(57)【要約】  本発明は、スルホラファン誘導体のファミリーに属する一般式（Ｉ）を有する新規な一連の化合物及びそれの光学異性体若しくはエナンチオマー形に関するものである。本発明はまた、それの製造方法に関するものでもある。本発明はさらに、前記一連の化合物の複数の医療（医薬、ホメオパシー及び植物療法）、食品、化粧品及び食事での使用、特別には酸化的プロセスが関連する疾患及びあらゆる種類の病気若しくは損傷、又は、前記プロセスに関与しないが、例えば癌などのＮｒｆ２転写制御因子が介在するものの予防及び／又は治療でのそれらの使用に関するものでもある。当該化合物は単独で又は別の形態としてシクロデキストリンに封入されて使用することができる。2015514688.tif 000064
2015514688.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）の化合物。
【化１】
2015514688.tif 000046
［式中、
Ｒは、直鎖、分岐、環状、複素環式、芳香族環状、芳香族複素環式、飽和若しくは不飽和鎖又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２は独立に、Ｈ、直鎖、分岐、環状、複素環式、芳香族環状、芳香族複素環式、飽和及び不飽和鎖からなる群から選択され；
Ｘ及びＹは、酸素原子及び電子対から選択され、Ｘ＝酸素原子の場合にはＹ＝電子対であり、又はその逆となるようになっており；
Ｘ１は、酸素、硫黄、ＮＲ３及び＋ＮＲ４Ｒ５を含む群から選択され、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は独立に、Ｈ、直鎖、分岐、環状、飽和及び不飽和鎖からなる群から選択され；
ｎ及びｍは０以上の自然数を表し；
ｐは１以上の自然数であり；
Ｚは硫黄若しくはセレンである。］
【請求項２】
Ｙが電子対である場合にＸが酸素原子である、下記一般式（Ｉａ）の請求項１に記載の化合物。
【化２】
2015514688.tif 000047
［式中、Ｒ、Ｚ、Ｘ１、ｍ、ｎ及びｐは請求項１のように定義される。］
【請求項３】
Ｙが酸素原子である場合にＸが電子対である、下記一般式（Ｉｂ）の請求項１に記載の化合物。
【化３】
2015514688.tif 000048
［式中、Ｒ、Ｚ、Ｘ１、ｍ、ｎ及びｐは請求項１のように定義される。］
【請求項４】
Ｘ１が酸素であり、Ｚが硫黄である請求項１から３のうちのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒが飽和直鎖アルキル鎖及び分岐アルキル鎖から選択される請求項１から４のうちのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒがメチル基である請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
ｎの値がｍの値に等しい請求項１から６のうちのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
ｎ及びｍが１に等しい前請求項に記載の化合物。
【請求項９】
ｐが１から３である請求項７及び８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
下記の段階：
（１）構造（Ｖ）：
【化４】
2015514688.tif 000049
の化合物を、式（ＩＩ）：
【化５】
2015514688.tif 000050
の化合物から出発して、ヒドロキシルの良好な脱離基Ｙ１への変換（Ｙ１はハロゲン原子若しくはスルホネート基を表す。）及び有機溶媒中でのこれら良好な脱離基Ｙ１のうちの一つのアジ化ナトリウムとの求核置換の反応によって式（Ｖ）の化合物へのアジド官能基の組み込みを行うことによって得る段階；
（２）前述の段階で得られた式（Ｖ）の化合物を、有機溶媒中チオ酢酸カリウムと反応させて、一般式（ＶＩ）：
【化６】
2015514688.tif 000051
の化合物を得る段階；
（３）段階（２）で得られた化合物を、有機溶媒中、低温で塩化スルフリル及び無水酢酸と反応させて、下記構造（ＶＩＩ）：
【化７】
2015514688.tif 000052
のスルフィニルクロライドを得る段階；
（４）有機溶媒中低温で、そして立体障害塩基若しくは立体障害のない塩基の存在下に段階（３）で得られた化合物を、炭水化物Ｒ′ＯＨから誘導されるキラル２級アルコールと反応させて、それぞれ構造（ＶＩＩＩ）若しくは構造（ＶＩＩＩａ）：
【化８】
2015514688.tif 000053
の化合物を製造する段階；
（５）有機溶媒中低温で、前の段階（４）で得られた化合物（ＶＩＩＩ）もしくは化合物（ＶＩＩＩａ）を、式Ｒ６Ｍ、グリニャル試薬Ｒ６ＭｇＸ２及びＲ１Ｒ２ＮＭ（Ｒ６は、直鎖、分岐、環状、複素環式、芳香族環状、芳香族複素環式、飽和及び不飽和鎖からなる群から選択され；Ｒ１及びＲ２は一般式（Ｉ）について定義のものと同じ意味を有し；Ｘ２はハロゲン原子であり、Ｍは金属原子である。）の有機金属化合物からなる群から選択される化合物と反応させて、それぞれ下記式（ＩＸ）若しくは式（ＩＸａ）：
【化９】
2015514688.tif 000054
の生成物を得る段階；
並びに
（６）前記段階からの式（ＩＸ）若しくは（ＩＸａ）の化合物のアジド基を、下記のように基ＺＣＮに変換する段階であって、
（６′）一般式（Ｉ）においてＺが硫黄である場合、前記変換が、有機溶媒中段階（５）で得られた化合物ＩＸ若しくは化合物ＩＸａをトリアリールホスフィンと反応させ、加熱し、第２段階で二硫化炭素と反応させることで、それぞれ式（Ｘ）若しくは（Ｘａ）：
【化１０】
2015514688.tif 000055
の生成物を得る段階を含み、
又は
（６′′）一般式ＩにおいてＺがセレンである場合、前記変換が
（６′′ａ）化合物（ＩＸ）若しくは（ＩＸａ）のアジドを還元剤と反応させて、それぞれ式（ＸＩ）若しくは式（ＸＩａ）：
【化１１】
2015514688.tif 000056
の生成物を得る段階；
（６′′ｂ）式ＸＩ若しくはＸＩａの段階（６′′ａ）で得られた化合物をホルミル基移動剤と反応させて、それぞれ式ＸＩＩ若しくはＸＩＩａ：
【化１２】
2015514688.tif 000057
の化合物を得る段階；
及び
（６′′ｃ）チオホスゲン及びセレンを用い、塩基存在下及び有機溶媒中で、式ＸＩＩ若しくはＸＩＩａの段階（６′′ｂ）で得られたホルムアミドを式ＸＩＩＩ若しくはＸＩＩＩａ：
【化１３】
2015514688.tif 000058
のイソセレノシアネートに変換する段階を含む段階；
［ｎ、ｍ、ｐ、Ｘ１及びＲは請求項１でのように定義される。］を含む、請求項１から９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物を得る方法。
【請求項１１】
前記トリアリールホスフィンがトリフェニルホスフィンである前請求項に記載の方法。
【請求項１２】
段階（１）を、次のように、すなわち
（１ａ）下記式（ＩＩ）：
【化１４】
2015514688.tif 000059
の化合物のヒドロキシルのうちの一つを、良好な脱離基Ｙ１に変換して、構造（ＩＩＩ）：
【化１５】
2015514688.tif 000060
のモノヒドロキシル化誘導体を得る段階；
（１ｂ）有機溶媒中、段階（１ａ）で得られた化合物をアジ化ナトリウムと反応させて、一般式（ＩＶ）：
【化１６】
2015514688.tif 000061
の化合物を得る段階；
及び
（１ｃ）段階（１ｂ）で得られた化合物にまだ存在している式（ＩＩ）の化合物の第２のヒドロキシルを良好な脱離基Ｙ１に変換して、構造（Ｖ）：
【化１７】
2015514688.tif 000062
の化合物を得る段階
［ｎ、ｍ、ｐ及びＸ１は上記で定義の通りであり、Ｙ１はハロゲン原子若しくはスルホネート基である。］によって行う請求項１０又は１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
段階（１）を、次のように、すなわち
（１′ａ）式（ＩＩ）の化合物の２個のヒドロキシルを２個の良好な脱離基Ｙ１に変換して、構造（ＩＩＩａ）：
【化１８】
2015514688.tif 000063
の化合物（ｎ、ｍ、ｐ、Ｘ１及びＹ１は上記で定義の通りである。）を得る段階；並びに
（１′ｂ）有機溶媒を用い、段階（１′ａ）で得られた化合物の脱離基Ｙ１のうちの一つを、アジ化ナトリウムを用いてアジド官能基で置換することで一般式（Ｖ）の化合物を得る段階によって行う請求項１０又は１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
炭水化物から誘導される前記キラル２級アルコールがグルコフラノースから誘導される、請求項１０から１３のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
Ｙ１がスルホネートである請求項１０から１４のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
Ｙ１がメシレート又はトリフレートである前請求項に記載の方法。
【請求項１７】
Ｒ′ＯＨがジアセトン−Ｄ−グルコースである請求項１０から１６のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒがメチルである請求項１０から１７のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記立体障害塩基がトリアルキルアミンであり、好ましくはトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、コリジン及びジメチルアニリンを含む群から選択され、前記立体障害のない塩基が芳香族アミンであり、好ましくはピリジン、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）及びイミダゾールを含む群から選択される請求項１０から１８のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記立体障害塩基がトリエチルアミンであり、前記立体障害のない塩基がピリジンである前請求項に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１から９のうちのいずれか１項に記載の少なくとも一つの化合物を製剤中に含む組成物。
【請求項２２】
前記化合物がシクロデキストリンに封入されている前請求項に記載の組成物。
【請求項２３】
栄養組成物、ホメオパシー組成物、食事療法組成物、植物療法組成物、医薬組成物及び化粧品組成物から選択される請求項２１又は２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
前記医薬組成物がさらに、少なくとも一つの添加剤又は医薬として許容される媒体を含む前請求項に記載の組成物。
【請求項２５】
別の有効成分をさらに含む前請求項に記載の組成物。
【請求項２６】
医療で使用される請求項１から９のうちのいずれか１項に記載の化合物又は請求項２１から２５のうちのいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
酸化的プロセスが関与する疾患及び障害を予防及び治療するための前請求項に記載の化合物又は組成物。
【請求項２８】
ＮＲｆ２転写制御因子の活性化に関連する疾患及び障害を予防及び治療するための請求項２６に記載の化合物又は組成物。
【請求項２９】
乳房、皮膚、消化管、気道、結腸、胃、食道、肺、口腔、咽頭、子宮内膜及び膵臓の癌を含む群から選択される癌、好ましくは膵臓癌、結腸癌及び／又はピロリ菌の作用によって引き起こされる胃癌を予防及び治療するための請求項２６から２８のうちのいずれか１項に記載の化合物又は組成物。
【請求項３０】
好ましくはアトピー性の鼻炎、結膜炎、皮膚炎及び喘息を含む群から選択されるアトピー性疾患を予防及び治療するための請求項２６から２８のうちのいずれか１項に記載の化合物又は組成物。
【請求項３１】
好ましくはグラム陽性菌、グラム陰性菌及び酵母を含む群から選択される細菌についての抗菌剤として使用される請求項２６から２８のうちのいずれか１項に記載の化合物又は組成物。
【請求項３２】
利尿剤、緩下剤若しくは抗貧血剤組成物から選択される医薬組成物、加齢性黄斑変性に対する保護、喘息によって引き起こされる呼吸器炎症に対する保護、アレルギー性鼻炎に対する保護、慢性閉塞性肺疾患に対する保護並びにパーキンソン病及び活性酸素種によって引き起こされる変性に対する保護を行う組成物として使用される請求項２６から２８のうちのいずれか１項に記載の化合物又は組成物。
【請求項３３】
心血管疾患、好ましくはインシュリン抵抗性の糖尿病、脳血栓症、肥満、憩室症及び白内障を含む群から選択される疾患の予防及び治療で使用される請求項２６から２８のうちのいずれか１項に記載の化合物又は組成物。
【請求項３４】
