟化剤のゼラチンへの添加によって「ソフトゼラチン」を製造するために、製造の前に好ましくは改変される。可塑剤を添加することにより、例えばコーティングのような、溶解及び／又は更なる処理を最適化するために望ましくてよいように、柔らかさとフレキシビリティの増強を達成する。ゼラチン又は他のヒドロゲル形成ポリマーとの組み合わせのための、本発明の有用な可塑剤としては、グリセリン（１，２，３−プロパントリオール）、Ｄ−ソルビトール（Ｄ−グルシトール）、ソルビタンＢＰ（非結晶性ソルビトール溶液）、又はＤ−ソルビトールの水溶液、ソルビタン（例えばＡｎｄｉｄｒｉｂｏｒｂ  ８５／７０）、マンニトール、マルチトール、アラビックガム、クエン酸トリエチル、クエン酸トリ−ｎ−ブチル、ジブチルセバケートが挙げられる。他、又は同様の低分子量ポリオール類、例えば、エチレングリコール及びプロピレングリコールがまた企図される。ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールもまた使用されてよいが、これはそのほど好ましいものではない。グリセリン及びＤ−ソルビトールは、シグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）米国ミズーリ州セントルイス）又はロケット（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）社フランス（Ｆｒａｎｃｅ）から入手できる。他の機能のために含まれるいくつかの活性物質及び賦形剤は、可塑剤として働きうる。
【０１４８】
軟化剤又は可塑剤は、使用されるのであれば、理想的には、本発明の組成物の乾燥重量あたり、３０％まで、好ましくは２０％まで、より好ましくは１０％まで、またより好ましくは３〜８％、最も好ましくは４％〜６％の比率で組み込まれうる。
【０１４９】
ヒドロゲル形成ポリマーは、任意のアジュバントが結合する前記界面活性剤に加えて、更なる界面活性剤を含むことが本発明の範囲内で可能であり、界面活性剤化合物の混合物であってよいことが想起されうる。
【０１５０】
必須ではないが、ヒドロゲル形成ポリマーはまた、随意に、本発明の組成物の崩壊速度を促進することが特に望まれる場合には、崩壊剤を含んでよい。含んでよい崩壊剤の例としては、アルギン酸、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、低置換ヒドロキシプロピルセルロース及びナトリウムデンプングリコレートが挙げられる。
【０１５１】
結晶化阻害剤（例えばおよそ組成物の乾燥重量あたり１％）もまた、本発明の組成物中に含むことができる。例としては、例えば乳化剤のような他の役割も果たしうる、ヒドロキシプロピル／メチルセルロース（ＨＭＣ又はＨＰＭＣ、ヒプロメロースなど）である。
【０１５２】
別の好ましい実施形態においては、前記ポリマーマトリクスはキトサンであり、これは、添加物を加えることにより、もしくは加えなくてもバイオゲルとして存在する。例えば、米国特許第４，６５９，７００号（ジョンソン・アンド・ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ）社）、クマール・マエティ（Ｋｕｍａｒ Ｍａｊｅｔｉ）Ｎ．Ｖ．ラヴィ（Ｒａｖｉ）、Ｒｅａｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ｆｉｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ４６，１，２０００；ポール（Ｐａｕｌ）ら、ＳＴ．Ｐ．Ｐｈａｒｍａ Ｓｃｉｅｎｃｅ １０，５，２０００などを参照のこと。これらの３報の全体を参照として本明細書に取り入れておく。キトサン誘導体、例えば、チオール化物なども本発明の範疇に含まれる。
【０１５３】
ヒドロゲル形成ポリマーは低水含量でよく、したがって、組成物は、低水含量でよい。
【０１５４】
ある実施形態において、組成物は、ジスルフィド結合を含む化合物を含まない。実施形態において、ヒドロゲル形成ポリマーは、ジスルフィド結合を含む化合物を含まない。
【０１５５】
界面活性剤
界面活性剤は、本明細書で記述した製造工程中、中間体として作製された「湿潤」（まだ乾燥していない）組成物中、ヒドロゲル形成ポリマー内に分散した自己組織体（例えばミセル）として存在してよい。また、乾燥組成物内の自己組織体（例えばミセル）として存在すると考えられているが、乾燥組成物中のミセル又はミセル様構造のような自己組織体が観察可能かどうかは、本発明の必要条件ではない。この時点で、自己組織体（例えばミセル）形態中の界面活性剤の存在が、界面活性剤の一部が自己組織体（例えばミセル）の外側である可能性が高いと推察されるので、組成物の全界面活性剤含量が、本形態内であることは要求されない。したがって、「湿潤」組成物中、ヒドロゲル形成ポリマーが、ゲル状態又はゾル（液体）状態であるかによらず、自己組織体（例えばミセル）の形成に必要な臨界濃度より高い（すなわち、臨界ミセル濃度より上）濃度にて、界面活性剤を含んでよい。
【０１５６】
ミセルに関して、分散したミセルの直径は、０．５ｎｍ〜２００ｎｍ、１ｎｍ〜５０ｎｍ、又は５〜２５ｎｍである。ミセルの大きさは、本技術分野中、公知の動的光散乱又は拡散ＮＭＲ技術によって求められる。ミセルの大きさは、直径として与えられるが、これは、ミセルが純粋な球状種でなければならないことを意味するのではなく、ただほぼ球状の構造を有することを指しているだけである。
【０１５７】
界面活性剤は、非イオン性界面活性剤であってよい。界面活性剤は、ポリオキシエチル化界面活性剤であってよい。界面活性剤は、親水性鎖、例えばポリオキシエチレン鎖又はポリヒドロキシル化鎖であってよい、親水性の頭部を有する。
【０１５８】
界面活性剤はもちろん、疎水性部分と、特に親水性鎖を有する。親水性鎖は、例えば少なくとも６つの炭素原子、随意に少なくとも１０の炭素原子、特に少なくとも１２の炭素原子を有する炭化水素鎖であってよく、いくつかの炭化水素鎖は、２２以下の炭素原子を有し、例えばＣ１０〜Ｃ２０、Ｃ１２〜Ｃ２０又はＣ１５〜Ｃ２０炭化水素鎖である。例えば上述したような数の炭素原子を有するアルキル鎖であってよい。例えば上述したような数の炭素原子を有する、１つ以上の炭素−炭素二重結合を含むアルケニル鎖であってよい。界面活性剤には、疎水性特徴を維持するという条件で置換される、炭化水素鎖、例えばアルキル鎖又はアルケニル鎖が含まれてよい。例えば、１つ又は２つの置換基、例えば、ハロゲン（例えばＦ又はＣｌ）、ヒドロキシ、チオール、オキソ、ニトロ、シアノから選択される１個の置換基が存在してよく、ヒドロキシ又はチオール置換基は、例えば脂肪酸によってエステル化されてよい。界面活性剤の１つの分類には、ヒドロキシによってモノ置換されたヒドロカルビル部分を含み、随意に、界面活性剤の、例えばビーズ内の界面活性剤の一定分量のヒドロキシ基の少なくとも一部が、本明細書で開示された脂肪酸、又はモノヒドロキシ脂肪酸によってエステル化されるか、又は少なくとも６個の炭素原子、随意に少なくとも１０個の炭素原子、特に少なくとも１２個の炭素原子を有する脂肪アルコールによってエーテル化されてよく、いくつかの炭化水素鎖は、２２個以下の炭素原子を有し、例えばＣ１０〜Ｃ２０、Ｃ１２〜Ｃ２０又はＣ１５〜Ｃ２０脂肪アルコールである。
【０１５９】
疎水性鎖は、エステル化脂肪酸Ｒ１−ＣＯＯＨの一部であるか、又はエーテル化又はエステル化脂肪アルコールＲ１−ＣＯＨの一部であってよく、式中Ｒ１は、例えば先の段落に記載したような疎水性鎖である。エステル形成、場合によっては、エーテル形成基は典型的に、親水性鎖を含むであろう。脂肪酸分子Ｒ１−ＣＯＯＨ又は脂肪アルコール分子Ｒ１−ＣＯＨの一部は、遊離酸又はアルコールとしてであってよく、一部は、エステル化されるか、脂肪酸の場合、エーテル化されてよい。
【０１６０】
上記のように、界面活性剤は、親水性鎖を有してよく、非イオン性界面活性剤であってよく、両方の要求をみたしてよい。親水性鎖は、またポリ（オキシエチレン）又はマクロゴールとしても公知の、ポリ（エチレングリコール）であってよい。親水性鎖は、式−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＯＲのものであってよく、式中、ｎは５又は６〜５０であり、Ｒは、Ｈ又はアルキル、例えばエチル又はメチルである。本発明は、ｎが６〜４０、例えば６〜３５であるものも含まれる。いくつかの実施形態において、ｎは６〜２５であり、任意に８〜２５又は８〜１５である。他の実施形態において、ｎは８〜５０又は８〜４０であり、例えば１０〜５０、１０〜４０又は１０〜３５である。ある実施形態において、ｎは１５である。式−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＯＲのすべての親水性鎖に関して、実施形態の１つの分類において、ＲはＨである。
【０１６１】
親水性鎖は、ポリ水酸化化鎖（例えば、Ｃ５〜Ｃ１０鎖などのＣ５〜Ｃ２０）でよく、例として、グルカミドなど、側鎖の炭素原子にヒドロキシ基を有するものが挙げられる。
【０１６２】
界面活性剤は、以上で記述したような疎水性鎖と、以上で記述したような親水性鎖の組み合わせを含んでよい。したがって、本明細書で記述したような脂肪酸のマクロゴールエステル、又は本明細書で記述したような脂肪アルコールのマクロゴールエーテルであってよく、又はそれらを含んでよい。
【０１６３】
疎水性鎖と親水性鎖を含むミセル形成界面活性剤は、マクロゴールエステル、マクロゴールエーテル、ジブロックコポリマー、トリブロックコポリマー及び両親媒性ポリマーからなる群より選択可能である。本発明のある実施形態において、群の任意の組み合わせが本発明の範囲に含まれる。
【０１６４】
本発明中での使用のために好適なマクロゴールエステルの例は、少なくとも６炭素原子、任意に少なくとも１０炭素原子、特に少なくとも１２炭素原子を有する脂肪酸のマクロゴールエステルであり、いくつかの脂肪酸は、２２以下の炭素原子を有し、例えば、Ｃ１０〜Ｃ２０、Ｃ１２〜Ｃ２０又はＣ１５〜Ｃ２０脂肪酸である。脂肪酸は、飽和又は不飽和であってよいが、特に飽和である。マクロゴール２５セトステアリールエーテル（クレモフォア（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）（登録商標）Ａ２５）、マクロゴール６セトステアリールエーテル（クレモフォア（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）（登録商標）Ａ６）、マクロゴールグリセロールリシノレート３５（クレモフォア（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）（登録商標）ＥＬ）、マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレート４０（クレモフォア（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）（登録商標）ＲＨ４０）、マクロゴール−１５−ヒドロキシステアレート（ポリオキシ−１５−ヒドロキシステアレート  ＵＳ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ  ａｎｄ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ、例えばすでにソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）（登録商標）ＨＳ１５として公知の、コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５）が挙げられる。本発明での使用のために好適なマクロゴールエーテルの例は、少なくとも６炭素原子、随意に少なくとも１０炭素原子、特に少なくとも１２炭素原子を有する脂肪アルコールのマクロゴールエーテルであり、いくつかの脂肪アルコールは、２２以下の炭素原子を有し、例えば、Ｃ１０〜Ｃ２０、Ｃ１２〜Ｃ２０又はＣ１５〜Ｃ２０脂肪アルコールである。脂肪アルコールは、飽和又は不飽和であってよく、しかし一実施形態において飽和される。コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５は、１５モルのエチレンオキシドを、１モルの１２−ヒドロキシステアリン酸と反応させることによって得られ、界面活性剤はしたがって、１０〜２５モルのエチレンオキシドを、１モルの１２−ヒドロキシステアリン酸と反応させることによって得ることが可能な、（反応させることによって得た界面活性剤の特徴を有する）界面活性剤であってよく、又はそれを含んでよく、エチレンオキシドのモル数は、１２〜２５、随意に１５〜２０、例えば１５又は２０である。
【０１６５】
コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５は、１２−ヒドロキシステアリン酸のポリグルコールモノ及びジエステルと、約３０％の遊離ポリエチレングリコールからなる。エステル部分の主要成分は、以下の化学構造
【０１６６】
【化１】
2015521997.tif 000003
を有し、式中ｘ及びｙは整数であり、１２−ヒドロキシ基の小さな部分が、ポリエチレングリコールでエーテル化可能である。
【０１６７】
したがって、界面活性剤は、分子が混在するものでよい。例えば、製造工程にて使用される界面活性剤組成物は、ポリエトキシル化（ＰＥＧ化）分子を含んでよく、更に遊離ポリエトキシ（遊離ＰＥＧ）化合物を含んでよく、又は製造工程で使用される界面活性剤組成物は、ポリヒドロキシル化部分を有する分子を含んでよく、更に遊離ポリヒドロキシ化合物を含んでよい。 界面活性剤が、遊離ＰＥＧとの組み合わせで、ＰＥＧ化脂肪酸、例えばＰＥＧ化ヒドロキシ脂肪酸であるか、又はそれを含むものが、本発明の実施の中に含まれる。
【０１６８】
本発明での使用のために好適な両親媒性ポリマーの例としては、アルキルグルカミド、ポリエトキシル化アルキルエーテルとしても公知の脂肪アルコールポリ（エトキシ）レート、ポリ（エトキシル）化脂肪酸エステル（Ｍｙｒｊ又はコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ））、脂肪アミドポリエトキシレート、脂肪アミンエトキシレート、アルキルフェノールエトキシレート、ポリエトキシル化ソルビタンエステル（ポリソルベート）、ポリエトキシル化グリセリド又はポリグリセロールエステルが挙げられる。
【０１６９】
本発明での使用のために好適なコポリマーの例としては、プロニクス（ポロキサマー）、ポリビニルピロリドン−ポリビニルアセテート（Ｐｌａｓｄｏｎｅ  Ｓ６３０）、アミノアルキルメタクリレートコポリマー（オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）ＥＰＯ）、メタクリル酸−メチルメタクリレートコポリマー（オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）Ｓ１００、Ｌ１００）、ポリカプロラクトン−ＰＥＧ、ポリカプロラクトン−メトキシ−ＰＥＧ、ポリ（アスパラギン酸）−ＰＥＧ、ポリ（ベンジル−Ｌ−グルタメート）−ＰＥＧ、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）メトキシ−ＰＥＧ、ポリ（ベンジル−Ｌ−アスパルテート−ＰＥＧ、又はポリ（Ｌ−リシン）−ＰＥＧが挙げられる。
【０１７０】
好ましい実施形態において、界面活性剤は、マクロゴールエステル、より好ましくは、ＢＡＳＦ社によって販売されるコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５のような、欧州薬局方モノグラフ番号２０５２  マクロゴール−１５−ヒドロキシステアレートに一致する、マクロゴールエステルである。
【０１７１】
好適な界面活性剤には、製造中、ＣＭＣを超える量で（ヒドロゲル形成ポリマーを含む）水性相と混合され、透明な液を形成するものを含む。コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５はそのような界面活性剤である。
【０１７２】
ある実施形態において、界面活性剤の微生物抗原に対する重量比は、１０：１〜１００：１、随意に５０：１〜１００：１である。いくつかの実施形態において、比は、８０：１〜９０：１である。特定の実施形態において、比は、５０：１〜６０：１である。
【０１７３】
実施形態において、界面活性剤は、組成物の乾燥重量に基づいて、２０〜５５重量％、例えば３０〜４５重量％、３０〜４０重量％で組成物中に存在する。
【０１７４】
自己組織体形成化合物の組み合わせ
特定の実施形態において、本発明の組成物は、自己組織体形成化合物の組み合わせを含む。そのような自己組織体形成化合物の組み合わせは、本明細書の前項に記載されたような２種以上の界面活性剤から構成されてよい。あるいは、界面活性剤は、少なくとも潜在的に界面活性剤とミセルを形成可能であり、数ある中でも、カチオン性脂質及び糖脂質から随意に選択される、一つ又は複数の他の化合物と混合してよい。更なる選択肢として、組成物は、本明細書の前項に記載されたような複数の界面活性剤と、界面活性剤と少なくとも潜在的に自己組織体（例えばミセル）を形成可能な、カチオン性脂質と糖脂質から随意に選択される一つ又は複数の他の化合物を含んでよい。
【０１７５】
自己組織体形成（例えばミセル形成）化合物の組み合わせを含む「混合自己組織体」又は「混合ミセル」に関して、理論に束縛されるものではないが、アジュバントα−ＧａｌＣｅｒの少なくとも一部が、前記自己組織体形成界面活性剤と一緒に、これらの混合構造中、自己組織体形成化合物として機能するであろうと考えられる。他の糖脂質とセラミドは、単一で、又は他の糖脂質又はセラミドとの組み合わせで使用されるかにかかわらず、同様に作用すると考えられる。
【０１７６】
本発明にはしたがって、
・２種以上の自己組織体形成（例えばミセル形成）界面活性剤、例えば疎水性鎖及び親水性鎖を有する２種以上の界面活性剤と、
・化合物、例えばカチオン性脂質及び糖脂質から選択される、単一化合物又は２種以上の化合物と、
・２種以上の自己組織体形成（例えばミセル形成）界面活性剤と、化合物、例えばカチオン性脂質及び糖脂質から選択される、単一化合物又は２種以上の化合物と、
を含む、本明細書に記載されたような組成物が含まれる。
【０１７７】
更なる賦形剤
本発明では、少なくとも１つの活性物質、界面活性剤及びヒドロゲル形成ポリマーに加えて、１種類もしくはそれ以上の下記の物質又は物質のカテゴリーの組成物内への組み込みが予定される。例えば、組成物は、例えばタンパク質分解酵素阻害剤、又は酸分解に対する保護剤、又は両方（例えば水酸化ナトリウムのようなアルカリ）のような保護剤、例えば粘膜又は生体付着剤のような接着物質、活性医薬組成物の可溶性を最大化するための賦形剤、ＧＩＴ中の活性医薬組成物の透過性を最大化する賦形剤、及び油、例えば中鎖トリグリセリド組成物、カチオン性脂質、例えばリポソームトランスフェクション試薬、及び／又は更なる界面活性剤を含んでよい。
【０１７８】
上皮バリアの透過性を促進するための典型的な賦形剤としては、カプリン酸ナトリウム、ドデカン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、ＳＮＡＣ、キトサン及びそれらの誘導体、脂肪酸、脂肪酸エステル、ポリエーテル、胆汁塩、リン脂質、アルキルポリグルコシド、ヒドロキシラーゼ阻害剤、種々の医薬成分に共有結合した一酸化窒素又は二酸化炭素ドナー基を含む、抗酸化剤（例えばアスコルビン酸）及び／又は一酸化窒素ドナーが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。先のリストは、回腸中の透過性を促進するために特に重要である。
【０１７９】
結腸中の透過性を促進するために、典型的な賦形剤としては、カプリン酸ナトリウム、ドデカン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、ＳＮＡＣ、キトサン及びそれらの誘導体、脂肪酸、脂肪酸エステル、ポリエーテル、胆汁塩、リン脂質、アルキルポリグルコシド、ヒドロキシラーゼ阻害剤、種々の医薬成分に共有結合する一酸化窒素又は二酸化炭素ドナー基を含む、抗酸化剤及び／又は一酸化窒素ドナーが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１８０】
組成物は更に、吸収制限剤、例えばオメガ３油のようなエッセンシャルオイル、例えばニームのような天然植物抽出物、イオン交換樹脂、例えばアゾ結合のような細菌分解性結合リンカー、例えばアミロース、グアーゴム、ペクチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン、コンドロイチン硫酸、デキストラン、グアーゴム及びローカストビーンガムのような多糖類、核因子κＢ阻害剤、例えばフマル酸、クエン酸などのような酸、並びにこれらの改変を含む、回腸及び結腸中の活性物質の治療潜在力を促進させるために、賦形剤を含んでよいが、これらに限定されない。
【０１８１】
組成物は更に、例えば単一油又は油の組み合わせを含んでよく、任意の医薬品として許容される油であればよい。油には、植物油（例えばニーム油）、石油化学油及び揮発性エッセンシャルオイルが含まれてよい。組成物は、例えば、オメガ−３油のようなポリ不飽和脂肪酸、中鎖トリグリセリド、オリーブ油、セサミ油、ココナッツ油、パームカーネル油を含み、好ましくは飽和ココナッツ及びパームカーネル油由来カプリル酸及びカプリン酸脂肪酸及びグリセリンを含む、天然トリグリセリドに基づく油を含みうる。他の可能性ある油は、例えばラブラフィル（Ｌａｂｒａｆｉｌ）（例えばガッテフォッセ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）社による製品番号Ｍ２１２５ＣＳ）のようなリノレオイルマクロゴールグリセリド（ポリオキシグリセリド）と、例えばガッテフォッセ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）社によるラブラソール（Ｌａｂｒａｓｏｌ）のようなカプリロカプロイルマクロゴールグリセリドを含む。
【０１８２】
油としては、例えば中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）組成物から選択される液体脂質であってよく、中鎖トリグリセリドは、Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸から選択される少なくとも１つの脂肪酸の１つ以上のトリグリセリドである。本発明にて有用な市販されているＭＣＴ組成物は、天然生成物から由来した混合物であり、通常又は常に、少量のＭＣＴｓではない化合物を含み、用語「中鎖トリグリセリド組成物」はしたがって、そのような組成物を含むと解釈されるべきである。
【０１８３】
本発明の組成物には更に、カチオン性脂質、例えばカチオン性リポソームトランスフェクション試薬が含まれてよい。カチオン性脂質には、疎水性部分、例えば１つ以上の炭素−炭素二重結合を有するアルキル鎖又はアルケニル鎖と、カチオン性基が含まれる。疎水性基は、例えば飽和アルキル鎖又は不飽和アルキル鎖でありうる。カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムプロパンメチルサルフェート）、ＤＯＳＰＥＲ（１，３−ジオレオイルオキシ−２−（６−カルボキシスペルミル）−プロピルアミド）、ＤＣ−コレステロールＨＣｌ（塩酸３β−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル）コレステロール）、ＤＯＤＡＰ（１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン）、ＤＤＡＢ（ジメチルジオクタデシルアンモニウム）、１２：０  ＥＰＣ（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン）、ＤＯＴＭＡ（１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン）、ＤＯＥＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン塩化物塩）、ＤＯＧ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール）、ＤＯＤＡＰ（１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＧ（１，２−ジオレオイルｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］ナトリウム塩）、ＤＯＳＰＡ（２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２−（スペルミンカルボキサアミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート）、ＤＯＴＭＡ（塩化Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ．Ｎ−トリメチルアンモニウム）、ＤＭＲＩＥ（臭化１，２−ジミリチルオキシプロピル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウム）、ＤＭＫＥ（Ｏ，Ｏ’−ジミリスチル−Ｎ−リシルアスパラギン酸）、ＤＭＫＤ（Ｏ，Ｏ’−ジミリスチル−Ｎ−リシルグルタミン酸）及びＤＯＰＳ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｌ−セリン］ナトリウム塩）及びこれらの組み合わせからなる群より選択されてよい。
