(57)【要約】【課題】ホルモン含有エマルジョンを提供する。【解決手段】本発明は、ａ）プロゲストゲン及び／又はエストロゲン、及びｂ）魚油トリグリセリドであって、該魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、該脂肪酸は、該脂肪酸の少なくとも４５質量％の量で、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含む魚油トリグリセリドを含む非経口投与のためのホルモン含有水中油エマルジョンに関する。【選択図】図１
2015508792.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）プロゲストゲン及び／又はエストロゲン、及び
ｂ）魚油トリグリセリドであって、該魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、該脂肪酸は、該脂肪酸の少なくとも４５質量％の量で、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含む魚油トリグリセリド
を含む非経口投与のためのホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項２】
更に、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）を含む請求項１記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項３】
前記魚油トリグリセリドは、油成分の総質量に基づき、少なくとも２５質量％、好ましくは、少なくとも３５質量％、更に好ましくは少なくとも５０質量％、とりわけ、少なくとも７５質量％及び特に、少なくとも８５質量％の量でそれぞれ存在する請求項１又は２記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項４】
前記エマルジョンは、油成分の総質量に基づき、５ないし７５質量％、好ましくは、１０ないし５５質量％及びとりわけ、１５ないし４５質量％の範囲の量でそれぞれ中鎖トリグリセリドを含む請求項１ないし３の何れか１項に記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項５】
前記エマルジョンは、プロゲストゲン及びエストロゲンを、好ましくは、２：１ないし５００：１、より好ましくは、２：１ないし２００：１の質量比で含む請求項１ないし４の何れか１項に記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項６】
前記エマルジョンは、前記魚油トリグリセリド及び中鎖トリグリセリドを、１：１ないし９：１の範囲の質量比で含む請求項１ないし５の何れか１項に記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項７】
前記エマルジョンは、エストラジオール及び／又はプロゲステロンを含む請求項１ないし６の何れか１項に記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項８】
前記エマルジョンは、０．１５ないし１２ｇ／Ｌの範囲の量でプロゲステロンを含み及び／又は前記エマルジョンは、０．０１５ｇ／Ｌないし１．５ｇ／Ｌの範囲の量でエストラジオールを含む請求項１ないし７の何れか１項に記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項９】
前記魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、ω−３−脂肪酸の総量は、エステル化された脂肪酸の総量に基づいて、少なくとも５０質量％、好ましくは、少なくとも５５質量％、より好ましくは、少なくとも６０質量％及び最も好ましくは、少なくとも６５質量％である請求項１ないし８の何れか１項に記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項１０】
前記エマルジョンは、卵レシチン、大豆レシチン、海産甲殻類から誘導されたリン脂質及びこれらの混合物からなる群より選択される乳化剤を含む請求項１ないし９の何れか１項に記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項１１】
前記エマルジョンは、ω−３−脂肪酸部分を含むリン脂質、好ましくは、オキアミ（オキアミ目）から得られたリン脂質を含む請求項１ないし１０の何れか１項に記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項１２】
ａ）１．０ないし２．０ｇ／Ｌの範囲の量のプロゲステロン及び／又は０．０５ｇ／Ｌないし１．０ｇ／Ｌの範囲の量のエストラジオール；
ｂ）油性分の総量に基づいて、
ｉ）魚油トリグリセリド  少なくとも５０質量％（ここで、該魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、該脂肪酸は、該脂肪酸の少なくとも４５質量％の量で、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含み、好ましくは、ω−３−脂肪酸の総量は、該脂肪酸の少なくとも５０質量％である。）；及び
ｉｉ）ＭＣＴ  １０ないし５０質量％
を含む油成分を、前記水中油エマルジョンに基づき、１００ないし３００ｇ／Ｌ；
ｃ）リン脂質  ４ないし２０ｇ／Ｌ、及び
ｄ）グリセロール  １０ないし５０ｇ／Ｌ
を含む
請求項１ないし１１の何れか１項に記載のホルモン含有水中油エマルジョン。
【請求項１３】
請求項１ないし１２の何れか１項で規定される水中油エマルジョンを含むか又は該水中油エマルジョンからなる医薬組成物。
【請求項１４】
脳卒中及び／又はトラウマ後の神経障害の治療又は予防における使用のための請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１５】
脳震とう後の神経傷害の治療又は予防における使用のための又はトラウマ的な出来事の治療又は予防における使用のための請求項１３記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロゲストゲン及び／又はエストロゲン；及び魚油トリグリセリドを含む非経口投与のためのホルモン含有水中油エマルジョン並びに前記水中油エマルジョンを含むか又は前記水中油エマルジョンからなる医薬組成物に関する。該医薬組成物は、特に、脳卒中及び／又はトラウマ後の神経障害の治療又は予防における使用のため、及び／又は、脳震とう及び／又は中枢神経系への外傷後の神経障害の治療又は予防における使用のためのものである。
【背景技術】
【０００２】
背景
外傷性脳損傷（ＴＢＩ）は、意識の低下又は改変状態を伴う、認識機能、身体機能及び心理社会的機能の永続的又は一時的な障害を導き得る、外的な機械力から脳への非−退行性、非−先天性の損傷である。一部の患者は、ＴＢＩの結果として、日常生活の活動を行うのに長期間又は一生援助が必要となる。
【０００３】
ＴＢＩが引き起こす問題の非道さにも拘わらず、死亡率の改善又はＴＢＩに続く予後の改善において有効であることが証明された承認薬は、現在存在していない。しかしながら、２つの最近の臨床試験が、ステロイドホルモンであるプロゲステロンを用いるＴＢＩの成功的治療を示した（Ｘｉａｏ等、２００８年、Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ、１２：Ｒ６１；Ｗｒｉｇｈｔ等、Ａｎｎ．Ｅｍｅｒｇ．Ｍｅｄ．２００７年、４９：３９１−４０２）。両研究は、プロゲステロンが、ＴＢＩ患者において安全で且つ良好な耐容性を示し、ＴＢＩ患者へのプロゲステロンの投与が死亡率の低下を導くことを示した。更に、特許出願、国際公開第２００６／１０２６４４号パンフレット、国際公開第２００６／１０２５９６号パンフレット、国際公開第２００８／０３９８９８号パンフレット、米国特許出願公開第２０１１／０２６２４９４号明細書及び米国特許出願公開第２０１１／０２６２４９５号明細書は、プロゲステロンを非経口投与することによるＴＢＩの治療方法を概説する。
【０００４】
更に、Ａｌｋａｙｅｄ等は、Ｓｔｒｏｋｅ  ３１、１６１（２００３年）中で、脳卒中患者の症状における皮下投与されたエストロゲン及びプロゲステロンの好ましい影響を記載している。
脳血管発作（ＣＶＡ）としても知られている脳卒中は、脳への血液供給における障害に起因する脳機能の急速な喪失である。これは、閉塞（血栓症、動脈塞栓症）により生じる虚血（血流の欠如）又は出血（血液の漏洩）に起因し得る。結果として、脳の病変部は機能できなくなるが、それは、身体の片側における１以上の四肢を動かすことができなくなること、会話を理解するか又は考案することができなくなること又は視野の片側が見えなくなることを結果として生じ得る
【０００５】
脳卒中は、医学的な緊急事態であり、永続的な神経障害、合併症及び死亡を引き起こし得る。それは、米国及び欧州における成人の身体障害の主原因であり、全世界の死亡の２番目の主原因である。脳卒中の危険因子は、高齢、高血圧（高い血圧）、過去の脳卒中又は一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、糖尿病、高コレステロール、喫煙及び心房細動を含む。高血圧が脳卒中の最も重要な修正可能な危険因子である。
【０００６】
プロゲステロンのようなプロゲストゲン及び／又はエストラジオールのようなエストロゲンの最も効果的な投与の経路は、静脈内投与のような非経口を介する。しかしながら、プロゲステロン及び／又はエストラジオール分子の疎水性、及び故に水におけるその乏しい溶解性は、製剤の制約を示す。水溶液は、患者に対してプロゲステロンの有効治療用量
を送達できる製剤を提供しない。しかしながら、プロゲステロン及び／又はエストラジオールは、トリグリセリドベースの溶媒のような疎水性溶媒中で調製される治療的に有効な濃度を可能とするのには十分に脂溶性である。
【０００７】
水中油エマルジョンの静脈内注射を介する疎水性薬剤の送達は、本技術分野において既知である。Ｗｒｉｇｈｔ等、Ａｎｎ．Ｅｍｅｒｇ．Ｍｅｄ．２００７年、４９：３９１−４０２において、２−成分系が利用されているが、ここで、プロゲステロンが最初にアルコール溶液中に溶解され（第一成分）、続いて、このアルコール性のプロゲステロン溶液が市販で入手可能な脂質エマルジョンであるＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）２０％（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ、スウェーデン）（第二成分）中へ注入され、アルコール溶液／エマルジョン混合物の静脈内投与の少し前に、手動で混合される（例えば、振とうにより）。
【０００８】
この製造方法の使用には、以下の多数の欠点が存在する：
第一に、ＴＢＩ患者へのアルコール溶液の投与は、望ましいものではない。第二に、アルコールの存在はプロゲステロン及び／又はエストラジオールの可溶化を補助するものの、低せん断の手動混合は、プロゲステロン／エストラジオールの全てを油相に導入することを可能としない。結論として、そのようなエマルジョンは、プロゲステロン又はエストラジオールの限定された量のみを可溶化することを可能とし、したがって、所望の血清−プロゲステロン及び／又はエストラジオールレベルを達成するために、多量の脂質が投与されねばならない。しかしながら、患者への多容量のエマルジョン及び／又は多量の脂質の投与は、脂質異常症又は浮腫の誘導のような、深刻な影響をもたらし得る。患者は、結果として、望ましくない脂質及び／又は液体の負荷にさらされ、副作用の危険下に置かれる。
【０００９】
更に、未溶解のプロゲステロン及び／又はエストラジオールは、水相中において結晶化及びそれに続く酸化の影響を受けやすく、よって、高レベルの粒子状物質を生じて組成物中に蓄積するだけでなく、活性成分の高レベルの分解生成物も生じる。実際、プロゲステロンのアルコール溶液が市販の脂質エマルジョン組成物（Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）２０％のような）中に注入された場合、該ホルモンの１部は、該エマルジョン中で可溶化されるよりも、結晶形態として観察されることが示されている。未可溶化プロゲステロンは、輸液バッグ及び供給ダクトの表面に吸着することが報告されている。全てのプロゲステロンが、これらの２−成分エマルジョンの油相に混入するものではないという観察結果は、最終組成物において達成されたプロゲステロンの濃度及び該ホルモンの生体内利用率を不確実にする。
【００１０】
最終的に、安定性の問題に起因して、結果として生じる混合物は、室温で貯蔵し得ないため、２−成分系のプロゲステロン−脂質混合物は、投与のほんの数時間前に調製されねばならない（即ち、使用の数時間以内に、第一成分は第二成分に添加されて混合される。）。そのような混合物を必要に応じて調製することは、時間がかかり及び医師にとって不便であることの両方であり、迅速な治療が患者予後に対して重要であり得るところのＴＢＩ治療との関連で非常に不満足である。
【００１１】
