(57)【要約】  本発明は式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム化合物、又はその化合物製造方法および医薬用途を提供する。本発明は、天然薬材ベニバナを原料にし、優れた抽出プロセスによって新型モノマー薬物水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られ、純度は９８．５％以上を保証でき、抗血小板凝集、冠状動脈性心臓病、狭心症、急性脳虚血などの諸血液循環障害疾患の治療に水酸基ベニバナ黄色素Ａよりもっと安全で効果的、安定で制御可能なモノマー化合物であり、高い水溶性及び人体耐性を有する。【化１】2015525232.tif 000014
2015525232.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ)で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム：
【化１】
2015525232.tif 000012
【請求項２】
前記請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの調製方法、下記式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａに基づき式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られるステップを特徴とする。
【化２】
2015525232.tif 000013
【請求項３】
前記請求項２が述べた方法、特徴は式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａは次の方法によって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られる：式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａはナトリウムイオン交換樹脂柱によって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られ、又は式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａはナトリウム塩との反応によって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られ、ここ前記のナトリウム塩は水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムの中の１種または２種以上から選択する。
【請求項４】
前記請求項３が述べた方法によって、前記のナトリウムイオン交換樹脂は００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂である。
【請求項５】
前記請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの調製方法、ベニバナ薬材を原料にし、次のような抽出、ナトリウム塩に転化、分離と精製のステップを経過し、（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを得られることを特徴とする。
（１）抽出：ベニバナ薬材を水で抽出して、ベニバナ抽出液を得られる。
（２）ナトリウム塩に転化：ステップ（１）により得られたベニバナ抽出液はナトリウムイオン交換樹脂カラムを通して、ベニバナ黄色素は式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムに転化し、式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含める溶離液を得られる。
（３）分離：ステップ（２）が収集した式（１）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含める溶離液がマクロ孔質樹脂カラムを通して分離され、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの粗製品を得られる。
（４）精製：ステップ（３）により得られた式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品はデキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離され、さらに、限外ろ過膜による限外濾過し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【請求項６】
前記請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの調製方法、ベニバナ薬材を原料にし、次のような抽出、分離、精製、酸性化、ナトリウム塩に転化のステップを経過し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを得られることを特徴とする：
（１）抽出：ベニバナ薬材は水で抽出して、ベニバナ抽出液を得られる。
（２）分離：ステップ（１）により得られたベニバナ抽出液はマクロ孔質樹脂カラムを通して分離され、ベニバナ黄色素粗製品を得られる。
（３）精製：ステップ（２）により得られたベニバナ黄色素粗製品をデキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離される。さらに、限外ろ過膜による限外濾過し、凍結乾燥された後ベニバナ黄色色素精製製品を得られる。
（４）酸性化：ステップ（３）により得られたベニバナ黄色素精製製品に水や酸を入れて、ｐＨ値を１．５−２．５に調整し、析出した淡黄色固体を収集し、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａを得られる。
（５）ナトリウム塩に転化：ステップ（３）により得られた式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａに給水後、０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム又は炭酸水素ナトリウム（好ましくは、水酸化ナトリウム）溶媒液を利用してＰＨを４−７に調整し、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａは式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを生成し、反応生成物を限外ろ過膜による限外濾過し、ろ液を凍結乾燥し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【請求項７】
前記請求項５又は６の方法によって、ここ前記マクロ孔質樹脂は、ＨＺ８０１型マクロ孔質樹脂である。
【請求項８】
前記の請求項５又は６の方法によって、デキストランゲルカラムクロマトグラフィーはＳｅｐｈａｄｅｘ°ＬＨ−２０デキストランゲルカラムクロマトグラフィーで分離され、純水を溶離液にする。前記限外ろ過は、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過する。
【請求項９】
１種の製剤、薬剤活性成分及び薬学的に許容され得る担体としての前記請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを含有する。好ましく、前記の製剤は凍結乾燥粉末注射剤である。より好ましくは、前記の凍結乾燥粉末注射剤は請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム又は請求項２−８のいずれかに記載の方法を通して得られた式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を注射用水に溶解させ、０．２２μｍのミリポアフィルター又は分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外濾過膜によって濾過された後、ボトルに分注し、凍結乾燥後式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの凍結乾燥粉末注射剤を得られる。
【請求項１０】
請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは医薬品への利用、前記薬物は、抗ＰＡＦ又はＡＤＰ誘導された血小板凝集作用があり、心筋虚血や脳虚血又は血栓症によるダメージ疾患に関する予防および治療に用いる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規化合物に関して、具体的に、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム化合物やこの化合物製造方法及び医薬用途を提供する。天然薬物化学の分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
漢方薬ベニバナはキク科植物Ｃａｒｔｈａｍｕｓ°ｔｉｎｃｔｏｕｉｕｓＬ．の乾燥花で、一般的な鬱血を放散して血液の循環を活性化させる漢方薬として、冠状動脈性心臓病、狭心症などの諸血液循環障害疾患の治療に用いる。水酸基ベニバナ黄色素Ａ（ｈｙｄｒｏｘｙｓａｆｆｌｏｒ  ｙｅｌｌｏｗ  Ａ）はシングルカルコン配糖体構造を有する化合物であり、ベニバナ薬理効能の最効果的な水溶性部位として、血小板活性化因子に誘発される血小板凝集と解放を抑制することでき、血小板活性化因子と血小板受容体との結合を競合に抑制することができ、それに、ベニバナ黄色素の鬱血を放散して血液の循環を活性化させる効果的な成分である。研究によって、多面の心血管薬理作用を有し、抗凝固、線溶促進、抗血栓形成、微小循環を改善することなどができる。
【０００３】
既存の技術は水酸基ベニバナ黄色素Ａ及びそれらの抽出、分離、精製法や水酸基ベニバナ黄色素A注射液（凍結乾燥粉末注射剤を含める）が公開されている。しかし、既存の水酸基ベニバナ黄色素Ａ製品の純度や安定性は依然として多少問題がある。既存のベニバナ黄色素の純度から見て、基本には不純物が１０％以上あり、また、そのような不純物の構造・性質のいずれにも定性できなかった。ある程度の質量制御不能性がある。ベニバナ薬材から抽出したベニバナ黄色素不純物スペクトルが一致することが十分に保証できない。      
【０００４】
ＣＮ１０２６７５３７９Ａはベニバナから精製水酸基ベニバナ黄色素Ａの抽出方法を開示する。具体的に漢方薬ベニバナから抽出、弱塩基性イオン交換樹脂の精製、中級性マクロ孔質樹脂の精製と非極性マクロ孔質樹脂の精製、凍結乾燥の５ステップを通して含有量が８０％以上の水酸基ベニバナ黄色素Ａを得られ、移行率は２０％以上であることを開示する。
【０００５】
ＣＮ１０１１９５６４７Ａ、ＣＮ１０１２１５３０７Ａ、ＣＮ１４７５２７２Ａはベニバナから抽出する精製水酸基ベニバナ黄色素Ａの方法を開示し、含有量が９０％の水酸基ベニバナ黄色素Ａを得られた。
【０００６】
しかし、水酸基ベニバナ黄色素Ａの安定性が悪くて、水酸基ベニバナ黄色素Ａ剤は長期的に放置された後純度が低くなるうえに、医薬効能を影響する。特に水酸基ベニバナ黄色素Ａ注射製剤の投与安全性が懸念されている。
【０００７】
薬物研究のメインコンテンツは、薬物の安全性、有効性、安定性及び制御性を含め、四つは全部不可欠である。生産されて臨床に使用されたベニバナ黄色素注射剤は薬力学試験、臨床評価などを経過して、水酸基ベニバナ黄色素A化合物自体の安全性と有効性が証明できる。しかし、水酸基ベニバナ黄色素Aの抽出プロセス及び化合物安定性の要因により、上市されている既存の水酸基ベニバナ黄色素A原料の純度からみて、基本的１０％以上の不純物を含める。また、そのような不純物の構造・性質のいずれにも定性できなかった。ある程度に質量の制御不能性がある。ベニバナ薬材から抽出したベニバナ黄色素不純物スペクトルが一致することが十分に保証できない。このため、既存の水酸基ベニバナ黄色素A薬剤、特に注射液薬剤の効果的な成分の安定性と純度は依然として薬品安全性、品質制御性の改善を制約・影響する主要な面である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】中国特許出願公開第１０１１９５６４７号
【特許文献２】中国特許出願公開第１０１２１５３０７号
【特許文献３】中国特許出願公開第１４７５２７２号
【発明の概要】
【０００９】
〔発明内容〕
既存の技術の欠点を克服するために、本発明は、新規なの水酸基ベニバナ黄色素A化合物を提供する。具体的言えば水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムという新規化合物を提供する。この新規化合物は、天然薬材ベニバナを原料にし、優れた抽出プロセス、分離、精製のステップを通して新規化合物を得られる。試験や研究はこの水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは水酸基ベニバナ黄色色素Ａより、安全効果的な、より安定し制御可能なモノマー化合物であることを表明でき、将来は冠状動脈性心臓病、狭心症などの諸血液循環障害疾患の治療に応用する。
【００１０】
本発明の請求項別々以下のようである：
本発明は式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを提供する：
【００１１】
【化１】
2015525232.tif 000003
【００１２】
分子式:Ｃ２７Ｈ３１Ｏ１６Ｎａ
本発明の他の目的として、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの製造方法を提供し、その特徴は、下記の式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａによって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを製造するステップにある。
【００１３】
【化２】
2015525232.tif 000004
【００１４】
好ましく、前記の製造方法、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａは次の方法によって式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られる：式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａはナトリウムイオン交換樹脂柱によって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られ、又は式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａはナトリウム塩との反応によって式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られ、ここ前記のナトリウム塩は水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムの１種または２種以上から選択する。
【００１５】
好ましく、前記の製造方法、ナトリウムイオン交換樹脂は００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂である。これらの両樹脂が市販品があり、例えば、上海華震科技有限会社から購入できる。
【００１６】
一つの実施形態にとして、前記の調製方法は、ベニバナ薬材を原料にし、次のような抽出、ナトリウム塩に転化、分離と精製のステップを経過し、（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られることを特徴とする。
