(57)【要約】  ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合する工学的に作製された多価および多重特異的二重可変ドメイン結合タンパク質、ならびに製造方法、および疾患の予防、診断および／または治療における使用が提供される。
2015508994.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それぞれ独立してＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含む、第一および第二のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
ＶＤ１は、第一の可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、但し、Ｘ１は、ＣＨ１ではなく、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、ならびに
ｎは、０または１であり、
第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ１ドメインが、第一の機能的標的結合部位を形成し、第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ２ドメインが、第二の機能的標的結合部位を形成し、
結合タンパク質がＩＬ−１３およびＩＬ−１７を結合させることができ、
（ｉ）ＩＬ−１３の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲと配列番号３１からの３つのＣＤＲ、
配列番号３２からの３つのＣＤＲと配列番号３３からの３つのＣＤＲ、もしくは
配列番号３４からの３つのＣＤＲと配列番号３５からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｉｉ）ＩＬ−１７の機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３６からの３つのＣＤＲと配列番号３７からの３つのＣＤＲ、
配列番号３８からの３つのＣＤＲと配列番号３９からの３つのＣＤＲ、
配列番号４０からの３つのＣＤＲと配列番号４１からの３つのＣＤＲ、
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号５２からの３つのＣＤＲ、
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号５３からの３つのＣＤＲ、
配列番号４３からの３つのＣＤＲと配列番号５０からの３つのＣＤＲ、
配列番号４４からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ、
配列番号４５からの３つのＣＤＲと配列番号５４からの３つのＣＤＲ、
配列番号４６からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ、
配列番号４７からの３つのＣＤＲと配列番号５４からの３つのＣＤＲ、
配列番号４８からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲまたは
配列番号４９からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ
を含む結合タンパク質。
【請求項２】
それぞれ独立してＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含む、２つの第一のポリペプチド鎖および２つの第二のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
ＶＤ１は、第一の可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、但しＸ１はＣＨ１ではなく、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、
ｎは、０または１であり、
第一および第二のポリペプチド鎖のそれぞれのセット上のＶＤ１ドメインが、第一の機能的標的結合部位を形成し、第一および第二のポリペプチド鎖のそれぞれのセット上のＶＤ２ドメインが、第二の機能的標的結合部位を形成し、
結合タンパク質がＩＬ−１３とＩＬ−１７を結合させることができ、
（ｉ）ＩＬ−１３に対して機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲと配列番号３１からの３つのＣＤＲ、
配列番号３２からの３つのＣＤＲと配列番号３３からの３つのＣＤＲまたは
配列番号３４からの３つのＣＤＲと配列番号３５からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｉｉ）ＩＬ−１７に対して機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３６からの３つのＣＤＲと配列番号３７からの３つのＣＤＲ、
配列番号３８からの３つのＣＤＲと配列番号３９からの３つのＣＤＲ、
配列番号４０からの３つのＣＤＲと配列番号４１からの３つのＣＤＲ、
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号５２からの３つのＣＤＲ、
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号５３からの３つのＣＤＲ、
配列番号４３からの３つのＣＤＲと配列番号５０からの３つのＣＤＲ、
配列番号４４からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ、
配列番号４５からの３つのＣＤＲと配列番号５４からの３つのＣＤＲ、
配列番号４６からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ、
配列番号４７からの３つのＣＤＲと配列番号５４からの３つのＣＤＲ、
配列番号４８からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲまたは
配列番号４９からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ
を含む結合タンパク質。
【請求項３】
（ｉ）直接結合ＥＬＩＳＡによって測定された場合に、ＩＬ−１３について最大約２．４４２ｎＭおよび／もしくはＩＬ−１７について最大約０．７０３４ｎＭのＩＣ５０；
（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、ＩＬ−１３について少なくとも約２．１０×１０４Ｍ−１ｓ−１および／もしくはＩＬ−１７について少なくとも約６．８０×１０３Ｍ−１ｓ−１の結合速度定数（Ｋｏｎ）；
（ｉｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、ＩＬ−１３について最大約１．４０×１０−４ｓ−１および／もしくはＩＬ−１７について最大約１．７０×１０−４ｓ−１の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）；ならびに／または
（ｉｖ）表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、ＩＬ−１３について最大約１．１０×１０−１０Ｍおよび／またはＩＬ−１７について最大約２．６０×１０−８Ｍの解離定数（Ｋｄ）
でＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合する、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項４】
（ｉ）Ｘ１が、配列番号１−２９のいずれか１つまたはＧ４Ｓ反復配列であり、
（ｉｉ）Ｘ１が、ＣＬではなく、
（ｉｉｉ）（Ｘ１）ｎが（Ｘ１）０であり、および／もしくは（Ｘ２）ｎが（Ｘ２）０であり、
（ｉｖ）Ｆｃ領域が、バリアント配列Ｆｃ領域であり、
（ｖ）Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥもしくはＩｇＤ由来のＦｃ領域であり、
（ｉｖ）結合タンパク質が、結晶化された結合タンパク質であり、ならびに／または
（ｖ）ＩＬ−１３に対して機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、配列番号３０と配列番号３１、配列番号３２と配列番号３３または配列番号３４と配列番号３５を含み、ＩＬ−１７に対して機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３６と配列番号３７、
配列番号３８と配列番号３９、
配列番号４０と配列番号４１、
配列番号４２と配列番号５２、
配列番号４２と配列番号５３、
配列番号４３と配列番号５０、
配列番号４４と配列番号５１、
配列番号４５と配列番号５４、
配列番号４６と配列番号５１、
配列番号４７と配列番号５４、
配列番号４８と配列番号５１もしくは
配列番号４９と配列番号５１
を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
免疫接着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｎｓｉｏｎ）分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤である薬剤をさらに含み、
（ｉ）造影剤が放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンであり、場合によって、放射性標識が３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍであり、または
（ｉｉ）治療剤または細胞毒性剤が代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である、
請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含む結合タンパク質コンジュゲート。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項に記載の結合タンパク質のアミノ酸配列をコードする単離された核酸。
【請求項７】
場合によって、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ、ｐＥＦ６  ＴＯＰＯ、ｐＨｙｂＥ、ｐＢＯＳまたはｐＢＪから選択される、請求項６に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項８】
請求項７に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９】
原核細胞、エシュリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、真核細胞、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、Ｓｆ９細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、ＣＨＯ細胞またはＣＯＳ細胞である、請求項８に記載の宿主細胞。
【請求項１０】
結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、培地中で請求項８または請求項９に記載の宿主細胞を培養することを含む、結合タンパク質を産生する方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法によって産生されるタンパク質。
【請求項１２】
請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１３】
追加の治療剤が、場合によって、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断剤；接着分子遮断剤；抗サイトカイン抗体またはその機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストから選択される、少なくとも１つの追加の治療剤をさらに含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
治療が達成されるように、結合タンパク質を対象に投与することによって、疾患または障害について対象を治療するための医薬の製造における、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質の使用。
【請求項１５】
障害が、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型、多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニア関連関節炎、サルモネラ関連関節炎、アテローム性疾患、アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎関連肺疾患、多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性、男性不妊症ＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動���炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害、うつ病、統合失調症、Ｔｈ２型およびＴｈ１型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛、疼痛の異なる形態、癌、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、造血性悪性病変、白血病、リンパ腫、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性細菌感染、慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、大動脈瘤、末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、持続的心房細動、発作性心房細動、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれ���の臓器の移植片拒絶、いずれかの組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、Ａ型肝炎、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎、ブドウ膜炎、視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ．ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性、メンセル変性、デジェリーヌ−トーマス変性、シャイ−ドレーガー変性、マシャド−ジョセフ変性、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身��発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷、出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス感染、真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）、無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器の異種移植拒絶、いずれかの組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ｃｉｓ）、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ  ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎、結節性動脈周囲炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（Ｐ
ＭＲ）、原発性パーキンソニズム、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎）、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性または創傷治癒である請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
医薬が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮投与のために製剤化される、請求項１４または請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
イムノアッセイは、試験試料を少なくとも１つの結合タンパク質および少なくとも１つの検出可能な標識と接触させることを含み、
少なくとも１つの結合タンパク質は、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質を含む、
イムノアッセイによって試験試料中の少なくとも１つの標的またはその断片の存在、量または濃度を決定するための方法。
【請求項１８】
（ｉ）第一の複合体を形成するために、試験試料を、標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの結合タンパク質と接触させること、（ｉｉ）第二の複合体を形成するために、複合体を、結合タンパク質に結合しまたは結合タンパク質が結合しない標的もしくはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの検出可能な標識と接触させることおよび（ｉｉｉ）第二の複合体における検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、試験試料中の標的またはその断片の存在、量または濃度を検出することをさらに含み、標的またはその断片の存在、量または濃度が、検出可能な標識によって発生したシグナルと直接相関する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
（ｉ）第一の複合体を形成するために、試験試料を、標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの結合タンパク質と接触させること、
（ｉｉ）第二の複合体を形成するために、複合体を、結合タンパク質への結合について標的またはその断片と競合する少なくとも１つの検出可能な標識と接触させることおよび
（ｉｉｉ）第二の複合体における検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、試験試料中の標的またはその断片の存在、量または濃度を検出することをさらに含み、標的またはその断片の存在、量または濃度が、検出可能な標識によって発生したシグナルに間接的に相関する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記試験試料が患者由来であり、前記方法が、
（ｉ）患者の治療的／予防的処置の効力を診断、予後診断または評価することをさらに含み、
（ｉｉ）効力を改善するために必要な、患者の治療的／予防的処置を改変することをさらに含み、
（ｉｉｉ）自動化システムまたは半自動化システムにおける使用に適合され、および／または
（ｉｖ）試料中の１を超える標的の存在、量または濃度を決定する、
請求項１７から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
（ｉ）標的またはその断片について試験試料をアッセイするための説明書および
（ｉｉ）請求項１または２に記載の結合タンパクを含む少なくとも１つの結合タンパク質
を含む、標的またはその断片の存在、量または濃度について試験試料をアッセイするためのキット。
【請求項２２】
第一および第二のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第一のポリペプチド鎖が、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は、第一の重鎖可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の重鎖可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、但しＸ１はＣＨ１ではなく、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、
ｎは、０または１であり、
第二のポリペプチド鎖が、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は、第一の軽鎖可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の軽鎖可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、但しＸ１はＣＬではなく、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、
ｎは、０または１であり、
第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ１ドメインが、第一の機能的標的結合部位を形成し、第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ２ドメインが、第二の機能的標的結合部位を形成し、
結合タンパク質がＩＬ−１３とＩＬ−１７を結合させることができ、
（ｉ）ＩＬ−１３に対して機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からの３つのＣＤＲと配列番号３１からの３つのＣＤＲ、
配列番号３２からの３つのＣＤＲと配列番号３３からの３つのＣＤＲまたは
配列番号３４からの３つのＣＤＲと配列番号３５からの３つのＣＤＲ
を含み、
（ｉｉ）ＩＬ−１７に対して機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３６からの３つのＣＤＲと配列番号３７からの３つのＣＤＲ、
配列番号３８からの３つのＣＤＲと配列番号３９からの３つのＣＤＲ、
配列番号４０からの３つのＣＤＲと配列番号４１からの３つのＣＤＲ、
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号５２からの３つのＣＤＲ、
配列番号４２からの３つのＣＤＲと配列番号５３からの３つのＣＤＲ、
配列番号４３からの３つのＣＤＲと配列番号５０からの３つのＣＤＲ、
配列番号４４からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ、
配列番号４５からの３つのＣＤＲと配列番号５４からの３つのＣＤＲ、
配列番号４６からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ、
配列番号４７からの３つのＣＤＲと配列番号５４からの３つのＣＤＲ、
配列番号４８からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲまたは
配列番号４９からの３つのＣＤＲと配列番号５１からの３つのＣＤＲ
を含む結合タンパク質。
【請求項２３】
（ｉ）直接結合ＥＬＩＳＡによって測定された場合に、ＩＬ−１３について最大約２．４４２ｎＭおよび／もしくはＩＬ−１７について最大約０．７０３４ｎＭのＩＣ５０；
（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、ＩＬ−１３について少なくとも約２．１０×１０４Ｍ−１ｓ−１および／もしくはＩＬ−１７について少なくとも約６．８０×１０３Ｍ−１ｓ−１の結合速度定数（Ｋｏｎ）；
（ｉｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、ＩＬ−１３について最大で約１．４０×１０−４ｓ−１および／もしくはＩＬ−１７について最大で約１．７０×１０−４ｓ−１の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）；ならびに／または
（ｉｖ）表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、ＩＬ−１３について最大で約１．１０×１０−１０ＭおよびＩＬ−１７について最大で約２．６０×１０−８Ｍの解離定数（Ｋｄ）
でＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合する、請求項２２に記載の結合タンパク質。
【請求項２４】
２つの第一のポリペプチド鎖および２つの第二のポリペプチド鎖を含む、請求項２２または請求項２３に記載の結合タンパク質。
【請求項２５】
ＤＶＤ２１４８Ｈ（配列番号３０と３６を含む）およびＤＶＤ２１４８Ｌ（配列番号３１と３７を含む）；ＤＶＤ２１４９Ｈ（配列番号３６と３０を含む）およびＤＶＤ２１４９Ｌ（配列番号３７と３１を含む）；ＤＶＤ２１５０Ｈ（配列番号３０と３６を含む）およびＤＶＤ２１５０Ｌ（配列番号３１と３７を含む）；ＤＶＤ２１５１Ｈ（配列番号３６と３０を含む）およびＤＶＤ２１５１Ｌ（配列番号３７と３１を含む）；ＤＶＤ２１５２Ｈ（配列番号３０と３６を含む）およびＤＶＤ２１５２Ｌ（配列番号３１と３７を含む）；ＤＶＤ２１５３Ｈ（配列番号３６と３０を含む）およびＤＶＤ２１５３Ｌ（配列番号３７と３１を含む）；ＤＶＤ２１５４Ｈ（配列番号３０と３８を含む）およびＤＶＤ２１５４Ｌ（配列番号３１と３９を含む）；ＤＶＤ２１５５Ｈ（配列番号３８と３０を含む）およびＤＶＤ２１５５Ｌ（配列番号３９と３１を含む）；ＤＶＤ２１５６Ｈ（配列番号３０と３８を含む）およびＤＶＤ２１５６Ｌ（配列番号３１と３９を含む）；ＤＶＤ２１５７Ｈ（配列番号３８と３０を含む）およびＤＶＤ２１５７Ｌ（配列番号３９と３１を含む）；ＤＶＤ２１５８Ｈ（配列番号３０と３８を含む）およびＤＶＤ２１５８Ｌ（配列番号３１と３９を含む）；ＤＶＤ２１５９Ｈ（配列番号３８と３０を含む）およびＤＶＤ２１５９Ｌ（配列番号３９と３１を含む）；ＤＶＤ２１６０Ｈ（配列番号３０と４０を含む）およびＤＶＤ２１６０Ｌ（配列番号３１と４１を含む）；ＤＶＤ２１６１Ｈ（配列番号４０と３０を含む）およびＤＶＤ２１６１Ｌ（配列番号４１と３１を含む）；ＤＶＤ２１６２Ｈ（配列番号３０と４０を含む）およびＤＶＤ２１６２Ｌ（配列番号３１と４１を含む）；ＤＶＤ２１６３Ｈ（配列番号４０と３０を含む）およびＤＶＤ２１６３Ｌ（配列番号４１と３１を含む）；ＤＶＤ２１６４Ｈ（配列番号３０と４０を含む）およびＤＶＤ２１６４Ｌ（配列番号３１と４１を含む）；ＤＶＤ２１６５Ｈ（配列番号４０と３０を含む）およびＤＶＤ２１６５Ｌ（配列番号４１と３１を含む）；ＤＶＤ２１６６Ｈ（配列番号３２と３６を含む）およびＤＶＤ２１６６Ｌ（配列番号３３と３７を含む）；ＤＶＤ２１６７Ｈ（配列番号３６と３２を含む）およびＤＶＤ２１６７Ｌ（配列番号３７と３３を含む）；ＤＶＤ２１６８Ｈ（配列番号３２と３６を含む）およびＤＶＤ２１６８Ｌ（配列番号３３と３７を含む）；ＤＶＤ２１６９Ｈ（配列番号３６と３２を含む）およびＤＶＤ２１６９Ｌ（配列番号３７と３３を含む）；ＤＶＤ２１７０Ｈ（配列番号３２と３６を含む）およびＤＶＤ２１７０Ｌ（配列番号３３と３７を含む）；ＤＶＤ２１７１Ｈ（配列番号３６と３２を含む）およびＤＶＤ２１７１Ｌ（配列番号３７と３３を含む）；ＤＶＤ２１７２Ｈ（配列番号３２と３８を含む）およびＤＶＤ２１７２Ｌ（配列番号３３と３９を含む）；ＤＶＤ２１７３Ｈ（配列番号３８と３２を含む）およびＤＶＤ２１７３Ｌ（配列番号３９と３３を含む）；ＤＶＤ２１７４Ｈ（配列番号３２と３８を含む）およびＤＶＤ２１７４Ｌ（配列番号３３と３９を含む）；ＤＶＤ２１７５Ｈ（配列番号３８と３２を含む）およびＤＶＤ２１７５Ｌ（配列番号３９と３３を含む）；ＤＶＤ２１７６Ｈ（配列番号３２と３８を含む）およびＤＶＤ２１７６Ｌ（配列番号３３と３９を含む）；ＤＶＤ２１７７Ｈ（配列番号３８と３２を含む）およびＤＶＤ２１７７Ｌ（配列番号３９と３３を含む）；ＤＶＤ２１７８Ｈ（配列番号３２と４０を含む）およびＤＶＤ２１７８Ｌ（配列番号３３と４１を含む）；ＤＶＤ２１７９Ｈ（配列番号４０と３２を含む）およびＤＶＤ２１７９Ｌ（配列番号４１と３３を含む）；ＤＶＤ２１８０Ｈ（配列番号３２と４０を含む）およびＤＶＤ２１８０Ｌ（配列番号３３と４１を含む）；ＤＶＤ２１８１Ｈ（配列番号４０と３２を含む）およびＤＶＤ２１８１Ｌ（配列番号４１と３３を含む）；ＤＶＤ２１８２Ｈ（配列番号３２と４０を含む）およびＤＶＤ２１８２Ｌ（配列番号３３と４１を含む）；ＤＶＤ２１８３Ｈ（配列番号４０と３２を含む）およびＤＶＤ２１８３Ｌ（配列番号４１と３３を含む）；ＤＶＤ２１８４Ｈ（配列番号３４と３６を含む）およびＤＶＤ２１８４Ｌ（配列番号３５と３７を含む）；ＤＶＤ２１８５Ｈ（配列番号３６と３４を含む）およびＤＶＤ２１８５Ｌ（配列番号３７と３５を含む）；ＤＶＤ２１８６Ｈ（配列番号３４と３６を含む）およびＤＶＤ２１８６Ｌ（配列番号３５と３７を含む）；ＤＶＤ２１８７Ｈ（配列番号３６と３４を含む）およびＤＶＤ２１８７Ｌ（配列番号３７と３５を含む）；ＤＶＤ２１８８Ｈ（配列番号３４と３６を含む）およびＤＶＤ２１８８Ｌ（配列番号３５と３７を含む）；ＤＶＤ２１８９Ｈ（配列番号３６と３４を含む）およびＤＶＤ２１８９Ｌ（配列番号３７と３５を含む）；ＤＶＤ２１９０Ｈ（配列番号３４と３８を含む）およびＤＶＤ２１９０Ｌ（配列番号３５と３９を含む）；ＤＶＤ２１９１Ｈ（配列番号３８と３４を含む）およびＤＶＤ２１９１Ｌ（配列番号３９と３５を含む）；ＤＶＤ２１９２Ｈ（配列番号３４と３８を含む）およびＤＶＤ２１９２Ｌ（配列番号３５と３９を含む）；ＤＶＤ２１９３Ｈ（配列番号３８と３４を含む）およびＤＶＤ２１９３Ｌ（配列番号３９と３５を含む）；ＤＶＤ２１９４Ｈ（配列番号３４と３８を含む）およびＤＶＤ２１９４Ｌ（配列番号３５と３９を含む）；ＤＶＤ２１９５Ｈ（配列番号３８と３４を含む）およびＤＶＤ２１９５Ｌ（配列番号３９と３５を含む）；ＤＶＤ２１９６Ｈ（配列番号３４と４０を含む）およびＤＶＤ２１９６Ｌ（配列番号３５と４１を含む）；ＤＶＤ２１９７Ｈ（配列番号４０と３４を含む）およびＤＶＤ２１９７Ｌ（配列番号４１と３５を含む）；ＤＶＤ２１９８Ｈ（配列番号３４と４０を含む）およびＤＶＤ２１９８Ｌ（配列番号３５と４１を含む）；ＤＶＤ２１９９Ｈ（配列番号４０と３４を含む）およびＤＶＤ２１９９Ｌ（配列番号４１と３５を含む）；ＤＶＤ２２００Ｈ（配列番号３４と４０を含む）およびＤＶＤ２２００Ｌ（配列番号３５と４１を含む）；またはＤＶＤ２２０１Ｈ（配列番号４０と３４を含む）およびＤＶＤ２２０１Ｌ（配列番号４１と３５を含む）
を含む、請求項１から３または２２から２４のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１１年１２月３０日に出願した米国仮特許出願第６１／５８１，９６４号の利益を主張し、その全開示は、参照により本明細書に組み込まれている。
【０００２】
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合する多価および多重特異的結合タンパク質、製造方法ならびに急性および慢性炎症性疾患、癌および他の疾患の診断、予防および／または治療におけるこれらの使用が提供される。
【背景技術】
【０００３】
２つまたはそれ以上の抗原に結合することができる多重特異的結合タンパク質などの工学的に作製されたタンパク質が、本分野において公知である。このような多重特異的結合タンパク質は、細胞融合、化学的連結または組換えＤＮＡ技術を用いて作製することが可能である。当該技術分野において公知の多重特異的結合タンパク質の構造は様々に存在し、多数の構造および方法には明らかな不利益がある。
【０００４】
二特異的抗体は、クアドローマ技術を用いて作製されてきた。しかしながら、この技術における誤対合された副産物の存在および大幅に減少した産生率は、複雑な精製操作が必要とされることを意味している。二特異的抗体は、２つの異なるｍＡｂの化学的連結によっても生産することが可能である。しかしながら、このアプローチは、均一な調製を与えない。
【０００５】
以前に使用された他のアプローチは、ヘテロ−二官能性クロスリンカーを有する２つの親抗体のカップリング、タンデムな一本鎖Ｆｖ分子、ダイアボディ、二特異的ダイアボディ、一本鎖ダイアボディおよびジ−ダイアボディの製造を含む。しかしながら、これらのアプローチのそれぞれは不利益を有する。さらに、ＩｇＧの重鎖中に２つのＦａｂリピートを含み、４つの抗原分子に結合することができる多価の抗体構築物が記載されている（ＰＣＴ公開ＷＯ０１７７３４２およびＭｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（９）：４８５４−６１参照）。
【０００６】
米国特許第７，６１２，１８１号は、二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）または二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））と呼ばれる、高親和性を有する２つ以上の抗原に結合することが可能な結合タンパク質の新規なファミリーを提供する。
【０００７】
種々の構造が当該技術分野において提供され、いくつかは利点と欠点を有するが、特定の構築物は、特定の標的に結合する特定の特性を有する多価結合タンパク質を調製するために必要とされる。さらに、新しい可変ドメイン配列は、結合タンパク質の特性をさらに改善することができる。
【０００８】
インターロイキン１３（ＩＬ−１３）は、Ｔｈ２系統の活性化Ｔ細胞によって産生される１７ｋＤａの糖タンパク質である。ＩＬ−１３の機能は、ヒトＢ細胞においてＩｇＥにスイッチさせ、炎症性サイトカイン産生を抑制する免疫グロブリンアイソタイプを含む。ＩＬ−１３は、主に、喘息などの気道炎症の誘導に関連する。また、他のアレルギー性疾患、線維性状態、癌および感染症に繋がっている。
【０００９】
インターロイキン−１７（ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ａとも称する。）は、炎症部位における活性化Ｔ細胞によって分泌される２０−３０ｋＤのホモ二量体糖タンパク質である。ＩＬ−１７は、炎症部位への単球および好中球を集積させるために、様々な組織において、複数の接着分子、炎症性サイトカインおよびケモカインの産生を誘導することによって炎症性サイトカインとして機能する。ＩＬ−１７はまた、造血前駆細胞の成熟において重要な役割を果たす。ＩＬ−１７の不適切な産生または過剰な産生は、関節リウマチ、喘息、狼瘡、同種移植片拒絶、他の炎症性疾患または自己免疫疾患および癌を含む種々の疾患または障害の病態と関連している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第０１／７７３４２号
【特許文献２】米国特許第７，６１２，１８１号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（９）：４８５４−６１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる、改良された多価結合タンパク質が、当該技術分野において必要とされている。ＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合する新規な結合タンパク質が本明細書において提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる結合タンパク質が提供される。一実施形態において、高親和性で、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる結合タンパク質が提供される。
【００１４】
一実施形態において、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合するポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸またはポリペプチドを表し、Ｘ２はＦｃ領域を表し、ｎは０または１である結合タンパク質が提供される。一実施形態において、結合タンパク質中のＶＤ１およびＶＤ２は、重鎖可変ドメインである。別の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同じ抗原に結合することができる。別の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、異なる抗原に結合することができる。さらに別の実施形態において、Ｃは重鎖定常ドメインである。例えば、Ｘ１はリンカーである（但し、Ｘ１はＣＨ１ではない。）。
【００１５】
一実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合するポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域である。一実施形態において、Ｘ１は、リンカーであり、但し、ＣＨ１ではない。
【００１６】
一実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合するポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。一実施形態において、Ｘ１はリンカーであり、但し、ＣＬではない。
【００１７】
別の実施形態において、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合し、２つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第一のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第一のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域である。）を含み、前記第二のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第二のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。）を含む、結合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態において、第一および第二のＸ１は同じである。他の実施形態において、第一および第二のＸ１は異なっている。いくつかの実施形態において、第一のＸ１はＣＨ１ドメインではなく、および／または第二のＸ１はＣＬドメインではない。一実施形態において、第一のＸ１および第二のＸ１は短い（例えば、６アミノ酸）リンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１および第二のＸ１は長い（例えば、６を超えるアミノ酸）リンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１は短いリンカーであり、第二のＸ１は長いリンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１は長いリンカーであり、第二のＸ１は短いリンカーである。
【００１８】
一実施形態において、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、４つのポリペプチド鎖を含み、第一の２つのポリペプチド鎖のそれぞれは、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第一のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域であり、第二の２つのポリペプチド鎖のそれぞれは、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第二のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。このようなＤＶＤ結合タンパク質は、４つの抗原結合部位を有している。いくつかの実施形態において、第一および第二のＸ１は同じである。他の実施形態において、第一および第二のＸ１は異なる。いくつかの実施形態において、第一のＸ１は、ＣＨ１ドメインでないおよび／または第二のＸ１はＣＬドメインでない。別の実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、ＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合することができる。したがって、いくつかの実施形態において、結合タンパク質は、任意の配向で、ＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合することができる少なくとも２つの可変ドメイン配列（例えば、ＶＤ１およびＶＤ２）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して選択される。したがって、いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同一の配列番号を含み、他の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、異なる配列番号を含む。
【００１９】
一実施形態において、
（ａ）結合タンパク質はＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合し、
（ｂ）ＶＤ１もしくはＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９からの３つのＣＤＲを含み、
（ｃ）ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、独立して、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９からの３つのＣＤＲを含み、
（ｄ）ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号３６、３８、４０、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２もしくは３４からの３つのＣＤＲを含み、または
（ｅ）ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３６、３８、４０、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２もしくは３４からの３つのＣＤＲを含む。
【００２０】
別の実施形態において、
（ａ）ＶＤ１またはＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９を含み、
（ｂ）ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、独立して、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９を含み、
（ｃ）ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号３６、３８、４０、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９を含み、ＶＤ２重鎖可変ドメインは配列番号３０、３２もしくは３４を含み、または
（ｄ）ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３６、３８、４０、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９を含み、ＶＤ１重鎖可変ドメインは配列番号３０、３２もしくは３４を含む。
【００２１】
一実施形態において、
（ａ）結合タンパク質はＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合し、
（ｂ）ＶＤ１もしくはＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号５０、５１、５２、５３もしくは５４からの３つのＣＤＲを含み、
（ｃ）ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、独立して、配列番号５０、５１、５２、５３または５４からの３つのＣＤＲを含み、
（ｄ）ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号３７、３９、４１、５０、５１、５２、５３もしくは５４からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３もしくは３５からの３つのＣＤＲを含み、または
（ｅ）ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３７、３９、４１、５０、５１、５２、５３もしくは５４からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３もしくは３５からの３つのＣＤＲを含む。
【００２２】
別の実施形態において、
（ａ）ＶＤ１もしくはＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号５０、５１、５２、５３または５４を含み、
（ｂ）ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、独立して、配列番号５０、５１、５２、５３もしくは５４を含み、
（ｃ）ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号３７、３９、４１、５０、５１、５２、５３もしくは５４を含み、ＶＤ２軽鎖可変ドメインは配列番号３１、３３もしくは３５を含み、または
（ｄ）ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３７、３９、４１、５０、５１、５２、５３もしくは５４を含み、ＶＤ１軽鎖可変ドメインは配列番号３１、３３もしくは３５を含む。
【００２３】
別の実施形態において、結合タンパク質は、本明細書における表１に示される重鎖および軽鎖配列を含む。
【００２４】
重鎖、軽鎖、二本鎖または四本鎖の実施形態のいずれかのさらなる実施形態は、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）；ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）；ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）；ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）；ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）；ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）；ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）；ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）；ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）；またはＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２７）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２８）；またはＧ／Ｓに基づく配列（例えば、Ｇ４Ｓ（配列番号２９）とＧ４Ｓリピート）を含む少なくとも１つのＸ１リンカーを含む。一実施形態において、Ｘ２はＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｘ２は可変Ｆｃ領域である。
【００２５】
さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域は、第一のポリペプチド中に存在する場合、天然配列Ｆｃ領域またはバリアント配列Ｆｃ領域である。さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１のＦｃ領域、ＩｇＧ２のＦｃ領域、ＩｇＧ３のＦｃ領域、ＩｇＧ４のＦｃ領域、ＩｇＡのＦｃ領域、ＩｇＭのＦｃ領域、ＩｇＥのＦｃ領域またはＩｇＤのＦｃ領域である。
【００２６】
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合する結合タンパク質を作製する方法が提供される。一実施形態において、ａ）ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合する結合タンパク質を作製する方法は、ＩＬ−１３に結合する第一の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程；ｂ）ＩＬ−１７に結合する第二の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程；ｃ）本明細書に記載されている結合タンパク質のいずれかをコードする構築物（単数または複数）を調製する工程；およびｄ）ポリペプチド鎖を発現させ、第一および第二の抗原に結合する結合タンパク質を生じさせる工程を含む。
【００２７】
本明細書における実施形態のいずれかにおいて、存在する場合、ＶＤ１重鎖可変ドメイン、および存在する場合、軽鎖可変ドメインは、第一の親抗体またはその抗原結合部分由来であってもよく；存在する場合、ＶＤ２重鎖可変ドメイン、および存在する場合、軽鎖可変ドメインは、第二の親抗体またはその抗原結合部分由来であってもよい。第一および第二の親抗体は同じであってもよくまたは異なってもよい。
【００２８】
一実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は第一の抗原に結合し、第二の親抗体またはその抗原結合部分は第二の抗原に結合する。一実施形態において、第一および第二の抗原は同じ抗原である。別の実施形態において、親抗体は同じ抗原上の異なるエピトープに結合する。別の実施形態において、第一および第二の抗原は異なる抗原である。別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する効力と異なる効力で第一の抗原に結合する。さらに別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する親和性と異なる親和性で第一の抗原に結合する。
【００２９】
別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分および第二の親抗体またはその抗原結合部分は、ヒト抗体、ＣＤＲ移植された抗体、ヒト化抗体および／または親和性成熟された抗体である。
【００３０】
別の実施形態において、結合タンパク質は、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分によって示される少なくとも１つの所望の特性を有する。あるいは、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分は、結合タンパク質によって示される少なくとも１つの所望の特性を有する。一実施形態において、所望の特性は、１つ以上の抗体パラメーターである。別の実施形態において、抗体パラメーターは、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合性である。一実施形態において、結合タンパク質は多価である。別の実施形態において、結合タンパク質は多重特異的である。本明細書に記載されている多価および／または多重特異的結合タンパク質は、特に治療的見地から望ましい特性を有する。例えば、多価および／または多重特異的結合タンパク質は、（１）抗体が結合する抗原を発現している細胞によって、二価抗体より速く内部に取り込まれる（および／または異化される）；（２）タンパク質に結合するアゴニストであり；および／または（３）多価結合タンパク質が結合することができる抗原を発現している細胞の細胞死および／またはアポトーシスを誘導し得る。多価および／または多重特異的結合タンパク質の少なくとも１つの抗原結合特異性を提供する「親抗体」は、抗体が結合する抗原を発現している細胞によって内部に取り込まれ（および／または異化される）抗体であり得、および／またはアゴニスト、細胞死誘導および／またはアポトーシス誘導抗体であり得、本明細書に記載されている多価および／または多重特異的結合タンパク質は、これらの特性の１つ以上の改善を示し得る。さらに、親抗体は、これらの特性の任意の１つ以上を欠損してもよいが、本明細書に記載されるように、多価結合タンパク質として構築された場合、これらの１つ以上を取得してもよい。
【００３１】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１のうちの１つ以上の標的への結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、約１０２Ｍ−１ｓ−１から約１０３Ｍ−１ｓ−１、約１０３Ｍ−１ｓ−１から約１０４Ｍ−１ｓ−１、約１０４Ｍ−１ｓ−１から約１０５Ｍ−１ｓ−１、または約１０５Ｍ−１ｓ−１から約１０６Ｍ−１ｓ−１の、１つ以上の標的に対する結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。
【００３２】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約１０−３ｓ−１；最大約１０−４ｓ−１；最大約１０−５ｓ−１；または最大約１０−６ｓ−１のうちの１つ以上の標的への解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、約１０−３ｓ−１から約１０−４ｓ−１の、約１０−４ｓ−１から約１０−５ｓ−１の、または約１０−５ｓ−１から約１０−６ｓ−１の間の、１つ以上の標的に対する解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。
【００３３】
別の実施形態において、結合タンパク質は、最大約１０−７Ｍ；最大約１０−８Ｍ；最大約１０−９Ｍ；最大約１０−１０Ｍ；最大約１０−１１Ｍ；最大約１０−１２Ｍまたは最大約１０−１３Ｍのうちの１つ以上の標的への解離定数（Ｋｄ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、約１０−７Ｍから約１０−８Ｍの；約１０−８Ｍから約１０−９Ｍの；約１０−９Ｍから約１０−１０Ｍの；約１０−１０Ｍから約１０−１１Ｍの；約１０−１１Ｍから約１０−１２Ｍの；または約１０−１２Ｍから約１０−１３Ｍのその標的に対する解離定数（Ｋｄ）を有する。
【００３４】
別の実施形態において、結合タンパク質は、薬剤をさらに含むコンジュゲートである。一実施形態において、抗原は、免疫接着分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤である。一実施形態において、造影剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンである。別の実施形態において、放射性標識は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍである。さらに別の実施形態において、治療剤または細胞毒性剤は、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である。
【００３５】
別の実施形態において、結合タンパク質は結晶化された結合タンパク質であり、結晶として存在する。一実施形態において、この結晶は、無担体医薬徐放結晶である。別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は、この結合タンパク質の可溶性対応物より大きなインビボ半減期を有する。さらに別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は生物学的活性を保持する。
【００３６】
別の実施形態において、本明細書に記載されている結合タンパク質はグリコシル化される。例えば、グリコシル化パターンは、ヒトグリコシル化パターンである。
【００３７】
本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか１つをコードする単離された核酸も提供される。さらなる実施形態は、本明細書に開示されている単離された核酸を含むベクターを提供し、ベクターは、ｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３０（２）；ｐＴＴ３（追加の多重クローニング部位を有するｐＴＴ）；ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ、（１９９０年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：（１７）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ；ｐＥＦ６  ＴＯＰＯ；ｐＢＯＳ；ｐＨｙｂＥ；またはｐＢＪである。一実施形態において、ベクターは、米国特許公開第２００９０２３９２５９号に開示されているベクターである。
【００３８】
別の態様において、宿主細胞は、本明細書に開示されたベクターで形質転換される。一実施形態において、宿主細胞は原核細胞、例えば、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。別の実施形態において、宿主細胞は真核細胞、例えば、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞または真菌細胞である。一実施形態において、宿主細胞は、これらに限定されないが、ＣＨＯ、ＣＯＳ；ＮＳ０、ＳＰ２、ＰＥＲ．Ｃ６を含む哺乳動物細胞；またはサッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌細胞；またはＳｆ９などの昆虫細胞である。一実施形態において、異なる特異性を有する２つまたはそれ以上の結合タンパク質は、単一の組換え宿主細胞中で生産される。例えば、抗体の混合物の発現は、Ｏｌｉｇｏｃｌｏｎｉｃｓ（商標）（Ｍｅｒｕｓ  Ｂ．Ｖ．，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）米国特許第７，２６２，０２８号および第７，４２９，４８６号と呼ばれている。
【００３９】
結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、本明細書に開示されている宿主細胞のいずれか１つを培地中において培養することを含む、本明細書に開示されている結合タンパク質を生産する方法が提供される。一実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の５０％から７５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。別の実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の７５％から９０％が、二重特異的四価結合タンパク質である。別の実施形態において、生産された結合タンパク質の９０％から９５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。
【００４０】
一実施形態は、結合タンパク質の放出のための組成物を提供し、この組成物は、結晶化された結合タンパク質、成分、および少なくとも１つのポリマー性担体を含む。一実施形態において、ポリマー担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリラート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチラート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン、硫酸化多糖またはこれらの混和物および共重合体である。一実施形態において、成分は、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコールである。
【００４１】
別の実施形態は、本明細書に開示された組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む哺乳動物を治療する方法を提供する。
【００４２】
本明細書に開示された結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物が提供される。さらなる実施形態において、この医薬組成物は、疾患を治療するための少なくとも１つの追加の治療剤を含む。例えば、追加の薬剤は、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤（抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ−トラップが含まれるが、これらに限定されない。）、キナーゼ阻害剤（ＫＤＲおよびＴＩＥ−２阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）、共刺激分子遮断剤（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０が含まれるが、これらに限定されない。）、接着分子遮断剤（抗ＬＦＡ−１抗体、抗Ｅ／Ｌセレクチン抗体、小分子阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）、抗サイトカイン抗体またはその機能的断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦおよび抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体が含まれるが、これらに限定されない。）、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性薬剤、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸引用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストであり得る。
【００４３】
本明細書に開示されている結合部分によって結合され得る標的または複数の標的が有害である障害に罹患しているヒト対象を治療する方法であって、標的または複数の標的の活性が、ヒト対象において阻害され、１以上の症状が緩和されまたは治療が達成されるように、本明細書に開示されている結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む方法が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質は、例えば、炎症を伴う疾患などの自己免疫疾患に罹患しているヒトを治療するために使用することができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、喘息、アレルギー、アレルギー性肺疾患、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、線維症、嚢胞性線維症（ＣＦ）、線維性肺疾患、特発性肺線維症、肝線維症、狼瘡、Ｂ型肝炎関連肝疾患および線維症、敗血症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糸球体腎炎、炎症性皮膚疾患、乾癬、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、ＨＩＶによって引き起こされる感染症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症（ＯＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植拒絶反応、虚血性心疾患（ＩＨＤ）、セリアック病、接触過敏症、アルコール性肝疾患、ベーチェット病、アテローム硬化性血管疾患、眼球表面の炎症性疾患またはライム病を治療するために使用される。
【００４４】
別の実施形態において、治療されるべき障害または状態は、例えば、ＨＩＶ、ヒトライノウイルス、エンテロウイルス、コロナウイルス、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルスまたはアデノウイルスによって引き起こされる、ヒトにおけるウイルス感染によって生じる症状を含む。