急性若しくは慢性の肝臓損傷の患者における再生を向上させ、及び／又は免疫系の良好な機能に寄与するために使用される請求項２６から２８のうちのいずれか１項に記載の化合物又は組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は主として、酸化プロセスが関与するか、そのプロセスで示唆されていなくとも、Ｎｒｆ２転写制御因子を介して進行する疾患及びあらゆる種類の障害若しくは愁訴の予防及び／又は治療のための利用が関係する医薬分野に関する。本発明は、栄養、ホメオパシー、植物療法、食事療法及び／又は化粧品での使用が関係する工業分野にも適用可能である。
【背景技術】
【０００２】
疫学研究及び臨床研究によって、ブロッコリー、カリフラワー、赤キャベツ、芽キャベツ若しくはキャベツなどの十字花植物豊富な食事を摂取した群が、消化管の癌及び気道の癌などのある種の癌を発症する傾向が低いことを示す決定的な証拠が提供されている。この種類の食事が提供する化学発癌の予防及び化学療法効果は、イソチオシアネート型の官能基を含むことを構造的に特徴とする植物化学化合物の含有量が高いことに帰因するものとされている（Ｃｏｎａｗａｙ，  Ｃ．  Ｃ．；  Ｙａｎｇ，  Ｙ．  Ｍ．  Ｃｕｒｒ．  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．  ２００２，  ３，  ２３３）。
【０００３】
スルホラファン［（Ｒｓ）−１−イソチオシアナト−４−（メチルスルフィニル）−ブタン］は最初に、１９９２年にブロッコリーの抽出物から単離された。官能基イソチオシアネート及びスルホキシドを含むことを特徴とするこのキラル分子は、化学予防薬が広く示されていることから、第２相解毒酵素及びそれの高い活性の主たる誘発物質の一つである。従って、この種類の化合物及びそれの治療特性及び薬理特性を改善し得る他の同様の化合物に関して科学界の関心は、この１０年間で非常に大きいものとなってきた。
【０００４】
スルホラファンは、結腸癌を予防する上で役立つものであり、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）の作用によって引き起こされる胃癌の発達に対する予防的食事剤として作用する。最近の臨床研究及び前臨床研究によって、乳癌リスクのある女性におけるこの同じ化学予防活性が確認されている。
【０００５】
予防についての効果に加えて、スルホラファン及びある種の類縁体は、ヒト細胞系で、特に、結腸癌及び膵臓癌などのすでに確立している各種癌の治療において有効であることが確認されている。この抗癌活性は部分的には、イソチオシアネート基が存在することで、それらが細胞アポトーシスを誘発し得ることによるものである（Ｍｉｎ  Ｊｕｎｇ  Ｋｉｍ；  Ｓｏ  Ｈｅｅ  Ｋｉｍ；  Ｓｏｏ−Ｊｅｏｎｇ  Ｌｉｍ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．  ２０１０，  ３０，  ３６１１−３６１９）。従って、（Ｒ）−スルホラファンは、イン・ビトロ及びイン・ビボの両方でヒト前立腺癌細胞の増殖を阻害し、遺伝子組み換えマウスモデルでのこの種の癌の発達を遅延させる。
【０００６】
最近、スルホラファンが紫外線照射に対する保護を提供することから、日焼け損傷、ＲＯＳ（活性酸素種）によって生じる変性及び皮膚癌の発達が回避されることが示されている（Ｔａｌａｌａｙ  Ｐ．；  Ｆａｈｅｙ  Ｊ．  Ｗ．；  Ｈｅａｌｙ  Ｚ．  Ｒ．；  Ｗｅｈａｇｅ  Ｓ．  Ｌ．；  Ｂｅｎｅｄｉｃｔ  Ａ．  Ｌ．；  Ｍｉｎ  Ｃ．；  Ｄｉｎｋｏｖａ−Ｋｏｓｔｏｖａ  Ａ．  Ｔ．  ＰＮＡＳ．  ２００７，  １０４，  １７５００−１７５０５）。それはまた、喘息、アレルギー性鼻炎及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの疾患を生じさせる呼吸器炎症に対する保護作用を有する（Ｒｉｅｄｌ  Ｍ．  Ａ．；  Ｓａｘｏｎ  Ａ．；  Ｄｉａｚ−Ｓａｎｃｈｅｚ  Ｄ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２００９，  １３０，  ２４４−２５１）。
【０００７】
指摘しておくべき点として、この植物化学物質は、肥満細胞脱顆粒を阻害する能力を有することから、アトピー性の鼻炎、結膜炎及び皮膚炎などのアトピー性疾患を治療するための医薬品、自然食品及び化粧品として用いることができる（日本特許出願番号ＪＰ２００６３０１９５９）。
【０００８】
これらのスルホラファン由来イソチオシアネートに帰因する別の特徴は、グラム陽性菌及びグラム陰性菌並びに酵母に対する抗菌活性である。さらに、これらの誘導体がパーキンソン病（マウスモデルで）に対する保護作用を発揮し、特に利尿、抗貧血及び緩下剤特性も有することが示されている。スルホラファンの作用機序の分子的基礎についての研究で、この製造物が、第２相解毒酵素の刺激によって抗酸化剤として間接的に作用することが示されている。具体的には、それはＮｒｆ２細胞保護転写制御因子を活性化する。
【０００９】
Ｎｒｆ２は、多くの解毒酵素及び抗酸化酵素の発現を制御する転写制御因子である。ＫＥＡＰ１タンパク質は、それの核へ移行する能力を阻害するＮｒｆ２の細胞質リプレッサーであり、それは第２相解毒酵素の遺伝子発現を刺激する。Ｎｒｆ２は、ＫＥＡＰ１タンパク質のグリシン豊富ドメイン及びＮｒｆ２のＮＥＨ２ドメインにおける親水性領域を介してＫＥＡＰ１タンパク質と相互作用する。ＫＥＡＰ１は多くのシステイン残基を含むことから、第２相酵素誘導物質及び／又は酸化促進剤がこれらシステイン残基を酸化することができるか、共有結合的に修飾することができる。結果的に、Ｎｒｆ２がＫＥＡＰ１から分離し、核に移行する。そこに移行すると、Ｎｒｆ２は、小ＭＡＦタンパク質（筋腱膜線維肉腫（ｍｕｓｃｕｌｏ−ａｐｏｎｅｕｒｏｔｉｃ−ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ）ウィルスから派生した用語）と結合する。Ｎｒｆ２／ＭＡＦは、抗酸化反応エレメント（ＡＲＥ）に結合し、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼα２（ＧＳＴＡ２）、キノン酸化還元酵素ＮＡＤＰ（Ｈ）（ＮＱＯ１）、γ−グルタミン酸システインリガーゼ（γ−ＧＣＬＣ及びγ−ＧＣＬＭ）及びヘモオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）などの第２相解毒酵素若しくは抗酸化酵素をコードする遺伝子を標的として提供するヘテロ二量体を形成する。
【００１０】
スルホラファンは、それのチオール基を介して共有結合によってＫＥＡＰと直接相互作用する。ワサビのものと同様のスルホランである６−（メチルスルフィニル）ヘキシルイソシアネート（６−ＨＩＴＣ）は、Ｎｒｆ２の移行を刺激し、次にそれがＡＲＥを活性化する。
【００１１】
従って、そして核分子がフリーラジカルの別の分子を中和することができるだけであり、それらがそのプロセスにおいて破壊される直接抗酸化剤と対照的に、スルホラファンは酸化剤若しくは発癌物質（エピジェネティック因子）に対する保護において示唆される遺伝子を活性化することから、スルホラファンの抗酸化剤効果は、より長期的且つ効果的である（Ｙｏｕｎｇ−Ｊｏｏｎ  Ｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００３，  ３，  ７６８）。
【００１２】
さらに、最近、因子Ｎｒｆ２が増殖因子調節、シグナル伝達及び組織修復、具体的には酸化的ストレスによって誘発される肝臓の再生において重要な役割を果たすことが示された（Ｂｅｙｅｒ  Ｔ．；  Ｘｕ  Ｗ．；  Ｔｅｕｐｓｅｒ  Ｄ．；  Ｋｅｌｌｅｒ  Ｕ．；  Ｂｕｇｎｏｎ  Ｐ．；  Ｈｉｌｄｔ  Ｅ．；  Ｔｈｉｅｒｙ  Ｊ．；  Ｙｕｅｔ  Ｗａｉ  Ｋ．；  Ｗｅｒｎｅｒ  Ｓ．  Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ．  ２００８，  ２７，  ２１２−２２３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特願２００６−３０１９５９号明細書
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｃｏｎａｗａｙ，  Ｃ．  Ｃ．；  Ｙａｎｇ，  Ｙ．  Ｍ．  Ｃｕｒｒ．  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．  ２００２，  ３，  ２３３
【非特許文献２】Ｍｉｎ  Ｊｕｎｇ  Ｋｉｍ；  Ｓｏ  Ｈｅｅ  Ｋｉｍ；  Ｓｏｏ−Ｊｅｏｎｇ  Ｌｉｍ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．  ２０１０，  ３０，  ３６１１−３６１９
【非特許文献３】Ｔａｌａｌａｙ  Ｐ．；  Ｆａｈｅｙ  Ｊ．  Ｗ．；  Ｈｅａｌｙ  Ｚ．  Ｒ．；  Ｗｅｈａｇｅ  Ｓ．  Ｌ．；  Ｂｅｎｅｄｉｃｔ  Ａ．  Ｌ．；  Ｍｉｎ  Ｃ．；  Ｄｉｎｋｏｖａ−Ｋｏｓｔｏｖａ  Ａ．  Ｔ．  ＰＮＡＳ．  ２００７，  １０４，  １７５００−１７５０５
【非特許文献４】Ｒｉｅｄｌ  Ｍ．  Ａ．；  Ｓａｘｏｎ  Ａ．；  Ｄｉａｚ−Ｓａｎｃｈｅｚ  Ｄ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２００９，  １３０，  ２４４−２５１
【非特許文献５】Ｙｏｕｎｇ−Ｊｏｏｎ  Ｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００３，  ３，  ７６８
【非特許文献６】Ｂｅｙｅｒ  Ｔ．；  Ｘｕ  Ｗ．；  Ｔｅｕｐｓｅｒ  Ｄ．；  Ｋｅｌｌｅｒ  Ｕ．；  Ｂｕｇｎｏｎ  Ｐ．；  Ｈｉｌｄｔ  Ｅ．；  Ｔｈｉｅｒｙ  Ｊ．；  Ｙｕｅｔ  Ｗａｉ  Ｋ．；  Ｗｅｒｎｅｒ  Ｓ．  Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ．  ２００８，  ２７，  ２１２−２２３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
しかしながら、スルホラファンの水での溶解度が低いことが、それの相対的な化学的安定性と相まって、医薬品及びそれの臨床用途としてのそれの開発の妨げとなっていた。さらに、キラル製品に対する医薬品当局の制限があるため、スルホラファン及び／又は類縁物の両方のエナンチオマーについて、それらそれぞれの生理活性及び細胞傷害性を確認しなければならない。この意味では、特にはスルホラファン及び一般にはスルフィニルイソチオシアネート類はジアルキルスルホキシドであることから、文献に記載の方法によるエナンチオマー的に純粋な形でのそれらの合成は実利的ではない。
【００１６】
この種類の化合物を合成する上で、主要な問題点の一つが、スルホキシド基のキラリティにある。キラルスルホキシドを合成するには、主として下記の二つの方法が用いられる（Ｉ．  Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ、Ｎ．  Ｋｈｉａｒ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．  ２００３，  １０３，  ３６５１）。
【００１７】
−プロキラルスルフィドの不斉酸化：触媒として金属を使用。この方法の制限は、良好な不斉誘導は、置換基間で大きさにかなりの差がある場合にのみ生じるという点である。
−別の経路は、Ａｎｄｅｒｓｅｎの方法のＭｉｏｓｋｏｗｓｋｉ及びＳｏｌｌａｄｉｅによる変法であり、ジアステレオマー的に純粋なスルフィネートが得られるようにするもの：結晶化によって誘発される不斉変換のプロセスによる（Ｓ）−ｐ−トルエンスルフィン酸メンチル。この方法の欠点は、アリールスルホキシドの良好な不斉誘導のみが得られるという点である。
【００１８】
２００９年に、エナンチオマー的に純粋な形でスルホラファン及びある種の類縁体を得ることを可能にする新たな方法が公開された（Ｋｈｉａｒ  Ｎ．；  Ｗｅｒｎｅｒ  Ｓ．；  Ｍａｌｌｏｕｋ  Ｓ．；  Ｌｉｅｄｅｒ  Ｆ．；  Ａｌｃｕｄｉａ  Ａ．；  ＦＥＲＮＡＮＤＥＺ  Ｉ．  Ｊ．  ＯＲＧ．  ＣＨＥＭ．  ２００９，  ７４，  ６００２−６００９）。合成起源の類縁体が使えることで、研究を実施し、構造−活性の結論を確立することがより容易になる。このようにして、一連の化合物が製造され、それによって、スルフィニル硫黄の置換基の性質が活性に影響を与えることが確認された。製造されたこれらのスルホラファン誘導体は活性を示したが、活性はアリール−スルフィニル誘導体よりアルキル−スルフィニル誘導体の方が高く、その活性は、アルキル基の大きさが増すと低下することが認められた。
【００１９】
