(57)【要約】  本発明は、高濃度の抗ＩＬ６抗体を含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ６抗体と、アルギニンとを含んでなり、水溶液中にあって、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。このような抗体製剤を製造する方法、および使用する方法もまた提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ−６抗体、および
ｂ．約１５０ｍＭを超えるアルギニン
を含んでなり、水溶液中にあって、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。
【請求項２】
前記抗ＩＬ−６抗体が可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含んでなり、前記ＶＨ領域が配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、前記ＶＬ領域が配列番号１０、１１、および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる、請求項１に記載の抗体製剤。
【請求項３】
前記抗ＩＬ−６抗体が、配列番号１および配列番号２を含んでなる、請求項２に記載の抗体製剤。
【請求項４】
前記抗体が、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２℃〜８℃で１２ヶ月間にわたり安定している、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項５】
前記抗体製剤の前記粘度が、２３℃で１４ｃＰ未満である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項６】
２００ｍＭを超えるアルギニンを含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項７】
２２０ｍＭを超えるアルギニンを含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項８】
１５０ｍＭ〜４００ｍＭのアルギニンを含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項９】
界面活性剤をさらに含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項１０】
前記界面活性剤が、ポリソルベート、プルロニック、ブリジ、およびその他の非イオン性界面活性剤からなる群から選択される、請求項７に記載の抗体製剤。
【請求項１１】
前記界面活性剤が、ポリソルベート８０である、請求項８に記載の抗体製剤。
【請求項１２】
ヒスチジンをさらに含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項１３】
トレハロースを実質的に含まない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項１４】
二糖類を実質的に含まない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項１５】
還元糖、非還元糖、または糖アルコールを実質的に含まない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項１６】
オスモライトを実質的に含まない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項１７】
２７Ｇａ肉薄ＰＦＳ針の通過時に８Ｎ未満の射出力を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項１８】
３００〜４５０ｍｏｓｍ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項１９】
前記抗体が、前記抗体製剤の全ポリペプチド組成の９０％（ｗ／ｗ）を超える、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
【請求項２０】
ａ．配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗体、
ｂ．約１５０ｍＭ〜約４００ｍＭのアルギニン、
ｃ．約０．０１％〜約０．１％のポリソルベート８０、および
ｄ．約２０ｍＭ〜約３０ｍＭのヒスチジン
を含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。
【請求項２１】
ａ．配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗体、
ｂ．約１５０ｍＭ〜約４００ｍＭのアルギニン、
ｃ．約０．０１％〜約０．１％のポリソルベート８０、および
ｄ．約２０ｍＭ〜約３０ｍＭのヒスチジン
を含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。
【請求項２２】
ａ．配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約１５０ｍｇ／ｍＬの抗体、
ｂ．約２２０ｍＭのアルギニン、
ｃ．約０．０７％のポリソルベート８０、および
ｄ．約２５ｍＭのヒスチジン
を含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。
【請求項２３】
ａ．配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約１５０ｍｇ／ｍＬの抗体、
ｂ．約１５０ｍＭのアルギニン、
ｃ．約０．０７％のポリソルベート８０、および
ｄ．約２５ｍＭのヒスチジン
を含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。
【請求項２４】
ａ．配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの抗体、
ｂ．約２０ｍＭ〜約４００ｍＭのアルギニン、
ｃ．約０．０１％〜約０．１％のポリソルベート８０、
ｄ．約５ｍＭ〜約１００ｍＭのヒスチジン、および場合により
ｅ．約５０ｍＭ〜約４００ｍＭのトレハロース
を含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。
【請求項２５】
ａ．配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約５０ｍｇ／ｍＬの抗体、
ｂ．約０．０５％のポリソルベート８０、
ｃ．約２５ｍＭのヒスチジン、および
ｄ．約２２５ｍＭのトレハロース
を含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。
【請求項２６】
ａ．配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、
ｂ．約２５ｍＭのアルギニン、
ｃ．約０．０７％のポリソルベート８０、
ｄ．約２５ｍＭのヒスチジン、および
ｅ．約１８０ｍＭのトレハロース
を含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤。
【請求項２７】
請求項１〜３および２０〜２６のいずれか一項に記載の前記抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において骨関節炎に伴う疼痛を治療する方法。
【請求項２８】
請求項１〜３および２０〜２６のいずれか一項に記載の前記抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において慢性腰痛に伴う疼痛を治療する方法。
【請求項２９】
請求項１〜３および２０〜２６のいずれか一項に記載の前記抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において関節リウマチを治療する方法。
【請求項３０】
ａ．配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる抗体を約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに濃縮するステップと；
ｂ．アルギニンを（ａ）の前記抗体に添加して、約１５０ｍＭを超える濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップと
を含んでなり、（ｂ）の前記抗体製剤が、水溶液中にあり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有し、（ｂ）の前記抗体製剤が、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２℃〜８℃で１２ヶ月間にわたり安定している、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高濃度の抗ＩＬ６抗体を含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ６抗体と、アルギニンとを含んでなり、水溶液中にあって、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。このような抗体製剤を製造する方法、および使用する方法もまた提供される。
【背景技術】
【０００２】
抗体は、それらの標的認識特異性のために、様々な疾患および病状の治療で使用され、それによって全身投与に続いて非常に選択的な成果をもたらす。抗体は高い特異性を有し得る一方で、患者を治療するのに必要な用量は、特に慢性症状で典型的に高い。製造される大量の高純度モノクローナル抗体を提供するための、新しい製造および精製技術が開発されている。しかしこれらの抗体を安定化させるという難題が依然として存在し、投与に適した剤形で抗体を提供するという、さらにより大きな難題も存在する。
【０００３】
高用量の特異的抗体を用いて対象を治療するためには、用量剤形中の抗体濃度を増大させることが望ましい。濃度が高いほど、一般に、注射のための注入容積が小さくなる。しかし抗体は、より高い濃度では、凝集、沈殿、ゲル化、安定性低下、および／または粘度増大をはじめとする、特徴的な問題を提示することが多い。
【０００４】
高濃度剤形に付随する難題を克服するための、様々な方法が提案されている。例えば高濃度抗体製剤に伴う安定性問題に対処するために、抗体は頻繁に凍結乾燥され、次に投与直前に戻されることが多い。水戻しは投与過程に追加的なステップを付け加え、製剤に汚染物質を導入し得るので、概して最適ではない。さらに抗体を戻しても、凝集および高粘度の問題を抱え得る。
【０００５】
抗体製剤の投与にはまた、追加的な問題も存在する。場合によっては、抗体製剤は、投与前にその容器から取り出されて、適切な静注（ＩＶ）バッグ内で希釈される。抗体製剤を含有する調製されたＩＶバッグは、「混合無菌製剤」（ＣＳＰ）と称される。ＣＳＰは、対象への投与前に短時間保持されることが多い。ＣＳＰは、通常、患者に輸液する前に、沈殿または汚染の徴候について視覚的に検査される。ＣＳＰの安定性のための所望時間枠は、抗体製剤よりも短く、例えば室温で約４〜８時間、そして冷蔵条件下で２４〜３６時間である。
【０００６】
抗体製剤をＩＶバッグに入れることは、安定性の低下を引き起こし得る。抗体製品では、沈殿または粒子形成が起こり得て、ＩＶ溶液の外観検査、紫外可視吸光度による用量回収率、およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による高分子量化学種（ＨＭＷＳ）形成に関する安定性によって、評価され得る。効力もまた評価され得て、一般に生成物特異的試験によって評価される。
【０００７】
複数の可能な原因が、ＣＳＰの不安定性を引き起こし得る。タンパク質のコロイドおよび立体構造安定性は、イオン強度、ｐＨ、および二糖類またはアミノ酸などの賦形剤の存在などの溶液条件によって影響を受ける。界面活性剤は、界面応力によって引き起こされる凝集から保護するために、または粒子形成を阻害するために、タンパク質製剤に添加されることが多い。製剤賦形剤が、必要なレベル未満に希釈された場合に、タンパク質の安定性低下が起こり得る。さらに生理食塩水ＩＶバッグ中における高イオン強度環境への曝露が、いくつかのタンパク質の特異的分解経路を加速することもある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがってこれらの難題の多くを克服し得る、高濃度抗体製剤を提供する必要性が存在する。さらに抗体製剤が、希釈中に分解、沈殿せず、または別の様式で効力を失わない、抗体製剤をＩＶバッグに入れる方法に対する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、安定した低粘度の高濃度抗体製剤を対象とする。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ−６抗体と、（ｂ）約１５０ｍＭを超えるアルギニンとを含んでなり、水溶液中にあって、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
【００１１】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含んでなり、ＶＨ領域が配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、ＶＬ領域が配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる。一実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、配列番号１および配列番号２を含んでなる。
【００１２】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２℃〜８℃で１２ヶ月間にわたり安定している。
【００１３】
いくつかの実施形態では、抗体製剤の粘度は、２３℃で１４ｃＰ未満である。
【００１４】
様々な濃度のアルギニンが、使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２００ｍＭを超えるアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２２０ｍＭを超えるアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、１５０ｍＭ〜４００ｍＭのアルギニンを含んでなる。
【００１５】
様々なその他の成分が、抗体製剤に含まれ得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、界面活性剤をさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート、プルロニック、ブリジ、およびその他の非イオン性界面活性剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ヒスチジンをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、二糖類を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、還元糖、非還元糖、または糖アルコールを実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、オスモライトを実質的に含まない。
【００１６】
いくつかの実施形態では、製剤は、２７ゲージ肉薄ＰＦＳ針（２５Ｇａまたは２６Ｇａ針に相当する）の通過時に、８Ｎ未満の射出力を有する。いくつかの実施形態では、製剤は、３００〜４５０ｍｏｓｍ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。
【００１７】
