(57)【要約】本発明は、乳タンパク質に対するアレルギーの予防又は乳タンパク質についての経口寛容の誘導に使用するための低アレルゲン性架橋タンパク質であって、前記架橋タンパク質が、架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択される低アレルゲン性架橋タンパク質を提供する。本発明はさらに、乳タンパク質に対するアレルギーの予防又は乳タンパク質に対する経口寛容の誘導に使用するための栄養組成物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳タンパク質に対するアレルギーの予防又は乳タンパク質に対する経口寛容の誘導に使用するための低アレルゲン性架橋タンパク質であって、前記架橋タンパク質が、架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択される、低アレルゲン性架橋タンパク質。
【請求項２】
前記乳タンパク質が、カゼイン、カゼイン塩、乳清タンパク質、ラクトフェリン、トランスフェリン又はそれらの組み合わせ、好ましくはカゼイン、カゼイン塩又はそれらの組み合わせである、請求項１に記載の低アレルゲン性架橋タンパク質。
【請求項３】
前記架橋タンパク質が、酵素処理によって、好ましくはトランスグルタミナーゼでの処理によって架橋されている、請求項１又は２に記載の低アレルゲン性架橋タンパク質。
【請求項４】
前記架橋タンパク質が、０．１〜２、好ましくは０．５〜１のカゼイン又はカゼイン塩１分子当たりの架橋を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の低アレルゲン性架橋タンパク質。
【請求項５】
前記架橋タンパク質が、３６カ月まで、好ましくは１２カ月まで、より好ましくは６カ月までの年齢のヒト対象に投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の低アレルゲン性架橋タンパク質。
【請求項６】
前記架橋タンパク質が、乳タンパク質アレルギーを発症しやすい素因があるヒト対象に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の低アレルゲン性架橋タンパク質。
【請求項７】
乳タンパク質に対するアレルギーの予防又は乳タンパク質に対する経口寛容の誘導に使用するための栄養組成物であって、架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択される低アレルゲン性架橋タンパク質を含む栄養組成物。
【請求項８】
前記乳タンパク質が、カゼイン、カゼイン塩、乳清タンパク質、ラクトフェリン、トランスフェリン又はそれらの組み合わせ、好ましくはカゼイン、カゼイン塩又はそれらの組み合わせである、請求項７に記載の栄養組成物。
【請求項９】
前記架橋タンパク質が、酵素処理によって、好ましくはトランスグルタミナーゼでの処理によって架橋されている、請求項７又は８に記載の栄養組成物。
【請求項１０】
３６カ月まで、好ましくは１２カ月まで、より好ましくは６カ月までの年齢のヒト対象に投与される、請求項７〜９のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項１１】
前記架橋タンパク質が、乳タンパク質アレルギーを発症しやすい素因があるヒト対象に投与される、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、乾物重量で、
１０〜１５％のタンパク質であって、その少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％が架橋タンパク質であり、前記架橋タンパク質が架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択されるタンパク質と、
５０〜６５％の炭水化物と、
２２〜３０％の脂肪と、任意選択で
１〜６％のオリゴ糖と
を含む、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の栄養組成物。
【請求項１３】
架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択される架橋タンパク質を含む低アレルゲン性栄養組成物。
【請求項１４】
乾物重量で、
１０〜１５％のタンパク質であって、その少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％が架橋タンパク質であり、前記架橋タンパク質が架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択されるタンパク質と、
５０〜６５％の炭水化物と、
２２〜３０％の脂肪と、任意選択で
１〜６％のオリゴ糖と
を含む、請求項１３に記載の低アレルゲン性栄養組成物。
【請求項１５】
前記架橋タンパク質が、酵素処理によって、好ましくはトランスグルタミナーゼでの処理によって架橋されている、請求項１３又は１４に記載の低アレルゲン性栄養組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、牛乳タンパク質などの乳タンパク質に対するアレルギーの予防又はそのようなタンパク質に対する経口寛容の誘導に使用するための低アレルゲン性架橋タンパク質に関する。本発明はさらに、乳タンパク質に対するアレルギーの予防又は乳タンパク質に対する経口寛容の誘導に使用するための前記低アレルゲン性架橋タンパク質を含む栄養組成物、及び低アレルゲン性栄養組成物に関する。
【０００２】
［発明の背景］
食物アレルギーは、人生で最初に起きるのは牛乳アレルギーであることが最も多く、ほとんどの場合、食物中のタンパク質に反応することにより引き起こされる。様々な牛乳タンパク質、例えば、β−ラクトグロブリン、カゼイン、α−ラクトアルブミン及び血清アルブミンは、アレルゲンとして特定されている（Ｗａｌ，Ｊ．Ｍ．（１９９８年）Ｃｏｗ’ｓ  ｍｉｌｋ  ａｌｌｅｒｇｅｎｓ、Ａｌｌｅｒｇｙ、５３、１０１３〜１０２２）。また、カゼイン塩などの牛乳由来のタンパク質もアレルゲンとして特定されている。
【０００３】
