(57)【要約】本発明は、スピロ環インダンイミダゾール４−アミン、及びβ−セクレターゼ酵素（ＢＡＣＥ１）活性の阻害剤としてのその使用、それを含有する医薬組成物、並びに神経変性障害；認知低下、認知障害、認知症により特徴付けられる障害；及びβ−アミロイド凝集の生成により特徴付けられる疾患の処置における治療剤としてのその使用方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化２６】
2015532282.tif 000030
（式中：
Ｒ１は、１個又は複数のハロゲン原子で場合により置換されているＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、又はＣ２−６アルキニル（後の５個の基は、Ｃ１−６アルキル、ハロ、−ＣＮ、シクロアルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−ＯＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、及び−ＯＣ１−６ハロアルキルから独立して選択される１個又は複数の基で場合により置換されている）；
Ｏ−アリール又はＯ−ヘテロアリール（それぞれが、ハロゲン、−ＣＮ、及びＣ１−６アルキルから独立して選択される１個又は複数の基で場合により置換されている）；又は
ハロ、−ＣＮ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、及びＣ１−６ハロアルキルから独立して選択される１個又は複数の基で場合により置換されているＮＨＣＯ−ヘテロアリールであり；
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して−Ｈ、ハロ、−ＣＮ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、又はＣ１−６アルキル（ここで、Ｒ３及びＲ４により表されるＣ１−６アルキルは、１個又は複数のハロゲン原子で場合により置換されている（但し、Ｒ３及びＲ４が共に−Ｈであることはできない）であり；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲａ−、又は−Ｃ（Ｒ５Ｒ６）−であり；
Ｒａは、−Ｈ、又はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロ、−ＣＮ、−ＯＲ７、又はＣ１−６アルキル（ここで、Ｒ５及びＲ６により表されるＣ１−６アルキルは、１個又は複数のハロゲン原子で場合により置換されている）であり；そして
Ｒ７は、Ｈ、又はＣ１−６アルキルである）
の化合物、又はその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
式（ＩＩ）：
【化２７】
2015532282.tif 000031
の化合物又はその医薬的に許容される塩である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＩａ）：
【化２８】
2015532282.tif 000032
の化合物又はその医薬的に許容される塩である、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立して−Ｈ、又はＣ１−４アルキルであり（但し、Ｒ３及びＲ４が共に−Ｈであることはできない）；そして
Ｒ７が、−Ｈ又はＣ１−４アルキルである、請求項１〜３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立してＨ、メチル、又はエチルであり（但し、Ｒ３及びＲ４が共に−Ｈであることはできない）；そして
Ｒ７が、−Ｈ又はメチルである、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が、−ＣＮ、ハロ、フェニル、又は６員のヘテロアリール（２個の後の基は、ハロ、−ＣＮ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、及びＣ２−６アルキニルから選択される１個又は複数の基で場合により置換されている）；又は
１個又は複数のハロ基で場合により置換されている−ＮＨＣ（Ｏ）−（６員のヘテロアリール）である、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が、−ＣＮ、ハロ、フェニル、又はピリジル（後の２個の基は、ハロ、−ＣＮ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、又はＣ２−６アルキニルから選択される１個又は複数の基で場合により置換されている）；又は
１個又は複数のハロ基で場合により置換されている−ＮＨＣ（Ｏ）−ピリジルである、請求項１〜６のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が、−ＣＮ、ハロ、又はピリジニル（後の基は、ハロ、又はＣ２−６アルキニルで場合により置換されている）；又は
ハロで場合により置換されている−ＮＨＣ（Ｏ）−ピリジルである、請求項１〜７のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が、−ＣＮ又はハロである、請求項１〜８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１０】
【化２９】
2015532282.tif 000033
から選択されるか、又は前述のいずれかの医薬的に許容される塩である、請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
【化３０】
2015532282.tif 000034
から選択されるか、又は前述のいずれかの医薬的に許容される塩である、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩、及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
対象におけるＢＡＣＥ１により仲介される疾患又は障害の処置方法であって、対象に有効量の請求項１〜１１のいずれか１項記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項１４】
疾患又は障害が、神経変性障害、認知低下、認知障害、認知症、及びβ−アミロイド沈着又は神経原線維変化の生成により特徴付けられる疾患からなる群より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
疾患又は障害が、アルツハイマー病、２１番染色体トリソミー（ダウン症候群）、オランダ型遺伝性アミロイド性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、老年認知症、脳アミロイド血管症、変性認知症、血管性及び変性起源混合型認知症、パーキンソン病と関連する認知症、進行性核上まひと関連する認知症、及び大脳皮質基底変性と関連する認知症、びまん性レビー小体型アルツハイマー病、乾燥加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）、及び緑内障からなる群より選択される、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
疾患又は障害がアルツハイマー病である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
疾患又は障害が緑内障である、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
ＢＡＣＥ１により仲介される障害又は疾患の処置において使用するための、請求項１〜１１のいずれか１項記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩。
【請求項１９】
障害又は疾患が、神経変性障害、認知低下、認知障害、認知症、及びβ−アミロイド沈着又は神経原線維変化の生成により特徴付けられる疾患からなる群より選択される、請求項１８記載の使用のための化合物、又はその医薬的に許容される塩。
【請求項２０】
障害又は疾患が、アルツハイマー病、２１番染色体トリソミー（ダウン症候群）、オランダ型遺伝性アミロイド性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、老年認知症、脳アミロイド血管症、変性認知症、血管性及び変性起源混合型認知症、パーキンソン病と関連する認知症、進行性核上まひと関連する認知症、及び大脳皮質基底変性と関連する認知症、びまん性レビー小体型アルツハイマー病、乾燥加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）、及び緑内障からなる群より選択される、請求項１９記載の使用のための化合物又はその医薬的に許容される塩。
【請求項２１】
疾患又は障害がアルツハイマー病である、請求項２０記載の使用のための化合物、又はその医薬的に許容される塩。
【請求項２２】
疾患又は障害が緑内障である、請求項２０記載の使用のための化合物、又はその医薬的に許容される塩。
【請求項２３】
対象におけるＢＡＣＥ１により仲介される疾患又は障害の処置用医薬の製造のための、請求項１〜１１のいずれか１項記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩の使用。
【請求項２４】
疾患又は障害が、神経変性障害、認知低下、認知障害、認知症、及びβ−アミロイド沈着又は神経原線維変化の生成により特徴付けられる疾患からなる群より選択される、請求項２３記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩の使用。
【請求項２５】
