(57)【要約】【課題】本発明は、吸収性疎水性ポリオレフィンマトリックスを含むデバイス、システム、および使用方法、ならびに目的の検体を乾燥状態で含有する生体標本の液体懸濁液を貯蔵、保存、および回収するためのその使用方法を提供する。【解決手段】ポリオレフィンマトリックス上に吸収された目的の検体を含有する乾燥生体標本は、分子グレード水などで再構成され、ポリオレフィンマトリックスを圧縮することにより放出される。再構成された生体検体は、ウイルス核酸の定性および定量分析、そのようなウイルスの負荷試験、遺伝子型決定、および配列決定などの後次分析に適している。指示書付きのキット、および本発明の圧縮デバイスを使用して目的の検体を含有する生体標本を貯蔵、保存、および回収するためのその使用方法も提供される。【選択図】図８
2015525890.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体標本を保存および回収するための方法であって、
（ａ）側壁と、底部と、開閉可能で密閉可能な蓋とを有する内部空間を画定する容器を備え、吸収性３次元ポリオレフィンマトリックスが前記容器内に着脱可能に装着されたデバイス中に乾燥生体標本を提供することであって、前記ポリオレフィンマトリックスが、疎水性ポリオレフィン表面を持つ複数の間隙を含み、溶媒と、前記マトリックス上に吸収および乾燥させた生体標本とを含む少なくとも０．１ｍＬの蒸発体積の液体懸濁液から得られた前記乾燥生体標本をその中に含有している、提供することと、
（ｂ）前記ポリオレフィンマトリックス上の前記生体標本を、制御された体積の再構成媒質で再構成することと、
（ｃ）前記生体標本および再構成媒質を、前記マトリックスを圧縮することにより前記ポリオレフィンマトリックスから取り出すことと、を含む、方法。
【請求項２】
前記ポリオレフィンマトリックスが、実質的に疎水性の表面を有する複数の繊維を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリオレフィンマトリックス内の前記繊維が、ポリエチレン表面を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリオレフィンマトリックス内の前記繊維が、ポリエチレンでコーティングされたポリプロピレンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記ポリプロピレンおよびポリエチレンが、ほぼ等しい重量で存在する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記液体懸濁液の前記体積が、少なくとも０．５ｍＬである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記液体懸濁液の前記体積が、少なくとも１．０ｍＬである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記３次元ポリオレフィンマトリックスが、柱体、円盤、立方体、球体、角錐体、および円錐体からなる群から選択される形状である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記生体標本および再構成媒質が、シリンジ筒中の前記マトリックスを圧縮することにより前記ポリオレフィンマトリックスから取り出される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリオレフィンマトリックスが、前記ポリオレフィンマトリックスの前記体積の少なくとも５０％だけ圧縮される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ポリオレフィンマトリックスが、前記ポリオレフィンマトリックスの前記体積の少なくとも８０％だけ圧縮される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記生体標本が、核酸、タンパク質、炭水化物、脂質、全細胞、細胞断片、全ウイルス、およびウイルス断片からなる群から選択される目的の検体を含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記生体標本が、ＤＮＡおよびＲＮＡからなる群から選択される目的の検体を含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記生体標本が、全血、血漿、血清、リンパ液、滑液、尿、唾液、痰、精液、膣洗浄液、骨髄、脳脊髄液、生理学的体液、病理学的体液、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記生体標本を含む前記液体懸濁液が、細胞懸濁液、液体抽出液、組織ホモジネート、ＤＮＡまたはＲＮＡ合成からの媒質、生理食塩水、およびこれらの組み合わせをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記生体標本が、ウイルス負荷定量、遺伝子型決定、薬物耐性試験、または目的のウイルス核酸の他の分析に使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記目的のウイルス核酸が、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＨＢＶ、一本鎖または二本鎖ＲＮＡウイルス、一本鎖または二本鎖ＤＮＡウイルス、レトロウイルス、インフルエンザ、およびパルボウイルスＢ１９からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記目的のウイルス核酸が、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＨＢＶ、一本鎖または二本鎖ＲＮＡウイルス、一本鎖または二本鎖ＤＮＡウイルス、レトロウイルス、インフルエンザ、およびパルボウイルスＢ１９のゲノム内に含有される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
生体標本を保存および回収するためのデバイスであって、
（ａ）側壁、底部、および開閉可能で密封可能な蓋を有する内部空間を画定する密閉容器と、
（ｂ）前記容器内に着脱可能に装着された吸収性３次元ポリオレフィンマトリックスであって、疎水性ポリエチレン表面を有する複数の繊維により画定される複数の間隙を含み、かつ溶媒および生体標本を含む少なくとも０．５ｍＬの体積の液体懸濁液を同伴することができる、吸収性ポリオレフィンマトリックスと、を含む、デバイス。
【請求項２０】
前記ポリオレフィン吸収性マトリックスの前記繊維が、ポリエチレン表面で実質的にコーティングされたポリプロピレンコアを含む、請求項１９に記載のデバイス。
【請求項２１】
前記ポリオレフィンマトリックスが、柱体、円盤、立方体、球体、角錐体、および円錐体からなる群から選択される形状である、請求項１９に記載のデバイス。
【請求項２２】
前記ポリオレフィンマトリックスが、少なくとも１．０ｍＬの体積の液体懸濁液を同伴することができる、請求項１９に記載のデバイス。
【請求項２３】
前記ポリオレフィンマトリックスが、約０．０７７ｇ／ｃｃの密度を有する、請求項１９に記載のデバイス。
【請求項２４】
前記ポリオレフィンマトリックスが、前記ポリオレフィンマトリックスに対してプランジャーに力を印加することにより圧縮される、請求項１９に記載のデバイス。
【請求項２５】
前記ポリオレフィンマトリックスが、少なくとも５０％圧縮可能な体積を有する、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項２６】
前記生体標本が、ＲＮＡまたはＤＮＡを含有する、請求項１９に記載のデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、マトリックスを保存する生体標本、ならびにそれとともに使用するためのシステム、デバイス、および方法に関する。より具体的には、本発明は、ウイルス負荷、遺伝子型決定、および抗ウイルス薬耐性試験などの後次の定性および定量実験室分析のためのウイルスＤＮＡおよびＲＮＡ標本などの核酸の収集、貯蔵、および回収のためのマトリックスおよびシステムに関する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年８月６日に出願された米国仮出願第６１／６８０，１９３号の優先権を主張し、その全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
生体標本は、多くの場合、その中に含有される様々な検体のレベルおよび濃度の分析のために収集、輸送、および保管される。従来、生体標本の液体懸濁液は、冷蔵下で密封した気密管中に保管される。液体試料の収集、処理、輸送、および貯蔵は、それと関連付けられる多くの問題、例えば、遠隔収集センターにおける冷蔵（通常、ドライアイスによる）費用、試料の喪失を引き起こす容器破損または漏出のリスクおよび感染の危険性、出荷および貯蔵中の試料の不安定性、輸送キャリアによる液体バイオハザード出荷の受諾拒否、ならびに後次定性および定量分析の実験室方法に適合する量を保証するために適正な試料体積の収集を有する。上記問題に対処する費用は莫大である。
【０００４】
濾紙上の乾燥血斑（ＤＢＳ）および乾燥血漿斑（ＤＰＳ）試料採取は、液体試料採取手順の代替方法であり、世界中で使用されてある程度の成功をもたらしている。１９８０年代以降、Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｅｌｌ  Ｃｏｒｐ．、Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ  Ｃｏｒｐ．、およびＷｈａｔｍａｎ，Ｉｎｃ．などの製造者は、ＤＢＳおよびＤＰＳ試料採取のための濾紙を生産している。これらの市販の生体試料採取濾紙システムを使用する際に、血斑または血漿斑を濾紙の１つ以上の指定領域に置き、乾燥させ、次いで試験申請書を添えて実験室に郵送する。Ｗｈａｔｍａｎ  ３ＭＭ、ＧＦ／ＣＭ３０、ＧＦ／ＱＡ３０、Ｓ＆Ｓ  ９０３、ＧＢ００２、ＧＢ００３、またはＧＢ００４などの一般に使用される濾紙は、当業者に既知である。例えば、Ｓ＆Ｓ  ９０３セルロース（木材または木綿由来）濾紙およびＷｈａｔｍａｎガラス繊維濾紙といった血液標本収集のためのブロッティング物質のいくつかのカテゴリーが使用可能である。しかしながら、ある不利益がこれらの市販の濾紙と関連付けられた。具体的に、これらの市販の一般に使用されるある材料は、ある定性および定量バイオアッセイを実行するために好ましい精密な値および精度を提供する特徴を欠く。
【０００５】
遺伝物質は、遺伝子分析に使用するために十分な量の先行技術ＤＢＳから抽出および単離することができる。例えば、ＤＢＳは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による出生前ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の検出に使用されている（Ｃａｓｓｏｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３０（１２）：３０３９−４２，１９９２）。ＤＰＳおよびＤＢＳは、ＨＩＶ  ＲＮＡ検出および定量化（Ｃａｓｓｏｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３５：２７９５−２８０１，１９９７；Ｆｉｓｃｕｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３６：２５８−６０，１９９８；Ｏ′Ｓｈｅａ，ｅｔ  ａｌ．，ＡＩＤＳ  １３：６３０−１，１９９９；Ｂｉｇｇａｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｆｅｃ．Ｄｉｓ．１８０  １８３８−４３，１９９９；Ｂｒａｍｂｉｌｌａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４１（５）：１８８８−９３，２００３）、ＨＩＶ  ＤＮＡ検出および定量化（Ｐａｎｔｅｌｅｅｆｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３７：３５０−３，１９９９；Ｎｙａｍｂｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３２：２８５８−６０，１９９４）、およびＨＩＶ抗体検出（Ｅｖｅｎｇａｒｄ，ｅｔ  ａｌ．，ＡＩＤＳ  ３：５９１−５，１９８９；Ｇｗｉｎｎ，ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＭＡ  ２６５：１７０４−０８，１９９１）にも使用され、ある程度の成功をもたらしている。ＨＣＶ  ＲＮＡ検出および遺伝子型決定もＤＢＳを使用して報告される（Ｓｏｌｍｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ．４０（９）：３５１２−１４，２００２）。これらの研究は、ＤＰＳまたはＤＢＳを使用するとき、従来の液体血漿試料と比較して、力価との良好な相関が得られることを提供するが、室温貯蔵後にウイルス価の喪失が発生し得る（Ｃａｓｓｏｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３５：２７９５−２８０１，１９９７；Ｆｉｓｃｕｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３６：２５８−６０，１９９８）。ＤＢＳおよびＤＰＳ試料は、液体試料よりも明らかに安価で輸送に対する危険性が低い。
【０００６】
しかしながら、濾紙上のＤＢＳおよびＤＰＳからの検体微量抽出の手順は、多数の不利益を被る。例えば、濾紙からの十分なＤＮＡまたはＲＮＡの微量抽出は、例えば、渦流および遠心分離といった目的の遺伝子検体を損傷するある活発な手順の下で液体媒質中の再構成を必要とする。さらに、フィルターの繊維および他の成分は、再構成溶液の中に移動し、さらなる遠心分離を必要とし、および／または遺伝物質を単離する能力を、例えば、遺伝物質が分離カラムに接着するのをブロックすることにより妨げることができる。こうした以前の微量抽出手順は、高標準の技術支援を必要とし、それでも所望のレベルの感受性、再現性、定量化、および特異性を持つ結果を一貫して提供しない。
【０００７】
さらに、濾紙上のＤＢＳおよびＤＰＳに使用される試料体積は、通常５０〜２００μＬスポットに限定され、特に所望の検体物質の濃度が試料中で低いとき、検体検出ならびに正確な定量化および再現性において相当の困難に遭遇する可能性がある。先行技術においても、その中に含有される遺伝物質などの検体を分解する酵素および化学物質の意図的阻害が欠失している。静菌剤の存在下であっても、遺伝物質の酵素的、非酵素的、および自己溶解性破壊を許す条件が存在する。さらに、濾紙上のＤＢＳまたはＤＰＳからの遺伝物質の微量抽出は、高分子量ＤＮＡまたはＲＮＡの吸収が必要である場合、相当に困難である。新たな物質および輸送方法の導入は、試料が処理される方法を継続的に改善するが、後次分析に使用可能な試料の量および質は、以前として研究者および医師にとって同様に大きな関心事である。
【０００８】
米国特許第７，６３８，０９９号は、生体試料の収集、貯蔵、および輸送に有益な代替システムを提供する。参照文献は、吸収性マトリックス物質に有益であるとして、酢酸セルロース繊維および親水性ポリマー繊維の使用を示唆する。しかしながら、ある状況に対し、例えば試料中のウイルス負荷のより正確で再現可能な定量化を達成するようにさらなる改善が望まれる。
【０００９】
したがって、特に大領域研究において、および発展途上国ではよくあることだが、収集、遠心分離、貯蔵、および出荷が困難であり得る環境での適用のために、乾燥状態の目的の検体を含有する生体標本の液体懸濁液の収集、貯蔵、および輸送のための改善されたデバイスの必要性がある。さらに、その中に含有される目的の検体の検出、再現性、および定量化の精密な値および正確性を提供する後次分析のために、ウイルス標本の改善された回収の必要性がある。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、安全、便宜的、および簡素なデバイスならびに目的の検体を含有する生体標本の保存、貯蔵、および輸送のための方法を提供する必要性を部分的に満たす。本発明は、より望ましい検出の感度および特異性を提供する後次分析のために、目的の検体を含有する生体標本を回収する必要性も部分的に満たす。より具体的に、本発明は、患者におけるウイルス負荷の正確および再現可能な定量化のためのデバイス、システム、および方法として使用するために、疎水性ポリオレフィンポリマーを含む改善されたマトリックス貯蔵物質を提供する。本発明は、乾燥状態の生体標本の液体懸濁液を保存、貯蔵、および輸送するため、ならびに研究および施設確認される臨床試験における使用のための生体標本に含有される目的の検体をさらに再構成するための新規のデバイスおよび方法を提供する。
【００１１】
ある実施形態において、吸収性ポリオレフィンマトリックスは、ポリエチレンを含む疎水性ポリマーを含む。ある実施形態において、吸収性ポリオレフィン繊維マトリックスは、疎水性ポリエチレン表面コーティングを含む。ある実施形態において、マトリックスは、複数のポリオレフィン繊維ストランドを含み、吸収性ポリオレフィン繊維マトリックス内の各個別の繊維ストランドは、コアおよび外鞘で構成される。ある実施形態において、各繊維のコアは、ポリプロピレンを含み、各繊維の外側コーティング鞘は、ポリエチレンを含む。ある実施形態において、ポリオレフィン繊維マトリックス内の各個別の繊維ストランドは、約５０％ポリプロピレンを含む各ストランドのコア、および約５０％ポリエチレンを含む各ストランドのコアを取り囲む疎水性外鞘で構成される。
【００１２】
提示されたデータに基づき、本発明は、疎水性ポリオレフィン繊維マトリックスが、定量化および定性化のための核酸の吸収、保存、安定化、および後次回収のための以前の乾燥回収デバイスと比較して優れていることを提供する。理論に束縛されるものではないが、これらの驚くべき結果は、ポリオレフィンマトリックス内の埋め込まれた疎水性間隙、またはポケットの特製に起因すると考えられる。これらのポケットは、検体を存在させる容器を提供し、例えば、核酸といった検体から水を排除する一方、貯蔵中に安定した環境を提供する。改善された疎水性ポリオレフィンマトリックスは、さらに極性溶媒がより一貫して効率的に蒸発するのを許す。したがって、改善されたポリオレフィンマトリックスは、例えば、セルロースマトリックスよりも良好に検体を保持し、マトリックス内の粒子を懸濁する。マトリックス中の親水性ポリマー表面がより望ましいという先行技術における教示に反して、マトリックス中の疎水性ポリオレフィン表面は驚くほど有益であることが発見された。したがって、例えば、実質的に清浄なウイルス核酸は、優れた効率性とともに再構成されたマトリックスから溶出することができ、生体試料中のウイルス負荷の驚くほど正確な程度の定量化および定性化を許す。
【００１３】
本発明のポリオレフィン繊維マトリックスは、その上に吸収および乾燥された生体標本の０．０５ｍＬ以上の液体懸濁液を吸収する。ある実施形態において、ポリオレフィン繊維マトリックスは、少なくとも０．１ｍＬまたは０．５ｍＬの液体懸濁液を吸収する。さらに他の実施形態において、ポリオレフィン繊維マトリックスは、少なくとも１ｍＬ、１．５ｍＬ、２．０ｍＬ、２．５ｍＬ、３．０ｍＬ、またはそれ以上の生体標本の液体懸濁液を吸収する。
【００１４】
本発明は、吸収性ポリオレフィン繊維マトリックスが、多数の疎水性ポケットを内包する一方、マトリックスの体積の少なくとも１０％だけマトリックスに対して力を印加することにより圧縮され、その中に貯蔵される再懸濁された生体標本の一部分を放出できることを提供する。他の実施形態において、マトリックスは、該マトリックスの体積の少なくとも２０％、５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、またはそれ以上だけ圧縮され、マトリックス中に貯蔵される生体標本の液体懸濁液の一部分を放出することができる。言い換えれば、マトリックスは、少なくとも１０％多孔性であるか、またはその中での生体標本の貯蔵のために、ポリオレフィン繊維マトリックス内に多数の疎水性ポケットを含む少なくとも１０％の使用可能な空間を画定する。
【００１５】
ある実施形態において、ポリオレフィン繊維マトリックスは、種々の異なる形状の３次元であり、限定されないが、柱体、円盤、立方体、球体、角錐体、円錐体、凹形、ジグザグ形、陥入形、または他の形状、ならびに吸収のためおよび容器内側に適合するのに適した表面性状が挙げられる。ある実施形態において、マトリックスは、長さ約１８ｍｍ〜２４ｍｍ、または２１ｍｍおよび直径５ｍｍ〜１５ｍｍ、または９ｍｍの柱体形状であり、約０．０１ｇ／ｃｃ〜０．１ｇ／ｃｃ、または約０．０７７ｇ／ｃｃの密度を持つ。ある実施形態において、ポリオレフィン繊維サイズの大半は、約１〜１００ミクロン、１０〜５０ミクロン、または２０〜２５ミクロンの範囲であり、多数の疎水性ポケットを含有する。
【００１６】
本発明は、冷蔵または冷凍出荷および貯蔵の必要なく、空気乾燥させた体液試料の生体試験を可能にするデバイスおよび方法を提供する。本発明のデバイスおよび方法は、感染物質を世界中に出荷する費用、特に大規模臨床試験と関連付けられる費用を著しく低減する能力を提供する。さらに、生体標本を保存するための本発明のデバイスおよび方法が適用可能であり、定性および定量核酸分析を含む広範の難解な標準臨床試験を含む。
【００１７】
ある実施形態において、本発明は、目的の検体を含有する生体標本を保存および回収するためのデバイス、およびその使用方法を提供する。より具体的に、デバイスは、側壁と、底部と、開閉可能で密封可能な蓋またはキャップとを有する内部空間を画定する第１の密閉容器を備える。ある実施形態において、第１の密閉容器は、密封可能なキャップを有する管であり、吸収性３次元ポリオレフィン繊維マトリックスがその中に装着される。ある実施形態において、管またはキャップの内部は、内面延長を有し、吸収性３次元マトリックスがその上に着脱可能に装着される。
【００１８】
ある実施形態において、本発明は、目的の検体、例えば、無傷のウイルスＲＮＡまたはＤＮＡの再構成、圧縮、および放出のために、シリンジ筒形状またはマトリックスをその中に受容するための任意の他の好適な形状を持つ第２の密閉圧縮容器をさらに含む。ある実施形態において、マトリックスからの目的の検体の貯蔵、輸送、再構成、および放出のために、たった１つの容器が必要とされる。
【００１９】
ある実施形態において、デバイスは、任意に、マトリックスの乾燥状態ならびにそれがマトリックス上に含有する目的の生体標本および検体の完全性を維持するようにマトリックスと蒸気連通する密閉容器内に乾燥剤を含んでよい。例示の好適な乾燥剤として、限定されないが、モンモリロナイト粘土、塩化リチウム、活性アルミナ、アルカリアルミノケイ酸塩、ＤＱ１１ブリケット、シリカゲル、分子篩、硫酸カルシウム、または酸化カルシウムが挙げられる。ある実施形態において、乾燥剤は、比色分析手段によってその水分含有量を示す。他の実施形態において、溶媒が効率的に放出されない親水性酢酸セルロースマトリックスとは異なり、本発明の疎水性ポリオレフィン繊維マトリックスは、溶媒がより一貫して効率的に蒸発するのを許すため、乾燥剤は必須ではない。
【００２０】
本発明に従い、目的の検体として、限定されないが、核酸、タンパク質、炭水化物、脂質、全細胞、細胞断片、全ウイルス、またはウイルス断片が挙げられる。ある実施形態において、目的の検体は、ＤＮＡおよびＲＮＡ分子のいずれかまたは両方を含む核酸である。本発明は、具体的に、生体標本または対象におけるウイルス負荷を決定し、遺伝子型決定するために、ＲＮＡ、例えば、全ウイルスの検出および定量化のための改善されたシステムおよび方法を提供する。
【００２１】
ある実施形態において、目的の核酸は、ＨＣＶまたは他の一本鎖ＲＮＡウイルスである。ある実施形態において、目的の核酸は、ＨＩＶまたは他のレトロウイルスである。ある実施形態において、目的の核酸は、ＨＢＶまたは他の二本鎖ＤＮＡウイルスである。ある実施形態において、目的の核酸は、インフルエンザまたは他の二本鎖ＲＮＡウイルスである。ある実施形態において、目的の核酸は、パルボウイルスＢ１９または他の一本鎖ＤＮＡウイルスである。ある実施形態において、目的の核酸は、ＨＣＶゲノムまたは他の一本鎖ＲＮＡウイルスのゲノム内に含有される。ある実施形態において、目的の核酸は、ＨＩＶゲノムまたは他のレトロウイルスのゲノム内に含有される。ある実施形態において、目的の核酸は、ＨＢＶゲノムまたは他の二本鎖ＤＮＡウイルスのゲノムである。ある実施形態において、目的の核酸は、インフルエンザゲノムまたは他の二本鎖ＲＮＡウイルスのゲノムである。ある実施形態において、目的の核酸は、パルボウイルスＢ１９または他の一本鎖ＤＮＡウイルスのゲノムである。
【００２２】
本発明に従い、生体標本として、限定されないが、全血、血漿、尿、唾液、痰、精液、膣洗浄液、骨髄、脳脊髄液、他の生理学的体液、もしくは病理学的体液、またはこれらの組み合わせのいずれかが挙げられる。ある実施形態において、生体標本は、ＤＮＡおよびＲＮＡ分子のいずれかまたは両方を含む、核酸などの目的の検体を含有する全血などのヒト体液である。ある実施形態において、目的の検体は核酸であり、生体標本は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子のいずれかまたは両方を少なくとも５ｎｇ〜１μｇ含む。さらに他の実施形態において、生体標本は、液体懸濁液中に含有される。本発明に従い、液体懸濁液として、限定されないが、細胞懸濁液、液体抽出物、組織ホモジネート、ＤＮＡまたはＲＮＡ合成からの媒質、生理食塩水、または任意のこれらの組み合わせが挙げられる。
