(57)【要約】ヒトもしくはヒト化インターロイキン−７（ＩＬ−７）遺伝子を含む、遺伝子改変された非ヒト動物。ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子を含む細胞、胚、および非ヒト動物。ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する齧歯類。ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子を生殖細胞系列に含む遺伝子改変されたマウスであって、ここで上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子は、内因性マウスＩＬ−７調節配列の制御下にある、マウス。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子を形成するために少なくとも１つの非ヒトＩＬ−７エキソンの少なくとも１つのヒトＩＬ−７エキソンでの置換を生殖細胞系列に含む、遺伝子改変された非ヒト動物であって、ここで該置換は、内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座にあり、該ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子は、内因性非ヒト調節エレメントの制御下にある、遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項２】
齧歯類である、請求項１に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項３】
前記齧歯類は、ラットおよびマウスから選択される、請求項２に記載の遺伝子改変された齧歯類。
【請求項４】
前記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子は、ヒトエキソン１、ヒトエキソン２、ヒトエキソン３、ヒトエキソン４、ヒトエキソン５、ヒトエキソン６、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されるヒトエキソンを含む、請求項２に記載の遺伝子改変された齧歯類。
【請求項５】
前記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子は、５つ以下のヒトエキソンを含む、請求項４に記載の遺伝子改変された齧歯類。
【請求項６】
前記齧歯類は、マウスであり、前記改変された遺伝子座は、マウスエキソン２、３、４、および５の、ヒトＩＬ−７エキソン２、３、４、５、および６を含むヒトゲノムセグメントでの置換を含む、請求項３に記載の遺伝子改変された齧歯類。
【請求項７】
前記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子は、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質をコードするｃＤＮＡを含む、請求項１に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項８】
生殖細胞系列に、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子をコードする核酸配列を含む導入遺伝子を含む、遺伝子改変された非ヒト動物であって、ここで該ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子は、内因性非ヒト調節配列と上流および下流に隣接している、遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項９】
齧歯類である、請求項８に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項１０】
マウス、ラット、およびハムスターからなる群より選択される、請求項９に記載の齧歯類。
【請求項１１】
前記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子は、ヒトエキソン１、ヒトエキソン２、ヒトエキソン３、ヒトエキソン４、ヒトエキソン５、ヒトエキソン６、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されるヒトエキソンを含む、請求項８に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項１２】
前記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子は、少なくとも５つのヒトエキソンを含む、請求項１１に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項１３】
ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子を有する非ヒト動物を作製するための方法であって、該方法は、該非ヒト動物の生殖細胞系列を、内因性非ヒトＩＬ−７調節配列と上流および下流に隣接したヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子を含むように改変する工程を包含する、方法。
【請求項１４】
前記改変は、内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座にある、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記非ヒト動物は齧歯類である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記齧歯類は、マウス、ラット、およびハムスターからなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
同じ属もしくは種の野生型非ヒト動物に関して観察されるものと同じ発現パターンである発現パターンで、ヒトＩＬ−７を発現するように遺伝子改変されている、遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項１８】
前記非ヒト動物において発現されるヒトＩＬ−７のレベルは、対応する野生型マウスにおける非ヒトＩＬ−７のレベルとほぼ同じである、請求項１７に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項１９】
齧歯類である、請求項１７に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項２０】
齧歯類である、請求項１８に記載の遺伝子改変された非ヒト動物。
【請求項２１】
非ヒトＩＬ−７エキソン１、ヒトＩＬ−７エキソン２、ヒトＩＬ−７エキソン３、ヒトＩＬ−７エキソン４、ヒトＩＬ−７エキソン５およびヒトＩＬ−７エキソン６を含む、ヒト化ＩＬ−７遺伝子座。
【請求項２２】
前記ヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、前記非ヒトＩＬ−７エキソン１およびヒトＩＬ−７エキソン６に隣接する５’および３’非ヒトＩＬ−７非翻訳領域をさらに含む、請求項２１に記載のヒト化ＩＬ−７遺伝子座。
【請求項２３】
前記ヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、非ヒト３’非翻訳領域と連続する、３’ヒト非翻訳領域もしくはその一部を含む、請求項２１もしくは２２に記載のヒト化ＩＬ−７遺伝子座。
【請求項２４】
前記ヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、５’非ヒトＩＬ−７非翻訳領域、またはその一部を含み、非ヒトＩＬ−７エキソン１は、ヒトＩＬ−７エキソン２と連続している、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載のヒト化ＩＬ−７遺伝子座。
【請求項２５】
前記ヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、図１に示される構造を含む、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載のヒト化ＩＬ−７遺伝子座。
【請求項２６】
請求項２１〜２５のいずれか１項に記載のヒト化ＩＬ−７遺伝子座を含む、細胞。
【請求項２７】
前記細胞は、胚性幹細胞である、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
請求項１〜１２および１７〜２０のいずれか１項に記載の非ヒト動物から単離された、細胞もしくは組織。
【請求項２９】
前記組織は、胸腺組織、脾臓組織、表皮組織、および腸組織からなる群より選択される、請求項２８に記載の細胞もしくは組織。
【請求項３０】
前記組織は、胸腺組織である、請求項２９に記載の細胞もしくは組織。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（分野）
非ヒトＩＬ−７遺伝子配列の内因性遺伝子座において、ヒトＩＬ−７遺伝子配列での置換を含む遺伝子改変を含む、非ヒト動物（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、およびハムスターのような齧歯類）。内因性非ヒト調節配列の制御下にある遺伝子座から、または内因性非ヒト調節配列を含む内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座から、ヒトＩＬ−７もしくはヒト化ＩＬ−７を発現する齧歯類および他の非ヒト動物。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
ヒトＩＬ−７配列を含む無作為に挿入された導入遺伝子を有するトランスジェニックマウスは、当該分野で公知である。しかし、これらトランスジェニックマウスのうちの全てではないにしても大部分は、どのような局面にせよ最適ではない。例えば、ヒトＩＬ−７に対してトランスジェニックの大部分のマウスは、免疫細胞発生（例えば、Ｔ細胞発生）の調節異常（ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）におそらく起因する、特定の細胞（Ｔ細胞が挙げられる）の異常なレベルおよび／もしくは比を示す。
【０００３】
ヒトＩＬ−７コード配列を含み、ヒトＩＬ−７コード配列が内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座にあり、非ヒト動物が内因性非ヒト調節エレメントの制御下でヒトＩＬ−７を発現する非ヒト動物が、当該分野で未だに必要である。上記非ヒト動物において可能な限り生理学的に関連性のある様式においてヒトＩＬ−７を発現する非ヒト動物が当該分野で未だに必要である。ヒトＩＬ−７を発現し、非ヒト動物に、末梢Ｔ細胞において、および／もしくはＴ細胞サブタイプの比において顕著な異常がない非ヒト動物は、当該分野で必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
(要旨)
遺伝子改変された非ヒト動物、細胞、組織、および核酸が提供され、これらは、内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座においてヒトＩＬ−７ゲノム配列を含む。上記非ヒト動物は、改変された内因性ＩＬ−７遺伝子座の１もしくは複数の内因性非ヒト調節配列によって調節される改変された遺伝子座からヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する。種々の実施形態において、上記非ヒト動物は、齧歯類、例えば、マウス、ラット、ハムスターなどである。具体的実施形態において、上記齧歯類は、マウスもしくはラットである。
