(57)【要約】  本発明は、対象における遊離軽鎖（ＦＬＣ）生成を推定する方法であって、（ｉ）対象由来の試料中のＦＬＣの量を決定し；及び（ｉｉ）糸球体濾過により及び細網内皮系（ＲＥ）クリアランスにより試料の給源から消失されたＦＬＣに関して、試料中のＦＬＣの量を補正すること、を含む方法を提供する。
2015508173.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における遊離軽鎖（ＦＬＣ）生成を推定する方法であって：
（ｉ）対象由来の試料中のＦＬＣの量を決定し；
（ｉｉ）糸球体濾過により及び細網内皮系（ＲＥ）クリアランスにより試料の給源から消失されたＦＬＣに関して、試料中のＦＬＣの量を補正すること、
を含む、方法。
【請求項２】
糸球体濾過量（ＧＦＲ）が、対象について推定される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記推定されたＧＦＲが、正確なＧＦＲを生じるように、試料中で決定されたＦＬＣの型について補正される、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記ＦＬＣが、λＦＬＣ、κＦＬＣ又は総ＦＬＣである、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
対象におけるＦＬＣ生成の推定値を生じるために、補正されたＧＦＲをＲＥ補正因子に加算し、かつその合計を、試料中で決定されたＦＬＣ量により積算することにより、生成されたＦＬＣの量が推定される、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
前記試料が、血液、血漿又は血清の試料である、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
前記推定ＦＬＣ生成が、下記式：
【数１】
2015508173.tif 000011
（式中、
Ｐ＝対象により生成された推定されたＦＬＣ（ｍｇ／分）
ＦＬＣ＝試料中で決定されたＦＬＣの量（ｍｇ／Ｌ）
α＝ＦＬＣの型に関するＧＦＲ補正因子
ＧＦＲ＝対象について推定されたＧＦＲ
Ｋre＝ＲＥ定数
ν＝血管血漿容積と血管外体液容積間の容積比）
を用いて決定される、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項記載の方法を使用することを含んでなる、上昇したＦＬＣレベルを有する対象におけるＦＬＣ生成レベルを確定する方法。
【請求項９】
工程（ｉｉ）及び／又は前記式の使用が、コンピュータ上で実施される、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法を含んでなる、コンピュータに実装された方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項記載の方法を実施するために構成された、コンピュータプロセッサ及び記憶装置を備える装置。
【請求項１１】
請求項９記載の装置を備える、試料中のＦＬＣ量を定量することにより、対象におけるＦＬＣ生成のレベルを決定するためのアッセイ装置。
【請求項１２】
免疫抑制された患者が、感染症発症のリスクを有するかどうかを確定する方法であって、患者由来の試料中の遊離軽鎖（ＦＬＣ）の量を決定することを含み、ここでより低いＦＬＣ量が、患者の感染症を発症する増大した尤度と関連している、方法。
【請求項１３】
前記患者が、臓器移植レシピエントである、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記遊離軽鎖の量が、試料中の総遊離軽鎖の量である、請求項１２又は１３記載の方法。
【請求項１５】
前記感染症のリスクが、患者からの試料採取の９０日、６０日以内に又は３０日以内に生じると見込まれる、請求項１２〜１４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
前記ＦＬＣが、対象由来の血清の試料において決定される、請求項１１〜１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
前記総ＦＬＣが、抗−遊離軽鎖抗体を使用する免疫学的検定により決定される、請求項１１〜１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体が、抗−遊離κ軽鎖抗体及び抗−遊離λ軽鎖抗体の混合物である、請求項１４記載の方法。
【請求項１９】