【０１８４】
組成物は、ミセル形成以外の主要な役割を果たす界面活性剤を更に含んでもよく、カチオン性；両親媒性（両性イオン）；ペルフルオロ−オクタノエート（ＰＦＯＡ又はＰＦＯ）、ペルフルオロ−オクタンスルホネート（ＰＦＯＳ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリル硫酸アンモニウム及び他の硫酸アルキル塩、硫酸ラウリルエーテルナトリウム（ＳＬＥＳ）としても公知の硫酸ラウレスナトリウム及びアルキルベンゼンスルホネートを含む、アニオン性界面活性剤；及び、ペルフルオロ炭素、ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル（例えばＢｒｉｊ３５のようなＢｒｉｊ）、Ｍｙｒｊ（例えばＭｙｒｊ４９、５２又は５９）、Ｔｗｅｅｎ  ２０又は８０（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅとして公知）、（Ｂｒｉｊ、Ｍｙｒｊ及びＴｗｅｅｎ製品は、Ｃｒｏｄａより市販されている）、ポリオキシエチレン（ポリ（エチレンオキシド））の２つの親水性鎖によって隣接された、ポリオキシプロピレン（ポリ（プロピレンオキシド））の中心疎水性鎖からなる非イオン性トリブロックコポリマーであるポロキサマー、を含む非イオン性界面活性剤、から選択されてよい。水性相中の好ましいアニオン性界面活性剤は、ＳＤＳである。更なる界面活性剤の混合物、例えばペルフルオロ炭素を含む混合物もまた考慮される。
【０１８５】
本発明の実施形態において、組成物には、理論に束縛はされないが、少なくとも部分的な水性相を形成（ポリマーマトリクス）すると考えられる、親水性界面活性剤が含まれる。
【０１８６】
本発明の組成物の水性相中に含有されることが意図されたこのような界面活性剤は、好ましくは、簡単に分散するか、分散可能な界面活性剤であり、このことで、本発明の組成物の製造及び処理が促進される。界面活性剤は、少なくとも１０、随意に少なくとも１５、例えば少なくとも３０、随意に３８〜４２、例えば４０のＨＬＢを有してよい。そのような界面活性剤は、どの特定の型（イオン性、非イオン性、両イオン性）でよく、０．１％〜６％、例えば０．１％〜５％、０．１％〜４％又は０．１％〜３％、より好ましくは少なくとも１％の割合、特に１．０〜４．５又は５％の間、理想的には、２〜４％の範囲前後、例えば２〜３％又はおよそ２％又はおよそ４％の組成物の乾燥重量の比率として含んでよい。
【０１８７】
特に明記又は要求されていない限り、全ての百分率及び比は重量に基づいている。
【０１８８】
水性相中に含有される特定のアニオン性界面活性剤としては、ペルフルオロ−オクタノエート（ＰＦＯＡ又はＰＦＯ）、ペルフルオロ−オクタンスルホネート（ＰＦＯＳ）、硫酸ドデシルナトリウム（ＳＤＳ）、硫酸ラウリルアンモニウム及び他の硫酸アルキル塩、硫酸ラウリルエーテルナトリウム（ＳＬＥＳ）としても公知の硫酸ラウレスナトリウムとアルキルベンゼンスルホネートが挙げられる。界面活性剤の特定の分類には、硫酸塩が含まれる。水性相中の好ましいアニオン性界面活性剤はＳＤＳである。アニオン性界面活性剤の混合物もまた適している。
【０１８９】
調製の際、水性相内の導入時点における界面活性剤の物理的形状が、本発明による組成物の調製の容易さに影響を及ぼす。このことから、液体界面活性剤を使用してもよいが、特に水性相がゼラチンを含む時には、室温で固体形状（例えば結晶、顆粒又は粉末）である界面活性剤を使用することが好ましい。
【０１９０】
一般的に、 界面活性剤を混合物して使用することで、例えば、本発明の組成物の最適な長期安定性を達成でき、短鎖の界面活性剤はより短期での安定度を向上させ（加工に対する補助）、長鎖の界面活性剤はより長期での安定度を向上させる（保存期間に対する補助）。。いくつかの実施形態において、より短鎖の界面活性剤は、界面活性剤の疎水性部分として、Ｃ１０アルキルまで（例えばＣ６〜Ｃ１０アルキル）を有し、一方で、より長鎖の界面活性剤は、界面活性剤の疎水性部分として、Ｃ１０以上のアルキル（例えばＣ１０〜Ｃ２２アルキル）を有する。Ｃ１０アルキル界面活性剤は、他の賦形剤及び活性物質の性質に依存して、加工を促進でき、又は保存期間を延ばすことができ、またはその両方を可能にすることができる。より高級のアルキルは、本発明の特定の実施において、Ｃ１１〜Ｃ２２又はＣ１２〜Ｃ２２アルキルであってよく、いくつかの実施形態においては、Ｃ１８以下である。
【０１９１】
水性相中の界面活性剤に代わり、又は補完するものとして、本発明は、界面活性剤様の乳化剤（結晶化阻害剤としても知られている）を使用することも含んでおり、そのようなものとしてはＨＰＭＣ（ヒプロメロースとしても知られている）などが挙げられる。しかし、一般的に、それらを使用する目的は、比較的少量の使用で粘度の上昇を抑えることにあり、そうすることによって加工しやすくなる。
【０１９２】
組成物には更に、小腸のようなＧＩＴ中で吸収された後、全身で生物学的利用能を向上させるための賦形剤や他の活性医薬品、又は他の成分が含まれてよく、ＰｇＰポンプ阻害剤を含むがこれに限定されない排出ポンプ阻害剤、及びシトクロームＰ４５０  ３Ａ阻害剤を含むがこれに限定されない代謝阻害剤が含まれる。
【０１９３】
組成物は更に、小腸のようなＧＩＴ中の吸収に関連する全身副作用を減少するための賦形剤を含んでもよく、例えば、クルクミノイド、フラバノイドのような抗酸化剤が含まれ、更に具体的には、クルクミン、β−カロテン、α−トコフェロール、アスコルビン酸又はラザロイドが含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【０１９４】
組成物は更に、又は別々に（例えばアスコルビン酸又はＢＨＴ−ブチルヒドロキシトルエンのような）抗酸化剤、味マスキング又は光感受性成分又は光保護成分を含んでよい。抗酸化剤は、水性相中（例えば親水性抗酸化剤）又は界面活性剤相中（例えば、ビタミンＥのような疎水性抗酸化剤）、例えば１重量％まで、好ましくは０．０１〜０．５０重量％、より好ましくは０．１０〜０．２０重量％組み込まれてよい。
【０１９５】
組成物は更に、ビタミンＡ／Ｂ／Ｃ／Ｅ、カロテノイド／β−カロテン及び鉄、マンガン、セレン、亜鉛のような免疫増強栄養素を含んでよい。そのような栄養素は組成物中に存在してよいが、組成物がコーティングを有する場合、例えばビーズの形態である場合、栄養素はコーティング内に含まれてよい。
【０１９６】
組成物は更に、又は別々に、望むのであれば、胃環境中に、剤形のビーズが残る、又はより長く残ることを保証するために、粘着因子を含んでよい。本発明によるビーズにはまた、例えば、望まれるＧＩ部位中にビーズを局所化する手段として、浮遊又は密度減少を促進、又は可能にする材料を含んでよい。剤形のビーズはまた、胃又は他のＧＩ部位中膨潤及び／又は凝集するための手段を有してよい。
【０１９７】
本発明の剤形は、以上で開示した賦形剤を含んでよい。ある実施形態において、剤形中に存在する任意の賦形剤は、剤形の組成物の集団内に含まれなくてよい。
【０１９８】
形状、大きさ及びジオメトリー
本発明の組成物は、無数の形状及び大きさに形成可能である。組成物の調製方法を記述している以下の項目において、液状ミセル分散体を硬化するか又は硬化させられることが可能な鋳型内に、液状ミセル分散体を注ぐ又は導入することを含む種々の方法が提供される。したがって、組成物は、適切な鋳型を作製することによって所望のいかなる形状にも（例えば円盤状、丸剤又は錠剤の形に）作製可能である。しかしながら、鋳型を使用することは必須ではない。例えば、組成物は、例えば液状ミセル分散体を硬化するか又は硬化させられることが可能な平らな表面上に液状ミセル分散体を注ぐことによって得たシート状に形成されてよい。
【０１９９】
好ましくは、組成物は、以下で記述するような、球、又は球様の形状であってよい。好ましくは、本発明の組成物は、実質的に球形で、継ぎ目のないビーズ（シームレスビーズ）の形態である。ビーズ表面上に継ぎ目がないことは、コーティングなどの更なる加工に対して有利であり、これは、より均一なコーティングを施せる、均一な流動性が得られるなどの理由に因る。ビーズ上に継ぎ目がないことで、ビーズの溶解の一貫性も高まる。
【０２００】
本発明に従うビーズの好ましい大きさ又は直径範囲は、ビーズを経口投与した場合に、胃内で保持されないように選択することが可能である。より大きな剤形では、胃内滞留時間が一定せず、食物と一緒の時のみ幽門括約筋を通過する。一方でより小さな粒子は、食物に関係なく幽門を通過する。従って、適切な大きさの範囲（以下を参照）を選択することにより、投与後治療効果の予測をより正確にする。例えば、従来の圧縮ピルのような１個の大きなモノリシック経口フォーマットと比較して、（本発明の剤形によって予定されるような）消化管内に放出されたビーズの集団は、腸管腔での分散が十分に行われることから、上皮領域への接触が増え、吸収が促進され、例えばＮＳＡＩＤ類で観察されるような刺激がなく、例えば、結腸などの消化管の特定の部分における局所薬物効果を所望する場合などには、局所コーティングがより十分に行われる。回腸−盲腸接合部内での滞留時間が短縮されることが更なる潜在的な長所である。
【０２０１】
好ましくは、本発明の組成物は、マトリクス材料の可能性のある薄いスキンを除き、随意のコーティング層を除き、モノリシック、つまり、内部が（すなわち、断面的に）均質である。
【０２０２】
本発明の組成物によって提供されるべきビーズは、一般に、直径の範囲が０．５ｍｍ〜１０ｍｍであり、上限は、好ましくは５ｍｍ、例えば２．５ｍｍである。特に都合がよいのは、上限が、２ｍｍ又は１．７ｍｍである。下限は好ましくは、１ｍｍ、例えば１．２ｍｍ、より好ましくは１．３ｍｍ、最も好ましくは１．４ｍｍである。１つの実施形態において、直径は、０．５ｍｍ〜２．５ｍｍ、例えば１ｍｍ〜３ｍｍ、１ｍｍ〜２ｍｍ、１．２ｍｍ〜３ｍｍ又は１．２ｍｍ〜２ｍｍである。ビーズは、その最小の大きさにかかわらず、２．５ｍｍ以下の直径を有してよい。ビーズは、それらの最小の大きさにかかわらず、２ｍｍ以下の直径を有してよい。
【０２０３】
本明細書で記述したようなビーズは、アスペクト比が１．５以下であってもよく、例えば１．３以下、例えば１．２以下、特に１．１〜１．５、１．１〜１．３又は１．１〜１．２のアスペクト比を有してもよい。本明細書で記述するようなビーズの集団、例えば少なくとも１０個のビーズは、１．５以下、例えば１．３以下、例えば１．２以下、及び特に１〜１．５、１〜１．３又は１〜１．２の平均アスペクト比を有してよい。本段落にて記載したアスペクト比は随意に、コートされたビーズに適用し、随意に未コートビーズに適用する。平均アスペクト比は好適には、粒子サイズ解析機、例えばＩｎｎｏｐｈａｒｍａ  Ｌａｂｓ，Ｄｕｂｌｉｎ  １８，  Ｉｒｅｌａｎｄのアイコン（Ｅｙｅｃｏｎ）（商標）粒子分析機を用いて、ビーズの集団、例えば少なくとも１０個のビーズに対して求める。
【０２０４】
本開示のビーズはしたがって、上記段落[０２０５]にて開示したような大きさと、１〜１．５のアスペクト比を有してもよい。本開示のビーズは、上記段落［０２０６］にて開示されたような大きさと、１．３以下のアスペクト比、例えば１．２以下、特に１．１〜１．５、１．１〜１．３又は１．１〜１．２のアスペクト比を有してもよい。
【０２０５】
ビーズの大きさ（直径）は、好適な技術、例えば顕微鏡、ふるい、沈殿、光学センシングゾーン法、電気的センシングゾーン法又はレーザー光散乱によって測定することができる。本明細書の目的のために、ビーズの大きさは、ＵＳＰ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｔｅｓｔ＜７８６＞  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｉ（ＵＳＰ  ２４−ＮＦ  １８（Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｖｅｎｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，２０００）ｐｐ．１９５５−１９６７）にしたがった解析ふるいによって測定する。
【０２０６】
実施形態において、本発明のビーズは単分散である。他の実施形態において、本発明のビーズは単分散ではない。「単分散」とは、ビーズの集団（例えば少なくとも１００個、より好ましくは少なくとも１０００個）に対して、ビーズのそれらの直径の変動係数（ＣＶ）が３５％以下、随意に２５％以下、例えば１５％以下、１０％以下、又は、随意に８％以下、例えば５％以下であることを意味する。ポリマービーズの特定の分類は、２５％以下のＣＶを有する。本明細書中で引用しているＣＶは、（標準偏差／平均値）×１００と定義され、ここで、「平均値」とは、粒子径の平均であり、標準偏差とは粒子の大きさの標準偏差である。ＣＶのそのような測定は、ふるいを用いて行える。
【０２０７】
本発明には、３５％のＣＶと平均直径が１ｍｍ〜２ｍｍ、例えば１．５ｍｍのビーズを含む。本発明はまた、２０％のＣＶと平均直径が１ｍｍ〜２ｍｍ、例えば１．５ｍｍのビーズ、１０％のＣＶと平均直径が１ｍｍ〜２ｍｍ、例えば１．５ｍｍのビーズも含む。実施形態の１つの分類において、ビーズの９０％が、直径０．５ｍｍ〜２．５ｍｍであり、例えば１ｍｍ〜２ｍｍである。
【０２０８】
本発明の組成物の別の可能な形状は、半球状のビーズであり、その２個が、随意に、平面部分で連結して２つの別異の半分（ハーフ）から成る１個のビーズを形成しているものである。そして、所望する場合には、２つの別異の半分がおのおの別異の組成物を有しており、例えば、各々が別異の活性物質を包含している、または、活性物質は同一であるが賦形剤が異なるようにし、これにより、２個の半球間で透過性、溶解性または放出プロファイルを変えられる。
【０２０９】
本発明の組成物によって提供されるビーズはまた、例えば薬剤学の当業者に既知のように、例えば、その上に材料の更なる材料の層が適用可能であるノンパレルシードとしてビーズを用いることによって、更なる例えば医薬又は栄養素形態を創製するための出発点として用いられてもよい。更なる層の材料は、本文書にて記述されるような、同一の、又は異なる活性物質及び／あるいは同一又は異なる賦形剤を含んでいてもよい。そのような改変は、同一又は異なる活性物質の異なる放出を許容し、例えば、固定用量の組み合わせにて１種より多い活性物質を含む単一の製剤（ピル）、心血管医薬品に特に重要なアイデアを意味する一般名「ポリピル」に関して議論されるように、多数の固定用量組み合わせ製品の含有を促進する。
【０２１０】
本発明の組成物は、その外表面上に追加の材料のコートを有してよい。このコートは、薬物重層（ドラッグレイヤリング）を含む、多数の方法で施すことができ、以下の「コーティング」という表題の項目により具体的に記載している。そのような実施形態の１つにおいて、本発明の組成物には、例えばヒドロゲル形成ポリマーマトリクス内に含まれ、ミニカプセルフォーマット中液体コアとして含まれる酸と、例えば薬物重層によってコートとして塗布した重炭酸とが含まれる。組成物がポリマーコートを、例えば結腸への放出を制御するために有する場合には、重炭酸は随意に、又は追加としてコーティングポリマー中に含まれてもよく、また含まれなくてもよい。本組成物は、例えば痛みを軽減させるため、又は炎症を軽減させるために、消化管中に二酸化炭素を放出することを意図する。関連する実施形態において、コア又は組成物には、酸を含有することで、多様なｐＫａ（酸解離定数）を有する活性物質の小腸または結腸内での溶解性を向上させる。あるいは、コア又は組成物は、塩基を含有することで、多様なｐＫａを有する活性物質の腸内での溶解性を向上させる。
【０２１１】
他の特徴
ある実施形態において本発明の組成物は、1種類もしくはそれ以上の構成要素、構成成分、賦形剤、構造的特性、機能的特性、又は上述した先行技術のその他の側面を含む。
【０２１２】
本発明の特定数の実施形態を総括すると、上記及び本明細書の他の箇所に記載の組成物は、更に、次に示すうちの1種類若しくはそれ以上の状態を呈することがある：実質的に水を含まない、ゲル状態、固体状態、不溶性、非粉末状、成形されている、特定形状を有する、及び溶液状でない。
【０２１３】
好ましくは、本発明の組成物は、本質的又は実質的に乾燥しており、例えば、遊離水の含量は５重量％未満、好ましくは１重量％未満である。好ましくは、ビーズは均質である。但し、加工条件は多岐にわたることがあり（以下の記載を参照）、例えば、外皮は硬く、コアは柔らかいなどの不均一性があることで、ビーズの表面とは反対のコアに油滴を完全に固定できない。本発明に従ったビーズの大きな形態又は形状では、特にそのような不均一性を具現化するように加工を行うことがある。
【０２１４】
低遊離水含量は、本発明の組成物のある実施形態の際だった特徴である。遊離水含量は、熱重量分析（ＴＧＡ）を用いて測定可能であり、例えば、市販されているＴＡ  Ｑシリーズの装置のうち、ＴＧＡ  Ｑ５００などを使用する。ＴＧＡは、温度変化に伴う、重量変化を測定するものである。例えば、ＴＧＡ測定には、温度スキャン（例えば、２０℃／分にて２０〜４００℃）を含んでおり、約１００℃において試料が消失した重量から水分含量が求められる。
【０２１５】
１つの実施形態において、ミセル分散体は、隣接するミセル間の癒着が実質的になく、固化ヒドロゲル形成ポリマー中に均一に分散する。したがって、ミセル分散は好ましくは、固化中保持されている。
【０２１６】
本発明の組成物は一般に、成形体又は成形体内部に、複数のミセルを含んでおり、これらは、噴霧乾燥の間に、しばしばミセルの凝集後に、単一の、又は少数のミセルを取り込むミクロンサイズの粒子に通常由来する粉末とは異なり、典型的に数百又は数千のミセルを含んでよい。粉末の実施形態を除外するわけではないが、本発明に従う組成物が微粒子である場合には、好ましくは、粉末粒子よりも大きな粒子を含むことで、該組成物は粉末ではない剤形となる。
【０２１７】
本発明の「固体」組成物（すなわち以下で記述する工程でのヒドロゲルの固体化及び乾燥後）は好適に、界面活性剤含有小腸及び界面活性剤制限結腸の少なくとも一つ、例えば両方において、構成成分が簡単にミセルを形成する。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、
ａ）２５〜７０％（好適には４０〜６５％、特に４５〜６０％）のヒドロゲル形成ポリマー（例えばゼラチン）と、
ｂ）２０〜５０％（好適には３０〜４０％）の界面活性剤（例えばコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５）と、
ｃ）１〜１０％（好適には３〜８％）の可塑剤（例えば、ソルビトール）と、
ｄ）０．０１〜２％（好適には０．１〜１％又は０．１〜０．３％）のアジュバント（例えばα−ＧａｌＣｅｒ）と、
を含み、ここで％は、組成物上に随意のコーティングがない状態における組成物の乾燥重量に基づいた重量による。これらの実施形態における組成物は更に、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を含む。最終剤形中において所望の用量を投与するため、例えば１回投与あたり細胞１０８〜１０１４個を提供するのに十分な濃度である。
【０２１９】
１つの実施形態においては、本発明により、ビーズに即時放出性（ＩＲ：ｉｍｍｅｄｉａｔｅ ｒｅｌｅａｓｅ）を持たせることができ、たとえば、コートを施さない、腸溶性コートを施す、または、水性相において、時間を限定して、もしくは抑制剤を含まないビーズの分散および／または溶解を阻止するように設計されたコートを施すことなどである。別の実施形態においては、本発明により、ビーズに遅延放出または持続放出（ＳＲ：ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）特性が付与される。例えば、本明細書の別の章、特に「コーティング」という表題がついている章に詳細に記載されているようなコート（１種類もしくはそれ以上のコート）を施されている。また、本発明は、持続放出ビーズまたは制御放出（ＣＲ：ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）ビーズと組み合わせて即時放出ビーズが調製されて、これは、ＩＲ：ＳＲ／ＣＲの比率を可変にしている実施形態も提供する。即時放出ビーズは、持続放出ビーズもしくは放出制御ビーズと次のような比率で組み合わせることができる（力価に基づくｗ／ｗ）：即時放出（ＩＲ）ミニカプセル１０％＋持続放出（ＳＲ）ミニカプセル／放出制御（ＣＲ）ミニカプセル９０％；ＩＲ２０％＋ＳＲ／ＣＲ８０％；３０％ＩＲ＋ＳＲ／ＣＲ７０％；ＩＲ４０％＋ＳＲ／ＣＲ６０％；ＩＲ５０％＋ＳＲ／ＣＲ５０％など。
【０２２０】
実施形態において、ビーズ又は成形単位は即時放出コートを有し、ミセル含有組成物からなるコアとＩＲコートとの間に、以下に挙げる少なくとも１つを行うサブコートを有する：機械的強度を提供する；水分吸収を防止する；コアからの活性物質の放出を調節する；コアからの活性物質の放出を安定化させる（例えば、コアからの活性物質の放出を調節及び安定化させる）。
【０２２１】
１つの実施形態において、自己組織体、例えばミセルは、自己組織体の大きさによって特徴付けられる。ミセルの大きさを決定する簡便な方法は、本明細書で以前に記述したような動的光散乱法であり、そこでミセルの大きさは、流体力学的直径として測定される。光散乱は、溶液中の粒子の大きさ分布プロファイルを決定するために使用可能な技術である。光が粒子に当ると、光は周囲四方に散乱する（Ｒａｙｌｅｉｇｈ散乱）。光源がレーザーである場合、及び光源が単色及びコヒーレントである場合、散乱強度における時間依存変動が観察される。これらの変動は、溶液内の粒子がブラウン運動を行っており、したがって溶液内の散乱粒子間の距離は時間に伴って常に変化しているという事実による。粒子の動的情報は、測定された時間遅延に依存している実験中に記録された強度記録の自動相関性に由来する。短時間の遅延では、粒子が最初にあった初期状態から、大幅に移動する機会がないので相関性は高い。時間遅延がより長くなるにつれ、相関性は指数関数的にゼロになるまで減衰し始める。これは、長期間が経過した後、初期及び最終状態の散乱強度間に相関性がないことを意味する。この指数関数的減衰は、粒子の運動に、具体的には拡散係数に関連する。減衰に適応するために、推定した分布の計算に基づく数値的方法が用いられる。サンプルが単分散である場合、減衰は単純に、単一の指数関数であり、多分散性指数（Ｐｄｌ）はゼロか、ゼロに近づく。しかしながら、サンプルが多分散である場合、減衰は、（２つの集団が存在する場合）双指数関数的であるか、又はより複雑な減衰を有しうる。多分散性指数は、減衰のフィッティングから得られ、Ｐｄｌ＝０にてその最大値に達する。
【０２２２】
ミセルのような自己組織体の大きさ及び構造を測定するための他の有用な分析方法としては、小角Ｘ線散乱と拡散核磁気共鳴が挙げられる。そのような技術は、例えばオリバー（Ｏｌｉｖｅｒ）らのＰＬＯＳ  ｏｎｅ，Ｍａｙ  ２０１３，  Ｖｏｌ．８（５）、ｅ６２４８８及びコラフェミナ（Ｃｏｌａｆｅｍｍｉｎａ）らのＪ．Ｐｈｙｓ  Ｃｈｅｍ  Ｂ２００７，１１１，７１８４−７１９３などでよく知られている。
【０２２３】
製造方法
本明細書で記述する製造方法は、液体を混合する工程を含む。そのような混合工程は、液状で混合されるべき物質が液状となる温度で実施されなければならない。例えば、温度可逆性ゲル化剤は、それらが液状である温度、例えば５０〜７５℃、例えば５０〜７０℃、又は５５〜７５℃、例えば６０〜７０℃にて混合されなければならず、水性ゼラチンを含む組成物を混合する特定の実施形態において約５５℃又は６５℃にて混合されなければならない。コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５もまた、液状で混合されるべきであり、室温又は室温より僅かに高い温度で好適に保持され、例えばその目的に対して少なくとも３０℃、例えば３５〜５０℃、特に４０℃の温度で保持される。コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５と水性ゼラチンの両方を混合する場合、コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５及び水性ゼラチンが共に液体である、より高い温度、例えば５０〜７５℃、例えば５５〜７５℃で混合する。
【０２２４】
本明細書に開示されているような組成物は、ヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相内で自己組織体分散体を形成するため、水と、ヒドロゲル形成ポリマーと、界面活性剤と、活性物質とを含む材料を混合することによって形成することができる。次に、ヒドロゲル形成ポリマーをゲル化させる。好適には、製法は、所望の形態、例えばビーズに、水性自己組織体分散体を配合又は加工する工程を含む。形成工程は、水性ミセル分散体を成形する工程を含むが、好ましくは水性ミセル分散体を単一のオリフィスノズルを通して排出し、形成した液滴を冷却媒質中、例えば水不混和性冷却液中に通過させることで液滴を冷却してビーズを形成する工程を含む。
【０２２５】
