(57)【要約】  式(I)：2015531792.tif 000128(I)［式中、a)R1は、Hまたは−CH3であり、R2は、Ryであるか；または、b)R1は、Rxであり、R2はHであり；RxおよびRyは、本明細書に開示されている］の化合物およびその塩を開示する。また、Notch受容体を阻害するために該化合物を用いる方法、ならびに該化合物を含有する医薬組成物も開示する。これらの化合物は、様々な治療領域（例えば癌）における、疾患もしくは障害の処置、予防、または進行の遅延において有用である。
2015531792.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)：
【化１】
2015531792.tif 000121
(I)
［式中、
a)R1はHまたは−CH3であり、R2はRyであるか；または
b)R1はRxであり、R2はHであり；
Rxは、−CH2OC(O)−(CH2)n−(CRaRb)n−Xであり；
Xは、−NReRf、−OP(=O)(OH)2、
【化２】
2015531792.tif 000122
または
【化３】
2015531792.tif 000123
であり；
RaおよびRbは、独立して、Hおよび／またはC1−3アルキルであるか、またはそれらが結合している炭素原子と共にC3−5シクロアルキル環を形成し；
各nは、独立して０および／または1であり；
Ryは、Zまたは−S−Zであり；
Zは、−NRcRdおよび／または−CO2Rgで置換されたC1−6アルキルであり；
RcおよびRdは、独立して、Hおよび／またはC1−4アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と共に1〜2個の窒素原子を含有するヘテロ環を形成し、ここで前記ヘテロ環は、−OH、C1−4アルキル、および／またはNReRfから独立して選択される0〜2個の置換基により置換されている；
ReおよびRfは、独立して、Hおよび／またはC1−4アルキルであり；および
Rgは、HまたはC1−4アルキルである］
の化合物またはその塩。
【請求項２】
Rxが、−CH2OC(O)C(CH3)2NH2、−CH2OC(O)CH(CH3)NH2、−CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2、
【化４】
2015531792.tif 000124
Ryが、−SCH2CH2NH2、−SCH2CH2N(CH3)2、−SCH2CH(NH2)C(O)OH、−SCH2CH(NH2)C(O)OCH3、−CH2NHCH2CH(CH3)2、
【化５】
2015531792.tif 000125
である、請求項1に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
R1がHであり、R2がRyである、請求項2に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
Ryが−SCH2CH2NH2、−SCH2CH(NH2)C(O)OH、または
【化６】
2015531792.tif 000126
である、請求項3に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
R1が−CH3であり、R2がRyである、請求項2に記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
Ryが−CH2NHCH2CH(CH3)2、−SCH2CH2NH2、−SCH2CH2N(CH3)2、−SCH2CH(NH2)C(O)OH、−SCH2CH(NH2)C(O)OCH3、
【化７】
2015531792.tif 000127
である、請求項5に記載の化合物またはその塩。
【請求項７】
R1がRxであり、R2がHである、請求項5に記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル(4-(ホスホノオキシ)フェニル)アセテート(1)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 4-((ホスホノオキシ)メチル)ベンゾエート(2)；(3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 3-(2,4-ジメチル-6-(ホスホノオキシ)フェニル)-3-メチルブタノエート(3)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 2-メチルアラニネート(4)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル L-アラニネート(5)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル L-バリネート(6)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 1-アミノシクロプロパンカルボキシレート(7)；(2S,3R)-N-((2-アミノエチル)スルファニル)-N'-((3S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(8)；S-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-L-システイン(9)；(2S,3R)-N-((イソブチルアミノ)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(10)；(2S,3R)-N-((2-アミノエチル)スルファニル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(11)；S-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-L-システイン(12)；(2S,3R)-N-((2-(ジメチルアミノ)エチル)スルファニル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(13)；メチル S-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-L-システイナート(14)；(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-N'-((4-メチル-1-ピペラジニル)メチル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(15)；(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-N'-(1-ピペリジニルメチル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(16)；(2S,3R)-N-((4-アミノ-1-ピペリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(17)；(2S,3R)-N-((4-(ジメチルアミノ)-1-ピペリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(18)；(2S,3R)-N-((4-ヒドロキシ-1-ピペリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(19)；(2S,3R)-N-((3-ヒドロキシ-1-ピロリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(20)；(2S,3R)-N-((3-(ジメチルアミノ)-1-ピロリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(21)；(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-N'-(1-ピロリジニルメチル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(22)；およびその塩、
から選択される、請求項1に記載の化合物。
【請求項９】
請求項1〜8のいずれか1項に記載の化合物および／またはその塩；ならびに医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
癌の治療における療法に使用するための、請求項1〜9のいずれか1項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１１】
癌の治療のために、前記治療が、更にダサチニブ、パクリタキセル、タモキシフェン、デキサメタゾンおよびカルボプラチンから選択される1つ以上の別の薬剤を含み、それらが連続してまたは同時に投与される、請求項10に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１２】
癌の治療のための医薬の製造において用いるための、請求項1〜9のいずれか1項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、Notch阻害剤のプロドラッグとして有用なベンゾジアゼピノン化合物に関する。本発明は、さらに、Notch経路に関連する症状、例えば、癌および他の増殖性疾患の治療のための化合物のプロドラッグとして有用である、少なくとも1つの本発明の化合物を含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Notchシグナル伝達は、様々な細胞プロセス(例えば、細胞運命決定、分化、増殖、アポトーシス、および血管形成)に関与している(非特許文献１；非特許文献２)。Notchタンパク質は、1回貫通型ヘテロ二量体膜貫通分子である。Notchファミリーには、4つの受容体、NOTCH1〜4が含まれ、それらは、DSLファミリーに属するリガンド(Delta-like 1、3、4、ならびにJagged 1および2)に結合することによって活性化される。
【０００３】
NOTCHの活性化および成熟には、γセクレターゼ(プレセニリン1もしくはプレセニリン2、ニカストリン、APH1、およびPEN2を含む多タンパク質複合体)により仲介されるタンパク質分解性の切断ステップを含む、一連のプロセシングステップが必要とされる。NOTCHが切断されると、NOTCH細胞内ドメイン(NICD)が膜から遊離される。遊離されたNICDは核へ移行し、そこでCSLファミリーメンバー(RBPSUH, ”suppressor of hairless”、およびLAG1)と協力して、転写活性化因子として機能する。NOTCH標的遺伝子には、HESファミリーメンバー(例えばHES-1)が含まれる。HES-1は、遺伝子の転写抑制因子(例えば、HERP1(HEY2としても知られる)、HERP2(HEY1としても知られる)、およびHATH1(ATOH1としても知られる))として機能する。
【０００４】
Notch経路の異常な活性化は腫瘍形成の一因である。Notchシグナル伝達の活性化は、様々な固形腫瘍(卵巣癌、膵癌、および乳癌を含む)、ならびに血液腫瘍(例えば、白血病、リンパ腫、および多発性骨髄腫)の病因に関与している。様々な固形腫瘍および血液腫瘍の治療におけるNotch阻害の役割およびその有用性が、非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０；および非特許文献１１に記載されている。
【０００５】
Notch阻害剤として有用であって、かつ効果的な濃度の薬物曝露をもたらす十分な代謝安定性を有する化合物が、依然として必要とされている。さらに、患者に経口投与または静脈内投与することができる、Notch阻害剤として有用な化合物が依然として必要とされている。
【０００６】
特許文献１は、神経障害(例えば、アルツハイマー病)を治療するために有用なスクシノイルアミノベンゾジアゼピン化合物を開示している。この文献には、γセクレターゼ活性およびアミロイドタンパク質の神経への沈着の形成に関連するアミロイド前駆体タンパク質のプロセシングを阻害することが開示されている。
【０００７】
式(A)：
【化１】
2015531792.tif 000003
(A)
の構造を有する化合物(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド、および
式(B)：
【化２】
2015531792.tif 000004
(B)
の構造を有する(2R,3S)-N-((3S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド、
は、Notch経路の阻害剤としての活性を有しており、故にそれらは抗癌剤として有用である。これらの化合物、製造方法、これの化合物を用いる方法が、米国特許出願番号第13/426,730号に開示されている。この文献は本発明の出願人に譲渡されており、これら明細書の全ては本明細書に組み込まれる。
【０００８】
理解されるとおり、化合物(A)および(B)を患者へ、改善された送達に対する必要性がいまだ存在している。
【０００９】
出願人らは、化合物(A)および(B)各々の投与にとって有用な化合物(A)および(B)のプロドラッグを見出した。これらのプロドラッグは、生理学的に重要なpH値にて、化合物(A)および(B)よりも良好な溶解度を有しており、驚くべきことに、より広範な投薬範囲および／またはより広範な医薬処方にて化合物(A)および(B)を投与できる。薬物としての性能にとって重要である、望ましい安定性、生物学的利用能、治療指数、および毒性値を有する医薬品として有用であるこれらのプロドラッグ化合物を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第7,053,084号明細書(B1)
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Bray, Nature Reviews Molecular Cell Biology, 7:678-689 (2006).
【非特許文献２】Fortini, Developmental Cell 16:633-647 (2009).
【非特許文献３】Miele, L. et al., Current Cancer Drug Targets, 6:313-323 (2006).
【非特許文献４】Bolos, V. et al., Endocrine Reviews, 28:339-363 (2007).
【非特許文献５】Shih, I.-M. et al., Cancer Research, 67:1879-1882 (2007).
【非特許文献６】Yamaguchi, N. et al., Cancer Research, 68:1881-1888 (2008).
【非特許文献７】Miele, L., Expert Review Anti-cancer Therapy, 8:1197-1201 (2008).
【非特許文献８】Purow, B., Current Pharmaceutical Biotechnology, 10:154-160 (2009).
【非特許文献９】Nefedova, Y. et al., Drug Resistance Updates, 11:210-218 (2008).
【非特許文献１０】Dufraine, J. et al., Oncogene, 27:5132-5137 (2008).
【非特許文献１１】Jun, H.T. et al., Drug Development Research, 69:319-328 (2008).
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
(発明の概要)
本発明は、Notchシグナル伝達経路の選択的阻害剤として有用である(2R,3S)-N-((3S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミドおよび(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミドのプロドラッグ化合物(該プロドラッグ化合物の塩も含む)を、提供することにより前述の要求を満たす。
【００１３】
本発明は、医薬的に許容される担体；および少なくとも1つの式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、医薬組成物も提供する。
【００１４】
本発明は、式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を哺乳動物患者に投与することを含む、Notch受容体の活性に関連する疾患または障害の治療方法も提供する。
【００１５】
本発明は、式(I)の化合物および/またはその塩を製造するための方法および中間体も提供する。
【００１６】
本発明は、療法に用いるための式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩も提供する。
【００１７】
本発明は、癌の治療のための医薬の製造における式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩の使用も提供する。
【００１８】
式(I)の化合物は、様々なNotch受容体-関連症状の治療、予防または治癒において使用できるNotch阻害剤のプロドラッグである。これらのプロドラッグ化合物を含有する医薬組成物は、様々な治療領域(例えば癌)における、疾患もしくは障害の治療、予防、または進行の遅延において有用である。
【００１９】
本発明のこれらおよび他の特徴を、以下に続けて開示するように、拡充して記載する。
【００２０】
本発明を、以下に記載の添付の図面を参照することにより説明する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図1は、TALL1 ヒトT-細胞急性リンパ芽球性白血病に対する化合物Aおよび実施例12、化合物Aのプロドラッグの抗腫瘍効果を示す。静脈内投与 QDx3, 毎週 x 3。各記号は、8匹のマウス群の腫瘍重量中央値を示す。(●)コントロール；(□)化合物A, 3 mg/kg；(○)実施例12, 1.5 mg/kg；(◇)実施例12, 3 mg/kg；(△)実施例12, 6 mg/kg.
【発明を実施するための形態】
【００２２】
(詳細な説明)
本発明の第一態様は、式(I)：
【化３】
2015531792.tif 000005
［式中、
a)R1は、Hまたは−CH3であり、R2は、Ryであるか；または
b)R1は、Rxであり、R2は、Hであり；
Rxは、−CH2OC(O)−(CH2)n−(CRaRb)n−Xであり；
Xは、−NReRf、−OP(=O)(OH)2、
【化４】
2015531792.tif 000006
または
【化５】
2015531792.tif 000007
であり；
RaおよびRbは、独立してHおよび／またはC1−3アルキルであるか、またはそれらが結合している炭素原子と共に、C3−5シクロアルキル環を形成し；
各nは、独立して0および／または1であり；
Ryは、Zまたは−S−Zであり；
Zは、−NRcRdおよび／または−CO2Rgで置換されたC1−6アルキルであり；
RcおよびRdは、独立して、Hおよび／またはC1−4アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と共に1〜2個の窒素原子を含有するヘテロ環を形成し、ここで前記ヘテロ環は、−OH、C1−4アルキル、および／またはNReRfから独立して選択される0〜2個の置換基により置換されている；
ReおよびRfは、独立してHおよび／またはC1−4アルキルであり；および
Rgは、HまたはC1−4アルキルである］
の化合物またはその塩を提供する。
【００２３】
一実施態様は、式(I)：
［式中、
a)R1は、Hまたは−CH3であり、R2は、Ryであり；または
b)R1は、Rxであり、R2は、Hであり；
Rxは、−CH2OC(O)C(CH3)2NH2、−CH2OC(O)CH(CH3)NH2、−CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2、
【化６】
2015531792.tif 000008
；および
Ryは、−SCH2CH2NH2、−SCH2CH2N(CH3)2、−SCH2CH(NH2)C(O)OH、−SCH2CH(NH2)C(O)OCH3、−CH2NHCH2CH(CH3)2、
【化７】
2015531792.tif 000009
］
の化合物またはその塩を提供する。
【００２４】
一実施態様は、R1が、Hまたは−CH3であり；R2が、Ryであり；および、Ryが、第一態様に規定されている式(I)の化合物またはその塩を提供する。この化合物は、式(II)：
【化８】
2015531792.tif 000010
(II)
の構造である。
【００２５】
一実施態様は、式(II)(式中、Ryは、Zまたは−S−Zであり；Zは、−NRcRdおよび／または−CO2Rgで置換されたC1−6アルキルである；RcおよびRdは、独立してHおよび／またはC1−4アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と共に、窒素ヘテロ原子を含有し、かつ0〜1個のさらなるヘテロ原子を含有する5〜6員ヘテロ環を形成し、ここで前記ヘテロ環は、−OH、C1−4アルキル、および／またはNReRfから独立して選択される0〜2個の置換基で置換されている；および、ReおよびRfは、第一態様において規定される)の化合物またはその塩を提供する。この実施態様には、化合物中の5〜6員のヘテロ環が、窒素ヘテロ原子を含有し、かつ窒素または酸素から選択される0〜1個のさらなるヘテロ原子を含有する化合物が含まれる。この実施態様には、該5〜6員ヘテロ環がピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンから選択される化合物も含まれる。
【００２６】
一実施態様は、式(II)(式中、R1およびRyは、第一態様において規定される；ならびに、RcおよびRdは、独立してHおよび／またはC1−4アルキルである）の化合物またはその塩を提供する。実施態様には、RcおよびRdが独立してHおよび／またはC1−2アルキルである化合物が含まれる。この実施態様には、RcおよびRdが、独立してHおよび／または−CH3である化合物も含まれる。
【００２７】
一実施態様は、式(II)(式中、R1およびRyは第一態様に規定される；ならびに、RcおよびRdは、それらが結合している窒素原子と共に、窒素ヘテロ原子を含有し、かつ0〜1個のさらなるヘテロ原子を含有する5〜6員ヘテロ環を形成し、ここで前記ヘテロ環は、−OH、C1−4アルキル、および／またはNReRfから独立して選択される0〜2個の置換基により置換される)の化合物またはその塩を提供する。この実施態様には、化合物(式中、該5〜6員ヘテロ環は、窒素ヘテロ原子を含有し、かつ窒素または酸素から選択される0〜1個のさらなるヘテロ原子を含有する)が含まれる。この実施態様には、化合物(式中、該5〜6員ヘテロ環は、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジンおよびモルホリンから選択される)も含まれる。
【００２８】
一実施態様は、式(I)(式中、R1およびR2は、第一態様において規定され；ならびに、ReおよびRfは、独立してHおよび／またはC1−2アルキルである)の化合物またはその塩を提供する。この実施態様には、ReおよびRfが、独立してHまたは−CH3である化合物が含まれる。この実施態様には、ReがHであり、かつRfがHである化合物も含まれる。
【００２９】
一実施態様は、式(II)(式中、R1およびRyは、第一態様において規定される；および、Rgは、HまたはC1−2アルキルである)の化合物またはその塩を提供する。この実施態様には、RgがHまたは−CH3である化合物が含まれる。
【００３０】
一実施態様は、式(I)(式中、R1はHであり、R2はRyである)の化合物またはその塩を提供する。この化合物は、式(III)：
【化９】
2015531792.tif 000011
(III)
の構造である。
この実施態様には、式(III)(式中、Ryは、−SCH2CH2NH2または−SCH2CH(NH2)C(O)OHである)の化合物またはその塩が含まれる。
【００３１】
一実施態様は、
【化１０】
2015531792.tif 000012
および
【化１１】
2015531792.tif 000013
から選択される式(III)の化合物またはその塩を提供する。
【００３２】
一実施態様は、式(I)(式中、R1は−CH3であり、R2はRyである)
の化合物またはその塩を提供する。この化合物は、式(IV)：
【化１２】
2015531792.tif 000014
(IV)
の構造を有する。
一実施態様は、式(IV)：
(式中、Ryは、−CH2NHCH2CH(CH3)2、−SCH2CH2NH2、−SCH2CH2N(CH3)2、−SCH2CH(NH2)C(O)OH、−SCH2CH(NH2)C(O)OCH3、
【化１３】
2015531792.tif 000015
である)
の化合物またはその塩を提供する。
【００３３】
一実施態様は、
【化１４】
2015531792.tif 000016
から選択される、式(III)の化合物またはその塩を提供する。
【００３４】
一実施態様は、
【化１５】
2015531792.tif 000017
から選択される、式(III)の化合物またはその塩を提供する。
【００３５】
一実施態様は、
【化１６】
2015531792.tif 000018
から選択される、式(III)の化合物またはその塩を提供する。
【００３６】
一実施態様は、
【化１７】
2015531792.tif 000019
から選択される、式(III)の化合物またはその塩を提供する。
【００３７】
一実施態様は、式(I)の化合物(式中、R1はRxであり、R2がHである)；またはその塩を提供する。この化合物は、式(V)：
【化１８】
2015531792.tif 000020
(V)
の構造を有する。
【００３８】
一実施態様は、式(V)(式中、Rxは第一態様に規定される；および、Xは−NReRf、
【化１９】
2015531792.tif 000021
、
または
【化２０】
2015531792.tif 000022
である)
の化合物またはその塩を提供する。
【００３９】
一実施態様は、式(V)(式中、Rxは、第一態様において規定される；および、Xは−NReRfである)の化合物またはその塩を提供する。この実施態様には、化合物(式中、ReおよびRfは、独立してHおよび／またはC1−2アルキルである)が含まれる。この実施態様には、Xが−NH2または−N(CH3)2である化合物も含まれる。
【００４０】
一実施態様は、
式(V)(式中、Rxが、−CH2OC(O)C(CH3)2NH2、−CH2OC(O)CH(CH3)NH2、−CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2、または
【化２１】
2015531792.tif 000023
である)の化合物またはその塩を提供する。
【００４１】
一実施態様は、式(V)(式中、Rxは、第一態様において定義される；および、Xは、
【化２２】
2015531792.tif 000024
または
【化２３】
2015531792.tif 000025
である)
の化合物またはその塩を提供する。
【００４２】
一実施態様は、式(V)(式中、Rxは、
【化２４】
2015531792.tif 000026
である)
の化合物またはその塩を提供する。
【００４３】
一実施態様は、((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル(4-(ホスホノオキシ)フェニル)アセテート(1)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 4-((ホスホノオキシ)メチル)ベンゾエート(2)；(3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 3-(2,4-ジメチル-6-(ホスホノオキシ)フェニル)-3-メチルブタノエート(3)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 2-メチルアラニネート(4)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル L-アラニネート(5)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル L-バリネート(6)；((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 1-アミノシクロプロパンカルボキシレート(7)；(2S,3R)-N-((2-アミノエチル)スルファニル)-N'-((3S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(8)；S-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-L-システイン(9)；(2S,3R)-N-((イソブチルアミノ)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(10)；(2S,3R)-N-((2-アミノエチル)スルファニル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(11)；S-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-L-システイン(12)；(2S,3R)-N-((2-(ジメチルアミノ)エチル)スルファニル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(13)；メチル S-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-L-システイナート(14)；(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-N'-((4-メチル-1-ピペラジニル)メチル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(15)；(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒド��-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-N'-(1-ピペリジニルメチル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(16)；(2S,3R)-N-((4-アミノ-1-ピペリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(17)；(2S,3R)-N-((4-(ジメチルアミノ)-1-ピペリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(18)；(2S,3R)-N-((4-ヒドロキシ-1-ピペリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(19)；(2S,3R)-N-((3-ヒドロキシ-1-ピロリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(20)；(2S,3R)-N-((3-(ジメチルアミノ)-1-ピロリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(21)；および(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-N'-(1-ピロリジニルメチル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド(22)、
から選択される少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその塩を提供する。
【００４４】
本発明は、その精神または本質的特性から逸脱することなく、他の具体的な形態で具現化されうる。本発明は、本明細書に記載された本発明の態様および/または実施態様の全ての組み合わせを包含する。本発明のあらゆる実施態様はいずれの他の実施態様と組み合わされて、さらなる実施態様を説明しうると理解される。また、実施態様のそれぞれ個々の要素は、いずれの実施態様からのあらゆる他の要素と組み合わされてさらなる実施態様を説明するものであることも理解される。
【００４５】
(定義)
