(57)【要約】  アウリントリカルボン酸複合体の分子量1キロダルトン未満の成分を用いて、哺乳類種、好ましくはヒトにおける補体の膜侵襲複合体を選択的に阻害する。好ましい阻害剤はアウリントリカルボン酸、アウリンクアドラカルボン酸、およびアウリンヘキサカルボン酸である。補体の膜侵襲複合体の選択的阻害により治療されるために好ましい疾患は、加齢黄斑変性、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、発作性夜間血色素尿症、マラリア感染症、および多発性硬化症である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アウリントリカルボン酸複合体の分子量1キロダルトン未満の成分の有効量を、必要とするヒトまたはその他の哺乳類種において、経口的または非経口的に投与することによって、補体の膜侵襲複合体を選択的に阻害することによる、医学的治療方法。
【請求項２】
膜侵襲複合体の前記選択的阻害剤がアウリントリカルボン酸である、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
膜侵襲複合体の前記選択的阻害剤がアウリンクアドラカルボン酸である、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
膜侵襲複合体の前記選択的阻害剤がアウリンヘキサカルボン酸である、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
膜侵襲複合体の前記選択的阻害剤が、分子量1キロダルトン未満のアウリントリカルボン酸複合体のエステルである、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
膜侵襲複合体の前記選択的阻害剤が必要とされる状態が、加齢黄斑変性である、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
膜侵襲複合体の前記選択的阻害剤が必要とされる状態が、アルツハイマー病である、請求項1に記載の方法。
【請求項８】
膜侵襲複合体の前記選択的阻害剤が必要とされる状態が、アテローム性動脈硬化症である、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
補体の膜侵襲複合体が宿主細胞上に形成され自己破壊を引き起こしていることを疑う余地なく確証することができる全ての状態における、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
アウリントリカルボン酸複合体の分子量1キロダルトン未満の成分の有効量を、必要とするヒトまたはその他の哺乳類種において、経口的または非経口的に投与することによって、代替補体経路のC3転換酵素の段階を選択的に阻害することによる、医学的治療方法。
【請求項１１】
C3転換酵素の前記選択的阻害剤がアウリントリカルボン酸である、請求項10に記載の方法。
【請求項１２】
C3転換酵素の前記選択的阻害剤がアウリンクアドラカルボン酸である、請求項10に記載の方法。
【請求項１３】
C3転換酵素の前記選択的阻害剤がアウリンヘキサカルボン酸である、請求項10に記載の方法。
【請求項１４】
C3転換酵素の前記選択的阻害剤が必要とされる状態が、関節リウマチである、請求項10に記載の方法。
【請求項１５】
C3転換酵素の前記選択的阻害剤が必要とされる状態が、発作性夜間血色素尿症である、請求項10に記載の方法。
【請求項１６】
C3転換酵素の前記選択的阻害剤が必要とされる状態が、マラリア感染症である、請求項10に記載の方法。
【請求項１７】
C3転換酵素の前記選択的阻害剤が必要とされる状態が、多発性硬化症である、請求項10に記載の方法。
【請求項１８】
C3転換酵素が宿主細胞上に形成され自己破壊を引き起こしていることを疑う余地なく確証することができる全ての状態における、請求項10に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[35]  補体系を阻害する多数の薬剤が記述されてきた。
【背景技術】
【０００２】
これらにはヘパリン、スラミン、イプシロンアミノカプロン酸、およびトラネキサム酸が含まれる。しかしながら、古典的補体経路の必要なオプソニン作用の機能性を維持しながら、代替経路のC3転換酵素活性ないしは両方の経路による膜侵襲複合体の構築を阻止することによって自己破壊を防ぐ、経口的に有効な薬剤は記述されていなかった。異常補体活性化を治療するための唯一認可された薬剤はエクリズマブであり、これは代替経路のC5転換を阻止するヒト化モノクローナル抗体である。この薬剤は発作性夜間血色素尿症の治療用に認可されている。この薬剤は49%の事例において有効である（Hillmen et al. 2006）。しかしながら、この薬剤はより初期の段階であるC3転換酵素を阻止せず、そのことは赤血球の溶血の進行をもたらし得る（Parker 2012）。さらに、高分子量免疫グロブリン抗体であるこの薬剤は血液脳関門を通過せず、中枢神経系障害においては有効でない。
【０００３】
[36]  発明者らは本発明において、アウリントリカルボン酸合成複合体（ATAC）の分子量1 kDa未満の成分が、代替経路のC3転換酵素を遮断し、さらに、C5b8にC9が加わる最終段階において代替経路および古典的経路の両方のMAC構築を遮断することを示す。発明者らはさらに、これらが経口投与後に安全かつ有効であることを示す。
【０００４】
[37]  補体は、自然免疫系および適応免疫系の両方において鍵となる要素である。補体は4つの主要な機能を果たす：処分する標的の認識、食作用を補助するためのオプソニン化、アナフィラトキシンの生成、および、生細胞表面への膜侵襲複合体（MAC）の挿入によって細胞を直接殺すことである。補体は生きた生物体の必須防御システムであるが、諸刃の剣として広く認識されている。そのオプソニン化成分は有益であるが、膜侵襲複合体は自己破壊的となる可能性がある。
【０００５】
[38]  現在理解されているところの補体系を図1に示す。それは2つの主要な経路からなる。すなわち、古典的経路および代替経路である。これらの経路は異なるオプソニン化機序を有するが、膜侵襲複合体（C5b-9）を形成するための終末成分の構築を共有する。古典的経路は、貪食（ファゴサイトーシス）すべき標的をC1複合体のC1q成分が認識することによって開始する。続く段階には、C1複合体が解離すること、C2、C4およびC3が切断され増幅をもたらすこと、ならびに活性化された補体成分が標的に共有結合することが関わる。このようにして、標的は、上記結合した活性化補体成分に対する受容体を有する食細胞によって処分される。
【０００６】
[39]  どちらの経路も、C5がC5aおよびC5bへと切断されることをもたらす。放出されたC5b断片はその後、近傍の細胞の膜に自らを挿入することができる。それからC6、C7、C8、およびC9 (n)が順次その膜に結合することができる。C9の追加は、膜に穴を開けることによって機能的な複合体をもたらし、これによって細胞は死に至る。その生理的目的は外来病原体を殺すことであるが、無菌病原の場合には、近隣細胞（バイスタンダー）溶解として知られる現象によって宿主細胞を破壊し得る。
【０００７】
[40]  補体系は従って2つの部分により作用する。第1の部分はオプソニン化であり、これは標的組織を食作用のために準備する。第2の部分は膜侵襲複合体の構築であり、これは細胞を殺す目的を有する。前者は必須であるが、後者は必須ではない。例えば、日本人の約0.12%がC9の第4エクソンにおけるCGA-TGA（アルギニン95終始）ナンセンス変異についてホモ接合型である（Kira et al., 1999）。これらの人々は機能的な膜侵襲複合体を作ることができない。これは、この欠損がありながら健康な生活を送っている150,000人を超える日本人がいることを意味する。この日本人の経験的知識は、膜侵襲複合体形成の長期に渡る選択的阻害が実行可能な治療戦略であることを示している。
【０００８】
