(57)【要約】  β−アミロイド（Ａβ）誘導体の毒性作用をブロックすることによる、眼障害、特に緑内障の予防および治療の方法、当該予防およびそのインターバル治療を行うための薬剤組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において、前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するためのアミノ酸配列Ｘ−ＹまたはＹ−Ｘを含むペプチド（式中、Ｘは芳香族アミノ酸であり、Ｙはグリシン以外の別のアミノ酸である）であって、
前記ペプチドは、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記ペプチドは投与されない、または
ｂ）前記ペプチドは前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、前記投与方法を繰り返してもよい、ペプチド。
【請求項２】
前記第２の期間の間、前記ペプチドが前記治療有効量の２０〜７５％である用量で投与される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
前記第２の期間の間、前記ペプチドが前記治療有効量の２５〜５０％である用量で投与される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
前記第２の期間の間、前記ペプチドが投与されず、次いで、治療有効量の前記ペプチドの前記対象への投与のさらなる第１の期間が続く、請求項１に記載のペプチド。
【請求項５】
前記第２の期間に次いで、治療有効量の前記ペプチドの前記対象への投与のさらなる第１の期間が続く、請求項１に記載のペプチド。
【請求項６】
前記第１の期間における前記治療有効量の前記ペプチドの前記投与が少なくとも１週間継続される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項７】
前記第１の期間における前記治療有効量の前記ペプチドの前記投与が最長で１か月継続される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項８】
前記第２の期間が少なくとも１か月、または少なくとも２か月である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項９】
前記第２の期間が最長で３か月、または最長で６か月、または最長で１年である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１０】
前記第２の期間が３か月〜６か月である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１１】
前記ペプチドが、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ（配列番号６）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（配列番号１１）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ａｉｂ（配列番号１６）、Ｄ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｔｙｒ（配列番号１７）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号１８）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｙｒ（配列番号２７）、Ｄ−Ｐｒｏ−Ａｉｂ（配列番号２８）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号２９）、Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号３１）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（配列番号３２）、およびＰｒｏ−Ｄ−Ｐｈｅ（配列番号３３）から選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１２】
前記ペプチドが薬学的に許容される塩の形である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１３】
前記ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が、１日または複数日からなる期間内に投与される複数回の単一用量の形態で投与される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１４】
前記ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が漸増（up-titration）および漸減（down-titration）から選択される異なる用量強度で投与される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１５】
前記ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が即放性製剤として投与される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１６】
前記ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が放出調節製剤として投与される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１７】
前記予防および／または治療される少なくとも１つの眼病態が、原発閉塞隅角緑内障、続発開放隅角緑内障、広隅角緑内障、ステロイド緑内障、外傷性緑内障、色素散乱症候群、偽落屑症候群、続発閉塞隅角緑内障、血管新生緑内障、ブドウ膜炎および緑内障、加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、変性視神経症、ならびに最終的に失明に至る進行性の視力喪失を特徴とする眼科病変からなる群から選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１８】
前記ペプチドが、前記第１および／または前記第２の期間の両方において、少なくとも１つの眼病態を治療または予防するのに有効な少なくとも１つの追加薬剤の治療有効量と組み合わせて投与される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの追加薬剤が、眼疾患を治療するために投与される医薬品であり、抗緑内障薬、抗生物質、抗炎症薬、ステロイド、抗アレルギー薬および人工涙液から選択される少なくとも１つの作用剤を含有する、請求項１８に記載のペプチド。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの追加薬剤が、アセタゾラミド、ジクロフェナミド、カルテオロール、チモロール、メチプラノロール、ベタキソロール、ピンドロール、レボブノロール、ブリモニジン、クロニジン、ピロカルピン、カルバコール、ジピベフリン、アプラクロニジン、ブリンゾラミド、ドルゾラミンデ、ビマトプロスト、トラバプロスト、ラタノプロスト、クロロテトラサイクリン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、フシジニック酸、ゲンタマイシン、カナマイシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、オキシテトラサイクリン、ナタマイシン、アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、トブラマイシン、エリスロマイシン、ポリミキシン−Ｂ、アカクロビル、トリフルリジン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルオロメトロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、リメキソロン、クロモグリカート、アゼラスチン、ロドキサミド、エメダスチン、ネドクロミル、レボカバスチン、オロパタジネア、ケトチフェン、ヒプロメロース、カルボマー、ヒアルロナート、カルメロース、ヒプロメロース、ポビドン、ヒエテロース、ポリビニルアルコール、デクスパンテノール、テトリゾリン、トロキセルチン、トラマゾリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、フェニレフリンおよびアンタゾリンから選択される、請求項１８に記載のペプチド。
【請求項２１】
β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において、前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するための（−）−エピガロカテキン−３−ガラート（ＥＧＣＧ）、Ｄ−ｐｅｐ（ＱＳＨＹＲＨＩＳＰＡＱＶ）、ＩＡＰＰ−ＧＩ、マンノース、スクロース、ラフィノース、リスベラトロール、フロレチン、ナリンゲニン、アピゲニン、クエルセチン、タイワニアフラボン（ＴＦ）、２’，８”−ビアピゲニン、アメントフラボン、およびスマフラボンから選択される物質および／またはその組合せであって、
前記物質および／またはその組合せは、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記物質は投与されない、または
ｂ）前記物質は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、前記投与方法を繰り返してもよい、物質および／またはその組合せ。
【請求項２２】
β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において、前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するための物質であって、
前記物質は、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記物質は投与されない、または
ｂ）前記物質は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、前記投与方法を繰り返してもよく、
前記物質は下記：
（Ｒ）−（２−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）−２−メチルプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル）、
（２−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパンアミド）−２−メチルプロパン酸メチル）、
（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパンアミド）シクロペンタンカルボン酸メチル）、
（Ｒ）−１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロペンタンカルボン酸、
（Ｒ）−（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロプロパンカルボン酸）、
（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチル）、
１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロヘキサンカルボン酸、
１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロヘキサンカルボン酸エチル、
１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパノイル）−２−メチルピロリジン−２−カルボン酸メチル、
（Ｒ）−３−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）オキセタン−３−カルボン酸、
（Ｒ）−３−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）オキセタン−３−カルボキサミド、
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド
（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸
からなる群から選択される、物質。
【請求項２３】
β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において、前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するための物質であって、
前記物質は、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記物質は投与されない、または
ｂ）前記物質は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、前記投与方法を繰り返してもよく、
前記物質は下記からなる群：
Ｎ−（（Ｒ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピル）−２，２−ジメチル−マロンアミド酸、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸メチルアミド、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、
（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソ−ヘキサン酸、
（Ｒ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサン酸、
（Ｒ，Ｅ）−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−５−（Ｎ−メチルアセトアミド）ヘキサ−３−エン酸
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸メチルアミド、
（Ｅ）−（Ｓ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、
（Ｅ）−（Ｓ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸メチルアミド、
（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸メチルアミド、
（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸
から選択される、物質。
【請求項２４】
Ａβ毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において、前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するための嵩高い無毒性β−アミロイド（Ａβ）タンパク質凝集体。
【請求項２５】
前記凝集体が、Ａβ凝集調節因子を前記対象に投与することによるインターバル療法によって誘導および持続され、前記Ａβ凝集調節因子は、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで
ａ）前記Ａβ凝集調節因子は投与されない、または
ｂ）前記Ａβ凝集調節因子は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、前記投与方法を繰り返してもよい、請求項２４に記載の凝集体。
【請求項２６】
前記凝集体が、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミドおよび（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸からなる群から選択されるＡβ凝集調節因子を前記対象に投与することによって誘導および／または持続され、
前記Ａβ凝集調節因子は、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで
ａ）前記Ａβ凝集調節因子は投与されない、または