前記方法が、ネフェロメトリー又は比濁法によりＦＬＣの量を決定することを含んでなる、請求項１１〜１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
前記対象が、Ｂ細胞関連疾患の症状を有さない、請求項１１〜１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
コンピュータ上で実行される場合、コンピュータに、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法を実行させるコードを含む、コンピュータ読み取り可能な媒体製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象における遊離軽鎖（ＦＬＣ）生成を推定する方法、並びに移植を受けた対象が感染症を有する可能性を推定する方法又は増加したＦＬＣ生成の分析に関する。
【背景技術】
【０００２】
本出願人は、患者における広範な単クローン性ガンマグロブリン血症に関してアッセイする方法として、遊離軽鎖を長年研究してきている。診断におけるそのような遊離軽鎖の使用は、Ａ．Ｒ．  Ｂｒａｄｗｅｌｌの著書「血清遊離軽鎖分析（Ｓｅｒｕｍ  Ｆｒｅｅ  Ｌｉｇｈｔ  Ｃｈａｉｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）、第６版（２００８）、ＩＳＢＮ  ９７８０７０４４２７９６９」において詳細に検証されている。患者においてポリクローナル抗体生成の減少又は増加が存在する多クローン性異常も、知られている。
【０００３】
抗体は、重鎖及び軽鎖を含む。これらは通常、２倍対称を有し、かつ各々、可変領域ドメイン及び定常領域ドメインを含む、２本の同一重鎖及び２本の同一軽鎖により構成される。軽鎖／重鎖の各対の可変ドメインは連結し、抗原結合部位を形成し、その結果両鎖は、抗体分子の抗原結合特異性に寄与する。軽鎖には、２つの型κ及びλがあり、任意の所定の抗体分子は、いずれかの軽鎖を有するが、決して両方を有することはない。ヒトにおいては生成されるκ分子はλ分子よりもおよそ２倍多く存在するが、これは一部の哺乳動物においては異なる。通常軽鎖は、重鎖に結合している。しかし、一部の非結合「遊離軽鎖」は、個体の血清中又は尿中において検出可能である。通常は軽鎖の重鎖への結合により隠されている遊離軽鎖の表面に対する抗体を生じることにより、該遊離軽鎖が特異的に同定され得る。遊離軽鎖（ＦＬＣ）において、この表面は露出され、それが免疫学的に検出されることが可能になる。κ又はλ遊離軽鎖の検出用の市販のキットとしては、例えば、Ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ社（バーミンガム、英国）により製造された「Ｆｒｅｅｌｉｔｅ（商標）」が挙げられる。本出願人は先に、遊離κ、遊離λの量、及び／又は遊離κ／遊離λの比の測定は、患者における単クローン性ガンマグロブリン血症の検出を可能にすることを確定した。これは、例えば、インタクト免疫グロブリン型多発性骨髄腫（ＭＭ）、軽鎖ＭＭ、非分泌型ＭＭ、ＡＬアミロイド症、軽鎖沈着症、くすぶり型ＭＭ、形質細胞腫及びＭＧＵＳ（意義未確定の単クローン性ガンマグロブリン血症）の診断の補助として、使用されている。ＦＬＣの検出はまた、例えば他のＢ細胞悪液質の診断の補助として使用され、かつ実際に一般に単クローン性ガンマグロブリン血症の診断のための尿中ベンスジョーンズタンパク質分析の代替としても使用されている。
【０００４】
本出願人はまた、ＦＬＣのアッセイは、個体が明らかに健常対象である場合であっても、その個体の長期生存を予測するために使用することができることを先に確定している（ＷＯ  ２０１１／０２１０４１）。本出願人はまた、総ＦＬＣ濃度は、長期生存と統計学的に有意に関連付けられることを発見した。更にこの関連付けは、コレステロール、クレアチニン、及びＣ反応性タンパク質などの現存する長期生存の予後判定マーカーに関する関連付けに類似しているか又はそれらよりもより良いように見える。総ＦＬＣ測定に関するアッセイは、該文献において明らかにされている。総ＦＬＣを測定するアッセイは、商品名「Ｃｏｍｂｙｌｉｔｅ」で、Ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ社（バーミンガム、英国）から入手可能である。
【０００５】