人生の早い時期には、ヒト免疫系はまだ発達中であり、食物抗原に対する（経口）寛容を発達させることができていない可能性がある。その結果として、赤ちゃんや子供などのヒト対象は、食物タンパク質に対して過剰免疫応答を開始し、それに対してアレルギー応答を起こす。
【０００４】
ほとんどの場合、食物過敏症は、敏感な赤ちゃんや子供が潜在的なアレルゲンを含有する新しい食べ物に初めて遭遇した直後に発症する。母乳は別として、一般に、ヒトの赤ちゃんが遭遇する最初の食物タンパク質は上述したように牛乳タンパク質であり、牛乳アレルギーはヒトの赤ちゃんにおいて最も一般的な食物アレルギーである。牛乳アレルギーであると確定した赤ちゃんは、卵及び穀物タンパク質などの他の食物タンパク質に対してもアレルギーを発症するリスクが高まることが一般的に受け入れられている。これらのアレルギーはすべて、アトピー性皮膚炎、腸の問題、湿疹及び喘息などのアトピー性疾患として臨床的に現われ得る。したがって、そのようなアレルギーを予防又は治療する必要性が存在する。
【０００５】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、食物由来のタンパク質は、最初の感作後の１型（急性）過敏性反応の誘導に関与する食物アレルギーに敏感な人において存在すると考えられる。食物アレルギーを引き起こす食品タンパク質に対する１型アレルギー反応は、大部分がアレルゲン特異的ＩｇＥの産生をもたらす免疫応答のヘルパーＴ２（Ｔｈ２）分極を特徴とする（感作相）。
【０００６】
その後に特異的アレルゲンによる受容体の架橋が続く、肥満細胞及び好塩基球上の高親和性受容体ＦｃｓεＲ１へのＩｇＥの結合は、脱顆粒を引き起こす（エフェクター／チャレンジ相）。ヒスタミン、ロイコトリエン及びサイトカインなどのメディエーターの放出は、特定の食物の摂取後、数分から１時間内に皮膚、胃腸管、気道及び時折アナフィラキシーに関与する臨床症状を引き起こす。
【０００７】
したがって、食事の観点から、牛乳タンパク質などの乳タンパク質に対するアレルギーの発症を予防する必要性が存在する。牛乳又は他の哺乳動物からの乳は、赤ちゃんに与えられるヒトの母乳を補完又は完全に置き換えるために使用されることが非常に多いので、これは重要である。
【０００８】
一般に、インタクトな乳タンパク質との接触を延期することは、対象が牛乳タンパク質などの乳タンパク質に対するアレルギーを発症することを予防する。基本的に、インタクトな乳タンパク質との接触を延期するには２つの方法がある。
【０００９】
第１の方法は、乳タンパク質を含有する食品を完全に回避することである。しかし、このような食事は、利用可能な食品が非常に限られるため、コンプライアンスが低いという欠点を有する。さらに、乳児にとって、牛乳タンパク質ベースの人工乳は、ヒトの母乳の最善の代替物として決定されている。
【００１０】
乳タンパク質に対するアレルギーの発症を予防するための第２の方法は、タンパク質のコンフォメーション変化を介してアレルギーエピトープを隠蔽、破壊若しくは開示することによって、又はタンパク質内に位置する隠蔽されたエピトープの胃腸酵素へのアクセスを改善することによって乳タンパク質のアレルゲン性を変化させることである（Ｇｕｏら、（１９９５年）、Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  β−ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  ｓｏｄｉｕｍ  ｃａｓｅｉｎａｔｅ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  ｂｙ  ｐｅｐｓｉｎ  ａｎｄ  ｔｒｙｐｓｉｎ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、７８、２３３６〜２４４）。
【００１１】
１つの一般的に適用される方法は、広範囲に（潜在的な）アレルゲン性食品タンパク質を加水分解することである。しかし、ほとんどの場合、このような種類の製品は、味が悪く、不溶性、低下した乳化能力及び／又は貧弱なレオロジー特性などの貧弱な機能特性を有する。さらに、広範な加水分解により、これらのタンパク質は経口寛容を誘導する能力を失う可能性がある。これは、インタクトなタンパク質を摂取するとき、対象がアレルギーの発症に依然として敏感であることを意味する。
【００１２】
食物アレルギーを予防する別の方法は、ヒト対象に、比較的少量の牛乳タンパク質などのアレルゲンタンパク質を数週間の期間にわたって投与する方法によって、経口寛容を誘導することである。また、（わずかに）形を変えたアレルギーを発症するリスクがある対象にアレルゲンタンパク質を投与することも可能であり得る。この目的のために、（部分的に）加水分解されたタンパク質が使用される。
【００１３】
Ｆｒｉｔｓｃｈｅら、（Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｖｏｌ１００、Ｎｏ．２、２６６〜２７３頁、１９９７年）には、加水分解度が１８％である酵素的に加水分解された乳タンパク質の使用は、インタクトな牛乳タンパク質に対する経口寛容を誘導することができたことが動物モデルで示されている。これらの実験の結果は、ラットにそのような加水分解された牛乳タンパク質を与えることで、アレルゲン性は処理しなかったタンパク質と比較して１００倍を超えて減少し、アレルギー反応を抑制することを示した。
【００１４】
また、ｖａｎ  Ｅｓｃｈら（Ｐｅｄｒｉａｔｉｃ  ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２０１１年：２２：８２０〜８２６）には、ホエータンパク質加水分解物はホエーに対する経口寛容を誘導する能力を有することが示されている。
【００１５】
しかしながら、既に上で示したように、食品タンパク質、特に牛乳タンパク質の酵素加水分解は、カゼインが加水分解されている食品の場合、特に、味の悪さ及び貧弱な機能的及び／又はレオロジー特性を引き起こす。このような味の悪さ及び良好な機能的及び／又はレオロジー特性の欠如は、他の成分でマスクされなければならず、それはプロセス及び製品のコスト並びに複雑さをさらに増大させる。
