(57)【要約】本明細書は、標的療法のための薬物送達結合体を記載する。さらに詳しくは、本明細書は、癌および炎症性疾患を治療するのに有用な1つ以上の非天然アミノ酸を含む多価リンカーを包含する薬物送達結合体を記載する。
2015536323.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：B−L(D)xで示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩(ここで、Bは、細胞表面受容体結合および／または標的リガンドのラジカルであり、Dは、それぞれの場合において独立して選ばれた薬物のラジカルであり、xは、1、2、3、4および5から選ばれる整数であり；およびLは、1つ以上の非天然アミノ酸を含む多価放出可能なリンカーであり；および、ここで、Bは、Lに共有的に結合し、Lは、Dに共有的に結合する)；および
ここで、化合物は、以下の式の任意のサブセットまたはサブグループのいずれか1つではない：
2015536323.tif 000269
2015536323.tif 000270
EC0038
2015536323.tif 000271
EC0054
2015536323.tif 000272
EC0056
2015536323.tif 000273
EC0077
2015536323.tif 000274
EC0088
2015536323.tif 000275
EC0136
2015536323.tif 000276
EC0137
2015536323.tif 000277
EC0138
2015536323.tif 000278
EC0260
および／または
ここで、化合物は以下の式ではない：
2015536323.tif 000279
EC0153
および／または
ここで、化合物は、以下の式の任意のサブセットまたはサブグループのいずれか1つではない：
2015536323.tif 000280
2015536323.tif 000281
EC0052
2015536323.tif 000282
EC0069
2015536323.tif 000283
EC0070
2015536323.tif 000284
EC0071
2015536323.tif 000285
EC0111
2015536323.tif 000286
EC0155
2015536323.tif 000287
EC0894
および／または
ここで、化合物は、以下の式の任意のサブセットまたはサブグループのいずれか1つではない：
2015536323.tif 000288
EC0082
2015536323.tif 000289
EC0083
2015536323.tif 000290
EC0084
および／または
ここで、化合物は以下の式ではない：
2015536323.tif 000291
EC0060
および／または
上記の任意の組合せ、またはその任意の医薬的に許容しうる塩ではない。
【請求項２】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−立体配置を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アラニン、D−アスパラギン酸、D−アスパラギン、D−システイン、D−グルタミン酸、D−フェニルアラニン、D−ヒスチジン、D−イソロイシン、D−リシン、D−ロイシン、D−メチオニン、D−プロリン、D−グルタミン、D−アルギニン、D−セリン、D−トレオニン、D−バリン、D−トリプトファン、D−チロシンおよびD−オルニチン、ならびにそれらの任意のアミノ酸誘導体から選ばれる。請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Lが、2つ以上の非天然アミノ酸を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Lが、3つ以上の非天然アミノ酸を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Lが、4つ以上の非天然アミノ酸を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
リガンドが、葉酸受容体結合リガンドである、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項８】
リガンドがD−グルタミルを含む葉酸塩である、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項９】
Lが、1つ以上のジスルフィドをさらに含む、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１０】
Lが、1つ以上の二価親水性ラジカルをさらに含む、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１１】
Lが、1つ以上の二価ポリオキシラジカルをさらに含む、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１２】
Lが、1つ以上の二価ポリヒドロキシラジカルをさらに含む、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１３】
少なくとも1つのポリヒドロキシラジカルが、式：
CH2−(CH(OH))n−CH2−OH
(式中、nは、1、2、3、4、5および6から選ばれる)
で示される請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Lが、二価ポリグルタミン酸ラジカル(ここで、少なくとも1つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルを形成する)を含む、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１５】
少なくとも1つのグルタミン酸が、D−グルタミン酸である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
少なくとも1つのグルタミン酸が、非置換D−グルタミン酸である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Lが、二価ポリ(D−グルタミン酸)ラジカル(ここで、少なくとも1つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する)を含む、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１８】
Lが、式：
(K−L)d
(式中、Kは、二価D−グルタミン酸ラジカルであり、Lは、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する二価L−グルタミン酸ラジカルであり、dは、1、2、3または4である)
の二価ラジカルを含む、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１９】
少なくとも1つのアミノポリヒドロキシラジカルが、式：
NH−CH2−(CH(OH))m−CH2−OH
(式中、mは、1、2、3、4、5および6から選ばれる)
である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２０】
少なくとも1つのアミノポリヒドロキシラジカルが、式：
NH−CH2−(CH(OH))m−CH2−OH
(式中、mは、1、2、3、4、5および6から選ばれる)
である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２１】
少なくとも1つのアミノポリヒドロキシラジカルが、式：
NH−CH2−(CH(OH))m−R
(式中、mは、1、2、3、4、5および6から選ばれ、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルである)
である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２２】
少なくとも1つのアミノポリヒドロキシラジカルが、式：
NH−CH2−(CH(OH))m−R
(式中、mは、1、2、3、4、5および6から選ばれ、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルである)
である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２３】
Lが、式：
S−CH2CH2−O−C(O)
の二価ラジカルを含む、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項２４】
Lが、式：
S−S−CH2CH2−O−C(O)
の二価ラジカルを含む、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項２５】
xが、1である、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項２６】
少なくとも1つの薬物が、細胞毒性薬である、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項２７】
少なくとも1つの薬物が、癌治療剤である、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項２８】
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンである、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項２９】
少なくとも1つの薬物が、炎症治療薬である、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項３０】
少なくとも1つの薬物が、ジヒドロ葉酸レダクターゼインヒビターである、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項３１】
少なくとも1つの薬物が、ラパマイシンの哺乳動物標的(mTOR)のインヒビターである、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項３２】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000292
で示されるラジカルである、請求項１〜５のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項３３】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000293
で示されるラジカルである、請求項１〜５のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項３４】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000294
で示されるラジカルである、請求項１〜５のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項３５】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000295
で示されるラジカルである、請求項１〜５のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項３６】
化合物が、式：EC1456
2015536323.tif 000296
またはその医薬的に許容しうる塩である、請求項１〜５のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項３７】
化合物が、式：EC1669
2015536323.tif 000297
またはその医薬的に許容しうる塩である、請求項１〜５のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項３８】
1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用で、請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項３９】
任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用で、治療有効量の1種以上の請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物を含む単位用量または単位投与剤形組成物。
【請求項４０】
治療有効量の1種以上の請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物を含む、宿主動物における癌または炎症の治療用組成物；または治療有効量の1種以上の請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物を含み、任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せをさらに含む医薬組成物。
【請求項４１】
宿主動物における癌または炎症の治療用医薬の製造における、任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用での1種以上の請求項１〜６のいずれか1つに記載の化合物の使用。
【請求項４２】
癌が、薬物耐性癌である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
癌が、卵巣癌である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４４】
癌が、乳癌である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４５】
癌が、非小細胞肺癌である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４６】
癌が、肝細胞癌腫または肝細胞癌である、請求項４１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法119条(e)の下に、2012年10月16日出願の米国仮出願第61/714,565号、2013年3月15日出願の米国仮出願第61/790,234号、2013年8月13日出願の米国仮出願第61/865,382号および2013年9月13日出願の米国仮出願第61/877,317号に対する優先権を主張する。本出願はまた、米国特許法365条(c)の下に、び2013年3月15日出願の米国特許出願第13/837,539号に対する優先権を主張する。上記各出願の開示の全体を参照することにより本出願に含める。
技術分野
本明細書に記載の発明は、標的療法のための薬物送達結合体に関連する。さらに詳しくは、本明細書に記載の発明は1つ以上の非天然アミノ酸を含む多価リンカーを包含する薬物送達結合体に関連する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳類免疫系は、腫瘍細胞、他の病原性細胞、および侵入する外来病原体の認識および排除のための手段を提供する。免疫系は通常、強力な防御線を提供するが、癌細胞などの病原性細胞および他の感染性因子が宿主免疫反応を逃れて、共存する宿主病原性と共に増殖または持続する多くの例がある。化学療法剤および放射線療法は、たとえば複製を繰り返す新生物を排除するために開発されてきた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら現在入手可能な化学療法剤および放射線療法投与計画の多くは、それらが病原性細胞を優先的に破壊するための十分な選択性を欠いており、造血系の細胞および他の非病原性細胞などの正常な宿主細胞も傷つけるために有害な副作用を有する。これらの抗癌剤の有害な副作用は、病原性細胞集団に対して選択的であり、宿主毒性の低い新たな治療法の開発の必要性を際立たせている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
1つ以上の非天然アミノ酸から形成された多価リンカーを包含する薬物送達結合体が、病原性細胞集団を治療するのに有効であり、低い宿主動物毒性を示すことが発見されている。
本発明の1つの例示的かつ非限定的実施態様では、本明細書は、式：
B−L−Dx
[式中、B、L、Dおよびxは、本明細書に記載されるさまざまな実施態様および態様において定義される]
で示される化合物を記載する。
【０００５】
もう1つの実施態様では、1種以上の化合物を含む医薬組成物もまた、本明細書に記載される。1つの態様では、組成物は、癌、炎症などを有する患者を治療するための治療有効量の1種以上の化合物を包含する。組成物が、限定的ではないが、他の治療的に活性な化合物および／または1種以上の担体、希釈剤、賦形剤など、およびそれらの組合せなどの他の化合物および／または成分を包含してもよいことを理解すべきである。もう1つの実施態様では、癌、炎症などを有する患者または宿主動物を治療するための化合物および医薬組成物を用いる方法もまた、本明細書に記載される。1つの態様では、方法は、癌、炎症などを有する患者に、1種以上の本明細書に記載の化合物および／または組成物を投与するステップを包含する。もう1つの態様では、方法は、癌、炎症などを有する患者を治療するために、治療有効量の1種以上の本明細書に記載の化合物および／または組成物を投与することを包含する。もう1つの実施態様では、癌、炎症などを有する患者を治療するための医薬の製造における化合物および組成物の使用もまた、本明細書に記載される。1つの態様では、医薬は、治療有効量の1種以上の癌、炎症などを有する患者を治療するための化合物および／または組成物を包含する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図1Aは、37℃にて1時間でのKB細胞におけるEC1669の相対的親和性を示す。図1Bは、37℃にて1時間でのCHO−β細胞におけるEC1669の相対的親和性を示す。
【図２】図2は、2時間および72時間でのXTT細胞生存性によって決定されたRAW264.7細胞におけるEC1669の細胞静止作用を示す。
【図３】図3Aは、100 μmol/kgでEC0923との共投与にてEC1456を投与されたマウス(黒三角)および非処置(PBS)コントロールマウス(黒四角)と比較した、連続して2週間、1 μmol/kgｘ3回/週(TIW)(月/水/金)にてEC1456を投与されたnu/nuマウス(黒丸)における、KB腫瘍に対するEC1456のインビボ活性を示す。点線の垂直線は、最終投与の日を表す。図3Bは、EC1456が、動物の体重によって決定されるどのような観察可能な全動物毒性も、もたらさなかったことを示す。
【図４】図4Aは、s.c.KB腫瘍を有するnu/nuマウスにおけるEC1663の活性を示す。ここで、EC1663は、2週間、週3回(月/水/金)、0.5 μmol/kgを第7日から開始して静脈内投与され(黒三角)、非処置コントロール(黒四角)と比較された。N＝5動物/コホート。点線の垂直線は、最後の投与日である。図4Aは、試験動物における4/4 PRを示す。図4Bは、EC1663が、有意な宿主動物毒性を示さなかったことを示す。
【図５】図5Aは、樹立皮下されたMDA−MB−231腫瘍に対するEC1456の活性を示す。s.c. MDA−MB−231腫瘍(94−145 mm3)を有する動物は、2週間、週3回(月/水/金)、2 μmol/kg(パネルA)のEC1456(黒丸)を第１7日から開始して静脈内投与され、非処置動物(黒四角)と比較された。N＝5動物/コホート。点線の垂直線は、最後の投与日である。図5Bは、EC1456が、重量変化％によって決定される全動物毒性を引き起こさなかったことを示す。
【図６】図6Aは、s.c.KB−CR2000(シスプラチン耐性)腫瘍(98−148 mm3)を有する動物におけるEC1456の活性を示す。ここで、EC1456が、2週間、週3回(月/水/金)、2 μmol/kg(黒丸)を第6日から開始して静脈内投与されるか、または3 mg/kgのシスプラチンが、2週間、週2回(火/木)(黒三角)を第6日から開始して静脈内投与され、非処置コントロールと比較された。N＝5動物/コホート。点線の垂直線は、最後の投与日である。図6Bは、EC1456が、有意な宿主動物毒性を示さなかったことをを示す。対照的に、シスプラチン処置は、投与期間中、実質的な宿主動物毒性をもたらした。
【図７】図7は、アジュバント誘導関節炎に対するEC1496のインビボ有効性を示す。矢印は、処置日を示す。(a)健康なコントロール、(b)非処置コントロール、(c)EC1496、(d)EC1496＋過剰EC0923(コンパレーター/競合化合物)。
【図８】図8Aは、関節炎に対するEC1669のインビボ有効性を示す。(a)健康なコントロール、(a)非処置コントロール、(b)EC1669(375 nmol/kg)、(c)EC1669＋500x EC0923。図8Bは、EC1669が、全動物毒性を示さないことを示す。(a)非処置コントロール、(b)EC1669(375 nmol/kg)、(c)EC1669＋500x EC0923、(d)健康なコントロール。
【図９】図9Aは、手の腫れによって決定された関節炎に対するEC1669のインビボ有効性を示す。図9Bは、骨X線写真によって決定された関節炎に対するEC1669のインビボ有効性を示す。
【図１０】図10Aは、AIAラットにおけるEC1669単独およびEC1669＋セルセプトの組合せ共療法のインビボ有効性を示す。ここで、第0日は、誘導後9日であり、矢印は、処置日を示す。(a)健康なコントロール、(b)非処置コントロール、(c)EC1669(1000 nmol/kg、siw、sc)、(d)CellCept(商標)(30 mg/kg、po、qdx5)、(e)EC1669＋セルセプト(CellCept)(商標)。図10Bは、投与プロトコルのそれぞれの混合物と比較した全動物毒性を示す。
【図１１】図11は、手の腫れによって決定されたAIAラットにおけるEC1669単独およびEC1669＋セルセプトの組合せ共療法のインビボ有効性を示す。
【図１２】図12Aは、EAU(両眼の全ブドウ膜炎スコア)に対するEC1669のインビボ有効性を示す。動物は、誘導後第8日から開始して、1日おきにEC1669(黒四角)、EC1669＋EC0923(白四角)およびMTX(黒菱形)で処置されるか、または非処置動物(黒丸)に由来する。第0日は、誘導後8日であり、矢印は、処置日を示す。図12Bは、EC1669が、全動物毒性を示さないことを示す。
【図１３】図13Aは、EAU(両眼の全ブドウ膜炎スコア)に対するEC1496のインビボ有効性を示す。(a)ブドウ膜炎非処置コントロール、(b)EC1496(375 nmol/kg)、(c)EC1496＋過剰EC0923。図13Bは、組織学によって決定されたEAUに対するEC1496のインビボ有効性を示す。
【図１４】図14Aは、EAEに対するEC1669のインビボ有効性を示す。(a)非処置EAEコントロール、(b)EC1669(250 nmol/kg)、(c)EC1669＋過剰EC0923。動物は、EAE誘導後第8日から開始して一日おき(矢印によって示される)に処置され、非処置コントロールと比較される。図14Bは、各グループについて平均した、体重における変化パーセントを示す。
【図１５】図15は、EAEに対するEC1496のインビボ有効性を示す。非処置動物およびEAE誘導後第8日から開始して一日おきにEC1496およびEC1496＋EC0923で処置された動物からの個々のEAEスコアが示され、非処置コントロールと比較される。
【図１６】図16Aは、EC1496(500 nmol/kg、s.c.)の薬物動態ならびにアミノプテリンおよびアミノプテリンヒドラジドのインビボ生成を示す。図16Bは、EC0746(比較化合物、500 nmol/kg、s.c.)の薬物動態ならびにアミノプテリンおよびアミノプテリンヒドラジドのインビボ生成を示す。
【図１７】図17は、マウスにおける3H−EC1669、パネル(A)、(C)および(E)；ならびに3H−メトトレキサート、パネル(B)、(D)および(F)の薬物動態的生体内分布を示す。試験化合物は、500 nmol/kg、s.c.でBalb/cマウスに投与された。
【図１８】図18は、放射能の経時測定値としての、マウスにおける3H−EC1669(黒四角)および3H−MTX(黒三角)のRBC取り込みの比較を示す。
【図１９】図19は、(b)EC1496(3 μmol/kg)および(c)EC0746(比較化合物、3 μmol/kg))の間の相対的全動物毒性、ならびに葉酸欠損ラットにおいて2週間BIW(週2回)投与された場合のビヒクルコントロール(a)に対する比較を示す。
【図２０】図20は、ビヒクルコントロールと比較した、EC1456の最大耐量(MTD)を示す。ビヒクルコントロール(黒四角)、0.33 μmol/kgでのEC1456(黒丸)、0.41 μmol/kgでのEC1456(上向き黒三角)、0.51 μmol/kgでのEC1456(下向き黒三角)および0.67 μmol/kgでのEC1456(黒菱形)。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
詳細な記載
本発明のいくつかの例示的実施態様は、以下の項(clause)によって記載される：
式：B−L(D)xで示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩(ここで、Bは、細胞表面受容体結合および／または標的リガンドのラジカルであり、Dは、それぞれの場合において独立して選ばれた薬物のラジカルであり、xは、1、2、3、4および5から選ばれる整数であり；およびLは、1つ以上の非天然アミノ酸を含む多価放出可能なリンカー(releasable linker)であり；および、ここで、Bは、Lに共有的に結合し、Lは、Dに共有的に結合する)；および
ここで、化合物は、以下の式の任意のサブセットまたはサブグループのいずれか1つではない：
2015536323.tif 000003
2015536323.tif 000004
EC0038
2015536323.tif 000005
EC0054
2015536323.tif 000006
EC0056
2015536323.tif 000007
EC0074
2015536323.tif 000008
EC0077
2015536323.tif 000009
EC0088
2015536323.tif 000010
EC0136
2015536323.tif 000011
EC0137
2015536323.tif 000012
EC0138
2015536323.tif 000013
EC0260
および／または
ここで、化合物は以下の式ではない：
2015536323.tif 000014
EC0153
および／または
ここで、化合物は、以下の式の任意のサブセットまたはサブグループのいずれか1つではない：
2015536323.tif 000015
2015536323.tif 000016
EC0052
2015536323.tif 000017
EC0069
2015536323.tif 000018
EC0070
2015536323.tif 000019
EC0071
2015536323.tif 000020
EC0111
2015536323.tif 000021
EC0155
2015536323.tif 000022
EC0894
および／または
ここで、化合物は、以下の式の任意のサブセットまたはサブグループのいずれか1つではない：
2015536323.tif 000023
EC0082
2015536323.tif 000024
EC0083
2015536323.tif 000025
EC0084
および／または
ここで、化合物は以下の式ではない：
2015536323.tif 000026
EC0060
および／または
上記の任意の組合せ、またはその任意の医薬的に許容しうる塩ではない。
【０００８】
B−L(D)xが細胞表面受容体に結合する能力がある前記項に記載の化合物。
リガンドがビタミン受容体結合リガンドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
リガンドが葉酸塩受容体結合リガンドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
リガンドが葉酸塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
リガンドがD−グルタミルを含む葉酸塩(D−葉酸塩とも呼ばれる)またはプテロイル−D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つの化合物。BがD−葉酸塩のラジカルである場合、Bの包含されたD−グルタミル部分は、リンカーLの部分ではないことが本明細書において理解されるべきである。
【０００９】
Bが、式：
2015536323.tif 000027
で示される非天然葉酸塩ラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
リガンドが、葉酸塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１０】
Bが、式：
2015536323.tif 000028
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１１】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−立体配置を有する前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アラニン、D−アスパラギン酸、D−アスパラギン、D−システイン、D−グルタミン酸、D−フェニルアラニン、D−ヒスチジン、D−イソロイシン、D−リシン、D−ロイシン、D−メチオニン、D−プロリン、D−グルタミン、D−アルギニン、D−セリン、D−トレオニン、D−バリン、D−トリプトファン、D−チロシンおよびD−オルニチン、ならびにそれらの任意のアミノ酸誘導体から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１２】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アスパラギン酸、D−アスパラギン、D−システイン、D−グルタミン酸、D−ヒスチジン、D−リシン、D−メチオニン、D−グルタミン、D−アルギニン、D−セリン、D−トレオニン、D−トリプトファン、D−チロシンおよびD−オルニチン、ならびにそれらの任意のアミノ酸誘導体から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１３】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アスパラギン酸、D−アスパラギン、D−システイン、D−グルタミン酸、D−ヒスチジン、D−リシン、D−グルタミン、D−アルギニン、D−セリン、D−トレオニン、D−トリプトファンおよびD−オルニチン、ならびにそれらの任意のアミノ酸誘導体から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１４】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アスパラギン酸、D−システイン、D−グルタミン酸、D−リシン、D−アルギニン、D−セリンおよびD−オルニチン、ならびにそれらの任意のアミノ酸誘導体から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１５】
Lが、2つ以上の非天然アミノ酸を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、3つ以上の非天然アミノ酸を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、4つ以上の非天然アミノ酸を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、1つ以上のジスルフィドをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つのジスルフィドが、L−システイニルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つのジスルフィドが、D−システイニルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、1つ以上の二価親水性ラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、2つ以上の二価親水性ラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、3つ以上の二価親水性ラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１６】
Lが、4つ以上の二価親水性ラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、1つ以上の二価ポリオキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、2つ以上の二価ポリオキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、3つ以上の二価ポリオキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１７】
Lが、4つ以上の二価ポリオキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、1つ以上の二価ポリヒドロキシラジカルをさらに含む前記項に記載のいずれか1つの化合物。
Lが、2つ以上の二価ポリヒドロキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、3つ以上の二価ポリヒドロキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、4つ以上の二価ポリヒドロキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、ポリヒドロキシラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも2つの非天然アミノ酸が、ポリヒドロキシラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも3つの非天然アミノ酸が、ポリヒドロキシラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも4つの非天然アミノ酸が、ポリヒドロキシラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つのポリヒドロキシラジカルが、式：
CH2−(CH(OH))n−CH2−OH
(式中、nは、1、2、3、4、5および6から選ばれる)。
で示される前記項のいずれか1つに記載の化合物。
nが、1、2、3および4から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
nが、3および4から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
nが、3である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリグルタミン酸ラジカル(ここで、少なくとも1つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリグルタミン酸ラジカル(ここで、少なくとも2つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリグルタミン酸ラジカル(ここで、少なくとも3つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリグルタミン酸ラジカル(ここで、少なくとも4つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１８】
少なくとも1つのグルタミン酸が、D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも2つのグルタミン酸が、D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも3つのグルタミン酸が、D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも4つのグルタミン酸が、D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つのグルタミン酸が、非置換D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも2つのグルタミン酸が、非置換D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも3つのグルタミン酸が、非置換D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも4つのグルタミン酸が、非置換D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１９】
Lが、二価ポリ(D−グルタミン酸)ラジカル(ここで、少なくとも1つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリ(D−グルタミン酸)ラジカル(ここで、少なくとも2つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリ(D−グルタミン酸)ラジカル(ここで、少なくとも3つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリ(D−グルタミン酸)ラジカル(ここで、少なくとも4つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２０】
Lが、式：
(K−L)d
(式中、Kは、二価D−グルタミン酸ラジカルであり、Lは、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する二価L−グルタミン酸ラジカルであり、dは、1、2、3または4である)
の二価ラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
dが、2、3または4である前記項に記載の化合物。
dが、3または4である前記項に記載の化合物。
dが、3である前記項に記載の化合物。
少なくとも1つのアミノポリヒドロキシラジカルが、式：
NH−CH2−(CH(OH))m−CH2−OH
(式中、mは、1、2、3、4、5および6から選ばれる)
である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２１】
少なくとも1つのアミノポリヒドロキシラジカルが、式：
NH−CH2−(CH(OH))m−R
(式中、mは、1、2、3、4、5および6から選ばれ、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルである)
である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
mが、1、2、3および4から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
mが、3および4から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２２】
Lが、式：
S−CH2CH2−O−C(O)
の二価ラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２３】
Lが、式：
S−S−CH2CH2−O−C(O)
の二価ラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２４】
L−Dが、式：
S−CH2CH2−O−C(O)−D
のラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２５】
L−Dが、式：
S−S−CH2CH2−O−C(O)−D
のラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
xが、3である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
xが、2である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
xが、1である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２６】
少なくとも1つの薬物が、細胞毒性薬である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、癌治療剤である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、ビンカアルカロイドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、デスアセチルビンブラスチンモノヒドラジドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンAである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンBである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンAヒドラジドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンBヒドラジドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２７】
少なくとも1つの薬物が、Tuv残基がエーテルアミナルを包含するチューブリシンである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、Tuv残基がエーテルアミナルを包含するチューブリシンヒドラジドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、炎症治療薬である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、抗炎症薬である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、ジヒドロ葉酸レダクターゼインヒビターである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、アミノプテリンメトトレキサートである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、アミノプテリンである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２８】
少なくとも1つの薬物が、ラパマイシンの哺乳動物標的(mTOR)のインヒビターである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、シロリムス(ラパマイシン)、テムシロリムス、エベロリムスまたはリダフォロリムスである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、T−2マイコトキシンでない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、デュオカルマイシンでない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、マイトマイシンでない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、デスアセチルビンブラスチンモノヒドラジドでない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２９】
少なくとも1つのDが、式：
2015536323.tif 000029
または
2015536323.tif 000030
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３０】
少なくとも1つのDが、式：
2015536323.tif 000031
または
2015536323.tif 000032
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３１】
少なくとも1つのDが、式：
2015536323.tif 000033
2015536323.tif 000034
2015536323.tif 000035
2015536323.tif 000036
[式中、n＝1、2、3、4、5または6、あるいは、n＝1、2または3、あるいは、n＝2または3である]
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３２】
少なくとも1つのDが、式：
2015536323.tif 000037
2015536323.tif 000038
2015536323.tif 000039
2015536323.tif 000040
[式中、n＝1、2、3、4、5または6、あるいは、n＝1、2または3、あるいは、n＝2または3である]
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３３】
少なくとも1つの薬物が、核酸またはDNA転写因子、もしくはそのプロドラッグに結合しうるか、またはそれと反応しうる化合物である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３４】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000041
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３５】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000042
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３６】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000043
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３７】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000044
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３８】
化合物が、式：EC1456
2015536323.tif 000045
またはその医薬的に許容しうる塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３９】
化合物が、式：EC1456
2015536323.tif 000046
またはその医薬的に許容しうる塩でない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４０】
化合物が、式：EC1496
2015536323.tif 000047
またはその医薬的に許容しうる塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４１】
化合物が、式：EC1496
2015536323.tif 000048
またはその医薬的に許容しうる塩でない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４２】
化合物が、式：EC1669
2015536323.tif 000049
またはその医薬的に許容しうる塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４３】
化合物が、式：EC1669
2015536323.tif 000050
またはその医薬的に許容しうる塩でない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４４】
1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用で、前記項のいずれか1つに記載の化合物を含む医薬組成物。
【００４５】
任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用で、治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を含む単位用量または単位投与剤形組成物。
【００４６】
治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を含む、宿主動物における癌または炎症の治療用組成物；または治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を含み、任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せをさらに含む医薬組成物。
【００４７】
治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を宿主動物に投与するステップを含む、宿主動物における癌または炎症の治療方法；または治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を含み、任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せをさらに含む医薬組成物。
【００４８】
宿主動物における癌または炎症の治療用医薬の製造における、任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用での1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物の使用。
【００４９】
癌が、薬物耐性癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、白金耐性癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、シスプラチン耐性癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、薬物耐性卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、シスプラチン耐性卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５０】
癌が、NCI/ADR−RESまたはNCI/ADR−RES関連卵巣癌などの白金耐性卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５１】
癌が、IGROVCDDPまたはIGROVCDDP関連卵巣癌などの白金耐性卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５２】
癌が、乳癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５３】
癌が、薬物耐性乳癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５４】
癌が、MDA−MB−231またはMDA−MB−231関連乳癌などの三重陰性乳癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５５】
癌が、非小細胞肺癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５６】
癌が、肝細胞癌腫または肝細胞癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５７】
式：
2015536323.tif 000051
[式中、Lは、脱離基である]
で示される前記項のいずれか1つに記載の化合物の製造用中間体またはその医薬的に許容しうる塩。
【００５８】
式：
2015536323.tif 000052
[式中、Mは、水素またはカチオンである]
で示される前記項のいずれか1つに記載の化合物の製造用中間体またはその医薬的に許容しうる塩。
【００５９】
式：
2015536323.tif 000053
[式中、Lは、脱離基である]
で示される請求項1に記載の化合物の製造用中間体またはその医薬的に許容しうる塩。
【００６０】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、対応する細胞表面受容体に結合することによって標的病原細胞内に内在化されうる。特に、葉酸受容体などのビタミン受容体は、ビタミンを選択的および／または特異的に結合し、たとえば、受容体媒介性エンドサイトーシスを介して内在化が起こりうる。
いったん内在化されると、本明細書に記載する化合物が標的細胞に送達されるまで、放出可能なリンカーは実質的または完全に無傷なので、本明細書に記載する化合物に含まれる放出可能なリンカーが、標的細胞の内部への薬物カーゴの送達を可能にし、したがって、非標的細胞に対する毒性を減少させる。したがって、本明細書に記載する化合物は、細胞内生化学工程に薬物を送達することによって細胞内で作用し、非宿主動物の健康な細胞および組織への非結合薬物曝露の量を減少させる。
【００６１】
もう1つの実施態様では、葉酸受容体結合リガンドを包含する本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を包含しない対応する化合物と比較して、葉酸受容体に対するより大きい特異性を示す。もう1つの実施態様では、葉酸受容体結合リガンドを包含する本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体発現細胞に対する高い活性を示す。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、シスプラチン耐性KB細胞、NCl/ADR−RES−Cl2細胞、IGROV1細胞およびMDA−MB−231細胞といったようなKB細胞などの病原細胞に対してインビトロおよびインビボで強力な活性を示す。もう1つの実施態様では、葉酸受容体結合リガンドを包含する本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体陰性細胞への有意な結合を示さない。もう1つの実施態様では、葉酸受容体結合リガンドを包含する本明細書に記載する化合物は、葉酸状態アルファ(α)および／または葉酸受容体ベータ(β)などの高親和性葉酸受容体を介して優先的または排他的に細胞に入る。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、一般に、還元葉酸担体(RFC)を介するなどの受動輸送を介して実質的に細胞に入らない。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を包含しない化合物と比較して、より低い宿主動物毒性を示す。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を包含しない化合物と比較して、より大きい血清安定性を示す。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を包含しない化合物と比較して、迅速に除去される。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、肝クリアランスと比較して、主として腎クリアランスを介して除去される。
【００６２】
本発明の薬物送達結合体は、ヒトの臨床医学と獣医学応用の両方のために使用することが可能である。したがって、病原細胞集団を抱え、本明細書に記載する化合物によって治療される宿主動物は、ヒトであってもよいし、獣医学応用の場合は、実験動物、農業動物、家畜動物、または野生動物であってもよい。本発明は、宿主動物、たとえば、それらに限定されるわけではないが、ヒト、実験動物、たとえば、げっ歯類(たとえば、マウス、ラット、ハムスターなど)、ウサギ、サル、チンパンジーなど、家畜動物、たとえば、イヌ、ネコ、およびウサギなど、農業動物、たとえば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど、および、拘束された野生動物、たとえば、クマ、パンダ、ライオン、トラ、ヒョウ、ゾウ、シマウマ、キリン、ゴリラ、イルカ、およびクジラなど、を含む宿主動物、に施すことが可能である。
【００６３】
本発明は、これらの宿主動物において各種の病態を招く病原細胞集団に対して適用することが可能である。本発明によれば、「病原細胞」とは、癌細胞、感染性因子、たとえば、細菌およびウィルス、細菌またはウィルス感染細胞、病的状態をもたらすことが可能な活性化マクロファージ、および炎症を引き起こすその他の病原細胞、ビタミン受容体またはビタミンおよび／またはビタミン受容体結合リガンドに結合する受容体を特異的に発現する、優先的に発現する、または過剰発現する、任意のタイプの病原細胞、および、葉酸および／または葉酸受容体結合リガンドに結合する高親和性葉酸受容体を特異的に発現する、優先的に発現する、または過剰発現する、任意のタイプの病原細胞を意味する。病原細胞はまた、本明細書に記載する化合物による治療がその疾患の症状の軽減をもたらす任意の細胞を包含することができる。たとえば、病原細胞は、ある状況下では病原性となる宿主細胞、たとえば、移植片対宿主疾患の原因とはなるが、別の状況下では病原性ではない免疫系細胞、であることも可能である。
【００６４】
したがって、病原細胞集団は、腫瘍形成性、たとえば、良性腫瘍および悪性腫瘍を含む腫瘍形成性の癌細胞集団であってもよいし、または、非腫瘍形成性であってもよい。癌細胞集団は自発性に生じてもよいし、あるいは、宿主動物の生殖細胞系に存在する突然変異または体細胞突然変異のような過程によって生じてもよいし、あるいは、化学的、ウィルス的、または放射線誘発的に生じてもよい。本発明は、癌、たとえば、上皮癌、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、メラノーマ、中皮腫、バーキットリンパ腫、鼻咽頭癌、白血病、および骨髄腫、を治療するのに利用が可能である。癌細胞集団としては、口腔、甲状腺、内分泌腺、皮膚、胃、食道、喉頭、膵臓、結腸、膀胱、骨、卵巣、子宮頸部、子宮、乳房、睾丸、前立腺、直腸、腎臓、肝臓、および、肺の各癌が挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００６５】
もう1つの実施態様では、疾患が、関節リウマチおよび変形性関節症などの関節炎、糸球体腎炎、増殖性網膜症、再狭窄、潰瘍性大腸炎、クローン病、線維筋痛、乾癬および他の皮膚の炎症、骨髄炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、紅斑性狼瘡、サルコイドーシス、全身硬化症、臓器移植拒絶反応(GVHD)および慢性炎症から選ばれる前記実施態様の任意の1つの方法または医薬組成物が記載される。
【００６６】
薬物は、医薬的活性化合物などの、細胞機能を調節させる、またはその他のやり方で修飾することが可能ならば、いずれの分子であってもよい。例示的薬物としては、たとえば、それらに限定されるわけではないが、ペプチド、オリゴペプチド、レトロ逆転(retro−inverso)オリゴペプチド、タンパク質、タンパク質類縁体であって、少なくとも一つの非ペプチド結合がペプチド結合を置換する類縁体、アポタンパク質、糖タンパク質、酵素、補酵素、酵素阻害剤、アミノ酸とその誘導体、受容体、およびその他の膜タンパク質；抗原、およびそれに対する抗体；ハプテン、およびそれに対する抗体；ホルモン、脂質、リン脂質、リポソーム；毒素；抗生物質；鎮痛剤；気管支拡張剤；ベータブロッカー；抗菌剤；抗高血圧剤；循環系薬剤、たとえば、抗不整脈剤、グリコシド心臓薬、抗狭心症剤および血管拡張剤など；中枢神経系薬剤、たとえば、刺激剤、向精神薬、抗躁剤および抑制剤など；抗ウィルス剤；抗ヒスタミン剤；ガン治療薬、たとえば、化学療法剤など；精神安定剤；抗うつ剤；H−2拮抗剤；抗痙攣剤；抗嘔吐薬；プロスタグランジンおよびプロスタグランジン類縁体；筋弛緩剤；抗炎症物質；刺激剤；うっ血除去剤；鎮吐剤；利尿剤；鎮痙剤；抗喘息薬；抗パーキンソン薬；去痰剤；鎮咳剤；粘液溶解剤；および、ミネラルおよび栄養添加物が挙げられる。
【００６７】
さらに、薬物は、細胞傷害性を持つ、腫瘍透過性を強化する、腫瘍細胞増殖を抑制する、アポトーシスを増進する、標的細胞の抗アポトーシス活性を下げる、感染性因子によって引き起こされる疾患を治療するのに使用される、病原細胞に向けた内在的免疫反応を強化する、または任意のタイプの病原細胞による疾患状態の治療に使用される、薬物であることが可能である。さらなる例示的薬物としては、アドレノコルチコイドおよびコルチコステロイド、アルキル化剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシンおよびアクラマイシン誘導体、エストロゲン、抗代謝剤、たとえば、シトシンアラビノシド、プリン類縁体、ピリミジン類縁体、およびメトトレキサート、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチンおよび他の白金化合物、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、タキソテール(登録商標)、シクロフォスファミド、ダウノマイシン、リゾキシン、T2トキシン、植物アルカロイド、プレドニソン、ヒドロキシ尿素、テニポシド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管阻害剤、エポチロン、チューブリシン、シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、seco−シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、O−Ac−seco−シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、ブレオマイシンおよび他の任意の抗生物質、窒素マスタード、ニトロスウレア、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビンなどのピンカアルカロイドおよびデアセチルビンブラスチンモノヒドラジドビノレルビンなどのその類縁体と誘導体、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、チオコルヒチン、トリチルシステイン、ハリコンドリンB、ドラスタチン類、たとえば、ドラスタチン10、アマニチン類、たとえば、α−アマニチンなど、カンプトテシン、イリノテカン、および他のカンプトテシン誘導体、ゲルダナマイシンおよびゲルダナマイシン誘導体、エストラムスチン、ノコダゾール、MAP4、コルセミド、炎症および炎症誘導剤、ペプチドおよびペプチド様シグナル伝達阻害剤、および、任意のその他の薬物または毒素が挙げられる。本明細書に記載する結合体に包含されうるその他の薬物としては、シロリムスまたはエベロリムスなどのラパマイシン、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、クロラムフェニコール、アミノグリコシド抗生物質、ゲンタマイシン、アンフォテリシンB、アシクロビル、トリフルリジン、ガンシクロビル、ジドブジン、アマンタジン、リバビリン、および、任意のその他の抗菌化合物が挙げられる。
【００６８】
もう1つの実施態様では、薬物は、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾミブ、チューブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エベロリムス、α−アマニチン、ベルカリン、ジデムニンB、ゲルダナマイシン、プルバラノールA、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポチロン、メイタンシンおよびチロシンキナーゼ阻害剤、ならびにそれらの類縁体および誘導体から選ばれる。
【００６９】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、ビンカアルカロイド、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾミブ、チューブリシン、アミノプテリン、シロリムスまたはエベロリムスなどのラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、α−アマニチン、ベルカリン、ジデムニンB、ゲルダナマイシン、プルバラノールA、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポチロン、メイタンシンおよびチロシンキナーゼ阻害剤、ならびにそれらの類縁体および誘導体から例示的に得選ばれる、少なくとも2つの薬物(D)を包含する。1つの変形態様では、薬物(D)は、同じである。もう1つの変形態様では、薬物(D)は、異なる。
【００７０】
本明細書に記載する薬物送達結合体化合物は、任意の他の公知の薬物が標的化されてもされなくても、その追加薬物との併用療法で投与されうる。例示的追加薬物として、ペプチド、オリゴペプチド、レトロ逆転(retro−inverso)オリゴペプチド、タンパク質、タンパク質類縁体であって、少なくとも一つの非ペプチド結合がペプチド結合を置換する類縁体、アポタンパク質、糖タンパク質、酵素、補酵素、酵素阻害剤、アミノ酸とその誘導体、受容体、およびその他の膜タンパク質；抗原、およびそれに対する抗体；ハプテン、およびそれに対する抗体；ホルモン、脂質、リン脂質、リポソーム；毒素；抗生物質；鎮痛剤；気管支拡張剤；ベータブロッカー；抗菌剤；抗高血圧剤；循環系薬剤、たとえば、抗不整脈剤、グリコシド心臓薬、抗狭心症剤、および、血管拡張剤など；中枢神経系薬剤、たとえば、刺激剤、向精神薬、抗躁剤、および、抑制剤など；抗ウィルス剤；抗ヒスタミン剤；癌治療薬、たとえば、化学療法剤など；精神安定剤；抗うつ剤；H−2拮抗剤；抗痙攣剤；抗嘔吐薬；プロスタグランジンおよびプロスタグランジン類縁体；筋弛緩剤；抗炎症物質；刺激剤；うっ血除去剤；鎮吐剤；利尿剤；鎮痙剤；抗喘息薬；抗パーキンソン薬；去痰剤；鎮咳剤；粘液溶解剤；および、ミネラルおよび栄養添加物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００７１】
もう1つの実施態様では、治療因子を含む少なくとも一つの追加組成物を、薬物送達結合体媒介の病原細胞集団の除去を強化するために、前述の方法と組み合わせて、または、補助剤として投与することが可能であるし、あるいは、1種を越える追加治療因子を投与することが可能である。治療因子は、内在的免疫反応を刺激することが可能な化合物、化学療法剤、または投与薬物送達結合体の効力を補佐することが可能な別の治療因子から選んぶことができる。本発明方法は、前述の結合体に加えて、内在的免疫反応を刺激することが可能な化合物または組成物(たとえば、サイトカイン)、たとえば、それらに限定されないが、サイトカインまたは免疫細胞成長因子、たとえば、インターロイキン1−18、幹細胞因子、塩基性FGF、EGF、G−CSF、GM−CSF、FLK−2リガンド、HILDA、MIP−1α、TGF−α、TGF−β、M−CSF、IFN−α、IFN−β、IFN−γ、可溶性CD23、LIF、および、それらの組み合わせを含む化合物または組成物を宿主に対し投与することによって行うことができる。
【００７２】
これらの因子の治療的に有効な組み合わせも使用が可能である。1つの実施態様では、たとえば、IL−2の治療有効量、たとえば、約0.1 MIU/m2／用量／日から約15 MIU/m2／用量／日の範囲の量を、1日複数回投与計画で、かつ、IFN−αを、たとえば、0.1 MIU/m2／用量／日から約7.5 MIU/m2／用量／日の範囲の量を、1日複数回投与計画で、病原細胞を抱える宿主動物の病原細胞を除去する、低減させる、または中和させるために、薬物送達結合体と同時に使用することが可能である(MIU＝百万国際単位、m2＝平均人のおよその体表面積)。もう1つの実施態様では、IL−12およびIFN−αが、インターロイキンおよびインターフェロンの前述の治療有効量として使用され、さらに別の実施態様では、IL−15およびIFN−αが、インターロイキンおよびインターフェロンの前述の治療有効量として使用される。もう1つの実施態様では、IL−2およびIFN−αまたはIFN−γ、およびGM−CSFが、前述の治療有効量において併用される。本発明はまた、サイトカイン類の、他の任意の有効な組み合わせ、たとえば、他のインターロイキンおよびインターフェロン、およびコロニー刺激因子の組み合わせを含めた併用を企図する。
【００７３】
たとえば、それ自体が細胞傷害性である、または、腫瘍透過性を強化するように作用することが可能な化学療法剤も、薬物送達結合体と組み合わせて本発明方法に用いるのに好適である。このような化学療法剤としては、アドレノコルチコイドおよびコルチコステロイド、アルキル化剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシンおよびアクラマイシン誘導体、エストロゲン、抗代謝剤類、たとえば、シトシンアラビノシド、プリン類縁体、ピリミジン類縁体、および、メトトレキサートなど、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチンおよび他の白金化合物、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、タキソテール(登録商標)、シクロフォスファミド、ダウノマイシン、リゾキシン、T2トキシン、植物アルカロイド、プレドニソン、ヒドロキシウレア、テニポシド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管阻害剤、エポチロン、チューブリシン、シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、seco−シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、O−Ac−seco−シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、ブレオマイシンおよび他の任意の抗生物質、ナイトロジェンマスタード、ニトロス尿素、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびその類縁体と誘導体、たとえば、デアセチルビンブラスチンモノヒドラジドなど、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、チオコルヒチン、トリチルシステイン、ハリコンドリンB、ドラスタチン類、たとえば、ドラスタチン10など、アマニチン類、たとえば、α−アマニチンなど、カンプトテシン、イリノテカン、および他のカンプトテシン誘導体、ゲルダナマイシンおよびゲルダナマイシン誘導体、エストラムスチン、ノコダゾール、MAP4、コルセミド、炎症および炎症誘導剤、ペプチドおよびペプチド様シグナル伝達阻害剤、および、任意のその他の従来技術で認知済みの薬物または毒素が挙げられる。本発明にしたがって使用が可能なその他の薬物としては、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、クロラムフェニコール、アミノグリコシド抗生物質、ゲンタマイシン、アンフォテリシンB、アシクロビル、トリフルリジン、ガンシクロビル、ジドブジン、アマンタジン、リバビリン、マイタンシン類およびその類縁体および誘導体、ゲムシタビン、および、任意のその他の従来技術で認知済みの薬物または毒素任意の抗菌化合物が挙げられる。
