(57)【要約】  本発明は、ＰＩ３Ｋ（ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼ）阻害剤として作用するオキサゾリジン−２−オン置換ピリミジン化合物、ならびにその医薬組成物、これらの製造のための方法、およびＰＩ３Ｋ依存性の状態、疾患および障害の治療のための使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１７９】
2015508096.tif 000204
（式中、
Ｒ１＝
【化１８０】
2015508096.tif 000205
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【化１８１】
2015508096.tif 000206
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝ＨおよびＲ３＝Ｈ；
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；または
Ｒ４＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ；
あるいは
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５が一緒になって、−（ＣＨ２）４−を形成するか；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ；
あるいは
Ｒ２＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；ならびに
Ｒ３およびＲ５が一緒になって、基
【化１８２】
2015508096.tif 000207
もしくは基
【化１８３】
2015508096.tif 000208
を形成するか、
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２およびＲ４が一緒になって、基
【化１８４】
2015508096.tif 000209
を形成する）
の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５＝−（ＣＨ２）４−；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ
である、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ
である、請求項１または請求項２に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３
である、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項５】
式（ＩＡ’）
【化１８５】
2015508096.tif 000210
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
である、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項６】
式（ＩＡ）
【化１８６】
2015508096.tif 000211
（式中、
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３）
である、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３
である、請求項６に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項８】
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨおよびＲ５＝Ｈまたは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ
である、請求項７に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項９】
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５，５−ジメチル−オキサゾリジン−２−オン、
ラセミ３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−４，５’−ビピリミジン−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−４，５’−ビピリミジン−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン（絶対立体配置は未確定）、
（Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−４，５’−ビピリミジン−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン（絶対立体配置は未確定）、
（３ａＳ，７ａＳ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−ヘキサヒドロ−ベンゾオキサゾール−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−メトキシメチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−（Ｄ８−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−（２−ヒドロキシ−エチル）−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
ギ酸（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−メチル−２−オキソ−オキサゾリジン−４−イルメチルエステル、
（Ｓ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−Ｄ８−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−オキサゾリジン−２−オン、
（３ａＲ，６ａＲ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］オキサゾール−２（３Ｈ）−オン、
ラセミ（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−ヒドロキシヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン、
（３ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−ヒドロキシヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン、
（３ａＳ，６Ｓ，６ａＳ）−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−ヒドロキシヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン、および
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
から選択される、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１０】
（４Ｓ，５Ｒ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、または
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
から選択される化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩の治療有効量と、１種または複数の薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩の治療有効量と、１種または複数の追加の治療活性剤とを含む、組合せ。
【請求項１３】
がんを治療する方法であって、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩の治療有効量を対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項１４】
医薬品として使用するための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１５】
がんの治療に使用するための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１６】
がんの治療のための医薬品の製造における、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＩ３Ｋ（ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼ）阻害剤として作用するオキサゾリジン−２−オン置換ピリミジン化合物、ならびにその医薬組成物、これらの製造のための方法、およびＰＩ３Ｋ依存性の状態、疾患および障害の治療のための使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、イノシトール脂質のＤ−３’位へのホスフェートの移動を触媒し、これによって、ホスホイノシトール−３−ホスフェート（ＰＩＰ）、ホスホイノシトール−３，４−ジホスフェート（ＰＩＰ２）およびホスホイノシトール−３，４，５−トリホスフェート（ＰＩＰ３）を産生する脂質キナーゼのファミリーを含み、これらが今度は、プレクストリン相同性、ＦＹＶＥ、Ｐｈｏｘおよび他のリン脂質結合ドメインを含有するタンパク質を、多くの場合原形質膜において、様々なシグナル伝達複合体にドッキングさせることによりシグナル伝達カスケードにおけるセカンドメッセンジャーとして作用する（（Vanhaesebroeckら、Annu. Rev. Biochem 70:535頁(2001)；Katsoら、Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615 (2001)）。２つのクラス１  ＰＩ３Ｋの中で、クラス１Ａ  ＰＩ３Ｋは、ｐ８５α、ｐ５５α、ｐ５０α、ｐ８５βまたはｐ５５γとなり得る調節サブユニットと構成的に関連している触媒ｐ１１０サブユニット（α、β、δアイソフォーム）から構成されるヘテロ二量体である。クラス１Ｂサブクラスは、１つのファミリーメンバー、つまり、２つの調節サブユニット、ｐ１０１またはｐ８４のうちの一方と関連している触媒ｐ１１０γサブユニットから構成されるヘテロ二量体を有する（Frumanら、Annu Rev. Biochem. 67:481頁(1998)；Suireら、Curr. Biol. 15:566頁(2005)）。ｐ８５／５５／５０サブユニットのモジュラードメインは、活性化受容体および細胞質チロシンキナーゼ上の特異的配列状況でホスホチロシン残基と結合し、クラス１Ａ  ＰＩ３Ｋの活性化および局在化をもたらす、Ｓｒｃ相同性（ＳＨ２）ドメインを含む。クラス１Ｂ  ＰＩ３Ｋは、ペプチドおよび非ペプチドリガンドの多様なレパートリーと結合するＧタンパク質共役受容体により直接活性化される（Stephensら、Cell 89:105頁(1997))；Katsoら、Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615〜675頁(2001)）。結果的に、生成した、クラスＩのＰＩ３Ｋのリン脂質産物は、上流受容体を、増殖、生存、走化性、細胞トラフィッキング、運動性、代謝、炎症性応答およびアレルギー応答、転写ならびに翻訳を含めた下流細胞活動に連結させる（Cantleyら、Cell 64:281頁(1991)；EscobedoおよびWilliams、Nature 335:85頁(1988)；Fantlら、Cell 69:413頁(1992)）。
【０００３】
多くの場合、ＰＩＰ２およびＰＩＰ３は、ウイルス性がん遺伝子ｖ−Ａｋｔのヒトホモログの産物であるＡｋｔを原形質膜に集め、ここで、Ａｋｔは、増大および生存に重要な多くの細胞内シグナル伝達経路のための接点として作用する（Fantlら、Cell 69:413〜423頁(1992)；Baderら、Nature Rev. Cancer 5:921頁(2005)；VivancoおよびSawyer、Nature Rev. Cancer 2:489頁(2002)）。ＰＩ３Ｋの異常な調節は、多くの場合Ａｋｔ活性化を介して生存を高め、ヒトがんにおける最も多い事象の１つであり、複数のレベルで起こることが示されている。ホスホイノシチドをイノシトール環の３’位で脱リン酸化し、これを行うことにより、ＰＩ３Ｋ活性に拮抗する腫瘍サプレッサー遺伝子ＰＴＥＮは、様々な腫瘍で機能が消失している。他の腫瘍では、ｐ１１０αアイソフォーム、ＰＩＫ３ＣＡ、およびＡｋｔのための遺伝子は増幅し、これらの遺伝子産物の増加したタンパク質発現が数種のヒトがんにおいて実証されている。さらに、ｐ８５−ｐ１１０複合体を上方調節する役目を果たすｐ８５αの変異および転座がヒトがんにおいて記載されている。最後に、下流シグナル伝達経路を活性化するＰＩＫ３ＣＡにおける体細胞性ミスセンス変異が、広範なヒトがんにおいて、かなりの頻度で記載されている。（Kang at el.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802頁(2005)；Samuelsら、Science 304:554頁(2004)；Samuelsら、Cancer Cell 7:561〜573頁(2005)）。
【０００４】
一部の腫瘍において、ｐ１１０βアイソフォーム、ＰＩＫ３ＣＢが増幅、または過剰発現している。加えて、ＰＴＥＮ損失により推進された腫瘍は、ｐ１１０αよりもむしろｐ１１０βに対して感受性を有し得ることが研究により示されている。（Jiaら、Nature、454:776〜779頁(2008). Weeら、PNAS 105 (35)、13057〜13062頁(2008)；Liuら、Nature Rev. Drug Discovery 8:627〜644頁(2009)）。
【０００５】
ｐ１１０δおよびｐ１１０γの両方は、造血細胞系に主に発現し、白血球シグナル伝達においてかなりの役割を果たしているように見える（Liuら、Blood 110(4)、1191〜1198頁(2007)）。しかし、これらはまた、一部のがんにおいても役割を果たしている（Knobbeら、Brain Pathol. 13、507〜518頁(2003)；KangらPNAS 103(5)、1289〜1294頁(2006)）。ｐ１１０δ発現は、白血球に限定されており、これは、白血球媒介性疾患におけるその潜在的役割を指し示している（VanhaesebroeckらPNAS 94(9)、4330〜4335頁(1997)）。ｐ１１０δは、急性ミエロイド白血病を有する患者の芽細胞において上方調節され、ここで、ｐ１１０βは、細胞生存における主要な役割を果たし（Sujobertら、Blood 106(3)、1063〜1066頁(2005)）、白血病および他の血液系悪性腫瘍におけるターゲットとしてのその潜在能力を示している。ｐ１１０δ活性化は、Ｂ細胞悪性腫瘍の発症において重要な役割を果たし、したがってｐ１１０δの阻害を使用して、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、血漿細胞ミエローマおよびホジキンリンパ腫（ＮＨ）などを治療することができる、Castilloら、Expert Opin. Investig. Drugs 21、15〜22頁(2012)）。
【０００６】
これらの観察は、ホスホイノシトール−３キナーゼおよびこのシグナル伝達経路の上流および下流の成分の調節解除が、ヒトのがんおよび増殖性疾患に関連する最も一般的な調節解除の１つであることを示している（Parsonsら、Nature 436:792頁(2005)；Hennesseyら、Nature Rev. Drug Disc. 4:988〜1004頁(2005)）。
【０００７】
ＷＯ２００７／０８４７８６は、ＰＩ３Ｋを阻害する置換ピリミジン分子について記載している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
クラスＩのＰＩ３Ｋアイソフォーム（アルファ、ベータ、デルタおよびガンマ）のうちの２種以上の活性を阻害する化合物に対する必要性が依然として存在する。これは、このような化合物が、独自の特異性、例えば、ＰＩ３ＫクラスＩのファミリーの１メンバーに対する特異性を有する化合物と比較して、他のアイソフォームを介した経路の再編成により適応メカニム（mechanim）を回避する能力を有すると考えられているからである。
【０００９】
ＰＩ３Ｋアイソフォームのうちの少なくとも１種の阻害能力の増加（すなわち、より低い濃度で少なくとも１種のＰＩ３Ｋアイソフォーム、特にアルファおよびベータアイソフォームのうちの１種または両方を阻害する）もまた有利となり得る。例えば、ＰＴＥＮの無効な腫瘍の場合、推進するアイソフォームがｐ１１０ｂであるにもかかわらず、完全な効力を得るためには、他のクラスＩＡアイソフォームの参加を必要とする可能性がある。例えば、ｐ１１０ａをコード化する遺伝子の発がん性形態により主に推進されるがん（例えばＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７ＲまたはＥ５４５Ｋ）、ならびにＰＩＫ３ＣＡのより多くのコピー数を示す腫瘍の治療のために、ＰＩ３Ｋアルファキナーゼを強力に阻害する化合物に対する必要性もまた存在する。
【００１０】
ｍＴＯＲと比較して、１種または複数のＰＩ３Ｋアイソフォーム（例えば、アルファ、ベータ、デルタおよびガンマアイソフォームのうちの少なくとも２種、好ましくは３種、例えばアルファ、ベータおよびデルタアイソフォーム）を好んで選択的に阻害する化合物もまた望ましい。これは、さらに特に、化合物がＰＩ３Ｋよりもさらに強くｍＴＯＲを阻害する（好ましくない比）場合、ｍＴＯＲ阻害作用は、安全窓を一般的に減少させるからである。
【００１１】
さらに、チューブリン結合などのオフターゲット効果がより少ない、特にオフターゲット効果を保有しないＰＩ３Ｋ阻害剤が望ましい。これは、そのような作用が、目標に的中したＰＩ３Ｋ阻害と関連しない毒性作用を引き起こす可能性があり、したがってこのような化合物は、治療効果が確実にＰＩ３Ｋ阻害に対して制御可能となり、ＰＩ３Ｋ阻害に起因するものとなるよう、追加的な、注意深い投薬制御を必要とすることもあるからである。したがって、オフターゲット効果の少ないもしくは弱い、またはオフターゲット効果を持たない化合物に対する必要性が存在する。
【００１２】
望ましくは、少なくとも１種（例えばＰＩ３Ｋアルファ）、しかし特に２種（例えばＰＩ３ＫアルファおよびＰＩ３Ｋベータ）または３種（例えばＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３ＫベータおよびＰＩ３Ｋデルタ）、またはすべての４種のクラス１のＰＩ３Ｋ（ＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３Ｋベータ、ＰＩ３ＫデルタおよびＰＩ３Ｋガンマ）の改善された阻害、ならびにオフターゲット効果が低下した（特に、存在しない）化合物が探究されている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、ＰＩ３Ｋ阻害剤である化合物およびその医薬組成物を提供する。本発明はまた、これらの化合物を含む組合せも提供する。本発明は、ＰＩ３Ｋ媒介性疾患、例えば、がんなどを治療、予防または回復させる方法における使用のための本発明の化合物をさらに提供し、この方法は、本発明のＰＩ３Ｋ阻害化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。本発明はまた、本発明の化合物の調製に有用な中間体も提供する。
【００１４】
本発明は、一態様において、式（Ｉ）
【００１５】
【化１】
2015508096.tif 000002
（式中、
Ｒ１＝
【００１６】
【化２】
2015508096.tif 000003
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）、
またはＲ１＝
【００１７】
【化３】
2015508096.tif 000004
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝ＨおよびＲ３＝Ｈ；
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；または
Ｒ４＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ；
あるいは
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５が一緒になって、−（ＣＨ２）４−を形成するか；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ；
あるいは
Ｒ２＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；ならびに
Ｒ３およびＲ５が一緒になって、基
【００１８】
【化４】
2015508096.tif 000005
もしくは基
【００１９】
【化５】
2015508096.tif 000006
を形成するか、
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２およびＲ４が一緒になって、基
【００２０】
【化６】
2015508096.tif 000007
を形成する）
の化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００２１】
波線は、モルホリンの、分子の残りの部分への結合点、また存在する場合、他の示されている基の、分子の残りの部分への結合点を示す。
【００２２】
本明細書中の開示全体を通して、符号「＝」は、「等しい」という標準的意味を有し、本発明の定義において、「等しい」または「〜である（is）」または「表す」で置き換えることができる。例として、句「Ｒ３＝Ｈ」は、「Ｒ３はＨである」、または「Ｒ３はＨを表す」と読み替えることができる。
【００２３】
式（Ｉ）の化合物は、例えば、ＰＩ３キナーゼ依存性疾患、特にがんなどの増殖性疾患、例えば腫瘍疾患の治療に使用するのに適切であると考えられている。
【００２４】
本発明は、述べられている定義および結びの実施例を含む、以下の記載を参照してより完全に理解することができる。記載されている実施形態は、他に述べられていない限り、独立して、総合的にまたは任意の組合せで解釈されるものとする。本明細書で使用される場合、「含む（including）」、「含有する（containing）」および「含む（comprising）」などの用語は、これらの開かれた、非限定的な意味で、本明細書中で使用される。
【００２５】
他に特定されていない限り、「本発明の化合物（複数も可）」などの用語は、式（Ｉ）およびその下位の式の化合物（例えば式（ＩＡ）および（ＩＡ’））、ならびにこの化合物の塩、ならびに同位体標識した化合物（重水素置換を含む）を指す。
【００２６】
本発明の化合物は、別途述べられていない限り、式（Ｉ）およびその下位の式で表される立体配置を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】実施例１０の結晶性物質の示差走査熱量測定グラフである。
【図２】実施例１０の結晶性物質の粉末Ｘ線回折グラフである。
【図３】実施例１８、バッチＡの結晶性物質の示差走査熱量測定グラフである。
【図４】実施例１８、バッチＡの結晶性物質の粉末Ｘ線回折グラフである。
【図５】実施例１８、バッチＢの結晶性物質の示差走査熱量測定グラフである。
【図６】実施例１８、バッチＢの結晶性物質の粉末Ｘ線回折グラフである。
【図７】実施例１８、バッチＣの結晶性物質の示差走査熱量測定グラフである。
【図８】実施例１８、バッチＣの結晶性物質の粉末Ｘ線回折グラフである。
【図９】実施例１８、バッチＤの結晶性物質の示差走査熱量測定グラフである。
【図１０】実施例１８、バッチＤの結晶性物質の粉末Ｘ線回折グラフである。
【図１１】実施例１８、バッチＥの結晶性物質の示差走査熱量測定グラフである。
【図１２】実施例１８、バッチＥの結晶性物質の粉末Ｘ線回折グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明の様々な実施形態が本明細書中に記載されている。各実施形態において特定された特徴を他の特定された特徴と組み合わせることによって、本発明のさらなる実施形態を提供することができることを認識されたい。本発明の様々な（列挙された）実施形態もまた本明細書中に記載されている。
【００２９】
本発明は、一態様において、式（Ｉ）
【００３０】
【化７】
2015508096.tif 000008
（式中、
Ｒ１＝
【００３１】
【化８】
2015508096.tif 000009
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）、
またはＲ１＝
【００３２】
【化９】
2015508096.tif 000010
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝ＨおよびＲ３＝Ｈ；
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；または
Ｒ４＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ；
あるいは
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５が一緒になって、−（ＣＨ２）４−を形成するか；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ；
あるいは
Ｒ２＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；ならびに
Ｒ３およびＲ５が一緒になって、基
【００３３】
【化１０】
2015508096.tif 000011
もしくは基
【００３４】
【化１１】
2015508096.tif 000012
を形成するか、
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２およびＲ４が一緒になって、基
【００３５】
【化１２】
2015508096.tif 000013
を形成する）
による化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００３６】
その態様の好ましい実施形態では、
Ｒ１＝
【００３７】
【化１３】
2015508096.tif 000014
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）、
またはＲ１＝
【００３８】
【化１４】
2015508096.tif 000015
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝ＨおよびＲ３＝Ｈ；
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；または
Ｒ４＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ；
あるいは
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５が一緒になって、−（ＣＨ２）４−を形成するか、
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ；
あるいは
Ｒ２＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；ならびに
Ｒ３およびＲ５が一緒になって、基
【００３９】
【化１５】
2015508096.tif 000016
または基
【００４０】
【化１６】
2015508096.tif 000017
を形成するか、
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２およびＲ４が一緒になって、基
【００４１】
【化１７】
2015508096.tif 000018
を形成する
式（Ｉ）による化合物、または薬学的に許容されるその塩が提供される。
【００４２】
その態様のさらに好ましい実施形態では、
Ｒ１＝
【００４３】
【化１８】
2015508096.tif 000019
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）、
またはＲ１＝
【００４４】
【化１９】
2015508096.tif 000020
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝ＨおよびＲ３＝Ｈ；
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；または
Ｒ４＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ；
あるいは
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５が一緒になって、−（ＣＨ２）４−を形成するか；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨである
式（Ｉ）による化合物、または薬学的に許容されるその塩が提供される。
【００４５】
さらなる好ましい実施形態では、式（Ｉ）
【００４６】
【化２０】
2015508096.tif 000021
（式中、
Ｒ１＝
【００４７】
【化２１】
2015508096.tif 000022
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【００４８】
【化２２】
2015508096.tif 000023
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝ＨおよびＲ３＝Ｈ；
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；または
Ｒ４＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ；
あるいは
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５が一緒になって、−（ＣＨ２）４−を形成するか；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ）
の化合物または薬学的に許容されるその塩が提供される。
【００４９】
さらなる代替の好ましい実施形態では、式（Ｉ）
【００５０】
【化２３】
2015508096.tif 000024
（式中、
Ｒ１＝
【００５１】
【化２４】
2015508096.tif 000025
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【００５２】
【化２５】
2015508096.tif 000026
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２およびＲ３＝Ｈ；
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；または
Ｒ４＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ；
あるいは
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５が一緒になって、−（ＣＨ２）４−を形成するか；
あるいは
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈ；および
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ）
による化合物または薬学的に許容されるその塩が提供される。
【００５３】
上述の実施形態のうちのいずれか１つにおける式（Ｉ）に関して、以下の詳細な記載を示す。
【００５４】
Ｒ１ａ
一実施形態では、Ｒ１ａはＨである。
【００５５】
別の実施形態ではＲ１ａは−ＣＨ３である。
【００５６】
好ましい実施形態ではＲ１ａはＨである。
【００５７】
本発明のさらなる実施形態を、以下に記載する。
【００５８】
一実施形態では、
Ｒ１＝
【００５９】
【化２６】
2015508096.tif 000027
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【００６０】
【化２７】
2015508096.tif 000028
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５＝−（ＣＨ２）４−；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；および
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ、
または薬学的に許容されるその塩。
【００６１】
別の実施形態では、
Ｒ１＝
【００６２】
【化２８】
2015508096.tif 000029
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【００６３】
【化２９】
2015508096.tif 000030
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；および
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ、
または薬学的に許容されるその塩。
【００６４】
さらなる実施形態では、
Ｒ１＝
【００６５】
【化３０】
2015508096.tif 000031
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【００６６】
【化３１】
2015508096.tif 000032
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３、
または薬学的に許容されるその塩。
【００６７】
さらなる実施形態では、
Ｒ１＝
【００６８】
【化３２】
2015508096.tif 000033
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３、
または薬学的に許容されるその塩。
【００６９】
別の実施形態では、
Ｒ１＝
【００７０】
【化３３】
2015508096.tif 000034
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３、
または薬学的に許容されるその塩。
【００７１】
別の実施形態では、好ましくは、
Ｒ１＝
【００７２】
【化３４】
2015508096.tif 000035
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
Ｒ２＝−ＣＨ３または−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨおよびＲ５＝Ｈまたは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、
または薬学的に許容されるその塩。
【００７３】
別の実施形態では、好ましくは、
Ｒ１＝
【００７４】
【化３５】
2015508096.tif 000036
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、および
Ｒ５＝Ｈ、
または薬学的に許容されるその塩。
【００７５】
一実施形態では、
Ｒ１＝
【００７６】
【化３６】
2015508096.tif 000037
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【００７７】
【化３７】
2015508096.tif 000038
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ
Ｒ２およびＲ５＝−（ＣＨ２）４−；
あるいは
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈ；および
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ、
または薬学的に許容されるその塩。
【００７８】
別の実施形態では、
Ｒ１＝
【００７９】
【化３８】
2015508096.tif 000039
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【００８０】
【化３９】
2015508096.tif 000040
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈ；および
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ、
または薬学的に許容されるその塩。
【００８１】
さらなる実施形態では、
Ｒ１＝
【００８２】
【化４０】
2015508096.tif 000041
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【００８３】
【化４１】
2015508096.tif 000042
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３、
または薬学的に許容されるその塩。
【００８４】
さらなる実施形態では、
Ｒ１＝
【００８５】
【化４２】
2015508096.tif 000043
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３、
または薬学的に許容されるその塩。
【００８６】
別の実施形態では、
Ｒ１＝
【００８７】
【化４３】
2015508096.tif 000044
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３、
または薬学的に許容されるその塩。
【００８８】
別の実施形態では、好ましくは、
Ｒ１＝
【００８９】
【化４４】
2015508096.tif 000045
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨおよびＲ５＝Ｈまたは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、
または薬学的に許容されるその塩。
【００９０】
別の実施形態では、好ましくは、
Ｒ１＝
【００９１】
【化４５】
2015508096.tif 000046
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、および
Ｒ５＝Ｈ、
または薬学的に許容されるその塩。
【００９２】
別の好ましい実施形態では、
Ｒ１＝
【００９３】
【化４６】
2015508096.tif 000047
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、および
Ｒ５＝Ｈ、
または薬学的に許容されるその塩。
【００９４】
一実施形態では、以下の式（ＩＡ’）
【００９５】
【化４７】
2015508096.tif 000048
（式中、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、上述の実施形態のうちのいずれかに記載されている通りである）
の化合物が提供される。
【００９６】
一実施形態では、Ｒ１ａは水素であってよく、したがって、以下の式（ＩＡ）
【００９７】
【化４８】
2015508096.tif 000049
（式中、
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３）
の化合物または薬学的に許容されるその塩が提供される。
【００９８】
式（ＩＡ）の化合物の一実施形態では、
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３、
または薬学的に許容されるその塩。
【００９９】
式（ＩＡ）の化合物の別の実施形態では、
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨおよびＲ５＝Ｈまたは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、
または薬学的に許容されるその塩。
【０１００】
式（ＩＡ）の化合物の別の実施形態では、
Ｒ２＝−ＣＨ３または−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨおよび
Ｒ５＝Ｈ、
または薬学的に許容されるその塩。
【０１０１】
式（ＩＡ）の化合物の別の実施形態では、
Ｒ２＝−ＣＨ３；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、および
Ｒ５＝Ｈ、
または薬学的に許容されるその塩。
【０１０２】
代わりに、Ｒ１ａが水素であってもよい実施形態では、以下の式（ＩＡ）
【０１０３】
【化４９】
2015508096.tif 000050
（式中、