本発明の特徴および利点は、以下の詳細な説明を読むことで、当業者によってさらに容易に理解されうる。当然のことながら、上部および下部の別個の実施態様中に明確な根拠として記載された本発明のある特定の特徴を組み合わせて、単独の実施態様を形成してもよい。反対に、単独の実施態様中に簡潔な根拠として記載された本発明の様々な特徴を組み合わせて、それらのサブコンビネーションを形成してもよい。本明細書において、例として特定された実施態様かまたは好ましい実施態様は、例示目的であって限定するものではないことが意図される。
【００４６】
本明細書において他に特に記載のない限り、単数形の言及には複数の言及もまた含まれうる。例えば、「a」および「an」は、１かまたは１以上のいずれかを示しうる。
【００４７】
別段の記載がない限り、原子価が満たされていないいずれのヘテロ原子は、その原子価を満たすのに十分な水素原子を有すると考える。
【００４８】
本明細書に記載の定義は、引用により本明細書に援用されるいずれの特許、特許出願、および/または特許出願公開に記載された定義よりも優先される。
【００４９】
本発明を説明するために用いられる様々な用語の定義を以下に記載する。これらの定義は、本明細書の全体を通して(それらが他に特定の場合に限定されない限り)、個別にか、またはより大きな基の一部としてのいずれかで用いられる用語に適用される。
【００５０】
本明細書の全体を通して、基およびそれらの置換基は、安定な部分および化合物をもたらすように、当業者により選択されうる。
【００５１】
当分野で用いられる慣習に従って、
【化２５】
2015531792.tif 000027
は本明細書において、コアまたは骨格構造への部分または置換基の結合点である結合を表すために、構造式中で用いられる。
【００５２】
本明細書で用いる用語「アルキル」は、例えば、1〜6個の炭素原子、1〜4個の炭素原子、または1〜2個の炭素原子を含む、分枝鎖および直鎖両方の飽和脂肪族炭化水素基を言う。アルキル基の例としては、限定はされないが、メチル(Me)、エチル(Et)、プロピル(例えば、n-プロピルおよびi-プロピル)、ブチル(例えば、n-ブチル、i-ブチル、sec-ブチル、およびt-ブチル)、ペンチル(例えば、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル)、n-ヘキシル、2-メチルペンチル、2-エチルブチル、3-メチルペンチル、ならびに4-メチルペンチルが挙げられる。シンボル「C」の後に下付き文字で数字が記載されている場合、該下付き文字は特定の基が有しうる炭素原子の数をより具体的に規定する。例えば、「C1-C6アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖アルキル基を意味する。
【００５３】
用語「シクロアルキル」は、1つの環と環あたり3〜6個の炭素を含有する完全飽和炭化水素基をいう。該用語は「C3−6シクロアルキル」は、C3、C4、C5、C6シクロアルキル基を含むことを意図している。シクロアルキル基の例示には、次のものに限定しないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルが挙げられる。分枝鎖シクロアルキル基、例えば1-メチルシクロプロピルおよび2-メチルシクロプロピルは、「シクロアルキル」の定義に含まれる。
【００５４】
用語「ヘテロシクロ」または「ヘテロサイクリル」は、互換的に使用することができ、少なくとも1つの環が少なくとも1つのヘテロ原子(O、SまたはN)を含む非芳香族3〜7員単環式基をいい、前記ヘテロ原子含有環は、好ましくは独立してO、S、および／またはNから選択される1〜3個のヘテロ原子を有する。窒素原子は、所望により四級化されていてもよい。
【００５５】
該句「医薬的に許容される」は本明細書において、適切な医学的判断の範囲内で、妥当な利益/リスク比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずにヒトおよび動物の組織と接触して用いるのに適した、化合物、物質、組成物、および/または剤形を意味するように用いられる。
【００５６】
式(I)の化合物は、アモルファスな固形物または結晶性の固形物として提供され得る。凍結乾燥を用いて、固形物として式(I)の化合物を提供することができる。
【００５７】
式(I)の化合物の溶媒和物(例えば、水和物)は、本発明の範囲内であることもまた理解されるべきである。用語「溶媒和物」とは、式(I)の化合物と、１つ以上の溶媒分子(有機または無機であってもよい)との物理的会合を意味する。この物理的会合には、水素結合が含まれる。特定の例において、例えば、１つ以上の溶媒分子が結晶性固体の結晶格子内に組み込まれている場合には、溶媒和物を単離することができる。「溶媒和物」には、溶液相および単離可能な溶媒和物の両方が含まれる。例示的な溶媒和物には、水和物、エタノレート、メタノレート、イソプロパノレート、アセトニトリル溶媒和物、酢酸エチル溶媒和物が含まれる。溶媒和物化に関する方法は、当分野では既知である。
【００５８】
プロドラッグは、インビボで変換されて生理活性剤を提供することができる化合物である。
【００５９】
加えて、式(I)の化合物は、製造後に単離および精製して、重量で99％以上の式(I)の化合物(「実質的に純粋な」)を含む組成物を得て、次いでそれを本明細書に記載のとおり用いるかまたは製剤化できる。そのような「実質的に純粋な」式(I)の化合物も、本発明の一部として本明細書において意図される。
【００６０】
「安定な化合物」および「安定な構造」とは、反応混合物から有用な純度への単離、および有効な治療薬への製剤化に耐えるのに十分強い化合物を示すことを意図する。本発明は安定な化合物を具体化するものと意図される。
【００６１】
「治療上有効な量」は、NOTCH受容体の阻害剤として作用するか、または増殖性疾患(例えば癌)を治療もしくは予防するのに有効である、本発明の化合物単独の量か、特許請求された化合物の組み合わせの量か、または他の活性成分と組み合わされた本発明の化合物の量を包含することを意図する。
【００６２】
本明細書で用いる「処置すること」または「治療」には、哺乳動物、とりわけヒトにおける疾患状態の治療が含まれ、ならびに:(a)とりわけ、哺乳動物が疾患状態に罹りやすいが、まだ罹患していると診断されていない場合において、哺乳動物での疾患状態が生じるのを予防すること；(b)疾患状態の抑制、すなわち、その進行を抑止すること；および/または(c)疾患状態を軽減すること、すなわち、疾患状態の退行をもたらすこと、が含まれる。
【００６３】
本発明の化合物は、本発明の化合物に出現する原子の全ての同位体を含むことを意図する。同位体には、原子番号が同一であるが質量数が異なる原子が含まれる。一般的な例として、水素の同位体には重水素(D)およびトリチウム(T)が含まれるが、これらに限定するものではない。炭素の同位体としては13Cおよび14Cが挙げられる。同位体で標識された本発明の化合物は一般に、当業者に公知の通常の技法によるか、または本明細書に記載されたものと類似した方法によって、他で用いられる非標識試薬の代わりに適切な同位体-標識試薬を用いて、製造することができる。
【００６４】
式(I)の化合物は、本発明の範囲でもある塩を形成しうる。特に明記しない限り、本願化合物に関する言及は、その塩に関する言及を含むものと理解される。用語「塩(複数可)」は、無機酸および／または有機酸と塩基と形成される酸性塩および／または塩基性塩を意味する。さらに、用語「塩(複数可)」は、例えば、式(I)の化合物が、塩基性部分(例えばアミンまたはピリジンもしくはイミダゾール環）および酸性部分(例えばカルボン酸）の両方を含有する場合には、両性イオン(内塩)を含みうる。医薬的に許容される(すなわち、無毒性で生理学的に許容される)塩、例えば、カチオンが塩の毒性または生物活性に大きく寄与しない、許容される金属塩およびアミン塩などが好ましい。しかしながら、他の塩は、例えば、製造中に用いることができる単離または精製工程において有用でありうるので、本発明の範囲であると考えられる。式(I)の化合物の塩は、例えば、媒体、例えば塩を沈殿させるものまたは水性媒体中で、式(I)の化合物をある量、例えば同量の酸または塩基と反応させ、次いで、凍結乾燥させることによって、形成されうる。
【００６５】
酸付加塩の例として、酢酸塩(例えば、酢酸またはトリハロ酢酸、例えばトリフルオロ酢酸と形成されるもの)、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩(camphorate)、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、(塩酸と形成される)塩酸塩、(臭化水素と形成される)臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、(マレイン酸と形成される)マレイン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、(メタンスルホン酸と形成される)メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩(例えば、硫酸と形成されるもの)、スルホン酸塩(例えば、本明細書に記載のもの)、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、例えばトシル酸塩、ウンデカン酸塩などが挙げられる。
【００６６】
塩基性塩の例として、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えばナトリウム塩、リチウム塩、およびカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩およびマグネシウム塩；バリウム塩、亜鉛塩、およびアルミニウム塩；有機塩基との塩(例えば、有機アミン)、例えばトリアルキルアミン、例えばトリエチルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、N−ベンジル−β−フェネチルアミン、１−エフェナミン、N,N’−ジベンジルエチレン−ジアミン、デヒドロアビエチルアミン、Ｎ−エチルピペリジン、ベンジルアミン、ジシクロヘキシルアミンまたは同様の医薬的に許容されるアミンとの塩ならびにアミノ酸、例えばアルギニン、リジンなどとの塩が挙げられる。塩基性窒素含有基は、物質、例えば、ハロゲン化低級アルキル(例えば、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピル、およびブチル)、硫酸ジアルキル(例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ブチル、および硫酸ジアミル)、長鎖ハロゲン化物(例えば、塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル)、ハロゲン化アラルキル(例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル)などで四級化されうる。好ましい塩には、一塩酸塩、硫酸水素塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩または硝酸塩が含まれる。
【００６７】
式(I)で示される化合物は、処置する症状に適切ないずれの方法(部位特異的処置の必要性、または投与される式(I)の化合物の量に依存し得る)によっても投与されることができる。
【００６８】
また、本発明には、式(I)の化合物またはその塩；ならびに1以上の無毒の医薬的に許容される担体および/または希釈剤および/またはアジュバント(本明細書においてまとめて「担体」物質と称される)、さらに、必要に応じて、他の活性成分を含有する医薬組成物の類が包含される。該式(I)の化合物は、いずれの適切な経路によって、好ましくはそのような経路に適応した医薬組成物の形態で、目的の治療に対して有効な量で投与されうる。本発明の化合物および組成物は、例えば、通常の医薬的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルを含む用量単位剤形で、経口、粘膜、または非経口(parentally)(血管内、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、および胸骨内を含む)で投与されてもよい。例えば、該医薬担体は、マンニトールもしくはラクトースおよび微結晶セルロースの混合物を含んでよい。該混合物は、さらなる成分、例えば、滑沢剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム)および崩壊剤(例えばクロスポビドン)を含んでもよい。該担体混合物は、ゼラチンカプセルに詰められるか、または錠剤として圧縮されてもよい。該医薬組成物は、例えば、経口剤形または注入液として投与されてもよい。
【００６９】
経口投与の場合、該医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、液体カプセル剤、懸濁剤、または液剤の形態であってもよい。該医薬組成物は、好ましくは、特定の量の活性成分を含む用量単位の形態で製造される。例えば、該医薬組成物は、約1〜2000 mg、好ましくは約1〜500 mg、およびさらに好ましくは約5〜150 mgの範囲の量の活性成分を含有する錠剤またはカプセル剤として提供されてもよい。ヒトまたは他の哺乳動物に対する適切な1日用量は、患者の症状および他の因子に応じて幅広く変化させてもよいが、ルーチンな方法を用いて決定することができる。
【００７０】
本明細書において意図されるいずれの医薬組成物も、例えば、いずれの許容可能で適切な経口製剤によって経口で送達され得る。経口製剤の例としては、例えば、錠剤、トローチ剤、ドロップ剤(lozenge)、水性もしくは油性懸濁剤、分散性粉末剤もしくは顆粒剤、エマルジョン剤、硬もしくは軟カプセル剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定するものではない。経口投与用の医薬組成物は、経口投与用の医薬組成物の製造において当業者に公知のいずれの方法に従って、製造され得る。医薬的に服用しやすい(palatable)製剤を提供するために、本発明による医薬組成物は、甘味剤、香味剤、着色剤、粘滑剤、抗酸化剤、または保存剤から選択される少なくとも1つの剤を含み得る。
【００７１】
錠剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物と錠剤の製造に適した少なくとも1つの無毒の医薬的に許容される賦形剤を混合することによって製造され得る。賦形剤の例としては、例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、およびリン酸ナトリウムなど；造粒および崩壊剤、例えば、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、コーンスターチ、およびアルギン酸など；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、ポリビニル-ピロリドン、およびアラビアガム(acacia)など；ならびに、滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、およびタルクなどが挙げられるが、これらに限定するものではない。加えて、錠剤は、コーティングされないか、あるいは不快な味の薬剤の嫌な味をマスクするか、または消化管での活性成分の崩壊および吸収を遅延させることによって活性成分の効果を長時間持続させるために公知の技法によってコーティングされ得る。水溶性矯味物質の例としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースが挙げられるが、これらに限定するものではない。時間遅延物質(time delay material)の例としては、エチルセルロースおよび酢酸酪酸セルロースが挙げられるが、これらに限定するものではない。
【００７２】
硬ゼラチンカプセル剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物と少なくとも1つの不活性固体希釈剤(例えば炭酸カルシウム；リン酸カルシウム；およびカオリンなど)を混合することによって製造され得る。
【００７３】
軟ゼラチンカプセル剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物を、少なくとも1つの水溶性担体(例えば、ポリエチレングリコールなど)；および少なくとも1つの油媒体(例えば、ラッカセイ油、流動パラフィン、およびオリーブ油など)と混合することによって製造され得る。
【００７４】
水性懸濁剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物を水性懸濁剤の製造に適した少なくとも1つの賦形剤と混合することによって製造され得る。水性懸濁剤の製造に適した賦形剤の例としては、例えば、懸濁化剤(例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム(gum tragacanth)、およびアカシアガムなど)；崩壊剤または湿潤剤(例えば、天然のリン脂質(例えばレシチン)など)；アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物(例えば、ポリオキシエチレンステアレートなど)；エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物(例えば、ヘプタデカエチレン-オキシセタノール(oxycetanol)など)；エチレンオキシドと部分エステル(脂肪酸およびヘキシトールに由来)との縮合生成物(例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなど)；および、エチレンオキシドと部分エステル(脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来)との縮合生成物(例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートなど)が挙げられるが、これらに限定するものではない。水性懸濁剤はまた、少なくとも1つの保存剤(例えば、p-ヒドロキシ安息香酸エチルおよびp-ヒドロキシ安息香酸n-プロピルなど)；少なくとも1つの着色剤；少なくとも1つの香味剤；および/または、少なくとも1つの甘味剤(限定はされないが、例えば、スクロース、サッカリン、およびアスパルテームを含む)を含むことができる。
【００７５】
油性懸濁剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物を、植物油(例えば、ラッカセイ油；オリーブ油；ゴマ油；およびヤシ油など)；または鉱物油(例えば、流動パラフィンなど)のいずれかの中に懸濁させることによって製造することができる。油性懸濁剤はまた、少なくとも1つの増粘剤、例えば、蜜ロウ；固形パラフィン；およびセチルアルコールなどを含むことができる。風味のよい(palatable)油性懸濁剤を提供するために、すでに上述した甘味剤のうちの少なくとも1つ、および/または少なくとも1つの香味剤を、該油性懸濁剤に加えることができる。油性懸濁剤はさらに、限定はされないが、例えば、抗酸化剤(例えば、ブチルヒドロキシアニソール、およびα-トコフェロールなど)を含めた少なくとも1つの保存剤を含むことができる。
【００７６】
分散性散剤および顆粒剤を、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物と、少なくとも1つの分散剤および/または湿潤剤；少なくとも1つの懸濁化剤；ならびに/あるいは少なくとも1つの保存剤とを混合させることによって製造することができる。適切な分散剤、湿潤剤、および懸濁化剤は、すでに上述したものである。保存剤の例としては、限定はされないが、例えば、抗酸化剤(例えば、アスコルビン酸)が挙げられる。加えて、分散性散剤および顆粒剤はまた、少なくとも1つの賦形剤(限定はされないが、例えば、甘味剤；香味剤；および着色剤を含む)を含むことができる。
【００７７】
少なくとも1つの式(I)の化合物の乳剤は、例えば、水中油型乳剤として製造され得る。式(I)の化合物を含有する乳剤の油性相は、公知の方法で公知の成分から構成されうる。該油相は、限定はされないが、例えば、植物油(例えば、オリーブ油およびラッカセイ油など)；鉱物油(例えば、流動パラフィンなど)；およびそれらの混合物によって製造され得る。該相は、単に乳化剤のみを含有してもよいが、少なくとも1つの乳化剤と脂肪もしくは油または脂肪と油の両者との混合物を含有してもよい。適切な乳化剤としては、限定はされないが、例えば、天然のリン脂質(例えば、大豆レシチン)；脂肪酸およびヘキシトール無水物由来のエステルまたは部分エステル(例えば、ソルビタンモノオレエートなど)；および部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物(例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなど)が挙げられる。好ましくは、親水性乳化剤は、安定剤として作用する親油性乳化剤を一緒に含まれる。また、油および脂肪の両方が含まれることが好ましい。安定剤の有無にかかわらず乳化剤はいわゆる乳化ワックスを形成し、該ワックスは油および脂肪と一緒に、クリーム製剤の油性分散相を形成するいわゆる乳化軟膏基剤を形成する。乳剤は、甘味剤、香味剤、保存剤、および/または抗酸化剤も含むこともできる。本発明の製剤における使用に適切な乳化剤および乳化安定剤には、Tween 60、Span 80、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリルモノステアレート、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリルジステアレートが、単独かまたはワックスもしくは当分野で周知の他の物質と共に含まれる。
【００７８】
式(I)の化合物は、例えば、静脈内、皮下、および/または筋肉内に、いずれの医薬的に許容される適切な注射可能な形態によっても投与され得る。注射可能な形態の例としては、限定はされないが、例えば、許容可能なビヒクルおよび溶媒(例えば、水、リンガー液、および生理食塩水など)を含有する無菌の水溶液；無菌の水中油型マイクロエマルション；および水性もしくは油性の懸濁液が挙げられる。
【００７９】
非経口投与用の製剤は、水性または非水性の等張で無菌の注射液剤または懸濁剤の形態であってもよい。これらの液剤および懸濁剤は、無菌の粉末または顆粒から、経口投与用の製剤での使用において言及した担体または希釈剤のうちの1つ以上を用いるか、または他の適切な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁化剤を用いることによって、製造されうる。該化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、トラガカントガム(tragacanth gum)、および/または様々な緩衝剤中に溶解されうる。他のアジュバントおよび投与様式が、製薬分野において広く周知である。また、該活性成分を、適切な担体(生理食塩水、ブドウ糖(dextrose)、または水を含む)との組成物、あるいはシクロデキストリン(すなわち、CAPTISOL(登録商標))、共溶媒可溶化剤(すなわち、プロピレングリコール)またはミセル可溶化剤(すなわち、Tween 80)との組成物として、注射により投与してもよい。
【００８０】
無菌の注射製剤はまた、無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁液(例えば、1,3-ブタンジオール中の溶液)であってよい。許容されるビヒクルおよび溶媒の中で用いてもよいものは、水、リンガー液、および生理食塩水である。加えて、無菌の固定油が、溶媒または懸濁化媒質として通常用いられる。この目的のために、任意の刺激の少ない固定油(合成モノ-またはジグリセリドが含まれる)を用いてもよい。さらに、脂肪酸(例えばオレイン酸など)が注射剤の製造において用いられる。
【００８１】
無菌の注射可能な水中油型マイクロエマルションは、例えば、1)少なくとも1つの式(I)の化合物を油性相(例えば、大豆油およびレシチンの混合物など)中に溶解させること；2)油相を含む式(I)を水とグリセロールの混合物と合わせること；および、3)この合わせた混合物を処理してマイクロエマルションを形成させることによって、製造され得る。
【００８２】
無菌の水性もしくは油性の懸濁剤は、当分野で既に公知の方法に従って、製造され得る。例えば、無菌の水性の液剤または懸濁剤は、無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒(例えば、1,3-ブタンジオールなど)を用いて製造され得て；無菌の油性の懸濁剤は、無菌で無毒の許容される溶媒または懸濁化媒質(例えば、無菌の固定油(例えば、合成モノ-またはジグリセリド)；および脂肪酸(例えばオレイン酸など)など)を用いて製造され得る。
【００８３】
本発明の医薬組成物で使用してもよい医薬的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルとしては、限定はされないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、自己乳化型ドラッグデリバリーシステム(SEDDS)(例えば、d-α-トコフェロールポリエチレングリコール 1000 コハク酸塩)、医薬剤形で用いる界面活性剤(例えば、Tween、クレモフォール界面活性剤(BASF)を含むポリエトキシ(polyethoxylated)ヒマシ油、または他の同様のポリマーデリバリーマトリックス)、血清タンパク質(例えばヒト血清アルブミン)、緩衝物質(例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム)、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質(例えば、プロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロック重合体、ポリエチレングリコール)および羊毛脂が挙げられる。シクロデキストリン(例えば、α-、β-、およびγ-シクロデキストリン)または化学修飾誘導体(例えば、2-および3-ヒドロキシプロピル-シクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデキストリン)、あるいは他の可溶化誘導体もまた、本明細書に記載の式の化合物の送達を高めるために有利に用いられうる。
【００８４】
本発明の医薬的に活性な化合物は、ヒトおよび他の哺乳動物を含む患者に投与するための薬剤を製造する薬学の通常の方法に従って、加工され得る。該医薬組成物は、通常の製薬工程(例えば、滅菌)で処理されてよく、ならびに/あるいは通常のアジュバント(例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤など)を含んでもよい。加えて、錠剤および丸薬は、腸溶コーティングを用いて製造され得る。そのような組成物はまた、アジュバント(例えば、湿潤剤、甘味剤、香味剤、および芳香剤)を含有してもよい。
【００８５】
投与する化合物の量、ならびに本発明の化合物および/または組成物を用いた疾患状態の治療のための投与レジメンは、対象の年齢、体重、性別および病状、疾患の種類、疾患の重篤性、投与経路および投与頻度、ならびに用いる特定の化合物を含む様々な因子に依存する。従って、該投与レジメンは大きく変化させてもよいが、標準的な方法を用いてルーチン的に決定することができる。1日用量は、約0.001〜100 mg/kg体重、好ましくは約0.005〜約50 mg/kg体重、最も好ましくは約0.01〜10 mg/kg体重が適切でありうる。1日用量を、1日あたり1〜4回で投与することができる。
【００８６】
治療目的で、本発明の活性化合物は、通常、指定された投与経路に適する1つ以上のアジュバントと組み合わされる。経口投与の場合、該化合物を、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、ゼラチン、アカシアガム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および/またはポリビニルアルコールと混合した後、投与しやすいように錠剤化するかまたはカプセルに包んでもよい。そのようなカプセルまたは錠剤には、ヒドロキシプロピルメチルセルロース中に活性化合物が分散した状態で提供することができるような、徐放性製剤が含まれうる。
【００８７】
本発明の医薬組成物は、式(I)の化合物またはその塩、ならびに、適宜、いずれかの医薬的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルから選択されるさらなる物質(agent)を含有する。本発明の別の組成物は、本明細書に記載の式(I)の化合物またはその塩、ならびに医薬的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを含有する。
【００８８】
(有用性)
式(I)の化合物は、癌、例えば、Notch活性化に依存した癌の治療に有用である。Notch活性化は、様々な固形腫瘍(卵巣、膵臓、ならびに乳癌を含む)および血液腫瘍(例えば、白血病、リンパ腫、および多発性骨髄腫)の病因と関係している。
【００８９】
一実施態様において、癌の治療のための方法であって、それを必要としている哺乳動物に式(I)の化合物またはその塩を投与することを含む、該方法を提供する。本実施態様の方法は、限定はされないが、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、頭頚部癌、腎癌、肝癌、肺癌(非小細胞肺癌(NSCLC)を含む)、卵巣癌、膵臓癌、胆嚢癌、前立腺癌、甲状腺癌、骨肉腫、横紋筋肉腫、悪性線維性組織球腫(MFH)、線維肉腫、膠芽腫/星状細胞腫、神経芽腫、メラノーマ、T細胞急性リンパ性白血病(T-ALL)、および中皮腫を含む、様々な癌を治療するために用いることができる。例えば、実施態様の方法は、乳癌、大腸癌、または膵臓癌の治療に用いられる。好ましくは、該哺乳動物はヒトである。例えば、癌を治療するために治療上有効な量が、本実施態様の方法において投与されうる。本実施態様における投与経路には、非経口投与および経口投与が含まれる。
【００９０】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に式(I)の化合物またはその塩を投与することを含み、該癌が結腸直腸癌である方法を提供する。好ましくは、該哺乳動物はヒトである。例えば、癌を治療するために治療上有効な量が、本実施態様の方法において投与されうる。本実施態様における投与経路には、非経口投与および経口投与が含まれる。
【００９１】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に式(I)の化合物またはその塩を投与することを含み、該癌がトリプルネガティブの乳癌である方法を提供する。好ましくは、該哺乳動物はヒトである。例えば、癌を治療するために治療上有効な量が、本実施態様の方法において投与されうる。本実施態様における投与経路には、非経口投与および経口投与が含まれる。
【００９２】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に式(I)の化合物またはその塩を投与することを含み、該癌が非小細胞肺癌である方法を提供する。好ましくは、該哺乳動物はヒトである。例えば、癌を治療するために治療上有効な量が、本実施態様の方法において投与されうる。本実施態様における投与経路には、非経口投与および経口投与が含まれる。
【００９３】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に式(I)の化合物またはその塩を投与することを含み、該癌が膵臓癌である方法を提供する。好ましくは、該哺乳動物はヒトである。例えば、癌を治療するために治療上有効な量が、本実施態様の方法において投与されうる。本実施態様における投与経路には、非経口投与および経口投与が含まれる。
【００９４】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に式(I)の化合物またはその塩を投与することを含み、該癌が卵巣癌である方法を提供する。好ましくは、該哺乳動物はヒトである。例えば、癌を治療するために治療上有効な量が、本実施態様の方法において投与されうる。本実施態様における投与経路には、非経口投与および経口投与が含まれる。
