(57)【要約】  細胞増殖性障害の個体を処置する方法において、かかる処置を必要とする個体に治療有効量の化合物プテロスチルベンを投与するステップを含み、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を高める方法を提供する。ある実施形態では、１２−ＨＥＴＥのレベルをプテロスチルベンの投与によって低下させることができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞増殖性障害の個体を処置する方法において、かかる処置を必要とする個体に治療有効量の化合物プテロスチルベンを投与するステップを含み、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を高めることを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記ＵＧＴ活性をＵＧＴ発現の誘導によって高めることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法において、前記個体がヒトであることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法において、前記プテロスチルベン化合物が、薬学的に許容される担体又は栄養補給食品として許容される担体を含む組成物で用意されることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法において、総用量に対する前記治療有効量のプテロスチルベンが、前記組成物の総重量を基準にして、約０．１重量％〜約１０重量％の範囲であることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項４に記載の方法において、総用量に対する前記治療有効量のプテロスチルベンが、前記組成物の総重量を基準にして、約０．１重量％〜約０．５重量％の範囲であることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項４に記載の方法において、１日総用量に対する前記治療有効量のプテロスチルベンが、約５ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲であることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項４に記載の方法において、１日総用量に対する前記治療有効量のプテロスチルベンが、約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇの範囲であることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項７に記載の方法において、前記化合物の投与経路が、経口、局所、皮内、経皮及び皮下からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項７に記載の方法において、前記細胞増殖性障害が皮膚がんであることを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法において、前記皮膚がんが、基底細胞癌、有棘細胞癌、悪性黒色腫、カポジ肉腫、メルケル細胞癌及び皮膚のリンパ腫からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法において、前記悪性黒色腫が転移性であることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項７に記載の方法において、前記細胞増殖性障害が日光角化症及び異形成母斑からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法において、１２−ＨＥＴＥのレベルが低下することをさらに特徴とする方法。
【請求項１５】
個体におけるＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性の、ＵＶにより誘発される消失を防止又は抑制する方法において、かかる処置を必要とする個体に治療有効量の化合物プテロスチルベンを投与するステップを含み、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を高めることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法において、前記ＵＧＴ活性をＵＧＴ発現の誘導によって高めることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法において、前記個体が細胞増殖性障害に罹患していることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法において、前記個体がヒトであることを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法において、前記プテロスチルベン化合物が、薬学的に許容される担体又は栄養補給食品として許容される担体を含む組成物で用意されることを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法において、総用量に対する前記治療有効量のプテロスチルベンが、前記組成物の総重量を基準にして、約０．１重量％〜約１０重量％の範囲であることを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項１９に記載の方法において、総用量に対する前記治療有効量のプテロスチルベンが、前記組成物の総重量を基準にして、約０．１重量％〜約０．５重量％の範囲であることを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項１９に記載の方法において、１日総用量に対する前記治療有効量のプテロスチルベンが、約５ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲であることを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項１９に記載の方法において、１日総用量に対する前記治療有効量のプテロスチルベンが、約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇの範囲であることを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２２に記載の方法において、前記化合物の投与経路が、経口、局所、皮内、経皮及び皮下からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２２に記載の方法において、前記細胞増殖性障害が皮膚がんであることを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法において、前記皮膚がんが、基底細胞癌、有棘細胞癌、悪性黒色腫、カポジ肉腫、メルケル細胞癌及び皮膚のリンパ腫からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法において、前記悪性黒色腫が転移性であることを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２２に記載の方法において、前記細胞増殖性障害が日光角化症及び異形成母斑からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２２に記載の方法において、前記細胞増殖性障害が、乳がん、卵巣がん、子宮頚がん、前立腺がん、精巣がん、結腸直腸がん、肺がん、腎がん、肝がん、脳がん、胃がん、気管支がん、膵がん、膀胱がん及び骨がんからなる群から選択されるがんであることを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項１５に記載の方法において、１２−ＨＥＴＥのレベルが低下することをさらに特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
細胞増殖性障害の処置方法に関連して、有効量のプテロスチルベンを使用してＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を増加又は誘導する方法について記載する。ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を誘導するために個体に投与するのに好適な、プテロスチルベンを含有する医薬配合剤及び栄養補給配合剤について記載する。
【背景技術】
【０００２】
