(57)【要約】  本明細書では、侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）の診断、治療及び治療の監視方法について記載されている。この方法には、ＩＡ罹患の疑いのある被験体の呼気中での１つ以上の揮発性有機化合物（ＶＯＣ）の存在を検出することを含むことができる。
2015534053.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）の被験体の診断方法であって、
被験体の呼気を含むサンプル又は被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプルを得ること、
前記被験体の呼気を含むサンプル又は前記被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプル中で、前記Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種により産出された揮発性有機化合物（ＶＯＣ）の１つ、２つ、３つ又はそれ以上の前記サンプル中の存在を検出すること、
前記サンプル中に前記ＶＯＣの１つ、２つ、３つ又はそれ以上が存在する場合、被験体をＩＡを有すると診断すること、
を含み、
前記ＶＯＣは、ファルネセン、β−バチレネン、ｃｉｓ−ゲラニルアセトン、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンからなる群から選択される、前記方法。
【請求項２】
ファルネセン、β−バチレネン及びｃｉｓ−ゲラニルアセトンからなる群から選択される１つ、２つ又は３つの前記ＶＯＣサンプル中での存在を検出すること及び前記サンプル中にファルネセン、β−バチレネン及びｃｉｓ−ゲラニルアセトンの１つ、２つ又は３つすべてを有するＩＡを有する被験体を診断することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）を有する被験体の治療方法であって、
被験体の呼気を含むサンプル又は被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプルを得ること、
ファルネセン、β−バチレネン及びｃｉｓ−ゲラニルアセトンからなる群から選択される１つ、２つ又は３つのＶＯＣの前記サンプル中での存在を検出すること、
呼気にファルネセン、β−バチレネン、ｃｉｓ−ゲラニルアセトンの１つ、２つ又は３つすべてが含まれる被験体に抗真菌治療を行うこと、を含む、前記方法。
【請求項４】
前記治療は、１種以上の抗真菌薬の１つ以上の投与量を投与することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
被験体におけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ、又はＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ感染の存在の検出方法であって、
被験体の呼気を含むサンプル又は被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプルを得ること、
前記サンプル中において、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンからなる群から選択される１つ、２つ、３つ又はそれ以上の、例えば、すべてのＶＯＣの存在を検出すること、
を含む前記方法であって、
カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン又はファルネセンの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべての存在がＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ感染の存在が示し、
エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン及び１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエンの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべての存在がＡ．ｔｅｒｒｅｕｓ感染の存在を示し、
９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンの１つ又は両方の存在が前記被験体におけるＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ感染の存在を示す、前記方法。
【請求項６】
Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ又はＡ．ｔｅｒｒｅｕｓ感染を有する被験体に対して、例えばボリコナゾールなどのアゾールを含む治療を選択すること及び任意により行うこと、又は
Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ感染を保有する被験体にアムホテリシンＢ（ＡＭＢ）（例えば、Ｄ−ＡＭＢ又は脂質製剤ＡＭＢ）を含む療法を選択すること、及び任意により行うこと、
を更に含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
被験体における侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）の治療有効性の監視方法であって、
前記被験体の呼気を含むサンプル中又は前記被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプルにおいて、前記Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種によって生成された１つ、２つ、３つ又はそれ以上の揮発性有機化合物（ＶＯＣ）の第一濃度を求めること、
前記被験体に対して、ＩＡの治療を行うこと、
前記被験体に治療後、得られたサンプル中の前記ＶＯＣの第二濃度を決定すること、
ＶＯＣの前記第一濃度と第二濃度とを比較すること、
を含む方法であって、
前記ＶＯＣは、前記被験体中において、ファルネセン、β−バチレネン、ｃｉｓ−ゲラニルアセトン、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンからなる群から選択され、
前記ＶＯＣの減少は前記ＩＡ被験体の治療において治療が有効であったことを示し、前記ＶＯＣの上昇又は変化がない場合には前記ＩＡ被験体の治療において前記治療が奏功なかったことを示す、前記方法。
【請求項８】
前記治療は１種以上の抗真菌薬の１つ以上の投与量を投与することを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ＩＡ治療用の候補化合物の同定方法であって、
１つ以上のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種を含む試験培養液を提供すること、
前記試験化合物がない状態で、前記培養液の前記ヘッドスペース中の真菌ＶＯＣのベースライン値を検出すること、
前記試験培養液を試験化合物と接触させること、
前記試験培養液中の前記ＶＯＣの第二濃度を求めること、
ＶＯＣの前記第二濃度と前記ベースライン値とを比較すること、及び
前記ＩＡ治療の候補化合物として、前記試験培養液中の真菌ＶＯＣ濃度を減少させる試験化合物を同定すること、
を含む方法であって、
前記ＶＯＣは、前記被験体中において、ファルネセン、β−バチレネン、ｃｉｓ−ゲラニルアセトン、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンからなる群から選択される、前記方法。
【請求項１０】
培養液におけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ、又はＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ感染の存在の検出方法であって、
前記培養液からのサンプル、例えば前記培養液のヘッドスペースからのガスを得ること、
前記サンプル中において、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンからなる群から選択される前記ＶＯＣの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えば、すべての前記存在を検出すること、
を含む前記方法であって、
カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン又はファルネセンの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべての存在が前記培養液中のＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓの存在を示し、
エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン及び１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエンの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべての存在が前記培養液中のＡ．ｔｅｒｒｅｕｓの前記存在を示し、
９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンの１つ又は両方の存在が前記培養液中のＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓの存在を示す、前記方法。
【請求項１１】