【００９５】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に式(I)の化合物またはその塩を投与することを含み、該癌がメラノーマである方法を提供する。好ましくは、該哺乳動物はヒトである。例えば、癌を治療するために治療上有効な量が、本実施態様の方法において投与されうる。本実施態様における投与経路には、非経口投与および経口投与が含まれる。
【００９６】
一実施態様において、癌の治療のための医薬の製造における式(I)の化合物またはその塩の使用を提供する。好ましくは、本実施態様において、処置される癌には、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、頭頚部癌、腎癌、肝癌、肺癌(非小細胞肺癌(NSCLC)を含む)、卵巣癌、膵臓癌、胆嚢癌、前立腺癌、甲状腺癌、骨肉腫、横紋筋肉腫、悪性線維性組織球腫(MFH)、線維肉腫、膠芽腫/星状細胞腫、神経芽腫、メラノーマ、T細胞急性リンパ性白血病(T-ALL)、および中皮腫のうちの1つ以上が含まれる。本実施態様の適切な医薬には、非経口投与用の医薬(例えば、液剤および懸濁剤など)および経口投与用の医薬(例えば、錠剤、カプセル剤、液剤、および懸濁剤など)が含まれる。
【００９７】
一実施態様は、癌の治療における療法で使用するための式(I)の化合物またはその塩を提供する。本実施態様において、治療対象の癌には、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、頭頚部癌、腎癌、肝癌、肺癌(非小細胞肺癌(NSCLC)を含む)、卵巣癌、膵臓癌、胆嚢癌、前立腺癌、甲状腺癌、骨肉腫、横紋筋肉腫、悪性線維性組織球腫(MFH)、線維肉腫、膠芽腫/星状細胞腫、神経芽腫、メラノーマ、T細胞急性リンパ性白血病(T-ALL)、および中皮腫のうちの1つ以上が含まれる。
【００９８】
一実施態様において、哺乳動物におけるNotch活性化に依存している癌の治療のための、少なくとも1つの式(I)の化合物またはその塩を患者に投与することを含む方法を提供する。この実施態様の方法はまた、限定はされないが、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、頭頚部癌、腎癌、肝癌、肺癌(非小細胞肺癌(NSCLC)を含む)、卵巣癌、膵臓癌、胆嚢癌、前立腺癌、甲状腺癌、骨肉腫、横紋筋肉腫、悪性線維性組織球腫(MFH)、線維肉腫、膠芽腫/星状細胞腫、神経芽腫、メラノーマ、T細胞急性リンパ性白血病(T-ALL)、および中皮腫を含む、様々な癌を治療するために用いられ得る。好ましくは、この実施態様の方法は、乳癌、大腸癌、または膵臓癌を治療するために用いられる。好ましくは、該哺乳動物はヒトである。例えば、癌を治療するために治療上有効な量が、本実施態様の方法において投与されうる。適切な投与経路には、非経口投与および経口投与が含まれる。
【００９９】
癌の治療において、化学療法薬および/または他の治療(例えば、放射線療法)の組み合わせが、多くの場合に有利である。第2(または第3)の薬剤は、第1の治療薬と同じかまたは異なる作用メカニズムを有していてよい。例えば、投与される2つ以上の薬剤が異なる様式または細胞周期の異なる段階で作用し、ならびに/あるいは、該2つ以上の薬剤が重複しない毒性または副作用を有し、ならびに/あるいは、組み合わされた該薬剤が各々、患者が呈する特定の病態の治療において実証済みの効果を有している、薬剤の組み合わせを用いてもよい。
【０１００】
一実施態様において、癌の治療のための方法であって、それを必要としている哺乳動物に式(I)の化合物またはその塩を投与すること；ならびに、1つ以上の別の抗癌剤を投与することを含む、該方法を提供する。
【０１０１】
該句「別の抗癌剤」とは、以下のうちのいずれか1つ以上から選択される薬剤を言う:アルキル化剤(ナイトロジェンマスタード、アルキルスルホネート、ニトロソウレア、エチレンイミン誘導体、およびトリアゼンを含む)；抗血管新生剤(マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を含む)；代謝拮抗剤(アデノシンデアミナーゼ阻害剤、葉酸拮抗剤、プリン類似体、およびピリミジン類似体を含む)；抗生物質または抗体(モノクローナル抗体、CTLA-4抗体、アントラサイクリンを含む)；アロマターゼ阻害剤；細胞周期応答調節剤；酵素；ファルネシル-タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ホルモン性および抗ホルモン性の薬剤およびステロイド(合成アナログ、グルココルチコイド、エストロゲン/抗エストロゲン[例えば、SERM]、アンドロゲン/抗アンドロゲン、プロゲスチン、プロゲステロン受容体アゴニスト、ならびに黄体形成ホルモン放出ホルモン[LHRH]アゴニストおよびアンタゴニストを含む)；インスリン様増殖因子(IGF)/インスリン様増殖因子受容体(IGFR)系調節剤(system modulator)(IGFR1阻害剤を含む)；インテグリン-シグナル伝達阻害剤；キナーゼ阻害剤(マルチキナーゼ阻害剤、および/または、SrcキナーゼまたはSrc/abl阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ[CDK]阻害剤、pan-Her、Her-1およびHer-2抗体、VEGF阻害剤(抗-VEGF抗体を含む)、EGFR阻害剤、マイトジェン活性化タンパク質[MAP]阻害剤、MET阻害剤、MEK阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、PDGF阻害剤、ならびに他のチロシンキナーゼ阻害剤またはセリン/スレオニンキナーゼ阻害剤を含む)；微小管撹乱物質(例えば、エクチナサイジンまたはそれらのアラログおよび誘導体)；微小管安定化剤(例えば、タキサン、ならびに天然のエポチロンおよびそれらの合成および半合成アナログ)；微小管結合の不安定化剤(ビンカアルカロイドを含む)；トポイソメラーゼ阻害剤；プレニルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；白金配位錯体(platinum coordination complex)；シグナル伝達阻害剤；ならびに、抗癌および細胞傷害性薬物として用いられる他の薬剤(例えば、生物学的応答調節剤、増殖因子、および免疫調節剤)。
【０１０２】
従って、本発明の化合物を、癌または他の増殖性疾患の治療において有用な他の抗癌治療と組み合わせて投与してもよい。本発明はさらに、癌の治療のための医薬の製造における式(I)の化合物またはその塩の使用を包含し、ならびに/あるいは、該式(I)の化合物またはその塩は他の抗癌剤もしくは細胞傷害性薬物および癌の治療のための治療法と組み合わせて用いられるとの説明書を付した、当該式(I)の化合物のパッケージを包含する。本発明は、キット形態(例えば、一緒にパッケージされるか、別個のパッケージに入れられてキットとして共に販売されるか、または共に処方されるようにパッケージされる)での少なくとも1つの式(I)の化合物と1つ以上のさらなる薬剤の組み合わせをさらに包含する。
【０１０３】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に、式(I)の化合物またはその塩；ダサチニブ；および適宜、1つ以上の別の抗癌剤を投与することを含む、該方法を提供する。
【０１０４】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に、式(I)の化合物またはその塩；パクリタキセル；および適宜、1つ以上の別の抗癌剤を投与することを含む、該方法を提供する。
【０１０５】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に、式(I)の化合物またはその塩；タモキシフェン；および適宜、1つ以上の別の抗癌剤を投与することを含む、該方法を提供する。
【０１０６】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に、式(I)の化合物またはその塩；グルココルチコイド；および適宜、1つ以上の別の抗癌剤を投与することを含む、該方法を提供する。適切なグルココルチコイドの例示は、デキサメタゾンである。
【０１０７】
一実施態様において、癌を治療するための方法であって、それを必要としている哺乳動物に、式(I)の化合物またはその塩；カルボプラチン；および適宜、1つ以上の別の抗癌剤を投与することを含む、該方法を提供する。
【０１０８】
本発明の化合物は、前述の症状に関連した副作用への対処におけるそれらの特定の有用性について選択された他の治療薬と共に、製剤化されるかまたは同時投与され得る。例えば、本発明の化合物は、悪心、過敏症および胃刺激を防ぐための薬剤(例えば、制吐薬ならびにH1およびH2抗ヒスタミン薬)と共に製剤化されうる。
【０１０９】
一実施態様において、式(I)の化合物またはその塩；キナーゼ阻害剤(小分子、ポリペプチド、抗体など)、免疫抑制剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗真菌剤、抗生物質、または抗血管過剰増殖化合物から選択される1つ以上のさらなる薬剤；ならびに、いずれの医薬的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを含有する医薬組成物を提供する。
【０１１０】
上記の他の治療薬は、本発明の化合物と組み合わせて用いられる場合、例えば、Physicians' Desk Reference (PDR)に示されている量か、または他に当業者により決定される量で用いられてもよい。本発明の方法において、そのような他の治療薬は、本発明の化合物の投与よりも前、同時、または後で投与されうる。
【０１１１】
しかしながら、いずれの特定の対象に対する具体的な用量レベルおよび投与頻度は変化させてもよく、一般的には、限定はされないが、例えば、投与形態での特定の式(I)の化合物の生物学的利用能、該特定の式(I)の化合物の代謝安定性および作用期間、対象の種、体重、全般的な健康状態、性別、および食餌、投与の様式および時間、排出速度、薬剤の組み合わせ、ならびに特定の症状の重篤度を含む様々な因子に依存しうる。例えば、1日用量は、約0.001〜100 mg/kg体重、好ましくは約0.005〜約50 mg/kg体重、そして最も好ましくは約0.01〜10 mg/kg体重が適切でありうる。該1日用量を、1日当たり1〜4回で投与することができる。
【０１１２】
該投与は継続的であることができる(すなわち、毎日、または間欠的)。本明細書で用いる用語「間欠的な」または「間欠的に」は、規則的または不規則な間隔のいずれかで休止および開始することを意味する。例えば、間欠的な投与には、1〜6日／週の投与；周期的な投与(例えば、連続2〜8週間の連日投与、その後、最大1週間の投与しない休止期間)；または隔日投与が含まれる。
【０１１３】
一実施態様において、該式(I)の化合物を、それを必要としている患者に毎日1回以上、継続的に投与する。例えば、治療上有効な量の式(I)の化合物を、それを必要としている患者に、連日、毎日1回以上投与する。
【０１１４】
一実施態様において、該式(I)の化合物を、それを必要としている患者に、毎日1回以上、間欠的に投与する。例えば、治療上有効な量の式(I)の化合物を、それを必要としている患者に、間欠的スケジュールに従って毎日1回以上投与する。
【０１１５】
一実施態様において、式(I)の化合物を、それを必要としている患者に、連日、毎日1回以上投与し、その後、1日以上投与を休止する。好ましくは、治療上有効な量の式(I)の化合物を投与する。休薬期間を伴う連続投与の例は、次のようなものである：7日間の治療の後、7日の治療休止；14日間の治療の後、7日間の治療休止；および、7日間の治療の後、14日間の治療休止の周期。治療/治療休止の周期を、患者を治療するために必要な複数回繰り返すことができる。
【０１１６】
一実施態様において、該式(I)の化合物を、それを必要としている患者に、間欠的な投与スケジュールに従って投与する。間欠的な投与スケジュールは、患者に式(I)の化合物を投与する日および患者に式(I)の化合物を投与しない日を含めた反復スケジュールである。間欠的な投与スケジュールの例は、次のようなものである:週に4日で連続3週間投与した後、1週投与休止し、4週間間隔で繰り返す；週に5日で連続2週間投与した後、1週投与休止し、3週間間隔で繰り返す；ならびに、週に4日で1週間投与した後、2週投与休止し、3週間間隔で繰り返す。好ましくは、治療上有効な量の式(I)の化合物を投与する。
【０１１７】
一実施態様において、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその塩を、1日投与した後、6日休止し、1週間スケジュールで繰り返す。
【０１１８】
一実施態様において、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその塩を、1日投与した後、6日休止する1週間スケジュールで、1〜4週間繰り返して、その後1週間投与休止する。例えば、式(I)の化合物を、1日投与した後、6日投与休止するスケジュールを3週間行い、その後1週間休止する。この4週間のサイクルを1回以上繰り返すことができる。
【０１１９】
一実施態様において、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその塩を、連続2日投与した後、5日休止し、1週間スケジュールで繰り返す。
【０１２０】
一実施態様において、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその塩を、連続3日投与した後、4日休止し、1週間スケジュールで繰り返す。
【０１２１】
一実施態様において、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその塩を、1日投与した後、10〜13日休止する。
【０１２２】
一実施態様において、少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその塩を、各々1日に1回投与する(QD)。この実施態様には、1日に1回の経口投与が含まれる。
【０１２３】
一実施態様において、少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその塩は、各々1日に2回投与する(BID)。この実施態様には、1日に2回の経口投与が含まれる。
【０１２４】
一実施態様において、少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその塩は、隔日に投与される：1日投与して、その後1日休止する。この2日の周期を、１回以上繰り返した。
【０１２５】
(製造方法)
本発明の化合物は、有機合成の分野の当業者に周知の多くの方法で製造することができる。本発明の化合物は、以下に記載される方法、および有機合成化学の分野で公知の合成方法、あるいは当業者により認められているその改変方法を用いて合成することができる。好ましい方法としては、限定はされないが、以下に記載のものが挙げられる。本明細書中の全ての引用文献は、引用によりその全般が本明細書に援用される。
【０１２６】
本発明の化合物は、この項に記載の反応および技法を用いて製造されうる。該反応は、用いる試薬および物質に適した溶媒中で実施され、もたらされる変換に対して適切なものである。また、以下に記載の合成方法の説明において、提示した反応条件(溶媒の選択、反応雰囲気、反応温度、実験時間およびワークアップ方法を含む)は全て、該反応の標準である条件となるように選択され、それは当業者によって容易に認識されるべきであると解される。分子の様々な部分に存在する官能基が、提示された試薬および反応に適合しなければならないことは、有機合成の分野の当業者により理解される。反応条件に適合する置換基に対するそのような制限は、当業者に容易に認識され得て、またその結果、代替方法を用いる必要があろう。これにより、本発明の目的の化合物を得るために、合成工程の順序を改変する判断か、またはさらに別の1つの特定のプロセススキームを選択する判断が、しばしば必要とされうる。また、この分野のいずれの合成経路の計画においても別の主流の判断が、本願に記載の化合物に存在する反応性官能基の保護のために用いられる保護基の賢明な選択であることが認識されるであろう。Greeneら(Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley and Sons (1999))により、熟練した実践者のための多くの別法についての信頼できる説明が記載されている。
【０１２７】
式(I)の化合物を、以下のスキームで説明される方法を参照して製造してもよい。そこに示される通り、最終生成物は式(I)と同一の構造式を示す化合物である。いずれの式(I)の化合物も、適切な置換基を用いて、試薬の適切な選択により、該スキームによって、製造されうることが理解されよう。溶媒、温度、圧力、および他の反応条件は、当業者によって容易に選択されうる。出発物質は、市販されているか、あるいは、当業者によって容易に製造される。化合物の構成要素は、本明細書のここもしくは他の場所で定義される。
【０１２８】
スキーム1〜8に要約される方法(Guarino, V.R. et al., Prodrugs：Challenges and Rewards, Stella, V.J. et al. eds., Springer：New York(2007), Part 2, pp 133-187, およびその中で引用された文献)を用いて、式(I)の化合物を合成することができる。
スキーム1
【化２６】
2015531792.tif 000028
【０１２９】
工程1：当業者に公知の様々な方法を用いて、化合物vを製造することができる。例えば、スキーム1に示したとおり、適切に置換されたベンゾジアゼピン(i)を、適切な溶媒中(例えば、N,N-ジメチルホルムアミド(DMF))において、塩基(例えば、炭酸セシウム)の存在下でハロアルキルチオエーテル(例えば、(クロロメチル)(メチル)スルファン))で処理して、式iiの化合物を得た。
【０１３０】
工程2：非プロトン性の溶媒(例えばジクロロメタン(DCM))中において、アミン塩(例えば、トリエチル塩化アンモニウム)存在下で、試薬(例えば、塩化スルフリル)による化合物iiの処理により、式iii(Hal = 塩素)の化合物への変換を実行できる。
【０１３１】
工程3：式ivの化合物を、非プロトン性の溶媒中で(例えばアセトニトリルまたはDMF)、適切に置換されたカルボン酸またはカルボキシレート塩で処理して、塩基の存在下において(カルボン酸から開始する場合)(例えば炭酸カリウム)化合物iiiから製造できる。
【０１３２】
工程4：化合物ivの脱保護を、当業者には公知の幾つかの方法にて達成できる。例えば、PG=tBuまたはBocである場合、化合物ivを、溶媒(例えばDCM)において、試薬(例えばトリフルオロ酢酸)により処理して、化合物vを得ることができる。
【０１３３】
化合物vを製造するためのさらなる方法は、スキーム2に示される。
【化２７】
2015531792.tif 000029
工程1：好適に官能化されたカルボン酸(PG-X-(CRaRb)n(CH2)nCO2H)またはカルボキシレート塩(vi)を、低温(例えば0℃)にて、水および適切な有機溶媒(例えばDCM)の二相混合液中で、塩基(例えばNa2CO3)、四級アンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウムスルフェート)の存在下において、アルキル化剤(例えば、クロロメチルクロロスルフェート)で処理して化合物viを得ることができる。
【０１３４】
工程2：化合物viを、適切な溶媒(例えばDCM)中において、塩基(例えばK2CO3)の存在下に、化合物iで処理して、化合物ivを得る。
【０１３５】
工程3：化合物ivの脱保護を、当業者には公知の複数の方法において達成することができる。例えば、PG = tBuまたはBocである場合、化合物ivを、溶媒(例えばDCM)中において、試薬(例えばトリフルオロ酢酸)で処理して、化合物vを得ることができる。
【０１３６】
親化合物のスルフェンアミドを基にしたプロドラッグの製造は、スキーム3に示される。
【化２８】
2015531792.tif 000030
【０１３７】
工程1：アルコール性溶媒(例えばMeOH)中における、銀塩(例えば硝酸銀)および二硫化物(例えば、tert-ブチル 2,2'-ジスルファンジイルビス(エタン-2,1-ジイル)ジカルバメート)の混合液を、塩基(例えばトリエチルアミン)の存在下において、化合物iで処理して、化合物viiiを得ることができる。
【０１３８】
工程2：化合物viiiの脱保護を、当業者には公知の幾つかの方法にて達成できる。例えば、PG=tBuまたはBocである場合に、化合物viiiを、溶媒(例えばDCM)中の試薬(例えばトリフルオロ酢酸)により処理して、化合物ixを得ることができる。
【０１３９】
化合物xiのプロドラッグのマンニッヒ型塩を、当業者には公知の方法(スキーム4)により製造できる。
【０１４０】
【化２９】
2015531792.tif 000031
【０１４１】
工程1：例えば、化合物iを、適切な溶媒(例えばMeOH)中において、ホルムアルデヒド、アミン(例えばピロリジン)と反応させて、化合物xを得ることができる。
【０１４２】
工程2：化合物xの脱保護を、当業者には公知の幾つかの方法にて達成できる。例えば、PG=tBuまたはBocである場合に、化合物xを、溶媒(例えばジエチルエーテル)中の溶媒(例えばDCMまたは無水HCl)において、試薬(例えばトリフルオロ酢酸)で処理して、化合物xiを得ることができる。
【実施例】
【０１４３】
本発明は以下の実施例においてさらに明確にされる。該実施例は例示のみを目的として提供されることが理解されるべきである。上記の考察および例から、当業者であれば、本発明の本質的特徴を確認することができ、そして、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、変更および改変を行って本発明を様々な使用および条件に適応させることができる。結果として本発明は、本明細書に記載の実例によって制限されるのではなく、むしろ添付の特許請求の範囲によって定義される。
(略語)
ACN            アセトニトリル
Bn            ベンジル
Boc            tert-ブトキシカルボニル
Boc2O        二炭酸ジ-tert-ブチル
CBz            ベンジルオキシカルボニル
DCM            ジクロロメタン
DEA            ジエチルアミン
dil.          希釈
DMF            ジメチルホルムアミド
DMSO          ジメチルスルホキシド
EDCI          1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド 塩酸塩
EtOH          エタノール
EtOAc        酢酸エチル
equiv.        当量
g            グラム
hまたはhr        時間(複数含む)
HOBt          ヒドロキシベンゾトリアゾール
HPLC          高速液体クロマトグラフィー
IPA            イソプロピルアルコール
LCMS          液体クロマトグラフィー質量分析
LDA            リチウムジイソプロピルアミド
LAH            水素化アルミニウムリチウム
MeOH          メタノール
min            分(複数含む)
mL            ミリリットル
mmol          ミリモル
n-BuLi        n-ブチルリチウム
NaHMDS        ナトリウム ビス(トリメチルシリル)アミド
NH4OAc        酢酸アンモニウム
RT            保持時間
t-Bu          三級ブチル
TBTU          O-(1H-ベンゾトリアゾール−1−イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム テトラフルオロボーレート
TEA            トリエチルアミン
TFA            トリフルオロ酢酸
Tf2O          トリフルオロメチルスルホン酸 無水物
THF            テトラヒドロフラン
TLC            薄層クロマトグラフィー
μL            マイクロリットル
【０１４４】
化合物Ａ
(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化３０】
2015531792.tif 000032
Ａ
製造物A-1A：tert-ブチル 5,5,5-トリフルオロペンタノエート
【化３１】
2015531792.tif 000033
(A-1A)
THF(30 mL)およびヘキサン(30 mL)中の5,5,5-トリフルオロペンタン酸(5 g, 32.0 mmol)の撹拌した溶液に、0℃にて、tert-ブチル 2,2,2-トリクロロアセトイミデート(11.46 mL, 64.1 mmol)を加えた。該混合液を0℃で15分間撹拌した。ボロントリフルオリドエーテラート(0.406 mL, 3.20 mmol)を加え、該反応混合液を室温まで終夜昇温させた。該澄明な反応混合液に、固体のNaHCO3(5 g)を加え、30分間撹拌した。該混合液をMgSO4によって濾過し、ヘキサン(200 mL)で洗浄した。該溶液を45分間静置させて、得られる固形物質を同じMgSO4フィルターで再度濾過することにより除去した。該フィルターケーキを、ヘキサン(100 mL)で洗浄して、加熱せずに減圧下で濃縮した。該体積を約30 mLまで減らし、該混合液を、清潔なフリット漏斗によって濾過し、ヘキサン(5 mL)で洗浄した後、次いで加熱せずに減圧下で濃縮した。得られた溶媒を含まない油状物を0.45μm ナイロンメンブレンディスクフィルターにより濾過して、製造物A-1A(6.6 g, 31.4 mmol 98％収率)を無色の油状物として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 1.38 (s, 9 H)1.74-1.83 (m, 2 H)2.00-2.13 (m, 2 H)2.24 (t, J=7.28 Hz, 2 H).
【０１４５】
製造物A-1B：(4S)-4-(プロパン-2-イル)-3-(5,5,5-トリフルオロペンタノイル)-1,3-オキサゾリジン-2-オン
【化３２】
2015531792.tif 000034
(A-1B)
DCM(50 mL)およびDMF(3滴)中の5,5,5-トリフルオロペンタン酸(5.04 g, 32.3 mmol)の撹拌した溶液に、塩化オキサリル(3.4 mL, 38.8 mmol)を5分かけて滴加し、該溶液を、泡立ちが全て治まるまで撹拌した。該反応混合液を減圧下で濃縮して、淡黄色の油状物を得た。THF(100 mL)中の(4S)-4-(プロパン-2-イル)-1,3-オキサゾリジン-2-オン(4.18 g, 32.4 mmol)溶液を入れた別のフラスコに、-78℃で、n-BuLi(2.5M／ヘキサン)(13.0 mL, 32.5 mmol)を、シリンジを介して5分かけて滴加した。10分間撹拌した後、THF(20 mL)中に溶解させた上記の酸塩化物を、カニューレを介して15分かけて加えた。該反応混合液を0℃まで昇温させ、浴が昇温するのにつれて室温まで昇温させ、終夜撹拌した。該反応混合液に、飽和NH4Clを加えた後、該混合液をEtOAc(2x)で抽出した。有機物を合わせて、食塩水で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、減圧下で濃縮した。該粗製物質を、フラッシュクロマトグラフィー(Teledyne ISCO CombiFlash Rf, 5％〜60％ 溶媒 A/B=ヘキサン/EtOAc, REDISEP(登録商標)SiO2 120g)により精製した。適切な画分を濃縮して、製造物A-1B(7.39 g, 86％)を無色の油状物として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 4.44 (1 H, dt, J=8.31, 3.53 Hz), 4.30 (1 H, t, J=8.69 Hz), 4.23 (1 H, dd, J=9.06, 3.02 Hz), 2.98-3.08 (2 H, m), 2.32-2.44 (1 H, m, J=13.91, 7.02, 7.02, 4.03 Hz), 2.13-2.25 (2 H, m), 1.88-2.00 (2 H, m), 0.93 (3 H, d, J=7.05 Hz), 0.88 (3 H, d, J=6.80 Hz).
【０１４６】
製造物A-1C：(2S,3R)-tert-ブチル 6,6,6-トリフルオロ-3-((S)-4-イソプロピル-2-オキソオキサゾリジン-3-カルボニル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノエート、および
製造物A-1D：(2R,3R)-tert-ブチル 6,6,6-トリフルオロ-3-((S)-4-イソプロピル-2-オキソオキサゾリジン-3-カルボニル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノエート
【化３３】
2015531792.tif 000035
THF(59 mL)中のジイソプロピルアミン(5.3 mL, 37.2 mmol)の冷たい撹拌溶液(-78℃)に、窒素雰囲気下においてn-BuLi(2.5M／ヘキサン)(14.7 mL, 36.8 mmol)を加えた後、該混合液を0℃まで昇温させて、LDAの0.5M溶液を得た。別の容器に製造物A-1B(2.45 g, 9.17 mmol)を入れて、該物質をベンゼンと2回共沸混合させた(RotoVapの空気吸入口に窒素吸入口を装着して湿気を完全に排除した)後、トルエン(15.3 mL)を加えた。この溶液を、乾燥塩化リチウム(1.96 g, 46.2 mmol)を含むフラスコに加えた。-78℃に冷却して得られた混合液(-78℃まで冷却した)に、上記LDA溶液(21.0 mL, 10.5 mmol)を加えて、-78℃で10分間撹拌して、0℃まで10分間昇温させた後、-78℃まで再冷却した。製造物A-1A(3.41 g, 16.07 mmol)を含む別の反応容器(これもまたベンゼンと2回共沸混合させた)に、トルエン(15.3 mL)を加えた。該混合液を、-78℃まで冷却し、LDA(37.0 mL, 18.5 mmol)を加え、得られた溶液を-78℃で25分間撹拌した。その後、該エステル由来のエノラートを、カニューレによりオキサゾリジノンエノラートの溶液に移し、-78℃でさらに5分間撹拌した。該セプタムを取り外し、該反応容器に固形粉末のビス(2-エチルヘキサノイルオキシ)銅(9.02 g, 25.8 mmol)を迅速に加え、該セプタムを元に戻した。すぐに該溶液を冷浴から取り出し、急速に回しながら温水浴(40℃)に入れると、それと同時に最初の青緑色から茶色へ色が変化した。該反応混合液を20分間撹拌して、5％NH4OH水溶液(360 mL)に注ぎ入れ、EtOAc(2x)で抽出した。有機物を合わせて、食塩水で洗浄し、乾燥させて(Na2SO4)、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー(Teledyne ISCO CombiFlash Rf, 0％〜60％ 溶媒 A/B=ヘキサン/EtOAc, REDISEP(登録商標)SiO2 120g)により精製した。適切な画分を濃縮して、製造物A-1C(2.87 g, 66％)を粘稠性の淡黄色油状物として得た。1H NMRにより、該製造物はジアステレオアイソマー1C:1Dの1.6:1混合物(2.74 ＆ 2.84 ppmでの多重線の積分による測定として)であることが示された：1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 4.43-4.54 (2 H, m), 4.23-4.35 (5 H, m), 4.01 (1 H, ddd, J=9.54, 6.27, 3.51 Hz), 2.84 (1 H, ddd, J=9.41, 7.28, 3.64 Hz), 2.74 (1 H, ddd, J=10.29, 6.27, 4.02 Hz), 2.37-2.48 (2 H, m, J=10.38, 6.98, 6.98, 3.51, 3.51 Hz), 2.20-2.37 (3 H, m), 1.92-2.20 (8 H, m), 1.64-1.91 (5 H, m), 1.47 (18 H, s), 0.88-0.98 (12 H, m).
