(57)【要約】（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種全てを含むワクチンを投与することによって、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための方法。上記ワクチンはまた、髄膜炎菌外膜小胞を含み得る。一局面において、（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原、（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原、および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種を含む免疫原性組成物を投与することによる、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための方法が提供され、ここで該免疫原性組成物は、（ａ）髄膜炎菌外膜小胞を含まないか、もしくは（ｂ）髄膜炎菌外膜小胞を含むかのいずれかであり、そして該ｆＨｂｐ抗原、ＮＨＢＡ抗原および／もしくはＮａｄＡ抗原のうちの少なくとも１つは、可溶性形態で該組成物に存在する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原、（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原、および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種を含む免疫原性組成物を投与することによる、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための方法であって；ここで該免疫原性組成物は、（ａ）髄膜炎菌外膜小胞を含まないか、もしくは（ｂ）髄膜炎菌外膜小胞を含むかのいずれかであり、そして該ｆＨｂｐ抗原、ＮＨＢＡ抗原および／もしくはＮａｄＡ抗原のうちの少なくとも１つは、可溶性形態で該組成物に存在する、方法。
【請求項２】
前記組成物は、ｆＨｂｐ、ＮＨＢＡおよびＮａｄＡのうちの２種のみを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記組成物は、ｆＨｂｐ、ＮＨＢＡおよびＮａｄＡのうちの３種全てを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物は、以下のｆＨｂｐ抗原：（ａ）第１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、ここで該第１のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号１に対して少なくともａ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号１の少なくともｘ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；（ｂ）第２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、ここで該第２のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号２に対して少なくともｂ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号２の少なくともｙ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；ならびに／あるいは（ｃ）第３のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチドであって、ここで該第３のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号３に対して少なくともｃ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号３の少なくともｚ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド、
のうちの１種以上を含む、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物は、配列番号１に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物は、配列番号１２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物は、配列番号１１に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物は、（ａ）配列番号４に対して７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／もしくは（ｂ）配列番号４の少なくとも７個連続したアミノ酸のフラグメント、を含むＮＨＢＡ抗原を含む、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物は、（ａ）配列番号５に対して７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／もしくは（ｂ）配列番号５の少なくとも７個連続したアミノ酸のフラグメント、を含むＮａｄＡ抗原を含む、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物は、（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む抗原；（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む抗原；および（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗原、の各々を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物は、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む抗原；（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含む抗原；および（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗原、の各々を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
記載された前記ポリペプチドは、実質的に等しい質量で存在する、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物は、１種以上のさらなる髄膜炎菌タンパク質抗原を含む、上記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記被験体はまた、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５および／もしくはＹのうちの１種以上に対して免疫化される、上記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物は、１種以上の髄膜炎菌莢膜サッカリド抗原を含む、上記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物は、１種以上の非髄膜炎菌抗原を含む、上記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物は、アジュバントを含む、上記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物は、アルミニウム塩アジュバントを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物は、筋肉内注射によって前記被験体に投与される、上記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化することにおいて使用するための免疫原性組成物であって、ここで該免疫原性組成物は、（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種を含む、免疫原性組成物。
【請求項２１】
前記被験体の免疫化は、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための医薬の製造における（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種の使用。