第ＩＩ相代謝の間に、内因性又は外因性の基質は、内因性分子の共有結合によってより親水性になる。第ＩＩ相は抱合代謝とも呼ばれる。なぜなら、抱合する部分、例えば、スルホナート、グルクロナート、グルタチオン、グリシナート、アセタート、及びメチラートを形成することができるからである。通例、第ＩＩ相代謝を身体が使用して、基質分子の親水性を高め、抱合した生成物の輸送及び排出を容易にする。
【０００３】
第ＩＩ相グルクロン酸抱合反応は、酵素のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）ファミリーによって触媒される。グルクロン酸抱合反応は、グルクロノシル基を、ウリジン５’−ジホスホ−グルクロン酸（ＵＤＰ−ＧＡ）から、酸素、窒素、硫黄又はカルボキシル官能基を含有する基質分子に転移することからなる。ＵＧＴ酵素は、発癌物質の変異原性、及び生体異物と内因性代謝中間体との双方の毒性に対する反応性の高い防衛システムを示す。さらに、代謝的に活性な組織において、一定の転写因子、例えばペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）は、ＵＧＴ遺伝子の発現及び活性の制御に能動的な役目をする。Ｒｕｎｇｅ−Ｍｏｒｒｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＰＡＲ  Ｒｅｓ．（２００９），Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ７２８９４１，１４頁、“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ａｎｄ  ＵＤＰ−Ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ＰＰＡＲｓ”（Ｈｉｎｄａｗｉ  Ｐｕｂｌ．  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照されたい。
【０００４】
グルクロン酸抱合は、生物学的に活性な内因性ホルモン及び代謝中間体の調節に生理学的な役目をする。ＵＧＴの重要な１つの内因性基質はビリルビンであり、その代謝はＵＧＴ１Ａ１によって厳しく管理され、これにより排出生成物ビリルビンジグルクロニドを形成する。別のアイソフォーム、ＵＧＴ２Ｂ４は、ヒト肝臓中で胆汁酸を抱合する主要なＵＧＴ酵素として知られており、ヒオデオキシコール酸のグルクロン酸抱合を触媒する。さらに、ＵＧＴの種々のアイソフォームが誘導可能であることが観察されており、それらの活性の制御は薬物の解毒及び排出の重要な決定因子となり得る。例えば、ＰＰＡＲはＵＧＴの制御において重要な役目をする（Ｂａｒｂｉｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００３）２７８：３２８５２−３２８６０）。
【０００５】
ＰＰＡＲ核内受容体網は、細胞エネルギーバランスの中心的な決定因子である。レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）とのヘテロ二量体の共同関係において、ＰＰＡＲは、リガンドにより活性化された核内受容体転写因子を形成し、これは細胞の脂質代謝、エネルギー恒常性及び炎症に関与する広範な標的遺伝子（ＵＧＴを含む）の発現を統合することが可能である。ＰＰＡＲ−αアイソフォームの発現は、肝臓、腎臓及び心臓において顕著であり、これらの器官で当該アイソフォームが脂肪酸の酸化の制御に従事している。ＰＰＡＲ−αは生体内変換酵素の誘導を媒介することもできる。酵素受容体活性化結合に鍵と鍵穴の一致を使用して、脂肪酸は細胞エネルギーの主要な供給源となり、ＰＰＡＲ−αの重要な生理学的活性化因子となる。上記のＰＰＡＲ−ＲＸＲヘテロ二量体は、他の活性化補助因子とともに、標的遺伝子の調節領域内のペルオキシソーム増殖因子応答配列（ＰＰＲＥ）と呼ばれるＤＮＡ配列に結合し、ＵＧＴなどの酵素の転写及び翻訳を開始する。
【０００６】
したがって、ＵＧＴの発現及び活性化を制御するために、適切且つ選択的な酵素誘導物質を提供しなければならない。ヒトにおいては、ＰＰＡＲ−αアゴニストであるクロフィブラートなど、一定のＵＧＴ誘導物質が知られている（Ｂａｒｂｉｅｒ、上記引用文中）。ラットにおいては、ＵＧＴ１Ａ１はＰＰＡＲ−αの標的遺伝子であり、ＰＰＡＲ−αアゴニストなどの一定の誘導物質に曝露すると、肝臓中でこのＵＧＴのｍＲＮＡ発現を増加させることができる（Ｓｈｅｌｂｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．ａｎｄ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ（２００６）３４：１７７２−１７７８）。
【０００７】
さらに、ＵＧＴは、１２−ヒドロキシエイコサテトラエン酸、即ち１２（Ｓ）−ＨＥＴＥ（「１２−ＨＥＴＥ」）をグルクロン酸抱合し、不活性化する事が示されている。Ｔｕｒｇｅｏｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．（２００３）４４：１１８２−１１９１を参照されたい。一定の炎症過程、さらにはＵＶにより誘発される損傷及び／又は皮膚発癌に対する反応として、アラキドン酸（「ＡＡ」）、即ち膜リン脂質中に天然に存在する脂肪酸は、リポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）によって複数の活性なエイコサノイドに代謝される。ＡＡのＬＯＸ代謝によって、ロイコトリエン及びヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴＥ）が生成する。５−ＬＯＸはロイコトリエン及び５−ＨＥＴＥの生成を担い、１２−ＬＯＸは１２−ＨＥＴＥを生成する。詳細には、リポキシゲナーゼはＡＡを不安定なヒドロペルオキシ−エイコサテトラエン酸（ＨＰＥＴＥ）に変換し、次にこれがペルオキシダーゼによって加水分解されてＨＥＴＥになる。５−ＬＯＸ及び１２−ＬＯＸの両代謝物は、アポトーシスに対する抵抗性並びに増殖、血管新生及び細胞遊走の増加によって発癌を促進することを多くの証拠が示している。５−ＬＯＸ及び１２−ＬＯＸの双方とも、正常な上皮にはほとんど存在しないが、種々の上皮がんに恒常的に発現することが多い。
【０００８】
１２−ＬＯＸｍＲＮＡのレベルが高いと、後期のがん及び予後不良と結びつくこともある。さらに、１２−ＬＯＸは、マウスモデルでの皮膚発癌において直接的な役目をすることが実証されており、１２−ＨＥＴＥは、マウスにおいて、正常な皮膚と比較して皮膚腫瘍では高レベルで検出されている。具体的には、１２−ＨＥＴＥのレベルは、乳頭腫及び有棘細胞癌において、同じマウスの正常な皮膚より５０倍の高さであった（Ｖｉｒｍａｎｉ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．（２００１）１６２（２）：１６１−１６５；Ｋｒｉｅｇ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．（１９９５）１４（２）：１１８−１２９）。別のマウスモデルでは、特定の１２−ＬＯＸ阻害剤（バイカリン）を使用すると、ＵＶＢにより誘発される皮膚のＤＮＡ損傷に対して保護性があることが実証された（Ｂｉｎｇ−Ｒｏｎｇ，Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｏｔｏｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｐｈｏｔｏｉｍｍｕｎｏｌ．Ｐｈｏｔｏｍｅｄ．（２００８）２４（４）：１７５−１８２）。この結果は皮膚がんの進行における１２−ＨＥＴＥの重要性をさらに強調するものである。このため、理論に縛られるものではないが、ヒト皮膚がんは、１２−ＬＯＸの直接的な抑制によって、又は１２−ＬＯＸシグナル伝達の抑制、即ち１２−ＨＥＴＥレベルの低下によって、処置又は防止することができると仮定される。上記のとおり、ＵＧＴは、１２−ＨＥＴＥをグルクロン酸抱合することができ、したがって不活性化することができ、身体による１２−ＨＥＴＥの排出を導く。しかし、皮膚で発現したＵＧＴは、皮膚がん及び他の増殖性障害の一番疑わしい原因因子であるＵＶ照射によって下方制御される場合がある。
【０００９】
上記を考慮すると、個体、動物又はヒトに投与することによってＵＧＴ発現を活性化又は誘導することができる酵素誘導物質又はアゴニストを提供することが望ましいであろう。さらに、ＵＧＴ発現を活性化又は誘導することができる酵素誘導物質又はアゴニストは、１２−ＨＥＴＥのレベルも低下させるであろうと期待され、このことは、当技術分野に有用な貢献として役目を果たすであろう。
【００１０】
