(57)【要約】  本発明は、放射性ヨウ素化ベクター、とりわけ放射性ヨウ素化された放射性医薬品及びその製造方法に関する。本発明は、ＨＰＬＣによる精製を必要とすることなく放射性ヨウ素化ベクターの製造及び精製を可能にする方法、並びにかかる方法に有用なビオチン様置換基を含む新規な前駆体を提供する。【選択図】    図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）ビオチン含有スズ前駆体を放射性ヨウ化物及び酸化剤と接触させて、放射性ヨウ素化化合物、未反応の前駆体及び反応副生物を含む反応混合物を形成し、
（ii）段階（ｉ）の反応混合物をアビジン又はストレプトアビジンと接触させることにより、前記アビジン又はストレプトアビジンを前記前駆体及び副生物と結合させて、アビジン／ストレプトアビジンに結合した前駆体及びアビジン／ストレプトアビジンに結合した副生物を得、
（iii）前記アビジン／ストレプトアビジンに結合した前駆体及びアビジン／ストレプトアビジンに結合した副生物から放射性ヨウ素化化合物を分離する
ことを含む、放射性ヨウ素化化合物を製造する方法。
【請求項２】
さらに、段階（ｉ）の反応混合物を還元剤と接触させて還元反応混合物を形成し、還元反応混合物を段階（ii）及び（iii）で使用することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
さらに、段階（ｉ）を溶解性向上剤の存在下で実施するか、又は段階（ｉ）で得られた反応混合物を溶解性向上剤と接触させることを含む、請求項１又は請求項２記載の方法。
【請求項４】
さらに、段階（ii）で反応混合物を溶解性向上剤と接触させることを含む、請求項１又は請求項２記載の方法。
【請求項５】
組成物をアビジン又はストレプトアビジンと接触させることが、
反応混合物又は還元反応混合物をアビジン又はストレプトアビジン固体支持体のカラムに通して下降させること、
アビジン又はストレプトアビジン固体支持体を反応混合物又は還元反応混合物と混合した後ろ過すること、
ビオチンを含有する前駆体をアビジン又はストレプトアビジン固体支持体に付着させた後、ビオチンを含有する前駆体を放射性ヨウ化物及び酸化剤と接触させ、次いで放射性ヨウ素化化合物を溶出すること、
反応混合物又は還元反応混合物を可溶性のアビジン又はストレプトアビジンで処理した後、アビジン又はストレプトアビジンに結合した複合体を放射性ヨウ素化化合物からサイズ分離すること、又は
反応混合物又は還元反応混合物をストレプトアビジン又はアビジン−被覆表面の上に通すこと
の少なくとも１つを含む、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
放射性ヨウ素化化合物がアリール部分を含む、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
放射性ヨウ素化化合物がビニル部分を含む、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
放射性ヨウ素化化合物が、放射性ヨウ素化安息香酸、放射性ヨウ素化ベンズアミド、放射性ヨウ素化ベンジルアミン、及び放射性ヨウ素化ベンジルグアニジンから選択される、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
ビオチン含有スズ前駆体が式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩である、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【化１】
2015514702.tif 000024
式中、
Ｒ1は、芳香族又はビニル性炭素をヨウ化物で置換することができる芳香族又はビニル基であり、
Ｒ2及びＲ3は、各々独立に、Ｒ1、各々０〜４個のＲ5基で置換されているアルキル又はアルコキシアルキルから選択されるものであるか、或いはＲ2及びＲ3は、それらが結合しているＳｎ原子と共に、適宜Ｎ、Ｏ又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜８員環を形成し、
Ｚは、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルキレン又はヘテロシクロアルキレンから選択されるが、Ｚがアリーレン又はヘテロアリーレンである場合にはｍが１以上であることを条件とし、ｎ＝１〜９であるが、但しＺが−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−である場合ｐ＝２〜１０であり、
Ｘは、−Ｏ−及び−ＮＲ4−から選択され、
Ｒ4は、Ｈ及びアルキルから選択されるが、アルキルは０〜４個のＲ6基で置換されており、
各Ｒ5は、独立に、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから選択され、
Ｒ6は、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから選択され、
Ｒa、Ｒb及びＲcは、各々独立に、−Ｈ及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択され、
Ｙは、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2及びＯから選択され、
ｉは、０、１、又は２であり、
ｍ、ｎ及びｐは、各々独立に、０〜１０の整数であり、ここでｍ＋ｎ＋ｐ3１である。
【請求項１０】
放射性ヨウ化物が123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ及び131Ｉから選択される、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
酸化剤がヨードゲン及び過酢酸から選択される、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
酸化剤がチューブ又はビーズ上に予め被覆される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化２】
2015514702.tif 000025
式中、
Ｒ1は、芳香族又はビニル性炭素をヨウ化物で置換することができる芳香族又はビニル基であり、
Ｒ2及びＲ3は、各々独立に、Ｒ1、各々０〜４個のＲ5基で置換されているアルキル又はアルコキシアルキルから選択されるものであるか、或いはＲ2及びＲ3は、それらが結合しているＳｎ原子と共に、場合によりＮ、Ｏ、又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜８員環を形成し、
Ｚは、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルキレン又はヘテロシクロアルキレンから選択されるが、但しＺがアリーレン若しくはヘテロアリーレンである場合ｍは少なくとも１であり、
Ｘは、−Ｏ−及び−ＮＲ4−から選択され、
Ｒ4は、Ｈ及びアルキルから選択されるが、アルキルは０〜４個のＲ6基で置換されており、
各Ｒ5は、独立に、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから選択され、
Ｒ6は、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから選択され、
Ｒa、Ｒb及びＲcは、各々独立に、−Ｈ及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択され、
Ｙは、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2及びＯから選択され、
ｍ、ｎ及びｐは、各々独立に、０〜１０の整数であり、ここでｍ＋ｎ＋ｐ3１である。
【請求項１４】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化３】
2015514702.tif 000026
式中、
Ｒ1は、芳香族又はビニル性炭素をヨウ化物で置換することができる芳香族又はビニル基であり、
Ｒ2及びＲ3は、各々独立に、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル又はアルコキシアルキルから選択されるものであるか、或いはＲ2及びＲ3は、それらが結合しているＳｎ原子と共に、適宜Ｎ、Ｏ又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい４、５又は６員環を形成し、
Ｚは、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−であり、
Ｘは、Ｏ及びＮＨから選択され、
Ｙは、Ｓ又はＳＯ2から選択され、
ｐは、２〜４の整数である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性ヨウ素化ベクター、殊に放射性ヨウ素化された放射性医薬品及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