【００２３】
本発明は、本発明により提供されるデバイス中のマトリックスから、ＲＮＡなどの目的の検体を含有する生体標本を保存および回収するためのシステムおよび方法をさらに提供する。ある実施形態において、該方法は、疎水性ポリオレフィン繊維で構成される吸収性マトリックスを含むデバイスを提供する以下のステップを含み、ある実施形態において、各繊維のストランドは、コアおよび外鞘表面で構成され、各ストランドの該コアは、ポリプロピレンを含み、各ストランドの該外鞘表面は、ポリエチレンを含む。該方法において、マトリックスは、液体および目的の検体を含有する生体標本を含む少なくとも０．０５ｍＬの体積の蒸発させた液体懸濁液から得られる、その上に含有される乾燥した生体標本とともに提供され得る。該方法は、制御量の再構成媒質でマトリックス上に生体標本を再構成することと、例えば、マトリックスを圧縮することによりマトリックスから生体標本を取り出すことと、をさらに含む。
【００２４】
ある実施形態において、再構成溶液は水媒質である。他の実施形態において、再構成緩衝液は、１Ｘリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、または任意にアジ化ナトリウムもしくは他の抗菌剤を含む無ヌクレアーゼ水を含む。さらに他の実施形態において、再構成緩衝液は、「溶解」緩衝液である。再構成緩衝液は、任意の数または組み合わせの使用可能な生物学的保存剤または血液抗凝固剤を含んでもよく、限定されないが、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸ナトリウム、およびヘパリンが挙げられる。
【００２５】
一実施形態において、該方法は、第２の容器、例えば、シリンジ筒中のマトリックスを圧縮する前に、容器からマトリックスを取り出すことを含むことができる。さらに別の実施形態において、マトリックスの圧縮は、同じ容器内の疎水性ポリオレフィンマトリックスに対して力を印加して目的の検体を放出することにより達成される。本発明に従い、圧縮デバイス中の疎水性ポリオレフィンマトリックスは、マトリックスの体積の少なくとも１０％、２０％、２５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、またはそれ以上だけ圧縮して、マトリックス中に懸濁される生体標本の一部分を放出することができる。
【００２６】
本発明は、目的の検体を含有する生体標本の液体懸濁液を保存するため、ならびにフォローアップ回収および分析のためのキットをさらに提供する。ある実施形態において、該キットは、本発明により提供される圧縮デバイスと、目的の検体を含有する生体標本を保存するための指示書と、を含む。該キットは、検体の分解を阻害する安定化溶液をさらに含むことができる。該キットは、生体標本中に含有される目的の検体を回収するための再構成媒質、圧縮デバイス、およびさらなる指示書をさらに含むことができる。ある実施形態において、圧縮デバイスは、カップが取り付けられたプランジャーを含有するシリンジ筒形状を持つ管を備え、マトリックスが永久に付着され、該マトリックスの圧縮がプランジャーに力を印加することにより達成されるようにし、マトリックスの体積の少なくとも１０％〜９０％、またはそれ以上が圧縮され、結合された生体標本の一部分を放出する。
【００２７】
本発明は、目的の検体を含有する回収された生体標本を使用する後次分析をさらに提供する。ある実施形態において、目的の検体は、当該技術分野において既知の分析および診断方法を使用して検出または分析されるＲＮＡ分子である。ある実施形態において、目的の検体は、ＨＣＶまたはＨＩＶなどの無傷のウイルスであり、デバイスから回収された生体標本は、再現性、正確性、および精度の評価および分析的測定に使用される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１Ａ】本発明の一実施形態に従う組み立てデバイスの斜視図である。
【図１Ｂ】試料追加の準備ができている本発明の一実施形態に従う解体デバイスの斜視図である。
【図２】本発明の一実施形態に従うデバイスのポリオレフィンマトリックスへの試料の追加を示す。
【図３】本発明の一実施形態に従うデバイスのポリオレフィンマトリックスへの試料の追加を示す。
【図４】本発明の一実施形態に従うデバイスのポリオレフィンマトリックスを空のシリンジ筒に移入する準備の斜視図である。
【図５】ポリオレフィンマトリックスのシリンジ筒への完全送達の斜視図である。
【図６】ピペットチップによりマトリックスの上に静かに置かれ、再構成緩衝液をゆっくり分注するポリオレフィンマトリックスの再水和を示す。
【図７Ａ】プランジャーのシリンジ筒への挿入を示す。
【図７Ｂ】シリンジプランジャーへの圧力の印加を示す。
【図７Ｃ】ポリオレフィンマトリックスプラグの圧縮を示す。
【図７Ｄ】試料回収の完了を示す。
【図８】Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイを使用するマトリックス比較研究のための線形回帰分析を提供する。
【図９】新鮮な血漿および本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料を使用する試料相関およびＨＣＶウイルス負荷を提供する。
【図１０】新鮮な血漿および本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理され、ｍＬｙｓｉｓで回収された血漿試料を使用する試料相関およびＨＩＶ−１ウイルス負荷を提供する。
【図１１】新鮮な血漿および本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理され、水で回収された血漿試料を使用する試料相関およびＨＩＶ−１ウイルス負荷を提供する。
【図１２】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用するＨＣＶ分析測定範囲の決定を提供する。
【図１３】Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＡｍｐｌｉＰｒｅｐ／ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶアッセイを使用する冷凍血漿および本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料の比較を提供する。
【図１４】Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＡｍｐｌｉＰｒｅｐ／ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＩＶアッセイを使用する冷凍血漿および本発明のＶｉｖｅｓＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料の比較を提供する。
【図１５】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用するＨＩＶ−１分析的測定範囲の決定を提供する。
【図１６】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する周囲条件でのＨＣＶ７日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図１７】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する周囲条件での７日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図１８】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理されていない名目冷凍血漿における初期試験点（１日目）で分析されたＨＣＶ力価、および７日間ＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵され、その後にＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図１９】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する周囲貯蔵条件でのＨＣＶ  ２１日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図２０】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する周囲貯蔵条件での２１日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図２１】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する４℃貯蔵条件でのＨＣＶ  ２１日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図２２】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する４℃貯蔵条件での２１日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図２３】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する４０℃／７５％  ＲＨ貯蔵条件でのＨＣＶ  ２１日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図２４】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する４０℃／７５％  ＲＨ貯蔵条件での２１日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図２５】２１日貯蔵後の貯蔵条件によって見られる、２１日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図２６】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用する周囲条件でのＨＩＶ−１安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図２７】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用する周囲条件でのＨＩＶ−１安定性研究における標的および実際のＨＩＶ−１力価の比較を提供する。
【図２８】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する周囲貯蔵条件でのＨＣＶ  ６２日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図２９】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する周囲貯蔵条件での６２日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図３０】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する４℃貯蔵条件でのＨＣＶ  ６２日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図３１】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する４℃貯蔵条件での６２日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図３２】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する４０℃／７５％  ＲＨ貯蔵条件でのＨＣＶ  ６２日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図３３】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する４０℃／７５％  ＲＨ貯蔵条件での６２日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図３４】６２日貯蔵後の貯蔵条件によって見られる、６２日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図３５】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用する周囲条件でのＨＩＶ−１  ６２日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図３６】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用する周囲条件での６２日安定性研究における標的および実際のＨＩＶ−１力価の比較を提供する。
【図３７】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用する４℃貯蔵条件でのＨＩＶ−１  ６２日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図３８】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用する４℃貯蔵条件での６２日安定性研究における標的および実際のＨＩＶ−１力価の比較を提供する。
【図３９】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用する４０℃／７５％  ＲＨ貯蔵条件でのＨＩＶ−１  ６２日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図４０】濃度レベルによって見られる、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用する４０℃／７５％  ＲＨ貯蔵条件での６２日安定性研究における標的および実際のＨＩＶ−１力価の比較を提供する。
【図４１】６２日貯蔵後の貯蔵条件によって見られる、６２日安定性研究における標的および実際のＨＩＶ−１力価の比較を提供する。
【図４２】標的および達成された冷凍血漿試料の線形回帰分析を提供する。
【図４３】ＨＩＶ−１検出限界（ＬＯＤ）評価のプロビット分析を提供する。
【図４４】Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶ試験（ｖ２．０）を使用する、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料および冷凍血漿について、回帰分析を提供する。
【図４５】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶ試験（ｖ２．０）を使用する周囲貯蔵条件でのＨＣＶ  ７日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図４６】Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶ試験（ｖ２．０）を使用する周囲貯蔵条件での７日安定性研究における標的および実際のＨＣＶ力価の比較を提供する。
【図４７】標的および達成された冷凍血漿試料の線形回帰分析を提供する。
【図４８】ＨＣＶ  ＬＯＤ／ＬＯＱ研究のプロビット分析を提供する。
【図４９】３マトリックス上に負荷された１．０ｍＬを示す。全てのマトリックスが、全ての物質を完全に吸収したことを実証する、負荷時に取られた写真。
【図５０】負荷された１．０ｍＬ、１．５ｍＬ、および２．０ｍＬを示す。負荷時に取られた写真。１．５ｍＬの場合、標本は完全に吸収されず、液体が逆キャップの内縁に貯留したことが観察された。２．０ｍＬの場合、標本は完全に吸収されず、液体が逆キャップの内縁を越えて流れ、逆キャップの外縁に貯留したことが観察された。
【図５１】負荷された１．０ｍＬ、１．５ｍＬ、および２．０ｍＬを示す。負荷後３０分に取られた写真。１．５ｍＬの場合、全ての標本がマトリックスにより完全に吸収されたことが観察された。２．０ｍＬの場合、標本はまだ完全に吸収されず、液体が依然として逆キャップの外縁に貯留したことが観察された。
【図５２】負荷された１．０ｍＬ、１．５ｍＬ、および２．０ｍＬを示す。終夜乾燥した後に取られた写真。全てのマトリックスを乾燥させた。１．５ｍＬの場合、全ての標本がマトリックスにより完全に吸収され、乾燥されたことが観察された。２．０ｍＬの場合、マトリックスは全ての標本を吸収せず、乾燥した標本が逆キャップの外縁に現れたことが観察された。
【図５３】Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用するＨＩＶ−１濃度研究の結果のボックスプロットを提供する。
【図５４】Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用する本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料（ｎ＝１８０）の散布図を提供する。
【図５５】Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイを使用する本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料および冷凍血漿試料について、回帰分析を提供する。
【図５６】本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料のＡｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイを使用する周囲貯蔵条件でのＨＢＶ６０日安定性研究の線形回帰分析を提供する。
【図５７】Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイを使用する周囲貯蔵条件での６０日安定性研究における標的力価および実際の力価の比較を提供する。
【図５８】標的および達成された冷凍血漿試料の線形回帰分析を提供する。
【図５９】ＨＢＶ  ＬＯＤ／ＬＯＱ研究のプロビット分析を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、以下の本発明の好ましい実施形態の詳細な説明および本明細書に含まれる実施例への参照によって、より容易に理解することができる。しかしながら、本デバイス、物質、および方法を開示および説明する前に、該デバイス、物質および方法の特定の実施形態が、当然ながら多様であり得、その多数の変更および変化形が当業者には明らかであろうため、本発明はこれらに限定されないことを理解されたい。本明細書に使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、制限することを意図するものではないこともまた、理解されたい。
【００３０】
本発明は、目的の検体を含有する生体標本の液体懸濁液の回収、貯蔵、および輸送のためのデバイスおよび方法を提供する。より具体的に、本発明は、使用するのに便宜的で簡素な乾燥状態の生体標本を含有する液体懸濁液の回収、貯蔵、および輸送のためのデバイスおよび方法を提供する。本明細書において使用される場合、「１つの（ａまたはａｎ）」という用語は、それらが使用される文脈に応じて１つまたは複数を意味する。例えば、試料中の「１つの検体」は、特定型の目的の検体を指し（例えば、無傷のＨＣＶまたはＨＩＶ  ＲＮＡなど）、試料中に多数の複製が存在し得る。試料が検体を含有すると称される場合、試料は、多くの他の型の目的の検体も含有し得ることを理解されたい。
【００３１】
本発明に従い、生体標本が保存され得る期間は、生体標本の試料を回収源から後次分析が行われる場所に移すのに必要な時間と同じだけ短くてよい。したがって、本発明は、そのような保存が数分、数時間、数日、数ヶ月、またはそれ以上の期間発生し得ることを提供する。生体標本が本発明により提供されるデバイス中に貯蔵され得る温度条件は限定されない。通常、試料は、周囲温度または室温、例えば、約１５℃〜約４０℃、好ましくは約１５℃〜２５℃で出荷および／または貯蔵される。別の実施形態において、試料は、低温環境に貯蔵されてよい。例えば、短期間貯蔵において、試料は、約２℃〜約１０℃で冷蔵され得る。さらに別の実施例において、試料は、約４℃〜約８℃で冷蔵されてよい。別の実施例において、長期貯蔵において、試料は、約−８０℃〜約−１０℃で冷凍され得る。さらに別の実施形態において、試料は、約−６０℃〜約−２０℃で冷凍され得る。さらに、デバイスは、好ましくは、乾式もしくは乾燥した条件または不活性雰囲気下で貯蔵され得るが、必ずしもそうとは限らない。
【００３２】
ある実施形態において、本発明は、側壁と、底部と、開閉可能で密封可能な蓋またはキャップとを有する内部空間を画定する第１の密閉容器を備え、吸収性３次元疎水性ポリオレフィン繊維マトリックスが第１の密閉容器内に配置されたデバイスを提供する。本発明は、シリンジ筒形状または任意の他の好適な形状を持つ第２の容器と、それとともに含有されるプランジャーと、をさらに備えることができ、マトリックスは、目的の検体の圧縮および放出のためにその中に置かれ得る。ある実施形態において、マトリックスは、生体標本とともに負荷して乾燥することができ、保護的な乾式輸送容器として機能し、目的の検体の放出のための再構成マトリックスの圧縮のために構成された単一容器中に置かれ得る。
【００３３】
第１または第２の容器の形状は限定されないが、例えば、柱状、長方形、または管状であり得る。容器の構成のための物質は限定されないが、例えば、プラスチック、金属箔、金属箔を含む積層体、金属化フィルム、ガラス、酸化シリコンでコーティングされたフィルム、酸化アルミニウムでコーティングされたフィルム、液晶ポリマー層、およびナノコンポジットの層、金属または合金、アクリル、および非晶質炭素であり得る。ある実施形態において、本発明は、ねじ込みスクリューキャップを有する第１の密閉容器を提供する。他の実施形態において、蓋またはキャップは、フリップトップ様式などで第１の密閉容器に取り付けられたままであり得る。さらに他の実施形態において、蓋またはキャップは、コーク様または任意の他の開閉可能な構成であってもよい。蓋またはキャップは、第１の密閉容器が閉じられるときに気密密封を提供することもできる。
【００３４】
デバイスは、生体標本を保持し、その中で目的の検体を乾燥し、検体を再構成および放出するための疎水性ポリオレフィン繊維マトリックスも含む。ある実施形態において、疎水性マトリックスは、製造中に品質制御され得るポリオレフィン繊維から作製される。本明細書において使用される場合、「ポリオレフィン繊維マトリックス」という用語は、モノマーとして簡素なオレフィン（一般式ＣｎＨ２ｎを持つアルケンとも呼ばれる）から生産される少なくとも１種のポリオレフィンポリマーで作製された繊維マトリックスを指す。「疎水性」ポリオレフィン表面という用語は、例えば、最小または実質的に存在しないポリオレフィン表面と水分子との間の水素結合または他の化学結合相互作用に起因するように、一般に水をはじくか、または湿潤に耐えるポリオレフィン表面を説明するために使用される。疎水性ポリオレフィン表面は、一般に、極性溶媒、特に水、または他の極性基と相互作用する分子実体または置換基を欠失する。一態様において、ポリオレフィン表面の疎水性は、接触角、θＣによって定量化することができ、これはポリオレフィン表面と接触点、つまり、水／空気（または水／蒸気）界面がポリオレフィン表面に触れる場所における水表面の接線との間の角度である。例えば、水接触角が約８５°を上回る場合、ポリオレフィン表面は「疎水性」と見なすことができる。別の態様において、水接触角が約９０°を上回る；あるいは約９５°を上回る；あるいは約１００°を上回る；あるいは約１０５°を上回る；あるいは約１１０°を上回る；あるいは約１１５°を上回る、あるいは約１２０°を上回る場合、ポリオレフィン表面は「疎水性」と見なすことができる。
【００３５】
ある実施形態において、疎水性ポリオレフィン繊維マトリックスは、ポリエチレン表面などの疎水性の第１のポリオレフィンを有する繊維を含む。ある実施形態において、表面は、ポリプロピレンなどの第２のポリオレフィンのコア上に実質的に配置されるコーティングまたは鞘であり得る。各ポリマーの相対量は、１０重量％〜９０重量％ポリエチレンおよび１０重量％〜９０重量％ポリプロピレンの範囲、いくつかの実施形態では、約５０重量％ポリエチレンおよび約５０重量％ポリプロピレンであり得る。疎水性ポリマー繊維は、当該技術分野において既知であるように、一緒に結合されて成形され、Ｆｉｌｔｒｏｎａ  Ｐｏｒｏｕｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓなどから市販されており、２ミクロン〜１００ミクロンの範囲の孔サイズを持つ。
【００３６】
ある実施形態において、本発明の疎水性ポリオレフィンマトリックスは、目的の検体を含有する生体標本の液体懸濁液が保持され、それに適用される目的の検体の貯蔵または後次再構成および分析のために溶媒（例えば、水または他の流体）の蒸発を阻害しない吸収性物質である。本発明のマトリックスは、該マトリックス中の液体懸濁液の同伴を提供するように多孔性性質の疎水性ポリオレフィン表面を含む。本明細書において使用される場合、「同伴する」という用語およびその派生語は、極性溶媒および検体の液体懸濁液が、化学的および／または物理的相互作用に実質的な依存なしに一時的にマトリックスの間隙または孔内に封入され得、水のような極性溶媒が蒸発し、懸濁された検体をマトリックス中に残すことができるようにする。
【００３７】