[41]   膜侵襲複合体は、補体系の持続的な活動過剰が存在する全ての疾患において病態を悪化させる。それに加えて、代替経路C3転換酵素の活動過剰が存在する疾患においても病態が悪化し得る。そのような疾患としては、関節リウマチ、発作性夜間血色素尿症、多発性硬化症、マラリア感染症、アルツハイマー病、加齢黄斑変性、およびアテローム性動脈硬化症が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の目的は、そのような状態をうまく治療するための方法を提供することである。本発明者らは、有機化合物の大きなライブラリーをスクリーニングして、これらの経路の選択的阻害剤となる見込みのあるものを探した。市販されている「アウリントリカルボン酸」が、最初のスクリーニング試験をパスした唯一の物質であった。本発明者らは、この製品が少量のアウリントリカルボン酸しか含んでいないことを発見した。この製品は大部分が高分子量物質の複合体から成っていた。本発明者らはその粗製物質を分画して、分子量（MW）1kDa未満の成分の特性を調べた。上記所望の特性は、真のアウリントリカルボン酸（ATA、MW422）、アウリンクアドラカルボン酸（aurin quadracarboxylic acid）（AQA、MW572）、アウリンヘキサカルボン酸（AHA、MW858）、およびこれらの組合せ（低分子量アウリントリカルボン酸複合体（ATAC）と呼ぶ）において確認された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】[44] McGeer et al. 米国特許出願第13/195,216号、2011年8月1日出願。
【特許文献２】[45] Bernstein et al. 米国特許第4,007,290号、1977年2月8日登録。
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】[47] Anderson DH, Mullins RF, Hageman GS, Johnson LV. 2002. A role for local inflammation in the formation of drusen in the aging eye. Am. J. Ophthalmol. 134(3): 411-431.
【非特許文献２】[48] Anderson DH, Radeke MJ, Gallo NB, Chapin EA, Johnson PT, Curlettie CR, Hancox LS, Hu J, Ebright JN, Malek G, Hauser MA, Rickman CB, Bok D, Hageman GS, Johnson LV. 2010. The pivotal role of the complement system in aging and age-related macular degeneration: hypothesis revisited. Prog. Ret. Eye Res. 29: 95-112.
【非特許文献３】[49] Cushman M, Kanamathareddy S. 1990. Synthesis of the covalent hydrate of the incorrectly assumed structure of aurintricarboxylic acid. Tetrahedron 46(5): 1491-1498.
【非特許文献４】[50] Cushman M, Kananathareddy S, De Clercq E, Scols D, Goldman ME, Bowen JA. 1991. Synthesis and anti-HIV activities of low molecular weight aurintricarboxylic acid fragments and related compounds. J. Med. Chem 34: 337-342.
【非特許文献５】[51] Cushman M, Wang P, Stowell JG, Schols D, De Clercq E. 1992. Structural investigation and anti-HIV activities of high molecular weight ATA polymers. J. Org. Chem. 57: 7241-7248.
【非特許文献６】[52] Genain CP, Cannelloa B, Hauser SI et al. 1999. Identification of autoantibodies associated with myelin damage in multiple sclerosis. Nat. Med. 5, 170-175.
【非特許文献７】[53] Gonzalez RG, Blackburn BJ, Schleich T. 1979. Fractionation and structural elucidation of the active components of aurintricarboxylic acid, a potent inhibitor of protein nucleic acid interactions. Biochimica et Biophysica Acta 562: 534-545.
【非特許文献８】[54] Heisig GB, Lauer M. 1941. Ammonium salt of aurin tricarboxylic acid. Organic Syntheses 1: 54.
【非特許文献９】[55] Hillmen, P., Young, N.S., Schubert, J., et al. 2006. The complement inhibitor eculizumab in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. N. Engl. J. Med. 355, 1233-1243.
【非特許文献１０】[56] Kira S, Ihara K, Takada H, Gondo K, Hara T. 1998. Nonsense mutation in exon 4 of human complement C9 gene is the major cause of Japanese complement C9 deficiency. Human Gen. 102(6): 605-610.
【非特許文献１１】[57] Lee, M., Guo, J. P., Schwab, C., McGeer, E. G., and McGeer, P. L. (2012) Selective inhibition of the membrane attack complex of complement by low molecular weight components of the aurin tricarboxylic acid synthetic complex.  Neurobiol. Aging. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.neurobiolaging.2011.12.005.
【非特許文献１２】[58] McGeer PL, Akiyama H, Itagaki S, McGeer EG. 1989. Activation of the classical complement pathway in brain tissue of Alzheimer patients. Neuroscience Letters 107: 341-346
【非特許文献１３】[59] Okraj, M., Heinegard, d., Holmdahl, R., and Blom, A.M. (2007) Rheumatoid arthritis and the complement system. Ann. Med. 39, 517-530.
【非特許文献１４】[60] Owens MR, Holme S. 1996. Aurin tricarboxylic acid inhibits adhesion of platelets to subendothelium. Thrombosis Res. 81: 177-185.
【非特許文献１５】[61] Parker CJ. 2012 Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria 19(3):141-148
【非特許文献１６】[62] Rogers J, Cooper NR, Webster S, Schultz J, McGeer PL, Styren SD, Civin WH, Brachova L, Bradt B, Ward P, Lieberburg I. Complement activation by b-amyloid in Alzheimer disease. 1992. Proc Natl Acad Sci USA 89:10016-10020, 1992
【非特許文献１７】[63] Silver KL, Higgins SJ, McDonald CR, and Kain KC 2010. Complement driven immune responses to malaria: fuelling severe malarial diseases. Cellular Microbial. 8, 1036-1045.