【０１４７】
製造物A-1E：(2R,3S)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸、および
製造物A-1F：(2R,3R)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸
【化３４】
2015531792.tif 000036
THF(140 mL)および水(42 mL)中の製造物A-1Cおよび1D(4.54 g, 9.51 mmol)の冷たい撹拌溶液(0℃)に、過酸化水素(30％／水)(10.3 g, 91 mmol)およびLiOH(685.3 mg, 28.6 mmol)を順次加えて、該混合液を1時間撹拌した。その後、該反応容器を冷浴から取り出し、次いで1.5時間撹拌した。該反応混合液に、飽和NaHCO3(45 mL)および飽和Na2SO3(15 mL)を加えた後、減圧下にてある程度濃縮した。得られた粗溶液をDCM(3x)で抽出した。水相を、1N HClを用いてpH〜1-2まで酸性化し、次いでDCM(3x)およびEtOAc(1x)で抽出した。有機物を合わせて、食塩水で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、減圧下で濃縮して、製造物A-1EおよびA-1Fの混合物(3.00 g, 86％)を無色の油状物として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 2.76-2.84 (1 H, m, ジアステレオアイソマー2), 2.64-2.76 (3 H, m), 2.04-2.35 (8 H, m), 1.88-2.00 (4 H, m), 1.71-1.83 (4 H, m), 1.48 (9 H, s, ジアステレオアイソマー1), 1.46 (9 H, s, ジアステレオアイソマー2)；1H NMRにより、t-ブチル基のピークの積分により、A-1E:A-1Fの1.7:1混合物が示された。
【０１４８】
製造物A-1E：(2R,3S)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸、および
製造物A-1F：(2R,3R)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸
【化３５】
2015531792.tif 000037
THF(19 mL)中のジイソプロピルアミン(1.7 mL, 11.93 mmol)の冷たい撹拌溶液(-78℃)に、窒素雰囲気下において、n-BuLi(ヘキサン中で2.5M)(4.8 mL, 12.00 mmol)を加えた。該混合液を5分間撹拌した後、0℃まで昇温させた。別の容器において、THF(18 mL)中の製造物A-1EおよびA-1Fの混合物(1.99 g, 5.43 mmol)の冷たい撹拌溶液(-78℃)に、上記で製造したLDA溶液を、25分かけてカニューレからゆっくりと加えた。該混合液を15分間撹拌した後、室温(24℃水浴に入れた)まで15分間昇温させ、次いで-78℃まで15分間再び冷却した。該反応混合液に、シリンジを介してEt2AlCl(ヘキサン中で1M)(11.4 mL, 11.40 mmol)を加えた。得られた混合液を、10分間撹拌して、室温まで15分間昇温させた後、-78℃まで15分間冷却し戻した。メタノール(25 mL)を迅速に加え、室温まで昇温させながら激しく回した。その後、得られた混合液を、最初の体積の〜1/4まで濃縮した。該混合液を、EtOAc中に溶解させて、1N HCl(50 mL)および氷(75g)で洗浄した。水相を分離して、EtOAc(2x)で抽出した。有機物を合わせて、KF(2.85g／75 mL水)および1N HCl(13 mL)[得られた溶液 pH3〜4]の混合液、次いで食塩水で洗浄して、乾燥させて(Na2SO4)、濾過して、減圧下で濃縮して、製造物A-1Eおよび製造物A-1Fの9:1(A-1E:A-1F)のジアステレオアイソマーリッチな混合物(1H NMRにより決定)(2.13 g, ＞99％)を、粘稠性の淡黄色油状物として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 2.64-2.76 (2 H, m), 2.04-2.35 (4 H, m), 1.88-2.00 (2 H, m), 1.71-1.83 (2 H, m), 1.48 (9 H, s).
【０１４９】
製造物A-1G：(3S)-3-アミノ-1-メチル-5-フェニル-1,3-ジヒドロ-2H-1,4-ベンゾジアゼピン-2-オン、および
製造物A-1H：(3R)-3-アミノ-1-メチル-5-フェニル-1,3-ジヒドロ-2H-1,4-ベンゾジアゼピン-2-オン
【化３６】
2015531792.tif 000038
ラセミの3-アミノ-1-メチル-5-フェニル-1,3-ジヒドロ-2H-1,4-ベンゾジアゼピン-2-オン(Rittle, K.E. et al.,  Tetrahedron Letters, 28(5):521-522 (1987))を、文献の方法に従って製造した。該エナンチオマーを、キラル-SFC条件下において以下の方法を用いて分離した：CHIRALPAK(登録商標)AS-H 5x25； 移動相：CO2中、30％MeOH+0.1％DEA； 流速：280 mL/分； 圧力：100 bar； 温度：35℃.
【０１５０】
S-エナンチオマー(製造物A-1G)を得た：HPLC：保持時間=1.75分(CHIRALPAK(登録商標)AS-H 4.6x250 mmにおいて、CO2中、30％MeOH+0.1％DEA, 3 mL/分, 35℃, 100 bar, 230 nm, 10μl 注入)； 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 7.58-7.63 (2 H, m), 7.55 (1 H, ddd, J=8.50, 7.11, 1.76 Hz), 7.40-7.47 (1 H, m), 7.34-7.40 (3 H, m), 7.31 (1 H, dd, J=7.81, 1.51 Hz), 7.14-7.22 (1 H, m), 4.46 (1 H, s), 3.44 (3 H, s), 3.42 (2 H, s)； [α]D= 155° (c=1.9, MeOH) (Lit. Rittle, K.E. et al., Tetrahedron Letters, 28(5):521-522 (1987)：[α]D=-236°).
【０１５１】
R-エナンチオマー(製造物A-1H)も得た：HPLC：保持時間=1.71分； [α]D=+165° (c=2.1, MeOH)(Lit [α]D= +227°).
【０１５２】
製造物A-1Gを製造するための別法:
製造物A-1G・CSA塩：(3S)-3-アミノ-1-メチル-5-フェニル-1,3-ジヒドロ-2H-1,4-ベンゾジアゼピン-2-オン, (1S)-(+)-10-カンファースルホン酸塩
【化３７】
2015531792.tif 000039
製造物A-1G・CSAを、ラセミ体3-アミノ-1-メチル-5-フェニル-1,3-ジヒドロ-2H-1,4-ベンゾジアゼピン-2-オン(9.98g, 37.6 mmol)(上記に示されるとおり文献に従って製造)から、文献の方法(Reider, P.J. et al., J. Org. Chem., 52:955-957 (1987))に従って製造した。製造物1G・CSA(16.91g, 99％)を、無色の固形物として得た：旋光度：[α]D = -26.99° (c=1, H2O)(Lit. [α]D  = -27.8° (c=1, H2O))
【０１５３】
製造物A-1I：tert-ブチル (2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノエート、および
製造物A-1J：tert-ブチル (2R,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノエート
【化３８】
2015531792.tif 000040
DMF(19 mL)中の製造物A-1G(1.45 g, 5.47 mmol)ならびに製造物A-1Eおよび1Fの9:1混合物(1.989 g, 5.43 mmol)の撹拌溶液に、O-ベンゾトリアゾール-1-イル-N,N,N',N'-テトラ-メチルウロニウムテトラフルオロボレート(1.79 g, 5.57 mmol)およびトリエチルアミン(3.0 mL, 21.52 mmol)を加え、該混合液を終夜撹拌した。次いで、該反応混合液を、水(125 mL)に注ぎ入れ、沈殿した固形物を濾取して、水で洗浄し、風乾させて、製造物A-1Iおよび製造物A-1Jの8:1混合物(2.95 g, 89％)をクリーム色の固形物として得た：MS (ES)：m/z= 614 [M+H]+； 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 7.55-7.65 (3 H, m), 7.44-7.52 (2 H, m), 7.35-7.45 (4 H, m), 5.52 (1 H, d, J=8.03 Hz), 3.48 (3 H, s), 2.63 (2 H, ddd, J=9.35, 3.95, 3.76 Hz), 2.14-2.25 (4 H, m), 1.90-2.03 (3 H, m), 1.69-1.82 (1 H, m), 1.51 (9 H, s).
【０１５４】
製造物A-1K：(2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸、および
製造物A-1L：(2R,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸
【化３９】
2015531792.tif 000041
DCM(20 mL)中の上記の製造物A-1Iおよび製造物A-1Jの混合物(2.95 g, 4.81 mmol)の冷たい撹拌溶液(0℃)に、TFA(20 mL, 260 mmol)を加えた。該反応混合液を1時間撹拌した後、室温まで昇温させて、2.5時間撹拌した。該反応混合液をトルエン(50 mL)で希釈し、減圧下で濃縮した。この得られた残留物をトルエン(50 mL)に再溶解させて、減圧下で濃縮して、高真空下で乾燥させた。該粗生成物をDCMに溶解させ、SiO2(15g)を加えて、該スラリーを濃縮した後、フラッシュクロマトグラフィー(Teledyne ISCO CombiFlash Rf, 0％〜45％ 溶媒 A/B=DCM/EtOAc, REDISEP(登録商標)SiO2 80g)により精製した。適切な画分を濃縮して、製造物A-1Kおよび製造物A-1Lの混合物(2.00 g, 75％)をクリーム色の固形物として得た：HPLC：保持時間=2.770分(クロモリス(登録商標)SpeedROD 4.6 x 50 mm (4分グラジエント)4分にわたる10〜90％MeOH水溶液(0.1％TFAを含む), 4 mL/分で溶出, 254 nmでモニタリング)；MS (ES)：m/z= 558 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 8.32 (1 H, d, J=8.03 Hz), 7.65-7.71 (1 H, m), 7.50-7.60 (3 H, m), 7.41-7.49 (2 H, m), 7.39 (1 H, dd, J=7.91, 1.63 Hz), 7.23-7.35 (2 H, m), 5.59 (1 H, d, J=8.03 Hz), 3.51 (3 H, s), 2.81 (1 H, ddd, J=10.54, 6.90, 3.64 Hz), 2.67-2.76 (1 H, m), 2.22-2.33 (3 H, m), 1.99-2.12 (3 H, m), 1.85-1.94 (1 H, m), 1.79 (1 H, ddd, J=13.87, 7.84, 3.64 Hz).
【０１５５】
化合物A
DMF(25 mL)中の製造物A-1Kおよび製造物A-1Lの8:1混合物(3.46 g, 6.21 mmol)の撹拌溶液に、窒素雰囲気下において、塩化アンモニウム(3.32 g, 62.1 mmol)、EDC(3.55 g, 18.52 mmol)、HOBT(2.85 g, 18.61 mmol)およびトリエチルアミン(16 mL, 115 mmol)を加えて、該混合液を終夜撹拌した。該反応混合液を、激しく攪拌しながら水(200 mL)に注ぎ入れた後に静置した。得られる固形物を濾過により集めて、水で洗浄し、乾燥させて、3.6 gの無色の固形物を得た。該固形物を、分取SFCクロマトグラフィー(Lux-Cellulose-2 (3x25cm), 8％メタノール／CO2, 140ml/分, 220nmおよび35℃にて；サンプル：50ccのメタノール中に3.6g, 濃度=70mg/ml, スタックインジェクション：0.5cc/9.2分)により精製した。目的の生成物を含む画分を濃縮し、減圧下で終夜乾燥させた。化合物A(2.74 g, 79％)を無色の固形物として得た：HPLC：保持時間=9.601分(H2O/CH3CN(TFA含有), Sunfire C18 3.5um, 4.6x150mm, 4.6x150mm, グラジエント = 15分, 波長 = 220および254 nm). MS (ES)：m/z= 557 [M+H]+； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.54 (1 H, d, J=7.28 Hz), 7.71-7.80 (1 H, m), 7.68 (2 H, d, J=8.78 Hz), 7.50-7.62 (3 H, m), 7.45 (2 H, t, J=7.28 Hz), 7.29-7.40 (2 H, m), 7.15 (1 H, br. s.), 5.30 (1 H, d, J=7.28 Hz), 3.39 (3 H, s), 2.74-2.86 (1 H, m), 2.02-2.32 (3 H, m), 1.45-1.79 (4 H, m)； [α]D = -107.0° (5.73 mg/mL, DMSO).
【０１５６】
化合物Aを製造するための別法：
製造物A-1M：3,3,3-トリフルオロプロピル トリフルオロメタンスルホネート
【化４０】
2015531792.tif 000042
(A-1M)
CH2Cl2(120 mL)中の2,6-ルチジン(18.38 mL, 158 mmol)の冷たい撹拌溶液(-25℃)に、Tf2O(24.88 mL, 147 mmol)を3分かけて加えて、該混合液を5分間撹拌した。該反応混合液に、3,3,3-トリフルオロプロパン-1-オール(12 g, 105 mmol)を3分間隔で加えた。2時間後、該反応混合液を室温まで昇温させ、1時間撹拌した。該反応混合液を半分の体積まで濃縮した後、シリカゲルカラム(330g ISCO)に直接重層し、CH2Cl2で溶出して精製した。製造物A-1M(13.74 g, 53％)を無色の油状物として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 4.71 (2 H, t, J=6.15 Hz), 2.49-2.86 (2 H, m).
【０１５７】
製造物A-1N：(4S)-4-ベンジル-3-(5,5,5-トリフルオロペンタノイル)-1,3-オキサゾリジン-2-オン
【化４１】
2015531792.tif 000043
(A-1N)
製造物A-1Nを、5,5,5-トリフルオロペンタン酸(3.35 g, 21.46 mmol)および(4S)-4-ベンジル-1,3-オキサゾリジン-2-オン(3.80 g, 21.46 mmol)から、製造物A-1Bについて示した一般的な方法によって製造した。製造物A-1N(5.67 g, 84％)を、粘稠性の無色油状物として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 7.32-7.39 (2 H, m), 7.30 (1 H, d, J=7.05 Hz), 7.18-7.25 (2 H, m), 4.64-4.74 (1 H, m), 4.17-4.27 (2 H, m), 3.31 (1 H, dd, J=13.35, 3.27 Hz), 3.00-3.11 (2 H, m), 2.79 (1 H, dd, J=13.35, 9.57 Hz), 2.16-2.28 (2 H, m), 1.93-2.04 (2 H, m).
【０１５８】
製造物A-1O：tert-ブチル (3R)-3-(((4S)-4-ベンジル-2-オキソ-1,3-オキサゾリジン-3-イル)カルボニル)-6,6,6-トリフルオロヘキサノエート
【化４２】
2015531792.tif 000044
(A-1O)
THF(20 mL)中の製造物A-1N(3.03 g, 9.61 mmol)の冷たい撹拌溶液(-78℃)に、NaHMDS(THF中で1.0M)(10.6 mL, 10.60 mmol)を窒素雰囲気下にて加えた。2時間後、tert-ブチル 2-ブロモアセテート(5.62 g, 28.8 mmol)を、-78℃にて、シリンジを介してそのまま加えて、同一の温度で撹拌を維持した。6時間後、該反応混合液を室温まで昇温させた。該反応混合液を飽和NH4ClおよびEtOAcの間に分配した。有機相を分離して、水層をEtOAc(3x)で抽出した。有機物を合わせて、食塩水で洗浄して、乾燥させ(Na2SO4)、濾過して、減圧下で濃縮した。該残渣を、フラッシュクロマトグラフィー(Teledyne ISCO CombiFlash Rf, 5％〜100％ 溶媒 A/B=ヘキサン/EtOAc, REDISEP(登録商標)SiO2 120g)により精製した。適切な画分を濃縮して、製造物A-1O(2.79 g, 67.6％)を粘稠性の無色油状物として得た：1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 7.34 (2 H, d, J=7.30 Hz), 7.24-7.32 (3 H, m), 4.62-4.75 (1 H, m, J=10.17, 6.89, 3.43, 3.43 Hz), 4.15-4.25 (3 H, m), 3.35 (1 H, dd, J=13.60, 3.27 Hz), 2.84 (1 H, dd, J=16.62, 9.57 Hz), 2.75 (1 H, dd, J=13.35, 10.07 Hz), 2.47 (1 H, dd, J=16.62, 4.78 Hz), 2.11-2.23 (2 H, m), 1.90-2.02 (1 H, m), 1.72-1.84 (1 H, m), 1.44 (9 H, s).
【０１５９】
製造物A-1P：(2R)-2-(2-tert-ブトキシ-2-オキソエチル)-5,5,5-トリフルオロペンタン酸
【化４３】
2015531792.tif 000045
製造物A-1Pを、製造物A-1O(2.79 g, 6.50 mmol)から、製造物A-1Eについて示された一般的な方法によって製造した。製造物A-1P(1.45 g, 83％)を無色の油状物として得た:1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 2.83-2.95 (1 H, m), 2.62-2.74 (1 H, m), 2.45 (1 H, dd, J=16.62, 5.79 Hz), 2.15-2.27 (2 H, m), 1.88-2.00 (1 H, m), 1.75-1.88 (1 H, m), 1.45 (9 H, s).
【０１６０】
製造物A-1E：(2R,3S)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸、および
製造物A-1F：(2R,3R)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸
【化４４】
2015531792.tif 000046
THF(60 mL)中の製造物A-1P(5.44 g, 20.13 mmol)の冷たい撹拌溶液(-78℃)に、LDA(24.60 mL, 44.3 mmol)を7分かけてゆっくりと加えた。2時間撹拌した後、製造物A-1M(6.44 g, 26.2 mmol)を該反応混合液に3分かけて加えた。45分後に、該反応混合液を、1時間-25℃(氷/MeOH/ドライアイス)に昇温させた後、0℃まで昇温させた。45分後に、製造物A-1M(1g)を加えて、該反応混合液を20分間撹拌した。該反応液を、水および1N NaOHでクエンチし、CH2Cl2で抽出した。有機層を再度、1N NaOH(2x)で抽出して、水層を合わせた。水層を氷/水浴中で冷却した後、濃HClを用いてpH2まで酸性化した。次に、該水層をEtOAcで抽出した。有機物を合わせて、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物を高真空下で乾燥させて、製造物A-1Eおよび製造物A-1Fの1:5(A-1E:A-1F)の混合物(1H NMRにより決定した)(5.925 g, 80％)を淡黄色の固形物として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ ppm 2.81 (1 H, ddd, J=10.17, 6.32, 3.85 Hz), 2.63-2.76 (1 H, m), 2.02-2.33 (4 H, m), 1.86-1.99 (2 H, m), 1.68-1.85 (2 H, m), 1.47 (9 H, s).
【０１６１】
製造物A-1E：(2R,3S)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸、および
製造物A-1F：(2R,3R)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸
【化４５】
2015531792.tif 000047
製造物A-1Eおよび製造物A-1Fの混合物(64 mg, 1.758 mmol)をTHF(6 mL)に溶解させて無色の溶液を得て、これを-78℃に冷却した。次いで、LDA(2.149 mL, 3.87 mmol)(ヘプタン/THF/エチルベンゼン中で1.8M)を、該反応混合液に10分かけてゆっくりと加えた。15分間撹拌した後、該反応混合液を室温の水浴中に置いた。15分後、該反応混合液を-78℃の浴に戻し、その後塩化ジエチルアルミニウム(3.87 mL, 3.87 mmol)(ヘキサン中で1M)を、5分かけてゆっくりと加えた。該反応混合液を-78℃で撹拌した。15分後に、該反応混合液を、室温の水浴中に10分間置いて、その後-78℃の浴温まで冷却し戻した。15分後に、該反応を、MeOH(8 mL, 198 mmol)でクエンチし、-78℃の浴を取り外して濃縮した。該反応混合液に、氷およびHCl(16 mL, 16.00 mmol)を加えて、この混合液を続いてEtOAc(2x)で抽出した。有機層をフッ化カリウム(920 mg, 15.84 mmol)(25 mLのH2O中)およびHCl(4.5 mL, 4.50 mmol)で洗浄した。有機物を無水硫酸マグネシウム上で乾燥させて、減圧下で濃縮して、製造物A-1Eおよび製造物A-1Fの9:1(1E:1F)を多く含む混合物(540 mg, 1.583 mmol, 90％収率)を淡黄色/橙色の固形物を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 2.64-2.76 (2 H, m), 2.04-2.35 (4 H, m), 1.88-2.00 (2 H, m), 1.71-1.83 (2 H, m), 1.48 (9 H, s).
【０１６２】
製造物A-1Eを製造するための別法:
製造物A-1Q：(2R,3S)-1-ベンジル 4-tert-ブチル 2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシネート
【化４６】
2015531792.tif 000048
(A-1Q)
機械撹拌器、温度計ソケットおよび窒素バブラーを備えた、清潔で乾燥した5 Lの4つ口丸底フラスコに、室温で、N,N-ジメチルホルムアミド(2.07 L)、製造物A-1Eおよび製造物A-1Fの1.2:1混合物(207 g, 0.5651 mol)、炭酸カリウム(117.1 g, 0.8476 mol)、その後臭化ベンジル(116 g, 0.6781 mol)を15〜20分かけて入れた。該反応混合液を2〜3時間撹拌した。反応の完了後に、減圧下において50〜55℃で、該反応混合液を乾固するまで濃縮した。酢酸エチル(3.1 L, 30容積)を、該濃縮反応物に加えて、次いで該混合液を水(2.07 L)、食塩水(0.6 L)で洗浄した後、無水硫酸ナトリウム(207 g)で乾燥させて、濾過し、真空下で40〜45℃で、乾固するまで濃縮した。該残渣をジクロロメタン(1.035 L, 5容積)に溶解させた後に、シリカゲル(60-120)(607 g, 3.0 w/w)上に吸収させて、その後カラムクロマトグラフィー(溶媒として石油エーテルおよび酢酸エチルを使用)を用いて精製した。いくつかのバッチをプールした後に、製造物A-1Q(235 g)を得た。HPLC純度：99.77％.
【０１６３】
製造物A-1E：(2R,3S)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸
【化４７】
2015531792.tif 000049
(A-1E）
清潔で乾燥した2 Lオートクレーブ容器にメタノール(540 mL)を入れ、窒素で5〜10分間パージした。オートクレーブ容器に10％パラジウム炭素(12 g, 20％)を加え、該容器を5〜10分間、再度窒素でパージした。製造物A-1Q(60g, 0.1315 mol)を加えて、該オートクレーブ容器をメタノール(60mL)で洗い流して、水素圧力下(5Kg)において20〜25℃で、4〜6時間撹拌した。反応の完了後、該反応物を、セライト(登録商標)によって濾過し、メタノール(180 mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム(60 g)で乾燥させ、濾過し、真空下において45〜50℃で、乾固するまで濃縮して、製造物A-1E(45.8 g, 95％)を無色の固形物として得た：HPLC純度：98.9％.
【０１６４】
製造物A-1Eを製造するための別法:
製造物A-1E：(2R,3S)-3-(tert-ブトキシカルボニル)-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸
【化４８】
2015531792.tif 000050
(A-1E）
製造物A-1Eを、THF(2.0L)中のLDA(THF、エチルベンゼンおよびヘプタン中で1.8 M溶液)(698mL, 2.3当量)および塩化ジエチルアルミニウム(ヘキサン中で1.0 M溶液)(1256mL, 2.3当量)を用いて、上記と同じ方法で製造物A-1EおよびA-1Fの混合物(200g, 0.5460 mol)から製造した。上記に説明した通り、後処理した後に、得られた残渣を以下のように処理した：該粗物質を、2Lの4つ口丸底フラスコに加えた後、30℃以下でMTBE(1.0L)を加えた。得られた混合液を5〜10分間撹拌して澄明な溶液を得た。該得られた混合液に、30℃以下の温度でヘキサン(600mL)を加えた。該反応混合液を10分間撹拌した。次に、tert-ブチルアミン(43.8g, 1.1当量)を、30℃以下で15分間かけてゆっくりと加えた。該反応混合液を30℃以下で2時間撹拌して、濾過した。該固体物質を、5:3 MTBE:ヘキサン(200mL)で洗浄し、濾液を濃縮して、琥珀色のボトルに移した。濾過した固形物をジクロロメタン(2.0L)に溶解させ、1N HCl(2.0)で洗浄した。該有機層を食塩水(1.0L x 2)で洗浄した後、45℃以下で減圧下において濃縮した。この物質が91.12％の純度であることが分かった。該物質を、上記のt-ブチルアミン結晶化精製法によって再度精製した。製造物A-1E(78 g, 39％)を得た：HPLC純度：99.54％.