放射性ヨウ素化ベクターは治療、医学診断撮像及び研究のための有用なツールである。例えば、123Ｉ標識ベクターはＳＰＥＣＴイメージングに使用され、124Ｉ標識ベクターはＰＥＴイメージングに使用され、125Ｉ標識ベクターは生物学的アッセイ及び療法に使用され、131Ｉ標識ベクターは治療に使用される。
【０００３】
放射性ヨウ素化は、酸化性条件下ヨウ化物の放射性同位体（例えば、123Ｉ-種）でビニル又はアリール−スズ前駆体を処理して、目的とする放射性ヨウ素化生成物をスズ解裂産物と共に得ることにより達成することができる。過剰のアリール−スズ前駆体を使用して、放射性ヨウ化物の速く、かつ効率的な利用を確実にする。通例、目的とする放射性ヨウ素化生成物をスズ解裂産物及び未反応のアリール−スズ前駆体から分離するためにＨＰＬＣが必要とされる。しかしながら、ＨＰＬＣは時間がかかり、従って活性の損失が生じ、また一般にかなりの投資、空間及び熟練した人を必要とする。
【０００４】
ペプチド及び抗体のような生体分子を始めとする広範囲の化合物に対して効果があるＨＰＬＣフリープロセスがあれば有利であろう。例えば、Ｅｅｒｓｅｌｓ，Ｊ．Ｌ．Ｈ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，２００５．４８（４）：ｐ．２４１−２５７及びＣｏｅｎｅｎ，Ｈ．Ｈ．ら，Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ２００６：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ．ｐ．１０１参照。しかし、ＨＰＬＣフリープロセスの必要性が認められており、２つの報告されている解決策には多くの欠点がある。
【０００５】
【化１】
2015514702.tif 000002
文書に記載されている第１の手法はＸ（スキーム１に示した）として不溶性の樹脂又はポリマーを使用する。前駆体Ｐｒｅｃはスズリンカーを介して樹脂に結合したベクターからなる。酸化的放射性ヨウ素化の際、目的とする放射性ヨウ素化Ｉ−Ｐｒｏｄが反応中に遊離し、ろ過によってＰｒｅｃ及びＣから分離することができる。例えば、Ｃｕｌｂｅｒｔ，Ｐ．Ａ．ら，Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，１９９３．１９（３）：ｐ．２４７−２５３、Ｈｕｎｔｅｒ，Ｄ．Ｈ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，１９９９．４２（７）：ｐ．６５３−６６１、及びＫａｂａｌｋａ，Ｇ．Ｗ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，２００１．４４（１３）：ｐ．９２１−９２９参照。しかしながら、この手法には幾つかの欠点がある。例えば、特に承認を得るために純度及び無菌性を規制当局に対して立証しなければならない放射性医薬品の場合、樹脂に結合した前駆体の製造、精製及び特性決定は困難である。さらに、樹脂に関する化学は溶液相化学ほど容易でないことが多く、この手法が抗体のような感受性の高い生体分子に対して働くか否かは明らかではない。
【０００６】
第２の手法において、（スキーム１に示されている）ＸはＣＦ3（ＣＦ2）5ＣＨ2ＣＨ2−のようなフルオラス相テールである。放射性ヨウ素化の後、目的とするＩ−Ｐｒｏｄは、フルオラス相テールのためにＰｒｅｃ及びＣが保持されるフルオラス−相ｓｅｐ−ｐａｋに通して溶出することで単離される。例えば、Ｄｏｎｏｖａｎ，Ａ．Ｃ．ら，Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ，２００８．３５（７）：ｐ．７４１−６、Ｄｏｎｏｖａｎ，Ａ．ら，Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ，２００６．１２８（１１）：ｐ．３５３６−３５３７、及びＶａｌｌｉａｎｔ，Ｊ．Ｆ．ら，米国特許第７３３５３４７号（２００８）参照。フルオラス相との相互作用を最大化するためにＳｎは３つのフルオラス相テールを有する。しかしながら、この手法にも幾つかの欠点がある。例えば、ベクターが大きい分子、例えばペプチド又は抗体である場合、前駆体のクロマトグラフィー特性はフルオラス相テールではなく、大きいベクターによって支配されるであろうから、前駆体がフルオラス相ｓｅｐ−ｐａｋに保持される可能性は低いであろう。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００９／００５５４５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本教示は、ＨＰＬＣによる精製を必要としないで放射性ヨウ素化ベクターを製造・精製する方法、及びかかる方法に使用される新規な前駆体を提供する。いかなる特定の理論にも束縛されることは望まないが、かかる方法は、時間とコストを節約するだけでなく、最初の放射性同位体の利用を最大化し、生成物の最適の放射活性を維持する点においても有利であろうと考えられる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
幾つかの実施形態では、本教示は、放射性ヨウ素化化合物を製造する方法を提供する。この方法は、ビオチンを含有するスズ前駆体を放射性ヨウ化物及び酸化剤(oxidant)と接触させて、放射性ヨウ素化化合物、未反応前駆体及び反応の副生物を含む反応混合物を形成し、反応混合物をアビジン又はストレプトアビジンと接触させ、それによって放射性ヨウ素化化合物を前駆体及び反応副生物から分離することを含んでいる。
【００１０】
幾つかの実施形態では、本教示は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１１】
【化２】
2015514702.tif 000003
式中、
Ｒ1は、芳香族又はビニル性炭素をヨウ素で置換することができる芳香族又はビニル基であり、
Ｒ2及びＲ3は、Ｒ1、各々０〜４個のＲ5基で置換されていてもよいアルキル又はアルコキシアルキルから各々独立に選択されるものであるか、或いはＲ2及びＲ3は、それらが結合しているＳｎ原子と共に、適宜Ｎ、Ｏ又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜８員環を形成し、
Ｚは、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルキレン又はヘテロシクロアルキレンから選択されるが、Ｚがアリーレン又はヘテロアリーレンである場合にはｍが１以上であることを条件とし、
Ｘは、−Ｏ−及び−ＮＲ4−から選択され、
Ｒ4は、Ｈ及びアルキルから選択されるが、アルキルは０〜４個のＲ6基で置換されていてもよく、
各Ｒ5は、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから独立に選択され、
Ｒ6は、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから選択され、
Ｒa、Ｒb及びＲcは、−Ｈ及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから各々独立に選択され、
Ｙは、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2及びＯから選択され、
ｉは、０、１又は２であり、
ｍ、ｎ及びｐは、各々独立に０〜１０の整数であって、ｍ＋ｎ＋ｐ≧１である。
【００１２】
式（Ｉ）又は（Ａ）の特定の実施形態では、ｍ、ｎ及びｐは各々独立に０〜１０の整数であって、ｍ＋ｎ＋ｐ≧２である。
【００１３】
式（Ｉ）又は（Ａ）の特定の実施形態では、Ｒ2及びＲ3はいずれもＨである。
【００１４】
式（Ｉ）又は（Ａ）の特定の実施形態では、ｍ、ｎ及びｐは各々独立に０〜１０の整数であって、ｍ＋ｎ＋ｐ≧２であり、Ｒ2及びＲ3はいずれもＨである。
【００１５】
幾つかの実施形態では、本教示は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１６】
【化３】
2015514702.tif 000004
式中、
Ｒ1は、芳香族又はビニル性炭素をヨウ素で置換することができる芳香族又はビニル基であり、
Ｒ2及びＲ3は、各々独立に（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル又はアルコキシアルキルから選択されるものであるか、或いはＲ2及びＲ3は、それらが結合しているＳｎ原子と共に、適宜Ｎ、Ｏ又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい４、５又は６員環を形成し、
Ｚは、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−であり、
Ｘは、Ｏ及びＮＨから選択され、
Ｙは、Ｓ又はＳＯ2から選択され、
ｐは、２〜４の整数である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１Ａ〜１Ｅは、放射性ヨウ素化で使用する様々な酸化剤に対する本教示の代表的なビオチン前駆体の安定性を示すグラフである。
【図２】図２Ａ〜２Ｃは、放射性ヨウ素化で使用する様々な酸化剤に対する本教示の代表的なビオチンスルホン前駆体の安定性を示すグラフである。