【００１６】
食品タンパク質の抗原性を低下させる別の方法は、これらのタンパク質を重合又は架橋することである（Ｃｌａｒｅ，Ｄ．Ａ．ら、２００７年、Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｅａｎｕｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５５、４３２〜４３８）。
【００１７】
Ｖｉｌｌａｓ−Ｂｏａｓらの研究では、重合を誘導されたトランスグルタミナーゼのβ−ラクトグロブリンの抗原性への影響が検討されている（Ｖｉｌｌａｓ−Ｂｏａｓ，Ｍ．Ｂ．ら、２０１０年、Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｏｎ  β−ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄａｉｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ、２０、６、３８６〜３９２頁）。この研究では、システインなどの追加の薬剤は、トランスグルタミナーゼでβ−ラクトグロブリンを処理することができるように使用されなければならなかった。さらに、重合した試料から行われたペプシン消化は、β−ラクトグロブリンの抗原性を抑制しないことが示された。
【００１８】
Ｍｏｌ．Ｎｕｔｒ．Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓ．２０１０年のＳｔａｎｉｃらの論文において、酵素処理によるカゼインの架橋が記載されている。しかしながら、この論文では、カゼインに対するアレルギーを既に発症していた対象のみが検討されている。Ｓｔａｎｉｃらは、架橋カゼインの非感作能力については言及せず、カゼインに対するアレルギーの発症の予防、又は架橋カゼイン若しくはカゼイン塩が経口寛容を誘導する可能性についても説明していない。
【００１９】
乳中に存在する重要な乳タンパク質は、カゼインである。カゼインは、牛乳におけるタンパク質の約８０％、人乳において２０〜４５％の間を構成する。
【００２０】
乳（例えば牛乳）や乳製品中のカゼインの含有量が比較的高いことを考慮すると、このタンパク質、その塩（カゼイン塩）又は誘導体に対するアレルギーは、相当な問題を引き起こし得る。したがって、これらのタンパク質に対するアレルギーの予防及びそれらに対する経口寛容を誘導するための深刻な必要性が存在する。
【００２１】
［発明の概要］
驚くべきことに、本発明者らは、乳タンパク質に対するアレルギーを予防する、及び乳タンパク質、特にカゼイン又はカゼイン塩についての経口寛容を誘導する方法を見出した。
【００２２】
本発明者らは、乳タンパク質アレルギーを発症しやすい素因がある、乳児などのヒト対象を含む哺乳動物に投与された架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩が、カゼイン又はカゼイン塩などの乳タンパク質、特に牛乳タンパク質に対するアレルギーを発症する感作を強く減少させることを見出した。したがって、カゼイン又はカゼイン塩などの乳タンパク質に対するアレルギーの発症が予防される。
【００２３】
架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩は、インタクトなタンパク質、すなわち、カゼイン又はカゼイン塩に対する経口寛容を誘導することがさらに見出された。したがって、方法は、減感作療法によって、カゼイン又はカゼイン塩などの乳タンパク質に対するアレルギーを予防するために提供される。
【００２４】
乳タンパク質に対するアレルギーの予防における特に良好な結果は、トランスグルタミナーゼでの処理などの酵素処理によって架橋されているカゼイン又はカゼイン塩が使用される場合に得られている。
【００２５】
したがって、本発明による架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩は、低年齢小児、例えば、１２カ月まで、好ましくは６カ月までの子供などの素因がある人における、カゼイン又はカゼイン塩などの乳タンパク質に対するアレルギーの予防、すなわち、感作の予防（例えば、臨床関連の症状の軽減として測定される）のために使用することができる。さらに、そのような人において、カゼイン及びカゼイン塩などの乳タンパク質に対する経口寛容を誘導するために使用することができる。
【００２６】
［定義］
本明細書で使用される「低アレルゲン性」という用語は、その通常の科学的な意味を有し、アレルギー反応が全く引き起こされない、又は軽度のアレルギー反応のみが引き起こされる状況を指す。
【００２７】
本明細書で使用される「タンパク質」という用語は、少なくとも１０個のアミノ酸残基を含む線状ポリペプチドを指す。
【００２８】
本明細書で使用される「乳タンパク質」という用語は、ウシ（例えば乳牛）、ヤギ、ヒツジ若しくはラクダなどの非ヒト哺乳動物からの乳中に存在するタンパク質、又はそのようなタンパク質の塩（例えばカゼイン塩）を指す。
【００２９】
「牛乳」又は「牛乳タンパク質」という用語は、乳牛を含むウシ由来の乳又は乳タンパク質をそれぞれ指す。
【００３０】
本明細書で使用される「アレルギー」という用語は、その通常の科学的な意味を有し、免疫系の過敏性障害を指す。
【００３１】
本明細書で使用される「カゼイン」という用語は、その通常の科学的な意味を有し、α−カゼイン、β−カゼイン、κ−カゼイン又は哺乳動物の乳中に存在するようなそれらの組み合わせを指す。
【００３２】
本明細書で使用される「カゼイン塩」という用語は、その通常の科学的な意味を有し、乳中に存在するカゼインから調製される塩を指す。
【００３３】
本明細書で使用される「感作」という用語は、その通常の科学的な意味を有し、宿主を潜在的なアレルゲンに繰り返し暴露することによって、免疫系がアレルゲンにさらに応答しやすくなるプロセスを指す。
【００３４】
本明細書で使用される「アレルゲン」という用語は、その通常の科学的な意味を有し、アレルギー反応を引き起こし得る物質を指す。
【００３５】