この目的に好適なマトリックスとして、限定されないが、疎水性ポリオレフィンホモポリマーおよびコポリマーを含むか、またはそれらで構成されるマトリックスが挙げられる。エチレン単独のポリマー、α−オレフィンポリマーと合わされるか、または共重合化されたポリマーが特に好適である。α−オレフィンポリマーの例として、限定されないが、プロピレン、１−ブテン、２−ブテン、３−メチル−１−ブテン、イソブチレン、１−ペンテン、２−ペンテン、３−メチル−１−ペンテン、４−メチル−１−ペンテン、１−ヘキセン、２−ヘキセン、３−ヘキセン、３−エチル−１−ヘキセン、１−ヘプテン、２−ヘプテン、３−ヘプテン、４つの正常オクテン、４つの正常ノネン、または５つの正常デセンが挙げられる。別の態様において、α−オレフィンポリマーは、１−ブテン、１−ペンテン、１−ヘキセン、１−オクテン、１−デセン、またはスチレンから選択されてよい。ある実施形態において、親水性オレフィンポリマーは、コアを形成し、ポリエチレンで作製されるような疎水性ポリマーは、本発明のポリオレフィン繊維マトリックスの各ストランドの外鞘表面を形成する。
【００３８】
任意の比率のポリマーを用いて、本明細書における使用に好適なポリオレフィンポリマーマトリックスを調製することができる。例えば、エチレンは、各ストランドの外鞘表面に対して約５〜約９５モルパーセントで使用され、好適なモノマーのいずれかは、各ストランドのコアに対してαオレフィンのモルパーセントの平衡を構成することができる。したがって、エチレンを約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、または９５モルパーセントで使用して、好適な物質を調製することができ、それらの好適なモノマーのいずれかを用いて、αオレフィンのモルパーセントの平衡を構成することができる。あるいは、エチレンを約５〜約９５モルパーセント、約１５〜約８５モルパーセント、または約２５〜約７５、約３５〜約６５、または約４５〜約５５モルパーセントで使用することができ、好適なモノマーのいずれかを用いてαオレフィンのモルパーセントの均衡を形成する。ある実施形態において、ポリエチレンは、本発明のポリオレフィン繊維マトリックス内の各ストランドの外鞘表面に使用され、ポリプロピレンはコアに使用される。ポリオレフィンポリマーは、該ポリマーが開示されるデバイスおよび方法を調製および使用するために使用される方法に耐え得る限り、低密度または高密度、高度に分岐または実質的に非分岐などであり得る。ある実施形態において、本発明の得られるポリオレフィン繊維マトリックスの密度は、約０．０７７グラム／ｃｃである。
【００３９】
したがって、本発明のポリオレフィン繊維マトリックスは、液体懸濁液を容易に迅速に吸収するとともに、目的の検体を含有する生体標本を一貫して効率的および正確に放出する能力を有する。ある実施形態において、ポリオレフィン繊維マトリックスは、目的の検体を含有する生体標本の液体懸濁液の試料を少なくとも０．０５ｍＬ、０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、０．６ｍＬ、０．７ｍＬ、０．８ｍＬ、もしくは０．９ｍＬ、１．０ｍＬ、１．５ｍＬ、２．０ｍＬ、２．５ｍＬ、３．０ｍＬ、またはそれ以上を吸収することができる。「吸収する」および「吸着する」という用語は、同義に使用され、液体懸濁液が、マトリックスから容易に取り出され、目的の検体を残すような方法でポリオレフィン繊維マトリックスの中またはその上に組み込まれることを意味する。
【００４０】
ポリオレフィンマトリックスの体積は、液体懸濁液の吸収時に拡大してもしなくてもよく、また乾燥時に接触してもしなくてもよい。しかしながら、液体飽和マトリックスは、その多孔性に起因してその飽和体積の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、またはそれ以上だけ圧縮され、検体を含有する同伴流体を放出することができる。体積測定圧縮は、再構成された生体標本の放出のための１つの便宜的な技法であるが、遠心分離または真空圧などの任意の他の手段を代替として用いて生体標本をマトリックスから放出することができる。
【００４１】
したがって、本明細書において使用される場合、「圧縮する」、「圧縮可能な」、「圧縮」という用語、および「圧縮する」という語の他の派生語は、力または圧力がマトリックスに印加される一方、飽和マトリックスの体積が飽和マトリックスの元の体積と比較して低減されることを意味する。本明細書において使用される場合、「生体標本の一部分」という用語は、液体懸濁液中に含有される生体標本の少なくともいくらかがマトリックスから放出されることを意味する。ある実施形態において、マトリックスは、最大体積の再構成された生体標本がマトリックスから放出されるまで圧縮される。
【００４２】
ある実施形態において、ポリオレフィン繊維マトリックスは、柱体、立方体、球体、角錐体、または円錐体などの形状の３次元である。ある実施形態において、マトリックスは、長さ約２１ｍｍおよび直径９ｍｍの柱体形状であり、約０．１０３グラムの重量を持つ。しかしながら、マトリックスは、任意の必要な体積容量を達成するために拡大、延長、または短縮することができる。ポリオレフィン繊維サイズは、変動し得るが、一般に約１〜１００ミクロンまたは２０〜２５ミクロンである。
【００４３】
ある実施形態において、検体の再構成および回収のために、マトリックスは、その中にプランジャーが受容される容器またはシリンジ筒内に装着されるか、または置かれ、マトリックスは、該マトリックスに対してプランジャーに力を印加することにより圧縮され、例えば、再構成された生体懸濁液をポートを通じて放出する。さらに他の実施形態において、マトリックスは、密閉容器およびプランジャーから着脱可能であり得る。本明細書において使用される場合、「着脱可能な」という用語は、マトリックスが容器およびプランジャーから脱離または分離され得ることを意味する。
【００４４】
本明細書において使用される場合、「液体懸濁液」という用語は、生体標本を含有する任意の液体媒質および混合物を指す。これは、例えば、水、生理食塩水；ヒト、動物、および植物の細胞懸濁液；細菌、真菌、プラスミド、ウイルスの抽出液または懸濁液；蠕虫、プロトゾア、スピロヘータを含む寄生虫の抽出液または懸濁液；ヒトまたは動物体組織、例えば、骨、肝臓、腎臓、脳の液体抽出物またはホモジネート；ＤＮＡまたはＲＮＡ合成からの媒質；化学的または生化学的に合成されたＤＮＡまたはＲＮＡの混合物；および任意の生体標本が液体媒質中にあるか、またはあり得る任意の他の源を含む。
【００４５】
本明細書において使用される場合、「生体標本」という用語は、目的の任意の検体、例えば、遺伝物質がその中に溶解、懸濁、混合、または他の方法で含有される液体または固体形態のいずれかの試料を指す。本明細書において使用される場合、「遺伝物質」という用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）のいずれかまたは両方を含む核酸を指す。「生体標本」という用語は、ヒトまたは動物の全血、血漿、血清、リンパ液、滑液、骨髄、脳脊髄液、精液、唾液、尿、便、痰、膣洗浄液、皮膚落屑、毛根細胞など、分泌液、排出液、浸出液、および濾出液などの生理学的および病理学的体液；目的の検体を含有するヒト、動物、植物、細菌、真菌、プラスミド、ウイルス、寄生虫などの任意の細胞または細胞成分、およびこれらの任意の組み合わせも指す。
【００４６】
本明細書において使用される場合、「目的の検体」という用語は、検出または分析されることを目的とする生体標本中の任意のマイクロまたはマクロ分子を指す。これらは、例えば、核酸、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、酵素、アミノ酸、受容体、炭水化物、脂質、細胞、任意の細胞内または細胞外分子および断片、ウイルス、ウイルス分子および断片などを含む。ある実施形態において、目的の検体は、ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれかまたは両方を含む核酸である。本明細書において使用される場合、「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、直鎖もしくは分岐、一本鎖もしくは二本鎖であるＲＮＡもしくはＤＮＡ、ハイブリッド、またはその断片を指す。該用語は、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドも包含する。該用語は、コード領域ならびに上流または下流非コード領域も包含する。さらに、イノシン、５−メチルシトシン、６−メチルアデニン、ヒポキサンチン、およびその他などのあまり一般的でない塩基を含有するポリヌクレオチドも包含される。ＲＮＡのリボース糖基中のホスホジエステル骨格または２′−ヒドロキシへの修飾などの他の修飾も含まれる。核酸／ポリヌクレオチドは、ゲノム調製、ｃＤＮＡ調製、インビトロ合成、ＲＴ−ＰＣＲ、およびインビトロまたはインビボ転写を含む任意の手段により生産されてよい。ある実施形態において、核酸は、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡ、例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、または任意の他のヒトもしくは動物ウイルス病原体からのＤＮＡまたはＲＮＡのいずれかまたは両方である。
【００４７】
ある実施形態において、本発明により提供される圧縮デバイスは任意に、マトリックスの乾燥状態および密閉容器内のマトリックス上の目的の検体の完全性を維持するために、乾燥剤、天然または合成乾燥剤のいずれかを容器内に含んでよい。ある実施形態において、乾燥剤は、水分に反応性の染料指示薬を有する圧縮デバイス中のマトリックスと蒸気連通し、それにより該乾燥剤は、湿気または水分に曝露されると明色に変化する。ある実施形態において、乾燥剤は、容器内の乾燥剤とマトリックスとの間に空気透過性障壁が形成されるように、マトリックスと蒸気連通する。デバイスにおいて使用される乾燥剤は、当該技術分野において周知であり、限定されないが、モンモリロナイト粘土、塩化リチウム、活性アルミナ、アルカリアルミノケイ酸塩、ＤＱ１１ブリケット、シリカゲル、分子篩、硫酸カルシウム、および酸化カルシウムが挙げられる。該乾燥剤は、含水量の比色指示薬とともに提供することができる。乾燥剤は、本発明の疎水性ポリオレフィン繊維マトリックスを持つデバイス内に必要でない場合がある。
【００４８】
本発明のポリオレフィン繊維マトリックスは任意に、マトリックスに吸収された組成物を含んでよく、該組成物は、生体標本に含有される目的の検体の分解から保護する。本明細書において使用される場合、「目的の検体の分解から保護する」という用語は、本発明のデバイス中のマトリックスが、生体標本中に含有される目的の貯蔵検体を実質的に非分解形態で維持することを意味するが、但し目的の検体は、多くの異なる種の後次分析手順に好適であることを条件とする。分解からの保護は、細菌、フリーラジカル、ヌクレアーゼ、紫外線照射、酸化剤、アルキル化剤、または酸性剤（例えば、大気中の汚染物質）を含む化学薬剤または生物学的薬剤により引き起こされる目的の検体の実質的な損傷からの保護が挙げられる。ある実施形態において、本発明のマトリックス上に吸収される組成物は、弱塩基、キレート化剤、洗剤または界面活性剤などのタンパク質変性剤、ヌクレアーゼ阻害剤、およびフリーラジカルトラップの１種以上を含んでよい。目的の貯蔵検体がＲＮＡ、特に不安定なＲＮＡである場合、組成物は、ＲＮａｓｅ阻害剤および不活性化剤、遺伝子プローブ、相補ＤＮＡまたはＲＮＡ（または機能的に等しい化合物）、ＲＮＡを安定化するか、またはその分解を予防するタンパク質および有機部分を含んでよい。
【００４９】
任意に使用され得る分解から保護する別の組成物は、酸素捕捉剤元素である。本明細書において使用される場合、「酸素捕捉元素」という用語は、目的の試料にマイナスの影響を及ぼすことなく、所与の環境からの酸素の量を消費、枯渇、または低減する物質を指す。好適な酸素捕捉元素は、当業者に周知である。酸素捕捉元素の非限定例として、限定されないが、元素の周期表の第１、第２、または第３の遷移系から選択される遷移金属などの酸素に反応性の金属粒子を含む組成物が挙げられ、マンガネーゼＩＩまたはＩＩＩ、鉄ＩＩまたはＩＩＩ、コバルトＩＩまたはＩＩＩ、ニッケルＩＩまたはＩＩＩ、銅ＩまたはＩＩ、ロジウムＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ、およびルテニウムを含む。遷移金属は、好ましくは鉄、ニッケル、または銅である。鉄酸素捕捉元素の例は、ＭｕｌｔｉｓｏｒｂからのＤ５００である。他の市販の酸素捕捉剤は、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ、Ｄｏｗなどの会社から購入されてもよい。酸素捕捉元素の他の例は、目的の試料にマイナスの影響を及ぼすことなく、所与の環境からの酸素の量を消費、枯渇、または低減する酵素であってよい。
【００５０】
他の実施形態において、圧縮デバイスは任意に、密封、出荷、または貯蔵する前に周知のガスパージングプロセスを通じて窒素またはアルゴンなどの修飾雰囲気を含んでよい。「修飾雰囲気」という用語は、正常な大気ガス組成物を少なくとも１つの不活性ガスまたは目的の試料を分解させないガスと任意に置換または変更することを指す。
【００５１】
本明細書において使用される場合、本発明の組成物に好適な「弱塩基」は、約６〜１０のｐＨ、好ましくは約ｐＨ８〜９．５を有するルイス塩基であってよい。本発明の組成物に好適な弱塩基は、組成物の他の成分と併せて、ｐＨ６〜１０、好ましくはｐＨ約８．０〜９．５の組成物を提供してもよい。本発明に従う好適な弱塩基として、有機および無機塩基が挙げられる。好適な無機弱塩基として、例えば、アルカリ金属炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、またはホウ酸塩（例えば、ナトリウム、リチウム、または炭酸カリウム）が挙げられる。好適な有機弱塩基として、例えば、トリス−ヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）、エタノールアミン、トリエタノールアミンおよびグリシン、ならびに有機酸のアルカリ塩（例えば、クエン酸三ナトリウム）が挙げられる。好ましい有機弱塩基は、弱一価有機塩基、例えば、トリスである。弱塩基は、遊離塩基または塩、例えば、炭酸塩のいずれかであってよい。該弱塩基は、目的の検体を分解から保護する、緩衝剤系を提供する、結合金属イオンにおけるキレート化剤の適切な作用を保証する、および機能するために二価金属イオンに完全に依存し得ない酸ヌクレアーゼの作用を予防するなどの種々の機能を提供し得ると考えられる。
【００５２】
本明細書において使用される場合、「キレート化剤」は、グループＩＩおよびグループＩＩＩ多価金属イオンおよび遷移金属イオン（例えば、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｚｎ、Ｍｎなど）を含む多価イオンを複合することができる任意の化合物である。ある実施形態において、キレート化剤は、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸塩、またはオキサル酸塩である。キレート化剤の１つの機能は、貯蔵生体標本とともに存在する場合、目的の検体、特に核酸に損傷を引き起こし得る多価イオンに結合することであると考えられる。キレート化剤によりキレート化され得るイオンとして、多価活性金属イオン、例えば、マグネシウムおよびカルシウム、ならびに遷移金属イオン、例えば、鉄が挙げられる。カルシウムおよびマグネシウムの両方は、核酸を破壊し得る酵素（例えば、最も既知のヌクレアーゼ）の共因子として作用することにより核酸分解を促進することが知られている。さらに、鉄などの遷移金属イオンは、酸化および還元を容易に受け、フリーラジカルの生産または直接酸化により核酸を損傷し得る。
【００５３】
組成物は、目的の検体が核酸である場合、タンパク質変性剤をさらに含むことができる。本明細書において使用される場合、「タンパク質変性剤」は、非核酸化合物、例えば、ヌクレアーゼを変性するように機能する。タンパク質変性剤が洗剤または界面活性剤である場合、界面活性剤は、乾燥固体マトリックスにより試料の取り込みを促進するように湿潤剤としても作用し得る。「界面活性剤」および「洗剤」という用語は、同義であり、本明細書全体で交互に使用されてよい。目的の核酸に実質的に影響を及ぼすことなくタンパク質を変性する任意の薬剤は、本発明に好適であり得る。ある実施形態において、タンパク質変性剤として洗剤が挙げられる。本明細書において使用される場合、「洗剤」としてイオン性洗剤、好ましくはアニオン性洗剤が挙げられる。本発明に好適なアニオン性洗剤は、脂肪族または芳香族部分などの炭化水素部分、および１種以上のアニオン基を有してよい。特に、好適なアニオン洗剤として、硫酸ドデシルナトリウム（ＳＤＳ）およびサルコシン酸ラウリルナトリウム（ＳＬＳ）が挙げられる。イオン性洗剤は、その外膜またはカプシド中にタンパク質または脂質を有する微生物、例えば、真菌、細菌、またはウイルスの不活性化を引き起こす。これは、ヒトに対して病原性であり得るか、または核酸の分解を引き起こし得る微生物を含む。洗剤による微生物の不活性化は、有機体外部タンパク質、内部タンパク質、タンパク質含有膜、または生存性に必須の任意の他のタンパク質の二次構造の崩壊の結果であると考えられる。しかしながら、洗剤は、有機体のいくつかの形態、例えば、高度に耐性の細菌胞子および極めて安定した腸管ビリオンを不活性化しない場合がある。
【００５４】
組成物は任意に、フリーラジカルトラップを含んでよい。本明細書において使用される場合、「フリーラジカルトラップ」は、フリーラジカルとの反応物としてＤＮＡ分子またはその成分に対して好ましいように十分に反応性であり、フリーラジカル自体の損傷を生成しないように十分に安定した化合物である。好適なフリーラジカルトラップの例として、尿酸または尿酸塩、マンニトール、安息香酸塩（Ｎａ、Ｋ、Ｌｉ、またはトリス塩）、１−３ジメチル尿酸、グアニジン、グアン、チミン、アデニン、シトシン、Ｎ−アセチル−ヒスチジン、ヒスチジン、デフェロキサミン、ジメチルスルホキシド、５′５′ジメチルピロリン−Ｎ−オキシド、チオシアン酸塩およびチオ尿素が挙げられる。好適なフリーラジカルトラップとして、マンニトール、チオシアン酸塩、尿酸、または尿酸塩が挙げられる。核酸が貯蔵される期間が長いほど、フリーラジカルトラップが固体マトリックスに吸収される組成物中に有益に含まれ得る可能性が高いと考えられる。核酸が短時間貯蔵されるにすぎない場合でも、フリーラジカルトラップは、依然として組成物中に組み込まれてよい。フリーラジカルトラップの１つの機能は、フリーラジカルを損傷する核酸を捕捉することであり得ると考えられる。例えば、使用されるフリーラジカルトラップが尿酸または尿酸塩であるとき、そうでなければヌクレオチド塩基、例えば、グアニンを損傷するフリーラジカルを受け入れるフリーラジカルトラップとしても作用し得るアラントインに変換され得る。ある実施形態において、フリーラジカルトラップは、源にかかわらずフリーラジカルと反応する（空気中に存在するフリーラジカルを含む）。フリーラジカルは、血液などの生体標本中の鉄の酸化または還元を通じて生成されてよい。通常、フリーラジカルは、例えば、血液の変性血清タンパク質中存在する基の自発酸化によって生成されると考えられる。フリーラジカルは、紫外線、ｘ線、および高エネルギー粒子などの照射によって生成されてもよい。さらに、弱酸でもあるフリーラジカルトラップ、例えば、尿酸は、上記に論じられる弱塩基により提供される緩衝系の成分として機能してもよい。またフリーラジカルトラップは、原位置処理が所望されない場合、核酸の貯蔵試料の取り出しを強化し得る。
【００５５】
図１Ａおよび１Ｂを参照すると、目的の検体を含有する生体標本の液体懸濁液を貯蔵するための本発明の例示の圧縮デバイスが示される。容器２０は、柱状であり、側壁２２、底部２４、および容器２０の開口部に密封可能に係合する開閉可能な蓋２６を有する。蓋２６は、容器２０内の着脱可能なマトリックス３０を保持する延長部２８を有する。ポリオレフィン繊維マトリックス３０は、１ｍＬの生体標本の液体懸濁液を吸収することができる柱体であり、飽和マトリックスの体積の少なくとも５０％だけ圧縮して生体標本の一部分を放出する。乾燥剤４０は、容器２０内に任意に置かれてよく、その中の湿気または水分を制御するようにマトリックス３０と蒸気連通するために、任意の空気透過性障壁４２によりマトリックス３０で分離されてよい。
【００５６】
本発明は、生体標本を保存および回収するための方法をさらに提供し、（ａ）側壁と、底部と、開閉可能で密閉可能な蓋とを有する内部空間を画定する容器を備え、吸収性３次元ポリオレフィンマトリックスが容器内に着脱可能に装着されたデバイス中に乾燥生体標本を提供することであって、ポリオレフィンマトリックスが、疎水性ポリオレフィン表面を持つ複数の間隙を含み、溶媒と、マトリックス上に吸収および乾燥させた生体標本とを含む少なくとも０．１ｍＬの蒸発体積の液体懸濁液から得られた乾燥生体標本をその中に含有している、提供することと（ｂ）制御体積の再構成媒質を用いてポリオレフィンマトリックス上に生体標本を再構成することと、（ｃ）マトリックスを圧縮することによりポリオレフィンマトリックスから生体標本および再構成媒質を取り出すことと、を含む。任意の好適および／または一般に使用可能な乾燥方法、例えば、真空乾燥、低温乾燥、低圧乾燥、およびファン乾燥を本発明の方法において使用することができる。
【００５７】
ある実施形態において、ポリオレフィンマトリックスは、実質的に疎水性の表面を有する複数の繊維を含む。ある実施形態において、ポリオレフィンマトリックス内の繊維は、ポリエチレン表面を有する。他の実施形態において、ポリオレフィンマトリックス内の繊維は、ポリエチレンでコーティングされたポリプロピレンを含む。ある実施形態において、ポリプロピレンおよびポリエチレンは、各繊維ストランド中にほぼ等しい量で存在する。
【００５８】
図１Ｂを参照すると、容器２０の蓋２６は、ポリオレフィン繊維マトリックス３０を保持する蓋延長部２８を有し、第２の密閉容器内に含有されるプランジャーに取り付けられるカップに永久に装着され得る。目的の検体を含有する任意の生体標本の液体懸濁液をポリオレフィン繊維マトリックス３０の上に添加し、マトリックス３０の中に完全に吸収させる（図３）。生体標本をその上に結合したマトリックス３０を持つ蓋２６を空気乾燥させ、次いで周囲温度での保存のために容器２０で再構築する。
【００５９】
本発明の方法は、さらに任意に、安定化組成物をポリオレフィン繊維マトリックスに適用して目的の検体を分解から保護する中間ステップを含む。目的の検体に応じて、安定化組成物は、上記に論じられるように、限定されないが、弱塩基、キレート化剤、タンパク質変性剤（洗剤または界面活性剤など）、ヌクレアーゼ阻害剤、およびフリーラジカルトラップのうちの１種以上を含んでよい。特に不安定なＲＮＡの保護のために、安定化組成物は、ＲＮａｓｅ阻害剤および不活性化剤、遺伝子プローブ、相補ＤＮＡまたはＲＮＡ（または機能的に等しい化合物）、ＲＮＡを安定化するか、またはその分解を予防するタンパク質および有機部分を含んでよい。
【００６０】
本発明は、目的の検体を含有する生体標本を、圧縮デバイス中のポリオレフィン繊維マトリックスから回収するための方法をさらに提供する。ある実施形態において、該方法は、以下のステップ：ａ）再構成媒質をマトリックスに適用し、目的の検体を含有する結合された生体標本を再水和することと、ｂ）マトリックスを圧縮して生体標本の一部分を放出することと、を含む。本発明に従い、再構成媒質は分子グレード水である。他の実施形態において、再構成媒質は、１Ｘリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）またはヌクレアーゼを含まない水の成分を含み、任意にアジ化ナトリウムまたは他の抗菌剤の添加を伴う。再構成媒質は、任意の数または組み合わせの使用可能な生物学的保存剤または血液抗凝固剤を含んでもよく、限定されないが、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸ナトリウム、およびヘパリンが挙げられる。ＰＢＳまたはヌクレアーゼを含まない水は、マトリックスからの目的の検体の再水和、再懸濁、および回収のための滅菌および中性媒質として機能する。アジ化ナトリウムなどの抗菌剤は、含まれるとき、微生物成長およびＲＮａｓｅによる後次汚染を予防する。ＥＤＴＡ、クエン酸ナトリウム、およびヘパリンなどの生物学的保存剤は、含まれるとき、抗凝固剤および／またはキレート化剤として機能する。
【００６１】
図４〜７に示される実施形態において、生体試料は分析のために調製される。図４は、デバイスのポリオレフィン繊維マトリックス３０を空のシリンジ筒５２に移入する準備の斜視図である。図５は、ポリオレフィン繊維マトリックス３０のシリンジ筒５２への完全送達の斜視図である。
【００６２】
図６は、ピペットチップ５３によりマトリックス３０の上に静かに置かれ、再構成緩衝液をゆっくり分注するポリオレフィン繊維マトリックス３０の再水和を示す。図７Ａは、プランジャー５４のシリンジ筒５４への挿入を示す。図７Ｂは、シリンジプランジャー４２への圧力の印加を示す。図７Ｃは、マトリックス３０の圧縮を示す。図７Ｄは、マトリックス３０からの試料回収の完了を示す。
【００６３】
ある実施形態において、目的の検体は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子のいずれかまたは両方を含む核酸である。ある実施形態において、生体標本の液体懸濁液は、少なくとも約５アトグラムまたは１μｇの単離されたＤＮＡまたはＲＮＡ分子を含有する。本明細書において使用される場合、「単離された」、「単離」という用語、および「単離する」という語の他の派生語は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子が、天然に関連付けられる実質的に他の細胞物質、または組換え技術により生産されるときは培養媒質、または化学的に合成されるときは化学的前駆体もしくは他の化学物質のいくつかを含まないことを意味する。