【非特許文献１８】[64] Yasojima K, Schwab C, McGeer EG, McGeer PL. 2001. Generation of C-reactive protein and complement components in atherosclerotic plaques. American J. Pathol. 158(3): 1039-1051.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
［技術的課題］
内在性の制御因子の制限を超える補体活性化は、生存可能な宿主組織の自己破壊をもたらし得ることが長年知られてきた。破壊される器官および細胞は、脳および脊髄細胞、特に神経細胞および希突起膠細胞；網膜細胞、特に色素上皮細胞；心臓および動脈筋細胞；関節細胞；ならびに腎細胞であり得る。今まで、これらの器官および組織においてそのような望ましくない補体活性化を生ずる様々な状態を治療する満足な方法は存在しなかった。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
[65]［技術的解決］
【００１３】
[66]  この一般的課題に対する解決は、ATA、AQA、AHA、およびこれらの誘導体を、単独でまたは組み合わせて、これらの組織において補体のC3転換酵素および膜侵襲複合体の形成を選択的に遮断するために十分な用量において投与することである。これらの活性成分は、経口的に、静脈内に、皮下に、または炎症性の関節や筋肉のような患部への直接的注射により、投与され得る。
【発明の効果】
【００１４】
[67]［有利な効果］
病態の寛解とともに、望ましくない補体活性化によるさらなる自己破壊を防ぐという効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】[69] 図1は、アルツハイマー病において活性化された場合の古典的補体経路および加齢黄斑変性において活性化された場合の代替補体経路の、標準的な概略図である。膜侵襲複合体の形成は古典的経路と代替経路の両方に共通であることに注意。
【００１６】
【図２】[70] 図2は、アウリントリカルボン酸合成複合体（ATAC）の1 KDa未満の3成分の推定構造および質量とともに、分離された成分の対応する質量分析を示す。（a）ATA、MW 422、(5,5'-((3-カルボキシ-4-オキソシクロヘキサ-2,5-ジエン-1-イリデン)メチレン)ビス(2-ヒドロキシ安息香酸)、（b）AQA、MW 572（推定構造5,5-((3-カルボキシ-5-((3カルボキシ-4-オキソシクロヘキサ-2,5-ジエン-1-イリデン)メチル)-4-ヒドロキシフェニル)メチレン)ビス(2ヒドロキシ安息香酸)）、（c）AHA、MW858（推定構造5,5'-((3-カルボキシ-5-((3-カルボキシ-4-オキソシクロヘキサ-2,5-ジエン-1-イリデン)メチル)-4-ヒドロキシベンジル)-4-ヒドロキシフェニル)メチレン)ビス(2-ヒドロキシ安息香酸)）。ES-はネガティブスキャンモードを意味し、真の質量に-1の値を付与する。ES+はポジティブスキャンモードを意味し、真の質量に+1の値を付与する。
【００１７】
【図３】[71] 図3は、ヒトおよびラットの血清のCH50分析を示す。それぞれの成分がほぼ同一のIC50値を有することに注意。これらは、ATAについては544、AQAについては576、AHAについては559、そしてATACについては580であった（nM）。ラット血清においてATACについてのIC50は268 nMであった。
【００１８】
【図４】[72] 図4は、ATA、AQA、AHA、およびATACがC9のC5b678への追加を阻止して膜侵襲複合体の形成を妨げることにより選択的に作用することを証明する、ウェスタンブロット分析を示す。ヒト標準血清を、ATA、AQA、AHA、およびATACの水溶液のアリコートで前処理した後に、ヒト補体に対して感作されたヒツジ赤血球に加えた。反応混合物を37℃で1時間インキュベートした。アリコートを10%ポリアクリルアミドゲルにロードしてSDS-PAGEに付した。タンパク質をメンブレンに移し、補体タンパク質に対する適切な一次抗体（表1）を用いて発色させた。（a）C1q、C3、C4、およびC5に対する抗体を用いて発色させたウェスタンブロットのメンブレン。第1レーン、未処理血清；第2レーン、赤血球（RBC）が加えられた血清；第3レーン、ATACで保護された赤血球を伴った血清。未処理の血清においては、C1q、C3、C4、およびC5についてのバンドが容易に検出されたことに注意。第2および第3レーンにおいては、活性化産物C3d、C4d、およびC5aが検出され、オプソニン化が起こったことが示された。第2レーンではMACが検出されたが、第3レーンでは検出されず、ATACがMAC形成を阻止していたことが示された。MAC形成のどの段階が関与していたかを分析するために、（b）ATAC、（c）ATA、（d）AQA、および（e）AHAに関して、ウェスタンブロットメンブレンをC6、C7、C8およびC9に対する抗体で処理した。結果は同一であった。各パネルにおいて、第1レーンは血清、第2レーンは無保護赤血球、第3レーンはATA、AQA、AHA、またはATACのいずれかで保護された赤血球、そして第4レーンはC9タンパク質を補足した以外は第3レーンと同じである。未処理血清においてはC6、C7、C8、およびC9が容易に検出されることが見て取れる。第2レーンは、補体侵襲によって溶血した無保護赤血球においては完全に形成された膜侵襲複合体であるC5b-9のみが検出されることを示している。細胞がATA、AQA、AHA、またはATACのいずれかで保護された第3レーンでは、膜侵襲複合体が完全には形成せず、C8の段階で中断している。C6抗体はC5b6、C5b67、およびC5b678を検出している。C7抗体はC5b67とC5b678を検出し、C8抗体はC5b678を検出している。第4レーンは、C9の段階でのみ遮断が起こることの確認を提供している。C6、C7、C8、およびC9でプローブしてC5b-9が検出されるようになっていることを見て取ることができ、従ってATACによる遮断がC9の段階におけるものであったことが確立された。ブロットにおいて非常にかすかなC9バンドが依然として視認されることから、添加されたC9はこのプロセスにおいてその全てが消費されてはいないことが示唆される。
【００１９】
