(57)【要約】  本発明は、リパーゼ活性を有する単離されたポリペプチドおよびこのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。本発明はまた、このポリヌクレオチドを含む核酸構築物、ベクター、および宿主細胞、ならびにこのポリペプチドの作製方法および使用方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
リパーゼ活性を有する単離されたポリペプチドであって、
（ａ）配列番号２の成熟ポリペプチドに対して少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）（ｉ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列または（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補体と低ストリンジェンシー条件、中ストリンジェンシー条件、中−高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、もしくは超高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の前記成熟ポリペプチドコード配列に対して少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｄ）置換、欠失、および／または挿入を１つまたは複数の位置で含む（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の前記ポリペプチドの変異体；ならびに
（ｅ）リパーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）の前記ポリペプチドの断片
からなる群から選択される、ポリペプチド。
【請求項２】
配列番号２または配列番号２の前記成熟ポリペプチドを含んでいるかまたは構成している請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記成熟ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸１〜２９２である、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む組成物。
【請求項５】
前記組成物が、リパーゼを欠く均等組成物と比較して、表面に存在する脂質汚れの除去においてより有効である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
カルシウム（Ｃａ2+）、マグネシウム（Ｍｇ2+）、および第一鉄（Ｆｅ2+）から好ましくは選択される１種または複数の２価カチオンをさらに含む、請求項４または５に記載の組成物。
【請求項７】
前記界面活性剤が、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性イオン性界面活性剤からなる群から選択される１種または複数の界面活性剤をさらに含む、請求項４〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記界面活性剤が、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ナトリウム水素化ココエート、ラウレス硫酸ナトリウム、Ｃ１２−１４パレス−７、Ｃ１２−１５パレス−７、Ｃ１２−１５パレス硫酸ナトリウム、およびＣ１４−１５パレス−４からなる群から選択される１種または複数の界面活性剤を含む、請求項４〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
ｐＨ８．０〜１１で製剤化された、請求項４〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、洗濯洗浄組成物、食器洗浄組成物、硬質表面洗浄組成物、およびパーソナルケア洗浄組成物からなる群から選択される、請求項４〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物の形態が、液体、ゲル、棒状石鹸、粉末、粒状固体、錠剤、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項４〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、約１０℃〜９０℃の温度での脂質の加水分解において有効である、請求項４〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、Ｌｉｐｒ１３９リパーゼの代わりにサーモミセス・ラヌギノサス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）リパーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標））を含む均等組成物に比較して、脂質基質の加水分解においてより有効である、請求項７〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
ヘミセルラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、アミラーゼ、またはそれらの混合物から選択される１種または複数の酵素をさらに含む、請求項４〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
配列番号２に対して少なくとも９２％の同一性を有する前記リパーゼの安定性が、配列番号２に対して少なくとも９２％の同一性を有する前記リパーゼの代わりにサーモミセス・ラヌギノサス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）リパーゼを含む均等組成物におけるサーモミセス・ラヌギノサス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）リパーゼの安定性よりも高く、好ましくは、前記安定性が、最終組成物および／または最終洗浄媒体において測定される、請求項４〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
配列番号２に対して少なくとも９２％の同一性を有するリパーゼおよび界面活性剤を加えることを含む、請求項４〜１５のいずれか一項に記載の組成物を製造する方法。
【請求項１７】
洗浄される表面上に存在する脂質汚れを請求項４〜１５のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む、表面を洗浄するための方法。
【請求項１８】
汚染物および／または汚れを請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチドまたは請求項４〜１５のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む、前記汚染物および／または表面上の前記汚れの中に存在する脂質を加水分解するための方法。
【請求項１９】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２０】
発現宿主において前記ポリペプチドの産生をもたらす１つまたは複数の制御配列と作動可能に結合している請求項１９に記載のポリヌクレオチドを含む、核酸構築物または発現ベクター。
【請求項２１】
前記ポリペプチドの産生をもたらす１つまたは複数の制御配列と作動可能に結合している請求項１９に記載のポリヌクレオチドを含む、組換え宿主細胞。
【請求項２２】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチドを作製する方法であって、
（ａ）前記ポリペプチドの産生に資する条件下で、野生型形態において前記ポリペプチドを産生する細胞を培養することと、
（ｂ）前記ポリペプチドを回収することと
を含む、方法。
【請求項２３】
リパーゼ活性を有するポリペプチドを作製する方法であって、
（ａ）前記ポリペプチドの産生に資する条件下で、請求項２１に記載の宿主細胞を培養することと、
（ｂ）前記ポリペプチドを回収することと
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表の参照
本出願はコンピュータ読取り可能な形態の配列表を含み、この配列表は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、リパーゼ活性を有するポリペプチドおよびこのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。本発明はまた、このポリヌクレオチドを含む核酸構築物、ベクター、および宿主細胞、ならびにこのポリペプチドの作製方法および使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
本発明は、リパーゼ活性を有するポリペプチドおよびこのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。Ｇｌｏｇａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ  ２０１１，１０：５４に開示されているリパーゼは、配列番号２と９１．８％のアミノ酸配列同一性を示す。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、リパーゼ活性を有する単離されたポリペプチドであって、
（ａ）配列番号２の成熟ポリペプチドに対して少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）（ｉ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列または（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補体と低ストリンジェンシー条件、中ストリンジェンシー条件、中−高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、もしくは超高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列に対して少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｄ）置換、欠失、および／または挿入を１つまたは複数の位置で含む（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリペプチドの変異体；ならびに
（ｅ）リパーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）のポリペプチドの断片
からなる群から選択される、ポリペプチドに関する。
【０００５】
本発明はまた、本発明のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド；このポリヌクレオチドを含む核酸構築物；組換え発現ベクター；組換え宿主細胞；およびこのポリペプチドの作製方法に関する。
【０００６】
本発明はまた、組成物、組成物を製造する方法、表面を洗浄する方法、および脂質を加水分解する方法に関する。
【０００７】
定義
本組成物および本方法を詳細に説明する前に、明確さのために以下の用語を定義する。定義されない用語および略語は、当技術分野で使用されるそれらの通常の意味に一致するものとする。
【０００８】
リパーゼ：「リパーゼ」、「リパーゼ酵素」、「脂肪分解酵素」、「脂質エステラーゼ」、「脂肪分解ポリペプチド」、および「脂肪分解タンパク質」という用語は、酵素命名法により定義されるクラスＥＣ３．１，１に属する酵素を指す。これは、これらに限定されないが、トリアシルグリセロールリパーゼ活性（ＥＣ３．１．１．３）、モノグリセリドリパーゼ活性（ＥＣ３．１．１．２３）、ホスホリパーゼ活性（数個のＥＣ）、リソホスホリパーゼ活性、フェルラ酸エステラーゼ活性、クチナーゼ活性（ＥＣ３．１．１．７４）、ステロールエステラーゼ活性（ＥＣ３．１．１．１３）および／またはワックス−エステルヒドロラーゼ活性（ＥＣ３．１．１．５０）が挙げられ得る、リパーゼ活性を有し得る。本発明の目的のために、リパーゼ活性は、実施例に記載する手順に従い決定される。一態様では、本発明の変異体は、配列番号２の成熟ポリペプチドのリパーゼ活性の少なくとも２０％、例えば、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％を有する。
【０００９】
対立遺伝子変異体：「対立遺伝子変異体」という用語は、同一の染色体座を占める遺伝子の２つ以上の代替形態のうちの任意のものを意味する。対立遺伝子変異は、突然変異によって自然に生じ、集団内に多型を結果としてもたらし得る。遺伝子突然変異は、サイレント（コードされるポリペプチドにおいて変化がない）であり得るか、または改変されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることがあり得る。ポリペプチドの対立遺伝子変異体は、遺伝子の対立遺伝子変異体によってコードされるポリペプチドである。
【００１０】
触媒ドメイン：「触媒ドメイン」という用語は、酵素の触媒機構を含む酵素の領域を意味する。
【００１１】
ｃＤＮＡ：「ｃＤＮＡ」という用語は、真核細胞または原核細胞から得られたスプライスされた成熟ｍＲＮＡ分子から逆転写によって調製可能であるＤＮＡ分子を意味する。ｃＤＮＡは、対応するゲノムＤＮＡ中に存在し得るイントロン配列を欠いている。元の一次ＲＮＡ転写物は、スプライスされた成熟ｍＲＮＡとして出現する前にスプライシングを含む一連のステップを介して処理されるｍＲＮＡに対する前駆体である。
【００１２】
コード配列：「コード配列」という用語は、ポリペプチドのアミノ酸配列を直接的に特定するポリヌクレオチドを意味する。コード配列の境界は、一般にオープンリーディングフレームによって判定されるが、これは、ＡＴＧ、ＧＴＧもしくはＴＴＧなどの開始コドンで始まり、ＴＡＡ、ＴＡＧもしくはＴＧＡなどの終止コドンで終わる。コード配列は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ、またはこれらの組合せであってよい。
【００１３】
制御配列：「制御配列」という用語は、本発明の成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現に必要なすべての核酸配列を意味する。各制御配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して自生（すなわち、同じ遺伝子由来）であっても外来性（すなわち、異なる遺伝子由来）であっても、相互に自生もしくは外来性であってもよい。このような制御配列としては、これらに限定されないが、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモータ、シグナルペプチド配列、および、転写ターミネータが挙げられる。制御配列としては、プロモータ、ならびに、転写および翻訳停止シグナルが最低限挙げられる。制御配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコード領域との制御配列の連結反応を促進させる特定の制限部位を導入するために、リンカーと共に提供され得る。
【００１４】
発現：「発現」という用語は、ポリペプチドの生成に関与するいずれかのステップを含み、特にこれらに限定されないが、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾および分泌が挙げられる。
【００１５】
発現ベクター：「発現ベクター」という用語は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、また、発現をもたらす制御ヌクレオチドに作動可能に結合している直線状または環状のＤＮＡ分子を意味する。
【００１６】
断片：「断片」という用語は、成熟ポリペプチドのアミノおよび／またはカルボキシル末端から１つまたは複数（例えばいくつか）のアミノ酸が存在しないポリペプチドを意味し；ここで、断片は、リパーゼ活性を有する。一態様では、断片は、成熟ポリペプチドのアミノ酸の数の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％を有する。
【００１７】
高ストリンジェンシー条件：「高ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、５０％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて６５℃で３回洗浄される。
【００１８】
宿主細胞：「宿主細胞」という用語は、本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物または発現ベクターを伴う形質転換、形質移入、形質導入等に対する感受性を有するいずれかの細胞型を意味する。「宿主細胞」という用語は、複製の最中に生じる突然変異によって親細胞とは異なっている親細胞のいずれかの子孫を包含する。
【００１９】
単離された：「単離された」という用語は、天然では存在しない形態または環境にある物質を意味する。単離された物質の非制限的例として、（１）任意の非天然型物質、（２）これらに限定されないが、天然では関連している天然に存在する成分の１つまたは複数または全部から少なくとも部分的に取り出された任意の酵素、変異体、核酸、タンパク質、ペプチドもしくは補因子；（３）天然に存在する物質に対して、人為的に修飾された任意の物質；または（４）天然では関連している他の成分と比較して物質の量を増加すること（例えば、物質をコードする遺伝子の複数のコピー；物質をコードする遺伝子と天然で関連するプロモータより強力なプロモータの使用）によって修飾された任意の物質が挙げられる。単離された物質は、発酵ブロスサンプル中に存在し得る。
【００２０】
低ストリンジェンシー条件：「低ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、２５％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて５０℃で３回洗浄される。
【００２１】
成熟ポリペプチド：「成熟ポリペプチド」という用語は、Ｎ−末端処理、Ｃ−末端切断、グリコシル化、リン酸化などのような、翻訳および任意の翻訳後修飾後のその最終形態でのポリペプチドを意味する。一態様において、成熟ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸１〜２９２である。
【００２２】
成熟ポリペプチドコード配列：「成熟ポリペプチドコード配列」という用語は、リパーゼ活性を有する成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。一態様において、成熟ポリペプチドコード配列は、配列番号１のヌクレオチド３０〜９０５である。
【００２３】
中ストリンジェンシー条件：「中ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、３５％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて５５℃で３回洗浄される。
【００２４】
中−高ストリンジェンシー条件：「中−高ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、３５％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて６０℃で３回洗浄される。
【００２５】
核酸構築物：「核酸構築物」という用語は、一本鎖もしくは二本鎖である核酸分子を意味し、これは、天然遺伝子から単離されるか、または、本来自然には存在し得ないような核酸のセグメント、もしくは、合成された核酸のセグメントを含有するよう修飾されており、１つまたは複数の制御配列を含む。
【００２６】
作動可能に結合：「作動可能に結合」という用語は、制御配列がコード配列の発現をもたらすよう、ポリヌクレオチドのコード配列と比して制御配列が適切な位置に位置されている構成を意味する。
【００２７】
配列同一性：２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間の関連性が、「配列同一性」というパラメータによって記載される。
【００２８】
本発明の目的のために、２つのアミノ酸配列間の配列同一性は、好ましくはバージョン５．０．０以降のＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）のＮｅｅｄｌｅプログラムにおいて実装されている、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いて判定される。用いられるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティおよびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳボージョン）置換マトリックスである。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長の同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される。
（同等の残基×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）
【００２９】
本発明の目的のために、２つのデオキシリボヌクレオチド配列間の配列同一性は、ＥＭＢＯＳＳ  ｐａｃｋａｇｅ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，上記参照）、好ましくはバージョン５．０．０以降のＮｅｅｄｌｅ  ｐｒｏｇｒａｍに実装されているＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，上記参照）を用いて判定される。用いられるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティ、および、ＥＤＮＡＦＵＬＬ（ＮＣＢＩ  ＮＵＣ４．４のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長の同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される：
（同一のデオキシリボヌクレオチド×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）
【００３０】
サブ配列：「サブ配列」という用語は、成熟ポリペプチドコード配列の５’および／または３’末端から１つまたは複数（例えばいくつか）のヌクレオチドが存在しないポリペプチドを意味し；ここで、サブ配列は、リパーゼ活性を有する断片をコードする。一態様では、本発明の断片は、成熟ポリペプチドヲコードするヌクレオチドの数の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％を有する。
【００３１】
変異体：「変異体」という用語は、改変、すなわち、置換、挿入、および／または欠失を１つまたは複数（例えば、いくつか）の位置で含む、リバーゼ活性を有するポリペプチドを意味する。置換とは、ある位置を占めるアミノ酸を異なるアミノ酸で置き換えることを意味し；欠失とは、ある位置を占めるアミノ酸が除去されていることを意味し；挿入とは、ある位置を占めるアミノ酸に隣接しかつ直後にアミノ酸を加えることを意味する。
【００３２】
超高ストリンジェンシー条件：「超高ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、５０％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて７０℃で３回洗浄される。
【００３３】
超低ストリンジェンシー条件：「超低ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、２５％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて４５℃で３回洗浄される。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
リパーゼ活性を有するポリペプチド
一実施形態では、本発明は、配列番号２の成熟ポリペプチドに対して少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する単離されたポリペプチドであって、リパーゼ活性を有するポリペプチドに関する。一態様では、ポリペプチドは、配列番号２の成熟ポリペプチドと、アミノ酸が２４個以下（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、または２４個）異なる。
【００３５】
本発明のポリペプチドは、好ましくは、配列番号２のアミノ酸配列またはその対立遺伝子変異体を含んでいるかまたは構成している；あるいは、リパーゼ活性を有するその断片である。別の態様では、ポリペプチドは、配列番号２の成熟ポリペプチドを含んでいるかまたは構成している。別の態様では、ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸１〜２９２を含んでいるかまたは構成している。
【００３６】
別の実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列または（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補体と超低ストリンジェンシー条件、低ストリンジェンシー条件、中ストリンジェンシー条件、中−高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、もしくは超高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる、リパーゼ活性を有する単離されたポリペプチドに関する（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【００３７】
配列番号１のポリヌクレオチドまたはそのサブ配列、および配列番号２のポリペプチドまたはその断片は、当技術分野で周知の方法に従って異なる属または種の菌株からリパーゼ活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡを同定しクローニングするための核酸プローブを設計するために使用され得る。特に、このようなプローブは、標準的なサザンブロッティング手順に従い、関心のある細胞のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡとハイブリダイゼーションさせて、その中の対応する遺伝子を同定しかつ単離するために使用され得る。このようなプローブは、全配列よりもかなり短いものであり得るが、少なくとも１５、例えば、少なくとも２５、少なくとも３５、または少なくとも７０ヌクレオチド長であるべきである。好ましくは、核酸プローブは、少なくとも１００ヌクレオチド長、例えば、少なくとも２００ヌクレオチド長、少なくとも３００ヌクレオチド長、少なくとも４００ヌクレオチド長、少なくとも５００ヌクレオチド長、少なくとも６００ヌクレオチド長、少なくとも７００ヌクレオチド長、少なくとも８００ヌクレオチド長、または少なくとも９００ヌクレオチド長である。ＤＮＡプローブおよびＲＮＡプローブの両方が使用され得る。プローブは、典型的には、対応する遺伝子を検出するために（例えば、32Ｐ、3Ｈ、35Ｓ、ビオチンまたはアビジンで）標識される。このようなプローブは、本発明に包含される。
【００３８】
そのような他の菌株から調製されたゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリーが、上記のプローブとハイブリダイズしかつリパーゼ活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡについてスクリーニングされ得る。そのような他の菌株からのゲノムＤＮＡまたは他のＤＮＡは、アガロースもしくはポリアクリルアミドゲル電気泳動、または他の分離手法によって分離され得る。ライブラリーからのＤＮＡまたは分離されたＤＮＡは、ニトロセルロースまたは他の好適なキャリア材料に移され固定化され得る。このキャリア材料が、配列番号１またはそのサブ配列とハイブリダイズするクローンまたはＤＮＡを同定するためにサザンブロットで使用される。
【００３９】
本発明の目的のために、ハイブリダイゼーションとは、こうしたポリヌクレオチドが（ｉ）配列番号１；（ｉｉ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列；（ｉｉｉ）その完全長相補体；または（ｖ）そのサブ配列に対応する標識された核酸プローブに、超低ストリンジェンシー条件〜超高ストリンジェンシー条件の下でハイブリダイズすることを示す。核酸プローブがこれらの条件下でハイブリダイズする分子は、例えば、Ｘ線フィルムまたは当技術分野で公知の任意の他の検出手段を用いて、検出され得る。
【００４０】
別の実施形態では、本発明は、配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列に対して少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる、リパーゼ活性を有する単離されたポリペプチドに関する。
【００４１】
別の実施形態では、本発明は、置換、欠失、および／または挿入を１つまたは複数（例えば、いくつか）の位置で含む、配列番号２の成熟ポリペプチドの変異体に関する。別の実施形態では、本発明は、置換、欠失、および／または挿入を１つまたは複数（例えば、いくつか）の位置で含む、本発明のポリペプチドの変異体に関する。一実施形態では、配列番号２の成熟ポリペプチドに導入されるアミノ酸置換、欠失および／または挿入の数は、２４個以下（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、または２４個）である。アミノ酸の変更は、軽微な性質のもの、すなわち、タンパク質の折りたたみおよび／もしくは活性に著しい影響を及ぼさない保存的なアミノ酸置換もしくは挿入；典型的には１〜３０個のアミノ酸の、僅かな欠失；僅かなアミノ末端もしくはカルボキシル末端の伸長（例えば、アミノ末端メチオニン残基）；２０〜２５個までの残基の小さなリンカーペプチド；または実効電荷もしくは別の機能を変更することにより精製を促進する僅かな伸長（例えば、ポリヒスチジントラクト、抗原性エピトープまたは結合ドメイン）であり得る。
【００４２】
保存的置換の例は、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジンおよびヒスチジン）、酸性アミノ酸（グルタミン酸およびアスパラギン酸）、極性アミノ酸（グルタミンおよびアスパラギン）、疎水性アミノ酸（ロイシン、イソロイシンおよびバリン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン）、および小アミノ酸（グリシン、アラニン、セリン、トレオニンおよびメチオニン）の群の範囲内である。一般的に特異的活性を改変しないアミノ酸置換は、当技術分野で公知であり、例えばＨ．Ｎｅｕｒａｔｈ  ａｎｄ  Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，１９７９，Ｉｎ，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにより記載されている。一般的な置換は、Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｙｒ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、およびＡｓｐ／Ｇｌｙである。
【００４３】
あるいは、アミノ酸の変更は、ポリペプチドの物理化学的特性が改変されるような性質のものである。例えば、アミノ酸の変更は、ポリペプチドの末端安定性を改善したり、基質特異性を改変したり、ｐＨ最適条件を変更したりなどし得る。
【００４４】
ポリペプチド中の必須アミノ酸は、部位特異的突然変異誘発またはアラニンスキャニング突然変異誘発などの、当技術分野で公知の手順に従って同定され得る（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５）。後者の手法では、単一のアラニン突然変異が分子中の残基毎に導入され、その分子の活性に重要なアミノ酸残基を同定するために、結果として生じた変異体分子がリパーゼ活性について試験される。Ｈｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４６９９−４７０８も参照されたい。酵素活性部位または他の生物学的相互作用の活性部位はまた、推定接触部位のアミノ酸の突然変異と組み合わせて、核磁気共鳴、結晶学、電子回折、または光親和性標識などの手法によって決定される、物理的構造解析によって決定することもできる。例えば、ｄｅ  Ｖｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４；Ｗｌｏｄａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３０９：５９−６４を参照されたい。必須アミノ酸が何であるかは、関連ポリペプチドとのアライメントから推測することもできる。単一または多重のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入は、突然変異誘発、組換え、および／またはシャッフリング、それに続く適切なスクリーニング手順の公知の方法（例えば，Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：５３−５７；Ｂｏｗｉｅ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：２１５２−２１５６；国際公開第９５／１７４１３号パンフレット；または国際公開第９５／２２６２５号パンフレットにより開示されているもの）を用いて行われ、試験され得る。使用され得る他の方法としては、エラープローンＰＣＲ、ファージディスプレイ（例えば、Ｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３０：１０８３２−１０８３７；米国特許第５２２３４０９号明細書；国際公開第９２／０６２０４号パンフレット）、および領域特異的突然変異誘発（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．１９８６，Ｇｅｎｅ  ４６：１４５；Ｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，ＤＮＡ  ７：１２７）が挙げられる。
【００４５】
突然変異誘発／シャッフリング方法は、宿主細胞によって発現された、クローニングされ、突然変異誘発されたポリペプチドの活性を検出するために、高スループットの自動化されたスクリーニング方法と組み合わされ得る（Ｎｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １７：８９３−８９６）。活性なポリペプチドをコードする突然変異誘発されたＤＮＡ分子が宿主細胞から回収され、当技術分野における標準的な方法を用いて迅速に配列決定され得る。これらの方法により、ポリペプチド中の個々のアミノ酸残基の重要性の迅速な決定が可能になる。
【００４６】
