(57)【要約】  本発明は、カルボキシアミドトリアゾールオロテートとの組合せ療法を利用して、薬剤耐性へと導く、腫瘍内微小環境内で誘発される細胞毒性薬物妨害メカニズムを標的とすることにより、該細胞毒性薬物の感度を増強することに関連する。細胞毒性薬物の特定の用量を、細胞毒性薬物の感度および抗腫瘍活性を改善するために、カルボキシアミドトリアゾールオロテートと共に決定する。
2015508100.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法薬物に対する感度を高める方法であって、該方法が以下の工程：
十分な量の該化学療法薬物を投与する工程；
抗癌活性を妨害する恐れのある、腫瘍内微小環境において誘発されたメカニズムを同定する工程；
該腫瘍内微小環境における該抗癌活性を妨害する該メカニズムを標的とする、組合せ薬物を選択する工程；
該化学療法薬物と該組合せ薬物との間の薬力学的相互作用を測定して、投与時間および最適の組合せ投薬療法を選択する工程；および
該組合せ投薬療法を施して、最大の効率、該微小環境における最低の妨害または正常な細胞に対する最少の毒性を達成する工程、
を含むことを特徴とする、前記化学療法薬物に対する感度を高める方法。
【請求項２】
前記化学療法薬物と共に、十分な量で選択的に投与される前記組合せ薬物が、カルボキシアミドトリアゾールオロテートである、請求項1記載の方法。
【請求項３】
前記カルボキシアミドトリアゾールオロテートと共に、十分な量で選択的に投与される前記化学療法薬物が、テモゾロミドである、請求項2記載の方法。
【請求項４】
前記カルボキシアミドトリアゾールオロテートと共に、十分な量で選択的に投与される前記化学療法薬物が、イマチニブメシル酸塩である、請求項2記載の方法。
【請求項５】
前記カルボキシアミドトリアゾールオロテートと共に、十分な量で選択的に投与される前記化学療法薬物が、ドキソルビシン塩酸塩である、請求項2記載の方法。
【請求項６】
前記カルボキシアミドトリアゾールオロテートと共に、十分な量で選択的に投与される前記化学療法薬物が、メトトレキサートである、請求項2記載の方法。
【請求項７】
化学療法薬物に対する感度を高める方法であって、該方法が以下の工程：
様々な用量の該化学療法薬物を投与して、正常な動物での最大耐用量を決定する工程；
該化学療法活性を妨害する、該化学療法薬物によって誘発されたメカニズムを同定する工程；
該化学療法活性を妨害する該メカニズムを標的とする、組合せ薬物を選択する工程；
更に、様々な用量の該組合せ薬物を、様々な用量の該化学療法薬物に投与する工程；
該化学療法薬物と該組合せ薬物との間の薬力学的相互作用を測定して、正常な動物において許容される組合せ投薬療法を選択する工程；および
該選択された組合せ投薬療法を、腫瘍を移植した動物においてテストして、最大の抗腫瘍活性および正常な細胞に対する最低の毒性を実現する工程、
を含むことを特徴とする、前記化学療法薬物に対する感度を高める方法。
【請求項８】
前記選択された組合せ療法が、最大の抗腫瘍活性を実現する、上記化学療法薬物の用量および前記組合せ薬物の用量に相当する、請求項7記載の方法。
【請求項９】
最大の抗腫瘍活性を実現する、十分な量の化学療法薬物および十分な量の組合せ薬物を含むことを特徴とする、組合せ療法の薬剤組成物。
【請求項１０】
前記化学療法薬物がテモゾロミドであり、かつ前記組合せ薬物がカルボキシアミドトリアゾールオロテートである、請求項9記載の薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(他の出願との相互引照）
本件特許出願は、2010年9月3日付で出願された米国特許出願第12/807,415号の一部継続出願に係り、また該米国特許出願は、2009年9月4日付で出願された米国特許出願第12/584,448号の一部継続出願に係る。これら米国特許出願の内容全体を、ここに参考として組み入れる。
【０００２】
本発明は、細胞毒性を持つ化学療法薬物並びに生物学的薬物(一括して「細胞毒性」薬物と呼ばれる)の悪性腫瘍における感度を、カルボキシアミドトリアゾールオロテート（carboxyamidotriazole orotate）(CTO)との組合せ療法を利用して、該腫瘍内の微小環境（tumor microenvironment）における該細胞毒性薬物の初期メカニズムおよび/または薬剤耐性のその後の発現を標的とすることにより、高めることに関連する。より具体的には、本発明は、マルチターゲット型の小分子であるCTOと組合せた特定の細胞毒性薬物の、該細胞毒性薬物の感度を改善し、上記腫瘍内微小環境における該細胞毒性薬物により引起されるメカニズムを調節し、また薬剤耐性の発現を阻害し、または減じ、かくして該細胞毒性薬物の効力の増強へと導くための方法並びに組成物に関する。力価決定された(titrated)量の該細胞毒性薬物およびCTOを含む、このように注意深く設計された組合せ療法は、深刻な毒性と関連している、用量高密度化法に頼ることなしに、最大の効力を実現する。このような組合せ治療システムは、患者の生活の質を改善するであろう。
【背景技術】
【０００３】
細胞毒性薬物は、今や殆どの癌患者の治療処置中のある時点において利用されている。細胞毒性薬物は、幾つかの原発癌および転移癌を治癒することができ、また多くの型の癌における、腫瘍体積を減じ、様々な症状を治療し、また更には寿命を延長する上で効果的であり得る。癌患者における該細胞毒性薬物の治療開始用量は、制癌製剤のための非臨床的評価に関する、フード＆ドラッグアドミニストレーションからのガイドライン(Guidelines from the Food & Drug Administration for Nonclinical Evaluation for Anticancer Pharmaceuticals)(ICH S9)によって要求されているように、インビトロにおける様々な腫瘍細胞系およびインビボでの動物腫瘍モデルにおける、治療用量の前臨床評価に基いている。実験的な異種移植腫瘍モデルにおいて、用量-応答曲線は、線形段階において傾きが急であり、また該腫瘍が、該用量-応答曲線の該線形段階にある場合の用量における減少は、殆ど常に、その抗腫瘍活性における低下が観測される前に、該腫瘍を効果的に治癒させる能力の喪失をもたらす。異種移植モデルは、ヒト悪性腫瘍に関する理想的なモデルに相当し得ないが、その一般的な原理は、臨床的調節、設定に適用されている。このような用量における経験的変更は、アジュバント疾患設定または進行疾患設定の何れかにおいて、化学療法を受けている、薬物-感受性腫瘍に罹患した患者における治療ミスの主な理由に相当する。