疾患又は障害が、アルツハイマー病、２１番染色体トリソミー（ダウン症候群）、オランダ型遺伝性アミロイド性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、老年認知症、脳アミロイド血管症、変性認知症、血管性及び変性起源混合型認知症、パーキンソン病と関連する認知症、進行性核上まひと関連する認知症、大脳皮質基底変性と関連する認知症、びまん性レビー小体型アルツハイマー病、乾燥加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）、及び緑内障からなる群より選択される、請求項２４記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩の使用。
【請求項２６】
疾患又は障害がアルツハイマー病である、請求項２５記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩の使用。
【請求項２７】
疾患又は障害が緑内障である、請求項２５記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１２年９月２８日付けで出願された米国仮出願第６１／７０６，９５７号（その全教示が、本明細書において引用により取り込まれる）の恩典を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、スピロ環インダンイミダゾール４−アミン、及びβ−セクレターゼ酵素（ＢＡＣＥ１）活性の阻害剤としてのその使用、それを含有する医薬組成物、並びに神経変性障害；認知低下、認知障害、認知症により特徴付けられる障害；及びβ−アミロイド沈着及び／又は神経原線維変化の生成により特徴付けられる疾患の処置における治療剤としてのその使用方法に関する。
【０００３】
発明の背景
β−アミロイド（本明細書において、「Ａベータ」又は「Ａβ」としても言及される）沈着、及び神経原線維変化は、アルツハイマー病（ＡＤ）と関連する２つの主要な病理特徴である。臨床的には、ＡＤは、記憶、認知、推理、判断、及び見当識の喪失により特徴付けられる。疾患が進行するにつれ、運動、感覚、及び言語能力も影響され、複数の認知機能の広範な機能障害が生じる。これらの認知の喪失は徐々に生じるが、典型的には、重篤な機能障害を引き起こし、最終的には４〜１２年以内に死に至る。
【０００４】
β−アミロイド沈着は、主に、Ａβペプチド（これは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のタンパク質分解の生成物である）の凝集である。より具体的には、Ａβペプチドは、β−アミロイド形成経路の一部としての、Ｃ−末端での１個又は複数のγ−セクレターゼによる、及びＮ−末端でのβ−セクレターゼ酵素（ＢＡＣＥ１）（アスパルチルタンパク質分解酵素及びメマプシン２としても知られる）によるＡＰＰの切断から生じる。
【０００５】
ＢＡＣＥ活性は、ＡβペプチドのＡＰＰからの生成と直接的に相関し、研究により、徐々に、ＢＡＣＥの阻害がＡβペプチドの生成を阻害することが示されている。
【０００６】
アミロイド形成プラーク及び血管性アミロイド血管障害はまた、２１番染色体トリソミー（ダウン症候群）、オランダ型遺伝性アミロイド性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、及び他の神経変性障害を有する患者の脳も特徴付ける。神経原線維変化はまた、認知症を誘導する障害を含む他の神経変性障害においても生じる。
【０００７】
近年、Ａβは、カスパーゼ−３により仲介される異常なアミロイド前駆体タンパク質プロセシング、実験的緑内障におけるＲＧＣ中のＡβの増大した発現、及び緑内障を有する患者における低減した硝子体Ａβレベル（網膜のＡβ沈着と一致する）の根拠を伴い、緑内障における網膜神経節細胞（ＲＧＣ）アポトーシスの発症に結び付けられることが報告されている。アミロイド沈着はまた、乾燥加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）に罹患した患者、及びＡＭＤの動物モデルにおける黄斑変性とも関連付けられた。
【０００８】
国際公開公報第２０１２／０８７２３７号には、β−セクレターゼの阻害剤としてのスピロ環インダンイミダゾール４−アミンが開示されている。
【０００９】
発明の概要
本発明は、ＢＡＣＥ１阻害剤であり、患者における上昇したβ−アミロイド沈着又はβ−アミロイドレベルにより特徴付けられる疾患又は障害の処置において治療剤として有用である化合物を提供する。開示される化合物は、国際公開公報第２０１２／０８７２３７号における対応する化合物より、ＢＡＣＥ１酵素活性の阻害剤として有意に強力な有効性を有する（本明細書の実施例９及び１０、及び実施例１０の表１及び２を参照）。
【００１０】
本発明の１つの実施態様は、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩａ）：
【化１】
2015532282.tif 000002
（式中：
Ｒ１は、１個又は複数のハロゲン原子で場合により置換されているＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、又はＣ２−６アルキニル（後の５個の基は、Ｃ１−６アルキル、ハロ、−ＣＮ、シクロアルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、−ＯＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、及び−ＯＣ１−６ハロアルキルから独立して選択される１個又は複数の基で場合により置換されている）；
−Ｏ−アリール又は−Ｏ−ヘテロアリール（それぞれが、ハロゲン、−ＣＮ、及びＣ１−６アルキルから独立して選択される１個又は複数の基で場合により置換されている）；又は
ハロ、−ＣＮ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル、及びＣ１−６ハロアルキルから独立して選択される１個又は複数の基で場合により置換されている−ＮＨＣＯ−ヘテロアリールであり；
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して−Ｈ、ハロ、−ＣＮ、−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、又はＣ１−６アルキル（ここで、Ｒ３及びＲ４により表されるＣ１−６アルキル基は、１個又は複数のハロゲン原子で場合により置換されている（但し、Ｒ３及びＲ４が共に−Ｈではあることはできない））であり；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲａ−、又は−Ｃ（Ｒ５Ｒ６）−であり；
Ｒａは、−Ｈ又はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立してＨ、ハロ、−ＣＮ、−ＯＲ７、又はＣ１−６アルキル（ここで、Ｒ５及びＲ６により表されるＣ１−６アルキル基は、１個又は複数のハロゲン原子で場合により置換されている）であり；
Ｒ７は、Ｈ又はＣ１−６アルキルである）
から選択される構造式により表される化合物、又はその医薬的に許容される塩である。
【００１１】
直前に記載の化合物は、本明細書において、「本発明の化合物（compounds of the present invention）」、又は単に「発明の化合物（compounds of the invention）」として言及される。本発明の別の実施態様は、医薬として使用するための、本発明の化合物、又はその医薬的に許容される塩である。
【００１２】
本発明の別の実施態様は、本発明の化合物、又はその医薬的に許容される塩を、医薬的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体との混合物で含む医薬組成物である。
【００１３】
本発明の別の実施態様は、対象におけるＢＡＣＥ１により仲介される障害又は疾患の処置において使用するための、本発明の化合物、又はその医薬的に許容される塩である。
【００１４】
本発明の別の実施態様は、対象におけるＢＡＣＥ１により仲介される障害の処置用医薬の製造のための、本発明の化合物、又はその医薬的に許容される塩の使用である。
【００１５】
本発明の別の実施態様は、ＢＡＣＥ１により仲介される疾患又は障害を有する対象の処置方法であって、対象に有効量の本発明の化合物、又はその医薬的に許容される塩を投与することを含む方法である。
【００１６】
発明の詳細な説明
本発明の化合物は、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩａ）（式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩａ）中の可変物の定義は、上の発明の概要にて提供される）により表されるＢＡＣＥ１阻害剤である。或は、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩａ）により表されるＢＡＣＥ１阻害剤について、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して−Ｈ又はＣ１−４アルキルであり（但し、Ｒ３及びＲ４が共に−Ｈであることはできない）；Ｒ７は、−Ｈ又はＣ１−４アルキルであり；残りの可変物は、発明の概要にて上述された通りである。式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩａ）により表されるＢＡＣＥ１阻害剤の別の代替において、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立してＨ、メチル、又はエチルであり（但し、Ｒ３及びＲ４が共に−Ｈであることはできない）；Ｒ７は、−Ｈ又はメチルであり；残りの可変物は、発明の概要にて上述された通りである。
【００１７】