抗体製剤中の抗体は、様々な純度を有し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体製剤の全ポリペプチド組成の９０％を超える（ｗ／ｗ）。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約１５０ｍＭ〜約４００ｍＭのアルギニン、（ｃ）約０．０１％〜約０．１％のポリソルベート８０、（ｄ）約２０ｍＭ〜約３０ｍＭのヒスチジンを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約１５０ｍＭ〜約４００ｍＭのアルギニン、（ｃ）約０．０１％〜約０．１％のポリソルベート８０、（ｄ）約２０ｍＭ〜約３０ｍＭのヒスチジンを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
【００２０】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約１５０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約２２０ｍＭのアルギニン、（ｃ）約０．０７％のポリソルベート８０、および（ｄ）約２５ｍＭのヒスチジンを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約１５０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約１５０ｍＭのアルギニン、（ｃ）約０．０７％のポリソルベート８０、および（ｄ）約２５ｍＭのヒスチジンを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
【００２２】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約２０ｍＭ〜約４００ｍＭのアルギニン、（ｃ）約０．０１％〜約０．１％のポリソルベート８０、（ｄ）約５ｍＭ〜約１００ｍＭのヒスチジン、および場合により（ｅ）約５０ｍＭ〜約４００ｍＭのトレハロースを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約５０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．０５％のポリソルベート８０、（ｃ）約２５ｍＭのヒスチジン、および（ｄ）約２２５ｍＭのトレハロースを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる可変重鎖領域（ＶＨ）と、配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる可変軽鎖領域（ＶＬ）とを含んでなる、約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約２５ｍＭのアルギニン、（ｃ）約０．０７％のポリソルベート８０、（ｄ）約２５ｍＭのヒスチジン、および（ｅ）約１８０ｍＭのトレハロースを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において骨関節炎に伴う疼痛を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において慢性腰痛に伴う疼痛を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において関節リウマチを治療する方法を対象とする。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる抗体を約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに濃縮するステップと、（ｂ）アルギニンを（ａ）の抗体に添加して、約１５０ｍＭを超える濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなり、（ｂ）の抗体製剤が、水溶液中にあり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有し、（ｂ）の抗体製剤が、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２℃〜８℃で１２ヶ月間にわたり安定している、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体に対する、様々な賦形剤の予測された安定化能力を示すグラフである。これは、アルギニンが、この抗体にとって、最もコロイド的に安定化させる賦形剤であると、予測されないことを実証する。最も安定化させる賦形剤がスクロースおよびトレハロースであると予測された一方で、最も安定化させないのは、ＮａＣｌおよび硫酸ナトリウムであると予測された。
【図２】トレハロース、スクロース、ソルビトール、およびトレハロース／ＮａＣｌの粘度対濃度曲線である。
【図３】（ｉ）２１０ｍＭのトレハロース、（ｉｉ）１８０ｍＭのトレハロース／２５ｍＭのアルギニン、（ｉｉｉ）１７０ｍＭのトレハロース／５０ｍＭのアルギニン、（ｉｖ）１８０ｍＭのトレハロース／９０ｍＭのアルギニン、（ｖ）１５０ｍＭのアルギニン、または（ｖｉ）２２０ｍＭのアルギニンが添加された、抗体製剤の粘度対濃度曲線である。
【図４】（ｉ）２１０ｍＭのトレハロース、（ｉｉ）１８０ｍＭのトレハロース／２５ｍＭのアルギニン、（ｉｉｉ）１７０ｍＭのトレハロース／５０ｍＭのアルギニン、（ｉｖ）１８０ｍＭのトレハロース／９０ｍＭのアルギニン、（ｖ）１５０ｍＭのアルギニン、または（ｖｉ）２２０ｍＭのアルギニンが添加された、抗体製剤の粘度対濃度曲線である。
【図５】（ｉ）２１０ｍＭのトレハロース、（ｉｉ）１８０ｍＭのトレハロース／２５ｍＭのアルギニン、（ｉｉｉ）１５０ｍＭのアルギニン、または（ｉｖ）２２０ｍＭのアルギニンが添加された、抗体製剤の粘度対濃度曲線である。
【図６】（ｉ）１５０ｍＭのアルギニン、（ｉｉ）２２０ｍＭのアルギニン、または（ｉｉｉ）７５ｍＭのトレハロース／１００ｍＭのアルギニンが添加された、抗体製剤の粘度対濃度曲線である。
【図７】１５０ｍＭのアルギニンおよび２２０ｍＭのアルギニンが添加された、抗体製剤粘度の比較である。
【図８】様々な賦形剤を含有する、１００ｍｇ／ｍＬおよび１５０ｍｇ／ｍＬの抗体製剤の粘度の温度依存性が実証された。
【図９】２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物、２２０ｍＭのアルギニン塩酸塩、０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、ｐＨ６．０中の抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の熱安定プロファイルである。
【図１０】０．２ミクロンのインラインフィルターを通過させる模擬点滴および３ｃｃガラスバイアル内への収集後の、ＩＶからの抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の低用量サンプルの写真である（初期時点）。
【図１１】０．２ミクロンのインラインフィルターを通過させる模擬点滴および３ｃｃガラスバイアル内への収集後の、０．０１２％のｗ／ｖポリソルベート８０で処理されたＩＶバッグからの、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の低用量サンプルの写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本明細書に示され記載される特定の実装は例であり、本出願の範囲をどのようにも限定しないものと理解される。本明細書に記載される本発明の実施形態および特性のそれぞれは、あらゆる全ての方法で併用し得るものと理解される。
【００２９】
本明細書で参照される公開特許、特許出願、ウェブサイト、企業名、および学術文献は、それぞれが具体的かつ個別に参照によって援用されると示されるのと同程度に、その内容全体を参照によって本明細書に援用する。本明細書で参照されるあらゆる参考文献と、本明細書の特定の教示間のあらゆる矛盾は、本教示を支持して解決されるものとする。同様に、当該技術分野で理解される語または語句の定義と、本明細書で具体的に教示される語または語句の定義の間のあらゆる矛盾は、本教示を支持して解決されるものとする。
【００３０】
本明細書の用法では、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容が明確に指示しない限り、それが言及する用語の複数形もまた具体的に包含する。
【００３１】
本開示全体にわたり、百分率、比率などの全ての表現は、特に断りのない限り、「重量基準」である。本明細書の用法では、「重量基準」は、「質量基準」という用語と同義であり、本明細書で定義される比率または百分率が、容積、厚さ、またはその他の尺度でなく、重量に準拠することを示す。
【００３２】
「約」という用語は、本明細書では、およそ、範囲、大体、または前後を意味するために使用される。数値範囲に関連して「約」という用語が使用される場合、それは記載される数値の上下の境界を延長することで、範囲を修飾する。一般に「約」という用語は、規定値の上下の数値を１０％の差異で修飾するために、本明細書で使用される。
【００３３】
本明細書で使用される技術的および科学的用語は、特に断りのない限り、本出願が関係する技術分野の当業者によって通常理解される意味を有する。本明細書では、当業者に知られている様々な方法論および材料に言及する。その各開示内容全体を参照によって本明細書に援用する、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９）；Ｋａｕｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，”ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ（１９９５）；およびＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｅｄ．，“Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，”ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９９１）をはじめとする標準的基準研究が、組み換えＤＮＡ技術の一般的原理を記載している。
【００３４】
本発明は、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。本明細書に記載される「抗体製剤」という用語は、１つまたは複数の抗体分子を含んでなる組成物を指す。本発明の「抗体」という用語は、特に限定的でない。明確さのために、「抗体」はその最も広い意味で解釈され、あらゆる免疫グロブリン（Ｉｇ）、その活性変異体または所望の変異体、およびその活性断片または望ましい断片（例えばＦａｂ断片、ラクダ科動物抗体（一本鎖抗体）、およびナノボディ）を含む。「抗体」という用語はまた、二量体または多量体をも指し得る。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得て、天然にまたは組み換え的に生成され得る。したがってヒト、非ヒト、ヒト化、およびキメラ抗体は、全て「抗体」という用語に包含される。典型的に、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡクラスの１つのモノクローナル抗体であり、より典型的には、ＩｇＧまたはＩｇＡのモノクローナル抗体である。
【００３５】
本発明の抗体は、鳥および哺乳類をはじめとする、あらゆる動物起源であり得る。いくつかの実施形態では、本発明の方法の抗体は、ヒト、マウス（例えばマウスおよびラット）、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書の用法では、「ヒト」抗体としては、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体が挙げられ、ヒト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体、または１つまたは複数のヒト免疫グロブリンで組み換えられて内在性免疫グロブリンを発現しない動物から単離された抗体が含まれる。例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらに付与された、米国特許第５，９３９，５９８号明細書を参照されたい。
【００３６】
本発明の抗体としては、例えば、天然抗体、無処理モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの無処理抗体から生成される多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、抗体断片（例えば１つまたは複数の抗原と結合しおよび／またはそれを認識する抗体断片）、ヒト化抗体、ヒト抗体（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５９１，６６９号明細書および米国特許第５，５４５，８０７号明細書）、抗体ファージライブラリーから単離される抗体群および抗体断片（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３））が挙げられる。本発明の方法によって精製される抗体は、Ｎ−またはＣ末端で、異種ポリペプチドと組み換え的に融合し得て、またはポリペプチドまたはその他の組成物と化学的に結合し得る（共有結合および非共有結合を含む）。例えば本発明の方法によって精製される抗体は、検出アッセイ中で標識として有用な分子と、および異種ポリペプチド、薬剤、または毒素などのエフェクター分子と、組み換え的に融合または共役し得る。例えばＰＣＴ公開国際公開第９２／０８４９５号パンフレット；国際公開第９１／１４４３８号パンフレット；国際公開第８９／１２６２４号パンフレット；米国特許第５，３１４，９９５号明細書；および欧州特許第３９６，３８７号明細書を参照されたい。
【００３７】
いくつかの実施形態では、抗体は、当該技術分野で周知のように、１つまたは複数の抗原に対するものであり得る。適切な抗炎症性抗体の例としては、アダリムマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、およびセルトリズマブペゴルなどの抗ＴＮＦα抗体；カナキヌマブなどの抗ＩＬ１β抗体；ウステキヌマブおよびブリアキヌマブなどの抗ＩＬ１２／２３（ｐ４０）抗体；およびダクリズマブなどの抗ＩＬ２Ｒ抗体が挙げられるが、これに限定されるものではない。適切な抗がん抗体の例としては、ベリムマブなどの抗ＢＡＦＦ抗体；リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体；エピラツズマブなどの抗ＣＤ２２抗体；ダクリズマブなどの抗ＣＤ２５抗体；イラツムマブなどの抗ＣＤ３０抗体、ゲムツズマブなどの抗ＣＤ３３抗体、アレムツズマブなどの抗ＣＤ５２抗体；イピリムマブなどの抗ＣＤ１５２抗体；セツキシマブなどの抗ＥＧＦＲ抗体；トラスツズマブおよびペルツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体；シルツキシマブなどの抗ＩＬ６抗体；およびベバシズマブなどの抗ＶＥＧＦ抗体；トシリズマブなどの抗ＩＬ６受容体抗体が挙げられるが、これに限定されるものではない。特定の実施形態では、抗体製剤は、抗ＩＬ６抗体を含んでなる。
【００３８】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、抗ＩＬ６抗体を含んでなり、抗ＩＬ−６抗体は、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含んでなり、ＶＨ領域は配列番号７、８および９を含んでなる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、ＶＬ領域は配列番号１０、１１および１２を含んでなるＣＤＲを含んでなる。