材料の混合には、水性予備混合物（又は水性相）と、界面活性剤予備混合物（又は界面活性剤相）とを混合する工程を含んでもよく、ここで水性予備混合物は、水と水溶性物質とを含み、一方で界面活性剤予備混合物は、界面活性剤と界面活性剤可溶性物質とを含む。いくつかの実施形態において、水性予備混合物は、少なくとも１種の水分散性物質を含む。いくつかの実施形態において、界面活性剤予備混合物は、少なくとも１種の界面活性剤分散性物質を含む。
【０２２６】
水性予備混合物は、水溶性成分、すなわちヒドロゲル形成ポリマー、随意の水溶性賦形剤、随意の親水性活性物質の水溶液を含むか、又は通常それらからなる。水性予備混合物は、最終組成物の微生物内容物の少なくとも一部、例えばその全てを含んでもよい。水性予備混合物は、最終組成物のアジュバント内容物の少なくとも一部、例えばその全てを含んでよい。水性予備混合物は、本明細書の他の箇所に記載されているような、可塑剤、すなわち水溶性賦形剤を含んでよい。水性予備混合物は、例えばポリマー粘度を増加させたり、乳化を向上させたり、それによって加工中の活性物質の沈殿を防止することを助けるために、界面活性剤を含んでよい。ＳＤＳはそのような界面活性剤の一例である。水性相は、１種類もしくはそれ以上の制御放出ポリマーを含んでもよい。いずれにしても、水性予備混合物の構成成分を、例えば１時間〜１２時間撹拌して、完成した水性予備混合物を形成することができる。
【０２２７】
界面活性剤相予備混合物には、疎水性及び両親媒性成分の記述された界面活性剤中の溶液を含む。本明細書では、最終組成物の微生物の少なくとも一部と、アジュバントの少なくとも一部を含む界面活性剤相予備混合物を開示する。界面活性剤相予備混合物は、最終組成物の微生物内容物の全てと、アジュバント内容物の少なくとも一部、例えば全てを含んでよい。界面活性剤相予備混合物は、最終組成物の微生物内容物の一部（一部は水性相予備混合物にも含まれる）と、最終組成物のアジュバント内容物の少なくとも一部、例えば全てを含んでよい。界面活性剤相が、微生物内容物の一部を含む場合、その割合は、少なくとも５０ｗｔ％、例えば少なくとも７５ｗｔ％であってよい。界面活性剤相が、アジュバント内容物の一部を含む場合、その割合は、少なくとも５０ｗｔ％、例えば少なくとも７５ｗｔ％であってよい。界面活性剤が、疎水性鎖と親水性鎖を含んでもよいことも想起されるであろう。疎水性及び両親媒性成分は、存在する場合、疎水性及び両親媒性活性物質から選択される１種類もしくはそれ以上の活性物質を含んでよい。
【０２２８】
従って、界面活性剤予備混合物は、多くの場合で微生物を含むであろう。典型的に、微生物は、界面活性剤内に直接、例えば、凍結乾燥又は他の乾燥粉末として含まれるであろうし、又は微生物は、界面活性剤に水性懸濁製剤として含まれてよい。微生物は、凍結乾燥又は他の乾燥粉末として、及び水性懸濁製剤として両方で、界面活性剤内に含まれてよい。本発明はしたがって、界面活性剤／活性剤予備混合物の製造方法を提供する。本発明の方法には、（ｉ）界面活性剤と、（ｉｉ）微生物と、随意に（ｉｉｉ）アジュバントとを混合することが含まれる。界面活性剤予備混合物は、界面活性剤及び任意の活性物質に対して、更なる物質を含んでよい。例えば、更なる賦形剤を含んでよい。そのような更なる賦形剤は、疎水性又は両親媒性であってよく、例えば、水不混和性材料、例えば油を含んでよい。更なる賦形剤はしたがって、液体脂質、例えば中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）組成物であってよく、中鎖トリグリセリドは、Ｃ６〜Ｃ１２脂肪酸から選択される少なくとも１種の脂肪酸の１種以上のトリグリセリドである。任意の１種類もしくはそれ以上の活性物質は、界面活性剤予備混合物内に混合される前に、溶媒、例えばエタノール又はＭＣＴ組成物中に予め溶解していてもよい。いくつかの実施形態において、界面活性剤予備混合物の構成成分を、例えば１０分〜３時間混合（又は撹拌）して予備混合物を形成する。
【０２２９】
２つの予備混合物を、例えば数秒間〜１時間、例えば３０秒間〜１時間、好適には５分間〜１時間の期間、混合及び撹拌して、水性ヒドロゲル形成ポリマー中の自己組織体（例えばミセル）の分散体を形成してもよく、分散体をついで処理して、最終調製物を形成してもよい。２つの予備混合物を、混合容器内での撹拌によって分散体内に混合してよく、これらを更に、又はあるいは連続フローミキサー内で混合してよい。
【０２３０】
従って、本発明の組成物を作製するための基本的な方法は、ヒドロゲル形成ポリマー（又はポリマーの混合液）の液状体（好ましくは溶液）を、活性物質及び界面活性剤と混合して、ポリマーによって形成されたヒドロゲル中に分散体を形成することである。（本明細書の他の箇所で記載されるような）要求される最終組成物を考慮すると、界面活性剤と、液状ヒドロゲル形成ポリマー（すなわち、ヒドロゲル形成ポリマーの溶液又は懸濁液）とを、１：２〜５、好ましくはおよそ１：３又は１：４の範囲の比率で混合してよい。一般に、自己組織体の分散体、例えばミセルの分散体を達成するために、当業者が詳しいであろう磁気又は機械的システム、例えばオーバーヘッドスターラーを用いて、組成物を単に穏やかに撹拌することが必要である。連続撹拌することが好ましい。混合はまた、インライン混合システムを用いて達成することもできる。この目的を達成するためには、任意の適切な実験用撹拌装置又は工業スケールのミキサーを用いることができ、例えば（スチュアート（Ｓｔｕａｒｔ）によって製造された）マグネティックスターラー（Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｓｔｉｒｒｅｒ）、又は（ＫＮＦ又はＦｉｓｈｅｒによる）オーバーヘッドスターラー（Ｏｖｅｒｈｅａｄ  Ｓｔｉｒｒｅｒ）などが挙げられる。好ましくは、該装置は、水などの内容物の蒸発を最小限に抑えるように組み立てる。本発明に従う方法のひとつの実施形態においては、好ましくは、この目的を達成するために、閉鎖系を用いて撹拌を行う。インライン混合が、閉鎖系処理のために特に好適でありうる。
【０２３１】
本発明は、界面活性剤相液体と水不溶性成分とが、水性相と混合される透明な溶液に形成される実施形態を含む。両方の相は、それらを混合してエマルジョンを形成する前に透明な溶液であってよい。
【０２３２】
実施形態においては、界面活性剤予備混合物中の界面活性剤の濃度は、水性予備混合物との混合に際して、混合された混合液中の界面活性剤濃度が、使用された界面活性剤に対するＣＭＣを超え、ミセルが、ヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相中に形成されるように選択される。使用される界面活性剤の濃度に依存して、ミセル以外の自己組織体もまた形成しうる。特定の界面活性剤に対するＣＭＣは、Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｉｎ  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２，ホルムベルグら（Ｈｏｌｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．）にて記述されたような、既知の方法を用いて決定してよい。
【０２３３】
実施形態において、水性及び界面活性剤予備混合物の混合は結果として、透明な溶液、例えばマイクロエマルジョンの形成となり、その中でヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相は連続相である。界面活性剤相と水性相の混合による透明な溶液の形成は、一般に、極めて小さな自己組織体が、例えばマイクロエマルジョンとして形成されたことを示唆する。マイクロエマルジョンは、水性相中の自己組織体の熱力学的に安定な分散体であり、自己組織体の大きさは、透明外観を与えるのに十分小さくなる。本明細書で以前に記載したように、実施形態において水性相及び界面活性剤相の混合から生じる分散相として存在する自己組織体の大きさは、約０．５ｎｍ〜２００ｎｍ、例えば約１ｎｍ〜５０ｎｍ、又は約５ｎｍ〜２５ｎｍである。形成された自己組織体の大きさ、及び組成物（例えばマイクロエマルジョン）の光学的等方性のような他の特徴を、本明細書で以上に記載したような既知の技術を用いて決定してよい。
【０２３４】
前記ポリマーマトリクスが、実質的にゼラチンにソルビトールを添加したものから構成されている実施形態において、ポリマーマトリクスの水性相は、適量のソルビトール（所望する場合には、ならびに界面活性剤および／もしくは活性物質）を水に加え、約６０〜７５℃に加熱して溶液にし、次に、ゼラチンを加えて調製する。但し、正確な添加の順番およびタイミングは重要ではない。典型的な「ゼラチン溶液」は、８〜２５％（例えば１５〜２５％、好ましくは１７〜１８％）のゼラチン、７５％〜８５％（好ましくは７７〜８２％）の水＋１〜５％（好ましくは１．５〜３％）のソルビトールを含む。
【０２３５】
しかしながら、分散体が形成される温度の選択は、活性物質の温度不安定性、及びゼラチン中に含まれる可塑剤の量、ゼラチンのタイプ、並びにその他の因子を含む種々の因子に依存する。しかしながら、一般に、ゼラチン溶液（特に標準的、又は通常のゼラチンの場合）は５０〜７０℃、好適には６０〜７０℃に維持することで流動状態を保持する。
【０２３６】
加工温度は、所望する目標温度（例えば、３７℃など）に下げることができ、これは、低融点ゼラチン（またはゼラチン誘導体、もしくは融点降下剤を加えたゼラチンの混合物）、その他のポリマーマトリクス材料（例えば、アルギン酸ナトリウムなど）を用いることによって可能になり、これらは、例えば、本発明に従う組成物中に取導入する活性物質が熱に対して不安定な場合に必要となる。別の方法としては、熱に不安定な活性物質は、そのような物質が高温の媒質と接触する時間を制限できるような適切な装置または機械を使用することによって高温で加工することもできる。例えば、ゼラチンの液滴を機械押し出しによって調製し、冷却槽などを用いてすぐに冷却すれば、もうひとつの適切な注入管を用いて、熱感受性活性物質を液状ゼラチン溶液に注入し（さらに、該混合物を即座にホモジナイズし）、すぐにビーズ形成ノズルまたはその他の滴下手段を利用して押し出すことにより、該活性物質が高温のゼラチンに晒される時間を最小限に留めることで、該活性物質が熱分解する度合いを抑えることができる。この方法を実施するには、ホモジナイザー（例えば、スクリューホモジナイザーなど）などの任意の適切なデバイスに、ＷＯ２００８／１３２７０７（シグモイド・ファーマ（Ｓｉｇｍｏｉｄ Ｐｈａｒｍａ）社）などに記載されているような押し出し式装置を組み合わせたものを使用できる。この出願の全体を参照として本明細書中に取り入れておく。
【０２３７】
本発明はしたがって、水性相及び界面活性剤相の混合物を、単一のオリフィスノズルを通して排出し、液滴を形成する工程を含み、ヒドロゲル形成ポリマーは次に、固化を引き起こす、又は固化させて、それによって液滴がビーズを形成する。ヒドロゲル形成ポリマーは、サーモトロピックポリマー又はサーモトロピックポリマーの混合物予備混合物であり、水性相（水性予備混合物とも呼ばれる）が高温であり、予備混合物界面活性剤相（界面活性剤予備混合物とも呼ばれる）が、好適には室温を超えないような低温であり、２つの予備混合物は、それぞれの供給ラインを通して予備混合物混合装置へ流れ、２つの予備混合物が混合される。そして２つの予備混合物の少なくとも１つは、混合装置からノズルまでの移動において混合物が移動するよりも大きな距離を、その供給ラインを通して移動する。２つの予備混合物を、ノズルに並置された位置において、例えば、ノズルに並置されたインライン混合装置によって混合してもよい。
【０２３８】
本発明は、界面活性剤予備混合物が、２つの予備混合物を混合する前に、水性予備混合物より低温である工程を含む。水性予備混合物よりも低温で界面活性剤予備混合物を保持することが、工程中、組成物の熱不安定成分（例えば微生物及び／又はアジュバント）に対するダメージを減少させるために使用可能である。実施形態において、ノズルに隣接して、界面活性剤及び水性予備混合物の混合物を形成することが有利でありうる。そのようなアレンジメントは、混合物を、液滴としてノズル（一般に単一ノズル）から冷却媒質中に即時に排出することを可能にし、それによって、（抗原又はアジュバントのような熱不安定物質を含んでよい）界面活性剤予備混合物の構成成分が高温にさらされる時間を最小化する。界面活性剤予備混合物の構成成分が、工程中、高温にさらされる時間は、ノズル近傍に混合装置（例えばインラインミキサー）の出口を配置すること、及び／又は混合装置からノズルまで高混合流速を使用することによって更に最小化することが可能である。冷却媒質は、本明細書に記載されたものであってよく、例えば、低温ガス、又は油槽のような好適な液体媒質であってよい。
【０２３９】
一般に、自己組織体形成界面活性剤が液体である場合、加熱する必要はなく、活性物質を、透明になるまで撹拌しながら室温で加える。界面活性剤相は、更なる成分を含むことが可能である。これらの他の成分には、界面活性剤に加えて、揮発性（又は不揮発性）溶媒が挙げられる。界面活性剤相はまた、本明細書の他の箇所そして実施例に記載したように、活性物質の目的の比率を達成するために、適切な量の活性物質（水性相と界面活性剤との混合の前に界面活性剤に加えられるなら）も含んでよい。界面活性剤が、例えばコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５のようなワックス状固形物である実施形態においては、ワックス状固形物を、例えば３０℃より高く加熱することで液状となる。
【０２４０】
以上で記述したように、撹拌しながら、界面活性剤を液体水性相に添加することで分散体が形成される。得られた分散体は、上記した固化されたビーズ組成物を有するが、液水もまだ存在する。
【０２４１】
水性相及び界面活性剤を混合した後に、１種以上の活性物質を随意に加えてもよい。
【０２４２】
自己組織体分散体を次に、鋳型又は他の容器へ注ぐ、若しくは導入する、又はシート上、若しくはシート間に注ぐ、又は他の液体中に滴下送達（又は押出）することで、ポリマーマトリクス含有水性相が、固化に際して、意図した鋳型、容器、シート又は液滴／ビーズの形態を取る。鋳型形成、例えばビーズ化を遅延することなく進めることが好ましい。
【０２４３】
鋳型を利用する以外の方法としては、特別な機械を用いて、例えば、本発明として半球状ビーズを採用している既述の半球状ビーズを作出することが挙げられる（「形状、大きさ及びジオメトリー」という表題のついている章を参照）。２個のそのような半球を合わせることにより、１個のビーズ、すなわち、２つの別個の半球からなる１個のビーズがつくられ、この工程は、２種類の別異のエマルションをそれぞれ流すための２本のチューブ（通常は、チューブ断面は半円形）を押し出し口またはノズルの直前でひとつに合わせて、２種類のエマルションの流れを分離する平らな仕切りを有する１本の２穴チューブとなっている特別な装置を使用することによって実施する。このような構造にすることにより、押し出されてくる２種類のエマルションが押し出し口で初めて接触することになる。従って、押し出し口に到達するまでの連結２穴チューブの断面は２個の半円形に見える。実際の操作においては、２つの半球状のエマルションの流れが合流して、押出しに際して単一の、実質的に球状のビーズが形成されるようにして、通常の液滴が押し出されて固化される。
【０２４４】
固化は、ポリマーマトリクスの性質に合わせて、多様な方法で行うことができ、例えば、鋳型、容器、シート、液滴／ビーズなどの周囲の温度を変えることにより、または、固化用の流動体もしくは硬化液を加えて、鋳型の形状にゲル化もしくは固化させることにより実施できる。特定の実施形態においては、温度変化、ならびに固化促進液もしくは硬化液の添加の両方を、共に、または同時に行う。
【０２４５】
本発明に従う組成物がビーズの形状をとっている好ましい実施形態においては、該ビーズは、例えば、固化用の流動体中に自己組織体分散体を滴下するなどの方法で形成できる。ビーズを形成するエマルジョンの粘度がある点に達すると、滴下による形成は困難になることから、特別の装置を使用することが好ましい。
【０２４６】
「乾燥」という語句を用いる場合、乾燥ミセル分散体を製造するために乾燥工程が必要であることを意味しているわけではなく（乾燥工程が除外されるわけではないが）、むしろ、固体もしくは固体化された水性外相が実質的に水を含まない、または市販の水を含まないことを意味する。水性相（外部相）の固化は、化学的（例えば架橋によって）、又は物理的（例えば冷却又は加熱することによって）手段を含む種々の手段を通して実施されてよい。この点に関し、「水性相」という語句は、本明細書中では、本発明に従う組成物の外部相（連続相）を意味するのに用いられているが、ある実施形態においては、ビーズを含む組成物の大部分に水は存在しないか、または、ビーズの架橋マトリクス内に捕獲されていることがある。しかしながら、ビーズを含む組成物の外部相は水溶性であり、水性媒質中に溶解する。１つの実施形態において、固体組成物中のミセル形成界面活性剤によってとられた形態にかかわらず、水性相が溶解するか、又は水性媒質にさらされたときに、自己組織体が放出される。
【０２４７】
したがって、本発明のいくつかの実施形態において、本発明にしたがった組成物は、溶解によって、又は水性媒質、例えば組成物の経口投与に続く胃腸液のような、溶解媒質にさらされると、自己組織体を放出する。実施形態において、組成物（例えばミセル）から放出された自己組織体は、約０．５ｎｍ〜２００ｎｍ、例えば約１ｎｍ〜５０ｎｍ、又は約５ｎｍ〜２５ｎｍである。自己組織体（例えばミセル）の大きさは、例えば本明細書で以前に定義されたような、動的光散乱によって求めることができる。好適に、本発明に係る組成物からのそのような自己組織体（例えばミセル）の放出は、水性溶解媒質中に組成物を配置すること、及び、動的光散乱を用いて、溶解媒質中に放出された自己組織体の大きさを測定することによって求めることができる。溶解媒質は、ヒドロゲル形成ポリマーを含むマトリクスが、水性媒質にさらされ、自己組織体（例えばミセル）の形成及び／又は溶解媒質内への放出を許容するようにすべきである。したがって、組成物が、放出を遅延又は制御するためにコートされるときに、溶解媒質がヒドロゲルマトリクスを含むコア内に浸透することを可能にし、自己組織体の形成及び／又は溶解媒質内への放出を許容するために、例えば媒質のｐＨ又は溶解媒質中の滞留時間を調節することが必要であり得る。例えば、組成物を、腸溶性コーティングでコートするときに、溶解媒質のｐＨは、腸溶性コーティングの溶解、及びコアが水性溶解媒質にさらされるのを許容するために、ｐＨ＞５．５又は＞６．５まで増加させる必要がありうる。自己組織体を測定するために使用した溶解媒質は単に、水であってよく、例えば３７℃にてｐＨ７．２〜７．３の水であってよい。組成物を溶解媒質内に配置した後、溶解媒質を定期的にサンプリングし、例えば本明細書で記述した動的光散乱法を用いて、組成物からの自己組織体の存在／放出に関して解析することができる。
【０２４８】
固化が温度の上昇または下降によって可能な場合には、固化用の流動体の温度を調節し、所望する速度で固化を進行させる。例えば、ポリマーマトリクスとしてゼラチンを用いる場合には、固化用の流動体の温度はエマルションの温度より下げることでポリマーマトリクスを固化させる。この場合、固化用の流動体は冷却液と称される。
【０２４９】
固化を化学的に行う場合、例えば、固化用の流動体に接触させて架橋を引き起こす場合、固化用流動体中のそのような構成成分の濃度、および／または温度（またはその他の特性もしくは内容物）を調整することによって、所望する固化の速度および度合いが得られる。例えば、アルギン酸塩をポリマーマトリクスとして選択した場合、固化用流動体のひとつの構成成分としてはカルシウム含有物（例えば、塩化カルシウムなど）を用い、アルギン酸塩の架橋反応を誘導して固化させることができる。別の方法としては、同一の、もしくは類似のカルシウム含有物を、流体エマルジョンを含む水性相中に加え（例えば、分散させ）、その後、ビーズ形成を行い、エマルションの液滴が滴下されている、または加えられている固化用流動体に、ｐＨの高い、もしくは低い物質を添加するなどによって架橋反応を誘導する。そのような静電架橋反応では、カルシウムイオンの利用度（濃度）およびその他の物理的条件（特に温度）を制御することにより、得られるミニビーズの性質が変化する。固化用の流動体としては、気体（例えば、空気など）もしくは液体、またはこれらの両方を用いることができる。例えば、ポリマーマトリクスとしてゼラチンを使用する場合には、固化流動体は、初期には気体様のもの（例えば、液滴を冷却空気中に通過させるなど）を用い、次に、液体（例えば、液滴を冷却液中に通過させるなど）を用いる。固化流動体は逆の順番で用いてもよく、また、気体様もしくは液体の冷却流動体は、単独で用いてもよい。別の方法としては、該流動体がスプレー冷却されており、該冷却気体中にコロイドをスプレー噴射して固化させる。
【０２５０】
ゼラチンまたはその他の水溶性ポリマー（又はポリマー混合物）を用いて不動化マトリクスを形成することを意図する場合には、好ましくは、該固化流動体は非水性液体（例えば、中鎖トリグリセリド類、鉱油、または同様の物質であって、好ましくは、濡れを最小限にするために、ＨＬＢ値の低いもの）であり、エマルションが固化してビーズを形成するときに、槽（冷却槽）内にあって、該エマルションの液滴の受け皿となれるものである。非水性液体を用いることにより、冷却を行う場合の温度選択の幅が広がる。
【０２５１】
液体冷却槽（浴）を使用する場合、標準的なゼラチンをヒドロゲル形成ポリマーとして用いるときには、一般的には、２０℃以下、好ましくは５〜１５℃、より好ましくは８〜１２℃に維持する。冷却槽内の冷却流動体としてトリグリセリドを選択するのであれば、好ましい例は、サソール（Ｓａｓｏｌ）社から販売されているミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）８１０である。
【０２５２】
ゼラチン又は他のサーモトロピックポリマー又はポリマー混合物をヒドロゲル形成ポリマーマトリクスとして選択した場合、分解（例えば、活性物質がタンパク質である場合に生じるタンパク質の三次構造の分解など）を避けるために、適切な温度範囲を考慮することにより、適度な速度でポリマーを確実に固化させる。
【０２５３】
ポリマーマトリクスとしてアルギン酸塩を選択した場合、ビーズの典型的な製造方法には、上述のように油滴が分散しているアルギン酸ナトリウムの３％溶液を、０．１Ｍの塩化カルシウムを含む４℃の架橋反応槽に滴下し、アルギン酸カルシウムを生成することを含む。この方法は、「拡散固化（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｓｅｔｔｉｎｇ）」と呼ばれ、カルシウムがビーズ内に拡散し、架橋結合または固化（硬化）を促進すると考えられている。シリンジポンプまたはイノテック（Ｉｎｏｔｅｃｈ）装置を使用し、滅菌針またはその他のノズル（仕様については本明細書の別の箇所に記載しており、振動させながら使用できる）を通して液滴を作成または押し出すことができ、このとき、ポンプを使用する場合には、流量は５ml／時間などに設定する。口径４．５ｍｍのチューブを通して１５〜２０ml／分で該針の上部に下向きに空気を流すことで、所望する場合には、液滴の大きさを小さくできる。次に、成形されたばかりのビーズを塩化カルシウム槽中で最長１時間撹拌する。ポリマーマトリクスとしてカラギーナンを使用する場合には、塩の添加および温度低下（例えば、冷却した油の中に滴下するなど）の両方を行うことで固化させる。
【０２５４】
アルギン酸塩を用いる別の方法は内部ゲル化であり、この方法では、カルシウムイオンを予め水性相に分散させておき、後に活性化して親水コロイド粒子のゲル化を起こす。例えば、これは、アルギン酸塩の架橋反応を起こす（カルシウム）イオンを不活性な形で添加し、当該イオンの十分な分散が完了した後に、ｐＨなどを変化させて活性化させる（グリックスマン（Ｇｌｉｃｋｓｍａｎ）、１９８３年ａ；ホーフラー（Ｈｏｅｆｌｅｒ）、２００４年を参照。これらを参照として本明細書中に取り入れておく）。この方法は、迅速なゲル化が所望される場合、ならびに／または架橋反応槽に拡散させることにより、ＡＰＩの消失を招く可能性がある場合にはとりわけ有用である。
【０２５５】
他のイオントロピックポリマーを、アルギン酸塩の代わりに使用する場合、アルギン酸塩に関して本明細書にて記述したものに対して好適な類似の方法を使用してよい。
【０２５６】
成形、鋳型成形またはビーズ成形に続いて、得られた形状物を洗浄、し、必要に応じて乾燥する。ビーズを固化用流動体中で固化させる場合は、上述の調製方法の最終段階で、固化用流動体から固化したミニビーズを取り出す作業を含む。これは例えば、固化用流動体（例えば、中鎖トリグリセリドなど）を網かごに通すことなどによってミニビーズを回収し、好ましくはこの操作はビーズ形成後に遅滞なく行い、例えば、ビーズ形成から５分、１０分、１５分、２０分、２５分または３０分以内に行う。過量の固化用流動体は遠心分離（または、過量の流動体を除去するように設計されたその他の装置もしくは機械）によって除去し、続いてビーズを乾燥させて水もしくは遊離の水を除去し、ならびに／または、任意の追加の溶媒（例えば、前の段階において、活性物質を溶解させる、もしくは溶解を促進するために使用したエタノールまたはイソプロピルアルコールなど）のうちの一部もしくは全てを除去し、次に、随意に、酢酸エチルなどを用いて洗浄し、その後「乾燥」段階を経て過量の溶媒（例えば、酢酸エチルなど）を除去する。ここで、イソプロピルアルコールは溶媒の一例であり、好ましくは、後の加工中に除去し、油相または水性相中の残存量を減らす。乾燥は当該分野において既知の任意の適切な方法で行うことができ、例えば、ドラム式乾燥機に暖かい空気（１５〜２５℃、好ましくは２０℃前後）を通し、空気によって水を気化させるか、またはエントレインメントを起こさせる。そのような乾燥機としては、フロインド・ドラム（Ｆｒｅｕｎｄ Ｄｒｕｍ）乾燥機などが挙げられ、これは、スフェレックス（Ｓｐｈｅｒｅｘ）装置群の一部として使用できる。ポリマーマトリクスとしてゼラチンを使用する場合には（例えば、水性不動化相の主構成成分として）、ほとんどの場合において、乾燥工程が必要であり、ビーズに対しては、上述したように空気中で乾燥させることが好ましい。得られた組成物（本発明に従う組成物）は、上により詳述しているように、基本的に乾燥した状態である。
