(57)【要約】本発明は、対象における極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞を含む幹細胞輸送を向上させるために動員剤を使用する方法を提供する。一実施形態において、藻類、果実、キノコ、微生物、母体体液およびそれらの抽出物のブレンド組成物が、幹細胞の輸送を促進するために使用され、組織および／または器官内の特定の維持および修復部位への幹細胞の移動がもたらされる。さらに、本明細書において、アファニゾメノン・フロス・アクアもしくはその抽出物、ツルドクダミもしくはその抽出物、クコもしくはその抽出物、初乳もしくはその抽出物、スピルリナもしくはその抽出物、フコイダン、ヤマブシタケもしくはその抽出物、霊芝もしくはその抽出物、および／または冬虫夏草もしくはその抽出物を含む群から選択される成分の１つ以上と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物が提供される。【選択図】図１
2015522076.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における幹細胞動員を増加させる方法であって、
幹細胞動員を増加させることができる動員剤を提供することと、
前記対象における幹細胞動員を増加させるのに十分な量で、前記対象に一定量の動員剤を投与することとを含む方法。
【請求項２】
前記動員剤は、アファニゾメノン・フロス・アクアもしくはその抽出物、ツルドクダミもしくはその抽出物、クコもしくはその抽出物、初乳もしくはその抽出物、スピルリナもしくはその抽出物、フコイダン、ヤマブシタケもしくはその抽出物、霊芝もしくはその抽出物、および／または冬虫夏草もしくはその抽出物からなる群から選択される成分の１つ以上を含む組成物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記動員剤は、アファニゾメノン・フロス・アクアまたはその抽出物である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記動員剤は、ツルドクダミまたはその抽出物である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記動員剤は、フコイダンである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＶＳＥＬ細胞は、活性化または休眠ＶＳＥＬである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記幹細胞は、割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）またはエピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記一定量を投与することは、経口投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記経口投与は、カプセルまたは丸薬の使用を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
アファニゾメノン・フロス・アクアもしくはその抽出物、ツルドクダミもしくはその抽出物、クコもしくはその抽出物、初乳もしくはその抽出物、スピルリナもしくはその抽出物、フコイダン、ヤマブシタケもしくはその抽出物、霊芝もしくはその抽出物、および／または冬虫夏草もしくはその抽出物からなる群から選択される成分の１つ以上と、
薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年７月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／６７０，２５３号に対する優先権の利益を主張するものであり、その全ての内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願は、極小胚様（ＶＳＥＬ）細胞を含む幹細胞の動員により体内での再生過程に関与する組成物および方法の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
本明細書における刊行物の全ては、あたかも各個々の刊行物または特許出願が参照により組み込まれるように具体的におよび個別に示されるのと同じ程度に参照により本明細書に組み込まれる。以下の説明は、本発明の理解に有用となり得る情報を含む。本明細書において提供される情報のいずれも、先行技術である、もしくは現在請求されている発明に関連すること、または具体的もしくは暗示的に参照されるいずれの刊行物も、先行技術であることを認めてはいない。
【０００４】
幹細胞（ＳＣ）は、自己複製し、体の様々な細胞型に分化する独特の能力を有する細胞である。幹細胞の２つの周知の型は、胚性幹細胞および成体幹細胞である。胚性幹細胞（ＥＳＣ）は、５〜１０日齢の胚から抽出され、いったん単離されると、に体外ので成長させ、成体生物に見られる事実上全ての細胞型に分化させることができる。成体幹細胞（ＡＳＣ）は、自己複製して各組織の特殊な細胞に分化することができる未分化または原始細胞であり、出生後の任意の生体内に見られる。ＡＳＣが体の正常な維持および再生過程において重要な役割を担うことは、十分に確立されている。例えば、骨髄および血液内の細胞は、日常的な恒常作用（例えば、血液の形成）に関連して、および損傷（例えば、創傷修復）に反応して組織を置換および修復することが、長い間知られている。（Ｄｒａｐｅａｕ，２０１０）。
【０００５】
しかしながら、ますます多くの証拠が、維持および再生におけるＡＳＣの能力のより広範な役割を明確に示している。第１に、最近の刊行物では、ＡＳＣが、これまで理解されていたものより広範な細胞群であり、はるかにより高度に不均一な集団でることが明確化されている。（Ｒａｔａｊｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８およびＤ’Ｉｐｐｏｌｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。重要なことに、これは、最近までほぼ完全に未知であったいくつかの重要な動作主体を含んでいる。第２に、これらの細胞の多くは、卓越した特徴、例えば広い可塑性（すなわち分化能）および堅牢な自己複製能力を示す。総合的に、新たに発見された動作主体を含むＡＳＣのこれらの組み合わされたカテゴリーは、何が成体生物の全体的な再生および修復能力であるかを再考することを必要としている。
【０００６】
この考え方のシフトは、体の治癒過程と再生過程との間の関連性、および広範な種類の細胞型に分化する幹細胞の能力に焦点を置いている。これに関して、幹細胞は、長い間、修復および置換の源として機能すると理解されてきた。古典的な成体幹細胞、例えば骨髄幹細胞、および骨髄間質細胞（ＭＳＣ）は、起源組織から遊離して、対象の循環系または免疫系内を循環し、様々な器官および組織内に移動して、成熟した最終分化細胞となる。体内の新たな種類のＡＳＣ、例えば極小胚様（ＶＳＥＬ）の識別は、修復および再生のための体のさらなる源を引き出す新たな機会を形成する。重要なことに、幹細胞輸送（すなわち、遊離、循環、ホーミングおよび／または移動）の向上は、これらの生理学的過程を増幅し、様々な病状に対する潜在的な治療法を提供することができる。治療的アプローチとして幹細胞動員を促す様々な組成物および方法が知られている一方で、ＡＳＣの新たに発見された型がまたどのようにこれらの過程に関与し得るかを理解することに極めて関心が持たれている。
【０００７】
したがって、本明細書において開示される本発明の組成物および方法は、より高い生命力および疾患発生の低減のために、体内の幹細胞の遊離、循環、ホーミングおよび／または移動を向上させ、損傷組織の治癒および処置を促進すると共に、ある程度の細胞の損失を受けた組織の再生を補助する。ある特定の実施形態において、極小胚様（ＶＳＥＬ）細胞等の新たに発見されたＡＳＣに対し、動員剤が適用される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｄｒａｐｅａｕ  Ｃ．，  Ｃｒａｃｋｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｄｅ，  Ｓｕｔｔｏｎ  Ｈａｒｔ  Ｐｒｅｓｓ  （Ｐｏｒｔｌａｎｄ，  ＯＲ  ２０１０）
【非特許文献２】Ｒａｔａｊｃｚａｋ  Ｍ．，  Ｚｕｂａ−Ｓｕｒｍａ  Ｅ．，  Ｗｙｓｏｃｚｙｎｓｋｉ  Ｍ．，  Ｒａｔａｊｃｚａｋ  Ｊ．，  Ｋｕｃｉａ  Ｍ．  Ｖｅｒｙ  ｓｍａｌｌ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ−ｌｉｋｅ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ：  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｏｒｉｇｉｎ，  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．  Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ２００８  ３６，  ７４２−５１．
【非特許文献３】Ｄ’Ｉｐｐｏｌｉｔｏ  Ｇ．，  Ｄｉａｂｉｒａ  Ｓ．，  Ｈｏｗａｒｄ  Ｇ．，  Ｍｅｎｅｉ  Ｐ．，  Ｒｏｏｓ  Ｂ．，  Ｓｃｈｉｌｌｅｒ  Ｐ．  Ｍａｒｒｏｗ−ｉｓｏｌａｔｅｄ  ａｄｕｌｔ  ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  （ＭＩＡＭＩ）  ｃｅｌｌｓ，  ａ  ｕｎｉｑｕｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ｙｏｕｎｇ  ａｎｄ  ｏｌｄ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．  ２００４  １１７，  ２９７１−８１．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
組成物および方法に関連して説明および例示される以下の実施形態およびその態様は、範囲を限定するのではなく、例示的および説明的であることを意図する。
【００１０】
本明細書において、対象における幹細胞動員を増加させる方法であって、幹細胞動員を増加させることができる動員剤を提供することと、対象における幹細胞動員を増加させるのに十分な量で、対象に一定量の動員剤を投与することとを含む方法が記載される。他の実施形態において、動員剤は、アファニゾメノン・フロス・アクアもしくはその抽出物、ツルドクダミもしくはその抽出物、クコもしくはその抽出物、初乳もしくはその抽出物、スピルリナもしくはその抽出物、フコイダン、ヤマブシタケもしくはその抽出物、霊芝もしくはその抽出物、および／または冬虫夏草もしくはその抽出物を含む群から選択される成分の１つ以上を含む組成物である。他の実施形態において、動員剤は、アファニゾメノン・フロス・アクアまたはその抽出物である。他の実施形態において、動員剤は、ツルドクダミまたはその抽出物である。他の実施形態において、動員剤は、フコイダンである。他の実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。他の実施形態において、ＶＳＥＬ細胞は、活性化または休眠ＶＳＥＬである。他の実施形態において、幹細胞は、割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）またはエピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）である。他の実施形態において、一定量を投与することは、経口投与を含む。他の実施形態において、経口投与は、カプセルまたは丸薬の使用を含む。
【００１１】
さらに、本明細書において、アファニゾメノン・フロス・アクアもしくはその抽出物、ツルドクダミもしくはその抽出物、クコもしくはその抽出物、初乳もしくはその抽出物、スピルリナもしくはその抽出物、フコイダン、ヤマブシタケもしくはその抽出物、霊芝もしくはその抽出物、および／または冬虫夏草もしくはその抽出物を含む群から選択される成分の１つ以上と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
例示的実施形態は、参照される図において例示される。本明細書に開示される実施形態および図は、限定的ではなく例示的であるとみなされるべきである。
【００１３】
【図１】トリパンブルーで染色された血球計上の細胞である。示された円形の明るい細胞は、割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）の一例である活性化極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。バックグラウンドのより暗い細胞は、休眠ＶＳＥＬである。細胞は、手動細胞計数器を使用して１６正方形グリッド上で計数され、１：８で希釈した。境界上のＶＳＥＬは、焦点によって休眠または活性化ＶＳＥＬのいずれかとなり得る。