ポリペプチドは、あるポリペプチドの領域が、別のポリペプチドの領域のＮ末端またはＣ末端に融合しているハイブリッドポリペプチドであり得る。
【００４７】
ポリペプチドは、別のポリペプチドが本発明のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合している融合ポリペプチドまたは切断可能な融合ポリペプチドであり得る。融合ポリペプチドは、別のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを本発明のポリヌクレオチドに融合させることにより作製される。融合ポリペプチドを作製するための手法は当技術分野で公知であり、ポリペプチドをコードするコード配列を、それらがフレーム内にあるように、かつ融合ポリペプチドの発現が同一のプロモータおよびターミネータの制御下にあるように、連結することを含む。融合ポリペプチドはまた、融合ポリペプチドが翻訳後に生成されるインテイン技術を用いて構築され得る（Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：２５７５−２５８３；Ｄａｗｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６６：７７６−７７９）。
【００４８】
融合ポリペプチドは、２つのポリペプチドの間に切断部位をさらに含み得る。融合タンパク質が分泌されると、この部位は切断されて２つのポリペプチドを放出する。切断部位の例としては、これらに限定されないが、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：５６８−５７６；Ｓｖｅｔｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７６：２４５−２５１；Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ−Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６３：３４８８−３４９３；Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：４９８−５０３；およびＣｏｎｔｒｅｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：３７８−３８１；Ｅａｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２５：５０５−５１２：Ｃｏｌｌｉｎｓ−Ｒａｃｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：９８２−９８７；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ６：２４０−２４８；およびＳｔｅｖｅｎｓ，２００３，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｌｄ  ４：３５−４８に開示されている部位が挙げられる。
【００４９】
リパーゼ活性を有するポリペプチドの供給源
本発明のリパーゼ活性を有するポリペプチドは、任意の属の微生物から得られ得る。本発明の目的のために、所与の供給源と関連して本明細書で使用される「から得られる」という用語は、ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドが、その供給源によって、またはその供給源からのポリヌクレオチドが挿入された菌株によって産生されることを意味するものとする。一態様では、所与の供給源から得られるポリペプチドは、細胞外に分泌される。
【００５０】
ポリペプチドは、細菌ポリペプチドであり得る。例えば、ポリペプチドは、リパーゼ活性を有するグラム陽性細菌ポリペプチド（例えば、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ゲオバチルス属（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、オーシャノバチルス属（Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、レンサ球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、またはストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）のポリペプチド）、またはグラム陰性細菌ポリペプチド（例えば、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、セデセア属（Ｃｅｄｅｃｅａ）、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、フラボバクテリウム属（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、フゾバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、イリオバクター属（Ｉｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、またはウレアプラズマ属（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）のポリペプチド）であり得る。
【００５１】
一態様では、ポリペプチドは、バチルス・アルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・サークランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・ラウツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｕｔｕｓ）、バチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、またはバチルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）のポリペプチドである。
【００５２】
別の態様では、ポリペプチドは、ストレプトコッカス・エクウィシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）、またはストレプトコッカス・エクウィ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．  Ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）のポリペプチドである。
【００５３】
別の態様では、ポリペプチドは、ストレプトミセス・アクロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトミセス・アベルミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）、ストレプトミセス・コエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）、ストレプトミセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）、またはストレプトミセス・リビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｉｖｉｄａｎｓ）のポリペプチドである。
【００５４】
別の態様では、ポリペプチドは、セデセア・ダビセ（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｄａｖｉｓａｅ）、セデセア・ラペゲイ（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｌａｐｅｇｅｉ）、セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐ）００１（セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）３としても知られる）、セデセア・ネテリ（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｎｅｔｅｒｉ）（以前はセデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）４またはセデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）００２として知られていた）、セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐ）０１２（セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）５としても知られる）、またはセデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐ）−１６６４０のポリペプチドである。
【００５５】
別の態様では、ポリペプチドは、セラチア・エントモフィラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｅｎｔｏｍｏｐｈｉｌａ）、セラチア・フィカリア（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｆｉｃａｒｉａ）、セラチア・フォンチコラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｆｏｎｔｉｃｏｌａ）、セラチア・グリメシイ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｇｒｉｍｅｓｉｉ）、セラチア・リクファシエンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、セラチア・オドリフェラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｏｄｏｒｉｆｅｒａ）、セラチア・プリムチカ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｐｌｙｍｕｔｈｉｃａ）、セラチア・プロテアマキュランス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｐｒｏｔｅａｍａｃｕｌａｎｓ）、セラチア・キニボランス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｑｕｉｎｉｖｏｒａｎｓ）、セラチア・ルビダエア（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｒｕｂｉｄａｅａ）、セラチア・シンビオチカ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｓｙｍｂｉｏｔｉｃａ）のポリペプチドである。
【００５６】
ポリペプチドは、真菌ポリペプチドであり得る。例えば、ポリペプチドは、酵母ポリペプチド（例えば、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、クルイベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロミセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、またはヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）のポリペプチド）；または糸状真菌ポリペプチド（例えば、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、ハラタケ属（Ａｇａｒｉｃｕｓ）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、オーレオバシディウム属（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、ボトリオスパエリア属（Ｂｏｔｒｙｏｓｐａｅｒｉａ）、セリポリオプシス属（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ）、カエトミジウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｄｉｕｍ）、クリソスポリウム属（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、バッカクキン属（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ）、コクリオボルス属（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ）、コプリノプシス属（Ｃｏｐｒｉｎｏｐｓｉｓ）、コプトテルメス属（Ｃｏｐｔｏｔｅｒｍｅｓ）、コリナスクス属（Ｃｏｒｙｎａｓｃｕｓ）、クリホネクトリア属（Ｃｒｙｐｈｏｎｅｃｔｒｉａ）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ジプロジア属（Ｄｉｐｌｏｄｉａ）、エキシジア属（Ｅｘｉｄｉａ）、フィリバシジウム属（Ｆｉｌｉｂａｓｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、ジッベレラ属（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ）、ホロマスチゴトイデス属（Ｈｏｌｏｍａｓｔｉｇｏｔｏｉｄｅｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、イルペックス属（Ｉｒｐｅｘ）、シイタケ属（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ）、レプトスパエリア属（Ｌｅｐｔｏｓｐａｅｒｉａ）、マグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）、メラノカルプス属（Ｍｅｌａｎｏｃａｒｐｕｓ）、メリピルス属（Ｍｅｒｉｐｉｌｕｓ）、ケカビ属（Ｍｕｃｏｒ）、ミセリオフトーラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）、ネオカリマスティクス属（Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ）、アカパンカビ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、ペシロミセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ファネロカエテ属（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ）、ピロミセス属（Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ）、ポイトラシア属（Ｐｏｉｔｒａｓｉａ）、プソイドプレクタニア属（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅｃｔａｎｉａ）、プソイドトリコニンファ属（Ｐｓｅｕｄｏｔｒｉｃｈｏｎｙｍｐｈａ）、リゾムコール属（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ）、スエヒロタケ属（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ）、スキタリジウム属（Ｓｃｙｔａｌｉｄｉｕｍ）、タラロミセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、サーモアスカス属（Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、トリコファエア属（Ｔｒｉｃｈｏｐｈａｅａ）、バーティシリウム属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）、フクロタケ属（Ｖｏｌｖａｒｉｅｌｌａ）、またはキシラリア属（Ｘｙｌａｒｉａ）のポリペプチド）であり得る。
【００５７】
別の態様では、ポリペプチドは、サッカロミセス・カールスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミセス・ジアスタチクス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）、サッカロミセス・ドウグラシイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｏｕｇｌａｓｉｉ）、サッカロミセス・クルイベリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、サッカロミセス・ノルベンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ）、またはサッカロミセス・オビフォルミス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｏｖｉｆｏｒｍｉｓ）のポリペプチドである。
【００５８】
別の態様では、ポリペプチドは、アクレモニウム・セルロリチカス（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ  ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ）、アスペルギルス・アクレアツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・フォエチヅス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｏｅｔｉｄｕｓ）、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・ジャポニカス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、クリソスポリウム・イノプス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｉｎｏｐｓ）、クリソスポリウム・ケラチノフィルム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｋｅｒａｔｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）、クリソスポリウム・ルクノウェンセ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、クリソスポリウム・メルダリウム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｍｅｒｄａｒｉｕｍ）、クリソスポリウム・パンニコラ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｐａｎｎｉｃｏｌａ）、クリソスポリウム・クェエンスランジカム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ）、クリソスポリウム・トロピカム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｔｒｏｐｉｃｕｍ）、クリソスポリウム・ゾナタム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｚｏｎａｔｕｍ）、フザリウム・バクトリジオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｂａｃｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・セレアリス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｅｒｅａｌｉｓ）、フザリウム・クロオクウェレンセ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ）、フザリウム・カルモラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウム・グラミナム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｕｍ）、フザリウム・ヘテロスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・ネグンジ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｎｅｇｕｎｄｉ）、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・レチクラタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）、フザリウム・ロゼウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ）、フザリウム・サンブシナム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｍｂｕｃｉｎｕｍ）、フザリウム・サルコクロウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｒｃｏｃｈｒｏｕｍ）、フザリウム・スポロトリキオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・スルフレウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ）、フザリウム・トルロサム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ）、フザリウム・トリコテシオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・ベネナタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フミコラ・グリセア（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｇｒｉｓｅａ）、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕ���ｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、イルペックス・ラクテウス（Ｉｒｐｅｘ  ｌａｃｔｅｕｓ）、ムーコル・ミエヘイ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、ミセリオフトーラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、ニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、ペニシリウム・フニクロスム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ）、ペニシリウム・プルプロゲナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）、ファネロカエテ・クリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ  ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、チエラビア・アクロマチカ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｃｈｒｏｍａｔｉｃａ）、チエラビア・アルボミセス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｌｂｏｍｙｃｅｓ）、チエラビア・アルボピロサ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｌｂｏｐｉｌｏｓａ）、チエラビア・アウストラレインシス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｕｓｔｒａｌｅｉｎｓｉｓ）、チエラビア・フィメチ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｆｉｍｅｔｉ）、チエラビア・ミクロスポラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ）、チエラビア・オビスポラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｏｖｉｓｐｏｒａ）、チエラビア・ペルビアナ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｐｅｒｕｖｉａｎａ）、チエラビア・セトサ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｓｅｔｏｓａ）、チエラビア・スペデドニウム（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｓｐｅｄｅｄｏｎｉｕｍ）、チエラビア・サブサーモフィラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｓｕｂｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、チエラビア・テレストリス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）、トリコデルマ・ハルジアナム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマ・コニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマ・ロンギブラキアタム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、またはトリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｅ）のポリペプチドである。
【００５９】
前述の種について、本発明は、完全および不完全状態の両方、ならびに他の分類学上の均等物（例えば、アナモルフ）を、それらが知られている種の名称に関わらず、包含することが理解されよう。当業者であれば、適切な均等物が何であるかを容易に認識するだろう。
【００６０】
これらの種の菌株は、多くの培養物コレクション（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）、Ｃｅｎｔｒａａｌｂｕｒｅａｕ  Ｖｏｏｒ  Ｓｃｈｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＣＢＳ）、およびＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＮＲＲＬ））において公的に容易に入手できる。
【００６１】
ポリペプチドは、自然界（例えば、土壌、堆肥、水など）から単離された微生物または天然素材（例えば、土壌、堆肥、水など）から直接得られたＤＮＡ試料を含めた他の供給源から、上述のプローブを用いて同定され得られ得る。自然の生息環境から直接微生物およびＤＮＡを単離するための手法は、当技術分野で周知である。さらに、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、別の微生物のゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡライブラリーまたは混合ＤＮＡ試料を同様にスクリーニングすることにより得られ得る。ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドがプローブを用いて検出されると、そのポリヌクレオチドは、当業者に公知の手法を利用することにより単離またはクローニングされ得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，上記参照）。
【００６２】
ポリヌクレオチド
本発明はまた、本明細書に記載されるように、本発明のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドに関する。
【００６３】
ポリヌクレオチドを単離またはクローニングするために使用される手法は、当技術分野で公知であり、ゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡ、またはそれらの組合せからの単離を含む。ゲノムＤＮＡからのポリヌクレオチドのクローニングは、例えば周知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）または共有される構造的特徴を有するクローニングされたＤＮＡ断片を検出するための発現ライブラリーの抗体スクリーニングを用いることにより、実施され得る。例えば、Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，ＰＣＲ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、連結活性化転写（ｌｉｇａｔｉｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）（ＬＡＴ）、およびポリヌクレオチドベースの増幅（ＮＡＳＢＡ）などの他の核酸増幅手順が使用され得る。ポリヌクレオチドは、セデセア属（Ｃｅｄｅｃｅａ）の菌株から、または関連生物からクローニングされ得、したがって、例えば、ポリヌクレオチドのポリペプチドコード領域の対立遺伝子変異体または種変異体であり得る。
【００６４】
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの修飾は、そのポリペプチドに実質的に類似するポリペプチドを合成するために必要であり得る。ポリペプチドに「実質的に類似する」という用語は、そのポリペプチドの天然に存在しない形態を指す。これらのポリペプチド（例えば、比活性、熱安定性、ｐＨ最適条件などが異なる変異体）は、その本来の供給源から単離されたポリペプチドとは、何らかの操作方法が異なり得る。こうした変異体は、配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列として示されるポリヌクレオチドに基づいて（例えば、そのサブ配列）、および／またはポリペプチドのアミノ酸配列における変化を結果としてもたらさないが、酵素の産生が意図された宿主生物のコドン使用頻度に対応する、ヌクレオチド置換の導入により、もしくは異なるアミノ酸配列を生じ得るヌクレオチド置換の導入により、構築され得る。ヌクレオチド置換の一般的な説明については、例えば、Ｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ２：９５−１０７を参照されたい。
【００６５】
核酸構築物
本発明はまた、制御配列と適合する条件下で好適な宿主細胞においてコード配列の発現をもたらす１つまたは複数の制御配列に作動可能に結合している本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物に関する。
【００６６】
ポリヌクレオチドは、ポリペプチドの発現をもたらすように種々の方法で操作され得る。ベクターへのポリヌクレオチドの挿入前のポリヌクレオチドの操作は、発現ベクターによっては望ましいかまたは必要であり得る。組換えＤＮＡ方法を利用してポリヌクレオチドを修飾するための手法が、当技術分野で周知である。
【００６７】
制御配列は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現のために宿主細胞により認識されるポリヌクレオチドである、プロモータであり得る。プロモータは、ポリペプチドの発現を仲介する転写制御配列を含有する。プロモータは、変異体プロモータ、末端切断（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）プロモータ、およびハイブリッドプロモータを含む、宿主細胞において転写活性を示す任意のポリヌクレオチドであり得、宿主細胞にとって同種または異種のいずれかである細胞外または細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から得られ得る。
【００６８】
細菌宿主細胞において本発明の核酸構築物の転写をもたらすのに好適なプロモータの例は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＱ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＬ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ペニシリナーゼ遺伝子（ｐｅｎＰ）、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）マルトース生成アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＭ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）レバンスクラーゼ遺伝子（ｓａｃＢ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｘｙｌＡおよびｘｙｌＢ遺伝子、バチルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ｃｒｙＩＩＩＡ遺伝子（Ａｇａｉｓｓｅ  ａｎｄ  Ｌｅｒｅｃｌｕｓ，１９９４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  １３：９７−１０７）、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｌａｃオペロン、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｔｒｃプロモータ（Ｅｇｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｇｅｎｅ  ６９：３０１−３１５）、ストレプトミセス・コエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）アガラーゼ遺伝子（ｄａｇＡ）、および原核生物β−ラクタマーゼ遺伝子（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７５：３７２７−３７３１）、さらにはｔａｃプロモータ（ＤｅＢｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２１−２５）から得られるプロモータである。さらなるプロモータは、Ｇｉｌｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ２４２：７４−９４の“Ｕｓｅｆｕｌ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｂａｃｔｅｒｉａ”；およびＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，上記参照、に記載されている。タンデムプロモータの例は、国際公開第９９／４３８３５号パンフレットに開示されている。
【００６９】
