(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ３’は、詳細な説明及び特許請求の範囲に定義される）の化合物及びその薬学的に許容し得る塩に関する。加えて、本発明は、式Ｉの化合物を製造及び使用する方法、並びにそのような化合物を含有する医薬組成物に関する。式Ｉの化合物は、ＬＭＰ７阻害薬であり、例えば、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患のような関連する炎症性疾患及び障害を処置する際に有用であり得る。
2015536913.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１１】
2015536913.tif 000019
［式中、
Ｘは、ＣＨ２、Ｏ又はＮＨであり；
Ｙは、ＣＨ又はＮであり；
Ｚは、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ１は、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル又は−ＣＨ２−フェニルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−７アルキル又は−ＣＨ２−フェニルであり；そして
Ｒ３又はＲ３’の一方は、水素であり、そして、他方は、Ｃ３−８シクロアルキル、非置換Ｃ１−７アルキル又はＣ１−７アルコキシで置換されているＣ１−７アルキルであるか、又は
Ｒ３及びＲ３’は、これらが連結している炭素原子と一緒に結合して、Ｃ３−８シクロアルキル部分を形成する］
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｘが、ＣＨ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが、Ｏ又はＮＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｙが、ＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｙが、Ｎである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｚが、ＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｚが、Ｎである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが、ＣＨ２であり、Ｙ及びＺが、ＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１が、メチル、−ＣＨ２−フェニル又はシクロプロピルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が、−ＣＨ２−フェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２が、ブチル又は−ＣＨ２−フェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３又はＲ３’の一方が、水素であり、そして、他方が、シクロプロピル、メチル又は−ＣＨ２ＯＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３が、メチルであり、そして、Ｒ３’が、水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３及びＲ３’が、これらが結合している炭素原子と一緒に組み合わさり、シクロプロピル部分を形成する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
該化合物が以下：
【化１２】
2015536913.tif 000020
2015536913.tif 000021
2015536913.tif 000022
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
該化合物が以下：
【化１３】
2015536913.tif 000023
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物と薬学的に許容し得る担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１８】
治療活性物質としての使用のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２０】
関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための医薬の調製のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される炎症性疾患又は障害を処置するための方法であって、それを必要とする被検体に治療有効量の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項２３】
本明細書に上述される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、炎症性疾患又は障害の哺乳動物における治療及び／又は予防のために有用な有機化合物、特に、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患（ＩＢＤ）の処置のための大環状ケトアミド化合物、それらの製造法、それらを含有する医薬組成物、並びにＬＭＰ７阻害薬としてのそれらの使用に関する。
【０００２】
発明の背景
ＬＭＰ７は、Ｔ／Ｂリンパ球及び単球などの免疫細胞、並びにＩＦＮ−γ及びＴＮＦαを含む炎症性サイトカインに曝露されている非免疫細胞において主に発現される、免疫プロテアソームの必須成分である。免疫プロテアソームは、抗原性ペプチドレパートリーの生成及びＭＨＣクラスＩ拘束性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の形成において重要な役割を果たす（Moebius J. et al. European Journal of Immunology. 2010; Basler, M. et al. Journal of Immunology. 2004. 3925-34）。新生のデータは、ＬＭＰ７がまた、ＭＨＣクラスＩ媒介性の抗原提示の調節以外に、炎症性サイトカインの産生及び免疫細胞機能を調節することも示唆している。
【０００３】
小分子ＬＭＰ７阻害薬であるＰＲ−９５７は、Ｔｈ１／１７の分化、Ｂ細胞のエフェクター機能及び炎症性サイトカイン（ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２３）の産生を強く遮断することが示されている（Muchamuel T. et al. Natural Medicine. 2009. 15, 781-787; Basler M. et al. Journal of Immunology. 2010, 634-41）。
【０００４】
加えて、ＰＲ−９５７によるＬＭＰ７遮断は、いくつかの前臨床自己免疫疾患モデルにおいて治療的効果をもたらすことが実証されている。最初に、ＰＲ−９５７は、マウスＣＡＩＡ及びＣＩＡ関節炎モデルにおいて、有意に低下した炎症及び骨侵食の特徴と共に、疾患スコアを有意に減少させることが実証された（Muchamuel T. et al. Natural Medicine. 2009. 15, 781-787）。加えて、ＰＲ−９５７は、ＭＲＬ／ｌｐｒループス傾向のマウスモデルにおいて形質細胞の数及び抗−ｄｓＤＮＡ ＩｇＧのレベルを減少させ、これらのマウスにおける疾患進行を抑制した（Ichikawa HT, et al. Arthritis & Rheumatism. 2012. 64, 493-503）。さらに、ＰＲ−９５７は、マウスのＤＳＳ誘発大腸炎モデルにおいて炎症及び組織破壊を低下させた（Basler M. et al. Journal of Immunology. 2010, 634-41）。最後に、ＬＭＰ７ノックアウトマウスはまた、ＩＢＤモデルにおいて疾患から守られることが示された（Schmidt N. et al. Gut 2010. 896-906）。