ホルモン含有エマルジョンを作成するための別の方法は、脂質エマルジョンを製造する間に、ホルモンを油中へ直接組み込むことを記載する（国際公開第２００４／１１０４０２号パンフレット）。
【００１２】
中国特許第１０１１５２１８６号明細書は、注射用プロゲステロン製剤の調製において界面活性剤ソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）Ｓ１５又はポロクサマー（ｐｏｒｏｘａｍｅｒ）１８８の使用を記載している。これらの界面活性剤の使用は、高いプロゲステロンの溶
解性を達成し得る一方で、高い濃度のこれらの界面活性剤の静脈内投与は、ヒスタミン放出における中程度の上昇、じんましん及びアナフィラキシー反応（そう痒症、紅斑）を含む望ましくない副作用を伴う。
【００１３】
本技術分野において既知の、脂質エマルジョンにおけるプロゲステロン及び／又はエストラジオールの溶解性を増加する一つの方法は、有機溶媒の使用である。プロゲステロンは、安息香酸又はその誘導体中に高溶解性である。例えば、特開昭６０−２５８１１０号公報は、脂質エマルジョンにおけるプロゲステロンの溶解性を増加するために安息香酸ベンジルの使用を記載する。しかし、ベンジルアルコール及び安息香酸ベンジルは通常毒性を有し、アレルギーを引き起こすため、非経口投与のための組成物におけるそれらの含有は、重大な危険であると考えられる。
【００１４】
エマルジョンの溶解性及び安定性に関連する問題を別にしても、神経障害の治療又は予防におけるホルモンの有効性を改善するという問題が残る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】国際公開第２００６／１０２６４４号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００６／１０２５９６号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００８／０３９８９８号パンフレット
【特許文献４】米国特許出願公開第２０１１／０２６２４９４号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第２０１１／０２６２４９５号明細書
【特許文献６】国際公開第２００４／１１０４０２号パンフレット
【特許文献７】中国特許第１０１１５２１８６号明細書
【特許文献８】特開昭６０−２５８１１０号公報
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｘｉａｏ等、２００８年、Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ、１２：Ｒ６１
【非特許文献２】Ｗｒｉｇｈｔ等、Ａｎｎ．Ｅｍｅｒｇ．Ｍｅｄ．２００７年、４９：３９１−４０２
【非特許文献３】Ａｌｋａｙｅｄ等、Ｓｔｒｏｋｅ  ３１、１６１（２００３年）
【発明の概要】
【００１７】
驚くべきことに、プロゲストゲン及び／又はエストロゲン；及びω−３−脂肪酸が豊富な魚油及び／又は１以上のω−３−脂肪酸部分を含むリン脂質を含む非経口投与のためのホルモン含有水中油エマルジョンにより、先行技術に関連する問題が解消されることが見出された。
【００１８】
定義
ここで使用される用語“油”は、“脂質”及び“脂肪”と容易に交換可能であり、体温（例えば、約３７℃）で液体であり、且つ注射用製剤において医薬的に許容可能である、脂溶性の高沸点有機化合物を言及する。本発明の油は、グリセリド、部分的グリセリド、脂肪酸残基及び非グリセリドの両方並びにそれらの混合物を含む。別段の指示がない限り、リン脂質は、ここで使用される用語“油”に含まれない。
【００１９】
ここで使用される用語“水中油エマルジョン”は、液体油が水性媒体（連続相）中に小さな液滴（不連続相）で分散しているコロイド分散系を言及する。
ここで使用される用語“リン脂質”は、１個または２個の脂肪酸及び１個のホスフェート基を有するグリセロールのエステルを言及する。グリセロールから誘導されたリン脂質に加えて、ここで使用される用語“水中油エマルジョン”は、スフィンゴミエリンも含む
。
ここで使用される用語“水性媒体”は、水−含有液体を言及する。
ここで使用される単数形“ａ”、“ａｎ”及び“ｔｈｅ”は、単数のみに指定する明示的な定めをした場合を除き、単数及び複数の両方を示す。
【００２０】
ここで使用される語句“治療有効量”とは、薬剤がそのような治療を必要とする対象者に投与されるための特異的な薬理反応を提供する薬剤用量を意味する。治療有効量又は薬剤の治療レベルは、例え、そのような用量が当業者により治療有効量であると考えられたとしても、必ずしもここに記載される状態／疾患の治療において有効ではないだろうことが強調される。便宜上のためだけに、例示的な用量、薬剤送達量、治療有効量及び治療レベルが、成人対象者を参照して以下に提供される。当業者は、特定の対象者及び／又は状態／疾患を治療する必要に応じて、標準的技法に従ってそのような量を調節できる。
【００２１】
特段の指示が無い限り、ここで“体積当りの質量％”又は“％  ｗｔ／ｖｏｌ”との言及がなされる場合はいつでも、これらの用語は、それが含まれる組成物１００ｍＬ当りのｇにおける成分の質量を記載する。特段の指示が無い限り、ここで“質量当りの質量％”又は“％  ｗｔ／ｗｔ”との言及がなされる場合はいつでも、これらの用語は、成分が含まれる組成物の質量パーセントとしての成分の質量を提供する。
【００２２】
ここで、“ＰＣＳ”又は“光子相関分光法”が言及される場合はいつでも、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  １０００  ＨＳＡ（Ｍａｌｖｅｒｎ  インストリメンツ）を使用する、ＵＳＰ、＜７２９＞章、方法Ｉに記載された方法に従って測定されたＰＣＳを意味する。
【００２３】
ここで、ｄ（０，５）（体積ベースの平均直径）が言及される場合はいつでも、Ｈｙｄｒｏ  Ｓ  分散ユニットを備えた、Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００（Ｍａｌｖｅｒｎ
インストリメンツ）を使用する、ＵＳＰ、＜４２９＞（粒子径の光回折測定）に記載された方法に従って測定されたｄ（０，５）を意味する。
【００２４】
ここで、“ゼータ電位”が言及される場合はいつでも、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  １０００
ＨＳＡ（Ｍａｌｖｅｒｎ  インストリメンツ）を使用する、実験的に決定されたコロイド系における運動電位を意味する。
【００２５】
ここで、“結晶固体のない”が言及される場合はいつでも、本発明のエマルジョンが、注射液における粒子径及び粒子数のための基準（ＵＳＰ  ７８８、方法２−顕微鏡粒子計数試験）を満たすことを意味する。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
詳細な記載
本発明の最初の態様は、
ａ）プロゲストゲン及び／又はエストロゲン、及び
ｂ）魚油トリグリセリドであって、該魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、該脂肪酸は、該脂肪酸の少なくとも４５質量％の量で、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含む魚油トリグリセリド
を含む非経口投与のためのホルモン含有水中油エマルジョンである。
【００２７】
本発明の水中油エマルジョンは、油相及び水相を含む。
本発明の水中油エマルジョンは、医薬品有効成分（ＡＰＩ）として、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンを含む。
【００２８】
ここで使用される“プロゲストゲン”は、天然のプロゲステロン及び合成プロゲストゲ
ンの両方を含む。一般に、プロゲストゲンは一般式Ｉを有し、ここで、Ｘ１及びＸ２は独立して、−ＣＯＣＨ3、−ＯＣＯＣ5Ｈ11、−ＯＨ、エチニル基、−ＯＣＯＣＨ3、−Ｈ、−ＣＨ2ＣＮから選択され；ここで、Ｘ３は、−Ｈ、−ＣＨ3又は−Ｃｌから選択され；ここで、Ｘ４は、−Ｈ、−ＯＨ又は−ＣＨ3、から選択され及び、ここで、Ｘ５は、ＣＨ3又はＣＨ2ＣＨ3から選択される。
プロゲストゲンは、例えば、炭素３及び４、４及び５、５及び６、６及び７、５及び１０、１０及び９及び／又は１５及び１６の間の１以上の二重結合を伴う環構造を含み得る。
【化１】
2015508792.tif 000003
【００２９】
そのようなプロゲストゲンは、例えば、５−α−ジヒドロプロゲステロン、６−デヒドロ−レトロプロゲステロン（ディドロゲステロン）、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、レボノルゲストレル、ノルエチンドロン、酢酸ノルエチンドロン；ノルエチノドレル、ノルゲストレル、メドロキシプロゲステロン、クロルマジノン及びメゲストロールのようなプロゲステロンの誘導体を含む。“プロゲストゲン”はまた、プロゲステロンの１７α−ＯＨエステルを生成する修飾体並びにプロゲステロン及び／又は１９−ノル−プロゲステロン上に６−α−メチル、６−メチル、６−エン及び６−クロロ置換基を導入する修飾体も含むが、これらに限定されるものではない。更に、合成プロゲストゲンの非限定の例は、ノルエチンドロン（Ｍｉｃｒｏｎｏｒ（登録商標））、ノルゲストレル（Ｏｖｒｅｔｔｅ（登録商標））、レボノルゲストレル（Ｎｏｒｐｌａｎｔ（登録商標）；エチニル
エストラジオールを伴う；Ａｌｅｓｓｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｅｔｔｅ（登録商標））、ゲストデン、酢酸メドロキシプロゲステロン（Ｐｒｏｖｅｒａ（登録商標））、プロメゲストン、酢酸ノメゲストロール、リネストレノール及びジエノゲストを含む。
【００３０】
１態様において、プロゲストゲンは、プロゲステロン、ノルエチノドレル、酢酸ノルエチドロン、メドロキシプロゲステロン、メドロキシプロゲステロン１７−アセテート、レボノルゲストレル、ディドロゲステロン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ノルエチドロン、ゲストデン、酢酸ノメゲストロール、プロメゲストン、ジエノゲスト、クロルマジニオン、メゲストロール、酢酸メゲストロール及び／又はそれらの混合物からなる群より選択される。
【００３１】
特定の態様において、プロゲストゲンは、５−α−ジヒドロプロゲステロン、メドロキシプロゲステロン、ディドロゲステロン及びプロゲステロン及び／又はそれらの混合物からなる群より選択される。
更なる態様において、プロゲストゲンは、プレグネロノン、プロゲステロン、メドロキシプロゲステロン及びそれらの医薬的に許容された誘導体からなる群より選択される。
【００３２】
特定の態様において、プロゲストゲンは、プロゲステロンである。ここで使用される用語“プロゲステロン”は、以下の式ＩＩ：
【化２】
2015508792.tif 000004
で表される構造を有するプロゲストゲンファミリーのメンバーを言及する。
【００３３】
プロゲステロンはまた、Ｄ４−プレグネン−３，２０−ジオン；δ−４−プレグネン３，２０−ジオン；又はプレグネ−４−エン−３，２０−ジオンとしても知られている。非常に特殊な態様において、プロゲステロンは、微粒化される。Ｐｒｏｑｕｉｎａ（メキシコ）は、微粒化プロゲステロンの一つの供給会社である。
【００３４】
本発明に従う使用のために適したプロゲストゲン（例えば、プロゲステロンを含む、あらゆるプロゲストゲン）は、医薬的に許容される塩の形態にあり得る。
本発明の水中油エマルジョンは、少なくとも０．１ｇ／Ｌ、好ましくは、少なくとも０．１５ｇ／Ｌ、より好ましくは、０．１５ｇ／Ｌないし１２．０ｇ／Ｌの範囲、更に好ましくは、０．８ｇ／Ｌないし４．０ｇ／Ｌ、特には、１．０ｇ／Ｌないし２．５ｇ／Ｌのプロゲストゲンの量を含み得る。
【００３５】
好ましい態様において、該水中油エマルジョンは、０．１５ｇ／Ｌないし１２ｇ／Ｌの範囲の量におけるプロゲステロンを含む。
本発明の水中油エマルジョンは、少なくとも０．３ｇ／Ｌ、少なくとも０．５ｇ／Ｌ、少なくとも１ｇ／Ｌのプロゲストゲン（例えば、プロゲステロン）の量を含み得る。これらの態様の何れかに従って、エマルジョンは、３．０ｇ／Ｌ以下、２．５ｇ／Ｌ以下又は２．０ｇ／Ｌ以下のプロゲストゲン（例えば、プロゲステロン）の量を含み得る。特定の態様において、本発明の水中油エマルジョンは、プロゲステロンの、約１．０ｇ／Ｌないし２．０ｇ／Ｌ、特に、約１．５ｇ／Ｌのプロゲステロンを含む。
【００３６】
本発明の別の態様に従って、水中油エマルジョンは、１種以上のエストロゲンを含む。
好ましい態様において、該エマルジョンは、以下の式ＩＩＩ：
【化３】
2015508792.tif 000005
において反映されるエストリオール（１，３，５（１０）−エストラトリエン−３，１６−α，１７β−トリオール）を含む。
【００３７】
更なる態様において、該エマルジョンは、以下の式ＩＶ：
【化４】
2015508792.tif 000006
において反映されるエストラジオール（１，３，５（１０）−エストラトリエン−３，１７β−ジオール）を含む。
【００３８】