【０００４】
細胞毒性薬物の投与を受けている、薬物-感受性腫瘍に罹患した患者における治療ミスのもう一つの理由は、該腫瘍の微小環境に及ぼす該細胞毒性薬物の効果であり、その理由は、該化学療法が、該腫瘍自体に対する該療法の抗腫瘍活性を妨害する恐れのある、メカニズムを引起す可能性があるからである。本発明は、CTOを誘発して、該微小環境において該細胞毒性薬物によって誘発される初期および終期近傍の変化を調節し、その抗腫瘍活性に対する妨害を最小化し、該化学療法の感度を改善して、治療の成功を達成する方法を提供する。より詳しくは、CTOを、上記組合せ用の標的薬物として選択し、それにより該細胞毒性薬物の感度および効力を妨害する、上記腫瘍内微小環境において誘発されたメカニズムの幾つかを制御、調節する。
【発明の概要】
【０００５】
充実性腫瘍および血液学的悪性腫瘍の幾つかの型を患う患者に対する治癒力のある治療法をもたらした、1950年代および1960年代における化学療法の開発以来、薬剤耐性をもたらす可能性のある遺伝的変化の理解は、革新的な治療法を与えたが、不幸にも、これらの研究は、これまで治療の成功を達成するのに必要とされる感度および有効投薬量の決定における、該腫瘍の微小環境に及ぼす該化学療法の初期効果を検討しなかった。本発明は、i) 特定の腫瘍型の微小環境に及ぼす細胞毒性薬物の効果を評価し、ii) 該薬物の抗癌活性を媒介しあるいは該抗癌活性を妨害するメカニズムを同定し、iii) 該抗癌活性を妨害するメカニズムを最小化または阻害する組合せ治療薬物、例えばCTOを選択し、iv) 該細胞毒性薬物と該CTOを用いた組合せ化学療法との間の薬力学的相互作用を決定し、またv) 該細胞毒性薬物およびCTOの最適の組合せを決定して、最大効力および最低毒性を実現するための方法を提供する。
【０００６】
換言すれば、本発明は、上記細胞毒性化学療法薬の有効投与量を決定するための方法を提供するものであり、該有効投与量は、該薬物をカルボキシアミドトリアゾール(CAI)のオロチン酸塩であるカルボキシアミドトリアゾールオロテート(CTO)と組合せることにより該薬物の感度を高めることに基いている。CAIは、レセプタ-作動性カルシウムチャンネル-媒介カルシウム流入の阻害剤であり、またヒト神経膠芽細胞腫細胞を包含する幾つかのヒト癌細胞系において、増殖抑制および抗-侵襲機能を持つことが示されている(Ge等, 2000)。第二のメッセンジャーとしてのカルシウムの動態化を妨害することによって、CAIは、アラキドン酸およびその代謝物質の放出；一酸化窒素の放出；イノシトールホスフェートの発生；およびチロシンのホスホリル化を含む、カルシウム-感受性シグナル伝達経路を阻害することができる(Ge等, 2000；Kohn等, 1992)。CAIは、細胞性タンパク質STATSおよびCrkLのホスホリル化を阻害し、イマチニブメシル酸塩（imatinib mesylate）-耐性慢性骨髄性白血病細胞におけるアポトーシスを、bcr-ablのダウンレギュレーションによって誘発する(Alessandro等, 2008)。CTOは、これらの腫瘍並びに該腫瘍の微小環境、および薬剤耐性を誘発し、あるいは該薬物の抗腫瘍活性を妨害する恐れのあるメカニズムを標的とする。
【０００７】
上記組合せ療法の時期および期間は、上記細胞毒性化学療法の上記腫瘍内微小環境に及ぼす効果の動力学およびその程度の理解に基いて、該細胞毒性薬物による化学療法の開始時点から、または該化学療法中の様々な段階において、決定することができる。化学療法的細胞毒性薬物およびその用量の選択を導く一般的な原理は、該薬物の該腫瘍内微小環境に及ぼす影響を考慮していない。結果として、ある癌を治療するために選択された該用量は、該微小環境における初期の妨害を克服するために過剰量を含むことができ、また結果として最適な治療の成功を実現するために再評価する必要がある可能性がある。
通常、細胞毒性薬物に関して確立された投薬法は、この妨害において、該細胞毒性薬物の感度は、考慮に入れられておらず、従って使用する用量の増大へと導く。用量密な方法は、腫瘍の収縮を実現するために使用されるが、これらは癌患者において深刻な毒性を引起し、また該患者の生活の質に悪影響を及ぼす。用量密な治療法を用いる代わりに、感度におけるこの妨害を阻害し、または減じることの決定的な必要性がある。本発明は、用量高密度化法を採用するのではなく寧ろ治療の成功を実現するために、該薬物の感度を極大化するのに利用し得る場合における、既存の使用に付されている薬物を用いた新規な薬物療法プログラム、または細胞毒性薬物とCTOとの組合せを設計する、新規な薬物の開発に係るパラダイムを与える。
【０００８】
細胞毒性薬物による化学療法は、現在主に次の4種の臨床的設定において使用されている：1) 如何なる他の有効な治療法も存在しない、進行した疾患または癌に対する簡易(一次)的導入治療；2) 外科手術および/または放射線治療等の局部的な治療形態が、それ自体のみでは不十分である、局在化された疾患を発症している患者のネオアジュバント治療；3) 外科手術および/または放射線療法を包含する局部的治療法のためのアジュバント治療；および4) サンクチュアリ(聖域)サイトへの直接点滴注入または癌による直接的な影響を受けた身体の特定領域のサイト-指向性灌流。医師のための癌の化学療法薬物マニュアル(Physicians” Cancer Chemotherapy Drug Manual), E. Chu編, V.T. DeVita, Jr, 2010参照。本発明は、上記4種の臨床的設定各々における、幾つかの細胞毒性薬物の感度を高めるための、新規な薬物治療プログラムを開発するためのパラダイムを提供する。
【０００９】
本発明の方法によれば、1) 腫瘍が特定の細胞毒性薬物に対して応答性であるか否かを同定し；2) 該薬物の抗癌活性を潜在的に妨害する可能性のある、上記腫瘍内微小環境における分子ターゲットのプロファイルを同定し；および3) 該細胞毒性薬物および目標とする化学療法、例えば細胞毒性薬物およびCTOの最も適切な組合せ療法を選択することが必要である。癌を治療するための細胞毒性薬物の使用と通常関連する諸問題点としては、必要とされる高い用量、正常な細胞に対する毒性、選択性および感度の欠如、免疫抑制および薬剤耐性が挙げられ、その理由は、該抗癌活性を妨害する分子ターゲットが、制御されないからである。
また、薬剤耐性は、その薬物に耐性となっている悪性細胞によっても引起される可能性があり、また多くの細胞関連メカニズムが、恐らく、該薬物の代謝、該薬物に対する該細胞の透過性の変更、あるいは該薬物の促進された排除、阻害された酵素の変更された選択制、または化学療法または生物学的治療法に対する抵抗性に関与する幾つかの遺伝子の増幅に関与している。これは、以下に記載するように、該薬物に多数回に渡り暴露した後に観測される。