本発明においては、初めて、今日までに知られているものより水溶性が高いスルホラファン誘導体若しくは類縁体が合成され、留意しておきべき点として、親水性が高くなることで、それらの生物学的利用能が高くなる可能性がある。さらに、本発明では、本発明者らを含む研究グループが開発した、効率的でエナンチオマー的に異なる形でスルホラファンの親水性類縁体の両方の光学異性体又はエナンチオマーを初めて合成する方法（エナンチオマー的に純粋な合成）を用いる。強調すべき点として、その方法で用いられるアキラル塩基に立体指向効果があるため、この方法は、スルフィニル硫黄上での二つのエピマースルフィネートを合成するのに一つのキラルアルコール（ＤＡＧ）のみを用いる。さらに、この方法には、原料のスルフィニルクロライドの動的速度論的分割が関与する。すなわち、この方法は、両方のエナンチオマーを選択的に得られるようにするものである。合成された類縁体は、Ｎｒｆ２転写制御因子の活性化剤として、そしてある種の第２相解毒酵素の活性化におけるキラル識別として優れた特性を示した。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明は、酸化的プロセスが関係するか、このプロセスで示唆されるものではないがＮｒｆ２転写制御因子を介して進行する疾患及びあらゆる種類の障害若しくは損傷の予防若しくは治療を主として意図した医薬、ホメオパシー、植物療法、栄養、食事療法又は化粧品組成物として使用される化合物に関する。
【００２１】
第１の態様において本発明は、下記一般式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２２】
【化１】
2015514688.tif 000003
式中、
Ｒは、直鎖、分岐、環状、複素環式、芳香族環状、芳香族複素環式、飽和、不飽和鎖又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２は独立に、Ｈ、直鎖、分岐、環状、複素環式、芳香族環状、芳香族複素環式、飽和及び不飽和鎖からなる群から選択され；
Ｘ及びＹは、酸素（の原子）及び電子対から選択され、Ｘ＝酸素の場合にはＹ＝電子対であり、又はその逆（Ｘ＝電子対の場合、Ｙ＝酸素）となるようになっており；
Ｘ１は、酸素、硫黄、ＮＲ３及び＋ＮＲ４Ｒ５を含む群から選択され、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は独立に、Ｈ、直鎖、分岐、環状、飽和及び不飽和鎖からなる群から選択され；
ｎ及びｍは０以上の自然数であり；
ｐは１以上の自然数であり；
Ｚは硫黄若しくはセレンである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】１５Ｓｓ類縁体についての１Ｈ  ＮＭＲスペクトラムである。
【図２】１６Ｒｓ類縁体についての１Ｈ  ＮＭＲスペクトラムである。
【図３】解毒酵素であるグルタミン酸−システインリガーゼ（触媒サブユニット）（ＧＣＬＣ）、グルタミン酸−システインリガーゼ（調節サブユニット）（ＧＣＬＭ）及びキノン酸化還元酵素（ＮＱＯ１）についてのリアルタイムＰＣＲ試験における、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）スルホラファン及び本発明者らの研究グループで合成されたスルホラファンと比較した、１５Ｓｓ、１５Ｒｓ及び１６Ｒｓ類縁体についてのｍＲＮＡの相対的発現の値を示す図である。
【図４】ルシフェラーゼ試験における、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）スルホラファン及び本発明者らの研究グループで合成されたスルホラファンと比較した、３種類の異なる濃度（５０ｎＭ、０．５及び５．０Ｍ）の１５Ｓｓ、１５Ｒｓ及び１６Ｒｓ類縁体についてのルシフェラーゼ活性の相対的発現の値を示す図である。
【図５】実施した全ての試験の平均±標準誤差（ＳＥＭ）として表した、試験で使用される各細胞系での全ての製造物についてのＩＣ５０を示す、細胞系Ａ−５４９（ヒト肺腺癌）及びＭＲＣ−５（胎児肺線維芽細胞）についての５種類の異なる濃度（１、３、１０、３２及び１００ｍＭ）でのＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）スルホラファンと比較した４種類の異なる濃度（１０、３２、１００及び３２０ｍＭ）での化合物１５Ｓｓ及び１５Ｒｓの細胞傷害性の曲線である。
【図６】スルフィニル硫黄に結合したメチル基のプロトンからのシグナルの領域（２．８０から２．６０ｐｐｍ）が拡大された、時間ゼロ及び錯体形成から４０日後での包接錯体１６−Ｒｓ−αＣＤについての１Ｈ  ＮＭＲスペクトラム（Ｄ２Ｏ、２９８Ｋ、５００ＭＨｚ）である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
記載されている式（Ｉ）の化合物は、イソチオシアネート類及びイソセレノシアネート類のファミリーに属するスルホラファンの誘導体（又は類縁体）である。これらの化合物は、それの親水性が高いために、これまでに知られている化合物より優れた、高い生物学的利用能を示すスルホラファンの新たな水溶性類縁体を構成するものである。これらの化合物は、スルホラファンのように、構造にキラルスルフィニル基を有することから、それらは二つのエナンチオマー形で存在する。従って、本発明により、初めて、スルホラファンから誘導される各化合物の両方のエナンチオマー、硫黄に関してＲ配置のもの及びＳ立体化学のものの両方を選択的に得ることができる。
【００２５】
上記の一般的説明によれば、記載の式（Ｉ）の化合物は、Ｙが電子対である時にＸが酸素原子である、又はＸが電子対である時にＹが酸素原子であって、それぞれ下記一般式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の化合物を与える場合を網羅するものである。
【００２６】
【化２】
2015514688.tif 000004
式中、Ｒ、Ｚ、Ｘ１、ｍ及びｎは請求項１で定義されている。
【００２７】
好ましい実施形態において、Ｚは硫黄原子であり、下記一般式（Ｉａ′）及び（Ｉｂ′）の化合物を与える。
【００２８】
【化３】
2015514688.tif 000005
さらにより好ましい実施形態において、Ｘ１は酸素である。
【００２９】
別の特定の実施形態において、Ｒは直鎖、分岐、環状、複素環式、芳香族環状、芳香族複素環式、飽和若しくは不飽和鎖又は２級アミンである。本発明のさらにより好ましい実施形態において、Ｒは直鎖若しくは分岐のアルキル鎖である。別のさらにより好ましい実施形態において、アルキル鎖は飽和である。
【００３０】
別の特定の実施形態において、ｎはｍと等しく、より好ましくはｎ及びｍが等しく１からｐであり、さらにより好ましくは１から３である。さらにより好ましい場合、ｎ及びｍは１に等しい。
【００３１】
特定の実施形態において、ｐは１から３である。
【００３２】
本発明のさらにより好ましい実施形態は、Ｘ１が酸素であり、ｎ及びｍが１に等しく、ｐが１に等しく、下記式Ｉａ′（１）及びＩｂ′（１）の化合物を与える式Ｉａ′及びＩｂ′の化合物を含む。
【００３３】
【化４】
2015514688.tif 000006
本発明の別の好ましい実施形態は、Ｘ１が酸素であり、ｎ及びｍが１に等しく、ｐが２であり、下記式Ｉａ′（２）及びＩｂ′（２）の化合物を与える式Ｉａ′及びＩｂ′の化合物を含む。
【００３４】
【化５】
2015514688.tif 000007
本発明の別の好ましい実施形態は、Ｘ１が酸素であり、ｎ及びｍが１であり、ｐが３に等しく、下記式Ｉａ′（３）及びＩｂ′（３）の化合物を与える式Ｉａ′及びＩｂ′の化合物を含む。
【００３５】
【化６】
2015514688.tif 000008
本発明の別のさらにより好ましい実施形態において、Ｒはメチル基である。
【００３６】
「直鎖」という用語は、本発明において、Ｃ−Ｃ共有結合によって結合している１から１５個の数の炭素原子によって形成され、それの構造が水素結合によって補完されている鎖を指す。
【００３７】
「分岐鎖」という用語は、本発明において、その鎖を構成する原子のうちの一つに結合した少なくとも１個の別の炭素原子が存在する炭素鎖を指す。
【００３８】
「環状鎖」という用語は、本発明において、直鎖の末端炭素から水素が取り除かれ、その炭素を鎖の第１の炭素に結合させた結果と見なすことができる、３から８個の数の炭素原子によって形成された環構造を有する鎖を指す。
【００３９】
「複素環鎖」という用語は、本発明において、炭素原子及び窒素、酸素若しくは硫黄からなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子からなり、不飽和、飽和若しくは部分飽和である３から１５個の環員を有する安定な単環式、二環式若しくは三環式鎖を指す。好ましくは、４から８員を有して１個以上のヘテロ原子を有し、より好ましくは５から６員を有して１以上のヘテロ原子を有し、さらにより好ましくは１個若しくは２個のヘテロ原子を有している。本発明に関しては、複素環は単環系、二環系若しくは三環系であることができ、それは縮合環を含んでいても良い。複素環基の窒素、炭素及び硫黄原子は、酸化されていても良い。窒素原子は四級化されていても良く、複素環基は部分飽和若しくは完全飽和であっても良く、又は芳香族であっても良い。複素環の例には、テトラヒドロフラン、ジオキサン及びピペリジンなどがあり得るが、これらに限定されるものではない。
【００４０】
「芳香族環状鎖」という用語は、本発明において、芳香族性の単環系若しくは多環系からなる炭素鎖を指す。
【００４１】
「芳香族複素環鎖」という用語は、本発明において、環の１以上の原子がＮ、Ｏ若しくはＳのヘテロ原子からなる芳香族環状鎖を指す。
【００４２】
「飽和鎖」という用語は、本発明において、二重結合も三重結合もない炭素原子を指す。
【００４３】
「不飽和鎖」という用語は、本発明において、少なくとも一つの二重若しくは三重Ｃ−Ｃ結合がある炭素鎖を指す。
【００４４】
第２の態様において、本発明は、下記の段階：
（１）構造（Ｖ）：
【００４５】
【化７】
2015514688.tif 000009
の化合物を、式（ＩＩ）：
【００４６】
【化８】
2015514688.tif 000010
の化合物から、ヒドロキシルの良好な脱離基Ｙ１への変換（Ｙ１はハロゲン原子若しくはスルホネート基を表す。）及び次に有機溶媒中での前記良好な脱離基Ｙ１のうちの一つとアジ化ナトリウムとの反応によって式（Ｖ）の化合物へのアジド官能基の組み込みを行うことによって得る段階；
（２）前述の段階で得られた式（Ｖ）の化合物を、有機溶媒中チオ酢酸カリウムと反応させて、一般式（ＶＩ）：
【００４７】
【化９】
2015514688.tif 000011
の化合物を得る段階；
（３）段階（２）で得られた化合物を、有機溶媒中、低温で塩化スルフリル及び無水酢酸と反応させて、構造（ＶＩＩ）：
【００４８】
【化１０】
2015514688.tif 000012
のアジド基を有するポリエチレングリコールスルフィニルクロライドを得る段階；
（４）有機溶媒中低温で、そして立体障害塩基若しくは立体障害のない塩基の存在下に段階（３）で得られた化合物を、炭水化物Ｒ′ＯＨから誘導されるキラル２級アルコールと反応させて、それぞれ構造（ＶＩＩＩ）若しくは構造（ＶＩＩＩａ）：
【００４９】
【化１１】
2015514688.tif 000013
の化合物を製造する段階；
（５）有機溶媒中低温で、前の段階（４）で得られた化合物を、式Ｒ６Ｍ、グリニャル試薬Ｒ６ＭｇＸ２及びＲ１Ｒ２ＮＭ（Ｒ６は、直鎖、分岐、環状、複素環式、芳香族環状、芳香族複素環式、飽和及び不飽和鎖からなる群から選択され；Ｒ１及びＲ２は一般式（Ｉ）について定義のものと同じ意味を有し；Ｘ２はハロゲン原子であり、Ｍは金属原子である。）の有機金属化合物からなる群から選択される化合物と反応させて、下記式（ＩＸ）若しくは式（ＩＸａ）：
【００５０】
【化１２】
2015514688.tif 000014
の生成物を得る段階；
（６）前記段階からの式（ＩＸ）若しくは（ＩＸａ）の化合物のアジド基を、下記のように基ＺＣＮに変換する段階であって、
（６′）一般式（Ｉ）においてＺが硫黄である場合、前記変換が、有機溶媒中段階（５）で得られた化合物をトリアリールホスフィン、好ましくはトリフェニルホスフィンと反応させ、加熱し、第２段階で二硫化炭素と反応させることで、それぞれ式（Ｘ）若しくは（Ｘａ）：
【００５１】
【化１３】
2015514688.tif 000015
の生成物を得る段階を含み、
又は
（６′′）一般式（Ｉ）においてＺがセレンである場合、前記変換が
（６′′ａ）化合物（ＩＸ）若しくは（ＩＸａ）のアジドを還元剤と反応させて、それぞれ式（ＸＩ）若しくは式（ＸＩａ）：
【００５２】
【化１４】
2015514688.tif 000016
の生成物を得る段階；
（６′′ｂ）式（ＸＩ）若しくは（ＸＩａ）の段階（６′′ａ）で得られた化合物をホルミル基移動剤と反応させて、それぞれ式（ＸＩＩ）若しくは（ＸＩＩａ）：
【００５３】
【化１５】
2015514688.tif 000017
の化合物を得る段階；
及び