２種以上の特異的抗体が増加した又は減少した生成を有するポリクローナル抗体関連疾患が、一般に知られている。例えばこれは、存在する２種の個別の腫瘍給源由来の、抗体生成の全般的増加によるか、又は２種以上のモノクローナル抗体により特徴付けられる。慢性感染症、自己免疫疾患及び多くの腫瘍は、多クローン性免疫グロブリンの増加を引き起こす。皮膚疾患、肺疾患及び腸管疾患は、ＩｇＡ濃度の増加を引き起こす可能性がより大きいのに対し、全身性感染症は、特にＩｇＧ以外の、全ての免疫グロブリンを増加するであろう。
【０００６】
例えば血清又は血漿などの試料中で同定されたＦＬＣの量は、数多くの要因により影響を受けるであろう。ＦＬＣは、Ｂ細胞系列の細胞により生成される。多クローン性ＦＬＣの生成は、感染症並びに急性及び慢性炎症のために、増加することができる。ＦＬＣは、健常対象においては、ほぼ全てが、腎臓を経た腎クリアランスにより消失される。しかし腎機能障害の対象においては、細網内皮系（ＲＥ）ネットワークを介したクリアランスが、より大きい作用を有するであろう。
【０００７】
従来、推定されたＦＬＣ生成は、糸球体濾過量（ＧＦＲ）を用い、血清遊離軽鎖レベルを直接調節することにより、補正されている。ＧＦＲとは、水及び溶解物質が、腎臓を介し単位時間当たりに血液から濾過される量の測定値である。ＧＦＲを計算又は推定する典型的方法は、糸球体により濾過されるが、腎尿細管により吸収又は分泌されないことがわかっている、対象へ注射された化合物を、使用する。これらは、ＧＦＲを計算するためのＣｒ−ＥＤＴＡ及びイヌリンを含む。クレアチニン及びシスタチンＣなどの天然の内在性化合物も、ＧＦＲの推定に使用されている。
【０００８】
Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎら（Ｃｌｉｎ．  Ｊ．  Ａ．  Ｓｏｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ  （２００８）、３：１６８４−１６９０）は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）患者における血清中及び尿中の多クローン性ＦＬＣの定量的評価を研究した。これは、ＣＫＤ病期を評価するために使用した。血清試料及び尿試料を、クレアチニン及びシスタチンＣについて分析した。クレアチニン量を使用し、例えばクレアチニン−ベースのコックロフト−ゴールト（Ｃｏｃｋｒｏｆｔ−Ｇａｕｌｔ）式を用い、推定ＧＦＲ（ｅＧＦＲ）を計算した。これは、ＣＫＤ患者におけるｅＧＦＲによる、血清κ及びＦＬＣの相関関係を研究するために使用した。この論文は、κＦＬＣは、λＦＬＣのおよそ２倍の量で生成されるが、λＦＬＣは、それらの腎クリアランスを遅くする二量体をより頻繁に形成することを注記している。更に、腎クリアランスはＣＫＤ患者においては低下するので、ＲＥ系は重要性が高くなり始める。ＲＥは、ＦＬＣの分子量により影響を受けない。
【０００９】
これは、ＦＬＣクリアランスとＧＦＲの間の関係は、正比例しないこと、及び対象におけるＦＬＣ生成の正確な評価をするために、ＲＥクリアランスの作用を考慮することが必要であることを示している。
【００１０】
本出願人は、ＧＦＲ因子及びＲＥクリアランスに関して観察されたＦＬＣ濃度を補正することは、ＦＬＣ生成の推定を向上し、より良いデータ分析並びに患者の診断及び予後判定を可能にすることを確定した。これは、この補正は、変動するＧＦＲ値を伴うがそれ以外は正常であるか又は見かけ上健常である個体由来のデータのデータセットに、モデルをフィットすることにより、より良く推定することができるという認識を利用している。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、対象における遊離軽鎖（ＦＬＣ）生成を推定する方法であって：
（ｉ）対象由来の試料中のＦＬＣの量を決定する工程；並びに
（ｉｉ）糸球体濾過により及び細網内皮（ＲＥ）クリアランスにより試料の給源から消失されたＦＬＣに関して、試料中のＦＬＣの量を補正する工程：
を含んでなる方法を提供する。
【００１２】
糸球体濾過は、例えばクレアチニン又はシスタチンＣを使用することにより、対象に関して推定することができる。典型的にはこれは、コックロフト−ゴールト式（Ｃｏｃｋｒｏｆｔ  Ｄ．Ｗ．及びＧａｕｌｔ  Ｍ．Ｈ、Ｎｅｐｈｒｏｎ．  （１９７６）  １６：３１−４１）、又はクレアチニンベースＭＤＲＤ式（Ｖｅｒｖｏｏｒｔ  Ｇ．ら、Ｎｅｐｈｒｏｌ．  Ｄｉａｌ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  （２００２）  １７（１１）：１９０９−１３）を使用する。
【００１３】
ＧＦＲ及び／又はＲＥは、測定することができる。ＲＥ補正値は、予め決定された定数であることができる。