【図５】[73] 図5は、プロパージン、C3／C3b、B／Bb因子、およびD因子に対する抗体を用いて発色させたウェスタンブロットのメンブレンを示しており、C1阻害因子（インヒビター）またはC4b抗体による古典的経路活性化の阻害の効果を明らかにし、ATAによるC3転換酵素の阻害を示している。（a）標準血清は、プロパージン、C3、B因子、およびD因子についての検出可能なバンドを示している（第1レーン）。C1阻害因子の存在下でザイモサンによって活性化させると、プロパージン抗体およびC3b抗体を用いて発色させたブロット上にPC3b、PC3bBb、およびPC3bBbC3bに相当するバンドが現れ、Bb因子抗体を用いて発色させたブロット上にはPC3bBbとPC3bBbとPC3bBbC3bに相当するバンドが現れる（第2レーン）。これらのデータは、プロパージンは代替経路を開始するためのC3bの結合に必要とされ、C3転換酵素およびC5転換酵素が活性化されることを実証している。ATAの添加は、PC3bおよびPC3bBについてのバンドのみが現れるという結果をもたらし、これは、結合したB因子をD因子が切断する段階における遮断を示すものである（第3レーン）。プロパージンが添加された第4レーンおよびD因子が添加された第5レーンは、どちらも、PC3bBbおよびPC3bBbC3bについての弱いバンドの再出現を示しており、代替経路活性化の部分的な回復が示唆されている。赤血球膜上にD因子のバンドは検出されず、このプロテアーゼは結合せずに液中に残ったことが示唆された。3つの独立実験が行われ、これらは代表的なものである。（b）C5／C5aに対する抗体を用いて発色させた、残余血清のウェスタンブロット。標準血清においてC5についてのバンドが容易に検出された（第1レーン）。ザイモサンおよびC1阻害因子による処理は、C5のバンドの消失および活性化産物C5aの出現をもたらした（第2レーン）。ATAおよびC1阻害因子の添加（第3レーン）はC5の切断を妨げ、これは、プロパージン（1マイクログラム／ml、第4レーン）およびD因子（0.1マイクログラム／ml、第5レーン）を用いた処理によって部分的に中和された。（c）C5／C5b、C6、C7、C8、およびC9に対する抗体を用いた残余膜の処理。標準血清の第1レーンは、各補体タンパク質が標準血清中に検出されたことを示している。第2レーンの、ザイモサンおよびC1阻害因子とともに血清処理した後の膜は、各々のタンパク質バンドの消失、ならびにMAC形成成分C5b6、C5b67、C5b678および完全に形成されたC5b-9の出現という結果となった。ATAが添加された第3レーンは、完全なる遮断が起こって、膜上に活性化バンドは現れていないことを示している。第4および第5レーンは、それぞれプロパージンおよびD因子で血清を補足したものであり、C5b6、C5b67、およびC5b678についてのより弱いバンドが現れて補体系の部分的活性化を示したが、C5b-9段階における遮断はなお存在し、ATAはC9がC5b-8に加わることも阻止していたことが示された。
【００２０】
【図６】[74] 図6は、ATAがD因子（Factor D：FD）およびC9に結合するがプロパージン（properdin：Pro）、B因子（Factor B：FB）、C2、C3、C4、C5、C6、C7、あるいはC8には結合しないことを示す図である。これらのタンパク質は1〜32 ng／mlの濃度においてマイクロウェルプレートに適用され、その後100マイクログラム／mlのATAを加えた。
【００２１】
【図７】[75] 図7は、代替補体経路の概略図であり、C3転換酵素の段階およびC9がC5b-8に加わる段階におけるATAによる遮断を図示している。
【００２２】
【図８】[76] 図8は、ヒト血清におけるCH50の結果を、ATACとATACのメチル誘導体とで比較したものを示す。メチル誘導体はATAよりも効力が低く、推定IC50が2.52μMであった。
【００２３】
【図９】[77] 図9は、マウス血清の補体活性化に対する、経口投与されたATACの効果を示す。標準固形飼料を給餌した6匹のB6SJL-Tgマウスからの血清を組み合わせて、ATAC補足固形飼料を給餌した6匹のB6SJL-Tgマウスからの組み合わされた血清と比較した。血清は1〜16倍に希釈した。この溶液（25マイクロリットル）を100マイクロリットルの抗体コンジュゲート化ヒツジ赤血球（5×106細胞）とともに1時間インキュベートした。その混合物を遠心分離し、100マイクロリットルの上清中に放出されたヘモグロビンの相対量を、405ナノメートルにおける吸光度によって記録した。標準固形飼料を給餌したマウスからの血清は、溶血を起こすためにATAC給餌マウスよりも希釈を要した。IC50はそれぞれ6.89および1.92倍であり、これは3.59倍の保護に相当する。
【００２４】
【図１０】[78] 図10は、標準飼料給餌B6SJL-Tgマウスと比較したATAC給餌B6SJL-Tgマウスの記憶保持を示し、隠されたプラットフォームを試験の第6日目に取り除いた後のプラットフォーム近傍における探索の率によって評価したものである。ATAC給餌マウスは、標準飼料給餌マウスと比べて、除去されたプラットフォームがあった正しい領域において有意に長い時間の探索行動を示し、記憶保持がより優れていたことが示された。
【００２５】
【図１１】[79] 図11は表1を示し、ウェスタンブロットにおいて補体タンパク質を検出するために使用された抗体を列記している。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
[80]［最良の形態］  ATA、AQA、AHA、そのアンモニウム塩もしくはその他の塩、そのメチル誘導体もしくはその他の誘導体、またはその混合物を、必要とするヒトまたは動物に送達するための好ましい態様は、経口ルートによるものである。上記活性成分のあらゆる組合せを伴ったカプセル剤または丸剤を、許容可能な従来型医薬担体とともに製剤して、放出を持続させ、効力を増強させ、活性成分の代謝を減少させることができる。これらの担体としては、乳糖、ステアリン酸、プロピレングリコール、セルロースあるいは当業者によく知られるその他の成分を挙げることができるが、これらに限定されない。活性成分の投与量は、各々の特定の投与対象の必要性に応じて、1日あたり50 mgから10グラムまで変動し得る。
【００２７】
[81]［発明の形態］  上記の好ましい形態に加えて、代替的な送達形態として、静脈内、皮下、および、関節または筋肉への直接注入が挙げられる。経口投与が不可能な状況、または、ある局所的な部位に高濃度が必要もしくは望ましいとされた状況において、これらの形態が望ましくなるであろう。
【００２８】
[1]［アウリントリカルボン酸複合体の合成］
【００２９】
[2]  アウリントリカルボン酸複合体の合成は、刊行されている標準的手順（Cushman and Kanamathareddy, 1990）に従って行った。
１．3,3'-ジクロロ-5,5'-ジカルボキシ-4,4'-ジヒドロキシジフェニルメタンの合成：
3-クロロサリチル酸（1 g）をメタノール（10 ml）中に溶解した。水（2.5 ml）を加え、フラスコを氷-塩（NaCl）槽中で-5℃に冷却した。温度を-5℃に維持しながら、濃硫酸（30 ml）を20分間に渡ってゆっくり加えた。それからこの反応混合物をこの温度で1時間撹拌しながら37%ホルムアルデヒド溶液（4 ml）を加えた。1時間温度を0℃に維持し、その後、混合物をさらに24時間室温に置いた。反応混合物を砕氷（150 g）中に注ぎ入れ、沈殿物を濾過して乾燥させて産物3,3'-ジクロロ-5,5'-ジカルボキシ-4,4'-ジヒドロキシジフェニルメタン（収量0.92g、92%）を粉末として得た。試料をメタノールから再結晶させた。
２．3,3'-ジカルボキシ-4,4'-ジヒドロキシジフェニルメタンの合成：