【００６４】
本発明は、デバイスのポリオレフィン繊維マトリックスから分子グレード水などの再構成媒質の中に回収された生体標本中に含有される目的の検体が、後次分析に供されることをさらに提供する。本明細書において使用される場合、「後次分析」という用語は、再構成媒質中に貯蔵される回収された生体標本上で行われ得る任意の分析を含む。あるいは、生体標本中に含有される目的の検体は、当該技術分野において既知の方法を使用して、分析前に単離、精製、または抽出されてよい。目的の検体は、化学的、生化学的、または生物学的分析に供されてよい。好ましい実施形態の１つにおいて、目的の検体は、事前の抽出、精製、または単離の有無にかかわらず、検出または分析することができるＤＮＡまたはＲＮＡ分子のいずれかまたは両方を含む核酸である。ＤＮＡまたはＲＮＡの抽出、精製、または単離は、必要に応じて、当該技術分野において既知の方法に基づいて行われる。後次分析の例として、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、逆転写酵素で開始されたＰＣＲ、ＤＮＡ、またはＲＮＡハイブリダイゼーション技術が挙げられ、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡ検出および定量化、ウイルス負荷試験、ＤＮＡまたはＲＮＡ遺伝子決定などが挙げられる。「後次分析」は、遺伝子プローブを使用する他の技法、ゲノム配列決定、酵素アッセイ、親和性標識、標識または抗体を使用する検出方法、および多の同様の方法も含む。
【００６５】
本発明は、目的の検体を含有する生体標本の液体懸濁液を保存するためのキットも提供する。本発明のキットは、１つ以上の容器、１つ以上のポリオレフィン繊維マトリックス、および任意に乾燥剤、および生体標本を保存するためのその使用についての指示書を含む本明細書に開示される圧縮デバイスを提供する。該キットは任意に、安定化溶液を含んでよい。本発明のキットは、再構成媒質、圧縮デバイス、および生体標本の再水和および回収のためのさらなるプロトコルをさらに含むことができる。該キットの容器は、目的の検体を含有する生体標本の液体懸濁液のマトリックスへの適用中、または適用および生体標本の試料の後次処理の１つ以上の段階中の使用に好適な任意の容器であってよい。したがって、ある実施形態において、生体標本の液体懸濁液は、同じキットで全て適用、貯蔵、輸送され、さらに処理されてよい。あるいは、液体懸濁液はマトリックスに適用されてもよく、該マトリックスは、異なる容器で処理するためにキット容器から取り出される。
【００６６】
該キットは、本明細書に開示されるポリオレフィン繊維マトリックスのいずれかの１つ以上を含んでもよい。これは、生体標本中に含有される目的の検体の保護のための組成物の有無にかかわらず、１つ以上のポリオレフィン繊維マトリックスを含む。本発明のキットの一態様は、目的の検体を含有する再構成された生体標本がマトリックスを圧縮することにより放出されるということである。この手順は、試料を渦流および遠心分離することを避け、試料損傷の可能性、人件費、および試料のマトリックス汚染の減少を提供する。本発明のキットの圧縮デバイスは、マトリックス上に力または圧力を提供してそれを圧縮するように使用される任意のデバイスであってよい。ある実施形態において、プランジャーを備える圧縮デバイスは、ポリオレフィン繊維マトリックスに永久に取り付けられ、該マトリックスは、生体標本が中で調製および貯蔵される同じキット容器（複数可）中でマトリックスに対してプランジャーに力を印加することにより圧縮される。あるいは、圧縮デバイスは、ポリオレフィン繊維マトリックスから分離されたシリンジを備え、該マトリックスは、容器から取り出され、シリンジ筒中に置かれ、力または圧力がシリンジのプランジャーに印加され、マトリックスを圧縮して再構成された生体標本を放出する。
【００６７】
本出願全体で様々な刊行物が参照される。これらの刊行物、およびそれらの刊行物内で引用される参照文献の全ての開示は、本発明が属する技術分野の状態をより完全に説明するために、本明細書において参照によりそれら全体が本出願に組み込まれる。
【００６８】
上記は本発明のある実施形態に関すること、および本発明の範囲から逸脱することなくそこに多数の変更を行ってよいことも理解されたい。本発明は、以下の実施例によってさらに例証され、それはいかなるようにも本発明の範囲に制限を与えるものとして解釈されない。逆に、種々の他の実施形態、その修正、および同等物を用いることができ、これらは、本明細書の説明を読むことで、本発明の精神および／または添付の特許請求の範囲の範囲から逸脱することなく、当業者に示され得ることを、明確に理解されたい。
【実施例】
【００６９】
実施例１
１．０ｍＬ試料調製およびデバイス回収キット
キット構成要素：
この実施例は、体液または組織からの３６個の乾燥生体標本の調製、輸送、および回収のためのキットを提供する。乾燥周囲輸送のための３６個の１．０ｍＬ試料の調製および回収のための物質および試薬は、以下を含む。
【００７０】
構成要素                              量
デバイスキット容器（管）              それぞれ36個
再構成緩衝剤                          3Ｘ13mL
使い捨て3mLシリンジ                  それぞれ36個
15mL円錐遠心分離管                    それぞれ36個
【００７１】
貯蔵および取扱い：
【００７２】
受領時に、全てのキット構成要素を室温（１５〜２５℃）で乾燥貯蔵する。指示乾燥剤が青色であるときだけデバイス容器管を使用する。デバイスキット容器管は、指示乾燥剤が白色またはピンク色に見える場合は使用してはならない。１０００μＬピペット、エアロゾル障壁を持つ１０００μＬ滅菌ＤＮａｓｅを含まない、ＲＮａｓｅを含まないピペットチップ、１５ｍＬ円錐管を保持するためのラック、安全眼鏡、実験室コート、粉末を含まない使い捨てグローブ、およびバイオハザード廃棄物容器などの物質も必要であるが、キットの安全注意事項により提供されない：使い捨ての粉末を含まないグローブを使用して感染因子を伝達することができるかのように全ての材料を取り扱う。血液由来病原体の伝播の予防に関する良好な実験室実施基準および普遍的予防策を利用する（疾病対策センター改訂：Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｐｒｅｃａｕｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ，ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｂｌｏｏｄ  ｂｏｒｎｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｓｅｔｔｉｎｇｓ．ＭＭＷＲ，１９８８、３７：３７７−８２，３８７−８、臨床研究所規格委員会Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｗｏｒｋｅｒｓ  ｆｒｏｍ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ  ｂｙ  ｂｌｏｏｄ，  ｂｏｄｙ  ｆｌｕｉｄｓ，  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ、承認されたガイドラインＮＣＣＬＳ  Ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ２９−Ａ  Ｖｉｌｌａｎｏｖａ（ＰＡ）：ＮＣＣＬＳ；１９９７  Ｄｅｃ．９０ｐ、連邦労働安全衛生法Ｂｌｏｏｄｂｏｒｎｅ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ  Ｓｔａｎｄａｒｄ，２９  ＣＦＲ  １９１０，１０３０）。潜在的に感染因子を含有することが疑われる任意の流出は、０．５％  ｗ／ｖ次亜塩素酸ナトリウム（１０％  ｖ／ｖ漂白剤）で速やかに清掃した。標本と接触した全ての標本および物質を、それらが感染因子を含有するように廃棄する。感染因子を含有することが知られているか、または疑われる物質が摂取されるか、または開いた裂傷、病巣、または粘膜（眼、鼻腔など）と接触した場合は、速やかに医師に相談する。
【００７３】
実施例２
デバイスキットを使用する試料調製
試料調製ステップは、滅菌技法および潜在的に感染性の物質の取扱いに関する普遍的予防策を使用して、生物学的安全キャビネット内で行った。試料調製プロセスを開始する前に、図１Ａおよび１Ｂに例証されるデバイスキットを使用するプロトコルをよく理解すべきである。
【００７４】
目的の検体を含有する生体標本の試料液体懸濁液を負荷する前に、デバイス容器からのキャップを外し、反転させて清潔な作業台上に吸収性マトリックスを上に向けて置いた（図１Ａおよび１Ｂ）。最大約１ｍＬの試料流体を、マトリックスプラグの上にゆっくり添加し、マトリックスの中に完全に吸収させた。試料流体を負荷したデバイスキットマトリックスを空気乾燥させた。一般に、生物学的安全キャビネット内の空気乾燥は、約４．５〜５時間かかる。一旦試料が完全に乾燥すると、乾燥した標本を含有するマトリックスを保持するキャップをデバイスキット容器管に慎重に再び取り付けた。ここで標本は、周囲温度で出荷または貯蔵する準備ができている。
【００７５】
実施例３
デバイスキットを使用する試料回収
試料回収ステップもまた、滅菌技法および潜在的に感染性の物質の取扱いに関する普遍的予防策を使用して、生物学的安全キャビネット内で行った。基本的に、滅菌３ｍＬまたは５ｍＬ使い捨てＬＵＥＲ−ＬＯＫシリンジ（キットにより提供される）を、１５ｍＬ収集管（これもキットにより提供される）の中に挿入した。プランジャーをシリンジ筒から取り出した。乾燥標本を含有する吸収性マトリックスを、それが取り付けられたキャップから抜け出すのに程良い圧力でシリンジ筒の口部の滅菌内側に対してマトリックスを押し付けることによりシリンジ筒に移入し、シリンジの底部に自由に落下させた（図４および５）。取り外されたマトリックスプラグを持つシリンジ筒を、１５ｍＬの円錐収集管の中に置き、それをさらにラックの中に置く。約１ｍＬの再構成緩衝液（キットにより供給される）をゆっくり直接マトリックスプラグの上に適用し、マトリックス内に吸収される乾燥標本を静かに再水和した（図６）。吸収率を検査し、必要に応じて再構成緩衝液を添加しながら適用速度を調整する必要があり、再構成緩衝液を完全に吸収するのに失敗すると、より低い回収収率をもたらし得るため、最初にマトリックスに吸収されずに緩衝剤をシリンジの底部で回収するのを許さないようにする必要がある。再水和標本を、追加の１７５μＬの再構成緩衝剤をマトリックスプラグの上に添加する前に室温で少なくとも１０分間インキュベートさせた。
【００７６】
シリンジプランジャーをシリンジ筒に再度挿入し、プランジャーがマトリックスプラグを完全に圧縮し、最大容積の約１ｍＬが１５ｍＬ回収管内に回収されるまで安定した均一な圧力で押した（図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、および７Ｄ）。次いで、シリンジ筒、プランジャー、および圧縮したマトリックスを１５ｍＬ回収管から取り出し、適切な廃棄物容器に破棄した。新たに回収された標本を含有する１５ｍＬ回収管を、提供されたスクリューキャップで密封した。貯蔵、試験、またはさらなる後次分析のために再構成試料を準備する。
【００７７】
実施例４
ＶｉｖｅＳＴデバイスマトリックス比較研究
１．目的
本研究の目的は、セルロースマトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイスの性能を、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイを使用して合成疎水性ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスと比較することであった。ＨＢＶ感染試料（３レベル、各５複製）を負荷し、両方のマトリックス上で周囲条件で７日間貯蔵した。マトリックスから回収された標本は、冷凍試料を用いて同時に行った。
【００７８】
２．方法論
Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイ上の全ての試験は、修正なしにＦＤＡ承認プロトコル（０．５ｍＬ）に従い行った。１ｍＬ  ＨＢＶ感染血漿を各マトリックスの上に負荷し、７日間周囲温度で貯蔵して、１ｍＬの分子グレード水を回収した。
【００７９】
冷凍試料（３レベル、各５複製）のＨＢＶウイルス負荷の結果を、セルロースマトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイスおよび疎水性ポリオレフィン繊維マトリックスを有する本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスから回収された標本と比較した。
【００８０】
３．装置および試薬
以下の市販の製品／装置を本研究の過程で用いた：本発明のＶｉｖｅＳＴ試料貯蔵および輸送デバイス（カタログ番号ＶＳＴ−１Ｅ、ＶｉｖｅＢｉｏ  ＬＬＣ、Ａｌｐｈｒｅｔｔａ，ＧＡ）、およびセルロースマトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイス（ＶｉｖｅＢｉｏ，ＬＬＣ、Ａｌｐｈａｒｅｔｔａ，ＧＡ）；ＢＤ３ｍＬシリンジ−ＬＵＥＲ−ＬＯＫチップ：Ｒｅｆ  ３０９６５６７（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ；Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）；一般的な実験室消耗品および装置（遠心分離管、滅菌エアロゾル耐性ピペットチップ、ピペット、渦流、遠心分離など）；ＨＹＣＬＯＮＥ  ＨＹＰＵＲＥ分子生物学グレード水（カタログ番号：ＳＨ３０５３８．０２、ＨｙＣｌｏｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）；ヒト血漿（Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ  ｂｌｏｏｄ  ｓｅｒｖｉｃｅｓ；Ｍｅｍｐｈｉｓ，ＴＮ）；Ａｂｂｏｔｔ試料調製システム（４×２４調製）、リスト番号：０６Ｋ１２−０２４（Ａｂｂｏｔｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｃ；Ｄｅｓ  Ｐｌａｉｎｅｓ，ＩＬ）；Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶ  ＡＭＰキット（カタログ番号：０２Ｎ４０−９０、Ａｂｂｏｔｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｃ；Ｄｅｓ  Ｐｌａｉｎｅｓ，ＩＬ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶ制御キット（カタログ番号：０２Ｎ４０−８０、Ａｂｂｏｔｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｃ；Ｄｅｓ  Ｐｌａｉｎｅｓ，ＩＬ）；Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶ較正キット（カタログ番号：０２Ｎ４０−７０、Ａｂｂｏｔｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｃ；Ｄｅｓ  Ｐｌａｉｎｅｓ，ＩＬ）；ｍ２０００ｒｔを含むＡｂｂｏｔｔｍ２０００ｓｐシステム（Ａｂｂｏｔｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｃ；Ｄｅｓ  Ｐｌａｉｎｅｓ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、および関連物質。
【００８１】
４．実験設計
高力価ＨＢＶ感染血漿試料を正常なヒト血漿中に希釈し、３つの濃度を生じた（約５ログ、約４ログ、および約３ログ）。各濃度の５つの複製（合計ｎ＝１５）を、セルロースマトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイスおよびポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスのそれぞれの上に負荷した。同一アリコート（３レベル、５複製）を冷凍貯蔵した（−８０℃）。全てのマトリックスを層流フード中で終夜乾燥させ、翌日キャップをして周囲条件で７日間貯蔵した。両方のマトリックスセットから標本を回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイパッケージ添付文書に概説されるように、ｂｉｏＭＯＮＴＲ研究方法（ＲＭ−００８．００、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイを使用するＨＢＶ  ＲＮＡの定量化）に従い行った単一アッセイにおいて冷凍標本と同時に分析した。
５．結果−Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶウイルス負荷結果の概要を以下の表１に提供する。
【表１】
2015525890.tif 000003
【００８２】
本実施例の結果は、全ての濃度にわたって平均低減を実証した：ａ）冷凍血漿とポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間の０．０３  ログＩＵ／ｍＬおよびｂ）冷凍血漿とセルロースマトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間の０．２４ログ  ＩＵ／ｍＬ。全ての濃度にわたる標準偏差（ログＩＵ／ｍＬ）は、ａ）冷凍血漿に対して０．０７未満、ｂ）ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料に対して０．０３未満、およびｃ）セルロースマトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料に対して０．０９未満であった。
【００８３】
図８に示されるように、線形回帰分析は、ａ）ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料と比較して、冷凍血漿に対してＲ２＝０．９９９９９８、およびｂ）セルロースマトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料と比較して、冷凍血漿に対してＲ２＝０．９９９１を生じた。
【００８４】
６．最終結論
したがって、本実施例は、ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵されたＨＢＶ感染血漿試料が回収され、冷凍血漿と同様の結果を生じたことを提供する。冷凍血漿と比較したとき、最小喪失（０．０３ログＩＵ／ｍＬ）および全ての濃度にわたって高い再現性が見られた（標準偏差０．０３未満）。対照的に、セルロースマトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵されたＨＢＶ感染血漿試料は、冷凍血漿と比較してより大きな喪失（０．２４  ログ  ＩＵ／ｍＬ）およびより全ての濃度にわたる高い変動性（標準偏差０．０９未満）を呈した。
【００８５】
したがって、ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスは、より良好で優れた試料回収および最小限の試料喪失を提供するとともに、セルロースマトリックスを持つデバイスと比較して、全ての濃度にわたって再現性を提供し、ポリオレフィン繊維マトリックスが、セルロースマトリックスよりも良好に検体および懸濁粒子をマトリックス内に保持し、溶媒がより一貫して効率的に蒸発するのを許すことを示唆する。
【００８６】
実施例５
抽出されたＲＮＡ対無傷のウイルス
１．実験設計
本実験の目的は、無傷のウイルスと比較して、ポリオレフィンマトリックスＶｉｖｅＳＴデバイスの核酸の結合および放出特性を評価することであった。−８０℃で貯蔵された１ｍＬアリコートのＨＣＶ感染血漿試料（Ｎ＝２０）を研究に使用し、以下のように指定した。
Ａ＝ＥａｓｙＭＡＧシステムを使用してＲＮＡを抽出し、セルロース繊維マトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷した後、水で回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイで分析した。
Ｂ＝ＥａｓｙＭＡＧシステムを使用してＲＮＡを抽出し、ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷した後、水で回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイで分析した。
Ｃ＝セルロース繊維マトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイス上に試料を負荷し、水で回収して、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイで分析した。
Ｄ＝ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に試料を負荷し、水で回収して、ＲＥＡＬＴＩＭＥ  Ａｂｂｏｔｔ  ＨＣＶアッセイで分析した。
【００８７】
２．１  手順−ＥａｓｙＭＡＧを使用する核酸単離に続いて、セルロース繊維マトリックスまたはポリオレフィン繊維マトリックスのいずれかを持つＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理される。
ａ）取り出した１ｍＬ血漿アリコートを「１Ａ、２Ａ．．．２０Ａ」および「１Ｂ、２Ｂ．．．２０Ｂ」として指定し、−８０℃から室温に解凍した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）ＥａｓｙＭＡＧ標準核酸抽出プロトコルに従い、４０個の試料＋２個の陰性対照を処理し、抽出後、全ての試料をＥａｓｙＭＡＧ溶出緩衝液を使用して１ｍＬ体積を希釈した。
ｄ）４２個のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップに試料指定を標識した（すなわち、１Ａ〜２０Ａ、１Ｂ〜２０Ｂ、陰性対照〜古いマトリックス、陰性対照〜新しいマトリックス）。
ｅ）各試料に対して１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷した。
ｆ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させた。
ｇ）水を使用して、乾燥させたＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｈ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイに進む前に、回収された試料を−８０℃で冷凍した。
【００８８】
２．２  手順−セルロース繊維マトリックスまたはポリオレフィン繊維マトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料
ａ）取り出した１ｍＬ血漿アリコートを「１Ｃ、２Ｃ．．．２０Ｃ」および「１Ｄ、２Ｄ．．．２０Ｄ」として指定し、−８０℃から室温に解凍した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）４２個のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップに試料指定を標識した（すなわち、１Ｃ〜２０Ｃ、１Ｄ〜２０Ｄ、陰性対照〜セルロースマトリックス、陰性対照〜ポリオレフィン繊維マトリックス）。
ｄ）各試料に対して１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷した。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイスの負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させた。
ｆ）水を使用して、乾燥させたＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイに進む前に、回収された試料を−８０℃で冷凍した。
【００８９】
２．３  手順−Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイ：Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶパッケージ添付文書に従い試料を処理した。
【００９０】
３．結果：結果を以下の表２に提供する。
【表２】
2015525890.tif 000004
【００９１】
４．結論
平均して、抽出されたＲＮＡの場合、ポリオレフィン繊維マトリックスは、セルロースマトリックスよりも高い回収を生じた（０．２９ログＩＵ／ｍＬより高い）。臨床的に有意なカットオフ付近で、ポリオレフィンマトリックスは、セルロースマトリックスよりも抽出されたＲＮＡに対してより良好に機能することを支持する。
【００９２】