ＦＬＣは、λＦＬＣ、κＦＬＣ又は総ＦＬＣ（λ＋κ）であることができる。ＧＦＲは、λからκまで変動し、従ってＧＦＲは、試料中で測定されたＦＬＣの型について補正することができる。λ及びκは、個別に決定し、かつ任意に一緒に加算し、総ＦＬＣ生成を決定することができる。あるいは、総ＦＬＣは、例えば、組合せられた抗−ＦＬＣ抗体を用いて、測定することができる。
【００１４】
典型的には、対象におけるＦＬＣ生成の推定値を生じるために、補正されたＧＦＲをＲＥ補正因子に加算し、かつこの合計を、試料中で決定されたＦＬＣ量により積算することにより、生成されたＦＬＣの量が推定される。
この試料は、尿であってよいが、典型的には血液、血漿又は血清である。
【００１５】
典型的には、推定ＦＬＣ生成は、下記式を用いて決定される：
【００１６】
【数１】
2015508173.tif 000003
【００１７】
（式中、
Ｐ＝対象により生成された推定されたＦＬＣ
ＦＬＣ＝試料中で決定されたＦＬＣの量
α＝ＦＬＣの型に関するＧＦＲ補正因子
ＧＦＲ＝対象について決定されたＧＦＲ
Ｋre＝ＲＥ定数
ν＝血管血漿容積と血管外体液容積間の容積比）。
【００１８】
Ｋreは、このモデルに関して一定であると仮定されてよく、これは仮定された定数であってよい（典型的には１．６×１０-4分-1）。あるいは、ＲＥ変数が、このモデルに関して決定されてよい。
ακは、典型的には０．０００４２００１１であり、αλは、典型的には０．０００３８１４１である。しかしこれらは、例えば集団差を考慮し、変動することができる。
ＲＥクリアランスは両方の場所で生じるが、ＧＦＲは血管空間内で生じるので、νは、この方式で決定される。平均的ヒトに関する、本計算式において典型的に使用される代表値は、およそ０．２１である。
これは、本発明の工程（ｉｉ）において使用することができる。
【００１９】
本発明の方法を使用することを含むコンピュータが実装する方法も提供され、ここで工程（ｉｉ）及び／又は前記式は、コンピュータ上で実施される。
【００２０】
本発明の方法を実施するために構成された、コンピュータプロセッサ及び記憶装置を備える装置が、提供される。そのような装置を備える、試料中のＦＬＣ量を決定するためのアッセイ装置も提供される。ＦＬＣを決定するためのアッセイ装置は、当該技術分野において一般に公知である。これは、生成されたＦＬＣの推定された量を表示するための、スクリーンなどの出力を備えてよい。
【００２１】
本発明はまた、コンピュータ上で実行した場合、コンピュータに、本発明の方法を実行させるコードを備える、コンピュータ読み取り可能な媒体製品も提供する。
【００２２】
試料中のＦＬＣの測定値は、当該技術分野において一般に公知の方法を使用し、決定することができる。
κＦＬＣ又はλＦＬＣに特異的な抗体、又は抗体断片は、一般に公知であり、かつ商品名Ｆｒｅｅｌｉｔｅ（商標）で市販されている。
【００２３】
典型的にはＦＬＣは、ＥＬＩＳＡアッセイなどの免疫学的検定、又はＬｕｍｉｎｉｘ（商標）ビーズなどの蛍光標識ビーズを利用し、決定される。
【００２４】
ＥＬＩＳＡは例えば、特異的抗原を検出するために抗体を使用する。本アッセイにおいて使用される１種又は複数の抗体は、基質を、検出可能な被検体へ変換することが可能な酵素により標識されてよい。そのような酵素としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及び当該技術分野において公知の他の酵素が挙げられる。あるいは、他の検出可能なタグ又はラベルも、酵素の代わりに又は酵素と一緒に使用されてよい。これらは、放射性同位元素；フルオレセイン、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ、オレゴングリーン、ＢＯＤＩＰＹ、ローダミンレッド、カスケードブルー、Ｍａｒｉｎａ  Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、カスケードイエロー、金を含む、当該技術分野において公知の広範な着色ラベル及び蛍光ラベル；並びに、ビオチン（例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、英国から入手可能）などの複合体が挙げられる。色素ゾル（ｄｙｅ  ｓｏｌ）、金属ゾル、化学発光ラベル又は着色したラテックスも、使用されてよい。１種又は複数のこれらのラベルは、本明細書に説明された様々な発明に従い、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、あるいは本明細書に説明された他のアッセイ、標識された抗体又はキットにおいて、使用されてよい。