（１）抽出：ベニバナ薬材は水で抽出する。
（２）ナトリウム塩に転化：ステップ（１）により得られたベニバナ抽出液はナトリウムイオン交換樹脂カラムを通して、ベニバナ黄色素は式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを生成する。
（３）分離：ステップ（２）が収集した式（１）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含める溶離液はマクロ孔質樹脂脂柱を通して分離され、式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品を得られる。
（４）精製：ステップ（３）により得られた式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品はデキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離され、さらに、限外ろ過膜による限外濾過し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【００１７】
好ましく、前記の調製方法では、前記のステップ（１）においてベニバナの１０〜３０倍重量の水を利用し５０〜１００℃の条件で２〜３回抽出し、毎回０．５〜２４時間で、冷却した抽出液を収集して得られる。
【００１８】
好ましく、前記の調製方法において、前記ステップ（２）は、ステップ（１）により得られた抽出液をナトリウムイオン交換樹脂カラムに通し、前記のナトリウムイオン交換樹脂は００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂で、式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含む溶離液を収集する。
【００１９】
好ましく、前記の調製方法において、前記ステップ（３）は、ステップ（２）により得られ式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの溶離液をマクロ孔質樹脂ＨＺ８０１カラムを用いて分離し、水を溶離剤にして、溶離液を収集する、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品を得られる。
【００２０】
好ましく、前記の調製方法において、前記ステップ（４）が、ステップ（３）により得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品をＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０デキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離し、純水を溶離剤にして、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含む溶離液を収集し、減圧濃縮した後濃縮液を得られ、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過し限外ろ過液を得られ、凍結乾燥後、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【００２１】
もう一つの具体的実施の形態として、特徴は前記の調製方法において、ベニバナ薬材を原料にし、次のような抽出、分離、精製、酸性化、ナトリウム塩に転化のステップを経過し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを得られる：
（１）抽出：ベニバナ薬材は水で抽出し、ベニバナ抽出液を得られる。
（２）分離：ステップ（１）により得られたベニバナ抽出液をマクロ孔質樹脂カラムに通して分離され、ベニバナ黄色素粗製品を得られる。
（３）精製：ステップ（２）により得られたベニバナ黄色素粗製品をデキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離され、さらに、限外ろ過膜による限外濾過し、凍結乾燥した後ベニバナ黄色色素精製製品を得られる。
（４）酸性化：ステップ（３）により得られたベニバナ黄色素精製製品に水や酸（好ましくは塩酸）を入れて、ｐＨ値を１．５−２．５に調整し、析出した淡黄色固体を収集し、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａを得られる。
（５）ナトリウム塩に転化：ステップ（３）により得られた式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａに給水後、０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム又は炭酸水素ナトリウム（好ましくは、水酸化ナトリウム）溶媒液を利用してＰＨを４−７に調整し、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａは式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを生成し、反応生成物は限外ろ過膜による限外濾過し、ろ液を凍結乾燥後、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【００２２】
好ましく、前記の調製方法において、前記のマクロ孔質樹脂は、ＨＺ８０１型マクロ孔質樹脂である。好ましく、前記の調製方法において、デキストランゲルカラムクロマトグラフィーはＳｅｐｈａｄｅｘ°ＬＨ−２０デキストランゲルカラムクロマトグラフィーで分離され、純水を溶離剤にする。前記の限外ろ過は、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過を行う。
【００２３】
ベニバナ薬材水抽出液は、主にベニバナ黄色素化学成分を含む。本発明は意外に、ベニバナ薬材水抽出液は、ナトリウムイオン交換樹脂カラム（例えば、００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂）を通して、ベニバナ水抽出液中のベニバナ黄色素の全てを本発明前記の式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム新規化合物に変換することを発見した。発明者はナトリウムイオン交換樹脂の分離過程中、ベニバナ黄色素遊離の式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａアニオンは交換されたナトリウムイオンと結合しさらに再生成され、式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られると推定する。これも以下の実験的検証を得られる。前記の式（ＩＩ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａのサンプルや００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂を利用して、本発明の実施例１の方法でナトリウムイオン交換樹脂の分離を行い、得られた溶離液を収集し、式（Ｉ）に示した水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含有することと測定された。
【００２４】
同様に、本発明はベニバナ黄色素精製製品を酸化させた後、水酸基ベニバナ黄色素Aを得られ、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム又は炭酸水素ナトリウム等のナトリウム塩で処理することによって、高収率、高純度の式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの新規化合物を得られると発見した。
【００２５】
本発明の他の発明目的として、１種の製剤を提供する、上記の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを医薬活性成分及び薬学的に許容され得る担体として含有される。好ましく、前記の製剤は凍結乾燥粉末注射剤で、上記の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム或いは、前記の方法によって得られる式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を、注射用水に溶解させ、０．２２μｍのミリポアフィルター又は分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜によるろ過後、ボトルに分注し、凍結乾燥後、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの凍結乾燥粉末注射剤を得られる。
【００２６】
単位製剤の中に５０ｍｇ−２００ｍｇの水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含有することが可能である。例えば、以下のように調製できる。（１）射出用の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末注射剤、毎ボトルに５０ｍｇ−２００ｍｇを含有；（２）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム塩化ナトリウム注射液、各１００ｍｌの塩化ナトリウム注射液は５０ｍｇ−２００ｍｇの水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含む；（３）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムブドウ糖輸液。各１００ｍｌのブドウ糖輸液は５０ｍｇ−２００ｍｇの水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含有する。
【００２７】
本発明の一つの具体的実施形態として、本発明の式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム及びその凍結乾燥粉末注射剤は、ベニバナ薬材の抽出、ナトリウムイオン交換樹脂の変換、マクロ孔樹脂の分離、デキストランゲルクロマトグラフィーの分離、限外ろ過のステップを通して調製する。具体的には：
（１）ベニバナ薬材を原料にし、温度が５０〜１００℃の適量の水を添加し抽出する。抽出は、水抽出で２〜３回、毎回０．５〜２４時間、抽出の用水量はベニバナ生薬重量の１０〜３０倍にする。抽出後滓を除去し、抽出液を５〜３０℃まで冷却し、２〜２４時間に放置する。
（２）抽出液をナトリウムイオン交換樹脂に通し、流速１〜３０ｍｌ／ｍｉｎ、最後に、１カラム容量の水でカラム中の抽出液を排出する。
（３）マクロ孔質樹脂分離：ステップ（２）により得られたベニバナ抽出液をマクロ孔質樹脂ＨＺ８０１カラムによって分離され、マクロ孔質樹脂カラムの柱内径と柱高の比は１：８〜１５、精製水を溶離剤にし、溶離流速１０〜３０ｍｌ／ｍｉｎ、溶離液を収集し、減圧濃縮後水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの濃縮液粗製品を得られる。
（４）デキストランゲルクロマトグラフィーの分離：ステップ（３）により得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの濃縮液粗製品を濾過または遠心分離後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ°ＬＨ−２０デキストランゲルクロマトグラフィーによって分離し、
クロマトグラフィーカラムの直径と高さの比率は１：５〜２０で、精製水を溶離剤にし、溶離流速は線形流速を制御し１〜１０ｃｍ／ｈに保持し、、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム溶離液を収集し、減圧濃縮後濃縮液を得られる。
（５）限外濾過：ステップ（４）により得られた濃縮液を濾過又は遠心された後、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外濾過膜を用いて限外濾過して限外ろ過液を得られる。
（６）凍結乾燥：ステップ（５）により得られた限外ろ過液を凍結乾燥させ、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られる。
（７）ステップ（６）により得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を注射用水に溶解させる。は０．２２μｍのミリポアフィルターまたは分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜を用いてろ過後、ボトル中に分注して、凍結乾燥後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末注射剤を得られる。
【００２８】
ここ、前記のナトリウムイオン交換樹脂が、００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂を用いる。前記のマクロ孔樹脂分離は、マクロ孔質樹脂ＨＺ８０１を用いる。前記のデキストランゲルクロマトグラフ分離は、デキストランゲルＬＨ−２０を利用する。前記の限外ろ過は、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外濾過膜を用いる。
【００２９】
本発明は前記の式（Ｉ）に示す水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの医薬品への応用を提供する。前記薬物は、抗ＰＡＦ又はＡＤＰに誘導された血小板凝集の作用があり、心筋虚血や脳虚血または血栓症によるダメージ疾患に関する予防及び治療に応用する。その臨床的応用量は５０−２００ｍｇ／一日である。
【００３０】
本発明は、天然薬材ベニバナを原料にし、優れた抽出形態によって新型モノマー薬物化合物である式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを提供し、純度が９８．５％以上に確保でき、不純物個数は５個以下に制御できる。より主なは、水酸基ベニバナ黄色素Ａより、本発明の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムはもっと安定し、投与安全性や制御性に有利となる。冠状動脈性心臓病、狭心症等の諸血液循環障害疾患の治療に水酸基ベニバナ黄色素Ａより安全効果的、安定し制御可能な単量体化合物になる。
薬力学的研究試験一：
試験の目的：水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムと射出用ベニバナ黄色素（５０ｍｇ／ボトル）の静脈内注射は狗の急性心筋梗塞の保護作用を観察すること。
被験薬物
射出用ベニバナ黄色素（５０ｍｇ／ボトル）由来：浙江永寧薬業株式会社、含有量：５０ｍｇ／ボトルの水酸基ベニバナ黄色素Ａ４２．５ｍｇ。
【００３１】
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末（実施例1により得られた）
動物
健康な１８匹の雑種犬、雌雄は半々で、無作為に３組に分けた。
群                          動物の数    用量              投与方法
生理食塩水群                  ６匹  生理食塩水１ｍｌ／ｋｇ        静脈注射
射出用ベニバナ黄色素          ６匹  ベニバナ黄色素１０ｍｇ／ｋｇ    静脈注射