【００４５】
本明細書において提供される結合タンパク質は、神経障害を治療するために用いることができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、神経再生および脊髄損傷を含む神経変性疾患および状態を治療するために用いられる。
【００４６】
一実施形態において、本明細書において開示されている組成物および方法を用いて治療または診断され得る疾患には、限定されないが、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱および尿路上皮を含む）、女性生殖路（子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む）、男性生殖路（前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む）、内分泌腺（甲状腺、副腎および下垂体を含む）および皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫（骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む）、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍（星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む）、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫の両方）を含む原発性および転移性の癌が挙げられる。
【００４７】
別の実施形態は、疾患または障害の治療における結合タンパク質の使用を提供し、前記疾患または障害は、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型および多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、アテローム性疾患／アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織���患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害、うつ病、統合失調症、Ｔｈ２型およびＴｈ１型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛、疼痛の様々な形態、癌、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、造血性悪性病変、白血病、リンパ腫、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）および動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症���機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎（Ａ型）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ．ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・デジェリーヌ−トーマス・シャイ−ドレーガーおよびマシャド−ジョセフ）、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラ��シー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ｃｉｓ）、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｊｕｎｔｉｖｉｔｉｓ  ｓｉｃｃａ）、クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ  ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分
泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）、原発性パーキンソニズム、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎）、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、坐骨神経痛、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性、もしくは創傷治癒である。
【００４８】
一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療剤および／または化学療法剤と組み合わせて用いる場合、癌を治療するために使用されまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防もしくは阻害において使用される。
【００４９】
別の態様において、本明細書に論述されているような第二の作用物質の投与前、投与と同時または投与後に、本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか１つを投与する工程を含む、疾患に罹患している患者を治療する方法が提供される。一実施形態において、第二の作用物質は、ブデノシド、上皮増殖因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチラート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１βｍＡｂ、抗ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体ｍＡｂ、増殖因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ−１９、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはこれらのリガンドに対する抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３またはＴＧＦβである。特定の実施形態において、本明細書に開示されている医薬組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮投与によって、患者に投与される。
【００５０】
また、本明細書に開示されている結合タンパク質に対する抗イディオタイプ抗体も提供される。抗イディオタイプ抗体は、本明細書において提供される結合タンパク質に組み込むことができる、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク領域または任意のその一部などの、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。
【００５１】
試験試料におけるＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７もしくはその断片の存在、量または濃度を決定する方法が提供される。この方法は、イムノアッセイによって、抗原またはその断片について試験試料をアッセイすることを含む。イムノアッセイは、（ｉ）少なくとも１つの結合タンパク質および少なくとも１つの検出可能な標識を使用し、（ｉｉ）試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的指標としての検出可能な標識によって生じるシグナルと、対照または較正因子における抗原またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的指標として生じるシグナルとを比較することを含む。較正因子は、場合によって、一連の較正因子の一部であり、この場合、較正因子のそれぞれは、抗原またはその断片の濃度によって、その一連の較正因子中の他の較正因子と異なっている。本方法は、（ｉ）捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を形成するために、試料を、抗原またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの捕捉剤と接触させること、（ｉｉ）捕捉剤／抗原またはその断片／検出剤の複合体を形成するために、捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を、検出可能な標識を含み、抗原またはその断片上のエピトープに結合し、捕捉剤に結合しない少なくとも１つの検出剤と接触させることおよび（ｉｉｉ）（ｉｉ）において形成された捕捉剤／抗原またはその断片／検出剤の複合体における検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度を決定することを含むことができ、少なくとも１つの捕捉剤および／または少なくとも１つの検出剤は少なくとも１つの結合タンパク質である。
【００５２】
あるいは、本方法は、（ｉ）捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を形成するために、試験試料と、抗原またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの捕捉剤とを接触させ、同時にまたはいずれかの順番で連続して、試験試料と、少なくとも１つの捕捉剤への結合に関して試験試料中の任意の抗原またはその断片と競合し得る、検出可能に標識された抗原またはその断片とを接触させ、試験試料中に存在する任意の抗原またはその断片および検出可能に標識された抗原は互いに競合し、それぞれ、捕捉剤／抗原またはその断片の複合体と捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体を形成することおよび（ｉｉ）（ｉｉ）において形成された捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体において検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度を決定することを含むことができ、少なくとも１つの捕捉剤は、少なくとも１つの結合タンパク質であり、捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体における検出可能な標識によって生じるシグナルは、試験試料中の抗原またはその断片の量または濃度に反比例する。
【００５３】
試験試料は、患者由来であり得、この場合、本方法は、患者の治療的／予防的処置の効力を診断、予後診断または評価する工程をさらに含み得る。本方法が、患者の治療的／予防的処置の効力を評価することをさらに含む場合、この方法は、場合によって、効力を改善するために必要な、患者の治療的／予防的処置の改変を加えることをさらに含む。本方法は、自動化システムまたは半自動化システムにおける使用に適合させることができる。したがって、本明細書に記載されている方法はまた、対象が、所与の疾患、障害または状態を有するまたはそれを発症する危険性があるか否かを判定するために使用することができる。具体的には、このような方法は、以下：
（ａ）対象由来の試験試料中の、分析物またはその断片の濃度または量を（例えば、本明細書に記載されている方法または当該技術分野において公知の方法を用いて）決定する工程；
（ｂ）工程（ａ）において決定された分析物またはその断片の濃度または量と、予め決定されたレベルとを比較する工程を含むことができ、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量が予め決定されたレベルと比較して好ましい場合、対象は、所定の疾患、障害または状態を有さないまたはその危険性がないと決定される。
しかしながら、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量が予め決定されたレベルと比較して好ましくない場合、対象は、所定の疾患、障害または状態を有するまたはその危険性があると決定される。
【００５４】
さらに、対象における疾患の進行を監視する方法が本明細書に提供される。場合によって、本方法は、以下：
（ａ）分析物の対象由来の試験試料中の濃度または量を決定する工程；
（ｂ）分析物の対象由来の後者の試験試料中の濃度または量を決定する工程；および
（ｃ）工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量と、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量とを比較することを含み、工程（ｂ）において決定された濃度または量が変化しない場合または工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して好ましくない場合、対象における疾患は継続し、進行しまたは悪化していると判断される。比較して、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量が、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して好ましい場合、対象における疾患は中断し、軽減しまたは改善されたと判断される。
【００５５】
場合によって、本方法は、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量と、例えば、予め決定されたレベルとを比較することをさらに含む。さらに、場合によって、例えば、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量が、予め決定されたレベルと比較して、不利に変更されたことを比較が示す場合、本方法は、ある期間、１以上の医薬組成物を用いて対象を治療することを含む。
【００５６】
また、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７またはその断片について試験試料をアッセイするキットが提供される。キットは、抗原またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分、抗原またはその断片について試験試料をアッセイするための指示書を含み、少なくとも１つの成分は、本明細書に開示されている結合タンパク質を含む少なくとも１つの組成物を含み、結合タンパク質は、場合によって、検出可能に標識されている。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質構築物の模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる多価および／または多重特異的結合タンパク質が提供される。二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）または二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））およびこれらの医薬組成物ならびに核酸、組換え発現ベクターおよびこのようなＤＶＤ結合タンパク質を作製するための宿主細胞もまた提供される。インビトロまたはインビボのいずれかにおいて、特定の抗原を検出するＤＶＤ結合タンパク質を使用する方法もまた提供される。
【００５９】
本明細書に別段の定義がなければ、本明細書で使用される科学および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。何らかの曖昧さが伏在している場合には、本明細書中に付与されている定義は、すべての辞書または本明細書外の定義に優越する。文脈上別段の必要がなければ、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。「または」の使用は、別段の記載がなければ、「および／または」を意味する。「含んでいる」という用語ならびに「含む」および「含まれた」などのその他の形式の使用は、限定的なものではない。
【００６０】
一般的に、本明細書に記載されている細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリッド形成に関連して使用される命名法は、周知のものであり、本分野において一般的に使用されている。一般に、本明細書において提供される方法および技術は、別段の記載がなければ、本分野において周知の慣用方法に従い、ならびに本明細書を通じて引用および論述されている様々な一般的参考文献およびより具体的な参考文献中に記載されているように、実施することができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明書に従って、本分野で一般的に遂行されているように、または本明細書に記載されているように、実施される。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学に関して使用される命名法、ならびに本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学の実験室操作および技術は、周知のものであり、本分野で一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、調合、および送達、および患者の治療に対しては、標準的な技術を使用し得る。
【００６１】
本開示がより容易に理解し得るように、特定の用語を以下に定義する。
【００６２】
「抗体」という用語は、４つのポリペプチド鎖（２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖）から一般に構成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子またはＩｇ分子のエピトープ結合特性を保持した機能的断片、変異体、バリアントまたはこれらの誘導体を表すものとする。このような断片、変異体、バリアントまたは誘導体抗体のフォーマットは、本分野において公知である。完全長の抗体の一実施形態において、各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。ＣＨは、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＣＬは単一のＣＬドメインから構成される。ＶＨおよびＶＬは、より保存された領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。）が散在された超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される。）へ、さらに細分割することが可能である。一般に、各ＶＨおよびＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。免疫グロブリン分子は、あらゆる種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
【００６３】
「二特異的抗体」という用語は、その２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの一対）の１つの上に１つの抗原（またはエピトープ）を結合し、その第二の結合アーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）の上の異なる抗原（またはエピトープ）に結合する抗体を指す。二特異的抗体は、２つの異なる抗原結合アーム（特異性とＣＤＲ配列の両方における）を有し、それが結合するそれぞれの抗原について一価である。二特異的抗体には、クアドローマ技術（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ（１９８３年）Ｎａｔｕｒｅ  ３０５（５９３４）：５３７−４０）によって、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的コンジュゲーション（Ｓｔａｅｒｚｅｔ  ａｌ．（１９８５年）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４（６０１２）：６２８−３１）によってまたはノブ・イントゥ・ホールもしくはＦｃ領域中に突然変異を導入する同様のアプローチ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０（１４）：６４４４−６４４８）によって生成されるものが含まれる。
【００６４】
「親和性成熟された」抗体とは、変化を有しない親抗体と比べて、抗体の１つ以上のＣＤＲ中に、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす１つ以上の変化を有する抗体である。典型的な親和性成熟された抗体は、標的抗原に対してｎＭの親和性を有し、またはｐＭの親和性さえ有する。親和性成熟された抗体は、本分野において公知の操作によって産生される。「Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３」は、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載している。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基の無作為な突然変異導入は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）ＰｒｏｃＮａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６によって記載されており、活性増強アミノ酸残基による選択的突然変異導入位置、接触または過剰変異位置での突然変異は、米国特許第６，９１４，１２８号に記載されている。
【００６５】
「ＣＤＲ移植された抗体」という用語は、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域の１つ以上の配列が別の抗体のＣＤＲ配列で置換されている重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体を指す。例えば、２つの抗体は、マウスＣＤＲの１つ以上がヒトＣＤＲ配列で置換されているマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体などの異なる種由来であり得る。
【００６６】
「ヒト化抗体」という用語は、ヒト以外の種由来の、より「ヒト類似に」、すなわち、ヒト生殖系列配列により類似するように改変された抗体を表す。ヒト化抗体の１つの種類は、非ヒトＣＤＲ配列がヒトのＶＨおよびＶＬ配列中に導入されて、対応するヒトＣＤＲ配列が置換されているＣＤＲ移植された抗体である。「ヒト化抗体」はまた、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に（例えば、アミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性で）有するフレームワーク領域（ＦＲ）配列と、非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する少なくとも１つのＣＤＲを含む抗体またはそのバリアント、誘導体、類似体もしくは断片である。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列が非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）の配列に対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列がヒト免疫グロブリンの配列である、少なくとも１つの、典型的には２つ可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的にすべてを含んでもよい。ヒト化抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含んでもよい。一実施形態において、ヒト化抗体はまた、ヒト免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／または重鎖のヒト化可変ドメインのみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖、ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、重鎖、ならびに軽鎖の少なくとも可変ドメインを含有する。
【００６７】
「二重可変ドメイン結合タンパク質」および「二重可変ドメイン免疫グロブリン」という用語は、その２つの結合アーム（例えば、ＨＣ／ＬＣの一対）のそれぞれにおいて２つの可変ドメインを有する結合タンパク質を指し（ＰＣＴ出願公開第ＷＯ０２／０２７７３号参照）、それぞれが抗原に結合することができる。一実施形態において、それぞれの可変ドメインは、異なる抗原またはエピトープに結合する。別の実施形態において、それぞれの可変ドメインは、同じ抗原またはエピトープに結合する。別の実施形態において、二重可変ドメイン結合タンパク質は、同一の特異性と同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一の抗原結合アームを有し、それが結合するそれぞれの抗原に対して二価である。一実施形態において、ＤＶＤ結合タンパク質は、単一特異的であってもよく、すなわち、１つの抗原に結合することができまたは多重特異的であってもよく、すなわち、２つ以上の抗原に結合することができる。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）と呼ばれる。一実施形態において、４本鎖ＤＶＤ結合タンパク質の各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド、軽鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの抗原結合部位を含む。一実施形態において、それぞれの結合部位は、抗原結合部位あたりの抗原結合に関与する全６つのＣＤＲを有する重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。
【００６８】
「抗イディオタイプ抗体」という用語は、別の抗体の抗原結合部位のアミノ酸配列に対して惹起された抗体を指す。抗イディオタイプ抗体は、抗原に対する免疫応答を増強するために投与され得る。
【００６９】
「生物学的活性」という用語は、分子の１つ以上の固有の生物学的特性（インビボで見られるように天然に存在するものであっても、組換え手段によって提供される、または可能にされるものであっても）を表す。生物学的特性には、受容体に結合すること；細胞増殖の誘導、細胞増殖を阻害すること、他のサイトカインの誘導、アポトーシスの誘導および酵素活性が含まれるが、これらに限定されない。
【００７０】
「中和」という用語は、結合タンパク質が抗原に特異的に結合した場合、抗原の生物学的活性を相殺することを指す。一実施形態において、中和結合タンパク質は、抗原（例えば、サイトカイン）に結合し、少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれ以上にその生物学的活性を低下させる。
【００７１】
「特異性」とは、抗原に選択的に結合する結合タンパク質の能力を指す。
【００７２】
「親和性」は、結合タンパク質と抗原との間の相互作用の強さであり、結合タンパク質のＣＤＲの配列によって、ならびに抗原の性質、例えばそのサイズ、形状および／または電荷によって決定される。結合タンパク質は、負の副作用を最小限にしながら、所望の治療の評価項目を提供する親和性について選択することができる。親和性は、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて測定することができる。
【００７３】
「効力」という用語は、所望の効果を達成するための結合タンパク質の能力を意味し、その治療有効性の測定である。効力は、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて評価することができる。
【００７４】
「交差反応性」という用語は、惹起された標的以外の標的に結合する結合タンパク質の能力を指す。一般に、結合タンパク質は、適切に高い親和性でその標的組織（単数または複数）／抗原（単数または複数）に結合するが、非標的の正常組織に対して適切に低い親和性を示す。個々の結合タンパク質は、一般に、２つの基準を満たすように選択される。（１）抗体標的の既知の発現に適切な組織染色。（２）同じ臓器からのヒトとｔｏｘ種（マウスおよびカニクイザル）との間の類似した染色パターン。交差反応性を評価するためのこれらの方法および他の方法は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７５】
「生物学的機能」という用語は、結合タンパク質の特異的なインビトロまたはインビボにおける作用を意味する。結合タンパク質は、抗原のいくつかのクラスを対象とし、複数の作用機序を介して所望の治療結果を達成することができる。結合タンパク質は、可溶性タンパク質、細胞表面抗原ならびに細胞外タンパク質沈着物を対象にすることができる。結合タンパク質は、それらの標的の活性を作働させ、拮抗しまたは中和することができる。結合タンパク質は、それらが結合する標的のクリアランスを助けることができまたは細胞に結合したときに細胞毒性をもたらすことがある。２つ以上の抗体の部分は、単一の結合タンパク質分子において異なる機能を達成するために、多価フォーマットに組み込むことができる。生物学的機能を評価するために使用されるインビトロアッセイおよびインビボモデルは、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７６】
「安定な」結合タンパク質は、結合タンパク質が、保存時にその物理的安定性、化学的安定性および／または生物学的活性を本質的に保持しているものである。長期間にわたって、種々の温度にてインビトロで安定である多価結合タンパク質が望ましい。結合タンパク質を安定化し、種々の温度でそれらの安定性を評価する方法は、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７７】
「溶解性」という用語は、水性溶液中に分散させたままにするタンパク質の能力を意味する。水性製剤中のタンパク質の溶解性は、疎水性および親水性アミノ酸残基の適切な分布に依存し、したがって、溶解性は、正確に折り畳まれたタンパク質の生成と相関し得る。当業者は、日常的なＨＰＬＣ技術および当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて、結合タンパク質の可溶性の増加または減少を検出することができる。
【００７８】
結合タンパク質は、様々な宿主細胞を用いて生成されてもよく、またはインビトロで生成されてもよく、労力あたりの相対収率は「生成効率」を決定する。生成効率に影響を及ぼす因子には、限定されないが、宿主細胞型（原核生物または真核生物）、発現ベクターの選択、ヌクレオチド配列の選択および使用される方法が挙げられる。結合タンパク質生成に使用される材料および方法、ならびに生成効率の測定は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７９】
「免疫原性」という用語は、免疫応答を誘導する物質の能力を意味する。治療的結合タンパク質の投与は、免疫応答の特定の発生率をもたらし得る。多価形式の免疫原性を誘導し得る潜在的な要素は、親抗体の選択中に分析することができ、このような危険性を低下させるための工程は、多価結合タンパク質形式にそれらの配列を組み込む前に、親抗体を最適化するために採用することができる。抗体と結合タンパク質の免疫原性を減少させる方法は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００８０】
「標識」および「検出可能な標識」という用語は、特異的結合対のメンバー間の反応（例えば、結合）を検出可能なものにするために、抗体またはその分析物などの特異的結合対のメンバーに結合させた部分を意味する。特異的結合対の標識された部分は、「検出可能に標識されている」と呼ばれる。したがって、「標識された結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の同定を与える標識が取り込まれたタンパク質を表す。一実施形態において、標識は、視覚または計測手段によって検出可能な信号を生成することができる、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識されたアミノ酸の取り込み、または印を付けたアビジン（例えば、光学的方法または比色分析法によって検出することができる、蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができるビオチン部分のポリペプチドへの付着である。ポリペプチド用の標識の例には、以下の放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍ）；色原体、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）；酵素的標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；およびガドリニウムキレートなどの磁気作用物質が含まれるが、これらに限定されない。イムノアッセイに一般に使用される標識の代表例には、光を生じる部分、例えばアクリジニウム化合物および蛍光を生じる部分、例えばフルオレセインが含まれる。この関連で、部分自体が検出可能に標識され得るが、さらに別の部分との反応後に検出可能にされ得る。
【００８１】
「連結体」という用語は、第二の化学部分（治療剤または細胞毒性剤など）に化学的に連結された抗体などの結合タンパク質を表す。「作用物質」という用語は、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子または生物由来物質から作製された抽出物を含む。一実施形態において、治療剤または細胞毒性剤には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらの類似体または相同体が含まれるが、これらに限定されるものではない。イムノアッセイとの関連において使用される場合、連結抗体は、検出抗体として使用される検出可能に標識された抗体であってよい。
【００８２】
「結晶」および「結晶化された」という用語は、結晶の形態で存在する結合タンパク質（例えば、抗体）またはその抗原結合部分を表す。結晶は、物質の固体状態の一形態であり、これは、非晶質の固体状態または液体の結晶状態などの他の形態とは異なる。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）または分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な反復する三次元配列から構成される。これらの三次元配列は、本分野においてよく理解されている特異的な数学的関係に従って整列されている。結晶中で反復されている基礎的単位または構築ブロックは、非対称単位と呼ばれる。所定の十分に整えられた結晶的対称性に合致する配置での非対称単位の反復は、結晶の「単位格子」を与える。すべての三次元中での規則的な転換による単位格子の反復は、結晶を与える。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）を参照されたい。
【００８３】
「ベクター」という用語は、核酸分子に連結されている別の核酸を輸送することができる該核酸分子を表す。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、その中にさらなるＤＮＡセグメントを連結し得る環状二本鎖ＤＮＡループを表す。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、ここで、追加のＤＮＡセグメントはウイルスゲノム中に連結され得る。他のベクターにはＲＮＡベクターが含まれる。ある種のベクターは、当該ベクターがその中に導入された宿主細胞中で自律的複製を行うことができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中へ導入されて、宿主細胞のゲノム中に組み込まれることが可能であり、これにより、宿主ゲノムとともに複製される。ある種のベクターは、それらが作用可能に連結されている遺伝子の発現を誘導することが可能である。このようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に、「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。プラスミドは、最も一般的に使用されるベクターの形態であるので、本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、発現ベクターの他の形態もまた含まれ、例えば、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）なども含まれる。一群のｐＨｙｂＥベクター（米国特許出願第６１／０２１，２８２号）は、親抗体およびＤＶＤ結合タンパク質のクローニングに使用された。ｐＪＰ１８３由来のＶ１；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇ１，ｚ，非Ｖ２は、抗体および野生型定常領域を有するＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１９１由来のＶ２；ｐＨｙｂＥ−ｈＣＫ  Ｖ３は、抗体およびカッパ定常領域を有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１９２由来のＶ３；ｐＨｙｂＥ−ｈＣＩ  Ｖ２は、抗体およびランダ定常領域を有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。Ｖ４は、ラムダシグナルペプチドおよびカッパ定常領域を用いて構築され、ラムダ−カッパハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。Ｖ５は、カッパシグナルペプチドおよびラムダ定常領域を用いて構築され、カッパ−ラムダハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１８３由来のＶ７；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇ１，ｚ，非Ｖ２は、抗体および（２３４、２３５ＡＡ）突然変異定常領域を有するＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用された。
【００８４】
「組換え宿主細胞」または「宿主細胞」という用語は、外来ＤＮＡがその中に導入されている細胞を表す。このような用語は、当該細胞を表すのみならず、このような細胞の子孫も表す。突然変異または環境的な影響のために、後続の世代中にある種の修飾が生じ得るので、このような子孫は、実際には親細胞と同一でないことがあり得るが、本明細書において使用される「宿主細胞」という用語の範囲になお含まれる。一実施形態において、宿主細胞には、原核および真核細胞が含まれる。一実施形態において、真核細胞には、原生生物、真菌、植物および動物細胞が含まれる。別の実施形態において、宿主細胞には、原核細胞株Ｅ．コリ；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３、ＣＯＳ、ＮＳ０、ＳＰ２およびＰＥＲ．Ｃ６；昆虫細胞株Ｓｆ９および真菌細胞サッカロミセス・セレビシアエが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００８５】
「トランスフェクション」という用語は、宿主細胞への外因性核酸（例えば、ＤＮＡ）を導入するために一般的に用いられる様々な技術を包含し、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどが挙げられる。
【００８６】
「サイトカイン」という用語は、細胞間媒介物質として別の細胞集団に作用する１つの細胞集団から放出されるタンパク質を指す。「サイトカイン」という用語には、天然源由来または組換え細胞培養物由来のタンパク質および天然配列のサイトカインの生物学的に活性な同等物が含まれる。
【００８７】
「生物学的試料」という用語は、生物または生物であったものから得られた物質の量を意味する。このような物質には、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が含まれるが、これらに限定されない。
【００８８】
「成分」という用語は、組成物の要素を指す。診断キットに関連して、例えば、成分は、試験試料のアッセイ用のキットに含めることができる、捕捉抗体、検出またはコンジュゲート抗体、対照、較正因子、一連の較正因子、感受性パネル、容器、緩衝液、希釈剤、塩、酵素、酵素の補因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液として）、停止液などであってもよい。したがって、「成分」は、例えば、抗分析物（例えば、抗ポリペプチド）抗体に結合させることによって、固体支持体上に固定されている、上記のポリペプチドまたは他の分析物を含めることができる。いくつかの成分は、溶液中にあってもよくまたはアッセイにおける使用として再構成するために凍結乾燥されてもよい。
【００８９】
「対照」は、分析物を含まない（「陰性対照」）または分析物を含む（「陽性対照」）ことが知られている組成物を表す。陽性対照は、既知の濃度の分析物を含み得る。「対照」、「陽性対照」および「較正物質」は、既知の濃度の分析物を含む組成物を表すために本明細書において互換的に使用され得る。「陽性対照」は、アッセイ性能特性を確立するために使用することが可能であり、試薬（例えば、分析物）の完全性の有用な指標である。
【００９０】
「所定のカットオフ」および「所定のレベル」は、所定のカットオフ／レベルに対してアッセイの結果を比較することにより診断／予後診断／治療的効力の結果を評価するために使用されるアッセイのカットオフ値を一般に表し、所定のカットオフ／レベルは様々な臨床的パラメーター（例えば、疾患の重症度、進行／非進行／改善など）にすでにつながっておりまたは関連している。本開示は例示的な所定のレベルを提供し得るが、カットオフ値はイムノアッセイの性質（例えば、使用される抗体など）に応じて様々となり得ることが周知である。さらに、本明細書における開示を他のイムノアッセイに適合させて、本開示を基礎とする他のイムノアッセイについてのイムノアッセイ特異的なカットオフ値を得ることは、当業者の通常の技術の範囲内に十分にある。所定のカットオフ／レベルの正確な値はアッセイ間で様々となり得るが、（もしあれば）本明細書に記載されている相関は一般に適用可能であるはずである。
【００９１】
本明細書に記載されている診断アッセイにおいて使用される「前処理試薬」、例えば、溶解、沈殿および／または可溶化試薬は、あらゆる細胞を溶解するものおよび／または試験試料中に存在するあらゆる分析物を可溶化するものである。前処理は、本明細書でさらに記載されるように、すべての試料に必要というわけでない。とりわけ、分析物（例えば、目的のポリペプチド）の可溶化は、試料中に存在するあらゆる内在性結合タンパク質からの分析物の放出を伴い得る。前処理試薬は均一（分離工程を必要としない）または不均一（分離工程を必要とする）であり得る。不均一前処理試薬を使用すると、アッセイの次の工程に進行する前に任意の沈殿した分析物結合タンパク質は試験試料から除去される。
【００９２】
本明細書に記載されているイムノアッセイおよびキットとの関連で「品質管理試薬」には、較正物質、対照および感受性パネルが含まれるが、これらに限定されない。「較正物質」または「標準物質」は、抗体または分析物などの分析物の濃度を内挿するための較正（標準）曲線を確立するために典型的に（例えば複数など、１つ以上）使用される。あるいは、所定の陽性／陰性カットオフ近くにある単一の較正物質を使用することが可能である。「感受性パネル」を含むように、複数の較正物質（すなわち、２つ以上の較正物質または様々な量の（複数の）較正物質）を組み合わせて使用することが可能である。
【００９３】
「特異的結合パートナー」という用語は、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学的または物理的な手段を介して互いに特異的に結合する２つの異なる分子を含む。したがって、抗原および抗体の特異的結合に加えて、他の特異的結合対は、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物およびレクチン、相補的なヌクレオチド配列、エフェクターおよび受容体分子、補因子および酵素、酵素阻害剤および酵素などを含み得る。さらに、特異的結合対は、元の特異的結合メンバーの類似体、例えば、分析物類似体であるメンバーを含み得る。免疫反応性特異的結合メンバーには、単離または組換えで産生された抗原、抗原断片およびモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む抗体ならびにその複合体、断片およびバリアント（バリアントの断片を含む）が含まれる。
【００９４】
「Ｆｃ領域」という用語は、無傷の抗体のパパイン消化によって生成され得る、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義する。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン（ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）を含み、場合によって、ＣＨ４ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変化させるために、Ｆｃ部分中のアミノ酸残基を置換することが、本分野において周知である（例えば、米国特許第５，６４８，２６０号および第５，６２４，８２１号）。Ｆｃ領域は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および抗体と抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。いくつかの場合において、これらのエフェクター機能は、治療用の免疫グロブリンに対して望ましいが、他の場合において、治療目的に応じて、不要であるまたは有害でさえあり得る。
【００９５】
結合タンパク質の「抗原結合部分」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する結合タンパク質（例えば、抗体）の１つ以上の断片を意味する。結合タンパク質の抗原結合部分は、完全長の抗体の断片、ならびに、２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する、二特異的、二重特異的または多重特異的フォーマットで行うことができる。結合タンパク質の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域において、ジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別個の遺伝子によってコードされているが、これらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子を形成している単一のタンパク質鎖として、これらの作製を可能とする合成リンカーによって、組換え法を用いて連結することが可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている。）。このような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものとする。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態も包含される。さらに、一本鎖抗体も、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒に、抗原結合領域の対を形成する直列Ｆｖセグメントの対を含む「直鎖抗体」（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。
【００９６】
「多価結合タンパク質」という用語は、２つまたはそれ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を意味する。一実施形態において、多価結合タンパク質は、３つまたはそれ以上の抗原結合部位を有するように工学的に作製され、天然に存在しない抗体である。「多重特異的結合タンパク質」という用語は、２つ以上の関連標的または非関連標的に結合することができる結合タンパク質を指す。一実施形態において、本明細書に提供される二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含み、四価または多価の結合タンパク質である。
【００９７】
「リンカー」という用語は、アミノ酸残基または２つのポリペプチド（例えば、２つのＶＨまたは２つのＶＬドメイン）に連結させて用いられるペプチド結合によって接続された２つ以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドを意味する。このようなリンカーポリペプチドは、本分野において周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。
【００９８】
「Ｋａｂａｔ番号」、「Ｋａｂａｔ定義」および「Ｋａｂａｔ標識」という用語は、本明細書において、互換的に使用される。本分野において認められているこれらの用語は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基に比べて、より可変的な（すなわち、超可変的な）アミノ酸残基に付番するシステムを表す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置３１から３５、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から６５およびＣＤＲ３に対するアミノ酸位置９５から１０２にわたる。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置２４から３４、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から５６およびＣＤＲ３に対するアミノ酸位置８９から９７にわたる。
【００９９】
「ＣＤＲ」という用語は、免疫グロブリン可変領域配列内の相補性決定領域を意味する。重鎖および軽鎖可変領域のそれぞれについて、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と命名されている、重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれにおいて３つのＣＤＲが存在する。「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる単一の可変領域中に生じる３つのＣＤＲ群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なる系に従って、異なって定義されてきた。Ｋａｂａｔによって記載された系（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））は、抗体のいずれの可変領域に対しても適用可能な明瞭な残基付番系を提供するのみならず、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界を提供する。これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲと称され得る。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３）は、ＫａｂａｔＣＤＲ内のある種の亜部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造を採ることを見出した。これらの亜部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３（「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ、軽鎖および重鎖領域を表記する。）と表記される。これらの領域は、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲと称される場合があり、これは、ＫａｂａｔＣＤＲと重複する境界を有する。ＫａｂａｔＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界が、Ｐａｄｌａｎ（１９９５）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２−４５によって記載されている。さらに別のＣＤＲ境界定義が、上記系の１つに厳格に従わない場合があり得るが、それにも関わらず、ＫａｂａｔＣＤＲと重複するが、これらは、特定の残基または残基の群またはさらにはＣＤＲ全体が、抗原結合に著しい影響を与えないという予測または実験的な発見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書に使用されている方法は、これらの系のいずれかに従って定義されたＣＤＲを使用し得るが、ある種の実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを使用する。
【０１００】
「エピトープ」という用語は、結合タンパク質、例えば、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる、ポリペプチドおよび／または他の決定因子によって結合される抗原の領域を意味する。ある種の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホリルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、ある種の実施形態において、特異的な三次元構造的特徴および／または特異的な電荷特徴を有し得る。一実施形態において、エピトープは、特異的結合パートナー上の相補的部位に結合することが知られている抗原（またはその断片）の領域のアミノ酸残基を含む。抗原断片は１を超えるエピトープを含むことができる。ある種の実施形態において、結合タンパク質が、タンパク質および／または高分子の複雑な混合物中で、その標的抗原を認識する場合に、抗体は抗原を特異的に結合する。抗体が交差競合する（一方が他方の結合または調節作用を妨げる）場合、結合タンパク質は「同じエピトープに結合する」。さらに、エピトープの構造上の定義（重複、類似、同一）は有益であり、機能上の定義は、構造上（結合）および機能上（調節、競合）のパラメーターを包含する。タンパク質の異なる領域は、異なる機能を果たすことができる。例えば、サイトカインの特定の領域は、受容体活性をもたらすそのサイトカイン受容体と相互作用し、一方、このタンパク質の他の領域は、サイトカインを安定化するために必要とされ得る。サイトカインシグナル伝達の負の影響を排除するために、サイトカインは、受容体相互作用領域（単数または複数）に特異的に結合する結合タンパク質を用いて標的化され得て、それによってその受容体の結合を阻止する。あるいは、結合タンパク質は、サイトカイン安定化に関与する領域を標的化され得て、それによって、分解のためのタンパク質を指定する。エピトープ認識を可視化し、モデル化する方法は、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【０１０１】
「薬物動態」とは、薬物が、生物によって、吸収され、分散され、代謝されおよび排泄されるプロセスを指す。所望の薬物動態プロファイルを有する多価結合タンパク質分子を生成するために、同様の所望の薬物動態プロファイルを有する親モノクローナル抗体が選択される。選択された親モノクローナル抗体のＰＫプロファイルは、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて、げっ歯類において容易に決定することができる。
【０１０２】
「生物学的利用能」とは、投与後にその標的に到達する活性薬剤の量を指す。生物学的利用能は、安定性、溶解性、免疫原性および薬物動態を含む前述の特性のいくつかの関数であり、当業者に知られている方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて評価することができる。
【０１０３】
「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの会社）、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムな生物特異的相互作用の分析を可能とする光学現象を意味する。さらなる記載については、Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６を参照されたい。「Ｋｏｎ」という用語は、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ／抗原複合体を形成する、結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質）と抗原の結合についての結合速度（ｏｎ  ｒａｔｅ）定数を意味する。「Ｋｏｎ」という用語はまた、本明細書において互換的に用いられ、「会合速度定数」または「ｋａ」を意味する。その標的抗原への結合タンパク質の結合速度または結合タンパク質、例えば抗体、と抗原との間の複合体形成の速度を示すこの値はまた、以下の式によって示される。
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ
【０１０４】
「Ｋｏｆｆ」という用語は、結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質）の、例えば、本分野で知られているＤＶＤ−Ｉｇタンパク質／抗原複合体からの解離についての解離速度（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）定数または「解離速度（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）定数」を意味する。この値は、以下の式によって示されるように、結合タンパク質、例えば抗体、のその標的抗原からの解離速度または遊離抗体と抗原への経時的なＡｂ−Ａｇ複合体の分離を示す。
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
【０１０５】
「Ｋｄ」および「平衡解離定数」という用語は、平衡状態での滴定測定においてまたは解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を結合速度定数（Ｋｏｎ）で割ることによって得られた値を意味する。会合速度定数、解離速度定数および平衡解離定数は、抗原への結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質）の結合親和性を表すために使用される。結合および解離速度定数を決定する方法は本分野において周知である。蛍光を基礎とする技術の使用は、高い感度を提供し、平衡状態で生理的緩衝液中の試料を調べることができる。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイなどの他の実験的アプローチおよび機器を使用することが可能である（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎから入手可能な機器）。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（動態排除アッセイ）アッセイも使用することが可能である。
【０１０６】
「バリアント」という用語は、アミノ酸の付加（例えば、挿入）、欠失または保存的置換によってアミノ酸配列中の所与のポリペプチドとは異なるが、所与のポリペプチドの生物活性を保持するポリペプチドを意味する（例えば、バリアントＩＬ−１７抗体は、ＩＬ−１７との結合について抗ＩＬ−１７抗体と競合することができる。）。アミノ酸の保存的置換、すなわち特性が類似する（例えば、親水性ならびに荷電領域の程度および分布）異なるアミノ酸とのアミノ酸の置き換えは、微小変化が典型的に関与すると本分野で認識されている。これらの微小変化は、本分野で理解されているように、アミノ酸のヒドロパシーインデックスを考慮することにより部分的に特定することが可能である（例えば、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２参照）。アミノ酸のヒドロパシーインデックスは、この疎水性および荷電の考慮を基礎とする。タンパク質中のヒドロパシーインデックスの類似したアミノ酸を置換することが可能であり、このタンパク質はタンパク質の機能を依然として保持することが本分野において知られている。一態様において、±２のヒドロパシーインデックスを有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質となる置換を明らかにするために使用することも可能である。ペプチドとの関連でアミノ酸の親水性を考慮すると、抗原性および免疫原性とよく相関することが報告されている有用な尺度である、そのペプチドの最大の局所平均親水性の計算が可能となる（例えば、米国特許第４，５５４，１０１号参照）。本分野で理解されているように、類似した親水性値を有するアミノ酸の置換は、生物活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。一態様において、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸を用いて置換が行われる。アミノ酸のヒドロパシーインデックスと疎水性値はどちらもそのアミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。この観察に一致して、生物学的機能と適合するアミノ酸置換は、アミノ酸、特に、疎水性、親水性、荷電、サイズおよび他の特性によって明らかにされるこれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存することが理解されている。「バリアント」という用語は、タンパク質分解、リン酸化または他の翻訳後修飾などによって異なる形でプロセシングされているが、その生物活性または抗原反応性、例えばＩＬ−１７に結合する能力を保持するポリペプチドまたはその断片を含む。「バリアント」という用語は、他に定義がなければ、バリアントの断片を包含する。バリアントは、野生型配列に対して９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％または７５％同一であってもよい。
【０１０７】
Ｉ．結合タンパク質の生成
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる結合タンパク質およびそれを作製する方法が提供される。結合タンパク質は、様々な技術を用いて生成することができる。発現ベクター、宿主細胞および結合タンパク質を生成する方法が提供され、当該技術分野において周知である。
【０１０８】
Ａ．親モノクローナル抗体の作製
ＤＶＤ結合タンパク質の可変ドメインは、目的の抗原に結合することができるポリクローナルＡｂおよびｍＡｂなど、親抗体から取得することが可能である。これらの抗体は、天然に存在し得、または組換え技術によって作製され得る。当業者は、例えば、限定されないが、ハイブリドーマ技術の使用、選択されたリンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）、ファージ、酵母もしくはＲＮＡ−タンパク質融合ディスプレイまたは他のライブラリーの使用、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも一部を含む非ヒト動物の免疫化、ならびにキメラ抗体、ＣＤＲ移植された抗体およびヒト化された抗体の調製を含む、抗体を生成するための多数の方法に精通している。例えば、米国特許公開第２００９０３１１２５３  Ａ１参照。可変ドメインは、親和性成熟技術を用いて調製することができる。
【０１０９】