【００７４】
本明細書で用いる用語「リンカー」は、2つ以上の分子の官能性部分を連結して、結合体を形成する原子の鎖を包含する。例示として、原子の鎖は、C、N、O、S、SiおよびP、またはC、N、O、Sおよび P、C、N、OおよびSから選ばれる。原子の鎖は、結合リガンド、薬物、診断剤、イメージング剤などの結合体の異なる機能的能力を共有的に連結する。リンカーは、連続的主鎖において、約2〜約100個の原子などのさまざまな長さを有することができる。リンカーを形成するのに使用される原子を、全ての化学的に関連する方法によって組み合わせることができ、その例としては、アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン基などを形成する炭素原子の鎖；エーテル、ポリオキシアルキレン基を形成する、またはカルボニル基と組み合わせる場合はエステルおよびカーボネートなどを形成する、炭素および酸素原子の鎖；アミン、イミン、ポリアミン、ヒドラジン、ヒドラゾンを形成する、またはカルボニル基と組み合わせる場合はアミド、尿素、セミカルバジド、カルバジドなどを形成する、炭素および窒素原子の鎖；アルコキシアミン、アルコキシルアミンを形成する、またはカルボニル基と組み合わせル場合はウレタン、アミノ酸、アシルオキシアミン、ヒドロキサム酸などを形成する、炭素、窒素および酸素原子の鎖；などが挙げられる。さらに、前述の例示的な実施態様のそれぞれにおける鎖を形成する原子は、たとえばアルカン、アルケン、アルキン、イミンなどがリンカーに含まれるラジカルでありうるように、飽和または不飽和であり、したがって単結合、二重結合または三重結合を形成しうることが理解されるべきである。さらに、リンカーを形成する原子はまた、互いに環化するか、または環式構造の一部であり、リンカーにおいて、シクロアルカン、環状エーテル、環状アミン、および他の複素環、アリーレン、ヘテロアリーレンなどのリンカーを形成する二価環式構造を形成しうることが理解されるべきである。この後者の配置において、リンカーの長さは、1つ以上の環式構造を通る任意の経路によって定義されうることを理解すべきである。例示的に、リンカーの長さは、環式構造のそれぞれ1つを通る最短経路によって定義される。リンカーが、炭素、窒素、ケイ素またはリン原子上のいずれかの上の任意の置換基などの
原子の鎖に沿った任意の1つ以上の開放性原子価にて任意に置換されうることを理解すべきである。リンカーが、分子の2つ以上の機能性部分を連結して、任意の開放原子価にて結合体を形成することができることも理解すべきであり、結合体を形成している2つ以上の機能性部分のいずれかが、リンカーの任意の明らかな末端に結合されることは必要ではない。
【００７５】
もう1つの実施態様では、葉酸−リンカーラジカルは、以下の式：
2015536323.tif 000054
[式中、m、nおよびqは、0〜8の範囲から独立して選ばれる整数である；AAは、アミノ酸であり、R1は、水素、アルキルまたは窒素保護基であり、薬物は、(*)原子で任意に結合される]
で示される。1つの態様では、AAは、天然または非天然の立体配置のいずれかを有する天然アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、親水性アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、Aspおよび／またはArgである。もう1つの態様では、整数nは、1以上である。もう1つの態様では、整数nは、2以上である。もう1つの態様では、整数nは、3以上である。もう1つの態様では、整数nは、4以上である。もう1つの態様では、整数nは、5以上である。もう1つの態様では、整数qは、1以上である。もう1つの態様では、整数qは、1である。もう1つの態様では、整数mは、1以上である。もう1つの態様では、整数mは、1である。もう1つの態様では、R1は、水素である。薬物および任意追加のリンカーおよび任意追加の受容体結合リガンドを、2,ω−ジアミノアルカン酸フラグメントの遊離NH側鎖にて、または遊離開放原子価によって示される末端カルボキシレートにて、上記式に結合することができる。上記態様のすべての組合せが、本発明のさらなる例示的実施態様として本明細書に記載されることを理解すべきである。たとえば、もう1つの実施態様では、nは1以上であり、mは1以上であり；またはnは1以上であり、mは1であり、qは1である；などである。
【００７６】
もう1つの実施態様では、葉酸−リンカーラジカルは、以下の式：
2015536323.tif 000055
[式中、m、n、qおよびpは、0〜8の範囲から独立して選ばれる整数である；AAは、アミノ酸であり、R1は、水素、アルキルまたは窒素保護基であり、薬物は、(*)原子で任意に結合される]
で示される。1つの態様では、AAは、天然または非天然の立体配置のいずれかを有する天然アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、親水性アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、Aspおよび／またはArgである。もう1つの態様では、整数nは、1以上である。もう1つの態様では、整数nは、2以上である。もう1つの態様では、整数nは、3以上である。もう1つの態様では、整数nは、4以上である。もう1つの態様では、整数nは、5以上である。もう1つの態様では、整数qおよび／またはpは、1以上である。もう1つの態様では、整数qおよび／またはpは、1である。もう1つの態様では、整数mは、1以上である。もう1つの態様では、整数mは、1である。もう1つの態様では、R1は、水素である。薬物および任意追加のリンカーおよび任意追加の受容体結合リガンドを、2,ω−ジアミノアルカン酸フラグメントの遊離NH側鎖にて、システイニルチオール基にて、または遊離開放原子価によって示される末端カルボキシレートにて、上記式に結合することができる。上記態様のすべての組合せが、本発明のさらなる例示的実施態様として本明細書に記載されることを理解すべきである。たとえば、もう1つの実施態様では、nは1以上であり、mは1以上であり；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1である；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1であり、pは1である；などである。
【００７７】
もう1つの実施態様では、葉酸−リンカーラジカルは、以下の式：
2015536323.tif 000056
[式中、m、n、q、pおよびrは、0〜8の範囲から独立して選ばれる整数である；AAは、アミノ酸であり、R1は、水素、アルキルまたは窒素保護基であり、薬物は、(*)原子で任意に結合される]
で示される。1つの態様では、AAは、天然または非天然の立体配置のいずれかを有する天然アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、親水性アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、Aspおよび／またはArgである。もう1つの態様では、整数nは、1以上である。もう1つの態様では、整数nは、2以上である。もう1つの態様では、整数nは、3以上である。もう1つの態様では、整数nは、4以上である。もう1つの態様では、整数nは、5以上である。もう1つの態様では、整数qおよび／またはpおよび／またはrは、1以上である。もう1つの態様では、整数qおよび／またはpおよび／またはrは、1である。もう1つの態様では、整数mは、1以上である。もう1つの態様では、整数mは、1である。もう1つの態様では、R1は、水素である。薬物および任意追加のリンカーおよび任意追加の受容体結合リガンドを、2,ω−ジアミノアルカン酸フラグメントの遊離NH側鎖にて、システイニルチオール基にて、セリニルヒドロキシ基にて、または遊離開放原子価によって示される末端カルボキシレートにて、上記式に結合することができる。上記態様のすべての組合せが、本発明のさらなる例示的実施態様として本明細書に記載されることを理解すべきである。たとえば、もう1つの実施態様では、nは1以上であり、mは1以上であり；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1である；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1であり、pは1である；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1であり、rは1である；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1であり、pは1であり、rは1である；などである。
【００７８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、リンカーまたはスペーサーリンカーとも呼ばれる、本明細書に記載の1つ以上の二価親水性ラジカルである。さまざまな親水性リンカーの配置および／または配向が直線または分枝様式であるか、またはその両方出会ってよいことを理解されたい。たとえば、親水性リンカーは、リガンドと1つ以上の薬物の結合体を形成するリンカーの主鎖を形成することができる。あるいは、リンカーの親水性部分は、結合リガンドBを1種以上の薬物Dに連結している原子の主鎖につり下がるか、または結合することができる。この後者の配置において、親水性部分は、原子の主鎖に対して、近位または遠位であってよい。
【００７９】
もう1つの実施態様では、リンカーは、直線の程度がより多いか、またはより少なくてよく、親水性基は、主として結合体における鎖様リンカーを形成するように一連にアレンジされる。該もう1つの方法では、この直線態様では、親水性基は、リンカーのいくつかまたはすべての主鎖を形成する。
【００８０】
もう1つの実施態様では、リンカーは、親水性基で分岐される。この分岐した態様では、親水性基は、主鎖に対して近位であってもよく、あるいは主鎖に対して遠位であってもよい。これらの配置のそれぞれでは、リンカーは、形状において、より球状または円筒状である。1つの変形態様では、リンカーは、ボトルブラシ様の形状である。1つの態様では、リンカーの主鎖は、アミドの直線系で形成され、リンカーの親水性部分は、単糖類、スルホネートなどならびにそれらの誘導体および類縁体を結合することによるなどの分枝側鎖の平行配置によって形成される。
【００８１】
リンカーが、インビボで遭遇する生理的条件などの特定の条件下で中性であるか、またはイオン化されてよいことが理解される。選ばれた条件下でのイオン化合物リンカーのために、リンカーは、脱プロトンして陰イオンを形成してもよく、あるいは、プロトン化されて、陽イオンを形成してもよい。１つ以上の脱プロトン化またはプロトン化イベントが起こりうることが理解される。さらに、同じリンカーが、脱プロトン化またはプロトン化されて、内部塩または両性イオン化合物を形成しうることが理解される。
【００８２】
もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、中性、特に、生理的条件下で中性であり、該リンカーは、有意にプロトン化も脱プロトンもしない。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、プロトン化されて、１つ以上の陽電荷をもつことができる。プロトン化能力が条件依存性であることが理解される。1つの態様では、条件は、生理的条件であり、リンカーは、インビボでプロトン化される。もう1つの実施態様では、スペーサーは、中性である領域およびプロトン化されて1つ以上の陽電荷をもちうる領域の両方を包含する。もう1つの実施態様では、スペーサーは、脱プロトン化されて1つ以上の陰電荷を持ちうる領域およびプロトン化されて1つ以上の陽電荷をもちうる領域の両方を包含する。この後者の実施態様では、両性イオンまたは内部塩が形成されうることが理解される。
【００８３】
1つの態様では、脱プロトン化されて陰電荷を持ちうるリンカーは、アスパラギン酸、グルタミン酸および長鎖カルボン酸基、ならびに硫酸のアルキルエステルなどの硫酸エステルを包含する。もう1つの態様では、プロトン化されて陽電荷をもつことができるリンカーの領域は、それぞれ任意に置換される、エチレンジアミン、プロピレンジアミン、ブチレンジアミンリアミノアルキレンといったようなアミノ基、および／またはピロリジン、ピペリジン、ピペラジンなどの複素環、および他のアミノ基を包含する。もう1つの実施態様では、中性であるリンカーの領域は、糖類、炭水化物、サッカリド、イノシトールなどのポリヒドロキシル基、および／またはポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンなどのポリオキシアルキレン基といったようなポリエーテル基を包含する。
【００８４】
1つの実施態様では、本明細書に記載する親水性スペーサーリンカーは、主として、炭素、水素および酸素から形成され、約3：1以下、または約2：1以下の炭素/酸素比を有する。1つの態様では、本明細書に記載する親水性リンカーは、複数のエーテル官能基を包含する。もう1つの態様では、本明細書に記載する親水性リンカーは、複数のヒドロキシル官能基を包含する。このようなリンカーを形成するのに用いることができる例示的フラグメントおよびラジカルとして、炭水化物などのポリヒドロキシル化合物、ポリエチレングリコールユニットなどのポリエーテル化合物およびカルボキシルおよびアルキル硫酸などの酸基が挙げられる。1つの変形態様では、オリゴアミドスペーサーなどもリンカーに包含されうる。
【００８５】
例示的な二価親水性リンカーとして、ペプチドの特徴と糖の特徴の両方を含む本明細書に記載するサッカロペプチドなどの炭水化物；クリック化学としても知られている[2+3]ヒュスゲン(Huisgen)環化により組み込まれうるグルクロニド；2−デオキシヘキサピラノース(2−デオキシグルコース、2−デオキシグルクロニドなど)などのβ−アルキルグリコシド；およびβ−アルキルマンノピラノシド、が挙げられる。例示的なPEG基には、約４〜約20個のPEG基の範囲の特定の長さのものが含まれる。例示的なアルキル硫酸エステルをクリック化学により主鎖に直接導入することもできる。例示的なオリゴアミドスペーサーには、EDTAおよびDTPAスペーサー、β−アミノ酸などが含まれる。
【００８６】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、以下の式：
2015536323.tif 000057
2015536323.tif 000058
[式中、mは、独立して、それぞれの場合に1〜約8から選ばれる整数であり；ｐは、1〜約10から選ばれる整数であり、そしてnは、独立して、それぞれの場合に１〜約3から選ばれる整数である]
で示されるリンカーなどの1種以上のポリエーテルを包含する。1つの態様では、mは、独立して、それぞれの場合に１〜約３である。別の態様において、ｎは、それぞれの場合に1である。もう1つの態様では、pは、独立して、それぞれの場合に約4〜約6である。例示的には、前述に対応して、対応するポリプロピレンポリエーテルが本明細書において企図され、親水性スペーサーリンカーとして結合体に含まれうる。さらに、ポリエチレンポリエーテルとポリプロピレンポリエーテルの混合が親水性スペーサーリンカーとして結合体に含まれうることが理解される。更に、前述のポリエーテル化合物の環状の変形態様、たとえばテトラヒドロフラニル、1,3−ジオキサン、1,4−ジオキサンなどを含むものが、本明細書において企図される。
【００８７】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、単糖、オリゴ糖、多糖などを組み込んだリンカーなどの複数のヒドロキシル官能基を含む。ポリヒドロキシル含有スペーサーリンカーは、複数の−(CROH)−基(ここでRは、水素またはアルキルである)を含むことが理解されるべきである
【００８８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1種以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000059
2015536323.tif 000060
2015536323.tif 000061
2015536323.tif 000062
2015536323.tif 000063
2015536323.tif 000064
2015536323.tif 000065
2015536323.tif 000066
2015536323.tif 000067
[式中、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、mは、1〜約3の整数であり、nは、1〜約5または2〜約5の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、rは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの態様では、整数nは、3または4である。もう1つの態様では、整数pは、3または4である。もう1つの態様では、整数rは、1である。
【００８９】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、以下のフラグメント：
2015536323.tif 000068
2015536323.tif 000069
2015536323.tif 000070
[式中、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、mは、1〜約3の整数であり、nは、1〜約5または2〜約5の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、rは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの態様では、整数nは、3または4である。もう1つの態様では、整数pは、3または4である。もう1つの態様では、整数rは、1である。
【００９０】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下の環式ポリヒドロキシ基：
2015536323.tif 000071
2015536323.tif 000072
2015536323.tif 000073
2015536323.tif 000074
2015536323.tif 000075
2015536323.tif 000076
[式中、nは、2〜約5の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、rは、1〜約4の整数である]
を含む。1つの態様では、整数nは、3または4である。もう1つの態様では、整数pは、3または4である。もう1つの態様では、整数rは、2または3である。リンカーのそのような部分の全ての立体化学形態が、本明細書において企図されることが理解される。たとえば、上記の式において、この部分を、リボース、キシロース、グルコース、マンノース、ガラクトースまたは他の糖から誘導することができ、これらの分子に存在する側鎖ヒドロキシルおよびアルキル基の立体化学配置を保持することができる。さらに、前述の式において、多様なデオキシ化合物も企図されることが理解されるべきである。例示的に、以下の式の化合物が企図され：
2015536323.tif 000077
[式中、それぞれ、nは、rと同じであるかまたは少なく、たとえば、rが2または3である場合、nは、1または2、あるいは1、2、3である]
【００９１】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、以下の式：
2015536323.tif 000078
[式中、nおよびrは、それぞれ、1〜約3から選ばれる整数である]
で示される1つ以上のポリヒドロキシラジカルを含む。1つの態様では、リンカーは、1つ以上の以下の式：
2015536323.tif 000079
で示されるポリヒドロキシル化合物を包含する。
【００９２】
リンカーのそのような部分の全ての立体化学形態が、本明細書において企図されることが理解される。たとえば、上記の式において、この部分を、リボース、キシロース、グルコース、マンノース、ガラクトースまたは他の糖から誘導することができ、これらの分子に存在する側鎖ヒドロキシルおよびアルキル基の立体化学配置を保持することができる。
【００９３】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、リンカーの主鎖から離れている1つ以上のポリヒドロキシル基を含む。1つの実施態様において、そのような炭水化物基またはポリヒドロキシル基は、トリアゾール基により主鎖と連結しており、トリアゾール結合親水性スペーサーリンカーを形成する。例示的には、リンカーは、以下の式：
2015536323.tif 000080
[式中、n、mおよびrは、整数であり、それぞれ独立して、1〜約5から選ばれる]
で示されるフラグメントを含む。1つの例示的な態様では、mは、独立して、それぞれの場合に２または３である。もう1つの態様では、ｒは、それぞれの場合に1である。もう1つの態様では、nは、それぞれの場合に1である。一つの変形態様では、ポリヒドロキシル基をリンカーの主鎖に連結する基は、ピロール、ピラゾール、1,2,4−トリアゾール、フラン、オキサゾール、イソオキサゾール、チエニル、チアゾール、イソチアゾール、オキサジアゾールなどの、ただしこれらに限定されない異なるヘテロアリール基である。同様に、二価６員環ヘテロアリール基が企図される。前述の例示的親水性スペーサーリンカーの他の変形態様には、以下の式：
2015536323.tif 000081
[式中、nおよびrは、整数であり、それぞれ独立して、それぞれの場合に1〜約5から選ばれ、そしてpは、1〜約4から選ばれる整数である]
などのオキシアルキレン基が包含される。
【００９４】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、アミド基により主鎖と連結した1つ以上の炭水化物基またはポリヒドロキシル基を含み、アミド結合親水性スペーサーリンカーを形成する。例示的には、そのようなリンカーは、以下の式：
2015536323.tif 000082
[式中、nは、1〜約3から選択される整数であり、そしてmは、1〜約22から選択される整数である]
で示されるフラグメントを包含する。1つの例示的態様では、nは、1または2である。もう1つの例示的態様では、mは、約6〜約10から選ばれ、例示的に8である。1つの変形態様において、ポリヒドロキシル基をリンカーの主鎖に連結する基は、エステル、尿素、カルバメート、アシルヒドラゾンなどの、ただしこれらに限定されない異なる官能基である。同様に、環状の変形態様も企図される。前述の例示的親水性スペーサーリンカーの他の変形態様には、以下の式：
2015536323.tif 000083
で示されるようなオキシアルキレン基を包含する。
[式中、nおよびrは、整数であり、それぞれ独立して、それぞれの場合に1〜約5から選択され、そしてpは、1〜約4から選択される整数である]
【００９５】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000084
2015536323.tif 000085
2015536323.tif 000086
[式中、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、1〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【００９６】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000087
[式中、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、2〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【００９７】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000088
2015536323.tif 000089
2015536323.tif 000090
[式中、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、1〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【００９８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000091
[式中、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、2〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【００９９】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000092
2015536323.tif 000093
2015536323.tif 000094
[式中、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、1〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【０１００】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、主鎖と、以下の式：
2015536323.tif 000095
〔式中、nは、それぞれの場合に0〜約3から独立して選ばれる整数である〕により例示されるような分枝側鎖モチーフとの組み合わせである。上記の式は、4員、5員、6員、さらに大きな員の環状糖を表すことが意図される。さらに、上記の式を修飾してデオキシ糖を表すことができ、ここで式に存在する１つ以上のヒドロキシ基は、水素、アルキルまたはアミノで置換されていることが理解されるべきである。さらに、1つ以上のヒドロキシル基が酸化されて対応するカルボニルになっている対応するカルボニル化合物が、上記の式により企図されることが理解されるべきである。さらに、この例示的な実施態様において、ピラノースは、カルボキシルとアミノの両方の官能基を含み、(a)主鎖に挿入することができ、(b)この実施態様の変形態様において分枝側鎖に合成ハンドルを提供することができる。側鎖ヒドロキシル基のいずれかを使用して、対応するオリゴ糖を調製する追加の糖を含む、他の化学フラグメントを結合することができる。ピラノースまたは他の糖を単一炭素で主鎖に挿入すること、すなわち一つの原子に同種原子が二つ結合した対の炭素でのスピロ配置および同様の配置を含む、この実施態様の他の変形態様も企図される。たとえば、リンカーまたは薬剤Dまたは結合リガンドBの1つまたは2つの末端を糖に連結して、1,1；1,2；1,3；1,4；2,3または他の配置で主鎖に挿入することができる。
【０１０１】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する親水性スペーサーリンカーは、主として、炭素、水素および窒素から形成され約3：1以下または約2：1以下の、炭素／窒素比を有する。つの態様では、本明細書に記載されている親水性リンカーは、複数のアミノ官能基を含む。
【０１０２】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下の式：
2015536323.tif 000096
2015536323.tif 000097
2015536323.tif 000098
2015536323.tif 000099
2015536323.tif 000100
2015536323.tif 000101
[式中、nは、それぞれの場合に1〜約3から独立して選択される整数である]
で示されるアミノ基を含む。1つの態様では、整数nは、それぞれの場合に1または2である。別の態様において、整数nは、それぞれの場合に1である。
【０１０３】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、硫酸のアルキルエステルなどの硫酸エステルである。例示的には、リンカーは、以下の式：
2015536323.tif 000102
[式中、nは、それぞれの場合に1〜約3から独立して選択される整数である]
を包含する。例示的に、nは、独立して、それぞれの場合に1または2である。
【０１０４】
ヘテロ原子に結合している遊離水素を含む、そのようなポリヒドロキシル、ポリアミノ、カルボン酸、硫酸などのリンカーにおいて、1つ以上の遊離水素原子を適切なヒドロキシル、アミノまたは酸保護基でそれぞれ保護してもよいし、あるいは対応するプロドラッグとしてブロックしてもよく、後者は、一般的なまたは特定の生理学的条件下で母体薬剤を放出するプロドラッグのような、特定の使用にために選択される、ということが理解される。
【０１０５】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、1つ以上の以下の二価ラジカル：
2015536323.tif 000103
2015536323.tif 000104
[式中、上述のとおり、nは、2〜約5の整数であり、pは1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約4の整数である]
を含む。
【０１０６】
前述の実施態様において、(*)原子などの開放された部位は、結合リガンド(B)または送達される薬物(D)の結合する位置であることが、さらに理解されるべきである。
さらに、Bおよび任意のDのいずれかまたは両方の結合は、直接的であってもよく、または1つ以上の本明細書に記載のラジカルを含む介在リンカーを介するものであってもよいことが、理解されるべきである。さらに、(*)原子は、任意の薬物Dをもつ放出可能なリンカーを形成してもよく、またはリンカーLの他の部分を形成してもよい。
【０１０７】
もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、１つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、少なくとも3つの炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーおよび1つ以上のアスパラギン酸を含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル化合物基含有リンカーおよび1つ以上のグルタミン酸を含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカー、1つ以上のグルタミン酸、1つ以上のアスパラギン酸および１つ以上のベータアミノアラニンを含む。一連の変形態様において、前述のそれぞれの実施態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上のシステインも含む。もう1つの一連の変形態様において、前述のそれぞれの実施態様において、親水性スペーサーリンカーは、少なくとも１つのアルギニンも含む。
【０１０８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、少なくとも1つの結合リガンド(L)と少なくとも1つの薬物(D)とを連結する原子の鎖に含まれている、1つ以上の二価1,4−ピペラジンを含む親水性スペーサーリンカーを含む。1つの変形態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む。もう1つの変形態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーおよび1つ以上のアスパラギン酸を含む。もう1つの変形態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーおよび1つ以上のグルタミン酸を含む。一連の変形態様において、前述のそれぞれの実施態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上のシステインも含む。もう1つの一連の変形態様において、前述のそれぞれの実施態様において、親水性スペーサーリンカーは、少なくとも１つのアルギニンも含む。
【０１０９】
もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、たとえばアミノエチルピペラジニルアセトアミドなどの、ただしこれに限定されない1つ以上のオリゴアミド親水性スペーサーを含む。
【０１１０】
もう1つの実施態様では、あ多価リンカーLは、1つ以上のトリアゾール結合炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む親水性スペーサーリンカーを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上のアミド結合炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、１つ以上のPEG基および１つ以上のシステインを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上のEDTE誘導体を含む。
【０１１１】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、式：
2015536323.tif 000105
[式中、*は、葉酸への結合点を示し、**は、薬物への結合点を示し；FおよびGは、それぞれ独立して、1、2、3または4である]
で示される二価ラジカルを包含する。
【０１１２】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、式：
2015536323.tif 000106
[式中、*、**、***は、それぞれ、葉酸受容体結合部分Bおよび1つ以上の薬物Dへの結合点を示す]
で示される三価ラジカルを包含する。薬物が、より少ない場合、*、**、***は、水素またはへテロ原子で置換されることが理解されるべきである。FおよびGは、それぞれ独立して、1、2、3または4であり；W1は、NHまたはOである。もう1つの態様では、m1は、0または1である。
【０１１３】
本明細書に記載する任意の実施態様では、−NR1R2−、酸素、イオウ、および式：−(NHR1NHR2)−、−SO−、−(SO2)−、および−N(R3)O−[ここで、R1、R2およびR3は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、置換アリール、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールおよびアルコキシアルキルから選ばれる]などのヘテロ原子リンカーが、多価リンカーLに包含されることもできる。多価リンカーへの薬物ラジカルD、多価リンカーへのリガンドラジカルB、または多価リンカーからさまざまなジおよびポリ多価ラジカルといったように、ヘテロ原子リンカーが、本明細書に記載の任意のラジカルに共有的に結合するように用いられてもよいことを理解すべきである。
【０１１４】
リンカーの部分を形成するのに用いることができる例示的さらなる二価ラジカルは、以下のとおりである。
2015536323.tif 000107
【０１１５】
2015536323.tif 000108
【０１１６】
2015536323.tif 000109
【０１１７】
多価リンカーLは、放出可能なリンカーである。
【０１１８】
本明細書で用いる用語「放出可能なリンカー」は、本明細書に記載する化合物が標的細胞に送達もしくはその内部に送達される場合に、生理的条件下で切断されうる少なくとも1つの結合を包含するリンカーを意味する。したがって、用語「放出可能なリンカー」は、これらの系が細胞表面受容体結合リガンドの標的でない限り、一般に、単に、血清、血漿、消化管または肝臓などのインビボで不安定な結合を意味するのではない。しかしながら、送達および／または選択的標的化の後、放出可能なリンカーは、1つ以上のpH−不安定、酸−不安定、塩基−不安定、酸化的に不安定、代謝的に不安定、生化学的に不安定、および／または酵素−不安定な結合を有することによるなどの、生理的条件下で、リンカー中に、またはBもしくは任意のDへのリンカーの共有結合に、少なくとも1つの切断される結合を含むいずれかの工程によって、切断されうる。結合切断をもたらすこのような生理的条件は、生物学的または代謝的工程を必ずしも含まず、むしろ、たとえば、生理的pHにおいて起こるか、または細胞質pHよりも低いpHを有するエンドソームなどの細胞器官への区画化の結果とし起こる加水分解反応などの標準的化学反応を含みうることが理解される。
【０１１９】
切断しうる結合は、2つの隣接する原子を放出可能なリンカー内で連結できること、および／または、他のリンカーまたは本明細書に記載のBおよび／またははDを、放出可能なリンカーのどちらかの末端で連結できること、が理解される。切断しうる結合が2つの隣接する原子を放出可能なリンカー内で連結する場合、結合の切断の後、放出可能なリンカーは、2つ以上のフラグメントに分断される。あるいは、切断しうる結合が、放出可能なリンカーと、追加のヘテロ原子、スペーサーリンカー、リンカーのもう1つの放出可能な部分、任意のD、またはBなどの別の部分との間にある場合、結合の切断の後、放出可能なリンカーは、他の部分から分離される。
【０１２０】
それ自体が切断しうる結合を含むか、またはBおよび／または任意のDと切断しうる結合を形成する例示的ラジカルは、ヘミアセタールおよびそのイオウバリエーション、アセタールおよびそのイオウバリエーション、ヘミアミナール、アミナールなどであり、あるいは、1−アルコキシアルキレン、1−アルコキシシクロアルキレン、1−アルコキシアルキレンカルボニル、1−アルコキシシクロアルキレンカルボニルなどの、少なくとも1つのヘテロ原子で置換されたメチレンフラグメントから形成されうる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル(カルボキシアリール)カルボニル、カルボニル(ビスカルボキシアリール)カルボニルなどの多価リンカーが挙げられる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、アルキレン(ジアルキルシリル)、アルキレン(アルキルアリールシリル)、アルキレン(ジアリールシリル)、(ジアルキルシリル)アリール、(アルキルアリールシリル)アリール、(ジアリールシリル)アリールなどの多価リンカーが挙げられる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、オキシカルボニルオキシ、オキシカルボニルオキシアルキル、スルホニルオキシ、オキシスルホニルアルキルが挙げられる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、イミノアルキリデニル、カルボニルアルキリデンイミニル、イミノシクロアルキリデニル、カルボニルシクロアルキリデンイミニルなどの多価リンカーが挙げられる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、アルキレンチオ、アルキレンアリールチオおよびカルボニルアルキルチオなどの多価リンカーが挙げられる。前述のフラグメントのそれぞれは、任意に、本明細書に定義する置換基X2で置換される。
【０１２１】
置換基X2は、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシレート、アルキルアルカノエート、グアニジノアルキル、R4−カルボニル、R5−カルボニルアルキル、R6−アシルアミノおよびR7−アシルアミノアルキルであることができ、ここで、R4およびR5は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体およびペプチドから選ばれ、そしてR6およびR7は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体およびペプチドから選ばれる。この実施態様において、ヘテロ原子リンカーは、窒素を含むことができ、置換基X2およびヘテロ原子リンカーは、それらが結合する放出可能なリンカーと一緒になって、複素環を形成する。
【０１２２】
複素環は、ピロリジン、ピペリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ピロリジノン、ピペリジノン、オキサゾリジノン、イソオキサゾリジノン、チアゾリジノン、イソチアゾリジノンおよびスクシンイミドでありうる。
【０１２３】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、メチレン、1−アルコキシアルキレン、1−アルコキシシクロアルキレン、1−アルコキシアルキレンカルボニルおよび1−アルコキシシクロアルキレンカルボニルに結合して、アセタールまたはケタールを形成する酸素を含んでよく、それぞれのフラグメントは、本明細書に定義する置換基X2で任意に置換される。あるいは、メチレンまたはアルキレンは、任意に置換されたアリールで置換される。
【０１２４】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、スルホニルアルキルに結合して、アルキルスルホネートを形成する酸素を含んでよい。
【０１２５】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、イミノアルキリデニル、カルボニルアルキリデンイミニル、イミノシクロアルキリデニルおよびカルボニルシクロアルキリデンイミニルに結合して、ヒドラゾンを形成する窒素を含んでよく、それぞれは、本明細書に定義する置換基X2で任意に置換される。代替的な立体配置は、ヒドラゾンは、カルボン酸誘導体、オルトギ酸誘導体またはカルバモイル誘導体でアシル化されて、さまざまなアシルヒドラゾンを含む放出可能なリンカーを形成することができる。
【０１２６】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、アルキレン(ジアルキルシリル)、アルキレン(アルキルアリールシリル)、(ジアルキルシリル)アリール、アルキレン(ジアリールシリル)、(ジアルキルシリル)アリール、(アルキルアリールシリル)アリールおよび(ジアリールシリル)アリールに結合して、シラノールを形成する酸素を含んでよく、それぞれは、本明細書に定義する置換基X2で任意に置換される。
【０１２７】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル(カルボキシアリール)カルボニル、カルボニル(ビスカルボキシアリール)カルボニルに結合して、アミド、あるいは薬物窒素をもつアミドを形成する窒素を含んでよい。
【０１２８】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル(カルボキシアリール)カルボニル、カルボニル(ビスカルボキシアリール)カルボニルに結合して、エステル、あるいは薬物酸素をもつエステルを形成する窒素を含んでよい。
【０１２９】
二価スペーサーリンカーは、任意の化学的に関連する方法において、直接または中断へテロ原子を介して組み合わされて、本明細書に記載する放出可能なリンカーを構築してもよいことが理解されるべきである。さらに、スペーサーおよびヘテロ原子リンカーの配置の性質が、放出可能なリンカーがインビボで切断される場所を決定することが理解されるべきである。たとえば、イオウ原子において終結する2つのスペーサーリンカーは、組み合わされる場合、ジスルフィドを形成し、それは、そのように形成された放出可能なリンカーにおける切断しうる結合である。
【０１３０】
たとえば、もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオスクシンイミド−1−イルアルキルオキシメチルオキシ部分を含み、ここで、メチルは、任意に、アルキルまたは置換アリールで置換される。
【０１３１】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオスクシンイミド−1−イルアルキルカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とアシルアジリジンを形成する。
【０１３２】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、1−アルコキシシクロアルキレンオキシ部分を含む。
【０１３３】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、アルキレンアミノカルボニル(ジカルボキシルアリーレン)カルボキシレートを含む。
【０１３４】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、ジチオアルキルカルボニルヒドラジドを含み、ここで、ヒドラジドは、薬物とヒドラゾンを形成する。
【０１３５】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオスクシンイミド−1−イルアルキルカルボニルヒドラジドを含み、ここで、ヒドラジドは、薬物とヒドラゾンを形成する。
【０１３６】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオアルキルスルホニルアルキル(二置換シリル)オキシを含み、ここで、二置換シリルは、アルキルで置換されるか、または任意に置換されたアリールで置換される。
【０１３７】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、天然アミノ酸およびその立体異性体から選ばれる複数の追加のスペーサーリンカーを含む。
【０１３８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカーボネートを形成する。
【０１３９】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカーボネートを形成し、アリールは、任意に置換される。
【０１４０】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、4−ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカーボネートを形成し、アリールは、任意に置換される。
【０１４１】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオスクシンイミド−1−イルアルキルオキシアルキルオキシアルキリデンを含み、ここで、アルキリデンは、薬物とヒドラゾンを形成し、各アルキルは、独立して選ばれ、オキシアルキルオキシは、任意に、アルキルで置換されるか、または任意に置換されたアリールで置換される。
【０１４２】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルオキシカルボニルヒドラジドを含む。
【０１４３】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−または3−ジチオアルキルアミノを含み、ここで、アミノは、薬物と、ビニル系アミドを形成する。
【０１４４】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルアミノを含み、ここで、アミノは、薬物とビニル系アミドを形成し、そしてアルキルはエチルである。
【０１４５】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−または3−ジチオアルキルアミノカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートを形成する。
【０１４６】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルアミノカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートを形成する。もう1つの態様では、アルキルはエチルである。
【０１４７】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートを形成する。もう1つの態様では、アルキルはエチルである。
【０１４８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートまたはカルバモイルアジリジンを形成する。
【０１４９】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、4−ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートまたはカルバモイルアジリジンを形成する。
【０１５０】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式(II)：
2015536323.tif 000110
2015536323.tif 000111
(II)
[式中、nは、1〜約4から選ばれる整数であり；RaおよびRbは、それぞれ独立して、水素、および任意に分枝したC1−C4アルキルといったような低級アルキルなどのアルキルから選ばれ；あるいはRaおよびRbは、結合する炭素原子と一緒になって、炭素環式環を形成し；Rは、任意に置換されたアルキル基、任意に置換されたアシル基または適当に選ばれた窒素保護基であり；(*)は、薬物、ビタミン、造影剤、診断剤、他の二価リンカーまたは結合体の他の部分のための結合点を示す]
で示される二価ラジカルを含む。
【０１５１】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式(III)：
2015536323.tif 000112
2015536323.tif 000113
(III)
[式中、mは、1〜約4から選ばれる整数であり；Rは、任意に置換されたアルキル基、任意に置換されたアシル基または適当に選ばれた窒素保護基であり；(*)は、薬物、ビタミン、造影剤、診断剤、他の二価リンカーまたは結合体の他の部分のための結合点を示す]
で示される二価ラジカルを含む。
【０１５２】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式(IV)：
2015536323.tif 000114
2015536323.tif 000115
(IV)
[式中、mは、1〜約4から選ばれる整数であり；Rは、任意に置換されたアルキル基、任意に置換されたアシル基または適当に選ばれた窒素保護基であり；(*)は、薬物、ビタミン、造影剤、診断剤、他の二価リンカーまたは結合体の他の部分のための結合点を示す]
で示される二価ラジカルを含む。
【０１５３】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、式：
2015536323.tif 000116
2015536323.tif 000117
2015536323.tif 000118
[式中、Xは、NH、OまたはSである]
から選ばれる1つ以上のラジカルリンカーを含む。
【０１５４】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式：
2015536323.tif 000119
を有するラジカルを含む。
【０１５５】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式：
2015536323.tif 000120
[式中、Xは、窒素、酸素またはイオウなどのヘテロ原子であり、nは、0、1、2および3から選ばれる整数であり、Rは、水素、またはアルコキシといったような、陽電荷を誘導的に、またはアリール環上の共鳴によって安定化する能力をもつ置換基などの置換基であり、記号(*)は、結合点を示す]
を有するラジカルを含む。ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロなど(これらに限定されない)の他の置換基がアリール環、ベンジル炭素、アルカン酸またはメチレン橋上に存在してもよいことが理解される。
【０１５６】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、カルボニル、チオノカルボニル、アルキレン、シクロアルキレン、アルキレンシクロアルキル、アルキレンカルボニル、シクロアルキレンカルボニル、カルボニルアルキルカルボニル、1−アルキレンスクシンイミド−3−イル、1−(カルボニルアルキル)スクシンイミド−3−イル、アルキレンスルホキシル、スルホニルアルキル、アルキレンスルホキシルアルキル、アルキレンスルホニルアルキル、カルボニルテトラヒドロ−2H−ピラニル、カルボニルテトラヒドロフラニル、1−（カルボニルテトラヒドロ−2H−ピラニル）スクシンイミド−3−イルおよび1−(カルボニルテトラヒドロフラニル）スクシンイミド−3−イルから選ばれるラジカルを含み、ここで、該スペーサーリンカーは、それぞれ、1つ以上の置換基X1で任意に置換される；
ここで、各置換基X1は、独立して、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシレート、アルキルアルカノエート、グアニジノアルキル、R4−カルボニル、R5−カルボニルアルキル、R6−アシルアミノおよびR7−アシルアミノアルキルから選ばれ、ここで、R4およびR5は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体およびペプチドから選ばれ、そしてR6およびR7は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体およびペプチドから選ばれる。
【０１５７】
本明細書に記載する化合物は、1つ以上の不斉中心を含んでもよく、あるいは複数の立体異性体として存在することができてもよい。1つの実施態様において、本明細書に記載する発明が、具体的に示される場合を除き、特定の立体化学要件に限定されないこと、ならびに、化合物、およびそれらを含む組成物、方法、用途および医薬は、光学的に純粋であるか、またはラセミおよびエナンチオマーの他の混合物、ジアステレオマーの他の混合物などのさまざまな立体異性体混合物のいずれかであってよいことを理解すべきである。立体異性体のこのような混合物が、1つ以上の不斉中心において、単一の立体化学的立体配置を含んでもよく、あるいは1つ以上の他の不斉中心において、立体化学的立体配置の混合物を含んでもよいことも理解すべきである。
【０１５８】
同様に、本明細書に記載する化合物は、シス、トランス、EおよびZ二重結合などの幾何学的中心を含んでもよい。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する発明は、特定の基化学的異性体要件に限定されないこと、ならびに、化合物、およびそれらを含む組成物、方法、用途および医薬は、純粋であるか、またはさまざまな幾何学的異性体の混合物のいずれかであってよいことを理解すべきである。幾何学的異性体のこのような混合物が、1つ以上の二重結合において、単一の立体配置を含んでもよく、あるいは1つ以上の他の二重結合において、幾何学的異性体の混合物を含んでもよいことも理解すべきである。
【０１５９】
本明細書で用いる用語「細胞表面受容体結合または標的化リガンド」は、一般に、細胞表面上に見い出される、特に、病原細胞の表面上に過剰発現されて見い出されるか、および／または該細胞表面上に優先的に発現される、受容体に結合する、および／または受容体を標的化する化合物を意味する。例示的リガンドとして、ビタミンおよびビタミン受容体結合化合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６０】
例示的ビタミン成分としては、カルニチン、イノシトール、リポ酸、ピリドキサル、アスコルビン酸、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、リボフラビン、チアミン、ビオチン、ビタミンB12、および、脂溶性ビタミンA、D、EおよびKが挙げられる。これらのビタミン、および受容体結合性類縁体および誘導体は、ラジカルが、多価リンカーLへの共有結合のために形成されうる標的体を構成する。本明細書に記載されるビタミン受容体結合性薬剤送達結合体を形成する。ビオチン受容体に結合する例示的ビオチン類縁体として、ビオシチン、ビオチンスルホキシド、オキシビオチンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６１】
葉酸受容体に結合する例示的葉酸類縁体として、が挙げられるが、これらに限定されるものではない。フォリン酸、プテロポリグルタミン酸、およびテトラヒドロプテリン、ジヒドロ葉酸、テトラヒドロ葉酸などの葉酸受容体結合プテリジン、ならびにこれらのデアザおよびジデアザ類縁体が含まれる。用語「デアザ」および「ジデアザ」類縁体は、天然の葉酸構造またはその類縁体もしくは誘導体において、1または2個の窒素原子で置換されている炭素原子を有する当該技術で確認されている類縁体を意味する。たとえば、デアザ類縁体には、葉酸、フォリン酸、プテロポリグルタミン酸、およびテトラヒドロプテリン、ジヒドロ葉酸およびテトラヒドロ葉酸などの葉酸受容体結合プテリジンの1−デアザ、3−デアザ、5−デアザ、8−デアザおよび10デアザ類縁体が含まれる。ジデアザ類縁体には、たとえば、葉酸、フォリン酸、プテロポリグルタミン酸、およびテトラヒドロプテリン、ジヒドロ葉酸およびテトラヒドロ葉酸などの葉酸受容体結合プテリジンの1,5−ジデアザ、5,10−ジデアザ、8,10−ジデアザおよび5,8−ジデアザ類縁体が含まれる。本発明の複合体形成リガンドとして有用な他の葉酸には、葉酸受容体結合類縁体のアミノプテリン、アメトプテリン（メトトレキサートとしても知られる）、N10−メチルフォレート、2−デアミノ−ヒドロキシフォレート、１−デアザメトプテリンまたは3−デアザメトプテリンなどのデアザ類縁体および3',5'−ジクロロ−4−アミノ−4−デオキシ−N10−メチルプテロイルグルタミン酸（ジクロロメトトレキサート）が含まれる。
前述の葉酸類縁体および／または誘導体は、葉酸受容体に結合する能力を反映して慣用的に葉酸（folate）と呼ばれ、そのようなリガンドは、外来分子と結合された場合、本明細書に記載の葉酸仲介エンドサイトーシスを介するような膜貫通輸送を増強するのに効果的である。
【０１６２】
葉酸受容体に結合する追加的な葉酸の類縁体は、米国特許出願公開第2005/0227985号及び同第2004/0242582号に記載されており、これらの開示は参照として本明細書に組み込まれる。例示的に、そのような葉酸類縁体は、一般式：
2015536323.tif 000121
[式中、XおよびYは、それぞれ独立して、ハロ、R2、OR2、SR3およびNR4R5から選ばれ；
U、VおよびＷは、それぞれ独立して、−(R6a)C＝、−N＝、−(R6a)C(R7a)−および−N(R4a)−から選ばれ；Qは、CおよびCHから選ばれ；Tは、S、O、Nおよび−C＝C−から選ばれ；
A1およびA2は、それぞれ独立して、酸素、硫黄、−C(Z)−、−C(Z)O−、−OC(Z)−、−N(R4b)−、−C(Z)N(R4b)−、−N(R4b)C(Z)−、−OC(Z)N(R4b)−、−N(R4b)C(Z)O−、−N(R4b)C(Z)N(R5b)−、−S(O)−、−S(O)2−、−N(R4a)S(O)2−、−C(R6b)(R7b)−、−N(C≡CH)−、−N(CH2C≡CH)−、C1〜C12アルキレンおよびC1〜C12アルキレンオキシから選ばれ、ここでZは、酸素またはイオウであり；
R1は、水素、ハロ、C1〜C12アルキルおよびC1〜C12アルコキシから選ばれ；R2、R3、R4、R4a、R4b、R5、R5b、R6bおよびR7bは、それぞれ独立して、水素、ハロ、C1〜C12アルキル、C1〜C12アルコキシ、C1〜C12アルカノイル、C1〜C12アルケニル、C1〜C12アルキニル、（C1〜C12アルコキシ）カルボニルおよび（C1〜C12アルキルアミノ）カルボニルから選ばれ；
R6およびR7は、それぞれ独立して、水素、ハロ、C1〜C12アルキルおよびC1〜C12アルコキシから選ばれるか、またはR6およびR7は、一緒になって、カルボニル基を形成し；R6aおよびR7aは、それぞれ独立して、水素、ハロ、C1〜C12アルキルおよびC1〜C12アルコキシから選ばれるか、またはR6aおよびR7aは、一緒になって、カルボニル基を形成し；
Lは、本明細書に記載されている二価リンカーであり、そして
n、p、r、sおよびtは、それぞれ独立して、0または1である]
を有する。
【０１６３】
本明細書で用いる用語「アミノ酸」は、一般に、ベータ、ガンマおよび式：
−N(R)−(CR’R”)q−C(O)−
[式中、Rは、水素、アルキル、アシル、または、適当な窒素保護基であり、R’およびR”は、それぞれの出現において互いに独立して選ばれる水素または置換基であり、および、qは、1、2、3、4または5などの整数である]
で示されるアミノ酸などの、より長いアミノ酸を意味する。例示的には、R’および／またはR”はそれぞれ独立して、水素、または、天然のアミノ酸に存在する側鎖、たとえば、メチル、ベンジル、ヒドロキシメチル、チオメチル、カルボキシル、カルボキシルメチル、グアニジノプロピルなど、および、それらの誘導体および保護誘導体に一致するが、ただしそれらに限定されない。前述の式は、立体異性変形体を全て含む。たとえば、アミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、リシン、グルタミン、アルギニン、セリン、オルニチン、トレオニンなどから選ばれてもよい。
【０１６４】
本明細書で用いる用語「アミノ酸誘導体」は、一般に、本明細書で定義するアミノ酸を意味し、ここで、アミノ基および／または側鎖のいずれか、または両方が置換される。例示的アミノ酸誘導体は、アミン、ヒドロキシ、カルボン酸およびチオプロドラッグおよび保護基などの、アミノ基および／または側鎖のプロドラッグおよび保護基を包含する。さらなる例示的アミノ酸誘導体として、ヒドロキシ基、アミド、カルバメートのエーテルおよびエステル、およびアミノ基、エステル、アミドのウレア、およびカルボン酸基のシアノ誘導体などの本明細書に記載のアミノ酸の置換変形体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６５】
本明細書で用いる用語「チューブリシン」は、一般に、式：
2015536323.tif 000122
[式中、
nは1〜3であり；
Vは、H、OR2またはハロであり、および、Wは、H、OR2またはアルキルであり、ここで、R2は独立して、それぞれの場合に、H、アルキルおよびC(O)R3から選ばれ、ここで、R3は、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールまたはアリールアルキル(これらのそれぞれが任意に置換される)であり；ただし、R2は、VおよびWがともにOR2であるとき、Hではなく；あるいは、VおよびWは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
X＝H、C1−4アルキル、アルケニル(これらのそれぞれが任意に置換される)、または、CH2QR9であり；ここで、Qは、−N−、−O−または−S−であり；R9＝H、C1−4アルキル、アルケニル、アリールまたはC(O)R10であり；R10＝C1−6アルキル、アルケニル、アリールまたはヘテロアリールであり(これらのそれぞれが任意に置換される)；
Zはアルキルであり、および、YはOであり；あるいは、ZはアルキルまたはC(O)R4であり、および、Yは存在せず、ここで、R4は、アルキル、CF3またはアリールであり；
R1はHであるか、あるいは、R1は、ハロ、ニトロ、カルボキシラートまたはその誘導体、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、およびOR6から選ばれる1〜3個の置換基を表し、ここで、R6は、水素または任意に置換されたアリール、フェノール保護基、プロドラッグ部分、アルキル、アリールアルキル、C(O)R7、P(O)(OR8)2またはSO3R8であり、ここで、R7およびR8は独立して、それぞれの場合に、H、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル(これらのそれぞれが任意に置換される)から選ばれるか、または、R8は金属カチオンであり；および、
RはOHまたは脱離基であるか、あるいは、Rはアシルヒドラジドなどのカルボン酸誘導体を形成する]
で示されるテトラペプチド化合物を意味する。
【０１６６】
前述のチューブリシンのそれぞれの結合体は、本明細書に記載される。1つの変形体では、Zはメチルである。もう1つの変形体では、R1はHである。もう1つの変形体では、R1はC(4)にてOR6であり、ここで、R6はH、アルキルまたはCOR7である。もう1つの変形体では、VはHであり、WはOC(O)R3である。もう1つの変形体では、X＝CH2QR9である。もう1つの変形体では、X＝CH2OR9である。もう1つの変形体では、R9はアルキルまたはアルケニルである。もう1つの変形体では、R9はC(O)R10である。もう1つの変形体では、R10＝任意に置換されたC1−6アルキルである。もう1つの変形体では、R10＝C1−6アルキルである。もう1つの変形体では、Rはアシルヒドラジドを形成する。前述の記載が、一般的チューブリシン構造の変形体のそれぞれの化学的に可能な組合せの明確な記載であることを理解すべきである。たとえば、前述の記載が、Zがメチルであり、およびR1がHである；R1がC(4)にてOR6であり、R6がHである；Zがメチルであり、R1がC(4)にてOR6であり、R6がHであり、およびX＝CH2OR9である；などの変形体の記載であることを理解すべきである。
【０１６７】
天然のチューブリシンは、一般に、 N−メチルピペコリン酸(Mep)、イソロイシン(Ile)、チューブバリン(tubuvalin)(Tuv)と呼ばれる非天然アミノ酸、および、チューブチロシン(tubutyrosine)(Tut、チロシンの類縁体）と呼ばれる非天然アミノ酸、または、チューブフェニルアラニン(tubuphenylalanine)(Tup、フェニルアラニンの類縁体）と呼ばれる非天然アミノ酸のどちらか、からなる直線のテトラペプチドである。もう1つの実施態様では、以下の式：
2015536323.tif 000123
[式中、R、R1およびR10は、本明細書のさまざまな実施態様で記載するとおりである]
で示される天然のチューブリシンおよびその類縁体および誘導体、およびその医薬的塩が記載される。前述のチューブリシンのそれぞれの結合体は、本明細書に記載される。
【０１６８】
もう1つの実施態様では、以下の一般式：
2015536323.tif 000124
2015536323.tif 000125
で示される天然のチューブリシンの結合体およびその医薬的塩が記載される。
【０１６９】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する各チューブリシンの末端カルボン酸基または末端アシルヒドラジン基にて結合体が形成される化合物が、本明細書に記載される。
【０１７０】
本明細書で用いる用語「ラパマイシン」は、シロリムス(ラパマイシン)、テムシロリムス、エベロリムスおよびリダフォロリムスならびに関連化合物、および式：
2015536323.tif 000126
[式中、
YAは、ORCまたはOCH2CH2ORCであり；
RA、RBまたはRCのうちの1つは、Lに接続された結合であり；および
RA、RBおよびRCのうちの他の2つは、独立して、それぞれの場合において、水素、任意に置換されたヘテロアルキル、プロドラッグ形成基およびC(O)RD(ここで、RDは、それぞれの場合において、独立して、水素、およびアルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルから選ばれ、それぞれ、任意に置換される)から選ばれる]
で示される化合物およびその医薬的に許容しうる塩を包含すると理解される。
【０１７１】
本明細書で用いる用語「アルキル」は、任意に分枝される炭素原子の鎖を包含する。本明細書で用いる用語「アルケニル」および「アルキニル」は、任意に分枝され、それぞれ、少なくとも1つの二重結合または三重結合を包含する炭素原子の鎖を包含する。アルキニルが、1つ以上の二重結合を含んでもよいことを理解すべきである。特定の実施態様において、アルキルは、C1−C24、C1−C12、C1−C8、C1−C6およびC1−C4などの限定された長さのものが有利であることも理解すべきである。例示的に、このようなC1−C8、C1−C6およびC1−C4などの特に限定された長さのアルキル基は、低級アルキルと呼ばれる。特定の実施態様において、アルケニルおよび／またはアルキニルが、それぞれ、C2−C24、C2−C12、C2−C8、C2−C6およびC2−C4などの限定された長さのものが有利であることも理解すべきである。例示的に、このようなC2−C8、C2−C6およびC2−C4などの特に限定された長さのアルケニルおよび／またはアルキニル基は、低級アルケニルおよび／またはアルキニルと呼ばれる。本願明細書において、より短いアルキル、アルケニルおよび／またはアルキニル基が、より低い親油性を化合物に加えてもよく、したがって、異なる薬物動態挙動を有するであろうことが理解される。本明細書に記載する本発明の実施態様では、それぞれの場合において、アルキルの記述が、本明細書に定義するアルキル、および任意に低級アルキルを意味することを理解すべきである。本明細書に記載する本発明の実施態様では、それぞれの場合において、アルケニルの記述が、本明細書に定義するアルケニル、および任意に低級アルケニルを意味することを理解すべきである。本明細書に記載する本発明の実施態様では、それぞれの場合において、アルキニルの記述が、本明細書に定義するアルキニル、および任意に低級アルキニルを意味することを理解すべきである。例示的アルキル、アルケニルおよびアルキニル基として、メチル、エチル、n−プロピル、イソプロピル、n−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、2−ペンチル、3−ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなど、および1つ以上の二重および／または三重結合またはその組合せを含む対応する基が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１７２】