別の実施態様において、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、又は（ＩＩａ）により表されるＢＡＣＥ１阻害剤について、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ７は、上の段落に記載された通りであり；Ｒ２は、−ｉ）ＣＮ、ハロ、フェニル、又は６員のヘテロアリール（後の２個の基は、ハロ、−ＣＮ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、及びＣ２−６アルキニルから選択される１個又は複数の基で場合により置換されている）、又はｉｉ）１個又は複数のハロ基で場合により置換されている−ＮＨＣ（Ｏ）−（６員のヘテロアリール）であり；残りの可変物は、発明の概要にて上述された通りである。或は、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩａ）により表されるＢＡＣＥ１阻害剤について、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ７は、上の段落に記載された通りであり、Ｒ２は、−ｉ）ＣＮ、ハロ、フェニル、又はピリジル（後の２個の基は、ハロ、−ＣＮ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、又はＣ２−６アルキニルから選択される１個又は複数の基で場合により置換されている）、又はｉｉ）１個又は複数のハロ基で場合により置換されている−ＮＨＣ（Ｏ）−ピリジルであり；残りの可変物は、発明の概要にて上述された通りである。式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩａ）により表されるＢＡＣＥ１阻害剤の別の代替において、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ７は、上の段落に記載された通りであり；Ｒ２は、−ＣＮ、ハロ、又はピリジニルであり、後者の基は、ハロ又はＣ２−６アルキニルで場合により置換されているか、又はハロで場合により置換されている−ＮＨＣ（Ｏ）−ピリジルであり；残りの可変物は、発明の概要にて上述された通りである。式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩａ）により表されるＢＡＣＥ１阻害剤のさらに別の代替において、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ７は、上の段落に記載された通りであり；Ｒ２は、−ＣＮ、又はハロであり；残りの可変物は、発明の概要にて上述された通りである。
【００１８】
用語の定義
本明細書で具体的に定義されない用語は、本開示及び内容に照らして当業者により付与される意味が付与されるべきである。しかしながら、明細書において用いられる通り、特に指定されない限り、以下の用語は示される意味を有し、以下の慣例が優先される。
【００１９】
「アルキル」は、特定の数の炭素原子を有する飽和脂肪族分岐又は直鎖の１価炭化水素基を意味する。例えば、「（Ｃ１−Ｃ６）アルキル」は、１〜６個の炭素原子を直鎖又は分岐配置で有する基を意味する。「（Ｃ１−Ｃ６）アルキル」は、メチル（−ＣＨ３）、エチル（−ＣＨ２ＣＨ３）、プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、及び−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３）、ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、及び−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ３）、ペンチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、及び−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、及びヘキシル（−ＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、及び−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）ＣＨ３）を含む。
【００２０】
「アルケニル」は、少なくとも１個の２重結合を含有し、特定の数の炭素原子を有する分岐又は直鎖の１価炭化水素基を意味する。アルケニルは、単又は多不飽和であってもよく、Ｅ又はＺ配置で存在し得る。例えば、「（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル」は、２〜６個の炭素原子を直鎖又は分岐配置で有する基を意味する。
【００２１】
「アルキニル」は、少なくとも１個の３重結合を含有し、特定の数の炭素原子を有する分岐又は直鎖の１価炭化水素基を意味する。例えば、「（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル」は、２〜６個の炭素原子を直鎖又は分岐配置で有する基を意味する。
【００２２】
「アリール」、「アリール基」、「アリール環」、「芳香族」、「芳香族基」、及び「芳香環」は、互換的に用いられ、芳香族単環式又は多環式炭化水素環系を意味する。「アリール」は、フェニル、ナフタレニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、及びアントラセニルを含むが、これらに限定されない。
【００２３】
「シクロアルキル」は、特定の数の炭素原子を有する飽和脂肪族環状炭素基を意味する。例えば、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルは、単環中に配置された３〜８個の炭素原子を有する基を意味する。（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクタンを含むが、これらに限定されない。
【００２４】
「ヘテロアリール」は、「ヘテロアリール基」、「ヘテロアリール環」、「ヘテロ芳香族」、「ヘテロ芳香族基」、及び「ヘテロ芳香環」と互換的に用いられる。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）ｒ（式中、ｒ＝０、１、又は２である）から選択される１個又は複数のヘテロ原子を含有し、５〜１４個の環原子からなる単又は多環系（ここで、ヘテロ原子の少なくとも１個が、芳香環の一部である）を意味する。用語「ヘテロアリール」は、可能な異性体の全てを含むことが意図される。
【００２５】
例えば、「ヘテロアリール」は、互いに基として描かれておらず、適当な原子価が維持される限り、共有結合を通じて任意の原子に結合し得る、以下の典型的な構造を含むが、これに限定されない。
【００２６】
単環式
【化２】
2015532282.tif 000003
【００２７】
二環式
【化３】
2015532282.tif 000004
【００２８】
本発明の化合物が、全ての互変異性型を示すことなく、名称又は構造により描かれるとき、その化合物及びその医薬的に許容される塩が全ての互変異性体を包含するものとして、解されるべきである。
【００２９】
本発明の化合物が、立体化学を示すことなく、名称又は構造により描かれるとき、その化合物及びその医薬的に許容される塩が、全ての立体、光学、及び幾何異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、Ｅ／Ｚ異性体など）、及びそのラセミ化合物、並びに別々のエナンチオマーの異なる割合の混合物、ジアステレオマーの混合物、又は任意の前述の形態の混合物を包含するものとして、解されるべきである。
【００３０】
立体、光学、又は幾何異性体が、名称又は構造により描かれるとき、命名された、又は描かれた立体、光学、又は幾何異性体の立体、光学、及び／又は幾何異性体純度は、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、又は９９．９％純度（重量）であることが、解されるべきである。立体、光学、及び幾何異性体純度は、混合物中の命名された、又は描かれた立体、光学、及び幾何異性体の重量を、混合物中の全ての立体、光学、及び幾何異性体の総重量で割ることにより、決定される。
【００３１】
本発明の化合物又はその医薬的に許容される塩が、命名されるか、又は構造により描かれるとき、その化合物の溶媒和物、水和物、及び無水形態、及びその医薬的に許容される塩の溶媒和物、水和物、及び無水形態が、本発明に含まれることは、解されるべきである。「溶媒和物」は、溶媒分子が、結晶化中の結晶格子に取り込まれた結晶形に言及する。溶媒和物は、水又は非水性溶媒、例えば、エタノール、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸、エタノールアミン、及びＥｔＯＡｃを含み得る。水が、結晶格子に取り込まれた溶媒分子である溶媒和物は、典型的には、「水和物」として言及される。水和物は、化学量論水和物、並びに可変量の水を含有する組成物を含む。「無水形態」は、結晶構造に取り込まれた溶媒又は水がない化合物、又は溶媒又は水が実質的にない化合物（例えば、溶媒又は水の化合物に対するモル比１：１０、１：２０；１：１００；又は１：２００未満）に言及する。
【００３２】
塩
語句「医薬的に許容される」を本明細書で用いて、堅実な医療判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、又は他の問題又は合併症なく、かつ合理的な利益／リスク比に見合った、ヒト及び動物の組織と接触させての使用に適している、化合物、材料、組成物、及び／又は投薬形態に言及する。
【００３３】