配列番号７
抗ＩＬ６重鎖ＣＤＲ１
2015536934.tif 000003
配列番号８
抗ＩＬ６重鎖ＣＤＲ２
2015536934.tif 000004
配列番号９
抗ＩＬ６重鎖ＣＤＲ３
2015536934.tif 000005
配列番号１０
抗ＩＬ６軽鎖ＣＤＲ１
2015536934.tif 000006
配列番号１１
抗ＩＬ６軽鎖ＣＤＲ２
2015536934.tif 000007
配列番号１２
抗ＩＬ６軽鎖ＣＤＲ３
2015536934.tif 000008
【００３９】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、抗ＩＬ６抗体を含んでなり、抗ＩＬ６抗体は、それぞれ配列番号５および６を含んでなる、ＶＨ領域およびＶＬ領域を含んでなる。
配列番号５
抗ＩＬ６可変重鎖
2015536934.tif 000009
配列番号６
抗ＩＬ６可変軽鎖
2015536934.tif 000010
【００４０】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、配列番号３〜４によって記載される抗ＩＬ６抗体を含んでなる。
配列番号３
抗ＩＬ６抗体重鎖
2015536934.tif 000011
配列番号４
抗ＩＬ６抗体軽鎖
2015536934.tif 000012
【００４１】
いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体は、アダリムマブ（ヒュミラ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標）、Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｉｘａｎ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ／Ｃｈｕｇａｉ）、インフリキシマブ（レミケード（登録商標）、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ／Ｔａｎａｂｅ）、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ／Ｃｈｕｇａｉ）、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）、Ｃｈｕｇａｉ／Ｒｏｃｈｅ）、パリビズマブ（シナジス（登録商標）、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／Ａｂｂｏｔｔ）、アレムツズマブ（キャンパス（登録商標）、Ｇｅｎｚｙｍｅ）、およびモタビズマブ（ヌマックス（登録商標）、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）からなる群から選択される、市販の抗体である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ６抗体は、修飾抗ＩＬ６抗体である。例えばいくつかの実施形態では、抗ＩＬ６抗体は、ＦｃドメインのＣＨ２ドメインに、３つのアミノ酸置換（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）を含有する抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体であり、置換は、配列番号１〜２で表わされる抗ＩＬ６（ＹＴＥ）の血清半減期を増大させることが示されている。
配列番号１
抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体重鎖
2015536934.tif 000013
配列番号２
抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体軽鎖
2015536934.tif 000014
【００４３】
例えばＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：５１７１−５１８０（２００２）を参照されたい。抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体は、全体的な分子量がおよそ１４８ｋＤａのヒトＩｇＧ１κモノクローナル抗体であり、Ｆｃ領域内の残基Ａｓｎ−３００に、Ｎ結合オリゴ糖付着部位を１つ含有する。抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体は、ＩＬ−６受容体αリガンド相互作用と、引き続く機能的事象を阻止すると考えられる。抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の配列は、配列番号１および２に見ることができる。抗ＩＬ−６抗体の非限定的例はまた、参照によってその内容全体を本明細書に援用する、国際公開第２００８／０６５３７８号パンフレット、国際公開第２０１０／０８８４４４号パンフレット、米国特許第８，１９８，４１４号明細書、および米国特許出願公開第２０１２００３４２１２号明細書にも記載される。
【００４４】
例えばヒトＩＬ−６のヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースに見ることができる（例えば受入番号ＮＭ０００６００．２を参照されたい）。ヒトＩＬ−６のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（例えば受入番号Ｐ０５２３１を参照されたい）、２００２年１２月４日に出願されて米国特許第７，４１４，０２４号明細書として付与された米国特許出願第１０／４９６，７９３号明細書（１欄を参照されたい）；および２００９年５月２２日に出願されて米国特許第７，８３３，７５５号明細書として付与された米国特許出願第１２／４７０，７５３号明細書（１９欄を参照されたい）に見ることができる（ヒトＩＬ−６のアミノ酸配列は、具体的に参照によって本明細書に援用する）。ヒトＩＬ−６はまた、Ｈｉｒａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２４（６０９２），７３−７６（１９８６）にも記載された。これらの受入番号、特許出願、および学術誌論文のそれぞれは、明示的に参照によって本明細書に援用する。
【００４５】
一実施形態では、ＩＬ−６ポリペプチドは、ヒトＩＬ−６、その類似体、誘導体または断片である。
【００４６】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体製剤は、抗ＩＬ−６抗体を含んでなる。本発明の抗体は、関心のある抗原またはその断片と特異的に結合し、その他の抗原またはその断片とは特異的に結合しない。例えば抗Ｉ６抗体は、インターロイキン−６ポリペプチドと免疫特異的に結合し、その他のポリペプチドとは特異的に結合しない。好ましくは、ＩＬ−６と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、その他のポリペプチドまたはその他のポリペプチド断片に対する親和性と比較して、ＩＬ−６またはＩＬ−６ポリペプチド断片に対してより高い親和性を有する。抗体の親和性は、単一抗原−抗体部位における特異的抗原に対する結合の尺度であり、本質的に、抗体の抗原結合部位と特定のエピトープとの間の相互作用に存在する、全ての引力および斥力の総和である。特定の抗原（例えばＩＬ−６ポリペプチドまたはＩＬ−６ポリペプチド断片）に対する抗体の親和性は、式、Ｋ＝［Ａｇ  Ａｂ］／［Ａｇ］［Ａｂ］によって定義される平衡定数Ｋによって表されてもよく、それは抗体結合部位の親和性であり、式中、［Ａｇ］は遊離抗原の濃度であり、［Ａｂ］は遊離抗体の濃度であり、［Ａｇ  Ａｂ］は抗原−抗体複合体の濃度である。抗原および抗体が共に強力に反応する場合、遊離抗原または遊離抗体は非常にわずかとなり、したがって抗体の平衡定数または親和性は高くなる。高親和性抗体は、抗原と抗体の間に良好な適合がある場合に見られる（抗体親和性の考察については、Ｓｉｇａｌ  ａｎｄ  Ｒｏｎｅｄ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．５６−５７；およびＳｅｙｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｈ，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，ｐｐ．３１−３２を参照されたい）。好ましくは、ＩＬ−６ポリペプチドまたはその断片と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、その他の抗原と交差反応しない。すなわち、その他のポリペプチドまたはその他のポリペプチド断片に対するよりも高いエネルギーで、ＩＬ−６ポリペプチドまたはその断片と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片（例えば抗体特異性の考察については、Ｐａｕｌ  ｅｄ．，１９８９，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３３２−３３６を参照されたい）。ＩＬ−６ポリペプチドと免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）などの免疫測定法、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、およびＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、または当業者に知られているその他の技術によって同定し得る（例えばインビボで抗体−抗原相互作用を判定するための様々なアッセイの考察については、Ｓｅｙｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  ���ｏｍｐａｎｙ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，ｐｐ．３３−４１を参照されたい）。ＩＬ−６ポリペプチドまたはその断片と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、ＩＬ−６ポリペプチドのみと拮抗し、その他の活性とは顕著に拮抗しない。
【００４７】
本明細書の用法では、抗体の文脈で「アナログ」または「抗体アナログ」という用語は、第２の抗体、すなわち抗体と同様または同一の機能を持つが、必ずしも抗体と同様または同一のアミノ酸配列を含まず、または抗体と同様または同一の構造を有しない、抗体アナログを指す。同様のアミノ酸配列を有する抗体とは、以下の少なくとも１つを満たす抗体アナログを指す：（ａ）抗体のアミノ酸配列と、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有する抗体アナログ；（ｂ）少なくとも５連続アミノ酸残基、少なくとも１０連続アミノ酸残基、少なくとも１５連続アミノ酸残基、少なくとも２０連続アミノ酸残基、少なくとも２５連続アミノ酸残基、少なくとも４０連続アミノ酸残基、少なくとも５０連続アミノ酸残基、少なくとも６０連続アミノ残基、少なくとも７０連続アミノ酸残基、少なくとも８０連続アミノ酸残基、少なくとも９０連続アミノ酸残基、少なくとも１００連続アミノ酸残基、少なくとも１２５連続アミノ酸残基、または少なくとも１５０連続アミノ酸残基の抗体をコードするヌクレオチド配列と、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる抗体アナログ；および（ｃ）抗体をコードするヌクレオチド配列と、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされる抗体アナログ。抗体と同様の構造がある抗体アナログとは、抗体と同様の二次、三次または四次構造を有するタンパク性作用物質を指す。抗体アナログまたは抗体の構造は、ペプチド配列決定、Ｘ線結晶構造解析、核磁気共鳴、円二色性、および結晶学的電子顕微鏡検査をはじめとするが、これに限定されるものではない、当業者に知られている方法によって判定し得る。
【００４８】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の％同一性を判定するために、最適比較目的で配列を整列させる（例えば第２のアミノ酸または核酸配列との最適アラインメントのために、第１のアミノ酸配列または核酸配列の中にギャップを導入し得る）。次に対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド配列部位にある、アミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、分子はその位置において同一である。２つの配列間の％同一性は、配列により共有される同一位置数の関数である（すなわち％同一性＝同一重複位置数／位置総数×１００％）。一実施形態では、２つの配列は長さが同じである。
【００４９】
２つの配列間の％同一性の判定は、数学的アルゴリズムを使用しても達成し得る。２つの配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの非限定的一例は、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２２６４−２２６８に記載され、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３−５８７７に記載されるように修正されている、アルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｈ，１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。本発明の核酸分子と相同的なヌクレオチド配列を得るために、例えばｓｃｏｒｅ＝１００、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝１２のＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセットで、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を実施し得る。本発明のタンパク質分子と相同的なアミノ酸配列を得るために、例えばｓｃｏｒｅ＝−５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３のＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータセットで、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を実施し得る。比較目的で、ギャップありアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載されるＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用し得る。代案としては、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の距離関係（Ｉｄ）を検出する反復サーチを実施し得る。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴプログラムを使用する場合、それぞれのプログラムの（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータを使用し得る（例えばＮＣＢＩウェブサイトを参照されたい）。配列比較のために利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的例は、Ｍｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを使用する場合、ＰＡＭ  １２０  ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ、ｇａｐ  ｌｅｎｇｔｈ  ｐｅｎａｌｔｙ＝１２、およびｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｙ＝４を使用し得る。