3,3'-ジクロロ-5,5'-ジカルボキシ-4,4'-ジヒドロキシジフェニルメタン（0.92 g）をエタノール（18 ml）およびトリエチルアミン（10 ml）に溶解した。パラジウム炭素を溶液に加え、混合物を水素雰囲気下で48時間撹拌した。触媒を濾し取り、溶媒を蒸発させ、残渣に水（100 ml）を加えた。溶液を冷まし、濃塩酸（5 ml）を加えた。白色沈殿物を濾過して乾燥させて産物3,3'-ジカルボキシ-4,4'-ジヒドロキシジフェニルメタン（0.75 g、90%）を固形物として得た。それを溶解してメタノールから再結晶させた。粉末亜硝酸ナトリウム（4 g）を激しい撹拌によって濃硫酸（4 ml）に加えた。化合物3,3'-ジカルボキシ-4,4'-ジヒドロキシジフェニルメタン（0.75 g）とサリチル酸（0.38 g）の混合物を、均一になるまで撹拌した。それからそれを亜硝酸ナトリウム・硫酸の溶液中に注ぎ入れた。さらに18時間室温で撹拌を続けた。撹拌しながら混合物を砕氷（100 g）中に注ぎ入れた。暗いオレンジ色の沈殿物を濾過して乾燥させて粗製産物（0.6 g、収率60 %）を得た。その粉末を分析のために2%水酸化アンモニウム中に溶解した。
３．3,3',3'-トリカルボキシ-4,4',4'-トリヒドロキシトリフェニルカルビノール複合体（アウリントリカルボン酸複合体）：
粉末亜硝酸ナトリウム（4 g）を激しい撹拌によって濃硫酸（4 ml）に加えた。化合物3,3'-ジカルボキシ-4,4'-ジヒドロキシジフェニルメタン（0.75 g）とサリチル酸（0.38 g）の混合物を、均一になるまで撹拌した。それからそれを亜硝酸ナトリウム・硫酸の溶液中に注ぎ入れた。さらに18時間室温で撹拌を続けた。撹拌しながら混合物を砕氷（100 g）中に注ぎ入れた。暗いオレンジ色の沈殿物を濾過して乾燥させて粗製産物（0.6 g、収率60 %）を得た。その粉末を分析のために2%水酸化アンモニウム中に溶解した。
【００３０】
[3]［ATACの分離および分析］
【００３１】
[4]  合成によって得た粉末、またはシグマ・アルドリッチ社から購入した「アウリントリカルボン酸」、またはGFSケミカルズ社（オハイオ州コロンバス）のアルミノンを、高分子量成分と低分子量成分に分離した。典型的な実験では、5グラムの物質を0.2 %水酸化アンモニウム（45 ml）に溶解し、空気圧（70〜75 Psi、5.3 kg／cm2で6時間）下で強制的に1kDaフィルター（PLAC04310、ミリポア社、マサチューセッツ州バラーシア）に通した。その濾過した物質を凍結乾燥により再結晶させた。濾過物（1 ml中4.5 mg）をその後サイズ排除クロマトグラフィーカラム（60%エタノール中に充填されたセファデックスLH-20、GEヘルスケア社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）に適用した。3つの異なる溶出画分を回収した。この3つの画分および出発混合物を、ESCIイオン源およびウォーターズ・アライアンス四重極検出器を備えたウォーターズZQ機器上の質量分析により分析した。全ての試料は陽および陰モードにおけるエレクトロスプレーイオン化ならびに大気圧化学イオン化に晒した。スキャンはm/z 0-1100とm/z 500-1500の範囲とした。分子量422、572、および858の3つの分子が検出された。これらの分子量は、図3に示すように、それぞれATA、AQA、およびAHAに対応する。1.5 kDa未満の他の誘導体は検出されなかった。これら成分を分離して質量分析により分析した。3つの供給源からの結果はほぼ同一であった。低分子量成分は全体の12〜16%を占めるに過ぎなかった。それらは全て、分子量422、572、および858の3つの分子を含有していた。
【００３２】
[5]［膜侵襲複合体およびC3転換酵素の選択的阻害剤としての低分子量産物の評価］
【００３３】
[6]  アウリントリカルボン酸複合体の低分子量産物（すなわちATAとAQAとAHA）による古典的補体経路の遮断の強さを評価するためには、標準的なCH50アッセイを利用した。ヒツジ赤血球を、ウサギ抗ヒツジ赤血球抗体と一晩インキュベートすることにより感作させた。それから、様々な量の低分子量アウリントリカルボン酸画分（ATAC）の有り・無しで希釈した血清を、感作赤血球とともに37℃で1時間インキュベートした。インキュベート物を5,000 rpmで10分間遠心分離した。405 nmにおける吸光度（OD）を読むことにより、補体侵襲により破壊された赤血球から血清中に放出されたヘモグロビンを測定した。陽性対照としては、赤血球を水で100%溶解させ、陰性対照としては、インキュベート物に血清を加えなかった。
【００３４】
[7]  結果を図3に示す。これらの成分の各々が、ほぼ同一程度において、ヒト補体媒介の赤血球溶血を阻害した。IC50値は、ATAについては544 nM、AQAについては576 nM、AHAについては559 nM、そしてATACについては580 nMであった。ラット血清におけるATACについてのIC50は268 nMであった。これらのデータは、低分子量アウリントリカルボン酸誘導体による補体活性化の阻害はナノモル濃度域のものであってヒト血清だけでなくげっ歯類血清も含むことを確立するものである。
【００３５】
[8]  補体カスケードのどの段階で遮断が起こっていたのかを決定するために、CH50アッセイの変形を実施した。溶血を測定する代わりに、ウェスタンブロット分析を行って、どの血清補体タンパク質が消費されて感受性膜上の活性化補体産物に転換されたかを決定した。補体タンパク質は、遮断の段階に至るところまでしか消費され転換されない。遮断点以降の段階の補体タンパク質は血清中に未変化のまま残るが、それらの活性化産物は細胞膜上に現れる。結果を図4に示す。ヒト血清は16倍に希釈した。それからそれをATA、AQA、AHA、またはATACで30分間処理した。その後、等体積の抗体コンジュゲート化ヒツジ赤血球を加えた。この混合物を37℃で1時間インキュベートした。それからそれらを溶解バッファーで処理した後、ウェスタンブロットのためにローディングバッファーで処理した。各試料から等量のタンパク質をゲルに適用し、10% SDSにより分離した。SDSの後、PVDFメンブレンにタンパク質を移した。それから、よく確立されている手法を使用して（Lee et al., 2011）、そのメンブレンを様々な一次抗体で処理した後に標識化二次抗体で処理した。使用した抗体の一覧を表1に示す。抗体により認識されたバンドを、増強化学発光システムの使用および写真用フィルムへの曝露により可視化した。同じメンブレンを複数の異なる抗体でプローブするために、メンブレンをストリッピングバッファーで処理し（Lee et al., 2011）、続けて別の一次抗体で前と同じようにして処理した。
【００３６】