ＶＯＣの前記存在を検出することには、前記ＶＯＣの前記存在を検出するために、前記サンプルのアッセイを行うことを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＶＯＣの存在を検出するために前記サンプルをアッセイすることに、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）又は分光測定法を使用することを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記分光測定法は移動度分光法（ＩＭＳ）又は示差移動度分光法（ＤＭＳ）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記被験体はヒトである、請求項１〜１０、１２又は１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記被験体はヒトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗真菌薬は、アンホテリシンＢ製剤、アゾール抗真菌薬又はエキノカンディン抗真菌薬である、請求項４又は８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、２０１２年９月７日に出願された米国特許仮出願第６１／６９８，１５５号の利益を主張する。前述の出願の内容全体が参考として本明細書に援用される。
【０００２】
連邦政府資金による研究開発
本発明は、米国国立保健研究所によって認められた認可番号第Ｒ２１ＡＩ０８５４５４号、第Ｋ２３ＡＩ０９７２２５号及び第８ＵＬ１ＴＲ０００１７０号において、政府支援の下でなされた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
本明細書では、侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）の診断、治療及び治療の監視方法が提供される。この方法には、ＩＡ罹患の疑いのある被験体の呼気中での１つ以上の揮発性有機化合物（ＶＯＣ）の存在を検出することを含むことができる。
【背景技術】
【０００４】
ＩＡは、免疫不全患者、特に化学療法誘発性好中球減少症患者又は移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）のグルココルチコイド治療を受けた結果による免疫抑制患者において、一般的であり、急速に進行し、罹病率が高く、高い頻度で致死性感染症となる疾患である。適時に診断され、適切な抗真菌療法が迅速に開始されることにより、臨床転帰が改善される。しかし、臨床上及びＸ線撮影による症状発現は非特異的であり、標準的培養及び抗原診断法では、ＩＡに対する感度及び特異性に欠ける。確定診断は、依然として生検に依存しているが、多くの場合、これらの衰弱している患者においては、受け入れ難いほどの疾患となり、高い頻度で無益である。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書に記載されるように、本発明者は、（１）Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓによって産生される揮発性有機化合物（ＶＯＣ）及び病原菌種を互いに区別するために使用可能なｉｎ  ｖｉｔｒｏでのその他の病原菌類の独自の種特異的特性の同定を行い、（２）これらの種特異的ＶＯＣプロファイルのパターン検出を用いて真菌類の迅速な区別のために、示差移動度分析計（ＤＭＳ）を使用できることを示し、（３）呼気中におけるファルネセン、β−バチレネン及びｃｉｓ−ゲラニルアセトンの組み合わせなどのＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓＶＯＣパターンの直接解析により、侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）患者を正確に同定した。
【０００６】
第１の態様では、このように、本発明は、侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）被験体の診断方法を提供する。本方法は、被験体の呼気を含むサンプル又は被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプルを得ること、被験体の呼気を含むサンプル又は被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプルにおいて、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種から産生された１つ、２つ、３つ又はそれ以上の揮発性有機化合物（ＶＯＣ）のサンプルの存在を検出すること、及びサンプル中における１つ、２つ、３つ又はそれ以上のＶＯＣの存在（すなわち存在する場合）に基づいて、ＩＡ被験体を診断すること、を含み、ＶＯＣは、ファルネセン、β−バチレネン、ｃｉｓ−ゲラニルアセトン、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレン、からなる群から選択される。
【０００７】
いくつかの実施形態では、本方法には、ファルネセン、β−バチレネン及びｃｉｓ−ゲラニルアセトンからなる群から選択される１つ、２つ又は３つのＶＯＣサンプル中での存在を検出すること及びＩＡ含有サンプル中に１つ、２つ又は３つすべてのファルネセン、β−バチレネン及びｃｉｓ−ゲラニルアセトンを有する被験体を診断すること、を含む。好ましい実施態様では、ＩＡの診断は、サンプル中にＶＯＣファルネセン、β−バチレネン及びｃｉｓ−ゲラニルアセトンの３つすべてが存在していることに基づく。
【０００８】
別の態様では、本発明は、侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）被験体の治療方法を提供する。本方法は、被験体の呼気を含むサンプル又は被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプルを得ること、ファルネセン、β−バチレネン及びｃｉｓ−ゲラニルアセトンからなる群から選択される１つ、２つ又は３つのＶＯＣサンプル中での存在を検出すること、及び呼気にファルネセン、β−バチレネン、ｃｉｓ−ゲラニルアセトンの１つ、２つ又は３つすべてが含まれる被験体に抗真菌治療を行うこと、を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本治療には、１種以上の投与量の１種以上の抗真菌薬（例えば、アンホテリシンＢ製剤）、アゾール化合物及びエキノカンディンを投与することを含む。
【００１０】
別の態様では、本発明は、被験体におけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ、又はＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ感染の存在の検出方法を提供する。本方法は、被験体の呼気を含むサンプル又は被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプルを得ること、及びサンプル中において、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンからなる群から選択されるＶＯＣの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えば、すべての存在を検出すること、を含む。カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン又はファルネセンの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべてが存在することから、被験体中のＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ感染の存在が示唆され、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、及び１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエンが１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべてが存在することから、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ感染の存在が示唆され、かつ、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンのいずれか一方又は両方が存在することから、Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ感染の存在が示唆される。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本方法は、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ感染又はＡ．ｔｅｒｒｅｕｓ感染を保有する被験体に対して、アゾール（例えば、ボリコナゾール）を含む療法を選択すること、及び所望により行うことを含むか、又は、Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ感染を保有する被験体に対して、アムホテリシンＢ（ＡＭＢ）（例えば、Ｄ−ＡＭＢ）又は脂質製剤ＡＭＢを含む療法を選択すること、及び所望により行うことを含む。
【００１２】