Ｂ．親モノクローナル抗体を選択するための基準
ＤＶＤ結合タンパク質分子において望まれる少なくとも１つ以上の特性を有する親抗体を選択することを含む実施形態が提供される。一実施形態において、所望の特性は、例えば、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用能、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合などの１つ以上の抗体パラメーターである。例えば、米国特許出願公報第２００９０３１１２５３号を参照されたい。
【０１１０】
Ｃ．結合タンパク質分子の構築
結合タンパク質は、２つの異なる親モノクローナル抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技術によって、直接または短いリンカーを介して直列に連結され、その後に軽鎖定常ドメインＣＬが続くように設計され得る。同様に、重鎖は、直接的にまたはリンカーを介して、タンデムに連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、その後に定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域を含む（図１）。
【０１１１】
可変ドメインは、本明細書に記載されている方法のいずれか１つによって作製された親抗体から得られた組換えＤＮＡ技術を用いて取得することが可能である。一実施形態において、可変ドメインは、マウス重鎖または軽鎖可変ドメインである。別の実施形態において、可変ドメインは、ＣＤＲ移植されたまたはヒト化された可変重鎖または軽鎖ドメインである。一実施形態において、可変ドメインは、ヒト重鎖または軽鎖可変ドメインである。
【０１１２】
リンカー配列は、単一のアミノ酸またはポリペプチド配列であり得る。一実施形態において、リンカー配列の選択は、いくつかのＦａｂ分子の結晶構造分析に基づいている。Ｆａｂまたは抗体分子構造中の可変ドメインとＣＨ１／ＣＬ定常ドメインの間には、天然の柔軟な連結が存在する。この天然の連結は、ＶドメインのＣ末端由来の４−６残基およびＣＬ／ＣＨ１ドメインのＮ末端由来の４−６残基によって構成される約１０から１２個のアミノ酸残基を含む。ＤＶＤ結合タンパク質は、それぞれ、軽鎖および重鎖中のリンカーとしてＣＬまたはＣＨ１のＮ末端の５から６アミノ酸残基、または１１から１２アミノ酸残基を用いて作製された。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基、特に最初の５から６個のアミノ酸残基は、強い二次構造なしにループ立体構造を採ることが可能であり、したがって、２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーとして作用することが可能である。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基は、それらがＩｇ配列の一部であるため、可変ドメインの天然の伸長である。したがって、それらの使用は、リンカーおよび接合分析物から潜在的に生じる任意の免疫原性を大幅に最小化する。
【０１１３】
さらなる実施形態において、重鎖、軽鎖、二本鎖または四本鎖の実施形態のいずれかは、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）；ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）；ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）；ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）；ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）；ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）；ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）；ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）；ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）；またはＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２７）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２８）；またはＧ／Ｓに基づく配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート；配列番号２９）を含む、少なくとも１つのリンカーを含む。一実施形態において、Ｘ２はＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｘ２はバリアントＦｃ領域である。
【０１１４】
他のリンカー配列は、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのあらゆる長さのあらゆる配列を含み得るが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのすべての残基は含まない。例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５から１２個のアミノ酸残基；軽鎖リンカーは、ＣκまたはＣλに由来することが可能であり；ならびに重鎖リンカーは、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、ＣεおよびＣμを含む、いずれかのアイソタイプのＣＨ１に由来することが可能である。リンカー配列は、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、Ｇ／Ｓを基礎とする配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート；配列番号２９）；ヒンジ領域に由来する配列および他のタンパク質から得られる他の天然配列などの他のタンパク質からも由来し得る。
【０１１５】
一実施形態において、定常ドメインは、組換えＤＮＡ技術を用いて、２つの連結された可変ドメインに連結されている。一実施形態において、連結された重鎖可変ドメインを含む配列は、重鎖定常ドメインに連結され、連結された軽鎖可変ドメインを含む配列は、軽鎖定常ドメインに連結される。一実施形態において、定常ドメインは、それぞれ、ヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインである。一実施形態において、ＤＶＤ重鎖は、Ｆｃ領域にさらに連結されている。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。別の実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｆｃ領域には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤから得られるＦｃ領域が含まれる。
【０１１６】
別の実施形態において、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドは組み合わされて、ＤＶＤ結合タンパク質を形成する。表１Ａ−表１Ｃは、疾患の治療に有用な例示的な抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列を列挙している。一実施形態において、いずれかの配向における、表１−表１Ｃに列挙されたＶＨおよび／またはＶＬ領域の少なくとも２つを含むＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が提供される。いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して選択される。よって、いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は同じ配列番号を含み、他の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は異なる配列番号を含む。以下に与えられるＶＨおよびＶＬドメイン配列は、当該技術分野において知られているまたは当該技術分野において知られている方法を用いて容易に識別され得る相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク配列を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のこれらのＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列は、同じ抗原に結合する、当該技術分野において知られている結合タンパク質由来の他のＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列によって、機能を損なうことなく置換される。
【０１１７】
【表１】
2015508994.tif 000003
【０１１８】
【表２】
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【０１１９】
【表３】
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【０１２０】
特異的な標的に結合することができる特異的ＤＶＤ結合タンパク質およびこれを作製する方法の詳細な説明は、以下の実施例の部において提供される。
【０１２１】
Ｄ．結合タンパク質の作製
本明細書において提供される結合タンパク質は、本分野で公知の多数のいずれかによって作製され得る。例えば、宿主細胞からの発現において、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって、宿主細胞中に形質移入される。原核または真核宿主細胞のいずれの中でも、本明細書において提供されるＤＶＤ結合タンパク質を発現することは可能であるが、真核細胞（特に、哺乳動物細胞）は、原核細胞に比べて、適切に折り畳まれ、免疫学的に活性なＤＶＤ結合タンパク質を集合および分泌する傾向がより大きいので、ＤＶＤ結合タンパク質は真核細胞、例えば哺乳動物宿主細胞中で発現される。
【０１２２】
ＤＶＤタンパク質の組換え発現用の典型的なシステムにおいて、リン酸カルシウムによって媒介された形質移入によって、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞中に導入される。組換え発現ベクター内で、重鎖および軽鎖遺伝子は、遺伝子の転写の高いレベルを誘導するために、各々、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＰＬプロモーター制御要素へ作用可能に連結されている。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択／増幅を用いて、ベクターで形質移入されたＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も担持する。選択された形質転換体宿主細胞は、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖の発現を可能とするために培養され、完全な状態のＤＶＤ結合タンパク質が培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地からＤＶＤタンパク質を回収するために、標準的な分子生物学的技術が使用される。ＤＶＤタンパク質が合成されるまで、適切な培地中で、本明細書において提供される宿主細胞を培養することによって、本明細書において提供されるＤＶＤタンパク質を合成する方法も提供される。本方法は、培地からＤＶＤタンパク質を単離することをさらに含むことが可能である。
【０１２３】
ＤＶＤ結合タンパク質の重要な特徴は、ＤＶＤ結合タンパク質が、慣用の抗体として、類似の様式で産生および精製され得ることである。ＤＶＤ結合タンパク質の産生は、定常領域の配列修飾、または化学的修飾を必要とせずに、所望される二重特異的活性を有する均一な単一の主産物をもたらす。「二特異的」、「多重特異的」および「多重特異的多価」完全長結合タンパク質を作製するための他の以前に記載された方法は、集合した不活性な単一特異的、多重特異的、多価の完全長結合タンパク質と、異なる結合部位の組合せを有する多価完全長結合タンパク質との混合物の細胞内産生または分泌された産生をもたらし得る。
【０１２４】
驚くべきことに、本明細書において提供される「二重特異的多価完全長結合タンパク質」の設計は、主として、所望される「二重特異的多価完全長結合タンパク質」へ集合する二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖をもたらす。
【０１２５】
集合され、発現された二重可変ドメイン免疫グロブリン分子の少なくとも５０％、少なくとも７５％および少なくとも９０％が、所望の二重特異的四価タンパク質であり、したがって、増大した商用的有用性を有する。したがって、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現し、「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の単一の主要産物をもたらす方法が提供される。
【０１２６】
「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の「主要産物」をもたらす単一細胞において二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現させる方法であって、「主要産物」は、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての集合されたタンパク質の５０％超であり、例えば、７５％超および９０％超である方法が提供される。
【０１２７】
ＩＩ．結合タンパク質の使用
本明細書において提供される結合タンパク質は２つまたはそれ以上の抗原に結合することができるので、本発明の結合タンパク質は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学など慣用のイムノアッセイを用いて、（例えば、血清または血漿などの生物学的試料中で）抗原を検出するために使用することが可能である。結合タンパク質は、結合したまたは結合していない抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例は、ルミノールであり、適切な放射性材料の例には、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍが含まれる。
【０１２８】
一実施形態において、本明細書に提供される結合タンパク質はインビトロとインビボの両方においてそれらの抗原標的の活性を中和することができる。したがって、このような結合タンパク質は、例えば、抗原を含有する細胞培地中で、ヒト対象中で、本明細書において提供される結合タンパク質が交差反応する抗原を有するその他の哺乳動物対象中で、抗原活性を阻害するために使用することが可能である。別の実施形態において、抗原活性が有害である疾病または疾患に罹患している対象中の抗原活性を低下させる方法が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質は、治療目的のために、ヒト対象に投与することができる。
【０１２９】
「抗原活性が有害である障害」という用語は、障害に罹患している対象における抗原の存在が、障害の病態生理に関与しているまたは障害の悪化に寄与する因子のいずれかであるまたはそれが疑われることが示されている疾患および他の障害を含むことを意図する。したがって、抗原活性が有害である疾患は、抗原活性の低下が疾患の症候および／または進行を緩和することが予測される疾患である。このような疾患は、例えば、本疾患に罹患している患者の生物学的液体中の抗原濃度の増加（例えば、対象の血清、血漿、滑液中などの抗原の濃度の増加）によって明らかとされ得る。本明細書において提供される結合タンパク質で治療することが可能な疾患の非限定的な例には、以下に、および結合タンパク質の医薬組成物に関するセクションに論述されている疾患が含まれる。
【０１３０】
ＤＶＤ結合タンパク質は、効力／安全を増強し、および／または患者の対象範囲を増加させるために、２つの異なる標的を同時に遮断するための治療剤として有用である。
【０１３１】
さらに、本明細書において提供されるＤＶＤ結合タンパク質は、細胞内送達（内部移行受容体および細胞内分子を標的化すること）、脳内への送達（血液脳関門を横切るために、トランスフェリン受容体および中枢神経系疾患媒介物質を標的化すること）など、組織特異的な送達（増強された局所ＰＫにより、より高い効力および／またはより低い毒性を得るために、組織マーカーおよび疾病媒介物質を標的とすること）のために使用することが可能である。また、ＤＶＤ結合タンパク質は、その抗原の非中和エピトープへの結合を介して特異的な位置へ抗原を送達するための担体タンパク質としての役割も果たすことができ、さらに、抗原の半減期を増加させることもできる。さらに、ＤＶＤ結合タンパク質は、患者に植え込まれた医療デバイスに物理的に連結されまたはこれらの医療デバイスを標的とするように設計され得る（Ｂｕｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．、（２００６）Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５８（３）：４３７−４４６；Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、（２００６）Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００（２２−２３）：６３１８−６３２４；Ｄｒｕｇ／ｄｅｖｉｃｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ、Ｗｕ（２００６）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２７（１１）：２４５０−２４６７；Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  ｄｅｖｉｃｅｓ．、Ｍａｒｑｕｅｓ（２００５）Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒ．Ｒｅｇｅｎ．Ｍｅｄ．３７７−３９７参照）。要約すれば、医療用インプラントの部位へ、細胞の適切な種類を誘導することは、正常な組織機能の治癒および回復を促進し得る。あるいは、用具に連結されたＤＶＤ、または用具を標的とするＤＶＤ−Ｉｇによって、装置の植え込み時に放出される媒介物質（サイトカインが含まれるが、これに限定されない。）の阻害も提供される。
【０１３２】
Ａ．様々な疾病における結合タンパク質の使用
本明細書において提供される結合タンパク質分子は、様々な疾患を治療するための治療分子としても有用であり、例えば、結合タンパク質によって認識される標的は有害である。このような結合タンパク質は、特定の疾患に関与する１つ以上の標的に結合することができる。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７の阻害はまた、動物モデルにおける抗ウイルスワクチンを増強することが示され、ＨＩＶおよび他の感染症、例えば、ヒトライノウイルス、他のエンテロウイルス、コロナウイルス、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルスまたはアデノウイルスの治療において有益であり得る。
【０１３３】
開示を制限することなく、特定の疾患状態に関する追加情報が提供される。
【０１３４】
１．ヒト自己免疫および炎症性応答
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７は、一般的な自己免疫および炎症反応に関与しており、例えば、喘息、アレルギー、アレルギー性肺疾患、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、線維症、嚢胞性線維症（ＣＦ）、線維性肺疾患、特発性肺線維症、肝線維症、狼瘡、Ｂ型肝炎関連肝疾患および線維症、敗血症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糸球体腎炎、炎症性皮膚疾患、乾癬、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症（ＯＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植拒絶反応、虚血性心疾患（ＩＨＤ）、セリアック病、接触過敏症、アルコール性肝疾患、ベーチェット病、アテローム硬化性血管疾患、眼球表面の炎症性疾患またはライム病などが挙げられる。
【０１３５】
本明細書において提供される結合タンパク質は、神経疾患を治療するために使用することができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、神経変性疾患ならびに神経再生および脊髄損傷を伴う状態を治療するために使用される。
【０１３６】
２．喘息
アレルギー性喘息は、好酸球増加症、杯細胞異形成、上皮細胞の変化、気道過敏症（ＡＨＲ）ならびにＴｈ２およびＴｈ１サイトカイン発現ならびに上昇した血清ＩｇＥレベルの存在によって特徴付けられる。コルチコステロイドは、今日、喘息に対する最も重要な抗炎症性治療であるが、それらの作用機序は非特異的であり、特に、若い患者集団では、安全性についての懸念が存在する。したがって、より特異的で、標的化された治療の開発が必要とされる。マウスにおけるＩＬ−１３は、好酸球性炎症とは無関係に、喘息、例えば、ＡＨＲ、粘液過剰分泌および気道線維症の多数の特徴を模倣するという証拠が増している（Ｆｉｎｏｔｔｏら（２００５）Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７（８）：９９３−１００７；Ｐａｄｉｌｌａら（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４（１２）：８０９７−８１０５）。
【０１３７】
ＩＬ−１３は、喘息を伴う病的応答を引き起こす上で中心的な役割を有するとされている。肺でのＩＬ−１３の効果を低減させるための抗ＩＬ−１３ｍＡｂ療法の開発は、喘息の新規治療としてかなりの有望性を与える刺激的な新しいアプローチである。しかしながら、差別的な免疫学的経路の他の媒介物質も、喘息の病因に関与しており、ＩＬ−１３に加えて、これらの媒介物質を遮断することは、付加的な治療上の利益を提供し得る。このような標的対には、限定されないが、ＩＬ−１３および炎症促進性サイトカイン、例えばＩＬ−１７が挙げられる。ＩＬ−１７が喘息の病因に関与しているという証拠が増している。ＩＬ−１７は、気道に好中球を誘導し、また、喘息におけるＴ−ヘルパー２（Ｔｈ２）細胞媒介性の好酸球性気道炎症を高める。最近の研究では、ＩＬ−１７の阻害剤および他の多様な調節因子が、抗原誘発性気道炎症、気管支過敏性および喘息の動物モデルにおけるＴｈ２サイトカインレベルを減少させることが実証されている（概説については、ＰａｒｋおよびＬｅｅ（２０１０）Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｒｅｓ．、１１：７８を参照されたい。）。
【０１３８】
炎症およびＡＨＲをともに評価することができる、ＯＶＡによって誘導された喘息マウスモデルなどの動物モデルが本分野において公知であり、様々な結合タンパク質分子が喘息を治療する能力を測定するために使用し得る。喘息を研究するための動物モデルは、Ｃｏｆｆｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１（１２）：１８７５−１８７９；Ｌｌｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７７，２６３−２９５；Ｂｏｙｃｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１（１２）：１８６９−１８７３；およびＳｎｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｂｒｉｔ．Ｓｏｃ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５（２）：１４６−５２に開示されている。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｏｘｉｃｏｌ．９２（１−３）：２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．７７：９９−１０２；Ｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８（２）：２５０−２５７参照）。
【０１３９】
３．関節リウマチ
全身性疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の滑液中の慢性的炎症反応によって特徴付けられ、軟骨の変性と隣接する関節骨のただれを伴う。多くの炎症促進性サイトカイン、ケモカインおよび成長因子が、罹患した関節中に発現されている。最近の研究は、ＲＡにおけるＴ細胞の関与が、ＩＬ−１７によって、有意な程度に媒介されることを示す。動物研究は、顕著に増加したＩＬ−１７発現が、ヒトＲＡに似た関節病変を発症したマウスにおいて検出されたことを示している。ＩＬ−１７遮断の有益な効果はまた、疾患の種々の動物モデルにおいて観察された（概説については、Ｗｉｔｏｗｓｋｉら（２００４）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６１：５６７−５７９を参照されたい。）。結合タンパク質分子が関節リウマチの治療に対して有用であるかどうかは、コラーゲンによって誘導された関節炎マウスモデルなど、前臨床動物ＲＡモデルを用いて評価することが可能である。他の有用なモデルも本分野において周知である（Ｂｒａｎｄ（２００５）Ｃｏｍｐ．Ｍｅｄ．５５（２）：１１４−２２参照）。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＴＮＦ、ヒトおよびマウスＩＬ−１５などに対する反応性）を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスＣＩＡモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である；簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。
【０１４０】
４．全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
ＳＬＥの免疫病原性の特徴は、ポリクローナルＢ細胞活性化であり、これは、高グロブリン血症、自己抗体産生および免疫複合体形成をもたらす。ＩＬ−１３およびＩＬ−１７の有意なレベル増加は、全身性エリテマトーデスの患者において検出されている（Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（２００１）Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ、３４（１）：１９−２５；Ｗｏｎｇら（２００８）Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７（３）：３８５−９３）。ＩＬ−１７は、ＳＬＥの病因において重要なサイトカインである。ＩＬ−１７産生の増大は、ＳＬＥを有する患者においてならびに狼瘡様疾患を有する動物において示されている。動物モデルは、ＩＬ−１７の遮断が狼瘡の出現を減少させることを実証している（概説については、Ｎａｌｂａｎｄｉａｎら（２００９）１５７（２）：２０９−２１５を参照されたい。）。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＣＤ２０、ヒトおよびマウスインターフェロンαなどに対する反応性）を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスループスモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である。簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。
【０１４１】
５．多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、主に病因が不明である複雑なヒト自己免疫型疾病である。神経系を通じたミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の免疫学的破壊が、多発性硬化症の主要な病因である。主に検討すべきであるのは、自己免疫の発達に寄与する免疫学的機序である。特に、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞などの他のＴ細胞のバランス／調節を補助する、抗原発現、サイトカインおよび白血病相互作用ならびに調節性Ｔ細胞は、治療標的の同定のための重要な領域である。ＭＳにおいて、ＩＬ−１７の発現増加は、脳病変と、血液および脳脊髄液から単離された単核細胞の両方において検出されている。ＩＬ−１７産生細胞は、活性なＭＳ病変において非常に富化しており、このサイトカインの中和は有益である可能性があることを示唆する（概説については、Ｗｉｔｏｗｓｋｉら（２００４）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６１：５６７−５７９を参照されたい。）。
【０１４２】
ＭＳを治療するための結合タンパク質の有用性を評価するためのいくつかの動物モデルが、本分野において公知である（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１１）：５６５−７１；Ｌｕｂｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８（３）：１９７−２０８；Ｇｅｎａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７５（３）：１８７−９７；Ｔｕｏｈｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９（７）：１０３３−４２；Ｏｗｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｎｅｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．１３（１）：５１−７３；およびＨａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５（７）：４７６１−８参照）。ヒトおよび動物種オルソログに対する親抗体の交差反応性を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスＥＡＥモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である。簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。同じ概念は他の非げっ歯類種の動物モデルに当てはまり、「適合代理抗体」由来結合タンパク質は予期される薬理学および場合によると安全性研究のために選択される。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｏｘｉｃｏｌ．９２（１−３）：２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｄｅｖｅｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．７７：９９−１０２；Ｊｏｎｅｓ（２０００）ＩＤｒｕｇｓ  ３（４）：４４２−６）参照）。
【０１４３】
６．敗血症
圧倒的な炎症性応答および免疫応答は、敗血症性ショックの本質的な特徴であり、敗血症によって誘導される組織損傷、多臓器不全および死亡の病因において中心的な役割を果たす。サイトカインは、敗血症性ショックの媒介物質であることが示されている。これらのサイトカインは、組織に対して直接的な毒性効果を有しており、ホスホリパーゼＡ２も活性化させる。これらの効果および他の効果は、血小板活性化因子の濃度増加、一酸化窒素合成酵素活性の促進、好中球による組織浸潤の促進および好中球活性の促進をもたらす。敗血症のＩＬ−１７レベルおよび臨床予後は、負に相関することが示されている。ＩＬ−１７Ａの中和は、敗血症患者の生存率を有意に向上させることができる（Ｆｌｉｅｒｌら（２００８）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２２：２１９８−２２０５を参照されたい。）。
【０１４４】
一実施形態は、例えば、ＩＬ−１３およびＩＬ−１７などの、敗血症に関与する１つ以上の標的を結合させることができる結合タンパク質に関連する。敗血症を治療するためのこのような結合タンパク質の有効性は、当該技術分野で公知の前臨床動物モデルにおいて評価することができる（Ｂｕｒａｓら（２００５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．４（１０）：８５４−６５およびＣａｌａｎｄｒａら（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６（２）：１６４−７０を参照されたい。）。
【０１４５】
７．神経疾患
ａ．神経変性疾患
神経変性疾患は、通常、それらが年齢依存性である場合においては慢性でありまたは急性（例えば、脳卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷など）である。それらは、神経機能の進行性の喪失（例えば、神経細胞死、軸索損失、神経炎性ジストロフィー、脱髄）、運動能力の喪失および記憶喪失によって特徴付けられる。これらの慢性神経変性疾患は、複数の細胞種および媒介物質の間で複雑な相互作用を示す。このような疾病に対する治療戦略は限られており、非特異的な抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＣＯＸ阻害剤）または神経細胞の喪失および／またはシナプス機能を抑制するための作用物質で炎症プロセスを遮断することが大部分を占める。これらの治療は、疾病の進行を停止させることができない。１を超える疾患媒介物を標的とする特定の治療は、単一の疾患メカニズムを標的にして観察されるものよりも、慢性神経変性疾患のさらにより良好な治療効果を提供することができる（Ｄｅａｎｅら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．９：９０７−１３；およびＭａｓｌｉａｈら（２００５）Ｎｅｕｒｏｎ．４６：８５７を参照されたい。）。
【０１４６】
本明細書において提供される結合タンパク質分子は、アルツハイマー病などの慢性神経変性疾患に関与する１つ以上の標的に結合することが可能である。結合タンパク質分子の効力は、アミロイド前駆体タンパク質またはＲＡＧＥを過剰発現し、アルツハイマー病様の症候を発症するトランスジェニックマウスなどの前臨床動物モデルで妥当性を確認することが可能である。さらに、結合タンパク質分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的結合タンパク質を選択することができる。結合タンパク質分子は、パーキンソン病などの他の神経変性疾患の治療のためにも使用することが可能である。
【０１４７】
ｂ．神経細胞の再生および脊髄損傷
病的機序の知見の増大にかかわらず、脊髄損傷（ＳＣＩ）は、なお、多大な損害を与える症状であり、高い医学的な要求を特徴とする医学的な適応症である。多くの脊髄損傷は、挫傷または圧迫傷害であり、通常、一次損傷に続いて、最初の損傷を悪化させ、病変部位の著しい拡大（特には、１０倍超）をもたらす二次的な損傷機序（炎症媒介物質、例えば、サイトカインおよびケモカイン）が起こる。ＩＬ−１７は、神経炎症に寄与し、機能回復を妨げる、二次アンフォールディングの媒介物質である。ＩＬ−１７  ＫＯマウスを用いた研究は、ＩＬ−１７が、神経因性損傷後の神経炎症性応答および疼痛過敏症に寄与することを実証している（ＫｉｍおよびＭｏａｌｅｍ−Ｔａｙｌｏｒ（２０１０）Ｊ  Ｐａｉｎ．１２（３）：３７０−８３）。ＩＬ−１７欠損は、マウスにおける脊髄挫傷損傷後の運動機能回復および組織温存を向上させる（Ｈｉｌｌら（２０１１）Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ．４８７（３）：３６３−７）。
【０１４８】
結合タンパク質分子の効力は、脊髄損傷の前臨床動物モデルにおいて、妥当性を確認することが可能である。さらに、これらの結合タンパク質分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的結合タンパク質を選択することができる。一般に、抗体は、脳血液関門（ＢＢＢ）を効率的および適切な様式で横切らない。しかしながら、ある種の神経疾患（例えば、脳卒中、外傷性脳傷害、多発性硬化症など）では、ＢＢＢが損なわれる場合があり、結合タンパク質および抗体の脳内への増加した浸透を許容する。ＢＢＢの漏出が起こらない他の神経症状では、グルコースおよびアミノ酸担体などの担体媒介性輸送体ならびにＢＢＢの血管内皮における受容体媒介性トランスサイトーシス媒介細胞構造／受容体を含む内在性輸送系の標的化を使用することができ、これにより、結合タンパク質のトランスＢＢＢ輸送が可能になる。このような輸送を可能にするＢＢＢでの構造には、限定されないが、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＬＲＰおよびＲＡＧＥが含まれる。さらに、戦略は、低分子量の薬物、ナノ粒子および核酸を含む、ＣＮＳへ潜在的薬物を輸送するためのシャトルとして結合タンパク質を使用することも可能である（Ｃｏｌｏｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１７（３）：２６６−７４；Ｂｏａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１８（２）：４４７−５５）。
【０１４９】
８．腫瘍疾患
モノクローナル抗体療法が、癌に対する重要な治療法として登場している（ｖｏｎ  Ｍｅｈｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５４：３４３−６９）。２つの別個の腫瘍媒介物質を標的とする二重特異的抗体の使用は、単一特異的療法に比べて、さらなる有利さを与えるものと思われる。ＩＬ−１７は、おそらく血管新生を刺激することによって、腫瘍増殖を支持することが示唆されている。ＩＬ−１３は、抗腫瘍免疫および腫瘍増殖の調節に重要な役割を果たす。研究は、ＩＬ−１３が、ＮＫＴ細胞が腫瘍免疫監視を抑制する新たな免疫調節経路の中心であることを示す（概説については、Ｋｏｌｌｓら（２００３）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８：９−１１およびＴｅｒａｂｅら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５３（２）：７９−８５を参照されたい。）。
【０１５０】
一実施形態において、本明細書において提供される組成物および方法を用いて治療または診断され得る疾患には、限定されないが、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱および尿路上皮を含む。）、女性生殖路（子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む。）、男性生殖路（前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む。）、内分泌腺（甲状腺、副腎および下垂体を含む。）および皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫（骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む。）、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍（星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む。）、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫の両方）を含む原発性および転移性の癌が挙げられる。
【０１５１】
一実施形態において、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療法および／もしくは他の化学療法剤と組み合わせて使用される場合、癌を治療するためにまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防において使用される。
【０１５２】
９．遺伝子治療
特定の実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質をコードする核酸配列または本明細書において提供される別の予防薬もしくは治療薬は、遺伝子治療を手段として、障害または１つ以上の症状を治療、予防、管理または改善するために投与される。遺伝子治療とは、発現されたまたは発現可能な核酸の対照への投与によって行われる治療を指す。この実施形態において、核酸は、予防効果または治療効果を媒介する本明細書において提供されるそれらによってコードされた抗体または予防薬もしくは治療薬を生成する。
【０１５３】
当該技術分野において利用可能である遺伝子治療のための方法のいずれかは、本明細書において提供される方法において使用され得る。遺伝子治療の方法に関する一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら（１９９３）  Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；ＷｕおよびＷｕ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；ＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；ならびにＭａｙ（１９９３）ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５を参照されたい。使用することができる組換えＤＮＡ技術の、当該技術分野において一般的に知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編集）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。遺伝子治療の様々な方法の詳細な説明は、米国特許出願公開第ＵＳ２００５００４２６６４号に開示されている。
【０１５４】
ＩＩＩ．医薬組成物
単独または予防薬、治療薬および／または医薬として許容される担体と組み合わせた、１つ以上の結合タンパク質を含む医薬組成物が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質を含む医薬組成物は、疾患を診断し、検出し、もしくはモニタリングし、疾患または１つもしくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、もしくは軽減する上で、および／または研究において使用されるが、これらに限定されない。単独または予防薬、治療薬および／または医薬として許容される担体と組み合わせた医薬組成物の製剤は、当業者に公知である（米国特許出願公開第２００９０３１１２５３Ａ１）。
【０１５５】
本明細書において提供される予防薬または治療薬を投与する方法には、限定されないが、非経口投与（例えば、皮内、筋内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与、粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路）および経肺投与（例えば、吸入器または噴霧器を用いて投与されるエアロゾル化化合物）が挙げられる。特定の投与経路のための医薬組成物の製剤ならびに投与の様々な方法に必要とされる材料および技術が利用可能であり、当業者に公知である（米国特許出願公開第２００９０３１１２５３Ａ１）。
【０１５６】
投与計画は、最適な所望の反応（例えば、治療的または予防的反応）を提供するように調整されてもよい。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、いくつかに分割した用量は経時的に投与さてもよく、または用量は比例的に減少されてもよくもしくは治療状況の緊急性によって示されるように増加されてもよい。投与の容易性および投与量の均一性のために投薬単位形態において非経口組成物を処方することが特に有利である。「投薬単位形態」という用語は、処置されるべき哺乳動物対象のための単位用量として適した物理的に別個の単位を指し；それぞれの単位は、必要とされる医薬的担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。本明細書において提供される投薬単位形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特性および達成されるべき特定の治療効果または予防効果および（ｂ）個体における感受性の処置のために、このような活性化合物の配合に関する当該技術分野における固有の制限、によって決定され、直接的に依存する。
【０１５７】
本明細書において提供される結合タンパク質の治療的または予防的な有効量についての例示的であり、非限定的な範囲は、０．１−２０ｍｇ／ｋｇであり、例えば、１−１０ｍｇ／ｋｇである。用量値は、緩和されるべき状態の種類および重症度によって変化し得ることに留意すべきである。いずれかの特定の対象について、特定の投薬処方は、個々の必要性および組成物を投与しまたは投与を管理している者の専門的な判断に従って、経時的に調整されてもよく、本明細書において記載されている用量範囲は、単に例示的であり、請求される組成物の範囲または実施を制限することを意図していないことはさらに理解されるべきである。
【０１５８】
ＩＶ．併用療法
本明細書において提供される結合タンパク質はまた、種々の疾患の治療に有用な１つ以上の追加の治療薬とともに投与することができ、追加の薬剤は、その意図される目的で当業者によって選択される。例えば、追加の薬剤は、本明細書において提供される抗体によって治療される疾患または状態の治療に有用であるとして当該技術分野において認識されている治療薬であり得る。組合せは、１を超える追加の薬剤、例えば、２つまたは３つの追加の薬剤を含むことができる。
【０１５９】
併用療法剤には、限定されないが、抗腫瘍剤、放射線療法、化学療法、例えばＤＮＡアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン剤、パクリタキセル、ドセタキセル、タキソール、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ジェムザール、アントラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、キナーゼ阻害剤およびｓｉＲＮＡが含まれる。
【０１６０】
自己免疫疾患および炎症性疾患を治療するための組合せは、イブプロフェンのような薬剤を含む、ＮＳＡＩＤＳとも称される非ステロイド性抗炎症薬（単数または複数）である。他の組合せは、プレドニゾロンなどのコルチコステロイドである；ステロイド使用の周知の副作用は、本明細書において提供される結合タンパク質と組み合わせて患者を治療するときに必要とされるステロイド用量を徐々に減らすことによって、低減することが可能でありまたは除去することさえ可能である。本明細書において提供される抗体またはその抗体結合部分とともに組み合わせることが可能な関節リウマチに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：サイトカイン抑制抗炎症薬（単数または複数）（ＣＳＡＩＤ）；他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡまたはＣＤ１５４を含むこれらのリガンド（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）などの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。
【０１６１】
治療剤の組合せは、異なる点で、自己免疫およびこれに続く炎症カスケードを干渉し得る。例には、本明細書において開示される結合タンパク質、ならびにキメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、可溶性ｐ５５もしくはｐ７５ＴＮＦ受容体、またはこれらの誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤のようなＴＮＦアンタゴニスト；またはＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）が挙げられる。他の組合せには、本明細書において開示される結合タンパク質およびインターロイキン１１が含まれる。さらに別の組合せには、ＩＬ−１２機能と平行して、ＩＬ−１２機能に依存してまたはＩＬ−１２と協調して作用し得る自己免疫応答の中心的プレーヤーが含まれる；特に、ＩＬ−１８抗体または可溶性ＩＬ−１８受容体またはＩＬ−１８結合タンパク質などのＩＬ−１８アンタゴニストが関連する。ＩＬ−１２およびＩＬ−１８は重複しているが、異なる機能を有しており、両者に対するアンタゴニストの組合せは、最も有効であり得ることが示されている。さらに別の組合せは、本明細書において開示される結合タンパク質と非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤である。さらに他の組合せには、本明細書において開示される結合タンパク質と、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含む、共同刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストが含まれる。
【０１６２】
本明細書において提供される結合タンパク質はまた、薬剤と併用されてもよく、例えば、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン（ｐｅｎｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、金チオリンゴ酸塩（筋内および経口）、アザチオプリン、コルヒチン（ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ）、コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）、β−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウムおよびオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体または誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリムシノロン・アセトニド、プロポキシフェンナプシラート／ａｐａｐ、フォラート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、ヒドロコドン二酒石酸塩／ａｐａｐ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組み換え、塩酸トラマドール、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロナートナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ��８０１およびメソプラムなどの作用物質とも組み合わされ得る。組合せは、メトトレキサートまたはレフルノミドを含み、中程度または重症の関節リウマチの症例においてはシクロスポリンを含む。
【０１６３】
一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、関節リウマチの治療用の以下の薬剤の１つと併用して投与される：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤；メトトレキサート；プレドニゾン；セレコキシブ；葉酸；硫酸ヒドロキシクロロキン；ロフェコキシブ；エタネルセプト；インフリキシマブ；レフルノミド；ナプロキセン；バルデコキシブ；スルファサラジン；メチルプレドニゾロン；イブプロフェン；メロキシカム；酢酸メチルプレドニゾロン；金チオリンゴ酸ナトリウム；アスピリン；アザチオプリン；トリアムシノロンアセトニド；プロプキシフェンナプシラート／ａｐａｐ；フォラート；ナブメトン；ジクロフェナク；ピロキシカム；エトドラク；ジクロフェナクナトリウム；オキサプロジン；塩酸オキシコドン；重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ；ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール；フェンタニル；アナキンラ、ヒト組み換え；塩酸トラマドール；サルサラート；スリンダク；シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン；アセトアミノェン；アレンドロナートナトリウム；プレドニゾロン；硫酸モルヒネ；塩酸リドカイン；インドメタシン；硫酸グルコサミン／コンドロイチン；シクロスポリン；塩酸アミトリプチリン；スルファジアジン；塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン；塩酸オロパタジン；ミソプロストール；ナプロキセンナトリウム；オメプラゾール；ミコフェノラートモフェチル；シクロホスファミド；リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ；ＭＲＡ；ＣＴＬＡ４−ＩＧ；ＩＬ−１８ＢＰ；ＩＬ−１２／２３；抗ＩＬ−１８；抗ＩＬ−１５；ＢＩＲＢ−７９６；ＳＣＩＯ−４６９；ＶＸ−７０２；ＡＭＧ−５４８；ＶＸ−７４０；ロフルミラスト；ＩＣ−４８５；ＣＤＣ−８０１またはメソプラム。
【０１６４】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な炎症性腸疾患に対する治療剤の非限定的な例には、以下：ブデノシド；上皮細胞増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βｍＡｂ；抗ＩＬ−６ｍＡｂ；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）または炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３またはＴＧＦβ）またはｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤とも組み合わされ得る。
【０１６５】
結合タンパク質を組み合わせることが可能なクローン病に対する治療剤の例には、以下：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）またはｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））阻害剤またはＰＤＥ４阻害剤が含まれる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシドおよびデキサメタゾンと組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質またはこれらの抗原結合部分はまた、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸およびオルサラジンなどの薬剤、ならびにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成または作用を妨害する薬剤、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤またはＩＬ−１ｒａと組み合わされ得る。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤または６−メルカプトプリンとともに使用され得る。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシレート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、フォレート、シプロフロキサシン／デキストロース−水、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、テトラサイクリン塩酸塩、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム、リン酸コデイン／アセトアミノフェン（ａｐａｐ）、塩酸コレセベラム、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニソロン、ナタリズマブまたはインターフェロンガンマと組み合わせることができる。
【０１６６】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な多発性硬化症に対する治療剤の非限定的な例には、以下：コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロン−β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロン−β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンα−ｎ３）（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロン−β１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＥＧインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン；他のヒトサイトカインまたは成長因子およびこれらの受容体（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦ）に対する抗体もしくはアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノレート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）または炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３またはＴＧＦβ）またはｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤と組み合わされ得る。
【０１６７】
本明細書において提供される結合タンパク質を組み合わせることが可能な多発性硬化症のための治療剤の例には、インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ１ａおよびＩＦＮβ１ｂ；コパキソン、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤、例えばカスパーゼ−１の阻害剤、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤ならびにＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体が含まれる。
【０１６８】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な喘息に対する治療剤の非限定的な例には、以下：アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、イプラトロピウム臭化物、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アミノキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラナート、レボフロキサシン、吸入補助装置、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、塩酸マキシフロキサシン、ドキシサイクリン水和物（ｈｙｃｌａｔｅ）、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フロ酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナタート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニル、塩酸セチリジン／シュードエフェドリン、フェニレフリン／ｃｏｄ／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／シュードエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールが含まれる。
【０１６９】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能なＣＯＰＤに対する治療剤の非限定的な例には、以下：硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、イプラトロピウムブロミド、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アミノキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラナート、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロロフェニル、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、チオトロピウムブロミド、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストが含まれる。
【０１７０】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な乾癬に対する治療剤の非限定的な例には、以下：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、増強された（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ）二プロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フロ酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／皮膚軟化剤（ｅｍｏｌｌ）、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿処方、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス（ｂｉｓｍｕｔｈ  ｓｕｂｇａｌ）／酸化亜鉛（ｚｎｏｘ）／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アンスラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化剤、フルオシノニド／皮膚軟化剤、鉱物油／ひまし油／ｎａ  ｌａｃｔ、鉱物油／落花生油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、ソラーレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジンが含まれる。
【０１７１】