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム群６匹水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
１０ｍｇ／ｋｇ              静脈注射
上記薬物は静脈内注射投与で、臨床上使用予定の経路（静脈注射）と一致し、投与回数が一回である。
【００３２】
実験方法
動物を秤量した後３％のペントバルビタールナトリウム３０ｍｇ／ｋｇを静脈内注射によって動物を麻酔する。気管にチューブを挿入し、麻酔呼吸机と接合し、開胸後機械的通気を行い、呼吸数は１６−１８回／分で、吸気と呼気との比が１：２で、一回換気量は３５０〜５５０ｍｌ、血液ガスの分析結果によって通気指標を調整する。針状電極を四肢及び胸の皮下に挿入して、標準肢誘導とＶ１、Ｖ３、Ｖ５の心電図を監視する。左胸骨の３番目の肋間に沿って開胸し、４番目の肋骨を切断し完全に心臓を露出させる。心膜を切り、心膜のハンモックを作る。静脈内リドカイン２ｍｇ／ｋｇを注射し、不整脈を防ぐ。左前下冠動脈の開始部位を分離し、前下動脈の下に２段の１号糸を巻き付けて、緩い結び目をする。直径１ｍｍのワイヤーを１番目の緩い結び目の中に挿入した後結ぶ。ワイヤーと冠動脈と一緒に結び、ワイヤーを引き出す。３０分後に２番目の結び目を接合する（同時に静脈に被験薬物を注射）。２番目の結び目を接合した後の５分、１０分、３０分及び１、２、３、４時間の心電図の変化を観察する。４時間後、心臓を取り心臓重量を量って、大動脈起始部左右の冠動脈の開口部に沿って加圧し１０％のカーボンインク１０ｍｌを入れて、心筋の非虚血領域（黒く染められる心筋）と虚血領域（黒く染めていない領域]を表示し、虚血領域を切って重量を量る。そして、虚血領域を０．５〜１ｃｍ厚さの心筋スライスに切断され、生理食塩水で洗浄し、３７℃の０．０２５％塩化ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）液に置いて染色される。染める過程中心筋と完全に接触させるために、随時に染色液を振る。３０分後直ちに余剰染料を水で流す。心筋梗塞が着色されていない、非梗塞心筋は黒色に染色される、着色部分を切って、無着色梗塞領域を秤量する。
観察指標
投与後主な観察指標は胸部誘導心電図ＳＴ上昇程度及び心筋梗塞の範囲などの定量的指標である、具体的には次のようである。
１、ＳＴ段の上昇程度：ΔＳＴ、結紮前のＳＴが０点。
【００３３】
投与後５分、１５分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間を観察時間とする。
２、心筋梗塞程度
虚血心筋重量（ｇ）：即ち結紮された冠動脈血液供給領域の心筋重量。
梗塞心筋重量（ｇ）：即ち心筋染色の無着色部分。
心筋梗塞率（％）：（梗塞領域／虚血領域）＊１００％
試験照合
陰性対照群      生理食塩水    １ｍｇ／ｋｇ
統計解析
試験結果はＸ±Ｓで表示され、対応のないｔ−検定法によって統計され、Ｐ＜０．０５の場合は顕著な統計学的違いがある。
【００３４】
試験結果
１、薬物により麻醉犬心筋梗塞後ST部上昇程度に対する影響
生理食塩水と比較して、静脈に射出用ベニバナ黄色素と水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを注射する。投与後の５分から4時間まで麻酔開胸犬の冠動脈結紮によるＳＴ段上昇度程度を顕著に低減できる。結果を表１で示す。
【００３５】
【表１】
2015525232.tif 000005
【００３６】
２、射出用ベニバナ黄色素と水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは格別に麻酔開胸犬の急性心筋梗塞の心肌梗塞範囲を縮小することができる。その中で、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム注射群の効果が最もよい。結果を表２で示す。
【００３７】
【表２】
2015525232.tif 000006
【００３８】
試験結論
水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムと射出用ベニバナ黄色素より、虚血心筋壊死の防止に良い効果を有する。
薬力学的研究の試験二：
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは抗血小板凝集の機能があり、急性脳虚血に予防・治療の作用を有する。
【００３９】
被験薬物
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末（実施例１により得られた）
１、犬の生体外心臓や脳血管に対しての選択性：この実験はＢｅａｇｌｅ犬の脳底動脈リングと冠動脈リングを体外血管測定装置に固定し、張力センサを調整してバースカップ液に、１０−６ｍｏｌ／Ｌのフェニルエピネフリンを入れて、血管を適度な張り維持させた。そして５ｍｉｎ毎にバースカップ液に１ｍｌ当たり１０ｍｇの分量の射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを加え、血管リングの反応が弱く又は反応しなくなるまで（一般投与頻度が４−５回）停止する。血管収縮や拡張変化値を計算した。実験結果は、注射用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは心臓の血管リングに対しての拡張作用は３０．９％、脳血管リングに対しての拡張機能が７２．８％であることにより、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは脳血管はに非常に優れた選択性及び拡張機能を有すると説明できる。
２、急性脳虚血に対する影響：実験はＳＤラットを用いて、静脈に水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを注射した後、従来の中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）縫合方法により急性脳虚血モデルを作製する。２４ｈ飼育した後に、その神経学的行動を評価する。その後、ラットを断頭して脳を取り出し、モールドに入れ７になるように切断し、ＴＴＣ染色を行う。生存脳組織が赤色に染色され、壊死脳組織は染色されなかった。その後、グラフィカル解析ソフトウェアで壊死脳組織が脳半球で占めている割合を計算する。その結果、脳梗塞領域の溶媒対照群は３８％、ニモジピン陽性対照群が１５．４％、射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの低中高の３つの用量群それぞれは３８．０％、２７．２％及び２１．５％、溶媒対照群と比較して中高用量が著しく急性脳虚血による脳組織壊死を軽減する作用を有する。
３、ラット脳血管透過性への影響：ラットの静脈内に投与し、１日に１回、７日連続して、最終投与後ラットを麻酔し、エバンスブルー５０ｍｇ／ｋｇを静脈内注射し、５分後両側の頸動脈を結紮して、３時間後動物を断頭し脳を取り出して、秤量してホルムアミドの溶液中に浸漬した。４５℃の恒温槽の中に７２ｈ置いた。この時の脳血管でのエバンスブルーはホルムアミド溶液中に浸出でき、分光光度計でホルムアミド溶液中のエバンスブルー析出量を検出し、量の多少は脳血管透過性の高低を表示する。実験結果：射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの高用量群は、エバンスブルーが脳血管からオーバーフローすることを大幅に減少する作用がある。当該薬液は血管透過性の減少に良い効果があることを説明できる。
４犬の脳血流量に対する影響：Ｂｅａｇｌｅ犬を実験動物にして、ペントバルビタールナトリウムで麻酔した。その後、外頸静脈、内頸静脈と椎骨動脈を手術で分離され、外頸静脈を結紮し、頸静脈及び椎骨動脈にフロープローブを配置し、２箇所のプローブが記録した血流量を足し合わせて２を掛けた後は全脳の血液供給を代表する。実験終了後脳を取り出して重量を量って、１００ｇあたり脳組織血流量を計算した。試験結果、射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを静脈に投与後、中高用量の二つの群は血流量を著しく増加させる作用を有するが、血流量増加の維持時間が短く（約１５ｍｉｎ）、当該実験は今後、急性脳虚血の臨床治療に静脈内注入の方法で投与すべきことを提示する。
５急性脳低酸素症への影響：昆明マウスとＳＤラットを実験動物として、酸素欠損環境に置かれて、生存時間を記録した。動物に投与後、急性低酸素耐性を向上させるかどうかを了解する。実験結果：マウスは密閉された容器で、溶媒対照群の生存時間は３２ｍｉｎ、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを注射される低中高の３つの用量群のマウス生存期間はそれぞれ３７、３７、３７ｍｉｎ、統計学的処理を介して、溶媒対照群に較べて有意差がある（Ｐ＜０．０５〜０．０１）。ラットの実験は９７％の窒素ガスと３％酸素の環境で行い、動物を容器に置かれたから呼吸停止まで、各群の生存時間は、溶媒対照群の平均は３分４３秒である。陽性対照群（ニモジピン）は５分４５秒、両者間の比較相違が極めて大きいである。射出用の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの低中高の３つの用量群がそれぞれ３分３０秒、４分３５秒と４分１２秒で、溶媒対照群と比較し、中高用量群生存時間が大幅に異なる。
６抗血小板凝集：実験は計器で測定と生体実験の二つの部分を含める：
１）計器の測定方法：ウサギの静脈内に水酸基ベニバナ黄色色素Ａナトリウムを注射し、毎日に一回で５日連続して、最終の投与後の２時間内で心臓から血液を４ｍｌ取って、低速遠心によって血小板リッチな血清を得られる。高速遠心され乏血小板血清を得られる。血小板凝集誘導剤はアデノシン二リン酸（ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ；ＡＤＰ）及び血小板凝集活性化因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ＡｃｔｉｖａｔｉｎｇＦａｃｔｏｒＰＡＦ）の２種を選択して、血小板凝集計器で測定する。水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム射出液の抗ＡＤＰとＰＡＦ誘導された血小板凝集実験において、非常に良好な抗血小板凝集作用があることが示され、３つの用量の間に良好な量-効関係の存在を表示される。
２）生体方法：ラテックスチューブを用いてラットの動静脈間を短絡させ、ラテックスチューブの中に手術用糸が固定され、血小板粘着の特徴を利用し、短絡を開いて血液をラテックスチューブに沿って動静脈を通して１５分間を流させ、糸を取り出して重量を量って、糸の乾燥重量を差し引いたら残りは糸に付着する血小板重量である。実験結果、糸に付着した血小板重量溶媒対照群が１４．８±１．５７ｍｇ、陽性対照群が８．６２±２．７９ｍｇ、射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの低中高の三つの用量群の付着血小板重量それぞれは１３．８±１．９５ｍｇ、９．８７±１．５０ｍｇ、９．０２±１．２９ｍｇ、中高用量群と溶媒対照群と比較し有意な差があり、射出用水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムは非常に良い抗ラット血小板凝集の作用があると説明できる。
７、血液粘度への影響：ウサギの静脈に投与し、１日に１回、５日連続し、最終投与し２時間心臓から血液を取り抗凝固後、直接に血液レオメーター計器を利用して検出した。結果は、溶媒対照群と比べ、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム治療群は用薬量の増加とともに、血液粘性の低せん断、中せん断、高せん断の３つの指標も低くなり、低下幅も用量の増加とともに大きくなる。高用量群の効果が陽性対照薬ニモジピン注射液群より優れた。射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは血液粘性の低下に著しい作用を有すると説明できる。
二、安定性試験
試験の目的：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムと水酸基ベニバナ黄色素Aの安定性及び理化学的データを観察すること
被験薬物
水酸基ベニバナ黄色素Ａ    ＣＮ１０２６７５３７９Ａの方法で作る    純度８９．９％
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム    自製（実施例1）  純度９８．６％
結果を表３に示す。
【００４０】
【表３】
2015525232.tif 000007
【００４１】
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム  自製（実施例２により）純度９９．２％。結果を表４に示す。
【００４２】
【表４】
2015525232.tif 000008
【００４３】
水酸基ベニバナ黄色色素Aナトリウムの理化学的データ、表５に示す。
【００４４】
【表５】
2015525232.tif 000009
【００４５】
試験の結果から、本発明の新規な式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムと水酸基ベニバナ黄色素Ａの安定性の比較試験によって、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの方が安定性のよいうえに、質量がもっと安全・確実と説明できる。水酸基ベニバナ黄色素Ａの酸性が強い、人体耐ｐＨを超えて、注射する時痛いなどの不快感を引き起こすうえに、溶解性が悪い。本発明の新規な式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムが高い耐性や溶解性を有する。
【００４６】
実施例１から得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム化合物は赤外スペクトル（ＩＲ）、質量分析（ＭＳ）、核磁気共鳴水素スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ）、炭素スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ）、ＣＯＳＹスペクトル、ＤＥＰＴ１３５スペクトル及びＨＳＱＣスペクトルを通して構造を確認され、以下のようである：
【００４７】
【化３】
2015525232.tif 000010
【００４８】
１．赤外吸収スペクトル
装置型番：Ｂｒｕｋｅｒ  ＶＥＣＴＯＲ−２２型赤外吸収分光器
ＩＲ（臭化カリウム錠剤）
ＩＲスペクトルの主な特徴ピークを表６に示す。
【００４９】
【表６】
2015525232.tif 000011
【００５０】
２、質量スペクトル
装置型番：アメリカＦＩＮＮＩＧＡＮ会社液質併用多段イオンイオントラップ質量分析器（（ＬＣＱ−ＤＥＣＡＸＰ）
試験条件：ＥＳＩ
質量スペクトルＭＳ
＋ｃ  ＥＳＩ  ６３５．１４（Ｍ）＋
−ｃ  ＥＳＩ  ６１１．２５（Ｍ−Ｎａ）− 
３、核磁気共鳴水素スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ）と炭素スペクトル
装置型番：ＢＲＵＣＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＩＩＩ  ５００型超伝導核磁気共鳴装置
試験条件：溶媒：ＤＭＳＯ、内部標準：ＴＭＳ