【００５０】
いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体は、抗体製剤に添加される前に精製される。「単離する」および「精製する」という用語は、例えば宿主細胞タンパク質を含んでなる組成物など、抗体がその中にある組成物中の不純物またはその他の汚染物質からの抗体の分離を指す。いくつかの実施形態では、抗体から、少なくとも５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％（ｗ／ｗ）の不純物が浄化される。例えばいくつかの実施形態では、例えば抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体などの抗体の精製は、組成物中に元々存在する、９９％（ｗ／ｗ）の宿主細胞タンパク質からの抗体の分離を含んでなるであろう。
【００５１】
いくつかの実施形態では、「単離する」、および「精製する」という用語は、例えば世界保健機関または米国食品医薬品局など、政府機関のガイドラインに一致する程度に、例えば抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体などの抗体を組成物中の不純物またはその他の汚染物質から分離することを指す。
【００５２】
本発明の抗体製剤は、製薬目的で使用し得る。製薬用途で使用される抗体は、概して、特に細胞タンパク質汚染物質、細胞ＤＮＡ汚染物質、ウイルスおよびその他の伝染性作用物質をはじめとする、細胞培養物からの汚染物質に関して、高レベルの純度を有しなくてはならない。“ＷＨＯ  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎｉｍａｌ  ｃｅｌｌｓ  ａｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ：Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ  Ｎｏ．５０．”Ｎｏ．８７８．Ａｎｎｅｘ  １，１９９８．を参照されたい。汚染物質に対する懸念に応えて、世界保健機関（ＷＨＯ）は、様々な汚染物質のレベルに対する制限を設けた。例えばＷＨＯは、タンパク質製品の投与あたり１０ｎｇ未満のＤＮＡ制限を推奨する。同様に米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、０．５ｐｇ／ｍｇタンパク質以下のＤＮＡ制限を設定した。したがっていくつかの実施形態では、本発明は、例えば米国食品医薬品局および／または世界保健機関などの１つまたは複数の政府機関によって規定される、汚染物質制限を満たし、またはそれを上回る、抗体製剤を対象とする。
【００５３】
いくつかの実施形態では、抗本明細書に記載される抗体製剤は、薬学的に許容可能である。「薬学的に許容可能」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性またはその他の合併症なしに、ヒトおよび動物組織との接触に適する、妥当な利点／リスク比に見合った抗体製剤を指す。
【００５４】
抗体製剤の純度は、変動し得る。いくつかの実施形態では、例えば抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体などの関心のある治療用抗体は、抗体製剤中に存在する全ポリペプチドの９０％（ｗｔ／ｗｔ）を超える。いくつかの実施形態では、例えば抗ＩＬ６（ＹＴＥ）などの関心のある治療用抗体は、抗体製剤中に存在する全ポリペプチドの９５％（ｗｔ／ｗｔ）、９８％（ｗｔ／ｗｔ）、９９％（ｗｔ／ｗｔ）、９９．５％（ｗｔ／ｗｔ）または９９．９％（ｗｔ／ｗｔ）を超える。
【００５５】
抗体製剤中の抗体濃度は、変動し得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬを超え、約５０ｍｇ／ｍＬを超え、約７５ｍｇ／ｍＬを超え、約１００ｍｇ／ｍＬを超え、約１２５ｍｇ／ｍＬを超え、約１５０ｍｇ／ｍＬを超え、約１７５ｍｇ／ｍＬを超え、または約２００ｍｇ／ｍＬを超える。いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬ〜３００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ〜約１７５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、または約１５０ｍｇ／ｍＬである。
【００５６】
本発明の抗体製剤は、アルギニンを含んでなり得る。アルギニンは、式、
【化１】
2015536934.tif 000015
によって表わし得る、条件的非必須アミノ酸である。本明細書の用法では、アルギニンは、アルギニンの遊離塩基形態、ならびにあらゆる全てのそれらの塩を含み得る。いくつかの実施形態では、アルギニンは、その薬学的に許容可能な塩を含む。例えばアルギニンは、塩酸アルギニンを含むであろう。本明細書の用法では、アルギニンは、全ての鏡像異性体（例えばＬ−アルギニンおよびＤ−アルギニン）、および鏡像異性体の任意の組み合わせ（例えば５０％のＬ−アルギニンと５０％のＤ−アルギニン；９０％〜１００％のＬ−アルギニンと１０％〜０％のＤ−アルギニンなど）もまた含む。いくつかの実施形態では、「アルギニン」という用語は、９９％を超えるＬ−アルギニンおよび１％未満のＤ−アルギニンを含む。いくつかの実施形態では、「アルギニン」という用語は、鏡像異性的に純粋なＬ−アルギニンを含む。いくつかの実施形態では、アルギニンは製薬等級のアルギニンである。
【００５７】
アルギニンは、例えば抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体などの様々な抗体を、熱力学的に不安定化することが予測される。例えば、図１を参照されたい。当業者は、例えば抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体などの所与のタンパク質について、例えばアルギニンなどの不安定化作用物質の量の増大が、例えばタンパク質構造を変性させるなど、タンパク質構造をその天然形態から変化させる能力を増大させるであろうことを予測であろう。いかなる特定の理論よる限定も受けないが、本発明者らは、抗体製剤中のアルギニン量の増大が、事実上、ＤＳＣによって測定される融解温度を低下させるにもかかわらず、アルギニンは、実際には、保存時のＳＥ−ＨＰＬＣ分解速度による測定で、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体に対して不安定化効果でなく、安定化効果を提供することを見出した。したがっていくつかの実施形態では、抗体製剤中に高濃度のアルギニンが存在して、製剤中の抗体に対する安定化効果を提供し得る。
【００５８】
様々な濃度のアルギニンが、抗体製剤中に存在し得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２０ｍＭを超えるアルギニン、２５ｍＭを超えるアルギニン、５０ｍＭを超えるアルギニン、７５ｍＭを超えるアルギニン、１００ｍＭを超えるアルギニン、１２５ｍＭを超えるアルギニン、１５０ｍＭを超えるアルギニン、１７５ｍＭを超えるアルギニン、２００ｍＭのアルギニン、２０５ｍＭを超えるアルギニン、２１０ｍＭを超えるアルギニン、２１５ｍＭを超えるアルギニン、２２０ｍＭのを超えるアルギニン、２３０ｍＭを超えるアルギニン、２４０ｍＭを超えるアルギニン、２５０ｍＭを超えるアルギニン、２７５ｍＭを超えるアルギニン、３００ｍＭを超えるアルギニン、または３５０ｍＭを超えるアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２００ｍＭを超えるアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２２０ｍＭを超えるアルギニンを含んでなる。
【００５９】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、最大で８００ｍＭのアルギニン、最大で７００ｍＭのアルギニン、最大で６５０ｍＭのアルギニン、最大で６００ｍＭのアルギニン、最大で５５０ｍＭのアルギニン、最大で５００ｍＭのアルギニン、最大で４５０ｍＭのアルギニン、または最大で４００ｍＭのアルギニンを含んでなる。
【００６０】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２５ｍＭ〜６００ｍＭのアルギニン、５０ｍＭ〜６００ｍＭのアルギニン、７５ｍＭ〜６００ｍＭのアルギニン、１００ｍＭ〜６００ｍＭのアルギニン、１２５ｍＭ〜５００ｍＭのアルギニン、１５０ｍＭ〜４００ｍＭのアルギニン、１７５ｍＭ〜４００ｍＭのアルギニン、２００ｍＭ〜３５０ｍＭのアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、１５０ｍＭ〜４００ｍＭのアルギニンを含んでなる。
【００６１】
本明細書に記載されるように、アルギニン濃度が上昇している抗体製剤は、経時的に安定性が増大している。抗体製剤中の抗体安定性は、様々な手段によって判定し得る。いくつかの実施形態では、抗体安定性は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって判定される。ＳＥＣは、それらの流体力学的サイズ、拡散係数、および表面特性の組み合わせに基づいて、分析物（例えばタンパク質および抗体などの巨大分子）を分離する。したがって例えばＳＥＣは、様々な変性状態にある抗体および／または分解された抗体から、天然の三次元立体構造にある抗体を分離し得る。ＳＥＣでは、固定層は、一般に、ガラスまたは鋼鉄カラム内の緻密な三次元マトリックスに充填された、不活性粒子から構成される。移動相は、純水、水性緩衝液、有機溶剤、これらの混合物、またはその他の溶媒であり得る。固定相粒子は、特定サイズ未満の化学種のみを進入させる小さな孔および／またはチャンネルを有する。したがって大型粒子は、これらの孔およびチャンネルから排除されるが、より小型の粒子は、流動移動相から取り出される。粒子が、固定相孔内で固定化状態にある時間は、それらが孔内にどの程度浸透したかに、ある程度左右される。移動相流から取り出されることで、それらのカラムからの溶出にはより長い時間がかかり、サイズの違いに基づいて粒子間の分離がもたらされる。
【００６２】
いくつかの実施形態では、ＳＥＣを同定技術と組み合わせて、タンパク質またはその断片を同定し、または特性解析する。タンパク質同定および特性解析は、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などのクロマトグラフィー技術、免疫測定法、電気泳動、紫外線／可視／赤外線分光法、ラマン分光法、表面増強ラマン分光法、質量分光分析、ガスクロマトグラフィー、静的光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外線分光法（ＦＴＩＲ）、円二色性（ＣＤ）、尿素誘導タンパク質アンフォールディング技術、内在性トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、および／またはＡＮＳタンパク質結合をはじめとするがこれに限定されない、様々な技術によって達成し得る。
【００６３】
いくつかの実施形態では、タンパク質同定は、高圧液体クロマトグラフィーによって達成される。ＨＰＬＣ実施するための様々な手段および装置が、当業者に知られている。一般にＨＰＬＣは、その中で分離が起きる分離カラムに、関心のあるタンパク質を含有する液体溶媒を装填することを伴う。ＨＰＬＣ分離カラムは、固体粒子（例えばシリカ、ポリマー、または吸着材）で充填され、サンプル混合物は、カラム粒子との相互作用に伴って、化合物に分離される。ＨＰＬＣ分離は、液体溶媒条件（例えば圧力、温度）、サンプル混合物と液体溶媒との化学相互作用（例えば疎水性、プロトン付加など）、およびサンプル混合物と分離カラム内に充填された固体粒子との化学相互作用（例えばリガンド親和性、イオン交換など）の影響を受ける。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ＳＥＣおよびタンパク質の同定は、同一装置内で、または同時に行われる。例えばＳＥＣとＨＰＬＣは併用し得て、ＳＥ−ＨＰＬＣと称されることが多い。
【００６５】
本明細書で特定される技術などの既知の技術を使用して、様々な抗体および抗体分解産物を分離することで、抗体製剤中の抗体安定性を判定し得る。本明細書の用法では、「安定性」という用語は、一般に、タンパク質、ペプチド、または別の生理活性高分子などの生物活性作用物質の完全性維持、または分解、変性、凝集またはアンフォールディングの最小化に関連する。本明細書の用法では，「改善された安定性」とは、一般に、分解、変性、凝集またはアンフォールディングをもたらすことが知られている条件下で、関心のあるタンパク質（例えば抗ＩＬ６（ＹＴＥ）などの抗体）、ペプチドまたは別の生理活性高分子が、対照タンパク質、ペプチドまたは別の生理活性高分子と比較して、より大きな安定性を維持することを意味する。例えば「アルギニン存在下における改善された安定性」という語句は、例えば抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体などの関心のあるタンパク質が、アルギニン不在下の同一抗体と比較して、アルギニン存在下で抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の分解、変性、凝集またはアンフォールディングの低下した量を有するであろうことを示す。
【００６６】
いくつかの実施形態では、安定性とは、低から検出不能レベルの凝集を有する抗体製剤を指す。「低から検出不能レベルの凝集」という語句は、本明細書の用法では、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）、静的光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外線分光法（ＦＴＩＲ）、円二色性（ＣＤ）、尿素誘導タンパク質アンフォールディング技術、内在性トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、および１−アニリノ−８−ナフタレンスルホン酸（ＡＮＳ）タンパク質結合技術による測定で、タンパク質の重量を基準にして５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、および０．５％以下の凝集を含有するサンプルを指す。
【００６７】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、低から検出不能レベルの断片化を有する。「低から検出不能レベルの断片化」という用語は、本明細書の用法では、例えば、ＨＰＳＥＣによる測定で単一ピーク内に、または還元キャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）による測定で２ピーク（例えば重鎖および軽鎖）（またはサブユニット内の全てのピーク）内に、非分解抗体またはその非分解断片に相当する、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％以上の総タンパク質を含有し、５％を超え、４％を超え、３％を超え、２％を超え、１％を超え、または０．５％を超える総タンパク質をそれぞれ有する、その他の単一ピークを含有しないサンプルを指す。「還元キャピラリーゲル電気泳動」という用語は、本明細書の用法では、抗体中のジスルフィド結合を還元するのに十分な還元条件下における、キャピラリーゲル電気泳動を指す。