ｂ）前記Ａβ凝集調節因子は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、前記投与方法を繰り返してもよい、請求項２４に記載の凝集体。
【請求項２７】
前記凝集体がＡβ産生細胞の条件培地中でまたは合成Ａβから誘導され、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミドおよび（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸からなる群から選択されるＡβ凝集調節因子は、凝集を嵩高い無毒性凝集体に誘導するのに適切な条件下でＡβ産生細胞の前記条件培地または前記合成Ａβに添加されており、その後、前記凝集体が単離および洗浄される、請求項２４に記載の凝集体。
【請求項２８】
β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療を必要とする対象において、前記β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態を予防および／または治療する方法であって、
アミノ酸配列Ｘ−ＹまたはＹ−Ｘを含むペプチド（式中、Ｘは芳香族アミノ酸であり、Ｙはグリシン以外の別のアミノ酸である）を前記対象に投与するステップを含み、前記ペプチドは、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記ペプチドは投与されない、または
ｂ）前記ペプチドは前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、前記投与方法を繰り返してもよい、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、β−アミロイド（Ａβ）誘導体の毒性作用の調節（modulate）により眼障害、特に緑内障および黄斑変性症を予防および治療する方法、その眼障害の前記予防および治療を達成するための薬剤組成物、ならびに前記治療に有効な特定の投与に関する。
【背景技術】
【０００２】
緑内障は米国の失明原因の第２位であることが諸研究によって明らかになっている（非特許文献１）。緑内障との病理学的相関が認められるのは視神経を形成する網膜神経節細胞（ＲＧＣ）およびそれらの軸索の進行性変性である。
【０００３】
緑内障の分類には次の異なるタイプ：原発閉塞隅角緑内障、続発開放隅角緑内障、ステロイド緑内障、外傷性緑内障、色素散乱症候群、偽落屑症候群、続発閉塞隅角緑内障、血管新生緑内障、ブドウ膜炎および緑内障、ならびに他の眼科非特定病変が含まれる。
【０００４】
同様に、黄斑変性症は、β−アミロイドの発生にも起因し、進行性の視力喪失につながり、最終的に失明に至る網膜の病変を伴う病態である。
【０００５】
以前は、緑内障の定義に正常範囲を上回る眼内圧（ＩＯＰ）の上昇が含まれていた。しかし、ＩＯＰが明らかに上昇している多くの個体は緑内障を発症せず、緑内障患者の５０％まではＩＯＰが上昇していない。
【０００６】
緑内障の治療に現在利用可能な医薬品は、β−アドレナリン遮断薬、コリン作動薬、炭酸脱水酵素阻害薬、およびα２作動薬を含むいくつかの薬理学的クラスに属する。すべて、ＩＯＰが低下する機序の下で作動する。これらの既存の治療薬は典型的には点眼剤として投与される。高浸透圧物質は救急処置として静脈内投与することができる。さらに、特別な場合にはレーザー療法および外科的方法が適用される。
【０００７】
緑内障患者において２０年間の追跡調査の後には、治療法にかかわりなく、緑内障に関連した失明が少なくとも片眼では２７％、両眼では９％に到達することになるであろう（非特許文献２）。したがって、代替治療方針に対する未だ満たされていない重要な医療ニーズがある。特に正常化されたＩＯＰで進行性の緑内障性障害をもつ患者にとっては、網膜神経節細胞の変性に重点を置いた療法が必要である。
【０００８】
機械的、血管性および興奮毒性機序を含めて、網膜神経節細胞の変性の原因に関して様々な理論がある。最近になって、β−アミロイド（Ａβ）は死にかけている網膜神経節細胞と共存することが明らかになった（非特許文献３、４）。動物実験から、特に可溶性Ａβ１−４２ペプチドオリゴマーは網膜神経節細胞にとって非常に強力な毒素であることが実証される（非特許文献５、６）。
【０００９】
Ａβを標的にする複数の可能性のある治療が開発中である。これらの手法の共通機序は、Ａβの有害な影響を、その形成を防止すること（例えば、ＡＰＰセクレターゼ阻害剤）によって、抗体によりＡβを中和することによって、またはＡβ凝集に干渉することによって対抗することである。最後に挙げた機序は、動物モデルから得られたデータがＡβ凝集阻害因子またはＡβ凝集調節因子（modulator）のＡβ誘導神経毒性に及ぼす有益な効果を明らかに示しているので科学界内部で興味が増大している。
【００１０】
神経毒性Ａβ凝集種を阻害すると、網膜神経節細胞の緑内障性変性が低減されることがわかった（非特許文献６）。これらの動物実験で使用される阻害因子はコンゴーレッドおよびＡβ抗体であった。これらの阻害因子は薬理研究ツールにすぎず、様々な理由でヒトの治療には適していない。
【００１１】
眼障害、特に緑内障および黄斑変性症を予防および治療する新規方法ならびにその眼障害の当該予防および治療を達成するための薬剤組成物を提供することは利益になるはずである。現在の科学的理解によれば、Ａβ凝集阻害因子またはＡβ凝集調節因子は長期間にわたって連続投与することにより、治療に関連した神経保護効果をもたらす。治療の中断は短期間だけの中断でさえ、阻害因子／調節因子の非存在下に、神経毒性凝集が直ちに再開し、疾患が（以前より潜在的にはるかに急速に）進行する状況に至ると理解される。同じ状況が前述の他のＡβ関連疾患の療法についても前提とされる。
【００１２】
さらに、緑内障または黄斑変性症などのＡβ関連眼病態の治療には、硝子体内注射などの不快なステップを含む投与経路がしばしば必要である。したがって、患者のコンプライアンスおよび全般的な満足感を高める必要がある。
【００１３】
最初の有効量とその後に続く「ブースター」用量との厳密に連続的な用法ではなく、それらの間に休薬期を挟む可能性があることを特徴とするインターバル療法により神経保護効果を実現することができれば、患者にとって明らかに利益になるはずである。このような投与計画はそれでもなお、確実に考えられる最良の臨床治療結果となるようにすべきであることは当然である。
【００１４】
特許文献１には、Ａβ凝集調節因子が緑内障の治療において治療に関連した神経保護効果を生じ得ることが開示されている。
【００１５】
本発明により、このようなＡβ凝集調節因子を用いるインターバル療法は緑内障および黄斑変性症の治療に有効な手法であり得ることが発見された。
【００１６】
さらに、低減させた用量のＡβ凝集調節因子を投与することによって十分なまたは安定した治療効果が得られた患者において、インターバル治療により緑内障の再発を予防できることが確認された。このような治療に伴う恩恵は、治療効果が依然として十分でありながら、薬物曝露が大幅に低減されること、特に慢性曝露が低減されることである。また、インターバル治療は患者に対する投与の便宜性を高め、それによってコンプライアンスに好ましい影響を及ぼす。
【００１７】
本発明が対処する当技術分野の別のニーズは以下において明らかになり、さらに別のニーズは当業者に明らかである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００６８８８号
【特許文献２】米国特許出願公開第２００６／０２３４９４７号明細書
【特許文献３】国際出願第ＰＣＴ／ＩＬ２０１１／０５００１０号
【特許文献４】国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１１／０６８８２０号
【特許文献５】米国特許第５，８１４，３４４号明細書
【特許文献６】米国特許第５，１００，６６９号明細書
【特許文献７】米国特許第４，８４９，２２２号明細書
【特許文献８】国際公開第９５／１１０１０号
【特許文献９】国際公開第９３／０７８６１号
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】Leske MC、The epidemiology of open-angle glaucoma: a review、Am J Epidemiology 1983;118: 166-191
【非特許文献２】Hattenhauer MG、Johnson DH、Ing HH、et al.、The probability of blindness from open-angle glaucoma、Ophthalmology 1998;105: 2099-2104
【非特許文献３】McKinnon SJ.、Glaucoma: Ocular Alzheimer's disease?、Front Biosci. 2003;8: 1140-1156
【非特許文献４】Yoneda S、Hara H、Hirata A、Fukushima M、Inomata Y、Tanihara H、Vitreous fluid levels of beta-amyloid(1-42)and tau in patients with retinal diseases、Jpn J Ophthalmol. 2005;49(2): 106-108
【非特許文献５】Dahlgren KN、Manelli AM、Stine WB Jr、Baker LK、Krafft GA、LaDu MJ、Oligomeric and fibrillar species of amyloid-beta peptides differentially affect neuronal viability、J Biol Chem. 2002;277(35): 32046-32053;
【非特許文献６】Guo L、Salt TE、Luong V、Wood N、Cheung W、Maass A、Ferrari G、Russo-Marie F、Sillito AM、Cheetham ME、Moss SE、Fitzke FW、Cordeiro F、Targeting amyloid-β in glaucoma treatment、PNAS 2007;104(33): 13444-13449
【非特許文献７】Porat Y, Mazor Y, Efrat S, Gazit E. Inhibition of islet amyloid polypeptide fibril formation : A potential role for heteroaromatic interactions. Biochemistry 2004;43:14454-14462
【非特許文献８】Hudson SA、Ecroyd H、Dehle FC、Musgrave IF、Carver JA、(-)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG)maintains kappacasein in its pre-fibrillar state without redirecting its aggregation pathway、J Mol Biol 2009 Sep 25;392(3):689-700
【非特許文献９】Ehrnhoefer DE、Bieschke J、Boeddrich A、Herbst M、Masino L、Lurz R、et al.、EGCG redirects amyloidogenic polypeptides into unstructured, off-pathway oligomers、Nat Struct Mol Biol 2008 Jun;15(6):558-66
【非特許文献１０】Wiesehan, K.、Stohr, J.、Nagel-Steger, L.、van Groen, T.、Riesner, D. and Willbold, D.、(2008)、Inhibition of cytotoxicity and amyloid fibril formation by a D-amino acid peptide that specifically binds to Alzheimer's disease amyloid peptide、Protein Eng Des Sel 21: 241-6
【非特許文献１１】Rezaei-Ghaleh N、Andreetto E、Yan LM、Kapurniotu A、Zweckstetter M、Interaction between amyloid beta peptide and an aggregation blocker peptide mimicking islet amyloid polypeptide、PLoS One 2011;6(5):e20289
【非特許文献１２】Wang MS、Boddapati S、Sierks MR、Antifibrillizing agents catalyze the formation of unstable intermediate aggregates of beta-amyloid、Biotechnol Prog 2010 Jul;26(4):1172-9
【非特許文献１３】Ladiwala AR、Mora-Pale M、Lin JC、Bale SS、Fishman ZS、Dordick JS、et al.、Polyphenolic Glycosides and Aglycones Utilize Opposing Pathways To Selectively Remodel and Inactivate Toxic Oligomers of Amyloid beta、Chembiochem 2011 Jun 10
【非特許文献１４】Thapa A、Woo ER、Chi EY、Sharoar MG、Jin HG、Shin SY、et al.、Biflavonoids are superior to monoflavonoids in inhibiting amyloid-beta toxicity and fibrillogenesis via accumulation of nontoxic oligomer-like structures、Biochemistry 2011 Apr 5;50(13): 2445-55
【非特許文献１５】A.R. Gennaro、"Remington's Pharmaceutical Sciences"、20th Edition
【非特許文献１６】McKinnon, S. J.;Lehman, D. M.;Kerrigan-Baumrind, L. A.;Merges, C. A.;Pease, M. E.;Kerrigan, D. F.;Ransom, N. L.;Tahzib, N. G.;Reitsamer, H. A.;Levkovitch-Verbin, H.;Quigley, H. A.、and Zack, D. J.、Caspase activation and amyloid precursor protein cleavage in rat ocular hypertension、Invest Ophthalmol Vis Sci. 2002 Apr;43(4):1077-87
【非特許文献１７】Morrison J.C.、Moore C.G.、Deppmeier L.M.、Gold B.G.、Meshul C.K.、Johnson E.C.、 A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage、Exp Eye Res. 1997;64(1): 85-96
【非特許文献１８】Cordeiro, M. F.、Guo, L., Luong, V.、Harding, G.、Wang, W.、Jones, H. E.、Moss, S. E.、Sillito, A. M.、and Fitzke, F. W.、2004、Real-time imaging of single nerve cell apoptosis in retinal neurodegeneration、Proc Natl Acad Sci U S A, 101, 13352-6
【非特許文献１９】Kietselaer, B. L.、Hofstra, L.、Dumont, E. A.、 Reutelingsperger, C. P.、and Heidendal, G. A.、 2003、The role of labeled Annexin A5 in imaging of programmed cell death. From animal to clinical imaging、Q J Nucl Med, 47, 349-61
