(57)【要約】  乳脂肪球（ＭＧＦ）２０ｗｔ％以上と少なくとも１種のＣ１２〜Ｃ２０脂肪酸とを含み、酸化亜鉛を含まない、皮膚障害および／または細胞異常増殖障害を治療するための医薬組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳脂肪球（ＭＧＦ）２０ｗｔ％以上と、少なくとも１種のＣ１２〜Ｃ２０脂肪酸とを含み、酸化亜鉛を含まないことを特徴とする、皮膚障害および／または細胞異常増殖障害を治療するための医薬組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物において、前記ＭＦＧの量が２０〜４０ｗｔ％であることを特徴とする組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の組成物において、前記ＭＧＦの量が２０〜２５ｗｔ％であることを特徴とする組成物。
【請求項４】
請求項１乃至３の何れか一項に記載の組成物において、ＭＧＦのサイズ範囲が１〜１０μｍであることを特徴とする組成物。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか一項に記載の組成物において、前記Ｃ１２〜Ｃ２０脂肪酸がステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、リノール酸、セテアリン酸、ミリスチン酸からなる群から選択されることを特徴とする組成物。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか一項に記載の組成物において、前記Ｃ１２〜Ｃ２０脂肪酸の量が１０ｗｔ％であることを特徴とする組成物。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか一項に記載の組成物において、前記組成物が乳化剤をさらに含み、有効成分であるＭＧＦの水中油型エマルションであることを特徴とする組成物。
【請求項８】
請求項１乃至７の何れか一項に記載の組成物において、前記組成物が局所投与、静脈内投与、筋肉内投与、または経口投与できることを特徴とする組成物。
【請求項９】
請求項１乃至８の何れか一項に記載の組成物において、皮膚障害が皮膚創傷および皮膚熱傷、皮膚瘢痕、ケロイドおよび過角化から選択され、細胞異常増殖障害が扁平上皮癌またはがんから選択されることを特徴とする組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の組成物において、皮膚創傷および／または皮膚熱傷が緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に感染していることを特徴とする組成物。
【請求項１１】
請求項１乃至７の何れか一項に記載の医薬組成物を製造する方法において、乳化剤を沸騰水に溶解する工程と、前記ＭＧＦと脂肪酸とを含む油状物を融解する工程と、前記融解した油状物を前記溶解した乳化剤に１２００回転／分の速度で５分間混合する工程とを含むことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、扁平上皮癌、皮膚障害、皮膚熱傷、皮膚創傷および熱傷創の緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染、あらゆるがんおよび腫瘍形成、パーキンソン病、胃病変および潰瘍化、軟骨修復、関節炎に関する様々な疾患の治療に使用される医薬組成物に関する。標的とする皮膚障害には、皮膚創傷、痂皮形成、全層皮膚創傷の肥厚性瘢痕形成、ケロイドがある。
【０００２】
本発明は、特に、上記疾患および障害の治療に使用される、天然物、即ち、乳脂肪球（ＭＦＧ）を含み、酸化亜鉛を含まない医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
がんは、先進諸国における主な死因１つである。がんは、２つの遺伝的特性、即ち、制御不能な細胞分裂と、これらの細胞が、隣接する組織に直接入り込んで増殖すること（浸潤）または離れた部位に細胞が移動すること（転移）の何れかにより他の組織に侵入する能力とを特徴とする疾患の１種である。最初、過剰増殖性により腫瘍または新生物が生じる。ＤＮＡが損傷し、その結果、機能の中でもとりわけ、細胞分裂、細胞周期を制御する重要な遺伝子に突然変異が生じることにより無秩序な増殖が起こる。
【０００４】
がんは、それらが生じる組織や細胞の種類により分類することができる。上皮細胞から発生するがんは、癌腫と称され、結合や筋肉細胞から発生するものは肉腫と称される。他のがんとしては、造血細胞から生じるもの（例えば、白血病）および神経系のがんが挙げられる。
【０００５】
一般的に、がんは、初期の異常細胞集団が、突然変異と選択の連続的なサイクルを経てより異常な細胞に変化する過程で生じるものと思われる。突然変異するとがんを引き起こす１００を超える様々な遺伝子が同定されてきた。これらのいわゆるがん関連遺伝子は、成長因子、サイトカイン、ホルモン、細胞外マトリックス等をコードし、これらは多くのシグナル伝達経路と関係している。従って、がんにより媒介される凝固系の活性化は、成長および転移などの腫瘍に関する活動に重要な役割を果たし、臨床的に、血栓症を有するがん患者は、血栓症を有していないがん患者と比較して寿命が短かった。さらに、アラキドン酸は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでがん細胞の成長および増殖を誘導することが分かっている。この過程に関与する可能性のあるがんとしては、結腸がん、膵臓がん、乳がん、前立腺がん、肺がん、皮膚がん、膀胱（ｕｒｉｎａｒｙ  ｂｌａｄｄｅｒ）がん、肝臓がん、結腸直腸がん、食道がん、乳がん、肺がんおよび膀胱（ｂｌａｄｄｅｒ）がんが挙げられるが、全てを網羅しているわけではない。慢性炎症、細菌感染およびウイルス感染（例えば、ヘリコバクター・ヘパティカス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｈｅｐａｔｉｃｕｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ  Ｃ））が、肝がん、胃腺癌などの特定のがんの発生に一定の役割を果たすことも分かっている。さらに、がん疼痛は、がん患者の診断、生活の質、および生存率に顕著な影響を及ぼす。
【０００６】
一般的な悪性腫瘍である扁平上皮癌（ＳＣＣ）などの口腔がんは、世界的に、がん罹患および死亡ならびに国際的ながんの全負担（ｏｖｅｒａｌｌ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｕｒｄｅｎ）の重要な要因となっている。扁平上皮癌は、黒色腫以外の１種の皮膚がんであり、また、とりわけ、唇、口、食道、膀胱、前立腺、肺、膣、および頸部を含む様々な組織にがんの形態として生じる。扁平上皮細胞はまた、消化管、肺および身体の他の部位の管壁（ｌｉｎｉｎｇ）にも生じる。扁平上皮癌は、一般的に、外科的切除により治療される。皮膚ＳＣＣの治療の非外科的選択肢としては、局所化学療法、局所免疫応答調節剤、光線力学的療法（ＰＤＴ）、放射線療法、および全身的化学療法が挙げられる。イミキモドクリームなどの局所療法およびＰＤＴの使用は、一般的に、前癌病変およびｉｎ  ｓｉｔｕ病変に限定される。放射線療法は、手術が不可能な患者に対する第一の治療選択肢であり、転移性または高リスク皮膚扁平上皮癌患者に対する補助療法である。現時点では、転移性疾患の患者には専ら全身的化学療法が使用される。