【０１６５】
化合物Aを製造するための別法:
製造物A-1I：tert-ブチル(2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノエート
【化４９】
2015531792.tif 000051
(A-1I）
機械撹拌器、温度計ソケットおよび窒素バブラーを備えた、清潔で乾燥した2 L 4つ口丸底フラスコに、20〜25℃で窒素雰囲気下において、N,N-ジメチルホルムアミド(457 mL)、製造物A-1E(45.7g, 0.1248mol)および製造物A-1G・CSA(62.08g, 0.1248mol)を入れた。該反応混合液を15〜20分間撹拌して20〜25℃にて澄明な溶液を得た。該反応混合液に、20〜25℃にてTBTU(48.16g, 0.1498 mol)を加えた後、20〜25℃にて15〜20分かけてトリエチルアミン(50.51g, 0.4992 mol)を加えた。該反応混合液を、窒素雰囲気下で20〜25℃にて60〜120分間撹拌した。反応の完了後、該反応液を、撹拌下において20〜25℃で水(1.37L, 30容積)に注ぎ入れた。該反応混合液を、20〜25℃で30分間撹拌した。該反応混合液を濾過して、水(228 mL)で洗浄した。得られた固体物質を、酢酸エチル(457 mL)に溶解させ、水(2x137 mL)、食塩水(137 mL)で洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウム(45.7g)で乾燥させた。該反応混合液に活性炭(9.14 g, 20％)を加え、30分間撹拌した。該混合液を、セライト(登録商標)ベッドおよび1ミクロンの濾布によって濾過し、活性炭を酢酸エチル(137 mL)で洗浄し、1.0容積まで濃縮した後、石油エーテル(457 mL, 10容積)を加え、20〜25℃で30分間撹拌した。該固形物を、濾取して、石油エーテル(137 mL)で洗浄した後、乾燥による損失が3.0％未満となるまで、40〜45℃にて8時間減圧下で乾燥させた。製造物A-1I(65.2 g, 85％)を得た：HPLC純度：98.26％.
【０１６６】
製造物A-1K：(2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸
【化５０】
2015531792.tif 000052
(A-1K)
機械撹拌器、温度計ソケットおよび窒素バブラーを備えた清潔で乾燥した3 L 4つ口丸底フラスコに、20〜25℃で、窒素雰囲気下においてジクロロメタン(980 mL)、続いて製造物A-1I(140 g, 0.2282 mol)を入れた。該反応混合液を0〜5℃まで冷却し、トリフルオロ酢酸(980 mL)を30〜40分間ゆっくりと加えた。得られた混合液を、窒素雰囲気下において0〜5℃で2時間撹拌した。該反応温度を20〜25℃まで昇温させ、該反応混合液を20〜25℃で1〜2時間撹拌した。反応の完了後に、該反応混合液を、減圧下で50〜55℃にて、濃縮乾固させた。トルエン(3x700 mL)を、濃縮した反応物に加えて、その後減圧下で50〜55℃にて留去した。トルエンからの濃縮が完了した後、該反応物に酢酸エチル(280 mL)を20〜25℃にて加え、60分間撹拌し、その後、固形物を濾過により集めた。該得られる固形物を、酢酸エチル(140 mL)で洗浄し、乾燥による損失が2.0％未満であるまで、50〜55℃で12時間、真空下で乾燥させた。製造物A-1K(106 g, 84％)を得た：HPLC純度：98.43％.
【０１６７】
化合物A:
反応容器に、製造物A-1K(30 g, 53.81 mmol)、HOBt(8.7g, 64.38 mmol)、およびTHF(150 mL)を、室温にて入れた。該均一な溶液に、EDCI(12.4g, 64.68 mmol)を加えて、該混合液を15分間撹拌した後、8℃まで冷却した。該反応混合液に、温度が10℃以下に維持できるように、アンモニア(2M／IPA)(81 mL, 162 mmol)を5分かけて加えた。得られた濃いスラリー(heavy slurry)を10分間撹拌し、30分かけて室温まで昇温させた後、4時間撹拌した。反応が完了した時点で、水(230 mL)を、温度が20℃以下に維持されるように15分かけてゆっくりと加えた後、得られる混合液を2時間撹拌した。該固形物を濾過により集め、水(3X60 mL)で洗浄し、次いで、55℃にて減圧下で48時間、乾燥させた。上記の粗生成物を、1 L 3つ口丸底フラスコに加えた。IPA(200 mL)を加えた後、該混合液を80℃まで加熱して均一な溶液を得た。水(170 mL)を、内部温度を＞75℃に維持するようにゆっくりと(15分)加えた。得られたスラリーを撹拌し、室温まで2時間冷却した。固形物を濾過により集め、水(2 X 50 mL)で洗浄した後、減圧下で乾燥させた(55℃で24時間、および30℃で48時間)。化合物Ａ(23.4 g, 78％収率)を得た：HPLC純度：99.43％.
【０１６８】
化合物B
(2R,3S)-N-((3S)-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化５１】
2015531792.tif 000053
(B)
製造物B-2A：(3S)-3-アミノ-5-フェニル-1,3-ジヒドロ-2H-1,4-ベンゾジアゼピン-2-オン、および
製造物B-2B：(3R)-3-アミノ-5-フェニル-1,3-ジヒドロ-2H-1,4-ベンゾジアゼピン-2-オン
【化５２】
2015531792.tif 000054
ラセミ体の3-アミノ-5-フェニル-1,3-ジヒドロ-2H-1,4-ベンゾジアゼピン-2-オン(J. Med. Chem., 49:2311-2319 (2006), 化合物# 5)を、文献の方法に従って製造した。エナンチオマーを、Berger SFC MGIIIカラムで分離した：Lux 25X3 cm, 5cm； 移動相：CO2中で、30％MeOH+0.1％DEA；流速：150 mL/分；温度：40℃；検出器波長：250 nM．S-エナンチオマー製造物B-2Aを白色の固形物として得た：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 10.67 (1 H, br. s.), 7.58 (1 H, td, J=7.65, 1.76 Hz), 7.37-7.53 (5 H, m), 7.23-7.30 (2 H, m), 7.14-7.22 (1 H, m), 4.23 (1 H, s), 2.60 (2 H, br. s.)；HPLC：保持時間=3.0625分 (OD-Hカラムで、CO2中、30％MeOH+0.1％DEA, 3 mL/分, 35℃, 96 bar, 230 nm, 10μl注入)；[α]D = -208.3°(5.05 mg/mL, MeOH). また、R-エナンチオマー製造物B-2Bをオフホワイト色の固形物として得た：HPLC：保持時間=3.970分；[α]D = 182.1°(2.01 mg/mL, MeOH).
【０１６９】
製造物B-2C：tert-ブチル (2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノエート、および
製造物B-2D：tert-ブチル (2R,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノエート
【化５３】
2015531792.tif 000055
製造物B-2Cを、製造物A-1Iについて示した一般的な方法に従って、製造物B-2A(564 mg, 2.244 mmol)ならびに製造物A-1Eおよび製造物A-1Fの混合物(822 mg, 2.244 mmol)から製造した。製造物B-2Cおよび製造物B-2D(1.31 g, 97％)を得た：HPLC：保持時間=3.443分(クロモリス(登録商標)ODS 4.6 x 50 mm (4分グラジエント)4分にわたり10〜90％MeOH水溶液(0.1％TFAを含む)、4 mL/分で溶出, 220 nmでモニタリング)； MS (ES)：m/z= 600.3 [M+H]+.
【０１７０】
製造物B-2E：(2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸、および
製造物B-2F：(2R,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-2-オキソ-5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3-イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサン酸
【化５４】
2015531792.tif 000056
製造物B-2Eおよび製造物B-2Fの混合物を、製造物A-1Kについて示した一般的な方法によって、製造物B-2Cおよび製造物B-2Dの混合物(1.31g, 2.185 mmol)から製造した。製造物B-2Eおよび製造物B-2Fの混合物(1.18 g, 99％)を得た：HPLC：保持時間=2.885分(クロモリス(登録商標)ODS 4.6 x 50 mm (4分グラジエント)4分にわたり10〜90％MeOH水溶液(0.1％TFAを含む)、4 mL/分で溶出, 220 nmでモニタリング)。MS (ES)：m/z= 544.2 [M+H]+.
【０１７１】
化合物B:
化合物Bを、化合物Ａについて示した一般的な方法に従って、製造物B-2Eおよび製造物B-2Fの混合物(354 mg, 0.651 mmol)から製造した。ジアステレオアイソマーを分離した後に、化合物B(188 mg, 52％)を白色の固形物として得た：HPLC：保持時間=9.063分(H2O/CH3CN(TFAを含む), Sunfire C18 3.5um, 4.6x150mm, 4.6x150mm, グラジエント = 15分, 波長 = 220および254 nm)； MS (ES)：m/z= 543 [M+H]+； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 10.87 (1 H, br. s.), 9.50-9.55 (1 H, m), 7.62-7.69 (2 H, m), 7.40-7.57 (5 H, m), 7.29-7.36 (2 H, m), 7.22-7.28 (1 H, m), 7.16 (1 H, br. s.), 5.25 (1 H, d), 3.30-3.32 (1 H, m), 2.75-2.86 (1 H, m), 2.44-2.48 (1 H, m), 2.06-2.34 (3 H, m), 1.51-1.77 (4 H, m)； [α]D = -114.4° (8.04 mg/mL, DMSO).
【０１７２】
実施例1
((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル(4-(ホスホノオキシ)フェニル)アセテート
【化５５】
2015531792.tif 000057
(1)
製造物1A：(2R,3S)-N1-((S)-1-((メチルチオ)メチル)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化５６】
2015531792.tif 000058
(1A)
DMF(0.5 mL)中の化合物B(0.020 g, 0.037 mmol)の溶液に、Cs2CO3(0.036 g, 0.111 mmol)を加えた。該反応混合液を、窒素下で10分間攪拌して、次いで(クロロメチル)(メチル)スルファン(8.90 mg, 0.092 mmol)を加えた。該反応混合液を、窒素下で室温にて2時間攪拌して、次いでEtOAc(3 mL)で希釈し、食塩水(2 x 2 mL)で洗浄して、乾燥させて(Na2SO4)、真空下にて45℃で濃縮した。粗製物質を、Prep-TLC(SiO2, 50% EtOAc/石油エーテル)により精製して、表題化合物(15 mg)を得て、これを次の工程で使用した。MS(ES)：m/z = 603 [M+H]+.
【０１７３】
製造物1B：(2R,3S)-N1-((S)-1-(クロロメチル)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化５７】
2015531792.tif 000059
(1B)
DCM(0.5 mL)中の製造1A(0.015 g, 0.025 mmol)の溶液に、トリエチルアミン塩酸塩(5.14 mg, 0.037 mmol)を加えた。該反応混合液を、室温にて5分間攪拌して、次いで塩化スルフリル(2.53 μl, 0.031 mmol)を、窒素下に0℃で滴加した。該反応混合液を、室温にて2時間攪拌して、次いで減圧下において10℃で濃縮した。得られる粗製試料を、さらなる精製をせずに、次の工程へとすすめた：MS(ES)：m/z = 587 [M+H]+.
【０１７４】
製造物1C：((S)-3-((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-1−イル)メチル 2-(4-((ジ-tert-ブトキシホスホリル)オキシ)フェニル)アセテート
【化５８】
2015531792.tif 000060
(1C)
DMF(0.5 mL)中の製造物1B(0.015 g, 0.025 mmol)の溶液に、2-(4-((ジ-tert-ブトキシホスホリル)オキシ)フェニル)酢酸(0.015 g, 0.044 mmol)、Cs2CO3(0.035 g, 0.107 mmol)、ヨウ化ナトリウム(3.80 mg, 0.025 mmol)を加えた。該反応混合液を、室温で10分間窒素雰囲気下において攪拌した。該混合液を、次いで水(5 mL)で処理して、EtOAc(3 x 3 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、乾燥させて(Na2SO4)、濾過して、45℃で濃縮乾固させた。粗製物質を、分取逆相HPLCにより精製して、製造物1C(0.020 g)を得た：MS(ES)：m/z = 899 [M+H]+.
【０１７５】
実施例1
DCM(0.5 mL)中の製造物1C(0.020 g, 0.022 mmol)の溶液に、0℃で3当量の1M HCl(エーテル溶液中)を加えた。該反応混合液を、室温で窒素雰囲気下において4時間攪拌し、次いでさらに2当量の1M HCl(エーテル溶液中)を、該反応混合液に加えて、攪拌を、室温でさらに2時間継続させた。エーテル(2当量)中の1M HClを最後に添加して、該反応混合液を、該出発物質が消失するまでさらに2時間攪拌した。該溶媒を、窒素流下で除去して、得られる粗生成物を減圧下で乾燥させた。粗製物質を、分取逆相HPLC(カラム：Symmetry C18(300 x 19)mm, 7 micron, 流速：17 mL/分, 移動相 A：0.1% TFA/水, 移動相 B：ACN)により精製して、実施例1(0.009 g, 49%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.58(d, J=7.2 Hz, 1H), 7.66-7.76(m, 3H), 7.40-7.59(m, 6H), 7.28(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.15(br s, 1H), 7.00(s, 4H), 5.94(d, J=10.4 Hz, 1H), 5.81(d, J=10.4 Hz, 1H), 5.39(d, J=7.2 Hz, 1H), 2.77-2.85(m, 1H), 2.08-2.38(m, 4H), 1.50-1.76(m, 5H), 1.20-1.31(m, 3H)；HPLC：RT = 11.765 min(カラム：XBridge フェニル(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：水中で0.05% TFA(pH 2.5)(低濃度のNH3により調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 787(M+H)+.
【０１７６】
実施例2
((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 4-((ホスホノオキシ)メチル)ベンゾエート
【化５９】
2015531792.tif 000061
(2)
製造物2A：((S)-3-((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-1−イル)メチル 4-(((ジ-tert-ブトキシホスホリル)オキシ)メチル)ベンゾエート
【化６０】
2015531792.tif 000062
(2A)
製造物1B(30 mg, 0.051 mmol)、4-(((ジ-tert-ブトキシホスホリル)オキシ)メチル)安息香酸(30.6 mg, 0.089 mmol)、Cs2CO3(69.5 mg, 0.213 mmol)の溶液を、DMF(1 mL)中で合わせて、室温にて2時間攪拌した。次いで、該反応混合液を、水(10 mL)およびEtOAc(30 mL)により希釈した。該層を分離して、該水層を、EtOAc(2 x 20 mL)で抽出した。合わせた有機抽出液を、食塩水(20 mL)で洗浄して、乾燥させ(Na2SO4)、濾過して、真空濃縮した。粗製物質を、分取TLC(SiO2, 50% EtOAc/石油エーテル)により精製して、製造物2A(22 mg, 0.015 mmol, 28.9%収率)を得て、これを次の工程に直接使用した。MS(ES)：m/z = 899(M+H)+.
【０１７７】
実施例2
窒素下で無水DCM(0.5 mL)中の製造2A(22 mg, 0.024 mmol)の攪拌溶液に、室温にてエーテル(0.245 mL, 0.245 mmol)中で1N HClを加えた。2時間後に、別の1N HCl/エーテル(0.5 mL)を加えて、該反応混合液を、45分間攪拌した。さらなる1N HCl/エーテル(0.5 mL)を、1時間後に添加した。該反応混合液を、出発物質が消費されるまで攪拌した。得られる反応混合液を、濃縮して、該得られる粗製生成物を、分取逆相HPLC(カラム：Symmetry C18(300 x 19)mm, 7 micron, 流速：17 mL/分, 移動相 A：0.1% TFA(水中), 移動相 B：ACN)により精製して、実施例2(3.6 mg, 4.30 μmol, 17.58%収率)を白色固体として得た。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.58(d, J=7.28 Hz, 1H),7.86- 7.89(m, 1H), 7.75-7.82(m, 1H), 7.64-7.73(m, 3H), 7.31-7.53(m, 9H)7.12-7.17(m, 1H), 6.10-6.17(m, 2H), 5.45(d, J=7.2 Hz, 1H), 4.91-4.93(m, 2H), 2.77-2.85(m, 1H), 2.32-2.38(m,1H), 2.08-2.30(m, 3H), 1.50-1.76(m, 5H)；HPLC：RT = 9.462 min(カラム：SunFire C18(4.6 x 150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水(低濃度のNH3でpH2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 787(M+H)+.
【０１７８】
実施例3
(3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 3-(2,4-ジメチル-6-(ホスホノオキシ)フェニル)-3-メチルブタノエート
【化６１】
2015531792.tif 000063
(3)
製造物3A：2-(4-ヒドロキシ-2-メチルブタン-2−イル)-3,5-ジメチルフェノール
【化６２】
2015531792.tif 000064
(3A)
0℃でTHF(20 mL)中で4,4,5,7-テトラメチルクロマン-2-オン(2.7 g, 13.22 mmol)の攪拌溶液に、15分間かけてゆっくりとTHF(33.0 mL, 66.1 mmol)中の1M LAHを加えて、該反応混合液を、2時間かけて室温まで昇温させた。該反応混合液を、1.5N HClでクエンチして、減圧下で濃縮して、次いでEtOAcで(100 mL)希釈した。有機層を、食塩水(3 x 40 mL)で洗浄して、無水Na2SO4で乾燥させて、濾過して、真空濃縮した。得られる残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して(SiO2,ヘキサン中で20% EtOAc)、製造物3A(1.72 g, 8.26 mmol, 62.5%収率)を、粘性油油状物として得た。１H NMR(400 MHz, CHCl3-d)δ ppm 6.50(d, J=0.75 Hz, 1H)6.35(s, 1H)3.61(t, J=7.15 Hz, 2H)2.47(s, 3H)2.21(t, J=7.15 Hz, 2H)2.18(s, 3H)1.56(s, 6H).
【０１７９】
製造物3B：2-(4-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-2-メチルブタン-2−イル)-3,5-ジメチルフェノール
【化６３】
2015531792.tif 000065
(3B)
0℃でDMF(10 mL)中の製造物3A(1.72 g, 8.26 mmol)の攪拌溶液に、tert-ブチルクロロジメチルシラン(1.493 g, 9.91 mmol)およびイミダゾール(1.405 g, 20.64 mmol)を加えて、該反応混合液を、室温まで3時間昇温させた。該反応混合液を、減圧下に濃縮して、EtOAc(20 mL)で希釈して、食塩水(2 x 20 mL)で洗浄して、次いで無水 Na2SO4上で乾燥させて、真空濃縮した。得られた褐色残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して(SiO2, 30% EtOAc/ヘキサン)、製造物3B(2.5 g, 7.75 mmol, 94%収率)をオフホワイトの固体として得た。１H NMR(400 MHz, CHCl3-d)δ ppm 6.48(d, J=0.50 Hz, 1H)6.40(d, J=1.50 Hz, 1H)5.53(s, 1H)3.59(t, J=6.88 Hz, 2H)2.45(s, 3H)2.18(s, 3H)2.11(t, J=7.00 Hz, 2H)1.55(s, 6H)0.87(s, 9H)0.03(s, 6H).
【０１８０】
製造物3C：ジベンジル 2-(4-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-2-メチルブタン-2−イル)-3,5-ジメチルフェニルリン酸塩
【化６４】
2015531792.tif 000066
(3C)
THF(6 mL)中の製造物3B(0.6 g, 1.860 mmol)およびカリウム 2-メチルプロパン-2-オレエート(0.230 g, 2.046 mmol)の攪拌溶液に、テトラベンジル二リン酸塩(1.102 g, 2.046 mmol)を加えて、該反応混合液を、60℃で終夜加熱した。該反応混合液を、次いで減圧下で濃縮して、EtOAcで希釈して、食塩水(2x10 mL)で洗浄した。該有機層を、Na2SO4上で乾燥させて、濾過して、真空濃縮した。得られた残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して(SiO2, 20% EtOAc/ヘキサン)、製造物3C(0.475 g, 0.815 mmol, 43.8%収率)を淡黄色液体として得た。１H NMR(400 MHz, CHCl3-d)δ ppm 7.30-7.36(m, 10H)7.09-7.12(m, 1H)6.70-6.74(m, 1H)5.12(d, J=8.28 Hz, 4H)3.49(t, J=7.40 Hz, 2H)2.51(s, 3H)2.18(s, 3H)2.10(t, J=7.40 Hz, 2H)1.53(s, 6H)0.83-0.85(m, 9H),)0.03(s, 6H).
【０１８１】
製造物3D：3-(2-(ビス(ベンジルオキシ)ホスホリルオキシ)-4,6-ジメチルフェニル)-3-メチルブタン酸
【化６５】
2015531792.tif 000067
(3D)
0℃でアセトン(10 mL)中の製造物3C(0.288 g, 0.494 mmol)の攪拌溶液に、ヨウ化カリウム(0.328 g, 1.977 mmol)を加えて、該反応混合液を10分間攪拌した。三酸化クロム(1.35 M ジョーンズ試薬)(1.464 mL, 1.977 mmol)を、次いでゆっくりと加えて、該反応混合液を、4時間室温まで昇温させた。該反応混合液を、減圧下で濃縮して、EtOAc(10 mL)で希釈して、食塩水(3x20 mL)で洗浄して、無水Na2SO4で乾燥させ、次いで真空濃縮した。得られた残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して(SiO2, 30% EtOAc/ヘキサン)、製造物3D(0.152 g, 0.315 mmol, 63.7%収率)を淡黄色固体として得た。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 11.78(s, 1H)7.35-7.40(m, 9H)6.93(s, 1H)6.75(s, 1H)5.15(d, J=8.28 Hz, 4H)2.80(s, 2H)2.49(s, 3H)2.12(s, 3H)1.52(s, 6H).
【０１８２】
製造物3E：((S)-3-((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-1−イル)メチル 3-(2-((ビス(ベンジルオキシ)ホスホリル)オキシ)-4,6-ジメチルフェニル)-3-メチルブタノエート
【化６６】
2015531792.tif 000068
(3E)
0℃でDCM(2 mL)中の製造物1A(69 mg, 0.115 mmol)の攪拌溶液に、トリエチルアミン塩酸塩(23.64 mg, 0.172 mmol)および塩化スルフリル(0.279 ml, 3.44 mmol)を滴加した。該反応混合液を、1時間室温まで昇温させた。該反応混合液を、次いで室温で窒素雰囲気下において減圧濃縮して、直ぐに次の工程に用いた。上記の得られた中間体を、DMF(2 mL)に溶解して、製造物3D(152 mg, 0.315 mmol)、炭酸セシウム(187 mg, 0.573 mmol)を室温にて加えて、該反応混合液を、4時間攪拌した。該反応混合液を、次いで室温にて減圧下に濃縮して、EtOAc(5 mL)で希釈して、食塩水(2 x 10 mL)で洗浄した。該有機層を、乾燥させて(Na2SO4)、濾過して、次いで真空濃縮した。得られた該残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して(SiO2, 30% EtOAc/ヘキサン)、製造物3E(100 mg, 0.096 mmol, 84%収率)をオフホワイトの固体として得た。HPLC RT：2.330 min.(Column-Ascentis Express C8 (5x2.1mm-2.7μm), M相 A：2% ACN-98% H2O-10mM NH4COOH, M相 B：98%ACN−2%H2O-10mM NH4COOH, 流速= 1mL/分). MS(ES)：m/z = 1037 [M+H]+.
【０１８３】
実施例3
エタノール(2 mL)中の製造物3E(75 mg, 0.072 mmol)の攪拌溶液に、窒素雰囲気下で10% Pd/C(30 mg, 0.282 mmol)を加えた。次いで、該反応混合液を、水素雰囲気下で20分間攪拌した。該反応混合液を、CELITE(登録商標)パッドを通して濾過して、減圧下で濾液を濃縮した。粗製残留物を、分取逆相HPLC(Inertsil ODS(4.6x250)mm, 5 micron, 移動相 A：0.1% TFA/水：アセトニトリル(90：10), 移動相 B：メタノール, 流速：1mL/min)により精製した。適切な画分を凍結乾燥することにより、実施例3(12.5 mg)をオフホワイトの固体として得た。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.61(d, J=7.78 Hz, 1H)7.59-7.69(m, 2H)7.50-7.58(m, 3H)7.37-7.49(m, 3H)7.29-7.37(m, 2H)7.15(s, 1H)7.09(d, J=8.28 Hz, 1H)6.51(s, 2H)5.95(d, J=10.54 Hz, 1H)5.38(d, J=7.78 Hz, 1H)5.31(d, J=10.29 Hz, 1H)3.02(d, J=15.81 Hz, 2H)2.77-2.87(m, 2H)2.31(s, 3H)2.11-2.22(m, 3H)2.06(s, 3H)1.54-1.75(m, 5H)1.40(s, 6H)；HPLC：RT = 11.331 min(SunFire C18(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水(アンモニアによりpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5)移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5),流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 857 [M+H]+.
【０１８４】
実施例4
((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 2-メチルアラニネート
【化６７】
2015531792.tif 000069
(4)
製造物4A：クロロメチル-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-2-メチルプロパノエート
【化６８】
2015531792.tif 000070
(4A)
DCM(10 mL)および水(5 mL)中の2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-2-メチルプロパン酸(1 g, 4.92 mmol)、炭酸ナトリウム(2.61 g, 24.60 mmol)およびテトラブチルアンモニウム硫酸水素塩(0.334 g, 0.984 mmol)の攪拌溶液に、0℃でクロロ硫酸クロロメチル(1.624 g, 9.84 mmol)を加えた。該反応混合液を、終夜室温へ昇温させた。混合液を、DCM(10 mL)で希釈して、水(10 mL)を加えて、該有機層を分離して、食塩水(2 x 10 mL)で洗浄して、無水Na2SO4で乾燥させた。該混合液を、濾過して、真空で濃縮して、得られる残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して(SiO2, 0〜10% EtOAc/ヘキサン)、製造物4A(0.8 g, 3.18 mmol, 64.6%収率)をオフホワイトの固体として得た：1H NMR(400 MHz, クロロホルム-d)δ ppm 5.75(s, 2H), 4.90(br s., 1H), 1.51(s, 6H), 1.43(s, 9H).