【００２５】
ＥＬＩＳＡ型アッセイの構成は、それ自身当該技術分野において周知である。例えば、ＦＬＣに特異的な「結合抗体」は、基質上に固定されている。この「結合抗体」は、当該技術分野において周知である方法により、基質上に固定されてよい。試料中のＦＬＣは、この「結合抗体」により結合され、このことはＦＬＣを基質へ「結合抗体」を介して結合する。
結合していない免疫グロブリンは、洗浄除去される。
【００２６】
ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、結合した免疫グロブリンの存在は、結合抗体よりも、関心対象のＦＬＣの異なる部分に特異的である標識された「検出抗体」を用いて、決定することができる。
【００２７】
フローサイトメトリーを使用し、関心対象のＦＬＣの結合を検出することができる。この技術は、例えば細胞選別に関して当該技術分野において周知である。しかしこれは、ビーズなどの標識された粒子を検出するため、及びそれらのサイズを測定するために使用することもできる。「実践フローサイトメトリー（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）」、第３版（１９９４）、Ｈ．  Ｓｈａｐｉｒｏ、Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ社、ニューヨーク、及び「フローサイトメトリー最初の原理（Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，  Ｆｉｒｓｔ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ）」（第２版）２００１年、Ａ．Ｌ．  Ｇｉｖｅｎ、Ｗｉｌｅｙ  Ｌｉｓｓ社などの、多くの教本が、フローサイトメトリーについて説明している。
【００２８】
ＦＬＣに特異的な抗体などの、結合抗体の１種が、ポリスチレン又はラテックスビーズなどのビーズに結合される。これらのビーズは、試料及び第二の検出抗体と混合される。この検出抗体は、検出可能なラベルにより標識されることが好ましく、これは試料中の検出されるべきＦＬＣに結合する。これは、アッセイされるべきＦＬＣが存在する場合、標識されたビーズを生じる。
【００２９】
その後標識されたビーズは、フローサイトメトリーにより検出することができる。様々な蛍光ラベルなどの様々なラベルを、例えば、抗−遊離λ抗体及び抗−遊離κ抗体のために使用することができる。本明細書に記載された他の被検体に特異的な他の抗体も、このアッセイ又はそれらの被検体の検出を可能にする本明細書に記載の他のアッセイにおいて使用することができる。これは、結合したＦＬＣの各型の量を同時に決定すること、又は他の被検体の存在を決定することを可能にする。
【００３０】
あるいは、又は加えて、異なるサイズのビーズを、異なる抗体のために、例えば異なるマーカー特異性抗体のために使用してよい。フローサイトメーターは、異なるサイズのビーズ間で識別することができ、従って試料中の各ＦＬＣ又は他の被検体の量を迅速に決定することができる。
【００３１】
代替方法は、例えば、市販のＬｕｍｉｎｅｘ（商標）ビーズなどの、蛍光標識されたビーズに結合された抗体を使用する。異なるビーズが、異なる抗体と共に使用される。異なるビーズは、異なる発蛍光団混合物により標識され、その結果異なる被検体が、蛍光波長により決定されることが可能になる。Ｌｕｍｉｎｅｘビーズは、Ｌｕｍｉｎｅｘ社（オースチン、テキサス州、米国）から入手可能である。
【００３２】
側方流動装置も、使用することができる。
使用されるアッセイは、ネフェロメトリー又は比濁法が好ましい。
【００３３】
本発明の更なる態様は、本発明の第一の態様に従う方法の使用を含んでなる、上昇したＦＬＣレベルを伴う対象においてＦＬＣ生成レベルを確定する方法を提供する。この方法は、そのような患者における生成のより良い分析を示す。この患者は、単クローン性又は多クローン性Ｂ細胞疾患などの、感染症、ＨＩＶ又は癌を有し得る。患者は、慢性リンパ球性白血病又はホジキンリンパ腫を有し得る。
【００３４】
本出願人は、腎移植した移植レシピエントからのＦＬＣ情報のコホートを研究するために本方法を使用することにより、本発明の方法を使用する妥当性も評価している。
これは、ＦＬＣのより低いレベルは、患者がその後３０日間にわたり感染症を発症する増加したリスクを示したことを示唆した。
【００３５】