【０００５】
種々の実施形態および局面において、上記非ヒト動物は、改変された内因性ＩＬ−７遺伝子座において上記非ヒト動物の生殖細胞系列の中に改変されたＩＬ−７遺伝子を含み、ここで上記改変された内因性ＩＬ−７遺伝子座は、上記内因性ＩＬ−７遺伝子のうちの少なくとも一部のヒト化を含む。種々の実施形態において、上記マウスは、上記改変されたＩＬ−７遺伝子座に関してヘテロ接合性であるかもしくはホモ接合性である。一実施形態において、第１の内因性ＩＬ−７対立遺伝子の欠如および第２の内因性ＩＬ−７対立遺伝子のヒト化を含む非ヒト動物が、提供される。種々の実施形態および局面において、上記ヒト化は、１もしくは複数のエキソンおよび／もしくはイントロンのヒト化である。種々の実施形態および局面において、内因性非ヒト５’非翻訳領域および内因性非ヒト３’非翻訳領域のうちの一方もしくは両方が改変された動物の中で保持されている、改変されたＩＬ−７遺伝子座を有する非ヒト動物が提供される。
【０００６】
いくつかの局面において、本発明の非ヒト動物は、配列番号１の中に含まれる５’非翻訳領域を含む。いくつかの局面において、本発明の非ヒト動物は、配列番号２の中に含まれる３’非翻訳領域を含む。いくつかの実施形態において、本発明の非ヒト動物は、配列番号１の中に含まれる５’非翻訳領域および配列番号２の中に含まれる３’非翻訳領域を含む。
【０００７】
いくつかの局面において、本発明の非ヒト動物は、配列番号１である５’非翻訳領域を含む。いくつかの局面において、本発明の非ヒト動物は、配列番号２である３’非翻訳領域を含む。いくつかの局面において、本発明の非ヒト動物は、配列番号１である５’非翻訳領域および配列番号２である３’非翻訳領域を含む。
【０００８】
いくつかの局面において、本発明のヒト化ＩＬ−７遺伝子は、ヒトＩＬ−７遺伝子のエキソン２〜６を含む連続配列と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高い）同一である配列を有する。いくつかの特定の局面において、本発明のヒトＩＬ−７遺伝子は、配列番号３を含む。いくつかの局面において、本発明のヒト化ＩＬ−７遺伝子は、図１に示されるヒト化を示す配列を有する。
【０００９】
一局面において、内因性齧歯類ＩＬ−７ゲノム配列の内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座において、ヒトＩＬ−７ゲノム配列での置換を含む遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００１０】
一実施形態において、上記遺伝子改変された齧歯類は、上記ヒトＩＬ−７ゲノム配列の（上記ＩＬ−７遺伝子の転写の方向に関して）上流に第１の齧歯類調節配列および上記ヒトＩＬ−７ゲノム配列の下流に第２の齧歯類調節配列を含む。一実施形態において、上記第１の齧歯類調節配列は、齧歯類プロモーターおよび／もしくはエンハンサーを含み、上記第２の齧歯類調節配列は、３’−ＵＴＲを含む。
【００１１】
一実施形態において、上記齧歯類はマウスであり、マウスエキソン１およびヒトエキソン２、３、４、５、および６を有する内因性マウスＩＬ−７遺伝子遺伝子座を含む。一実施形態において、上記内因性マウスＩＬ−７遺伝子遺伝子座は、転写の方向に関して、上流から下流へと、マウスエキソン１、第１のマウスイントロンのうちの少なくとも一部、およびヒトエキソン２からヒトエキソン６までを含む連続するヒトゲノムフラグメントを含む。一実施形態において、上記マウスは、（ＩＬ−７遺伝子の転写の方向に関して）プロモーターおよび調節領域の上流に完全な内因性マウスＩＬ−７を含む内因性マウスＤＮＡの連続配列をさらに含み、ここで上記連続マウスＤＮＡは、ヒトゲノムフラグメントの上流にあり；ヒトゲノムフラグメントの下流に内因性マウスＤＮＡ  ３’−ＵＴＲの連続配列をさらに含む。
【００１２】
一実施形態において、上記マウスは、配列番号１、配列番号２、およびこれらの組み合わせから選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるマウス配列を含む。具体的実施形態において、上記マウスは、配列番号１および配列番号２から選択されるマウス配列を含む。
【００１３】
一局面において、改変された遺伝子座を形成するために、内因性マウスＩＬ−７ゲノム配列の内因性マウスＩＬ−７遺伝子座において、ヒトＩＬ−７ゲノム配列での置換を含む遺伝子改変されたマウスが提供され、ここで上記ヒトＩＬ−７ゲノム配列は、少なくとも１つのヒトエキソンを含み、上記改変された遺伝子座は、配列番号１、配列番号２、およびこれらの組み合わせの配列から選択されるマウス配列を含む。
【００１４】
一実施形態において、上記置換は、エキソン２から６までを含むヒトゲノムフラグメントを含み、上記ヒトゲノムフラグメントは、マウスエキソン１に連結されて、改変された内因性マウスＩＬ−７遺伝子座を形成し、ここで上記改変されたマウスＩＬ−７遺伝子座は、配列番号１、配列番号２、およびこれらの組み合わせから選択されるマウス配列を含む。
【００１５】
一局面において、齧歯類エキソン１および齧歯類イントロン１のうちの少なくとも一部、ならびにヒトＩＬ−７エキソン２、３、４、５、および６のヒトＩＬ−７遺伝子配列を含むＩＬ−７遺伝子を含む遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類は、齧歯類上流ＩＬ−７調節配列、齧歯類ＩＬ−７  ３’−ＵＴＲ、およびこれらの組み合わせから選択される配列を含む。
【００１６】
一局面において、配列番号１、配列番号２、およびこれらの組み合わせから選択される配列を含む遺伝子改変されたマウスが提供され；ここで上記マウスは、マウスＩＬ−７タンパク質のエキソン２から５までをコードする内因性配列を欠いており、上記マウスは、内因性マウスＩＬ−７遺伝子座においてヒトＩＬ−７エキソン２、３、４、５、および６をコードする核酸配列を含む。
【００１７】
一局面において、少なくとも１つのヒトＩＬ−７エキソンを発現するように改変されている内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座からヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する、遺伝子改変された齧歯類が提供される。一実施形態において、上記齧歯類ＩＬ−７遺伝子座は、少なくとも２つのヒトＩＬ−７エキソンを含む配列によってコードされるヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現するように改変されている。一実施形態において、上記齧歯類ＩＬ−７遺伝子座は、少なくとも３つのヒトＩＬ−７エキソンを含む配列によってコードされるヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現するように改変されている。一実施形態において、上記齧歯類ＩＬ−７遺伝子座は、少なくともヒトＩＬ−７エキソン２、３、４、５、および６（すなわち、２から６まで）を含む配列によってコードされるヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現するように改変されている。一実施形態において、上記齧歯類ＩＬ−７遺伝子座は、ヒトＩＬ−７タンパク質を発現するように改変されている。いくつかの特定の局面において、上記齧歯類ＩＬ−７遺伝子座は、ヒトＩＬ−７タンパク質（その配列は、図１に示されるとおりの遺伝子座によってコードされるタンパク質を示す）を発現するように改変されている。いくつかの特定の局面において、上記齧歯類ＩＬ−７遺伝子座は、ヒトＩＬ−７遺伝子のエキソン２〜６によってコードされる配列を含むヒトＩＬ−７タンパク質を発現するように改変されている。いくつかの特定の局面において、上記齧歯類ＩＬ−７遺伝子座は、配列番号３に示されるヒトＩＬ−７遺伝子のエキソン２〜６によってコードされる配列を含むヒトＩＬ−７タンパク質を発現するように改変されている。
【００１８】
一局面において、少なくともヒトＩＬ−７エキソン２から６までを、齧歯類ＩＬ−７エキソン２から５までの代わりに含むように改変されている内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座からヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供される。
【００１９】
一局面において、ヒト化内因性齧歯類ＩＬ−７コード領域を含むヒト化内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座からヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記ヒト化内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座は、野生型齧歯類ＩＬ−７コード領域の上流にある野生型齧歯類に存在する内因性齧歯類調節エレメント、および上記野生型齧歯類ＩＬ−７コード領域の下流にある内因性齧歯類調節エレメントの全てを含む。
【００２０】
一局面において、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質をコードする核酸配列の上流および下流に齧歯類調節領域を含むヒト化齧歯類ＩＬ−７遺伝子座からヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質は、野生型齧歯類において齧歯類ＩＬ−７タンパク質の発現パターンとほぼ同じ発現パターンで発現される。一実施形態において、上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７の血清発現のレベルは、野生型齧歯類における齧歯類ＩＬ−７タンパク質の血清発現のレベルとほぼ同じである。
【００２１】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類のリンパ球集団は、年齢を合わせた野生型マウスにおけるＢ細胞の集団と数がほぼ同じであるそのＢ細胞集団によって特徴付けられる。一実施形態において、上記改変された齧歯類は、年齢を合わせた野生型マウスにおける成熟Ｂ細胞の集団と数がほぼ同じである成熟Ｂ細胞の集団によって特徴付けられる。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−７タンパク質は、ヒトＩＬ−７タンパク質と同一である。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−７タンパク質は、ヒトＩＬ−７遺伝子のうちの少なくともエキソン２から６までによってコードされるヒト配列を含む。
【００２２】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類のリンパ球集団は、年齢を合わせた野生型マウスにおけるＴ細胞の集団と数がほぼ同じであるＴ細胞の集団によって特徴付けられる。一実施形態において、上記改変された齧歯類は、年齢を合わせた野生型マウスにおける成熟Ｔ細胞の集団と数がほぼ同じである成熟Ｔ細胞の集団を示す。一実施形態において、上記改変された齧歯類は、年齢を合わせた野生型マウスにおける末梢Ｔ細胞の集団と数がほぼ同じである末梢Ｔ細胞の集団を示す。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−７タンパク質は、ヒトＩＬ−７タンパク質と同一である。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−７タンパク質は、ヒトＩＬ−７遺伝子のうちの少なくともエキソン２から６までによってコードされるヒト配列を含む。