（６′′ｃ）チオホスゲン及びセレンを用い、塩基存在下及び有機溶媒中で、式（ＸＩＩ）若しくは（ＸＩＩａ）の段階（６′′ｂ）で得られたホルムアミドを式（ＸＩＩＩ）若しくは（ＸＩＩＩａ）：
【００５４】
【化１６】
2015514688.tif 000018
のイソセレノシアネートに変換する段階を含む段階；
を含む、あらゆる変形形態での上記の式（Ｉ）のイソチオシアネート若しくはイソセレノシアネートを得る方法に関するものであり、
ｎ、ｍ、ｐ、Ｘ１及びＲは上記で提供の意味を有し；
Ｙ１は、ハロゲン原子若しくはスルホネート、好ましくはスルホネート、非常に好ましくはメシレート若しくはトリフレートであり；
Ｒ′は炭水化物誘導体、好ましくはグルコフラノースである。
【００５５】
本明細書の文脈において、ハライドは、周期表の１７族を構成する元素（ハロゲン）から選択される元素を意味する。
【００５６】
記載の方法の特定の実施形態では、段階（１）において、最初に式（ＩＩ）の化合物の１個の水酸基のみを良好な脱離基に変換することができ、次にその基をアジ化ナトリウムとの反応によってアジドで置換し、最後に残っている他のヒドロキシル基を、第１のものについて行う方法と同様にして別の良好な脱離基に変換する。基本的には、この場合、式（Ｖ）の化合物は、次のようにして、すなわち
（１ａ）下記式（ＩＩ）：
【００５７】
【化１７】
2015514688.tif 000019
の化合物のヒドロキシルのうちの一つを、良好な脱離基Ｙ１に変換して、構造（ＩＩＩ）：
【００５８】
【化１８】
2015514688.tif 000020
のモノヒドロキシル化誘導体を得る段階；
（１ｂ）有機溶媒中、段階（１ａ）で得られた化合物をアジ化ナトリウムと反応させて、一般式（ＩＶ）：
【００５９】
【化１９】
2015514688.tif 000021
の化合物を得る段階；
及び
（１ｃ）段階（１ｂ）で得られた化合物にまだ残っている式（ＩＩ）の化合物の第２のヒドロキシルを良好な脱離基Ｙ１に変換して、構造（Ｖ）の化合物を得る段階
によって、得られるものと考えられ、
ｎ、ｍ、ｐ及びＸ１は上記で与えられた意味を有し、Ｙ１はハロゲン原子若しくはスルホネート、好ましくはスルホネート、非常に好ましくはメシレート若しくはトリフレートである。
【００６０】
記載の方法の別の特定の実施形態では、段階（１）において、化合物（ＩＩ）の２個のヒドロキシルを同時に２個の良好な脱離基に変換し、次にそのうちの一つをアジ化ナトリウムを用いてアジドで置換する。基本的に、この場合、式（Ｖ）の化合物は、下記のように、
（１′ａ）式（ＩＩ）の化合物の２個のヒドロキシルを２個の良好な脱離基Ｙ１に変換して、構造（ＩＩＩａ）：
【００６１】
【化２０】
2015514688.tif 000022
の化合物（ｎ、ｍ、ｐ、Ｘ１及びＹ１は上記で与えられた意味を有する。）を得る段階；並びに
（１′ｂ）有機溶媒中、段階（１′ａ）で得られた化合物の脱離基Ｙ１のうちの一つを、アジ化ナトリウムを用いてアジド官能基で置換することで一般式（Ｖ）の化合物を得る段階
によって得られると考えられる。
【００６２】
好ましくは、前述した式（ＩＩ）及び（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）及び（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）及び（ＩＸａ）、（Ｘ）及び（Ｘａ）、（ＸＩ）及び（ＸＩａ）、（ＸＩＩ）及び（ＸＩＩａ）並びに（ＸＩＩＩ）及び（ＸＩＩＩａ）の全ての化合物において、ｎ及びｍは１に等しく、ｐは１、２若しくは３に等しく、Ｘ１は酸素である。
【００６３】
やはり好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）及び（Ｖ）の化合物において、Ｙ１はメシレートである。
【００６４】
好ましくは、化合物ＶＩＩＩ及び化合物ＶＩＩＩａにおいて、Ｒ′はジアセトン−Ｄ−グルコースである。
【００６５】
やはり好ましくは、化合物（ＩＸ）及び（ＩＸａ）、（Ｘ）及び（Ｘａ）、（ＸＩ）及び（ＸＩａ）、（ＸＩＩ）及び（ＸＩＩａ）並びに（ＸＩＩＩ）及び（ＸＩＩＩａ）において、Ｒはメチルである。
【００６６】
好ましくは、段階（４）でエナンチオマーを得るための立体障害塩基はトリアルキルアミンであり、好ましくはトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、コリジン及びジメチルアニリンからなる群から選択され、より好ましくはそれはトリエチルアミンである。段階（４）でエナンチオマーを得るための立体障害のない塩基に関しては、それは好ましくは芳香族アミンであり、好ましくはピリジン、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）及びイミダゾールからなる群から選択され、より好ましくはそれはピリジンである。
【００６７】
この化合物ファミリー、具体的には段階６′及び６′′の最終生成物は、Ｎｒｆ２転写制御因子を活性化する能力を有することで生理活性を示すことが立証されており、それにより、それらを医療分野で、特には非常に多様な疾患及び障害の予防若しくは治療に用いることが可能となる。
【００６８】
従って、本発明の第３の態様は、製剤中にあらゆる変形形態で少なくとも一つの化合物を含む組成物からなる。この組成物は、式（Ｉ）の化合物を組み合わせる成分に応じて、医薬、栄養、化粧品、ホメオパシー、食事療法及び／又は植物療法の形態のものであることができる。
【００６９】
次に、その組成物は、式（Ｉ）の化合物に加えて、例えば、少なくとも一つの添加剤若しくは医薬として許容される媒体、及び／又は少なくとも別の医薬として許容される活性成分又は当業界で公知の別の賦形剤を含むことで、個体が消化することができる医薬組成物又は医薬品を与えることができる。前記医薬組成物の製造は、当業者に公知の従来の方法によって行うことができる。治療法での使用の場合、式（Ｉ）の化合物は好ましくは、医薬組成物、即ち希釈剤及び担体などの通常の医薬添加剤を除き、そして通常の用量レベルで有毒であると見なされる材料を含まない医薬として許容される純度レベルを有するものである。活性成分の純度レベルは、好ましくは５０％より上、より好ましくは７０％より上、さらにより好ましくは９０％より上である。好ましい実施形態において、それは９５％より高い式（Ｉ）の化合物である。
【００７０】
前記組成物で使用可能な医薬として許容される添加剤及び媒体は、当業者に公知であり、治療組成物の製造で通常用いられる添加剤及び媒体である。
【００７１】
本発明で記載の化合物並びにそれを含む医薬組成物は、他の別の薬剤又は活性成分と併用して、併用療法を提供することができる。前記の別の薬剤は、同じ医薬組成物の一部を形成していても良く、或いは式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物の投与と同時若しくは非同時に投与される別個の組成物の形態で供給されるものであっても良い。
【００７２】
別の特定の実施形態において、前記医薬組成物は、固体形態で、又は医薬として許容される希釈剤中の水系懸濁液の形態で調製される。本発明によって提供される治療組成物は、いずれか好適な投与経路によって投与することができることから、前記組成物は、選択される投与経路に適した医薬形態で製剤される。特定の実施形態において、本発明によって供給される治療組成物の投与は、経口、局所、直腸若しくは非経口経路（皮下、腹腔内、皮内、筋肉、静脈投与など）によって行われる。
【００７３】
同様に、式（Ｉ）のスルホラファン誘導体を含む栄養組成物は、生理活性成分として、機能性食品若しくは飲料の組成物用に食品の強化で一般的に使用される成分を含むことができる。強化は、健康増進及び収縮疾患のリスク低減などの特定の機能を実現するために、液体若しくは再生される粉末形態での食品若しくは飲料（水、ハーブティー、ジュース、ゼリーなど）に外部栄養素を加える操作と理解すべきである。それに関する限り、ハーブティーは、注入、浸軟、混合飲料などを包含するものである。
【００７４】
さらに、式（Ｉ）のスルホラファン誘導体を含む化粧品組成物は、クリーム、ローション、液体若しくは乳濁液、成形（ｃｏｍｐａｃｔｅｄ）粉末若しくはルースパウダー、乾燥バー（ｄｒｙ  ｂａｒ）、ゲル及びオイル、美顔パック、石鹸及び日焼け止め（防水性及び耐水）から選択される。
【００７５】
本発明の第４の態様は、あらゆる実施形態及び代替形態での本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物並びにそれを含む組成物の医療における使用である。本発明から理解すべき点として、医療の文脈でのこれらの使用のいずれも同様に、医療で使用される本明細書に記載の一般式（Ｉ）の化合物、並びに疾患の予防及び治療のための当該化合物の方法、例えば投与に関するものである。さらに本発明は、これまで議論してきたあらゆる場合で、医療で使用される組成物を製造する上での一般式（Ｉ）の化合物の使用を包含する。これらの使用において、一般式（Ｉ）の化合物は、単独で用いることができるか、シクロデキストリンに封入して安定性、水溶解度及び生物学的利用能を高めることもできる。
【００７６】
好ましい実施形態において、前記化合物及び前記組成物は、酸化的プロセスが関与する（即ち、それが生じるかそれに関連する）疾患及び障害の予防及び治療に用いられる。別の好ましい実施形態において、前記化合物及び前記組成物は、Ｎｒｆ２転写制御因子の活性化が関連する疾患及び障害の予防及び治療に用いられる。この場合、上記の酸化的プロセスがあっても良い。
【００７７】
好ましくは、前記化合物及び前記組成物は、癌、より好ましくは乳癌、皮膚癌、消化管及び気道の癌、結腸癌、胃癌、食道の癌、肺癌、口腔癌、咽頭癌、子宮内膜癌及び膵臓癌を含む群から選択される癌の予防及び治療で用いられる。より好ましくは、それは、膵臓癌、結腸癌及び／又はピロリ菌の作用によって引き起こされる胃癌の予防及び治療に用いられる。
【００７８】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物及びそれを含む組成物は、アトピー性疾患、より好ましくはアトピー性の鼻炎、結膜炎、皮膚炎及び喘息を含む群から選択される疾患の予防及び治療に用いられる。
【００７９】
本発明の別の特定の実施形態において、前記化合物及び前記組成物は、好ましくはグラム陽性菌及びグラム陰性菌並びに酵母を含む群から選択される細菌についての抗菌剤として用いられる。
【００８０】
やはり好ましくは、前記化合物及び前記組成物は、利尿剤、緩下剤若しくは抗貧血剤組成物から選択される医薬組成物、加齢性黄斑変性に対する保護のための、喘息によって引き起こされる呼吸器炎症に対する保護のための、アレルギー性鼻炎に対する保護のための、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に対する保護のための、及びパーキンソン病及びＲＯＳ（活性酸素種）によって引き起こされる変性に対する保護のための組成物として使用される。
【００８１】
最後に、本発明は、心血管疾患、糖尿病、脳血栓症、肥満、憩室症及び白内障を含む群から選択される疾患の予防及び治療におけるこれら一般式（Ｉ）の化合物及びそれを含む組成物の使用に関する。さらに、それらは、好ましくは糖尿病患者での心臓の病気のリスクを低下させ、免疫系の適切な機能に寄与することができる。
【００８２】
本発明の化合物の使用は、式（Ｉ）の化合物又はそれの組み合わせを単独で用いるか、他の治療若しくは何らかの医療処置と組み合わせて用いるプロトコールでのそれの使用に適合するものである。
【００８３】
本明細書の説明及び特許請求の範囲を通じて、「含む」という言葉及びそれの変形型は、他の技術的特徴、添加剤、成分又は段階を排除するものではない。当業者には、一部には本明細書の説明及び一部には本発明の実施から、本発明の他の目的、利点及び特徴が明らかになろう。下記の実施例及び図面は、説明を目的として提供されるものであって、本発明を限定するものではない。
【００８４】
図面の説明
図１：１５Ｓｓ類縁体についての１Ｈ  ＮＭＲスペクトラム。
【００８５】
図２：１６Ｒｓ類縁体についての１Ｈ  ＮＭＲスペクトラム。
【００８６】
図３：解毒酵素であるグルタミン酸−システインリガーゼ（触媒サブユニット）（ＧＣＬＣ）、グルタミン酸−システインリガーゼ（調節サブユニット）（ＧＣＬＭ）及びキノン酸化還元酵素（ＮＱＯ１）についてのリアルタイムＰＣＲ試験における、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）スルホラファン及び本発明者らの研究グループで合成されたスルホラファンと比較した、１５Ｓｓ、１５Ｒｓ及び１６Ｒｓ類縁体についてのｍＲＮＡの相対的発現の値を示す図。
【００８７】
図４：ルシフェラーゼ試験における、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）スルホラファン及び本発明者らの研究グループで合成されたスルホラファンと比較した、３種類の異なる濃度（５０ｎＭ、０．５及び５．０Ｍ）の１５Ｓｓ、１５Ｒｓ及び１６Ｒｓ類縁体についてのルシフェラーゼ活性の相対的発現の値を示す図。