糸状真菌宿主細胞において本発明の核酸構築物の転写をもたらすのに好適なプロモータの例は、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）アセトアミダーゼ、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）中性α−アミラーゼ、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）酸安定性α−アミラーゼ、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）またはアスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）グルコアミラーゼ（ｇｌａＡ）、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）アルカリ性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン様プロテアーゼ（国際公開第９６／００７８７号パンフレット）、フザリウム・ベネナタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）アミログルコシダーゼ（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、フザリウム・ベネナタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）ダリア（Ｄａｒｉａ）（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、フザリウム・ベネナタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）クイン（Ｑｕｉｎｎ）（国際公開第００／５６９００号パンフレット）リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）リパーゼ、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）β−グルコシダーゼ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＶ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＶ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）β−キシロシダーゼのための遺伝子から得られるプロモータ、およびＮＡ２−ｔｐｉプロモータ（非翻訳リーダーがアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子からの非翻訳リーダーに置き換えられた、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）中性αアミラーゼ遺伝子からの修飾されたプロモータ；非限定的な例としては、非翻訳リーダーがアスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）またはアスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子からの非翻訳リーダーに置き換えられた、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）中性α−アミラーゼ遺伝子からの修飾されたプロモータ；ならびにその変異体プロモータ、末端切断プロモータ、およびハイブリッドプロモータが挙げられる。
【００７０】
酵母宿主においては、有用なプロモータは、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ガラクトキナーゼ（ＧＡＬ１）、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）アルコールデヒドロゲナーゼ／グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ１、ＡＤＨ２／ＧＡＰ）、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ）、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）メタロチオネイン（ＣＵＰ１）、およびサッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）３−ホスホグリセリン酸キナーゼのための遺伝子から得られる。酵母宿主細胞のための他の有用なプロモータは、Ｒｏｍａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｙｅａｓｔ  ８：４２３−４８８により記載されている。
【００７１】
制御配列はまた、転写ターミネータであり得、宿主細胞により認識されて転写を終結させる。ターミネータは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの３’末端に作動可能に結合される。宿主細胞中で機能を果たせる任意のターミネータが本発明において使用され得る。
【００７２】
細菌宿主細胞のための好ましいターミネータは、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ）アルカリ性プロテアーゼ（ａｐｒＨ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼ（ａｍｙＬ）、およびエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）リボソームＲＮＡ（ｒｒｎＢ）のための遺伝子から得られる。
【００７３】
糸状真菌宿主細胞のための好ましいターミネータは、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）アントラニル酸シンターゼ、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）α−グルコシダーゼ、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、およびフザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン様プロテアーゼのための遺伝子から得られる。
【００７４】
酵母宿主細胞のための好ましいターミネータは、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）チトクロムＣ（ＣＹＣ１）、およびサッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼのための遺伝子から得られる。酵母宿主細胞のための他の有用なターミネータは、Ｒｏｍａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，上記参照、により記載されている。
【００７５】
制御配列はまた、遺伝子の発現を増加させる、プロモータの下流にあってかつ遺伝子のコード配列の上流にあるｍＲＮＡスタビライザ領域であり得る。
【００７６】
好適なｍＲＮＡスタビライザ領域の例は、バチルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ｃｒｙＩＩＩＡ遺伝子（国際公開第９４／２５６１２号パンフレット）およびバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＳＰ８２遺伝子（Ｈｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  １７７：３４６５−３４７１）から得られる。
【００７７】
制御配列はまた、宿主細胞による翻訳に重要な、ｍＲＮＡの非翻訳領域である、リーダーであり得る。リーダーは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’末端に作動可能に結合される。宿主細胞中で機能を果たせる任意のリーダーが使用され得る。
【００７８】
糸状真菌宿主細胞のための好ましいリーダーは、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼおよびアスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）トリオースリン酸イソメラーゼのための遺伝子から得られる。
【００７９】
酵母宿主細胞に好適なリーダーは、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）３−ホスホグリセリン酸キナーゼ、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α因子、およびサッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）アルコールデヒドロゲナーゼ／グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ２／ＧＡＰ）のための遺伝子から得られる。
【００８０】
制御配列はまた、ポリヌクレオチドの３’末端に作動可能に結合される配列であって、転写されると転写されたｍＲＮＡにポリアデノシン残基を付加するシグナルとして宿主細胞により認識される配列である、ポリアデニレーション配列であり得る。宿主細胞中で機能を果たせる任意のポリアデニレーション配列が使用され得る。
【００８１】
糸状真菌宿主細胞のための好ましいポリアデニレーション配列は、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）アントラニル酸シンターゼ、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）α−グルコシダーゼ  アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、およびフザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン様プロテアーゼのための遺伝子から得られる。
【００８２】
酵母宿主細胞のために有用なポリアデニレーション配列は、Ｇｕｏ  ａｎｄ  Ｓｈｅｒｍａｎ，１９９５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌ．１５：５９８３−５９９０により記載されている。
【００８３】
制御配列はまた、ポリペプチドのＮ末端に結合されるシグナルペプチドをコードし、そのポリペプチドを細胞の分泌経路に指向するシグナルペプチドコード領域であり得る。ポリヌクレオチドのコード配列の５’末端は、ポリペプチドをコードするコード配列のセグメントと翻訳リーディングフレーム内で天然に結合されたシグナルペプチドコード配列を本質的に含有し得る。あるいは、コード配列の５’末端は、そのコード配列にとって外来のシグナルペプチドコード配列を含有し得る。外来シグナルペプチドコード配列は、コード配列がシグナルペプチドコード配列を天然に含有しない場合に必要とされ得る。あるいは、外来シグナルペプチドコード配列は、ポリペプチドの分泌を高めるために単に天然シグナルペプチドコード配列に取って代わり得る。しかしながら、発現されたポリペプチドを宿主細胞の分泌経路に指向する任意のシグナルペプチドコード配列が使用され得る。
【００８４】
細菌宿主細胞のための有効なシグナルペプチドコード配列は、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＮＣＩＢ  １１８３７マルトース生成アミラーゼ、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）サブチリシン、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）β−ラクタマーゼ、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）α−アミラーゼ、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）中性プロテアーゼ（ｎｐｒＴ、ｎｐｒＳ、ｎｐｒＭ）、およびバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｐｒｓＡのための遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。さらなるシグナルペプチドは、Ｓｉｍｏｎｅｎ  ａｎｄ  Ｐａｌｖａ，１９９３，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５７：１０９−１３７により記載されている。
【００８５】
糸状真菌宿主細胞のための有効なシグナルペプチドコード配列は、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）中性アミラーゼ、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）セルラーゼ、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）エンドグルカナーゼＶ、フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）リパーゼ、およびリゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼのための遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。
【００８６】
酵母宿主細胞のための有用なシグナルペプチドは、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α因子およびサッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）インベルターゼのための遺伝子から得られる。他の有用なシグナルペプチドコード配列は、Ｒｏｍａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，上記参照、により記載されている。
【００８７】
制御配列はまた、ポリペプチドのＮ末端に位置するプロペプチドをコードするプロペプチドコード配列であり得る。結果として生じるポリペプチドは、プロ酵素またはプロポリペプチド（または場合によってはチモーゲン）として公知である。プロポリペプチドは、一般的に不活性であり、プロポリペプチドからのプロペプチドの触媒的または自己触媒的切断によって活性なポリペプチドに変換され得る。プロペプチドコード配列は、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）アルカリ性プロテアーゼ（ａｐｒＥ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中性プロテアーゼ（ｎｐｒＴ）、ミセリオフトーラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）ラッカーゼ（国際公開第９５／３３８３６号パンフレット）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼ、およびサッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α因子のための遺伝子から得られ得る。
【００８８】
シグナルペプチド配列およびプロペプチド配列の両方が存在する場合は、プロペプチド配列は、ポリペプチドのＮ末端の隣に位置し、シグナルペプチド配列は、プロペプチド配列のＮ末端の隣に位置する。
【００８９】
宿主細胞の成長に関してポリペプチドの発現を調節する調節配列を加えることもまた望ましくあり得る。調節系の例は、調節化合物の存在を含む化学的または物理的刺激に応答して遺伝子の発現のスイッチをオンまたはオフにさせるものである。原核生物系における調節系としては、ｌａｃ、ｔａｃ、およびｔｒｐオペレーター系が挙げられる。酵母では、ＡＤＨ２系またはＧＡＬ１系が使用され得る。糸状真菌では、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼプロモータ、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡα−アミラーゼプロモータ、およびアスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）グルコアミラーゼプロモータが使用され得る。調節配列の他の例は、遺伝子増幅を可能にするものである。真核生物系では、これらの調節配列には、メトトレキセートの存在下で増幅されるジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、および重金属で増幅されるメタロチオネイン遺伝子が含まれる。これらの場合において、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、調節配列と作動可能に結合されよう。
【００９０】
発現ベクター
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド、プロモータ、ならびに転写および翻訳停止シグナルを含む組換え発現ベクターに関する。１つまたは複数の好都合な制限部位を含んでそのような部位においてポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの挿入または置換を可能にし得る組換え発現ベクターを、種々のヌクレオチド配列および制御配列を一緒に連結して作製し得る。あるいは、ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含む核酸構築物を、発現のための適切なベクターに挿入することにより発現され得る。発現ベクターを生成する際、コード配列は、コード配列が発現のための適切な制御配列と作動可能に結合されるようにベクター内に配置される。
【００９１】
組換え発現ベクターは、組換えＤＮＡ手順に好都合に供され得かつポリヌクレオチドの発現をもたらし得る、任意のベクター（例えば、プラスミドまたはウイルス）であり得る。ベクターの選択は、典型的には、ベクターと、ベクターが導入されることになる宿主細胞との適合性によって決まるだろう。ベクターは、直鎖状または閉環状プラスミドであり得る。
【００９２】
ベクターは、自律複製ベクター、すなわち、その複製が染色体の複製とは無関係である、染色体外のエンティティとして存在するベクター（例えば、プラスミド、染色体外エレメント、ミニ染色体、または人工染色体）であり得る。ベクターは、自己複製を確実にするための任意の手段を含有し得る。あるいは、ベクターは、宿主細胞に導入された時にゲノムに組み込まれ、それが組み込まれた染色体と一緒に複製されるものであり得る。さらに、単一のベクターもしくはプラスミド、または宿主細胞のゲノムに導入されるべき全ＤＮＡを一緒に含有する２つもしくはそれ以上のベクターもしくはプラスミド、またはトランスポゾンが使用され得る。
【００９３】
ベクターは、好ましくは、形質転換細胞、トランスフェクト細胞、形質導入細胞、または類似の細胞の容易な選択を可能にする１つまたは複数の選択可能マーカーを含有する。選択可能マーカーは、その産物が、殺生物剤またはウイルス耐性、重金属に対する耐性、栄養要求体に対する原栄養性（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｈｙ）などをもたらす遺伝子である。
【００９４】
細菌選択可能マーカーの例は、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）もしくはバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｄａｌ遺伝子、または抗生物質耐性（例えば、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、ネオマイシン、スペクチノマイシン、またはテトラサイクリン耐性）を付与するマーカーである。酵母宿主細胞に好適なマーカーとしては、これらに限定されないが、ＡＤＥ２、ＨＩＳ３、ＬＥＵ２、ＬＹＳ２、ＭＥＴ３、ＴＲＰ１、およびＵＲＡ３が挙げられる。糸状真菌宿主細胞における使用のための選択可能マーカーとしては、これらに限定されないが、ａｍｄＳ（アセトアミダーゼ）、ａｒｇＢ（オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ）、ｂａｒ（フォスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼ）、ｈｐｈ（ヒグロマイシンホスホトランスフェラーゼ）、ｎｉａＤ（硝酸レダクターゼ）、ｐｙｒＧ（オロチジン−５’−リン酸デカルボキシラーゼ）、ｓＣ（硫酸アデニルトランスフェラーゼ）、およびｔｒｐＣ（アントラニル酸シンターゼ）、ならびにそれらの均等物が挙げられる。アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）細胞における使用に好ましいのは、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）またはアスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ａｍｄＳおよびｐｙｒＧ遺伝子およびストレプトミセス・ハイグロスコピカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）ｂａｒ遺伝子である。
【００９５】
ベクターは、好ましくは、宿主細胞のゲノムへのベクターの組み込みまたはゲノムとは無関係な細胞内でのベクターの自律複製を可能にするエレメントを含有する。
【００９６】
宿主細胞ゲノムへの組み込みについて、ベクターは、相同または非相同組換えによるゲノムへの組み込みのために、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列またはベクターの任意の他のエレメントに依拠し得る。あるいは、ベクターは、染色体内の正確な位置での宿主細胞のゲノムへの相同組換えによる組み込みを指向するためのさらなるポリヌクレオチドを含有し得る。正確な位置での組み込みの可能性を高めるためには、組み込みエレメントは、相同組換えの確率を向上させるために、対応する標的配列に対して高度の配列同一性を有する十分な数の核酸（例えば、１００〜１０，０００塩基対、４００〜１０，０００塩基対、および８００〜１０，０００塩基対）を含有すべきである。組み込みエレメントは、宿主細胞のゲノム内の標的配列と相同である任意の配列であり得る。さらに、組み込みエレメントは、非コードまたはコードポリヌクレオチドであり得る。他方において、ベクターは、非相同組換えにより宿主細胞のゲノムに組み込まれ得る。
【００９７】
自律複製について、ベクターは、問題の宿主細胞においてベクターが自律複製することを可能にする複製起点をさらに含み得る。複製起点は、細胞内で機能する、自律複製を仲介する任意のプラスミドレプリケーターであり得る。「複製起点」または「プラスミドレプリケーター」という用語は、プラスミドまたはベクターがインビボで複製することを可能にするポリヌクレオチドを意味する。
【００９８】
細菌複製起点の例は、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）における複製を可能にするプラスミドｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９、ｐＡＣＹＣ１７７、およびｐＡＣＹＣ１８４、ならびにバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）における複製を可能にするｐＵＢ１１０、ｐＥ１９４、ｐＴＡ１０６０、およびｐＡＭβ１の複製起点である。
【００９９】
酵母宿主細胞における使用のための複製起点の例は、２ミクロン複製起点、ＡＲＳ１、ＡＲＳ４、ＡＲＳ１およびＣＥＮ３の組み合わせ、ならびにＡＲＳ４およびＣＥＮ６の組み合わせである。
【０１００】
繊維状真菌細胞において有用な複製起点の例は、ＡＭＡ１およびＡＮＳ１（Ｇｅｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｇｅｎｅ９８：６１−６７；Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：９１６３−９１７５；国際公開第００／２４８８３号パンフレット）である。ＡＭＡ１遺伝子の単離およびその遺伝子を含むプラスミドまたはベクターの構築は、国際公開第００／２４８８３号パンフレットに開示されている方法に従って遂行され得る。
【０１０１】
本発明のポリヌクレオチドの２コピー以上が、ポリペプチドの産生を増加させるために宿主細胞に挿入され得る。ポリヌクレオチドのコピー数の増加は、宿主細胞ゲノムへの当該配列の少なくとも１つのさらなるコピーを組み込むことにより、または増幅可能な選択可能マーカー遺伝子をポリヌクレオチドと共に含むことにより（ここで、選択可能マーカー遺伝子の増幅されたコピーを含有し、それによりポリヌクレオチドのさらなるコピーを含有する細胞は、適切な選択可能薬剤の存在下で細胞を培養することにより選択され得る）得られ得る。
【０１０２】
本発明の組換え発現ベクターを構築するための上記のエレメントを連結するために使用される手順は、当業者に周知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，上記参照）。
【０１０３】
宿主細胞
本発明はまた、本発明のポリペプチドの産生をもたらす１つまたは複数の制御配列に作動可能に結合している本発明のポリヌクレオチドを含む、組換え宿主細胞に関する。ポリヌクレオチドを含む構築物またはベクターは、その構築物またはベクターが染色体組み込み物（ｉｎｔｅｇｒａｎｔ）としてまたは先に記載した自己複製する染色体外ベクターとして維持されるように、宿主細胞に導入される。「宿主細胞」という用語は、複製の間に生じる突然変異のために親細胞と同一でない、親細胞のあらゆる後代を包含する。宿主細胞の選択は、ポリペプチドをコードする遺伝子およびその供給源に大いに依存する。
【０１０４】
宿主細胞は、本発明のポリペプチドの組換え産生において有用な任意の細胞（例えば、原核生物または真核生物）であり得る。
【０１０５】
原核生物宿主細胞は、任意のグラム陽性またはグラム陰性細菌であり得る。グラム陽性細菌としては、これらに限定されないが、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ゲオバチルス属（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、オーシャノバチルス属（Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、レンサ球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、およびストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が挙げられる。グラム陰性細菌としては、これらに限定されないが、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、セデセア属（Ｃｅｄｅｃｅａ）、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、フラボバクテリウム属（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、フゾバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、イリオバクター属（Ｉｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、およびウレアプラズマ属（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）が挙げられる。
【０１０６】
細菌宿主細胞は、これらに限定されないが、バチルス・アルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・サークランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・ラウタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｕｔｕｓ）、バチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、およびバチルス・ツリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の細胞が挙げられる、任意のバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞であり得る。
【０１０７】
細菌宿主細胞はまた、これらに限定されないが、ストレプトコッカス・エクウィシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）、およびストレプトコッカス・エクウィ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．Ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）の細胞が挙げられる、任意のレンサ球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞であり得る。
【０１０８】
細菌宿主細胞はまた、これらに限定されないが、ストレプトミセス・アクロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトミセス・アベルミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）、ストレプトミセス・コエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）、ストレプトミセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）、およびストレプトミセス・リビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｉｖｉｄａｎｓ）の細胞が挙げられる、任意のストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）細胞であり得る。
【０１０９】
細菌宿主細胞はまた、これらに限定されないが、セデセア・ダビセ（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｄａｖｉｓａｅ）、セデセア・ラペゲイ（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｌａｐｅｇｅｉ）、セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐ）００１（セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）３としても知られる）、セデセア・ネテリ（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｎｅｔｅｒｉ）（以前はセデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）４またはセデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）００２として知られていた）、セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐ）０１２（セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐｅｃｉｅｓ）５としても知られる）、またはセデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐ）−１６６４０のポリペプチドが挙げられる、任意のセデセア属（Ｃｅｄｅｃｅａ）細胞であり得る。
【０１１０】
細菌宿主細胞はまた、これらに限定されないが、セラチア・エントモフィラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｅｎｔｏｍｏｐｈｉｌａ）、セラチア・フィカリア（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｆｉｃａｒｉａ）、セラチア・フォンチコラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｆｏｎｔｉｃｏｌａ）、セラチア・グリメシイ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｇｒｉｍｅｓｉｉ）、セラチア・リクファシエンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、セラチア・オドリフェラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｏｄｏｒｉｆｅｒａ）、セラチア・プリムチカ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｐｌｙｍｕｔｈｉｃａ）、セラチア・プロテアマキュランス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｐｒｏｔｅａｍａｃｕｌａｎｓ）、セラチア・キニボランス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｑｕｉｎｉｖｏｒａｎｓ）、セラチア・ルビダエア（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｒｕｂｉｄａｅａ）、セラチア・シンビオチカ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｓｙｍｂｉｏｔｉｃａ）のポリペプチドが挙げられる、任意のセラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）細胞であり得る。
【０１１１】
バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、プロトプラスト形質転換（例えば、Ｃｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ，１９７９，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．１６８：１１１−１１５参照）、コンピテント細胞形質転換（例えば、Ｙｏｕｎｇ  ａｎｄ  Ｓｐｉｚｉｚｅｎ，１９６１，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．８１：８２３−８２９、またはＤｕｂｎａｕ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄｏｆｆ−Ａｂｅｌｓｏｎ，１９７１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５６：２０９−２２１参照）、エレクトロポレーション（例えば、Ｓｈｉｇｅｋａｗａ  ａｎｄ  Ｄｏｗｅｒ，１９８８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：７４２−７５１参照）、または接合（例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎｅ，１９８７，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：５２７１−５２７８参照）により実施され得る。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞へのＤＮＡの導入は、プロトプラスト形質転換（例えば、Ｈａｎａｈａｎ，１９８３，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６６：５５７−５８０参照）またはエレクトロポレーション（例えば、Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：６１２７−６１４５参照）により実施され得る。ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、プロトプラスト形質転換、エレクトロポレーション（例えば、Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｆｏｌｉａ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（Ｐｒａｈａ）４９：３９９−４０５参照）、接合（例えば、Ｍａｚｏｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７１：３５８３−３５８５）、または形質導入（例えば、Ｂｕｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：６２８９−６２９４）により実施され得る。シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、エレクトロポレーション（例えば、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６４：３９１−３９７参照）または接合（例えば、Ｐｉｎｅｄｏ  ａｎｄ  Ｓｍｅｔｓ，２００５，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７１：５１−５７）により実施され得る。レンサ球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、ナチュラルコンピテンス（例えば、Ｐｅｒｒｙ  ａｎｄ  Ｋｕｒａｍｉｔｓｕ，１９８１，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．３２：１２９５−１２９７参照）、プロトプラスト形質転換（例えば、Ｃａｔｔ  ａｎｄ  Ｊｏｌｌｉｃｋ，１９９１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｓ  ６８：１８９−２０７）、エレクトロポレーション（例えば、Ｂｕｃｋｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６５：３８００−３８０４）、または接合（例えば、Ｃｌｅｗｅｌｌ，１９８１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．４５：４０９−４３６）により実施され得る。しかしながら、宿主細胞にＤＮＡを導入するための当技術分野で公知の任意の方法が使用され得る。
【０１１２】
宿主細胞はまた、真核生物（例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、または真菌細胞）であり得る。
【０１１３】
宿主細胞は、真菌細胞であり得る。「真菌」は、本明細書で使用される場合、子嚢菌門、担子菌門、ツボカビ門、および接合菌門、さらに卵菌門およびすべての栄養胞子真菌を含む（Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ，Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ  ａｎｄ  Ｂｉｓｂｙ’ｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｆｕｎｇｉ，８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，ＣＡＢ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫにより定義されているとおり）。
【０１１４】
真菌宿主細胞は、酵母細胞であり得る。「酵母」は、本明細書で使用される場合、子嚢胞子形成酵母（エンドミセス目）、担子胞子形成酵母、および不完全菌類に属する酵母（不完全酵母菌網）を含む。酵母の分類は将来変わり得るので、本発明の目的のためには、酵母は、Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔ（Ｓｋｉｎｎｅｒ，Ｐａｓｓｍｏｒｅ，ａｎｄ  Ｄａｖｅｎｐｏｒｔ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｓｏｃ．Ａｐｐ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｎｏ．９，１９８０）に記載されているように定義されるものとする。
【０１１５】
酵母宿主細胞は、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ハンセヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、クルイベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロミセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、またはヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）の細胞（例えば、クルイベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、サッカロミセス・カールスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミセス・ジアスタチクス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）、サッカロミセス・ドウグラシイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｏｕｇｌａｓｉｉ）、サッカロミセス・クルイベリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、サッカロミセス・ノルベンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ）、サッカロミセス・オビフォルミス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｏｖｉｆｏｒｍｉｓ）、またはヤロウイア・リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）の細胞）であり得る。
【０１１６】
真菌宿主細胞は、糸状真菌細胞であり得る。「糸状真菌」は、真菌亜門（Ｅｕｍｙｃｏｔａ）および卵菌亜門（Ｏｏｍｙｃｏｔａ）のすべての糸状形態を含む（Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，上記参照、により定義されているとおり）。糸状真菌は、一般的に、キチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナン、および他の複雑な多糖類からなる菌糸体壁により特徴付けられる。栄養増殖は菌糸伸長によるものであり、炭素異化は絶対好気性である。それに対して、酵母（例えば、サッカロミセス・セレビジアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））による栄養増殖は単細胞葉状体の出芽によるものであり、炭素異化は発酵により得る。
【０１１７】
糸状真菌宿主細胞は、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、オーレオバシディウム属（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、ブジェルカンデラ属（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ）、セリポリオプシス属（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ）、クリソスポリウム属（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、ヒトヨタケ属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）、コリオラス属（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、フィリバシジウム属（Ｆｉｌｉｂａｓｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、マグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）、ケカビ属（Ｍｕｃｏｒ）、ミセリオフトーラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）、ネオカリマスティクス属（Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ）、アカパンカビ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、ペシロミセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ファネロカエテ属（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ）、フレビア属（Ｐｈｌｅｂｉａ）、ピロミセス属（Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ）、ヒラタケ属（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）、スエヒロタケ属（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ）、タラロミセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、サーモアスカス属（Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、ホウロクタケ属（Ｔｒａｍｅｔｅｓ）、またはトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）の細胞であり得る。
【０１１８】
例えば、糸状真菌宿主細胞は、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・フォエチヅス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｏｅｔｉｄｕｓ）、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・ジャポニカス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニーゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、ブジェルカンデラ・アダスタ（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ  ａｄｕｓｔａ）、セリポリオプシス・アネイリナ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ａｎｅｉｒｉｎａ）、セリポリオプシス・カレギエア（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｃａｒｅｇｉｅａ）、セリポリオプシス・ギルベセンス（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｇｉｌｖｅｓｃｅｎｓ）、セリポリオプシス・パンノシンタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｐａｎｎｏｃｉｎｔａ）、セリポリオプシス・リブロサ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｒｉｖｕｌｏｓａ）、セリポリオプシス・スブルファ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｕｂｒｕｆａ）、セリポリオプシス・スブベルミスポラ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｕｂｖｅｒｍｉｓｐｏｒａ）、クリソスポリウム・イノプス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｉｎｏｐｓ）、クリソスポリウム・ケラチノフィルム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｋｅｒａｔｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）、クリソスポリウム・ルクノウェンセ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、クリソスポリウム・メルダリウム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｍｅｒｄａｒｉｕｍ）、クリソスポリウム・パンニコラ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｐａｎｎｉｃｏｌａ）、クリソスポリウム・クェエンスランジカム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ）、クリソスポリウム・トロピカム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｔｒｏｐｉｃｕｍ）、クリソスポリウム・ゾナタム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｚｏｎａｔｕｍ）、コプリヌス・シネレウス（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｉｎｅｒｅｕｓ）、コリオルス・ヒルスタス（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｈｉｒｓｕｔｕｓ）、フザリウム・バクトリジオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｂａｃｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・セレアリス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｅｒｅａｌｉｓ）、フザリウム・クロオクウェレンセ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ）、フザリウム・カルモラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウム・グラミナム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｕｍ）、フザリウム・ヘテロスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・ネグンジ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｎｅｇｕｎｄｉ）、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・レチクラタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）、フザリウム・ロゼウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ）、フザリウム・サンブシナム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｍｂｕ���ｉｎｕｍ）、フザリウム・サルコクロウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｒｃｏｃｈｒｏｕｍ）、フザリウム・スポロトリキオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・スルフレウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ）、フザリウム・トルロサム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ）、フザリウム・トリコテシオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・ベネナタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、ムーコル・ミエヘイ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、ミセリオフトーラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、ニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、ペニシリウム・プルプロゲナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）、ファネロカエテ・クリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ  ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、フレビア・ラジアタ（Ｐｈｌｅｂｉａ  ｒａｄｉａｔａ）、プレウロタス・エリンギイ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｅｒｙｎｇｉｉ）、チエラビア・テレストリス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）、トラメテス・ビロサ（Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｖｉｌｌｏｓａ）、トラメテス・ベルシコロル（Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、トリコデルマ・ハルジアナム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマ・コニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマ・ロンギブラキアタム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、またはトリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｅ）の細胞であり得る。
【０１１９】
真菌細胞は、それ自体公知のやり方で、プロトプラスト形成、プロトプラストの形質転換、および細胞壁の再生を含む方法により、形質転換され得る。アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）およびトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）宿主細胞の形質転換に適した手順は、欧州特許第２３８０２３号明細書、Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：１４７０−１４７４、およびＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１４１９−１４２２に記載されている。フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種を形質転換するのに適した方法は、Ｍａｌａｒｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｇｅｎｅ  ７８：１４７−１５６、および国際公開第９６／００７８７号パンフレットにより記載されている。酵母は、Ｂｅｃｋｅｒ  ａｎｄ  Ｇｕａｒｅｎｔｅ，Ｉｎ  Ａｂｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｎ．ａｎｄ  Ｓｉｍｏｎ，Ｍ．Ｉ．，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  １９４，ｐｐ１８２−１８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５３：１６３；およびＨｉｎｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７５：１９２０により記載されている手順を用いて形質転換され得る。
【０１２０】
作製方法
本発明はまた、本発明のポリペプチドを作製する方法であって、（ａ）ポリペプチドの産生に資する条件下で、野生型形態においてポリペプチドを産生する細胞を培養することと、（ｂ）ポリペプチドを回収することとを含む、方法に関する。好ましい態様では、細胞は、セデセア属（Ｃｅｄｅｃｅａ）の細胞である。より好ましい態様では、細胞は、セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐ）−１６６４０の細胞である。
【０１２１】
本発明はまた、本発明のポリペプチドを作製する方法であって、（ａ）ポリペプチドの産生に資する条件下で、本発明の組換え宿主細胞を培養することと、（ｂ）ポリペプチドを回収することとを含む、方法に関する。
【０１２２】
宿主細胞は、当技術分野で公知の方法を用いてポリペプチドの産生に適した栄養培地中で培養される。例えば、細胞は、振盪フラスコ培養により、または好適な培地中でポリペプチドが発現および／もしくは単離されることを可能にする条件下において行われる実験用もしくは工業用発酵槽中での小規模もしくは大規模発酵（連続発酵、回分発酵、流加発酵、または固相発酵を含む）により、培養され得る。培養は、当技術分野で公知の手順を用いて、炭素および窒素の供給源ならびに無機塩を含む好適な栄養培地中で行われる。好適な培地は、商業的供給業者から入手可能であるか、または（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログにおいて）公開された組成に従って調製され得る。ポリペプチドが栄養培地中に分泌される場合は、ポリペプチドは、その培地から直接回収され得る。ポリペプチドが分泌されない場合は、ポリペプチドは、細胞溶解産物から回収され得る。
【０１２３】
ポリペプチドは、ポリペプチドに特異的な当技術分野で公知の方法を用いて検出され得る。これらの検出方法としては、これらに限定されないが、特異的抗体の使用、酵素産物の形成、または酵素基質の消失が挙げられる。例えば、酵素アッセイは、ポリペプチドの活性を決定するために使用され得る。
【０１２４】
ポリペプチドは、当技術分野で公知の方法を用いて回収され得る。例えば、ポリペプチドは、通常の手順（これらに限定されないが、収集、遠心分離、濾過、抽出、噴霧乾燥、蒸発、または沈殿が挙げられる）により栄養培地から回収され得る。
【０１２５】
ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドを得るために、当技術分野で公知の種々の手順（これらに限定されないが、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、疎水性、クロマトフォーカシング、およびサイズ排除）、電気泳動法（例えば、分取等電点電気泳動）、示差溶解度（例えば、硫酸アンモニウム沈殿）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、または抽出（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｊａｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒｙｄｅｎ，ｅｄｉｔｏｒｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９参照）が挙げられる）により精製され得る。
【０１２６】
代替的な態様では、ポリペプチドは回収されないで、ポリペプチドを発現させる本発明の宿主細胞がポリペプチドの供給源として使用される。
【０１２７】
植物
本発明はまた、回収可能な量でポリペプチドまたはドメインを発現および産生するように本発明のポリヌクレオチドを含む、単離された植物（例えば、トランスジェニック植物）、植物部分、または植物細胞に関する。ポリペプチドまたはドメインは、植物または植物部分から回収され得る。あるいは、ポリペプチドまたはドメインを含有する植物または植物部分はそのまま、食物もしくは飼料の質を改善する（例えば、栄養価、嗜好性、およびレオロジー特性を改善する）ために、または栄養阻害因子（ａｎｔｉｎｕｔｒｉｔｉｖｅ  ｆａｃｔｏｒ）を破壊するために使用され得る。
【０１２８】
トランスジェニック植物は、双子葉植物（ｄｉｃｏｔ）または単子葉植物（ｍｏｎｏｃｏｔ）であり得る。単子葉植物の例は、草（例えば、牧草（イチゴツナギ、イチゴツナギ属）、試料草（例えば、ウシノケグサ属、ドクムギ属）、寒地型牧草（例えば、ヌカボ属）、および穀草（例えば、コムギ、オートムギ、ライムギ、オオムギ、イネ、モロコシ、およびメイズ（トウモロコシ）））である。
【０１２９】
双子葉植物の例は、タバコ、マメ科植物（例えば、ルピナス）、ジャガイモ、テンサイ、エンドウ、インゲン、およびダイズ、ならびにアブラナ科植物（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ科）（例えば、カリフラワー、ナタネ、および近縁モデル生物アラビドプシス・タリアナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ））である。
【０１３０】
植物部分の例は、茎、カルス、葉、根、果実、種子、および塊茎、ならびにこれらの部分を構成する個々の組織（例えば、表皮、葉肉、柔組織、維管束組織、分裂組織）である。特定の植物細胞コンパートメント（例えば、葉緑体、アポプラスト、ミトコンドリア、液胞、ペルオキシソームおよび細胞質）もまた、植物部分であると見なされる。さらに、組織起源が何であろうと、あらゆる植物細胞が、植物部分であると見なされる。同様に、本発明の利用を容易にするために単離された特定の組織および細胞などの植物部分（例えば、胚、胚乳、アリューロン、および種皮）もまた、植物部分と見なされる。
【０１３１】
そのような植物、植物部分、および植物細胞の後代もまた、本発明の範囲内に含まれる。
【０１３２】
ポリペプチドまたはドメインを発現させるトランスジェニック植物または植物細胞は、当技術分野で公知の方法に従って構築され得る。手短に言えば、こうした植物または植物細胞は、ポリペプチドまたはドメインをコードする１つまたは複数の発現構築物を植物宿主ゲノムまたは葉緑体ゲノムに組み込み、結果として生じた改変された植物または植物細胞を増殖させてトランスジェニック植物または植物細胞とすることにより構築される。
【０１３３】
発現構築物は、好都合には、選択した植物または植物部分におけるポリヌクレオチドの発現に必要とされる適切な調節配列と作動可能に結合しているポリペプチドまたはドメインをコードするポリヌクレオチドを含む核酸構築物である。さらに、発現構築物は、発現構築物が組み込まれた植物細胞を同定するのに有用な選択可能マーカー、および問題の植物への構築物の導入に必要なＤＮＡ配列を含み得る（後者は使用されるＤＮＡ導入方法にもよる）。
【０１３４】
調節配列（例えば、プロモータ配列およびターミネータ配列ならびに任意選択でシグナルまたはトランジット配列）の選択は、例えば、ポリペプチドまたはドメインがいつ、どこで、そして如何にして発現されることが望まれるかに基づいて、決定される。例えば、ポリペプチドまたはドメインをコードする遺伝子の発現は、構成的でも誘導的でもよいし、または発育段階特異的でも組織特異的でもよく、また、遺伝子産物は、特定の組織または植物部分（例えば、種子または葉）を標的とし得る。調節配列は、例えば、Ｔａｇｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ８６：５０６により記載されている。
【０１３５】
構成的発現には、３５Ｓ−ＣａＭＶ、メイズユビキチン１、またはイネアクチン１プロモータが使用され得る（Ｆｒａｎｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ  ２１：２８５−２９４；Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８：６７５−６８９；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ３：１１５５−１１６５）。器官特異的プロモータは、例えば、貯蔵シンク組織（例えば、種子、ジャガイモ塊茎、および果実）からのプロモータ（Ｅｄｗａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｒｕｚｚｉ，１９９０，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２４：２７５−３０３）、または代謝シンク組織（例えば、分裂組織）からのプロモータ（Ｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．１９９４，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２４：８６３−８７８）、種子特異的プロモータ（例えば、イネからのグルテリン、プロラミン、グロブリン、またはアルブミンプロモーター）（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．１９９８，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．３９：８８５−８８９）、ビシア・ファバ（Ｖｉｃｉａ  ｆａｂａ）からのレグミンＢ４および未知の種子タンパク質遺伝子からのビシア・ファバ（Ｖｉｃｉａ  ｆａｂａ）プロモータ（Ｃｏｎｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５２：７０８−７１１）、種子油体タンパク質からのプロモータ（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．３９：９３５−９４１）、ブラシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）からの貯蔵タンパク質ｎａｐＡプロモータ、または、例えば国際公開第９１／１４７７２号パンフレットに記載されている、当技術分野で公知の任意の他の種子特異的プロモータであり得る。さらに、プロモータは、葉特異的プロモータ（例えば、イネまたはトマトからのｒｂｃｓプロモータ）（Ｋｙｏｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０２：９９１−１０００）、コレラウイルスアデニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモータ（Ｍｉｔｒａ  ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ，１９９４，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６：８５−９３）、イネからのａｌｄＰ遺伝子プロモータ（Ｋａｇａｙａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２４８：６６８−６７４）、または創傷誘導性プロモータ（例えば、ジャガイモｐｉｎ２プロモータ（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２：５７３−５８８））であり得る。同様に、プロモータは、非生物的処理（例えば、温度、乾燥、または塩分変化）により誘導され得るか、またはプロモータを活性化する外因的に適用される物質（例えば、エタノール、エストロゲン、植物ホルモン（例えば、エチレン、アブシジン酸、およびジベレリン酸）、および重金属）により誘導され得る。
【０１３６】
プロモータエンハンサーエレメントもまた、植物中のポリペプチドまたはドメインのより高い発現を達成するために使用され得る。例えば、プロモータエンハンサーエレメントは、プロモータとポリペプチドまたはドメインをコードするポリヌクレオチドとの間に配置されるイントロンであり得る。例えば、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，上記参照、は、発現を高めるためのイネアクチン１遺伝子の第１イントロンの使用を開示している。
【０１３７】
選択可能マーカー遺伝子および発現構築物の任意の他の部分は、当技術分野で利用可能なものから選択され得る。
【０１３８】
核酸構築物は、当技術分野で公知の通常の手法（アグロバクテリウム属（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）媒介形質転換、ウイルス媒介形質転換、顕微注射、粒子衝撃、バイオリスティック形質転換、およびエレクトロポレーションを含む）に従って植物ゲノムに組み込まれる（Ｇａｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１２９３；Ｐｏｔｒｙｋｕｓ，１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：５３５；Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ  ３３８：２７４）。
【０１３９】
アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）媒介遺伝子移入は、トランスジェニック双子葉植物を生成するための方法であり（概観については、Ｈｏｏｙｋａｓ  ａｎｄ  Ｓｃｈｉｌｐｅｒｏｏｒｔ，１９９２，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９：１５−３８参照）かつ単子葉植物を形質転換するための方法でもあるが、他の形質転換方法が、これらの植物のために使用され得る。トランスジェニック単子葉植物を生成するための方法は、胚カルスまたは発生中の胚の粒子衝撃（形質転換用ＤＮＡでコーティングされた微細な金粒子またはタングステン粒子）である（Ｃｈｒｉｓｔｏｕ，１９９２，Ｐｌａｎｔ  Ｊ．２：２７５−２８１；Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ，１９９４，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５：１５８−１６２；Ｖａｓｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：６６７−６７４）。単子葉植物の形質転換のための代替方法は、Ｏｍｉｒｕｌｌｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１：４１５−４２８により記載されているようにプロトプラスト形質転換に基づくものである。さらなる形質転換方法としては、米国特許第６３９５９６６号明細書および米国特許第７１５１２０４号明細書（これらは両方とも、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものが挙げられる。