【００２３】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類のリンパ球集団は、年齢を合わせた野生型マウスのＴ細胞集団におけるＣＤ４：ＣＤ８比とほぼ同じであるＣＤ４：ＣＤ８比を示すＴ細胞集団によって特徴付けられる。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−７タンパク質は、ヒトＩＬ−７タンパク質と同一である。一実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−７タンパク質は、ヒトＩＬ−７遺伝子のうちの少なくともエキソン２から６までによってコードされるヒト配列を含む。
【００２４】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類は、慢性大腸炎を発生させる傾向の欠如；大腸粘膜リンパ球におけるＩＬ−７の過剰発現の欠如；大腸粘膜リンパ球におけるＩＬ−７の通常の、もしくは野生型の発現；重篤な皮膚炎の欠如；単核細胞の広範に及ぶ皮膚浸潤によって特徴付けられる皮膚炎がない；年齢を合わせた野生型マウスにおけるＣＤ４：ＣＤ８比とほぼ同じであるそのＴ細胞集団におけるＣＤ４：ＣＤ８比を示す；野性型マウスにおけるマウスＩＬ−７の発現パターンとほぼ同じであるヒトＩＬ−７の発現パターンを示す；およびこれらの組み合わせから選択される特徴を含む。
【００２５】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類は、慢性大腸炎を発生させる傾向がない。
【００２６】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類は、大腸粘膜リンパ球においてＩＬ−７の過剰発現を示さない。
【００２７】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類は、単核細胞の広範な皮膚浸潤によって特徴付けられる皮膚炎を示さない。
【００２８】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類は、皮膚へのリンパ球増殖を示さない。
【００２９】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類は、年齢を合わせた野生型マウスより高い頻度でＢ細胞および／もしくはＴ細胞リンパ球を示さない。
【００３０】
一局面において、ヒト化ＩＬ−７タンパク質もしくはヒトＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変されたマウスが提供され、ここで上記マウスは、野生型マウスが大腸炎、慢性大腸炎、重篤な皮膚炎、単核細胞による真皮の病的なおよび／もしくは広範な浸潤、真皮のリンパ球増殖、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、成熟Ｂ細胞および／もしくはＴ細胞の数の減少、末梢Ｂ細胞および／もしくはＴ細胞の数の減少、ＣＤ４＋  Ｔ細胞の異常な数、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の異常な数、ならびにこれらの組み合わせから選択される病態を発生させるほどの傾向にない。
【００３１】
いくつかの局面において、ヒトＩＬ−７タンパク質を発現する遺伝子改変されたマウスが提供され、上記ヒトＩＬ−７タンパク質の配列は、マウスＩＬ−７遺伝子配列の、ヒトＩＬ−７遺伝子配列での置換を示し、ここで上記ヒトＩＬ−７遺伝子配列は、ヒトＩＬ−７遺伝子のエキソン２〜６を含む。いくつかの特定の局面において、上記置換は、マウスＩＬ−７遺伝子のエキソン２〜５を含む配列の置換である。いくつかの特定の局面において、ヒトＩＬ−７遺伝子は、配列番号３を含む。いくつかの特定の局面において、上記ヒトＩＬ−７タンパク質の発現は、マウス調節エレメントの制御下にある。
【００３２】
いくつかの局面において、マウスＩＬ−７タンパク質を検出可能に発現しない遺伝子改変されたマウスが提供される。いくつかの特定の局面において、本明細書で記載されるとおりのマウスのゲノムは、マウスＩＬ−７遺伝子の全体もしくは一部の欠失を含む。いくつかの特定の局面において、本明細書で記載されるとおりのマウスのゲノムは、エキソン２〜５に対応する内因性ＩＬ−７遺伝子配列の欠失を含む。
【００３３】
一局面において、生殖細胞系列において、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子を形成するために、少なくとも１つの非ヒトＩＬ−７エキソンの、少なくとも１つのヒトＩＬ−７エキソンでの置換を含む遺伝子改変された非ヒト動物が提供され、ここで上記置換は、内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座にあり、ここで上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子は、内因性非ヒト調節エレメントの制御下にある。
【００３４】
一実施形態において、上記遺伝子改変された非ヒト動物は、齧歯類である。一実施形態において、上記齧歯類は、ラットおよびマウスから選択される。
【００３５】
一実施形態において、上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子は、ヒトエキソン１、ヒトエキソン２、ヒトエキソン３、ヒトエキソン４、ヒトエキソン５、ヒトエキソン６、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されるヒトエキソンを含む。一実施形態において、上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子は、５つ以下のヒトエキソンを含む。
【００３６】
一実施形態において、上記遺伝子改変された非ヒト動物は、マウスである齧歯類であり、上記改変された遺伝子座は、マウスエキソン２、３、４、および５の、ヒトＩＬ−７エキソン２、３、４、５、および６を含むヒトゲノムセグメントでの置換を含む。
【００３７】
一実施形態において、上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子は、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質をコードするｃＤＮＡを含む。
【００３８】
一局面において、生殖細胞系列に、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子をコードする核酸配列を含む導入遺伝子を含む遺伝子改変された非ヒト動物が提供され、ここで上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子は、内因性非ヒト調節配列と上流および下流で隣接する。
【００３９】
一実施形態において、上記遺伝子改変された非ヒト動物は、齧歯類である。一実施形態において、上記齧歯類は、マウス、ラット、およびハムスターからなる群より選択される。
【００４０】
一実施形態において、上記遺伝子改変された非ヒト動物は、ヒトエキソン１、ヒトエキソン２、ヒトエキソン３、ヒトエキソン４、ヒトエキソン５、ヒトエキソン６、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されるヒトエキソンを含む。一実施形態において、上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子は、少なくとも５つのヒトエキソンを含む。
【００４１】
一局面において、非ヒトエキソン１、ヒトエキソン２、ヒトエキソン３、ヒトエキソン４、ヒトエキソン５およびヒトエキソン６を含むヒト化ＩＬ−７遺伝子座が提供される。いくつかの特定の局面において、上記ヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、非ヒトエキソン１およびヒトエキソン６に隣接する５’および３’の非ヒト非翻訳領域をさらに含む。いくつかの特定の実施形態において、上記ヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、非ヒト３’非翻訳領域と連続する、３’ヒト非翻訳領域もしくはその一部を含む。いくつかの特定の局面において、上記ヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、５’非ヒト非翻訳領域もしくはその一部、およびヒトエキソン２と連続する非ヒトエキソン１を含む。いくつかの特定の局面において、ヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、図１に示される構造を含む。
【００４２】
一局面において、非ヒトＩＬ−７調節配列に作動可能に連結されたヒトＩＬ−７遺伝子のヒトエキソン２〜６を含むヒト化ＩＬ−７遺伝子座が提供される。いくつかの特定の局面において、本発明のヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、非ヒトＩＬ−７エキソン１を含む。いくつかの特定の局面において、本発明のヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、非ヒトＩＬ−７エキソン１および非ヒトＩＬ−７イントロン１を含む。いくつかの特定の実施形態において、本発明のヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、非ヒトＩＬ−７  ３’非翻訳領域もしくはとその一部と連続する３’ヒトＩＬ−７非翻訳領域もしくはその一部を含む。いくつかの特定の局面において、本発明のヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、５’非ヒト非翻訳領域もしくはその一部、およびヒトＩＬ−７エキソン２と連続する非ヒトエキソン１を含む。
【００４３】
一局面において、実質的にヒトであるＩＬ−７タンパク質をコードする配列を含むヒト化ＩＬ−７遺伝子座が提供される。いくつかの特定の局面において、本発明のヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、配列番号３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９８％同一である配列を含む。いくつかの特定の局面において、本発明のヒト化ＩＬ−７遺伝子座は、配列番号３を含む。いくつかの特定の局面において、本発明のＩＬ−７タンパク質は、配列番号３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９８％同一である配列によってコードされる。いくつかの特定の局面において、本発明のＩＬ−７タンパク質は、配列番号３によってコードされる。
【００４４】
一局面において、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子を有する非ヒト動物を作製するための方法が提供され、上記方法は、内因性非ヒトＩＬ−７調節配列と上流および下流で隣接するヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子を含むように上記非ヒト動物の生殖細胞系列を改変する工程を包含する。
【００４５】
上記方法の一実施形態において、上記改変は、内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座にある。