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３）
の化合物または薬学的に許容されるその塩が提供される。
【０１０４】
式（ＩＡ）の化合物の一実施形態では、
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｒ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３、
または薬学的に許容されるその塩。
【０１０５】
式（ＩＡ）の化合物の別の実施形態では、
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨおよびＲ５＝Ｈまたは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、
または薬学的に許容されるその塩。
【０１０６】
式（ＩＡ）の化合物の別の実施形態では、
Ｒ２＝−ＣＨ３または−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、および
Ｒ５＝Ｈ、
または薬学的に許容されるその塩。
【０１０７】
式（ＩＡ）の化合物の好ましい実施形態では、
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、および
Ｒ５＝Ｈ、
または薬学的に許容されるその塩。
【０１０８】
さらなる実施形態（列挙される）は以下の通りである：
実施形態１
式（Ｉ）
【０１０９】
【化５０】
2015508096.tif 000051
（式中、
Ｒ１＝
【０１１０】
【化５１】
2015508096.tif 000052
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
またはＲ１＝
【０１１１】
【化５２】
2015508096.tif 000053
（式中、Ｄ＝重水素）；
Ｒ２＝ＨおよびＲ３＝Ｈ；
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；または
Ｒ４＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ；
あるいは
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３もしくは−ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５が一緒になって、−（ＣＨ２）４−を形成するか；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ；
あるいは
Ｒ２＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；ならびに
Ｒ３およびＲ５が一緒になって、基
【０１１２】
【化５３】
2015508096.tif 000054
もしくは基
【０１１３】
【化５４】
2015508096.tif 000055
を形成するか、
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２およびＲ４が一緒になって、基
【０１１４】
【化５５】
2015508096.tif 000056
を形成する）
の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１１５】
実施形態２
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ３＝ＨおよびＲ４＝Ｈ；
Ｒ２およびＲ５＝−（ＣＨ２）４−；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ
である、実施形態１による化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１１６】
実施形態３
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３；
あるいは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝Ｈ；ならびに
Ｒ２＝−ＣＨ２ＯＨ、およびＲ３＝−ＣＨ３；または
Ｒ２＝Ｈもしくは−ＣＨ３、およびＲ３＝−ＣＨ２ＯＨ
である、実施形態１もしくは実施形態２による化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１１７】
実施形態４
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３
である、実施形態１から３のいずれか１つの実施形態による化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１１８】
実施形態５
式（ＩＡ’）
【０１１９】
【化５６】
2015508096.tif 000057
（式中、Ｒ１ａ＝Ｈまたは−ＣＨ３）
である、実施形態１から４のいずれか１つによる化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１２０】
実施形態６
式（ＩＡ）
【０１２１】
【化５７】
2015508096.tif 000058
（式中、
Ｒ２＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｈ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３）
である、実施形態１による化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１２２】
実施形態７
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、およびＲ５＝Ｈ、または
Ｒ４＝Ｈ、およびＲ５＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ、または
Ｒ４＝Ｈもしくは−ＣＨ３およびＲ５＝Ｈもしくは−ＣＨ３
である、実施形態６による化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１２３】
実施形態８
Ｒ２＝−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨもしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨおよびＲ５＝Ｈまたは
Ｒ４＝ＨおよびＲ５＝ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＯＨ
である、実施形態７による化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１２４】
実施形態９
Ｒ２＝−ＣＨ３または−ＣＨ２ＯＨ；
Ｒ３＝Ｈ；
Ｒ４＝−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨおよび
Ｒ５＝Ｈ
である、実施形態８による化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１２５】
実施形態１０
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５，５−ジメチル−オキサゾリジン−２−オン、
ラセミ３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−４，５’−ビピリミジン−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−４，５’−ビピリミジン−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン（絶対立体配置は未確定）、
（Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−４，５’−ビピリミジン−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン（絶対立体配置は未確定）、
（３ａＳ，７ａＳ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−ヘキサヒドロ−ベンゾオキサゾール−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−メトキシメチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−（Ｄ８−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−（２−ヒドロキシ−エチル）−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
ギ酸（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−メチル−２−オキソ−オキサゾリジン−４−イルメチルエステル、
（Ｓ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−Ｄ８−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−オキサゾリジン−２−オン、
（３ａＲ，６ａＲ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］オキサゾール−２（３Ｈ）−オン、
ラセミ（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−ヒドロキシヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン、
（３ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−ヒドロキシヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン、
（３ａＳ，６Ｓ，６ａＳ）−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−ヒドロキシヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン、および
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
から選択される、実施形態１による化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１２６】
実施形態１１
（４Ｓ，５Ｒ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、および
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
から選択される、実施形態１による化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【０１２７】
実施形態１２
（４Ｓ，５Ｒ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン、および
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
から選択される化合物。
【０１２８】
実施形態１３
化合物（４Ｓ，５Ｒ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン。
【０１２９】
実施形態１４
化合物（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン。
【０１３０】
実施形態１５
化合物（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン。
【０１３１】
実施形態１６
実施形態１３、実施形態１４または実施形態１５の化合物の薬学的に許容される塩。
【０１３２】
本発明のさらに別の態様では、図２に示されている粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じエックス線回折スペクトルを有する、実施例１０で得た化合物の結晶形態が提供される。
【０１３３】
本発明のさらに別の態様では、図４に示されている粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じエックス線回折スペクトルを有する、実施例１８、バッチＡで得た化合物の結晶形態が提供される。
【０１３４】
本発明のさらに別の態様では、図６に示されている粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じエックス線回折スペクトルを有する、実施例１８、バッチＢで得た化合物の結晶形態が提供される。
【０１３５】
本発明のさらに別の態様では、図８に示されている粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じエックス線回折スペクトルを有する、実施例１８、バッチＣで得た化合物の結晶形態が提供される。
【０１３６】
本発明のさらに別の態様では、図１０に示されている粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じエックス線回折スペクトルを有する、実施例１８、バッチＤで得た化合物の結晶形態が提供される。
【０１３７】
本発明のさらに別の態様では、図１２に示されている粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じエックス線回折スペクトルを有する、実施例１８、バッチＥで得た化合物の結晶形態が提供される。
【０１３８】
エックス線回折ピーク位置に関して「基本的に同じ」という用語は、典型的なピーク位置および強度のばらつきが考慮に入れられていることを意味する。例えば、当業者であれば、ピーク位置（２θ）は、通常０．２°分だけのいくらかの装置間のばらつきを示すことを理解されよう。さらに、当業者であれば、相対的ピーク強度は、装置間のばらつき、ならびに結晶化度の程度、好ましい配向性、調製した試料表面、および当業者に公知の他の要素によるばらつきを示し、定性的尺度のみで解釈されるべきであることを理解されよう。
【０１３９】
特定の実施形態は、本明細書中に記載されている特定の例示された化合物により提供される。
【０１４０】
本発明は、ＰＩ３Ｋが本明細書中に記載されている疾病病因をもたらしている疾患、状態および／または障害の治療において有用な化合物およびその医薬製剤を提供する。
【０１４１】
本発明の化合物は、特に本明細書中に含有されている記載を考慮して、化学薬品技術において周知のプロセスに類似のプロセスを含む合成経路により合成することができる。出発物質は一般的に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）などの販売元から入手可能であるか、または当業者に周知の方法を使用して容易に調製される（例えば、Louis F. FieserおよびMary Fieser、Reagents for Organic Synthesis、1〜19巻、Wiley、New York (1967〜1999編)、または補足を含めた、Beilsteins Handbuch der organischen Chemie、4、Aufl.編  Springer-Verlag、Berlin（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースを介しても入手可能）に一般的に記載されている方法により調製）。
【０１４２】
例示目的のため、以下に描写されている反応スキームは、本発明の化合物を合成するための有望な経路ならびに主要中間体を提供する。個々の反応ステップのさらに詳細な記載については、以下の実施例のセクションを参照されたい。当業者であれば、他の合成経路を使用して、本発明の化合物を合成することができることを理解されよう。特定の出発物質および試薬が以下のスキームに描写され、考察されているが、他の出発物質および試薬で容易に置換することによって、様々な誘導体および／または反応条件を提供することができる。加えて、以下に記載されている方法により調製された化合物の多くは、当業者に周知の従来の化学反応を使用して、本開示を考慮してさらに改質することができる。
【０１４３】
本発明の化合物の調製において、中間体の遠くの官能基（例えば、第一級または第二級アミノ、ヒドロキシルまたはカルボキシル基）の保護が必要なこともある。このような保護に対する必要性は遠くの官能基の性質および調製方法の条件に応じて異なることになる。適切なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）として、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。適切なヒドロキシル保護基として、トリアルキルシリルエーテルが挙げられ、このアルキル基のうちの１または２つをフェニルに置き換えることができる。適切なカルボキシル保護基（Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｐｇ）として、アルキルエステル（例えば、メチル、エチルまたはｔ−ブチル）、ベンジルエステル、シリルエステルなどが挙げられる。このような保護に対する必要性は、当業者により容易に決定することができる。保護基の一般的な記載およびこれらの使用については、T. W. Greene、Protective Groups in Organic Synthesis、John Wiley & Sons、New York、1991を参照されたい。
【０１４４】
スキーム１（以下）は、式（ＩＡ’）の化合物（式中、Ｒ１〜Ｒ５は上記に定義された通りである）を生成するために有望な経路について記載している。保護基が存在する場合、脱保護ステップを加えることによって、保護されたＩＡ’をＩＡ’へと変換する。
【０１４５】
【化５８】
2015508096.tif 000059
【０１４６】
代わりに、式（ＩＡ’）の化合物はまた、スキームＩに示されているステップを逆転する、すなわちＳｕｚｕｋｉカップリングを最初に、続いてＩｂとのＢｕｃｈｗａｌｄ反応により合成することもできる。
【０１４７】
市販されていないオキサゾリジン−２−オンＩｂに対して、以下のスキーム２は、前記中間体（式中、Ｒ２〜Ｒ５は上記に定義された通りである）を調製するためのプロセスを提供する。第一級ヒドロキシル基がＲ２〜Ｒ５のいずれかに存在する場合、スキーム３に例示されているように選択的保護ステップが先行する。スキーム４に示されているように、アミン基はさらに先行するステップにおいて保護することができ、スキーム４では異なるヒドロキシル保護基も示されている。
【０１４８】
【化５９】
2015508096.tif 000060
【０１４９】
【化６０】
2015508096.tif 000061
【０１５０】
【化６１】
2015508096.tif 000062
【０１５１】
スキーム３の、およびスキーム２に一般的に示されているようにトリホスゲンで環化され、スキーム５で具体的に示されている、保護された生成物は、Ｉｂ中間体の例を提供するものである。
【０１５２】
【化６２】
2015508096.tif 000063
【０１５３】
スキーム４の、およびスキーム６に示されているように水素化ナトリウムで環化された、二重保護された生成物は、Ｉｂ中間体の例を提供するものである。
【０１５４】
【化６３】
2015508096.tif 000064
【０１５５】
スキーム７は、スキーム４の二重保護された中間体の代替の経路を描写しており、この中間体は、スキーム６にすでに示されているように次いで環化することができる。
【０１５６】
【化６４】
2015508096.tif 000065
【０１５７】
以下のスキーム８は、ボロン酸エステル中間体Ｂの合成を示す。
【０１５８】
【化６５】
2015508096.tif 000066
【０１５９】
スキーム１に示されているように、スキーム６の環化した生成物と、４，６−ジクロロ−ピリミジン中間体（例えば、中間体Ａまたはステップ１０．１の生成物であり、両方とも本明細書中以下で言及されている）との反応により、さらなる中間体を提供でき、特定のものを示すと以下の通りである：
【０１６０】
【化６６】
2015508096.tif 000067
【０１６１】
スキーム１に示されているような形成された中間体と、中間体Ｂとのさらなる反応により、以下のような保護された生成物ＩＡ’をもたらされる：
【０１６２】
【化６７】
2015508096.tif 000068
【０１６３】
したがって、本発明の中間体化合物は、以下の式
【０１６４】
【化６８】
2015508096.tif 000069
の化合物を含む。
【０１６５】
前記式において、Ｒ１ａおよびＲ４は、本明細書中で以前に定義された通りであり、Ｈａｌは、ハロゲン、例えばクロロなどであり、ＰＧは保護基、例えばシリル保護基であり、このシリル保護基が、例えばトリアルキルシリルエーテル（ここで、アルキル基のうちの１または２つをフェニルで置き換えることができる）、例えばアルキル−ジフェニル−シリルエーテル保護基、具体的にはジメチル−ｔｅｒｔブチル−シリル、またはジフェニル−ｔｅｒｔブチルシリルを形成する。
【０１６６】
本発明の別の中間体化合物は、以下の式
【０１６７】
【化６９】
2015508096.tif 000070
の化合物を含む。
【０１６８】
本明細書中で上記に描写されているような、同様に保護された他の中間体化合物は、第一級ヒドロキシル基がＲ２〜Ｒ５のいずれかに存在する場合、本明細書中で式を参照して想定することができる。このような保護された化合物もまた本開示に含まれる。例えば、Ｒ４が基−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨである場合、これを保護することによって、Ｒ４が−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＰＧ（式中、ＰＧは上記に定義された通りである）である化合物、例えば、
【０１６９】
【化７０】
2015508096.tif 000071
を提供することができる。
【０１７０】
例えば、最終生成物を得るための、保護された生成物ＩＡ’の第三級ブチルジフェニルシリルまたは第三級ブチルジメチルシリルで保護されたヒドロキシル基の脱保護（シリルエーテルの一般的脱保護）は、ＨＦ．ピリジン（例えば、ＴＨＦ中）またはＨＣｌを使用して達成することができる。
【０１７１】
本発明の化合物、または本明細書中で使用されている中間体は、単離され、それ自体化合物として（例えば遊離塩基形態）使用することができるか、または例えば化合物のｐＫＡ値が塩形成を可能にするようなものである場合にはその塩として使用することができる。本明細書で使用される場合、「塩」または「塩類」という用語は、本発明の化合物の酸付加塩または塩基付加塩を指す。「塩」は、特に「薬学の（pharmaceutical）許容される塩」を含む。「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持し、通常、生物学的にまたは他の点で不所望でない塩を指す。本発明の化合物は、アミノ基の存在により、酸付加塩を形成することが可能となり得る。本発明の化合物、それ自体が好ましい。
【０１７２】
薬学的に許容される酸付加塩の形成のための無機酸および有機酸として、例えば、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物／臭化水素酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、カンファースルホルネート（camphorsulfornate）、塩化物／塩酸塩、クロロテオフィリン酸塩、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩およびトリフルオロ酢酸塩が挙げられる。
【０１７３】
塩誘導のための無機酸として、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。
【０１７４】
塩誘導のための有機酸として、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸などが挙げられる。薬学的に許容される塩基付加塩は、無機塩基および有機塩基と共に形成することができる。
【０１７５】
塩誘導のための無機塩基として、例えば、アンモニウム塩および周期表Ｉ〜ＸＩＩ段の金属が挙げられる。特定の実施形態では、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛、および銅から誘導することができ；特に適切な塩として、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウムの塩が挙げられる。
【０１７６】
塩誘導のための有機塩基として、例えば、第一級、第二級、および第三級アミン、置換アミン、例えば自然発生の置換アミン、環式アミン、塩基性イオン交換樹脂などを含めたものなどが挙げられる。特定の有機アミンとして、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リシン、メグルミン、ピペラジンおよびトロメタミンが挙げられる。
【０１７７】
本発明の薬学的に許容される塩を形成することができる場合、これらは、親化合物、塩基性または酸性の部分から、従来の化学的手法により合成することができる。一般的に、このような塩は、遊離酸形態のこれらの化合物を、化学量論的量の適当な塩基（例えば、Ｎａ、Ｃａ、Ｍｇ、またはＫの水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩など）と反応させること、または遊離塩基形態のこれらの化合物を、化学量論的量の適当な酸と反応させることによって調製することができる。このような反応は通常、水中または有機溶媒中、またはこれら２つの混合物中で行われる。一般的に、実行可能な場合には、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体の使用が望ましい。追加の適切な塩のリストは、例えば、「Remington’s Pharmaceutical Sciences」、第20版、Mack Publishing Company、Easton、Pa.、(1985)；ならびに「Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties、Selection、and Use」、StahlおよびWermuth (Wiley-VCH、Weinheim、Germany、2002)に見出すことができる。
【０１７８】
別途示されていない限り、本明細書中で与えられているあらゆる式は、標識されていない形態を表すことが意図されている。重水素で同位体標識した形態の化合物は、Ｈの代わりに置換基として重水素（Ｄ）で示されている。他の同位体標識した本発明の化合物を調製することができ、これは、１個または複数の原子が選択された原子量または質量数を有する原子により置き換えられていること以外は、本明細書中で与えられた式により描写されている構造を有することができる。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例として、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、および塩素の同位体、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２５Ｉなどが挙げられる。本発明は、本明細書中で定義されたような様々な同位体標識した化合物、例えば、３Ｈ、１３Ｃ、および１４Ｃなどの放射性同位元素がその中に存在するようなものなどを含むことができる。このような同位体標識された化合物は、代謝性実験（１４Ｃを用いる）、反応動態実験（例えば２Ｈまたは３Ｈを用いる）、検出または画像化技術、例えば、薬物もしくは基質の組織分布アッセイを含めたポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）または単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）などにおいて、または患者の放射線治療において有用である。特に、１８Ｆまたは標識化合物は、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ実験に対して特に望ましいものとなり得る。同位体標識した本発明の化合物は一般的に、スキームにおいて開示されている手順を実行することにより、または以下に記載されている実施例および調製において、非同位体標識した試薬、例えば重水素標識したモルホリン（Ｄ８−モルホリン）を、すぐに利用できる同位体標識した試薬で置換することによって、調製することができる。
【０１７９】
さらに、より重い同位体、特に重水素（すなわち、２ＨまたはＤ）との置換により、より高い代謝安定性の結果として得られる特定の療法上の利点、例えばインビボでの半減期の増加、必要とされる用量の減少、ＣＹＰ阻害の減少（競合的または時間依存性の）または療法指数の改善が生じ得る。例えば、重水素との置換により、重水素で置換されていない化合物の有害副作用、例えば、競合的ＣＹＰ阻害、時間依存性ＣＹＰ不活性化などをモジュレートすることができる。この文脈において重水素は、本発明の化合物における置換基とみなされることを理解されたい。このようなより重い同位体、具体的には重水素の濃度は、同位体の濃縮係数により定義され得る。「同位体の濃縮係数」という用語は、本明細書で使用される場合、同位体の存在度と、特定された同位体の天然存在度との間の比を意味する。本発明の化合物の中の置換基が重水素と表示された場合、このような化合物は、それぞれ指定された重水素原子に対して、少なくとも３５００（各指定された重水素原子において５２．５％の重水素結合）、少なくとも４０００（６０％の重水素結合）、少なくとも４５００（６７．５％の重水素結合）、少なくとも５０００（７５％の重水素結合）、少なくとも５５００（８２．５％の重水素結合）、少なくとも６０００（９０％の重水素結合）、少なくとも６３３３．３（９５％の重水素結合）、少なくとも６４６６．７（９７％の重水素結合）、少なくとも６６００（９９％の重水素結合）、または少なくとも６６３３．３（９９．５％の重水素結合）の同位体の濃縮係数を有する。
【０１８０】
さらに、本発明の化合物は、それらの塩を含めて、それらの水和物の形態でも得ることができ、またはそれらの結晶化のために使用される他の溶媒を含むことができる。本発明の化合物は、本質的にまたは設計により、薬学的に許容される溶媒（水を含む）と共に溶媒和物を形成することができる。このような溶媒分子は、薬学的技術において一般的に使用されているものであり、レシピエントに無害であることが知られている、例えば、水、エタノールなどである。「水和物」という用語は、溶媒分子が水である複合体を指す。「溶媒和物」という用語は、１個または複数の溶媒分子が結晶格子構造に組み込まれている、本発明の化合物（薬学的に許容されるその塩を含む）の分子複合体を指す。溶媒和物中の溶媒分子は、規則的な配置および／または非規則的な配置で存在することができる。溶媒和物は、化学量論的量または非化学量論的量の溶媒分子を含むことができる。例えば、非化学量論的量の溶媒分子を有する溶媒和物は、溶媒和物からの溶媒の部分的な損失から生じ得る。溶媒和物は、結晶格子構造内に２個以上の本発明による分子または化合物を含む、ダイマーまたはオリゴマーとして生じ得る。
【０１８１】
本発明の化合物は、その塩、水和物および溶媒和物を含めて、本質的にまたは設計により、多形体を形成することができる。
【０１８２】
本明細書で使用される場合「多形体」とは、化学組成は同じだが、結晶を形成する分子、原子、および／またはイオンの空間的な配置が異なる結晶形態を指す。
【０１８３】
本明細書で使用される場合、「非晶質」とは、結晶ではない固形の分子、原子、および／またはイオンを指す。アモルファス固体は、明確なエックス線回折パターンを示さない。
【０１８４】
本発明による薬学的に許容される溶媒和物は、結晶化の溶媒が同位体置換されていてもよいもの、例えばＤ２Ｏ、ｄ６−アセトン、ｄ６−ＤＭＳＯなどを含む。
【０１８５】
本発明の化合物は、キラル中心を含有し、よって異性体の形態で存在することを当業者であれば認識されよう。本明細書で使用される場合、「異性体」という用語は、分子式は同じだが、原子の配置および構成が異なる、異なる化合物を指す。また本明細書で使用される場合、「光学異性体」または「立体異性体」という用語は、所与の本発明の化合物に対して存在し得る様々な立体異性体の構成のいずれかを指す。置換基は、炭素原子のキラル中心において付加していることができることを理解されたい。したがって、本発明の化合物は、本発明の化合物の構造的描写において、キラル中心に立体特異性配置を指し示すことで示されるエナンチオマーを含み、破線状のくさびの結合は、付加した置換基または原子が平面の下にあることを示し、実線状のくさびの結合は、付加した置換基または原子が平面の上にあることを示している。
【０１８６】
「エナンチオマー」は、互いに重ね合せできないミラーイメージである一対の立体異性体である。一対のエナンチオマーの１：１混合物は「ラセミ」混合物である。この用語は、適当な場合、ラセミ混合物を意味するように使用される。
【０１８７】
「ジアステレオ異性体」は、少なくとも２個の非対称的原子を有するが、これらは互いにミラーイメージではない立体異性体である。
【０１８８】
絶対立体配置は、Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ  Ｒ−Ｓシステムに従い特定される。化合物が純粋なエナンチオマーである場合、各キラル炭素での立体配置は、ＲまたはＳのいずれかで特定することができる。絶対配置が不明な分解化合物は、これらが、ナトリウムＤ線の波長で平面偏光を回転させる方向に応じて、（＋）または（−）（右旋性または左旋性）を指定することができる。本明細書中に記載されている特定の化合物は、１つまたは複数の不斉中心または軸を含有し、したがって、絶対立体配置に関して、（Ｒ）−または（Ｓ）−と定義することができる、エナンチオマー、ジアステレオマー、および他の立体異性形態を生じ得る。
【０１８９】
本発明の化合物の任意の非対称的原子（例えば、キラル炭素など）は、エナンチオマーを豊富に含む、例えば（Ｒ）−または（Ｓ）−構成であることができる。特定の実施形態では、各非対称的原子は、特定の非対称的原子（例えばキラル炭素）に対して記載されている（Ｒ）−または（Ｓ）−構成において、少なくとも５０％の不斉収率、少なくとも６０％の不斉収率、少なくとも７０％の不斉収率、少なくとも８０％の不斉収率、少なくとも９０％の不斉収率、少なくとも９５％の不斉収率、または少なくとも９９％の不斉収率を有する。
【０１９０】
したがって、本発明の化合物は、実質的に純粋なエナンチオマーの形態であることができる。
【０１９１】
結果として得た任意の異性体混合物は、構成成分の物理化学的な差に基づいて、例えば、クロマトグラフィーおよび／または分別再結晶により、純粋なまたは実質的に純粋な光学異性体へと分離することができる。
【０１９２】
光学活性な（Ｒ）異性体および（Ｓ）異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製することができ、または従来の技法を使用して分離することができる。最終生成物または中間体の結果として得た任意のラセミ体は、公知の方法で光学対掌体へと分離することができる。例えば、公知の方法には、光学活性な酸または塩基を用いて得たそのジアステレオマー塩の分離、および光学活性な酸性化合物または塩基性化合物の遊離が含まれる。特に塩基性部分をこうして採用することによって、例えば、光学活性な酸、例えば、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸またはカンファー−１０−スルホン酸と共に形成される塩の分別再結晶により、本発明の化合物をこれらの光学対掌体へと分離することができる。ラセミ生成物はまた、キラル吸着剤を使用して、キラルクロマトグラフィー、例えば、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分離することができる。
【０１９３】
化合物が二重結合を含有する場合、置換基はＥまたはＺ構成であってよい。化合物が二置換のシクロアルキルを含有する場合、シクロアルキル置換基はｃｉｓ構成またはｔｒａｎｓ構成を有してもよい。すべての互変異性体形態もまた含まれることが意図されている。
【０１９４】
水素結合に対してドナーおよび／またはアクセプターとして作用することが可能な基を含有する本発明の化合物は、適切な共結晶形成剤と共に共結晶を形成することが可能となり得る。これらの共結晶は、公知の共結晶形成手順により本発明の化合物から調製することができる。このような手順は、粉砕すること、加熱すること、共昇華すること、共溶融すること、または溶液中で本発明の化合物を共結晶形成剤と、結晶化条件下で接触させること、およびこれによって形成された共結晶を単離することを含む。適切な共結晶形成剤として、ＷＯ２００４／０７８１６３において記載されているものが挙げられる。したがって本発明は、本発明の化合物を含む共結晶をさらに提供する。
【０１９５】
式（Ｉ）の化合物はＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）を阻害し、したがって、タンパク質または脂質キナーゼ依存性疾患、特にクラスＩのＰＩ３キナーゼ、ＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３Ｋベータ、ＰＩ３ＫデルタおよびＰＩ３Ｋガンマまたはその個々のキナーゼメンバーの１種もしくは複数または述べられたキナーゼのうちの任意の２種以上の任意の組合せに依存する疾患の治療において有用となり得る。
【０１９６】
２種以上のクラスＩのＰＩ３Ｋアイソフォーム（アルファ、ベータ、デルタおよびガンマ）、特にクラスＩＡメンバーと実質的に等しい効力を有するｐ１１０ａ、ｐ１１０ｂおよびｐ１１０ｄ、ならびに、任意選択で、クラスＩＢメンバーｐ１１０ｇの活性を阻害する化合物は、利点があると考えられる。なぜなら、このような化合物は、独自の特異性、例えば、ＰＩ３ＫクラスＩのファミリーの１つのメンバーに対する特異性を有する化合物と比較して、他のアイソフォームを介した経路再編成により、適応メカニム（mechanim）を回避する能力を有すると考えられるからである。「等しい効力を有する」とは、化合物が、数種のアイソフォームを、例えば本明細書中に記載されている酵素アッセイまたは細胞アッセイで測定した場合、同等の範囲まで阻害することを意味する。
【０１９７】
ＰＩ３Ｋアイソフォームのうちの少なくとも１種の阻害能力の増加（すなわち少なくとも１種のＰＩ３Ｋアイソフォームをより低い濃度で阻害する）もまた有利となり得る。例えばＰＴＥＮの無効な腫瘍の場合、推進するアイソフォームはｐ１１０ｂであるが、完全な効力を得るためには、他のクラスＩのＡアイソフォームの参加を必要とする可能性がある。例えば、アルファおよびベータアイソフォームに対する能力は有利となり得る。
【０１９８】
例えば、ｐ１１０ａ（例えばＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７ＲまたはＥ５４５Ｋ）をコード化している発がん性形態の遺伝子により主に推進されるがん、ならびにＰＩＫ３ＣＡのより多くのコピー数を示す腫瘍の治療のため、ＰＩ３Ｋアルファキナーゼを強力に阻害する化合物に対する必要性もまた存在する。
【０１９９】
本発明の化合物が、ｍＴＯＲに対する活性を示すことなく、述べられているＰＩ３キナーゼ活性を示す、またはｍＴＯＲよりも、１種または複数のクラスＩのＰＩ３キナーゼを阻害することに対して有利な選択性を少なくとも示すことが望ましい。例えば、ｍＴＯＲ阻害作用は、さらに特に化合物がＰＩ３Ｋよりもさらに強くｍＴＯＲを阻害する場合（好ましくない比）、安全窓を一般的に減少させるので、ｍＴＯＲと比較して、１種または複数のＰＩ３Ｋアイソフォーム（例えば少なくとも２種、好ましくは３種、例えば、アルファ、ベータおよびデルタアイソフォーム）を好んで選択的に阻害する化合物が望ましい。
【０２００】
さらに、オフターゲット効果がより低い、またはオフターゲット効果を保有しない、例えば、チューブリン結合を保有しないようなＰＩ３Ｋ阻害剤が望まれる。これは、このような作用が、オンターゲットＰＩ３Ｋ阻害に関連しない毒性作用を引き起こす可能性があり、したがってこのような化合物は、治療効果がＰＩ３Ｋ阻害に対して確実に制御可能となり、これに起因するものとなるよう、追加の注意深い投薬制御が必要となり得るからである。本発明の化合物は，本明細書中に記載されている手順を使用して測定した場合、弱いオフターゲット効果（チューブリン結合）を示すか、または観察されるこのような効果を示さない。
【０２０１】
２種以上のクラスＩのＰＩ３Ｋアイソフォーム（アルファ、ベータ、デルタおよびガンマ）、特に実質的に等しい効力を有するクラスＩＡメンバーであるｐ１１０ａ、ｐ１１０ｂおよびｐ１１０ｄ、ならびに、任意選択でクラスＩＢメンバーｐ１１０ｇの活性を阻害し、加えてより低いオフターゲット効果を有する、またはオフターゲット効果を保有しない、例えば、チューブリン結合を保有しない、または減少したチューブリン結合を示す化合物が望まれる。
【０２０２】