【０１４０】
形質転換に続いて、発現構築物を組み込んだ形質転換体が選択され、当技術分野で周知の方法に従って、完全な植物に再生される。多くの場合、形質転換手順は、例えば、２つの別個のＴ−ＤＮＡ構築物を用いる共形質転換または特異的リコンビナーゼによる選択遺伝子の部位特異的切除を用いることにより、再生中または次の世代のいずれかにおいて、選択遺伝子を選択的に排除するように設計される。
【０１４１】
本発明の構築物による特定の植物遺伝子型の直接的形質転換に加えて、トランスジェニック植物は、構築物を有する植物を、構築物を欠く別の植物に交配することによって作製され得る。例えば、ポリペプチドまたはドメインをコードする構築物は、特定の植物品種に、全くその所与の品種の植物を直接形質転換する必要なしに、交配により導入され得る。したがって、本発明は、本発明に従って形質転換された細胞から直接再生される植物のみならず、そのような植物の後代も包含する。本明細書で使用される場合、後代とは、本発明に従って調製される親植物の任意の世代の子孫を指し得る。そのような後代は、本発明に従って調製されたＤＮＡ構築物を含み得る。交配は、出発系とドナー植物系との他花受粉により植物系への導入遺伝子の導入を結果としてもたらす。そのような工程の非限定的な例は、米国特許第７１５１２０４号明細書に記載されている。
【０１４２】
植物は、戻し交配変換のプロセスによって生成され得る。例えば、植物は、戻し交配変換された遺伝子型、系統、同系繁殖体（ｉｎｂｒｅｄ）またはハイブリッドと称される植物を含む。
【０１４３】
遺伝子マーカーは、一方の遺伝的背景から他方の遺伝的背景への本発明の１つまたは複数の導入遺伝子の遺伝子移入を支援するために使用され得る。マーカー支援選択は、それが表現型変異に起因するエラーを回避するために使用され得るという点で、通常の育種に比べて利点を提供する。さらに、遺伝子マーカーは、特定の交配の個々の後代におけるエリート生殖質の相対的程度に関するデータを提供し得る。例えば、さもなければ農学的に望ましくない遺伝的背景を有する所望の形質を有する植物がエリート親に交配される場合は、遺伝子マーカーは、関心のある形質を保有するのみならず、比較的大きな割合の所望の生殖質も有する後代を選択するために使用され得る。このようにして、特定の遺伝的背景に１つまたは複数の形質を遺伝子移入するために必要とされる世代数が、最小限に抑えられる。
【０１４４】
本発明はまた、本発明のポリペプチドまたはドメインを作製する方法であって、（ａ）ポリペプチドまたはドメインの産生に資する条件下で、ポリペプチドまたはドメインをコードするポリヌクレオチドを含むトランスジェニック植物または植物細胞を培養することと、（ｂ）ポリペプチドまたはドメインを回収することとを含む、方法に関する。
【０１４５】
組成物
以下に例示される組成物成分の非限定的なリストは、組成物における使用に適するものであり、ここにおける方法は、例えば、洗浄性能を助けるまたは高めるため、洗浄されるべき基材の処理のため、または香料、着色剤、染料などの場合と同様に組成物の審美性を改変するために、本発明の特定の実施形態に望ましく組み込まれ得る。任意の組成物に組み込まれる任意のそのような成分のレベルは、組み込みについて先に記載されたあらゆる材料に追加される。これらのさらなる成分の正確な性質およびそれらの組み込みのレベルは、組成物の物理的形態およびそれが使用されることになる洗浄操作の性質によって決まることになる。他に指示がない限り、パーセント量は、組成物の重量を基準とするものである（重量％）。好適な成分材料としては、これらに限定されないが、界面活性剤、ビルダー、キレート剤、染料移行阻害剤、分散剤、酵素、および酵素安定化剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、事前に形成した過酸、ポリマー分散剤、粘土汚染物除去剤／再付着防止剤、増白剤、抑泡剤、染料、色調染料、香料、香料送達系、構造弾力化剤、布地柔軟剤、担体、ヒドロトロープ、加工助剤、溶媒、および／または顔料が挙げられる。以下の開示に加えて、他のこのような成分の好適例および使用レベルについては、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５５７６２８２号明細書、米国特許第６３０６８１２号明細書、および米国特許第６３２６３４８号明細書に見出される。
【０１４６】
それ故、特定の実施形態では、本発明は、以下の補助材料の１つまたは複数を含有しない：界面活性剤、ビルダー、キレート剤、染料移行阻害剤、分散剤、追加の酵素、および酵素安定化剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、事前に形成した過酸、ポリマー分散剤、粘土汚染物除去剤／再付着防止剤、増白剤、抑泡剤、染料、香料、香料送達系、構造弾力化剤、布地柔軟剤、担体、ヒドロトロープ、加工助剤、溶媒、および／または顔料。しかしながら、１つまたは複数の成分が存在する場合、以下に詳述するような１つまたは複数の成分が存在し得る。
【０１４７】
界面活性剤−本発明による組成物は、界面活性剤または界面活性剤系を含むことができ、この界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、両性イオン性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤、およびそれらの混合物から選択することができる。界面活性剤は、存在する場合、典型的には、０．１〜６０重量％、１〜５０重量％または５〜４０重量％のレベルで存在する。
【０１４８】
好適なアニオン性洗浄界面活性剤には、スルフェートおよびスルホネート洗浄界面活性剤が含まれる。
【０１４９】
好適なスルホネート洗浄界面活性剤には、アルキルベンゼンスルホネート、一態様では、Ｃ10〜13アルキルベンゼンスルホネートが含まれる。好適なアルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）は、市販の直鎖アルキルベンゼン（ＬＡＢ）をスルホン化することにより得ることができ；好適なＬＡＢには、Ｉｓｏｃｈｅｍ（登録商標）またはＰｅｔｒｅｌａｂ（登録商標）などの低級２−フェニルＬＡＢが含まれ、他の好適なＬＡＢには、Ｈｙｂｌｅｎｅ（登録商標）などの高級２−フェニルＬＡＢが含まれる。好適なアニオン性洗浄界面活性剤は、ＤＥＴＡＬ触媒工程により得られるアルキルベンゼンスルホネートであるが、ＨＦなどの他の合成経路が適していることもある。一態様では、ＬＡＳのマグネシウム塩が使用される。
【０１５０】
好適なスルフェート洗浄界面活性剤には、アルキルスルフェート、一態様では、Ｃ8〜18アルキルスルフェートまたは主としてＣ12アルキルスルフェートが含まれる。
【０１５１】
他の好適なスルフェート洗浄界面活性剤は、アルキルアルコキシル化スルフェート、一態様ではアルキルエトキシル化スルフェート、一態様ではＣ8〜18アルキルアルコキシル化スルフェート、別の態様ではＣ8〜18アルキルエトキシル化スルフェートであり、典型的には、アルキルアルコキシル化スルフェートの平均アルコキシル化度は０．５〜２０または０．５〜１０であり、典型的には、アルキルアルコキシル化スルフェートは、平均エトキシル化度が０．５〜１０、０．５〜７、０．５〜５、または０．５〜３のＣ8〜18アルキルエトキシル化スルフェートである。
【０１５２】
アルキルスルフェート、アルキルアルコキシル化スルフェート、およびアルキルベンゼンスルホネートは、直鎖状であっても分枝状であってもよく、置換されていても置換されていなくてもよい。
【０１５３】
洗浄界面活性剤は、中間鎖分枝洗浄界面活性剤、一態様では、中間鎖分枝アニオン性洗浄界面活性剤、一態様では、中間鎖分枝アルキルスルフェート、および／または中間鎖分枝アルキルベンゼンスルホネート、例えば、中間鎖分枝アルキルスルフェートであってもよい。一態様では、中間鎖分枝は、Ｃ1〜4アルキル基、典型的には、メチル基および／またはエチル基である。
【０１５４】
好適な非イオン性洗浄界面活性剤は、以下のものからなる群から選択される：ＮＥＯＤＯＬ（登録商標）などのＣ8〜Ｃ18アルキルエトキシレート；アルコキシレート単位がエチレンオキシ単位、プロピレンオキシ単位、またはそれらの混合物であり得るＣ6〜Ｃ12アルキルフェノールアルコキシレート；Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）など、エチレンオキシド／プロピレンオキシドブロックポリマーとのＣ12〜Ｃ18アルコールおよびＣ6〜Ｃ12アルキルフェノール縮合物；Ｃ14〜Ｃ22中間鎖分枝アルコール；典型的には１〜３０の平均アルコキシル化度を有するＣ14〜Ｃ22中間鎖分枝アルキルアルコキシレート；アルキルポリサッカライド、一態様では、アルキルポリグリコシド；ポリヒドロキシ脂肪酸アミド；エーテルキャップドポリ（オキシアルキル化）アルコール界面活性剤；ならびにそれらの混合物。
【０１５５】
好適な非イオン性洗浄界面活性剤には、アルキルポリグルコシドおよび／またはアルキルアルコキシル化アルコールが含まれる。
【０１５６】
一態様では、非イオン性洗浄界面活性剤には、アルキルアルコキシル化アルコール、一態様では、Ｃ8〜18アルキルアルコキシル化アルコール、例えばＣ8〜18アルキルエトキシル化アルコールが含まれ、アルキルアルコキシル化アルコールは、１〜５０、１〜３０、１〜２０、または１〜１０の平均アルコキシ化度を有し得る。一態様では、アルキルアルコキシル化アルコールは、１〜１０、１〜７、さらには１〜５または３〜７の平均エトキシ化度を有するＣ8〜18アルキルエトキシル化アルコールであってもよい。アルキルアルコキシル化アルコールは、直鎖状であっても分枝状であってもよく、置換されていても置換されていなくてもよい好適な非イオン性界面活性剤にはＬｕｔｅｎｓｏｌ（登録商標）が含まれる。
【０１５７】
好適なカチオン性洗浄界面活性剤には、アルキルピリジニウム化合物、アルキル第四級アンモニウム化合物、アルキル第四級ホスホニウム化合物、アルキル第三級スルホニウム化合物、およびそれらの混合物が含まれる。
【０１５８】
好適なカチオン性洗浄界面活性剤は、以下の一般式を有する第四級アンモニウム化合物である：（Ｒ）（Ｒ1）（Ｒ2）（Ｒ3）Ｎ+  Ｘ-、式中、Ｒは、直鎖または分枝の置換または無置換Ｃ6〜18アルキルまたはアルケニル部分であり、Ｒ1およびＲ2は独立して、メチルまたはエチル部分から選択され、Ｒ3は、ヒドロキシル、ヒドロキシメチル、またはヒドロキシエチル部分であり、Ｘは、電荷的中性を付与するアニオンであり、好適なアニオンには、ハライド、例えばクロライド；スルフェート；およびスルホネートが含まれる。好適なカチオン性洗浄界面活性剤は、モノＣ6〜18アルキルモノヒドロキシエチルジメチル第四級アンモニウムクロライドである。極めて好適なカチオン性洗浄界面活性剤は、モノＣ8〜10アルキルモノヒドロキシエチルジメチル第四級アンモニウムクロライド、モノＣ10〜12アルキルモノヒドロキシエチルジメチル第四級アンモニウムクロライド、およびモノＣ10アルキルモノヒドロキシエチルジメチル第四級アンモニウムクロライドである。
【０１５９】
好適な両性／双性イオン性界面活性剤としては、アミンオキシドおよびベタインが挙げられる。アミン中和化アニオン性界面活性剤−本発明のアニオン性界面活性剤および補助アニオン性共界面活性剤は、酸形態で存在し得るものであり、前記酸形態を中和して、本洗剤組成物で使用するのに望ましい界面活性剤塩を形成させることができる。典型的な中和剤には、水酸化物、例えばＮａＯＨまたはＫＯＨなどの金属対イオン塩基が含まれる。酸形態にある、本発明のアニオン性界面活性剤および補助アニオン性界面活性剤または共界面活性剤を中和するためのさらなる好ましい薬剤には、アンモニア、アミン、またはアルカノールアミンが含まれる。アルカノールアミンが好ましい。好適な非限定例としては、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、および当技術分野で公知の他の直鎖又は分枝アルカノールアミンが挙げられ、例えば、極めて好ましいアルカノールアミンとしては、２−アミノ−１−プロパノール、１−アミノプロパノール、モノイソプロパノールアミン、または１−アミノ−３−プロパノールが挙げられる。アミンによる中和は、全体的または部分的な範囲で行うことができ、例えば、アニオン性界面活性剤混合物の一部をナトリウムまたはカリウムで中和し、アニオン性界面活性剤混合物の一部をアミンまたはアルカノールアミンで中和することもできる。
【０１６０】
１種または複数のアニオン性界面活性剤と、それに加えて、任意選択でカチオン性界面活性剤などの追加の界面活性剤を伴う１種または複数の非イオン性界面活性剤との混合物を含む界面活性剤系が好ましいこともある。アニオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤との好ましい重量比は、少なくとも２：１、または少なくとも１：１〜１：１０である。
【０１６１】
ビルダー−本発明の組成物は、１種または複数のビルダー、共ビルダー、ビルダー系、またはそれらの混合物を含むことができる。ビルダーが使用される場合、洗浄組成物は、典型的には、少なくとも１重量％、２〜６０重量％、または５〜１０重量％のビルダーを含むことになる。食器洗浄組成物では、ビルダーのレベルは、典型的には、４０〜６５重量％、または５０〜６５重量％である。組成物は、ビルダーを実質的に含まなくてもよく；実質的に含まないということは、ゼオライトおよび／またはリン酸が「意図的に添加されていない」ことを意味する。典型的なゼオライトビルダーには、ゼオライトＡ、ゼオライトＰ、およびゼオライトＭＡＰが含まれる。典型的なリン酸ビルダーは、トリポリリン酸ナトリウムである。
【０１６２】
ビルダーおよび／または共ビルダーは、特に、ＣａおよびＭｇと水溶性錯体を形成するキレート剤であってもよい。洗剤で使用される当技術分野で公知のいずれのビルダーおよび／または共ビルダーも利用することができる。ビルダーの非限定例としては、ゼオライト、ジホスフェート（ピロホスフェート）、三リン酸ナトリウム（ＳＴＰまたはＳＴＰＰ）などのトリホスフェート、炭酸ナトリウムなどのカーボネート、メタケイ酸ナトリウムなどの可溶性シリケート、層状シリケート（例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ製のＳＫＳ−６）、２−アミノエタン−１−オール（ＭＥＡ）、イミノジエタノール（ＤＥＡ）、および２，２’，２”−ニトリロトリエタノール（ＴＥＡ）などのエタノールアミン、ならびにカルボキシメチルイヌリン（ＣＭＩ）、ならびにそれらの組合せが挙げられる。
【０１６３】
洗浄組成物は、共ビルダーを単独で、またはビルダー、例えばゼオライトビルダーと組み合わせて含むことができる。共ビルダーの非限定例としては、ポリアクリレートのホモポリマーまたはそのコポリマー、例えば、ポリ（アクリル酸）（ＰＡＡ）またはコポリ（アクリル酸／マレイン酸）（ＰＡＡ／ＰＭＡ）が挙げられる。さらに非限定例としては、シトレート、キレート剤、例えば、アミノカルボキシレート、アミノポリカルボキシレートおよびホスホネート、ならびにアルキル−またはアルケニルコハク酸が挙げられる。さらなる特定の例としては、２，２’，２”−ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、イミノ二コハク酸（ＩＤＳ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＥＤＤＳ）、メチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）、グルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジイルビス（ホスホン酸）（ＨＥＤＰ）、エチレンジアミンテトラキス（メチレン）テトラキス（ホスホン酸）（ＥＤＴＭＰＡ）、ジエチレントリアミンペンタキス（メチレン）ペンタキス（ホスホン酸）（ＤＴＰＭＰＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸（ＥＤＧ）、アスパラギン酸−Ｎ−一酢酸（ＡＳＭＡ）、アスパラギン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＡＳＤＡ）、アスパラギン酸−Ｎ−一プロピオン酸（ＡＳＭＰ）、イミノ二コハク酸（ＩＤＡ）、Ｎ−（２−スルホメチル）アスパラギン酸（ＳＭＡＳ）、Ｎ−（２−スルホエチル）アスパラギン酸（ＳＥＡＳ）、Ｎ−（２−スルホメチル）グルタミン酸（ＳＭＧＬ）、Ｎ−（２−スルホエチル）グルタミン酸（ＳＥＧＬ）、Ｎ−メチルイミノ二酢酸（ＭＩＤＡ）、α−アラニン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（α−ＡＬＤＡ）、セリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＥＤＡ）、イソセリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＩＳＤＡ）、フェニルアラニン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＰＨＤＡ）、アントラニル酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＡＮＤＡ）、スルファニル酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＬＤＡ）、タウリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＴＵＤＡ）およびスルホメチル−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＭＤＡ）、Ｎ−（ヒドロキシエチル）−エチリデンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエタノールグリシン（ＤＥＧ）、ジエチレントリアミン五（メチレンホスホン酸）（ＤＴＰＭＰ）、アミノトリス（メチレンホスホン酸）（ＡＴＭＰ）、ならびにそれらの組合せおよび塩が挙げられる。さらなる例示的なビルダーおよび／または共ビルダーは、例えば、国際公開第０９／１０２８５４号パンフレット、米国特許第５９７７０５３号明細書に記載されている。
【０１６４】
キレート剤および結晶成長阻害剤−本明細書の組成物は、キレート剤および／または結晶成長阻害剤を含有することができる。好適な分子には、銅、鉄、および／またはマンガンのキレート剤、ならびにそれらの混合物が含まれる。好適な分子としては、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミンペンタ酢酸）、ＨＥＤＰ（ヒドロキシエタンジホスホン酸）、ＤＴＰＭＰ（ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）、１，２−ジヒドロキシベンゼン−３，５−ジスルホン酸ジナトリウム塩水和物、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、エチレンジアミンジコハク酸（ＥＤＤＳ）、Ｎ−ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、Ｎ−ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（ＨＥＩＤＡ）、ジヒドロキシエチルグリシン（ＤＨＥＧ）、エチレンジアミンテトラプロピオン酸（ＥＤＴＰ）、カルボキシメチルイヌリン、および２−ホスホノブタン１，２，４−トリカルボン酸（Ｂａｙｈｉｂｉｔ（登録商標）ＡＭ）、およびそれらの誘導体が挙げられる。典型的には、組成物は、０．００５〜１５重量％または３．０〜１０重量％のキレート剤または結晶成長阻害剤を含むことができる。
【０１６５】
漂白成分−本発明の方法および組成物に組み込むのに適した漂白成分には、１種の漂白成分または２種以上の漂白成分の混合物が含まれる。好適な漂白成分としては、漂白触媒、光漂白剤、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、事前に形成した過酸、およびそれらの混合物が挙げられる。一般に、漂白剤成分が使用される場合、本発明の組成物は、０．００００１〜９０重量％、０．０００１〜５０重量％、または０．００１〜２５重量％含むことができる。好適な漂白成分は、以下のものを含む：
（１）事前に形成した過酸：好適な事前に形成した過酸としては、これらに限定されないが、事前に形成した過酸もしくはその塩からなる群から選択される化合物、典型的には、ペルオキシカルボン酸もしくはその塩、またはペルオキシスルホン酸もしくはその塩のいずれかが挙げられる。
【０１６６】
事前に形成した過酸もしくはその塩は、好ましくはペルオキシカルボン酸もしくはその塩であり、これは、典型的には、下記の化学式に対応する化学構造：
【化１】
2015523078.tif 000002
を有し、
式中、Ｒ14は、アルキル、アラルキル、シクロアルキル、アリールもしくは複素環式基から選択され；Ｒ14基は、直鎖または分岐状の、置換もしくは非置換であってよく；Ｙは、電荷中性を達成する任意の好適な対イオンであり、好ましくは、Ｙは、水素、ナトリウムもしくはカリウムから選択される。好ましくは、Ｒ14は、直鎖または分岐状の、置換もしくは非置換Ｃ6〜9アルキルである。好ましくは、過酸もしくはその塩は、ペルオキシヘキサン酸、ペルオキシヘプタン酸、ペルオキシオクタン酸、ペルオキシノナン酸、ペルオキシデカン酸、それらの任意の塩、またはそれらの任意の組合せから選択される。特に好ましい過酸は、フタルイミド−ペルオキシ−アルカン酸、とりわけ、ε−フタルイミド−ペルオキシ−ヘキサン酸（ＰＡＰ）である。好ましくは、過酸もしくはその塩は、３０℃〜６０℃の範囲の融点を有する。
【０１６７】
事前に形成した過酸もしくはその塩はペルオキシスルホン酸もしくはその塩であってもよく、これは、典型的には、下記の化学式に対応する化学構造：
【化２】
2015523078.tif 000003
を有し、
式中、Ｒ15は、アルキル、アラルキル、シクロアルキル、アリールもしくは複素環式基から選択され；Ｒ15基は、直鎖または分岐状の、置換もしくは非置換であってよく；Ｚは、電荷中性を達成する任意の好適な対イオンであり、好ましくは、Ｚは、水素、ナトリウムもしくはカリウムから選択される。好ましくは、Ｒ15は、直鎖または分岐状の、置換もしくは非置換Ｃ6〜9アルキルである。好ましくはこのような漂白成分は、０．０１〜５０重量％、または０．１〜２０重量％の量で本発明の組成物中に存在してよい。
【０１６８】
（２）過酸化水素源としては、例えば、過ホウ酸（通常は一水和物または四水和物）、過炭酸、過硫酸、過リン酸、過ケイ酸のナトリウム塩およびこれらの混合物などのアルカリ金属塩を含む無機過酸化水和物塩類が挙げられる。本発明の一態様では、無機過酸化水和物塩類、例えば、過ホウ酸、過炭酸およびこれらの混合物からなる群から選択されるものなど。使用する場合には、無機過酸化水和物塩類は、組成物全体の０．０５〜４０重量％、または１〜３０重量％の量で存在し、典型的に、結晶性固体のような組成物に含有させるが、この固体をコーティングしてもよい。好適なコーティングは、アルカリ金属ケイ酸塩、炭酸塩もしくはホウ酸塩またはこれらの混合物などの無機塩、あるいは、水溶性もしくは分散性ポリマー、ワックス、油または脂肪酸石鹸などの有機材料を含む。好ましくは、このような漂白成分は、０．０１〜５０重量％または０．１〜２０重量％の量で、本発明の組成物中に存在させることができる。
【０１６９】
（３）好適な漂白活性化剤は、Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌを有するものであり、式中、Ｒは、漂白活性化剤が疎水性の場合には、６〜１４個の炭素原子または８〜１２個の炭素原子、また漂白活性化剤が親水性の場合には、６個未満の炭素原子または４個未満の炭素原子を有する、任意選択で分枝状のアルキル基であり；Ｌは脱離基である。好適な脱離基の例は、安息香酸およびその誘導体、特にベンゼンスルホネートである。好適な漂白活性化剤としては、ドデカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシ安息香酸またはその塩、３，５，５−トリメチルヘキサノイルオキシベンゼンスルホネート、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）およびノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）が挙げられる。また、好適な漂白活性化剤は国際公開第９８／１７７６７号パンフレットにも開示されている。任意の好適な漂白活性化剤を使用することができるが、本発明の一態様では、対象の洗浄組成物は、ＮＯＢＳ、ＴＡＥＤまたはそれらの混合物を含むことができる。存在する場合、過酸および／または漂白活性化剤は、一般に、布地ケアおよびホームケア組成物を基準にして、０．１〜６０重量％、０．５〜４０重量％または０．６〜１０重量％の量で組成物中に存在する。１種または複数の疎水性過酸またはその前駆体を１種または複数の親水性過酸またはその前駆体と組み合わせて使用することができる。好ましくは、このような漂白成分は、０．０１〜５０重量％、または０．１〜２０重量％の量で、本発明の組成物中に存在させることができる。
【０１７０】
過酸化水素源および過酸または漂白活性化剤の量は、利用可能な酸素（過酸化物源由来）と過酸とのモル比が、１：１〜３５：１、またはさらには２：１〜１０：１となるように選択することができる。
【０１７１】
（４）ジアシル過酸化物−好ましいジアシル過酸化物漂白種には、一般式：Ｒ1−Ｃ（Ｏ）−ＯＯ−（Ｏ）Ｃ−Ｒ2（式中、Ｒ1は、少なくとも５個の炭素原子の直鎖を含有し、任意選択で１個または複数の置換基（例えば、−Ｎ+（ＣＨ3）3、−ＣＯＯＨもしくは−ＣＮ）および／またはアルキル基の隣接する炭素原子間に挿入された１つまたは複数の割り込み部分（例えば、−ＣＯＮＨ−もしくは−ＣＨ＝ＣＨ−）を含有する、Ｃ6〜Ｃ18アルキル、好ましくはＣ6〜Ｃ12アルキル基を示し；Ｒ2は、過酸化物部分と適合する脂肪族基を示し、その結果、Ｒ1およびＲ2は合わせて計８〜３０個の炭素原子を含有する）のジアシル過酸化物から選択されるものが含まれる。好ましい一態様では、Ｒ1およびＲ2は、直鎖非置換Ｃ6〜Ｃ12アルキル鎖である。最も好ましくは、Ｒ1およびＲ2は同一である。Ｒ1およびＲ2の両方がＣ６〜Ｃ１２アルキル基であるジアシル過酸化物が特に好ましい。好ましくは、Ｒ基（Ｒ1またはＲ2）の少なくとも一方、最も好ましくはその一方のみは、アルファ位置に、または好ましくはアルファ位置にもベータ位置にも、あるいは最も好ましくはアルファ位置にもベータ位置にもガンマ位置にも分枝もペンダント環も含まない。さらに好ましい一実施形態では、好ましくは、Ｒ１アシル基の加水分解は過酸を生成するように迅速であるが、Ｒ２アシル基の加水分解は緩慢であるように、ＤＡＰを非対称とすることができる。
【０１７２】
テトラアシル過酸化物漂白種は、好ましくは、一般式：Ｒ3−Ｃ（Ｏ）−ＯＯ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ2）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＯ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ3（式中、Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ9アルキル基またはＣ3〜Ｃ7アルキル基を示し；ｎは、２〜１２または４〜１０の整数（両端の値を含む）を示す）のテトラアシル過酸化物から選択される。
【０１７３】
好ましくは、ジアシルおよび／またはテトラアシル過酸化物漂白種は、洗浄液の重量を基準として少なくとも０．５ｐｐｍ、少なくとも１０ｐｐｍ、または少なくとも５０ｐｐｍ供給するのに十分な量で存在する。好ましい実施形態では、漂白種は、洗浄液の重量を基準として０．５〜３００ｐｐｍ、３０〜１５０ｐｐｍ供給するのに十分な量で存在する。
【０１７４】
好ましくは、漂白成分は、漂白触媒（５および６）を含む。
【０１７５】
（５）好ましい有機（非金属）漂白触媒としては、過酸および／またはその塩から酸素原子を受容して、その酸素原子を酸化可能な基質に輸送することができる漂白触媒がある。好適な漂白触媒として、これらに限定されないが、イミニウムカチオンおよびポリイオン；イミニウム双性イオン；修飾アミン；修飾アミン酸化物；Ｎ−スルホニルイミン；Ｎ−ホスホニルイミン；Ｎ−アシルイミン；チアジアゾール二酸化物；ペルフルオロイミン；環状糖ケトンならびにこれらの混合物が挙げられる。
【０１７６】
好適なイミニウムカチオンおよびポリイオンとしては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９９２），４９（２），４２３−３８（例えば、ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４，ｐ．４３３を参照）に記載のように調製される、Ｎ−メチル−３，４−ジヒドロイソキノリニウムテトラフルオロホウ酸塩；米国特許第５３６０５６９号明細書（例えば、Ｃｏｌｕｍｎ  １１，Ｅｘａｍｐｌｅ  １を参照）に記載のように調製される、Ｎ−メチル−３，４−ジヒドロイソキノリニウムｐ−トルエンスルホン酸塩；ならびに米国特許第５３６０５６８号明細書（例えば、Ｃｏｌｕｍｎ  １０，Ｅｘａｍｐｌｅ．３を参照）に記載のように調製される、Ｎ−オクチル−３，４−ジヒドロイソキノリニウムｐ−トルエンスルホン酸塩。
【０１７７】
好適なイミニウム双性イオンとしては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：米国特許第５５７６２８２号明細書（例えば、Ｃｏｌｕｍｎ  ３１，Ｅｘａｍｐｌｅ．ＩＩを参照）に記載のように調製される分子内塩である、Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，４−ジヒドロイソキノリウム；米国特許第５８１７６１４号明細書（例えば、Ｃｏｌｕｍｎ  ３２，Ｅｘａｍｐｌｅ．Ｖを参照）に記載のように調製される分子内塩である、Ｎ−［２−（スルホキシ）ドデシル］−３，４−ジヒドロイソキノリニウム；国際公開第０５／０４７２６４号パンフレット（例えば、第１８頁、Ｅｘａｍｐｌｅ．８を参照）に記載のように調製される分子内塩である、２−［３−［（２−エチルヘキシル）オキシ］−２−（スルホオキシ）プロピル］−３，４−ジヒドロイソキノリニウム、；ならびに分子内塩である２−［３−［（２−ブチルオクチル）オキシ］−２−（スルホオキシ）プロピル］−３，４−ジヒドロイソキノリニウム。
【０１７８】
好適な修飾アミン酸素輸送触媒としては、これらに限定されないが、１，２，３，４−テトラヒドロ−２−メチル−１−イソキノリノールがあり、これは、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９８７），２８（４８），６０６１−６０６４に記載の方法に従い製造することができる。好適な修飾アミン酸素輸送触媒としては、これらに限定されないが、ナトリウム１−ヒドロキシ−Ｎ−オキシ−Ｎ−［２−（スルホキシ）デシル］−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンがある。
【０１７９】
好適なＮ−スルホニルイミン酸素輸送触媒としては、これらに限定されないが、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９０），５５（４），１２５４−６１に記載の方法に従い調製される、３−メチル−１，２−ベンズイソチアゾール１，１−二酸化物がある。
【０１８０】
好適なＮ−ホスホニルイミン酸素輸送触媒としては、これらに限定されないが、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９４），（２２），２５６９−７０に記載の方法に従い調製される、「Ｒ−（Ｅ）］−Ｎ−［（２−クロロ−５−ニトロフェニル）メチレン］−Ｐ−フェニル−Ｐ−（２，４，６−トリメチルフェニル）−ホスフィン酸アミドがある。
【０１８１】
好適なＮ−アシルイミン酸素輸送触媒としては、これらに限定されないが、Ｐｏｌｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３），７７（５），５７７−５９０に記載の方法に従い調製される、「Ｎ（Ｅ）］−Ｎ−（フェニルメチレン）アセトアミドがある。
【０１８２】
好適なチアジアゾール二酸化物酸素輸送触媒としては、これらに限定されないが、米国特許第５７５３５９９号明細書（Ｃｏｌｕｍｎ  ９，Ｅｘａｍｐｌｅ．２を参照）に記載の方法に従い調製される、３−メチル−４−フェニル−１，２，５−チアジアゾール１，１−ジオキシドがある。
【０１８３】
好適なペルフルオロイミン酸素輸送触媒としては、これらに限定されないが、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９４），３５（３４），６３２９−３０に記載の方法に従い製造することができる、２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオロ−Ｎ−（ノナフルオロブチル）ブタンイミドイルフッ化物がある。
【０１８４】
好適な環状糖ケトン酸素輸送触媒としては、これらに限定されないが、米国特許第６６４９０８５号明細書（Ｃｏｌｕｍｎ  １２，Ｅｘａｍｐｌｅ．１）に記載の方法に従い調製される、１，２：４，５−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−エリスロ−２，３−ヘキソジウロ−２，６−ピラノースがある。
【０１８５】
漂白触媒は、イミニウムおよび／もしくはカルボニル官能基を含んでもよく、典型的に、酸素原子の受容時、特に過酸および／もしくはその塩からの酸素原子の受容時に、オキサジリジウムおよび／もしくはジオキシラン官能基を形成することができる。漂白触媒は、オキサジリジウム官能基を含んでもよく、および／または酸素原子の受容時、特に過酸および／もしくはその塩からの酸素原子の受容時に、オキサジリジウム官能基を形成することができる。漂白成分は、環状イミニウム官能基を含んでもよく、好ましくは、環状部分は、５〜８原子（窒素原子を含む）、好ましくは６原子の環サイズを有する。漂白触媒は、アリリミニウム官能基、好ましくは二環式アリリミニウム官能基、好ましくは３，４−ジヒドロイソキノリニウム官能基を含んでもよい。典型的には、イミン官能基は、４級イミン官能基であり、典型的に、酸素原子の受容時、特に過酸および／もしくはその塩からの酸素原子の受容時に、４級オキサジリジウム官能基を形成することができる。別の態様では、洗剤組成物は、０以下のｌｏｇＰo/w、−０．５以下のｌｏｇＰo/w、−１．０以下のｌｏｇＰo/w、−１．５以下のｌｏｇＰo/w、−２．０以下のｌｏｇＰo/w、−２．５以下のｌｏｇＰo/w、−３．０以下のｌｏｇＰo/w、あるいは−３．５以下のｌｏｇＰo/wを有する漂白成分を含む。ｌｏｇＰo/wを決定する方法については、以下に詳しく記載する。
【０１８６】