【００６８】
当業者は、タンパク質の安定性が、製剤組成に加えて、その他の特性に左右されることを理解するであろう。例えば安定性は、温度、圧力、湿度、および外部放射線形態によって影響され得る。したがって特に断りのない限り、本明細書で言及される安定性は、２〜８℃、１気圧、相対湿度６０％、および標準的バックグラウンド放射線レベルで測定されると見なされる。
【００６９】
「安定した」という用語は、相対的であり、絶対的でない。したがって本明細書の目的で、いくつかの実施形態では、抗体を２℃〜８℃で６ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２℃〜８℃で１２ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２℃〜８℃で１８ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体製剤中の抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２℃〜８℃で２４ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体製剤中の抗体は安定している。
【００７０】
いくつかの実施形態では、抗体を２３℃〜２７℃で３ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２３℃〜２７℃で６ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２３℃〜２７℃で１２ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２３℃〜２７℃で２４ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。
【００７１】
いくつかの実施形態では、抗体を４０℃で保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、１ヶ月あたり、６％未満、４％未満、３％未満、２％未満または１％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を５℃で保存した際に、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、１ヶ月あたり、６％未満、４％未満、３％未満、２％未満または１％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。
【００７２】
いくつかの実施形態では、８週間、４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月または２４ヶ月間にわたり、例えばＥＬＩＳＡなどの当業者に知られている抗体結合アッセイによる測定で、抗体が、参照抗体と比較して、製剤の抗体（その抗体断片を含む）の結合活性に、非常にわずかまたは皆無の低下を示す場合に、本発明の抗体製剤は安定していると見なし得る。
【００７３】
本明細書に記載される抗体製剤は、様々な粘度を有し得る。抗体製剤の粘度測定法は当業者に知られており、例えばレオメータ（例えば５０ｍｍ、４０ｍｍまたは２０ｍｍコーンアクセサリー付きＡｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  ＭＣＲ３０１レオメータ）が挙げられる。本発明のいくつかの実施形態では、粘度は、毎秒剪断速度１０００の高剪断限界で報告された。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２０ｃＰ未満、１８ｃＰ未満、１５ｃＰ未満、１３ｃＰ未満、または１１ｃＰ未満の粘度を有する。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、１４ｃＰ未満の粘度を有する。当業者は、粘度が温度に左右され、したがって特に断りのない限り、本明細書で提供される粘度は、特に断りのない限り２３℃で測定されることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、抗体製剤の粘度は、２３℃で１４ｃＰ未満である。
【００７４】
「射出力」という用語は、抗体製剤を針を通過させるのに必要な圧力の量（ニュートン単位）である。射出力は、抗体製剤を対象に投与する際に、抗体製剤によって提供される抵抗性と相関する。射出力は、投与する針のゲージ、ならびに温度に左右される。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、国際標準化機構（ＩＳＯ）文献「Ｓｔａｉｎｌｅｓｓ  ｓｔｅｅｌ  ｎｅｅｄｌｅ  ｔｕｂｉｎｇ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｄｅｖｉｃｅｓ」（ＩＳＯ  ９６２６：１９９１）で定義され、ＢＤ  Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）によって製造される２７Ｇａ肉薄ＰＦＳ針の通過時に、１５Ｎ、１２Ｎ、１０Ｎ、または８Ｎ未満の射出力を有する。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２５または２６ゲージ針の通過時に、１５Ｎ、１２Ｎ、１０Ｎ、または８Ｎ未満の射出力を有する。
【００７５】
抗体製剤は、異なるモル浸透圧濃度を有し得る。抗体製剤のモル浸透圧濃度の測定法は、当業者に知られており、例えば浸透圧計（例えばＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｉｎｃ  ２０２０凝固点降下浸透圧計）が挙げられる。いくつかの実施形態では、製剤は、２００〜６００ｍｏｓｍ／ｋｇ、２６０〜５００ｍｏｓｍ／ｋｇ、または３００〜４５０ｍｏｓｍ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。いくつかの実施形態では、製剤は、オスモライトを含まない。
【００７６】
本発明の抗体製剤は、様々なｐＨレベルを有し得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤のｐＨは、４〜７、４．５〜６．５、または５〜６である。いくつかの実施形態では、抗体製剤のｐＨは６．０である。適切な緩衝液の添加をはじめとするが、これに限定されるものではない、様々な手段を利用して、所望のｐＨレベルを得てもよい。
【００７７】
抗体製剤には、様々なその他の成分が含まれ得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、緩衝液（例えば酢酸エステル、リン酸またはクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えばポリソルベート）、および／または安定剤（例えばヒトアルブミン）などを含んでなり得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、例えばイオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、スクロース、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、硫酸プロタミンやリン酸水素二ナトリウムやリン酸水素カリウムや塩化ナトリウムや亜鉛塩などの塩または電解質、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、およびポリエチレングリコールをはじめとする、薬学的に許容可能な担体を含んでなり得る。
【００７８】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、界面活性剤をさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート、プルロニック、ブリジ、およびその他の非イオン性界面活性剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。製剤中の界面活性剤濃度は、変動し得る。例えばいくつかの実施形態では、製剤中の界面活性剤濃度は、約０．００１％〜約１％、約０．００５％〜約０．５％、約０．０．０１％〜約０．１％、または約０．０５％〜約０．０７％である。
【００７９】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ヒスチジンをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、製剤中のヒスチジン濃度は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約２５ｍＭである。
【００８０】
いくつかの実施形態では、抗体製剤から様々な成分を省き得て、または抗体製剤は、その成分を「実質的に含まない」ことができる。「実質的に含まない」という用語は、本明細書の用法では、０．０１％未満、０．００１％未満、０．０００５％未満、０．０００３％未満、または０．０００１％未満の指定された成分を含有する、抗体製剤を指す。
【００８１】
いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを実質的に含まず、すなわち抗体製剤は、０．０１％未満、０．００１％未満、％０．０００５％未満、０．０００３％未満、または０．０００１％未満のトレハロースを含有する。いくつかの実施形態では、製剤は、約１０ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約３５０ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約１８０ｍＭまたは約２２５ｍＭ濃度のトレハロースを含んでなる。いくつかの実施形態では、トレハロースは、アルギニンと組み合わせて使用される。アルギニンおよびトレハロースの濃度は変動し得て、互いに独立であり得る。いくつかの実施形態では、アルギニン：トレハロースのモル比は、約０：１、約１：２０、約１：１０、約１：８、約１：５、約１：２、約１：１、約２：１、約５：１、約１０：１、または約１０：０であり得る。
【００８２】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は糖類を実質的に含まず、すなわち抗体製剤、前記製剤は、０．０１％未満、０．００１％未満、０．０００５％未満、０．０００３％未満、または０．０００１％未満の糖類を含有する。「糖類」という用語は、本明細書の用法では、多価アルコール誘導体である分子のクラスを指す。糖類は、通常、炭水化物と称され、例えば単糖類、二糖類、および多糖類などの異なる量の糖（糖類）単位を含有してもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、二糖類を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、還元糖、非還元糖、または糖アルコールを実質的に含まない製剤。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ヒスチジン、プロリン、グルタミン酸、ソルビトール、二価の金属イオン、および／またはコハク酸を実質的に含まない。
【００８３】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）例えば抗ＩＬ６抗体などの約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）１５０ｍＭ〜４００ｍＭのアルギニン、（ｃ）０．０１％〜０．１％のポリソルベート８０、（ｄ）５ｍＭ〜１００ｍＭのヒスチジンを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ｐＨ６．０で、（ａ）例えば抗ＩＬ６抗体などの１５０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２５ｍＭのヒスチジン（例えばＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物）、（ｃ）２２０ｍＭのアルギニン（例えばアルギニンＨＣｌ）、および（ｄ）０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ｐＨ６．０で、（ａ）例えば抗ＩＬ６抗体などの１５０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２５ｍＭのヒスチジン（例えばＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物）、（ｃ）１５０ｍＭのアルギニン（例えばアルギニンＨＣｌ）、および（ｄ）０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含んでなる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）例えば抗ＩＬ６抗体などの約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２０ｍＭ〜４００ｍＭのアルギニン、（ｃ）０．０１％〜０．１％のポリソルベート８０、（ｄ）５ｍＭ〜１００ｍＭのヒスチジン、および場合により（ｅ）約５０ｍＭ〜約４００ｍＭのトレハロースを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ｐＨ６．０で、（ａ）例えば抗ＩＬ６抗体などの５０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２５ｍＭのヒスチジン（例えばＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物）、（ｃ）２２５ｍＭのトレハロース、および（ｄ）０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ｐＨ６．０で、（ａ）例えば抗ＩＬ６抗体などの１００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２５ｍＭのヒスチジン（例えばＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物）、（ｃ）１８０ｍＭのトレハロース、（ｄ）２５ｍＭのアルギニン、および（ｅ）０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含んでなる。
【００８５】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）１５０ｍＭ〜４００ｍＭのアルギニン、（ｃ）０．０１％〜０．１％のポリソルベート８０、（ｄ）１０ｍＭ〜５０ｍＭのヒスチジンを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ｐＨ６．０で、（ａ）配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる１５０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２５ｍＭのヒスチジン（例えばＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物）、（ｃ）２２０ｍＭのアルギニン（例えばアルギニンＨＣｌ）、および（ｄ）０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ｐＨ６．０で、（ａ）配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる、１５０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２５ｍＭのヒスチジン（例えばＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物）、（ｃ）１５０ｍＭのアルギニン（例えばアルギニンＨＣｌ）、および（ｄ）０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含んでなる。