【図３】図３Ａ〜３Ｅは、ストレプトアビジン樹脂が様々な溶媒比において本教示の代表的な前駆体を保持する能力を示すグラフである。
【図４】図４は、本教示の代表的な放射性ヨウ素化生成物の精製前のＵＶ及びγトレースを示す。
【図５】図５は、本教示の代表的な放射性ヨウ素化生成物の精製後のＵＶ及びγトレースを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
ＰＥＴ及びＳＰＥＣＴに基づく医用撮像における感度は、対象の部位に局在化される放射能の量、従ってその結果として作用剤の用量当たりの放射能又はその作用剤の「比放射能」に依存する。ＰＥＴ及びＳＰＥＣＴイメージング剤の化学的純度を最大化して、患者の安全を確保すると共に特に効果的な比放射能を達成することが重要である。効果的な比放射能は、放射性標識作用剤のモル数を、その放射性標識作用剤と同様な生物学的性質を有する全ての分子のモル数で割った値と定義される。
【００１９】
放射性ヨウ素化（下記スキーム１参照）は、ビニル又はアリール−スズ前駆体（「Ｐｒｅｃ」）を酸化性条件ヨウ素の放射性同位体（例えば、123Ｉ-種）で処理して目的とする放射性ヨウ素化生成物（「Ｉ−Ｐｒｏｄ」）及びスズ解裂生成物（「Ｃ」）を生成させることによって達成することができる。放射性ヨウ化物の速くて効率的な利用を確実にするために過剰のアリール−スズ前駆体が使用される。
【００２０】
【化４】
2015514702.tif 000005
放射性ヨウ素化には過剰の前駆体（「Ｐｒｅｃ」）を使用するので、未反応のＰｒｅｃは低い比放射能の主要な原因である。低含量の受容体の撮像の場合、未反応のＰｒｅｃは受容体を飽和させ、放射性標識生成物Ｉ−Ｐｒｏｄの結合を低下させ、その結果画質が悪くなり得る。
【００２１】
また、ＰＥＴ及び／又はＳＰＥＣＴイメージング剤の化学的純度を最大化して患者の安全を確保することも重要である。放射性ヨウ素化化合物の化学的純度を高めるための現行の手法はＨＰＬＣ精製に依存しているが、これには時間がかかり、従って放射能の減衰が起こり、放射性ヨウ素化生成物を前駆体からクロマトグラフィー的に分離する能力によって制限され、しかも高価である。本教示は、ＨＰＬＣ精製を使用することなく、放射性ヨウ素化ベクターの高い化学的純度を達成する放射性ヨウ素化ベクターを製造及び精製する方法を記載する。
【００２２】
本教示は、例えば研究、診断撮像及び治療の目的の、放射性ヨウ素化のための新規な前駆体及びこれらの前駆体を用いて放射性ヨウ素化ベクターを製造・精製する方法に関する。いかなる特定の理論にも束縛されることは望まないが、かかる方法及び前駆体は、限定されることはないが、放射性ヨウ素化ベクターを前駆体及び解裂生成物から精製するためのＨＰＬＣの必要性の排除、簡単な化合物である故の前駆体の容易な製造、特性決定及び精製できる能力、前駆体及び放射性ヨウ素化ベクターのクロマトグラフィー的識別が最小であるペプチド又は抗体のような大きい分子を始めとする広範囲の放射性ヨウ素化ベクターに対する有用性、並びに前駆体と水性反応混合物との適合性を含めて、従来技術に対して多くの利点を有すると考えられる。
【００２３】
製造及び精製方法
１以上の実施形態では、本教示は、放射性ヨウ素化化合物を製造又は精製する方法を提供する。かかる方法は、一般に、ビオチン含有スズ前駆体を放射性ヨウ化物及び酸化剤と接触させて、放射性ヨウ素化化合物、未反応の前駆体及び反応副生物を含む反応混合物を形成し、反応混合物をアビジン又はストレプトアビジンと接触させて放射性ヨウ素化化合物を前駆体及び反応副生物から分離することを含む。１以上の実施形態では、本方法はさらに反応混合物を溶解性向上剤と接触させることを含む。
【００２４】
１以上の実施形態では、本教示は、放射性ヨウ素化化合物を製造又は精製する方法を提供する。かかる方法は一般に、ビオチン含有スズ前駆体を放射性ヨウ化物、酸化剤及び溶解性向上剤と接触させて、放射性ヨウ素化化合物、溶解性向上剤、未反応の前駆体及び反応副生物を含む反応混合物を形成し、反応混合物をアビジン又はストレプトアビジンと接触させて放射性ヨウ素化化合物を前駆体及び反応副生物から分離することを含む。
【００２５】
１以上の実施形態では、本教示は、放射性ヨウ素化化合物を製造又は精製する方法を提供する。かかる方法は一般に、ビオチン含有スズ前駆体を放射性ヨウ化物及び酸化剤と接触させて、放射性ヨウ素化化合物、未反応の前駆体及び反応副生物を含む反応混合物を形成し、反応混合物を溶解性向上剤及びアビジン又はストレプトアビジンと接触させて放射性ヨウ素化化合物を前駆体及び反応副生物から分離することを含む。
【００２６】
１以上の実施形態では、本教示は、放射性ヨウ素化化合物を製造又は精製する方法を提供する。かかる方法は一般に、ビオチン含有スズ前駆体を放射性ヨウ化物及び酸化剤と接触させて、放射性ヨウ素化化合物、未反応の前駆体及び反応副生物を含む反応混合物を形成し、反応混合物を還元剤と接触させて還元反応混合物を形成し、還元反応混合物をアビジン又はストレプトアビジンと接触させて放射性ヨウ素化化合物を前駆体及び反応副生物から分離することを含む。１以上の実施形態では、本方法はさらに、反応混合物又は還元反応混合物を溶解性向上剤と接触させる段階を含む。
【００２７】
１以上の実施形態では、本教示は、放射性ヨウ素化化合物を製造又は精製する方法を提供する。かかる方法は一般に、ビオチン含有スズ前駆体を放射性ヨウ化物、酸化剤及び溶解性向上剤と接触させて、放射性ヨウ素化化合物、溶解性向上剤、未反応の前駆体及び反応副生物を含む反応混合物を形成し、反応混合物を還元剤と接触させて還元反応混合物を形成し、還元反応混合物をアビジン又はストレプトアビジンと接触させて放射性ヨウ素化化合物を前駆体及び反応副生物から分離することを含む。
【００２８】
１以上の実施形態では、本教示は、放射性ヨウ素化化合物を製造又は精製する方法を提供する。かかる方法では一般に、ビオチン含有スズ前駆体を放射性ヨウ化物及び酸化剤と接触させて、放射性ヨウ素化化合物、未反応の前駆体及び反応副生物を含む反応混合物を形成し、反応混合物を還元剤と接触させて還元反応混合物を形成し、還元反応混合物を溶解性向上剤及びアビジン又はストレプトアビジンと接触させて放射性ヨウ素化化合物を前駆体及び反応副生物から分離する。
【００２９】
典型的な反応条件下で、残留する未結合放射性ヨウ素は最小である。放射性ヨウ素が反応により完全に消費されない場合、残留する未結合放射性ヨウ素の固相抽出法又はその他による予備的又は後精製は当業者に自明であろうと理解される。これには、限定されることはないがイオン交換、シリカゲル、アルミナ、逆相樹脂等が含まれ得る。
【００３０】
溶解性向上剤との接触は本明細書に記載の方法の間どの時点でも行うことができると理解される。例えば、ビオチン含有スズ前駆体は反応混合物の形成中に溶解性向上剤と接触させることができ、或いは、反応混合物は上記のように形成し、ある期間の後反応混合物を溶解性向上剤と接触させてもよい。同様に、ビオチン含有スズ前駆体は反応混合物の形成中、還元剤と接触させる前に溶解性向上剤と接触させることができ、或いは、反応混合物は上記のように形成し、ある期間の後反応混合物を溶解性向上剤と、その後還元剤と接触させてもよいし、又は溶解性向上剤及び還元剤と同時に接触させてもよい。同様に、還元反応混合物を溶解性向上剤と接触させるとき、この接触はアビジン又はストレプトアビジンとの接触の前、同時、又は後に行うことができる。当業者は上記の適当な時期を決定することができる。
【００３１】
本明細書で使用する場合用語「放射性ヨウ素化化合物」又は「単離放射性ヨウ素化化合物」とは、化合物の芳香族又はビニル部分上に放射性のヨウ素置換基を含む芳香族又はビニル化合物をいう。放射性のヨウ素置換基の例には123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ及び131Ｉがある。従って、幾つかの実施形態では、放射性ヨウ素化化合物はアリール酸のようなアリール部分を含む。代表的な放射性ヨウ素化化合物としては、限定されることはないが放射性ヨウ素化安息香酸、放射性ヨウ素化ベンズアミド、放射性ヨウ素化ベンジルアミン、及び放射性ヨウ素化ベンジルグアニジンがある。
【００３２】
本明細書で使用する場合、「ビオチン」とは、アビジン又はストレプトアビジンと結合する、ビオチン、ビオチンの酸化生成物、及びビオチン様置換基、例えば、ビオチン、オキシビオチン、ビオチンスルホン及びビオチンスルホキシド、並びにこれらの立体異性体を含めていう。本明細書で使用する場合、用語「ビオチン含有スズ前駆体」とは、ビオチン、ビオチンの酸化生成物、又はビオチン様置換基、並びに芳香族又はビニル炭素においてヨウ化物で標識されると共にアビジン又はストレプトアビジンに結合することができる芳香族又はビニル基を含むスズ複合体をいう。スズ分子は１以上の芳香族又はビニル性炭素の炭素原子に直接結合によって結合する。また、スズ分子は、直接結合を介して、又はリンカーを介して、ビオチン、ビオチンの酸化生成物、又はビオチン様置換基に結合する。
【００３３】