さらに、皮膚がんを含む細胞増殖性障害の個体を処置するための酵素誘導物質又はアゴニストの使用において、かかる処置を必要とする個体に治療有効量の化合物プテロスチルベンを投与するステップを含み、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を高める使用は、当技術分野に有用な貢献となるであろう。
【発明の概要】
【００１１】
細胞増殖性障害の個体を処置する方法において、かかる処置を必要とする個体に治療有効量の化合物プテロスチルベンを投与するステップを含み、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を高める方法を提供する。
【００１２】
別の実施形態では、個体（例えば細胞増殖性障害に罹患している個体）におけるＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性の、ＵＶにより誘発される消失を防止又は抑制する方法において、かかる処置を必要とする個体に治療有効量の化合物プテロスチルベンを投与するステップを含み、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を高める方法を提供する。
【００１３】
さらなる実施形態では、前癌性日光角化症（ＡＫ）病変における１２−ＨＥＴＥのレベルを、プテロスチルベンの投与によって低下させることができる。
【００１４】
他のさらなる実施形態では、前癌性の増殖細胞又は悪性細胞における１２−ＬＯＸの発現レベルを、プテロスチルベンの投与によって低下させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、本発明の実施形態において提案されている、ＵＧＴが１２−ＨＥＴＥを不活性化することができる代謝経路を表す。
【図２】図２は、２５ｍＪ／ｃｍ２の単一線量のＵＶ−Ｂに曝露した正常なヒトメラノサイト中のＵＧＴのＵＶ−Ｂによる下方制御を表す。塗りつぶしの棒：未処置の細胞、斜線の棒：左から右へ、それぞれ４時間及び２４時間ＵＶ−Ｂ処置した細胞。
【図３】図３は、一実施形態での、正常なヒトメラノサイト中のＵＧＴ２アイソフォームの、ＵＶ−Ｂにより誘発される消失、及びプテロスチルベン（Ｐｔｅｒｏ）での前記消失の防止を表す。ＵＶ−Ｂ線量：２５ｍＪ／ｃｍ２。塗りつぶしの棒：未処置の細胞、斜線の棒：ＵＶ−Ｂ処置した細胞、縦線の棒：ＵＶ−Ｂ処置及びプテロスチルベン処置（１００ｎＭ）。
【図４】図４は、別の実施形態での、ＵＧＴアイソフォームファミリーメンバーの全ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ分析（ポジティブコントロールとしてＧＡＰＤＨ）による、初代培養の正常なヒトケラチノサイト中のＵＧＴｍＲＮＡ発現を表す。
【図５】図５は、別の実施形態での、正常なヒトケラチノサイト中のＵＧＴ２Ｂ１７アイソフォームの、ＵＶ−Ｂにより誘発される消失、及びプテロスチルベンでの前記消失の防止を表す。ＵＶ−Ｂ線量：２５ｍＪ／ｃｍ２。塗りつぶしの棒：未処置の細胞、斜線の棒：ＵＶ−Ｂ処置した細胞、縦線の棒：ＵＶ−Ｂ処置及びプテロスチルベン処置（１００ｎＭ）。
【図６】図６は、別の実施形態での、プテロスチルベン（Ｐｔｅｒｏ）又はレスベラトロール（Ｒｅｓ）５０μＭでＳＫｍｅｌ２８ヒト黒色腫細胞を処置した後のウェスタンブロット（ローディングコントロールとしてＢ−アクチン）による、１２−ＬＯＸ発現を表す。
【図７】図７は、同じヒト患者（ｎ＝６）の正常な皮膚及びＡＫにおいて測定した１２−ＨＥＴＥのレベルを表す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
細胞増殖性障害の処置のために個体に治療有効量で投与することができる、プテロスチルベンを含有する安全で有効な健康補助食品を用意した。一実施形態では、細胞増殖性障害の個体を処置する方法は、かかる処置を必要とする個体に治療有効量の化合物プテロスチルベンを投与するステップを含み、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を高める。
【００１７】
ある実施形態では、前記プテロスチルベンを含有する安全で有効な健康補助食品は、日光角化症（ＡＫ）及びＵＶにより誘発される皮膚の光損傷に関連する他の前癌病変の後退をもたらすことになる。さらに、前記プテロスチルベンを含有する健康補助食品は、非黒色腫皮膚がん（ＮＭＳＣ）の処置、抑制及び／又は防止に使用されることになる。
【００１８】
さらなる実施形態では、細胞増殖性障害に罹患している個体において、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性の消失を抑制する方法は、かかる処置を必要とする個体に治療有効量の化合物プテロスチルベンを投与するステップを含み、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を高める。
【００１９】
ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）は、グルクロン酸が、高エネルギー補助因子である、ＵＤＰ−グルクロン酸から、ヒドロキシル基、カルボキシル基、アミノ基又はチオール基などの利用可能な反応中心又は求核中心を含有する生体異物、薬物又は内因性基質に転移するのを触媒する。ＵＧＴは、主として肝臓及び腸内に発現する第ＩＩ相生体内変換酵素であり、小胞体の管腔側に位置する膜結合酵素である。親基質と比較して、グルクロン酸抱合の最終生成物は、通例、極性がより高く、尿又は胆汁を通して排泄及び排出するのにより好適である。
【００２０】
ＵＧＴの内因性基質は、ビリルビン、中性ステロイド、胆汁酸、脂肪酸及びレチノイドを含む。ＵＧＴの生体異物の基質は、ベンゾ［ａ］ピレンなどの環境毒物からアセトアミノフェン及び他のＮＳＡＩＤなどの一般的な医薬までの範囲である。個別のＵＧＴアイソフォームは、基質特異性及び誘導制御について特有のパターンを呈する。種々のＵＧＴが種特異的且つ組織特異的に発現する。２つの主要なＵＧＴ遺伝子ファミリーはＵＧＴ１及びＵＧＴ２である。
【００２１】
ＰＰＡＲはＵＧＴの制御に関与することが知られている。特に、ＵＧＴは、ＰＰＡＲ−γではなくＰＰＡＲ−αの標的である。レスベラトロールは既知のＰＰＡＲ−γ活性化物質で、ＵＧＴの誘導を幾分示しているが、ＰＰＡＲ−αの活性化物質ではない。類似のスチルベンの群についての一研究において、プテロスチルベンのみがシプロフィブラートと同様にＰＰＡＲ−αを活性化した（Ｒｉｍａｎｄｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．（２００５）５３：３４０３−３４０７）。プテロスチルベンはＰＰＡＲ−γの活性化物質とは考えられていない。このサブタイプの選択性は、プテロスチルベンを使用してＵＧＴ発現を活性化又は誘導する本手法において有利であると考えられる。
【００２２】
ＵＧＴは、例えばＵＶにより誘発される皮膚発癌の過程の中で酵素１２−ＬＯＸによって生成される１２−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１２−ＨＥＴＥ）を、グルクロン酸抱合し、不活性化することがわかっている。プテロスチルベン及びその栄養補給配合剤は、ＵＧＴ活性を誘導することができ、このため皮膚における１２−ＨＥＴＥのレベルを低下させることが発見された。
【００２３】
図１は、アラキドン酸（ＡＡ）代謝及びＵＧＴ抱合代謝のモデルを示す。シクロオキシゲンセス（Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎｓｅｓ）も炎症過程において役目を果たすことができるが、本明細書では論考しない。全体として、図１は、１２−ＨＥＴＥの生成及び代謝を含む、ＵＶにより誘発される皮膚がんの進行（又はＵＶにより誘発される他の種類の皮膚損傷、例えば日焼け）において提案されるＡＡ代謝の役目を示す。
【００２４】
非黒色腫皮膚がん（ＮＭＳＣ）は、圧倒的に多いがんであり、ヒトを苦しめる。ＮＭＳＣの発生率は、他のがんの形態のすべてを合わせた発生率とほぼ同じである。アメリカがん協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）の推定によると、２００７年には、米国内で１００万件を超える新たな非黒色腫皮膚がんの症例が診断され、非黒色腫皮膚がんに関連する死亡は約２，７００件であった。しかし、この推定値は、皮膚の有棘細胞癌及び基底細胞癌については報告の必要がないことを考慮すると低く、このため、実際の年間症例件数はおそらく３００万を超えている。ＮＭＳＣには２つの主な型があり、基底細胞癌は症例の約８０％を占め、有棘細胞癌は約２０％を占める。ＮＭＳＣによる大多数の死亡の原因は有棘細胞癌である。有棘細胞癌を含むほとんどのＮＭＳＣの原因は、日光曝露及びその結果として生じる光発癌である。ＮＭＳＣの処置は外科手術であり、瘢痕及び他の病的状態が残ることが多い。
【００２５】