【０００７】
最近まで、がん化学療法は、主として、ＤＮＡターゲティング、微小管破壊、またはＤＮＡの合成および修復に関与する重要な細胞タンパク質もしくは代謝産物のターゲティングに重点を置いてきた。このような薬理学的介入の目的は、正常な細胞および臓器に対してかなりの毒性を有する悪性の細胞に致命的な損傷を引き起こすことであった。制がん剤の開発は、現在、腫瘍細胞の死または細胞分裂停止の誘導に至らしめる、より選択性の高い可能性がある方法に向けて転換しつつあり、シグナル伝達阻害剤は臨床試験から承認される治療適応症の調査に進んだ。
【０００８】
全層皮膚創傷の肥厚性瘢痕形成または肥厚性瘢痕およびケロイドは、臨床医が直面する重要な問題である。これらの瘢痕は主観的問題と客観的問題の両方を引き起こし、治療結果は満足できるものではない。肥厚性瘢痕は、創傷治癒の長期化、局所創傷感染、および創傷の機械的張力などの幾つかの局所創傷要因に関連する。肥厚性瘢痕は、心臓手術の後の胸骨切開瘢痕のような手術創や第３度熱傷に関連することが多い。増殖性瘢痕（肥厚性瘢痕およびケロイド）の発生は、細胞増殖および移動、炎症、サイトカインの合成および発現、細胞外マトリックスの合成および蓄積、ならびに成熟のような、創傷治癒段階に影響を及ぼす異常に関連することが分かった。さらに、家畜では、熱傷損傷後の皮膚瘢痕化が大きな医学的問題となっている。皮膚機能の回復は、熱傷専門外科医による皮膚熱傷の治療における熱傷専門外科医の関心事となっている。しかし、全層皮膚欠損を、易損性で不安定なことが多い分層植皮で治療すると瘢痕形成が起こる。
【０００９】
肥厚性瘢痕やケロイドの現在の治療は、経験的で、信頼性がなく、予測不可能である。全層皮膚損失の場合、皮膚再生は大抵成功せず、その結果、瘢痕形成や創収縮が起こる。現在まで、全層皮膚損失における瘢痕化を予防または治療するための処方薬はない。シリコーンジェルシート瘢痕マッサージ、圧迫および包帯、イミキモドクリーム剤およびタマネギ抽出物のようないくつかの方法が、熱傷患者における肥厚性瘢痕発生の予防に使用されてきた。しかし、これらの方法は、大抵の場合、無効であることが判明している。
【００１０】
皮膚の熱損傷または皮膚熱傷は、初期の局所炎症応答よりずっと大きい身体の反応を誘導する。病原菌の侵入、抗原チャレンジ、ならびに創傷の清浄化および切除により外傷がさらに繰り返し生じるため、熱傷創は、身体の残りの部分に対して絶えず重大な脅威となる。炎症応答の誘導には、創傷内の血液供給および微小血管透過性を制御するメディエーターの複合カスケードが関与する。これらのメディエーターの多くは、炎症過程の一部であるか、またはその産物である。それらは、熱傷浮腫をきたす血管透過性亢進および静水圧上昇の原因となり、熱傷創内の炎症から生じる。
【００１１】
しかし、様々な薬物で炎症反応を抑制する試みはあまり成功しなかった。また、広範な熱損傷および敗血症により免疫抑制が起こる。免疫抑制を引き起こす欠損については依然として検討中であり、サイトカインによる炎症反応の抑制に関心が高まっている。
【００１２】
皮膚バリアの損傷は、細菌感染または体液損失などの多くの合併症を招く。手術創や熱傷では、皮膚や皮膚構造の感染が起こることが多い。熱傷患者では、感染、特に、ヒトの皮膚の常在菌叢の一部として他のシュードモナスｓｐｐ（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ）と共に見られる日和見病原体である、グラム陰性桿菌の１種である緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の感染が最も深刻な合併症の１つである。緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は本来、多くの薬物種に対して耐性があり、あらゆる有効な抗微生物薬に対して耐性を獲得することができるため、この生物に感染した患者の治療は特に問題である。皮膚感染はヒトの死亡率や罹患率が著しく高くなる原因となり、それにより入院が長期化するおよび／または医療費が増加することが多い。微生物コロニー形成およびその後の増殖を抑えるスルファジアジン銀などの局所抗微生物療法は、依然として最も重要な熱傷創治療方法の１つである。また、経口投与される抗生物質は、フルオロキノロンを除いて、一般的に、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）による大部分の深刻な皮膚感染および軟組織感染に対して無効である。熱傷を負っている患者が緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）敗血症を発症すると、その死亡率は７５％を超える。
【００１３】
亜鉛は、多くの金属物体や合金中に見られる極一般的な元素である。亜鉛はまた、歯磨き粉やサンスクリーンから、薬物送達のためのナノテクノロジーを用いる医薬に至る多くの薬物にも使用され、多くの食品に、とりわけ肉に天然に存在する。少量の亜鉛は健康に極めて重要である。しかし、亜鉛アレルギーは極めて稀ではあるが、それらは深刻な問題の原因となっている。従って、医薬中に、特に、組成物が静脈内投与または経口投与される場合には、また亜鉛が有効成分ではない場合には、極微量の亜鉛も含まれないようにすることが好ましい。
【００１４】
従って、扁平上皮癌、皮膚障害、皮膚熱傷、緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）による皮膚創傷および熱傷創の感染、がん、パーキンソン病、胃病変および潰瘍化、軟骨修復、関節炎などの疾患を穏やかに且つ比較的低侵襲的に治療するための、副作用が少ない医薬組成物が強く求められており、酸化亜鉛（ＺｎＯ）などの金属化学物質を含まない前記組成物は豊富な天然物をベースにし、安価である。
【００１５】
上記目的は、扁平上皮癌、皮膚障害、皮膚熱傷、緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）による皮膚創傷および熱傷創の感染、がんを局所投与、注射投与、または経口投与により治療するための、乳脂肪球（ＭＦＧ）を２０％以上または２０％〜２５％含む医薬組成物を使用することにより達成される。
【００１６】
単なる担体としてのＭＦＧの使用は既に知られている。欧州特許第０３０６９７１号明細書は、脂溶性薬理活性薬物を送達するための脂質マトリックスとしてのＭＦＧの使用を開示している。しかし、有効成分、即ち、薬物としてのＭＦＧの使用は開示されていない。
【００１７】