本発明の更なる態様は、患者由来の試料中の遊離軽鎖（ＦＬＣ）の量を検出することを含んでなる、免疫抑制された患者が、重大な感染症（抗生物質及び／又は抗ウイルス薬による治療を必要とするもの）の感染を発症するリスクを有するかどうかを確定する方法を提供し、ここでより低量のＦＬＣは、感染症を発症する患者の増大した尤度に関連している。
【００３６】
自己免疫疾患患者又は臓器移植レシピエントを含む、免疫抑制された患者は、感染症の増加したリスクにさらされ得る。本方法は、感染症を発症し得るそのような患者を確定する方式を提供する。
【００３７】
臓器移植されたとは、腎移植であってよい。ＦＬＣの総量が決定されるか、あるいはκＦＬＣ又はλＦＬＣが決定される。試料は、尿であってよいが、典型的には血液、血漿又は血清である。ＦＬＣは、先に説明された方法により決定されてよい。
【００３８】
典型的には、正常値０．４５〜０．９２ｍｇ／分を下回る値は、その後３０日以内の感染症発症の増大したリスクを、典型的に指摘している。
この移植患者は典型的には、Ｂ細胞関連疾患、又は多クローン性Ｂ細胞疾患の症状は存在していない。
【００３９】
単クローン性Ｂ細胞疾患は、骨髄腫（インタクト免疫グロブリン骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌型骨髄腫など）、ＭＧＵＳ（意義未確定の単クローン性ガンマグロブリン血症）、ＡＬアミロイド症、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、ホジキンリンパ腫、濾胞中心細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、前Ｂ細胞白血病又は急性リンパ芽球性白血病を含み、多クローン性関連疾患は、高ガンマグロブリン血症又は低ガンマグロブリン血症を含む。
【００４０】
本出願人は、ＦＬＣ濃度を使用し、可能性のある感染症を予測することは可能であることを示した。このことは、抗生物質などの予防薬を提供することができるか、あるいは患者へ投与される免疫抑制薬の量を減少することを意味する。
本発明はここで、下記の図面を単に参照し、実施例により説明される。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１は、ラムダ及びカッパに関する、ＦＬＣ生成及びクリアランスのモデルを示す。
【図２】図２は、カッパ及びラムダに関する健常患者について得られた患者データに対する、λ及びκのフィッティングモデルを示す。
【図３】図３は、図２に示したデータセット及びフィッティングに関して、フィットしたモデルの残差を示す。
【図４】図４は、本発明の計算式により算出したＦＬＣ生成による、腎移植患者に関する経時的生存の解析を示す（上側の線は０．６３３５ｍｇ／分以上、下側の線は０．６３３５ｍｇ／分を下回る）。
【図５】図５は、シスタチンＣ  ｅＧＦＲ計算を使用し補正されたＦＬＣ生成以外は同じ情報を示す（下側の線は、１５．３未満、上側の線は、１５．３以上）。
【図６】図６は、０．３での１−特異度の、ＦＬＣレベル、補正ＦＬＣレベル及び推定ＦＬＣ生成に関する、ＣＫＤ患者からのデータのＲＯＣ解析を示す。ラインは、（ｉ）ＭＤＲＤ  ｅＧＦＲについて補正された総ＦＬＣ、総ＦＬＣ（ｍｇ／Ｌ）、推定ＦＬＣ生成（ｍｇ／分）、血清シスタチンＣについて補正されたｔＦＬＣ、参照ラインである。
【図７ａ−７ｂ】図７ａ及び７ｂは、（ａ）総ＦＬＣ［４４．２７］ｍｇ／Ｌ、及び（ｂ）推定ＦＬＣ生成についての、慢性腎疾患患者に関するカプラン・マイアー（Ｋａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ）生存曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
モデル作製
本出願人は、ＦＬＣのクリアランスの計算は、数多くのパラメータの考慮を必要とすることを確定した：ＧＦＲはＦＬＣの各型について変動するので、ＧＦＲは、κ又はλについて調節した。このことを、図１にまとめている。
【００４３】
【表１】
2015508173.tif 000004
【００４４】
表１に示した基準値は、文献からか、又は入手可能なデータの最良の推定値である。
この情報を使用し、２４時間にわたる、定常量の腎機能及び一定のＦＬＣ生成に関するモデルを作製した。血漿中に認められたカッパの量
【００４５】
【数２】
2015508173.tif 000005
【００４６】
又は
【数３】
2015508173.tif 000006
【００４７】
は、下記計算式を基にしている：
【数４】
2015508173.tif 000007
【００４８】