式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの核磁気共鳴１Ｈ−ＮＭＲ（図１）、１３Ｃ−ＮＭＲ（図２）、ＣＯＳＹスペクトル（図３）、ＤＥＰＴ１３５スペクトル（図４）及びＨＳＱＣスペクトル（図５）、説明書の添付図面のようである。
【００５１】
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの１Ｈ−ＮＭＲデータ以下のように帰属した：
化学シフトδ（ｐｐｍ）２．８４〜４．１４（１４Ｈ）は糖部分水素Ｇ１〜Ｇ６  とＧ’１〜Ｇ’６に帰属する。４．３９〜４．７７（８Ｈ）は糖水酸基の水素に帰属する。７．２６（１Ｈ）７．３９（１Ｈ）は８と９に帰属する。６．７５〜７．４２（４Ｈ）は１１〜１５に帰属する。１８．６５（１Ｈ）は３−ＯＨに帰属する。４．７０（１Ｈ）は４−ＯＨに帰属する；９．７２（１Ｈ）は１３−ＯＨに帰属する。
【００５２】
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの１３Ｃ−ＮＭＲデータは以下のように帰属した：ＤＥＰＴ１３５が示した化学シフトδ（ｐｐｍ）６１．０５（１Ｃ）。６１．４６（１Ｃ）（二級炭素）は糖部分炭素Ｇ６、Ｇ’６に帰属する；６８．６０、６９．６２、６９．８３、７０．８６、７３.８０、７８．２５、７９．１５、８０．１９、８０．６２、８５．５７（１０Ｃ）は（三級炭素）糖部分炭素Ｇ１〜Ｇ５とＧ’１〜Ｇ’５に帰属する。１１５．５２（２Ｃ）（三級炭素）は１２と１４に帰属される。１２９．２６（２Ｃ）（三級炭素）は１１と１５に帰属する。１２３．２２（１Ｃ）１３５．６３（１Ｃ）（三級炭素）は８と９に帰属する。化学シフトδ（ｐｐｍ）１８９．３７、１０５．９６、１９５．２９、８５．２４、１８２.６９、９９．２４（６Ｃ）は１〜６に帰属する。１７９．０６（１Ｃ）、１２７．２７（１Ｃ）、１５８．３４（１Ｃ）は別々７、１０、１３に帰属する。
【００５３】
〔添付図面の説明〕
図１：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素Ａナトリウムの水素スペクトル
図２：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素Ａナトリウムのの炭素スペクトル
図３：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素ＡナトリウムのＣＯＳＹスペクトル
図４：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素ＡナトリウムのＤＥＰＴ１３５スペクトル
図５：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素ＡナトリウムのＨＳＱＣスペクトル
〔具体的実施態様〕
実施例１：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出して、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件で抽出して、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりと処理ができたバランスがよい００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂に加えて、カラムの径高比は１：１０、カラム容量５００ｍｌ、流速は３ｍｌ／ｍｉｎ、最後に、１カラム容量の水でカラムの抽出液を排出し、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含有する流出液を収集し、徐々にマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムに入れる。カラムの径高比が１：１２で、毎分１０ｍｌの試料流速である。試料が終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分20mlの流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％である。精製水を溶離剤にして、は毎分５ｍｌの溶離流速で、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの部分を収集した。収集液は６０℃で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品濃縮液を得られた。ベニバナで計算すると、毎キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られた。凍結乾燥した後淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品粉末を得られ、純度は９８．６％で、紅花で計算すると、収率は０．４５％前後である。
【００５４】
上記により得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を注射用水に溶解させ、０．２２μｍのミリポアフィルタで濾過され後ボトル中分注して、凍結乾燥した後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末注射剤を得られた。
【００５５】
実施例２：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出して、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件で抽出して、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりとマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムの中に入れて、カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料が終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮された後、ベニバナ黄色素濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。ベニバナ黄色素粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％である。精製水を溶離液にして、毎分５ｍｌの溶離流速で、ベニバナ黄色素部分を収集した。収集液を６０℃で減圧濃縮された後、ベニバナ黄色素濃縮液を得られた。ベニバナで計算すると、毎キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られた。凍結乾燥した後純度は９０％である淡黄色のベニバナ黄色素粉末を得られた。ベニバナ黄色素粉末に水を入れて溶解させ、ＨＣｌを利用して酸化させ、冷所に２〜２４時間放置した後、固体を析出した。固体をろ過した後、水をいれてから０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム液を利用しｐＨを６．０前後に調整し、凍結乾燥した後、淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を得られ、純度は９９．２％で、ベニバナで計算すると、収率は、０．７０％前後である。
【００５６】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの構造を式（Ｉ）に示す。
【００５７】
上記で得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を注射用水に溶解させ、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜を利用してろ過後ボトル中に分注した。凍結乾燥した後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの凍結乾燥粉末注射剤得られる。
【００５８】
実施例３：水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出して、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件によって抽出して、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりと処理ができたバランスがよいマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂に加えて、カラムの径高比は１：１０、カラム容量５００ｍｌ、流速は３ｍｌ／ｍｉｎ、
流出液を収集し、徐々にマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムに入れる。カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％を占める。毎分５ｍｌの溶離流速で、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの部分を収集する。収集液を６０℃で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、各キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られる。凍結乾燥した後淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品粉末を得られ、純度は９８．７％で、ベニバナで計算すると、収率は０．５０％前後である。
【００５９】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの構造は式（Ｉ）に示す。
【００６０】
実施例４：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出し、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件によって抽出し、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりとマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムの中に入れる。カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮され、ベニバナ黄色素A濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。ベニバナ黄色素粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量は柱床体積の１０％である。精製水を溶離液にして、溶離流速は毎分５ｍｌで、ベニバナ黄色素部分を収集する。収集液を６０℃で減圧濃縮された後、ベニバナ黄色素濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、各キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られる。凍結乾燥した後淡黄色のベニバナ黄色素粉末を得られ、純度は約９０％である。ベニバナ黄色素粉末に水を入れて溶解させ、ＨＣｌを利用して酸化させ、冷所に２〜２４時間放置した後、固体を析出する。固体をろ過した後、水を入れてから０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの炭酸ナトリウム液を利用しｐＨを６．０前後に調整し、凍結乾燥した後、淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を得られ、純度は９９．１％で、ベニバナで計算すると、収率は０．７５％前後である。
【００６１】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの構造を式（Ｉ）に示す。
【００６２】
実施例５：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出し、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件によって抽出し、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりとマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムの中に入れる。カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮され、ベニバナ黄色素粗製品濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。ベニバナ黄色素粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％である。精製水を溶離液にして、溶離流速は毎分５ｍｌで、ベニバナ黄色素部分を収集する。収集液を６０℃で減圧濃縮された後、ベニバナ黄色素濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、各キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られる。凍結乾燥した後は約９０％の純度である淡黄色のベニバナ黄色素粉末を得られる。ベニバナ黄色素粉末に水を入れて溶解後ＨＣｌを利用して酸化させ、冷所に２〜２４時間放置した後、固体を析出する。固体をろ過した後、水を入れてから０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの炭酸水素ナトリウム溶液を利用しｐＨを６．０前後に調整し、凍結乾燥した後、淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム精製製品を得られ、純度は９９．３％で、ベニバナで計算すると、収率は０．６９％前後である。
【００６３】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの構造は式（Ｉ）に示す。
【００６４】
実施例６：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出し、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件によって抽出し、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりとマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムの中に入れる。カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮され、ベニバナ黄色素粗製品濃縮液を得られる。
【００６５】
ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。ベニバナ黄色素粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％である。精製水を溶離剤にして、毎分５ｍｌの溶離流速で、ベニバナ黄色素部分を収集する。収集液をバランスが取れた強酸性Ｈ型陽イオン交換樹脂に添加して、流出液を収集する。収集液を６０℃の条件で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａ濃縮液を得られ、冷所に２〜２４時間を放置し固体を析出させる。固体をろ過した後、水を入れて０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム液を利用しｐＨを６．０前後に調整する。凍結乾燥した後に、淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を得られ、純度は９９．８％で、ベニバナで計算すると収率は０．６８％前後である。