【請求項２３】
前記被験体の免疫化は、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法を含む、請求項２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｘに対して免疫化するためのワクチンの分野にある。
【背景技術】
【０００２】
ほぼ全ての髄膜炎菌疾患は、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの中の株に起因するが、血清群Ｘが関連していることもときおりある。血清群Ｘに対して使用するためのワクチンは現在存在しない。従って、血清群Ｘの中の株に対して有効なワクチンが未だに必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
（発明の開示）
ＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）製品（参考文献１〜４に記載される；４ＣＭｅｎＢとしても公知）は、血清群Ｂ髄膜炎菌に対して免疫化するために設計された。本発明者らは、ＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）で免疫化した患者は、血清群Ｘの中の株に対しても保護されることを見いだした。
【０００４】
従って、本発明は、（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種を含む免疫原性組成物を投与することによって、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための方法を提供する。
【０００５】
同様に、本発明は、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化することにおける使用のための免疫原性組成物を提供し、ここで上記免疫原性組成物は、（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種を含む。
【０００６】
また、本発明は、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための医薬の製造における、（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種の使用を提供する。
【０００７】
いくつかの実施形態において、上記免疫原性組成物はまた、髄膜炎菌外膜小胞を含む；他の実施形態において、上記免疫原性組成物は、髄膜炎菌外膜小胞を含まない。上記組成物が髄膜炎菌外膜小胞を含む場合、上記免疫原性組成物は、非ＯＭＶ形態で（例えば、可溶性形態で）上記ｆＨｂｐ抗原、ＮＨＢＡ抗原および／もしくはＮａｄＡ抗原のうちの少なくとも１種を含む。
【０００８】
（血清群Ｘ防御）
本発明は、上記免疫原性組成物のレシピエントが、血清群Ｘの中のＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ細菌による感染および／もしくは上記細菌に起因する疾患に対する防御を提供する免疫応答を開始するように、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するために使用される。この血清群は、（α１→４）結合Ｎ−アセチルグルコサミン１−ホスフェートの鎖を有する莢膜サッカリドによって特徴付けられる。
【０００９】
血清群Ｘの株に対する防御は、疫学的に測定され得るが、例えば、免疫原性組成物がレシピエントにおいて血清殺菌性抗体（ＳＢＡ）応答を誘起することを確認するために、間接的尺度を使用することは、より一般的であり都合が良い。上記ＳＢＡアッセイは、この分野の標準であり（例えば、参考文献５〜８を参照のこと）、調和的手法を使用する場合、良好な研究室間再現性を示す［９］。簡潔には、上記組成物のレシピエント由来の血清は、標的細菌（本発明では、血清群Ｘ髄膜炎菌）とともに補体（好ましくは、ヒト補体であるが、仔ウサギ補体がしばしば代わりに使用される）の存在下でインキュベートされ、上記細菌の死滅が、ＳＢＡ活性を決定するために種々の希釈率の血清で評価される。
【００１０】
上記組成物が、血清群Ｘ髄膜炎菌の各株およびあらゆる株に対して防御するべきである、または上記組成物の各レシピエントおよび全てのレシピエントが防御されなければならない、ということは必ずしも必要でない。このような普遍的な防御は、この分野では通常の標準ではない。むしろ、防御は、通常は、臨床的に関連する分離菌の一団（しばしば、国ごとを基本にして選択され、おそらく時間を経れば変動する）に対して評価され、レシピエントの集団にわたって測定される。種々の血清群Ｘの株は、防御効力を確認するために利用可能である。例えば、上記組成物は、Ｍ４０５（ＮＡＭＲＵ＃４；  ＡＴＣＣ  ３５５６０）から、株８６００６０（ＰｕｂＭＬＳＴデータベースの参照株６５７；株名称Ｘ：Ｐ１．１２−１，１３−５：Ｆ５−５：ＳＴ−２４（ｃｃ７５０）；Ｚ６４３０としても公知）から、株９５５７、９５５８および／もしくは９５５９［３０］から、参考文献１０の表１に列挙される血清群Ｘの株から、参考文献１１で特徴付けられる株からなど保護し得る。
【００１１】
血清群Ｘ内では、上記免疫原性組成物がｆＨｂｐ抗原を含む場合、上記方法は、上記組成物中の改変体と同じｆＨｂｐ改変体を有する株もしくは分離菌に対して免疫化するために有用であり得る。例えば、上記組成物が改変体１  ｆＨｂｐを含む場合、上記方法は、改変体１  ｆＨｂｐを発現する血清群Ｘの株に対して免疫化するために最も有用である。
【００１２】
血清群Ｘ髄膜炎菌に対して免疫化されるのと同様に、レシピエントはまた、他の血清群（例えば、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５および／もしくはＹのうちの１種以上）に対して免疫化され得る。例えば、参考文献１２が報告するところによれば、ＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）中の抗原は、血清群Ｙから保護し得、参考文献１３が示唆するところによれば、ｆＨｂｐは、血清群Ｂ単独の範囲を超えて防御を提供し得る。
【００１３】
（免疫原性組成物）
本発明は、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を防御するために、免疫原性組成物（例えば、ワクチン）を使用する。上記組成物は、ｆＨｂｐ抗原、ＮＨＢＡ抗原および／もしくはＮａｄＡ抗原のうちの少なくとも１種を含み、これら含まれる抗原に対する免疫応答を誘起する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、これら３種の抗原、例えば、ｆＨＢＰ、ＮＨＢＡもしくはＮａｄＡのうちの１種のみを含む（しかしさらなる抗原を含んでもよい）。いくつかの実施形態において、上記組成物は、これら３種の抗原のうちの２種のみ（例えば、ｆＨＢＰ＋ＮＨＢＡ、ｆＨＢＰ＋ＮａｄＡ、ＮＨＢＡ＋ＮａｄＡ）を含む（しかしさらなる抗原を含んでもよい）。他の実施形態において、上記組成物は、これら３種の抗原のうちの３種全てを含む（そしてさらなる抗原を含んでもよい）。
【００１４】
上記組成物は、血清群Ｘ莢膜サッカリドの免疫原性量を含まない。すなわち、血清群Ｘに対する防御は、抗サッカリド応答によって説明され得ない。血清群Ｘ莢膜サッカリドは、遊離サッカリドとしても、結合体化サッカリドとしても、膜に位置したサッカリド（例えば、ＯＭＶにおいて）としても存在しない。
【００１５】
好ましい組成物は、（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むｆＨｂｐ抗原（例えば、配列番号７）；（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＮＨＢＡ抗原（例えば、配列番号９）；および（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＮａｄＡ抗原、のうちの各々を含む。ＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）は、１つのこのような組成物である。
【００１６】
配列番号６、配列番号８および配列番号１０が、組み合わせにおいて有用なアミノ酸配列であるが、本発明は、これらの正確な配列に限定されない。従って、これらアミノ酸配列のうちの１種、２種、もしくは３種全ては、その改変された配列が、改変されていない配列からなるポリペプチドになお結合する抗体を誘起し得ることを条件として、独立して、最大５個までの単一のアミノ酸変化（すなわち、１個、２個、３個、４個もしくは５個の単一のアミノ酸置換、欠失および／もしくは挿入）によって改変され得る。
