(57)【要約】本発明は、試料（６）からの生物学的パラメーターを分析するための装置に関し、当該装置は、（ｉ）第一の移送手段（５、２０、２５）を有し、（ii）第一の調製手段（７）を有し、（iii）細胞の構成成分を測定するための手段（８）を有し、（iv）第一の調製手段（７）からの試料において、少なくとも１つの対象の分析物に特異的な少なくとも１つのリガンドで表面を官能基化された粒子を有する検定試薬（Ｒ３）で少なくとも１つの希釈を実行できる第二の調製手段（１０、１１、２２、２３、２４）を有し、（ｖ）官能基化された粒子の凝集を測定することによって、少なくとも１つの対象の分析物の検定ができる免疫検出測定手段（３０、３１）を有し、前記装置は、さらに、（ｉ）第一の移送手段（５、２０、２５）から少なくとも部分的に離れた第二の移送手段（４、２１、２２、２６）を有し、（ii）磁性コロイド状粒子を有する前記官能基化された粒子の凝集の促進を磁気相互作用によって引き起こすことができる、磁場（２８）を印加する手段を有する。本発明はまた、前記装置において実施される方法にも関する。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的試料（６）を用いて生物学的パラメーターを分析するための装置であって、当該装置は：
―  前記生物学的試料（６）を第一の調製手段（７）へと少なくとも部分的に移送することができる第一の移送手段（５、２０、２５）を有し、
―  少なくとも１つの希釈剤および／または１つの試薬で、前記生物学的試料（６）の少なくとも１つの希釈を実行できる第一の調製手段（７）を有し、
―  少なくとも１つの対象の分析物に特異的な少なくとも１つのリガンドで表面が官能基化された粒子を有する検定試薬（Ｒ３）によって、前記第一の調製手段（７）からの第一の試料に、少なくとも１つの希釈を実行できる第二の調製手段（１０、１１、２２、２３、２４）を有し、
―  官能基化された粒子の凝集度を測定用キュベット（９）内で測定することによって、前記第二の調製手段（１０、１１、２２、２３、２４）からの試料において、少なくとも１つの対象の分析物を検定することができる免疫検出測定手段（３０、３１）を有し、
その特徴は、当該装置が、また：
―  第二の移送手段（４、２１、２２、２６）をも有し、該第二の移送手段は、前記第一の移送手段（５、２０、２５）から少なくとも部分的に離れており、かつ、該第二の移送手段は、前記第一の調製手段（７）において事前に希釈された前記第一の試料を取得し、それを前記第二の調製手段（１０、１１、２２、２３、２４）へと移送することができるものであり、かつ、
―  前記測定用キュベット（９）内に磁場（２８）を印加するための手段をも有し、該手段は、磁性相互作用によって、磁性コロイド状粒子を有する前記官能基化された粒子の凝集の促進を引き起こすことができるものである、
前記装置。
【請求項２】
当該装置が、細胞の構成成分を測定するための手段（８、５０）をも有し、該手段は、前記生物学的試料（６）から、全容積に対する細胞容積の少なくとも１つの測定を提供できるものである、請求項１記載の装置。
【請求項３】
当該装置が、細胞の構成成分を測定するための手段（８）をも有し、該手段は、前記第一の調製手段（７）からの第二の試料から、全容積に対する細胞容積の少なくとも１つの測定を提供できるものである、請求項１記載の装置。
【請求項４】
前記官能基化された粒子が、ポリマー材料で作られた外殻によって取り囲まれた、酸化鉄の高い含有量のコアを持った粒子を有してなる、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項５】
前記官能基化された粒子が、平均直径１マイクロメートル未満の、実質的に球体形状を持った粒子を有してなる、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項６】
前記免疫検出測定手段（２）が光学的な測定手段を有し、該光学的な測定手段は、前記測定用キュベット（９）の近傍に配置された少なくとも１つの光源（３０）と少なくとも１つの検出器（３１）とを持っており、前記キュベットが、前記光学的な測定手段（３０、３１）の少なくとも高さにおいて、実質的に透明な壁部を持っている、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項７】
前記免疫検出測定手段がまた、少なくとも１つの光源（３０）からコリメート光線（３２）を生じさせることができる光調節手段を有し、該コリメート光線が、前記測定用キュベット（９）を通過するものである、請求項６記載の装置。
【請求項８】
当該装置が、６００ナノメートルから９００ナノメートルまでの間の光の波長で発光することができる少なくとも１つの光源（３０）をも有する、請求項６または７に記載の装置。
【請求項９】
当該装置が、前記測定用キュベット（９）内に磁場を生じさせることができる電磁石（２８）をも有する、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１０】
当該装置が、前記測定用キュベット（９）の温度を調節するための手段をも有する、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１１】
当該装置が、前記検定試薬（Ｒ３）を格納するための最適な温度に調節された格納容器（１１）をも有する、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１２】
当該装置が、格納された前記検定試薬（Ｒ３）中で、前記官能基化された粒子を懸濁状態にするための、および／または、懸濁状態に保つための、超音波撹拌手段（１３）をも有し、該超音波撹拌手段が次の手段：
前記格納容器に結合された外部ソノトロード、
前記検定試薬（Ｒ３）に浸漬されたソノトロード、
のうちの少なくとも１つを有する、請求項１０記載の装置。
【請求項１３】
前記第一の移送手段が、サンプリングニードル（２０）を有し、かつ、該サンプリングニードル（２０）を移動させるための手段（２５）を有する、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１４】
前記第二の移送手段が、サンプリングニードル（２１）を有し、かつ、前記サンプリングニードル（２１）を移動させるための手段（２６）を有し、これらが検定試薬（Ｒ３）を前記測定用キュベット（９）内に移送することができる、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１５】
前記第二の移送手段が、前記第一の調製手段（７）から試料を取得することができるサンプリングバルブ（２２）を有する、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１６】
全血試料（６）を有する生物学的試料を用いて、生物学的パラメーターを分析するための、先行する請求項のいずれか一項に記載の装置。
【請求項１７】
当該装置が、少なくとも１つのヘマトクリット測定を提供することができる、細胞の構成成分を測定する手段（８、５０）を有する、請求項１６記載の装置。
【請求項１８】
生物学的試料（６）を用いて生物学的パラメーターを分析するための方法であって、当該方法は：
―  第一の移送手段（５、２０、２５）によって、前記生物学的試料（６）の少なくとも１部分を第一の調製手段（７）へと移送するステップを有し、
―  第一の調製手段（７）によって、少なくとも１つの希釈剤および／または１つの試薬で、前記生物学的試料（６）の少なくとも１つの希釈を実行するステップを有し、
―  第二の調製手段（１０、１１、２２、２３、２４）によって、前記第一の調製手段（７）からの第一の試料において、少なくとも１つの対象の分析物に特異的な少なくとも１つのリガンドで表面が官能基化された粒子を有する検定試薬（Ｒ３）で、少なくとも１つの希釈を実行するステップを有し、
―  官能基化された粒子の凝集度を測定用キュベット（９）内で測定することによって、免疫検出測定手段（３０、３１）によって、前記第二の調製手段（１０、１１、２２、２３、２４）からの試料で、少なくとも１つの対象の分析物を検定するステップを有し、