本明細書で用いる用語「アルキレン」は、任意に分枝される炭素原子の二価の鎖を包含する。本明細書で用いる用語「アルケニレン」および「アルキニレン」は、任意に分枝され、それぞれ少なくとも1つの二重結合および／または三重結合炭素原子の二価の鎖を包含する。アルキニレンが、1つ以上の二重結合を包含してもよいことを理解すべきである。特定の実施態様において、アルキレンが、C1−C24、C1−C12、C1−C8、C1−C6およびC1−C4などの限定された長さを有するものが有利であることもさらに理解すべきである。例示的に、このようなC1−C8、C1−C6およびC1−C4などの特に限定された長さのアルキレン基は、低級アルキレンと呼ばれる。特定の実施態様において、アルケニレンおよび／またはアルキニレンが、それぞれ、C2−C24、C2−C12、C2−C8、C2−C6およびC2−C4などの限定された長さのものが有利であることも理解すべきである。例示的に、このようなC2−C8、C2−C6およびC2−C4などの特に限定された長さのアルケニレンおよび／またはアルキニレン基は、低級アルケニレンおよび／またはアルキニレンと呼ばれる。本願明細書において、より短いアルキレン、アルケニレンおよび／またはアルキニレン基が、より低い親油性を化合物に加えてもよく、したがって、異なる薬物動態挙動を有するであろうことが理解される。本明細書に記載する本発明の実施態様では、それぞれの場合において、アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレンの記述が、本明細書に定義するアルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン、および任意に低級アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレンを意味することを理解すべきである。例示的アルキレンとして、メチレン、エチレン、n−プロピレン、イソプロピレン、n−ブチレン、イソブチレン、sec−ブチレン、ペンチレン、1,2−ペンチレン、1,3−ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１７３】
本明細書で用いる用語「シクロアルキル」は、任意に分枝される、鎖の少なくとも一部が環式である炭素原子の鎖を包含する。シクロアルキルアルキルが、シクロアルキルの一部であることを理解すべきである。シクロアルキルが、多環式であってよいことを理解すべきである。例示的シクロアルキルとして、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、2−メチルシクロプロピル、シクロペンチルエチ−2−イル、アダマンチルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書で用いる用語「シクロアルケニル」は、任意に分枝され、少なくとも1つの二重結合を含む、鎖の少なくとも一部が環式である炭素原子の鎖を包含する。1つ以上の二重結合が、シクロアルケニルの環式部分、および／またはシクロアルケニルの非環式部分にあってよいことを理解すべきである。シクロアルケニルアルキルおよびシクロアルキルアルケニルが、それぞれシクロアルケニルの部分であることを理解すべきである。シクロアルキルが、多環式であってよいことを理解すべきである。例示的シクロアルケニルとして、シクロペンテニル、シクロヘキシルエテン−2−イル、シクロヘプテニルプロペニルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。鎖形成シクロアルキルおよび／またはシクロアルケニルが、C3−C24、C3−C12、C3−C8、C3−C6およびC5−C6などの限定された長さのものであることが有利であることをさらに理解すべきである。本願明細書において、より短いアルキルおよび／またはアルケニル鎖形成シクロアルキルおよび／またはシクロアルケニルが、それぞれ、より低い親油性を化合物に加えてもよく、したがって、異なる薬物動態挙動を有するであろうことが理解される。
【０１７４】
本明細書で用いる用語「ヘテロアルキル」は、炭素および少なくとも1つのヘテロ原子の両方を包含し、任意に分枝される。例示的ヘテロ原子として、窒素、酸素およびイオウが挙げられる。特定の変形態様において、例示的ヘテロ原子として、リンおよびセレンが挙げられる。本明細書で用いる用語、ヘテロシクリルおよびヘテロ環を含む「シクロヘテロアルキル」は、炭素および少なくとも1つのヘテロ原子の両方を包含し、任意に分枝され、鎖の少なくとも一部が環式である原子の鎖を包含する。例示的ヘテロ原子として、窒素、酸素およびイオウが挙げられる。特定の変形態様において、例示的ヘテロ原子として、リンおよびセレンが挙げられる。例示的シクロヘテロアルキルとして、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、キヌクリジニルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１７５】
本明細書で用いる用語「アリール」は、それぞれ、任意に置換されてよい多環式芳香族炭素環式基を包含する。本明細書に記載する例示的芳香族炭素環式基として、フェニル、ナフチルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書で用いる用語「ヘテロアリール」は、任意に置換されてよい芳香族複素環式基を包含する。例示的芳香族複素環式基として、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、テトラジニル、キノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１７６】
本明細書で用いる用語「アミノ」は、NH2基、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ(ここで、ジアルキルアミノ中の2つのアルキル基は、同一または異なって、すなわち、アルキルアルキルアミノであってよい)を包含する。例示的に、アミノは、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノなどを包含する。さらに、アミノアルキルまたはアシルアミノのようにアミノが変更するか、またはもう1つの用語によって変更される場合、用語アミノの上述の変形態様が、包含される。例示的に、アミノアルキルとして、H2N−アルキル、メチルアミノアルキル、エチルアミノアルキル、ジメチルアミノアルキル、メチルエチルアミノアルキルなどが挙げられる。例示的に、アシルアミノとして、アシルメチルアミノ、アシルエチルアミノなどが挙げられる。
【０１７７】
本明細書で用いる用語「アミノおよびその誘導体」は、それぞれ、任意に置換される、本明細書に記載するアミノ、およびアルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、ヘテロアルケニルアミノ、ヘテロアルキニルアミノ、シクロアルキルアミノ、シクロアルケニルアミノ、シクロヘテロアルキルアミノ、シクロヘテロアルケニルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールアルケニルアミノ、アリールアルキニルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノ、ヘテロアリールアルケニルアミノ、ヘテロアリールアルキニルアミノ、アシルアミノなどを包含する。用語「アミノ誘導体」は、尿素、カルバメートなども包含する。
【０１７８】
本明細書で用いる用語「ヒドロキシおよびその誘導体」は、それぞれ、任意に置換される、OH、およびアルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、ヘテロアルケニルオキシ、ヘテロアルキニルオキシ、シクロアルキルオキシ、シクロアルケニルオキシ、シクロヘテロアルキルオキシ、シクロヘテロアルケニルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アリールアルケニルオキシ、アリールアルキニルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、ヘテロアリールアルケニルオキシ、ヘテロアリールアルキニルオキシ、アシルオキシなどを包含する。用語「ヒドロキシ誘導体」は、カルバメートなども包含する。
【０１７９】
本明細書で用いる用語「チオおよびその誘導体」は、それぞれ、任意に置換される、SH、およびアルキルチオ、アルケニルチオ、アルキニルチオ、ヘテロアルキルチオ、ヘテロアルケニルチオ、ヘテロアルキニルチオ、シクロアルキルチオ、シクロアルケニルチオ、シクロヘテロアルキルチオ、シクロヘテロアルケニルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ、アリールアルケニルチオ、アリールアルキニルチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロアリールアルキルチオ、ヘテロアリールアルケニルチオ、ヘテロアリールアルキニルチオ、アシルチオなどを包含する。用語「チオ誘導体」は、チオカルバメートなども包含する。
【０１８０】
本明細書で用いる用語「アシル」は、それぞれ、任意に置換される、ホルミル、およびアルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、ヘテロアルキルカルボニル、ヘテロアルケニルカルボニル、ヘテロアルキニルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルケニルカルボニル、シクロヘテロアルキルカルボニル、シクロヘテロアルケニルカルボニル、アリールカルボニル、アリールアルキルカルボニル、アリールアルケニルカルボニル、アリールアルキニルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアリールアルキルカルボニル、ヘテロアリールアルケニルカルボニル、ヘテロアリールアルキニルカルボニル、アシルカルボニルなどを包含する。
【０１８１】
本明細書で用いる用語「カルボニルおよびその誘導体」は、基C(O)、C(S)、C(NH)およびその置換アミノ誘導体を包含する。
【０１８２】
本明細書で用いる用語「カルボン酸およびその誘導体」は、基CO2Hおよびその塩、ならびにそのエステルおよびアミド、およびCNを包含する。
【０１８３】
本明細書で用いる用語「任意に置換された」は、任意に置換されるラジカル上の水素原子と他の官能基の置換を包含する。このような他の官能基として、例示的に、アミノ、ヒドロキシル、ハロ、チオール、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。例示的に、任意のアミノ、ヒドロキシル、チオル、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキルおよび／またはスルホン酸は、任意に置換される。
【０１８４】
本明細書で用いる用語「任意に置換されたアリール」および「任意に置換されたヘテロアリール」は、任意に置換されるアリールまたはヘテロアリール上の水素原子と他の官能基の置換を包含する。このような他の官能基として、例示的に、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。例示的に、任意のアミノ、ヒドロキシ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキルおよび／またはスルホン酸は、任意に置換される。
【０１８５】
例示的置換基として、ラジカル−(CH2)xZX(ここで、xは、0−6の整数であり、ZXは、ハロゲン、ヒドロキシ、アルカノイルオキシ、たとえばC1−C6 アルカノイルオキシ、任意に置換されたアロイルオキシ、アルキル、たとえばC1−C6アルキル、アルコキシ、たとえばC1−C6アルコキシ、シクロアルキル、たとえばC3−C8シクロアルキル、シクロアルコキシ、たとえばC3−C8シクロアルコキシ、アルケニル、たとえばC2−C6アルケニル、アルキニル、たとえばC2−C6アルキニル、ハロアルキル、たとえばC1−C6ハロアルキル、ハロアルコキシ、たとえばC1−C6ハロアルコキシ、ハロシクロアルキル、たとえばC3−C8ハロシクロアルキル、ハロシクロアルコキシ、たとえばC3−C8ハロシクロアルコキシ、アミノ、C1−C6アルキルアミノ、(C1−C6アルキル)(C1−C6アルキル)アミノ、アルキルカルボニルアミノ、N−(C1−C6アルキル)アルキルカルボニルアミノ、アミノアルキル、C1−C6アルキルアミノアルキル、(C1−C6アルキル)(C1−C6アルキル)アミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、N−(C1−C6アルキル)アルキルカルボニルアミノアルキル、シアノおよびニトロから選ばれる；またはZXは、−CO2R4および−CONR5R6(ここで、R4、R5およびR6は、それぞれ、独立して、それぞれの場合、水素、C1−C6アルキル、アリール−C1−C6アルキルおよびヘテロアリール−C1−C6アルキルから選ばれる)から選ばれる)が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１８６】
たとえば、細胞表面受容体および／または標的化リガンドおよび／または独立して選ばれる薬物に関して本明細書で用いる用語「ラジカル」は、ヘテロ原子上の1つ以上の水素原子またはアルキル基などの原子または基が除去されて、多価リンカーLに結合するためのラジカルを提供する、本明細書に記載の細胞表面受容体および／または標的化リガンドおよび／または独立して選ばれる薬物を意味する。このようなリガンドラジカルおよび薬物ラジカルは、本明細書において、それぞれ、リガンド類縁体および薬物類縁体とも呼ばれてよい。
【０１８７】
本明細書で用いる用語「脱離基」は、求核試薬が原子上の求電子部位に付加されうるように結合される、原子上に求電子部位を生成する反応性官能基を意味する。例示的脱離基として、ハロゲン、任意に置換されたフェノール、アシルオキシ基、スルホンオキシ基などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。このような脱離基は、アルキル、アシルなどであってよいことを理解すべきである。このような脱離基は、本明細書において、脱離基がアシル上に存在する場合など、活性化基とも呼ばれてよい。さらに、限定的ではないが、PyBop、BOP−Cl、BOP、ペンタフルオロフェノール、イソブチルクロロホルメートなどの従来のペプチド、アミドおよびエステルカップリング剤が、カルボニル基上の本明細書に定義する脱離基を含む、さまざまな中間体を形成する。
【０１８８】
本明細書に開示されるすべての場合において、可変部のための整数の範囲の記述は、記述された範囲のすべての個々のメンバーおよび可変部のためのすべての可能な部分範囲を記載することを理解すべきである。たとえば、nが0〜8の整数であるという記述は、範囲、0、1、2、3、4、5、6、7および8の個々の値およびnが0、またはnが1、またはnが2であるなどの選択しうる値を記載する。さらに、nが0〜8の整数であるという記述は、nが1〜8、1〜7、1〜6、2〜8、2〜7、1〜3、2〜4の整数であるといったような、さらなる実施態様に基づいてよい、各およびすべての部分範囲も記載する。
【０１８９】
本明細書で用いる用語「組成物」は、一般に、特定の量の特定の成分を含む任意の生成物から、ならびに特定の量の特定の成分の組合せから、直接または間接的に得られる任意の生成物を意味する。本明細書に記載する組成物が、本明細書に記載する単離された化合物、またはその塩、溶液、水和物、溶媒和物および本明細書に記載する化合物のその他の形態から製造されうることを理解すべきである。ヒドロキシ、アミノなどの特定の官能基が、化合物のさまざまな物理的形態で、錯体、および／または水および／またはさまざまな溶媒との配位化合物を形成することが理解される。組成物が、本明細書に記載する化合物のさまざまなアモルファス、非アモルファス、部分結晶、結晶性および／または他の形態学的形態から製造されうることも理解すべきである。組成物が、本明細書に記載する化合物のさまざまな水和物および／または溶媒和物から製造されうることも理解すべきである。したがって、本明細書に記載する化合物を記述するこのような医薬組成物は、本明細書に記載する化合物のさまざまな形態学的形態および／または溶媒和物または水和物形態の個々、あるいは任意の組合せを包含すると理解されるべきである。さらに、組成物が、本明細書に記載する化合物のさまざまな共結晶から製造されうることを理解すべきである。
【０１９０】
例示的に、組成物は、1種以上の担体、希釈剤および／または賦形剤を包含してもよい。本願明細書に記載する化合物またはそれらを含む組成物は、本明細書に記載する方法に適した任意の従来の投与剤形において治療有効量で製剤されてもよい。本願明細書に記載する化合物またはそのような製剤などのそれらを含む組成物は、既知の手順(一般に、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、(21st編、2005)を参照)を用い、本明細書に記載する方法のための広範な従来の経路で、および広範な投与剤形で、投与することができる。
【０１９１】
本明細書で用いる用語「治療有効量」は、治療される疾患または障害の症状の緩和などの、研究者、獣医師、医師またはその他および／またはの臨床医によって求められる、組織系、動物またはヒトにおける生物学的または医薬的応答を引き起こす活性化合物または医薬品の量を意味する。1つの態様では、治療有効量は、任意の医療に適用しうる合理的な利点／リスク比で、疾患または疾患の症状を治療または緩和しうる量である。しかしながら、本明細書に記載する化合物および組成物の総位置日用量は、健全な医学的判断の範囲内で、主治医によって決定されうることを理解すべきである。任意の特定の患者のための特定の治療有効用量レベルは、治療される障害および障害の重篤度；用いられる特定の化合物の活性；用いられる特定の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、患者の性別および食事療法；用いられる特定の化合物の投与時間、投与経路および除去速度；治療期間；用いられる特定の化合物と併用または同時に用いた薬物；および当技術分野における研究者、獣医師、医師または他の臨床医に周知の同様の因子；などのさまざまな因子に応じて変わる。
【０１９２】
本明細書で用いる用語「投与する」は、患者に、本明細書に記載する化合物および組成物を導入するすべての手段を包含し、経口(po)、静脈内(iv)、筋肉内(im)、皮下(sc)、経皮、吸入、口腔内、眼内、舌下、膣内、直腸などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書に記載する化合物および組成物は、従来の非毒性の医薬的に許容しうる担体、補助剤およびビヒクルなどを含む単位投与剤形および／または製剤で投与することができる。
【０１９３】
経口投与のための例示的形式として、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤などが挙げられる。
【０１９４】
非経口投与のための例示的経路として、静脈内、動脈内、腹腔内、硬膜外、尿道内、胸骨内、筋肉内および皮下、ならびに当技術分野で認められた任意の他の非経口投与経路が挙げられる。
【０１９５】
本明細書に記載する疾患、投与経路、および／または、化合物および／または組成物が局所的または全身的に投与されるかどうかに応じて、約1 μg/kg〜約1 g/kgの範囲の用量といったような広範な許容投薬が本明細書において企図される。投薬は、1回であるかまたは分割されてよく、q.d.(1日1回)、b.i.d.(1日2回)、t.i.d.(1日3回)、あるいは1日おき、週1回、月1回、四半期に1回などの広範なプロトコルにしたがって投与されてよい。これらの場合のそれぞれにおいて、本明細書に記載する治療有効量が、投与の例に対応するか、または投与プロトコルによって決定される総1日、1週、1か月もしくは四半期用量に対応することが理解される。
【０１９６】
本明細書で用いる用語「プロドラッグ」は、一般に、生体系に投与された場合に、1つ以上の自発的化学反応、酵素触媒化学反応および／または代謝的化学反応、またはそれらの組合せの結果として、生物学的に活性な化合物を生み出す任意の化合物を意味する。インビボでは、プロドラッグは、典型的に、酵素(エステラーゼ、アミダーゼ、ホスファターゼなど)、単純な生化学またはインビボにおけるその他の工程によって作用を受けて、薬学的により活性な薬物を遊離または再生成させる。この活性化は、内因性宿主酵素またはプロドラッグの投与前、投与後もしくは投与中に宿主に投与される非内因性酵素の作用を介して起こりうる。プロドラッグのさらなる詳細は、米国特許第5,627,165号；およびPathalkら、Enzymic protecting group techniques in organic synthesis、Stereosel. Biocatal. 775−797(2000)に記載されている。プロドラッグが、標的化送達、安全性、安定性などの目標が達成されるとすぐに、もとの薬物に有利に変換され、プロドラッグ形成基の開放された残りが迅速に除去されることが理解される。
【０１９７】
プロドラッグは、−OH−、−SH、−CO2H、−NR2などの、化合物上に存在する1つ以上の官能基にインビボで最終的に開裂される基を結合させることによって、本明細書に記載する化合物から製造することができる。例示的プロドラッグとして、基がアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキルである場合、カルボン酸エステル、ならびに、結合された基がアシル基、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、ホスフェートまたはスルフェートである場合、ヒドロキシル、チオールおよびアミンのエステルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。活性エステルとも呼ばれる例示的エステルとして、1−インダニル、N−オキシスクシンイミド；アシルオキシアルキル基、たとえばアセトキシメチル、ピバロイルオキシメチル、β−アセトキシエチル、β−ピバロイルオキシエチル、1−(シクロヘキシルカルボニルオキシ)プロプ−1−イル、(1−アミノエチル)カルボニルオキシメチルなど；アルコキシカルボニルオキシアルキル基、たとえばエトキシカルボニルオキシメチル、α−エトキシカルボニルオキシエチル、β−エトキシカルボニルオキシエチルなど；ジ低級アルキルアミノアルキル基などのジアルキルアミノアルキル基、たとえばジメチルアミノメチル、ジメチルアミノエチル、ジエチルアミノメチル、ジエチルアミノエチルなど；2−(アルコキシカルボニル)−2−アルケニル基、たとえば2−(イソブトキシカルボニル)ペント−2−エニル、2−(エトキシカルボニル)ブト−2−エニルなど；およびラクトン基、たとえばフタリジル、ジメトキシフタリジルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１９８】
さらなる例示的プロドラッグは、本明細書に記載する化合物の溶解度および／または安定性を増加させるように機能するアミドまたはリン基などの化学的部分(chemical moiety)を含む。アミノ基のためのさらなる例示的プロドラッグとして、(C3−C20)アルカノイル；ハロ−(C3−C20)アルカノイル；(C3−C20)アルケノイル；(C4−C7)シクロアルカノイル；(C3−C6)−シクロアルキル(C2−C16)アルカノイル；任意に置換されたアロイル、たとえば非置換アロイルまたはハロゲン、シアノ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、(C1−C3)アルキルおよび(C1−C3)アルコキシ(それぞれ、1つ以上の1〜3個のハロゲン原子で任意に置換される)から選ばれる1〜3個の置換基で置換されたアロイル；任意に置換されたアリール(C2−C16)アルカノイルおよび任意に置換されたヘテロアリール(C2−C16)アルカノイル、たとえば非置換であるかまたはハロゲン、(C1−C3)アルキルおよび(C1−C3)アルコキシ(それぞれ、1〜3個のハロゲン原子でさらに任意に置換される)から選ばれる1〜3個の置換基で置換されたアリールまたはヘテロアリールラジカル；およびヘテロアリール部分にO、SおよびNから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を有し、アルカノイル部分に2〜10個の炭素原子を有する任意に置換されたヘテロアリールアルカノイル、たとえば非置換であるかまたはハロゲン、シアノ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、(C1−C3)アルキルおよび(C1−C3)アルコキシ(それぞれ、1〜3個のハロゲン原子でさらに任意に置換される)から選ばれる1〜3個の置換基で置換されたヘテロアリールラジカル；が挙げられるが、これらに限定されるものではない。例示された基は、例示的であって、網羅的ではなく、従来の工程によって製造されうる。
【０１９９】
プロドラッグ自体が、重要な生物活性を持たなくてもよいが、インビボ投与後に、1つ以上の自発的化学反応、酵素触媒化学反応および／または代謝的化学反応、またはそれらの組合せを受けて、生物学的に活性であるか、または生物学的に活性な化合物の前駆体である本明細書に記載する化合物を生成することができることが理解される。しかしながら、幾つかの場合では、プロドラッグが生物学的に活性であることが理解される。プロドラッグが、改善された経口バイオアベイラビリティ、薬力学的半減期などを介して、薬効または安全性を改善するのに役立つことができることが多いことも理解される。プロドラッグは、望ましくない薬物特性を単にマスクするか、または薬物送達を改善する基を包含する本明細書に記載する化合物の誘導体という意味も有する。たとえば、1つ以上の本明細書に記載する化合物は、遊離に遮断または最小化され、低経口薬物吸収、部位特異性の欠如、化学的不安定性、毒性および患者の承諾性が乏しいこと(嫌な味、悪臭、注射部位の痛みなど)およびその他のものなどの臨床薬物適用における薬理学的、医薬的または薬物動態的バリヤーになりうる望ましくない特性を示してもよい。プロドラッグ、または可逆的誘導体を用いるその他の方策が、薬物の臨床適用の最適化において有用であることが本明細書において理解される。
【０２００】
本明細書に記載する化合物、リンカー、中間体および結合体は、国際出願番号 WO 2009/002993、WO 2004/069159、WO 2007/022494およびWO 2006/012527、および米国特許出願番号 13/837539(2013年3月15日出願)に記載されているような従来の工程を用いて製造されうる。上述の文献のそれぞれの開示は、その全体において参照することによって本明細書に援用される
【０２０１】
本明細書に引用した各文献は、参照することによって本明細書に援用される
【０２０２】
以下の実施例は、本発明の特定の実施態様をさらに説明するが、以下の例示的実施例は、いかなる方法でも本発明を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２０３】
化合物実施例
本明細書に記載する化合物は、本明細書に記載する工程および合成を用いて、ならびに一般的有機合成法を用いて、製造されうる。さらに詳しくは、該化合物を製造するための方法は、米国特許出願公開公報2005/0002942(その開示は、参照することによって本明細書に援用される)に記載される。
【０２０４】
実施例：葉酸−ペプチドの一般的形成。以下の反応工程式に示すように、酸感受性Fmoc−AA−Wang樹脂(1)上のFmoc−方策などの標準的方法を用いるポリマーサポート逐次的アプローチによって、葉酸−含有ペプチジルフラグメント Pte−Glu−(AA)n−NH(CHR2)CO2H(3)を製造する。
【０２０５】
反応工程式
2015536323.tif 000127
(a)20% ピペリジン/DMF；(b)Fmoc−AA−OH、PyBop、DIPEA、DMF；(c)Fmoc−Glu(O−t−Bu)−OH、PyBop、DIPEA、DMF；(d)1. N10(TFA)−Pte−OH；PyBop、DIPEA、DMSO；(e)TFAA、(CH2SH)2、i−Pr3SiH；(f)NH4OH、pH 10.3。
【０２０６】
非天然アミノ酸が、適当な出発物質を用いる前述の工程に包含されてよいことを理解すべきである。
【０２０７】
本明細書に記載する工程のこの例示的実施態様では、R1はFmocであり、R2は所望の適当に保護されたアミノ酸側鎖であり、DIPEAはジイソプロピルエチルアミンである。PyBOPおよび本明細書に記載もしくは当技術分野で既知のその他のものなどの標準的カップリング手順が用いられ、ここで、カップリング剤は、活性化試薬として例示的に適用されて、効率的カップリングを確実にする。Fmoc保護基は、ピペリジン、テトラブチルアンモニウムフルオリド(TBAF)での処理などの標準的条件下、各カップリングステップ後に除去される。Fmoc−Glu−OtBu、Fmoc−D−Glu−OtBu、N10−TFA−Pte−OHなどの適切に保護されたアミノ酸ビルディングブロックは、反応工程式に記載のとおり用いられ、ステップ(b)においてはFmoc−AA−OHによって表される。このようにAAは、任意のアミノ酸出発物質を意味し、適切に保護される。本明細書で用いるアミノ酸が、1つ以上の炭素によって分離されたアミンおよびカルボン酸官能基を有する任意の試薬を意味することを企図され、天然のアルファおよびベータアミノ酸ならびにこれらのアミノ酸のアミノ酸誘導体および類縁体を包含することを理解すべきである。特に、保護されたセリン、トレオニン、システイン、アスパラギン酸などの保護された側鎖を有するアミノ酸は、本明細書に記載する葉酸−ペプチド合成においても使用されてよい。さらに、ガンマ、デルタまたはより長い同族アミノ酸が、本明細書に記載する葉酸−ペプチド合成における出発物質として包含されることもできる。さらに、ノルロイシン、イソバリン、β−メチルトレオニン、β−メチルシステイン、β,β−ジメチルシステインなどの同族側鎖または代替の分枝構造を有するアミノ酸類縁体が、本明細書に記載する葉酸−ペプチド合成における出発物質として包含されることもできる。
【０２０８】
固体サポートペプチド(2)を製造するために、Fmoc−AA−OHが関与するカップリングシーケンス(ステップ(a)および(b))は、n回行われるが、ここで、nは整数であり、0〜約100であってよい。最後のカップリングステップの後、残りのFmoc基は除去され(ステップ(a))、ペプチドは、グルタミン酸誘導体に連続的にカップリングされ(ステップ(c))、脱保護され、TFA−保護プテロイン酸にカップリングされる(ステップ(d))。続いて、ペプチドは、トリフルオロ酢酸、エタンジチオールおよびトリイソプロピルシラン処理によりポリマーサポートから切断される(ステップ(e))。これらの反応条件は、適切に保護されたアミノ酸側鎖の部分を形成しうるt−Bu、t−BocおよびTrt保護基の同時除去をもたらす。TFA保護基は、塩基で処理することにより除去され(ステップ(f))、葉酸含有ペプチジルフラグメント(3)が提供される。
【０２０９】
2015536323.tif 000128
EC119
LCMS [ESI [M＋H]+：1046；部分1H NMR (D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)、4.40−4.75(series of m、5H)、4.35(m、2H)、4.16(m、1H)、3.02(m、2H)、2.55−2.95(series of m、8H)、2.42(m、2H)、2.00−2.30(m、2H)、1.55−1.90(m、2H)、1.48(m、2H)ppm。
【０２１０】
実施例：以下の化合物などの1つ以上のD−アミノ酸を含有する対応する化合物もまた、製造することができる：
2015536323.tif 000129
EC1213
LCMS [ESI、 [M+H]+1) 1046。部分1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.6(d)、3.8−4.6(m)、2.8−3.2(m)、2.2−2.8(m)、1−2.2(m)
【０２１１】
2015536323.tif 000130
EC0835
MS(ESI、[M+H]+1) ＝1046.5。部分1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.6(d)、3.8−4.6(m)、2.8−3.2(m)、2.2−2.8(m)、1−2.2(m)
【０２１２】
2015536323.tif 000131
EC819
MS(ESI、[M+H]+1)＝1046.4。部分1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.6(d)、6.6(d)、4−4.6(m)、3.4−3.8(m)、3−3.15(m)、1−2.8(m)
【０２１３】
2015536323.tif 000132
EC259
[M+H]+＝1047.52。部分1H NMR(D2O)：8.6(s、1H)、7.5(d、2H)、6.65(d、2H)、4.4(dd、2H)、4.18(m、4H)、2.9(t、2H)、2.75(t、2H)、2.6−2.15(m、10H)、2.1−1.8(m、3H)、1.7−1.4(m、3H)、1.3(m、3H)。
【０２１４】
2015536323.tif 000133
EC1544
MS(ESI [M＋H]+)：1046。部分1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ(ppm)8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２１５】
2015536323.tif 000134
EC1547
MS(ESI、[M＋H]+)＝1046.7。 部分1H−NMR(D2O)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.6(d)、4.4−4.8(m)、4−4.2(m)2.2−3(m)、1.8−2.2(m)、1.3−1.7(m)
【０２１６】
2015536323.tif 000135
および
2015536323.tif 000136
。
【０２１７】
実施例：チューブリシンヒドラジドの製造。EC0347(TubB−H)を製造することによって例示される。
2015536323.tif 000137
EC0347
無水EtOAc(2.0 mL)中のチューブリシンB(0.15 mg)溶液に、N,N−ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA、6.1 μL)およびクロロギ酸イソプチル(3.0 μL)を−15℃にてシリンジで順に加えた。アルゴン下、−15℃にて45分間攪拌した後、反応混合物を−20℃に冷却し、無水ヒドラジン(5.0 μL)を加えた。アルゴン下、−20℃にて3時間、反応混合物を攪拌し、1.0 mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH 7.0、1.0 mL)を加えて反応を停止し、プレパラティブHPLCに注入して精製した。カラム：Waters XTerra Prep MS C18 10 μm、19ｘ250 mm；移動相A：1.0 mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH 7.0；移動相B：アセトニトリル；方法：20分間かけて、10%B〜80%B、流速＝25mL/分。15.14−15.54分からの画分を集め、凍結乾燥して、EC0347を白色固体(2.7 mg)で製造した。上述の方法は、チューブリシン出発化合物の適切な選択によって、他のチューブリシンヒドラジドを製造するために等しく適用可能である。
【０２１８】
実施例：カップリング試薬EC0311の合成。
2015536323.tif 000138
無水DCM(5.0 mL)中のHOBt−OCO2−(CH2)2−SS−2−ピリジンHCl(685 mg、91%)の懸濁液に、0℃にてDIPEA(0.60 mL)を加え、アルゴン下で2分間攪拌し、無水ヒドラジン(0.10 mL)を加えた。反応混合物を、アルゴン下、0℃にて10分間攪拌し、室温にてさらに30分間攪拌し、ろ過し、ろ液をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中の2% MeOH)によって精製して、EC0311を透明濃厚油状物(371 mg)で得、静置して固化させた。
【０２１９】
実施例：チューブリシンジスルフィドの製造(段階的工程)。
2015536323.tif 000139
EC0312のための例示。無水EtOAc(2.0 mL)中のチューブリシンB(82 mg)の溶液に、DIPEA(36 μL)およびクロロギ酸イソプチル(13 μL)を−15℃にてシリンジで順に加えた。アルゴン下、−15℃にて45分間攪拌した後、反応混合物に無水EtOAc(1.0 mL)中のEC0311の溶液を加えた。得られる溶液を、アルゴン下、−15℃にて15分間攪拌し、室温にてさらに45分間攪拌し、濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中の2〜8% MeOH)によって精製して、EC0312を白色固体(98 mg)で得た。上述の方法は、チューブリシン出発化合物の適切な選択によって、他のチューブリシンヒドラジドを製造するために等しく適用可能である。
【０２２０】
実施例：
2015536323.tif 000140
DCM(4 ml)中のドキソルビシン(100 mg、0.184 mmol)および2−[ベンゾトリアゾール−1−イル−(オキシカルボニルオキシ)−エチルジスルファニル]−ピリジン(77.8 mg、0.184 mmol)の溶液に、DIPEA(0.064 ml、0.368 mmol)を加えた。反応物を2時間攪拌した。TLC(DCM中の10% MeOH)は、反応の完了を示した。DCMを減圧除去し、 SiO2カラム(DCM中の10% MeOH)で精製して、純粋な生成物(90 mg、65%)を得た。LCMS(ESI)：(M＋H)+ 計算値：C35H36N2O13S2、757.17；実測値 757.30、1H NMR(300 MHz、CDCl3/CD3OD)：δ 8.44(br s、1H)、8.00(d、1H)、7.65−7.82(m、 3H)、7.38(d、1H)、7.18(br s、1H)、5.45(s、1H)、5.25(s、3H)、4.70(m、2H)、4.3(m、1H)、4.22−3.90(m、2H)、3.75(s、1H)、3.62(s、1H)、3.35−2.90(m、2H)、2.45−2.10(m、2H)、1.85(m、5H)、1.32(d、3H)。
【０２２１】
実施例：チューブリシンBピリジルジスルフィド。
2015536323.tif 000141
同様に、本明細書に記載のように、チューブリシンBピリジルジスルフィドを製造する。
【０２２２】
実施例：D−EC0488。
2015536323.tif 000142
H−Cys(4−メトキシトリチル)−2−クロロトリチル−樹脂から出発し、および以下のSPPS試薬を用いる本明細書に記載する一般的ペプチド合成手順にしたがって、SPPSによって、この化合物を製造した：
2015536323.tif 000143
【０２２３】
カップリングステップ。ペプチド合成容器に、樹脂を加え、アミノ酸溶液、DIPEAおよびPyBOPを加えた。アルゴンを1時間通気し、DMFおよびIPAで3回洗浄した。各アミノ酸カップリングの前に、Fmoc脱保護のためにDMF中の20% ピペリジン、3ｘ(10分間)を用いた。9つのカップリングステップすべてが完了するまで続けた。DMF中の2%ヒドラジンによる樹脂の最終処理、3ｘ(5分間)において、プテロイン酸上のTFA保護基を切断し、樹脂をDMF(3ｘ)、IPA(3ｘ)、MeOH(3ｘ)で洗浄し、樹脂にアルゴンを30分間通気した。
【０２２４】
切断ステップ。試薬：92.5% TFA、2.5% H2O、2.5% トリイソプロピルシラン、2.5% エタンジチオール。アルゴン通気しながら、切断試薬で3回(10分、5分、5分)樹脂を処理し、排液し、切断試薬で樹脂を1回洗浄し、溶液を合せる。5mlになるまで回転蒸発し、ジエチルエーテル(35 mL)中で沈殿させる。遠心分離し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させる。粗固体の約半分(〜100 mg)をHPLCによって精製した。
【０２２５】
HPLC精製ステップ。カラム：Waters Xterra Prep MS C18 10 μm 19x250 mm；溶媒A：10mM 酢酸アンモニウム、pH 5；溶媒B：ACN；方法：5分 0% B〜25分 20% B 26mL/分。生成物含有画分を集め、凍結乾燥して、43 mg EC0488(51%収率)を得た。1H NMRおよびLC/MS(正確な質量1678.62)は、生成物に一致した。
【０２２６】
実施例：
2015536323.tif 000144
EC1577
MS(ESI、[M＋H]+)＝1681。部分1H NMR(D2O)：8.96(s)、7.65(d)、6.81(d)、4.66(s)、4.40−4.15(m)、3.90−3.54(m)、3.50−3.18(m)、2.97−2.90(m)、2.51−1.80(m)。
【０２２７】
実施例：ジスルフィド含有チューブリシン結合体の一般的合成。
2015536323.tif 000145
R1がHまたはOHであり、R10がアルキルまたはアルケニルである特定の天然のチューブリシンのピリジニルジスルフィド誘導体によって例示される。チオール基を含む結合リガンド−リンカー中間体を脱イオン水に入れ(約20 mg/mL、使用前にアルゴン通気10分間)、懸濁液のpHを飽和NaHCO3(約20 mg/mL、使用前にアルゴン通気10分間)によって、約6.9ぶ調節した(懸濁液は、pHが上昇すると溶液になる)。溶液に、必要に応じて追加の脱イオン水を加え(約20−25%)、水性溶液に、THF中のEC0312の溶液(約20 mg/mL)をただちに加える。反応混合物は、急速に均質になる。アルゴン下、たとえば、45分間攪拌した後、反応混合物を2.0 mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH 7.0、約150体積パーセント)で希釈し、排気によってTHFを除去する。得られる懸濁液をろ過し、ろ液をプレパラティブHPLC(本明細書に記載のように)によって精製してもよい。画分を凍結乾燥して、結合体を単離する。上述の方法は、チューブリシン出発化合物の適切な選択によって、他のチューブリシン結合体を製造するために等しく適用可能である。
【０２２８】
実施例：結合体製造のための一般的方法2(ワンポット)。
2015536323.tif 000146
EC1456の製造による例示。無水EtOAc(0.50 mL)中のチューブリシンA(18 mg)の溶液に、DIPEA(7.8 μL)およびクロロギ酸イソプチル(3.1 μL)を、−15℃にて、シリンジの補助により、順に加えた。アルゴン下、−15℃にて35分間攪拌した後、反応混合物に、無水EtOAc(0.50 mL)中のEC0311(5.8 mg)の溶液を加えた。冷却を止め、反応混合物をアルゴン下、さらに45分間攪拌し、濃縮し、減圧し、残渣をTHF(2.0 mL)に溶解した。同時に、D−EC0488(40 mg)を脱イオン水(使用前に10分間のアルゴン通気)に溶解し、水溶液のpHを飽和NaHCO3によって6.9に調節した。D−EC0488溶液に追加の脱イオン水を加えて、総量2.0 mLにし、活性化チューブリシンを含むTHF溶液をただちに加えた。急速に均質になる反応混合物をアルゴン下、50分間攪拌し、2.0 mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH 7.0、15 mL)を加えて反応を停止させた。得られる濁った溶液をろ過し、ろ液をプレパラティブHPLCに注入して精製した。カラム：Waters XTerra Prep MS C18 10 μm、19ｘ250 mm；移動相A：2.0 mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH 7.0；移動相B：アセトニトリル；方法：1%Bで5分間、次いで、次の30分間をかけて1%B〜60%B、流速＝26mL/分。20.75−24.50分間からの画分を集め、凍結乾燥して、EC1456を淡黄色の綿毛状の固体で得た(26 mg)。上述の方法は、チューブリシンまたは他の薬物出発化合物の適切な選択によって、他のチューブリシンおよび他の結合体を製造するために等しく適用可能である。
【０２２９】
実施例：EC1663およびEC1664。以下のさらなる化合物が、本明細書に記載する方法を用いて製造可能である：
2015536323.tif 000147
【０２３０】
実施例：EC1426は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000148
【０２３１】
実施例：EC1456は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000149
【０２３２】
実施例：N10−TFA保護EC1454は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000150
【０２３３】
実施例：EC1454は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000151
EC1454：MS(ESI、[M+2H]2+)＝840.90、[M+H]+＝1681.3。部分1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.45(s)、4.35(t)、4.15−4.3(m)、3.3−3.6(m)、3.25(m)、3.0(m)、2.7−2.9(m)、2−2.3(m)、1.6−2(m)。
【０２３４】
2015536323.tif 000152
EC1415：[M＋H]+＝1709.69、[M+2H]2+＝855.22。部分1H NMR(D2O、300 MHz) δ(ppm)：8.6(s、1H)、7.45(d、2H)、6.5(d、2H)、4.5(s、2H)、4.3−4.1(m、6H)、3.95(t、1H)、3.8−3.4(m、19H)、3.4−2.95(m、7H)、2.4−1.7(m、26H)、1.6(m、1H)、1.25(s、2H)、1.05(s、3H)。
【０２３５】
実施例：EC1004は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000153
【０２３６】
磁気攪拌棒および温度プローブを備えた丸底フラスコに、ジペプチドEC1458、イミダゾールおよび塩化メチレンを加える。いったんすべての固体が溶解したら、溶液を氷浴で冷却する。クロロトリエチルシラン(TESCl)を滴下し、氷浴を除去する。反応の完了をモニターする。クロロトリエチルシランおよび／またはイミダゾールの第2の部分を必要に応じて加える。イミダゾールHCl塩をろ去し、塩化メチレンを加える。塩化ナトリウムの飽和溶液(塩水)で有機物を洗浄し、水性層を塩化メチレンで1回逆抽出し、有機層を合わせ、塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、回転蒸発器で濃縮する。残渣をテトラヒドロフラン(THF)に溶解し、およそ−45℃に冷却する。トルエン中のカリウムビス(トリメチルシリル)アミド(KHMDS)の溶液を滴下する。攪拌しながら、酪酸クロロメチルを加え、反応をモニターする。メタノールを加えて反応を停止し、次いで、酢酸エチルおよび塩水を加える。水性層を捨て、有機物を塩水で1回洗浄する。有機層を回転蒸発器で濃縮し、油状残渣をシリカゲルのショートプラグに通す。プラグを、石油エーテル中の酢酸エチルの20%溶液で洗浄する。合わせた有機物を、蒸留が止まるまで、回転蒸発器で濃縮する。粗EC1004油状物を、LCおよびNMRによって分析し、使用するまで冷凍庫で保管する。
【０２３７】
実施例：EC1005は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000154
適当な大きさの水素添加フラスコに、R−N−メチルピペコリネート(MEP)、ペンタフルオロフェノール、N−メチルピロリジノン(NMP)およびエチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド(EDC)を入れる。混合物を少なくとも16時間攪拌する。N−メチルピロリジノン(NMP)に溶解したEC1004および10 wt% Pd/Cを加える。反応混合物を、水素圧下、LC分析によって反応が完了するまで攪拌／振とうする。セライトを通して、Pd/Cをろ去する。セライトを酢酸エチルで洗浄し、合わせた有機物を、1%重炭酸ナトリウム／10%塩化ナトリウム溶液で3回洗浄する。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、回転蒸発器で濃縮する。残渣をDCMに溶解し、溶離液として酢酸エチルおよび石油エーテルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーによって精製する。画分を集め、純度を検査し、合わせ、回転蒸発器で乾燥させる。油EC1005状物を、LCによってアッセイし、使用するまで冷凍庫で保管する。
【０２３８】
実施例：EC1008は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000155
EC1005を、に1,2−ジクロロエテン(DCE)溶解し、水酸化トリメチルチンを加える。反応混合物を加熱し、LCによって反応をモニターする。完了後、混合物を氷浴で冷却し、ろ過する。次いで、固体をDCEで洗浄する。有機層を水で1回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥する。溶液を回転蒸発器で濃縮し、残渣をテトラヒドロフラン(THF)に溶解する。トリエチルアミントリヒドロフルオリドを加え、混合物を、LCでモニターしながら攪拌する。ピリジン、ジメチルアミノピリジン(DMAP)および酢酸無水物を加える。反応物を攪拌し、LCによってモニターする。反応混合物を濃縮して残渣にし、生成物を、溶離液としてアセトニトリルおよび水を用いるC18カラムクロマトグラフィーによって精製する。生成物画分を集め、濃縮し、凍結乾燥して、白色〜オフホワイトの粉末を得る。
【０２３９】
実施例：EC1426は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000156
EC1422を、テトラヒドロフラン(THF)に溶解し、(ベンゾトリアゾール−1−イルオキシ)トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(PyBop)およびジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を加える。すべての固体が溶解したら、ヒドラジンを加え、反応物を攪拌し、完了をモニターする。EC0607を加え、混合物を攪拌し、完了をLCによってモニターする。酢酸エチルを加え、有機物を、飽和塩化アンモニウムで1回、飽和重炭酸ナトリウムで2回、そして飽和塩化ナトリウムで1回洗浄する。有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥し、回転蒸発器で濃縮する。粗EC1426を、溶離液としてジクロロメタンおよびメタノールを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製する。画分を集め、合わせた生成物画分を回転蒸発器で濃縮して、黄色固体を得る。
【０２４０】
実施例：EC1428は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000157
EC1008をジクロロメタンに溶解し、DCMに溶解したペンタフルオロフェノールをN−シクロヘキシルカルボジイミド, N’−メチルポリスチレン(DCC−樹脂)とともに加える。混合物を攪拌し、反応の完了をLCによってモニターする。混合物をろ過して、樹脂を除去し、有機層を回転蒸発器で濃縮して、活性化EC1008を得る。別のフラスコにおいて、EC1426をジクロロメタンに溶解し、トリフルオロ酢酸を加える。反応混合物を攪拌し、によって完了をモニターする。反応混合物を回転蒸発器で濃縮して、脱保護EC1426を得る。活性化EC1008を、DMFに溶解し、ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を加える。脱保護EC1426をDMFに溶解し、反応混合物に加える。反応物を攪拌し、LCによって完了をモニターする。酢酸エチルを加え、有機物を飽和ｚ水性塩化ナトリウムで3回洗浄する。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、揮発物を回転蒸発器で除去する。粗EC1428を、溶離液としてジクロロメタンおよびメタノールを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製する。画分を集め、純度を検査し、合わせた生成物画分を回転蒸発器で濃縮して、黄色固体を得る。EC1428を冷凍庫で保管する。
【０２４１】
実施例：WO2012/019123、WO2009/055562、国際出願番号US2013/034672および米国仮出願番号61/793082(それぞれの開示は、その全体において参照することによって本明細書に援用される)に記載の工程にしたがって、さらなるチューブリシンおよびチューブリシン中間体を製造することができる。
【０２４２】
実施例：例示的チューブリシンは、以下のとおりである：
2015536323.tif 000158
【０２４３】
実施例：EC1454は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000159
N10−TFA保護EC1454の固相合成は、樹脂結合トリチル保護D−システインにより開始される。樹脂を、ジメチルホルムアミド(DMF)に懸濁し、DMFで2回洗浄する。反応混合物に、EC0475(グルタミン修飾L−グルタミン酸)、(ベンゾトリアゾール−1−イルオキシ)トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(PyBOP)およびジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を加える。少なくとも1時間後、カイザー試験を行って、カップリングが完了したことを確実にする。樹脂を、DMFで3回、IPAで3回およびDMFで3回洗浄する。樹脂を、DMF中のピペリジンで3回、DMFで3回およびIPAで3回ゆっくりと洗浄する。カイザー試験を行って、脱保護が完了したことを確認する。樹脂をDMFで3回洗浄し、シーケンス中の次のアミノ酸を、同じ工程にしたがってカップリングさせる。以下の順序で、モノマーをカップリングさせる：1)EC0475、2)Fmoc−D−Glu(OtBu)−OH、3)EC0475、 4)Fmoc−D−Glu(OtBu)−OH、5)EC0475、6)Fmoc−D−Glu−OtBuおよび7)N10−TFA−Pte−OH。
【０２４４】
最終カップリングが完了すれば、樹脂をメタノールで3回洗浄し、室温にて樹脂にアルゴンを通気して乾燥させる。乾燥した樹脂をTFA、水、エタンジチオールおよびトリイソプロピルシランの混合物に懸濁する。1時間後、樹脂をろ去し、TFAで洗浄する。冷エチルエーテルを加えて生成物を沈殿させ、ろ過し、エーテルで洗浄する。固体を室温にて減圧乾燥し、冷凍庫で保管する。
【０２４５】
2015536323.tif 000160
N10−TFA EC1454を、アルゴンスパージ水に溶解する。炭酸ナトリウム(1M水溶液、アルゴンスパージ)を加えて、pHを9.4〜10.1にする。反応混合物を少なくとも20分間攪拌する。LCにより反応の完了が決定すれば、2M HClでpHを1.9〜2.3に調節して反応を停止させる。溶離液としてアセトニトリルおよびpH5の酢酸アンモニウム緩衝液を用いるC18カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製する。画分を集め、HPLCによって純度を検査する。合わせた生成物画分を回転蒸発器で濃縮し、次いで、凍結乾燥して、EC1454を黄色固体で得る。MS(ESI、[M+2H]2+)＝840.90、 [M+H1]+＝1681.3。選択された1H−NMR(DMSO、300 MHz)δ(ppm)：8.6(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.45(s)、4.35(t)、4.15−4.3(m)、3.3−3.6(m)、3.25(m)、3.0(m)、2.7−2.9(m)、2−2.3(m)、1.6−2(m)。生成物を−20℃で保管する。
【０２４６】
実施例：EC1456は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000161
EC1428を、アセトニトリルに溶解し、pH 7.4のリン酸ナトリウム緩衝液中のEC1454の溶液を加える。添加の前後に溶液をアルゴンでスパージする。反応混合物を少なくとも15分間攪拌し、次いで、完了を検査する。溶離液としてアセトニトリルおよびpH7.4のリン酸緩衝液を用いるC18カラムクロマトグラフィーによって所望生成物を精製する。生成物画分を集め、純度を検査し、あわせ、限外ろ過によって濃縮して、10〜20 mg/mL EC1456である水性溶液を得る。最終精製b通溶液をアッセイのためにサンプリングし、次いで、冷凍庫で保管する。
【０２４７】
高解像度Waters Acquity UPLC Xevo Gs−S QTOF質量分析計にて、EC1456のポジティブエレクトロスプレー質量スペクトルを得た。スペクトルは、UPLC吸入システム上の主要コンポーネントの分離後に得られ、解像力は約35,000であった。M+Hモノアイソトピックピークの正確な質量測定値は、2625.0598であったが、これは、式：C110H166N23O45S3のイオンについての理論値である2625.0570から1.1 ppmの誤差である。同位体分布は、その式とも一致する。
【０２４８】
EC1456についてのES+スペクトルの質量スペクトル特徴
2015536323.tif 000162
【０２４９】
〜30mgのEC1456のサンプルを、重水素化されたジメチルスルホキシドおよび重水素化された水の9：1混合物665 μLに溶解した。ブロードバンドおよびプロトンオブザーブコイルの両方を含む2チャンネルプローブを備えたアジレント・モデルDD2分光分析計において26℃、500MHzにて、1H NMRスペクトルを得た。すべてのスペクトルは、2.5ppm(1H)および39.50 ppm(13C)におけるDMSO溶媒残留シグナルを基準とした。
【０２５０】
すべてのスペクトル特性は、後記の図面に記載の原子の番号付けを用いる後記の表中の両方のNMRスペクトル(1Hおよび13C)について割り当てられ、ここで、符号＊は、ジスルフィド結合の連結を示す。
2015536323.tif 000163
【０２５１】
割り当ては、COSYおよびTCSY 2D実験を用いる結合H−H連結を介して、2D NOESYを用いる空間H−H近接を介して、1D DEPT実験を用いる炭素多重度測定、およびプロトン検出2D実験HSQCおよびHMBCを用いる結合C−H連結を介して、などの1Dおよび2D NMR実験の両方に基づいて作成された。大部分の場合において、1Dスペクトルにおけるオーバーラップ(同じ化学シフトにおいて共鳴する異なるプロトンまたは炭素)は、2Dスペクトルにおいて分割することができたが、これらの場合、表は、2Dスペクトルから測定されるが、同時共鳴グループについて合算積分した化学シフトを反映する。1Dオーバーラップ(ほとんど同一のグルタミン酸とグルタミンサブユニットなど)の幾つかの場合において、複数の原子番号の間の一重または多重共鳴の不明瞭でない割り当てを除外する2D相関スペクトルにおけるオーバーラップも存在したが、これらの場合、1つの表の行において、化学シフトおよび／または原子番号割り当てのための複数エントリーがある。
【０２５２】
NHおよびOHプロトンは、D2O重水素原子によって交換され、5〜10 ppm領域における弱いブロードピーク以外は、スペクトルにほとんど存在しない。表に列挙されないスペクトル中の1Hピークは、3.75 ppmにおけるブロードHODピークおよび2.50 ppmにおけるDMSOピークを包含する。HODピークは、どの共鳴も覆い隠さないが、ブロードベースライン上昇により、4.2および3.4−3.7 ppmにおける近くの共鳴の積分を上昇させる。DMSOピークは、この共鳴に積分されないH129の共鳴を覆い隠す。表に列挙されないスペクトル中の13Cピークは、39.50 ppmにおける非常に大きいDMSO溶媒を包含する。DMSOピークは、C91およびC93からの両方のシグナルを覆い隠す。C116ピークは、近くのアミド基の周りの構造変化による大規模な広幅化により、13Cスペクトルにおいて観察可能ではない。すべての3つの化学シフト(C91、C93、C116)は、プロトン検出2D相関スペクトルにおいて、可視的であり、測定される。
【０２５３】
EC1456についてのプロトンNMR割り当て
2015536323.tif 000164
【０２５４】
2015536323.tif 000165
【０２５５】
2015536323.tif 000166
【０２５６】
EC1456についての炭素NMR割り当て
2015536323.tif 000167
【０２５７】
2015536323.tif 000168
【０２５８】
2015536323.tif 000169
【０２５９】
EC1456のIRスペクトルは、Ever−Glo中/遠IR源、拡張範囲臭化カリウム(KBr)ビームスプリッターおよび重水素化硫酸トリグリシン(DTGS)検出器を備えたネクサス(Nexus)6700(登録商標)フーリエ変換赤外線(FT−IR)分光光度計(Thermo Nicolet)において取得される。ゲルマニウム(Ge)を備えた減衰全反射(ATR)アクセサリ(Thunderdome(商標)、Thermo Spectra−Tech)を用いて、データを取得した。スペクトルは、4 cm−1のスペクトル分解能で収集された256の相互に加えられた(co−added)スキャンを表す。バックグラウンドデータセットは純粋なGe結晶を用いて得た。これらの2つのデータセットの互いに対する比を取ることにより、Log 1/R(R＝反射率)スペクトルを得た。波長の較正はポリスチレンを用いて行った。
【０２６０】
EC1456基準物質についての赤外線域割り当て
2015536323.tif 000170
【０２６１】
紫外線スペクトルEC1456は、Perkin−Elmer Lambda 25 UV/Vis分光計で取得された。スペクトルは、25℃にて、経路長1cm、0.1M NaOH溶媒中の40.7 uMにて記録された。分子は、UV領域における吸収とオーバーラップする多くの発色団を含むが、366 nm、288 nmおよび243 nmにおける極大値は、主として、それぞれ、プテロイン酸、ベンズアミド／フェノールおよびチアゾール−アミドサブ構造による。
【０２６２】
実施例：N10−TFA保護EC1579は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000171
【０２６３】
実施例：EC1579は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000172
EC1579 MS(ESI、[M+2H]2+)＝840.89(M+1H)1+＝1681.0. 部分1H−NMR(D2O)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.65(d)、4.4−4.8(m)、4−4.2(m)、3.4−3.8(m)3−3.3(m)2.75(s)、1.6−2.4(m)。
【０２６４】
実施例：EC0948は、ここに記載する工程によって製造される。
2015536323.tif 000173
EC0848：MS(ESI、[M+2H]2+)＝840.8. [M+H]+＝1681.1。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：s、8.6；d、7.6；d、6.6；s、4.45；m、4−4.2；m、3.3−3.8；m、3.1−3.3；m、3−3.1；m、2.7−2.9；m、1.7−2.3；s、1.15
【０２６５】
2015536323.tif 000174
EC1669
【０２６６】
実施例：EC1669は、以下のように、EC1579およびEC0469から、ここに記載する工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000175
EC1579(200mg、1.0当量)を、脱酸素化(アルゴン通気)20 mM PO4(pH＝7)緩衝液(4.0 mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0 mL)中のEC0469(80 mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下する。30分後、EC1669(132mg)を、0−30%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥する(49%収率)。化学式：C87H122N26O40S2；正確な質量：2234.78；MW 2236.18。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1118.39、実測値1119.52。部分1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)δ(ppm)8.67(s)、8.59(2)、7.61(d)、7.56(d)、6.71(d)、6.61(d)、3.34−3.39(m)’
【０２６７】
実施例：以下のさらなる化合物は、ここに記載する一般的方法にしたがって記載され、製造される。
2015536323.tif 000176
EC1456
2015536323.tif 000177
EC1586
2015536323.tif 000178
EC1739(C113H173N23O44S3；MW 2653.91)
EC1454(8.5mg、1.5当量)を、脱気(Ar通気)20mMリン酸 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1717(3.8mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1739(5.3mg、59%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)＝1327.06、実測値1327.73
【０２６８】
2015536323.tif 000179
EC1664(C111H169N23O44S3；分子量2625.85)
EC1454(5.5mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mMリン酸 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1662(3.6mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1664(4.6mg、54%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1313.05、実測値1313.37。部分1H NMR(DMSO w/ 10% D2O、300 MHz)δ(ppm)8.61(s)、8.15(s)、7.58(d)、6.94(d)、6.60(m)、5.78(d)、5.22(d)、4.47(m)、4.09−4.33(m)、0.99(d)、0.93(d)、0.76(t)、0.71(t)、0.61(d)。
【０２６９】
2015536323.tif 000180
EC1663(化学式：C110H167N23O44S3；MW 2611.83)
EC1454(16.1mg、1.2当量)を、脱気(Ar通気)20mMリン酸 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1661(8.7mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1663(15.8mg、76%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1306.04、実測値1306.82。
【０２７０】
2015536323.tif 000181
EC1416(C112H169N23O45S3；MW 2653.87)
EC1415(20 mg)を、pH7 リン酸(pH 7.75、アルゴンでパージ)に溶解した。この溶液に、等体積のMeOH中のEC0312(14 mg)の懸濁液を加えた。反応混合物を、アルゴン下、周囲温度にて45分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)にロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(18 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+2H]2+) 1328、1H NMR(DMSO−d6、D2O、300MHz)：8.6(s、1H)、8.15(s、1H)、7.85(bd、1H)、7.55(d、2H)、6.95(d、2H)、6.6(m、4H)、6.2(d、1H)、5.68(d、1H)、5.2(d、1H)、4.5(bs、3H)、4.5−4.3(m、4H)、4.3−4.0(m、10H)、3.5−3.3(m、13H)、3.2(bd、5H)、3.1−2.8(m、8H)、2.75(bs、5H)、2.6−1.6(m、50H)、1.4(m、9H)、1.2(m、9H)、1.0(dd、9H)、0.7(m、11H)、0.6(d、3H)。
【０２７１】
2015536323.tif 000182
EC1299(C85H118N22O28S3；MW 1992.18)
【０２７２】
20 mM pH7 リン酸緩衝液(3.0 mL)中のEC0259(35 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(1.5 mL)を、MeOH(5.5 mL)中のEC0312(39 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(25 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+H]+) 1993。
【０２７３】
2015536323.tif 000183
EC1549(C85H118N22O28S3；MW 1992.17)
20 mM pH7 リン酸緩衝液(3.0 mL)中のEC0259(35 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(1.5 mL)を、MeOH(5.5 mL)中のEC0312(39 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(25 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+H]+) 1993。
【０２７４】
2015536323.tif 000184
EC1548(C85H118N22O28S3；MW 1992.17)
20 mM pH7 リン酸緩衝液(1.95 mL)中のEC1544(55.1 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.30 mL)を、MeOH(2.30 mL)中のEC1248 (58.0 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(61.5 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+H]+) 1993。
【０２７５】
2015536323.tif 000185
EC1393(C87H122N22O28S3；MW 2020.23)