本明細書において提供される結合タンパク質を組み合わせることが可能なＳＬＥ（狼瘡）に対する治療剤の例には、以下：ＮＳＡＩＤ、例えば、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ；抗マラリア剤、例えば、ヒドロキシクロロキン；ステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン；細胞障害剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノラートモフェチル、メトトレキサート；ＰＤＥ４の阻害剤またはプリン合成阻害剤、例えば、Ｃｅｌｌｃｅｐｔが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、薬剤と併用されてもよく、例えば、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランならびにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成、産生または作用を妨害する作用物質、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤およびＩＬ−１ｒａのようなカスパーゼ阻害剤とも組み合わされ得る。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤；またはＴ細胞活性化分子を標的とする分子、例えば、ＣＴＬＡ−４−ＩｇＧまたは抗Ｂ７抗体ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体とともに使用され得る。本明細書において提供される結合タンパク質は、ＩＬ−１１または抗サイトカイン抗体、例えば、ホノトリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体）または抗受容体受容体抗体、例えば、抗ＩＬ−６受容体抗体およびＢ細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、ＬＪＰ３９４（アベチムス）、Ｂ細胞を枯渇させまたは不活化する薬剤、例えば、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンホスタット−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））およびｂｃｌ−２阻害剤（トランスジェニックマウスにおけるｂｃｌ−２過剰発現が狼瘡様表現型をもたらすことが実証されているためである（Ｍａｒｑｕｉｎａ参照）。）とともに使用され得る。本明細書において提供される医薬組成物は、本明細書において提供される結合タンパク質の「治療的有効量」または「予防的有効量」を含み得る。「治療的有効量」は、所望の治療的結果を達成するための投薬量で、および所望の治療的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。結合タンパク質の治療的有効量は、当業者によって決定され得、病状、年齢、性別および個体の体重ならびに結合タンパク質が個体内で所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。治療的有効量は、抗体または抗体部分のあらゆる毒性効果または有害効果が、治療的に有益な効果によって凌駕される量でもある。「予防的有効量」は、所望の予防的結果を達成するために必要な投薬量で、および所望の予防的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す���典型的には、疾病のより初期段階の前にまたは疾病のより初期段階において、予防的投薬が患者に使用されるので、予防的有効量は、治療的有効量より少ない。
【０１７２】
Ｖ．診断
本明細書における開示はまた診断の適用例を提供し、限定されないが、診断アッセイ法、１つ以上の結合タンパク質を含む診断用キット、ならびに自動化および／または半自動化システムにおける使用のための方法およびキットの適応が含まれる。提供される方法、キットおよび適応は、個体における疾患または障害の検出、監視および／または治療に用いることができる。これは、以下でさらに明らかにされる。
【０１７３】
Ａ．アッセイの方法
本開示は、本明細書に記載されている少なくとも１つの結合タンパク質を使用して試験試料中の分析物またはその断片の存在、量または濃度を決定する方法も提供する。本分野において知られているあらゆる適切なアッセイは、この方法において使用することが可能である。例には、限定されないが、イムノアッセイおよび／または質量分析法を用いる方法が含まれる。
【０１７４】
本開示によって提供されるイムノアッセイは、とりわけ、サンドイッチイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、競合阻害イムノアッセイ、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、酵素増幅イムノアッセイ技術（ＥＭＩＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）および均一系化学発光アッセイを含む。
【０１７５】
化学発光微粒子イムノアッセイ、特にＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）を使用するものは、イムノアッセイの例である。
【０１７６】
質量分析法を用いる方法は、本開示によって提供され、限定されないが、ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化）またはＳＥＬＤＩ（表面増強レーザー脱離／イオン化）が含まれる。
【０１７７】
イムノアッセイおよび質量分析法を用いて生物学的試験試料を回収し、操作し、処理しおよび分析するための方法は、本開示の実施において提供される（ＵＳ２００９−０３１１２５３Ａ１）。
【０１７８】
Ｂ．キット
試験試料における分析物またはその断片の存在、量または濃度について試験試料をアッセイするためのキットも提供される。キットは、分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分および分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための説明書を含む。分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分は、場合によって、固相上に固定されている、本明細書に開示されている結合タンパク質および／または抗分析物結合タンパク質（またはその断片、バリアントまたはそのバリアントの断片）を含む組成物を含むことができる。
【０１７９】
場合によって、キットは、単離されたまたは精製された分析物を含み得る、較正因子または対照を含むことができる。キットは、イムノアッセイおよび／または質量分析法によって、分析物について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分を含むことができる。キット成分は、分析物、結合タンパク質および／または抗分析物結合タンパク質またはその断片を含み、場合によって、当該分野で公知の任意の検出可能な標識を用いて標識されてもよい。本開示の実施において提供される構築のための材料および方法は、当業者に公知である（米国２００９−０３１１２５３Ａ１）。
【０１８０】
Ｃ．キットおよび方法の適合
本明細書に記載されているイムノアッセイなどのアッセイによって試験試料における分析物の存在、量または濃度を決定するキット（またはその成分）ならびに方法は、例えば、米国特許第５，０８９，４２４号および第５，００６，３０９号に記載され、例えば、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）によってＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）として商業的に販売されている（固相が微粒子を含むものを含めて）様々な自動化システムおよび半自動化システムにおける使用に適合させることが可能である。
【０１８１】
Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能な他のプラットホームには、ＡｘＳＹＭ（登録商標）、ＩＭｘ（登録商標）（例えば、米国特許第５，２９４，４０４号を参照されたい、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）およびＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩならびに他のプラットホームが含まれるが、これらに限定されない。さらに、アッセイ、キットおよびキットの成分は、他のフォーマットにおいて、例えば、電気化学的または他の携帯もしくはポイントオブケアアッセイシステムで使用することが可能である。本開示は、例えば、サンドイッチイムノアッセイを行う商業的Ａｂｂｏｔｔ  Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）電気化学的イムノアッセイシステムに適用可能である。免疫センサーならびに単回使用試験装置におけるこれらの製造および操作方法は、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、第７，４１９，８２１号、および第７，６８２，８３３号；ならびに米国特許公開第２００４００１８５７７号、第２００６０１６０１６４号、およびＵＳ２００９０３１１２５３に記載されている。
【０１８２】
本明細書に記載されている本方法の他の適切な改変および適合が明白であり、本明細書に開示されている範囲または実施形態から逸脱することなく、適切な均等物を用いてこれらを行い得ることは、当業者に容易に明確になる。ここに、ある種の実施形態を詳細に記載してきたが、例示のみを目的とし、限定することを意図したものではない、下記の実施例を参照することによって、本発明がより明確に理解される。
【実施例】
【０１８３】
［実施例１］  抗ＩＬ−１７ヒト化モノクローナル抗体ｈ１０Ｆ７の生成
［実施例１．２］  ヒト化抗ヒトＩＬ−１７抗体ｈ１０Ｆ７の親和性成熟
ヒト化抗ヒトＩＬ−１７抗体は従前に開示された。この抗体は、その後、ヒト、カニクイザルおよびマウスのＩＬ−１７に対するその全親和性を改善するために、親和性成熟された。いくつかのライブラリーは、以下の仕様に従って作製された：
【０１８４】
Ｈ１＋Ｈ２ライブラリー：
−３０、３１、３３、３５、５３、５６、５７および５８での７残基における限定された突然変異誘発。
−２７、４８、５１、５２、５４、６７および６９位でのヒト生殖系列とｈ１０Ｆ７配列間のトグル。
Ｈ３ライブラリー：
−９５−１００ｃと１０２での限定された突然変異誘発。
−９３でのヒト生殖系列とｈ１０Ｆ７配列間のトグル。
ＬＣライブラリー１：
−３０、３１、３２、３４、５０、５３、８９、９１、９２、９３および９６での限定された突然変異誘発。
−４、２４、２７、２９、３３、３６、４３、４７、５２および５５位でのヒト生殖系列とｈ１０Ｆ７配列間のトグル。
【０１８５】
ＬＣライブラリー２：ヒト抗体に対する同一性を高めるためにＣＤＲ１におけるＧ２８位でのさらなる残基で構築される
−２８、３０、３１、３２、３４、５０、５３、８９、９１、９２、９３および９６での限定された突然変異誘発。
−２４、２７、２９、３３、３７、４４、４８、５２および５５位でのヒト生殖系列とｈ１０Ｆ７配列間のトグル。
−ｓｃＦｖとして最初に試験されるべきＦＲ１（４位）における１つのフレームワーク生殖系列突然変異。結合は影響されない場合、「Ｍ」は「Ｌ」よりも優先される。
【０１８６】
ｒＨＣライブラリー：Ｈ１＋Ｈ２およびＨ３ライブラリーのアウトプットを組み換える。
【０１８７】
ｒＨＣＬＣライブラリー：Ｈ１＋Ｈ２、Ｈ３およびＬＣ１またはＬＣ２ライブラリーのアウトプットを組み換える。（ＬＣ２アウトプット結合が、少なくともＷＴと同程度に良好であるように見える場合、ＬＣ１よりもＬＣ２を選択し、その他の場合は、ＬＣ１アウトプットを組み換える。）。
【０１８８】
４つすべてのライブラリーは、濃度を減少させたビオチン化抗原の存在下で、ヒト、カニクイザルおよびマウスのＩＬ−１７に結合する能力について別々に選択された。ライブラリー選択から回収されたすべての突然変異したＣＤＲ配列は、追加のライブラリーに組み換えられ、組み換えられたライブラリーは、個々の抗体が同定される前に、よりストリンジェントな選択条件に供された。
【０１８９】
下記の表は、親和性成熟選択プロトコールに供されたｈ１０Ｆ７抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列のリストを提供する。それぞれのＶＨおよびＶＬ配列の個々のＣＤＲのアミノ酸残基は太字で示される。
【０１９０】
【表４】
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【０１９１】
上記のセクションＩ．Ｃにおける表１Ｂおよび１Ｃは、変換されたクローンからの個々のＶＨおよびＶＬ配列を提供する。これらの親和性成熟された配列は完全長ＩｇＧに変換された。
【０１９２】
【表５】
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【０１９３】
［実施例２］  抗ＩＬ−１３および抗ＩＬ−１７二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質の生成ならびに特徴付け
既知のアミノ酸配列を有する親抗体を用いた四本鎖二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、ＤＶＤ結合タンパク質の可変重鎖配列およびＤＶＤ結合タンパク質の可変軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド断片を合成し、当該技術分野において公知の方法に従って、ｐＨｙｂＣ−Ｄ２ベクターに断片をクローニングすることにより生成された。ＤＶＤ結合タンパク質構築物は、当該技術分野において既知の方法に従って、２９３細胞にクローニングされ、そこで発現させ、精製された。ＤＶＤ結合タンパク質についてのＤＶＤ  ＶＨ鎖およびＶＬ鎖を以下に提供する。
【０１９４】
［実施例２．１］  ＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合するＤＶＤ結合タンパク質
【０１９５】
【表６】
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【０１９６】
表５は、２９３細胞において、１リットルあたりのｍｇとして発現した親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇ構築物に関する収量データを含有する。
【０１９７】
【表７】
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【０１９８】
すべてのＤＶＤ−Ｉｇ分子は２９３細胞において十分に発現した。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、プロテインＡカラムを通して容易に精製することができた。大部分の場合において、５ｍｇ／Ｌを超える精製されたＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が、２９３細胞の上清から容易に得ることができた。
【０１９９】
［実施例３］  親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の機能的活性を決定するために使用されるアッセイ
［実施例３．１］  ＩＬ−１３バイオアッセイおよび中和アッセイ  Ａ５４９細胞は、１００μＬ体積でウェルあたり１．５−２×１０５細胞でプレーティングされ、一晩、３７℃、５％ＣＯ２にてインキュベートされた。１６−２０時間の一晩のインキュベーション後、元の１００μｌ培地の播種体積は除去され、１００μＬの４００ｎｇ／ｍＬ（２×濃縮）のｒｈＴＮＦ−αがすべてのウェルに添加された。プレートは、ＩＬ−１３および抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の添加まで、３７℃、５％ＣＯ２にて置かれた。抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（４×濃縮）の２０μｇ／ｍＬ作業ストックは、完全Ｆ１２培地において調製された。８点の連続希釈は、マーシュ希釈プレートの完全Ｆ１２中で行われた（５μｇ／ｍＬ−０．０００３μｇ／ｍＬ）。６０μＬ／ウェルのそれぞれの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質希釈物は、９６ウェルｖ底（Ｃｏｓｔａｒ＃３８９４）プレートに４点測定で添加され、６０μＬの４×濃縮された（２０ｎｇ／ｍＬ）溶液のＩＬ−１３は、細胞のみの対照を除いて、すべてのウェルに添加された。１時間のインキュベーション後、１００μＬの上記ＩＬ−１３／抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質複合体は、Ａ５４９細胞に添加された。すべてのウェル体積は、２００μＬに等しかった。組換えＩＬ−１３の最終濃度は５ｎｇ／ｍＬであり、ｒｈＴＮＦ−αは２００ｎｇ／ｍＬであった。次に、すべてのプレート試薬は１×濃縮された。１６−２０時間のインキュベーション後、ウェル内容物（２００μＬ）は、９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３７９９）に移され、−２０℃の冷凍庫に入れられた。上清は、アッセイ実験室においてＥＬＩＳＡによってｈＴＡＲＣレベルについて試験された。中和能力は、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１３単独の対照値に対する阻害パーセントを計算することによって決定された。報告されたＩＣ５０値（シグモイド曲線用量応答）はグラフパッドプリズムを用いて計算された。
【０２００】
【表８】
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【０２０１】
Ｎ末端またはＣ末端位置のいずれかにおけるＡＢ３９７、ＡＢ３９８またはＡＢ３９９からのＶＤを含有するすべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、Ａ５４９  ＩＬ−１３中和アッセイにおいて中和を示した。
【０２０２】
［実施例３．２］  ＩＬ−１７バイオアッセイおよび中和アッセイ
ヒトＨＳ２７細胞株（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１６３４）は、ＩＬ−１７に応答してＩＬ−６を分泌する。ＩＬ−１７誘導性のＩＬ−６分泌は、抗ＩＬ−１７抗体を中和することによって阻害される（例えば、Ｊ．Ｉｍｍ．１５５：５４８３−５４８６（１９９５）またはＣｙｔｏｋｉｎｅ  ９：７９４−８００（１９９７）を参照されたい。）。
【０２０３】
ＨＳ２７細胞は、アッセイ培地（１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ＃２６１４０）、４ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、ペニシリンＧ（１００Ｕ／５００ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００μｇ／５００ｍｌ）を含むＤＭＥＭ高グルコース培地（Ｇｉｂｃｏ＃１１９６５））中で維持された。細胞がアッセイ当日に約８０−９０％コンフルエントになるまで、細胞はＴ１５０フラスコ中で増殖された。ヒトＩＬ−１７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃３１７−ＩＬ／ＣＦ）は、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含まない滅菌ＰＢＳ中で再構成され、凍結保存され、使用のために新鮮に解凍され、アッセイ培地中で４０ｎｇ／ｍｌ（４×）に希釈された。抗体の連続希釈物は、別々のプレートにおいて作製され（４×濃縮）、４０ｎｇ／ｍｌ（４×）等量のヒトＩＬ−１７とともに混合され、３７℃にて１時間インキュベートされた。ＨＳ２７細胞（典型的には、５０μｌアッセイ培地中に約２０，０００細胞）は、９６ウェル平底組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３５９９）のそれぞれのウェルに添加され、次に、プレインキュベートされた抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質＋ＩＬ−１７ミックスの５０μｌを添加した。ＩＬ−１７の最終濃度は１０ｎｇ／ｍｌであった。細胞は、約２４時間、３７℃にてインキュベートされた。その後、培地の上清が回収された。ＩＬ−１７中和のレベルは、製造業者の使用説明書に従って、市販のＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙキットを用いて、上清中のＩＬ−６量を決定することによって測定された。ＩＣ５０値は、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質対ＩＬ−６量可変勾配フィットの対数を用いて得られた。
【０２０４】
【表９】
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【０２０５】
Ｎ末端またはＣ末端位置のいずれかにおけるＡＢ２７３、ＡＢ２７４またはＡＢ２７５からのＶＤを含有するすべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、ＨＳ２７  ＩＬ−１７中和アッセイにおいて中和を示した。
【０２０６】
［実施例３．３］  ＢＩＡＣＯＲＥ技術を用いた親和性の決定
【０２０７】
【表１０】
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【０２０８】
ＢＩＡＣＯＲＥ法：
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）は、結合（ｏｎ−ｒａｔｅ）定数および解離（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）定数の反応速度測定を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの親和性を決定した。標的抗原（例えば、精製された組換え標的抗原）への抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）１０００または３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）により、２５℃で稼働しているＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．００５％サーファクタントＰ２０）を用いて表面プラズモン共鳴に基づく測定によって決定された。すべての化学物質は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）から入手し、または他には本明細書に記載される別の供給元から入手した。例えば、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中に希釈された、約５０００ＲＵのヤギ抗マウスＩｇＧ、（Ｆｃγ）、断片特異的なポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）は、製造業者の使用説明書に従って標準的なアミンカップリングキットおよび２５μｇ／ｍｌでの操作を用いてＣＭ５研究等級のバイオセンサーチップ全体に直接固定化された。バイオセンサー表面上の未反応部分をエタノールアミンを用いてブロックした。フローセル２および４において修飾されたカルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用した。フローセル１および３におけるヤギ抗マウスＩｇＧなしの未修飾のカルボキシメチルデキストランを基準表面として使用した。反応速度分析のために、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを用いて、８個すべての注入物の結合および解離相に対して、１：１ラングミュア（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合モデルから誘導された速度方程式を同時にフィッティングさせた（グローバルフィット分析を使用）。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面の全体で捕捉するために、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水中に、精製された抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質試料を希釈した。リガンドとして捕捉されるべき抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（２５μｇ／ｍｌ）を５μｌ／分の流速で反応マトリックス全体に注入した。結合速度定数および解離結合定数のｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１）およびｋｏｆｆ（ｓ−１）は、２５μｌ／分の連続的流速下で決定された。１０−２００ｎＭの範囲の異なる抗原濃度にて速度論結合測定を行うことによって速度定数を導いた。次に、以下の式：ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎによって、速度論的速度定数から抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質および標的抗原間の反応の平衡解離定数（Ｍ）を計算した。結合を時間の関数として記録し、速度論的速度定数を計算した。このアッセイにおいて、１０６Ｍ−１ｓ−１程度に速い結合速度および１０−６ｓ−１程度に遅い解離速度が測定された。
【０２０９】
【表１１】
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【０２１０】
Ｂｉａｃｏｒｅ技術によって特徴付けられたすべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合は維持され、親抗体の結合能力に匹敵していた。すべての可変ドメインは親抗体と同様の高い親和性で結合していた。
【０２１１】
［実施例４］  抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の特徴付け
機能的活性を阻害するための精製されたＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の能力は、例えば、実施例３に記載されるようにサイトカインバイオアッセイを用いて決定された。組換えヒト抗原に対するＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合親和性は、実施例４に記載されるように表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定を用いて決定された。抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のバイオアッセイからのＩＣ５０値および親和性を位置付けた。親ｍＡｂの活性を完全に維持するＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、将来の進行のための候補対象として選択された。上位２−３の最も有益なＤＶＤ−Ｉｇタンパク質をさらに特徴付けた。
【０２１２】
［実施例４．１］  ヒト化抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の薬物動態分析
薬物動態研究は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットおよびカニクイザルにおいて行われる。雄性および雌性のラットならびにカニクイザルは、４ｍｇ／ｋｇのｍＡｂまたはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の単回投薬で静脈内または皮下に投薬され、抗原捕捉ＥＬＩＳＡを用いて試料を分析し、薬物動態パラメーターを非コンパートメント分析によって決定する。要約すると、ヤギ抗ビオチン抗体（５ｍｇ／ｍｌ、４℃、一晩）を用いてＥＬＩＳＡプレートを被覆し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてブロックし、１０％ＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋのＴＴＢＳ中の５０ｎｇ／ｍｌのビオチン化ヒト抗原とともに室温で２時間インキュベートする。血清試料を連続的に希釈し（ＴＴＢＳ中の０．５％血清、１０％Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ）およびプレート上で３０分間、室温にてインキュベートする。ＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒト抗体を用いて検出を行い、４パラメーターのロジスティックフィットを用いて、標準曲線の助けにより濃度を決定する。薬物動態パラメーターに関する値は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を用いて、非コンパートメントモデルによって決定される。良好な薬物動態プロファイル（Ｔ１／２は８−１３日またはそれより良好であり、低クリアランスおよび優れた生物学的利用能は５０−１００％である。）を有するヒト化ｍＡｂが選択される。
【０２１３】
［実施例４．２］  ヒト化モノクローナル抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の物理化学的およびインビトロでの安定性分析
サイズ排除クロマトグラフィー
水を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を２．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、２０ｍＬをＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ＃ｋ５５３９−０５ｋ）を用いてＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステム上で分析した。２１１ｍＭ硫酸ナトリウム、９２ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を用いて、流速０．３ｍＬ／分にて試料をカラムから溶出した。ＨＰＬＣシステムの操作条件は以下の通りである：
移動相：２１１ｍＭのＮａ２ＳＯ４、９２ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４＊７Ｈ２０、ｐＨ７．０
勾配：アイソクラチック
流速：０．３ｍＬ／分
検出波長：２８０ｎｍ
オートサンプラー冷却装置温度：４℃
カラムオーブン温度：周囲
実行時間：５０分
【０２１４】
表１０は、上記プロトコルにより測定したモノマー（予想される分子量を有する非凝集タンパク質）％として表される親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の純度データを含む。
【０２１５】
【表１２】
2015508994.tif 000027
2015508994.tif 000028
【０２１６】
ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、大部分のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が９０％を超えるモノマーを示す優れたＳＥＣプロファイルを示した。このＤＶＤ−Ｉｇタンパク質プロファイルは、親抗体について観察されたものと類似していた。
【０２１７】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
還元条件下および非還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を分析する。Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）を対照として用いる。還元条件について、１００ｍＭのＤＴＴを含む２×トリスグリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＬＣ２６７６、ロット＃１３２３２０８）と１：１で試料を混合し、６０℃で３０分間加熱する。非還元条件について、試料緩衝液と１：１で試料を混合し、１００℃で５分間加熱する。還元試料（１０ｍｇ／レーン）を１２％プレキャストのトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＣ６００５ｂｏｘ、ロット＃６１１１０２１）上に装填し、非還元試料（１０ｍｇ／レーン）を８％−１６％プレキャストのトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＣ６０４５ｂｏｘ、ロット＃６１１１０２１）上に装填する。ＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ  ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＬＣ５９２５、ロット＃１３５１５４２）を分子量マーカーとして用いる。ゲルをＸＣｅｌｌ  ＳｕｒｅＬｏｃｋミニセルゲルボックス（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＩ０００１）に入れ、最初に、ゲル内の試料を積層するために電圧７５を加え、次にダイフロント（ｄｙｅ  ｆｒｏｎｔ）がゲルの底に到達するまで定電圧１２５にしてタンパク質を分離する。使用される泳動緩衝液は１×トリスグリシンＳＤＳ緩衝液であり、１０×トリスグリシンＳＤＳ緩衝液（ＡＢＣ、ＭＰＳ−７９−０８０１０６）から調製される。コロイド状青色染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃４６−７０１５、４６−７０１６）を用いてゲルを一晩染色し、バックグラウンドを除くためにＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染する。次に、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０、Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いて、染色されたゲルをスキャンする。
【０２１８】
沈降速度分析
３つの標準的な２セクターのカーボン・エポンセンターピースの各々の試料チャンバー内に抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を装填する。これらのセンターピースは１．２ｃｍの光路長を有し、サファイアウィンドウで構築される。基準緩衝液に関してはＰＢＳを使用し、各チャンバーは１４０μＬを含む。Ｂｅｃｋｍａｎ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＸＬ−Ｉ分析用超遠心分離機（シリアル＃ＰＬ１０６Ｃ０１）の４ホール（ＡＮ−６０Ｔｉ）ローターを用いて、すべての試料を同時に試験する。
【０２１９】
実行条件をプログラムし、ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ（ｖ５．６）を用いて遠心分離制御を行う。試料およびローターは、分析前の１時間（２０．０±０．１℃）熱平衡化させる。適切なセル装填の確認を３０００ｒｐｍで行い、１回のスキャンを各ウェルについて記録する。沈降速度条件は以下の通りである：
試料細胞体積：４２０ｍＬ
基準細胞体積：４２０ｍＬ
温度：２０℃
ローター速度：３５，０００ｒｐｍ
時間：８：００時間
ＵＶ波長：２８０ｎｍ
半径刻み幅：０．００３ｃｍ
データ回収：信号加算平均なしの１工程あたり１データポイント
スキャン総数：１００
【０２２０】
完全な抗体のＬＣ−ＭＳ分子量測定
完全な抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の分子量をＬＣ−ＭＳによって分析する。水を用いて各抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を約１ｍｇ／ｍＬに希釈する。タンパク質マイクロトラップ（Ｍｉｃｈｒｏｍ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ、カタログ＃００４／２５１０９／０３）を備えた１１００ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）システムを用いて、脱塩し、試料の５ｍｇをＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中の０．０８％ＴＦＡ、０．０２％ＴＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０８％ＦＡおよび０．０２％ＴＦＡ）を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は２０００から３５００の質量対電荷比である。
【０２２１】
抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の軽鎖および重鎖のＬＣ−ＭＳ分子量測定
抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の軽鎖（ＬＣ）、重鎖（ＨＣ）および脱グリコシル化されたＨＣの分子量測定をＬＣ−ＭＳによって分析する。水を用いて抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１ｍｇ／ｍＬに希釈し、試料は、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、３０分間、３７℃でＬＣおよびＨＣに還元される。抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を脱グリコシル化するために、１００ｍｇの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１００ｍＬの全体積中の２ｍＬのＰＮＧａｓｅ  Ｆ、５ｍＬの１０％Ｎ−オクチルグルコシドとともに、一晩３７℃にてインキュベートされる。脱グリコシル化後、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、試料を３０分間、３７℃にて還元する。Ｃ４カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１４ＴＰ５１１５、Ｓ／Ｎ０６０２０６５３７２０４０６９）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣシステムを用いて脱塩し、試料（５ｍｇ）をＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中の０．０８％ＦＡ、０．０２％ＴＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０８％ＦＡおよび０．０２％ＴＦＡ）を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は８００から３５００の質量対電荷比である。
【０２２２】
ペプチドマッピング
７５ｍＭ重炭酸アンモニウム中の最終濃度が６Ｍの塩酸グアニジンを用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１５分間、室温にて変性させる。変性試料は、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、３７℃、６０分間還元させ、次に、暗所にて３７℃、３０分間、５０ｍＭヨード酢酸（ＩＡＡ）を用いてアルキル化される。アルキル化後、４リットルの１０ｍＭ重炭酸アンモニウムに対して、一晩４℃で試料を透析する。透析された試料は、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム、ｐＨ７．８を用いて１ｍｇ／ｍＬに希釈され、１００ｍｇの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１：２０（ｗ／ｗ）トリプシン／Ｌｙｓ−Ｃ：抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の比でトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃Ｖ５１１１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ、カタログ＃１１  ０４７  ８２５  ００１）を用いて３７℃で４時間消化される。消化物は、１ＮのＨＣｌを１ｍＬ用いてクエンチされる。質量分析計検出を用いたペプチドマッピングについて、４０ｍＬの消化物は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣシステムを備えた、Ｃ１８カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１８ＴＰ５１、Ｓ／Ｎ  ＮＥ９６０６  １０．３．５）上で逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰＨＰＬＣ）によって分離される。ペプチドの分離は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ等級の水中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）を使用する勾配を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて実行する。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は８００から２５００の質量対電荷比である。
【０２２３】
ジスルフィド結合マッピング
抗体を変性するために、１００ｍＬの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１００ｍＭ重炭酸アンモニウム中の８ＭグアニジンＨＣｌの３００ｍＬと混合される。ｐＨをチェックして、ｐＨが７から８の間であることを確認し、最終濃度が６ＭのグアニジンＨＣｌ中で１５分間、室温にて試料を変性させる。一部の変性試料（１００ｍＬ）をＭｉｌｌｉ−Ｑ水で６００ｍＬに希釈し、最終のグアニジン−ＨＣｌ濃度を１Ｍとする。試料（２２０ｍｇ）は、１：５０のトリプシン：抗体もしくはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質または１：５０のＬｙｓ−Ｃ：抗体もしくはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（ｗ／ｗ）の比（４．４ｍｇ酵素：２２０ｍｇ試料）でトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃Ｖ５１１１、ロット＃２２２６５９０１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ、カタログ＃１１０４７８２５００１、ロット＃１２８０８０００）を用いて３７℃で約１６時間消化される。さらに５ｍｇのトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃを試料に添加し、消化をさらに２時間、３７℃で進行させる。各試料に１ｍＬのＴＦＡを添加することによって消化を停止させる。消化された試料は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣシステム上のＣ１８カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１８ＴＰ５１、Ｓ／Ｎ  ＮＥ０２０６３０−４−１Ａ）を用いてＲＰＨＰＬＣによって分離される。分離は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ等級の水中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）を用いて、ペプチドマッピングについて使用されたものと同じ勾配で５０ｍＬ／分の流速にて実行する。ＨＰＬＣの操作条件は、ペプチドマッピングについて使用された条件と同じである。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は８００から２５００の質量対電荷比である。ジスルフィド結合は、ペプチドの実測されたＭＷと、ジスルフィド結合によって連結されたトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃペプチドの予測されたＭＷとを合致させることによって割り当てられる。
【０２２４】
遊離スルフヒドリル決定
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質中の遊離システインを定量するために使用される方法は、特徴的な発色生成物である５−チオ−（２−ニトロ安息香酸）（ＴＮＢ）を生じさせる、エルマン試薬である５，５ｃ−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）とスルフヒドリル基（ＳＨ）の反応に基づいている。反応は、式：
ＤＴＮＢ  ＋  ＲＳＨ（Ｒ）ＲＳ−ＴＮＢ  ＋  ＴＮＢ−  ＋  Ｈ＋
において説明される。
【０２２５】
ＴＮＢ−の吸光度は、Ｃａｒｙ  ５０分光光度計を用いて、４１２ｎｍで測定される。吸光度曲線は、遊離ＳＨ標準として２メルカプトエタノール（ｂ−ＭＥ）の希釈を用いてプロットし、タンパク質中の遊離スルフヒドリル基の濃度は、試料の４１２ｎｍでの吸光度から決定される。
【０２２６】
ｂ−ＭＥ標準ストックは、最終濃度が０．１４２ｍＭになるように、ＨＰＬＣ等級の水を用いて１４．２Ｍのｂ−ＭＥを連続希釈することによって調製される。次に、各濃度について３点測定の標準を調製する。アミコンウルトラ１０，０００ＭＷＣＯ遠心フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ＃ＵＦＣ８０１０９６、ロット＃Ｌ３ＫＮ５２５１）を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、緩衝液をアダリムマブについて使用した処方緩衝液（５．５７ｍＭリン酸一水素ナトリウム、８．６９ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１０６．６９ｍＭのＮａＣｌ、１．０７ｍＭクエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭクエン酸、６６．６８ｍＭマンニトール、ｐＨ５．２、０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ）に交換する。試料をシェーカー上で室温にて２０分間混合する。次に、１８０ｍＬの１００ｍＭのＴｒｉｓ緩衝液、ｐＨ８．１を各試料に添加し、標準は、１０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ８．１中の２ｍＭのＤＴＮＢを３００ｍＬ添加する。完全に混合した後、Ｃａｒｙ  ５０分光光度計上で４１２ｎｍの吸光度について試料および標準を測定する。遊離ＳＨの量とｂ−ＭＥ標準のＯＤ４１２ｎｍをプロットすることによって、標準曲線を得る。試料の遊離ＳＨ含有量は、ブランクを差し引いた後、この曲線に基づいて計算される。
【０２２７】
弱い陽イオン交換クロマトグラフィー
１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１ｍｇ／ｍＬに希釈する。電荷異質性は、ＷＣＸ−１０  ＰｒｏＰａｃ分析用カラム（Ｄｉｏｎｅｘ、カタログ＃０５４９９３、Ｓ／Ｎ０２７２２）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムを用いて分析される。試料を８０％移動相Ａ（１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０）および２０％移動相Ｂ（１０ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０）においてカラムに充填し、１．０ｍＬ／分の流速で溶出する。
【０２２８】
オリゴ糖プロファイリング
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のＰＮＧａｓｅ  Ｆ処理後に放出されるオリゴ糖は、２−アミノベンズアミド（２−ＡＢ）標識試薬を用いて誘導される。蛍光標識されたオリゴ糖は、順相の高速液体クロマトグラフィー（ＮＰＨＰＬＣ）によって分離され、異なる形態のオリゴ糖は、保持時間に基づいて、既知の標準と比較して特徴付けられる。
【０２２９】
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を最初にＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて消化し、重鎖のＦｃ部分からＮ結合のオリゴ糖を切断する。２ｍＬのＰＮＧａｓｅ  Ｆおよび３ｍＬの１０％Ｎ−オクチルグルコシドとともに５００ｍＬエッペンドルフチューブに抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（２００ｍｇ）を入れる。リン酸緩衝生理食塩水を添加し、最終体積を６０ｍＬにする。７００ＲＰＭに設定したエッペンドルフのサーモミキサー中で一晩３７℃にて試料をインキュベートする。また、Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）を対照としてＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて消化する。
【０２３０】
ＰＮＧａｓｅ  Ｆ処理後、７５０ＲＰＭに設定されたエッペンドルフのサーモミキサー中で９５℃、５分間、試料をインキュベートしてタンパク質を沈殿させ、次に、２分間、１０，０００ＲＰＭでエッペンドルフの遠心分離機に試料を置き、沈殿したタンパク質を沈降させる。オリゴ糖を含む上清を５００ｍＬのエッペンドルフチューブに移し、スピード−ｖａｃ中、６５℃で乾燥させる。
【０２３１】
Ｐｒｏｚｙｍｅから購入される２ＡＢ標識キット（カタログ＃ＧＫＫ−４０４、ロット＃１３２０２６）を用いて、オリゴ糖を２ＡＢで標識する。製造業者の使用説明書に従って標識試薬を調製する。酢酸（１５０ｍＬ、キットにおいて提供される）をＤＭＳＯバイアル（キットにおいて提供される）に添加し、溶液を数回、上下にピペッティングすることによって混合する。酢酸／ＤＭＳＯ混合物（１００ｍＬ）を２−ＡＢ色素のバイアル（使用直前）に移し、色素が完全に溶解するまで混合する。次に、色素溶液を還元剤（キットにおいて提供される）のバイアルに添加し、十分に混合に混合する（標識試薬）。標識試薬（５ｍＬ）を各々乾燥させたオリゴ糖試料バイアルに添加し、完全に混合する。６５℃で７００−８００ＲＰＭに設定されたエッペンドルフのサーモミキサーに反応バイアルを置き、２時間反応させる。
【０２３２】
標識反応後、Ｐｒｏｚｙｍｅから入手されるＧｌｙｃｏＣｌｅａｎｓカートリッジ（カタログ＃ＧＫＩ−４７２６）を用いて過剰の蛍光色素を取り除く。試料を添加前、カートリッジを１ｍＬのｍｉｌｌｉ−Ｑ水で洗浄し、その後、１ｍＬの３０％酢酸溶液で５回洗浄する。試料を添加直前に、１ｍＬのアセトニトリル（Ｂｕｒｄｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ＃ＡＨ０１５−４）をカートリッジに添加する。
【０２３３】
すべてのアセトニトリルがカートリッジを通過した後、新たに洗浄したディスクの中心に試料をスポット状に置き、ディスク上に１０分間吸着させる。１ｍＬのアセトニトリルを用いてディスクを洗浄し、続いて、１ｍＬの９６％アセトニトリルで５回洗浄する。カートリッジを１．５ｍＬのエッペンドルフチューブ上に置き、２−ＡＢ標識されたオリゴ糖をｍｉｌｌｉ  Ｑ水の３回の洗浄（各洗浄あたり４００ｍＬ）により溶出させる。
【０２３４】
Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムに連結させたＧｌｙｃｏｓｅｐ  Ｎ  ＨＰＬＣ（カタログ＃ＧＫＩ−４７２８）カラムを用いてオリゴ糖を分離する。Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムは、システムコントローラー、脱気装置、二重ポンプ、試料冷却器を備えたオートサンプラーおよび蛍光検出器からなっていた。
【０２３５】
高温での安定性
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の緩衝液は、５．５７ｍＭリン酸一水素ナトリウム、８．６９ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１０６．６９ｍＭのＮａＣｌ、１．０７ｍＭクエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭクエン酸、６６．６８ｍＭマンニトール、０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ、ｐＨ５．２；または１０ｍＭヒスチジン、１０ｍＭメチオニン、４％マンニトール、ｐＨ５．９のいずれかであり、Ａｍｉｃｏｎ超遠心フィルターを用いる。適切な緩衝液を用いて、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の最終濃度を２ｍｇ／ｍＬに調整する。次に、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の溶液を濾過滅菌し、０．２５ｍＬのアリコートを無菌条件下で調製する。アリコートを−８０℃、５℃、２５℃または４０℃で１、２または３週間放置する。インキュベーション期間の終わりに、サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって試料を分析する。
【０２３６】
安定性試料は、還元条件下および非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析される。使用される手法は、本明細書に記載されたものと同じである。コロイド状青色染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃４６−７０１５、４６−７０１６）を用いてゲルを一晩染色させ、バックグラウンドが透明になるまでＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染される。次に、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０、Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いて、染色されたゲルをスキャンする。高い感度を得るために、銀染色キット（Ｏｗｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて同じゲルを銀染色し、製造業者によって提供される推奨の手順を用いる。
【０２３７】
動的走査蛍光光度法
ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１０ｍＭクエン酸１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）中で透析され、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得た。３点測定は、それぞれのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質について実施された。それぞれの試料について、２７μｌのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、９６ウェルプレートのウェルに添加され、３μｌの４×希釈されたＳＹＰＲＯオレンジ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともに混合された。色素は、５０００×濃度でＤＭＳＯ中に供給され、水で４×の作業濃度に希釈された。プレートは、３０秒間遠心分離され、色素とタンパク質の両方が、ウェルの底に沈殿することを確保し、完全な混合がピペットチップにより穏やかな吸引によって確保された。次に、プレートは接着フィルムで密封された。
【０２３８】
リアルタイムＰＣＲ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、７５００シリーズ）は、温度とともに蛍光強度の変化を測定するために使用された。プレートは、約０．５℃／分の温度ランプ速度にて、２５℃から９５℃まで加熱され、発光蛍光は、ＴＡＭＲＡフィルターを用いて回収された。データは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌにエクスポートされ、それぞれのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質について温度対蛍光としてプロットされた。融解の開始は、サーモグラムがベースライン蛍光を超えて上昇する温度として記述された。ＳＹＰＲＯオレンジは疎水性色素であり、アンフォールディングタンパク質分子中の露出された疎水性残基に優先的に結合する。したがって、アンフォールディング温度の開始は、蛍光の増加によって測定され、ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の熱安定性の指標である。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のアンフォールディング温度は、表１１に見出すことができる。
【０２３９】
【表１３】
2015508994.tif 000029
【０２４０】
大部分のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、アンフォールディング温度＞５０を示した。このＤＶＤ−Ｉｇタンパク質プロファイルは、親抗体について観察されたプロファイルと同様である。
【０２４１】
溶解度決定
ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質候補は、１５ｍＭのＨｉｓ（ｐＨ６．０）中で透析された。これに続いて、３０Ｋカットオフを有するセントリコンにおいて５０μｌまでそれらを濃縮した。溶解度は、４℃での保存後、沈殿が存在しないことによって視覚的に確認し、２８０ｎｍでＵＶ吸光度を測定することによって定量的に決定された。
【０２４２】
【表１４】
2015508994.tif 000030
【０２４３】
大部分のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、透明な外観を示し、２５ｍｇ／ｍｌを超えて濃縮され得た。このＤＶＤ−Ｉｇタンパク質プロファイルは、親抗体について観察されたプロファイルと同様である。
【０２４４】
参照による援用
本出願を通して引用されてもよい、すべての引用される参考資料（参考文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含む）の内容は、これによって、これらの参考資料がそこに記載されているかのように、いずれかの目的で参考資料の全体を参照することにより明確に援用される。本開示は、別段の記載がない限り、当該技術分野において周知である免疫学、分子生物学および細胞生物学の従来技術を使用する。
【０２４５】
本開示は、分子生物学および薬物送達の分野で周知の技術全体も、参照により組み込む。これらの技術には、以下の公報に記載されている技術が含まれるが、これに限定されるものではない。
Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆Ｓｏｎｓ，  ＮＹ  （１９９３）．
Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．，  Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （４ｔｈ  Ｅｄ．  １９９９）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ＮＹ．  （ＩＳＢＮ  ０−４７１−３２９３８−Ｘ）．
Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，  Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  （ｅｄｓ．），  Ｗｉｌｅｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４）；  
Ｇｉｅｇｅ，  Ｒ．  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，  Ａ．  Ｂａｒｒｅｔｔ，  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  ２ｎｄ  ｅａ．，  ｐｐ．  ２０  １−１６，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  （１９９９）；
Ｇｏｏｄｓｏｎ，  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ｖｏｌ．  ２，  ｐｐ．  １１５−１３８  （１９８４）；
Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ：  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１  （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８１；
Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．  １９８８）；  
Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．  （１９８７）  ａｎｄ  （１９９１）；
Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２；
Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  （２００１）  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．  ７９０  ｐｐ．  （ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）．
Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ  （１９９０）；
Ｌｕ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｄｓ．，  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  （２００１）  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｐｒｅｓｓ．  Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，  ＭＡ．  ２９８  ｐｐ．  （ＩＳＢＮ  １−８８１２９９−２１−Ｘ）．
Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌａ．  （１９７４）；  