【００１０】
例えば、ジヒドロ葉酸レダクターゼをコードする遺伝子の増幅は、メトトレキサートに対する耐性と関連しており、一方でチミジル酸シンターゼをコードする遺伝子の増幅は、5-フルオロピリジンによる治療に対する耐性に関係している。
テモゾロミド（temozolomide）の治療上の利益は、DNAをアルキル化/メチル化するその能力に依存しており、該アルキル化/メチル化は、最も高頻度で、グアニン残基のN-7またはO-6位において起る。このメチル化は、該DNAを損ない、また腫瘍細胞の死を引起す。しかし、幾つかの腫瘍細胞はこの型のDNAの損傷を修復することができ、また結果として、O-6-メチグアニン(methyguanine)-DNAメチトランスフェラーゼ(methytransferase)(MSMT)またはO-6-アルキグアニン(alkyguanine)-DNAアルキルトランスフェラーゼ(AGTまたはAGAT)を発現することによってテモゾロミドの治療上の効力を減衰する。幾つかの腫瘍において、MGMT/AGT遺伝子の後成的遺伝子サイレンシングは、この酵素の合成を阻害し、またその結果、このような腫瘍は、テモゾロミドによる殺傷に対して感受性となる。逆に、脳腫瘍におけるMGMTタンパク質の存在は、テモゾロミドに対する低い応答性が予想され、またこれらの患者は殆どその利益を享受しない。しかし、テモゾロミドに対する耐性は、他のファクタとも関連している。GBM患者において、該腫瘍は、最初はテモゾロミドに対して応答するが、後には、高い用量においてさえ、該腫瘍は、数クール後には治療抵抗性となる。このことは、他の妨害ファクタが、癌細胞に対するテモゾロミドの感度を減少する可能性があることを示唆している。
【００１１】
従って、他のメカニズムとも関連している可能性のある、テモゾロミドに対する耐性のメカニズムを理解する必要性があるが、その理由は、このテモゾロミドが、血液脳関門を横断する数少ない薬物の一つであり、また悪性神経膠腫および多形性(神経)膠芽腫の治療において使用されているが、数クールの後にはその薬物に対する耐性が発現されるからである。
ドキソルビシンによって誘発される上記腫瘍内微小環境における変化が、腫瘍ターゲットへのその送達を妨害する可能性があり、また結果としてドキソルビシンおよびCTOの組合せ療法が、ドキソルビシンの感度を維持するための解決策を与えることができることを示す、幾つかの証拠がある。
幾つかの場合において、薬物に対する耐性は、該細胞毒性薬物の感度および効力を妨害する、該腫瘍内微小環境内での様々な分子(例えば、サイトカイン、カルシウムチャンネルシグナル伝達物質、分子シグナル伝達物質)の高い生産性と関連している可能性がある。従って、該薬物分子の意図された標的よりも下流側の突然変異性の変化、または決して該薬物のそのターゲットへの到達を可能としない、あるいは該薬物分子に対するフィードバックメカニズムを作動させる腫瘍の代謝上の特徴のために、最も合理的に理解された薬物分子でさえも失敗に帰する恐れがある。
【００１２】
従って、細胞毒性薬物による腫瘍収縮の経験的な証拠を頼みとする、癌の薬物療法およびその開発のための合理的な方法が必要とされ、結果として、実時間における上記腫瘍内微小環境での該化学療法の作用のメカニズムを理解し、生化学的および分子的ターゲットを指向した新規な主要構造を規定し、また該細胞毒性薬物の最適の機能を発揮させる。本発明は、この要求を満足し、追加の利点をも提供する。本発明は、従来技術とは区別される。というのは、従来技術の何れも、該腫瘍内微小環境における細胞毒性薬物の効果、影響を阻害しおよび/または減じるという問題を扱っていないからである。ここで、該腫瘍内微小環境は、治療の初期段階における該薬物の感度を妨害し、その後より永続的な生化学的変化が、該治療の更に後の段階における薬剤耐性へと導く。本発明は、初期の妨害を標的とし、またその結果として該細胞毒性薬物の感度を維持しあるいは増強するCTOを用いた、タイムリーな組合せ療法を提供し、かくして最適の効力を得るために該薬物の用量を増やす必要性を排除する。
CTOにより調節される上記分子ターゲットの幾分かを誘発する細胞毒性薬物と、CTOの適当な組合せ用量および療法との組合せは、従って本発明の基本的な目的である、新規な上首尾の癌治療プログラムに対する、より効果的かつより低毒性のパラダイムを提供する。上記参考文献の関連する主題は、特別に、参考としてここに組入れる。
【００１３】
本発明は、一般的に使用されている細胞毒性薬物または可能性のある新規な候補物質を同定し、かつカルボキシアミドトリアゾールオロテート(CTO)の最適な用量との組合せで使用した場合の、各薬物に対する最適な治療的用量を決定するための方法を提供することにより、従来技術に固有の諸欠点の解決法を探求する。該組合せ療法は、腫瘍細胞に対する該細胞毒性薬物の感度を改善し、上記腫瘍内微小環境および該腫瘍細胞における妨害および薬剤耐性の発現を減じ、また該細胞毒性薬物の効力を増強する。
本発明は、細胞毒性薬物とCTOとの組合せを用いた、タイムリーな組合せ療法を利用して、上記腫瘍内微小環境を標的として、薬物の妨害および薬剤耐性を阻害することにより、該細胞毒性薬物の感度を増強する方法並びに組成物を提供する。
本発明は、i) 腫瘍の病理的なカテゴリーの、特定の化学療法薬物に対する応答性に係るより重要な知見；ii) 該薬物の細胞毒性活性の細胞性、生化学的および分子的ターゲット並びに上記腫瘍内微小環境および該薬物に対して耐性の腫瘍細胞における、耐性のメカニズムに係る理解；およびiii) 該薬物の薬物動態学的および薬力学的挙動および正常な器官に対する毒性に係るパターンに関する知見を提供するための、臨床前研究および臨床研究に基く、薬物治療法に関するパラダイムを提供する。
【００１４】
本発明は、上記細胞毒性薬物および目標とする化学療法剤、例えばCTOの適当な組合せ療法を設計するパラダイムを提供するものであり、ここで該組合せ療法は、該細胞毒性薬物の上記腫瘍内微小環境における細胞性、生化学的なおよび分子的なターゲットを標的とし、結果として該組合せ療法は、該細胞毒性薬物の感度を増強し、また薬剤耐性の発現を阻止し、および/または減じる。