【００８８】
【化２１】
2015514688.tif 000023
図５：実施した全ての試験の平均±標準誤差（ＳＥＭ）として表した、試験で使用される各細胞系での全ての製造物についてのＩＣ５０を示す、細胞系Ａ−５４９（ヒト肺腺癌）及びＭＲＣ−５（胎児肺線維芽細胞）についての５種類の異なる濃度（１、３、１０、３２及び１００ｍＭ）でのＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）スルホラファンと比較した４種類の異なる濃度（１０、３２、１００及び３２０ｍＭ）での化合物１５Ｓｓ及び１５Ｒｓの細胞傷害性の曲線。各図は、少なくとも三つの独立の実験を表し、それらの中で、そして各ＩＣ５０値についての両方で、統計解析の結果はｐ値を用いるｔ検定に関して示されている。ｔ検定は、二つの値が統計的見地から有意差を有するか否かを示すものである。０．０５を超えるｐ値は統計的に有意とは見なされず、記号によって示されておらず、０．０５より低いｐ値は統計的有意性を示し、星印（＊）によって示され、次にｐが０．０１より低い場合、それは２個の星印で示され、それが０．００１より低い場合には３個で示される。
【００８９】
【表１】
2015514688.tif 000024
図６：スルフィニル硫黄に結合したメチル基のプロトンからのシグナルの領域（２．８０から２．６０ｐｐｍ）が拡大された、時間ゼロ及び錯体形成から４０日後での包接錯体１６−Ｒｓ−αＣＤについての１Ｈ  ＮＭＲスペクトラム（Ｄ２Ｏ、２９８Ｋ、５００ＭＨｚ）。
【実施例】
【００９０】
以下、本発明に記載の化合物の特異性及び抗力を示す本発明者らが実施したいくつかの試験によって本発明を説明する。
【００９１】
［実施例１］．２個のヒドロキシル基のうちの１個の良好な脱離基への選択的変換と、次にモノアジドの形成及び２番目のヒドロキシルの良好な脱離基への最終変換による式（Ｖ）の化合物を得る方法
１．１．選択的メシル化の一般的方法
アルゴン雰囲気下及び０℃で、相当するエチレングリコール（１当量）及びＮＥｔ３（０．８モル当量）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液にメタンスルホニルクロライド（１当量）を滴下する。０℃で１時間後、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で処理し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。有機残留物を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水して、真空留去する。得られた残留物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨを２０：１比で用いるカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【００９２】
メタンスルホン酸５−ヒドロキシ−３−オキサペンチル（１）
【００９３】
【化２２】
2015514688.tif 000025
一般法に従って、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中ジエチレングリコール（２１．２２ｇ、１８．９８ｍＬ、２００ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ３（１６．１９ｇ、２２．３０ｍＬ、１６０ｍｍｏｌ）から、これを製造する。（１）の化合物１２．４ｇ（３３％）が黄色油状物として得られる。
【００９４】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ４．３２−４．３０（ｍ、２Ｈ）、３．７１−３．６９（ｍ、２Ｈ）、３．６７−３．６５（ｍ、２Ｈ）、３．５５−３．５３（ｍ、２Ｈ）、３．００（ｓ、３Ｈ）、２．７４（ｓ、１Ｈ）。
【００９５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７２．６、６９．２、６８．８、６１．５、３７．６。
【００９６】
ＨＲＭＳ：Ｃ５Ｈ１３Ｏ５Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋１８５．０４８４、実測値：１８５．０４７８（−３．１ｐｐｍ）。
【００９７】
メタンスルホン酸８−ヒドロキシ−３，６−ジオキサオクチル（２）
【００９８】
【化２３】
2015514688.tif 000026
一般法に従って、ＴＨＦ（１２５ｍＬ）中トリエチレングリコール（３０．０３ｇ、２６．７０ｍＬ、２００ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ３（１６．１９ｇ、２２．３０ｍＬ、１６０ｍｍｏｌ）から、これを製造する。２の化合物１３．６９ｇ（３０％）が青色様油状物として得られる。
【００９９】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ４．３１−４．２９（ｍ、２Ｈ）、３．７１−３．７０（ｍ、２Ｈ）、３．６５−３．６３（ｍ、２Ｈ）、３．６２−３．５８（ｍ、４Ｈ）、３．５２−３．５０（ｍ、２Ｈ）。
【０１００】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７２．５、７０．６、７０．２、６９．２、６８．９、６１．６、３７．６。
【０１０１】
ＨＲＭＳ：Ｃ７Ｈ１７Ｏ６Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋２２９．０７４６、実測値：２２９．０７４１（−２．１ｐｐｍ）。
【０１０２】
１．２．モノアジドの形成方法
モノアジドの一般的形成方法
アジ化ナトリウム（１当量）を、相当するモノメシレート（１当量）のＥｔＯＨ中溶液に加える。反応混合物を９０分間加熱還流する。この時間終了後、反応液を放置して室温とし、飽和ＮａＣｌ溶液で中和する。水相をエチルエーテルで抽出し、合わせた有機抽出液を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下に留去する。それを、溶離液としてＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ（１：１）を用いるカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０１０３】
５−アジド−３−オキサペンタノール（３）
【０１０４】
【化２４】
2015514688.tif 000027
一般法に従って、ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中のモノメシレート１（１１．６１ｇ、６３．０６ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（４．５１ｇ、６９．３６ｍｍｏｌ）から、これを製造する。アジド３が、６４％（５．２６ｇ）の収率で黄色様液体として得られる。
【０１０５】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ３．７５−３．７０（ｍ、２Ｈ）、３．６８−３．６６（ｍ、２Ｈ）、３．６０−３．５８（ｍ、２Ｈ）、３．３９（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．３５（ｓ、１Ｈ）。
【０１０６】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７２．４、６９．９、６１．７、５０．７。
【０１０７】
８−アジド−３，６−ジオキサオクタノール（４）
【０１０８】
【化２５】
2015514688.tif 000028
一般法に従って、ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中のモノメシレート２（１１．５０ｇ、５０．３８ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（３．２８ｇ、５０．３８ｍｍｏｌ）から、これを製造する。アジド４が、６６％（５．８１ｇ）の収率で黄色様液体として得られる。
【０１０９】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ３．７４−３．７０（ｍ、２Ｈ）、３．６８−３．６５（ｍ、６Ｈ）、３．６２−３．６０（ｍ、２Ｈ）、３．３９（ｔ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．３６（ｓ、１Ｈ）。
【０１１０】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７２．６、７０．６、７０．３、７０．０、６１．６、５０．６。
【０１１１】
ＨＲＭＳ：Ｃ６Ｈ１４Ｎ３Ｏ３の計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋１７６．１０３３；実測値：１７６．１０３５（−１．２ｐｐｍ）。
【０１１２】
１．３．メシル化の方法
メシル化の一般法
アルゴン雰囲気下及び０℃で、相当するアジド（１当量）及びＮＥｔ３（１．２当量）のＴＨＦ中溶液にメタンスルホニルクロライド（１．５当量）を滴下する。室温で５時間後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌで中和し、それをＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄する。有機相から溶媒を除去することで得られる残留物を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：１混合物を用いるカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０１１３】
メタンスルホン酸５−アジド−３−オキサペンチル（５）
【０１１４】
【化２６】
2015514688.tif 000029
一般法に従って、メタンスルホニルクロライド（３．９８ｍＬ、５１．４５ｍｍｏｌ）を滴下して、ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の５−アジド−３−オキサペンタノール３（４．５ｇ、３４．３０ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ３（５．７３ｍＬ、４１．１６ｍｍｏｌ）から、これを製造する。化合物５が定量的収率で黄色様油状物として得られる。
【０１１５】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ４．３５−４．３３（ｍ、２Ｈ）、３．７６−３．７４（ｍ、２Ｈ）、３．６６（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．３７（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．０３（ｓ、３Ｈ）。
【０１１６】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７０．２、６９．０、５０．７、３７．６。
【０１１７】
ＨＲＭＳ：Ｃ５Ｈ１２Ｎ３Ｏ４Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋２１０．０５４９、実測値：２１０．０５３５（−６．４ｐｐｍ）。
【０１１８】
メタンスルホン酸８−アジド−３，６−ジオキサオクチル（６）
【０１１９】
【化２７】
2015514688.tif 000030
一般法に従って、メタンスルホニルクロライド（２．９８ｍＬ、３８．５４ｍｍｏｌ）を滴下することで、ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の８−アジド−３，６−ジオキサオクチル−１−オール４（４．５ｇ、２５．６９ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ３（４．３０ｍＬ、３０．８３ｍｍｏｌ）から、これを製造する。化合物６が、定量的収率で（９２％）黄色様液体として得られる。
【０１２０】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ４．３３−４．３２（ｍ、２Ｈ）、３．７５−３．７３（ｍ、２Ｈ）、３．６６−３．６０（ｍ、６Ｈ）、３．３４（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．０２（ｓ、３Ｈ）。
【０１２１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７０．７、７０．６、７０．１、６９．３、６９．１、５０．７、３７．７。
【０１２２】