【００６６】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの構造は式（Ｉ）に示す。
【図１】
2015525232.tif 000015
【図２】
2015525232.tif 000016
【図３】
2015525232.tif 000017
【図４】
2015525232.tif 000018
【図５】
2015525232.tif 000019
【手続補正書】
【提出日】平成26年4月17日(2014.4.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ)で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム：
【化１】
2015525232.tif 000020
【請求項２】
前記請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの調製方法、下記式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａに基づき式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られるステップを特徴とする。
【化２】
2015525232.tif 000021
【請求項３】
前記請求項２が述べた方法、特徴は式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａは次の方法によって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られる：式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａはナトリウムイオン交換樹脂柱によって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られ、又は式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａはナトリウム塩との反応によって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られ、ここ前記のナトリウム塩は水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムの中の１種または２種以上から選択する。
【請求項４】
前記請求項３が述べた方法によって、前記のナトリウムイオン交換樹脂は００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂である。
【請求項５】
前記請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの調製方法、ベニバナ薬材を原料にし、次のような抽出、ナトリウム塩に転化、分離と精製のステップを経過し、（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを得られることを特徴とする。
（１）抽出：ベニバナ薬材を水で抽出して、ベニバナ抽出液を得られる。
（２）ナトリウム塩に転化：ステップ（１）により得られたベニバナ抽出液はナトリウムイオン交換樹脂カラムを通して、ベニバナ黄色素は式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムに転化し、式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含める溶離液を得られる。
（３）分離：ステップ（２）が収集した式（１）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含める溶離液がマクロ孔質樹脂カラムを通して分離され、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの粗製品を得られる。
（４）精製：ステップ（３）により得られた式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品はデキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離され、さらに、限外ろ過膜による限外濾過し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【請求項６】
前記請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの調製方法、ベニバナ薬材を原料にし、次のような抽出、分離、精製、酸性化、ナトリウム塩に転化のステップを経過し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを得られることを特徴とする：
（１）抽出：ベニバナ薬材は水で抽出して、ベニバナ抽出液を得られる。
（２）分離：ステップ（１）により得られたベニバナ抽出液はマクロ孔質樹脂カラムを通して分離され、ベニバナ黄色素粗製品を得られる。
（３）精製：ステップ（２）により得られたベニバナ黄色素粗製品をデキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離される。さらに、限外ろ過膜による限外濾過し、凍結乾燥された後ベニバナ黄色色素精製製品を得られる。
（４）酸性化：ステップ（３）により得られたベニバナ黄色素精製製品に水や酸を入れて、ｐＨ値を１．５−２．５に調整し、析出した淡黄色固体を収集し、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａを得られる。
（５）ナトリウム塩に転化：ステップ（３）により得られた式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａに給水後、０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム又は炭酸水素ナトリウム（好ましくは、水酸化ナトリウム）溶媒液を利用してＰＨを６に調整し、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａは式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを生成し、反応生成物を限外ろ過膜による限外濾過し、ろ液を凍結乾燥し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【請求項７】
前記請求項５又は６の方法によって、ここ前記マクロ孔質樹脂は、ＨＺ８０１型マクロ孔質樹脂である。
【請求項８】
前記の請求項５又は６の方法によって、デキストランゲルカラムクロマトグラフィーはＳｅｐｈａｄｅｘ°ＬＨ−２０デキストランゲルカラムクロマトグラフィーで分離され、純水を溶離液にする。前記限外ろ過は、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過する。
【請求項９】
１種の製剤、薬剤活性成分及び薬学的に許容され得る担体としての前記請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを含有する。好ましく、前記の製剤は凍結乾燥粉末注射剤である。より好ましくは、前記の凍結乾燥粉末注射剤は請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム又は請求項２−８のいずれかに記載の方法を通して得られた式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を注射用水に溶解させ、０．２２μｍのミリポアフィルター又は分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外濾過膜によって濾過された後、ボトルに分注し、凍結乾燥後式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの凍結乾燥粉末注射剤を得られる。
【請求項１０】
請求項１の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは医薬品への利用、前記薬物は、抗ＰＡＦ又はＡＤＰ誘導された血小板凝集作用があり、心筋虚血や脳虚血又は血栓症によるダメージ疾患に関する予防および治療に用いる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規化合物に関して、具体的に、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム化合物やこの化合物製造方法及び医薬用途を提供する。天然薬物化学の分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
漢方薬ベニバナはキク科植物Ｃａｒｔｈａｍｕｓ°ｔｉｎｃｔｏｕｉｕｓＬ．の乾燥花で、一般的な鬱血を放散して血液の循環を活性化させる漢方薬として、冠状動脈性心臓病、狭心症などの諸血液循環障害疾患の治療に用いる。水酸基ベニバナ黄色素Ａ（ｈｙｄｒｏｘｙｓａｆｆｌｏｒ  ｙｅｌｌｏｗ  Ａ）はシングルカルコン配糖体構造を有する化合物であり、ベニバナ薬理効能の最効果的な水溶性部位として、血小板活性化因子に誘発される血小板凝集と解放を抑制することでき、血小板活性化因子と血小板受容体との結合を競合に抑制することができ、それに、ベニバナ黄色素の鬱血を放散して血液の循環を活性化させる効果的な成分である。研究によって、多面の心血管薬理作用を有し、抗凝固、線溶促進、抗血栓形成、微小循環を改善することなどができる。
【０００３】
既存の技術は水酸基ベニバナ黄色素Ａ及びそれらの抽出、分離、精製法や水酸基ベニバナ黄色素A注射液（凍結乾燥粉末注射剤を含める）が公開されている。しかし、既存の水酸基ベニバナ黄色素Ａ製品の純度や安定性は依然として多少問題がある。既存のベニバナ黄色素の純度から見て、基本には不純物が１０％以上あり、また、そのような不純物の構造・性質のいずれにも定性できなかった。ある程度の質量制御不能性がある。ベニバナ薬材から抽出したベニバナ黄色素不純物スペクトルが一致することが十分に保証できない。      
【０００４】
ＣＮ１０２６７５３７９Ａはベニバナから精製水酸基ベニバナ黄色素Ａの抽出方法を開示する。具体的に漢方薬ベニバナから抽出、弱塩基性イオン交換樹脂の精製、中級性マクロ孔質樹脂の精製と非極性マクロ孔質樹脂の精製、凍結乾燥の５ステップを通して含有量が８０％以上の水酸基ベニバナ黄色素Ａを得られ、移行率は２０％以上であることを開示する。
【０００５】
ＣＮ１０１１９５６４７Ａ、ＣＮ１０１２１５３０７Ａ、ＣＮ１４７５２７２Ａはベニバナから抽出する精製水酸基ベニバナ黄色素Ａの方法を開示し、含有量が９０％の水酸基ベニバナ黄色素Ａを得られた。
【０００６】
しかし、水酸基ベニバナ黄色素Ａの安定性が悪くて、水酸基ベニバナ黄色素Ａ剤は長期的に放置された後純度が低くなるうえに、医薬効能を影響する。特に水酸基ベニバナ黄色素Ａ注射製剤の投与安全性が懸念されている。
【０００７】
薬物研究のメインコンテンツは、薬物の安全性、有効性、安定性及び制御性を含め、四つは全部不可欠である。生産されて臨床に使用されたベニバナ黄色素注射剤は薬力学試験、臨床評価などを経過して、水酸基ベニバナ黄色素A化合物自体の安全性と有効性が証明できる。しかし、水酸基ベニバナ黄色素Aの抽出プロセス及び化合物安定性の要因により、上市されている既存の水酸基ベニバナ黄色素A原料の純度からみて、基本的１０％以上の不純物を含める。また、そのような不純物の構造・性質のいずれにも定性できなかった。ある程度に質量の制御不能性がある。ベニバナ薬材から抽出したベニバナ黄色素不純物スペクトルが一致することが十分に保証できない。このため、既存の水酸基ベニバナ黄色素A薬剤、特に注射液薬剤の効果的な成分の安定性と純度は依然として薬品安全性、品質制御性の改善を制約・影響する主要な面である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】中国特許出願公開第１０１１９５６４７号
【特許文献２】中国特許出願公開第１０１２１５３０７号
【特許文献３】中国特許出願公開第１４７５２７２号
【発明の概要】
【０００９】
〔発明内容〕
既存の技術の欠点を克服するために、本発明は、新規なの水酸基ベニバナ黄色素A化合物を提供する。具体的言えば水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムという新規化合物を提供する。この新規化合物は、天然薬材ベニバナを原料にし、優れた抽出プロセス、分離、精製のステップを通して新規化合物を得られる。試験や研究はこの水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは水酸基ベニバナ黄色色素Ａより、安全効果的な、より安定し制御可能なモノマー化合物であることを表明でき、将来は冠状動脈性心臓病、狭心症などの諸血液循環障害疾患の治療に応用する。
【００１０】
本発明の請求項別々以下のようである：
本発明は式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを提供する：
【００１１】
【化１】
2015525232.tif 000022
【００１２】
分子式:Ｃ２７Ｈ３１Ｏ１６Ｎａ
本発明の他の目的として、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの製造方法を提供し、その特徴は、下記の式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａによって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを製造するステップにある。
【００１３】
【化２】
2015525232.tif 000023
【００１４】
好ましく、前記の製造方法、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａは次の方法によって式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られる：式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａはナトリウムイオン交換樹脂柱によって式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られ、又は式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａはナトリウム塩との反応によって式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られ、ここ前記のナトリウム塩は水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムの１種または２種以上から選択する。
【００１５】
好ましく、前記の製造方法、ナトリウムイオン交換樹脂は００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂である。これらの両樹脂が市販品があり、例えば、上海華震科技有限会社から購入できる。
【００１６】
一つの実施形態にとして、前記の調製方法は、ベニバナ薬材を原料にし、次のような抽出、ナトリウム塩に転化、分離と精製のステップを経過し、（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られることを特徴とする。