平均して、ポリオレフィン繊維マトリックスは、新鮮な血漿と比較して抽出されたＲＮＡに対してより高い回収を生じた（０．２５ログＩＵ／ｍＬより高い）。臨床的に有意なカットオフ付近で、ポリオレフィンマトリックスは、新鮮な血漿よりも抽出されたＲＮＡに対してより良好に機能することを支持する。
【００９３】
これらのデータに基づき、ポリオレフィン繊維マトリックスは、核酸の吸収、保存、安定化、および後次回収について、セルロースマトリックスと比較して優れている。これらの驚くべき結果は、恐らくポリオレフィンマトリックス内の埋め込まれた疎水性ポケットの特製に起因する。これらのポケットは、核酸を存在させる容器および「避難場所」を提供し、核酸から水を排除する一方、貯蔵中に安定した環境を核酸に提供する。
【００９４】
実施例６
本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料のＨＣＶ評価
１．実験設計
−８０℃で貯蔵された１ｍＬアリコートのＨＣＶ感染血漿試料（Ｎ＝１９）を分析の各部に使用し、以下のように指定した。
Ａ＝Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイで分析した試料
Ｂ＝ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理し（水で溶出）、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイで分析した試料
Ｃ＝Ａｂｂｏｔｔ  ＨＣＶ  ＧＴアッセイで分析した試料
Ｄ＝ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理し（水で溶出）、Ａｂｂｏｔｔ  ＨＣＶ  ＧＴアッセイで分析した試料
【００９５】
各血漿試料の追加のアリコートを追加の試験のために−８０℃で維持した。
【００９６】
２．１  手順−本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理した試料
ａ）取り出した血漿アリコートを「１Ｂ、２Ｂ．．．１９Ｂ」および「１Ｄ、２Ｄ．．．１９Ｄ」として指定し、−８０℃から室温に解凍した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明の３８個のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップを試料指定（すなわち、１Ｂ〜１９Ｂ、１Ｄ〜１９Ｄ）で標識し、２個の追加のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手してそれぞれを陰性対照として標識した。
ｄ）各試料についてポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明の１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷し、１ｍＬの正常（ＨＣＶ陰性）ヒト血漿を陰性対照と標識されたＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷した。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイスの負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させた。
ｆ）水を使用して、乾燥させたＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）回収した試料を−８０℃で冷凍した。
【００９７】
２．２手順−Ａｂｂｏｔｔ  ｍ２０００  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイ
ａ）取り出した血漿アリコートを「１Ａ、２Ａ．．．１９Ａ」として指定し、ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスから回収したアリコートを「１Ｂ、２Ｂ．．．１９Ｂおよび陰性対照」として指定し、−８０℃から室温に解凍した。
ｂ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶパッケージ添付文書に従い試料を処理した。
【００９８】
２．３．手順−Ａｂｂｏｔｔ  ｍ２０００  ＨＣＶ  ＧＴアッセイ
ａ）取り出した血漿アリコートを「１Ｃ、２Ｃ．．．１９Ｃ」として指定し、ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスから回収したアリコートを「１Ｄ、２Ｄ．．．１９Ｄおよび陰性対照」として指定し、−８０℃から室温に解凍した。
ｂ）Ａｂｂｏｔｔ  ＨＣＶ  ＧＴパッケージ添付文書に従い試料を処理した。
【００９９】
３．結果−結果の概要を以下の表３および４に提供する。
【表３】
2015525890.tif 000005
【表４】
2015525890.tif 000006
【０１００】
４．結論
ＨＣＶ遺伝子型決定結果は、試験されるＨＣＶ遺伝子型１、１ａ、１ｂ、２、および３を持つ冷凍血漿と比較して、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスから回収された血漿試料と１００％一致を実証した（表３）。ＨＣＶウイルス負荷結果は、冷凍血漿と比較して、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスから取り出された血漿について、０．３２の平均低減を示した（表４および図９）。
【０１０１】
以前に刊行された乾燥血斑／血漿斑データに基づき、新鮮な血漿からの定量と乾燥した収集デバイスからの定量との間に約０．５〜０．７ログ低減を予想する（Ａｍｅｌｌａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，ＨＩＶ  Ｍｅｄ．８：３９６−４００、中央値喪失は有意であり、０．６４ログコピー／ｍＬに等しいことを論じる；Ｈａｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １４：６１９−２９、ＤＰＳと血漿との間の中央値差は、０．０７７〜０．６４ログコピー／ｍＬであった）。ここで、本研究は、ポリオレフィンマトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料から回収された平均ウイルスＲＮＡは、刊行された文献に基づいて以前に予想された値よりも驚くほど高く、再現性が高いことを実証した。
【０１０２】
実施例７
本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料についてのＨＩＶ−１およびＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１遺伝子型決定評価
１．実験設計
−８０℃で貯蔵された１ｍＬアリコートのＨＩＶ−１陽性血漿試料（Ｎ＝２０）を分析の各部に使用し、以下のように指定した。
Ａ＝Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイで分析した試料
Ｂ＝ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理し（水で溶出）、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイで分析した試料
Ｃ＝ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理し（ｍＬｙｓｉｓ緩衝液で溶出）、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイで分析した試料
Ｄ＝ＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１  Ｐｒｏ  ＆  ＲＴ遺伝子型アッセイで分析した試料
Ｅ＝ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理し（水で溶出）、ＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１  Ｐｒｏ  ＆  ＲＴ遺伝子型アッセイで分析した試料
【０１０３】
各血漿試料の追加のアリコートを追加の試験のために−８０℃で維持した。
【０１０４】
２．１  手順−本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理した試料
ａ）取り出した血漿アリコートを「１Ｂ、２Ｂ．．．２０Ｂ」、「１Ｃ、２Ｃ．．．２０Ｃ」、および「１Ｅ、２Ｅ．．．２０Ｅ」として指定し、−８０°Ｃから室温に解凍した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明の６０個のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップを試料指定（すなわち、１ｂ〜２０ｂ、１ｃ〜２０ｃ、１ｅ〜２０ｅ）で標識し、２個の追加のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手してそれぞれを陰性対照として標識した。
ｄ）各試料について１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷し、１ｍＬの正常（ＨＩＶ−１陰性）ヒト血漿を陰性対照と標識されたＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷した。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させた。
ｆ）水を使用して、乾燥させたＶｉｖｅＳＴデバイスから試料「１ｂ〜２０ｂ」、「１ｅ〜２０ｅ」、および「陰性対照〜水」を回収し、溶解緩衝液を用いて試料「１ｃ〜２０ｃ」および「陰性対照〜溶解」を回収した。
ｇ）回収した試料を−８０°Ｃで冷凍した。
【０１０５】
２．２．手順−Ａｂｂｏｔｔ  ｍ２０００  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイ
ａ）取り出した血漿アリコートを「１Ａ、２Ａ．．．２０Ａ」として指定し、ＶｉｖｅＳＴデバイスから回収したアリコートを「１Ｂ、２Ｂ．．．２０Ｂ」、「１Ｃ．．．２Ｃ．．．２０Ｃ」、「陰性対照〜水」、および「陰性対照〜溶解」として指定し、−８０°Ｃから室温に解凍した。
ｂ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイのパッケージ添付文書に従い試料を処理した。
【０１０６】
２．３  手順−ＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１  Ｐｒｏ  ＆  ＲＴ遺伝子型アッセイ
ａ）取り出した血漿アリコートを「１Ｄ、２Ｄ．．．２０Ｄ」として指定し、ＶｉｖｅＳＴデバイスから回収したアリコートを「１Ｅ、２Ｅ．．．２０Ｅ」として指定し、−８０℃から室温に解凍した。
ｂ）ＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１  Ｐｒｏ  ＆  ＲＴ遺伝子型アッセイのパッケージ添付文書に従い試料を処理した。
【０１０７】
３．結果−結果の概要を以下の表５および６に提供する。
【表５】
2015525890.tif 000007
【表６】
2015525890.tif 000008
【０１０８】
４．結論
ＨＩＶ−１ウイルス負荷結果は、ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスから回収された血漿について、ｍＬｙｓｉｓ緩衝液を使用して０．２６ログの平均低減を示し、水を使用して０．５９ログ低減を示した（図１０、図１１、および表６）。
【０１０９】
ＨＩＶ−１薬物耐性突然変異は、１７対中１０対（５９％）で特定され、冷凍血漿と比較して、ＶｉｖｅＳＴデバイスから回収された血漿試料間の１００％一致を実証した。混合物Ｔ２１５Ｙ／Ｃは、ＶｉｖｅＳＴデバイスから回収された試料中１７分の１で特定されたが、対応する血漿は突然変異Ｔ２１５Ｙを報告した。Ｖ７５１での突然変異は、血漿試料中１７個のうち１個で特定されたが、ＶｉｖｅＳＴデバイスから回収された対合試料は野生型であった。１７対中１対は、ＶｉｒｏＳｅｑ報告のＴ６９予防生成における欠失を実証した。１７対中１対の血漿試料は、Ｍ１８４Ｖを有したが、低いウイルス負荷に起因して、ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された対応する試料についての結果は生成されなかった。低いウイルス負荷に起因して、１７個のうち３個の対合試料についての遺伝子型結果は生成されなかった（表５）。
【０１１０】
以前に刊行された乾燥血斑／血漿斑データに基づき、新鮮な血漿からの定量と乾燥した収集デバイスからの定量との間に約０．５〜０．７ログ低減を予想する（Ａｍｅｌｌａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，ＨＩＶ  Ｍｅｄ．８：３９６−４００、中央値喪失は有意であり、０．６４ログコピー／ｍＬに等しいことを論じる；Ｈａｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １４：６１９−２９、ＤＰＳと血漿との間の中央値差は、０．０７７〜０．６４ログコピー／ｍＬであった）。さらに、刊行されたデータに基づき、特に低いウイルス血症ＨＩＶ試料から有効な遺伝子型分析結果について、単位複製配列の十分な完全性（品質および量）が得られないと予想する（Ｌｏｆｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，ＡＩＤＳ  ２３：２３５９−６６、ウイルス学的失敗を検出するために、約５，０００コピー／ｍＬの血漿ＲＮＡレベルで患者からの試料に対して性能が最良であることを提供する；Ｈａｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １４：６１９−２９、全体増幅成功率は高いＶＬに対して高いが（３．０超〜４．０ログコピー／ｍＬ）、より低いＶＬの場合に低減されることを提供する（３．０ログ未満、血漿の場合の１４０ｍＬと比較して、スポットに使用される少量に起因して感受性が低減される）。
【０１１１】
ここで、本研究は、ポリオレフィンマトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスから回収された平均ウイルスＲＮＡが、驚くほど高く（０．２６ログを回収）、刊行された文献に基づいて以前に予想された値よりも再現性が高いことを実証した。さらに、広いウイルスＲＮＡ範囲にわたって分析された１７対中１４対（８２％）において結果が得られ、予想よりも遺伝子型決定成功率が高い。
【０１１２】
実施例８
本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料のＨＣＶ検証（直線性および精度）
１．実験設計
本研究の目的は、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用して、ポリオレフィンマトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、分析測定範囲および精度を検証することであった。本実施例は、分析測定範囲（直線範囲）および精度の検証について説明する。
【０１１３】
２．精度（アッセイ間およびアッセイ内精度）
本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス中に貯蔵された変動するウイルス負荷値（低、中間、および高ウイルス負荷）の３つの試料を３重複で、異なる日に２人の異なる操作者により行われる３つの別個のアッセイ上で試験した（Ｎ＝２７試料）。表７は、精度検証アッセイのための実験設計の命名法について説明する。
【０１１４】
３．分析測定範囲
分析測定範囲を試験するために、高力価試料（４Ｅ６  ＩＵ／ｍＬ）を正常ヒト血漿中で連続的に希釈し、１：２、１：２０、１：２００、１：２，０００、１：２０，０００、および１：２００，０００の希釈を生じ、ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理した。各希釈をｍ２０００プラットフォーム上の単一実験において３重複で試験する（Ｎ＝２１）。表８は、分析測定範囲検証アッセイのための実験設計の命名法について説明する。各血漿試料の追加のアリコートを追加の試験のために−８０℃で維持した。
【０１１５】
４．手順
ａ）精度アッセイのための試料は、既知の濃度のＨＣＶ陽性試料であった。分析測定範囲アッセイのための試料を以下のように調製した：高力価試料を希釈して６連続希釈を作製し、１．３〜６．６ログ１０  ＩＵ／ｍＬの濃度範囲を持つ７つの試料をもたらした。これらの試料を表８に示されるように３重複で調製した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ５１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップを試料指定で標識した（表７）。
ｄ）各試料（各１．０ｍＬ）について１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷し、１ｍＬの正常（ＨＣＶ陰性）ヒト血漿を陰性対照と標識されたＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷した。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させた。
ｆ）水を使用して、乾燥させたＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイパッケージ添付文書に従い試料を処理した。
【０１１６】
ＨＣＶ精度アッセイの結果を以下の表７および９に提供する。ＨＣＶ分析測定範囲決定の結果を以下の表８および図１２に提供する。
【表７】
2015525890.tif 000009
【表８】
2015525890.tif 000010
【表９】
2015525890.tif 000011
【０１１７】
５．結論
本研究は、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理されたＨＣＶ陽性試料の分析測定範囲が２０ＩＵ／ｍＬ〜４，０００，０００ＩＵ／ｍＬまたは１．３〜６．６ログ１０ＩＵ／ｍＬであることを決定した。線形回帰分析Ｒ２値は、分析測定範囲試料に対して０．９９７９である。全ての精度アッセイの標準偏差は、±０．２ログ１０ＩＵ／ｍＬであり、ロバスト再現性を示す。アッセイ間精度について９５％信頼レベルでの変動係数（％ＣＶ）は、全ての試料濃度の全ての時点で０．０６％未満であった。アッセイ内精度について９５％信頼レベルでの変動係数（％ＣＶ）は、全ての試料濃度の全ての時点で０．０５％未満であった。
【０１１８】
以前に刊行された乾燥血斑スポットおよび乾燥血漿斑データは、少なくとも０．５ログを示した。精度の標準偏差は、ウイルス負荷分析の場合、高度に変動する回収および再現性の低減をもたらす（Ａｎｄｒｅｏｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｃｌｉｎ．Ｖｉｒｏｌ．４７：４−７、１０％の症例（ｎ＝１３）において、ＤＢＳ  ＲＮＡは検出可能でないが、血漿中で測定可能であることを論じる（２．１〜３．０４ログ）。１つのＤＢＳは、２．７４ログを示したが、対応する血漿レベルは１．６７ログ未満であった。全ての他の例において、血漿中の検出不可能なＲＮＡは、ＤＢＳ中で検出可能ではなかった（ｎ＝１８）。ここで、本研究は、広いウイルス負荷範囲にわたって驚くべき再現性を実証し、ポリオレフィンマトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを使用する核酸の非常にロバストな貯蔵および回収を示す。
【０１１９】
実施例９
Ｒｏｃｈｅ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶアッセイを使用して本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料のＨＣＶ評価
１．実験設計
本研究の目的は、Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＡｍｐｌｉＰｒｅｐ／ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶアッセイを使用して、ポリオレフィンマトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料中のＨＣＶを評価することであった。Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＡｍｐｌｉＰｒｅｐ／ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶアッセイを使用する分析の場合、１．２ｍＬアリコートのＨＣＶ陽性血漿試料（Ｎ＝２０）を分析に使用した。各血漿試料の追加のアリコートを追加の試験のために−８０℃で維持した。
【０１２０】
２．手順
ａ）高力価試料をＨＣＶ陰性正常ヒト血漿中に希釈し、表１０に記載されるように試料を生成した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）１．２ｍＬの各試料を−８０℃で冷凍貯蔵するか（未決の分析）、または表１０に示されるように本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理した。
ｄ）２０個のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップを試料指定で標識した（表１０）。
ｅ）各試料に対して１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷した（各１．２ｍＬ）。
ｆ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させた。
ｇ）１．２ｍＬの水を使用して、ＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｈ）回収した試料を−８０℃で冷凍した。
ｉ）回収した試料および貯蔵した冷凍血漿アリコートを、Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＡｍｐｌｉＰｒｅｐ／ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶアッセイを使用して分析した。
【０１２１】
３．結果−結果を以下の表１０に提供する。
【表１０】
2015525890.tif 000012
【０１２２】
４．結論
Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＡｍｐｌｉＰｒｅｐ／ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶアッセイにおいて本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて血漿を処理したときに観察されたＨＣＶ  ＲＮＡの平均喪失は、０．３２ログ１０ＩＵ／ｍＬである（表１０）。血漿試料を２．３〜６．６ログ１０ＩＵ／ｍＬの濃度範囲にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料と比較したときの直線性は、線形回帰分析値（Ｒ２）０．９８７４を有した（図１３）。
【０１２３】
以前に刊行された乾燥血斑／血漿斑データに基づき、新鮮な血漿からの定量と乾燥した収集デバイスからの定量との間に約０．５〜０．７ログ低減を予想する（Ａｍｅｌｌａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，ＨＩＶ  Ｍｅｄ．８：３９６−４００、中央値喪失は有意であり、０．６４ログコピー／ｍＬに等しいことを論じる；Ｈａｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １４：６１９−２９、ＤＰＳと血漿との間の中央値差は、０．０７７〜０．６４ログコピー／ｍＬであった）。ここで、本研究は、ポリオレフィンマトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを使用して回収された平均ウイルスＲＮＡは、刊行された文献に基づいて以前に予想された値よりも驚くほど高く、再現性が高いことを実証した。
【０１２４】
実施例１０
Ｒｏｃｈｅ  ＨＩＶ１  ＲＮＡ  ＴａｑＭａｎアッセイを使用して本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料のＨＩＶ評価
１．実験設計
本研究の目的は、Ｒｏｃｈｅ  ＨＩＶ１  ＲＮＡ  ＴａｑＭａｎアッセイを使用して本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料中のＨＩＶを評価することであった。Ｒｏｃｈｅアッセイを使用する分析のために、−８０℃で貯蔵された１．２ｍＬアリコートのＨＩＶ−１陽性血漿試料（Ｎ＝２０）を使用し、アリコートを以下のように指定した。
ｐ＝Ｒｏｃｈｅ  ＨＩＶ−１  ＲＮＡ  ＴａｑＭａｎアッセイで分析した血漿試料
ｖ＝ポリオレフィン繊維マトリックスを持つＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理し（水で溶出）、Ｒｏｃｈｅ  ＨＩＶ−１  ＲＮＡ  ＴａｑＭａｎアッセイで分析した血漿試料
【０１２５】
各血漿試料の追加のアリコートを追加の試験のために−８０℃で維持した。