本明細書で用いられる「医薬的に許容される塩」は、開示される化合物の誘導体（ここで、親化合物は、その酸又は塩基塩を作成することにより、修飾される）に言及する。医薬的に許容される塩の例は、塩基性残基（例えば、アミン）の鉱酸塩又は有機酸塩；酸性残基（例えば、カルボン酸）のアルカリ塩又は有機塩などを含むが、これらに限定されない。例えば、かかる塩は、アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン（２，２’−イミノビス（エタノール））、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、２−アミノエタノール、エチレンジアミン、Ｎ−エチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、リシン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン（２，２’，２”−ニトリロトリス（エタノール））、トロメタミン、水酸化亜鉛、酢酸、２．２−ジクロロ−酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、４−アセタミド−安息香酸、（＋）−カンファー酸、（＋）−カンファー−１０−スルホン酸、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、デカン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、エチレンジアミン四酢酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、Ｄ−グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２−オキソ−グルタル酸、グリセロリン酸、グリシン、グリコール酸、ヘキサン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イソ酪酸、ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、リシン、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ガラクタル酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オクタン酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモン酸（エンボン酸）、リン酸、プロピオン酸、（−）−Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、及びウンデシレン酸由来の塩を含む。好ましい塩は、Ｌ−マンデル酸及びマレイン酸である。更なる医薬的に許容される塩は、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛などの金属由来のカチオンと形成され得る（Pharmaceutical salts, Berge, S.M. et al., J. Pharm. Sci., (1977), 66:1-19も参照）。
【００３４】
本発明の医薬的に許容される塩は、塩基性又は酸性部分を含有する親化合物から、従来の化学的方法により、合成することができる。一般的に、かかる塩は、これらの化合物の遊離酸又は塩基形態を、十分量の適当な塩基又は酸と、水、又はエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルなどの有機希釈剤、又はその混合物中で反応させることにより、調製することができる。
【００３５】
例えば、本発明の化合物の精製又は単離に有用である上述のもの以外の酸の塩（例えば、トリフルオロ酢酸塩）はまた、本発明の一部を含む。
【００３６】
処置方法
本発明は、対象における上昇したβ−アミロイド沈着又はβ−アミロイドレベルにより特徴付けられる障害又は疾患の処置において有用である化合物に関し、ここで、β−セクレターゼ酵素（ＢＡＣＥ１）活性の阻害は、治療上有益なものであり、これは、神経変性障害、認知低下、認知障害、認知症により特徴付けられる障害、及びβ−アミロイド沈着及び／又は神経原線維変化の生成により特徴付けられる疾患の治療、改善、又は予防を含むが、これらに限定されない。
【００３７】
本発明の化合物は、アルツハイマー病、２１番染色体トリソミー（ダウン症候群）、オランダ型遺伝性アミロイド性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、老年認知症、脳アミロイド血管症、変性認知症、血管性及び変性起源混合型認知症、パーキンソン病と関連する認知症、進行性核上まひと関連する認知症、大脳皮質基底変性と関連する認知症、びまん性レビー小体型アルツハイマー病、乾燥加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）、及び緑内障の処置に有用である。ＡＭＤの「乾燥」型はまた、「中心性地図状萎縮」としても知られ、感覚神経網膜下の網膜色素上皮層への萎縮から生じ、これが、眼の中心部における光受容体（杆体及び錐体）の喪失による視力喪失を引き起こす。この状態に利用可能な医学的又は外科的処置は、現在存在しない。これまでに利用可能な処置（例えば、National Eye Instituteにより提案されるもの）は、ビタミンサプリメントを高用量の酸化防止剤、ルテイン、及びゼアキサンチンと共に使用することを含み、これは、乾燥型黄斑変性の進行を遅延させ得る。緑内障は、視神経への不可逆的損傷及び視力の喪失を生じる、眼内の体液圧が増大する疾患である。Ａβは、実験的緑内障においてアポトーシス網膜神経節細胞と共存し、有意な網膜神経節細胞アポトーシスを用量及び時間依存的に誘発する。
【００３８】
従って、本発明は、医薬としての化合物又はその医薬的に許容される塩に関する。
【００３９】
更に、本発明は、β−セクレターゼ酵素（ＢＡＣＥ１）の活性の阻害が治療上有益なものである疾患及び／又は状態の処置における化合物の使用に関する。
【００４０】
更に、本発明は、神経変性障害、認知低下、認知障害、認知症により特徴付けられる障害、及びβ−アミロイド沈着又は神経原線維変化の生成により特徴付けられる疾患の処置における化合物の使用に関する。
【００４１】
故に、本発明は、アルツハイマー病、２１番染色体トリソミー（ダウン症候群）、オランダ型遺伝性アミロイド性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、老年認知症、脳アミロイド血管症、変性認知症、血管性及び変性起源混合型認知症、パーキンソン病と関連する認知症、進行性核上まひと関連する認知症、大脳皮質基底変性と関連する認知症、びまん性レビー小体型アルツハイマー病、乾燥型ＡＭＤ、及び緑内障の処置における本発明の化合物の使用に関する。
【００４２】
本発明はまた、必要な患者において過剰なＢＡＣＥ１活性と関連するか、又は付随する障害の処置方法であって、前記患者に有効量の開示される化合物、又はその医薬的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、必要とする対象においてＢＡＣＥ１の活性を阻害する方法であって、対象に投与すること、及び／又はその受容体を、有効量の少なくとも１個の開示される化合物、又はその医薬的に許容される塩と接触させることを含む方法を提供する。本発明はまた、必要とする対象におけるβ−アミロイド沈着の改善方法であって、前記対象に有効量の少なくとも１個の開示される化合物、又はその医薬的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００４３】
本発明は、必要な対象におけるＢＡＣＥ１により仲介される障害を処置又は改善する治療方法であって、必要な対象に有効量の本明細書に記載の本発明の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又はその組成物を投与することを含む方法を含む。
【００４４】
本明細書で用いられる用語「対象」及び「患者」は、互換的に用いられ得、処置の必要な哺乳動物、例えば、愛玩動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギなど）、及び実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモットなど）を意味する。典型的には、対象は、処置を必要とするヒトである。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「処置すること」又は「処置」は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることに言及する。効果は、予防的（すなわち、障害又は疾患の発症の可能性を低減すること）、又は治療的であることができ、１個又は複数の以下の結果：疾患、障害、又は症候群の範囲を部分的又は全体的に低減すること；障害と関連する臨床症状又は指標を改善又は好転させること；又は疾患、障害、又は症候群の進行の可能性を遅延、阻害、又は低減することを部分的に又は実質的に達成することを含む。本明細書で教示される化合物は、当業者に理解される通り、選択された投与経路に依存して、患者に様々な形態で投与され得る。本教示の化合物は、例えば、経口、非経口、口腔、舌下、経鼻、直腸、パッチ、ポンプ、又は経皮投与され、医薬組成物が適宜製剤化され得る。非経口投与は、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、経上皮、経鼻、肺内、くも膜下腔内、直腸、及び局所投与方法を含む。
【００４６】
本発明による化合物の１日当たりの適用可能な用量範囲は、通常、０．１〜３０００mg、好ましくは、１〜２０００mg、より好ましくは、１０〜１０００mg、最も好ましくは、５０又は５００mgである。それぞれの投薬量単位は、便宜上、０．１〜１０００mg、好ましくは、２５〜２５０mgを含有し得る。
【００４７】
実際の医薬的有効量又は治療投薬量は、もちろん、当業者に公知の要因、例えば、患者の年齢及び体重、投与経路、及び疾患の重症度に依存する。任意の場合において、組み合わせが、患者の固有の状態に基づき、デリバリーされるべき医薬的有効量を可能にする投薬量及び方法で投与される。
【００４８】
医薬組成物