【０２５７】
上述したビーズ化法の最初の工程において自己組織体分散体の液滴が形成される方法に関しては、上述した方法の変形も可能であり、液滴を多様な固化用流動体に導入することを含む。
【０２５８】
一般的には、最終的に得られるビーズが球状または実質的に球状であるためには、液体分散物（水性及び界面活性剤相の混合物）と、例えば気体又は液体のような、適切な固化用流動体との間に表面張力を持たせることによって、前記ミニビーズを作成する必要がある。
【０２５９】
別の方法としては、前記ビーズは、一定の直径を有するオリフィスもしくはノズルを通して液体分散物を排出または押し出すことによって作成でき、随意に、振動数を選択する、および／または重力に従う流動を行う。このような方法に使用される機械の例としては、フロインド・スフェレックス（Ｆｒｅｕｎｄ Ｓｐｈｅｒｅｘ）、ＩＴＡＳ／ランボ（ＩＴＡＳ／Ｌａｍｂｏ）、グローベックス（Ｇｌｏｂｅｘ）またはイノテック（Ｉｎｏｔｅｃｈ）加工装置などが挙げられる。フロインド（Ｆｒｅｕｎｄ）社製のスフェレックス（Ｓｐｈｅｒｅｘ）装置は、本発明に従うビーズの製造にふさわしく、該機械については米国特許第５，８８２，６８０号（フロインド（Ｆｒｅｕｎｄ）ら）に記載されており、その内容の全体を参照として本明細書中に取り入れておく。好ましくは、振動数は１０〜１５ｒｐｍの範囲で選択するが、最終的な振動数（およびこれとは別に選択される振幅）は、ビーズに加工するコロイドの粘度によって決まる。低温で固化させることを目的としてポリマーマトリクスを選択した場合には、オリフィス／ノズルまでの製造ラインを一定の温度に維持して溶液の流動性を保持することが好ましい。
【０２６０】
したがって、本発明は、水及び（したがってヒドロゲル形成ポリマーを含む）水溶性／分散性材料を含む水性予備混合物と、界面活性剤、微生物及び任意にアジュバント、及び界面活性剤可溶性／分散性材料を含む界面活性剤予備混合物とを形成することと、２つの予備混合物を混合して、ヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相内に、分散体（分散相）を形成することと、を含む、本発明の組成物を製造するための方法を含むことが理解されよう。分散体は次に、成形単位、例えばビーズに形成してよい。特に、組成物の製造には随意に、
（ｉ）水溶性成分（例えば、本明細書の他の箇所で記載したような、ヒドロゲル形成ポリマー、随意の水溶性賦形剤、随意の親水性栄養素）の水溶液を含むか、又は通常それらからからなる水性相予備混合物を形成することと、
（ｉｉ）微生物、随意にアジュバント及び随意に疎水性及び両親媒性成分（例えば本明細書他の箇所で記述したような栄養素）から選択される他の成分の、界面活性剤中の混合物を含む、界面活性剤相予備混合物を形成することと、
（ｉｉｉ）２つの相を混合して、分散体を形成することと、随意に
（ｉｖ）分散体をビーズに調製すること、例えば分散体を、単一のオリフィスノズルを通して排出して液滴を形成し、液滴を水不混和性冷却液体中に落下させることで液滴を冷却してビーズとし、その後、該冷却液体から該ビーズを分離することと、
が含まれてよい。
【０２６１】
いくつかの製造プロセスは、以下の（Ａ）〜（Ｄ）を含み、あるいは、製造プロセスは、ステップ（Ａ）〜（Ｄ）の単一、又は任意の組み合わせを含んでよい。
【０２６２】
（Ａ）水性相の調製例
水性相成分を、撹拌、例えば超音波処理撹拌の下、水、例えば精製水に加える。固体を完全に溶解するために、温度を例えば５５〜７５℃まで、特に６５℃まで徐々に上昇させる。水性相成分は、ヒドロゲル形成ポリマー、例えばゼラチン又は寒天、随意に１種類もしくはそれ以上の他の賦形剤、例えばＤ−ソルビトール（可塑剤）及び随意に１種類もしくはそれ以上の活性物質を含む。可能性のある水性相成分は、本明細書の他の箇所に記載されている。水性相成分は、微生物細胞（無傷及び／又は断片化によらない）を含んでよい。これにより、製造中、界面活性剤相中に微生物内容物の少なくとも一部及び、随意に微生物内容物の全体が設けられるプロセス及び生成物が開示される。それにもかかわらず、本発明は、全微生物内容物が水性相中にある組成物及びプロセスを包含する。
【０２６３】
ゼラチンは、Ａ型ゼラチンであってよい。少ないが好適な実施の場合によって、ゼラチンはＢ型である。ゼラチンは、１２５〜３００、随意に２００〜３００、例えば２５０〜３００、特に２７５のブルーム値を有してよい。水性相の構成成分を、例えば１時間〜１２時間撹拌して水性相（水性予備混合物）を調製する。
【０２６４】
（Ｂ）界面活性剤相の調製例
界面活性剤相成分を、撹拌、例えば超音波処理撹拌の下、界面活性剤に加える。固体を完全に溶解するために、温度を、コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５のようなワックス状界面活性剤の場合には通常３５〜５０℃、特に４０℃まで、徐々に上昇させる。界面活性剤相成分を、通常透明な溶液を得るまで、撹拌する。界面活性剤相の成分は、界面活性剤、例えばコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）（登録商標）ＨＳ１５と、随意に１種類もしくはそれ以上の活性物質とを含む。使用可能な界面活性剤相成分は、本明細書の他の箇所に記載されている。特に、界面活性剤相は、微生物細胞（無傷及び／又は断片化によらない）と、通常アジュバントを含んでよい。界面活性剤相の成分を、例えば１０時間〜３時間撹拌して、界面活性剤相（界面活性剤予備混合物）を調製する。
【０２６５】
水性相と界面活性剤相の少なくとも１つは、少なくとも１つの活性物質を含む。
【０２６６】
（Ｃ）２つの相の混合例
水性相と界面活性剤相を混合する。２つの相は所望の重量にて混合してよく、例えば、界面活性剤相の水性相に対する重量比は、１：１〜１：１０、例えば１：１〜１：６、随意に１：１〜１：４であり、場合によって１：３〜１：４である。他の実施形態において、界面活性剤相の水性相に対する重量比は、１：１〜１：３、例えば１：１．４〜１：１．６のような、１：１〜１：２．５又は１：１〜１：２であってよい。得られた溶液を、高温で、例えば界面活性剤がマクロゴール−１５−ヒドロキシステアレート、例えばコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５であるか、又はコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５の融点と同様の融点を有する場合、５５〜７５℃の温度で、特に６５℃で、撹拌、例えば超音波処理撹拌を行って、均一のミセル分散体を得て、次に、均一分散体からビーズを形成する。特に、均一分散体を、単一のオリフィスノズルを通して排出して液滴を形成し、該液滴を冷却媒質中に落下させる。ノズルを適当に振動することで、液滴形成が促進される。ノズルは、２〜２００Ｈｚ、随意に１５〜５０Ｈｚの周波数で振動してよい。
【０２６７】
冷却媒質は例えば、空気又は油であってよく、油は、例えば中鎖トリグリセリド、例えばミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）８１０Ｎのように、好適に生理学的に許容可能である。冷却媒質は、しばしば１５℃未満、例えば１０℃未満しかし０℃より高い、冷却温度であってよい。いくつかの実施形態において、冷却温度は、８〜１０℃である。ノズルサイズ（口径）は典型的に、０．５〜７．５ｍｍ、例えば０．５〜５ｍｍ、任意に０．５〜４ｍｍである。いくつかの実施形態において、ノズル口径は、１〜５ｍｍ、例えば２〜５ｍｍ、任意に３〜４ｍｍであってよく、特に３．４ｍｍであってよい。
【０２６８】
口径３．４ｍｍのノズルを通す流速は、５〜３５ｇ／分、随意に１０〜２０ｇ／分であり、異なるサイズのノズルでは、ノズル面積に対して適当に調節される。
【０２６９】
以上、及び本記述の他の箇所で記載したプロセスの特定の実施形態において、界面活性剤相と水性相との混合により、マイクロエマルジョン又はマイクロエマルジョンの特徴を有する組成物の形成となり、そこで界面活性剤を含む自己組織体が、本明細書で以前に記載したようなヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相中に分散され、透明で熱力学的に安定な組成物を提供する。例えば、２つの相の混合により、例えば、ゼラチンのようにヒドロゲル形成ポリマーを含む水性相中に分散したコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５のような、マクロゴール−１５−ヒドロキシステアレートを含むミセルを含むマイクロエマルジョンであってもよい。
【０２７０】
（Ｄ）ビーズの加工例
冷却したビーズの回収は、例えばこれらを、１５〜６０分の滞留時間経過後、例えばおよそ３０分後、冷却油から回収する。冷却液体（例えば油）から回収したビーズを遠心分離して、余分な冷却液体を除去し、次いで乾燥させてよい。好適に、乾燥は、室温、例えば１５〜２５℃、随意に２０〜２５℃で実施する。乾燥は、例えば６〜２４時間、室温で乾燥したビーズの場合例えば約１２時間、ドラム乾燥機中で実施してよい。乾燥したビーズを、好適には、水と少なくとも部分的に混和性のある揮発性非水性液体で洗浄してよく、例えばこれらは、酢酸エチルで洗浄してよい。洗浄したビーズを室温、例えば１５〜２５℃、随意に２０〜２５℃で乾燥させてよい。乾燥は、例えば６〜４８時間、例えば室温にて乾燥されたビーズの場合、約２４時間ドラム乾燥機内で実施してよい。乾燥に続いて、ビーズを１〜１０ｍｍ、任意に２〜５ｍｍを孔サイズのふるいを通して、オーバーサイズのビーズを除去し、ついで０．５〜９ｍｍ、任意に１〜４ｍｍの孔サイズのふるいを通して、アンダーサイズのビーズを除去する。
【０２７１】
ふるい工程によって通らなかったビーズを再使用することもできる。
【０２７２】
スフェレックス（Ｓｐｈｅｒｅｘ）装置（およびその他の装置）には、２種類の流動体が確実に同時に押し出されるようにするために、二重同心円穴ノズルが使用できるように調整を施す。このとき、内側の穴を通っている流動体はコアを形成し、外側の穴を通っている流動体はカプセルを形成する。カプセルを形成する流動体は、上述した方法のうちのひとつに従って固化する。本発明に従う組成物についての特定の実施形態を得るためには、コアを形成する流動体は、固化しやすくても、そうでなくてもよい。
【０２７３】
このように調整した上記の機械を用い、本発明に従うカプセル形の組成物であって、「形状、大きさおよびジオメトリー」の章に記載したように、コアに流動体（気体または液体）が充填されている組成物を製造することができる。本発明に従い、コアは、カプセル用材料のように組成物であってもよく、随意に、別個の組成物であってもよい。すなわち、上述した方法のうちのひとつに従い、固化しやすいものであってもよい。中間内層の存在が所望される場合には、３穴ノズルおよびそれに適したチューブを用いることができ、そのような中間内層とは、例えば、スフェアの内表面に存在する非水性材料の内部フィルム層などであり、室温で固体であるものが良い。従って、連続する相の柔らかさ／硬さに関しては、例えば、該組成物が２層の場合には固体：固体などと、３層の場合には固体：固体：固体、もしくは液体／半液状：固体：固体などのように表記する。
【０２７４】
本発明の更なる様態として、本明細書で記述した任意のプロセスによって得られうる（特徴を有する）組成物が提供される。
【０２７５】
先の節では、コートを施していないビーズの作成について記述している。好ましくは、本発明に従う実施形態は、コートを施したビーズであり、これについては、本明細書の別の箇所に詳述している。そのようなコーティングは単一または複数の場合があり、多様な方法で加工できる（別の章を参照）。
【０２７６】
２つの同心円状オリフィス（中心および外側）を有する上述の方法のうちのひとつ（随意に振動させているノズルからエマルジョンを排出する方法）においては、外側の流動体は、活性物質を含んでいるポリマー材料などのコート（ビーズの外側）を形成する（ポリマーコーティング）か、またビーズに徐放性特性を付与することができ、さらに、内層（コア）は本発明に従う組成物であるようにすることができる。好ましくは、フロインド（Ｆｒｅｕｎｄ）社製のスフェレックス（Ｓｐｈｅｒｅｘ）装置を使用する（フロインド（Ｆｒｅｕｎｄ）らに付与された米国特許第５，８８２，６８０号を参照。この特許の全ての内容を参照として本明細書中に取り入れておく。）。他の同様の排出又は押出装置、例えば本明細書で以前に記載した排出装置を使用してもよい。
【０２７７】
スフェレックス（Ｓｐｈｅｒｅｘ）装置を用いることで、非常に優れた単分散性が得られる。例えば、典型的な１００ｇのバッチ中、９７ｇのビーズが直径１．４〜２ｍｍまたは１〜２ｍｍであった。ビーズを所望する大きさの範囲にするには、いろいろな大きさの粒子を除外／スクリーニングするための当該分野において既知の方法を用いる。例えば、バッチを１回目には網目の大きさが２ｍｍのふるい、続いて１．４ｍｍのふるいにかけることにより、大きい／小さいビーズを除外／スクリーニングできる。
【０２７８】
ビーズをコートしたい場合には、直径が１．４〜２ｍｍの範囲が適切である。これより小さいと、コーティング装置のスプレーがビーズにかからない可能性があり、大きすぎて硬い場合には、ビーズに均一なコーティングを施すために必須であるスムーズな流動性が得られない可能性がある。
【０２７９】
前記ビーズは、加工条件が多様であるにも拘わらず、内部、すなわち断面が均質、つまり、継ぎ目がないことが好ましい。そのような加工条件の例としては、流体エマルジョンの温度、固化流動体の温度、および、該流動体中の構成成分の濃度を変えること、ならびに、乾燥を含む特定の加工段階を実施する時間を変えることなどが挙げられる。本発明においては好ましくないが、ビーズの製造に際してそのような変更を行い、例えば、より硬い外殻とより柔らかいコアとを有し、コアに向かって（ビーズ表面とは逆方向に）油滴が不完全に固定されているような不均質性を付与することもできる。本発明に従う組成物のより大きな形状（例えば、ビーズではないなど）を特別に作成し、そのような不均質性を具体化させてもよい。しかしながら、本発明では、好ましくは、内部が均質な組成物であり、ビーズの実施形態においては、均質な媒質、例えば十分均一に分散されたミセルなどを用いてビーズ形成／滴下を行うことが好ましい。ビーズ形成用ミセル分散体内が均質であることにより、乾燥条件が形状の対称性に及ぼす影響を回避できる。
【０２８０】
本発明は更に、本明細書で記載したように得た組成物の特徴を有する生成物、それによって作製された方法を除外して、組成物の特徴によって定義されているその特徴に関して定義された生成物を提供する。
【０２８１】
コーティング
活性物質の、特に微生物及び随意のアジュバントの、標的化、制御及び／又は徐放のために、ビーズにコーティングを施すことができる。適切なコートを施す方法としては、例えば結腸内放出が求められる場合には、最初の４時間は、溶解媒質中への活性物質の溶解が１０％以下となるように、そして、次の２４時間で、バーストさせて（瞬時に放出させて）最大溶解度（約１００％）に達するように加工する。多数の別異の標的プロファイルが考えられ、本例は単なる事例である。
【０２８２】
したがって、本発明の１つの実施形態によれば、その少なくともいくつか、任意にその全てが、ビーズからの活性物質（微生物及び任意のアジュバント）の放出を制御するためにコートを有する（すなわちコートされている）、ビーズの集団を含む剤形が提供される。１つの実施形態において、コートは、フィルムであり、他の実施形態においては、該コートは膜である。該コート、例えばフィルム又は膜は、胃の後まで放出を遅延させるため、そして胃液から微生物及び任意のアジュバントを保護するために働いてよく、コートはしたがって腸溶性コートであってよい。コートは、任意に、他の賦形剤又は活性物質、例えば活性物質において以上の項目で記述した可塑剤を任意に含む、１種類もしくはそれ以上の物質、好ましくはポリマー性の性質（例えば、以下により詳細に記載しているようなメタクリレート類、多糖類など）、又はそのような物質１つ以上の組み合わせを含んでよい。可塑剤を使用する場合、好ましいものとしては、クエン酸トリエチル（ＴＥＣ）などの親水性可塑剤が挙げられ、例えば、以下で記述するようなコーティングとして、オイドラギット（オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ））（登録商標）類のポリマーを使用する場合に特に好ましい。別の好ましい可塑剤としては、ＤＢＳが挙げられ、これについては、エチルセルロースを用いたコーティングと関連させて以下に詳述している。別の、またはそのほか随意に賦形剤に加えられるものとしては、滑剤が挙げられる。滑剤とは、粉末もしくはその他の媒質に加えて流動性を向上させる物質である。典型的な滑剤はタルクであり、コーティングとしてオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（登録商標）類のポリマーを用いる場合に特に好ましい。
【０２８３】
活性物質、例えば本明細書の他の箇所に記載されているように、免疫系を刺激する栄養素（例えば栄養素の組み合わせ）を含む１つ又は複数のコーティングが存在しうる。そのようなコーティングは、速効放出コーティング、遅延放出コーティング又は徐放性コーティングであってよい。そのような栄養素及び／又は他の活性物を含む即放性コーティングは、制御放出コーティングの上部、及び／又は下部、例えば腸溶性コーティング又は浸食され得るコーティングの上部、及び／又は下部に設けられる。
【０２８４】
本発明の実施形態において、組成物は、薬物の放出及び／又は不動化マトリクスの溶解を許容するために、ヒドロゲル形成ポリマーと、更に、薬物の放出、及び／又はコーティングに穿孔を施す（ポレーション）、及び／又は該コーティング内への組成物の露出における所望の遅延（又は他の変化）を得ることが可能なポリマーとを含む。１つの実施形態において、組成物は、２つの種類のポリマーを組み合わせてひとつのポリマー材料とする、または、別異のコートとして組成物に施す。
【０２８５】
制御放出は、更なるコーティングなしに達成可能である。この場合、ポリマーマトリクスは、活性物質の制御放出を目的とした、更なるポリマーを含む。ヒドロゲル形成ポリマーの混合物が本発明によって企図される一方で、多くの実施形態における本発明の組成物には、実質的に、本明細書で記述したもののうち、単独の材料又は材料の型であるポリマーマトリクス材料、及び／又は水性相中の特定の更なる重合性成分の含有なしに固化可能なマトリクスを含む。しかしながら、混合物は、特定の性能特性を達成することが好ましい可能性がある。したがって、特定の抑制物質又は減速物質（減速剤）を、水溶性ポリマーマトリクス内に加えることが望ましい。ある実施形態において、そのような添加は、コート（又はコーティング）を免除することを許容する。抑制物質又は減速物質が水溶性ポリマーマトリクス内に含まれる他の実施形態においては、コート（又はコーティング）が存在してよく望ましい。例えば、（胃のような）酸環境中不溶性である減速物質の添加が、胃中の放出を防止又は遅延させるために選択され、コーティングは必要ではなく、すなわち組成物はコート／コーティングを有さなくてよい。あるいは、酸媒質中可溶性の減速物質の添加が、胃に向けて遠位の腸中での放出を遅延させるために選択されてよい。この場合も、コーティングは必要ではなく、すなわち組成物はコート／コーティングを有さなくてよい。しかしながら、酸媒質中可溶性の減速物質を加えた本発明にしたがった組成物は任意に、特定の利点を達成するために、例えば酸耐性ポリマーでコートされてよい。そのような組成物は、酸耐性ポリマーコートの効果によって、（完全な）胃放出から保護される（又は胃放出が遅延される）。小腸及び大腸の環境はもはや酸性でないので、胃から遠位で、コートの損失に続いて、酸可溶性剤が放出を遅延する。
【０２８６】
酸環境中不溶性の減速物質又は抑制物質は、その溶解性がｐＨ依存である、すなわちより高いｐＨにて可溶性であるポリマーを含む。そのようなポリマーは、以下の「コーティング」という表題の項目にて詳細に記載しており、そのようなポリマーは、コート／コーティングとして、又は水溶性ポリマーマトリクス内へ加えられた減速物質として使用することができる。「コーティング」という表題の以下の項目にて記載された好適な減速物質の例は、ｐＨ５．５以上で可溶性であるので、胃環境中の放出を防止するために使用されるＨＰＭＣＰ（ヒドロキシ−プロピル−メチル−セルロース−フラル酸、またヒプロメロースフタル酸としても公知）である（非酸（塩基）媒質中可溶性のポリマーの他の例に関して当該項目を参照のこと）。ＨＰＭＣＰはまた、造孔剤としても使用してよい。酸環境中可溶性の減速物質又は抑制物質は、その可溶性がｐＨ依存である、すなわちより低いｐＨにて可溶性であるポリマーを含む。そのようなポリマーには、例えばジメチルアミノエチルメタクリレート、ブチルメタクリレート及びメチルメタクリレート系コポリマーのような、カチオン性ポリマーが挙げられる。本発明による使用してよいそのようなカチオン性コポリマーの例は、エヴォニック・インダストリーズ（Ｅｖｏｎｉｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）社から発売されている、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）ＥＰＯである。
【０２８７】
本発明の剤形に、ビーズの複数の集団が含まれてよいことがすでに表明されてきた。コーティングの実施形態内で、集団間の差は、コート中にあり、すなわちビーズの２つ（又はそれ以上）の集団は、その１つがコーティングである種々の面において異なってよい。
【０２８８】
コートは、以下で記述するように施すことができ、厚さ及び密度に関して様々であってよい。コートの量は、本発明の乾燥組成物（例えばビーズ）へ加えた（乾燥組成物によって得られた）重量増加によって定義される。重量増加は好ましくは、０．１％〜５０％、好ましくはビーズの乾燥重量の１％〜１５％の範囲内、より好ましくは、３％〜１０％の範囲内、又は５〜１２％の範囲内、又は８〜１２％の範囲内である。
【０２８９】
重合性コーティング材料は、メタクリル酸コポリマー、アンモニオメタクリレートコポリマー、又はこれらの混合物を含んでよい。例えばオイドラギット（ＥＵＤＲＡＧＩＴ）（商標）Ｓ及びオイドラギット（ＥＵＤＲＡＧＩＴ）（商標）Ｌ（Ｅｖｏｎｉｋ）のような、メタクリル酸コポリマーが特に好適である。これらのポリマーは、胃抵抗性及び腸溶性ポリマーである。これらのポリマーフィルムは、純水及び希釈酸中不溶性である。これらは、それらのカルボン酸の含量に依存して、より高いｐＨにて溶解してよい。オイドラギット（ＥＵＤＲＡＧＩＴ）（商標）Ｓ及びオイドラギット（ＥＵＤＲＡＧＩＴ）（商標）Ｌは、ポリマーコーティング中、単一成分として、又は任意の比での組み合わせで、使用可能である。ポリマーの組み合わせを用いることによって、ポリマー材料が、様々なｐＨレベル、例えばオイドラギット（ＥＵＤＲＡＧＩＴ）（商標）Ｌ及びオイドラギット（ＥＵＤＲＡＧＩＴ）（商標）Ｓが別に可溶性であるｐＨ間にて可溶性を示すことが可能である。特に、コーティングは、本段落中で記述された１つ以上のコポリマーを含む腸溶性コーティングであってよい。特定のコーティング材料は、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）Ｌ３０Ｄ−５５である。
【０２９０】
商標「オイドラギット（ＥＵＤＲＡＧＩＴ）」は、メタクリル酸コポリマー、特にエヴォニック（Ｅｖｏｎｉｋ）社によってオイドラギット（ＥＵＤＲＡＧＩＴ）（商標）のもとで販売されているものを意味するために、本明細書以下で使用される。
【０２９１】
上記コーティングは、ポリマー性材料を含んでおり、該ポリマーは、医薬品として許容される少なくとも１種類の水溶性ポリマーからなる主成分（例えば、総ポリマーコーティング量の５０％以上）、および、随意に、医薬品として許容される少なくとも１種類の水に不溶なポリマーからなる少量成分（例えば、総ポリマーコーティング量の５０％以下）を含む。別の場合には、上記膜コーティングは、医薬品として許容される少なくとも１種類の水に不溶なポリマーからなる主成分（例えば、総ポリマーコーティング量の５０％以上）、および、随意に、医薬品として許容される少なくとも１種類の水溶性のポリマーからなる少量成分（例えば、総ポリマーコーティング量の５０％以下）を含む。
【０２９２】