【図２】割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）の一例である極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞の試料が示されている。室温でインキュベートすると、血液採取から２４時間後に播種した。Ａ）播種の日の不希釈試料、Ｂ）播種から３日後の不希釈試料、Ｃ）播種の日の１：１０希釈物、Ｄ）播種から３日後の１：０希釈物、Ｅ）播種の日の１：２０希釈物、Ｆ）播種の日の１：１０希釈物。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本明細書において引用される全ての参考文献は、参照により、その全体が完全に記載されるものとして組み込まれる。別途定義されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者が一般に理解する意味と同一の意味を有する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３ｒｄ  ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ  ２００１）；Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５ｔｈ  ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ  ２００１）；およびＳａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ  ２００１），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９７５）は、本明細書に記載の本発明の組成物の薬学的送達に好適な組成物および製剤を説明しており、当業者に、本明細書において使用される用語の多くの一般的な指針を提供する。
【００１５】
当業者は、本発明の実践において使用することができる、本明細書に記載の方法および材料と同様または同等である多くの方法および材料を認識する。実際に、本発明は、本明細書に記載の方法に決して限定されない。本発明の目的において、以下の用語は、以下のように定義される。
【００１６】
「投与すること」および／または「投与する」は、本明細書において使用される場合、薬学的組成物を患者に送達するための任意の経路を指す。送達経路は、非侵襲的経口（口を介した）、局所的（皮膚）、経粘膜的（経鼻、経口腔／舌下、経膣、経眼および経直腸）および吸引経路、ならびに非経口経路および当該技術分野において知られた他の方法を含み得る。非経口は、眼窩内、注入、動脈内、頚動脈内、嚢内、心臓内、皮内、筋肉内、腹腔内、肺内、髄腔内、胸骨内、鞘内、子宮内、静脈内、くも膜下、被膜下、皮下、経粘膜、または経気管を含む、一般に注射に関連した送達経路を指す。非経口経路を介して、組成物は、注入または注射用の溶液または懸濁液の形態であっても、または凍結乾燥粉末としての形態であってもよい。
【００１７】
「アファニゾメノン・フロス・アクア」または「ＡＦＡ」は、本明細書において使用される場合、シアノバクテリアの淡水種である藍藻類の１種を指す。
【００１８】
「藍藻類」は、本明細書において使用される場合、単細胞、コロニーまたは線状形態として存在し得る藍色植物門に属するグラム陰性光合成細菌の一般名を指す。代表的な藍藻類は、これらに限定されないが、スピルリナおよびアファニゾメノン種を含み、その一例は、藍藻類のアファニゾメノン・フロス・アクア（ＡＦＡ）種である。「藻類」は、微細藻類種の細胞である「藻」の複数形である。例えば、「藍藻類」は、単一のアファニゾメノン種の複数の細胞、単一のスピルリナ種の複数の細胞、または複数のアファニゾメノンおよび／もしくはスピルリナ種からの細胞の混合物を指す。
【００１９】
「循環系」は、本明細書において使用される場合、血管およびリンパ系を含む、対象の体全体に血液および血液成分を移動させるための機構を指す。循環系の機構は、心臓、血管（動脈、静脈および毛細血管）、ならびにリンパ管を含むが、これらに限定されない。
【００２０】
「初乳」は、本明細書において使用される場合、様々な栄養物、および消化の過程により破壊されることを防止するプロテアーゼ阻害物質を含有する、授乳の最初の数日間に雌の哺乳動物の乳腺により分泌される液体を指す。ヒトは、出産後の最初の２日間は比較的少量の初乳を産生するが、ウシは、約９ガロンの初乳を産生する。初乳は、伝達因子、ＰＲＰ、ＩＧＦ−１、ｎ−アセチルノイラミン酸、ＧＭＰ、核酸およびデフェンシンを含む、濃縮されたレベルの重要な免疫モジュレータを含有する。初乳抽出物は、単球による食作用を活性化し、多形有核細胞における反応性酸素バーストを増加させることが示されている。初乳はまた、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性化を誘引し、また体外の細胞ベースアッセイにおいて抗炎症性サイトカインの分泌を誘引することが示されている。本明細書における初乳への言及はまた、その誘導体および人工的代替物を含む。
【００２１】
「ツルドクダミの成分」は、本明細書において使用される場合、ツルドクダミからの任意の画分、抽出物、または単離もしくは精製分子を指す。例えば、成分は、ツルドクダミのタンパク質もしくは核酸または多糖、植物化学物質、あるいは画分である。したがって、本発明のある特定の実施形態において、ツルドクダミの成分は、ツルドクダミを破壊し、無機または有機溶媒を添加し、画分を回収することにより得られる。画分の特定の限定されない例は、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、または蒸留を使用して単離される。分画は、ツルドクダミの成分の分子量または疎水性に基づいてもよい。ツルドクダミ中に見られる成分の例は、中でも、ヒドロキシルスチルベン、アントラキノンおよび誘導体、レシチン、クリソファン酸、エモジン、レイン、クリソファン酸アントロン、ならびに２，３，５，４’−テトラヒドロキシスチルベン−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドを含む。
【００２２】
「クコの成分」は、本明細書において使用される場合、クコからの任意の画分、抽出物、または単離もしくは精製分子を指す。例えば、成分は、クコのタンパク質もしくは核酸または多糖、植物化学物質、あるいは画分である。したがって、本発明のある特定の実施形態において、クコの成分は、クコを破壊し、無機または有機溶媒を添加し、画分を回収することにより得られる。画分の特定の限定されない例は、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、または蒸留を使用して単離される。分画は、クコの成分の分子量または疎水性に基づいてもよい。
【００２３】
「アファニゾメノン・フロス・アクアの成分」または「ＡＦＡの成分」は、本明細書において使用される場合、アファニゾメノン・フロス・アクアからの任意の画分、抽出物、または単離もしくは精製分子を指す。例えば、成分は、アファニゾメノン・フロス・アクアのタンパク質もしくは核酸または多糖、植物化学物質、あるいは画分である。別の例において、炭水化物に富む画分を、水溶性画分からの粒子状物質の機械的分離により得ることができる。粗多糖画分は、ＡＦＡを７０％エタノールで６５℃で４時間抽出し、エタノール抽出物を遠心分離し、乾燥するまで蒸発させることにより得ることができ、ＡＦＡの元の乾燥重量の約３０％の収率が得られる。
【００２４】
「分化」は、本明細書において使用される場合、細胞が生物学的機能を実行するようにより特殊化される過程を指す。例えば、造血幹細胞、造血前駆細胞および／または幹細胞は、分化多能性幹細胞から、特定の系統に特化した細胞および／または特徴的機能を有する細胞、例えば成熟体細胞に変化し得る。分化は、悪性転換を生じた細胞により全体的または部分的に失われることの多い特性である。
【００２５】
「向上」、「向上させる」または「向上させること」は、本明細書において使用される場合、細胞または生物の特定のパラメータの性能改善または他の生理学的に有益な増加を指す。時折、現象の向上は、特定のパラメータの測定値の増加として定量化される。例えば、幹細胞の移動は、循環系内を循環する幹細胞の数の低減として測定され得るが、これは、それにもかかわらず、失われた、または損傷した機能を交換または修正する細胞への分化を含むがこれらに限定されない、これらの細胞が有益な生理学的結果を実行または促進し得る体の領域へのそれらの移動の向上を表し得る。一実施形態において、向上は、循環幹細胞の数の１５％、２０％、３０％または５０％超の低減を指す。１つの特定の制限されない例において、幹細胞移動の向上は、非造血系統の細胞の集団の低減、例えば細胞の集団または細胞の集団の反応の１５％、２０％、３０％、５０％、７５％またはそれ以上の低減をもたらす、またはそれにより測定され得る。一実施形態において、向上したパラメータは、幹細胞の輸送である。一実施形態において、向上したパラメータは、元の組織からの幹細胞の遊離である。一実施形態において、向上したパラメータは、幹細胞の移動である。別の実施形態において、パラメータは、幹細胞の分化である。さらに別の実施形態において、パラメータは、幹細胞のホーミングである。
【００２６】
「フコイダン」は、本明細書において使用される場合、藻類から得られた硫酸化フカンを表す。フコイダンは、以下の非網羅的なリストに記載されるような広範な藻類種から得られている：オキナワモズク、ナガマツモ、ホソマツモ、モツキチャソウメン、デスマレスチア・インテルメディア、ウイキョウモ、アミジグサ、パディナ・パボニカ、スパトグルッスム・スクロエデリ、アデルノシスチス・ユトリクラリス、ピライエラ・リトラリス、アスコフィルム・ノドスム、ビフルカリア・ビフルカタ、フクス・ベシクロスス、フクス・スピラリス、フクス・セラツス、ヒバマタ、ヒマンタリア・ロレア、ヒジキ、ペルベチア・カナリクラタ、エゾイシゲ、サルガッスム・ステノフィルム、アカモク、サルガッスム・ケルマニウム、タマハハキモク、オニワカメ、クシロワカメ、ネコアシコンブ、ツルモ、クロメ、カジメ、アラメ、ミツイシコンブ、ラミナリア・ブラジリエンシス、ラミナリア・クロウストニ、ラミナリア・ディギタータ、マコンブ、ホソメコンブ、カラフトコンブ、マクロシスティス・インテグリフォリア、マクロシスティス・ピリフェラ、ネレオシスチス・ルーキアナ、ワカメ、セイヨウハバノリ、カヤモノリ。フコイダンに関しては相当な薬学的研究がなされており、主として、フコースの硫酸化エステルを９５％超含むＦ−フコイダン、および約２０％のグルクロン酸であるＵ−フコダインの２つの異なる形態が着目され、そのそれぞれは、本明細書において使用される「フコダイン」という用語に含まれる。フコイダンの源に依存して、フコイダンは、ある特定の実施形態において遊離剤として機能することができ、他の実施形態において、フコイダンは、移動剤として機能することができる。
【００２７】
「造血」は、本明細書において使用される場合、血液細胞の形成および発達を指す。出生前、造血は卵黄嚢内で生じ、次いで肝臓、最終的には骨髄で生じる。正常成人において、造血は、主として骨髄およびリンパ組織で生じる。全ての血液細胞は、３つ、２つまたは１つの造血分化経路に特化した分化万能性幹細胞から発達する。これは、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球マクロファージ系統の細胞、および赤血球細胞を含む造血細胞の産生を含む。
【００２８】
「造血剤」は、本明細書において使用される場合、造血に影響する化合物、抗体、核酸分子、タンパク質、細胞または他の分子を指す。分子薬剤は、自然発生的分子または合成分子であってもよい。いくつかの場合において、薬剤は、造血細胞の成長、増殖、成熟、移動もしくは分化または遊離に影響する。様々な実施形態において、薬剤は、クコ、またはクコの抽出物もしくは成分である。
【００２９】
「造血幹細胞」は、本発明において使用される場合、最終的に赤血球、白血球、巨核球、および血小板を含む全ての血液細胞に分化することができる分化多能性幹細胞を意味する。これは、前駆細胞または芽細胞への分化の中間段階を含み得る。「造血前駆細胞」、「前駆細胞」または「芽細胞」という用語は、本発明において同義的に使用され、分化能が低減されているが、まだ骨髄またはリンパ系統等の特定の系統の異なる細胞に成熟化することができる成熟化ＨＳＣを説明している。「造血前駆細胞」は、赤芽球バースト形成単位、顆粒球、赤血球、マクロファージ、巨核球コロニー形成単位、顆粒球、赤血球、マクロファージおよび顆粒球マクロファージコロニー形成単位を含む。
【００３０】
「ホーミング」は、本明細書において使用される場合、循環系から組織または器官内に移動する細胞の過程を指す。いくつかの場合において、ホーミングは、組織特異的接着分子および接着過程を介して達成される。ホーミングは、骨髄に戻る移動を指してもよい。
【００３１】
「免疫学的に正常」は、本明細書において使用される場合、個体が属する種に典型的な免疫系特性を示す対象を指す。これらの典型的な特性は、中でも、機能性Ｂ細胞およびＴ細胞、ならびに、特定の生物の免疫学的特徴として機能する、細胞表面抗原と呼ばれる構造的細胞成分を含む。
【００３２】
「免疫力が低下した」は、本明細書において使用される場合、遺伝子型または表現型免疫不全を有する対象を指す。遺伝子型免疫不全対象は、液性または細胞媒介反応の生成不能をもたらす遺伝子欠陥を有する。遺伝子型免疫不全対象の特定の限定されない例は、ＳＣＩＤマウスまたはｂｇ／ｎｕ／ｘｉｄマウス等の遺伝子型免疫不全マウスである。「表現型免疫不全対象」は、応答が見られないように表現型的に改変された免疫反応を遺伝子的に生成することができる対象である。１つの特定の制限されない例において、表現型免疫不全受容者は、放射線照射されている。別の特定の制限されない例において、表現型免疫不全対象は、化学療法により処置されている。さらに別の特定の制限されない例において、表現型免疫不全対象は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）等の細菌またはウイルス感染に罹患している。
【００３３】
「単離された生物学的成分」（例えば、核酸分子、ポリペプチド、多糖または他の生物学的分子）は、本明細書において使用される場合、成分が自然に発生する他の生物学的成分から実質的に分離または精製された生物学的成分を指す。核酸およびタンパク質は、標準的精製法、宿主細胞における組み換え発現により単離されるか、または化学的に合成され得る。
【００３４】