本発明は、上記腫瘍内微小環境における負のフィードバックを目標とする目的の化学療法薬(CTO)および上記細胞毒性薬物の様々な用量を、正常な齧歯目動物並びに腫瘍モデルにおける臨床前研究においてテストすることを要求することにより、組合せ薬物療法を開発する方法に変更をもたらす。一般的に、このような組合せは、臨床前および臨床研究において個々の薬物について行った研究により得た組織学的データに基いており、またこのような従来技術は、これら薬物間の薬力学的および薬物動態学的相互作用を見落としており、従って該薬物の悪影響を、患者に与える危険性をもたらす。この方法は、細胞毒性薬物の用量密な方法が利用された場合に、深刻な毒性に耐えなければならない癌患者にとって極めて必要性が高い。
【００１５】
本発明の更なる態様は、生物学的治療薬剤および目標とする化学療法剤、例えばCTOを用いた、組合せ療法の開発であり、この方法は、上記腫瘍内微小環境において該生物学的物質により誘発される負のフィードバックを標的とし、それによって該腫瘍細胞に対する該生物学的物質の感度および効力を維持するものである。
上記最高水準の技術に鑑みて、本発明は、臨床前研究における薬物の組合せに係る、組合せ療法の構想を提供するものであり、該研究は、腫瘍担持モデルに対する正常体における組合せ療法の、様々な組合せの毒性に関する信頼性のある情報を与える。換言すれば、本発明は、第一に患者における薬物療法のリスクの発現を減じ、かつ該患者に対する危険性を回避するであろう。
【００１６】
本発明の目的は、1種またはそれ以上の細胞毒性薬物および1種またはそれ以上の目標とする化学療法薬物、例えばCTOの、最適な組合せ組成物を設計して、最適かつ一般的にはより低い用量を使用することにより、該細胞毒性薬物の感度を高め、その治療効果を増強し、また長期間に渡り毒性を減じる方法を提供することにある。換言すれば、本発明は、タイムリーな組合せ法による、用量低減パラダイムを提供するものである。化学療法剤の用量を減じることによって、患者の生活の質を改善するために、このような方法に対する大きな需要がある。
上記したこのような方法は、数種の細胞毒性薬物の感度および効力に関して、該細胞毒性薬物をCTOと組合せた場合、該薬物について予想外の重要な発見をもたらした。より重要なことに、以前に設定された治療的用量から一層低い用量の細胞毒性薬物とCTOとの組合せが、実際により高い効力をもたらすことを見出した。この用量-希釈組合せ法は、一般的に使用されている用量密な方法と比較して、薬剤耐性を減じ、感度を高め、効力を高め、かつ薬物毒性を減じるための要件を満たしている。本発明は、以前に設定された治療的用量から一層低い用量を使用して、より良好な効力を得るばかりでなく、それに関連する毒性における低減をも達成する重要かつ新規な方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図1は、様々な用量（different doses）のCTOによる治療に対する、SC経路で移植したLOX IMVIヒトメラノーマ(SC Implanted LOX IMVI Human Melanoma)の応答を示す図である。
【図２】図2は、様々な用量のテモゾロミドによる治療に対する、SC経路で移植したLOX IMVIヒトメラノーマの応答を示す図である。
【図３】図3は、様々な用量のCTOおよび高用量のテモゾロミド(90mg/kg/服用)による治療に対する、SC経路で移植したLOX IMVIヒトメラノーマの応答を示す図である。
【図４】図4は、様々な用量のCTOおよび低用量のテモゾロミド(60mg/kg/服用)による治療に対する、SC経路で移植したLOX IMVIヒトメラノーマの応答を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、上記腫瘍内微小環境における細胞毒性薬物の細胞性、生化学的および分子的なターゲットを評価することによって、また癌細胞による該細胞毒性薬物に対する耐性に関連する、重要なゲノムおよび表現型の変化の幾つかを有効利用することにより実現される。本発明は、i) 特定の癌に対する細胞毒性薬物を選択し；ii) この薬剤が、インビトロまたはインビボでの、腫瘍内微小環境における細胞性、生化学的および分子的なターゲットに及ぼす効果を評価し；iii) 該ターゲットによる耐性を阻害または防止し、該細胞毒性薬物および該標的化学療法薬、例えばCTOの様々な組合せの力価を、腫瘍に罹っていないマウスにおける臨床前の毒物学的研究および効力の研究において測定するために、該腫瘍内微小環境において誘発された該ターゲットを阻害する、組合せ化学療法剤を選択し；およびiv) 該薬物のヒトにおける出発用量を設定するためのパラダイムを提供する。
治療法を開発するためのこのパラダイムは、最大の効力および最低の薬物関連毒性を実現するように選択された、上記2種またはそれ以上の薬物の最適の組合せの確立を目的とする。癌治療プログラムを開発するためのこのような方法は、長い間必要とされており、また細胞毒性制癌剤による過剰投与を回避することにより、患者の首尾よい治療および安全性の保証に対する大きな要求がある。
【００１９】
化学療法の投薬スケジュールは、数種の癌における薬剤耐性の発現に影響を及ぼす
薬剤耐性は、癌の治療における化学療法の失敗の主要な原因であり、また転移性の進行期癌に罹患した大多数の患者の死の原因となる。患者は、最初は化学療法に十分に応答する。しかし、癌細胞は、有意な適応性を有し、また化学療法の多数回に渡るサイクルは、先天的に耐性の、または該治療クール中に発現された耐性を持つ腫瘍細胞を選別することを示しており、最終的に該疾患は不治のものとなる。
【００２０】
腫瘍内微小環境における化学療法の妨害および耐性
薬剤耐性は、癌細胞内の分子的ファクタおよび腫瘍内微小環境両者に起因するものであり得る。低酸素性部位、不規則な血液の流れおよび供給、細胞外マトリックス、該腫瘍における高い細胞密度、高い間質流圧力等の問題は、薬理学的および物理的な障壁を生成する可能性があり、化学療法薬は、この障壁を介して拡散できず、また該腫瘍に達することができない。あるいはまた、薬物の腫瘍細胞への送達は、細胞膜の薬物排出トランスポータのアップレギュレーションにより妨害される可能性がある。MDR 1遺伝子の生成物であるP-糖タンパク質(P-gp)は、癌の多剤耐性へと導く主要な分子である。益々増大する証拠は、骨髄由来の細胞(BMDC)が、腫瘍の成長、腫瘍起因性血管形成および転移に寄与することを示唆している。重要なことに、細胞毒性化学療法薬に対する急性反応においては、数種の型のBMDCが腫瘍内で急速に動員される。これらBMDCおよび化学療法で処置されたマウス由来の血漿は、マトリックスメタロプロテイナーゼ-９(MMP9)および上皮-間葉移行を誘発することにより、腫瘍細胞内の転移性を促進する。ルイス肺癌細胞を静脈内投与経路で注入したマウスにおいて、細胞毒性薬剤であるパクリタクセルによる治療は、MMP9阻害剤で抑制することのできる様式で、転移を促進した。従って、パクリタクセルおよびMMP9阻害剤の組合せ療法を使用することによるMMP9の阻害は、これらの転移を阻害することができた。