【００１７】
組成物中のポリペプチドは、実質的に等しい質量で存在し得る。すなわち、それらの各々の質量は、上記ポリペプチド全ての平均質量の±５％以内である。従って、上記組成物が３種のポリペプチドを含む場合、ｆＨｂｐ、ＨＮＢＡおよびＮａｄＡの各々について、それらは、ａ：ｂ：ｃの質量比（ここでａ、ｂおよびｃの各々は、０．９５〜１．０５の間である）で存在し得る。
【００１８】
（ｆＨｂｐ（Ｈ因子結合タンパク質））
上記ｆＨｂｐ抗原は、詳細に特徴付けられてきた。それは、タンパク質「７４１」（参考文献２６の中の配列番号２５３５および配列番号２５３６）、「ＮＭＢ１８７０」、「ＧＮＡ１８７０」［１４〜１６］、「Ｐ２０８６」、「ＬＰ２０８６」もしくは「ＯＲＦ２０８６」［１７〜１９］としても公知であった。それは、天然ではリポタンパク質であり、多くの髄膜炎菌の血清群にわたり発現される。ｆＨｂｐのＣ末端免疫優性ドメイン（ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ  ｄｏｍａｉｎ）（「ｆＨｂｐＣ」）の構造は、ＮＭＲによって決定された［２０］。上記タンパク質のこの部分は、８つのストランドで構成されるβバレルを形成し、そのストランドは、変動性の長さのループによって繋がれている。上記バレルの前には、短いαヘリックスおよび可撓性のＮ末端テールがある。上記タンパク質は、参考文献２１において、Ｈ因子結合タンパク質として確認され、ｆＨｂｐと名付けられた。
【００１９】
上記ｆＨｂｐ抗原は、３種の別個の改変体に分かれ［２２］、所定のファミリーに対して惹起された血清は同じファミリー内で殺菌性であるが、他の２つのファミリーのうちの一方を発現する株に対しては活性でない。すなわち、ファミリー内交差防御は存在するが、ファミリー間交差防御は存在しないことが見いだされた。本発明は、単一のｆＨｂｐ改変体を使用し得るが、より広い適用範囲（ｃｏｖｅｒａｇｅ）を提供するために、有用なことには、組成物は上記改変体のうちの２種もしくは３種に由来するｆＨｂｐを含み得る。
【００２０】
組成物が単一のｆＨＢＰ抗原を含む場合、それは、以下のうちの１つを含み得る：
（ａ）第１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、ここで上記第１のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号１に対して少なくともａ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号１の少なくともｘ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、ここで上記第２のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号２に対して少なくともｂ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号２の少なくともｙ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；
（ｃ）第３のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチドであって、ここで上記第３のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号３に対して少なくともｃ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号３の少なくともｚ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド。
【００２１】
組成物が２種の異なる髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原を含む場合、それは、以下の組み合わせを含み得る：（ｉ）上記で定義されるとおりの第１のおよび第２のポリペプチド；（ｉｉ）上記で定義されるとおりの第１のおよび第３のポリペプチド；または（ｉｉｉ）上記で定義されるとおりの第２のおよび第３のポリペプチド。第１のおよび第３のポリペプチドの組み合わせが好ましい。
【００２２】
他の実施形態において、組成物は、３種の異なる髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原を、上記で定義されるとおりの第１の、第２のおよび第３のポリペプチドとともに含む。
【００２３】
組成物が２種もしくは３種の異なる髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原を含む場合、これらはいくらかの共通する配列を共有し得るものの、上記第１の、第２のおよび第３のポリペプチドは、異なるｆＨＢＰアミノ酸配列を有する。
【００２４】
上記第１のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与される場合、配列番号１の成熟アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質（株ＭＣ５８）に結合する抗体を含む抗体応答を誘起する。いくつかの実施形態において、これら抗体のうちのいくらかもしくは全ては、配列番号２の成熟アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも、配列番号３の成熟アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも結合しない。
【００２５】
上記第２のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与される場合、配列番号２の成熟アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質（株９６１−５９４５）に結合する抗体を含む抗体応答を誘起する。いくつかの実施形態において、これら抗体のうちのいくらかもしくは全ては、配列番号１の成熟アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも、配列番号３の成熟アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも、結合しない。
【００２６】
上記第３のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与される場合、配列番号３の成熟アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質（Ｍ１２３９）に結合する抗体を含む抗体応答を誘起する。いくつかの実施形態において、これら抗体のうちのいくらかもしくは全ては、配列番号１の成熟アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも、配列番号２の成熟アミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質にも、結合しない。
【００２７】
いくつかの実施形態において、配列番号１の少なくともｘ個連続したアミノ酸のフラグメントはまた、配列番号２の中にも配列番号３の中にも存在しない。同様に、配列番号２の少なくともｙ個連続したアミノ酸のフラグメントもまた、配列番号１の中にも配列番号３の中にも存在しなくてもよい。同様に、配列番号３の少なくともｚ個連続したアミノ酸のフラグメントもまた、配列番号１の中にも配列番号２の中にも存在しなくてもよい。いくつかの実施形態において、配列番号１〜３のうちの１つに由来する上記フラグメントを連続配列としてその他の２つの配列番号に対して整列させた場合、上記フラグメントとその他の２つの配列番号の各々との間の同一性は、７５％未満、例えば、７０％未満、６５％未満、６０％未満などである。
【００２８】
値ａは、少なくとも８０（例えば、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９またはそれより大きい）である。値ｂは、少なくとも８０（例えば、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９またはそれより大きい）である。値ｃは、少なくとも８０（例えば、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９またはそれより大きい）である。上記値ａ、ｂおよびｃは、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態において、ａ、ｂおよびｃは、同一である。