【０００５】
まとめると、データは、ＬＭＰ７活性がＢ／Ｔリンパ球の機能及び炎症性サイトカインの産生（その全ては、関節リウマチ、ループス及びＩＢＤの病因における臨床的に確証された標的／経路である）と密接に関係していることを強く示唆している。従って、既存のデータは、自己免疫疾患の適応のためにＬＭＰ７を標的化することについての強い論理的根拠を提供している。自己免疫のような慢性疾患における共有結合性阻害薬の長期使用に伴う潜在的ライアビリティのために、可逆的共有結合性の又は非共有結合性の小分子ＬＭＰ７阻害薬が自己免疫疾患の適応のために大変望ましい。
【０００６】
発明の概要
本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
2015536913.tif 000003
［式中、
Ｘは、ＣＨ２、Ｏ又はＮＨであり；
Ｙは、ＣＨ又はＮであり；
Ｚは、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ１は、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル又は−ＣＨ２−フェニルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−７アルキル又は−ＣＨ２−フェニルであり；そして
Ｒ３又はＲ３’の一方は、水素であり、そして、他方は、Ｃ３−８シクロアルキル、非置換Ｃ１−７アルキル又はＣ１−７アルコキシで置換されているＣ１−７アルキルであるか、又は
Ｒ３及びＲ３’は、これらが結合している炭素原子と一緒に組み合わさり、Ｃ３−８シクロアルキル部分を形成する］
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【０００７】
本発明はまた、当該化合物を含む医薬組成物、当該化合物を使用する方法、及び当該化合物を調製する方法を提供する。
【０００８】
引用又は依拠される文献は全て、参照によって本明細書に明示的に組み入れられる。
【０００９】
発明の詳細な説明
特に指示のない限り、本明細書及び特許請求の範囲において使用される以下の特定の用語及び表現は、次のように定義される：
【００１０】
用語「部分」は、別の原子又は分子に１つ又は複数の化学結合によって結合されて、それによって分子の一部を形成する、ある原子又は化学的に結合された原子群を指す。例えば、式Ｉの可変部Ｒは、式Ｉの核構造に共有結合によって結合された部分を指す。
【００１１】
１つ又は複数の水素原子を有する特定の部分に関して、用語「置換されている」は、その部分の水素原子の少なくとも１つが別の置換基又は部分に置き換わっていることを指す。例えば、用語「ハロゲンによって置換されているＣ１−７アルキル」は、Ｃ１−７アルキル（以下に定義される）の１つ又は複数の水素原子が１つ又は複数のハロゲン原子に置き換わっていることを指す（例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、クロロメチルなど）。
【００１２】
用語「アルキル」は、１〜２０個の炭素原子を有する、脂肪族の直鎖又は分岐鎖飽和炭化水素部分を指す。特定の実施態様において、アルキルは、１〜１０個の炭素原子を有する。
【００１３】
用語「Ｃ１−７アルキル」は、１〜７個の炭素原子を有するアルキル部分を指す。Ｃ１−７アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec−ブチル及びtert−ブチルを含む。
【００１４】
用語「Ｃ１−７アルコキシ」は、式−Ｏ−Ｒ’（式中、Ｒ’は、アルキル基である）で表される基を示す。Ｃ１−７アルコキシ部分の例は、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ及びtert−ブトキシを含む。
【００１５】
「アリール」は、単環式、二環式又は三環式の芳香族環を有する、一価の環式芳香族炭化水素部分を意味する。アリール基は、本明細書において定義されるように場合により置換されていてよい。アリール部分の例は、特に限定されないが、フェニル、ナフチル、フェナントリル、フルオレニル、インデニル、ペンタレニル、アズレニル、オキシジフェニル、ビフェニル、メチレンジフェニル、アミノジフェニル、ジフェニルスルフィジル、ジフェニルスルホニル、ジフェニルイソプロピリデニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾフラニル、ベンゾジオキシリル、ベンゾピラニル、ベンゾオキサジニル、ベンゾオキサジノニル、ベンゾピペラジニル（benzopiperadinyl）、ベンゾピペラジニル（benzopiperazinyl）、ベンゾピロリジニル、ベンゾモルホリニル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニルなど（各々場合により置換されているその部分水素化誘導体を含む）を含む。
【００１６】
用語「ハロ」、「ハロゲン」及び「ハライド」は、互換的に使用され得、置換基フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを指す。
【００１７】
「Ｃ３−８シクロアルキル」は、単環式又は二環式の環を有する、一価の飽和炭素環部分を意味する。Ｃ３−８シクロアルキル部分は、１つ又は複数の置換基で場合により置換されていてよい。Ｃ３−８シクロアルキル部分の例は、特に限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなど（その部分不飽和（シクロアルケニル）誘導体を含む）を含む。
【００１８】
特に指示のない限り、用語「水素」又は「ヒドロ」は、Ｈ２ではなく、水素原子（−Ｈ）の部分を指す。
【００１９】
特に指示のない限り、用語「式の化合物（a compound of the formula）」又は「式の化合物（a compound of formula）」又は「式の化合物（compounds of the formula）」又は「式の化合物（compounds of formula）」は、その式によって定義される化合物の属（genus）から選択される任意の化合物（特に指定のない場合は、任意のそのような化合物の任意の薬学的に許容し得る塩又はエステルを含む）を指す。
【００２０】
用語「薬学的に許容し得る塩」は、遊離塩基又は遊離酸の生物学的効果及び特性を保持し、生物学的にもその他の面でも望ましくないことはない塩を指す。塩は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など、好ましくは塩酸）及び有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、サリチル酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、Ｎ−アセチルシステインなど）と形成され得る。加えて、塩は、無機塩基又は有機塩基の遊離酸への付加によっても調製され得る。無機塩基から誘導される塩は、特に限定されないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム及びマグネシウム塩などを含む。有機塩基から誘導される塩は、特に限定されないが、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リシン、アルギニン、Ｎ−エチルピペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂などの、第一級、第二級及び第三級アミン、天然の置換アミンを含む置換アミン、環状アミン並びに塩基性イオン交換樹脂の塩を含む。
【００２１】
本発明の化合物は、薬学的に許容し得る塩の形態で存在することができる。本発明の化合物はまた、薬学的に許容し得るエステル（すなわち、プロドラッグとして使用される式Ｉの酸のメチル及びエチルエステル）の形態で存在することもできる。本発明の化合物はまた、溶媒和、例えば(i.e.)水和され得る。溶媒和は、製造プロセスの過程で達成され得るか、又は例えば(i.e.)当初無水であった式Ｉの化合物の吸湿性の結果として起こり得る（水和）。
【００２２】