「クコ（Ｌｙｃｉｕｍ  ＢａｒｂａｒｕｍまたはＬ．Ｂａｒｂａｒｕｍ）」は、本明細書において使用される場合、小さな明るい橙赤色の楕円形のベリーまたは成長した果実を指す。１つの例示的な起源は、中国北部、主に寧夏回族自治区にある。時折、ゴジベリーまたはウルフベリーとも呼ばれる。クコは、何百もの植物性食物、例えばジャガイモ、トマト、ナス、およびペッパー（パプリカ）を含むナス科植物であるナス科に属する。
【００３５】
「リンパ増殖」は、本明細書において使用される場合、リンパ球の産生の増加を指す。
【００３６】
「調整」または「調整する」または「調整すること」は、本明細書において使用される場合、反応の上方制御（すなわち、活性化もしくは刺激）、下方制御（すなわち、阻害もしくは抑制）または組み合わせもしくは別個のその２つを指す。
【００３７】
「移動」は、本明細書において使用される場合、多細胞生物の発達および維持における細胞の動きの中心的過程を指す。細胞はしばしば、一般に走化性と呼ばれる特定の外部シグナルに応答して、およびそれに向かって移動する。移動は、循環系から組織または器官内に動く細胞の過程を含む。より具体的には、循環幹細胞は、細胞表面の接着分子の発現により毛細血管内皮の表面に係止され、内皮細胞および幹細胞の両方において細胞骨格の変化をもたらし、組織および／または器官部位までの途中での毛細血管壁を通した動きを可能にする。いくつかの場合において、ホーミングは、組織特異的接着分子および接着過程を介して達成される。
【００３８】
「移動剤」は、本明細書において使用される場合、循環系から組織または器官内に動く細胞の過程を促進することができる動員剤である。幹細胞の移動は、例えば、循環もしくは免疫系における循環幹細胞の低下により、または、循環幹細胞の毛細血管内皮等の血管表面へのホーミング、係止、および／もしくは溢出に関連する、細胞表面上での表面マーカーおよび／もしくは接着分子の発現により示され得る。移動剤の例は、多糖に富む画分（画分Ａ）および水溶性画分（画分Ｂ）を含む、アファニゾメノン・フロス・アクアから抽出された単離または精製成分、クコ抽出物の多糖に富む画分（画分Ａ）を含む、クコから抽出された単離または精製成分、初乳抽出物のタンパク質に富む画分（画分Ｂ）を含む、初乳から抽出された単離または精製成分、藻類から抽出された単離成分または化合物を含むフコイダン、例えばクサモズクまたはその他の藻類またはその抽出物を含む、藻類抽出物の多糖に富む画分（画分Ｃ）に見られる化合物、キノコから抽出された単離成分または化合物を含む、キノコから抽出された単離または精製成分、例えば冬虫夏草またはその抽出物、霊芝またはその抽出物、ヤマブシタケまたはその抽出物を含む、キノコ抽出物の多糖に富む画分（画分Ｄ）に見られる化合物、アルスロスピラ・プラテンシス、アルスロスピラ・マキシマ、またはその抽出物を含む、スピルリナから抽出された単離または精製成分を含む。異なる実施形態において、この薬剤は、ＣＤ３４ｈｉｇｈ（ＣＤ３４＋）細胞等の幹細胞の移動に影響する。別の実施形態において、この薬剤は、活性化および／または休眠ＶＳＥＬの循環に影響する。一実施形態において、移動剤は、末梢血中を循環する骨髄由来幹細胞および／または造血幹細胞の数を減少させる。別の実施形態において、移動剤は、循環幹細胞上でのＣＸＣＲ４の向上した発現に関連する。
【００３９】
「キノコ多糖体」は、本明細書において使用される場合、キノコの様々な種、例えば冬虫夏草、ヤマブシタケ、および霊芝において主に見られるグルカンを指す。これにはまた、先天性および細胞媒介免疫反を向上させ、動物およびヒトにおいて抗腫瘍活性を示し得る薬用キノコからの多くの生物活性多糖または多糖−タンパク質複合体が含まれる。
【００４０】
「薬学的に許容される担体」は、本明細書において使用される場合、本発明において有用な従来の薬学的に許容される担体を指す。
【００４１】
「ツルドクダミ（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍまたはＰ．ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）」は、本明細書において使用される場合、中国の中部および南部に自生する、木質塊茎から２〜４ｍの高さまで成長する草本性の多年生つる植物の種を指す。葉は、長さ３〜７ｃｍおよび幅２〜５ｃｍであり、幅広い矢じり形状であり、全縁を有する。花は直径６〜７ｍｍであり、白色または緑がかった白色であり、１０ｃｍ〜２０ｃｍまでの長さの短く高密度の円錐花序上に生じる。果実は、長さ２．５〜３ｍｍの痩果である。これはまた、ファロピア・マルチフローラ（Ｆａｌｌｏｐｉａ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）、ラディックス・ポリゴニ（Ｒａｄｉｘ  Ｐｏｌｙｇｏｎｉ）、ラディックス・ポリゴニ・マルチフローリ（Ｒａｄｉｘ  Ｐｏｌｙｇｏｎｉ  Ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｉ）、フリースフラワー、何首烏、またはフォーチ（Ｆｏ−Ｔｉ）としても知られる。
【００４２】
「多糖」は、本明細書において使用される場合、分岐または非分岐鎖においてグリコシド結合した約１０個を超える単糖類残基のポリマーを指す。
【００４３】
「前駆細胞」は、本明細書において使用される場合、定義された細胞系統において子孫を生じる細胞を指す。
【００４４】
「促進する」および／または「促進すること」は、本明細書において使用される場合、細胞または生物の特定の挙動の増強を指す。一実施形態において、促進することは、単球由来幹細胞の動員に関連する。別の実施形態において、促進することは、幹細胞のメラニン細胞への分化に関連する。
【００４５】
幹細胞の「補充」は、本明細書において使用される場合、循環系内の幹細胞が組織または器官内の特定の部位内に移動する過程を指す。補充は、化学誘導性シグナルまたは細胞受容体等の化合物または分子により促進され得る。例えば、ＣＸＣＲ４およびＳＤＦ−１は両方とも、幹細胞のホーミングおよび移動における役割が特定されている。
【００４６】
「遊離剤」は、本明細書において使用される場合、元の組織からの幹細胞の遊離および放出を促進することができる動員剤である。元の組織からの幹細胞の遊離は、例えば、循環もしくは免疫系における循環幹細胞の増加により、または、元の組織、例えば骨髄からの幹細胞の放出に関連したマーカーの発現により示され得る。遊離剤の例は、ワカメ等の藻類の抽出物から得られるようなフコイダンを含む。一実施形態において、遊離剤は、末梢血中の骨髄由来幹細胞および／または造血幹細胞の数を増加させる。別の実施形態において、遊離剤は、末梢血中を循環するＣＤ３４ｈｉｇｈ（ＣＤ３４＋）細胞等の幹細胞の数に影響する。別の実施形態において、遊離剤は、対象の末梢血中の循環活性化および／または休眠ＶＳＥＬの数に影響する。
【００４７】
「衛星細胞」は、本明細書において使用される場合、多くの場合筋肉組織の末梢部に位置し、筋肉内に移動して組織修復および復元を補助することができる、筋特異的幹細胞を指す。
【００４８】
「幹細胞」は、本明細書において使用される場合、最終分化しておらず、したがって他の型の細胞を生成することができる細胞である。幹細胞の特性は、心臓細胞、皮膚細胞または神経細胞等の特定の形状および特別な機能を有する成熟細胞に発達する可能性である。幹細胞は、分化全能性、分化万能性、および分化多能性の３つの型に分けられる。「分化全能性幹細胞」は、体内の任意の細胞に成長および分化することができ、したがって、生物全体の細胞および組織を形成することができる。「分化万能性幹細胞」は、自己複製および２つ以上の細胞または組織型への分化が可能である。「分化多能性幹細胞」は、自己複製および成体細胞または組織型への分化が可能なクローン細胞である。分化多能性幹細胞分化には、分化能が低減されているが、まだ特定の系統の異なる細胞に成熟化することができる前駆細胞または芽細胞への分化の中間段階が関与し得る。「幹細胞」という用語は、本明細書において使用される場合、自己複製および分化が可能な分化全能性、分化万能性幹細胞および分化多能性幹細胞を指す。「骨髄由来幹細胞」は、造血系を復元し得る骨髄において見られる原始幹細胞であり、内皮、間葉、および分化万能性能力を有する。幹細胞は、接着性間質細胞型として、または、細胞表面上に、もしくは細胞が細胞表面ＣＤ３４に対し陰性である様式でＣＤ３４を発現するより分化した細胞として、骨髄内に存在し得る。「成体幹細胞」は、自己複製の可能性をある程度有し、複数の細胞型への分化が可能な、成体生物において見られる肝細胞の集団である。幹細胞の具体例は、骨髄間質細胞（ＭＳＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、骨髄分離成体多系統誘導（ＭＩＡＭＩ）細胞、分化多能性成体前駆細胞（ＭＡＰＣ）、極小胚様幹細胞（ＶＳＥＬ）、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または原始割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。
【００４９】
「幹細胞循環剤」（ＳＣＣＡ）、「動員剤」、および／または「動員因子」は、本明細書において使用される場合、循環系から組織または器官への幹細胞の遊離、循環、ホーミングおよび／または移動に影響する、１種以上の化合物、抗体、核酸分子、タンパク質、多糖、細胞、または、神経ペプチドおよび他のシグナル伝達分子を含むがそれらに限定されない他の分子を指す。分子薬剤は、自然発生的分子または合成分子であってもよい。動員剤の例は、「遊離剤」（遊離剤は、元の組織からの幹細胞の放出を促進することができる）および「移動剤」（移動剤は、循環系から組織または器官内に動く細胞の過程を促進することができる）を含む。
【００５０】
「対象」は、本明細書において使用される場合、コンパニオン・アニマル、家畜、および動物園の動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物および他の動物を含む、全ての動物を含む。「動物」という用語は、任意の生きた多細胞脊椎生物、すなわち、例えば哺乳動物、トリ、サル、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、げっ歯類等を含むカテゴリーを含む。同様に、「哺乳動物」という用語は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物を含む。
【００５１】
「治療上効果的な量」は、本明細書において使用される場合、処置されている対象において所望の効果を達成するのに十分な、特定の組成物または組成物中の活性薬剤の量を指す。例えば、これは、組織を補給する、修復する、または回復させる幹細胞の移動を向上させるために効果的な量であってもよい。別の実施形態において、「治療上効果的な量」は、幹細胞の輸送を向上させる、例えば、血流内の循環幹細胞のレベルの上昇により実証され得るように、幹細胞の遊離を増加させるのに効果的な量である。さらに別の実施形態において、「治療上効果的な量」は、血流内の循環幹細胞のレベルの低下、および／またはホーミングおよび移動に関連した表面マーカーの発現により実証され得るように、循環系から様々な組織または器官への幹細胞のホーミングおよび移動を向上させるのに十分な量である。治療上効果的な量は、対象の生理学的状態（年齢、性別、疾患の種類および段階、全体的な身体状態、所与の用量に対する反応性、所望の臨床効果を含む）ならびに投与経路を含むがそれらに限定されない、様々な因子に依存して変動し得る。臨床および薬理学的分野における当業者は、日常的な実験を通して治療上効果的な量を決定することができる。
【００５２】
「輸送」は、本明細書において使用される場合、循環または免疫系内を巡回する、元の組織からの細胞の動きの過程、ならびに組織および／または器官内の部位に向かう局在化を指す。輸送はまた、元の組織からの遊離、例えば骨髄からの幹細胞の放出から始まる幹細胞動員を含む。輸送は、さらに、元の組織からの細胞の動き、内皮への接着によるホーミング、移行、ならびに標的組織および／または器官内の最終的移動を含む。さらに、輸送は、免疫系の細胞の動きの過程を含み得る。輸送の１つの特定の限定されない例は、移動とも呼ばれる標的器官への幹細胞の動きである。輸送の別の特定の限定されない例は、骨髄を離れて標的器官に動くＢ細胞またはプレＢ細胞の動きである。
【００５３】
「処置する」、「処置すること」および「処置」は、本明細書において使用される場合、治療的処置および予防的または防止的措置の両方を指し、目的物は、処置が最終的に成功しない場合であっても、標的化された状態、疾患または障害（集合的に「病気」）を防止または抑制（低下）する。処置を必要とする者は、すでに病気に罹患している者、および病気に罹患しやすい者、または病気が予防されるべき者を含み得る。
【００５４】
述べたように、成体幹細胞（ＡＳＣ）は、不均一な集団であり、幹細胞において、可塑性（すなわち分化能）および自己複製能力が異なる様々なメンバーが存在する。１つの分類は、まず可塑性および自己複製能力の増加の順番で示されるように、ＡＳＣの４つの一般的種類、すなわち１）胚葉系統幹細胞、２）前駆細胞、３）エピブラスト様幹細胞、および４）割球様幹細胞を提供する。
【００５５】
古典的な成体幹細胞、例えば胚葉系統造血幹細胞（ＨＳＣ）および骨髄幹細胞（ＢＭＳＣ）は、体の造血および免疫系の治癒および再生過程を活発化する。これは、体内の貯蔵区画から再生または修復部位に向かうＨＳＣおよびＢＭＳＣの動きを通して達成される。例えば、ＨＳＣおよびＢＭＳＣの主要な源は、腰、肋骨、胸骨および他の骨構造を含む骨髄である。骨髄は、ＨＳＣおよびＢＭＳＣの独特の制御微環境であり、細胞外基質糖タンパク質および豊富なミネラル痕跡を有する。これらの特徴は、特定の生理学的条件に対する幹細胞の反応を誘導する重要な分子相互作用を有する「ニッチ」を提供する。ニッチからのＨＳＣおよびＢＭＳＣの動きは、正常な健常者の末梢血流内のこれらの細胞の出現をもたらす。血流内での循環を通して、ＨＳＣおよびＢＭＳＣは、細胞表面上に発現した受容体（例えばＣＸＣＲ４）の組み合わせにより維持および／または修復の部位に、ならびに化学誘引物質、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ−１）を発現する部位に向かって動く。（Ｄｒａｐｅａｕ，２０１０）。