【００２９】
値ｘは、少なくとも７（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。値ｙは、少なくとも７（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。値ｚは、少なくとも７（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。上記値ｘ、ｙおよびｚは、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態において、ｘ、ｙおよびｚは、同一である。
【００３０】
フラグメントは、好ましくは、それぞれの配列番号の配列に由来するエピトープを含む。他の有用なフラグメントは、その少なくとも１つのエピトープを保持しながら、それぞれの配列番号のＣ末端から１以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより大きい）を、および／もしくはＮ末端から１以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより大きい）を欠いている。
【００３１】
本発明で使用されるアミノ酸配列は、配列番号１、２もしくは３と比較して、１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０など）の保存的アミノ酸置換（すなわち、あるアミノ酸の、関連した側鎖を有する別のアミノ酸での置換）を含む。遺伝的にコードされるアミノ酸は、一般に、４つのファミリーに分けられる：（１）酸性（すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸）；（２）塩基性（すなわち、リジン、アルギニン、ヒスチジン）；（３）非極性（すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）；および（４）非荷電の極性（すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンはときおり、芳香族アミノ酸としてまとめて分類される。一般に、これらファミリー内での単一のアミノ酸の置換は、生物学的活性に対して大きな影響を有しない。上記ポリペプチドは、参照配列に対して１個以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０など）の単一のアミノ酸欠失を有し得る。上記ポリペプチドはまた、参照配列に対して１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０など）の挿入（例えば、１、２、３、４もしくは５アミノ酸の各々）を含み得る。
【００３２】
有用な第１のアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも８５％の同一性（例えば、≧９５％もしくは１００％）を有する。別の有用な第１のアミノ酸配列は、配列番号１２と少なくとも９５％の同一性（例えば、≧９８％もしくは１００％）を有する。
【００３３】
有用な第３のアミノ酸配列は、配列番号３に対して少なくとも８５％の同一性（例えば、≧９５％もしくは１００％）を有する。別の有用な第３のアミノ酸配列は、配列番号１１に対して少なくとも９５％の同一性（例えば、≧９８％もしくは１００％）を有する。
【００３４】
配列番号１１および１２（もしくはそれらの近縁の改変体（ｃｌｏｓｅ  ｖａｒｉａｎｔ））におよそ基づく第１のおよび第３の配列の混合物を含む組み合わせは、特に有用である。従って、組成物は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび配列番号１２のアミノ酸配列を含むさらなるポリペプチドを含み得る。
【００３５】
本発明で使用され得る別の有用なｆＨｂｐは、例えば、参考文献２３で開示される改変形態（例えば、そこの配列番号２０もしくは２３を含む）のうちの１つである。これら改変形態は、種々のｆＨｂｐ改変体に対して広く殺菌性である抗体応答を誘起するために、単一のｆＨｂｐポリペプチドを使用し得る。参考文献２３の中の配列番号７７は、使用され得る別の有用なｆＨｂｐ配列である。
【００３６】
本発明で使用されるｆＨｂｐ抗原は、例えば、Ｎ末端システイン残基で脂質化され得る。他の実施形態において、それらは脂質化されず、天然の成熟Ｎ末端システインの上流にアミノ酸配列を含み得る。配列番号１〜３および１１〜１２は、その関連した成熟ｆＨｂｐポリペプチドの天然のＮ末端のシステインで始まる。脂質化ｆＨＢＰに関しては、システインに結合した脂質は、通常、例えば、トリパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）、ジパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイン（Ｐａｍ２Ｃｙｓ）、Ｎ−アセチル（ジパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイン）などとして、パルミトイル残基を含む。
【００３７】
ｆＨＢＰの投与は、好ましくは、配列番号１、２もしくは３のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合し得る抗体を誘起する。本発明で使用するための有利なｆＨＢＰ抗原は、被験体への投与後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を誘起し得る。
【００３８】
ｆＨＢＰポリペプチドの総量は、通常、１〜５００μｇ／用量の間（例えば、６０〜２００μｇ／用量の間）、もしくは１２０〜５００μｇ／ｍｌの間である。
【００３９】
上記ｆＨｂｐ抗原配列を含むポリペプチドは、その配列のみを含み得るか、またはそれは、融合ポリペプチドであり得る。ｆＨｂｐ配列に関する１つの有用な融合パートナーは、ＮＭＢ２０９１ポリペプチドであり、これは通常、上記ｆＨｂｐ配列の上流にある。従って、上記ｆＨｂｐ抗原は、ＮＭＢ２０９１−ｆＨｂｐ融合物（例えば、配列番号６）として本発明の組成物に存在し得る。
【００４０】
（ＮＨＢＡ（ナイセリアヘパリン結合抗原））
ＮＨＢＡは、髄膜炎菌血清群Ｂの株ＭＣ５８［２４］の公にされたゲノム配列に、遺伝子ＮＭＢ２１３２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号  ＧＩ：７２２７３８８；本明細書では配列番号４）として含まれた。多くの株に由来するＮＨＢＡの配列は、それ以来公開されてきた。例えば、ＮＨＢＡの対立遺伝子形態（タンパク質「２８７」といわれる）は、参考文献２５の図５および図１５、ならびに参考文献２６の実施例１３および図２１（そこでは、配列番号３１７９〜３１８４）で認められ得る。ＮＨＢＡの種々の免疫原性フラグメントもまた、報告されてきた。上記タンパク質は、参考文献２７においてヘパリン結合タンパク質として確認され、ＮＨＢＡと名付けられた。
【００４１】
本発明での使用に好ましいＮＨＢＡ抗原は、（ａ）配列番号４に対して７０％以上の同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより大きい）を有する；および／または（ｂ）配列番号４の少なくとも「ｎ」個連続したアミノ酸のフラグメント（ここで「ｎ」は、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより大きい）である）を含む、アミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号４のエピトープを含む。
【００４２】
最も有用なＮＨＢＡ抗原は、被験体への投与後に、配列番号４のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合し得る抗体を誘起し得る。本発明での使用に有利なＮＨＢＡ抗原は、被験体への投与後に、殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を誘起し得る。
【００４３】
上記ＮＨＢＡ抗原配列を含むポリペプチドは、その配列のみを含み得るか、またはそれは、融合タンパク質であり得る。ＮＨＢＡ配列に関して１つの有用な融合パートナーは、ＮＭＢ１０３０ポリペプチドであり、これは通常、上記ＮＨＢＡ配列の下流にある。従って、上記ＮＨＢＡ抗原は、ＮＨＢＡ−ＮＭＢ１０３０融合物（例えば、配列番号９）として本発明の組成物に存在し得る。