【００２１】
同様に、幾つかの血管新生療法は、逆説的に血管機能を増強することが示された。抗体を用いてVEGFレセプタを標的とすることは、「血管の正常化」と呼ばれる、血管機能における一時的な改善をもたらし、また腫瘍低酸素症における低減および高い放射線感受性に関連している。しかし、この応答の一時的性質は、臨床的実務への移行を困難なものとしている。VEGFの過度の発現は、発癌シグナルの伝達に関連しており、VEGFの誘発は、ホスホイノシチド-3キナーゼ(PI3K)経路を介する、RASシグナル伝達によって作動し得る。PI3キナーゼに起因するシグナル伝達は、特に癌細胞のシグナル伝達において主要な役割を演じている。従って、抗-VEGF、例えばCTOを用いた組合せ療法は、上記血管の改善を阻害し、また上記抗-血管新生療法の改善を可能とする。同様に、化学療法薬としての細胞毒性物質と共に与えられるPI3キナーゼ阻害剤、例えばCTOは、該細胞毒性物質の該腫瘍への送達性を改善し、またその効力をも改善し得る。CTOは、PI2のPI3への転化を阻害することによって、PI3キナーゼ活性を阻害する。更に、CTOは、PI3キナーゼのバーティカルターゲティング(vertical targeting)および癌細胞の増殖において重要である、カルシウムシグナル伝達およびチャンネリングの阻害剤である。CTOは、成長のために悪性メラノーマ細胞により必要とされるVEGFの阻害剤である。しかし、単独療法として、VEGF遮断薬、例えばベバシズマブまたはアフリベルセプト(AfliberceptTM)を用いた標的療法(targeted therapy)は、該腫瘍の負荷量を減じることに失敗し、またこれら薬物の細胞毒性薬物との組合せは、メラノーマの治療において失敗した。
【００２２】
分子的なファクタによる化学療法の妨害およびこれに対する耐性
化学療法に対する耐性は、ある治療に対して応答していた癌が、突然増殖し始める際に起こる。換言すれば、該癌細胞が、該化学療法の作用に対して抵抗している。該薬物を、変更するか、あるいはその用量を高めることが必要となるであろう。化学療法に対する耐性に関して、分子的レベルにおける幾つかの可能な理由がある。該化学療法によって殺傷されない癌細胞の幾つかは、突然変異を起こし、また該薬物に対して耐性となる。一旦これらが増殖すると、これらは、より一層該化学療法に対して耐性のものとなり得る。もう一つの理由は、遺伝子の増殖である。あるがん細胞は、特定の遺伝子の数百にも及ぶ複製物を生成することができ、該特定の遺伝子は、該化学療法薬を無効にする、タンパク質の過剰生産を誘発する。更に別の理由は、癌細胞が、該細胞によるp-糖タンパク質を用いた該薬物の吸上げを可能とし、あるいは該細胞壁を横切って該薬物を搬送するタンパク質がその作用を停止することから、該癌細胞が薬物の取込みを停止することである。もう一つの理由は、癌細胞が該薬物を不活性化し、あるいは該薬物によって引起されたDNAの損傷部を修復するメカニズムを発現することである。換言すれば、癌を治療する場合の、最良の武器は、該薬物感受性および化学療法に対する耐性における、可能な最小限度での干渉である。
【００２３】
メラノーマは、高率の血管系腫瘍であり、そこではVEGFが、メラノーマ患者における病因および低い予後と関連している。メラノーマにおける分子的な異種性は、BRAF阻害剤の応答を維持することを困難にし、またこのことは、BRAF変異体メラノーマがBRAF阻害剤に対する感度を維持する程度を、PI3キナーゼが限定する恐れがあることを示唆している。
幾つかの薬物は、それ自体毒性であるが、その毒性は、これらを他の薬剤との組合せで使用した場合には、増強される恐れがあり、この組み合わせの毒性は、該個々の成分の毒性の総和よりも一層高くなる可能性がある。化学療法に関連する組織の損傷は、パラクリンの生存促進性(prosurvival)分泌プログラムを活性化し得るとの考えは、IL-6により活性化されたシグナル伝達経路の阻害が、従来の化学療法用の細胞毒性物質の治療効力を増強するであろうことを示唆している。
【００２４】
薬剤耐性を明らかにする化学療法用細胞毒性薬物の例
テモゾロミドは、悪性度IV(Grade IV)の星細胞腫、多形性膠芽腫とも呼ばれる進行性の高い脳腫瘍を治療するために使用されている、経口投与型のアルキル化剤である。これは、また皮膚がんの一形態であるメラノーマ、悪性度IIIの未分化の星細胞腫および乏突起神経膠腫および成人および子供における悪性神経膠腫の治療のためにも使用される。研究室での研究および臨床的な試験は、テモゾロミドを他の薬剤と組合せることにより、このテモゾロミドの抗癌力価をさらに高めることが可能か否かを検討している。
本発明は、テモゾロミドの抗腫瘍活性を更に改善する方法並びに組成物を提供する。具体的には、本発明は、感度および抗腫瘍活性を増強するための、テモゾロミドおよびCTOによる組合せ治療法を提供する。
より詳しくは、上記組合せ療法は、まず2種の薬物の腫瘍を持たないマウスにおける力価を測定して、該組合せの用量の許容範囲を決定することにより設計される。
【００２５】
上記パラダイムにおける次の段階は、該許容用量を腫瘍のあるマウスにおいて使用し、また治療効果を実現するのに最も効果的な組合せを見積もることである。
本発明は、上記最良の組合せ治療効果が、低用量の細胞毒性薬物および低用量のCTOを使用した場合に観測されることを示す、全く予想外のかつ新規な結果を記載する。公開されている文献および実際の臨床的実務とは逆に、本発明は、最大の治療効果を実現するために、用量希釈に基く方法並びに組成物を提供する。
本発明の目的の一つは、上記腫瘍内微小環境において上記細胞毒性薬物により引起される妨害を、これら薬物をCTO、即ち多機能性ターゲットを持つ小分子との組合せ療法において使用することによって、低減することにあり、該ターゲットの幾つかは、以下において詳細に例証されるように、細胞毒性薬物の感度喪失および薬剤耐性の発現に関与していた。
【実施例】
【００２６】
実施例1：正常なマウスにおける組合せ治療薬の力価決定
この第一の実験の目的は、5-アミノ-1-(4-(4-クロロベンゾイル)-3,5-ジクロロベンジル)-1,2,3-トリアゾール-4-カルボキシアミドオロテート(CTO)およびテモゾロミド、5-FU、メトトレキサート、ドキソルビシンおよびダウノルビシンからなる群から選択される細胞毒性化学療法薬の組合せ治療に対する、メスの無胸腺症NCr-nu/nuマウスの許容度を評価することであった。