本明細書で使用する場合、用語「ビオチンを含有する副生物」又は「反応副生物」とは、ヨウ化物と本明細書に定義されているビオチンを含有する前駆体との反応の生成物をいう。この反応は一般に、ヨウ化物で標識することができる芳香族ベクターからのスズ部分の解裂を引き起こす。かかる副生物は通例直接又はリンカーを介してビオチン又はビオチン様置換基に結合したスズ部分を含む。
【００３４】
幾つかの実施形態では、酸化剤はヨードゲン(iodogen)及び過酢酸から選択される。例えば、酸化剤は固体又は溶液若しくは懸濁液であることができ、又は酸化剤はチューブ又はビーズ上に予め被覆することができる。幾つかの実施形態では、放射性ヨウ化物は123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、及び131Ｉから選択される。
【００３５】
本明細書で使用する場合、用語「溶解性向上剤」とは、水又は水と有機共溶媒の混合物に対する有機分子の溶解性を高める分子をいう。これらは通例両親媒性であり、疎水性領域と親水性領域を含有する。代表的な溶解性向上剤には、もちろん限定されることはないが、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）、シクロデキストリン（例えばα、β、γシクロデキストリン）、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンのようなシクロデキストリンの類似体、及びラウリル硫酸ナトリウムがある。
【００３６】
本明細書で使用する場合、用語「還元剤」とは、添加された酸化剤及び残存するあらゆる未反応の親電子性放射性ヨウ素種を還元する作用剤をいう。代表的な還元剤には、限定されることはないが重亜硫酸ナトリウム、チオ亜硫酸ナトリウム又はメタ重亜硫酸ナトリウムがある。
【００３７】
幾つかの実施形態では、ビオチン含有スズ前駆体は式（Ａ）で表される化合物又はそのその薬学的に許容される塩である。
【００３８】
【化５】
2015514702.tif 000006
式中、
Ｒ1は、芳香族又はビニル性炭素がヨウ化物で置換されることができる芳香族又はビニル基であり、
Ｒ2及びＲ3は、各々独立に、Ｒ1、各々０〜４個のＲ5基で置換されたアルキル又はアルコキシアルキルから選択されるものであるか、或いはＲ2及びＲ3は、それらが結合しているＳｎ原子と共に、適宜Ｎ、Ｏ又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜８員環を形成し、
Ｚは、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルキレン又はヘテロシクロアルキレンから選択されるが、但し、Ｚがアリーレン又はヘテロアリーレンであり、ｎ＝１〜９の場合、ｍは１以上であり、またＺが−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−である場合、ｐ＝２〜１０であり、
Ｘは、−Ｏ−及び−ＮＲ4−から選択され、
Ｒ4は、Ｈ及びアルキルから選択されるが、アルキルは０〜４個のＲ6基で置換され、
各Ｒ5は、独立に、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから選択され、
Ｒ6は、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから選択され、
Ｒa、Ｒb及びＲcは、各々独立に、−Ｈ及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択され、
ｉは、０、１、又は２であり、
Ｙは、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2及びＯから選択され、
ｍ、ｎ及びｐは、各々独立に０〜１０の整数であって、ｍ＋ｎ＋ｐ≧１であり、
ｑ及びｒは各々個別に０又は１の整数であり、ｓは１〜３の整数であるが、但しｑ＋ｒ＋ｓ＝３である。
【００３９】
他の実施形態では、ビオチン含有スズ前駆体は式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である。
【００４０】
【化６】
2015514702.tif 000007
式中、
Ｒ1は、芳香族又はビニル性炭素がヨウ化物で置換されることができる芳香族又はビニル基であり、
Ｒ2及びＲ3は、各々独立に、Ｒ1、各々０〜４個のＲ5基で置換されているアルキル又はアルコキシアルキルから選択されるものであるか、或いはＲ2及びＲ3は、それらが結合しているＳｎ原子と共に、適宜Ｎ、Ｏ又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜８員環を形成し、
Ｚは、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルキレン又はヘテロシクロアルキレンから選択されるが、但しＺがアリーレン若しくはヘテロアリーレンであり、ｎ＝１〜９である場合、ｍは１以上であり、またＺが−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−である場合、ｐ＝２〜１０であり、
Ｘは、−Ｏ−及び−ＮＲ4−から選択され、
Ｒ4は、Ｈ及びアルキルから選択されるが、アルキルは０〜４個のＲ6基で置換され、
各Ｒ5は、独立に、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから選択され、
Ｒ6は、−Ｈ、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＮＲaＲb、−ＯＲc、−Ｓ（Ｏ）iＲc、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒc、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲc及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒcから選択され、
Ｒa、Ｒb及びＲcは、各々独立に、−Ｈ及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択され、
Ｙは、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2及びＯから選択され、
ｉは、０、１、又は２であり、
ｍ、ｎ及びｐは、各々独立に、０〜１０の整数であって、ｍ＋ｎ＋ｐ≧１である。
【００４１】
本明細書で使用する場合、ヨウ化物で標識することができる芳香族又はビニル基は、ヨウ素部分（残基）が、芳香族（例えばヨウ化アリール）又はビニル基（例えばヨウ化ビニル）に結合して治療薬、診断薬又は両方を生じることを意味する。用語「ヨウ化アリール」とは、ヨウ化物（ヨウ素）が直接結合している芳香族基をいう。用語「ヨウ化ビニル」とは、ヨウ化物（ヨウ素）が直接結合しているビニル基をいう。１つの実施形態では、ヨウ化物で標識することができる芳香族ベクターは５〜１４員のアリール部分又は５〜１４員のヘテロアリール部分を含む。
【００４２】
本明細書で使用する場合、用語「ベクター」とは、芳香族又はビニル性炭素原子がヨウ化物で置換されている芳香族又はビニル基をいう。本明細書で使用する場合、表現「芳香族ベクター」とは、１以上の芳香族部分を含む物質、例えば小分子有機化合物又は巨大分子を指していう。従って、「ヨウ化物で標識することができる芳香族ベクター」とは、１以上の環置換基をヨウ化物置換基と交換することができる芳香族ベクターをいう。
【００４３】
本明細書で使用する場合、表現「ビニルベクター」は、１以上のビニル部分を含む物質、例えば小分子有機化合物又は巨大分子をいう。従って、「ヨウ化物で標識することができるビニルベクター」は、１以上のビニル性炭素置換基をヨウ化物置換基と交換することができるビニルベクターをいう。幾つかの実施形態では、ヨウ化物で標識することができる芳香族又はビニルベクターは（ヨウ化物で標識されると）治療薬、診断薬又は両方を生ずる。
【００４４】
本明細書で使用する場合、用語「治療薬」とは、身体に対してある効果を及ぼすことができる薬物、薬剤、又はその他の物質、例えば、症状、病理学的障害又は疾病の発現及び／又は進行を予防、治療、緩和するために使用することができる作用剤をいう。治療薬には、低分子量薬物、タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチド、核酸、多糖及びその他の巨大分子が含まれ、各々合成であることも、又は天然に産生されることもできる。用語「薬物（薬剤）」には、分子量が約５０〜約１０００ダルトンの有機化合物のような小分子が含まれる。
【００４５】
本明細書で使用する場合、用語「診断薬」は、生理学的状態又は機能の検出又はモニターを可能にする物質、例えば、症状、病理学的障害又は病気の存在及び／又は進行を検出、撮像及び／又はモニターするために使用することができる作用剤をいう。
【００４６】
幾つかの実施形態では、式Ａ、Ｉ及び／又はII中のＲ2及びＲ3は各々独立に（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル若しくはヘキシル、又はアルコキシアルキル、例えばメトキシメチル、エトキシエチル、メトキシメトキシメチル、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ3から選択される。幾つかの実施形態では、式Ａ、Ｉ及び／又はII中のＲ2及びＲ3は各々独立にメチル、エチル、ｎ−プロピル又はｎ−ブチルから選択される。