その特徴は、当該方法が、また：
―  前記第一の移送手段（５、２０、２５）から少なくとも部分的に離れた第二の移送手段（４、２１、２２、２６）によって、前記第一の調製手段（７）において事前に希釈された前記第一の試料を取得し、それを前記第二の調製手段（１０、１１、２２、２３、２４）へと移送するステップをも有し、
―  磁気相互作用によって、磁性コロイド状粒子を有する前記官能基化された粒子の凝集の促進を引き起こすように、前記測定用キュベット（９）内に磁場を印加するステップをも有する、
前記方法。
【請求項１９】
当該方法が、細胞の構成成分を測定する手段（８、５０）によって、前記生物学的試料（６）から、全容積に対する細胞容積の少なくとも１つの測定を得るステップをも有する、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
当該方法が、細胞の構成成分を測定する手段（８）によって、前記第一の調製手段（７）からの第二の試料から、全容積に対する細胞容積の少なくとも１つの測定を得るステップをも有する、請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの対象の分析物の検定が：
―  少なくとも１つの試料および検定試薬（Ｒ３）を有する測定溶液を、前記測定用キュベット（９）に入れるステップを有し、
―  前記測定用キュベットを通して、第一の光強度を測定するステップを有し、
―  磁場の影響の下で前記官能基化された粒子の凝集を可能にするように、所与の時間、前記測定用キュベット（９）内に該磁場を印加するステップを有し、
―  前記磁場をオフにした後、リガンドと対象の分析物との間の結合に起因する前記官能基化された粒子の残留凝集を表す、第二の光強度を測定するステップを有し、
―  前記第一の光強度と第二の光強度との比率に応じた、光学密度における変動を算出するステップを有し、
―  前記光学密度における変動から対象のタンパク質の濃度を算出するように、事前に決定されたキャリブレーション関数を適用するステップを有する、
請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記生物学的試料が、×５００を超える程度にまで前記測定溶液に希釈される、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
全血試料を有する生物学的試料（６）を用いて、生物学的パラメーターを分析するための、請求項１８〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
当該方法が、前記対象の分析物を検定するために：
―  サポニンを有する溶解試薬（Ｒ１）と、
―  最適なｐＨを維持できる緩衝液（Ｒ２）と
を用いる、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
当該方法が、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）である対象の分析物の検定を可能にする、リガンドで官能基化された粒子を使用する、請求項２３または２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的試料（バイオロジカル サンプル）、特に、全血試料を用いた、生物学的測定、とりわけ、血液学的なおよび生化学的な測定を実行するための分析装置および方法に関する。
【０００２】
本発明の分野は、より具体的には、ただしそれに限定されるものではないが、分析システムの分野である。
【背景技術】
【０００３】
先行技術
少なくとも１つの血液分析物（血液検体）の検定（アッセイ）を追加的に含んだ、血液細胞の構成成分の分別（識別）および計数は、診断学の分野においては極めて重要なものである。実際、生物学的な分析についての大抵の要求は、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）または他のプロカルシトニン（ＰＣＴ）などといった、１以上の分析物の検定に対する追加的な要求を含んだ、全血算定（complete blood count、ＣＢＣ）に関するものである。
【０００４】
現在、これらの分析には、２種類の試料を取得する必要がある：血液学的な分析を意図した抗凝血剤で取得した第一の試料、および、生化学的な分析を意図した抗凝血剤なしで取得した第二の試料。
【０００５】
生化学的な分析を意図した試料は、血清または血漿の生体分子を検定するための分析器において処理される前に、遠心分離される。血液学的な分析を意図した試料は、自動化された血液学的装置を用いて処理される前に、管内で細胞を懸濁状態に保つために撹拌される。さらに、非常に多くの場合において、取得された２種類の試料は、異なる研究室内に配置された別個の装置のためのものであることが意図されている。このプロセスは、概して、長時間にわたり、かつ高価である。多くの状況では、何がしか、全血算定の迅速な測定、および、１以上の分析物の検定が必要とされる。このアプローチは、技術によって全血（すなわち、血液細胞と血漿）の検定が可能になる場合には想定が可能である。この迅速さは、患者にとっては、紛れもなく有益であるが、これは、処理の遅延の低減およびコストの低減にも貢献する。
【０００６】
例えば、このタイプの分析は、外来の医療(ambulatory medicine)において、救急の医療(emergency medicine)において、または、他に、分析速度が決定要因となるようなルーティン的な研究所において、必要とされている。これらすべての状況では、分析前に試料の調製に必要な「分析前」作業を簡略化することが求められており、また、確実な診断を可能にするために、高いレベルの正確さと再現性をもって、非常に速い分析が求められる。
【０００７】
血液学的な測定と生物学的な検定との結合（組合わせ）については、例えば、Oku et alによる文献ＵＳ６ １０６ ７７８に記載されている。前記文献は、血液学的なモジュールと生化学的なモジュールとを有し、かつ、以下の血液学的なパラメーターの測定を可能とする分析装置について記載している：白血球計数（ＷＢＣ計数）、赤血球計数（ＲＢＣ計数）、血小板計数（ＰＬＴ計数）、平均血球容積（mean corpuscular volume、ＭＣＶ）、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）、および、ヘモグロビン（Ｈｇｂ）。
【０００８】
この装置の主な欠点は、高い分析速度が可能でないということである。これは、単一の搬送器（キャリッジ）と単一のサンプリングニードルが、血液学的なモジュールと生化学的なモジュールにおいて、血液および試薬のサンプリングおよび分配に使用されるからである。ニードルの占有率が高過ぎることによって、より短い血液学的な分析時間、例えば６０秒よりも短い時間、が可能にならないということになる。
【０００９】
他の欠点は、同じニードルが、血液希釈工程の前に、血液試料および試薬を収容するために使用されるという事項によって生じ、これが、少量の分析物の高感度な検定にとって有害なコンタミネーション（キャリーオーバー、持ち越し汚染）の問題を引き起こす。
【００１０】
最後に、前記文献に記載されている生物学的な検定では、次の事項を達成することができない。それは、高い分析速度と、一方で、同時に、試料同士の間のコンタミネーション無しに、高感度で再現性のある測定を与えることとを両立させて、求める分析物を検定するための免疫学的な反応速度を得ることである。これは、コロイド状凝集現象を用いた、よく知られた原理に基づいている。多くの場合、「ＬＡＩ」即ち「ラテックス凝集免疫比濁法（latex agglutination immunoassay）」と呼ばれるこのテストは、以下の原理に基づいている：それは、所与の抗原に特異的な抗体がコロイド状の粒子に固着し、そして、少なくとも２つの粒子による抗原の捕捉によって、溶液の濁度を変える凝集物が生じ、それによって、抗原の定量検定が可能になるというものである。