別の態様では、本発明は、被験体における侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）の治療有効性の監視方法を提供する。本方法には、被験体からの呼気を含むサンプル又は被験体から分離されたＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含む疑いのある懸濁培養液のヘッドスペースを含むサンプルにおいて、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種によって作製された揮発性有機化合物（ＶＯＣ）の１つ、２つ又は３つ又はそれ以上の第一濃度を決定すること、ＩＡ被験体に治療を行うこと、被験体に治療後、得られたサンプル中のＶＯＣの第二濃度を決定すること、及びＶＯＣの第一濃度と第二濃度とを比較すること、を含み、ここで、ＶＯＣは、被験体中のファルネセン、β−バチレネン、ｃｉｓ−ゲラニルアセトン、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンからなる群から選択される。ＶＯＣの減少は、ＩＡ被験体の治療において治療が有効であったことを示し、ＶＯＣの上昇又は変化がない場合には、ＩＡ被験体の治療において治療が奏功なかったことを示す。
【００１３】
いくつかの実施形態では、本治療には、１種以上の投与量の１種以上の抗真菌薬（例えば、アンホテリシンＢ製剤）、アゾール化合物及びエキノカンディンを投与することを含む。
【００１４】
更に別の態様では、本発明は、ＩＡ治療の候補化合物の同定方法を提供する。本方法は、１つ以上のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種を含む試験培養液を提供すること、試験化合物がない状態で、培養液ヘッドスペース中の真菌ＶＯＣのベースライン値を検出すること、試験培養液と試験化合物とを接触させること、試験培養液中におけるＶＯＣの第二濃度を決定すること、ＶＯＣの第二濃度とベースライン値とを比較すること、及びＩＡ治療の候補化合物として、試験培養中での真菌ＶＯＣ濃度を低下させる試験化合物を同定すること、を含み、ここで、被験体において、ＶＯＣは、ファルネセン、β−バチレネン、ｃｉｓ−ゲラニルアセトン、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンからなる群から選択される。
【００１５】
別の態様では、本発明は、培養液中におけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ、又はＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ感染の存在の検出方法を提供する。本方法は、ガスなどの培養液のサンプル及び培養液のヘッドスペースのサンプルを得ること及びサンプル中において、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンからなる群から選択されるＶＯＣの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべての存在を検出すること、を含む。カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン又はファルネセンの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えば、すべてが存在することから、培養液中のＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓの存在が示唆され、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、及び１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエンが１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべてが存在することから、培養液中のＡ．ｔｅｒｒｅｕｓの存在が示唆され、かつ、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンのいずれか１つ又は両方が存在することから、培養液中のＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓの存在が示唆される。
【００１６】
本明細書において記載されている各種の方法のいくつかの実施形態では、ＶＯＣの存在を判断することには、サンプルのアッセイを行って、ＶＯＣの存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、サンプルをアッセイして、ＶＯＣの存在を検出することには、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）又は分光測定法を使用することを含む。いくつかの実施形態では、分光測定法は、移動度分光法（ＩＭＳ）又は示差移動度分光法（ＤＭＳ）である。
【００１７】
本明細書において記載されている各種の方法のいくつかの実施形態では、被験体は、ヒトである。
【００１８】
別に定義されていない限り、本発明の属する当業者に一般に理解されるとおり、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、同一の意味を有する。本発明において使用する方法及び材料は、本明細書に記載され、その他、当業者に既知の好適な方法及び材料を使用することもできる。材料、方法及び実施例は、例示のみを目的とするものであり、限定することを意図してはいない。本明細書に記載されたすべての刊行物、特許出願、特許、配列、データベース登録及びその他の参照は、全体として本明細書に参考として組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含む本明細書が管理するものとなる。
【００１９】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態と図から、及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養液のヘッドスペースガス又は患者の呼気からのＶＯＣの収集、昇温脱離トラップでのＶＯＣ濃度、ＧＣでの昇温脱離及びデュアル質量分析／示差移動度分光システムでの並列データの取得を示す図である。
【図２Ａ】Ａ）ＹＰＤ媒体において、９６時間でＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ対照株及び臨床株のＧＣ−ＭＳにより生じた全イオンクロマトグラム（ＴＩＣ）であり、種内のＶＯＣプロファイルの再現性を示す。
【図２Ｂ】Ｂ）種間ＶＯＣプロファイルの不均質性を示す一般的な病原真菌類のＧＣ−ＭＳ  ＴＩＣである。
【図３】Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓのＶＯＣプロファイルの重要な特徴：Ａ．カンフェン、Ｂ．α−ピネン、Ｃ．β−ピネン、Ｄ．リモネン、Ｅ．α−ベルガモテン及びＦ．ファルネセン。
【図４】Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓのＶＯＣプロファイルの重要な特徴：Ａ．エリキセン、Ｂ．α−サンタレン、Ｃ．β−エレメン、Ｄ．アコラジエン、Ｅ．カミグレン及びＦ．１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン。
【図５】Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓのＶＯＣプロファイルの重要な特徴：Ａ．９−デセン−２−オン、Ｂ．β−セスキフェランドレン。
【図６】菌糸増殖に伴うＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓのＶＯＣ放散速度論。
【図７】菌糸増殖に伴うＡ．ｔｅｒｒｅｕｓのＶＯＣ放散速度論。
【図８】菌糸増殖に伴うＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓのＶＯＣ放散速度論。
【図９】抗真菌療法によるＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ  ＶＯＣの主要な変調。Ａ）ミカファンギンを加えたＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓのＧＣ／ＭＳ  ＴＩＣであり、２４時間での主要ＶＯＣの初期増加を示し、Ｂ）ボリコナゾールを加えたＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓのＧＣ／ＭＳ  ＴＩＣであり、２４時間での主要ＶＯＣのほぼ完全な減弱を示す図である。
【図１０】Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種の正イオンＤＭＳ分光を示す図である。Ａ）Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓの２つの要素間のＤＭＳパターンの保護、及びＢ）Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓの２つの要素間のＤＭＳパターンの保護。ＤＭＳパターンは、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓとＡ．ｔｅｒｒｅｕｓとでは明確に異なる。
【図１１】Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ及びＡ．ｔｅｒｒｅｕｓの主成分分析（ＰＣＡ）スコアプロットを示す図である。Ａ）それぞれの文字は、実験的複製された株種Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ（Ａ）及びＡ．ｔｅｒｒｅｕｓ（Ｂ）を示す。全分散率及び絶対固有値は、各軸のカッコ内に示す。Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓとＡ．ｔｅｒｒｅｕｓのＤＭＳの特徴とこれらの両種間の分離については、明確な群化が認められる。Ｂ）それぞれの文字は、実験的複製された臨床株及び培養収集株であるＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ（Ａ、Ｂ）及びＡ．ｔｅｒｒｅｕｓ（Ｃ、Ｄ）を示し、これらは、種内の明確な群化及び種間の明確な分離を伴う。