【００５６】
ＡＳＣの４つの一般的種類内の新たに発見された動作主体のうち、それらの再生および修復過程への関与が、以前に特定されたＡＳＣ、例えばＨＳＣおよびＢＭＳＣの関与を反映するかどうかを理解することが極めて興味深い。これは、成体生物に見られる最も原始的なＡＳＣのいくつかを示し得る極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞の役割の理解を含む。これらのＶＳＥＬ細胞は、胚性幹細胞（ＥＳＣ）のそれと類似しした、近似的な分化全能性および／または分化万能性を有し得る。したがって、それらは、ＡＳＣの最も原始的な種類である割球様幹細胞として分類され得る（胚割球は、ＥＳＣの１つの源である）。広い可塑性等のＶＳＥＬのＥＳＣとの機能的類似性は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞の命名を一部説明している。ＶＳＥＬの命名を説明する第２の態様は、他の細胞と比較して、それらが非常に小さなサイズ（時には直径１〜２μｍ未満）であることである。
【００５７】
ＶＳＥＬは、精原細胞に加えて、事実上全ての体細胞型の形成に基づき近似的分化全能性を有するものとして説明されている（Ｙｏｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌａｃｋ，２００５ｂ）。３つ全ての胚葉（内胚葉、中胚葉、外胚葉）から得られる細胞に発達するこの能力は、ＥＳＣの分化万能性の特質に極めて類似している（Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．２００５）。特に、これらの細胞はまた、ＥＳＣに特徴的なマーカーを発現する（例えば、中でもＯｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、Ｒｅｘ−１）（Ｚｕｂａ−Ｓｕｒｍａ，ｅｔ  ａｌ．２００９）。マーカー発現における類似性だけでなく、ＶＳＥＬはまた、ＥＳＣに類似した真正染色質（「開いたクロメーション」）核状態および核型安定性の観察に基づき、ＥＳＣに類似しているようである。
【００５８】
さらに、ＶＳＥＬは、極めて稀である（骨髄単細胞の全集合の０．０１％まで少ない）ことが知られている（同上）。ＶＳＥＬ細胞は、成人期まで生存する、早期原腸形成／器官形成の間に存在する幹細胞の子孫であってもよい。さらに発達すると、ＶＳＥＬは、非体細胞組織（例えば配偶子）を形成することができないが、まだ３つ全ての胚葉を形成することができる、若干より特化したエピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）に成熟化する。また、ＥＬＳＣはより大きく（多くの場合直径６〜８μｍ未満）、これは次いで分化多能性前駆細胞を生じ、最終的に胚葉特異的幹細胞を生じる。ＶＳＥＬだけでなく、多系統誘導（ＭＩＡＭＩ）細胞等の他の種類の分化多能性細胞もまた、最近特定されている。これらの細胞はまた、３つの胚葉にわたる広い分化能および高い増殖速度を有するが、それらのより大きなサイズ（７μｍ超）により、それらはＥＬＳＣまたは新たに発見された種類の分化多能性前駆細胞として分類され得る。（Ｄ’Ｉｐｐｏｌｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。
【００５９】
それらの広い分化能および堅牢な自己複製能力を鑑みて、ＶＳＥＬは、体内の全ての組織および器官にわたる治癒および再生への大きな独特の寄与を提供し得る。そのＨＳＣおよびＢＭＳＣの対応物と同様に、ＶＳＥＬは、ＣＸＣＲ４を発現し、ケモカイン、ＳＤＦ−１に応答する。これは、幹細胞ニッチから動いて、正常な健常者の末梢血流内のＶＳＥＬの出現をもたらす能力を示唆する。実際に、最も最近の研究では、ＶＳＥＬが末梢血内に存在することが特定されている（Ｋｕｃｉａ，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，ａｂｓｔｒａｃｔ）。加えて、それらの結果は、ＶＳＥＬが、ニッチから維持および修復部位に向かうＨＳＣおよびＢＭＳＣの動きを促進する動員剤に応答することをさらに示していた。これは、一例として、末梢血中のＶＳＥＬの数を増加させるための、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の適用を含む。（同上。）
【００６０】
動員剤（幹細胞循環剤、または動員因子としても知られる）は、部分的に、機械的および化学誘導性シグナルを操作することにより機能し、そのシグナルにより幹細胞は、末梢血流内を循環し、修復および再生が必要な組織の部位に補充される。例えば、機械的力または他の因子が、幹細胞の表面上のＬ−セレクチンを活性化し得る。一方、Ｌ−セレクチンの活性化は、受容体ＣＸＣＲ４の発現の上昇を促進し得る。また、組織損傷の部位における細胞は、ＳＤＦ−１リガンドを分泌し、それにより受容体ＣＸＣＲ４を発現する幹細胞を損傷部位に引き付けることができる。ＳＤＦ−１およびＣＸＣＲ４の相互作用は、幹細胞の循環を末梢血流内で停止させるのに十分な接着を促進する。（Ｄｒａｐｅａｕ，２０１０）。以前に、本発明者らは、様々な動員剤がＨＳＣおよびＢＭＳＣの輸送を促進することができることを実証した。その例は、米国特許第７，６５１，６９０号、同第８，０３４，３２８号およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２／００６１００号を含む。ＶＳＥＬによるＣＸＣＲ４の発現、およびＳＤＦ−１に対する反応性は、これらの動員剤がＶＳＥＬに対する同様の効果を促進することができることを強く示唆している。
【００６１】
再生および修復のための新たに発見された潜在的に有効なＶＳＥＬの源を引き出すことに加えて、本発明者らの動員剤は、さらなる他の利益を提供する。幹細胞動員を促進する既存の方法は、低い動的性能、高コスト、不便な投与方法および望ましくない副作用を含む、大きな欠点を有している。顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）またはその組み換え形態は、ピーク循環ＨＳＣ数を達成するために数日を要する。僅か数分以内に作用し、血流内の循環ＨＳＣレベルの上昇に対する短期間の効果を有するインターロイキン−８（ＩＬ−８）の投与に関しては、反対の問題が存在する。（Ｆｒｅｎｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）Ｇ−ＣＳＦおよび異なる分子、ＣＸＣＲ４拮抗物質ＡＭＤ３１００は、中でも出血、脾臓破裂、血痰、骨障害を含む重大な副作用を有し得る。したがって、当該技術分野において、幹細胞動員剤をヒト対象に送達し、副作用なしで、および低減されたコストでプラスの臨床的利益を得るための効果的で便利な方法が必要とされている。
【００６２】
ツルドクダミ．フリースフラワー根としても知られるツルドクダミ植物の乾燥塊根は、何首烏とも呼ばれる伝統的な中国医薬として使用されており、この医薬は、死の判決を受け食物も飲料も与えられずに投獄された名高い中国軍将校の話から、ＴＣＭにおいて有名である。つる状の草、ツルドクダミの葉および根を摂取することにより生き延びたが、この将校を捕らえた人は、後にその遺体がまだ光沢のある黒髪を有しているのを発見した。この語の起源は疑わしいが、ツルドクダミが体の再生および復活能力を引き出す重要な特性を有するという長年支持されてきた考えを説明するのに役立つ。最近の科学的研究では、ツルドクダミの抽出物が、早期胚形成および幹細胞識別の維持の両方に関与する２つの重要な経路である、ソニック・ヘッジホッグ（Ｓｈｈ）の増加した発現およびβ−カテニン発現により、実際に毛包成長を促進することができることが確認されている。（Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．２０１１）
【００６３】
ツルドクダミ抽出物のさらなる分析により、この植物が、生物活性化合物の豊富な源であることが確認されたが、その顕著な２つの例は、アントラキノンおよび誘導体、ならびにヒドロキシルスチルベンである。アントラキノンおよび誘導体は、抗マラリア剤、下剤、および化学療法治療薬の基剤として機能した。ヒドロキシルスチルベン、例えば２，３，５，４’−テトラヒドロキシスチルベン−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドは、異なる神経変性疾患の症状を回避する重要な神経保護効果を提供することが示されている。総合的に、これらの結果は、ツルドクダミ抽出物の成分が、おそらくは炎症を調整し、癌増殖のリスクを低減し、ならびに／または体の細胞、組織および器官のための保護効果を提供することにより、体の治癒および再生に重要な特性を有することを示している。
【００６４】
ツルドクダミ中のこれらの成分の効果は、ある特定の条件においてはある程度理解されているが、ツルドクダミの成分がどのようにして体内の幹細胞活性に特異的に影響し得るのかに関してはまだまだ知られていない。これは、説明したように、幹細胞が体の自然の治癒および再生機構において重要な役割を担うことを考えれば、驚くべきことである。対象に対して行われているいくつかの研究の１つは、ツルドクダミ抽出物が、マウスにおけるツルドクダミ抽出物の投与後の骨髄幹細胞およびリンパ前駆細胞の数の増加により示されるように、幹細胞および前駆細胞の増殖を促進することを示している。（Ｚｈｉｗｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．１９９１）。同様に、米国特許出願第１２／００６，２２１号は、マウスにおける投与後のＧＭ−ＣＳＦおよび幹細胞因子（ＳＣＦ）発現の増加を説明している。上述のように、ＧＭ−ＣＳＦおよびＳＣＦの両方が、幹細胞移動および動員において重要な役割を担うものとして示唆されることを考えると、これらの結果は、ツルドクダミ抽出物の幹細胞活性に対する潜在的効果に関する興味深い疑問を提示している。
【００６５】
フコイダン．フコイダン（当該技術分野においてフコイジンまたは硫酸化フカンとしても知られる）は、静脈注射すると骨髄内の区画から末梢血流へのＨＳＣの放出を促進すると説明された硫酸化フカン多糖Ｌ−セレクチン作動物質であるが、この効果はＬ−セレクチンの刺激とは無関係であると思われる（Ｆｒｅｎｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。末梢血流内でのＨＳＣの循環は、体内の幹細胞再生および修復機構の促進における重要なステップである。硫酸化フカンとして、フコイダンは、藻類の様々な種に見られる。棘皮動物（例えばウニおよびナマコ）等の動物種においても、他の硫酸化フカンが発見されている。
【００６６】
フコイダンは、硫酸化フコース多糖Ｌ−セレクチンリガンドであるため、そのセレクチン活性は、シアリル化、フコシル化、および硫酸化等の重要な炭水化物またはポリペプチド修飾に依存する。フコイダン等の硫酸化フカンの、Ｐ−およびＫ−セレクチン上の結合部位の存在は、少なくとも部分的に、フコイダンがＢＭからのＨＳＣの脱離を促進する機構であることが実証されている。（Ｆｒｅｎｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，２４６１、Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，１９０）おそらくはより重大なことに、フコイダン等の硫酸化フカンは、ＳＤＦ−１上に存在するヘパリン結合ドメインへの完全な結合を通して、内皮表面または骨髄上に隔離されたＳＤＦ−１を置き換えることが示されている。フコイダンによるＳＤＦ−１のヘパリン結合部位の占有は、細胞表面への連結を防止し、それにより血漿中の循環ＳＤＦ−１レベルを増加させる。（Ｓｗｅｅｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）
【００６７】
いかなる特定の理論にも束縛されないが、血流内のＳＤＦ−１リガンドの向上したレベルは、このようにして、骨髄からのＶＳＥＬを発現するＣＸＣＲ４受容体の放出を促進し得る。このモデルに基づいて、本発明者らは、フコイダン等のＬ−セレクチンリガンドが、ＶＳＥＬを動員する重要な能力を有することができ、フコイダンで構成される栄養補助食品の経口投与が、体内での自然の再生および修復を最も良好に補助し得ると仮定した。
【００６８】
本発明は、動員剤の投与により、それを必要とする対象に広範な臨床的および生理学的利益を提供するための新たな組成物および方法を提供する。いなかる特定の理論にも束縛されることを望まないが、本発明者らは、本発明の組成物の投与により得られた有益な、および他の生理学的結果が、動員剤の投与に続く幹細胞輸送および移動の向上から得られると考えている。
【００６９】
様々な実施形態において、動員剤は、藍藻（例えば、アファニゾメノン・フロス・アクア）、ツルドクダミ、クコ、初乳、キノコ多糖体（例えば、冬虫夏草、ヤマブシタケ（ライオンの鬣）、霊芝（レイシ）、フコイダン（任意選択で藻類、例えばワカメ、クサモズク（リム））、スピルリナ（例えば、アルスロスピラ・プラテンシス、アルスロスピラ・マキシマから抽出された）、その類似体、その誘導体、その抽出物、その合成または薬学的均等物、その画分、および上記項目のいずれかの組み合わせを含む群から選択される１つ以上の成分を含む。
【００７０】