[9]  典型的な結果を図4aに示す。左レーンには血清のみがロードされ、C1q、C3、C4、およびC5のバンドが容易に検出されたことが示されている。隣のレーンは感作赤血球を添加したことの効果を示しており、感作赤血球は添加後に補体侵襲により溶血されている。元の血清タンパク質が消費され赤血球膜中に組み入れられる。C1qは代謝されなかったが、C1複合体から解離するためバンドが濃くなった。元のC3は切断されたためもはや検出されず、C3b断片が膜に共有結合されている。分解産物C3dが検出された。C4はもはや検出されなかったが、それは、C4も同様に切断されC4b断片が膜に結合され、分解産物C4dへと代謝されたからである。この断片も検出された。C5は切断され、C5a産物のバンドが検出された。最後に、赤血球の膜上に形成されその溶血を引き起こしたC5b-9膜侵襲複合体が検出された。
【００３７】
[10]  次のメンブレンは、血清と感作赤血球をATACの存在下でインキュベートした効果を示している。オプソニン化段階に関する同一のバンドが検出されたが、赤血球は溶血せず、膜侵襲複合体は検出されなかった。
【００３８】
[11]  膜侵襲複合体の構築のどの段階が遮断されていたかを決定するために、さらなる分析を行った。残余血清から赤血球を分離して、ウェスタンブロット分析のために処理する前に洗浄したことを除き、インキュベーションは前と同じように行った。C6、C7、C8、およびC9に対する抗体でブロットをプローブした。ATACについては図4bに、ATAについては図4cに、AQAについては図4dに、AHAについては図4eに結果を示す。各成分について結果は同一であった。ヒト血清単独についての第1レーンは、未処理血清においてC6、C7、C8、およびC9が容易に検出されたことを示している。第2レーンは、補体侵襲により溶血された無保護赤血球において、これらの抗体は完全に形成された膜侵襲複合体であるC5b-9のみを検出したことを示している。第3レーンにおいては、ATACによって細胞が保護され、膜侵襲複合体は完全に形成されずC8段階において停止していることが示されている。C6抗体はC5b6、C5b67、およびC5b678を検出した。C7抗体はC5b67およびC5b678を検出した一方、C8抗体はC5b678を検出した。これらのデータは、ATACはC9がC5b678に結合する段階において膜侵襲複合体の形成を停止させるということを確立するものである。C9(n)は膜破壊孔を創出するために必要であるから、この遮断はC9結合を阻止することについてきわめて特異的である。
【００３９】
[12]  代替経路に対するATACの作用を決定するために、古典的経路をC1阻害因子（1.8マイクログラム／ml）またはC4b抗体（1,1000希釈）で遮断した実験を行った。これらの実験のために、ヒト血清（15倍希釈）を、C1阻害因子とATA（5μM、第3レーン）またはプロパージン（1マイクログラム／ml、第4レーン）もしくはD因子（0.1マイクログラム／ml、第5レーン）を伴ったATAとともに1時間インキュベートした後に、オプソニン化ザイモサン（1マイクログラム／ml）を加えた。この混合物を37℃で1時間インキュベートし、5,000 rpmにて10分間遠心分離した。ペレットをハンクの平衡塩類溶液（HBSS）で2回洗浄し、SDS-PAGEおよび免疫ブロッティングのためにサンプルローディングバッファーで処理した。このバッファーは、50 mMトリス（pH 6.8）、0.1% SDS、0.1%ブロモフェノールブルー、および10%グリセロールからなるものであった。形成された分子複合体を維持するために、SDS-PAGEについては穏和な条件を用いた。C1qブロッティングについては、従来型のサンプルローディングバッファー（50 mMトリス（pH 6.8）、1% SDS、0.1%ブロモフェノールブルーおよび10%グリセロール、ならびに2%ベータ-メルカプトエタノール）を使用した。
【００４０】
[13]  図5aは、これらの赤血球膜のウェスタンブロットを、それぞれプロパージン（1／2,000）、C3b（1／2,000）、B／Bb因子（1／2,000）、およびD因子（1／2,000）に対するモノクローナル抗体を用いて発色させたときの結果を示す。各ブロットにおける第1レーンは、未処理血清における天然タンパク質が検出されたことを示している。第2レーンは、C1阻害因子の存在下でザイモサンによって媒介された補体侵襲により溶血された赤血球において、プロパージン、C3b、およびB／Bb因子に対する抗体によって、PC3b（〜240kDa）、PC3bB（〜340 kDa）、PC3bBb（〜300 kDa）、および PC3bBbC3b（＞410 kDa）の分子量に相当する同様のバンドが検出されたことを示している。これらのデータは、膜上にC3転換酵素およびC5転換酵素が存在していたことを示している。しかしながら、C3bについての独立したバンドは検出されなかった。この結果は、C3bが、結合してその赤血球膜への結合を誘導するためのプロパージンを必要としたことを示唆している。D因子に対する抗体はD因子についてのバンドを検出せず、D因子は膜上にSDS安定性の複合体を形成しなかったことが示唆された。第3レーンは5μMのATAの存在下で得られた結果を示している。PC3bBbおよびPC3bBbC3bについてのバンドは形成しなかった。そのかわりに、より初期段階のPC3bおよびPC3bBについての強いバンドが現れた。これらの結果は、活性化の停止が、D因子によってPC3bBが切断されてC3転換酵素を形成する段階において起こったことを示している。第4および第5レーンは、血清にプロパージン（1マイクログラム／ml）またはD因子（0.1マイクログラム／ml）を補足することの効果を示している。ATAの作用が部分的に克服された。PC3bBについてのバンドは残存したが、PC3bBbおよびPC3bBbC3bについての弱いバンドが再び現れた。D因子のバンドは観察されなかった。この結果は、D因子は膜への安定な結合を形成せずに血清中に残るということのさらなる証拠を提供するものである。
【００４１】
[14]  図5bは、C5／C5aに対する抗体を用いて発色されたウェスタンブロットにより示される、残余血清における作用を図示している。ザイモサンおよびC1阻害因子による処理は、C5のバンドの消失および活性化産物C5aの出現をもたらした（第2レーン）。ATAおよびC1阻害因子の添加（第3レーン）はC5の切断を妨げたが、これはプロパージン（第4レーン）およびD因子（第5レーン）による処理によって部分的に中和された。より弱いC5についてのバンドとともにC5aについてのかすかなバンドが現れ、血清C5が部分的に活性化されたことが示唆された。
【００４２】
[15]  図5cは、MAC構成成分であるC5／C5b、C6、C7、C8、およびC9に対する抗体を用いた発色により、赤血球膜に対するこれらの処理の作用を示したものである。第1レーンは、未処理血清においてC5、C6、C7、C8、およびC9についてのバンドが容易に検出されたことを示している。ザイモサンおよびC1阻害因子を伴った血清処理後の膜の第2レーンでは、上記タンパク質バンドの各々の消失、および、MAC形成成分であるC5b6、C5b67、C5b678と、完全に形成されたC5b-9との出現がもたらされた。第3レーンは、ATAが添加されたものであるが、膜上に活性化バンドが現れず完全な遮断が見られたことを示している。第4および第5レーンは、血清がそれぞれプロパージンおよびD因子によって補足されたものであり、C5b6、C5b67、およびC5b678についてのより弱いバンドが現れて補体系が部分的に活性化していることを示したが、C5b-9段階で依然として遮断されており、ATAはC9がC5b-8に加わることも阻止したことが示された。