【図１２】侵襲性アスペルギルス症（黒いクロマトグラム）患者の代表的呼気サンプル及びＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ  Ａｆ２９３（逆位赤クロマトグラム）ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養のＧＣ−ＭＳ全イオンクロマトグラムのオーバレイを示す図である。
【図１３】ＩＡ患者及び非ＩＡ患者の呼気中の主要Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ  ＶＯＣの相対存在比ヒートマップを示す図である。各行は個々の患者の呼気を示し、各列は、主要Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ  ＶＯＣの１つを示す。
【図１４】抗真菌療法による呼気のＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ化合物の減弱を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
病原型により、その標準的代謝物の一部として、ＶＯＣが生成する。農業産業及び環境保健産業は、事前に微生物ＶＯＣの検出について調査し、欠陥粒子及びカビ感染「シックビル」をそれぞれを同定し、これらの分野の研究者は、これらの設定において、カビから放出されるＶＯＣ組成物の種特異差を明らかにした。
【００２２】
本明細書に記載されるように、本発明者は、これらの種を互いに及び他のカビから区別するために使用できるいくつかの揮発性テルペン及びセスキテルペン化合物を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ及びＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓの固有の種特異的ＶＯＣプロファイルを同定し、示差移動度分析計（ＤＭＳ）が、これらの種特異的ＶＯＣプロファイルのパターンに基づく同定を用いて、真菌類の迅速な区別に使用できることを示した。また、ｉｎ  ｖｉｖｏで誘発される新規Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ＶＯＣ、つまり、セスキテルペンβ−バチレネン及び酸化ファルネセン誘導ｃｉｓ−ゲラニルアセトンに加えて、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養液中で同定された主要テルペン及びセスキテルペン化合物は、ＩＡ患者の呼気中に存在した。ファルネセン、β−バチレネン及びｃｉｓ−ゲラニルアセトンの組み合わせにより、ＩＡ患者と、感受性９３％及び特異性９６％の他の原因の肺炎を有する患者とを正確に区別した。
【００２３】
これらの固有のＶＯＣプロファイルの検出は、研究所におけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ及び他のカビ種の種レベルでの同定のために、利用することができ、また、ＩＡが疑われる患者の呼気中において、これらの真菌揮発性特性を直接検出することにより、ＩＡ及びその他の真菌性肺炎の迅速、非侵襲的かつ非常に正確な種特異的診断に使用することができる。例えば、ＤＭＳ系検出法など、本明細書に記載される方法及びデバイスは、真菌代謝物のこのパターンに関して、リアルタイム患者呼気監視用に携帯用小型ベッドサイド呼気ガス検出システムに適用することができ、現在可能な診断よりも、早期のＩＡ診断、更に合理的試験に基づいて規定された抗真菌薬物治療、抗真菌薬物治療の臨床的応答の監視及び最終的に患者の転帰を良好にすることができる。
【００２４】
本明細書に記載されるように、その他の使用において、これらのＶＯＣプロファイルは以下に使用することができる。
ａ：侵襲性真菌感染のリスクのある免疫不全患者人口の増加において、侵襲性アスペルギルス症の診断及びアスペルギルス症と他の肺炎原因との区別を行うための迅速、非侵襲、感応性、種特異的呼気試験、
ｂ：奏功したＩＡの抗真菌治療を示す代理マーカー、及び
ｃ：ＶＯＣプロファイル（すなわち、サンプル中におけるＶＯＣの存在）に基づく、例えば、微生物研究所におけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種の迅速な同定及び抗真菌感受性試験。
【００２５】
侵襲性アスペルギルス症
本明細書に記載の方法を使用して、被験体中において、侵襲性アスペルギルス症（ＩＡ）を検出又は診断し、ＩＡの治療法の選択及び治療、及びＩＡ治療の監視を行うことができる。侵襲性肺アスペルギルス症、副鼻腔内又は鼻腔内アスペルギルス症、散在性アスペルギルス症及び単一器官侵襲性アスペルギルス症など、（例えば、洞／鼻／気道内の器官）（例えば、Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ２００８；  ４６：３２７-６０；Ｍｉｌｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．１９８９  Ｆｅｂｒｕａｒｙ；４２（２）：１２３-１２７参照のこと）など、異なる形態の侵襲性アスペルギルス症において、本方法を使用することができる。好ましい実施形態では、侵襲性肺アスペルギルス症被験体に本明細書に記載の方法を使用することができる。
【００２６】
サンプル
本明細書に記載の方法は、気体又は液体サンプル上で実施することができる。いくつかの実施形態では、サンプルは、直接個人から又はベンチレーターなどの人工呼気器から採取した呼気である。あるいは、本方法は、既知の又は疑われる培養液のヘッドスペースを用いて、例えば、市販の又は研究室にて培養された種、又は、例えば、患部生検（例えば、鼻腔生検、経胸郭経皮的針吸引生検又はビデオ補助胸腔鏡下生検）又は気管支肺胞洗浄液から得られた臨床サンプルなど、被験体の一次サンプルから入手した種などのＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種を対象に、実施することができる。サンプルは、好適な増殖培地に維持し、サンプル中の任意のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種を増殖及び代謝させることができる。特定の実施形態において、本発明は、被験体から臨床サンプルを採取し、例えば、マイクロ流体を用いた培地内又は例えば、従来の培養方法による培養液中に入れることを含む。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種が存在する場合は、代謝が刺激される。この代謝の結果として生じるヘッドスペース（気相）は、本明細書に記載の方法又は当業者に既知（例えば、ＵＳ２０１００２９１６１７参照）の方法を用いて、収集し、分析することができる。いくつかの実施形態では、気管支鏡検査法／気管支肺胞洗浄によって得られた気管支肺胞洗浄液でこれらの方法を直接実施する。いくつかの実施形態では、サンプルは、例えば、患者の呼気などのガス又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養サンプルのヘッドスペースからのガスである。ヘッドスペースガスを使用する場合、存在する化合物については、好ましくは、気密密閉環境において、ヘッドスペースを十分な時間、培養液と接触させた後、ガスを収集する必要がある。
【００２７】
また、ＶＯＣは、気相と平衡であることが予測されるため、液体サンプル中で検出することができる。このため、代替形態に加えて、又は代替形態として、本明細書に記載の方法を用いて分析したサンプルとしては、例えば、血液（例えば、血漿又は血清）、リンパ液、尿、涙、唾液、痰、鼻粘液、粘液（例えば、去痰）、若しくは被験体からのＣＳＦ（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種に感染したことが既知であるか、又は疑われる組織又は器官に近づく又は好ましくは接触する体液など）又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養液の液相（例えば、上澄み）などの液体を挙げることができる。いくつかの実施形態では、サンプルは、被験体の唾液を含む。
【００２８】
検出方法
当業者に既知の多数の方法を使用して、サンプル中での本明細書に記載されるＶＯＣの存在を検出することができる。例示的方法（特に、ガスサンプルと共に使用するため）としては、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、例えば、質量分析法（四極、飛行時間、タンデム型質量分析法、イオンサイクロトロン共鳴及び／又はセクター（磁性及び／又は静電）など）の分光測定法、イオン移動度分光測定法、フィールド非対称的イオン移動度分光測定法及び／又はＤＭＳ、燃料電池電極、光吸収分光法、ナノ粒子技術、たわみ板波（ＦＰＷ）センサー、電気化学センサー、光音響分光装置、レーザーベース装置、電子鼻（生体誘導、表面被覆ずみ）、及び各種電離技術が挙げられる。例えば、ＵＳ２０１００２９１６１７及びＵＳ２００７０００３９９６を参照のこと。好ましい方法としては、イオン移動度分光法（ＩＭＳ）又は示差移動度分光法（ＤＭＳ）が挙げられる。