40 mM pH7 リン酸緩衝液中のEC1392(20 mg)の溶液のpHを、飽和NaHCO3溶液で8に調節した。この溶液に、等体積のMeOH中のEC0312(20 mg)の懸濁液を加えた。反応混合物を、アルゴン下、周囲温度にて30分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)にロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(15 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+2H]2+)1011.39。1H NMR(DMSO−d6、D2O、300 MHz)：8.6(s、1H)、8.15(s、1H)、7.85(bd、1H)、7.55(d、2H)、6.95(d、2H)、6.6(m、4H)、6.2(d、1H)、5.68(d、1H)、5.2(d、1H)、4.6(t、1H)、4.5(m、3H)、4.5−4.0(m、11H)、3.2−2.8(m、6H)、2.8−2.5(m、8H)、2.4(m、5H)、2.2−2.0(m、14H)、2.0−1.7(m、7H)、1.6−1.3(m、13H)、1.25(d、8H)、1.1−0.95(dd、8H)、0.75(m、10H)、0.6(d、2H)。
【０２７６】
実施例：ここに記載する化合物は、以下の2つの方法によって製造することもできる：
方法A：アルゴンパージ下、溶液のpHをNaHCO3溶液でpH＝7に調節することによって、葉酸スペーサーを水に溶解する。次いで、有機溶媒中のチオフィリック(thiophilic)剤を加える。アルゴンパージしながら、反応混合物を室温にて攪拌する。反応の進行を分析的HPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0；B＝ACN)によってモニターする。反応の完了後、有機溶媒を蒸発させ、次いで、得られる溶液を、C18カラムでのプレップ−HPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液または2 mM リン酸緩衝液、pH＝7.0；B＝ACN)によって精製する。
【０２７７】
方法B：葉酸スペーサーを水に溶解し、酸(AcOHまたは希HCl)でpHを2に調節する。得られるpH調節スペーサーを凍結乾燥し、次いで、DMSOに再溶解する。反応混合物をアルゴンでパージし、Et3N(またはDIPEA)の10モル当量物を加える。この溶液に、有機溶媒(DMSO、THF、ACNなど)中のチオフィリック(thiophilic)剤を加える。反応の進行を分析的HPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液または2 mM リン酸緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN)によってモニターする。反応の完了後、反応混合物を、C18カラムでのプレップ−HPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液または2 mM リン酸緩衝液、pH＝7.0；B＝ACN)によって精製する。
【０２７８】
実施例：さらなる例示的リンカー中間体(葉酸スペーサーとも呼ばれる)をここに記載する：
2015536323.tif 000186
EC0014：1H NMR(D2O、500 MHz)δ(ppm)8.73(s、1H、FA H−7)、7.56(d、2H、FA H−12＆H16)、6.73(d、2H、FA H−13＆H15)、4.45(m、2H)、4.1(m、2H)、3.61(d、2H)、2.82(m、3H)、2.74(dd、1H)、2.37(m、2H)、2.18(m、1H)、2.09(m、3H)、1.74(m、1H)
【０２７９】
実施例：
2015536323.tif 000187
EC0020：MS(ESI、[M+H]+)746。1H NMR(D2O、500 MHz)δ(ppm)8.76(s、1H、FA H−7)、7.68(d、2H、FA H−12＆H16)、6.8(d、2H、FA H−13＆H15)、4.71(dd、1H、Asp H−2)、4.64(s、2H FA H−9)、4.41(dd、1H、D−Glu H−2)、4.3(dd、1H、Cys H−2)、4.1(dd、Dpr H−2),3.72(dd、1H、Dpr H−3A)、3.52(dd、1H、Dpr H−3B)、2.89(dd、1H、Cys H−3A)、2.85(dd、1H、Cys H−3B)、2.81(dd、1H、Asp H−3A)、2.62(dd、1H、Asp H−3B)、2.44(dd、2H、D−Glu H−4)、2.27(m、1H、D−Glu H−3A)、2.08(m、1H、D−Glu H−3B)。13C NMR(DMSO−d6+D2O、75 MHz)：δ 174.78、174.42、172.68(2C)、170.45、168.25、167.08、162.24、156.24、154.38、151.24、149.41(2C)、129.52、128.14、121.74、111.98、55.76、53.02(2C)、52.77、50.89、46.16、36.61、32.26、27.32、26.60
【０２８０】
実施例：
2015536323.tif 000188
EC0028
2015536323.tif 000189
EC0048
2015536323.tif 000190
EC0049：MS(ESI、[M+H]+) 795。
2015536323.tif 000191
EC0053：MS(ESI、[M+H]+)746
2015536323.tif 000192
EC0055
2015536323.tif 000193
EC0059：MS(ESI、[M+H]+) 816
2015536323.tif 000194
EC0066：MS(ESI、[M+H]+) 1317
2015536323.tif 000195
EC0067：MS(ESI、[M+H]+) 699
2015536323.tif 000196
EC0073：N10−TFA−EC073 MS(ESI、[M+H]+)1183。
2015536323.tif 000197
EC0075：MS(ESI、[M+H]+) 931
2015536323.tif 000198
EC0076：MS(ESI、[M+H]+) 731
2015536323.tif 000199
EC0149：[M+H]+＝ 631。1H NMR(D2O)：8.55(s、1H)、7.5(d、2H)、6.61(d、2H)、4.42(s、2H)、4.35(dd、1H)、4.25(m、2H)、4.1(s、1H)、3.68(m、1H)、3.5(m、1H)、3.35−3.2(m、3H)、3.1(dd、1H)、2.4−2.1(m、3H)、2.1−1.9(m、4H)。
【０２８１】
2015536323.tif 000200
EC0150：MS(ESI、[M+H]+)631。選択された1H NMR(D2O)δ(ppm)8.42(s、1H、FA H−7)、7.50(d、2H、FA H−12＆16)、6.65(d、2H、FA H−13＆15)、4.42(s、2H)、4.3−4.1(m、2H)、4.0−3.85(m、1H)、3.35−3.30(m、1H)、3.30−3.10(m、2H)、3.10−2.90(m、2H)、2.80−2.70(m、1H)、2.65−2.50(m、2H)、2.30−2.10(m、3H)、2.10−1.85(m、2H)、1.95−1.80(m、2H)。
【０２８２】
2015536323.tif 000201
EC0151：MS(ESI、[M+H]+) 630。選択された1H NMR(D2O)δ(ppm)8.42(s、1H、FA H−7)、7.50(d、2H、FA H−12＆16)、6.65(d、2H、FA H−13＆15)、4.42(s、2H)、4.3−4.1(m、2H)、4.0−3.85(m、1H)、3.35−3.30(m、1H)、3.30−3.10(m、2H)、3.10−2.90(m、2H)、2.80−2.70(m、1H)、2.65−2.50(m、2H)、2.30−2.10(m、3H)、2.10−1.85(m、2H)、1.95−1.80(m、2H)。
【０２８３】
2015536323.tif 000202
EC0232：MS(ESI、[M+H]+) 774。1H NMR(D2O)：8.56(s)、7.50(d)、6.65(d)、4.48−4.41(m)、4.21(dd)、4.08(dd)、3.48−3.42(m)、3.28−3.09(m)、2.61−2.35(m)、2.28−2.18(m)、2.16−2.02(m)、1.97−1.62(m)。
【０２８４】
2015536323.tif 000203
EC0252：[M+H]+＝1046.83。1H NMR(D2O)：8.58(s、1H)、7.5(d、2H)、6.6(d、2H)、3.05−2.6(m、5H)、2.3−1.9(m、4H)、1.8−1.2(m、7H)。
【０２８５】
2015536323.tif 000204
EC0259：[M+H]+＝1047.52。1H NMR(D2O)：8.6(s、1H)、7.5(d、2H)、6.65(d、2H)、4.4(dd、2H)、4.18(m、4H)、2.9(t、2H)、2.75(t、2H)、2.6−2.15(m、10H)、2.1−1.8(m、3H)、1.7−1.4(m、3H)、1.3(m、3H)。
【０２８６】
2015536323.tif 000205
EC1213：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046。選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２８７】
2015536323.tif 000206
EC1214：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046。選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２８８】
2015536323.tif 000207
EC1215：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046。選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２８９】
2015536323.tif 000208
EC1216：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046
選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２９０】
2015536323.tif 000209
EC1217：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046。選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２９１】
2015536323.tif 000210
EC1392：[M＋H]+＝1074.85。1H NMR(D2O、300 MHz) δ(ppm)：8.55(s、1H)、7.45(d、2H)、6.5(d、2H)、4.6(m、2H)、4.45(t、1H)、4.35(bs、2H)、4.2(m、1H)、4.1(s、1H)、4.05(m、1H)、2.9(t、2H)、2.75−2.4(m、6H)、2.3(m、2H)、2.2−1.9(m、2H)、1.8−1.4(m、2H)、1.2(m、2H)、1.3(s、3H)、1.2(s、3H)。
【０２９２】
2015536323.tif 000211
EC1347：MS(ESI、[M＋H]+)＝701.57。選択された1H−NMR(DMSO、300 MHz)δ(ppm)：8.65(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.2−4.6(m)、2.6−3.2(m)、1.8−2.6(m)、1.1−1.7(m)
【０２９３】
2015536323.tif 000212
EC0589：MS(ESI、[M+H]+)746。選択された1H NMR(DMSO−d6+D2O、300 MHz)：δ 8.46(s、1H)、7.45(d、J＝8.4 Hz、2H)、6.47(d、J＝8.4 Hz、2H)、4.39( t、J＝6.6 Hz、1H)。
【０２９４】
2015536323.tif 000213
EC0819：MS(ESI、[M+H]+)＝1046.4。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.6(d)、6.6(d)、4−4.6(m)、3.4−3.8(m)、3−3.15(m)、1−2.8(m)。
【０２９５】
2015536323.tif 000214
EC0823：MS(ESI、[M+H]+)＝672.3。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.8(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.4−4.6(m)、4.2−4.4(m)、3.4−3.8(m)、1.8−2.8(m)、1.15(s)
【０２９６】
2015536323.tif 000215
EC0835：MS(ESI、[M+H]+)＝1046.5。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.6(d)、3.8−4.6(m)、2.8−3.2(m)、2.2−2.8(m)、1−2.2(m)
【０２９７】
2015536323.tif 000216
EC0923：MS(ESI、[M+H]+)＝672.3。選択された1H−NMR(D2O)δ(ppm)：8.8(s)、7.75(d)、6.85(d)、4.4−5(m)、2.6−2.9(m)、2.4−2.6(m)、2−2.6(m)
【０２９８】
2015536323.tif 000217
EC0879：MS(ESI、[M+H]+)＝442.3。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.7(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.55(s)、4.3(m)、2.2−2.6(m)、1.8−2.2(m)、1−1.2(m)
【０２９９】
2015536323.tif 000218
EC0306：[M+H]+＝1100.51。1H NMR(D2O)：δ  8.75(s、1H)、7.6(d、2H)、6.75(d、2H)、4.7−4.5(m、5H)、4.38(m、2H)、4.2(m、2H)、4.1(d、1H)、3.85−3.5(m、10H)、2.95−2.6(m、4H)、2.45(m、2H)、2.3−2.0(m、2H)。
【０３００】
2015536323.tif 000219
EC0368：[M+H]+＝2175.5。1H NMR(D2O)：8.6(s、1H)、7.5(d、2H)、6.6(d、2H)、4.45(bs、3H)、4.35−4.2(m、4H)、4.05(t、1H)、3.6−3.35(bs、114H)、3.2(s、6H)、2.77(t、2H)、2.65(dd、1H)、2.55−2.45(m、3H)、2.4−2.2(m、6H)、2.1−1.8(m、2H)。
【０３０１】
2015536323.tif 000220
EC0373：[M+H]+＝1346.0。1H NMR(D2O)：8.55(s、1H)、7.5(d、2H)、6.6(d、2H)、4.4(s、2H)、4.25(m,2H)、4.05(t、1H)、3.7(dd、1H)、3.6−3.3(m、50H)、3.25(dd、3H)、3.05(dd、3H)、2.8(t、2H)、2.7(dd、2H)、2.6(dd、1H)、2.4(t、2H)、2.2−1.9(m、4H)。
【０３０２】
2015536323.tif 000221
EC0536：[M+2H]2+＝941.2。1H NMR(D2O)：8.55(s、1H)、7.5(d、2H)、6.6(d、2H)、4.4(s、2H)、4.25(m,2H)、4.1(m、5H)、3.85(t、1H)、3.8−3.4(m、21H)、3.4−2.95(m、7H)、2.8(s、2H)、2.7−2.4(ddd、2H)、2.4−1.7(m、22H)、1.55(m、1H)。
【０３０３】
実施例：さらなる例示的化合物および該化合物の製造方法をここに記載する：
EC1579の結合体
2015536323.tif 000222
EC1840
2015536323.tif 000223
EC1833
2015536323.tif 000224
EC1828
2015536323.tif 000225
EC1824
2015536323.tif 000226
EC1823
【０３０４】
DMSO(0.4 mL)中のEC1579(酸性化、13.0 mg、0.0077 mmole)の溶液および12 μLのDIPEA(0.070 mmole、13.5当量)を、DMSO(0.2 mL)中の EC1822(5.6 mg、0.0052 mmole)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(12.4 mg)を淡黄色固体で得た。選択された1H NMR(DMSO−d6)δ(ppm)8.62(s、1H)、8.20(s、1H)、7.60(d、2H)、7.56(d)、6.93(d、2H)、6.61(m、3H)、5.25(d、1H)、4.51(d、1H)、4.50−4.40(m、3H)、4.32−4.10(m、10H)、3.65−3.50(m、10H)、3.40−3.30(m、10H)、3.30−3.10(m、7H)、3.10−2.95(m、3H)、2.95−2.80(m、3H)、2.75−2.60(br、3H)、2.40−2.00(m、14H)、2.0−1.3(m、24H)、1.30−1.05(m、6H)、0.99(d、3H)、0.88(d、3H)、0.86(d、3H)、0.79(t、6H)、0.73(t、3H)、0.64(br、3H)
【０３０５】
2015536323.tif 000227
EC1818
2015536323.tif 000228
EC1756
【０３０６】
実施例：EC1746の合成
2015536323.tif 000229
20 mM pH7 リン酸緩衝液(4.2 mL)中のEC1579(30.9 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.30 mL)を、MeOH(4.8 mL)中のEC1662(16.9 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(33.1 mg)を綿毛状の淡黄色固体で得た。MS(ESI、M+H)＝2627。EC1746 1H NMR(D2O)：8.66(s)、8.10(s)、7.62(b)、6.99(b)、6.69(b)、5.81(b)、5.18(b)、4.60−4.18(m)、3.91−0.57(m)。
【０３０７】
実施例：EC1669の合成
2015536323.tif 000230
EC1579(200mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(4.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0mL、Aldrich)中のEC0469(80mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1669(132mg、49%)を、0−30%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1118.39、実測値1119.52。部分1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)d(ppm)8.67(s)、8.59(2)、7.61(d)、7.56(d)、6.71(d)、6.61(d)、3.34−3.39(m)。
【０３０８】
実施例：EC1665の合成
2015536323.tif 000231
EC1579(15mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0mL、Aldrich)中のEC0564(10.5mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1665(13.4mg、55%)を、10−100%アセトニトリル/10 mM NH4OAc pH5緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1368.09、実測値1368.30
【０３０９】
EC1454の結合体
実施例：EC1751の合成
2015536323.tif 000232
EC1454(21.1mg、1.3当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1716(10.8mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1751(8.5mg、33%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1320.05、実測値1320.72。選択された1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)d(ppm)8.61(s)、8.15(s)、7.58(d)、6.94(d)、6.60(m)、5.79(d)、5.22(d)、4.47(m)、4.09−4.33(m)、0.98(d)、0.93(d)、0.75(m)、0.61(d)
【０３１０】
実施例：EC1750の合成
2015536323.tif 000233
EC1454(31.1mg、1.3当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1715(15.3mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1750(18.0mg、97%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1299.03、実測値1299.19。部分1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)d(ppm)8.61(s)、8.14(s)、7.57(d)、6.93(d)、6.60(m)、5.77(d)、5.23(d)、4.47(m)、0.98(d)、0.92(d)、0.76(m)、0.71(t)、0.61(d)
【０３１１】
実施例：EC1739の合成
2015536323.tif 000234
EC1454(8.5mg、1.5当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1717(3.8mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1739(5.3mg、59%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1327.06、実測値1327.73
【０３１２】
2015536323.tif 000235
MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1313.05、実測値1313.37。選択された1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)d(ppm)8.61(s)、8.15(s)、7.58(d)、6.94(d)、6.60(m)、5.78(d)、5.22(d)、4.47(m)、4.09−4.33(m)、0.99(d)、0.93(d)、0.76(t)、0.71(t)、0.61(d)
【０３１３】
実施例：EC1664の合成
EC1454(5.5mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1662(3.6mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1664(4.6mg、54%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。
【０３１４】
実施例：EC1663の合成
2015536323.tif 000236
EC1454(16.1mg、1.2当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1661(8.7mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1663(15.8mg、76%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1306.04、実測値1306.82
【０３１５】
実施例：EC1653の合成
2015536323.tif 000237
EC1454(8.3mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0mL、Aldrich)中のEC0564(5.8mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1653(6.3mg、46%)を、10−100%アセトニトリル/10 mM NH4OAc pH5緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、((M−2)/2))予測値 1368.09、実測値1368.74
【０３１６】
2015536323.tif 000238
EC1647
2015536323.tif 000239
EC1642
【０３１７】
実施例：EC1496の合成
2015536323.tif 000240
EC1454(324mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(4.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0mL、Aldrich)中の粗EC0469(142mg、1.1当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1496(221mg、51%)を、0−30%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、((M+2)/2))予測値 1118.39、実測値1119.02
【０３１８】
2015536323.tif 000241
EC1456
【０３１９】
実施例：EC1415の結合体
2015536323.tif 000242
EC1438
【０３２０】
実施例：EC1416の合成
2015536323.tif 000243
EC1415(20 mg)を、pH7 リン酸(pH 7.75、アルゴンでパージ)に溶解した。この溶液に、等体積のMeOH中のEC0312(14 mg)の懸濁液を加えた。反応混合物を、アルゴン下、周囲温度にて45分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)にロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(18 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+2H]2+) 1328。1H NMR(DMSO−d6、D2O、300MHz)：8.6(s、1H)、8.15(s、1H)、7.85(bd、1H)、7.55(d、2H)、6.95(d、2H)、6.6(m、4H)、6.2(d、1H)、5.68(d、1H)、5.2(d、1H)、4.5(bs、3H)、4.5−4.3(m、4H)、4.3−4.0(m、10H)、3.5−3.3(m、13H)、3.2(bd、5H)、3.1−2.8(m、8H)、2.75(bs、5H)、2.6−1.6(m、50H)、1.4(m、9H)、1.2(m、9H)、1.0(dd、9H)、0.7(m、11H)、0.6(d、3H)。
【０３２１】
実施例：EC1392の結合体
2015536323.tif 000244
MS(ESI、[M+2H]2+)1011.39
2015536323.tif 000245
【０３２２】
実施例：EC59の結合体
20 mM pH7.1 リン酸緩衝液(2.4 mL)中のEC59(13.2 mg)の溶液を、MeOH(2.4 mL)中のEC0312(14.2 mg)の溶液に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(15.3 mg)を綿毛状の淡黄色固体で得た。
2015536323.tif 000246
【０３２３】
実施例：EC1347の結合体
2015536323.tif 000247
2015536323.tif 000248
EC1208：LCMS [ESI(M＋H)+：1918]。1選択された1H NMRデータ for EC145(D2O、300 MHz)：δ 8.67(s、1H、FA H−7)、7.50(br s、1H、VLB H−11’)、7.30−7.40(br s、1H、VLB H−14’)、7.35(d、2H、J＝7.8 Hz、FA H−12＆16)、7.25(m、1H、VLB H−13’)、7.05(br s、1H、VLB H−12’)、6.51(d、2H、J＝8.7 Hz、FA H−13＆15)、6.4(s、2H、VLB H−14＆17)、5.65(m、1H、VLB H−7)、5.5(m、1H、VLB H−6)、4.15(m,1H、VLB H−8’)、3.82(s、3H、VLB C18’−CO2CH3)、3.69(s、3H、VLB C16 −OCH3)、2.8(s、3H、VLB N−CH3)、1.35(br s、1H、VLB H−3’)、1.15(m、1H、VLB H−2’)、0.9(t、3H、J＝7 Hz、VLB H−21’)、0.55(t、3H、J＝6.9 Hz、VLB H−21)ppm。
【０３２４】
2015536323.tif 000249
EC1209：LCMS [ESI(M＋H)+：1918]。1選択された1H NMRデータ for EC145(D2O、300 MHz)：δ 8.67(s、1H、FA H−7)、7.50(br s、1H、VLB H−11’)、7.30−7.40(br s、1H、VLB H−14’)、7.35(d、2H、J＝7.8 Hz、FA H−12＆16)、7.25(m、1H、VLB H−13’)、7.05(br s、1H、VLB H−12’)、6.51(d、2H、J＝8.7 Hz、FA H−13＆15)、6.4(s、2H、VLB H−14＆17)、5.65(m、1H、VLB H−7)、5.5(m、1H、VLB H−6)、4.15(m,1H、VLB H−8’)、3.82(s、3H、VLB C18’−CO2CH3)、3.69(s、3H、VLB C16 −OCH3)、2.8(s、3H、VLB N−CH3)、1.35(br s、1H、VLB H−3’)、1.15(m、1H、VLB H−2’)、0.9(t、3H、J＝7 Hz、VLB H−21’)、0.55(t、3H、J＝6.9 Hz、VLB H−21)ppm。
【０３２５】
2015536323.tif 000250
EC1575：20 mM pH7 リン酸緩衝液(2.0 mL)中のEC1577(9.5 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.50 mL)を、MeOH(2.0 mL)中のEC0312 (10.1 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(9.5 mg)を淡黄色固体で得た。LCMS [ESI(M＋H)+：2627]。1H NMR(D2O、300 MHz)：8.70(s)、8.11(s)、7.62(d)、7.00(d)、6.71(dd)、6.11(d)、5.80(d)、5.33(d)、4.60−4.50(m)、4.40−4.15(m)、3.88−3.51(m)、3.50−3.20(m)、3.19−2.80(m)、2.76(s)、2.60−1.43(m)、1.40−1.27(m),1.18(d)、1.02(d)、0.97−0.82(m)、0.76−0.63(m)。
【０３２６】
2015536323.tif 000251
EC1548：20 mM pH7 リン酸緩衝液(1.95  mL)中のEC1544(55.1 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.30 mL)を、MeOH(2.30 mL)中のEC1248 (58.0 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(61.5 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、M+1)1993
【０３２７】
2015536323.tif 000252
EC1549：20 mM pH7 リン酸緩衝液(2.0 mL)中のEC1547(23.5 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.30 mL)を、MeOH(2.3 mL)中のEC1248 (24.7 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(29.2 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、M+1)1993
【０３２８】
実施例：
2015536323.tif 000253
EC1349
【０３２９】
実施例：EC1299
2015536323.tif 000254
20 mM pH7 リン酸緩衝液(3.0 mL)中のEC0259(35 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(1.5 mL)を、ACN(5.5 mL)中のEC0312(39 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(25 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、M+1)1993
【０３３０】
実施例：
2015536323.tif 000255
EC0836
【０３３１】
実施例：
2015536323.tif 000256
EC0821
【０３３２】
実施例：
2015536323.tif 000257
EC153：MS( ESI、[M＋H]+) 1023；( ESI、[M−H]−) 1021； 1H NMR(DMSO−d6、300 MHz)：8.84(s、1H)、7.70(d、2H)、6.80(d、2H)、4.60(m、1H)、 4.56(s、2H)、4.34(m、2H)、4.10(m、2H)、3.85(m、2H)、3.60−3.30(m、5H)、3.20(s、2H)、318−3.05(m、1H)、3.0(br、2H)、2.90−2.70(m、2H)、2.40−2.00(m、4H)、1.95(m、3 H)、
【０３３３】
実施例：ここに記載する方法にしたがって、EC0059から出発して、以下の化合物を製造した：
2015536323.tif 000258
【０３３４】
実施例：EC1391
2015536323.tif 000259
【０３３５】
実施例：EC1390
【０３３６】
2015536323.tif 000260
EC74：MS( ESI、[M＋H]+) 1438.3；( ESI、[M−H]−) 1436.4
【０３３７】
比較例：以下の比較化合物を開示する：
比較例：
2015536323.tif 000261
EC0746(C87H122N26O40S2；MW 2236.18)
【０３３８】
比較例：
2015536323.tif 000262
【０３３９】
比較例：EC0923
2015536323.tif 000263
EC0923(C27H29N9O12；MW 671.57)
【０３４０】
方法および実施例
概要：以下の略語を、ここで用いる：部分寛解(PR)；完全寛解(CR)、週3回(M/W/F)(TIW)。
【０３４１】
方法：相対親和性アッセイ。既述された方法(Westerhof、G. R.、J. H. Schornagelら(1995) Mol. Pharm. 48：459−471)にわずかな変更を加えて、葉酸と比較した場合の葉酸受容体(FR)に対する親和性を決定する。簡単に説明すると、FR陽性KB細胞を高密度で24ウエル細胞培養プレートに播種し、プラスチックに18時間接着させる。指定のウエルにおいて、使用済みのインキュベーション培地を、試験物質または葉酸の不在下および濃度を増加させたそれらの存在下で、100 nM 3H−葉酸を補足した葉酸フリーRPMI(FFRPMI)と交換する。細胞を37℃にて60分間インキュベートし、次いで、pH7.4のPBSにて3回すすぐ。pH7.4のPBS中の1% SDS 500 μLを、各ウエルに加える。次いで、細胞溶解液を集め、5 mLのシンチレーションカクテルを含む個別のバイアルに加え、次いで、放射能を計数する。陰性コントロール管は、FFRPMI中の3H−葉酸のみを含む(コンペティターなし)。陽性コントロール管は、最終濃度1 mMの葉酸を含み、これらのサンプルで測定されたCPM(標識の非特異的結合を表す)は、すべてのサンプルから減算される。相対的親和性を、KB細胞上のFRに結合した3H−葉酸の50%を置き換えるのに必要な化合物の逆モル比として決定する(ここで、FRに対する葉酸の相対的親和性は、1と設定される)。
【０３４２】
実施例：EC1669は、細胞表面葉酸受容体(FR)への結合に対し、3H−葉酸に対して競合するリガンドの能力を決定するインビトロ競合結合アッセイによって決定されたように、葉酸受容体に対して高い結合親和性を示す。EC1669()。EC1669の相対的親和性値(1に設定された葉酸に対して標準化される)は、KBおよびCHO−FRβ細胞において、それぞれ0.53および0.13であると決定される(図1Aおよび図1Bを参照)。比較すると、メトトレキサート(MTX)は、細胞表面FRに対して乏しい結合を示した。特定の理論に縛られることを望むものではないが、EC1669の結合親和性は、FR媒介性エンドサイトーシスを介した効率的な細胞取り込みを可能にすると考えられる。
【０３４３】
方法：細胞DNA合成の阻害。本明細書に記載する化合物を、薬物の、KB細胞、RAW264.7マクロファージなどの葉酸受容体陽性細胞の増殖を阻害する能力を予測するインビトロアッセイを用いて評価する。細胞型の選択は、結合体を形成する薬物への選択された細胞の感受性に基づいて行なわれうることを理解すべきである。試験化合物は、本明細書に記載する方法にしたがって製造される、各化学療法薬に結合した葉酸から構成される。試験細胞を、さまざまな濃度の葉酸−薬物結合体に、少なくとも100倍過剰の葉酸の不在下または存在下で、曝露して、葉酸受容体仲介に特異的である活性を評価する。
【０３４４】
実施例：本明細書に記載する細胞毒性薬物の結合体は、KB細胞に対して活性がある。共投与葉酸を用いる競合実験によって示されるように、活性は、葉酸受容体によって媒介される。KB細胞を、少なくとも100倍過剰の葉酸の不在下または存在下で、指示された濃度の葉酸−薬物結合体に、37℃にて7時間暴露する。次いで、新鮮な培養培地で1回すすぎ、新鮮な培養培地中で、37℃にて72時間インキュベートする。細胞生存能力を、3H−チミジン取り込みアッセイを使用して評価した。本願明細書に記載する化合物について、用量依存性細胞毒性は、一般に、測定可能であり、大半の場合において、IC50値（新たに合成されたDNAへの3H−チミジン取り込みを50%低下させるのに必要な薬物結合体の濃度）は、低いナノモル範囲である。特定の理論に縛られることを望むものではないが、結合体の細胞毒性が過剰の遊離葉酸の存在下で低下される場合、このような結果は、観察された細胞死滅は葉酸塩受容体への結合によって媒介されたことをを示すと考えられる。
【０３４５】
実施例：EC1669は、マウスRAW264.7マクロファージに対して強力な細胞増殖抑制作用を示す。RAW264.7細胞におけるXTT細胞生存性アッセイにより、2時間の曝露および72時間のインキュベーション後、EC1669の抗増殖活性を測定する(図2)。RAW264.7マクロファージは、EC1669結合体を形成する薬物、アミノプテリンに感受性がある。細胞生存性は、使用説明書にしたがって、XTT(2,3−ビス(2−メトキシ−4−ニトロ−5−スルホ−フェニル)−2H−テトラゾリウム−5−カルボキサニリド)を加えることによって評価される。EC1669は、〜1.2 nMのIC50値で、細胞増殖の用量依存性阻害を示す。観察された抗増殖作用は、100倍過剰葉酸(FA)の存在下で、100%競合可能であったが、このことは、EC1669の作用のFR特異的モードを示している。
【０３４６】
方法：さまざまな癌細胞株に対するインビトロ活性。さまざまな細胞株についてIC50値を作成する。細胞を高密度で24ウエルファルコンプレートに播種し、ほとんど集密的な単層を一夜形成させる。試験化合物の添加の30分前に、すべてのウエルから使用済の培地を吸引し、新鮮な葉酸欠乏RPMI培地(FFRPMI)と交換する。ウエルのサブセットには、100 μM葉酸を含む培地を加えることを指定される。指定されたウエル中の細胞を用いて、標的化特異性を決定する。特定の理論に縛られることを望むものではないが、過剰葉酸の存在下で試験化合物によって生み出された細胞毒性活性、すなわち、FR結合に対する競合の存在は、FR特異的デリバリーに関連しない総活性の部分に対応するであると考えられる。1 mLの10%熱不活化ウシ胎児血清を含む新鮮なFFRPMIで1回すすいだ後、各ウエルに、示すとおり、100 μM遊離葉酸の存在下または不在下で、濃度を増加させながら試験化合物(サンプル当り4ウエル)を含む培地1 mLを加える。処理された細胞を37  ℃にて2時間パルスし、0.5 mLの培地で4回すすぎ、次いで、1 mLの新鮮な培地中で70時間までチェイスする。すべてのウエルから使用済の培地を吸引し、新鮮な5 μCi/mL 3H−チミジンを含む培地と交換する。さらに37 ℃にて2時間インキュベートした後、細胞を、0.5 mLのPBSで3回洗浄し、次いで、ウエル当り0.5 mLの氷冷5%トリクロロ酢酸で処理する。15分後、トリクロロ酢酸を吸引し、15分間0.5 mLの0.25 N水酸化ナトリウムの添加によって細胞材料を可溶化する。各可溶化サンプルの450 μLのアリコートを、3 mLのEcolumeシンチレーションカクテルを含むシンチレーションバイアルに移し、次いで、液体シンチレーションカウンターで計数する。最終結果を、非処置コントロールに対する3H−チミジン組み込みパーセンテージとして表す。
【０３４７】
実施例：本明細書に記載する化合物は、KB細胞などの病原細胞に対する強力なインビトロ活性を示す。本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含まない化合物と比較して、葉酸受容体に対するより大きい特異性を示す。たとえば、EC1456は、葉酸競合によって決定されるように、約1000倍の葉酸受容体に対する特異性(特異性＝競合グループと非競合グループの間のIC50の差異)、および非天然アミノ酸を有するリンカーLを含まない比較化合物EC0531と比較して、特異性における4倍の改善を示す。
【０３４８】
実施例：葉酸受容体発現細胞に対する選択性。本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体発現細胞に対する高い活性を示す。本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体陰性細胞に有意な結合を示さない。EC1456は、低および高FR発現細胞(FR+)に対して高い競合可能な結合を示し、FRを発現しない細胞(FR−)に対する結合を示さない。
【０３４９】
(FR+)および(FR−)細胞株におけるEC1456の活性
2015536323.tif 000264
(a)これらの特に選択された(FR−)細胞株(A549、H23、HepG2、AN3CA、LNCaP)に対する活性を0.1−100 nMから評価した；NAは、該当せず。
【０３５０】
方法：マウスにおける腫瘍増殖の阻害。4〜7週齢のマウス（Balb/cまたはnu/nu系）をHarlan Sprague Dawley, Inc.（Indianapolis, IN）から購入した。通常の齧歯類用飼料は高濃度の葉酸を含有する(6mg/kg固形飼料）；したがって、正常なヒト血清の範囲に近い血清葉酸濃度を達成するため、試験動物は、葉酸フリー飼料（Harlan diet #TD00434）により、腫瘍移植の前に約1週間、および方法中に維持する。腫瘍細胞の接種には、100 μL中、1ｘ106個ののBalb/c系のM109細胞（同系肺癌）または1ｘ106個のnu/nu系のKB細胞を、内側足背領域(右腋窩)の皮下に注射する。腫瘍の大きさを、キャリパーを使用して2〜3日毎に2つの垂直方向で測定し、その容量を、0.5 x L x W2として計算するが、ここで、L＝最長軸の測定値（mm）であり、W＝Lに対して垂直な軸の測定値（mm）である。次いで、細胞死滅Log(LCK)および処置対対照(T/C)値を、発表されている手順に従って計算する(たとえば、Leeら、「BMS−247550：a novel epothilone analog with a mode of action similar to paclitaxel but possessing superior antitumor efficacy」Clin Cancer Res 7：1429−1437(2001)；Rose、「Taxol−based combination chemotherapy and other in vivo preclinical antitumor studies」J Natl Cancer Inst Monogr 47−53(1993)を参照)。
【０３５１】
投与は、皮下腫瘍が50〜100 mm3(t0)の平均体積を有したときに開始し、典型的には、KB腫瘍では、腫瘍接種後(PTI)から8日目であり、M109腫瘍ではPTIから11日目である。試験動物(5匹/グループ)において、特に指示のない限り、1 μmol/kg〜5μmol/kgの薬剤送達結合体または同等な投与量のPBS(対照)を、週に3回(TIW)、3週間、静脈内注射する。投与溶液は、PBS中毎日新たに調製し、マウスの外側尾静脈に投与する。
【０３５２】
方法：一般的4T−1腫瘍アッセイ。6〜7週齢のマウス（雌Balb/c系）をHarlan, Inc., Indianapolis, INから得る。マウスを、Harlanの葉酸フリー飼料により、この実験を開始する前およびその期間中、合計3週間維持した。葉酸受容体陰性4T−1腫瘍細胞（動物当り1 x 106個の細胞）を、右腋窩の皮下に接種した。4T−1腫瘍の平均容量が〜100 mm3となる腫瘍接種後からおよそ5日目に、特に指示のない限り、マウス（5匹／グループ）に、3μmol/kgなどのさまざまな用量の薬剤送達結合体または同等な投与量のPBS（コントロール）を、週に3回(TIW)、3週間、i.v.注射する。腫瘍増殖を、各処理グループにおいて2日または3日間隔でキャリパーを使用して測定する。腫瘍容量を、方程式：V＝a x b2/2を使用して計算し、ここで、「a」は腫瘍の長さであり、そして「b」は幅である（ミリメートルで表す）。
【０３５３】
方法：薬物毒性決定。心臓穿刺により血液を回収し、血清を、Ani−Lytics, Inc.（Gaithersburg, MD）における、血中尿素窒素(BUN)、クレアチニン、総タンパク質、AST−SGOT、ALT−SGPT、および標準的な血液細胞パネルについての独立した分析にかけることにより、残留薬剤毒性を評価する。さらに、ホルマリン固定した心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、腸、骨格筋および骨（脛骨／腓骨）の組織病理学的評価を、Animal Reference Pathology Laboratories（ARUP; Salt Lake City, Utah）において、委員会により認可を受けた病理学者により実施する。
【０３５４】
方法：体重減少により測定された毒性。
試験動物の体重の変化のパーセンテージを、腫瘍接種後(PTI)の選択した日および投与中に決定する。結果をグラフにする。
【０３５５】
実施例：腫瘍に対するインビボ活性。本明細書に記載する化合物は、nu/nuマウスのKB腫瘍に対する高い力価および効力を示す。本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体発現腫瘍に対する特異的活性および低い宿主動物毒性を示す。たとえば、EC1456は、1 μmol/kg TIW、2週間、の静脈内投与した場合に、4/4の試験動物において完全寛解を示す。図3Aに示すように、EC1456は、過剰の比較化合物EC0923(50または100 μmol/kg)と競合可能であることによって明らかなように、葉酸受容体によって媒介される特異的活性も示す。図3Bに示すように、EC1456は、全動物毒性のどのような証拠も示さない。
【０３５６】
実施例：EC1663の治療効果を、ヒトKB腫瘍に対して評価した。図4Aに示すデータは、4/4の部分寛解をし、腫瘍体積は、コントロールと比較して有意に減少したが、ゼロにはならず、投与終了後に腫瘍は再増殖を始めた。より高い用量が、完全寛解および／または治癒をもたらすことができると考えられる。図4Bに示すデータは、投与された有効用量において、全動物毒性が観察されなかったことを示す。
【０３５７】
方法：TNBC腫瘍アッセイ。三重陰性乳癌(TNBC)は、エストロゲン、プロゲステロンおよびHer2/neuのための遺伝子発現の欠如を特徴とするサブタイプである。TNBCは、治療するのが困難であり、結果として生じる患者の死亡率は、報告によれば、乳癌の任意の他のサブタイプよりも不相応に高い。TNBC異種移植モデルは、nu/nuマウスにMDA−MB−231乳癌細胞を移植することによって、本明細書に記載するKBおよびM109モデルと同様の方法で作成した。投与は、皮下腫瘍が110〜150(一般に130) mm3(t0)の平均体積を有したときに開始し、典型的には、腫瘍接種後(PTI)から17日目である。試験動物(5匹/グループ)において、特に指示のない限り、1 μmol/kg〜5μmol/kgの薬剤送達結合体または同等な投与量のPBS(対照)を、週に3回(TIW)、2〜3週間、i.v.注射する。投与溶液は、PBS中毎日新たに調製し、マウスの外側尾静脈に投与する。
【０３５８】
実施例：確立された三重陰性FR陽性皮下MDA−MB−231乳癌異種移植片に対して試験した場合、EC1456は、週3回、2週連続計画での2 μmol/kgの静脈内用量で非常に活性が高いことが見い出される。この処置は、5匹のうち4匹に、腫瘍体積がゼロになり、約135日間を超える観測窓の期間中、再増殖が起こらない完全寛解をもたらした。特定の理論に縛られることを望むものではないが、動物は、三重陰性乳癌が治癒したと考えられる。EC1456についての結果を図5Aに示す。図5Bに示すように、抗腫瘍活性は、試験動物において有意な体重減少を伴わなかった。
【０３５９】
方法：ヒトシスプラチン耐性細胞株。ヒトシスプラチン耐性細胞株は、シスプラチンの濃度を増加させる(100→2000 nM；12ヶ月を超える期間)条件下でFR陽性KB細胞を培養することによって作成される。KB−CR2000細胞で標識されたヒトシスプラチン耐性細胞は、腫瘍形成性であることが見い出され、かつ、それらのインビボFR発現状態を保持することが見い出される。KB−CR2000腫瘍は、シスプラチン療法に対して耐性があることが確認される。高い、毒性用量のシスプラチン(図6Bに示すように、図6Aに示すように、平均体重減少は10.3%)は、単一の部分寛解(PR)をもたらさなかった。対照的に、EC1456は、5/5のCRが観察され、KB−CR腫瘍に対して非常に活性であることが見い出される。さらに、腫瘍の再増殖は、試験動物の1/5に観察されたにすぎなかった。特定の理論に縛られることを望むものではないが、4/5の試験動物において、約70日間の観察期間中に再増殖は起こらず、シスプラチン耐性癌が治癒されたと考えられる。さらに、シスプラチンとは異なって、EC1456は、マウスのこのコホートにおいて体重減少を引き起こさず、したがって、投与期間中、総動物毒性(gross animal toxicity)の証拠を示さなかった。
【０３６０】
実施例：結合および非結合薬物の比較。非結合チューブリシンBおよび非結合TubB−H(EC0347)薬物の治療効果を、マウスのヒトKB腫瘍に対してインビボで評価する。体重変化によって決定される、各非結合薬物の抗腫瘍効能および総毒性をEC1456結合体と比較する。このモデルにおいて、EC1456は、用量応答抗腫瘍活性をもたらした。完全寛解は、わずかな体重減少〜体重減少なしをもたらす治療条件下で観察された。対照的に、非結合のチューブリシンベース薬物は、マウスに非常に毒性の高い用量を投与された場合でさえ、抗腫瘍応答を得ることができなかった。結果を以下の表に示す。
【０３６１】
2015536323.tif 000265
＊非処置コントロールグループの平均体重減少は、2.4%であった。
1グループは、毒性により2投与のみを受けた。
【０３６２】
これらの結果は、チューブリシンBおよびTubBHが培養中の細胞への毒性が高い(典型的にIC50 〜1 nM)にもかかわらず、両方の作用剤が、抗腫瘍効果をもたらさないレベルで、マウスにおいて用量限定的毒性をもたらしたことを確認する。したがって、非結合化合物は、治療域を示さない。対照的に、結合TubBH(EC1456)などの薬物の結合体は、十分に確立されたヒト腫瘍異種移植片を有するマウスに対し、有意毒性なしで、抗腫瘍応答をもたらす。本明細書に記載する結合体は、毒性の高い薬物に治療域をもたらす。
【０３６３】
実施例：本明細書に記載する化合物は、10%血清/FDRPMI中の葉酸(相対的親和性＝1)と比較して高い葉酸受容体親和性、強力なインビトロ活性、強力なインビボ活性、葉酸受容体に対する特異性、および非結合薬物と比較して十分に高い治療指数を示す。
2015536323.tif 000266
【０３６４】
(a)葉酸との比較；(b)チミジン取り込みにより決定；(c)過剰葉酸と競合する場合の試験化合物のIC50；IC50が高ければ、特異性がより高いのが葉酸媒介である；(d)インビトロ特異性＝競合グループと非競合グループ間のIC50における差異；(e)nu/nuマウスにおける皮下KB腫瘍により決定；CR＝完全寛解、ここで、本明細書で定義する観察期間中の腫瘍体積は、グループのすべての試験動物についてゼロであった；(f)元のチューブリシン；NT＝試験せず。
【０３６５】
方法：アジュバント誘導関節炎(AIA)モデル。雌性ルイスラットを、関節炎誘導前9〜10日間葉酸欠乏飼料(Harlan Teklad、Indianapolis、IN)で飼育する。100 μLの軽油中の0.4〜0.5 mgの加熱殺菌したウシ型結核死菌(BD Diagnostic Systems、Sparks、MD)の皮内移植(尾の付け根)によって、アジュバント誘導関節炎(AIA)を誘導する。関節炎誘導の10日後、ラットの肢浮腫(関節炎の程度)を、修正された関節炎評価システム：0＝関節炎なし；1＝1種類の関節における腫れ；2＝2種類の関節における腫れ；3＝3種類の関節における腫れ；4＝すべての肢における腫れ；を用いて評価する。各ラットの総スコアは、4つの肢のそれぞれのスコアをまとめることによって計算され、各ラットの最大スコアは16である。関節炎誘導の10日後、総関節炎スコアが≧2であるラットを実験から外し、残りのラットをコントロールおよび処置グループに均等に割り当てる(健康なコントロールについてn＝2〜3である以外は、すべてのグループについてn＝5である)。他に特記しない限り、すべての処置は、第10日に開始される。ラットの肢は、骨の損傷を評価し決定するために、X線写真でも評価される。
【０３６６】
実施例：本明細書に記載する化合物は、炎症および骨損傷を伴う関節炎などの炎症性疾患を治療するのに有効である。図7に示すように、EC1496は、アジュバント誘導関節炎のラットモデルにおける肢の炎症を減少させるのに強力かつ有効である。図7は、EC1496が、肢浮腫の評価に基づいて、関節炎の進行を予防するのに有効であることを示す。EC1496(トレース(d))は、非処置コントロール(トレース(b))とは有意に異なる。さらに、データは、EC1496(トレース(d))は、EC1496が過剰の葉酸と共投与される競合コントロールグループとは有意に異なるので、効果が葉酸受容体媒介性であることを示す(トレース(d))。
【０３６７】
実施例：本明細書に記載する化合物は、炎症および骨損傷を伴う関節炎などの炎症性疾患を治療するのに有効である。例示的に、EC1496は、X線写真分析によって決定されるように、アジュバント誘導関節炎のラットモデルにおける骨損傷を減少または予防するのに強力かつ有効である。X線写真術は、視覚採点に基づいて、処置された動物が、非処置コントロール動物に見られる骨損傷を示さないことを明らかにする。それどころか、処置動物および健康動物は、同様の骨構造を示す。
【０３６８】
実施例：EC1669は、アジュバント関節炎に対する葉酸受容体特異的活性を示す。誘導後第9日から開始して、進行するAIAを有するラットを、関節炎スコアにしたがって3つのグループ(n＝5)：(1)非処置AIAコントロール、(2)EC1669処置グループ、および(3)EC1669＋EC0923競合グループに割り振る。すべての処置は、連続して2週間行う。AIAコントロールグループの動物は、非処置のままおく。EC1669処置グループの動物に、375 nmol/kgの投与量で、EC1669の週2回の皮下投与を行う。EC1669＋EC0923グループの動物に、375 nmol/kgの投与量で、EC1669および187.5 μmol/kgの投与量で、EC0923の週2回の皮下投与を行う。実験終点を図8A、図8B、図9Aおよび図9Bに示す：(a)関節炎スコア；(b)体重変化；および(c)肢重量(最終投与の4日後に測定)の増加パーセントによって評価された肢の腫れ、および(d)骨のX線写真術。EC1669は、肢の腫れ(コントロールと比較して〜80% compared to control)および骨損傷コントロールと比較して〜80%)を軽減させることにおいて非常に有効であることが見い出される。EC1669の抗関節炎活性は、葉酸コンペティター(EC0923)と競合可能である。
【０３６９】
実施例：続いての投与実験では、1000 nml/kgにて週1回、250 nmol/kgにて週2回、および500 nmol/kgにて週2回などのさまざまな投与計画を評価した。驚くべきことに、合計用量が1/2である、250 nmol/kgにて週2回の方が、1000 nml/kgにて週1回よりも優れていた。EC1669は、肢の腫れの低減化において、1000 nmol/kgにて週1回で44%減少という1000 nmol/kgにて週1回投与と比較して、500 nmol/kgにて週2回で81%減少、250 nmol/kgにて週2回で64%減少という週2回投与の場合に、週1回投与よりも有効であることが見い出された。
【０３７０】
実施例：EC1669＋セルセプトは、アジュバント誘導関節炎に対して、いずれかの作用剤単独よりも有効である。セルセプトは、臓器移植拒絶を予防するのに用いられる免疫抑制剤であるミコフェノール酸のプロドラッグである。セルセプトは、インビボで活性化され、T細胞増殖を阻害し、内皮細胞への白血球接着を妨害することができる、その活性産物を放出する。EC1669とセルセプトの組合せ効果を試験するために、進行するAIAを有するラットを、関節炎スコアにしたがって4つのグループ(n＝5)：(1)非処置AIAコントロール、(2)EC1669処置グループ、(3)セルセプト処置グループ、および(4)EC1669＋EC0923競合グループに割り振る。すべての処置は、AIA誘導後第9日から開始し、連続して2週間行う。AIAコントロールグループの動物は、非処置である。EC1669処置グループの動物に、1000 nmol/kgの投与量で、EC1669の週1回の皮下投与を行う。セルセプト処置グループの動物に、週5日、30 mg/kgの投与量で、セルセプトの経口投与を毎日行う。EC1669およびセルセプトの組合せ処置グループの動物に、1000 nmol/kgの投与量で、EC1669の週1回の皮下投与、および週5日、30 mg/kgの投与量で、セルセプトの毎日経口投与を行う。 図10Aおよび図11に示すように、EC1669およびセルセプトの併用療法は、疾患の進行による関節炎スコア、肢の腫れおよび体重減少を減少させることにおいて、いずれかの作用剤単独よりも有効である。図10Bは、EC1669およびセルセプトの併用療法が、いずれかの薬物単独よりも、より低い毒性しか引き起こさないことを示す。
【０３７１】
方法：コラーゲン誘導関節炎(CIA)モデル。葉酸欠乏飼料(Harlan Teklad、Indianapolis、IN)で飼育する雌性ルイスラットにおいて、コラーゲン誘導関節炎(CIA)を誘導する。第0日に、フロイント不完全アジュバントと製剤された500 μgのウシコラーゲンII型(Chondrex、Redmond、WA)でラットを免疫する。第7日に、ロイント不完全アジュバントと製剤された250 μgの該ウシコラーゲンでブースター免疫化を行う。関節炎疾患を、製造者(Chondrex、Redmond、WA)によって記載された定性的な臨床スコアシステムによって評価する：0＝正常、1＝軽度であるが、明確な赤みおよび足首または手首の腫れ、あるいは明らかな赤みおよび影響を及ぼされた指の数にかかわりなく個々の指に限定された腫れ、2＝中程度の赤みおよび足首または手首の腫れ、3＝重度の赤みおよび指を含めた全肢の腫れ、および4＝複数の関節の関与する最大限に炎症を起こした肢。最初の免疫後の第10日に、ラットを、関節炎スコアにしたがって、対照および処置グループに均等に割り振る。CIAラットに、第10〜19日に、試験化合物の皮下投与を10回行う。各薬物について、第10および15日に誘導用量(たとえば、500 nmol/kg)を与え、第11〜14および16〜19日に維持用量(たとえば、100 nmol/kg)を与える。関節炎コントロールグループの動物は、非処置のままである。関節炎スコアおよび動物体重を週5回記録する。
【０３７２】
方法：動物実験の自己免疫性ブドウ膜炎モデル。実験的自己免疫性ブドウ膜炎(EAU)を、葉酸欠乏飼料Harlan Teklad、Indianapolis、IN)で飼育したルイスラットにおいて誘導する。第0日に、0.5 mgのグラウンデッド(grounded)結核菌H37Raを含むフロイント不完全アジュバントと製剤された25 μgのウシS−Ag PDSAgペプチドで動物を免疫する。同じ日に、腹腔内注射にて、動物当り1 μの投与量で、精製百日咳毒素(PT)を与える。各眼におけるブドウ膜炎の重篤度を、定性的視覚スコアシステムによって評価する：0＝疾患なし、眼は半透明で光を反射する(赤色反射)；0.5(トレース)＝虹彩における拡張血管、1＝虹彩における充血した血管、異常な瞳孔収縮；2＝濁った前眼房、赤色反射の減少；3＝中程度に不透明な前眼房、しかし瞳孔はまだ可視、鈍い赤色反射；および4＝不透明な前眼房およびあいまいな瞳孔、赤色反射の喪失、眼球突出。この評価により、動物当り8の最大ブドウ膜塩スコアが得られる。
【０３７３】
実施例：本明細書に記載する化合物は、自己免疫性ブドウ膜炎を治療することにおいて抗力がある。EC1669は、自己免疫性ブドウ膜炎に対して葉酸受容体特異的活性を示す。EAUを呈している動物を、3つのグループに無作為に割り振る：(1)非処置EAUコントロール(n＝11)、(2)試験化合物処置グループ(n＝7)、such as EC1669、(3) EC1669＋EC0923などの試験化合物およびコンペティター化合物処置グループ(n＝7)、および(4)メトトレキサート(MTX)などの陽性コントロール処置グループ(n＝7)。すべての処置は、EAU誘導後第8日に開始する。EAUコントロールグループは、非処置である。EC1669処置グループの動物に、一日おきに(q2d)、250 nmol/kgの投与量で、EC1669の皮下投与を5回行う。EC1669＋EC0923処置グループの動物に、一日おきに250 nmol/kgの投与量で、EC1669、および葉酸コンペティターとして125 μmol/kgの投与量で、500倍過剰のEC0923の皮下投与を5回行う。MTX処置グループの動物に、一日おきに250 nmol/kgの投与量で、MTXの皮下投与を5回行う。各動物について、所定の頻度で、ブドウ膜炎スコアおよび動物の体重を記録する。検眼鏡を用いて、EAUの臨床的重篤度を毎日モニターし、動物当りの最大可能スコア8となる、眼当り0〜4のスケールで採点する。第16日に、動物を安楽死させ、ラットの眼球を組織学用にホルマリンで固定する。図12Aに示すように、疾患発病時におけるEC1669処置は、FR依存性様式でEAUの症状を効果的に低下させ、その活性は、皮下MTXと競合する。図12Bに示すように、処置に関連する体重減少は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する明細書に記載する結合体化合物では観察されなかった。
【０３７４】
実施例：図13Aに示すように、EC1496は、葉酸受容体特異的自己免疫性ブドウ膜炎に対して強力かつ有効である。図13Bに示すように、組織学によって組織を評価する。
【０３７５】
方法：自己免疫性脳脊髄炎(EAE)モデル。1 mgのグラウンデッド結核菌H37Raを含有するCFAと製剤された25 μgのモルモットミエリン塩基性タンパク質(MBP)に対する免疫化によって、ラットにおいて、EAEを誘導する。百日咳毒素(1 μg/ラット)を腹腔内投与して、臓器特異的自己免疫を増強する。誘導後第8日から開始して、ラットを4グループに分ける：(1)非処置コントロール(n＝8)、(2)試験化合物(n＝7)、および(3)試験化合物＋EC0923競合などのコンペティター化合物(n＝7)。すべての処置は、EAE誘導後の第8日に開始する。EAEコントロールグループの動物は、非処置のままである。試験化合物処置グループの動物に、一日おきに(q2d)、250 nmol/kgの投与量で、試験化合物の皮下投与を4回行う。試験化合物＋コンペティター化合物処置グループの動物に、一日おきに250 nmol/kgの投与量で、試験化合物、および例示的葉酸受容体コンペティターとして125 μmol/kgの投与量で、500倍過剰のEC0923などのコンペティター化合物の皮下投与を4回行う。EAEの臨床的重篤度を毎日モニターし、動物当り0〜5のスケールで採点する。EAEラットの上昇する麻痺の臨床的兆候を、0〜5のスケールに分ける：0＝疾患なし、0.5＝遠位尾部引きずり、1＝尾部引きずり、2＝軽度の麻痺；運動失調−弱った後肢、3＝中程度の麻痺；後肢不全麻痺、4＝完全後肢麻痺、5＝完全後肢麻痺および失禁（安楽死）。第16日に、動物を麻酔し、組織学用に脳および脊髄をホルマリンで固定する。
【０３７６】
実施例：本明細書に記載する化合物は、自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を治療することにおいて強力である。EC1669は、EAEに対して葉酸受容体特異的活性を示す。図14Aに示すように、疾患発病時におけるEC1669処置は、EAEの急性相中の神経症状を効果的に抑制する。図14Bに示すように、処置に関連する体重減少は、単独で投与される場合のEC1669では観察されなかった。EC1669の治療効果は、葉酸受容体コンペティターEC0923によって遮断される。
【０３７７】
実施例：図15に示すように、EC1496は、EAEに対して強力かつ有効である。処置に関連する体重減少は、単独で投与される場合のEC1496では観察されなかった。
【０３７８】
方法：ヒト血清安定性。従来のプロトコルおよび方法を用いて、本明細書に記載する化合物を安定性について試験する。簡単に言えば、試験化合物を、皮下注射などによって試験動物に投与する。結合体および任意に1つ以上の代謝物の血漿濃度を経時モニターする。結果をグラフにして、試験化合物および代謝物について、Cmax、Tmax、半減期およびAUCを決定する。
【０３７９】
実施例：少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する本明細書に記載する結合体化合物は、血漿中で、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを有さないコンパレーター結合体化合物よりも安定である。EC1495およびEC0746(コンパレーター化合物)をそれぞれ、皮下注射により、500 nmol/kgにて投与する。結合体および代謝物(アミノプテリンおよびアミノプテリンヒドラジドの血漿濃度を経時モニターする。図16Aおよび図16Bに示すように、EC1496は、EC0746より高いを示す。さらに、図16Aおよび図16Bは、EC1496が、EC0746よりも、実質的に少ない血漿中の薬物を放出することを示す。以下の表に示すように、親アミノプテリンおよびヒドラジド誘導体(EC0470)として、遊離薬物が放出される。
2015536323.tif 000267
【０３８０】
特定の理論に縛られることを望むものではないが、データは、EC1496などの少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する本明細書に記載する化合物がより大きい血漿安定性を示すことを示すと考えられる。さらに、ラットに皮下投与された後、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含しない比較例EC0746は、EC1496と比べて、2倍以上の薬物を放出する。EC1496はまた、EC0746よりも高いCmaxを示し、より高い有効治療用量をもたらす。最終的に、EC1496は、より短い半減期を示す。特定の理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載の結合体から早期に放出される薬物への曝露の期間もまた、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含しない化合物と比較して減少されるので、迅速なクリアランスがさらに、より低い毒性をもたらしうると考えられる。
【０３８１】
方法：血漿クリアランス。インビボ実験は、時点当り最低3匹の、ラットなどの試験動物を包含する。例示的に、内頸静脈カテーテルを付けた雌性ルイスラット(Harlan、レギュラーげっ歯類飼料)に、500 nmol/kgにて、EC1669などの試験化合物の単回皮下注射を行う。以下の時点で全血サンプル(300 μL)を採取する：注射後1分、10分、30分、1時間、2時間、3時間、4時間、8時間および12時間。血液サンプルを、0.15%酢酸溶液中の1.7 mg/mLのK3−EDTAおよび0.35 mg/mLのN−マレオニル−ベータ−アラニン(0.35 mg/mL)を含む抗凝固管に入れる。〜2,000 gにて3分間の遠心分離によって血漿サンプルを得、−80℃にて保管する。EC1669およびその活性代謝物であるアミノプテリン(AMT)およびAMTヒドラジド(EC0470)などの、血漿中の試験化合物および代謝物の量を、それぞれ、LC−MS/MSによって定量する。
【０３８２】