アンモニオメタクリレートコポリマー類（例えば、エヴォニック（Ｅｖｏｎｉｋ）社から販売されているオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＳおよびオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＬなど）も本発明での使用に適している。これらのポリマーは、生理的ｐＨの全領域にわたって、純水、希釈された酸、緩衝液、および／または消化液に不溶である。該ポリマーは、ｐＨとは無関係に、水および消化液中で膨張する。膨張した状態では、該ポリマーは水を透過させ、活性物質を溶解させる。ポリマーの透過性は、ポリマー内のエチルアクリレート（ＥＡ）基、メチルメタクリレート（ＭＭＡ）基およびトリメチルアンモニオエチルメタクリレートクロリド（ＴＡＭＣＩ）基の比率によって決まる。例えば、ＥＡ：ＭＭＡ：ＴＡＭＣＩの比が１：２：０．２のもの（オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＬ）は、それらを１：２：０．１の割合で含むもの（オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＳ）よりも透過性が高い。オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＬポリマーは、透過性が高い不溶性ポリマーである。オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＳポリマーは、透過性が低い不溶性フィルムである。この種類のポリマーの中で特に好ましい拡散制御性ｐＨ非依存性のものはＲＳ ３０ Ｄであり、これは、エチルアクリレート、メチルメタクリレートおよび少量のメタクリル酸エステルからなるコポリマーであり、四級アンモニウム基が塩として存在して、ポリマーに透過性を付与している。ＲＳ ３０Ｄは水性分散物として市販されている。
【０２９３】
アミノメタクリレートコポリマー類は、任意の比率で混合でき、比率を変更することにより、薬物放出速度を変えられる。例えば、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＳ：オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＬを９０：１０の割合で用いることができる。別の場合には、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＥ：オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＬを約１００：０〜約８０：２０、もしくは約１００：０〜約９０：１０、または任意の比率の範囲で使用できる。そのような調製物においては、一般的に、比較的透過性の低いポリマーであるオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＳをポリマー材料の主成分として含み、溶解性の大きいＲＬとともに用いて、該ポリマーが溶解することで隙間ができ、そこから溶質がミニビーズ内に入り込むことにより、予め溶解している活性物質と接触し、該活性物質を制御放出させる。
【０２９４】
アミノメタクリレートコポリマー類は、コーティング内の組成物が、薬物の所望する遅延放出を行う、および／もしくは、コーティングに穿孔を施すことを目的として、メタクリル酸コポリマー類と組み合わせてポリマー材料とすることができ、これにより、薬物の放出、ならびに／または、固定化ポリマーマトリクスもしくは水溶性ポリマーマトリクスの崩壊が起こる。アミノメタクリレートコポリマー（例えば、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＳなど）のメタクリル酸コポリマーに対する比は、約９９：１〜約２０：８０の範囲とすることができる。２種類の型のポリマーは、組み合わせてひとつのポリマー材料とすることができ、または、ビーズに施す別異のコートとして使用することができる。
【０２９５】
オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＦＳ ３０ Ｄは、メタクリル酸、メチルアクリレートおよびメチルメタクリレートから成る陰イオン性水性アクリル系ポリマー分散物であり、ｐＨ感受性である。このポリマーは、カルボキシル基の含量が少ないことから、ｐＨが高い（＞６．５）環境下で溶解する。このような系の長所は、従来から使用されている粉末重層（レイヤリング）および流動床コーティング技術を使用し、妥当な加工時間で容易に大量生産できることである。更なる例としてはオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）Ｌ３０Ｄ−５５が挙げられ、これは、メタクリル酸を活性基として有する陰イオンコポリマー類の水性分散物である。これは３０％の水性分散物として市販されている。
【０２９６】
上述のオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ポリマー類に加え、その他多数のコポリマー類を用いて薬物の放出制御を行うことができる。このようなものとしては、メタクリレートエステルコポリマー類であるオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＮＥおよびオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＮＭなどが挙げられる。オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ポリマー類に関するさらなる情報は、「医薬品投与剤形への水性ポリマーコーティング（Ａｑｕｅｏｕｓ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｃｏａｔｉｎｇｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ）」中の「ポリメタクリレートコーティング技術の化学および応用（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ Ｃｏａｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ）」（ジェームス・マクギニティ（Ｊａｍｅｓ ＭｃＧｉｎｉｔｙ）編、マーセル・デッカー（Ｍｅｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ）社（ニューヨーク）刊、ｐｐ．１０９−１１４）に記載されている。この内容の全てを参照として本明細書中に取り入れておく。
【０２９７】
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）の何種類かの誘導体もｐＨ依存性溶解性を示し、コーティングとして本発明に使用できる。このようなものとしては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）が挙げられ、これは、腸管上部で迅速に溶解し、また、メチルセルロースアセタートスクシナート（ＨＰＭＣＡＳ）は、分子内にイオン化可能なカルボキシル基が存在することにより、高いｐＨ環境下で溶解する（ＬＦグレードでは＞５．５、ＨＦグレードでは＞６．８）。これらのポリマーは、信越化学（Ｓｈｉｎ−Ｅｔｓｕ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）から販売されている。本明細書に記載しているその他のポリマーと同様に、これらはコーティングに有用であり、ＨＰＭＣおよびその誘導体をオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＬ−３０ Ｄなどのその他のポリマーと組み合わせてもよい。
【０２９８】
用いることができるポリマーコーティング物質は、溶解プロファイル、および／または、本発明に従う組成物に包含されている活性物質の放出性がｐＨ非依存性であるものである。そのような物質の例は既に記載済みである（例えば、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ＲＳおよびＲＬなど）。ｐＨ非依存性ポリマーコーティング物質の別の例としてはエチルセルロースが挙げられる。剤形をコーティングして使用するためのエチルセルロース組成物には、エチルセルロースに加えて、液体組成物の場合、液体賦形剤、１種類もしくはそれ以上の他の成分を含んでもよい。他の成分は、組成物の特徴、例えば安定性を調節するために働く。エチルセルロースは、そのような組成物中の唯一の制御放出ポリマーであってよい。エチルセルロースは、剤形をコーティングして使用するために、組成物の乾燥重量あたり、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも９０重量％、又は少なくとも９５重量％の量であってよい。したがって、エチルセルロースコーティングには、エチルセルロースに加えて、他の成分が含まれてよい。エチルセルロースは、エチルセルロースコーティングの重量あたり、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の量であってよい。
【０２９９】
本発明の組成物に適用することができる特定のエチルセルロースコーティング組成物は、エチルセルロースがミクロン単位以下〜ミクロン単位の大きさ（例えば、約０．１〜１０ミクロンなど）の粒子の分散体となっているものであり、これは、乳化剤（例えば、オレイン酸アンモニウム）の助けで、水に均一に懸濁されている。随意に、そして好ましくは、エチルセルロース分散物は可塑化剤、例えば、セバシン酸ジブチル（ＤＢＳ）または中鎖トリグリセリド類を含む。そのようなエチルセルロース分散物は、例えば、米国特許第４，５０２，８８８号に従って調製でき、該特許の内容を参照として本明細書中に取り入れておく。本発明での仕様に適したそのようなエチルセルロース分散物のひとつとして、シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（登録商標）（カラコン・オブ・ウエストポイント（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ ｏｆ Ｗｅｓｔ Ｐｏｉｎｔ）社（米国ペンシルバニア州））の名称で市販されているものが挙げられる。この製品では、エチルセルロース粒子はオレイン酸および可塑化剤などと混合され、随意に、押し出しおよび溶融されている。次に該溶融可塑化エチルセルロースは、直接乳化され、そのような方法としては、高圧下などで、随意に高剪断混合装置内でアンモニア水と混合することなどがある。イン・サイチュー（ｉｎ ｓｉｔｕ）でオレイン酸アンモニウムが生成し、これは例えば、可塑化エチルセルロース粒子を安定化させ、分散体を形成する。更に精製水を加えて最終固形物とすることもできる。米国特許第４，１２３，４０３号を参照。該特許の内容を参照として本明細書に取り入れておく。
【０３００】
以後、シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（登録商標）をエチルセルロースコーティング材料をさすものとして使用し、これは例えば、エチルセルロースがミクロン単位以下〜ミクロン単位の大きさ（例えば、約０．１〜１０ミクロンなど）の粒子の分散体となっているものであり、これは、乳化剤（例えば、オレイン酸アンモニウム）の助けで、水に均一に懸濁されている。特に、本明細書において用いているシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（登録商標）は、シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（登録商標）の名称でカラコン（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）社から販売されているものをさす。
【０３０１】
シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（登録商標）分散体は、フィルム形成性ポリマー、可塑化剤および安定化剤の組合せの例であり、これをコーティングとして使用することで、ｐＨとは比較的無関係に、再現性よく活性物質の放出を調節できる。薬物放出の基本的方法は、シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（登録商標）分散膜を通しての拡散であり、フィルムの厚さによって直接制御される。コートされた組成物の溶解性を調節することを目的として、シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（登録商標）を用いることは特に好ましく、コーティングに使用するシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（登録商標）の量を増減することによって実現できる。特に明記していない限り、「シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）」という語は、シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）Ｅ−７−１９０２０、Ｅ−７−１９０３０、Ｅ−７−１９０４０またはＥ−７−１９０５０をさしている。Ｅ−７−１９０２０は、エチルセルロースにオレイン酸とセバシン酸ジブチルとを混ぜ、押し出し、溶融したものを含む。溶融可塑化エチルセルロースは、加圧下、高剪断混合装置内で、アンモニア水中で直接乳化する。イン・サイチュー（ｉｎ ｓｉｔｕ）でオレイン酸アンモニウムが生成することにより、可塑化エチルセルロース粒子が安定化し、分散体が形成される。更に精製水を加えて最終固形物とする。随意に、Ｅ−７−１９０３０には、コロイド状無水シリカが分散している。Ｅ−７−１９０４０は、セバシン酸ジブチルの代わりに中鎖トリグリセリドを含んでいる以外はＥ−７−１９０２０と類似している。Ｅ−７−１９０５０は、エチルセルロースにオレイン酸を混ぜた後、溶融押し出ししたものである。溶融可塑化エチルセルロースは、加圧下、高剪断混合装置内で、アンモニア水中で直接乳化する。イン・サイチュー（ｉｎ ｓｉｔｕ）でオレイン酸アンモニウムが生成することにより、可塑化エチルセルロース粒子が安定化し、分散体が形成される。しかしながら、Ｅ−７−１９０４０が好ましい。
【０３０２】
本発明は、シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）にその他のコーティング構成成分を組み合わせて用いることも含み、そのような構成成分としては、アルギン酸ナトリウムなどがあり、例えば、ニュートラテリック（Ｎｕｔｒａｔｅｒｉｃ）（商標）という名称で市販されているアルギン酸ナトリウムなどが挙げられる。
【０３０３】
上述したオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（商標）ポリマー類およびシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（登録商標）ポリマー類に加えて、他のポリマー、特に腸溶性、又はｐＨ依存ポリマーを使用してよい。そのようなポリマーとしては、次のようなものが挙げられる：フタレート、ブチレート、スクシナート、および／またはメリタート基など。そのようなポリマーとしては次のようなものが挙げられるが、これらに限定されるわけではない：酢酸フタル酸セルロース、酢酸コハク酸セルロース、セルロースハイドロジェンフタレート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｈｒｄｒｏｇｅｎ ｐｈｔａｌａｔｅ）、トリメリト酸酢酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセタートスクシナート、酢酸フタル酸デンプン、アミロースアセタートフタレート、ポリビニルアセタートフタレート、およびポリビニルブチラートフタレートなど。さらに、許容されれば、ポリマーの任意の組合せを混ぜ合わせて更なる制御放出または標的放出プロファイルを提供できる。
【０３０４】
コーティングは、すくなくとも１種類の可溶性賦形剤を追有し、ポリマー材料の透過性を増すことができる。好ましくは、少なくとも１種類の可溶性賦形剤を次のものから選択する：可溶性ポリマー、界面活性剤、アルカリ金属塩、有機酸、糖、および糖アルコール。そのような可溶性賦形剤としては、次のようなものが挙げられるが、これらに限定されるわけではない：ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、塩化ナトリウム、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびポリソルベート類など）、有機酸類（例えば、酢酸、アジピン酸、クエン酸、フマル酸、グルタル酸、リンゴ酸、コハク酸および酒石酸など）、糖類（例えば、デキストロース、フルクトース、グルコース、ラクトースおよびショ糖）、糖アルコール類（例えば、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトールおよびキシリトールなど）、キサンタンガム、デキストリン類ならびにマルトデキストリン類など。実施形態に応じて、ポリビニルピロリドンマンニトールおよび／またはポリエチレングリコールを可溶性賦形剤として使用できる。これらの少なくとも１種類の該可溶性賦形剤は、ポリマーの乾燥総重量に対して約１〜約１０重量％の範囲で使用できる。
【０３０５】
放出速度の変更、例えば、放出を遅らせる、または延長するなどは、任意の多数の方法で行える。メカニズムは、腸の局所のｐＨに依存している場合と無関係の場合とがあり、また、局所の酵素活性を活用して所望する効果を得ることもできる。放出を変更した調製物については当該分野において既知であり、次の米国特許に記載されている：第３，８４５，７７０号、第３，９１６，８９９号、第３，５３６，８０９号、第３，５９８，１２３号、第４，００８，７１９号、第５，６７４，５３３号、第５，０５９，５９５号、第、５，５９１，７６７号、第５，１２０，５４８号、第５，０７３，５４３号、第５，６３９，４７６号、第５，３５４，５５６号および５，７３３，５６６号など。これらの全てを参照として本明細書中に取り入れておく。
【０３０６】
シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（商標）又は結腸細菌酵素による（そして任意に、又はあるいは膵臓又は他の関連酵素による）分解を受けやすい第二のポリマー（例えば多糖類、特にヘテロ多糖類）の他のｐＨ依存ポリマー物質への添加は、活性物質の、第二のポリマーが分解される部位又は部位群への活性物の標的放出と、最適な溶解プロファイルを達成するために、本発明の組成物へ添加されたポリマーの量を調節することにおけるフレキシビリティとを提供する。
【０３０７】
かくして、本発明は、結腸内で活性物質を放出することを意図する組成物（本発明の、又はそうではない、いずれかの）のためのコーティングを提供し、該コーティングは、エチルセルロース（好ましくは、オレイン酸アンモニウムなどの乳化剤、および／もしくは可塑化剤（例えば、セバシン酸ジブチルもしくは中鎖トリグリセリドなどと調合されているもの）、ならびに、結腸に常在する細菌の酵素によって分解される多糖類の組合せである。そのような多糖類としては、次のようなものが挙げられる：コンドロイチン硫酸、ペクチン、デキストラン、グァーガムおよびアミロース、キトサンなど、ならびにそれらの任意の誘導体など。結腸特異的放出プロファイルを得るためには、特に好ましいのはキトサンである。本発明は、好ましくは、乳化剤（例えば、オレイン酸アンモニウムなど）および／または可塑化剤（例えば、セバシン酸ジブチルもしくは中鎖トリグリセリドなど）を加えて調製されたエチルセルロースと、結腸内に常在している細菌の酵素によって分解される多糖類との組合せを含む組成物にも関し、該組成物は液体ビヒクル（例えば、水など）を含んでいてもよい。
【０３０８】
多糖類そのものをコーティング剤として使用したが、その効果は限られていた。デンプン以外の多糖類の多くは、フィルム形成特性が良くないという欠点がある。また、多糖類はＧＩ管内で膨潤し、多孔質になる傾向があることから、薬物が早期に放出されてしまう。膵臓のα−アミラーゼによっては分解されないが、結腸の細菌性酵素によって分解されるという性質を持っている無晶性アミロースでさえも、水性媒質中では膨潤するという欠点があるが、このことは、不溶性ポリマー類（例えば、エチルセルロースおよびアクリレート類）をアミロースフィルムに加えることによって制御できる。しかしながら、アミロースは水溶性ではなく、水溶性多糖類を除外するわけではないことから、本発明者らは、細菌性酵素によって分解される水溶性多糖類（ＷＳＰ）を用いることにより、本発明に従う本実施形態のコーティングとして使用した場合に特に優れた結果が得られることを見出した。本発明に従うこの実施形態において特に好ましい多糖類はペクチンである。多様な種類のペクチンを用いることができ、いろいろな等級のもの、すなわち、メチル化の割合（ＤＭ：Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）、つまり、メタノールでエステル化されているカルボキシル基のパーセンテージが異なるものなどが含まれ、そのようなものとしては、例えば、ＤＭが５０％以上であり、高メトキシ（ＨＭ：ｈｉｇｈ ｍｅｔｈｏｘｙ）ペクチンとして知られているもの、もしくは低メトキシ（ＬＭ：ｌｏｗ ｍｅｔｈｏｘｙ）ペクチン、または、ＨＭペクチンとＬＭペクチンとを含む組合せペクチンなどが挙げられる。本実施形態においては、多様な割合のアセチル化（ＤＡｃ：Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ Ａｃｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）ペクチンも使用できる。まとめると、ＤＭおよびＤＡｃまたは置換の程度は、エステル化度（ＤＥ：Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ Ｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）として知られている。本発明に従い、多様なＤＥのペクチンを用いることができる。本発明に従う実施形態においては、ペクチンの代わりにアルギン酸ナトリウムを用いてもよい。しかしながら、その他の実施形態においては、従来通り、アミロースおよび／またはアミロースを含有するデンプンを含んでいてもよい。多様な等級のデンプン、すなわち、アミロースを多様な割合で含有するデンプンを用いることができ、そのようなものとしては、例えば、アミロースを５６％含有するハイロンＶ（Ｈｙｒｏｎ Ｖ）（ナショナル・スターチ・フード・イノヴェーション（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｒｃｈ Ｆｏｏｄ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ）社）または、アミロースを７０％含有するハイロンＶＩＩ（Ｈｙｒｏｎ ＶＩＩ）などが挙げられる。残りの部分はアミロペクチンが占めている。結腸への送達を行うため、すなわち、結腸内で活性物質を放出することを意図する組成物に特に好ましいのは、多糖類であるペクチン、アミロースおよびアルギン酸ナトリウムである。
【０３０９】
ペクチンは、エチルセルロース（好ましくはシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ））が孔を作らない場合には、造孔剤として作用することが知られている。「孔とは、組成物の表面からコアにかけてのシャフト状の穴の意味ではなく、コーティングがもろくなった部分もしくは欠落した部分のことであり、これは、本発明に従うコーティングの上および内部に確率論的に生じるものである。
【０３１０】
造孔剤については、シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）と関連して既に記載している（米国特許出願２００５／０２２０８７８などを参照）が、「胃内で溶解しない」物質としては、アルギン塩酸などが挙げられる。
【０３１１】
本発明の特定の実施形態によれば、水溶性多糖類（ＷＳＰ）がペクチンである場合、エチルセルロースまたはシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（商標）のペクチンに対する比は、理想的には、９０：１０〜９９：１の範囲であり、好ましくは９５：５〜９９：１であり、より好ましくは、９８：２〜９９：１である。
【０３１２】
この特に好ましい組合せ（エチルセルロースもしくはシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）＋ＷＳＰ（ペクチンなど））においては、重量増加およびエチルセルロースもしくはシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）とＷＳＰとの比は、様々に変更してコーティングおよびそのようなコートを有する本発明に従う組成物の挙動を改良することができる。驚くべきことに、コーティングポリマーに関するこの好ましい組合せの効果は、重量増加を０〜３０％（好ましくは５〜１０％）の範囲、エチルセルロースもしくはシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）のペクチンに対する重量比の範囲を９５：５〜９９．５：０．５（好ましくは９７：３〜９９：１）の範囲に選択することによって示された。特に好ましくは、エチルセルロースもしくはシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）を用いる場合の重量増加は、５〜１２％の範囲、または８〜１２％の範囲である。