【００８６】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２０ｍＭ〜４００ｍＭのアルギニン、（ｃ）０．０１％〜０．１％のポリソルベート８０、（ｄ）５ｍＭ〜１００ｍＭのヒスチジン、および場合により（ｅ）約５０ｍＭ〜約４００ｍＭのトレハロースを含んでなり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有する、安定した低粘度の抗体製剤を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ｐＨ６．０で、（ａ）配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる、５０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２５ｍＭのヒスチジン（例えばＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物）、（ｃ）２２５ｍＭのトレハロース、および（ｄ）０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ｐＨ６．０で、（ａ）配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる、１００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）２５ｍＭのヒスチジン（例えばＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物）、（ｃ）１８０ｍＭのトレハロース、（ｄ）２５ｍＭのアルギニン、および（ｅ）０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含んでなる。
【００８７】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与することで、炎症性疼痛構成要素がある患者を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与することで、活性化ＩＬ−６依存性経路がある患者を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において疼痛を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において骨関節炎に伴う疼痛を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において慢性腰痛に伴う疼痛を治療する方法を対象とする。
【００８８】
本明細書の用法では、「対象」は、「患者」と同義的に使用し得て、ヒト、ならびに飼育動物および家畜、動物園動物、スポーツ用動物、およびペットなどであるが、これに限定されるものではない、非ヒトをはじめとする、哺乳類に分類されるあらゆる動物を指す。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトを指す。
【００８９】
「治療する」および「治療」という用語は、治療処置と、予防的、保全的、またはは防止的手段との双方を指し、目的は、望まれない生理学的な病状、障害または疾患を予防または緩和（軽減）し、あるいは有益なまたは所望の臨床結果を得ることである。「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、（１つまたは複数の予防薬または治療薬の投与をはじめとするが、これに限定されるものではない）１つまたは複数の治療法の実施から得られる、このような疾患または障害（例えばＩＬ−６ポリペプチドの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、ＩＬ−６受容体またはその１つもしくは複数のサブユニットの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、または感染症（好ましくは呼吸器感染症））の進行、重症度、および／または持続期間の低下または改善、あるいはその１つまたは複数の症状の改善を指す。特定の実施形態では、このような用語は、様々な病状に伴う疼痛の低下を指す。別の実施形態では、このような用語は、肥満細胞による炎症性作用物質放出の低下、またはこのような炎症性作用物質による生物学的効果の低下を指す。別の実施形態では、このような用語は、過剰増殖性細胞（例えばがん性細胞）の増殖、形成および／または増加の低下を指す。なおも別の実施形態では、このような用語は、原発性、局所的または転移性がんの根除、除去または抑制を指す（例えばがんの拡大の最小化または遅延）。なおも別の実施形態では、このような用語は、非小細胞肺がんの根除、除去または抑制を指す（例えばがんの拡大の最小化または遅延）。なおも別の実施形態では、このような用語は、関節リウマチの根除、除去または抑制を指す。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含んでなる、対象において関節リウマチを治療する方法を対象とする。
【００９０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体製剤の治療有効量が投与されて、病状が治療される。本明細書の用法では、「治療有効量」という用語は、疾患または障害（例えばＩＬ−６ポリペプチドの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、ＩＬ−６受容体またはその１つまたは複数のサブユニットの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、または感染症（好ましくは呼吸器感染症）あるいは１つまたは複数のその症状）の重症度を低下させ、呼吸器病状の持続期間を低下させ、このような疾患または障害の１つまたは複数の症状を改善し、このような疾患または障害の進行を予防し、このような疾患または障害の退縮を引き起こし、または別の治療法の治療効果を高めまたは改善するのに十分な治療法（例えばＩＬ−６ポリペプチドと免疫特異的に結合する抗体）の量を指す。いくつかの実施形態では、治療有効量は、前もって特定され得ず、例えば用量漸増などの様々な手段を使用して、例えば医師またはその他の保健医療提供者などの介護者によって判定され得る。適切な治療有効量はまた、例えば動物モデルを使用して、日常的実験法によって判定し得る。
【００９１】
「治療法（ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）」および「治療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」という用語は、疾患または障害（例えばＩＬ−６ポリペプチドの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、ＩＬ−６受容体またはその１つもしくは複数のサブユニットの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、または感染症（好ましくは呼吸器感染症）あるいはその１つまたは複数の症状）の予防、治療、管理、または改善において使用し得る、あらゆるプロトコル、方法、および／または作用物質を指し得る。特定の実施形態では、「治療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」および「治療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」という用語は、熟練した医療関係者に知られている、そのような疾患または障害あるいは１つまたは複数の症状の治療、管理、予防、または改善において有用な、抗ウイルス療法、抗細菌療法、抗真菌療法、生物学的療法、支持療法、および／またはその他の治療法を指す。
【００９２】
本明細書の用法では、「治療法プロトコル」という用語は、投薬および治療的に有効な１つまたは複数の治療法（例えば治療薬）の実施のタイミングのためのレジメンを指す。
【００９３】
本発明の抗体製剤の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入または局所投与法を介し得る。非経口という用語は、本明細書の用法では、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸または膣内投与を含む。いくつかの実施形態では、単離抗体は、抗ＩＬ６抗体（例えば抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体）であり、投与経路は皮下注射である。これらの投与形態は全て、本発明の範囲内として明確に検討される一方で、いくつかの実施形態では、抗体製剤は、注射、特に静脈内もしくは動脈内注射または点滴による投与に適する。
【００９４】
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、対象への投与前に静注製剤中で希釈される。場合によっては、例えばＩＶバッグなどの静注製剤中の抗体製剤の希釈に際して、可視粒子の形成が起こり得る。粒子形成に対処するために、いくつかの実施形態では、抗体製剤を入れる前に、緩衝液と界面活性剤を静注バッグに添加するステップを含んでなる、抗体製剤の静注バッグ内での希釈に際して、粒子形成を低下させる方法が提供される。
【００９５】
「ＩＶバッグ保護剤」という用語は、本明細書に記載される抗体製剤の静注バッグ内での希釈前に、静注バッグに添加される界面活性剤を指す。ＩＶバッグ保護剤はまた、例えば凍結乾燥抗体製剤などの当業者に知られているその他の抗体製剤の添加前に、静注バッグに添加し得る。
【００９６】
ＩＶバッグ保護剤として使用するのに適する界面活性剤は、一般に、ＩＶ製剤中での使用に適するものであろう。いくつかの実施形態では、ＩＶバッグ保護剤中で使用される界面活性剤は、抗体製剤で使用されるのと同じ緩衝液である。例えば抗体製剤が、界面活性剤としてポリソルベート８０を含んでなる場合、抗体製剤を静注バッグに入れる前に、ポリソルベート８０が静注バッグに添加される。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ＩＶバッグ保護剤は界面活性剤を含んでなり、それは、ＩＶ製剤に添加すると、ＩＶ製剤中で、約０．００６％〜約０．０１８％の界面活性剤、約０．００８％〜約０．０１５％の界面活性剤、約０．００９％〜約０．０１２％の界面活性剤、約０．００９％の界面活性剤、約０．０１０％の界面活性剤、約０．０１１％の界面活性剤または約０．０１２％の界面活性剤の範囲の界面活性剤濃度を生じる。いくつかの実施形態では、界面活性剤はポリソルベート８０（ＰＳ８０）であり、それは、ＩＶ製剤に添加すると、ＩＶ製剤中で、約０．００６％〜約０．０１８％の界面活性剤、約０．００８％〜約０．０１５％の界面活性剤、約０．００９％〜約０．０１２％の界面活性剤、約０．００９％の界面活性剤、約０．０１０％の界面活性剤、約０．０１１％の界面活性剤または約０．０１２％の界面活性剤の範囲の界面活性剤濃度を生じる。いくつかの実施形態では、ＩＶ保護剤の添加から得られるＩＶバッグ内の界面活性剤濃度は、抗体製剤中の界面活性剤濃度とほぼ同じ、その約半分、またはその約７分の１である。
【００９８】
ＩＶバッグ内の界面活性剤の所望の最終濃度が分かれば、ＩＶバッグ保護剤中に所望の濃度の界面活性剤を調合し得る。例えばいくつかの実施形態では、ＩＶバッグ保護剤は、約０．０１％〜約１０．０％の界面活性剤、約０．０５％〜約５％の界面活性剤、約０．１％〜約２％の界面活性剤、または約０．５％〜約１％の界面活性剤を含んでなり得る。
【００９９】
いくつかの実施形態では、本発明は、（１）抗体製剤、および（２）ＩＶ保護剤を含んでなる、キットを対象とし得る。いくつかの実施形態では、本発明は、（１）抗体製剤、および（２）界面活性剤を含んでなるＩＶ保護剤を含んでなる、キットを対象とし得る。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。いくつかの実施形態では、本発明は、（１）本明細書に記載される抗体製剤、および（２）ＩＶ保護剤を含んでなるキットを対象とし得る。いくつかの実施形態では、本発明は、（１）本明細書に記載される抗体製剤、および（２）ＩＶ保護剤を含んでなるキットを対象とし得て、（ｉ）ＩＶ保護剤は、ＩＶ製剤への添加時に、約０．００６％〜約０．０１８％の範囲のポリソルベート８０を生じるのに十分な量のポリソルベート８０を含んでなる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、本発明は、（１）本明細書に記載されるＩＶ保護剤をＩＶ製剤に添加するステップと、（２）抗体製剤を添加するステップとを含んでなる、抗体製剤をＩＶ製剤中で希釈する前に、例えばＩＶバッグなどのＩＶ製剤を前処理する方法を対象とする。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）抗体を約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに濃縮するステップと、（ｂ）アルギニンを（ａ）の抗体に添加して、約１５０ｍＭを超える濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、方法は、（ｃ）ヒスチジンを添加して、１０ｍＭ〜１００ｍＭ濃度のヒスチジンを有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、方法は、（ｄ）例えばポリソルベート８０などの界面活性剤を添加して、０．０２％〜０．１％濃度の界面活性剤を有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）抗体を約１００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに濃縮するステップと、（ｂ）アルギニンを（ａ）の抗体に添加して、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭ濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、方法は、（ｃ）ヒスチジンを添加して、１０ｍＭ〜１００ｍＭ濃度のヒスチジンを有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、方法は、（ｄ）例えばポリソルベート８０などの界面活性剤を添加して、０．０２％〜０．１％濃度の界面活性剤を有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、方法は、トレハロースを添加して、約１００ｍＭ〜約３００ｍＭ濃度のトレハロースを有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）抗体を約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに濃縮するステップと、（ｂ）トレハロースを（ａ）の抗体に添加して、約１００ｍＭ〜約４００ｍＭ濃度のトレハロースを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなる、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、方法は、（ｃ）ヒスチジンを添加して、１０ｍＭ〜１００ｍＭ濃度のヒスチジンを有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、方法は、（ｄ）例えばポリソルベート８０などの界面活性剤を添加して、０．０２％〜０．１％濃度の界面活性剤を有する抗体製剤を得るステップをさらに含んでなる。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１および２のアミノ酸配列を含んでなる抗体を約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに濃縮するステップと；（ｂ）アルギニンを（ａ）の抗体に添加して、約１５０ｍＭを超える濃度のアルギニンを有する抗体製剤を得るステップとを含んでなり、（ｂ）の抗体製剤が、水溶液中にあり、２３℃で２０ｃＰ未満の粘度を有し、（ｂ）の抗体製剤が、ＳＥＣ  ＨＰＬＣによる測定で、２℃〜８℃で１２ヶ月間にわたり安定している、安定した低粘度の抗体製剤を製造する方法を対象とする。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、コストの削減、方法段階の削減、誤りの機会の減少、安全でないまたは不適切な添加剤の導入の機会の減少などのいずれかによって、製造会社がより効率的な−方法で、ヒトへの投与に適した抗体製剤を製造できるようにする。本発明の抗体製剤は、凍結乾燥抗体を戻すことなく投与し得る。