（１）抽出：ベニバナ薬材は水で抽出する。
（２）ナトリウム塩に転化：ステップ（１）により得られたベニバナ抽出液はナトリウムイオン交換樹脂カラムを通して、ベニバナ黄色素は式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを生成する。
（３）分離：ステップ（２）が収集した式（１）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含める溶離液はマクロ孔質樹脂脂柱を通して分離され、式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品を得られる。
（４）精製：ステップ（３）により得られた式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品はデキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離され、さらに、限外ろ過膜による限外濾過し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【００１７】
好ましく、前記の調製方法では、前記のステップ（１）においてベニバナの１０〜３０倍重量の水を利用し５０〜１００℃の条件で２〜３回抽出し、毎回０．５〜２４時間で、冷却した抽出液を収集して得られる。
【００１８】
好ましく、前記の調製方法において、前記ステップ（２）は、ステップ（１）により得られた抽出液をナトリウムイオン交換樹脂カラムに通し、前記のナトリウムイオン交換樹脂は００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂で、式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含む溶離液を収集する。
【００１９】
好ましく、前記の調製方法において、前記ステップ（３）は、ステップ（２）により得られ式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの溶離液をマクロ孔質樹脂ＨＺ８０１カラムを用いて分離し、水を溶離剤にして、溶離液を収集する、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品を得られる。
【００２０】
好ましく、前記の調製方法において、前記ステップ（４）が、ステップ（３）により得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの粗製品をＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０デキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離し、純水を溶離剤にして、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含む溶離液を収集し、減圧濃縮した後濃縮液を得られ、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過し限外ろ過液を得られ、凍結乾燥後、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【００２１】
もう一つの具体的実施の形態として、特徴は前記の調製方法において、ベニバナ薬材を原料にし、次のような抽出、分離、精製、酸性化、ナトリウム塩に転化のステップを経過し、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを得られる：
（１）抽出：ベニバナ薬材は水で抽出し、ベニバナ抽出液を得られる。
（２）分離：ステップ（１）により得られたベニバナ抽出液をマクロ孔質樹脂カラムに通して分離され、ベニバナ黄色素粗製品を得られる。
（３）精製：ステップ（２）により得られたベニバナ黄色素粗製品をデキストランゲルカラムクロマトグラフィーによって分離され、さらに、限外ろ過膜による限外濾過し、凍結乾燥した後ベニバナ黄色色素精製製品を得られる。
（４）酸性化：ステップ（３）により得られたベニバナ黄色素精製製品に水や酸（好ましくは塩酸）を入れて、ｐＨ値を１．５−２．５に調整し、析出した淡黄色固体を収集し、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａを得られる。
（５）ナトリウム塩に転化：ステップ（３）により得られた式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａに給水後、０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム又は炭酸水素ナトリウム（好ましくは、水酸化ナトリウム）溶媒液を利用してＰＨを６に調整し、式（ＩＩ）水酸基ベニバナ黄色素Ａは式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを生成し、反応生成物は限外ろ過膜による限外濾過し、ろ液を凍結乾燥後、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を得られる。
【００２２】
好ましく、前記の調製方法において、前記のマクロ孔質樹脂は、ＨＺ８０１型マクロ孔質樹脂である。好ましく、前記の調製方法において、デキストランゲルカラムクロマトグラフィーはＳｅｐｈａｄｅｘ°ＬＨ−２０デキストランゲルカラムクロマトグラフィーで分離され、純水を溶離剤にする。前記の限外ろ過は、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過を行う。
【００２３】
ベニバナ薬材水抽出液は、主にベニバナ黄色素化学成分を含む。本発明は意外に、ベニバナ薬材水抽出液は、ナトリウムイオン交換樹脂カラム（例えば、００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂）を通して、ベニバナ水抽出液中のベニバナ黄色素の全てを本発明前記の式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム新規化合物に変換することを発見した。発明者はナトリウムイオン交換樹脂の分離過程中、ベニバナ黄色素遊離の式（ＩＩ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａアニオンは交換されたナトリウムイオンと結合しさらに再生成され、式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られると推定する。これも以下の実験的検証を得られる。前記の式（ＩＩ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａのサンプルや００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂を利用して、本発明の実施例１の方法でナトリウムイオン交換樹脂の分離を行い、得られた溶離液を収集し、式（Ｉ）に示した水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含有することと測定された。
【００２４】
同様に、本発明はベニバナ黄色素精製製品を酸化させた後、水酸基ベニバナ黄色素Aを得られ、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム又は炭酸水素ナトリウム等のナトリウム塩で処理することによって、高収率、高純度の式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの新規化合物を得られると発見した。
【００２５】
本発明の他の発明目的として、１種の製剤を提供する、上記の式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを医薬活性成分及び薬学的に許容され得る担体として含有される。好ましく、前記の製剤は凍結乾燥粉末注射剤で、上記の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム或いは、前記の方法によって得られる式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの精製製品を、注射用水に溶解させ、０．２２μｍのミリポアフィルター又は分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜によるろ過後、ボトルに分注し、凍結乾燥後、式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの凍結乾燥粉末注射剤を得られる。
【００２６】
単位製剤の中に５０ｍｇ−２００ｍｇの水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含有することが可能である。例えば、以下のように調製できる。（１）射出用の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末注射剤、毎ボトルに５０ｍｇ−２００ｍｇを含有；（２）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム塩化ナトリウム注射液、各１００ｍｌの塩化ナトリウム注射液は５０ｍｇ−２００ｍｇの水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含む；（３）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムブドウ糖輸液。各１００ｍｌのブドウ糖輸液は５０ｍｇ−２００ｍｇの水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含有する。
【００２７】
本発明の一つの具体的実施形態として、本発明の式（Ｉ）で表される水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム及びその凍結乾燥粉末注射剤は、ベニバナ薬材の抽出、ナトリウムイオン交換樹脂の変換、マクロ孔樹脂の分離、デキストランゲルクロマトグラフィーの分離、限外ろ過のステップを通して調製する。具体的には：
（１）ベニバナ薬材を原料にし、温度が５０〜１００℃の適量の水を添加し抽出する。抽出は、水抽出で２〜３回、毎回０．５〜２４時間、抽出の用水量はベニバナ生薬重量の１０〜３０倍にする。抽出後滓を除去し、抽出液を５〜３０℃まで冷却し、２〜２４時間に放置する。
（２）抽出液をナトリウムイオン交換樹脂に通し、流速１〜３０ｍｌ／ｍｉｎ、最後に、１カラム容量の水でカラム中の抽出液を排出する。
（３）マクロ孔質樹脂分離：ステップ（２）により得られたベニバナ抽出液をマクロ孔質樹脂ＨＺ８０１カラムによって分離され、マクロ孔質樹脂カラムの柱内径と柱高の比は１：８〜１５、精製水を溶離剤にし、溶離流速１０〜３０ｍｌ／ｍｉｎ、溶離液を収集し、減圧濃縮後水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの濃縮液粗製品を得られる。
（４）デキストランゲルクロマトグラフィーの分離：ステップ（３）により得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの濃縮液粗製品を濾過または遠心分離後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ°ＬＨ−２０デキストランゲルクロマトグラフィーによって分離し、
クロマトグラフィーカラムの直径と高さの比率は１：５〜２０で、精製水を溶離剤にし、溶離流速は線形流速を制御し１〜１０ｃｍ／ｈに保持し、、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム溶離液を収集し、減圧濃縮後濃縮液を得られる。
（５）限外濾過：ステップ（４）により得られた濃縮液を濾過又は遠心された後、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外濾過膜を用いて限外濾過して限外ろ過液を得られる。
（６）凍結乾燥：ステップ（５）により得られた限外ろ過液を凍結乾燥させ、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを得られる。
（７）ステップ（６）により得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を注射用水に溶解させる。は０．２２μｍのミリポアフィルターまたは分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜を用いてろ過後、ボトル中に分注して、凍結乾燥後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末注射剤を得られる。
【００２８】
ここ、前記のナトリウムイオン交換樹脂が、００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂やマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂を用いる。前記のマクロ孔樹脂分離は、マクロ孔質樹脂ＨＺ８０１を用いる。前記のデキストランゲルクロマトグラフ分離は、デキストランゲルＬＨ−２０を利用する。前記の限外ろ過は、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外濾過膜を用いる。
【００２９】
本発明は前記の式（Ｉ）に示す水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの医薬品への応用を提供する。前記薬物は、抗ＰＡＦ又はＡＤＰに誘導された血小板凝集の作用があり、心筋虚血や脳虚血または血栓症によるダメージ疾患に関する予防及び治療に応用する。その臨床的応用量は５０−２００ｍｇ／一日である。
【００３０】
本発明は、天然薬材ベニバナを原料にし、優れた抽出形態によって新型モノマー薬物化合物である式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを提供し、純度が９８．５％以上に確保でき、不純物個数は５個以下に制御できる。より主なは、水酸基ベニバナ黄色素Ａより、本発明の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムはもっと安定し、投与安全性や制御性に有利となる。冠状動脈性心臓病、狭心症等の諸血液循環障害疾患の治療に水酸基ベニバナ黄色素Ａより安全効果的、安定し制御可能な単量体化合物になる。
薬力学的研究試験一：
試験の目的：水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムと射出用ベニバナ黄色素（５０ｍｇ／ボトル）の静脈内注射は狗の急性心筋梗塞の保護作用を観察すること。
被験薬物
射出用ベニバナ黄色素（５０ｍｇ／ボトル）由来：浙江永寧薬業株式会社、含有量：５０ｍｇ／ボトルの水酸基ベニバナ黄色素Ａ４２．５ｍｇ。
【００３１】
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末（実施例1により得られた）
動物
健康な１８匹の雑種犬、雌雄は半々で、無作為に３組に分けた。
群                          動物の数    用量              投与方法
生理食塩水群                  ６匹  生理食塩水１ｍｌ／ｋｇ        静脈注射
射出用ベニバナ黄色素          ６匹  ベニバナ黄色素１０ｍｇ／ｋｇ    静脈注射