【００４７】
幾つかの実施形態では、式Ａ、Ｉ及び／又はII中のＲ2及びＲ3は、それらが結合しているＳｎ原子と共に、場合によりＮ、Ｏ、又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜８員環を形成する。例えば、形成される環は以下のものの１つであることができる。
【００４８】
【化７】
2015514702.tif 000008
式Ａ、Ｉ及び／又はIIの幾つかの実施形態では、ＸはＯ及びＮＲ4から選択され、Ｒ4はＨ及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択される。例えば、式Ａ、Ｉ及び／又はIIの幾つかの実施形態では、ＸはＯ及びＮＨから選択される。幾つかの実施形態では、ＹはＯ、Ｓ、ＳＯ、及びＳＯ2から選択される。例えば、式Ａ、Ｉ及び／又はIIの幾つかの実施形態では、ＹはＳである。式Ａ、Ｉ及び／又はIIの他の実施形態では、ＹはＳＯ2である。式Ａ、Ｉ及び／又はIIの幾つかの実施形態では、Ｚは−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−、−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−から選択される。例えば、式Ａ、Ｉ及び／又はIIの幾つかの実施形態では、Ｚは−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−である。
【００４９】
式Ａ、Ｉ及び／又はIIの幾つかの実施形態では、ｍ、ｎ及びｐは各々独立に０〜５の整数である。例えば、式Ａ、Ｉ及び／又はIIの幾つかの実施形態では、ｍ及びｎはいずれも０であり、ｐは２〜４の整数である。
【００５０】
幾つかの実施形態では、Ｒ2及びＲ3は各々独立に（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択され、ＸはＯ及びＮＲ4から選択され、ＹはＳ、ＳＯ、及びＳＯ2から選択され、Ｚは−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−、及び−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−から選択され、Ｒ4はＨ及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択され、ｍ、ｎ及びｐは各々独立に０〜５の整数である。
【００５１】
式Ａ、Ｉ及び／又はIIの幾つかの実施形態では、Ｒ2及びＲ3は各々独立にメチル、エチル、ｎ−プロピル又はｎ−ブチルから選択され、ＸはＯ及びＮＨから選択され、ＹはＳＯ2であり、Ｚは−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−であり、ｍ及びｎはいずれも０であり、ｐは２〜４の整数である。
【００５２】
幾つかの実施形態では、Ｒ2及びＲ3は、Ｓｎ原子と一緒になって、場合によりＮ、Ｏ、又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３、４、５、６、７、又は８員環を形成し、ＸはＯ及びＮＲ4から選択され、ＹはＳ、ＳＯ、及びＳＯ2から選択され、Ｚは−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−、及び−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−から選択され、Ｒ4はＨ及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択され、ｍ、ｎ及びｐは各々独立に０〜５の整数である。
【００５３】
式Ａ、Ｉ及び／又はIIの幾つかの実施形態では、Ｒ2及びＲ3は、Ｓｎ原子と一緒になって、場合によりＮ、Ｏ、又はＳから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい５又は６員環を形成し、ＸはＯ及びＮＨから選択され、ＹはＳＯ2であり、Ｚは−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキレン−Ｏ−であり、ｍ及びｎはいずれも０であり、ｐは２〜４の整数である。
【００５４】
例えば、幾つかの実施形態では、ビオチンを含有する副生物は式（II）の１以上の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む。
【００５５】
【化８】
2015514702.tif 000009
式中、Ｒ2〜Ｒ6、Ｚ、Ｘ、Ｙ、Ｒa、Ｒb、Ｒc、ｍ、ｎ及びｐは式（Ｉ）及びその様々な実施形態に対して上で定義した通りであり、Ｒ1Aは−ＯＨであって、ｔは１であるか、又は、Ｒ1Aは−Ｏ−であって、ｔは２である。
【００５６】
幾つかの実施形態では、反応混合物又は還元反応混合物をアビジン又はストレプトアビジンと接触させることは、以下のことの少なくとも１つを含む。
反応混合物又は還元反応混合物をアビジン又はストレプトアビジン固体支持体のカラムに通す、
アビジン又はストレプトアビジン固体支持体を反応混合物又は還元反応混合物と混合した後ろ過する、
ビオチンを含有する前駆体をアビジン又はストレプトアビジン固体支持体に付着させ、続いてビオチンを含有する前駆体を放射性ヨウ化物及び酸化剤と接触させ、その後放射性ヨウ素化化合物を溶出する、
反応混合物又は還元反応混合物を可溶性のアビジン又はストレプトアビジンで処理した後、アビジン−又はストレプトアビジン−結合した複合体を放射性ヨウ素化化合物からサイズ分離する、又は
反応混合物又は還元反応混合物をストレプトアビジン又はアビジン−被覆表面上に通す。
【００５７】
本発明は、伝統的なＨＰＬＣ法により達成される純度に匹敵する純度レベルの放射性ヨウ素化化合物を提供する。この高いレベルの純度により、本明細書に開示されている方法で製造された放射性ヨウ素化化合物を診断又は治療薬として使用することが可能になる。幾つかの実施形態では、かかる方法では、最小の不純物を有する放射性ヨウ素化化合物の製造が可能になる。例えば、幾つかの実施形態では、放射性ヨウ素化化合物は、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満のビオチンを含有する前駆体又はビオチンを含有する副生物を含む組成である。幾つかの実施形態では、放射性ヨウ素化化合物は、約０．９％未満、約０．８％未満、約０．７％未満、約０．６％未満、約０．５％未満、約０．４％未満、約０．３％未満、約０．２％未満、約０．１％未満、又はさらに約０．０５％未満のビオチンを含有する前駆体又はビオチンを含有する副生物を含む組成である。一般に、放射性ヨウ素化化合物を製造する結果となる主要な汚染物質は未反応のビオチンを含有する前駆体及び／又はビオチンを含有する副生物である。そこで、本明細書に開示されている方法は所望の放射性ヨウ素化化合物を未反応のビオチンを含有する前駆体及び／又はビオチンを含有する副生物から分離するのに有効であるので、得られる放射性ヨウ素化化合物は９０％以上、９５％以上、９９％以上、９９．１％以上、９９．２％以上、９９．３％以上、９９．４％以上、９９．５％以上、９９．６％以上、９９．７％以上、９９．８％以上、９９．９％以上又は９９．９５％以上の純度である。
【００５８】
本明細書で使用する場合、用語「アルキル」は、飽和した脂肪族の直鎖又は枝分かれした一価の炭化水素基をいう。他に明記しない限り、アルキル基は通例１−６個の炭素原子を有し、すなわち（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルである。本明細書で使用する場合、「（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル」基は、線状又は枝分かれした配置の１〜６個の炭素原子を有する基を意味する。「アルキレン基」は飽和脂肪族で枝分かれした又は直鎖の二価炭化水素基である。他に明記しない限り、アルキレン基は通例１−６個の炭素原子を有し、すなわち、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキレンである。
【００５９】
本明細書で使用する場合、用語「アルコキシアルキル」とは、隣接してない炭素原子が酸素で置き換えられているアルキルをいう。アルコキシアルキルの例には、例えば、メトキシメチル、エトキシエチル、プロポキシメチル、又は−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ3がある。
【００６０】
用語「アリール」とは芳香族炭化水素環系をいう。用語「アリール」は、用語「アリール部分」、「アリール環」及び「アリール基」と互換的に用いることができる。アリール基は通例６〜１４個の環原子を有する。「アリール」には、単環式の環、及び単環式アリール環が１以上の他のアリール環に縮合している多環式の環が包含される。アリール基の例には、限定されることはないが、フェニル、ナフチル、アントラセニル、１，２−ジヒドロナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、フルオレニル、インダニル、インデニルなどがある。「置換アリール基」は１以上の置換可能な環原子が置換されている。アリーレンとは二価のアリール基をいう。