同じ分子式を有するがそれらの原子の結合の性質若しくは順序又はそれらの原子の空間的配列が異なる化合物は「異性体」と呼ばれ、本発明の範囲内である。それらの原子の空間的配列が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。ジアステレオマーは、１つ又は複数のキラル中心で反対の立体配置を有する立体異性体であり、エナンチオマーではない。互いに重ね合わせることができない鏡像である、１つ又は複数の不斉中心を有する立体異性体は、「エナンチオマー」と呼ばれる。化合物が不斉中心を有するとき、例えば、炭素原子が４個の異なる基に結合している場合、１対のエナンチオマーが可能である。エナンチオマーは、その不斉中心（１つ又は複数）の絶対配置によって特徴付けられ得、Cahn、Ingold及びPrelogのＲ及びＳ順位則によって又はその分子が偏光面を回転させる様式によって記載され、右旋性又は左旋性として（すなわち、それぞれ、（＋）−異性体又は（−）−異性体として）表示される。キラル化合物は、個々のエナンチオマー又はそれらの混合物のいずれかとして存在することができる。エナンチオマーを同じ割合で含有する混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。
【００２３】
化合物の「治療有効量」という用語は、疾患の症状を予防、緩和又は改善するために、あるいは処置される被検体の生存期間を延長するために効果的な化合物の量を意味する。治療有効量の決定は、当技術分野における技能の範囲内である。本発明に係る化合物の治療有効量又は投与量は、広い範囲内で変えることができ、当技術分野において公知の様式で決定され得る。そのような投与量は、投与される特定の化合物（複数）、投与経路、処置される病態及び処置される患者を含む、それぞれの特定の症例における個別の要件に調整されるだろう。一般に、およそ７０Kgの体重の成人への経口又は非経口投与の場合、約０．１mg〜約５，０００mg、１mg〜約１，０００mg又は１mg〜１００mgの一日投与量が適切であり得るが、必要であればその下限及び上限を超えてもよい。一日投与量は、単回用量として又は分割用量で投与され得るか、又は非経口投与の場合には、持続的点滴として与えられ得る。
【００２４】
用語「薬学的に許容し得る担体」は、溶媒、分散媒体、被覆剤、抗菌及び抗真菌剤、等張剤並びに吸収遅延剤を含む、薬剤の投与と適合性のある任意の及び全ての材料、並びに薬剤の投与と適合性のある他の材料及び化合物を含むことが意図される。任意の慣用の媒体又は薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、本発明の組成物におけるその使用が考慮される。また、補助活性化合物を当該組成物中に組み込むこともできる。
【００２５】
本発明の組成物の調製に有用な薬学的担体は、固体、液体又は気体であり得；従って、当該組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、粉剤、腸溶性コーティング製剤又は他の保護製剤（例えば、イオン交換樹脂に結合しているか又は脂質−タンパク質小胞に封入されている）、徐放性製剤、液剤、懸濁剤、エリキシル剤、エアロゾル剤などの形態をとることができる。担体は、石油、動物、植物又は合成起源の油を含む様々な油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などから選択され得る。水、生理食塩水、デキストロース水溶液及びグリコールが、特に（血液と等張である場合）注射用液剤のための好ましい液体担体である。例えば、静脈内投与用の製剤は、固体活性成分（複数）を水に溶解させて水溶液を生成し、その溶液を滅菌することにより調製される、活性成分（複数）の無菌水溶液を含む。好適な薬学的賦形剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、乳糖、タルク、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどを含む。当該組成物は、例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤又は乳化剤、浸透圧調整用の塩、緩衝剤などの慣用の薬学的添加剤に付され得る。好適な薬学的担体及びそれらの製剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin に記載されている。そのような組成物は、いずれにしても、レシピエントへ適切に投与するための適切な投与剤形を調製するために、有効量の活性化合物を好適な担体と共に含有するだろう。
【００２６】
本発明の方法の実施において、有効量の本発明の化合物のいずれか１つ又は本発明の化合物のいずれかの組み合わせ又はその薬学的に許容し得る塩若しくはエステルは、当技術分野において公知の通常の許容し得る方法のいずれかを介して、単独又は組み合わせのいずれかで投与される。従って、当該化合物又は組成物は、経口（例えば、口腔）、舌下、非経口（例えば、筋肉内、静脈内又は皮下）、直腸（例えば、坐剤又は洗浄剤によって）、経皮（例えば、皮膚エレクトロポレーション）又は吸入（例えば、エアロゾルによって）によって、錠剤及び懸濁剤を含む、固体、液体又は気体の投与剤形で投与され得る。投与は、適宜、単回の単位投与剤形の持続的治療で、又は単回投与治療で実施され得る。当該治療組成物はまた、パモ酸などの親油性の塩と併せた油乳剤又は分散剤の形態であっても、皮下又は筋肉内投与用の生物分解性の徐放性組成物の形態であってもよい。
【００２７】
詳細には、本発明は、式（Ｉ）：
【化２】
2015536913.tif 000004
［式中、
Ｘは、ＣＨ２、Ｏ又はＮＨであり；
Ｙは、ＣＨ又はＮであり；
Ｚは、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ１は、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル又は−ＣＨ２−フェニルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−７アルキル又は−ＣＨ２−フェニルであり；そして
Ｒ３又はＲ３’の一方は、水素であり、そして、他方は、Ｃ３−８シクロアルキル、非置換Ｃ１−７アルキル又はＣ１−７アルコキシで置換されているＣ１−７アルキルであるか、又は
Ｒ３及びＲ３’は、これらが結合している炭素原子と一緒に組み合わさり、Ｃ３−８シクロアルキル部分を形成する］
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【００２８】
別の実施態様において、本発明は、Ｘが、ＣＨ２である、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００２９】
別の実施態様において、本発明は、Ｘが、Ｏ又はＮＨである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３０】
別の実施態様において、本発明は、Ｙが、ＣＨである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３１】
別の実施態様において、本発明は、Ｙが、Ｎである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３２】
別の実施態様において、本発明は、Ｚが、ＣＨである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３３】
別の実施態様において、本発明は、Ｚが、Ｎである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３４】
別の実施態様において、本発明は、Ｘが、ＣＨ２であり、Ｙ及びＺが、ＣＨである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３５】
別の実施態様において、本発明は、Ｒ１が、メチル、−ＣＨ２−フェニル又はシクロプロピルである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３６】
別の実施態様において、本発明は、Ｒ１が、−ＣＨ２−フェニルである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３７】