【０１８５】
製造物4B：ヨードメチル-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-2-メチルプロパノエート
【化６９】
2015531792.tif 000071
(4B)
アセトン(2 mL)中の製造物4A(0.2 g, 0.795 mmol)の攪拌溶液に、ヨウ化ナトリウム(0.476 g, 3.18 mmol)を加えた。該反応混合液を、室温で終夜攪拌した。該混合液を、EtOAc(10 mL)で希釈して、水(15 mL)を加えて、該有機層を分離して、食塩水(2x10mL)で洗浄して、無水Na2SO4で乾燥させた。該混合液を、濾過して、真空で濃縮して、製造物4B(0.21 g, 0.612 mmol, 77%収率)を褐色の液体として得た。１H NMR(400 MHz, CHCl3-d)δ ppm 5.96(s, 2 H), 4.88(br s., 1H), 1.47(s, 6H), 1.44(s, 9H).
【０１８６】
製造物4C：((S,Z)-3-((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-1−イル)メチル 2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-2-メチルプロパノエート
【化７０】
2015531792.tif 000072
(4C)
DMF(1 mL)中の化合物B(20 mg, 0.037 mmol)および炭酸セシウム(24.02 mg, 0.074 mmol)の混合液に、DMF(0.5 mL)中の製造物4B(63.3 mg, 0.184 mmol)の溶液を加えた。該反応混合液を、室温にて終夜攪拌した。水(5 mL)を、該反応混合液に加えて、該混合液を、EtOAc(3 x 5 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、無水Na2SO4で乾燥させて、濾過して、濃縮して、乾固させた。粗製物質を、分取-TLC(60% EtOAc/ヘキサン)により精製して、製造物4C(14 mg, 0.018 mmol, 50%収率)をオフホワイトの固体として得た。HPLC RT：2.003 min(カラム：ZORBAX(登録商標) SB C18(4.6x50)mm 5μm, ポジティブモードM相 A：10% MeOH〜90% H2O-0.1% TFA M相 B：90% MeOH-10% H2O-0.1% TFA 流速：5 mL/分). MS(ES)：m/z = 758 [M+H]+. 
【０１８７】
実施例4
0℃でDCM(0.5 mL)中の製造物4C(28 mg, 0.037 mmol)の溶液に、ジオキサン(1 mL, 0.111 mmol)中の4M HClを滴加した。該混合液を、室温まで昇温させて、24℃で4時間攪拌した。該反応混合液を、次いで濃縮して、乾固させた。得られた黄色固体を、水/ジエチルエーテル(4 mL, 1：1)の混合液中にとり、目的の化合物を水に抽出して、不純物をジエチルエーテル層で洗い流した。該水層を、凍結乾燥させて、実施例4(19 mg, 0.029 mmol, 78%収率))をオフホワイトの固体として得た。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.63(d, J=7.28 Hz, 1 H), 8.45(br. s., 3 H), 7.74-7.84(m, 2 H), 7.67(br. s., 1 H), 7.54-7.61(m, 3 H), 7.43-7.52(m, 3 H), 7.38-7.42(m, 1 H), 7.16(br. s., 1 H), 6.17(d, J=10.79 Hz, 1 H), 5.83(d, J=10.54 Hz, 1 H), 5.43(d, J=7.28 Hz, 1 H), 2.77-2.87(m, 1 H), 2.15(dd, J=19.07, 10.04 Hz, 4 H), 1.52-1.76(m, 5 H), 1.43(s, 2 H)1.31(s, 3 H), 1.27(s, 3 H). HPLC：RT = 10.054 min(SunFire C18(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水 (pH 2.5), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5)流速：1mL/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 658 [M+H]+.
【０１８８】
実施例5
((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル L-アラニネート
【化７１】
2015531792.tif 000073
(5)
製造物5A：(S)-クロロメチル 2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)プロパノエート
【化７２】
2015531792.tif 000074
(5A)
氷/水浴において、冷却したDCM(20mL)および水(20 mL)中の(S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)プロパン酸(1g, 5.29mmol)、テトラブチルアンモニウム硫酸水素塩(0.359g, 1.057mmol)およびNa2CO3(2.80g, 26.4mmol)の激しく攪拌した混合液に、クロロ硫酸クロロメチル(1.09 mL, 10.57 mmol)を4分間にわたりゆっくりと加えた。氷/水浴において30分間攪拌後、冷却浴を取り除いて、該反応液を、室温で攪拌した。16時間攪拌後、室温にて反応を、水で希釈して、DCMで抽出した。該水層をDCMで逆抽出して、該有機層を合わせて、MgSO4上で乾燥させて、濾過して、濃縮し、製造物5A(1.64 g)を得た。
【０１８９】
製造物5B：(S)-((S,Z)-3-((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-1−イル)メチル 2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)プロパノエート
【化７３】
2015531792.tif 000075
(5B)
DMF(2 mL)中の化合物B(50 mg, 0.092 mmol)およびK2CO3(38.2 mg, 0.277 mmol)の懸濁液を、製造物5A(54.8 mg, 0.230 mmol)で処理して、該反応を、室温で終夜攪拌した。該反応を、水(10 mL)およびEtOAc(10 mL)で希釈した。該層を分離して、該有機層を、水で1回洗浄して、乾燥させて(Na2SO4)、濾過した後に、濃縮乾固させた。生成物を、少量のDCMに溶解して、フラッシュクロマトグラフィー(SiO2, 0% 酢酸エチル/ヘキサン〜70% 酢酸エチル/ヘキサン, 24 g カラム, 30 min グラジエント)により精製して、製造物5B(28 mg, 40.8%)を得た。HPLC RT = 2.918 min(CHROMOLITH(登録商標)SpeedROD, 5.0um, 4.6mm x 50mm, 10〜90% メタノール水溶液(0.1% TFAを含む), 4 min グラジエント, 220 nmでモニター). MS(ES)：m/z = 744.5 [M+H+].
【０１９０】
実施例5
DCM(1 mL)中の製造物5B(19 mg, 0.026 mmol)の溶液を、ジオキサン(0.064 mL, 0.255 mmol)中の4N HClで処理して、室温で4時間攪拌した。得られる懸濁液を濃縮して、乾固させた。粗反応生成物を、少量のMeOHに溶解して、逆相HPLC(YMC ODS C18 5 μm 20 x 100mm, 10〜90% メタノール水溶液(0.1% TFAを含む), 20 mL/分, 20 min グラジエント, 220 nmでモニター)により精製した。生成物(保持時間=12.838分)を単離して、凍結乾燥により乾固させて、実施例5(7.3 mg, 36.3%)を得た。HPLC RT = 7.075 min(Xbridge フェニル 3.5 μm, 3 x 150 mm, 10% 95/5 水/ACN(0.05% TFAを含む)〜100% 5/95 水/ACN(0.05% TFAを含む), 15分 グラジエント, 流速 = 0.5 mL/分, 220および254 nmでモニター). MS(ES)：m/z = 644.4 [M+H+]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 9.61(d, J=7.3 Hz, 1H), 8.27(br. s., 3H), 7.83-7.71(m, 2H), 7.64(br. s., 1H), 7.60-7.52(m, 3H), 7.51-7.42(m, 3H), 7.37(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.14(s, 1H), 6.20(d, J=10.6 Hz, 1H), 5.73(d, J=10.6 Hz, 1H), 5.41(d, J=7.3 Hz, 1H), 4.10(br. s., 1H), 2.87-2.77(m, 1H), 2.46-2.37(m, 2H), 2.29-2.05(m, 3H), 1.78-1.48(m, 4H), 1.16(d, J=7.3 Hz, 3H).
【０１９１】
実施例6
((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル L-バリネート
【化７４】
2015531792.tif 000076
(6)
製造物6A：(S)-クロロメチル 2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチルブタノエート
【化７５】
2015531792.tif 000077
(6A)
氷/水浴中で冷却したDCM(80 mL)および水(80 mL)中の(S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-メチルブタン酸(4g, 18.41mmol)、テトラブチルアンモニウム硫酸水素塩(1.25g, 3.68 mmol)、およびNa2CO3(9.76 g, 92 mmol)の激しく攪拌した混合液に、クロロ硫酸クロロメチル(3.8 mL, 36.8 mmol)を4分かけてゆっくりと加えた。氷/水浴において30分間攪拌後に、冷却浴を取り外して、該反応液を室温で攪拌した。16時間攪拌後に、該反応を、室温にて水により希釈して、DCMで抽出した。該水層をDCMで逆抽出して、該有機層を合わせて、MgSO4上で乾燥させて、濾過して、濃縮した。粗製物質(5.45g)を精製せずに使用した。
【０１９２】
製造物6B：(S)-((S,Z)-3-((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-1−イル)メチル 2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチルブタノエート
【化７６】
2015531792.tif 000078
(6B)
DMF(2 mL)中の化合物 B(50 mg, 0.092 mmol)およびK2CO3(38.2 mg, 0.277 mmol)の懸濁液を、製造物6A(61.2 mg, 0.230 mmol)で処理して、該反応液を、室温で終夜攪拌した。18時間後に、追加の製造物6A(61.2 mg, 0.230 mmol)およびK2CO3(38.2 mg, 0.277 mmol)を加えて、該反応液を再度、終夜攪拌した。該反応液を、次いで水(10 mL)およびEtOAc(10 mL)で希釈した。該層を分離して、該有機層を、水で1回洗浄して、乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、次いで濃縮して乾固させた。粗製生成物を、少量のDCMに溶解して、フラッシュクロマトグラフィー(SiO2, 0% 酢酸エチル/ヘキサン〜70% 酢酸エチル/ヘキサン, 24 g カラム, 30 min グラジエント)により精製して、製造物6B(19 mg, 26.7%)を得た。HPLC RT = 3.128 min(CHROMOLITH(登録商標)SpeedROD, 5.0um, 4.6mm x 50mm, 10〜90% メタノール水溶液(0.1% TFAを含む), 4 min グラジエント, 220 nmでモニター).  MS(ES)：m/z = 772.5 [M+H+].
【０１９３】
実施例6
DCM(1 mL)中の製造物6B(19 mg, 0.025 mmol)の溶液を、ジオキサン(0.062 mL, 0.246 mmol)中の4N HClで処理して、室温で4時間攪拌した。得られる懸濁液を、濃縮乾固させた。粗製反応生成物を、少量のMeOHに溶解して、逆相HPLC(YMC ODS C18 5 μm 20 x 100mm, 10〜90% メタノール水溶液(0.1% TFAを含む), 20 mL/分, 20 min グラジエント, 220 nmでモニター)により精製した。生成物(保持時間 = 13.726分)を単離して、凍結乾燥して、乾固させて、実施例6(7.3 mg, 35.9%)を得た。HPLC RT = 7.333 min(Xbridge フェニル 3.5 μm, 3 x 150 mm, 10% 95/5 水/ACN(0.05% TFAを含む)〜100% 5/95 水/ACN(0.05% TFAを含む), 15分 グラジエント, 流速 = 0.5 mL/分, 220および254 nmでモニター).  MS(ES)：m/z = 672.4 [M+H+]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 9.64(d, J=7.3 Hz, 1H), 8.34(br. s., 3H), 7.81-7.74(m, 2H), 7.65(br. s., 1H), 7.61-7.53(m, 4H), 7.51-7.42(m, 4H), 7.41-7.37(m, 1H), 7.13(br. s., 1H), 6.27(d, J=10.8 Hz, 1H), 5.65(d, J=10.6 Hz, 1H), 5.40(d, J=7.3 Hz, 1H), 3.96(br. s., 1H), 2.84-2.76(m, 1H), 2.48-2.39(m, 2H), 2.30-2.06(m, 4H), 2.04-1.92(m, 1H), 1.74-1.46(m, 4H), 0.80(d, J=7.0 Hz, 3H), 0.76(d, J=7.0 Hz, 3H).
【０１９４】
実施例7
((3S)-3-(((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-1−イル)メチル 1-アミノシクロプロパンカルボキシレート
【化７７】
2015531792.tif 000079
(7)
製造物7A：((S)-3-((2R,3S)-3-カルバモイル-6,6,6-トリフルオロ-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-1−イル)メチル 1-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)シクロプロパンカルボキシレート
【化７８】
2015531792.tif 000080
(7A)
DMF(1 mL)中の化合物B(0.015 g, 0.028 mmol)の溶液に、K2CO3(7.64 mg, 0.055 mmol) を加えて、該反応混合液を、窒素雰囲気下において10分間室温で攪拌した。次いで、DMF中のクロロメチル 1-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)シクロプロパンカルボキシレート(0.035 g, 0.138 mmol)を加えて、混合液を、終夜室温で攪拌した。追加のクロロメチル 1-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)シクロプロパンカルボキシレート(0.035 g, 0.138 mmol)およびK2CO3(7.64 mg, 0.055 mmol)を加えて、混合液を室温にて終夜攪拌した。粗製混合液を、EtOAcで希釈して、水(2 x 1 mL)で洗浄した。EtOAc層を、乾燥させて(Na2SO4)、濾過して、濃縮して、乾固させた。粗製生成物を、分取TLC(50% EtOAc/石油エーテル)を用いて精製して、製造物7A(12 mg)を得た。MS(ES)：m/z = 756(M+H)+.
【０１９５】
実施例7
−10℃でDCM(0.5 mL)中の製造物7A(12 mg, 0.16 mmol)の溶液に、ジオキサン(0.2 mL)中で1M HCl溶液を加えた。該反応混合液を、−10℃で2時間攪拌して、次いで追加の1M HCl/ジオキサン(0.2 mL)を0℃で加えた。1時間後に、該反応混合液を濃縮して、分取逆相HPLC(TFA/MeCN)により精製して、実施例7(5 mg)を得た。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.57(d, J=7.03 Hz, 1H), 8.28-8.72(m, 1H), 7.77(d, J=3.51 Hz, 2H), 7.63-7.69(m, 1H), 7.53-7.60(m, 3H), 7.42-7.52(m, 3H), 7.38(s, 1H), 7.15(br s, 1H), 6.09(d, J=10.54 Hz, 1H), 5.82(d, J=10.54 Hz, 1H), 5.42(d, J=7.2 Hz, 1H), 2.79-2.98(m, 2H), 2.06-2.29(m, 3H), 1.47-1.82(m, 5H), 1.06-1.30(m, 5H)；HPLC：RT = 11.050 min(SunFire C18(4.6 x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水(NH3でpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1 mL/分, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 656 [M+H]+.
【０１９６】
実施例8
(2S,3R)-N-((2-アミノエチル)スルファニル)-N'-((3S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化７９】
2015531792.tif 000081
(8)
製造物8A：tert-ブチル(2-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)チオ)エチル)カルバメート
【化８０】
2015531792.tif 000082
(8A)
MeOH(1 mL)中の硝酸銀(23.49 mg, 0.138 mmol)の懸濁液を、ジ-tert-ブチル(ジスルファンジイルビス(エタン-2,1-ジイル))ジカルバメート(48.7 mg, 0.138 mmol)で処理した。反応混合液を、30分間攪拌して、次いで化合物B(25 mg, 0.046 mmol)およびTEA(0.019 mL, 0.138 mmol)を加えて、淡黄色の溶液を得た。18時間後に、該反応混合液を、真空下において濃縮した。赤色の粗製油状物を、少量のDCMに溶解して、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して(SiO2, 0%〜50% EtOAc(ヘキサン中))、tert-ブチル(2-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)チオ)エチル)カルバメートを得た。MS(ES)：m/z = 718(M+H)+.
【０１９７】
実施例8
DCM(2 mL)中の製造物8A(44 mg, 0.061 mmol)溶液を、0℃でTFA(0.236 mL, 3.07 mmol)により処理した。該反応混合液を、室温へ昇温させて、4時間攪拌した。該反応混合液を、次いで濃縮して、粗製物質を、分取逆相クロマトグラフィー(カラム：Symmetry C18(300x19)mm, 7 micron, 流速：1 mL/分, 移動相 A：0.1% TFA/水, 移動相 B：ACN)により精製して、実施例8(19.6 mg, 0.032 mmol, 51.8%収率)を白色固体として得た。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 10.87(s, 1H), 9.58(s, 1H), 9.47(s, 1H), 7.87(br s, 3H), 7.63-7.69(m, 1H), 7.42-7.56(m, 5H), 7.23-7.35(m, 3H), 5.26(d, J=7.28 Hz, 1H), 3.49-3.52(m, 1H), 2.85-3.02(m, 5H), 2.65-2.73(m, 1H), 2.08-2.29(m, 3H), 1.57-1.84(m, 3H), 1.40-1.51(m, 1H)；HPLC：RT = 11.765 min(カラム：SunFire C18(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水(低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 618(M+H)+.
【０１９８】
実施例9
S-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-L-システイン
【化８１】
2015531792.tif 000083
(9)
実施例9A：(2R,2'R)-ジ-tert-ブチル 3,3'-ジスルファンジイルビス(2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)プロパノエート
【化８２】
2015531792.tif 000084
(9A)
THF(10.78 ml)中の(2R,2'R)-ジ-tert-ブチル 3,3'-ジスルファンジイルビス(2-アミノプロパノエート)(1.9 g, 5.39 mmol)の溶液を、トリエチルアミン(1.502 ml, 10.78 mmol)で処理して、室温で10分間攪拌した。二炭酸ジ-tert-ブチル(2.59 g, 11.86 mmol)を加えて、混合液を室温で12時間攪拌した。該反応混合液を、酢酸エチル(100 mL)で希釈して、1N HCl(2 x 50 mL)を用いて洗浄した。該有機層を、次いでH2O(50 mL)および食塩水(50 mL)で洗浄した。該有機層を、次いで無水Na2SO4上で乾燥させて、濾過し、濃縮して、淡黄色の油状物を得て、これをさらにフラッシュクロマトグラフィー(SiO2, 酢酸エチル/ヘキサン)により精製して、(2R,2'R)-ジ-tert-ブチル 3,3'-ジスルファンジイルビス(2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)プロパノエート)(1.4 g, 2.53 mmol, 47.0%収率)を白色固体として得た。１H NMR(400 MHz, CHCl3-d)δ ppm 5.33(br s, 2H), 4.46(br s, 2H), 3.08-3.27(m, 4H), 1.48(s, 18H), 1.45(s, 18H).
【０１９９】
実施例9B：(R)-tert-ブチル 2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((S)-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)チオ)プロパノエート
【化８３】
2015531792.tif 000085
(9B)
メタノール(5 mL)中の硝酸銀(31.3 mg, 0.184 mmol)の僅かに懸濁した溶液を、製造物9A(102 mg, 0.184 mmol)で処理した。30分間攪拌した後に、化合物B(25 mg, 0.046 mmol)およびTEA(25.7 μl, 0.184 mmol)を加えた。得られる混合液を、室温で終夜攪拌した。該反応を、次いで濃縮乾固させた。粗製生成物を、少量のDCMに溶解して、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して(SiO2, 0% 酢酸エチル/ヘキサン〜60% 酢酸エチル/ヘキサン, 24 g カラム, 40 min グラジエント)、製造物9B(19 mg, 50.4%)を得た。HPLC RT = 3.356 min(CHROMOLITH(登録商標)SpeedROD, 5.0um, 4.6mm x 50mm, 10〜90% メタノール水溶液(0.1% TFAを含む), 4 min グラジエント, 220 nmでモニター). MS(ES)：m/z = 818.5 [M+H+]. 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d)δ 8.40(br. s., 1H), 7.78(s, 1H), 7.64(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.60-7.50(m, 3H), 7.49-7.32(m, 4H), 7.26-7.15(m, 2H), 5.57(d, J=7.7 Hz, 1H), 5.45(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.26(br. s., 1H), 3.45(d, J=14.3 Hz, 1H), 2.88-2.79(m, 1H), 2.72(br. s., 1H), 2.45-2.07(m, 6H), 2.03-1.91(m, 2H), 1.82-1.67(m, 1H), 1.47(d, J=5.1 Hz, 18H).
【０２００】
実施例9
DCM(3 mL)中の製造物9B(18 mg, 0.022 mmol)の溶液を、TFA(0.3 mL, 3.89 mmol)で処理して、室温で8時間攪拌して、次いで濃縮して、乾固させた。粗製反応生成物を、少量のMeOHに溶解して、逆相HPLC(YMC ODS C18 5 μm 20 x 100mm, 10〜90% メタノール水溶液(0.1% TFAを含む), 20 mL/分, 20 min グラジエント, 220 nmでモニター)により精製した。生成物(保持時間=14.069分)を単離して、凍結乾燥して、乾固させて、実施例9(10.3 mg, 60.3%)を得た。HPLC RT = 8.928 min (SunFire C18 3.5μm, 3 x 150 mm, 10% 95/5 水/ACN(0.05% TFAを含む)〜100% 5/95 水/ACN(0.05% TFAを含む), 15 分 グラジエント, 流速 = 0.5 mL/分, 220および254 nmでモニター). MS(ES)：m/z = 622.4 [M+H+]. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ 10.86(s, 1H), 9.60(s, 1H), 9.56(d, J=7.5 Hz, 1H), 8.42(br. s., 3H), 7.65(t, J=7.0 Hz, 1H), 7.57-7.39(m, 5H), 7.32(d, J=7.5 Hz, 2H), 7.28-7.22(m, 1H), 5.25(d, J=7.5 Hz, 1H), 3.98(br. s., 1H), 3.27(dd, J=14.9, 3.6 Hz, 1H), 3.02(dd, J=15.1, 8.9 Hz, 1H), 2.94-2.84(m, 1H), 2.77-2.64(m, 1H), 2.28-2.10(m, 2H), 1.85-1.54(m, 2H), 1.45(d, J=9.2 Hz, 1H).
【０２０１】
実施例10
(2S,3R)-N-((イソブチルアミノ)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化８４】
2015531792.tif 000086
(10)
2-メチルプロパン-1-アミン(0.714 mL, 7.19 mmol)を、化合物A(0.020 g, 0.036 mmol)のエタノール溶液(1.5 mL)に溶解した。次いでホルムアルデヒド(0.535 mL, 7.19 mmol)を、一定に攪拌しながらゆっくりと加えた。該反応混合液を、75℃で48時間加熱した。該反応混合液を、次いで濃縮して、乾固させて、水(5 mL)で希釈して、EtOAcで抽出した。該有機層を合わせて、Na2SO4で乾燥させて、濾過し、濃縮して、乾固させた。粗製物質を、分取逆相HPLC(カラム：Symmetry C18(300x19)mm 7μ, 移動相 A：0.1% TFA/水：アセトニトリル(90：10), 移動相 B：アセトニトリル, 流速：15 mL/分)により精製して、実施例10(0.0082 g, 35.6%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.53(d, J=7.2 Hz, 1H), 8.28-8.48(m, 1H), 7.69-7.80(m, 2H), 7.51-7.59(m, 3H), 7.42-7.49(m, 2H), 7.32-7.38(m, 2H), 5.32(d, J=7.53 Hz, 1H), 4.12-4.20(m, 1H), 3.90-4.09(m, 1H), 3.40(s, 1H), 3.18-3.22(m,1H), 2.82-2.90(m, 1H), 2.29(d, J= 6.8 Hz, 1H), 2.09(m, 6H), 1.57-1.80(m, 4H), 0.85(d, J=4.0 Hz, 6H)；HPLC：RT = 15.808 min(カラム：XBridge フェニル(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水(低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 642(M+H)+.
【０２０２】
実施例11
(2S,3R)-N-((2-アミノエチル)スルファニル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化８５】
2015531792.tif 000087
(11)
製造物11A：tert-ブチル 2-((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-((S,Z)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-3-イルカルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミドチオ)エチルカルバメート
【化８６】
2015531792.tif 000088
(11A)
MeOH(1.2 mL)中の硝酸銀(0.018 g, 0.108 mmol)懸濁液に、ジ-tert-ブチル(ジスルファンジイルビス(エタン-2,1-ジイル))ジカルバメート(0.038 g, 0.108 mmol)を加えて、該混合液を24℃で20分間攪拌した。次いで、化合物A(0.020 g, 0.036 mmol)を、該反応混合液に添加し、その後TEA(0.015 mL, 0.108 mmol)を加えた。4時間攪拌後、混合液を、真空濃縮した。粗製物質を、カラムクロマトグラフィー(SiO2, ヘキサン中で0〜10% EtOAc)により部分精製して、銀に関連する不純物を除去した。粗製物質を、さらに分取TLC(0〜50% EtOAc/ヘキサン)により精製して、製造物11A(0.028 g, 108%)を得た：HPLC：RT = 18.653 min(カラム：XBridge フェニル(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水 (pH 2.5に低濃度のNH3を用いて調整), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 732(M+H)+.
【０２０３】
実施例11
0℃でDCM(1.2 ml)中の製造物11A(0.028 g, 0.038 mmol)の溶液に、TFA(0.147 ml, 1.913 mmol)を加えて、混合液を室温まで昇温させた。24時間攪拌の後に、該反応混合液を、濃縮して、乾固させた。粗製物質を、分取逆相HPLC(カラム：Inertsil ODS(250x19mm)5μ, 移動相 A：0.1% TFA/水, 移動相 B：アセトニトリル, 流速：16 mL/分)により精製して、実施例11(0.008 g, 33.1%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.60(d, J=7.28 Hz, 1H), 9.46(s, 1H), 7.85(br. s., 3H), 7.67-7.78(m, 2H), 7.52-7.59(m, 3H), 7.43-7.50(m, 2H), 7.32-7.38(m, 2H), 5.31(d, J=7.28 Hz, 1H), 3.40(s, 3H), 2.84-3.02(m, 5H), 2.63-2.72(m, 1H), 2.07-2.35(m, 4H), 1.56-1.84(m, 3H), 1.39-1.49(m, 1H).  HPLC：RT = 7.700 min(カラム：SunFire C18(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水(低濃度のNH3を用いてpH2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 632(M+H)+.