【００６１】
用語「ヘテロアリール」、「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」及び「ヘテロアリール部分」は、本明細書中で互換的に用いられており、炭素及び少なくとも１個（通例１〜４個、より典型的には１又は２個）のヘテロ原子（例えば、酸素、窒素又はイオウ）から選択される通例５〜１４個の環原子を有する芳香族環基をいう。「ヘテロアリール」には、単環式環、及び単環式ヘテロ芳香族環が１以上の他のアリール又はヘテロアリール環に縮合している多環式環が包含される。単環式ヘテロアリール基の例としては、限定されることはないが、フラニル（例えば、２−フラニル、３−フラニル）、イミダゾリル（例えば、Ｎ−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、５−イミダゾリル）、イソキサゾリル（例えば、３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル）、オキサジアゾリル（例えば、２−オキサジアゾリル、５−オキサジアゾリル）、オキサゾリル（例えば、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、ピラゾリル（例えば、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル）、ピロリル（例えば、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル）、ピリジル（例えば、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピリミジニル（例えば、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル）、ピリダジニル（例えば、３−ピリダジニル）、チアゾリル（例えば、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、イソチアゾリル、トリアゾリル（例えば、２−トリアゾリル、５−トリアゾリル）、テトラゾリル（例えば、テトラゾリル）、及びチエニル（例えば、２−チエニル、３−チエニル）がある。多環式芳香族ヘテロアリール基の例には、カルバゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、インドリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノリニル、イソキノリニル、インダゾリル、イソインドリル、アクリジニル、又はベンゾイソキサゾリルがある。「置換ヘテロアリール基」は、水素と結合している環炭素又は環窒素原子である１以上の置換可能な環原子が置換されている。ヘテロアリーレンとは二価のヘテロアリール基をいう。
【００６２】
用語「シクロアルキル」とは、単環式又は多環式の飽和炭化水素環系をいう。例えば、Ｃ5〜Ｃ7シクロアルキルには、限定されることはないが、各々場合により置換されていてもよいシクロペンチル、シクロヘキシル又はシクロヘプチルがある。シクロアルキレンとは二価のシクロアルキル基をいう。
【００６３】
用語「ヘテロシクロアルキル」とは、一般に１−４個の環ヘテロ原子を含有する３〜１０員の非芳香族環をいう。各ヘテロ原子は窒素、第四窒素、酸化窒素（例えば、ＮＯ）、酸素、並びにスルホキシド及びスルホンをはじめとするイオウから独立に選択される。代表的な単環式ヘテロシクロアルキル基としては、モルホリニル、チオモルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリニジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、などがある。ヘテロシクロアルキレンとは二価のヘテロシクロアルキル基をいう。
【実施例】
【００６４】
実験
略語
Ａｃ：アセチル
Ｂｎ：ベンジル
ＤＭＡＰ：４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ：Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＨＰＬＣ：高性能液体クロマトグラフィー
ＮＭＰ：１−メチル−２−ピロリジノン
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理的食塩水
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＦＰ：テトラフルオロフェニル。
【００６５】
実施例１ 前駆体の合成
ビオチン又はビオチンスルホン単位を有するアリールスタナンを設計し調製した。ビニル性スタナンは同様な方法で調製することができる。３−スタニル安息香酸／エステルをモデル系として選択した。これは、対応する放射性標識生成物（３−ヨード安息香酸／エステル）が、簡単な化学反応によって他の診断及び治療ベクターにコンジュゲートすることができるからである。他の結合も可能であるが、エステルはやや酸性の標識条件下で充分に安定であり、またエステル結合の前駆体（すなわち、アルコール）は確立された一般に高い収率の反応、例えばヒドロホウ素化又はオゾン分解によって容易に利用できるので、ビオチンとアリールスタナンのエステル結合を選択した。
【００６６】
鍵となる重要な中間体６は、高い収率でスキーム２に示されているように市販のＢｕ2ＳｎＣｌ2（１）から良好な収率で調製した。
【００６７】
【化９】
2015514702.tif 000010
簡潔にいうと、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の二塩化ジブチルスズ（１５．２ｇ、５０ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で臭化フェニルマグネシウム（３０ｍＬ、６０ｍｍｏｌ、２．０Ｍ、ＴＨＦ中）を加えた。得られた混合物を０℃で１ｈ撹拌した後、ＮＨ4Ｃｌ（５０ｍＬ、飽和水溶液）でクエンチし、Ｅｔ2Ｏ（１００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濃縮した。油状の残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１００％ヘキサン）で精製して９５％の収率で化合物４を得た（１８．４ｇ、４７．５ｍｍｏｌ）。
【００６８】
化合物４（１．９４ｇ、５．０ｍｍｏｌ）をＥｔ2Ｏ（５．０ｍＬ）に溶かし、０℃に冷却した。Ｅｔ2Ｏ中ＨＣｌの無水の溶液（２．５ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ、２．０Ｍ）を滴下して加えた。得られた透明な溶液を３０ｍｉｎ放置して室温に暖めた。グリニャール試薬（１５ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ、０．５Ｍ、ＴＨＦ又はＥｔ2Ｏ中）を０℃で加え、得られた懸濁液をさらに１ｈ撹拌した。ＮＨ4Ｃｌ（１０ｍＬ、飽和水溶液）でクエンチし、Ｅｔ2Ｏ（１０ｍＬ×３）で抽出した後、合わせた有機抽出物をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濃縮した。油状の残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１００％ヘキサン）で精製して化合物５を９０％の収率で得た。
【００６９】
化合物５（１．４６ｇ、４．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４．０ｍＬ）中の溶液に、９−ＢＢＮ−Ｈ（６．０ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ、１．０Ｍ、ＴＨＦ中）を０℃で加えた。反応溶液を１ｈ放置して室温に暖めた。Ｈ2Ｏ（１０ｍＬ）を反応混合物に加え、続いてＮａＢＯ3（１．６３ｇ、２０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を室温で１２ｈ激しく撹拌した後、ジエチルエーテル（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濃縮した。油状の残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１：１ヘキサン／酢酸エチル）で精製して化合物６を９２％の収率で得た（１．４１ｇ、３．６８ｍｍｏｌ）。
【００７０】
スキーム３に示されているように、アルコール６をビオチン又はビオチンスルホンでエステル化してアリールスタナン７及び８を得た。アリールスタナンをＩ2で処理してＳｎ−Ｉ化学種を得、これをさらに還元して、ワンポット法を用いて二量体型スズ化学種９及び１０を得た。
【００７１】
【化１０】
2015514702.tif 000011