別の実施態様において、本発明は、Ｒ２が、ブチル又は−ＣＨ２−フェニルである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３８】
別の実施態様において、本発明は、Ｒ２が、−ＣＨ２−フェニルである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００３９】
別の実施態様において、本発明は、Ｒ３又はＲ３’の一方が、水素であり、そして、他方が、シクロプロピル、メチル又は−ＣＨ２ＯＣＨ３である、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００４０】
別の実施態様において、本発明は、Ｒ３が、メチルであり、そして、Ｒ３’が、水素である、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００４１】
別の実施態様において、本発明は、Ｒ３及びＲ３’が、これらが結合している炭素原子と一緒に組み合わさり、シクロプロピル部分を形成する、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００４２】
本発明の特定の実施態様は、式（Ｉ’）：
【化３】
2015536913.tif 000005
［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、上記に定義されるとおりであり、より特定すると、Ｒ１は、−ＣＨ２−フェニルであり、Ｒ２は、−ＣＨ２−フェニルであり、そして、Ｒ３は、メチルである］
で表される化合物に関する。
【００４３】
別の実施態様において、本発明は、式（Ｉ）に係る化合物を提供し、ここで、該化合物は以下である：
【化４】
2015536913.tif 000006
2015536913.tif 000007
2015536913.tif 000008
【００４４】
別の実施態様において、本発明は、式（Ｉ）に係る化合物を提供し、ここで、該化合物は以下である：
【化５】
2015536913.tif 000009
【００４５】
別の実施態様において、本発明は、（９Ｓ，１２Ｓ）−１２−メチル−１１，１４−ジオキソ−１０，１３−ジアザ−トリシクロ［１５．３．１．１２，６］ドコサ−１（２０），２（２２），３，５，１７（２１），１８−ヘキサエン−９−カルボン酸（（Ｓ）−１−ベンジル−２−ベンジルカルバモイル−２−オキソエチル）−アミドである、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００４６】
別の実施態様において、本発明は、治療有効量の式（Ｉ）に係る化合物と薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００４７】
別の実施態様において、本発明は、治療活性物質としての使用のための、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。
【００４８】
別の実施態様において、本発明は、炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための、式（Ｉ）に係る化合物の使用を提供し、特に、炎症性疾患又は障害は、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される。
【００４９】
別の実施態様において、本発明は、炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための医薬の調製のための、式（Ｉ）に係る化合物の使用を提供し、特に、炎症性疾患又は障害は、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される。
【００５０】
別の実施態様において、本発明は、炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための、式（Ｉ）に係る化合物を提供し、特に、炎症性疾患又は障害は、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される。
【００５１】
別の実施態様において、本発明は、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患（ＩＢＤ）から選択される炎症性疾患又は障害を処置するための方法であって、それを必要とする被検体に治療有効量の式（Ｉ）に係る化合物を投与する工程を含む方法を提供する。
【００５２】
別の実施態様において、本明細書において上述される発明が提供される。
【００５３】
これらの化合物を調製する際に使用される出発物質及び試薬は、一般に、販売業者（例えば、Aldrich Chemical Co.）から入手可能であるか、又はFieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-15; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes 1-5 and Supplementals; 及びOrganic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40 などの参考文献に記載される手順に従って、当業者に公知の方法によって調製されるかのいずれかである。
【００５４】
以下の合成反応スキームは、本発明の化合物が合成され得るいくつかの方法を単に例示するものであり、これらの合成反応スキームに対して様々な変形を行うことができ、これらは本出願に含まれる開示を参照した当業者に示唆されるであろう。
【００５５】
合成反応スキームの出発物質及び中間体は、所望であれば、特に限定されないが、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどを含む慣用の技術を使用して単離及び精製され得る。そのような物質は、物理定数及びスペクトルデータを含む慣用の手段を使用して特徴付けられ得る。
【００５６】
特に指定のない限り、本明細書に記載の反応は、好ましくは、不活性雰囲気下、大気圧で、約−７８℃〜約１５０℃、より好ましくは、約０℃〜約１２５℃の反応温度範囲で、最も好ましくかつ好都合には、ほぼ室温（又は周囲温度）、例えば、約２０℃で実施される。
【００５７】
本発明の化合物は、多数の慣用の手段によって製造され得る。例えば、これらは、以下のスキーム１〜４に概説されるプロセスに従って製造され得る。
【００５８】
【化６】
2015536913.tif 000010
【００５９】
スキーム１に示すように、Ｎ−Ｂｏｃ保護アミノ酸１は、ワインレブ（Weinreb）アミド２に変換され得、次に、水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ４）を使用してアルデヒド３に還元され得る。アルデヒドをアセトンシアノヒドリンで直ちに処理すると、新規シアノヒドリン４がジアステレオマーの混合物として形成され得る。Ｂｏｃ保護基の消失を伴うニトリルのカルボン酸への加水分解は、塩酸と共に加熱することによって実施され得る。二炭酸ジ−tert−ブチルを使用してＢｏｃ基を再導入すると、酸５が与えられ得、これをその後、ＨＡＴＵなどの活性化剤を使用して適切なアミン６とカップリングさせると、ヒドロキシアミド７が提供され得る。
【００６０】
【化７】
2015536913.tif 000011
【００６１】
スキーム２に見られるように、ＨＡＴＵなどの活性化剤を使用して酸８を適切に選択されたアミノ酸９とカップリングさせると、アミド１０が与えられ得る。
【００６２】
【化８】
2015536913.tif 000012
【００６３】
スキーム３に示すように、適切に保護されたホモフェニルアラニン誘導体１１を、イリジウム触媒下、ビス（ピナコラト）ジボロン１２を使用して選択的にホウ素化（borolated）すると（Org. Lett. 2010, 12, 3870 に記載される方法と同様にして）、１３が主要な位置異性体として与えられ得る。ビアリール誘導体１４は、１０と１３のスズキカップリングによって製造され得る。次に、ビアリール誘導体１４をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で脱保護すると、アミノ酸１５が現れ得る。化合物１６は、ＨＡＴＵなどの活性化剤の存在下、高希釈の条件下での大環状化によって与えられ得る。水酸化トリメチルスズを使用したエステル加水分解（Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 1378）は、重要な酸中間体１７を与え得る。