望ましくは、少なくとも１種（例えばＰＩ３Ｋアルファ）、しかし特に２種（例えばＰＩ３ＫアルファおよびＰＩ３Ｋベータ）または３種（例えばＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３ＫベータおよびＰＩ３Ｋデルタ）、または４種すべてのクラス１のＰＩ３Ｋ（ＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３Ｋベータ、ＰＩ３ＫデルタおよびＰＩ３Ｋガンマ）の改善された阻害、ならびにより低いオフターゲット効果（特に、オフターゲット効果のない）（例えばより低いチューブリン結合またはチューブリン結合のない）を示す化合物が探究される。望ましくは、これらの化合物は、ｍＴＯＲと比較して、１種または複数のＰＩ３Ｋアイソフォーム（例えば、少なくとも２種、好ましくは３種、例えば、アルファ、ベータおよびデルタアイソフォーム）に対して選択的な阻害を示す。
【０２０３】
結果的に、本発明の化合物のさらなる態様は、対象（例えば哺乳動物、好ましくはヒト）におけるＰＩ３キナーゼの阻害またはアンタゴニズムに関連する疾患、状態または障害の治療のために使用することができる（例えば医薬品の製造において）。したがって、ＰＩ３キナーゼ阻害との関連性のために、本発明の化合物は、がんなどの増殖性疾患の治療に有用と考えられる。本発明の化合物による治療に対する特定の疾患／状態として、良性、または特に悪性の腫瘍、固形腫瘍、脳、腎臓、肝臓、副腎、膀胱、乳房、胃（特に胃の腫瘍）、食道、卵巣、結腸、直腸、前立腺、膵臓、肺（例えば非小細胞肺がん、小細胞肺がん）、膣、甲状腺、肉腫、グリア芽細胞腫、多発性骨髄腫または消化器がん、特に結腸癌または結腸直腸の腺腫、または頸部および頭部の腫瘍、他の疾患、例えば、Ｃｏｗｄｅｎ症候群、Ｌｈｅｒｍｉｔｔｅ−Ｄｕｃｌｏｓ病およびＢａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ症候群など（またはＰＩ３Ｋ／ＰＫＢ経路が異常に活性化する疾患）、前立腺過形成、新生物、特に上皮の特徴のもの、好ましくは乳房の癌または扁平上皮癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）など、血漿細胞ミエローマおよびホジキンリンパ腫（ＮＨ）または白血病が挙げられる。化合物は望ましくは、腫瘍の退化をもたらし、腫瘍転移の形成および転移（また微小転移も）の増大を予防することができる。数種のまたは、特に、個々の脂質キナーゼおよび／または（さらなる）セリン／トレオニンタンパク質キナーゼが含まれる場合、式（Ｉ）の化合物を免疫系の疾患の治療に使用することも可能となり得る。
【０２０４】
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語、および本発明との関連で（特に特許請求の範囲との関連で）使用されている同様の用語は、本明細書中で他に指摘されていない限りまたは状況から明らかに矛盾しない限り、単数と複数の両方を網羅すると解釈されるものとする。
【０２０５】
本明細書中に記載されているすべての方法は、他に指摘されていない限り本明細書中でまたはさもなければ状況により明らかに矛盾していない限り、任意の適切な順序で実施することができる。本明細書中に示す任意のおよびすべての実施例、または例示的言語（例えば「例えば」）の使用は、本発明を単により良く解明することだけを意図するもので、他に特許請求された本発明の範囲に対して制限を提示するものではない。
【０２０６】
本発明の化合物は通常、医薬組成物（例えば、本発明の化合物と少なくとも１種の薬学的に許容される担体）として使用される。
【０２０７】
したがって、別の態様では、本発明は、本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【０２０８】
本発明の化合物は、非晶質形態の組成物で提供することができる。本発明の化合物は、その遊離形態、すなわち、塩の形態でない（遊離塩基形態）組成物で提供することができる。本発明の化合物は、その遊離形態、すなわち、塩の形態でなく（遊離塩基形態）、また非晶質形態でもある組成物で提供することができる。
【０２０９】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語には、これらは当業者には公知であるような、一般的に安全な（ＧＲＡＳ）溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗かび剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊薬剤、滑沢剤、甘味剤、着香剤、色素、緩衝剤（例えば、マレイン酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、酢酸、重炭酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなど）などとして認識されるものおよびそれらの組合せが含まれる（例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences、第18版Mack Printing Company、1990、1289〜1329頁を参照されたい）。任意の従来の担体が活性成分と不相容性である場合を除いて、療法用組成物または医薬組成物におけるその使用が想定される。本発明の目的のため、溶媒和物および水和物は、本発明の化合物および溶媒（すなわち、溶媒和物）または水（すなわち、水和物）を含む医薬組成物と考えられる。
【０２１０】
従来の溶解手順および混合手順を使用して、製剤を調製することができる。例えば、原薬（すなわち、本発明の化合物または安定化した形態の化合物（例えば、シクロデキストリン誘導体または他の公知の複合体形成薬剤との複合体））を、上記に記載されている賦形剤のうちの１種または複数の存在下で適切な溶媒中に溶解する。本発明の化合物は、通常薬学的剤形に製剤化することによって、容易に制御可能な用量の薬物を提供し、エレガントで、容易に取り扱うことのできる製品を患者に与える。
【０２１１】
医薬組成物は、特定の投与経路、例えば、経口投与、非経口投与、および直腸投与などに対して製剤化することができる。加えて、本発明の医薬組成物は、固形形態（制限なしでカプセル剤、錠剤、丸剤、粒剤、散剤または坐剤を含む）、または液体形態（制限なしで液剤、懸濁剤または乳剤を含む）へと作製することができる。医薬組成物は、従来の製薬工程、例えば、殺菌などの対象とすることができ、ならびに／または従来の不活性希釈剤、滑沢剤、もしくは緩衝剤、およびアジュバント、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤および緩衝剤などを含有することができる。
【０２１２】
通常、医薬組成物は、
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／もしくはグリシン；
ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／もしくはポリエチレングリコール；錠剤に関しては更に、
ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／もしくはポリビニルピロリドン；所望ならば
ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、もしくは発泡性混合物；ならびに／または
ｅ）吸収剤、着色料、香味料および甘味料
と一緒に活性成分を含む錠剤またはゼラチンカプセル剤である。
【０２１３】
錠剤は、当技術分野で公知の方法に従い、膜コーティングまたは腸溶コーティングされていてもよい。
【０２１４】
活性成分の溶液、さらに懸濁液、および特に等張水溶液または懸濁液を使用することができ、これは、例えば、活性成分を単独でまたはマンニトールなどの担体と一緒に含む凍結乾燥した組成物の場合、このような溶液または懸濁液を使用直前に生成することが可能である。医薬組成物は、無菌化することができ、および／またはアジュバント、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調整するための塩および／または緩衝剤を含んでもよく、それ自体公知の方式、例えば、従来の溶解プロセスまたは凍結乾燥プロセスを用いて調製される。前記溶液または懸濁液は、粘性増加物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンなどを含み得る。
【０２１５】
油中の懸濁液は、油成分として、注射目的のために慣習的な植物油、合成油または半合成油を含む。特に、酸成分として、８〜２２個の炭素原子、特に１２〜２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸、例えば、ラウリン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸または対応する不飽和の酸、例えば、オレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラシジン酸またはリノール酸を、所望する場合、抗酸化剤、例えば、ビタミンＥ、ベータカロテンまたは３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエンの添加と共に含有する液体脂肪酸エステルを挙げることができる。これらの脂肪酸エステルのアルコール成分は、最大６個の炭素原子を有し、モノヒドロキシもしくはポリヒドロキシ、例えば、モノヒドロキシ、ジヒドロキシもしくはトリヒドロキシ；アルコール、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールもしくはペンタノール；またはそれらの異性体、特にグリコールおよびグリセロールである。したがって以下の脂肪酸エステルの例が挙げられる：オレイン酸エチルエステル、ミリスチン酸イソプロピルエステル、パルミチン酸イソプロピルエステル、「Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ２３７５」（三オレイン酸ポリオキシエチレングリセロールエステル、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ、Ｐａｒｉｓ）、「Ｍｉｇｌｙｏｌ  ８１２」（Ｃ８〜Ｃ１２の鎖長を有する飽和脂肪酸のトリグリセリド、Ｈｕｌｓ  ＡＧ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、特に植物油、例えば、綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、ダイズ油など、さらに特にラッカセイ油。
【０２１６】
注射用組成物を、慣習的方式で滅菌の条件下で調製する；組成物のアンプルまたはバイアルへの導入、および容器の密閉にもこれが同様に適用される。
【０２１７】
経口投与のための医薬組成物は、活性成分を固体担体と組み合わせて、所望する場合、結果として得られた混合物を造粒し、所望する場合、または必要な場合、適当な賦形剤を、錠剤、糖衣錠コアまたはカプセル剤に添加後、混合物を処理することによって得ることができる。活性成分を拡散させ、または定められた量で放出することができるプラスチック担体にこれらを組み込むことも可能である。
【０２１８】
経口投与に対して適切な組成物は、錠剤、ロゼンジ剤、水性懸濁液または油性懸濁液、分散性散剤または粒剤、乳剤、硬質または軟質カプセル剤、またはシロップ剤またはエリキシル剤の形態で有効量の本発明の化合物を含む。経口の使用を目的とする組成物は、医薬組成物の製造に対して当技術分野で公知の任意の方法に従い調製され、このような組成物は、甘味剤、着香剤、着色剤および保存料からなる群から選択される１種または複数の薬剤を含有することによって、薬学的にエレガントで、口に合う調製物を提供することができる。錠剤は、活性成分を、錠剤の製造に対して適切であり非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合して含有し得る。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなど；造粒および崩壊剤、例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸など；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシアなど；および滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクなどである。錠剤は、コーティングされていないか、または消化管での崩壊および吸収を遅らせ、より長い期間にわたり長持ちする作用を提供するために、公知の技術によりコーティングされている。例えば、時間遅延物質、例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどを採用することができる。経口使用のための製剤は、活性成分が、不活性な固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合されている硬質ゼラチンカプセル剤として、または活性成分が、水もしくは油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合されている軟質ゼラチンカプセル剤として提示することができる。
【０２１９】
局所的投与のための医薬組成物は、活性成分を、この活性物質を溶解するもしくは分散するための液体担体（例えば、水性の液体担体）と、さらに場合によって、製剤化成分、例えば、液剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤もしくは軟膏剤を提供するための、例えば、溶媒／可溶化剤、ゲル化剤、油、安定剤、緩衝剤および保存剤などと一緒に組み合わせることによって得ることができる。局所的投与のための医薬組成物は、例えば、皮膚への塗布のために提供することができる。局所的投与のための医薬組成物は、ほぼ０．１％〜ほぼ２％の活性成分を含むことができ、この活性成分は特に式（Ｉ）の化合物、特に、本明細書中で個々の実施例に記載されている化合物である。
【０２２０】
塗布用の医薬組成物（または製剤）は、薬物を投与するために使用される方法に応じて、様々な方式で包装することができる。一般的に、流通用の製品は、適当な形態で医薬製剤が入れられている容器を含む。適切な容器は当業者には周知であり、ボトル（プラスチックおよびガラス）、アンプル、プラスチックバッグ、金属シリンダーなどの材料を含む。容器はまた、パッケージ内容物に安易に手が届かないよう、不正開封防止用集合体を含むこともできる。加えて、容器には、容器の内容物について記載するラベルがその上についている。ラベルはまた適当な警告も含む。
【０２２１】
治療有効量の本発明の化合物を含む医薬組成物は、非経口投与として使用するために製剤化することができる。医薬組成物（例えば、静注用（ｉｖ）製剤）は、従来の製薬工程、例えば殺菌などの対象とすることができ、および／または従来の不活性希釈剤、または緩衝剤、ならびにアジュバント、例えば、当業者などには周知の保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤および緩衝剤などを含有することができる。
【０２２２】
水は特定の化合物の分解を促進する可能性があるので、本発明は、本発明の化合物を活性成分として含む無水の医薬組成物および剤形をさらに提供する。本発明の無水の医薬組成物および剤形は、無水または低水分を含有する成分および低水分条件または低湿度条件を使用して調製することができる。無水の医薬組成物を調製し、その無水の性質が維持されるように保存することができる。したがって、無水組成物は、これらを適切な処方キット内に含めることができるように、水への曝露を防止することで知られている物質を使用して包装される。適切なパッケージングの例として、これらに限定されないが、密閉されたホイル、プラスチック、単位容量容器（例えば、バイアル）、ブリスターパック、およびストリップパックが挙げられる。
【０２２３】
本発明は、本発明の化合物が活性成分として分解する速度を減少させる１種または複数の薬剤を含む医薬組成物および剤形をさらに提供する。このような薬剤は、本明細書中で「安定剤」として言及され、これらに限定されないが、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、ｐＨ緩衝剤、または塩緩衝剤などを含む。
【０２２４】
本発明の化合物、特に、本明細書中で個々の実施例に記載されている化合物は、非晶質形態で提供することができる。
【０２２５】
本発明の化合物、特に、本明細書中で個々の実施例に記載されている化合物は、標準懸濁剤、ナノ懸濁剤および固体分散液として、例えば以下ようにして、製剤化することができる。
【０２２６】
標準懸濁剤：
１．）ターゲットとする製剤濃度３ｍｇ／ｍｌを目指して、実施例１８、バッチＥの結晶性物質の必要量を秤量した。
２．）次いで、実施例１８、バッチＥの結晶性物質を０．５％［ｗ／ｗ］カルボキシメチルセルロース／０．５％［ｗ／ｗ］Ｔｗｅｅｎ８０／水に分散した
３．）懸濁剤をボルテックスしてホモジナイズした
４．）プローブソニケーターを使用して、懸濁剤を超音波処理することによって、粒径を減少させた（２分）
ナノ懸濁剤：
１．）実施例１８、バッチＥの結晶性物質３２ｍｇを正確に秤量して特注の大理石粉砕デバイスに入れた
２．）２．１４８ｇの０．２ｍｍジルコニア粉砕媒体を粉砕デバイスに加えた
３．）０．６０８ｍｌの１％［ｗ／Ｖ］ＨＰＭＣ６０３（ヒドロキシプロピルメチルセルロース等級６０３）／０．０５％［／ｗ］ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）／水を粉砕デバイスに加えた
４．）粉砕デバイスを密閉し、回転式微粉砕にかけた
５．）試料を４００ｒｐｍで４時間微粉砕した
６．）シリンジを使用してナノ懸濁剤を収集した
固体分散液：
１．）実施例１８、バッチＥの結晶性物質３０ｍｇを秤量して凍結乾燥バイアルに入れた
２．）３０ｍｇのＨＰＭＣ６０３（ヒドロキシプロピルメチルセルロース等級６０３）を同じバイアルに加えた
３．）５．６ｍｌのジオキサンをバイアルに加えた。バイアルを蓋で密閉した。
４．）試料を周囲条件で１２時間撹拌した
５．）得た溶液を以下の条件に従い凍結乾燥した
【０２２７】
【表１】
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【０２２８】
本発明の化合物が、安定性の理由で、例えば、化合物を担体（例えば、ポリマー、例えばＨＰＭＣなど）および溶媒と組み合わせ、この混合物を凍結乾燥させることによって（結晶形態よりも、むしろ非晶質形態で化合物を提供することを意図して）調製された固体分散液として提供される場合、担体の量と化合物の量との比を増加させることによって、静置した際に化合物の再結晶化を回避することが有利となり得る。
【０２２９】
特定の場合には、本発明の化合物を、少なくとも１種の追加の薬学的（または療法用の）薬剤（例えば、抗増殖剤または抗がん剤または化学療法に通常使用される補助療法）と組み合わせて投与することが有利となり得る。本発明の化合物は、１種または複数の他の治療薬と同時に、またはその前後に投与することができる。代わりに、本発明の化合物は、同一もしくは異なる投与経路により別々に、または他の薬剤と同じ医薬組成物中で一緒に投与することもできる。適切な追加の抗がん剤としては、以下を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【０２３０】
ＨＥＲ２およびＨＥＲ３受容体阻害剤：ＨＥＲ２陽性の乳がんモデルにおいて最近例示されたように、ＰＩ３Ｋ阻害は、ＦｏｘＯ依存性ＨＥＲ２／ＨＥＲ３転写誘発を介して、再活性化の経路へとつながり、これは、この設定でのＨＥＲ２阻害剤の使用を意味する（Serraら、2011 Oncogene 30；Chandarlapatyら、2011 Cancer Cell 19；Chakrabartyら2012、PNAS 109）。例えばトラスツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅから、商標Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で販売されている）、ペルツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅから、商標Ｐｅｒｊｅｔａ（商標）で販売されている）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ製の抗体薬物コンジュゲート、トラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、エルロチニブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅから、商標Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）で販売されている、ゲフィチニブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａから、商標Ｉｒｅｓｓａ（商標）で販売されている）、ＭＯＲ１０７０３、ネラチニブ（またＨＫＩ−２７２、（２Ｅ）−Ｎ−［４−［［３−クロロ−４−［（ピリジン−２−イル）メトキシ］フェニル］アミノ］−３−シアノ−７−エトキシキノリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エナミドとしても知られており、ＰＣＴ公開ＷＯ０５／０２８４４３において記載されている）、ラパチニブまたはトシル酸ラパチニブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから、商標Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標）で販売されている）。このような組合せは、例えばＨＥＲ２陽性乳がんおよびＨＥＲ２が増幅した胃がんにおいて有用である。療法のターゲットとして、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）は、不活性なチロシンキナーゼを有するという難題を提示し、したがってＡＴＰ−模倣剤チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の有用性を排除する。この難題を回避するのは、ＥｒｂＢ３（例えば、ＭＭ−１２１）へのリガンド結合を遮断するか、またはＥｒｂＢ２が過剰発現する細胞においてＥｒｂＢ２を用いて、ＥｒｂＢ３の二量体化の遮断する（例えば、ペルツズマブ）ことを目指す抗体媒介性ストラテジーである
【０２３１】
エストロゲン受容体ダウンレギュレーター／アロマターゼ阻害剤：例えばフルベストラント（商標名Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）で販売されている）、レトロゾール（Ｎｏｖａｒｔｉｓから、商標Ｆｅｍａｒａ（登録商標）で販売されている）またはエクセメスタン（Ｐｆｉｚｅｒより商標Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）で販売されている）。このような組合せは、例えば、ＥＲ陽性乳がんの治療に有用である。この組合せに対する論理的根拠は、ＰＩ３Ｋ関連のホルモン耐性に対処することを目指すものである。
【０２３２】
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤：例えばＸＬ−５１８（ＣａｓＮｏ．１０２９８７２−２９−４、ＡＣＣ  Ｃｏｒｐ．から入手可能）、ＡＺＤ６２４４またはセルメチニブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＧＳＫ１１２０２１２（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＺＤ８３３０（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、またはＭＥＫ１６２。このような組合せは、例えば、ＫＲＡＳ変異型の肺がん、直腸結腸がん（ＣＲＣ）および膵臓がんの治療に有用である。
【０２３３】
Ｂｃｌ２／ＢｃｌＸＬ阻害剤：例えばＡＢＴ７３７（Ａｂｂｏｔｔ）。
【０２３４】
抗アンドロゲン：例えば、ニルタミド（商標名Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）およびＡｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）で販売されている）、ビカルタミド（商標名Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）で販売されている）、フルタミド（商標名Ｆｕｌｅｘｉｎ（商標）で販売されている）、ＭＤＶ３１００（エンザルタミド、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎにより商標名Ｘｔａｎｄｉ（登録商標）で販売されている）およびアビラテロン（Ｊａｎｓｓｅｎから、商標名Ｚｙｔｉｇａ（登録商標）で販売されている）。このような組合せは、例えば、ＰＴＥＮ不活性化を有する、ホルモン依存性前立腺がんの治療に有用である。この組合せに対する論理的根拠は、ＰＩ３Ｋとアンドロゲン受容体経路との間のやりとりに対処することを目指すものである。
【０２３５】
熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）阻害剤：例えばタネスピマイシン（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン、ＫＯＳ−９５３および１７−ＡＡＧとしても知られ、ＳＩＧＭＡから入手可能であり、米国特許第４，２６１，９８９号に記載されている）および５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−イソキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（ＡＵＹ９２２としても知られており、ＰＣＴ公開ＷＯ２００４／０７２０５１に記載されている）。このような組合せは、例えばＥＧＦＲ依存性肺がんの治療またはＥＧＲ阻害剤に対して治療抵抗性となるＥＧＲｍｕｔを阻害するため、またはＨＥＲ２陽性乳がん、またはＨＥＲ２陽性胃がんにおいて有用である。
【０２３６】
タキサン抗腫瘍剤：例えばカバジタキセル（１−ヒドロキシ−７β，１０β−ジメトキシ−９−オキソ−５β，２０−エポキシタクサ−１１−エン−２α，４，１３α−トリイル−４−アセテート−２−ベンゾエート−１３−［（２Ｒ，３Ｓ）−３−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノエート）、ラロタキセル（（２α，３ξ，４α，５β，７α，１０β，１３α）−４，１０−ビス（アセチルオキシ）−１３−（｛（２Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノイル｝オキシ）−１−ヒドロキシ−９−オキソ−５，２０−エポキシ−７，１９−シクロタキサ−１１−エン−２−イルベンゾエート）；
【０２３７】
抗有糸分裂剤：例えばドセタキセル（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓから、商標名Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）で販売されている）、乳がんの治療に対して有用である。
【０２３８】
植物アルカロイド：例えばパクリタキセル（商標名ＴａｘｏｌおよびＯｎｘａｌ（商標）で販売されている）およびパクリタキセルタンパク質結合（商標名Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）で販売されている）および前立腺がんの治療に対して有用である、ビンブラスチン（硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチンおよびＶＬＢとしても知られている、商標名Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）およびＶｅｌｂａｎ（登録商標）で販売されている）、ビンクリスチン（硫酸ビンクリスチン、ＬＣＲ、およびＶＣＲとしても知られている、商標名Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）およびＶｉｎｃａｓａｒ  Ｐｆｓ（登録商標）で販売されている）およびビノレルビン（商標名Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）で販売されている）。
【０２３９】
抗インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）抗体：例えば、フィギツムマブ（ＣＰ−７５１，８７１としても知られている、ＡＣＣ  Ｃｏｒｐから入手可能）、およびロバツムマブ（ＣＡＳ  Ｎｏ．９３４２３５−４４−６）。
【０２４０】
ＰＡＲＰ（ポリＡＤＰ−リボースポリメラーゼ）阻害剤：例えばＢＳＩ−２０１（イニパリブ）およびオラパリブ。このような組合せは、例えばＰＩ３Ｋ阻害剤によるＤＮＡ損傷機構の可能な誘発に対処するのに有用である。
【０２４１】
補助療法に対して適切な治療薬として、ステロイド、抗炎症剤、抗ヒスタミン、抗嘔吐剤、および本明細書中に記載されている疾患、状態、または障害に対する治療を受けている患者に対するケアの品質改善における使用のための、当業者に周知の他の薬剤が挙げられる。
【０２４２】
ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の活性化は細胞生存を推進するので、経路の阻害は、放射線療法および化学療法を含めた、がん細胞におけるアポトーシスを推進する療法と組み合わせると、結果として応答を改善することになり得る（Ghobrialら、CA Cancer J. Clin 55:178〜194頁(2005)）。例として、ＰＩ３キナーゼ阻害剤とカルボプラチンの組合せは、インビトロの増殖およびアポトーシスアッセイの両方において、ならびに卵巣がんの異種移植片モデルにおけるインビボでの腫瘍効力において相乗効果を実証した（WestfallおよびSkinner、Mol. Cancer Ther. 4:1764〜1771頁(2005)）。本発明の化合物は放射線療法と共に投与することができる。
【０２４３】
本発明の化合物またはその医薬組成物は、以下の経路により投与することができる：経腸、例えば、経鼻など；経直腸もしくは経口；非経口、例えば、筋肉内もしくは静脈内など；または局所的、例えば、皮膚投与など。ヒトにおける使用のための本発明の化合物またはその医薬組成物は、好ましくは経口的に投与される（例えば、錠剤形態で）。
【０２４４】
本発明の医薬組成物または組合せは、およそ５０ｋｇ〜およそ７０ｋｇの対象に対して、およそ１ｍｇ〜およそ１０００ｍｇの活性成分、またはおよそ１ｍｇ〜およそ５００ｍｇまたはおよそ１ｍｇ〜およそ２５０ｍｇまたはおよそ１ｍｇ〜およそ１５０ｍｇまたはおよそ０．５ｍｇ〜およそ１００ｍｇ、またはおよそ１ｍｇ〜およそ５０ｍｇの活性成分の単位用量とすることができる。単位用量はまた、およそ５０ｋｇ〜およそ７０ｋｇの対象に対して、およそ５０ｍｇおよそ１０００ｍｇの活性成分、またはおよそ５０ｍｇ〜およそ５００ｍｇまたはおよそ５０ｍｇ〜およそ２５０ｍｇまたはおよそ５０ｍｇ〜およそ１５０ｍｇまたはおよそ５０ｍｇ〜およそ１００ｍｇの活性成分とすることもできる。単位用量はまた、およそ５０ｋｇ〜およそ７０ｋｇの対象に対して、およそ１００ｍｇ〜およそ５００ｍｇの活性成分、またはおよそ２００ｍｇ〜およそ５００ｍｇまたはおよそ３００ｍｇ〜およそ５００ｍｇまたはおよそ３００ｍｇ〜およそ４００ｍｇの活性成分とすることもできる。これらの用量は、全一日の用量として提供してもよいし、単位用量または分割した用量で提供してもよい。用量は、活性成分を送達するために使用される特定の剤形に依存し得る。一般的に、化合物、医薬組成物、またはその組合せの治療有効投与量は、対象の種、その体重、年齢および個々の状態、治療を受けている障害もしくは疾患またはその重症度に依存する。用量はまた、治療を受けている種における活性成分のバイオアベイラビリティーにも依存し得る。通常のスキルの医師、薬剤師、臨床医または獣医は、障害または疾患の進行を予防、治療または阻害するために必要な活性成分のそれぞれの有効量を容易に決定することができる。
【０２４５】
上記引用された用量特性は、有利には哺乳動物、例えば、マウス、ラット、イヌ、サルまたは単離した器官、組織およびその調製物を使用して、インビトロおよびインビボ試験で実証できる。本発明の化合物は、例えば１０ｍＭのＤＭＳＯ保存液から調製した、例えば水溶液などの溶液の形態で、インビトロで、経腸、非経口的に、有利には静脈内に、例えば、懸濁液として、または水溶液中で、インビボで適用することができる。インビトロの用量は、およそ１０−３モル濃度〜およそ１０−９モル濃度の間の領域であってよい。インビボでの治療有効量は、投与経路に応じて、およそ０．１〜およそ５００ｍｇ／ｋｇの間、またはおよそ１〜およそ１００ｍｇ／ｋｇの間の範囲にわたってもよい。
【０２４６】
一般的に、本発明の化合物の治療有効量が、治療を必要とする患者に投与される。本発明の化合物の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的または医学的応答、例えば、酵素活性もしくはタンパク質活性もしくはタンパク質複合体活性の減少もしくは阻害を誘発する、または症状を回復させ、状態を軽減し、病状悪化を遅延もしくは遅らせる、または疾患を予防する本発明の化合物の量を指す。
【０２４７】
さらに別の態様では、哺乳動物においてがんを治療するための方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に本発明の化合物の有効量を投与するステップを含む、方法が提供される。
【０２４８】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、動物を指す。通常、動物は哺乳動物である。対象はまた、例えば、霊長類（例えば、男性または女性のヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚、トリなどを指す。特定の実施形態では、対象は霊長類である。好ましくは、対象はヒトである。
【０２４９】
本明細書で使用される場合、「阻害する」、「阻害」または「阻害している」という用語は、所与の状態、症状、もしくは障害、もしくは疾患の減少もしくは抑制、または生物活性もしくは生物学的過程のベースライン活性における有意な低減を指す。
【０２５０】
本明細書で使用される場合、任意の疾患または障害の「治療する」、「治療している」または「治療」という用語は、（ｉ）疾患または障害を回復させること（すなわち、疾患またはその臨床像のうちの少なくとも１つの発症を遅延させるまたは止めるまたは減少させる）；（ｉｉ）患者により識別可能でない可能性のあるものを含めて、少なくとも１つの物理的パラメーターを軽減するまたは回復させる；あるいは（ｉｉｉ）疾患もしくは障害の開始または発症または進行を予防するまたは遅らせることを指す。一般的に、「治療する」または「治療」という用語は、疾患、状態、または障害と闘う目的のための患者の管理およびケアについて記載しており、症状もしくは合併症の開始を予防する、症状もしくは合併症を軽減する、または疾患、状態もしくは障害を排除するための本発明の化合物の投与を含む。
【０２５１】
本明細書で使用される場合、このような対象が、このような治療から生物学的に、医学的にまたは生活の質において（好ましくは、対象はヒトである）利益を得るとすれば、対象は治療「を必要としている」のである。
【０２５２】
本発明の別の態様は、本発明の化合物と、アポトーシスを強化するための療法において同時の、別々のまたは連続的な使用のために、組み合わせた調製物として、少なくとも１種の他の治療薬（または医薬品）とを含む製品である。
【０２５３】
本発明の組合せ療法において、本発明の化合物および他の治療薬は、同一または異なる製造者により製造および／または製剤化することができる。さらに、本発明の化合物および他の治療薬（または医薬品）は、（ｉ）組合せ製品を医師へ譲渡する以前に（例えば、本発明の化合物および他の治療薬を含むキットの場合）；（ｉｉ）投与直前に医師自身により（または医師の指導のもと）；（ｉｉｉ）患者自身で、例えば、本発明の化合物および他の治療薬の連続投与中に、一緒にまとめて組合せ療法に含めることができる。
【０２５４】
したがって、本発明は、ＰＩ３Ｋを阻害するまたはＰＩ３Ｋに拮抗することにより疾患または状態を治療するための本発明の化合物の使用であって、医薬品が、別の治療薬と共に投与するために調製される、使用を提供する。本発明はまた、別の治療薬の使用も提供し、この場合、医薬品は、本発明の化合物と他の治療薬との組合せとして投与される。
【０２５５】
本発明の実施形態は以下の実施例により例示される。しかし、他の変形形態が当業者には公知であるかまたは本開示に鑑みて当業者には明らかであるように、本発明の実施形態はこれらの実施例の特定の詳細に限られるわけではないことを理解されたい。
［実施例］
【０２５６】
他に特定されていない限り、出発物質は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｄｈａｍ、Ｎ．Ｈ．）、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｆａｉｒｌａｗｎ、Ｎ．Ｊ．）、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｌｔｄ．（Ｃｏｒｎｗａｌｌ、Ｅｎｇｌａｎｄ）、Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｉｎｃ．（Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ、ＩＬ）、およびＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｌｏｎｄｏｎ、Ｅｎｇｌａｎｄ）などの販売元から一般的に入手可能である。
【０２５７】
以下の実施例において使用されている略語は、以下に列挙した対応する意味を有する。
ＡｃＯＨ  酢酸
ＡｌＣｌ３  三塩化アルミニウム
ＡＰＩ  気圧イオン化
Ｂｏｃ  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｒｉｎｅ  塩化ナトリウム飽和溶液（室温で）
ｂｒ．ｓ  幅広い一重線
ｎＢｕＯＨ  ｎ−ブタノール
ｔＢｕ  ｔｅｒｔ−ブチル
ＣＤＩ  カルボニルジイミダゾール
Ｃｅｌｉｔｅ  Ｃｅｌｉｔｅ  Ｃｏｒｐ．の商標（Ｗｏｒｌｄ  Ｍｉｎｅｒａｌｓ  Ｉｎｃ．）、Ｓａｎｔａ  Ｂａｒｂａｒａ、ＣＡ、ＵＳＡ、ｋｉｅｓｅｌｇｕｈｒに基づく濾過補助用
ＣＨ３ＣＮ  アセトニトリル
ｃｏｎｃ．  濃縮した
ｄ  二重線
ＤＣＥ  ジクロロエタン
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＤＥＡ  ジエチルアミン
ＤＩＥＡ  Ｎ，Ｎ−ジエチル−イソプロピルアミン
ＤＭＡＰ  ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ  ジメトキシエタン
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＥＳ−ＭＳ  エレクトロスプレー質量分析法
Ｅｔ  エチル
Ｅｔ３Ｎ  トリエチルアミン
Ｅｔ２Ｏ  ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＥｔＯＨ  エタノール
Ｈ  時間
ＨＰＬＣ  高速液体クロマトグラフィー
Ｈｙｆｌｏ  Ｈｙｆｌｏ  Ｓｕｐｅｒ  Ｃｅｌ（登録商標）
ｉＰｒ  イソプロピル
Ｋ２ＣＯ３  炭酸カリウム
ＫＯＨ  水酸化カリウム
Ｋ３ＰＯ４  リン酸カリウム
ＬＡＨ  水素化アルミニウムリチウム
ＬＣ  液体クロマトグラフィー
Ｍｅ  メチル
ＭｅＩ  ヨウ化メチル
ＭｅＯＨ  メタノール
ＭｇＳＯ４  硫酸マグネシウム
Ｍ  多重線
ｍｉｎ  分
ｍＬ  ミリリットル
ｍ．ｐ．  融点
ＭＳ  質量分析法
ＮａＨ  水素化ナトリウム
ＮａＨＣＯ３  重炭酸ナトリウム
Ｎａ２ＣＯ３  炭酸ナトリウム
ＮａＨＭＤＳ  ヘキサメチルジシラザンナトリウム
ＮａＯＨ  水酸化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４  硫酸ナトリウム
ＭｇＳＯ４  硫酸マグネシウム
ＮａＯＡｃ  酢酸ナトリウム
ＮＢＳ  Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＮＨ４Ｃｌ  塩化アンモニウム
ＮＨ４ＯＨ  水酸化アンモニウム
ＮＭＲ  核磁気共鳴
ＰＯＣｌ３  オキシ塩化リン（ＩＩＩ）
ＲＴ  室温
Ｒｆ  ＴＬＣ保持因子
ｓ  一重線
ｓｃＣＯ２  超臨界ＣＯ２
ｔ  三重線
ＴＢＡＦ  フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＤＰＳＣｌ  塩化ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル
ＴＢＭＥ  ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル
ＴＥＡ  トリエチルアミン
ＴＥＭＰＯ  ２，２，６，６−テトラメチルピペリジニルオキシル
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
ＴＬＣ  薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳ  トリメチルシリル
ＴＭＳＣｌ  クロロトリメチルシラン
ｔＲ  保持時間
ＴｓＣｌ  塩化ｐ−トルエンスルホニル
ＴｓＯＨ  ｐ−トルエンスルホン酸
ＵＶ  紫外線
【０２５８】
一般的方法
トリメチルシランを内部標準として使用してまたはしないで、１Ｈ−ＮＭＲ測定をＢｒｕｋｅｒ  Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ（商標）４００（４００ＭＨｚ）、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ（商標）６００（６００ＭＨｚ）または５００ＭＨｚ  ＤＲＸ  Ｂｒｕｋｅｒ  ＣｒｙｏＰｒｏｂｅ（５００ＭＨｚ）分光器で実施した。化学シフト（ｄ値）は、テトラメチルシランから低磁場においてｐｐｍで報告され、結合定数（Ｊ）はＨｚで示され、スペクトル分割パターンは、一重線（ｓ）、二重線（ｄ）、二重線二重線（ｄｄ）、三重線（ｔ）、四重線（ｑ）、多重線またはさらに重複する信号（ｍ）、幅広い信号（ｂｒ）として表されている。溶媒は括弧の中に示されている。
【０２５９】
それぞれの命名された溶媒系を使用して、プレコートしたシリカゲル６０Ｆ２５４ガラスプレート（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてＴＬＣを実施した。可視化は一般的に紫外光（２５４ｎｍ）で行った。
【０２６０】
ＨＰＬＣ条件：
ＬＣ−ＭＳ  １：
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＨＳＳ  Ｔ３  ２．１×５０ｍｍ、１．８μｍ。流量：１．２ｍＬ／ｍｉｎ。カラム温度：５０℃。勾配：１．４ｍｉｎで２％〜９８％Ｂ、９８％Ｂを０．７５ｍｉｎ、０．０４ｍｉｎで９８％〜２％Ｂ、２％Ｂを０．０１ｍｉｎ；Ａ＝水＋０．０５％ギ酸＋３．７５ｍＭ  酢酸アンモニウム、Ｂ＝アセトニトリル＋０．０４％ギ酸
検出の完全スキャン：２１５〜３５０ｎｍ
【０２６１】
ＬＣ−ＭＳ  ２：
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＨＳＳ  Ｔ３  ２．１×５０ｍｍ、１．８μｍ。流量：１．２ｍＬ／ｍｉｎ。カラム温度：５０℃。勾配：１．４ｍｉｎで２％〜９８％Ｂ、９８％Ｂを０．７５ｍｉｎ、０．０４ｍｉｎで９８％〜２％Ｂ、２％Ｂを０．０１ｍｉｎ；Ａ＝水＋０．０５％ギ酸＋０．０５％酢酸アンモニウム、Ｂ＝アセトニトリル＋０．０４％ギ酸
検出の完全スキャン：２１５〜３５０ｎｍ
【０２６２】
ＬＣ−ＭＳ  ３：
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＨＳＳ  Ｔ３  ２．１×５０ｍｍ、１．８μｍ。流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。カラム温度：６０℃。勾配：１．４ｍｉｎで５％〜９８％Ｂ、９８％Ｂを０．７５ｍｉｎ、０．０４ｍｉｎで９８％〜５％Ｂ、５％Ｂを０．０１ｍｉｎ；Ａ＝水＋０．０５％ギ酸＋３．７５ｍＭ  酢酸アンモニウム、Ｂ＝アセトニトリル＋０．０４％ギ酸
検出の完全スキャン：２１５〜３５０ｎｍ
【０２６３】
ＨＰＬＣ  １：
カラム：Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＲＰ１８ｅ  ４．６×１００ｍｍ、流量：２．０ｍＬ／ｍｉｎ。勾配：４．５ｍｉｎで２％〜１００％Ｂ、１００％Ｂを１ｍｉｎ、Ａ＝水＋０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
検出：２１５ｎｍ
【０２６４】
ＵＰＬＣ  １：
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  Ｃ１８、１．７μｍ  ２．１×５０ｍｍ、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。勾配：１．５ｍｉｎで５％〜１００％Ｂ、１００％Ｂを１ｍｉｎ、Ａ＝水＋０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
検出：２１８ｎｍ
【０２６５】
中間体Ａ：４−（４，６−ジクロロ−ピリミジン−２−イル）−モルホリン
中間体Ａは市販されており、または以下の手順を使用して調製することもできる。
【０２６６】
【化７１】
2015508096.tif 000073
【０２６７】
２，４，６−トリクロロピリミジン（５．０ｍＬ、４２．６ｍｍｏｌ）のメシチレン（８０ｍＬ）中溶液に、モルホリン（４．８３ｍＬ、５５．４ｍｍｏｌ）のメシチレン（２０ｍＬ）中溶液を１６５℃で滴加し、懸濁液を１６５℃で３０ｍｉｎ撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ、ＥｔＯＡｃおよびＮａＨＣＯ３で処理した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→７：３）。残渣をヘキサン中で粉砕し、濾過することによって、表題化合物を得た（３．３６ｇ、３３％）。ｔＲ：１．１１ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ１）；ＥＳＩ−ＭＳ：２３４．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０２６８】
中間体Ｂ：５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルアミン
【０２６９】
【化７２】
2015508096.tif 000074
ステップＢ．１からの生成物（１６．２ｇ、６６．３ｍｍｏｌ）、ビス−ピナコラトジボロン（１８．５ｇ、７２．９ｍｍｏｌ）およびＫＯＡｃ（１９．５ｇ、１９９ｍｍｏｌ）のジオキサン（３００ｍＬ）中懸濁液に、アルゴン下で、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ２Ｃｌ２付加物（２．４ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１１５℃で４ｈ撹拌した。反応混合物を５０℃に冷却し、ＥｔＯＡｃで処理した。結果として得た懸濁液をＨｙｆｌｏ上で濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。合わせ、濾過したもの（filtrated）を濃縮した。残渣を２Ｎ  ＮａＯＨ中に懸濁させ、ＲＴで５ｍｉｎ撹拌し，次いでＥｔ２ＯおよびＨ２Ｏを加え、二成分混合物を、Ｈｙｆｌｏを介して濾過した。濾液の相を分離した。結果として得た水層のｐＨをＨＣｌ  ４Ｎで５〜６に調節し、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をＥｔ２Ｏおよびヘキサン中で粉砕し、濾過することによって、表題化合物を得た（８．３３ｇ、４２％）。ｔＲ：１．００ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：２９０．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０２７０】
ステップＢ１：５−ブロモ−４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルアミン
【０２７１】
【化７３】
2015508096.tif 000075
２−アミノ−４−トリフルオロメチルピリミジン（２５ｇ、０．１５モル）のＣＨ３ＣＮ（８００ｍＬ）中溶液に、２００ｍＬのＣＨ３ＣＮ中に溶解したＮＢＳ（３４．８ｇ、０．１９５モル）を暗所で滴加した（２．５時間にわたり）。混合物をＲＴで４．５ｈ、暗所で撹拌し、次いで溶媒を蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃおよびＨ２Ｏ中に溶解し、二成分混合物を分液漏斗に移した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ９：１〜３：２の勾配を使用する、シリカゲル上でクロマトグラフィーで残渣を精製した。合わせた純粋な画分を蒸発させ、残渣を４０ｍＬのヘキサン中に懸濁させ、１０ｍｉｎ撹拌し、濾過し、２×２０ｍＬのヘキサンで洗浄することによって、ベージュ色の固体として表題生成物を得た（３１．２ｇ、８５％）。ｔＲ：０．８２ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ１）。
【実施例１】
【０２７２】
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０２７３】
【化７４】
2015508096.tif 000076
ステップ１．１からの生成物（３５０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）、中間体Ｂ（４４９ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍ、１．７ｍＬ、３．４８ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２（９５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中溶液を、アルゴン下、８０℃で１ｈ撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ中で希釈し、飽和したＮａＨＣＯ３で抽出した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ、９９．５：０．５→９８：２）。残渣をヘキサン中で粉砕し、濾過し、乾燥させた。残渣を分取ＨＰＬＣで精製することによって（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎ  Ｆｉｒｅ  Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５ｕｍ；０．１％ＴＦＡ−水／アセトニトリル；勾配、２０ｍｉｎでアセトニトリル５〜１００％）、表題化合物を得た（２６０ｍｇ、５２％）。ｔＲ：０．９３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４２６．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０２７４】
ステップ１．１：（Ｓ）−３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０２７５】
【化７５】
2015508096.tif 000077
（Ｓ）−４−メチル−２−オキサゾリジノン（４３２ｍｇ、４．１９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、アルゴン雰囲気下で、ＮａＨ（６０％鉱油、２０１ｍｇ、５．０２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、懸濁液をｒｔで３０ｍｉｎ撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ（１ｇ、４．１９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＲＴで４ｈ撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏで抽出した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、９７：３→１：１）、表題化合物を得た（６０５ｍｇ、４７％）。ｔＲ：１．００ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：２９９．２／３０１．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例２】
【０２７６】
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５，５−ジメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０２７７】
【化７６】
2015508096.tif 000078
ステップ２．１からの生成物（２８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）およびＴＢＡＦ（２ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ）の溶液をｒｔで一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００：０→９５：５）、表題生成物を得た。ｔＲ：０．８９ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４７０．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０２７８】
ステップ２．１：（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−５，５−ジメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０２７９】
【化７７】
2015508096.tif 000079
表題化合物を、実施例１に対して使用した手順と同様の手順で、ただし、ステップ２．２からの生成物を使用して調製した。混合を１００℃で４０ｍｉｎ実施した。抽出後、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→３０：７０）、表題生成物を得た。ｔＲ：１．４５ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：７０８．４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０２８０】
ステップ２．２：（Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−５，５−ジメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０２８１】
【化７８】
2015508096.tif 000080
ステップ２．３からの生成物（９５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、中間体Ａ（５８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、キサントホス（１０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２ｄｂａ３（４．５ｍｇ、４．９５ｕｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（１２１ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のジオキサン中溶液を、アルゴン下、１００℃で３ｈ撹拌した。混合物をｒｔに冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和溶液で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→０：１００）、表題生成物を得た（８５ｍｇ、５６％）。ｔＲ：１．５４ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：５８１．４／５８３．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０２８２】
ステップ２．３：（Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−５，５−ジメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０２８３】
【化７９】
2015508096.tif 000081
表題化合物を、ステップ６．２に対して使用した手順と同様の手順で、ただしステップ２．４からの生成物を使用し、イミダゾールの代わりにＥｔ３Ｎを使用して調製した。混合物をＲＴで１６ｈ撹拌した。反応混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→５５：４５）、表題生成物を得た。ｔＲ：１．３３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３８４．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０２８４】
ステップ２．４：（Ｓ）−４−ヒドロキシメチル−５，５−ジメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０２８５】
【化８０】
2015508096.tif 000082
ステップ２．５からの生成物（１１０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）およびＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、５ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の溶液をＲＴで４ｈ撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をさらなる精製なしで使用した。
【０２８６】
ステップ２．５：（Ｓ）−１，１，５，５−テトラメチル−ジヒドロ−オキサゾロ［３，４−ｃ］オキサゾール−３−オン
【０２８７】
【化８１】
2015508096.tif 000083
ステップ２．６からの生成物（１９０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６ｍＬ）中溶液に、アルゴン下、０℃で、ＮａＨ（８８ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ、油中６０％）を加え、混合物を０℃で６ｈ撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ中で粉砕し、濾過した。濾過した溶液を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→６０：４０）。
【０２８８】
ステップ２．６：（Ｓ）−４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【０２８９】
【化８２】
2015508096.tif 000084
（Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル２，２−ジメチルオキサゾリジン−３，４−ジカルボキシレート（５００ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）中溶液に、アルゴン下、０℃で臭化メチルマグネシウム（１．４ｍＬ、４．２４ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物を０℃で２ｈ撹拌した。反応をＮＨ４Ｃｌ飽和溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→６５：３５）。ｔＲ：１．０１ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：２６０．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例３】
【０２９０】
ラセミ３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−４，５’−ビピリミジン−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０２９１】
【化８３】
2015508096.tif 000085
中間体Ｂ（６８ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、ステップ３．１からの生成物（１２０ｍｇ、０２１ｍｍｏｌ）、２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３溶液（３１７μＬ、０．６３ｍｍｏｌ）およびテトラキス（１５ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２ｍＬ）中溶液を、８０℃で３ｈ撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ中で希釈し、Ｎａ２ＳＯ４を加えた。結果として得た懸濁液を濾過し、濾液を濃縮した。残渣をＴＨＦ（２ＭＬ）と共に溶解し、ＴＢＡＦ（２１２μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をｒｔで１６ｈ撹拌し、濃縮した。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ、９９：１→９６：４）。残渣をＤＣＭ／ヘキサン中で粉砕することによって、表題化合物を得た。ｔＲ：０．８５ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４５６．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０２９２】
ステップ３．１：４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０２９３】
【化８４】
2015508096.tif 000086
表題化合物を、ステップ２．２に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ３．２からの生成物を使用して調製した。抽出後、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９：１→１：１）、表題化合物を得た。
【０２９４】
ステップ３．２：４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０２９５】
【化８５】
2015508096.tif 000087
表題化合物を、ステップ６．４に対して記載されている手順と同様に、ただし、４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンを使用し、ＤＭＦの代わりにＤＣＭを使用して調製した。反応混合物をＥｔ２Ｏで抽出した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。結果として得た固体をヘキサン中で粉砕し、濾過することによって、表題化合物を得た。ｔＲ：１．２０ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３３９．２／３４１．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０２９６】
[実施例３Ａ]
３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−４，５’−ビピリミジン−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの最初に溶出するエナンチオマー
絶対立体配置は未確定。
【０２９７】
【化８６】
2015508096.tif 000088
実施例３のラセミ生成物の分取によるキラルＳＦＣ分離後、表題化合物を得た。（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ、３０×２５０ｍｍ。流量８０ｍＬ／ｍｉｎ。ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ８５：１５）。ｔＲ：３．９７ｍｉｎ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ、４．６×２５０ｍｍ。流量３ｍＬ／ｍｉｎ。ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ８５：１５）。
【０２９８】
[実施例３Ｂ]
３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−４，５’−ビピリミジン−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの第２に溶出するエナンチオマー
絶対立体配置は未確定。
【０２９９】
【化８７】
2015508096.tif 000089
実施例３のラセミ生成物の分取によるキラルＳＦＣ分離後、表題化合物を得た。（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ、３０×２５０ｍｍ。流量８０ｍＬ／ｍｉｎ。ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ８５：１５）。ｔＲ：４．４９ｍｉｎ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ、４．６×２５０ｍｍ。流量３ｍＬ／ｍｉｎ。ｓｃＣＯ２／ＭｅＯＨ８５：１５）。
【実施例４】
【０３００】
（３ａＳ，７ａＳ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−ヘキサヒドロ−ベンゾオキサゾール−２−オン
【０３０１】
【化８８】
2015508096.tif 000090
ステップ４．１からの生成物（６０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、中間体Ｂ（５４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍ、２６０μＬ、０．５２ｍｍｏｌ）およびパラジウムテトラキス（１０ｍｇ、８．７μｍｏｌ）のＤＭＥ（１．５ｍＬ）中溶液をアルゴン下、密封されたバイアルの中で、８０℃で２ｈ撹拌した。反応混合物を濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＨ、９９．８：０．２→９７．５：２．５）。残渣をＤＣＭ（２ｍＬ）中に溶解し、次いでヘキサン（４ｍＬ）中で処置した。結晶を濾過し、ヘキサン（３ｍｌ）で洗浄することによって、表題化合物を得た（３６ｍｇ、４４％）。ｔＲ：１．１０ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４６６．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３０２】
ステップ４．１：（３ａＳ，７ａＳ）−３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−ヘキサヒドロ−ベンゾオキサゾール−２−オン
【０３０３】
【化８９】
2015508096.tif 000091
表題化合物を、ステップ２．２に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ４．２からの生成物を使用して調製した。反応を１００℃で１ｈ実施した。反応混合物を、Ｈｙｆｌｏを介して濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９：１→１：１）、表題化合物を得た。ｔＲ：１．２０ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３３９．２／３４１．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３０４】
ステップ４．２：（３ａＳ，７ａＳ）−ヘキサヒドロ−ベンゾオキサゾール−２−オン
【０３０５】
【化９０】
2015508096.tif 000092
（１Ｓ，２Ｓ）−２−アミノシクロヘキサノール（７５０ｍｇ、６．５１ｍｍｏｌ）および２−ニトロフェニルクロロホルメート（１３７８ｍｇ、６．８４ｍｍｏｌ）を密封されたバイアル内で、９０℃で１ｈ、ＤＣＥ（１５ｍＬ）中で、ＤＩＥＡ（２．３９ｍＬ、１３．６８ｍｍｏｌ）と共に撹拌した。反応混合物を、５０ｍＬのＥｔＯＡｃおよび５０ｍＬのＮａＨＣＯ３飽和溶液と共に分液漏斗に取った。水層を５０ｍＬのＥｔＯＡｃで洗浄した。有機層を合わせ、５０ｍＬのＨ２Ｏ、５０ｍＬのブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：７：３→３：７）、表題化合物を得た（７７０ｍｇ、５．１３ｍｍｏｌ）。ｔＲ：０．６９ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；1H NMR (400MHz, <dmso>) δ ppm 1.19 - 1.44 (m, 3 H) 1.45 - 1.61 (m, 1 H) 1.65 (d, J=9.77Hz, 1 H) 1.76 (d, J=11.34Hz, 1 H) 1.82 - 1.93 (m, 1 H) 1.93 - 2.10 (m, 1 H) 3.03 - 3.23 (m, 1 H) 3.74 (td, J=11.34, 3.52Hz, 1 H) 7.53 (br. s., 1 H)
【実施例５】
【０３０６】
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−メトキシメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３０７】
【化９１】
2015508096.tif 000093
マイクロ波バイアル内で、ステップ５．１からの生成物（１１６ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）および中間体Ｂ（９０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２．１ｍＬ）中溶液に、Ｎａ２ＣＯ３飽和溶液（０．７ｍｌ）およびＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）２．ＣＨ２Ｃｌ２（２３ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をアルゴンで５ｍｉｎバブリングした。これを、マイクロ波の照射下、１２０℃で１５ｍｉｎ撹拌した。反応混合物をＤＣＭおよび水中に取り込んだ。層を分離し、いくらかのＤＣＭで水層をもう２回抽出した。次いで有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで脱水し、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：１００％→９５％ＤＣＭ）。得た残渣を逆相フラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ：１０％→１００％ＭｅＣＮ）、表題化合物を得た（１９ｍｇ、１３％）。ｔＲ：０．９１ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４５６．１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３０８】
ステップ５．１：（Ｓ）−３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−メトキシメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３０９】
【化９２】
2015508096.tif 000094
表題化合物を、ステップ２．２に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ５．２からの生成物を使用して調製した。反応を１１５℃で８０ｍｉｎ実施した。反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ／水で取り込んだ。層を分離し、水性の層をＤＣＭで３回抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで脱水した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：１００％→６０％ヘプタン．）、表題化合物を得た（１１６ｍｇ、２２％）。ｔＲ：０．９８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３２９．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３１０】
ステップ５．２：（Ｓ）−４−メトキシメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３１１】
【化９３】
2015508096.tif 000095
ＴｓＯＨ（８００ｍｇ、４．２１ｍｍｏｌ）を、ステップ５．３からの生成物（１．０１３ｇ、４．１３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中黄色溶液に加えた。混合物をＲＴで９０ｍｉｎ撹拌した。次いでＴｓＯＨ（１４０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加え、これをＲＴで７０ｍｉｎ撹拌した。次いで溶媒を除去し、残渣をトリエチルアミン（１．４４ｍｌ、１０．３２ｍｍｏｌ）と共にＤＣＭ（６ｍＬ）中に溶解した。トリホスゲン（０．６１３ｇ、２．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）中溶液を混合物にゆっくりと加えた。反応混合物をＲＴで２ｈ３０撹拌した。反応を数滴の水でクエンチした。次いで、緩衝剤を加えて、これをｐＨ＝４に酸性化し、次いで層を分離した。水性の層を１回抽出し、いくらかのＤＣＭでもう一回抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで脱水し、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：１００％→９０％ＤＣＭ）、表題化合物を得た（２３１ｍｇ、３８％）。ＥＳＩ−ＭＳ：１３２．１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３１２】
ステップ５．３：（Ｓ）−４−メトキシメチル−２，２−ジメチル−オキサゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【０３１３】
【化９４】
2015508096.tif 000096
ＮａＨ（２６５ｍｇ、６．６３ｍｍｏｌ）を、（Ｓ）−１−Ｂｏｃ−２，２−ジメチル−４−ヒドロキシメチルオキサゾリジン（ＡｓｔａＴｅｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｂｒｉｓｔｏｌ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）（１ｇ、４．１９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）中黄色溶液に加えた。次いで、混合物を周辺温度で１５ｍｉｎ撹拌した。ヨウ化メチル（３２３μＬ、５．１９ｍｍｏｌ）を黄色懸濁液に加え、混合物をｒｔで２ｈ３０撹拌した。次いで水を加えることによって、反応をクエンチした。溶媒を除去した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：５％→１０％ＭｅＯＨ）、表題化合物を得た（１．０１３ｇ、９４％）。ＥＳＩ−ＭＳ：２４６．１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）；1H NMR (400MHz, <cdcl3>) δ ppm 1.48 (s, 9 H) 1.53 (br. s., 6 H) 3.30 (m, 1 H) 3.36 (s, 3 H) 3.41 - 3.63 (m, 2 H) 3.88 - 4.00 (m, 2 H)
【実施例６】
【０３１４】
（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３１５】
【化９５】
2015508096.tif 000097
プラスチックバイアル内で、ＲＴで４日間、ステップ６．１からの生成物（６００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液を、ＴＨＦ（７．１４ｍＬ、５７．５ｍｍｏｌ）中ＨＦ．ピリジンで処理した。次いで、反応混合物を、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）の撹拌混合物に滴加した。次いで、ｐＨ約８になるまで固体ＮａＨＣＯ３を加え、層を分離した。水性の層を１００ｍＬのＥｔＯＡｃで洗浄した。有機抽出物を合わせ、水およびブラインで洗浄した。次いで、これをＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。粗製物をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ：９９：１→９５：５）。画分を合わせ、濃縮した。残渣をＤＣＭ中で超音波処理し、次いでヘキサンを加えた。得た結晶を濾別し、フラッシュクロマトグラフィーで３回再精製することによって（ＤＣＭ／ＥｔＡＯｃ：９：１→３：７、次いでヘキサン／ＴＨＦ：９：１→１：１、次いでヘキサン／ＴＨＦ：７：３→１：１）、表題化合物を得た（２４３ｍｇ、６４％）。ｔＲ：０．８０ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４５６．６［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３１６】
ステップ６．１：（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３１７】
【化９６】
2015508096.tif 000098
表題化合物を、実施例１に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ６．２からの生成物を使用して調製した。反応を８０℃で１ｈ実施した。抽出後、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ：９５．５：０．５→９７：３）、表題化合物を得た。ｔＲ：１．４３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：６９４．５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３１８】
ステップ６．２：（４Ｓ，５Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３１９】
【化９７】
2015508096.tif 000099
表題化合物を、ステップ２．２に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ６．３からの生成物を使用して調製した。反応を１００℃で３ｈ３０実施した。反応混合物をＥｔＯＡｃで取り込み、ＮａＨＣＯ３飽和溶液およびブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：１００％→３０％ヘプタン．）、表題化合物を得た（１１６ｍｇ、２２％）。ｔＲ：１．５１ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：５６７．４／５６９．５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３２０】
ステップ６．３：（４Ｓ，５Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３２１】
【化９８】
2015508096.tif 000100
ステップ６．４からの生成物（３．２ｇ、９．３１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３２ｍｌ）中に溶解し、Ｅｔ３Ｎ（３．２５ｍｌ、２３．２９ｍｍｏｌ）で処理した。溶液をアルゴンでフラッシュし、ＲＴで５ｍｉｎ撹拌した。次いで、これをトリホスゲン（１．３８２ｇ、４．６６ｍｍｏｌ）で処理し、ＲＴで１６Ｈ撹拌した。反応をＮＨ４Ｃｌ飽和溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、ＲＴで１０ｍｉｎ撹拌した。水層を分離し、有機層を水で洗浄した。合わせた水層をＤＣＭで３回出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：１００％→５０％ヘプタン．）、表題化合物を得た（２．２２ｇ、６１％）。ｔＲ：１．２８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３８７．３［Ｍ＋１８］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３２２】