【００１１】
この凝集反応の速度は、勿論、部分的に抗原濃度に依存する。最良の感度を求めるとき、粒子濃度は、常に、抗原濃度を超えていなければならない。特に、（抗原の数によって定まる）予期されるダブレットの数が、シングレット（非凝集粒子）の数と比較して非常に少ない場合、信号とノイズとの比率に影響するということを知った上で、抗原濃度の約１０倍の粒子濃度で最良の歩み寄りが得られる。
【００１２】
コロイド状凝集反応の速度はまた、粒子の拡散係数（平行移動および回転）と、コロイド状粒子の表面に固着した抗体の表面濃度とに関係している。この反応速度が、所与のインキューベーション時間における、テストの感度および検出閾値を定めるということも、また認められている。従って、同じ感度、より速い凝集速度で、より短いインキューベーション時間が必要となる。
【００１３】
不特定のノイズを著しく増大することなく、この反応を促進させるために、いくつかのアプローチが示唆され、そして、インキューベーション時間を減少することによって、より高い感度、または、より速い検定速度のいずれかが提供されている。これらの方法は、全て、外部場の適用の間に、コロイド状粒子の濃度を局所的に上昇させることによって、粒子の衝突の頻度を上げるという事実を共通に有している。
【００１４】
現在、３つの別々のアプローチが知られている：それは、定常超音波の使用、巨視的な二次元または三次元システムにおける交流電場の使用、および、最後に、超常磁性(superpramagnetic)のコロイド状粒子と組み合わせた、磁場の使用である。定常超音波の場合には、粒子の局所的な富化が、高い音圧域において生じ；高周波の交流電場が直交方向に印加される、制限された二次元系の場合には、（イオン循環によって誘導される）流体力学的起源（hydrodynamic origin）の引力の存在によって局所的な富化が生じ；高周波の交流電場が印加される、巨視的なシステムの場合には、（分極率の違いによって誘導される）双極子コロイド力の作用の下、局所的な富化が、鎖状の粒子の形態で生じ；超常磁性のコロイド状粒子が均一の磁場にさらされる、巨視的なシステムの場合には、磁性双極子相互作用によって誘導されて、富化が鎖の形状で生じる。
【００１５】
Bibette et alによる文献ＥＰ１ ４４６ ６６６が特に知られており、この文献は、コロイド状磁性粒子、即ち、５ナノメートル〜１０マイクロメートルのサイズの磁性粒子を用いて分析物を検出するための方法について記載している。
【００１６】
これらの粒子は、それらの表面において、具体的には、検定される分析物と特異的に結合することができ、かつ、超常磁性挙動をとることができる磁性材料を取り込むことができる抗体、抗原または他のあらゆる分子であり得るリガンドによって官能基化（ファンクショナライズ、官能化）される。磁場の印加の影響下で、これらは、鎖として凝集する傾向があり、従って、分析物の、２つの別々の粒子への付着を促進する。磁場をオフにした後は、分析物によって結合した粒子だけが、永久的な鎖状で組織化したままとなる。測定は、光学的な方法によって、顕微鏡で、または、密度測定によって実行される。上述の測定例は、特に、キャリブレーション血漿溶液中の分析物の検定に関する。
【００１７】
本発明の目的は、全血試料、即ち、細胞を事前に取り除いていない試料を用いて、迅速かつ確実に、血液学的なおよび生化学的な測定を実行するための装置および方法を提供することである。
【００１８】
本発明の他の目的は、単一の全血試料を用いて、自動的に血液学的なおよび生化学的な測定を実行するための装置および方法を提供することである。
【００１９】
本発明の他の目的は、全血試料を用いて、高速で、例えば、１分につきおよそ１回の測定で、血液学的なおよび生化学的な測定を実行するための装置および方法を提供することである。
【００２０】
本発明の他の目的は、高い測定感度、および生化学的測定のダイナミクスを達成することを可能にする、全血試料を用いた血液学的なおよび生化学的な測定を実行するための装置および方法を提供することである。
【００２１】
最後に、本発明の目的は、血液試料と試薬との間のクロス・コンタミナーションのリスクが最小限になった、全血試料を用いた血液学的なおよび生化学的な測定を実行するための装置および方法を提供することである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
本発明の開示
この目的は、生物学的試料を用いて生物学的パラメーターを分析するための装置によって達成でき、当該装置は：
―  前記生物学的試料を第一の調製手段（７）へと少なくとも部分的に移送することができる第一の移送手段を有し、
―  少なくとも１つの希釈剤および／または１つの試薬で、前記生物学的試料の少なくとも１つの希釈を実行できる第一の調製手段を有し、
―  少なくとも１つの対象の分析物に特異的な少なくとも１つのリガンドで表面が官能基化された粒子を有する検定試薬によって、前記第一の調製手段からの第一の試料に、少なくとも１つの希釈を実行できる第二の調製手段を有し、
―  官能基化された粒子の凝集度を測定用キュベット内で測定することによって、前記第二の調製手段からの試料において、少なくとも１つの対象の分析物を検定することができる免疫検出測定手段を有し、
その特徴は、当該装置が、また：
―  第二の移送手段をも有し、該第二の移送手段は、前記第一の移送手段から少なくとも部分的に離れており、かつ、該第二の移送手段は、前記第一の調製手段において事前に希釈された前記第一の試料を取得し、それを前記第二の調製手段へと移送することができるものであり、かつ、
―  前記測定用キュベット内に磁場を印加するための手段をも有し、該手段は、磁性相互作用によって、磁性コロイド状粒子を有する前記官能基化された粒子の凝集の促進を引き起こすことができるものである。
【００２３】
実施形態によれば、本発明による装置はまた、細胞の構成成分を測定するための手段をも有し、該手段は、前記生物学的試料から、全容積に対する細胞容積の少なくとも１つの測定を提供できるものである。
【００２４】
他の実施形態によれば、本発明による装置はまた、細胞の構成成分を測定するための手段をも有し、該手段は、前記第一の調製手段からの第二の試料から、全容積に対する細胞容積の少なくとも１つの測定を提供できるものである。
【００２５】
実施形態によれば、
―  第二の調製手段は、少なくとも１つの溶解操作を実行することができてもよく；
―  第一の調製手段からの第一の試料は、事前に、溶解操作が施されてもよく；
―  溶解操作は、溶解試薬で、または、物理的方法といったような他の手段によって、実行されてもよく；
―  第二の移送手段は、部分的に、または、完全に、第一の移送手段から分離していてよい。それらは、同時に、または、第一の移送手段と並行して、機能できるものであってよい。
【００２６】
官能基化された粒子は：
―  強磁性の材料を有する粒子を有するものでもよく；
―  ポリマー材料で作られた外殻によって取り囲まれた、酸化鉄の高い含有量のコアを持った粒子を有していてもよく；
―  平均直径１マイクロメートル未満、好ましくは、５００ナノメートル未満、より好ましくは、１００〜３００ナノメートルの、実質的に球体形状を持った粒子を有してなるものであってよい。
【００２７】
免疫検出測定手段は、光学的な測定手段を有していてもよく、該光学的な測定手段は、少なくとも１つの光源と少なくとも１つの検出器とを持ち、これら光源と検出器は前記測定用キュベットの近傍に配置されており、前記キュベットが、前記光学的な測定手段の少なくとも高さにおいて、実質的に透明な壁部を持っていてもよい。
【００２８】
免疫検出測定手段はまた、少なくとも１つの光源から、前記測定用キュベットを通過するコリメート光線を生じさせることができる光調節手段をも有していてもよい。
【００２９】
本発明による装置は、４００ナノメートルから４マイクロメートルまでの間の光の波長、好ましくは、６００ナノメートルから９００ナノメートルまでの光の波長で発光することができる少なくとも１つの光源をも有していてもよい。