【０３１３】
上記では、本発明にしたがった組成物からの活性物質の持続性および／もしくは徐放性放出に焦点を当ててきたが、本発明は、コートしていない、もしくは単純な腸溶コートを施された組成物またはその他の剤形をも包含する。それらは、単に組成物が胃内で崩壊するのを防ぐような十分なコーティングを施されており、初期小腸活性物質放出をおこなう。
【０３１４】
（以上／以下でより詳細に記述するような）好適な重合性コートでコートされる前に、本発明の組成物を乾燥させることが好ましい。ある実施形態において、第二を適用する前に、第一のコートを適用することも好ましい。一般に、第一のコートと第二のコートとは、同一又は異なる材料であってよく、本明細書で記述したコーティング材料の任意の分類から選択される。特別な実施形態において、第一のコートは任意に、第二のコートとの相互作用からコア（例えばビーズ）を任意に保護し、及び／又は第二のコートへの組成物成分の浸出を防止する。例えば、第一のコートは、ヒプロメロースを含んでよく、又は、であってよく、例えばヒプロメロース、二酸化チタン及びポリエチレングリコールから作製されてよく、第一のコートは、少なくとも５０重量％のヒプロメロースと、任意に少なくとも７５重量％のヒプロメロース、例えば、少なくとも８０重量％又は少なくとも８５重量％又は９０重量％のヒプロメロースを含んでよい。第一のコートを形成するために使用したコーティング材料はしたがって、以上の文中言及したヒプロメロースの乾燥重量割合を含んでよい。第二の（外側の）コートは、以上で記述したように腸溶性コーティングであってよく、細菌又は他の酵素によって分解可能なポリマーを含むポリマーの混合物を含んでよく、例えば以上で記述したシュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）−ペクチン混合物からなってよい。第一のコートにとって、ヒプロメロース、二酸化チタン及びポリエチレングリコールの混合物を使用することが望ましい場合、そのような混合物に相当する市販品としては、カラコン（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）社によって市販された製品である、オパドライ（Ｏｐａｄｒｙ）ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）などが入手可能である。より一般的に、商標オパドライ（Ｏｐａｄｒｙ）及びオパドライ（Ｏｐａｄｒｙ）ＩＩのもと、市販された種々の製品が言及されてよい。更に非限定例として、オパドライ（Ｏｐａｄｒｙ）ＹＳ−１−７７０６−Ｇホワイト、オパドライ（Ｏｐａｄｒｙ）Ｙｅｌｌｏｗ  ０３Ｂ９２３５７、オパドライ（Ｏｐａｄｒｙ）Ｂｌｕｅ０３Ｂ９０８４２）が挙げられる。これらの組成物は、乾燥フィルムコーティング組成物として販売されており、使用直前に水で希釈する。オパドライ（Ｏｐａｄｒｙ）およびオパドライＩＩ（Ｏｐａｄｒｙ ＩＩ）調製物は、セルロース由来のフィルム形成性ポリマー（例えば、ＨＰＭＣおよび／もしくはＨＰＣなど）を含み、さらに、ポリデキストロース、マルトデキストリン、可塑化剤（例えば、トリアセチン、ポリエチレングリコールなど）、ポリソルベート８０、着色剤（例えば、二酸化チタン、１種類もしくはそれ以上の染料またはレーキなど）、および／または、その他のフィルム形成性ポリマー（例えば、アクリレート−メタクリレートコポリマー類など）などを含んでいる。適切なオパドライ（Ｏｐａｄｒｙ）およびオパドライＩＩ（Ｏｐａｄｒｙ ＩＩ）調製物は、可塑化剤、ならびに１種類もしくはそれ以上のマルトデキストリン、ならびにポリデキストロースを含む。例えば、次のような組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない：ａ）トリアセチン、ならびにポリデキストロースもしくはマルトデキ��トリンもしくはラクトース；あるいは、ｂ）ポリエチレングリコールおよびポリデキストロースもしくはマルトデキストリンなど。特に好ましい市販品は、オパドライ・ホワイト（Ｏｐａｄｒｙ Ｗｈｉｔｅ）（ＨＰＭＣ／ＨＰＣを主材料とする）およびオパドライＩＩ・ホワイト（Ｏｐａｄｒｙ ＩＩ Ｗｈｉｔｅ）（ＰＶＡ／ＰＥＧを主材料とする）である。最初の保護コート用に適した別の（オパドライ（Ｏｐａｄｒｙ）以外の）製品としては、ポリビニルアルコール−ポリエチレングリコールグラフトコポリマー類を含むものがコリコート（Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ）ＩＲという名称で市販されており、メチルメタクリレートアンモニウムを基本物質するコポリマー類がオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）Ｅという名称で市販されている。別の好ましい例としては、低分子量ＨＰＭＣなどが挙げられる。随意に内部コートを、外部（または単独）コート（またはコーティング層）と同様の方法で施す。
【０３１５】
コーティング工程は、任意の適切な方法で実施でき、例えば、組成物にポリマーコート（特に上述したもの）の溶液を塗布するためのコーティング機械を使用する方法などが挙げられる。コーティング用ポリマーは、そのまま使用できるように調合済みの溶液としてメーカーから販売されているものであっても、メーカーの指示に従って使用前に調合するものであってもよい。
【０３１６】
適切なコーティング機械は当業者においては既知であり、例えば、穿孔パンを用いるもの、または流動床系を用いるものなどがあり、具体的には次のようなメーカーが挙げられる：グラット（ＧＬＡＴＴ）社、ヴェクター（Ｖｅｃｔｏｒ）社（例えば、ＣＦ３６０ＥＸなど）、ＡＣＣＥＬＡＣＯＴＡ（アクセラコータ）、ディオスナ（Ｄｉｏｓｎａ）社、オハラ（Ｏ‘Ｈａｒａ）社、および／またはハイコーター（ＨＩＣＯＡＴＥＲ）など。最も好ましいのは、ＭＦＬ−０１流動床コーター（Ｆｌｕｉｄ Ｂｅｄ Ｃｏａｔｅｒ）（フロインド（Ｆｒｅｕｎｄ）社）であり、「ボトムスプレー」配置で使用する。
典型的なコーティング条件は以下の通りである。
【０３１７】
【表１】
2015521997.tif 000004
【０３１８】
本発明の組成物を、１層もしくはそれ以上の層を有する組成物を調製するために、（例えば上記したコーティング機械を用いるような）薬理科学の分野における従来の方法を用いて、活性（栄養素及び／又は薬剤）層でコートしてよく、それぞれの層は、本明細書の他の箇所で記載したような、１種以上の活性栄養素、医薬又は他の成分／賦形剤を含む。薬物重層は、本明細書の他の箇所に記載されいるように、核、例えばビーズ上、溶液、懸濁液又は乾燥粉末いずれかからの、薬物の少なくとも１種、又は連続層の沈着を意味する。活性物質には随意に、賦形剤を含まなくてよく、又は１種以上の賦形剤との組み合わせであってもよい。
【０３１９】
薬物重層には、溶液／懸濁液層化、粉末層化、粉末薬物重層が含まれる。溶液／懸濁液層化において、薬物粒子を、結合液中に溶解又は懸濁する。粉末層化において、活性物質の結合液中の溶解性にかかわらず、低脂質飽和により完全溶解は生じない。粉末薬物重層において、結合剤溶液を先ず、予め調製したシーズ、例えば本明細書に記載したようなビーズ上に噴霧し、続いて粉末を添加する。流動層や遠心回転造粒機を含む、パン塗工機の改造機が好ましいが、上記で記載したような従来のパン塗工機をポリマーコーティングのために使用することができる。好適な造粒機の例としては、Ｒｏｔｏｒ造粒機（Ｇｌａｔｔ）、Ｒｏｔｏｒプロセッサ（Ａｅｒｏｍａｔｉｃ）、Ｓｐｉｒ−ａ−Ｆｌｏｗ（フロインド（Ｆｒｅｕｎｄ））及びＣＦ造粒機（フロインド（Ｆｒｅｕｎｄ））が挙げられる。
【０３２０】
本発明の組成物に適用してよく、及び／又は本発明の製造方法に組み込んでよい、薬物重層技術の更なる例は、ルオ（Ｌｕｏ）らのインターナショナル・ジャーナル・オブ・ファーマシューティカルズ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，３５８，（２００８），ページ１６〜２２）に記述されたような乾燥コーティングである。ルオ（Ｌｕｏ）らは、本発明での使用のために好適な乾燥コーティング方法、静電ドライコーティング、可塑剤ドライコーティング、熱ドライコーティング、及び可塑剤・静電・熱ドライコーティングなど多数を記載している。熱ドライコーティングは、熱と、生じる粉末粒子の部分的に融解した表面を、単独の結合力として使用する。コーティング工程は、活性物質を含むコーティング材料を、スフェロナイザー中、ビーズ上に広げることによって達成される。コーティング材料は、例えばスクリュー動力フィーダーによって、ビーズ上に広げる。コーティング材料は、本技術分野で公知の任意の手段によって（例えば赤外線ランプで）加熱される。本技術は、純粋なコーティング材料とともに、又は可塑剤を前投与したコーティング材料とともに使用可能である。
【０３２１】
ある実施形態において、薬物重層材料は、活性物質、例えば栄養素と、界面活性剤、特に自己組織体を形成するために有用な、本明細書で記載されるような界面活性剤と、随意に、ヒドロゲル形成ポリマーと混合した自己組織体形成界面活性剤と同一の界面活性剤とを含む。薬物重層にて使用した界面活性剤は、都合よく、室温にて固体のワックス状界面活性剤（特に２５℃にて固体であり、３０℃にて望ましくは固体である）である。そのような薬物重層は、インターナショナル・ジャーナル・オブ・ファーマシューティカルズ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ），３５８，（２００８）、ページ１６〜２２中、ルオ（Ｌｕｏ）らによって記載された技術にしたがって行うことができる。界面活性剤は、以上で開示したものから選択してよく、したがって、例えば脂肪酸のマクロゴールエステル、特にマクロゴール−１５−ヒドロキシステアリン酸塩、より具体的にはコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５であってよい。代表的な例において、本発明の組成物（特にビーズ）を、活性物質とマクロゴール−１５−ヒドロキシステアリン酸とともに重層化する。本発明はしたがって、界面活性剤、例えばマクロゴール−１５−ヒドロキシステアリン酸と、薬物とを含む少なくとも１層を含む、１層又は複数層を有する組成物を含む。ある実施形態において、マクロゴール−１５−ヒドロキシステアリン酸又は他の界面活性剤を、上記した熱ドライコーティング技術を用いてビーズ上に重層化する。前記少なくとも１層中に加えられる界面活性剤は、自己組織体を形成する界面活性剤と同一であってもよく、又は異なってもよい。
【０３２２】
薬物重層のためのシーズとしての、本発明のビーズの使用は、薬物重層工程によるペレットの調製における初期物質として従来のノンパレルを使用することより優れている。１つの理由は、本発明のビーズが最適なサイズであることによる。別の理由は、従来のノンパレルの主要成分であるスクロースが、糖尿病における有害な影響及び潜在的発癌性を含む公知の弱点を有することである。発明者／出願人らは、本発明の実施形態に用いられうる遠心顆粒化工程における、初期コア／ビーズの調製のための微晶質性セルロース（ＭＣＣ）の効率的な使用に気づいていないけれども、先行技術によればＭＣＣは薬物重層用物質としても試験されてきた。したがって１つの実施形態において、本発明は、本明細書で記載した、薬物がコートされているビーズを、シーズとして、又はノンパレルとして（すなわちノンパレルの代わりに）使用することを含む、薬物でコートされたペレットの製造方法を提供する。関連する実施形態において、本発明の組成物は、１層または２層以上の薬物層でコートされた本開示のビーズを含む。別の実施形態は、噴霧乾燥系工程を含む、上記した薬物重層の方法の１つ以上を用いることによって、貧水溶性活性物質の可溶性を促進する工程である。以上で詳細に記載した重合性コートは、薬物重層されたビーズに施しても施さなくてもよい。しかしながら、望むのであれば、そのような薬物重層の後に施すことができる。薬物層を施す際において、ビーズ上に層化される薬物は随意に、先ず例えば本明細書の他の箇所に記載された結合剤のような、適切な賦形剤と混合しうる。本文脈中、特定の好ましい結合剤は、ポリビニル・ピロリドン（またポリビニルピロリドンとも表記され、ＰＶＰ又はポビドンとしても知られている）である。種々のＫ値のＰＶＰを使用してよい。ＰＶＰのＫ値は、その平均分子量、重合化の程度、及び固有粘度の関数である。ＰＶＰ  Ｋ−３２を使用することが特に好ましい。本実施形態において、本発明の組成物の乾燥重量の５％までを、そのような結合剤としてよい。好ましくは約１％未満である。薬物重層に使用してよい他の好適な結合剤としては、ゼラチン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロール、水酸化デンプン、例えばマルトデキストリンが挙げられる。薬物重層を実施する組成物はまた随意に、本ポリマーコート中の同一又は異なる活性物質を含むためのオプションを含む、より一般に上記したような、放出を制御するために、ポリマーコーティングによってコートされてもよい。
【０３２３】
本発明はしたがって、
（ｉ）ミセル及び／又はミセル前駆体、及び（ｉｉ）生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される抗原を含む活性物質が分散した、ヒドロゲル形成ポリマーマトリクス材料を含む、又はそれからなるコアと、
該コアを取り囲み、前記コア中に含まれる活性物質と同一、又は異なってよい、活性物質を含む層であって、前記活性物質層は制御放出特性又は他の機能性も随意に有する活性物質層と、
を含む層状のビーズを含む。前記コアは更にアジュバントを含んでよい。任意のアジュバントと抗原が、ミセル及び／又はミセル前駆体中に含まれてよく、又はポリマーマトリクス内に含まれてよく、又は両方に含まれてよい。
【０３２４】
層状のビーズは、活性物質を含む、複数の層、例えば２層、３層、４層又は５層を有してよく、各層の活性物質は、他の各層の活性物質から独立して選択される。１つの実施形態において、各層には、他の各層と同一の活性物質が含まれ、どの２つの層も同一の活性物質を含まない。本段落中の用語「活性物質」は、単一の活性要素、及び活性要素の組み合わせを包含する。層状のビーズは、より一般に上記したような放出を制御するために、１層又は２層以上のポリマー層を含んでよい。そのようなポリマー層は、活性物質を含んでよく、したがって、薬物層並びに放出制御層を構成する。あるいは、ポリマー層は、活性物質を含まなくてよい。ポリマー層は、活性物質を含む、含まないに関わらず、コアと、ポリマー層の外の薬物層の間、又は２つの薬物層の間に局在してよく、又は外層を形成してもよい。
【０３２５】
本発明はしたがって、
ヒドロゲル形成ポリマーを含むマトリクスを含む、又はそれからなるコアであって、該マトリクス内に含まれる、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物と、界面活性剤と、アジュバントと、を含むコアと、
該コアを取り囲み、前記コアに含まれる活性物質と同一、又は異なってよい、活性物質を含む、活性物質層であって、制御放出特性又は他の機能性も任意に有する活性物質層と、
活性物質を含まないポリマー層と、
を含む層状のビーズを含む。
【０３２６】
ポリマー層は、コアと活性物質層との間に局在してよい。ポリマー層は、活性物質層の外に局在してよい。層状のビーズは、複数の活性物質層を含んでよく、更に、又はあるいは、複数のポリマー層を含んでよい。いくかの実施形態において、放出制御ポリマーを含む、少なくとも１つの活性物質層が存在する。いくつかの実施形態において、最外層は、放出制御ポリマーを含み、活性物質を含むか、他の実施において、活性物質を含まなくてよい。
【０３２７】
本発明の任意にコートされたビーズは、上記した方法にて、それらの製造に直接したがって、調製してよい。代替実施形態において、ビーズ、及び／又は最終剤形に、異なる特性を付与することが望ましい。本発明にしたがって、これを達成する１つの方法は、例えば結合剤に関連して上記したような他の成分とビーズの粉末混合物の流れを改善するために、造粒することである。無傷又は破損したビーズの顆粒は、液体（例えば結合剤又は溶媒溶液）を加え、先行技術に記載されたような造粒工程を実施することによって得られる。より大きな量の液体の造粒は、より狭い粒子サイズ範囲と、より粗く、より堅い顆粒を調製する、すなわち微細な顆粒粒子の割合が減少する。所定の粒子サイズを得るために必要な最適な液体の量は、バッチ対バッチの変動を最小化するために選択できる。本実施形態によれば、湿潤顆粒化を用いることで、流動性、圧縮率、バイオアベイラビリティ、均質性、静電特性、及び固体剤形として提示された本発明の組成物の安定性を改善する。湿潤顆粒化は、流動性、圧縮率、バイオアベイラビリティ、及び低用量ブレンドの均質性、粉末の静電特性及び剤形の安定性を改良するために使用してよい。本実施形態にしたがった湿潤顆粒化工程では、低粘度液体（好ましくは水）を、ビーズを含む調製物の残りと予め乾燥混合した結合剤を含む粉末ブレンドに加える、低又は高剪断混合装置を用いることができる。使用してよい他の顆粒化アプローチとしては、高剪断、押出、従来の湿潤顆粒化が挙げられる。
【０３２８】
剤形
更なる様態において、本発明は、本発明のビーズの集団を含む剤形を提供する。剤形のビーズは、ヒドロゲル形成ポリマーと、界面活性剤と、活性物質とを含む。剤形のビーズは任意に（上記したように）コートされてよい。ある実施形態において、剤形は、ビーズの少なくとも２つの集団を含んでよい。
【０３２９】
剤形のビーズが、活性医薬成分である、活性物質を含む場合、剤形は、医薬使用のために好適である。
【０３３０】
ヒドロゲル形成ポリマーと、本ポリマー内に分散したミセルの形態の界面活性剤と、活性物質とを含むビーズを調製することによって、剤形を得ることが可能である。随意に、ビーズはコートされ、任意のコーティングが、胃腸管（ＧＩＴ）中の公知の、又は所望の放出プロファイルを提供するような方法で調製されてよい。ビーズの集団を次に、当業者に公知の手段によって剤形を調製するために、（以下で記述するように）好適な単一の単位剤形に調製する。剤形を更に加工してＧＩＴ内の活性物質の変更放出速度を許容してもよい。
【０３３１】
ある実施形態において、剤形は、例えばヒト又は動物への投与のために好適な単位剤形中、本発明のビーズの集団を含む。単位剤形は、カプセル、錠剤、スプリンクル、サシェ、座薬、ペッサリー又は他の好適な単位剤形から選択される。
【０３３２】
実施形態において、ビーズの集団を含む剤形は、単一の単位剤形として提供され、例えば、ビーズを例えば胃中で放出する、単一ハードゲルカプセル中に含有させてよい。あるいは、ビーズを、サシェや、ビーズが食物に、又は飲料内にまかれたり、又は供給チューブ、例えば経鼻胃チューブ又は十二指腸供給チューブを介して投与することを許容する他の容器中で提供してよい。あるいは、ビーズを、錠剤として投与（例えばビーズの集団を以下で記述するように単一錠剤へ圧縮した場合）してよい。あるいはビーズを特殊化ボトルキャップ内に充填、例えば圧縮してよく、又は例えばボトルキャップをひねる際に、ビーズがボトル又はバイアルの流体又は他の含有物内に放出され、ビーズが、そのような含有物中、撹拌あり又はなしで分散（又は溶解）するように、特殊化ボトルキャップ又は密封された容器（又は密封されるべき容器）の他の要素中の空間を充たす。例としては、ヒューマン・ファーマ・インターナショナル（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（ＨＰＩ））Ｓ．ｐ．Ａ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙによって製造されたスマート・デリバリー・キャップ（Ｓｍａｒｔ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｃａｐ）である。
【０３３３】
剤形は、本発明のビーズが、例えば（製剤分野の当業者に公知の適切な油又は粉末系結合剤及び／又は充填剤と共に任意で、本発明の組成物中と同様のＡＰＩ、又は異なるＡＰＩを含み、好ましい例は、本発明の組成物が、シクロスポリンの即時又は制御放出を含むビーズの形態を取り、結合剤又は充填剤がＭＭＦ（ミコフェノール酸モフェチル、免疫抑制剤）を含む場合である）同一の形状の単一成型形態とは異なる条件において、異なる速度で分解する複数のビーズの圧縮を介して、より大量のビーズを作製するために更に開発されうるような方法にて調製されてよい。より大きな（例えば圧縮された）量はそれ自身が、ピル形状、錠剤形状、カプセル形状等を含む様々な形状をとってよい。ビーズ実施形態のこのバージョンが解決する特定の問題は、典型的に、粉末又はペレットで充たしたハードゲルカプセルで見られる、（沈降した微粒子含有物上の）「デッドスペース」及び／又は（微粒子含有物要素間の）「空洞スペース」である。そのようなデッド／空洞スペースを有するペレット又は粉末充填カプセルにおいて、患者は、カプセルがそのようデッドスペースを含まない場合に、必要とするよりも大きなカプセルを飲み込む必要がある。本発明の本実施形態のビーズは、カプセル又はシェルどちらでも、デッド／空洞スペースが非常に減少した、例えば本質的にはまったくない内部形状を採用するために、カプセル内で容易に圧縮されうる。あるいは、デッド又は空洞スペースを、ビーズを、例えば不活性であってよいか、例えば透過性増強又は溶解増強のような機能特性を有してよく、又はビーズ内の任意の活性物質と同一、又は異なる活性物質を含んでよい油のような賦形剤内に懸濁することによって、役立つように使用可能である。例えば、ハードゼラチンカプセルを、未コート及び／又はコートビーズと混合した液体媒質で充たしてよい。液体媒質は、１つ以上の、本明細書で記述した界面活性剤相成分であってよく、又は１つ以上の界面活性剤であってよい。特に好ましいが、非限定例であるものは、コーン油、（商標ＳＰＡＮ８５として販売される）トリオレイン酸ソルビタン、（商標ラブラファック（Ｌａｂｒａｆａｃ）として販売される）プロピレングリコールジカプリロカプレート、（商標トランクトール（Ｔｒａｎｃｕｔｏｌ）Ｐとして販売される）２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、及び（商標Ｔｗｅｅｎ８０として販売される）ポリソルベート８０が挙げられる。本実施形態中使用してよい、活性物質を含む液体媒質の例は、市販されているシクロスポリンプレマイクロエマルジョン、ネオラール（Ｎｅｏｒａｌ）（商標）である。ネオラール（Ｎｅｏｒａｌ）中、本発明にしたがってビーズを調製し、ハードゲルカプセルを充たすことが特に好ましい。
【０３３４】
そのようにして提示されたビーズは、単一種類（又は集団）のものであってよく、本明細書で記述した１つ以上の特徴に関して、集団間で異なる多種類（又は集団）、例えば異なる活性物質又は異なる賦形剤、又は異なる物理的形状、コートされた、多重コートされた、未コート等、のものであってよい。
【０３３５】
代表的な実施形態において、剤形のビーズは、少なくとも以下の材料、ヒドロゲル形成ポリマー、界面活性剤、及び生、死滅、弱毒化、不活化微生物から選択される微生物、と一緒に混合すること、ならびに随意に更に、アジュバントと一緒に混合することによって、自己組織体分散体を予め形成することによって形成される。分散体を、単一のオリフィスノズルから、好適な冷却液体内に排出することによって、固化ビーズ内に固定する。乾燥液体の除去と任意の随意的なコーティングに続いて、ビーズを、医薬使用に好適なゼラチンカプセル内に充填する。
【０３３６】
いくつかの実施形態において、剤形は、ＧＩＴ、例えば結腸内の特定の位置で、１つ以上の活性物質を放出するような方法で、適切に調製された。
【０３３７】
剤形が、少なくとも２つのビーズの集団を含む場合、少なくともビーズの一部（例えば第一集団）に、１つの活性物質（又は１つより多く）が含まれ、他のビーズ（第二集団）が１つの活性物質（又は１より多く）を含んでよい。少なくとも１つの集団が、生、死滅、弱毒化、不活化微生物から選択される微生物を含む活性物質を含み、随意にアジュバントを含む。１つの集団は、活性物質を含まなくてよく、「不活性化」物質、例えば酵素又は毒素封鎖剤を含んでよく、又は他の集団における活性物質の効果を増強する、穏和する又は促進してよい、活性賦形剤、例えば透過性増強剤を含んでよい。関連した実施形態において、本発明の剤形は、ビーズの複数集団を含んでよい。活性物質は、集団間で同一又は異なってよい。ビーズの２つの集団は、ある実施形態において、同一又は異なる活性物質の異なる放出プロファイルを提供するように、単独で、又は複数でのいずれかで、異なってコートされてよい。
【０３３８】
本発明の剤形は、経口投与に好適である。
【０３３９】
本発明は、したがって、本発明の複数の成形単位、例えばビーズを含む経口剤形を含む。
【０３４０】
組成物が、少なくとも２種の活性物質を含む場合、組成物はすでに記述されたように、共放出のために、（ポリマー相又は界面活性剤相内、又は両方いずれかで）ヒドロゲル形成ポリマービーズ又は成形単位内に、少なくとも２種の薬剤（１つは生、死滅、弱毒化、不活化微生物から選択される微生物）を含んでよく、及び／又は連続、例えばパルス放出のために、組成物の異なる部分において、少なくとも２種の薬剤を含んでよい。連続放出の観点から、組成物は、ヒドロゲル形成ポリマービーズ又は成形単位内に（ポリマー相又は界面活性剤相内、又は両方いずれかで）活性物質を含み、且つコーティング層内で活性物質を含んでよく、随意に２種以上の活性物質を、異なるコーティング層内に、又は同一の活性物質を２層以上の異なるコーティング層内に含んでよい。