【００２９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法としては、示差移動度分析計を使用してサンプル中のＶＯＣを検出することを含む。化学用及び生物学的感知用に開発された例示的微小測定示差移動度分析光法（ＤＭＳ）は、現在、Ｓｉｏｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎより入手可能である。ＤＭＳには、ＶＯＣ分析のための優れたプラットフォームとなるいくつかの特徴があり、定量的、選択的であり、かつ極めて感度の高く、一兆分率の範囲において揮発性検出限界がある（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ：１２ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒｓ，Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ  Ｓｅｎｓｏｒｓ，Ａｃｔｕａｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ；２００３；ｐ．１２３３−８  ｖｏｌ．２；Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ：Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ  Ｓｅｎｓｏｒｓ  ａｎｄ  Ａｃｔｕａｔｏｒｓ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ；２０００；Ｈｉｌｔｏｎ  Ｈｅａｄ，  Ｓｏｕｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ；２０００；Ｋｒｅｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｎｓｏｒｓ  Ｊｏｕｒｎａｌ，ＩＥＥＥ２００５；５（４）：６９６−７０３）。質量比／電荷比に基づいて粒子を分離させる質量分析（法）とは異なり、ＤＭＳでは、低電場及び高電場でのイオン移動度差を利用して、気圧でのイオンの気相分離を得る。ＤＭＳでは、ヒトの呼気などの負荷基質での質量分析など、他の分析技術による分解が困難な化合物を迅速に検出する（Ｋａｎｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ  ２００８；４３：１−２２；Ｋａｎｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ａ  ２００８；１１７７：１２−２７；Ｌｕｏｎｇ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｓｃｉ  ２００６；４４：２７６−２８６；Ｎａｚａｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ２００６；７６９７−７０６；Ｋｏｌａｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｓｔ２００７；１３２：８４２−６４）。
【００３０】
ＤＭＳは、調整して、特定のイオン質量を監視し、対象となる様々な化合物に焦点を当てるために、応答特性に適合させることができる。この場合は、試薬を必要とせずに、小型電源装置を使用して、既に微細加工されているセンサーによって必要な高電場を発生させ、その結果、ベッドサイドで使用することができる応答時間が数分の小型の携帯用機器が得られる。ＤＭＳの使用は、Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ（ＪＵＮＯ（商標））の微量の化学兵器の手持ち式携帯型検出器及びＴｈｅｒｍｏの空港爆発物検出器（例えば、ＵＳ７６０５３６７参照のこと）など、いくつかの商業用設定において奏功している。ＤＭＳ技術は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ及び他の細菌によって生成した独自のＶＯＣを特徴付けるための適用には奏功している（Ｆｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ２０１１；８３：１５３７−４６；Ｓｈｎａｙｄｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ２００５；７７：５９３０−７）。
【００３１】
ＤＭＳを用いて測定を行うには、ガスサンプルを分光計に導入して、イオン化し、そのイオンは、キャリアガスによってイオンフィルターを介して検出電極（ファラデープレート）に対して移送させる。ＤＭＳ装置は、異なるイオン移動度に基づいて物質の化学成分を分離することができる。その他の装置では、当該技術分野において既知の方法を使用して既知の方法を用いて測定を実施する。
【００３２】
本方法で使用することのできる追加の非限定的例のシステムとしては、ＵＳ２００９００７８８６５、ＵＳ２０１３０１６８５４８、ＵＳ２０１００２９１６１７及びＵＳ２００７０００３９９６に記載されている方法が挙げられる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、本方法には、周囲のＶＯＣを減算するための参照として提供するために、周囲空気のサンプルを得ること、及び空気中のＶＯＣの存在及び／又は濃度を検出することを含む。
【００３４】
液体サンプル中のＶＯＣの存在及び／又は濃度を検出するために、これに限定するものではないが、クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び分光測光法（例えば、ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ及び気相サンプル用の他の上述の方法）など、多数の方法が、当技術分野において既知である。
【００３５】
組み合わせ診断
いくつかの実施形態では、本方法は、ＩＡの更なる診断検査を実施することを含む。多数のこうした検査が、当技術分野において既知であり、ガラクトマンナン酵素免疫測定法、放射線医学的画像試験（例えば、ＣＴ画像作成）、気管支肺胞洗浄、経胸郭経皮的針吸引生検又はビデオ補助胸腔鏡下生検が挙げられる。これらの検査のうちの１つで陽性結果が認められると、ＩＡ診断を裏付ける更なるエビデンスを提供することができる（例えば、Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ２００８；４６：３２７-６０参照）。
【００３６】
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種の同定及び診断
本明細書に記載されるように、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓは、例えば、被験体の呼気を含むサンプルにおいて又はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含むことが疑われている培養液のヘッドスペースなどのサンプル中において、それぞれ、これらを同定するために使用することのできるＶＯＣを生成し、培養液は、例えば、被験体の生検の培養液又は例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種を含有しているか、又は混入していることが既知の又は疑いのある培養液など、微生物研究所の培養液であってもよい。この同定を用いて、特定種のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを保有している被験体の診断を行うことができ、それによって、以下に記述する治療など、種特異的治療を行うことができる。
【００３７】
このように、本明細書に記載の方法としては、被験体の呼気を含むサンプル又はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含んでいる疑いのある培養液のヘッドスペースを含むサンプルを得ること、及びサンプル中のＶＯＣを検出し、同定することが挙げられる。例えば、本法は、サンプル中において、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべての存在を検出することを含むことができる。カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン又はファルネセンが存在することにより、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えばすべてがサンプル中に存在することが示唆され（このため、サンプルを被験体から採取した場合には、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ感染）、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン及び１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエンの１つ、２つ、３つ又はそれ以上、例えば、すべてが存在することにより、サンプル中にＡ．ｔｅｒｒｅｕｓが存在することが示唆され（このため、サンプルを被験体から採取した場合には、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ感染）、及び９−デセン−２−オン、及びβ−セスキフェランドレンのうちの１つ又はその両方が存在することにより、サンプル中にＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓが存在することがわかる（このため、サンプルを被験体から採取した場合にはＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ感染）。いくつかの実施形態では、リモネン又はα−ピネンが存在する場合、正の種の同定及び種特異的診断を行うために他のＶＯＣの少なくとも１つの又は２つが存在している必要がある。
【００３８】
治療方法
本明細書に記載の方法を使用して、被験体の治療法を選択することができ、かつ、任意により、被験体に治療を施すことを含むことができる。被験体が本明細書に記載された方法によってＩＡを有すると診断されたとき、次に、治療上の有効量の抗真菌薬の投与を含む治療を行うことができる。