Ｏｌｄ，  Ｒ．Ｗ．  ＆  Ｓ．Ｂ．  Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：  Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  （３ｄ  Ｅｄ．  １９８５）  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｂｏｓｔｏｎ．  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；  Ｖ．２：４０９  ｐｐ．  （ＩＳＢＮ  ０−６３２−０１３１８−４）．
Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （２ｄ  Ｅｄ．  １９８９）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ．  Ｖｏｌｓ．  １−３．  （ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６）．
Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８
Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，  Ｅ．Ｌ．  Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ：  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  （１９８７）  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  ＮＹ  （ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｂｙ  Ｈｏｒｓｔ  Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ）．  ６３４  ｐｐ．  （ＩＳＢＮ  ０−８９５７３−６１４−４）．
【０２４６】
均等
本開示は、その精神または本質的な特徴から逸脱せずに他の具体的な形態で実施することができる。したがって、前述の実施形態は、本開示を限定するというよりはむしろ、すべての点において例示していると考えるべきである。よって、本開示の範囲は、前述の記載によるというよりはむしろ、添付される特許請求の範囲によって示され、したがって、特許請求の範囲の意味および均等の範囲内にあるすべての変更は本明細書に包含されることが意図される。
【図１】
2015508994.tif 000031
【配列表】
2015508994000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年8月27日(2014.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１１年１２月３０日に出願した米国仮特許出願第６１／５８１，９６４号の利益を主張し、その全開示は、本明細書に参考として援用されている。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介したＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含み、その全体が本明細書に参考として援用されている。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１３年１月２１日に作製され、１１６６４３０４．ｔｘｔと命名され、大きさは４６，７８８バイトである。
【０００３】
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合する多価および多重特異的結合タンパク質、製造方法ならびに急性および慢性炎症性疾患、癌および他の疾患の診断、予防および／または治療におけるこれらの使用が提供される。
【背景技術】
【０００４】
２つまたはそれ以上の抗原に結合することができる多重特異的結合タンパク質などの工学的に作製されたタンパク質が、本分野において公知である。このような多重特異的結合タンパク質は、細胞融合、化学的連結または組換えＤＮＡ技術を用いて作製することが可能である。当該技術分野において公知の多重特異的結合タンパク質の構造は様々に存在し、多数の構造および方法には明らかな不利益がある。
【０００５】
二特異的抗体は、クアドローマ技術を用いて作製されてきた。しかしながら、この技術における誤対合された副産物の存在および大幅に減少した産生率は、複雑な精製操作が必要とされることを意味している。二特異的抗体は、２つの異なるｍＡｂの化学的連結によっても生産することが可能である。しかしながら、このアプローチは、均一な調製を与えない。
【０００６】
以前に使用された他のアプローチは、ヘテロ−二官能性クロスリンカーを有する２つの親抗体のカップリング、タンデムな一本鎖Ｆｖ分子、ダイアボディ、二特異的ダイアボディ、一本鎖ダイアボディおよびジ−ダイアボディの製造を含む。しかしながら、これらのアプローチのそれぞれは不利益を有する。さらに、ＩｇＧの重鎖中に２つのＦａｂリピートを含み、４つの抗原分子に結合することができる多価の抗体構築物が記載されている（ＰＣＴ公開ＷＯ０１７７３４２およびＭｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（９）：４８５４−６１参照）。
【０００７】
米国特許第７，６１２，１８１号は、二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）または二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））と呼ばれる、高親和性を有する２つ以上の抗原に結合することが可能な結合タンパク質の新規なファミリーを提供する。
【０００８】
種々の構造が当該技術分野において提供され、いくつかは利点と欠点を有するが、特定の構築物は、特定の標的に結合する特定の特性を有する多価結合タンパク質を調製するために必要とされる。さらに、新しい可変ドメイン配列は、結合タンパク質の特性をさらに改善することができる。
【０００９】
インターロイキン１３（ＩＬ−１３）は、Ｔｈ２系統の活性化Ｔ細胞によって産生される１７ｋＤａの糖タンパク質である。ＩＬ−１３の機能は、ヒトＢ細胞においてＩｇＥにスイッチさせ、炎症性サイトカイン産生を抑制する免疫グロブリンアイソタイプを含む。ＩＬ−１３は、主に、喘息などの気道炎症の誘導に関連する。また、他のアレルギー性疾患、線維性状態、癌および感染症に繋がっている。
【００１０】
インターロイキン−１７（ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ａとも称する。）は、炎症部位における活性化Ｔ細胞によって分泌される２０−３０ｋＤのホモ二量体糖タンパク質である。ＩＬ−１７は、炎症部位への単球および好中球を集積させるために、様々な組織において、複数の接着分子、炎症性サイトカインおよびケモカインの産生を誘導することによって炎症性サイトカインとして機能する。ＩＬ−１７はまた、造血前駆細胞の成熟において重要な役割を果たす。ＩＬ−１７の不適切な産生または過剰な産生は、関節リウマチ、喘息、狼瘡、同種移植片拒絶、他の炎症性疾患または自己免疫疾患および癌を含む種々の疾患または障害の病態と関連している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第０１／７７３４２号
【特許文献２】米国特許第７，６１２，１８１号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（９）：４８５４−６１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる、改良された多価結合タンパク質が、当該技術分野において必要とされている。ＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合する新規な結合タンパク質が本明細書において提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
（発明の要旨）
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる結合タンパク質が提供される。一実施形態において、高親和性で、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる結合タンパク質が提供される。
【００１５】
一実施形態において、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合するポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸またはポリペプチドを表し、Ｘ２はＦｃ領域を表し、ｎは０または１である結合タンパク質が提供される。一実施形態において、結合タンパク質中のＶＤ１およびＶＤ２は、重鎖可変ドメインである。別の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同じ抗原に結合することができる。別の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、異なる抗原に結合することができる。さらに別の実施形態において、Ｃは重鎖定常ドメインである。例えば、Ｘ１はリンカーである（但し、Ｘ１はＣＨ１ではない。）。
【００１６】
一実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合するポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域である。一実施形態において、Ｘ１は、リンカーであり、但し、ＣＨ１ではない。
【００１７】
一実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合するポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。一実施形態において、Ｘ１はリンカーであり、但し、ＣＬではない。
【００１８】
別の実施形態において、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合し、２つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第一のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第一のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域である。）を含み、前記第二のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第二のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。）を含む、結合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態において、第一および第二のＸ１は同じである。他の実施形態において、第一および第二のＸ１は異なっている。いくつかの実施形態において、第一のＸ１はＣＨ１ドメインではなく、および／または第二のＸ１はＣＬドメインではない。一実施形態において、第一のＸ１および第二のＸ１は短い（例えば、６アミノ酸）リンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１および第二のＸ１は長い（例えば、６を超えるアミノ酸）リンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１は短いリンカーであり、第二のＸ１は長いリンカーである。別の実施形態において、第一のＸ１は長いリンカーであり、第二のＸ１は短いリンカーである。
【００１９】
一実施形態において、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、４つのポリペプチド鎖を含み、第一の２つのポリペプチド鎖のそれぞれは、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第一のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域であり、第二の２つのポリペプチド鎖のそれぞれは、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は第二のリンカーであり、Ｘ２はＦｃ領域を含まない。このようなＤＶＤ結合タンパク質は、４つの抗原結合部位を有している。いくつかの実施形態において、第一および第二のＸ１は同じである。他の実施形態において、第一および第二のＸ１は異なる。いくつかの実施形態において、第一のＸ１は、ＣＨ１ドメインでないおよび／または第二のＸ１はＣＬドメインでない。別の実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、ＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合することができる。したがって、いくつかの実施形態において、結合タンパク質は、任意の配向で、ＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合することができる少なくとも２つの可変ドメイン配列（例えば、ＶＤ１およびＶＤ２）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して選択される。したがって、いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、同一の配列番号を含み、他の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、異なる配列番号を含む。
【００２０】
一実施形態において、
（ａ）結合タンパク質はＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合し、
（ｂ）ＶＤ１もしくはＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９からの３つのＣＤＲを含み、
（ｃ）ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、独立して、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９からの３つのＣＤＲを含み、
（ｄ）ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号３６、３８、４０、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２もしくは３４からの３つのＣＤＲを含み、または
（ｅ）ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３６、３８、４０、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号３０、３２もしくは３４からの３つのＣＤＲを含む。
【００２１】
別の実施形態において、
（ａ）ＶＤ１またはＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９を含み、
（ｂ）ＶＤ１およびＶＤ２重鎖可変ドメインは、独立して、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９を含み、
（ｃ）ＶＤ１重鎖可変ドメインは、配列番号３６、３８、４０、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９を含み、ＶＤ２重鎖可変ドメインは配列番号３０、３２もしくは３４を含み、または
（ｄ）ＶＤ２重鎖可変ドメインは、配列番号３６、３８、４０、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８もしくは４９を含み、ＶＤ１重鎖可変ドメインは配列番号３０、３２もしくは３４を含む。
【００２２】
一実施形態において、
（ａ）結合タンパク質はＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合し、
（ｂ）ＶＤ１もしくはＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号５０、５１、５２、５３もしくは５４からの３つのＣＤＲを含み、
（ｃ）ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、独立して、配列番号５０、５１、５２、５３または５４からの３つのＣＤＲを含み、
（ｄ）ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号３７、３９、４１、５０、５１、５２、５３もしくは５４からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３もしくは３５からの３つのＣＤＲを含み、または
（ｅ）ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３７、３９、４１、５０、５１、５２、５３もしくは５４からの３つのＣＤＲを含み、ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号３１、３３もしくは３５からの３つのＣＤＲを含む。
【００２３】
別の実施形態において、
（ａ）ＶＤ１もしくはＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号５０、５１、５２、５３または５４を含み、
（ｂ）ＶＤ１およびＶＤ２軽鎖可変ドメインは、独立して、配列番号５０、５１、５２、５３もしくは５４を含み、
（ｃ）ＶＤ１軽鎖可変ドメインは、配列番号３７、３９、４１、５０、５１、５２、５３もしくは５４を含み、ＶＤ２軽鎖可変ドメインは配列番号３１、３３もしくは３５を含み、または
（ｄ）ＶＤ２軽鎖可変ドメインは、配列番号３７、３９、４１、５０、５１、５２、５３もしくは５４を含み、ＶＤ１軽鎖可変ドメインは配列番号３１、３３もしくは３５を含む。
【００２４】
別の実施形態において、結合タンパク質は、本明細書における表１に示される重鎖および軽鎖配列を含む。
【００２５】
重鎖、軽鎖、二本鎖または四本鎖の実施形態のいずれかのさらなる実施形態は、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）；ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）；ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）；ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）；ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）；ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）；ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）；ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）；ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）；またはＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２７）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２８）；またはＧ／Ｓに基づく配列（例えば、Ｇ４Ｓ（配列番号２９）とＧ４Ｓ（配列番号２９）リピート）を含む少なくとも１つのＸ１リンカーを含む。一実施形態において、Ｘ２はＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｘ２は可変Ｆｃ領域である。
【００２６】
さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域は、第一のポリペプチド中に存在する場合、天然配列Ｆｃ領域またはバリアント配列Ｆｃ領域である。さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１のＦｃ領域、ＩｇＧ２のＦｃ領域、ＩｇＧ３のＦｃ領域、ＩｇＧ４のＦｃ領域、ＩｇＡのＦｃ領域、ＩｇＭのＦｃ領域、ＩｇＥのＦｃ領域またはＩｇＤのＦｃ領域である。
【００２７】
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合する結合タンパク質を作製する方法が提供される。一実施形態において、ａ）ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合する結合タンパク質を作製する方法は、ＩＬ−１３に結合する第一の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程；ｂ）ＩＬ−１７に結合する第二の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程；ｃ）本明細書に記載されている結合タンパク質のいずれかをコードする構築物（単数または複数）を調製する工程；およびｄ）ポリペプチド鎖を発現させ、第一および第二の抗原に結合する結合タンパク質を生じさせる工程を含む。
【００２８】
本明細書における実施形態のいずれかにおいて、存在する場合、ＶＤ１重鎖可変ドメイン、および存在する場合、軽鎖可変ドメインは、第一の親抗体またはその抗原結合部分由来であってもよく；存在する場合、ＶＤ２重鎖可変ドメイン、および存在する場合、軽鎖可変ドメインは、第二の親抗体またはその抗原結合部分由来であってもよい。第一および第二の親抗体は同じであってもよくまたは異なってもよい。
【００２９】
一実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は第一の抗原に結合し、第二の親抗体またはその抗原結合部分は第二の抗原に結合する。一実施形態において、第一および第二の抗原は同じ抗原である。別の実施形態において、親抗体は同じ抗原上の異なるエピトープに結合する。別の実施形態において、第一および第二の抗原は異なる抗原である。別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する効力と異なる効力で第一の抗原に結合する。さらに別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する親和性と異なる親和性で第一の抗原に結合する。
【００３０】
別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分および第二の親抗体またはその抗原結合部分は、ヒト抗体、ＣＤＲ移植された抗体、ヒト化抗体および／または親和性成熟された抗体である。
【００３１】
別の実施形態において、結合タンパク質は、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分によって示される少なくとも１つの所望の特性を有する。あるいは、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分は、結合タンパク質によって示される少なくとも１つの所望の特性を有する。一実施形態において、所望の特性は、１つ以上の抗体パラメーターである。別の実施形態において、抗体パラメーターは、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合性である。一実施形態において、結合タンパク質は多価である。別の実施形態において、結合タンパク質は多重特異的である。本明細書に記載されている多価および／または多重特異的結合タンパク質は、特に治療的見地から望ましい特性を有する。例えば、多価および／または多重特異的結合タンパク質は、（１）抗体が結合する抗原を発現している細胞によって、二価抗体より速く内部に取り込まれる（および／または異化される）；（２）タンパク質に結合するアゴニストであり；および／または（３）多価結合タンパク質が結合することができる抗原を発現している細胞の細胞死および／またはアポトーシスを誘導し得る。多価および／または多重特異的結合タンパク質の少なくとも１つの抗原結合特異性を提供する「親抗体」は、抗体が結合する抗原を発現している細胞によって内部に取り込まれ（および／または異化される）抗体であり得、および／またはアゴニスト、細胞死誘導および／またはアポトーシス誘導抗体であり得、本明細書に記載されている多価および／または多重特異的結合タンパク質は、これらの特性の１つ以上の改善を示し得る。さらに、親抗体は、これらの特性の任意の１つ以上を欠損してもよいが、本明細書に記載されるように、多価結合タンパク質として構築された場合、これらの１つ以上を取得してもよい。
【００３２】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；または少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１のうちの１つ以上の標的への結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、約１０２Ｍ−１ｓ−１から約１０３Ｍ−１ｓ−１、約１０３Ｍ−１ｓ−１から約１０４Ｍ−１ｓ−１、約１０４Ｍ−１ｓ−１から約１０５Ｍ−１ｓ−１、または約１０５Ｍ−１ｓ−１から約１０６Ｍ−１ｓ−１の、１つ以上の標的に対する結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。
【００３３】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約１０−３ｓ−１；最大約１０−４ｓ−１；最大約１０−５ｓ−１；または最大約１０−６ｓ−１のうちの１つ以上の標的への解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、約１０−３ｓ−１から約１０−４ｓ−１の、約１０−４ｓ−１から約１０−５ｓ−１の、または約１０−５ｓ−１から約１０−６ｓ−１の間の、１つ以上の標的に対する解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。
【００３４】
別の実施形態において、結合タンパク質は、最大約１０−７Ｍ；最大約１０−８Ｍ；最大約１０−９Ｍ；最大約１０−１０Ｍ；最大約１０−１１Ｍ；最大約１０−１２Ｍまたは最大約１０−１３Ｍのうちの１つ以上の標的への解離定数（Ｋｄ）を有する。一実施形態において、結合タンパク質は、約１０−７Ｍから約１０−８Ｍの；約１０−８Ｍから約１０−９Ｍの；約１０−９Ｍから約１０−１０Ｍの；約１０−１０Ｍから約１０−１１Ｍの；約１０−１１Ｍから約１０−１２Ｍの；または約１０−１２Ｍから約１０−１３Ｍのその標的に対する解離定数（Ｋｄ）を有する。
【００３５】
別の実施形態において、結合タンパク質は、薬剤をさらに含むコンジュゲートである。一実施形態において、抗原は、免疫接着分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤である。一実施形態において、造影剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンである。別の実施形態において、放射性標識は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍである。さらに別の実施形態において、治療剤または細胞毒性剤は、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である。
【００３６】
別の実施形態において、結合タンパク質は結晶化された結合タンパク質であり、結晶として存在する。一実施形態において、この結晶は、無担体医薬徐放結晶である。別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は、この結合タンパク質の可溶性対応物より大きなインビボ半減期を有する。さらに別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は生物学的活性を保持する。
【００３７】
別の実施形態において、本明細書に記載されている結合タンパク質はグリコシル化される。例えば、グリコシル化パターンは、ヒトグリコシル化パターンである。
【００３８】
本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか１つをコードする単離された核酸も提供される。さらなる実施形態は、本明細書に開示されている単離された核酸を含むベクターを提供し、ベクターは、ｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３０（２）；ｐＴＴ３（追加の多重クローニング部位を有するｐＴＴ）；ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ、（１９９０年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：（１７）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ；ｐＥＦ６  ＴＯＰＯ；ｐＢＯＳ；ｐＨｙｂＥ；またはｐＢＪである。一実施形態において、ベクターは、米国特許公開第２００９０２３９２５９号に開示されているベクターである。
【００３９】
別の態様において、宿主細胞は、本明細書に開示されたベクターで形質転換される。一実施形態において、宿主細胞は原核細胞、例えば、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。別の実施形態において、宿主細胞は真核細胞、例えば、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞または真菌細胞である。一実施形態において、宿主細胞は、これらに限定されないが、ＣＨＯ、ＣＯＳ；ＮＳ０、ＳＰ２、ＰＥＲ．Ｃ６を含む哺乳動物細胞；またはサッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌細胞；またはＳｆ９などの昆虫細胞である。一実施形態において、異なる特異性を有する２つまたはそれ以上の結合タンパク質は、単一の組換え宿主細胞中で生産される。例えば、抗体の混合物の発現は、Ｏｌｉｇｏｃｌｏｎｉｃｓ（商標）（Ｍｅｒｕｓ  Ｂ．Ｖ．，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）米国特許第７，２６２，０２８号および第７，４２９，４８６号と呼ばれている。
【００４０】
結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、本明細書に開示されている宿主細胞のいずれか１つを培地中において培養することを含む、本明細書に開示されている結合タンパク質を生産する方法が提供される。一実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の５０％から７５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。別の実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の７５％から９０％が、二重特異的四価結合タンパク質である。別の実施形態において、生産された結合タンパク質の９０％から９５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。
【００４１】
一実施形態は、結合タンパク質の放出のための組成物を提供し、この組成物は、結晶化された結合タンパク質、成分、および少なくとも１つのポリマー性担体を含む。一実施形態において、ポリマー担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリラート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチラート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン、硫酸化多糖またはこれらの混和物および共重合体である。一実施形態において、成分は、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコールである。
【００４２】
別の実施形態は、本明細書に開示された組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む哺乳動物を治療する方法を提供する。
【００４３】
本明細書に開示された結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物が提供される。さらなる実施形態において、この医薬組成物は、疾患を治療するための少なくとも１つの追加の治療剤を含む。例えば、追加の薬剤は、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤（抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦ−トラップが含まれるが、これらに限定されない。）、キナーゼ阻害剤（ＫＤＲおよびＴＩＥ−２阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）、共刺激分子遮断剤（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０が含まれるが、これらに限定されない。）、接着分子遮断剤（抗ＬＦＡ−１抗体、抗Ｅ／Ｌセレクチン抗体、小分子阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）、抗サイトカイン抗体またはその機能的断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦおよび抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体が含まれるが、これらに限定されない。）、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性薬剤、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸引用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストであり得る。
【００４４】
本明細書に開示されている結合部分によって結合され得る標的または複数の標的が有害である障害に罹患しているヒト対象を治療する方法であって、標的または複数の標的の活性が、ヒト対象において阻害され、１以上の症状が緩和されまたは治療が達成されるように、本明細書に開示されている結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む方法が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質は、例えば、炎症を伴う疾患などの自己免疫疾患に罹患しているヒトを治療するために使用することができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、喘息、アレルギー、アレルギー性肺疾患、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、線維症、嚢胞性線維症（ＣＦ）、線維性肺疾患、特発性肺線維症、肝線維症、狼瘡、Ｂ型肝炎関連肝疾患および線維症、敗血症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糸球体腎炎、炎症性皮膚疾患、乾癬、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、ＨＩＶによって引き起こされる感染症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症（ＯＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植拒絶反応、虚血性心疾患（ＩＨＤ）、セリアック病、接触過敏症、アルコール性肝疾患、ベーチェット病、アテローム硬化性血管疾患、眼球表面の炎症性疾患またはライム病を治療するために使用される。
【００４５】
別の実施形態において、治療されるべき障害または状態は、例えば、ＨＩＶ、ヒトライノウイルス、エンテロウイルス、コロナウイルス、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルスまたはアデノウイルスによって引き起こされる、ヒトにおけるウイルス感染によって生じる症状を含む。
【００４６】
本明細書において提供される結合タンパク質は、神経障害を治療するために用いることができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、神経再生および脊髄損傷を含む神経変性疾患および状態を治療するために用いられる。
【００４７】
一実施形態において、本明細書において開示されている組成物および方法を用いて治療または診断され得る疾患には、限定されないが、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱および尿路上皮を含む）、女性生殖路（子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む）、男性生殖路（前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む）、内分泌腺（甲状腺、副腎および下垂体を含む）および皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫（骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む）、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍（星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む）、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫の両方）を含む原発性および転移性の癌が挙げられる。
【００４８】
別の実施形態は、疾患または障害の治療における結合タンパク質の使用を提供し、前記疾患または障害は、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型および多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、アテローム性疾患／アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織���患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害、うつ病、統合失調症、Ｔｈ２型およびＴｈ１型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛、疼痛の様々な形態、癌、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、造血性悪性病変、白血病、リンパ腫、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）および動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症���機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎（Ａ型）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ．ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・デジェリーヌ−トーマス・シャイ−ドレーガーおよびマシャド−ジョセフ）、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラ��シー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ｃｉｓ）、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｊｕｎｔｉｖｉｔｉｓ  ｓｉｃｃａ）、クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ  ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（または結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分
泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）、原発性パーキンソニズム、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎）、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、坐骨神経痛、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性、もしくは創傷治癒である。
【００４９】
一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療剤および／または化学療法剤と組み合わせて用いる場合、癌を治療するために使用されまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防もしくは阻害において使用される。
【００５０】
別の態様において、本明細書に論述されているような第二の作用物質の投与前、投与と同時または投与後に、本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか１つを投与する工程を含む、疾患に罹患している患者を治療する方法が提供される。一実施形態において、第二の作用物質は、ブデノシド、上皮増殖因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチラート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１βｍＡｂ、抗ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体ｍＡｂ、増殖因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ−１９、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはこれらのリガンドに対する抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３またはＴＧＦβである。特定の実施形態において、本明細書に開示されている医薬組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮投与によって、患者に投与される。
【００５１】
また、本明細書に開示されている結合タンパク質に対する抗イディオタイプ抗体も提供される。抗イディオタイプ抗体は、本明細書において提供される結合タンパク質に組み込むことができる、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク領域または任意のその一部などの、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。
【００５２】
試験試料におけるＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７もしくはその断片の存在、量または濃度を決定する方法が提供される。この方法は、イムノアッセイによって、抗原またはその断片について試験試料をアッセイすることを含む。イムノアッセイは、（ｉ）少なくとも１つの結合タンパク質および少なくとも１つの検出可能な標識を使用し、（ｉｉ）試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的指標としての検出可能な標識によって生じるシグナルと、対照または較正因子における抗原またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的指標として生じるシグナルとを比較することを含む。較正因子は、場合によって、一連の較正因子の一部であり、この場合、較正因子のそれぞれは、抗原またはその断片の濃度によって、その一連の較正因子中の他の較正因子と異なっている。本方法は、（ｉ）捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を形成するために、試料を、抗原またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの捕捉剤と接触させること、（ｉｉ）捕捉剤／抗原またはその断片／検出剤の複合体を形成するために、捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を、検出可能な標識を含み、抗原またはその断片上のエピトープに結合し、捕捉剤に結合しない少なくとも１つの検出剤と接触させることおよび（ｉｉｉ）（ｉｉ）において形成された捕捉剤／抗原またはその断片／検出剤の複合体における検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度を決定することを含むことができ、少なくとも１つの捕捉剤および／または少なくとも１つの検出剤は少なくとも１つの結合タンパク質である。
【００５３】
あるいは、本方法は、（ｉ）捕捉剤／抗原またはその断片の複合体を形成するために、試験試料と、抗原またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの捕捉剤とを接触させ、同時にまたはいずれかの順番で連続して、試験試料と、少なくとも１つの捕捉剤への結合に関して試験試料中の任意の抗原またはその断片と競合し得る、検出可能に標識された抗原またはその断片とを接触させ、試験試料中に存在する任意の抗原またはその断片および検出可能に標識された抗原は互いに競合し、それぞれ、捕捉剤／抗原またはその断片の複合体と捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体を形成することおよび（ｉｉ）（ｉｉ）において形成された捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体において検出可能な標識によって発生するシグナルに基づいて、試験試料中の抗原またはその断片の存在、量または濃度を決定することを含むことができ、少なくとも１つの捕捉剤は、少なくとも１つの結合タンパク質であり、捕捉剤／検出可能に標識された抗原またはその断片の複合体における検出可能な標識によって生じるシグナルは、試験試料中の抗原またはその断片の量または濃度に反比例する。
【００５４】
試験試料は、患者由来であり得、この場合、本方法は、患者の治療的／予防的処置の効力を診断、予後診断または評価する工程をさらに含み得る。本方法が、患者の治療的／予防的処置の効力を評価することをさらに含む場合、この方法は、場合によって、効力を改善するために必要な、患者の治療的／予防的処置の改変を加えることをさらに含む。本方法は、自動化システムまたは半自動化システムにおける使用に適合させることができる。したがって、本明細書に記載されている方法はまた、対象が、所与の疾患、障害または状態を有するまたはそれを発症する危険性があるか否かを判定するために使用することができる。具体的には、このような方法は、以下：
（ａ）対象由来の試験試料中の、分析物またはその断片の濃度または量を（例えば、本明細書に記載されている方法または当該技術分野において公知の方法を用いて）決定する工程；
（ｂ）工程（ａ）において決定された分析物またはその断片の濃度または量と、予め決定されたレベルとを比較する工程を含むことができ、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量が予め決定されたレベルと比較して好ましい場合、対象は、所定の疾患、障害または状態を有さないまたはその危険性がないと決定される。
しかしながら、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量が予め決定されたレベルと比較して好ましくない場合、対象は、所定の疾患、障害または状態を有するまたはその危険性があると決定される。
【００５５】
さらに、対象における疾患の進行を監視する方法が本明細書に提供される。場合によって、本方法は、以下：
（ａ）分析物の対象由来の試験試料中の濃度または量を決定する工程；
（ｂ）分析物の対象由来の後者の試験試料中の濃度または量を決定する工程；および
（ｃ）工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量と、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量とを比較することを含み、工程（ｂ）において決定された濃度または量が変化しない場合または工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して好ましくない場合、対象における疾患は継続し、進行しまたは悪化していると判断される。比較して、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量が、工程（ａ）において決定された分析物の濃度または量と比較して好ましい場合、対象における疾患は中断し、軽減しまたは改善されたと判断される。
【００５６】
場合によって、本方法は、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量と、例えば、予め決定されたレベルとを比較することをさらに含む。さらに、場合によって、例えば、工程（ｂ）において決定された分析物の濃度または量が、予め決定されたレベルと比較して、不利に変更されたことを比較が示す場合、本方法は、ある期間、１以上の医薬組成物を用いて対象を治療することを含む。
【００５７】
また、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７またはその断片について試験試料をアッセイするキットが提供される。キットは、抗原またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分、抗原またはその断片について試験試料をアッセイするための指示書を含み、少なくとも１つの成分は、本明細書に開示されている結合タンパク質を含む少なくとも１つの組成物を含み、結合タンパク質は、場合によって、検出可能に標識されている。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質構築物の模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる多価および／または多重特異的結合タンパク質が提供される。二重可変ドメイン結合タンパク質（ＤＶＤ結合タンパク質）または二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））およびこれらの医薬組成物ならびに核酸、組換え発現ベクターおよびこのようなＤＶＤ結合タンパク質を作製するための宿主細胞もまた提供される。インビトロまたはインビボのいずれかにおいて、特定の抗原を検出するＤＶＤ結合タンパク質を使用する方法もまた提供される。
【００６０】
本明細書に別段の定義がなければ、本明細書で使用される科学および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。何らかの曖昧さが伏在している場合には、本明細書中に付与されている定義は、すべての辞書または本明細書外の定義に優越する。文脈上別段の必要がなければ、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。「または」の使用は、別段の記載がなければ、「および／または」を意味する。「含んでいる」という用語ならびに「含む」および「含まれた」などのその他の形式の使用は、限定的なものではない。
【００６１】
一般的に、本明細書に記載されている細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリッド形成に関連して使用される命名法は、周知のものであり、本分野において一般的に使用されている。一般に、本明細書において提供される方法および技術は、別段の記載がなければ、本分野において周知の慣用方法に従い、ならびに本明細書を通じて引用および論述されている様々な一般的参考文献およびより具体的な参考文献中に記載されているように、実施することができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明書に従って、本分野で一般的に遂行されているように、または本明細書に記載されているように、実施される。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学に関して使用される命名法、ならびに本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学の実験室操作および技術は、周知のものであり、本分野で一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、調合、および送達、および患者の治療に対しては、標準的な技術を使用し得る。
【００６２】
本開示がより容易に理解し得るように、特定の用語を以下に定義する。
【００６３】
「抗体」という用語は、４つのポリペプチド鎖（２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖）から一般に構成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子またはＩｇ分子のエピトープ結合特性を保持した機能的断片、変異体、バリアントまたはこれらの誘導体を表すものとする。このような断片、変異体、バリアントまたは誘導体抗体のフォーマットは、本分野において公知である。完全長の抗体の一実施形態において、各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。ＣＨは、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＣＬは単一のＣＬドメインから構成される。ＶＨおよびＶＬは、より保存された領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。）が散在された超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される。）へ、さらに細分割することが可能である。一般に、各ＶＨおよびＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。免疫グロブリン分子は、あらゆる種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
【００６４】
「二特異的抗体」という用語は、その２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの一対）の１つの上に１つの抗原（またはエピトープ）を結合し、その第二の結合アーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）の上の異なる抗原（またはエピトープ）に結合する抗体を指す。二特異的抗体は、２つの異なる抗原結合アーム（特異性とＣＤＲ配列の両方における）を有し、それが結合するそれぞれの抗原について一価である。二特異的抗体には、クアドローマ技術（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ（１９８３年）Ｎａｔｕｒｅ  ３０５（５９３４）：５３７−４０）によって、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的コンジュゲーション（Ｓｔａｅｒｚｅｔ  ａｌ．（１９８５年）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４（６０１２）：６２８−３１）によってまたはノブ・イントゥ・ホールもしくはＦｃ領域中に突然変異を導入する同様のアプローチ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０（１４）：６４４４−６４４８）によって生成されるものが含まれる。
【００６５】
「親和性成熟された」抗体とは、変化を有しない親抗体と比べて、抗体の１つ以上のＣＤＲ中に、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす１つ以上の変化を有する抗体である。典型的な親和性成熟された抗体は、標的抗原に対してｎＭの親和性を有し、またはｐＭの親和性さえ有する。親和性成熟された抗体は、本分野において公知の操作によって産生される。「Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３」は、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載している。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基の無作為な突然変異導入は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）ＰｒｏｃＮａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６によって記載されており、活性増強アミノ酸残基による選択的突然変異導入位置、接触または過剰変異位置での突然変異は、米国特許第６，９１４，１２８号に記載されている。
【００６６】
「ＣＤＲ移植された抗体」という用語は、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ領域の１つ以上の配列が別の抗体のＣＤＲ配列で置換されている重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体を指す。例えば、２つの抗体は、マウスＣＤＲの１つ以上がヒトＣＤＲ配列で置換されているマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体などの異なる種由来であり得る。
【００６７】
「ヒト化抗体」という用語は、ヒト以外の種由来の、より「ヒト類似に」、すなわち、ヒト生殖系列配列により類似するように改変された抗体を表す。ヒト化抗体の１つの種類は、非ヒトＣＤＲ配列がヒトのＶＨおよびＶＬ配列中に導入されて、対応するヒトＣＤＲ配列が置換されているＣＤＲ移植された抗体である。「ヒト化抗体」はまた、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に（例えば、アミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性で）有するフレームワーク領域（ＦＲ）配列と、非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する少なくとも１つのＣＤＲを含む抗体またはそのバリアント、誘導体、類似体もしくは断片である。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列が非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）の配列に対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべての配列がヒト免疫グロブリンの配列である、少なくとも１つの、典型的には２つ可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的にすべてを含んでもよい。ヒト化抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含んでもよい。一実施形態において、ヒト化抗体はまた、ヒト免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／または重鎖のヒト化可変ドメインのみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖、ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、重鎖、ならびに軽鎖の少なくとも可変ドメインを含有する。
【００６８】
「二重可変ドメイン結合タンパク質」および「二重可変ドメイン免疫グロブリン」という用語は、その２つの結合アーム（例えば、ＨＣ／ＬＣの一対）のそれぞれにおいて２つの可変ドメインを有する結合タンパク質を指し（ＰＣＴ出願公開第ＷＯ０２／０２７７３号参照）、それぞれが抗原に結合することができる。一実施形態において、それぞれの可変ドメインは、異なる抗原またはエピトープに結合する。別の実施形態において、それぞれの可変ドメインは、同じ抗原またはエピトープに結合する。別の実施形態において、二重可変ドメイン結合タンパク質は、同一の特異性と同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一の抗原結合アームを有し、それが結合するそれぞれの抗原に対して二価である。一実施形態において、ＤＶＤ結合タンパク質は、単一特異的であってもよく、すなわち、１つの抗原に結合することができまたは多重特異的であってもよく、すなわち、２つ以上の抗原に結合することができる。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）と呼ばれる。一実施形態において、４本鎖ＤＶＤ結合タンパク質の各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド、軽鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの抗原結合部位を含む。一実施形態において、それぞれの結合部位は、抗原結合部位あたりの抗原結合に関与する全６つのＣＤＲを有する重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。
【００６９】
「抗イディオタイプ抗体」という用語は、別の抗体の抗原結合部位のアミノ酸配列に対して惹起された抗体を指す。抗イディオタイプ抗体は、抗原に対する免疫応答を増強するために投与され得る。
【００７０】
「生物学的活性」という用語は、分子の１つ以上の固有の生物学的特性（インビボで見られるように天然に存在するものであっても、組換え手段によって提供される、または可能にされるものであっても）を表す。生物学的特性には、受容体に結合すること；細胞増殖の誘導、細胞増殖を阻害すること、他のサイトカインの誘導、アポトーシスの誘導および酵素活性が含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
「中和」という用語は、結合タンパク質が抗原に特異的に結合した場合、抗原の生物学的活性を相殺することを指す。一実施形態において、中和結合タンパク質は、抗原（例えば、サイトカイン）に結合し、少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれ以上にその生物学的活性を低下させる。
【００７２】
「特異性」とは、抗原に選択的に結合する結合タンパク質の能力を指す。
【００７３】
「親和性」は、結合タンパク質と抗原との間の相互作用の強さであり、結合タンパク質のＣＤＲの配列によって、ならびに抗原の性質、例えばそのサイズ、形状および／または電荷によって決定される。結合タンパク質は、負の副作用を最小限にしながら、所望の治療の評価項目を提供する親和性について選択することができる。親和性は、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて測定することができる。
【００７４】
「効力」という用語は、所望の効果を達成するための結合タンパク質の能力を意味し、その治療有効性の測定である。効力は、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて評価することができる。