【実施例】
【０３４１】
以下の実施例において、全てのパーセンテージ及び比は重量による。
実施例は、一般に球形状で、典型的に１〜２ｎｍの直径を有するビーズの調製を記述している。ビーズは、以下の一般法にしたがって製造される。
【０３４２】
調製方法
界面活性剤相
抗原（すなわち微生物）とアジュバントとを、コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５中に溶解／分散する。抗原又はアジュバントを水溶液として供給し、この溶液を、均一な混合が達成されるまで、コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５と混合する。温度を３５〜４０℃に維持して、液体としてコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳを維持する。
ゼラチン相
【０３４３】
Ｄ−ソルビトールを室温にて水中に溶解し、ゼラチンを加え、温度を６０〜７０℃まで上昇させる。溶液を、成分が完全に溶解するまで撹拌する。（アジュバント水溶液を、必要であればゼラチン相を調製するために、随意に水との組み合わせで使用可能であるが、本選択肢は実施例の特徴ではない。）
【０３４４】
２つの相の混合
界面活性剤相とゼラチン相を、（表１にて示すように）異なるｗ／ｗ比で混合する。得られた混合液を、６０〜７０℃で撹拌して均一にする。均一な溶液を、単一オリフィスを通して排出して液滴を形成し、８〜１０℃にて冷却用油媒質ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）８１０Ｎに落とした。ノズルの口径は０．５〜３．５ｍｍである。
約３０分後、冷却油溶液からビーズを回収し、遠心分離して、余分な油を除去した後、室温で乾燥させた。
全ての調製物は、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）Ｌ３０  Ｄ−５５でコートされていた。
【０３４５】
本明細書の実施例において、以下の製造で得た最終乾燥ビーズ中に存在する細胞の数は測定しなかった。したがって、実験にて使用したビーズ中で引用された抗原レベルは、ビーズの調製にて使用した全ての細胞が最終乾燥ビーズ中に存在したと仮定する目標レベルである。マウス研究にて使用した最終乾燥ビーズ中の細胞の実際の数はしたがって、ビーズの調製の間の損失の結果として、目標レベルよりも低かった可能性がある。
【０３４６】
ＥＴＥＣ組成物
具体的には、調製物１及び２を以下の通りに得た。
調製物１
【０３４７】
界面活性剤予備混合物：コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５（１８．０２％）、ＥＴＥＣ懸濁液＊（８１．９８％）
水性予備混合物：ゼラチン（１７．１５％）、Ｄ−ソルビトール（１．６８％）、ＥＴＥＣ懸濁液＊（８１．１８％）
＊ＥＴＥＣ懸濁液は、細胞１×１０１０個／グラムを含む。
２つの相を、１：１．６９界面活性剤予備混合物対水性予備混合物の重量比で混合する。
【０３４８】
乾燥組成物
【０３４９】
【表２】
2015521997.tif 000005
【０３５０】
注：４．８×１０１０個のＥＴＥＣ細胞を使用して、調製物１を製造した。１０９３．１ｍｇのバッチサイズ及び１ビーズ＝２．１ｍｇの平均重量を考慮すると、バッチ中のビーズの総数は、１０９３．１ｍｇ／２．１＝５２１ビーズである。ＥＴＥＣ細胞／ビーズの濃度はしたがって、４．８×１０１０／５２１＝細胞９．２×１０７個／ビーズである。
ビーズを、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）Ｌ  ３０  Ｄ−５５の５．９％重量増加を達成するようにコートした。
【０３５１】
調製物２
界面活性剤予備混合物：コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５（１４．８１％）、αＧａｌＣｅｒ（０．０８％）、ＥＴＥＣ懸濁液＊（８５．１１％）
水性予備混合物：ゼラチン（１７．１７％）、Ｄ−ソルビトール（１．７１％）、ＥＴＥＣ懸濁液＊（８１．１１２％）
＊ＥＴＥＣ懸濁液は、細胞１×１０１０個／グラムを含む。
２つの相を、１：１．４３界面活性剤予備混合物対水性予備混合物の重量比で混合する。
【０３５２】
乾燥組成物
【０３５３】
【表３】
2015521997.tif 000006
【０３５４】
注：４．８×１０１０個のＥＴＥＣ細胞を使用して、調製物１を製造した。１０８４．４ｍｇのバッチサイズ及び１ビーズ＝２．１ｍｇの平均重量を考慮すると、バッチ中のビーズの総数は、１０８４．４ｍｇ／２．１＝５１７ビーズである。ＥＴＥＣ細胞／ビーズの濃度はしたがって、４．８×１０１０／５２１＝細胞９．３×１０７個／ビーズである。
１０８４．４ｍｇ乾燥重量のバッチサイズを考慮すると、バッチ内の各成分の絶対量（乾燥重量）は以下の通りであった。
【０３５５】
【表４】
2015521997.tif 000007
【０３５６】
調製物２の種々の比の概要を以下の表で提示する。
【０３５７】
【表５】
2015521997.tif 000008
【０３５８】
注：以上の計算した数値は、ＥＴＥＣ懸濁中の水の重量と、ビーズ内の残余水の重量を無視した概算である。
【０３５９】
本段落の教示を、本明細書の全ての適合する実施形態及び全ての適合する請求項を含む、本明細書の全開示に適用する。本発明には、以下の表の特徴１、特徴２、特徴３及び特徴５から選択された特徴を有する組成物が含まれる。表中、用語「細胞」は、対象の組成物の微生物細胞、例えば本明細書で参照する任意の細菌、真菌又は単細胞病原体を言う。
【０３６０】
【表６】
2015521997.tif 000009
【０３６１】
本発明は、（先の段落にて記述したように）その全ての開示にわたって更に、上記の表の特徴の、以下の組み合わせのいずれか１つを有する組成物を含む。
範囲１に対して、特徴１＆特徴２、特徴１＆特徴３、特徴１＆特徴４、特徴２＆特徴３、特徴２＆特徴４、特徴３＆特徴４、特徴１＆特徴２＆特徴３、特徴１＆特徴３＆特徴４、特徴１＆特徴２＆特徴４、特徴２＆特徴３＆特徴４、特徴１＆特徴２＆特徴３＆特徴４。範囲２に対して、特徴１＆特徴２、特徴１＆特徴３、特徴１＆特徴４、特徴２＆特徴３、特徴２＆特徴４、特徴３＆特徴４、特徴１＆特徴２＆特徴３、特徴１＆特徴３＆特徴４、特徴１＆特徴２＆特徴４、特徴２＆特徴３＆特徴４、特徴１＆特徴２＆特徴３＆特徴４。
【０３６２】
本発明は、その全ての開示にわたり、以下の、細胞に対するアジュバントの比（乾燥重量ｍｇ対細胞１０１０個）のいずれかを有する組成物を更に含む。０．１〜１００ｍｇ：細胞１０１０個、０．２〜１０ｍｇ：細胞１０１０個、０．２５〜１０ｍｇ：細胞１０１０個、０．４〜１０ｍｇ：細胞１０１０個、０．２〜５ｍｇ：細胞１０１０個胞、０．２５〜５ｍｇ：細胞１０１０個、０．４〜５ｍｇ：細胞１０１０個、１〜１０ｍｇ：細胞１０１０個、２〜１０ｍｇ：細胞１０１０個、４〜１０ｍｇ：細胞１０１０個、１０〜１００ｍｇ：細胞１０１０個、２５〜１００ｍｇ：細胞１０１０個、５０ｍｇ〜１００ｍｇ：細胞１０１０個、１０〜５０ｍｇ：細胞１０１０個、１０〜３０ｍｇ：細胞１０１０個、１０ｍｇ〜２０ｍｇ：細胞１０１０個。本段落の教示は、たとえば、範囲１及び２に関して、以上の表中の特徴１、２及び３のそれぞれに対して、そして直前の段落中に言及した特徴１、２及び３の２つ又は３つの組み合わせに対して適用する。微生物は、例えば細菌及び単細胞真菌から選択される１つ以上の単細胞微生物からなってよく、単細胞微生物の総量に対するアジュバントの比（アジュバントのｍｇ乾燥重量対細胞１０１０個）はこの場合、本段落において既に、そして本明細書の他の箇所で引用されたものであってよい。微生物は、任意の１以上、例えば１、２又は３つの本明細書に記載の微生物を含んでよいか、又はであってよい。微生物には、任意の１以上、例えば１、２又は３つの本明細書に記載の細菌が含まれてよく、又はであってよい。微生物には、ＥＴＥＣが含まれてよく、又はであってよい。微生物には、ｈ．ピロリが含まれてよく、又はであってよい。微生物には、コレラ菌が含まれてよく、又はであってよい。
【０３６３】
本発明はしたがって、そのすべての開示にわたって、微生物が1種以上の単細胞微生物からなる組成物を含む。そのような組成物において、界面活性剤の、単細胞微生物の総量に対する比（界面活性剤のｍｇ乾燥重量対細胞１０１０個）は、例えば１０〜２００ｍｇ：細胞１０１０個、随意に２５〜１２５ｍｇ：細胞１０１０個、例えば２５〜１５０ｍｇ：細胞１０１０個、２５〜１００ｍｇ：細胞１０１０個、５０〜２００ｍｇ：細胞１０１０個、５０〜１００ｍｇ：細胞１０１０個又は６０〜９０ｍｇ：細胞１０１０個、であってよい。
【０３６４】
実施例における、アジュバントの界面活性剤（コリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ）に対する乾燥重量比は、約１７５：１であり、これは、本開示の全範囲にわたって適用可能な任意の比である。また、２００：１以下、１５０：１以下、１００：１以下及び５０：１以下の任意比が、本開示の全範囲にわたって適用可能として記載されうる。
【０３６５】
ビーズを、ＭＦＬ０１上にコートして、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）Ｌ３０  Ｄ−５５の５．５％重量増加を達成した。
調製した調製物１及び２の要約を以下の表にて示す。
【０３６６】
【表７】
2015521997.tif 000010
【０３６７】
上の表で示した抗原（ＥＴＥＣ）は、ホルマリン死滅大腸菌Ｋ１２細菌（表面上にＣＦＡ／Ｉ線毛を発現している）を含んだ。
【０３６８】
以上の組成物は、（アジュバントとしてα―ＧａｌＣｅｒあり、又はなしで）これらの組成物でのマウスの経口免疫化が、強力な粘膜及び全身性抗体応答を誘導したのかどうか、及びその程度の判定に用いた。
【０３６９】
メスＢＡＬＢ／ｃマウスを、対照として重炭酸緩衝液、又は重炭酸緩衝液中ＥＴＥＣ（細胞３×１０８個／用量）単独、又はアジュバントとして、α−ＧａｌＣｅｒ（１０μｇ／用量）又はコレラ毒素（ＣＴ；１０μｇ／用量）と一緒に、０日目及び１日目に強制経口投与により免疫化するか、又はＥＴＥＣ（細胞３×１０８個／用量）を単独、又はα−ＧａｌＣｅｒ（１０μｇ／用量）と一緒に含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）で、経口免疫した。マウスを、１３日目、１４日目、２７日目及び２８日目に、同じ一連の免疫化で追加免疫した。ＩｇＧ及びＩｇＡ抗体力価の決定のために、マウスの複数群（ｎ＝５）から、追加免疫の１日前、及び最終投与の１２日後に血液採取した。糞便ペレットを全てのマウスから、追加免疫の１日前と、最終免疫化の１２日後に回収して、粘膜抗体応答を測定した。最終免疫化の２週間後、マウスをと殺し、腸洗浄液を回収した。マウスの小腸及び大腸の抽出物もまた得て、サポニンを使用して、粘膜抗体の続く解析のために、プロテアーゼ阻害剤を含む緩衝液中で凍結し、腸からのタンパク質を抽出した。
【０３７０】
実験群
１．重炭酸緩衝液
２．ＥＴＥＣ
３．ＥＴＥＣ  ＋  α−ＧａｌＣｅｒ
４．ＥＴＥＣ  ＋  ＣＴ
５．ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）（ＥＴＥＣ）
６．ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）（ＥＴＥＣ  ＋  α−ＧａｌＣｅｒ）
【０３７１】
増強された抗体応答が、非アジュバント化ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）ワクチンにて、又は溶液中ＥＴＥＣにて免疫化したマウスと比較して、ＥＴＥＣとα−ＧａｌＣｅｒとを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）で免疫化したマウスの血清、糞便ペレット、唾液及び腸洗浄液にて見られた。
ＥＴＥＣ組成物における結果
図１〜８を参照のこと
【０３７２】
溶液中ＥＴＥＣのみ：溶液中ＥＴＥＣワクチンによるマウスの経口免疫化は、抗原特異的ＩｇＡ抗体応答を誘導しなかった。ＣＦＡ／Ｉ特異的ＩｇＡは、本ワクチンで免疫化したマウスの１／５の糞便ペレット（図２）又は血清（図４）で検出可能であったのみであった。
【０３７３】
溶液中ＥＴＥＣ  ＋  α−ＧａｌＣｅｒ：溶液中アジュバントとしてのα−ＧａｌＣｅｒの添加は、溶液中ＥＴＥＣのみと比較して、粘膜又は全身いずれにおいても、抗原特異的抗体力価の有意な増強とはならなかった。
【０３７４】
ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）（ＥＴＥＣのみ）：非アジュバント化ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）調製物としてのＥＴＥＣワクチンの送達は、免疫化マウスの糞便ペレット（図１及び２）又は腸（図６、７及び８）中の検出可能な粘膜抗体とはならなかった。更に、全身性抗体応答は、溶液中ＥＴＥＣワクチンを経口投与されたマウス（図３及び４）と比較して、本調製物で免疫化されたマウスでは有意には増強されなかった。
【０３７５】
ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）（ＥＴＥＣ  ＋  α−ＧａｌＣｅｒ）：アジュバントとしてα−ＧａｌＣｅｒと一緒のＳｍＰｉｌｌ（登録商標）としてのＥＴＥＣの送達は、最終経口免疫化の後、全ての免疫化マウスの糞便ペレット（図２）、血清（図４）及び腸（図７）中の特異的ＩｇＡ応答を誘導した。本ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）調製物で免疫化したマウスからの糞便ペレットは、溶液中ＥＴＥＣ  ＋  α−ＧａｌＣｅｒ、又はＥｍＰｉｌｌ（登録商標）中ＥＴＥＣのみいずれかと比較して、有意に高い粘膜ＩｇＡ及びＩｇＧ（図１）を含んだ。特異的ＩｇＡ抗体は、ワクチン接種の第二シリーズ後に検出されたが、ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）調製物の増強効果は、免疫化の第三シリーズの後に最も明確にみられた。更に、サポニンによる腸タンパク質の抽出の後、溶液中又はＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中いずれかの非アジュバント化ワクチンを投与したマウスと比較して、有意により大きな抗原特異的ＩｇＧ及びＩｇＡ抗体力価が、ＥＴＥＣ及びα−ＧａｌＣｅｒを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）で経口免疫化したマウスの腸で見られた（図７及び８）。有意に増強したＣＦＡ／Ｉ特異的ＩｇＧ抗体がまた、ＥＴＥＣ及びα−ＧａｌＣｅｒを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）で免疫化したマウスの小腸洗浄液中でみられた（図６）。
【０３７６】
全身性ＩｇＡ及びＩｇＧに関して、最も強力な応答は、再び、ＥＴＥＣ及びα−ＧａｌＣｅｒを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）で経口免疫化したマウスで検出された（図３、４及び５）。抗原特異的ＩｇＧ抗体は、溶液中ＥＴＥＣ  ＋  α−ＧａｌＣｅｒ又はＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中ＥＴＥＣのみいずれかと比較して、２連又は３連の経口免疫化のいずれかの後に、ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中ＥＴＥＣ及びα−ＧａｌＣｅｒで免疫化したマウスの血清から、有意により大きかった（図３）。本調製物によって誘導された抗体サブクラスの解析によって、ＩｇＧ１が主に誘導されたサブタイプであることが明らかになった（図５）。
【０３７７】
結論
・α−ＧａｌＣｅｒを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中に調製したＥＴＥＣでのマウスの経口免疫化は、溶液中のＥＴＥＣ又はα−ＧａｌＣｅｒなしのＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中ＥＴＥＣでの免疫化と比較して、糞便ペレット及び腸において、有意により強い粘膜ＩｇＡ及びＩｇＧ抗体応答を誘導した。
・ＥＴＥＣ及びα−ＧａｌＣｅｒを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）でのマウスの免疫化はまた、血清中の抗原特異的抗体応答を誘導し、これは溶液中又はＳｍＰｉｌｌ（登録商標）中いずれかの非アジュバント化ＥＴＥＣワクチンで経口免疫化したマウスで生成されたものよりも、有意に大きかった。
要約すると、これらのデータは、本発明にしたがった、ＥＴＥＣ及びアジュバントとしてα−ＧａｌＣｅｒを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）調製物が、強力な粘膜及び全身性抗体応答を誘導することを確かにする。更に、本研究は、サポニンを用いる腸タンパク質の抽出によって、抗原特異的抗体が、本発明にしたがった、ＥＴＥＣ及びα−ＧａｌＣｅｒを含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）で経口免疫化したマウスの腸から検出可能であったこと、及びこれらの応答が、非アジュバント化ワクチンによって誘導されたものよりも有意に増大したことを示す。
【０３７８】
コレラ菌組成物
以下の実施例において、微生物は、稲葉型ＬＰＳを過剰発現するＪＳ１５６９  コレラ菌のホルマリン死滅化、遺伝子工学的に改変した株である。
【０３７９】
実施例及び図中の「ＪＳ１５６９」及び「ＪＳ１５６９  コレラ菌」に言及した場合、稲葉型ＬＰＳを過剰発現するＪＳ１５６９  コレラ菌の上記遺伝子工学的に改変した株を指す。
【０３８０】
ＪＳ１５６９  コレラ菌ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）調製物
【０３８１】
調製物３及び４を、ＥＴＥＣ調製物に関して以上で記述したものと類似の方法を用いて調製し、以下の組成物を得た。
【０３８２】
【表８】
2015521997.tif 000011
【０３８３】
簡単に記すと、調製物３及び４は以下の通りに調製した。
【０３８４】
調製物３（コレラ菌）
１．４０ｇのコレラ菌水性懸濁液（濃度＝細菌２．２４×１０１０個／ｍｌ）を、均一な分散物が得られるまで、室温にて、０．４１ｇのコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５と混合した（「界面活性剤相」）。界面活性剤相は、２２．１重量％のコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５と、７７．９％（重量％）のコレラ菌水性懸濁液を含んだ。
【０３８５】
異なるバイアル中、０．７１ｇのコレラ菌水性懸濁液（濃度＝細菌２．２４×１０１０個／ｍｌ）を、２．３ｇの精製水と混合し、０．０６３ｇのソルビトールを加え、溶液を全てのソルビトールが溶解するまで混合した。０．６３ｇのゼラチンを加え、温度を５５℃まで増加させ、混合液をゼラチンが溶けるまで撹拌した（「ゼラチン相」）。ゼラチン相は、１７．１％ゼラチン、１．７％ソルビトール、６２．１％精製水及び１９．１％のコレラ菌懸濁液からなった（重量％）。
【０３８６】
界面活性剤相をゼラチン相に加え、得られた組成物を、均一な混合相が得られるまで、５５℃で混合し、次に、組成物を、口径１ｍｍのノズルに通して、４℃に冷却した中鎖トリグリセリド中に排出し、球状ビーズを形成した。全てのビーズを調製した後、冷却油を除液し、ビーズを室温にて一晩乾燥させた。
ビーズ形成の前の、エマルジョンバッチの予想される乾燥組成は以下の通りであった。
【０３８７】
【表９】
2015521997.tif 000012
【０３８８】
上の表中の組成は、ビーズ形成の前の総バッチのものを表している。したがって、ビーズあたりの細胞の平均個数は、上で調製物１及び２に関して上記したように、平均ビーズサイズと重量に基づいて決定されてよい。
【０３８９】
ビーズを次に５．４％（重量増加分）オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）Ｌ３０  Ｄ−５５でコートした。得られた組成物は、細菌１．３×１０８個／ビーズの用量にて、抗原として、コレラ菌細菌を含んだ。
【０３９０】
調製物４（コレラ菌及びα−ＧａｌＣｅｒ）
１．４１ｇのコレラ菌水性懸濁液（濃度＝細菌２．２４×１０１０個／ｍｌ）を、均一の分散物が得られるまで、室温にて、０．４１ｇのコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５と２ｍｇのα−ＧａｌＣｅｒと混合した（「界面活性剤相」）。界面活性剤相は、２２．１％のコリフォール（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ）ＨＳ１５、０．１％のα−ＧａｌＣｅｒ及び７７．８％のコレラ菌水性懸濁液からなった（重量％）。
【０３９１】
異なるバイアル中、０．７２ｇのコレラ菌水性懸濁液（濃度＝細菌２．２４×１０１０個／ｍｌ）を、２．３ｇの精製水と混合し、０．０６４ｇのソルビトールを加え、溶液を全てのソルビトールが溶解するまで混合した。０．６３ｇのゼラチンを加え、温度を５５℃まで上昇させ、ゼラチンが溶けるまで混合液を撹拌した（「ゼラチン相」）。ゼラチン相は、１７．１％ゼラチン、１．７％ソルビトール、６１．８％精製水及び１９．４％のコレラ菌懸濁液からなった（重量％）。
【０３９２】
ゼラチン相に界面活性剤相を加え、得られた組成物を、５５℃で均一な相が得られるまで混合した。組成物を次に、調製物３にて記述したようにビーズに形成し、乾燥させた。
ビーズ調製物の前のエマルジョンバッチの予想される乾燥組成は以下の通りであった。
【０３９３】
【表１０】
2015521997.tif 000013
【０３９４】
ビーズを、７．４％（重量増加分）オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）Ｌ−３０  Ｄ  ５５でコートした。ビーズは、細菌１．２５×１０８個／ビーズの理論用量にて、抗原としてコレラ菌細菌及び、５．３μｇ／ビーズの理論用量にて、アジュバントとしてα−ＧａｌＣｅｒを含んだ。
【０３９５】
調製物５、６及び７ならびに比較調製物Ａ及びＢ
以下の組成物を、調製物３及び４の調製のために使用したものと類似の方法を用いて調製した。
【０３９６】
【表１１】
2015521997.tif 000014
【０３９７】
調製物３及び４を、以下の実験１〜３で使用した。調製物５、６、７及び比較調製物Ａ及びＢを、実験４及び５で使用した。
【０３９８】
マウス投与
メスＣ５７／ｂｌ６マウス（Ｈａｒｌａｎ  ＵＫ）を本研究で使用した。マウスを、溶液、及び／又はＳＭＰｉｌｌ（登録商標）組成物で、以下のように免疫化した。溶液：麻酔マウスを、重炭酸溶液（０．３５Ｍ、ｐＨ９）中、細菌＋／−アジュバントを含む溶液、２００μｌを強制飼養した。ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）組成物：ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）組成物（一般に２ビーズ）を、小容量の送達緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ５）中、フレキシブル強制飼養ニードルにて、麻酔マウスに投与した。
【０３９９】
コレラ菌実験１：糞便ペレット中の免疫応答
マウスに、重炭酸ナトリウム溶液のみ、又はコレラ毒素１０μｇ又はαＧａｌＣｅｒ１０μｇあり／なしの細菌２．５×１０８個、又はＳｍＰｉｌｌ（登録商標）調製物中、αＧａｌＣｅｒ１０μｇあり／無しの細菌２．５×１０８個を含む溶液で、連続２日間、２週間インターバルで合計３ラウンド、経口ワクチン接種した。糞便ペレットサンプルを、ワクチン接種の各ラウンドの前日と、最終ワクチン接種の２週間後に得、抗稲葉型ＬＰＳ  ＩｇＡ及びＩｇＧ応答を測定した。糞便ペレットサンプルを、ワクチンの各ラウンドの前日と、及び最終ワクチン接種の２週間後に得、抗稲葉型ＬＰＳのＩｇＡ及びＩｇＧ応答を測定した。図１３は、ＥＬＩＳＡによって測定された、免疫化の（ａ）１ラウンド後、（ｂ）２ラウンド後、（ｃ）３ラウンド後、糞便ペレット中で観察されたＩｇＡ力価を示し、（ｅ）免疫の３ラウンド後の糞便ペレット中のＩｇＧ力価を示す。図１３において、（ａ）〜（ｃ）及び（ｅ）の結果は、各群の全てのマウスの平均値及びＳＤを示す。図１４は、相当する時系列を示し、ワクチン接種の各ラウンド後の、ＩｇＡ応答の誘導の速度論を図示している。
【０４００】
コレラ菌実験２：腸内の局所免疫応答
マウスを、コレラ菌実験１中に記述したように経口ワクチン接種した。ワクチン接種の最終ラウンドの２週間後、マウスを麻酔し、かん流して、内蔵から血液を取り除いた。小腸を切除し、上部の小さな一部を除去して、サポニン溶液内に配置し、組織間抗体を抽出した。図１５は、ＥＬＩＳＡによって測定した、稲葉型特異的ＬＰＳのＩｇＡ（ａ）とＩｇＧ（ｂ）力価を示す。結果は、各群中の全てのマウスの平均値とＳＤを表す。