ＨＲＭＳ：Ｃ７Ｈ１６Ｎ３Ｏ５Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋２５４．０８１１、実測値：２５４．０８１１（０．１ｐｐｍ）。
【０１２３】
［実施例２］．２個のヒドロキシル基の良好な脱離基への１段階変換とそれに続くモノアジドの形成による式（Ｖ）の化合物の取得方法
２．１．１段階での２個のヒドロキシル基のメシル化の一般的方法
アルゴン雰囲気下及び０℃で、相当するエチレングリコール（１当量）及びＮＥｔ３（２．１モル当量）のＴＨＦ中溶液に、メタンスルホニルクロライド（２．１当量）を滴下する。０℃で１時間後、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で処理し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。有機残留物を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空留去する。
【０１２４】
ジメタンスルホン酸３，６，９−トリオキサウンデシル（７）
【０１２５】
【化２８】
2015514688.tif 000031
一般法に従って、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中、テトラエチレングリコール（２５．００ｇ、２２．３２ｍＬ、１２８．７ｍｍｏｌ）、２．１当量のＮＥｔ３（３７．６７ｍＬ、２７０．３ｍｍｏｌ）及び２．１当量のメシルクロライド（２０．９２ｍＬ、２７０．３ｍｍｏｌ）から、これを製造する。３の化合物４３．００ｇが、定量的収率で（９５％）黄色油状物として得られる。
【０１２６】
２．２．モノアジドの一般的形成方法
相当するモノメシレートからのモノアジド形成について実施例１に記載の方法と同様の方法に従って、これを製造する。
【０１２７】
メタンスルホン酸１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデシル（８）
【０１２８】
【化２９】
2015514688.tif 000032
一般法に従って、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中、ジメタンスルホン酸３，６，９−トリオキサウンデシル７（４６．１２ｇ、１３１．６２ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（８．５５７ｇ、１３１．６２ｍｍｏｌ）からこれを製造する。水１００ｍＬを反応混合物に加え、それをＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、減圧下に溶媒留去する。粗反応生成物を、ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ１：３混合物を用いるカラムクロマトグラフィーによって精製して、黄色様液体を得る（３０％）。
【０１２９】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ４．３９−４．３７（ｍ、２Ｈ）、３．７８−３．７６（ｍ、２Ｈ）、３．６８−３．６５（ｍ、１０Ｈ）、３．３９（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．０７（ｓ、３Ｈ）。
【０１３０】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７０．９、７０．８、７０．７、７０．２、６９．４、６９．２、５０．９、３７．８。
【０１３１】
ＨＲＭＳ：Ｃ９Ｈ２０Ｎ３Ｏ６Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋２９８．１０８１、実測値：２９８．１０７３（２．７ｐｐｍ）。
【０１３２】
［実施例３］．チオ酢酸エステルの形成方法
チオ酢酸エステルの一般的形成方法
チオ酢酸カリウム（１．２当量）を、相当するアジド誘導体のメタンスルホン酸エステル（１当量）のＤＭＦ中溶液に室温で少量ずつ加える。反応混合物を終夜撹拌し、それを水で洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出する。有機残留物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液及び飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、濾過し、留去する。粗反応生成物をカラムクロマトグラフィー、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：２によって精製する。
【０１３３】
チオ酢酸５−アジド−３−オキサペンチル（９）
【０１３４】
【化３０】
2015514688.tif 000033
一般的方法に従って、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の５（６．５ｇ、３１．０７ｍｍｏｌ）及びチオ酢酸カリウム（４．２６ｇ、３７．２８ｍｍｏｌ）から、これを合成する。９の化合物４．４６ｇ（７６％）が暗赤色液体として得られる。
【０１３５】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ３．６５（ｄｔ、Ｊ＝５．７及び１３．６Ｈｚ、４Ｈ）、３．３９（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．１２（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）。
【０１３６】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１９５．６、６９．９、６９．８、５０．８、２９．０。
【０１３７】
ＨＲＭＳ：Ｃ６Ｈ１２Ｎ３Ｏ２Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋１９０．０６５６、実測値：１９０．０６５０（３．０ｐｐｍ）。
【０１３８】
チオ酢酸８−アジド−３，６−ジオキサオクチル（１０）
【０１３９】
【化３１】
2015514688.tif 000034
一般的方法に従って、ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の６（５．００ｇ、１９．７４ｍｍｏｌ）及びチオ酢酸カリウム（２．７１ｇ、２３．６９ｍｍｏｌ）から、これを合成する。１０の化合物３．８０ｇ（８３％）が、暗赤色液体として得られる。
【０１４０】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ３．６５（ｔ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．６３−３．６０（ｍ、４Ｈ）、３．５９（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．３６（ｔ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．０７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ）。
【０１４１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１９５．５、７０．７、７０．５、７０．２、６９．９、５０．８、３０．６、２９．０。
【０１４２】
ＨＲＭＳ：Ｃ８Ｈ１６Ｎ３Ｏ３Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋２３４．０９１２、実測値：２３４．０９１４（０．７ｐｐｍ）。
【０１４３】
［実施例４］．スルフィニルクロライドの合成方法
スルフィニルクロライドの一般的合成方法
アルゴン雰囲気下−２０℃で相当するチオ酢酸エステル（１当量）のＣＨ２Ｃｌ２中溶液に、無水酢酸（１当量）及び塩化スルフリル（２当量）を加える。反応混合物を−５℃で１時間撹拌し、その時間終了後に溶媒を留去し、残留物を真空乾燥する。得られた粗スルフィニルクロライドをアルゴン雰囲気下に置き、直ちにスルフィン酸エステルの製造に用いる。
【０１４４】
５−アジド−３−オキサペンタンスルフィニルクロライド（１１）
【０１４５】
【化３２】
2015514688.tif 000035
通常の方法により、チオ酢酸５−アジド−３−オキサペンチル９（１．００ｇ、５．２８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）、無水酢酸（０．５ｍＬ、５．２８ｍｍｏｌ）及び塩化スルフリル（０．８５ｍＬ、１０．５７ｍｍｏｌ）中溶液から、これを製造する。スルフィニルクロライドが、定量的収率で暗緑色液体（１．０２ｇ）として得られる。
【０１４６】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ４．００（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．７１−３．６５（ｍ、４Ｈ）、３．３８（ｔ、Ｊ＝４．９Ｈｚ）。
【０１４７】
８−アジド−３，６−ジオキサオクタンスルフィニルクロライド（１２）
【０１４８】
【化３３】
2015514688.tif 000036
通常の方法により、チオ酢酸８−アジド−３，６−ジオキサオクチル１０（１．５０ｇ、６．４３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）、無水酢酸（０．６１ｍＬ、６．４３ｍｍｏｌ）及び塩化スルフリル（１．０３ｍＬ、１２．８６ｍｍｏｌ）中溶液から、これを製造する。
【０１４９】
［実施例５］．硫黄に関してＳ配置のＤＡＧスルフィン酸エステルのジアステレオマー選択的合成方法
硫黄に関してＳ配置のＤＡＧスルフィン酸エステルの一般的ジアステレオマー選択的合成方法
−７８℃でアルゴン雰囲気下に、１，２：５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−グルコフラノース（ＤＡＧ）（１当量）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３．６当量）の脱水トルエン中溶液に、相当するスルフィニルクロライド（３．５当量）を加える。この同じ温度で２時間撹拌後、反応混合物に１Ｍ  ＨＣｌを加え、それをＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、有機抽出液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液及び飽和ＮａＣｌ溶液の順で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水する。溶媒を減圧下に留去し、得られた残留物を、溶離液として２−プロパノール／ヘキサン（１：１０）を用いるカラムクロマトグラフィーによって精製して、支配的なジアステレオマーとして硫黄に関してＳ配置のスルフィン酸エステルを得る。
【０１５０】
（Ｓ）−５−アジド−３−オキサペンタンスルフィン酸１，２：５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−グルコフラノシル（１３−Ｓｓ）
【０１５１】
【化３４】
2015514688.tif 000037
一般的方法に従って、（ＤＡＧ）（０．５ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．２０ｍＬ）及び５−アジド−３−オキサペンタンスルフィニルクロライド１１（６．７２ｍｍｏｌ）から、これを合成する。そうして、スルフィン酸エステルが収率９７％で得られる。重クロロホルム中での粗反応生成物の分析により、生成する２種類のジアステレオマーが９１：９の比率であることが明らかになる。カラムクロマトグラフィーによる精製後に、１３−Ｓｓが、褐色油状物の形態で支配的ジアステレオマーとして得られる（０．７ｇ、８７％）。
【０１５２】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ５．８９（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．７５（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．６２（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．３０−４．２３（ｍ、２Ｈ、Ｈ４及びＨ５）、４．０８（ｄｄ、Ｊ＝５．９及び６．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．９９（ｄｄ、Ｊ＝３．５及び５．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．９０−３．８２（ｍ、２Ｈ）、３．６８−３．６０（ｍ、２Ｈ）、３．４２−３．３４（ｍ、２Ｈ）、３．１５−３．１０（ｍ、１Ｈ）、２．３０−２．９４（ｍ、１Ｈ）、１．５０（ｓ、３Ｈ）、１．４１（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｓ、３Ｈ）、１．３０（ｓ、３Ｈ）。