【００７５】
「交差反応性」という用語は、惹起された標的以外の標的に結合する結合タンパク質の能力を指す。一般に、結合タンパク質は、適切に高い親和性でその標的組織（単数または複数）／抗原（単数または複数）に結合するが、非標的の正常組織に対して適切に低い親和性を示す。個々の結合タンパク質は、一般に、２つの基準を満たすように選択される。（１）抗体標的の既知の発現に適切な組織染色。（２）同じ臓器からのヒトとｔｏｘ種（マウスおよびカニクイザル）との間の類似した染色パターン。交差反応性を評価するためのこれらの方法および他の方法は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７６】
「生物学的機能」という用語は、結合タンパク質の特異的なインビトロまたはインビボにおける作用を意味する。結合タンパク質は、抗原のいくつかのクラスを対象とし、複数の作用機序を介して所望の治療結果を達成することができる。結合タンパク質は、可溶性タンパク質、細胞表面抗原ならびに細胞外タンパク質沈着物を対象にすることができる。結合タンパク質は、それらの標的の活性を作働させ、拮抗しまたは中和することができる。結合タンパク質は、それらが結合する標的のクリアランスを助けることができまたは細胞に結合したときに細胞毒性をもたらすことがある。２つ以上の抗体の部分は、単一の結合タンパク質分子において異なる機能を達成するために、多価フォーマットに組み込むことができる。生物学的機能を評価するために使用されるインビトロアッセイおよびインビボモデルは、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７７】
「安定な」結合タンパク質は、結合タンパク質が、保存時にその物理的安定性、化学的安定性および／または生物学的活性を本質的に保持しているものである。長期間にわたって、種々の温度にてインビトロで安定である多価結合タンパク質が望ましい。結合タンパク質を安定化し、種々の温度でそれらの安定性を評価する方法は、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００７８】
「溶解性」という用語は、水性溶液中に分散させたままにするタンパク質の能力を意味する。水性製剤中のタンパク質の溶解性は、疎水性および親水性アミノ酸残基の適切な分布に依存し、したがって、溶解性は、正確に折り畳まれたタンパク質の生成と相関し得る。当業者は、日常的なＨＰＬＣ技術および当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて、結合タンパク質の可溶性の増加または減少を検出することができる。
【００７９】
結合タンパク質は、様々な宿主細胞を用いて生成されてもよく、またはインビトロで生成されてもよく、労力あたりの相対収率は「生成効率」を決定する。生成効率に影響を及ぼす因子には、限定されないが、宿主細胞型（原核生物または真核生物）、発現ベクターの選択、ヌクレオチド配列の選択および使用される方法が挙げられる。結合タンパク質生成に使用される材料および方法、ならびに生成効率の測定は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００８０】
「免疫原性」という用語は、免疫応答を誘導する物質の能力を意味する。治療的結合タンパク質の投与は、免疫応答の特定の発生率をもたらし得る。多価形式の免疫原性を誘導し得る潜在的な要素は、親抗体の選択中に分析することができ、このような危険性を低下させるための工程は、多価結合タンパク質形式にそれらの配列を組み込む前に、親抗体を最適化するために採用することができる。抗体と結合タンパク質の免疫原性を減少させる方法は、当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【００８１】
「標識」および「検出可能な標識」という用語は、特異的結合対のメンバー間の反応（例えば、結合）を検出可能なものにするために、抗体またはその分析物などの特異的結合対のメンバーに結合させた部分を意味する。特異的結合対の標識された部分は、「検出可能に標識されている」と呼ばれる。したがって、「標識された結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の同定を与える標識が取り込まれたタンパク質を表す。一実施形態において、標識は、視覚または計測手段によって検出可能な信号を生成することができる、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識されたアミノ酸の取り込み、または印を付けたアビジン（例えば、光学的方法または比色分析法によって検出することができる、蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができるビオチン部分のポリペプチドへの付着である。ポリペプチド用の標識の例には、以下の放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍ）；色原体、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）；酵素的標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；およびガドリニウムキレートなどの磁気作用物質が含まれるが、これらに限定されない。イムノアッセイに一般に使用される標識の代表例には、光を生じる部分、例えばアクリジニウム化合物および蛍光を生じる部分、例えばフルオレセインが含まれる。この関連で、部分自体が検出可能に標識され得るが、さらに別の部分との反応後に検出可能にされ得る。
【００８２】
「連結体」という用語は、第二の化学部分（治療剤または細胞毒性剤など）に化学的に連結された抗体などの結合タンパク質を表す。「作用物質」という用語は、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子または生物由来物質から作製された抽出物を含む。一実施形態において、治療剤または細胞毒性剤には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらの類似体または相同体が含まれるが、これらに限定されるものではない。イムノアッセイとの関連において使用される場合、連結抗体は、検出抗体として使用される検出可能に標識された抗体であってよい。
【００８３】
「結晶」および「結晶化された」という用語は、結晶の形態で存在する結合タンパク質（例えば、抗体）またはその抗原結合部分を表す。結晶は、物質の固体状態の一形態であり、これは、非晶質の固体状態または液体の結晶状態などの他の形態とは異なる。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）または分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な反復する三次元配列から構成される。これらの三次元配列は、本分野においてよく理解されている特異的な数学的関係に従って整列されている。結晶中で反復されている基礎的単位または構築ブロックは、非対称単位と呼ばれる。所定の十分に整えられた結晶的対称性に合致する配置での非対称単位の反復は、結晶の「単位格子」を与える。すべての三次元中での規則的な転換による単位格子の反復は、結晶を与える。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）を参照されたい。
【００８４】
「ベクター」という用語は、核酸分子に連結されている別の核酸を輸送することができる該核酸分子を表す。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、その中にさらなるＤＮＡセグメントを連結し得る環状二本鎖ＤＮＡループを表す。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、ここで、追加のＤＮＡセグメントはウイルスゲノム中に連結され得る。他のベクターにはＲＮＡベクターが含まれる。ある種のベクターは、当該ベクターがその中に導入された宿主細胞中で自律的複製を行うことができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中へ導入されて、宿主細胞のゲノム中に組み込まれることが可能であり、これにより、宿主ゲノムとともに複製される。ある種のベクターは、それらが作用可能に連結されている遺伝子の発現を誘導することが可能である。このようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に、「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。プラスミドは、最も一般的に使用されるベクターの形態であるので、本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、発現ベクターの他の形態もまた含まれ、例えば、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）なども含まれる。一群のｐＨｙｂＥベクター（米国特許出願第６１／０２１，２８２号）は、親抗体およびＤＶＤ結合タンパク質のクローニングに使用された。ｐＪＰ１８３由来のＶ１；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇ１，ｚ，非Ｖ２は、抗体および野生型定常領域を有するＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１９１由来のＶ２；ｐＨｙｂＥ−ｈＣＫ  Ｖ３は、抗体およびカッパ定常領域を有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１９２由来のＶ３；ｐＨｙｂＥ−ｈＣＩ  Ｖ２は、抗体およびランダ定常領域を有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。Ｖ４は、ラムダシグナルペプチドおよびカッパ定常領域を用いて構築され、ラムダ−カッパハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。Ｖ５は、カッパシグナルペプチドおよびラムダ定常領域を用いて構築され、カッパ−ラムダハイブリッドＶドメインを有するＤＶＤ軽鎖をクローニングするために使用された。ｐＪＰ１８３由来のＶ７；ｐＨｙｂＥ−ｈＣｇ１，ｚ，非Ｖ２は、抗体および（２３４、２３５ＡＡ）突然変異定常領域を有するＤＶＤ重鎖をクローニングするために使用された。
【００８５】
「組換え宿主細胞」または「宿主細胞」という用語は、外来ＤＮＡがその中に導入されている細胞を表す。このような用語は、当該細胞を表すのみならず、このような細胞の子孫も表す。突然変異または環境的な影響のために、後続の世代中にある種の修飾が生じ得るので、このような子孫は、実際には親細胞と同一でないことがあり得るが、本明細書において使用される「宿主細胞」という用語の範囲になお含まれる。一実施形態において、宿主細胞には、原核および真核細胞が含まれる。一実施形態において、真核細胞には、原生生物、真菌、植物および動物細胞が含まれる。別の実施形態において、宿主細胞には、原核細胞株Ｅ．コリ；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３、ＣＯＳ、ＮＳ０、ＳＰ２およびＰＥＲ．Ｃ６；昆虫細胞株Ｓｆ９および真菌細胞サッカロミセス・セレビシアエが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００８６】
「トランスフェクション」という用語は、宿主細胞への外因性核酸（例えば、ＤＮＡ）を導入するために一般的に用いられる様々な技術を包含し、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどが挙げられる。
【００８７】
「サイトカイン」という用語は、細胞間媒介物質として別の細胞集団に作用する１つの細胞集団から放出されるタンパク質を指す。「サイトカイン」という用語には、天然源由来または組換え細胞培養物由来のタンパク質および天然配列のサイトカインの生物学的に活性な同等物が含まれる。
【００８８】
「生物学的試料」という用語は、生物または生物であったものから得られた物質の量を意味する。このような物質には、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が含まれるが、これらに限定されない。
【００８９】
「成分」という用語は、組成物の要素を指す。診断キットに関連して、例えば、成分は、試験試料のアッセイ用のキットに含めることができる、捕捉抗体、検出またはコンジュゲート抗体、対照、較正因子、一連の較正因子、感受性パネル、容器、緩衝液、希釈剤、塩、酵素、酵素の補因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液として）、停止液などであってもよい。したがって、「成分」は、例えば、抗分析物（例えば、抗ポリペプチド）抗体に結合させることによって、固体支持体上に固定されている、上記のポリペプチドまたは他の分析物を含めることができる。いくつかの成分は、溶液中にあってもよくまたはアッセイにおける使用として再構成するために凍結乾燥されてもよい。
【００９０】
「対照」は、分析物を含まない（「陰性対照」）または分析物を含む（「陽性対照」）ことが知られている組成物を表す。陽性対照は、既知の濃度の分析物を含み得る。「対照」、「陽性対照」および「較正物質」は、既知の濃度の分析物を含む組成物を表すために本明細書において互換的に使用され得る。「陽性対照」は、アッセイ性能特性を確立するために使用することが可能であり、試薬（例えば、分析物）の完全性の有用な指標である。
【００９１】
「所定のカットオフ」および「所定のレベル」は、所定のカットオフ／レベルに対してアッセイの結果を比較することにより診断／予後診断／治療的効力の結果を評価するために使用されるアッセイのカットオフ値を一般に表し、所定のカットオフ／レベルは様々な臨床的パラメーター（例えば、疾患の重症度、進行／非進行／改善など）にすでにつながっておりまたは関連している。本開示は例示的な所定のレベルを提供し得るが、カットオフ値はイムノアッセイの性質（例えば、使用される抗体など）に応じて様々となり得ることが周知である。さらに、本明細書における開示を他のイムノアッセイに適合させて、本開示を基礎とする他のイムノアッセイについてのイムノアッセイ特異的なカットオフ値を得ることは、当業者の通常の技術の範囲内に十分にある。所定のカットオフ／レベルの正確な値はアッセイ間で様々となり得るが、（もしあれば）本明細書に記載されている相関は一般に適用可能であるはずである。
【００９２】
本明細書に記載されている診断アッセイにおいて使用される「前処理試薬」、例えば、溶解、沈殿および／または可溶化試薬は、あらゆる細胞を溶解するものおよび／または試験試料中に存在するあらゆる分析物を可溶化するものである。前処理は、本明細書でさらに記載されるように、すべての試料に必要というわけでない。とりわけ、分析物（例えば、目的のポリペプチド）の可溶化は、試料中に存在するあらゆる内在性結合タンパク質からの分析物の放出を伴い得る。前処理試薬は均一（分離工程を必要としない）または不均一（分離工程を必要とする）であり得る。不均一前処理試薬を使用すると、アッセイの次の工程に進行する前に任意の沈殿した分析物結合タンパク質は試験試料から除去される。
【００９３】
本明細書に記載されているイムノアッセイおよびキットとの関連で「品質管理試薬」には、較正物質、対照および感受性パネルが含まれるが、これらに限定されない。「較正物質」または「標準物質」は、抗体または分析物などの分析物の濃度を内挿するための較正（標準）曲線を確立するために典型的に（例えば複数など、１つ以上）使用される。あるいは、所定の陽性／陰性カットオフ近くにある単一の較正物質を使用することが可能である。「感受性パネル」を含むように、複数の較正物質（すなわち、２つ以上の較正物質または様々な量の（複数の）較正物質）を組み合わせて使用することが可能である。
【００９４】
「特異的結合パートナー」という用語は、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学的または物理的な手段を介して互いに特異的に結合する２つの異なる分子を含む。したがって、抗原および抗体の特異的結合に加えて、他の特異的結合対は、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物およびレクチン、相補的なヌクレオチド配列、エフェクターおよび受容体分子、補因子および酵素、酵素阻害剤および酵素などを含み得る。さらに、特異的結合対は、元の特異的結合メンバーの類似体、例えば、分析物類似体であるメンバーを含み得る。免疫反応性特異的結合メンバーには、単離または組換えで産生された抗原、抗原断片およびモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む抗体ならびにその複合体、断片およびバリアント（バリアントの断片を含む）が含まれる。
【００９５】
「Ｆｃ領域」という用語は、無傷の抗体のパパイン消化によって生成され得る、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義する。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン（ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）を含み、場合によって、ＣＨ４ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変化させるために、Ｆｃ部分中のアミノ酸残基を置換することが、本分野において周知である（例えば、米国特許第５，６４８，２６０号および第５，６２４，８２１号）。Ｆｃ領域は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および抗体と抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。いくつかの場合において、これらのエフェクター機能は、治療用の免疫グロブリンに対して望ましいが、他の場合において、治療目的に応じて、不要であるまたは有害でさえあり得る。
【００９６】
結合タンパク質の「抗原結合部分」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する結合タンパク質（例えば、抗体）の１つ以上の断片を意味する。結合タンパク質の抗原結合部分は、完全長の抗体の断片、ならびに、２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する、二特異的、二重特異的または多重特異的フォーマットで行うことができる。結合タンパク質の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域において、ジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別個の遺伝子によってコードされているが、これらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子を形成している単一のタンパク質鎖として、これらの作製を可能とする合成リンカーによって、組換え法を用いて連結することが可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている。）。このような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものとする。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態も包含される。さらに、一本鎖抗体も、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒に、抗原結合領域の対を形成する直列Ｆｖセグメントの対を含む「直鎖抗体」（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。
【００９７】
「多価結合タンパク質」という用語は、２つまたはそれ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を意味する。一実施形態において、多価結合タンパク質は、３つまたはそれ以上の抗原結合部位を有するように工学的に作製され、天然に存在しない抗体である。「多重特異的結合タンパク質」という用語は、２つ以上の関連標的または非関連標的に結合することができる結合タンパク質を指す。一実施形態において、本明細書に提供される二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含み、四価または多価の結合タンパク質である。
【００９８】
「リンカー」という用語は、アミノ酸残基または２つのポリペプチド（例えば、２つのＶＨまたは２つのＶＬドメイン）に連結させて用いられるペプチド結合によって接続された２つ以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドを意味する。このようなリンカーポリペプチドは、本分野において周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。
【００９９】
「Ｋａｂａｔ番号」、「Ｋａｂａｔ定義」および「Ｋａｂａｔ標識」という用語は、本明細書において、互換的に使用される。本分野において認められているこれらの用語は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基に比べて、より可変的な（すなわち、超可変的な）アミノ酸残基に付番するシステムを表す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置３１から３５、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から６５およびＣＤＲ３に対するアミノ酸位置９５から１０２にわたる。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置２４から３４、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から５６およびＣＤＲ３に対するアミノ酸位置８９から９７にわたる。
【０１００】
「ＣＤＲ」という用語は、免疫グロブリン可変領域配列内の相補性決定領域を意味する。重鎖および軽鎖可変領域のそれぞれについて、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と命名されている、重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれにおいて３つのＣＤＲが存在する。「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる単一の可変領域中に生じる３つのＣＤＲ群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なる系に従って、異なって定義されてきた。Ｋａｂａｔによって記載された系（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））は、抗体のいずれの可変領域に対しても適用可能な明瞭な残基付番系を提供するのみならず、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界を提供する。これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲと称され得る。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３）は、ＫａｂａｔＣＤＲ内のある種の亜部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造を採ることを見出した。これらの亜部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３（「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ、軽鎖および重鎖領域を表記する。）と表記される。これらの領域は、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲと称される場合があり、これは、ＫａｂａｔＣＤＲと重複する境界を有する。ＫａｂａｔＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界が、Ｐａｄｌａｎ（１９９５）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２−４５によって記載されている。さらに別のＣＤＲ境界定義が、上記系の１つに厳格に従わない場合があり得るが、それにも関わらず、ＫａｂａｔＣＤＲと重複するが、これらは、特定の残基または残基の群またはさらにはＣＤＲ全体が、抗原結合に著しい影響を与えないという予測または実験的な発見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書に使用されている方法は、これらの系のいずれかに従って定義されたＣＤＲを使用し得るが、ある種の実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを使用する。
【０１０１】
「エピトープ」という用語は、結合タンパク質、例えば、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる、ポリペプチドおよび／または他の決定因子によって結合される抗原の領域を意味する。ある種の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホリルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、ある種の実施形態において、特異的な三次元構造的特徴および／または特異的な電荷特徴を有し得る。一実施形態において、エピトープは、特異的結合パートナー上の相補的部位に結合することが知られている抗原（またはその断片）の領域のアミノ酸残基を含む。抗原断片は１を超えるエピトープを含むことができる。ある種の実施形態において、結合タンパク質が、タンパク質および／または高分子の複雑な混合物中で、その標的抗原を認識する場合に、抗体は抗原を特異的に結合する。抗体が交差競合する（一方が他方の結合または調節作用を妨げる）場合、結合タンパク質は「同じエピトープに結合する」。さらに、エピトープの構造上の定義（重複、類似、同一）は有益であり、機能上の定義は、構造上（結合）および機能上（調節、競合）のパラメーターを包含する。タンパク質の異なる領域は、異なる機能を果たすことができる。例えば、サイトカインの特定の領域は、受容体活性をもたらすそのサイトカイン受容体と相互作用し、一方、このタンパク質の他の領域は、サイトカインを安定化するために必要とされ得る。サイトカインシグナル伝達の負の影響を排除するために、サイトカインは、受容体相互作用領域（単数または複数）に特異的に結合する結合タンパク質を用いて標的化され得て、それによってその受容体の結合を阻止する。あるいは、結合タンパク質は、サイトカイン安定化に関与する領域を標的化され得て、それによって、分解のためのタンパク質を指定する。エピトープ認識を可視化し、モデル化する方法は、当業者に知られている（ＵＳ２００９０３１１２５３）。
【０１０２】
「薬物動態」とは、薬物が、生物によって、吸収され、分散され、代謝されおよび排泄されるプロセスを指す。所望の薬物動態プロファイルを有する多価結合タンパク質分子を生成するために、同様の所望の薬物動態プロファイルを有する親モノクローナル抗体が選択される。選択された親モノクローナル抗体のＰＫプロファイルは、当業者に公知の方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて、げっ歯類において容易に決定することができる。
【０１０３】
「生物学的利用能」とは、投与後にその標的に到達する活性薬剤の量を指す。生物学的利用能は、安定性、溶解性、免疫原性および薬物動態を含む前述の特性のいくつかの関数であり、当業者に知られている方法（ＵＳ２００９０３１１２５３）を用いて評価することができる。
【０１０４】
「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの会社）、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムな生物特異的相互作用の分析を可能とする光学現象を意味する。さらなる記載については、Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６を参照されたい。「Ｋｏｎ」という用語は、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ／抗原複合体を形成する、結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質）と抗原の結合についての結合速度（ｏｎ  ｒａｔｅ）定数を意味する。「Ｋｏｎ」という用語はまた、本明細書において互換的に用いられ、「会合速度定数」または「ｋａ」を意味する。その標的抗原への結合タンパク質の結合速度または結合タンパク質、例えば抗体、と抗原との間の複合体形成の速度を示すこの値はまた、以下の式によって示される。
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ
【０１０５】
「Ｋｏｆｆ」という用語は、結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質）の、例えば、本分野で知られているＤＶＤ−Ｉｇタンパク質／抗原複合体からの解離についての解離速度（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）定数または「解離速度（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ）定数」を意味する。この値は、以下の式によって示されるように、結合タンパク質、例えば抗体、のその標的抗原からの解離速度または遊離抗体と抗原への経時的なＡｂ−Ａｇ複合体の分離を示す。
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
【０１０６】
「Ｋｄ」および「平衡解離定数」という用語は、平衡状態での滴定測定においてまたは解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を結合速度定数（Ｋｏｎ）で割ることによって得られた値を意味する。会合速度定数、解離速度定数および平衡解離定数は、抗原への結合タンパク質（例えば、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質）の結合親和性を表すために使用される。結合および解離速度定数を決定する方法は本分野において周知である。蛍光を基礎とする技術の使用は、高い感度を提供し、平衡状態で生理的緩衝液中の試料を調べることができる。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイなどの他の実験的アプローチおよび機器を使用することが可能である（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎから入手可能な機器）。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（動態排除アッセイ）アッセイも使用することが可能である。
【０１０７】
「バリアント」という用語は、アミノ酸の付加（例えば、挿入）、欠失または保存的置換によってアミノ酸配列中の所与のポリペプチドとは異なるが、所与のポリペプチドの生物活性を保持するポリペプチドを意味する（例えば、バリアントＩＬ−１７抗体は、ＩＬ−１７との結合について抗ＩＬ−１７抗体と競合することができる。）。アミノ酸の保存的置換、すなわち特性が類似する（例えば、親水性ならびに荷電領域の程度および分布）異なるアミノ酸とのアミノ酸の置き換えは、微小変化が典型的に関与すると本分野で認識されている。これらの微小変化は、本分野で理解されているように、アミノ酸のヒドロパシーインデックスを考慮することにより部分的に特定することが可能である（例えば、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２参照）。アミノ酸のヒドロパシーインデックスは、この疎水性および荷電の考慮を基礎とする。タンパク質中のヒドロパシーインデックスの類似したアミノ酸を置換することが可能であり、このタンパク質はタンパク質の機能を依然として保持することが本分野において知られている。一態様において、±２のヒドロパシーインデックスを有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質となる置換を明らかにするために使用することも可能である。ペプチドとの関連でアミノ酸の親水性を考慮すると、抗原性および免疫原性とよく相関することが報告されている有用な尺度である、そのペプチドの最大の局所平均親水性の計算が可能となる（例えば、米国特許第４，５５４，１０１号参照）。本分野で理解されているように、類似した親水性値を有するアミノ酸の置換は、生物活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。一態様において、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸を用いて置換が行われる。アミノ酸のヒドロパシーインデックスと疎水性値はどちらもそのアミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。この観察に一致して、生物学的機能と適合するアミノ酸置換は、アミノ酸、特に、疎水性、親水性、荷電、サイズおよび他の特性によって明らかにされるこれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存することが理解されている。「バリアント」という用語は、タンパク質分解、リン酸化または他の翻訳後修飾などによって異なる形でプロセシングされているが、その生物活性または抗原反応性、例えばＩＬ−１７に結合する能力を保持するポリペプチドまたはその断片を含む。「バリアント」という用語は、他に定義がなければ、バリアントの断片を包含する。バリアントは、野生型配列に対して９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％または７５％同一であってもよい。
【０１０８】
Ｉ．結合タンパク質の生成
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７に結合することができる結合タンパク質およびそれを作製する方法が提供される。結合タンパク質は、様々な技術を用いて生成することができる。発現ベクター、宿主細胞および結合タンパク質を生成する方法が提供され、当該技術分野において周知である。
【０１０９】
Ａ．親モノクローナル抗体の作製
ＤＶＤ結合タンパク質の可変ドメインは、目的の抗原に結合することができるポリクローナルＡｂおよびｍＡｂなど、親抗体から取得することが可能である。これらの抗体は、天然に存在し得、または組換え技術によって作製され得る。当業者は、例えば、限定されないが、ハイブリドーマ技術の使用、選択されたリンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）、ファージ、酵母もしくはＲＮＡ−タンパク質融合ディスプレイまたは他のライブラリーの使用、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも一部を含む非ヒト動物の免疫化、ならびにキメラ抗体、ＣＤＲ移植された抗体およびヒト化された抗体の調製を含む、抗体を生成するための多数の方法に精通している。例えば、米国特許公開第２００９０３１１２５３  Ａ１参照。可変ドメインは、親和性成熟技術を用いて調製することができる。
【０１１０】
Ｂ．親モノクローナル抗体を選択するための基準
ＤＶＤ結合タンパク質分子において望まれる少なくとも１つ以上の特性を有する親抗体を選択することを含む実施形態が提供される。一実施形態において、所望の特性は、例えば、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用能、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合などの１つ以上の抗体パラメーターである。例えば、米国特許出願公報第２００９０３１１２５３号を参照されたい。
【０１１１】
Ｃ．結合タンパク質分子の構築
結合タンパク質は、２つの異なる親モノクローナル抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技術によって、直接または短いリンカーを介して直列に連結され、その後に軽鎖定常ドメインＣＬが続くように設計され得る。同様に、重鎖は、直接的にまたはリンカーを介して、タンデムに連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、その後に定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域を含む（図１）。
【０１１２】
可変ドメインは、本明細書に記載されている方法のいずれか１つによって作製された親抗体から得られた組換えＤＮＡ技術を用いて取得することが可能である。一実施形態において、可変ドメインは、マウス重鎖または軽鎖可変ドメインである。別の実施形態において、可変ドメインは、ＣＤＲ移植されたまたはヒト化された可変重鎖または軽鎖ドメインである。一実施形態において、可変ドメインは、ヒト重鎖または軽鎖可変ドメインである。
【０１１３】
リンカー配列は、単一のアミノ酸またはポリペプチド配列であり得る。一実施形態において、リンカー配列の選択は、いくつかのＦａｂ分子の結晶構造分析に基づいている。Ｆａｂまたは抗体分子構造中の可変ドメインとＣＨ１／ＣＬ定常ドメインの間には、天然の柔軟な連結が存在する。この天然の連結は、ＶドメインのＣ末端由来の４−６残基およびＣＬ／ＣＨ１ドメインのＮ末端由来の４−６残基によって構成される約１０から１２個のアミノ酸残基を含む。ＤＶＤ結合タンパク質は、それぞれ、軽鎖および重鎖中のリンカーとしてＣＬまたはＣＨ１のＮ末端の５から６アミノ酸残基、または１１から１２アミノ酸残基を用いて作製された。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基、特に最初の５から６個のアミノ酸残基は、強い二次構造なしにループ立体構造を採ることが可能であり、したがって、２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーとして作用することが可能である。ＣＬまたはＣＨ１ドメインのＮ末端残基は、それらがＩｇ配列の一部であるため、可変ドメインの天然の伸長である。したがって、それらの使用は、リンカーおよび接合分析物から潜在的に生じる任意の免疫原性を大幅に最小化する。
【０１１４】
さらなる実施形態において、重鎖、軽鎖、二本鎖または四本鎖の実施形態のいずれかは、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ（配列番号１）；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号２）；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号３）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ（配列番号４）；ＳＡＫＴＴＰ（配列番号５）；ＲＡＤＡＡＰ（配列番号６）；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ（配列番号７）；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ（配列番号８）；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４（配列番号９）；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ（配列番号１０）；ＡＤＡＡＰ（配列番号１１）；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ（配列番号１２）；ＴＶＡＡＰ（配列番号１３）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号１４）；ＱＰＫＡＡＰ（配列番号１５）；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ（配列番号１６）；ＡＫＴＴＰＰ（配列番号１７）；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ（配列番号１８）；ＡＫＴＴＡＰ（配列番号１９）；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ（配列番号２０）；ＡＳＴＫＧＰ（配列番号２１）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３）；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ（配列番号２４）；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ（配列番号２５）；またはＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳ（配列番号２６）；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ（配列番号２７）；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号２８）；またはＧ／Ｓに基づく配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート；配列番号２９）を含む、少なくとも１つのリンカーを含む。一実施形態において、Ｘ２はＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｘ２はバリアントＦｃ領域である。
【０１１５】
他のリンカー配列は、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのあらゆる長さのあらゆる配列を含み得るが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのすべての残基は含まない。例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５から１２個のアミノ酸残基；軽鎖リンカーは、ＣκまたはＣλに由来することが可能であり；ならびに重鎖リンカーは、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、ＣεおよびＣμを含む、いずれかのアイソタイプのＣＨ１に由来することが可能である。リンカー配列は、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、Ｇ／Ｓを基礎とする配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート；配列番号２９）；ヒンジ領域に由来する配列および他のタンパク質から得られる他の天然配列などの他のタンパク質からも由来し得る。
【０１１６】
一実施形態において、定常ドメインは、組換えＤＮＡ技術を用いて、２つの連結された可変ドメインに連結されている。一実施形態において、連結された重鎖可変ドメインを含む配列は、重鎖定常ドメインに連結され、連結された軽鎖可変ドメインを含む配列は、軽鎖定常ドメインに連結される。一実施形態において、定常ドメインは、それぞれ、ヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインである。一実施形態において、ＤＶＤ重鎖は、Ｆｃ領域にさらに連結されている。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。別の実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域である。別の実施形態において、Ｆｃ領域には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤから得られるＦｃ領域が含まれる。
【０１１７】
別の実施形態において、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドは組み合わされて、ＤＶＤ結合タンパク質を形成する。表１Ａ−表１Ｃは、疾患の治療に有用な例示的な抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列を列挙している。一実施形態において、いずれかの配向における、表１−表１Ｃに列挙されたＶＨおよび／またはＶＬ領域の少なくとも２つを含むＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が提供される。いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は、独立して選択される。よって、いくつかの実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は同じ配列番号を含み、他の実施形態において、ＶＤ１およびＶＤ２は異なる配列番号を含む。以下に与えられるＶＨおよびＶＬドメイン配列は、当該技術分野において知られているまたは当該技術分野において知られている方法を用いて容易に識別され得る相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク配列を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のこれらのＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列は、同じ抗原に結合する、当該技術分野において知られている結合タンパク質由来の他のＣＤＲおよび／またはフレームワーク配列によって、機能を損なうことなく置換される。
【０１１８】
【表１】
2015508994.tif 000032
【０１１９】
【表２】
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2015508994.tif 000034
2015508994.tif 000035
【０１２０】
【表３】
2015508994.tif 000036
2015508994.tif 000037
【０１２１】
特異的な標的に結合することができる特異的ＤＶＤ結合タンパク質およびこれを作製する方法の詳細な説明は、以下の実施例の部において提供される。
【０１２２】
Ｄ．結合タンパク質の作製
本明細書において提供される結合タンパク質は、本分野で公知の多数のいずれかによって作製され得る。例えば、宿主細胞からの発現において、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって、宿主細胞中に形質移入される。原核または真核宿主細胞のいずれの中でも、本明細書において提供されるＤＶＤ結合タンパク質を発現することは可能であるが、真核細胞（特に、哺乳動物細胞）は、原核細胞に比べて、適切に折り畳まれ、免疫学的に活性なＤＶＤ結合タンパク質を集合および分泌する傾向がより大きいので、ＤＶＤ結合タンパク質は真核細胞、例えば哺乳動物宿主細胞中で発現される。
【０１２３】
ＤＶＤタンパク質の組換え発現用の典型的なシステムにおいて、リン酸カルシウムによって媒介された形質移入によって、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞中に導入される。組換え発現ベクター内で、重鎖および軽鎖遺伝子は、遺伝子の転写の高いレベルを誘導するために、各々、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＰＬプロモーター制御要素へ作用可能に連結されている。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択／増幅を用いて、ベクターで形質移入されたＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も担持する。選択された形質転換体宿主細胞は、ＤＶＤ重鎖およびＤＶＤ軽鎖の発現を可能とするために培養され、完全な状態のＤＶＤ結合タンパク質が培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地からＤＶＤタンパク質を回収するために、標準的な分子生物学的技術が使用される。ＤＶＤタンパク質が合成されるまで、適切な培地中で、本明細書において提供される宿主細胞を培養することによって、本明細書において提供されるＤＶＤタンパク質を合成する方法も提供される。本方法は、培地からＤＶＤタンパク質を単離することをさらに含むことが可能である。
【０１２４】
ＤＶＤ結合タンパク質の重要な特徴は、ＤＶＤ結合タンパク質が、慣用の抗体として、類似の様式で産生および精製され得ることである。ＤＶＤ結合タンパク質の産生は、定常領域の配列修飾、または化学的修飾を必要とせずに、所望される二重特異的活性を有する均一な単一の主産物をもたらす。「二特異的」、「多重特異的」および「多重特異的多価」完全長結合タンパク質を作製するための他の以前に記載された方法は、集合した不活性な単一特異的、多重特異的、多価の完全長結合タンパク質と、異なる結合部位の組合せを有する多価完全長結合タンパク質との混合物の細胞内産生または分泌された産生をもたらし得る。
【０１２５】
驚くべきことに、本明細書において提供される「二重特異的多価完全長結合タンパク質」の設計は、主として、所望される「二重特異的多価完全長結合タンパク質」へ集合する二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖をもたらす。
【０１２６】
集合され、発現された二重可変ドメイン免疫グロブリン分子の少なくとも５０％、少なくとも７５％および少なくとも９０％が、所望の二重特異的四価タンパク質であり、したがって、増大した商用的有用性を有する。したがって、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現し、「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の単一の主要産物をもたらす方法が提供される。
【０１２７】
「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の「主要産物」をもたらす単一細胞において二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現させる方法であって、「主要産物」は、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての集合されたタンパク質の５０％超であり、例えば、７５％超および９０％超である方法が提供される。
【０１２８】
ＩＩ．結合タンパク質の使用
本明細書において提供される結合タンパク質は２つまたはそれ以上の抗原に結合することができるので、本発明の結合タンパク質は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学など慣用のイムノアッセイを用いて、（例えば、血清または血漿などの生物学的試料中で）抗原を検出するために使用することが可能である。結合タンパク質は、結合したまたは結合していない抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例は、ルミノールであり、適切な放射性材料の例には、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍが含まれる。
【０１２９】
一実施形態において、本明細書に提供される結合タンパク質はインビトロとインビボの両方においてそれらの抗原標的の活性を中和することができる。したがって、このような結合タンパク質は、例えば、抗原を含有する細胞培地中で、ヒト対象中で、本明細書において提供される結合タンパク質が交差反応する抗原を有するその他の哺乳動物対象中で、抗原活性を阻害するために使用することが可能である。別の実施形態において、抗原活性が有害である疾病または疾患に罹患している対象中の抗原活性を低下させる方法が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質は、治療目的のために、ヒト対象に投与することができる。
【０１３０】
「抗原活性が有害である障害」という用語は、障害に罹患している対象における抗原の存在が、障害の病態生理に関与しているまたは障害の悪化に寄与する因子のいずれかであるまたはそれが疑われることが示されている疾患および他の障害を含むことを意図する。したがって、抗原活性が有害である疾患は、抗原活性の低下が疾患の症候および／または進行を緩和することが予測される疾患である。このような疾患は、例えば、本疾患に罹患している患者の生物学的液体中の抗原濃度の増加（例えば、対象の血清、血漿、滑液中などの抗原の濃度の増加）によって明らかとされ得る。本明細書において提供される結合タンパク質で治療することが可能な疾患の非限定的な例には、以下に、および結合タンパク質の医薬組成物に関するセクションに論述されている疾患が含まれる。
【０１３１】
ＤＶＤ結合タンパク質は、効力／安全を増強し、および／または患者の対象範囲を増加させるために、２つの異なる標的を同時に遮断するための治療剤として有用である。
【０１３２】
さらに、本明細書において提供されるＤＶＤ結合タンパク質は、細胞内送達（内部移行受容体および細胞内分子を標的化すること）、脳内への送達（血液脳関門を横切るために、トランスフェリン受容体および中枢神経系疾患媒介物質を標的化すること）など、組織特異的な送達（増強された局所ＰＫにより、より高い効力および／またはより低い毒性を得るために、組織マーカーおよび疾病媒介物質を標的とすること）のために使用することが可能である。また、ＤＶＤ結合タンパク質は、その抗原の非中和エピトープへの結合を介して特異的な位置へ抗原を送達するための担体タンパク質としての役割も果たすことができ、さらに、抗原の半減期を増加させることもできる。さらに、ＤＶＤ結合タンパク質は、患者に植え込まれた医療デバイスに物理的に連結されまたはこれらの医療デバイスを標的とするように設計され得る（Ｂｕｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．、（２００６）Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５８（３）：４３７−４４６；Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、（２００６）Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００（２２−２３）：６３１８−６３２４；Ｄｒｕｇ／ｄｅｖｉｃｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ、Ｗｕ（２００６）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２７（１１）：２４５０−２４６７；Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  ｄｅｖｉｃｅｓ．、Ｍａｒｑｕｅｓ（２００５）Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒ．Ｒｅｇｅｎ．Ｍｅｄ．３７７−３９７参照）。要約すれば、医療用インプラントの部位へ、細胞の適切な種類を誘導することは、正常な組織機能の治癒および回復を促進し得る。あるいは、用具に連結されたＤＶＤ、または用具を標的とするＤＶＤ−Ｉｇによって、装置の植え込み時に放出される媒介物質（サイトカインが含まれるが、これに限定されない。）の阻害も提供される。
【０１３３】
Ａ．様々な疾病における結合タンパク質の使用
本明細書において提供される結合タンパク質分子は、様々な疾患を治療するための治療分子としても有用であり、例えば、結合タンパク質によって認識される標的は有害である。このような結合タンパク質は、特定の疾患に関与する１つ以上の標的に結合することができる。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７の阻害はまた、動物モデルにおける抗ウイルスワクチンを増強することが示され、ＨＩＶおよび他の感染症、例えば、ヒトライノウイルス、他のエンテロウイルス、コロナウイルス、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルスまたはアデノウイルスの治療において有益であり得る。
【０１３４】
開示を制限することなく、特定の疾患状態に関する追加情報が提供される。
【０１３５】
１．ヒト自己免疫および炎症性応答
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１７は、一般的な自己免疫および炎症反応に関与しており、例えば、喘息、アレルギー、アレルギー性肺疾患、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、線維症、嚢胞性線維症（ＣＦ）、線維性肺疾患、特発性肺線維症、肝線維症、狼瘡、Ｂ型肝炎関連肝疾患および線維症、敗血症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糸球体腎炎、炎症性皮膚疾患、乾癬、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症（ＯＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植拒絶反応、虚血性心疾患（ＩＨＤ）、セリアック病、接触過敏症、アルコール性肝疾患、ベーチェット病、アテローム硬化性血管疾患、眼球表面の炎症性疾患またはライム病などが挙げられる。
【０１３６】
本明細書において提供される結合タンパク質は、神経疾患を治療するために使用することができる。一実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、神経変性疾患ならびに神経再生および脊髄損傷を伴う状態を治療するために使用される。
【０１３７】
２．喘息
アレルギー性喘息は、好酸球増加症、杯細胞異形成、上皮細胞の変化、気道過敏症（ＡＨＲ）ならびにＴｈ２およびＴｈ１サイトカイン発現ならびに上昇した血清ＩｇＥレベルの存在によって特徴付けられる。コルチコステロイドは、今日、喘息に対する最も重要な抗炎症性治療であるが、それらの作用機序は非特異的であり、特に、若い患者集団では、安全性についての懸念が存在する。したがって、より特異的で、標的化された治療の開発が必要とされる。マウスにおけるＩＬ−１３は、好酸球性炎症とは無関係に、喘息、例えば、ＡＨＲ、粘液過剰分泌および気道線維症の多数の特徴を模倣するという証拠が増している（Ｆｉｎｏｔｔｏら（２００５）Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７（８）：９９３−１００７；Ｐａｄｉｌｌａら（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４（１２）：８０９７−８１０５）。
【０１３８】
ＩＬ−１３は、喘息を伴う病的応答を引き起こす上で中心的な役割を有するとされている。肺でのＩＬ−１３の効果を低減させるための抗ＩＬ−１３ｍＡｂ療法の開発は、喘息の新規治療としてかなりの有望性を与える刺激的な新しいアプローチである。しかしながら、差別的な免疫学的経路の他の媒介物質も、喘息の病因に関与しており、ＩＬ−１３に加えて、これらの媒介物質を遮断することは、付加的な治療上の利益を提供し得る。このような標的対には、限定されないが、ＩＬ−１３および炎症促進性サイトカイン、例えばＩＬ−１７が挙げられる。ＩＬ−１７が喘息の病因に関与しているという証拠が増している。ＩＬ−１７は、気道に好中球を誘導し、また、喘息におけるＴ−ヘルパー２（Ｔｈ２）細胞媒介性の好酸球性気道炎症を高める。最近の研究では、ＩＬ−１７の阻害剤および他の多様な調節因子が、抗原誘発性気道炎症、気管支過敏性および喘息の動物モデルにおけるＴｈ２サイトカインレベルを減少させることが実証されている（概説については、ＰａｒｋおよびＬｅｅ（２０１０）Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｒｅｓ．、１１：７８を参照されたい。）。
【０１３９】
炎症およびＡＨＲをともに評価することができる、ＯＶＡによって誘導された喘息マウスモデルなどの動物モデルが本分野において公知であり、様々な結合タンパク質分子が喘息を治療する能力を測定するために使用し得る。喘息を研究するための動物モデルは、Ｃｏｆｆｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１（１２）：１８７５−１８７９；Ｌｌｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７７，２６３−２９５；Ｂｏｙｃｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１（１２）：１８６９−１８７３；およびＳｎｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｂｒｉｔ．Ｓｏｃ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５（２）：１４６−５２に開示されている。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｏｘｉｃｏｌ．９２（１−３）：２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．７７：９９−１０２；Ｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８（２）：２５０−２５７参照）。
【０１４０】
３．関節リウマチ
全身性疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の滑液中の慢性的炎症反応によって特徴付けられ、軟骨の変性と隣接する関節骨のただれを伴う。多くの炎症促進性サイトカイン、ケモカインおよび成長因子が、罹患した関節中に発現されている。最近の研究は、ＲＡにおけるＴ細胞の関与が、ＩＬ−１７によって、有意な程度に媒介されることを示す。動物研究は、顕著に増加したＩＬ−１７発現が、ヒトＲＡに似た関節病変を発症したマウスにおいて検出されたことを示している。ＩＬ−１７遮断の有益な効果はまた、疾患の種々の動物モデルにおいて観察された（概説については、Ｗｉｔｏｗｓｋｉら（２００４）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６１：５６７−５７９を参照されたい。）。結合タンパク質分子が関節リウマチの治療に対して有用であるかどうかは、コラーゲンによって誘導された関節炎マウスモデルなど、前臨床動物ＲＡモデルを用いて評価することが可能である。他の有用なモデルも本分野において周知である（Ｂｒａｎｄ（２００５）Ｃｏｍｐ．Ｍｅｄ．５５（２）：１１４−２２参照）。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＴＮＦ、ヒトおよびマウスＩＬ−１５などに対する反応性）を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスＣＩＡモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である；簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。
【０１４１】
４．全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