【００３０】
実施形態によれば、本発明による装置はまた：
―  前記測定用キュベット内に磁場を生じさせることができる電磁石を有していてもよく、
―  測定用キュベットの温度を調節するための手段、および／または、測定用キュベットの温度を測定するための手段を有していてもよく、
―  検定試薬を格納するための最適な温度に調節された格納容器をも有していてもよく、前記温度は、好ましくは、５℃から１５℃までの間とすることが可能であり、
―  官能基化された粒子を、格納されている検定試薬中で懸濁状態にするための、および／または、懸濁状態に保つための、撹拌手段を有していてもよく、該撹拌手段のためには超音波を用いることが可能であり、かつ、次の手段のうちの少なくとも１つを有することが可能であり、それは：格納容器に結合された外部ソノトロード、検定試薬に浸漬されたソノトロードである。
【００３１】
実施形態によれば、前記第一の移送手段は、サンプリングニードルを有していてもよく、該サンプリングニードルを移動させるための手段を有していてもよい。
【００３２】
実施形態によれば、第二の移送手段は：
―  サンプリングニードルを有していてもよく、かつ、前記サンプリングニードル（２１）を移動させるための手段（２６）を有していてもよく、これらは検定試薬を前記測定用キュベット内に移送することができるものであり、
―  第一の調製手段から試料を取得することができるサンプリングバルブを有していてもよい。
【００３３】
生物学的試料は、あらゆるタイプの適切な生物学的試料を有していてもよく、例えば、骨髄試料、脳脊髄液試料、リンパ液試料、尿試料、または、全血試料、等が挙げられる。
【００３４】
従って、特定の実施形態によれば、本発明による装置は、全血試料を有する生物学的試料を用いて、生物学的パラメーターを分析するための装置であってよい。
【００３５】
これはまた、少なくとも１つのヘマトクリット測定を提供することができる、細胞の構成成分を測定する手段をも有していてもよい。
【００３６】
実施形態によれば、このヘマトクリット測定は：
―  生物学的試料から、
―  第一の調製手段からの第二の試料から、
提供されてよい。
【００３７】
より全般的には、細胞の構成成分を測定する手段は、ヘマトクリット測定手段、または、血液学的な測定手段を有していてもよく、該血液学的な測定手段は、血液要素の分別および／または計数、ヘモグロビンの検定、ヘマトクリット測定および細胞容積測定のうちの、少なくとも１つの血液学的な測定を提供できるものであればよい。
【００３８】
本発明の他の態様によれば、生物学的試料を用いて生物学的パラメーターを分析するための方法が提供され、当該方法は：
―  第一の移送手段によって、前記生物学的試料の少なくとも１部分を第一の調製手段へと移送するステップ（工程）を有し、
―  第一の調製手段によって、少なくとも１つの希釈剤および／または１つの試薬で、前記生物学的試料の少なくとも１つの希釈を実行するステップを有し、
―  第二の調製手段によって、前記第一の調製手段からの第一の試料において、少なくとも１つの対象の分析物に特異的な少なくとも１つのリガンドで表面が官能基化された粒子を有する検定試薬で、少なくとも１つの希釈を実行するステップを有し、
―  官能基化された粒子の凝集度を測定用キュベット内で測定することによって、免疫検出測定手段によって、前記第二の調製手段からの試料で、少なくとも１つの対象の分析物を検定するステップを有し、
その特徴は、当該方法が、また：
―  前記第一の移送手段から少なくとも部分的に離れた第二の移送手段によって、前記第一の調製手段において事前に希釈された前記第一の試料を取得し、それを前記第二の調製手段へと移送するステップをも有し、
―  磁気相互作用によって、磁性コロイド状粒子を有する前記官能基化された粒子の凝集の促進を引き起こすように、前記測定用キュベット内に磁場を印加するステップをも有する。
【００３９】
本発明による方法はまた、対象の分析物の検定に先立って、試料の溶解のステップを有していてもよい。これは、特に、第二の調製手段によって、第一の調製手段からの第一の試料に、少なくとも１つの溶解の操作を実行するステップを有していてもよい。この溶解操作は、溶解試薬で実行できる。
【００４０】
実施形態によれば、本発明による方法はまた、細胞の構成成分を測定する手段によって、前記生物学的試料から、全容積に対する細胞容積の少なくとも１つの測定を得るステップを有していてもよい。
【００４１】
他の実施形態によれば、本発明による方法はまた、細胞の構成成分を測定する手段によって、前記第一の調製手段からの第二の試料から、全容積に対する細胞容積の少なくとも１つの測定を得るステップを有していてもよい。
【００４２】
前記少なくとも１つの対象の分析物の検定は：
―  少なくとも１つの試料および検定試薬を有する測定溶液を、前記測定用キュベットに入れるステップを有していてもよく、
―  前記測定用キュベットを通して、第一の光強度を測定するステップを有していてもよく、
―  磁場の影響の下で前記官能基化された粒子の凝集を可能にするように、所与の時間、前記測定用キュベット内に該磁場を印加するステップを有していてもよく、
―  前記磁場をオフにした後、リガンドと対象の分析物との間の結合に起因する前記官能基化された粒子の残留凝集を表す、第二の光強度を測定するステップを有していてもよく、
―  前記第一の光強度と第二の光強度との比率に応じた、光学密度における変動を算出するステップを有していてもよく、
―  前記光学密度における変動から対象のタンパク質の濃度を算出するように、事前に決定されたキャリブレーション関数を適用するステップを有していてもよい。
【００４３】
実施形態によれば、生物学的試料は、×５００を超える程度にまで前記測定溶液に希釈されてよい。
【００４４】
実施形態によれば、本発明による方法は、全血試料を有する生物学的試料を用いて、生物学的パラメーターを分析するための方法であってよい。
【００４５】
前記対象の分析物を検定するために：
―  サポニンを有する溶解試薬と、
―  最適なｐＨを維持できる緩衝液と
を用いてもよい。
【００４６】
実施形態によれば：
―  対象の分析物は、対象のタンパク質であってよく、
―  本発明による方法は、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を検定することを可能にする、リガンドで官能基化された粒子を使用してもよい。
【００４７】
有利なことには、超常磁性の特性を有するコロイド状粒子と、均一な磁場との使用によって、反応速度に関して良好なコントロールと優れた性能のレベルとが可能になる。その主たる理由は、関与する力の起源に関係しており：コロイドの超常磁性の性質（相対的磁化率は、およそ１）が、回転拡散性を妨害することなく、直径およそ２００ｎｍのコロイドにおよそ数十ピコニュートンの力を加えることを可能にする。鎖における粒子間の緊密な接触が確立できるのと同時に、粒子を回転ブラウン運動の作用にさらし、抗原（または、対象の分析物、または、タンパク質）を捕捉した隣り合う粒子が、ダブレット形成を促す向きを迅速に見つけることができる。従って、数秒で、抗原または対象のタンパク質は、１リットルあたりおよそ１ピコモルの感度で検定できる。
【００４８】
磁場の非存在下では、粒子の磁化はゼロのようであるが、前記粒子は、この磁場の存在下では、高い磁性磁化率を示すという事実によって、超常磁性の特性が反映されていることが想起される。これらは、磁場の非存在下で自然に分散し、これらは、後者の存在下で鎖の形状に集まる。
【００４９】
この凝集反応の効率と迅速さとによって、先行技術の装置よりも高い測定速度を得ることが可能になる。それは、抗体（またはリガンド）と抗原（または、対象の分析物、または、タンパク質）との間の認識が、この場合、磁場によって強いられるからであって、ブラウン運動によって開始する粒子のランダムな衝突から生じる遭遇の成り行きまかせではないからである。磁場によって強いられるこの遭遇によって、凝集物を迅速に形成することが可能になり、従って、所与の時間において、生物学的テストの感度が著しく高まる。