【０１２６】
２．手順
ａ）ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理される血漿アリコートを取り出し、−８０℃から室温に解凍した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）２０個のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップを試料指定で標識した（表１１）。
ｄ）各試料に対して１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷した（各１．２ｍＬ）。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させた。
ｆ）水（各１．２ｍＬ）を使用して、ＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）回収した試料を−８０℃で冷凍した。
ｈ）回収した試料および貯蔵した冷凍血漿アリコートを、Ｒｏｃｈｅ  ＨＩＶ−１  ＲＮＡ  ＴａｑＭａｎアッセイを使用して分析した。
【０１２７】
３．結果−結果を以下の表１１および図１４に提供する。
【表１１】
2015525890.tif 000013
【０１２８】
４．結論
Ｒｏｃｈｅ  ＨＩＶ−１  ＲＮＡ  ＴａｑＭａｎアッセイにおいてＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて血漿試料を処理したときに観察されたＨＩＶ  ＲＮＡの平均喪失は、０．２１ログｃ／ｍＬである（表１１）。血漿試料を約２．１〜５．５ログｃ／ｍＬの濃度範囲にわたってＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料と比較したときの直線性は、線形回帰分析値（Ｒ２）０．９７１７を有する（図１４）。
【０１２９】
以前に刊行された乾燥血斑／血漿斑データに基づき、新鮮な血漿からの定量と乾燥した収集デバイスからの定量との間に約０．５〜０．７ログ低減を予想する（Ａｍｅｌｌａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，ＨＩＶ  Ｍｅｄ．８：３９６−４００、中央値喪失は有意であり、０．６４ログコピー／ｍＬに等しいことを論じる；Ｈａｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １４：６１９−２９、ＤＰＳと血漿との間の中央値差は、０．０７７〜０．６４ログコピー／ｍＬであった）。ここで、本研究は、ポリオレフィンマトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを使用して回収された平均ウイルスＲＮＡは、刊行された文献に基づいて以前に予想された値よりも驚くほど高く、再現性が高いことを実証した。
【０１３０】
実施例１１
本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料のＨＩＶ−１アッセイ検証（直線性および精度）
１．実験設計
本研究の目的は、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用して、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料について、分析測定範囲および精度を検証することであった。本実施例は、分析測定範囲（直線範囲）および精度の検証について説明する。
【０１３１】
２．精度（アッセイ間およびアッセイ内精度）
ＶｉｖｅＳＴデバイス中に貯蔵された変動するウイルス負荷値（低、中間、および高ウイルス負荷）の３つの試料を（最小）３重複で、異なる日に３つの別個のアッセイ上で試験した。
【０１３２】
３．分析測定範囲
分析測定範囲を試験するために、高力価試料（約８ログコピー／ｍＬ）を正常ヒト血漿中で連続的に希釈し、１：１０、１：１００、１：１，０００、１：１０，０００、１：１００，０００、１：１，０００，０００、および１：１０，０００，０００の希釈を生じ、ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理した。各希釈をｍ２０００プラットフォーム上の単一実験において３重複で試験した（Ｎ＝２１）。比較のために連続希釈液を冷凍し、解凍してｍ２０００プラットフォーム上で分析した（Ｎ＝２１）。各血漿試料の追加のアリコートを追加の試験のために−８０℃で維持した。
【０１３３】
４．手順
ａ）精度アッセイのための試料は、約８ログコピー／ｍＬの濃度を持つＨＩＶ−１陽性試料から希釈した。陰性ヒト血漿を用いて連続希釈液を作製し、約５ログコピー／ｍＬ、約４ログコピー／ｍＬ、および約３ログコピー／ｍＬの濃度を持つ試料を生じた。分析測定範囲アッセイのための試料を以下のように調製した：高力価試料を７回連続希釈して、１〜７ログコピー／ｍＬの濃度範囲を持つ７つの試料をもたらした。これらの試料を３重複で調製した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）適切な数のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップを試料指定で標識した。
ｄ）各試料（各１．１５ｍＬ）について１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷し、１．１５ｍＬの正常（ＨＩＶ−１陰性）ヒト血漿を陰性対照と標識されたＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷した。注記：Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１  ０．６ｍＬ適用は、１．１ｍＬ試料を必要とするため、１．１５ｍＬ試料をＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷／回収して適切な回収を保証した。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させ、アッセイワークシート上に負荷／回収日を指定し、一旦乾燥したらＶｉｖｅＳＴデバイスをキャップをして、周囲実験室条件で貯蔵した。
ｆ）水（各１．１５ｍＬ）を使用して、乾燥したＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１パッケージ添付文書に従い試料を処理した（０．６ｍＬ適用）。
ＨＩＶ−１精度アッセイの結果を以下の表１２に提供する。ＨＩＶ−１分析測定範囲決定の結果を以下の表１３および図１５に提供する。
【表１２】
2015525890.tif 000014
【表１３】
2015525890.tif 000015
【０１３４】
５．結論
全ての分析は、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用して行った（０．６ｍＬ適用）。本研究は、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理されたＨＩＶ−１陽性試料の分析測定範囲が２ログコピー／ｍＬ〜７ログコピー／ｍＬまたは１００コピー／ｍＬ〜１０，０００，０００コピー／ｍＬであることを決定した。線形回帰分析Ｒ２値は、分析測定範囲試料に対して０．９９４４である。Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１  ｍ２０００システムを使用して分析した冷凍ＨＩＶ−１試料と比較したとき、ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理され、それから回収されたＨＩＶ−１試料について、０．６０の平均喪失が観察された。
【０１３５】
精度分析の場合、全てのアッセイの標準偏差は、±０．２ログコピー／ｍＬ未満であり、ロバスト再現性を示す。アッセイ間精度について９５％信頼レベルでの変動係数（％ＣＶ）は、全ての試料濃度の全ての時点で０．０７％未満であった。アッセイ内精度について９５％信頼レベルでの変動係数（％ＣＶ）は、全ての試料濃度の全ての時点で０．１４％未満であった。
【０１３６】
実施例１２
Ａｂｂｏｔｔ  ＨＣＶアッセイを使用するＨＣＶの７日安定性研究
１．実験設計
本研究の目的は、７日の期間にわたる周囲条件でのＨＣＶ感染試料の貯蔵について、ポリオレフィン繊維マトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを評価することであった。４つの濃度でのＨＣＶ感染試料を０日目に本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスに添加し、終夜乾燥させた。次いで、ＶｉｖｅＳＴデバイスをキャッピングにより密封し、周囲条件で貯蔵した。１日目（各レベル４複製）、３日目、および７日目（各レベル５複製）に試料を回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイで分析した。対照として、１日目に各レベルの１つの冷凍血漿試料を分析した。各時点に陰性対照を含めた。アッセイ設計を表１４に示す。
【表１４】
2015525890.tif 000016
【０１３７】
２．手順
ａ）ＨＣＶ陽性試料レベル１〜４を直線希釈により調製し（表１５）、ＨＣＶ陰性血漿を陰性対照に使用した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）６０個のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップに試料指定を標識し、表１４に記載されるように、陰性対照に対して追加の３ＶｉｖｅＳＴデバイスを入手した。
ｄ）各試料（各１．０ｍＬ）について１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷し、１ｍＬの陰性ヒト血漿を各陰性対照の上に負荷した。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させた。
ｆ）水を使用して、ＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイパッケージ添付文書に従い試料を処理した。
【０１３８】
周囲条件でのＨＣＶ  ７日安定性研究の結果は、以下の表１５〜１６および図１６〜１８に提供する。
【表１５】
2015525890.tif 000017
【表１６】
2015525890.tif 000018
【０１３９】
３．結論
周囲温度で７日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料と比較して、冷凍血漿との間に０．５７ログＩＵ／ｍＬの最大喪失を記録した（表１６および図１８）。直線適合（Ｒ２＞０．９９）を全ての時点にわたって各レベルの線形回帰分析により示されるように、７日研究の過程で保持された（図１６）：１日目の試料のＲ２値０．９９４２、３日目の試料のＲ２値０．９９８７、７日目の試料のＲ２値０．９９２４。ここで注目すべき結果は、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス中のポリオレフィンマトリックスの上に負荷されるウイルスＲＮＡのレベルに関係なく、再現性、予測性、および定量性の高い喪失が、０．９９を上回る各ウイルスＲＮＡレベルでのＲ２値で経時的に実証されたという事実である。
【０１４０】
実施例１３
貯蔵条件比較を用いるＨＣＶの２１日安定性研究
１．実験設計
本研究の目的は、２１日の期間にわたる様々な貯蔵条件でのＨＣＶ感染試料の貯蔵について、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを評価することであった。
【０１４１】
４つの濃度でのＨＣＶ感染試料を０日目に本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスに添加し、終夜乾燥させた。次いで、ＶｉｖｅＳＴデバイスをキャッピングにより密封し、移動させて周囲条件（実験室ベンチ）、４℃（冷蔵庫）、および４０℃／７５％  ＲＨ（微気象チャンバ）で貯蔵した。試料（各レベル５複製）をＶｉｖｅＳＴデバイスから回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを用いて１日目、３日目、７日目、１０日目、１４日目、および２１日目に分析した。対照として、冷凍血漿試料（各レベル５複製）を１日目に分析した。各時点に陰性対照を含めた。アッセイ設計を表１７に示す。
【表１７】
2015525890.tif 000019
【０１４２】
２．手順
ａ）ＨＣＶ陽性試料レベル１〜４を、高力価ＨＣＶ感染血漿試料をＨＣＶ陰性（正常）ヒト血漿に希釈することにより調製し（表１７）、ＨＣＶ陰性血漿を陰性対照に使用した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）４４１個の本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップに試料指定を標識し、表１７に記載されるように、陰性対照に対してこれらのＶｉｖｅＳＴデバイスのうちの２１個を使用し、追加のアリコート（各レベルに５個＋１個の陰性対照）を−８０℃で貯蔵し、１日目の試料と同時に試験した。
ｄ）各試料（各１．０ｍＬ）について１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷し、１ｍＬの陰性ヒト血漿を各陰性対照の上に負荷した。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させ、負荷／回収日／時間をアッセイワークシート上に指定した。
ｆ）水を使用して、ＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイパッケージ添付文書に従い試料を処理した。
【０１４３】
３．結果−結果を表１８〜表２０および図１９〜図２５に提供する。
【表１８】
2015525890.tif 000020
【表１９】
2015525890.tif 000021
【表２０】
2015525890.tif 000022
【０１４４】
４．結論
周囲温度で貯蔵された試料について、冷凍血漿と２１日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に０．５１ログＩＵ／ｍＬ（−０．２３〜−０．５１ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大喪失を記録した。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０１〜０．１７の範囲であった。４℃で貯蔵された試料について、冷凍血漿と２１日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に０．４０ログＩＵ／ｍＬ（−０．２０〜−０．４０ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大喪失を記録した。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０２〜０．０９の範囲であった。微気象チャンバ中４０℃／７５％  ＲＨで貯蔵された試料について、冷凍血漿と２１日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に０．９３ログＩＵ／ｍＬ（−０．４２〜−０．９３ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大喪失を記録した。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０１〜０．１１の範囲であった。
【０１４５】
直線適合（Ｒ２＞０．９８）を全ての試験点および全ての貯蔵条件全体で線形回帰分析により示されるように、２１日研究の過程で保持された（図１９、２１、および２３）。２１日分析の線形回帰結果の概要は：周囲貯蔵の場合、Ｒ２値０．９９７０、４℃貯蔵の場合、Ｒ２値０．９９９７、４０℃／７５％  ＲＨ貯蔵の場合、Ｒ２値０．９９５９である。
【０１４６】
実施例１４
ＨＩＶ−１アッセイを使用するＡｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥを使用する周囲条件でのＨＩＶの２８日安定性研究
１．実験設計
本研究の目的は、少なくとも２８日の期間にわたる周囲条件でのＨＩＶ−１感染試料の貯蔵について、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを評価することであった。
【０１４７】
４つの濃度でのＨＩＶ−１感染試料を０日目に本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスに添加し、終夜乾燥させた。次いで、ＶｉｖｅＳＴデバイスをキャッピングにより密封し、周囲条件で貯蔵した。１日目、３日目、７日目、１０日目、１４日目、２１日目、および２８日目に試料を回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイで分析した。約３、約４、約５、および約６ログコピー／ｍＬの４つの濃度レベルの５つの複製を各試験点で分析した。各時点に陰性対照を含めた。各血漿試料の追加のアリコートを追加の試験のために−８０℃で維持する。
【０１４８】
２．手順
ａ）ＨＩＶ−１陽性試料レベル１〜４を直線希釈により調製し（表２１）、ＨＩＶ−１陰性血漿を陰性対照に使用した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）本発明の１４０個のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップを試料指定で標識し、７個の追加のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手してそれぞれを陰性対照として標識した。
ｄ）各試料（各１．１５ｍＬ）および１．１５ｍＬ陰性ヒト血漿について１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを各陰性対照の上に負荷し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１  ０．６ｍＬ適用は、１．１ｍＬ試料を必要とするため、１．１５ｍＬ試料をＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷／回収し、適切な回収を保証した。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させ、アッセイワークシート上に負荷／回収日を指定し、一旦乾燥したらＶｉｖｅＳＴデバイスにキャップをして、周囲実験室条件で貯蔵した。
ｆ）水（各１．１５ｍＬ）を使用して、ＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイパッケージ添付文書に従い試料を処理した（０．６ｍＬ適用）。
【０１４９】
３．結果−結果を表２１、表２２、図２６、および図２７に提供する。
【表２１】
2015525890.tif 000023
【表２２】
2015525890.tif 000024
【０１５０】
４．結論
全ての分析は、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用して行った（０．６ｍＬ適用）。分析測定範囲試験の場合、１日間ＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された試料は、冷凍試料と比較したとき、０．６０ログｃ／ｍＬの平均喪失をもたらした（実施例１１、ＨＩＶ−１検証（直線性および精度））。
【０１５１】
冷凍血漿と周囲温度で２８日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に１．０９ログｃ／ｍＬの平均喪失（範囲＝−０．８７ログｃ／ｍＬ〜１．２７ログコピー／ｍＬ）を記録した（表２２）。直線適合（Ｒ２＞０．９９６３）を全ての時点にわたって各レベルの線形回帰分析により示されるように、２８日研究の過程で保持された（図２６）：３日目の試料のＲ２値０．９９８９、７日目の試料のＲ２値０．９９６３、１０日目の試料のＲ２値０．９９８４、１４日目の試料のＲ２値０．９９７９、２１日目の試料のＲ２値０．９９８８、および２８日目の試料のＲ２値０．９９９。
【０１５２】
実施例１５
貯蔵条件比較を用いるＨＣＶの６２日安定性研究
１．実験設計
本研究は、実施例１３のＨＣＶ  ２１日安定性研究を６２日の貯蔵後に収集された追加データで補足するのに役立つ。元の研究中、各貯蔵条件に対して１つの追加の試料セットを本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの上に負荷した。これらの試料は、元の２１日研究中に利用されなかったため、関連貯蔵条件で貯蔵されたままであり、６２日後に分析した。本研究の目的は、６０日以上の期間にわたる様々な貯蔵条件でのＨＣＶ感染試料の貯蔵について、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを評価することであった。
【０１５３】
４つの濃度でのＨＣＶ感染試料を０日目に本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスに添加し、終夜乾燥させた。次いで、ＶｉｖｅＳＴデバイスをキャッピングにより密封し、移動させて周囲条件（実験室ベンチ）、４℃（冷蔵庫）、および４０℃／７５％  ＲＨ（微気象チャンバ）で貯蔵した。試料（各レベル５複製）をＶｉｖｅＳＴデバイスから回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを用いて１日目、３日目、７日目、１０日目、１４日目、２１日目、および６２日目に分析した。対照として、冷凍血漿試料（各レベル５複製）を１日目に分析した。各時点に陰性対照を含めた。アッセイ設計を表２３に示す。
【表２３】
2015525890.tif 000025
【０１５４】
２．手順
ａ）  ＨＣＶ陽性試料レベル１〜４を、高力価ＨＣＶ感染血漿試料をＨＣＶ陰性（正常）ヒト血漿に希釈することにより調製し（表２３）、ＨＣＶ陰性血漿を陰性対照に使用した。
ｂ）  各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）  ４４１個の本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップに試料指定を標識し、表２３に記載されるように、陰性対照に対してこれらのＶｉｖｅＳＴデバイスのうちの２１個を使用し、追加のアリコート（各レベルに５個＋１個の陰性対照）を−８０℃で貯蔵し、１日目の試料と同時に試験した。
ｄ）  各試料（各１．０ｍＬ）について１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷し、１ｍＬの陰性ヒト血漿を各陰性対照の上に負荷した。
ｅ）  ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させ、負荷／回収日／時間をアッセイワークシート上に指定した。
ｆ）  水を使用して、ＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）  Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶパッケージ添付文書に従い試料を処理した。
【０１５５】
３．結果−結果を表２４〜表２６および図２８〜図３４に提供する。
【表２４】
2015525890.tif 000026
【表２５】
2015525890.tif 000027
【表２６】
2015525890.tif 000028
【０１５６】
４．結論
周囲温度で貯蔵された試料について、冷凍血漿と６２日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に０．５８ログＩＵ／ｍＬ（−０．２３〜−０．５８ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大喪失を記録した。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０１〜０．１７の範囲であった。４℃で貯蔵された試料について、冷凍血漿と６２日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に０．４３ログＩＵ／ｍＬ（−０．２０〜−０．４３ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大喪失を記録した。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０２〜０．０９の範囲であった。微気象チャンバ中４０℃／７５％  ＲＨで貯蔵された試料について、冷凍血漿と６２日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に１．３７ログＩＵ／ｍＬ（−０．４２〜−１．３７ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大喪失を記録した。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０１〜０．１１の範囲であった。微気象チャンバ中に貯蔵された試料について、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に１日間貯蔵された試料と６２日間貯蔵された試料との間に０．８８ログＩＵ／ｍＬの平均喪失を記録した。