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム群６匹水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
１０ｍｇ／ｋｇ              静脈注射
上記薬物は静脈内注射投与で、臨床上使用予定の経路（静脈注射）と一致し、投与回数が一回である。
【００３２】
実験方法
動物を秤量した後３％のペントバルビタールナトリウム３０ｍｇ／ｋｇを静脈内注射によって動物を麻酔する。気管にチューブを挿入し、麻酔呼吸机と接合し、開胸後機械的通気を行い、呼吸数は１６−１８回／分で、吸気と呼気との比が１：２で、一回換気量は３５０〜５５０ｍｌ、血液ガスの分析結果によって通気指標を調整する。針状電極を四肢及び胸の皮下に挿入して、標準肢誘導とＶ１、Ｖ３、Ｖ５の心電図を監視する。左胸骨の３番目の肋間に沿って開胸し、４番目の肋骨を切断し完全に心臓を露出させる。心膜を切り、心膜のハンモックを作る。静脈内リドカイン２ｍｇ／ｋｇを注射し、不整脈を防ぐ。左前下冠動脈の開始部位を分離し、前下動脈の下に２段の１号糸を巻き付けて、緩い結び目をする。直径１ｍｍのワイヤーを１番目の緩い結び目の中に挿入した後結ぶ。ワイヤーと冠動脈と一緒に結び、ワイヤーを引き出す。３０分後に２番目の結び目を接合する（同時に静脈に被験薬物を注射）。２番目の結び目を接合した後の５分、１０分、３０分及び１、２、３、４時間の心電図の変化を観察する。４時間後、心臓を取り心臓重量を量って、大動脈起始部左右の冠動脈の開口部に沿って加圧し１０％のカーボンインク１０ｍｌを入れて、心筋の非虚血領域（黒く染められる心筋）と虚血領域（黒く染めていない領域]を表示し、虚血領域を切って重量を量る。そして、虚血領域を０．５〜１ｃｍ厚さの心筋スライスに切断され、生理食塩水で洗浄し、３７℃の０．０２５％塩化ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）液に置いて染色される。染める過程中心筋と完全に接触させるために、随時に染色液を振る。３０分後直ちに余剰染料を水で流す。心筋梗塞が着色されていない、非梗塞心筋は黒色に染色される、着色部分を切って、無着色梗塞領域を秤量する。
観察指標
投与後主な観察指標は胸部誘導心電図ＳＴ上昇程度及び心筋梗塞の範囲などの定量的指標である、具体的には次のようである。
１、ＳＴ段の上昇程度：ΔＳＴ、結紮前のＳＴが０点。
【００３３】
投与後５分、１５分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間を観察時間とする。
２、心筋梗塞程度
虚血心筋重量（ｇ）：即ち結紮された冠動脈血液供給領域の心筋重量。
梗塞心筋重量（ｇ）：即ち心筋染色の無着色部分。
心筋梗塞率（％）：（梗塞領域／虚血領域）＊１００％
試験照合
陰性対照群      生理食塩水    １ｍｇ／ｋｇ
統計解析
試験結果はＸ±Ｓで表示され、対応のないｔ−検定法によって統計され、Ｐ＜０．０５の場合は顕著な統計学的違いがある。
【００３４】
試験結果
１、薬物により麻醉犬心筋梗塞後ST部上昇程度に対する影響
生理食塩水と比較して、静脈に射出用ベニバナ黄色素と水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを注射する。投与後の５分から4時間まで麻酔開胸犬の冠動脈結紮によるＳＴ段上昇度程度を顕著に低減できる。結果を表１で示す。
【００３５】
【表１】
2015525232.tif 000024
【００３６】
２、射出用ベニバナ黄色素と水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは格別に麻酔開胸犬の急性心筋梗塞の心肌梗塞範囲を縮小することができる。その中で、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム注射群の効果が最もよい。結果を表２で示す。
【００３７】
【表２】
2015525232.tif 000025
【００３８】
試験結論
水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムと射出用ベニバナ黄色素より、虚血心筋壊死の防止に良い効果を有する。
薬力学的研究の試験二：
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは抗血小板凝集の機能があり、急性脳虚血に予防・治療の作用を有する。
【００３９】
被験薬物
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末（実施例１により得られた）
１、犬の生体外心臓や脳血管に対しての選択性：この実験はＢｅａｇｌｅ犬の脳底動脈リングと冠動脈リングを体外血管測定装置に固定し、張力センサを調整してバースカップ液に、１０−６ｍｏｌ／Ｌのフェニルエピネフリンを入れて、血管を適度な張り維持させた。そして５ｍｉｎ毎にバースカップ液に１ｍｌ当たり１０ｍｇの分量の射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを加え、血管リングの反応が弱く又は反応しなくなるまで（一般投与頻度が４−５回）停止する。血管収縮や拡張変化値を計算した。実験結果は、注射用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは心臓の血管リングに対しての拡張作用は３０．９％、脳血管リングに対しての拡張機能が７２．８％であることにより、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは脳血管はに非常に優れた選択性及び拡張機能を有すると説明できる。
２、急性脳虚血に対する影響：実験はＳＤラットを用いて、静脈に水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを注射した後、従来の中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）縫合方法により急性脳虚血モデルを作製する。２４ｈ飼育した後に、その神経学的行動を評価する。その後、ラットを断頭して脳を取り出し、モールドに入れ７になるように切断し、ＴＴＣ染色を行う。生存脳組織が赤色に染色され、壊死脳組織は染色されなかった。その後、グラフィカル解析ソフトウェアで壊死脳組織が脳半球で占めている割合を計算する。その結果、脳梗塞領域の溶媒対照群は３８％、ニモジピン陽性対照群が１５．４％、射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの低中高の３つの用量群それぞれは３８．０％、２７．２％及び２１．５％、溶媒対照群と比較して中高用量が著しく急性脳虚血による脳組織壊死を軽減する作用を有する。
３、ラット脳血管透過性への影響：ラットの静脈内に投与し、１日に１回、７日連続して、最終投与後ラットを麻酔し、エバンスブルー５０ｍｇ／ｋｇを静脈内注射し、５分後両側の頸動脈を結紮して、３時間後動物を断頭し脳を取り出して、秤量してホルムアミドの溶液中に浸漬した。４５℃の恒温槽の中に７２ｈ置いた。この時の脳血管でのエバンスブルーはホルムアミド溶液中に浸出でき、分光光度計でホルムアミド溶液中のエバンスブルー析出量を検出し、量の多少は脳血管透過性の高低を表示する。実験結果：射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの高用量群は、エバンスブルーが脳血管からオーバーフローすることを大幅に減少する作用がある。当該薬液は血管透過性の減少に良い効果があることを説明できる。
４犬の脳血流量に対する影響：Ｂｅａｇｌｅ犬を実験動物にして、ペントバルビタールナトリウムで麻酔した。その後、外頸静脈、内頸静脈と椎骨動脈を手術で分離され、外頸静脈を結紮し、頸静脈及び椎骨動脈にフロープローブを配置し、２箇所のプローブが記録した血流量を足し合わせて２を掛けた後は全脳の血液供給を代表する。実験終了後脳を取り出して重量を量って、１００ｇあたり脳組織血流量を計算した。試験結果、射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを静脈に投与後、中高用量の二つの群は血流量を著しく増加させる作用を有するが、血流量増加の維持時間が短く（約１５ｍｉｎ）、当該実験は今後、急性脳虚血の臨床治療に静脈内注入の方法で投与すべきことを提示する。
５急性脳低酸素症への影響：昆明マウスとＳＤラットを実験動物として、酸素欠損環境に置かれて、生存時間を記録した。動物に投与後、急性低酸素耐性を向上させるかどうかを了解する。実験結果：マウスは密閉された容器で、溶媒対照群の生存時間は３２ｍｉｎ、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを注射される低中高の３つの用量群のマウス生存期間はそれぞれ３７、３７、３７ｍｉｎ、統計学的処理を介して、溶媒対照群に較べて有意差がある（Ｐ＜０．０５〜０．０１）。ラットの実験は９７％の窒素ガスと３％酸素の環境で行い、動物を容器に置かれたから呼吸停止まで、各群の生存時間は、溶媒対照群の平均は３分４３秒である。陽性対照群（ニモジピン）は５分４５秒、両者間の比較相違が極めて大きいである。射出用の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの低中高の３つの用量群がそれぞれ３分３０秒、４分３５秒と４分１２秒で、溶媒対照群と比較し、中高用量群生存時間が大幅に異なる。
６抗血小板凝集：実験は計器で測定と生体実験の二つの部分を含める：
１）計器の測定方法：ウサギの静脈内に水酸基ベニバナ黄色色素Ａナトリウムを注射し、毎日に一回で５日連続して、最終の投与後の２時間内で心臓から血液を４ｍｌ取って、低速遠心によって血小板リッチな血清を得られる。高速遠心され乏血小板血清を得られる。血小板凝集誘導剤はアデノシン二リン酸（ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ；ＡＤＰ）及び血小板凝集活性化因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ＡｃｔｉｖａｔｉｎｇＦａｃｔｏｒＰＡＦ）の２種を選択して、血小板凝集計器で測定する。水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム射出液の抗ＡＤＰとＰＡＦ誘導された血小板凝集実験において、非常に良好な抗血小板凝集作用があることが示され、３つの用量の間に良好な量-効関係の存在を表示される。
２）生体方法：ラテックスチューブを用いてラットの動静脈間を短絡させ、ラテックスチューブの中に手術用糸が固定され、血小板粘着の特徴を利用し、短絡を開いて血液をラテックスチューブに沿って動静脈を通して１５分間を流させ、糸を取り出して重量を量って、糸の乾燥重量を差し引いたら残りは糸に付着する血小板重量である。実験結果、糸に付着した血小板重量溶媒対照群が１４．８±１．５７ｍｇ、陽性対照群が８．６２±２．７９ｍｇ、射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの低中高の三つの用量群の付着血小板重量それぞれは１３．８±１．９５ｍｇ、９．８７±１．５０ｍｇ、９．０２±１．２９ｍｇ、中高用量群と溶媒対照群と比較し有意な差があり、射出用水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムは非常に良い抗ラット血小板凝集の作用があると説明できる。
７、血液粘度への影響：ウサギの静脈に投与し、１日に１回、５日連続し、最終投与し２時間心臓から血液を取り抗凝固後、直接に血液レオメーター計器を利用して検出した。結果は、溶媒対照群と比べ、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム治療群は用薬量の増加とともに、血液粘性の低せん断、中せん断、高せん断の３つの指標も低くなり、低下幅も用量の増加とともに大きくなる。高用量群の効果が陽性対照薬ニモジピン注射液群より優れた。射出用水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムは血液粘性の低下に著しい作用を有すると説明できる。
二、安定性試験
試験の目的：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムと水酸基ベニバナ黄色素Aの安定性及び理化学的データを観察すること
被験薬物
水酸基ベニバナ黄色素Ａ    ＣＮ１０２６７５３７９Ａの方法で作る    純度８９．９％
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム    自製（実施例1）  純度９８．６％
結果を表３に示す。
【００４０】
【表３】
2015525232.tif 000026
【００４１】
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム  自製（実施例２により）純度９９．２％。結果を表４に示す。
【００４２】
【表４】
2015525232.tif 000027
【００４３】
水酸基ベニバナ黄色色素Aナトリウムの理化学的データ、表５に示す。
【００４４】
【表５】
2015525232.tif 000028
【００４５】
試験の結果から、本発明の新規な式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムと水酸基ベニバナ黄色素Ａの安定性の比較試験によって、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの方が安定性のよいうえに、質量がもっと安全・確実と説明できる。水酸基ベニバナ黄色素Ａの酸性が強い、人体耐ｐＨを超えて、注射する時痛いなどの不快感を引き起こすうえに、溶解性が悪い。本発明の新規な式（Ｉ）の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムが高い耐性や溶解性を有する。
【００４６】
実施例１から得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム化合物は赤外スペクトル（ＩＲ）、質量分析（ＭＳ）、核磁気共鳴水素スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ）、炭素スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ）、ＣＯＳＹスペクトル、ＤＥＰＴ１３５スペクトル及びＨＳＱＣスペクトルを通して構造を確認され、以下のようである：
【００４７】
【化３】
2015525232.tif 000029
【００４８】
１．赤外吸収スペクトル
装置型番：Ｂｒｕｋｅｒ  ＶＥＣＴＯＲ−２２型赤外吸収分光器
ＩＲ（臭化カリウム錠剤）
ＩＲスペクトルの主な特徴ピークを表６に示す。
【００４９】
【表６】
2015525232.tif 000030
【００５０】
２、質量スペクトル
装置型番：アメリカＦＩＮＮＩＧＡＮ会社液質併用多段イオンイオントラップ質量分析器（（ＬＣＱ−ＤＥＣＡＸＰ）
試験条件：ＥＳＩ
質量スペクトルＭＳ
＋ｃ  ＥＳＩ  ６３５．１４（Ｍ）＋
−ｃ  ＥＳＩ  ６１１．２５（Ｍ−Ｎａ）− 
３、核磁気共鳴水素スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ）と炭素スペクトル
装置型番：ＢＲＵＣＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＩＩＩ  ５００型超伝導核磁気共鳴装置
試験条件：溶媒：ＤＭＳＯ、内部標準：ＴＭＳ