【００４６】
上記方法の一実施形態において、上記非ヒト動物は、齧歯類である。一実施形態において、上記齧歯類は、マウス、ラット、およびハムスターからなる群より選択される。
【００４７】
一局面において、同じ属および種の野生型非ヒト動物について観察されるのと同じ発現パターンである発現パターンにおいてヒトＩＬ−７を発現するように遺伝子改変されている、遺伝子改変された非ヒト動物が提供される。一実施形態において、上記非ヒト動物は、齧歯類である。具体的実施形態において、上記齧歯類は、マウスおよびラットから選択される。
【００４８】
一実施形態において、上記非ヒト動物において発現されるヒトＩＬ−７のレベルは、対応する野生型マウスにおける非ヒトＩＬ−７のレベルとほぼ同じである。一実施形態において、上記非ヒト動物は、齧歯類である。具体的実施形態において、上記齧歯類は、マウスおよびラットから選択される。
【００４９】
一局面において、転写の方向に関して、５’から３’へと、マウスＩＬ−７  ５’非コード配列に相同な核酸配列、ヒトＩＬ−７タンパク質をコードするが上記ヒトＩＬ−７タンパク質をコードする配列の上流にも下流にもヒト調節配列を含まないヒトゲノムフラグメント、およびマウスＩＬ−７  ３’非コード配列に相同な核酸配列を含むＤＮＡ構築物が提供される。
【００５０】
一局面において、転写の方向に関して、５’から３’へと、マウスＩＬ−７エキソン１配列に相同な領域を含む核酸配列、ヒトＩＬ−７タンパク質をコードするが上記ヒトＩＬ−７タンパク質をコードする配列の上流にも下流にもヒト調節配列を含まないヒトゲノムフラグメント、およびマウスＩＬ−７  ３’非コード配列に相同な核酸配列を含むＤＮＡ構築物が提供される。
【００５１】
一局面において、遺伝子改変された齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類は、本明細書で記載されるとおりのＤＮＡ構築物を含む。
【００５２】
一局面において、ヒトＩＬ−７タンパク質を発現する齧歯類もしくは齧歯類細胞を作製するための本明細書で記載されるとおりのＤＮＡ構築物の使用が提供される。いくつかの特定の局面において、上記齧歯類もしくは齧歯類細胞は、齧歯類ＩＬ−７タンパク質を検出可能に発現しない。
【００５３】
一局面において、遺伝子改変された齧歯類細胞が提供され、ここで上記齧歯類細胞は、齧歯類ＩＬ−７をコードする遺伝子配列の内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座の、ヒトＩＬ−７をコードするヒトゲノム配列での置換を含む。いくつかの特定の局面において、上記置換は、本明細書で記載されるとおりのＤＮＡ構築物で行われる。いくつかの特定の局面において、上記齧歯類細胞は、ラット細胞である。いくつかの特定の局面において、上記齧歯類細胞は、マウス細胞である。
【００５４】
一実施形態において、上記ヒトゲノム配列は、ヒトＩＬ−７エキソン２からヒトＩＬ−７エキソン６までにわたる連続するヒト核酸配列を含む。
【００５５】
一実施形態において、上記遺伝子改変された齧歯類は、内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座においてマウスＩＬ−７プロモーターを含む。
【００５６】
一実施形態において、上記細胞は、多能性細胞、人工多能性細胞、全能性細胞、ＥＳ細胞、および卵細胞から選択される。
【００５７】
一実施形態において、上記細胞は、ヒトＩＬ−７を分泌する。一実施形態において、ヒトＩＬ−７を分泌する上記細胞は、上皮細胞（例えば、腸上皮細胞）、肝細胞、ケラチノサイト、樹状細胞、および濾胞樹状細胞から選択される。一実施形態において、上記齧歯類細胞は、骨髄樹状細胞である。一実施形態において、ヒトＩＬ−７を分泌する上記細胞は、胸腺間質細胞であり；具体的実施形態において、上記胸腺間質細胞は、皮質上皮細胞である。
【００５８】
一局面において、齧歯類胚が提供され、ここで上記胚は、内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座における、内因性齧歯類ＩＬ−７コード核酸配列の、ヒトＩＬ−７をコードする核酸配列での置換を含む少なくとも１つの齧歯類ドナー細胞（例えば、ＥＳ細胞、多能性細胞、全能性細胞など）を含む。一実施形態において、上記ドナー細胞は、マウスＥＳ細胞であり、上記胚は、プレ桑実胚（ｐｒｅ−ｍｏｒｕｌａ）、桑実胚、もしくは胚盤胞である宿主マウス胚である。
【００５９】
一局面において、内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座においてヒト化ＩＬ−７遺伝子を含む齧歯類組織が提供され、ここで上記齧歯類組織は、胸腺組織、脾臓組織、表皮組織、および腸組織から選択される。
【００６０】
一局面において、ヒトＩＬ−７をコードするＤＮＡ配列を含む遺伝子改変されたマウスが提供され、ここで上記マウスは、マウスＩＬ−７を発現せず、野生型マウスのＴ細胞集団とほぼ同じサイズであるＴ細胞集団を示す。
【００６１】
一実施形態において、上記マウスは、野生型マウスの末梢Ｔ細胞集団とほぼ同じサイズである末梢Ｔ細胞集団を示す。
【００６２】
一実施形態において、上記Ｔ細胞集団は、マウスＴ細胞集団である。
【００６３】
一実施形態において、上記マウスは、野生型マウスほどプロＢ細胞もしくはプレＢ細胞を含むＢ細胞腫瘍を発生させる傾向が高くない。
【００６４】
一実施形態において、上記マウスは、野生型マウスほどリンパ系腫瘍を発生させる傾向が高くない。
【００６５】
一実施形態において、上記マウスは、既知のリンパ球増殖の原因因子の非存在下でリンパ球増殖障害を示さない。
【００６６】
一実施形態において、上記マウスは、皮膚層におけるＴ細胞の病的浸潤を示さない。一実施形態において、上記マウスは、脱毛症の症状を示さない。
【００６７】
一実施形態において、上記遺伝子改変されたマウスのＴ細胞の大部分は、年齢を合わせた野生型マウスにおけるものとほぼ同じサイズ分布にある。具体的実施形態において、上記遺伝子改変されたマウスは、Ｔ細胞の拡大を示さない。
【００６８】
一局面において、内因性の改変された齧歯類ＩＬ−７遺伝子座からヒト化もしくはヒトＩＬ−７タンパク質を発現する齧歯類が提供され、ここで上記齧歯類におけるヒトＩＬ−７の血清濃度は、生理学的に正常である。
【００６９】
一局面において、生理学的に正常な濃度で上記齧歯類の血清中にヒト化ＩＬ−７遺伝子を発現するヒト化齧歯類が提供される。
【００７０】
一実施形態において、上記齧歯類は、マウスおよびラットから選択される。
【００７１】
一実施形態において、ヒトＩＬ−７の生理学的に正常な血清濃度は、１０ピコグラム／ｍＬ未満である。一実施形態において、ヒトＩＬ−７の生理学的に正常な血清濃度は、５ピコグラム／ｍＬ未満である。一実施形態において、上記齧歯類におけるヒトＩＬ−７の生理学的に正常な血清濃度は、約２ピコグラム／ｍＬ〜約４ピコグラム／ｍＬである。一実施形態において、上記齧歯類血清におけるヒトＩＬ−７の生理学的に正常な血清濃度は、約２．４ピコグラム／ｍＬ〜約３．２ピコグラム／ｍＬである。
【００７２】
一局面において、ヒトＩＬ−７タンパク質を作製するための方法が提供され、上記方法は、上記非ヒト動物の生殖細胞系列に、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子を内因性非ヒト調節エレメントの制御下で挿入する工程、上記非ヒト動物に上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７を作らせる工程、および上記非ヒト動物（例えば、哺乳動物、例えば、齧歯類（例えば、マウスもしくはラットもしくはハムスター））から、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７を単離する工程を包含する。
【００７３】
一局面において、ヒトＩＬ−７タンパク質を作製するための方法が提供され、上記方法は、本明細書で記載されるとおりの非ヒト動物（例えば、哺乳動物、例えば、齧歯類（例えば、マウスもしくはラットもしくはハムスター））から単離する工程を包含する。
【００７４】
一局面において、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子を生殖細胞系列に含む非ヒト動物を作製するための方法が提供され、上記方法は、上記非ヒト動物の生殖細胞系列に、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード核酸配列もしくはそのフラグメントを挿入する工程であって、ここで上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード核酸配列またはそのフラグメントは、内因性非ヒト調節エレメントの調節制御下にある、工程を包含する。一実施形態において、上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子は、内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座（すなわち、内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座における上流および下流の非ヒト調節エレメントの間に挿入され、ここで上記ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード核酸配列は、上記野生型の既存の非ヒトＩＬ−７コード配列と全体的もしくは部分的に置き換わっている）にある。一実施形態において、上記非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、齧歯類である。一実施形態において、上記齧歯類は、マウス、ラット、およびハムスターから選択される。
【００７５】
一局面において、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７遺伝子を含む非ヒト動物を作製するための方法が提供され、上記方法は、ヒトＩＬ−７遺伝子のエキソン２〜６を含むＤＮＡ構築物を、非ヒト細胞の内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子の中に挿入する工程を包含する。
【００７６】
一局面において、非ヒト動物から、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７タンパク質に曝されたＴ細胞を単離するための方法が提供され、上記方法は、本明細書で記載されるとおりの非ヒト動物からＴ細胞を単離する工程を包含する。一実施形態において、上記非ヒト動物は、マウスもしくはラットである。一実施形態において、上記Ｔ細胞は、非ヒトＴ細胞、例えば、齧歯類Ｔ細胞、例えば、マウスもしくはラットのＴ細胞である。一実施形態において、上記Ｔ細胞は、胸腺にあるＴ細胞および末梢Ｔ細胞から選択される。
【００７７】
一局面において、ヒトＩＬ−７のアンタゴニストである薬剤を同定するための方法が提供され、上記方法は、本明細書で記載されるとおりの遺伝子改変された齧歯類にある薬剤を投与する工程、上記齧歯類におけるヒトＩＬ−７媒介性機能に対する上記薬剤の効果を決定する工程、および上記薬剤が上記遺伝子改変された齧歯類におけるヒトＩＬ−７の機能に拮抗する場合、上記薬剤をＩＬ−７アンタゴニストとして同定する工程を包含する。
【００７８】
一局面において、ヒトＩＬ−７のアンタゴニストである薬剤を同定するための、本明細書で記載されるとおりの遺伝子改変された齧歯類の使用が提供され、上記使用は、上記遺伝子改変された齧歯類にある薬剤を投与し、上記齧歯類におけるヒトＩＬ−７媒介性機能に対する上記薬剤の効果を決定し、そして上記薬剤が上記遺伝子改変された齧歯類におけるヒトＩＬ−７の機能に拮抗する場合、上記薬剤をＩＬ−７アンタゴニストとして同定することを含む。