簡潔にいうと、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の化合物６（３８３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ビオチン（３６６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）又はビオチンスルホン（４１４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ．ＨＣｌ（２８７ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（触媒）を加えた。得られた溶液（ビオチンスルホンの場合は懸濁液）を室温で１２ｈ撹拌し、揮発性物質を真空中で除去した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）で精製して目的とするエステル７又は８を９０〜９５％の収率で得た。
【００７２】
ＣＨ2Ｃｌ2（２．０ｍＬ）中のエステル７（３０５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｉ2（３７９ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を室温で少しずつ加えた。得られた褐色の溶液を室温でさらに３０ｍｉｎ撹拌した。ＮａＢＨ4（１１３ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加え、続いてＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）を滴下して添加した。泡が消えた後、ＰｄＣｌ2（０．９ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を無色の懸濁液に加えた。得られた淡黄色の懸濁液を室温で１ｈ撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）にかけて目的とする二スズ化合物９（１６０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、収率６０％）を蝋状の固体として得た。化合物１０は、より低い収率（＜３０％）ではあったが同様にして合成された。
【００７３】
或いは、二量体型スズ化合物９及び１０はまた、スキーム４に示されているように１１のビオチン又はビオチンスルホンによるエステル化によっても製造されている。
【００７４】
【化１１】
2015514702.tif 000012
具体的には、化合物９の合成手順を用いて二スズ化合物１１を調製した。化合物７の場合と同様にしてエステル化を行って二スズ９及び１０を＞９０％の収率で得た。
【００７５】
化学種９及び１０を手にして、スキーム５に示されているように１２及びヨウ化アリール１３をモデル化合物として用いてＳｔｉｌｌｅカップリング条件を調べた。モデルスタナン１４の優秀な収率はＰｄ（ＰＰｈ3）2Ｃｌ2／ＫＯＡｃ／ＮＭＰで観察された。
【００７６】
【化１２】
2015514702.tif 000013
具体的には、ＮＭＰ（０．３ｍＬ）中の３−ヨード安息香酸１３（４９ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の脱気した溶液に、ＫＯＡｃ（５９ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ3）2Ｃｌ2（７ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた薄いオレンジ色の溶液を１０ｍｉｎ撹拌した後ヘキサブチル二スズ１２（２９０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２４ｈ撹拌した後、暗赤色の反応混合物をジエチルエーテル（０．５ｍＬ）で希釈し、直接シリカゲルカラム上にロードし、１：１ヘキサン／酢酸エチルでフラッシュして目的とするアリールスタナン１４を９１％の収率で得た（７５ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）。
【００７７】
これらと同じＳｔｉｌｌｅカップリング条件を、スキーム６に示されているようにビオチンを含有する二量体９及びビオチンスルホン二量体１０に応用して、ヨウ素化前駆体１５及び２を６０％〜６５％の収率で得た（精製はｓｅｍｉ−ｐｒｅｐ（半調製用）ＨＰＬＣで行った）。
【００７８】
【化１３】
2015514702.tif 000014
アリールグリニャール試薬のスズ−ハロゲン化学種への親核性付加を含む、アリール−スズ結合体を作成する代わりの方法を用いて、スキーム７に示されているようにベンジル保護されたスズ−ビオチン１９及びスズ−ビオチンスルホン１８前駆体を調製した。
【００７９】
【化１４】
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簡単にいうと、Ｅｔ2Ｏ中のアリールスタナン５（７３０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、無水のＨＣｌ（１．０ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ、２．０Ｍ、Ｅｔ2Ｏ中）を０℃で加えた。透明な反応混合物を放置してｒｔに３０ｍ暖めた。次いで、この粗製スズ−塩化物溶液に、−２０℃でグリニャール溶液（１０ｍＬのＴＨＦ中３．０ｍｍｏｌ、３−ヨード安息香酸のベンジルエステル及び塩化イソプロピルマグネシウムから新たに調製）を加えた。得られた灰色の懸濁液を放置して２ｈ０℃に暖めた。ＮＨ4Ｃｌ（１０ｍＬ、飽和水溶液）を用いて過剰のグリニャール試薬をクエンチし、反応混合物をＥｔ2Ｏ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して目的とするアリールスタナン１６を７５％の収率で得た（７４８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）。
【００８０】
アリールスタナン１６からアルコール１７を得るためのヒドロホウ素化は化合物５から化合物６への変換と同様に行った。アルコール１７のエステル化を化合物７及び８の合成と同様にして実施して、化合物１９（６０％）及び１８（６５％）を得た。
【００８１】
また、スキーム８に示されているように、ビオチン−ＰＥＧ−酸２１及びヒドロキシスタナン６から出発してＰＥＧ−鎖で変性された前駆体２２を調製した。
【００８２】
【化１５】
2015514702.tif 000016
【００８３】
【表１】
2015514702.tif 000017
【００８４】
【表２】
2015514702.tif 000018
注：  ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＩＩＩ  ７００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光計で記録し、残留する非重水素化溶媒を内部標準として用いて較正した。多重度を説明するために次の略語を使用した。ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｂｒ＝幅広。1Ｈ  ＮＭＲでは、信号の重度の重複のためＪ117Sn-H及びＪ119Sn-Hの平均を記録した。
【００８５】
実施例２ 安定性の検討
放射性ヨウ素化に用いたいろいろな酸化剤に対する１８及び１９の安定性を、ヨウ化物を加えないで調べて、ビオチン又はビオチンスルホンが放射性ヨウ素化反応に用いられる酸化剤と適合性であることを確かめた。
【００８６】
ヨードゲン試験：ヨードゲン（２０μｇ）被覆Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆバイアルに、前駆体（５％ＡｃＯＨを含有する５０μＬのＭｅＯＨ中５０μｇ）を加えた。混合物を室温で１０〜３０ｍｉｎ穏やかに振盪した後Ｎａ2Ｓ2Ｏ5（１００μＬ、０．１Ｍ、水性）でクエンチして反応を止めた。得られた透明な溶液の少量をＬＣ−ＭＳで検査した。
【００８７】
ヨウ素化ビーズ又は過酢酸試験：前駆体（５％ＡｃＯＨを含有する５０μＬのＭｅＯＨ中５０μｇ）を含有するＥｐｐｅｎｄｏｒｆバイアルに、酸化剤（ヨウ素化ビーズ又は５μＬの３０％過酢酸）を加えた。混合物を室温で１０ｍｉｎ〜１２０ｍｉｎ穏やかに振盪した後Ｎａ2Ｓ2Ｏ5（１００μＬ、０．１Ｍ、水性）でクエンチして反応を止めた。得られた透明な溶液の少量をＬＣ−ＭＳで検査した。
【００８８】
ビオチン１９は５％ＡｃＯＨ／ＭｅＯＨに安定であることが観察され、酸に触媒される水素化脱スタニル化(hydrodestannylation)は７２ｈ後観察されなかった（図１Ａ参照）。ヨードゲン被覆バイアル内で１９を処理すると複雑な生成物混合物が得られ、ＬＣ−ＭＳでは新しいピークがいずれもビオチンスルホン又はビオチンスルホキシドではないことが示された（図１Ｂ）。ヨードビーズ、すなわち固体に支持されたクロロスルホンアミドは、１９とずっとゆっくり反応した（図１Ｃ）。他方、過酢酸は１９をビオチンスルホンとビオチンスルホキシドの混合物に非常にきれいに酸化した（図１Ｄ及び１Ｅ）。