動員剤は、１つ以上の組成物中で互いに組み合わされてもよく、または、投与計画の一部として別個に投与または摂取されてもよい。それらは、個々の生理学的効果、追加的効果、ならびに／または、遊離剤および移動剤の両方として機能する等の互いとの相乗的効果を有してもよい。いくつかの実施形態において、動員剤は、移動剤として機能し、循環系から組織または器官内に動く細胞の過程を促進することができる。いくつかの実施形態において、動員剤は、遊離剤として機能し、元の組織からの幹細胞の遊離および放出を促進することができる。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００７１】
一実施形態において、動員剤、例えばアファニゾメノン・フロス・アクア（ＡＦＡ）等の藍藻が対象に投与されるが、対象には、藍藻および他の動員剤の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、藍藻全体を摂取および消化する。藍藻は、生、凍結、凍結乾燥、脱水、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。一実施形態において、動員剤は、藍藻の抽出物、または藍藻から抽出された単離成分もしくは化合物、例えば、藍藻抽出物の多糖に富む画分中に見られる化合物、または藍藻抽出物の水溶性区画内の化合物である。藍藻は、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。一実施形態において、藍藻は、移動剤として機能することができる。一実施形態において、藍藻は、遊離剤として機能することができる。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００７２】
一実施形態において、動員剤は、例えばツルドクダミが対象に投与されるが、対象には、ツルドクダミおよび他の動員剤の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、ツルドクダミの根、葉、茎、種、果実、および／または他の植物部位の全体を摂取および消化する。ツルドクダミの根、葉、茎、種、果実、および／または他の植物部位の全体は、生、凍結、凍結乾燥、脱水、発酵、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。したがって、ツルドクダミは、本明細書に記載のように、ツルドクダミの根、葉、茎、種、果実、および／または他の植物部位の全体を包含する。他の実施形態において、動員剤は、ツルドクダミの抽出物、またはツルドクダミから抽出された単離成分もしくは化合物、例えば、ツルドクダミ抽出物の多糖に富む画分、または水溶液に可溶な画分、または有機溶媒に可溶な画分中に見られる化合物である。ツルドクダミは、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。一実施形態において、ツルドクダミまたはその抽出物は、移動剤として機能することができる。一実施形態において、ツルドクダミまたはその抽出物は、遊離剤として機能することができる。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００７３】
ツルドクダミ中に見られる成分の抽出物は、アントラキノンおよび誘導体、ヒドロキシルスチルベン、レシチン、クリソファノール、クリソファン酸、クリソファノールアントロン、エモジン、フィスシオン、レイン、クリソファン酸アントロン、レスベラトロール、ピセイド、２，３，５，４’−テトラヒドロキシスチルベン−２−Ｏ−Ｏ−Ｄ−グルコピラノシド、２，３，５，４’−テトラヒドロキシスチルベン−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド−２’’−Ｏ−モノガロイルエステル、２，３，５，４’−テトラヒドロキシスチルベン−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド−３’’−Ｏ−モノガロイルエステル、２，３，５，４’−テトラヒドロキシスチルベン−２−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、没食子酸、カテキン、エピカテキン、３−Ｏ−ガロイル（−）−カテキン、３−Ｏ−ガロイル（−）−エピカテキン、３−Ｏ−ガロイル−プロシアニジンＢ−２，３，３’−ジ−Ｏ−ガロイル−プロシアニジンＢ−２、ならびにβ−シトステロールを含む。
【００７４】
調製されたツルドクダミ抽出物中の成分の同一性および性質は、抽出に使用された方法に依存して変動し得る。例えば、水抽出は、ツルドクダミから成分を抽出する主要な方法である。しかしながら、アントラキノンおよび誘導体等のある特定の成分は、極めて水に不溶性である。アントラキノンおよび誘導体はまた、室温で有機溶媒に不溶性であるが、高温有機溶媒（例えば沸点）、例えばメタノールまたはエタノールには可溶である。同様に、２，３，５，４’−テトラヒドロキシスチルベン−２−Ｏ−β−ｄ−グリコシドは、温度およびｐＨ依存的に水溶液中で容易に分解することが知られている。（Ｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１１）したがって、ツルドクダミの抽出物は、当該技術分野において知られた任意の方法に従い調製され得る。これは、水抽出、有機溶媒抽出（例えば、米国特許出願第１２／００６，２２１号）、またはそのような例示的方法の組み合わせ（例えば混合）を含む。使用され得る有機溶媒の例は、メタノール、ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、およびｎ−ブタノールを含む。２種以上の水および／または有機溶媒の組み合わせが共に添加され、異なる分配層に異なる成分を抽出するための追加的な分配層が生成されてもよい。同様に、ツルドクダミからの抽出物は、生の未処理植物全体もしくはその一部から調製されてもよく、または、抽出物は、処理されたツルドクダミ植物全体もしくはその一部から調製されてもよい。例えば、処理は、当該技術分野における任意の既知の方法により行われてもよく、その一例は、発酵である。処理は、例えば乳酸菌等の細菌による発酵（Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）を通して、または黒豆の添加を通して、ツルドクダミからの抽出物中の成分のバイオアベイラビリティを改善することができる。
【００７５】
一実施形態において、動員剤、例えばクコが対象に投与されるが、対象には、クコおよび他の動員剤の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、クコの実全体を摂取および消化する。実は、生、凍結、凍結乾燥、脱水、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。したがって、クコは、本明細書に記載のように、実全体およびその抽出物の両方を包含する。一実施形態において、動員剤は、クコの抽出物、またはクコから抽出された単離成分もしくは化合物、例えば、クコ抽出物の多糖に富む画分中に見られる化合物である。クコは、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。一実施形態において、クコは、移動剤として機能することができる。一実施形態において、クコは、遊離剤として機能することができる。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００７６】
一実施形態において、初乳が対象に投与されるが、対象には、初乳および他の動員剤の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、初乳全体を摂取および消化する。初乳は、生、凍結、凍結乾燥、脱水、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。したがって、初乳は、本明細書に記載のように、初乳全体およびその抽出物の両方を包含する。一実施形態において、動員剤は、初乳の抽出物、または初乳から抽出された単離成分もしくは化合物、例えば、初乳抽出物のタンパク質に富む画分中に見られる化合物である。初乳は、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。一実施形態において、初乳は、移動剤として機能することができる。一実施形態において、初乳は、遊離剤として機能することができる。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００７７】
一実施形態において、キノコまたはキノコのブレンドが対象に投与されるが、対象には、キノコおよび他の動員剤の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、キノコ全体を摂取および消化する。キノコは、生、凍結、凍結乾燥、脱水、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。したがって、キノコは、本明細書に記載のように、キノコ全体およびその抽出物の両方を包含する。一実施形態において、薬剤は、冬虫夏草またはその抽出物である。一実施形態において、動員剤は、霊芝またはその抽出物である。一実施形態において、動員剤は、ヤマブシタケまたはその抽出物である。キノコは、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。一実施形態において、キノコ、冬虫夏草、霊芝、および／またはヤマブシタケは、移動剤として機能することができる。一実施形態において、キノコ、冬虫夏草、霊芝、および／またはヤマブシタケは、遊離剤として機能することができる。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００７８】
一実施形態において、藻類が対象に投与されるが、対象には、藻類および他の動員剤の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、藻類全体を摂取および消化する。藻類は、生、凍結、凍結乾燥、脱水、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。したがって、藻類は、本明細書に記載のように、キノコ全体およびその抽出物の両方を包含する。一実施形態において、動員剤は、クサモズクまたはその抽出物である。藻類は、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。一実施形態において、藻類、クサモズクは、移動剤として機能することができる。一実施形態において、藻類、クサモズクは、遊離剤として機能することができる。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００７９】
一実施形態において、スピルリナが対象に投与されるが、対象には、スピルリナおよび他の動員剤の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、スピルリナ全体を摂取および消化する。スピルリナは、生、凍結、凍結乾燥、脱水、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。したがって、スピルリナは、本明細書に記載のように、スピルリナ全体およびその抽出物の両方を包含する。一実施形態において、動員剤は、アルスロスピラ・プラテンシス、アルスロスピラ・マキシマ、またはその抽出物である。スピルリナは、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。一実施形態において、スピルリナは、移動剤として機能することができる。一実施形態において、スピルリナは、遊離剤として機能することができる。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００８０】
本発明は、対象における幹細胞の輸送を向上させる方法をさらに提供する。一実施形態において、幹細胞の輸送のレベルは、対象の末梢血中の循環ＣＤ３４＋幹細胞の数に関連する。別の実施形態において、幹細胞の輸送のレベルは、対象の末梢血中の循環活性化および／または休眠ＶＳＥＬの数に関連する。別の実施形態において、幹細胞の輸送のレベルは、対象の末梢血中の循環幹細胞の数に関連する。異なる実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００８１】
本明細書において、治療上効果的な量の藍藻を対象に投与することにより幹細胞輸送を向上させるための方法が記載される。
【００８２】
一実施形態において、藍藻、例えばアファニゾメノン・フロス・アクア（ＡＦＡ）が対象に投与されるが、対象には、２種以上の藻類の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、藻類全体を摂取および消化する。藍藻は、生、凍結、凍結乾燥、脱水、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。
【００８３】
一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００８４】
代替の実施形態において、藍藻、例えばＡＦＡの抽出物が対象に投与される。別の実施形態において、藍藻は、植物全体、植物の一部、および／またはそれらの抽出物の両方を包含する。別の実施形態において、藍藻は、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。別の実施形態において、抽出物は、水溶性区画である。別の実施形態において、抽出物は、多糖に富む区画である。
【００８５】
本明細書において、治療上効果的な量のツルドクダミを対象に投与することにより幹細胞輸送を向上させるための方法が記載される。
【００８６】
一実施形態において、ツルドクダミが対象に投与されるが、対象には、２種以上の成分の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、植物全体または植物の一部を摂取および消化する。ツルドクダミは、生、凍結、凍結乾燥、脱水、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。