【００３９】
多数の抗真菌薬が、当技術分野において既知であり、開発されている。現在では、アムホテリシンＢデオキシコール酸（Ｄ−ＡＭＢ）及びその脂質製剤（ＡＭＢ脂質複合体（ＡＢＬＣ）、アムホテリシンＢリポソーム（ＬＡＭＢ）及びアンホテリシンＢの硫酸コレステリル複合体（ＡＭＢコロイド状分散体、ＡＢＣＤ）、アゾール化合物（イトラコナゾール、ボリコナゾール、ポサコナローズ）及びエキノキャンディン（カスポファンギン、ミカファンギン、アニデュラファンギン））が臨床用であるが、ボリコナゾール及びＤ−ＡＭＢは、米国において侵襲性アスペルギルス症の主要治療として認可されている唯一の化合物である。ＩＡ治療に関する詳細情報は、例えば、Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ２００８；４６：３２７-６０及びＭａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ，Ｕｐ−Ｔｏ−Ｄａｔｅ（ｔｏｐｉｃ  ｕｐｄａｔｅｄ  ｏｎ  Ｏｃｔ  １８，  ２０１２；  ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗ  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１３；以下のＵＲＬにて参照可能ｕｐｔｏｄａｔｅ．ｃｏｍ／ｃｏｎｔｅｎｔｓ／  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−ａｎｄ−ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ−ｏｆ−ｉｎｖａｓｉｖｅ−ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ？ｔｏｐｉｃＫｅｙ＝ＩＤ％２Ｆ２４５９＆ｅｌａｐｓｅｄＴｉｍｅＭｓ＝７＆ｖｉｅｗ＝ｐｒｉｎｔ＆ｄｉｓｐｌａｙｅｄＶｉｅｗ＝ｆｕｌｌ）を参照のこと。
【００４０】
いくつかの実施形態では、本方法には、例えば、上記のイトラコナゾール（ＩＴＲ）、ボリコナゾール（ＶＯＲ）、ポサコナローズ（ＰＯＳ）、ラブコナゾール（ＲＡＶ）又はイサブコナゾール（ＩＳＡ）又はアムホテリシンＢ（ＡＭＢ）製剤などのアゾール抗真菌薬をＩＡを保持すると同定された被験体に対して、本明細書に記載の方法で選択すること及び任意により投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、カスポファンギン、ミカファンギン又はアニデュラファンギンなどのエキノカンディンを単独で又はアゾール（ボリコナゾールなど）又はＡＭＢと組み合わせて、投与することを含む。
【００４１】
トリアゾールは、一部のＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ分離株に対して活性がなく、一部のＡ．ｔｅｒｒｅｕｓ分離株は、ＡＭＢに耐性があることは既知である。例えば、Ｂａｄｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００９，４７（１０）：３２７１参照のこと。したがって、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種が明らかになったいくつかの実施形態では、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ又はＡ．ｔｅｒｒｅｕｓを保持しているが、Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓは保持していない（及び任意により投与される）被験体にアゾール化合物（例えば、ＩＴＲ、ＶＯＲ、ＰＯＳ、ＲＡＶ又はＩＳＡ）が選択される。いくつかの実施形態では、Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓを保持している（及び任意により投与される）被験体にＡＭＢ（例えば、Ｄ−ＡＭＢ、ＡＢＬＣ、ＬＡＭＢ又はＡＢＣＤ）が選択される。いくつかの実施形態では、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓを保持している（及び任意により投与される）被験体にＡＭＢが選択されるが、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓを有する被験体には投与されない。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して、例えば、既知の又は疑いのある抗真菌薬による治療に対する、例えば、微生物学研究所で、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種の感受性を判定することができる。被験体がＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓを含んでいる疑いのある又は既知のサンプルを得て、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ環境を模倣した条件下において、上述のように培養し、その後、可能性のある治療（例えば、既知の治療又は実験的治療）を施す。治療を行った後、培養液のヘッドスペースに存在しているＶＯＣを抽出した。対照値（例えば、治療前のヘッドスペース中のＶＯＣ濃度）と比較して、治療によりＶＯＣが低下した場合、サンプル中のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓは、治療に感受性がある可能性があると考えられる。この場合、治療は、ＩＡ被験体の治療において有効である可能性が高く、その治療法を選択し、任意により被験体に施すことができる。
【００４３】
治療効果モニタリング
本明細書に記載されるように、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ感染の治療が奏功した結果、真菌ＶＯＣが減少する。したがって、本方法には、被験体において、例えば、ＩＡ治療前、ＩＡ治療中及びＩＡ治療後に、ＶＯＣ濃度の分析を繰り返し行うことを含んでもよい。ＶＯＣ濃度の低下から、治療が奏功していることが明らかになる。いくつかの実施形態では、ファルネセン、β−バチレネン及び／又はｃｉｓ−ゲラニルアセトンの１つ、２つ又は３つすべての濃度を求める。いくつかの実施形態では、ファルネセン、β−バチレネン、ｃｉｓ−ゲラニルアセトン、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン、ファルネセン、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン、１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエン、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンの１つ、２つ、３つ又はそれ以上の濃度を求める。
【００４４】
新規抗真菌剤の同定方法
本明細書に記載する方法は、ＩＡ治療に有用な薬剤を同定するための、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、無機又は有機大分子又は小分子試験化合物などの試験化合物のスクリーニング方法である。
【００４５】
本明細書で使用するとき、「小分子」は、分子量約３，０００Ｄダルトン未満の小さい有機分子又は無機分子を指す。一般に、本発明に有用な小分子は、３，０００ダルトン（Ｄａ）未満の分子量を有する。小分子は、例えば、少なくとも約１００Ｄａ〜約３，０００Ｄａ（例えば、約１００〜約３，０００Ｄａ、約１００〜約２５００Ｄａ、約１００〜約２，０００Ｄａ、約１００〜約１，７５０Ｄａ、約１００〜約１，５００Ｄａ、約１００〜約１，２５０Ｄａ、約１００〜約１，０００Ｄａ、約１００〜約７５０Ｄａ、約１００〜約５００Ｄａ、約２００〜約１５００、約５００〜約１０００、約３００〜約１０００Ｄａ又は約１００〜約２５０Ｄａ）であってよい。
【００４６】
試験化合物は、例えば、天然産物又はコンビナトリアルケミストリーライブラリーの要素であってもよい。電荷、芳香族性、水素結合、柔軟性、寸法、側鎖の長さ、疎水性及び剛性などの様々な機能を包含するために、一連の多様な分子を使用すべきである。小分子の合成に好適な組み合わせ技術は、Ｏｂｒｅｃｈｔ  ａｎｄ  Ｖｉｌｌａｌｇｏｒｄｏ，Ｓｏｌｉｄ−Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ａｎｄ  Ｐａｒａｌｌｅｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−Ｗｅｉｇｈｔ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ−Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（１９９８）により例示されるように、当技術分野において既知であり、「ｓｐｌｉｔ  ａｎｄ  ｐｏｏｌ」法又は「パラレル」合成法、固相及び液相合成法及びエンコーディング法（例えば、Ｃｚａｒｎｉｋ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏ．１：６０−６（１９９７）参照）などの技術が挙げられる。更に、多数の小分子ライブラリーが市販されている。好適な小分子試験化合物は、米国特許第６，５０３，７１３号に記載されており、その全体が本明細書に参照として援用される。
【００４７】