本明細書で使用される「アレルゲン性」という用語は、その通常の科学的な意味を有し、アレルギー反応を引き起こすアレルゲンである可能性を指す。
【００３６】
本明細書で使用される「経口寛容」という用語は、その通常の科学的な意味を有し、アレルゲン又はその誘導体の経口経路を介した事前投与によってアレルゲンに対する正常な応答を発生させる中で、ヒトなどの哺乳動物の免疫系が刺激されるアクティブなプロセスを指し、「経口免疫寛容」とも呼ばれる。
【００３７】
［発明の詳細な説明］
本発明の第１の態様は、乳タンパク質に対するアレルギーの予防又は牛乳タンパク質などの乳タンパク質に対する経口寛容の誘導に使用するための架橋タンパク質に関し、架橋タンパク質が、架橋カゼイン、架橋カゼイン塩又はそれらの組み合わせから選択される。
【００３８】
架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩は、好ましくは、予防されるべきアレルギーの乳タンパク質と同種の動物に由来する。より好ましくは、乳タンパク質は牛乳由来のカゼイン又はカゼイン塩であり、架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩も牛乳に由来する。
【００３９】
驚くべきことに、架橋されているカゼイン又はカゼイン塩は、哺乳動物、特にヒトの免疫系の感作の著しい減少を示すことが見出されている。したがって、このような架橋カゼイン又はカゼイン塩タンパク質は、牛乳タンパク質などの乳タンパク質に対するアレルギーを引き起こさない。それゆえ、カゼイン又はカゼイン塩などの乳タンパク質に対するアレルギーの発症は、架橋形態のこれらのタンパク質を投与することによって予防することが可能である。
【００４０】
その上に、天然カゼイン塩で感作する前の架橋カゼイン又はカゼイン塩の経口投与は、免疫系が刺激されてカゼイン又はカゼイン塩などの乳アレルゲンに対する寛容原性応答を発生させることを意味し、経口寛容を誘導することがさらに見出された。これは、感作を予防するために使用され得るが、これらの粒子が一般に免疫系によって認識されるには小さすぎるので経口寛容を誘導しない広範囲に加水分解されたタンパク質と比較して有利である。現在の架橋カゼイン又はカゼイン塩は、感作を著しく減少させつつ、経口寛容を誘導することができた。
【００４１】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、カゼイン又はカゼイン塩の架橋はこれらのタンパク質のアレルゲン性を有意に減少させ、これらのタンパク質に対する感作及びその後のアレルギー反応を予防すると考えられる。しかしながら、架橋カゼイン又はカゼイン塩は、免疫系を活発に刺激して乳アレルゲンに対する正常な応答を発生させるいくつかの寛容化エピトープを依然として含有すると考えられる。
【００４２】
好ましい実施形態において、架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩は、カゼイン、カゼイン塩、乳清タンパク質、ラクトフェリン、トランスフェリン又はそれらの組み合わせに対するアレルギーを予防するために使用される。これらの乳タンパク質は、好ましくは、牛乳に由来する。
【００４３】
本発明による架橋タンパク質は、カゼイン、カゼイン塩又はそれらの組み合わせに対して、アレルギーを防ぐ又は経口寛容を誘導するために使用されることが好ましい。
【００４４】
本発明の好ましい実施形態では、架橋タンパク質は酵素処理、好ましくはトランスグルタミナーゼ、より好ましくは微生物トランスグルタミナーゼによって架橋されている。より好ましい実施形態では、カゼイン、カゼイン塩又はそれらの組み合わせは、トランスグルタミナーゼでの処理により架橋される。
【００４５】
トランスグルタミナーゼは、分子間又は分子内架橋をもたらす、タンパク質中のグルタミン残基のγ−カルボキシアミド基とリジンのε−アミノ基の間のアシル転移反応を触媒する酵素である。商業的には、トランスグルタミナーゼはｆ．ｉ．Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ  Ｆｏｏｄｓ（Ｊａｐａｎ）から市販されている。
【００４６】
上記を考慮すると、本発明による架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩は、好ましくは、グルタミン残基のγ−カルボキシアミド基とリジンのε−アミノ基の間の架橋を含む。
【００４７】
トランスグルタミナーゼによるカゼインの架橋におけるトランスグルタミナーゼの使用は、参照として本明細書に組み込まれる国際公開第０１／７００４２号に既に記載されている。しかしながら、この文献では、このような架橋カゼイン又はカゼイン塩は、乳タンパク質に対するアレルギーの予防、特に牛乳に由来するカゼイン又はカゼイン塩に対するアレルギーの予防に使用することができることが認識されていない。
【００４８】
架橋タンパク質、すなわち、架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩は、５〜４０重量％のカゼイン、カゼイン塩又はそれらの組み合わせを含む水溶液などの組成物を架橋酵素、好ましくはトランスグルタミナーゼに曝露することによって調製されていることが好ましい。典型的には、タンパク質１グラム当たり０．０１〜２０単位の架橋酵素、好ましくはトランスグルタミナーゼをそのような組成物に添加し、組成物中のカゼイン又はカゼイン塩と２０〜８０℃で０．５〜１２時間反応させる。
【００４９】
カゼイン又はカゼイン塩分子間の架橋の程度は、好ましくは、カゼイン又はカゼイン塩１分子当たり０．１〜２、好ましくは０．５〜１の架橋が形成される。
【００５０】
酵素的架橋の後、使用されたトランスグルタミナーゼなどの酵素は、好ましくは不活性化される。これは、架橋カゼイン又はカゼイン塩分子と酵素の混合物を一定時間、所定の温度に加熱することにより行うことができる。トランスグルタミナーゼが使用される場合、酵素は、好ましくは９０℃以上で少なくとも３分間それらを加熱することにより不活性化される。
【００５１】