【０１５３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１１２．６、１０９．４、１０５．２、８３．８、８０．５、７９．８、７２．５、７０．４、６７．０、６４．５、５８．２、５０．７、２６．９、２６．８、２６．４、２５．４。
【０１５４】
ＨＲＭＳ：Ｃ１６Ｈ２７Ｎ３Ｏ８ＮａＳの計算値：［Ｍ＋Ｎａ］＋４４４．１４１７、実測値：４４４．１４０４（−２．８ｐｐｍ）。
【０１５５】
［α］２５Ｄ：−１５．３（約１．０、クロロホルム）。
【０１５６】
（Ｓ）−８−アジド−３，６−ジオキサオクタンスルフィン酸１，２：５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−グルコフラノシル（１４−Ｓｓ）
【０１５７】
【化３５】
2015514688.tif 000038
一般的方法に従って、（ＤＡＧ）（６６３．３７ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．６０ｍＬ）及び８−アジド−３，６−ジオキサオクタンスルフィニルクロライド１２（８．９２ｍｍｏｌ）から、これを合成する。スルフィン酸エステルが収率７８％で得られる。重クロロホルム中での粗反応生成物の分析により、生成する２種類のジアステレオマーが６８：３２の比率であることが明らかになる。カラムクロマトグラフィーによる精製後に、１４−Ｓｓが、黄色液体の形態で支配的ジアステレオマーとして得られる（５７８ｍｇ、５４％）。
【０１５８】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ５．８９（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．７５（ｄ、Ｊ＝２．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．６１（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．３０−４．２４（ｍ、２Ｈ、Ｈ４及びＨ５）、４．０８（ｄｄ、Ｊ＝６．０及び８．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．９９（ｄｄ、Ｊ＝５．２及び８．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．９０−３．８３（ｍ、２Ｈ）、３．６９−３．６３（ｍ、６Ｈ）、３．３８（ｔ、Ｊ＝５．０、２Ｈ）、３．１４（ｄｄｄ、Ｊ＝５．３、８．１及び１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．９５（ｄｄｄ、Ｊ＝４．５、５．２及び１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．５０（ｓ、３Ｈ）、１，４２（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｓ、３Ｈ）、１．３１（ｓ、３Ｈ）。
【０１５９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１１２．６、１０９．４、１０５．２、８３．８、８０．５、７９．８、７２．５、７１．０、７０．７、７０．３、６６．９、６４．６、５８．４、５０．８、２６．９、２６．８、２６．４、２５．４。
【０１６０】
ＨＲＭＳ：Ｃ１８Ｈ３２Ｎ３Ｏ９Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋４６６．１８６２、実測値：４６６．１８５９（０．６ｐｐｍ）。
【０１６１】
［α］２５Ｄ：−３６．１（約１．０、クロロホルム）。
【０１６２】
［実施例６］．硫黄に関してＲ配置のＤＡＧスルフィン酸エステルのジアステレオマー選択的合成方法
硫黄に関してＲ配置のＤＡＧスルフィン酸エステルの一般的ジアステレオマー選択的合成方法
−７８℃及びアルゴン雰囲気下に、（Ｓ）−１，２：５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−グルコフラノース（ＤＡＧ）（１当量）及びピリジン（３．６当量）の脱水トルエン中溶液に、相当するスルフィニルクロライド（３．５当量）を加える。この同じ温度で２時間撹拌後、反応混合物に１Ｍ  ＨＣｌを加え、それをＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、有機抽出液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液及び飽和ＮａＣｌ溶液の順で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水する。溶媒を減圧下に留去して、２種類のスルフィン酸エステルを得る。溶離液として２−プロパノール／ヘキサン（１：１０）を用いるカラムクロマトグラフィーによる精製後に、硫黄に関してＲ配置のスルフィン酸エステルが、支配的なジアステレオマーとして得られる。
【０１６３】
（Ｒ）−８−アジド−３，６−ジオキサオクタンスルフィン酸１，２：５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−グルコフラノシル（１４−Ｒｓ）
【０１６４】
【化３６】
2015514688.tif 000039
一般的方法に従って、（ＤＡＧ）（６６３、３７ｇｇ、２．５５ｍｍｏｌ）及びＰｙ（０．７４ｍＬ）及び８−アジド−３，６−ジオキサオクタンスルフィニルクロライド１０（８．９２ｍｍｏｌ）から、これを合成する。スルフィン酸エステルが収率７８％で得られる。重クロロホルム中での粗反応生成物の分析により、生成する２種類のジアステレオマーが６５：３５の比率であることが明らかになる。カラムクロマトグラフィーによる精製後に、１４−Ｓｓが、黄色液体の形態で支配的ジアステレオマーとして得られる（５７７．４ｍｇ、５４％）。
【０１６５】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ５．９０（ｄ、Ｊ＝３．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．７９（ｄ、Ｊ＝３．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．７３（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７−４．０９（ｍ、３Ｈ）、４．０３−３．９８（ｍ、１Ｈ）、３．８９−３．８６（ｍ、２Ｈ）、３．７１−３．６１（ｍ、６Ｈ）、３．３９（ｔ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．２０（ｄｄｄ、＝５．７、７．８及び１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．９５（ｄｔ、Ｊ＝５．０、１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．５０（ｓ、３Ｈ）、１．４１（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｓ、３Ｈ）、１．３０（ｓ、３Ｈ）。
【０１６６】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１１２．６、１０９．６、１０５．５、８３．９、８３．４、８１．０、７２．３、７０．９、７０．７、７０．３、６７．８、６４．２、５８．６、５０．９、２７．１、２６．９、２６．４、２５．５。
【０１６７】
ＨＲＭＳ：Ｃ１８Ｈ３２Ｎ３Ｏ９Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋４６６．１８４３、実測値：４６６．１８５９（−３．５ｐｐｍ）。
【０１６８】
［α］２５Ｄ：−１８．０（約１．０、クロロホルム）。
【０１６９】
［実施例７］．メチルスルホキシドのエナンチオマー選択的合成方法
メチルスルホキシドの一般的なエナンチオマー選択的合成方法
メチルマグネシウムクロライドの１．４Ｍ  ＴＨＦ中溶液（１．５当量）を、相当するＤＡＧスルフィン酸エステル（１当量）の脱水トルエン（１０ｍＬ）中溶液に０℃で加える。反応混合物をこの同じ温度で２時間撹拌する。この時間終了後、混合物をＮＨ４Ｃｌ水溶液で中和する。水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。有機抽出液をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮する。得られた残留物を、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ９：１溶媒混合物を用いるカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０１７０】
（Ｓ）−（＋）−８−アジド−３，６−ジオキサオクタニルメチルスルホキシド（１５−Ｓｓ）
【０１７１】
【化３７】
2015514688.tif 000040
通常の方法により、脱水トルエン中の（Ｒ）−８−アジド−３，６−ジオキサオクタンスルフィン酸１，２：５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−グルコフラノシル１４−Ｒｓ（４００ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）及びメチルマグネシウムクロライド（１．０２ｍＬ、１．４２ｍｍｏｌ）から、これが得られる。スルホキシド（１５−Ｓｓ）が、黄色液体として得られる（１５０．２０ｍｇ、７２％）。
【０１７２】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ３．９２−３．８８（ｍ、２Ｈ）、３．６７−３．６３（ｍ、６Ｈ）、３．３６（ｔ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．９９（ｄｄｄ、Ｊ＝６．１、７．４及び１３．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．７１２（ｄｔ、Ｊ＝４．３及び１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．６１（ｓ、３Ｈ）。
【０１７３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７０．８、７０．６、７０．２、６３．８、５５．０、５０．８、３９．４。
【０１７４】
ＨＲＭＳ：Ｃ７Ｈ１６Ｎ３Ｏ３Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋２２２．０９１１、実測値：２２２．０９１２（−０．６ｐｐｍ）。
【０１７５】
［α］２５Ｄ：＋６１．４（約１．１）クロロホルム。
【０１７６】
（Ｒ）−（−）−１−アジド−５−（メチルスルフィニル）−３−オキサペンタン（１６−Ｒｓ）
【０１７７】
【化３８】
2015514688.tif 000041
通常の方法により、脱水トルエン中の５−アジド−３−オキサペンタンスルフィン酸（Ｓ）−（１，２：５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−グルコフラノシル）１３−Ｓｓ（４７０ｇｇ、１．１２ｍｍｏｌ）及びメチルマグネシウムクロライド（１．２ｍＬ、１．６７ｍｍｏｌ）から、これが得られる。スルホキシド（１６−Ｒｓ）が、黄色液体として得られる（１５５．０ｍｇ、８０％）。
【０１７８】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ３．９１−３．８８（ｍ、２Ｈ）、３．６６−３．６３（ｍ、２Ｈ）、３．３６（ｃ、Ｊ＝４．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．９７（ｄｄｄ、Ｊ＝６．０、７．６及び１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．８５（ｄｔ、Ｊ＝４．３及び１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．６１（ｓ、３Ｈ）。
【０１７９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７０．２、６３．６、５４．７、５０．７、３９．３。
【０１８０】
ＨＲＭＳ：Ｃ５Ｈ１２Ｎ３Ｏ２Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋１７８．０６５０、実測値：１７８．０６４９（−０．７ｐｐｍ）。