【００７９】
一実施形態において、上記薬剤は、ＩＬ−７に結合する免疫グロブリン可変ドメインを含む。一実施形態において、上記薬剤は、ヒトＩＬ−７に特異的に結合するが、齧歯類ＩＬ−７には結合しない。一実施形態において、上記薬剤は抗体である。
【００８０】
一局面において、ある薬剤がＩＬ−７媒介性末梢Ｔ細胞集団を減少させるか否かを決定するための方法が提供され、上記方法は、本明細書で記載されるとおりの遺伝子改変された齧歯類に、ＩＬ−７アンタゴニストを一定期間にわたって投与する工程、上記齧歯類の末梢Ｔ細胞集団数を、投与後１もしくは複数の期間にわたって測定する工程、および上記ＩＬ−７アンタゴニストが上記末梢Ｔ細胞集団を減少させるか否かを決定する工程を包含する。
【００８１】
一局面において、ある薬剤がＩＬ−７媒介性末梢Ｔ細胞集団を減少させるか否かを決定するための、本明細書で記載されるとおりの遺伝子改変された齧歯類の使用が提供され、上記使用は、上記遺伝子改変された齧歯類にＩＬ−７アンタゴニストを一定期間にわたって投与し、上記齧歯類の末梢Ｔ細胞集団数を、投与後の１もしくは複数の期間で測定し、上記ＩＬ−７アンタゴニストが上記末梢Ｔ細胞集団を減少させるか否かを決定することを含む。
【００８２】
一局面において、上記遺伝子改変された非ヒト動物は、ヒトもしくはヒト化ＩＬ−７コード遺伝子に関してヘテロ接合性である。一実施形態において、上記非ヒト動物は、内因性ＩＬ−７タンパク質を発現できない。具体的実施形態において、上記非ヒト動物は、両方の内因性ＩＬ−７対立遺伝子のノックアウトを含む。
【００８３】
上記および以下の局面および実施形態の各々は、別段述べられなければ、そしてそうでないことが文脈から別段明らかにならなければ、一緒に使用されてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】図１は、野生型マウスＩＬ７遺伝子遺伝子座（上）およびヒト化内因性マウスＩＬ−７遺伝子座（下）の模式図を示す（正確な縮尺ではない）。白抜きの記号は、ヒト配列を示す；塗りつぶしの記号は、マウス配列を示す；陰付きのものは、非翻訳領域を示す；点描付きの領域は、他の配列を示す。
【００８５】
【図２】図２は、７５％  Ｃ５７Ｂ６および２５％  １２９／ＳｖＪ（７５／２５  ＷＴ）という遺伝子的バックグラウンドを有する野生型マウスおよび本明細書で記載されるとおりのヒト化内因性ＩＬ−７遺伝子座に関してヘテロ接合性のマウス（５１４８  Ｈｅｔ）の血清中のヒトＩＬ−７濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００８６】
（詳細な説明）
種々の実施形態において、本明細書で記載される遺伝子改変を含む非ヒト動物が、記載される。上記遺伝子改変された非ヒト動物は、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ（例えば、雌牛、雄牛、水牛）、シカ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、ネコ、イヌ、フェレット、霊長類（例えば、マーモセット、アカゲザル）からなる群より選択され得る。適切な遺伝子改変可能なＥＳ細胞が、容易に入手できない非ヒト動物に関しては、遺伝子改変を含む非ヒト動物を作製するために、他の方法が使用される。このような方法としては、例えば、非ＥＳ細胞ゲノム（例えば、線維芽細胞もしくは人工多能性細胞）を改変すること、および改変されたゲノムを適切な細胞（例えば、卵母細胞）に移入するために核移植を使用すること、および上記改変された細胞（例えば、改変された卵母細胞）を適切な条件下で非ヒト動物の中で懐胎させて、胚を形成することが挙げられる。
【００８７】
一局面において、上記非ヒト動物は、哺乳動物である。一局面において、上記非ヒト動物は、例えば、トビネズミ上科（ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  Ｄｉｐｏｄｏｉｄｅａ）もしくはネズミ上科（ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  Ｍｕｒｏｉｄｅａ）の小型哺乳動物である。一実施形態において、上記遺伝子改変された動物は、齧歯類である。一実施形態において、上記齧歯類は、マウス、ラット、およびハムスターから選択される。一実施形態において、上記齧歯類は、ネズミ上科から選択される。一実施形態において、上記遺伝子改変された動物は、カンガルーハムスター科（Ｃａｌｏｍｙｓｃｉｄａｅ）（例えば、マウス様ハムスター）、キヌゲネズミ（Ｃｒｉｃｅｔｉｄａｅ）（例えば、ハムスター、新世界ラットおよびマウス（Ｎｅｗ  Ｗｏｒｌｄ  ｒａｔ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ）、ハタネズミ）、ネズミ科（Ｍｕｒｉｄａｅ）（本来の（ｔｒｕｅ）マウスおよびラット、アレチネズミ、トゲマウス、タテガミネズミ）、アシナガマウス科（Ｎｅｓｏｍｙｉｄａｅ）（キノボリネズミ（ｃｌｉｍｂｉｎｇ  ｍｉｃｅ）、イワマウス（ｒｏｃｋ  ｍｉｃｅ）、有尾ラット（ｗｉｔｈ−ｔａｉｌｅｄ  ｒａｔ），マダガスカルラットおよびマウス（Ｍａｌａｇａｓｙ  ｒａｔ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ））、トゲヤマネ科（Ｐｌａｔａｃａｎｔｈｏｍｙｉｄａｅ）（例えば、トゲヤマネ）、およびネクラネズミ科（Ｓｐａｌａｃｉｄａｅ）（例えば、デバネズミ（ｍｏｌｅ  ｒａｔｅｓ）、タケネズミ、およびモグラネズミ）から選択される科に由来する。具体的実施形態において、上記遺伝子改変された齧歯類は、本来のマウスもしくはラット（ネズミ科）、アレチネズミ、トゲマウス、およびタテガミネズミから選択される。一実施形態において、上記遺伝子改変されたマウスは、ネズミ科のメンバーに由来する。一実施形態において、上記動物は、齧歯類である。具体的実施形態において、上記齧歯類は、マウスおよびラットから選択される。一実施形態において、上記非ヒト動物は、マウスである。
【００８８】
種々の実施形態において、上記非ヒト動物は、Ｃ５７ＢＬ／Ａ、Ｃ５７ＢＬ／Ａｎ、Ｃ５７ＢＬ／ＧｒＦａ、Ｃ５７ＢＬ／ＫａＬｗＮ、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｃ５７ＢＬ／６ＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＪ、Ｃ５７ＢＬ／１０、Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｃｒ、およびＣ５７ＢＬ／Ｏｌａから選択されるＣ５７ＢＬ系統のマウスである齧歯類である。別の実施形態において、上記マウスは、１２９Ｐ１、１２９Ｐ２、１２９Ｐ３、１２９Ｘ１、１２９Ｓ１（例えば、１２９Ｓ１／ＳＶ、１２９Ｓ１／ＳｖＩｍ）、１２９Ｓ２、１２９Ｓ４、１２９Ｓ５、１２９Ｓ９／ＳｖＥｖＨ、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）、１２９Ｓ７、１２９Ｓ８、１２９Ｔ１、１２９Ｔ２（例えば、Ｆｅｓｔｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｒｅｖｉｓｅｄ  ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｆｏｒ  ｓｔｒａｉｎ  １２９  ｍｉｃｅ，  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  １０：８３６を参照のこと。Ａｕｅｒｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ  （２０００）  Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｃｈｉｍｅｒａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  １２９／ＳｖＥｖ−  ａｎｄ  Ｃ５７ＢＬ／６−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓもまた参照のこと）である系統からなる群より選択される１２９系統である。具体的実施形態において、上記遺伝子改変されたマウスは、前述の１２９系統および前述のＣ５７ＢＬ／６系統とを交配したもの（ｍｉｘ）である。別の具体的実施形態において、上記マウスは、前述の１２９系統を交配したもの、もしくは前述のＢＬ／６系統を交配したものである。具体的実施形態において、上記交配したもののうちの１２９系統は、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）系統である。別の実施形態において、上記マウスは、ＢＡＬＢ系統（例えば、ＢＡＬＢ／ｃ系統）である。一実施形態において、上記マウスは、ＢＡＬＢ系統と別の前述の系統とを交配したものである。
【００８９】
一実施形態において、上記非ヒト動物は、ラットである。一実施形態において、上記ラットは、ウィスターラット、ＬＥＡ系統、スプラーグドーリー系統、フィッシャー系統、Ｆ３４４、Ｆ６、およびダークアグーチ（Ｄａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉ）から選択される。一実施形態において、上記ラット系統は、ウィスター、ＬＥＡ、スプラーグドーリー、フィッシャー、Ｆ３４４、Ｆ６、およびダークアグーチからなる群より選択される２つ以上系統を交配したものである。
【００９０】
非ヒトＩＬ−７遺伝子配列の、ヒトＩＬ−７遺伝子配列での置換を含む遺伝子改変された非ヒト動物が提供される。内因性齧歯類ＩＬ−７遺伝子座において、ＩＬ−７遺伝子のヒト化を含む齧歯類が提供される。内因性ＩＬ−７遺伝子座において、内因性ＩＬ−７遺伝子もしくはそのフラグメント（例えば、１もしくは複数のエキソンを含むフラグメント）の、ヒト化ＩＬ−７遺伝子もしくはそのフラグメント（例えば、１もしくは複数のエキソンを含むフラグメント）での置換を含む齧歯類（例えば、マウス）を作製するための方法。ヒト化遺伝子を含む細胞、組織、およびマウスが提供され、内因性非ヒトＩＬ−７遺伝子座からヒトＩＬ−７を発現する細胞、組織およびマウスもまた提供される。本発明のヒト化ＩＬ−７遺伝子の例示的な隣接ゲノム配列は、配列番号１（５’隣接配列）および配列番号２（３’隣接配列）に提供される。本発明の例示的ヒトＩＬ−７遺伝子は、配列番号３に提供される。
【００９１】
ＩＬ−７は、未成熟のＢ細胞およびＴ細胞の発生に必須であり、ある程度までは、成熟Ｔ細胞に必須なサイトカインである；ＩＬ−７ノックアウトマウスは、成熟したＢ細胞およびＴ細胞の重篤な欠乏を示す（ｖｏｎ  Ｆｒｅｅｄｅｎ−Ｊｅｆｆｒｙ  Ｕ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｌｙｍｐｈｏｐｅｎｉａ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  （ＩＬ）−７  ｇｅｎｅ−ｄｅｌｅｔｅｄ  ｍｉｃｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ＩＬ−７  ａｓ  ａ  ｎｏｎｒｅｄｕｎｄａｎｔ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８１  ：  １５１９−１５２６）。上記欠乏は、プロＢ細胞とプレＢ細胞との間の遮断、およびＴ細胞および成熟Ｂ細胞の抑制された集団を生じるＴ細胞増殖における遮断（Ｔ細胞分化における遮断よりむしろ；ＩＬ−７  ＫＯマウスにおけるＴ細胞型の比は、ほぼ正常である）に明らかに起因している（同文献）。ＩＬ−７は、胸腺および腸における上皮細胞によって、ケラチノサイト、肝臓および樹状細胞において産生されるが、通常のリンパ球によっては産生されない（例えば、Ｆｒｙ  Ｔ．Ｊ．  ａｎｄ  Ｍａｃｋａｌｌ，  Ｃ．Ｌ．  （２００２）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７：  ｆｒｏｍ  ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  ｃｌｉｎｉｃ，  Ｂｌｏｏｄ  ９９（１１）：３８９２−３９０４で総説されている）。