【００５０】
この効率はまた、高い希釈度（×５００よりも大きく、×１０００または×１５００でさえも超える）を使用することを可能にすると同時に、十分な測定時間を確保する。
【００５１】
とりわけ血液分析の分野においては、全血における対象の分析物またはタンパク質を検定するのに高い希釈度を使用できることが、本発明の特に有利な態様である。例えば、ＵＳ６ １０６ ７７８に記載されるような、簡単な撹拌によるラテックス粒子の凝集の方法を使用する先行技術の装置においては、遅い反応速度のため、使用される希釈度は、ここでは、およそ×１５から×５１である（例えば、Ｍｉｃｒｏｓ ＣＲＰ２００（登録商標）について）。偶然にも、ヘモグロビンを持った血液媒質は、可視波長において非常に吸収性がある。これは、光学的な測定が、赤外領域において行わなければならないことを意味し、そして、その長い波長のために、これらの測定は、媒質の吸収および濁度のすべての効果による影響を受けた、吸収または光学密度のシンプルな測定である。
【００５２】
およそ×５００またはそれ以上の希釈度によって、分析される媒質は、可視的な波長に関しては、非常に吸光性が低い。このことが、より短い波長を使用することを可能にし、かつ、媒質の吸収に対して粒子凝集物における分散現象によるロスが顕著な測定を成し遂げることを可能にする。従って、光学的な測定は、求められる現象をより（より密接に）表し、かつ、非常に高い感度の範囲と、先行技術の単純な吸収測定よりも低い測定ノイズレベルとを得ることを可能にする。
【００５３】
加えて、コロイド状粒子に使用される酸化鉄は、光の波長に応じた吸収の比率を有し、これは、ヘモグロビンの吸収の比率に近い。ヘモグロビンについてと同じように、６００から９００ｎｍまでの間に位置する透過性の波長があり、そこでは、媒質の吸収特性に関して過剰な障害なしに測定が実行できる。よって、非凝集粒子が媒質の分光学的な特性にほとんど乱れを生じさせず、それゆえに、測定に殆ど乱れを生じさせない。母体効果、即ち、検定される要素への媒質の影響が低減される。
【００５４】
例として、本発明による装置は、およそ×１５００の希釈度を用いて、２〜２００ｍｇ／ｌの範囲のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の検定を可能にする。
【００５５】
本発明の他の有利な態様によれば、検定試薬を測定用キュベット内に移送するために使用されるサンプリングニードルは、決して不希釈全血試料と接触することがない。これは、先行技術と比較して、実際の利点となる。というのは、この構成が、一方では、血液試料自体による検定試薬の汚染を制限することを可能にし、他方では、最終的な希釈において、１つの試料から他の試料へのキャリーオーバー干渉効果を低減することを可能にするからである。
【００５６】
同様に有利な態様によれば、細胞の構成成分の測定（または血液学的な測定）および免疫検出の測定が、並行して実行され、血液試料あたりおよそ１分という高い測定速度を得ることを可能にする。
【００５７】
加えて、血液学的な測定と免疫検出の測定とを組み合わせることは、流体的な部分や、サンプリングに限定されるものではない。実際、免疫検出の測定は、キャリブレーションを必要とし、それは有利にも、血液学的な測定の結果得たパラメーターを利用できる。
【００５８】
例えば、ヘマトクリット値は、試料の血清分画における（最初に、全血において検定された）分析物の濃度を表すために使用できる：この場合、検定される分析物の濃度を、白血球、血小板、および、赤血球の合計であるヘマトクリット値で除する。測定装置によってもたらされる非線形効果を考慮するために、全血において得られた値を次数２以上の多項式で除することも可能である。
【００５９】
他の実施例によれば、妨害源（過度に多い数の、赤血球および／または白血球および／または血小板、といったもの）である特定の異常を検出するために、差分的(differential)な細胞計数を考慮に入れることができる。この場合、分析物検定の結果は表示されない。
【００６０】
これらの計数測定もまた、次式のような多項補正関係を適用することによって、検定測定中に得られる光学密度の測定を補正するために、考慮に入れることができる：
2015508158.tif 000003
上記式中：
ｉ、ｊおよびｋは整数であり；
ＧＲ＃、ＧＢ＃、および、ＰＬＴ＃は、容積単位（Ｌ）あたりで表される赤血球、白血球および血小板数であり；
ａｉ、ｂｉ、および、ｃｉは、係数であり；
ＤＯ°は、補正されておらず、かつ、過剰な細胞、または、反応媒質における対応する破片に関連した測定アーチファクトを有する、測定された光学密度の値であり、；
ＤＯは、血液学的な測定から得られたデータに基づいて補正された光学密度の値である。
【００６１】
この関係は限定的でない；これには、特に、細胞容積の測定といったような、他のパラメーターが関与し得る。
【００６２】
図面および実施態様の記載
本発明の他の利点および詳細事項は、決して限定的でない使用および実施形態と、以下の添付図面とについての詳細な記載を読めば、明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】図１は、第一の実施形態による、本発明の装置の機能的なダイヤグラムを示している。
【図２】図２は、第一の実施形態による、本発明の装置をダイヤグラム的に示すものである。
【図３】図３は、免疫検出の測定用キュベットの断面図である。
【図４】図４は、図４（ａ）においては磁場での、図４（ｂ）においては光学信号での、検定測定中の測定信号取得の例を示している。
【図５】図５は、全血試料中のＣ反応性タンパク質を検定するためのキャリブレーション曲線の例を示している。
【図６】図６は、試料および試薬を取得する工程における、サンプリングバルブの動作を示している。
【図７】図７は、試料を移送して、測定用キュベットにおいて試薬と混合する工程における、サンプリングバルブの動作を図示している。
【図８】図８は、第二の実施形態による本発明の装置をダイヤグラム的に示すものである。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
図１および２を参照して、単一の全血試料６からヘモグラムを得ることを可能にし、かつ、少なくとも１つの血液分析物の検定を得ることを可能にする、分析装置の第一の実施形態を説明する。この装置は、１分間につき、およそ少なくとも１つの完全な（完結した）分析という、高い分析速度（分析レート）を得ることを可能にするように設計されている。
【００６５】
この装置は、血液学的なモジュール１と、免疫検出のモジュール２とで構成されている。これらの２つのモジュールは、機械的なおよび流体的なインターフェースである移送モジュール３によって結合されており、それによって、これらは同一の試料６を使用することができるようになっている。これらは、並行して作動する。このモジュールという形態での表現は、勿論、理解しやすくするための純粋に機能的なものであって、これは、構成要素の物理的な実施に関して、決して限定的なものではない。
【００６６】
血液学的なモジュール１は、例えば、ＵＳ６ １０６ ７７８に記載されるような当業者に知られる原理および技術に基づいている。従って、このモジュール１は、本文においては、比較的簡潔に記載する。これは、主に３つのサブアセンブリから構成され、それは、第一のサンプリングと移送の手段５、第一の調製手段７、および、血液学的な測定手段８である。
【００６７】
当該装置は、試料チェンジャーを有していてもよく、該試料チェンジャーは、管６に収容された血液試料を自動的に導入することを可能にする。
【００６８】
第一のサンプリングと移送の手段５は、移動しかつ吸引するシステムに接続された中空の金属製ニードル２０を有し、これが、試料管６から全血試料を取得することを可能にする。
【００６９】
このニードル２０の表面は、好ましくは、血液の様々な細胞および化学化合物の付着を制限することを意図した処理が施される。
【００７０】