日光角化症（ＡＫ）は前癌性の皮膚新生物であり、有棘細胞癌を引き起こす恐れがある。ＡＫは長時間の日光曝露の結果として生じる。ＡＫ及びＮＭＳＣの他の原因は、日焼けブース又はアーク溶接のＵＶ光、Ｘ線照射、又は一定の化学物質への曝露である。ＡＫはきわめて多い病変であり、一千万人を超える米国人が罹患している。オーストラリアでは、平均的リスクの人におけるＡＫの年間進行速度は、１０，０００人当たり８〜２４人の間である。高リスクの人（ＡＫに複数箇所罹患している人）の進行速度は３年間で１２〜３０パーセントも高い。ＡＫから生じる有棘細胞がんのうち２パーセントは転移する恐れがあり、７パーセントは局所的に再発する。日光角化症は、液体窒素又は例えば５−フルオロウラシルなどの局所的化学治療で処置されることがきわめて多い。日光角化症が、他の局所用剤（ジクロフェナク及びイミキモド）、光線力学治療、ケミカルピーリング又は非分割照射若しくは分割照射のレーザー切除表面再生（ａｂｌａｔｉｖｅ  ｌａｓｅｒ  ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）で処置されることはより少ない。
【００２６】
本明細書では、当然のことながら、「日光角化症」はＡＫを生じさせる増殖性障害である。
【００２７】
処置は幾つか知られているが、処置費用、罹患率及び死亡率を低下させるために、日光角化症及び皮膚がんの形成を未然に防止又は抑制するのが望ましいであろう。生涯にわたって日光から保護することが、日光角化症及び非黒色腫皮膚がんの発症のリスクを最小限にするための優れた方法である。しかし、患者の大多数は既に広範な光損傷を有し、日光から保護する行動を変えるのは困難であることがわかっている。
【００２８】
理想的な化学的予防薬があれば、副作用を最小にするか又はなくして、前癌病変の後退を実現し、ＮＭＳＣの発症を防止し、紫外光が関与する損傷を最小限にすることができる。上記のとおり、日光角化症を除去することができる局所用剤はあるが、一般に、処置部位にかなりの炎症が生じる。新規な手法が必要である。
【００２９】
ヒト皮膚は、下方の真皮層（真皮）に載っている上表皮層（表皮）を含む。表皮は主としてケラチノサイトでできており、ケラチノサイトは基部で発生し、上へと移動し、常に置換されている。古い死細胞が落ちると置換されるため、この層はそれ自体を常に再生している。表皮はメラノサイトも含有する。メラノサイトは一般にこの層の基部近くに位置し、色素メラニンを生成し、皮膚の色に貢献し、ＵＶからの保護も付与する。表皮は、免疫系に関与する樹状（ランゲルハンス）細胞、及びこの層の基部に見られる基底細胞も含有する。表皮は扁平細胞も含む。表皮層及び真皮層は幹細胞及び毛包も含有する。哺乳動物では、メラノサイトは、他の組織の中では脳、眼、耳及び心臓にも分布している。
【００３０】
説明した皮膚細胞は、ＵＶ光により誘発される損傷、ＤＮＡ損傷及び発癌に感受性が高い。
【００３１】
プテロスチルベン（３，５−ジメトキシ−４’−ヒドロキシ−トランス−スチルベン）は経口で生体利用が可能な化合物であり、血液中半減期ｔ１／２が約１０５分である。対照的に、レスベラトロールは生体利用性が劣り、ＵＧＴによって容易に代謝され、半減期がきわめて短く（血液中でｔ１／２が約１４分）、このため、その化学的予防薬としての効力が阻害される。
【００３２】
レスベラトロールは、経口投与又は局所適用すると、マウス皮膚においてＵＶ−Ｂが媒介する細胞損傷を防止することを示した研究が幾つかある（Ａｆａｑ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｈｏｒｔ−ｔｅｒｍ  ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  Ｂ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄａｍａｇｅｓ  ｂｙ  ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  ｉｎ  ＳＫＨ−１  ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｉｃｅ，”Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００３）１８６（１）：２８−３７；Ｒｅａｇａｎ−Ｓｈａｗ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｖｅｎｔｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  Ｂ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｂｙ  ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  ｉｎ  ＳＫＨ−１  ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ  ｓｋｉｎ，”Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００４）２３（３０）：５１５１−６０；及びＡｚｉｚ，Ｍ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ−Ｂ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｄａｍａｇｅ  ｂｙ  ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｓｋｉｎ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｖｉａ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｕｒｖｉｖｉｎ，”Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．（２００５）８１（１）：２５−３１）。レスベラトロールはＵＧＴ活性を誘導することも示されている（Ｃｈｏｗ，Ｈ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｄｒｕｇ−ａｎｄ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ−ｍｅｔａｂｏｌｉｚｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ｉｎ  ａ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒ  ｓｔｕｄｙ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｅｖ．Ｒｅｓ．（Ｐｈｉｌａ．Ｐａ．），（２０１０）３（９）：１１６８−７５）。しかし、化学的予防薬としてそれをヒトに使用するのは、生体利用性に劣るため、見込みがないと思われる（少なくとも単剤としては）。レスベラトロールはヒトにおいて忍容性が高いが、容易に代謝され（皮肉にもＵＧＴによって）、半減期が短く、このため、その化学的予防薬としての効力が阻害される。
【００３３】
プテロスチルベンはブドウ及び漿果に見られる。これはレスベラトロールの天然のジメチル化類似体であるが、半減期がより長く、その理由は、ＵＧＴによるその代謝を劇的に低下させることができるメチル基による可能性が最も高い（Ｈｏｕｇｅｅ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ａ  Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓ  ｍａｒｓｕｐｉｕｍ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ  ｐｔｅｒｏｓｔｉｌｂｅｎｅ，ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｈｕｍａｎ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ，”Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ．（２００５）７１（５）：３８７−９２）。プテロスチルベンは、マウス皮膚におけるＮＦ−ＫＢ、ＡＰ−１及びｉＮＯＳの活性化の抑制を含む、マウスにおける幾つかの生物学的アッセイにおいて、レスベラトロールと同等に、又はこれより大いに強力であることが示されている（Ｃｉｃｈｏｃｋｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｔｅｒｏｓｔｉｌｂｅｎｅ  ｉｓ  ｅｑｕａｌｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｓ  ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  ｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  １２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ−１３−ａｃｅｔａｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ＮＦｋａｐｐａＢ，ＡＰ−１，ＣＯＸ−２，ａｎｄ  ｉＮＯＳ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ，”Ｍｏｌ．Ｎｕｔｒ．Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓ．（２００８）５２  Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ６２−７０）。