【００９２】
簡潔に言うと、ＩＬ−７は、Ｔ細胞数を増大させ、Ｔ細胞機能を高める（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，  Ｊ．Ｊ．  （１９９１）  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−７  ｔｏ  ｎｏｒｍａｌ  ｍｉｃｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｌｙｍｐｈａｄｅｎｏｐａｔｈｙ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７：５６１−５６８；  Ｆａｌｔｙｎｅｋ，  Ｃ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＩＬ−７  ｔｏ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  ｍｉｃｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  ｎｕｍｂｅｒｓ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｓｏｍｅ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｉｎｅａｇｅ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４９：  １２７６−１２８２；  Ｒｉｓｄｏｎ，  Ｇ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ａｌｌｅｇｅｎｉｃ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，  Ｃｅｌｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４：  １４−２４を参照のこと）。Ｔ細胞の機能増強は、短期間のＩＬ−７曝露によって達成され得るのに対して、Ｔ細胞数の増大は、より長期間の曝露で達成される増殖効果を反映する（Ｇｅｉｓｅｌｈａｒｔ，  Ｌ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  ＩＬ−７  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ａｌｔｅｒｓ  ｔｈｅ  ＣＤ４：ＣＤ８  Ｒａｔｉｏ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｎｕｍｂｅｒｓ，  ａｎｄ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６：３０１９−３０２７；Ｔａｎ  Ｊ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  ＩＬ−７  ｉｓ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｎａｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９８（１５）：８７３２−８７３７もまた参照のこと）。
【００９３】
ＩＬ−７は、初期および後期両方のＴ細胞調節に必要である。ＩＬ−７は、Ｔ細胞によって発現されず、よって上記Ｔ細胞は、末梢にある非胸腺細胞によって放出され、末梢Ｔ細胞増殖および維持を担うと考えられるＩＬ−７に遭遇せねばならない（例えば、Ｇｕｉｍｏｎｄ，  Ｍ  （２００５）  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｓｉｇｎａｌｓ  ｉｎ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ２８（４）：２８９−２９４に総説されている）。ＩＬ−７枯渇は、激しく損なわれたＴ細胞発生およびナイーブＴ細胞の生存を生じる。ＩＬ−７はまた、成熟Ｔ細胞の生存に必須なようである；ＩＬ−７欠損マウスへの養子移入（ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）を介して獲得した成熟Ｔ細胞は、アポトーシスに入ってしまう（ここで上記マウスは、ＩＬ−７遺伝子を欠く）が、ＩＬ−７を発現し、ＩＬ−７Ｒ遺伝子を欠いているマウスにおいてはそうでない（Ｓｃｈｌｕｎｓ，  Ｋ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｏｆ  ｎａｉｖｅ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，  Ｎａｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １（５）：４２６−４３２．  Ｌｏｓｓ  ｏｆ  ＩＬ−７  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ａ  ＳＣＩＤ−ｌｉｋｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  （Ｐｕｅｌ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｌｅｏｎａｒｄ，  Ｗ．Ｊ．  （２０００）  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ＩＬ−７  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｓｕｌｔ  ｉｎ  Ｔ（−）Ｂ（＋）ＮＫ（＋）  ｓｅｖｅｒｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２：４６８−４７３）。このことは、Ｔ細胞減退（Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｔｒｏｐｈｙ）および細胞死（ＩＬ−７刺激の非存在下での不十分な解糖によっておそらく媒介される増殖率の低下によって引き起こされる）におそらく起因する（Ｊａｃｏｂｓ，  Ｓ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  ＩＬ−７  Ｉｓ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １８４：３４６１−３４６９）。
【００９４】
上記ヒトＩＬ−７遺伝子は、３３ｋｂを超えて伸びる６つのエキソンを含み、第８染色体上の８ｑ１２−１３に位置する。マウスＩＬ−７は、５つのエキソン（ヒトエキソン５に対応するものは、マウスにはない）を含み、ヒト遺伝子に対して約８０％相同であり；ヒトおよびマウス遺伝子の非コード配列の分析から、転写および遺伝子発現の調節を担う認識可能な調節モチーフが不十分であることが明らかになった（Ｌｕｐｔｏｎ，  Ｓ．Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  Ｍｕｒｉｎｅ  ＩＬ−７  Ｇｅｎｅｓ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４４（９）：３５９２−３６０１）。このことは、ＩＬ−７発現の調節が複雑であり得ることを示唆している。しかし、ｈＩＬ−７遺伝子座においてレポーター遺伝子を含むマウスＢＡＣフラグメントは、マウスでのＩＬ−７の発現パターンを首尾よく確認するために、マウスで発現された（例えば、Ａｖｌｅｓ，  Ｎ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｙｍｉｃ  ＩＬ−７  ｎｉｃｈｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０６（５）：  １５１２−１５１７；  Ｍａｚｚｕｃｃｈｅｌｌｉ，  Ｒ．Ｉ．  （２００９）  Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−７  Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｍｉｃｅ，  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ４（１１）：ｅ７６３７；  Ｒｅｐａｓ，  Ｊ．Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  ＩＬ７−ｈＣＤ２５  ａｎｄ  ＩＬ７−Ｃｒｅ  ＢＡＣ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｌｉｎｅｓ：  ｎｅｗ  ｔｏｏｌｓ  ｆｏｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＩＬ−７  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ，  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ４７：２８１−２８７を参照のこと）。少なくとも１例において、ＩＬ−７エキソンの、レポーターでのＢＡＣベースの置換は、野生型マウスのＩＬ−７発現を忠実に反復するということを期待して、４３ｋｂ  ＩＬ−７遺伝子座全体、ならびに５’隣接配列のうちの９６ｋｂおよび３’隣接配列のうちの１７ｋｂを要した（Ｒｅｐａｓｓ，  Ｊ．Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．（２００９））。いずれの場合にも、推定ＩＬ−７調節エレメントによって駆動されるレポーター発現に関する種々の研究からのデータは、互いに幾分か、および初期の観察と異なっている。このことは、ＩＬ−７調節がこれらレポーターマウスにおいて忠実には反復されなかった可能性があるという推論を裏付けている（ＩＬ−７レポータートランスジェニックマウスは、Ｋｉｍ，  Ｇ．Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｓｅｅｉｎｇ  Ｉｓ  Ｂｅｌｉｅｖｉｎｇ：  Ｉｌｌｕｍｉｎａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７，  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  １１（１）：  １−１０において総説されている）。ヒトＩＬ−７は、マウス細胞に対して機能的であるが、マウスＩＬ−７は、ヒト細胞に対しては機能的でない。
【００９５】