当該装置が、密閉された試料管６とともに稼働するように設計されている場合、このニードル２０は、ストッパーを穿孔するためのシステムを備え得る。この場合、当該装置はまた、圧力平衡化システムをも有する。
【００７１】
前記ニードル２０は、移動可能な搬送器２５に結合されており、該搬送器は、それを第一の調製手段７の容器の上方に位置合わせすること、および、前記血液のアリコート（一部分）を血液学的なモジュール１に分配することを可能にする。
【００７２】
第一の調製手段７は、いくつかの混合容器２７を有し、該容器それぞれが、１以上の特定の試薬送り、排出口、混合のためのバブリング回路、および、血液学的な測定装置８へと移送するための回路に接続されている。それらは、ヘモグラムの確立、および計数のために必要とされる混合物を得るために、様々な試薬を伴ったニードル２０によってもたらされるアリコートの混合および正確な検定を可能にする。
【００７３】
それぞれの容器２７は、試料の特定の処理のための１以上の試薬に関連付けられており：それは、赤血球の張度と等しい張度を有する試薬での希釈、赤血球の溶解、ヘモグロビンの安定した複合体の溶解および形成等である。次に、完全なヘモグラムを所望の速度で実行できるように、これらの混合物は、当業者に知られている、流体要素を有する特定の装置によって分析される。従って、これらの希釈容器２７および血液学的な測定装置８が、白血球、赤血球、および、血小板の計数および分別を可能にする。これらの血液学的なデータは、ヘマトクリットＨｃｔまたはウィントローブ指数の測定等、他のパラメーターを有する。最後に、白血球は、細胞の亜集団へと分別でき、リンパ球、単球、顆粒白血球、および／または、未熟細胞の計数を可能にする。
【００７４】
血液学的な測定手段８は、公知のフローサイトメトリー技術に基づいている。これらは、血球を一つ一つ、１以上のカウンター内へ通過させる移動手段を有し、かつ、インピーダンス測定と光学的測定とを組み合わせている。分析される混合物の容積は、精度要件を、特に、計数に関して満たすような形で制御される。これらのデータの処理によって、血液学的な結果を得ることが可能になる。
【００７５】
移送モジュール３は、血液学的なモジュール１と免疫検出なモジュール２との間のインターフェースを提供する。これは、血液学的なモジュール１における血液の１以上のアリコートの回収と、それを免疫検出モジュール２へ移送することを可能にする。
【００７６】
これはまた、追加の希釈および１以上の試薬の添加によって、免疫学的な測定のための混合物の調製を続行することを可能にする。
【００７７】
移送モジュール３は、サンプリングバルブ２２を有する第二の移送手段を有し、該サンプリングバルブは、第一の調製手段７内のキュベット２７内の試料を取得することを可能にする。これはまた、免疫検出モジュール２用の試料を調製するための第二の調製手段２３、２４を有する。その動作は、後程詳細に説明する。
【００７８】
免疫検出モジュール２は、測定用キュベット９を有する。これはまた、第二の調製手段１０、１１を一組の試薬と共に有し、該第二の調製手段は、それらの分配手段を備え、磁性粒子を含んだ検定（アッセイ）試薬Ｒ３を格納するための温度調節されたコンパートメント１１を備えている。これはまた、搬送器２６上に、または、電動アーム（図示せず）上に設けられた特定のニードル２１を有する第二の移送手段４を有する。これはまた、ニードル２１をすすぐためのすすぎ用キュベット１０を有する。
【００７９】
測定用キュベット９は、媒質における光学密度（光学濃度）の測定を実行するための特定の光学部品を備えており、任意選択的には、光源のパワーの測定によって補正される。これは、コイルでつくられた電磁石２８を持ち、該電磁石は、測定する媒質に磁場を印加することを可能にする。この場の印加、および、時間の関数としてのその振幅が、磁化サイクルを定める。これは、電子的なデバイスによって制御され、必要であれば、保磁場をキャンセルすることを可能にし、それは、光学密度の変動の測定と同期される。このサイクルのプロファイルは、実行される免疫学的な測定のタイプに依存する。測定原理については、後で、より詳細に正確に説明する。
【００８０】
測定用キュベット９は、温度調節された雰囲気中に保持される。これは、二次的な加熱システムを備えており、例えば、利用可能なゾーンにおいて、このキュベット９の周囲に配置された、加熱されるアルミニウムブロックが挙げられる。温度プローブが、その温度を測定することを可能にし、そして、温度は必要ならば調節され得る。
【００８１】
図３を参照すると、この測定用キュベット９は、およそ数百μｌの容量を持っている。これは、光線（ライトビーム）３２の通過の方向に、２つの対向する透明な平面を有する。その容積は、照射される容積を最大にするように設計されている。優先的には、これは、効果的なすすぎおよび乾燥のために、排出漏斗を有していてもよい。用途に応じて、これは、ガラス、石英、または、射出成形されたまたは機械加工されたプラスチック（例えば、ＰＭＭＡまたはポリアミド）等、といったような、様々な材料でつくられ得る。好ましくは、これは、血液の様々な細胞および化学的な化合物の付着を低減するために、物理化学的な表面処理が施される。
【００８２】
温度調節されるコンパートメント１１は、磁性粒子を用いた試薬Ｒ３を、自由度（典型的には５℃から１５℃までの間）をもった貯蔵温度に維持することを可能にし、それによって、該試薬を実際に分析器内に貯蔵することを可能にする。これは、撹拌システム、例えば、超音波撹拌システム１３を備え、それが、コロイド状粒子をそれらの溶液中で懸濁状態にして保つこと、そして、また、不特定相互作用によるあらゆる凝集物を解離させることを可能にする。この超音波撹拌システム１３は、試薬ボトルの外部のソノトロード（すなわち、超音波を伝送する部分）を有し、該ボトルに機械的に連結されている。当業者に知られている他の撹拌システムは、勿論、想定されてよい。
【００８３】
免疫学的な測定モジュール２を制御し、かつ、キャリブレートするための試薬はまた、この温度調節されるゾーン１１に格納できる。
【００８４】
温度調節システム１２は、コンパートメント１１の温度を維持することを可能にする。非常な正確性は持つ必要はない。業界で従来使用され、当業者に知られているシステムで、大いに十分である。例えば、これは、オールオアナッシング調整ループ（all-or-nothing regulation loop）によって制御されるペルチェ効果モジュールであってもよい。
【００８５】
特定のサンプリングニードル２１は、免疫検出モジュール２のための専用のものである。これは、サイクル速度を保証できるようにするためには必要であり、処理能力の高い分析器においては、血液学的なモジュール１のニードル２０の占有率（使用率）は高い。本文に示した構成では、これは、測定用キュベット９、磁性粒子ボトル１１、および、すすぎ用キュベット１０の上方で、その垂直および水平移動を可能にする搬送器２６とアクチュエーターとに関連付けられている。
【００８６】
このサンプリングニードル２１は、磁性粒子のサンプリングのために、および、分析される溶液へとそれを分注するために使用され、これが、検定試薬Ｒ３の汚染のリスクを制限する。これはまた、測定用キュベット９内の混合物を連続的に吸引し排出することによって混合を行うために使用することもできる。
【００８７】
免疫検出モジュール２において使用される試薬は、３つの主な機能を実行する、それらは即ち：
―血液細胞の溶解、
―安定した定められた値にｐＨを維持すること、
―凝集反応、
である。
【００８８】
Ｒ１は溶解試薬と呼ばれ、Ｒ２は緩衝液と呼ばれ、Ｒ３は磁性粒子を含む検定（アッセイ）試薬と呼ばれる。
【００８９】
試薬Ｒ１は、溶解剤を有し、該溶解剤は、洗浄剤、または、細胞膜を修飾および断片化する特性を持った他のあらゆる分子を有する。これは、例えば、サポニン類、または、他に第四級アンモニウム類の洗浄剤を有し得る。これはまた、胆汁酸類から選択されるアニオン性の洗浄剤を有し得る。
【００９０】
緩衝液Ｒ２は、反応進行中、一定のｐＨを維持することができる緩衝系を有する。これは、例えば、およそ８.５のｐＨを持った、５０ｍＭのグリシン緩衝剤であってよい。
【００９１】