ステップ６．４：（２Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシ）−ブタン−２−オール
【０３２３】
【化９９】
2015508096.tif 000101
Ｄ−トレオニノール（２ｇ、１９．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍｌ）中に溶解し、イミダゾール（３．８９ｇ、５７．１ｍｍｏｌ）で処理し、ＲＴで５ｍｉｎ撹拌した。次いで、アルゴン下、ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ（５．１３ｍｌ、１９．９７ｍｍｏｌ）を反応液に滴加した。反応液をＲＴで１６Ｈ撹拌した。次いで、これをＥｔＯＡｃ中で希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和溶液で２回洗浄し、ブラインで１回洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：１００％→０％ヘプタン）、表題化合物を得た（３．２１ｇ、４７％）。ｔＲ：０．９８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３４４．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例７】
【０３２４】
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３２５】
【化１００】
2015508096.tif 000102
ステップ７．１からの生成物（２００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、中間体Ｂ（１３１ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍ、５２６μＬ、１．０５ｍｍｏｌ）およびパラジウムテトラキス（２４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（４ｍＬ）中溶液を、アルゴン下、８０℃で２ｈ撹拌した。反応混合物をＮａ２ＳＯ４で処理し、ＥｔＯＡｃ中で希釈し、不溶性の部分を濾別した。フィルターケーキをＥｔＯＡｃで３回洗浄し、濾液を蒸発させた。次いで、残渣をＴＨＦ中に溶解し、ＴＢＡＦ溶液（１Ｎ、３５１μＬ、０．３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＲＴで１ｈ撹拌した。溶媒を除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ：９９：１→９５：５）、表題化合物を得た。ｔＲ：０．７４ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３２６】
ステップ７．１：（Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−オキサゾリジン−２−オン
【０３２７】
【化１０１】
2015508096.tif 000103
表題化合物を、ステップ２．２に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ７．２からの生成物を使用して調製した。反応を１００℃で３ｈ実施した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９：１→６：４）、表題化合物を得た。ｔＲ：１．５３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：５５３．４／５５５．５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３２８】
ステップ７．２：（Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−オキサゾリジン−２−オン
【０３２９】
【化１０２】
2015508096.tif 000104
表題化合物を、ステップ６．４に対して記載されている手順と同様に、ただし、（Ｓ）−４−（ヒドロキシメチル）オキサゾリジン−２−オン（ＳｐｅｅｄＣｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．Ｓｈａｎｇｈａｉ）を使用し、ＤＭＦの代わりにＤＣＭを使用して調製した。反応をＲＴで１６ｈ実施した。反応混合物を水で希釈し、Ｅｔ２Ｏで２回抽出した。有機層を合わせ、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：９８：２→４：６）。残渣をヘキサンおよびＥｔ２Ｏで処理した。得た結晶を濾別することによって、表題化合物を得た。ｔＲ：１．２６ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）、1H NMR (400MHz, <dmso>) δ ppm 0.98 (s, 9 H) 3.51 - 3.63 (m, 2 H) 3.88 (dd, J=8.60, 4.30Hz, 1 H) 4.14 (dd, J=8.60, 4.69Hz, 1 H) 4.30 - 4.38 (m, 1 H) 7.37 - 7.50 (m, 6 H) 7.57 - 7.65 (m, 4 H) 7.71 (s, 1 H).
【実施例８】
【０３３０】
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−（Ｄ８−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３３１】
【化１０３】
2015508096.tif 000105
表題化合物を、実施例６に対して記載されている全体の順序と同様に、ただし、中間体Ａの代わりにステップ８．１からの生成物を使用し、Ｄ−トレオニノールの代わりにＤ−アロ−トレオニノールを使用して調製した。ｔＲ：０．７９ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４６４．５［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３３２】
ステップ８．１：４−（４，６−ジクロロ−ピリミジン−２−イル）−Ｄ８−モルホリン
【０３３３】
【化１０４】
2015508096.tif 000106
２，４，６−トリクロロピリミジンを、Ｅｔ３ＮおよびＤ８−モルホリンと共にＥｔＯＨ中に溶解した。反応混合物をＲＴで１Ｈ撹拌した。次いで、これをＮａＨＣＯ３飽和溶液で希釈し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄した。次いで、これをＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：０％ヘキサン→４０％）。ｔＲ：０．９４ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：２４２．３／２４４．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例９】
【０３３４】
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−（２−ヒドロキシ−エチル）−オキサゾリジン−２−オン
【０３３５】
【化１０５】
2015508096.tif 000107
表題化合物を、実施例６に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ９．１からの生成物を使用して調製した。抽出をＤＣＭ中で実施した。残渣を分取ＨＰＬＣで精製し（Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ）、次いでフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００：０→９５：５）。ｔＲ：０．７８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４５６．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３３６】
ステップ９．１：（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−［１，３］オキサジナン−２−オン
【０３３７】
【化１０６】
2015508096.tif 000108
表題化合物を、実施例１に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ９．２からの生成物を使用して調製した。反応を１２０℃で１５ｍｉｎ実施した。反応混合物をＤＣＭ中に溶解し、Ｈ２Ｏで抽出した。有機層を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、８：２→４：６）。ｔＲ：１．５４ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：６９４．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３３８】
ステップ９．２：（Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−［１，３］オキサジナン−２−オン
【０３３９】
【化１０７】
2015508096.tif 000109
表題化合物を、ステップ２．２に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ９．３からの生成物を使用して調製した。反応を１１５℃で２．５ｈ実施した。混合物を濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ）で精製し、次いでフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、９：１→０：１００）。ｔＲ：１．４９ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：５６７．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３４０】
ステップ９．３：（Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−［１，３］オキサジナン−２−オン
【０３４１】
【化１０８】
2015508096.tif 000110
ステップ９．４からの生成物（９００ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）中溶液に、アルゴン下で、油中ＮａＨ６０％（１６０ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物をｒｔで４ｈ撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏで抽出した。有機層を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→０：１００）。ｔＲ：１．２３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３７０．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３４２】
ステップ９．４：［（Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−３−ヒドロキシ−プロピル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【０３４３】
【化１０９】
2015508096.tif 000111
ステップ９．５からの生成物（４０ｇ、７３ｍｍｏｌ）のＴＢＭＥ（４００ｍＬ）中溶液に、０℃で、ＬｉＢＨ４（ＴＨＦ中２Ｍ、７４ｍＬ、１４６ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物を０℃で１０ｍｉｎ撹拌し、次いでｒｔで温め、５ｈ撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、次いで０．５Ｍクエン酸溶液でクエンチした。混合物をＴＢＭＥで抽出した。有機層を脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。生成物をさらなる精製なしで使用した。
【０３４４】
ステップ９．５：（Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシ）−酪酸ベンジルエステル
【０３４５】
【化１１０】
2015508096.tif 000112
表題生成物を、ステップ６．４に対して記載されている手順と同様に調製した。Ｒｆ：０．７（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、８：２）
【０３４６】
ステップ９．６：（Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−酪酸ベンジルエステル
【０３４７】
【化１１１】
2015508096.tif 000113
Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−４−ベンジルエステル（１００ｇ、３０９ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１．８Ｌ）中溶液に、−２０℃で、ＮＭＭ（３４ｍＬ、３０９ｍｍｏｌ）を加え、次いでイソ−ブチルクロロホルメート（４０ｍＬ、３０９ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物を−２０℃で２０ｍｉｎ撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を−２０℃に冷却した。ＮａＢＨ４（１７．５ｇ、４６３ｍｍｏｌ）を−２０℃で少しずつ加えた。混合物を温め、ｒｔで１ｈ撹拌した。混合物を２０％クエン酸溶液でクエンチし、次いでＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＮａＨＣＯ３溶液、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。次のステップに対して、生成物をさらなる精製なしで使用した。
【実施例１０】
【０３４８】
（４Ｓ，５Ｒ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３４９】
【化１１２】
2015508096.tif 000114
表題化合物を、実施例６に対して記載されている全体の順序と同様に、ただし、中間体Ａの代わりにステップ１０．１からの生成物を使用し、Ｄ−トレオニノールの代わりにＤ−アロ−トレオニノールを使用して調製した。混合物をＮａ２ＣＯ３の飽和溶液に滴加した。添加後、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液を加えた（最終ｐＨは約７〜８であった。これを水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。残渣を分取ＨＰＬＣで精製した（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎ  Ｆｉｒｅ  Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ；０．１％ＴＦＡ−水／アセトニトリル；勾配、２０ｍｉｎでアセトニトリル５〜１００％）。残渣をＥｔ２Ｏ／ヘキサン（３／１）中で再結晶させた。結晶を濾別し、ヘキサンで洗浄することによって、表題化合物を得た。ｔＲ：２．８９ｍｉｎ（ＨＰＬＣ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４７０．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）；ｍ．ｐ．２１７．７℃（開始）。
【０３５０】
ステップ１０．１：（Ｓ）−４−（４，６−ジクロロ−ピリミジン−２−イル）−３−メチル−モルホリン
【０３５１】
【化１１３】
2015508096.tif 000115
２，４，６−トリクロロピリミジン（１００ｍｇ、０５３ｍｍｏｌ）をＤＩＰＥＡ（２８０μＬ、１．６ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−３−メチルモルホリン（５４ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）と共にジオキサン（２ｍＬ）中に溶解した。マイクロ波照射下で、反応混合物を１３０℃で１５ｍｉｎ温めた。次いで、これをＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣで精製することによって（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎ  Ｆｉｒｅ  Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ；０．１％ＴＦＡ−水／アセトニトリル；勾配、２０ｍｉｎでアセトニトリル５〜１００％）、表題化合物を得た（４５ｍｇ、３４％）。ｔＲ：３．７０ｍｉｎ（ＨＰＬＣ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：２４８．２／２５０．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例１１】
【０３５２】
（比較目的のため）：３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−オキサゾリジン−２−オン
【０３５３】
【化１１４】
2015508096.tif 000116
表題化合物を、実施例５（ステップ５．１を含む）と同様に、ただし、ステップ１１．１からの生成物を使用して調製した。反応を１００℃で１ｈ実施した。抽出をＥｔＯＡｃ中で実施した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→０：１００）。ｔＲ：０．８７ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４１２．４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３５４】
ステップ１１．１：３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−オキサゾリジン−２−オン
【０３５５】
【化１１５】
2015508096.tif 000117
表題化合物を、ステップ２．２に対して記載されている全体の順序と同様に、ただし、オキサゾリジン−２−オンを使用して調製した。ｔＲ：０．９３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：２８５．５／２８７．４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例１２】
【０３５６】
ギ酸（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−メチル−２−オキソ−オキサゾリジン−４−イルメチルエステル
【０３５７】
【化１１６】
2015508096.tif 000118
実施例１８の化合物（４７ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）をギ酸（８０μＬ、２．０９ｍｍｏｌ）中に溶解し、５℃で４日間保存した。次いで、これをＲＴまで温め、これを２日間保存した。次いでこれをＥｔＯＡｃで取り込み、ＮａＨＣＯ３飽和溶液およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣで精製することによって（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎ  Ｆｉｒｅ  Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ；０．１％ＴＦＡ−水／アセトニトリル；勾配、２０ｍｉｎでアセトニトリル５〜７０％）、表題化合物を得た（５７ｍｇ、８０％）。ｔＲ：０．８８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４８４．４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例１３】
【０３５８】
（Ｓ）−３−［２’−アミノ−２−（（Ｓ）−３−メチル−モルホリン−４−イル）−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル］−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３５９】
【化１１７】
2015508096.tif 000119
表題化合物を、実施例１１に対して記載されている全体の順序と同様に、ただし、中間体Ａの代わりにステップ１０．１からの生成物を使用し、オキサゾリジン−２−オンの代わりに（Ｓ）−４−メチル−２−オキサゾリジノンを使用して調製した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ：９９．８／０．２→９８／２）、次いで分取ＨＰＬＣで精製することによって（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎ  Ｆｉｒｅ  Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ；０．１％ＴＦＡ−水／アセトニトリル；勾配、２０ｍｉｎでアセトニトリル５〜１００％）、表題化合物を得た（３５ｍｇ、３２％）。ｔＲ：０．９８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４４０．１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例１４】
【０３６０】
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３６１】
【化１１８】
2015508096.tif 000120
表題化合物を、実施例６に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ１４．１からの生成物を使用して調製した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００：０→９５：５）。ｔＲ：０．７７ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４４２．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３６２】
ステップ１４．１：（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−オキサゾリジン−２−オン
【０３６３】
【化１１９】
2015508096.tif 000121
表題化合物を、実施例５に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ１４．２からの生成物を使用して調製した。反応を、油浴内で、１００℃で１ｈ実施した。抽出をＥｔＯＡｃ中で実施した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→０：１００）。ｔＲ：１．４０ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：６８０．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３６４】
ステップ１４．２：（Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−３−（６−クロロ−２−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−オキサゾリジン−２−オン
【０３６５】
【化１２０】
2015508096.tif 000122
表題化合物を、ステップ２．２に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ１４．３からの生成物を使用して調製した。抽出後、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→４０：６０）。ｔＲ：１．４９ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：５５３．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３６６】
ステップ１４．３：（Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−オキサゾリジン−２−オン
【０３６７】
【化１２１】
2015508096.tif 000123
ステップ１４．４からの生成物（２．７２ｇ、８．２７ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２．８８ｍＬ、２０．６７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ中溶液に、アルゴン下でトリホスゲン（９８２ｍｇ、３．３１ｍｍｏｌ）を滴加し、混合物をｒｔで５ｈ撹拌した。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチした。有機層を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００：０→０：１００）。ｔＲ：１．２１ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３７３．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３６８】
ステップ１４．４：（Ｓ）−１−アミノ−３−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシ）−プロパン−２−オール
【０３６９】
【化１２２】
2015508096.tif 000124
表題化合物を、ステップ６．４に対して記載されている手順と同様に、ただし、（Ｓ）−３−アミノプロパン−１，２−ジオールを使用し、イミダゾールの代わりにＥｔ３Ｎを使用して調製した。抽出後、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００：０→９０／１０）。ｔＲ：０．９３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３３０．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例１５】
【０３７０】
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３７１】
【化１２３】
2015508096.tif 000125
表題化合物を、実施例６に対して記載されている全体の順序と同様に、ただし、Ｄ−トレオニノールの代わりにステップ１５．１からの生成物を使用して調製した。ｔＲ：０．９８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３４４．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３７２】
ステップ１５．１：（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ブタン−１，２−ジオール
【０３７３】
【化１２４】
2015508096.tif 000126
表題化合物を、ステップ１９．１の手順と同様に、ただし、ステップ１５．２からの生成物を使用して調製した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ：９９．８／０．２→９８／２）、次いで分取ＨＰＬＣで精製することによって（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎ  Ｆｉｒｅ  Ｃ１８、３０ｘ１００ｍｍ、５μｍ；０．１％ＴＦＡ−水／アセトニトリル；勾配、２０ｍｉｎでアセトニトリル５〜１００％）、表題化合物を得た（３５ｍｇ、３２％）。ｔＲ：０．９８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４４０．１［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３７４】
ステップ１５．２：Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（Ｓ）−１−（（Ｒ）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）−エチル］−ヒドロキシルアミン
【０３７５】
【化１２５】
2015508096.tif 000127
表題化合物は、ステップ１９．２中に形成された第２の異性体である（１．０７ｇ、５７％）。ｔＲ：０．９１ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：２５２．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例１６】
【０３７６】
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３７７】
【化１２６】
2015508096.tif 000128
表題化合物を、実施例１１と同様に、ただし、（Ｒ）−４−メチル−２−オキサゾリジノンの代わりにステップ１６．１からの生成物を使用して調製した。反応を１００℃で１Ｈ実施した。反応混合物をＥｔＯＡｃで取り込んだ。これを、ＮａＨＣＯ３飽和溶液で２回、ブラインで１回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：０％→８５％ＥｔＯＡｃ）、表題化合物を得た（９．６ｍｇ、５８％）。．ｔＲ：０．９４ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４２６．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【０３７８】
ステップ１６．１：（Ｓ）−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３７９】
【化１２７】
2015508096.tif 000129
表題化合物を、ステップ６．３に対して記載されている手順と同様に、ただし、（Ｓ）−１−アミノプロパン−２−オールを使用して調製した。反応をＲＴで３Ｈ実施した。反応をＮＨ４Ｃｌ飽和溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、ＲＴで１０ｍｉｎ撹拌した。水層を分離し、有機層を水で洗浄した。合わせた水層をＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：０％→１００％ＥｔＯＡｃ）、表題化合物を得た（３８ｍｇ、９％）。1H NMR (400MHz, <DMSO>) δ ppm 1.27 (d, J=6.25Hz, 3 H) 2.94 - 3.08 (m, 1 H) 3.48 - 3.58 (m, 1 H) 4.62 (m, 1 H) 7.37 (br. s., 1 H)
【実施例１７】
【０３８０】
（Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−Ｄ８−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０３８１】
【化１２８】
2015508096.tif 000130
表題化合物を、実施例４に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ１７．１からの生成物を使用して調製した。完了後、反応混合物を、セライトを介して濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ、９９．５：０．５→９８：２）。残渣をＤＣＭ中で粉砕し、および、およびヘキサンで洗浄することによって、表題化合物を得た。ｔＲ：０．８９ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４３４．４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）；Ｒｆ：０．６７（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ、９５：５）。
【０３８２】
ステップ１７．１：（Ｓ）−３−（６−クロロ−２−Ｄ８−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３８３】
【化１２９】
2015508096.tif 000131
表題化合物を、ステップ２．２に対して記載されている手順と同様に、ただし、ステップ８．１からの生成物および（Ｓ）−４−メチル−２−オキサゾリジノンを使用して調製した。抽出をＤＣＭ中で実施した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、９：１→７：３）。ｔＲ：０．９７ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：３０７．３／３０９．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例１８】
【０３８４】
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−４−ヒドロキシメチル−５−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３８５】
【化１３０】
2015508096.tif 000132
表題化合物を、実施例６に対して記載されている全体の順序と同様に、ただし、Ｄ−トレオニノールの代わりにＤ−アロ−トレオニノールを使用して調製した。反応をＲＴで３３Ｈ実施した。混合物をＮａ２ＣＯ３飽和溶液に滴加した。添加後、ｐＨは約７〜８であった。これを水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。残渣を分取ＨＰＬＣで精製した（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎ  Ｆｉｒｅ  Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ；０．１％ＴＦＡ−水／アセトニトリル；勾配、２０ｍｉｎでアセトニトリル５〜６０％）。画分を合わせ、５％ＮａＨＣＯ３溶液で塩基性化した。生成物が沈殿し、これを濾別した。残留するパラジウムを排除するため、生成物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（４／１）中に溶解し、ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓのＭＰ−チオールのＳＰＥカートリッジに通し、次いで溶媒を蒸発させた。本方法に基づきいくつかのバッチを生成し、いくつかのワークアップにより、以下の通り結晶性物質を得た。
【０３８６】
バッチＡ：
このバッチの調製のため、生成物は、ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓのＭＰ−チオールのＳＰＥカートリッジに通さなかった。分取ＨＰＬＣ後に得た純粋な画分を合わせ、ＮａＨＣＯ３で処理した。ＣＨ３ＣＮを蒸発させると、この時点で生成物が結晶化した。生成物を濾過で収集し、水で洗浄し、乾燥させることによって、白色の固体として表題化合物を得た。ｍ．ｐ．２２１．３℃（開始）。
【０３８７】
バッチＢ：
このバッチの調製のため、生成物は、ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓのＭＰ−チオールのＳＰＥカートリッジに通さなかった。分取ＨＰＬＣ後に得た純粋な画分を合わせ、固体ＮａＨＣＯ３で処理した。ＣＨ３ＣＮを蒸発させると、この時点で生成物が結晶化した。水性混合物を冷蔵庫内で１ｈ保管し、濾過し、水で洗浄し、ＨＶ下で一晩乾燥させることによって、白色の固体を得た、ｍ＝２９８ｍｇ。ｍ．ｐ．２４９．９℃（開始）
【０３８８】
バッチＣ：
このバッチの調製のため、生成物は、ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓのＭＰ−チオールのＳＰＥカートリッジに通さなかった。分取ＨＰＬＣ後に得た純粋な画分を合わせ、蒸発させた。残渣をＣＨ３ＣＮ中に取り込み、次いで０．１％ＴＦＡを含有する水を加え、続いて固体ＮａＨＣＯ３を加えた。溶液を濃縮し、沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させることによって、白色の固体として表題生成物を得た。ｍ．ｐ．２３７．９℃（開始）
【０３８９】
バッチＤ：
ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓのＭＰ−チオールのＳＰＥカートリッジに通した後、溶媒を蒸発させた。残渣をＣＨ３ＣＮ中に溶解し、次いで同じ量の水で希釈した。ＣＨ３ＣＮを蒸発させ、生成物の結晶化の直前に、バッチＢのいくらかの結晶を加えた。次いで、ＣＨ３ＣＮを完全に蒸発させ、懸濁液を冷蔵庫の中で冷却した。次いでこれを濾過し、収集し、ＨＶ下で一晩乾燥させることによって、白色の固体として表題生成物を得た、ｍ．ｐ．２５９．０℃（開始）
【０３９０】
バッチＥ：
バッチＣに対して記載されている手順と同じ手順であるが、ただし、バッチＤのいくらかの結晶を加えることによって、結晶化を誘発させた。表題生成物を白色の固体として得た、ｍ．ｐ．２５８．８℃（開始）。
【実施例１９】
【０３９１】
（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−４−メチル−オキサゾリジン−２−オン
【０３９２】
【化１３１】
2015508096.tif 000133
表題化合物を、実施例６に対して記載されている全体の順序と同様に、ただし、Ｄ−トレオニノールの代わりにステップ１９．１からの生成物を使用して調製した。反応をＲＴで１６Ｈ３０実施した。混合物をＮａ２ＣＯ３の飽和溶液に滴加した。添加後、これを水で希釈し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。残渣を、分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎ  Ｆｉｒｅ  Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ；０．１％ＴＦＡ−水／アセトニトリル；勾配、２０ｍｉｎでアセトニトリル５〜８０％）で精製することによって、表題化合物を得た（１６．３ｍｇ、７５％）。ｔＲ：２．７９ｍｉｎ（ＨＰＬＣ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４５６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９３】
ステップ１９．１：（２Ｓ，３Ｓ）−３−アミノ−ブタン−１，２−ジオール
【０３９４】
【化１３２】
2015508096.tif 000134
ステップ１９．２からの生成物をＥｔＯＨ中の溶液中のＨＣｌの中で、ＲＴで２Ｈ撹拌した。溶媒を除去することによって、ＨＣｌ塩として表題化合物を得た（３０３ｍｇ、１００％）。1H NMR (400MHz, <dmso>) δ ppm 1.08 (d, J=6.65Hz, 3 H) 3.18 - 3.33 (m, 1 H) 3.33 - 3.45 (m, 1 H) 3.61 - 3.72 (m, 1 H) 7.85 (br. s., 2 H)
【０３９５】
ステップ１９．２：（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）−エチルアミン
【０３９６】
【化１３３】
2015508096.tif 000135
ステップ１９．３からの生成物（生成物２、最終溶出、５３８ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）をＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ）と共にＡｃＯＨ（２５ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を、Ｈ２条件下、ＲＴで１１Ｈ撹拌した。次いで、これをセライト上で濾過し、次いで溶媒を除去することによって、表題化合物を得た（３１１ｍｇ、１００％）。1H NMR (400MHz, <dmso>) δ ppm 0.90 - 1.04 (m, 3 H) 1.16 - 1.38 (m, 6 H) 2.76 - 2.90 (m, 1 H) 3.75 (dd, J=13.86, 7.22Hz, 2 H) 3.90 (br. s., 1 H); tR: 3.13 min (HPLC 1).