ＳＬＥの免疫病原性の特徴は、ポリクローナルＢ細胞活性化であり、これは、高グロブリン血症、自己抗体産生および免疫複合体形成をもたらす。ＩＬ−１３およびＩＬ−１７の有意なレベル増加は、全身性エリテマトーデスの患者において検出されている（Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（２００１）Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ、３４（１）：１９−２５；Ｗｏｎｇら（２００８）Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７（３）：３８５−９３）。ＩＬ−１７は、ＳＬＥの病因において重要なサイトカインである。ＩＬ−１７産生の増大は、ＳＬＥを有する患者においてならびに狼瘡様疾患を有する動物において示されている。動物モデルは、ＩＬ−１７の遮断が狼瘡の出現を減少させることを実証している（概説については、Ｎａｌｂａｎｄｉａｎら（２００９）１５７（２）：２０９−２１５を参照されたい。）。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性（例えば、ヒトおよびマウスＣＤ２０、ヒトおよびマウスインターフェロンαなどに対する反応性）を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスループスモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である。簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。
【０１４２】
５．多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、主に病因が不明である複雑なヒト自己免疫型疾病である。神経系を通じたミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の免疫学的破壊が、多発性硬化症の主要な病因である。主に検討すべきであるのは、自己免疫の発達に寄与する免疫学的機序である。特に、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞などの他のＴ細胞のバランス／調節を補助する、抗原発現、サイトカインおよび白血病相互作用ならびに調節性Ｔ細胞は、治療標的の同定のための重要な領域である。ＭＳにおいて、ＩＬ−１７の発現増加は、脳病変と、血液および脳脊髄液から単離された単核細胞の両方において検出されている。ＩＬ−１７産生細胞は、活性なＭＳ病変において非常に富化しており、このサイトカインの中和は有益である可能性があることを示唆する（概説については、Ｗｉｔｏｗｓｋｉら（２００４）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６１：５６７−５７９を参照されたい。）。
【０１４３】
ＭＳを治療するための結合タンパク質の有用性を評価するためのいくつかの動物モデルが、本分野において公知である（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１１）：５６５−７１；Ｌｕｂｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８（３）：１９７−２０８；Ｇｅｎａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７５（３）：１８７−９７；Ｔｕｏｈｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９（７）：１０３３−４２；Ｏｗｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｎｅｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．１３（１）：５１−７３；およびＨａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５（７）：４７６１−８参照）。ヒトおよび動物種オルソログに対する親抗体の交差反応性を基礎として、「適合代理抗体」由来結合タンパク質分子を用いてマウスＥＡＥモデルにおける妥当性確認研究を行うことが可能である。簡潔に述べると、２つ（またはそれ以上）のマウス標的特異的抗体を基礎とする結合タンパク質は、ヒト結合タンパク質構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る（例えば、類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など）。同じ概念は他の非げっ歯類種の動物モデルに当てはまり、「適合代理抗体」由来結合タンパク質は予期される薬理学および場合によると安全性研究のために選択される。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｏｘｉｃｏｌ．９２（１−３）：２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｄｅｖｅｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ．７７：９９−１０２；Ｊｏｎｅｓ（２０００）ＩＤｒｕｇｓ  ３（４）：４４２−６）参照）。
【０１４４】
６．敗血症
圧倒的な炎症性応答および免疫応答は、敗血症性ショックの本質的な特徴であり、敗血症によって誘導される組織損傷、多臓器不全および死亡の病因において中心的な役割を果たす。サイトカインは、敗血症性ショックの媒介物質であることが示されている。これらのサイトカインは、組織に対して直接的な毒性効果を有しており、ホスホリパーゼＡ２も活性化させる。これらの効果および他の効果は、血小板活性化因子の濃度増加、一酸化窒素合成酵素活性の促進、好中球による組織浸潤の促進および好中球活性の促進をもたらす。敗血症のＩＬ−１７レベルおよび臨床予後は、負に相関することが示されている。ＩＬ−１７Ａの中和は、敗血症患者の生存率を有意に向上させることができる（Ｆｌｉｅｒｌら（２００８）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２２：２１９８−２２０５を参照されたい。）。
【０１４５】
一実施形態は、例えば、ＩＬ−１３およびＩＬ−１７などの、敗血症に関与する１つ以上の標的を結合させることができる結合タンパク質に関連する。敗血症を治療するためのこのような結合タンパク質の有効性は、当該技術分野で公知の前臨床動物モデルにおいて評価することができる（Ｂｕｒａｓら（２００５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．４（１０）：８５４−６５およびＣａｌａｎｄｒａら（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６（２）：１６４−７０を参照されたい。）。
【０１４６】
７．神経疾患
ａ．神経変性疾患
神経変性疾患は、通常、それらが年齢依存性である場合においては慢性でありまたは急性（例えば、脳卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷など）である。それらは、神経機能の進行性の喪失（例えば、神経細胞死、軸索損失、神経炎性ジストロフィー、脱髄）、運動能力の喪失および記憶喪失によって特徴付けられる。これらの慢性神経変性疾患は、複数の細胞種および媒介物質の間で複雑な相互作用を示す。このような疾病に対する治療戦略は限られており、非特異的な抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＣＯＸ阻害剤）または神経細胞の喪失および／またはシナプス機能を抑制するための作用物質で炎症プロセスを遮断することが大部分を占める。これらの治療は、疾病の進行を停止させることができない。１を超える疾患媒介物を標的とする特定の治療は、単一の疾患メカニズムを標的にして観察されるものよりも、慢性神経変性疾患のさらにより良好な治療効果を提供することができる（Ｄｅａｎｅら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．９：９０７−１３；およびＭａｓｌｉａｈら（２００５）Ｎｅｕｒｏｎ．４６：８５７を参照されたい。）。
【０１４７】
本明細書において提供される結合タンパク質分子は、アルツハイマー病などの慢性神経変性疾患に関与する１つ以上の標的に結合することが可能である。結合タンパク質分子の効力は、アミロイド前駆体タンパク質またはＲＡＧＥを過剰発現し、アルツハイマー病様の症候を発症するトランスジェニックマウスなどの前臨床動物モデルで妥当性を確認することが可能である。さらに、結合タンパク質分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的結合タンパク質を選択することができる。結合タンパク質分子は、パーキンソン病などの他の神経変性疾患の治療のためにも使用することが可能である。
【０１４８】
ｂ．神経細胞の再生および脊髄損傷
病的機序の知見の増大にかかわらず、脊髄損傷（ＳＣＩ）は、なお、多大な損害を与える症状であり、高い医学的な要求を特徴とする医学的な適応症である。多くの脊髄損傷は、挫傷または圧迫傷害であり、通常、一次損傷に続いて、最初の損傷を悪化させ、病変部位の著しい拡大（特には、１０倍超）をもたらす二次的な損傷機序（炎症媒介物質、例えば、サイトカインおよびケモカイン）が起こる。ＩＬ−１７は、神経炎症に寄与し、機能回復を妨げる、二次アンフォールディングの媒介物質である。ＩＬ−１７  ＫＯマウスを用いた研究は、ＩＬ−１７が、神経因性損傷後の神経炎症性応答および疼痛過敏症に寄与することを実証している（ＫｉｍおよびＭｏａｌｅｍ−Ｔａｙｌｏｒ（２０１０）Ｊ  Ｐａｉｎ．１２（３）：３７０−８３）。ＩＬ−１７欠損は、マウスにおける脊髄挫傷損傷後の運動機能回復および組織温存を向上させる（Ｈｉｌｌら（２０１１）Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ．４８７（３）：３６３−７）。
【０１４９】
結合タンパク質分子の効力は、脊髄損傷の前臨床動物モデルにおいて、妥当性を確認することが可能である。さらに、これらの結合タンパク質分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的結合タンパク質を選択することができる。一般に、抗体は、脳血液関門（ＢＢＢ）を効率的および適切な様式で横切らない。しかしながら、ある種の神経疾患（例えば、脳卒中、外傷性脳傷害、多発性硬化症など）では、ＢＢＢが損なわれる場合があり、結合タンパク質および抗体の脳内への増加した浸透を許容する。ＢＢＢの漏出が起こらない他の神経症状では、グルコースおよびアミノ酸担体などの担体媒介性輸送体ならびにＢＢＢの血管内皮における受容体媒介性トランスサイトーシス媒介細胞構造／受容体を含む内在性輸送系の標的化を使用することができ、これにより、結合タンパク質のトランスＢＢＢ輸送が可能になる。このような輸送を可能にするＢＢＢでの構造には、限定されないが、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＬＲＰおよびＲＡＧＥが含まれる。さらに、戦略は、低分子量の薬物、ナノ粒子および核酸を含む、ＣＮＳへ潜在的薬物を輸送するためのシャトルとして結合タンパク質を使用することも可能である（Ｃｏｌｏｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１７（３）：２６６−７４；Ｂｏａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１８（２）：４４７−５５）。
【０１５０】
８．腫瘍疾患
モノクローナル抗体療法が、癌に対する重要な治療法として登場している（ｖｏｎ  Ｍｅｈｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５４：３４３−６９）。２つの別個の腫瘍媒介物質を標的とする二重特異的抗体の使用は、単一特異的療法に比べて、さらなる有利さを与えるものと思われる。ＩＬ−１７は、おそらく血管新生を刺激することによって、腫瘍増殖を支持することが示唆されている。ＩＬ−１３は、抗腫瘍免疫および腫瘍増殖の調節に重要な役割を果たす。研究は、ＩＬ−１３が、ＮＫＴ細胞が腫瘍免疫監視を抑制する新たな免疫調節経路の中心であることを示す（概説については、Ｋｏｌｌｓら（２００３）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８：９−１１およびＴｅｒａｂｅら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５３（２）：７９−８５を参照されたい。）。
【０１５１】
一実施形態において、本明細書において提供される組成物および方法を用いて治療または診断され得る疾患には、限定されないが、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路（腎臓、膀胱および尿路上皮を含む。）、女性生殖路（子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む。）、男性生殖路（前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む。）、内分泌腺（甲状腺、副腎および下垂体を含む。）および皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫（骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む。）、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍（星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む。）、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫（ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫の両方）を含む原発性および転移性の癌が挙げられる。
【０１５２】
一実施形態において、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療法および／もしくは他の化学療法剤と組み合わせて使用される場合、癌を治療するためにまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防において使用される。
【０１５３】
９．遺伝子治療
特定の実施形態において、本明細書において提供される結合タンパク質をコードする核酸配列または本明細書において提供される別の予防薬もしくは治療薬は、遺伝子治療を手段として、障害または１つ以上の症状を治療、予防、管理または改善するために投与される。遺伝子治療とは、発現されたまたは発現可能な核酸の対照への投与によって行われる治療を指す。この実施形態において、核酸は、予防効果または治療効果を媒介する本明細書において提供されるそれらによってコードされた抗体または予防薬もしくは治療薬を生成する。
【０１５４】
当該技術分野において利用可能である遺伝子治療のための方法のいずれかは、本明細書において提供される方法において使用され得る。遺伝子治療の方法に関する一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら（１９９３）  Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；ＷｕおよびＷｕ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；ＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；ならびにＭａｙ（１９９３）ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５を参照されたい。使用することができる組換えＤＮＡ技術の、当該技術分野において一般的に知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編集）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。遺伝子治療の様々な方法の詳細な説明は、米国特許出願公開第ＵＳ２００５００４２６６４号に開示されている。
【０１５５】
ＩＩＩ．医薬組成物
単独または予防薬、治療薬および／または医薬として許容される担体と組み合わせた、１つ以上の結合タンパク質を含む医薬組成物が提供される。本明細書において提供される結合タンパク質を含む医薬組成物は、疾患を診断し、検出し、もしくはモニタリングし、疾患または１つもしくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、もしくは軽減する上で、および／または研究において使用されるが、これらに限定されない。単独または予防薬、治療薬および／または医薬として許容される担体と組み合わせた医薬組成物の製剤は、当業者に公知である（米国特許出願公開第２００９０３１１２５３Ａ１）。
【０１５６】
本明細書において提供される予防薬または治療薬を投与する方法には、限定されないが、非経口投与（例えば、皮内、筋内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与、粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路）および経肺投与（例えば、吸入器または噴霧器を用いて投与されるエアロゾル化化合物）が挙げられる。特定の投与経路のための医薬組成物の製剤ならびに投与の様々な方法に必要とされる材料および技術が利用可能であり、当業者に公知である（米国特許出願公開第２００９０３１１２５３Ａ１）。
【０１５７】
投与計画は、最適な所望の反応（例えば、治療的または予防的反応）を提供するように調整されてもよい。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、いくつかに分割した用量は経時的に投与さてもよく、または用量は比例的に減少されてもよくもしくは治療状況の緊急性によって示されるように増加されてもよい。投与の容易性および投与量の均一性のために投薬単位形態において非経口組成物を処方することが特に有利である。「投薬単位形態」という用語は、処置されるべき哺乳動物対象のための単位用量として適した物理的に別個の単位を指し；それぞれの単位は、必要とされる医薬的担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。本明細書において提供される投薬単位形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特性および達成されるべき特定の治療効果または予防効果および（ｂ）個体における感受性の処置のために、このような活性化合物の配合に関する当該技術分野における固有の制限、によって決定され、直接的に依存する。
【０１５８】
本明細書において提供される結合タンパク質の治療的または予防的な有効量についての例示的であり、非限定的な範囲は、０．１−２０ｍｇ／ｋｇであり、例えば、１−１０ｍｇ／ｋｇである。用量値は、緩和されるべき状態の種類および重症度によって変化し得ることに留意すべきである。いずれかの特定の対象について、特定の投薬処方は、個々の必要性および組成物を投与しまたは投与を管理している者の専門的な判断に従って、経時的に調整されてもよく、本明細書において記載されている用量範囲は、単に例示的であり、請求される組成物の範囲または実施を制限することを意図していないことはさらに理解されるべきである。
【０１５９】
ＩＶ．併用療法
本明細書において提供される結合タンパク質はまた、種々の疾患の治療に有用な１つ以上の追加の治療薬とともに投与することができ、追加の薬剤は、その意図される目的で当業者によって選択される。例えば、追加の薬剤は、本明細書において提供される抗体によって治療される疾患または状態の治療に有用であるとして当該技術分野において認識されている治療薬であり得る。組合せは、１を超える追加の薬剤、例えば、２つまたは３つの追加の薬剤を含むことができる。
【０１６０】
併用療法剤には、限定されないが、抗腫瘍剤、放射線療法、化学療法、例えばＤＮＡアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン剤、パクリタキセル、ドセタキセル、タキソール、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ジェムザール、アントラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、キナーゼ阻害剤およびｓｉＲＮＡが含まれる。
【０１６１】
自己免疫疾患および炎症性疾患を治療するための組合せは、イブプロフェンのような薬剤を含む、ＮＳＡＩＤＳとも称される非ステロイド性抗炎症薬（単数または複数）である。他の組合せは、プレドニゾロンなどのコルチコステロイドである；ステロイド使用の周知の副作用は、本明細書において提供される結合タンパク質と組み合わせて患者を治療するときに必要とされるステロイド用量を徐々に減らすことによって、低減することが可能でありまたは除去することさえ可能である。本明細書において提供される抗体またはその抗体結合部分とともに組み合わせることが可能な関節リウマチに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：サイトカイン抑制抗炎症薬（単数または複数）（ＣＳＡＩＤ）；他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡまたはＣＤ１５４を含むこれらのリガンド（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）などの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。
【０１６２】
治療剤の組合せは、異なる点で、自己免疫およびこれに続く炎症カスケードを干渉し得る。例には、本明細書において開示される結合タンパク質、ならびにキメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、可溶性ｐ５５もしくはｐ７５ＴＮＦ受容体、またはこれらの誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤のようなＴＮＦアンタゴニスト；またはＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）が挙げられる。他の組合せには、本明細書において開示される結合タンパク質およびインターロイキン１１が含まれる。さらに別の組合せには、ＩＬ−１２機能と平行して、ＩＬ−１２機能に依存してまたはＩＬ−１２と協調して作用し得る自己免疫応答の中心的プレーヤーが含まれる；特に、ＩＬ−１８抗体または可溶性ＩＬ−１８受容体またはＩＬ−１８結合タンパク質などのＩＬ−１８アンタゴニストが関連する。ＩＬ−１２およびＩＬ−１８は重複しているが、異なる機能を有しており、両者に対するアンタゴニストの組合せは、最も有効であり得ることが示されている。さらに別の組合せは、本明細書において開示される結合タンパク質と非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤である。さらに他の組合せには、本明細書において開示される結合タンパク質と、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含む、共同刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストが含まれる。
【０１６３】
本明細書において提供される結合タンパク質はまた、薬剤と併用されてもよく、例えば、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン（ｐｅｎｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、金チオリンゴ酸塩（筋内および経口）、アザチオプリン、コルヒチン（ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ）、コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）、β−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウムおよびオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体または誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリムシノロン・アセトニド、プロポキシフェンナプシラート／ａｐａｐ、フォラート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、ヒドロコドン二酒石酸塩／ａｐａｐ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組み換え、塩酸トラマドール、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロナートナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ��８０１およびメソプラムなどの作用物質とも組み合わされ得る。組合せは、メトトレキサートまたはレフルノミドを含み、中程度または重症の関節リウマチの症例においてはシクロスポリンを含む。
【０１６４】
一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、関節リウマチの治療用の以下の薬剤の１つと併用して投与される：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤；メトトレキサート；プレドニゾン；セレコキシブ；葉酸；硫酸ヒドロキシクロロキン；ロフェコキシブ；エタネルセプト；インフリキシマブ；レフルノミド；ナプロキセン；バルデコキシブ；スルファサラジン；メチルプレドニゾロン；イブプロフェン；メロキシカム；酢酸メチルプレドニゾロン；金チオリンゴ酸ナトリウム；アスピリン；アザチオプリン；トリアムシノロンアセトニド；プロプキシフェンナプシラート／ａｐａｐ；フォラート；ナブメトン；ジクロフェナク；ピロキシカム；エトドラク；ジクロフェナクナトリウム；オキサプロジン；塩酸オキシコドン；重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ；ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール；フェンタニル；アナキンラ、ヒト組み換え；塩酸トラマドール；サルサラート；スリンダク；シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン；アセトアミノェン；アレンドロナートナトリウム；プレドニゾロン；硫酸モルヒネ；塩酸リドカイン；インドメタシン；硫酸グルコサミン／コンドロイチン；シクロスポリン；塩酸アミトリプチリン；スルファジアジン；塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン；塩酸オロパタジン；ミソプロストール；ナプロキセンナトリウム；オメプラゾール；ミコフェノラートモフェチル；シクロホスファミド；リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ；ＭＲＡ；ＣＴＬＡ４−ＩＧ；ＩＬ−１８ＢＰ；ＩＬ−１２／２３；抗ＩＬ−１８；抗ＩＬ−１５；ＢＩＲＢ−７９６；ＳＣＩＯ−４６９；ＶＸ−７０２；ＡＭＧ−５４８；ＶＸ−７４０；ロフルミラスト；ＩＣ−４８５；ＣＤＣ−８０１またはメソプラム。
【０１６５】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な炎症性腸疾患に対する治療剤の非限定的な例には、以下：ブデノシド；上皮細胞増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βｍＡｂ；抗ＩＬ−６ｍＡｂ；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）または炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３またはＴＧＦβ）またはｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤とも組み合わされ得る。
【０１６６】
結合タンパク質を組み合わせることが可能なクローン病に対する治療剤の例には、以下：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）またはｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））阻害剤またはＰＤＥ４阻害剤が含まれる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシドおよびデキサメタゾンと組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質またはこれらの抗原結合部分はまた、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸およびオルサラジンなどの薬剤、ならびにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成または作用を妨害する薬剤、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤またはＩＬ−１ｒａと組み合わされ得る。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤または６−メルカプトプリンとともに使用され得る。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質またはその抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシレート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、フォレート、シプロフロキサシン／デキストロース−水、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、テトラサイクリン塩酸塩、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム、リン酸コデイン／アセトアミノフェン（ａｐａｐ）、塩酸コレセベラム、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニソロン、ナタリズマブまたはインターフェロンガンマと組み合わせることができる。
【０１６７】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な多発性硬化症に対する治療剤の非限定的な例には、以下：コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロン−β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロン−β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンα−ｎ３）（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロン−β１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＥＧインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン；他のヒトサイトカインまたは成長因子およびこれらの受容体（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦ）に対する抗体もしくはアンタゴニストが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノレート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）または炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３またはＴＧＦβ）またはｂｃｌ−２阻害剤などの薬剤と組み合わされ得る。
【０１６８】
本明細書において提供される結合タンパク質を組み合わせることが可能な多発性硬化症のための治療剤の例には、インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ１ａおよびＩＦＮβ１ｂ；コパキソン、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤、例えばカスパーゼ−１の阻害剤、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤ならびにＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体が含まれる。
【０１６９】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な喘息に対する治療剤の非限定的な例には、以下：アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、イプラトロピウム臭化物、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アミノキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラナート、レボフロキサシン、吸入補助装置、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、塩酸マキシフロキサシン、ドキシサイクリン水和物（ｈｙｃｌａｔｅ）、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フロ酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナタート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニル、塩酸セチリジン／シュードエフェドリン、フェニレフリン／ｃｏｄ／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／シュードエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールが含まれる。
【０１７０】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能なＣＯＰＤに対する治療剤の非限定的な例には、以下：硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、イプラトロピウムブロミド、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アミノキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラナート、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロロフェニル、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、チオトロピウムブロミド、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストが含まれる。
【０１７１】
本明細書において提供される結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な乾癬に対する治療剤の非限定的な例には、以下：ＫＤＲの小分子阻害剤、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、増強された（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ）二プロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フロ酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／皮膚軟化剤（ｅｍｏｌｌ）、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿処方、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス（ｂｉｓｍｕｔｈ  ｓｕｂｇａｌ）／酸化亜鉛（ｚｎｏｘ）／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アンスラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化剤、フルオシノニド／皮膚軟化剤、鉱物油／ひまし油／ｎａ  ｌａｃｔ、鉱物油／落花生油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、ソラーレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジンが含まれる。
【０１７２】
本明細書において提供される結合タンパク質を組み合わせることが可能なＳＬＥ（狼瘡）に対する治療剤の例には、以下：ＮＳＡＩＤ、例えば、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ；抗マラリア剤、例えば、ヒドロキシクロロキン；ステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン；細胞障害剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノラートモフェチル、メトトレキサート；ＰＤＥ４の阻害剤またはプリン合成阻害剤、例えば、Ｃｅｌｌｃｅｐｔが含まれる。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、薬剤と併用されてもよく、例えば、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランならびにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成、産生または作用を妨害する作用物質、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤およびＩＬ−１ｒａのようなカスパーゼ阻害剤とも組み合わされ得る。本明細書において提供される結合タンパク質はまた、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤；またはＴ細胞活性化分子を標的とする分子、例えば、ＣＴＬＡ−４−ＩｇＧまたは抗Ｂ７抗体ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体とともに使用され得る。本明細書において提供される結合タンパク質は、ＩＬ−１１または抗サイトカイン抗体、例えば、ホノトリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体）または抗受容体受容体抗体、例えば、抗ＩＬ−６受容体抗体およびＢ細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本明細書において提供される抗体またはその抗原結合部分はまた、ＬＪＰ３９４（アベチムス）、Ｂ細胞を枯渇させまたは不活化する薬剤、例えば、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンホスタット−Ｂ（抗ＢｌｙＳ抗体）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、アダリムマブ（ＰＣＴ公開第ＷＯ９７／２９１３１号；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））およびｂｃｌ−２阻害剤（トランスジェニックマウスにおけるｂｃｌ−２過剰発現が狼瘡様表現型をもたらすことが実証されているためである（Ｍａｒｑｕｉｎａ参照）。）とともに使用され得る。本明細書において提供される医薬組成物は、本明細書において提供される結合タンパク質の「治療的有効量」または「予防的有効量」を含み得る。「治療的有効量」は、所望の治療的結果を達成するための投薬量で、および所望の治療的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。結合タンパク質の治療的有効量は、当業者によって決定され得、病状、年齢、性別および個体の体重ならびに結合タンパク質が個体内で所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。治療的有効量は、抗体または抗体部分のあらゆる毒性効果または有害効果が、治療的に有益な効果によって凌駕される量でもある。「予防的有効量」は、所望の予防的結果を達成するために必要な投薬量で、および所望の予防的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す���典型的には、疾病のより初期段階の前にまたは疾病のより初期段階において、予防的投薬が患者に使用されるので、予防的有効量は、治療的有効量より少ない。
【０１７３】
Ｖ．診断
本明細書における開示はまた診断の適用例を提供し、限定されないが、診断アッセイ法、１つ以上の結合タンパク質を含む診断用キット、ならびに自動化および／または半自動化システムにおける使用のための方法およびキットの適応が含まれる。提供される方法、キットおよび適応は、個体における疾患または障害の検出、監視および／または治療に用いることができる。これは、以下でさらに明らかにされる。
【０１７４】
Ａ．アッセイの方法
本開示は、本明細書に記載されている少なくとも１つの結合タンパク質を使用して試験試料中の分析物またはその断片の存在、量または濃度を決定する方法も提供する。本分野において知られているあらゆる適切なアッセイは、この方法において使用することが可能である。例には、限定されないが、イムノアッセイおよび／または質量分析法を用いる方法が含まれる。
【０１７５】
本開示によって提供されるイムノアッセイは、とりわけ、サンドイッチイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、競合阻害イムノアッセイ、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、酵素増幅イムノアッセイ技術（ＥＭＩＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）および均一系化学発光アッセイを含む。
【０１７６】
化学発光微粒子イムノアッセイ、特にＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）を使用するものは、イムノアッセイの例である。
【０１７７】
質量分析法を用いる方法は、本開示によって提供され、限定されないが、ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化）またはＳＥＬＤＩ（表面増強レーザー脱離／イオン化）が含まれる。
【０１７８】
イムノアッセイおよび質量分析法を用いて生物学的試験試料を回収し、操作し、処理しおよび分析するための方法は、本開示の実施において提供される（ＵＳ２００９−０３１１２５３Ａ１）。
【０１７９】
Ｂ．キット
試験試料における分析物またはその断片の存在、量または濃度について試験試料をアッセイするためのキットも提供される。キットは、分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分および分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための説明書を含む。分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分は、場合によって、固相上に固定されている、本明細書に開示されている結合タンパク質および／または抗分析物結合タンパク質（またはその断片、バリアントまたはそのバリアントの断片）を含む組成物を含むことができる。
【０１８０】
場合によって、キットは、単離されたまたは精製された分析物を含み得る、較正因子または対照を含むことができる。キットは、イムノアッセイおよび／または質量分析法によって、分析物について試験試料をアッセイするための少なくとも１つの成分を含むことができる。キット成分は、分析物、結合タンパク質および／または抗分析物結合タンパク質またはその断片を含み、場合によって、当該分野で公知の任意の検出可能な標識を用いて標識されてもよい。本開示の実施において提供される構築のための材料および方法は、当業者に公知である（米国２００９−０３１１２５３Ａ１）。
【０１８１】
Ｃ．キットおよび方法の適合
本明細書に記載されているイムノアッセイなどのアッセイによって試験試料における分析物の存在、量または濃度を決定するキット（またはその成分）ならびに方法は、例えば、米国特許第５，０８９，４２４号および第５，００６，３０９号に記載され、例えば、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，ＩＬ）によってＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）として商業的に販売されている（固相が微粒子を含むものを含めて）様々な自動化システムおよび半自動化システムにおける使用に適合させることが可能である。
【０１８２】
Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能な他のプラットホームには、ＡｘＳＹＭ（登録商標）、ＩＭｘ（登録商標）（例えば、米国特許第５，２９４，４０４号を参照されたい、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）およびＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩならびに他のプラットホームが含まれるが、これらに限定されない。さらに、アッセイ、キットおよびキットの成分は、他のフォーマットにおいて、例えば、電気化学的または他の携帯もしくはポイントオブケアアッセイシステムで使用することが可能である。本開示は、例えば、サンドイッチイムノアッセイを行う商業的Ａｂｂｏｔｔ  Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）電気化学的イムノアッセイシステムに適用可能である。免疫センサーならびに単回使用試験装置におけるこれらの製造および操作方法は、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、第７，４１９，８２１号、および第７，６８２，８３３号；ならびに米国特許公開第２００４００１８５７７号、第２００６０１６０１６４号、およびＵＳ２００９０３１１２５３に記載されている。
【０１８３】
本明細書に記載されている本方法の他の適切な改変および適合が明白であり、本明細書に開示されている範囲または実施形態から逸脱することなく、適切な均等物を用いてこれらを行い得ることは、当業者に容易に明確になる。ここに、ある種の実施形態を詳細に記載してきたが、例示のみを目的とし、限定することを意図したものではない、下記の実施例を参照することによって、本発明がより明確に理解される。
【実施例】
【０１８４】
［実施例１］  抗ＩＬ−１７ヒト化モノクローナル抗体ｈ１０Ｆ７の生成
［実施例１．２］  ヒト化抗ヒトＩＬ−１７抗体ｈ１０Ｆ７の親和性成熟
ヒト化抗ヒトＩＬ−１７抗体は従前に開示された。この抗体は、その後、ヒト、カニクイザルおよびマウスのＩＬ−１７に対するその全親和性を改善するために、親和性成熟された。いくつかのライブラリーは、以下の仕様に従って作製された：
【０１８５】
Ｈ１＋Ｈ２ライブラリー：
−３０、３１、３３、３５、５３、５６、５７および５８での７残基における限定された突然変異誘発。
−２７、４８、５１、５２、５４、６７および６９位でのヒト生殖系列とｈ１０Ｆ７配列間のトグル。
Ｈ３ライブラリー：
−９５−１００ｃと１０２での限定された突然変異誘発。
−９３でのヒト生殖系列とｈ１０Ｆ７配列間のトグル。
ＬＣライブラリー１：
−３０、３１、３２、３４、５０、５３、８９、９１、９２、９３および９６での限定された突然変異誘発。
−４、２４、２７、２９、３３、３６、４３、４７、５２および５５位でのヒト生殖系列とｈ１０Ｆ７配列間のトグル。
【０１８６】
ＬＣライブラリー２：ヒト抗体に対する同一性を高めるためにＣＤＲ１におけるＧ２８位でのさらなる残基で構築される
−２８、３０、３１、３２、３４、５０、５３、８９、９１、９２、９３および９６での限定された突然変異誘発。
−２４、２７、２９、３３、３７、４４、４８、５２および５５位でのヒト生殖系列とｈ１０Ｆ７配列間のトグル。
−ｓｃＦｖとして最初に試験されるべきＦＲ１（４位）における１つのフレームワーク生殖系列突然変異。結合は影響されない場合、「Ｍ」は「Ｌ」よりも優先される。
【０１８７】
ｒＨＣライブラリー：Ｈ１＋Ｈ２およびＨ３ライブラリーのアウトプットを組み換える。
【０１８８】
ｒＨＣＬＣライブラリー：Ｈ１＋Ｈ２、Ｈ３およびＬＣ１またはＬＣ２ライブラリーのアウトプットを組み換える。（ＬＣ２アウトプット結合が、少なくともＷＴと同程度に良好であるように見える場合、ＬＣ１よりもＬＣ２を選択し、その他の場合は、ＬＣ１アウトプットを組み換える。）。
【０１８９】
４つすべてのライブラリーは、濃度を減少させたビオチン化抗原の存在下で、ヒト、カニクイザルおよびマウスのＩＬ−１７に結合する能力について別々に選択された。ライブラリー選択から回収されたすべての突然変異したＣＤＲ配列は、追加のライブラリーに組み換えられ、組み換えられたライブラリーは、個々の抗体が同定される前に、よりストリンジェントな選択条件に供された。
【０１９０】
下記の表は、親和性成熟選択プロトコールに供されたｈ１０Ｆ７抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列のリストを提供する。それぞれのＶＨおよびＶＬ配列の個々のＣＤＲのアミノ酸残基は太字で示される。
【０１９１】
【表４】
2015508994.tif 000038
【０１９２】
上記のセクションＩ．Ｃにおける表１Ｂおよび１Ｃは、変換されたクローンからの個々のＶＨおよびＶＬ配列を提供する。これらの親和性成熟された配列は完全長ＩｇＧに変換された。
【０１９３】
【表５】
2015508994.tif 000039
【０１９４】
［実施例２］  抗ＩＬ−１３および抗ＩＬ−１７二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質の生成ならびに特徴付け
既知のアミノ酸配列を有する親抗体を用いた四本鎖二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、ＤＶＤ結合タンパク質の可変重鎖配列およびＤＶＤ結合タンパク質の可変軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド断片を合成し、当該技術分野において公知の方法に従って、ｐＨｙｂＣ−Ｄ２ベクターに断片をクローニングすることにより生成された。ＤＶＤ結合タンパク質構築物は、当該技術分野において既知の方法に従って、２９３細胞にクローニングされ、そこで発現させ、精製された。ＤＶＤ結合タンパク質についてのＤＶＤ  ＶＨ鎖およびＶＬ鎖を以下に提供する。
【０１９５】
［実施例２．１］  ＩＬ−１３およびＩＬ−１７に結合するＤＶＤ結合タンパク質
【０１９６】
【表６】
2015508994.tif 000040
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【０１９７】
表５は、２９３細胞において、１リットルあたりのｍｇとして発現した親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇ構築物に関する収量データを含有する。
【０１９８】
【表７】
2015508994.tif 000046
2015508994.tif 000047
【０１９９】
すべてのＤＶＤ−Ｉｇ分子は２９３細胞において十分に発現した。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、プロテインＡカラムを通して容易に精製することができた。大部分の場合において、５ｍｇ／Ｌを超える精製されたＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が、２９３細胞の上清から容易に得ることができた。
【０２００】
［実施例３］  親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の機能的活性を決定するために使用されるアッセイ
［実施例３．１］  ＩＬ−１３バイオアッセイおよび中和アッセイ  Ａ５４９細胞は、１００μＬ体積でウェルあたり１．５−２×１０５細胞でプレーティングされ、一晩、３７℃、５％ＣＯ２にてインキュベートされた。１６−２０時間の一晩のインキュベーション後、元の１００μｌ培地の播種体積は除去され、１００μＬの４００ｎｇ／ｍＬ（２×濃縮）のｒｈＴＮＦ−αがすべてのウェルに添加された。プレートは、ＩＬ−１３および抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の添加まで、３７℃、５％ＣＯ２にて置かれた。抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（４×濃縮）の２０μｇ／ｍＬ作業ストックは、完全Ｆ１２培地において調製された。８点の連続希釈は、マーシュ希釈プレートの完全Ｆ１２中で行われた（５μｇ／ｍＬ−０．０００３μｇ／ｍＬ）。６０μＬ／ウェルのそれぞれの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質希釈物は、９６ウェルｖ底（Ｃｏｓｔａｒ＃３８９４）プレートに４点測定で添加され、６０μＬの４×濃縮された（２０ｎｇ／ｍＬ）溶液のＩＬ−１３は、細胞のみの対照を除いて、すべてのウェルに添加された。１時間のインキュベーション後、１００μＬの上記ＩＬ−１３／抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質複合体は、Ａ５４９細胞に添加された。すべてのウェル体積は、２００μＬに等しかった。組換えＩＬ−１３の最終濃度は５ｎｇ／ｍＬであり、ｒｈＴＮＦ−αは２００ｎｇ／ｍＬであった。次に、すべてのプレート試薬は１×濃縮された。１６−２０時間のインキュベーション後、ウェル内容物（２００μＬ）は、９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３７９９）に移され、−２０℃の冷凍庫に入れられた。上清は、アッセイ実験室においてＥＬＩＳＡによってｈＴＡＲＣレベルについて試験された。中和能力は、５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１３単独の対照値に対する阻害パーセントを計算することによって決定された。報告されたＩＣ５０値（シグモイド曲線用量応答）はグラフパッドプリズムを用いて計算された。
【０２０１】
【表８】
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2015508994.tif 000049
【０２０２】
Ｎ末端またはＣ末端位置のいずれかにおけるＡＢ３９７、ＡＢ３９８またはＡＢ３９９からのＶＤを含有するすべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、Ａ５４９  ＩＬ−１３中和アッセイにおいて中和を示した。
【０２０３】
［実施例３．２］  ＩＬ−１７バイオアッセイおよび中和アッセイ
ヒトＨＳ２７細胞株（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１６３４）は、ＩＬ−１７に応答してＩＬ−６を分泌する。ＩＬ−１７誘導性のＩＬ−６分泌は、抗ＩＬ−１７抗体を中和することによって阻害される（例えば、Ｊ．Ｉｍｍ．１５５：５４８３−５４８６（１９９５）またはＣｙｔｏｋｉｎｅ  ９：７９４−８００（１９９７）を参照されたい。）。
【０２０４】
ＨＳ２７細胞は、アッセイ培地（１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ＃２６１４０）、４ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、ペニシリンＧ（１００Ｕ／５００ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００μｇ／５００ｍｌ）を含むＤＭＥＭ高グルコース培地（Ｇｉｂｃｏ＃１１９６５））中で維持された。細胞がアッセイ当日に約８０−９０％コンフルエントになるまで、細胞はＴ１５０フラスコ中で増殖された。ヒトＩＬ−１７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃３１７−ＩＬ／ＣＦ）は、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含まない滅菌ＰＢＳ中で再構成され、凍結保存され、使用のために新鮮に解凍され、アッセイ培地中で４０ｎｇ／ｍｌ（４×）に希釈された。抗体の連続希釈物は、別々のプレートにおいて作製され（４×濃縮）、４０ｎｇ／ｍｌ（４×）等量のヒトＩＬ−１７とともに混合され、３７℃にて１時間インキュベートされた。ＨＳ２７細胞（典型的には、５０μｌアッセイ培地中に約２０，０００細胞）は、９６ウェル平底組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３５９９）のそれぞれのウェルに添加され、次に、プレインキュベートされた抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質＋ＩＬ−１７ミックスの５０μｌを添加した。ＩＬ−１７の最終濃度は１０ｎｇ／ｍｌであった。細胞は、約２４時間、３７℃にてインキュベートされた。その後、培地の上清が回収された。ＩＬ−１７中和のレベルは、製造業者の使用説明書に従って、市販のＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙキットを用いて、上清中のＩＬ−６量を決定することによって測定された。ＩＣ５０値は、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質対ＩＬ−６量可変勾配フィットの対数を用いて得られた。
【０２０５】
【表９】
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【０２０６】
Ｎ末端またはＣ末端位置のいずれかにおけるＡＢ２７３、ＡＢ２７４またはＡＢ２７５からのＶＤを含有するすべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、ＨＳ２７  ＩＬ−１７中和アッセイにおいて中和を示した。
【０２０７】
［実施例３．３］  ＢＩＡＣＯＲＥ技術を用いた親和性の決定
【０２０８】
【表１０】
2015508994.tif 000052
【０２０９】
ＢＩＡＣＯＲＥ法：
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）は、結合（ｏｎ−ｒａｔｅ）定数および解離（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）定数の反応速度測定を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇの親和性を決定した。標的抗原（例えば、精製された組換え標的抗原）への抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）１０００または３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）により、２５℃で稼働しているＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．００５％サーファクタントＰ２０）を用いて表面プラズモン共鳴に基づく測定によって決定された。すべての化学物質は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）から入手し、または他には本明細書に記載される別の供給元から入手した。例えば、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中に希釈された、約５０００ＲＵのヤギ抗マウスＩｇＧ、（Ｆｃγ）、断片特異的なポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）は、製造業者の使用説明書に従って標準的なアミンカップリングキットおよび２５μｇ／ｍｌでの操作を用いてＣＭ５研究等級のバイオセンサーチップ全体に直接固定化された。バイオセンサー表面上の未反応部分をエタノールアミンを用いてブロックした。フローセル２および４において修飾されたカルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用した。フローセル１および３におけるヤギ抗マウスＩｇＧなしの未修飾のカルボキシメチルデキストランを基準表面として使用した。反応速度分析のために、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを用いて、８個すべての注入物の結合および解離相に対して、１：１ラングミュア（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合モデルから誘導された速度方程式を同時にフィッティングさせた（グローバルフィット分析を使用）。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面の全体で捕捉するために、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水中に、精製された抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質試料を希釈した。リガンドとして捕捉されるべき抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（２５μｇ／ｍｌ）を５μｌ／分の流速で反応マトリックス全体に注入した。結合速度定数および解離結合定数のｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１）およびｋｏｆｆ（ｓ−１）は、２５μｌ／分の連続的流速下で決定された。１０−２００ｎＭの範囲の異なる抗原濃度にて速度論結合測定を行うことによって速度定数を導いた。次に、以下の式：ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎによって、速度論的速度定数から抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質および標的抗原間の反応の平衡解離定数（Ｍ）を計算した。結合を時間の関数として記録し、速度論的速度定数を計算した。このアッセイにおいて、１０６Ｍ−１ｓ−１程度に速い結合速度および１０−６ｓ−１程度に遅い解離速度が測定された。
【０２１０】
【表１１】
2015508994.tif 000053
2015508994.tif 000054
2015508994.tif 000055
【０２１１】
Ｂｉａｃｏｒｅ技術によって特徴付けられたすべてのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合は維持され、親抗体の結合能力に匹敵していた。すべての可変ドメインは親抗体と同様の高い親和性で結合していた。
【０２１２】
［実施例４］  抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の特徴付け