実施例：EC1669は、ラットにおいて皮下投与後に速い血漿クリアランスを示す。EC1669は、数分以内に血流中で検出可能であり、投与後30分以内に、〜472 nMのCmaxとなり、注射後60分までプラトーが維持される。EC1669誘導AMTおよびEC0470は、それぞれ、27 nMおよび21 nMという同様のCmax値で検出されるが、EC1669のCmaxと比較すると30分間の遅延がある。EC1669自体は、〜37分という除去半減期で血液から迅速に除去されるが、2つの代謝物の除去半減期は、それぞれ、66分(AMT)および112分(EC0470)と、約2〜3倍長い。EC1669、AMTおよびEC0470の対応する曲線下領域(AUC)値は、それぞれ、52、5.9および3.9 nmol*分/mLである。それらのAUC応答に基づいて、以下の表に示すように、12時間の採取期間にわたって、血漿中で、〜15.8%の活性薬物曝露/放出(AMT＋EC0470)が推定される。
2015536323.tif 000268
【０３８３】
特定の理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載の結合体からの早期放出薬物への曝露の期間が、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含しない化合物と比較して、減少されると考えられるので、EC1669などの本明細書に記載の化合物について観察される速い血漿クリアランスは、より低い宿主動物毒性をもたらしうると考えられる。
【０３８４】
方法：薬物動態的生体内分布。このセクションでの実験は、時点当り、最低3匹の試験動物(マウス)を包含した。3H−メトトレキサート(3H−MTX)などの陽性コントロールと比較した、3H−EC1669(標識薬物)などの試験化合物の薬物動態的生体内分布を、葉酸欠乏飼料で飼育する雌性Balb/cマウスにおいて観察する。化合物は、500 nmol/kgで単回皮下(SC)注射として投与される。全血(＞300 μL)および各〜100 mgのさまざまな対象組織を、さまざまな時点(10分、30分、1時間、2時間、4時間、8時間、12時間、24時間および72時間など)で採取する。血液サンプルを、BDマイクロテイナ管(ヘパリン)に入れ、遠心分離(4,000 g x 3分、4℃)して、血漿(＞100 μL)を分離させる。残っている赤血球(RBC)塊を、リン酸緩食塩水(PBS、pH 7.4)で2回洗浄して、RBCを得る。集めた組織を秤量し、処理して、3H−EC1669および3H−MTX分布を決定する：血漿、RBC、心臓、肺、肝臓(最小葉)、脾臓、腎臓(1)、腸(盲腸の上)、糞便物質(結腸から)、筋肉および脳。
【０３８５】
実施例：皮下投与後の3H−EC1669および3H−メトトレキサートの薬物動態的生体内分布の比較。比較的薬物動態的生体内分布の結果を図17に示す(グラム当りの注射された用量パーセント(ID%/g)として)。投薬後10分の時点で、31 ID%/gの3H−MTXが肝臓によって取り込まれる。血漿中に、3H−MTXよりも2倍多い3H−EC1669が、見い出される(5.2 ID%/g 対 12 ID%/g)。RBC、脾臓、肝臓、腸およびび便中の3H−MTX保持は、全サンプリング期間中、3H−EC1669保持より常に高い。3H−MTX保持がEC1669よりも高いことを示すRBCのデータを、図18にもプロットする。特定の理論に縛られることを望むものではないが、これらのデータは、EC1669が、肝クリアランスにおいてMTXとは有意に異なり、MTXが肝臓によって優先的に除去されることを示唆すると考えられる。特定の理論に縛られることを望むものではないが、これらのデータは、EC1669が、RBC取り込みにおいてMTXとは有意に異なり、細胞侵入の異なる方法を示唆するとも考えられる。報告によれば、MTXは、典型的には、遍在的に発現された減少した葉酸担体(RFC)を介して非優先的に細胞に侵入する。本明細書に記載する化合物は、機能的葉酸受容体を介して特異的細胞に侵入することが明らかである。特定の理論に縛られることを望むものではないが、RBCデータは、本明細書に記載する結合体の葉酸受容体媒介性活性をさらに支持すると考えられる。
【０３８６】
続いての腎/肝分泌実験では、3H−EC1669または3H−MTXの皮下投与前に6時間絶食させてマウスを代謝ケージに収容する。投与後24時間の時点で、3H−EC1669投与動物の蓄尿において、3H−MTX投与動物よりも〜14%放射能が高いことが見い出される。対照的に、3H−MTX投与動物の蓄便において、EC1669投与動物よりも2倍高い放射能が見い出された。特定の理論に縛られることを望むものではないが、これらのデータは、EC1669が、腎対肝クリアランス比においてMTXとは有意に異なり、EC1669が肝臓よりもむしろ腎臓によって優先的に除去されることを示唆すると考えられる。報告によれば、MTXは、主な副作用として、特に長期使用後に肝毒性を引き起こす。特定の理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載する化合物の優先的腎クリアランスは、肝毒性などの副作用を少なくすると考えられる。
【０３８７】
実施例：本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを有さない化合物よりも毒性が低い。試験化合物を、等しい投与量で葉酸欠乏ラットに静脈内投与する。図19に示すように、EC1496などの、本明細書に記載する少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する結合体は、比較例であるEC0746などの、該リンカーを含まない対応する結合体よりも毒性が低い。
【０３８８】
実施例：最大耐量(MTD)。少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する本明細書に記載する結合体化合物は、1つ以上の非天然アミノ酸を含むリンカーを有さない化合物よりも改善された高いMTDを示す。雌性スプラーグ-ドーリーラットにおいて、試験化合物を、BIWで2週間静脈内投与する。図20に示すように、コンパレーター化合物EC0531は、0.33 μmol/kgのMTDを有するが、EC1456は、65%改善された、少なくとも0.51 μmol/kgのMTDを有する。組織病理学的変化は、MTD以下のEC1456の投与では観察されなかった。
【図１】
2015536323.tif 000298
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2015536323.tif 000305
【図９】
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【図１０】
2015536323.tif 000307
【図１１】
2015536323.tif 000308
【図１２】
2015536323.tif 000309
【図１３】
2015536323.tif 000310
【図１４】
2015536323.tif 000311
【図１５】
2015536323.tif 000312
【図１６】
2015536323.tif 000313
【図１７ＡＢ】
2015536323.tif 000314
【図１７ＣＤ】
2015536323.tif 000315
【図１７ＥＦ】
2015536323.tif 000316
【図１８】
2015536323.tif 000317
【図１９】
2015536323.tif 000318
【図２０】
2015536323.tif 000319
【手続補正書】
【提出日】平成27年7月7日(2015.7.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法119条(e)の下に、2012年10月16日出願の米国仮出願第61/714,565号、2013年3月15日出願の米国仮出願第61/790,234号、2013年8月13日出願の米国仮出願第61/865,382号および2013年9月13日出願の米国仮出願第61/877,317号に対する優先権を主張する。本出願はまた、米国特許法365条(c)の下に、2013年3月15日出願の米国特許出願第13/837,539号に対する優先権を主張する。上記各出願の開示の全体を参照することにより本出願に含める。
技術分野
本明細書に記載の発明は、標的療法のための薬物送達結合体に関連する。さらに詳しくは、本明細書に記載の発明は1つ以上の非天然アミノ酸を含む多価リンカーを包含する薬物送達結合体に関連する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳類免疫系は、腫瘍細胞、他の病原性細胞、および侵入する外来病原体の認識および排除のための手段を提供する。免疫系は通常、強力な防御線を提供するが、癌細胞などの病原性細胞および他の感染性因子が宿主免疫反応を逃れて、共存する宿主病原性と共に増殖または持続する多くの例がある。化学療法剤および放射線療法は、たとえば複製を繰り返す新生物を排除するために開発されてきた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら現在入手可能な化学療法剤および放射線療法投与計画の多くは、それらが病原性細胞を優先的に破壊するための十分な選択性を欠いており、造血系の細胞および他の非病原性細胞などの正常な宿主細胞も傷つけるために有害な副作用を有する。これらの抗癌剤の有害な副作用は、病原性細胞集団に対して選択的であり、宿主毒性の低い新たな治療法の開発の必要性を際立たせている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
1つ以上の非天然アミノ酸から形成された多価リンカーを包含する薬物送達結合体が、病原性細胞集団を治療するのに有効であり、低い宿主動物毒性を示すことが発見されている。
本発明の1つの例示的かつ非限定的実施態様では、本明細書は、式：
B−L−Dx
[式中、B、L、Dおよびxは、本明細書に記載されるさまざまな実施態様および態様において定義される]
で示される化合物を記載する。
【０００５】
もう1つの実施態様では、1種以上の化合物を含む医薬組成物もまた、本明細書に記載される。1つの態様では、組成物は、癌、炎症などを有する患者を治療するための治療有効量の1種以上の化合物を包含する。組成物が、限定的ではないが、他の治療的に活性な化合物および／または1種以上の担体、希釈剤、賦形剤など、およびそれらの組合せなどの他の化合物および／または成分を包含してもよいことを理解すべきである。もう1つの実施態様では、癌、炎症などを有する患者または宿主動物を治療するための化合物および医薬組成物を用いる方法もまた、本明細書に記載される。1つの態様では、方法は、癌、炎症などを有する患者に、1種以上の本明細書に記載の化合物および／または組成物を投与するステップを包含する。もう1つの態様では、方法は、癌、炎症などを有する患者を治療するために、治療有効量の1種以上の本明細書に記載の化合物および／または組成物を投与することを包含する。もう1つの実施態様では、癌、炎症などを有する患者を治療するための医薬の製造における化合物および組成物の使用もまた、本明細書に記載される。1つの態様では、医薬は、治療有効量の1種以上の癌、炎症などを有する患者を治療するための化合物および／または組成物を包含する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図1Aは、37℃にて1時間でのKB細胞におけるEC1669の相対的親和性を示す。図1Bは、37℃にて1時間でのCHO−β細胞におけるEC1669の相対的親和性を示す。
【図２】図2は、2時間および72時間でのXTT細胞生存性によって決定されたRAW264.7細胞におけるEC1669の細胞静止作用を示す。
【図３】図3Aは、100 μmol/kgでEC0923との共投与にてEC1456を投与されたマウス(黒三角)および非処置(PBS)コントロールマウス(黒四角)と比較した、連続して2週間、1 μmol/kgｘ3回/週(TIW)(月/水/金)にてEC1456を投与されたnu/nuマウス(黒丸)における、KB腫瘍に対するEC1456のインビボ活性を示す。点線の垂直線は、最終投与の日を表す。図3Bは、EC1456が、動物の体重によって決定されるどのような観察可能な全動物毒性も、もたらさなかったことを示す。
【図４】図4Aは、s.c.KB腫瘍を有するnu/nuマウスにおけるEC1663の活性を示す。ここで、EC1663は、2週間、週3回(月/水/金)、0.5 μmol/kgを第7日から開始して静脈内投与され(黒三角)、非処置コントロール(黒四角)と比較された。N＝5動物/コホート。点線の垂直線は、最後の投与日である。図4Aは、試験動物における4/4 PRを示す。図4Bは、EC1663が、有意な宿主動物毒性を示さなかったことを示す。
【図５】図5Aは、樹立皮下されたMDA−MB−231腫瘍に対するEC1456の活性を示す。s.c. MDA−MB−231腫瘍(94−145 mm3)を有する動物は、2週間、週3回(月/水/金)、2 μmol/kg(パネルA)のEC1456(黒丸)を第１7日から開始して静脈内投与され、非処置動物(黒四角)と比較された。N＝5動物/コホート。点線の垂直線は、最後の投与日である。図5Bは、EC1456が、重量変化％によって決定される全動物毒性を引き起こさなかったことを示す。
【図６】図6Aは、s.c.KB−CR2000(シスプラチン耐性)腫瘍(98−148 mm3)を有する動物におけるEC1456の活性を示す。ここで、EC1456が、2週間、週3回(月/水/金)、2 μmol/kg(黒丸)を第6日から開始して静脈内投与されるか、または3 mg/kgのシスプラチンが、2週間、週2回(火/木)(黒三角)を第6日から開始して静脈内投与され、非処置コントロールと比較された。N＝5動物/コホート。点線の垂直線は、最後の投与日である。図6Bは、EC1456が、有意な宿主動物毒性を示さなかったことをを示す。対照的に、シスプラチン処置は、投与期間中、実質的な宿主動物毒性をもたらした。
【図７】図7は、アジュバント誘導関節炎に対するEC1496のインビボ有効性を示す。矢印は、処置日を示す。(a)健康なコントロール、(b)非処置コントロール、(c)EC1496、(d)EC1496＋過剰EC0923(コンパレーター/競合化合物)。
【図８】図8Aは、関節炎に対するEC1669のインビボ有効性を示す。(a)健康なコントロール、(a)非処置コントロール、(b)EC1669(375 nmol/kg)、(c)EC1669＋500x EC0923。図8Bは、EC1669が、全動物毒性を示さないことを示す。(a)非処置コントロール、(b)EC1669(375 nmol/kg)、(c)EC1669＋500x EC0923、(d)健康なコントロール。
【図９】図9Aは、手の腫れによって決定された関節炎に対するEC1669のインビボ有効性を示す。図9Bは、骨X線写真によって決定された関節炎に対するEC1669のインビボ有効性を示す。
【図１０】図10Aは、AIAラットにおけるEC1669単独およびEC1669＋セルセプトの組合せ共療法のインビボ有効性を示す。ここで、第0日は、誘導後9日であり、矢印は、処置日を示す。(a)健康なコントロール、(b)非処置コントロール、(c)EC1669(1000 nmol/kg、siw、sc)、(d)CellCept(商標)(30 mg/kg、po、qdx5)、(e)EC1669＋セルセプト(CellCept)(商標)。図10Bは、投与プロトコルのそれぞれの混合物と比較した全動物毒性を示す。
【図１１】図11は、手の腫れによって決定されたAIAラットにおけるEC1669単独およびEC1669＋セルセプトの組合せ共療法のインビボ有効性を示す。
【図１２】図12Aは、EAU(両眼の全ブドウ膜炎スコア)に対するEC1669のインビボ有効性を示す。動物は、誘導後第8日から開始して、1日おきにEC1669(黒四角)、EC1669＋EC0923(白四角)およびMTX(黒菱形)で処置されるか、または非処置動物(黒丸)に由来する。第0日は、誘導後8日であり、矢印は、処置日を示す。図12Bは、EC1669が、全動物毒性を示さないことを示す。
【図１３】図13Aは、EAU(両眼の全ブドウ膜炎スコア)に対するEC1496のインビボ有効性を示す。(a)ブドウ膜炎非処置コントロール、(b)EC1496(375 nmol/kg)、(c)EC1496＋過剰EC0923。図13Bは、組織学によって決定されたEAUに対するEC1496のインビボ有効性を示す。
【図１４】図14Aは、EAEに対するEC1669のインビボ有効性を示す。(a)非処置EAEコントロール、(b)EC1669(250 nmol/kg)、(c)EC1669＋過剰EC0923。動物は、EAE誘導後第8日から開始して一日おき(矢印によって示される)に処置され、非処置コントロールと比較される。図14Bは、各グループについて平均した、体重における変化パーセントを示す。
【図１５】図15は、EAEに対するEC1496のインビボ有効性を示す。非処置動物およびEAE誘導後第8日から開始して一日おきにEC1496およびEC1496＋EC0923で処置された動物からの個々のEAEスコアが示され、非処置コントロールと比較される。
【図１６】図16Aは、EC1496(500 nmol/kg、s.c.)の薬物動態ならびにアミノプテリンおよびアミノプテリンヒドラジドのインビボ生成を示す。図16Bは、EC0746(比較化合物、500 nmol/kg、s.c.)の薬物動態ならびにアミノプテリンおよびアミノプテリンヒドラジドのインビボ生成を示す。
【図１７】図17は、マウスにおける3H−EC1669、パネル(A)、(C)および(E)；ならびに3H−メトトレキサート、パネル(B)、(D)および(F)の薬物動態的生体内分布を示す。試験化合物は、500 nmol/kg、s.c.でBalb/cマウスに投与された。
【図１８】図18は、放射能の経時測定値としての、マウスにおける3H−EC1669(黒四角)および3H−MTX(黒三角)のRBC取り込みの比較を示す。
【図１９】図19は、(b)EC1496(3 μmol/kg)および(c)EC0746(比較化合物、3 μmol/kg))の間の相対的全動物毒性、ならびに葉酸欠損ラットにおいて2週間BIW(週2回)投与された場合のビヒクルコントロール(a)に対する比較を示す。
【図２０】図20は、ビヒクルコントロールと比較した、EC1456の最大耐量(MTD)を示す。ビヒクルコントロール(黒四角)、0.33 μmol/kgでのEC1456(黒丸)、0.41 μmol/kgでのEC1456(上向き黒三角)、0.51 μmol/kgでのEC1456(下向き黒三角)および0.67 μmol/kgでのEC1456(黒菱形)。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
詳細な記載
本発明のいくつかの例示的実施態様は、以下の項(clause)によって記載される：
式：B−L(D)xで示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩(ここで、Bは、細胞表面受容体結合および／または標的リガンドのラジカルであり、Dは、それぞれの場合において独立して選ばれた薬物のラジカルであり、xは、1、2、3、4および5から選ばれる整数であり；およびLは、1つ以上の非天然アミノ酸を含む多価放出可能なリンカー(releasable linker)であり；および、ここで、Bは、Lに共有的に結合し、Lは、Dに共有的に結合する)；および
ここで、化合物は、以下の式の任意のサブセットまたはサブグループのいずれか1つではない：
2015536323.tif 000320
2015536323.tif 000321
EC0038
2015536323.tif 000322
EC0054
2015536323.tif 000323
EC0056
2015536323.tif 000324
EC0074
2015536323.tif 000325
EC0077
2015536323.tif 000326
EC0088
2015536323.tif 000327
EC0136
2015536323.tif 000328
EC0137
2015536323.tif 000329
EC0138
2015536323.tif 000330
EC0260
および／または
ここで、化合物は以下の式ではない：
2015536323.tif 000331
EC0153
および／または
ここで、化合物は、以下の式の任意のサブセットまたはサブグループのいずれか1つではない：
2015536323.tif 000332
2015536323.tif 000333
EC0052
2015536323.tif 000334
EC0069
2015536323.tif 000335
EC0070
2015536323.tif 000336
EC0071
2015536323.tif 000337
EC0111
2015536323.tif 000338
EC0155
2015536323.tif 000339
EC0894
および／または
ここで、化合物は、以下の式の任意のサブセットまたはサブグループのいずれか1つではない：
2015536323.tif 000340
EC0082
2015536323.tif 000341
EC0083
2015536323.tif 000342
EC0084
および／または
ここで、化合物は以下の式ではない：
2015536323.tif 000343
EC0060
および／または
上記の任意の組合せ、またはその任意の医薬的に許容しうる塩ではない。
【０００８】
B−L(D)xが細胞表面受容体に結合する能力がある前記項に記載の化合物。
リガンドがビタミン受容体結合リガンドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
リガンドが葉酸塩受容体結合リガンドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
リガンドが葉酸塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
リガンドがD−グルタミルを含む葉酸塩(D−葉酸塩とも呼ばれる)またはプテロイル−D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つの化合物。BがD−葉酸塩のラジカルである場合、Bの包含されたD−グルタミル部分は、リンカーLの部分ではないことが本明細書において理解されるべきである。
【０００９】
Bが、式：
2015536323.tif 000344
で示される非天然葉酸塩ラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
リガンドが、葉酸塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１０】
Bが、式：
2015536323.tif 000345
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１１】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−立体配置を有する前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アラニン、D−アスパラギン酸、D−アスパラギン、D−システイン、D−グルタミン酸、D−フェニルアラニン、D−ヒスチジン、D−イソロイシン、D−リシン、D−ロイシン、D−メチオニン、D−プロリン、D−グルタミン、D−アルギニン、D−セリン、D−トレオニン、D−バリン、D−トリプトファン、D−チロシンおよびD−オルニチン、ならびにそれらの任意のアミノ酸誘導体から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１２】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アスパラギン酸、D−アスパラギン、D−システイン、D−グルタミン酸、D−ヒスチジン、D−リシン、D−メチオニン、D−グルタミン、D−アルギニン、D−セリン、D−トレオニン、D−トリプトファン、D−チロシンおよびD−オルニチン、ならびにそれらの任意のアミノ酸誘導体から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１３】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アスパラギン酸、D−アスパラギン、D−システイン、D−グルタミン酸、D−ヒスチジン、D−リシン、D−グルタミン、D−アルギニン、D−セリン、D−トレオニン、D−トリプトファンおよびD−オルニチン、ならびにそれらの任意のアミノ酸誘導体から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１４】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アスパラギン酸、D−システイン、D−グルタミン酸、D−リシン、D−アルギニン、D−セリンおよびD−オルニチン、ならびにそれらの任意のアミノ酸誘導体から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１５】
Lが、2つ以上の非天然アミノ酸を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、3つ以上の非天然アミノ酸を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、4つ以上の非天然アミノ酸を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、1つ以上のジスルフィドをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つのジスルフィドが、L−システイニルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つのジスルフィドが、D−システイニルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、1つ以上の二価親水性ラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、2つ以上の二価親水性ラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、3つ以上の二価親水性ラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１６】
Lが、4つ以上の二価親水性ラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、1つ以上の二価ポリオキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、2つ以上の二価ポリオキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、3つ以上の二価ポリオキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１７】
Lが、4つ以上の二価ポリオキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、1つ以上の二価ポリヒドロキシラジカルをさらに含む前記項に記載のいずれか1つの化合物。
Lが、2つ以上の二価ポリヒドロキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、3つ以上の二価ポリヒドロキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、4つ以上の二価ポリヒドロキシラジカルをさらに含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、ポリヒドロキシラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも2つの非天然アミノ酸が、ポリヒドロキシラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも3つの非天然アミノ酸が、ポリヒドロキシラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも4つの非天然アミノ酸が、ポリヒドロキシラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つのポリヒドロキシラジカルが、式：
CH2−(CH(OH))n−CH2−OH
(式中、nは、1、2、3、4、5および6から選ばれる)。
で示される前記項のいずれか1つに記載の化合物。
nが、1、2、3および4から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
nが、3および4から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
nが、3である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリグルタミン酸ラジカル(ここで、少なくとも1つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリグルタミン酸ラジカル(ここで、少なくとも2つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリグルタミン酸ラジカル(ここで、少なくとも3つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリグルタミン酸ラジカル(ここで、少なくとも4つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１８】
少なくとも1つのグルタミン酸が、D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも2つのグルタミン酸が、D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも3つのグルタミン酸が、D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも4つのグルタミン酸が、D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つのグルタミン酸が、非置換D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも2つのグルタミン酸が、非置換D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも3つのグルタミン酸が、非置換D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも4つのグルタミン酸が、非置換D−グルタミン酸である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００１９】
Lが、二価ポリ(D−グルタミン酸)ラジカル(ここで、少なくとも1つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリ(D−グルタミン酸)ラジカル(ここで、少なくとも2つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリ(D−グルタミン酸)ラジカル(ここで、少なくとも3つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
Lが、二価ポリ(D−グルタミン酸)ラジカル(ここで、少なくとも4つのグルタミン酸は、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する)を含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２０】
Lが、式：
(K−L)d
(式中、Kは、二価D−グルタミン酸ラジカルであり、Lは、アミノポリヒドロキシラジカルとアミドを形成する二価L−グルタミン酸ラジカルであり、dは、1、2、3または4である)
の二価ラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
dが、2、3または4である前記項に記載の化合物。
dが、3または4である前記項に記載の化合物。
dが、3である前記項に記載の化合物。
少なくとも1つのアミノポリヒドロキシラジカルが、式：
NH−CH2−(CH(OH))m−CH2−OH
(式中、mは、1、2、3、4、5および6から選ばれる)
である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２１】
少なくとも1つのアミノポリヒドロキシラジカルが、式：
NH−CH2−(CH(OH))m−R
(式中、mは、1、2、3、4、5および6から選ばれ、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルである)
である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
mが、1、2、3および4から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
mが、3および4から選ばれる前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２２】
Lが、式：
S−CH2CH2−O−C(O)
の二価ラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２３】
Lが、式：
S−S−CH2CH2−O−C(O)
の二価ラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２４】
L−Dが、式：
S−CH2CH2−O−C(O)−D
のラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２５】
L−Dが、式：
S−S−CH2CH2−O−C(O)−D
のラジカルを含む前記項のいずれか1つに記載の化合物。
xが、3である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
xが、2である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
xが、1である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２６】
少なくとも1つの薬物が、細胞毒性薬である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、癌治療剤である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、ビンカアルカロイドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、デスアセチルビンブラスチンモノヒドラジドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンAである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンBである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンAヒドラジドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、チューブリシンBヒドラジドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２７】
少なくとも1つの薬物が、Tuv残基がエーテルアミナルを包含するチューブリシンである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、Tuv残基がエーテルアミナルを包含するチューブリシンヒドラジドである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、炎症治療薬である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、抗炎症薬である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、ジヒドロ葉酸レダクターゼインヒビターである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、アミノプテリンメトトレキサートである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、アミノプテリンである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２８】
少なくとも1つの薬物が、ラパマイシンの哺乳動物標的(mTOR)のインヒビターである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、シロリムス(ラパマイシン)、テムシロリムス、エベロリムスまたはリダフォロリムスである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、T−2マイコトキシンでない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、デュオカルマイシンでない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、マイトマイシンでない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
少なくとも1つの薬物が、デスアセチルビンブラスチンモノヒドラジドでない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００２９】
少なくとも1つのDが、式：
2015536323.tif 000346
または
2015536323.tif 000347
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３０】
少なくとも1つのDが、式：
2015536323.tif 000348
または
2015536323.tif 000349
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３１】
少なくとも1つのDが、式：
2015536323.tif 000350
2015536323.tif 000351
2015536323.tif 000352
2015536323.tif 000353
[式中、n＝1、2、3、4、5または6、あるいは、n＝1、2または3、あるいは、n＝2または3である]
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３２】
少なくとも1つのDが、式：
2015536323.tif 000354
2015536323.tif 000355
2015536323.tif 000356
2015536323.tif 000357
[式中、n＝1、2、3、4、5または6、あるいは、n＝1、2または3、あるいは、n＝2または3である]
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３３】
少なくとも1つの薬物が、核酸またはDNA転写因子、もしくはそのプロドラッグに結合しうるか、またはそれと反応しうる化合物である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３４】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000358
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３５】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000359
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３６】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000360
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３７】
B−Lが、式：
2015536323.tif 000361
で示されるラジカルである前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３８】
化合物が、式：EC1456
2015536323.tif 000362
またはその医薬的に許容しうる塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００３９】
化合物が、式：EC1456
2015536323.tif 000363
またはその医薬的に許容しうる塩でない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４０】
化合物が、式：EC1496
2015536323.tif 000364
またはその医薬的に許容しうる塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４１】
化合物が、式：EC1496
2015536323.tif 000365
またはその医薬的に許容しうる塩でない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４２】
化合物が、式：EC1669
2015536323.tif 000366
またはその医薬的に許容しうる塩である前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４３】
化合物が、式：EC1669
2015536323.tif 000367
またはその医薬的に許容しうる塩でない前記項のいずれか1つに記載の化合物。
【００４４】
1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用で、前記項のいずれか1つに記載の化合物を含む医薬組成物。
【００４５】
任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用で、治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を含む単位用量または単位投与剤形組成物。
【００４６】
治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を含む、宿主動物における癌または炎症の治療用組成物；または治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を含み、任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せをさらに含む医薬組成物。
【００４７】
治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を宿主動物に投与するステップを含む、宿主動物における癌または炎症の治療方法；または治療有効量の1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物を含み、任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せをさらに含む医薬組成物。
【００４８】
宿主動物における癌または炎症の治療用医薬の製造における、任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用での1種以上の前記項のいずれか1つに記載の化合物の使用。
【００４９】
癌が、薬物耐性癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、白金耐性癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、シスプラチン耐性癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、薬物耐性卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
癌が、シスプラチン耐性卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５０】
癌が、NCI/ADR−RESまたはNCI/ADR−RES関連卵巣癌などの白金耐性卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５１】
癌が、IGROVCDDPまたはIGROVCDDP関連卵巣癌などの白金耐性卵巣癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５２】
癌が、乳癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５３】
癌が、薬物耐性乳癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５４】
癌が、MDA−MB−231またはMDA−MB−231関連乳癌などの三重陰性乳癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５５】
癌が、非小細胞肺癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５６】
癌が、肝細胞癌腫または肝細胞癌である前記項のいずれか1つに記載の方法または組成物または単位用量または使用。
【００５７】
式：
2015536323.tif 000368
[式中、Lは、脱離基である]
で示される前記項のいずれか1つに記載の化合物の製造用中間体またはその医薬的に許容しうる塩。
【００５８】
式：
2015536323.tif 000369
[式中、Mは、水素またはカチオンである]
で示される前記項のいずれか1つに記載の化合物の製造用中間体またはその医薬的に許容しうる塩。
【００５９】
式：
2015536323.tif 000370
[式中、Lは、脱離基である]
で示される請求項1に記載の化合物の製造用中間体またはその医薬的に許容しうる塩。
【００６０】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、対応する細胞表面受容体に結合することによって標的病原細胞内に内在化されうる。特に、葉酸受容体などのビタミン受容体は、ビタミンを選択的および／または特異的に結合し、たとえば、受容体媒介性エンドサイトーシスを介して内在化が起こりうる。
いったん内在化されると、本明細書に記載する化合物が標的細胞に送達されるまで、放出可能なリンカーは実質的または完全に無傷なので、本明細書に記載する化合物に含まれる放出可能なリンカーが、標的細胞の内部への薬物カーゴの送達を可能にし、したがって、非標的細胞に対する毒性を減少させる。したがって、本明細書に記載する化合物は、細胞内生化学工程に薬物を送達することによって細胞内で作用し、非宿主動物の健康な細胞および組織への非結合薬物曝露の量を減少させる。
【００６１】
もう1つの実施態様では、葉酸受容体結合リガンドを包含する本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を包含しない対応する化合物と比較して、葉酸受容体に対するより大きい特異性を示す。もう1つの実施態様では、葉酸受容体結合リガンドを包含する本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体発現細胞に対する高い活性を示す。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、シスプラチン耐性KB細胞、NCl/ADR−RES−Cl2細胞、IGROV1細胞およびMDA−MB−231細胞といったようなKB細胞などの病原細胞に対してインビトロおよびインビボで強力な活性を示す。もう1つの実施態様では、葉酸受容体結合リガンドを包含する本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体陰性細胞への有意な結合を示さない。もう1つの実施態様では、葉酸受容体結合リガンドを包含する本明細書に記載する化合物は、葉酸状態アルファ(α)および／または葉酸受容体ベータ(β)などの高親和性葉酸受容体を介して優先的または排他的に細胞に入る。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、一般に、還元葉酸担体(RFC)を介するなどの受動輸送を介して実質的に細胞に入らない。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を包含しない化合物と比較して、より低い宿主動物毒性を示す。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を包含しない化合物と比較して、より大きい血清安定性を示す。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を包含しない化合物と比較して、迅速に除去される。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、肝クリアランスと比較して、主として腎クリアランスを介して除去される。
【００６２】
本発明の薬物送達結合体は、ヒトの臨床医学と獣医学応用の両方のために使用することが可能である。したがって、病原細胞集団を抱え、本明細書に記載する化合物によって治療される宿主動物は、ヒトであってもよいし、獣医学応用の場合は、実験動物、農業動物、家畜動物、または野生動物であってもよい。本発明は、宿主動物、たとえば、それらに限定されるわけではないが、ヒト、実験動物、たとえば、げっ歯類(たとえば、マウス、ラット、ハムスターなど)、ウサギ、サル、チンパンジーなど、家畜動物、たとえば、イヌ、ネコ、およびウサギなど、農業動物、たとえば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど、および、拘束された野生動物、たとえば、クマ、パンダ、ライオン、トラ、ヒョウ、ゾウ、シマウマ、キリン、ゴリラ、イルカ、およびクジラなど、を含む宿主動物、に施すことが可能である。
【００６３】
本発明は、これらの宿主動物において各種の病態を招く病原細胞集団に対して適用することが可能である。本発明によれば、「病原細胞」とは、癌細胞、感染性因子、たとえば、細菌およびウィルス、細菌またはウィルス感染細胞、病的状態をもたらすことが可能な活性化マクロファージ、および炎症を引き起こすその他の病原細胞、ビタミン受容体またはビタミンおよび／またはビタミン受容体結合リガンドに結合する受容体を特異的に発現する、優先的に発現する、または過剰発現する、任意のタイプの病原細胞、および、葉酸および／または葉酸受容体結合リガンドに結合する高親和性葉酸受容体を特異的に発現する、優先的に発現する、または過剰発現する、任意のタイプの病原細胞を意味する。病原細胞はまた、本明細書に記載する化合物による治療がその疾患の症状の軽減をもたらす任意の細胞を包含することができる。たとえば、病原細胞は、ある状況下では病原性となる宿主細胞、たとえば、移植片対宿主疾患の原因とはなるが、別の状況下では病原性ではない免疫系細胞、であることも可能である。
【００６４】
したがって、病原細胞集団は、腫瘍形成性、たとえば、良性腫瘍および悪性腫瘍を含む腫瘍形成性の癌細胞集団であってもよいし、または、非腫瘍形成性であってもよい。癌細胞集団は自発性に生じてもよいし、あるいは、宿主動物の生殖細胞系に存在する突然変異または体細胞突然変異のような過程によって生じてもよいし、あるいは、化学的、ウィルス的、または放射線誘発的に生じてもよい。本発明は、癌、たとえば、上皮癌、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、メラノーマ、中皮腫、バーキットリンパ腫、鼻咽頭癌、白血病、および骨髄腫、を治療するのに利用が可能である。癌細胞集団としては、口腔、甲状腺、内分泌腺、皮膚、胃、食道、喉頭、膵臓、結腸、膀胱、骨、卵巣、子宮頸部、子宮、乳房、睾丸、前立腺、直腸、腎臓、肝臓、および、肺の各癌が挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００６５】
もう1つの実施態様では、疾患が、関節リウマチおよび変形性関節症などの関節炎、糸球体腎炎、増殖性網膜症、再狭窄、潰瘍性大腸炎、クローン病、線維筋痛、乾癬および他の皮膚の炎症、骨髄炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、紅斑性狼瘡、サルコイドーシス、全身硬化症、臓器移植拒絶反応(GVHD)および慢性炎症から選ばれる前記実施態様の任意の1つの方法または医薬組成物が記載される。
【００６６】
薬物は、医薬的活性化合物などの、細胞機能を調節させる、またはその他のやり方で修飾することが可能ならば、いずれの分子であってもよい。例示的薬物としては、たとえば、それらに限定されるわけではないが、ペプチド、オリゴペプチド、レトロ逆転(retro−inverso)オリゴペプチド、タンパク質、タンパク質類縁体であって、少なくとも一つの非ペプチド結合がペプチド結合を置換する類縁体、アポタンパク質、糖タンパク質、酵素、補酵素、酵素阻害剤、アミノ酸とその誘導体、受容体、およびその他の膜タンパク質；抗原、およびそれに対する抗体；ハプテン、およびそれに対する抗体；ホルモン、脂質、リン脂質、リポソーム；毒素；抗生物質；鎮痛剤；気管支拡張剤；ベータブロッカー；抗菌剤；抗高血圧剤；循環系薬剤、たとえば、抗不整脈剤、グリコシド心臓薬、抗狭心症剤および血管拡張剤など；中枢神経系薬剤、たとえば、刺激剤、向精神薬、抗躁剤および抑制剤など；抗ウィルス剤；抗ヒスタミン剤；ガン治療薬、たとえば、化学療法剤など；精神安定剤；抗うつ剤；H−2拮抗剤；抗痙攣剤；抗嘔吐薬；プロスタグランジンおよびプロスタグランジン類縁体；筋弛緩剤；抗炎症物質；刺激剤；うっ血除去剤；鎮吐剤；利尿剤；鎮痙剤；抗喘息薬；抗パーキンソン薬；去痰剤；鎮咳剤；粘液溶解剤；および、ミネラルおよび栄養添加物が挙げられる。
【００６７】
さらに、薬物は、細胞傷害性を持つ、腫瘍透過性を強化する、腫瘍細胞増殖を抑制する、アポトーシスを増進する、標的細胞の抗アポトーシス活性を下げる、感染性因子によって引き起こされる疾患を治療するのに使用される、病原細胞に向けた内在的免疫反応を強化する、または任意のタイプの病原細胞による疾患状態の治療に使用される、薬物であることが可能である。さらなる例示的薬物としては、アドレノコルチコイドおよびコルチコステロイド、アルキル化剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシンおよびアクラマイシン誘導体、エストロゲン、抗代謝剤、たとえば、シトシンアラビノシド、プリン類縁体、ピリミジン類縁体、およびメトトレキサート、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチンおよび他の白金化合物、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、タキソテール(登録商標)、シクロフォスファミド、ダウノマイシン、リゾキシン、T2トキシン、植物アルカロイド、プレドニソン、ヒドロキシ尿素、テニポシド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管阻害剤、エポチロン、チューブリシン、シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、seco−シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、O−Ac−seco−シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、ブレオマイシンおよび他の任意の抗生物質、窒素マスタード、ニトロスウレア、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビンなどのピンカアルカロイドおよびデアセチルビンブラスチンモノヒドラジドビノレルビンなどのその類縁体と誘導体、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、チオコルヒチン、トリチルシステイン、ハリコンドリンB、ドラスタチン類、たとえば、ドラスタチン10、アマニチン類、たとえば、α−アマニチンなど、カンプトテシン、イリノテカン、および他のカンプトテシン誘導体、ゲルダナマイシンおよびゲルダナマイシン誘導体、エストラムスチン、ノコダゾール、MAP4、コルセミド、炎症および炎症誘導剤、ペプチドおよびペプチド様シグナル伝達阻害剤、および、任意のその他の薬物または毒素が挙げられる。本明細書に記載する結合体に包含されうるその他の薬物としては、シロリムスまたはエベロリムスなどのラパマイシン、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、クロラムフェニコール、アミノグリコシド抗生物質、ゲンタマイシン、アンフォテリシンB、アシクロビル、トリフルリジン、ガンシクロビル、ジドブジン、アマンタジン、リバビリン、および、任意のその他の抗菌化合物が挙げられる。
【００６８】
もう1つの実施態様では、薬物は、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾミブ、チューブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エベロリムス、α−アマニチン、ベルカリン、ジデムニンB、ゲルダナマイシン、プルバラノールA、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポチロン、メイタンシンおよびチロシンキナーゼ阻害剤、ならびにそれらの類縁体および誘導体から選ばれる。
【００６９】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、ビンカアルカロイド、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾミブ、チューブリシン、アミノプテリン、シロリムスまたはエベロリムスなどのラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、α−アマニチン、ベルカリン、ジデムニンB、ゲルダナマイシン、プルバラノールA、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポチロン、メイタンシンおよびチロシンキナーゼ阻害剤、ならびにそれらの類縁体および誘導体から例示的に得選ばれる、少なくとも2つの薬物(D)を包含する。1つの変形態様では、薬物(D)は、同じである。もう1つの変形態様では、薬物(D)は、異なる。
【００７０】
本明細書に記載する薬物送達結合体化合物は、任意の他の公知の薬物が標的化されてもされなくても、その追加薬物との併用療法で投与されうる。例示的追加薬物として、ペプチド、オリゴペプチド、レトロ逆転(retro−inverso)オリゴペプチド、タンパク質、タンパク質類縁体であって、少なくとも一つの非ペプチド結合がペプチド結合を置換する類縁体、アポタンパク質、糖タンパク質、酵素、補酵素、酵素阻害剤、アミノ酸とその誘導体、受容体、およびその他の膜タンパク質；抗原、およびそれに対する抗体；ハプテン、およびそれに対する抗体；ホルモン、脂質、リン脂質、リポソーム；毒素；抗生物質；鎮痛剤；気管支拡張剤；ベータブロッカー；抗菌剤；抗高血圧剤；循環系薬剤、たとえば、抗不整脈剤、グリコシド心臓薬、抗狭心症剤、および、血管拡張剤など；中枢神経系薬剤、たとえば、刺激剤、向精神薬、抗躁剤、および、抑制剤など；抗ウィルス剤；抗ヒスタミン剤；癌治療薬、たとえば、化学療法剤など；精神安定剤；抗うつ剤；H−2拮抗剤；抗痙攣剤；抗嘔吐薬；プロスタグランジンおよびプロスタグランジン類縁体；筋弛緩剤；抗炎症物質；刺激剤；うっ血除去剤；鎮吐剤；利尿剤；鎮痙剤；抗喘息薬；抗パーキンソン薬；去痰剤；鎮咳剤；粘液溶解剤；および、ミネラルおよび栄養添加物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００７１】
もう1つの実施態様では、治療因子を含む少なくとも一つの追加組成物を、薬物送達結合体媒介の病原細胞集団の除去を強化するために、前述の方法と組み合わせて、または、補助剤として投与することが可能であるし、あるいは、1種を越える追加治療因子を投与することが可能である。治療因子は、内在的免疫反応を刺激することが可能な化合物、化学療法剤、または投与薬物送達結合体の効力を補佐することが可能な別の治療因子から選んぶことができる。本発明方法は、前述の結合体に加えて、内在的免疫反応を刺激することが可能な化合物または組成物(たとえば、サイトカイン)、たとえば、それらに限定されないが、サイトカインまたは免疫細胞成長因子、たとえば、インターロイキン1−18、幹細胞因子、塩基性FGF、EGF、G−CSF、GM−CSF、FLK−2リガンド、HILDA、MIP−1α、TGF−α、TGF−β、M−CSF、IFN−α、IFN−β、IFN−γ、可溶性CD23、LIF、および、それらの組み合わせを含む化合物または組成物を宿主に対し投与することによって行うことができる。
【００７２】
これらの因子の治療的に有効な組み合わせも使用が可能である。1つの実施態様では、たとえば、IL−2の治療有効量、たとえば、約0.1 MIU/m2／用量／日から約15 MIU/m2／用量／日の範囲の量を、1日複数回投与計画で、かつ、IFN−αを、たとえば、0.1 MIU/m2／用量／日から約7.5 MIU/m2／用量／日の範囲の量を、1日複数回投与計画で、病原細胞を抱える宿主動物の病原細胞を除去する、低減させる、または中和させるために、薬物送達結合体と同時に使用することが可能である(MIU＝百万国際単位、m2＝平均人のおよその体表面積)。もう1つの実施態様では、IL−12およびIFN−αが、インターロイキンおよびインターフェロンの前述の治療有効量として使用され、さらに別の実施態様では、IL−15およびIFN−αが、インターロイキンおよびインターフェロンの前述の治療有効量として使用される。もう1つの実施態様では、IL−2およびIFN−αまたはIFN−γ、およびGM−CSFが、前述の治療有効量において併用される。本発明はまた、サイトカイン類の、他の任意の有効な組み合わせ、たとえば、他のインターロイキンおよびインターフェロン、およびコロニー刺激因子の組み合わせを含めた併用を企図する。
【００７３】
たとえば、それ自体が細胞傷害性である、または、腫瘍透過性を強化するように作用することが可能な化学療法剤も、薬物送達結合体と組み合わせて本発明方法に用いるのに好適である。このような化学療法剤としては、アドレノコルチコイドおよびコルチコステロイド、アルキル化剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシンおよびアクラマイシン誘導体、エストロゲン、抗代謝剤類、たとえば、シトシンアラビノシド、プリン類縁体、ピリミジン類縁体、および、メトトレキサートなど、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチンおよび他の白金化合物、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、タキソテール(登録商標)、シクロフォスファミド、ダウノマイシン、リゾキシン、T2トキシン、植物アルカロイド、プレドニソン、ヒドロキシウレア、テニポシド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管阻害剤、エポチロン、チューブリシン、シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、seco−シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、O−Ac−seco−シクロプロピルベンゾ[e]インドロン、ブレオマイシンおよび他の任意の抗生物質、ナイトロジェンマスタード、ニトロス尿素、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびその類縁体と誘導体、たとえば、デアセチルビンブラスチンモノヒドラジドなど、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、チオコルヒチン、トリチルシステイン、ハリコンドリンB、ドラスタチン類、たとえば、ドラスタチン10など、アマニチン類、たとえば、α−アマニチンなど、カンプトテシン、イリノテカン、および他のカンプトテシン誘導体、ゲルダナマイシンおよびゲルダナマイシン誘導体、エストラムスチン、ノコダゾール、MAP4、コルセミド、炎症および炎症誘導剤、ペプチドおよびペプチド様シグナル伝達阻害剤、および、任意のその他の従来技術で認知済みの薬物または毒素が挙げられる。本発明にしたがって使用が可能なその他の薬物としては、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、クロラムフェニコール、アミノグリコシド抗生物質、ゲンタマイシン、アンフォテリシンB、アシクロビル、トリフルリジン、ガンシクロビル、ジドブジン、アマンタジン、リバビリン、マイタンシン類およびその類縁体および誘導体、ゲムシタビン、および、任意のその他の従来技術で認知済みの薬物または毒素任意の抗菌化合物が挙げられる。
【００７４】
本明細書で用いる用語「リンカー」は、2つ以上の分子の官能性部分を連結して、結合体を形成する原子の鎖を包含する。例示として、原子の鎖は、C、N、O、S、SiおよびP、またはC、N、O、Sおよび P、C、N、OおよびSから選ばれる。原子の鎖は、結合リガンド、薬物、診断剤、イメージング剤などの結合体の異なる機能的能力を共有的に連結する。リンカーは、連続的主鎖において、約2〜約100個の原子などのさまざまな長さを有することができる。リンカーを形成するのに使用される原子を、全ての化学的に関連する方法によって組み合わせることができ、その例としては、アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン基などを形成する炭素原子の鎖；エーテル、ポリオキシアルキレン基を形成する、またはカルボニル基と組み合わせる場合はエステルおよびカーボネートなどを形成する、炭素および酸素原子の鎖；アミン、イミン、ポリアミン、ヒドラジン、ヒドラゾンを形成する、またはカルボニル基と組み合わせる場合はアミド、尿素、セミカルバジド、カルバジドなどを形成する、炭素および窒素原子の鎖；アルコキシアミン、アルコキシルアミンを形成する、またはカルボニル基と組み合わせル場合はウレタン、アミノ酸、アシルオキシアミン、ヒドロキサム酸などを形成する、炭素、窒素および酸素原子の鎖；などが挙げられる。さらに、前述の例示的な実施態様のそれぞれにおける鎖を形成する原子は、たとえばアルカン、アルケン、アルキン、イミンなどがリンカーに含まれるラジカルでありうるように、飽和または不飽和であり、したがって単結合、二重結合または三重結合を形成しうることが理解されるべきである。さらに、リンカーを形成する原子はまた、互いに環化するか、または環式構造の一部であり、リンカーにおいて、シクロアルカン、環状エーテル、環状アミン、および他の複素環、アリーレン、ヘテロアリーレンなどのリンカーを形成する二価環式構造を形成しうることが理解されるべきである。この後者の配置において、リンカーの長さは、1つ以上の環式構造を通る任意の経路によって定義されうることを理解すべきである。例示的に、リンカーの長さは、環式構造のそれぞれ1つを通る最短経路によって定義される。リンカーが、炭素、窒素、ケイ素またはリン原子上のいずれかの上の任意の置換基などの
原子の鎖に沿った任意の1つ以上の開放性原子価にて任意に置換されうることを理解すべきである。リンカーが、分子の2つ以上の機能性部分を連結して、任意の開放原子価にて結合体を形成することができることも理解すべきであり、結合体を形成している2つ以上の機能性部分のいずれかが、リンカーの任意の明らかな末端に結合されることは必要ではない。
【００７５】
もう1つの実施態様では、葉酸−リンカーラジカルは、以下の式：
2015536323.tif 000371
[式中、m、nおよびqは、0〜8の範囲から独立して選ばれる整数である；AAは、アミノ酸であり、R1は、水素、アルキルまたは窒素保護基であり、薬物は、(*)原子で任意に結合される]
で示される。1つの態様では、AAは、天然または非天然の立体配置のいずれかを有する天然アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、親水性アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、Aspおよび／またはArgである。もう1つの態様では、整数nは、1以上である。もう1つの態様では、整数nは、2以上である。もう1つの態様では、整数nは、3以上である。もう1つの態様では、整数nは、4以上である。もう1つの態様では、整数nは、5以上である。もう1つの態様では、整数qは、1以上である。もう1つの態様では、整数qは、1である。もう1つの態様では、整数mは、1以上である。もう1つの態様では、整数mは、1である。もう1つの態様では、R1は、水素である。薬物および任意追加のリンカーおよび任意追加の受容体結合リガンドを、2,ω−ジアミノアルカン酸フラグメントの遊離NH側鎖にて、または遊離開放原子価によって示される末端カルボキシレートにて、上記式に結合することができる。上記態様のすべての組合せが、本発明のさらなる例示的実施態様として本明細書に記載されることを理解すべきである。たとえば、もう1つの実施態様では、nは1以上であり、mは1以上であり；またはnは1以上であり、mは1であり、qは1である；などである。
【００７６】
もう1つの実施態様では、葉酸−リンカーラジカルは、以下の式：
2015536323.tif 000372
[式中、m、n、qおよびpは、0〜8の範囲から独立して選ばれる整数である；AAは、アミノ酸であり、R1は、水素、アルキルまたは窒素保護基であり、薬物は、(*)原子で任意に結合される]
で示される。1つの態様では、AAは、天然または非天然の立体配置のいずれかを有する天然アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、親水性アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、Aspおよび／またはArgである。もう1つの態様では、整数nは、1以上である。もう1つの態様では、整数nは、2以上である。もう1つの態様では、整数nは、3以上である。もう1つの態様では、整数nは、4以上である。もう1つの態様では、整数nは、5以上である。もう1つの態様では、整数qおよび／またはpは、1以上である。もう1つの態様では、整数qおよび／またはpは、1である。もう1つの態様では、整数mは、1以上である。もう1つの態様では、整数mは、1である。もう1つの態様では、R1は、水素である。薬物および任意追加のリンカーおよび任意追加の受容体結合リガンドを、2,ω−ジアミノアルカン酸フラグメントの遊離NH側鎖にて、システイニルチオール基にて、または遊離開放原子価によって示される末端カルボキシレートにて、上記式に結合することができる。上記態様のすべての組合せが、本発明のさらなる例示的実施態様として本明細書に記載されることを理解すべきである。たとえば、もう1つの実施態様では、nは1以上であり、mは1以上であり；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1である；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1であり、pは1である；などである。
【００７７】
もう1つの実施態様では、葉酸−リンカーラジカルは、以下の式：
2015536323.tif 000373