更なる態様において、該エマルジョンは、以下の式Ｖ：
【化５】
2015508792.tif 000007
において反映されるエストロンを含む。
【００３９】
本発明の好ましい態様に従って、水中油エマルジョンは、エストラジオール、エストロン、エストトリオール及びそれらの誘導体並びにそれらの混合物からなる群より選択されるエストロゲンを含む。
特に好ましいものは、エストラジオールである。
【００４０】
エストロゲンは、該エマルジョンに基づいて、好ましくは、０．０１５ｇ／Ｌないし５ｇ／Ｌ、より好ましくは、０．０１５ｇ／Ｌないし１．５ｇ／Ｌ及び最も好ましくは、０．０５ｇ／Ｌないし０．３ｇ／Ｌ（リットル当たりのグラム）の範囲の量で水中油エマルジョン中に存在する。好ましい態様において、該エマルジョンは、０．０１５ｇ／Ｌない
し１．５ｇ／Ｌ、好ましくは、０．０５ｇ／Ｌないし１．０ｇ／Ｌ、より好ましくは、０．０８ｇ／Ｌないし０．５ｇ／Ｌ及び特には、０．１ｇ／Ｌないし０．３ｇ／Ｌの範囲の量でエストラジオールを含む。
【００４１】
本発明の更なる態様に従って、水中油エマルジョンは、プロゲストゲン及びエストロゲンの組み合わせを含む。該エマルジョンにおいて、エストロゲンに対するプロゲストゲンの質量比は、２：１ないし５００：１、好ましくは、２：１ないし２００：１、更に好ましくは、５：１ないし５０：１及びより好ましくは、１０：１ないし２０：１であり得る。
好ましくは、水中油エマルジョンは、エストラジオール及び／又はプロゲステロンを含む。
【００４２】
本発明の１態様は、エストロンとプレグネロノン及び／又はプロゲステロンとの組み合わせ、他には、エストリオールとプレグネロノン及び／又はプロゲステロンとの組み合わせに関する。選択肢、特に好ましい態様は、エストラジオール及び／又はプレグネロノン及び／又はプロゲステロンの組み合わせ、特には、プロゲステロンとの組み合わせに関する。両選択肢において、メドロキシプロゲステロンは、付加的に含み得るか又はメドロキシプロゲステロンは、プレグネロノン及び／又はプロゲステロンと置き換えられ得る。よって、２種より多いホルモンがまた、本発明に従って組み合わせられ得る。
【００４３】
水中油エマルジョンのより良い投薬のために、親エマルジョンは、もし必要であれば、適当量の水、好ましくは、４倍量までの水で希釈され得る。
【００４４】
水中油エマルジョンの油相は、魚油トリグリセリドを含み、ここで、該魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、該脂肪酸は、該脂肪酸の少なくとも４５質量％の量で、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含み、好ましくは、ω−３−脂肪酸の総量が、該脂肪酸の少なくとも５０質量％（ｗｔ．−％）、より好ましくは、少なくとも５５質量％、より好ましくは、少なくとも６０質量％及び最も好ましくは、少なくとも６５質量％である。
【００４５】
欧州薬局方（ＥＰ）において、非経口エマルジョンにおける使用のために許容可能である魚油に関する２種のモノグラフ（即ち、表題“ω−３酸トリグリセリド”のＥＰ  １３５２、及び、表題“ω−３酸が豊富な魚油”のＥＰ  １９１２）が存在する（ＥＰ  １３５２、ＥＰ  １９１２、２００８年）。ＥＰ  １３５２における生物活性ｎ３−ＦＡｓのための組成及び必須要件がＥＰ  １９１２においてよりも遥かに高いということにおいて、モノグラフＥＰ  １３５２は、ＥＰ  １９１２から実質的に異なる（ＥＰ  １３５２：ＥＰＡ＋ＤＨＡ≧４５％；総ｎ３−ＦＡｓ≧６０％  対  ＥＰ  １９１２：ＥＰＡ：≧１３％；ＤＨＡ≧９％；総ｎ３−ＦＡｓ≧２８％）。ＥＰ  １９１２におけるｎ３−ＦＡｓのレベルは、自然において見られるレベルと一致する。比較すると、ＥＰ  １３５２において、ｎ３−ＦＡ濃度は、実質的により高いものであり、分子蒸留のような濃縮プロセスにより得られ得、それにより、存在する幾つかの望ましくない脂肪酸、例えば、ミリスチン酸、パルミチン酸及びステアリン酸が除去される。その際、存在する全ての脂肪酸の、及び、特にω−３脂肪酸の濃度は、比例して高くなる。例示的な態様において、魚油トリグリセリドは、該魚油トリグリセリドの脂肪酸の総質量に基づいて、少なくとも６０質量％、好ましくは少なくとも６５質量％の量でω−３脂肪酸を含む。魚油トリグリセリドは、該魚油トリグリセリドの脂肪酸の総質量に基づいて、少なくとも４５質量％、好ましくは少なくとも５０質量％のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の総量を含む。例えば、脂肪酸及びω−３脂肪酸（例えば、ＥＰＡ及びＤＨＡ等）は、ＥＰ  １３５２に従って、魚油トリグリセリド中のそのような酸の構成要素を参照してここで議論された。例えば、議論された脂肪酸及びω−３脂肪酸（例えば、ＥＰＡ及び
ＤＨＡ等）は、該魚油トリグリセリド中に存在する場合、それらのエステル化形態にある。
【００４６】
本発明に従って、魚油トリグリセリドは、総ω−３脂肪酸含有量の質量に基づいて、３０％以上の量におけるエイコサペンタエン酸、３０％以下の量におけるドコサヘキサエン酸及び約４０％以下の量におけるドコサペンタエン酸からなるω−３脂肪酸を含む。。
【００４７】
魚油トリグリセリドは、少なくとも１種のω−６脂肪酸、例えば、複数のω−６脂肪酸を含み得る。該少なくとも１種のω−６脂肪酸は、例えば、アラキドン酸又はＡＡ（２０：４ｎ６）、リノレン酸又はＬＡ（１８：２ｎ６）、γ−リノレン酸又はＡＬＡ（１８：３ｎ６）又はそれらの組み合わせを含み得る。例えば、前記少なくとも１種のω−６脂肪酸の総含有量は、グリセロールとエステル化されて魚油トリグリセリドを形成する脂肪酸の質量に基づいて、約０．１％ないし約１．０％、又は約０．２％ないし約０．９％、又は約０．３％ないし約０．８％、又は約０．４％ないし約０．７％、又は約０．５％ないし約０．６％であり得る。
【００４８】
ω−３脂肪酸（ｎ３−ＦＡｓ）の含有量の決定は、欧州薬局方“ω−３酸が豊富な魚油”中に記載されているようにしてなされ得る。ｎ３−ＦＡｓの含有量は、あらゆる単一のｎ３−ＦＡ又はそれらのあらゆる組み合わせからのものであり得る。例示的な態様において、組成物は、ＥＰＡ、ＤＨＡ、ＤＰＡ又はそれらの組み合わせ、例えば、ＥＰＡ、ＤＨＡ及びＤＰＡのそれぞれを含み得る。エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の個人の用量、例えば、総１日用量は、体重に基づいて、製剤の０ないし３００ｍｇ／ｋｇ、例えば、５０ないし２５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、１００ないし２００ｍｇ／ｋｇで変わり得る。ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の個人の用量、例えば、総１日用量は、体重に基づいて、製剤の０ないし３００ｍｇ／ｋｇ、例えば、５０ないし２５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、１００ないし２００ｍｇ／ｋｇで変わり得る。ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）の個人の用量、例えば、総１日用量は、体重に基づいて、製剤の０ないし３００ｍｇ／ｋｇ、例えば、５０ないし２５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、１００ないし２００ｍｇ／ｋｇで変わり得る。例えば、ＥＰＡ、ＤＨＡ及び／又はＤＰＡは、重要臓器への神経保護作用を提供するのに有効な量で存在し得る。
【００４９】
魚油トリグリセリドは、それぞれ油成分の総質量に基づいて、少なくとも２５質量％、好ましくは少なくとも３５質量％、更に好ましくは少なくとも５０質量％、特には少なくとも７５質量％及びとりわけ少なくとも８５質量％の量で存在し得る。
【００５０】
好ましい態様に従って、魚油トリグリセリドは、油成分の総質量に基づいて、５５ないし９５質量％、より好ましくは６０ないし９２質量％、特には７０ないし９０質量％の範囲の量で存在する。
本発明の好ましい態様に従って、水中油エマルジョンは、更に、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）を含む。
【００５１】
該エマルジョンの油成分の例示的な第二成分は、少なくとも１種の中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）、例えば、複数のＭＣＴｓを含み得る。例えば、前記少なくとも１種のＭＣＴは、該エマルジョンの油成分の総質量に基づいて、約１０％ないし約６９％、又は約１０％ないし約４０％、又は約１０％ないし約３０％、又は約１０％ないし約２０％、又は約１０％ないし約１５％、又は約２０％ないし約６０％、又は約３０％ないし約５０％、又は約４０％ないし約４５％存在し得る。例えば、ＭＣＴの例示的な範囲を採用することにより、人体へ送達されるエステル化されたω−３脂肪酸の量は、増加し得る。例えば、例示的なＭＣＴ範囲を採用することにより、人体へ送達されるエステル化されたω−３脂肪酸の量は、該エマルジョンの有利な代謝クリアランス及び物理化学的安定性の特性を依然
として達成しながら、比較的少ない量のＭＣＴで増加され得る。
【００５２】
例えば、ＭＣＴは、飽和中鎖脂肪酸、例えば、複数の飽和中鎖脂肪酸を含み得る。例示的な態様において、ＭＣＴは６ないし１２個の炭素原子を有する脂肪酸のトリグリセリドである。野菜のような植物、例えば、複数の植物から導かれ得る。ＭＣＴは、カプリル酸（例えば、ＭＣＴの約５０質量％ないし約８０質量％の量において）、８−炭素飽和ＦＡ（８：０）を含み得る。ＭＣＴはカプリン酸（例えば、ＭＣＴの約２０質量％ないし約５０質量％の量において）、１０−炭素飽和ＦＡ（１０：０）を含み得る。例えば、中鎖トリグリセリドは、該中鎖トリグリセリドの少なくとも９０質量％の量で、カプリル酸及びカプリン酸のトリグリセリドを含み得る。この開示における使用のためのＭＣＴの記載は、例えば、表題“トリグリセリド中鎖”（トリグリセリド飽和媒体）のＥＰモノグラフ０８６８の要求を満たし得る（ＥＰ  ０８６８、２００８年）。
【００５３】
ここに記載される水中油エマルジョン組成物の油は、更に、中鎖トリグリセリドを含み得る。“中鎖トリグリセリド”（ＭＣＴｓ）は、天然由来又は合成の何れかであり得るトリグリセリド油の別の種類である。ＭＣＴｓは長さにおいて、６ないし１４個の炭素、好ましくは６ないし１２個の炭素、特には、８ないし１０個の炭素の脂肪酸から形成される。水中油エマルジョンと共に投与された中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）は、殆どがエネルギー源としての機能を果たす。ＭＣＴは、例えば、Ｍｉｇｌｙｏｌ  ８１２（ＳＡＳＯＬ
ＧｍｂＨ、ドイツ）又はＣＲＯＤＡＭＯＬ  ＧＴＣＣ−ＰＮ（Ｃｒｏｄａ  Ｉｎｃ，ニュージャージー州）として市販で入手可能である。
【００５４】
本発明の好ましい態様に従って、該エマルジョンは、７、９及び１１個の炭素原子を有する脂肪酸の群から選択される脂肪酸の少なくとも５０質量％を含む脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなるＭＣＴを含む。
上記で定義されたようなＭＣＴと魚油グリセリドとの組み合わせは、本発明の水中油エマルジョンのために有利である。
【００５５】
本発明の好ましい態様に従って、水中油エマルジョンは、それぞれ油成分の総質量に基づいて、５ないし７５質量％、好ましくは、１０ないし５５質量％及び特には、１５ないし４５質量％の範囲の量において、中鎖トリグリセリドを含む。
本発明の好ましい態様において、水中油エマルジョンは、１：１ないし９：１、より好ましくは１．５：１ないし８：１、特には２：１ないし７：１の範囲の質量比で、魚油トリグリセリドと中鎖トリグリセリドを含む。
【００５６】
特に好ましい態様に従って、油相中の魚油トリグリセリド及びＭＣＴの量は、油成分の総質量に基づいて、少なくとも９０質量％、好ましくは少なくとも９５質量％、より好ましくは少なくとも９８質量％、特には少なくとも９９質量％である。
油成分は、付加的に更なる油を含み得るが、それは好ましくは３０℃未満、より特には２０℃未満及び１０℃未満を含む融点を有する。
【００５７】
好ましくは、油成分は、油成分の総質量に基づいて、少なくとも７５質量％のトリグリセリド又は少なくとも８５質量％のトリグリセリドを含む油を含む。特異的な態様において、油成分は、少なくとも９０質量％のトリグリセリド又は少なくとも９５質量％のトリグリセリドを含む。
更なる異的な態様において、油相は更に、“長鎖トリグリセリド”（ＬＣＴ）を含む。
【００５８】
ある態様において、油は野菜油を含み得る。“野菜油”は、植物種子又は木の実由来の油を言及する。野菜油は典型的には、３つの脂肪酸（通常、長さにおいて１４ないし２２個の炭素であって、油の原料に依存して、個数と位置が変わる不飽和結合を伴う）がグリ