欧州特許第１４５３５２６号明細書は、皮膚障害、皮膚熱傷および皮膚創傷を局所治療するための医薬組成物におけるＭＦＧの使用を開示している。前記組成物は、ＺｎＯおよび他の抗生物質、殺菌薬、スルホンアミドまたはレチノイドを含有する水中油型エマルションである。
【００１８】
栄養価の高い物質であるＭＦＧは、９９％トリグリセリドからなる。ＭＦＧのトリグリセリドコアは、内在性膜タンパク質を含有する脂質二重層に包囲されている。乳脂肪球は９９％トリグリセリドからなり、それは乳腺分泌細胞内でグルコース、アセテート、および低密度リポタンパク質などの血中前駆体から合成される。トリグリセリドコアの３分の２は、多価飽和脂肪酸（酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキジン酸）から構成されている。多価不飽和脂肪酸は、ヒトの体内で合成されない必須脂肪酸と見なされている。トリグリセリドの残りの３分の１は、多価不飽和脂肪酸（オレイン酸、リノール酸、リノレン酸およびアラキドン酸）である。これらの脂肪酸はそれぞれグリセリンに結合している。ＭＦＧのトリグリセリドコアは、内在性膜タンパク質を含有する脂質二重層に包囲されている。乳脂肪球は、乳脂肪球皮膜（ＭＦＧＭ）と称される薄膜に包囲された１〜１０μｍの直径範囲を有する。断面の厚みが約１０ｎｍであるこの膜は、タンパク質、リン脂質、糖タンパク質、ラクトアドヘリン、アネキシンＶ、ＲＧＤ、コレステロール、酵素、カロテン、ビタミンおよび他の微量成分の複雑な混合物からなる（Ｈａｍｏｓｈ  Ｍ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ＪＡ，Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ＴＲ，Ｓｃａｌｌａｎ  ＣＤ，Ｋｉｗａｎ  Ｒ，Ｃｅｒｉａｎｉ  ＲＬ，Ａｒｍａｎｄ  Ｍ，Ｍｅｈｔａ  ＮＲ，Ｈａｍｏｓｈ  Ｐ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｉｌｋ：ｔｈｅ  ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ．Ｓｅｍｉｎ  Ｐｅｒｉｎａｔｏｌ．１９９９  Ｊｕｎ；２３（３）：２４２−９．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ＪＡ，Ｓｃａｌｌａｎ  ＣＤ，Ｃｅｒｉａｎｉ  ＲＬ，Ｈａｍｏｓｈ  Ｍ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｒｅｅ  ｍａｊｏｒ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ．ＡｄｖＥｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．２００１；５０１：１７９−８７）。
【００１９】
ＭＦＧは、共役リノール酸、スフィンゴミエリン、酪酸、エーテル脂質、β−カロテンおよびビタミンＡ、ビタミンＤおよびビタミンＥ、ＢＲＡＣ１タンパク質およびＢＲＡＣ２タンパク質、ならびに他の成分を含み、本発明者らは動物モデルおよび様々なヒトがん細胞株においてそれらが発癌を抑制できるものと考えている。
【００２０】
様々な研究で、ＲＧＤペプチドは、インテグリン（αＶβ３およびαＶβ５）との相互作用によりＥＣＭタンパク質（例えば、フィブロネクチン、フィブリノーゲン）への線維芽細胞などの細胞の接着を抑制し、このようにしてヒト初代線維芽細胞のＤＮＡ合成および増殖を防止することが判明した。
【００２１】
これまでのところ、血液凝固の制御などのアネキシンＶの幾つかの生理的機能が報告されており、それはホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）活性を阻害し、従って、皮膚熱損傷に関与するアラキドン酸へのリン脂質の変換を阻害することにより炎症を調節することができる。アラキドン酸はシクロオキシゲナーゼと５−リポオキシゲナーゼの両方の生合成の主要な前駆体であり、それにはプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、プロスタサイクリン、トロンボキサンＢ２およびロイコトリエンＢ４が含まれ、その血漿レベルは熱傷後に上昇する。
【００２２】
ＭＦＧの抗微生物作用は、遊離脂肪酸（ＦＡ）とモノグリセリド（ＭＧ）を放出するリパーゼの存在に依存することが分かった。従って、部分加水分解乳脂肪の抗微生物特性は、組成ＦＡとＭＧによって変わる。
【発明の概要】
【００２３】
一態様では、本発明は、ＭＦＧ２０ｗｔ％以上と、少なくとも１種のＣ１２〜Ｃ２０脂肪酸とを含み、酸化亜鉛を含まない、皮膚障害および／または細胞異常増殖障害を治療するための医薬組成物を提供する。
【００２４】
別の態様では、本発明はまた、上記医薬組成物の製造方法も提供する。
【００２５】
本発明の他の態様および好ましい実施形態については、添付の特許請求の範囲に詳述する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１（Ａ）は、シリアンハムスターに７，１２−ジメチルベンズアントラセン（ＤＭＢＡ）により誘発させた扁平上皮癌を示し；（Ｂ）〜（Ｄ）は、結合組織への乳頭状突起を有する図１（Ａ）の扁平上皮癌の組織スライドを示す図である。
【図２】図２は、シリアンハムスターにＤＭＢＡにより誘発させた扁平上皮癌を示す図であり、（Ａ）は対照動物群であり、（Ｂ）はプラセボ動物群であり、（Ｃ）は本発明の医薬組成物で処置した動物群であり、（Ｄ）はＤＭＢＡで処理しなかった動物群である。
【図３】図３は、（Ａ）プラセボ動物群、（Ｂ）本発明の医薬組成物で処置した動物群における、術後２８日後のウサギの耳の腹側での肥厚性瘢痕組織形成を示す図である。
【図４】図４は、（Ａ）プラセボ動物群、（Ｂ）本発明の医薬組成物で処置した動物群における、術後２８日後のウサギの耳の腹側での肥厚性瘢痕組織形成の組織切片を示す図である。
【図５】図５は、生理食塩水溶液（対照）、プラセボ（プラセボ）および本発明の医薬組成物（被検薬）を投与して２時間後のウサギ皮膚熱傷のアラキドン酸代謝産物の放出の測定を示す図であり、（Ａ）プロスタグランジンＥ２の測定、（Ｂ）トロンボキサンＢ２の測定、（Ｃ）ロイコトリエンＢ４の測定を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、乳脂肪球（ＭＦＧ）２０ｗｔ％以上と、少なくとも１種のＣ１２〜Ｃ２０脂肪酸とを含み、酸化亜鉛を含まない、皮膚障害および／または細胞異常増殖障害を治療するための医薬組成物に関する。
【００２８】
重量％（ｗｔ％）は、組成物の重量によるパーセンテージを意味する。
【００２９】