好ましい実施形態において、本発明による架橋タンパク質は、３６カ月まで、好ましくは１２カ月、より好ましくは６カ月までの年齢のヒト対象に投与される。この期間中に、ヒトの免疫系は発達過程にあり、牛乳タンパク質などの乳タンパク質に対するアレルギーを発症する最も高いリスクを有する。したがって、非架橋カゼイン又はカゼイン塩の代わりに、本発明による架橋タンパク質、例えば、トランスグルタミナーゼなどの架橋酵素によって架橋されたカゼイン又はカゼイン塩のみを投与することが非常に好ましい。この方法は、ヒト対象の感作が回避され、カゼイン又はカゼイン塩などの乳タンパク質に対するアレルギーの発症が予防される。
【００５２】
さらに、架橋カゼイン又はカゼイン塩を投与することによって、カゼイン又はカゼイン塩などの乳タンパク質についての経口寛容をそのような人に誘導し得る。
【００５３】
上記は、乳タンパク質アレルギーを発症しやすい素因があるヒト対象に特に関係がある。例えば、牛乳タンパク質などの乳タンパク質アレルギーである親、兄弟又は姉妹などの親族を持つ、及び／又は皮膚炎及び／又は湿疹に苦しんでいるヒト対象。
【００５４】
本発明の第２の態様は、上述したように、乳タンパク質、特に牛乳タンパク質に対する、より詳細には牛乳由来のカゼイン又はカゼイン塩に対するアレルギーの予防のための低アレルゲン性架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩の使用に関する。架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩も牛乳に由来することが好ましい。
【００５５】
本発明の第３の態様は、上述したように、哺乳動物、好ましくはヒト、最も好ましくは、１２カ月まで、好ましくは６カ月までの人などの乳児において、乳タンパク質に対する経口寛容を誘導するための低アレルゲン性架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩の使用に関する。架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩は牛乳に由来することが好ましい。
【００５６】
本発明の第４の態様は、カゼイン及びカゼイン塩などの乳タンパク質に対するアレルギーを予防するための方法及びそのようなタンパク質に対する経口寛容を誘導するための方法であって、上述したように、ヒト対象、好ましくは３６カ月まで、好ましくは１２カ月、最も好ましくは６カ月までのヒト対象に架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩を投与することを含む方法に関する。
【００５７】
本発明の第５の態様は、カゼイン若しくはカゼイン塩などの乳タンパク質に対するアレルギーの予防又はそのようなタンパク質に対する経口寛容の誘導に使用するための栄養組成物であって、架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択される低アレルゲン性架橋タンパク質を含む栄養組成物に関する。
【００５８】
本発明による組成物は、好ましくは、１２カ月までの間、好ましくは６カ月までの年齢のヒト対象への投与に適している。したがって、栄養組成物は、好ましくは、乳児用栄養組成物として処方される。
【００５９】
栄養組成物は、架橋カゼイン又はカゼイン塩に加えて、他の一般的に使用される食品成分、好ましくは乳児用食品組成物に一般的に使用される食品成分、好ましくは低アレルゲン性乳児用食品組成物に使用される食品成分を含んでもよい。
【００６０】
栄養組成物は、乾物重量で、
１０〜１５％のタンパク質であって、その少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％が架橋タンパク質であり、前記架橋タンパク質が架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択されるタンパク質と、
５０〜６５％の炭水化物と、
２２〜３０％の脂肪と、任意選択で
１〜６％のオリゴ糖と
を含むことが好ましい。
【００６１】
好ましい実施形態では、少なくとも８０％、より好ましくは９０％、最も好ましくは、すべてのタンパク質が架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩である。炭水化物は、好ましくは、乾物重量で、２５〜６０％のラクトース、５〜１５％のデンプン、例えば、ジャガイモデンプン又はトウモロコシデンプンを含む。
【００６２】
好ましい実施形態において、使用されるデンプンは、乾物重量で、５〜２０％の加水分解されたデンプン、例えば、１５〜２０のＤＥ値（すなわち、デキストロース当量）を有するマルトデキストリン又は２０〜４０のＤＥを有するグルコースシロップを含む。
【００６３】
本出願の文脈内の脂肪という用語は、固体脂と油の両方を含む。パーム油、キャノーラ油、パーム核油、大豆油、ヒマワリ油、ココナッツ油、コーン油又はそれらの組み合わせなどの植物性油脂が使用されることが好ましい。しかし、魚油、単細胞油（例えば藻類由来）若しくは乳脂肪油又はそれらの組み合わせが使用されてもよい。また、アラキドン酸（ＡＡ）などの多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ’ｓ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）又はエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）が使用されてもよい。
【００６４】
使用されるオリゴ糖は、好ましくは、２〜８の間の重合度（ＤＰ）を有するガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）及び／又は２と６０の間のＤＰを有するフルクトオリゴ糖である。本発明の第６の態様は、架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択される架橋タンパク質を含む低アレルゲン性栄養組成物に関する。
【００６５】
低アレルゲン性栄養組成物は、乾物重量で、
１０〜１５％のタンパク質であって、その少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％が架橋タンパク質であり、前記架橋タンパク質が架橋カゼイン、架橋カゼイン塩及びそれらの組み合わせから選択されるタンパク質と、