セロール上の３つのヒドロキシ基とエステル結合を形成する場合に形成される、“長鎖トリグリセリド”（ＬＣＴｓ）である。ある態様において、高純度等級の野菜油（“超精製品（ｓｕｐｅｒ  ｒｅｆｉｎｅｄ）”とも呼ばれる）が、水中油エマルジョンの安全性及び安定性を確かなものとするために使用される。ある態様において、野菜油の制御された水素化により製造された水素化植物油が使用され得る。
【００５９】
例示的な野菜油は、アーモンド油、ババス油、クロフサスグリ種油、ボリジ油、キャノーラ油、ヒマシ油、ココナッツ油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油、ピーナッツ油、ヤシ油、パーム核油、菜種油、サフラワー油、大豆油、ヒマワリ油及びゴマ油を含むが、これらに限定されるものではない。これらの油の水素化された及び／又は部分的に水素化された形態もまた使用され得る。特定の態様において、油は、更に、サフラワー油、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油及び／又は大豆油を含む。更なる特定の態様において、油は、更に、サフラワー油及び／又は大豆油を含む。
【００６０】
油が更に大豆油を含む特定の態様において、該大豆油は、９ないし１３％のパルミチン酸含有量（ｗｔ．／ｗｔ）、２．５％ないし５％のステアリン酸含有量、１７％ないし３０％のオレイン酸含有量、４８％ないし５８％のリノール酸含有量及び５％ないし１１％のリノレン酸含有量を有し得る。
【００６１】
更に、特定の態様において、水中油エマルジョン組成物は、構造化トリグリセリドを含み得る。ここで使用される“構造化トリグリセリド”は、６ないし１２の炭素原子の炭素鎖長を有する少なくとも１つの脂肪酸基及び１２の炭素単位を超える炭素鎖長を有する少なくとも１つの脂肪酸基を有するトリグリセリド又はトリグリセリドの混合物を含むトリグリセリドである。
【００６２】
大量のω−３−脂肪酸残基が患者の治療において、ホルモンの効果を改善することが見出された。従って、本発明の特定の態様に従って、水中油エマルジョンは、植物油及び／又は魚油及びＭＣＴ以外の油が基本的に存在しない。本発明の意味の範囲内において基本的に存在しないとは、量が、該エマルジョンの総質量に基づいて、１０質量％未満、好ましくは５質量％未満、より好ましくは２質量％未満、特には１質量％未満、例えば、０．１質量％未満であることを意味する。
【００６３】
特定の態様において、該エマルジョンは、モノグリセリド、ジグリセリド、アセチル化モノグリセリド、アセチル化ジグリセリド及び／又はそれらの混合物からなる群より選択される極性改良剤の、０．８％  ｗｔ／ｗｔ以下又は０．５％  ｗｔ／ｗｔ以下を含む、０．９％  ｗｔ／ｗｔ以下を含む。別の特定の態様において、該エマルジョンは、０．５％  ｗｔ／ｗｔ以下のような、０．８％  ｗｔ／ｗｔ以下を含む、０．９％  ｗｔ／ｗｔ以下のモノグリセリドを含む。
【００６４】
別に表現すると、特定の態様において、該エマルジョンは、モノグリセリド、ジグリセリド、アセチル化モノグリセリド、アセチル化ジグリセリド及び／又はそれらの混合物からなる群より選択される極性改良剤の、２０質量％以下、１０質量％以下又は５質量％を含む、３０質量％以下のリン脂質を含む。該エマルジョンのリン脂質含有量と比較して、高い濃度での極性改良剤の使用は、該リン脂質の安定化特性において悪影響を有し得る。
【００６５】
特定の態様において、水中油エマルジョンは、１００ｇ／Ｌないし３００ｇ／Ｌ、好ましくは１２０ｇ／Ｌないし２８０ｇ／Ｌ及び特に１５０ｇ／Ｌないし２５０ｇ／Ｌ、例えば、２００ｇ／Ｌの油を含む。ある態様において、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンの実質的な割合は、水中油エマルジョンの油滴内に含まれる。ある態様において、８０％を超えるプロゲストゲン及び／又はエストロゲンが油滴内に溶解し且つ維持される。あ
る態様において、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンの８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％より多くが、油相中に溶解している（２０℃で決定された）。
【００６６】
本発明の水中油エマルジョンは、好ましくは、乳化剤を含むが、それは特に、５０ｇ／Ｌまで又は２０ｇ／Ｌまで、好ましくは２ないし１５ｇ／Ｌの量で存在する。
【００６７】
本発明の水中油エマルジョンは、更に、リン脂質を含む、１種以上の乳化剤／界面活性剤を含み得る。幾つかの態様において、該乳化剤は、天然由来である。天然由来の乳化剤は、大豆レシチン、卵レシチン、ヒマワリ油レシチン、スフィンゴシン、ガングリオシド、フィトスフィンゴシン及びそれらの組み合わせを含む。水素化レシチン、即ち、レシチンの制御水素化の生成物もまた、本発明において使用され得る。
【００６８】
特定の態様において、本組成物は、界面活性剤としてリン脂質を含む。本発明において有用な例示的なリン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されるものではない。これらは典型的に、１０ないし１８個の炭素原子のような、４ないし２２個の炭素原子及び種々の飽和度を有する。該組成物のリン脂質成分は、単一のリン脂質又は幾つかのリン脂質の混合物の何れかであり得る。使用されるリン脂質は、天然又は合成のものであり得るが、非経口投与、特に静脈内投与として許容されるべきものである。
【００６９】
好適なリン脂質の包括的でないリストを以下に列挙する：
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸、ナトリウム塩（ＤＭＰＡ、Ｎａ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸、ナトリウム塩（ＤＰＰＡ、Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸、ナトリウム塩（ＤＳＰＡ、Ｎａ）を含むホスファチジン酸；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）を含むホスホコリン；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）を含むホスホエタノールアミン；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＬＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＭＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール、アンモニウム塩（ＤＭＰ−ｓｎ−１−Ｇ、ＮＨ４）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＰＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＳＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール、ナトリウム塩（ＤＳＰ−ｓｎ−１Ｇ、Ｎａ）を含むホスホグリセロール；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、ナトリウム塩（ＤＰＰＳ、Ｎａ）を含むホスホセリン；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＰＯＰＧ、Ｎａ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、アンモニウム塩（ＰＯＰＧ、ＮＨ４）を含む混合鎖リン脂質；１−パルミトイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ−リソ−ＰＣ）、１−ステアロイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ
コリン（Ｓ−リソ−ＰＣ）を含むリゾリン脂質；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール  ２０００）−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＰＰＥ、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール  ５０００）−ＭＰＥＧ−５０００−ＤＳＰＥ、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール  ５０００）−ＭＰＥＧ−５０００−ＤＰＰＥ、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール  ７５０）−ＭＰＥＧ−７５０−ＤＳＰＥ、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール  ２０００）−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ、ナトリウム塩を含むペグリン脂質。
【００７０】
１態様において、本発明に従う組成物中のリン脂質の量は、該組成物の総容積における質量に基づいて、０．５ないし２５ｇ／Ｌの範囲内である。ある態様において、リン脂質は、１ないし１５ｇ／Ｌのような、０．８ないし１８ｇ／Ｌを含む、０．７ないし２０ｇ／Ｌの範囲内で存在し得る。
【００７１】
他の特定の態様において、リン脂質乳化剤の原料は、卵レシチンのような、レシチンである。米国薬局方（ＵＳＰ）に従って、レシチンは、アセトン−不溶性リン脂質の複合混合物を記載する一般名であり、それは主に、トリグリセリド、脂肪酸及び炭水化物のような他の物質の種々の量と組み合わされた、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン及びホスファチジルイノシトールからなる。
【００７２】
大豆レシチン及び卵レシチン（これらの化合物の水素化型を含む）は、生体系において安全性の長い歴史を有し、複合された乳化特性及び可溶化特性を有し及び生体内において殆どの合成界面活性剤よりも迅速に無害な物質へ代謝される傾向がある。市販で入手可能な大豆リン脂質／レシチンは、Ｃｅｎｔｒｏｐｈａｓｅ及びＣｅｎｔｒｏｌｅｘ製品（Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｓｏｙａ）、Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ、ドイツ）、Ｌｉｐｏｉｄ（Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍｂＨ、ドイツ）、ＥＰＩＫＵＲＯＮ（Ｄｅｇｕｓｓａ）及びＰＬ９０（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ、スウェーデン）である。特定の態様において、リン脂質の原料は卵レシチンである。
【００７３】
ある態様において、組成物におけるリン脂質を含む乳化剤の総量は、該組成物の総体積における質量に基づいて、０．５ｇ／Ｌないし４８ｇ／Ｌ、特に０．８ｇ／Ｌないし４２ｇ／Ｌの範囲内である。ある態様において、例えば、乳化剤が卵レシチンである場合、乳化剤の量は、４ｇ／Ｌないし２６ｇ／Ｌ、特に１０ないし２０ｇ／Ｌ、例えば、１１ないし１５ｇ／Ｌを含む、３．５ｇ／Ｌないし２７ｇ／Ｌを含む、例えば、３ｇ／Ｌないし２９ｇ／Ｌのような１ｇ／Ｌないし３９ｇ／Ｌの範囲内である。
好ましくは、該エマルジョンは、ω−３−脂肪酸部分を含むリン脂質、好ましくは、オキアミ（オキアミ目）から得られるリン脂質を含む。
【００７４】
１態様において、乳化剤は、６０ないし８０％  ｗｔ／ｗｔ、例えば、６７％  ｗｔ／ｗｔのホスファチジルコリン；１０−２０％  ｗｔ／ｗｔ、例えば、１５％  ｗｔ．／ｗｔのホスファチジルエタノールアミン；≦３％  ｗｔ／ｗｔ、例えば、２％  ｗｔ．／ｗｔのスフィンゴミエリン；及び≦３％  ｗｔ／ｗｔ、例えば、１％  ｗｔ／ｗｔのリゾホスファチジルコリンを含む卵レシチンである。
“Ｅｇｇ  ｌｅｃｉｔｈｉｎ  ＰＬ９０”（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ  ＡＢ）は、そのようなリン脂質含有量を有する卵レシチンの１例である。
【００７５】
ω−３−脂肪酸残基が、治療及び予防の間にホルモンの効果を改善することが見出された。従って、特に好ましい態様に従って、水中油エマルジョンは、ω−３−脂肪酸部分を有するリン脂質、好ましくは、オキアミ（オキアミ目）から得られるリン脂質を含む。
【００７６】