[式中、m、n、q、pおよびrは、0〜8の範囲から独立して選ばれる整数である；AAは、アミノ酸であり、R1は、水素、アルキルまたは窒素保護基であり、薬物は、(*)原子で任意に結合される]
で示される。1つの態様では、AAは、天然または非天然の立体配置のいずれかを有する天然アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、親水性アミノ酸である。もう1つの態様では、1つ以上のAAは、Aspおよび／またはArgである。もう1つの態様では、整数nは、1以上である。もう1つの態様では、整数nは、2以上である。もう1つの態様では、整数nは、3以上である。もう1つの態様では、整数nは、4以上である。もう1つの態様では、整数nは、5以上である。もう1つの態様では、整数qおよび／またはpおよび／またはrは、1以上である。もう1つの態様では、整数qおよび／またはpおよび／またはrは、1である。もう1つの態様では、整数mは、1以上である。もう1つの態様では、整数mは、1である。もう1つの態様では、R1は、水素である。薬物および任意追加のリンカーおよび任意追加の受容体結合リガンドを、2,ω−ジアミノアルカン酸フラグメントの遊離NH側鎖にて、システイニルチオール基にて、セリニルヒドロキシ基にて、または遊離開放原子価によって示される末端カルボキシレートにて、上記式に結合することができる。上記態様のすべての組合せが、本発明のさらなる例示的実施態様として本明細書に記載されることを理解すべきである。たとえば、もう1つの実施態様では、nは1以上であり、mは1以上であり；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1である；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1であり、pは1である；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1であり、rは1である；またはnは2以上であり、mは1であり、qは1であり、pは1であり、rは1である；などである。
【００７８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、リンカーまたはスペーサーリンカーとも呼ばれる、本明細書に記載の1つ以上の二価親水性ラジカルである。さまざまな親水性リンカーの配置および／または配向が直線または分枝様式であるか、またはその両方出会ってよいことを理解されたい。たとえば、親水性リンカーは、リガンドと1つ以上の薬物の結合体を形成するリンカーの主鎖を形成することができる。あるいは、リンカーの親水性部分は、結合リガンドBを1種以上の薬物Dに連結している原子の主鎖につり下がるか、または結合することができる。この後者の配置において、親水性部分は、原子の主鎖に対して、近位または遠位であってよい。
【００７９】
もう1つの実施態様では、リンカーは、直線の程度がより多いか、またはより少なくてよく、親水性基は、主として結合体における鎖様リンカーを形成するように一連にアレンジされる。該もう1つの方法では、この直線態様では、親水性基は、リンカーのいくつかまたはすべての主鎖を形成する。
【００８０】
もう1つの実施態様では、リンカーは、親水性基で分岐される。この分岐した態様では、親水性基は、主鎖に対して近位であってもよく、あるいは主鎖に対して遠位であってもよい。これらの配置のそれぞれでは、リンカーは、形状において、より球状または円筒状である。1つの変形態様では、リンカーは、ボトルブラシ様の形状である。1つの態様では、リンカーの主鎖は、アミドの直線系で形成され、リンカーの親水性部分は、単糖類、スルホネートなどならびにそれらの誘導体および類縁体を結合することによるなどの分枝側鎖の平行配置によって形成される。
【００８１】
リンカーが、インビボで遭遇する生理的条件などの特定の条件下で中性であるか、またはイオン化されてよいことが理解される。選ばれた条件下でのイオン化合物リンカーのために、リンカーは、脱プロトンして陰イオンを形成してもよく、あるいは、プロトン化されて、陽イオンを形成してもよい。１つ以上の脱プロトン化またはプロトン化イベントが起こりうることが理解される。さらに、同じリンカーが、脱プロトン化またはプロトン化されて、内部塩または両性イオン化合物を形成しうることが理解される。
【００８２】
もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、中性、特に、生理的条件下で中性であり、該リンカーは、有意にプロトン化も脱プロトンもしない。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、プロトン化されて、１つ以上の陽電荷をもつことができる。プロトン化能力が条件依存性であることが理解される。1つの態様では、条件は、生理的条件であり、リンカーは、インビボでプロトン化される。もう1つの実施態様では、スペーサーは、中性である領域およびプロトン化されて1つ以上の陽電荷をもちうる領域の両方を包含する。もう1つの実施態様では、スペーサーは、脱プロトン化されて1つ以上の陰電荷を持ちうる領域およびプロトン化されて1つ以上の陽電荷をもちうる領域の両方を包含する。この後者の実施態様では、両性イオンまたは内部塩が形成されうることが理解される。
【００８３】
1つの態様では、脱プロトン化されて陰電荷を持ちうるリンカーは、アスパラギン酸、グルタミン酸および長鎖カルボン酸基、ならびに硫酸のアルキルエステルなどの硫酸エステルを包含する。もう1つの態様では、プロトン化されて陽電荷をもつことができるリンカーの領域は、それぞれ任意に置換される、エチレンジアミン、プロピレンジアミン、ブチレンジアミンリアミノアルキレンといったようなアミノ基、および／またはピロリジン、ピペリジン、ピペラジンなどの複素環、および他のアミノ基を包含する。もう1つの実施態様では、中性であるリンカーの領域は、糖類、炭水化物、サッカリド、イノシトールなどのポリヒドロキシル基、および／またはポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンなどのポリオキシアルキレン基といったようなポリエーテル基を包含する。
【００８４】
1つの実施態様では、本明細書に記載する親水性スペーサーリンカーは、主として、炭素、水素および酸素から形成され、約3：1以下、または約2：1以下の炭素/酸素比を有する。1つの態様では、本明細書に記載する親水性リンカーは、複数のエーテル官能基を包含する。もう1つの態様では、本明細書に記載する親水性リンカーは、複数のヒドロキシル官能基を包含する。このようなリンカーを形成するのに用いることができる例示的フラグメントおよびラジカルとして、炭水化物などのポリヒドロキシル化合物、ポリエチレングリコールユニットなどのポリエーテル化合物およびカルボキシルおよびアルキル硫酸などの酸基が挙げられる。1つの変形態様では、オリゴアミドスペーサーなどもリンカーに包含されうる。
【００８５】
例示的な二価親水性リンカーとして、ペプチドの特徴と糖の特徴の両方を含む本明細書に記載するサッカロペプチドなどの炭水化物；クリック化学としても知られている[2+3]ヒュスゲン(Huisgen)環化により組み込まれうるグルクロニド；2−デオキシヘキサピラノース(2−デオキシグルコース、2−デオキシグルクロニドなど)などのβ−アルキルグリコシド；およびβ−アルキルマンノピラノシド、が挙げられる。例示的なPEG基には、約４〜約20個のPEG基の範囲の特定の長さのものが含まれる。例示的なアルキル硫酸エステルをクリック化学により主鎖に直接導入することもできる。例示的なオリゴアミドスペーサーには、EDTAおよびDTPAスペーサー、β−アミノ酸などが含まれる。
【００８６】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、以下の式：
2015536323.tif 000374
2015536323.tif 000375
[式中、mは、独立して、それぞれの場合に1〜約8から選ばれる整数であり；ｐは、1〜約10から選ばれる整数であり、そしてnは、独立して、それぞれの場合に１〜約3から選ばれる整数である]
で示されるリンカーなどの1種以上のポリエーテルを包含する。1つの態様では、mは、独立して、それぞれの場合に１〜約３である。別の態様において、ｎは、それぞれの場合に1である。もう1つの態様では、pは、独立して、それぞれの場合に約4〜約6である。例示的には、前述に対応して、対応するポリプロピレンポリエーテルが本明細書において企図され、親水性スペーサーリンカーとして結合体に含まれうる。さらに、ポリエチレンポリエーテルとポリプロピレンポリエーテルの混合が親水性スペーサーリンカーとして結合体に含まれうることが理解される。更に、前述のポリエーテル化合物の環状の変形態様、たとえばテトラヒドロフラニル、1,3−ジオキサン、1,4−ジオキサンなどを含むものが、本明細書において企図される。
【００８７】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、単糖、オリゴ糖、多糖などを組み込んだリンカーなどの複数のヒドロキシル官能基を含む。ポリヒドロキシル含有スペーサーリンカーは、複数の−(CROH)−基(ここでRは、水素またはアルキルである)を含むことが理解されるべきである
【００８８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1種以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000376
2015536323.tif 000377
2015536323.tif 000378
2015536323.tif 000379
2015536323.tif 000380
2015536323.tif 000381
2015536323.tif 000382
2015536323.tif 000383
2015536323.tif 000384
[式中、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、mは、1〜約3の整数であり、nは、1〜約5または2〜約5の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、rは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの態様では、整数nは、3または4である。もう1つの態様では、整数pは、3または4である。もう1つの態様では、整数rは、1である。
【００８９】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、以下のフラグメント：
2015536323.tif 000385
2015536323.tif 000386
2015536323.tif 000387
[式中、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、mは、1〜約3の整数であり、nは、1〜約5または2〜約5の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、rは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの態様では、整数nは、3または4である。もう1つの態様では、整数pは、3または4である。もう1つの態様では、整数rは、1である。
【００９０】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下の環式ポリヒドロキシ基：
2015536323.tif 000388
2015536323.tif 000389
2015536323.tif 000390
2015536323.tif 000391
2015536323.tif 000392
2015536323.tif 000393
[式中、nは、2〜約5の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、rは、1〜約4の整数である]
を含む。1つの態様では、整数nは、3または4である。もう1つの態様では、整数pは、3または4である。もう1つの態様では、整数rは、2または3である。リンカーのそのような部分の全ての立体化学形態が、本明細書において企図されることが理解される。たとえば、上記の式において、この部分を、リボース、キシロース、グルコース、マンノース、ガラクトースまたは他の糖から誘導することができ、これらの分子に存在する側鎖ヒドロキシルおよびアルキル基の立体化学配置を保持することができる。さらに、前述の式において、多様なデオキシ化合物も企図されることが理解されるべきである。例示的に、以下の式の化合物が企図され：
2015536323.tif 000394
[式中、それぞれ、nは、rと同じであるかまたは少なく、たとえば、rが2または3である場合、nは、1または2、あるいは1、2、3である]
【００９１】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、以下の式：
2015536323.tif 000395
[式中、nおよびrは、それぞれ、1〜約3から選ばれる整数である]
で示される1つ以上のポリヒドロキシラジカルを含む。1つの態様では、リンカーは、1つ以上の以下の式：
2015536323.tif 000396
で示されるポリヒドロキシル化合物を包含する。
【００９２】
リンカーのそのような部分の全ての立体化学形態が、本明細書において企図されることが理解される。たとえば、上記の式において、この部分を、リボース、キシロース、グルコース、マンノース、ガラクトースまたは他の糖から誘導することができ、これらの分子に存在する側鎖ヒドロキシルおよびアルキル基の立体化学配置を保持することができる。
【００９３】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、リンカーの主鎖から離れている1つ以上のポリヒドロキシル基を含む。1つの実施態様において、そのような炭水化物基またはポリヒドロキシル基は、トリアゾール基により主鎖と連結しており、トリアゾール結合親水性スペーサーリンカーを形成する。例示的には、リンカーは、以下の式：
2015536323.tif 000397
[式中、n、mおよびrは、整数であり、それぞれ独立して、1〜約5から選ばれる]
で示されるフラグメントを含む。1つの例示的な態様では、mは、独立して、それぞれの場合に２または３である。もう1つの態様では、ｒは、それぞれの場合に1である。もう1つの態様では、nは、それぞれの場合に1である。一つの変形態様では、ポリヒドロキシル基をリンカーの主鎖に連結する基は、ピロール、ピラゾール、1,2,4−トリアゾール、フラン、オキサゾール、イソオキサゾール、チエニル、チアゾール、イソチアゾール、オキサジアゾールなどの、ただしこれらに限定されない異なるヘテロアリール基である。同様に、二価６員環ヘテロアリール基が企図される。前述の例示的親水性スペーサーリンカーの他の変形態様には、以下の式：
2015536323.tif 000398
[式中、nおよびrは、整数であり、それぞれ独立して、それぞれの場合に1〜約5から選ばれ、そしてpは、1〜約4から選ばれる整数である]
などのオキシアルキレン基が包含される。
【００９４】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、アミド基により主鎖と連結した1つ以上の炭水化物基またはポリヒドロキシル基を含み、アミド結合親水性スペーサーリンカーを形成する。例示的には、そのようなリンカーは、以下の式：
2015536323.tif 000399
[式中、nは、1〜約3から選択される整数であり、そしてmは、1〜約22から選択される整数である]
で示されるフラグメントを包含する。1つの例示的態様では、nは、1または2である。もう1つの例示的態様では、mは、約6〜約10から選ばれ、例示的に8である。1つの変形態様において、ポリヒドロキシル基をリンカーの主鎖に連結する基は、エステル、尿素、カルバメート、アシルヒドラゾンなどの、ただしこれらに限定されない異なる官能基である。同様に、環状の変形態様も企図される。前述の例示的親水性スペーサーリンカーの他の変形態様には、以下の式：
2015536323.tif 000400
で示されるようなオキシアルキレン基を包含する。
[式中、nおよびrは、整数であり、それぞれ独立して、それぞれの場合に1〜約5から選択され、そしてpは、1〜約4から選択される整数である]
【００９５】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000401
2015536323.tif 000402
2015536323.tif 000403
2015536323.tif 000404
2015536323.tif 000405
[式中、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、1〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【００９６】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000406
[式中、Rは、H、アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルであり、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、2〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【００９７】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000407
2015536323.tif 000408
2015536323.tif 000409
[式中、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、1〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【００９８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000410
[式中、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、2〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【００９９】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下のフラグメント：
2015536323.tif 000411
2015536323.tif 000412
2015536323.tif 000413
[式中、mは、1〜約3から独立して選ばれる整数であり、nは、1〜約6の整数であり、pは、1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約3から選ばれる整数である]
を含む。1つの変形態様において、整数nは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数pは、3または4である。もう1つの変形態様において、整数rは1である。
【０１００】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、主鎖と、以下の式：
2015536323.tif 000414
〔式中、nは、それぞれの場合に0〜約3から独立して選ばれる整数である〕により例示されるような分枝側鎖モチーフとの組み合わせである。上記の式は、4員、5員、6員、さらに大きな員の環状糖を表すことが意図される。さらに、上記の式を修飾してデオキシ糖を表すことができ、ここで式に存在する１つ以上のヒドロキシ基は、水素、アルキルまたはアミノで置換されていることが理解されるべきである。さらに、1つ以上のヒドロキシル基が酸化されて対応するカルボニルになっている対応するカルボニル化合物が、上記の式により企図されることが理解されるべきである。さらに、この例示的な実施態様において、ピラノースは、カルボキシルとアミノの両方の官能基を含み、(a)主鎖に挿入することができ、(b)この実施態様の変形態様において分枝側鎖に合成ハンドルを提供することができる。側鎖ヒドロキシル基のいずれかを使用して、対応するオリゴ糖を調製する追加の糖を含む、他の化学フラグメントを結合することができる。ピラノースまたは他の糖を単一炭素で主鎖に挿入すること、すなわち一つの原子に同種原子が二つ結合した対の炭素でのスピロ配置および同様の配置を含む、この実施態様の他の変形態様も企図される。たとえば、リンカーまたは薬剤Dまたは結合リガンドBの1つまたは2つの末端を糖に連結して、1,1；1,2；1,3；1,4；2,3または他の配置で主鎖に挿入することができる。
【０１０１】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する親水性スペーサーリンカーは、主として、炭素、水素および窒素から形成され約3：1以下または約2：1以下の、炭素／窒素比を有する。つの態様では、本明細書に記載されている親水性リンカーは、複数のアミノ官能基を含む。
【０１０２】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、1つ以上の以下の式：
2015536323.tif 000415
2015536323.tif 000416
2015536323.tif 000417
2015536323.tif 000418
2015536323.tif 000419
2015536323.tif 000420
[式中、nは、それぞれの場合に1〜約3から独立して選択される整数である]
で示されるアミノ基を含む。1つの態様では、整数nは、それぞれの場合に1または2である。別の態様において、整数nは、それぞれの場合に1である。
【０１０３】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、硫酸のアルキルエステルなどの硫酸エステルである。例示的には、リンカーは、以下の式：
2015536323.tif 000421
[式中、nは、それぞれの場合に1〜約3から独立して選択される整数である]
を包含する。例示的に、nは、独立して、それぞれの場合に1または2である。
【０１０４】
ヘテロ原子に結合している遊離水素を含む、そのようなポリヒドロキシル、ポリアミノ、カルボン酸、硫酸などのリンカーにおいて、1つ以上の遊離水素原子を適切なヒドロキシル、アミノまたは酸保護基でそれぞれ保護してもよいし、あるいは対応するプロドラッグとしてブロックしてもよく、後者は、一般的なまたは特定の生理学的条件下で母体薬剤を放出するプロドラッグのような、特定の使用にために選択される、ということが理解される。
【０１０５】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、1つ以上の以下の二価ラジカル：
2015536323.tif 000422
2015536323.tif 000423
[式中、上述のとおり、nは、2〜約5の整数であり、pは1〜約5の整数であり、そしてrは、1〜約4の整数である]
を含む。
【０１０６】
前述の実施態様において、(*)原子などの開放された部位は、結合リガンド(B)または送達される薬物(D)の結合する位置であることが、さらに理解されるべきである。
さらに、Bおよび任意のDのいずれかまたは両方の結合は、直接的であってもよく、または1つ以上の本明細書に記載のラジカルを含む介在リンカーを介するものであってもよいことが、理解されるべきである。さらに、(*)原子は、任意の薬物Dをもつ放出可能なリンカーを形成してもよく、またはリンカーLの他の部分を形成してもよい。
【０１０７】
もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、１つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、少なくとも3つの炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーおよび1つ以上のアスパラギン酸を含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル化合物基含有リンカーおよび1つ以上のグルタミン酸を含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカー、1つ以上のグルタミン酸、1つ以上のアスパラギン酸および１つ以上のベータアミノアラニンを含む。一連の変形態様において、前述のそれぞれの実施態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上のシステインも含む。もう1つの一連の変形態様において、前述のそれぞれの実施態様において、親水性スペーサーリンカーは、少なくとも１つのアルギニンも含む。
【０１０８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、少なくとも1つの結合リガンド(L)と少なくとも1つの薬物(D)とを連結する原子の鎖に含まれている、1つ以上の二価1,4−ピペラジンを含む親水性スペーサーリンカーを含む。1つの変形態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む。もう1つの変形態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーおよび1つ以上のアスパラギン酸を含む。もう1つの変形態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上の炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーおよび1つ以上のグルタミン酸を含む。一連の変形態様において、前述のそれぞれの実施態様において、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上のシステインも含む。もう1つの一連の変形態様において、前述のそれぞれの実施態様において、親水性スペーサーリンカーは、少なくとも１つのアルギニンも含む。
【０１０９】
もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、たとえばアミノエチルピペラジニルアセトアミドなどの、ただしこれに限定されない1つ以上のオリゴアミド親水性スペーサーを含む。
【０１１０】
もう1つの実施態様では、あ多価リンカーLは、1つ以上のトリアゾール結合炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む親水性スペーサーリンカーを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上のアミド結合炭水化物含有またはポリヒドロキシル基含有リンカーを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、１つ以上のPEG基および１つ以上のシステインを含む。もう1つの実施態様では、親水性スペーサーリンカーは、1つ以上のEDTE誘導体を含む。
【０１１１】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、式：
2015536323.tif 000424
[式中、*は、葉酸への結合点を示し、**は、薬物への結合点を示し；FおよびGは、それぞれ独立して、1、2、3または4である]
で示される二価ラジカルを包含する。
【０１１２】
もう1つの実施態様では、多価リンカーLは、式：
2015536323.tif 000425
[式中、*、**、***は、それぞれ、葉酸受容体結合部分Bおよび1つ以上の薬物Dへの結合点を示す]
で示される三価ラジカルを包含する。薬物が、より少ない場合、*、**、***は、水素またはへテロ原子で置換されることが理解されるべきである。FおよびGは、それぞれ独立して、1、2、3または4であり；W1は、NHまたはOである。もう1つの態様では、m1は、0または1である。
【０１１３】
本明細書に記載する任意の実施態様では、−NR1R2−、酸素、イオウ、および式：−(NHR1NHR2)−、−SO−、−(SO2)−、および−N(R3)O−[ここで、R1、R2およびR3は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、置換アリール、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールおよびアルコキシアルキルから選ばれる]などのヘテロ原子リンカーが、多価リンカーLに包含されることもできる。多価リンカーへの薬物ラジカルD、多価リンカーへのリガンドラジカルB、または多価リンカーからさまざまなジおよびポリ多価ラジカルといったように、ヘテロ原子リンカーが、本明細書に記載の任意のラジカルに共有的に結合するように用いられてもよいことを理解すべきである。
【０１１４】
リンカーの部分を形成するのに用いることができる例示的さらなる二価ラジカルは、以下のとおりである。
2015536323.tif 000426
【０１１５】
2015536323.tif 000427
【０１１６】
2015536323.tif 000428
【０１１７】
多価リンカーLは、放出可能なリンカーである。
【０１１８】
本明細書で用いる用語「放出可能なリンカー」は、本明細書に記載する化合物が標的細胞に送達もしくはその内部に送達される場合に、生理的条件下で切断されうる少なくとも1つの結合を包含するリンカーを意味する。したがって、用語「放出可能なリンカー」は、これらの系が細胞表面受容体結合リガンドの標的でない限り、一般に、単に、血清、血漿、消化管または肝臓などのインビボで不安定な結合を意味するのではない。しかしながら、送達および／または選択的標的化の後、放出可能なリンカーは、1つ以上のpH−不安定、酸−不安定、塩基−不安定、酸化的に不安定、代謝的に不安定、生化学的に不安定、および／または酵素−不安定な結合を有することによるなどの、生理的条件下で、リンカー中に、またはBもしくは任意のDへのリンカーの共有結合に、少なくとも1つの切断される結合を含むいずれかの工程によって、切断されうる。結合切断をもたらすこのような生理的条件は、生物学的または代謝的工程を必ずしも含まず、むしろ、たとえば、生理的pHにおいて起こるか、または細胞質pHよりも低いpHを有するエンドソームなどの細胞器官への区画化の結果とし起こる加水分解反応などの標準的化学反応を含みうることが理解される。
【０１１９】
切断しうる結合は、2つの隣接する原子を放出可能なリンカー内で連結できること、および／または、他のリンカーまたは本明細書に記載のBおよび／またははDを、放出可能なリンカーのどちらかの末端で連結できること、が理解される。切断しうる結合が2つの隣接する原子を放出可能なリンカー内で連結する場合、結合の切断の後、放出可能なリンカーは、2つ以上のフラグメントに分断される。あるいは、切断しうる結合が、放出可能なリンカーと、追加のヘテロ原子、スペーサーリンカー、リンカーのもう1つの放出可能な部分、任意のD、またはBなどの別の部分との間にある場合、結合の切断の後、放出可能なリンカーは、他の部分から分離される。
【０１２０】
それ自体が切断しうる結合を含むか、またはBおよび／または任意のDと切断しうる結合を形成する例示的ラジカルは、ヘミアセタールおよびそのイオウバリエーション、アセタールおよびそのイオウバリエーション、ヘミアミナール、アミナールなどであり、あるいは、1−アルコキシアルキレン、1−アルコキシシクロアルキレン、1−アルコキシアルキレンカルボニル、1−アルコキシシクロアルキレンカルボニルなどの、少なくとも1つのヘテロ原子で置換されたメチレンフラグメントから形成されうる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル(カルボキシアリール)カルボニル、カルボニル(ビスカルボキシアリール)カルボニルなどの多価リンカーが挙げられる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、アルキレン(ジアルキルシリル)、アルキレン(アルキルアリールシリル)、アルキレン(ジアリールシリル)、(ジアルキルシリル)アリール、(アルキルアリールシリル)アリール、(ジアリールシリル)アリールなどの多価リンカーが挙げられる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、オキシカルボニルオキシ、オキシカルボニルオキシアルキル、スルホニルオキシ、オキシスルホニルアルキルが挙げられる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、イミノアルキリデニル、カルボニルアルキリデンイミニル、イミノシクロアルキリデニル、カルボニルシクロアルキリデンイミニルなどの多価リンカーが挙げられる。例示的な本明細書に記載する放出可能なリンカーとして、アルキレンチオ、アルキレンアリールチオおよびカルボニルアルキルチオなどの多価リンカーが挙げられる。前述のフラグメントのそれぞれは、任意に、本明細書に定義する置換基X2で置換される。
【０１２１】
置換基X2は、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシレート、アルキルアルカノエート、グアニジノアルキル、R4−カルボニル、R5−カルボニルアルキル、R6−アシルアミノおよびR7−アシルアミノアルキルであることができ、ここで、R4およびR5は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体およびペプチドから選ばれ、そしてR6およびR7は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体およびペプチドから選ばれる。この実施態様において、ヘテロ原子リンカーは、窒素を含むことができ、置換基X2およびヘテロ原子リンカーは、それらが結合する放出可能なリンカーと一緒になって、複素環を形成する。
【０１２２】
複素環は、ピロリジン、ピペリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ピロリジノン、ピペリジノン、オキサゾリジノン、イソオキサゾリジノン、チアゾリジノン、イソチアゾリジノンおよびスクシンイミドでありうる。
【０１２３】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、メチレン、1−アルコキシアルキレン、1−アルコキシシクロアルキレン、1−アルコキシアルキレンカルボニルおよび1−アルコキシシクロアルキレンカルボニルに結合して、アセタールまたはケタールを形成する酸素を含んでよく、それぞれのフラグメントは、本明細書に定義する置換基X2で任意に置換される。あるいは、メチレンまたはアルキレンは、任意に置換されたアリールで置換される。
【０１２４】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、スルホニルアルキルに結合して、アルキルスルホネートを形成する酸素を含んでよい。
【０１２５】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、イミノアルキリデニル、カルボニルアルキリデンイミニル、イミノシクロアルキリデニルおよびカルボニルシクロアルキリデンイミニルに結合して、ヒドラゾンを形成する窒素を含んでよく、それぞれは、本明細書に定義する置換基X2で任意に置換される。代替的な立体配置は、ヒドラゾンは、カルボン酸誘導体、オルトギ酸誘導体またはカルバモイル誘導体でアシル化されて、さまざまなアシルヒドラゾンを含む放出可能なリンカーを形成することができる。
【０１２６】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、アルキレン(ジアルキルシリル)、アルキレン(アルキルアリールシリル)、(ジアルキルシリル)アリール、アルキレン(ジアリールシリル)、(ジアルキルシリル)アリール、(アルキルアリールシリル)アリールおよび(ジアリールシリル)アリールに結合して、シラノールを形成する酸素を含んでよく、それぞれは、本明細書に定義する置換基X2で任意に置換される。
【０１２７】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル(カルボキシアリール)カルボニル、カルボニル(ビスカルボキシアリール)カルボニルに結合して、アミド、あるいは薬物窒素をもつアミドを形成する窒素を含んでよい。
【０１２８】
本明細書に記載のいずれかの実施態様では、放出可能なリンカーは、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル(カルボキシアリール)カルボニル、カルボニル(ビスカルボキシアリール)カルボニルに結合して、エステル、あるいは薬物酸素をもつエステルを形成する窒素を含んでよい。
【０１２９】
二価スペーサーリンカーは、任意の化学的に関連する方法において、直接または中断へテロ原子を介して組み合わされて、本明細書に記載する放出可能なリンカーを構築してもよいことが理解されるべきである。さらに、スペーサーおよびヘテロ原子リンカーの配置の性質が、放出可能なリンカーがインビボで切断される場所を決定することが理解されるべきである。たとえば、イオウ原子において終結する2つのスペーサーリンカーは、組み合わされる場合、ジスルフィドを形成し、それは、そのように形成された放出可能なリンカーにおける切断しうる結合である。
【０１３０】
たとえば、もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオスクシンイミド−1−イルアルキルオキシメチルオキシ部分を含み、ここで、メチルは、任意に、アルキルまたは置換アリールで置換される。
【０１３１】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオスクシンイミド−1−イルアルキルカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とアシルアジリジンを形成する。
【０１３２】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、1−アルコキシシクロアルキレンオキシ部分を含む。
【０１３３】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、アルキレンアミノカルボニル(ジカルボキシルアリーレン)カルボキシレートを含む。
【０１３４】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、ジチオアルキルカルボニルヒドラジドを含み、ここで、ヒドラジドは、薬物とヒドラゾンを形成する。
【０１３５】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオスクシンイミド−1−イルアルキルカルボニルヒドラジドを含み、ここで、ヒドラジドは、薬物とヒドラゾンを形成する。
【０１３６】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオアルキルスルホニルアルキル(二置換シリル)オキシを含み、ここで、二置換シリルは、アルキルで置換されるか、または任意に置換されたアリールで置換される。
【０１３７】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、天然アミノ酸およびその立体異性体から選ばれる複数の追加のスペーサーリンカーを含む。
【０１３８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカーボネートを形成する。
【０１３９】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカーボネートを形成し、アリールは、任意に置換される。
【０１４０】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、4−ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカーボネートを形成し、アリールは、任意に置換される。
【０１４１】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、3−チオスクシンイミド−1−イルアルキルオキシアルキルオキシアルキリデンを含み、ここで、アルキリデンは、薬物とヒドラゾンを形成し、各アルキルは、独立して選ばれ、オキシアルキルオキシは、任意に、アルキルで置換されるか、または任意に置換されたアリールで置換される。
【０１４２】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルオキシカルボニルヒドラジドを含む。
【０１４３】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−または3−ジチオアルキルアミノを含み、ここで、アミノは、薬物と、ビニル系アミドを形成する。
【０１４４】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルアミノを含み、ここで、アミノは、薬物とビニル系アミドを形成し、そしてアルキルはエチルである。
【０１４５】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−または3−ジチオアルキルアミノカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートを形成する。
【０１４６】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルアミノカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートを形成する。もう1つの態様では、アルキルはエチルである。
【０１４７】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートを形成する。もう1つの態様では、アルキルはエチルである。
【０１４８】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、2−ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートまたはカルバモイルアジリジンを形成する。
【０１４９】
もう1つの実施態様では、多価リンカーは、4−ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを含み、ここで、カルボニルは、薬物とカルバメートまたはカルバモイルアジリジンを形成する。
【０１５０】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式(II)：
2015536323.tif 000429
2015536323.tif 000430
(II)
[式中、nは、1〜約4から選ばれる整数であり；RaおよびRbは、それぞれ独立して、水素、および任意に分枝したC1−C4アルキルといったような低級アルキルなどのアルキルから選ばれ；あるいはRaおよびRbは、結合する炭素原子と一緒になって、炭素環式環を形成し；Rは、任意に置換されたアルキル基、任意に置換されたアシル基または適当に選ばれた窒素保護基であり；(*)は、薬物、ビタミン、造影剤、診断剤、他の二価リンカーまたは結合体の他の部分のための結合点を示す]
で示される二価ラジカルを含む。
【０１５１】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式(III)：
2015536323.tif 000431
2015536323.tif 000432
(III)
[式中、mは、1〜約4から選ばれる整数であり；Rは、任意に置換されたアルキル基、任意に置換されたアシル基または適当に選ばれた窒素保護基であり；(*)は、薬物、ビタミン、造影剤、診断剤、他の二価リンカーまたは結合体の他の部分のための結合点を示す]
で示される二価ラジカルを含む。
【０１５２】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式(IV)：
2015536323.tif 000433
2015536323.tif 000434
(IV)
[式中、mは、1〜約4から選ばれる整数であり；Rは、任意に置換されたアルキル基、任意に置換されたアシル基または適当に選ばれた窒素保護基であり；(*)は、薬物、ビタミン、造影剤、診断剤、他の二価リンカーまたは結合体の他の部分のための結合点を示す]
で示される二価ラジカルを含む。
【０１５３】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する化合物は、式：
2015536323.tif 000435
2015536323.tif 000436
2015536323.tif 000437
[式中、Xは、NH、OまたはSである]
から選ばれる1つ以上のラジカルを含む。
【０１５４】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式：
2015536323.tif 000438
を有するラジカルを含む。
【０１５５】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、式：
2015536323.tif 000439
[式中、Xは、窒素、酸素またはイオウなどのヘテロ原子であり、nは、0、1、2および3から選ばれる整数であり、Rは、水素、またはアルコキシといったような、陽電荷を誘導的に、またはアリール環上の共鳴によって安定化する能力をもつ置換基などの置換基であり、記号(*)は、結合点を示す]
を有するラジカルを含む。ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロなど(これらに限定されない)の他の置換基がアリール環、ベンジル炭素、アルカン酸またはメチレン橋上に存在してもよいことが理解される。
【０１５６】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する多価リンカーは、カルボニル、チオノカルボニル、アルキレン、シクロアルキレン、アルキレンシクロアルキル、アルキレンカルボニル、シクロアルキレンカルボニル、カルボニルアルキルカルボニル、1−アルキレンスクシンイミド−3−イル、1−(カルボニルアルキル)スクシンイミド−3−イル、アルキレンスルホキシル、スルホニルアルキル、アルキレンスルホキシルアルキル、アルキレンスルホニルアルキル、カルボニルテトラヒドロ−2H−ピラニル、カルボニルテトラヒドロフラニル、1−（カルボニルテトラヒドロ−2H−ピラニル）スクシンイミド−3−イルおよび1−(カルボニルテトラヒドロフラニル）スクシンイミド−3−イルから選ばれるラジカルを含み、ここで、該スペーサーリンカーは、それぞれ、1つ以上の置換基X1で任意に置換される；
ここで、各置換基X1は、独立して、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシレート、アルキルアルカノエート、グアニジノアルキル、R4−カルボニル、R5−カルボニルアルキル、R6−アシルアミノおよびR7−アシルアミノアルキルから選ばれ、ここで、R4およびR5は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体およびペプチドから選ばれ、そしてR6およびR7は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体およびペプチドから選ばれる。
【０１５７】
本明細書に記載する化合物は、1つ以上の不斉中心を含んでもよく、あるいは複数の立体異性体として存在することができてもよい。1つの実施態様において、本明細書に記載する発明が、具体的に示される場合を除き、特定の立体化学要件に限定されないこと、ならびに、化合物、およびそれらを含む組成物、方法、用途および医薬は、光学的に純粋であるか、またはラセミおよびエナンチオマーの他の混合物、ジアステレオマーの他の混合物などのさまざまな立体異性体混合物のいずれかであってよいことを理解すべきである。立体異性体のこのような混合物が、1つ以上の不斉中心において、単一の立体化学的立体配置を含んでもよく、あるいは1つ以上の他の不斉中心において、立体化学的立体配置の混合物を含んでもよいことも理解すべきである。
【０１５８】
同様に、本明細書に記載する化合物は、シス、トランス、EおよびZ二重結合などの幾何学的中心を含んでもよい。もう1つの実施態様では、本明細書に記載する発明は、特定の基化学的異性体要件に限定されないこと、ならびに、化合物、およびそれらを含む組成物、方法、用途および医薬は、純粋であるか、またはさまざまな幾何学的異性体の混合物のいずれかであってよいことを理解すべきである。幾何学的異性体のこのような混合物が、1つ以上の二重結合において、単一の立体配置を含んでもよく、あるいは1つ以上の他の二重結合において、幾何学的異性体の混合物を含んでもよいことも理解すべきである。
【０１５９】
本明細書で用いる用語「細胞表面受容体結合または標的化リガンド」は、一般に、細胞表面上に見い出される、特に、病原細胞の表面上に過剰発現されて見い出されるか、および／または該細胞表面上に優先的に発現される、受容体に結合する、および／または受容体を標的化する化合物を意味する。例示的リガンドとして、ビタミンおよびビタミン受容体結合化合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６０】
例示的ビタミン成分としては、カルニチン、イノシトール、リポ酸、ピリドキサル、アスコルビン酸、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、リボフラビン、チアミン、ビオチン、ビタミンB12、および、脂溶性ビタミンA、D、EおよびKが挙げられる。これらのビタミン、および受容体結合性類縁体および誘導体は、ラジカルが、多価リンカーLへの共有結合のために形成されうる標的体を構成する。本明細書に記載されるビタミン受容体結合性薬剤送達結合体を形成する。ビオチン受容体に結合する例示的ビオチン類縁体として、ビオシチン、ビオチンスルホキシド、オキシビオチンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６１】
葉酸受容体に結合する例示的葉酸類縁体として、が挙げられるが、これらに限定されるものではない。フォリン酸、プテロポリグルタミン酸、およびテトラヒドロプテリン、ジヒドロ葉酸、テトラヒドロ葉酸などの葉酸受容体結合プテリジン、ならびにこれらのデアザおよびジデアザ類縁体が含まれる。用語「デアザ」および「ジデアザ」類縁体は、天然の葉酸構造またはその類縁体もしくは誘導体において、1または2個の窒素原子で置換されている炭素原子を有する当該技術で確認されている類縁体を意味する。たとえば、デアザ類縁体には、葉酸、フォリン酸、プテロポリグルタミン酸、およびテトラヒドロプテリン、ジヒドロ葉酸およびテトラヒドロ葉酸などの葉酸受容体結合プテリジンの1−デアザ、3−デアザ、5−デアザ、8−デアザおよび10デアザ類縁体が含まれる。ジデアザ類縁体には、たとえば、葉酸、フォリン酸、プテロポリグルタミン酸、およびテトラヒドロプテリン、ジヒドロ葉酸およびテトラヒドロ葉酸などの葉酸受容体結合プテリジンの1,5−ジデアザ、5,10−ジデアザ、8,10−ジデアザおよび5,8−ジデアザ類縁体が含まれる。本発明の複合体形成リガンドとして有用な他の葉酸には、葉酸受容体結合類縁体のアミノプテリン、アメトプテリン（メトトレキサートとしても知られる）、N10−メチルフォレート、2−デアミノ−ヒドロキシフォレート、１−デアザメトプテリンまたは3−デアザメトプテリンなどのデアザ類縁体および3',5'−ジクロロ−4−アミノ−4−デオキシ−N10−メチルプテロイルグルタミン酸（ジクロロメトトレキサート）が含まれる。
前述の葉酸類縁体および／または誘導体は、葉酸受容体に結合する能力を反映して慣用的に葉酸（folate）と呼ばれ、そのようなリガンドは、外来分子と結合された場合、本明細書に記載の葉酸仲介エンドサイトーシスを介するような膜貫通輸送を増強するのに効果的である。
【０１６２】
葉酸受容体に結合する追加的な葉酸の類縁体は、米国特許出願公開第2005/0227985号及び同第2004/0242582号に記載されており、これらの開示は参照として本明細書に組み込まれる。例示的に、そのような葉酸類縁体は、一般式：
2015536323.tif 000440
[式中、XおよびYは、それぞれ独立して、ハロ、R2、OR2、SR3およびNR4R5から選ばれ；
U、VおよびＷは、それぞれ独立して、−(R6a)C＝、−N＝、−(R6a)C(R7a)−および−N(R4a)−から選ばれ；Qは、CおよびCHから選ばれ；Tは、S、O、Nおよび−C＝C−から選ばれ；
A1およびA2は、それぞれ独立して、酸素、硫黄、−C(Z)−、−C(Z)O−、−OC(Z)−、−N(R4b)−、−C(Z)N(R4b)−、−N(R4b)C(Z)−、−OC(Z)N(R4b)−、−N(R4b)C(Z)O−、−N(R4b)C(Z)N(R5b)−、−S(O)−、−S(O)2−、−N(R4a)S(O)2−、−C(R6b)(R7b)−、−N(C≡CH)−、−N(CH2C≡CH)−、C1〜C12アルキレンおよびC1〜C12アルキレンオキシから選ばれ、ここでZは、酸素またはイオウであり；
R1は、水素、ハロ、C1〜C12アルキルおよびC1〜C12アルコキシから選ばれ；R2、R3、R4、R4a、R4b、R5、R5b、R6bおよびR7bは、それぞれ独立して、水素、ハロ、C1〜C12アルキル、C1〜C12アルコキシ、C1〜C12アルカノイル、C1〜C12アルケニル、C1〜C12アルキニル、（C1〜C12アルコキシ）カルボニルおよび（C1〜C12アルキルアミノ）カルボニルから選ばれ；
R6およびR7は、それぞれ独立して、水素、ハロ、C1〜C12アルキルおよびC1〜C12アルコキシから選ばれるか、またはR6およびR7は、一緒になって、カルボニル基を形成し；R6aおよびR7aは、それぞれ独立して、水素、ハロ、C1〜C12アルキルおよびC1〜C12アルコキシから選ばれるか、またはR6aおよびR7aは、一緒になって、カルボニル基を形成し；
Lは、本明細書に記載されている二価リンカーであり、そして
n、p、r、sおよびtは、それぞれ独立して、0または1である]
を有する。
【０１６３】
本明細書で用いる用語「アミノ酸」は、一般に、ベータ、ガンマおよび式：
−N(R)−(CR’R”)q−C(O)−
[式中、Rは、水素、アルキル、アシル、または、適当な窒素保護基であり、R’およびR”は、それぞれの出現において互いに独立して選ばれる水素または置換基であり、および、qは、1、2、3、4または5などの整数である]
で示されるアミノ酸などの、より長いアミノ酸を意味する。例示的には、R’および／またはR”はそれぞれ独立して、水素、または、天然のアミノ酸に存在する側鎖、たとえば、メチル、ベンジル、ヒドロキシメチル、チオメチル、カルボキシル、カルボキシルメチル、グアニジノプロピルなど、および、それらの誘導体および保護誘導体に一致するが、ただしそれらに限定されない。前述の式は、立体異性変形体を全て含む。たとえば、アミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、リシン、グルタミン、アルギニン、セリン、オルニチン、トレオニンなどから選ばれてもよい。
【０１６４】
本明細書で用いる用語「アミノ酸誘導体」は、一般に、本明細書で定義するアミノ酸を意味し、ここで、アミノ基および／または側鎖のいずれか、または両方が置換される。例示的アミノ酸誘導体は、アミン、ヒドロキシ、カルボン酸およびチオプロドラッグおよび保護基などの、アミノ基および／または側鎖のプロドラッグおよび保護基を包含する。さらなる例示的アミノ酸誘導体として、ヒドロキシ基、アミド、カルバメートのエーテルおよびエステル、およびアミノ基、エステル、アミドのウレア、およびカルボン酸基のシアノ誘導体などの本明細書に記載のアミノ酸の置換変形体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１６５】
本明細書で用いる用語「チューブリシン」は、一般に、式：
2015536323.tif 000441
[式中、
nは1〜3であり；
Vは、H、OR2またはハロであり、および、Wは、H、OR2またはアルキルであり、ここで、R2は独立して、それぞれの場合に、H、アルキルおよびC(O)R3から選ばれ、ここで、R3は、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールまたはアリールアルキル(これらのそれぞれが任意に置換される)であり；ただし、R2は、VおよびWがともにOR2であるとき、Hではなく；あるいは、VおよびWは、結合する炭素と一緒になって、カルボニルを形成し；
X＝H、C1−4アルキル、アルケニル(これらのそれぞれが任意に置換される)、または、CH2QR9であり；ここで、Qは、−O−または−S−であり；R9＝H、C1−4アルキル、アルケニル、アリールまたはC(O)R10であり；R10＝C1−6アルキル、アルケニル、アリールまたはヘテロアリールであり(これらのそれぞれが任意に置換される)；
Zはアルキルであり、および、YはOであり；あるいは、ZはアルキルまたはC(O)R4であり、および、Yは存在せず、ここで、R4は、アルキル、CF3またはアリールであり；
R1はHであるか、あるいは、R1は、ハロ、ニトロ、カルボキシラートまたはその誘導体、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、およびOR6から選ばれる1〜3個の置換基を表し、ここで、R6は、水素または任意に置換されたアリール、フェノール保護基、プロドラッグ部分、アルキル、アリールアルキル、C(O)R7、P(O)(OR8)2またはSO3R8であり、ここで、R7およびR8は独立して、それぞれの場合に、H、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびアリールアルキル(これらのそれぞれが任意に置換される)から選ばれるか、または、R8は金属カチオンであり；および、
RはOHまたは脱離基であるか、あるいは、Rはアシルヒドラジドなどのカルボン酸誘導体を形成する]
で示されるテトラペプチド化合物を意味する。
【０１６６】
前述のチューブリシンのそれぞれの結合体は、本明細書に記載される。1つの変形体では、Zはメチルである。もう1つの変形体では、R1はHである。もう1つの変形体では、R1はC(4)にてOR6であり、ここで、R6はH、アルキルまたはCOR7である。もう1つの変形体では、VはHであり、WはOC(O)R3である。もう1つの変形体では、X＝CH2QR9である。もう1つの変形体では、X＝CH2OR9である。もう1つの変形体では、R9はアルキルまたはアルケニルである。もう1つの変形体では、R9はC(O)R10である。もう1つの変形体では、R10＝任意に置換されたC1−6アルキルである。もう1つの変形体では、R10＝C1−6アルキルである。もう1つの変形体では、Rはアシルヒドラジドを形成する。前述の記載が、一般的チューブリシン構造の変形体のそれぞれの化学的に可能な組合せの明確な記載であることを理解すべきである。たとえば、前述の記載が、Zがメチルであり、およびR1がHである；R1がC(4)にてOR6であり、R6がHである；Zがメチルであり、R1がC(4)にてOR6であり、R6がHであり、およびX＝CH2OR9である；などの変形体の記載であることを理解すべきである。
【０１６７】
天然のチューブリシンは、一般に、 N−メチルピペコリン酸(Mep)、イソロイシン(Ile)、チューブバリン(tubuvalin)(Tuv)と呼ばれる非天然アミノ酸、および、チューブチロシン(tubutyrosine)(Tut、チロシンの類縁体）と呼ばれる非天然アミノ酸、または、チューブフェニルアラニン(tubuphenylalanine)(Tup、フェニルアラニンの類縁体）と呼ばれる非天然アミノ酸のどちらか、からなる直線のテトラペプチドである。もう1つの実施態様では、以下の式：
2015536323.tif 000442
[式中、R、R1およびR10は、本明細書のさまざまな実施態様で記載するとおりである]
で示される天然のチューブリシンおよびその類縁体および誘導体、およびその医薬的塩が記載される。前述のチューブリシンのそれぞれの結合体は、本明細書に記載される。
【０１６８】
もう1つの実施態様では、以下の一般式：
2015536323.tif 000443
2015536323.tif 000444
で示される天然のチューブリシンの結合体およびその医薬的塩が記載される。
【０１６９】
もう1つの実施態様では、本明細書に記載する各チューブリシンの末端カルボン酸基または末端アシルヒドラジン基にて結合体が形成される化合物が、本明細書に記載される。
【０１７０】
本明細書で用いる用語「ラパマイシン」は、シロリムス(ラパマイシン)、テムシロリムス、エベロリムスおよびリダフォロリムスならびに関連化合物、および式：
2015536323.tif 000445
[式中、
YAは、ORCまたはOCH2CH2ORCであり；
RA、RBまたはRCのうちの1つは、Lに接続された結合であり；および
RA、RBおよびRCのうちの他の2つは、独立して、それぞれの場合において、水素、任意に置換されたヘテロアルキル、プロドラッグ形成基およびC(O)RD(ここで、RDは、それぞれの場合において、独立して、水素、およびアルキル、アルケニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルから選ばれ、それぞれ、任意に置換される)から選ばれる]
で示される化合物およびその医薬的に許容しうる塩を包含すると理解される。
【０１７１】
本明細書で用いる用語「アルキル」は、任意に分枝される炭素原子の鎖を包含する。本明細書で用いる用語「アルケニル」および「アルキニル」は、任意に分枝され、それぞれ、少なくとも1つの二重結合または三重結合を包含する炭素原子の鎖を包含する。アルキニルが、1つ以上の二重結合を含んでもよいことを理解すべきである。特定の実施態様において、アルキルは、C1−C24、C1−C12、C1−C8、C1−C6およびC1−C4などの限定された長さのものが有利であることも理解すべきである。例示的に、このようなC1−C8、C1−C6およびC1−C4などの特に限定された長さのアルキル基は、低級アルキルと呼ばれる。特定の実施態様において、アルケニルおよび／またはアルキニルが、それぞれ、C2−C24、C2−C12、C2−C8、C2−C6およびC2−C4などの限定された長さのものが有利であることも理解すべきである。例示的に、このようなC2−C8、C2−C6およびC2−C4などの特に限定された長さのアルケニルおよび／またはアルキニル基は、低級アルケニルおよび／またはアルキニルと呼ばれる。本願明細書において、より短いアルキル、アルケニルおよび／またはアルキニル基が、より低い親油性を化合物に加えてもよく、したがって、異なる薬物動態挙動を有するであろうことが理解される。本明細書に記載する本発明の実施態様では、それぞれの場合において、アルキルの記述が、本明細書に定義するアルキル、および任意に低級アルキルを意味することを理解すべきである。本明細書に記載する本発明の実施態様では、それぞれの場合において、アルケニルの記述が、本明細書に定義するアルケニル、および任意に低級アルケニルを意味することを理解すべきである。本明細書に記載する本発明の実施態様では、それぞれの場合において、アルキニルの記述が、本明細書に定義するアルキニル、および任意に低級アルキニルを意味することを理解すべきである。例示的アルキル、アルケニルおよびアルキニル基として、メチル、エチル、n−プロピル、イソプロピル、n−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、2−ペンチル、3−ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなど、および1つ以上の二重および／または三重結合またはその組合せを含む対応する基が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１７２】
本明細書で用いる用語「アルキレン」は、任意に分枝される炭素原子の二価の鎖を包含する。本明細書で用いる用語「アルケニレン」および「アルキニレン」は、任意に分枝され、それぞれ少なくとも1つの二重結合および／または三重結合炭素原子の二価の鎖を包含する。アルキニレンが、1つ以上の二重結合を包含してもよいことを理解すべきである。特定の実施態様において、アルキレンが、C1−C24、C1−C12、C1−C8、C1−C6およびC1−C4などの限定された長さを有するものが有利であることもさらに理解すべきである。例示的に、このようなC1−C8、C1−C6およびC1−C4などの特に限定された長さのアルキレン基は、低級アルキレンと呼ばれる。特定の実施態様において、アルケニレンおよび／またはアルキニレンが、それぞれ、C2−C24、C2−C12、C2−C8、C2−C6およびC2−C4などの限定された長さのものが有利であることも理解すべきである。例示的に、このようなC2−C8、C2−C6およびC2−C4などの特に限定された長さのアルケニレンおよび／またはアルキニレン基は、低級アルケニレンおよび／またはアルキニレンと呼ばれる。本願明細書において、より短いアルキレン、アルケニレンおよび／またはアルキニレン基が、より低い親油性を化合物に加えてもよく、したがって、異なる薬物動態挙動を有するであろうことが理解される。本明細書に記載する本発明の実施態様では、それぞれの場合において、アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレンの記述が、本明細書に定義するアルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン、および任意に低級アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレンを意味することを理解すべきである。例示的アルキレンとして、メチレン、エチレン、n−プロピレン、イソプロピレン、n−ブチレン、イソブチレン、sec−ブチレン、ペンチレン、1,2−ペンチレン、1,3−ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１７３】
本明細書で用いる用語「シクロアルキル」は、任意に分枝される、鎖の少なくとも一部が環式である炭素原子の鎖を包含する。シクロアルキルアルキルが、シクロアルキルの一部であることを理解すべきである。シクロアルキルが、多環式であってよいことを理解すべきである。例示的シクロアルキルとして、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、2−メチルシクロプロピル、シクロペンチルエチ−2−イル、アダマンチルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書で用いる用語「シクロアルケニル」は、任意に分枝され、少なくとも1つの二重結合を含む、鎖の少なくとも一部が環式である炭素原子の鎖を包含する。1つ以上の二重結合が、シクロアルケニルの環式部分、および／またはシクロアルケニルの非環式部分にあってよいことを理解すべきである。シクロアルケニルアルキルおよびシクロアルキルアルケニルが、それぞれシクロアルケニルの部分であることを理解すべきである。シクロアルキルが、多環式であってよいことを理解すべきである。例示的シクロアルケニルとして、シクロペンテニル、シクロヘキシルエテン−2−イル、シクロヘプテニルプロペニルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。鎖形成シクロアルキルおよび／またはシクロアルケニルが、C3−C24、C3−C12、C3−C8、C3−C6およびC5−C6などの限定された長さのものであることが有利であることをさらに理解すべきである。本願明細書において、より短いアルキルおよび／またはアルケニル鎖形成シクロアルキルおよび／またはシクロアルケニルが、それぞれ、より低い親油性を化合物に加えてもよく、したがって、異なる薬物動態挙動を有するであろうことが理解される。
【０１７４】
本明細書で用いる用語「ヘテロアルキル」は、炭素および少なくとも1つのヘテロ原子の両方を包含し、任意に分枝される。例示的ヘテロ原子として、窒素、酸素およびイオウが挙げられる。特定の変形態様において、例示的ヘテロ原子として、リンおよびセレンが挙げられる。本明細書で用いる用語、ヘテロシクリルおよびヘテロ環を含む「シクロヘテロアルキル」は、炭素および少なくとも1つのヘテロ原子の両方を包含し、任意に分枝され、鎖の少なくとも一部が環式である原子の鎖を包含する。例示的ヘテロ原子として、窒素、酸素およびイオウが挙げられる。特定の変形態様において、例示的ヘテロ原子として、リンおよびセレンが挙げられる。例示的シクロヘテロアルキルとして、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、キヌクリジニルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１７５】
本明細書で用いる用語「アリール」は、それぞれ、任意に置換されてよい多環式芳香族炭素環式基を包含する。本明細書に記載する例示的芳香族炭素環式基として、フェニル、ナフチルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書で用いる用語「ヘテロアリール」は、任意に置換されてよい芳香族複素環式基を包含する。例示的芳香族複素環式基として、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、テトラジニル、キノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１７６】
本明細書で用いる用語「アミノ」は、NH2基、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ(ここで、ジアルキルアミノ中の2つのアルキル基は、同一または異なって、すなわち、アルキルアルキルアミノであってよい)を包含する。例示的に、アミノは、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノなどを包含する。さらに、アミノアルキルまたはアシルアミノのようにアミノが変更するか、またはもう1つの用語によって変更される場合、用語アミノの上述の変形態様が、包含される。例示的に、アミノアルキルとして、H2N−アルキル、メチルアミノアルキル、エチルアミノアルキル、ジメチルアミノアルキル、メチルエチルアミノアルキルなどが挙げられる。例示的に、アシルアミノとして、アシルメチルアミノ、アシルエチルアミノなどが挙げられる。
【０１７７】
本明細書で用いる用語「アミノおよびその誘導体」は、それぞれ、任意に置換される、本明細書に記載するアミノ、およびアルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、ヘテロアルケニルアミノ、ヘテロアルキニルアミノ、シクロアルキルアミノ、シクロアルケニルアミノ、シクロヘテロアルキルアミノ、シクロヘテロアルケニルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールアルケニルアミノ、アリールアルキニルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノ、ヘテロアリールアルケニルアミノ、ヘテロアリールアルキニルアミノ、アシルアミノなどを包含する。用語「アミノ誘導体」は、尿素、カルバメートなども包含する。
【０１７８】