【００８７】
代替の実施形態において、ツルドクダミの抽出物が対象に提供または投与される。別の実施形態において、ツルドクダミは、植物全体、植物の一部、およびそれらの抽出物の両方を包含する。別の実施形態において、ツルドクダミは、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。別の実施形態において、抽出物は、アントラキノンおよび／または誘導体である。別の実施形態において、抽出物は、ヒドロキシルスチルベンである。代替の実施形態において、ツルドクダミ植物全体が対象に投与される。別の実施形態において、ツルドクダミ植物の一部が対象に投与される。一実施形態において、ツルドクダミの抽出物が対象に投与される。
【００８８】
本明細書において、治療上効果的な量のフコイダンを対象に投与することにより幹細胞輸送を向上させるための方法が記載される。
【００８９】
一実施形態において、ワカメ等の藻類が対象に投与されるが、対象には、２種以上の藻類の混合物が提供されてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、藻類全体を摂取および消化する。藻類は、生、凍結、凍結乾燥、脱水、またはいくつかの他の様式で保存されてもよい。
【００９０】
代替の実施形態において、藻類の抽出物が対象に提供または投与される。別の実施形態において、藻類は、植物全体および／またはその抽出物の両方を包含する。別の実施形態において、藻類は、単離もしくは精製物質として単体で提供されてもよく、または、薬学的に許容される担体を含む組成物の一部であってもよい。別の実施形態において、抽出物は、高度に硫酸化されたポリアニオン系可溶性繊維である。一実施形態において、抽出物は、単離フコイダンである。異なる実施形態において、フコイダンは、単離後に精製される。代替の実施形態において、多糖画分が対象に投与される。別の実施形態において、高度に硫酸化されたポリアニオン系可溶性繊維が対象に投与される。一実施形態において、単離フコイダンが対象に投与される。異なる実施形態において、精製フコイダンが対象に投与される。一実施形態において、ワカメは、対象への投与後に遊離剤として機能することができる。
【００９１】
本発明は、対象における幹細胞の輸送を向上させる方法をさらに提供する。一実施形態において、幹細胞の輸送のレベルは、対象の末梢血中の循環ＣＤ３４＋幹細胞の数に関連する。別の実施形態において、幹細胞の輸送のレベルは、対象の末梢血中の循環活性化および／または休眠ＶＳＥＬの数に関連する。別の実施形態において、本明細書に記載の方法は、対象における幹細胞の輸送を向上させ、アファニゾメノン・フロス・アクア等の藍藻もしくはその抽出物、ツルドクダミもしくはその抽出物、クコもしくはその抽出物、初乳もしくはその抽出物、スピルリナもしくはその抽出物、アルスロスピラ・プラテンシスもしくはその抽出物、アルスロスピラ・マキシマもしくはその抽出物、フコイダン、クサモズクもしくはその抽出物、ヤマブシタケもしくはその抽出物、霊芝もしくはその抽出物、および／または冬虫夏草もしくはその抽出物を含む群から選択される成分の１つ以上を含有する治療上効果的な量の組成物を投与し、それにより対象における幹細胞の輸送を向上させることを含む。一実施形態において、幹細胞輸送の向上は、アファニゾメノン・フロス・アクア等の藍藻もしくはその抽出物、ツルドクダミもしくはその抽出物、クコもしくはその抽出物、藍藻もしくはその抽出物、初乳もしくはその抽出物、スピルリナもしくはその抽出物、アルスロスピラ・プラテンシスもしくはその抽出物、アルスロスピラ・マキシマもしくはその抽出物、フコイダンもしくはその抽出物、クサモズクもしくはその抽出物、ヤマブシタケもしくはその抽出物、霊芝もしくはその抽出物、および／または冬虫夏草もしくはその抽出物を含む群から選択される成分の１つ以上を含有し、それにより対象における幹細胞の輸送を向上させる特定用量の組成物に対する幹細胞の反応を分析することにより測定され得る。
【００９２】
一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００９３】
本発明は、対象における炎症を低減する方法をさらに提供する。別の実施形態において、本明細書で提供される方法は、対象における炎症を低減し、アファニゾメノン・フロス・アクア等の藍藻もしくはその抽出物、ツルドクダミもしくはその抽出物、クコもしくはその抽出物、初乳もしくはその抽出物、スピルリナもしくはその抽出物、アルスロスピラ・プラテンシスもしくはその抽出物、アルスロスピラ・マキシマもしくはその抽出物、フコイダン、クサモズクもしくはその抽出物、ヤマブシタケもしくはその抽出物、霊芝もしくはその抽出物、および／または冬虫夏草もしくはその抽出物を含む群から選択される成分の１つ以上を含有する治療上効果的な量の組成物を投与し、それにより対象における幹細胞の輸送を向上させることを含む。一実施形態において、炎症のレベルは、幹細胞の線維形成に関連する。一実施形態において、繊維形成は、血小板由来成長因子のレベルにより調整される。一実施形態において、動員剤は、血小板を活性化しない。
【００９４】
一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。一実施形態において、動員剤は、血小板を活性化せず、ＶＳＥＬの繊維形成を低減する。
【００９５】
本発明は、薬学的調製物をさらに提供する。一実施形態において、薬学的調製物は、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、または１％ｗ／ｗのアファニゾメノン・フロス・アクア（ＡＦＡ）またはその抽出物である。一実施形態において、薬学的調製物は、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、または１％ｗ／ｗのツルドクダミである。一実施形態において、薬学的調製物は、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、または１％ｗ／ｗのフコイダンである。
【００９６】
本発明は、投薬計画をさらに提供する。一実施形態において、投薬計画は、処置されるべき疾患状態の重篤度および反応性に依存し、処置の過程は、単回投与から数日および／または数週間にわたる反復投与まで続く。別の実施形態において、投薬スケジュールは、体内に蓄積された活性成分の測定に基づく。ある特定の実施形態において、活性成分は、フコイダンである。一実施形態において、フコイダンは、ワカメまたはその抽出物から単離される。別の実施形態において、投薬計画は、対象における幹細胞輸送のレベルに依存する。一実施形態において、投薬計画は、対象に投与される遊離剤の活性に依存する。別の実施形態において、投薬計画は、対象の末梢血流内の循環ＣＤ３４＋幹細胞の数に依存する。別の実施形態において、投薬計画は、対象の末梢血中の循環活性化および／または休眠ＶＳＥＬの数に依存する。別の実施形態において、投薬計画は、対象の末梢血流内の骨髄由来幹細胞の数に依存する。一実施形態において、投薬計画は、毎日投与される３グラムのフコイダンである。別の実施形態において、投薬計画は、毎日投与される１グラムのフコイダンである。別の実施形態において、投薬計画は、毎日投与される５００ｍｇグラムのフコイダンである。別の実施形態において、投薬計画は、毎日投与される７５ｍｇグラムのフコイダンである。一実施形態において、投薬計画は、毎日投与される２５０ｍｇグラムのフコイダンである。
【００９７】
本発明は、対象における幹細胞の輸送を向上させるための方法であって、治療上効果的な量の動員剤または動員剤の多糖画分を投与し、それにより、投与経路とは無関係に、対象における幹細胞の遊離、循環、ホーミングおよび／または移動を増加させることを含む方法をさらに提供する。
【００９８】
本発明は、動員剤の投与後にＣＤ３４＋幹細胞等の循環幹細胞の集団の一時的増加を誘発する方法をさらに提供する。別の実施形態において、一時的増加は、対象の末梢血中の循環活性化および／または休眠ＶＳＥＬの数に関連する。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【００９９】
一実施形態において、幹細胞輸送の向上は、特定用量の動員剤に対する幹細胞の反応を分析することにより測定され得る。一実施形態において、動員剤を対象に提供することは、ある特定の期間内に、例えば１２日未満、６日未満、３日未満、２日未満、または１日未満にその対象の幹細胞の遊離を向上させる。代替の実施形態において、期間は、投与後１２時間未満、６時間、約４時間未満、約２時間未満、または約１時間未満である。
【０１００】
一実施形態において、動員剤の投与は、投与から約２〜約３時間後に、循環内への幹細胞の遊離をもたらす。別の実施形態において、遊離した幹細胞は、循環系に入り、対象の体内の循環幹細胞の数を増加させる。別の実施形態において、正常ベースラインと比較した循環幹細胞の数のパーセント増加は、対照と比較して約２５％、約５０％、約１００％または約１００％超の増加であってもよい。一実施形態において、対照は、同じ対象からのベースライン値である。別の実施形態において、対照は、未処理対象、またはプラセボもしくは薬理学的担体で処理された対象における循環幹細胞の数である。
【０１０１】
本発明は、ＣＤ３４＋幹細胞等の循環幹細胞の集団の一時的減少を誘発する方法をさらに提供する。別の実施形態において、一時的減少は、対象の末梢血中の循環活性化および／または休眠ＶＳＥＬの数に関連する。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【０１０２】
実施形態において、幹細胞移動の向上は、特定用量の動員剤に対する幹細胞の反応を分析することにより測定され得る。一実施形態において、動員剤を対象に提供することは、投与後ある特定の期間内に、例えば約５時間未満、約４時間未満、約２時間未満、または約１時間未満にその対象の幹細胞の移動を向上させる。
【０１０３】
別の実施形態において、正常ベースラインと比較した循環幹細胞の数のパーセント減少は、対照と比較して約２５％、約５０％、約１００％または約１００％超の増加であってもよい。一実施形態において、対照は、同じ対象からのベースライン値である。別の実施形態において、対照は、未処理対象、またはプラセボもしくは薬理学的担体で処理された対象における循環幹細胞の数である。
【０１０４】
別の実施形態において、藻類の抽出物の投与は、対象の体内の循環幹細胞の数の一時的減少により測定される幹細胞のホーミングの速度を増加させる。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【０１０５】
別の実施形態において、藻類は、クサモズクである。別の実施形態において、正常ベースラインと比較した循環幹細胞の数のパーセント減少は、対照と比較して約２５％、約５０％、約７５％、またはさらに約１００％であってもよい。一実施形態において、対照は、同じ対象からのベースライン値である。別の実施形態において、対照は、未処理対象、またはプラセボもしくは薬理学的担体で処理された対象における循環幹細胞の数である。
【０１０６】
一実施形態において、動員剤の投与は、投与から約１〜約３時間後に、循環から組織への幹細胞の移動をもたらす。循環幹細胞は、循環系から出、したがって対象の体内での循環幹細胞の数を減少させる。正常ベースラインと比較した循環幹細胞の数のパーセント減少は、対照と比較して約１５％、約３０％、約５０％または約７５％超の減少であってもよい。一実施形態において、対照は、同じ対象からのベースライン値である。別の実施形態において、対照は、未処理対象、またはプラセボもしくは薬理学的担体で処理された対象における循環幹細胞の数である。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【０１０７】
別の実施形態において、動員剤の抽出物の投与は、対象の体内の循環幹細胞の数の一時的減少により測定される幹細胞のホーミングの速度を増加させる。正常ベースラインと比較した循環幹細胞の数のパーセント減少は、対照と比較して約２５％、約５０％、約７５％、またはさらに約１００％であってもよい。一実施形態において、対照は、同じ対象からのベースライン値である。別の実施形態において、対照は、未処理対象、またはプラセボもしくは薬理学的担体で処理された対象における循環幹細胞の数である。別の実施形態において、動員剤の抽出物の投与は、循環幹細胞上でのＣＸＣＲ４発現の増加をもたらす。一実施形態において、幹細胞は、胚葉系統幹細胞、前駆細胞、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）または割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）である。一実施形態において、幹細胞は、極小胚様（ＶＳＥＬ）幹細胞である。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、動員剤を投与される対照は、健常である。他の実施形態において、対象は、免疫抑制、慢性病、外傷性の損傷、変性疾患、感染症、またはそれらの組み合わせ等の疾患または生理学的状態に罹患している。ある特定の実施形態において、対象は、皮膚、消化系、神経系、リンパ系、心臓血管系、内分泌系、またはそれらの組み合わせの疾患または状態に罹患している可能性がある。特定の実施形態において、対象は、骨粗しょう症、アルツハイマー病、心筋梗塞、パーキンソン病、外傷性脳損傷、多発性硬化症、肝硬変、以下の実施例に記載の疾患および状態のいずれか、またはそれらの組み合わせに罹患している可能性がある。治療上効果的な量の動員剤の投与は、上述の状態のいずれかを防止、処置および／もしくはその重症度を低下させる、または別様にそれに対して有益な臨床的利益を提供し得るが、本発明の方法および本発明の動員剤の使用の適用は、これらの使用に限定されない。様々な実施形態において、新規な組成物および方法は、中でも、骨、軟骨、腱および靭帯等の骨格組織、ならびにパーキンソン病および糖尿病等の変性疾患の処置における治療的実用性が見出される。血液から組織への幹細胞の遊離、循環、ホーミングおよび／または移動を向上させることは、修復効率の増加のための欠陥部位への幹細胞のより効率的な送達をもたらし得る。本発明の新規な組成物および方法はまた、遺伝子治療アプローチに関連して使用され得る。