５０〜６５％の炭水化物と、
２２〜３０％の脂肪と、任意選択で
１〜６％のオリゴ糖と
を含むことが好ましい。
【００６６】
好ましい実施形態では、少なくとも８０％、より好ましくは９０％、最も好ましくは、すべてのタンパク質が架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩である。
【００６７】
炭水化物は、好ましくは、乾物重量で、２５〜６０％のラクトース、５〜１５％のデンプン、例えば、ジャガイモデンプン又はトウモロコシデンプンを含む。
【００６８】
好ましい実施形態において、使用されるデンプンは、乾物重量で、５〜２０％の加水分解されたデンプン、例えば、１５〜２０のＤＥ値（すなわち、デキストロース当量）を有するマルトデキストリン及び／又は２０〜４０のＤＥを有するグルコースシロップを含む。
【００６９】
本出願の文脈内の脂肪という用語は、固体脂と油の両方を含む。パーム油、キャノーラ油、パーム核油、大豆油、ヒマワリ油、ココナッツ油、コーン油又はそれらの組み合わせなどの植物性油脂が使用されることが好ましい。しかし、魚油、単細胞油（例えば藻類由来）若しくは乳脂肪油又はそれらの組み合わせが使用されてもよい。また、アラキドン酸（ＡＡ）などの多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ’ｓ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）又はエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）が使用されてもよい。
【００７０】
使用されるオリゴ糖は、好ましくは、２〜８の間の重合度（ＤＰ）を有するガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）及び／又は２と６０の間のＤＰを有するフルクトオリゴ糖である。
【００７１】
架橋タンパク質は、好ましくは、酵素反応によって、好ましくはトランスグルタミナーゼでの処理によって架橋されている。
【００７２】
好ましい実施形態では、架橋タンパク質は、５〜４０重量％のカゼイン、カゼイン塩又はそれらの組み合わせを含む組成物をタンパク質１グラム当たり０．０１〜２０単位のトランスグルタミナーゼなどの架橋酵素に２０〜８０℃で０．５〜１２時間曝露することによって調製されている。
【００７３】
カゼイン又はカゼイン塩分子間の架橋の程度は、好ましくは、カゼイン又はカゼイン塩１分子当たり０．１〜２、好ましくは０．５〜１の架橋が形成される。さらに、架橋カゼイン又は架橋カゼイン塩は、好ましくは、グルタミン残基のγ−カルボキシアミド基とリジンのε−アミノ基の間の架橋を含む。
【００７４】
本発明による組成物は、好ましくは、３６カ月まで、好ましくは１２カ月、最も好ましくは６カ月までの年齢のヒト対象への投与に適している。したがって、栄養組成物は、好ましくは乳児用栄養組成物として処方される。
【００７５】
好ましい実施形態では、栄養組成物は、好ましくは、水溶液、好ましくは水で再構成した後に液体組成物を製造するのに適している粉末として処方される。最も好ましくは、本発明による組成物は、水で再構成される粉末である。
【００７６】
本発明による組成物は、ヒト、特に、３６カ月まで、好ましくは１２カ月、より好ましくは６カ月までの年齢のヒト対象を含む乳児、最も好ましくはアレルギーを発症するリスクがある又は発症しやすい素因があるヒトに毎日の栄養所要量を提供するためのものであることが好ましい。
【００７７】
以下の非限定的な実施例によって、本発明をさらに説明する。
【実施例】
【００７８】
実施例１（架橋カゼイン塩の調製）
牛乳由来のカゼインナトリウム溶液（２０％重量％カゼイン塩；７０℃での粘度３００ｍＰａ．ｓ）は、カゼイン塩１グラム当たり３単位の酵素を用いて、５０℃の温度で１時間、酵素トランスグルタミナーゼ［Ｅ．Ｃ．２．３．２．１３］と反応させた。
【００７９】
酵素は熱処理により不活性化した（それぞれ、９０〜１２０℃で３０〜２分間）。
【００８０】
酵素活性を不活性化するように処理されている架橋カゼイン塩溶液は、蒸気圧２〜３バール、ローラー速度１０〜２０ｒｐｍで動作するローラー乾燥機（１時間当たり１０〜３０ｋｇの容量）に直接適用した。ローラー乾燥機は、単一のドラム乾燥機を装備した「ＧＭＦ」製のパイロット機だった。ドラムは、直径５０ｃｍ、長さ５０ｃｍであった。
【００８１】
タンパク質濃度が低いにもかかわらず、優れたタンパク質膜がドラム上に形成された。乾燥した膜は、内蔵のナイフによって除去され、フライス盤及びふるいに供給された。架橋カゼイン塩を含む白色粉末を得た。
【００８２】
実施例２（架橋カゼイン塩及びカゼイン塩を用いたインビボ感作実験）
これらの実験では、架橋カゼイン塩及び天然カゼイン塩の感作能力及びアレルゲン性を評価するために、架橋カゼイン塩及び天然カゼイン塩をアレルギー性免疫応答の感作相及びチャレンジエフェクター相の両方で試験した。
【００８３】
２．１材料及び方法
実施例１の架橋カゼイン塩をこれらの実験において使用した。ＦｒｉｅｓｌａｎｄＣａｍｐｉｎａ  ＤＭＶからの天然カゼイン塩ＥＭ７を使用した。インビボ実験は、以下の処置群について行った：
【００８４】
【表１】
2015523378.tif 000002
【００８５】
２．２架橋カゼイン塩及び天然カゼイン塩を用いたマウスの経口感作