異常に調節されたかもしくは不十分に調節されたヒトＩＬ−７を発現するトランスジェニックマウスは、病態もしくは症候群の数々を示す。（リンパ系区画における発現を標的化するために）マウスＩｇ重鎖エンハンサー、κ軽鎖エンハンサー、および軽鎖プロモーターの制御下にあるマウスＩＬ−７  ｃＤＮＡに対してトランスジェニックなマウスは、Ｂ細胞前駆体の有意に増強された数、ならびに胸腺および末梢Ｔ細胞における胸腺細胞の全てのサブセットの発現全体を示す（Ｓａｍａｒｉｄｉｓ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ７−ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２１  ：４５３−４６０）。
【００９６】
ＳＲαプロモーターの制御下にあるマウスｃＤＮＡからＩＬ−７を発現するトランスジェニックマウスは、ヒトの慢性大腸炎を組織病理学的に摸倣する慢性大腸炎を含む数々の病態を発生させ、大腸粘膜リンパ球（しかし大腸上皮細胞ではない）におけるＩＬ−７の少なくとも一過性の過剰発現および大腸粘膜の杯細胞の粘液中の明らかなその蓄積によって特徴付けられる（Ｗａｔａｎａｂｅ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ７  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｍｉｃｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｃｏｌｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ７  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｏｌｏｎｉｃ  Ｍｕｃｏｓａ，  Ｊ．  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １８７（３）：３８９−４０２；  Ｔａｋｅｂｅ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  ｓＲ  ａｌｐｈａ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ：  ａｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｎｄ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃＤＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ  ｃｏｍｐｏｓｅｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｉｍｉａｎ  ｖｉｒｕｓ  ４０  ｅａｒｌｙ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｒ−Ｕ５  ｓｅｇｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｐｅａｔ，  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ８（１）：４６６−４７２）。トランスジェニックマウスにおける同じプロモーターによって駆動されるマウスＩＬ−７の構成的発現はまた、著しい奇形および単核細胞（大部分がＴＣＲγ∂細胞である）の広範な皮膚浸潤によって特徴付けられる重篤な皮膚炎を発生させる（Ｕｅｈｉｒａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｄ  ｂｙ  γ∂  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＩＬ−７  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ，  Ｉｎｔｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５（１２）：  １６１９−１６２７）。マウス重鎖プロモーターおよびエンハンサーによって駆動されるマウスＩＬ−７  ｃＤＮＡを発現するトランスジェニックマウスはまた、皮膚炎および真皮へのリンパ球増殖、しかし報告によれば、ＴＣＲαβ細胞およびＴｈｙ−１、ＣＤ３、およびＣＤ５を発現するが、ＣＤ４およびＣＤ８を欠いている細胞（ＣＤ４＋／ＣＤ８＋胸腺細胞は、これらトランスジェニックマウスには実質的にない）の増殖を示した；これらマウスはまた、これらマウスで観察された長期のリンパ球増殖とおそらく関連するＢ細胞リンパ腫およびＴ細胞リンパ腫を発生させた（Ｒｉｃｈ，  Ｂ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ７  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７７：３０５−３１６を参照のこと）。
【００９７】
ＩＬ−７遺伝子の調節異常は、種々の病的状態と関連する。ＭＨＣクラスＩＩ  Ｅαプロモーターの制御下でトランスジェニックマウスＩＬ−７を発現するマウスは、リンパ系腫瘍に非常に罹りやすい（例えば、Ｆｉｓｈｅｒ，  Ａ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｉｎ  ＩＬ−７  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ：  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｗｈｉｃｈ  ｒｅｔａｉｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ，  Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７（３）：４１４−４２３を参照のこと；Ｃｅｒｅｄｉｇ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｅｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ＩＬ−７  ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｍｕｔａｔｅｄ  ｐｒｅ−Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２９（９）：２７９７−２８０７もまた参照のこと）。Ｔ細胞サイズはまた、上記トランスジェニックマウスにおいてより大きく、ポリクローナルＴ細胞増殖が観察される（主に、ＣＤ８＋、これらマウスにおいて調節が乱されていることを示す）（Ｍｅｒｔｓｃｈｉｎｇ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  ＩＬ−７  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ：  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＩＬ−７  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，  Ｉｎｔｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７（３）：４０１−４１４）。上記ＭＨＣクラスＩＩ  Ｅαプロモーターを介してｍＩＬ−７を（約２５〜５０倍）過剰発現する他のトランスジェニックマウスは、非常に健康にみえ（Ｂ細胞腫瘍の低い発生率がなければ）、多数のＣＤ８＋細胞（これらは、ＣＤ４４ｈｉおよびＣＤ１２２ｈｉでもある）によって特徴付けられる野生型マウスよりＴ細胞数の１０〜２０倍の増大を示す（Ｋｉｅｐｅｒ  Ｗ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  （ＩＬ）−７  Ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ＩＬ−  １５  −ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｍｏｒｙ  Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ＣＤ８＋  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １９５（１２）：  １５３３−１５３９）。
【００９８】
上記ＭＨＣクラスＩＩ  Ｅαプロモーターの制御下にあるｃＤＮＡからマウスＩＬ−７を構成的に発現するマウスは、ＩＬ−７応答性初期Ｂ細胞を選択的に増殖させ、プロＢ細胞およびプレＢ細胞を含むよい腫瘍源である。ヒトＫ１４プロモーターによって駆動されるＩＬ−７を発現するマウスは、脱毛症に似た皮膚のＴ細胞浸潤を生じるリンパ球増殖応答を発生させる。
【００９９】
ＩＬ−７Ｒに対してトランスジェニックなマウスは、おそらく、トランスジェニックマウスにおける多数の二重陽性胸腺細胞によるＩＬ−７の欠乏に起因して、胸腺において二重陰性（ＣＤ４−  ＣＤ８−）前駆細胞のかなりの低下を示す。このことは、ＩＬ−７レベルが通常の胸腺細胞発生を促進するために繊細に制御されねばならないことを示唆する（例えば、Ｍａｌｅｋ，  Ｔ．Ｒ．  （２００４）  ＩＬ−７：  ａ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｒｅｓｏｕｒｃｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｙｍｏｐｏｉｅｓｉｓ，  Ｂｌｏｏｄ，  １０４（１３）：２８４２を参照のこと）。
【０１００】
ヒトＩＬ−７のクローニング程度に早く、ヒトＩＬ−７は、マウスプレＢ細胞の増殖を誘導し得ることが公知であった（Ｇｏｏｄｗｉｎ，  Ｒ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ７：  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｕｒｉｎｅ  Ｂ−ｌｉｎｅａｇｅ  ｌｉｎｅｓ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：３０２−３０６）。特定の慢性リンパ性白血病細胞において発現されるものの、マウスに移植された腫瘍細胞におけるマウスＩＬ−７の発現は、炎症および腫瘍原性の低下を誘導する。しかし逆説的なことには、ＩＬ−７に対してトランスジェニックなマウスは、リンパ腫に罹りやすい（Ｆｏｓｓ，  Ｈ．−Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｆｒｅｑｕｅｎｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−７  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  Ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １４６（１）：３３−３９において総説されている）。従って、生理学的に関連する様式で、内因性マウスＩＬ−７遺伝子座からヒトＩＬ−７（しかしマウスＩＬ−７ではない）を発現するマウス（特に、ヒトもしくはマウス腫瘍、例えば、リンパ系腫瘍を含むマウスに限定されない）を得ることは、望ましい。
【０１０１】
生理学的に関連する様式でヒトＩＬ−７を発現するマウスはまた、マウスにおけるヒト固形腫瘍の異種移植片モデルで、推定治療剤（ヒトＩＬ−７およびそのアナログが挙げられる）の抗腫瘍特性を評価するために有用である。例えば、ＳＣＩＤマウスにＨＴ２９ヒト結腸腺癌を移植し、種々の条件（例えば、天然Ｔ細胞の除去およびヒトＴ細胞の添加；組換えヒトＩＬ−７の添加など）下で試験した（Ｍｕｒｐｈｙ，  Ｗ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７  ａｎｄ  Ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９２：  １９１８−１９２４を参照のこと）。その研究から、ヒトＩＬ−７は、ヒトＴ細胞とともに投与した場合に、ヒトＩＬ−７の非存在下より有意に長い生存を生じることが見いだされた（同文献）。