【非特許文献２０】Szydlowska K.、Kaminska B.、Baude A.、Parsons C.G.、Danysz W.、2007、Neuroprotective activity of selective mGlu1 and mGlu5 antagonists in vitro and in vivo、Eur. J. Pharmacol. 554, 18-29
【非特許文献２１】Hartwick A. T.、 2001、Beyond intraocular pressure: neuroprotective strategies for future glaucoma therapy、Optom Vis Sci 78、85-94
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
したがって、本発明が包含すると考えられる発明は、特に以下のようにまとめることができる：
予防および／または治療を必要とする対象においてβ−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態を予防および／または治療する方法であって、アミノ酸配列Ｘ−ＹまたはＹ−Ｘを含むペプチド（式中、Ｘは芳香族アミノ酸であり、Ｙはグリシン以外の別のアミノ酸である）を対象に投与するステップを含み、前記ペプチドは、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記ペプチドは投与されない、または
ｂ）前記ペプチドは前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後この投与方法を繰り返してもよい、方法；
第２の期間の間、ペプチドが治療有効量の２０〜７５％の用量で投与される、前記方法；
第２の期間の間、ペプチドが治療有効量の２５〜５０％の用量で投与される、前記方法；
第２の期間の間、ペプチドが投与されず、次いで、治療有効量のペプチドの対象への投与のさらなる第１の期間が続く、前記方法；
第２の期間に次いで、治療有効量のペプチドの対象への投与のさらなる第１の期間が続く、前記方法；
第１の期間における治療有効量のペプチドの投与が少なくとも１週間継続される、前記方法；
第１の期間における治療有効量のペプチドの投与が最長で１か月継続される、前記方法；
第２の期間が少なくとも１か月、または少なくとも２か月である、前記方法；
第２の期間が最長で３か月、または最長で６か月、または最長で１年である、前記方法；
第２の期間が３か月〜６か月である、前記方法；
ペプチドがＤ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ（配列番号６）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（配列番号１１）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ａｉｂ（配列番号１６）、Ｄ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｔｙｒ（配列番号１７）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号１８）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｙｒ（配列番号２７）、Ｄ−Ｐｒｏ−Ａｉｂ（配列番号２８）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号２９）、Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号３１）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（配列番号３２）、およびＰｒｏ−Ｄ−Ｐｈｅ（配列番号３３）から選択される、前記方法；
ペプチドが薬学的に許容される塩の形である、前記方法；
ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が、１日または複数日からなる期間内に複数回投与される複数回の単一用量の形態で投与される、前記方法；
ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が漸増および漸減から選択される様々な用量強度で投与される、前記方法；
ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が即放性製剤として投与される、前記方法；
ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が放出調節製剤として投与される、前記方法；
少なくとも１つの眼病態が、原発閉塞隅角緑内障、続発開放隅角緑内障、広隅角緑内障、ステロイド緑内障、外傷性緑内障、色素散乱症候群、偽落屑症候群、続発閉塞隅角緑内障、血管新生緑内障、ブドウ膜炎および緑内障、加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、変性視神経症、ならびに最終的に失明に至る進行性の視力喪失を特徴とする眼科病変からなる群から選択される、前記方法；
ペプチドが、第１および／または第２の期間の両方において、少なくとも１つの眼病態を治療または予防するのに有効な少なくとも１つの追加薬剤の治療有効量と組み合わせて投与される、前記方法；
少なくとも１つの追加薬剤が、眼疾患を治療するために投与される医薬品であり、抗緑内障薬、抗生物質、抗炎症薬、ステロイド、抗アレルギー薬および人工涙液から選択される少なくとも１つの作用剤を含有する、前記方法；
少なくとも１つの追加薬剤が、アセタゾラミド、ジクロフェナミド、カルテオロール、チモロール、メチプラノロール、ベタキソロール、ピンドロール、レボブノロール、ブリモニジン、クロニジン、ピロカルピン、カルバコール、ジピベフリン、アプラクロニジン、ブリンゾラミド、ドルゾラミンデ、ビマトプロスト、トラバプロスト、ラタノプロスト、クロロテトラサイクリン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、フシジニック酸、ゲンタマイシン、カナマイシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、オキシテトラサイクリン、ナタマイシン、アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、トブラマイシン、エリスロマイシン、ポリミキシン−Ｂ、アカクロビル、トリフルリジン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルオロメトロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、リメキソロン、クロモグリカート、アゼラスチン、ロドキサミド、エメダスチン、ネドクロミル、レボカバスチン、オロパタジネア、ケトチフェン、ヒプロメロース、カルボマー、ヒアルロナート、カルメロース、ヒプロメロース、ポビドン、ヒエテロース、ポリビニルアルコール、デクスパンテノール、テトリゾリン、トロキセルチン、トラマゾリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、フェニレフリンおよびアンタゾリンから選択される、前記方法；
予防および／または治療を必要とする対象におけるβ−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態を予防および／または治療する方法であって、（−）−エピガロカテキン−３−ガラート（ＥＧＣＧ）、Ｄ−ｐｅｐ（ＱＳＨＹＲＨＩＳＰＡＱＶ）、ＩＡＰＰ−ＧＩ、マンノース、スクロース、ラフィノース、リスベラトロール、フロレチン、ナリンゲニン、アピゲニン、クエルセチン、タイワニアフラボン（ＴＦ）、２’，８”−ビアピゲニン、アメントフラボン、およびスマフラボンから選択される物質および／またはその組合せを対象に投与するステップを含み、物質および／またはその組合せは、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記物質は投与されない、または
ｂ）前記物質は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、この投与方法を繰り返してもよい、前記方法；
β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態を予防および／または治療を必要とする対象における、前記β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態を予防および／または治療する方法であって、
物質を少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与し、次いで、
ａ）物質を投与しない、または
ｂ）物質を治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与する、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、この投与方法を繰り返してもよい、ステップを含み、
物質は下記：
（Ｒ）−（２−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）−２−メチルプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル）、
（２−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパンアミド）−２−メチルプロパン酸メチル）、
（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパンアミド）シクロペンタンカルボン酸メチル）、
（Ｒ）−１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロペンタンカルボン酸、
（Ｒ）−（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロプロパンカルボン酸）、
（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチル）、
１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロヘキサンカルボン酸、
１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロヘキサンカルボン酸エチル、
１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパノイル）−２−メチルピロリジン−２−カルボン酸メチル、
（Ｒ）−３−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）オキセタン−３−カルボン酸、
（Ｒ）−３−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）オキセタン−３−カルボキサミド、
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド
（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸
からなる群から選択される、前記方法；
β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態を予防および／または治療を必要とする対象における、前記β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態を予防および／または治療する方法であって、
物質を少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与し、次いで、
ａ）物質を投与しない、または
ｂ）物質を治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与する、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、この投与方法を繰り返してもよい、ステップを含み、
物質は下記：
Ｎ−（（Ｒ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピル）−２，２−ジメチル−マロンアミド酸、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸メチルアミド、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、
（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸、
（Ｒ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサン酸、
（Ｒ，Ｅ）−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−５−（Ｎ−メチルアセトアミド）ヘキサ−３−エン酸
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸メチルアミド、
（Ｅ）−（Ｓ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、
（Ｅ）−（Ｓ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸メチルアミド、
（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸メチルアミド、
（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸
からなる群から選択される、前記方法；
さらに含まれるのは、Ａβ毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において、前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するための嵩高い無毒性β−アミロイド（Ａβ）タンパク質凝集体；
凝集体が、Ａβ凝集調節因子を対象に投与することによるインターバル療法によって誘導および持続され、Ａβ凝集調節因子は、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで
ａ）前記Ａβ凝集調節因子は投与されない、または
ｂ）前記Ａβ凝集調節因子は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、この投与方法を繰り返してもよい、前記凝集体；
凝集体が、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミドおよび（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸からなる群から選択されるＡβ凝集調節因子を対象に投与することによって誘導および／または持続され、
Ａβ凝集調節因子は、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで
ａ）前記Ａβ凝集調節因子は投与されない、または
ｂ）前記Ａβ凝集調節因子は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、
少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、この投与方法を繰り返してもよい、前記凝集体；
凝集体がＡβ産生細胞の条件培地中でまたは合成Ａβから誘導され、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミドおよび（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸からなる群から選択されるＡβ凝集調節因子は、凝集を嵩高い無毒性凝集体に誘導するのに適切な条件下でＡβ産生細胞の条件培地または合成Ａβに添加されており、その後このような凝集体が単離および洗浄される、前記凝集体。
【００２１】