典型的に、漂白成分は、０．０１〜０．３０、０．０５〜０．２５、あるいは０．１０〜０．２０のＸSOを有する漂白種を生成することができる。ＸSOを決定する方法については、以下に詳しく記載する。例えば、イソキノリニウム構造を有する漂白成分は、オキサジリジウム構造を有する漂白種を生成することができる。この例では、ＸSOは、オキサジリジウム漂白種のそれである。
【０１８７】
漂白触媒は、下記の化学式：
【化３】
2015523078.tif 000004
に対応する化学構造を有してもよく、
式中、ｎおよびｍは、独立して、０〜４であり、好ましくは、ｎおよびｍは両方が０であり；各Ｒ1は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、融合アリール、複素環、融合複素環、ニトロ、ハロ、シアノ、スルホナト、アルコキシ、ケト、カルボキシルおよびカルボアルコキシラジカルからなる群から選択される置換もしくは非置換ラジカルから選択され；ならびに任意の２つの隣接Ｒ1置換基が結合して、融合アリール、融合炭素環もしくは融合複素環を形成してもよく；各Ｒ2は、独立して、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルカリル、アリール、アラルキル、アルキレン、複素環、アルコキシ、アリールカルボニル基、カルボキシアルキル基およびアミド基からなる群から選択される置換もしくは非置換ラジカルから独立して選択され；任意のＲ2がいずれか他のＲ2と結合して、共通環の一部を形成してもよく；任意のジェミナルＲ2が結合してカルボニルを形成してもよく；また、任意の２つのＲ2が結合して、置換もしくは非置換の融合した不飽和部分を形成してもよく；Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ20置換もしくは非置換アルキルであり；Ｒ4は、水素または部分Ｑt−Ａであり、ここで、Ｑは、分岐または非分岐アルキレンであり、ｔ＝０または１であり、Ａは、ＯＳＯ3-、ＳＯ3-、ＣＯ2-、ＯＣＯ2-、ＯＰＯ32-、ＯＰＯ3Ｈ-およびＯＰＯ2-からなる群から選択されるアニオン基であり；Ｒ5は、水素または部分−ＣＲ11Ｒ12−Ｙ−Ｇb−Ｙc−［（ＣＲ9Ｒ10）y−Ｏ］k−Ｒ8であり；ここで、各Ｙは、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ−Ｈ、またはＮ−Ｒ8からなる群から選択され；各Ｒ6は、独立して、アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、前記部分は、置換もしくは非置換であり、置換もしくは非置換のいずれにかかわらず、前記部分は、２１個未満の炭素を有し；各Ｇは、独立して、ＣＯ，ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯおよびＰＯ2からなる群から選択され；Ｒ9およびＲ10は、独立して、ＨおよびＣ1〜Ｃ4アルキルからなる群から選択され；Ｒ11およびＲ12は、独立して、Ｈおよびアルキルからなる群から選択されるか、または合わせて考える場合、結合してカルボニルを形成してもよく；ｂ＝０または１；ｃ＝０または１であってよいが、ｂ＝０であるとき、ｃ＝０でなければならない；ｙは１〜６の整数であり；ｋは０〜２０の整数であり；Ｒ6はＨ、またはアルキル、アリールもしくはヘテロアリール部分であり；前記部分は、置換もしくは非置換であり；Ｘは、それが存在すれば、好適な電荷平衡対イオンであり、Ｒ4が水素である場合には、Ｘが存在するのが好ましく、好適なＸとしては、これらに限定されないが、塩化物、臭化物、硫酸塩、メトサルフェート、スルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ボロンテトラフルオリドおよびリン酸塩が挙げられる。
【０１８８】
本発明の一実施形態において、漂白触媒は、下記の一般式：
【化４】
2015523078.tif 000005
に対応する化学構造を有し
式中、Ｒ13は、３〜２４個の炭素原子（分岐炭素原子を含む）を含む分岐アルキル基および１〜２４個の炭素原子を含む直鎖アルキル基であり；好ましくは、Ｒ13は、８〜１８個の炭素原子を含む分岐アルキル基または８〜１８個の炭素原子を含む直鎖アルキル基であり；好ましくは、Ｒ13は、２−プロピルへプチル、２−ブチルオクチル、２−ペンチルノニル、２−ヘキシルデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ヘキサデシル、ｎ−オクタデシル、イソ−ノニル、イソ−デシル、イソ−トリデシルおよびイソ−ペンタデシル；好ましくは、Ｒ13は、２−ブチルオクチル、２−ペンチルノニル、２−ヘキシルデシル、イソ−トリデシルおよびイソ−ペンタデシルからなる群から選択される。
【０１８９】
漂白成分は、漂白触媒以外に、過酸源、特に有機漂白触媒を含んでもよい。過酸源は、以下：（ａ）事前に形成した過酸、（ｂ）好ましくは漂白活性化剤と組み合わせた過炭素塩、過ホウ酸塩または過硫酸塩（過硫酸水素源）；および（ｃ）織物または硬質表面処理ステップにおいて、水の存在下、ｉｎ  ｓｉｔｕで過酸を形成するペルヒドラーゼ酵素およびエステルから選択してもよい。
【０１９０】
過酸および／または漂白活性化剤が存在する場合、これは、一般に、組成物に対して、０．１〜６０重量％、０．５〜４０重量％、または０．６〜１０重量％存在する。１種または複数種の疎水性過酸またはその前駆体を１種または複数種の親水性過酸またはその前駆体と組み合わせて用いてもよい。
【０１９１】
過酸化水素源および過酸もしくは漂白活性化剤の量は、利用可能な酸素（過酸化物源から）：過酸のモル比が、１：１〜３５：１、あるいは２：１〜１０：１であるように選択してよい。
【０１９２】
（６）金属含有漂白触媒−触媒成分は、触媒金属複合体によって提供してもよい。１タイプの金属含有漂白触媒は、例えば、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングステン、モリブデン、もしくはマンガンカチオンなどの規定の漂白触媒活性の遷移金属カチオン、亜鉛もしくはアルミニウムカチオンなどの、漂白触媒活性がほとんどまたは全くない補助金属カチオン、ならびに触媒および補助金属カチオンについて既定の安定定数を有する金属イオン封鎖剤（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｅ）、特にエチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミンテトラ（メチレンリン酸）およびそれらの水溶性塩を含む触媒系である。このような触媒は、米国特許第４４３０２４３号明細書に開示されている。好ましい触媒は、国際公開第０９／８３９４０６号パンフレット、米国特許第６２１８３５１号明細書および国際公開第００／０１２６６７号パンフレットに記載されている。遷移金属触媒、または架橋多座配位子Ｎ−ドナー配位子である配位子が特に好ましい。
【０１９３】
必要に応じて、本明細書の組成物は、マンガン化合物を用いて、触媒することができる。このような化合物および使用レベルは、当業者には公知であり、例えば、米国特許第５５７６２８２号明細書に開示のマンガンベースの触媒がある。
【０１９４】
本発明で有用なコバルト漂白触媒は公知であり、例えば、米国特許第５５９７９３６号明細書；米国特許第５５９５９６７号明細書に記載されている。このようなコバルト触媒は、例えば、米国特許第５５９７９３６号明細書および米国特許第５５９５９６７号明細書に教示されているような公知の方法によって容易に調製される。
【０１９５】
本発明の組成物は、ビスピドン（米国特許第７５０１３８９号明細書）および／または大多環式硬質配位子（略称「ＭＲＬ」）などの配位子の遷移金属複合体を含むのが好適である。実際に、また非限定的に、水性洗浄媒質中少なくとも１億分の１部前後の活性ＭＲＬ種、典型的には、洗浄液中０．００５〜２５ｐｐｍ、０．０５〜１０ｐｐｍ、あるいは０．１〜５ｐｐｍのＭＲＬを提供するように、本発明の組成物および方法を調節することができる。
【０１９６】
本発明の遷移金属漂白触媒中の好適な遷移金属としては、例えば、マンガン、鉄およびクロミウムがある。好適なＭＲＬには、５，１２−ジエチル−１，５，８，１２−テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカンが含まれる。好適な遷移金属ＭＲＬは、例えば、米国特許第６２２５４６４号明細書および国際公開第００／３２６０１号パンフレットに教示されているような公知の手順により容易に調製される。
【０１９７】
（７）光漂白剤−好適な光漂白剤としては、例えば、スルホン化亜鉛フタロシアン  スルホン化アルミニウムフタロシアン、キサンテン染料およびこれらの混合物が挙げられる。本発明の組成物に用いるのに好ましい漂白成分には、過酸化水素源、漂白活性化剤および／または有機過酸（任意選択で、過酸化水素源と漂白活性化剤の反応によりｉｎ  ｓｉｔｕで生成する）が、漂白触媒と組み合わせて含まれる。好ましい漂白成分は、前述したように、漂白触媒、好ましくは有機漂白触媒を含む。
【０１９８】
特に好ましい漂白成分は、漂白触媒、特に有機漂白触媒である。
【０１９９】
布地色調剤−組成物は布地色調剤を含むことができる。好適な布地色調剤には、染料、染料−粘土コンジュゲート、および顔料が含まれる。好適な染料としては、小分子染料およびポリマー染料が挙げられる。好適な小分子染料としては、ダイレクトブルー、ダイレクトレッド、ダイレクトバイオレット、アシッドブルー、アシッドレット、アシッドバイオレット、ベーシックブルー、ベーシックバイオレット、およびベーシックレッドのカラーインデックス（Ｃ．Ｉ．）分類に該当する染料、またはそれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。
【０２００】
別の態様では、好適な小分子染料として、ダイレクトバイオレット９、ダイレクトバイオレット３５、ダイレクトバイオレット４８、ダイレクトバイオレット５１、ダイレクトバイオレット６６、ダイレクトバイオレット９９、ダイレクトブルー１、ダイレクトブルー７１、ダイレクトブルー８０、ダイレクトブルー２７９、アシッドレッド１７、アシッドレッド７３、アシッドレッド８８、アシッドレッド１５０、アシッドバイオレット１５、アシッドバイオレット１７、アシッドバイオレット２４、アシッドバイオレット４３、アシッドレッド５２、アシッドバイオレット４９、アシッドバイオレット５０、アシッドブルー１５、アシッドブルー１７、アシッドブルー２５、アシッドブルー２９、アシッドブルー４０、アシッドブルー４５、アシッドブルー７５、アシッドブルー８０、アシッドブルー８３、アシッドブルー９０およびアシッドブルー１１３、アシッドブラック１、ベーシックバイオレット１、ベーシックバイオレット３、ベーシックバイオレット４、ベーシックバイオレット１０、ベーシックバイオレット３５、ベーシックブルー３、ベーシックブルー１６、ベーシックブルー２２、ベーシックブルー４７、ベーシックブルー６６、ベーシックブルー７５、ベーシックブルー１５９のカラーインデックス（Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｄｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｌｏｒｉｓｔｓ，Ｂｒａｄｆｏｒｄ，ＵＫ）番号、およびそれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。別の態様では、好適な小分子染料として、アシッドバイオレット１７、アシッドバイオレット４３、アシッドレッド５２、アシッドレッド７３、アシッドレッド８８、アシッドレッド１５０、アシッドブルー２５、アシッドブルー２９、アシッドブルー４５、アシッドブルー１１３、アシッドブラック１、ダイレクトブルー１、ダイレクトブルー７１、ダイレクトバイオレット５１のカラーインデックス（Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｄｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｌｏｒｉｓｔｓ，Ｂｒａｄｆｏｒｄ，ＵＫ）番号、およびそれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。別の態様では、好適な小分子染料として、アシッドバイオレット１７、ダイレクトブルー７１、ダイレクトバイオレット５１、ダイレクトブルー１、アシッドレッド８８、アシッドレッド１５０、アシッドブルー２９、アシッドブルー１１３のカラーインデックス（Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｄｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｌｏｒｉｓｔｓ，Ｂｒａｄｆｏｒｄ，ＵＫ）番号、またはそれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。
【０２０１】
好適なポリマー染料としては、コンジュゲートしたクロモゲンを含有するポリマー（染料−ポリマーコンジュゲート）およびポリマー骨格の中に共重合したクロモゲンを有するポリマーからなる群から選択されるポリマー染料、ならびにそれらの混合物が挙げられる。
【０２０２】
別の態様では、好適なポリマー染料として、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（登録商標）（Ｍｉｌｌｉｋｅｎ）の名称で販売されている布地実質着色剤、少なくとも１つの反応性染料とヒドロキシル部分、第一級アミン部分、第二級アミン部分、チオール部分、およびそれらの混合物からなる群から選択される部分を含むポリマーからなる群から選択されるポリマーとから形成される染料−ポリマーコンジュゲートからなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。さらに別の態様では、好適なポリマー染料として、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（登録商標）バイオレットＣＴ、リアクティブブルー、リアクティブバイオレット、またはリアクティブレッド染料とコンジュゲートしたカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、例えば商品名ＡＺＯ−ＣＭ−ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ、製品コードＳ−ＡＣＭＣの下でＭｅｇａｚｙｍｅ，Ｗｉｃｋｌｏｗ，Ｉｒｅｌａｎｄにより販売されている、Ｃ．Ｉ．リアクティブブルー１９とコンジュゲートしたＣＭＣ、アルコキシル化トリフェニル−メタンポリマー着色剤、アルコキシル化チオフェンポリマー着色剤、およびそれらの混合物からなる群より選択されるポリマー染料が挙げられる。
【０２０３】
好ましい色調染料には、国際公開第０８／８７４９７号パンフレットに見出される増白剤が含まれる。これらの増白剤は以下の構造（Ｉ）によって特徴づけることができる：
【化５】
2015523078.tif 000006
式中、Ｒ1およびＲ2は、独立して、以下のものから選択することができる：
ａ）［（ＣＨ2ＣＲ’ＨＯ）x（ＣＨ2ＣＲ”ＨＯ）yＨ］
式中、Ｒ’は、Ｈ、ＣＨ3、ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）zＨ、およびそれらの混合物からなる群から選択され；Ｒ”は、Ｈ、ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）zＨ、およびそれらの混合物からなる群から選択され；ｘ＋ｙ≦５；ｙ≧１；かつｚ＝０〜５である；
ｂ）Ｒ1＝アルキル、アリール、またはアリールアルキルかつＲ2＝［（ＣＨ2ＣＲ’ＨＯ）x（ＣＨ2ＣＲ”ＨＯ）yＨ］
式中、Ｒ’は、Ｈ、ＣＨ3、ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）zＨ、およびそれらの混合物からなる群から選択され；Ｒ”は、Ｈ、ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）zＨ、およびそれらの混合物からなる群から選択され；ｘ＋ｙ≦１０；ｙ≧１；かつｚ＝０〜５である；
ｃ）Ｒ1＝［ＣＨ2ＣＨ2（ＯＲ3）ＣＨ2ＯＲ4］およびＲ2＝［ＣＨ2ＣＨ2（ＯＲ3）ＣＨ2ＯＲ4］
式中、Ｒ3は、Ｈ、（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）zＨ、およびそれらの混合物からなる群から選択され；かつｚ＝０〜１０であり；
Ｒ4は、（Ｃ1〜Ｃ16）アルキル基、アリール基、およびそれらの混合物からなる群から選択される；および
ｄ）Ｒ１およびＲ２は、独立して、スチレンオキシド、グリシジルメチルエーテル、イソブチルグリシジルエーテル、イソプロピルグリシジルエーテル、ｔ−ブチルグリシジルエーテル、２−エチルヘキシルグリシジルエーテル、およびグリシジルヘキサデシルエーテルのアミノ付加生成物に、１〜１０アルキレンオキシド単位を付加したものから選択することができる。
【０２０４】
本発明の好ましい増白剤は、以下の構造（ＩＩ）によって特徴づけることができる：
【化６】
2015523078.tif 000007
式中、Ｒ’は、Ｈ、ＣＨ3、ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）zＨ、およびそれらの混合物からなる群から選択され；Ｒ”は、Ｈ、ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）zＨ、およびそれらの混合物からなる群から選択され；ｘ＋ｙ≦５；ｙ≧１；かつｚ＝０〜５である。
【０２０５】
本発明のさらなる好ましい増白剤は、以下の構造（ＩＩＩ）によって特徴づけることができる：
【化７】
2015523078.tif 000008
典型的には合計５個のＥＯ基を有する混合物を含む。好適な好ましい分子は、上記の「パートａ」において、以下のペンダント基を有する構造Ｉに属するものである。
【０２０６】
【表１】
2015523078.tif 000009
【０２０７】
さらなる有用な増白剤には、米国特許出願公開第２００８／３４５１１号明細書（Ｕｎｉｌｅｖｅｒ）に記載されているものが含まれる。好ましい増白剤は「バイオレット１３」である。
【０２０８】
好適な染料粘土コンジュゲートとしては、少なくとも１つのカチオン性／塩基性染料とスメクタイト粘土とを含む群から選択される染料粘土コンジュゲートならびにそれらの混合物が挙げられる。別の態様では、好適な染料粘土コンジュゲートとして、Ｃ．Ｉ．ベーシックイエロー１〜１０８、Ｃ．Ｉ．ベーシックオレンジ１〜６９、Ｃ．Ｉ．ベーシックレッド１〜１１８、Ｃ．Ｉ．ベーシックバイオレット１〜５１、Ｃ．Ｉ．ベーシックブルー１〜１６４、Ｃ．Ｉ．ベーシックグリーン１〜１４、Ｃ．Ｉ．ベーシックブラウン１〜２３、ＣＩベーシックブラック１〜１１からなる群から選択される１つのカチオン性／塩基性染料と、モンモリロナイト粘土、ヘクトライト粘土、サポナイト粘土からなる群から選択される粘土とからなる群から選択される染料粘土コンジュゲートならびにそれらの混合物が挙げられる。さらに別の態様では、好適な染料粘土コンジュゲートとして、モンモリロナイトベーシックブルーＢ７  Ｃ．Ｉ．４２５９５コンジュゲート、モンモリロナイトベーシックブルーＢ９  Ｃ．Ｉ．５２０１５コンジュゲート、モンモリロナイトベーシックバイオレットＶ３  Ｃ．Ｉ．４２５５５コンジュゲート、モンモリロナイトベーシックグリーンＧ１  Ｃ．Ｉ．４２０４０コンジュゲート、モンモリロナイトベーシックレッドＲ１  Ｃ．Ｉ．４５１６０コンジュゲート、モンモリロナイトＣ．Ｉ．ベーシックブラック２コンジュゲート、ヘクトライトベーシックブルーＢ７  Ｃ．Ｉ．４２５９５コンジュゲート、ヘクトライトベーシックブルーＢ９  Ｃ．Ｉ．５２０１５コンジュゲート、ヘクトライトベーシックバイオレットＶ３  Ｃ．Ｉ．４２５５５コンジュゲート、ヘクトライトベーシックグリーンＧ１  Ｃ．Ｉ．４２０４０コンジュゲート、ヘクトライトベーシックレッドＲ１  Ｃ．Ｉ．４５１６０コンジュゲート、ヘクトライトＣ．Ｉ．ベーシックブラック２コンジュゲート、サポナイトベーシックブルーＢ７  Ｃ．Ｉ．４２５９５コンジュゲート、サポナイトベーシックブルーＢ９  Ｃ．Ｉ．５２０１５コンジュゲート、サポナイトベーシックバイオレットＶ３  Ｃ．Ｉ．４２５５５コンジュゲート、サポナイトベーシックグリーンＧ１  Ｃ．Ｉ．４２０４０コンジュゲート、サポナイトベーシックレッドＲ１  Ｃ．Ｉ．４５１６０コンジュゲート、サポナイトＣ．Ｉ．ベーシックブラック２コンジュゲート、およびそれらの混合物からなる群から選択される染料粘土コンジュゲートが挙げられる。
【０２０９】
好適な顔料としては、フラバントロン、インダントロン、１〜４個の塩素原子を有する塩素化インダントロン、ピラントロン、ジクロロピラントロン、モノブロモジクロロピラントロン、ジブロモジクロロピラントロン、テトラブロモピラントロン、ペリレン−３，４，９，１０−テトラカルボン酸ジイミド（イミド基はＣ１〜Ｃ３−アルキルまたはフェニルまたは複素環基で置換されていなくても置換されていてもよく、フェニルおよび複素環基は水溶性を付与しない置換基をさらに保持していてもよい）、アントラピリミジンカルボン酸アミド、ビオラントロン、イソビオラントロン、ジオキサジン顔料、銅フタロシアニン（１分子当たり最大２個の塩素原子を含有していてもよい）、ポリクロロ−銅フタロシアニンまたはポリブロモクロロ−銅フタロシアニン（１分子当たり最大１４個の臭素原子を含有する）、ならびにそれらの混合物からなる群から選択される顔料が挙げられる。
【０２１０】
別の態様では、好適な顔料として、ウルトラマリンブルー（Ｃ．Ｉ．ピグメントブルー２９）、ウルトラマリンバイオレット（Ｃ．Ｉ．ピグメントバイオレット１５）、およびそれらの混合物からなる群から選択される顔料が挙げられる。
【０２１１】
前述の布地色調剤は、組み合わせて使用することができる（布地色調剤のいずれの混合物も使用することができる）。好適な色調剤は、米国特許第７２０８４５９号明細書に詳細に記載されている。本発明の組成物中の染料の好ましいレベルは、０．００００１〜０．５重量％、または０．０００１〜０．２５重量％である。処理および／または洗浄段階に対して水中での好ましい染料濃度は、１ｐｐｂ〜５ｐｐｍ、１０ｐｐｂ〜５ｐｐｍ、または２０ｐｐｂ〜５ｐｐｍである。好ましい組成物では、界面活性剤の濃度は、０．２〜３ｇ／ｌである。
【０２１２】
カプセル−組成物はカプセルを含むことができる。一態様において、カプセルは、コア、内表面および外表面を有するシェルを含み、前記シェルは前記コアを被包している。
【０２１３】
前記カプセルの一態様では、前記コアは、香料；増白剤；染料；防虫剤；シリコーン；ワックス；香味料；ビタミン類；布地柔軟剤；スキンケア剤、一態様では、パラフィン；酵素；抗菌剤；漂白剤；感覚惹起剤；およびそれらの混合物からなる群から選択される材料を含むことができ；前記シェルは、ポリエチレン；ポリアミド；ポリビニルアルコール、任意選択で他のコモノマーを含有する；ポリスチレン；ポリイソプレン；ポリカーボネート；ポリエステル；ポリアクリレート；アミノプラスト、一態様では、前記アミノプラストは、ポリ尿素、ポリウレタン、および／またはポリ尿素ウレタンを含むことができ、一態様では、前記ポリ尿素は、ポリオキシメチレン尿素および／またはメラミンホルムアルデヒドを含むことができる；ポリオレフィン；多糖、一態様では、前記多糖はアルギネートおよび／またはキトサンを含むことができる；ゼラチン；シェラック；エポキシ樹脂；ビニルポリマー；水不溶性無機物；シリコーン；ならびにそれらの混合物からなる群から選択される材料を含むことができる。
【０２１４】
前記カプセルの一態様では、前記コアは香料を含むことができる。
【０２１５】
前記カプセルの一態様では、前記シェルはメラミンホルムアルデヒドおよび／または架橋メラミンホルムアルデヒドを含むことができる。
【０２１６】
一態様では、好適なカプセルはコア材料およびシェルを含むことができ、前記コアを少なくとも部分的に包囲する前記シェルが開示されている。前記カプセルの少なくとも７５％、８５％、または９０％は、０．２〜１０ＭＰａ、０．４〜５ＭＰａ、０．６〜３．５ＭＰａ、または０．７〜３ＭＰａの破壊強度；および０〜３０％、０〜２０％、または０〜５％の有益剤の漏出を有することができる。
【０２１７】
一態様では、前記カプセルの少なくとも７５％、８５％、または９０％は、１〜８０ミクロン、５〜６０ミクロン、１０〜５０ミクロン、または１５〜４０ミクロンの粒子サイズを有することができる。
【０２１８】
一態様では、前記カプセルの少なくとも７５％、８５％、または９０％は、３０〜２５０ｎｍ、８０〜１８０ｎｍ、または１００〜１６０ｎｍの粒子壁厚を有することができる。
【０２１９】
一態様では、前記カプセルコア材料は、香料原材料からなる群から選択される材料および／または任意選択で、植物油、例えば、ヒマシ油、ヤシ油、綿実油、ブドウ油、菜種、大豆油、トウモロコシ油、パーム油、亜麻仁油、サフラワー油、オリーブ油、ピーナッツ油、ヤシ油、パーム核油、ヒマシ油、レモン油、およびそれらの混合物を含む純粋および／またはブレンド植物油；植物油のエステル、ジブチルアジペート、ジブチルフタレート、ブチルベンジルアジペート、ベンジルオクチルアジペート、トリクレジルホスフェート、トリオクチルホスフェート、およびそれらの混合物を含むエステル；約８０℃超の沸点を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素；部分的に水素化されたテルフェニル、ジアルキルフタレート、モノイソプロピルビフェニルを含むアルキルビフェニル、ジプロピルナフタレンを含むアルキル化ナフタレン、灯油を含む石油スピリット、鉱油、およびそれらの混合物；ベンゼン、トルエン、およびそれらの混合物を含む芳香族溶媒；シリコーン油；ならびにそれらの混合物からなる群から選択される材料を含むことができる。
【０２２０】
一態様では、前記カプセル壁材は、アルデヒドおよびアミンの反応生成物を含む好適な樹脂を含むことができ、好適なアルデヒドとしてはホルムアルデヒドが挙げられる。好適なアミンとしては、メラミン、尿素、ベンゾグアナミン、グリコールウリル、およびそれらの混合物が挙げられる。好適なメラミンとしては、メチロールメラミン、メチル化メチロールメラミン、イミノメラミン、およびそれらの混合物が挙げられる。好適な尿素としては、ジメチロール尿素、メチル化ジメチロール尿素、尿素−レゾルシノール、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０２２１】
一態様では、好適なホルムアルデヒド捕捉剤を、例えばカプセルスラリー中でカプセルと共に使用することができ、かつ／またはカプセルが組成物に加えられる前、その間、またはその後に組成物に加えることができる。好適なカプセルは、米国特許出願公開第２００８／０３０５９８２号明細書；および／または米国特許出願公開第２００９／０２４７４４９号明細書の教示により作製することができる。
【０２２２】
好ましい態様では、組成物はまた、好ましくはカチオン性ポリマーまたは非イオン性ポリマーを含む群からなる付着助剤を含むことができる。好適なポリマーとしては、カチオン性デンプン、カチオン性ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルホルムアルデヒド、ローカストビーンガム、マンナン、キシログルカン、タマリンドガム、ポリエチレンテレフタレート、ならびに任意選択でアクリル酸およびアクリルアミドを含む群から選択される１つまたは複数のモノマーと共にジメチルアミノエチルメタクリレートを含有するポリマーが挙げられる。
【０２２３】
香料−一態様では、組成物は、以下のものからなる群から選択される１つまたは複数の香料原料を含む香料を含む：１，１’−オキシビス−２−プロパノール；１，４−シクロヘキサンジカルボン酸，ジエチルエステル；（エトキシメトキシ）シクロドデカン；１，３−ノナンジオール，モノアセテート；（３−メチルブトキシ）酢酸，２−プロペニルエステル；ベータ−メチルシクロドデカンエタノール；２−メチル−３−［（１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル）オキシ］−１−プロパノール；オキサシクロヘキサデカン−２−オン；アルファ−メチル−ベンゼンメタノールアセテート；トランス−３−エトキシ−１，１，５−トリメチルシクロヘキサン；４−（１，１−ジメチルエチル）シクロヘキサノールアセテート；ドデカヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト［２，１−ｂ］フラン；ベータ−メチルベンゼンプロパナール；ベータ−メチル−３−（１−メチルエチル）ベンゼンプロパナール；４−フェニル−２−ブタノン；２−メチルブタン酸，エチルエステル；ベンズアルデヒド；２−メチルブタン酸，１−メチルエチルエステル；ジヒドロ−５−ペンチル−２（３Ｈ）フラノン；（２Ｅ）−１−（２，６，６−トリメチル−２−シクロヘキセン−１−イル）−２−ブテン−１−オン；ドデカナール；ウンデカナール；２−エチル−アルファ，アルファ−ジメチルベンゼンプロパナール；デカナール；アルファ，アルファ−ジメチルベンゼンエタノールアセテート；２−（フェニルメチレン）オクタナール；２−［［３−［４−（１，１−ジメチルエチル）フェニル］−２−メチルプロピリデン］アミノ］安息香酸，メチルエステル；１−（２，６，６−トリメチル−３−シクロヘキセン−１−イル）−２−ブテン−１−オン；２−ペンチルシクロペンタノン；３−オキソ−２−ペンチルシクロペンタン酢酸，メチルエステル；４−ヒドロキシ−３−メトキシベンズアルデヒド；３−エトキシ−４−オキシベンズアルデヒド；２−ヘプチルシクロペンタノン；１−（４−メチルフェニル）エタノン；（３Ｅ）−４−（２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン−１−イル）−３−ブテン−２−オン；（３Ｅ）−４−（２，６，６−トリメチル−２−シクロヘキセン−１−イル）−３−ブテン−２−オン；ベンゼンエタノール；２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オン；４−メトキシベンズアルデヒド；１０−ウンデセナール；プロパン酸，フェニルメチルエステル；ベータ−メチルベンゼンペンタノール；１，１−ジエトキシ−３，７−ジメチル−２，６−オクタジエン；アルファ，アルファ−ジメチルベンゼンエタノール；（２Ｅ）−１−（２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン−１−イル）−２−ブテン−１−オン；酢酸，フェニルメチルエステル；シクロヘキサンプロパン酸，２−プロペニルエステル；ヘキサン酸，２−プロペニルエステル；１，２−ジメトキシ−４−（２−プロペニル）ベンゼン；１，５−ジメチル−ビシクロ［３．２．１］オクタノ−８−オンオキシム；４−（４−ヒドロキシ−４−メチルペンチル）−３−シクロヘキセン−１−カルボキシアルデヒド；３−ブテン−２−オール；２−［［［２，４（または３，５）−ジメチル−３−シクロヘキセン−１−イル］メチレン］アミノ］安息香酸，メチルエステル；８−シクロヘキサデセン−１−オン；メチルイオノン；２，６−ジメチル−７−オクテン−２−オール；２−メトキシ−４−（２−プロペニル）フェノール；（２Ｅ）−３，７−ジメチル−２，６−オクタジエン−１−オール；２−ヒドロキシ−安息香酸，（３Ｚ）−３−ヘキセニルエステル；２−トリデセンニトリル；４−（２，２−ジメチル−６−メチレンシクロヘキシル）−３−メチル−３−ブテン−２−オン；テトラヒドロ−４−メチル−２−（２−メチル−１−プロペニル）−２Ｈ−ピラン；酢酸，（２−メチルブトキシ）−，２−プロペニルエステル；安息香酸，２−ヒドロキシ−，３−メチルブチルエステル；２−ブテン−１−オン，１−（２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン−１−イル）−，（Ｚ）−；シクロペンタンカルボン酸，２−ヘキシル−３−オキソ−，メチルエステル；ベンゼンプロパナール，４−エチル−．アルファ．，．アルファ．−ジメチル−；３−シクロヘキセン−１−カルボキシアルデヒド（３−（４−ヒドロキシ−４−メチルペンチル）−；エタノン，１−（２，３，４，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−３，６，８，８−テトラメチル−１Ｈ−３ａ，７−（メタノアズレン−５−イル）−，［３Ｒ−（３．アルファ．，３ａ．ベータ．７．ベータ．，８ａ．アルファ．）］−；ウンデカナール，２−メチル−２Ｈ−ピラン−２−オン，６−ブチルテトラヒドロ−；ベンゼンプロパナール，４−（１，１−ジメチルエチル）−．アルファ．−メチル−；２（３Ｈ）−フラノン，５−ヘプチルジヒドロ−；安息香酸，２−［（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクチリデン）アミノ］−，メチル；安息香酸，２−ヒドロキシ−，フェニルメチルエステル；ナフタレン，２−メトキシ−；２−シクロペンテン−１−オン，２−ヘキシル−；２（３Ｈ）−フラノン，５−ヘキシルジヒドロ−；オキシランカルボン酸，３−メチル−３−フェニル−，エチルエステル；２−オキサビシクロ［２．２．２］オクタン，１，３，３−トリメチル−；ベンゼンペンタノール，．ガンマ．−メチル−；３−オクタノール，３，７−ジメチル−；３，７−ジメチル−２，６−オクタジエンニトリル；３，７−ジメチル−６−オクテン−１−オール；テルピネオールアセテート；２−メチル−６−メチレン−７−オクテン−２−オール，ジヒドロ誘導体；３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−４，７−メタノ−１Ｈ−インデン−６−オールプロパノエート；３−メチル−２−ブテン−１−オールアセテート；（Ｚ）−３−ヘキセン−１−オールアセテート；２−エチル−４−（２，２，３−トリメチル−３−シクロペンテン−１−イル）−２−ブテン−１−オール；４−（オクタヒドロ−４，７−メタノ−５Ｈ−インデン−５−イリデン）−ブタナール；３−２，４−ジメチル−シクロヘキセン−１−カルボキシアルデヒド；１−（１，２，３，４，５，６，７，８−オクタヒドロ−２，３，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル−エタノン；２−ヒドロキシ−安息香酸，メチルエステル；２−ヒドロキシ−安息香酸，ヘキシルエステル；２−フェノキシ−エタノール；２−ヒドロキシ−安息香酸，ペンチルエステル；２，３−ヘプタンジオン；２−ヘキセン−１−オール；６−オクテン−２−オール，２，６−ジメチル−；ダマスコン（アルファ、ベータ、ガンマ、もしくはデルタ、またはそれらの混合物），４，７−メタノ−１Ｈ−インデン−６−オール，３ａ，４，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−，アセテート；９−ウンデセナール；８−ウンデセナール；イソシクロシトラール；エタノン，１−（１，２，３，５，６，７，８，８ａ−オクタヒドロ−２，３，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）−；３−シクロヘキセン−１−カルボキシアルデヒド，３，５−ジメチル−；３−シクロヘキセン−１−カルボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−；１，６−オクタジエン−３−オール，３，７−ジメチル−；１，６−オクタジエン−３−オール，３，７−ジメチル−，アセテート；リリアル（ｐ−ｔ−ブシナール）、およびシクロペンタノン、２−［２−（４−メチル−３−シクロヘキセン−１−イル）プロピル］−および１−メチル−４−（１−メチルエテニル）シクロヘキセン、ならびにそれらの混合物。
【０２２４】