【０１０２】
従って、ヒトＩＬ−７を発現するマウス、特に、異種移植片（例えば、ヒト腫瘍）を支え得るマウス（例えば、免疫不全マウス）は、具体的かつ十分に確立された有用性を有する。ＩＬ−７シグナル伝達は、インビトロおよびインビボでヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）の発生および生存に必要であることが示された（Ｔｏｕｗ，  Ｉ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７  ｉｓ  ａ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｆ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｂｌｏｏｄ  ７５，  ２０９７−２１０１）。Ｔ−ＡＬＬは、予後不良の侵襲性の血液癌である；Ｔ−ＡＬＬ細胞の増殖および生存を駆動する機構の理解は、インビボでの患者由来腫瘍の増殖を支え得る異種移植片モデルがないことに起因して、比較的不十分なままである。従って、ヒトＩＬ−７を発現する免疫不全動物が、このようなＴ細胞関連悪性腫瘍に対する薬学的組成物を試験するために、例えば、ヒトＩＬ−７を発現し、移植されたＴ細胞由来腫瘍（ここで上記腫瘍は、発生および生存にＩＬ−７シグナル伝達を要する）を有するマウスでのＩＬ−７媒介性シグナル伝達を標的とする、薬学的組成物の効力を試験するために、非常に貴重なインビボシステムとして役立ち得る。
【実施例】
【０１０３】
（実施例１．マウスＩＬ−７遺伝子座のヒト化）
マウスＥＳ細胞を、内因性マウスＩＬ−７遺伝子座において、マウスＩＬ−７調節エレメントの制御下で、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）遺伝子工学技術を使用して、マウスＩＬ−７遺伝子配列をヒトＩＬ−７遺伝子配列で置換するように改変して、図１に示されるとおりのヒト化遺伝子座を産生した。
【０１０４】
標的化構築物。  標準的細菌相同組換え（ＢＨＲ）技術を使用して、ＢＨＲを行って、マウスＩＬ−７遺伝子座に標的化するためのヒトＩＬ−７遺伝子を含む大きな標的化ベクター（ＬＴＶＥＣ）を構築する（例えば、Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２１（６）：６５２−６５９を参照のこと）。直鎖状のフラグメントを、ＰＣＲ生成した相同性ボックスをクローニングしたカセットにライゲーションして生成し、続いて、ライゲーション産物のゲルでの単離および標的細菌人工染色体（ＢＡＣ）を有するＢＨＲコンピテント細菌へとエレクトロポレーションを行う。マウスＢＡＣ  ｂＭＱ−２７１ｇ１８を、マウス配列の供給源として使用する；ヒトＢＡＣ  ＲＰ１１−６２５Ｋ１をヒト配列の供給源として使用する。選択工程の後、正確に組換えられたクローンを、新たな接合部にわたるＰＣＲおよび制限分析によって同定する。相同性アームおよびヒトＩＬ−７遺伝子配列を含む大きな標的化ベクター（ＬＴＶＥＣ）を作製した。マウスＥＳ細胞を、上記ＬＴＶＥＣ構築物でエレクトロポレーションし、選択培地で増殖させ、ドナーＥＳ細胞として使用して、ヒト化ＩＬ−７マウスを作製した。
【０１０５】
上記マウスＩＬ−７遺伝子（マウスＧｅｎｅ  ＩＤ：  ９６５６１  ；  Ｒｅｆ  Ｓｅｑ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ：ＮＭ＿００８３７１．４）は、エキソン２から５までを欠失させ（欠失座標  ＮＣＢＩＭ３７：ｃｈ３：７６０４６５０−７５７３０２１  ；マイナス鎖）、それをヒトＩＬ−７（Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ  ＩＤ：  ６０２３；  Ｒｅｆ  Ｓｅｑ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ＮＭ＿０００８８０．３）エキソン２から６までで置換する（置換座標  ＧＲＣｈ３７Ｌｃｈ＊：７９７１１１６８−７９６４４６０８；マイナス鎖）ことによって改変される。ヒトゲノムＩＬ−７配列は、配列番号３（ＮＣ＃１６６Ｅ２Ｆ２）で提供される。マウスゲノムＩＬ−７遺伝子座は公知であり、アクセッション番号ＮＣ００００６９６（本明細書によって参考として援用される）の下で４１，３５１ｎｔ配列として報告されている；上記マウスＩＬ−７ゲノム遺伝子座の関連する５’配列および３’配列は、配列番号１（５’隣接）および配列番号２（３’隣接）に提供される。
【０１０６】
上記ヒト化ＩＬ−７遺伝子を含むＬＴＶＥＣは、ＮｏｔＩ部位で上流に隣接した４８ｋｂ上流マウス標的化アーム、およびＮｏｔＩ部位で下流に隣接した７７ｋｂ下流マウス標的化アームを有した。上記ＬＴＶＥＣを、エレクトロポレーションのためにＮｏｔＩで直鎖状にした。
【０１０７】
上記ＬＴＶＥＣの構築後に、ＬＴＶＥＣのヌクレオチド配列をマウス／ヒト５’接合部にわたって得た。これは、５’（マウス）から３’（ヒト）へと、以下の配列を含んだ（マウス／ヒト接合部ヌクレオチドは、括弧内）：
【化１】
2015523863.tif 000002
。
【０１０８】
上記ヒト挿入物および上記カセットの５’末端の接合部（図１を参照のこと）にわたるＬＴＶＥＣのヌクレオチド配列を決定したところ、５’から３’へと、ヒト配列／制限部位／ｌｏｘｐ／ヒト配列を有するカセット配列／括弧内の制限部位接合部ヌクレオチドを有する以下の配列を含んだ：
【化２】
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。
【０１０９】
上記カセットの末端とマウス配列の始まりとの接合部にわたるＬＴＶＥＣのヌクレオチド配列を決定したところ、５’から３’へと、カセット配列／制限部位／括弧内の接合部ヌクレオチドを有するマウス配列を有する以下の配列を含んだ：
【化３】
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。
【０１１０】
ＥＳ細胞のエレクトロポレーション後に、天然の対立遺伝子喪失アッセイ（ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｎａｔｉｖｅ  ａｌｌｅｌｅ  ａｓｓａｙ）（例えば、Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）を参照のこと）を行って、上記標的化に起因する内因性ＩＬ−７配列の喪失を検出する。プライマー対、フラグメントサイズ、およびＴＡＱＭＡＮＴＭプローブは、表１に示されるとおりである。ＣＩプローブは、ｎｔ９，６３５〜９，６６４でマウスＩＬ−７ゲノム配列（ＮＣ００００６９６）に結合する；Ｃ２プローブは、ｎｔ３９，７９３〜３９，８２５でマウスＩＬ−７ゲノム配列（ＮＣ００００６９６）に結合する。対立遺伝子アッセイの獲得のために、Ｃ３プローブは、ｎｔ２９，２１４〜２９，２４２でヒトＩＬ−７ゲノム配列（ＮＣ＃１６６Ｅ２Ｆ２）に結合する。
【表１】
2015523863.tif 000005
【０１１１】
（実施例２．ヒト化ＩＬ−７マウス）
ヒト化ＩＬ−７マウスの生成。  ヒト化ＩＬ−７遺伝子座を含むドナーマウスＥＳ細胞を、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法（Ｐｏｕｅｙｍｉｒｏｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｆ０  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｍｉｃｅ  ｆｕｌｌｙ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｇｅｎｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｅｍｂｒｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ａｌｌｏｗｉｎｇ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ａｎａｌｙｓｅｓ，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５：９１−９９）によって、初期段階のマウス胚に導入する。ドナーＥＳ細胞に完全に由来する４個のＦ０マウスを得た。これは、内因性マウスＩＬ−７遺伝子座のヒト化に関してヘテロ接合性であった。Ｆ０マウスを、上記ヒト化に関してホモ接合性になるように交配する。ホモ接合性マウスを、ホモ接合性を確認するために遺伝子型決定する。全てのマウス研究は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ’ｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）が監督および承認した。
【０１１２】
（実施例３．マウスにおけるヒトＩＬ−７の発現）
上記ＩＬ−７遺伝子に関してヒト化したマウスおよびそれらの非ヒト化同腹仔コントロールから採血し、ヒトＩＬ−７の血清濃度を、ＱｕａｎｔｉｋｉｎｅＨＳ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−７  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ製）を使用して測定した。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌを使用してデータを分析し、Ｐｒｉｓｍ統計分析ソフトウェアを使用してプロットした。上記ヒト化ＩＬ−７遺伝子座に関してヘテロ接合性のマウス（ＭＡＩＤ  ５１４８  ｈｅｔと称した）は、生理学的に関連する濃度で血清中にヒトＩＬ−７を発現した。これは、二重ノックアウトマウスにおいてレンチウイルスで形質導入したヒトＩＬ−７を有するトランスジェニックヒトＩＬ−７マウスとは対照的である。このマウスは、非生理学的でかつ潜在的に非常に有害な高レベルの血清中のヒトＩＬ−７（１０〜１００ｐｇ／ｍＬ）を示す（Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ，  Ｒ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７  （ｈＩＬ−７）  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  （ＨＩＳ）  Ｍｉｃｅ  Ｅｘｐａｎｄｓ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ，  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５（８）：ｅ１２００９）。対照的に、ヒト化内因性ＩＬ−７遺伝子座に関してヘテロ接合性のマウスは、血清中約２．４〜約３．２ｐｇ／ｍＬを示した（図２）。これは、ＩＬ−７の正常なもしくは生理学的に適切なレベルを示す。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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