式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの核磁気共鳴１Ｈ−ＮＭＲ（図１）、１３Ｃ−ＮＭＲ（図２）、ＣＯＳＹスペクトル（図３）、ＤＥＰＴ１３５スペクトル（図４）及びＨＳＱＣスペクトル（図５）、説明書の添付図面のようである。
【００５１】
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの１Ｈ−ＮＭＲデータ以下のように帰属した：
化学シフトδ（ｐｐｍ）２．８４〜４．１４（１４Ｈ）は糖部分水素Ｇ１〜Ｇ６  とＧ’１〜Ｇ’６に帰属する。４．３９〜４．７７（８Ｈ）は糖水酸基の水素に帰属する。７．２６（１Ｈ）７．３９（１Ｈ）は８と９に帰属する。６．７５〜７．４２（４Ｈ）は１１〜１５に帰属する。１８．６５（１Ｈ）は３−ＯＨに帰属する。４．７０（１Ｈ）は４−ＯＨに帰属する；９．７２（１Ｈ）は１３−ＯＨに帰属する。
【００５２】
水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの１３Ｃ−ＮＭＲデータは以下のように帰属した：ＤＥＰＴ１３５が示した化学シフトδ（ｐｐｍ）６１．０５（１Ｃ）。６１．４６（１Ｃ）（二級炭素）は糖部分炭素Ｇ６、Ｇ’６に帰属する；６８．６０、６９．６２、６９．８３、７０．８６、７３.８０、７８．２５、７９．１５、８０．１９、８０．６２、８５．５７（１０Ｃ）は（三級炭素）糖部分炭素Ｇ１〜Ｇ５とＧ’１〜Ｇ’５に帰属する。１１５．５２（２Ｃ）（三級炭素）は１２と１４に帰属される。１２９．２６（２Ｃ）（三級炭素）は１１と１５に帰属する。１２３．２２（１Ｃ）１３５．６３（１Ｃ）（三級炭素）は８と９に帰属する。化学シフトδ（ｐｐｍ）１８９．３７、１０５．９６、１９５．２９、８５．２４、１８２.６９、９９．２４（６Ｃ）は１〜６に帰属する。１７９．０６（１Ｃ）、１２７．２７（１Ｃ）、１５８．３４（１Ｃ）は別々７、１０、１３に帰属する。
【００５３】
〔添付図面の説明〕
図１：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素Ａナトリウムの水素スペクトル
図２：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素Ａナトリウムのの炭素スペクトル
図３：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素ＡナトリウムのＣＯＳＹスペクトル
図４：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素ＡナトリウムのＤＥＰＴ１３５スペクトル
図５：式（Ｉ）水酸基ベニバナ黄色色素ＡナトリウムのＨＳＱＣスペクトル
〔具体的実施態様〕
実施例１：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出して、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件で抽出して、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりと処理ができたバランスがよい００１＊７ナトリウムイオン交換樹脂に加えて、カラムの径高比は１：１０、カラム容量５００ｍｌ、流速は３ｍｌ／ｍｉｎ、最後に、１カラム容量の水でカラムの抽出液を排出し、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムを含有する流出液を収集し、徐々にマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムに入れる。カラムの径高比が１：１２で、毎分１０ｍｌの試料流速である。試料が終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分20mlの流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％である。精製水を溶離剤にして、は毎分５ｍｌの溶離流速で、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの部分を収集した。収集液は６０℃で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品濃縮液を得られた。ベニバナで計算すると、毎キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られた。凍結乾燥した後淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品粉末を得られ、純度は９８．６％で、紅花で計算すると、収率は０．４５％前後である。
【００５４】
上記により得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を注射用水に溶解させ、０．２２μｍのミリポアフィルタで濾過され後ボトル中分注して、凍結乾燥した後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム凍結乾燥粉末注射剤を得られた。
【００５５】
実施例２：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出して、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件で抽出して、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりとマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムの中に入れて、カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料が終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮された後、ベニバナ黄色素濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。ベニバナ黄色素粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％である。精製水を溶離液にして、毎分５ｍｌの溶離流速で、ベニバナ黄色素部分を収集した。収集液を６０℃で減圧濃縮された後、ベニバナ黄色素濃縮液を得られた。ベニバナで計算すると、毎キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られた。凍結乾燥した後純度は９０％である淡黄色のベニバナ黄色素粉末を得られた。ベニバナ黄色素粉末に水を入れて溶解させ、ＨＣｌを利用して酸化させ、冷所に２〜２４時間放置した後、固体を析出した。固体をろ過した後、水をいれてから０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム液を利用しｐＨを６．０前後に調整し、凍結乾燥した後、淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を得られ、純度は９９．２％で、ベニバナで計算すると、収率は、０．７０％前後である。
【００５６】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの構造を式（Ｉ）に示す。
【００５７】
上記で得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を注射用水に溶解させ、分画分子量８０００−１００００ダルトンの限外ろ過膜を利用してろ過後ボトル中に分注した。凍結乾燥した後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの凍結乾燥粉末注射剤得られる。
【００５８】
実施例３：水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出して、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件によって抽出して、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりと処理ができたバランスがよいマクロ孔ＨＢ−８ナトリウムイオン交換樹脂に加えて、カラムの径高比は１：１０、カラム容量５００ｍｌ、流速は３ｍｌ／ｍｉｎ、
流出液を収集し、徐々にマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムに入れる。カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％を占める。毎分５ｍｌの溶離流速で、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの部分を収集する。収集液を６０℃で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、各キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られる。凍結乾燥した後淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品粉末を得られ、純度は９８．７％で、ベニバナで計算すると、収率は０．５０％前後である。
【００５９】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの構造は式（Ｉ）に示す。
【００６０】
実施例４：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出し、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件によって抽出し、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりとマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムの中に入れる。カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮され、ベニバナ黄色素A濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。ベニバナ黄色素粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量は柱床体積の１０％である。精製水を溶離液にして、溶離流速は毎分５ｍｌで、ベニバナ黄色素部分を収集する。収集液を６０℃で減圧濃縮された後、ベニバナ黄色素濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、各キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られる。凍結乾燥した後淡黄色のベニバナ黄色素粉末を得られ、純度は約９０％である。ベニバナ黄色素粉末に水を入れて溶解させ、ＨＣｌを利用して酸化させ、冷所に２〜２４時間放置した後、固体を析出する。固体をろ過した後、水を入れてから０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの炭酸ナトリウム液を利用しｐＨを６．０前後に調整し、凍結乾燥した後、淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を得られ、純度は９９．１％で、ベニバナで計算すると、収率は０．７５％前後である。
【００６１】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの構造を式（Ｉ）に示す。
【００６２】
実施例５：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出し、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件によって抽出し、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりとマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムの中に入れる。カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮され、ベニバナ黄色素粗製品濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。ベニバナ黄色素粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％である。精製水を溶離液にして、溶離流速は毎分５ｍｌで、ベニバナ黄色素部分を収集する。収集液を６０℃で減圧濃縮された後、ベニバナ黄色素濃縮液を得られる。ベニバナで計算すると、各キログラムベニバナから３５〜５０ｍｌの濃縮液を得られる。凍結乾燥した後は約９０％の純度である淡黄色のベニバナ黄色素粉末を得られる。ベニバナ黄色素粉末に水を入れて溶解後ＨＣｌを利用して酸化させ、冷所に２〜２４時間放置した後、固体を析出する。固体をろ過した後、水を入れてから０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの炭酸水素ナトリウム溶液を利用しｐＨを６．０前後に調整し、凍結乾燥した後、淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム精製製品を得られ、純度は９９．３％で、ベニバナで計算すると、収率は０．６９％前後である。
【００６３】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの構造は式（Ｉ）に示す。
【００６４】
実施例６：水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム
秤量されたベニバナに１２．５倍薬材重量の脱イオン水を入れて、１００℃の条件で２０−２５分間抽出し、ろ過、濾滓に１０倍薬材重量の脱イオン水を再び入れて前記条件によって抽出し、ろ過。二回の抽出液を合わせて、室温まで冷却し、遠心機を使用して分離し、遠心分離液を取って予備する。上記遠心分離液をゆっくりとマクロ孔質樹脂（型番ＨＺ８０１）分離カラムの中に入れる。カラムの径高比が１：１２で、試料流速は毎分１０ｍｌである。試料終了後、常温の脱イオン水を利用し毎分２０ｍｌの流速で溶離させる。溶離液は６０℃で減圧濃縮され、ベニバナ黄色素粗製品濃縮液を得られる。
【００６５】
ベニバナで計算すると、毎キログラムのベニバナから濃縮液１００ｍｌを得られる。ベニバナ黄色素粗製品濃縮液をセファデックスＬＨ−２０カラムに加えて、カラムの径高比は１：５で、試料量はカラム床体積の１０％である。精製水を溶離剤にして、毎分５ｍｌの溶離流速で、ベニバナ黄色素部分を収集する。収集液をバランスが取れた強酸性Ｈ型陽イオン交換樹脂に添加して、流出液を収集する。収集液を６０℃の条件で減圧濃縮された後、水酸基ベニバナ黄色素Ａ濃縮液を得られ、冷所に２〜２４時間を放置し固体を析出させる。固体をろ過した後、水を入れて０．１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム液を利用しｐＨを６．０前後に調整する。凍結乾燥した後に、淡黄色の水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウム精製製品を得られ、純度は９９．８％で、ベニバナで計算すると収率は０．６８％前後である。
【００６６】
同定後、得られた水酸基ベニバナ黄色素Ａナトリウムの構造は式（Ｉ）に示す。
【国際調査報告】
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