一態様では、組成物は、水溶性ヒドロキシル化合物またはメラミン−ホルムアルデヒドまたは修飾ポリビニルアルコールのいずれかを含むカプセル化香料粒子を含むことができる。一態様では、カプセルは、（ａ）１種または複数の水溶性ヒドロキシル化合物を含む少なくとも部分的に水溶性の固体マトリックス、好ましくはデンプン；および（ｂ）固体マトリックスによりカプセル化された香油を含む。
【０２２５】
さらなる態様では、香料は、シッフ塩基を形成するように、ポリアミン、好ましくはポリエチレンイミンと事前に複合体形成させることができる。
【０２２６】
ポリマー−組成物は１種または複数のポリマーを含むことができる。例としては、カルボキシメチルセルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピリジン−Ｎ−オキシド）、ポリ（ビニルイミダゾール）、ポリアクリレートなどのポリカルボキシレート、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、およびラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーがある。
【０２２７】
組成物は、以下の一般構造を有する化合物などの１種または複数の両親媒性洗浄ポリマーを含むことができる：ビス（（Ｃ2Ｈ5Ｏ）（Ｃ2Ｈ4Ｏ）ｎ）（ＣＨ3）−Ｎ+−ＣxＨ2x−Ｎ+−（ＣＨ3）−ビス（（Ｃ2Ｈ5Ｏ）（Ｃ2Ｈ4Ｏ）ｎ）、式中、ｎ＝２０〜３０、ｘ＝３〜８である。
【０２２８】
組成物は、布地および表面から油脂粒子を除去するように、親水性と疎水性のバランスが取れた両親媒性アルコキシル化油脂洗浄ポリマーを含むことができる。本発明の両親媒性アルコキシル化油脂洗浄ポリマーの特定の実施形態は、コア構造およびそのコア構造に結合した複数のアルコキシレート基を含む。これらは、内側のポリエチレンオキシドブロックと外側のポリプロピレンオキシドブロックとを好ましくは有するアルコキシル化ポリアルキレンイミンを含むことができる。
【０２２９】
ポリアクリレートから調製されるものなどアルコキシル化ポリカルボキシレートは、さらなる油脂除去性能を提供するのに本明細書において有用である。このような材料は、国際公開第９１／０８２８１号パンフレットおよびＰＣＴ９０／０１８１５号明細書に記載されている。化学的には、これらの材料は、７〜８個のアクリレート単位当たり１個のエトキシ側鎖を有するポリアクリレートを含む。この側鎖は、式−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）m（ＣＨ2）nＣＨ3（式中、ｍは２〜３、ｎは６〜１２である）である。この側鎖は、ポリアクリレート「骨格」にエステル結合して、「コーム」ポリマー型構造を与える。分子量は変動し得るものであるが、典型的には、２０００〜５０，０００の範囲にある。このようなアルコキシル化ポリカルボキシレートは、本明細書では組成物の０．０５重量％〜１０重量％で含むことができる。
【０２３０】
本発明のイソプレノイド由来界面活性剤、ならびに他の共界面活性剤および他の補助成分とのそれらの混合物は、両親媒性グラフトコポリマーと共に使用するのに特に適しており、好ましくは、両親媒性グラフトコポリマーは、（ｉ）ポリエチレングリコール骨格と、（ｉｉ）ポリビニルアセテート、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物から選択される少なくとも１つのペンダント部分とを含む。好ましい両親媒性グラフトコポリマーは、ＢＡＳＦから供給されるＳｏｋａｌａｎ  ＨＰ２２である。好適なポリマーとしては、ランダムグラフトコポリマー、好ましくは、ポリエチレンオキシド骨格および複数のポリビニルアセテート側鎖を有するポリビニルアセテートグラフト化ポリエチレンオキシドポリマーが挙げられる。ポリエチレンオキシド骨格の分子量は好ましくは６０００であり、ポリエチレンオキシドとポリビニルアセテートの重量比は、４０〜６０であり、また５０個のエチレンオキシド単位当たり最大１個のグラフト点がある。
【０２３１】
カルボキシレートポリマー−本発明の組成物はまた、マレアート／アクリレートランダムコポリマーまたはポリアクリレートホモポリマーなどの１種または複数のカルボキシレートポリマーを含むことができる。一態様では、カルボキシレートポリマーは、４，０００〜９，０００Ｄａまたは６，０００〜９，０００Ｄａの分子量を有するポリアクリレートホモポリマーである。
【０２３２】
汚染物放出ポリマー−本発明の組成物はまた、以下の構造（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩＩ）の１つによって定義される構造を有する１つまたは複数の汚染物ポリマーを含むことができる：
（Ｉ）−［（ＯＣＨＲ1−ＣＨＲ2）a−Ｏ−ＯＣ−Ａｒ−ＣＯ−］d
（ＩＩ）−［（ＯＣＨＲ3−ＣＨＲ4）b−Ｏ−ＯＣ−ｓＡｒ−ＣＯ−］e
（ＩＩＩ）−［（ＯＣＨＲ5−ＣＨＲ6）c−ＯＲ7］f
式中、
ａ、ｂ、およびｃは、１〜２００であり；
ｄ、ｅ、およびｆは、１〜５０であり；
Ａｒは、１，４−置換フェニレンであり；
ｓＡｒは、５位がＳＯ3Ｍｅで置換されている１，３−置換フェニレンであり；
Ｍｅは、Ｌｉ、Ｋ、Ｍｇ／２、Ｃａ／２、Ａｌ／３、アンモニウム、アルキル基がＣ1〜Ｃ18アルキルもしくはＣ2〜Ｃ10ヒドロキシアルキル、またはそれらの混合物であるモノ−、ジ−、トリ−、またはテトラアルキルアンモニウムであり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6は、独立して、ＨまたはＣ1〜Ｃ18ｎ−またはイソ−アルキルから選択され；かつ
Ｒ7は、直鎖もしくは分枝Ｃ1〜Ｃ18アルキルまたは直鎖もしくは分枝Ｃ2〜Ｃ30アルケニル、または５〜９個の炭素原子を有するシクロアルキル、またはＣ8〜Ｃ30アリール基、またはＣ6〜Ｃ30アリールアルキル基である。
【０２３３】
好適な汚染物放出ポリマーは、Ｒｅｐｅｌ−ｏ−ｔｅｘポリマーなどのポリエステル汚染物放出ポリマーであり、Ｒｈｏｄｉａにより供給されるＲｅｐｅｌ−ｏ−ｔｅｘ、ＳＦ−２、およびＳＲＰ６が含まれる。他の好適な汚染物放出ポリマーとして、Ｔｅｘｃａｒｅポリマーが挙げられ、Ｃｌａｒｉａｎｔにより供給されるＴｅｘｃａｒｅ  ＳＲＡ１００、ＳＲＡ３００、ＳＲＮ１００、ＳＲＮ１７０、ＳＲＮ２４０、ＳＲＮ３００、およびＳＲＮ３２５が含まれる。他の好適な汚染物放出ポリマーには、Ｓａｓｏｌにより供給されるＭａｒｌｏｑｕｅｓｔ  ＳＬなどのＭａｒｌｏｑｕｅｓｔポリマーがある。
【０２３４】
セルロースポリマー−本発明の組成物はまた、アルキルセルロース、アルキルアルコキシアルキルセルロース、カルボキシアルキルセルロース、アルキルカルボキシアルキルセルロースから選択されるものを含む、１種または複数のセルロースポリマーを含むことができる。一態様では、セルロースポリマーは、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、メチルカルボキシメチルセルロース、およびそれらの混合物を含む群から選択される。一態様では、カルボキシメチルセルロースは、０．５〜０．９のカルボキシメチル置換度および１００，０００〜３００，０００Ｄａの分子量を有する。
【０２３５】
酵素−組成物は、洗浄性能および／または布地ケアの利点を提供する１種または複数の酵素を含むことができる。好適な酵素の例としては、これらに限定されないが、ヘミセルラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、およびアミラーゼ、またはそれらの混合物が挙げられる。典型的な組合せは、例えば、アミラーゼと組み合わせたプロテアーゼおよびリパーゼを含み得る酵素カクテルである。組成物中に存在する場合、前述の追加の酵素は、組成物の重量を基準として、０．００００１〜２重量％、０．０００１〜１重量％、または０．００１〜０．５重量％の酵素タンパク質のレベルで存在することができる。
【０２３６】
一態様では、好ましい酵素にはプロテアーゼが含まれよう。好適なプロテアーゼとしては、メタロプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼ（中性またはアルカリ性の微生物セリンプロテアーゼ（例えば、サブチリシン（ＥＣ３．４．２１．６２））を含む）が挙げられる。好適なプロテアーゼとしては、動物、植物または微生物起源のものが挙げられる。一態様では、そのような好適なプロテアーゼは、微生物起源のものであり得る。好適なプロテアーゼとしては、上述の好適なプロテアーゼの化学的または遺伝学的に修飾された突然変異体が挙げられる。一態様では、好適なプロテアーゼは、セリンプロテアーゼ（例えば、アルカリ性微生物プロテアーゼまたは／およびトリプシン型プロテアーゼ）であり得る。好適な中性またはアルカリ性のプロテアーゼの例としては以下のものが挙げられる。
【０２３７】
（ａ）サブチリシン（ＥＣ３．４．２１．６２）（米国特許第６３１２９３６号明細書；米国特許第５６７９６３０号明細書；米国特許第４７６００２５号明細書；米国特許第７２６２０４２号明細書および国際公開第０９／０２１８６７号パンフレットに記載されるバチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、Ｂ．アルカロフィルス（Ｂ．ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｂ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、およびバチルス・ギブソニイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｉｂｓｏｎｉｉ）などのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に由来するものを含む）。
【０２３８】
（ｂ）（例えば、ブタまたはウシ起源の）トリプシンなどのトリプシン型またはキモトリプシン型プロテアーゼ（国際公開第８９／０６２７０号パンフレットに記載されるフザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）プロテアーゼならびに国際公開第０５／０５２１６１号パンフレットおよび国際公開第０５／０５２１４６号パンフレットに記載されるセルモナス（Ｃｅｌｌｕｍｏｎａｓ）に由来するキモトリプシンプロテアーゼを含む）。
【０２３９】
（ｃ）メタロプロテアーゼ（国際公開第０７／０４４９９３号パンフレットに記載されるバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）に由来するものを含む）。
【０２４０】
好ましいプロテアーゼとしては、バチルス・ギブソニイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｉｂｓｏｎｉｉ）またはバチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｌｅｎｔｕｓ）に由来するものが挙げられる。
【０２４１】
好適な市販のプロテアーゼ酵素としては、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓにより商品名Ａｌｃａｌａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｐｒｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（登録商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（登録商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ  Ｕｌｔｒａ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ  Ｕｌｔｒａ（登録商標）、Ｏｖｏｚｙｍｅ（登録商標）、Ｎｅｕｔｒａｓｅ（登録商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（登録商標）およびＥｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）の下で販売されているもの、Ｄａｎｉｓｃｏにより商品名Ｍａｘａｔａｓｅ（登録商標）、Ｍａｘａｃａｌ（登録商標）、Ｍａｘａｐｅｍ（登録商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｏｘ（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  ＯＸＰ（登録商標）、Ｏｐｔｉｃｌｅａｎ（登録商標）およびＯｐｔｉｍａｓｅ（登録商標）の下で販売されているもの、Ｈｅｎｋｅｌ／Ｋｅｍｉｒａから入手可能なもの、すなわち、ＢＬＡＰ（以下の変異Ｓ９９Ｄ＋Ｓ１０１Ｒ＋Ｓ１０３Ａ＋Ｖ１０４Ｉ＋Ｇ１５９Ｓを有する米国特許第５３５２６０４号明細書の図２９に示される配列、以後ＢＬＡＰと呼ぶ）、ＢＬＡＰ  Ｒ（ＢＬＡＰ＋Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ１９９Ｍ＋Ｖ２０５Ｉ＋Ｌ２１７Ｄ）、ＢＬＡＰ  Ｘ（ＢＬＡＰ＋Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ２０５Ｉ）およびＢＬＡＰ  Ｆ４９（ＢＬＡＰ＋Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ａ１９４Ｐ＋Ｖ１９９Ｍ＋Ｖ２０５Ｉ＋Ｌ２１７Ｄ）（すべてＨｅｎｋｅｌ／Ｋｅｍｉｒａから）、および花王からのＫＡＰ（変異Ａ２３０Ｖ＋Ｓ２５６Ｇ＋Ｓ２５９Ｎを有するバチルス・アルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）サブチリシン）が挙げられる。
【０２４２】
好適なα−アミラーゼとしては、細菌起源または真菌起源のものが挙げられる。化学的または遺伝学的に修飾された突然変異体（変異体）が含まれる。好ましいアルカリ性α−アミラーゼは、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）（例えば、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、または他のバチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（例えば、バチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＮＣＩＢ１２２８９、ＮＣＩＢ１２５１２、ＮＣＩＢ１２５１３、ＤＳＭ９３７５（米国特許第７１５３８１８号明細書）ＤＳＭ１２３６８、ＤＳＭＺ  ｎｏ．１２６４９、ＫＳＭ  ＡＰ１３７８（国際公開第９７／００３２４号パンフレット）、ＫＳＭ  Ｋ３６またはＫＳＭ  Ｋ３８（欧州特許第１０２２３３４号明細書）））の菌株に由来する。好ましいアミラーゼとしては、以下のものが挙げられる。
【０２４３】
（ａ）国際公開第９４／０２５９７号パンフレット、国際公開第９４／１８３１４号パンフレット、国際公開第９６／２３８７４号パンフレットおよび国際公開第９７／４３４２４号パンフレットに記載される変異体、特に、国際公開第９６／２３８７４号パンフレットにおいて配列番号２として示される酵素に対して以下の位置：１５、２３、１０５、１０６、１２４、１２８、１３３、１５４、１５６、１８１、１８８、１９０、１９７、２０２、２０８、２０９、２４３、２６４、３０４、３０５、３９１、４０８、および４４４のうちの１つまたは複数に置換を有する変異体。
【０２４４】
（ｂ）米国特許第５８５６１６４号明細書、国際公開第９９／２３２１１号パンフレット、国際公開第９６／２３８７３号パンフレット、国際公開第００／６００６０号パンフレットおよび国際公開第０６／００２６４３号パンフレットに記載される変異体、特に、国際公開第０６／００２６４３号パンフレットにおいて配列番号１２として示されるＡＡ５６０酵素に対して以下の位置：２６、３０、３３、８２、３７、１０６、１１８、１２８、１３３、１４９、１５０、１６０、１７８、１８２、１８６、１９３、２０３、２１４、２３１、２５６、２５７、２５８、２６９、２７０、２７２、２８３、２９５、２９６、２９８、２９９、３０３、３０４、３０５、３１１、３１４、３１５、３１８、３１９、３３９、３４５、３６１、３７８、３８３、４１９、４２１、４３７、４４１、４４４、４４５、４４６、４４７、４５０、４６１、４７１、４８２、４８４に１つまたは複数の置換を有する変異体であって、好ましくは、Ｄ１８３*およびＧ１８４*の欠失も含むもの。
【０２４５】
（ｃ）国際公開第０６／００２６４３号パンフレット中の配列番号４（バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＳＰ７２２からの野生型酵素）と少なくとも９０％の同一性を示す変異体、特に、１８３位および１８４位に欠失を有する変異体並びに参照により本明細書に組み込まれる国際公開第００／６００６０号パンフレットに記載される変異体。
【０２４６】
（ｄ）バチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）７０７からの野生型酵素（米国特許第６０９３５６２号明細書中の配列番号７）と少なくとも９５％の同一性を示す変異体、特に、以下の変異Ｍ２０２、Ｍ２０８、Ｓ２５５、Ｒ１７２、および／またはＭ２６１のうちの１つまたは複数を含むもの。好ましくは、前記アミラーゼは、Ｍ２０２Ｌ、Ｍ２０２Ｖ、Ｍ２０２Ｓ、Ｍ２０２Ｔ、Ｍ２０２Ｉ、Ｍ２０２Ｑ、Ｍ２０２Ｗ、Ｓ２５５Ｎおよび／またはＲ１７２Ｑのうちの１つまたは複数を含む。特に好ましいのは、変異Ｍ２０２ＬまたはＭ２０２Ｔを含むものである。
【０２４７】
（ｅ）国際公開第０９／１４９１３０号パンフレットに記載される変異体、好ましくは、国際公開第０９／１４９１３０号パンフレット中の配列番号１または配列番号２（ゲオバチルス・ステアロフェルモフィルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｓｔｅａｒｏｐｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）からの野生型酵素またはその末端切断型）と少なくとも９０％の同一性を示すもの。
【０２４８】
好適な市販のα−アミラーゼとしては、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＬＩＱＵＥＺＹＭＥ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ  ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＵＰＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）およびＢＡＮ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、ＫＥＭＺＹＭ（登録商標）ＡＴ  ９０００  Ｂｉｏｚｙｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｔｒａｄｉｎｇ  ＧｍｂＨ  Ｗｅｈｌｉｓｔｒａｓｓｅ  ２７ｂ  Ａ−１２００  Ｗｉｅｎ  Ａｕｓｔｒｉａ、ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＳＴＡＲ（登録商標）、ＥＮＺＹＳＩＺＥ（登録商標）、ＯＰＴＩＳＩＺＥ  ＨＴ  ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）およびＰＵＲＡＳＴＡＲ  ＯＸＡＭ（登録商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ）、ならびにＫＡＭ（登録商標）（花王）が挙げられる。一態様では、好適なアミラーゼには、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）およびＳＴＡＩＮＺＹＭＥ  ＰＬＵＳ（登録商標）およびそれらの混合物が含まれる。
【０２４９】
一態様では、そのような酵素は、リパーゼ（米国特許第６９３９７０２号明細書および米国特許出願公開第２００９／０２１７４６４号明細書に記載されているものなどの「第１サイクルリパーゼ（ｆｉｒｓｔ  ｃｙｃｌｅ  ｌｉｐａｓｅ）」を含む）からなる群から選択され得る。一態様では、リパーゼは、第１洗浄リパーゼ（ｆｉｒｓｔ−ｗａｓｈ  ｌｉｐａｓｅ）であり、好ましくはＴ２３１ＲおよびＮ２３３Ｒ変異のうちの１つまたは複数を含むサーモミセス・ラヌギノサス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）からの野生型リパーゼの変異体である。野生型配列は、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｏ５９９５２（サーモミセス・ラヌギノサス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）（フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ））由来）の２６９個のアミノ酸（アミノ酸２３〜２９１）である。好ましいリパーゼとしては、商品名Ｌｉｐｅｘ（登録商標）およびＬｉｐｏｌｅｘ（登録商標）の下で販売されているものが挙げられよう。
【０２５０】
一態様では、他の好ましい酵素として、米国特許第７１４１４０３号明細書中のアミノ酸配列配列番号２に対して少なくとも９０％、９４％、９７％または９９％の同一性の配列を有する、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）のメンバーにとって内因性の細菌ポリペプチドを含む、エンド−ベータ−１，４−グルカナーゼ活性（ＥＣ３．２．１．４）を示す微生物由来エンドグルカナーゼ、およびそれらの混合物が挙げられる。好適なエンドグルカナーゼは、商品名Ｃｅｌｌｕｃｌｅａｎ（登録商標）およびＷｈｉｔｅｚｙｍｅ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）の下で販売されている。
【０２５１】
他の好ましい酵素としては、商品名Ｐｅｃｔａｗａｓｈ（登録商標）、Ｐｅｃｔａｗａｙ（登録商標）、Ｘｐｅｃｔ（登録商標）の下で販売されているペクチン酸リアーゼ、ならびに商品名Ｍａｎｎａｗａｙ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）およびＰｕｒａｂｒｉｔｅ（登録商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ）の下で販売されているマンナナーゼが挙げられる。
【０２５２】
染料移行阻害剤−本発明の組成物はまた、１種または複数の染料移行阻害剤を含むことができる。好適なポリマー性染料移行阻害剤としては、これらに限定されないが、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ−オキシドポリマー、Ｎ−ビニルピロリドンおよびＮ−ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドン、およびポリビニルイミダゾール、ならびにそれらの混合物を挙げることができる。組成物中に存在する場合、染料移行阻害剤は、組成物の０．０００１重量％〜１０重量％、０．０１重量％〜５重量％、または０．１重量％〜３重量％のレベルで存在することができる。
【０２５３】
増白剤−本発明の組成物はまた、蛍光増白剤など、洗浄される商品に色合いを整えることができる追加の成分を含有することができる。
【０２５４】
組成物は、以下の構造を有する、アルファ結晶形態のＣ．Ｉ．蛍光増白剤２６０を含むことができる：
【化８】
2015523078.tif 000010
【０２５５】
一態様では、増白剤は、アルファ結晶形態のＣ．Ｉ．蛍光増白剤２６０などの冷水可溶性増白剤である。一態様では、増白剤は、主にアルファ結晶形態であり、これは、典型的には、Ｃ．Ｉ．蛍光増白剤２６０の少なくとも５０重量％、少なくとも７５重量％、少なくとも９０重量％、少なくとも９９重量％、または実質的にすべてもがアルファ結晶形態であることを意味する。
【０２５６】
増白剤は、典型的には、３〜３０マイクロメートル、３マイクロメートル〜２０マイクロメートル、または３〜１０マイクロメートルの重量平均一次粒子サイズを有する、微粒子化された粒子形態である。
【０２５７】
組成物はベータ結晶形態のＣ．Ｉ．蛍光増白剤２６０を含むことができ、また（ｉ）アルファ結晶形態のＣ．Ｉ．蛍光増白剤２６０と、（ｉｉ）ベータ結晶形態のＣ．Ｉ．蛍光増白剤との重量比を少なくとも０．１、または少なくとも０．６とすることができる。ＢＥ６８０８４７号明細書は、アルファ結晶形態のＣ．Ｉ蛍光増白剤２６０を製造する方法に関する。
【０２５８】
本発明において有用となり得る商用蛍光増白剤は亜群に分類することができ、それらには、これらに限定されないが、スチルベン、ピラゾリン、クマリン、カルボン酸、メチンシアニン、ジベンゾチオフェン−５，５−ジオキシド、アゾール、５員環および６員環複素環の誘導体、ならびに他の種々の薬剤が含まれる。このような増白剤の例は、“Ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｂｒｉｇｈｔｅｎｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ”，Ｍ．Ｚａｈｒａｄｎｉｋ，出版社Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８２）に開示されている。本組成物において有用な蛍光増白剤の具体的な非限定例は、米国特許第４７９０８５６号明細書および米国特許第３６４６０１５号明細書で同定されたものである。
【０２５９】
さらに好適な増白剤は以下の構造を有する：
【化９】
2015523078.tif 000011
【０２６０】
好適な蛍光増白剤レベルは、０．０１重量％、０．０５重量％、０．１重量％、または０．２重量％の下限レベルから０．５重量％または０．７５重量％の上限レベルを含む。
【０２６１】
一態様では、増白剤は粘土の上に負荷されて粒子を形成することができる。ケイ酸塩−本発明の組成物はまた、ケイ酸ナトリウムまたはケイ酸カリウムなどのケイ酸塩を含有することができる。組成物は、０重量％から１０重量％未満、９重量％、または８重量％、または７重量％、または６重量％、または５重量％、または４重量％、または３重量％、またはさらには２重量％のケイ酸塩を含むことができ、また上記の０重量％、または０．５重量％、または１重量％のケイ酸塩から含むことができる。好適なケイ酸塩はケイ酸ナトリウムである。
【０２６２】
分散剤−本発明の組成物はまた、分散剤を含有することができる。好適な水溶性有機材料は、ホモポリマーまたはコポリマーの酸またはそれらの塩を含み、ここでポリカルボン酸は、２個以下の炭素原子により互いから分離している少なくとも２つのカルボキシル基を含む。
【０２６３】
酵素安定化剤−組成物中で使用される酵素は、種々の手法により安定化させることができる。本明細書で使用される酵素は、完成した布地ケアおよびホームケア組成物中にカルシウムイオンおよび／またはマグネシウムイオンの水溶性供給源を存在させることより、組成物がそのようなイオンを酵素に提供し、安定化させることができる。プロテアーゼを含む水性組成物の場合には、ボレート、４−ホルミルフェニルボロン酸、フェニルボロン酸、およびそれらの誘導体を含むホウ素化合物などの可逆的なプロテアーゼ阻害剤、またはギ酸カルシウム、ギ酸ナトリウム、および１，２−プロパンジオールなどの化合物を加えて、安定性をさらに改善することができる。
【０２６４】
溶媒−好適な溶媒には、水、および親油性液体などの他の溶媒が含まれる。好適な親油性液体の例としては、シロキサン、他のシリコーン、炭化水素、グリコールエーテル、グリセリンエーテルなどのグリセリン誘導体、全フッ素化アミン、全フッ素化およびハイドロフルオロエーテル溶媒、低揮発性非フッ素化有機溶媒、ジオール溶媒、他の環境にやさしい溶媒、ならびにそれらの混合物が挙げられる。
【０２６５】
構造化剤／増粘剤−構造化液体は、それによって構造が一次成分（例えば界面活性剤物質）により形成されるように内部的に構造化することも、かつ／または二次成分（例えばポリマー、粘土、および／またはケイ酸物質）を使用して３次元マトリックス構造を提供することにより外部的に構造化することもできる。組成物は、０．０１〜５重量％、または０．１〜２．０重量％の構造化剤を含むことができる。構造化剤は、典型的には、ジグリセリドおよびトリグリセリド、エチレングリコールジステアレート、微結晶セルロース、セルロース系物質、マイクロファイバーセルロース、Ｐｏｌｙｇｅｌ  Ｗ３０（３ＶＳｉｇｍａ）などの疎水的に修飾されたアルカリ膨潤性エマルジョン、バイオポリマー、キサンタンガム、ジェランガム、およびそれらの混合物からなる群から選択される。好適な構造化剤には、硬化ヒマシ油およびその非エトキシル化誘導体が含まれる。好適な構造化剤は、米国特許第６８５５６８０号明細書に開示されている。このような構造化剤は、ある範囲のアスペクト比を有する糸状の構造系を有する。他の好適な構造化剤およびそれらを製造する方法は、国際公開第１０／０３４７３６号パンフレットに記載されている。
【０２６６】
コンディショニング剤−本発明の組成物は、高融点脂肪族化合物を含むことができる。本明細書において有用な高融点脂肪族化合物は、２５℃以上の融点を有し、脂肪アルコール、脂肪酸、脂肪アルコール誘導体、脂肪酸誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される。低融点のこのような化合物を、このセクションに含めることは意図していない。高融点化合物の非限定例は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，第５版，１９９３、およびＣＴＦＡ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，第２版，１９９２に見ることができる。
【０２６７】
高融点脂肪族化合物は、濡れた髪に適用したときのつるつるした感触、乾燥した髪における柔軟性および保湿した感触など、コンディショニングの改善を示す利点を提供することを考慮して、０．１〜４０重量％、１〜３０重量％、１．５〜１６重量％、１．５〜８重量％のレベルで組成物中に含まれる。
【０２６８】
本発明の組成物は、カチオン性ポリマーを含有することができる。組成物中のカチオン性ポリマーの濃度は、典型的には、０．０５〜３重量％、０．０７５〜２．０重量％、または０．１〜１．０重量％の範囲である。好適なカチオン性ポリマーは、組成物の使用目的のｐＨ（このｐＨは一般にｐＨ３〜ｐＨ９、またはｐＨ４〜ｐＨ８の間の範囲になる）で、少なくとも０．５ｍｅｑ／ｇｍ、少なくとも０．９ｍｅｑ／ｇｍ、少なくとも１．２ｍｅｑ／ｇｍ、少なくとも１．５ｍｅｑ／ｇｍ、または７ｍｅｑ／ｇｍ未満、および５ｍｅｑ／ｇｍ未満のカチオン性電荷密度を有する。本明細書において、ポリマーの「カチオン性電荷密度」は、ポリマー上の正電荷数とポリマーの分子量との比を指す。このような好適なカチオン性ポリマーの平均分子量は、一般に、１０，０００〜１０００万の間、５０，０００〜５００万の間、または１００，０００から３００万の間になる。
【０２６９】
本発明の組成物に使用される好適なカチオン性ポリマーは、第四級アンモニウム部分またはカチオン性プロトン化アミノ部分などのカチオン性窒素含有部分を含有する。ポリマーが水中に、組成物中に、または組成物のコアセルベート相中に可溶である限り、かつ対イオンが組成物の必須成分と物理的および化学的に適合する限り、または組成物の性能、安定性、もしくは美観を過度に損なわない限り、任意のアニオン性対イオンをカチオン性ポリマーと共に使用することができる。このような対イオンの非限定例としては、ハロゲン化物（例えば、塩化物、フッ化物、臭化物、ヨウ化物）、スルフェート、およびメチルスルフェートが挙げられる。
【０２７０】
このようなポリマーの非限定例は、ＣＴＦＡ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，第３版，Ｅｓｔｒｉｎ，Ｃｒｏｓｌｅｙ，ａｎｄ  Ｈａｙｎｅｓ編，（Ｔｈｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．（１９８２））に記載されている。
【０２７１】
組成物に使用される他の好適なカチオン性ポリマーとしては、多糖ポリマー、カチオン性グアーガム誘導体、第四級窒素含有セルロースエーテル、合成ポリマー、エーテル化セルロースのコポリマー、グアー、およびデンプンが挙げられる。使用される場合、本明細書におけるカチオン性ポリマーは、組成物中に可溶であるか、または本明細書の上記に記載した、カチオン性ポリマーならびにアニオン性、双性、および／もしくは両性イオン性界面活性剤成分によって形成される組成物中の複合コアセルベート相中に可溶であるかのいずれかである。カチオン性ポリマーの複合コアセルベートはまた、組成物中の他の荷電物質と共に形成することができる。好適なカチオン性ポリマーは、米国特許第３９６２４１８号明細書、第３９５８５８１号明細書、および米国特許出願公開第２００７／０２０７１０９号明細書に記載されている。
【０２７２】
本発明の組成物は、コンディショニング剤として非イオン性ポリマーを含むことができる。１０００を超える分子量を有するポリアルキレングリコールが本明細書では有用である。以下の一般式を有するものが有用である：
【化１０】
2015523078.tif 000012
式中、Ｒ95は、Ｈ，メチル、およびそれらの混合物からなる群から選択される。コンディショニング剤、特にシリコーンを組成物中に含むことができる。本発明の組成物に有用なコンディショニング剤は、典型的には、乳化液体粒子を形成する水不溶性で水分散性の不揮発性液体を含む。組成物に使用される好適なコンディショニング剤は、一般に、シリコーン（例えば、シリコーン油、カチオン性シリコーン、シリコーンガム、高屈折率シリコーン、およびシリコーン樹脂）、有機コンディショニング油（例えば、炭化水素油、ポリオレフィン、および脂肪酸エステル）もしくはそれらの組合せとして特徴づけられるコンディショニング剤、またはそうでなければ本明細書の水性界面活性剤マトリックス中に液体分散粒子を形成するコンディショニング剤である。このようなコンディショニング剤は、組成物の必須成分と物理的および化学的に適合すべきであり、またそうでなければ組成物の安定性、美観、または性能を過度に損なうべきではない。
【０２７３】
組成物中のコンディショニング剤の濃度は、所望のコンディショニング利点を提供するのに十分であるべきである。このような濃度は、コンディショニング剤、所望のコンディショニング性能、コンディショニング剤粒子の平均サイズ、他の成分の種類および濃度、ならびに他の同様の要因により異なり得る。
【０２７４】