一実施形態によれば、本組成物は、２０〜４０ｗｔ％、２０〜３５ｗｔ％、２０〜３０ｗｔ％、好ましくは２０〜２５ｗｔ％の量のＭＦＧを含む。欧州特許第１４５３５２６号明細書のクリーム剤の形態で提供される医薬組成物とは対照的に、亜鉛も酸化亜鉛も添加されない。組成物中のＭＦＧの量が２０ｗｔ％以上であれば、追加の保護剤、保存剤または抗感染剤として、または追加の有効成分として酸化亜鉛が存在しなくても、皮膚障害および／または細胞異常増殖の効果的な治療を提供するのに十分である。特に、医薬組成物を非局所投与する場合、即ち、静脈内投与、筋肉内投与、または経口投与する場合、亜鉛または酸化亜鉛が存在しないようにしければならない。
【００３０】
ＭＦＧは、溶かして澄ましたバター脂である食用のバターオイルから、またはＭＦＧ１００％の半流動体の澄ましバターであるギーから得ることができる。前記ＭＧＦは１〜１０μｍのサイズ範囲を有する。
【００３１】
Ｃ１２〜Ｃ２０脂肪酸は、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、リノール酸、セテアリン酸（ｃｅｔｅａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、ミリスチン酸からなる群から選択される。好ましくは、前記Ｃ１２〜Ｃ２０脂肪酸は、オレイン酸およびセテアリン酸からなる群から選択される。最も好ましくは、前記Ｃ１２〜Ｃ２０脂肪酸はオレイン酸またはセテアリン酸である。前記Ｃ１２〜Ｃ２０脂肪酸は１０ｗｔ％の量で存在する。前記Ｃ１２〜Ｃ２０脂肪酸は、本発明の医薬組成物のガレヌス製剤に増粘剤としての構造を提供し、皮膚熱傷の治療において、有効成分、即ち、ＭＦＧと相乗効果を提供することもできる。
【００３２】
本組成物はさらに乳化剤を含む。それは乳化剤と一緒に水中油型エマルションを形成し、ＭＦＧはそれに有効成分として添加される。医薬組成物は、懸濁剤（シリアン（Ｓｙｒｉａｎ）懸濁剤）の形態でまたはクリーム剤（シリアンクリーム剤）の形態で投与することができる。製剤の形態の選択は投与方法に依存し、それは、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与または局所投与であってもよい。従って、水中油型エマルションの形態のクリーム剤は、特に、熱傷または熱損傷を負っている患者では、局所投与に最適な薬物として選択される。一般的に、外用軟膏製剤はクリーム製剤よりも患者に受け入れられ難く：クリーム剤の方が軟膏剤より適用し易く、衣類の汚れを引き起こし難いと認識されている。
【００３３】
別の実施形態では、皮膚障害は、皮膚創傷、皮膚熱傷、皮膚瘢痕、ケロイド、および過角化（ｈｙｐｅｒｃｏｒｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ）を含む。本発明の医薬組成物はまた、皮膚瘢痕の形成、肥厚性皮膚瘢痕、ケロイド、細胞の増殖および移動、炎症、サイトカインの合成および発現、細胞外マトリックスの合成および蓄積、ならびに成熟のような創傷治癒段階に影響を及ぼす異常に関連する前記皮膚障害を予防するために使用することもできる。これらの皮膚瘢痕、肥厚性皮膚瘢痕、ケロイド、創傷治癒段階に影響を及ぼす異常に関連する前記皮膚障害の前記予防は、本発明の医薬組成物の局所投与により、特に、クリーム製剤（シリアンクリーム剤）での医薬組成物の局所投与により実施することができる。
【００３４】
別の実施形態では、細胞異常増殖障害は、扁平上皮癌またはがんから選択される。理論に拘泥されるものではないが、ＭＦＧは、幾種類かのタンパク質と他の成分、とりわけ、共役リノール酸、スフィンゴミエリン、酪酸、エーテル脂質、β−カロテンおよびビタミンＡおよびビタミンＤを含み、それらはｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデルおよびヒトがん細胞株において発癌を抑制することができる。従って、ＭＦＧ中に存在するラクトアドヘリン、アネキシンＶは、局所適用されると、血液凝固を抑制し、プロトロンビンおよび／またはトロンビンの活性化を抑制することができる。トロンビンは静脈血栓症だけでなく、腫瘍成長、転移および血管形成も誘導すると認識されているため、医薬組成物中に存在するＭＦＧをがん疾患の治療に使用することができる。本願では、皮膚熱損傷への局所適用にＭＦＧが存在するため、幾つかのアラキドン酸代謝産物（ＰＧＥ２、ＴＸＡ２およびＬＴＢ４）が抑制される。前記代謝産物は、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、肺がん、皮膚がん、肝臓がん、膀胱がんおよび結腸がんなどの多くのがんに関与するため、２０ｗｔ％以上のＭＦＧを含む本発明の医薬組成物をこのようながんの治療に、発癌および腫瘍の転移能の低下に、腫瘍成長の低下に使用することができる。異常な細胞増殖の過程にシクロオキシゲナーゼ１および２（ＣＯＸ）、リポオキシゲナーゼ（ＬＯＸ）が関与する前記がんは、本発明の医薬組成物で治療することができる。
【００３５】
インテグリンαＶβ３に結合するＲＧＤペプチドが関与するがんは、本発明の医薬組成物で治療することができる。前記組成物は、線維芽細胞によるＥＣＭ合成を阻害することにより、乳がんなどのがんの転移の治療または予防に使用することもできる。
【００３６】
細菌感染および／またはウイルス感染、例えば、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｉｌｌｏｒｙ）、シトロバクター・ローデンチウム（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ）、ヘリコバクター・ヘパティカス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｈｅｐａｔｉｃｕｓ）、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ）の感染による慢性炎症過程に起因するがんは、感染により誘発される慢性炎症と同様に、本発明の医薬組成物を用いることにより治療することができる。
【００３７】
がんによる侵害受容および疼痛もまた、２０ｗｔ％以上のＭＦＧを含む医薬組成物を用いることにより、予防するおよび／または治療もしくは減弱することができる。
【００３８】
任意選択により、このようながんの治療（例えば、化学療法）に加えて、本発明の医薬組成物を治療として使用できる他のがんは、腺癌、黒色腫、白血病、膠芽腫、結腸がん、卵巣がんから選択することができる。
【００３９】
別の実施形態によれば、本医薬組成物は、皮膚創傷および皮膚熱傷、特に、緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に感染した皮膚創傷および皮膚熱傷の治療に使用することができる。酸化亜鉛または抗生物質などの追加の抗感染薬、抗真菌薬および抗微生物薬がなくても、本発明の医薬組成物中に有効成分としてＭＦＧが２０ｗｔ％以上あれば、患者、好ましくは熱傷患者の創傷および熱傷への、グラム陰性桿菌である緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の感染および／または再コロニー形成を治療および予防するのに効果的である、またはスルファジアジンと同じくらい十分な効果がある。ＭＦＧを含むが抗感染薬を添加していないこのような医薬組成物を使用する利点の１つは、緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）などの病原菌の薬物耐性が生じないことである。さらに、本発明のこのような医薬組成物は、薬物耐性を示す緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に感染したこのような皮膚創傷または皮膚熱傷創傷の治療に使用することができる。