【００３４】
プテロスチルベン又はその誘導体を含む栄養補給配合剤を使用して、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）活性を有利に増加させる、又はそのｉｎ  ｖｉｖｏ発現を誘導することができると考えられる。このＵＧＴの上方制御により、例えば、ヒトケラチノサイト又はメラノサイトに見られるＵＶ照射に対応した下方制御を含む一定の要因によって引き起こされるＵＧＴの消失を抑制又は防止することができる。図１を参照されたい。
【００３５】
プテロスチルベンの有用な治療投与量は、限定はしないが、ヒト個体において約５ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲とすることができる。別の好適な用量範囲は、約２０ｍｇ〜約２５０ｍｇである。プテロスチルベンは、薬学的に許容される担体又は栄養補給食品として許容される担体をそれぞれ含む、医薬組成物又は栄養補給組成物として配合することができる。プテロスチルベンを含有する医薬組成物の一実施形態では、プテロスチルベンの好適な濃度は、組成物の総重量を基準にして、約０．１重量％〜約１０重量％の範囲とすることができる。
【００３６】
本発明の栄養補給組成物は、栄養補給食品として許容される担体と組み合わせて投与することができる。かかる配合剤中の活性成分は、１重量％〜９９重量％、又は０．１重量％〜９９．９重量％を占めることができる。「栄養補給食品として許容される担体」とは、配合剤の他の成分と適合性があり、ユーザーに対して有害でない任意の担体、希釈剤又は添加剤を意味する。有用な添加剤には、微結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、任意の許容される糖（例えばマンニトール、キシリトール）が含まれ、美容的使用には油系が好ましい。
【００３７】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わせて投与することができる。かかる配合剤中の活性成分は、１重量％〜９９重量％、又は０．１重量％〜９９．９重量％を占めることができる。「薬学的に許容される担体」とは、配合剤の他の成分と適合性があり、ユーザーに対して有害でない任意の担体、希釈剤又は添加剤を意味する。
【００３８】
プテロスチルベンは、例えばヒト患者には、１日投与量約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇで供与することができる。別の好適な投与量範囲は１日につき約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇである。別の好適な投与量範囲は１日につき約５０ｍｇ〜約１００ｍｇである。特に好適な投与量は、１日につき投与される約１００ｍｇである。
【００３９】
皮膚が標的器官として使用される場合、ＡＫ病変における１２−ＨＥＴＥのレベルを、プテロスチルベン補給を受ける前と後の両方で測定して、個体におけるＵＧＴ発現の誘導を評価することができる。以下は、他の測定可能な評価項目の中でも、プテロスチルベンが、ＵＧＴ発現の誘導及び／又はＵＧＴ活性の増加、１２−ＨＥＴＥレベルの低下及び／又は１２−ＬＯＸ発現の抑制をする有効性を評価するための、第ＩＩ相臨床試験の一般的な試験デザインである。
【００４０】
試験母集団
有棘細胞癌の病歴があり、現在日光角化症に罹患している３４名〜４０名の被験者が最後まで試験をすることになる。ＮＭＳＣのリスクの高い人を試験対象とし、１８歳を超えていることとする。詳細には、ここ５年以内に有棘細胞癌に少なくとも１箇所罹患したことがあり、現在前腕に少なくとも１０箇所日光角化症（ＡＫ）のある被験者とすることになる。
【００４１】
試験デザイン
試験は、ＮＭＳＣを抑制又は防止する新規な方法を評価する機会を提供する。これは、分子マーカーの分析から標準的な臨床的評価まで、最新の組成イメージングまでの種々の評価項目を利用している。このデザインにより、関連の重要な評価項目用バイオマーカー（このため種々の確認データを得ることができる）を用いて、想定薬を初めて臨床的に試験して、労力の節約を可能にする。
【００４２】
適格な被験者には、プテロスチルベンを経口で約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇの範囲の用量で投与することができる。一実施形態では、患者に１００ｍｇのプテロスチルベンを経口で毎日投与することになる。プテロスチルベンは、栄養補給食品として許容される担体と組み合わせた適切な栄養補給配合剤で供与する、又は当該担体と同時投与することができる。或いは、プテロスチルベンは、薬学的に許容される担体と組み合わせた適切な医薬配合剤で供与する、又は当該担体と同時投与することができる。
【００４３】
治療期間は約１２週間までとすることができる。被験者は、試験治療の４週、８週及び１２週に、次いで処置後には、試験の１６週及び２０週に評価されることになる。
【００４４】
プテロスチルベン補給の前と後で、広視野機能イメージング（ｗｉｄｅ−ｆｉｅｌｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ）（ＷｉＦＩ）技術を用いてＡＫ病変のイメージングを実施して、例えば血流、脂肪含量及び含水量における変化を測定することができる。広視野機能イメージング（ＷｉＦＩ）とは、２種の広視野イメージング装置、即ち空間的に調整された反射／蛍光イメージング（ｓｐａｔｉａｌｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ｒｅｆｌｅｃｔａｎｃｅ／ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ）（ＭＩ）及びレーザースペックルイメージング（ＬＳＩ）を統合したものである。ＷｉＦＩは、混濁した組織中の組織血流及び生化学的組成（即ちオキシヘモグロビン及びデオキシヘモグロビン、含水量及び脂質含量）を同時に測定することができる。これは、厚い組織中の数ミリメートルの深さでの迅速（即ちミリ秒の時間尺度）且つ局在的（即ち数十μｍ〜ｍｍ）なイベントを試験するために十分な時空間の解像度を有する。被験者は、来院毎に、この安全で（標準的なデジタル写真撮影と類似しているが、皮膚に当てられる赤色光及び近赤外光を使用して行われる）、迅速で（１０分以下）非侵襲的な測定を実施されることになる。これらの試験は、カリフォルニア大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｉｒｖｉｎｅ）のＢｅｃｋｍａｎ  Ｌａｓｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒにて実施可能である。少なくとも３箇所のＡＫを含有する日光で損傷した皮膚の８ｃｍ２切片のＷｉＦＩが、来院毎に実施されることになる。１２週には処置前と比較して、ＡＫにおける血流の低下が観察されると予想している。
【００４５】
このように、血流を非侵襲的ＷｉＦＩイメージングによって、マッピングしたＡＫの脂肪含量及び含水量と同様に検査することになる。１２−ＨＥＴＥは血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の活性化を通して血管新生を刺激することが可能であるため、プテロスチルベン補給後にＡＫ病変への血流の低下が観察されると予想している。
【００４６】
試験スケジュール
各患者に、皮膚科の審査、即ちＡＫ及び／又は日光による損傷についての両腕、両脚及び他の皮膚領域の全皮膚検査を含むがこれに限定しない一次スクリーニングのための来院が実施されることになる。以下の試験、即ち、血液試験（鑑別を伴うＣＢＣ）、包括的代謝パネル、脂質パネル及び尿検査を実施することもできる。
【００４７】