【００４３】
[16]  次の一連の実験は、プロパージン、D因子、および補体タンパク質に対するATAの結合を直接的に試験した。これらのタンパク質を、1〜32 ng／mlの濃度範囲においてマイクロウェルプレート上に固定した。それからATAを100マイクログラム／mlの濃度で添加して、方法の欄に記述したように溶液をインキュベートした。それから、先に刊行された本発明者らの蛍光定量法（Lee et al. 2011）に従って、タンパク質に対するATAの結合をアッセイした。図6にその結果を示す。プロパージンに対するATAの結合はなかった。バックグラウンドの蛍光のみが観察された。この結果は、赤血球膜に対するプロパージンの結合がATAによって影響されなかったという観察と合致している。しかしながら、ATAは、D因子およびC9の両方に濃度依存的に結合した。そのような結合は、ATAが何故、D因子がPC3Bを切断してPC3Bbを形成する段階にて代替経路を遮断し、C9がC5b678に加わる段階にて古典的経路および代替経路の両方を遮断するかを説明するものである。しかしながら、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、およびB因子（各32 ng／ml）のようなその他の補体タンパク質はATAと結合しなかった。
【００４４】
[17]  要約として、図7は、ATAが干渉する段階を示した、代替補体経路の略図である。代替経路の活性化は、まず、プロパージンが膜上にて標的に結合することを要する。それからC3bが、結合したプロパージンに付着することができる。続いてB因子が加わることができる。決定的に重要なのは、その複合体上でB因子が切断されてC3転換酵素を形成する段階である（PC3bBb）。そのときに初めて、血清中にまだ残っている相当量のC3が切断されてC3転換酵素に加わってC5転換酵素を形成することができる（PC3bBbC3b）。D因子がB因子のこの切断を行う。赤血球膜のウェスタンブロット上でD因子が組み入れられたバンドは観察されなかったことから、血清中のD因子は、膜に結合したPC3bBと安定な結合を形成しなさそうである。D因子は、結合したB因子に短時間付着してそれを切断し、それから解離してBa因子とともに血清に戻り得る。ATAはこの段階を妨害するのだが、それはおそらく、溶液中のD因子に結合して、結合状態のPC3bBにD因子がアクセスすることを妨げることによるものである。もしこの段階が克服されてC5転換酵素が形成できるようになっても（PC3bBbC3b）、ATAはなおC9がC5b678へ加わることを阻止し、MACの形成を妨げる。従って、ATAは代替経路に対する2段階の阻害を提供し、代替経路の望ましくない活性化が起こる状況において特に有効となり得る。
【００４５】
[18]［ATAメチルエステルの合成および濾過］
【００４６】
[19]  ATACの単純な誘導体も補体阻害特性を有することを実証するために、メチルエステルを合成し、ヒト血清に対してCH50アッセイによって試験した。手短に述べると、ATAC（0.8 g）をメタノール（16 ml）に溶解し、濃硫酸（610マイクロリットル）を加えた。この反応混合物を55℃で1時間、還流させた。溶媒を蒸発させ、残った固形物を回収した。この産物を、非エステル化物質と比較してCH50アッセイにおいて試験し、29%の活性を有することが見出された（図8、分子量を422と仮定するとIC50は0. 64μMに対して2.52μM）。
【００４７】
[20]［インビボ試験］
【００４８】
[21]  本発明は継続性をもって安全に投与できる物質を必要とすることから、動物においてインビボで試験することを要する。これは、得られた粉末の混合物を通常の固形飼料に添加して、マウスその他の種に摂食させることによって達成することができる。ここでの例は、アルツハイマー病突然変異に関してトランスジェニックであるマウス（B6SJL-Tg）であった。そのようなマウスを利用することにより、安全性についてだけではなく、アルツハイマー病における有効性の可能性についても製品が試験された。
【００４９】
[22]  対照B6SJL-Tgマウスには通常の固形飼料が給餌され、試験B6SJL-Tgマウスには0.5mg／kg ATACが補足された固形飼料が給餌された。固形飼料の消費に基づいて、試験マウスは5mg／kg／日のATACを摂取しているものと計算された。給餌は日齢56〜63日から開始され、さらに30日間または48日間続けられ、その後マウスを犠牲にした。剖検では、ATAC強化飼料または通常飼料のいずれで給餌したマウスのいずれの臓器にも病理的証拠は観察されなかった。これらのデータは、ATACが、5mg／kg／日の用量で44日間継続的に消費された場合に十分に許容され安全であると見られることを示している。
【００５０】
[23]  CH50アッセイの結果を図9に示す。様々な希釈率（1〜16倍）の血清を、抗体コンジュゲート化ヒツジ赤血球とともに1時間インキュベートした。上記摂取マウスからの血清はより低い希釈率を要し、これは膜侵襲複合体が阻害されることと合致している（IC50は、通常固形飼料で給餌したマウスの6.89倍に対して1.92倍）。これらのデータは、3.59倍の保護が達成されたことを示している。これらのデータは、ATACが経口投与後に吸収され、試験された用量においてMAC形成の有効な阻害剤であることを確立するものである。
【００５１】
[24]  B6SJL-Tgマウスは、ベータアミロイドタンパク質沈着の急速な蓄積のために早期記憶欠損を生じる。通常飼料またはATAC飼料で給餌したB6SJL-Tgマウスの記憶力を、標準的な水迷路試験を使用して試験した。不透明液および直径10 cmの隠されたプラットフォームを有する直径1.5メートルのプールにおいてこれを実施した。マウスを、第1日目の視認可能状態での訓練のためにプールに入れ、続いて、プラットフォームが隠れた状態での4日間の訓練を行った。翌日、隠れたプラットフォームを取り除いて測定を行い、その隠れたプラットフォームが置かれていた場所にマウスがいかに早く帰着するか、すなわちその位置をいかに良く記憶していたかを決定した。プラットフォームが置かれていた領域内の動物の移動の軌跡をHVS202プラス画像解析装置によってとらえた。データは2元配置ANOVAによって分析した。ATAC処置マウスは、未処置マウスよりも2.5倍好成績であったことが見出された。データを図10に示す。要約すると、アルツハイマー病トランスジェニックマウスにおけるこれらのインビボデータは、ATACはこれらの動物において安全であるばかりでなく有益でもあることを示している。ATACは体重増加および記憶保持を改善させ、そのことは、補体の膜侵襲複合体の形成を阻害するその能力と相関する。
【００５２】
[25]［ヒト疾患の治療への本発明の適用可能性］
【００５３】