本発明の方法を使用してスクリーニングしたライブラリーには、様々な種類の試験化合物を含むことができる。所与のライブラリーは、一連の構造上関連のある又は関連のない試験化合物を含むことができる。いくつかの実施形態では、試験化合物は、ペプチド又はペプチド模倣分子である。いくつかの実施形態では、試験化合物は、核酸である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、例えば、対象ペプチドの既知の自然結合パートナーに構造上類似している第一試験化合物又は対象ペプチドと結合可能であるとして同定された第一の小分子などの第一試験化合物の構造を、例えば、当該技術分野に既知の方法又は本明細書に記載の方法で系統的に変化させること、及びその結果得られる生物活性に対する構造、例えば、構造・活性関係研究などを相関させること、によって試験化合物及びそのライブラリーを得ることができる。当業者は理解しているであろうが、構造−活性関係などを構築する様々な標準的方法がある。したがって、場合によっては、研究が大いに経験的であってもよく、また他方では、内因性ポリペプチドの三次元構造又はその一部を、小分子化合物（複数可）の合理的設計の開始点として使用することができる。例えば、一実施形態では、例えば、本明細書に記載の方法を用いて、一般的な小分子ライブラリーをスクリーニングする。
【００４９】
いくつかの実施形態では、試験化合物は、１つ以上のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種を含む試験サンプルに適用され、かつ本明細書に記載されるように、培養液ヘッドスペース中のＶＯＣ濃度を低下させる試験化合物の能力を求める。
【００５０】
いくつかの実施形態では、試験用サンプルは、本明細書に記載された記載のように、ｉｎ  ｖｉｖｏ疾患モデルであるか、又はｉｎ  ｖｉｖｏ疾患モデルから求める（例えばそのモデルから抽出したサンプル）。１つ以上のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種により感染された、例えば、げっ歯類など（ラット又はマウスなど）の動物モデルを使用することができる。
【００５１】
本明細書に記載される方法によってスクリーニングされ、ＶＯＣの低下が認められた試験化合物は、候補化合物と考えることができる。１つ以上のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種によって感染され、感染動物モデルの呼気を含むサンプル又は感染動物サンプル培養液のヘッドスペースを含むサンプルにおいてＶＯＣの低下が認められた、例えば、げっ歯類などの例えばｉｎ  ｖｉｖｏ疾患モデルにおいて、スクリーニングされた候補化合物は、候補治療薬と考えることができる。一旦臨床設定においてスクリーニングされた候補治療薬は、治療薬である。候補化合物、候補治療薬及び治療薬は、任意により、最適化及び／又は誘導体化され、かつ生理学的に許容できる賦形剤と配合され、医薬組成物を形成する。
【００５２】
したがって、第一スクリーンで「ヒット化合物」と同定された試験化合物（例えば、動物モデルにおいて、真菌ＶＯＣを低下させる試験化合物）は、選択し、例えば、合理的設計を用いて、系統的に変更して、結合親和性、結合活性、特異性又は他のパラメータを最適化することができる。このような最適化は、本明細書に記載の方法を用いるために、スクリーニングすることができる。したがって、一実施形態では、本発明は、当業者に既知の方法及び／又は本明細書に記載された方法を用いて、第一ライブラリーの化合物をスクリーニングすること、ライブラリー中の１つ以上のヒット化合物を同定すること、これらのヒット化合物に対して、系統構造上の変更を行い、ヒット化合物に構造的に関連のある第二ライブラリーの化合物を構築すること、及び本明細書に記載の方法を用いて、第二ライブラリーをスクリーニングすること、を含む。
【００５３】
ヒット化合物として同定された試験化合物は、ＩＡの治療に有用な、候補治療用化合物と考えることができる。「ヒット化合物」の構造を決定するために有用な、例えば、ＮＭＲ、質量分析法、電子捕獲検出器を装備したガスクロマトグラフィー、蛍光分光法及び吸収分光法などの様々な技術を本明細書に記載される方法において使用することができる。したがって、本発明は、本明細書に記載の方法によって「ヒット化合物」として同定された化合物及び本明細書に記載の疾患の治療、予防若しくは発現又は進行の遅延における投与方法及び使用方法をも含む。
【００５４】
候補治療化合物として同定された試験化合物は、本明細書で記載されるように、ＩＡ動物モデルに投与することによって、更にスクリーニングすることができる。動物では、臨床転帰に関連のあるパラメータなど、例えば、疾患パラメータの改善のために、疾患の変化を監視することができる。いくつかの実施形態では、パラメータは、ＶＯＣ又は生存率であり、ＶＯＣの低下又は生存率の上昇が改善となる。いくつかの実施形態では、被験体は、例えば、ＩＡのヒトなどのヒトであり、パラメータは、真菌ＶＯＣ濃度又は生存率である。
【実施例】
【００５５】
本発明は、更に、次の実施例にて記載されるが、これは、特許請求の範囲に記載されている本発明の範囲を制限するものではない。
【００５６】
実施例１．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ＶＯＣプロファイルの定義
質量分析計及び示差移動度分析計（ＧＣ−ＭＳ／ＤＭＳ）をインターフェースとするガスクロマトグラフィーを使用して、ヒトの肺環境を模倣し、菌糸の増殖を促進するために設計されたインキュベーション条件下におけるヒトの病原体となるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種（もっとも注目すべきは、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ及びＡ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養液のヘッドスペースガスにおいて、ＶＯＣプロファイルの特徴付けを行った。これは、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、菌糸の増殖並びにヒト組織血管及び組織への侵襲を介して拡散するためである。
【００５７】
カビ株（表１）をサボーラウドデキストロース寒天斜面培地で、２５℃にてインキュベートした。分生子を収集して、分生子懸濁液を滅菌水中で調製した。分生子は、血球計算器で定量化した。
【表１】
2015534053.tif 000003
【００５８】
いずれの実験も、最上部にゴム隔膜を組み込んだ気密クリンプ付き２０ｍＬガラスバイアル瓶内で、１０４分生子を微生物培地５ｍＬ（富栄養培地ＹＰＤ（Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ  Ｐｅｐｔｏｎｅ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ）ブロス又は低栄養Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ最少培地のいずれか（Ｐｏｎｔｅｃｏｒｖｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎ  Ｇｅｎｅｔ  １９５３；  ５：１４１−２３８）若しくは、鉄欠乏、アルカリストレス下又は窒素枯渇条件下（ＭｃＤｏｎａｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ  ２００８；  ４：ｅ１０００１５４））に播種した。培養液を２４〜１４４時間、２００ｒｐｍ、３７℃でインキュベートし、アルゴンキャリアガス及び２０ｍＬ／分に校正した大気サンプリングポンプを用いて、Ｔｅｎａｘ  ＴＡ（２００ｍｇ）、Ｃａｒｂｏｇｒａｐｈ１ＴＤ（１００ｍｇ）及びＣａｒｂｏｘｅｎ１００３（１００ｍｇ）の直列ベッドを含むＭａｒｋｅｓ昇温脱離トラップ上に、ヘッドスペースガスを動的に吸着させて、最適化し、多様なサイズ及び極性のＶＯＣを保持するようにした。
【００５９】
また、真菌分離株サブセットを抗真菌薬ボリコナゾール、アンホテリシンＢリポソーム及びミカファンギンにそれぞれの濃度１．０ｍｇ／ｍＬで曝露した後、ヘッドスペースＶＯＣを回収した。
【００６０】
ＶＯＣは、デュアルＧＣ−ＭＳ／ＤＭＳシステム（図１）で脱着させた。-ガスクロマトグラフィーからの溶離液は、各化合物を同定することができるＭＳとＤＭＳ（ＰＯＴ（ｐｏｉｎｔ−ｏｆ−ｃａｒｅ）ガス検出デバイスとして、容易に使用できる極めて感度が高く、選択性の高いガス検出器である）との間で分離させ、各化合物の移動パターンを測定した。ＮＩＳＴ  ＭＳ  Ｓｅａｒｃｈ  ２．０  Ｌｉｂｒａｒｙを使用して、ＧＣ−ＭＳデータの全イオンクロマトグラム（ＴＩＣ）において、ＶＯＣを同定した。Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓとＡ．ｔｅｒｒｅｕｓとの正イオンスペクトルのＤＭＳ出力のスペクトル特性の差は、目視で区別することができ、主成分分析（ＰＣＡ）を用いて、ＭＡＴＬＡＢ（Ｖｅｒｓｉｏｎ  Ｒ２０１２ａ）中のアルゴリズムを使用して、これらの真菌類間のクラス差の程度を評価した。
【００６１】
患者の呼気中のＶＯＣの回収
呼気は、Ｌｏｃｃｉｏｎｉ  Ｂｒｅａｔｈ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｓａｍｐｌｅｒを用いて、ＩＡの疑いのある患者から採取した。いずれの患者も、最長４分の一回呼気量を９００ｍＬ／分に校正した大気サンプリングポンプを用いて、ＴｅｎａｘＴＡ（２００ｍｇ）、Ｃａｒｂｏｇｒａｐｈ１ＴＤ（１００ｍｇ）及びＣａｒｂｏｘｅｎ１００３（１００ｍｇ）の直列床を含む、２つの平行昇温脱離トラップに吸収させた。周囲空気は、各呼気サンプルと同時に流量９００ｍＬ／分でサンプリングし、患者の呼気サンプル中の任意の環境ＶＯＣとして制御した。これらのサンプルは、上述のｉｎ  ｖｉｔｒｏ真菌培養液と同一の昇温脱離ＧＣ−ＭＳ法を使用して分析した。
【００６２】
結果
ＶＯＣプロファイルの種間均質性、種中異質性：