【０１０９】
本発明は、対象への投与のための様々な組成物をさらに提供する。一実施形態において、投与は、眼内、膣内、直腸内、鼻腔内、表皮、および経皮を含む局所的投与である。一実施形態において、投与は、経口投与である。一実施形態において、経口投与用の組成物は、散剤、顆粒剤、水もしくは非水性媒体中の懸濁剤もしくは溶液、カプセル剤、分包剤、錠剤、トローチ剤または発泡性剤形を含む。別の実施形態において、経口投与用の組成物は、増粘剤、香味剤、希釈剤、乳化剤、分散補助剤または結合剤をさらに含む。
【０１１０】
本明細書において、動員剤、および幹細胞輸送の促進に向けて動員剤を使用する方法が記載される。さらに、本明細書において、移動剤、および循環系から組織または器官に動く幹細胞の過程を促進するために移動剤を使用する方法が記載される。また、本明細書において、遊離剤、および元の組織からの幹細胞の放出を促進するために遊離剤を使用する方法が記載される。本発明者らは、幹細胞動員剤の効果的な投与を示し、それにより幹細胞に関連した維持および人体内での修復を促進するための、安全で便利な効果的方法を達成した。幹細胞の病理学は、極めて重要で興味深く、本明細書に開示される主題に関連するが、本発明の基盤となる範囲は、血液から組織への幹細胞の遊離、循環、ホーミングおよび／または移動が、損傷組織の修復ならびに既存の組織の活力および健康の維持において重要であることである。したがって、この目的を達成するための方法および組成物を開発することの重要性が、本発明の焦点および目標に含まれる。
【０１１１】
したがって、本発明は、中でも、幹細胞の輸送を支援することにより、体内の自然の組織治癒および再生を向上させるための新規な組成物および方法を提供する。さらに、本発明は、哺乳動物における幹細胞の輸送を促進することにより、哺乳動物における健康問題の進行を防止、減速または別様に減退させるための新規な組成物および方法を提供する。本明細書に記載の組成物および方法は、組織への幹細胞の遊離、循環、ホーミングおよび／または移動を支援することにより、既存の組織の再生をさらに増加させ、したがって組織修復の過程を支援し得る。
【実施例】
【０１１２】
以下の実施例は、請求される発明をより良く説明するために提供され、主題の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。特定の材料が言及される場合、それは単に例示を目的とし、本発明を限定することを意図しない。当業者は、発明の能力を行使することなく、および本発明の範囲から逸脱することなく、同等の手段、組成物または反応物質を開発することができる。
【０１１３】
実施例１
研究デザイン：ヒトＶＳＥＬの動員
健常ヒト対象およびウマに対する予備実験は、ＡＦＡの服用が、哺乳動物の末梢血中を循環するＶＳＥＬの総数を増加させることを示している。本発明者らは、２０歳から７０歳の間の年齢の、３５名の成人健常ヒトボランティアに対して研究を行った。研究を開始する前に、対象は、Ｍｅｒｃｅｒ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅにより承認されたＩＲＢの下で、インフォームド・コンセントに署名した。試験の参加基準は、対象が健常であること、処方薬を服用していないこと、ならびに、ＨＩＶ、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＴＬＶ、サイトメガロウイルスおよびＳＴＤ等の感染性因子のパネルに対し、血清学的に陰性の試験結果であることであった。
【０１１４】
末梢循環内へのヒトＶＳＥＬの動員に対するＡＦＡの効果を決定するために、ヒト対象から静脈穿刺により血液を採取し、１２ｍｇの１５％エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有する真空採取管内に収集した。
【０１１５】
この最初の血液採取は、血漿が分画されＶＳＥＬ用に濃縮された対照試料として機能した。静脈穿刺およびＶＳＥＬの単離は、以下のように行った。標準的医療手順に従った穿刺および血液採取後、血液を管内に入れ、これを３〜４回反転させて、ＥＤＴＡ溶液を混合物中に分散させた。次いで、血液採取管を４℃の遠心分離機内に４８時間設置した。４８時間の重力分離後、血液を、血漿に富む画分、ならびに赤血球／白血球、造血幹細胞および他の種類の幹細胞を含有する細胞画分に分離した。血漿画分を除去し、別個の管内で４℃で保存した。１５マイクロリットルのこの溶液を、１５マイクロリットルの無菌０．４％トリパンブルーと混合し、血球計に設置した。ＶＳＥＬはトリパンブルー陽性であり、２．０ミクロン未満のサイズである。若干より特化したＶＳＥＬ、例えばエピブラスト様幹細胞に移行するものは、トリパンブルー陽性または陰性であり、３〜５ミクロンのサイズである。エピブラスト様幹細胞は、トリパンブルーで染色されず、６ミクロンを超えるサイズである。ＶＳＥＬの精製のための方法の追加的な例は、例えば、米国特許公開第２００９／０１０４１５８号に見出すことができる。
【０１１６】
休眠および活性化ＶＳＥＬ両方の数を決定するために、血球計を用いて対象の分画血漿から手作業で細胞計数を行った（図１を参照されたい）。最初の血液採取時、対照試料からの細胞数は、対象の分画血漿中を循環する休眠および活性化ＶＳＥＬ両方の数のパーセント増加を計算するためのベースラインとして機能した。最初の血液採取直後、対象は２つのＳｔｅｍＥｎｈａｎｃｅカプセルを服用した。ＳｔｅｍＥｎｈａｎｃｅ服用から１時間後に、同じ対象に対し第２の血液採取を行った。再び細胞計数を行い、末梢循環内に動員されたＶＳＥＬの数に対するＡＦＡの効果を決定した。
【０１１７】
実施例２
休眠および活性化ＶＳＥＬの分析
さらに、顕微鏡下で、活性化ＶＳＥＬを、それらのｉ）増加したサイズ（＞２μｍ）、ｉｉ）低減した生体染色色素取り込み、およびｉｉｉ）それらの光屈折特性により決定した。さらに、休眠ＶＳＥＬは、光に対し非屈折性であり、また生体染色色素トリパンブルーを排除する能力のない微小なミクロ細胞（＜２μｍ）として定義される（図１を参照されたい）。動員結果の解析は、ＡＦＡ服用が、循環ＶＳＥＬの総数を、０．６４の標準偏差で平均３２．４４％増加させることを明らかにした（表１を参照されたい）。循環内のＶＳＥＬの総数の中央パーセント増加は、１８．３７％である。  ＡＦＡ服用から１時間後、血液中を循環するＶＳＥＬの数が約２０〜３０％増加することが判明した。
【表１】
2015522076.tif 000003
【０１１８】
実施例３
ＶＳＥＬの動員剤
２つのＶＳＥＬ部分集団（すなわち、活性化および休眠ＶＳＥＬ）の分析において、ＡＦＡ服用後の血液中の活性化ＶＳＥＬの総数のパーセント増加は、１９．３３％であった。同様に、休眠ＶＳＥＬのパーセント増加は、５０．５２％であった。活性化されたＶＳＥＬの中央パーセント増加は２１．２１％であり、一方で、休眠ＶＳＥＬの中央パーセント増加は８．７５％であった。対象の間での２つの部分集団の細胞数の変動は、対象の年齢および生理学的状態等のいくつかの因子に起因し得る。例えば、対象間のこれらの差は、休眠ＶＳＥＬ部分集団において観察される、中央パーセント増加と平均パーセント増加との間の大きな変動をもたらし得る。血液採取時の対象の生理学的状態に依存して、動員されている休眠ＶＳＥＬの数は、同じ個人内で変動し得る。それにもかかわらず、試験に含まれた３５名の対象のほとんどは、ＡＦＡ服用後に、血液中を循環する休眠および活性化ＶＳＥＬの増加の両方を示した。また、この試験における外れ値は、以下に列挙される３つの異なるカテゴリーの１つに分類されたことに留意すべきである。
１．休眠ＶＳＥＬの増加および活性化ＶＳＥＬの減少。
２．活性化ＶＳＥＬの増加と連動した休眠ＶＳＥＬの減少。
３．活性化および休眠ＶＳＥＬの両方の減少。
【０１１９】
実施例４
ヒトＶＳＥＬの活性化
ヒトＶＳＥＬの活性化の解析は、その形態の変化により決定された。直接光下で細胞を解析するために、生体染色物質としてのトリパンブルーによる顕微鏡解析を行った。位相差顕微鏡下での湿潤スライドが、計数チャンバを用いた細胞計数からの測定値を支持した。活性化ＶＳＥＬは、トリパンブルー陰性であり、中間的バックグラウンド上で明るい色を示し、円形であり、約２μｍ以上のサイズであると説明される。休眠ＶＳＥＬは、トリパンブルー陽性であり、中間的バックグラウンド上で暗い色を有し、円形の形態であり、約１〜２μｍのサイズである。ＶＳＥＬのこれらの２つの部分集団を、ＡＦＡ服用の前および後に別個に計数した。各部分集団の中央および平均パーセント増加の両方を、集積データから計算した。
【０１２０】
上記パラメータを使用した細胞数解析からの結果は、活性化ＶＳＥＬのＡＦＡ服用後の平均パーセント増加が１９．３３％であることを示した。ＡＦＡ服用後の中央パーセント増加は、２１．２１％であった。細胞数データは、ＡＦＡ服用が、いくつかの外れ値を除いて、活性化ＶＳＥＬの１９〜２２％の増加を一貫してもたらすことを示した。
【０１２１】
特定の対象の血液中の活性化ＶＳＥＬを分析するための試験のこの部分において見られた外れ値もまた、年齢、健康、ストレスレベル、および患者間の他の生理学的な差異等の、結果を複雑化する変数に起因し得る。また、対象の血液中の休眠ＶＳＥＬ部分集団の測定においても同様の外れ値が観察された。
【０１２２】
実施例５
ヒトＶＳＥＬの体外の分析
体内動員試験と同様に、対象の血液からＶＳＥＬを収集し、組織培養プレート上に播種した。血液試料は、ＡＦＡの服用前（Ｔ０）、および２つのＡＦＡカプセルの服用から１時間後（Ｔ１）に得られた。これらの実験の根拠は、ＡＦＡの生理学的効果が体外ので分析され得るかを決定することであった。ＥＤＴＡを含有する７ｍＬの真空採取管に血液を採取し、ＶＳＥＬ濃縮分画血漿のために様々な間隔で処理した。最初の血液採取から２４時間後、４８時間後、および７２時間後に、血液試料からＶＳＥＬ血漿画分（ＶＳＥＬ−ｐｆ）を収集した。これらの３つの時間間隔は、ＡＦＡ服用が体外のでＶＳＥＬ活性化を向上させ、血液試料中の他の細胞構成物質による推定幹細胞成長因子の遊離を誘発するかを決定するために使用された。
【０１２３】
細胞計数を行った後、各試料を１．０×１０６細胞／ｃｍ２で組織培養培地に播種した。（無血清合成ＢＬＳＣ基本培地、ｐＨ７．４：５ｍＬの抗生物質−抗真菌剤溶液および４９５ｍＬのＢＬＳＣ基本培地で調製、カタログ＃ＭＢＣ−ＡＳＢ−ＭＥＤ−１００−Ａ００２、Ｍｏｒａｇａ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）。ＶＳＥＬのさらなる培養は、当該技術分野において知られた技術に従って行うことができる。これには、例えば、米国特許公開第２００９／０１０４１６０号に記載の方法が含まれる。
【０１２４】
さらに、ＡＦＡの後の服用が、ｉ）接着性、ｉｉ）複屈折性顆粒数の増加、ｉｉｉ）回転楕円体の形成、およびｉｖ）フィブリン基質の形成に関してＶＳＥＬ培養物に影響し得るかを詳細に分析するために、試料を異なる希釈度で播種した。年齢が４５歳から５２歳の範囲である４人の健常対象（感染性因子のパネルに対して血清学的に陰性であった）から採取した血液を、体外のＶＳＥＬ−ｐｆの分析に使用した。
【０１２５】
ＶＳＥＬ−ｐｆを収集および処理するための２つの修正されたプロトコルを、体外の試験に使用した。ＶＳＥＬ−ｐｆの収集が血小板活性化を排除する１つの手順、「過程１」が開発され、したがって、ＶＳＥＬを含有する濃縮血漿画分中の血小板以来成長因子（ＰＤＧＦ）はより低いレベルとなるはずである。例として、「過程１」は、血小板の除去のために２重遠心分離に依存している。遠心分離用の蓋付クエン酸塩管（複数可）内に収集された血液を、まず１５００〜２０００ｇのＲＣＦ（相対遠心力）で１０分間回転させた。軟膜または細胞分画を乱さずに、プラスチック製注入器を使用して血漿の上部３／４の分画を除去した。この分離された結晶分画をプラスチック製遠心管に入れ、１５００〜２０００ｇのＲＣＦでさらに１０分間回転させた。この二重遠心分離された血漿分画の上部３／４を、乏血小板血漿（ＰＰＰ）分画として除去した。
【０１２６】
第２の手順、「過程２」は、血小板が活性化されるＶＳＥＬ−ｐｆを収集するための標準的プロトコルを組み込み、ＰＤＧＦ濃度は、ＥＤＴＡおよび重力分離を使用した画分プラズマにおいてより高いと予測された。上述のように、この過程は、静脈穿刺から採取された血液へのＥＤＴＡ溶液の添加と、４℃で４８時間の冷却と、血漿に富む画分、ならびに赤血球／白血球、造血幹細胞および他の種類の幹細胞を含有する細胞画分への分離ための重力分離とに依存する。
【０１２７】
実施例６
結果
予備的な体外の結果は、Ｔ０およびＴ１試料の両方において、フィブリン基質形成（図２）が、希釈されたＶＳＥＬ−ｐｆにおいて生じることを実証した。これらの非希釈試料において、ＶＳＥＬ−ｐｆの播種後２４時間以内にフィブリン基質が観察された。ＡＦＡ服用が非希釈試料におけるフィブリン形成に影響するかを判別するのは困難であった。しかしながら、収集した血漿分画を連続的に希釈すると、Ｔ１試料よりもＴ０試料においてより速い速度でフィブリン形成が観察された。１：１０の希釈で播種された培養物は、Ｔ０培養物とＴ１培養物との間の最初にフィブリン基質形成が観察された時間に最も大きな差を示した（表ＩＩ）。この観察は、ＡＦＡ服用が、フィブリン形成を観察するための運動速度に体外で影響することを示唆していた。
【０１２８】
ＡＦＡまたはその代謝物が体外のフィブリン基質形成のための速度に影響するかを決定するために、対象の血液から、ＶＳＥＬ−ｐｆを異なる時間間隔（すなわち１日目、２日目および３日目）で処理および培養した。表ＩＩは、細胞培養物中にフィブリン基質形成を観察するために必要な時間量を示す実験結果の要約であり、ＡＦＡ服用の阻害効果を反映している。