【０４０１】
コレラ菌実験３：全身性免疫応答
マウスを、コレラ菌実験１中に記述されたように経口ワクチン接種した。ワクチン接種の最終ラウンドの２週間後、尾血によって血清を得た。図１６は、ＥＬＩＳＡによって測定した、稲葉型特異的ＬＰＳのＩｇＡ（ａ）、ＩｇＧ（ｂ）及びＩｇＧ１（ｃ）力価を示す。結果は、各群の全てのマウスの平均値及びＳＤを表す。
【０４０２】
コレラ菌実験４：高用量免疫化−糞便ペレット
【０４０３】
マウスを、プラセボ（ゼラチン）ＳｍＰｉｌｌ（登録商標）、又はｉ）アジュバントなしで細菌４．５×１０８個、ｉｉ）細菌４．５×１０８個及びコレラ毒素１０μｇ、ｉｉｉ）αＧａｌＣｅｒ１０μｇと共に細菌４．５×１０８個を含むＳｍＰｉｌｌｓ、又はαＧａｌＣｅｒ１０μｇあり／なしでの細菌１２×１０８個と共にＳｍＰｉｌｌｓで、１又は２連続日いずれかで、２週間のインターバルで、合計３ラウンド経口ワクチン接種した。糞便ペレットサンプルを、ワクチン接種の各ラウンドの前日と、最終ワクチン接種の２週間後で得、抗稲葉型ＬＰＳのＩｇＡ及びＩｇＧ応答を測定した。図１７は、ＥＬＩＳＡによって測定した、免疫化の１、２及び３ラウンド後観察された、種々のＩｇＡ力価を示す。結果は、サンプルの一連の希釈のＯＤ４９２吸光度を表す。
【０４０４】
コレラ菌実験５：高用量免疫化−腸ＩｇＡ応答
マウスを、コレラ菌実験４にて記述したような経口ワクチン接種した。ワクチン接種の最終ラウンドの２週間後、マウスを麻酔し、かん流して内蔵から血液を除去した。小腸を切除し、上部の小さな部分を除去し、サポニン溶液中に配置して、組織間抗体を抽出した。図１８は、ＥＬＩＳＡによって測定された、免疫化の３ラウンド後観察された、種々の稲葉型ＬＰＳ特異的ＩｇＡ力価を示す。結果は、サンプルの一連の希釈のＯＤ４９２吸光度を表す。
【０４０５】
結論−図１３〜１８を参照のこと
αＧａｌＣｅｒ及びコレラ菌ＪＳ１５６９を含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）組成物は、コレラ菌ＪＳ１５６９のみを含む組成物と比較して、増強された免疫応答を示し、これは、αＧａｌＣｅｒが、微生物を含むＳｍＰｉｌｌ組成物の効果的なアジュバントであることを図示している（図１３〜１８）。
【０４０６】
αＧａｌＣｅｒと一緒にＪＳ１５６９を含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）組成物は、抗原のみ、又は抗原とＣＴの溶液中に送達された同一の調製物と比べて、全身及び局所腸内で、より強い応答を誘導する（図１５及び１６）。
【０４０７】
αＧａｌＣｅｒと一緒のＪＳ１５６９を含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）組成物は、抗原のみを送達する同一の調製物と比べて、糞便物質中、より強い抗体力価を誘導する（図１７）。
【０４０８】
αＧａｌＣｅｒとＪＳ１５６９  コレラ菌を含むＳｍＰｉｌｌ（登録商標）組成物での二連続日におけるワクチン接種は、ワクチン接種のラウンドあたり一日のみのワクチン接種を上回る利点を示さなかった（図１７及び１８）。
【０４０９】
参照研究１及び２
α−ＧａｌＣｅｒと共に、抗原としてコレラ毒素サブユニットＢ（ＣＴＢ）を含むＳｍｐｉｌｌ（登録商標）組成物を、マウス中、参照研究１及び２にて使用し、その結果を図１０〜１２に示す。組成物は、以上で記述したものと類似の方法を用いて調製し、以下の予想乾燥重量組成物を得た。
【０４１０】
【表１２】
2015521997.tif 000015
参照研究１及び２は、本発明にしたがった「全細胞」微生物ではなく、サブユニット抗原を含む組成物の効果を示す。
【０４１１】
アスペクト比
ミニビーズを、ノズルから押し出して、冷却媒質内に落とすことによって、上記手順に概して従って作製した。本例においてしかし、ビーズは、活性物に微生物を有する点において本発明内に含まれなかった。ビーズのいくつかを、シュアリース（Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ）（商標）とペクチン混合物で、本明細書中に記載されたようにコートした。コートしたビーズのサンプル集団と、未コートビーズのサンプル集団との両方が、アイコン（Ｅｙｅｃｏｎ）（商標）粒子分析機を用いて測定したときに１．２の平均アスペクト比を有することを典型的に見出した。
【図１】
2015521997.tif 000016
【図２】
2015521997.tif 000017
【図３】
2015521997.tif 000018
【図４】
2015521997.tif 000019
【図５】
2015521997.tif 000020
【図６】
2015521997.tif 000021
【図７】
2015521997.tif 000022
【図８】
2015521997.tif 000023
【図１０】
2015521997.tif 000024
【図１１】
2015521997.tif 000025
【図１２】
2015521997.tif 000026
【図１３】
2015521997.tif 000027
【図１４】
2015521997.tif 000028
【図１５】
2015521997.tif 000029
【図１６】
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【図９】
2015521997.tif 000031
【図１７】
2015521997.tif 000032
【図１８】
2015521997.tif 000033
【手続補正書】
【提出日】平成26年9月5日(2014.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
・界面活性剤、
・生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物、
・セラミドであるか、セラミドを含むアジュバント、及び
・前記界面活性剤、前記微生物及び前記アジュバントを含むヒドロゲル形成ポリマーを含む組成物であって、
水と混合したときに、界面活性剤及びアジュバントを含む自己組織体を放出可能であり、該自己組織体が、ミセル、ベシクル、マイクロエマルジョン、リオトロピック・ラメラ相、又はこれらの組み合わせから選択される、組成物。
【請求項２】
前記界面活性剤が、マクロゴールエステル、マクロゴールエーテル、ジブロックコポリマー、トリブロックコポリマー、及び両親媒性ポリマー、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記界面活性剤が、置換されていないか、又は１個のヒドロキシ基で置換されているアルキル鎖を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記界面活性剤がＰＥＧ鎖を含む、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項５】
前記界面活性剤が、ＰＥＧ化脂肪酸、例えばＰＥＧ化ヒドロキシ脂肪酸であるか、又はこれらを含み、前記ＰＥＧ化脂肪酸が、遊離ＰＥＧと併用されていてもよい、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
ヒドロゲル形成ポリマーを含むマトリクスと、
該マトリクス内に含まれる、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物、界面活性剤、並びにアジュバントと、
を含む組成物であって、
前記アジュバントが、セラミドであるか、又はセラミドを含み、
前記界面活性剤が、ポリエトキシル化ヒドロキシ脂肪酸であるか、又はポリエトキシル化ヒドロキシ脂肪酸を含む、組成物。
【請求項７】
前記界面活性剤がマクロゴール−１５−ヒドロキシステアレートである、請求項５又は６に記載の組成物。
【請求項８】
前記アジュバントの少なくとも一部が、前記界面活性剤の少なくとも一部と結合している、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記微生物内容物の少なくとも一部が、前記界面活性剤の少なくとも一部と結合している、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ヒドロゲル形成ポリマーに対する前記界面活性剤の重量比が、１：０．５〜１：２．５であり、１：０．５〜１：２、例えば１：１〜１：２．５又は１：１〜１：２であってもよい、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ヒドロゲル形成ポリマーに対する前記界面活性剤の重量比が、１：１．４〜１：１．８、例えば、１：１．６〜１：１．７である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、サーモトロピックヒドロゲル形成ポリマー、及びその組み合わせから選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、ゼラチン、寒天、アガロース、ペクチン、カラギーナン、及びキトサン、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、ゼラチンを含むか、又はゼラチンである、請求項１２又は請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、組成物の乾燥重量に基づいて、少なくとも２５重量％、好適には少なくとも４０重量％、例えば２５〜７０重量％、場合によっては４０〜７０重量％のヒドロゲル形成ポリマーを含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、可塑剤、例えばソルビトール又はグリセリンを更に含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記可塑剤が、組成物の乾燥重量の１０重量％以下で、例えば３〜８重量％で、又は好適には４重量％〜６重量％で組成物中に存在する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
キトサンを含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記微生物が細菌であり、定着因子、例えば定着因子抗原Ｉ（ＣＡＦ／Ｉ）発現細菌であってもよい、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記微生物が、腸管毒素原性大腸菌である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記微生物がヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記微生物がビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏ  Ｃｈｏｌｅｒａｅ）である請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記微生物が、ウイルス又は真菌である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記微生物に加え、１種以上の抗原を更に含む、例えば、複数種の微生物、例えば、複数種の単細胞微生物を含み、複数種の細菌株を含んでいてもよい、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記アジュバントが、α−ガラクトシルセラミドであるか、又はα−ガラクトシルセラミドを含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記微生物が、１種以上の単細胞微生物からなり、単細胞微生物の総量に対するアジュバントの割合（１０１０細胞に対するアジュバントのｍｇ乾燥重量）が０．１〜１００ｍｇ：細胞１０１０個であり、０．１〜１０ｍｇ：細胞１０１０個、例えば０．２５〜５ｍｇ：細胞１０１０個、特に０．４〜５ｍｇ：細胞１０１０個であってもよい、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記界面活性剤が、１０以上、例えば１５〜２０のＨＬＢ値を有する、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記界面活性剤が、組成物の乾燥重量に基づいて、２０〜５５重量％、例えば３０〜４５重量％、又は３０〜４０重量％で、組成物中に存在する、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３０】
カチオン性脂質が更に含まれ、該カチオン性脂質が、ＤＯＴＡＰ及びＤＯＳＰＥＲから選択されてもよい、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記微生物が、１種以上の単細胞微生物からなり、単細胞微生物の総量に対する界面活性剤の割合（細胞１０１０個に対する界面活性剤のｍｇ乾燥重量）が１０〜２００ｍｇ：細胞１０１０個であり、２５〜１２５ｍｇ：細胞１０１０個、例えば２５〜１５０ｍｇ：細胞１０１０個、２５〜１００ｍｇ：細胞１０１０個、５０〜２００ｍｇ：細胞１０１０個、５０〜１００ｍｇ：細胞１０１０個又は６０〜９０ｍｇ：細胞１０１０個であってもよい、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
０．５ｍｍ〜５ｍｍの直径を有するビーズの形態である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記ビーズが、１ｍｍ〜２ｍｍの直径を有する、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが実質的に乾燥しており、前記ビーズがコーティングを有している、請求項３２又は請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記コーティングが活性物質を含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記コーティングが即放性コーティングである、請求項３４又は請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記ビーズが、徐放性コーティング、例えば腸溶性コーティングを含む、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３８】
免疫増強栄養素、例えば、ビタミンＡ、Ｂ（例えばビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ナイアシン（ビタミンＢ３）、パントテン酸、リボフラビン（ビタミンＢ２）、チアミン（ビタミンＢ１）及び葉酸の１種又は組み合わせ）、ビタミンＣ、ビタミンＥ、カロテノイド、例えばβ−カロテン、鉄、マンガン、セレン及び亜鉛から選択される１種以上の栄養素を更に含み、例えば、前記組成物が、マトリクス（ヒドロゲル形成ポリマー）中、界面活性剤と共に、及び／又はコーティング中に栄養素を含む、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記微生物が、無傷及び断片化微生物細胞を組み合わせて含むか、又は無傷及び断片化微生物細胞を組み合わせたものであり、ホルマリンによって死滅していてもよい、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４０】
水性溶解媒質中においたときに、溶解媒質からの水が、ヒドロゲルポリマーに接触した場合に、前記組成物が界面活性剤を含む自己組織体（例えばミセル）を放出し、該自己組織体が、約０．５ｎｍ〜２００ｎｍ、例えば約１ｎｍ〜５０ｎｍ、又は約５ｎｍ〜２５ｎｍの動的光散乱を用いて測定した、流体力学的直径を有する、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記組成物が、前記界面活性剤以外の油を実質的に含まない、請求項１〜４０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４２】
ｉ）界面活性剤と、セラミドを含むか、若しくはセラミドであるアジュバントと、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物とを含む界面活性剤予備混合物；及び
ｉｉ）水とヒドロゲル形成ポリマーとを含む水性液体予備混合物を混合することを含む方法であって、
混合に続き、前記界面活性剤が、前記ヒドロゲル形成ポリマー内に分散した自己組織体として存在し、該自己組織体が、ミセル、ベシクル、マイクロエマルジョン、リオトロピック・ラメラ相、またはこれらの組み合わせから選択され、前記自己組織体がミセルであってもよい、方法。
【請求項４３】
単一のオリフィスノズルを通して、前記ｉ）及びｉｉ）の混合物を排出して液滴を形成し、前記ヒドロゲル形成ポリマーを固化させるか、又は固化することを可能にし、それによって前記液滴がビーズを形成することを更に含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記界面活性剤予備混合物の温度が、ｉ）及びｉｉ）を混合する前には水性相の温度よりも低い、請求項４２又は請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記界面活性剤予備混合物の温度が、２つを一緒に混合する前には、水性液体予備混合物の温度よりも低く、ｉ）及びｉｉ）が、前記単一のオリフィスノズルと隣接して混合される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ヒドロゲル形成ポリマーが、サーモトロピックポリマー又はサーモトロピックポリマーの混合物であり、前記水性液体予備混合物が高温であり、前記界面活性剤予備混合物が周囲温度を超えない温度であり、前記２つの予備混合物が、それぞれの供給ラインを介して、前記２つの予備混合物が混合される混合装置に流入し、前記２つの予備混合物の少なくとも１つが、混合装置からノズルまでの移動において、混合物が移動するよりも長い距離を、その供給ラインを介して移動する、請求項４２又は４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記２つの予備混合物を、前記ノズルに並置された直列型混合装置によって混合する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
（ａ）（ｉ）界面活性剤、（ｉｉ）生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物、及び（ｉｉｉ）セラミドであるアジュバントを混合し、界面活性剤予備混合物を形成することと、
（ｂ）工程（ａ）由来の前記界面活性剤予備混合物を、水及びヒドロゲル形成ポリマーを含む水性予備混合物と混合することと、を有する方法であって、前記界面活性剤が、自己組織体を形成するのに十分な量存在し、前記自己組織体が、ミセル、ベシクル、マイクロエマルジョン、リオトロピック・ラメラ相、又はこれらの組み合わせから選択され、前記自己組織体がミセルであってもよい、方法。
【請求項４９】
疎水性賦形剤、例えば中鎖トリグリセリドを、前記界面活性剤、前記微生物及び前記アジュバントと混合する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記界面活性剤予備混合物が、１０重量％未満、好ましくは５重量％未満、１重量％未満、０．５重量％未満、０．１重量％未満又は０．００１重量％未満の前記界面活性剤以外の油を含み、特に、前記界面活性剤予備混合物が前記界面活性剤以外の油を含まない、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記界面活性剤が、ポリエトキシル化ヒドロキシ脂肪酸であるか、又はポリエトキシル化ヒドロキシ脂肪酸を含み、前記界面活性剤は、遊離ＰＥＧと併用して、ＰＥＧ化ヒドロキシ脂肪酸であるか、又はＰＥＧ化ヒドロキシ脂肪酸を含んでいてもよく、好ましくは、前記界面活性剤はマクロゴール−１５−ヒドロキシステアレートであるか、又はマクロゴール−１５−ヒドロキシステアレートを含む、請求項４２〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記アジュバントが、α−ガラクトシルセラミドであるか、又はα−ガラクトシルセラミドを含む、請求項４２〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
前記水性予備混合物及び前記界面活性剤予備混合物を混合して、マイクロエマルジョンを形成する、請求項４２〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
分散体を、成形単位、例えばビーズに形成することを更に含む、請求項４２〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記形成が、分散体を、単一のオリフィスノズルを通して排出し、水不混和性冷却液体中に落下させるか、又は落下させることを可能にする液滴を形成して該液滴を冷却してビーズを形成し、前記冷却液体から前記ビーズを分離することを含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
１以上のコーティングを、前記成形単位に付着させることを更に含む、請求項５４又は請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記１以上のコーティングが、即放性コーティング及び徐放性コーティングから選択される少なくとも１つのコーティングを含み、例えば前記徐放性コーティングは腸溶性コーティングである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
請求項１０〜３１、３８〜４０のいずれか１項において、又はそれらの従属項によって容認された前記請求項のあらゆる組み合わせにおいて記載された特徴を更に含む、請求項４２〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
請求項４２〜５８のいずれか１項に記載の方法により調製された組成物の特徴を有する組成物。
【請求項６０】
請求項３２〜３９のいずれか１項に記載のビーズの集団、又は請求項５４〜５７のいずれか１項によって得ることのできる成形単位の集団を含む経口剤形。
【請求項６１】
前記ビーズ又は成形単位の第一集団と、該第一集団とは異なる前記ビーズ又は成形単位の第二集団とを含む、請求項６０に記載の剤形。
【請求項６２】
少なくとも１つの追加投与を含む、投与計画で使用するための、請求項６０又は請求項６１に記載の剤形。
【請求項６３】
分散された自己組織体を有するヒドロゲルを含む組成物を乾燥することによって得られた組成物の特徴を有する生成物であって、前記組成物が、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される抗原を含む第一活性物質と、アジュバントを含む第二活性物質とを更に含み、前記アジュバントがセラミドであるか、又はセラミドを含み、前記組成物が、請求項１〜４１のいずれか１項において、又はそれらの従属項によって容認された前記請求項のあらゆる組み合わせにおいて更に定義されたようにされていてもよい、生成物。
【請求項６４】
経口剤形、例えばゼラチンカプセルの製造における、請求項６３の生成物の使用。
【請求項６５】
生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される抗原を含む生成物を対象に経口投与することを含む、生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される微生物を対象に投与するための方法であって、前記生成物が、請求項１〜４１のいずれか１項で定義された組成物、又は請求項６０〜６２のいずれか１項で定義された剤形、又は請求項５９若しくは６３で定義された生成物である、方法。
【請求項６６】
生、死滅、弱毒化及び不活化した微生物から選択される抗原を含む生成物を対象に経口投与することを含む、微生物が原因の疾患に対して対象をワクチン接種するための方法であって、前記生成物が、請求項１〜４１のいずれか１項で定義された組成物、又は請求項６０〜６２のいずれか１項で定義された剤形、又は請求項５９若しくは６３２で定義された生成物であり、不活化又は弱毒化形態で前記生成物に含まれる微生物が、前記疾患の原因である微生物に対する免疫応答を生じるための前記生成物の投与後に有効である、方法。
【請求項６７】
初回投与の後、例えば初回投与の後少なくとも１週間、前記生成物の投与を繰り返すことを含む、請求項６５又は請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記生成物の少なくとも２回の投与を繰り返すことを含み、各投与が互いに、例えば少なくとも１週間の期間離れている、請求項６５又は請求項６６に記載の方法。
【国際調査報告】
2015521997.tif 000034
2015521997.tif 000035
2015521997.tif 000036
2015521997.tif 000037