本発明の化合物を投与するための適当な製剤は、当業者に明らかであり、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、ロゼンジ、トローチ剤、液剤、シロップ剤、エリキシル剤、サシェ、注射剤、吸入薬、及び粉剤などを含む。医薬上有効な化合物（複数を含む）の含有量は、全体として組成物の０．１〜９５重量％、好ましくは、５〜９０重量％の範囲内であるべきである。
【００４９】
適当な錠剤は、例えば、式Ｉ記載の１個又は複数の化合物を、公知の賦形剤、例えば、不活性な希釈剤、担体、崩壊剤、アジュバント、界面活性剤、結合剤、及び／又は滑沢剤と混合することにより、得られ得る。錠剤はまた、幾つかの層からなり得る。
【００５０】
併用療法
１つの実施態様において、本発明は、本明細書に記載の疾患又は障害を処置又は改善するための併用療法を含む。併用療法は、少なくとも１個の本発明の化合物の、例えば、γ−セクレターゼ阻害剤、又はモジュレーター；Ａβオリゴマー又はＡβ原線維の形成を阻害するアミロイド凝集阻害剤（例えば、ＥＬＮＤ−００５）；直接的又は間接的に作用する神経保護物質及び／又は疾患修飾物質；抗酸化剤（例えば、ビタミンＥ、又はギンコリド）；抗炎症物質（例えば、Ｃｏｘ阻害剤、Ａβ低減特性を更に、又は独占的に有するＮＳＡＩＤ）；ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤（スタチン）；アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ドネペジル、リバスチグミン、タクリン、又はガランタミン）；ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（例えば、メマンチン）；ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト；ＡＭＰＡ受容体陽性モジュレーター、ＡＭＰＡキナーゼ、モノアミン受容体再取り込み阻害剤、神経伝達物質の濃度又は放出を調節する物質；成長ホルモンの分泌を誘導する物質（例えば、イブタモレンメシラート、及びカプロモレリン）；ＣＢ−１受容体アンタゴニスト、又はインバースアゴニスト；抗生物質（例えば、ミノサイクリン、又はリファンピシン）；ＰＤＥ２、ＰＤＥ４、ＰＤＥ５、ＰＤＥ９、ＰＤＥ１０阻害剤、ＧＡＢＡＡ受容体インバースアゴニスト、ＧＡＢＡＡ受容体アンタゴニスト、ニコチン受容体アゴニスト又は部分アゴニスト、又は陽性モジュレーター、α４β２ニコチン受容体アゴニスト又は部分アゴニスト、又は陽性モジュレーター、α７ニコチン受容体アゴニスト又は部分アゴニスト、又は陽性モジュレーター；ヒスタミンＨ３アンタゴニスト、５ＨＴ−４アゴニスト又は部分アゴニスト、５ＨＴ−６アンタゴニスト、α２−アドレナリン受容体アンタゴニスト、カルシウムアンタゴニスト、ムスカリン受容体Ｍ１アゴニスト又は部分アゴニスト、又は陽性モジュレーター、ムスカリン受容体Ｍ２アンタゴニスト、ムスカリン受容体Ｍ４アンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体５陽性モジュレーター、抗うつ剤、例えば、シタロプラム、フルオキセチン、パロキセチン、セルトラリン、及びトラゾドン；抗不安薬、例えば、ロラゼパム、及びオキサゼパム；抗精神病薬、例えば、アリピプラゾール、クロザピン、ハロペリドール、オランザピン、クエチアピン、リスペリドン及びジプラシドン、並びに本発明による化合物の有効性及び／又は安全性が増大され、及び／又は不所望の副作用が低減されるような方法で、受容体又は酵素を調節する他の物質の群から選択される１個又は複数の剤との組み合わせを投与することを含む。本発明による化合物はまた、上述の疾患及び状態の処置のための免疫療法（例えば、Ａβ又はその部分での能動免疫、又はヒト化抗Ａβ抗体又はナノボディでの受動免疫）と組み合わせて用いられてもよい。
【００５１】
併用療法は、本発明の化合物の１個又は複数の他の剤との同時投与、本化合物と１個又は複数の他の剤の連続投与、本化合物及び１個又は複数の他の剤を含有する組成物の投与、又は本化合物及び１個又は複数の他の剤を含有する別々の組成物の同時投与を含む。
【００５２】
実験部分
化合物の調製方法
本発明の化合物は、容易に利用可能な試薬及び出発材料を用いる従来の方法を利用して、調製することができる。本発明の中間体の調製に用いられる試薬は、市販されているか、又は文献に記載の標準的方法により調製することができるかのいずれかである。
【００５３】
マイクロ波反応を、ＣＥＭ反応器において、ディスカバリーＳＰシステムを用いて実行した。ＮＭＲデータを提示する場合、スペクトルを、Varian-400（４００MHz）で得た。スペクトルを、テトラメチルシランから低磁場に、プロトン数、多重度と共にppmで報告し、場合によっては、結合定数を、重水素化溶媒を基準にして、挿入的に示した。化合物を、以下に記載の基本的な分取ＨＰＬＣ方法により精製した。
【００５４】
方法１：
移動相Ａ：０．０５％ＮＨ４ＯＨを含む水；移動相Ｂ：ＡＣＮ；流速：２５mL/分；検出：ＵＶ２２０nm／２５４nm；カラム：Phenomenex Gemini C18  ２５０＊３０mm＊５μm；カラム温度：３０℃。
時間（分） ％Ａ ％Ｂ
０．０        ６８    ３２
１２．００    ３８    ６２
１２．２０      ０  １００
１３．５        ０  １００
１３．７      ９０    １０
【００５５】
方法２：
移動相Ａ：０．０５％ＮＨ４ＯＨを含む水；移動相Ｂ：ＡＣＮ；流速：２５mL/分；検出：ＵＶ２２０nm／２５４nm；カラム：Durashell C18  ２５０＊３０mm＊５μm；カラム温度：３０℃。
時間（分） ％Ａ ％Ｂ
０．０        ６７    ３３
１２．００    ４７    ５３
１２．２０      ０  １００
１３．５        ０  １００
１３．７      ９０    １０
【００５６】
ＬＣ−ＭＳデータを、以下のクロマトグラフィー条件を用いて得た。
【００５７】
方法１：
ＨＰＬＣシステム：Waters ACQUITY；カラム：Waters ACQUITY CSH（商標）Ｃ１８  １．７μM。
ガードカラム：Waters Assy、Frit、０．２μM、２．１mm；カラム温度：４０℃。
移動相：Ａ：ＴＦＡ：水（１：１０００、ｖ：ｖ）移動相Ｂ：ＴＦＡ：ＡＣＮ（１：１０００、ｖ：ｖ）；流速：０．６５mL/分；注入容量：２μL；取込時間：約１．５分。
【００５８】
勾配プログラム：
時間（分） Ｂ％
０          １０
０．８      ９０
１．２０    ９０
１．２１    １０
【００５９】
質量分析装置パラメーター
質量分析装置：Waters SQD；イオン化：ポジティブエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）；スキャンモード（１００〜１４００m/z（０．２秒毎））；ＥＳキャピラリー電圧：３．５kV；ＥＳコーン電圧：２５ｖ。
【００６０】
供給源温度：１２０℃；脱溶媒和温度：５００℃；脱溶媒和ガス流：窒素設定６５０（L/時間）；コーンガス流：窒素設定５０（L/時間）。
【００６１】
ラセミ化合物を、キラルカラムにより、後述の方法による超臨界流体技術を用いて分離した。
【００６２】
方法Ａ：
装置：Thar SFC 80；カラム：ＡＤ２５０mm＊３０mm、５μm；移動相：Ａ：超臨界ＣＯ２、Ｂ：ＩＰＡ（０．０５％ＤＥＡ）、Ａ：Ｂ＝８０：２０、６０ml/分；カラム温度：３８℃；ノズル圧：１００Bar；ノズル温度：６０℃；蒸発器温度：２０℃；トリマー温度：２５℃；波長：２２０nm。
【００６３】
方法Ｂ：
装置：SFC MG2；カラム：ＯＪ２５０nm＊３０nm、５μm；移動相：Ａ：超臨界ＣＯ２、Ｂ：ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）、Ａ：Ｂ＝９０：１０、７０ml/分；カラム温度：３８℃；ノズル圧：１００Bar；ノズル温度：６０℃；蒸発器温度：２０℃；トリマー温度：２５℃；波長：２２０nm。
【００６４】
本発明を、以下の実施例により説明し、以下の略語が用いられ得る。
【００６５】
【表１】
2015532282.tif 000005
【００６６】
実施例１
【化４】
2015532282.tif 000006
【００６７】
工程１：中間体３の合成
【化５】
2015532282.tif 000007
【００６８】
０℃の無水ＴＨＦ（１Ｌ）中の６−ブロモ−インダン−１−オン（１００．００ｇ、４７３．８mmol）の混合物に、ｔ−ＢｕＯＫ（５８．５ｇ、５２１．２mmol）を加えた。５分後、混合物を室温まで放温し、更に１０分間撹拌した。メタクリル酸メチル（４９．８ｇ、５３．２mL、４９７．５mmol、１．０５当量）を、１回で加えた。２時間後、アクリル酸メチル（４９．０ｇ、５１．２mL、５６８．６mmol、１．２当量）を反応混合物に加えた。室温で３時間撹拌後、ＭｅＩ（１０１ｇ、４４．３mL、７１０．７mmol、１．５当量）を反応混合物に加え、混合物を１６時間更に撹拌した。Ｈ２Ｏ（１Ｌ）、続いてＬｉＯＨ＊Ｈ２Ｏ（７９．５ｇ、１８９５mmol、４．０当量）を加えた。混合物を、２８時間室温で撹拌した。ＴＨＦを減圧下で取り除いた。残渣を、Ｈ２Ｏ（１Ｌ）で希釈し、濾過し、濾液が中性になるまで、Ｈ２Ｏで洗浄した。生成物をＭｅＯＨで洗浄して、５０ｇの中間体３を得た。
【００６９】
工程２：中間体４の合成
【化６】
2015532282.tif 000008
【００７０】
ＦｅＣｌ３（６．０ｇ、３７．０mmol）とトルエン（６０mL）の混合物を、０℃まで冷却した。ＴＨＦ（４８mL）中の中間体３（１１．９ｇ、３７．０mmol）の混合物を、混合物に加えた。混合物を、５分間０℃で撹拌し、次に、−１０℃まで冷却した。ＴＨＦ（１２mL）中のｔ−ＢｕＮＨ２−ＢＨ３（３．５ｇ、４０．７mmol）の溶液を、反応混合物に−１０℃で滴下した。反応混合物を、約−１０℃で３０分間撹拌し、ＨＣｌ水溶液（６Ｎ、１０mL）でクエンチし、約０℃で３０分間撹拌し、次に、そのまま室温まで放温した。混合物を濃縮して、ＴＨＦを取り除き、トルエン（６０mL）を加えた。水層を取り除き、有機相を水（３×６０mL）で洗浄した。有機相を、半分の容量まで濃縮し、５０℃まで放温して、溶液を得て、次に、０℃まで１時間かけて冷却し、０℃で１時間維持した。固形物を濾過し、冷（０℃）トルエン（１２mL）で洗浄し、減圧乾固させて、化合物４（９．９３ｇ）を得た。