【００６４】
【化９】
2015536913.tif 000013
【００６５】
スキーム４に示すように、ヒドロキシアミド７はＴＦＡで処理され得る。このように生成された遊離アミン塩は、ＨＡＴＵなどの活性化剤を使用して、酸１７とその場でカップリングさせると、ヒドロキシアミド１８が与えられ得る。ケトアミド１９は、デス−マーチンペルヨージナンでの酸化によって提供され得る。
【００６６】
実施例
本明細書においては、特定の例示的実施態様を記述及び記載しているが、本発明の化合物は、適切な出発物質を使用し、本明細書に一般的に記載される方法に従って、かつ／又は当業者に利用可能な方法によって調製され得る。空気感受性の試薬が関与する反応は全て、不活性雰囲気下で実施した。試薬は、特に断りのない限り、販売業者から入手したものをそのまま使用した。
【００６７】
実施例１
（９Ｓ，１２Ｓ）−１２−メチル−１１，１４−ジオキソ−１０，１３−ジアザ−トリシクロ［１５．３．１．１２，６］ドコサ−１（２０），２（２２），３，５，１７（２１），１８−ヘキサエン−９−カルボン酸（（Ｓ）−１−ベンジル−２−ベンジルカルバモイル−２−オキソ−エチル）−アミド
【化１０】
2015536913.tif 000014
【００６８】
工程１
ＤＭＦ（２５０mL）中の（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニル−プロピオン酸（２５ｇ、９４．３４mmol）の溶液に、窒素雰囲気下、室温で、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１３．７２ｇ、１４１．５０mmol）、ＨＡＴＵ（３７．６４ｇ、９９．０５mmol）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５０．７０mL、２８３．０１mmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に、酢酸エチル（１０００mL）で希釈し、水（５×２５０mL）で洗浄した。有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗残渣を、ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃを使用したCombiFlashカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−１−（メトキシ−メチル−カルバモイル）−２−フェニル−エチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル２７．５ｇ（９４％）を無色の油状物として与えた。LC/MS: (M+H)+ = 309.0。
【００６９】
工程２
ＴＨＦ（１８０mL）中の（Ｓ）−１−（メトキシ−メチル−カルバモイル）−２−フェニル−エチル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（１５ｇ、４８．７０mmol）の撹拌溶液に、０℃で、ＬｉＡｌＨ４（ＴＨＦ中１．０M、５７mL、５７mmol）を加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次に、ガス発生が止むまで、硫酸ナトリウム十水和物の一部ずつの(portionwise)添加によって慎重にクエンチした。ＥｔＯＡｃを加え、反応混合物を室温で３０分間激しく撹拌し、次に、濾過した。濾液を乾燥させ、減圧下で濃縮して、（（Ｓ）−１−ベンジル−２−オキソ−エチル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル１１．０ｇ（９１％）を白色の固体として与え、これをさらに精製することなく使用した。
【００７０】
工程３
ＤＣＭ（８０mL）中の（（Ｓ）−１−ベンジル−２−オキソ−エチル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル（７．０ｇ、２８．１mｍｏl）の溶液に、アセトンシアノヒドリン（７．１６ｇ、８４．３mmol）及びトリエチルアミン（２．３６mL、１６．８６mmol）を加えた。反応物を室温で３時間撹拌し、次に、水を加え、有機物を減圧下で除去した。水性残渣を酢酸エチルで抽出し、水で２回洗浄した。有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗残渣を、ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃを移動相として使用したCombiFlashカラムクロマトグラフィーによって精製して、（（Ｓ）−１−ベンジル−２−シアノ−２−ヒドロキシ−エチル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル５．０ｇ（５８％）を黄色の油状物として得た。LC/MS: (M+H)+ = 277.4。
【００７１】
工程４
６M ＨＣｌ（９０mL）中の（（Ｓ）−１−ベンジル−２−シアノ−２−ヒドロキシ−エチル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル（５．０ｇ、１８．１１mmol）の溶液を１００℃で１６時間加熱し、次に、室温まで冷やし、真空下で濃縮して、（Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニル−酪酸塩酸塩４．０ｇ（９５％）をオフイエローの固体として与え、これをさらに精製することなく使用した。LC/MS: (M+H)+ = 196.2。
【００７２】
工程５
１，４−ジオキサン（１５０ml）及び水（１５０mL）中の（Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニル−酪酸塩酸塩（１８．０ｇ、７７．９mmol）の溶液に、重炭酸ナトリウム（６５．４５ｇ、７７９mmol）及び二炭酸ジ−tert−ブチル（２５．４８ｇ、１１６．９mmol）を加えた。混合物を室温で１６時間激しく撹拌した。有機相を減圧下で除去した。残っている不均一な水層を水（２００mL）で希釈し、Ｅｔ２Ｏで抽出した（２×２００mL、廃棄した）。次に、２M ＨＣｌ水溶液の添加によって水層をｐＨ＝３にし、ＥｔＯＡｃ（３×４００mL）で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ、減圧下で濃縮して、（Ｓ）−３−tert−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニル−酪酸１８．０ｇ（７８％）をオフホワイトの固体として与えた。LC/MS: (M+H)+ = 296.6。
【００７３】
工程６
ＤＭＦ（１５０mL）中の（Ｓ）−３−tert−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニル−酪酸（１０．０ｇ、３３．８９mmol）の撹拌溶液に、ベンジルアミン（４．３５ｇ、４０．６７mmol）、ＨＡＴＵ（１４．１６ｇ、３７．２８mmol）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６．５６ｇ、５０．８４mmol）を加えた。反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌し、次に、酢酸エチル（８００mL）で希釈し、氷冷水（２×９５０mL）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗残渣を、ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃを使用したCombiFlashカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−１−ベンジル−２−ベンジルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル７．３ｇ（５６％）を白色の固体として与えた。LC/MS: (M+H)+ = 385.2。