ν＝血管血漿容積と血管外体液容積間の容積比
α＝λ及びκに関するＧＦＲ補正値
Ｐ（Ｔ）＝経時的ＦＬＣ合成
Ｋre＝ＲＥクリアランス。
【００４９】
これは、該計算式における信頼（ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ）を示しかつ未知のパラメータを推定するために、他の点では残差平方和解析によるにもかかわらず、ＧＦＲの変動するレベルを有する患者の集団セットからのＦＬＣ対ＧＦＲの実際のデータ（ｄａｔｅ）にフィットした。最小平方和を生じる値を伴うこの計算式は、最大の信頼を伴う計算式である。
【００５０】
図２及び図３は、そのようなデータセットのひとつへのフィッティングを示す。これは、該モデルのフィッティングを向上するために、いくつかの異なるデータセットに関して反復した（データは示さず）。炎症及び感染症の徴候を示す患者を除外するために、Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルが＞１０ｍｇ／Ｌを上回る患者は、このデータセットには含まなかった。
【００５１】
次に、得られた患者のＧＦＲ及びＦＬＣ濃度で、κＦＬＣ及びλＦＬＣの生成レベルを推定するために、下記計算式を適用した。
【００５２】
【数５】
2015508173.tif 000008
【００５３】
これはまた、総ＦＬＣ生成を推定することを可能にした。
【００５４】
移植データの解析
先に説明された計算式を使用し、腎移植患者における重大な感染症のリスクに対する総ＦＬＣを研究した。
データを、新たな計算式を用いて解析し、ＦＬＣ生成を推定し、シスタチンＣを使用する先行技術のｅＧＦＲ推定により補正した総ＦＬＣ生成と比較した。
【００５５】
図４は、総推定ＦＬＣ生成の０．６３３５ｍｇ／分（上側線）を上回り、かつ０．６３３５ｍｇ／分（下側線）を下回る総推定ＦＬＣ生成に関する生存に対する感染を示す。これは、ＦＬＣは、次の３０日間に重大な感染症を有する患者の尤度を指摘するために使用することができることを示し、このことはこれらの患者の更なる予防的治療の可能性を開いている。
【００５６】
図５は、同じデータを示しているが、総ＦＬＣ生成を計算するために、先行技術のシスタチンＣ  ｅＧＦＲ計算を用いて算出した。２つの集団内の差異を認めるのは著しくより困難であり、かつカプラン・マイアー解析を用い、統計学的有意性を示さなかった。これは、ＦＬＣ生成を算出するための新規計算式は、提示されたデータからのトレンドの検出を向上し、その結果ＦＬＣ値に関する患者の精度の向上を生じることを明らかにしている。
【００５７】
ＦＬＣ生成を推定するためのデータの補正の有用性は、高レベルＦＬＣを伴う患者におけるＦＬＣの生成の計算を含むように拡大されてよい。例えばＣＫＤ患者は、高レベルのＣＫＤを有することが多い。より高いレベルのＦＬＣは、死亡率に関連している。このことは、図６に示されている。補正され推定された生成曲線は、観察された死亡例を、腎機能障害を随伴した症例及び上昇したＦＬＣ生成に関連した症例から区別している。このことは、向上されたデータの解析及びリスク因子の評価を可能にしている。
【００５８】
多変量解析は、ＦＬＣ生成は、ＦＬＳ腎クリアランスから総ＦＬＣレベルまでを区別することができることを示している。ＣＲＰ及びシスタチンＣは、ＦＬＣレベルとは無関係である。
【００５９】
ｉ）  エンターアウトプットによるコックス（Ｃｏｘ）回帰を使用する、腎移植集団における（低ＦＬＣ生成後）３０日目の重大な感染症に関連した因子の単変量解析。
【００６０】
【表２】
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【００６１】
ｉｉ）  変数減少選択法によるコックス回帰を使用する、感染症に関連した因子の多変量解析。多変量解析は、性別、ＷＢＣ数、ＩｇＧレベル及び総ＦＬＣ推定生成は、３０日目の感染症に有意に関連していることを指摘した。他の因子は、有意性が認められなかった。
【００６２】
【表３】
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【００６３】
総ＦＬＣ生成及び推定された生成に関する生存曲線を、図７ａ及び図７ｂに示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７ａ−７ｂ】
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【国際調査報告】
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