本発明はまた、β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において、前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するためのアミノ酸配列Ｘ−ＹまたはＹ−Ｘを含むペプチド（式中、Ｘは芳香族アミノ酸であり、Ｙはグリシン以外の別のアミノ酸である）であって、ペプチドは、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記ペプチドは投与されない、または
ｂ）前記ペプチドは前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、この投与方法を繰り返してもよい、ペプチド；
第２の期間の間、ペプチドが治療有効量の２０〜７５％である用量で投与される、前記ペプチド；
第２の期間の間、ペプチドが治療有効量の２５〜５０％である用量で投与される、前記ペプチド；
第２の期間の間、ペプチドが投与されず、次いで、治療有効量の前記ペプチドの前記対象への投与のさらなる第１の期間が続く、前記ペプチド；
第２の期間に次いで、治療有効量の前記ペプチドの前記対象への投与のさらなる第１の期間が続く、前記ペプチド；
第１の期間における治療有効量のペプチドの投与が少なくとも１週間継続される、前記ペプチド；
第１の期間における治療有効量のペプチドの投与が最長で１か月継続される、前記ペプチド；
第２の期間が少なくとも１か月、または少なくとも２か月である、前記ペプチド；
第２の期間が最長で３か月、または最長で６か月、または最長で１年である、前記ペプチド；
第２の期間が３か月〜６か月である、前記ペプチド；
ペプチドがＤ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ（配列番号６）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（配列番号１１）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ａｉｂ（配列番号１６）、Ｄ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｔｙｒ（配列番号１７）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号１８）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｙｒ（配列番号２７）、Ｄ−Ｐｒｏ−Ａｉｂ（配列番号２８）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号２９）、Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号３１）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（配列番号３２）、およびＰｒｏ−Ｄ−Ｐｈｅ（配列番号３３）から選択される、前記ペプチド；
ペプチドが薬学的に許容される塩のである、前記ペプチド；
ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が、１日または複数日からなる期間内に投与される複数回の単一用量の形態で投与される、前記ペプチド；
ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が漸増（up-titration）および漸減（down-titration）から選択される異なる用量強度で投与される、前記ペプチド；
ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が即放性製剤として投与される、前記ペプチド；
ペプチドまたはその薬学的に許容される塩が放出調節製剤として投与される、前記ペプチド；
少なくとも１つの眼病態が、原発閉塞隅角緑内障、続発開放隅角緑内障、広隅角緑内障、ステロイド緑内障、外傷性緑内障、色素散乱症候群、偽落屑症候群、続発閉塞隅角緑内障、血管新生緑内障、ブドウ膜炎および緑内障、加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、変性視神経症、ならびに最終的に失明に至る進行性の視力喪失を特徴とする眼科病変からなる群から選択される、前記ペプチド；
ペプチドが、第１および／または第２の期間の両方において、少なくとも１つの眼病態を治療または予防するのに有効な少なくとも１つの追加薬剤の治療有効量と組み合わせて投与される、前記ペプチド；
少なくとも１つの追加薬剤が、眼疾患を治療するために投与される医薬品であり、抗緑内障薬、抗生物質、抗炎症薬、ステロイド、抗アレルギー薬および人工涙液から選択される少なくとも１つの作用剤を含有する、前記ペプチド；
少なくとも１つの追加薬剤が、アセタゾラミド、ジクロフェナミド、カルテオロール、チモロール、メチプラノロール、ベタキソロール、ピンドロール、レボブノロール、ブリモニジン、クロニジン、ピロカルピン、カルバコール、ジピベフリン、アプラクロニジン、ブリンゾラミド、ドルゾラミンデ、ビマトプロスト、トラバプロスト、ラタノプロスト、クロロテトラサイクリン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、フシジニック酸、ゲンタマイシン、カナマイシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、オキシテトラサイクリン、ナタマイシン、アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、トブラマイシン、エリスロマイシン、ポリミキシン−Ｂ、アカクロビル、トリフルリジン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルオロメトロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、リメキソロン、クロモグリカート、アゼラスチン、ロドキサミド、エメダスチン、ネドクロミル、レボカバスチン、オロパタジネア、ケトチフェン、ヒプロメロース、カルボマー、ヒアルロナート、カルメロース、ヒプロメロース、ポビドン、ヒエテロース、ポリビニルアルコール、デクスパンテノール、テトリゾリン、トロキセルチン、トラマゾリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、フェニレフリンおよびアンタゾリンから選択される、前記ペプチドにも関する。
【００２２】
本発明はまた、β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において、前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するための（−）−エピガロカテキン−３−ガラート（ＥＧＣＧ）、Ｄ−ｐｅｐ（ＱＳＨＹＲＨＩＳＰＡＱＶ）、ＩＡＰＰ−ＧＩ、マンノース、スクロース、ラフィノース、リスベラトロール、フロレチン、ナリンゲニン、アピゲニン、クエルセチン、タイワニアフラボン（ＴＦ）、２’，８”−ビアピゲニン、アメントフラボン、およびスマフラボンから選択される物質および／またはその組合せであって、物質および／またはその組合せは、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記物質は投与されない、または
ｂ）前記物質は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、この投与方法を繰り返してもよい、物質および／またはその組合せ；
同様に、β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するための（Ｒ）−（２−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）−２−メチルプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル）、（２−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパンアミド）−２−メチルプロパン酸メチル）、（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−エチルプロパンアミド）シクロペンタンカルボン酸メチル）、（Ｒ）−１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロペンタンカルボン酸、（Ｒ）−（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロプロパンカルボン酸）、（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチル）、１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロヘキサンカルボン酸、１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロヘキサンカルボン酸エチル、１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパノイル）−２−メチルピロリジン−２−カルボン酸メチル、（Ｒ）−３−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）オキセタン−３−カルボン酸、（Ｒ）−３−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）オキセタン−３−カルボキサミド、（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド、（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸からなる群から選択される物質であって、物質は、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記物質は投与されない、または
ｂ）前記物質は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、この投与方法を繰り返してもよい、物質；
ならびに、β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する少なくとも１つの眼病態の予防および／または治療において、前記予防および／または治療を必要とする対象に使用するためのＮ−（（Ｒ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピル）−２，２−ジメチル−マロンアミド酸、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸メチルアミド、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸、（Ｒ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサン酸、（Ｒ，Ｅ）−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−５−（Ｎ−メチルアセトアミド）ヘキサ−３−エン酸、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸エチルアミド、（Ｅ）−（Ｓ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、（Ｅ）−（Ｓ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸メチルアミド、（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸メチルアミド、（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸からなる群から選択される物質であって、物質は、少なくとも１日の第１の期間、少なくとも治療有効量で毎日投与され、次いで、
ａ）前記物質は投与されない、または
ｂ）前記物質は前記治療有効量の０％より多く、７５％までである用量で投与される、少なくとも１週間の第２の期間が続き、
その後、この投与方法を繰り返してもよい、物質にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂにより、Ａβ１−４２による網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の脱分極が阻害されたことを示すグラフである。
【図２】Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂにより、Ａβ１−４２によるＬＴＰ阻害が低減されたことを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本明細書で使われる「インターバル治療」は、最初に、第１の期間、第１の治療有効量を投与し、所定の第２の期間、低減させた第２の用量、例えば第１の用量の０から≦０．７５の間である第２の用量を投与する治療を指す。
【００２５】
第１の治療有効量の投与に関して、このような投与は、短期間（典型的には１〜７日）内での単一用量の複数回（典型的には１〜１０回）投与からなることもある。さらに、複数の用量が投与される状況では、それらの用量強度が異なることがある。このような変化には薬物およびその忍容性に応じて漸増と漸減の両方が含まれ得ることが意図されている。
【００２６】
特に眼病態の治療に関して、第１の用量の投与経路と第２の用量の投与経路は異なってもよい。例えば、第１の用量は硝子体内注射により投与することができ、第２の用量は局所投与することができる。
【００２７】
「間欠的インターバル治療」は、第２の用量が第１の用量の０％に等しいインターバル治療の特定の実施形態を指す。
【００２８】
第２の期間は第１の期間より長い期間になる場合が多い。例えば、第１の期間は１日とすることができ、第２の期間は１週間もしくは複数週間または１か月もしくは複数か月とすることができ、あるいは第１の期間は１週間にし、第２の期間は２週間以上または１か月もしくは複数か月にする。第２の期間は１年以下にする場合が多い。
【００２９】
本明細書で使われる「連続的な治療」には、先に定義された第２の用量を第２の期間適用することは含まれない。
【００３０】
本発明は視覚障害に対する従来療法の限界に対処し、緑内障および他の変性眼障害のヒトにおける失明を有効に治療するための薬学的に許容される療法を提供する。根底にある機序は、特定の神経毒性Ａβ種の毒性作用をブロックすることによる網膜神経節細胞の損失の予防または回復である。
【００３１】
本療法について記載されている代表的な物質は最初、ＩＩ型糖尿病やプリオン病などのアミロイド細線維の形成を特徴とする疾患（非特許文献７）、およびアルツハイマー型認知症を含む脳の変性疾患（ＧＡＺＩＴ，  Ｅ、特許文献２）の治療用に設計された。さらに詳細には、Ｇａｚｉｔは、アミノイソ酪酸などの修飾アミノ酸をおそらく含む短鎖ペプチドが、分子認識過程およびアミロイド細線維自己集合と相互作用することによって毒性Ａβ種の形成の破壊に適用されることを開示している（Ｇａｚｉｔ、特許文献２）。本発明者らは、これらの物質が脳とは異なる別の器官系、すなわち両眼において治療効果を示すことを確認した（特許文献１）。これらの物質は、緑内障の動物モデルにおける網膜神経節細胞喪失の予防および治療の際に治療効果を示す。公知の作用剤であるコンゴーレッドおよびＡβ抗体に比べて、これらの物質は次の利点を有する：
−これらの物質は、費用効果高く大規模生産することができる低分子である。
−これらの物質は、患者に容易に経口投与（例えば、錠剤またはカプセル剤として）または局所投与（例えば、点眼剤、眼用クリーム剤、眼内デポー剤）することができる。
−これらの物質は忍容性が良好である。
−これらの物質は単純な薬物動態特性を有する。
【００３２】
さらに追加の物質も本発明の方法に適用されてもよい。特に、本発明はポリフェノール（−）−エピガロカテキン−３−ガラート（ＥＧＣＧ）を利用する方法を含む（非特許文献８、９）。１２量体ペプチドＤ−ｐｅｐ（ＱＳＨＹＲＨＩＳＰＡＱＶ）も本方法において活性を示すより大きいペプチドの代表である（非特許文献１０）。膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）の二重Ｎ−メチル化類似体ＩＡＰＰ−ＧＩを含む追加のペプチド種が本方法に適用されてもよい（非特許文献１１）。単純な糖類であるマンノース、スクロース、およびラフィノースを含む糖類も本方法に適用されてもよい（非特許文献１２）。ポリフェノールアグリコンも本方法に使用されてもよく、その代表としては、リスベラトロール、フロレチン、ナリンゲニン、アピゲニン、およびクエルセチンを挙げることができる（非特許文献１３）タイワニアフラボン（ＴＦ）、２’，８”−ビアピゲニン、アメントフラボン、およびスマフラボンなどのビフラボノイドは、本方法に適用されてもよいフラボン種の代表である（非特許文献１４）。