ポリエチレングリコール(PEG 400、MW 400)は、アルドリッチケミストリー(Aldrich Chemistry)社から購入した。脱イオン水は、ラブケム社(LabChem, Inc.)から購入した。クルセル(Klucel)(ヒドロキシプロピルセルロース)は、アルドリッチ(Aldrich)社から購入した。塩水(生理食塩水、動物のみに使用)は、ノバ-テック社(Nova-Teck, Inc)から購入した。ツイーン80(Tween 80；T80、ポリソルベート80)は、フィッシャーサイエンティフィック(Fisher Scientific)社から購入した。    CTO(MW 580.76)は、受取った際に、光から保護し、室温にて保存した。CTOは、40％PEG 400の脱イオン水溶液中、51.3mg/mLなる濃度にて、週1回(第1日目および8日目)に処方した。テモゾロミド(TemozolomideTM)(テモゾロミド、シャーリング社(Schering Co.), 20mg/カプセル)は、各治療日に、T80を数滴その粉末に添加し、次いで0.3％のクルセルの塩水溶液を添加して、濃度を4.5mg/mLとすることにより製造した。
【００２７】
この研究は、第1日目に、全体で25匹のマウスに対して、1群当たり5匹のマウスを含む4つのマウス群からなっていた。第1群中の動物は、テモゾロミドとの組合せで、連続する14日間にわたり、1日に1回、513mg/kg/服用なる投与量でCTOにより処置(Q1Dx14、第1-14日目)した。ここで、該テモゾロミドは、4日毎に1回、全体として3回の治療(Q4Dx3、第1、5および9日目)に対して、90mg/kg/服用なる用量にて投与された。第2群中の動物は、テモゾロミドとの組合せで、Q1Dx14スケジュールで、342mg/kg/服用なる投与量で、CTOにより処置した。ここで、該テモゾロミドは、Q4Dx3スケジュールで、90mg/kg/服用なる投与量にて投与された。第3群中の動物は、テモゾロミドとの組合せで、Q1Dx14スケジュールで、513mg/kg/服用なる投与量で、CTOにより処置した。ここで、該テモゾロミドは、Q4Dx3スケジュールで、60mg/kg/服用なる投与量にて投与された。第4群中の動物は、テモゾロミドとの組合せで、Q1Dx14スケジュールで、342mg/kg/服用なる投与量で、CTOにより処置した。ここで、該テモゾロミドは、Q4Dx3スケジュールで、60mg/kg/服用なる投与量にて投与された。個々の動物の体重を、以下の表1に示す。
【００２８】
2015508100.tif 000003
【００２９】
結果：90または60mg/kg/服用(それぞれ第1群および第3群)なる用量のテモゾロミドとの組合せで、513mg/kg/服用なる用量でのCTOの投与は、実験第4日目に観測された6％(1.3-1.4g)という最大平均体重減と関連付けられた。90mg/kg/服用(第2群)なる用量のテモゾロミドとの組合せで、342mg/kg/服用なる用量でのCTOの投与は、実験第8日目に観測された4％(1.0g)という最大平均体重減と関連付けられた。60mg/kg/服用(第4群)なる用量のテモゾロミドとの組合せで、342mg/kg/服用なる用量でのCTOの投与は、実験第4日目に観測された6％(1.4g)という最大平均体重減と関連付けられた。該治療の終了後に、全4群の動物は、体重増を示した。即ち、最大耐用量(MTD)は、この実験においては、CTOについて513mg/kg/服用以上であり、またテモゾロミドについて90mg/kg/服用以上であった。MTDは、死をもたらすことがなく、あるいは20％以下の平均体重減をもたらす用量として定義される。
【００３０】
実施例2：マウスにおけるヒトLOX IMVIメラノーマの異種移植モデルにおけるテモゾロミドおよびCTOによる組合せ療法
本実験TTI-6Aの目的は、メスの無胸腺症NCr-nu/nuマウスに、皮下経路(SC)-移植されたヒトLOX IMVIメラノーマの異種移植片に対する、テモゾロミドとの組合せとして投与した場合の、CTOの抗腫瘍活性を評価することであった。メスの6-週齢無胸腺症NCr-nu/nuマウスは、チャールズリバーラボラトリーズ(Charles River Laboratories)社(MA州、ウイルミントン(Wilmington, MA))から購入した。ヒトLOX IMVIメラノーマ細胞は、腹水継代培養物(ascites passage)として維持された。各マウスの右脇腹近傍に、23gの針を用いて、百万個(1x106)のインビボ継代由来の該LOX IMVIヒトメラノーマ細胞を、SC経路で移植した。腫瘍片を移植した日を、第0日とした。90匹の動物の個々の腫瘍は、治療開始日である腫瘍移植後の第6日(2011年7月20日)に、その質量において126-198mg(そのサイズ：126-198mm3)まで増殖、成長した。適当なサイズ範囲にある腫瘍を持つこれらの選択された動物を、9つの治療群に割り当て、第6日目における全群の平均腫瘍質量が、相互にできる限り近い値となるようにした(平均腫瘍質量は165または166mgであり、メディアン腫瘍質量は162〜176mgなる範囲であった)。
CTOは、各治療日において、正確な個々の動物の体重に基いて、マウスに投与され、その注入体積は0.1mL/10g体重であった。テモゾロミドの投与製剤は、各治療日において、正確な個々の動物の体重に基いて、処方の30分以内にマウスに投与された。その注入体積は、0.2mL/10g体重であった。
【００３１】
本研究は、1群当たり10匹のマウスからなる9群からなっていた。第1群の動物は、テモゾロミド賦形剤(0.3％クルセルの塩水溶液)との組合せで、CTO賦形剤(40％PEG 400の脱イオン水溶液)により、Q1Dx14スケジュールで治療された。ここで、該テモゾロミド賦形剤は、Q4Dx3スケジュール(第6、10および14日目)で投与された。第2および3群の動物は、Q1Dx14スケジュールで、夫々513および342mg/kg/服用なる投与量で、CTOによる治療を受けた。第4および5群の動物は、Q4Dx3スケジュールで、夫々90および60mg/kg/服用なる投与量で、テモゾロミドによる治療を受けた。第6および7群の動物は、テモゾロミドとの組合せで、夫々513および342mg/kg/服用なる用量にて、Q1Dx14スケジュールでCTOによる治療を受けた。ここで、該テモゾロミドは、Q4Dx3スケジュールで、90mg/kg/服用なる用量で投与された。第8および9群の動物は、テモゾロミドとの組合せで、夫々513および342mg/kg/服用なる用量にて、Q1Dx14スケジュールでCTOによる治療を受けた。ここで、該テモゾロミドは、Q4Dx3スケジュールで、60mg/kg/服用なる用量で投与された。