【００４４】
（ＮａｄＡ（ナイセリアアドヘシンＡ））
上記ＮａｄＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂの株ＭＣ５８［２４］の公にされたゲノム配列に、遺伝子ＮＭＢ１９９４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号  ＧＩ：７２２７２５６；本明細書では配列番号５）として含まれた。多くの株に由来するＮａｄＡ抗原の配列は、それ以来公開されており、ナイセリアアドヘシンとしてのそのタンパク質の活性は、十分に記録されてきた。ＮａｄＡの種々の免疫原性フラグメントもまた、報告されてきた。上記タンパク質は、アドヘシンとして確認され、参考文献２８でＮａｄＡと名付けられた。
【００４５】
本発明での使用に好ましいＮａｄＡ抗原は、（ａ）配列番号５に対して７０％以上の同一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより大きい）を有する；および／または（ｂ）配列番号５の少なくとも「ｎ」個連続したアミノ酸のフラグメント（ここで「ｎ」は、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより大きい）である）を含む、アミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５のエピトープを含む。
【００４６】
最も有用なＮａｄＡ抗原は、被験体への投与後に、配列番号５のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合し得る抗体を誘起し得る。本発明での使用に有利なＮａｄＡ抗原は、被験体への投与後に、殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を誘起し得る。配列番号１０は、１つのこのようなフラグメントである。
【００４７】
（外膜小胞）
いくつかの実施形態において、上記免疫原性組成物は、髄膜炎菌外膜小胞（ＯＭＶ）を含まない。しかし、他の実施形態において、上記免疫原性組成物は、髄膜炎菌ＯＭＶを含む。このようなＯＭＶを含有する実施形態において、上記組成物は、非ＯＭＶ形態において（例えば、可溶性形態において）、ｆＨｂｐ抗原、ＮＨＢＡ抗原および／もしくはＮａｄＡ抗原のうちの少なくとも１種を含む。従って、これら組成物は、ＯＭＶと１種以上の可溶性抗原とを混合することによって調製され、これは、参考文献２９および３０でとられたアプローチとは対照的である。
【００４８】
組成物がＯＭＶを含む場合、これらＯＭＶは、髄膜炎菌外膜の破壊もしくはそれからの小胞形成（ｂｌｅｂｂｉｎｇ）を行って、そこから外膜由来の抗原を保持する小胞を形成することによって得られる任意のプロテオリポソーム小胞であり得る。従って、この用語は、例えば、ＯＭＶ（ときおり「小胞（ｂｌｅｂ）」といわれる）、マイクロ小胞（ＭＶ）および「天然ＯＭＶ」（「ＮＯＭＶ」）を含む。種々のこのような小胞は、当該分野で公知であり（例えば、参考文献３１〜４５を参照のこと）、これらのうちのいずれかが、本発明の組成物の中に含まれ得る。
【００４９】
（さらなる髄膜炎菌抗原）
組成物は、１種以上のさらなる髄膜炎菌タンパク質抗原（例えば、ＨｍｂＲ、ＮｓｐＡ、ＮｈｈＡ、Ａｐｐ、Ｏｍｐ８５、ＴｂｐＡ、ＴｂｐＢ、および／もしくはＣｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼ）を含み得る。
【００５０】
組成物は、１種以上の髄膜炎菌サッカリド抗原を含み得、これは、代表的には、キャリアタンパク質に結合体化される。従って、例えば、組成物は、血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／もしくはＹに由来する１種以上の莢膜サッカリドを含み得る。例えば、上記組成物は、ＭＥＮＶＥＯ、ＭＥＮＡＣＴＲＡ、もしくはＮＩＭＥＮＲＩＸ製品（これらの全ては、血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの各々の結合体化莢膜サッカリドを含む）に存在する結合体を含み得る。
【００５１】
（非髄膜炎菌抗原）
組成物は、１種以上の非髄膜炎菌抗原を含み得る。例えば、それは、（ａ）ＰＲＥＶＮＡＲ製品およびＳＹＮＦＬＯＲＩＸ製品にあるように、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原（例えば、サッカリド（代表的には、結合体化される））；（ｂ）Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、表面抗原ＨＢｓＡｇ）；（ｃ）Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原（例えば、百日咳ホロトキシン（ＰＴ））およびＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）（必要に応じて、パータクチンならびに／もしくは凝集原２および３と組み合わせても）；（ｄ）ジフテリア抗原（例えば、ジフテリアトキソイド）；（ｅ）破傷風抗原（例えば、破傷風トキソイド）；（ｆ）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ（Ｈｉｂ）のサッカリド抗原（代表的には、結合体化される）；ならびに／または（ｇ）不活化ポリオウイルス抗原のうちの１種以上を含み得る。
【００５２】
（非抗原成分）
その抗原に加えて、本発明の免疫原性組成物は、代表的には、薬学的に受容可能なキャリアを含み、このようなキャリアの詳細な考察は、参考文献４６で入手可能である。
【００５３】
組成物のｐＨは、通常は６〜８の間であり、より好ましくは、６．５〜７．５の間（例えば、約７）である。安定なｐＨは、緩衝液（例えば、Ｔｒｉｓ緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、もしくはヒスチジン緩衝液）の使用によって維持され得る。従って、組成物は、一般に、緩衝液を含む。
【００５４】
組成物は、無菌であり得、そして／もしくは発熱物質を含まなくあり得る。組成物は、ヒトに関して等張性であり得る。
【００５５】
組成物は、免疫学的に有効な量のその抗原を含む。「免疫学的に有効な量」とは、被験体に投与される場合、上記抗原に対する抗体応答を誘起するために有効な量である。この量は、処置される予定の個体の健康状態および身体的状態、彼らの年齢、上記個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望の防御の程度、上記ワクチンの処方、処置している医師の医学的状況の評価、ならびに他の関連因子に依存して変動し得る。上記量は、比較的広い範囲（これは、慣用的な治験を通じて決定され得る）の中に入ることが予測される。本発明の組成物の上記抗原の含有量は、一般に、１用量あたりのタンパク質の質量の点で表される。用量１０〜５００μｇ（例えば、５０μｇ）／抗原が有用であり得る。
【００５６】
免疫原性組成物は、免疫学的アジュバントを含み得る。従って、例えば、それらは、アルミニウム塩アジュバントもしくは水中油型エマルジョン（例えば、水中スクアレンエマルジョン）を含み得る。適切なアルミニウム塩としては、水酸化物（例えば、オキシ水酸化物）、ホスフェート（例えば、ヒドロキシホスフェート、オルトホスフェート）（例えば、参考文献４７の第８章＆第９章を参照のこと）、またはこれらの混合物が挙げられる。上記塩は、任意の適した形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）を取り得、上記塩への抗原の吸着が好ましい。患者への投与のための組成物中のＡｌ＋＋＋の濃度は、好ましくは、５ｍｇ／ｍｌ未満（例えば、≦４ ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌなど）である。好ましい範囲は、０．３〜１ｍｇ／ｍｌの間である。最大０．８５ｍｇ／用量が好ましい。水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムアジュバントは、本発明での使用に特に適している。
【００５７】
組成物は、特に複数用量形式でパッケージされる場合、抗菌物質を含み得る。抗菌物質（例えば、チメロサールおよび２−フェノキシエタノール）は、ワクチン中に一般的に見いだされるが、水銀非含有保存剤を使用するかもしくは保存剤を全く使用しないかのいずれかが好ましい。