【０３９７】
ステップ１９．３：Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（Ｒ）−１−（（Ｓ）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）−エチル］−ヒドロキシルアミンおよびＮ−ベンジル−Ｎ−［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）−エチル］−ヒドロキシルアミン
【０３９８】
【化１３４】
2015508096.tif 000136
ステップ１９．４からの生成物の８０ｍｌのＥｔ２Ｏ中のよく撹拌した溶液（１．４８ｇ（６．２９ｍｍｏｌ））を、ヘキサン中６．２９ｍｌ（６．２９ｍｍｏｌ）の１Ｍ  Ｅｔ２ＡｌＣｌに一度に加え、撹拌を１５ｍｉｎ継続した。次いで、混合物を−６０℃に冷却し、Ｅｔ２Ｏ中の６．２９ｍｌ（１８．８７ｍｍｏｌ）の３Ｍ臭化メチルマグネシウムで処理した。混合物を−６０℃で２ｈ撹拌し、次いで夜の間に撹拌下で、ゆっくりとＲＴまで温めた。その後、反応物をＮａＯＨ（２Ｍ、４０ｍｌ）で処理した。ＲＴで１５ｍｉｎ撹拌後、混合物をＥｔ２Ｏと共に抽出した（３×１２０）。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、真空下で濃縮した。残渣をＭｅＯＨ中に溶解し、逆相分取ＨＰＬＣ、８回の注入により精製した（２０ｍｉｎで、Ｈ２Ｏ［＋０．１％ＴＦＡ］／ＣＨ３ＣＮ９７：３〜５０：５０）：
−  画分１〜３を一緒に収集し、約２ｇのＮａＨＣＯ３で塩基性化してから、濃縮した。結果として得た層を２×１５０ｍｌのＥｔ２Ｏで抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発乾燥させることによって、１．０１ｇの無色の油を得た。これをゆっくりと結晶化させた（１ＨＮＭＲにより純度約９９％；ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２．３６；ＥＳＩ−ＭＳ：２５２．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １））−＞生成物１
−  画分５〜７を一緒に収集し、約２ｇのＮａＨＣＯ３で塩基性化してから、濃縮した。結果として得た懸濁液を２×１５０ｍｌのＥｔ２Ｏで抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発乾燥させることによって、３６３ｍｇの白色の固体を得た（１ＨＮＭＲによる純度約９９％；ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２．４４；ＥＳＩ−ＭＳ：２５２．３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １））−＞生成物２。
【０３９９】
ステップ１９．４：（Ｓ，Ｚ）−Ｎ−（（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチレン）−１−フェニルメタンアミンオキシド
【０４００】
【化１３５】
2015508096.tif 000137
１．５０ｇ（１１．５３ｍｍｏｌ）（Ｒ）−２，２−ジメチル−１．３−ジオキソラン−４−カルボキサルデヒド（Ｆｌｕｏｒｏｃｈｅｍ、Ｈａｄｆｉｅｌｄ、ＵＫ）を６０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、１．６４ｇ（１１．５３ｍｍｏｌ）の硫酸ナトリウムで処理した。反応混合物をアルゴンでフラッシュし、１．４２ｇ（１１．５３ｍｍｏｌ）のＮ−ベンジル−ヒドロキシルアミン（市販の塩酸塩から調製）の２０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中溶液で処理した。反応混合物を、アルゴン下、ＲＴで１６．５ｈ撹拌し、次いで濾過した。シリカゲルを濾液に加え、あらかじめ吸収させてから、シリカゲル上でのクロマトグラフィーで精製した（勾配：３０ｍｉｎでヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ０％〜１００％）。Ｆｒ．２０〜８０を収集し、蒸発乾燥させ、真空下で一晩乾燥させることによって、１．４８ｇの白色の固体を得た（ＨＰＬＣによる純度約１００％、Ｒｔ＝１．４３）；ＥＳＩ−ＭＳ：２３６．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １））
【実施例２０】
【０４０１】
（Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリン−４−イル−４’−トリフルオロメチル−［４，５’］ビピリミジニル−６−イル）−５−ヒドロキシメチル−オキサゾリジン−２−オン
【０４０２】
【化１３６】
2015508096.tif 000138
表題化合物を、実施例６に対して記載されている全体の順序と同様に、ただし、Ｄ−トレオニノールの代わりに（Ｒ）−３−アミノプロパン−１，２−ジオールを使用して調製した。反応をＲＴで１６Ｈ実施した。次いで、反応混合物をＮａＨＣＯ３で慎重にクエンチした。次いで、これをＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和溶液で２回およびブラインで１回洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ：０％→１０％ＭｅＯＨ）、表題化合物を得た（２２．８ｍｇ、３８％）。ｔＲ：０．７７ｍｉｎ（ＨＰＬＣ  １）；ＥＳＩ−ＭＳ：４４２．２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  １）。
【実施例２１】
【０４０３】
（３ａＲ，６ａＲ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］オキサゾール−２（３Ｈ）−オン
【０４０４】
【化１３７】
2015508096.tif 000139
（３ａＲ，６ａＲ）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］オキサゾール−２（３Ｈ）−オン（１００ｍｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）、中間体Ｂ（１１５ｍｇ、０．３９８ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（１９５ｍｇ、０．９１８ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ／Ｈ２Ｏ（２．２ｍＬ）中溶液を、アルゴン下、８０℃で１．５ｈ撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ中で希釈し、飽和したＮａＨＣＯ３で抽出した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  ７０：３０→０：１００）、無色の固体として、表題化合物を得た（８８ｍｇ、６２％）：ｔＲ＝０．８４ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４５４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４０５】
ステップ２１．１：（３ａＲ，６ａＲ）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］オキサゾール−２（３Ｈ）−オン
【０４０６】
【化１３８】
2015508096.tif 000140
（３ａＲ，６ａＲ）−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］オキサゾール−２（３Ｈ）−オン（５００ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）、４−（４，６−ジクロロピリミジン−２−イル）モルホリン（１０８８ｍｇ、４．６５ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２．１４ｇ、６．５８ｍｍｏｌ）のジオキサン（２０ｍＬ）中溶液に、アルゴンで脱気後、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（１５７ｍｇ、０．２７１ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（７０．９ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を８５℃で６ｈ温めた。反応混合物を１０％のＮａＨＣＯ３水溶液に加え、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をＭｅＯＨ中で一晩粉砕し、濾別し、乾燥させることによって、無色の固体として、表題化合物を得た（１．１２ｇ、８７％）：ｔＲ＝０．９２ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：３２７、３２９［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４０７】
ステップ２１．２：（３ａＲ，６ａＲ）−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］オキサゾール−２（３Ｈ）−オン
【０４０８】
【化１３９】
2015508096.tif 000141
（３Ｒ，４Ｒ）−４−アミノテトラヒドロフラン−３−オール（１．１ｇ、７．８８ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（４．５４ｍｌ、２６．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中に溶解した（ビス（トリクロロメチル）カーボネート（１．７５ｇ、５．９１ｍｍｏｌ）を、ＲＴで３０ｍｉｎの期間にわたり加えた。２５℃で０．５ｈ撹拌した後、反応混合物をＫ２ＣＯ３水溶液に加え、１ｈ撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２を蒸発させた。水相をＥｔ２Ｏで洗浄し、その後蒸発乾燥させた。残渣をＥｔＯＨ／ＴＨＦ１：１と共に粉砕し、シリカゲルのプラグを介して、無機塩を濾過で除去し、濾液を濃縮することによって、ベージュ色の固体として表題化合物を得た（９３０ｍｇ、９０％）：ＥＳＩ−ＭＳ：１４７［Ｍ＋ＮＨ］＋。
【実施例２２】
【０４０９】
（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−ヒドロキシヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン
【０４１０】
【化１４０】
2015508096.tif 000142
（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン（８１０ｍｇ、１．２５３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２ｍＬ）中溶液に、ＴＨＦ（１．０ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）中１Ｍ  ＴＢＡＦを０℃で滴加した。反応混合物を０℃で３０ｍｉｎおよびＲＴで２ｈ撹拌してから、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘキサン−ＴＨＦ６０：４０→０：１００）。残渣をＥｔ２Ｏ中で粉砕し、濾過し、乾燥させた。残渣を分取ＨＰＬＣで精製することによって（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎ  Ｆｉｒｅ  Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ；０．１％ＴＦＡ−水／アセトニトリル；勾配、２０ｍｉｎでアセトニトリル５〜１００％）、表題化合物を得た（４３０ｍｇ、７２％）；ｔＲ＝０．９３ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝０．８１ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４６８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４１１】
ステップ２２．１：（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン
【０４１２】
【化１４１】
2015508096.tif 000143
表題化合物を、実施例２１に対して記載されている手順と同様に、（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−６−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オンおよび中間体Ｂから、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２の代わりにＰｄ（ＰＰｈ３）４を使用し、Ｋ３ＰＯ４の代わりにＮａ２ＣＯ３を使用して調製することによって、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンからの結晶化後、白色の固体として表題化合物を得た：ｔＲ＝１．６２ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．４７ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：５８２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４１３】
ステップ２２．２：（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−６−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン
【０４１４】
【化１４２】
2015508096.tif 000144
表題化合物を、ステップ２１．１に対して記載されている手順と同様に、（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−６−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オンおよび中間体Ａから調製した：ｔＲ＝１．７６ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．５８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４５５、４５７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４１５】
ステップ２２．３：（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−６−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン
【０４１６】
【化１４３】
2015508096.tif 000145
（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−６−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（（２−ニトロフェニル）スルホニル）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン（１．４７ｇ、３．３２ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２．１６４ｇ、６．６４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５ｍＬ）中懸濁液に、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（０．９２１ｇ、５．６５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで１６ｈ撹拌した。反応混合物を蒸発させ、残渣をＮａＨＣＯ３飽和溶液中に懸濁させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製後（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９０：１０→５０：５０）、黄色の油として、表題化合物を得た（０．８４ｇ、９８％）：ＴＬＣ（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．２８。
【０４１７】
ステップ２２．４：（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−６−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（（２−ニトロフェニル）−スルホニル）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン
【０４１８】
【化１４４】
2015508096.tif 000146
（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−６−ヒドロキシ−３−（（２−ニトロフェニル）スルホニル）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン（１．２ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）および２，６−ルチジン（０．８５１ｍＬ、７．３１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中溶液に、０℃でｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（１．０９１ｍＬ、４．７５ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を０℃で１ｈ、続いてＲＴで２ｈ撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、２０％のＮａＨ２ＰＯ４水溶液およびＨ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ／ヘプタンからの結晶化後、白色の固体として表題化合物を得た（１．５ｇ、８８％）：ＴＬＣ（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．５４；ｔＲ＝１．５８ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．４３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４６０［Ｍ＋ＮＨ４］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４１９】
ステップ２２．５：（３ａＲ＊，６Ｒ＊，６ａＲ＊）−６−ヒドロキシ−３−（（２−ニトロフェニル）スルホニル）ヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オン
【０４２０】
【化１４５】
2015508096.tif 000147
ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ＊，２Ｓ＊，５Ｓ＊）−６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−イル（（２−ニトロフェニル）スルホニル）カルバメート（２．０ｇ、５．１０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中溶液に、アンバーリスト１５（４．０ｇ）を加え、結果として得た懸濁液を２５℃で１．５ｈ撹拌した。反応混合物を濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘプタン−ＥｔＯＡｃ  ９０：１０→ＥｔＯＡｃ）後、ベージュ色の固体として表題化合物を得た（１．２４ｇ、７３％）：ＴＬＣ（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  １：２）Ｒｆ＝０．３６；ｔＲ＝０．８０ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝０．７７ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：３４６［Ｍ＋ＮＨ４］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４２１】
ステップ２２．６：（ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ＊，２Ｓ＊，５Ｓ＊）−６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−イル（（２−ニトロフェニル）スルホニル）カルバメート
【０４２２】
【化１４６】
2015508096.tif 000148
ｔｅｒｔ−ブチルシクロペンタ−２−エン−１−イル（（２−ニトロフェニル）スルホニル）カルバメート（２．７５ｇ、７．４６ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ３（１．２５４ｇ、１４．９３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中懸濁液に、メタクロロ過安息香酸（２．５８ｇ、１４．９３ｍｍｏｌ）を一度に加えた。結果として得た反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、２０％のＮａ２ＳＯ３水溶液、ＮａＨＣＯ３飽和溶液および水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。ＥｔＯＡｃからの結晶化後、白色結晶として表題化合物を得た（２．０１ｇ、６８％）：ＴＬＣ（ヘプタン−ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．４８；ｔＲ＝１．２０ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．１２ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：３２９［Ｍ−イソブチレン］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４２３】
ステップ２２．７：（ｔｅｒｔ−ブチルシクロペンタ−２−エン−１−イル（（２−ニトロフェニル）スルホニル）カルバメート
【０４２４】
【化１４７】
2015508096.tif 000149
トリフェニルホスフィン（３．０９ｇ、１１．７７ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル２−ニトロフェニルスルホニルカルバメート（３．４０ｇ、１１．２３ｍｍｏｌ）およびシクロペンタ−２−エノール（０．９００ｇ、１０．７０ｍｍｏｌ）のトルエン（６０ｍＬ）中懸濁液に、−２０℃でアゾジカルボン酸ジエチル（１．９４８ｍＬ、１２．３０ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を−２０℃で２ｈ、続いて０℃で３ｈ撹拌した。反応混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９５：５→３：１）後、白色の固体として表題化合物を得た（２．７９ｇ、６７％）：ｔＲ＝１．３４ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．２４ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：３８６Ｍ＋ＮＨ４］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４２５】
[実施例２２Ａ]
（３ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−および（３ａＳ，６Ｓ，６ａＳ）−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−ヒドロキシヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オンのＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ上で最初に溶出するエナンチオマー
絶対立体配置は未確定。
実施例２２のラセミ生成物の分取によるキラルＨＰＬＣ分離後、表題化合物を得た。（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ  ２０μｍ５×５００ｍｍ。流量７０ｍＬ／ｍｉｎ。ヘプタン／ＥｔＯＨ／ＤＥＡ２０：８０：０．０１）。ｔＲ：１７．７ｍｉｎ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ、４．６×２５０ｍｍ。流量１．２ｍＬ／ｍｉｎ。ヘプタン／ＥｔＯＨ７０：３０）。
【０４２６】
[実施例２２Ｂ]
（３ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−および（３ａＳ，６Ｓ，６ａＳ）−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−６−ヒドロキシヘキサヒドロ−２Ｈ−シクロペンタ［ｄ］オキサゾール−２−オンのＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ上で第２に溶出するエナンチオマー
絶対立体配置は未確定。
実施例２２のラセミ生成物の分取によるキラルＨＰＬＣ分離後、表題化合物を得た。（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ  ２０μｍ５×５００ｍｍ。流量７０ｍＬ／ｍｉｎ。ヘプタン／ＥｔＯＨ／ＤＥＡ２０：８０：０．０１）。ｔＲ：２３．３ｍｉｎ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ、４．６×２５０ｍｍ。流量１．２ｍＬ／ｍｉｎ。ヘプタン／ＥｔＯＨ７０：３０）。
【実施例２３】
【０４２７】
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４２８】
【化１４８】
2015508096.tif 000150
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）エチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン（２．１ｇ、３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、ＴＨＦ（３ｍＬ、３ｍｍｏｌ）中１Ｍ  ＴＢＡＦを０℃で滴加した。反応混合物を０℃で１ｈ撹拌してから、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９０：１０：１→０：１００：１０）。精製した生成物をＭｅＯＨから再結晶化することによって、白色の固体として、表題化合物を得た（１．１７ｇ、８３％）：ｔＲ＝０．８０ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝０．８２ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４７０［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４２９】
ステップ２３．１：（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）エチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４３０】
【化１４９】
2015508096.tif 000151
表題化合物を、実施例２２．１に対して記載されている手順と同様に、４Ｓ，５Ｒ）−５−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）エチル）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンおよび中間体Ｂから調製することによって、ＭｅＯＨからの結晶化後、表題化合物を得た：ｔＲ＝１．７２ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．５５ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：７０８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４３１】
ステップ２３．２：（４Ｓ，５Ｒ）−５−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）エチル）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４３２】
【化１５０】
2015508096.tif 000152
表題化合物を、ステップ２１．１に対して記載されている手順と同様に、５−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）エチル）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の４：１混合物と中間体Ａとから調製することによって、ＴＨＦ／ＭｅＯＨからの２回の再結晶化により（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体を除去した後、表題化合物の（４Ｓ，５Ｒ）−ジアステレオ異性体のみを得た：ｔＲ＝１．８８ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．６４ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：５８１、５８３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）；1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 1.08 (s, 9H), 1.36 (d, 3H), 2.02 (m, 2H), 3.70-3.90 (m,10H), 4.82 (m, 2H), 7.40-7.50 (m, 6H), 7.51 (s, 1H), 7.67 (m, 4H).
【０４３３】
ステップ２３．３：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）エチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４３４】
【化１５１】
2015508096.tif 000153
５−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）エチル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン（４．１ｇ、７．８ｍｍｏｌ）の（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の４：１混合物のアセトニトリル（４０ｍＬ）中溶液に、（ＮＨ４）２Ｃｅ（ＮＯ３）６（１０．７１ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中溶液を０℃で加えた。反応混合物を０〜５℃で４ｈ撹拌した。混合物を氷水に加え、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をＮａＨＣＯ３飽和溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  １０：１→ＥｔＯＡｃ）の後、ジアステレオマーの、４：１混合物として表題化合物を得た（２．２ｇ、７１％）：ＴＬＣ（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．２３；ｔＲ＝１．４７ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．３３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４０１［Ｍ＋ＮＨ４］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４３５】
ステップ２３．４：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）エチル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４３６】
【化１５２】
2015508096.tif 000154
５−（２−ヒドロキシエチル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン（２．６５ｇ、１０ｍｍｏｌ）の（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオマーの４：１混合物のＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液に、イミダゾール（１．７３ｇ、２５ｍｍｏｌ）およびＴＢＤＰＳＣｌ（３．５７ｇ、１３ｍｍｏｌ）を０〜５℃で加えた。反応混合物をＲＴに温め、ＲＴで一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留する油をＴＢＭＥ中に溶解し、１０％のＫＨＳＯ４水溶液、Ｈ２Ｏ、ＮａＨＣＯ３飽和溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→２：１）後、ジアステレオマーの４：１混合物として表題化合物を得た（４．１８ｇ、８０％）：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ３：１）Ｒｆ＝０．２７；ｔＲ＝１．７０ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．５２ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：５２６［Ｍ＋Ｎａ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４３７】
ステップ２３．５：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（２−ヒドロキシエチル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４３８】
【化１５３】
2015508096.tif 000155
（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−アリル−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン（２．６７ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ２：１（４０ｍＬ）中４：１混合物を、−７８℃でオゾン処理した。完全なオゾニド形成後、ＮａＢＨ４（０．５７ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴに温め、ＲＴで２時間撹拌した。反応混合物を２０％のＫ２ＣＯ３水溶液に加え、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮することによって、淡黄色の油として、表題化合物を生成した（２．６５ｇ、９９％）：ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ＝０．２８；ｔＲ＝０．６８ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝０．６９ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：２６６［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４３９】
ステップ２３．６：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−アリル−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４４０】
【化１５４】
2015508096.tif 000156
ベンジル（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシヘキサ−５−エン−２−イル）（４−メトキシベンジル）カルバメートおよびベンジル（（２Ｓ，３Ｓ）−３−ヒドロキシヘキサ−５−エン−２−イル）（４−メトキシベンジル）カルバメート（３．５５ｇ、９．５ｍｍｏｌ）の４：１混合物のＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液に、アルゴン下、−５０℃でＮａＨＭＤＳのＴＨＦ（１０．５ｍＬ）中１Ｍ溶液を加えた。反応混合物を−４０℃で０．５ｈ撹拌後、混合物を冷たい１０％のＫＨＳＯ４水溶液に加え、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ１０：１→１：１）後、無色の油として表題化合物を得た（２．４ｇ、９７％）：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．４２；ｔＲ＝１．０３ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝０．９９ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：２６２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）；1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 1.06 (d, 2.4H), 1.13 (d, 0.6H), 2.30-2.40 (m, 2H), 3.25 (m, 0.2H), 3.66 (m, 0.8H, 4.54のシグナルに対して強いNOE), 3.75 (s, 3H), 4.07 (d, 1H), 4.10 (m, 0.2H), 4.48 (d, 1H), 4.54 (m, 0.8H), 5.05-5,20 (m, 2H), 5.23 (m, 0.2H), 5.78 (m, 0.8H), 6.92 (d, 2H), 7.22 (d, 0.4H), 7.24 (d, 1.6H).