【００４０】
本発明はまた、２０ｗｔ％以上の乳脂肪球（ＭＧＦ）と、少なくとも１種のＣ１２〜Ｃ２０脂肪酸とを含み、酸化亜鉛を含まない医薬組成物を有効量、対象に投与することを含む、対象の皮膚障害および／または細胞異常増殖障害の治療方法にも関する。前記投与は、局所投与、静脈内投与、筋肉内投与、または経口投与である。
【００４１】
本発明はさらに、懸濁製剤またはクリーム製剤での本発明の医薬組成物の製造方法に関する。製剤、即ち、水中油型エマルションの形態は、一方のまたは他方の形態を得るために添加される医薬品添加物に依存する。前記方法は、沸騰水に乳化剤を溶解する工程を含む。
【００４２】
この工程で、水に可溶な化合物を全て添加することができる。乳化剤は、アルキルアルコール、アルキルポリグルコシド、ポリグリセリンアルキルエステル、アルキルアルコールのＣ１〜Ｃ４エステル、アルキルカルボキシレートのＣ１〜Ｃ４エステル、アルキルアミド、アルキルベタイン、およびアルキルホスフェートまたはリン脂質、アルキル第四級アミン、アルキルアミンオキサイド、ポリエトキシ化アルキルアルコール、ポリエチレングリコールのアルキルエステル、およびこれらの混合物から選択することができる。好ましくは、乳化剤はトリエタノールアミンである。
【００４３】
本方法は、ＭＦＧと脂肪酸とを含む油状物を、前記成分の融点まで加熱することにより融解することを含む別の工程を含む。油状物は、パラフィン、ワセリン、ミリスチン酸イソプロピルから選択される油状の医薬品添加物をさらに含んでもよい。次いで、本方法は、融解した油状物を溶解した乳化剤に、１２００回転／分の速度のミキサーで５分間混合またはブレンドする工程を含む。
【００４４】
当業者は、製剤についての以下の説明および例示、ならびにｉｎ  ｖｉｖｏ実験およびアッセイの結果に鑑みて、本発明の医薬組成物の製造プロセスおよびその特性をさらによく理解することができるであろう。
【実施例】
【００４５】
実施例１：シリアン懸濁剤
この製剤は、有効成分としてＭＦＧを水中油型エマルションの形態で含有し、注射投与（静脈内もしくは筋肉内）または経口投与に比較的好適である。この製品は、ＩＶ、ＩＭ注射用および経口投与用である。
シリアン懸濁剤の処方は次の通りである。
2015522651.tif 000002
【００４６】
有効成分として使用されるＭＦＧは、直径１〜１０μｍである。ＭＦＧは市販されており、即ち、バターオイルまたは純バター脂ギーから製造され、これは１００％ＭＦＧを含有する。オレイン酸は、その液体の形態が懸濁液の維持を助けるため、好ましい脂肪酸である。
【００４７】
懸濁剤は、欧州特許第０３０６９７１号明細書に記載されるのと同様に製造することができる。この製剤は次のように処理される。
１．ミキサーに水を入れ、沸点まで加熱する。この段階で、トリエタノールアミンなどの水に溶解し得る物質を添加する。
２．油状物であるＭＦＧおよびオレイン酸を融点まで加熱する。
３．融解した油状物を水の混合物にゆっくり添加する。この混合は、１２００回転／分の速度で約５分間継続する。
このプロセスは滅菌条件下で行った。このようにして、この滅菌懸濁剤を滅菌ボトルに詰める。
【００４８】
実施例２：シリアンクリーム剤
クリーム剤の形態のこの製剤は、有効成分としてＭＦＧを水中油型エマルションの形態で含有し、局所投与に比較的好適である。一般的に、外用軟膏製剤はクリーム製剤よりも患者に受け入れられ難く：クリーム剤の方が軟膏より適用し易く、衣類の汚れを引き起こし難いと認識されている。従って、患者の認容性を高めるために、ＭＦＧの新規なクリーム製剤が開発されてきた。
シリアンクリーム剤の処方は次の通りである。
2015522651.tif 000003
【００４９】
有効成分として使用されるＭＦＧは、直径１〜１０μｍである。ＭＦＧは市販されており、即ち、バターオイルまたは純バター脂ギーから製造され、これは１００％ＭＦＧを含有する。
【００５０】
セテアリン酸を使用すると製剤がクリーム状の形態になるため、セテアリン酸の使用が好ましい。
【００５１】
ミリスチン酸イソプロピルと流動パラフィンは、ガーゼによるクリーム剤の吸収を相乗的に低減し、ガーゼが熱傷部位に接着することを防止する。
【００５２】
クリーム剤は、欧州特許第０３０６９７１号明細書に記載されるのと同様に製造することができる。この製剤は次のように処理される。
１．ミキサーに水を入れ、沸点まで加熱する。この段階で、水に溶解し得る物質であるトリエタノールアミンを添加する。
２．油状物であるＭＦＧ、セテアリン酸、ミリスチン酸イソプロピルを、さらにワセリンおよび流動パラフィンと共に融点まで加熱する。
３．融解した油状物を水の混合物にゆっくり添加する。この混合は、１２００回転／分の速度で約５分間継続する。
このプロセスは滅菌条件下で行い、冷却後、クリーム剤をチューブに充填する。最終的なクリーム剤に微生物汚染がないか試験する。
【００５３】
実施例３：シリアンハムスターにＤＭＢＡにより誘発させた扁平上皮癌の処置
本発明の医薬組成物である、２０％のＭＦＧを含有するシリアン懸濁剤を、頬袋（ｂｕｃｃａｌ  ｐｏｕｃｈ）がＤＭＢＡ（７−１２−ジメチルベンズ［ａ］アントラセン）により誘発させた扁平上皮癌に罹患しているシリアンハムスターに静脈内投与する。
【００５４】
動物実験
動物の取り扱いは、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）のガイドラインおよび推奨に従って行った。実験は、１００〜１１０ｇの８〜１０週齢の雄性シリアンゴールデンハムスターで行った。
【００５５】
発癌
全ての動物で、ハムスターの右頬袋粘膜にＤＭＢＡ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）の０．５％流動パラフィン溶液を４号ブラシで週３回、１４週間塗布した。
【００５６】
腫瘍評価
本発明の医薬組成物で処置を開始する前に、各動物の頬袋を検査し、前癌病変または腫瘍発生を評価した。平均腫瘍体積（４／３・πｒ３）（ｒ＝１／２腫瘍直径（ｍｍ））と腫瘍の平均数とを掛けることにより、腫瘍形成およびサイズを算出した。組織病理分析を行うために、腫瘍の試料をホルマリン固定し、パラフィン包埋パラフィンし、その切片をヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。シリアン懸濁剤の投与中、頬袋の腫瘍を週１回、肉眼で検査した。処置後、腫瘍発生率、体積および制御率を調べ、算出した。
【００５７】