【００７１】
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：ｔＲ＝１．２４分、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３２３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００７２】
1H-NMR (CDCl3): δ: 7.88-7.89 (s, 1H), 7.67-7.69 (d, 1H), 7.31-7.33 (d, 1H), 3.60 (s, 1H), 2.98 (s, 2H), 1.76-1.79 (m, 4H), 1.07-1.08 (m, 2H), 1.02-1.06 (m, 6H)。
【００７３】
工程３：中間体５の合成
【化７】
2015532282.tif 000009
【００７４】
ＤＭＦ（２００mL）中の中間体４（２０．０ｇ、６１．９mmol）の混合物に、ＮａＨ（５．０ｇ、１２３．８mmol）を０℃で加え、混合物を１５分間０℃で撹拌した。ＭｅＩ（１７．６ｇ、１２３．８mmol）を０℃で加え、混合物を室温まで放温し、１．５時間室温で撹拌した。混合物を、Ｈ２Ｏでクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相を、Ｈ２Ｏ、続いてブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得て、これを、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル；３０：１〜５：１）により精製して、中間体５（２０ｇ）を得た。
【００７５】
工程４：中間体６の合成
【化８】
2015532282.tif 000010
【００７６】
脱水ＴＨＦ（２００ml）中の中間体５（２０．０ｇ、５９．３mmol）とチタニウム（ＩＶ）エトキシド（１０８．２ｇ、４７４．４mmol）の混合物を、室温で１時間撹拌した。（Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミド（２９ｇ、２３７．２mmol）を加え、得られた混合物を、８０℃、Ｎ２雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を冷却し、Ｈ２Ｏ（４００ml）を加えた。混合物を濾過し、水層をＥｔＯＡｃ（３×４００mL）で抽出した。合わせた有機相を、乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗中間体を得た。これを、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル；２０：１）により精製して、中間体６（１８．４ｇ）を得た。
【００７７】
工程５：中間体７の合成
【化９】
2015532282.tif 000011
【００７８】
無水ＤＣＭ（１０mL）中の中間体６（１．０ｇ、２．３mmol）の溶液に、ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、２mL、８．０mmol）を、０℃で撹拌しながら加え、０℃で１時間撹拌した。混合物を、ＮａＨＣＯ３（２０mL）を約５分間撹拌しながら加えることによりクエンチし、次に、ＤＣＭ（３×２０mL）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（２×２０mL）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で取り除いて、粗中間体７（８００mg）を得て、これを精製することなく次の工程にそのまま用いた。
【００７９】
ＬＣＭＳ：ｔＲ＝２．１０分、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３３６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８０】
工程６：中間体８の合成
【化１０】
2015532282.tif 000012
【００８１】
２−オキソプロパンチオアミド（３７０mg、３．６mmol）を、ＭｅＯＨ（１５mL、無水）中の中間体７（８００mg、２．４mmol）の混合物に加え、得られた混合物を６０℃で一晩撹拌した。室温まで冷却後、得られた沈殿物を、濾過により集め、冷ＭｅＯＨ（２×５mL）で洗浄した。固形物を減圧乾固させて、粗中間体８（６００mg）を得て、これを、精製することなく次の工程にそのまま用いた。
【００８２】
ＬＣＭＳ：ｔＲ＝１．１９分、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４２０．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８３】
工程７：実施例１の合成
【化１１】
2015532282.tif 000013
【００８４】
中間体８（６００mg、１．４mmol）を、ＭｅＯＨ（２０mL）とＴＨＦ（１０mL）の混合物に加えた。ｔ−ＢｕＯＯＨ（５mL、３６mmol、水中６５％）の溶液、及びＮＨ４ＯＨ（５mL）を加え、得られた混合物を一晩室温で撹拌した。水（１０mL）及びブライン（１０mL）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（３×３０mL）で抽出し、合わせた有機層を、ブライン（２×２０mL）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残渣を、分取ＨＰＬＣ（方法１）により精製して、実施例１のラセミ混合物（３００mg）を得た。ラセミ混合物を、ＳＦＣキラルクロマトグラフィー方法Ａにより更に精製して、所望の実施例１を第１の溶出異性体として得た。
【００８５】
ＬＣＭＳ：ｔＲ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４０４．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８６】
1H NMR (CD3OD): δ 7.38-7.42 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.26-7.28 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.85-6.86 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.06-3.18 (m, 2H), 2.28-2.36 (m, 4H), 1.62-1.78 (m, 2H), 1.45-1.60 (m, 2H), 1.15-1.25 (m, 1H), 0.90-1.10 (m, 6H), 0.81-0.87 (m, 1H)。
【００８７】
ＳＦＣ（方法１）：ｔＲ＝４．１９分。
【００８８】
実施例２
【化１２】
2015532282.tif 000014
【００８９】
工程１：中間体１０の合成
【化１３】
2015532282.tif 000015
【００９０】
ＴＨＦ（１０mL）中の実施例１（３００mg、０．７４mmol）の混合物に、Ｂｏｃ２Ｏ（４８０mg、２．２mmol）、及びＴＥＡ（３００mg、３．０mmol）を加え、一晩室温で撹拌した。混合物を濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル；１０：１〜１：１）により精製して、中間体１０（３５０mg）を得た。
【００９１】
ＬＣＭＳ：ｔＲ＝０．９０分、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４０４．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９２】
1H NMR: (CDCl3), δ 9.82 (s, 1H), 7.41-7.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.18-7.20 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.08 (s, 2H) 2.24-2.36 (m, 4H), 1.47-1.72 (m, 14H), 0.81-1.05 (m, 7H)。
【００９３】
工程２：実施例２の合成
【化１４】
2015532282.tif 000016
【００９４】
濃硫酸（４８μL）を、ＤＭＡ（２０mL）に加え、溶媒をＮ２で２０分間パージした。別のフラスコに、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（０．３ｇ）、及びＸｐｈｏｓ（１．２５ｇ）を、Ｎ２下で加え、続いて上述の溶媒を加えた。次に、得られた混合物を８０℃で３０分間加熱して、混合物Ａを得た。
【００９５】
別のフラスコにおいて、ＤＭＡ（５０mL）をＮ２でパージし、中間体８（２．２ｇ、４．０mmol）、Ｚｎ（ＣＮ）２（０．５ｇ、４．０mmol）、及び亜鉛末（１４．１mg）を加えた。混合物Ａをこの溶液に加え、得られた混合物を９０℃で１時間加熱した。反応混合物を、室温まで冷却し、Ｈ２Ｏ（１００mL）及びＥｔＯＡｃ（１００mL）で希釈し、１０分間撹拌した。混合物を、セライトに通して濾過し、有機層を分離させた。次に、水層をＥｔＯＡｃ（２×３０mL）で抽出した。合わせた有機層を、水、ブラインで洗浄し、乾燥させ、溶媒を減圧下で取り除いた。粗生成物を、まず分取ＨＰＬＣ（方法２）、続いてＳＦＣ方法Ａにより精製して、実施例２（９．４mg）を得た。