【０２０４】
実施例12
S-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-L-システイン
【化８７】
2015531792.tif 000089
(12)
製造物12A：S-tert-ブチル 2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)チオ)プロパノエート
【化８８】
2015531792.tif 000090
(12A)
MeOH(1 mL)中の硝酸銀(8.39 mg, 0.049 mmol)の懸濁液を、製造物9A(37.2 mg, 0.067 mmol)で処理した。混合液を、30分間攪拌して、次いで化合物A(20 mg, 0.036 mmol)およびTEA(10.02 μl, 0.072 mmol)で処理した。2時間後に、別の1.5当量の製造物9A、1.1当量の硝酸銀および1.6当量のTEAを加えて、該反応混合液を、室温で終夜攪拌した。該混合液を、次いで真空濃縮した。この粗製油状物を、少量のDCMに溶解して、フラッシュクロマトグラフィー(SiO2, 0%〜50% EtOAc/ヘキサン)により精製して、製造物12A(30.6 mg, 0.037 mmol, 82%収率)を明褐色の油状物として得た。MS(ES)：m/z = 832 [M+H]+.
【０２０５】
実施例12
DCM(1 mL)中の製造物12A(15 mg, 0.018 mmol)溶液を、0℃でTFA(0.069 mL, 0.902 mmol)により処理した。該反応混合液を、30分間0℃で攪拌して、次いで3.5時間室温に昇温させた。別のTFA(0.069 mL, 0.902 mmol)を、0℃で添加して、該反応混合液を、さらに2時間室温で攪拌した。追加のTFA(0.069 mL, 0.902 mmol)を、0℃で加えて、該反応混合液を、室温で終夜攪拌した。得られる溶液を濃縮して、該残留物を、分取逆相HPLC(カラム：Inertsil ODS(250x19mm)5μ, 移動相 A：0.1% TFA/水, 移動相 B：アセトニトリル, 流速：16 mL/分)により精製して、実施例12(3 mg, 4.44 μmol, 24.62%収率)を、白色粉末として凍結乾燥後に得た。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.57-9.64(m, 2H), 8.41(br s, 3H), 7.66-7.79(m, 2H), 7.52-7.59(m, 3H), 7.44-7.48(m, 2H), 7.32-7.39(m, 2H), 5.31(d, 7.2Hz, 1H), 3.97(br s, 1H), 2.98-3.06(m, 2H), 2.52-2.68(m, 5H), 2.11-2.28(m, 3H), 1.72-1.83(m, 1H), 1.56-1.71(m, 2H), 1.43(t, J=12.30 Hz, 1H), 1.15-1.26(m, 1H)；HPLC：RT = 7.893 min(SunFire C18(4.6 x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水NH3を用いて(pH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1 mL/分, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 676 [M+H]+.
【０２０６】
実施例13
(2S,3R)-N-((2-(ジメチルアミノ)エチル)スルファニル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化８９】
2015531792.tif 000091
(13)
MeOH(1.2 mL)中の硝酸銀(0.183 g, 1.078 mmol)の懸濁液に、2,2'-ジスルファンジイルビス(N,N-ジメチルエタンアミン)(0.112 g, 0.539 mmol)を加えて、該混合液を24℃で20分間攪拌した。次いで、化合物A(0.020 g, 0.036 mmol)を、該反応混合液に添加して、その後TEA(0.025 mL, 0.180 mmol)を加えた。室温で24時間攪拌した後、該混合液を、真空濃縮乾固させた。粗製物質を、カラムクロマトグラフィー(SiO2, 0〜10% EtOAc/ヘキサン)により部分精製して、金属性の不純物を除去した。それを、さらに分取逆相HPLC(カラム：Symmetry C18(300x19)mm 7μ, 移動相 A：0.1% TFA/水, 移動相 B：アセトニトリル, 流速：15 mL/分)により精製して、実施例13(0.0042 g, 17.72%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.60(d, J=7.53 Hz, 1H), 9.45(s, 1H), 9.15(br s, 1H), 7.67-7.78(m, 2H), 7.52-7.59(m, 3H), 7.44-7.50(m, 2H), 7.33-7.38(m, 2H), 5.30(d, J=7.28 Hz, 1H), 3.38-3.44(m, 5H), 3.19-3.27(m, 6H), 2.87-2.96(m, 2H), 2.65-2.69(m, 4H), 2.31-2.35(m, 2H), 1.42-1.71(m, 4H)；HPLC：RT = 9.168 min(カラム：XBridge フェニル(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水(低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 660(M+H)+.
【０２０７】
実施例14
メチル S-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-(((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)カルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサノイル)アミノ)-L-システイナート
【化９０】
2015531792.tif 000092
(14)
製造物14A：メチル 2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-((S,Z)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-3-イルカルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミドチオ)プロパノエート
【化９１】
2015531792.tif 000093
(14A)
MeOH(1 mL)中の硝酸銀(22.89 mg, 0.135 mmol)の懸濁液を、(2R,2'R)-ジメチル 3,3'-ジスルファンジイルビス(2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)プロパノエート)(63.2 mg, 0.135 mmol)で処理した。30分間攪拌した後に、化合物A(25 mg, 0.045 mmol)およびTEA(0.019 mL, 0.135 mmol)を加えて、明黄色の溶液を得た。該反応混合液を、室温で4時間攪拌して、次いで追加の3等量の該ジスルフィド、3当量の硝酸銀、3当量のTEAを加えた。40時間攪拌した後に、該反応混合液を真空濃縮した。粗製物質を、少量のDCMに溶解して、フラッシュクロマトグラフィー(SiO2, 0%〜50% EtOAc/ヘキサン)により精製して、製造物14Aをオフホワイトの固体として得た。MS(ES)：m/z = 790 [M+H]+.
【０２０８】
実施例14
DCM(2 mL)中の製造物14A(56 mg, 0.071 mmol)の溶液を、0℃で、TFA(0.273 mL, 3.55 mmol)で処理した。該反応混合液を、室温まで昇温させて、6時間攪拌した。該反応混合液を、次いで濃縮して、分取HPLC(カラム：XTERRA登録商標RP18(250x4.6)mm, 5 micron, 流速：1 mL/分, 移動相 A：0.1% TFA(水/ACN(90/10)中), 移動相 B：ACN)により精製して、実施例14(19.6 mg, 39.3%)を白色固体として得た。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.56-9.64(m, 2H), 8.54(br. s., 3H), 7.66-7.78(m, 2H), 7.52-7.60(m, 3H), 7.47(m, 2H), 7.32-7.39(m, 2H), 5.32(d, J=7.28 Hz, 1H), 4.14(dd, J=8.28, 4.27 Hz, 1H), 3.76(s, 3 H), 3.31-3.41(m, 3H)3.26(dd, J=15.31, 4.27 Hz, 2H), 3.04(dd, J=15.06, 8.53 Hz, 1H), 2.91(td, J=10.42, 3.26 Hz, 1 H), 2.63-2.73(m, 1H), 2.11-2.28(m, 3H), 1.72-1.84(m, 1H), 1.54-1.71(m, 2H), 1.38-1.48(m, 1H)；MS(ES)：m/z = 690 [M+H]+.
【０２０９】
実施例15
(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-N'-((4-メチル-1-ピペラジニル)メチル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化９２】
2015531792.tif 000094
(15)
エタノール(1.2 mL)中の化合物 A(0.020 g, 0.036 mmol)の溶液に、1-メチルピペラジン(0.720 g, 7.19 mmol)に続いてホルムアルデヒド(0.198 mL, 7.19 mmol)を加えて、該混合液を、75℃で18時間加熱した。該混合液を、減圧下にて濃縮し、水(7 mL)で希釈して、EtOAc(2 x 5 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、無水Na2SO4上で乾燥させて、濾過して、濃縮して乾固させた。粗製物質を、分取逆相HPLC(カラム：Symmetry C18(300x19)mm 7μ, 移動相 A：0.1% TFA in 水：アセトニトリル(90：10), 移動相 B：アセトニトリル, 流速：15 mL/分)により精製して、実施例15(0.0156 g, 64.9%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.57(d, J=7.28 Hz, 1H), 9.4(br s, 1H), 8.61(t, J=5.65 Hz, 1H), 7.66-7.78(m, 2H), 7.52-7.59(m, 3H), 7.43-7.49(m, 2H), 7.33-7.37(m, 2H), 5.31(d, J=7.28 Hz, 1H), 4.03-4.10(m, 1H), 3.93-4.01(m, 1H), 3.40(s, 3H), 2.82-3.01(m, 6H), 2.78(s, 3H), 2.62-2.74(m, 1H), 2.08-2.31(m, 4H), 1.48-1.80(m, 4H)；HPLC：RT = 7.233 min(カラム：SunFire C18(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水(低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 669(M+H)+.
【０２１０】
実施例16
(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-N'-(1-ピペリジニルメチル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化９３】
2015531792.tif 000095
(16)
化合物A(0.020 g, 0.036 mmol)を、ピペリジン(0.712 mL, 7.19 mmol)およびホルムアルデヒド(0.535 mL, 7.19 mmol)の溶液に溶解して、24℃で18時間攪拌した。該混合液を減圧下で濃縮して、水(7 ml)で希釈し、EtOAc(2 x 5 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、無水Na2SO4上で乾燥させて、濾過し、濃縮して、乾固させた。粗製物質を、分取逆相HPLC(カラム：Symmetry C18(300x19)mm 7μ, 移動相 A：0.1% TFA/水：アセトニトリル(90：10), 移動相 B：アセトニトリル, 流速：15 mL/分)により精製して、実施例16(0.0129 g, 54.9%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.60(d, J=7.28 Hz, 1H), 9.45(br s, 1H), 9.37(t, J=6.65 Hz, 1H), 7.67-7.78(m, 2H), 7.52-7.59(m, 3H), 7.44-7.50(m, 2H), 7.32-7.38(m, 2H), 5.32(d, J=7.28 Hz, 1H), 4.39-4.53(m, 2H), 3.40(s, 3H), 2.98-3.06(m, 3H), 2.92(td, J=10.35, 3.39 Hz, 2H), 2.64(td, J=9.98, 3.64 Hz, 2H), 2.13-2.34(m, 4H), 1.52-1.86(m, 7H), 1.22-1.40(m, 2H)；HPLC：RT = 7.527 min(カラム：SunFire C18(4.6x150)mm, 3.5 micron SC/862, 緩衝液：0.05% TFA /水 (低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 654(M+H)+.
【０２１１】
実施例17
(2S,3R)-N-((4-アミノ-1-ピペリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化９４】
2015531792.tif 000096
(17)
実施例17A：tert-ブチル 1-(((2S,3R)-6,6,6-トリフルオロ-3-((S,Z)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e][1,4]ジアゼピン-3-イルカルバモイル)-2-(3,3,3-トリフルオロプロピル)ヘキサンアミド)メチル)ピペリジン-4-イルカルバメート
【化９５】
2015531792.tif 000097
(17A)
エタノール(1.0 mL)中の化合物 A(0.020 g, 0.036 mmol)の溶液に、tert-ブチル ピペリジン-4-イルカルバメート(1.440 g, 7.19 mmol)を加えて、その後ホルムアルデヒド(0.535 mL, 7.19 mmol)を加えて、該混合液を、75℃で18時間加熱した。該混合液を、減圧下で濃縮して、水(7 mL)で希釈して、EtOAc(2x5 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過して、濃縮し、乾固させた。粗製物質を、分取TLC(0〜50% EtOAc/ヘキサン)により精製して、製造物17A：(0.036 g, 129%)を得た：MS(ES)：m/z = 769(M+H)+.
【０２１２】
実施例17
0℃でDCM(2 mL)中の製造物17A(0.036 g, 0.047 mmol)の溶液に、TFA(0.361 mL, 4.68 mmol)を滴加して、混合液を室温へと昇温させた。4時間後に、該反応混合液を濃縮して、乾固させた。粗製物質を、分取逆相HPLC(カラム：Symmetry C18(300x19)mm 7μ, 移動相 A：0.1% TFA/水, 移動相 B：アセトニトリル, 流速：15 mL/分)により精製して、実施例17(0.009 g, 28.7%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.59(d, J=7.28 Hz, 1H), 7.95(br s, 3H), 7.68-7.78(m, 2H), 7.53-7.59(m, 3H), 7.44-7.49(m, 2H), 7.33-7.38(m, 2H), 5.32(d, J=7.53 Hz, 1H), 4.20-4.59(m, 2H), 3.40(s, 3H), 2.89-2.95(m, 2H), 2.66-2.69(m, 1H), 2.15-2.30(m, 4H), 2.01(br s, 2H), 1.47-1.74(m, 9H)1.36-1.46(m, 1H)；HPLC：RT = 6.447 min(カラム：SunFire C18(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水 (低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 669(M+H)+.
【０２１３】
実施例18
(2S,3R)-N-((4-(ジメチルアミノ)-1-ピペリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化９６】
2015531792.tif 000098
(18)
エタノール(1.2 mL)中の化合物 A(0.020 g, 0.036 mmol)の溶液に、N,N-ジメチルピペリジン-4-アミン(0.922 g, 7.19 mmol)を加えて、続いてホルムアルデヒド(0.535 mL, 7.19 mmol)を加えて、該混合液を75℃で18時間加熱した。該混合液を減圧下に濃縮して、水(7 mL)で希釈して、EtOAc(2x5 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、Na2SO4で乾燥させて、濾過して、濃縮して、乾固させた。粗製物質を、分取逆相HPLC(カラム：Symmetry C18(300x19)mm 7μ, 移動相 A：0.1% TFA/水：アセトニトリル(90：10), 移動相 B：アセトニトリル, 流速：15 mL/分)により精製して、実施例18(0.0195 g, 78%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.75(br s, 1H), 9.59(d, J=7.28 Hz, 1H), 7.67-7.79(m, 1H), 7.53-7.59(m, 3H), 7.43-7.50(m, 2H), 7.32-7.38(m, 2H), 5.32(d, J=7.53 Hz, 1H), 4.33(br s, 2H), 3.40(s, 3H), 2.90(t, J=10.54 Hz, 2H), 2.60-2.77(m, 9H), 2.07-2.31(m, 6H), 1.50-1.84(m, 8H).  HPLC：RT =7.854 min(カラム：XBridge フェニル(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水 (低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 697(M+H)+.
【０２１４】
実施例19
(2S,3R)-N-((4-ヒドロキシ-1-ピペリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化９７】
2015531792.tif 000099
(19)
化合物 A(0.020 g, 0.036 mmol)を、MeOH(1.2 mL)中のピペリジン-4-オール(0.727 g, 7.19 mmol)およびホルムアルデヒド(0.535 mL, 7.19 mmol)の溶液に溶解して、75℃で18時間加熱した。該混合液を、濃縮して、水(7 mL)で希釈して、EtOAc(2x5 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、無水Na2SO4で乾燥させて、濾過し、濃縮して、乾固させた。粗製物質を、分取逆相HPLC(カラム：Inertsil ODS-3(250x20)mm 5μ, 移動相 A：0.1% TFA/水, 移動相 B：アセトニトリル, 流速：14 mL/分)により精製して、実施例19(0.019 g, 79%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.61(d, J=7.28 Hz, 1H), 9.38(dd, J=13.18, 6.65 Hz, 2H), 7.72-7.79(m, 1H), 7.67-7.71(m, 1H), 7.52-7.59(m, 3H), 7.44-7.50(m, 2H), 7.33-7.39(m, 2H), 5.32(d, J=7.28 Hz, 1H), 4.42-4.55(m, 2H), 3.93(br s, 1H), 3.40(s, 3H), 3.33(d, J=8.53 Hz, 1H), 3.05-3.22(m, 3H), 2.87-2.96(m, 2H), 2.60-2.69(m, 1H), 2.14-2.35(m, 3H), 1.72-1.99(m, 4H), 1.50-1.72(m, 5H).  HPLC：RT = 7.381 min(カラム：SunFire C18(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水 (pH 2.5に低濃度のNH3を用いて調整), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 670(M+H)+.
【０２１５】
実施例20
(2S,3R)-N-((3-ヒドロキシ-1-ピロリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化９８】
2015531792.tif 000100
(20)
化合物 A(0.020 g, 0.036 mmol)を、MeOH(1.0 mL)中のピロリジン-3-オール(0.626 g, 7.19 mmol)およびホルムアルデヒド(0.535 mL, 7.19 mmol)の溶液に溶解した。次いで、該反応混合液を、75℃で18時間加熱した。該混合液を、次いで減圧下で濃縮して、水(7 mL)で希釈して、EtOAc(2x5 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、無水 Na2SO4上で乾燥させて、濾過して、濃縮して、乾固させた。粗製物質を、分取逆相 HPLC(カラム：SunFire C18(150x19)mm 5μ, 移動相 A：0.1% TFA/水, 移動相 B：アセトニトリル, 流速：14 mL/分)により精製して、実施例20(0.0185 g, 79%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.61(d, J=7.28 Hz, 1H), 9.40(br s, 1H), 7.68-7.79(m, 2H), 7.53-7.60(m, 3H), 7.44-7.50(m, 2H), 7.34-7.38(m, 2H), 5.45(br s, 1H), 5.32(d, J=7.53 Hz, 1H), 4.39-4.62(m, 3H), 3.40(s, 3H), 3.03-3.31(m, 4H), 2.92(t, J=9.41 Hz, 1 H), 2.62(br s, 1H), 2.10-2.32(m, 4H), 1.73-2.00(m, 3H), 1.51-1.72(m, 3H). HPLC：RT = 8.532 min(カラム：XBridge フェニル(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA /水 (低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 656(M+H)+.
【０２１６】
実施例21
(2S,3R)-N-((3-(ジメチルアミノ)-1-ピロリジニル)メチル)-N'-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化９９】
2015531792.tif 000101
(21)
化合物 A(0.020 g, 0.036 mmol)を、MeOH(1.2 mL)中のN,N-ジメチルピロリジン-3-アミン(0.821 g, 7.19 mmol)およびホルムアルデヒド(0.535 mL, 7.19 mmol)溶液に溶解した。該反応混合液を、75℃で18時間加熱した。該混合液を濃縮して、水(7 mL)で希釈して、EtOAc(2x5 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、無水Na2SO4上で乾燥させて、濾過して、濃縮し、乾固させた。粗製物質を、分取逆相 HPLC(カラム：Symmetry C18(250x20mm), 移動相 A：0.1% TFA/水：アセトニトリル(90：10), 移動相 B：アセトニトリル, 流速：15 mL/分) により精製して、実施例21(0.019 g, 77%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.57(d, J=7.28 Hz, 1H), 8.65(br s, 1H), 7.72-7.78(m, 1H), 7.67-7.71(m, 1H), 7.52-7.59(m, 3H), 7.44-7.50(m, 2H), 7.33-7.38(m, 2H), 5.31(d, J=7.53 Hz, 1H), 4.00 - 4.22(m, 2H), 3.40(s, 3H), 2.77-2.91(m, 6H), 2.73(br s, 7H), 2.11-2.28(m, 4H), 1.94(d, J=7.03 Hz, 1H), 1.51-1.80(m, 5H).  HPLC：RT = 8.287 min(カラム：XBridge フェニル(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水 (低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 683(M+H)+.
【０２１７】
実施例22
(2R,3S)-N-((3S)-1-メチル-2−オキソ−5-フェニル-2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ベンゾジアゼピン-3−イル)-N'-(1-ピロリジニルメチル)-2,3-ビス(3,3,3-トリフルオロプロピル)スクシンアミド
【化１００】
2015531792.tif 000102
(22)
化合物A(0.020 g, 0.036 mmol)を、MeOH(1.2 mL)中のホルムアルデヒド(0.535 mL, 7.19 mmol)およびピロリジン(0.595 mL, 7.19 mmol)の溶液に溶解した。該混合液を、室温で18時間攪拌した。該混合液を、次いで濃縮して、乾固させて、水(7 mL)で希釈して、EtOAc(2x5 mL)で抽出した。該有機層を合わせて、無水Na2SO4上で乾燥させて、濾過して、濃縮して、乾固させた。該粗製物質を、分取逆相HPLC(カラム：SunFire C18(150x20)mm 5μ, 移動相 A：10 mM NH4OAc/水：アセトニトリル(90：10), 移動相 B：アセトニトリル, 流速：14 mL/分)により精製して、実施例16(0.0182 g, 79%)を得た：1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 9.55(d, J=7.53 Hz, 1H), 8.51(t, J=6.02 Hz, 1H), 7.67-7.77(m, 2H), 7.52-7.59(m, 3H), 7.43-7.49(m, 2H), 7.33-7.37(m, 2H), 5.31(d, J=7.28 Hz, 1H), 4.13(dd, J=12.42, 6.40 Hz, 1H), 3.95(dd, J=12.55, 5.52 Hz, 1H), 3.40(s, 3H), 2.81-2.89(m, 1H), 2.06-2.30(m, 8H), 1.54-1.68(m, 9H).  HPLC：RT = 14.937 min(カラム：XBridge フェニル(4.6x150)mm, 3.5 micron, 緩衝液：0.05% TFA/水 (低濃度のNH3を用いてpH 2.5に調整した), 移動相 A：緩衝液：アセトニトリル(95：5), 移動相 B：アセトニトリル：緩衝液(95：5), 流速：1ml/min, 220 nmでモニター)；MS(ES)：m/z = 640(M+H)+.