ω−３−脂肪酸残基を含むリン脂質は、オキアミから得ることができる。例えば、オキアミ油は、ω−３−脂肪酸−含有リン脂質を、オキアミ油の質量に基づいて、約２０ないし約６０％、例えば、約３０ないし約５０％の量で含み得る。例示的な態様において、オキアミ油は、ω−３−脂肪酸−含有トリグリセリドを、オキアミ油の質量に基づいて、約３０％未満、例えば、約５％未満の量で含み得る。例示的な態様において、オキアミ油は、実質的にω−３−脂肪酸−含有トリグリセリドが存在しないものであり得る。例えば、リン脂質（ＰＬｓ）とトリグリセリド（ＴＧｓ）の双方は、特定の官能基が、それぞれｓｎ１、ｓｎ２及びｓｎ３として言及される位置−１、位置−２及び位置−３で、それぞれの炭素に結合される３−炭素骨格（トリアシルグリセロール）を有する。ＰＬｓとＴＧｓの双方におけるｓｎ１位及びｓｎ２位は、１８−炭素化合物（例えば、リノール酸、α−リノレン酸、オレイン酸及びステアリン酸）のような長鎖脂肪酸及び／又は２０個以上の炭素を含む超長鎖脂肪酸（例えば、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン酸）を含み得る。ＴＧｓにおいて、ｓｎ３位がまた、上記の長鎖脂肪酸により占有され、そしてそのようなこれらの化合物は、“中性脂肪”として既知であるが、一方、ＰＬｓにおいて、ｓｎ３位はその分子を、親水性と疎水性の両方が付与される、両親媒性化合物として既知の分子に顕著に変化させる、コリン、エタノールアミン、セリン、イノシトール等のようなアルコールに結合されたリン酸により占有される。生体膜及び両親媒性特性を有することの構造的組成の部分として、ＰＬｓは多くの代謝工程において極めて重要な役割を演じる。
【００７７】
例示的な態様において、ω−３−脂肪酸−含有リン脂質の所定量は、リン脂質の１位及び２位に結合されているが、リン脂質の３位に結合されていないω−３−脂肪酸を含む。即ち、ω−３−脂肪酸−含有リン脂質の所定量は、リン脂質の２位（即ち、中間位置）においてω−３−脂肪酸を含み得る。例えば、リン脂質の１位及び２位に結合されているが、リン脂質の３位に結合されていないω−３−脂肪酸を含むω−３−脂肪酸−含有リン脂質は、該ω−３−脂肪酸−含有リン脂質の総質量に基づいて、約７０％ないし約８０％、例えば、約８０％ないし約９５％の量で存在し得る。
【００７８】
別の例示的な観点に従って、水中油エマルジョンを非経口的に投与する方法が提供され、該方法は、存在する不飽和ω−３−脂肪酸の化学分解及び酸化に対抗する天然由来の抗酸化剤であるアスタキサンチンの保護濃度を含む非経口水中油エマルジョン中に、海産甲殻類から得られたリン脂質を含む組成物を、ヒトに非経口投与することを含む。ポリ不飽和ω−３−脂肪酸の酸化は、静脈内投与において有害であり得る活性酸素種の形成を引き起こす。よって、特定のω−３−脂肪酸が豊富な水中油エマルジョンは、化学分解に対する保護を必要とする。オキアミ油中に見られるアスタキサンチンは、ω−６−脂肪酸の酸化に対して保護する大豆油中のα−トコフェロールの存在に類似する、ω−３−脂肪酸の酸化に対する独特の保護を提供し得る。それ自体は、オキアミ油中に見られる海洋ベースのリン脂質と同様に、該エマルジョンの物理的安定性を独自に促進し得るｎ３−ＦＡｓの高濃度を含み、それによりオキアミ油中のアスタキサンチンの存在もまた水中油エマルジョンの化学安定性を独自に促進し得る。主要な界面活性剤又は卵リン脂質を伴う共−界面活性剤としてのオキアミ油の例示的な観点のように、アスタキサンチンは主要な抗酸化剤又はα−トコフェロールを伴う共−抗酸化剤であり得るだろう。
【００７９】
本発明の更なる代替の態様は、
ａ）上記で規定されるようなプロゲストゲン及び／又はエストロゲン、及び
ｂ）上記で規定されるような海産甲殻類から得られたリン脂質
を含む非経口投与のためのホルモン含有水中油エマルジョンである。
【００８０】
１態様において、該エマルジョンは、ポリエチレングリコール１５−ヒドロキシステアレートの、１．５％  ｗｔ／ｗｔ以下、１．２％  ｗｔ／ｗｔ以下又は０．４％  ｗｔ／
ｗｔ以下を含む０．８％  ｗｔ／ｗｔ以下を含む。別の態様において、組成物は、１．５％  ｗｔ／ｗｔ以下、１．２％  ｗｔ／ｗｔ以下又は０．４％  ｗｔ／ｗｔ以下を含む０．８％  ｗｔ／ｗｔ以下のポリエチレングリコールエステル及び／又はポリエチレン−プロピレングリコールを含む。
【００８１】
幾つかの態様に従って、本発明は、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンを含む医薬組成物であって、前記組成物は水相、油相及び界面活性剤を含むエマルジョンの形態にある組成物を提供する。
【００８２】
水媒体
上記されるように、本発明の水中油エマルジョンは、更に、水媒体を含む。“水媒体”又は“水相”は、水−含有液体を言及する。幾つかの態様において、水媒体は、水及び／又は水性緩衝溶液である。
【００８３】
本発明の水中油エマルジョンは、７０ないし９８質量％、好ましくは７０ないし９０質量％を含み得る。
幾つかの態様において、該エマルジョンは生理的に相溶性の緩衝剤の０ないし４ｍＭを含み得る。
【００８４】
幾つかの態様において、本発明に従う水中油エマルジョンは、共−界面活性剤を任意に含む。本発明のエマルジョンにおける使用のために好適な共−界面活性剤は、脂質エマルジョンの凝集及び／又は合体を防ぐものである。例示的な共−界面活性剤は、コレステロール、オレイン酸、オレエート、ツィーン８０（ＰＥＧ−ソルビタン  モノオレエート）、ＨＣＯ−６０、Ｓｏｌｕｔｏｌ  Ｈ１５（ポリオキシエチレン−６６０−ヒドロキシステアレート）、ＰＥＧ−４００（ポリエチレングリコール）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（ＢＡＳＦ）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（ポリオキシエチレン−３５−リシノレエート）又はデオキシコール酸のような胆汁酸の塩を含むが、これらに限定されない。他の態様において、共−界面活性剤は、例えば、Ｃ１６−Ｃ２０脂肪酸、それらの塩及び／又はそれらの混合物或いはＣ１８脂肪酸、それらの塩及び／又はそれらの混合物のような、Ｃ１２−Ｃ２２脂肪酸、それらの塩及び／又はそれらの混合物からなる群より選択される。特定の態様において、該脂肪酸は、単不飽和である。
【００８５】
幾つかの態様において、共−界面活性剤は、０．００５％以上又は０．０１％以上又は０．０２％以上の量（ｗｔ／ｖｏｌ）で組成物中に存在し得る。これらの態様の何れかに従って、共−界面活性剤は、４％以下又は１％以下又は０．０４％以下の量（ｗｔ／ｖｏｌ）で存在し得る。
【００８６】
特定の態様において、共−界面活性剤は、パルミチン酸、オレイン酸又はステアリン酸のような長鎖脂肪酸或いはそれらのアルカリ塩からなる群より選択される。オレエート及び／又はオレイン酸、特にオレイン酸ナトリウムが、特に好適な共−界面活性剤である。
【００８７】
共−界面活性剤がオレエート及び／又はオレイン酸である、ある態様において、該共−界面活性剤は、０．００５％以上又は０．０１％以上又は０．０２％以上の量（ｗｔ／ｖｏｌ）で存在し得る。これらの態様の何れかに従って、共−界面活性剤は、０．５％以下、０．２％以下、０．１％以下又は０．０５％以下の量（ｗｔ／ｖｏｌ）で存在し得る。特定の態様において、共−界面活性剤は、オレイン酸ナトリウムであり且つ０．０３％  ｗｔ／ｖｏｌ（０．３ｇ／Ｌ）の量で存在する。ここに記載されるエマルジョンは、長期に亘って、静脈内注射又は静脈内点滴のような、非経口注入のために好適であり得る。典型的な治療期間は、例えば、３−７日間であり得る。特定の態様において、ある共−界面活性剤の濃度は、従って、炎症、チトクロームＰ４５０阻害等のような副作用を防ぐため
に最小限に保たれる。特定の態様において、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（ポリ（エチレングリコール）−１３−ポリ（プロピレングリコール  コ−プロピレングリコール）が、０．７％（ｗｔ／ｗｔ）未満又は０．５％（ｗｔ／ｗｔ）未満の量で存在する。他の特定の態様において、Ｓｏｌｕｔｏｌ−ＨＳ（マクロゴール−１５−ヒドロキシステアレート）が、１．２％（ｗｔ／ｗｔ）未満又は１％（ｗｔ／ｗｔ）未満の量で存在する。
【００８８】
浸透圧性薬剤
本発明に従う水中油エマルジョンは、浸透圧性薬剤及び／又は等張調節剤を含み得る。そのような組成物は、２００ないし１０００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲における浸透圧を有し得る。
【００８９】
本発明の特定の態様に従って、該エマルジョンは、等張で、等浸透圧であり得る。該組成物は、２２０ないし６００ｍＯｓｍ／ｋｇ又は２３０ないし３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有し得る。
【００９０】
好適な浸透圧性薬剤及び／又は等張調節剤は、塩化カリウム又は塩化ナトリウム、トリハロース、スクロース、ソルビトール、グリセロール、グルコース、キシリトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、アルブミン、アミノ酸及びこれらの混合物を含む。ある態様において、２８０ないし３００ｍＯｓｍ／ｋｇのような、２７０ないし３３０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧は、グリセロール、デキストロース、ラクトース、ソルビトール又はスクロースのような、同様に浸透圧を増加する薬剤を用いて達成される。
【００９１】
１態様において、浸透圧性薬剤は、グリセロール、ソルビトール又はキシリトールのような、生理的に許容されるポリオールである。特定の態様において、浸透圧性薬剤は、グリセロールである。
【００９２】
浸透圧性薬剤及び／又は等張調節剤は、一般に、有害な生物学的効果を有さないが、等浸透圧性の及び／又は等張の組成物を提供するのに十分な量で使用される。グリセロールが浸透圧性薬剤である場合、グリセロールは、２．３％ないし２．７％を含む、２．１％ないし２．９％（ｗｔ／ｖｏｌ）のような、２ないし５％（ｗｔ／ｖｏｌ）の範囲内で存在し得る。特定の態様において、本発明のエマルジョンは２．５％のグリセロール（２５ｇ／Ｌ）を含む。
【００９３】
ｐＨ調節剤
幾つかの態様において、本発明に従うエマルジョンは、ｐＨ７．０ないし８．０を含む、ｐＨ６．５ないしｐＨ８．５のような、ｐＨ６．０ないしｐＨ９．０の範囲内のｐＨを有する。組成物のｐＨは、該技術分野における既知の方法、例えば、脂肪酸上の負電荷を中和する適当な塩基の使用を介して、適当な緩衝剤の使用を介して又はそれらの組み合わせにより調整され得る。種々の塩基及び緩衝剤が、本発明のエマルジョンとの使用のために好適である。当業者は、該エマルジョンへの緩衝剤の添加が、該エマルジョンの最終ｐＨだけでなく、イオン強度にも影響することを理解するだろう。高イオン強度緩衝剤は、該エマルジョンのゼータ電位に悪影響を及ぼし得るため、望ましくない。特定の態様において、ｐＨは、１Ｎ水酸化ナトリウムの添加により所望の値に調整される。
【００９４】
任意の添加物
本発明に従うエマルジョンは、任意に、結合剤、キレート剤、錯化剤、防腐剤（抗菌剤及び抗酸化剤を含む）、粘度調整剤及び他の生体適合性材料又は治療剤のような、医薬的に許容される添加剤の１種以上を含む。
【００９５】
組成物成分の比率
本発明の組成物中に含まれ得る異なる成分の量は上記で示される一方、本発明の他の観点は、以下で議論されるように、特定の成分の比率に関する。
【００９６】
乳化剤（リン脂質）：油
水中油エマルジョンにおけるリン脂質の過剰量が、オートクレーブ処理及び／又は貯蔵の後に、ｐＨの低下を引き起こす、リン脂質の分解生成物における増加を誘導し得、それは次にエマルジョンの安定性に悪影響を及ぼすことが見出された。
【００９７】
好ましい態様において、例えば、乳化剤がリン脂質である場合、該エマルジョンは、１２ないし２６％を含む８．４ないし４２．５％のような、１５ないし２２％を含む１４ないし２５％のような、６．８ないし４３％の範囲内の量（総油成分の％  ｗｔ．／ｗｔとして表される）における乳化剤を含む。特定の態様において、乳化剤は、リン脂質であり、油の１６ないし１８％（ｗｔ／ｗｔ）の量で存在する。
【００９８】
更なる好ましい態様において、水中油エマルジョンは、６．８％以上、８．４％以上、１２％以上、１４％以上又は１５％以上の、油の％  ｗｔ／ｗｔとして表される量でリン脂質を含む。幾つかの態様において、組成物は４３％以下、４２．５％以下、２６％以下、２５％以下又は２２％以下の、油の％  ｗｔ／ｗｔとして表される量でリン脂質を含む。
【００９９】
本発明の別の好ましい態様において、例えば、リン脂質の原料がレシチンである場合、組成物は油の６ないし１６％（ｗｔ／ｗｔ）を含む、油の４ないし１８％（ｗｔ／ｗｔ）のような、油の８ないし１４％（ｗｔ／ｗｔ）のような、油の３ないし２０％（ｗｔ／ｗｔ）の範囲内の量でレシチンを含む。特定の態様において、乳化剤は卵レシチンであり、油の１９ないし２１％（ｗｔ／ｗｔ）の量で存在する。
【０１００】
幾つかの態様において、本発明のエマルジョンは、８％以上、１０％以上、１３％以上、１５％以上又は１８％以上の、油の％  ｗｔ／ｗｔとして表される量で、卵レシチンのようなレシチンを含む。幾つかの態様において、組成物は５０％以下、４８％以下、４０％以下、３３％以下又は３１％以下の、油の％  ｗｔ／ｗｔとして表される量で、卵レシチンのようなレシチンを含む。
【０１０１】
共−界面活性剤：油
上記のように、本発明のある態様において、組成物は、オレエート又はオレイン酸のような共−界面活性剤を含む。特定の態様において、共−界面活性剤は、０．３ないし０．７％を含む０．１ないし０．９％のような、０．０８ないし２％の範囲内の、油成分の％