本発明の医薬組成物を用いた動物の処置
シリアン懸濁剤をチューブを通して静脈内投し、各動物の大腿静脈に導入した。無作為化した後、動物を、動物各１０匹からなるＡ、ＢおよびＣの３群に割り付けた。Ａ群では、各動物にシリアン懸濁剤０．２ｍｌを毎日投与した。Ｂ群では、各動物に、有効成分であるＭＦＧを含まないシリアン懸濁剤の基剤０．２ｍｌを毎日投与した。Ｃ群では、各動物に生理食塩水溶液０．２ｍｌを毎日投与した。
【００５８】
組織病理分析
頬袋全体を切除し、目に見える腫瘍の数を計数するために透明板上で平らに伸ばした。ホルマリン固定した頬袋をほぼ同じ幅の４〜６片に切断し、スイスロール状に巻き、処理し、パラフィンに包埋した。組織病理分析を行うために、各試料の切片（５μｍ）３０個に切断し、１番目、１５番目、および３０番目のスライドをヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。確立された基準（Ｋｒａｍｅｒ  Ｉ，Ｌｕｃａｓ  Ｒ，Ｐｉｎｄｂｏｒｇ  Ｊ，Ｓｏｂｉｎ  Ｌ．ＷＨＯ，Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｎｇ  ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  ｏｒａｌ  ｐｒｅｃａｎｃｅｒｏｕｓ  ｌｅｓｉｏｎｓ：  ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｐｌａｋｉａ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｌｅｓｉｏｎｓ：ａｎ  ａｉｄ  ｔｏ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｏｒａｌ  ｐｒｅｃａｎｃｅｒ．Ｏｒａｌ  Ｓｕｒｇ．Ｏｒａｌ  Ｍｅｄ．Ｏｒａｌ  Ｐａｔｈｏｌ  １９７８；４６：５１８−５８９．Ｌｅｉｎｉｎｇｅｒ，Ｉ．；ＫＪｏｋｉｎｅｎ，Ｍ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒｓ  ｉｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｉｍａｌｓ．Ｔｕｒｏｓｏｖ，Ｖ．，ｅｄｉｔｏｒ．Ａｌｂａｎｙ，ＮＹ：ＩＡＲＣ；１９８２．ｐ．１６７−１６９）を用いて、基底細胞過形成、異形成、扁平上皮癌および乳頭腫の診断を行った。
【００５９】
結果
−シリアン懸濁剤で処置する前
ハムスターの頬袋（ＨＢＰ）にＤＭＢＡを１４週間局所適用した結果、ハムスターの口腔内に成熟した大きい外方増殖性腫瘍と、十分に分化した扁平上皮癌が生じた。平均腫瘍体積１０８ｍｍ３±９ｍｍ３の１１０％腫瘍形成が認められる（図１、Ａ）。組織学的に、ＤＭＢＡにより誘発させたＨＢＰ腫瘍は、扁平上皮が結合組織に乳頭状に突出した浸潤扁平上皮癌であった（図１Ｂ、ＣおよびＤ）。
【００６０】
−シリアン懸濁剤で処置した後
巨視的には、第１週に、処置群Ａでは他の群（Ｂ群およびＣ群）と比較して腫瘍サイズの約２０％減少が認められた。第２週に、処置群Ａでは対照群およびプラセボ群（それぞれ、Ｂ群およびＣ群）と比較して腫瘍の色が暗色から薄赤色に変化することも判明し、これは腫瘍の血液灌流を示す。処置群Ａでは、腫瘍は凹凸のある白みがかった層に覆われていたが、Ｂ群およびＣ群ではそのようになっておらず、この層はなかった。シリアン懸濁剤の静脈内投与により、腫瘍体積が顕著に減少した。この減少は、処置開始後、３週目に始まった。処置開始後８週間の時点では、シリアン懸濁剤で処置した動物には、もはや腫瘍が認められなかった。Ｂ群およびＣ群では腫瘍が認められ、腫瘍の形成に変化がなかった（図２）。Ｂ群およびＣ群と比較して、シリアン懸濁剤で処置した群の動物には、悪性新生物または前癌病変は認められなかった。
【００６１】
これらの結果により、ＭＦＧが患部（腫瘍）に集中し、そのため、処置した動物では処置の第１週に腫瘍体積が２０％減少し、シリアンハムスターでは８週間処置した後に腫瘍が消失することが示唆される。従って、本発明の医薬組成物であるシリアン懸濁剤は、扁平上皮癌のモデルであるこれらのタイプの腫瘍を治療するのに効果的であることが実証される。
【００６２】
実施例４：動物耳モデルにおける肥厚性瘢痕の処置
本発明の医薬組成物である、２５％のＭＦＧを含有するシリアンクリーム剤を、ヒト肥厚性瘢痕のモデルであるウサギの耳に誘発させた肥厚性瘢痕を生じている雄性ニュージーランド種ウサギに局所投与する。
【００６３】
動物試験
Ｍｏｒｉｓらにより記載された肥厚性瘢痕耳モデル（Ｍｏｒｒｉｓ  ＤＥ，Ｗｕ  Ｌ，Ｚｈａｏ  ＬＬ，Ｂｏｌｔｏｎ  Ｌ，Ｒｏｔｈ  ＳＩ，Ｌａｄｉｎ  ＤＡ，Ｍｕｓｔｏｅ  ＴＡ．Ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｆｏｒ  ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ  ｄｅｒｍａｌ  ｓｃａｒｒｉｎｇ：ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｉｅｓ．ＰｌａｓｔＲｅｃｏｎｓｔｒ．Ｓｕｒｇ．１９９７  Ｓｅｐ；１００（３）：６７４−８１）に従って、体重２．５〜３．０ｋｇの雄性ニュージーランド種ウサギ１０匹の耳に肥厚性瘢痕を誘発させた。動物の取り扱いは、実験室条件および獣医師による監督ならびにＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）のガイドラインおよび推奨に従って行った。
【００６４】
創傷損傷による肥厚性瘢痕の誘発
直径７ｍｍの４つの円形の全層皮膚を、顕微手術を用いることにより各耳の腹側面を軟骨が露出するまで切除した。軟骨膜層を除去すると創傷の上皮化が遅延し、それにより肥厚性瘢痕が誘発される。
【００６５】
本発明の医薬組成物を用いた処置
動物を各５匹からなる２群に割り付けた。第１群では、２５％のＭＦＧを含有するシリアンクリーム剤を創傷に毎日４回、術後２８日間適用した。第２群では、有効成分を含まないシリアンクリーム剤（プラセボ）を創傷に毎日４回、術後２８日間適用した。２８日目の術後２８日目にウサギを犠牲にし、瘢痕を正常な周囲組織の薄い縁部と共に完全に切除した。組織病理分析および組織形態計測学的分析を行うために、瘢痕を１０％ホルマリンで固定し、その切片をヘマトキシリン・エオシン染色した。全ての瘢痕について組織形態計測学的検査を用いて、全瘢痕面積（肥大面積＋ベースライン）をベースライン面積で割ることにより、瘢痕肥大指数（ＳＨＩ）を算出した。スチューデントのｔ−検定を用いて皮膚に創傷がない群と他の群との比較を行い、試験群間の平均を比較した。有意性のレベルはＰ値０．０５未満に設定した。データは、ＳＨＩの平均±ＳＥＭとして示した。
【００６６】
結果