【実施例】
【０１０６】
実施例１
材料と方法
材料
使用された全ての材料は、ＵＳＰまたは複数公定等級であった。全ての溶液および緩衝液は、ＵＳＰまたはＨＰＬＣ水を使用して調製し、さらなる使用前に、０．２μｍのＰＶＤＦフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｍｉｌｌｅｘ  ＧＶ，ＳＬＧ０３３ＲＢ）を通して濾過した。精製抗ＩＬ６（ＹＴＥ）は、浄化した。バイオセーフティーキャビネットＨｏｏｄ（ＢＳＣ）内の無菌条件下で、安定性試験のための精製抗ＩＬ６（ＹＴＥ）サンプルを調製した。バルク材料は、２〜８℃で保存した。
【０１０７】
方法
ｉ．タンパク質濃度判定
抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体濃度は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計を用いて、２８０ｎｍにおける吸光度測定によって判定された。測定された１．７１（ｍｇ／ｍＬ）-1ｃｍ-1の吸光係数を使用して、タンパク質濃度を計算した。
【０１０８】
ｉｉ．サイズ排除クロマトグラフィーによる純度判定
２８０ｎｍにおけるＵＶ検出がある、ＴＳＫ−ゲルＧ３０００ＳＷＸＬカラムおよびＳＷガードカラム（Ｔｏｓｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ，Ｍｏｎｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を用いて、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣシステム上で、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析を実施した。０．１Ｍのリン酸ナトリウム、０．１Ｍの硫酸ナトリウム、および０．０５％（ｗ／ｖ）のアジ化ナトリウムを含有する、ｐＨ６．８の移動相を使用して、２０分間にわたり１．０ｍＬ／分の流速を使用して、サンプルをアッセイした。約２５０マイクログラムのタンパク質を注入した。可溶性凝集体、モノマー、および断片の溶出は、それぞれおよそ６〜８分、８．５分、および９〜１１．５分で起きた。
【０１０９】
ｉｉｉ．逆相クロマトグラフィーによる断片化レベルの判定
断片化レベルは、Ｍｉｃｈｒｏｍ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  ＰＬＲＰ−Ｓ  ＣＭ８１００９２／００カラムを用いて、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣシステムを使用して評価した。
【０１１０】
ｉｖ．外観
ＰｈＥｕｒ（それぞれ２．９．２０、２．２．１および２．２．２節）から適応された手順に従って、可視粒子、透明度／乳白光、および色について外観検査を実施した。
【０１１１】
ｖ．肉眼不可視粒子の分析
光掩蔽（ＨＩＡＣ９７０５）またはフロー顕微鏡検査（Ｂｒｉｇｈｔｗｅｌｌ  Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ，ＭＦＩ）のどちらかを使用して、肉眼不可視粒子の分析を実施した。
【０１１２】
ｖｉ．浸透圧
Ａｄｖａｎｃｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．２０２０凝固点降下浸透圧計を使用して、浸透圧を測定した。
【０１１３】
ｖｉｉ．粘度評価
Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  ＭＣＲ３０１レオメータを使用して、様々な濃度における抗ＩＬ６（ＹＴＥ）製剤の粘度を評価した。
【０１１４】
ｖｉｉｉ．製剤安定性試験
異なる賦形剤を用いて調合した抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体を、清澄な３ｃｃの１３ｍｍガラスバイアルに充填した。加速スクリーニングのために、サンプルを４０℃／７５％ＲＨおよび２５℃／６０％ＲＨおよび５℃で安定化した。ＳＥＣ  ＨＰＬＣ、ＲＰ  ＨＰＬＣを用いて、サンプルを分析し、バイアルを粒子について視覚的に検査した。さらに必要に応じて、選択された時点を効力、浸透圧、ｐＨ、ＨＩＡＣ、およびＭＦＩについて分析した。
【０１１５】
ｉｘ．濁度を使用したコロイド安定性スクリーニング
Ｃａｒｙ  ＥｃｌｉｐｓｅマルチセルＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計を使用して、約６２℃の高温に曝した際の様々な抗ＩＬ６抗体製剤の濁度を時間に対して測定することで、コロイド安定性をスクリーニングした。より不安定な製剤は、時間経過と共に微粒子および沈殿物が形成する（すなわち３６０ｎｍでより高い吸光度を有する）ために濁るのに対し、コロイド的により安定している製剤は、より長時間にわたり透明なままである。
【０１１６】
ｘ．示差走査熱量測定を使用した熱安定性
１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で９６ウェルプレートを使用して、ＶＰ−ＤＳＣ超高感度示差走査熱量計（Ｍｉｃｒｏｃａｌ，Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）上で、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）実験を実施した。サンプルを１時間あたり９０℃の速度で、２０から１００℃まで加熱した。正規化した熱容量（Ｃｐ）データは、緩衝液ベースラインについて補正した。第１の融解転移（Ｔm1）および第２の融解転移（Ｔm2）を使用して、タンパク質の立体構造安定性に対するそれらの安定効果に従って、賦形剤を順位付けした。
【０１１７】
ｘｉ．示差走査型蛍光定量法を使用した熱安定性
５倍レベル（元の濃度は５０００倍）でＳＹＰＲＯオレンジ染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓ６６５１）を用いて、約０．５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で、示差走査蛍光光度分析（ＤＳＦ）実験を実施した。賦形剤原液とタンパク質／染料原液（約５ｍｇ／ｍＬのタンパク質と５０倍の染料）を９：１の比率で混合して、様々な賦形剤の等張溶液に調合された標的レベルを得た。９６ウェルプレートのウェルあたり２５μｌで、染料をタンパク質溶液および緩衝液／賦形剤と共に完全に混合した。ＢｉｏＲａｄ  Ｃ１０００サーマルサイクラーＰＣＲプレートリーダーを使用して、折り畳まれていないタンパク質分子への染料結合に起因する蛍光増大を測定した。サンプルを三重反復試験にかけて、１．２℃／分の速度をもたらす、読み取りあたり１０秒間で０．２℃の増分で、２０から９０℃まで加熱した。蛍光中の変曲点は、タンパク質の立体構造安定性尺度であるＴｈとして報告された。
【０１１８】
実施例２
立体構造熱安定性
実施例１に記載されるようにして、様々な賦形剤が抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の立体構造（熱）安定性に及ぼす効果を調べた。結果は、表１に示される。
【０１１９】
【表１】
2015536934.tif 000016
【０１２０】
表１から分かるように、アルギニンは、特に２５ｍＭヒスチジンの塩基緩衝液条件と比較して、立体構造的に最も安定化させない賦形剤であった。
【０１２１】
さらなる調査は、図１に見られるように、アルギニンが、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体に対してコロイド的に最も安定化させる賦形剤であると、予測すらされなかったことを実証した。コロイド的に最も安定化させる賦形剤が、スクロースおよびトレハロースであった一方で、最も安定化させなかったのは、ＮａＣｌおよび硫酸ナトリウムであった。
【０１２２】
実施例３
粘度および安定性スクリーニングアセスメント
実施例１に記載されるようにして、複数抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体製剤の粘度プロファイル、および安定性を評価し、安定性および予測されるシリンジ機能性観点の双方について、許容可能であることが分かった。１４ｃＰの粘度は、薬剤充填済みシリンジ製品のための肉薄２７ゲージ針を使用して、許容可能なシリンジ滑り力性能をもたらすことが予測された（約７Ｎの射出力および９〜１６秒の注入時間）。
【０１２３】
表２は、１００ｍｇ／ｍＬにおける抗ＩＬ６（ＹＴＥ）製剤の安定性および粘度に対する、ｐＨ、緩衝液タイプ、ヒスチジンレベル、およびアルギニンレベルの影響の調査を要約する。
【０１２４】
【表２】
2015536934.tif 000017
【０１２５】
サンプル１、２、および３は、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体製剤が、より低いｐＨにおいて、より不安定でより粘質であることを示す。サンプル５、４、および３は、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体製剤中のアルギニンレベルの増大が、どちらも望ましい特性である、より高い安定性と、より低い粘度をもたらすことを示す。サンプル５および６は、ヒスチジン緩衝液強度の増大が、粘度も低下させ安定性も増大させ得ることを示す。ヒスチジンを添加するアプローチは、既知の潜在的な経時的黄変問題のために、さらに追究しなかった。これらの結果は、試験した全ての組み合わせについて、５〜６のｐＨ範囲で、粘度および安定性が許容可能であったことを示す。ｐＨ６．０におけるより高いアルギニンレベルが、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）の安定性と粘度の双方に対して、最適なようである。
【０１２６】
様々な賦形剤を使用した抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体製剤の粘度プロファイルを評価し、１５０ｍｇ／ｍＬの製剤について、どの条件が最適であるかを判定した。図２Ａを参照されたい。トレハロース、スクロース、およびソルビトールは、互いに同様の粘度プロファイルを有し、塩は、粘度を効果的に低下させなかった。データは、塩が抗体製剤の粘度を低下できないことを示す。図２Ｂは、粘度に対する、アルギニン、グルタミン酸、塩化ナトリウム、およびトレハロースの効果を実証する。
【０１２７】
抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体製剤粘度に対する、様々な追加的な賦形剤の効果を調べた。結果は、表３に見られる。
【０１２８】
【表３】
2015536934.tif 000018
【０１２９】
アルギニンレベルの増大は、より低い粘度プロファイルをもたらした（図３および図４）。２５ｍＭ程度に低いアルギニンが、１００ｍｇ／ｍＬで名目上１０ｃＰ未満に粘度を低下できた。１５０ｍｇ／ｍＬの抗体製剤を得るための１５０ｍＭのアルギニンおよび２２０ｍＭのアルギニンは、どちらも粘度を名目上約１５ｃＰ未満に低下でき、より高い２２０ｍＭのアルギニンのオプションは、実質的に約１０ｃＰに低下させた（図５）。１００ｍＭアルギニンと７５ｍＭトレハロースの試みで示されるように、データは、＜２０ｃＰの標的を達成するために、１５０ｍＭのアルギニンが必要であることを示唆する（図６）。２２０ｍＭのアルギニン抗ＩＬ６（ＹＴＥ）製剤は、約１８５ｍｇ／ｍＬ（過剰濃度レベル）で、１５０ｍＭのアルギニンよりも約５ｃＰ低い粘度プロファイルを有する。図７を参照されたい。図８は、先行する１００および１５０ｍｇ／ｍＬの製剤について、粘度の温度依存性を示す。
【０１３０】
実施例４
安定性および粘度に対する賦形剤の影響の調査
複数の製剤パラメータに対する、トレハロースおよびアルギニンの影響を評価する実験を実施した。抗体製剤を４０℃または５℃のいずれかで保存して、様々な時点で純度低下を判定した。２８０ｎｍにおけるＵＶ検出がある、ＴＳＫ−ゲルＧ３０００ＳＷＸＬカラムおよびＳＷガードカラム（Ｔｏｓｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ，Ｍｏｎｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を使用して、実施例１に記載される高性能サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。結果は、表４に提供される。
【０１３１】
【表４】
2015536934.tif 000019
【０１３２】
「合格」は、製剤が、可視粒子を事実上含まなかったことを示す。これらのアセスメントは、上で提供されるトレハロースおよびアルギニン製剤中で、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）が１００ｍｇ／ｍＬ以上で安定していることを実証する。
【０１３３】
実施例５
抗ＩＬ６（ＹＴＥ）熱安定性
２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物、２２０ｍＭの塩酸アルギニン、０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、ｐＨ６．０の中に１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ６抗体を含有する、抗ＩＬ６抗体製剤を製造した。この製剤の組成は、表５に概説される。
【０１３４】
【表５】
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【０１３５】
２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物、１５０ｍＭの塩酸アルギニン、０．０７％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、ｐＨ６．０の中に１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ６抗体を含有する、抗ＩＬ６抗体製剤を製造した。この製剤の組成は、表６に概説される。
【０１３６】
【表６】
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【０１３７】
医薬品を３ｃｃガラスバイアルに無菌充填し、栓をしてアルミニウムオーバーシールで密封した。
【０１３８】
抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の熱安定性
表５に提示される製剤中の約１ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ６（ＹＴＥ）（２５ｍＭＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物、２２０ｍＭ塩酸アルギニン、０．０７％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ６．０）について、ＤＳＣを実施した。熱安定性プロファイルは、図９に記載される。
【０１３９】
実施例６
ＩＶバッグ保護剤
ｉ．材料
凍結乾燥製剤を使用して、複数供給業者からの様々なタイプの静脈輸液（ＩＶ）バッグおよびライン内における、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の適合性を評価した。抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体は凍結乾燥形態であり、それを戻して、２５ｍＭＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物、２２５ｍＭ（８．５％［ｗ／ｖ］）トレハロース二水和物、０．０５％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ６．０中の５０ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体を得た。
【０１４０】
ｉｉ．方法
（ａ）適合性試験手順
診療所で利用できるＩＶバッグ（またはボトル）、ＩＶフィルター延長セット、および様々なタイプの関連接触材料を使用して保持され送達される、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体ＣＳＰの使用時安定性を評価した。試験範囲は、１００ｍＬのＩＶバッグを使用した２０ｍｇ〜６００ｍｇであった（０．２ｍｇ／ｍＬ〜６ｍｇ／ｍＬ）。計算された抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体用量容積をバッグに入れて、穏やかに混合した。ＩＶバッグを覆わずに、室温（ＲＴ、およそ２３℃）および冷蔵条件下（２〜８℃）の双方で、２４時間保存した。適切なインキュベーション時間後、ＩＶ投与、フィルター、および針付き延長セットを通じた、ポンプまたは重力のいずれかによる１００ｍＬ／時間での模擬点滴によって、ＩＶバッグ内のＣＳＰを収集した。外観検査、ＨＰＳＥＣ、および紫外可視（ＵＶ−Ｖｉｓ）吸光度によって、ＣＳＰにおける抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の粒子形成／沈殿安定性および回収率を評価した。
【０１４１】
（ｂ）外観検査
ＩＶバッグに対して直接、また３ｃｃガラス薬物バイアル内に模擬輸液した材料についても、可視粒子、透明度／乳白光、および色について、ＰｈＥｕｒから適応された手順（それぞれ２．９．２０、２．２．１、および２．２．２節）に従って、外観検査を実施した。出発抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体製剤は、わずかに乳白光があり無色から淡黄色であった。模擬点滴後、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体ＣＳＰは、全てのＣＳＰサンプルで透明無色から淡黄色であった。しかしＩＶＢＰを使用しなかった場合は、ＩＶバッグ内での抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の希釈に際して、粒子レベルの増大が観察された。ＩＶＢＰの使用は、ＣＳＰ中の粒子形成を軽減した。
【０１４２】
（ｃ）純度および可溶性凝集
ＴＳＫ−ゲルＧ３０００ＳＷＸＬカラムおよびＳＷガードカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を使用して、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）を実施し、ＣＳＰサンプルの純度と可溶性凝集を評価した。
【０１４３】
（ｄ）濃度および回収率
Ａｇｉｌｅｎｔモデル８４５３  ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ  ＣＡ）を使用して、２８０ｎｍにおける紫外可視（ＵＶ−Ｖｉｓ）吸光度によって、タンパク質回収率を評価し、タンパク質濃度をアッセイした。ＵＶ−Ｖｉｓの量子化限界未満の用量では、２８０ｎｍでの蛍光励起および３３５ｎｍでの発光があるＨＰＳＥＣを使用して、線形ピーク面積標準検量線を使用して、タンパク質をアッセイした。
【０１４４】
ｉｉｉ．結果と考察
（ａ）生理食塩水ＩＶバッグ内の粒子形成
ＩＶＢＰを使用しなかった最初の試験では、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体について、１００ｍＬの生理食塩水ＩＶバッグ内に、および０．２ミクロンインラインフィルターを通じた模擬点滴後に３ｃｃガラスバイアル内に収集された材料中に、可視粒子が観察された（図１０）。その他の全ての検査結果は、許容可能だった。可視粒子は、一般に７０・ｍよりも大型であるため、これらの可視粒子は、０．２２ミクロンインラインフィルターの後に形成されていなくてはならない。事実上、３ｃｃガラスバイアル内に収集されたサンプルは、手動外観検査過程で反転および旋回撹拌する間に、粒子レベルが増大したことが観察された。本発明者らは、粒子形成が、溶液中に存在する界面活性剤が不十分であるという事実に起因するという、仮説を立てた。これを調査するために、追加的なポリソルベートをＩＶバッグ内に添加した。
【０１４５】
（ｃ）粒子形成に対する界面活性剤レベルの影響の調査
最高およそ２５０倍のポリソルベート希釈の効果を評価した（１００ｍＬ／０．４ｍＬ＝２５０倍希釈）。抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体をＩＶバッグ内に投入する前に、生理食塩水ＩＶ液をポリソルベート８０の添加によって改質した。添加されるポリソルベート８０は０％〜０．０１８％ｗ／ｖで変動し、外観検査を実施した（表７）。
【０１４６】
【表７】
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【０１４７】
２０ｍｇの使用量では、残留する０．０００２％のＰＳ８０は、添加された抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体製剤容積中のポリソルベートの希釈によって、寄与されたことに留意されたい（０．０５％／２５０＝０．０００２％）。これらのデータに基づいて、０．００９％ｗ／ｖを超えるポリソルベート８０は、ＣＳＰ中で観察された粒子形成を効果的に軽減し得た。図１１は、０．０１２％ｗ／ｖのポリソルベート８０が添加された、生理食塩水中の抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の写真を示す。
【０１４８】
（ｄ）ＩＶバッグ内の粒子形成を軽減するためのＩＶバッグ保護剤（ＩＶＢＰ）の使用
ＩＶＢＰを使用して、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の安定性を維持するのに必要なより高レベルのポリソルベートを提供した。誤差およびバッグ過充填変動性を考慮した、レベルの頑強性のために、０．０１２％ｗ／ｖの最終ポリソルベート８０レベルを目標とした。使用されたＩＶバッグ保護剤（ＩＶＢＰ）は、ｐＨ６．０のクエン酸緩衝液中で調合された、０．６５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であった。ＩＶバッグの調製手順を変更し、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体用量を添加する前に、１．８ｍＬの容積のＩＶＢＰを添加して、穏やかに混合した。これは、低用量で約０．０１２％ｗ／ｖ、高用量で０．０１８％ｗ／ｖのポリソルベートレベルをもたらした。５種の異なる生理食塩水ＩＶバッグタイプ内のＩＶＢＰを用いて、適合性試験を実施した。ＩＶＢＰを使用した場合、これらは抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体と適合性であることが分かった。
【０１４９】
ｉｖ．結論
この事例研究では、ＩＶバッグ内のＣＳＰ中のタンパク質性粒子の形成が、保護レベル未満へのポリソルベート８０の希釈によって引き起こされた。バッグ希釈剤のＩＶバッグ保護剤（ＩＶＢＰ）による前処置は、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体臨床用無菌製剤（ＣＳＰ）の粒子形成を軽減するのに必要なレベル以上（約０．００９％超）に、ＩＶバッグ内のポリソルベートレベルを維持するために必要であると判定された。使用されたＩＶバッグ保護剤（ＩＶＢＰ）は、ｐＨ６．０のクエン酸緩衝液中で調合された、０．６５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体の前に、バッグに添加された。ポリソルベート含有ＩＶバッグ保護剤（ＩＶＢＰ）の実装は、抗ＩＬ６（ＹＴＥ）抗体ＣＳＰの粒子形成を完全に軽減した。
【０１５０】
実施例７
非抗ＩＬ６抗体の安定性と粘度に対する賦形剤の影響の調査
複数の製剤パラメータに対する、プロリンおよびアルギニンの影響を評価する実験を実施した。抗ＩＬ６抗体および非抗ＩＬ６抗体（抗体Ｘ）製剤を４０℃および５℃で保存し、様々な時点で、純度低下および可視粒子外観を判定した。ＤＳＣ（ＶＰ−ＤＳＣ，Ｍｉｃｒｏｃａｌ，Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）を使用して、熱安定性を判定した。Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  ＭＣＲ３０１レオメータを使用して、製剤粘度を測定した。２８０ｎｍにおけるＵＶ検出がある、ＴＳＫ−ゲルＧ３０００ＳＷＸＬカラムおよびＳＷガードカラム（Ｔｏｓｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ，Ｍｏｎｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を使用して、実施例１に記載される高性能サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。ＤＳＣを使用して、熱安定性を判定した。
【０１５１】
結果は、表８に提供される。２つの抗体Ｘ製剤を比較した。２つの抗体Ｘ製剤は、１つが５０ｍＭのアルギニンを有し、もう１つが５０ｍＭのプロリンを有したこと以外は、同一であった。結果は、抗体Ｘでは、アルギニン製剤中の粒子の可視外観が、５℃で１１週間後に許容不能であったのに対し、プロリン含有製剤は、目に見える粒子を実質的に含まないままであったことを示す。したがってアルギニンは、抗体Ｘ製剤の粒子形成に悪影響を及ぼした。どちらの抗体Ｘ製剤も、ＨＰ−ＳＥＣによる測定で、安定性で同様の純度低下率を有し、アルギニンが、抗体Ｘを安定化も不安定化もしなかったことを示す。アルギニンは、抗体Ｘ製剤の粘度を低下させた。トレハロース／アルギニン製剤中の抗体ＸのＴｍ１は、アルギニン製剤中の抗ＩＬ６抗体よりも実質的に高かったが、それでもなお、より低い純度低下率と、可視粒子を事実上含まないままであるという事実によって示されるように、抗ＩＬ６抗体の安定性が、はるかにより高かったことは、注目すべきである。これらの比較例は、アルギニンが、抗ＩＬ６抗体を安定化したのと同じようには、抗体Ｘを安定化しなかったことを示す。抗体Ｘの純度低下率は、アルギニンではより低くはなかったが（同じ状態のまま）、アルギニンは粒子形成に関する不安定性をもたらさなかった。
【０１５２】
【表８】
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【０１５３】
実施例８
４種の異なる抗体の安定性に対するアルギニンおよびその他の賦形剤の影響
抗ＩＬ６抗体の安定性、そしてまたいくつかの異なる非抗ＩＬ６抗体の安定性に対する、様々な賦形剤の影響を評価する実験を複数濃度で実施した。試験された賦形剤は、塩基緩衝液（賦形剤なし）、トレハロース、塩、および塩酸アルギニンであった。様々な抗体について、ＤＳＣを使用して熱安定性を判定した。抗体製剤を４０℃で保存して、ＨＰ−ＳＥＣを使用して純度低下率を測定した。２８０ｎｍにおけるＵＶ検出がある、ＴＳＫ−ゲルＧ３０００ＳＷＸＬカラムおよびＳＷガードカラム（Ｔｏｓｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ，Ｍｏｎｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を使用して、実施例１に記載される高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）を実施した。
【０１５４】
試験結果を表９に要約する。全ての抗体に対する、塩基緩衝液のみの場合と比較したアルギニンの影響を表１０に要約する。アルギニンは、全ての抗体中でＴｍ１の低下を引き起こしたにもかかわらず、４種の抗体の純度低下率に対するアルギニンの影響に、一貫した傾向はなかった。抗ＩＬ６抗体は、これらの４つの抗体の内、アルギニンによって実質的に安定化された唯一の抗体であった。アルギニンは、抗体の内２種の純度低下率に影響を及ぼさなかった（アッセイの変動性範囲内である、１ヶ月あたり約０．２％以下の純度低下）。１種の抗体がアルギニンによって不安定化された（抗体Ｂ、表９、１４行）。
【０１５５】
抗ＩＬ６抗体（表９、１〜６行）では、アルギニン製剤は、より低い測定されたＴｍ１を有したが、それらは純度低下率を評価した際に最も安定していた。対照的に、アルギニンが抗体ＢのＴｍ１を低下させ、純度低下率もまた増大させた一方で、トレハロースは、Ｔｍ１を増大させ、純度低下率を減少させた（表９、１１〜１４行）。抗体ＡおよびＣでは、Ｔｍ１は、トレハロースで増大し、塩およびアルギニンの双方で低下したが、なおも純度低下率は１ヶ月あたり０．２％（アッセイの予測される変動以内）であり続け、全ての製剤が同様の安定性を有したことが示唆された。
【０１５６】
【表９】
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【０１５７】
【表１０】
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【０１５８】
本明細書に記載される全ての様々な実施形態または選択肢は、あらゆる全てのバリエーションで組み合わせ得る。そのいくつかの実施形態を参照して、本発明を具体的に示し説明したが、当業者は、それらが単なる例として提示され、限定でなく、本発明の精神と範囲を逸脱することなく、形態および詳細の様々な変更が可能であることを理解するであろう。したがって本発明の広さおよび範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきではなく、以下の特許請求の範囲およびそれらの均等物によってのみ定義されるべきである。
【０１５９】
学術誌論文または抄録、公開されたまたは対応する米国または外国特許出願、付与された特許もしくは外国特許、またはあらゆるその他の文献をはじめとする、本明細書で引用される全ての文献は、引用された文献中に提示される全てのデータ、表、数値、および文章を含めて、それぞれその全体を参照によって本明細書に援用する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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