【００５８】
組成物は、界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（ポリソルベート）（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０）を含み得る。界面活性剤は、一般に、低レベル（例えば、＜０．０１％）で存在する。組成物は、ＯＭＶ調製に由来する残留界面活性剤（例えば、デオキシコール酸）を含み得る。残留界面活性剤の量は、好ましくは、髄膜炎菌タンパク質１μｇごとに０．４μｇ未満（より好ましくは、０．２μｇ未満）である。
【００５９】
ワクチンがＬＯＳを含む場合、タンパク質１μｇごとにＬＯＳの量は、好ましくは、０．１２μｇ未満（より好ましくは、０．０５μｇ未満）である。
【００６０】
組成物は、張度を与えるために、ナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含み得る。１０±２ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌの濃度が代表的である（例えば、約９ｍｇ／ｍｌ）。
【００６１】
（組成物の投与）
本発明の組成物は、一般に、患者に直接投与される。直接送達は、非経口注射によって（例えば、皮下に、腹腔内に、静脈内に、筋肉内に、もしくは組織の間質腔間に）、または任意の他の適切な経路によって達成され得る。例えば、大腿部もしくは上腕部への筋肉内投与が好ましい。注射は、針（例えば、皮下注射針）を介するものであり得るが、針なし注射が代わりに使用されてもよい。代表的な筋肉内投与容積は、０．５ｍｌである。
【００６２】
投与は、単一用量スケジュールを含み得るが、通常は、複数用量スケジュールを含む。初回刺激用量の間の適切な間隔は、例えば、４〜１６週間の間（例えば、１ヶ月もしくは２ヶ月）で慣用的に決定され得る。ＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）は、２ヶ月齢、４ヶ月齢および６ヶ月齢で投与される得か、または２ヶ月、３ヶ月および４ヶ月で投与され得、４回目の任意選択の用量は１２ヶ月におけるものである。
【００６３】
免疫化される被験体は、ヒトであり、例えば、０〜１２ヶ月齢、１〜５歳、５〜１８歳、１８〜５５歳、または５５歳を超える任意の年齢であり得る。
【００６４】
（一般）
本発明の実施は、別段示されなければ、化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の当該分野の技術範囲内の従来法を使用する。このような技術は、文献中に十分に説明されている。例えば、参考文献４８〜５４などを参照のこと。
【００６５】
用語「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、もっぱらＸからなってもよいし、さらなる何か、例えば、Ｘ＋Ｙを含んでもよい。
【００６６】
数値ｘに関連する用語「約」とは、任意選択のものであり、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【００６７】
本発明が「エピトープ」に関係する場合、このエピトープは、Ｂ細胞エピトープおよび／もしくはＴ細胞エピトープであり得るが、通常は、Ｂ細胞エピトープである。このようなエピトープは、経験的に同定され得る（例えば、ＰＥＰＳＣＡＮ［５５，５６］もしくは類似の方法を使用して）か、またはそれらは、（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指数（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｉｎｄｅｘ）［５７］、マトリクスベースのアプローチ［５８］、ＭＡＰＩＴＯＰＥ［５９］、ＴＥＰＩＴＯＰＥ［６０，６１］、ニューラルネットワーク（ｎｅｕｒａｌ  ｎｅｔｗｏｒｋ）［６２］、ＯｐｔｉＭｅｒ  ＆  ＥｐｉＭｅｒ［６３，６４］、ＡＤＥＰＴ［６５］、Ｔｓｉｔｅｓ［６６］、親水性［６７］、抗原性指数［６８］または参考文献６９〜７３などで開示される方法を使用して）推定され得る。エピトープは、抗体もしくはＴ細胞レセプターの抗原結合部位によって認識されこれに結合する抗原の一部であり、それらはまた、「抗原決定基」ともいわれ得る。
【００６８】
２つのアミノ酸配列の間のパーセンテージ配列同一性への言及は、整列させた場合、そのパーセンテージのアミノ酸が、上記２つの配列を比較したときに同じであることを意味する。このアラインメントおよび％相同性もしくは配列同一性は、当該分野で公知のソフトウェアプログラム（例えば、参考文献７４の第７．７．１８節に記載されるもの）を使用して決定され得る。好ましいアラインメントは、ギャップオープンペナルティー１２およびギャップ伸長ペナルティー２、６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスでのアフィンギャップ検索を使用するＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって、決定される。上記Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献７５に開示されている。
【００６９】
語「実質的に」は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含んでいなくてもよい。必要な場合、語「実質的に」は、本発明の定義から省略され得る。
【００７０】
（図面の簡単な説明）
図面は存在しない。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
ＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）製品は、参考文献１〜３に記載され、それは、ＮａｄＡ（下位改変体（ｓｕｂｖａｒｉａｎｔ）３．１）、ｆＨｂｐ下位改変体１．１（ＧＮＡ２０９１−ｆＨｂｐ融合タンパク質として）、およびＮＨＢＡ下位改変体１．２（ＮＨＢＡ−ＧＮＡ１０３０融合タンパク質として）の各々５０μｇを含み、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ株ＮＺ９８／２５４に由来する２５μｇ  ＯＭＶとともに１．５ｍｇ  水酸化アルミニウム上に吸着されている。
【００７２】
１１のＭｅｎＸ株（数カ国から１９９５年から２００７年までの間に単離）を得た。それらの血清型および血清亜型［７６］、ＭＬＳＴ［７７］および遺伝子型は、以下のとおりであった：
【００７３】
【表１】
2015521595.tif 000002
【００７４】
同じクローナルコンプレックスの中の、および同じＰｏｒＡ可変領域およびＦｅｔＡマーカーおよびｆＨｂｐサブタイプ（改変体１）を有する最初の９株（全て判別不能）は、アフリカの国々に由来し；その他の２株は、フランスで単離された。
【００７５】
ＳＢＡに関しては、血清を、ワクチン接種前およびＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）ワクチンの投与後に、臨床研究から得た。幼児に関しては、試験されたサンプルは、３回の免疫化もしくは３回の免疫化＋１回の追加免疫のいずれかを受けた４０名の幼児に由来した。他の年齢群に関しては、プールした血清は、２用量をワクチン接種した１２名の青年もしくは２３名の成人に由来した。上記成人の大部分は、四価（ＡＣＷＹ）ポリサッカリドワクチンを既に受けていた。血清群Ｘの莢膜サッカリドに対するポリクローナルウサギ血清を、陽性コントロールとして使用した。
【００７６】
ヒト補体を、ＳＢＡアッセイのために、ワクチン接種した被験体由来の血清（ｈＳＢＡ）およびコントロールとして使用したポリクローナル血清とともに、使用した。ｈＳＢＡに関しては、力価４を防御として定義した［７８］。ワクチン応答を、ワクチン接種前に＜４の応答を示した株に関しては、ｈＳＢＡ力価が少なくとも８のパーセンテージとして、またはワクチン接種前に少なくとも４の応答を示した株に関しては４倍の増大として、のいずれかでスコア付けした。ＳＢＡ力価は、以下のとおりであった：
【００７７】
【表２】
2015521595.tif 000003
【００７８】
従って、全ての分離菌は、ポリクローナル抗莢膜血清を使用して、ＳＢＡ力価≧１２８を有した。幼児では、全ての免疫化前力価は、８より低かった（防御と相関したｈＳＢＡ力価）。僅かに高い免疫化前力価は、青年および成人で認められた。
【００７９】