機能的活性を阻害するための精製されたＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の能力は、例えば、実施例３に記載されるようにサイトカインバイオアッセイを用いて決定された。組換えヒト抗原に対するＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の結合親和性は、実施例４に記載されるように表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定を用いて決定された。抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のバイオアッセイからのＩＣ５０値および親和性を位置付けた。親ｍＡｂの活性を完全に維持するＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、将来の進行のための候補対象として選択された。上位２−３の最も有益なＤＶＤ−Ｉｇタンパク質をさらに特徴付けた。
【０２１３】
［実施例４．１］  ヒト化抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の薬物動態分析
薬物動態研究は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットおよびカニクイザルにおいて行われる。雄性および雌性のラットならびにカニクイザルは、４ｍｇ／ｋｇのｍＡｂまたはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の単回投薬で静脈内または皮下に投薬され、抗原捕捉ＥＬＩＳＡを用いて試料を分析し、薬物動態パラメーターを非コンパートメント分析によって決定する。要約すると、ヤギ抗ビオチン抗体（５ｍｇ／ｍｌ、４℃、一晩）を用いてＥＬＩＳＡプレートを被覆し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてブロックし、１０％ＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋのＴＴＢＳ中の５０ｎｇ／ｍｌのビオチン化ヒト抗原とともに室温で２時間インキュベートする。血清試料を連続的に希釈し（ＴＴＢＳ中の０．５％血清、１０％Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ）およびプレート上で３０分間、室温にてインキュベートする。ＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒト抗体を用いて検出を行い、４パラメーターのロジスティックフィットを用いて、標準曲線の助けにより濃度を決定する。薬物動態パラメーターに関する値は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を用いて、非コンパートメントモデルによって決定される。良好な薬物動態プロファイル（Ｔ１／２は８−１３日またはそれより良好であり、低クリアランスおよび優れた生物学的利用能は５０−１００％である。）を有するヒト化ｍＡｂが選択される。
【０２１４】
［実施例４．２］  ヒト化モノクローナル抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の物理化学的およびインビトロでの安定性分析
サイズ排除クロマトグラフィー
水を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を２．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、２０ｍＬをＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ＃ｋ５５３９−０５ｋ）を用いてＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステム上で分析した。２１１ｍＭ硫酸ナトリウム、９２ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を用いて、流速０．３ｍＬ／分にて試料をカラムから溶出した。ＨＰＬＣシステムの操作条件は以下の通りである：
移動相：２１１ｍＭのＮａ２ＳＯ４、９２ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４＊７Ｈ２０、ｐＨ７．０
勾配：アイソクラチック
流速：０．３ｍＬ／分
検出波長：２８０ｎｍ
オートサンプラー冷却装置温度：４℃
カラムオーブン温度：周囲
実行時間：５０分
【０２１５】
表１０は、上記プロトコルにより測定したモノマー（予想される分子量を有する非凝集タンパク質）％として表される親抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の純度データを含む。
【０２１６】
【表１２】
2015508994.tif 000056
2015508994.tif 000057
【０２１７】
ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、大部分のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質が９０％を超えるモノマーを示す優れたＳＥＣプロファイルを示した。このＤＶＤ−Ｉｇタンパク質プロファイルは、親抗体について観察されたものと類似していた。
【０２１８】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
還元条件下および非還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を分析する。Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）を対照として用いる。還元条件について、１００ｍＭのＤＴＴを含む２×トリスグリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＬＣ２６７６、ロット＃１３２３２０８）と１：１で試料を混合し、６０℃で３０分間加熱する。非還元条件について、試料緩衝液と１：１で試料を混合し、１００℃で５分間加熱する。還元試料（１０ｍｇ／レーン）を１２％プレキャストのトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＣ６００５ｂｏｘ、ロット＃６１１１０２１）上に装填し、非還元試料（１０ｍｇ／レーン）を８％−１６％プレキャストのトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＣ６０４５ｂｏｘ、ロット＃６１１１０２１）上に装填する。ＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ  ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＬＣ５９２５、ロット＃１３５１５４２）を分子量マーカーとして用いる。ゲルをＸＣｅｌｌ  ＳｕｒｅＬｏｃｋミニセルゲルボックス（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ＥＩ０００１）に入れ、最初に、ゲル内の試料を積層するために電圧７５を加え、次にダイフロント（ｄｙｅ  ｆｒｏｎｔ）がゲルの底に到達するまで定電圧１２５にしてタンパク質を分離する。使用される泳動緩衝液は１×トリスグリシンＳＤＳ緩衝液であり、１０×トリスグリシンＳＤＳ緩衝液（ＡＢＣ、ＭＰＳ−７９−０８０１０６）から調製される。コロイド状青色染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃４６−７０１５、４６−７０１６）を用いてゲルを一晩染色し、バックグラウンドを除くためにＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染する。次に、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０、Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いて、染色されたゲルをスキャンする。
【０２１９】
沈降速度分析
３つの標準的な２セクターのカーボン・エポンセンターピースの各々の試料チャンバー内に抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を装填する。これらのセンターピースは１．２ｃｍの光路長を有し、サファイアウィンドウで構築される。基準緩衝液に関してはＰＢＳを使用し、各チャンバーは１４０μＬを含む。Ｂｅｃｋｍａｎ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＸＬ−Ｉ分析用超遠心分離機（シリアル＃ＰＬ１０６Ｃ０１）の４ホール（ＡＮ−６０Ｔｉ）ローターを用いて、すべての試料を同時に試験する。
【０２２０】
実行条件をプログラムし、ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ（ｖ５．６）を用いて遠心分離制御を行う。試料およびローターは、分析前の１時間（２０．０±０．１℃）熱平衡化させる。適切なセル装填の確認を３０００ｒｐｍで行い、１回のスキャンを各ウェルについて記録する。沈降速度条件は以下の通りである：
試料細胞体積：４２０ｍＬ
基準細胞体積：４２０ｍＬ
温度：２０℃
ローター速度：３５，０００ｒｐｍ
時間：８：００時間
ＵＶ波長：２８０ｎｍ
半径刻み幅：０．００３ｃｍ
データ回収：信号加算平均なしの１工程あたり１データポイント
スキャン総数：１００
【０２２１】
完全な抗体のＬＣ−ＭＳ分子量測定
完全な抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の分子量をＬＣ−ＭＳによって分析する。水を用いて各抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を約１ｍｇ／ｍＬに希釈する。タンパク質マイクロトラップ（Ｍｉｃｈｒｏｍ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ、カタログ＃００４／２５１０９／０３）を備えた１１００ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）システムを用いて、脱塩し、試料の５ｍｇをＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中の０．０８％ＴＦＡ、０．０２％ＴＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０８％ＦＡおよび０．０２％ＴＦＡ）を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は２０００から３５００の質量対電荷比である。
【０２２２】
抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の軽鎖および重鎖のＬＣ−ＭＳ分子量測定
抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の軽鎖（ＬＣ）、重鎖（ＨＣ）および脱グリコシル化されたＨＣの分子量測定をＬＣ−ＭＳによって分析する。水を用いて抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１ｍｇ／ｍＬに希釈し、試料は、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、３０分間、３７℃でＬＣおよびＨＣに還元される。抗体およびＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を脱グリコシル化するために、１００ｍｇの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１００ｍＬの全体積中の２ｍＬのＰＮＧａｓｅ  Ｆ、５ｍＬの１０％Ｎ−オクチルグルコシドとともに、一晩３７℃にてインキュベートされる。脱グリコシル化後、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、試料を３０分間、３７℃にて還元する。Ｃ４カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１４ＴＰ５１１５、Ｓ／Ｎ０６０２０６５３７２０４０６９）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣシステムを用いて脱塩し、試料（５ｍｇ）をＡＰＩ  Ｑｓｔａｒパルサーｉ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ水中の０．０８％ＦＡ、０．０２％ＴＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０８％ＦＡおよび０．０２％ＴＦＡ）を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は８００から３５００の質量対電荷比である。
【０２２３】
ペプチドマッピング
７５ｍＭ重炭酸アンモニウム中の最終濃度が６Ｍの塩酸グアニジンを用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１５分間、室温にて変性させる。変性試料は、最終濃度が１０ｍＭのＤＴＴを用いて、３７℃、６０分間還元させ、次に、暗所にて３７℃、３０分間、５０ｍＭヨード酢酸（ＩＡＡ）を用いてアルキル化される。アルキル化後、４リットルの１０ｍＭ重炭酸アンモニウムに対して、一晩４℃で試料を透析する。透析された試料は、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム、ｐＨ７．８を用いて１ｍｇ／ｍＬに希釈され、１００ｍｇの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１：２０（ｗ／ｗ）トリプシン／Ｌｙｓ−Ｃ：抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の比でトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃Ｖ５１１１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ、カタログ＃１１  ０４７  ８２５  ００１）を用いて３７℃で４時間消化される。消化物は、１ＮのＨＣｌを１ｍＬ用いてクエンチされる。質量分析計検出を用いたペプチドマッピングについて、４０ｍＬの消化物は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００ＨＰＬＣシステムを備えた、Ｃ１８カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１８ＴＰ５１、Ｓ／Ｎ  ＮＥ９６０６  １０．３．５）上で逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰＨＰＬＣ）によって分離される。ペプチドの分離は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ等級の水中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）を使用する勾配を用いて、５０ｍＬ／分の流速にて実行する。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は８００から２５００の質量対電荷比である。
【０２２４】
ジスルフィド結合マッピング
抗体を変性するために、１００ｍＬの抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１００ｍＭ重炭酸アンモニウム中の８ＭグアニジンＨＣｌの３００ｍＬと混合される。ｐＨをチェックして、ｐＨが７から８の間であることを確認し、最終濃度が６ＭのグアニジンＨＣｌ中で１５分間、室温にて試料を変性させる。一部の変性試料（１００ｍＬ）をＭｉｌｌｉ−Ｑ水で６００ｍＬに希釈し、最終のグアニジン−ＨＣｌ濃度を１Ｍとする。試料（２２０ｍｇ）は、１：５０のトリプシン：抗体もしくはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質または１：５０のＬｙｓ−Ｃ：抗体もしくはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（ｗ／ｗ）の比（４．４ｍｇ酵素：２２０ｍｇ試料）でトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃Ｖ５１１１、ロット＃２２２６５９０１）またはＬｙｓ−Ｃ（Ｒｏｃｈｅ、カタログ＃１１０４７８２５００１、ロット＃１２８０８０００）を用いて３７℃で約１６時間消化される。さらに５ｍｇのトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃを試料に添加し、消化をさらに２時間、３７℃で進行させる。各試料に１ｍＬのＴＦＡを添加することによって消化を停止させる。消化された試料は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣシステム上のＣ１８カラム（Ｖｙｄａｃ、カタログ＃２１８ＴＰ５１、Ｓ／Ｎ  ＮＥ０２０６３０−４−１Ａ）を用いてＲＰＨＰＬＣによって分離される。分離は、移動相Ａ（ＨＰＬＣ等級の水中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）および移動相Ｂ（アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡおよび０．０８％ＦＡ）を用いて、ペプチドマッピングについて使用されたものと同じ勾配で５０ｍＬ／分の流速にて実行する。ＨＰＬＣの操作条件は、ペプチドマッピングについて使用された条件と同じである。ＡＰＩ  ＱＳＴＡＲ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ質量分析計は、４．５キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は８００から２５００の質量対電荷比である。ジスルフィド結合は、ペプチドの実測されたＭＷと、ジスルフィド結合によって連結されたトリプシンまたはＬｙｓ−Ｃペプチドの予測されたＭＷとを合致させることによって割り当てられる。
【０２２５】
遊離スルフヒドリル決定
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質中の遊離システインを定量するために使用される方法は、特徴的な発色生成物である５−チオ−（２−ニトロ安息香酸）（ＴＮＢ）を生じさせる、エルマン試薬である５，５ｃ−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）とスルフヒドリル基（ＳＨ）の反応に基づいている。反応は、式：
ＤＴＮＢ  ＋  ＲＳＨ（Ｒ）ＲＳ−ＴＮＢ  ＋  ＴＮＢ−  ＋  Ｈ＋
において説明される。
【０２２６】
ＴＮＢ−の吸光度は、Ｃａｒｙ  ５０分光光度計を用いて、４１２ｎｍで測定される。吸光度曲線は、遊離ＳＨ標準として２メルカプトエタノール（ｂ−ＭＥ）の希釈を用いてプロットし、タンパク質中の遊離スルフヒドリル基の濃度は、試料の４１２ｎｍでの吸光度から決定される。
【０２２７】
ｂ−ＭＥ標準ストックは、最終濃度が０．１４２ｍＭになるように、ＨＰＬＣ等級の水を用いて１４．２Ｍのｂ−ＭＥを連続希釈することによって調製される。次に、各濃度について３点測定の標準を調製する。アミコンウルトラ１０，０００ＭＷＣＯ遠心フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ＃ＵＦＣ８０１０９６、ロット＃Ｌ３ＫＮ５２５１）を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、緩衝液をアダリムマブについて使用した処方緩衝液（５．５７ｍＭリン酸一水素ナトリウム、８．６９ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１０６．６９ｍＭのＮａＣｌ、１．０７ｍＭクエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭクエン酸、６６．６８ｍＭマンニトール、ｐＨ５．２、０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ）に交換する。試料をシェーカー上で室温にて２０分間混合する。次に、１８０ｍＬの１００ｍＭのＴｒｉｓ緩衝液、ｐＨ８．１を各試料に添加し、標準は、１０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ８．１中の２ｍＭのＤＴＮＢを３００ｍＬ添加する。完全に混合した後、Ｃａｒｙ  ５０分光光度計上で４１２ｎｍの吸光度について試料および標準を測定する。遊離ＳＨの量とｂ−ＭＥ標準のＯＤ４１２ｎｍをプロットすることによって、標準曲線を得る。試料の遊離ＳＨ含有量は、ブランクを差し引いた後、この曲線に基づいて計算される。
【０２２８】
弱い陽イオン交換クロマトグラフィー
１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０を用いて抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を１ｍｇ／ｍＬに希釈する。電荷異質性は、ＷＣＸ−１０  ＰｒｏＰａｃ分析用カラム（Ｄｉｏｎｅｘ、カタログ＃０５４９９３、Ｓ／Ｎ０２７２２）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムを用いて分析される。試料を８０％移動相Ａ（１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０）および２０％移動相Ｂ（１０ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０）においてカラムに充填し、１．０ｍＬ／分の流速で溶出する。
【０２２９】
オリゴ糖プロファイリング
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のＰＮＧａｓｅ  Ｆ処理後に放出されるオリゴ糖は、２−アミノベンズアミド（２−ＡＢ）標識試薬を用いて誘導される。蛍光標識されたオリゴ糖は、順相の高速液体クロマトグラフィー（ＮＰＨＰＬＣ）によって分離され、異なる形態のオリゴ糖は、保持時間に基づいて、既知の標準と比較して特徴付けられる。
【０２３０】
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を最初にＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて消化し、重鎖のＦｃ部分からＮ結合のオリゴ糖を切断する。２ｍＬのＰＮＧａｓｅ  Ｆおよび３ｍＬの１０％Ｎ−オクチルグルコシドとともに５００ｍＬエッペンドルフチューブに抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質（２００ｍｇ）を入れる。リン酸緩衝生理食塩水を添加し、最終体積を６０ｍＬにする。７００ＲＰＭに設定したエッペンドルフのサーモミキサー中で一晩３７℃にて試料をインキュベートする。また、Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ロットＡＦＰ０４Ｃ）を対照としてＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いて消化する。
【０２３１】
ＰＮＧａｓｅ  Ｆ処理後、７５０ＲＰＭに設定されたエッペンドルフのサーモミキサー中で９５℃、５分間、試料をインキュベートしてタンパク質を沈殿させ、次に、２分間、１０，０００ＲＰＭでエッペンドルフの遠心分離機に試料を置き、沈殿したタンパク質を沈降させる。オリゴ糖を含む上清を５００ｍＬのエッペンドルフチューブに移し、スピード−ｖａｃ中、６５℃で乾燥させる。
【０２３２】
Ｐｒｏｚｙｍｅから購入される２ＡＢ標識キット（カタログ＃ＧＫＫ−４０４、ロット＃１３２０２６）を用いて、オリゴ糖を２ＡＢで標識する。製造業者の使用説明書に従って標識試薬を調製する。酢酸（１５０ｍＬ、キットにおいて提供される）をＤＭＳＯバイアル（キットにおいて提供される）に添加し、溶液を数回、上下にピペッティングすることによって混合する。酢酸／ＤＭＳＯ混合物（１００ｍＬ）を２−ＡＢ色素のバイアル（使用直前）に移し、色素が完全に溶解するまで混合する。次に、色素溶液を還元剤（キットにおいて提供される）のバイアルに添加し、十分に混合に混合する（標識試薬）。標識試薬（５ｍＬ）を各々乾燥させたオリゴ糖試料バイアルに添加し、完全に混合する。６５℃で７００−８００ＲＰＭに設定されたエッペンドルフのサーモミキサーに反応バイアルを置き、２時間反応させる。
【０２３３】
標識反応後、Ｐｒｏｚｙｍｅから入手されるＧｌｙｃｏＣｌｅａｎｓカートリッジ（カタログ＃ＧＫＩ−４７２６）を用いて過剰の蛍光色素を取り除く。試料を添加前、カートリッジを１ｍＬのｍｉｌｌｉ−Ｑ水で洗浄し、その後、１ｍＬの３０％酢酸溶液で５回洗浄する。試料を添加直前に、１ｍＬのアセトニトリル（Ｂｕｒｄｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ＃ＡＨ０１５−４）をカートリッジに添加する。
【０２３４】
すべてのアセトニトリルがカートリッジを通過した後、新たに洗浄したディスクの中心に試料をスポット状に置き、ディスク上に１０分間吸着させる。１ｍＬのアセトニトリルを用いてディスクを洗浄し、続いて、１ｍＬの９６％アセトニトリルで５回洗浄する。カートリッジを１．５ｍＬのエッペンドルフチューブ上に置き、２−ＡＢ標識されたオリゴ糖をｍｉｌｌｉ  Ｑ水の３回の洗浄（各洗浄あたり４００ｍＬ）により溶出させる。
【０２３５】
Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムに連結させたＧｌｙｃｏｓｅｐ  Ｎ  ＨＰＬＣ（カタログ＃ＧＫＩ−４７２８）カラムを用いてオリゴ糖を分離する。Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムは、システムコントローラー、脱気装置、二重ポンプ、試料冷却器を備えたオートサンプラーおよび蛍光検出器からなっていた。
【０２３６】
高温での安定性
抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の緩衝液は、５．５７ｍＭリン酸一水素ナトリウム、８．６９ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１０６．６９ｍＭのＮａＣｌ、１．０７ｍＭクエン酸ナトリウム、６．４５ｍＭクエン酸、６６．６８ｍＭマンニトール、０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ、ｐＨ５．２；または１０ｍＭヒスチジン、１０ｍＭメチオニン、４％マンニトール、ｐＨ５．９のいずれかであり、Ａｍｉｃｏｎ超遠心フィルターを用いる。適切な緩衝液を用いて、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の最終濃度を２ｍｇ／ｍＬに調整する。次に、抗体またはＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の溶液を濾過滅菌し、０．２５ｍＬのアリコートを無菌条件下で調製する。アリコートを−８０℃、５℃、２５℃または４０℃で１、２または３週間放置する。インキュベーション期間の終わりに、サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって試料を分析する。
【０２３７】
安定性試料は、還元条件下および非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析される。使用される手法は、本明細書に記載されたものと同じである。コロイド状青色染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃４６−７０１５、４６−７０１６）を用いてゲルを一晩染色させ、バックグラウンドが透明になるまでＭｉｌｌｉ−Ｑ水で脱染される。次に、Ｅｐｓｏｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎスキャナー（モデル１６８０、Ｓ／Ｎ  ＤＡＳＸ００３６４１）を用いて、染色されたゲルをスキャンする。高い感度を得るために、銀染色キット（Ｏｗｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて同じゲルを銀染色し、製造業者によって提供される推奨の手順を用いる。
【０２３８】
動的走査蛍光光度法
ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、１０ｍＭクエン酸１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）中で透析され、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得た。３点測定は、それぞれのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質について実施された。それぞれの試料について、２７μｌのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、９６ウェルプレートのウェルに添加され、３μｌの４×希釈されたＳＹＰＲＯオレンジ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともに混合された。色素は、５０００×濃度でＤＭＳＯ中に供給され、水で４×の作業濃度に希釈された。プレートは、３０秒間遠心分離され、色素とタンパク質の両方が、ウェルの底に沈殿することを確保し、完全な混合がピペットチップにより穏やかな吸引によって確保された。次に、プレートは接着フィルムで密封された。
【０２３９】
リアルタイムＰＣＲ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、７５００シリーズ）は、温度とともに蛍光強度の変化を測定するために使用された。プレートは、約０．５℃／分の温度ランプ速度にて、２５℃から９５℃まで加熱され、発光蛍光は、ＴＡＭＲＡフィルターを用いて回収された。データは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌにエクスポートされ、それぞれのＤＶＤ−Ｉｇタンパク質について温度対蛍光としてプロットされた。融解の開始は、サーモグラムがベースライン蛍光を超えて上昇する温度として記述された。ＳＹＰＲＯオレンジは疎水性色素であり、アンフォールディングタンパク質分子中の露出された疎水性残基に優先的に結合する。したがって、アンフォールディング温度の開始は、蛍光の増加によって測定され、ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の熱安定性の指標である。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質のアンフォールディング温度は、表１１に見出すことができる。
【０２４０】
【表１３】
2015508994.tif 000058
【０２４１】
大部分のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、アンフォールディング温度＞５０を示した。このＤＶＤ−Ｉｇタンパク質プロファイルは、親抗体について観察されたプロファイルと同様である。
【０２４２】
溶解度決定
ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質候補は、１５ｍＭのＨｉｓ（ｐＨ６．０）中で透析された。これに続いて、３０Ｋカットオフを有するセントリコンにおいて５０μｌまでそれらを濃縮した。溶解度は、４℃での保存後、沈殿が存在しないことによって視覚的に確認し、２８０ｎｍでＵＶ吸光度を測定することによって定量的に決定された。
【０２４３】
【表１４】
2015508994.tif 000059
【０２４４】
大部分のＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、透明な外観を示し、２５ｍｇ／ｍｌを超えて濃縮され得た。このＤＶＤ−Ｉｇタンパク質プロファイルは、親抗体について観察されたプロファイルと同様である。
【０２４５】
参照による援用
本出願を通して引用されてもよい、すべての引用される参考資料（参考文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含む）の内容は、これによって、これらの参考資料がそこに記載されているかのように、いずれかの目的で参考資料の全体を参照することにより明確に援用される。本開示は、別段の記載がない限り、当該技術分野において周知である免疫学、分子生物学および細胞生物学の従来技術を使用する。
【０２４６】
本開示は、分子生物学および薬物送達の分野で周知の技術全体も、参照により組み込む。これらの技術には、以下の公報に記載されている技術が含まれるが、これに限定されるものではない。
Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆Ｓｏｎｓ，  ＮＹ  （１９９３）．
Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．，  Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （４ｔｈ  Ｅｄ．  １９９９）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ＮＹ．  （ＩＳＢＮ  ０−４７１−３２９３８−Ｘ）．
Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，  Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  （ｅｄｓ．），  Ｗｉｌｅｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４）；  
Ｇｉｅｇｅ，  Ｒ．  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，  Ａ．  Ｂａｒｒｅｔｔ，  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  ２ｎｄ  ｅａ．，  ｐｐ．  ２０  １−１６，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  （１９９９）；
Ｇｏｏｄｓｏｎ，  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ｖｏｌ．  ２，  ｐｐ．  １１５−１３８  （１９８４）；
Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ：  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１  （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８１；
Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．  １９８８）；  
Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．  （１９８７）  ａｎｄ  （１９９１）；
Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２；
Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  （２００１）  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．  ７９０  ｐｐ．  （ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）．
Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ  （１９９０）；
Ｌｕ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｄｓ．，  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  （２００１）  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｐｒｅｓｓ．  Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，  ＭＡ．  ２９８  ｐｐ．  （ＩＳＢＮ  １−８８１２９９−２１−Ｘ）．
Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌａ．  （１９７４）；  
Ｏｌｄ，  Ｒ．Ｗ．  ＆  Ｓ．Ｂ．  Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：  Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  （３ｄ  Ｅｄ．  １９８５）  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｂｏｓｔｏｎ．  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；  Ｖ．２：４０９  ｐｐ．  （ＩＳＢＮ  ０−６３２−０１３１８−４）．
Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （２ｄ  Ｅｄ．  １９８９）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ．  Ｖｏｌｓ．  １−３．  （ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６）．
Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８
Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，  Ｅ．Ｌ．  Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ：  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  （１９８７）  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  ＮＹ  （ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｂｙ  Ｈｏｒｓｔ  Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ）．  ６３４  ｐｐ．  （ＩＳＢＮ  ０−８９５７３−６１４−４）．
【０２４７】
均等
本開示は、その精神または本質的な特徴から逸脱せずに他の具体的な形態で実施することができる。したがって、前述の実施形態は、本開示を限定するというよりはむしろ、すべての点において例示していると考えるべきである。よって、本開示の範囲は、前述の記載によるというよりはむしろ、添付される特許請求の範囲によって示され、したがって、特許請求の範囲の意味および均等の範囲内にあるすべての変更は本明細書に包含されることが意図される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一および第二のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、各ポリペプチド鎖は独立してＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は、第一の可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、および
ｎは、０または１であり、
第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ１ドメインが、第一の機能的標的結合部位を形成し、第一および第二のポリペプチド鎖上のＶＤ２ドメインが、第二の機能的標的結合部位を形成し、結合タンパク質がＩＬ−１３およびＩＬ−１７を結合することができ、
ａ）ＩＬ−１３に関する機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０からのＣＤＲ１−３と配列番号３１からのＣＤＲ１−３、
配列番号３２からのＣＤＲ１−３と配列番号３３からのＣＤＲ１−３、もしくは
配列番号３４からのＣＤＲ１−３と配列番号３５からのＣＤＲ１−３
を含み、ならびに
ｂ）ＩＬ−１７に関する機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３６からのＣＤＲ１−３と配列番号３７からのＣＤＲ１−３、
配列番号３８からのＣＤＲ１−３と配列番号３９からのＣＤＲ１−３、
配列番号４０からのＣＤＲ１−３と配列番号４１からのＣＤＲ１−３、
配列番号４２からのＣＤＲ１−３と配列番号５２からのＣＤＲ１−３、
配列番号４２からのＣＤＲ１−３と配列番号５３からのＣＤＲ１−３、
配列番号４３からのＣＤＲ１−３と配列番号５０からのＣＤＲ１−３、
配列番号４４からのＣＤＲ１−３と配列番号５１からのＣＤＲ１−３、
配列番号４５からのＣＤＲ１−３と配列番号５４からのＣＤＲ１−３、
配列番号４６からのＣＤＲ１−３と配列番号５１からのＣＤＲ１−３、
配列番号４７からのＣＤＲ１−３と配列番号５４からのＣＤＲ１−３、
配列番号４８からのＣＤＲ１−３と配列番号５１からのＣＤＲ１−３、または
配列番号４９からのＣＤＲ１−３と配列番号５１からのＣＤＲ１−３
を含む、結合タンパク質。
【請求項２】
ＩＬ−１３とＩＬ−１７を結合することができ、
ａ）ＩＬ−１３に関する機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３０と配列番号３１、
配列番号３２と配列番号３３、または
配列番号３４と配列番号３５を含み、および
ｂ）ＩＬ−１７に関する機能的標的結合部位を形成する可変ドメインが、
配列番号３６と配列番号３７、
配列番号３８と配列番号３９、
配列番号４０と配列番号４１、
配列番号４２と配列番号５２、
配列番号４２と配列番号５３、
配列番号４３と配列番号５０、
配列番号４４と配列番号５１、
配列番号４５と配列番号５４、
配列番号４６と配列番号５１、
配列番号４７と配列番号５４、
配列番号４８と配列番号５１、または
配列番号４９と配列番号５１
を含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３】
第一および第二のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第一のポリペプチド鎖が、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は、第一の重鎖可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の重鎖可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、
Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、および
ｎは、０または１であり、
第二のポリペプチド鎖が、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎを含み、
ＶＤ１は、第一の軽鎖可変ドメインであり、
ＶＤ２は、第二の軽鎖可変ドメインであり、
Ｃは、定常ドメインであり、
Ｘ１は、リンカーであり、
（Ｘ１）ｎの場合、ｎは、０または１であり、および
（Ｘ２）ｎの場合、ｎは、０である、
請求項１または２に記載の結合タンパク質。
【請求項４】
２つの第一のポリペプチド鎖および２つの第二のポリペプチド鎖ならびに４つの機能的標的結合部位を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
ＤＶＤ２１４８Ｈ（配列番号３０、２１および３６を含む）およびＤＶＤ２１４８Ｌ（配列番号３１、１３および３７を含む）；
ＤＶＤ２１４９Ｈ（配列番号３６、２１および３０を含む）およびＤＶＤ２１４９Ｌ（配列番号３７、１３および３１を含む）；
ＤＶＤ２１５０Ｈ（配列番号３０、２１および３６を含む）およびＤＶＤ２１５０Ｌ（配列番号３１、１４および３７を含む）；
ＤＶＤ２１５１Ｈ（配列番号３６、２１および３０を含む）およびＤＶＤ２１５１Ｌ（配列番号３７、１４および３１を含む）；
ＤＶＤ２１５２Ｈ（配列番号３０、２２および３６を含む）およびＤＶＤ２１５２Ｌ（配列番号３１、１３および３７を含む）；
ＤＶＤ２１５３Ｈ（配列番号３６、２２および３０を含む）およびＤＶＤ２１５３Ｌ（配列番号３７、１３および３１を含む）；
ＤＶＤ２１５４Ｈ（配列番号３０、２１および３８を含む）およびＤＶＤ２１５４Ｌ（配列番号３１、１３および３９を含む）；
ＤＶＤ２１５５Ｈ（配列番号３８、２１および３０を含む）およびＤＶＤ２１５５Ｌ（配列番号３９、１３および３１を含む）；
ＤＶＤ２１５６Ｈ（配列番号３０、２１および３８を含む）およびＤＶＤ２１５６Ｌ（配列番号３１、１４および３９を含む）；
ＤＶＤ２１５７Ｈ（配列番号３８、２１および３０を含む）およびＤＶＤ２１５７Ｌ（配列番号３９、１４および３１を含む）；
ＤＶＤ２１５８Ｈ（配列番号３０、２２および３８を含む）およびＤＶＤ２１５８Ｌ（配列番号３１、１３および３９を含む）；
ＤＶＤ２１５９Ｈ（配列番号３８、２２および３０を含む）およびＤＶＤ２１５９Ｌ（配列番号３９、１３および３１を含む）；
ＤＶＤ２１６０Ｈ（配列番号３０、２１および４０を含む）およびＤＶＤ２１６０Ｌ（配列番号３１、１３および４１を含む）；
ＤＶＤ２１６１Ｈ（配列番号４０、２１および３０を含む）およびＤＶＤ２１６１Ｌ（配列番号４１、１３および３１を含む）；
ＤＶＤ２１６２Ｈ（配列番号３０、２１および４０を含む）およびＤＶＤ２１６２Ｌ（配列番号３１、１４および４１を含む）；
ＤＶＤ２１６３Ｈ（配列番号４０、２１および３０を含む）およびＤＶＤ２１６３Ｌ（配列番号４１、１４および３１を含む）；
ＤＶＤ２１６４Ｈ（配列番号３０、２２および４０を含む）およびＤＶＤ２１６４Ｌ（配列番号３１、１３および４１を含む）；
ＤＶＤ２１６５Ｈ（配列番号４０、２２および３０を含む）およびＤＶＤ２１６５Ｌ（配列番号４１、１３および３１を含む）；
ＤＶＤ２１６６Ｈ（配列番号３２、２１および３６を含む）およびＤＶＤ２１６６Ｌ（配列番号３３、１３および３７を含む）；
ＤＶＤ２１６７Ｈ（配列番号３６、２１および３２を含む）およびＤＶＤ２１６７Ｌ（配列番号３７、１３および３３を含む）；
ＤＶＤ２１６８Ｈ（配列番号３２、２１および３６を含む）およびＤＶＤ２１６８Ｌ（配列番号３３、１４および３７を含む）；
ＤＶＤ２１６９Ｈ（配列番号３６、２１および３２を含む）およびＤＶＤ２１６９Ｌ（配列番号３７、１４および３３を含む）；
ＤＶＤ２１７０Ｈ（配列番号３２、２２および３６を含む）およびＤＶＤ２１７０Ｌ（配列番号３３、１３および３７を含む）；
ＤＶＤ２１７１Ｈ（配列番号３６、２２および３２を含む）およびＤＶＤ２１７１Ｌ（配列番号３７、１３および３３を含む）；
ＤＶＤ２１７２Ｈ（配列番号３２、２１および３８を含む）およびＤＶＤ２１７２Ｌ（配列番号３３、１３および３９を含む）；
ＤＶＤ２１７３Ｈ（配列番号３８、２１および３２を含む）およびＤＶＤ２１７３Ｌ（配列番号３９、１３および３３を含む）；
ＤＶＤ２１７４Ｈ（配列番号３２、２１および３８を含む）およびＤＶＤ２１７４Ｌ（配列番号３３、１４および３９を含む）；
ＤＶＤ２１７５Ｈ（配列番号３８、２１および３２を含む）およびＤＶＤ２１７５Ｌ（配列番号３９、１４および３３を含む）；
ＤＶＤ２１７６Ｈ（配列番号３２、２２および３８を含む）およびＤＶＤ２１７６Ｌ（配列番号３３、１３および３９を含む）；
ＤＶＤ２１７７Ｈ（配列番号３８、２２および３２を含む）およびＤＶＤ２１７７Ｌ（配列番号３９、１３および３３を含む）；
ＤＶＤ２１７８Ｈ（配列番号３２、２１および４０を含む）およびＤＶＤ２１７８Ｌ（配列番号３３、１３および４１を含む）；
ＤＶＤ２１７９Ｈ（配列番号４０、２１および３２を含む）およびＤＶＤ２１７９Ｌ（配列番号４１、１３および３３を含む）；
ＤＶＤ２１８０Ｈ（配列番号３２、２１および４０を含む）およびＤＶＤ２１８０Ｌ（配列番号３３、１４および４１を含む）；
ＤＶＤ２１８１Ｈ（配列番号４０、２１および３２を含む）およびＤＶＤ２１８１Ｌ（配列番号４１、１４および３３を含む）；
ＤＶＤ２１８２Ｈ（配列番号３２、２２および４０を含む）およびＤＶＤ２１８２Ｌ（配列番号３３、１３および４１を含む）；
ＤＶＤ２１８３Ｈ（配列番号４０、２２および３２を含む）およびＤＶＤ２１８３Ｌ（配列番号４１、１３および３３を含む）；
ＤＶＤ２１８４Ｈ（配列番号３４、２１および３６を含む）およびＤＶＤ２１８４Ｌ（配列番号３５、１３および３７を含む）；
ＤＶＤ２１８５Ｈ（配列番号３６、２１および３４を含む）およびＤＶＤ２１８５Ｌ（配列番号３７、１３および３５を含む）；
ＤＶＤ２１８６Ｈ（配列番号３４、２１および３６を含む）およびＤＶＤ２１８６Ｌ（配列番号３５、１４および３７を含む）；
ＤＶＤ２１８７Ｈ（配列番号３６、２１および３４を含む）およびＤＶＤ２１８７Ｌ（配列番号３７、１４および３５を含む）；
ＤＶＤ２１８８Ｈ（配列番号３４、２２および３６を含む）およびＤＶＤ２１８８Ｌ（配列番号３５、１３および３７を含む）；
ＤＶＤ２１８９Ｈ（配列番号３６および３４を含む）およびＤＶＤ２１８９Ｌ（配列番号３７および３５を含む）；
ＤＶＤ２１９０Ｈ（配列番号３４、２１および３８を含む）およびＤＶＤ２１９０Ｌ（配列番号３５、１３および３９を含む）；
ＤＶＤ２１９１Ｈ（配列番号３８、２１および３４を含む）およびＤＶＤ２１９１Ｌ（配列番号３９、１３および３５を含む）；
ＤＶＤ２１９２Ｈ（配列番号３４、２１および３８を含む）およびＤＶＤ２１９２Ｌ（配列番号３５、１４および３９を含む）；
ＤＶＤ２１９３Ｈ（配列番号３８、２１および３４を含む）およびＤＶＤ２１９３Ｌ（配列番号３９、１４および３５を含む）；
ＤＶＤ２１９４Ｈ（配列番号３４、２２および３８を含む）およびＤＶＤ２１９４Ｌ（配列番号３５、１３および３９を含む）；
ＤＶＤ２１９５Ｈ（配列番号３８、２２および３４を含む）およびＤＶＤ２１９５Ｌ（配列番号３９、１３および３５を含む）；
ＤＶＤ２１９６Ｈ（配列番号３４、２１および４０を含む）およびＤＶＤ２１９６Ｌ（配列番号３５、１３および４１を含む）；
ＤＶＤ２１９７Ｈ（配列番号４０、２１および３４を含む）およびＤＶＤ２１９７Ｌ（配列番号４１、１３および３５を含む）；
ＤＶＤ２１９８Ｈ（配列番号３４、２１および４０を含む）およびＤＶＤ２１９８Ｌ（配列番号３５、１４および４１を含む）；
ＤＶＤ２１９９Ｈ（配列番号４０、２１および３４を含む）およびＤＶＤ２１９９Ｌ（配列番号４１、１４および３５を含む）；
ＤＶＤ２２００Ｈ（配列番号３４、２２および４０を含む）およびＤＶＤ２２００Ｌ（配列番号３５、１３および４１を含む）；
またはＤＶＤ２２０１Ｈ（配列番号４０、２２および３４を含む）およびＤＶＤ２２０１Ｌ（配列番号４１、１３および３５を含む）
を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【請求項６】
ａ）Ｘ１が、配列番号１−２９のいずれか１つであり、
ｂ）Ｘ１が、ＣＨ１またはＣＬではなく、
ｃ）Ｆｃ領域が、バリアント配列Ｆｃ領域であり、
ｄ）Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥもしくはＩｇＤ由来のＦｃ領域であり、および／または
ｅ）結合タンパク質が、結晶化された結合タンパク質である、請求項１から４のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【請求項７】
ａ）直接結合ＥＬＩＳＡによって測定された場合に、最大約２．４４２ｎＭのＩＣ５０、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約２．１０×１０４Ｍ−１ｓ−１の結合速度定数（Ｋｏｎ）、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約１．４０×１０−４ｓ−１の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）、および／または表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約１．１０×１０−１０Ｍの解離定数（ＫＤ）でＩＬ−１３に結合することができ、ならびに／もしくは
ｂ）直接結合ＥＬＩＳＡによって測定された場合に、最大約０．７０３４ｎＭのＩＣ５０、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約６．８０×１０３Ｍ−１ｓ−１の結合速度定数（Ｋｏｎ）、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約１．７０×１０−４ｓ−１の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）、および／または表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約２．６０×１０−８Ｍの解離定数（ＫＤ）でＩＬ−１７に結合することができる、請求項１から６のいずれか一項に記載の結合タンパク質。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含む、結合タンパク質コンジュゲートであって、免疫接着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｎｓｉｏｎ）分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤である薬剤をさらに含み、
ａ）造影剤が場合によって放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンであり；場合によって、前記放射性標識が３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍであり、または
ｂ）治療剤または細胞毒性剤が場合によって代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である、結合タンパク質コンジュゲート。
【請求項９】
請求項１から７のいずれか一項に記載の結合タンパク質のアミノ酸配列をコードする単離された核酸。
【請求項１０】
請求項９に記載の単離された核酸を含むベクターであって、場合によって、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐｃＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ、ｐＥＦ６  ＴＯＰＯ、ｐＨｙｂＥ、ｐＢＯＳおよびｐＢＪから選択される、ベクター。
【請求項１１】
請求項１０に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１２】
原核細胞、エシュリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、真核細胞、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、Ｓｆ９細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、ＣＨＯ細胞またはＣＯＳ細胞である、請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１３】
結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、培地中で請求項１１または請求項１２に記載の宿主細胞を培養することを含む、結合タンパク質を産生する方法。
【請求項１４】
請求項１から７のいずれか一項に記載の結合タンパク質または請求項８に記載の結合タンパク質コンジュゲートと、医薬として許容される担体と、を含む医薬組成物。
【請求項１５】
少なくとも１つの追加の治療剤をさらに含む、請求項１４に記載の医薬組成物であって、追加の治療剤が、場合によって、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断剤；接着分子遮断剤；抗サイトカイン抗体またはその機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストである、医薬組成物。
【請求項１６】
疾患または障害について対象を治療するための医薬の製造における、請求項１から７のいずれか一項に記載の結合タンパク質の使用であって、前記障害が、場合によって関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型、多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニア関連関節炎、サルモネラ関連関節炎、アテローム性疾患、アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎関連肺疾患、多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性、男性不���症ＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害、うつ病、統合失調症、Ｔｈ２型およびＴｈ１型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛、疼痛の異なる形態、癌、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、造血性悪性病変、白血病、リンパ腫、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性細菌感染、慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、大動脈瘤、末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、持続的心房細動、発作性心房細動、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈ���ｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器の移植片拒絶、いずれかの組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、Ａ型肝炎、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎、ブドウ膜炎、視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ．ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性、メンセル変性、デジェリーヌ−トーマス変性、シャイ−ドレーガー変性、マシャド−ジョセフ変性、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失��、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷、出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス感染、真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）、無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器の異種移植拒絶、いずれかの組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ｃｉｓ）、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病またはクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ  ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発
性動脈炎、結節性動脈周囲炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）、原発性パーキンソニズム、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ｓａｐｈｏ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎）、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性または創傷治癒である、使用。
【請求項１７】
医薬が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮投与のために製剤化される、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
イムノアッセイによって、試験試料中の少なくとも１つの標的またはその断片の存在、量または濃度を決定する方法であって、
イムノアッセイは、試験試料を少なくとも１つの結合タンパク質および少なくとも１つの検出可能な標識と接触させることを含み、
少なくとも１つの結合タンパク質は、請求項１から７のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含む、方法。
【請求項１９】
さらに、
ａ）試験試料を、標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの結合タンパク質と接触させて、第一の複合体を形成すること、
ｂ）前記複合体を、結合タンパク質に結合するか或いは結合タンパク質によっては結合されない標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの検出可能な標識と接触させて、第二の複合体を形成すること、および
ｃ）第二の複合体における検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、試験試料中の標的またはその断片の存在、量または濃度を検出すること
を含み、
標的またはその断片の存在、量または濃度が、検出可能な標識によって発生したシグナルに直接的に相関する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
さらに、
ａ）試験試料を、標的またはその断片上のエピトープに結合する少なくとも１つの結合タンパク質と接触させて、第一の複合体を形成すること、
ｂ）前記複合体を、前記結合タンパク質への結合について標的またはその断片と競合する少なくとも１つの検出可能な標識と接触させて、第二の複合体を形成すること、および
ｃ）第二の複合体における検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、試験試料中の標的またはその断片の存在、量または濃度を検出すること
を含み、
標的またはその断片の存在、量または濃度が、検出可能な標識によって発生したシグナルに間接的に相関する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
標的またはその断片の存在、量、または濃度について試験試料をアッセイするためのキットであって、
ａ）標的またはその断片について試験試料をアッセイするための説明書、および
ｂ）請求項１から７のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含む少なくとも１つの結合タンパク質
を含む、キット。
【国際調査報告】
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