【０２１８】
(生物学的アッセイ）
本発明の化合物の薬理学的特性は、多くの生物学的アッセイによって確認されうる。以下に例示される生物学的アッセイを本発明の化合物で実施した。
【０２１９】
Notch-CBF1 トランス活性化アッセイ
Notch-CBF1(C-プロモーター結合因子I)セルベーストランス活性化アッセイは、放出されたNotch細胞内ドメインフラグメント(NICD)の、CBF1および他の核因子との結合における転写因子として機能する能力に基づいている。ルシフェラーゼアッセイを用いてNotch-CBF1転写活性の拮抗作用を測定した。HeLa子宮頚癌細胞に、切断されたNotch 1、Notch 2、Notch 3、もしくはNotch 4受容体を含むpCDNA3.1/Hygroプラスミド、および4コピーのCBF1結合部位を含むPGL3ルシフェラーゼ受容体ベクターを一時的に同時トランスフェクトする。次いで該細胞を、試験化合物の非存在下または存在下でのNotch-CBF1活性について試験した。DMEM(高グルコース、HEPES含有)、1X グルタミン/ペニシリン/ストレプトマイシンおよび10％ウシ胎仔血清中で維持されているHeLa細胞を、製造元の仕様書に従って、Monster Transfection Kit(Mirus #MIR2906)を用いて、T175フラスコ(4.5 x106 細胞/フラスコ)中において、一時的にトランスフェクトした。表1は、トランスフェクションについての各DNA量を示す。
表1
【表２２】
2015531792.tif 000103
【０２２０】
トランスフェクションの6時間後、細胞をトリプシン処理し、384-ウェルの黒色のPoly-D-リジンコート組織培養プレートに、95 μL アッセイ培地(DMEM(高グルコース、HEPES含有)、1X グルタミン/ペニシリン/ストレプトマイシン、0.0125％BSA、1X 非必須アミノ酸)中、5x103細胞/ウェルの密度で、播種した。5 μM〜8.4x10-5 μM(3倍連続希釈)の最終濃度範囲で試験化合物を含むアッセイ培地(5 μL)を、該細胞に加えた後、該細胞プレートを、37℃および5％CO2で18時間インキュベートした。コントロールウェルには、DMSOビヒクル(総数)か、または0.5 μMの自製(in-house）小分子阻害剤を含めた(バックグラウンド数値)。各サンプルについて2連を用いた。ルシフェラーゼ活性を、製造元の仕様書(Promega, Cat. #：E2550)に従って、50 μl STEADY-GLO(登録商標）ルシフェラーゼ試薬を用いて20分間インキュベートした後に測定し、Envisionプレートリーダー(PerkinElmer, Boston, MA)により分析した。
【０２２１】
化合物のアンタゴニスト効力を、100 x [1-(サンプルの平均-バックグラウンドの平均)/(全体の平均-バックグラウンドの平均)]として表し、ここで、サンプルとは試験化合物の存在下におけるルシフェラーゼ活性であり、バックグラウンドとは小分子阻害剤コントロールの存在下でのルシフェラーゼ活性に等しく、全体はDMSOウェルで誘導されたシグナルである。データを、4つのパラメータロジスティック適合方程式(fit equation）を用いてプロットし、IC50値を、ルシフェラーゼ活性の50％を阻害する化合物の濃度として定義した。
【０２２２】
以下の表2は、上述のNotch-CBF1トランス活性化アッセイで測定した、化合物Aおよび化合物BについてのNotch 1およびNotch 3のIC50値を挙げたものである。表2の結果は、2桁に四捨五入したものである。
表2
【表２３】
2015531792.tif 000104
【０２２３】
ハイスループット(HT)代謝安定性パネル
非経口的投与された化合物は、血流に入り、肝臓を通る1つ以上の経路を経る。肝臓によって容易に代謝されない化合物を、治療上有効な血漿中濃度で、治療上有効な期間、投与することができる。
【０２２４】
経口投与された化合物は、典型的には、腸壁を通して血流中に吸収され、肝臓を通る第1の経路を経る。肝臓を通るこの第1の経路において容易に代謝されない化合物は、身体の他の部域に治療上有効な量で分配され得る。
【０２２５】
代謝安定性アッセイによって、10分間インキュベートした後のヒト、ラット、マウス、イヌ、および/またはサルのミクロソームを用いた、in vitroでのCYP-媒介代謝安定性を評価した。各化合物を重複試験した。
【０２２６】
これらのアッセイの結果を、10分間インキュベートした後の反応混合物中に残存する親化合物の割合として表した(残存率)。概して、これらの結果を用いて、試験化合物のCYP-媒介またはNADPH-依存性の代謝の程度のみを評価した。該化合物が著しく代謝(＜40-50％残存)された場合、このことにより、in vivoでの化合物の高いクリアランスはCYP-媒介代謝に起因することが示唆された。しかしながら、これらのin vitroアッセイにおいて化合物が中程度(50-80％)または低い(＞85％)代謝を示した場合には、高いクリアランスは依然として、in vivoでの他の代謝および排出経路を介している可能性があった。
【０２２７】
これらのアッセイの残存率の結果はin vivoでの化合物のクリアランスを予測するものであって、これら結果からCYP-媒介代謝が優位な排出経路であると仮定された。異なるミクロソーム種における、結果の範囲は、おおよそ表3に示される通りである。
表3
代謝安定性 - 結果解釈ガイドライン
【表２４】
2015531792.tif 000105
【０２２８】
以下の表4に、ヒトおよびマウスの代謝安定性アッセイで測定された化合物Aおよび化合物BのCYP-媒介代謝安定性を列挙する。表4の結果は2桁に四捨五入されたものである。肝臓ミクロソームアッセイにおいて、0％残存率は試験化合物の完全なCYP-媒介代謝を示しており、100％の値は試験化合物のCYP-媒介代謝が検出されなかったことを示していた。化合物Aおよび化合物Bは、ヒト肝臓ミクロソーム(HLM)については各々97および88％の残存値、およびマウス肝臓ミクロソーム(MsLM)については各々91％および86％の残存値という代謝安定性を有していた。
【表２５】
2015531792.tif 000106
【０２２９】
(方法および材料）
肝臓ミクロソームとのインキュベーション
試験化合物を、100％DMSO中の3.5 mMのストック溶液として得た。試験化合物を希釈して1.4％DMSOを含む50 μMアセトニトリル(ACN)溶液を作り、次いでそれをミクロソームとのインキュベーションのための100x ストックとして用いた。各化合物を、代謝安定性-ヒト、ラット、およびマウスアッセイ一式の3種をそれぞれ別々に、または代謝安定性-イヌ一式もしくは代謝安定性-サル一式を個々の種として、2連で試験した。化合物、NADPH、および肝臓ミクロソーム溶液を、インキュベーションのために、3つの工程で合わせた:
1.  100 mM NaPi(pH 7.4), 5 mM MgCl2緩衝液中の、肝臓ミクロソーム懸濁液(タンパク質濃度 1.1 mg/ml）(152 μl)を、37℃にて予め温めた。
2.  50 μM 化合物(98.6％ACN, 1.4％DMSO)(1.7 μl)を同じチューブに加え、37℃で5分間、予めインキュベートした。
3.  該反応を、予め温めた100 mM NaPi(pH 7.4)中の10 mM NADPH溶液を17 μl加えることによって開始させた。
【０２３０】
反応成分をよく混合し、該反応混合液の75 μlをすぐに150 μlクエンチ/停止溶液に移し入れた(0-時点, T0)。反応液を37℃で10分間インキュベートした後、さらなる75 μlのアリコートを150 μlのクエンチ溶液に移し入れた。100 μM DMN(注射剤品質管理のためのUV標準)を含むアセトニトリルをクエンチ溶液として用いて、代謝反応を終了させた。
【０２３１】
クエンチした混合液を、1500 rpm(〜500 X g)で、ALLEGRA(登録商標）X-12遠心機、SX4750ローター(Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA)において、15分間遠心分離して、変性したミクロソームのペレットを得た。次いで、親化合物とその代謝物の混合物を含む90 μlの体積の上清抽出物を、UV-LC/MS-MS分析のために別の96-ウェルプレートに移し、該混合物中に残存する親化合物の割合を決定した。
表5
代謝安定性アッセイ - 反応成分
【表２６】
2015531792.tif 000107
【０２３２】
サンプル分析 - 器具使用
HPLC：ポンプ - Thermo Surveyor； オートサンプラー - CTC/LEAP HTS； UV検出器 - Thermo Surveyor PDA plus； カラム - 0.5 μm インラインフィルターを備えたVarian C18, 3 μm, 2 x 20 mm； 構造的完全性事前分析(structural integrity pre-analysis）のための移動相 ：(A) 98％水、2％アセトニトリル(10 mM 酢酸アンモニウム含有）； (B) 10％水、90％アセトニトリル(10 mM 酢酸アンモニウム含有）； 反応サンプル分析のための移動相 ：(A)98％水、2％アセトニトリル(0.1％ギ酸含有）； (B) 2％水、98％アセトニトリル(0.1％ギ酸含有）； (C) 0.1％水酸化アンモニウム／水； (D) 0.1％水酸化アンモニウム／アセトニトリル.
【０２３３】
質量分析計：Thermo TSQ Quantum Ultra トリプル四重極質量分析計；
サンプル分析：構造的完全性事前分析.
【０２３４】
代謝安定性構造的完全性事前分析を用いて、アッセイした化合物の純度を評価した。化合物を、57 μlの3.5 mM DMSO溶液として96-ウェルプレート中に得た。該3.5 mM化合物DMSOストック溶液を、同じ体積のアセトニトリル、イソプロパノール、およびMilliQ-H2Oを含む溶液を用いて、18倍希釈した。得られた溶液(200 μM)を、Thermo LCQ Deca XP Plus イオントラップ質量分析計でのLC-UV/MS(Waters Sentry 2.1 mm ガードカラムを備えたWaters XBridge C18, 5 μm, 2 x 50 mm カラムおよび以下の表に記載のLC条件を用いて、5 μl注入量および1 ml/分の流速で）により、構造的完全性について分析した。得られたデータは、220 nmでのUV吸光度による純度を反映していた。50％以上の純度を有する化合物の結果のみを報告した。
表6
代謝安定性 - 構造的完全性グラジエント
【表２７】
2015531792.tif 000108
【０２３５】
サンプル分析 - インキュベートしたサンプル
MS/MS条件の最適化を、加熱エレクトロスプレー(H-ESI)源を備えたThermo TSQ Quantum トリプル四重極質量分析計において自動注入により実施し、SRMトランジションおよびそれらの対応する衝突エネルギー値を得た。1:1 メタノール:水中の20 μM濃度の化合物溶液を、流速90 μL/分で注入した後、流速50 μL/分で移動相を合わせ、その後、供給源に導入した。全ての化合物を、まず移動相AおよびB(50％Aおよび50％B)を用い、必要であれば、移動相CおよびD(これもまた50:50の組成物である)を用いて、最適化した。最適化されたパラメーター(極性、SRMトランジションおよび衝突エネルギーを含む）を、Microsoft Access データベースに保存した。
【０２３６】
自動注入から得られた質量分析条件を用いて、代謝安定性アッセイからのインキュベーションサンプルを分析した。注入量は5 μlであって、流速は0.8 ml/分であった。用いたグラジエントを、以下の表に示した。全てのサンプルを、まず、移動相AおよびBを用いたグラジエントで注入した。必要であれば(例えば、クロマトグラフ的理由のため)、サンプルを同一のグラジエントで再注入した(ただし、移動相CおよびDを用いる）。全てのLC-MS/MS分析パラメーターを、コンピューターを用いて生データファイルに保存した。
表7
代謝安定性 - サンプル分析グラジエント
【表２８】
2015531792.tif 000109
【０２３７】
データ解析
ピーク積分を、XCALIBUR(登録商標）ソフトウェアを用いて行った。残存率の算出を、各化合物についてのT10分サンプルからのLC-MS/MSピーク領域とT0分サンプルからのLC-MS/MSピーク領域を比較することによって、実施した。
【０２３８】
質の管理
一連のこれらの化合物を、各アッセイプレートにおいて、試験化合物と一緒に試験した。これらコントロール化合物についての結果が以下に示す期待される範囲に該当した場合のみ、データを承認してアップロードした。
表8
代謝安定性アッセイ - ミクロソーム種によるコントロール化合物の値
【表２９】
2015531792.tif 000110
SD = 標準偏差
【０２３９】
代謝安定性半減期パネル
ヒトまたは動物の肝臓ミクロソームにおいて、in vitroで決定された代謝速度および半減期を用いて、化合物の固有クリアランス(CLint)および肝クリアランス(CLh,b)を決定した。これらのパラメーターは、in vivoヒトクリアランス(in vivoでの薬物曝露のレベルを定義する）を予測するために有用であった(Obach et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 283:46-58(1997)； Obach, Drug Metab. Dispos., 27:1350-1359 (1999))。
【０２４０】
代謝安定性半減期アッセイパネルは、ヒト、ラット、マウス、イヌおよびサルミクロソームにおける、in vitroでのCYP-媒介(NADPH-依存性)代謝のタイムコースおよび速度を評価する。該タイムコースは45分のインキュベーションに及び、0、5、10、15、30、および45分の時点が含まれ、その各々にて、混合物中の試験化合物残存量を測定した。
【０２４１】
結果解釈ガイドライン
代謝安定性半減期アッセイの結果を半減期(T1/2, 分)として表した。一般に、これらの結果は、試験化合物のCYP-媒介またはNADPH-依存性の代謝の程度のみを評価するために用いられるべきである。該化合物が著しく代謝された(T1/2＜14分)場合、これにより、in vivoでの高いクリアランスはCYP-媒介代謝に起因することが示唆された。しかしながら、これらのin vitroアッセイにおいて該化合物が中程度(14〜70分)または低い(＞70分)代謝を示した場合、高いクリアランスは依然としてin vivoでの他の代謝および排出経路を介している可能性があった。
【０２４２】
これらのアッセイの結果はin vivoでの化合物のクリアランスを予測するものであって、これらの結果からCYP-媒介代謝が優位な排出経路であると仮定された。ヒトのミクロソーム種において、結果の範囲は、おおよそ以下の表に示される通りである。
表9
代謝安定性半減期 - 結果解釈ガイドライン
【表３０】
2015531792.tif 000111
【０２４３】
方法および材料
肝臓ミクロソームはBD-Biosciences(Woburn, MA)から入手し、NADPHはAppliChem Incから入手し；全ての他の試薬はSigmaから入手した。
【０２４４】
肝臓ミクロソームとのインキュベーション
試験化合物を100％DMSO中の3.5 mMストック溶液として得た。該試験化合物を希釈して50 μM アセトニトリル(ACN)溶液(1.4％DMSO含有）を作り、その後、それをミクロソームとのインキュベーション用の100-倍ストックとして用いた。各化合物を、ヒト、ラット、マウス、イヌおよびサルの肝臓ミクロソームにおいて試験した。化合物、NADPHおよび肝臓ミクロソーム溶液を、インキュベーションのために3つの工程で合わせた:
1.  450 μlの肝臓ミクロソーム懸濁液、100 mM NaPi, pH 7.4、5 mM MgCl2緩衝液中の1.1 mg/mlのタンパク質濃縮物を、37℃にて予め温めた。
2.  5 μlの50 μM 化合物(98.6％ACN, 1.4％DMSO)を同じチューブに加え、37℃で5分間、プレインキュベートした。
3.  50 μlの予め温めた100 mM NaPi, pH 7.4中の10 mM NADPH溶液を加えることによって、反応を開始させた。
【０２４５】
反応液の成分をよく混合し、すぐに65 μlを130 μlクエンチ/停止溶液に移し入れた(0-時点, T0)。反応液を37℃で5、10、15、30および45分間インキュベートし、各時点で65 μlのアリコートを130 μlのクエンチ溶液に移し入れた。内部標準(100 ng/ml)を含むアセトニトリルをクエンチ溶液として用いて、代謝反応を終了させた。
【０２４６】
クエンチした混合液を、ALLEGRA(登録商標）X-12遠心機, SX4750ローター(Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA)において1500 rpm(〜500 X g)で15分間遠心分離して、変性したミクロソームを沈殿させた。その後、親化合物とその代謝物の混合物を含む90 μlの体積の上清抽出物を、LC/MS-MS分析のための別の96-ウェルプレートに移し、該混合物中に残存している親化合物の割合％を決定した。
表10
代謝安定性半減期アッセイ - 反応成分
【表３１】
2015531792.tif 000112
【０２４７】
サンプル分析 - 器具使用
HPLC：ポンプ - 島津LC-20 ADシリーズ バイナリポンプ；オートサンプラー - CTC/LEAP HTS.
【０２４８】
マウスにおけるヒト腫瘍異種移植モデル
全ての齧歯動物をHarlan Sprague Dawley Co.(Indianapolis, Indiana)から入手し、区別された(defined）病原体フリーのコロニー中のアンモニア-フリーの環境で維持した。全てのマウスを約1週間検疫した後で、それらを腫瘍増殖および薬効試験のために用いた。食物および水を自由裁量でマウスに摂食させた。Bristol-Myers Squibb 薬学研究所の動物管理プログラムは、米国実験動物管理公認協会(AAALAC)により公認されている。全ての実験を、Bristol-Myers Squibb (BMS)動物試験法およびガイドラインに従って、実施した。
【０２４９】
免疫不全のbalb/c nu/nuヌードマウスまたはNOD-SCIDマウス(Harlan Sprague Dawley)において、腫瘍異種移植片を皮下(SC)で増殖させて維持した。ドナーマウスから得られた腫瘍断片を用いて、適切なマウス系統(表11)において皮下移植片として腫瘍を増殖させた。
表11
マウスにおける様々なヒト腫瘍異種移植片の増殖に対する組織型および宿主マウス系統/性別要件
【表３２】
2015531792.tif 000113
【０２５０】
前臨床化学療法試験
有意義な反応を見いだすために必要な数の動物を、実験開始時にプールし、各々に、13-内径トロカールを用いて腫瘍断片(〜20 mg)を皮下移植した。腫瘍を、予め定められたサイズ(size window）(該範囲外の腫瘍は除いた)まで増殖させ、動物を、様々な処置群およびコントロール群に均等に分配した。通常、各処置群およびコントロール群当たり8匹のマウスであった。個々の体重に基づいて各動物を処置した。処置された動物を、治療に関連する毒性/死亡数について毎日調べた。処置を開始する前に各群の動物の体重を測定し(Wt1)、その後、最終処置の投薬の後に再度測定した(Wt2)。体重の差(Wt2-Wt1)は処置関連毒性の指標を提供する。
【０２５１】
腫瘍反応は、腫瘍が予め定められた「標的」サイズである0.5 gmまたは1 gm(腫瘍のタイプに依存）に到達するまで、キャリパーを用いて週に2回腫瘍を測定することによって決定された。腫瘍重量(mg)を、式:
腫瘍重量 = (長さ x 幅2) ÷ 2
から推定した。
【０２５２】
腫瘍反応判断基準は、腫瘍増殖阻害(％TGI)の観点から表わされる。腫瘍増殖遅延は、コントロール群(C)が予め定められた標的サイズに達するのに必要とされる時間(日)に対する、処置された腫瘍(T)が予め定められた標的サイズに達するのに必要とされる時間(日)の差として定義される。この目的のために、群の腫瘍重量は中間腫瘍重量(medium tumor weight）(MTW)として表わされる。
【０２５３】
腫瘍増殖阻害は以下のとおり算出される。
2015531792.tif 000114
(式中、
Ct = 処置終了時におけるコントロールの腫瘍サイズの中央値
C0 = 処置開始時におけるコントロールの腫瘍サイズの中央値
Tt = 処置終了時における処置群の腫瘍サイズの中央値
T0 = 処置開始時における処置群の腫瘍サイズの中央値）
【０２５４】
活性は、少なくとも1腫瘍の体積倍加時間に等しい期間における50％以上の耐用性腫瘍増殖阻害(すなわち、TGI ≧ 50％)または0.5以上のlog細胞死(LCK>0.5)の達成として定義され、薬剤処置は、少なくとも2腫瘍の体積倍加時間に等しい期間でなくてはならない。
【０２５５】
腫瘍反応は、コントロール群(C)が予め定められた標的サイズに到達するのに要する時間(日）に対する、処置群(T)が予め定められた標的サイズに到達するのに要する時間(日）の差としても定義される、腫瘍増殖遅延(TGD値)の観点から表される。
【０２５６】
可能ならいつでも、抗腫瘍活性は、過剰な毒性(すなわち、1個体以上の死亡)が出現する直前の用量レベルとして定義される最大耐用量(MTD)までの用量レベルの範囲で決定された。死亡が発生した場合、死亡の日を記録した。腫瘍が標的サイズに達する前に死亡する処置マウスは、薬物毒性で死亡したと見なされる。標的サイズ未満の腫瘍を有するコントロールマウスで死亡したマウスはいなかった。薬物毒性により1個体以上が死亡した処置群は、過剰な毒性処置(toxic treatment）を有していたと見なされ、それらのデータは化合物の抗腫瘍効果評価に含まれない。
【０２５７】
処置耐容性に影響を及ぼす潜在的な薬物毒性相互作用は、化学療法試験の組み合わせにおいて、重要な考慮すべき事柄である。組み合わせ治療の結果の解釈は、同程度の耐性用量の組み合わせの抗腫瘍活性に対する、最良の反応の単剤の抗腫瘍活性の比較に基づかなくてはならない。従って、治療の相乗作用を、単独療法のいずれの耐性用量で達成された最適効果を超えた組み合わせ剤の耐容性レジメンで達成された治療効果として定義した。データの統計的評価を、Gehanの一般化ウィルコクソン検定を用いて実施した。統計的有意性を、P＜0.05にて判断した。
【０２５８】
薬物投与
in vitro研究において、全ての剤を、100％DMSOに溶解させ、培地/10％ウシ胎仔血清中に連続希釈した。Notch阻害剤の齧歯動物への投与において、2つの異なる賦形剤を用いた:[1]94％Labrafil/5％ETOH/1％TW80または[2]ETOH/TPGS/PEG300(10:10:80)。Notch阻害剤は、典型的には、QDx15, 10日投与-2日投与休止のスケジュールで経口投与された(他のスケジュールもまた評価され、有効であることが示されたけれども）。例えば、QDx12, 4日投与-3日投与休止を含む投与レジメンは、QDx15, 10日投与-2日投与休止と同等の有効性であることが示された。
【０２５９】
In vivo 抗腫瘍活性
化合物Aは、マウスにおいて増殖させた多様なヒト癌異種移植片に対する、広域の抗悪性腫瘍活性を示す。16のヒト癌異種移植片(ヒトT細胞急性リンパ性白血病、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、膠芽腫、非小細胞肺癌、大腸癌、骨肉腫、および神経芽腫を含む）において著しい抗腫瘍活性が示された(表12)。
表12
【表１】
2015531792.tif 000115
【表２】
2015531792.tif 000116
【０２６０】
熱力学平衡水溶解度アッセイ
標準物調製：校正標準を、試料(0.5〜0.7 mg)を正確に秤量して、メタノール(5 ml)中で調製した。該物質がメタノールに完全に溶解しなければ、他の溶媒(例えばDMSOまたは混合溶媒)を使用した。
【０２６１】
試験試料の調製：過剰量の粉末プロドラッグを、ガラスバイアル中(2 mL)で緩衝液[50 mMリン酸カリウム(pH 6.5)および50 mM 酢酸ナトリウム(pH4.0)](1 mL)と平衡化した。該溶液を、超音波処理して、〜30秒間ボルテックス処理を行なった。バイアルを、300 rpmにて室温で24時間振とうした。特定のプロドラッグに対する正確なインキュベーション時間は、先の水溶液安定性データを基にした。化合物が24時間まで緩衝液中で安定であったならば、その後、溶解度を24時間後に測定して、別に速度論的溶解度データを報告した。次いで、最終飽和溶液を、エッペンドルフチューブ(1.5 mL)に移して、〜2分間、10000rpmsで遠心分離した。飽和溶液からの上清を、HPLC用ガラスバイアルに移して、溶解度を14点校正曲線を用いてHPLCにより分析した。
【表３】
2015531792.tif 000117
【０２６２】
溶液安定性アッセイ
アセトニトリルストック溶液：プロドラッグのアセトニトリルストック溶液を、秤量した化合物(1.5〜2.0 mg)を、体積測定用フラスコ(5 mL)中のアセトニトリル(5.0 mL)に溶解して調製した。
【０２６３】
pH 6.5の緩衝液のワーキング溶液：薬物の緩衝液のワーキング溶液(pH 6.5)を、アセトニトリルストック溶液(1.5 mL)を、10 mLのバイアル中の安定性緩衝液(50 mMリン酸カリウム, pH 6.5)(3.5 mL)に加えて、混合することにより調製した。3 mLのシリンジを用いて、溶液(〜3 mL)を、Gelman 0.45 μm シリンジフィルターを用いて、清潔なLCバイアル(1.5 mL)中に吸引濾過した。この濾過した溶液を使用して、試験経過期間中のプロドラッグの分解を評価した。標的濃度：90〜120 μg/mL(70% 水：30% アセトニトリル)。
【０２６４】
pH 4.0の酸性ワーキング溶液：薬物のワーキング溶液(pH 4.0)を、アセトニトリルストック溶液(1.5 mL)を、バイアル(10 mL)中の安定性緩衝液(50 mM 酢酸ナトリウム, pH 4.0)(3.5 mL)に加えて、混合することにより調製した。3 mLのシリンジを用いて、溶液(〜3 mL)を、Gelman 0.45 μm シリンジフィルターを用いて清潔なLCバイアル(1.5 mL)中に吸引濾過した。この濾過した溶液を使用して、試験経過期間中のプロドラッグの分解を評価した。標的濃度：90〜120 μg/mL(70% 水：30% アセトニトリル)
【０２６５】
実験方法：上記した試料調製法に従って、1つの試料(n=1)を、各pH条件につき調製した。試料を、次いで37℃に維持したHPLCオートサンプラーに置き、この試料を24時間にわたり分析した。プロドラッグ残存率(%)を、開始ピークエリア(t=0 h)と比べて記録した。親の半減期に対する変換が計算できた場合には、t1/2を作成した。プロドラッグから親化合物への変換は、最終時点での試料のLCMSおよびHPLC分析により確認した。
【０２６６】
典型的なLCパラメーターを以下に示す：
HPLC系：HP1100 Series, Hewlett Packard., Heated autosampler
分析カラム：Synergi 4u Hydro C18, 4.6mm x 5.0 cm, PHENOMENEX(登録商標)
カラム温度：40℃
オートサンプラー温度：37℃
流速：1.0 mL/分
注入体積：10 μL
移動相： A：アセトニトリル
B：0.1% リン酸/水
実施時間：14.0分
【０２６７】
典型的なLCMSパラメーターを以下に示す：
LC-MS 系：Surveyor HPLC 系, ThermoFinnigan LCQ Deca XP Max(Ion trap)
分析カラム：Synergi 4u Hydro C18, 4.6mm x 5.0 cm, PHENOMENEX(登録商標)
カラム温度：40℃
オートサンプラー温度：22℃
流速：1.0 mL/分
注入体積：5 μL
移動相：A：95% アセトニトリル/5% 20 mM 酢酸アンモニウム
B：5% アセトニトリル/95% 20 mM 酢酸アンモニウム
LCQ パラメーター：
シース流速：81.64
Aux/Sweep 流速：19.01
電流(uA)：10.89
電圧(kV)：5.00
キャピラリー(C)：348.10
キャピラリー電圧(V)：30.44
【表４】
2015531792.tif 000118
【０２６８】
プロドラッグ評価：ラットにおける単回投薬の薬物動態
雌のSprague-Dawleyラット(250-300g)を、薬物動態試験のために使用した。ラットを、投薬の前に一晩飢餓状態とし、投薬4時間後に摂食させた。各試験において、動物(N=2〜3匹)の群に、静脈内(IV)注射(10分かけて)として頸静脈から試験化合物を投与した。投薬後の0.5、1、3、5、7、24時間時に、K2EDTAを入れたチューブに、頸静脈から血液試料(〜0.3 mL)を採血した。4℃(1500-2000xg)での遠心分離により得た血漿試料を、LC/MS/MSによる分析まで-20℃で貯蔵した。
【０２６９】
薬物動態アッセイのためのデータ分析
薬物動態パラメーターを、血漿濃度(LC/MS/MSにより決定した)の時間データ(Thermokinetica Software version 4.4.1)の非コンパートメント分析により得た。ピーク濃度(Cmax)およびCmax、Tmaxについての時間を、実験的観察から直接記録した。ゼロ時間から最終採血時間までの曲線下面積(AUC0-t)を、直線およびlogの台形総和の組合せを用いて計算した。全血漿クリアランス(CLTp)、分布の定常状態体積(Vss)、見かけの排除半減期(t1/2)および平均滞留時間(MRT)を、IV投与後に評価した。T1/2の値を、定量可能な濃度にて3点の最小値を用いて推定した。絶対経口バイオアベイラビリティFを、経口投薬とIV投薬後の用量正規化したAUC値の割合として算出した。プロドラッグ投与後の化合物Aまたは化合物Bの血漿暴露(AUC0-24hまたはAUC0-7h)を、親化合物AまたはB投与後の暴露と比較した。化合物AまたはBとプロドラッグとの相対バイオアベイラビリティを算出した(表16〜17)。
【表５】
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【表６】
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【０２７０】
実施例12および化合物Aを、TALL1 ヒトT-細胞急性リンパ芽球白血病に対するインビボ効力について評価した。実施例12は、化合物Aのプロドラッグである。図1に示したとおり、化合物Aおよび実施例12は、腫瘍増殖阻害(TGI)により規定されたとおり活性であった。
【図１】
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【国際調査報告】
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