３週齢の特定病原体フリーの雌のＣ３Ｈ／ＨｅＯｕＪマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓａｉｎｔ  Ｇｅｒｍａｉｎ  ｓｕｒ  ｌ’Ａｒｂｒｅｓｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）から購入し、半精製した牛乳タンパク質を含まないマウス固形飼料（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、  Ｗｉｊｋ  ｂｉｊ  Ｄｕｕｒｓｔｅｄｅ、  Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）上で維持した。動物の世話及び使用は、Ｄｕｔｃｈ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓのガイドラインに従って行った。天然カゼイン塩と比較して、架橋カゼイン塩の感作能力を調べるために、マウスは、アジュバントとして１０μｇのコレラ毒素（Ｑｕａｄｒａｔｅｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｅｐｓｏｍ、ＵＫ）と混合したＰＢＳ（０．５ｍｌ、Ｃａｍｂｒｅｘ  Ｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｖｅｒｖｉｅｒｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）中で均質化した架橋カゼイン塩又はカゼイン塩２０ｍｇを用いて、０、７、１４、２１及び２８日目に鈍針で経口感作させた。非感作マウスは、ＰＢＳのみでコレラ毒素が与えられた。最後の経口感作の１週間後、皮内天然カゼイン塩チャレンジ後にアナフィラキシー反応及び体温変化を測定した。２４時間後、マウスに天然カゼイン塩又は架橋カゼイン塩５０ｍｇで経口的にチャレンジし、３０分後に血液サンプルを採取した。血液サンプルを１３，５００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、血清を−２０℃で保存した。
【００８６】
２．３アナフィラキシーショックスコア及び体温
架橋カゼイン塩及び天然カゼイン塩の残存感作能力を評価するために、皮内架橋カゼイン塩又は天然カゼイン塩チャレンジ後に、臨床的に関連する症状としてアナフィラキシー反応及び体温を測定した。ショックの重症度を確立するために、Ｌｉら（Ｌｉら、１９９９年）から出典した有効なアナフィラキシースコア表を用いた（表２）。体温の変化を測定するために、すべてのマウスは個々の体温を測定するために、移植可能な電子ＩＤトランスポンダ（Ｂｉｏ  Ｍｅｄｉｃ  Ｄａｔａ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｄｅｌａｗａｒｅ、ＵＳＡ）を与えられた。
【００８７】
【表２】
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【００８８】
２．４ｍＭＣＰ−１及びカゼイン塩特異的血清ＩｇＥの測定
アレルゲン特異的ＩｇＥの濃度は、前に説明したようにＥＬＩＳＡによって血清中で測定した（ｖａｎ  Ｅｓｃｈら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ；２００９年）。要するに、Ｍｉｃｒｏｌｏｎプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−ｏｎｅ、Ｍｏｎｒｏｅ、ＵＳＡ）をアレルゲンで４℃で１８時間被覆した。各インキュベーション工程後にプレートを洗浄した。血清サンプルを適用し、室温で２時間（ＲＴ）インキュベートした後、ビオチン標識ラット抗マウスＩｇＥとともにＲＴで９０分間インキュベートした。プレートは、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼとともにＲＴで１時間インキュベートし、ｏ−フェニレンジアミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で発色させた。反応を４Ｍ  Ｈ２ＳＯ４で停止させ、吸光度をＢｅｎｃｈｍａｒｋマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）上で４９０ｎｍで測定した。マウス肥満細胞の血清濃度プロテアーゼ１（ｍＭＣＰ−１）は、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｍｏｒｅｄｕｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｔｄ．、Ｍｉｄｌｏｔｈｉａｎ、ＵＫ）を用いて製造元のプロトコールに従って測定した。
【００８９】
２．５統計分析
血清中の肥満細胞メディエーターｍＭＣＰ−１の統計分析は、一方向ＡＮＯＶＡ及び事後ボンフェローニの多重比較検定を用いて行った。アナフィラキシーショックのスコア、特異的ＩｇＥ及び体温は、分散が有意に異なるので、クラスカル・ワリス検定、続いてダンの多重比較検定を用いて統計的に分析した。すべての統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（バージョン４．０３）を用いて行った。
【００９０】
結果
２．６アナフィラキシーショックのスコア
感作能力
皮内カゼイン塩チャレンジの後、非感作マウスはアナフィラキシーショック症状を示さず、カゼイン塩感作マウスは深刻なアナフィラキシーショック症状（スコア＝３）で応答した。天然カゼイン塩感作マウスでの感作とは対照的に、アナフィラキシーショック症状は、本発明による架橋カゼイン塩に対して感作されたマウスでは観察されなかった。
【００９１】
２．７体温
感作能力
体温は、感作マウスにおける皮内カゼイン塩チャレンジの３０分後に測定した。測定結果を表３に示す。
【００９２】
【表３】
2015523378.tif 000004
【００９３】
体温の有意な低下は、非感作マウスと比較して、カゼイン塩に対して感作されたマウスにおいて皮内チャレンジの３０分後に観察された。体温の低下は、架橋カゼイン塩に対して感作されたマウスでは観察されなかった。（Ａｎｏｖａの後、スチューデントｔ検定；ｐ＝０．０２２）。
【００９４】
これらの結果は、体温に基づいて、架橋カゼイン塩の感作能力が天然カゼイン塩と比較して飛躍的に低下していることを示している。
【００９５】
２．８ｍＭＣＰ−１血清濃度
感作能力
血清ｍＭＣＰ−１レベルを経口チャレンジの３０分後に測定した。結果を表４に示す。
【００９６】
【表４】
2015523378.tif 000005
【００９７】
ｍＭＣＰ−１レベルの上昇は、非感作マウスと比較して、天然カゼイン塩感作マウスにおいて測定された。架橋カゼイン塩に対して感作されたマウスにおける経口チャレンジは、非感作マウスと比較してｍＭＣＰ−１レベルの有意な上昇をもたらさなかった。