溶解試薬Ｒ１および緩衝液Ｒ２は、単一の試薬に組み合わせることができる。
【００９２】
検定試薬Ｒ３は、サブミクロンの粒子を有し、その表面には検定される分析物に対する抗体が固着している。これらの粒子は、δＤ／Ｄ＜２０％となるような平均径Ｄおよび標準偏差δＤを特徴とし、平均径は１００〜３００ｎｍである。これらの実質的に球体形の粒子は、ポリマー材料でつくられた外殻から形成され、その厚さは数十ナノメートルであり、その中には、酸化鉄の含有量が高いコアがある。そのような試薬Ｒ３の例は、ＥＰ１ ４４６ ６６６においても見られ得る。
【００９３】
粒子凝集物の検出は、コロイド状混合物によって分散した光を検出するために最適化された光学的装置によって実行される。これは、発光ダイオード（ＬＥＤ）タイプの光源３０と、測定用キュベット９の一方の側に配置されたフォトダイオードまたは光電子増倍管を持った検出器３１とを有する。これはまた、ビーム調節手段を有し、該手段は、コリメートされた光線３２を生成し、キュベット９を通過させることを可能にし、該光線の拡散は、最小限であり、理想的には、回析によって制限される。
【００９４】
概しては、低い時間的コヒーレンスを持った光源３０を使用することが望ましく、それは、レーザーグラニュラリティ現象（laser granularity phenomenon）、または他に、アセンブリの壁部において多重反射から生じる、分析媒質における多重干渉（multiple interferences）等、様々な光学的ノイズを低減または回避するためである。
【００９５】
図４を参照する。検定測定を実行するために、磁化サイクルが実行され、該サイクルは、時間的なプロファイルを有する磁場の印加を有し、該プロファイルは、その形状、その持続時間、その期間の数等について定められている。図４（ａ）に図示されるように、示した例では、この磁化サイクルは、磁場の時間的なステップ関数の適用を有する。磁場の印加中、コロイド状の磁性粒子は鎖状に集まる。磁場の遮断後、これらは、リガンドまたは抗体による、対象の分析物またはタンパク質の捕捉によって形成される凝集物を除いて、再度分散する。
【００９６】
図４（ｂ）に図示されるように、測定用キュベット９を通過して伝送される光学信号は、磁化サイクルの前、最中、および、後において記録される。次に、透過光の変動は、光学密度の変動δＯＤ＝−Ｌｏｇ（Ｉｔ/Ｉｏ）（式中、「Ｌｏｇ」は、対数演算であり、Ｉｔは、磁場の印加後の透過光の強度であり、Ｉｏは、磁場の印加前の透過光の強度である）を算出することによって、磁場の印加の前後で決定される。この透過光の変動は、形成した凝集物による分散による。
【００９７】
検定されるそれぞれの分析物（濃度Ｃｉの、ｉで表されるもの）について、当該方法は、変動δＯＤｉを決定することを可能にする。実際、測定されるδＯＤｉの量は、Ｃｉに正比例しない。数学的な関数は、多項式であってよく、その係数がキャリブレーションによって決定され、数式Ｃｉ＝Ｆｉ（δＯＤｉ）(式中、Ｆｉは、分析物Ｃｉに特有の関数である)の関係によってＣｉを決定することができる。
【００９８】
図５は、全血試料におけるＣ反応性タンパク質を検定するためのキャリブレーション関数の例を示している。
【００９９】
２つの異なる分析物を検定するための、本発明による方法の例示的な実施形態については、ここで、より正確に説明する。
【０１００】
血液学的なモジュール１は、１時間につき８０回のテストを実行することができるように設計されている。
【０１０１】
完全なヘモグラムを得、また、血液要素の計数をも得るためのサイクルの期間は、４５秒である。
【０１０２】
免疫検出モジュール２は、２つの測定用キュベット９を有し、それらキュベットは、２つの同時の測定を、これもまた４５秒で実行することを可能にする。これらの測定は、２つの異なる分析物の測定、または、２つの異なる測定範囲における同じ分析物の測定を有していてもよい。
【０１０３】
移送モジュール３は、赤血球計数のために血液学的なモジュール１によって始めに調製された希釈物を、サンプリングバルブ２２を通してサンプリングすることを可能にする。次に、これは、２つの測定用キュベット９に、同じ血液試料の２つの異なる調製物を同時に送る。
【０１０４】
当該装置は、以下の時間的なシーケンスを実行する：
血液学的なモジュール１は、血液アリコート６をサンプリングし、そのニードル２０を０から１０ｓまですすぐ（リンスする）。並行して、２つのモジュールの様々なキュベットがすすがれる。次に、血液学的なモジュール１は、赤血球（ＲＢＣ）計数用に第一の希釈物を調製し、他方で、免疫検出モジュール２が、検定試薬Ｒ３をサンプリングして、その２つの測定用キュベット９（それぞれのキュベットが、タンパク質に特異的な異なる検定試薬Ｒ３を受け取る）内にそれらを分注し始める。約２０秒後、ＲＢＣ希釈物の一部が、免疫検出モジュール２へと移送され、他方で、後者が、検定試薬Ｒ３の分注を終える。血液学的なモジュール１は、他のその容器２７において、他の混合物の調製を並行して続行する。このとき、サイクルの開始から約２５ｓであり、血液学的なモジュールは、４５ｓまでのそのサイクルにおいて、その役割を終える。この間、免疫検出モジュール２の測定用キュベット９内の溶液は、混合され、次に、検定測定が開始し、サイクルの開始から４５ｓで終わる。
【０１０５】
検定測定サイクルは、９秒だけ続き、この結果、速度は、調製サイクルの持続時間によって制限されるということに留意するべきである。従って、本発明による方法は、例えば、マイクロ流体システムに基づいた好適な調製システムを用いて、はるかにより高い測定速度に適合可能である。
【０１０６】
本実施形態において使用されたサンプリングバルブ２２は、当業者によく知られた、スライドゲートタイプのサンプリングバルブである。それは、支持体４１内に並進移動的な移動部分４０を有する。該移動部分４０は、これを通過するキャピラリ管を持ち、これが、アリコートを格納することを可能にし、該支持体４１は、流体ポートを有する。アリコートが、第一の流体ポートによって吸入され得、移動部分４０に格納され得、次に、該移動部分４０は、アリコートが他の流体ポートを通じて放出され得るように移動する。
【０１０７】
サンプリングバルブ２２は、２つのタイプのアリコートを処理する：
―  第一のシリーズのアリコートであって、これらは、血液学的なモジュール内に入っている、いくつかの所定の容積の試料希釈物のサンプリングに対応する：これらのサンプリングされた容積は、ｖ１、ｖ２で表される；
―  第二のシリーズのアリコートであって、これらは、いくつかの量の溶解試薬Ｒ１のサンプリングに対応する：これらのサンプリングされた容積は、ｖ'１、ｖ'２で表される。
【０１０８】
それぞれの容積ｖ'１は、それぞれのアリコートｖ１に含まれる細胞の全溶解を実行するように調節される。サンプリングバルブ２２は、アリコートｖ１およびｖ'１を流体的に結合するように設計されている。
【０１０９】
図６を参照すると、先ず第一に、容器２７内の試料と、容器２３内の溶解試薬Ｒ１とのサンプリングを可能にするために、サンプリングバルブ２２が位置決めされる。これらのサンプリングは、シリンジ４３を用いて、ポンプ送りによって実行され、該シリンジはまた、容器２４内の緩衝液Ｒ２をサンプリングする。 
【０１１０】
図７を参照すると、第二に、サンプリングバルブ２２は、アリコートｖ１およびｖ'１を緩衝液Ｒ２によって測定用キュベット９内に押し入れることができるように位置決めされ、その容積ｖ''１は、所望の最終希釈度を得るために調節され、また、測定用キュベット９に入れられる。この押しは、シリンジ４３によって実行される。
【０１１１】
加えて、（求められるタンパク質に特異的な）検定試薬Ｒ３の容積ｖ'''１は、免疫検出モジュール２のサンプリングニードル２１によって、測定用キュベット９内へと分注される。
【０１１２】
Ｃ反応性タンパク質、即ちＣＲＰ、といったような分析物を検定するためには：
―  溶解試薬Ｒ１は、試料の細胞要素を迅速に溶解することができる洗浄剤の水溶液である。該洗浄剤は、イオン性または非イオン性であり得、サポニンが好ましい；