シリコーンコンディショニング剤の濃度は、典型的には、０．０１〜１０重量％の範囲である。好適なシリコーンコンディショニング剤、およびシリコーン用の任意選択の懸濁化剤の非限定例は、米国再発行特許第３４，５８４号明細書；米国特許第５１０４６４６号明細書；米国特許第５１０６６０９号明細書；米国特許第４１５２４１６号明細書；米国特許第２８２６５５１号明細書；米国特許第３９６４５００号明細書；米国特許第４３６４８３７号明細書；米国特許第６６０７７１７号明細書；米国特許第６４８２９６９号明細書；米国特許第５８０７９５６号明細書；米国特許第５９８１６８１号明細書；米国特許第６２０７７８２号明細書；米国特許第７４６５４３９号明細書；米国特許第７０４１７６７号明細書；米国特許第７２１７７７７号明細書；米国特許出願公開第２００７／０２８６８３７Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２００５／００４８５４９Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２００７／００４１９２９Ａ１号明細書；英国特許第８４９４３３号明細書；独国特許第１００３６５３３号明細書（これらはすべて参照により本明細書に組み込まれる）；Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｓｉｌｉｃｏｎｅｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９６８）；Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｓｉｌｉｃｏｎｅ  Ｒｕｂｂｅｒ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄａｔａ  Ｓｈｅｅｔｓ  ＳＥ  ３０，ＳＥ  ３３，ＳＥ  ５４  ａｎｄ  ＳＥ  ７６；Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｐｅｔｒａｒｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（１９８４）；およびＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｖｏｌ．１５，第２版，ｐｐ  ２０４−３０８，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９８９）に記載されている。
【０２７５】
本発明の組成物はまた、コンディショニング剤として、単独でまたはシリコーン（本明細書に記載される）などの他のコンディショニング剤と組み合わせて、０．０５〜３重量％の少なくとも１つの有機コンディショニング油を含むことができる。好適なコンディショニング油としては、炭化水素油、ポリオレフィン、および脂肪酸エステルが挙げられる。さらに、本明細書において組成物に使用するのに適しているのは、米国特許第５６７４４７８号明細書および米国特許第４５２９５８６号明細書に、または米国特許第５７５０１２２号明細書；米国特許第４５０７２８０号明細書；米国特許第４６６３１５８号明細書；米国特許第４１９７８６５号明細書；米国特許第４２１７９１４号明細書；米国特許第４３８１９１９号明細書；および米国特許第４４２２８５３号明細書に記載されるコンディショニング剤である。
【０２７６】
衛生および悪臭−本発明の組成物はまた、リシノール酸亜鉛、チモール、Ｂａｒｄａｃ（登録商標）などの第四級アンモニウム塩、ポリエチレンイミン（ＢＡＳＦ製のＬｕｐａｓｏｌ（登録商標など）およびその亜鉛錯体、銀および銀化合物、特にＡｇ+を除放するように設計されたものまたはナノ銀分散体の１つまたは複数を含むことができる。
【０２７７】
プロバイオティクス−組成物は、国際公開第０９／０４３７０９号パンフレットに記載されるものなど、プロバイオティクスを含むことができる。
【０２７８】
増泡剤−高い起泡性が所望される場合、Ｃ10〜Ｃ16アルカノールアミドまたはＣ10〜Ｃ14アルキルサルフェートなどの増泡剤を、典型的には、１〜１０重量％のレベルで組成物中に組み込むことができる。Ｃ10〜Ｃ14モノエタノールおよびジエタノールアミドは、このような増泡剤の典型的な種類の例である。上述されるアミンオキシド、ベタイン、およびスルタインなどの高起泡補助界面活性剤と共に、このような増泡剤を使用することも有益である。所望により、ＭｇＣｌ2、ＭｇＳＯ4、ＣａＣｌ2、ＣａＳＯ4等の水溶性マグネシウムおよび／またはカルシウム塩を、典型的には、０．１〜２重量％のレベルで加えて、さらなる起泡をもたらすとともに、油脂除去性能を増強することができる。
【０２７９】
抑泡剤−泡の形成を低減または抑制する化合物を本発明の組成物に組み込むことができる。泡の抑制は、米国特許第４４８９４５５号明細書および米国特許第４，４８９，５７４号明細書に記載される、いわゆる「高濃度洗浄プロセス」、ならびにフロントローディング式洗濯機において特に重要となり得る。抑泡剤として多種多様な物質を使用することができ、抑泡剤は当業者に周知である。例えば、Ｋｉｒｋ  Ｏｔｈｍｅｒ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，第３版，第７巻，ｐ．４３０−４４７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９７９）を参照されたい。抑泡剤の例としては、モノカルボン脂肪酸およびその中の可溶性塩、パラフィンなどの高分子量炭化水素、脂肪酸エステル（例えば、脂肪酸トリグリセリド）、一価アルコールの脂肪酸エステル、脂肪族Ｃ18〜Ｃ40ケトン（例えば、ステアロン）、Ｎ−アルキル化アミノトリアジン、好ましくは融点が約１００℃未満のワックス状炭化水素、シリコーン抑泡剤、および二級アルコールが挙げられる。抑泡剤は、米国特許第２９５４３４７号明細書；米国特許第４２６５７７９号明細書；米国特許第４２６５７７９号明細書；米国特許第３４５５８３９号明細書；米国特許第３９３３６７２号明細書；米国特許第４６５２３９２号明細書；米国特許第４９７８４７１号明細書；米国特許第４９８３３１６号明細書；米国特許第５２８８４３１号明細書；米国特許第４６３９４８９号明細書；米国特許第４７４９７４０号明細書；米国特許第４７９８６７９号明細書；米国特許第４０７５１１８号明細書；欧州特許第８９３０７８５１．９号明細書；欧州特許第１５０８７２号明細書；およびＤＯＳ  ２，１２４，５２６号明細書に記載されている。
【０２８０】
自動洗濯機で使用されるいかなる洗剤組成物の場合も、泡は、洗濯機からあふれ出る程に形成されるべきでない。使用する場合、抑泡剤は、好ましくは「抑泡量」で存在する。「抑泡量」によって、十分に泡を制御して、自動洗濯機で使用するための低起泡性洗濯洗剤をもたらす、この泡制御剤の量を、組成物の配合者が選択することができることを意味する。
【０２８１】
本明細書における組成物は、一般に、０〜１０重量％の抑泡剤を含むことになる。モノカルボン脂肪酸およびその中の塩は、抑泡剤として使用する場合、典型的には最大で５重量％の量で存在することになる。好ましくは、０．５〜３重量％の脂肪族モノカルボキシレート抑泡剤を使用する。シリコーン抑泡剤は、典型的には、最大２．０重量％の量で使用するが、増量して使用することもできる。モノステアリルホスフェート抑泡剤は、一般に、０．１〜２重量％の範囲の量で使用する。炭化水素抑泡剤は、典型的には、０．０１〜５．０重量％の範囲の量で使用するが、増量して使用することもできる。アルコール石鹸抑泡剤は、典型的には、０．２〜３重量％で使用する。
【０２８２】
本明細書における組成物は、広範囲のｐＨにわたって洗浄活性を有し得る。特定の実施形態では、組成物は、ｐＨ４〜ｐＨ１１．５において洗浄活性を有する。他の実施形態では、組成物は、ｐＨ８〜ｐＨ１０において活性である。
【０２８３】
本明細書における組成物は、広範囲の温度にわたって、例えば１０℃以下〜９０℃において洗浄活性を有し得る。好ましくは、温度は５０℃未満もしくは４０℃未満、または３０℃未満でもある。特定の実施形態では、組成物の至適温度範囲は、１０℃〜２０℃、１５℃〜２５℃、１５℃〜３０℃、２０℃〜３０℃、２５℃〜３５℃、３０℃〜４０℃、３５℃〜４５℃、または４０℃〜５０℃である。
【０２８４】
本明細書における組成物はさらに、カルシウム（Ｃａ2+）、マグネシウム（Ｍｇ2+）、および第一鉄（Ｆｅ2+）、またはそれらの組合せなどの２価カチオンの添加により安定化させることができる。
【０２８５】
一部の態様では、本発明は、Ｌｉｐｒ１３９リパーゼの代わりにサーモミセス・ラヌギノサス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）リパーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標））を含む均等組成物に比較して、脂質基質の加水分解により有効である組成物に関する。他の態様では、組成物は、Ｌｉｐｒ１３９リパーゼの代わりにＬｉｐｅｘ（商標）を含む。
【０２８６】
組成物の形態
本明細書に記載される洗浄組成物は、例えば、洗濯用途、硬質表面洗浄、食器洗浄用途、ならびに義歯、歯、毛髪、および皮膚などの化粧用途に有利に使用される。さらに、より低い温度の溶液における有効性の増大という特異な利点のために、本明細書に記載されるＬｉｐｒ１３９酵素は、洗濯用途に理想的に適している。本発明の組成物は、特に、固体または液体の洗浄組成物および／または処理組成物である。一態様では、本発明は、組成物の形態が、液体、ゲル、棒状石鹸、粉末、粒状固体、錠剤、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される、洗濯組成物に関する。本発明の別の態様では、組成物は、単一または多重コンパートメントの単位用量形態を有する。
【０２８７】
水溶性フィルム−本発明の組成物はまた、水溶性フィルム内に封入することができる。好ましいフィルム材料は、好ましくはポリマー材料である。当技術分野で公知であるように、フィルム材料は、例えば、ポリマー材料のキャスティング、ブロー成形、押出し、またはブロー押出しにより得ることができる。パウチ材料として使用するのに適した、好ましいポリマー、コポリマー、またはそれらの誘導体は、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアルキレンオキシド、アクリルアミド、アクリル酸、セルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、セルロースアミド、ポリビニルアセテート、ポリカルボン酸および塩、ポリアミノ酸またはペプチド、ポリアミド、ポリアクリルアミド、マレイン酸／アクリル酸のコポリマー、デンプンおよびゼラチンを含む多糖類、キサンタンおよびカラゴム（ｃａｒｒａｇｕｍ）などの天然ゴムから選択される。より好ましいポリマーは、ポリアクリレートおよび水溶性アクリレートコポリマー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストリン、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マルトデキストリン、ポリメタクリレートから選択され、最も好ましくは、ポリビニルアルコール、ポリビニルアルコールコポリマー、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ならびにそれらの組合せから選択される。好ましくは、パウチ材料中のポリマー、例えばＰＶＡポリマーのレベルは、少なくとも６０重量％である。ポリマーは、任意の重量平均分子量を有することができるが、好ましくは、約１，０００〜１，０００，０００、約１０，０００〜３００，０００、約２０，０００〜１５０，０００である。ポリマーの混合物もパウチ材料として使用することができる。
【０２８８】
当然のことながら、異なるフィルム材料および／または異なる厚さのフィルムを、本発明のコンパートメントの作製に使用することができる。異なるフィルムを選択することの利点は、得られるコンパートメントが異なる溶解性または放出特性を示し得ることである。
【０２８９】
好ましいフィルム材料は、ＭｏｎｏＳｏｌ商品番号Ｍ８６３０、Ｍ８９００、Ｈ８７７９で知られるＰＶＡフィルム、ならびに米国特許第６１６６１１７号明細書および米国特許第６７８７５１２号明細書に記載されるもの、ならびに相当する溶解性および変形能特性を有するＰＶＡフィルムである。
【０２９０】
本明細書におけるフィルム材料はまた、１種または複数の添加成分を含むことができる。例えば、可塑剤、例えばグリセロール、エチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ソルビトール、およびそれらの混合物を添加することが有益となることがある。他の添加剤としては、洗浄水に送達される機能的な洗剤添加剤、例えば有機ポリマー分散剤等が挙げられる。
【０２９１】
組成物を作製する方法
本発明の組成物は、任意の好適な形態に製剤化することができ、配合者により選択される任意の方法により調製することができる。この方法の非限定例は、出願人の実施例および米国特許第４９９０２８０号明細書；米国特許出願公開第２００３００８７７９１Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２００３００８７７９０Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２００５０００３９８３Ａ１号明細書；米国特許出願公開第２００４００４８７６４Ａ１号明細書；米国特許第４７６２６３６号明細書；米国特許第６２９１４１２号明細書；米国特許出願公開第２００５０２２７８９１Ａ１号明細書；欧州特許出願公開第１０７０１１５Ａ２号明細書；米国特許第５８７９５８４号明細書；米国特許第５６９１２９７号明細書；米国特許第５５７４００５号明細書；米国特許第５５６９６４５号明細書；米国特許第５５６５４２２号明細書；米国特許第５５１６４４８号明細書；米国特許第５４８９３９２号明細書；米国特許第５４８６３０３号明細書に記載されており、これらはすべて、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の組成物、または本発明に従って調製される組成物は、これらに限定されないが、布地、硬質表面、ならびに布地およびホームケア領域（例えば、エアフレッシュナーおよび香り送達系を含む空気ケア、自動車ケア、食器洗浄、布地コンディショニング（柔軟にすることおよび／または新鮮にすることを含む）、洗濯洗浄、洗濯およびすすぎの添加および／またはケア、床および便器用クリーナーを含む硬質表面洗浄および／または処理）の他の任意の表面を処理するための組成物、顆粒または粉末形態の多目的洗剤または「ヘビーデューティー」洗剤、特に洗浄洗剤；液体、ゲル、またはペースト形態の多目的洗剤、特にいわゆるヘビーデューティー液体型；微細布地用液体洗剤；食器手洗い用洗剤またはライトデューティー食器洗剤、特に高起泡性型；家庭用途および業務用途のための種々の錠剤型、粒剤型、液剤型、およびすすぎ助剤型を含む食洗機用食器洗剤；自動車またはカーペット用シャンプー、便器用クリーナーを含む浴室クリーナー；ならびに漂白添加剤などの洗浄補助剤、および乾燥機用シートなどの「汚れ付着」型または前処理型の基材負荷組成物を含む、洗浄および／または処理組成物を含む。繊維製品および／または硬質表面、最も好ましくは繊維製品を洗浄および／または処理するための組成物および方法が好ましい。組成物は、好ましくは、洗浄工程の前処理ステップまたは主要洗浄ステップで使用される組成物、最も好ましくは繊維製品の洗浄ステップで使用するための組成物である。
【０２９２】
本明細書で使用される場合、「布地および／または硬質表面の洗浄および／または処理組成物」という用語は、他に指示がない限り、顆粒または粉末形態の多目的洗剤または「ヘビーデューティー」洗剤、特に洗浄洗剤；液体、ゲル、またはペースト形態の多目的洗剤、特にいわゆるヘビーデューティー液体型；微細布地用液体洗剤；食器手洗い用洗剤またはライトデューティー食器洗剤、特に高起泡性型；家庭用途および業務用途のための種々の錠剤型、粒剤型、液剤型、およびすすぎ助剤型を含む食洗機用食器洗剤；液体洗浄剤および殺菌剤、自動車またはカーペット用シャンプー、便器用クリーナーを含む浴室クリーナー；液体、固体、および／または乾燥機用シート形態であり得る、柔軟にすることおよび／または新鮮にすることを含む布地コンディショニング組成物；ならびに漂白添加剤などの洗浄補助剤、および乾燥機用シートなどの「汚れ付着」型または前処理型の基材負荷組成物を含む、洗浄および／または処理組成物のサブセットである。適用可能であるこのような組成物はすべて、標準形態、濃縮形態、または特定の態様では、非水性になり得る程の高濃縮形態であっても可能である。
【０２９３】
使用方法
本発明は、繊維製品もしくは硬質表面、または布地および／もしくはホームケアの分野の他の表面を処理することを含む、任意の表面を洗浄するための方法を含む。本発明の好ましい態様では、この方法は、最も好ましくは、繊維製品の洗浄工程で使用するために、あるいは手洗い食器洗浄と自動／機械食器洗浄の両方を含む食器洗浄に使用するために、洗浄工程の前処理ステップまたは主要洗浄ステップで処理される表面に接触させるステップを含む。本発明の一実施形態では、表面を洗浄および／または処理するための方法の中で、リパーゼ変異体および他の成分を逐次的に加える。あるいはリパーゼ変異体および他の成分を同時に加える。
【０２９４】
本明細書で使用される場合、洗浄は、これらに限定されないが、スクラビングおよび機械的撹拌を含む。洗浄は、国際公開第０８／１０１９５８号パンフレットに記載されるように、かつ／またはスクラビングおよび機械的撹拌に追加して、もしくはその代わりに圧力を交互に加えることにより（圧力／真空）、泡組成物を用いて行うことができる。このような表面または布地の乾燥は、家庭内または工業的環境のいずれかで使用される一般的手段の任意の１つによって遂行することができる。本発明の洗浄組成物は、理想的には、洗濯および食器洗浄の用途で使用するのに適している。したがって、本発明は、これらに限定されないが、布地、食器、刃物、および台所用品を含む対象を洗浄するための方法を含む。この方法は、出願人の洗浄組成物、洗浄添加剤、またはそれらの混合物の少なくとも１つの実施形態を含む前記洗浄組成物と、洗浄される対象とを接触させるステップを含む。布地は、通常の消費者または施設使用条件で洗濯することができるほとんどいずれの布地も含み得る。溶液のｐＨは、８〜１０．５とすることができる。組成物は、５００ｐｐｍ〜１５．０００ｐｐｍの溶液濃度で使用することができる。水温は、典型的には、５℃〜９０℃の範囲である。水と布地の比は、典型的には、１：１〜３０：１である。
【０２９５】
一態様では、本発明は、洗浄組成物を製造するためにＬｉｐｒ１３９を使用する方法に関する。一態様では、本発明は、対象を洗浄するための洗浄組成物の使用に関する。
【０２９６】
一態様では、本発明は、洗浄組成物を安定化する方法であって、配列番号２に対して少なくとも７５％の同一性を有するリパーゼを組成物に加えることを含み、組成物の安定性が、配列番号２に対して少なくとも７５％の同一性を有するリパーゼの代わりにサーモミセス・ラヌギノサス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）リパーゼを含む均等組成物の安定性よりも高く、好ましくは、安定性が、最終洗浄組成物および／または最終洗浄媒体において測定される、方法に関する。
【０２９７】
一態様では、本発明は、配列番号２に対して少なくとも７５％の同一性を有するリパーゼおよび界面活性剤を加えることを含む、組成物を製造する方法に関する。一態様では、本発明は、洗浄される表面上に存在する脂質汚れを洗浄組成物と接触させることを含む、表面を洗浄するための方法に関する。一態様では、本発明は、汚染物および／または汚れを洗浄組成物と接触させることを含む、汚染物および／または表面上の汚れに存在する脂質を加水分解するための方法に関する。
【実施例】
【０２９８】
以下の実施例により本発明をさらに説明する。以下の実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【０２９９】
培地および溶液
別段の指摘がない限り、材料は試薬グレードのものである。市販の酵素Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）およびＬｉｐｅｘ（商標）を、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓから入手した。
【０３００】
実施例１：同定、クローニングおよび発現
セデセア属種（Ｃｅｄｅｃｅａ  ｓｐ）−１６６４０からの染色体ＤＮＡを、ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）により単離した。５μｇの染色体ＤＮＡを、Ｉｌｌｕｍｉｎａ配列決定のためにＦＡＳＴＥＲＩＳ  ＳＡ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄに送付した。ゲノム配列を、脂質分解酵素をコードするオープンリーディングフレームについて分析し、Ｌｉｐｒ１３９リパーゼを同定した。
【０３０１】
配列番号１として示されるＬｉｐｒ１３９合成遺伝子のヌクレオチド配列は、Ｇｅｎｅ  Ａｒｔ（ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ  ＢｉｏＰａｒｋ，Ｊｏｓｅｆ−Ｅｎｇｅｒｔ−ｓｔｒ．１１，９３０５３，Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）により合成された。Ｓａｎｇｅｒ配列決定によってＬｉｐｒ１３９をコードする遺伝子配列を確認した。この合成遺伝子を、国際公開第１２／０２５５７７号パンフレットに記載されるように、ＳａｃＩおよびＭｌｕＩ制限部位を使用してバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）発現ベクターの中にサブクローニングした。形質転換体を、６μｇ／ｍｌのクロラムフェニコールを添加したＬＢプレート上で選択した。
【０３０２】
組み込まれた発現構築物を含有する組換えバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）クローンを選択し、それぞれが３４ｍｇ／ｌのクロラムフェニコールを添加したカゼインベースの培地１０ｍｌを含有する５００ｍｌのバッフル付き三角フラスコ中で回転式振動テーブル上にて培養した。このクローンを２６℃で５日間培養した。酵素を含有する上清を回収し、以下に記載のように酵素を精製した。
【０３０３】
実施例２：精製
発酵上清を、０．２２μｍカットオフのＰＥＳ  Ｂｏｔｔｌｅトップフィルター（カタログ番号：５６７−００２０、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｋａｓｔｒｕｐｓｖｅｊ  ９０，４０００  Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を通して濾過し、１Ｍ  ＮａＣｌに調整し、５０ｍｌのデシルアミンアガロースカラム（Ａｃｅｔｙｌｅｒｅｔ  Ｄｅｃｙｌａｍｉｎａｇａｒｏｓｅ、カタログ番号ＣＳ７６、ＵｐＦｒｏｎｔ  Ｃｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ／Ｓ、Ｌｅｒｓｏ  Ｐａｒｋａｌｌｅ  ４２、２１００  Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ  Ｏ、Ｄｅｎｍａｒｋ）上でのＨＩＣ／アフィニティークロマトグラフィーに適用した。カラムを、３カラム容量（ＣＶ）の緩衝液Ａ（５０ｍＭボレート；１Ｍ  ＮａＣｌ；ｐＨ９）で洗浄し、続いて、３ＣＶの１００％緩衝液Ｂ（５０ｍＭボレート；３０％イソプロパノール；ｐＨ９）を用いてタンパク質を溶出した。タンパク質の溶出を２８０ｎｍでモニターした。２８０ｎｍの吸光度が高い画分を、そのＬｉｐｒ１３９含量に関してＳＤＳ−Ｐａｇｅで分析した。
【０３０４】
純粋なタンパク質の画分をプールし、導電率が３ｍＳ／ｃｍ未満となるまでＭｉｌｌｉＱ  Ｈ2Ｏで希釈し、次いで、５０ｍｌのＱ−セファロースファストフローカラム（カタログ番号１７−０５１０−０１  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｐａｒｋ  Ａｌｌｅ  ２９５、２６０５  Ｂｒｏｎｄｂｙ，Ｄｅｎｍａｒｋ）上に負荷した。カラムを３ＣＶの緩衝液Ａ（５０ｍＭボレート；ｐＨ９）で洗浄し、続いて、０％〜１００％の勾配で緩衝液Ｂ（５０ｍＭボレート；１Ｍ  ＮａＣｌ；ｐＨ９）を用いてタンパク質を溶出した。タンパク質の溶出を２８０ｎｍでモニターしたところ、タンパク質の大部分がおよそ５０％の緩衝液Ｂにおいて溶出した。
【０３０５】
画分をＳＤＳ−Ｐａｇｅで分析し、純粋な画分をプールした。精製されたタンパク質は、３０ｋＤの推定ＭＷおよび純度＞９５％を有していた。
【０３０６】
配列番号２で示される成熟Ｌｉｐｒ１３９リパーゼのアミノ酸配列を、インゲル消化物（Ｉｎ−ｇｅｌ  ｄｉｇｅｓｔ）により確認した。
【０３０７】
実施例３：トリグリセリドに対する加水分解活性
プレートアッセイ
種々の基質に対するリパーゼの加水分解活性を以下の寒天プレートを用いて検討した：オリーブ油プレート（１％オリーブ油；１％  ＬｉｔｅｘアガロースＨＳＨ１０００；１ｍＭ  ＣａＣｌ2；５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ８．０）、トリブチリンプレート（１．２５％トリブチリン；１．６５％アラビアゴム；１％  ＬｉｔｅｘアガロースＨＳＨ１０００；５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ；０．００８％ブリリアントグリーン；ｐＨ７．０）およびレシチンプレート（１％ホスファチジルコリン；１％  ＬｉｔｅｘアガロースＨＳＨ１０００；５０ｍＭアセテート；１ｍＭ  ＣａＣｌ2；ｐＨ５．５）。
【０３０８】
種々のｐＨでの加水分解活性を、以下のｐＨを有するオリーブ油プレート上で評価した：ｐＨ７、ｐＨ８、ｐＨ９およびｐＨ１０（１％オリーブ油；１％ＬｉｔｅｘアガロースＨＳＨ１０００；１ｍＭ  ＣａＣｌ2；５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７および８）または５０ｍＭボレート（ｐＨ９および１０））。
【０３０９】
精製酵素、緩衝液（陰性対照）ならびにＬｉｐｏｌａｓｅ（商標）およびＬｉｐｅｘ（商標）（陽性対照）の２０μｌのアリコートをそれぞれ、直径３ｍｍのパンチ穴に分注し、２０℃で２４時間インキュベートした。次いで、プレートについて、穴のまわりのクリアリングゾーンの有無を調べた。加水分解活性は、穴のまわりのクリアリングゾーンにより示された。陰性対照ではクリアリングゾーンは生じなかった。
【０３１０】
Ｌｉｐｒ１３９は、試験した３つすべての基質に対して加水分解活性を示した。オリーブ油プレート上では、Ｌｉｐｒ１３９は、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）に匹敵する加水分解活性を示し、Ｌｉｐｅｘ（商標）よりも高い活性を示した。トリブチリンプレート上では、Ｌｉｐｒ１３９は、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）およびＬｉｐｅｘ（商標）に匹敵する活性を示した。レシチンプレート上では、Ｌｉｐｒ１３９は、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）およびＬｉｐｅｘ（商標）の両方と比較して増加した活性を示した。
【０３１１】
Ｌｉｐｒ１３９は、ｐＨ８、ｐＨ９およびｐＨ１０で加水分解活性を示し、ｐＨ９で最大の活性を示した。
【０３１２】
実施例４：脂肪酸に対する加水分解活性
ｐＮＰアッセイ
種々の脂肪酸に対するＬｉｐｒ１３９の加水分解活性を、ｐ−ニトロフェニルアシルエステル類を基質として用いて動力学的アッセイにおいて検討した。基質：ｐ−ニトロフェニルブチレート（Ｃ３）、ｐ−ニトロフェニルカプロエート（Ｃ６）、ｐ−ニトロフェニルカプレート（Ｃ１０）、ｐ−ニトロフェニルラウレート（Ｃ１２）およびｐ−ニトロフェニルパルミテート（Ｃ１６）（すべてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｄａｎｍａｒｋ  Ａ／Ｓ，Ｋｉｒｋｅｂｊｅｒｇ  Ａｌｌｅ  ８４，２６０５  Ｂｒｏｎｄｂｙから；カタログ番号：Ｃ３：Ｎ−９８７６、Ｃ６：Ｎ−０５０２、Ｃ１０：Ｎ−０２５２、Ｃ１２：Ｎ−２００２、Ｃ１６：Ｎ−２７５２）のＤＭＳＯ中の１００ｍＭストック溶液を、アッセイ緩衝液（５０ｍＭトリス；ｐＨ７．７；０．４％トリトンＸ−１００）で１ｍＭの最終濃度まで希釈した。
【０３１３】
Ｌｉｐｒ１３９ならびに対照：Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）およびＬｉｐｅｘ（商標）（５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ；ｐＨ８．０；１０ｐｐｍトリトンＸ−１００；＋／−２０ｍＭ  ＣａＣｌ2中）を、９６ウェルＮＵＮＣプレート（カタログ番号：２６０８３６，Ｋａｍｓｔｒｕｐｖｅｊ  ９０，ＤＫ−４０００，Ｒｏｓｋｉｌｄｅ）中、以下の最終濃度で基質溶液に添加した：０．０１ｍｇ／ｍｌ；５×１０-3ｍｇ／ｍｌ；２．５×１０-4ｍｇ／ｍｌ；および１．２５×１０-4ｍｇ／ｍｌ。ｐ−ニトロフェニルアシルの加水分解によるｐ−ニトロフェノールの放出を、Ｓｐｅｃｔｒａ  ｍａｘ  １９０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＧｍｂＨ，Ｂｉｓｍａｒｃｋｒｉｎｇ  ３９，８８４００  Ｂｉｂｅｒａｃｈ  ａｎ  ｄｅｒ  Ｒｉｓｓ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により、１０秒間隔で５分間、４０５ｎｍでモニターした。
【０３１４】
測定したすべての基質について、Ｌｉｐｒ１３９の加水分解活性は、２ｍＭ  ＣａＣｌ2の存在下での方が、ＣａＣｌ2の不在下で測定した活性と比較して、著しくより高かった。
【０３１５】
ＣａＣｌ2の存在下では、Ｌｉｐｒ１３９は、試験したすべての鎖長について、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）およびＬｉｐｅｘ（商標）よりも低い（４０〜５０％の）加水分解活性を示した。Ｌｉｐｒ１３９についての最大活性は、ｐＮＰ−カプレート（Ｃ１０）に対して測定された。
【０３１６】
２ｍＭ  ＣａＣｌ2の不在下では、Ｌｉｐｒ１３９は、ｐＮＰ−カプレート（Ｃ１０）の場合にその最も高い活性を示し、これに対する活性は、対照のＬｉｐｅｘ（商標）およびＬｉｐｏｌａｓｅ（商標）よりも高かった。その他の基質については、活性は、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）およびＬｉｐｅｘ（商標）に匹敵した。
【０３１７】
実施例５：安定性
リパーゼの熱安定性を、ＶＰ−示差走査熱量計（ＭｉｃｒｏＣａｌ  Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，ＵＳＡ）を使用して、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により決定した。９０Ｋ／時間の一定のプログラムされた加熱速度で、選択された緩衝液中の酵素溶液を加熱した後に得られるサーモグラム（Ｃｐ対Ｔ）中の変性ピーク（主要な吸熱ピーク）の頂点として、熱変性温度、Ｔｄ（℃）を得た。試料溶液および参照溶液（約０．５ｍｌ）を熱量計に負荷し（参照：酵素を含まない緩衝液）、２５℃で１０分間予め熱平衡させた後、２５℃〜１１０℃のＤＳＣスキャンを行った。変性温度を約＋／−１℃の正確さで決定した。
【０３１８】
ｐＨ８（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）において、熱変性温度は７３℃まで測定された。
【０３１９】
実施例６：相対的洗浄性能
洗濯における洗浄性能を評価するために、自動機械的応力分析（ＡＭＳＡ）を使用して、洗浄実験を実施した。ＡＭＳＡプレートは、試験溶液用の多数のスロットと、洗浄される洗濯試料である繊維製品をすべてのスロット開口部に対してしっかりと押し込むリッドとを有する。洗浄時間中、プレート、試験溶液、繊維製品、およびリッドを激しく振動させることにより、試験溶液を繊維製品に接触させ、規則的、周期的振動方式で機械的応力を加えた。さらに詳細な説明については、国際公開第０２／４２７４０号パンフレット、特に第２３〜２４頁のパラグラフ「Ｓｐｅｃｉａｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔｓ」を参照されたい。
【０３２０】
異なるｐＨのグリシン緩衝液中、ならびに異なる界面活性剤レベルおよび異なるｐＨを有する組成物中で、洗濯実験を行った。実験条件を以下に指定する。
【０３２１】
【表２】
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【０３２２】
【表３】
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【０３２３】
ＮａＯＨまたはクエン酸により、指定されたｐＨへの最終調整を行った。ＣａＣｌ2およびＭｇＣｌ2（Ｃａ2+：Ｍｇ2+＝４：１）を試験系に添加することにより、水の硬度を１５°ｄＨに調整した。
【０３２４】
洗浄した後、繊維製品を水道水ですすぎ、濾紙を用いて繊維製品から過剰な水を除去し、その直後に、８５℃で５分間繊維製品を乾燥させた。
【０３２５】
洗浄性能は、洗浄した汚染繊維製品の色の変化として測定した。汚染物は、ウコンと混合されたクリームであった。ウコンは色素クルクミンを含有しており、クルクミンは、ｐＨ依存性の色変化を有することによりｐＨ指標として機能する。リパーゼ活性は、クリームアシルグリセリドからの遊離脂肪酸の放出に繋がり、これがｐＨ低下に繋がり、その結果、クルクミンｐＨ指標の色の変化に繋がる。従って、リパーゼ洗浄性能は、白色光で照らしたときに、洗浄した汚染繊維製品から反射放出される光の色の変化の程度として表すことができる。
【０３２６】
洗浄した汚染繊維製品の画像を捉えるのに用いた、プロ仕様のフラットベッドスキャナー（Ｋｏｄａｋ  ｉＱｓｍａｒｔ，Ｋｏｄａｋ，Ｍｉｄｔａｇｅｒ  ２９，ＤＫ−２６０５  Ｂｒｏｎｄｂｙ，Ｄｅｎｍａｒｋ）で色測定を実施した。スキャン画像の光強度値を抽出するため、画像からの２４ビットピクセル値を、赤、緑および青（ＲＧＢ）値へと変換した。ベクトルとしてＲＧＢ値を一緒に加え、次に、得られたベクトルの長さを求めることにより強度値（Ｉｎｔ）を算出した。
【数１】
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【０３２７】
リパーゼ活性による色の変化を、全反射放出光の強度（Ｉｎｔ）に対する緑色光（Ｇ）の反射放出の増加として測定した。参照リパーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標））に対するリパーゼの洗浄性能（ＲＰ（洗浄））を：ＲＰ（洗浄）＝（Ｇ／Ｉｎｔ（試験リパーゼ）−Ｇ／Ｉｎｔ（酵素なし））／（Ｇ／Ｉｎｔ（リパーゼ参照）−Ｇ／Ｉｎｔ（酵素なし））として算出した。
【０３２８】
【表４】
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【０３２９】
さらに、Ｌｉｐｒ１３９の相対的洗浄性能（ＲＰ（洗浄））を、１０％〜１００％の界面活性剤を含有する組成物において試験した場合、リパーゼＬｉｐｅｘ（商標）を用いたレベルであった。
【０３３０】
本明細書において記載され請求される発明は、本明細書に開示される特定の態様によって範囲が限定されるべきものではない。というのは、これらの態様は、本発明のいくつかの態様の例示として意図されるものであるからである。あらゆる均等態様が、本発明の範囲内にあることが意図される。実際、本明細書に示され記載されたものに加え、本発明の様々な改変形態が、上述の記載から当業者に明らかになるだろう。そのような改変形態もまた、添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図される。矛盾する場合には、定義を含む本開示が優先される。
【配列表】
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【国際調査報告】
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