スクリーニング来院から４週間以内に、実験室試験及び血液試験をレビューする。左右の前腕のＡＫの写真撮影及び計数を行う。次いで、患者の皮膚上に試験の領域を選び（８ｃｍ×８ｃｍ）、指定してスライドにマッピングする。選んでマッピングした領域は、少なくとも３箇所のＡＫを有するものとするが、右腕でも左腕でもよい。生検前及び生検後の領域の指定を、イメージング部位に加えて行う。ＮＭＳＣと疑われる生検試料を採取する。この段階で、非侵襲的イメージング（即ちＷｉＦＩ）を実施することができる。
【００４８】
一実施形態では、皮膚の生検部位は、処置前ＡＫ（ｐｒｅ−ＡＫ）として指定することができる。生検の結果、ＡＫではなく異型の細胞構造であると判明した場合、その被験者の処置を継続し、モニターしてもよい。
【００４９】
臨床試験の後期を通して、例えば４週、８週及び１２週に、皮膚の試験領域をモニターし、検査し、写真撮影及び／又はイメージングする。有害事象について患者をモニターすることになる。
【００５０】
１２週間の最後に、皮膚の試験領域を検査し、写真撮影し、イメージングすることになる。具体的には、各患者の左右の前腕のＡＫを写真撮影し、計数する。次いで、上記の血液試験及び尿試験に加えて、ＮＭＳＣと疑われる処置後の生検試料及び処置後のＡＫ部位（ｐｏｓｔ−ＡＫ）を採取し、分析する。
【００５１】
ある実施形態では、処置後の、１６週及び２０週に（又はその前後の別の計画した時点で）、皮膚の試験領域を、上記のとおり、マッピング、検査、写真撮影及びイメージングすることになる。
【００５２】
組織サンプル及びバイオマーカー評価
開始時（処置前）及び処置後（１２週）の４ｍｍのＡＫ生検組織を各患者から得る。生検組織を半分にカットすることになる。臨床的生検法の直後に、サンプルを薄く切り、片方の半分を病理組織学的分析に送り、残ったサンプルをバイオマーカー分析のため、実験室に送ることになる。すべてのバイオマーカー分析は、処置終了後に４名の患者の一群で実施されることになり、これにより、一対のサンプルを一緒に分析することができる。
【００５３】
アラキドン酸代謝物（１２−ＨＥＴＥ及びＰＧＥ２）のレベル（ｐｇ／ｍｇタンパク質）を日光ケロトーセス（ａｃｔｉｎｉｃ  ｋｅｒｏｔｏｓｅｓ）の処置前に定量し、次いで、確立したプロトコルに従い三連四重極型質量分析計に連結した液体クロマトグラフィー（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）を使用して処置後のレベルと比較することになる。アッセイには、サンプルを調製するために、組織抽出、超音波処理、遠心分離及びタンパク質含有量の定量が必要で、その後ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを行う。ＡＫにおける１２−ＨＥＴＥ及びＰＧＥ２のレベルは、プテロスチルベン処置又はプテロスチルベン補給後に顕著に低下しているであろうと期待される。
【００５４】
ＣＯＸ−２、１２−ＬＯＸ、ＵＧＴ及び１５−ＰＧＤＨのタンパク質レベルは、確立したプロトコルに従いアクチンを基準にしたウェスタンブロットによって、半定量的に測定することになる。プテロスチルベン処置後のＡＫからの発現レベルにおける変化は、濃度測定の後で処置前のレベルと比較し、倍率変化として報告することになる。ＣＯＸ−２及び１２−ＬＯＸの発現は、プテロスチルベン処置後に顕著に低下しているであろうと期待される。逆に、ＵＧＴ及び１５−ＰＧＤＨのタンパク質レベルはプテロスチルベン補給後にＡＫにおいて顕著に増加しているであろうと期待される。
【００５５】
臨床試験評価項目
上記の試験は、ランダム化も対照群もない単一の治療群試験を説明するものである。試験の第一の目的は、プテロスチルベン補給を受ける前と後で、被験者の前癌性日光角化症（ＡＫ）病変における生理活性脂質１２−ヒドロキシエイコステトラエン酸（１２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（１２−ＨＥＴＥ）のレベルを評価することである。理論に縛られるものではないが、仮説は、試験治療が、前癌性日光角化症の後退をもたらし、皮膚の光による損傷に関連する他の前癌病変を退行させる、安全で有効な栄養補給であると判明するであろうというものである。割り付けられた試験薬のすべての用量に≧８０％のコンプライアンスを示す被験者を、主要評価項目である１２−ＨＥＴＥ（ｐｇ／ｍｇタンパク質）について評価可能であるとみなすことにする。副次的評価項目には、ＰＧＥ２（ｐｇ／ｍｇタンパク質）及びＵＧＴ、ＣＯＸ−２、１５−ＰＤＧＨ及び１２−ＬＯＸの酵素タンパク質レベルが含まれる。追加の副次的評価項目には、ＡＫ病変において測定した血流、脂肪含量及び含水量、元からのＡＫ病変の数、新たなＡＫ病変の数及び非黒色腫皮膚がん（ＮＭＳＣ）の数が含まれる。
【００５６】
送達システム
好適な剤形には、錠剤、カプセル剤、溶液剤、懸濁剤、粉末剤、ガム及び糖菓剤が含まれる。舌下送達システムには、以下に限定はしないが、舌下及び舌上用の可溶性錠剤、液滴及び飲料が含まれる。可食性フィルム、親水性ポリマー、経口可溶性フィルム又は経口可溶性小片を使用することができる。他の有用な送達システムは、口内若しくは鼻内用の噴霧剤又は吸入剤などを含む。
【００５７】
経口投与用として、錠剤、カプセル剤、丸剤、粉末剤、顆粒剤又は他の好適な剤形を調製するために、プテロスチルベンは１種又は複数種の固形不活性成分と組み合わせることができる。例えば、活性薬は、少なくとも１種の添加剤、例えば、充填剤、結合剤、軟釈剤、崩壊剤、溶解遅延剤、吸収加速剤、湿潤剤、吸収剤又は滑沢剤と組み合わせることができる。他の有用な添加剤には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、マンニトール、キシリトール、甘味剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、微結晶セルロース、シリカ、ゼラチン、二酸化ケイ素などが含まれる。
【００５８】
投与経路
化合物は、経口、舌下、頬側、経眼、経肺、経直腸及び非経腸投与、又は口内若しくは鼻内用噴霧（例えば、噴霧蒸気、液滴又は固形粒子の吸入）としての経路を含むがこれらに限定されないいずれの経路でも投与することができる。非経腸投与には、例えば、静脈内、筋肉内、動脈内、腹腔内、鼻腔内、腟内、嚢内（例えば膀胱に）、皮内、経皮、局所又は皮下投与が含まれる。やはり本発明の範囲内で企図するのは、患者の身体に、薬物の全身又は局所放出が時間をおいて起こる徐放性配合剤で、プテロスチルベンを点滴注入することである。例えば、薬物は、循環への徐放、又は腫瘍成長の局所部位への放出のために、デポーで局在化させてもよい。
【００５９】
処置は、単回の連続セッションでも、不連続のセッションでも、必要なだけの期間実施することができる。処置担当医は、患者の反応に基づいて、処置の増加、低減又は中断の仕方がわかるであろう。一実施形態によれば、処置は約４〜約１２週間実施する。処置のスケジュールは、必要に応じて反復してもよい。
【００６０】
プテロスチルベン及びその栄養補給配合剤は、基底細胞癌、有棘細胞癌、悪性黒色腫、カポジ肉腫、メルケル細胞癌、皮膚のリンパ腫、母斑、異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド及び乾癬を含むがこれらに限定されない皮膚がんなどの、様々な種類のがん及び腫瘍に対して有効であると考えられる。
【００６１】
皮膚がんは、転移性又は非転移性の固形腫瘍であり得る。したがって、本明細書で使用する「腫瘍細胞」という用語は、上記の同定された障害のうち任意の１つに罹患した細胞を含む。
【００６２】
乳がん、卵巣がん、子宮頚がん、前立腺がん、精巣がん、結腸直腸がん、肺がん、腎がん、肝がん、脳がん、胃がん、気管支がん、膵がん、膀胱がん及び骨がんからなる群から選択されるがんに限らないがこれらを含む他の細胞増殖性障害は、本明細書に記載するプテロスチルベン配合剤による処置に対して感受性がある。
【００６３】
プテロスチルベン及びその栄養補給配合剤は、良性の徴候を特徴とする細胞増殖性障害である非がん性細胞増殖性障害の処置にも有用であると考えられる。かかる障害は、細胞が身体によって異常に高速で作られるという点で、細胞増殖性又は過剰増殖性としても知られていることがある。プテロスチルベン配合剤による処置が可能と考えられる非がん性細胞増殖性障害には、日光角化症（ＡＫ）及び他の前癌性病変が含まれる。
【００６４】
ＵＶ−Ｂ照射処置用の材料及び方法の項
試薬及び細胞培養