【０１５７】
直線適合（Ｒ２＞０．９８）を全ての試験点および全ての貯蔵条件全体で線形回帰分析により示されるように、６２日研究の過程で保持された（図２８、３０、および３２）。６２日分析の線形回帰結果の概要は：周囲貯蔵の場合、Ｒ２値０．９９１８、４℃貯蔵の場合、Ｒ２値０．９９７７、４０℃／７５％  ＲＨ貯蔵の場合、Ｒ２値０．９９７９である。
【０１５８】
実施例１６
貯蔵条件比較を用いるＨＩＶの６２日安定性研究
１．実験設計
本研究の目的は、６２日の期間にわたる様々な貯蔵条件でのＨＩＶ−１感染試料の貯蔵について、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを評価することであった。
【０１５９】
４つの濃度でのＨＩＶ−１感染試料を０日目に本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスに添加し、終夜乾燥させた。次いで、ＶｉｖｅＳＴデバイスをキャッピングにより密封し、移動させて周囲条件（実験室ベンチ）、４℃（冷蔵庫）、および４０℃／７５％  ＲＨ（微気象チャンバ）で貯蔵した。試料（各レベル５複製）をＶｉｖｅＳＴデバイスから回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを用いて１日目、３日目、７日目、１０日目、１４日目、２１日目、および６２日目に分析した。対照として、冷凍血漿試料（各レベル５複製）を１日目に分析した。各時点に陰性対照を含めた。アッセイ設計を表２７に示す。
【表２７】
2015525890.tif 000029
【０１６０】
２．手順
ａ）ＨＩＶ−１陽性試料レベル１〜４を、高力価ＨＩＶ−１感染血漿試料をＨＩＶ−１陰性（正常）ヒト血漿に希釈することにより調製し（表２７）、ＨＩＶ−１陰性血漿を陰性対照に使用した。
ｂ）各試料を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）４４１個の本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップに試料指定を標識し、表２７に記載されるように、陰性対照に対してこれらのＶｉｖｅＳＴデバイスのうちの２１個を使用し、追加のアリコート（各レベルに５個＋１個の陰性対照）を−８０℃で貯蔵し、１日目の試料と同時に試験した。
ｄ）各試料（各１．１ｍＬ）および１．１５ｍＬ陰性ヒト血漿について１個のＶｉｖｅＳＴデバイスを各陰性対照の上に負荷し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１  ０．６ｍＬ適用は、１．１ｍＬ試料を必要とするため、１．１５ｍＬ試料をＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷し、適切な回収体積を保証した。
ｅ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させ、負荷／回収日／時間をアッセイワークシート上に指定した。
ｆ）水（各１．１５ｍＬ）を使用して、ＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
ｇ）Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイパッケージ添付文書に従い試料を処理した（０．６ｍＬ適用）。
【０１６１】
３．結果−結果を表２８〜表３０および図３５〜図４１に提供する。
【表２８】
2015525890.tif 000030
【表２９】
2015525890.tif 000031
【表３０】
2015525890.tif 000032
【０１６２】
４．結論
周囲温度で貯蔵された試料について、冷凍血漿と６２日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に０．９１ログＩＵ／ｍＬ（−０．６５〜−０．９１ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大喪失を記録した。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０２〜０．１３の範囲であった。４℃で貯蔵された試料について、冷凍血漿と６２日の期間にわたってＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に０．８４ログＩＵ／ｍＬ（−０．６０〜−０．８４ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大喪失を記録した。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０２〜０．０７の範囲であった。微気象チャンバ中４０℃／７５％  ＲＨで貯蔵された試料について、冷凍血漿と６２日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に１．６９ログＩＵ／ｍＬ（−０．７９〜−１．６９ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大喪失を記録した。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０２〜０．１２の範囲であった。微気象チャンバ中に貯蔵された試料について、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に１日間貯蔵された試料と６２日間貯蔵された試料との間に０．７０ログｃ／ｍＬの平均喪失を記録した。
【０１６３】
直線適合（Ｒ２＞０．９５）を全ての試験点および全ての貯蔵条件全体で線形回帰分析により示されるように、６２日研究の過程で保持された（図３５、３７、および３９）。６２日分析の線形回帰結果の概要は：周囲貯蔵の場合、Ｒ２値０．９９５３、４℃貯蔵の場合、Ｒ２値０．９９６１、４０℃／７５％  ＲＨ貯蔵の場合、Ｒ２値０．９５５５である。
【０１６４】
実施例１７
Ａｂｂｏｔｔ  ＨＣＶアッセイを使用するＨＩＶ−１検出限界（ＬＯＤ）評価
１．実験設計
本実験の目的は、７日の期間にわたって周囲条件でＨＩＶ−１感染試料を貯蔵するための本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの検出限界（ＬＯＤ）を評価することであった。
【０１６５】
６つの直線濃度でのＨＩＶ−１感染血漿試料（各レベルｎ＝１４試料）を本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスに添加し（０日目）、層流フード内に置き、終夜乾燥させた。次いで、ＶｉｖｅＳＴデバイスをキャッピングにより密封し、周囲条件で７日間貯蔵した。７日目に試料をＶｉｖｅＳＴデバイスから回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイで分析した。各濃度の追加のアリコートを冷凍貯蔵し、ＶｉｖｅＳＴデバイスから回収された試料と同時に分析した。アッセイ設計を表３１に示す。各血漿試料の追加のアリコートを追加の試験のために−８０℃で維持した。全てのロット番号をアッセイワークシートに記録した。
【表３１】
2015525890.tif 000033
【０１６６】
２．１  手順−本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理した試料
ａ）ＬＯＤアッセイのための試料は、約８ログ／ｍＬの濃度を持つＨＩＶ−１陽性試料から希釈し、陰性ヒト血漿を用いて連続希釈液を作製して、表３１に記載される濃度を持つ試料を生じ、各濃度の約２０ｍＬを必要とした。
ｂ）各試料濃度を渦流させて適切な混合を保証した。
ｃ）８４個の本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを入手し、それぞれのキャップを試料指定で標識した。
ｄ）各試料濃度（各１．１５ｍＬ）について１４個のＶｉｖｅＳＴデバイスを負荷し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１  ０．６ｍＬ適用は、１．１ｍＬ試料を必要とするため、１．１５ｍＬ試料をＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷し、適切な回収体積を保証した。
ｅ）１．１ｍＬの各試料濃度を滅菌スクリューキャップ管にピペットで注入し、−８０℃で貯蔵した。
ｆ）ＶｉｖｅＳＴデバイス中の負荷したマトリックスを層流フード内で少なくとも１２時間、３６時間を超えずに乾燥させ、負荷／回収日／時間をアッセイワークシート上に指定した。
ｇ）負荷したＶｉｖｅＳＴデバイスにキャップをして密封し、周囲実験質条件で７日間貯蔵した。
ｈ）水（各１．１５ｍＬ）を使用して、ＶｉｖｅＳＴデバイスから試料を回収した。
【０１６７】
２．２  手順−Ａｂｂｏｔｔ  ｍ２０００  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイ：Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイパッケージ添付文書に従い、冷凍試料およびＶｉｖｅＳＴデバイスから回収した試料を処理した（０．６ｍＬ適用）。
【０１６８】
３．結果−ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理されなかったＨＩＶ−１感染冷凍血漿試料の結果を表３２および図４２に提示する。ＶｉｖｅＳＴデバイス上で７日間貯蔵した後に処理および回収されたＨＩＶ−１感染試料の結果を表３３、表３４、および図４３に提示する。
【表３２】
2015525890.tif 000034
【表３３】
2015525890.tif 000035
【表３４】
2015525890.tif 000036
【０１６９】
４．結論
高力価ＨＩＶ−１陽性試料を正常なヒト血漿中に希釈し、６つの濃度の希釈を生じた。希釈した試料は予想よりわずかに低い値を生じたが、線形回帰分析は、Ｒ２値０．９２０６７を生じ、希釈した試料が、本研究における使用に許容されることを示す（表３２および図４２）。ＨＩＶ−１  ＲＮＡの最大喪失０．８８ログｃ／ｍＬを、冷凍血漿と比較して、ＶｉｖｅＳＴデバイス上に７日間貯蔵した血漿試料について観察した（表３３および表３４）。データのプロビット分析に基づいて、３５３ｃ／ｍＬ（２．５５ログｃ／ｍＬ）のＨＩＶ−１濃度を持つ血漿試料をＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷および貯蔵したとき（最大７日間）、試料が９５％の可能性で検出された（図４３）。全ての分析に対して、Ａｂｂｏｔｔデータ分析ソフトウェアにより４０ｃ／ｍＬ未満（１．６０ログｃ／ｍＬ未満）であると報告された結果は、貯蔵されたＨＩＶ−１較正曲線を使用して手動で計算した。
【０１７０】
実施例１８
Ｖｉｔｒｏ  Ｓｅｑ  ＨＩＶ−１遺伝子型決定システム（ｖ２．０）における使用のためにＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料の評価
１．目的
本研究の目的は、Ｖｉｔｒｏ  Ｓｅｑ  ＨＩＶ−１遺伝子型決定システム（ｖ２．０）における使用のために本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料を評価することであった。本実施例は、ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理されていない冷凍血漿と比較して、精度の結果を説明する。
【０１７１】
２．方法論
ＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１遺伝子型決定システム（ｖ２．０）は、ＨＩＶ−１ゲノム突然変異を検出する定性ＲＮＡ系周期配列決定アッセイである。該アッセイは、ＨＩＶ−１  ｐｏｌ遺伝子の全体プロテアーゼ領域および逆転写領域の３分の２において突然変異を検出する。該アッセイは、５つの主なプロセス：逆転写（ＲＴ）；ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）；周期配列決定；自動配列決定；およびソフトウェア分析に基づいている。
【０１７２】
プロテアーゼおよび逆転写領域を増幅して１．８ｋｂ単位複製配列を生成した。単位複製配列を、約１．３ｋｂコンセンサス配列を生成する７つのプライマーの配列決定テンプレートとして使用した。ＶｉｒｏＳｅｑ ＨＩＶ−１遺伝子型決定システム（ｖ２．８）ソフトウェアを使用して、コンセンサス配列を既知のＨＸＢ−２参照配列と比較し、試料中に存在する突然変異を決定した。
【０１７３】
３．実験設計
ＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１遺伝子型決定システム（ｖ２．０）における本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料の性能を、精度について冷凍血漿と比較して評価した。比較遺伝子型分析を、３．５８〜５．１７ログｃ／ｍＬの範囲のウイルス負荷を持つ１０個の対合ＨＩＶ−１血漿試料の重複アリコート上で行った（冷凍対ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料）。再現性を評価するために、１０個の対合試料のうち２つの試料の複製（純希釈、１：２、および１：４希釈）および１つの試料の複製（純希釈および１：４希釈）を分析した。冷凍血漿試料をＥｔＯＨを介して抽出した（ＦＤＡ承認されたパッケージ添付文書に従い手動抽出）。本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料は、ｂｉｏＭＯＮＴＲの研究方法によって抽出した（ＲＭ−００５．００、ＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１遺伝子型決定システムおよびＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ３１００／３１３０遺伝子分析器を使用するＨＩＶ−１  Ｐｒｏ／ＲＴ領域の配列決定）。この方法は、ＮｕｃｌｉＳＥＮＳ  ｅａｓｙＭａｇプラットフォーム（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ，Ｉｎｃ．）を使用し、自動化ＲＮＡ抽出、常磁性シリカ粒子を利用する。全てのＨＩＶ−１配列決定反応をＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ３１００遺伝子分析器キャピラリープラットフォーム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上で処理し、ＶｉｒｏＳｅｑソフトウェア（ｖ２．８）を使用してデータを分析した。ｂｉｏＭＯＮＴＲ独自のｂｉｏＣｏｎＴ配列分析ツールを介してＨＩＶ−１配列相同性を分析した。
【０１７４】
４．結果
薬物耐性突然変異は、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿と冷凍血漿との間のＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１生成報告において１００％一致した（１０／１０対）。ＨＩＶ−１薬物耐性突然変異は、６／１０対合標本において検出されたＷＴウイルスとともに４／１０対において特定された。対合試料の全てに対し、プロテアーゼおよび逆転写領域について、ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料を冷凍血漿と比較したとき、ヌクレオチドレベルに９９％を上回る一致が存在した（表３５）。複製試料の場合（純希釈、１：２および１：４希釈）、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料は、分析された希釈に関わらず、同一の薬物耐性プロファイルパターンを生成した。
【表３５】
2015525890.tif 000037
【０１７５】
５．結論
ＶｉｒｏＳｅｑ  ＨＩＶ−１遺伝子型決定システム（ｖ２．０）における本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料の使用は、薬物耐性突然変異について１００％一致、冷凍血漿と比較して９９％を上回るヌクレオチドレベルを実証した。さらに、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料の複製は、同一の薬物耐性突然変異パターンを生成した。これらの結果は、ＨＩＶ−１耐性試験のためにＨＩＶ−１陽性個体から得られた血漿を輸送するためのＶｉｖｅＳＴデバイスの有用性を実証する。
【０１７６】
実施例１９
Ｒｏｃｈｅ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶアッセイを使用するＨｉｇｈ  Ｐｕｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍ検証
１．目的
本研究の目的は、Ｒｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶ（ｖ２．０）アッセイを使用して、Ｈｉｇｈ  Ｐｕｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍとの併用について本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを検証することであった。本研究は、精度研究；直線性（分析測定範囲）；安定性（７日）；冷凍血漿と比較した精度；および検出限界（ＬＯＤ）／定量限界（ＬＯＱ）の結果を説明する。
【０１７７】
２．方法論
Ｈｉｇｈ  Ｐｕｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍと併用するためのＲｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ（ｖ２．０）は、ＲＴ−ＰＣＲを使用して臨床標本中のＨＣＶのＲＮＡゲノムから増幅生成物を生成する定量ＲＴ−ＰＣＲ系アッセイである。該プロセスは、２つの主なステップ：ａ）血漿試料からのウイルスＲＮＡの抽出、およびｂ）ウイルスＲＮＡの同時検出を伴う増幅に基づいている。
【０１７８】
３．実験設計
Ｈｉｇｈ  Ｐｕｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍと併用するためのＲｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶ（ｖ２．０）上の全ての試験は、ＦＤＡ承認プロトコル（０．５ｍＬ）に従い修正なしに行った。Ｒｏｃｈｅ  ＨＣＶアッセイは、０．５ｍＬ試料を必要とするため、０．８ｍＬ試料を各ＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷し、そこから回収して適切な試料体積を保証した。全ての負荷したＶｉｖｅＳＴデバイスは、周囲温度（ＲＴ）で貯蔵した。本アッセイにおける本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料の性能を、精度、正確性、分析測定範囲、安定性、および検出限界（ＬＯＤ）／定量限界（ＬＯＱ）について評価した。
【０１７９】
３．１  精度（アッセイ間およびアッセイ内精度）
アッセイ間およびアッセイ内精度を査定するために、変動するウイルス負荷値（低、中間、および高ウイルス負荷）を持つＨＣＶ感染血漿試料を３重複で本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵し、回収して、異なる日にＲｏｃｈｅ  ＨＣＶアッセイで試験した（ｎ＝２７）。結果の概要を表３６に提供する。
【表３６】
2015525890.tif 000038
【０１８０】
結論：
平均濃度約３．５５、約４．１５、および約４．４５ログＩＵ／ｍＬで達成されたアッセイ間およびアッセイ内標準偏差（ＳＤ）は、０．１５ログＩＵ／ｍＬ未満であり、ロバスト再現性を示す。アッセイ間精度の９５％信頼区間（９５％  ＣＩ）は、全ての試料濃度に対して全ての時点で＋／−０．０７であった。アッセイ内精度の９５％信頼区間（９５％  ＣＩ）は、全ての試料濃度に対して全ての時点で＋／−０．１７であった。
【０１８１】
３．２  分析測定範囲および精度
分析測定範囲を試験するために、高力価ＨＣＶ感染血漿試料（約６ログコピー／ｍＬ）を正常ヒト血漿中で連続的に希釈した（７レベル）。各レベルを本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの上に３重複で負荷し、７日間貯蔵し、回収して単一実行で試験した（ｎ＝２１）。冷凍血漿と比較した正確性の場合、同一の連続希釈液を冷凍し（３重複）、解凍して分析した（Ｎ＝２１）。結果を表３７および図４４に提供する。
【表３７】
2015525890.tif 000039
【０１８２】
結論
本研究は、約３〜約６ログ（冷凍血漿と比較してＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料）の範囲全体で良好な試料相関を確認し、線形回帰分析を用いてＲ２値０．９９５４を生じた。冷凍血漿と比較したとき、回収および分析前に７日間周囲条件（ＲＴ）でＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された試料について、０．５３ログＩＵ／ｍＬ  ＨＣＶ  ＲＮＡの平均低減を観察した。
【０１８３】
３．３  安定性
安定性を査定するために、変動するウイルス負荷値（低、中間、および高ウイルス負荷）を持つＨＣＶ感染血漿試料を、周囲条件（ＲＴ）でＶｉｖｅＳＴデバイス上に１日間、３日間、および７日間貯蔵した後、Ｒｏｃｈｅ  ＨＣＶアッセイで分析した（ｎ＝２７）。結果を表３８、図４５、および図４６に提供する。
【表３８】
2015525890.tif 000040
【０１８４】
結論
周囲温度（ＲＴ）で貯蔵された試料について、冷凍血漿と７日の期間にわたって本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵された血漿試料との間に０．５７ログＩＵ／ｍＬ（−０．３１〜−０．５７ログＩＵ／ｍＬの範囲）の最大低減を記録した（表３８）。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０１〜０．１５の範囲であった。直線適合（Ｒ２＞０．９７）を全ての時点で線形回帰分析により示されるように、７日研究の過程で保持された（図４５）。
【０１８５】
３．４  検出限界（ＬＯＤ）／定量限界（ＬＯＱ）
ＬＯＤ／ＬＯＱの決定のために、ＨＣＶ感染血漿をＨＣＶ陰性ヒト血漿中に希釈し、約４０〜４４０ＩＵ／ｍＬの希釈液を生じた。ＨＣＶ  ＲＮＡ濃度を確認するために、希釈試料を分析し、線形回帰分析を行った。次いで、各濃度の２０個の複製を本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの上に負荷し、周囲条件（ＲＴ）で７日間貯蔵した。回収後、単一ロットの抽出および増幅試薬を使用して試料を試験した。プロビット分析を行い、９５％ヒット率を決定した。
【表３９】
2015525890.tif 000041
【表４０】
2015525890.tif 000042
【０１８６】
結論
ＬＯＤ／ＬＯＱ研究の場合、希釈した血漿試料は、予想よりわずかに高いＨＣＶウイルス負荷値を生じたが、線形回帰分析は、Ｒ２値０．９９４６を生じ、希釈した試料が、ＬＯＤ／ＬＯＱ研究との併用に許容されることを示す（表３９および図４７）。ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された血漿試料からのデータのプロビット分析に基づいて、１６１  ＩＵ／ｍＬ（２．２１ログｃ／ｍＬ）のＨＣＶ  ＲＮＡ濃度を持つ血漿試料を本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷し、周囲条件（ＲＴ）で７日間貯蔵したとき、試料が９５％の可能性で定量化された（図４８）。プロビット値を再計算し、検出限界（ＬＯＤ）を決定した。これは、ＡｍｐｌｉＬｉｎｋソフトウェアにより検出されたが定量化されなかった試料のウイルス負荷値を計算することを必要とした（すなわち、結果＜２５ＩＵ／ｍＬ）。
【０１８７】
５．最終結論
Ｈｉｇｈ  Ｐｕｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍと併用するためのＲｏｃｈｅ  ＣＯＢＡＳ  ＴａｑＭａｎ  ＨＣＶ試験（ｖ２．０）を用いる本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの使用は、許容される精度、再現性、正確性、および安定性を実証した。これらの結果は、周囲条件（ＲＴ）での７日間の貯蔵後、冷凍血漿と比較して、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料について、ＨＣＶ濃度の約０．５５ログＩＵ／ｍＬ低減が観察されたことを示す。７日後に９５％の可能性で定量化されたＨＣＶ  ＲＮＡの濃度は１６１ＩＵ／ｍＬであった。これらの結果は、ウイルス負荷試験のためにＨＣＶ感染試料を貯蔵するためのＶｉｖｅＳＴデバイスの有用性を実証する。
【０１８８】
実施例２０
本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの濃度研究
１．目的