ＭＦＧクリーム剤を含有するシリアンクリーム剤を適用すると、プラセボ群と比較して術後の血液凝固が抑制されることが判明した。この第１群では痂皮形成がなく、創傷は３日後から創傷が治癒するまで白みがかった表面皮膜で被覆されていた。プラセボ群では、４日後に痂皮が形成された。プラセボ群の創傷は、２５％のＭＦＧを含むシリアンクリーム剤を局所適用した群よりも１４日早く治癒したが、この処置群だけ、肥厚性瘢痕の形成が予防され、プラセボ群で認められたものと反対に、紅斑性、肥厚性および比較的大きい創傷は認められなかった（図３ＡおよびＢ）。２５％のＭＦＧを含む医薬組成物で処置した動物群では、平均肥厚性瘢痕指数（ＳＨＩ）が１．０８±０．０１であったが、それに対してプラセボ群ではＳＨＩが１．５４±０．０３（Ｐ＝０．０３）であった（図４）。これは処置群における肥厚性瘢痕の８５％減少に対応し、それは細胞外マトリックス、特に、コラーゲンの合成が阻害されたことによるものである。従って、クリーム剤の形態で適用すると、ＭＦＧは肥厚性瘢痕形成を予防することが分かる。また、発明の医薬組成物は、コラーゲンの過剰な蓄積が関与する他の線維増殖性障害にも効果的となり得ることも示唆される。
【００６７】
実施例５：創傷および熱傷の処置
炎症を軽減し、熱傷および熱損傷を治療するために、熱傷創を負っている雄性ニュージーランド種ウサギに、本発明の医薬組成物である、２５％のＭＦＧを含有するシリアンクリーム剤を局所投与する。
【００６８】
動物試験
体重２〜２．５ｋｇの雄性ニュージーランドホワイト種ウサギ３０匹をこの実験に使用した。動物の取り扱いは、実験室条件および獣医師による監督ならびにＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）のガイドラインおよび推奨に従って行った。
【００６９】
熱傷創および熱損傷の誘発
Ｋｎａｂｌらにより記載されたアルミニウムスタンプ（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｐａｒｔｉａｌ  ｓｋｉｎ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ｂｕｒｎｓ：ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｂｕｒｎ  ｗｏｕｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｂｕｒｎｓ  １９９９；２５：２２９−３５）を変更した。スタンプの加熱面における正確な最適温度の監視が可能となるように、熱電対型のフィードバックセンサを備えた電子温度制御器を設けた。さらなる温度制御を行うためにディマーも組み込んだ。このようにして、アルミニウムスタンプ温度の連続的な確認および監視を達成した。約３．８ｃｍ２の熱傷面積が生じるように、通常の半田ごてに直径２．２ｃｍの丸いスタンプを取り付けた。電流のスイッチを入れて１５分後に所望のスタンプ温度１００℃に達した。次いで、それを１２秒間当てて全層皮膚熱傷を生じさせた。
【００７０】
本発明の医薬組成物を用いた処置
熱傷を受けた動物を同等の３群に無作為に割り付けた。各群は動物１０匹からなる。Ａ群では、動物は全てシリアンクリーム剤２ｇを受傷部位に付けて処置した。Ｂ群では、動物は全て、対照として単なる生理食塩水で被覆したままにし、Ｃ群（プラセボ群）では、動物は全て、ＭＦＧを含まないシリアンクリーム剤２ｇで処置した。その後、全動物の熱傷部位を熱傷後２時間閉塞性創傷被覆材（Ｔｅｇａｄｅｒｍ，３Ｍ，ＵＳＡ）で被覆した。
【００７１】
アラキドン酸代謝産物の抑制の測定
処置を適用して２時間後に、真皮および表皮を含む熱傷を受けた皮膚から約２ｃｍ２の皮膚生検を採取した。生検を３８℃の生理食塩水で洗浄し、Ｅｌｉｓａアッセイ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ＵＫ，）によるアラキドン酸代謝産物：プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、トロンボキサンＢ２（ＴＸＢ２）およびロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）の測定に使用した。ＴＸＢ２は不安定であるため、それらは、通常、それらの安定な代謝産物であるＴＸＡ２を測定することにより定量される。分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて統計解析を行った。コントラストを９５％信頼区間で形成し、その後、シェッフェの検定による有意性分析を行った。データは、平均±１．９６＊ＳＥＭである。解析は、（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  １９９８）ｖｅｒｓｉｏｎ２．０．を用いて行った。
【００７２】
結果
熱傷を受けた皮膚で、２５％のＭＦＧを含有するシリアンクリーム剤で局所処置を行うと、対照群およびプラセボ群と比較して、ＰＧＥ２（Ｐ＝０．００００）（図５Ａ）、ＴＸＢ２（Ｐ＝０．００００）（図５Ｂ）およびＬＴＢ４（Ｐ＝０．００００）（図５Ｃ）の放出が有意に抑制された。これらの結果から、ＭＦＧを有効成分として含む医薬組成物で熱損傷した皮膚の熱傷創の局所処置を行うと、アラキドン酸代謝産物の放出が抑制されることが分かる。前記代謝産物は、熱傷創の炎症過程の一部またはその産物であるメディエーターである。それらは、熱傷浮腫をきたす血管透過性亢進および静水圧上昇の原因となる。ＰＧＥ２は、微小血管透過性亢進と相まって浮腫の一因となる熱傷後血管拡張を創傷に引き起こす比較的強力な炎症メディエーターの１つであると思われることが公表された。また、プロスタグランジンが炎症における疼痛および発熱の惹起に関与することも知られている。特定の抗プロスタグランジン剤は、動物におけるこれらの進行性病変の予防や、熱傷後の皮膚壊死の深度および量の低減に繋がる皮膚灌流の改善に効果的な可能性があることも分かっている。以前の研究において、全層熱傷で、様々なトロンボキサン阻害剤を用いて熱傷治療すると、熱傷後の皮膚微小循環が改善し、熱傷後の浮腫が減少し、熱傷創治癒が改善し、皮膚灌流が改善した。他の科学出版物では、ＬＴＢ４合成またはＬＴＢ４受容体を阻害すると、敗血症の場合にはマウス腹腔への好中球の移動が減少し、好中球および好酸球の浸潤が抑制され、マウスおよびラットの足の生検で炎症性疼痛の抗侵害受容効果を示すことも実証されている。
【００７３】
従って、この実験のこれらの結果から、２０％以上のＭＦＧを有効成分として含む医薬組成物は、クリーム剤の形態で前記組成物を局所投与した後、アラキニドン酸代謝産物であるＰＧＥ２、ＴＸＢ２およびＬＴＢ４が抑制されることにより、熱傷創の治療に効果的であることが分かる。
【００７４】
実施例６：緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に感染した創傷および熱傷の処置
熱傷創を負い、緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に感染した雄性Ｗｉｓｔａｒラットに、本発明の医薬組成物である、２５％のＭＦＧを含有するシリアンクリーム剤を局所投与する。局所抗微生物療法は、依然として最も重要な熱傷創治療方法の１つである。局所抗微生物療法の目的は、微生物のコロニー形成およびその後の増殖を抑えることである。現在、スルファジアジン銀（ＳＳＤ）が最も広く使用されている局所抗微生物剤である。