【００９６】
ＬＣＭＳ：ｔＲ＝０．８８分、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３５１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９７】
1H NMR: (メタノール-d4): δ 7.62 - 7.65 (dd, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.52-7.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.26 - 3.31 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.18 - 3.23 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.29-3.35 (m, 4 H), 1.60-1.75 (m, 2H), 1.45-1.55 (m, 2H), 1.18-1.27 (m, 1H), 0.96-0.98 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 0.94-0.96 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 0.82-0.90 (m, 1H)。
【００９８】
実施例３
【化１５】
2015532282.tif 000017
【００９９】
実施例３を、中間体４から、実施例１の工程６〜工程１１に記載の方法、続いて実施例２の工程１及び２に記載の方法により合成した。終ラセミ粗生成物を、キラルＳＦＣ方法Ｂにより精製して、実施例３を第１の溶出異性体として得た。
【０１００】
ＬＣＭＳ：ｔＲ＝０．４１分、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３３７．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０１】
1H NMR: (メタノール-d4), δ 7.62 - 7.65 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.51-7.54 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 3.26 - 3.31 (m, 1H), 3.18 - 3.23 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.46-2.52 (t, J = 9.6 Hz, 1 H), 2.32 (s, 3H), 1.45-1.60 (m, 4H), 1.14-1.21 (t, J = 13.2 Hz, 1H), 0.95-0.96 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 0.93-0.95 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 0.81-0.88 (t, J = 12.8 Hz, 1H)。
【０１０２】
実施例４
【化１６】
2015532282.tif 000018
【０１０３】
工程１：中間体１３の合成
【化１７】
2015532282.tif 000019
【０１０４】
オーブンで乾燥させた３Ｌのフラスコに、６−ブロモ−１−インダノン（１００ｇ、４７３．８mmol）、アクリル酸メチル（８６．４ｇ、９０mL、９９５mmol、２．１当量）、無水ＴＨＦ（８００mL）を入れ、０℃まで冷却した。少量のｔＢｕＯＫ（０．５ｇ）を加え、２分後、更に少量のｔＢｕＯＫ（０．５ｇ）を加えた。５分後、冷却浴を取り除き、残りのｔＢｕＯＫ（６３ｇ）を同等量ずつ２０分かけて加えた（６４ｇ、５６８．６mmol）。混合物を、更に２時間室温で撹拌した。ＤＭＦ（２４０mL）を、反応混合物に加え、続いてＭｅＩ（６０mL、９４７．６mmol）を加え、混合物を、更に１２時間撹拌した。反応を、１０％クエン酸溶液でクエンチし、減圧下で濃縮して、有機溶媒の大半を取り除き、その後、濾過した。ケーキを、水、続いてＭｅＯＨにより洗浄して、粗中間体１２（２００ｇ）を得て、これを次の工程にそのまま用いた。
【０１０５】
【化１８】
2015532282.tif 000020
【０１０６】
中間体１２（２００ｇ、５４７．６mmol、粗）を、ＴＨＦとＨ２Ｏの混合物（１：１；３．６Ｌ）に加え、続いてＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（９２ｇ、２１９０mmol）を加えた。混合物を、１６時間室温で、次に、１２時間７０℃で撹拌した。反応混合物を、減圧下で濃縮して、ＴＨＦを取り除き、濾過した。ケーキを、Ｈ２Ｏで洗浄し、次に、ＭｅＯＨ（５０mL）と５分間撹拌し、再度濾過し、更なる量の冷ＭｅＯＨ（５０mL）で洗浄した。固形物を集めて、中間体１３（７５ｇ）を得た。
【０１０７】
工程２：中間体１４の合成
【化１９】
2015532282.tif 000021
【０１０８】
乾燥フラスコに、ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ（１．２ｇ、３．３mmol）及び無水ＭｅＯＨ（６０mL）をＮ２雰囲気下で入れ、撹拌して、透明の溶液を得た。化合物１３（１０．０ｇ、３２．６mmol）及び無水ＴＨＦ（２４０mL）を、Ｎ２雰囲気下で加え、混合物を、−７８℃まで冷却した。ＮａＢＨ４（０．４ｇ、１３．０mmol）を、−７８℃、Ｎ２雰囲気下で、勢いよく撹拌しながら加えた。混合物を、−７８℃で２０分間撹拌した。反応を、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１００mL）及びＨ２Ｏ（２００mL）を−７８℃で撹拌しながら加えることにより、クエンチした。混合物を、周囲温度までゆっくり放温した。混合物を、酢酸エチル（３×１５０mL）で抽出した。合わせた有機層を、Ｈ２Ｏ（２×２００mL）、ブライン（２×２００mL）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル；２０：１〜３：１）により精製して、中間体１３Ａ（７．５ｇ）を得た。
【０１０９】
ＬＣ−Ｍｓ：ｔＲ＝３．１９分：ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３１１．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１０】
1H NMR: (CDCl3): δ 7.59 (s, 1H), 7.22-7.25 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.88-6.91 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.80-6.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.84 (s, 1H), 4.87 (s, 2H), 4.31-4.36 (m, 2H), 3.50-3.55 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.15-3.25 (m, 1H), 3.09-3.14 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.00-3.06 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 1.90-2.10 (m, 3H), 1.25-1.50 (m, 5H), 1.15-1.25 (t, J = 6.4 Hz, 3H)。
【０１１１】
【化２０】
2015532282.tif 000022
【０１１２】
ＮａＨを、ＤＭＦ（２０mL）（０．９６ｇ、４０mmol）中の中間体１３Ａ（６．１８ｇ、２０mmol）の混合物に０℃で加え、０℃で２時間撹拌し、次に、ＭｅＩ（３．５mL）を混合物に加え、一晩撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（４０mL）及びＨ２Ｏ（４０mL）で希釈した。有機層を分離させ、水層をＥｔＯＡｃ（２×６０mL）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、溶媒を取り除いて、中間体１４（５．０ｇ）を得た。
【０１１３】
工程３：中間体１５Ａ及び１５Ｂの合成
【化２１】
2015532282.tif 000023
【０１１４】
ＴＨＦ（１００mL）中の中間体１４（５．０ｇ、１５．３mmol）の混合物に、Ｔｉ（ＯＥｔ）４（３５．０ｇ、１５３mmol）を加え、室温で１時間撹拌した。（Ｓ）Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミド（７．４ｇ、６１．２mmol）を加え、一晩還流した。溶液を室温まで冷却し、混合物を、Ｈ２Ｏ（８０mL）とＥｔＯＡｃ（８０mL）の間で分配させた。水層をＥｔＯＡｃ（３×８０mL）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（５０mL）で洗浄し、乾燥させ、濃縮して残渣を得た。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ；２０：１）により精製して、それぞれ、中間体１５Ａ（１．６ｇ）及び１５Ｂ（１．４ｇ）を得た。
【０１１５】
実施例４を、中間体１５Ａから、実施例１の工程４〜工程６に記載の方法により合成した。
【０１１６】
ＬＣ−Ｍｓ：ｔＲ＝３．１９分：ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３９０．２３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１７】