―  緩衝剤Ｒ２は、反応媒質、例えば、グリシン緩衝剤において、８.５のｐＨを維持できる緩衝剤系である；
―  検定試薬Ｒ３は、粒子の懸濁物を有し、該粒子上に、検定される分析物（この場合、ＣＲＰ）を特異的に認識できる単クローン性または多クローン性の抗体が共有結合的に固着している。任意選択的には、懸濁物は、いくつかの粒子集団を有し得、これらのそれぞれが、表面を固定された異なる（単クローン性または多クローン性の）抗体を持ち、それぞれの抗体は、検定される分析物の異なるエピトープを認識する。
【０１１３】
２〜２００ｍｇ／ｌの範囲のＣＲＰについてのプロトコルの例は、以下の通りである：
ｖ１＝６.５μｌの試料であって、該試料は、血液学的なモジュール（１／４０）の白血球を測定するための容器内で前希釈されているもの、
ｖ'１＝１００μｌの、蒸留水中０.２％のサポニン、
ｖ''１＝１１８μｌの、０.１Ｍグリシン緩衝剤、ｐＨ８.５、
ｖ'''１＝２５μｌの、０.４％の粒子の懸濁物。
【０１１４】
実施形態の変更形態によれば：
―  サンプリング移送モジュール５は、例えば、文献ＷＯ２００９/０２４７１０に記載されるような、分注システムに接続されたサンプリングバルブまたはサンプリングシステムを有していてもよい。これはまた、ニードル２０の代わりにキャピラリ管を有していてもよい；
―  血液学的な測定用に始めに調製された１以上の希釈物を、第二の移送手段（または移送モジュール）にて、１以上の容器２７内で直接サンプリングすることができる。このサンプリングは、希釈度および使用される試薬に応じて、任意の容器内で実行できる。これは、また、免疫学的な測定専用の容器内であってもよい。その構成は、２つの原則的な基準に従って選択される。先ず、移送される混合物は、免疫学的な測定（例えば、互いに対する試薬の適合性(compatibility)、希釈度の適合性等）の必要性を満たさなければならない。次に、当該方法は、血液学的なモジュール１に対してわずかに侵入的でなければならず、特に、これは、そのサイクルの期間を大幅に延長してはならない。勿論、これはまた、血液学的なモジュール１に必要とされる希釈物を分解してはならない；
―  測定用キュベット９は、分析される溶液を混合するためのシステムを有していてもよい。これは、バブリング回路によって、または、パイプ若しくは専用チャンバー内の連続した吸引と排出の回路によって、区別なく提供され得る；
―  測定用キュベット９は、温度調節されなくてもよい。これは、１以上の温度センサーを有していてもよく、該センサーが、適切なモデルまたはアルゴリズムを適用することによって免疫検出の測定を補正するために使用される；
―  （超音波）撹拌システム１３は、様々な形で実施できる。これは、ボトルとソノトロードとの間のドライカップリングまたはウェットカップリングによって、ボトルの外側での撹拌によって非侵入的に実施され得る。そして、振動ニードルの形態にて液浸したソノトロードを使用すること、または、撹拌を実施するためにサンプリングニードルを使用することさえ、可能である；
―  第二の移送手段４は、サンプリングニードル２１を、血液学的なモジュール１の容器２７に入れることを可能にするように設計することができる。この場合、水平搬送器２６の支持体は、該血液学的なモジュール１の搬送器２５と同じ支持体に取り付けることができる。これはまた、別個の支持体に取り付けることもでき、任意選択的には、関連する容器に位置合わせされるならば、血液学的なモジュールのキュベット２７の位置合わせの軸線上に位置合わせされ得る。水平搬送器はまた、回転アームに置き換えられ得る。この場合、血液学的なモジュール２７の任意のキュベット、測定用キュベット９、すすぎ用キュベット１０、および、粒子のボトル１１は、このアームの回転中心を中心におよそ円形に配列されていなければならない；
―  試料が、最初に、血液学的なモジュールの容器の１つにおいて、特に、白血球計数に使用された容器において事前に希釈されている場合には、溶解試薬Ｒ１は省略できる。この場合、全血試料は、免疫検出モジュール内に移送される前に血液学的なモジュールの溶解試薬と混合できる。この場合、同様に、試料は、免疫検出モジュールにおいて、緩衝液Ｒ２および検定試薬Ｒ３だけを受け取る；
―  光源３０は、小さい寸法のあらゆる光源を有してよく、レーザー、スーパールミネッセントダイオード、ＲＣ−ＬＥＤ（resonant cavity light-emitting diode、共振空洞発光ダイオード）、または、程よくダイヤフラム加工された白熱灯といったものが挙げられる。シングルモード光ファイバーから生じた光線のコリメーションによって、ビーム３２を生成することも可能である。
【０１１５】
ここで、図８を参照し、単一の全血試料６を用いてヘモグラムと少なくとも１つの血液分析物の検定とを得るための分析装置の第二の実施形態について説明する。この装置は、１分につきおよそ少なくとも１回の完結した分析をするという高い分析速度を達成できるように設計される。
【０１１６】
この装置は、免疫検出モジュール２および外部の血液学的なモジュール５０を有する。外部の血液学的なモジュール５０は、第一の実施形態の血液学的なモジュール１と同様に動作し、免疫検出モジュール２は同じである。従って、第一および第二の実施形態の違いについてのみ、以下に詳細に説明する。
【０１１７】
本実施形態において、免疫検出モジュール２と外部の血液学的なモジュール５０との間を移送されるのは、全血試料６であって、第一の実施形態にあるように、事前希釈物ではない。従って、ヘモグラム測定と、血液分析物の検定のための測定とが、常に同じ全血試料６で実行される。
【０１１８】
当該装置は、免疫検出モジュール２と外部の血液学的なモジュール５０との間で、管６に入っている血液試料を自動的に移送することを可能にする試料チェンジャーを有していてもよい。
【０１１９】
血液学的なおよび免疫検出の測定の組み合わせは、全血試料６の共有に限定されない。上述のように、血液学的な測定を使用して免疫検出の測定を処理できるようにするため、情報もまた、モジュール間を伝送される。このために、免疫検出モジュール２と外部の血液学的なモジュール５０とは、コンピューターネットワークによって相互接続されてもよい。
【０１２０】
本発明による装置は、上述のように、常に、第一のサンプリングと移送の手段５と、第一の調製手段７とを有するが、これらは、免疫検出モジュール２に機能的に取り付けられている。同じように、移送モジュール３は、第一の実施形態のそれと同一であるが、免疫検出モジュール２に機能的に取り付けられている。
【０１２１】
第一の調製手段７は、ニードル２０によって、全血試料６からもたらされるアリコートの第一の希釈を実行することを可能にするキュベット２７を有する。
【０１２２】
移送モジュール３は、サンプリングバルブ２２を持った第二の移送手段を有し、それによって、第一の調製手段７におけるキュベット２７内の試料を取得することが可能になっている。
【０１２３】
従って、この実施形態は、前述の通り、高い希釈度で免疫検出の測定を実行することを可能にすると同時に、中間キュベット２７の使用によって、血液試料６間の二次汚染のリスクを最小限にする。
【０１２４】
最後に、外部の血液学的なモジュール５０が、それ自体のサンプリング調製手段を有し、該手段が、第一のサンプリングと移送の手段５から離れ、かつ、免疫検出モジュール２に取り付けられた第一の調製手段７から離れていることに留意するべきである。
【０１２５】
変更形態によれば、
―  免疫検出モジュール２を、いくつかの外部の血液学的なモジュール５０に結合することが可能であり；
―  第一の実施形態に示される通り、免疫検出モジュール２を、１以上の外部の血液学的なモジュール５０および血液学的なモジュール１に結合することができる。 
【０１２６】
勿論、本発明は、直前に記載された実施例に限定されず、本発明の文脈から逸脱することなく、これらの実施例に、数多くの調整がなされ得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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