【００７４】
工程７
ＤＭＦ（８ml）中の３−（３−ブロモフェニル）プロパン酸（８００mg、３．４９mmol）、２−アミノプロパン酸（Ｓ）−tert−ブチル塩酸塩（６９８mg、３．８４mmol）及びＨＡＴＵ（１．４６ｇ、３．８４mmol）の溶液に、０℃で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．８３ml、１０．５mmol）を加えた。黄色の反応混合物を室温で一晩撹拌し、次に、水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機物を水（３×）及びブラインで洗浄し、次に、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（１０％〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、（Ｓ）−２−［３−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−プロピオン酸tert−ブチルエステル１．１１ｇ（８９％）を粘性の無色の油状物として与えた。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.30 - 7.38 (m, 2H), 7.10 - 7.21 (m, 2H), 5.99 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.46 (quin, J = 7.1 Hz, 1H), 2.86 - 3.04 (m, 2H), 2.36 - 2.62 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.32 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
【００７５】
工程８
ＭｅＯＨ（２０ml）中の（Ｓ）−２−（tert−ブトキシカルボニルアミノ）−４−フェニルブタン酸（１．０ｇ、３．５８mmol）の溶液に、０℃で、トリメチルシリルジアゾメタン（Ｅｔ２Ｏ中２．０M、３．６ml、７．２mmol）を滴下した。追加のトリメチルシリルジアゾメタン（Ｅｔ２Ｏ中２．０M）をアリコート１mLで淡黄色が持続する限り(until)加えた。合計９mL（約５当量）の試薬を加えた。反応を数滴の酢酸でクエンチしたところ、溶液は無色になった。混合物を濃縮した。残渣をシリカゲルに吸収させ、クロマトグラフィー（１０％〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−４−フェニル−酪酸メチルエステル１．０３ｇ（９８％）を無色の油状物として与えた。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.27 - 7.33 (m, 2H), 7.15 - 7.24 (m, 3H), 5.07 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.31 - 4.44 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.64 - 2.73 (m, 2H), 2.09 - 2.25 (m, 1H), 1.88 - 2.03 (m, 1H), 1.46 (s, 9H)。
【００７６】
工程９
３５mLの圧力管に、ビス（ピナコラト）ジボロン（９５２mg、３．７５mmol）、４，４’−ジ−tert−ブチル−２，２’−ビピリジン（３７mg、０．１４mmol）及び［Ｉｒ（ＯＭｅ）ＣＯＤ）］２（４５mg、０．０７mmol）を入れた。ヘキサン（１６ml）中の（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−４−フェニル−酪酸メチルエステル（１．０ｇ、３．４１mmol）の溶液を加えた。管を窒素でパージし、次に、密閉して、６５℃で１６時間加熱した。暗い栗色の反応物を室温まで冷やし、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、フラスコに移して濃縮した。残渣をシリカゲルに吸収させ、クロマトグラフィー（１０％〜２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、粘性の無色の油状物９００mgを単離した。ＮＭＲ分析は、（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−４−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−酪酸メチルエステル：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.66 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.31 - 7.33 (m, 1H), 7.21 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.38 (br. s., 1H), 3.75 (s, 3H), 2.65 - 2.74 (m, 2H), 2.11 - 2.23 (m, 1H), 1.89 - 2.02 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.37 (s, 12H)；（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−４−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−酪酸メチルエステル：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.75 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.31 - 7.35 (m, 2H), 5.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.38 (br. s., 1H), 3.75 (s, 3H), 2.65 - 2.74 (m, 2H), 2.11 - 2.23 (m, 1H), 1.89 - 2.02 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.36 (s, 12H)；及び（Ｓ）−４−［３，５−ビス−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−酪酸メチルエステル：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 8.14 (s, 1H), 7.73 (s, 2H), 5.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.38 (br. s., 1H), 3.74 (s, 3H), 2.65 - 2.74 (m, 2H), 2.11 - 2.23 (m, 1H), 1.89 - 2.02 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.36 (s, 24H)の約３：１：１の混合物を示した。
【００７７】
工程１０