【表２】
2015522076.tif 000004
【０１２９】
実施例７
血漿血清培養物中の線維形成に対する動員剤の効果
血液採取から１日後に試料が収集およびＶＳＥＬ−ｐｆ処理された場合、フィブリン基質形成は、試料を播種してから３〜５日後の培養物中で観察された。より重要なことに、ＡＦＡ服用後の試料（Ｔ１）におけるフィブリン形成は、Ｔ０培養物（ＡＦＡの服用前に収集された血液試料）と比較してさらに２４時間のインキュベーションを必要としたが、これは、ＡＦＡ服用後の体外のフィブリン形成に対する阻害効果を示唆している。この体外の効果は、２日目または３日目に播種された培養物中でフィブリン基質を形成するまでの時間を比較すると、経時的に消散する（フィブリン基質を形成するまでの時間を短縮する）と思われる。
【０１３０】
また、体外の実験結果は、血漿画分中のＰＤＧＦが、ＡＦＡの抗フィブリン形成効果をある程度低減し得ることを示唆している。ＰＤＧＦにより示された遮蔽効果は、過程２（ＰＤＧＦ濃縮プロトコル）を使用して播種された培養物と比較して、過程１を使用した培養物中でのフィブリン基質形成中に観察される速度の差を説明し得る。１日目の培養物の播種に使用された血漿画分は、２日目および３日目試料よりも、ＰＤＧＦの濃度がより低かったと思われる。したがって、過程２によるＶＳＥＬ−ｐｆの収集は、ＡＦＡ服用後の抗フィブリン形成体外の効果をある程度ブロックし得る。
【０１３１】
実施例８
血漿中の血小板由来成長因子の解析
フィブリン形成に関する体外の分析におけるＰＤＧＦの存在を確認するために、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検査法）を行って、収集したヒト血漿をＰＤＧＦ−ＢＢ（血小板由来成長因子）に関して調査した。ＶＳＥＬ−ｐｆからのアリコートを用いて、Ｔ０およびＴ１試料、ならびに過程１および２を使用した試料に対してＥＬＩＳＡを行った。
【０１３２】
実施例９
方法
９６ウェルプレートを、モノクローナル抗ヒトＰＤＧＦ−Ｂサブユニット抗体で被覆し、室温で一晩インキュベートした。次いで、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（リン酸緩衝生理食塩水およびＴｗｅｅｎ−２０）で洗浄し、１％  ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）およびＰＢＳからなる緩衝液でブロックした。次いで、ブロック緩衝液を除去し、プレートを再び洗浄した。洗浄後、標準ＰＤＧＦ−ＢＢおよび血漿の連続希釈物をプレートに添加した。標準ＰＤＧＦ−ＢＢは、陽性対照として使用された。分析における陰性対照として検出抗体および抗原は使用しなかった。解析に使用された標準ＰＤＧＦおよび血漿は共に、希釈当たり１０倍連続希釈した。検出抗体は、ビオチン化抗ＰＤＧＦ−ＢＢ抗体であった。検出抗体の被覆後、ストレプトアビジンアルカリホスファターゼをプレートに添加し、続いてｐ−ニトロフェニルリン酸塩を添加した。次いで、プレートを約３０分間発現させ、洗浄し、プレートリーダで４０５ｎｍの吸収で読み出した。結晶中のＰＤＧＦの濃度を計算するために、標準滴定曲線を作成した（表２を参照されたい）。次いで、ＰＤＧＦに関して解析されたプラズマを、ＡＦＡ服用前および服用後で比較した（詳細は、セクションＩＩＩを参照されたい）。ＡＦＡ服用前に抽出された血漿は、Ｔ０と標示される。ＡＦＡ服用から１時間後に抽出された血漿は、Ｔ１と標示される。６名の対象が、試験のこの部分に使用された。
【０１３３】
実施例１０
結果
表ＩＩＩは、ＥＬＩＳＡから得られたデータを要約している。血漿試料中のＰＤＧＦの濃度は、濃縮された血漿から収集されたＶＳＥＬの数に概して対応していたことに留意されたい。血漿中のＶＳＥＬのより高い細胞濃度は、同じ血漿画分中のＰＤＧＦの増加したレベルに相互関係を持った。
【表３】
2015522076.tif 000005
【０１３４】
血漿中のＰＤＧＦの濃度は、３．３３ｎｇ／ｍｌから１０．２ｎｇ／ｍｌの範囲であった。Ｔ０におけるＰＤＧＦの平均濃度は、７．２３ｎｇ／ｍｌであった。Ｔ１においては、平均ＰＤＧＦ濃度は７．２１ｎｇ／ｍｌであった。全体的に、結晶中のＰＤＧＦの濃度は、Ｔ０とＴ１との間のＰＤＧＦの濃度におけるわずかな差（０．０１５ｎｇ／ｍｌ）により示されるように、ＡＦＡ服用の前および後において比較的一定を維持した。
【表４】
2015522076.tif 000006
【０１３５】
表ＩＶは、ＶＳＥＬｓ−ｐｆを培養プレートに播種する時点での収集された血漿画分中のＰＤＧＦの濃度を要約している。２つの異なる方法（過程１または過程２）により収集された血漿画分に対し行われたＥＬＩＳＡは、ＶＳＥＬ−ｐｆ中のＰＤＧＦの濃度に影響するようであった。対象の血液からＶＳＥＬを収集するための実施例１におけるプロトコルを使用して、濃縮プラズマ画分中に遊離されたＰＤＧＦが約２０％増加した。さらに、ＡＦＡ服用は、ＰＤＧＦの血漿レベルを増加させなかった。
【０１３６】
実施例１１
ＶＳＥＬ輸送および抗炎症特性に対する動員剤の効果
血液中のＭｏｒａｇａのＶＳＥＬの動員および活性化に対するＳｔｅｍＥｎｈａｎｃｅ（ＡＦＡ）服用の効果は、体内および体外の両方で示された。血液中を循環するＶＳＥＬの数の増加が、ＡＦＡの服用前および服用後の対象の血液からの細胞計数を行うことにより確認された。興味深いことに、強い身体的活動／ストレス（トレッドミル上で３０分）がまた、対象の血液中の循環ＶＳＥＬの数の増加をもたらし得る。さらに、ＳｔｅｍＥｎｈａｎｃｅ服用はまた、対象の血液中を循環する活性化ＶＳＥＬの数を増加させる。しかしながら、体外の実験およびＥＬＩＳＡ解析は、ＡＦＡ服用が血漿を活性化しないことを示唆している。体外の実験では、ＡＦＡ服用後の抗炎症活性が明らかとなった。フィブリノゲンの血漿レベルの増加は炎症に関連するため、試験の結果は、フィブリノゲンがフィブリンに変換される速度が、ＡＦＡ服用後にＶＳＥＬ培養物において減少することを示した。体外の結果はまた、細胞培養物においてフィブリン基質の形成が最初に観察される速度に影響するＰＤＧＦの潜在的役割を明らかにしている。試験結果は、最終的に、ＳｔｅｍＥｎｈａｎｃｅの服用が以下の効果を有することを示した。
１．ＡＦＡ服用は、総細胞数を３２．４４％増加させる。
２．ＡＦＡ服用は、活性化ＶＳＥＬを１９．３３％増加させる。
３．ＡＦＡ服用は、休眠ＶＳＥＬを５０．５２％増加させる。
４．体外の解析は、ＡＦＡ服用が抗炎症効果を有し得ることを示唆している。
５．ＡＦＡ服用の前および後で、ＰＤＧＦの濃度は一定を維持する。
【０１３７】
上述の様々な方法および技術は、本発明を実行するいくつかの手法を提供する。当然ながら、説明された目的または利点の全てが、本明細書に記載の任意の特定の実施形態に従って達成され得るとは限らないことを理解されたい。したがって、例えば、当業者は、方法が、本明細書において教示または示唆され得るような他の目的または利点を必ずしも達成することなく、本明細書において教示されるような１つの利点または利点の一群を達成または最適化する様式で行われ得ることを認識する。様々な有利および不利な代替例が本明細書において示唆されている。いくつかの好ましい実施形態は、１つの、別の、またはいくつかの有利な特徴を具体的に含むが、他のの実施形態は、１つの、別の、またはいくつかの不利な特徴を具体的に除外し、さらに他の実施形態は、１つの、別の、またはいくつかの有利な特徴を含めることにより、現在の不利な特徴を具体的に軽減することが理解されるべきである。
【０１３８】
さらに、当業者は、異なる実施形態からの様々な特徴の適用性を認識する。同様に、上記の様々な要素、特徴およびステップ、ならびにそのような要素、特徴またはステップそれぞれの他の既知の均等物は、本明細書に記載の原理に従い方法を実行するために、当業者により組み合わされ、および適合され得る。様々な要素、特徴およびステップのうち、いくつかは多様な実施形態に具体的に含まれ、いくつかは具体的に除外される。
【０１３９】
本発明は、ある特定の実施形態および実施例に関連して開示されてきたが、本発明の実施形態は、具体的に開示された実施形態を超えて、他の代替の実施形態および／または使用、ならびにその修正および均等物まで拡大解釈されることが当業者によって理解される。
【０１４０】
多くの変形例および代替の要素が、本発明の実施形態において開示された。さらなる変形例および代替の要素が、当業者にさらに明らかとなる。これらの変形例には、限定されることなく、極小胚様細胞（ＶＳＥＬ）、割球様幹細胞（ＢＬＳＣ）、エピブラスト様幹細胞（ＥＬＳＣ）の源、ＶＳＥＬ、ＢＬＳＣ、ＥＬＳＣ、幹細胞動員剤をを調製、単離または精製する方法、幹細胞動員剤、その類似体および誘導体を調製、単離、または精製する方法、幹細胞動員剤、その類似体および誘導体を使用して、様々な疾患および／または状態を処置する方法、使用される技術および組成物および溶液の使用、ならびに本発明の教示を通して形成された生成物の具体的な使用が含まれる。本発明の様々な実施形態は、これらの変形例または要素を具体的に含有または除外し得る。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、本発明のある特定の実施形態を説明および請求するために使用される成分の量、濃度等の特性、反応条件等を表現する数は、いくつかの場合において、「約」という用語で修飾されるように理解されるべきである。したがって、いくつかの実施形態において、記された説明および添付の特許請求の範囲において示される数値パラメータは、具体的な実施形態により得られることが求められる所望の特性に依存して変動し得る近似値である。いくつかの実施形態において、数値パラメータは、報告される有効桁数に照らして、および通常の丸め技法を適用することにより解釈されるべきである。本発明のいくつかの実施形態の広い範囲を示す数値範囲およびパラメータは近似値であるにもかかわらず、特定の実施例において示される数値は、実行可能な限り正確に報告される。本発明のいくつかの実施形態において示される数値は、それらの各試験計測中に見られる標準偏差から必然的に生じるある特定の誤差を含有し得る。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、本発明の具体的な実施形態を説明する文脈中で（特に以下の特許請求の範囲のいくつかの文脈中で）使用される用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」、ならびに同様の指示物は、単数および複数の両方を含むと解釈され得る。本明細書中の値の範囲の列挙はその範囲に入る各別々の値を個々に言及する省略法として働くと単に意図される。本明細書中に別段の定めなき限り、各個々の値は、それが本明細書中に個々に列挙されているかのように本明細書中に組み込まれる。本明細書中に示される全ての方法は、本明細書中に別段の定めなき限り、または別段のように文脈により明らかに矛盾しない限り、いかなる好適な順序でも行われ得る。本明細書におけるある特定の実施形態に関して提供されるいかなるおよび全ての実施例または例示的な言語（例えば、「等の」）の使用は単に本発明をよりよく例示することが意図され、そして別段のように請求される本発明の範囲についての限定を提示しない。本明細書中のどの言語も本発明の実施に本質的な非請求要素を示すと解釈されるべきでない。
【０１４３】
本明細書に開示される本発明の代替の要素または実施形態のグループ化は限定として解釈されるべきでない。各グループ構成要素は個々に、またはそのグループの他の構成要素もしくは本明細書中に見られる他の要素とのどんな組み合わせでも言及され、そして請求され得る。１グループの１つ以上の構成要素は利便性および／または特許性の理由のためにグループ中に含められ、またはグループから消去され得る。そのような包含または消去が起こるとき、本明細書は改変されたグループを含有し、したがって付属の請求項中で使用される全てのマーカッシュ形式のグループの記述を実現するとみなされる。
【０１４４】
本発明を実行するための本発明者に知られた最善の形態を含む本発明の好ましい実施形態が、本明細書に記載される。それらの好ましい実施形態に対する変形は、上記説明を読めば、当業者に明らかとなる。当業者は、そのような変形例を適宜使用することができ、また本発明は、本明細書において具体的に説明されるものとは別様に実施され得ることが企図される。したがって、本発明の多くの実施形態は、適用法により許可されるように、本明細書に付随する特許請求の範囲において列挙される主題の全ての修正および均等物を含む。さらに、上記に示される要素の、それらの全ての可能な変形の、どんな組み合わせも、本明細書中に別段の定めなき限り、または別段のように文脈により明らかに矛盾しない限り、本発明に含まれる。
【０１４５】
さらに、本明細書全体にわたり、特許および刊行物に対する数多くの参照がなされている。上記の引用された参考文献および刊行物はそれぞれ、参照することによりその全体が本明細書に個々に組み込まれる。
【０１４６】
最後に、本明細書において開示される本発明の実施形態は、本発明の原理の例示であることが理解されるべきである。使用され得る他の修正は、本発明の範囲内となり得る。したがって、限定ではなく例として、本発明の代替の構成が、本明細書における教示に従って利用され得る。したがって、本発明の実施形態は、示されるおよび説明されるとおりの正確なものに限定されない。
【表５−１】
2015522076.tif 000007
【表５−２】
2015522076.tif 000008
【表５−３】
2015522076.tif 000009
【表５−４】
2015522076.tif 000010
【表５−５】
2015522076.tif 000011
【図１】
2015522076.tif 000012
【図２】
2015522076.tif 000013
【国際調査報告】
2015522076.tif 000014