ｗｔ／ｗｔとして表される量で存在し得る。別の態様において、共−界面活性剤は、前記油の０．０２％  ｗｔ／ｗｔより多い量で存在する。特定の態様において、共−界面活性剤は、オレエート又はオレイン酸であり、油の０．５％（ｗｔ／ｗｔ）の量で存在する。
【０１０２】
幾つかの態様において、共−界面活性剤は、０．０２以上、０．０８％以上、０．１％以上又は０．３％以上の、油の％  ｗｔ／ｗｔとして表される量で存在し得る。他の態様において、油の％  ｗｔ／ｗｔとして表される量における、共−界面活性剤の濃度は、２％以下、０．９％以下又は０．７％以下である。
【０１０３】
共−界面活性剤：乳化剤（リン脂質）
本発明の好ましい態様において、組成物は、乳化剤としてのリン脂質及びオレエートのような共−界面活性剤を含む。これらの態様の特定の観点において、共−界面活性剤及び
乳化剤は、１：６８ないし１：２０を含む１：８２ないし１：１７のような、２：８５ないし１：３４を含む１：５１ないし１：２６のような、１：８５ないし１：１２の範囲内の、リン脂質に対する共−界面活性剤の比率（ｗｔ／ｗｔ）で存在し得る。
【０１０４】
好ましい態様において、共−界面活性剤及びリン脂質は、１：８５以上、１：８２以上、１：６８以上、１：５１以上又は２：８５以上の、リン脂質に対する共−界面活性剤の比率（ｗｔ／ｗｔ）で存在する。幾つかの態様において、共−界面活性剤及びリン脂質は、１：１２以下、１：１７以下、１：２０以下、１：２６以下又は１：３４以下の、リン脂質に対する共−界面活性剤の比率（ｗｔ／ｗｔ）で存在する。
本発明の別の好ましい態様において、組成物は、乳化剤としての卵レシチン及びオレエートのような共−界面活性剤を含む。これらの態様の特定の態様において、共−界面活性剤及び乳化剤は、１：７０ないし３：７０を含む１：８０ないし１：２０のような、１：５０ないし１：４０を含む１：６０ないし１：３０のような、１：１００ないし１：１５の範囲内の、レシチンに対する共−界面活性剤の比率（ｗｔ／ｗｔ）で存在し得る。
【０１０５】
特定の態様において、共−界面活性剤及びレシチンは、１：１００以上、１：８０以上、１：７０以上、１：６０以上又は１：５０以上の、レシチンに対する共−界面活性剤の比率（ｗｔ／ｗｔ）で存在する。幾つかの態様において、共−界面活性剤及びレシチンは、１：１５以下、１：２０以下、３：７０以下、１：３０以下又は１：４０以下の比率（ｗｔ／ｗｔ）で存在する。
【０１０６】
共−界面活性剤がオレエートであり且つ乳化剤が卵レシチンである特定の態様において、乳化剤に対する共−界面活性剤の比率（ｗｔ／ｗｔ）は、１：４０ないし１：２５のような、１：４５ないし１：２０の範囲内である。
【０１０７】
包装
本発明の水中油エマルジョンは、すぐに使える（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）組成物として提供され得る。ここで使用される“すぐに使える”は、希釈又は複数の成分との混合のような更なる処方が必要でないことを意味する。
【０１０８】
本発明の水中油エマルジョンは、密封包装で提供され得る。該包装は、脂質配合物並びにプロゲストゲン及び／又はエストロゲンとの使用のために共通であるべきである。油性配合物の包装のためにあまり好適でない材料の例は、ＰＶＣ及びＤＥＨＰを含む。油性配合物と共通である好適な包装は、ポリプロピレンベースの袋及びガラス瓶を含むが、これらに限定されるものではない。慣用のガラスは、本発明の組成物のための好適な包装材料である。特定の態様において、該エマルジョンは、密封された容器中に包装される。該容器は、物理的環境からの保護を提供するためにオーバーラップされ得る。１態様において、組成物は、２５０ｍＬの体積を有する密封容器中に包装される。１態様において、水中油エマルジョンは、不活性ガスのヘッドスペース下で密封容器中に包装される。
【０１０９】
幾つかの態様において、組成物は、不活性容器内に包装される。幾つかの態様において、不活性容器は光遮蔽される。他の態様において、該容器は二層壁を含み、及び、より特定の態様において、該二層の間の領域は、酸化を妨げるために不活性ガスで充填される。長期貯蔵のために、包装材料は、組成物内の酸素分解物の形成を妨げるために、環境大気から本発明の組成物の方への酸素の拡散を有利に妨げる。
【０１１０】
幾つかの態様において、組成物は、単位用量で包装される。単位用量は、対象者へのプロゲストゲン及び／又はエストロゲンの大量用量の投与のために又は治療の最初の１時間、最初の２時間、最初の４時間等のような、時間の所定期間に亘る組成物の投与のために十分な組成物を提供し得る。単位用量は、緊急事態において、例えば、救急車における救
急医療隊員による又は損傷／事故が発生した場所で応急手当を行う人又は医師による、組成物の迅速で簡便な投与を可能とする。単位用量形態の非限定的な例は、注射、事前充填注射器（ｐｒｅ−ｆｉｌｌｅｄ  ｓｙｒｉｎｇｅｓ）、ガラスバイアル瓶及び／又は密封バッグである。
【０１１１】
幾つかの態様において、組成物は、持続点滴療法で投与するために使用される、インスリンポンプデバイスと類似のデバイス内に、又は、そのようなデバイスと共に使用するために設計されたカートリッジ内に包装される。例示的なインスリンポンプは、ＭｉｎｉＭｅｄ又はＤｉｓｅｔｒｏｎｉｃにより市販されているものである。そのようなポンプは、例えば、カニューレ、組成物が貯蔵されるポンプ貯蔵器又はカートリッジ、電池で操作され得るポンプ及び、例えば、コンピューターチップのような、使用者が送達される活性物の実際の量を制御することを可能とする手段を含み得る。
【０１１２】
特定の例
一つの特定の態様において、本発明のエマルジョンは、
ａ）１．０ないし２．０ｇ／Ｌの範囲の量のプロゲステロン；
ｂ）油性分の総量に基づいて、
ｉ）魚油トリグリセリド  少なくとも５０質量％（ここで、該魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、該脂肪酸は、該脂肪酸の少なくとも４５質量％の量で、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含み、好ましくは、ω−３−脂肪酸の総量は、該脂肪酸の少なくとも５０質量％である。）；及び
ｉｉ）ＭＣＴ  １０ないし５０質量％
を含む油成分を、前記水中油エマルジョンに基づき、１００ないし３００ｇ／Ｌ；
ｃ）リン脂質  ４ないし２０ｇ／Ｌ、好ましくは、リン脂質  ８ないし２０ｇ／Ｌ及び
ｄ）グリセロール  １０ないし５０ｇ／Ｌ
を含む。
【０１１３】
一つの特定の態様において、本発明のエマルジョンは、
ａ）０．０５ないし１．０ｇ／Ｌの範囲の量のエストラジオール及び１．０ないし２．０ｇ／Ｌの範囲の量のプロゲステロン；
ｂ）油性分の総量に基づいて、
ｉ）魚油トリグリセリド  少なくとも５０質量％（ここで、該魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、該脂肪酸は、該脂肪酸の少なくとも４５質量％の量で、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含み、好ましくは、ω−３−脂肪酸の総量は、該脂肪酸の少なくとも５０質量％である。）；及び
ｉｉ）ＭＣＴ  １０ないし５０質量％
を含む油成分を、前記水中油エマルジョンに基づき、１００ないし３００ｇ／Ｌ；
ｃ）リン脂質  ４ないし２０ｇ／Ｌ、好ましくは、リン脂質  ８ないし２０ｇ／Ｌ及び
ｄ）グリセロール  １０ないし５０ｇ／Ｌ
を含む。
【０１１４】
一つの特定の態様において、本発明のエマルジョンは、
ａ）０．０５ないし１．０ｇ／Ｌの範囲の量のエストラジオール；
ｂ）油性分の総量に基づいて、
ｉ）魚油トリグリセリド  少なくとも５０質量％（ここで、該魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、該脂肪酸は、該脂肪酸の少なくとも４５質量％の量で、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含み、好ましくは、ω−３−脂肪酸の総量は、該脂肪酸の少なくとも５０質量％である。
）；及び
ｉｉ）ＭＣＴ  １０ないし５０質量％
を含む油成分を、前記水中油エマルジョンに基づき、１００ないし３００ｇ／Ｌ；
ｃ）リン脂質  ４ないし２０ｇ／Ｌ、好ましくは、リン脂質  ８ないし２０ｇ／Ｌ及び
ｄ）グリセロール  １０ないし５０ｇ／Ｌ
を含む。
【０１１５】
エマルジョンの特性
本発明に従う組成物は、典型的には、外観において乳白色であり、視覚的に均一なエマルジョンとして存在する。
【０１１６】
エマルジョン液滴の粒度分布
ＰＦＡＴ５値
米国薬局方（ＵＳＰ）は、脂質注射用エマルジョンにおける小球粒度分布のための制限を設定している（ＵＳＰ  ７２９−Ｐｈａｒｍ．Ｆｏｒｕｍ．２００５；３：１４４８−１４５３）。脂肪＞５μｍの体積加重パーセントとして表される、注射用エマルジョン中の直径＞５μｍの脂肪小球のための制限は、０．０５％を超えないか又はＰＦＡＴ５が０．０５％を超えないことである（ＵＳＰ  ７２９−Ｐｈａｒｍ．Ｆｏｒｕｍ．２００５；３：１４４８−１４５３）。値が０．０５％を超えるＰＦＡＴ５を有する組成物は、静脈内投与のために安全でないと考えられる。エマルジョンのＰＦＡＴ５値は、該エマルジョンの総油含有量、リン脂質の種類及び量、共−界面活性剤の選択、油に対する共−界面活性剤の比率及び凝集及び／又は合体に対するエマルジョン液滴の安定性を含む幾つかの要因により影響され得る。
【０１１７】
特定の態様において、本発明に従う組成物は、０．０２％以下を含む０．０４％以下のような、０．０１％以下を含むような、０．０５％以下のＰＦＡＴ５値を有する。
【０１１８】
１態様において、本発明の組成物の１００％のエマルジョン液滴は、直径において５μｍ以下であり、液滴の９９％を含む、少なくとも液滴の９８％が、１．５μｍ以下の直径である。直径において１μｍを超える液滴の粒度分布は、コールター  カウンター（Ｃｏｕｌｔｅｒ  ｃｏｕｎｔｅｒ）（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＩＩＩ）により決定される。
【０１１９】
ＰＣＳ
１態様において、直径において１μｍ以下の液滴は、３５０ｎｍの最大ＰＣＳ  ｚ−平均及び／又は０．２５以下のＰＣＳ多分散値を有する。特定の態様において、直径において１μｍ以下の液滴は、２５０ｎｍの最大ｚ−平均及び／又は０．２０以下の多分散値を有する。更に特定の態様において、径において１μｍ以下の液滴は、２２０ｎｍの最大ｚ−平均及び／又は０．１５以下の多分散値を有する。
【０１２０】
中央（ｍｅｄｉａｎ）液滴径
該エマルジョン液滴径は、液滴径が、凝集、クリーム状化、合体、オストワルド熟成及び最終的な相分離のような現象の速度に直接影響するため、エマルジョン不安定化の反応速度論を決定する主要パラメーターである。エマルジョン液滴径は、従って、エマルジョン安定性の指標である。例えば、油の種類、界面活性剤及び共−界面活性剤の種類、活性成分の存在、油の量、界面活性剤に対する油の比率及び共−界面活性剤に対する油の比率を含む複数のパラメーターが、エマルジョン液滴径に影響する。特定の態様において、本発明に従う組成物は、体積ベースの中央径、又は、１２１℃で１５分間のオートクレーブ処理後及び／又は４週間を含む少なくとも３週間の６０℃での貯蔵後に、約≦２００ｎｍを含む≦２３０ｎｍのような、約≦１８０ｎｍを含む≦１８５ｎｍのような、≦３００ｎ
ｍのＤ［４，３］を維持する。
【０１２１】
平均液滴径
１態様において、本発明に従う組成物のエマルジョン液滴粒子は、体積ベースの平均直径、又は、≦２００ｎｍを含む≦２５０ｎｍのような、≦１８０ｎｍを含む≦１８５ｎｍのような、≦３２０ｎｍのｄ（０，５）を有する。好ましくは、該液滴粒子は、２４０ないし３２０ｎｍの範囲である。
【０１２２】
特定の態様において、本発明に従う組成物は、体積ベースの平均直径、又は、１２１℃で１５分間のオートクレーブ処理後及び／又は４週間を含む少なくとも３週間の６０℃での貯蔵後に、≦２００ｎｍを含む≦２５０ｎｍのような、≦１８０ｎｍを含む≦１８５ｎｍのような、≦３００ｎｍのｄ（０，５）を維持する。
【０１２３】
ゼータ電位
ゼータ電位はエマルジョンの安定性に関係する。高いゼータ電位を有するエマルジョンは、電気的に安定化される一方、低いゼータ電位を有するものは、凝固又は凝集する傾向がある。エマルジョンのゼータ電位は、例えば、界面活性剤及び共−界面活性剤の選択及び量、エマルジョンのｐＨ並びに水溶液のイオン強度により影響される。
【０１２４】
１態様において、本発明の組成物は、−５１ｍＶないし−６０ｍＶを含む−４０ｍＶないし−６５ｍＶのような、−３０ｍＶないし−７０ｍＶの範囲内のゼータ電位を有する。加えて、本発明のエマルジョン組成物のゼータ電位は、−３０ｍＶ、−３５ｍＶ、−４０ｍＶ、−４５ｍＶ、−５０ｍＶ、−５５ｍＶ、−６０ｍＶ、−６５ｍＶ又は−７０ｍＶ又はそれ以上であり得る。
【０１２５】
粒子状物質
ある態様において、本発明のエマルジョンは、周囲温度（例えば、４℃、２℃ないし８℃又は２０℃ないし２５℃から選択される１以上の温度）で、結晶固体が存在しない。特定の態様において、本発明のエマルジョン組成物は、注射液中の粒子径及び数のための標準に適合する（ＵＳＰ  ７８８、方法２−顕微鏡粒子計数試験）。例えば、該組成物は、１ｍＬ当り０−１２個の１０μｍ以上の粒子及び１ｍＬ当り０−２個の２５μｍ以上の粒子を含み得る。