【００３３】
さらに、本発明者らは、これらの化合物の作用機序が化合物それ自体に加えてＡβタンパク質の無害な集合体の形成を特徴とすることを確認した。原子間力顕微鏡像で、これらの集合体は嵩高いＡβタンパク質凝集体として現れる。これらの凝集体はニューロンに対して不活性であり、無毒性である。これらの無毒性の嵩高いＡβ凝集体の集合は非常に急速に起こり、それによってＡβ単量体の高度に構造化された病的βシート様オリゴマーへの凝集が回避され、最終的に患者の治療に役立つ。
【００３４】
今まで、確実に毒性Ａβオリゴマーが形成されないようにするには連続的なＡβ凝集調節因子レベルが必要であると理解されていた。しかし、本発明は有益な治療効果を連続的なＡβ凝集調節因子レベル無しで実現することもできるという予想外の発見に基づいている。実際には、第１有効量のＡβ凝集調節因子を投与して、無毒性の嵩高いＡβ凝集体の形成を開始すれば十分である。驚くべきことに、かかる経路は、最初の開始後、有機体におけるＡβプロセッシングの主要経路になり、凝集調節因子がもはや存在しなくなった後でさえ、ある程度の時間主要経路のままである。これによって、上記のＡβ凝集調節因子はインターバルを置いて（intervallic）適用されると、その場合には自己保持型プロセスを開始するように働くことになる。無毒性の嵩高いＡβ凝集体は一旦形成されると、生体「磁石」として働いて、可溶性Ａβを有機体から自動的に除去する。こうした状況において、Ａβのプロセッシングは薬理作用剤の非存在下でさえ無毒性の嵩高いＡβ凝集体の急速な形成に再び向けられる。この上昇したＡβレベルの連続的無毒化が神経保護治療効果の根底である。
【００３５】
これらの物質の投与を含む方法は、前述のようなすべての形態の緑内障、および色素散乱症候群、偽落屑症候群、続発閉塞隅角緑内障、血管新生緑内障、ブドウ膜炎、加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、変性視神経症、ならびに最終的に失明に至る進行性の視力喪失を特徴とする当業者に公知の他の眼科病変を含む様々なタイプの眼障害の患者を治療する際に適用される。このような病態は共通して網膜または視神経の変性過程と関連した進行性視力低下を示す。治療は予防法としての非常に早期の段階を含む疾患進行のすべての段階で可能である。臨床効果は、第一に緑内障性変性を既に患っている患者における視力の急性改善、及び第二に進行性視力悪化の減速または停止という二面性を有することがある。片眼または両眼において緑内障と関連した失明を発症する患者でさえ、視力をある程度回復することができる。
【００３６】
本方法は、本発明の物質を含有する調製物をある時間間隔で投与することを場合によっては含む。これによって、可溶なＡβの別の凝縮中心として新鮮な無毒性の嵩高いＡβ凝集体が形成される（「ブースター」投与）。根底にある疾患治療のタイプおよび段階に応じて、数日間から数か月のサイクルが可能である。公知の連続的治療レジメンに比べて、本発明のインターバル療法は次の利点を有する：
−２日ごとから１年当たりわずか数回までの薬物投与の治療間隔は、１日当たり数回から少なくとも１日１回までも必要とされる投与に比べて患者の便益および生活の質における顕著な改善である。これは、投与経路およびＡβ関連疾患のタイプとは無関係に当てはまる。
−インターバル療法に対する患者のコンプライアンスも改善されている。患者は医薬品を投与しなければならない頻度が多くなればなるほど、治療で悩まされ、投与時点を省くだけである。コンプライアンスが高まれば、治療の恩恵が改善する。
−革新的な治療レジメンによって、薬物への全曝露が大幅に低減される。曝露の低減は有害作用のリスクの低減を意味する。そのように、有益な治療効果を失うことなく、忍容性および安全性プロファイルを劇的に向上することができる。
−患者１人当たりの投与される化合物の全量が低減され、それによって生産費用が劇的に低減される。
【００３７】
あるいは、嵩高い無毒性のＡβ凝集体を合成によって（嵩高い合成凝集体）またはＡβ産生細胞の条件培地から得ることができる。例えば、Ａβ産生細胞の条件培地をＡβ凝集調節因子と共にインキュベートしてもよい。
【００３８】
Ａβタンパク質およびそれぞれのＡβ凝集調節因子が無毒性の嵩高いＡβ凝集体を形成した後、これらの無毒性の嵩高いＡβ凝集体を、除去可能なＡβ凝集調節因子がすべてすすぎ落とされるまで分画超遠心／洗浄（または段階希釈など他の適切な技法）することにより、分離することができる。次いで、清浄された表面にＡβ凝集調節因子を含まない無毒性の嵩高いＡβ凝集体をＡβ凝集調節因子の代わりに投与して、嵩高いＡβ凝集体のさらなる形成を促進することによって特定の神経毒性Ａβ種の毒性作用をブロックすることができる。
【００３９】
本方法は、眼障害の治療において有効であることが当技術分野において公知である少なくとも１つの追加薬剤を投与することを場合によっては含む。このような投与は、本インターバル治療レジメンとかかわりなく、少なくとも１つの追加薬剤の好ましい治療レジメンに従って含めることができる。これらの追加の作用剤は、上記のものを含む抗緑内障薬の一般クラス、抗生物質、抗ウイルス剤、ステロイド、抗アレルギー薬、人工涙液ならびに局所性および全身性の眼治療に使用される他の薬物から選択することができる。代表的な抗緑内障薬としては、アセタゾラミド、ジクロフェナミド、カルテオロール、チモロール、メチプラノロール、ベタキソロール、ピンドロール、レボブノロール、ブリモニジン、クロニジン、ピロカルピン、カルバコール、ジピベフリン、アプラクロニジン、ブリンゾラミド、ドルゾラミンデ、ビマトプロスト、トラバプロスト、およびラタノプロストが挙げられる。眼感染症に使用される代表的な抗生物質は、クロロテトラサイクリン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、フシジニック酸、ゲンタマイシン、カナマイシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、オキシテトラサイクリン、ナタマイシン、アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、トブラマイシン、エリスロマイシン、およびポリミキシン−Ｂである。代表的な抗ウイルス剤としては、アカクロビルおよびトリフルリジンが挙げられる。代表的なステロイドとしては、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルオロメトロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、およびリメキソロンが挙げられる。代表的な抗アレルギー薬としては、クロモグリカート、アゼラスチン、ロドキサミド、エメダスチン、ネドクロミル、レボカバスチン、オロパタジネアおよびケトチフェンが挙げられる。代表的な人工涙液としては、ヒプロメロース、カルボマー、ヒアルロナート、カルメロース、ヒプロメロース、ポビドン、ヒエテロース、ポリビニルアルコール、およびデクスパンテノールが挙げられる。代表的な他のよく使用される眼治療薬はテトリゾリン、トロキセルチン、トラマゾリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、フェニレフリン、アンタゾリンである。
【００４０】
特許文献２に記載される以下のペプチドは、上記で論じた、Ｇａｚｉｔによって述べられたアミノイソ酪酸などの修飾アミノ酸をおそらく含む短鎖ペプチドの代表である。Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号１）、Ａｉｂ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｓｎ−Ａｉｂ（配列番号２）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｓｎ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号３）、Ａｉｂ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ａｉｂ（配列番号４）、Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号５）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ（配列番号６）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号７）、Ａｉｂ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｓｎ−Ａｉｂ（配列番号８）、Ａｉｂ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ａｉｂ（配列番号９）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ（配列番号１０）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（配列番号１１）、Ａｉｂ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（配列番号１２）、Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ａｉｂ（配列番号１３）、Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ（配列番号１４）、β−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｎ（配列番号１５）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ａｉｂ（配列番号１６）、Ｄ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｔｙｒ（配列番号１７）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号１８）、Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ（配列番号１９）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｉｂ（配列番号２０）、Ａｉｂ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ（配列番号２１）、Ａｉｂ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｉｂ（配列番号２２）、Ｄ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号２３）、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ（配列番号２４）、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ（配列番号２５）、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ（配列番号２６）、Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｙｒ（配列番号２７）、Ｄ−Ｐｒｏ−Ａｉｂ（配列番号２８）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号２９）、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）、Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｒｏ（配列番号３１）、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ（配列番号３２）、およびＰｒｏ−Ｄ−Ｐｈｅ（配列番号３３）。別段の注記のない限り、残基Ａｉｂはα−アミノイソ酪酸を意味すると理解される。
【００４１】
さらに、トリプトファン部分を含む短鎖分子は適切なＡβ凝集調節因子として働くことができる。適切な化合物については、特許文献３に記載されており、参照により本明細書に援用する。特に出願時のその出願の表１、実施例および特許請求の範囲に示す化合物は、本明細書に記載される方法に従った使用に適している。例えば、以下の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を使用することができる：
（Ｒ）−（２−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）−２−メチルプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル）、
（２−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパンアミド）−２−メチルプロパン酸メチル）、
（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチルプロパンアミド）シクロペンタンカルボン酸メチル）、
（Ｒ）−１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロペンタンカルボン酸、
（Ｒ）−（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロプロパンカルボン酸）、
（１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチル）、
１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロヘキサンカルボン酸、
１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）シクロヘキサンカルボン酸エチル、
１−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパノイル）−２−メチルピロリジン−２−カルボン酸メチル、
（Ｒ）−３−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）オキセタン−３−カルボン酸、
（Ｒ）−３−（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）オキセタン−３−カルボキサミド，
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド
（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸
【００４２】
さらに適切な化合物については、特許文献４に記載されており、参照により本明細書に援用する。特に出願時のその出願の実施例および特許請求の範囲に示す化合物は、本明細書に記載される方法に従った使用に適している。例えば、以下の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を使用することができる：
Ｎ−（（Ｒ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−プロピル）−２，２−ジメチル−マロンアミド酸、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸アミド、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸−メチルアミド、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、
（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸、
（Ｒ）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサン酸、