１，４−ジオキサン（１２ml）中の（Ｓ）−２−［３−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−プロピオン酸tert−ブチルエステル（９１８mg、２．５８mmol）及び（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−４−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−酪酸メチルエステル（工程３からの混合物の主成分、９００mg、２．１５mmol）の溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１２４mg、０．１１mmol）及び２．０M 炭酸ナトリウム水溶液（３．２ml、６．４mmol）を加えた。二相性混合物を９０℃で３．５時間撹拌し、次に、室温まで冷やし、水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルに吸収させ、クロマトグラフィー（２０％〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、粘性の無色の油状物６４７mg（５３％）を単離した。ＮＭＲ分析は、（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−４−｛３’−［２−（（Ｓ）−１−tert−ブトキシカルボニル−エチルカルバモイル）−エチル］−ビフェニル−３−イル｝−酪酸メチルエステル及び（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−４−｛３’−［２−（（Ｓ）−１−tert−ブトキシカルボニル−エチルカルバモイル）−エチル］−ビフェニル−４−イル｝−酪酸メチルエステルの約３：１の混合物を示した。LC/MS: (M+Na)+ = 591。
【００７８】
工程１１
ジクロロメタン（８ml）中の（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−４−｛３’−［２−（（Ｓ）−１−tert−ブトキシカルボニル−エチルカルバモイル）−エチル］−ビフェニル−３−イル｝−酪酸メチルエステル（工程４からの混合物の主成分、６４７mg、１．１４mmol）の溶液に、ＴＦＡ（２ml、２６．０mmol）を加えた。明黄色の反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。追加のＴＦＡ（２ml）を加え、撹拌を２．５時間続け、次に、混合物を濃縮し、ジクロロメタン（３×）で追い出した(chased)。残渣をジクロロメタン（２００ml）及びＤＭＦ（５０ml）に溶解した。次に、ＨＡＴＵ（５１９mg、１．３７mmol）、続いて、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．６ml、９．１mmol）を加えた。黄色の反応混合物を室温で９６時間撹拌した。ジクロロメタンを減圧下で除去した。氷冷しながら、水（２００mL）を加えた。水層をＥｔ２Ｏ（２００mL）、次に、ＥｔＯＡｃ（２００mL）で抽出した。合わせた有機物を水（４×）及びブラインで洗浄し、次に、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗残渣をシリカゲルに吸収させ、最初に５０％〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、次に、０％〜２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いてクロマトグラフィーによって精製して、（９Ｓ，１２Ｓ）−１２−メチル−１１，１４−ジオキソ−１０，１３−ジアザ−トリシクロ［１５．３．１．１２，６］ドコサ−１（２０），２（２２），３，５，１７（２１），１８−ヘキサエン(hexaene)−９−カルボン酸メチルエステル８３mg（１９％）を白色の固体として与えた。LC/MS: (M+H)+ = 395; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.27 - 7.47 (m, 5H), 7.04 - 7.11 (m, 3H), 6.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.86 - 5.00 (m, 1H), 4.18 (ddd, J = 11.4, 7.6, 4.0 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.20 (ddd, J = 13.8, 10.8, 2.6 Hz, 1H), 2.86 (ddd, J = 13.8, 8.5, 2.6 Hz, 1H), 2.66 (dd, J = 8.5, 4.5 Hz, 2H), 2.55 - 2.63 (m, 1H), 2.34 - 2.46 (m, 1H), 2.15 - 2.30 (m, 1H), 1.94 - 2.08 (m, 1H), 1.40 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
【００７９】
工程１２
１，２−ジクロロエタン（３ml）中の（９Ｓ，１２Ｓ）−１２−メチル−１１，１４−ジオキソ−１０，１３−ジアザ−トリシクロ［１５．３．１．１２，６］ドコサ−１（２０），２（２２），３，５，１７（２１），１８−ヘキサエン−９−カルボン酸メチルエステル（８０mg、０．２０mmol）の溶液に、水酸化トリメチルスズ（１８３mg、１．０１mmol）を加えた。濁った反応混合物を８０℃で６時間撹拌し、次に、室温まで冷やし、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃと１．０M ＨＣｌで分液した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機物を１．０M ＨＣｌ（５×）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、次に、濃縮し、高真空下で乾燥させて、（９Ｓ，１２Ｓ）−１２−メチル−１１，１４−ジオキソ−１０，１３−ジアザ−トリシクロ［１５．３．１．１２，６］ドコサ−１（２０），２（２２），３，５，１７（２１），１８−ヘキサエン−９−カルボン酸を白色の半固体として与え、これをさらに精製することなく使用した。
【００８０】
工程１３
ジクロロメタン（２ml）中の（（Ｓ）−１−ベンジル−２−ベンジルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル（９３mg、０．２４mmol）の溶液に、ＴＦＡ（０．５０ml、６．５mmol）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次に、濃縮し、ジクロロメタン（２×）で追い出し、高真空下で乾燥させて、淡黄色の油状物を得た。油状物に、ＤＭＦ（２ml）中の（９Ｓ，１２Ｓ）−１２−メチル−１１，１４−ジオキソ−１０，１３−ジアザ−トリシクロ［１５．３．１．１２，６］ドコサ−１（２０），２（２２），３，５，１７（２１），１８−ヘキサエン−９−カルボン酸（工程６からの粗物質、７７mg、０．２０mmol）の溶液を加えた。次に、ＨＡＴＵ（８５mg、０．２２mmol）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１８ml、１．０１mmol）を加えた。黄色の反応混合物を室温で一晩撹拌し、次に、水でクエンチした。得られた沈殿物を濾過によって集め、水で洗浄し、吸引により、次に、高真空下で乾燥させて、（９Ｓ，１２Ｓ）−１２−メチル−１１，１４−ジオキソ−１０，１３−ジアザ−トリシクロ［１５．３．１．１２，６］ドコサ−１（２０），２（２２），３，５，１７（２１），１８−ヘキサエン−９−カルボン酸（（Ｓ）−１−ベンジル−２−ベンジルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−アミド１１０mg（８４％）をオフホワイトの固体及びエピマーの混合物として与えた。LC/MS: (M+Na)+ = 669。
【００８１】
工程１４