実施例５
【化２２】
2015532282.tif 000024
【０１１８】
実施例５を、実施例４から実施例２に記載の方法により合成した。
【０１１９】
ＬＣ−Ｍｓ：ｔＲ＝２．９９分：ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３３７．２３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２０】
1HNMR: (CD3OD): δ 7.60-7.62 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz  1H), 7.50-7.52 (d, J = 7.6 Hz 1H), 7.07 (s, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.25-3.33 (m, 1H), 3.15-3.20 (d, J = 16.4 Hz 1H), 2.61 (m, 1H), 2.31 (s, 1H), 2.04-2.10 (m, 1H), 1.43-1.58 (m, 4H), 1.28-1.31 (m, 1H), 0.91-0.93 (d, J = 6.4 Hz 3H), 0.78-0.86 (t, J = 12.8 Hz, 1H)。
【０１２１】
実施例６
【化２３】
2015532282.tif 000025
【０１２２】
３−フルオロ−５−ピリジンボロン酸（９０mg、０．６６mmol）を、ジオキサン（５mL）中の実施例１（３５０mg、０．６mmol）の溶液に加え、続いてＣｓ２ＣＯ３水溶液（２mL、水中２Ｍ）を加えた。混合物を、Ｎ２流を５分間バブリングすることによりパージし、次に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４０mg、０．０６mmol）を加えた。終混合物を、２時間１１０℃、Ｎ２雰囲気下で撹拌した。反応物を、室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、濾過した。濾液を、濃縮し、ＳＦＣ方法Ａにより精製して、実施例６を得た。
【０１２３】
ＬＣＭＳ：ｔＲ＝０．９９分、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４２１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２４】
1H NMR (CD3OD): δ 8.57-8.59 (t, J = 1.2 Hz, 1H), 8.39-8.40 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.80-7.85 (m, 1H), 7.58-7.61 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.47-7.50 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.02 (s, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.13-3.26 (m, 2H), 2.25-2.38 (m, 4H), 1.62-1.69 (m, 2H), 1.51-1.61 (m, 2H), 1.21-1.31 (m, 1H), 0.94-0.97 (m, 6H), 0.83-0.90 (m, 1H)。
【０１２５】
１９Ｆ  ＮＭＲ：（ＣＤ３ＯＤ）：δ−１２８．５９ppm。
【０１２６】
実施例７
【化２４】
2015532282.tif 000026
【０１２７】
実施例７を、実施例６に記載の方法により、（５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル）ボロン酸を、３−フルオロ−５−ピリジニルボロン酸の代わりに用いて合成した。
【０１２８】
ＬＣＭＳ：ｔＲ＝１．０１分、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４４１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２９】
1H NMR: (CD3OD): δ 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55-7.59 (m, 1H), 7.48-7.50 (m, 1H), 6.99 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.16-3.28 (m, 2H), 2.30 - 2.37 (m, 4H), 2.10 (s, 3H), 1.66-1.80 (m, 2H), 1.52-1.65 (m, 2H), 1.23-1.30 (m, 1H), 0.96-0.99 (m, 6H), 0.85-0.91 (t, J = 12.8 Hz, 1H)。
【０１３０】
実施例８
以下の化合物を、実施例１〜７に記載の手順の適当な改変、例えば、出発材料の適当な選択により合成することができる。
【０１３１】
【化２５】
2015532282.tif 000027
【０１３２】
実施例９
ＢＡＣＥ１アッセイ（アッセイ１）
化合物の阻害活性を、ＢＡＣＥ１活性の蛍光クエンチアッセイにより、市販の基質HiLyte Fluor（商標）４８８−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−（ＱＸＬ（商標）５２０）−ＯＨ（配列番号：１）（AnaSpec、San Jose、CA）、及びｍｙｃ−ｈｉｓタグに融合され、かつＨＥＫ２９３／ＢＡＣＥｅｃｔ細胞からＯｐｔｉＭＥＭ（商標）（Invitrogen）に分泌された、切断ヒトβ−セクレターゼ、ＢＡＣＥ１（アミノ酸１〜４５４）を用いて、評価した。基質を、１mg/mlでＤＭＳＯ中に溶解した。
【０１３３】
アッセイを、ＢＡＣＥ１の外部ドメインを含有するＯｐｔｉＭＥＭ（商標）（上清を２４時間かけて回収し、細胞片を遠心分離により無くした）、所望の２倍の濃度の試験化合物及び２％ＤＭＳＯを含有する水２５μl、１μM基質ペプチド、２０mM  ＮａＯＡｃ、pH４．４、及び０．０４％Triton-X100の存在下、総アッセイ容量５０μlにて、３８４ウェルプレートにおいて行った。一般的には、化合物希釈液２５μlをプレートに加え、続いて、０．２％TritonX-100を含む水中に１：１０で希釈したＯｐｔｉＭＥＭ（商標）を含有するＢＡＣＥ１  １０μlを加えた。反応を、ＮａＯＡｃバッファー中の基質１５μlを加えて開始させた。反応液を、室温（暗所）、Envision（登録商標）multilabel reader（Perkin Elmer）にてインキュベーションし、基質の切断を、６０分間、ｅｘ：４８５nm、ｅｍ：５３８nmでの動態として記録した。酵素を含有しないブランクウェルを、それぞれのプレート上にてインキュベーションした。
【０１３４】
全３８４ウェルにおける反応速度を得るために、蛍光の強度を、時間に対して消失させた。これらの速度を、パーセント対照を計算するために用い、これは、１％ＤＭＳＯを含有する阻害されていない対照を１００％とし、酵素の不存下で行ったブランク対照を０％として用いた。Assay Explorer（登録商標）を用いて、パーセント対照を試験化合物濃度に適合させることにより、ＩＣ５０値を計算した。
【０１３５】
実施例１０
Ｈ４−ＡＰＰｗｔ細胞ベースアッセイ（アッセイ２）
ヒトＡＰＰを安定的に発現するＨ４神経膠腫細胞株（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＨＴＢ−１４８）におけるＡβ１−ｘペプチドの産生をモニタリングするアッセイにおいて、化合物の細胞への効力を評価した。試験化合物を、ＤＭＳＯ中に溶解し、培地（１０％ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ）にて事前希釈して、アッセイ中の化合物の終濃度を２倍にした。それぞれのウェルが、終容量２００μl中約１０，０００細胞を含有するように、等容量の試験化合物の２×溶液及び細胞懸濁液を、９６ウェル培養プレートに加えた。アッセイ中のＤＭＳＯの終濃度は、０．２％であった。プレートを、５時間、３７℃、５％ＣＯ２にてインキュベーションして、細胞をウェルの底に試験化合物の存在下で接着させた。培地を取り除き、試験化合物を同じ終濃度で含有する新たな培地で置き換えた。プレートを、１８時間、３７℃、５％ＣＯ２にてインキュベーションした。Ａｂ１−ｘの濃度を、AlphaLISAイムノアッセイ（PerkinElmer、カタログ番号ＡＬ２８８）を用い、製造元のプロトコールに従い、決定した。ＤＭＳＯ又は１０μM  β−セクレターゼ阻害剤（ＢＡＣＥ阻害剤ＩＶ、EMD Bioscience、カタログ番号５６５７８８）を含有するウェル中のＡβ１−ｘの濃度を、それぞれ、阻害されていない対照、及びバックグラウンド対照として、試験化合物を含むそれぞれのウェルのパーセント阻害値を計算するために、用いた。これらのパーセント阻害値を、４パラメータ曲線適合を用いて化合物濃度に対して回帰させ、ＩＣ５０値（５０％の阻害効果を観察した化合物の濃度）を、曲線上の変曲点に対応する化合物濃度として計算した。
【０１３６】
本発明の化合物を、アッセイ１において測定したＢＡＣＥ１阻害能について、及びアッセイ２において測定した細胞阻害能について、試験した。生物学的データを、以下の表１に示す。
【０１３７】
【表２】
2015532282.tif 000028
【０１３８】
以下の表２は、国際公開公報第２０１２／０８７２３７号に記載されるある種の化合物に対する、本発明の化合物の優位性を示す。
【０１３９】
【表３】
2015532282.tif 000029
【配列表】
2015532282000001.app
【国際調査報告】
2015532282.tif 000035
2015532282.tif 000036
2015532282.tif 000037