（Ｒ，Ｅ）−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−５−（Ｎ−メチルアセトアミド）ヘキサ−３−エン酸、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸−アミド、
（Ｅ）−（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸−メチルアミド、
（Ｅ）−（Ｓ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸−アミド、
（Ｅ）−（Ｓ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸−メチルアミド
（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸−メチルアミド
（Ｒ）−５−アセチルアミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−４−オキソヘキサン酸
【００４３】
記載された物質が本来代表するものにすぎず、代替物質が薬理学における当業者に公知であることは当業者には明らかであろう。
【００４４】
「類似体」または「誘導体」という用語は本明細書では従来の薬学的意味で使用されて、本方法の活性物質（Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂなど）に構造的に似ているが、その参照分子の１つまたは複数の特定置換基を代替の置換基で置換し、それによって当該分子に構造的に似ている分子が生成されるように、標的を定めて制御された形で修飾された分子を指す。改善されたまたは偏りのある特性（特定の目的受容体タイプにおけるより高い効力および／または選択性、哺乳類の血液脳関門を通過するより高い能力、より少ない副作用など）を有する可能性がある、既知物を若干修飾したものを同定するための類似体の合成および（例えば、構造分析および／または生化学的分析を利用した）スクリーニングは、製薬化学において周知のドラッグデザイン手法である。
【００４５】
さらに、当業者に公知の方法を使用して、β−アミロイド（Ａβ）毒性を制御する際に改善された治療有効性、すなわち特定の目的受容体タイプにおけるより高い効力および／または選択性、哺乳類の血液脳関門を通過するより高いまたはより低い能力（例えば、より速いまたはより低い血液脳関門通過速度）、より少ない副作用などを有する、本発明の物質の類似体および誘導体を生成することができる。
【００４６】
本発明の物質は、その高活性度と低毒性とが相まって最も好ましい治療係数を提示することから、前記物質に感受性を示す徴候もしくは病態、または典型的には本出願の他の箇所に記載されている徴候もしくは病態の治療、軽減、または回復、寛解、または消失のために、前記物質を必要とする対象、例えば生きている動物（ヒトを含む）の身体に、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤と場合によっては並行して、同時に、または一緒に、特にかつ場合によってはそれらの薬剤組成物の形で、経口経路にせよ、直腸内経路にせよ、（静脈内、眼内、および皮下を含む）非経口経路にせよ、さらには場合によっては（点眼剤、眼用クリーム剤、および眼内デポー製剤を含む）局所経路にせよ、有効量で投与することができる。適切な用量範囲は、通常のように的確な投与方法、投与剤形、投与の適応症、投与対象およびその体重、ならびに担当医師または獣医の選択および経験に応じて１日１〜１０００ミリグラム、あるいは１日１０〜５００ミリグラム、場合によっては１日５０〜５００ミリグラムである。
【００４７】
用量または量に付される「治療上有効」という用語は、物質または薬剤組成物を必要とする（人体を含む）生きている動物の身体への投与後に所望の活性を生じるのに十分であるような、物質または薬剤組成物の量を指す。「治療する」という用語は、本明細書では対象における疾患の少なくとも１つの症状を軽減または緩和することを意味するのに使用される。本発明で意味する範囲内では、「治療する」という用語は、発症（すなわち、疾患の臨床的顕在化より前の期間）を阻止し、遅延させ、かつ／または疾患の発症もしくは悪化のリスクを低下させることも表す。
【００４８】
本発明の組成物と共に使用される「薬学的に許容される」という句は、哺乳類（例えば、ヒト）に投与された場合に生理的に忍容でき、有害反応を典型的には生じないような組成物の分子および他の成分を指す。「薬学的に許容される」という用語はまた、哺乳類、さらに詳細にはヒトにおける使用に関して、米国連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されていること、または米国薬局方もしくは一般的に認識されている他の薬局方に記載されていることを意味することもある。
【００４９】
本発明の物質は、薬学的に許容される塩の形をとることができる。「薬学的に許容される塩」は、親化合物の生物学的効果および特性を有し、生物学的にせよそうでないにせよ望ましくないものではない塩を指す。塩または異性体の性質は重要なものではない。ただし、塩または異性体が無毒性であり、所望の薬理活性に実質的に干渉しないことを条件とする。
【００５０】
本発明の薬剤組成物に適用される「担体」という用語は、活性物質（Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂなど）と一緒に投与される希釈剤、賦形剤、またはビヒクルを指す。このような薬剤用担体は、水、食塩水、デキストロース水溶液、グリセロール水溶液、および落花生油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などの石油、動物、野菜または合成起源の油を含む油などの無菌液体とすることができる。適切な薬剤用担体については、非特許文献１５に記載されている。
【００５１】
「約」または「およそ」という用語は、通常所与の値もしくは範囲の２０％以内、または５％以内を含む、１０％以内を意味する。あるいは、特に生物学系においては、「約」という用語は、所与の値の２倍以内を含む、約１ｌｏｇ（すなわち、１桁）以内を意味する。
【００５２】
本発明の方法と共に、治療有効量の活性物質および／または治療有効量を下回る活性物質、例えば治療有効量の０と≦０．７５の間の活性物質を含む薬剤組成物も提供される。本発明の組成物は、（すべて薬学的に許容される）担体または賦形剤をさらに含んでもよい。
【００５３】
緑内障を含む眼障害の治療に、本Ａβ凝集調節因子またはそれらを含む薬剤組成物を本発明の投与スキームに従って使用することができる。一実施形態において、調節因子および／または薬剤組成物（医薬品）は、本明細書に開示される特定の投与（例えば、インターバル治療、維持療法、１日１回、１日２回投与、または１日３回投与）用に適合され、または適切に調製されている。このために、パッケージおよび／または添付文書および／または患者情報および／または剤形それ自体に対応する情報が含まれ得る。
【００５４】
本発明の活性成分（例えば、Ａβ凝集調節因子）または組成物は、緑内障を含む眼障害の治療用の医薬品の製造に使用することができ、医薬品は本明細書に開示される特定の投与（例えば、インターバル治療、維持療法、１日１回、１日２回投与、または１日３回投与）用に適合され、または適切に調製されている。このために、添付文書および／または患者情報に対応する情報が含まれている。
【００５５】
本発明によれば、活性物質の剤形は、以下に従って固形、半固形、または液体製剤とすることができる。
【００５６】
本発明の活性物質は、従来の無毒性の薬学的に許容される担体を含有する投与単位製剤で経口、局所、非経口、または粘膜（例えば、頬側、吸入、または直腸）投与することができる。小児対象者に投与する別の実施形態において、活性物質を風味付き液体（例えば、ペパーミント風味）として製剤化することができる。活性物質はカプセル剤、錠剤などの剤形で、または半固形製剤もしくは液体製剤として経口投与することができる（非特許文献１５を参照のこと）。
【００５７】
錠剤またはカプセル剤の剤形での経口投与では、活性物質を結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充てん剤（例えば、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトールならびに他の還元糖および非還元糖、微結晶セルロース、硫酸カルシウム、またはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、またはシリカ、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、ベヘン酸グリセリル、ステアリン酸カルシウムなど）；崩壊剤（例えば、バレイショデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤化剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、着色剤および矯味剤、ゼラチン、甘味剤、天然および合成ゴム（アカシア、トラガカントまたはアルギナートなど）、緩衝塩、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなど無毒性の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせることができる。
【００５８】
錠剤を、例えばアラビアゴム、ゼラチン、タルカム、二酸化チタンなどを含有することができる濃糖液でコーティングすることができる。あるいは、錠剤を易揮発性有機溶媒または有機溶媒の混合物に溶解するポリマーでコーティングすることができる。特定の実施形態において、活性物質は即放性（ＩＲ）錠剤または放出調節（ＭＲ）錠剤に製剤化される。即放性固形剤形では、活性成分の大部分またはすべてを６０分以下などの短期間にわたって放出することが可能になり、薬物の急速な吸収が可能になる。放出調節経口固形剤形では、治療上有効な血漿中レベルを同様に長時間間隔にわたって維持し、かつ／または活性物質の他の薬物動態特性を改変するために、活性物質の長時間にわたる徐放が可能になる。
【００５９】
軟ゼラチンカプセル剤の製剤では、活性物質を例えば植物油またはポリエチレングリコールと混合することができる。硬ゼラチンカプセル剤には、上記の錠剤用賦形剤、例えばラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン（例えば、バレイショデンプン、トウモロコシデンプンまたはアミロペクチン）、セルロース誘導体かゼラチンを使用して活性物質の顆粒を含めることができる。また、薬物の液体または半固形物を硬ゼラチンカプセル剤に充填することもできる。
【００６０】
本発明の組成物を例えばポリグリコール酸／乳酸（ＰＧＬＡ）から作製されたマイクロスフェアまたはマイクロカプセルに導入することもできる（例えば、特許文献５〜９を参照のこと）。生体適合性ポリマーは、活性物質の放出制御を実現するのに使用することができ、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリヒドロピラン、ポリシアノアクリラート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーが挙げられる。
【００６１】
活性物質の半固形または液体形の製剤も使用することができる。物質は製剤の０．１から９９重量％の間を構成することができ、さらに詳細には注射向けの製剤では０．５から２０重量％の間、経口投与に適した製剤では０．２から５０重量％の間を構成することができる。
【００６２】
本発明の一実施形態において、活性物質は放出調節製剤として投与される。放出調節剤形は、患者のコンプライアンスを改善し、かつ有害反応の発生率を低減することによって確実に有効で安全な療法となるようにする手段を提供する。即放性剤形に比べて、放出調節剤形を使用すると、投与後の薬理作用を引き延ばし、投与間隔の全体にわたって血漿中薬物濃度の可変性を低減し、それによって鋭いピークをなくすかまたは低減することができる。
【００６３】
放出調節剤形は、活性物質でコーティングされたコアまたは活性物質が中に入っているコアを含むことができる。次いで、存在しているコアを放出調節ポリマーでコーティングする。活性物質はその中に分散されている。放出調節ポリマーは徐々に崩壊し、活性物質がゆっくり時間をかけて放出される。したがって、組成物の最外層は、組成物が水性環境、すなわち胃腸管に曝露されたときにコーティング層を通過する活性物質の拡散を効果的に減速させて制御する。活性物質の正味拡散速度は、主に胃液のコーティング層またはマトリックスを透過する能力および活性物質自体の溶解度に依存している。
【００６４】
本発明の別の実施形態において、活性物質は経口液体製剤として製剤化される。経口投与用の液体調製物は、例えば液剤、シロップ剤、乳剤または懸濁剤の剤形をとることができ、あるいは乾式製品として提供され、使用前に水または他の適切なビヒクルを加えて戻すことができる。経口投与用の調製物を活性化合物の放出制御または延期が行われるように適切に製剤化することができる。
【００６５】
液体剤形として経口投与する場合には、活性物質を無毒性の薬学的に許容される不活性担体（例えば、エタノール、グリセロール、水）、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）、非水性のビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分画植物油）、保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピルまたはソルビン酸）などと組み合わせることができる。抗酸化剤などの安定剤（ＢＨＡ、ＢＨＴ、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、クエン酸）を添加して、剤形を安定化することもできる。例えば、液剤は約０．２重量％〜約２０重量％の活性物質を含有することができ、残りは糖ならびにエタノール、水、グリセロールおよびプロピレングリコールの混合物である。場合によっては、このような液体製剤は着色剤、矯味剤、サッカリンおよび粘稠化剤として、カルボキシメチルセルロース、または他の賦形剤を含有してもよい。
【００６６】
別の実施形態において、治療有効量の活性物質が、保存剤、甘味剤、可溶化剤、および溶媒を含有する経口液剤として投与される。経口液剤は、１つまたは複数の緩衝剤、矯味剤、または追加の賦形剤を含むことができる。別の実施形態において、ペパーミント矯味剤または他の矯味剤が活性物質経口液体製剤に添加される。
【００６７】
吸入投与では、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切な気体を使用して、活性物質を加圧パックまたはネブライザーからのエアゾールスプレープレゼンテーション（aerosol spray presentation）の形で都合よく送達することができる。加圧エアゾールの場合は、定量を送達するためのバルブを設けることによって、投与単位を決定することができる。例えば、化合物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤との混合粉体を含有する、吸入器またはインサフレーターで使用するためのゼラチン製のカプセルおよびカートリッジを製剤化することができる。
【００６８】
注射による非経口適用向けの液剤は、活性物質の薬学的に許容される水溶性塩の水溶液として好ましくは約０．５重量％〜約１０重量％の濃度で調製することができる。これらの液剤は安定剤および／または緩衝剤も含むことができ、好都合なことには様々な投与単位アンプルで提供することができる。
【００６９】
本発明の製剤は、非経口で、すなわち例えばボーラス注射または連続注入による直接注射で眼内、静脈内（ｉ．ｖ．）、脳室内（ｉ．ｃ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、真皮下（ｓ．ｄ．）、または皮内（ｉ．ｄ．）投与により送達することができる。注射用製剤は、保存剤を添加した単位剤形、例えばアンプル、または多回投与容器で提供することができる。あるいは、活性成分は、使用する前に適切なビヒクル、例えば発熱物質を含まない無菌水を加えて戻すことができる散剤とすることができる。
【００７０】