【００９８】
架橋カゼイン塩に対する感作の減少が観察されたかどうかを調べるために、架橋カゼイン塩感作マウスにおけるｍＭＣＰ−１血清濃度を天然カゼイン塩感作マウスにおけるｍＭＣＰ−１濃度の上昇と比較した。実際、架橋カゼイン塩感作マウスにおけるｍＭＣＰ−１濃度は、非感作マウスのレベルにまで減少した。これらの結果は、架橋カゼイン塩での感作は、腸の肥満細胞の脱顆粒を誘導しなかったことを示している。
【００９９】
２．９カゼイン塩特異的ＩｇＥ
架橋カゼイン塩感作マウスとは対照的に、カゼイン塩特異的ＩｇＥレベルの上昇は、天然カゼイン塩に対して感作されたマウスにおいて測定された。結果を図５に示す。
【０１００】
【表５】
2015523378.tif 000006
【０１０１】
架橋カゼイン塩に対して感作されたマウスにおいて、天然カゼイン塩感作マウスと比較して、特異的血清ＩｇＥの減少があった。マウスがカゼイン塩と比較して架橋カゼイン塩で感作されている場合、臨床的に関連する症状を発症するリスクの減少と組み合わせた特異的ＩｇＥレベルに基づいて、データは牛乳アレルギーのリスクの減少を指す。
【０１０２】
実施例３（架橋カゼイン塩及びカゼイン塩を用いたインビボ寛容実験）
これらの実験では、本発明による架橋カゼイン塩の天然カゼイン塩に対する経口寛容を誘導する能力を牛乳アレルギーのマウスモデルにおいて試験した。４週齢のＣ３Ｈ／ＨｅＯｕＪ雌マウスを用いた。
【０１０３】
３．１材料及び方法
寛容実験については、実施例２に記載の方法を用い、−７日から−２日まで毎日経口強制飼養により投与することによる（マウス当たり１日当たり５０ｍｇ）、ＰＢＳ、カゼイン塩、架橋カゼイン塩又は広範囲に加水分解されたカゼイン塩ＣＥ９０ＳＴＬ（ＦｒｉｅｓｌａｎｄＣａｍｐｉｎａ  ＤＯＭＯ、ＵＳＡ）での前処置（コレラ毒素の非存在下）が先行した。感作のためのカゼイン塩での経口強制飼養では、アジュバントとしてコレラ毒素を用いて、０、７、１４、２１及び２８日目にマウスに投与された。３３日目にカゼイン塩又はカゼインでの皮内チャレンジを行った。チャレンジの１時間後、急性アナフィラキシーショックスコア及び体温を測定した。３５日目に、粘膜の肥満細胞メディエーターｍＭＣＰ−１の測定のために、カゼイン塩又はカゼインでの経口チャレンジを行った。
【０１０４】
【表６】
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【０１０５】
結果
３．２アナフィラキシーショックスコア、寛容誘導
ＰＢＳで前処置された動物において、非感作動物（グループ１）はアナフィラキシーショック症状を示さなかった（アナフィラキシースコア＝０）。ＰＢＳで前処置され、カゼイン塩で感作されたマウス（グループ２）は、中程度のアナフィラキシーショック症状で応答した（スコア＝２）。また、広範囲に加水分解されたカゼイン塩で前処置され、カゼイン塩で感作された動物（グループ５）は、深刻なアナフィラキシーショック症状で応答し（スコア＝２）、インタクトなタンパク質のための寛容が発生しなかったことを示している。予想された通り、未処置のマウスのカゼイン塩での前処置（グループ３）は、カゼイン塩への感作を低下させ（スコア＝０）、経口寛容の誘導を示唆している。広範囲に加水分解されたカゼイン塩での前処置（グループ５）とは対照的に、本発明による架橋カゼイン塩での前処置（グループ４）は、動物のカゼイン塩への感作を予防し（スコア＝０）、架橋カゼイン塩がカゼイン塩についての経口寛容を誘導したことを示している。
【０１０６】
３．３体温
体温の有意な低下が、非感作マウス（グループ１）と比較して、カゼイン塩に対して感作されたＰＢＳで前処置されたマウス（グループ２）において皮内チャレンジの３０分後に観察された。この低下は、広範囲に加水分解されたカゼイン塩で前処置され、カゼイン塩で感作された動物（グループ５）においても観察され、インタクトなタンパク質のための寛容が発生しなかったことを示している。予想された通り、体温の低下は、カゼイン塩で前処置されカゼイン塩で感作された動物において（グループ３）観察されず、経口寛容の誘導を示唆している。広範囲に加水分解されたカゼイン塩での処置とは対照的に、本発明による架橋カゼイン塩で前処置され、カゼイン塩に対して感作されたマウス（グループ４）において、体温の低下は観察されず、架橋カゼイン塩がカゼイン塩についての経口寛容を誘導したことを示している。
【０１０７】
【表７】
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【０１０８】
３．４ｍＭＣＰ−１血清濃度
異なるグループにおける血清ｍＭＣＰ−１レベルは、以下の通りであった。
【０１０９】
【表８】
2015523378.tif 000009
【０１１０】
カゼイン塩で感作されたＰＢＳで前処置されたマウスのグループ（グループ２）と広範囲に加水分解されたカゼイン塩で前処置されたマウスのグループ（グループ５）の両方が、ｍＭＣＰ−１レベルの明らかな上昇を示した。これは、経口寛容がカゼイン塩のために発生しなかったことを示している。カゼイン塩で前処置されカゼイン塩で感作されたマウスのグループ（グループ３）では、ｍＭＣＰ−１レベルの深刻な上昇は観察されなかった。また、架橋カゼイン塩で前処置されカゼイン塩で感作されたマウスのグループ（グループ４）でもｍＭＣＰ−１レベルの深刻な上昇は観察されず、本発明による架橋カゼイン塩がカゼイン塩に対する経口寛容を誘導したことを示している。
【０１１１】
３．５カゼイン塩特異的ＩｇＥ
架橋カゼイン塩で前処置されたマウス（グループ４）及びカゼイン塩で前処置されカゼイン塩で感作されたマウス（グループ３）とは対照的に、広範囲に加水分解されたカゼイン塩で前処置されたマウス（グループ５）は、カゼイン塩特異的ＩｇＥレベルの上昇を示した。また、ＰＢＳで前処置されカゼイン塩で感作されたマウス（グループ２）も、カゼイン塩特異的ＩｇＥレベルの上昇を示した。
【０１１２】
【表９】
2015523378.tif 000010
【国際調査報告】
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