本明細書で用いる用語「ヒドロキシおよびその誘導体」は、それぞれ、任意に置換される、OH、およびアルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、ヘテロアルケニルオキシ、ヘテロアルキニルオキシ、シクロアルキルオキシ、シクロアルケニルオキシ、シクロヘテロアルキルオキシ、シクロヘテロアルケニルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アリールアルケニルオキシ、アリールアルキニルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、ヘテロアリールアルケニルオキシ、ヘテロアリールアルキニルオキシ、アシルオキシなどを包含する。用語「ヒドロキシ誘導体」は、カルバメートなども包含する。
【０１７９】
本明細書で用いる用語「チオおよびその誘導体」は、それぞれ、任意に置換される、SH、およびアルキルチオ、アルケニルチオ、アルキニルチオ、ヘテロアルキルチオ、ヘテロアルケニルチオ、ヘテロアルキニルチオ、シクロアルキルチオ、シクロアルケニルチオ、シクロヘテロアルキルチオ、シクロヘテロアルケニルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ、アリールアルケニルチオ、アリールアルキニルチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロアリールアルキルチオ、ヘテロアリールアルケニルチオ、ヘテロアリールアルキニルチオ、アシルチオなどを包含する。用語「チオ誘導体」は、チオカルバメートなども包含する。
【０１８０】
本明細書で用いる用語「アシル」は、それぞれ、任意に置換される、ホルミル、およびアルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、ヘテロアルキルカルボニル、ヘテロアルケニルカルボニル、ヘテロアルキニルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルケニルカルボニル、シクロヘテロアルキルカルボニル、シクロヘテロアルケニルカルボニル、アリールカルボニル、アリールアルキルカルボニル、アリールアルケニルカルボニル、アリールアルキニルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアリールアルキルカルボニル、ヘテロアリールアルケニルカルボニル、ヘテロアリールアルキニルカルボニル、アシルカルボニルなどを包含する。
【０１８１】
本明細書で用いる用語「カルボニルおよびその誘導体」は、基C(O)、C(S)、C(NH)およびその置換アミノ誘導体を包含する。
【０１８２】
本明細書で用いる用語「カルボン酸およびその誘導体」は、基CO2Hおよびその塩、ならびにそのエステルおよびアミド、およびCNを包含する。
【０１８３】
本明細書で用いる用語「任意に置換された」は、任意に置換されるラジカル上の水素原子と他の官能基の置換を包含する。このような他の官能基として、例示的に、アミノ、ヒドロキシル、ハロ、チオール、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。例示的に、任意のアミノ、ヒドロキシル、チオル、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキルおよび／またはスルホン酸は、任意に置換される。
【０１８４】
本明細書で用いる用語「任意に置換されたアリール」および「任意に置換されたヘテロアリール」は、任意に置換されるアリールまたはヘテロアリール上の水素原子と他の官能基の置換を包含する。このような他の官能基として、例示的に、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。例示的に、任意のアミノ、ヒドロキシ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキルおよび／またはスルホン酸は、任意に置換される。
【０１８５】
例示的置換基として、ラジカル−(CH2)xZX(ここで、xは、0−6の整数であり、ZXは、ハロゲン、ヒドロキシ、アルカノイルオキシ、たとえばC1−C6 アルカノイルオキシ、任意に置換されたアロイルオキシ、アルキル、たとえばC1−C6アルキル、アルコキシ、たとえばC1−C6アルコキシ、シクロアルキル、たとえばC3−C8シクロアルキル、シクロアルコキシ、たとえばC3−C8シクロアルコキシ、アルケニル、たとえばC2−C6アルケニル、アルキニル、たとえばC2−C6アルキニル、ハロアルキル、たとえばC1−C6ハロアルキル、ハロアルコキシ、たとえばC1−C6ハロアルコキシ、ハロシクロアルキル、たとえばC3−C8ハロシクロアルキル、ハロシクロアルコキシ、たとえばC3−C8ハロシクロアルコキシ、アミノ、C1−C6アルキルアミノ、(C1−C6アルキル)(C1−C6アルキル)アミノ、アルキルカルボニルアミノ、N−(C1−C6アルキル)アルキルカルボニルアミノ、アミノアルキル、C1−C6アルキルアミノアルキル、(C1−C6アルキル)(C1−C6アルキル)アミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、N−(C1−C6アルキル)アルキルカルボニルアミノアルキル、シアノおよびニトロから選ばれる；またはZXは、−CO2R4および−CONR5R6(ここで、R4、R5およびR6は、それぞれ、独立して、それぞれの場合、水素、C1−C6アルキル、アリール−C1−C6アルキルおよびヘテロアリール−C1−C6アルキルから選ばれる)から選ばれる)が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１８６】
たとえば、細胞表面受容体および／または標的化リガンドおよび／または独立して選ばれる薬物に関して本明細書で用いる用語「ラジカル」は、ヘテロ原子上の1つ以上の水素原子またはアルキル基などの原子または基が除去されて、多価リンカーLに結合するためのラジカルを提供する、本明細書に記載の細胞表面受容体および／または標的化リガンドおよび／または独立して選ばれる薬物を意味する。このようなリガンドラジカルおよび薬物ラジカルは、本明細書において、それぞれ、リガンド類縁体および薬物類縁体とも呼ばれてよい。
【０１８７】
本明細書で用いる用語「脱離基」は、求核試薬が原子上の求電子部位に付加されうるように結合される、原子上に求電子部位を生成する反応性官能基を意味する。例示的脱離基として、ハロゲン、任意に置換されたフェノール、アシルオキシ基、スルホンオキシ基などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。このような脱離基は、アルキル、アシルなどであってよいことを理解すべきである。このような脱離基は、本明細書において、脱離基がアシル上に存在する場合など、活性化基とも呼ばれてよい。さらに、限定的ではないが、PyBop、BOP−Cl、BOP、ペンタフルオロフェノール、イソブチルクロロホルメートなどの従来のペプチド、アミドおよびエステルカップリング剤が、カルボニル基上の本明細書に定義する脱離基を含む、さまざまな中間体を形成する。
【０１８８】
本明細書に開示されるすべての場合において、可変部のための整数の範囲の記述は、記述された範囲のすべての個々のメンバーおよび可変部のためのすべての可能な部分範囲を記載することを理解すべきである。たとえば、nが0〜8の整数であるという記述は、範囲、0、1、2、3、4、5、6、7および8の個々の値およびnが0、またはnが1、またはnが2であるなどの選択しうる値を記載する。さらに、nが0〜8の整数であるという記述は、nが1〜8、1〜7、1〜6、2〜8、2〜7、1〜3、2〜4の整数であるといったような、さらなる実施態様に基づいてよい、各およびすべての部分範囲も記載する。
【０１８９】
本明細書で用いる用語「組成物」は、一般に、特定の量の特定の成分を含む任意の生成物から、ならびに特定の量の特定の成分の組合せから、直接または間接的に得られる任意の生成物を意味する。本明細書に記載する組成物が、本明細書に記載する単離された化合物、またはその塩、溶液、水和物、溶媒和物および本明細書に記載する化合物のその他の形態から製造されうることを理解すべきである。ヒドロキシ、アミノなどの特定の官能基が、化合物のさまざまな物理的形態で、錯体、および／または水および／またはさまざまな溶媒との配位化合物を形成することが理解される。組成物が、本明細書に記載する化合物のさまざまなアモルファス、非アモルファス、部分結晶、結晶性および／または他の形態学的形態から製造されうることも理解すべきである。組成物が、本明細書に記載する化合物のさまざまな水和物および／または溶媒和物から製造されうることも理解すべきである。したがって、本明細書に記載する化合物を記述するこのような医薬組成物は、本明細書に記載する化合物のさまざまな形態学的形態および／または溶媒和物または水和物形態の個々、あるいは任意の組合せを包含すると理解されるべきである。さらに、組成物が、本明細書に記載する化合物のさまざまな共結晶から製造されうることを理解すべきである。
【０１９０】
例示的に、組成物は、1種以上の担体、希釈剤および／または賦形剤を包含してもよい。本願明細書に記載する化合物またはそれらを含む組成物は、本明細書に記載する方法に適した任意の従来の投与剤形において治療有効量で製剤されてもよい。本願明細書に記載する化合物またはそのような製剤などのそれらを含む組成物は、既知の手順(一般に、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、(21st編、2005)を参照)を用い、本明細書に記載する方法のための広範な従来の経路で、および広範な投与剤形で、投与することができる。
【０１９１】
本明細書で用いる用語「治療有効量」は、治療される疾患または障害の症状の緩和などの、研究者、獣医師、医師またはその他および／またはの臨床医によって求められる、組織系、動物またはヒトにおける生物学的または医薬的応答を引き起こす活性化合物または医薬品の量を意味する。1つの態様では、治療有効量は、任意の医療に適用しうる合理的な利点／リスク比で、疾患または疾患の症状を治療または緩和しうる量である。しかしながら、本明細書に記載する化合物および組成物の総位置日用量は、健全な医学的判断の範囲内で、主治医によって決定されうることを理解すべきである。任意の特定の患者のための特定の治療有効用量レベルは、治療される障害および障害の重篤度；用いられる特定の化合物の活性；用いられる特定の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、患者の性別および食事療法；用いられる特定の化合物の投与時間、投与経路および除去速度；治療期間；用いられる特定の化合物と併用または同時に用いた薬物；および当技術分野における研究者、獣医師、医師または他の臨床医に周知の同様の因子；などのさまざまな因子に応じて変わる。
【０１９２】
本明細書で用いる用語「投与する」は、患者に、本明細書に記載する化合物および組成物を導入するすべての手段を包含し、経口(po)、静脈内(iv)、筋肉内(im)、皮下(sc)、経皮、吸入、口腔内、眼内、舌下、膣内、直腸などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書に記載する化合物および組成物は、従来の非毒性の医薬的に許容しうる担体、補助剤およびビヒクルなどを含む単位投与剤形および／または製剤で投与することができる。
【０１９３】
経口投与のための例示的形式として、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤などが挙げられる。
【０１９４】
非経口投与のための例示的経路として、静脈内、動脈内、腹腔内、硬膜外、尿道内、胸骨内、筋肉内および皮下、ならびに当技術分野で認められた任意の他の非経口投与経路が挙げられる。
【０１９５】
本明細書に記載する疾患、投与経路、および／または、化合物および／または組成物が局所的または全身的に投与されるかどうかに応じて、約1 μg/kg〜約1 g/kgの範囲の用量といったような広範な許容投薬が本明細書において企図される。投薬は、1回であるかまたは分割されてよく、q.d.(1日1回)、b.i.d.(1日2回)、t.i.d.(1日3回)、あるいは1日おき、週1回、月1回、四半期に1回などの広範なプロトコルにしたがって投与されてよい。これらの場合のそれぞれにおいて、本明細書に記載する治療有効量が、投与の例に対応するか、または投与プロトコルによって決定される総1日、1週、1か月もしくは四半期用量に対応することが理解される。
【０１９６】
本明細書で用いる用語「プロドラッグ」は、一般に、生体系に投与された場合に、1つ以上の自発的化学反応、酵素触媒化学反応および／または代謝的化学反応、またはそれらの組合せの結果として、生物学的に活性な化合物を生み出す任意の化合物を意味する。インビボでは、プロドラッグは、典型的に、酵素(エステラーゼ、アミダーゼ、ホスファターゼなど)、単純な生化学またはインビボにおけるその他の工程によって作用を受けて、薬学的により活性な薬物を遊離または再生成させる。この活性化は、内因性宿主酵素またはプロドラッグの投与前、投与後もしくは投与中に宿主に投与される非内因性酵素の作用を介して起こりうる。プロドラッグのさらなる詳細は、米国特許第5,627,165号；およびPathalkら、Enzymic protecting group techniques in organic synthesis、Stereosel. Biocatal. 775−797(2000)に記載されている。プロドラッグが、標的化送達、安全性、安定性などの目標が達成されるとすぐに、もとの薬物に有利に変換され、プロドラッグ形成基の開放された残りが迅速に除去されることが理解される。
【０１９７】
プロドラッグは、−OH−、−SH、−CO2H、−NR2などの、化合物上に存在する1つ以上の官能基にインビボで最終的に開裂される基を結合させることによって、本明細書に記載する化合物から製造することができる。例示的プロドラッグとして、基がアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキルである場合、カルボン酸エステル、ならびに、結合された基がアシル基、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、ホスフェートまたはスルフェートである場合、ヒドロキシル、チオールおよびアミンのエステルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。活性エステルとも呼ばれる例示的エステルとして、1−インダニル、N−オキシスクシンイミド；アシルオキシアルキル基、たとえばアセトキシメチル、ピバロイルオキシメチル、β−アセトキシエチル、β−ピバロイルオキシエチル、1−(シクロヘキシルカルボニルオキシ)プロプ−1−イル、(1−アミノエチル)カルボニルオキシメチルなど；アルコキシカルボニルオキシアルキル基、たとえばエトキシカルボニルオキシメチル、α−エトキシカルボニルオキシエチル、β−エトキシカルボニルオキシエチルなど；ジ低級アルキルアミノアルキル基などのジアルキルアミノアルキル基、たとえばジメチルアミノメチル、ジメチルアミノエチル、ジエチルアミノメチル、ジエチルアミノエチルなど；2−(アルコキシカルボニル)−2−アルケニル基、たとえば2−(イソブトキシカルボニル)ペント−2−エニル、2−(エトキシカルボニル)ブト−2−エニルなど；およびラクトン基、たとえばフタリジル、ジメトキシフタリジルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１９８】
さらなる例示的プロドラッグは、本明細書に記載する化合物の溶解度および／または安定性を増加させるように機能するアミドまたはリン基などの化学的部分(chemical moiety)を含む。アミノ基のためのさらなる例示的プロドラッグとして、(C3−C20)アルカノイル；ハロ−(C3−C20)アルカノイル；(C3−C20)アルケノイル；(C4−C7)シクロアルカノイル；(C3−C6)−シクロアルキル(C2−C16)アルカノイル；任意に置換されたアロイル、たとえば非置換アロイルまたはハロゲン、シアノ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、(C1−C3)アルキルおよび(C1−C3)アルコキシ(それぞれ、1つ以上の1〜3個のハロゲン原子で任意に置換される)から選ばれる1〜3個の置換基で置換されたアロイル；任意に置換されたアリール(C2−C16)アルカノイルおよび任意に置換されたヘテロアリール(C2−C16)アルカノイル、たとえば非置換であるかまたはハロゲン、(C1−C3)アルキルおよび(C1−C3)アルコキシ(それぞれ、1〜3個のハロゲン原子でさらに任意に置換される)から選ばれる1〜3個の置換基で置換されたアリールまたはヘテロアリールラジカル；およびヘテロアリール部分にO、SおよびNから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を有し、アルカノイル部分に2〜10個の炭素原子を有する任意に置換されたヘテロアリールアルカノイル、たとえば非置換であるかまたはハロゲン、シアノ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、(C1−C3)アルキルおよび(C1−C3)アルコキシ(それぞれ、1〜3個のハロゲン原子でさらに任意に置換される)から選ばれる1〜3個の置換基で置換されたヘテロアリールラジカル；が挙げられるが、これらに限定されるものではない。例示された基は、例示的であって、網羅的ではなく、従来の工程によって製造されうる。
【０１９９】
プロドラッグ自体が、重要な生物活性を持たなくてもよいが、インビボ投与後に、1つ以上の自発的化学反応、酵素触媒化学反応および／または代謝的化学反応、またはそれらの組合せを受けて、生物学的に活性であるか、または生物学的に活性な化合物の前駆体である本明細書に記載する化合物を生成することができることが理解される。しかしながら、幾つかの場合では、プロドラッグが生物学的に活性であることが理解される。プロドラッグが、改善された経口バイオアベイラビリティ、薬力学的半減期などを介して、薬効または安全性を改善するのに役立つことができることが多いことも理解される。プロドラッグは、望ましくない薬物特性を単にマスクするか、または薬物送達を改善する基を包含する本明細書に記載する化合物の誘導体という意味も有する。たとえば、1つ以上の本明細書に記載する化合物は、遊離に遮断または最小化され、低経口薬物吸収、部位特異性の欠如、化学的不安定性、毒性および患者の承諾性が乏しいこと(嫌な味、悪臭、注射部位の痛みなど)およびその他のものなどの臨床薬物適用における薬理学的、医薬的または薬物動態的バリヤーになりうる望ましくない特性を示してもよい。プロドラッグ、または可逆的誘導体を用いるその他の方策が、薬物の臨床適用の最適化において有用であることが本明細書において理解される。
【０２００】
本明細書に記載する化合物、リンカー、中間体および結合体は、国際出願番号 WO 2009/002993、WO 2004/069159、WO 2007/022494およびWO 2006/012527、および米国特許出願番号 13/837539(2013年3月15日出願)に記載されているような従来の工程を用いて製造されうる。上述の文献のそれぞれの開示は、その全体において参照することによって本明細書に援用される
【０２０１】
本明細書に引用した各文献は、参照することによって本明細書に援用される
【０２０２】
以下の実施例は、本発明の特定の実施態様をさらに説明するが、以下の例示的実施例は、いかなる方法でも本発明を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２０３】
化合物実施例
本明細書に記載する化合物は、本明細書に記載する工程および合成を用いて、ならびに一般的有機合成法を用いて、製造されうる。さらに詳しくは、該化合物を製造するための方法は、米国特許出願公開公報2005/0002942(その開示は、参照することによって本明細書に援用される)に記載される。
【０２０４】
実施例：葉酸−ペプチドの一般的形成。以下の反応工程式に示すように、酸感受性Fmoc−AA−Wang樹脂(1)上のFmoc−方策などの標準的方法を用いるポリマーサポート逐次的アプローチによって、葉酸−含有ペプチジルフラグメント Pte−Glu−(AA)n−NH(CHR2)CO2H(3)を製造する。
【０２０５】
反応工程式
2015536323.tif 000446
(a)20% ピペリジン/DMF；(b)Fmoc−AA−OH、PyBop、DIPEA、DMF；(c)Fmoc−Glu(O−t−Bu)−OH、PyBop、DIPEA、DMF；(d)1. N10(TFA)−Pte−OH；PyBop、DIPEA、DMSO；(e)TFAA、(CH2SH)2、i−Pr3SiH；(f)NH4OH、pH 10.3。
【０２０６】
非天然アミノ酸が、適当な出発物質を用いる前述の工程に包含されてよいことを理解すべきである。
【０２０７】
本明細書に記載する工程のこの例示的実施態様では、R1はFmocであり、R2は所望の適当に保護されたアミノ酸側鎖であり、DIPEAはジイソプロピルエチルアミンである。PyBOPおよび本明細書に記載もしくは当技術分野で既知のその他のものなどの標準的カップリング手順が用いられ、ここで、カップリング剤は、活性化試薬として例示的に適用されて、効率的カップリングを確実にする。Fmoc保護基は、ピペリジン、テトラブチルアンモニウムフルオリド(TBAF)での処理などの標準的条件下、各カップリングステップ後に除去される。Fmoc−Glu−OtBu、Fmoc−D−Glu−OtBu、N10−TFA−Pte−OHなどの適切に保護されたアミノ酸ビルディングブロックは、反応工程式に記載のとおり用いられ、ステップ(b)においてはFmoc−AA−OHによって表される。このようにAAは、任意のアミノ酸出発物質を意味し、適切に保護される。本明細書で用いるアミノ酸が、1つ以上の炭素によって分離されたアミンおよびカルボン酸官能基を有する任意の試薬を意味することを企図され、天然のアルファおよびベータアミノ酸ならびにこれらのアミノ酸のアミノ酸誘導体および類縁体を包含することを理解すべきである。特に、保護されたセリン、トレオニン、システイン、アスパラギン酸などの保護された側鎖を有するアミノ酸は、本明細書に記載する葉酸−ペプチド合成においても使用されてよい。さらに、ガンマ、デルタまたはより長い同族アミノ酸が、本明細書に記載する葉酸−ペプチド合成における出発物質として包含されることもできる。さらに、ノルロイシン、イソバリン、β−メチルトレオニン、β−メチルシステイン、β,β−ジメチルシステインなどの同族側鎖または代替の分枝構造を有するアミノ酸類縁体が、本明細書に記載する葉酸−ペプチド合成における出発物質として包含されることもできる。
【０２０８】
固体サポートペプチド(2)を製造するために、Fmoc−AA−OHが関与するカップリングシーケンス(ステップ(a)および(b))は、n回行われるが、ここで、nは整数であり、0〜約100であってよい。最後のカップリングステップの後、残りのFmoc基は除去され(ステップ(a))、ペプチドは、グルタミン酸誘導体に連続的にカップリングされ(ステップ(c))、脱保護され、TFA−保護プテロイン酸にカップリングされる(ステップ(d))。続いて、ペプチドは、トリフルオロ酢酸、エタンジチオールおよびトリイソプロピルシラン処理によりポリマーサポートから切断される(ステップ(e))。これらの反応条件は、適切に保護されたアミノ酸側鎖の部分を形成しうるt−Bu、t−BocおよびTrt保護基の同時除去をもたらす。TFA保護基は、塩基で処理することにより除去され(ステップ(f))、葉酸含有ペプチジルフラグメント(3)が提供される。
【０２０９】
2015536323.tif 000447
EC119
LCMS [ESI [M＋H]+：1046；部分1H NMR (D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)、4.40−4.75(series of m、5H)、4.35(m、2H)、4.16(m、1H)、3.02(m、2H)、2.55−2.95(series of m、8H)、2.42(m、2H)、2.00−2.30(m、2H)、1.55−1.90(m、2H)、1.48(m、2H)ppm。
【０２１０】
実施例：以下の化合物などの1つ以上のD−アミノ酸を含有する対応する化合物もまた、製造することができる：
2015536323.tif 000448
EC1213
LCMS [ESI、 [M+H]+1) 1046。部分1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.6(d)、3.8−4.6(m)、2.8−3.2(m)、2.2−2.8(m)、1−2.2(m)
【０２１１】
2015536323.tif 000449
EC0835
MS(ESI、[M+H]+1) ＝1046.5。部分1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.6(d)、3.8−4.6(m)、2.8−3.2(m)、2.2−2.8(m)、1−2.2(m)
【０２１２】
2015536323.tif 000450
EC819
MS(ESI、[M+H]+1)＝1046.4。部分1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.6(d)、6.6(d)、4−4.6(m)、3.4−3.8(m)、3−3.15(m)、1−2.8(m)
【０２１３】
2015536323.tif 000451
EC259
[M+H]+＝1047.52。部分1H NMR(D2O)：8.6(s、1H)、7.5(d、2H)、6.65(d、2H)、4.4(dd、2H)、4.18(m、4H)、2.9(t、2H)、2.75(t、2H)、2.6−2.15(m、10H)、2.1−1.8(m、3H)、1.7−1.4(m、3H)、1.3(m、3H)。
【０２１４】
2015536323.tif 000452
EC1544
MS(ESI [M＋H]+)：1046。部分1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ(ppm)8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２１５】
2015536323.tif 000453
EC1547
MS(ESI、[M＋H]+)＝1046.7。 部分1H−NMR(D2O)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.6(d)、4.4−4.8(m)、4−4.2(m)2.2−3(m)、1.8−2.2(m)、1.3−1.7(m)
【０２１６】
2015536323.tif 000454
および
2015536323.tif 000455
。
【０２１７】
実施例：チューブリシンヒドラジドの製造。EC0347(TubB−H)を製造することによって例示される。
2015536323.tif 000456
EC0347
無水EtOAc(2.0 mL)中のチューブリシンB(0.15 mg)溶液に、N,N−ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA、6.1 μL)およびクロロギ酸イソプチル(3.0 μL)を−15℃にてシリンジで順に加えた。アルゴン下、−15℃にて45分間攪拌した後、反応混合物を−20℃に冷却し、無水ヒドラジン(5.0 μL)を加えた。アルゴン下、−20℃にて3時間、反応混合物を攪拌し、1.0 mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH 7.0、1.0 mL)を加えて反応を停止し、プレパラティブHPLCに注入して精製した。カラム：Waters XTerra Prep MS C18 10 μm、19ｘ250 mm；移動相A：1.0 mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH 7.0；移動相B：アセトニトリル；方法：20分間かけて、10%B〜80%B、流速＝25mL/分。15.14−15.54分からの画分を集め、凍結乾燥して、EC0347を白色固体(2.7 mg)で製造した。上述の方法は、チューブリシン出発化合物の適切な選択によって、他のチューブリシンヒドラジドを製造するために等しく適用可能である。
【０２１８】
実施例：カップリング試薬EC0311の合成。
2015536323.tif 000457
無水DCM(5.0 mL)中のHOBt−OCO2−(CH2)2−SS−2−ピリジンHCl(685 mg、91%)の懸濁液に、0℃にてDIPEA(0.60 mL)を加え、アルゴン下で2分間攪拌し、無水ヒドラジン(0.10 mL)を加えた。反応混合物を、アルゴン下、0℃にて10分間攪拌し、室温にてさらに30分間攪拌し、ろ過し、ろ液をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中の2% MeOH)によって精製して、EC0311を透明濃厚油状物(371 mg)で得、静置して固化させた。
【０２１９】
実施例：チューブリシンジスルフィドの製造(段階的工程)。
2015536323.tif 000458
EC0312のための例示。無水EtOAc(2.0 mL)中のチューブリシンB(82 mg)の溶液に、DIPEA(36 μL)およびクロロギ酸イソプチル(13 μL)を−15℃にてシリンジで順に加えた。アルゴン下、−15℃にて45分間攪拌した後、反応混合物に無水EtOAc(1.0 mL)中のEC0311の溶液を加えた。得られる溶液を、アルゴン下、−15℃にて15分間攪拌し、室温にてさらに45分間攪拌し、濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中の2〜8% MeOH)によって精製して、EC0312を白色固体(98 mg)で得た。上述の方法は、チューブリシン出発化合物の適切な選択によって、他のチューブリシンヒドラジドを製造するために等しく適用可能である。
【０２２０】
実施例：
2015536323.tif 000459
DCM(4 ml)中のドキソルビシン(100 mg、0.184 mmol)および2−[ベンゾトリアゾール−1−イル−(オキシカルボニルオキシ)−エチルジスルファニル]−ピリジン(77.8 mg、0.184 mmol)の溶液に、DIPEA(0.064 ml、0.368 mmol)を加えた。反応物を2時間攪拌した。TLC(DCM中の10% MeOH)は、反応の完了を示した。DCMを減圧除去し、 SiO2カラム(DCM中の10% MeOH)で精製して、純粋な生成物(90 mg、65%)を得た。LCMS(ESI)：(M＋H)+ 計算値：C35H36N2O13S2、757.17；実測値 757.30、1H NMR(300 MHz、CDCl3/CD3OD)：δ 8.44(br s、1H)、8.00(d、1H)、7.65−7.82(m、 3H)、7.38(d、1H)、7.18(br s、1H)、5.45(s、1H)、5.25(s、3H)、4.70(m、2H)、4.3(m、1H)、4.22−3.90(m、2H)、3.75(s、1H)、3.62(s、1H)、3.35−2.90(m、2H)、2.45−2.10(m、2H)、1.85(m、5H)、1.32(d、3H)。
【０２２１】
実施例：チューブリシンBピリジルジスルフィド。
2015536323.tif 000460
同様に、本明細書に記載のように、チューブリシンBピリジルジスルフィドを製造する。
【０２２２】
実施例：
2015536323.tif 000461
EC1577
MS(ESI、[M＋H]+)＝1681。部分1H NMR(D2O)：8.96(s)、7.65(d)、6.81(d)、4.66(s)、4.40−4.15(m)、3.90−3.54(m)、3.50−3.18(m)、2.97−2.90(m)、2.51−1.80(m)。
【０２２３】
実施例：ジスルフィド含有チューブリシン結合体の一般的合成。
2015536323.tif 000462
R1がHまたはOHであり、R10がアルキルまたはアルケニルである特定の天然のチューブリシンのピリジニルジスルフィド誘導体によって例示される。チオール基を含む結合リガンド−リンカー中間体を脱イオン水に入れ(約20 mg/mL、使用前にアルゴン通気10分間)、懸濁液のpHを飽和NaHCO3(約20 mg/mL、使用前にアルゴン通気10分間)によって、約6.9ぶ調節した(懸濁液は、pHが上昇すると溶液になる)。溶液に、必要に応じて追加の脱イオン水を加え(約20−25%)、水性溶液に、THF中のEC0312の溶液(約20 mg/mL)をただちに加える。反応混合物は、急速に均質になる。アルゴン下、たとえば、45分間攪拌した後、反応混合物を2.0 mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH 7.0、約150体積パーセント)で希釈し、排気によってTHFを除去する。得られる懸濁液をろ過し、ろ液をプレパラティブHPLC(本明細書に記載のように)によって精製してもよい。画分を凍結乾燥して、結合体を単離する。上述の方法は、チューブリシン出発化合物の適切な選択によって、他のチューブリシン結合体を製造するために等しく適用可能である。
【０２２４】
実施例：EC1663およびEC1664。以下のさらなる化合物が、本明細書に記載する方法を用いて製造可能である：
2015536323.tif 000463
【０２２５】
実施例：EC1426は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000464
【０２２６】
実施例：EC1456は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000465
【０２２７】
実施例：N10−TFA保護EC1454は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000466
【０２２８】
実施例：EC1454は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000467
EC1454：MS(ESI、[M+2H]2+)＝840.90、[M+H]+＝1681.3。部分1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.45(s)、4.35(t)、4.15−4.3(m)、3.3−3.6(m)、3.25(m)、3.0(m)、2.7−2.9(m)、2−2.3(m)、1.6−2(m)。
【０２２９】
2015536323.tif 000468
EC1415：[M＋H]+＝1709.69、[M+2H]2+＝855.22。部分1H NMR(D2O、300 MHz) δ(ppm)：8.6(s、1H)、7.45(d、2H)、6.5(d、2H)、4.5(s、2H)、4.3−4.1(m、6H)、3.95(t、1H)、3.8−3.4(m、19H)、3.4−2.95(m、7H)、2.4−1.7(m、26H)、1.6(m、1H)、1.25(s、2H)、1.05(s、3H)。
【０２３０】
実施例：EC1004は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000469
【０２３１】
磁気攪拌棒および温度プローブを備えた丸底フラスコに、ジペプチドEC1458、イミダゾールおよび塩化メチレンを加える。いったんすべての固体が溶解したら、溶液を氷浴で冷却する。クロロトリエチルシラン(TESCl)を滴下し、氷浴を除去する。反応の完了をモニターする。クロロトリエチルシランおよび／またはイミダゾールの第2の部分を必要に応じて加える。イミダゾールHCl塩をろ去し、塩化メチレンを加える。塩化ナトリウムの飽和溶液(塩水)で有機物を洗浄し、水性層を塩化メチレンで1回逆抽出し、有機層を合わせ、塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、回転蒸発器で濃縮する。残渣をテトラヒドロフラン(THF)に溶解し、およそ−45℃に冷却する。トルエン中のカリウムビス(トリメチルシリル)アミド(KHMDS)の溶液を滴下する。攪拌しながら、酪酸クロロメチルを加え、反応をモニターする。メタノールを加えて反応を停止し、次いで、酢酸エチルおよび塩水を加える。水性層を捨て、有機物を塩水で1回洗浄する。有機層を回転蒸発器で濃縮し、油状残渣をシリカゲルのショートプラグに通す。プラグを、石油エーテル中の酢酸エチルの20%溶液で洗浄する。合わせた有機物を、蒸留が止まるまで、回転蒸発器で濃縮する。粗EC1004油状物を、LCおよびNMRによって分析し、使用するまで冷凍庫で保管する。
【０２３２】
実施例：EC1005は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000470
適当な大きさの水素添加フラスコに、R−N−メチルピペコリネート(MEP)、ペンタフルオロフェノール、N−メチルピロリジノン(NMP)およびエチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド(EDC)を入れる。混合物を少なくとも16時間攪拌する。N−メチルピロリジノン(NMP)に溶解したEC1004および10 wt% Pd/Cを加える。反応混合物を、水素圧下、LC分析によって反応が完了するまで攪拌／振とうする。セライトを通して、Pd/Cをろ去する。セライトを酢酸エチルで洗浄し、合わせた有機物を、1%重炭酸ナトリウム／10%塩化ナトリウム溶液で3回洗浄する。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、回転蒸発器で濃縮する。残渣をDCMに溶解し、溶離液として酢酸エチルおよび石油エーテルを用いるシリカゲルクロマトグラフィーによって精製する。画分を集め、純度を検査し、合わせ、回転蒸発器で乾燥させる。油EC1005状物を、LCによってアッセイし、使用するまで冷凍庫で保管する。
【０２３３】
実施例：EC1008は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000471
EC1005を、に1,2−ジクロロエテン(DCE)溶解し、水酸化トリメチルチンを加える。反応混合物を加熱し、LCによって反応をモニターする。完了後、混合物を氷浴で冷却し、ろ過する。次いで、固体をDCEで洗浄する。有機層を水で1回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥する。溶液を回転蒸発器で濃縮し、残渣をテトラヒドロフラン(THF)に溶解する。トリエチルアミントリヒドロフルオリドを加え、混合物を、LCでモニターしながら攪拌する。ピリジン、ジメチルアミノピリジン(DMAP)および酢酸無水物を加える。反応物を攪拌し、LCによってモニターする。反応混合物を濃縮して残渣にし、生成物を、溶離液としてアセトニトリルおよび水を用いるC18カラムクロマトグラフィーによって精製する。生成物画分を集め、濃縮し、凍結乾燥して、白色〜オフホワイトの粉末を得る。
【０２３４】
実施例：EC1426は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000472
EC1422を、テトラヒドロフラン(THF)に溶解し、(ベンゾトリアゾール−1−イルオキシ)トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(PyBop)およびジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を加える。すべての固体が溶解したら、ヒドラジンを加え、反応物を攪拌し、完了をモニターする。EC0607を加え、混合物を攪拌し、完了をLCによってモニターする。酢酸エチルを加え、有機物を、飽和塩化アンモニウムで1回、飽和重炭酸ナトリウムで2回、そして飽和塩化ナトリウムで1回洗浄する。有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥し、回転蒸発器で濃縮する。粗EC1426を、溶離液としてジクロロメタンおよびメタノールを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製する。画分を集め、合わせた生成物画分を回転蒸発器で濃縮して、黄色固体を得る。
【０２３５】
実施例：EC1428は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000473
EC1008をジクロロメタンに溶解し、DCMに溶解したペンタフルオロフェノールをN−シクロヘキシルカルボジイミド, N’−メチルポリスチレン(DCC−樹脂)とともに加える。混合物を攪拌し、反応の完了をLCによってモニターする。混合物をろ過して、樹脂を除去し、有機層を回転蒸発器で濃縮して、活性化EC1008を得る。別のフラスコにおいて、EC1426をジクロロメタンに溶解し、トリフルオロ酢酸を加える。反応混合物を攪拌し、によって完了をモニターする。反応混合物を回転蒸発器で濃縮して、脱保護EC1426を得る。活性化EC1008を、DMFに溶解し、ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を加える。脱保護EC1426をDMFに溶解し、反応混合物に加える。反応物を攪拌し、LCによって完了をモニターする。酢酸エチルを加え、有機物を飽和ｚ水性塩化ナトリウムで3回洗浄する。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、揮発物を回転蒸発器で除去する。粗EC1428を、溶離液としてジクロロメタンおよびメタノールを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製する。画分を集め、純度を検査し、合わせた生成物画分を回転蒸発器で濃縮して、黄色固体を得る。EC1428を冷凍庫で保管する。
【０２３６】
実施例：WO2012/019123、WO2009/055562、国際出願番号US2013/034672および米国仮出願番号61/793082(それぞれの開示は、その全体において参照することによって本明細書に援用される)に記載の工程にしたがって、さらなるチューブリシンおよびチューブリシン中間体を製造することができる。
【０２３７】
実施例：例示的チューブリシンは、以下のとおりである：
2015536323.tif 000474
【０２３８】
実施例：EC1454は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000475
N10−TFA保護EC1454の固相合成は、樹脂結合トリチル保護D−システインにより開始される。樹脂を、ジメチルホルムアミド(DMF)に懸濁し、DMFで2回洗浄する。反応混合物に、EC0475(グルタミン修飾L−グルタミン酸)、(ベンゾトリアゾール−1−イルオキシ)トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(PyBOP)およびジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を加える。少なくとも1時間後、カイザー試験を行って、カップリングが完了したことを確実にする。樹脂を、DMFで3回、IPAで3回およびDMFで3回洗浄する。樹脂を、DMF中のピペリジンで3回、DMFで3回およびIPAで3回ゆっくりと洗浄する。カイザー試験を行って、脱保護が完了したことを確認する。樹脂をDMFで3回洗浄し、シーケンス中の次のアミノ酸を、同じ工程にしたがってカップリングさせる。以下の順序で、モノマーをカップリングさせる：1)EC0475、2)Fmoc−D−Glu(OtBu)−OH、3)EC0475、 4)Fmoc−D−Glu(OtBu)−OH、5)EC0475、6)Fmoc−D−Glu−OtBuおよび7)N10−TFA−Pte−OH。
【０２３９】
最終カップリングが完了すれば、樹脂をメタノールで3回洗浄し、室温にて樹脂にアルゴンを通気して乾燥させる。乾燥した樹脂をTFA、水、エタンジチオールおよびトリイソプロピルシランの混合物に懸濁する。1時間後、樹脂をろ去し、TFAで洗浄する。冷エチルエーテルを加えて生成物を沈殿させ、ろ過し、エーテルで洗浄する。固体を室温にて減圧乾燥し、冷凍庫で保管する。
【０２４０】
2015536323.tif 000476
N10−TFA EC1454を、アルゴンスパージ水に溶解する。炭酸ナトリウム(1M水溶液、アルゴンスパージ)を加えて、pHを9.4〜10.1にする。反応混合物を少なくとも20分間攪拌する。LCにより反応の完了が決定すれば、2M HClでpHを1.9〜2.3に調節して反応を停止させる。溶離液としてアセトニトリルおよびpH5の酢酸アンモニウム緩衝液を用いるC18カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製する。画分を集め、HPLCによって純度を検査する。合わせた生成物画分を回転蒸発器で濃縮し、次いで、凍結乾燥して、EC1454を黄色固体で得る。MS(ESI、[M+2H]2+)＝840.90、 [M+H1]+＝1681.3。選択された1H−NMR(DMSO、300 MHz)δ(ppm)：8.6(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.45(s)、4.35(t)、4.15−4.3(m)、3.3−3.6(m)、3.25(m)、3.0(m)、2.7−2.9(m)、2−2.3(m)、1.6−2(m)。生成物を−20℃で保管する。
【０２４１】
実施例：EC1456は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000477
EC1428を、アセトニトリルに溶解し、pH 7.4のリン酸ナトリウム緩衝液中のEC1454の溶液を加える。添加の前後に溶液をアルゴンでスパージする。反応混合物を少なくとも15分間攪拌し、次いで、完了を検査する。溶離液としてアセトニトリルおよびpH7.4のリン酸緩衝液を用いるC18カラムクロマトグラフィーによって所望生成物を精製する。生成物画分を集め、純度を検査し、あわせ、限外ろ過によって濃縮して、10〜20 mg/mL EC1456である水性溶液を得る。最終精製b通溶液をアッセイのためにサンプリングし、次いで、冷凍庫で保管する。
【０２４２】
高解像度Waters Acquity UPLC Xevo Gs−S QTOF質量分析計にて、EC1456のポジティブエレクトロスプレー質量スペクトルを得た。スペクトルは、UPLC吸入システム上の主要コンポーネントの分離後に得られ、解像力は約35,000であった。M+Hモノアイソトピックピークの正確な質量測定値は、2625.0598であったが、これは、式：C110H166N23O45S3のイオンについての理論値である2625.0570から1.1 ppmの誤差である。同位体分布は、その式とも一致する。
【０２４３】
EC1456についてのES+スペクトルの質量スペクトル特徴
2015536323.tif 000478
【０２４４】
〜30mgのEC1456のサンプルを、重水素化されたジメチルスルホキシドおよび重水素化された水の9：1混合物665 μLに溶解した。ブロードバンドおよびプロトンオブザーブコイルの両方を含む2チャンネルプローブを備えたアジレント・モデルDD2分光分析計において26℃、500MHzにて、1H NMRスペクトルを得た。すべてのスペクトルは、2.5ppm(1H)および39.50 ppm(13C)におけるDMSO溶媒残留シグナルを基準とした。
【０２４５】
すべてのスペクトル特性は、後記の図面に記載の原子の番号付けを用いる後記の表中の両方のNMRスペクトル(1Hおよび13C)について割り当てられ、ここで、符号＊は、ジスルフィド結合の連結を示す。
2015536323.tif 000479
【０２４６】
割り当ては、COSYおよびTCSY 2D実験を用いる結合H−H連結を介して、2D NOESYを用いる空間H−H近接を介して、1D DEPT実験を用いる炭素多重度測定、およびプロトン検出2D実験HSQCおよびHMBCを用いる結合C−H連結を介して、などの1Dおよび2D NMR実験の両方に基づいて作成された。大部分の場合において、1Dスペクトルにおけるオーバーラップ(同じ化学シフトにおいて共鳴する異なるプロトンまたは炭素)は、2Dスペクトルにおいて分割することができたが、これらの場合、表は、2Dスペクトルから測定されるが、同時共鳴グループについて合算積分した化学シフトを反映する。1Dオーバーラップ(ほとんど同一のグルタミン酸とグルタミンサブユニットなど)の幾つかの場合において、複数の原子番号の間の一重または多重共鳴の不明瞭でない割り当てを除外する2D相関スペクトルにおけるオーバーラップも存在したが、これらの場合、1つの表の行において、化学シフトおよび／または原子番号割り当てのための複数エントリーがある。
【０２４７】
NHおよびOHプロトンは、D2O重水素原子によって交換され、5〜10 ppm領域における弱いブロードピーク以外は、スペクトルにほとんど存在しない。表に列挙されないスペクトル中の1Hピークは、3.75 ppmにおけるブロードHODピークおよび2.50 ppmにおけるDMSOピークを包含する。HODピークは、どの共鳴も覆い隠さないが、ブロードベースライン上昇により、4.2および3.4−3.7 ppmにおける近くの共鳴の積分を上昇させる。DMSOピークは、この共鳴に積分されないH129の共鳴を覆い隠す。表に列挙されないスペクトル中の13Cピークは、39.50 ppmにおける非常に大きいDMSO溶媒を包含する。DMSOピークは、C91およびC93からの両方のシグナルを覆い隠す。C116ピークは、近くのアミド基の周りの構造変化による大規模な広幅化により、13Cスペクトルにおいて観察可能ではない。すべての3つの化学シフト(C91、C93、C116)は、プロトン検出2D相関スペクトルにおいて、可視的であり、測定される。
【０２４８】
EC1456についてのプロトンNMR割り当て
2015536323.tif 000480
【０２４９】
2015536323.tif 000481
【０２５０】
2015536323.tif 000482
【０２５１】
EC1456についての炭素NMR割り当て
2015536323.tif 000483
【０２５２】
2015536323.tif 000484
【０２５３】
2015536323.tif 000485
【０２５４】
EC1456のIRスペクトルは、Ever−Glo中/遠IR源、拡張範囲臭化カリウム(KBr)ビームスプリッターおよび重水素化硫酸トリグリシン(DTGS)検出器を備えたネクサス(Nexus)6700(登録商標)フーリエ変換赤外線(FT−IR)分光光度計(Thermo Nicolet)において取得される。ゲルマニウム(Ge)を備えた減衰全反射(ATR)アクセサリ(Thunderdome(商標)、Thermo Spectra−Tech)を用いて、データを取得した。スペクトルは、4 cm−1のスペクトル分解能で収集された256の相互に加えられた(co−added)スキャンを表す。バックグラウンドデータセットは純粋なGe結晶を用いて得た。これらの2つのデータセットの互いに対する比を取ることにより、Log 1/R(R＝反射率)スペクトルを得た。波長の較正はポリスチレンを用いて行った。
【０２５５】
EC1456基準物質についての赤外線域割り当て
2015536323.tif 000486
【０２５６】
紫外線スペクトルEC1456は、Perkin−Elmer Lambda 25 UV/Vis分光計で取得された。スペクトルは、25℃にて、経路長1cm、0.1M NaOH溶媒中の40.7 uMにて記録された。分子は、UV領域における吸収とオーバーラップする多くの発色団を含むが、366 nm、288 nmおよび243 nmにおける極大値は、主として、それぞれ、プテロイン酸、ベンズアミド／フェノールおよびチアゾール−アミドサブ構造による。
【０２５７】
実施例：N10−TFA保護EC1579は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000487
【０２５８】
実施例：EC1579は、以下の工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000488
EC1579 MS(ESI、[M+2H]2+)＝840.89(M+1H)1+＝1681.0. 部分1H−NMR(D2O)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.65(d)、4.4−4.8(m)、4−4.2(m)、3.4−3.8(m)3−3.3(m)2.75(s)、1.6−2.4(m)。
【０２５９】
実施例：EC0948は、ここに記載する工程によって製造される。
2015536323.tif 000489
EC0848：MS(ESI、[M+2H]2+)＝840.8. [M+H]+＝1681.1。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：s、8.6；d、7.6；d、6.6；s、4.45；m、4−4.2；m、3.3−3.8；m、3.1−3.3；m、3−3.1；m、2.7−2.9；m、1.7−2.3；s、1.15
【０２６０】
2015536323.tif 000490
EC1669
【０２６１】
実施例：EC1669は、以下のように、EC1579およびEC0469から、ここに記載する工程にしたがって製造される。
2015536323.tif 000491
EC1579(200mg、1.0当量)を、脱酸素化(アルゴン通気)20 mM PO4(pH＝7)緩衝液(4.0 mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0 mL)中のEC0469(80 mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下する。30分後、EC1669(132mg)を、0−30%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥する(49%収率)。化学式：C87H122N26O40S2；正確な質量：2234.78；MW 2236.18。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1118.39、実測値1119.52。部分1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)δ(ppm)8.67(s)、8.59(2)、7.61(d)、7.56(d)、6.71(d)、6.61(d)、3.34−3.39(m)’
【０２６２】
実施例：以下のさらなる化合物は、ここに記載する一般的方法にしたがって記載され、製造される。
2015536323.tif 000492
EC1456
2015536323.tif 000493
EC1586
2015536323.tif 000494
EC1739(C113H173N23O44S3；MW 2653.91)
EC1454(8.5mg、1.5当量)を、脱気(Ar通気)20mMリン酸 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1717(3.8mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1739(5.3mg、59%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)＝1327.06、実測値1327.73
【０２６３】
2015536323.tif 000495
EC1664(C111H169N23O44S3；分子量2625.85)
EC1454(5.5mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mMリン酸 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1662(3.6mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1664(4.6mg、54%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1313.05、実測値1313.37。部分1H NMR(DMSO w/ 10% D2O、300 MHz)δ(ppm)8.61(s)、8.15(s)、7.58(d)、6.94(d)、6.60(m)、5.78(d)、5.22(d)、4.47(m)、4.09−4.33(m)、0.99(d)、0.93(d)、0.76(t)、0.71(t)、0.61(d)。
【０２６４】
2015536323.tif 000496
EC1663(化学式：C110H167N23O44S3；MW 2611.83)
EC1454(16.1mg、1.2当量)を、脱気(Ar通気)20mMリン酸 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1661(8.7mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1663(15.8mg、76%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1306.04、実測値1306.82。
【０２６５】
2015536323.tif 000497
EC1416(C112H169N23O45S3；MW 2653.87)
EC1415(20 mg)を、pH7 リン酸(pH 7.75、アルゴンでパージ)に溶解した。この溶液に、等体積のMeOH中のEC0312(14 mg)の懸濁液を加えた。反応混合物を、アルゴン下、周囲温度にて45分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)にロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(18 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+2H]2+) 1328、1H NMR(DMSO−d6、D2O、300MHz)：8.6(s、1H)、8.15(s、1H)、7.85(bd、1H)、7.55(d、2H)、6.95(d、2H)、6.6(m、4H)、6.2(d、1H)、5.68(d、1H)、5.2(d、1H)、4.5(bs、3H)、4.5−4.3(m、4H)、4.3−4.0(m、10H)、3.5−3.3(m、13H)、3.2(bd、5H)、3.1−2.8(m、8H)、2.75(bs、5H)、2.6−1.6(m、50H)、1.4(m、9H)、1.2(m、9H)、1.0(dd、9H)、0.7(m、11H)、0.6(d、3H)。
【０２６６】
2015536323.tif 000498
EC1299(C85H118N22O28S3；MW 1992.18)
【０２６７】
20 mM pH7 リン酸緩衝液(3.0 mL)中のEC0259(35 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(1.5 mL)を、MeOH(5.5 mL)中のEC0312(39 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(25 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+H]+) 1993。
【０２６８】
2015536323.tif 000499
EC1549(C85H118N22O28S3；MW 1992.17)
20 mM pH7 リン酸緩衝液(3.0 mL)中のEC0259(35 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(1.5 mL)を、MeOH(5.5 mL)中のEC0312(39 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(25 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+H]+) 1993。
【０２６９】
2015536323.tif 000500
EC1548(C85H118N22O28S3；MW 1992.17)
20 mM pH7 リン酸緩衝液(1.95 mL)中のEC1544(55.1 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.30 mL)を、MeOH(2.30 mL)中のEC1248 (58.0 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(61.5 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+H]+) 1993。
【０２７０】
2015536323.tif 000501
EC1393(C87H122N22O28S3；MW 2020.23)
40 mM pH7 リン酸緩衝液中のEC1392(20 mg)の溶液のpHを、飽和NaHCO3溶液で8に調節した。この溶液に、等体積のMeOH中のEC0312(20 mg)の懸濁液を加えた。反応混合物を、アルゴン下、周囲温度にて30分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)にロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(15 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+2H]2+)1011.39。1H NMR(DMSO−d6、D2O、300 MHz)：8.6(s、1H)、8.15(s、1H)、7.85(bd、1H)、7.55(d、2H)、6.95(d、2H)、6.6(m、4H)、6.2(d、1H)、5.68(d、1H)、5.2(d、1H)、4.6(t、1H)、4.5(m、3H)、4.5−4.0(m、11H)、3.2−2.8(m、6H)、2.8−2.5(m、8H)、2.4(m、5H)、2.2−2.0(m、14H)、2.0−1.7(m、7H)、1.6−1.3(m、13H)、1.25(d、8H)、1.1−0.95(dd、8H)、0.75(m、10H)、0.6(d、2H)。
【０２７１】
実施例：ここに記載する化合物は、以下の2つの方法によって製造することもできる：
方法A：アルゴンパージ下、溶液のpHをNaHCO3溶液でpH＝7に調節することによって、葉酸スペーサーを水に溶解する。次いで、有機溶媒中のチオフィリック(thiophilic)剤を加える。アルゴンパージしながら、反応混合物を室温にて攪拌する。反応の進行を分析的HPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0；B＝ACN)によってモニターする。反応の完了後、有機溶媒を蒸発させ、次いで、得られる溶液を、C18カラムでのプレップ−HPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液または2 mM リン酸緩衝液、pH＝7.0；B＝ACN)によって精製する。
【０２７２】
方法B：葉酸スペーサーを水に溶解し、酸(AcOHまたは希HCl)でpHを2に調節する。得られるpH調節スペーサーを凍結乾燥し、次いで、DMSOに再溶解する。反応混合物をアルゴンでパージし、Et3N(またはDIPEA)の10モル当量物を加える。この溶液に、有機溶媒(DMSO、THF、ACNなど)中のチオフィリック(thiophilic)剤を加える。反応の進行を分析的HPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液または2 mM リン酸緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN)によってモニターする。反応の完了後、反応混合物を、C18カラムでのプレップ−HPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液または2 mM リン酸緩衝液、pH＝7.0；B＝ACN)によって精製する。
【０２７３】
実施例：さらなる例示的リンカー中間体(葉酸スペーサーとも呼ばれる)をここに記載する：
2015536323.tif 000502
EC0014：1H NMR(D2O、500 MHz)δ(ppm)8.73(s、1H、FA H−7)、7.56(d、2H、FA H−12＆H16)、6.73(d、2H、FA H−13＆H15)、4.45(m、2H)、4.1(m、2H)、3.61(d、2H)、2.82(m、3H)、2.74(dd、1H)、2.37(m、2H)、2.18(m、1H)、2.09(m、3H)、1.74(m、1H)
【０２７４】
実施例：
2015536323.tif 000503
EC0020：MS(ESI、[M+H]+)746。1H NMR(D2O、500 MHz)δ(ppm)8.76(s、1H、FA H−7)、7.68(d、2H、FA H−12＆H16)、6.8(d、2H、FA H−13＆H15)、4.71(dd、1H、Asp H−2)、4.64(s、2H FA H−9)、4.41(dd、1H、D−Glu H−2)、4.3(dd、1H、Cys H−2)、4.1(dd、Dpr H−2),3.72(dd、1H、Dpr H−3A)、3.52(dd、1H、Dpr H−3B)、2.89(dd、1H、Cys H−3A)、2.85(dd、1H、Cys H−3B)、2.81(dd、1H、Asp H−3A)、2.62(dd、1H、Asp H−3B)、2.44(dd、2H、D−Glu H−4)、2.27(m、1H、D−Glu H−3A)、2.08(m、1H、D−Glu H−3B)。13C NMR(DMSO−d6+D2O、75 MHz)：δ 174.78、174.42、172.68(2C)、170.45、168.25、167.08、162.24、156.24、154.38、151.24、149.41(2C)、129.52、128.14、121.74、111.98、55.76、53.02(2C)、52.77、50.89、46.16、36.61、32.26、27.32、26.60
【０２７５】
実施例：
2015536323.tif 000504
EC0028
2015536323.tif 000505
EC0048
2015536323.tif 000506
EC0049：MS(ESI、[M+H]+) 795。
2015536323.tif 000507
EC0053：MS(ESI、[M+H]+)746
2015536323.tif 000508
EC0055
2015536323.tif 000509
EC0059：MS(ESI、[M+H]+) 816
2015536323.tif 000510
EC0066：MS(ESI、[M+H]+) 1317
2015536323.tif 000511
EC0067：MS(ESI、[M+H]+) 699
2015536323.tif 000512
EC0073：N10−TFA−EC073 MS(ESI、[M+H]+)1183。
2015536323.tif 000513
EC0075：MS(ESI、[M+H]+) 931
2015536323.tif 000514
EC0076：MS(ESI、[M+H]+) 731
2015536323.tif 000515
EC0149：[M+H]+＝ 631。1H NMR(D2O)：8.55(s、1H)、7.5(d、2H)、6.61(d、2H)、4.42(s、2H)、4.35(dd、1H)、4.25(m、2H)、4.1(s、1H)、3.68(m、1H)、3.5(m、1H)、3.35−3.2(m、3H)、3.1(dd、1H)、2.4−2.1(m、3H)、2.1−1.9(m、4H)。
【０２７６】
2015536323.tif 000516
EC0150：MS(ESI、[M+H]+)631。選択された1H NMR(D2O)δ(ppm)8.42(s、1H、FA H−7)、7.50(d、2H、FA H−12＆16)、6.65(d、2H、FA H−13＆15)、4.42(s、2H)、4.3−4.1(m、2H)、4.0−3.85(m、1H)、3.35−3.30(m、1H)、3.30−3.10(m、2H)、3.10−2.90(m、2H)、2.80−2.70(m、1H)、2.65−2.50(m、2H)、2.30−2.10(m、3H)、2.10−1.85(m、2H)、1.95−1.80(m、2H)。
【０２７７】
2015536323.tif 000517
EC0151：MS(ESI、[M+H]+) 630。選択された1H NMR(D2O)δ(ppm)8.42(s、1H、FA H−7)、7.50(d、2H、FA H−12＆16)、6.65(d、2H、FA H−13＆15)、4.42(s、2H)、4.3−4.1(m、2H)、4.0−3.85(m、1H)、3.35−3.30(m、1H)、3.30−3.10(m、2H)、3.10−2.90(m、2H)、2.80−2.70(m、1H)、2.65−2.50(m、2H)、2.30−2.10(m、3H)、2.10−1.85(m、2H)、1.95−1.80(m、2H)。
【０２７８】
2015536323.tif 000518
EC0232：MS(ESI、[M+H]+) 774。1H NMR(D2O)：8.56(s)、7.50(d)、6.65(d)、4.48−4.41(m)、4.21(dd)、4.08(dd)、3.48−3.42(m)、3.28−3.09(m)、2.61−2.35(m)、2.28−2.18(m)、2.16−2.02(m)、1.97−1.62(m)。
【０２７９】
2015536323.tif 000519
EC0252：[M+H]+＝1046.83。1H NMR(D2O)：8.58(s、1H)、7.5(d、2H)、6.6(d、2H)、3.05−2.6(m、5H)、2.3−1.9(m、4H)、1.8−1.2(m、7H)。
【０２８０】
2015536323.tif 000520
EC0259：[M+H]+＝1047.52。1H NMR(D2O)：8.6(s、1H)、7.5(d、2H)、6.65(d、2H)、4.4(dd、2H)、4.18(m、4H)、2.9(t、2H)、2.75(t、2H)、2.6−2.15(m、10H)、2.1−1.8(m、3H)、1.7−1.4(m、3H)、1.3(m、3H)。
【０２８１】
2015536323.tif 000521
EC1213：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046。選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２８２】
2015536323.tif 000522
EC1214：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046。選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２８３】
2015536323.tif 000523
EC1215：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046。選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２８４】
2015536323.tif 000524
EC1216：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046
選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２８５】
2015536323.tif 000525