【０１２６】
エマルジョンの安定性
無菌状態
特定の態様において、本発明に従うエマルジョンは、無菌状態である。ここで使用される“無菌状態”とは、ＵＳＰ章＜７１＞の要求を満たす組成物を言及する。特定の態様において、組成物はＵＳＰ章＜８５＞“細菌エンドトキシン試験”の要求を満たし、任意に更に、ＵＳＰ章＜１５１＞“発熱性物質試験”の要求を満たす。特定の態様において、本発明のエマルジョンは、該エマルジョンの化学安定性及び／又は物理安定性を維持又は改善しながら、改善されたプロゲステロン及び／又はエストロゲンの溶解性を達成する。特定の態様において、組成物は、該組成物の物理的又は化学的な完全性を障害すること無しに、１２１℃で１５分間のオートクレーブ処理により加熱滅菌され得る。オートクレーブ処理による滅菌は、例えば、ろ過滅菌と比較して、微生物学的安全性の観点からだけでなく、経済的によりコスト効率が良いことからも有利である。
【０１２７】
更に、特定の態様において、該エマルジョンは、例えば、（ａ）組成物が、注射液における粒子径及び粒子数のための基準（ＵＳＰ  ７８８、方法２）を満たし及び／又はプロゲストゲン及び／又はエストロゲン結晶のより少ないレベルを含み、（ｂ）組成物が、低いＰＦＡＴ５値を有し（上記でより詳細に議論されているように）、（ｃ）組成物が、化
学的不純物のより低いレベルを含み、（ｄ）組成物が、微生物学的安全性のための最適な標準方法を使用してオートクレーブ処理され得、及び／又は組成物がアルコール又は潜在的に毒性の有機溶媒を含まないような、先行技術を超える安全性の優位性を示す。
【０１２８】
ここに記載される組成物の上述の優位性の１つ以上の結果として、該エマルジョンは、その中に含まれるプロゲストゲンの改善された利用可能性（例えば、血清ホルモンレベル及び／又は血漿濃度に反映され得るような、良好な薬物動態及び生物学的利用能）を提供し、及び、該エマルジョンの投与は、先行技術の組成物と比較して、患者の投薬において、改善された一貫性を提供する。
【０１２９】
使用するのに簡便で安全であることに加えて、最終的に、本発明に従うエマルジョン組成物は、室温で１又は２年の保存可能期間を有する、無菌の、すぐに使える（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）形態で有利に提供される。
【０１３０】
製造方法
本発明の更なる態様は、本発明の水中油エマルジョンの製造方法である。
該方法は、
ａ）魚油トリグリセリドを含む油相中のプロゲストゲン及び／又はエストロゲンを溶解すること（ここで、該魚油トリグリセリドは、脂肪酸でエステル化されたグリセロールからなり、該脂肪酸は、該脂肪酸の少なくとも４５質量％の量で、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含み、好ましくは、ω−３−脂肪酸の総量は、該脂肪酸の少なくとも６０質量％である。）；
ｂ）水相中の油相を、好ましくは乳化剤の存在下で、乳化すること
の工程を含む。
【０１３１】
別の観点において、本発明は、前にここで規定したような水中油エマルジョンの製造方法であって、該方法が、
ａ）水及びリン脂質及び任意の浸透圧性薬剤を混合して水性組成物を製造すること；
ｂ）プロゲストゲン及び／又はエストロゲン並びに油を混合して油性組成物を製造すること；
ｃ）前記水性組成物及び前記油性組成物を混合し、続いて均一化して均一の水中油エマルジョンを形成すること
の工程を含む方法に関する。
【０１３２】
特定の態様に従って、水性組成物は、該水性組成物が油性組成物と混合される前に、均一の懸濁液を製造するように均一化される。別の有利な態様において、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンは、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンの希釈を促進するために、少なくとも４０℃の温度を有する油に添加される。他の特定の態様において、油性組成物は、それが水性組成物と混合される前に、ろ過される。
【０１３３】
幾つかの非常に特定の態様において、該製造方法は、以下の工程：
Ａ）水性媒体中に任意の浸透圧性薬剤を溶解し及び攪拌すること；
Ｂ）卵レシチンのような乳化剤を添加し及び攪拌すること；
Ｃ）任意に共−界面活性剤及び任意のｐＨ調節剤を添加し及び混合すること；
Ｄ）油中にプロゲストゲン及び／又はエストロゲンを溶解して油相を形成すること；
Ｅ）油相をろ過し、続いて水相にろ過された油相を添加し及び混合すること；
Ｆ）均一化して均一なエマルジョンを形成すること；
Ｇ）水を任意に添加すること；
Ｈ）ｐＨをｐＨ８．０ないし８．８に調整するのに十分な１Ｎ  ＮａＯＨを任意に添加すること；
Ｉ）最終体積に達するのに十分な水性媒体を任意に添加すること
を含む。
【０１３４】
特定の態様において、均一化は、３５０気圧以上又は３７０気圧以上で達成される。
特定の態様において、該エマルジョンの製造方法は、水性媒体中（油中よりも）に卵レシチンを溶解する工程、油相を水相に添加する工程（逆よりも）及び３５０気圧以上で均一化する工程を含む。これらの工程は、結果として粒子径及びエマルジョン安定性に関して有利な特性を伴うエマルジョンが生じると考えられる。
別の特定の態様において、該エマルジョンは、密封容器中に包装され、例えば少なくとも１２１℃で最低限１５分間の保持時間で加熱することにより滅菌される。オートクレーブプログラムは、回転循環（ｒｏｔａｒｙ  ｃｙｃｌｅ）であり得る。
【０１３５】
他の非常に特定の態様において、該製造方法は、以下の工程：
Ａ）水性媒体中に浸透圧性薬剤を溶解し及び攪拌すること；
Ｂ）具体的には卵レシチンであるリン脂質を添加し及び攪拌すること；
Ｃ）任意に共−界面活性剤及び任意のｐＨ調節剤を添加し及び混合すること；
Ｄ）魚油トリグリセリド中にプロゲステロン及び／又はエストロゲンを溶解して油相を形成すること；
Ｅ）油相をろ過し、続いて水相にろ過された油相を添加し及び混合すること；
Ｆ）均一化して均一なエマルジョンを形成すること；
Ｇ）水を任意に添加すること；
Ｈ）ｐＨをｐＨ８．０ないし８．８に調整するのに十分な１Ｎ  ＮａＯＨを任意に添加すること；
Ｉ）最終体積に達するのに十分な水性媒体を任意に添加すること
を含む。
【０１３６】
以下に製造方法の例を提供する。当業者は種々の修飾物及び変化物が作られ得、及び依然として本発明の範囲内となることを容易に理解するだろう。
【０１３７】
治療方法
本発明の更なる態様は、本発明の水中油エマルジョンを含むか又は本発明の水中油エマルジョンからなる医薬組成物である。
好ましくは、本発明の医薬組成物は、脳卒中及び／又はトラウマ後の神経障害の治療又は予防における使用のためのものである。
更なる好ましい態様に従って、本発明の医薬組成物は、脳震とう後の神経傷害の治療又は予防における使用のための又はトラウマ的な出来事の治療又は予防における使用のためのものである。
【０１３８】
ここに記載されるエマルジョンは、治療的又は予防的使用のために、対象者に経静脈的又は経動脈的のような、非経口的に投与され得る。特定の態様において、対象者はヒトのような哺乳類である。
ここに記載されるエマルジョンは、神経保護及び／又は神経再生特性を有する。組成物は、従って、神経系障害又は疾患の治療又は予防において有用である。例示的な障害及び疾患は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害又は疾患、脊髄損傷、外傷性脳損傷、脳機能の一時的な喪失により特徴付けられる震盪を含む軽度の頭部外傷、小児脳損傷、パーキンソン病のようなＣＮＳの変性疾患、アルツハイマー病を含む認知症、多発性硬化症及び慢性の糖尿病性神経障害のような脱髄疾患を含むが、これらに限定されない。
【０１３９】
他の例示的な障害及び疾患は、虚血性ＣＮＳ損傷のような虚血性神経障害、虚血性脳卒中、出血性脳卒中及び一過性脳虚血性発作を含む卒中並びに心臓手術の間の心肺バイパス
方に起因する神経認知障害、例えば、かん流後症候群を含む。更なる例は、失語症、睡眠、睡眠障害及び外傷後ストレス障害のような不安障害を含む。
【０１４０】
組成物はまた、認識機能の復元、睡眠様式の復元、気分障害の復元等のような上で列記した障害と関連する症状の軽減を提供することにも有用である。医薬組成物はまた、外傷後ストレス障害を治療することにも有用である。
【０１４１】
１態様に従って、本発明は外傷性脳損傷のような外傷性ＣＮＳ損傷を有する哺乳類対象者の治療法方を提供する。例示的な方法は、それを必要とする対象者に、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンの治療有効濃度が送達されるように、本発明に従う医薬組成物を投与することによる、哺乳類対象者におけるＴＢＩの治療を含む。特定の態様において、哺乳類対象者は、ヒトである。例えば、本発明の方法は、ＴＢＩのような外傷性ＣＮＳ損傷を有する対象者に、本発明のプロゲストゲン及び／又はエストロゲン含有医薬組成物を非経口投与することを含み得る。本発明の方法に従って、医薬組成物は、外傷性中枢神経系損傷に関係する有益な治療応答を推進するために使用される。
【０１４２】
外傷性脳損傷は、脳機能を一時的に又は永久的に損なう、脳組織に対する物理的な損傷である。診断は、臨床的に疑われ、画像化（主としてＣＴ）により確認され得る。臨床症状は、重症度及び結果において大きく異なる。損傷は通常、開放性又は非開放性として分類される。開放性損傷は、頭皮及び頭蓋骨の貫通を含む。非開放性損傷は、典型的には、迅速な脳の加速及び減速を生じる、頭が打たれた、物を打ちつけた又は激しく振られた場合に発生する。
【０１４３】
本発明の医薬組成物は、鈍的外傷（例えば、非開放的損傷）並びに貫通損傷を含むＴＢＩを治療するために使用され得る。“治療”により、改善された形態回復（即ち、促進された組織生存能力）及び／又は行動回復の両方を含む、外傷性ＣＮＳ損傷を有する対象者におけるあらゆる改善が意図される。該改善は、外傷性ＣＮＳ損傷に続く、行動及び解剖の回復の速度及び／又は程度の何れかにおける増加として特徴付けられ得る。従って、“有益な治療応答”は、完全寛解及び部分寛解の両方を含む。完全な又は部分的な治療応答が生じているか否かを決定するための種々の方法が、特許出願、国際公開第２００６／１０２６４４号パンフレット、国際公開第２００６／１０２５９６号パンフレット及び国際公開第２００８／０３９８９８号公報中において詳細に議論されている。
【０１４４】
“治療有効量”により、治療効果を引き出すために十分であるプロゲストゲン及び／又はエストロゲンの量が意図される。よって、幾つかの態様において、本発明に従う投与された用量単位におけるプロゲストゲン及び／又はエストロゲンの量は、ＣＮＳに対する外傷性損傷に続く神経損傷の治療又は予防に有効であり、従って、神経保護効果を引き出す。神経変性は中枢神経系におけるニューロンの進行性消失である。ここで使用される“神経保護”とは、外傷性ＣＮＳ損傷に続く神経変性の進行の停止及び／又は逆転である。治療有効量は、例えば、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンの特異的活性、外傷性損傷の重症度及びパターン、結果として生じる神経損傷、患者の反応性、患者の体重、他の個人内の多様性と共に、投与の様式及び／又は方法及び使用される医薬組成物を含む多くの因子に依存するだろう。
【０１４５】
本発明の医薬組成物は、静脈内（ＩＶ）注射、筋肉内（ＩＭ）注射又は皮下（ＳＣ）注射を含む、本技術分野において既知のあらゆる許容可能な方法を使用して投与され得る。本発明の特定の態様において、組成物は、ＩＶ注射によるような、静脈内投与される。静脈内投与される場合、組成物は１ないし１４４時間の期間に亘る点滴により投与され得る。
【０１４６】
プロゲストゲン及び／又はエストロゲンは、１日に１回又は数回投与され得る。処置の期間は、１、２、３、４、５、６、７日又はそれ以上の期間、１日１回であり得る。１日用量は、個別の用量単位若しくは幾つかのより少ない用量単位の形態における単回投与又は特定の間隔での細分された用量の複数回投与の何れかにより投与され得る。それに続く用量単位は、治療効果が達成されるように、初回投与後何時でも投与され得る。例えば、更なる用量単位は、損傷後の最初の数日間に亘って生じ得る浮腫の第二波から対象者を保護するために投与され得る。特定の態様において、最初の用量単位は、損傷後８時間よりも遅れることなく投与される。
【０１４７】
本発明の特定の態様において、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンは、一定の投与計画において投与される。“一定の投与計画”により、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンが、処置の経過に亘って、プロゲストゲン及び／又はエストロゲンの一定の１時間ごとの総注入用量で投与されることが意図される。
【０１４８】
本発明の更なる態様において、少なくとも１種の更なる神経保護薬が、外傷性ＣＮＳ損傷後の神経保護を促進するために、プロゲストゲン及び／又はエストロゲン（同じ組成物の１部として又は別の組成物中の何れか）との組み合わせにおいて投与され得る。