ワクチン接種後、ｈＳＢＡ力価は、試験された全てのスケジュールおよび年齢群で、全てのアフリカ由来分離菌に対して増大した。ワクチン接種前に力価少なくとも４を有する分離菌に関しては、ｈＳＢＡ力価の４倍の増大は、株ＬＮＰ１４３５５を除いて（３倍の増大）、全ての場合で認められた。アフリカ株とは対照的に、フランスの２つの単離株は、免疫化後血清によって死滅しなかったが、ＳＢＡ力価は、全ての場合で増大した。
【００８０】
従って、髄膜炎菌性の髄膜炎に関与したＭｅｎＸ株（少なくとも、１９９５年から２００７年までの間に単離されたアフリカ株について）は、４ＣＭｅｎＢ  ＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）ワクチンによって網羅され得る。これら分離菌の適用範囲を、それらのｆＨｂｐ改変体タイプに基づいて十分に推定した。
【００８１】
本発明は、例示によってのみ上記で記載されており、改変は、本発明の範囲および趣旨内にとどまりつつ行われ得ることは、理解される。
【００８２】
【化１】
2015521595.tif 000004
【００８３】
【化２】
2015521595.tif 000005
【配列表】
2015521595000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年12月18日(2014.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原、（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原、および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種を含む、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための免疫原性組成物であって；ここで該免疫原性組成物は、（ａ）髄膜炎菌外膜小胞を含まないか、もしくは（ｂ）髄膜炎菌外膜小胞を含むかのいずれかであり、そして該ｆＨｂｐ抗原、ＮＨＢＡ抗原および／もしくはＮａｄＡ抗原のうちの少なくとも１つは、可溶性形態で該組成物に存在する、免疫原性組成物。
【請求項２】
前記組成物は、ｆＨｂｐ、ＮＨＢＡおよびＮａｄＡのうちの２種のみを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物は、ｆＨｂｐ、ＮＨＢＡおよびＮａｄＡのうちの３種全てを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物は、以下のｆＨｂｐ抗原：（ａ）第１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、ここで該第１のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号１に対して少なくともａ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号１の少なくともｘ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；（ｂ）第２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、ここで該第２のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号２に対して少なくともｂ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号２の少なくともｙ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；ならびに／あるいは（ｃ）第３のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチドであって、ここで該第３のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号３に対して少なくともｃ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号３の少なくともｚ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド、
のうちの１種以上を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物は、配列番号１に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物は、配列番号１２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物は、配列番号１１に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物は、（ａ）配列番号４に対して７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／もしくは（ｂ）配列番号４の少なくとも７個連続したアミノ酸のフラグメント、を含むＮＨＢＡ抗原を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物は、（ａ）配列番号５に対して７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／もしくは（ｂ）配列番号５の少なくとも７個連続したアミノ酸のフラグメント、を含むＮａｄＡ抗原を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物は、（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む抗原；（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む抗原；および（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗原、の各々を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む抗原；（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含む抗原；および（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗原、の各々を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
記載された前記ポリペプチドは、実質的に等しい質量で存在する、請求項４〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物は、１種以上のさらなる髄膜炎菌タンパク質抗原を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記被験体はまた、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５および／もしくはＹのうちの１種以上に対して免疫化されることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物は、１種以上の髄膜炎菌莢膜サッカリド抗原を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物は、１種以上の非髄膜炎菌抗原を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物は、アジュバントを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物は、アルミニウム塩アジュバントを含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物は、筋肉内注射によって前記被験体に投与されることを特徴とする、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化することにおいて使用するための免疫原性組成物であって、ここで該免疫原性組成物は、（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種を含む、免疫原性組成物。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための医薬の製造における（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種の使用。
【請求項２３】