EC1217：LCMS(ESI [M＋H]+)：1046。選択された1H NMRデータ(D2O、300 MHz)：δ 8.68(s、1H、FA H−7)、7.57(d、2H、J＝8.4 Hz、FA H−12＆16)、6.67(d、2H、J＝9 Hz、FA H−13＆15)。
【０２８６】
2015536323.tif 000526
EC1392：[M＋H]+＝1074.85。1H NMR(D2O、300 MHz) δ(ppm)：8.55(s、1H)、7.45(d、2H)、6.5(d、2H)、4.6(m、2H)、4.45(t、1H)、4.35(bs、2H)、4.2(m、1H)、4.1(s、1H)、4.05(m、1H)、2.9(t、2H)、2.75−2.4(m、6H)、2.3(m、2H)、2.2−1.9(m、2H)、1.8−1.4(m、2H)、1.2(m、2H)、1.3(s、3H)、1.2(s、3H)。
【０２８７】
2015536323.tif 000527
EC1347：MS(ESI、[M＋H]+)＝701.57。選択された1H−NMR(DMSO、300 MHz)δ(ppm)：8.65(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.2−4.6(m)、2.6−3.2(m)、1.8−2.6(m)、1.1−1.7(m)
【０２８８】
2015536323.tif 000528
EC0589：MS(ESI、[M+H]+)746。選択された1H NMR(DMSO−d6+D2O、300 MHz)：δ 8.46(s、1H)、7.45(d、J＝8.4 Hz、2H)、6.47(d、J＝8.4 Hz、2H)、4.39( t、J＝6.6 Hz、1H)。
【０２８９】
2015536323.tif 000529
EC0819：MS(ESI、[M+H]+)＝1046.4。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.6(d)、6.6(d)、4−4.6(m)、3.4−3.8(m)、3−3.15(m)、1−2.8(m)。
【０２９０】
2015536323.tif 000530
EC0823：MS(ESI、[M+H]+)＝672.3。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.8(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.4−4.6(m)、4.2−4.4(m)、3.4−3.8(m)、1.8−2.8(m)、1.15(s)
【０２９１】
2015536323.tif 000531
EC0835：MS(ESI、[M+H]+)＝1046.5。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.6(s)、7.5(d)、6.6(d)、3.8−4.6(m)、2.8−3.2(m)、2.2−2.8(m)、1−2.2(m)
【０２９２】
2015536323.tif 000532
EC0923：MS(ESI、[M+H]+)＝672.3。選択された1H−NMR(D2O)δ(ppm)：8.8(s)、7.75(d)、6.85(d)、4.4−5(m)、2.6−2.9(m)、2.4−2.6(m)、2−2.6(m)
【０２９３】
2015536323.tif 000533
EC0879：MS(ESI、[M+H]+)＝442.3。選択された1H−NMR(DMSO)δ(ppm)：8.7(s)、7.6(d)、6.6(d)、4.55(s)、4.3(m)、2.2−2.6(m)、1.8−2.2(m)、1−1.2(m)
【０２９４】
2015536323.tif 000534
EC0306：[M+H]+＝1100.51。1H NMR(D2O)：δ  8.75(s、1H)、7.6(d、2H)、6.75(d、2H)、4.7−4.5(m、5H)、4.38(m、2H)、4.2(m、2H)、4.1(d、1H)、3.85−3.5(m、10H)、2.95−2.6(m、4H)、2.45(m、2H)、2.3−2.0(m、2H)。
【０２９５】
2015536323.tif 000535
EC0368：[M+H]+＝2175.5。1H NMR(D2O)：8.6(s、1H)、7.5(d、2H)、6.6(d、2H)、4.45(bs、3H)、4.35−4.2(m、4H)、4.05(t、1H)、3.6−3.35(bs、114H)、3.2(s、6H)、2.77(t、2H)、2.65(dd、1H)、2.55−2.45(m、3H)、2.4−2.2(m、6H)、2.1−1.8(m、2H)。
【０２９６】
2015536323.tif 000536
EC0373：[M+H]+＝1346.0。1H NMR(D2O)：8.55(s、1H)、7.5(d、2H)、6.6(d、2H)、4.4(s、2H)、4.25(m,2H)、4.05(t、1H)、3.7(dd、1H)、3.6−3.3(m、50H)、3.25(dd、3H)、3.05(dd、3H)、2.8(t、2H)、2.7(dd、2H)、2.6(dd、1H)、2.4(t、2H)、2.2−1.9(m、4H)。
【０２９７】
2015536323.tif 000537
EC0536：[M+2H]2+＝941.2。1H NMR(D2O)：8.55(s、1H)、7.5(d、2H)、6.6(d、2H)、4.4(s、2H)、4.25(m,2H)、4.1(m、5H)、3.85(t、1H)、3.8−3.4(m、21H)、3.4−2.95(m、7H)、2.8(s、2H)、2.7−2.4(ddd、2H)、2.4−1.7(m、22H)、1.55(m、1H)。
【０２９８】
実施例：さらなる例示的化合物および該化合物の製造方法をここに記載する：
EC1579の結合体
2015536323.tif 000538
2015536323.tif 000539
EC1833
2015536323.tif 000540
EC1828
2015536323.tif 000541
EC1824
2015536323.tif 000542
EC1823
【０２９９】
DMSO(0.4 mL)中のEC1579(酸性化、13.0 mg、0.0077 mmole)の溶液および12 μLのDIPEA(0.070 mmole、13.5当量)を、DMSO(0.2 mL)中の EC1822(5.6 mg、0.0052 mmole)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(12.4 mg)を淡黄色固体で得た。選択された1H NMR(DMSO−d6)δ(ppm)8.62(s、1H)、8.20(s、1H)、7.60(d、2H)、7.56(d)、6.93(d、2H)、6.61(m、3H)、5.25(d、1H)、4.51(d、1H)、4.50−4.40(m、3H)、4.32−4.10(m、10H)、3.65−3.50(m、10H)、3.40−3.30(m、10H)、3.30−3.10(m、7H)、3.10−2.95(m、3H)、2.95−2.80(m、3H)、2.75−2.60(br、3H)、2.40−2.00(m、14H)、2.0−1.3(m、24H)、1.30−1.05(m、6H)、0.99(d、3H)、0.88(d、3H)、0.86(d、3H)、0.79(t、6H)、0.73(t、3H)、0.64(br、3H)
【０３００】
2015536323.tif 000543
EC1818
2015536323.tif 000544
EC1756
【０３０１】
実施例：EC1746の合成
2015536323.tif 000545
20 mM pH7 リン酸緩衝液(4.2 mL)中のEC1579(30.9 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.30 mL)を、MeOH(4.8 mL)中のEC1662(16.9 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(33.1 mg)を綿毛状の淡黄色固体で得た。MS(ESI、M+H)＝2627。EC1746 1H NMR(D2O)：8.66(s)、8.10(s)、7.62(b)、6.99(b)、6.69(b)、5.81(b)、5.18(b)、4.60−4.18(m)、3.91−0.57(m)。
【０３０２】
実施例：EC1669の合成
2015536323.tif 000546
EC1579(200mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(4.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0mL、Aldrich)中のEC0469(80mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1669(132mg、49%)を、0−30%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1118.39、実測値1119.52。部分1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)d(ppm)8.67(s)、8.59(2)、7.61(d)、7.56(d)、6.71(d)、6.61(d)、3.34−3.39(m)。
【０３０３】
実施例：EC1665の合成
2015536323.tif 000547
EC1579(15mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0mL、Aldrich)中のEC0564(10.5mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1665(13.4mg、55%)を、10−100%アセトニトリル/10 mM NH4OAc pH5緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1368.09、実測値1368.30
【０３０４】
EC1454の結合体
実施例：EC1751の合成
2015536323.tif 000548
EC1454(21.1mg、1.3当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1716(10.8mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1751(8.5mg、33%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1320.05、実測値1320.72。選択された1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)d(ppm)8.61(s)、8.15(s)、7.58(d)、6.94(d)、6.60(m)、5.79(d)、5.22(d)、4.47(m)、4.09−4.33(m)、0.98(d)、0.93(d)、0.75(m)、0.61(d)
【０３０５】
実施例：EC1750の合成
2015536323.tif 000549
EC1454(31.1mg、1.3当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1715(15.3mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1750(18.0mg、97%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1299.03、実測値1299.19。部分1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)d(ppm)8.61(s)、8.14(s)、7.57(d)、6.93(d)、6.60(m)、5.77(d)、5.23(d)、4.47(m)、0.98(d)、0.92(d)、0.76(m)、0.71(t)、0.61(d)
【０３０６】
実施例：EC1739の合成
2015536323.tif 000550
EC1454(8.5mg、1.5当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1717(3.8mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1739(5.3mg、59%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1327.06、実測値1327.73
【０３０７】
2015536323.tif 000551
MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1313.05、実測値1313.37。選択された1H NMR(DMSO w/ 10% D2O)d(ppm)8.61(s)、8.15(s)、7.58(d)、6.94(d)、6.60(m)、5.78(d)、5.22(d)、4.47(m)、4.09−4.33(m)、0.99(d)、0.93(d)、0.76(t)、0.71(t)、0.61(d)
【０３０８】
実施例：EC1664の合成
EC1454(5.5mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1662(3.6mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1664(4.6mg、54%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。
【０３０９】
実施例：EC1663の合成
2015536323.tif 000552
EC1454(16.1mg、1.2当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(2.0mL、Aldrich)中のEC1661(8.7mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1663(15.8mg、76%)を、10−100%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、[M+2H]2+)予測値 1306.04、実測値1306.82
【０３１０】
実施例：EC1653の合成
2015536323.tif 000553
EC1454(8.3mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(2.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0mL、Aldrich)中のEC0564(5.8mg、1.0当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1653(6.3mg、46%)を、10−100%アセトニトリル/10 mM NH4OAc pH5緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、((M−2)/2))予測値 1368.09、実測値1368.74
【０３１１】
2015536323.tif 000554
EC1647
2015536323.tif 000555
EC1642
【０３１２】
実施例：EC1496の合成
2015536323.tif 000556
EC1454(324mg、1.0当量)を、脱気(Ar通気)20mM PO4 pH7緩衝液(4.0mL)に溶解し、アルゴン通気下、室温にて、無水ジメチルスルホキシド(4.0mL、Aldrich)中の粗EC0469(142mg、1.1当量)の攪拌溶液に滴下した。30分後、EC1496(221mg、51%)を、0−30%アセトニトリル/50 mM NH4HCO3 pH7緩衝液におけるプレパラティブHPLCによって精製し、凍結乾燥した。MS(ESI、((M+2)/2))予測値 1118.39、実測値1119.02
【０３１３】
2015536323.tif 000557
【０３１４】
実施例：EC1415の結合体
2015536323.tif 000558
【０３１５】
実施例：EC1416の合成
2015536323.tif 000559
EC1415(20 mg)を、pH7 リン酸(pH 7.75、アルゴンでパージ)に溶解した。この溶液に、等体積のMeOH中のEC0312(14 mg)の懸濁液を加えた。反応混合物を、アルゴン下、周囲温度にて45分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)にロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(18 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、[M+2H]2+) 1328。1H NMR(DMSO−d6、D2O、300MHz)：8.6(s、1H)、8.15(s、1H)、7.85(bd、1H)、7.55(d、2H)、6.95(d、2H)、6.6(m、4H)、6.2(d、1H)、5.68(d、1H)、5.2(d、1H)、4.5(bs、3H)、4.5−4.3(m、4H)、4.3−4.0(m、10H)、3.5−3.3(m、13H)、3.2(bd、5H)、3.1−2.8(m、8H)、2.75(bs、5H)、2.6−1.6(m、50H)、1.4(m、9H)、1.2(m、9H)、1.0(dd、9H)、0.7(m、11H)、0.6(d、3H)。
【０３１６】
実施例：EC1392の結合体
2015536323.tif 000560
MS(ESI、[M+2H]2+)1011.39
2015536323.tif 000561
【０３１７】
実施例：EC59の結合体
20 mM pH7.1 リン酸緩衝液(2.4 mL)中のEC59(13.2 mg)の溶液を、MeOH(2.4 mL)中のEC0312(14.2 mg)の溶液に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(15.3 mg)を綿毛状の淡黄色固体で得た。
2015536323.tif 000562
【０３１８】
実施例：EC1347の結合体
2015536323.tif 000563
2015536323.tif 000564
EC1208：LCMS [ESI(M＋H)+：1918]。1選択された1H NMRデータ for EC145(D2O、300 MHz)：δ 8.67(s、1H、FA H−7)、7.50(br s、1H、VLB H−11’)、7.30−7.40(br s、1H、VLB H−14’)、7.35(d、2H、J＝7.8 Hz、FA H−12＆16)、7.25(m、1H、VLB H−13’)、7.05(br s、1H、VLB H−12’)、6.51(d、2H、J＝8.7 Hz、FA H−13＆15)、6.4(s、2H、VLB H−14＆17)、5.65(m、1H、VLB H−7)、5.5(m、1H、VLB H−6)、4.15(m,1H、VLB H−8’)、3.82(s、3H、VLB C18’−CO2CH3)、3.69(s、3H、VLB C16 −OCH3)、2.8(s、3H、VLB N−CH3)、1.35(br s、1H、VLB H−3’)、1.15(m、1H、VLB H−2’)、0.9(t、3H、J＝7 Hz、VLB H−21’)、0.55(t、3H、J＝6.9 Hz、VLB H−21)ppm。
【０３１９】
2015536323.tif 000565
EC1209：LCMS [ESI(M＋H)+：1918]。1選択された1H NMRデータ for EC145(D2O、300 MHz)：δ 8.67(s、1H、FA H−7)、7.50(br s、1H、VLB H−11’)、7.30−7.40(br s、1H、VLB H−14’)、7.35(d、2H、J＝7.8 Hz、FA H−12＆16)、7.25(m、1H、VLB H−13’)、7.05(br s、1H、VLB H−12’)、6.51(d、2H、J＝8.7 Hz、FA H−13＆15)、6.4(s、2H、VLB H−14＆17)、5.65(m、1H、VLB H−7)、5.5(m、1H、VLB H−6)、4.15(m,1H、VLB H−8’)、3.82(s、3H、VLB C18’−CO2CH3)、3.69(s、3H、VLB C16 −OCH3)、2.8(s、3H、VLB N−CH3)、1.35(br s、1H、VLB H−3’)、1.15(m、1H、VLB H−2’)、0.9(t、3H、J＝7 Hz、VLB H−21’)、0.55(t、3H、J＝6.9 Hz、VLB H−21)ppm。
【０３２０】
2015536323.tif 000566
EC1575：20 mM pH7 リン酸緩衝液(2.0 mL)中のEC1577(9.5 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.50 mL)を、MeOH(2.0 mL)中のEC0312 (10.1 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(9.5 mg)を淡黄色固体で得た。LCMS [ESI(M＋H)+：2627]。1H NMR(D2O、300 MHz)：8.70(s)、8.11(s)、7.62(d)、7.00(d)、6.71(dd)、6.11(d)、5.80(d)、5.33(d)、4.60−4.50(m)、4.40−4.15(m)、3.88−3.51(m)、3.50−3.20(m)、3.19−2.80(m)、2.76(s)、2.60−1.43(m)、1.40−1.27(m),1.18(d)、1.02(d)、0.97−0.82(m)、0.76−0.63(m)。
【０３２１】
2015536323.tif 000567
EC1548：20 mM pH7 リン酸緩衝液(1.95  mL)中のEC1544(55.1 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.30 mL)を、MeOH(2.30 mL)中のEC1248 (58.0 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(61.5 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、M+1)1993
【０３２２】
2015536323.tif 000568
EC1549：20 mM pH7 リン酸緩衝液(2.0 mL)中のEC1547(23.5 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(0.30 mL)を、MeOH(2.3 mL)中のEC1248 (24.7 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(29.2 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、M+1)1993
【０３２３】
実施例：
2015536323.tif 000569
EC1349
【０３２４】
実施例：EC1299
2015536323.tif 000570
20 mM pH7 リン酸緩衝液(3.0 mL)中のEC0259(35 mg)の溶液および飽和NaHCO3溶液(1.5 mL)を、ACN(5.5 mL)中のEC0312(39 mg)の溶液に順に加えた。得られる均質な溶液を、アルゴン下、周囲温度にて20分間攪拌し、次いで、精製のために、プレパラトリーHPLC(移動相A＝50 mM NH4HCO3緩衝液、pH＝7.0。B＝ACN。方法：5−80% B、20分間)に直接ロードした。所望生成物含有画分を集め、合わせ、凍結乾燥して、生成物(25 mg)を淡黄色固体で得た。MS(ESI、M+1)1993
【０３２５】
実施例：
2015536323.tif 000571
【０３２６】
実施例：
2015536323.tif 000572
【０３２７】
実施例：
2015536323.tif 000573
EC153：MS( ESI、[M＋H]+) 1023；( ESI、[M−H]−) 1021； 1H NMR(DMSO−d6、300 MHz)：8.84(s、1H)、7.70(d、2H)、6.80(d、2H)、4.60(m、1H)、 4.56(s、2H)、4.34(m、2H)、4.10(m、2H)、3.85(m、2H)、3.60−3.30(m、5H)、3.20(s、2H)、318−3.05(m、1H)、3.0(br、2H)、2.90−2.70(m、2H)、2.40−2.00(m、4H)、1.95(m、3 H)、
【０３２８】
実施例：ここに記載する方法にしたがって、EC0059から出発して、以下の化合物を製造した：
2015536323.tif 000574
【０３２９】
2015536323.tif 000575
【０３３０】
2015536323.tif 000576
EC74：MS( ESI、[M＋H]+) 1438.3；( ESI、[M−H]−) 1436.4
【０３３１】
比較例：以下の比較化合物を開示する：
比較例：
2015536323.tif 000577
EC0746(C87H122N26O40S2；MW 2236.18)
【０３３２】
比較例：
2015536323.tif 000578
【０３３３】
比較例：EC0923
2015536323.tif 000579
EC0923(C27H29N9O12；MW 671.57)
【０３３４】
方法および実施例
概要：以下の略語を、ここで用いる：部分寛解(PR)；完全寛解(CR)、週3回(M/W/F)(TIW)。
【０３３５】
方法：相対親和性アッセイ。既述された方法(Westerhof、G. R.、J. H. Schornagelら(1995) Mol. Pharm. 48：459−471)にわずかな変更を加えて、葉酸と比較した場合の葉酸受容体(FR)に対する親和性を決定する。簡単に説明すると、FR陽性KB細胞を高密度で24ウエル細胞培養プレートに播種し、プラスチックに18時間接着させる。指定のウエルにおいて、使用済みのインキュベーション培地を、試験物質または葉酸の不在下および濃度を増加させたそれらの存在下で、100 nM 3H−葉酸を補足した葉酸フリーRPMI(FFRPMI)と交換する。細胞を37℃にて60分間インキュベートし、次いで、pH7.4のPBSにて3回すすぐ。pH7.4のPBS中の1% SDS 500 μLを、各ウエルに加える。次いで、細胞溶解液を集め、5 mLのシンチレーションカクテルを含む個別のバイアルに加え、次いで、放射能を計数する。陰性コントロール管は、FFRPMI中の3H−葉酸のみを含む(コンペティターなし)。陽性コントロール管は、最終濃度1 mMの葉酸を含み、これらのサンプルで測定されたCPM(標識の非特異的結合を表す)は、すべてのサンプルから減算される。相対的親和性を、KB細胞上のFRに結合した3H−葉酸の50%を置き換えるのに必要な化合物の逆モル比として決定する(ここで、FRに対する葉酸の相対的親和性は、1と設定される)。
【０３３６】
実施例：EC1669は、細胞表面葉酸受容体(FR)への結合に対し、3H−葉酸に対して競合するリガンドの能力を決定するインビトロ競合結合アッセイによって決定されたように、葉酸受容体に対して高い結合親和性を示す。EC1669()。EC1669の相対的親和性値(1に設定された葉酸に対して標準化される)は、KBおよびCHO−FRβ細胞において、それぞれ0.53および0.13であると決定される(図1Aおよび図1Bを参照)。比較すると、メトトレキサート(MTX)は、細胞表面FRに対して乏しい結合を示した。特定の理論に縛られることを望むものではないが、EC1669の結合親和性は、FR媒介性エンドサイトーシスを介した効率的な細胞取り込みを可能にすると考えられる。
【０３３７】
方法：細胞DNA合成の阻害。本明細書に記載する化合物を、薬物の、KB細胞、RAW264.7マクロファージなどの葉酸受容体陽性細胞の増殖を阻害する能力を予測するインビトロアッセイを用いて評価する。細胞型の選択は、結合体を形成する薬物への選択された細胞の感受性に基づいて行なわれうることを理解すべきである。試験化合物は、本明細書に記載する方法にしたがって製造される、各化学療法薬に結合した葉酸から構成される。試験細胞を、さまざまな濃度の葉酸−薬物結合体に、少なくとも100倍過剰の葉酸の不在下または存在下で、曝露して、葉酸受容体仲介に特異的である活性を評価する。
【０３３８】
実施例：本明細書に記載する細胞毒性薬物の結合体は、KB細胞に対して活性がある。共投与葉酸を用いる競合実験によって示されるように、活性は、葉酸受容体によって媒介される。KB細胞を、少なくとも100倍過剰の葉酸の不在下または存在下で、指示された濃度の葉酸−薬物結合体に、37℃にて7時間暴露する。次いで、新鮮な培養培地で1回すすぎ、新鮮な培養培地中で、37℃にて72時間インキュベートする。細胞生存能力を、3H−チミジン取り込みアッセイを使用して評価した。本願明細書に記載する化合物について、用量依存性細胞毒性は、一般に、測定可能であり、大半の場合において、IC50値（新たに合成されたDNAへの3H−チミジン取り込みを50%低下させるのに必要な薬物結合体の濃度）は、低いナノモル範囲である。特定の理論に縛られることを望むものではないが、結合体の細胞毒性が過剰の遊離葉酸の存在下で低下される場合、このような結果は、観察された細胞死滅は葉酸塩受容体への結合によって媒介されたことをを示すと考えられる。
【０３３９】
実施例：EC1669は、マウスRAW264.7マクロファージに対して強力な細胞増殖抑制作用を示す。RAW264.7細胞におけるXTT細胞生存性アッセイにより、2時間の曝露および72時間のインキュベーション後、EC1669の抗増殖活性を測定する(図2)。RAW264.7マクロファージは、EC1669結合体を形成する薬物、アミノプテリンに感受性がある。細胞生存性は、使用説明書にしたがって、XTT(2,3−ビス(2−メトキシ−4−ニトロ−5−スルホ−フェニル)−2H−テトラゾリウム−5−カルボキサニリド)を加えることによって評価される。EC1669は、〜1.2 nMのIC50値で、細胞増殖の用量依存性阻害を示す。観察された抗増殖作用は、100倍過剰葉酸(FA)の存在下で、100%競合可能であったが、このことは、EC1669の作用のFR特異的モードを示している。
【０３４０】
方法：さまざまな癌細胞株に対するインビトロ活性。さまざまな細胞株についてIC50値を作成する。細胞を高密度で24ウエルファルコンプレートに播種し、ほとんど集密的な単層を一夜形成させる。試験化合物の添加の30分前に、すべてのウエルから使用済の培地を吸引し、新鮮な葉酸欠乏RPMI培地(FFRPMI)と交換する。ウエルのサブセットには、100 μM葉酸を含む培地を加えることを指定される。指定されたウエル中の細胞を用いて、標的化特異性を決定する。特定の理論に縛られることを望むものではないが、過剰葉酸の存在下で試験化合物によって生み出された細胞毒性活性、すなわち、FR結合に対する競合の存在は、FR特異的デリバリーに関連しない総活性の部分に対応するであると考えられる。1 mLの10%熱不活化ウシ胎児血清を含む新鮮なFFRPMIで1回すすいだ後、各ウエルに、示すとおり、100 μM遊離葉酸の存在下または不在下で、濃度を増加させながら試験化合物(サンプル当り4ウエル)を含む培地1 mLを加える。処理された細胞を37  ℃にて2時間パルスし、0.5 mLの培地で4回すすぎ、次いで、1 mLの新鮮な培地中で70時間までチェイスする。すべてのウエルから使用済の培地を吸引し、新鮮な5 μCi/mL 3H−チミジンを含む培地と交換する。さらに37 ℃にて2時間インキュベートした後、細胞を、0.5 mLのPBSで3回洗浄し、次いで、ウエル当り0.5 mLの氷冷5%トリクロロ酢酸で処理する。15分後、トリクロロ酢酸を吸引し、15分間0.5 mLの0.25 N水酸化ナトリウムの添加によって細胞材料を可溶化する。各可溶化サンプルの450 μLのアリコートを、3 mLのEcolumeシンチレーションカクテルを含むシンチレーションバイアルに移し、次いで、液体シンチレーションカウンターで計数する。最終結果を、非処置コントロールに対する3H−チミジン組み込みパーセンテージとして表す。
【０３４１】
実施例：本明細書に記載する化合物は、KB細胞などの病原細胞に対する強力なインビトロ活性を示す。本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含まない化合物と比較して、葉酸受容体に対するより大きい特異性を示す。たとえば、EC1456は、葉酸競合によって決定されるように、約1000倍の葉酸受容体に対する特異性(特異性＝競合グループと非競合グループの間のIC50の差異)、および非天然アミノ酸を有するリンカーLを含まない比較化合物EC0531と比較して、特異性における4倍の改善を示す。
【０３４２】
実施例：葉酸受容体発現細胞に対する選択性。本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体発現細胞に対する高い活性を示す。本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体陰性細胞に有意な結合を示さない。EC1456は、低および高FR発現細胞(FR+)に対して高い競合可能な結合を示し、FRを発現しない細胞(FR−)に対する結合を示さない。
【０３４３】
(FR+)および(FR−)細胞株におけるEC1456の活性
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(a)これらの特に選択された(FR−)細胞株(A549、H23、HepG2、AN3CA、LNCaP)に対する活性を0.1−100 nMから評価した；NAは、該当せず。
【０３４４】
方法：マウスにおける腫瘍増殖の阻害。4〜7週齢のマウス（Balb/cまたはnu/nu系）をHarlan Sprague Dawley, Inc.（Indianapolis, IN）から購入した。通常の齧歯類用飼料は高濃度の葉酸を含有する(6mg/kg固形飼料）；したがって、正常なヒト血清の範囲に近い血清葉酸濃度を達成するため、試験動物は、葉酸フリー飼料（Harlan diet #TD00434）により、腫瘍移植の前に約1週間、および方法中に維持する。腫瘍細胞の接種には、100 μL中、1ｘ106個ののBalb/c系のM109細胞（同系肺癌）または1ｘ106個のnu/nu系のKB細胞を、内側足背領域(右腋窩)の皮下に注射する。腫瘍の大きさを、キャリパーを使用して2〜3日毎に2つの垂直方向で測定し、その容量を、0.5 x L x W2として計算するが、ここで、L＝最長軸の測定値（mm）であり、W＝Lに対して垂直な軸の測定値（mm）である。次いで、細胞死滅Log(LCK)および処置対対照(T/C)値を、発表されている手順に従って計算する(たとえば、Leeら、「BMS−247550：a novel epothilone analog with a mode of action similar to paclitaxel but possessing superior antitumor efficacy」Clin Cancer Res 7：1429−1437(2001)；Rose、「Taxol−based combination chemotherapy and other in vivo preclinical antitumor studies」J Natl Cancer Inst Monogr 47−53(1993)を参照)。
【０３４５】
投与は、皮下腫瘍が50〜100 mm3(t0)の平均体積を有したときに開始し、典型的には、KB腫瘍では、腫瘍接種後(PTI)から8日目であり、M109腫瘍ではPTIから11日目である。試験動物(5匹/グループ)において、特に指示のない限り、1 μmol/kg〜5μmol/kgの薬剤送達結合体または同等な投与量のPBS(対照)を、週に3回(TIW)、3週間、静脈内注射する。投与溶液は、PBS中毎日新たに調製し、マウスの外側尾静脈に投与する。
【０３４６】
方法：一般的4T−1腫瘍アッセイ。6〜7週齢のマウス（雌Balb/c系）をHarlan, Inc., Indianapolis, INから得る。マウスを、Harlanの葉酸フリー飼料により、この実験を開始する前およびその期間中、合計3週間維持した。葉酸受容体陰性4T−1腫瘍細胞（動物当り1 x 106個の細胞）を、右腋窩の皮下に接種した。4T−1腫瘍の平均容量が〜100 mm3となる腫瘍接種後からおよそ5日目に、特に指示のない限り、マウス（5匹／グループ）に、3μmol/kgなどのさまざまな用量の薬剤送達結合体または同等な投与量のPBS（コントロール）を、週に3回(TIW)、3週間、i.v.注射する。腫瘍増殖を、各処理グループにおいて2日または3日間隔でキャリパーを使用して測定する。腫瘍容量を、方程式：V＝a x b2/2を使用して計算し、ここで、「a」は腫瘍の長さであり、そして「b」は幅である（ミリメートルで表す）。
【０３４７】
方法：薬物毒性決定。心臓穿刺により血液を回収し、血清を、Ani−Lytics, Inc.（Gaithersburg, MD）における、血中尿素窒素(BUN)、クレアチニン、総タンパク質、AST−SGOT、ALT−SGPT、および標準的な血液細胞パネルについての独立した分析にかけることにより、残留薬剤毒性を評価する。さらに、ホルマリン固定した心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、腸、骨格筋および骨（脛骨／腓骨）の組織病理学的評価を、Animal Reference Pathology Laboratories（ARUP; Salt Lake City, Utah）において、委員会により認可を受けた病理学者により実施する。
【０３４８】
方法：体重減少により測定された毒性。
試験動物の体重の変化のパーセンテージを、腫瘍接種後(PTI)の選択した日および投与中に決定する。結果をグラフにする。
【０３４９】
実施例：腫瘍に対するインビボ活性。本明細書に記載する化合物は、nu/nuマウスのKB腫瘍に対する高い力価および効力を示す。本明細書に記載する化合物は、葉酸受容体発現腫瘍に対する特異的活性および低い宿主動物毒性を示す。たとえば、EC1456は、1 μmol/kg TIW、2週間、の静脈内投与した場合に、4/4の試験動物において完全寛解を示す。図3Aに示すように、EC1456は、過剰の比較化合物EC0923(50または100 μmol/kg)と競合可能であることによって明らかなように、葉酸受容体によって媒介される特異的活性も示す。図3Bに示すように、EC1456は、全動物毒性のどのような証拠も示さない。
【０３５０】
実施例：EC1663の治療効果を、ヒトKB腫瘍に対して評価した。図4Aに示すデータは、4/4の部分寛解をし、腫瘍体積は、コントロールと比較して有意に減少したが、ゼロにはならず、投与終了後に腫瘍は再増殖を始めた。より高い用量が、完全寛解および／または治癒をもたらすことができると考えられる。図4Bに示すデータは、投与された有効用量において、全動物毒性が観察されなかったことを示す。
【０３５１】
方法：TNBC腫瘍アッセイ。三重陰性乳癌(TNBC)は、エストロゲン、プロゲステロンおよびHer2/neuのための遺伝子発現の欠如を特徴とするサブタイプである。TNBCは、治療するのが困難であり、結果として生じる患者の死亡率は、報告によれば、乳癌の任意の他のサブタイプよりも不相応に高い。TNBC異種移植モデルは、nu/nuマウスにMDA−MB−231乳癌細胞を移植することによって、本明細書に記載するKBおよびM109モデルと同様の方法で作成した。投与は、皮下腫瘍が110〜150(一般に130) mm3(t0)の平均体積を有したときに開始し、典型的には、腫瘍接種後(PTI)から17日目である。試験動物(5匹/グループ)において、特に指示のない限り、1 μmol/kg〜5μmol/kgの薬剤送達結合体または同等な投与量のPBS(対照)を、週に3回(TIW)、2〜3週間、i.v.注射する。投与溶液は、PBS中毎日新たに調製し、マウスの外側尾静脈に投与する。
【０３５２】
実施例：確立された三重陰性FR陽性皮下MDA−MB−231乳癌異種移植片に対して試験した場合、EC1456は、週3回、2週連続計画での2 μmol/kgの静脈内用量で非常に活性が高いことが見い出される。この処置は、5匹のうち4匹に、腫瘍体積がゼロになり、約135日間を超える観測窓の期間中、再増殖が起こらない完全寛解をもたらした。特定の理論に縛られることを望むものではないが、動物は、三重陰性乳癌が治癒したと考えられる。EC1456についての結果を図5Aに示す。図5Bに示すように、抗腫瘍活性は、試験動物において有意な体重減少を伴わなかった。
【０３５３】
方法：ヒトシスプラチン耐性細胞株。ヒトシスプラチン耐性細胞株は、シスプラチンの濃度を増加させる(100→2000 nM；12ヶ月を超える期間)条件下でFR陽性KB細胞を培養することによって作成される。KB−CR2000細胞で標識されたヒトシスプラチン耐性細胞は、腫瘍形成性であることが見い出され、かつ、それらのインビボFR発現状態を保持することが見い出される。KB−CR2000腫瘍は、シスプラチン療法に対して耐性があることが確認される。高い、毒性用量のシスプラチン(図6Bに示すように、図6Aに示すように、平均体重減少は10.3%)は、単一の部分寛解(PR)をもたらさなかった。対照的に、EC1456は、5/5のCRが観察され、KB−CR腫瘍に対して非常に活性であることが見い出される。さらに、腫瘍の再増殖は、試験動物の1/5に観察されたにすぎなかった。特定の理論に縛られることを望むものではないが、4/5の試験動物において、約70日間の観察期間中に再増殖は起こらず、シスプラチン耐性癌が治癒されたと考えられる。さらに、シスプラチンとは異なって、EC1456は、マウスのこのコホートにおいて体重減少を引き起こさず、したがって、投与期間中、総動物毒性(gross animal toxicity)の証拠を示さなかった。
【０３５４】
実施例：結合および非結合薬物の比較。非結合チューブリシンBおよび非結合TubB−H(EC0347)薬物の治療効果を、マウスのヒトKB腫瘍に対してインビボで評価する。体重変化によって決定される、各非結合薬物の抗腫瘍効能および総毒性をEC1456結合体と比較する。このモデルにおいて、EC1456は、用量応答抗腫瘍活性をもたらした。完全寛解は、わずかな体重減少〜体重減少なしをもたらす治療条件下で観察された。対照的に、非結合のチューブリシンベース薬物は、マウスに非常に毒性の高い用量を投与された場合でさえ、抗腫瘍応答を得ることができなかった。結果を以下の表に示す。
【０３５５】
2015536323.tif 000581
＊非処置コントロールグループの平均体重減少は、2.4%であった。
1グループは、毒性により2投与のみを受けた。
【０３５６】
これらの結果は、チューブリシンBおよびTubBHが培養中の細胞への毒性が高い(典型的にIC50 〜1 nM)にもかかわらず、両方の作用剤が、抗腫瘍効果をもたらさないレベルで、マウスにおいて用量限定的毒性をもたらしたことを確認する。したがって、非結合化合物は、治療域を示さない。対照的に、結合TubBH(EC1456)などの薬物の結合体は、十分に確立されたヒト腫瘍異種移植片を有するマウスに対し、有意毒性なしで、抗腫瘍応答をもたらす。本明細書に記載する結合体は、毒性の高い薬物に治療域をもたらす。
【０３５７】
実施例：本明細書に記載する化合物は、10%血清/FDRPMI中の葉酸(相対的親和性＝1)と比較して高い葉酸受容体親和性、強力なインビトロ活性、強力なインビボ活性、葉酸受容体に対する特異性、および非結合薬物と比較して十分に高い治療指数を示す。
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【０３５８】
(a)葉酸との比較；(b)チミジン取り込みにより決定；(c)過剰葉酸と競合する場合の試験化合物のIC50；IC50が高ければ、特異性がより高いのが葉酸媒介である；(d)インビトロ特異性＝競合グループと非競合グループ間のIC50における差異；(e)nu/nuマウスにおける皮下KB腫瘍により決定；CR＝完全寛解、ここで、本明細書で定義する観察期間中の腫瘍体積は、グループのすべての試験動物についてゼロであった；(f)元のチューブリシン；NT＝試験せず。
【０３５９】
方法：アジュバント誘導関節炎(AIA)モデル。雌性ルイスラットを、関節炎誘導前9〜10日間葉酸欠乏飼料(Harlan Teklad、Indianapolis、IN)で飼育する。100 μLの軽油中の0.4〜0.5 mgの加熱殺菌したウシ型結核死菌(BD Diagnostic Systems、Sparks、MD)の皮内移植(尾の付け根)によって、アジュバント誘導関節炎(AIA)を誘導する。関節炎誘導の10日後、ラットの肢浮腫(関節炎の程度)を、修正された関節炎評価システム：0＝関節炎なし；1＝1種類の関節における腫れ；2＝2種類の関節における腫れ；3＝3種類の関節における腫れ；4＝すべての肢における腫れ；を用いて評価する。各ラットの総スコアは、4つの肢のそれぞれのスコアをまとめることによって計算され、各ラットの最大スコアは16である。関節炎誘導の10日後、総関節炎スコアが≧2であるラットを実験から外し、残りのラットをコントロールおよび処置グループに均等に割り当てる(健康なコントロールについてn＝2〜3である以外は、すべてのグループについてn＝5である)。他に特記しない限り、すべての処置は、第10日に開始される。ラットの肢は、骨の損傷を評価し決定するために、X線写真でも評価される。
【０３６０】
実施例：本明細書に記載する化合物は、炎症および骨損傷を伴う関節炎などの炎症性疾患を治療するのに有効である。図7に示すように、EC1496は、アジュバント誘導関節炎のラットモデルにおける肢の炎症を減少させるのに強力かつ有効である。図7は、EC1496が、肢浮腫の評価に基づいて、関節炎の進行を予防するのに有効であることを示す。EC1496(トレース(d))は、非処置コントロール(トレース(b))とは有意に異なる。さらに、データは、EC1496(トレース(d))は、EC1496が過剰の葉酸と共投与される競合コントロールグループとは有意に異なるので、効果が葉酸受容体媒介性であることを示す(トレース(d))。
【０３６１】
実施例：本明細書に記載する化合物は、炎症および骨損傷を伴う関節炎などの炎症性疾患を治療するのに有効である。例示的に、EC1496は、X線写真分析によって決定されるように、アジュバント誘導関節炎のラットモデルにおける骨損傷を減少または予防するのに強力かつ有効である。X線写真術は、視覚採点に基づいて、処置された動物が、非処置コントロール動物に見られる骨損傷を示さないことを明らかにする。それどころか、処置動物および健康動物は、同様の骨構造を示す。
【０３６２】
実施例：EC1669は、アジュバント関節炎に対する葉酸受容体特異的活性を示す。誘導後第9日から開始して、進行するAIAを有するラットを、関節炎スコアにしたがって3つのグループ(n＝5)：(1)非処置AIAコントロール、(2)EC1669処置グループ、および(3)EC1669＋EC0923競合グループに割り振る。すべての処置は、連続して2週間行う。AIAコントロールグループの動物は、非処置のままおく。EC1669処置グループの動物に、375 nmol/kgの投与量で、EC1669の週2回の皮下投与を行う。EC1669＋EC0923グループの動物に、375 nmol/kgの投与量で、EC1669および187.5 μmol/kgの投与量で、EC0923の週2回の皮下投与を行う。実験終点を図8A、図8B、図9Aおよび図9Bに示す：(a)関節炎スコア；(b)体重変化；および(c)肢重量(最終投与の4日後に測定)の増加パーセントによって評価された肢の腫れ、および(d)骨のX線写真術。EC1669は、肢の腫れ(コントロールと比較して〜80% compared to control)および骨損傷コントロールと比較して〜80%)を軽減させることにおいて非常に有効であることが見い出される。EC1669の抗関節炎活性は、葉酸コンペティター(EC0923)と競合可能である。
【０３６３】
実施例：続いての投与実験では、1000 nmol/kgにて週1回、250 nmol/kgにて週2回、および500 nmol/kgにて週2回などのさまざまな投与計画を評価した。驚くべきことに、合計用量が1/2である、250 nmol/kgにて週2回の方が、1000 nmol/kgにて週1回よりも優れていた。EC1669は、肢の腫れの低減化において、1000 nmol/kgにて週1回で44%減少という1000 nmol/kgにて週1回投与と比較して、500 nmol/kgにて週2回で81%減少、250 nmol/kgにて週2回で64%減少という週2回投与の場合に、週1回投与よりも有効であることが見い出された。
【０３６４】
実施例：EC1669＋セルセプトは、アジュバント誘導関節炎に対して、いずれかの作用剤単独よりも有効である。セルセプトは、臓器移植拒絶を予防するのに用いられる免疫抑制剤であるミコフェノール酸のプロドラッグである。セルセプトは、インビボで活性化され、T細胞増殖を阻害し、内皮細胞への白血球接着を妨害することができる、その活性産物を放出する。EC1669とセルセプトの組合せ効果を試験するために、進行するAIAを有するラットを、関節炎スコアにしたがって4つのグループ(n＝5)：(1)非処置AIAコントロール、(2)EC1669処置グループ、(3)セルセプト処置グループ、および(4)EC1669＋EC0923競合グループに割り振る。すべての処置は、AIA誘導後第9日から開始し、連続して2週間行う。AIAコントロールグループの動物は、非処置である。EC1669処置グループの動物に、1000 nmol/kgの投与量で、EC1669の週1回の皮下投与を行う。セルセプト処置グループの動物に、週5日、30 mg/kgの投与量で、セルセプトの経口投与を毎日行う。EC1669およびセルセプトの組合せ処置グループの動物に、1000 nmol/kgの投与量で、EC1669の週1回の皮下投与、および週5日、30 mg/kgの投与量で、セルセプトの毎日経口投与を行う。 図10Aおよび図11に示すように、EC1669およびセルセプトの併用療法は、疾患の進行による関節炎スコア、肢の腫れおよび体重減少を減少させることにおいて、いずれかの作用剤単独よりも有効である。図10Bは、EC1669およびセルセプトの併用療法が、いずれかの薬物単独よりも、より低い毒性しか引き起こさないことを示す。
【０３６５】
方法：コラーゲン誘導関節炎(CIA)モデル。葉酸欠乏飼料(Harlan Teklad、Indianapolis、IN)で飼育する雌性ルイスラットにおいて、コラーゲン誘導関節炎(CIA)を誘導する。第0日に、フロイント不完全アジュバントと製剤された500 μgのウシコラーゲンII型(Chondrex、Redmond、WA)でラットを免疫する。第7日に、ロイント不完全アジュバントと製剤された250 μgの該ウシコラーゲンでブースター免疫化を行う。関節炎疾患を、製造者(Chondrex、Redmond、WA)によって記載された定性的な臨床スコアシステムによって評価する：0＝正常、1＝軽度であるが、明確な赤みおよび足首または手首の腫れ、あるいは明らかな赤みおよび影響を及ぼされた指の数にかかわりなく個々の指に限定された腫れ、2＝中程度の赤みおよび足首または手首の腫れ、3＝重度の赤みおよび指を含めた全肢の腫れ、および4＝複数の関節の関与する最大限に炎症を起こした肢。最初の免疫後の第10日に、ラットを、関節炎スコアにしたがって、対照および処置グループに均等に割り振る。CIAラットに、第10〜19日に、試験化合物の皮下投与を10回行う。各薬物について、第10および15日に誘導用量(たとえば、500 nmol/kg)を与え、第11〜14および16〜19日に維持用量(たとえば、100 nmol/kg)を与える。関節炎コントロールグループの動物は、非処置のままである。関節炎スコアおよび動物体重を週5回記録する。
【０３６６】
方法：動物実験の自己免疫性ブドウ膜炎モデル。実験的自己免疫性ブドウ膜炎(EAU)を、葉酸欠乏飼料Harlan Teklad、Indianapolis、IN)で飼育したルイスラットにおいて誘導する。第0日に、0.5 mgのグラウンデッド(grounded)結核菌H37Raを含むフロイント不完全アジュバントと製剤された25 μgのウシS−Ag PDSAgペプチドで動物を免疫する。同じ日に、腹腔内注射にて、動物当り1 μの投与量で、精製百日咳毒素(PT)を与える。各眼におけるブドウ膜炎の重篤度を、定性的視覚スコアシステムによって評価する：0＝疾患なし、眼は半透明で光を反射する(赤色反射)；0.5(トレース)＝虹彩における拡張血管、1＝虹彩における充血した血管、異常な瞳孔収縮；2＝濁った前眼房、赤色反射の減少；3＝中程度に不透明な前眼房、しかし瞳孔はまだ可視、鈍い赤色反射；および4＝不透明な前眼房およびあいまいな瞳孔、赤色反射の喪失、眼球突出。この評価により、動物当り8の最大ブドウ膜塩スコアが得られる。
【０３６７】
実施例：本明細書に記載する化合物は、自己免疫性ブドウ膜炎を治療することにおいて抗力がある。EC1669は、自己免疫性ブドウ膜炎に対して葉酸受容体特異的活性を示す。EAUを呈している動物を、3つのグループに無作為に割り振る：(1)非処置EAUコントロール(n＝11)、(2)試験化合物処置グループ(n＝7)、such as EC1669、(3) EC1669＋EC0923などの試験化合物およびコンペティター化合物処置グループ(n＝7)、および(4)メトトレキサート(MTX)などの陽性コントロール処置グループ(n＝7)。すべての処置は、EAU誘導後第8日に開始する。EAUコントロールグループは、非処置である。EC1669処置グループの動物に、一日おきに(q2d)、250 nmol/kgの投与量で、EC1669の皮下投与を5回行う。EC1669＋EC0923処置グループの動物に、一日おきに250 nmol/kgの投与量で、EC1669、および葉酸コンペティターとして125 μmol/kgの投与量で、500倍過剰のEC0923の皮下投与を5回行う。MTX処置グループの動物に、一日おきに250 nmol/kgの投与量で、MTXの皮下投与を5回行う。各動物について、所定の頻度で、ブドウ膜炎スコアおよび動物の体重を記録する。検眼鏡を用いて、EAUの臨床的重篤度を毎日モニターし、動物当りの最大可能スコア8となる、眼当り0〜4のスケールで採点する。第16日に、動物を安楽死させ、ラットの眼球を組織学用にホルマリンで固定する。図12Aに示すように、疾患発病時におけるEC1669処置は、FR依存性様式でEAUの症状を効果的に低下させ、その活性は、皮下MTXと競合する。図12Bに示すように、処置に関連する体重減少は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する明細書に記載する結合体化合物では観察されなかった。
【０３６８】
実施例：図13Aに示すように、EC1496は、葉酸受容体特異的自己免疫性ブドウ膜炎に対して強力かつ有効である。図13Bに示すように、組織学によって組織を評価する。
【０３６９】
方法：自己免疫性脳脊髄炎(EAE)モデル。1 mgのグラウンデッド結核菌H37Raを含有するCFAと製剤された25 μgのモルモットミエリン塩基性タンパク質(MBP)に対する免疫化によって、ラットにおいて、EAEを誘導する。百日咳毒素(1 μg/ラット)を腹腔内投与して、臓器特異的自己免疫を増強する。誘導後第8日から開始して、ラットを4グループに分ける：(1)非処置コントロール(n＝8)、(2)試験化合物(n＝7)、および(3)試験化合物＋EC0923競合などのコンペティター化合物(n＝7)。すべての処置は、EAE誘導後の第8日に開始する。EAEコントロールグループの動物は、非処置のままである。試験化合物処置グループの動物に、一日おきに(q2d)、250 nmol/kgの投与量で、試験化合物の皮下投与を4回行う。試験化合物＋コンペティター化合物処置グループの動物に、一日おきに250 nmol/kgの投与量で、試験化合物、および例示的葉酸受容体コンペティターとして125 μmol/kgの投与量で、500倍過剰のEC0923などのコンペティター化合物の皮下投与を4回行う。EAEの臨床的重篤度を毎日モニターし、動物当り0〜5のスケールで採点する。EAEラットの上昇する麻痺の臨床的兆候を、0〜5のスケールに分ける：0＝疾患なし、0.5＝遠位尾部引きずり、1＝尾部引きずり、2＝軽度の麻痺；運動失調−弱った後肢、3＝中程度の麻痺；後肢不全麻痺、4＝完全後肢麻痺、5＝完全後肢麻痺および失禁（安楽死）。第16日に、動物を麻酔し、組織学用に脳および脊髄をホルマリンで固定する。
【０３７０】
実施例：本明細書に記載する化合物は、自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を治療することにおいて強力である。EC1669は、EAEに対して葉酸受容体特異的活性を示す。図14Aに示すように、疾患発病時におけるEC1669処置は、EAEの急性相中の神経症状を効果的に抑制する。図14Bに示すように、処置に関連する体重減少は、単独で投与される場合のEC1669では観察されなかった。EC1669の治療効果は、葉酸受容体コンペティターEC0923によって遮断される。
【０３７１】
実施例：図15に示すように、EC1496は、EAEに対して強力かつ有効である。処置に関連する体重減少は、単独で投与される場合のEC1496では観察されなかった。
【０３７２】
方法：ヒト血清安定性。従来のプロトコルおよび方法を用いて、本明細書に記載する化合物を安定性について試験する。簡単に言えば、試験化合物を、皮下注射などによって試験動物に投与する。結合体および任意に1つ以上の代謝物の血漿濃度を経時モニターする。結果をグラフにして、試験化合物および代謝物について、Cmax、Tmax、半減期およびAUCを決定する。
【０３７３】
実施例：少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する本明細書に記載する結合体化合物は、血漿中で、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを有さないコンパレーター結合体化合物よりも安定である。EC1495およびEC0746(コンパレーター化合物)をそれぞれ、皮下注射により、500 nmol/kgにて投与する。結合体および代謝物(アミノプテリンおよびアミノプテリンヒドラジドの血漿濃度を経時モニターする。図16Aおよび図16Bに示すように、EC1496は、EC0746より高いを示す。さらに、図16Aおよび図16Bは、EC1496が、EC0746よりも、実質的に少ない血漿中の薬物を放出することを示す。以下の表に示すように、親アミノプテリンおよびヒドラジド誘導体(EC0470)として、遊離薬物が放出される。
2015536323.tif 000583
【０３７４】
特定の理論に縛られることを望むものではないが、データは、EC1496などの少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する本明細書に記載する化合物がより大きい血漿安定性を示すことを示すと考えられる。さらに、ラットに皮下投与された後、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含しない比較例EC0746は、EC1496と比べて、2倍以上の薬物を放出する。EC1496はまた、EC0746よりも高いCmaxを示し、より高い有効治療用量をもたらす。最終的に、EC1496は、より短い半減期を示す。特定の理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載の結合体から早期に放出される薬物への曝露の期間もまた、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含しない化合物と比較して減少されるので、迅速なクリアランスがさらに、より低い毒性をもたらしうると考えられる。
【０３７５】
方法：血漿クリアランス。インビボ実験は、時点当り最低3匹の、ラットなどの試験動物を包含する。例示的に、内頸静脈カテーテルを付けた雌性ルイスラット(Harlan、レギュラーげっ歯類飼料)に、500 nmol/kgにて、EC1669などの試験化合物の単回皮下注射を行う。以下の時点で全血サンプル(300 μL)を採取する：注射後1分、10分、30分、1時間、2時間、3時間、4時間、8時間および12時間。血液サンプルを、0.15%酢酸溶液中の1.7 mg/mLのK3−EDTAおよび0.35 mg/mLのN−マレオニル−ベータ−アラニン(0.35 mg/mL)を含む抗凝固管に入れる。〜2,000 gにて3分間の遠心分離によって血漿サンプルを得、−80℃にて保管する。EC1669およびその活性代謝物であるアミノプテリン(AMT)およびAMTヒドラジド(EC0470)などの、血漿中の試験化合物および代謝物の量を、それぞれ、LC−MS/MSによって定量する。
【０３７６】
実施例：EC1669は、ラットにおいて皮下投与後に速い血漿クリアランスを示す。EC1669は、数分以内に血流中で検出可能であり、投与後30分以内に、〜472 nMのCmaxとなり、注射後60分までプラトーが維持される。EC1669誘導AMTおよびEC0470は、それぞれ、27 nMおよび21 nMという同様のCmax値で検出されるが、EC1669のCmaxと比較すると30分間の遅延がある。EC1669自体は、〜37分という除去半減期で血液から迅速に除去されるが、2つの代謝物の除去半減期は、それぞれ、66分(AMT)および112分(EC0470)と、約2〜3倍長い。EC1669、AMTおよびEC0470の対応する曲線下領域(AUC)値は、それぞれ、52、5.9および3.9 nmol*分/mLである。それらのAUC応答に基づいて、以下の表に示すように、12時間の採取期間にわたって、血漿中で、〜15.8%の活性薬物曝露/放出(AMT＋EC0470)が推定される。
2015536323.tif 000584
【０３７７】
特定の理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載の結合体からの早期放出薬物への曝露の期間が、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含しない化合物と比較して、減少されると考えられるので、EC1669などの本明細書に記載の化合物について観察される速い血漿クリアランスは、より低い宿主動物毒性をもたらしうると考えられる。
【０３７８】
方法：薬物動態的生体内分布。このセクションでの実験は、時点当り、最低3匹の試験動物(マウス)を包含した。3H−メトトレキサート(3H−MTX)などの陽性コントロールと比較した、3H−EC1669(標識薬物)などの試験化合物の薬物動態的生体内分布を、葉酸欠乏飼料で飼育する雌性Balb/cマウスにおいて観察する。化合物は、500 nmol/kgで単回皮下(SC)注射として投与される。全血(＞300 μL)および各〜100 mgのさまざまな対象組織を、さまざまな時点(10分、30分、1時間、2時間、4時間、8時間、12時間、24時間および72時間など)で採取する。血液サンプルを、BDマイクロテイナ管(ヘパリン)に入れ、遠心分離(4,000 g x 3分、4℃)して、血漿(＞100 μL)を分離させる。残っている赤血球(RBC)塊を、リン酸緩食塩水(PBS、pH 7.4)で2回洗浄して、RBCを得る。集めた組織を秤量し、処理して、3H−EC1669および3H−MTX分布を決定する：血漿、RBC、心臓、肺、肝臓(最小葉)、脾臓、腎臓(1)、腸(盲腸の上)、糞便物質(結腸から)、筋肉および脳。
【０３７９】
実施例：皮下投与後の3H−EC1669および3H−メトトレキサートの薬物動態的生体内分布の比較。比較的薬物動態的生体内分布の結果を図17に示す(グラム当りの注射された用量パーセント(ID%/g)として)。投薬後10分の時点で、31 ID%/gの3H−MTXが肝臓によって取り込まれる。血漿中に、3H−MTXよりも2倍多い3H−EC1669が、見い出される(5.2 ID%/g 対 12 ID%/g)。RBC、脾臓、肝臓、腸およびび便中の3H−MTX保持は、全サンプリング期間中、3H−EC1669保持より常に高い。3H−MTX保持がEC1669よりも高いことを示すRBCのデータを、図18にもプロットする。特定の理論に縛られることを望むものではないが、これらのデータは、EC1669が、肝クリアランスにおいてMTXとは有意に異なり、MTXが肝臓によって優先的に除去されることを示唆すると考えられる。特定の理論に縛られることを望むものではないが、これらのデータは、EC1669が、RBC取り込みにおいてMTXとは有意に異なり、細胞侵入の異なる方法を示唆するとも考えられる。報告によれば、MTXは、典型的には、遍在的に発現された減少した葉酸担体(RFC)を介して非優先的に細胞に侵入する。本明細書に記載する化合物は、機能的葉酸受容体を介して特異的細胞に侵入することが明らかである。特定の理論に縛られることを望むものではないが、RBCデータは、本明細書に記載する結合体の葉酸受容体媒介性活性をさらに支持すると考えられる。
【０３８０】
続いての腎/肝分泌実験では、3H−EC1669または3H−MTXの皮下投与前に6時間絶食させてマウスを代謝ケージに収容する。投与後24時間の時点で、3H−EC1669投与動物の蓄尿において、3H−MTX投与動物よりも〜14%放射能が高いことが見い出される。対照的に、3H−MTX投与動物の蓄便において、EC1669投与動物よりも2倍高い放射能が見い出された。特定の理論に縛られることを望むものではないが、これらのデータは、EC1669が、腎対肝クリアランス比においてMTXとは有意に異なり、EC1669が肝臓よりもむしろ腎臓によって優先的に除去されることを示唆すると考えられる。報告によれば、MTXは、主な副作用として、特に長期使用後に肝毒性を引き起こす。特定の理論に縛られることを望むものではないが、本明細書に記載する化合物の優先的腎クリアランスは、肝毒性などの副作用を少なくすると考えられる。
【０３８１】
実施例：本明細書に記載する化合物は、少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを有さない化合物よりも毒性が低い。試験化合物を、等しい投与量で葉酸欠乏ラットに静脈内投与する。図19に示すように、EC1496などの、本明細書に記載する少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する結合体は、比較例であるEC0746などの、該リンカーを含まない対応する結合体よりも毒性が低い。
【０３８２】
実施例：最大耐量(MTD)。少なくとも1つの非天然アミノ酸を含むリンカーを包含する本明細書に記載する結合体化合物は、1つ以上の非天然アミノ酸を含むリンカーを有さない化合物よりも改善された高いMTDを示す。雌性スプラーグ-ドーリーラットにおいて、試験化合物を、BIWで2週間静脈内投与する。図20に示すように、コンパレーター化合物EC0531は、0.33 μmol/kgのMTDを有するが、EC1456は、65%改善された、少なくとも0.51 μmol/kgのMTDを有する。組織病理学的変化は、MTD以下のEC1456の投与では観察されなかった。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：B−L(D)x(ここで、Bは、細胞表面受容体結合リガンドのラジカルであり、Dは、チューブリシンのラジカルであり、xは1であり；およびLは、1つ以上の非天然アミノ酸を含む多価放出可能なリンカーであり；および、ここで、Bは、Lに共有的に結合し、Lは、Dに共有的に結合する)で示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項２】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−立体配置を有する、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項３】
少なくとも1つの非天然アミノ酸が、D−アラニン、D−アスパラギン酸、D−アスパラギン、D−システイン、D−グルタミン酸、D−フェニルアラニン、D−ヒスチジン、D−イソロイシン、D−リシン、D−ロイシン、D−メチオニン、D−プロリン、D−グルタミン、D−アルギニン、D−セリン、D−トレオニン、D−バリン、D−トリプトファン、D−チロシンおよびD−オルニチンから選ばれる請求項１または２に記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項４】
Lが、少なくとも１つのD−システインおよび少なくとも２つのD−グルタミン酸を含む請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項５】
Bが、葉酸受容体結合リガンドである請求項１〜４のいずれか１つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項６】
Bが、葉酸塩である請求項１〜５のいずれか１つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項７】
Bが、D-葉酸塩である請求項１〜６のいずれか１つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項８】
Bが、式：
2015536323.tif 000585
である請求項１〜７のいずれか１つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項９】
Dが、式：
2015536323.tif 000586
または
2015536323.tif 000587
で示されるラジカルである請求項１〜８のいずれか１つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項１０】
B-Lが、式：
2015536323.tif 000588
で示されるラジカルである請求項１〜９のいずれか１つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項１１】
式：
2015536323.tif 000589
で示される請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項１２】
式：B−L(D)x(ここで、xは1であり、Dは薬物であり、およびB-Lは、式：
2015536323.tif 000590
であり、Lは、Dに共有的に結合する）で示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項１３】
Dが、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾミブ、チューブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エベロリムス、α−アマニチン、ベルカリン、ジデムニンB、ゲルダナマイシン、プルバラノールA、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポチロン、メイタンシンおよびチロシンキナーゼ阻害剤から選ばれる請求項１２に記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項１４】
1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用で、請求項１〜１３のいずれか1つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩を含む医薬組成物。
【請求項１５】
患者における癌の治療用医薬の製造における、任意に1つ以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せとの併用で、請求項１〜１３のいずれか1つに記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩の使用。
【国際調査報告】
2015536323.tif 000591
2015536323.tif 000592
2015536323.tif 000593