上記SC腫瘍を測定し、また上記動物の体重を1週当たり2回測定した。腫瘍の体積は、楕円球に対する式：LxW2/2 = mm3によって決定した。ここで、LおよびWは、夫々各測定において集められた最大のおよび最少の垂直方向の寸法を意味する。この実験は第35日目に終了させた。
【００３２】
評価されたパラメータ：非特異的な死亡固体数、完全な腫瘍回帰個体数、第35日目における腫瘍のない生存個体数、および該腫瘍が4回の腫瘍質量倍増(four tumor mass doublings)に至るメディアン時間を決定した。第19日目(CTOによる治療の最終日および該コントロール群におけるマウスが依然として生存している場合の、データ収集の最終日)における、該処置群におけるメディアン腫瘍質量対コントロール群(T/Cx100%)におけるメディアン腫瘍質量の比較は、上記組合せ治療の抗腫瘍効力の付随的な評価のために利用された。結果を図1〜4にまとめた。用量513および342mg/kg/服用(それぞれ第2および3群)でのCTOの経口投与は、第8日目に観測された、夫々4%(0.9g)および2%(0.6g)という最大平均体重減と関連付けられた。これら両用量のCTOにより治療された動物群における腫瘍の成長は、個々の動物の、4回の腫瘍質量倍増に至る時間を比較した場合に、該コントロール群における該腫瘍の成長、増殖とは統計的に異なっている(第1群対第2群：P<0.001；第1群対第3群：P=0.004)ことが分かった。第19日目のT/C値は、夫々65％および70％であった。これら両CTO-治療群における第19日目の腫瘍の質量は、賦形剤-処置のコントロール群における腫瘍質量とは統計的に異なっていた(第1群対第2群：P<0.001；第1群対第3群：P=0.010)。この観測された抗腫瘍活性は、個々の動物の、4回の腫瘍質量倍増に至る時間を比較した場合(第2群対第3群：P=0.556)および第19日目の個々の動物の腫瘍質量を比較した場合(第2群対第3群：P=0.204)に、用量-依存性ではなかった。図1参照。
【００３３】
90および60mg/kg/服用なる用量でのテモゾロミドの経口投与(夫々第4および5群)は、これら両群において、7％(1.6-1.8g)なる最大平均体重減と関連付けられた。メディアン腫瘍は、17.2および12.3日において、4回の腫瘍質量倍増に至り、夫々8.5および3.6日間という該メディアン腫瘍の成長における遅れをもたらした。上記両テモゾロミド-処置群における該腫瘍の成長は、個々の動物の、4回の腫瘍質量倍増に至る時間を比較した場合(両群に対してP<0.001)、上記コントロール群における腫瘍の成長とは、統計的に異なっていることが分かった。第19日目におけるそのT/C値は、それぞれ36％および57％であった。テモゾロミドで治療したこれら両群における第19日目の腫瘍質量は、賦形剤-処置コントロール群における該腫瘍の質量とは、統計的に異なっていた(両群に対してP<0.001)。該観測された抗腫瘍活性は、個々の動物の、4回の腫瘍質量倍増に至る時間を比較した場合(第4群対第5群：P<0.001)および第19日目の個々の動物の腫瘍質量を比較した場合(第4群対第5群：P=0.004)、用量依存性であった。図2参照。
【００３４】
90mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドとの組合せによる、513mg/kg/服用なる用量でのCTOの投与(第6群)は、第22日目において観測された、16％(3.7g)なる最大平均体重減と関連付けられた。20.2日で、そのメディアン腫瘍は、4回の腫瘍質量倍増に至り、11.5日なる該メディアン腫瘍の成長における遅れをもたらした。この組合せ治療群における該腫瘍の成長は、個々の動物の、4回の腫瘍質量倍増に至る時間を比較した場合(第1群対第6群：P<0.001)、上記コントロール群における該腫瘍の成長とは、統計的に異なっているが、腫瘍の成長は、90mg/kg/服用なる用量のテモゾロミド単独による治療群における該腫瘍の成長とは異なっていない(第4群対第6群：P=0.383)ことが分かった。第19日目のT/C値は27％であった。この組合せ治療群における第19日目の腫瘍質量は、上記賦形剤-処置コントロール群における該腫瘍質量とは統計的に異なっており(第1群対第6群：P<0.001)、また90mg/kg/服用なる用量のテモゾロミド単独による治療群における該腫瘍質量とは統計的に異なっていた(第4群対第6群：P=0.021)。
【００３５】
90mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドとの組合せによる、342mg/kg/服用なる用量でのCTOの投与(第7群)は、第19および22日目に観測された、15％(3.5g)という最大平均体重減と関連付けられた。この群の3匹の動物は死亡した(これら動物の死亡は、第19、25および28日目に起った)。16.9日で、そのメディアン腫瘍は、4回の腫瘍質量倍増に至り、8.2日なる該メディアン腫瘍の成長における遅れをもたらした。この組合せ治療群における該腫瘍の成長は、個々の動物の、4回の腫瘍質量倍増に至り時間を比較した場合(第1群対第7群：P<0.001)、上記コントロール群における該腫瘍の成長とは統計的に異なっているが、腫瘍の成長は、90mg/kg/服用なる用量のテモゾロミド単独による治療群における該腫瘍の成長とは異なっていない(第4群対第7群：P=0.890)ことが分かった。第19日目のT/C値は35％であった。この組合せ治療群における第19日目の腫瘍質量は、上記賦形剤-処置コントロール群における該腫瘍質量とは統計的に異なっている(第1群対第7群：P<0.001)が、腫瘍質量は、90mg/kg/服用なる用量のテモゾロミド単独による治療群における該腫瘍質量とは異なってはいなかった(第4群対第7群：P=0.211)。図3参照。
【００３６】