【０４４１】
ステップ２３．７：（２Ｓ，３Ｒ）−および（２Ｓ，３Ｓ）−ベンジル４−メトキシベンジル（１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
【０４４２】
【化１５５】
2015508096.tif 000157
（Ｓ）−ベンジル４−メトキシベンジル（１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート（３．８６ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、亜鉛ダスト（１．６４ｇ、２５ｍｍｏｌ）、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（５ｍＬ）および臭化アリル（２．２ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２５〜３０℃で１ｈ撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏで希釈し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を１０％のＫＨＳＯ４水溶液、Ｈ２Ｏ、ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→２：１）後、無色の油として、表題化合物を得た（３．５ｇ、９７％）：ｔＲ＝１．２５ｍｉｎおよび１．２７ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）（（２Ｓ，３Ｒ）−および（２Ｓ，３Ｓ）−ジアステレオ異性体の４：１混合物）、ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．５１；ｔＲ＝１．６８ｍｉｎおよび１．６９ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：３７０［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４４３】
ステップ２３．８：（Ｓ）−ベンジル４−メトキシベンジル（１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
【０４４４】
【化１５６】
2015508096.tif 000158
（Ｓ）−ベンジル（１−ヒドロキシプロパン−２−イル）（４−メトキシベンジル）カルバメート（１１．８ｇ、３５．５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中溶液に、ＮａＨＣＯ３（３．２８ｇ、３９ｍｍｏｌ）、ＫＢｒ（０．２５ｇ、２．１ｍｍｏｌ）およびＴＥＭＰＯ０．１６８ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０〜５℃に冷却し、５％のＮａＣｌＯ水溶液（８５ｍＬ、７１ｍｍｏｌ）を３０ｍｉｎ以内に加えた。０〜５℃で１ｈ撹拌した後、反応混合物をＮａ２Ｓ２Ｏ３溶液に加え、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をＮａＨ２ＰＯ４水溶液、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮することによって、黄色の油として、表題化合物を得た（１１．２ｇ、９６％）：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．５５；ｔＲ＝１．２９ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．１５ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：３２８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４４５】
ステップ２３．１０：（Ｓ）−ベンジル（１−ヒドロキシプロパン−２−イル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【０４４６】
【化１５７】
2015508096.tif 000159
（Ｓ）−２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）（４−メトキシベンジル）アミノ）プロパン酸［４３９５８９−２３−８］（１６ｇ、４１．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）中溶液に、アルゴン下、０〜５℃で、ボランジメチルスルフィド（８．４ｍＬ、８４ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。反応混合物を、０〜５℃で１ｈ、続いて４０〜４５℃で３ｈ撹拌した。ＭｅＯＨの注意深い添加により過剰のボランを粉砕し、反応混合物を、２００ｍＬのＭｅＯＨ（３×）、およびＣＨＣｌ３（２×）と共に蒸発させた。乾燥後、無色の油として、表題化合物を得た（１３．７ｇ、９９％）：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．２２；ｔＲ＝１．０６ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）、ｔＲ＝１．０２ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：３３０［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【実施例２４】
【０４４７】
（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンのＬＣ−ＭＳ  ３上で最初に溶出するジアステレオ異性体
２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｒ）−構成を任意に振り分けた。
【０４４８】
【化１５８】
2015508096.tif 000160
表題化合物を、実施例２３に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンおよびＴＢＡＦから調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ５：１→ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１）後、およびＭｅＯＨからの再結晶化後、白色の固体として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ＝０．５０；ｔＲ＝０．８８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４８４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４４９】
ステップ２４．１：（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
保護された２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｒ）−構成を任意に振り分けた。
【０４５０】
【化１５９】
2015508096.tif 000161
表題化合物を、ステップ２２．１に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−５−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンおよび中間体Ｂから調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→ＥｔＯＡｃ）後、淡黄色の発泡体として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．４５；ｔＲ＝１．５７ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：７２２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４５１】
ステップ２４．２：（４Ｓ，５Ｒ）−５−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
保護された２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｒ）−構成を任意に振り分けた。
【０４５２】
【化１６０】
2015508096.tif 000162
表題化合物を、ステップ２１．１に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−５−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンおよび中間体Ａから調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→３：１）後、無色の油として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．６５；ｔＲ＝１．６７ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：５９５、５９７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４５３】
ステップ２４．３：（４Ｓ，５Ｒ）−５−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
保護された２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｒ）−構成を任意に振り分けた。
【０４５４】
【化１６１】
2015508096.tif 000163
表題化合物を、ステップ２３．３に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−５−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンから調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→ＥｔＯＡｃ）後、無色の油として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．２８；ｔＲ＝１．３８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４１５［Ｍ＋ＮＨ４］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４５５】
ステップ２４．４：（４Ｓ，５Ｒ）−５−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
保護された２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｒ）−構成を任意に振り分けた。
【０４５６】
【化１６２】
2015508096.tif 000164
表題化合物を、ステップ２３．４に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−５−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン（ステップ２４．５からの最初に溶出する（２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−ジアステレオ異性体の１５％が混入）から調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→ＥｔＯＡｃ）後、無色の油として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ３：１）Ｒｆ＝０．２６；ｔＲ＝１．５５ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：５４０［Ｍ＋Ｎａ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４５７】
ステップ２４．５：（４Ｓ，５Ｒ）−５−（（Ｓ）−および（４Ｓ，５Ｒ）−５−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
ケトンの還元後の２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｓ）−構成を最初に溶出する生成物（４Ｓ，５Ｒ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体に任意に割り当てた。
【０４５８】
最初に溶出する生成物は（４Ｓ，５Ｒ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体である：
【０４５９】
【化１６３】
2015508096.tif 000165
【０４６０】
第２に溶出する生成物は、（２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−ジアステレオ異性体（２−ヒドロキシプロピル部分に対して（２Ｒ）−構成を任意に割り当てた）の混合物であり：
【０４６１】
【化１６４】
2015508096.tif 000166
これには最初に溶出する（４Ｓ，５Ｒ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体が混入していた：
【０４６２】
【化１６５】
2015508096.tif 000167
【０４６３】
表題化合物を、ステップ２３．５に対して記載されている手順と同様に、３−（４−メトキシベンジル）−４−メチル−５−（２−メチルアリル）オキサゾリジン−２−オンの（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の３：１混合物から調製することによって、異性体の３：３：１：１混合物のフラッシュクロマトグラフィーの複数の分離（ＲｅｄｉＳｅｐ  Ｒｆ  Ｇｏｌｄ  シリカゲル；ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１→ＥｔＯＡｃおよびトルエン／ＥｔＯＡｃ  ３：１→ＥｔＯＡｃ）後、無色の油として、個々の２つのマイナーな（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−および（２Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体ならびに個々の２つのメジャーな（２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−および（２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−ジアステレオ異性体を得た：
表題化合物（２−ヒドロキシプロピル部分に対して（２Ｓ）−構成を任意に割り当てた）の最初に溶出する（２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−ジアステレオ異性体：ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ＝０．３９；ｔＲ＝０．７５２ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）；ｔＲ＝０．７６ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：２８０［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）；1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 1.12 (d, 3H), 1.28 (d, 3H), 1.5-1.63 (m, 1H), 1.81 (m, 1H), 1.90 (d, 1H), 3.68 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 4.03 (d, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.60 (ddd, 1H), 4.79 (d, 1H), 6.89 (d, 2H), 7.22 (d, 2H).
最初に溶出する（２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−ジアステレオ異性体の１５％が混入した、表題化合物（２−ヒドロキシプロピル部分に対して（２Ｒ）−構成を任意に割り当てた）の第２に溶出する（２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−ジアステレオ異性体：ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ＝０．３５；ｔＲ＝０．７４２ｍｉｎおよび０．７５２ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）；ｔＲ＝０．７５ｍｉｎおよび０．７６ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：２８０［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）；1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 1.12 (d, 3H), 1.28 (d, 3H), 1.50-1.64 (m, 1H), 1.81 (m, 0.15H), 1.90 (d, 0.15H). 1.94 (m, 0.85H), 2.21 (d, 0.85H), 3.67 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 4.01 (m, 1H), 4.13 (m, 1H), 4.73 (m, 0.85H), 4.79 (d, 0.15H), 4.80 (d, 1H), 6.90 (d, 2H), 7.22 (d, 2H).
【０４６４】
ステップ２４．６：３−（４−メトキシベンジル）−４−メチル−５−（２−メチルアリル）オキサゾリジン−２−オンの（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体
【０４６５】
【化１６６】
2015508096.tif 000168
表題化合物を、ステップ２３．６に対して記載されている手順と同様に、ベンジル（（２Ｓ）−３−ヒドロキシ−５−メチルヘキサ−５−エン−２−イル）（４−メトキシベンジル）カルバメートの（２Ｓ，３Ｒ）−および（２Ｓ，３Ｓ）−ジアステレオ異性体の３：１混合物から調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→１：１）後、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の３：１混合物として、表題化合物を得た：ｔＲ＝１．１１２ｍｉｎ（ＵＰＬＣ  １）；ｔＲ＝１．０５ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：２７６［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）；1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 1.13 (d, 2.2H), 1,20 (d, 0.8H), 1.76 (s, 0.8H), 1.80 (s, 2.2H), 2.23 (ddd, 0.25H), 2.27 (dd, 0.75H), 2.39 (dd, 0.25H) 2.46 (dd, 0.75H), 3.28 (m,0.25H), 3.68 (m, 0.75H), 3.83 (s, 3H), 3.99 (d, 0.75H), 4.04 (d, 0.35H), 4.14 (m, 0.25H), 4.62 (m, 0.75H), 4.70-4.90 (m, 4H), 6.90 (d, 2H), 7.25 (d, 2H).
【０４６６】
ステップ２４．７：ベンジル（３−ヒドロキシ−５−メチルヘキサ−５−エン−２−イル）（４−メトキシベンジル）カルバメートの（２Ｓ，３Ｒ）−および（２Ｓ，３Ｓ）−ジアステレオマー
【０４６７】
【化１６７】
2015508096.tif 000169
表題化合物を、ステップ２３．７に対して記載されている手順と同様に、（Ｓ）−ベンジル４−メトキシベンジル（１−オキソプロパン−２−イル）カルバメートおよび３−ブロモ−２−メチルプロパ−１−エンから調製することによって、（２Ｓ，３Ｒ）−および（２Ｓ，３Ｓ）−ジアステレオマーの３：１混合物として表題化合物を得た：ｔＲ＝１．３２２ｍｉｎ（メジャーな異性体）および１．３２９ｍｉｎ（マイナーな異性体）（ＵＰＬＣ  １）；ｔＲ＝１．２３ｍｉｎ（メジャーな異性体）および１．２４ｍｉｎ（マイナーな異性体）（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：３８４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【実施例２５】
【０４６８】
（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（（Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの９：１混合物である、ＬＣ  ＭＳ  ３上で第２に溶出する生成物
２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｓ）−構成を任意に振り分けた。
【０４６９】
【化１６８】
2015508096.tif 000170
表題化合物を、実施例２３に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの８：１混合物およびＴＢＡＦから調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ５：１→ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１）後、およびＭｅＯＨからの再結晶化後、白色の固体として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ＝０．５０；ｔＲ＝０．８７ｍｉｎ（マイナーな（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオマー）および０．８９ｍｉｎ（メジャーな（４Ｓ，５Ｒ）−ジアステレオマー）（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４８４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４７０】
ステップ２５．１：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
保護された２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｓ）−構成を任意に振り分けた。
【０４７１】
【化１６９】
2015508096.tif 000171
表題化合物を、ステップ２２．１に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの７：１混合物および中間体Ｂから調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→ＥｔＯＡｃ）後、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の８：１混合物として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．４５；ｔＲ＝１．５８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：７２２［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４７２】
ステップ２５．２：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
保護された２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｓ）−構成を任意に振り分けた。
【０４７３】
【化１７０】
2015508096.tif 000172
表題化合物を、ステップ２１．１に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの７：１混合物および中間体Ａから調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→３：１）後、およびＭｅＯＨ／ＴＨＦからの結晶化後、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の７：１混合物として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．６５；ｔＲ＝１．６７ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：５９５、５９７［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４７４】
ステップ２５．３：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
保護された２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｓ）−構成を任意に振り分けた。
【０４７５】
【化１７１】
2015508096.tif 000173
表題化合物を、ステップ２３．３に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの７：１混合物から調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→２：１）後、無色の油として、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の１０：１混合物としての表題化合物を得た：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．３０；ｔＲ＝１．３８ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４１５［Ｍ＋ＮＨ４］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４７６】
ステップ２５．４：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
保護された２−ヒドロキシプロピル部分の絶対立体配置は未確定であり、（Ｓ）−構成を任意に振り分けた。
【０４７７】
【化１７２】
2015508096.tif 000174
表題化合物を、ステップ２３．４に対して記載されている手順と同様に、ステップ２４．５で調製した（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの７：１混合物から調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→ＥｔＯＡｃ）後、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の７：１混合物として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ３：１）Ｒｆ＝０．２６；ｔＲ＝１．５６ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：５４０［Ｍ＋Ｎａ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【実施例２６】
【０４７８】
（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−５−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４７９】
【化１７３】
2015508096.tif 000175
表題化合物を、ステップ２２．１に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）−５−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの５：１混合物ならびに中間体Ｂから調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  ９０：１０：１→１０：１００：１０）後およびＭｅＯＨからの再結晶化後、白色の固体としてならびに（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の７：１混合物として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ＝０．４３；ｔＲ＝０．９３ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：４９８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４８０】
ステップ２６．１：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−３−（６−クロロ−２−モルホリノピリミジン−４−イル）−５−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４８１】
【化１７４】
2015508096.tif 000176
表題化合物を、ステップ２１．１に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）プロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの５：１混合物および中間体Ａから調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  １０：１→ＥｔＯＡｃ）後、淡黄色の発泡体としてならびに（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の５：１混合物として、表題化合物を得た：ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１）Ｒｆ＝０．５５；ｔＲ＝１．０２ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：３７１、３７３［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４８２】
ステップ２６．２：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４８３】
【化１７５】
2015508096.tif 000177
表題化合物を、ステップ２３．３に対して記載されている手順と同様に、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オンの５：１混合物から調製することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １：１→ＥｔＯＡｃ−ＭｅＯＨ  ５：１）後、無色の油として、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の５：１混合物としての表題化合物を得た：ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１）Ｒｆ＝０．４０；ｔＲ＝０．４１ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：１７４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４８４】
ステップ２６．３：（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−５−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン
【０４８５】
【化１７６】
2015508096.tif 000178
メチル２−（（４Ｓ，５Ｒ）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチル−２−オキソオキサゾリジン−５−イル）アセテートおよびメチル２−（（４Ｓ，５Ｓ）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチル−２−オキソオキサゾリジン−５−イル）アセテート（２．０ｇ、６．８２ｍｍｏｌ）の３：１混合物のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液に、アルゴン下、−７８℃で、ＴＨＦ（６．８２ｍｌ、２０．４６ｍｍｏｌ）中３Ｍ塩化メチルマグネシウム溶液をゆっくりと加えた。添加後、反応混合物をＲＴに温めた。１０％のＮＨ４Ｃｌ水溶液の添加後、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物をＨ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→ＥｔＯＡｃ）後、無色の油として表題化合物を得た（１．２ｇ、５９％、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の３：１混合物）：ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １０：１）Ｒｆ＝０．４３；ｔＲ＝０．８０ｍｉｎおよび０．８１ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：２９４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）；1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 1.12 (d, 2.25H), 1.22 (d, 0.75), 1.32 (s, 1.5H), 1.34 (s, 4.5H), 1.68 (dd, 1H), 1.86 (dd, 0.25H), 1.93 (dd, 0.75H), 3.23 (m, 0.25H), 3.64 (m, 0.75H), 3.83 (s, 3H), 3.99 (d, 0.75H), 4.04 (d, 0.25H), 4.26 (d, 0.25H), 4.72 (d, 0.25H), 4.73 (m, 0.75H), 4.80 (d, 0.75H), 6.89 (d, 0.5H), 6.90 (d, 1.5H), 7.23 (d, 0.5H), 7.24 (1.5H).
【０４８６】
ステップ２６．４：メチル２−（（４Ｓ，５Ｒ）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチル−２−オキソオキサゾリジン−５−イル）アセテートおよびメチル２−（（４Ｓ，５Ｓ）−３−（４−メトキシベンジル）−４−メチル−２−オキソオキサゾリジン−５−イル）アセテート
【０４８７】
【化１７７】
2015508096.tif 000179
（３Ｒ，４Ｓ）−および（３Ｓ，４Ｓ）−メチル３−ヒドロキシ−４−（（４メトキシベンジル）アミノ）ペンテノナ−ト（４．１ｇ、１０．７４ｍｍｏｌ）の３：１混合物のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）中懸濁液に、ＤＩＥＡ（８．４４ｍｌ、４８．３ｍｍｏｌ）を加え、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中に溶解した（ビス（トリクロロメチル）カーボネート（２．３８９ｇ、８．０５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で加えた。ＲＴで０．５ｈ撹拌後、反応混合物をＮａＨＣＯ３飽和溶液に加え、生成物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた抽出物をＨ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮することによって、フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２０：１→ＥｔＯＡｃ）後の後、淡黄色の発泡体として、表題化合物を生成した（２．０２ｇ、６３％、（４Ｓ，５Ｒ）−および（４Ｓ，５Ｓ）−ジアステレオ異性体の３：１混合物）：ＴＬＣ（トルエン／ＥｔＯＡｃ  １：１）Ｒｆ＝０．４７；ｔＲ＝０．８４ｍｉｎ（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：２９４［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）；1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 1.11 (d, 2.25H), 1.27 (d, 0.75H), 2.57 (dd, 0.25H), 2.67 (dd, 0.75H), 2.75 (dd, 0.25H), 2.81 (dd, 0.75H), 3.34 (m, 0.25H), 3.70 (s, 0.75H), 3.73 (s, 2.25H), 3.77 (m, 0.75H), 3.83 (s, 3H), 3.99 (d, 0.75H), 4.04 (d, 0.25H), 4.44 (m, 0.25H), 4.75 (d, 0.25H), 4.78 (d, 0.75H), 4.88 (m, 0.75H), 6.90 (d, 2H), 7.22 (d, 0.5H), 7.23 (d, 1.5H).
【０４８８】
ステップ２６．５：（３Ｒ，４Ｓ）−および（３Ｓ，４Ｓ）−メチル３−ヒドロキシ−４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）ペンテノナ−ト
【０４８９】
【化１７８】
2015508096.tif 000180
（３Ｒ，４Ｓ）−メチル４−アミノ−３−ヒドロキシペンテノナ−ト塩酸塩［１１１０６１−２５−７］（２．１７ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中懸濁液に、ＮａＯＡｃ（１．３５７ｇ、１６．５４ｍｍｏｌ）を加え、１０ｍｉｎの撹拌後、ｐ−アニスアルデヒド（１．３７ｍＬ、１１．２ｍｍｏｌ）およびモレキュラーシーブ（２ｇ）を加えた。反応混合物をＲＴで１６ｈ撹拌した。２ｍＬのＡｃＯＨの添加後、ＮａＢＨ３ＣＮ（１．１１ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）を３０ｍｉｎの期間にわたり少しずつ加えた。ＲＴでさらに３０ｍｉｎ撹拌後、反応混合物を濾過し、濾液を４Ｎの水性ＨＣｌで酸性化し、蒸発乾燥させた。残渣を最初にＥｔ２Ｏで洗浄し、次いでＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  １：１中に懸濁させ、無機物質を濾別した。５０℃で４ｈ乾燥後、濾液を濃縮することによって、ベージュ色の固体として、表題化合物を得た（２．９ｇ、８０％、（３Ｒ，４Ｓ）−および（３Ｓ，４Ｓ）−ジアステレオ異性体の３：１混合物）：ｔＲ＝０．４６ｍｉｎ（（３Ｒ，４Ｓ）−ジアステレオ異性体）および０．４８ｍｉｎ（（３Ｓ，４Ｓ）−ジアステレオ異性体）（ＬＣ−ＭＳ  ３）；ＥＳＩ−ＭＳ：２６８［Ｍ＋Ｈ］＋（ＬＣ−ＭＳ  ３）。
【０４９０】
上記実施例の化合物に対する１Ｈ  ＮＭＲデータを、以下の表に示す。
【０４９１】
【表２−１】
2015508096.tif 000181
【表２−２】
2015508096.tif 000182
【表２−３】
2015508096.tif 000183
【表２−４】
2015508096.tif 000184
【表２−５】
2015508096.tif 000185
【表２−６】
2015508096.tif 000186
【表２−７】
2015508096.tif 000187
【０４９２】
さらなる物理的特性
実施例１０および１８から得た結晶性物質、バッチＡ〜Ｅは、以下の通りさらに特徴付けられた。
【０４９３】
融点測定：