本研究の目的は、１．０ｍＬより多くの標本（すなわち、最大２．０ｍＬ）が、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの上に成功的に負荷され得るかを決定することであった。全ての標本は、負荷体積にかかわらず、１．０ｍＬ中に回収し、生体標本を濃縮することにより感受性が改善されるかどうかを確かめる。本研究は、標本負荷体積実験の結果、ならびに「濃縮標本」を「非濃縮標本」との比較で分析する結果を説明する。
【０１８９】
２．方法論
ＨＩＶ−１感染血漿は、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの上に負荷し、そこから回収した。回収された標本を、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイパッケージ添付文書に概説されるように、ｂｉｏＭＯＮＴＲ研究方法（ＲＭ−００２．００、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１アッセイを使用するＨＩＶ−１  ＲＮＡの定量化）に従い分析した。
【０１９０】
３．実験設計
３．１  標本負荷体積
ポリオレフィンマトリックスを持つ本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの上に成功的に負荷され得る血漿の最大体積を査定するために、ＨＩＶ−１感染血漿（１．０ｍＬ、１．５ｍＬ、および２．０ｍＬ）を個別に標識されたＶｉｖｅＳＴデバイスの各ポリオレフィンマトリックスの上にピペットで置いた。以下に記載されるように、写真を撮り結果を記録した。
【０１９１】
結論：１．０ｍＬの血漿を本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスのポリオレフィンマトリックスの上に負荷し、負荷時に完全に吸収された。最大１．５ｍＬの追加体積を負荷したが、負荷後約３０分まで完全に吸収されなかった。１．５ｍＬを上回る任意の体積は、マトリックスにより吸収されるように見えなかった。この過剰体積は、キャップの内面で乾燥したように見え、分析のために回収することはできなかった。
【０１９２】
３．２  Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１
本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを使用してＨＩＶ−１感染血漿の濃度を査定するために、約２．０８ログｃ／ｍＬ（約１２０ｃ／ｍＬ）の濃度でのＨＩＶ−１感染血漿試料を分析した。１ｍＬで１０個の複製、および１．５ｍＬで１０個の複製それぞれをそれぞれ個別に標識されたＶｉｖｅＳＴデバイスの各ポリオレフィンマトリックスの上にピペットで置いた。
【０１９３】
負荷されたマトリックスを周囲温度で層流フード内で終夜乾燥させた。デバイスにキャップをして、回収前に周囲温度で４日間貯蔵した。１ｍＬ分子グレード水を使用して全ての標本を回収し、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＩＶ−１パッケージ添付文書に従い分析した（０．５ｍＬ適用）。結果を表４１および図５３に提供する。
【表４１】
2015525890.tif 000043
【０１９４】
結論：１．５ｍＬの低力価ＨＩＶ−１感染血漿試料が本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷され、１．０ｍＬの分子グレード水を使用して回収されたとき、１ｍＬが負荷され、１．０ｍＬ分子グレード水を使用して回収されたときの平均値１．６ログｃ／ｍＬと比較して、平均値２．１４ログｃ／ｍＬが得られた。これらの結果は、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスが血漿標本中のウイルスを濃縮するために使用され得ることを示す。
【０１９５】
４．最終結論
最大１．５ｍＬの血漿を、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスのポリオレフィンマトリックス上に成功的に負荷することができる。１．０ｍＬの過剰体積は、即時に吸収されなかったが、約３０分後にマトリックスに完全に吸収され得る。本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを使用して、負荷されたものより低い体積を回収することによりウイルス標的を濃縮した。しかしながら、１．５ｍＬインプットと比較して、１ｍＬインプットで得られた結果との間に直接比例関係はなく、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスでの標的濃度が定性アッセイに対してより有意義に適用され得ることを示す（陽性／陰性試験）。
【０１９６】
実施例２１
低力価ＨＣＶ研究
１．目的
本研究の目的は、低力価ＨＣＶ感染血漿の貯蔵について、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの性能を評価することであった。本研究は、低力価ＨＣＶ研究の結果を説明する。
【０１９７】
２．方法論
Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイ上の全ての試験は、修正なしにＦＤＡ承認プロトコル（０．９ｍＬ）に従い行った。１ｍＬ  ＨＣＶ感染血漿をＶｉｖｅＳＴデバイスの上に負荷し、乾燥させて、３日間、４日間、５日間、または７日間周囲温度で貯蔵して、１ｍＬ分子グレード水中に回収した。冷凍試料のＨＣＶウイルス負荷結果をＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料と比較した。
【０１９８】
３．実験設計
低力価ＨＣＶ感染血漿試料の一群（ＨＣＶ  １ｂ型）をＱｎｏｓｔｉｃｓから購入した。物質をドライアイス上で出荷し、−８０℃で貯蔵し、分析を待った。Ｑｎｏｓｔｉｃｓは、ＷＨＯ第２国際標準に対して試験したときに１．７６ログＩＵ／ｍＬ；ＷＨＯ第４国際標準に対して試験したときに２．１４ログＩＵ／ｍＬ；および割り当て値１００ＩＵ／ｍＬという試験結果を提供した。
【０１９９】
購入した物質のウイルス負荷を確認するために、４５個の試料を解凍し、ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理されることなく分析した（すなわち、冷凍試料）。本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料の性能を評価するために、１８０個の試料を解凍し、ＶｉｖｅＳＴデバイスの上に負荷して（各１ｍＬ）乾燥させ、周囲条件で貯蔵した。３日間、４日間、５日間、および７日間の貯蔵後に１ｍＬ分子グレード水を使用して４５個の試料をＶｉｖｅＳＴデバイスから回収した。冷凍試料および全ての回収された標本を、パッケージ添付文書およびｂｉｏＭＯＮＴＲ研究方法（ＲＭ−００３．００、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用するＨＣＶ  ＲＮＡの定量化）に従いＡｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイにおいて分析した。
【０２００】
４．結果
冷凍試料および本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料のＡｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶウイルス負荷結果の概要を以下の表４２（ログＩＵ／ｍＬ）および表４３（ＩＵ／ｍＬ）に提供する。
【０２０１】
４５個の冷凍試料を試験することに基づくＱｎｏｓｔｉｃｓパネル試料の平均濃度は、１．８０ログＩＵ／ｍＬ（６９ＩＵ／ｍＬ）であり、１．５６〜２．２０ログＩＵ／ｍＬ（３７〜１５８ＩＵ／ｍＬ）の範囲を持つ。平均ウイルス負荷は、Ｑｎｏｓｔｉｃｓの割り当て値が１００ＩＵ／ｍＬ以下である。本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料の１００％は、周囲温度で３日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、平均ウイルス負荷１．３５ログＩＵ／ｍＬ（２３ＩＵ／ｍＬ）；周囲温度で４日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、１．２９ログＩＵ／ｍＬ（２１ＩＵ／ｍＬ）、周囲温度で５日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、１．２７ログＩＵ／ｍＬ（２０ＩＵ／ｍＬ）、および周囲温度で７日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、１．２６ログＩＵ／ｍＬ（１９ＩＵ／ｍＬ）で検出された。
【０２０２】
全てのアッセイ全体の標準偏差は、冷凍試料（ｎ＝４５）の場合０．１７ログＩＵ／ｍＬ；周囲温度で３日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、０．１２ログＩＵ／ｍＬ；周囲温度で４日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、０．１７ログＩＵ／ｍＬ；周囲温度で５日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、０．１９ログＩＵ／ｍＬ；および周囲温度で７日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、０．１３ログＩＵ／ｍＬであった。
【０２０３】
本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料のウイルス負荷の平均低減は、冷凍血漿と比較して、周囲温度で３日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、０．４５ログＩＵ／ｍＬ；周囲温度で４日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、０．５１ログＩＵ／ｍＬ、周囲温度で５日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、０．５３ログＩＵ／ｍＬ、および周囲温度で７日間貯蔵されたとき（ｎ＝４５）、０．５４ログＩＵ／ｍＬであった。
【０２０４】
図５４に示されるように、散布図は、ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された全ての試料が冷凍血漿より低い結果を生じること以外に顕著な傾向を示さない。冷凍試料（ｎ＝４５）の平均が１．８０ログＩＵ／ｍＬであったとき、ＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された全ての試料（ｎ＝１８０）は、０．７１ログＩＵ／ｍＬ〜１．７７ログＩＵ／ｍＬの結果を生じた。Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶデータ分析ソフトウェアにより１．０８ログＩＵ／ｍＬ未満（１２ＩＵ／ｍＬ未満）と報告された結果は、貯蔵されたＨＣＶ較正曲線を使用して手動で計算した。
【表４２】
2015525890.tif 000044
【表４３】
2015525890.tif 000045
【０２０５】
５．最終結論
１．８０ログＩＵ／ｍＬ（６９ＩＵ／ｍＬ）の平均ウイルス負荷を持つ冷凍血漿試料（ｎ＝１８０）を本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に最大７日間貯蔵した。回収時、これらの試料の１００％をＡｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＣＶアッセイを使用して検出した。ウイルス負荷にいくらかの低減があったが、回収は貯蔵時間にかかわらず非常に再現可能であった。これらのデータは、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料に対して、冷凍血漿から得られるであろう値でウイルス負荷を正規化／整列するために相関因子０．５ログＩＵ／ｍＬの使用を支持する。
【０２０６】
実施例２２
Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイとともに使用するためにＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料の検証
１．目的
本研究の目的は、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイを使用するために本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理された試料を検証することであった。本研究は、精度および正確性研究；直線性（分析測定範囲）；安定性（７日）；冷凍血漿と比較した正確性；および検出限界（ＬＯＤ）／定量限界（ＬＯＱ）の結果を説明する。
【０２０７】
２．方法論
Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイは、慢性的にＨＢＶ感染した個人からのヒト血漿（ＥＤＴＡ）におけるＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ＤＮＡの定量化のためのインビトロポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）系アッセイである。該プロセスは、２つの主なステップ：ａ）血漿試料からのウイルスＤＮＡの抽出、およびｂ）ウイルスＤＮＡの同時検出を伴う増幅に基づいている。
【０２０８】
３．実験設計
Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイ上の全ての試験は、修正なしにＦＤＡ承認されたプロトコル（０．５ｍＬ）、およびｂｉｏＭＯＮＴＲ研究方法（ＲＭ００８．００、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイを使用するＨＢＶ  ＤＮＡの定量化）に従い行った。Ａｂｂｏｔｔ  ＨＢＶアッセイ（０．５ｍＬプロトコル）は、０．７〜１．２ｍＬ試料を必要とするため、１．０ｍＬ試料を本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷し、そこから回収して適切な試料体積を保証した。全ての負荷したＶｉｖｅＳＴデバイスは、周囲温度（ＲＴ）で貯蔵した。本アッセイにおける本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料の性能を、精度、正確性、分析測定範囲、安定性、および検出限界（ＬＯＤ）／定量限界（ＬＯＱ）について評価した。
【０２０９】
４．１  精度（アッセイ間およびアッセイ内精度）
アッセイ間およびアッセイ内精度を査定するために、変動するウイルス負荷値（低、中間、および高ウイルス負荷）を持つＨＢＶ感染血漿試料を３重複で本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵し、回収して、異なる日にＡｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイで試験した（ｎ＝２７）。結果の概要を以下の表４４に提供する。
【表４４】
2015525890.tif 000046
【０２１０】
結論：平均濃度約３．６、約４．７、および約５．８ログＩＵ／ｍＬで達成されたアッセイ間およびアッセイ内標準偏差（ＳＤ）は、０．１３ログＩＵ／ｍＬ未満であり、ロバスト再現性を示す。アッセイ間精度について９５％信頼区間での変動係数（％ＣＶ）は、全ての試料濃度の全ての時点で０．０６％未満であった。アッセイ内精度について９５％信頼レベルでの変動係数（％ＣＶ）は、全ての試料濃度の全ての時点で０．１４％未満であった。
【０２１１】
４．２  分析測定範囲および精度
分析測定範囲を試験するために、高力価ＨＣＶ感染血漿試料（約７ログＩＵ／ｍＬ）を正常ヒト血漿中で連続的に希釈した（７レベル）。各レベルをＶｉｖｅＳＴデバイスの上に３重複で負荷し、７日間貯蔵し、回収して単一実行で試験した（ｎ＝２１）。冷凍血漿と比較した正確性の場合、同一の連続希釈液を冷凍し（３重複）、解凍して分析した（Ｎ＝２１）。結果を表４５および図５５に提供する。
【表４５】
2015525890.tif 000047
【０２１２】
結論：本研究は、約１〜約７ログ（冷凍血漿と比較して本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料）の範囲全体で例外的な試料相関を確認し、線形回帰分析を用いてＲ２値０．９９７０６を生じた。平均して、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスから回収された試料は、周囲条件（ＲＴ）で７日間貯蔵された後、冷凍血漿と比較して等しいウイルス負荷値を生じた。
【０２１３】
４．３  安定性
安定性を査定するために、変動するウイルス負荷値（低、中間、および高ウイルス負荷）を持つＨＢＶ感染血漿試料を、周囲条件（ＲＴ）で本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に１日間、４日間、７日間、１４日間、３０日間、および６０日間貯蔵した後、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイで分析した。冷凍血漿と比較した正確性の場合、同一の連続希釈液を冷凍し（３重複）、解凍して分析した（Ｎ＝２１）。結果を表４６、図５６、および図５７に提供する。
【表４６】
2015525890.tif 000048
【０２１４】
結論：本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上で６０日の期間にわたって周囲条件（ＲＴ）で貯蔵された試料の場合、冷凍血漿と比較してＨＢＶ  ＤＮＡの低減はなかった（表４６および図５７）。全てのレベル／全ての試験点全体の標準偏差は、０．０２〜０．１３の範囲であった。直線適合（Ｒ２＞０．９９）を全て時点で線形回帰分析により示されるように、６０日研究の過程で保持された（図５６）。
【０２１５】
４．４  検出限界（ＬＯＤ）／定量限界（ＬＯＱ）
ＬＯＤ／ＬＯＱの決定のために、ＨＢＶ感染血漿をＨＢＶ陰性ヒト血漿中に希釈し、約１．５〜５０ＩＵ／ｍＬの希釈液を生じた。ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度を確認するために、希釈試料を分析し、線形回帰分析を行った。次いで、各濃度の１５個の複製を本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスの上に負荷し、周囲条件（ＲＴ）で７日間貯蔵した。回収後、単一ロットの抽出および増幅試薬を使用して試料を試験した。プロビット分析を行い、９５％ヒット率を決定した。
【表４７】
2015525890.tif 000049
【表４８】
2015525890.tif 000050
【０２１６】
結論：ＬＯＤ／ＬＯＱ研究の場合、希釈した血漿試料は、予想よりわずかに高いＨＢＶウイルス負荷値を生じたが、線形回帰分析は、Ｒ２値０．９５７５を生じ、希釈した試料が、ＬＯＤ／ＬＯＱ研究との併用に許容されることを示す（表４７および図５８）。表４８に要約されるように、１５個の試料のうち１４個、または推定ウイルス負荷６ＩＵ／ｍＬを持つ９３％が検出され、手動で計算された平均ウイルス負荷４ＩＵ／ｍＬを生じた。推定ウイルス負荷７ＩＵ／ｍＬを持つ全ての試料（１５個のうち１５個）が検出され、手動で計算された平均ウイルス負荷６ＩＵ／ｍＬを生じた。
【０２１７】
プロビット分析は、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された全ての試料で行い、Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶデータ分析ソフトウェアにより分析および定量化した。この分析に基づいて、１３ＩＵ／ｍＬ（１．１０ログＩＵ／ｍＬ）のＨＢＶ  ＤＮＡ濃度を持つ血漿試料を本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に負荷し、周囲条件（ＲＴ）で７日間貯蔵したとき、試料が９５％の可能性で定量化された（図５９）。Ａｂｂｏｔｔソフトウェアにより定量化された試料値のみを使用してプロビット分析を行った（すなわち、＞１０ＩＵ／ｍＬ）。
【０２１８】
５．最終結論
Ａｂｂｏｔｔ  ＲＥＡＬＴＩＭＥ  ＨＢＶアッセイを用いて本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて貯蔵および処理された試料の使用は、許容される精度、再現性、正確性、および安定性を実証した。これらの結果は、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイス上に貯蔵されたＨＢＶ感染血漿が、本発明のＶｉｖｅＳＴデバイスを通じて処理されていない冷凍血漿から得られたものに相当する結果を生じることを確認する。
【０２１９】
他の実施形態および使用は、本開示に照らして当業者には明らかである。当業者は、多数の変更および修正を本発明の実施形態に行うことができること、およびそのような変更および修正は、本発明の趣旨から逸脱することなく行うことができることを理解するであろう。したがって、添付の特許請求の範囲は、全てのそのような等しい変化形を本発明の趣旨および範囲内に含まれるものとして網羅することが意図される。
【図１Ａ】
2015525890.tif 000051
【図１Ｂ】
2015525890.tif 000052
【図２】
2015525890.tif 000053
【図３】
2015525890.tif 000054
【図４】
2015525890.tif 000055
【図５】
2015525890.tif 000056
【図６】
2015525890.tif 000057
【図７Ａ】
2015525890.tif 000058
【図７Ｂ】
2015525890.tif 000059
【図７Ｃ】
2015525890.tif 000060
【図７Ｄ】
2015525890.tif 000061
【図８】
2015525890.tif 000062
【図９】
2015525890.tif 000063
【図１０】
2015525890.tif 000064
【図１１】
2015525890.tif 000065
【図１２】
2015525890.tif 000066
【図１３】
2015525890.tif 000067
【図１４】
2015525890.tif 000068
【図１５】
2015525890.tif 000069
【図１６】
2015525890.tif 000070
【図１７】
2015525890.tif 000071
【図１８】
2015525890.tif 000072
【図１９】
2015525890.tif 000073
【図２０】
2015525890.tif 000074
【図２１】
2015525890.tif 000075
【図２２】
2015525890.tif 000076
【図２３】
2015525890.tif 000077
【図２４】
2015525890.tif 000078
【図２５】
2015525890.tif 000079
【図２６】
2015525890.tif 000080
【図２７】
2015525890.tif 000081
【図２８】
2015525890.tif 000082
【図２９】
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【図３０】
2015525890.tif 000084
【図３１】
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【図３２】
2015525890.tif 000086
【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
2015525890.tif 000089
【図３６】
2015525890.tif 000090
【図３７】
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【図３８】
2015525890.tif 000092
【図３９】
2015525890.tif 000093
【図４０】
2015525890.tif 000094
【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
2015525890.tif 000099
【図４６】
2015525890.tif 000100
【図４７】
2015525890.tif 000101
【図４８】
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【図４９】
2015525890.tif 000103
【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
2015525890.tif 000109
【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【国際調査報告】
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2015525890.tif 000115
2015525890.tif 000116
2015525890.tif 000117
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