60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドとの組合せによる、513mg/kg/服用なる用量でのCTOの投与(第8群)は、第22日目において観測された、8％(2.0g)なる最大平均体重減と関連付けられた。15.5日で、そのメディアン腫瘍は、4回の腫瘍質量倍増に達し、6.8日なる該メディアン腫瘍の成長における遅れをもたらした。この組合せ治療群における該腫瘍の成長は、個々の動物の、4回の腫瘍質量倍増に達する時間を比較した場合(第1群対第8群：P<0.001)の上記コントロール群における該腫瘍の成長、および60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミド単独による治療群における該腫瘍の成長(第5群対第8群：P=0.001)とは統計的に異なっていることが分かった。第19日目のT/C値は47％であった。この組合せ治療群における第19日目の腫瘍質量は、上記賦形剤-処置コントロール群における該腫瘍質量とは統計的に異なっており(第1群対第8群：P<0.001)、また60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミド単独による治療群における該腫瘍質量とは統計的に異なっていた(第5群対第8群：P=0.017)。この組合せ治療の抗腫瘍活性は、各化合物を夫々単独で投与することにより生じる抗腫瘍活性に比して相加的であった：即ち、第8群(513mg/kg/服用なる用量のCTO+60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドを投与)におけるメディアン腫瘍成長の遅れ=6.8日と比較して、第2群(513mg/kg/服用なる用量にてCTOを投与)におけるメディアン腫瘍成長の遅れ=3.1日；第5群(60mg/kg/服用なる用量にてテモゾロミドを投与)におけるメディアン腫瘍成長の遅れ=3.6日。
【００３７】
60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドとの組合せによる、342mg/kg/服用なる用量でのCTOの投与(第9群)は、第15および19日目において観測された、10％(2.2-2.3g)なる最大平均体重減と関連付けられた。1匹の動物が第19日目に死亡した。19.4日で、そのメディアン腫瘍は、4回の腫瘍質量倍増に至り、10.7日なる該メディアン腫瘍の成長における遅れをもたらした。この組合せ治療群における該腫瘍の成長は、個々の動物の、4回の腫瘍質量倍増に至る時間を比較した場合(第1群対第9群：P<0.001)の上記コントロール群における該腫瘍の成長、および60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミド単独での治療群における該腫瘍の成長(第5群対第9群：P=0.001)とは統計的に異なっていることが分かった。第19日目のT/C値は39％であった。この組合せ治療群における第19日目の腫瘍質量は、上記賦形剤-処置コントロール群における該腫瘍質量とは統計的に異なっており(第1群対第9群：P<0.001)、また60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミド単独での治療群における該腫瘍質量とは統計的に異なっていた(第5群対第9群：P=0.001)。この組合せ治療の抗腫瘍活性は、各化合物を夫々単独で投与することにより生じる抗腫瘍活性に比して相加的以上のものであった：即ち、第9群(342mg/kg/服用なる用量のCTO+60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドを投与)におけるメディアン腫瘍成長の遅れ=10.7日と比較して、第3群(342mg/kg/服用なる用量にてCTOを投与)におけるメディアン腫瘍成長の遅れ=1.6日；第5群(60mg/kg/服用なる用量にてテモゾロミドを投与)におけるメディアン腫瘍成長の遅れ=3.6日。図4参照。
【００３８】
従って、連続する14日間に及ぶ、513または342mg/kg/服用なる用量でのCTOの経口投与は、メスの無胸腺症NCr-nu/nuマウスにSC経路で移植した場合に、ヒトLOX IMVIメラノーマ異種移植片の成長、増殖の測定可能な阻害をもたらした。CTOのこの観測された抗腫瘍活性は、用量-依存性ではなかった。全体として3回の治療に対して、4日毎に1回、90および60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドの経口投与は、該ヒトLOX IMVIメラノーマ異種移植片の成長の、測定し得る用量-依存性の阻害をもたらした。90mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドを用いてテストされた、上記両用量でのCTOによる組合せ治療は、90mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドを単独で投与することにより達成された抗腫瘍活性と比較して、高い抗腫瘍活性をもたらさなかったが、60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドを用いてテストされた、該両用量でのCTOによる組合せ治療は、60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドを単独で投与することにより達成された抗腫瘍活性と比較して、高い抗腫瘍活性をもたらした。513mg/kg/服用なる用量のCTO+60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドによる組合せ治療の抗腫瘍活性は相加的なものであったが、342mg/kg/服用なる用量のCTO+60mg/kg/服用なる用量のテモゾロミドによる組合せ治療の抗腫瘍活性は、相加的以上のものであった。これらの結果は、より低用量のテモゾロミドを用いる用量希釈戦略が、最大抗腫瘍活性をもたらすことを立証している。このことは、癌患者を治療する際に一般的に使用されている用量密な方法の確立された実務とは逆であり、またこの「用量希釈」戦略により最大の治療効果およびより低い毒性を実現する上で、極めて大きな影響を与える見込みがある。
【００３９】
本発明は、その範囲において、上記実施例において記載された態様によって限定されるものではなく、該実施例は本発明の一局面の例示として意図されたものであり、また機能的に等価なあらゆる方法が、本発明の範囲内に入る。事実、本明細書において示され、また記載されたもの以外の、本発明の様々な変更は、上記説明から当業者には明らかとなるであろう。このような変更は添付した特許請求の範囲に入るものとする。
当業者は、本明細書において説明された本発明の具体的な態様に対する全ての等価物を認識し、あるいは日常的な実験程度を利用して確認することができるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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