融点は示差走査熱量測定（ＤＳＣ）で決定した。ＴＡ装置、ＤＳＣ  ２０００、シリアルＮｏ．１０００３６を使用してＤＳＣを測定した。１〜５ｍｇの試料を秤量して標準的アルミニウムパンに入れた（パン＋蓋、ＴＡ  ９００７８６．９０１、９００７７９．９０１）。Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｑ−シリーズソフトウエアＶ．２．６．０．３６７およびＴｈｅｒｍａｌ  ＡｄｖａｎｔａｇｅソフトウエアＶ４．６．９を使用して、装置を作動した。Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｖ４．３Ａ  Ｂｕｉｌｄ  ４．３．０．６を使用して熱イベントを特徴付けた。空のパンに対して試料を測定した。以下のプロトコルに従い試料を処置した：
ステップ１：−４０℃で平衡化する
ステップ２：１０℃／ｍｉｎ／３００℃で加熱する
モジュレーション：なし
【０４９４】
得たグラフは、図１、３、５、７、９および１１において示されている。
【０４９５】
粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）：
およそ２〜５ｍｇの試料量を対物レンズスライド上に配置し、ＣｕＫａアノードを有するＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８  ＧＡＤＤＳ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒ（シリアルＮｏ．００２４８２）上でエックス線ビームの中央に置いた。試料と検出器の距離は３０ｃｍであった。２つのフレームを５と４０°２−シータの間で記録した。ＧＡＤＤＳソフトウエア４．１．２７を使用してフレームを融合した。ＥＶＡ  １０．０．０を使用して評価を行った。
【０４９６】
得たグラフは、図２、４、６、８、１０および１２において示されている。
【０４９７】
代表的な２−シータ［°］ピークを以下の表において提供する：
【０４９８】
【表３】
2015508096.tif 000188
【０４９９】
【表４】
2015508096.tif 000189
【０５００】
【表５】
2015508096.tif 000190
【０５０１】
【表６】
2015508096.tif 000191
【０５０２】
【表７】
2015508096.tif 000192
【０５０３】
【表８】
2015508096.tif 000193
【０５０４】
生物活性
本発明の化合物のＰＩ３キナーゼ阻害剤としての効力は、以下の通り実証することができる：
化合物希釈物の調製（３８４−ウェル）
試験化合物をＤＭＳＯ（１０ｍＭ）中に溶解し、個々のＮｏｖａｒｔｉｓコンパウンドハブにより、独自の２Ｄマトリクスチップを保持する１．４ｍＬの平底またはＶ形状のマトリクス管に移した。これらのチップの数は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  Ｎｕｍｂｅｒｓにはっきりと連結されていた。直ちに使用しない場合、保存液は−２０℃で保存した。試験手順に対して、バイアルは霜取りし、スキャナーで特定し、これによって、作業シートを作成し、これに従いそれに続く作業ステップを行った。
【０５０５】
化合物は、記載されているように、個々の実験（８つの濃度（シングルポイント）で１０の化合物を可能とする９６ウェル）用にＤＭＳＯ中で、手作業で希釈するか、または３８４−ウェルでプロファイリング用に試験する場合、以下に記載されているように調製した。このフォーマットは、４つの参照化合物を含む、８つの濃度（シングルポイント）で、最大４０の個々の試験化合物のアッセイを可能にした。希釈プロトコルには、「事前希釈プレート」、「マスタープレート」および「アッセイプレート」の生成が含まれる。
【０５０６】
事前希釈プレート：９６ポリプロピレンウェルプレートを事前希釈プレートとして使用した。プレート位置Ａ１〜Ａ１０上にそれぞれ１０の試験化合物を含み、１つの標準化合物をＡ１１に、１つのＤＭＳＯ対照をＡ１２に含む、全部で４つの事前希釈プレートを調製した。希釈ステップのパターンは表１に要約されている。プログラムは、これらのピペットステップを、ＨａｍｉｌｔｏｎＳＴＡＲロボットで実行するように書かれている。
【０５０７】
【表９】
2015508096.tif 000194
【０５０８】
マスタープレート：４つの「事前希釈プレート」の標準化合物および対照を含む、個々の化合物希釈物１００μＬを、それぞれ９０％ＤＭＳＯ中の以下の濃度、１’８２０、５６４、１８２、５４．６、１８．２、５．４６、１．８２および０．５４６μＭを含む、３８４の「マスタープレート」に移した。
【０５０９】
アッセイプレート：次いで、「マスタープレート」の化合物希釈物のそれぞれ５０ｎＬを３８４−ウェル「アッセイプレート」へとピペットで取ることによって同一の「アッセイプレート」を調製した。化合物を、１：１８１希釈に対応するアッセイ成分４．５μＬプラス酵素４．５μＬと混合し、それぞれ１０、３．０、１．０、０．３、０．１、０．０３、０．０１および０．００３μＭの最終濃度を可能にした。「マスタープレート」の調製は、Ｍａｔｒｉｘ  ＰｌａｔｅＭａｔｅ  Ｐｌｕｓロボットで、「アッセイプレート」の複製はＨｕｍｍｉｎｇＢｉｒｄロボットで操作した。
【０５１０】
発現構造体を生成する方法
触媒活性物質ヒトＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ、およびｍＴＯＲを、記載されているように、クローン化し、発現させ、精製した（Maira SM、Stauffer F、Brueggen J、Furet P、Schnell C、Fritsch C、Brachmann S、Chene P、de Pover A、Schoemaker K、Fabbro D、Gabriel D、Simonen M、Murphy L、Finan P、Sellers W、Garcia-Echeverria C (2008)、Mol Cancer Ther.7:1851〜63頁およびMaira SM、Pecchi S、Brueggen J、Huh K、Schnell C、Fritsch C、Nagel T、Wiesmann M、Brachmann S、Dorsch M、Chene P、Schoemaker K、De Pover A、Menezes D、Fabbro D、Sellers W、Garcia-Echeverria C、Voliva CF (2011)、Mol. Cancer Ther. 受理済み）。
【０５１１】
ＰＩ３Ｋアルファ、ＰＩ３Ｋベータに対する生化学的試験法
ルミネセンスベースのＡＴＰ検出試薬ＫｉｎａｓｅＧｌｏを、Ｃａｔａｌｙｓ、Ｗａｌｌｉｓｅｌｌｅｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄを介してＰｒｏｍｅｇａ、（Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｖ６７１４、Ｌｏｔ  Ｎｏ．２３６１６１）から入手した。（Ｌ−アルファ−ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、Ｌｉｖｅｒ、Ｂｏｖｉｎｅ）をＡｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄ（Ｃａｔ．Ｎｏ．８４００４２Ｃ、Ｌｏｔ＃ＬＰＩ−２７４）から入手し、ホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスフェート（ＰＩＰ（４，５）２（Ａｖａｎｔｉ、Ｃａｔ．Ｎｏ．８４００４６Ｘ）またはＬ−α−ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）をＡｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄ（Ｃａｔ．Ｎｏ．８４００４２Ｃ、Ｌｏｔ＃ＬＰＩ−２７４）から入手した。Ｌ−α−ホスファチジルセリン（ＰＳ）は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄ（Ｃａｔ．Ｎｏ．８４００３２Ｃ）製のもので、ｎ−オクチルグルコシドはＡｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄ（Ｃａｔ．Ｎｏ．１０６３４４２５００１）製のものであった。ルミネセンスは、ＡＴＰ濃度を求めるための確実な読出しであり、したがって、多くのキナーゼの活性を、これらの基質に関わらず追跡調査するために使用されている。Ｋｉｎａｓｅ  Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ／ＷＩ、ＵＳＡ）は、キナーゼ反応後に溶液中に残存するＡＴＰの量を定量化することによって、キナーゼ活性を測定する均質なＨＴＳ方法である。
【０５１２】
セクション８．２に記載されている通り、５０ｎＬの化合物希釈物をブラック３８４−ウェル低容量Ｎｏｎ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｔｙｒｅｎｅ（ＮＢＳ）プレート（Ｃｏｓｔａｒ  Ｃａｔ．Ｎｏ．ＮＢＳ＃３６７６）上に分配した。メタノール中１０ｍｇ／ｍｌ溶液として提供されるＬ−α−ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）をガラス管に移し、窒素ビーム下で乾燥させた。次いでこれをボルテックスすることにより３％のオクチルグルコシド中に再懸濁させ、４℃で保存した。ＰＩ／ＯＧのミックス５μＬを、ＰＩ３ＫａおよびＰｉ３Ｋｂサブタイプと共に加えた。最終容量１０μＬの１０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％ＣＨＡＰＳ、１ｍＭ  ＤＴＴおよび１μＭ  ＡＴＰを含有するＡＴＰ−ミックス５μｌの添加によりキナーゼ反応が開始し、反応は室温で生じた。１０μｌのＫｉｎａｓｅＧｌｏにより反応を停止し、１０ｍｉｎｓ後、各ウェル当たり０．１秒の統合時間を使用して、Ｓｙｎｅｒｇｙ２リーダーにおいてプレートを読み取った。２．５μＭのＮＶＰ−ＢＧＴ２２６（標準）をアッセイプレートに加えることによって、キナーゼ反応の１００％阻害を生成し、０％阻害は溶媒ビヒクル（水中９０％ＤＭＳＯ）により得た。ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６は参照化合物として使用し、これを１６の希釈ポイントの形態で（２通り）すべてのアッセイプレートに含めた。
【０５１３】
各化合物の８つの濃度（普通１０、３．０、１．０、０．３、０．１、０．０３０、０．０１０および０．００３μＭ）でのパーセンテージ阻害のＩＣ５０値、ｎ＝２は、記載されているように、シグモイドの用量反応曲線を、阻害剤の濃度にわたりアッセイの読出しプロットにフィッティングさせることによって導いた。すべてのフィッティングは、プログラムＸＬｆｉｔ４（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ、ＵＫ）を用いて実施した。
【０５１４】
ＰＩ３Ｋデルタ、ＰＩ３Ｋガンマに対する生化学的試験法
ＴＲ−ＦＲＥＴ  Ａｄａｐｔａ（商標）  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙ  ＫｉｔをＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ／ＣＡ、ＵＳＡ）（Ｃａｔ．Ｎｏ．ＰＶ５０９９）から購入した。キットは以下の試薬を含有している：Ａｄａｐｔａ  Ｅｕ−ａｎｔｉ−ＡＤＰ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水中のユウロピウム標識した抗ＡＤＰ抗体、Ｃａｔ．Ｎｏ．ＰＶ５０９７）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７標識したＡＤＰトレイサー（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水中の６４７標識したＡＤＰトレイサーＣａｔ．Ｎｏ．ＰＶ５０９８）、専売のＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液ｐＨ７．５（Ｃａｔ．Ｎｏ．ＰＶ３５７４）。
【０５１５】
ＰＩＫ３ＣＤ基質ホスファチジルイノシトールをＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手した（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５中２ｍＭ  ＰＩからなるベシクル；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＰＶ５３７１）。ＰＩＫ３ＣＧ基質ホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスフェート（ＰＩＰ（４，５）２をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手した（ＰＩＰ２：ＰＳ、１ｍＭ  ＰＩＰ２：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５中１９ｍＭ  ＰＳ、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡからなる大単層ベシクル；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＰＶ５１００）。
【０５１６】
時間分解蛍光共鳴エネルギー移動法（ＴＲ−ＦＲＥＴ）は、１つの色素（ドナー）内の励起させた電子から、共鳴を介して、隣接する色素（アクセプター）の電子へ伝達され、次いでフォトンとして放出される、２つの隣接する色素間のエネルギー伝達に基づく技術である。このエネルギー伝達は、アクセプターの蛍光発光の増加、およびドナーの蛍光発光の低減により検出される。タンパク質キナーゼに対するＴＲ−ＦＲＥＴアッセイは、化合物の自己蛍光からの干渉または沈殿した化合物からの光散乱を、フラッシュランプ励起源による励起後に遅延を導入することによって克服する、長寿命のランタニドテルビウムまたはユウロピウムキレートをドナー種として使用している。結果は多くの場合、アクセプターおよびドナー蛍光体の強度の比として表現される。このような値のレシオメトリックな（ratiometric）性質は、ウェルの間のアッセイ量の差を補正し、ならびに有色の化合物によるクエンチ作用を補正する。Ａｄａｐｔａ（商標）アッセイは、２つの段階：キナーゼ反応段階およびＡＤＰ検出段階に分割することができる。キナーゼ反応段階では、すべてのキナーゼ反応成分をウェルに加え、各キナーゼに対して特異的に設定した期間の間、反応物をインキュベートさせておく。反応後、Ｅｕ標識した抗ＡＤＰ抗体の検出溶液、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７標識したＡＤＰトレイサー、およびＥＤＴＡ（キナーゼ反応を停止するため）をアッセイウェルに加える。キナーゼ反応で形成されたＡＤＰが、抗体からのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７標識したＡＤＰトレイサーに取って代わり、結果としてＴＲ−ＦＲＥＴ信号の低減が生じる。阻害剤の存在下では、キナーゼ反応により形成されるＡＤＰの量は減少し、結果として得られる、影響無しの抗体トレイサー相互作用は高いＴＲ−ＦＲＥＴ信号を維持する。Ａｄａｐｔａ（商標）アッセイでは、ドナー（ユウロピウム抗ＡＤＰ抗体）は３４０ｎｍにおいて励起し、そのエネルギーをアクセプターへと移す（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７標識したＡＤＰトレイサー）。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７からの発光は、これがドナーの発光ピーク（６１５／６２０ｎｍで測定）の間に位置することから、６６５ｎｍに中心を置くフィルターでモニターすることができる。
【０５１７】
セクション２．２に記載されている通り、５０ｎＬの化合物希釈物を白色の３８４−ウェル小容量ポリスチレンプレートに分配した。次いで、５μＬのＰＩ３ＫｇおよびＰＩ３Ｋｄおよび脂質基質（ＰＩまたはＰＩＰ２：ＰＳ）、続いて５μＬのＡＴＰ（最終アッセイ量１０μＬ）をＲＴでインキュベートする。Ａｄａｐｔａ（商標）ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイ用の標準反応緩衝液は、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．０５％ＣＨＡＰＳを含有した。Ｅｕ標識した抗ＡＤＰ抗体およびＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液中のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７標識したＡＤＰトレイサー（ＩＶＧ専売）を含有するＥＤＴＡ混合物５μＬで反応を停止させた。１５〜６０ｍｉｎｓ後、統合時間０．４秒および遅延０．０５秒を使用して、Ｓｙｎｅｒｇｙ２リーダーにおいてプレートを読み取る。キナーゼ反応の１００％阻害に対する対照は、ＰＩ３Ｋを、標準反応緩衝液で置き換えていることにより実施した。０％阻害に対する対照は、化合物の溶媒ビヒクル（Ｈ２Ｏ中９０％ＤＭＳＯ）より得た。標準的化合物ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６は、参照化合物として使用し、これを１６の希釈ポイントの形態で（２通り）すべてのアッセイプレートに含めた。
【０５１８】
ＥｘｃｅｌフィットのソフトウエアまたはＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用してデータを分析した。ＥＣ５０値は、シグモイド用量反応曲線を、阻害剤濃度にわたりアッセイ読出しプロットにフィッティングさせることによって導かれた。すべてのフィッティングは、プログラムＸＬｆｉｔ４（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ、ＵＫ）を用いて実施した。８つの濃度（普通１０、３．０、１．０、０．３、０．１、０．０３０、０．０１０および０．００３μＭ）での各化合物のパーセンテージ阻害のＥＣ５０値の測定、ｎ＝２は、シグモイドの用量反応曲線を、阻害剤濃度にわたりアッセイ読出しのプロットにフィッティングさせることによって導いた。すべてのフィッティングは、プログラムＸＬｆｉｔ４（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ、ＵＫ）を用いて実施した。
【０５１９】
ｍＴＯＲに対する生化学的試験法
タンパク質キナーゼに対するＴＲ−ＦＲＥＴアッセイは、化合物の自己蛍光による干渉または沈殿した化合物からの光散乱を、フラッシュランプ励起源による励起後に遅延を導入することによって克服する、長寿命のランタニドテルビウムまたはユウロピウムキレートをドナー種として使用する。結果は、多くの場合、アクセプターとドナー蛍光体の強度の比として表現される。このような値のレシオメトリック性質は、ウェル間のアッセイ量の差を補正し、ならびに有色の化合物によるクエンチ作用を補正する。
【０５２０】
結合アッセイは、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７標識した、ＡＴＰ−競合的キナーゼ阻害剤の、対象となるキナーゼへの結合および置換に基づく。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの「キナーゼトレイサー」は、広範囲なキナーゼターゲットに対処するために開発され、ＡＴＰ−競合的キナーゼ阻害剤に基づくもので、これにより、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの「キナーゼトレイサー」はＡＴＰ部位またはＡＴＰ部位の構造を変化させるアロステリック部位に結合する任意の化合物の検出に適切となっている。ＡＴＰ部位に結合する阻害剤は、ＡＴＰ部位だけに結合するタイプＩキナーゼ阻害剤と、ＡＴＰ部位およびＤＦＧ−ｏｕｔ（非活性）構造において曝露された疎水性部位の両方に結合するタイプＩＩ阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）／イマチニブ、ソラフェニブ、ＢＩＲＢ−７９６）の両方を含む。ＩＩＩ型阻害剤は、ＡＴＰと競合しない化合物であり、大まかには、アロステリック阻害剤と呼ばれる。１５種の多様なＩＩＩ型阻害剤の研究では、１種を除く全部の化合物が、活性アッセイに相当する能力で、結合実験において検出されたことが実証された。ただひとつの例外は、基質競合的化合物であり、したがって真のアロステリック阻害剤ではなかった。
【０５２１】
大部分の蛍光ベースのキナーゼ活性アッセイとは対照的に、ＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）Ｅｕ３＋キナーゼ結合実験は、持続的に読み取ることができ、これは、遅い結合反応速度を有する化合物の評価を促進する。また、大部分の活性アッセイとは異なり、結合実験は、活性のあるまたは非活性化したキナーゼ調製物のいずれかを使用して実施することができ、これによって、非活性化キナーゼ、例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）／イマチニブおよび一部のアロステリック阻害剤などに優先的に結合する化合物の特徴付けが可能となる。
【０５２２】
Ｌａｎｔｈａｓｃｒｅｅｎ（商標）キナーゼ結合実験において、ドナー（Ｅｕ３＋−抗ＧＳＴ抗体）は３４０ｎｍで励起し、そのエネルギーをアクセプター（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７標識したＡＴＰ競合的キナーゼ阻害剤＝Ｔｒａｃｅｒ−３１４）に移す。Ｔｒａｃｅｒ−３１４（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７阻害剤）からの発光は、これがドナーの発光ピーク（６１５／６２０ｎｍで測定）の間に位置することから、６６５ｎｍに中心を置くフィルターでモニターすることができる。トレイサー３１４とＥｕ３＋−抗ＧＳＴ抗体の両方のキナーゼへの結合は、Ｅｕ３＋−ドナー蛍光体からトレイサー３１４上のＡｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７−アクセプター蛍光体への高度のＦＲＥＴを結果として生じる。阻害剤のキナーゼへの結合は、トレイサーとの結合と競合し、結果としてＦＲＥＴの損失が生じる。
【０５２３】
セクション２．２に記載されている通り、５０ｎＬの化合物希釈物を、白色３８４−ウェル小容量ポリスチレンプレートに分配した。次いで５μＬのＧＳＴ−ｍＴＯＲおよびユウロピウム−抗ＧＳＴ抗体、続いて５μＬのトレイサー−３１４（最終アッセイ量１０μＬ）をＲＴでインキュベートする。Ｌａｎｔｈａｓｃｒｅｅｎ（商標）キナーゼ結合実験用の標準反応緩衝液は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．０１％ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ−１２７を含有した。６０ｍｉｎｓ後、統合時間０．２ミクロ秒および遅延０．１ミクロ秒を使用して、Ｓｙｎｅｒｇｙ２リーダーにおいてプレートを読み取る。
【０５２４】
発光比を計算するために、アクセプター（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７標識したトレイサー−３１４）から６６５ｎｍで発光した信号を、ドナー（Ｅｕ３＋抗ＧＳＴ抗体）から６２０ｎｍで発光した信号で割る。
【０５２５】
０％阻害に対する対照は、化合物の溶媒ビヒクル（Ｈ２Ｏ中９０％ＤＭＳＯ）より得た。相対的１００％阻害に対する対照は、ＧＳＴ−ｍＴＯＲおよびユウロピウム抗ＧＳＴ抗体を含有するミックスに１０μＭを加えることによって実施した。絶対的０％阻害に対する追加の対照は、ＧＳＴ−ｍＴＯＲなしでのＥｕ３＋抗ＧＳＴ抗体により得る。
【０５２６】
ＰＩ３Ｋアルファ、ベータおよびデルタに対する細胞アッセイ
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（増幅発光近接均質解析（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  ａｓｓａｙ）、ＡＬＰＨＡ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）は、均質のマイクロタイタープレートフォーマットにおける生体分子の相互作用を研究するための非放射性ビーズベースの近接アッセイ技術である。商品名ＳｕｒｅＦｉｒｅは、抗ホスホキナーゼおよび抗キナーゼ抗体からなるマッチさせた抗体ペアを使用することによって、細胞溶解物中の内因性細胞タンパク質のリン酸化を定量化することに適応したＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイを意味する。アッセイは、細胞におけるキナーゼシグナル伝達の特徴付けならびにキナーゼ阻害剤作用の測定を可能にする。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ技術は、多大な時間を必要とする洗浄手順を回避し、プレートの取扱いを減少させることから、標準的アッセイ技術、例えば、ＥＬＩＳＡなどを超えたいくつかの利点を提供する。さらに、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎは、少なくとも３８４−ウェルフォーマットに小型化可能であり、個々のＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ  アッセイキットに含まれている抗体の親和性に応じて、フェムトモルの範囲までの感度を提供する。高い感度は、一重項酸素分子の生成を含む内因性増幅機構により達成される。ＳｕｒｅＦｉｒｅアッセイキットは、特定のターゲットに対して市販されており、有効な抗体のペアを含む（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）。この報告は、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ  アッセイに対して適用される一般的手順および細胞ベースアッセイにおける慣用的キナーゼ阻害剤プロファイリングに対してそれぞれ半自動化されたステップについて記載している。
【０５２７】
ラット−１細胞株を安定して過剰発現させる、活性化したＰＩ３ＫクラスＩアイソフォームＲａｔ−１  ｐＢＡＢＥｐｕｒｏ  Ｍｙｒ−ＨＡ−ｈｐ１１０デルタ（Ｒａｔ−１＿ＰＩ３Ｋデルタ）およびＲａｔ−１  ｐＢＡＢＥｐｕｒｏ  Ｍｙｒ−ＨＡ−ｈｐ１１０アルファ（Ｒａｔ−１＿ＰＩ３Ｋアルファ）およびＲａｔ−１ｐＢＡＢＥｐｕｒｏ  Ｍｙｒ−ＨＡ−ｈｐ１１０ベータ（Ｒａｔ−１＿ＰＩ３ベータ）を（Maira SM、Stauffer F、Brueggen J、Furet P、Schnell C、Fritsch C、Brachmann S、Chene P、de Pover A、Schoemaker K、Fabbro D、Gabriel D、Simonen M、Murphy L、Finan P、Sellers W、Garcia-Echeverria C (2008)、Mol Cancer Ther. 7:1851-63頁およびMaira SM、Pecchi S、Brueggen J、Huh K、Schnell C、Fritsch C、Nagel T、Wiesmann M、Brachmann S、Dorsch M、Chene P, Schoemaker K、De Pover A、Menezes D、Fabbro D、Sellers W、Garcia-Echeverria C、Voliva CF (2011)、Mol. Cancer Ther.、受理済み）に記載されている通りに調製した。すべて細胞株は、完全な成長培地内（ＤＭＥＭ高グルコース、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清、１％（ｖ／ｖ）ＭＥＭ  ＮＥＡＡ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、ピューロマイシン（Ｒａｔ−１＿ＰＩ３ＫデルタおよびＲａｔ−１＿ＰＩ３Ｋアルファに対して１０μｇ／ｍＬ、Ｒａｔ−１＿ＰＩ３ベータに対して４μｇ／ｍＬ）、１％（ｖ／ｖ）Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）、９０％密集度まで、加湿したＣＯ２インキュベーター内で、３７℃／５％ＣＯ２／９０％湿度で培養し、週２回分割した。
【０５２８】
ラット−１細胞溶解物中のｐ−ＡＫＴ（Ｓ４７３）検出用に以下の物質を使用した：Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改質Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ）高グルコース（Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ．Ｎｏ．４１９６５）、加熱した不活化ウシ胎児血清、承認済み（ＨＩ  ＦＢＳ；Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｌｏｔ．Ｎｏ．１６１４０）、ＭＥＭ非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ；Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ．Ｎｏ．１１１４０）、ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ．Ｎｏ．１５６３０）、ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、１００ｘ；Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ．Ｎｏ．１５１４０−１２２）、Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ．Ｎｏ．２５０３０）、ピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂｕｃｈｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｐ９６２０）、ＤＭＳＯ（ＭＥＲＣＫ、Ｄｉｅｔｉｋｏｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ．Ｎｏ．８．０２９１２．２５００）、Ｈ２Ｏ、ＭｉｌｌｉＱ−Ｈ２Ｏ（他に述べられていない限り）（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ  ＱＧＡＲＤＯＯＲ１、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｚｕｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂｕｃｈｓ、ＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄＣａｔ．Ｎｏ．Ａ８４１２）、ＳｕｒｅＦｉｒｅ  ｐ−Ａｋｔ１／２（Ｓｅｒ４７３）アッセイキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｓｃｈｗｅｒｚｅｎｂａｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ．Ｎｏ．ＴＧＲＡＳ５０Ｋ）。
【０５２９】
ｐ−Ａｋｔ（Ｓ４７３）ＳｕｒｅＦｉｒｅアッセイは、細胞溶解物中のＳｅｒ４７３における内因性細胞Ａｋｔ１／２のリン酸化を測定する。ｍｙｒ−ＨＡ−タグ付きバージョンのヒトＰＩ３Ｋデルタ、ＰＩ３Ｋアルファ、またはＰＩ３Ｋベータのｐ１１０触媒サブユニットアイソフォームを安定して発現するＲａｔ−１細胞を使用して、アッセイは、３８４−ウェルフォーマットの２プレートプロトコルとして開発された。
【０５３０】
化合物試験のため、細胞を、２０μｌの完全成長培地中、４０００（ラット−１＿ＰＩ３Ｋデルタ）、７５００（ラット−１＿ＰＩ３Ｋアルファ）または６２００（Ｒａｔ−１＿ＰＩ３Ｋベータ）細胞の密度で細胞培養処理した３８４ウェルプレートに播種し、３７℃／５％ＣＯ２／９０％の湿度で２４ｈ培養した。化合物を移す直前に、完全培地を除去し、３０μｌのアッセイ緩衝液（ＤＭＥＭ高グルコース、１×ＭＥＭ  ＮＥＡＡ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ）を加え、１０μｌの化合物の前希釈物を細胞に移した。２０１０年２月以降の試験のため、アッセイ緩衝液を完全な成長培地と置換し、これにより同様の結果が明らかにされた（データは示されていない）。化合物を１ｈ処理した後、０．２４％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを補充した２０μｌの溶解緩衝液の添加により、細胞を溶解した。全検出量１２μｌ中の細胞溶解物５μｌを使用して、製造者の指示書に従い、ＳｕｒｅＦｉｒｅ  ｐ−Ａｋｔ１／２（Ｓｅｒ４７３）アッセイキットを用いて、ｐ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）の検出を実施した。
【０５３１】
８つの濃度（普通１０、３．０、１．０、０．３、０．１、０．０３０、０．０１０および０．００３μＭ）での各化合物のパーセンテージ阻害のＩＣ５０値、ｎ＝２は、記載されている通り、シグモイドの用量反応曲線を、阻害剤濃度わたりアッセイ読出しのプロットにフィッティングさせることによって導いた。すべてのフィッティングは、プログラムＸＬｆｉｔ４（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ、ＵＫ）を用いて実施した。
【０５３２】
ｍＴＯＲに対する細胞アッセイ
細胞ベースのアッセイ（３８４−ウェルフォーマット）が、ＴＳＣ１（結節性硬化症複合体１）、ｍＴＯＲキナーゼ活性の強力な抑制剤が欠如しているマウスから誘導された、ＭＥＦ（マウス胎仔繊維芽細胞）細胞における細胞ｍＴＯＲキナーゼ活性に対する化合物の作用の測定のために開発された。ＴＳＣ１の欠如により、ｍＴＯＲキナーゼは、構成的に活性化され、結果として、ｍＴＯＲの下流ターゲットの１つであるＳ６キナーゼ１（Ｓ６Ｋ１）のＴｈｒ３８９の永久的リン酸化が生じる。
【０５３３】
Ｓ６Ｋ１上のＴｈｒ３８９のリン酸化を求めることを可能にするＳｕｒｅＦｉｒｅキットを使用して、細胞溶解物におけるＳ６Ｋ１のホスホ−Ｔ３８９の定量的測定を可能にするアルファ−スクリーニングフォーマットで、アッセイを開発し、有効化し、実行した。ｍＴＯＲ特異的な（またはｍＴＯＲ経路−）阻害剤でＭＥＦＴＳＣ１−／−細胞を処理することにより、Ｓ６Ｋ１上のホスホ−Ｔ３８９のレベルを投与量依存的に減少させ、ＩＣ５０値の計算を可能にした。これらは、生化学的ｍＴＯＲ  ＡＴＰ−結合実験を用いて得た値と一致し、ｍＴＯＲ阻害剤の能力の定量的比較を可能にした。
【０５３４】
ＴＳＣ１−／−ＭＥＦ細胞（Kwiatkowski、D. J.、Zhang、H.、Bandura、J. L.、Heiberger、K. M.、Glogauer、M.、el-Hashemite、N.、およびOnda、H. (2002) Hum. Mol. Genet. 11、525-534頁）を、１０％ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２ｍＭグルタミンおよび１％（ｗ／ｖ）ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ高グルコース培地内で、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。
【０５３５】
Ｐ７０Ｓ６キナーゼのリン酸化の測定のためのＳｕｒｅＦｉｒｅキットを、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（ｐ７０Ｓ６Ｋ  ｐ−Ｔ３８９、＃ＴＧＲ７０Ｓ５０Ｋ）から購入し、供給元の指示に従い、およびＳｕｒｅＦｉｒｅアッセイに対する一般的な方法に従いアッセイを実施した。直ちに、１ウェル当たり５μＬの細胞溶解物を３８４−ウェル白色プロキシプレート（発光の読出し用）に移し、７μＬのＡおよび５μＬのＢ（最終容量：１２μＬ）と混合した。暗所で、ＲＴでの３ｈのインキュベーション後、ルミネセンスをＥｎｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。未処理の細胞を対照（高度の対照）として使用し、３μＭ  ＢＥＺ２３５で処理した細胞を低度の対照として使用した。高度および低度の対照に対して得た信号間のアッセイウィンドウを１００％と定義し、化合物作用をパーセント阻害と表現した。グラフの外挿による用量反応曲線からＩＣ５０値を計算した。
【０５３６】
上に記載されたアッセイを使用して得た結果を、以下の表に示す。ここで、ＳＥＭは、平均値の標準的誤差であり、ｎはデータ測定の数である。
【０５３７】
【表１０】
2015508096.tif 000195
【０５３８】
【表１１】
2015508096.tif 000196
【０５３９】
【表１２】
2015508096.tif 000197
【０５４０】
【表１３】
2015508096.tif 000198
【０５４１】
【表１４】
2015508096.tif 000199
【０５４２】
【表１５】
2015508096.tif 000200
【０５４３】
【表１６】
2015508096.tif 000201
【０５４４】
【表１７】
2015508096.tif 000202
【０５４５】
オフターゲット効果（チューブリン結合の証拠）を以下の通り測定した。
【０５４６】
サイトスピンアッセイの記載：
細胞周期Ｇ２／Ｍは、サイトスピンアッセイを停止させることによってＭＡＰＰ誘導体のチューブリン結合（的外れの）結合活性を検出する：５×１０５細胞のＡ２０５８細胞を、２ｍＬのＤＭＥＭ（１％ピルビン酸ナトリウム、１％グルタミンおよび１０％ＦＣＳを含有する高グルコース）を有する６−ウェルクラスターにプレーティングした。１８時間後、試験アイテムを濃度５μＭ（試験アイテムの１μＬの１０ｍＭ溶液をスパイクする）で加えた。２４時間後、細胞をトリプシン処理し、１５ｍＬの円錐体の管に移した。次いで細胞を遠心分離でペレットにし、ＰＢＳ／Ｏ（１０％ＦＣＳを含有）で再懸濁させた。細胞をＣＡＳＹカウンターでカウントし、各試料を１×１０６細胞／ｍＬに平衡化した。次いで、２００μＬ（２×１０５細胞）を１．５ｍＬのサイトスピン管（Ｈｅｒａｅｕｓ  Ｓｅｐａｔｅｃ、Ｒｅｆ  １１５２）に移し、顕微鏡スライド（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｅｆ：＃ＰＨ０４０８２０の上で調節した、Ｓｅｐａｔｅｃｈ装置（Ｈｅｒａｅｕｓ、Ｒｅｆ  ＃３４２５）を含有するサイトスピン装置を用いて５０×ｇで、４℃で５ｍｉｎ遠心分離した。次いで、細胞を室温で１５ｍｉｎ固定し、製造者の推奨に従い、Ｄｉｆｆ  Ｑｕｉｃｋ（登録商標）アッセイ（Ｍｅｄｉｏｎ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｅｆ：＃１３０８３２）で着色した。Ｇ２／Ｍ停止を反映して濃縮したＤＮＡが、顕微鏡下でスライドを検査した際に、細胞内で強調された染色により明らかになる。染色は、濃縮したＤＮＡの存在に対して目視により評価し、スコアを付けた（０＝濃縮したＤＮＡが観察されない（オフターゲット活性がないことを示唆）、１＝（弱いオフターゲット活性を示唆）、２＝（中程度のオフターゲット活性を示唆）、３＝多量の濃縮ＤＮＡが観察された（強い的外れの活性を示唆））。
【０５４７】
この方法を使用して得たデータを以下の表に示す：
【０５４８】
【表１８】
2015508096.tif 000203
【図１】
2015508096.tif 000212
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2015508096.tif 000216
【図６】
2015508096.tif 000217
【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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