本発明は、活性物質と場合によってはそれ以外の製剤成分とを含有する１つまたは複数の容器を備えた薬剤パックまたはキットも提供する。特定の実施形態において、活性物質は茶さじ２杯分の容量の注射器（ｄｏｓａｇｅ  ＫＯＲＣ（登録商標））を用いて投与するための経口液剤（例えば、２ｍｇ／ｍｌ）として提供される。経口注射器にはそれぞれ、計量用のハッチマークがあり、（先端を下にして）注射器の右側の線はｔｓｐ単位を表し、左側の線はｍｌ単位を表す。
【００７１】
最適な治療有効量は、的確な投与方法、薬物の投与剤形、投与の適応症、投与対象（例えば、体重、健康状態、年齢、性別など）、ならびに担当医師または獣医の選択および経験を考慮に入れて経験的に決定され得る。
【００７２】
直腸適用の投与単位は液剤もしくは懸濁剤とすることができ、あるいは本発明の物質を中性脂肪基剤との混合物として含む坐剤もしくは停留浣腸剤の形、または活性物質を植物油またはパラフィン油と混合して含む直腸ゼラチンカプセル剤の形で調製することができる。
【００７３】
本発明の組成物の毒性および治療有効性は、実験動物において標準的製薬手順により、例えばＬＤ５０（母集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（母集団の５０％に対して治療有効な用量）を決定することによって決定することができる。治療効果と毒性作用の間の用量比が治療係数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。大きい治療係数を示す組成物が好ましい。
【００７４】
ヒトの治療的処置における本発明の活性物質の適切な有効量は、経口投与の場合約０．０１〜１０ｍｇ／体重１ｋｇ、非経口投与の場合０．００１〜１０ｍｇ／体重１ｋｇである。
【００７５】
治療期間は短期、例えば数週間（例えば、８〜１４週間）、またはさらに投与する必要はもはやないと担当医がみなすまでの長期とすることができる。
【００７６】
本発明の活性物質は単剤療法として、またはβ−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する眼病態、さらに具体的には緑内障の治療に処方される別の物質と組み合わせて投与してもよい。
【００７７】
活性物質に付される「組合せ」という用語は、本明細書では２つの活性物質を含む単一の薬剤組成物（製剤）（例えば、本明細書に記載される活性物質およびβ−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する眼病態またはさらに具体的には緑内障の治療に処方される別の物質を含む薬剤組成物）、または共同投与される、それぞれが１つの活性物質を含む別個の２つの薬剤組成物（例えば、本発明の活性物質またはβ−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する眼病態もしくはさらに具体的には緑内障の治療に処方される別の物質を含む薬剤組成物）を定義するために使用される。
【００７８】
本発明で意味する範囲内では、「共同投与」という用語を使用して、本明細書に記載される活性物質および第２の活性物質（例えば、β−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する眼病態またはさらに具体的には緑内障の治療に処方される別の物質）を同時に１つの組成物として、または同時に異なる組成物として、または順次に投与することを指す。しかし、順次投与が「共同」であるとみなされるには、本明細書に記載される活性物質と第２の活性物質を、哺乳類におけるβ−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する眼病態を治療するのに有益な効果が依然得られる時間間隔に分けて投与しなければならない。本発明は、このような「組合せ」療法が特定の日数行われる間、Ａβ凝集調節因子が治療有効量で投与され、治療上無効量（therapeutically sub-effective dosage）で投与され、または全く投与されないような組合せ投与戦略を包含する。
【００７９】
本発明の実験物質は緑内障の治療とさらに加齢性ＲＧＣ機能障害の治療にも有用であり得る。後者の病態についてもＡβの役割が示唆されているからである。さらに、緑内障において現在使用されている眼内圧降下剤、ならびに抗酸化剤、カルシウムチャネルブロッカー、ＮＯ合成酵素阻害剤、ニューロトロフィンおよび抗アポトーシス剤など提案されている将来の治療薬を用いた併用治療から、妥当と思われる相乗的治療効果を期待することができる。
【００８０】
本発明は、本発明の方法における物質について新規で、価値のある、驚くべき応用および使用、ならびに本明細書に記載される特徴および／または利点の少なくとも１つを有するその新規薬剤組成物を提供する。
【００８１】
生きている動物の身体において選択された病気の進行の阻害または軽減のために動物の身体を本発明の物質で治療する方法は、先に述べたように、通常許容される任意の薬学的経路により、軽減することが望まれる特定の病気の軽減に有効である選択された少なくとも１つの投与量を投与し、続いて所定の期間、無効投与量を投与するかまたは投与しないことにより行われる。
【００８２】
選択された病気または病態、特にβ−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する眼病態などの病気または病態の進行を阻害しまたは軽減するための、生きている動物の治療用医薬品の製造における、本発明の物質の使用は、有効量の本発明の化合物を薬学的に許容し得る希釈剤、賦形剤、または担体と混合するステップ、ならびに治療方法、薬剤組成物、および医薬品の製造における本発明の化合物の使用を含む、通常の方法で実施される。
【００８３】
活性物質を適切な薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と混合することによって調製される代表的な薬剤組成物としては、錠剤、カプセル剤、注射液剤、液体経口製剤、エアゾール製剤、ＴＤＳ製剤、およびナノ粒子製剤が挙げられ、したがってまた上記に従って経口使用、注射使用、または局所使用向けの医薬品が製造される。
【００８４】
薬理−要約
本発明の活性物質を使用する方法およびそれらの薬剤組成物は独特で有利で予測不可能な特性を特徴とし、それによって特許請求の範囲に記載する「発明の主題として」非自明になる。したがって、本方法および薬剤組成物は認められた信頼できる標準試験手法で下記の価値ある特性および特徴を示した：
【００８５】
薬理実施例１
方法
緑内障の実験モデルでは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の発現が増加し、おそらく関係すると思われるアポトーシスが網膜神経節細胞（ＲＧＣ）で起こる（非特許文献１６）。さらに、Ａβ１−４２の注射はＲＧＣにおけるアポトーシスを誘発する。抗体の眼適用、β−セクレターゼ活性の阻害またはオリゴマー化阻害などのＡＰＰ−Ａβ経路との干渉は、眼圧の上昇に起因する緑内障におけるＲＧＣアポトーシスを少なくとも一時的に防止する（非特許文献６）。
【００８６】
実験手法
雄Ｄａｒｋ  Ａｇｕｔｉラットモデルにおいて、片眼の強膜上静脈中に高張食塩水を注射して眼圧上昇（慢性高眼圧：ＯＨＴ）を誘発することによって緑内障を生じさせ、反対眼を対照として使用する（非特許文献１７）。処置群（１群当たりＮ＝４〜８）では、様々な用量の本発明の物質を、緑内障誘発の時点で硝子体内注射（液量５μｌ）し、いくつかの群では、以後７日間、投与を継続して、そのような延長治療が効力の増大をもたらすかどうかを見る。慢性高眼圧（ＯＨＴ）誘発の３週間後および６週間後におけるＲＧＣアポトーシスの程度を、動的共焦点走査型レーザー検眼鏡検査および蛍光標識アネキシンＶにより、各動物において評価する。３週間後および６週間後に動物を屠殺し、それらの眼を摘出し、４％パラホルムアルデヒド中で終夜固定する。その後、網膜を分離して、アポトーシスに関係する変化、例えばＦＩＴＣアネキシンＶキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国フランクリンレイクス）（非特許文献１８、１９）またはＴＵＮＥＬ（ｄＵＴＰニック末端標識法）［Ｒｏｃｈｅ社、インサイチュー細胞死検出キット、フルオレセイン標識］（非特許文献２０）で可視化される変化を評価する。本発明の実験物質で処置された動物では、評価を行った時点の少なくとも一方において、ＲＧＣアポトーシスの減少が起こる。
【００８７】
別の実験では、ラットを全身処置（ｓ．ｃ．）し、実験を上記のように繰り返す。この研究の目的は、全身性投与が眼内で十分に高い濃度をもたらすかどうかを確認することである。したがって、上記に加えて、眼の硝子体腔における本発明の物質の濃度を分析する。実験物質で全身処置された動物では、評価を行った時点の少なくとも一方で、ＲＧＣアポトーシスの減少が起こり、有意な濃度の実験物質が眼の硝子体腔に検出される。
【００８８】
緑内障を誘発する２４時間前に物質を１回適用（ｓ．ｃ．）する点以外は上記と同様にして、実験を繰り返す。研究から、緑内障が誘発された時点で、片眼に適用された物質の濃度は無視できるほどであることがわかる。驚くべきことに、このような処置に続いて、ある時点、例えば３週間後に評価したとき対照に対してＲＧＣ損失の低下が認められる。
【００８９】
試験管内実験１
さらに、ＲＧＣ細胞の毒性に対する実験物質の効果をインビトロで確認する。Ａβを実験物質（３００、１００、３０、１０、３、１、０．３μＭ）またはビヒクルと共に１〜７日間プレ凝集させ、次いでこの溶液の一部を初代ＲＧＣ培養物に４８時間加えて、Ａβの最終濃度＝１μＭにする。このインキュベーション中において、細胞を３７℃、湿度９５％、５％ＣＯ２の培養器中に維持する。その後、ＦＩＴＣアネキシンＶキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国フランクリンレイクス）を使用し、場合によってはヨウ化プロピジウムを用いて、アポトーシス／ネクローシスを確認する（非特許文献２０）。
【００９０】
試験管内実験２
あるいは、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）に対する毒性に及ぼす実験物質の効果を、後述のように穿孔パッチクランプ技法で記録されるＲＧＣ膜電位を使用して、試験管内で確認することができる。この技法は、抗生物質によって形成された膜内の穿孔により細胞質の透析が低減されるため、細胞膜電位を長時間モニターする機会が得られる。それにより、膜は小さいカチオンに対してのみ透過性を示す。
【００９１】
Ｂａｃｈｅｍ社の凍結乾燥Ａβ１−４２（コードＨ−１３６８、ロット番号１０３０２５５）をＨＦＩＰ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社）に濃度１ｍｇ／ｍｌで溶解し、それからＡβを調製する。実験では、Ａβ濃度を通常５０ｎＭに設定する。Ａβは、３６℃で９０分間インキュベーションした後、またいずれの場合でも生理学的浴液に希釈した瞬間から２時間以内に使用する。
【００９２】
ＲＧＣを新生仔（Ｐ５〜Ｐ６）マウス網膜から単離する。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃキットによって提供された標準化手順を使用して、ＲＧＣを単離する。培養状態４日間の終わりに、軸索を表す１つの長い突起の存在によってＲＧＣを同定する。
【００９３】
パッチクランプ記録の前に、細胞を浸している培地を外部記録溶液（１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５  ＫＣｌ、１．８  ＣａＣｌ２、０．５  ＭｇＣｌ２、１０  グルコース、１０  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ  ７．４）で置換する。パッチクランプ実験は、細胞内液（１４０ｍＭ  ＫＣｌ、１０  ＮａＣｌ、２  ＭｇＣｌ２、０．１  ＣａＣｌ２、１０  グルコース、１０  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ  ６．９）に最終濃度５μｇ／ｍｌとして希釈された抗生物質グラミシジン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社）を使用して行われる。この溶液を使用してパッチピペットを満たし、「穿孔パッチクランプ手順」の際に膜を穿孔する。前記グラミシジン濃度において、細胞への電気的アクセスが約５〜１０分後に得られる。
【００９４】
まず、対照条件におけるＲＧＣの静止電位を測定する。オーダーメイドのＵチューブ灌流装置を観察下の細胞に向け、網膜神経節細胞を灌流する溶液への完全な変化が１秒未満で実現する。
【００９５】
以下の化合物（例えば、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミドおよび（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０））のβアミロイド刺激網膜神経節細胞に対する作用を上記のように評価する。Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂの保護効果の例を図１に示す。Ａβ１−４２  ５０ｎＭ（３６℃で９０分プレインキュベート）は単離した網膜神経節細胞（ＲＧＣ）を脱分極した−矢印はＡβ１−４２適用時点を示す−図１Ａ。２分から１０分の間の可変時間の後、細胞静止電位はより高い陽電位の方へ移動する。図１Ｂでは、Ａβ１−４２のＡＢ１−４２脱分極効果が１μＭ  Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂコインキュベーション（３６℃で９０分）により妨げられることが明らかである。図１Ｃは、対照条件下、５０ｎＭ  Ａβおよび異なる２つのＤ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ濃度でのＲＧＣの平均静止電位を示す。対照条件（−５９．４±２．８ｍＶ）とＡβ刺激（３５．６±１．８ｍＶ）との差は極めて有意である（ｎ＝５、ｐ＝０．０１）。Ａβ適用とＡβ＋０．５μＭ  Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂとの間には有意差は認められない（−３９．３±１．８ｍＶ）。しかし、Ａβ  ５０ｎＭ＋１μＭ  Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂで刺激されたＲＧＣの平均静止膜電位（−４８．９±２．４ｍＶ）は統計学的に対照（ｎ＝５、ｐ＝０．０５）、Ａβ刺激単独（ｎ＝５、ｐ＝０．０５）、およびＡβ＋０．５μＭ  Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（ｎ＝５、ｐ＝０．０５）と異なる。これらの結果から、Ｄ−Ｔｒｐ−ＡｉｂがＡβ１−４２毒性から保護することがわかる。
【００９６】
これらのデータは、本発明の実験物質が緑内障の治療とさらに加齢性ＲＧＣ機能障害の治療にも有用であり得ることを強く示唆している。後者の病態についても同様にＡβの役割が示唆されているからである（非特許文献６）。さらに、緑内障において現在使用されている眼内圧降下剤、ならびに抗酸化剤、カルシウムチャネルブロッカー、ＮＯ合成酵素阻害剤、ニューロトロフィンおよび抗アポトーシス剤など提案されている将来の治療薬を用いた併用治療から、妥当と思われる相乗的治療効果を期待することができる（非特許文献２１）。
【００９７】
薬理実施例２
実験手順
嵩高い合成凝集体を生成する方法
Ａβ１−４２（注文番号６２−０−８０、バッチＹ１１０４２Ｔ１、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ社、米国カリフォルニア州サニーベール、ＣＡ  ９４０８６）を１００％ＨＦＩＰ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社）に約１ｍｇ／ｍｌになるまで懸濁し（２ｍｇを２ｍｌのＨＦＩＰに溶解し）、密封されているエッペンドルフ型バイアル中、３７℃で１．５時間振盪する。これを室温まで放冷し、次いで溶液を等量に小分けし、Ｓｐｅｅｄｖａｃを約３０分使用して、ＨＦＩＰを蒸発によって除去する。乾燥したら、Ａβ１−４２を−２０℃で貯蔵する。Ａβ１−４２を無水ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）に、ＰＢＳで必要とされた濃度の１００倍の濃度（すなわち、１００μＭの場合１０ｍＭ）まで超音波水浴を用いて溶解し、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）を加え／加えない（すなわち、１０：１比の場合、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）１００ｍＭ：１０ｍＭ  Ａβ１−４２）。次いで、この溶液をＰＢＳに直ちに希釈し、最終濃度１％ＤＭＳＯ中１００μＭ  Ａβにする。これらの溶液を使用する前に放置して室温で様々な時間（例えば、１時間、１日、１週間）凝集させる。