[26]［一般的考察］  補体系は通常、適応免疫系にのみ貢献するものと解釈されてきた。しかし補体系は自然免疫系の中心をなすものでもある。補体系は全ての慢性型変性疾患において活動する。MACが形成するほどまでに補体系が活性化されると、近隣細胞溶解（bystander lysis）を通じて病態が悪化する危険が存在する。代替補体経路の慢性的活性化によっても損傷が起こり得る。MACおよび代替経路活性化を選択的に遮断する経口的に有効な補体阻害剤は過去に記述されたことはなかったので、広範なヒト疾患状態における処置介入に関する治療的機会が切り開かれたことはなかった。ここに記述される発明は、本発明の利用によって一般的変性疾患における利益を期待することができる疾患の例を明示する。
【００５４】
[27]［関節リウマチ］  補体の古典的経路および代替経路の両方が関節リウマチにおいて病理的に活性化されるという強い証拠が存在する（Okroj et al. 2007）。関節炎の関節には、補体を活性化することができるタンパク質、さらには、古典的経路および代替経路の両方が活性化されたことを示すタンパク質が含まれている。関節リウマチのマウスモデルにおいては、C3、C5、またはB因子の欠損により耐性が達成され得る（Okroj et al. 2007）。これらのデータは、ATAまたはATACが関節リウマチにおいて有効であることを示している。
【００５５】
[28]［多発性硬化症］  多発性硬化症は、脳の白質の炎症により特徴づけられる再発寛解型疾患である。ミエリン抗原を標的とする特異的抗体が検出されており、そのことはこれが自己免疫障害であることを示唆している（Genain et al. 1999）。このプロセスにおいて補体が活性化されることから、ATAC療法の適切さが示される。
【００５６】
[29]［マラリア感染］  マラリアはアフリカおよび東南アジアにおいて蔓延している疾患であり、年間推定650,000人を死に至らせている。感染性病原体である熱帯熱マラリア原虫（plasmodium falciparum）は、蚊によって媒介され、ヒトおよび感受性動物において増強された補体活性化を起こす。感染したヒトの赤血球においてIgGおよびC3bBbの複合体が同定されており、古典的経路および代替経路の両方の活性化により引き起こされた損傷が示されている（Silver et al. 2010）。従って、ATACによる治療が有益な効果を有する。
【００５７】
[30]［発作性夜間血色素尿症］  発作性夜間血色素尿症は、赤血球におけるX染色体遺伝子PIGAのクローン性欠損に起因する。結果として、CD 55およびCD 59のような膜タンパク質を繋留するために必要なグリコサルホスファチジルイノシトール部分が機能しなくなる。赤血球と血小板は代替経路の細胞表面活性化を制限する能力を欠く。患者は致死的な血栓性および溶血性の発作に見舞われる。C5切断を阻止するモノクローナル抗体エクリズマブを隔週ごとに投与することは部分的に有効な治療であり、これは膜侵襲複合体の生成を防止する。しかしながらこの治療は、患者の49%において有効であるにすぎず、満足できるものではない（Hillmen et al. 2006）。C3転換酵素活性を阻止しないことがおそらくその理由である。C3転換酵素は、CD 55欠損のために非制御状態となっている（Parker 2010）。ATACは、経口により有効であって両方の欠損を埋め合わせるので、発作性夜間血色素尿症に対する真に決定的な治療となる。
【００５８】
[31]［アルツハイマー病］  この疾患の主要な原因であると考えられている、脳におけるベータアミロイドタンパク質沈着は、補体のオプソニン化成分によって同定することができることが長年知られている。これはC1qがベータアミロイドタンパク質に結合することによることが示されている（Rogers et al., 1992）。沈着の近傍では、損傷した神経突起を補体の膜侵襲複合体が装飾することも示されており、補体系による自己破壊が示唆される（McGeer et al., 1989）。これらのデータを合わせてみると、ベータアミロイドタンパク質沈着物の食作用が起こることができるように補体のオプソニン化の側面は維持する必要がある一方で、宿主ニューロンの自己破壊を無くせるように、膜侵襲複合体は選択的に阻止する必要があることが明らかである。
【００５９】
[32]［加齢黄斑変性］  この疾患に関連する細胞外沈着であるドルーゼンに付随して補体のオプソニン化成分が同定されている。変性する網膜色素上皮細胞の付近に膜侵襲複合体が見出された（Anderson et al., 2002）。遺伝学的解析により、H因子、補体B因子、およびC3における多型はいずれも加齢黄斑変性に罹患するリスクに有意に影響することが明らかにされた（Anderson et al., 2010）。これらのデータは、ドルーゼンの食作用が起こることができるように補体のオプソニン化の側面は維持する必要がある一方で、網膜色素上皮細胞の自己破壊を無くせるように、膜侵襲複合体は選択的に阻止する必要があることを明示している。
【００６０】
[33]［アテローム性動脈硬化］  アテローム性動脈硬化は、補体系によって悪化するとは一般に考えられていなかった。しかしながら、補体の活性化因子として知られるC反応性タンパク質のmRNAが、動脈硬化プラークの領域において10倍を超えて上方調節される。C反応性タンパク質の上方調節および補体のオプソニン化成分を示すプラーク領域はまた、膜侵襲複合体の存在も示す（Yasojima et al., 2001）。これは、膜侵襲複合体が無菌の状況中に存在し従って宿主組織のみを破壊し得るという、一般的なヒト変性状態のさらなる一例である。ここでもやはり、本明細書に記述される発明は、食作用を刺激することという補体の望ましい側面を維持しながら、膜侵襲複合体の自己破壊的側面を排除する。
【００６１】
[34]  当業者には理解されるように、これらの疾患は、本発明が治療的有益性を有することを見出すことができる多くの疾患のうちのほんの数例にすぎない。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
[83]  本発明は、現在満足な治療法が存在していない脳および末梢器官のいくつかの慢性的変性状態に関して新しい一大治療分野を切り開くはずである。それらの疾患としては、発作性夜間血色素尿症、関節リウマチ、多発性硬化症、マラリア感染症、アルツハイマー病、加齢黄斑変性、およびアテローム性動脈硬化症が挙げられるが、これらに限定されない。
【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図４ｃ】
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【図４ｄ】
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【図４ｅ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図５ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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