前記医薬は、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物を含む、請求項２２に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
語「実質的に」は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含んでいなくてもよい。必要な場合、語「実質的に」は、本発明の定義から省略され得る。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原、（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原、および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種を含む免疫原性組成物を投与することによる、血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための方法であって；ここで該免疫原性組成物は、（ａ）髄膜炎菌外膜小胞を含まないか、もしくは（ｂ）髄膜炎菌外膜小胞を含むかのいずれかであり、そして該ｆＨｂｐ抗原、ＮＨＢＡ抗原および／もしくはＮａｄＡ抗原のうちの少なくとも１つは、可溶性形態で該組成物に存在する、方法。
（項目２）
上記組成物は、ｆＨｂｐ、ＮＨＢＡおよびＮａｄＡのうちの２種のみを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記組成物は、ｆＨｂｐ、ＮＨＢＡおよびＮａｄＡのうちの３種全てを含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
上記組成物は、以下のｆＨｂｐ抗原：（ａ）第１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、ここで該第１のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号１に対して少なくともａ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号１の少なくともｘ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；（ｂ）第２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、ここで該第２のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号２に対して少なくともｂ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号２の少なくともｙ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；ならびに／あるいは（ｃ）第３のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチドであって、ここで該第３のアミノ酸配列は、（ｉ）配列番号３に対して少なくともｃ％の配列同一性を有する、および／または（ｉｉ）配列番号３の少なくともｚ個連続したアミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド、
のうちの１種以上を含む、上記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
上記組成物は、配列番号１に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目４に記載の方法。
（項目６）
上記組成物は、配列番号１２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目４に記載の方法。
（項目７）
上記組成物は、配列番号１１に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目４〜６のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
上記組成物は、（ａ）配列番号４に対して７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／もしくは（ｂ）配列番号４の少なくとも７個連続したアミノ酸のフラグメント、を含むＮＨＢＡ抗原を含む、上記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
上記組成物は、（ａ）配列番号５に対して７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／もしくは（ｂ）配列番号５の少なくとも７個連続したアミノ酸のフラグメント、を含むＮａｄＡ抗原を含む、上記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
上記組成物は、（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む抗原；（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む抗原；および（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗原、の各々を含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
上記組成物は、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む抗原；（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含む抗原；および（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗原、の各々を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
記載された上記ポリペプチドは、実質的に等しい質量で存在する、上記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
上記組成物は、１種以上のさらなる髄膜炎菌タンパク質抗原を含む、上記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１４）
上記被験体はまた、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５および／もしくはＹのうちの１種以上に対して免疫化される、上記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１５）
上記組成物は、１種以上の髄膜炎菌莢膜サッカリド抗原を含む、上記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１６）
上記組成物は、１種以上の非髄膜炎菌抗原を含む、上記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１７）
上記組成物は、アジュバントを含む、上記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１８）
上記組成物は、アルミニウム塩アジュバントを含む、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
上記組成物は、筋肉内注射によって上記被験体に投与される、上記項目のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化することにおいて使用するための免疫原性組成物であって、ここで該免疫原性組成物は、（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種を含む、免疫原性組成物。
（項目２１）
上記被験体の免疫化は、項目１〜１９のいずれか１項に記載の方法を含む、項目２０に記載の組成物。
（項目２２）
血清群Ｘ髄膜炎菌に対して被験体を免疫化するための医薬の製造における（ｉ）髄膜炎菌ｆＨｂｐ抗原；（ｉｉ）髄膜炎菌ＮＨＢＡ抗原；および／もしくは（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＮａｄＡ抗原のうちの１種、２種もしくは３種の使用。
（項目２３）
上記被験体の免疫化は、項目１〜１９のいずれか１項に記載の方法を含む、項目２２に記載の使用。
【国際調査報告】
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