正常なヒトメラノサイトを、ＵＣ  ＩｒｖｉｎｅのＩｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄが承認したプロトコルに従って、身元を特定しない新生児の環状切除手術による包皮から単離した。メラノサイトを上記のとおり単離し（Ｅｉｓｉｎｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８２）７９（６）：２０１８−２２；及びＬｉｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（２００９）１２９（２）：４２２−３１）、２％ウシ胎仔血清、１０ｎｇ／ｍｌの１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセタート及び０．１５％ウシ下垂体抽出物を添加したＭＣＤＢ１５３培地で培養した。プテロスチルベンをＣｈｒｏｍａＤｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｉｒｖｉｎｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から得た。
【００６５】
メラノサイトのＵＶ−Ｂ照射処置
ＵＶ−Ｂ照射を上記のとおり実施した（Ｌｉｕ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，“ＭｉＴＦ  ｌｉｎｋｓ  Ｅｒｋ１／２  ｋｉｎａｓｅ  ａｎｄ  ｐ２１  ＣＩＰ１／ＷＡＦ１  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ＵＶＣ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ，”Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ（２０１０）９：２１４）。細胞を約７０％コンフルエンスまで成長させ、ＵＶ−Ｂ照射処置のため、培地を完全に除去した。ＵＶＢ照射をＳｔｒａｔａｌｉｎｋｅｒ  ＵＶ架橋装置（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）の中でピーク波長３１２ｎｍにて実施した。ＵＶ照度を適切なプローブを備えた線量計で測定した。培養培地を照射処置直後に置換し、細胞を３７℃インキュベーターに戻して回収した。慢性曝露にするため、このプロセスを１時間毎に反復して合計５回の曝露とした。本明細書で示す時間は、常に最初の曝露後の時間を表す。
【００６６】
全ＲＮＡ単離、逆転写及びリアルタイムＰＣＲ
Ａｒｕｍ  ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用し、標準的な製造元のプロトコルに従って、全ＲＮＡを細胞から単離した。ＮａｎｏＤｒｏｐ  １０００（Ｔｈｅｒｍｏ／Ｆｉｓｈｅｒ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌａｗａｒｅ）を使用してＲＮＡを定量した。次いで、ｉＳｃｒｉｐｔ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ  Ｋｉｔ（ＢｉｏＲａｄ）を使用し、標準的なプロトコルに従って、ｃＤＮＡを１．０μｇのＲＮＡから作製した。メラノサイト中のＵＧＴｍＲＮＡの発現レベルを分析するために、リアルタイムＰＣＲを上記のとおり実施した（Ｃｈｅｎ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｒｅｖａｌｅｎｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｍｉｓｓｅｎｓｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＵＧＴ２Ｂ１０  ｇｅｎｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＵＧＴ２Ｂ１０  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｏｂａｃｃｏ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓ，”Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ（２００８）１８（３）：１８１−９１；及びＤｅｌｌｉｎｇｅｒ，Ｒ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰｈＩＰ  ａｎｄ  Ｎ−ＯＨ−ＰｈＩＰ  ｂｙ  ＵＤＰ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １Ａ１０，”Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ（２００７）２８（１１）：２４１２−８）。それに応じて、以前デザインされたＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）（ＩＤは、ＵＧＴ２Ｂ７についてはＨｓ００４２６５９２＿ｍ１、ＵＧＴ２Ｂ１０についてはＨｓ０２５５６２８２＿ｓ１、ＵＧＴ２Ｂ１５についてはＨｓ０３００８７６９＿ｇ１、ＮＱＯ１についてはＨｓ００１６８５７＿ｍ１、及びＧＡＰＤＨについてはＨｓ９９９９９９０５＿ｍ１）を、製造元のプロトコルに従って使用した。５０ｎｇのｃＤＮＡを含有する全体積２０μｌを使用し、グリセルアルデヒド３‐リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）を基準の「ハウスキーピング」遺伝子及びポジティブコントロールとして使用して、リアルタイムＰＣＲを実施した。リアルタイムＰＣＲはＣＦＸ９６  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ｍａｃｈｉｎｅ（ＢｉｏＲａｄ）で実施した。報告されたｍＲＮＡの発現値は、少なくとも３つの別個の実験の標準偏差を伴う平均値とする。
【００６７】
上記の方法は、以下の実施例との関連でさらに理解されるであろう。
【実施例】
【００６８】
実施例Ａ
急性ＵＶ−Ｂ曝露後の正常なヒトメラノサイト中のＵＧＴ発現の下方制御
ＵＧＴ２Ｂ７、ＵＧＴ２Ｂ１０及びＵＧＴ２Ｂ１５が、身元を特定しない新生児の包皮から単離したヒトメラノサイト中で発現しているのが発見された。さらに、ＵＧＴ発現は、試験した黒色腫の細胞株５つのうち４つで観察されなかった。このことは、ＵＧＴ発現の消失が黒色腫の病因の一部であるという興味深い可能性を提起する。ＵＶ−Ｂがメラノサイト中のＵＧＴ発現を制御し得るのかどうかを判断するために、再度メラノサイトを、身元を特定しない新生児の包皮から単離して培養した。次いで、これらの細胞を、日焼け線量とほぼ同等である２５ｍＪ／ｃｍ２の単一線量のＵＶ−Ｂに曝露した。次いで、細胞を、照射０時間後、４時間後及び２４時間後に回収し、上記の材料及び方法に記載したとおり、ＧＡＰＤＨ発現を基準にしたリアルタイムＰＣＲを使用して、ＵＧＴ発現をアッセイした。図２に示すように、ＵＧＴ２Ｂ７、ＵＧＴ２Ｂ１０及びＵＧＴ２Ｂ１５の発現レベルは、急性ＵＶ−Ｂ線量に応じてすべて低下した。特に、ＵＧＴ２Ｂ７発現は照射４時間後に検出不能であるが、その発現は、曝露２４時間後までに高いレベルに戻っている。ＵＧＴ２Ｂ１０発現は処置４時間後までに消失し、処置２４時間後に依然として検出不能であり、一方、ＵＧＴ２Ｂ１５の発現レベルは照射４時間後には変化していないが、照射２４時間後までに検出不能になる。ＮＡＤＰＨデヒドロゲナーゼキノン１（ＮＱＯ１）は、その発現がＵＶ−Ｂ曝露後に変化しなかったため、対照として使用する。これはＵＧＴ発現がＵＶ−Ｂ曝露によって制御され得ることの初めての実証であったが、急性ＵＶ曝露に関連して黒色腫のリスクが高まることと一致している。
【００６９】
実施例Ｂ
ヒトメラノサイト中のＵＧＴ発現の、ＵＶ−Ｂにより誘発される消失後のプテロスチルベン処置。
ここで、プテロスチルベンが、日焼け線量（２５ｍＪ／ｃｍ２）での急性ＵＶ−Ｂ曝露に応じたＵＧＴの消失を防止することができるかどうかを試験した。コーカサス系／ラテンアメリカ系の上記のメラノサイト細胞株を、未処置で放置、又はプテロスチルベン１００ｎＭで１時間処置した。次いで、細胞を上記のとおり照射し、照射後に、プテロスチルベン１００ｎＭを細胞培地と一緒に置換した。図３に示すように、プテロスチルベンは、照射４時間後と２４時間後の両方で、ＵＧＴ２Ｂ７、ＵＧＴ２Ｂ１０及びＵＧＴ２Ｂ１５の消失を防止したが、唯一の例外は４時間後のＵＧＴ２Ｂ１５発現であった。３種のＵＧＴのすべてが、プテロスチルベンでの処置の２４時間後に高いレベル（８倍まで）で観察された。
【００７０】
したがって、天然生成物プテロスチルベンは、ヒトメラノサイト中のＵＧＴ発現の、ＵＶ−Ｂにより誘発される消失、又は消失のリスクの低下を防止することができることが実証された。なお、ヒトケラチノサイトを使用して同じ手順を実施することができる。
【００７１】
実施例Ｃ
正常なヒトケラチノサイト中のＵＧＴ発現。