【０１４９】
今や、この発明が一般的に記載されたので、説明のみの目的でここに含まれ、そして本発明を制限することを意図しない特定の特異的な実施例を参照することにより、同様のことがより良く理解されるだろう。
【実施例】
【０１５０】
ホルモン含有油性エマルジョンの調製のための基本手順
グリセロール及び水の一部を混合した後、乳化剤（卵レシチン）及び共−乳化剤であるオレイン酸ナトリウムをＵｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘ（登録商標）セルホモジナイザーで分散させた（溶液Ｉ）。並行して、任意にトコフェロールを伴う油相を調製し、エストラジオール及びプロゲステロンを窒素不活性雰囲気下、７０℃で溶解した（溶液ＩＩ）。Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘ  セルホモジナイザーを使用して溶液ＩＩを溶液Ｉに添加し、続いて３０℃ないし７０℃による少なくとも４００気圧ないし８００気圧下、高圧ホモジナイザー中において４ないし５回均質化サイクルを行った。その後残りの水を添加し、結果として生じた水中油エマルジョンのｐＨ値を、溶液として可能な水酸化ナトリウムを用いて７．５ないし９．０に調整した。
【０１５１】
好適な品質の容器中に満たした後、該エマルジョンを既知の方法により加熱滅菌した。少なくとも０．５μｍの平均油滴径及び少なくとも１８ヶ月の貯蔵安定性を有する脂質液滴を伴う無菌で安定なｏ／ｗエマルジョンが結果として得られた。
【表１】
2015508792.tif 000008
１）ＥＰＡ及びＤＨＡの量は、魚油トリグリセリド中の脂肪酸の総量に基づいて、５５．５質量％（ｗｔ．−％）である。ＤＨＡに対するＥＰＡの質量比は３：２である。
【０１５２】
【表２】
2015508792.tif 000009
１）ＥＰＡ及びＤＨＡの量は、魚油トリグリセリド中の脂肪酸の総量に基づいて、５５．５質量％（ｗｔ．−％）である。ＤＨＡに対するＥＰＡの質量比は３：２である。
【０１５３】
【表３】
2015508792.tif 000010
１）ＥＰＡ及びＤＨＡの量は、魚油トリグリセリド中の脂肪酸の総量に基づいて、５５．５質量％（ｗｔ．−％）である。ＤＨＡに対するＥＰＡの質量比は３：２である。
【０１５４】
脳卒中モデルを用いた実験
脳卒中後の神経障害の治療における本発明のエマルジョンの効果を決定するために、表４にある通りのエマルジョンが解析された。
【表４】
2015508792.tif 000011
１）中鎖トリグリセリド
２）ＥＰＡ及びＤＨＡの量は、魚油トリグリセリド中の脂肪酸の総量に基づいて、５５質量％（ｗｔ．−％）である。ＤＨＡに対するＥＰＡの質量比は３：２である。
【０１５５】
本発明のエマルジョンの効果を決定するために使用される脳卒中モデルは、Ｊ．Ｄｏｎ
ｇ、Ｂ．Ｍｉｔｋａｒｉ、Ｍ．Ｋｉｐｐ及びＣ．Ｂｅｙｅｒ  Ｂｒａｉｎ，Ｂｅｈａｖｉｏｒ，ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２５（２０１１）７１５−７２６中に記載されている。
【０１５６】
方法
動物及び正常雄性ウィスターラットにおける実験的な一過性の中大脳動脈閉塞（＋ＭＣＡＯ）の手順
雄性ウィスターラット（約３００ｇ、３月齢、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ国）を無菌雰囲気中でした。動物は、１週間に１回ルーチンケージ管理（ｒｏｕｔｉｎｅ  ｃａｇｅ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ）及び欧州実験動物学会連合の推奨に従う微生物学的モニタリングを受けた。
【０１５７】
食餌及び水を不断（ａｄ  ｌｉｂｉｔｕｍ）で与えた。調査及び動物の世話の手順は、地区政府の動物被検体の世話のための審査委員会（Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｓｕｂｊｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ）（ノルトライン−ヴェストファーレン、ドイツ国）により承認されたものである。動物を５％イソフルラン（Ａｂｂｏｔｔ、ルードヴィヒスハーフェン、ドイツ国）で麻酔し、フェイスマスクを用いて１．５−２．５％イソフルラン（個々の動物及び手術工程に依存する）で維持した。正中頸部切開の後、左総頸動脈（ＣＣＡ）、内頸動脈（ＩＣＡ）及び外頸動脈（ＥＣＡ）を露出した。次に、基部に近いＥＣＡ及びＣＣＡを結紮した。迷走神経をできる限り注意深く保存した。次に、市販で入手可能なカテーテル（Ａｓａｈｉ  ＰＴＣＡ  Ｇｕｉｄｅ  Ｗｉｒｅ  Ｓｏｆｔ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｖａｓｃｕｌａｒ、ドイツ国）を、抵抗が手作業で観察されるところまで、ＩＣＡへの分岐の直前に末梢ＣＣＡのルーメンから誘導した。よって、中大脳動脈（ＭＣＡ）の起点はカテーテルの先端により閉塞されて、基礎値と比較して＞５０％の脳血流量（ＣＢＦ）の低下が得られた（以下参照）。体温は、全ての手術手順の間、加温パッド及びランプで３７-３７．５℃に維持された。１時間後、カテーテルを撤収し、再潅流期間を開始した。次に、出血を防ぐために露出された血管を注意深く結紮し、切開部を無菌で閉じ及び動物をそれらのケージへ戻した。２３時間後、ラットを５％イソフルランで深く麻酔し、組織染色、分子解析及び動物行動試験を実施した。
【０１５８】
ホルモン及び油性エマルジョン配合物並びにその適用
エマルジョンの適用及び血液試料採取
表４中に記載されるエマルジョンが、ｔＭＣＡＯの開始後１及び１２時間に、パーマネント頸静脈カテーテルを介して適用された。
静脈血の試料採取及びエマルジョンの適用のために、右外頸静脈が、頸部腹側領域における全ての結合組織及び筋膜から調製されることにより外面化された。
【０１５９】
血管内への小さな切開の後、頸静脈カテーテル（Ａｌｚｅｔ，ラット頸静脈カテーテル、Ｃｕｐｅｒｔｉｎａ、カルフォルニア州、米国）の先端を約１−１．５ｍｍ遠位に導入した。血管を、カテーテル上の切開部付近の遠位で、恒久的に２ｍｍくちばし状で且つゆるく結紮した。カテーテルは、実験の終了まで位置が維持された（２４時間後犠牲にする）。
【０１６０】
全ての注射は、マイクロポンプシステム（Ａｅｓｃｕｌａｐ、ドイツ国）を使用する３分間のゆっくりとした５００μＬの体積で実施された。頸静脈内のカテーテル先端の凝固を回避するために、チューブを高希釈ヘパリン（生理学的ＮａＣｌにおいて、１：１０００）で冠水した。
全ての使用された溶液は、適用前に体温（３８℃）に加温された。
ホルモン（１７β−エストラジオール及びプロゲステロン）は、ストック溶液として１
００％エタノール中に溶解され、更に与えられたエマルジョン中で希釈されて調製された（実施例１ないし３）。
【０１６１】
結果として生じる適用当りのステロイドの用量は：
プロゲステロン（Ｐ、シグマ−アルドリッチ、ドイツ国）１０ｍｇ／ｋｇ体重
１７β−エストラジオール（Ｅ、シグマ−アルドリッチ、ドイツ国）２５μｇ／ｋｇ体重であった。
ホルモンを伴うか又は伴わないエマルジョンを、ｔＭＣＡＯの開始後１時間及び１２時間に適用した。
【０１６２】
エマルジョンに加えて、塩化ナトリウム／エタノール溶液を含む脂質の無いホルモンを調製した（ＮａＣｌ／ＥｔＯＨ  Ｅ／Ｐ）。再度、ストック溶液を、エタノール中にホルモンを溶解することにより調製した。生理食塩水（ＮａＣｌ）におけるストック溶液の更なる希釈は、エマルジョンのために上に示したのと同一の適用体積（５００μＬ）及び投与計画を結果として生じた。
【０１６３】
局所脳血流（ｒＣＢＦ）の評価
適当なＭＣＡ閉塞を確実にするために、局所的脳虚血の間ＭＣＡ上の局所脳灌流を測定するためのレーザードップラー流量計を使用した。
従って、各動物は、ブレグマの約３−５ｍｍ後方で且つ正中線の４ｍｍ横で、無傷の硬膜上の２ｍｍレーザードップラープローブ（ＰｅｒｉＦｌｕｘ  Ｓｙｓｔｅｍ  ５０００、Ｔｙｐｅ  ＰＦ  ５００１、Ｐｅｒｉｍｅｄ、スウェーデン）の配置のために開頭術を受けた。基線測定が、ＩＣＡ中へカテーテルを挿入する前に直接なされた。ＭＣＡ上のｒＣＢＦが１０分間の間隔で記録され、平均値が計算された。基線と比較して、少なくとも５０％（平均値）ｒＣＢＦの減少を伴う動物のみが更に研究に加えられた。適当な酸素供給不足／閉塞が保障され得ないため、他の動物は研究から除外された。
【０１６４】
動物の分析
一般に、全ての分析は、単盲検方法で行われた。これに関連して、単盲検とは、適用されたエマルジョンの調製、ｔＭＣＡＯ手術及び全てのエマルジョンの適用を行った最初の実験者が、試験された薬剤を知っていることを意味する。この者はその後、動物を番号でコード化した。行動試験、１回拍出量分析の解析を取り扱う２番目の実験者は、完全に予備知識無しであり、単にコード番号で標識された動物を取り扱った。この者はその後、分析及び数学的／統計的評価を行い、データ・セットを、該データを対応する動物／処置に割り当てる最初の実験者へ戻した。
【０１６５】
梗塞体積の測定
梗塞体積のデータは、常に１００％に設定される、保護されていないｔＭＣＡＯ動物における総梗塞体積と比較したパーセント変化として表された。このことは、一目で保護のレベルをより良く比較することを可能とする。
【０１６６】
梗塞体積の正確な評価のために、塩化２，３，５−トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）染色法が適用された。脳は迅速に解剖され、ラット脳マトリクス（ｒａｔ  ｂｒａｉｎ  ｍａｔｒｉｘ）（Ａｌｔｏ  Ｂｒａｉｎ  Ｍａｔｒｉｘ  ｓｔａｉｎｌｅｓｓ  ｓｔｅｅｌ  １ｍｍ  ｒａｔ  ｃｏｒｏｎａｌ  ３００−６００  ＧＭ，Ｈａｖａｒｄ−Ａｐｐａｒａｔｕｓ）を用いて２−ｍｍ厚の冠状断面に切断された。断面はその後３７℃で１５分間２％ＴＴＣ溶液（生理食塩水で調製）中で培養された。生きている組織は赤に染色され、一方、梗塞された組織は染色されず、淡さが維持された。ＴＣＣ染色後、断面は冷凍保存された。ＴＴＣ染色された断面の画像が、キャノン  デジタル  ＩＸＵＳ  ９０１５カメラを用いて獲得された。総皮質梗塞体積が、各断面の平均面積を加え及び２ｍｍ（
断面の厚さ）を乗じることにより計算された。梗塞体積の浮腫補正が、等式、体積補正（皮質梗塞体積×全部の対側体積）／全部の同側体積を用いて行われた。浮腫体積が、対側大脳半球からの同側障害部の体積を減算することにより計算された（Ｇａｒｃｉａ等、ｓｔｒｏｋｅ  ２６：６２７−６３４，１９９５）。測定は、無料でアクセス可能なソフトウェアデバイス（ＩｍａｇｅＪ  １．４１、米国）を用いて達成された。
【０１６７】
行動試験
動物を犠牲にする少し前に、行動試験（Ｇａｒｃｉａ、ニューロスコアリング）が、小規模の変更を伴うＧａｒｃｉａ等（Ｓｔｒｏｋｅ  ２６：６２７−６３４、１９９５）に従う研究において含まれる全てのラットで達成された。結果として最大１８スコアを生じる１−３で採点される６つの独立した行動試験が行われた。以下の行動が評価された：自発運動、前足の差し出し、及び登る能力、ブラントスティック（ｂｌｕｎｔ  ｓｔｉｃｋ）を伴う身体の固有受容感覚、身体の固有受容感覚（洞毛接触）、自発歩行。典型的には、無傷の又は偽手術された動物は、常に１８Ｐに採点された。対照的に、ｔＭＣＡＯ動物は平均約６Ｐに採点された。
【０１６８】
脳卒中モデルを伴う試験の結果は、図１及び２に反映されている。該図中において、以下の略語が使用された：
ＮａＣｌ／ＥｔＯＨ  Ｅ／Ｐ  ｉ．ｖ．：静脈内に投与される上述のようなホルモン含有塩化ナトリウム／エタノール溶液
Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ  ＭＣＴ  Ｅ／Ｐ  ｉ．ｖ．：上述のようなホルモンが添加され及び静脈内に投与された表４中の実施例１に従うエマルジョン
５／５  エマルジョン  ｉ．ｖ．：ホルモンを伴わず及び静脈内に投与された実施例２に従うエマルジョン
５：５  エマルジョン  Ｅ／Ｐ  ｉ．ｖ．：上述のようなホルモンが添加され及び静脈内に投与された表４中の実施例２に従うエマルジョン
９：１  エマルジョン  ｉ．ｖ．：ホルモンを伴わず及び静脈内に投与された実施例３に従うエマルジョン
９：１  エマルジョン  Ｅ／Ｐ  ｉ．ｖ．：ホルモンが添加され及び静脈内に投与された表４中の実施例３に従うエマルジョン
【図面の簡単な説明】
【０１６９】
【図１】図１は、大脳皮質梗塞体積の体積における治療の効果を提示する。
【図２】図２は、行動採点における治療の効果を提示する。
【０１７０】
結果を見ても分るように、ホルモンであるプロゲストゲン及びエストロゲンと一緒になったω−３脂肪酸が豊富な魚油のエマルジョン（実施例２及び３）の使用は、相乗的で且つ予測不能な改善効果を提示する。
【図１】
2015508792.tif 000012
【図２】
2015508792.tif 000013
【国際調査報告】
2015508792.tif 000014
2015508792.tif 000015
2015508792.tif 000016