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験対象の各菌種では、各種内で保持されているＶＯＣプロファイル（図２Ａ）及び種間で異なるＶＯＣプロファイル（図２Ｂ）といった、独自のＶＯＣプロファイルとなった。テルペン化合物及びセスキテルペン化合物は、特に別の真菌類とは異なっていた。
【００６３】
Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓと他の真菌類のＶＯＣプロファイルの比較結果から、カンフェン、α−ピネン、β−ピネン、リモネン、α−ベルガモテン及びファルネセンは、特有のＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓであることがわかった（図３）。Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓと他の真菌類のＶＯＣプロファイルの比較結果から、エリキセン、α−サンタレン、β−エレメン、アコラジエン、カミグレン及び１，５，９−トリメチルシクロドデカトリエンは、Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓの主要な特徴であることがわかった（図４）。Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓと他の真菌類のＶＯＣプロファイルの比較結果から、９−デセン−２−オン及びβ−セスキフェランドレンは、Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓの主要なＶＯＣ特徴であることがわかった（図５）。
【００６４】
Ｉｎ  ＶｉｔｒｏにおけるＶＯＣ生成反応速度論：
各カビ種のｌａｇ、ｌｏｇ、定常期及び死滅期のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＶＯＣの放出反応速度を２４〜１４４時間にわたり、３７℃でインキュベーションして、評価した。Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓのＶＯＣの主要な特徴は、最初に、２４時間インキュベートして明確に識別することができ、すべての揮発物が、９６時間のインキュベートで、それぞれのピーク濃度に到達した（図６）。
【００６５】
Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓのＶＯＣの主要な特徴は、最初に、４８時間インキュベートして明確に識別することができ、９６〜１２０時間のインキュベートで、それぞれのピーク濃度に到達した（図７）。
【００６６】
Ａ．ｃａｌｉｄｏｕｓｔｕｓのＶＯＣの主要な特徴は、最初に、２４〜４８時間インキュベートして明確に識別することができ、９６時間のインキュベートで、それぞれのピーク濃度に到達した（図８）。
【００６７】
抗真菌曝露による、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ中のＶＯＣ放出の調製：
抗真菌薬への曝露がＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ中のＶＯＣ放出を調節するか否かをｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価した。ミカファンギンを４８時間、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓの菌糸培養液に添加した場合、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓにおける一部の主要ＶＯＣプロファイルでは、ミカファンギンを含有しない適合対照サンプルと比較して（図９Ａ）、２４時間後、最高１７倍の増大が認められ、インキュベーション期間及び菌糸死滅期間を長くすると、これらのＶＯＣプロファイルの減弱が観察された。その後、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓの主要ＶＯＣにおいて、アンホテリシンＢリポソームに応答して、類似した初期の減弱の増大が認められた。ボリコナゾールをＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓの４８時間菌糸培養液に添加したとき、ボリコナゾールを含有していない適合対照サンプルと比較して、２４時間後に、この種の主要ＶＯＣ特徴のほぼ完全な減弱が認められた（図９Ｂ）。
【００６８】
Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ及びＡ．ｔｅｒｒｅｕｓのＧＣ−示差移動度分光パターンの定義：
ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓのＰＯＴガス検知器として、携帯型ＧＣ−示差移動度分析計（ＤＭＳ）技術の使用に対する工程として、ＧＣからの溶離液は、ＭＳデバイスとＤＭＳデバイスとの間で分離させた。ＤＭＳは、極めて感度が高くかつ選択性の高い化学物質検出器であり、小型電源を用いて大気圧で作動し、特定のＶＯＣパターンを検出するために研究室外で使用することができる。Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ及びＡ．ｔｅｒｒｅｕｓから採取したヘッドスペースガスのＤＭＳ正イオンスペクトル特性を調査した。ＤＭＳパターンは、各種の要素内に明らかに保持され、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓとＡ．ｔｅｒｒｅｕｓとの差が明らかであった（図１０Ａ、１０Ｂ）。
【００６９】
主成分分析（ＰＣＡ）を用いて、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓとＡ．ｔｅｒｒｅｕｓとのクラス分類の程度を評価した。同一種からのサンプルには、群れがあり、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ群とＡ．ｔｅｒｒｅｕｓ群とでは明らかに分離していた（図１１Ａ、図１１Ｂ）。
【００７０】
患者の呼気中のＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ  ＶＯＣの定義：
侵襲性アスペルギルス症の疑いのある５４名の免疫不全患者から一回呼気量を採取して、呼気中に真菌ＶＯＣを検出することによって、ＩＡ患者と非ＩＡ患者とを区別することができるかを評価した。
【００７１】
５４名の患者のうち、２３名（４３％）が女性であり、４６名（８５％）が血液悪性疾患、２２名（４１％）が同種幹細胞移植を受け、６名（１１％）が固形臓器移植を受け、４６名（８５％）がＴ細胞免疫抑制薬が投与され、２４名（４４％）が長期の好中球減少症に罹患している。これらの特性は、ＥＯＲＴＣ／ＭＳＧにより確認された患者（３）又は確率の高い（２６）ＩＡ患者の２９名と、他の真菌感染又は他の感染プロセスが原因である結節性肺炎患者２５名とにおいて比較することができた。
【００７２】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び侵襲性アスペルギルス症患者の呼気中で同定したＡ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓの主要ＶＯＣ間で実質的に重なり合う（図１２）が、また、任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養条件によって誘導されることのないＩＡ患者の呼気中において、新規セスキテルペン化合物、β−バチレネン及び酸化ファルネセン誘導体、ｃｉｓ−ゲラニルアセトンを同定した。
【００７３】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ中で同定された主要ＶＯＣの一部は、ＩＡ患者内に非ＩＡ患者内とで同様に存在し、現在５１／５４名（９４％）-ＩＡ患者２９名中２７名（感度＝９３％）及び最終的に他の肺炎原因を有する２４名又は２５名（感度＝９６％）の患者において（図１３）、セスキテルペンのファルネセンとβ−バチレネンと酸化ファルネセン誘導体ｃｉｓ−ゲラニルアセトンとを組み合わせてＩＡ患者と非ＩＡ患者とを区別した。これらのＶＯＣは、各呼気サンプルと同時に採取した周囲空気対照サンプル中には存在していなかった。
【００７４】
呼気は、抗真菌療法を連続的に開始した後に数名の患者から採取し、これらの主要Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ  ＶＯＣは、治療から１〜２週間かけて低下すると考えられた。
【００７５】
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明に関連して記述されており、前述の発明を実施するための形態は、本発明の範囲を示すものであって、制限するものではなく、添付の特許請求の範囲によって規定されていることを理解すべきである。その他の態様、利点及び変更点は、以下の特許請求の範囲内である。
【図２Ａ】
2015534053.tif 000004
【図２Ｂ】
2015534053.tif 000005
【図３】
2015534053.tif 000006
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１４】
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【図１】
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【図１０】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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