ジクロロメタン（８ml）中の（９Ｓ，１２Ｓ）−１２−メチル−１１，１４−ジオキソ−１０，１３−ジアザ−トリシクロ［１５．３．１．１２，６］ドコサ−１（２０），２（２２），３，５，１７（２１），１８−ヘキサエン−９−カルボン酸（（Ｓ）−１−ベンジル−２−ベンジルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−アミド（１０５mg、０．１６mmol）のわずかに濁った溶液に、デス−マーチンペルヨージナン（１０３mg、０．２４mmol）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、その間に、濃厚な沈殿物が生じた。飽和ＮａＨＣＯ３（５ml）及び１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（５ml）の添加によってクエンチした。二相性混合物を２０分間激しく撹拌し、次に、層を分離した。水層をジクロロメタン（２×）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、次に、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、明黄色の固体まで濃縮した。ＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏでのトリチュレーションは、（９Ｓ，１２Ｓ）−１２−メチル−１１，１４−ジオキソ−１０，１３−ジアザ−トリシクロ［１５．３．１．１２，６］ドコサ−１（２０），２（２２），３，５，１７（２１），１８−ヘキサエン−９−カルボン酸（（Ｓ）−１−ベンジル−２−ベンジルカルバモイル−２−オキソ−エチル）−アミド３８mg（３６％）を白色の固体として与えた。LC/MS: (M+Na)+= 667; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.20 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.16 - 7.52 (m, 14H), 7.08 - 7.15 (m, 4H), 5.12 - 5.19 (m, 1H), 4.70 - 4.81 (m, 1H), 4.31 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.79 - 3.88 (m, 1H), 3.02 - 3.09 (m, 1H), 3.00 (dd, J = 9.3, 6.1 Hz, 1H), 2.78 - 2.88 (m, 2H), 2.75 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 2.53 - 2.59 (m, 1H), 2.15 (ddd, J = 12.9, 9.5, 2.9 Hz, 1H), 1.83 - 1.92 (m, 2H), 1.16 (d, J = 7.1 Hz, 3H)。
【００８２】
実施例２
以下の化合物は、実施例１に記載される手順と同様(analogous)の手順によって製造される：
【００８３】
【表１】
2015536913.tif 000015
2015536913.tif 000016
2015536913.tif 000017
【００８４】
実施例３
アッセイプロトコール及び結果
細胞ベースのプロテアソーム活性／選択性アッセイ
細胞ベースのプロテアソームサブユニット活性／選択性アッセイは、培養細胞中のプロテアソーム複合体と関連するβ５ｃ又はβ５ｉ（キモトリプシン様活性）、β２ｃ／２ｉ（トリプシン様）、及びβ１ｃ又はβ１ｉ（カスパーゼ様）プロテアーゼ活性の活性を独立に測定する一連の５種の蛍光アッセイであった。具体的には、それぞれのサブユニット活性に以下の基質を使用した：β１ｉ：（ＰＡＬ）２Ｒｈ１１０、β１ｃ：（ＬＬＥ）２Ｒｈ１１０、β２ｃ／２ｉ：（ＫＱＬ）２Ｒｈ１１０、β５ｃ：（ＷＬＡ）２Ｒｈ１１０、β５ｉ：（ＡＮＷ）２Ｒｈ１１０。次の手順に従った：
【００８５】
細胞の調製：Ramos細胞（ＤＰＢＳ中２×１０６／ml）２５μlを、ハーフエリアプレート（PerkinElmer Cat 6005569）中、最終５×１０４細胞／ウェルにプレーティングした。１００×４倍段階希釈した試験化合物又はＤＭＳＯ０．５μlを各ウェルに加えた。試験した化合物の最大濃度は、２０μMであり、従って、化合物の段階希釈を２００mMから開始した。３７℃で３０分間インキュベートした。次に、室温で１５分間平衡化した。０．０２５％ジギトニン、各基質２０μM及びＤＰＢＳ中の０．５Mスクロースからなる２×反応混合物２５μlを加えた。＠７００rpmで１分間振盪した。室温で１２０分間インキュベートした。次に、Envisionマルチラベルプレートリーダー（PerkinElmer）によって５００nm励起／５１９nm発光でプレートを読み取った。
【００８６】
改変ＰＢＭＣプロテアソーム活性アッセイ
この細胞ベースのプロテアソーム活性アッセイは、先のRamos細胞ベースのアッセイと基質は同様であるが、反応バッファーとしての１０％ＦＢＳ含有完全ＲＰＭＩとの関連でヒトＰＢＭＣを使用した。このアッセイは、初代ヒト細胞中の試験化合物の細胞透過のレベルを評価するように設計された。次の手順に従った：健康なドナーから新たに単離したＰＢＭＣを、Ｖ底９６プレート中、１０％ＦＢＳ含有完全ＲＰＭＩ１００μl中に１×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。１００×４倍段階希釈化合物１μl／ウェルを加え、１時間インキュベートした。試験した最大化合物濃度は、２０μM（１００×作業溶液を２mMから開始する）であった。細胞を＠２０００rpmで５分間スピンダウンした。上清を全て除去した。次に、細胞をＤＰＢＳ２５μlに再懸濁し、細胞を新たなハーフエリアプレート（PerkinElmer Cat 6005569）に移した。最終反応において、容量は、細胞懸濁液２５μl、１００×阻害薬又はＤＭＳＯ０．５μl、基質混合物（０．０２５％ジギトニン、２０uM基質（基質：（ＰＡＬ）２Ｒｈ１１０、（ＬＬＥ）２Ｒｈ１１０、（ＫＱＬ）２Ｒｈ１１０、（ＷＬＡ）２Ｒｈ１１０、又は（ＡＮＷ）２Ｒｈ１１０）／１０％ＦＢＳ及び０．５Mスクロース混合物）を含有する）２５μlを含む５０μlであった。１分間（＠７００rpm）振盪した。２時間インキュベートし、次に、Envisionプレートリーダーで５００nm励起／５１９nm発光を使用してプレートを読み取った。
【００８７】
ＰＢＭＣ  ＩＰ−１０アッセイ
次のように、全血からＰＢＭＣを単離した：血液を無菌環境でヘパリン処理した(heparinized)管中に集めた。血液を当容量のＰＢＳ／２％ＦＣＳで希釈し、この混合物３０mlを、８００ｇで３０秒間遠心しかつ室温まで温めておいた、Histopaque-1077 １５mlを含有するACCUSPIN管に加えた。次に、管を、室温にて８００ｇで２０分間、ノーブレーキで遠心した。ポリエチレンフリットの真上の単核細胞のバンドを、パスツールピペットによって取り出した。これらの単核細胞を滅菌ＰＢＳで３回洗浄し、カウントし、１０％加熱不活性化したウシ胎仔血清、１０mM ＨＥＰＥＳ、１mM ピルビン酸ナトリウム、ペニシリン（５０U/ml）、ストレプトマイシン（５０μg/ml）及びグルタミン（２mM）を補填したＲＰＭＩ１６４０中、約１．５×１０６／mlに再懸濁した。９６ウェル組織培養プレート（BD Falcon 353072）に約２×１０５細胞／ウェルをプレーティングし、最終濃度１％ＤＭＳＯで、化合物の滴定物と共に６０分間／３７℃でプレインキュベートした。次に、細胞を、Ａ型ＣｐＧ（Invivogen, Cat # tlrl-2216; ODN 2216）により最終濃度２．５μMで刺激した。細胞を一晩インキュベートし、上清を除去した。ウェル中に残留しているＰＢＭＣ細胞の生存率を、ATPliteルミネッセンスアッセイ（Perkin-Elmer）で製造業者の説明書によって測定した。ルミネッセンスをPerkin-Elmer Envisionでルミネッセンスフィルターを使用して測定した。ＩＰ１０レベルを、CXCL10/IP10 AlphaLISAキット（Perkin-Elmer）で、総容量を半分にする以外は製造業者の説明書によって測定した。蛍光を、EnvisionマルチラベルプレートリーダーでAlphaScreen標準設定を使用して測定した。
【００８８】
結果：
本発明の代表化合物についての上記アッセイの結果を以下の表１に提供し、表中のＩＣ５０及びＥＣ５０活性値は、μMにおけるものである：
【００８９】
表１
特定の実施態様の変更を行うことができ、これが依然として添付の特許請求の範囲の範囲内にあることから、本発明は上述した本発明の特定の実施態様に限定されないことを理解されたい。
【００９０】
【表２】
2015536913.tif 000018
【国際調査報告】
2015536913.tif 000024
2015536913.tif 000025