【００９８】
ＰＢＳ中で凝集させた後、溶液をＰＢＳで１０倍系列希釈し、次いでＡβ１−４２を「再び加え」て、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）を除去するが全Ａβ１−４２濃度を維持する。このＡβ１−４２シードトランスファーステップを少なくとも４回繰り返し、したがってＤ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）の最終残留濃度は初期濃度より１０，０００倍低い（例えば、１μＭから０．１ｎＭへ低下）。
【００９９】
得られる溶液には、Ａβ１−４２単独の場合は主に毒性オリゴマー種／シードが含まれるが、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）で処置した溶液の場合は無毒性／解毒性Ａβ１−４２シーズも含まれる。清浄で表面にＤ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）を含まない無毒性の嵩高いＡβ凝集体は、試験管内実験または動物実験の活性剤としてそのまままたはさらに希釈した後に使用される。
【０１００】
本明細書に開示される他のＡβ凝集調節因子のいずれか、例えば（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミドおよび（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸を使用することによって嵩高い凝集体を得るために、手順を同様に適用することができる。
【０１０１】
細胞を産生する条件培地から嵩高い凝集体を生成する方法
Ａβ産生細胞の条件培地を適切な濃度の様々なＡβ凝集調節因子、すなわちＤ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）、（Ｅ）−（Ｒ）−５−アミノ−６−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸、（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−１（１−アミノ−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）−３−（１−Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミドおよび（Ｒ）−３−（（２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２，２−ジメチル−ヘキサ−３−エン酸などと共にインキュベートする。数時間インキュベーションを行った後、Ａβタンパク質および各Ａβ凝集調節因子は上記のように無毒性の嵩高いＡβ凝集体を形成する。これらの無毒性の嵩高いＡβ凝集体を分画超遠心／洗浄（または段階希釈などの他の適切な技法）によって除去可能なＤ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）（または他のＡβ凝集調節因子）がすべて洗い流されるまで分離する。清浄で表面にＤ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）を含まない無毒性の嵩高いＡβ凝集体は、試験管内実験または動物実験の活性剤としてそのまままたはさらに希釈した後に使用される。
【０１０２】
Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）を含まない無毒性の嵩高いＡβ凝集体の保護効果を確認する方法
成体（２か月）マウスにエーテル麻酔を施し、断頭し、海馬横断面スライス（厚さ３５０μＭ）を得る。脳を速やかに摘出し、ビブロスライサーを用いて、氷冷リンゲル液中でスライスを作製する。すべてのスライスを保持チャンバーに少なくとも６０分配置し、次いで細胞外またはホールセル記録のために灌流チャンバーに移す。チャンバーを通る溶液の流速は１．５ｍｌ／分である。溶液の組成は、１２４ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＫＣｌ、２６ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１０ｍＭ  Ｄ−グルコース、および１．２５ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４であり、９５％  Ｏ２−５％  ＣＯ２混合物をバブリングさせ、最終ｐＨは７．３である。すべての実験は室温で行う。
【０１０３】
灌流溶液を充填したガラスマイクロピペット（１−２ＭＷ）を使用して、海馬のＣＡ１領域の樹状領域から興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）の細胞外記録が得られる。記録を増幅し、フィルター（３ｋＨｚ）にかけ、デジタル化（９ｋＨｚ）する。増幅されたｆＥＰＳＰおよびＮＭＤＡ−ＥＰＳＣをフィルター（３ｋＨｚ）にかけ、デジタル化（１５ｋＨｚ）し、「ＬＴＰプログラム」ソフトウェアを使用して測定し、オンラインでプロットする。ｆＥＰＳＰの勾配はピーク振幅の２０から８０％の間で測る。ｆＥＰＳＰの勾配を、強縮性刺激前の３０分制御期間に関して正規化する。
【０１０４】
長期増強（ＬＴＰ）誘発では、高周波刺激コンディショニングパルス（１００Ｈｚ；４〜５Ｖ）をＳｃｈａｆｆｅｒ側枝−交連経路に適用する。安定したベースライン記録を強縮性刺激の適用前に少なくとも３０分間行う。「嵩高い合成凝集体を生成する方法」に記載されているように、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）を加えまたは加えずに、Ａβ１−４２を調製し、ＬＴＰを誘発する９０分前に浴液に添加する（Ａβ１−４２最終濃度５０〜１００ｎＭ）。
【０１０５】
図２に示すように、強縮性刺激によって、対照条件下で強力なＬＴＰになる。Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂを加えずに系列希釈条件下で凝集させたＡβ１−４２  ５０ｎＭの先のインキュベーションによって、ＬＴＰが強力に阻害される。Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ系列希釈条件（Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ初期濃度＝１μＭ、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ最終濃度＝０．１ｎＭ）で「シード添加」した後に凝集させたＡβ１−４２  ５０ｎＭは、ＬＴＰ阻害の低下が有意である（対応のない両側スチューデントｔ検定、ｐ＝０．０１８４）。
【０１０６】
これらの結果は、Ａβ１−４２のｆＥＰＳＰに及ぼす毒性作用と、嵩高い合成凝集体の投与による対応する保護とを示す。
【０１０７】
嵩高い凝集体を用いた処置
上記の雄Ｄａｒｋ  Ａｇｕｔｉラット緑内障モデルにおいて、ＲＧＣアポトーシスの低減に及ぼす持続性のある有益な効果をもたらすために、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）を含まない無毒性の嵩高いＡβ凝集体など上記の無毒性の嵩高い凝集体を硝子体内注射により適用することができる。
【０１０８】
薬理実施例３
薬理実施例１に記載されたラット緑内障モデル（Ｍｏｒｒｉｓｏｎモデル）を用いると、高張食塩水を眼の強膜上静脈に適用することによって緑内障が誘発される。これによって、眼内圧の上昇が持続し、結果として網膜神経節細胞のＡβ関連神経変性が起こる。（上記のように生成した）清浄で表面にＤ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）を含まない無毒性の嵩高いＡβ凝集体をラットの両眼に眼内注射し、それによって網膜神経節細胞のＡβ誘発アポトーシスが有意に低減する。
【０１０９】
別の動物実験から、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）または他のＡβ凝集調節因子を３日から最長で４週間（さらにはそれ以上）の時間間隔で間欠適用すると、Ａβ毒性から保護され、１日当たり数回の適用を行う煩わしい連続的治療と同じ効能が得られることがわかる。
【０１１０】
薬理実施例４
緑内障ラットを用いた別の動物試験（上記の手順、Ｍｏｒｒｉｓｏｎモデル）において、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）を緑内障の誘発より３日前に適用する（１回単一ｓ．ｃ注射）。Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）（ラットにおける半減期１〜２時間）は緑内障誘発時点の動物においてもはや検出可能ではないが、網膜神経節細胞に強力な神経保護効果をもたらす。この予想外の成果についての説明は、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）での前処置によって、Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ（配列番号３０）と生理的に低濃度で広範に存在しているＡβとからなる無毒性の嵩高いＡβ凝集体（おそらく微小な無毒性の嵩高いＡβ凝集体）が形成されるということである。これらの無毒性の嵩高いＡβ凝集体は、Ａβがより高い濃度で放出されている場合でさえ、緑内障誘発後に毒性Ａβを単離する際に機能する。
【０１１１】
Ａβ調節因子機能は、経口、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内（デポーを含む）、結膜下、局所（例えば、点眼剤、ゲル剤、植え込み注射剤、改質コンタクトレンズなど）および他の医薬品製剤を含めて異なる適用経路にわたって一貫している。
【０１１２】
Ａβ関連神経変性疾患に対する上記の典型的モデルのポジティブな成果に基づいて、本発明の神経保護機序は他のＡβ関連疾患、特に眼黄斑変性症（ＡＭＤ）においても同様に有効であると結論づけることができる。
【０１１３】
結論
結論として、上記のことから、本発明は、本発明の方法における物質について新規で、価値のある、驚くべき応用および使用、ならびにその新規薬剤組成物（これらはすべて、さらに具体的に列挙された上記の特徴および利点を有する）を提供することが明らかである。
【０１１４】
本発明の活性物質およびそれらの組成物を使用する記載された方法の高次の機能は、報告された試験によって明らかなように、有用性を示すものである。しかし、ヒトにおける臨床評価は完了していない。本発明の範囲内に入る任意の物質または組成物のヒトにおける使用を目的とする流通およびマーケティングは、当然そのような問題を担当しそのような問題に関する判定を下す権限が与えられた米国連邦食品医薬局などの政府機関による事前承認に基づく必要があることは明らかに理解されている。
【０１１５】
本明細書に記載された、生きている動物の身体において選択された病気の進行の阻害または軽減のために動物の身体を治療する方法は、先に述べたように、通常許容される任意の薬学的経路により、軽減することが望まれる特定の病気の軽減に有効である選択された投与量と投与レジメンを使って行われる。
【０１１６】
選択された病気または病態、特にβ−アミロイド（Ａβ）毒性に関連する眼病態などの病気または病態の進行を阻害しまたは軽減するための、生きている動物の治療用医薬品の製造における、本発明の嵩高い凝集体の使用は、有効量の本発明の化合物を薬学的に許容し得る希釈剤、賦形剤、または担体と場合によっては混合するステップ、ならびに治療方法、薬剤組成物、および医薬品の製造における本発明の化合物の使用を含む、本発明のインターバルの方法で実施される。
【０１１７】
活性物質を適切な薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と場合によっては混合することによって調製される代表的な薬剤組成物としては、錠剤、カプセル剤、注射液剤、液体経口製剤、エアゾール製剤、ＴＤＳ製剤、およびナノ粒子製剤が挙げられ、したがってまた上記に従って経口使用、注射使用、または局所使用向けの医薬品が製造される。
【０１１８】
本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、本明細書に記載される修正に加えて、本発明の様々な修正は、前述の説明から当業者に自明となる。
【０１１９】
本明細書で引用される特許、特許出願、刊行物、試験方法、文献、および他の材料はすべて、参照により本明細書に援用される。
【配列表フリーテキスト】
【０１２０】
配列番号１：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号２：合成ペプチド、α−アミノイソ酪酸、ステレオアイソマーＤ
配列番号３：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号４：合成ペプチド、α−アミノイソ酪酸
配列番号５：合成ペプチド
配列番号６：合成ペプチド
配列番号７：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号８：合成ペプチド、α−アミノイソ酪酸、ステレオアイソマーＤ
配列番号９：合成ペプチド、α−アミノイソ酪酸
配列番号１０：合成ペプチド
配列番号１１：合成ペプチド、アミド化アミノ酸
配列番号１２：合成ペプチド、α−アミノイソ酪酸
配列番号１３：合成ペプチド、α−アミノイソ酪酸
配列番号１４：合成ペプチド
配列番号１５：合成ペプチド、β−アミノイソ酪酸、ステレオアイソマーＤ
配列番号１６：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ、α−アミノイソ酪酸
配列番号１７：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号１８：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号１９：合成ペプチド
配列番号２０：合成ペプチド、α−アミノイソ酪酸
配列番号２１：合成ペプチド、α−アミノイソ酪酸
配列番号２２：合成ペプチド、α−アミノイソ酪酸
配列番号２３：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号２４：合成ペプチド
配列番号２５：合成ペプチド
配列番号２６：合成ペプチド
配列番号２７：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号２８：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ、α−アミノイソ酪酸
配列番号２９：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号３０：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ、α−アミノイソ酪酸
配列番号３１：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号３２：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
配列番号３３：合成ペプチド、ステレオアイソマーＤ
【図１】
2015521608.tif 000002
【図２】
2015521608.tif 000003
【配列表】
2015521608000001.app
【国際調査報告】
2015521608.tif 000004
2015521608.tif 000005
2015521608.tif 000006
2015521608.tif 000007
2015521608.tif 000008
2015521608.tif 000009
2015521608.tif 000010
2015521608.tif 000011