ビオチンスルホン１８は酸化剤に対してより安定であり、小量の酸化生成物が観察されただけであった（図２参照）。
【００８９】
実施例３ ヨウ素化及び放射性ヨウ素化の検討
ヨードゲン又は過酢酸を酸化剤としてビオチンスルホン２のような前駆体のヨウ素化及び125Ｉ放射性ヨウ素化を検討した。代表的な放射性ヨウ素化を以下のスキーム９に示す。
【００９０】
【化１６】
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ヨウ素化（コールド／非放射性）手順：ヨードゲン（２０μｇ）被覆Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆバイアルに、前駆体（５％ＡｃＯＨを含有する５０μＬのＥｔＯＨ又はＭｅＯＨ中５０μｇ）、次いでＮａＩ（１０μＬのＨ2Ｏ中５μｇ）を加えた。混合物を室温で５ｍｉｎ間穏やかに振盪した後、Ｎａ2Ｓ2Ｏ5（１００μＬ、０．１Ｍ、水性）でクエンチして反応を止めた。得られた透明な溶液の少量をＬＣ−ＭＳで検査して反応の程度を決定した。
【００９１】
コールド検討は、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ＵＰＬＣカラム（１００×２．１ｍｍ、Ｃ１８、１．７μｍのＢＥＨ）を用いるＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ系で行った。移動相は流量０．３０ｍｌ／ｍｉｎの溶媒Ａ（Ｈ2Ｏ、０．１％ＴＦＡ）及び溶媒Ｂ（アセトニトリル、０．１％ＴＦＡ）からなっていた。溶媒Ｂの量は以下の表１に示すように経時的に変えた。
【００９２】
【表３】
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ヨードゲンによる125Ｉ放射性ヨウ素化（ホット）手順：ヨードゲン（２０μｇ）被覆Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆバイアルに、前駆体（５％ＡｃＯＨを含む５０μＬのＥｔＯＨ又はＭｅＯＨ中５０μｇ）、次いでＮａ125Ｉ（７．４ＭＢｑ［２００μＣｉ］、１０μＬの０．１Ｎ  ＮａＯＨ中）を加えた。混合物を室温で１０ｍｉｎ間穏やかに振盪した後Ｎａ2Ｓ2Ｏ5（１００μＬ、０．１Ｍ、水性）でクエンチして反応を止めた。得られた透明な溶液少量をＨＰＬＣで検査した。
【００９３】
過酢酸による125Ｉ放射性ヨウ素化（ホット）手順：Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆバイアルに、前駆体（５％ＡｃＯＨを含有する５０μＬのＥｔＯＨ又はＭｅＯＨ中５０μｇ）、続いてＮａ125Ｉ（７．４ＭＢｑ［２００μＣｉ］、１０μＬの１Ｎ  ＮａＯＨ中）及び過酢酸（５μＬ、３０％水性）を加えた。混合物を室温で１０ｍｉｎ間穏やかに振盪した後Ｎａ2Ｓ2Ｏ5（１００μＬ、０．１Ｍ、水性）でクエンチして反応を止めた。得られた透明な溶液少量をＨＰＬＣで検査した。
【００９４】
Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ＨＰＬＣカラム（１００×４．６ｍｍ、Ｃ１８、２．３ミクロン）を用いるＷａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣ系でＨＰＬＣ検討を行った。移動相は、流量０．８ｍｌ／ｍｉｎの溶媒Ａ（Ｈ2Ｏ、０．４％ギ酸アンモニウム）及び溶媒Ｂ（ＭｅＯＨ）からなっていた。溶媒Ｂの量は次の表２に示すように経時的に変えた。
【００９５】
【表４】
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図４は、ビオチンスルホン２の125Ｉ放射性ヨウ素化の結果を示す。過酢酸では小さい追加の生成物（ＵＶスペクトル上６ｍｉｎ）が生成し、ヨードゲンではＵＶクロマトグラム上に追加の生成物が生成したが、ヨードゲンの低減は明らかである。いずれの標識反応でも目的とする生成物125Ｉ−３が優れた放射化学的純度（＞９５％）で生成した。
【００９６】
実施例４ ストレプトアビジン結合検討
標識検討を試みる前に、ストレプトアビジン樹脂の前駆体、例えば化合物１５を保持する能力を評価した。１．０ｍＬの高容量ストレプトアビジン樹脂（２．０ｍＬの水中５０％スラリーとして調合した）を１．５−ｍＬの空のカートリッジにロードし、ＰＢＳ中１０％ＥｔＯＨ（５ｍＬ）で洗浄した。３と１５の混合物を１０％ＥｔＯＨ／ＰＢＳ（２５０μＬ）中で調製し、プリパックした高容量のストレプトアビジンアガロース樹脂カラムにロードした（総容量４００μＬ）。２０ｍｉｎのインキュベーション後、カラムをＥｔＯＨ／ＰＢＳの混合物（１０％ＥｔＯＨ／ＰＢＳ〜１００％ＥｔＯＨ）でフラッシュし、１ｍＬの画分を集めた。溶出液のＨＰＬＣトレースを図３に示す。予想通り、３は１０％ＥｔＯＨ／ＰＢＳで溶出したが、１５はカラム上に保持された。ビオチン−スズ酸１５の溶出は１００％のＥｔＯＨ洗浄のときだけ観察された。同様の挙動がビオチンスルホン前駆体２でも観察された。
【００９７】
これらの結果は、ビオチンスルホン−ストレプトアビジン又はビオチン−ストレプトアビジン相互作用がビオチンで変性したスタナンから非ビオチン含有分子を分離する際使用することができることを示唆している。従って、２及び１８のようなビオチンスルホン前駆体、又は１５、１９及び２２のようなビオチン含有前駆体を本明細書に記載されている方法に使用し得る。
【００９８】
実施例５ 精製検討
２とヨードゲンの125Ｉ放射性標識反応混合物を、ストレプトアビジン樹脂カラムを用いて精製した。上記実施例４に記載したような既に明らかにされた条件を使用して、標識混合物を１０％ＥｔＯＨ／ＰＢＳで希釈し、プリパックストレプトアビジン樹脂カラムにロードした。２０分インキュベーションした後、カラムを１０％ＥｔＯＨ／ＰＢＳ（１ｃｖ）でフラッシュした。図５に示されているように、９９％の活性が回収され、残留する２はＨＰＬＣで検出されなかった。このように、ビオチンスルホン−ストレプトアビジン法はＨＰＬＣフリー放射性ヨウ素化に容易に使用し得る。
【００９９】
実施例６ 溶解性向上剤の検討
所望の放射性ヨウ素化生成物125Ｉ−３ＩＢＡＢｎを得るための疎水性ベンジルエステル前駆体４の放射性ヨウ素化ではストレプトアビジン官能化樹脂を通した後有意な量の生成物が得られなかった。既に記載した条件下でほぼ全ての放射能が樹脂に保持された。しかし、反応後１０％、２０％及び４０％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ）ｗ／ｖを添加すると精製125Ｉ−３ＩＢＡＢｎの収率が９３％に改良された。
【０１００】
【化１７】
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放射性標識の手順：Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆバイアルに、５６．６μｇの前駆体４（５６．６μＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、ＥｔＯＨ）、５μＬのＡｃＯＨ、Ｎａ125Ｉ（１８．５ＭＢｑ又は５００μＣｉ、ｐＨ８〜１１、水性ＮａＯＨ中）及びヨードゲン（５０μＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、ＥｔＯＨ中）を続けて加えた。反応混合物を室温に２０分、時々揺り動かしながら放置した。１００μＬのＮａ2Ｓ2Ｏ3（０．１Ｍ、水性）でクエンチして反応を止めた後、混合物を１００μＬのＥｔＯＨで希釈した後、以下に記載するように試験した結合バッファーに加えた。
【０１０１】
添加剤の存在下におけるストレプトアビジン樹脂カラムによる精製のための一般手順：既に記載した１．６ｍＬの樹脂スラリー（０．８ｍＬの実際の樹脂）を用いてストレプトアビジン樹脂カラムをパックし、適当な結合バッファー（４．０ｍＬ、５ｃｖ）で洗浄した。上の放射性標識混合物の試料の一部８０μＬを適当な結合バッファー（９２０μＬ）で希釈し、１０分間混合した後ストレプトアビジンカラムにロードした。２０分間インキュベーションした後、放射性標識生成物を結合バッファーでカラムから溶出した（３つの０．５ｍＬ画分を集めた）。全ての画分（反応混合物をカラムにロードする際に収集された初留画分を含む）をＨＰＬＣ分析にかけた後合わせた。
試験した結合バッファー：
ＰＢＳ中１０％ＥｔＯＨ（対照実験）
ＰＢＳ中１０％（ｗｔ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ
ＰＢＳ中２０％（ｗｔ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ
ＰＢＳ中４０％（ｗｔ／ｖ）ＨＰ−β−ＣＤ。
【０１０２】
【表５】
2015514702.tif 000023
【図１】
2015514702.tif 000027
【図２】
2015514702.tif 000028
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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