ケラチノサイトは、表皮中の最も多いタイプの細胞である（表皮中の細胞の約９５％）。ＮＭＳＣはこの細胞から生じる可能性がある。この重要な皮膚細胞がＵＧＴを発現するかどうかを確認するために、ＲＴ−ＰＣＲを実施した。図４に示すように、ＵＧＴ１Ａ４、ＵＧＴ１Ａ６及びＵＧＴ２Ｂ１７は、新生児の包皮から単離された初代培養ヒトケラチノサイト（正常な）の中で発現しているのが示された。期待される大きさの帯域を切除し、標準法を用いて配列決定して、これらが指定のＵＧＴであることを確認した。これは、ヒトケラチノサイト中のＵＧＴ発現の初めてのキャラクタリゼーションであった。
【００７２】
図４は、初代培養ヒトケラチノサイト中のＵＧＴｍＲＮＡ発現を示している。ヒトケラチノサイトの全ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ分析を実施して、指定のＵＧＴファミリーメンバーを検出した。ＧＡＰＤＨプライマーをポジティブコントロール（＋）として使用した。他のＵＧＴファミリーメンバーは検出されなかった。
【００７３】
実施例Ｄ
ヒトケラチノサイト中のＵＧＴ２Ｂ１７発現の、ＵＶ−Ｂにより誘発される消失後のプテロスチルベン処置。
ここで、ＵＧＴ２Ｂ１７発現がＵＶ−Ｂ照射によって制御され得るのかどうか、及びプテロスチルベンがその消失を防止し得るのかどうかを試験した。ヒトケラチノサイトを、プテロスチルベン（１００ｎＭ）有り又は無しで、２５ｍＪ／ｃｍ２のＵＶ−Ｂ照射に曝露し、照射０時間後、２時間後、４時間後、８時間後及び２４時間後に回収した。次いで、リアルタイムＰＣＲを、ＵＧＴ２Ｂ１７について特定のＴａｑＭａｎアッセイを使用して実施した。図５に示すように、ＵＧＴ２Ｂ１７ｍＲＮＡ発現は、ＵＶ−Ｂ曝露後４時間という短さで大幅に下方制御され、少なくとも２４時間低いままである。重要なことであるが、上記のプテロスチルベン処置（１００ｎＭ）は、ＵＶ−Ｂが媒介するＵＧＴ２Ｂ１７の消失を阻止する。
【００７４】
図５に示すように、プテロスチルベンは、ＵＧＴ２Ｂ１７の消失を、照射４時間後、８時間後及び２４時間後に防止した。ＵＧＴ２Ｂ１７の相対ｍＲＮＡ発現が、ＧＡＰＤＨを基準とし、０時間を任意に１．０に設定して示されている。
【００７５】
したがって、天然生成物プテロスチルベンは、ヒトケラチノサイト中のＵＧＴ発現の、ＵＶ−Ｂにより誘発される消失、又は消失のリスクの低下を防止することができることが実証された。
【００７６】
実施例Ｅ
ヒト黒色腫細胞における１２−ＬＯＸ発現の、プテロスチルベン（Ｐｔｅｒｏ）による抑制。
図６に示すように、既知の方法で試験すると、プテロスチルベン（５０μＭ）はｉｎ  ｖｉｔｒｏで１２−ＬＯＸ活性を実質的に阻止した。指示したとおりの、未処置のまま（ＵＮ）、若しくは５０μＭのプテロスチルベン（Ｐｔｅｒｏ）で処置、若しくはレスベラトロール（Ｒｅｓ）で処置したＳＫｍｅｌ２８ヒト黒色腫細胞の１２−ＬＯＸのウェスタンブロット。Ｂ−アクチンをローディングコントロールとして使用した。プテロスチルベンの方がレスベラトロールよりも、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで１２−ＬＯＸ発現を抑制したことが観察された。
【００７７】
実施例Ｆ
正常な皮膚及びヒトＡＫにおける１２−ＨＥＴＥ活性
標準法を使用して、同じ患者の正常な皮膚又はＡＫの３ｍｍの皮膚のパンチ生検組織から脂質画分を抽出し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ標準法で分析して１２−ＨＥＴＥ濃度を測定した（ｎ＝６患者、各患者から採取した正常なサンプル及びＡＫサンプル）。図７に示すように、１２−ＨＥＴＥのレベルは、同じ個体の正常な皮膚と比較して、日光角化症（ＡＫ）では３倍の高さであった。
【００７８】
ＡＫにおける１２−ＨＥＴＥのレベルはこれまでに報告されていないため、これは新奇なデータであった。さらに、このデータは、上記の臨床試験において１２−ＨＥＴＥを臨床的評価項目として使用するために必要である。このデータは、１２−ＨＥＴＥの制御解除を示すマウス研究（Ｋｒｉｅｇ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，“１２−Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｓｏｅｎｚｙｍｅｓ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｓｋｉｎ  ｔｕｍｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，”Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．（１９９５）１４（２）：１１８−１２９）と相関性が高い。
【００７９】
１２−ＬＯＸは１２−ＨＥＴＥを生成するため、プテロスチルベンによって、増殖性又は前癌性の細胞中の１２−ＬＯＸ発現が低下すると、１２−ＨＥＴＥの形成が防止又は低減されるであろうし、且つ／又は、プテロスチルベンが、損傷した皮膚において１２−ＨＥＴＥを正常なレベルに回復させるのに有効であるだろう（１２−ＬＯＸの抑制とＵＧＴの上方制御との両方によって）と期待される。増殖性又は前癌性の細胞の処置により、ＡＫ（及び場合によりＮＭＳＣ）が後退又は退行するであろうと、さらに期待される。
【００８０】
実施例１
一実施形態によれば、患者（又は患者コホートの各構成員）を、許容される栄養補給用担体中に配合した１日投与量１００ｍｇのプテロスチルベンを次のように経口投与して処置する。１００ｍｇのプテロスチルベン及び１５０ｍｇの微結晶セルロースを組み合わせて植物性カプセルに入れる。患者の前腕の皮膚試験領域（８ｃｍ２）からＡＫ（及び場合によりＮＭＳＣ）を特定し、マッピング、写真撮影、イメージングを行い、病変の生検組織を採取してから、上記で詳しく述べたとおり、臨床試験を実施する。１２週間の試験のモニタリングの後に、各ヒト被験者が、皮膚試験領域に特定されたＡＫの後退を示しているであろうと期待される。
【００８１】
実施例１Ａ
ある実施形態によれば、患者（又は患者コホートの各構成員）を、許容される栄養補給用担体中に配合した１日投与量１００ｍｇのプテロスチルベンを経口投与して処置する。患者の前腕の皮膚試験領域（８ｃｍ２）からＡＫ（及び場合によりＮＭＳＣ）を特定し、マッピング、写真撮影、イメージングを行い、病変の生検組織を採取してから、上記で詳しく述べたとおり、臨床試験を実施する。１２週間にわたる試験の間に、ｍＲＮＡ又はタンパク質に応じた前癌性組織サンプル中のＵＧＴ発現は、大幅に増加するであろうと期待される。
【００８２】
実施例１Ｂ
一実施形態によれば、患者（又は患者コホートの各構成員）を、許容される栄養補給用担体中に配合した１日投与量１００ｍｇのプテロスチルベンを経口投与して処置する。患者の前腕の皮膚試験領域（８ｃｍ２）からＡＫ（及び場合によりＮＭＳＣ）を特定し、マッピング、写真撮影、イメージングを行い、病変の生検組織を採取してから、上記で詳しく述べたとおり、臨床試験を実施する。１２週間にわたる試験の間に、前癌性組織サンプル中の１２−ＨＥＴＥのレベルは大幅に低下するであろうと期待される。
【００８３】
実施例２
一実施形態によれば、患者（又は患者コホートの各構成員）を、許容される栄養補給用担体中に配合した１日投与量１００ｍｇのプテロスチルベンを次のように経口投与して処置する。１００ｍｇのプテロスチルベン及び１５０ｍｇの微結晶セルロースを組み合わせて植物性カプセルに入れる。患者の前腕の皮膚試験領域（８ｃｍ２）からＡＫ（及び場合によりＮＭＳＣ）を特定し、マッピング、写真撮影、イメージングを行い、病変の生検組織を採取してから、上記で詳しく述べたとおり、臨床試験を実施する。１２週間の試験のモニタリングの後に、処置によって、皮膚試験領域に特定された前癌性ＡＫのＮＭＳＣへの進行が防止され、且つ／又は各ヒト被験者における新たなＮＭＳＣの形成が抑制されるであろうと期待される。
【００８４】
上記の明細書において、本発明を、その一定の実施形態に関して記載し、多くの詳細を説明のために述べてきたが、本発明は追加の実施形態が可能であり、本明細書に記載した詳細の中には、本発明の基本原理から逸脱することなく相当に変更することが可能なものがあるということが当業者には明らかであろう。
【００８５】
本明細書に引用したすべての参考文献は、その内容全体を参照により本明細書に組み込んだものとする。本発明は、その趣旨又は本質的な特質から逸脱することなく、他の具体的な形態に具現化することができ、したがって、本発明の範囲を指定するものとして、上記の明細書よりもむしろ添付の特許請求の範囲について参照がなされるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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