【００７５】
動物試験および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｏｎｓａ）の感染
体重２００〜２２０ｇの雄性Ｗｉｓｔａｒラット３２匹を使用し、その取り扱いは、実験室条件および獣医師による監督ならびにＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）のガイドラインおよび推奨に従って行った。ラットに麻酔した後、背中を剃毛した。標準的方法を用いて、ラットを沸騰水に入れることにより皮膚全層背側熱湯傷を各ラットの体表面の約１５％に生じさせた。乳酸加リンゲル液２ｍｌを腹腔内注射して動物を蘇生させた。熱傷の１０分後に、各動物に緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（ＡＴＣＣ  ２７８５３）１×１０８コロニー形成単位を含有する液体培地０．５ｍｌを塗布することにより接種した。動物を別々の滅菌ケージに入れ、回復させた。
【００７６】
抗微生物活性の試験
２４時間後、動物を４群に動物各８匹ずつ無作為に割り付けた。第１群では、２５％のＭＦＧを含有するシリアンクリーム製剤を熱傷創動物に１日２回局所適用した。プラセボ群である第２群では、動物は、ＭＦＧを有効成分として含まないシリアンクリーム剤基剤を１日２回熱傷創に付けて局所処置を行った。第３群では、動物は、スルファジアジン銀１％（Ｆｌａｍｍａｚｉｎｅ（商標）Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｎｅｐｈｅｗ）で１日２回処置した。対照群である第４群では、熱傷を受け、感染した動物に０．９％塩化ナトリウム溶液０．７ｍｌを局所適用した。滅菌ガーゼをこれらの部位に被せ、創傷被覆材は全てスキンステープラで取り付けた。
【００７７】
熱傷損傷後７日後に動物を全て麻酔し、屠殺した。培養物は全て、無菌法を用いて得た。最初、開胸術を行った。左心室から血液培養物を得、肺生検を得た。血液標本をブレインハートインフュージョン液体培地に入れ；両方とも３５℃でインキュベートし、単離した生物を標準的方法で同定した。
【００７８】
熱傷焼痂の中心から皮膚全層穿刺生検９ｍｍを得た。焼痂およびその下にある筋膜を除去した後、熱傷焼痂深部の傍脊柱筋の分離生検（ｓｅｐａｒａｔｅ  ｂｉｏｐｓｙ）を得た。標準的方法（Ｕｌｋｕｒ，Ｅｒｓｉｎ  ＭＤ；Ｏｎｃｕｌ，Ｏｒａｌ  ＭＤ；Ｋａｒａｇｏｚ，Ｈｕｓｅｙｉｎ  ＭＤ；Ｃｅｌｉｋｏｚ，Ｂａｈａｔｔｉｎ  ＭＤ；Ｃａｖｕｓｌｕ，Ｓａｂａｎ  ＭＤ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  Ｓｉｌｖｅｒ−Ｃｏａｔｅｄ  Ｄｒｅｓｓｉｎｇ（Ａｃｔｉｃｏａｔ（商標）），Ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．５％（Ｂａｃｔｉｇｒａｓｓ（登録商標）），ａｎｄ  Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ  １％（Ｓｉｌｖｅｒｄｉｎ（登録商標））ｆｏｒ  Ｔｏｐｉｃａｌ  Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｉｎ  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ−Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ，Ｆｕｌｌ−Ｓｋｉｎ  Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  Ｂｕｒｎ  Ｗｏｕｎｄｓ  ｉｎ  Ｒａｔｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｕｒｎ  Ｃａｒｅ  ＆  Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ．Ｉｓｓｕｅ：Ｖｏｌｕｍｅ  ２６（５），Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ／Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００５，ｐｐ  ４３０−４３３．Ｈｅｒｎｄｏｎ  ＤＮ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｈｅｒｎｄｏｎ’ｓ  ｔｏｔａｌ  ｂｕｒｎ  ｃａｒｅ．２ｎｄ  ｅｄ．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．；２００１．ｐ．９８−１６９）を用いて、焼痂および筋肉の分離定量培養を行った。
【００７９】
結果
実験プロトコル全体を通して、動物の死亡は記録されなかった。接種した生物の各培養部位からの回収頻度を表１に詳述する。塗布した生物は対照群およびプラセボ群からのみ回収された。
2015522651.tif 000004
【００８０】
この結果、２５ｗｔ％のＭＦＧを含有するシリアンクリーム剤は、効果的な抗シュードモナス剤である。シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種は、熱傷を受けた患者の深刻な感染の要因となる病原体である。熱による熱傷または手術創の場合のように、宿主が免疫不全状態のとき、この日和見細菌は迅速にコロニー形成し、熱傷部位や創傷部位に感染する。熱傷創感染の有効な療法には、非経口投与されるスペクトルの広い抗生物質の費用がさらに必要となる。この試験において、ＭＦＧを含み、追加の抗生物質を含まない医薬製剤は効果的であり、熱傷創の感染の予防および治療に使用することもできる。
【図１Ａ】
2015522651.tif 000005
【図１Ｂ】
2015522651.tif 000006
【図１Ｃ】
2015522651.tif 000007
【図１Ｄ】
2015522651.tif 000008
【図２Ａ】
2015522651.tif 000009
【図２Ｂ】
2015522651.tif 000010
【図２Ｃ】
2015522651.tif 000011
【図２Ｄ】
2015522651.tif 000012
【図３Ａ】
2015522651.tif 000013
【図３Ｂ】
2015522651.tif 000014
【図４Ａ】
2015522651.tif 000015
【図４Ｂ】
2015522651.tif 000016
【図４Ｃ】
2015522651.tif 000017
【図５】
2015522651.tif 000018
【国際調査報告】
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