【０１８１】
［α］２５Ｄ：−８９．３（約１）クロロホルム。
【０１８２】
（Ｒ）−（−）−８−アジド−３，６−ジオキサオクタニルメチルスルホキシド（１５−Ｒｓ）
【０１８３】
【化３９】
2015514688.tif 000042
通常の方法により、脱水トルエン（５ｍＬ）中の（Ｓ）−８−アジド−３，６−ジオキサオクタンスルフィン酸１，２：５，６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−グルコフラノシル１４−Ｒｓ（１５０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及びメチルマグネシウムクロライド（０．３８ｍＬ、０．５３ｍｍｏｌ）から、これが得られる。スルホキシド１５−Ｒｓが、黄色液体として得られる（６０．００ｍｇ、７５％）。
【０１８４】
この生成物は、それの１５−Ｓｓエナンチオマーと同じ分光学的特性を有する。
【０１８５】
ＨＲＭＳ：Ｃ７Ｈ１６Ｎ３Ｏ３Ｓの計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋２２２．０９１３、実測値：２２２．０９１２（０．３ｐｐｍ）。
【０１８６】
［α］２５Ｄ：−６１．２（約１．０、クロロホルム）。
【０１８７】
［実施例８］．イソチオシアネートの合成方法
イソチオシアネートの一般的合成方法
トリフェニルホスフィン（１．９当量）を、相当するアジドアルキルメチルスルホキシド（１当量）のエーテル中溶液に加える。還流下に３時間加熱後、溶媒を留去する。二硫化炭素をこの残留物に加え、それを還流下に１時間加熱する。この時間終了後、溶媒を減圧下に留去する。得られた粗生成物を、溶離液として溶媒ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１の混合物を用いるカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【０１８８】
（Ｓ）−（＋）−８−イソチオシアナト−３，６−ジオキサオクタニルメチルスルホキシド（１７−Ｓｓ）
【０１８９】
【化４０】
2015514688.tif 000043
一般法に従って、（Ｓ）−（＋）−８−アジド−３，６−ジオキサオクタニルメチルスルホキシド（１５−Ｓｓ）（７８ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のエーテル（４．０ｍＬ）、トリフェニルホスフィン（１７５．６６ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）及び二硫化炭素（０．５０ｍＬ）中溶液から、これを製造する。イソチオシアネート（１７−Ｓｓ）が、黄色液体として得られる（５５ｍｇ、６６％）。
【０１９０】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ３．９４−３．９２（ｍ、２Ｈ）、３．７０−３．６５（ｍ、８Ｈ）、３．０２（ｄｄｄ、Ｊ＝５．８、７．８及び１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．８９（ｄｔ、Ｊ＝４．３及び１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．６４（ｓ、３Ｈ）。
【０１９１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１３２．７、７０．８、７０．７、６９．４、６３．８、５５．０、４５．４、３９．４。
【０１９２】
ＨＲＭＳ：Ｃ８Ｈ１６ＮＯ３Ｓ２の計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋２３８．０５７１、実測値：２３８．０５７２（−０．３ｐｐｍ）。
【０１９３】
［α］２５Ｄ：＋６２．８（約１．０、クロロホルム）。
【０１９４】
（Ｒ）−（−）−５−イソシアナト−３−オキサペンタニルメチルスルホキシド（１８−Ｒｓ）
【０１９５】
【化４１】
2015514688.tif 000044
一般法に従って、（Ｒ）−（−）−５−アジド−３−オキサペンタニルメチルスルホキシド１６−Ｒｓ（１１５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）のエーテル（４．６ｍＬ）、トリフェニルホスフィン（３２５．２４ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）及び二硫化炭素（０．９３ｍＬ）中溶液から、これを製造する。イソチオシアネート（１８−Ｒｓ）が、黄色液体として得られる（１０２ｍｇ、８２％）。
【０１９６】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ３．９６−３．８９（ｍ、２Ｈ）、３．７０−３．６１（ｍ、４Ｈ）、３．００（ｄｄｄ、Ｊ＝５．２、８．４及び１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．８６（ｄｄｄ、Ｊ＝３．９、４．７及び１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．６３（ｓ、３Ｈ）。図２。
【０１９７】
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１３３．５、６９．４、６３．７、５４．７、４５．３、３９．５。
【０１９８】
ＨＲＭＳ：Ｃ６Ｈ１２ＮＯ２Ｓ２の計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋１９４．０３０９、実測値：１９４．０３１０（０．３ｐｐｍ）。
【０１９９】
［α］２５Ｄ：−９８．５（約１．０、クロロホルム）。
【０２００】
（Ｒ）−（−）−８−イソシアナト−３，６−ジオキサオクタニルメチルスルホキシド（１７−Ｒｓ）
【０２０１】
【化４２】
2015514688.tif 000045
一般法に従って、（Ｒ）−（−）−８−アジド−３，６−ジオキサオクタニルメチルスルホキシド１５−Ｒｓ（４３ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のエーテル（４．０ｍＬ）、トリフェニルホスフィン（９６．８４ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及び二硫化炭素（０．２７ｍＬ）中溶液から、これを製造する。イソチオシアネート１７−Ｒｓが黄色液体として得られる（３３ｍｇ、７３％）。
【０２０２】
この生成物は、それの１７Ｓｓエナンチオマーと同じ分光学的特性を有する。
【０２０３】
ＨＲＭＳ：Ｃ８Ｈ１６ＮＯ３Ｓ２の計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋２３８．０５６７、実測値：２３８．０５７２（−１．９ｐｐｍ）。
【０２０４】
［α］２５Ｄ：−６２．５（約１．０、クロロホルム）。
【０２０５】
［実施例９］．一般式（Ｉ）の化合物の生理活性の研究
段階６′及び６′′（６′′ｃ）で製造した生成物の生理活性を、二つの別個の試験によって求めた。
【０２０６】
１）ルシフェラーゼ試験（Ｇｏｕｌｄ  Ｓ．  Ｊ．；  Ｓｕｂｒａｍａｎｉ  Ｓ．  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９９８，  １，  ５−１３）。これは、ＡＴＰ存在下にルシフェリンによって放出される光を測定することで、間接的に遺伝子の転写活性を測定するのに用いられる組換え法である。そうして、本発明者らは、放出された光をＮｒｆ２転写制御因子の機能に直接関連付けることができる。
【０２０７】
ルシフェラーゼをコードする遺伝子を、ヒトケラチン生成細胞の不死化細胞（ＨａＣａＴ細胞）に挿入する。対象のプロモーターの制御下にルシフェラーゼ遺伝子を含むこのトランスフェクト細胞は、酵素であるルシフェラーゼとルシフェリンとの反応の結果として発光し、それをルミノメーターを用いて測定して、その発光をスルホラファン分子及びそれの類縁体の抗酸化活性に関連付ける。
【０２０８】
この試験は、ＡＲＥを含むラットプロモーターＮｑｏ１（ｐＧＬ３−ｒＮＱ０１ＡＲＥ）（Ｆａｖｒｅａｕ，  Ｌ．  Ｖ．；Ｐｉｃｋｅｔｔ，  Ｃ．  Ｂ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  １９９５，  ２７０，  ２４４６８）の３１ｂｐ断片、及びルシフェラーゼ遺伝子の向流（ｃｏｕｎｔｅｒｃｕｒｒｅｎｔ）ＳＶ４０プロモーターを含むプラスミド（「レポーター遺伝子」）でトランスフェクションされたＨａＣａＴ細胞を用いる。
【０２０９】
トランスフェクション混合物を細胞に加えたら、２４時間後に、各種濃度のスルホラファン及びそれの類縁体（５０ｎＭ、０．５μＭ、５μＭ、５０μＭ、５００μＭ）又は陰性対照としてのＤＭＳＯを含む新鮮な培地とともにそれをインキュベートする。
【０２１０】
次に、ルシフェラーゼ活性を、ＭｉｃｒｏＬｕｍａｔＰｌｕｓ  ＬＢ９６Ｖルミノメーター（ＥＧ＆Ｇ  Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）を用いて測定し、ＤＭＳＯで処理した細胞と比較してＸ倍の活性化として結果を表す。結果は、Ｎｒｆ２転写制御因子の活性と相関している（図３）。５０μＭ及び５００μＭの濃度が細胞に対して毒性であることがわかった（図に含まれないデータ）。
【０２１１】
２）定量的リアルタイムＰＣＲ（（ｑＲＴ）−ＰＣＲ）：ＨａＣａＴ系の細胞をスルホラファン類縁体で２４時間処理する。この時間終了後、細胞について、ｍＲＮＡを抽出するための溶解プロセスを行う。このｍＲＮＡをｃＤＮＡに転写し、それをＰＣＲで用いる。
【０２１２】
この方法により、Ｎｒｆ２の標的である内在性遺伝子の制御が、ｍＲＮＡレベルで数量化される。具体的には、ＧＣＬｃ、ＧＣＬｍ及びＮＱＯ１をコードする遺伝子の発現が数量化される（図４）。
【０２１３】
［実施例１０］．シクロデキストリン（ＣＤ）への一般式（Ｉ）の化合物の封入。安定性、水溶解性及び生物学的利用能の研究。
【０２１４】
ホスト及びゲストの物理摘記混合によって包接錯体を製造し、錯体形成の確認並びにそれの化学量論、結合定数（Ｋａｓ）及び分解度の両方を、ＮＭＲスペクトル測定によって確認した。
【０２１５】
シクロデキストリン−スルホラファン錯体（ＣＤ−ＳＦＮ）が形成されると、包接錯体の１：１化学量論が、既に言及したように１Ｈスペクトル測定を評価方法として用いるＪｏｂの連続変化法（Ｊｏｂ，  Ｐ．  Ａｎｎａｌｉ  ｄｉ  Ｃｈｉｍｉｃａ．１９２８，  ９，  １１３−２０３）によって確認された。
【０２１６】
化合物１６−Ｒｓのα−シクロデキストリン（１６−ＲＳ−αＣＤ）への包接によって形成される錯体の結合定数を、Ｄ２Ｏ中での１Ｈ  ＮＭＲによる評価実験によって測定した。２９８Ｋでの結合定数（Ｋａｓ、Ｍ−１）を、ＣＤ濃度を上昇させながら類縁体の固定溶液を用いて１Ｈ  ＮＭＲシグナルの化学シフトにおける変化（Δδ、ｐｐｍ）を測定することで実験的に求めた。代表的な評価実験では、４．１６ｍＭの類縁体のＤ２Ｏ中溶液を調製し、５００μＬの小分け量をＮＭＲ管に移し入れ、初期スペクトラムを記録した。ＣＤの溶液を調製し（２６．５０ｍＭ）、１０μＬの小分け量をＮＭＲ管に加えることで、類縁体の濃度を一定に維持した。スルホラファン類縁体の完全な錯形成があるまで、加えるＣＤの量を増やし、各添加後に１Ｈ  ＮＭＲスペクトラムを記録した。ＣＤ濃度値を上昇させながらの類縁体のプロトンからのシグナルの化学シフト変動（Δδ）の曲線を、反復調整の最小二乗法を用いて数学的に処理することで、Ｋａｓ値を求めることができた。
【０２１７】
ＣＤと錯形成した類縁体の安定性を調べるため、プロトン核磁気共鳴も用いて、シクロデキストリンの存在下及び非存在下での室温における時間経過に伴う水溶液中でのスルホラファン類縁体の状態を確認した。
【０２１８】
全ての場合で、スルフィニル硫黄に結合したメチル基のプロトンからのシグナルを、生成物が受ける分解プロセスを観察するための基準とした。全てのスルホラファン類について、時間ゼロ及び４０日目でチェックを行った（図６）。
【図１】
2015514688.tif 000065
【図２】
2015514688.tif 000066
【図３】
2015514688.tif 000067
【図４】
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【図５】
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【図６】
2015514688.tif 000070
【国際調査報告】
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2015514688.tif 000072
2015514688.tif 000073
2015514688.tif 000074