(57)【要約】  本発明は、非ヒト哺乳動物における乳房炎を治療および／または予防するための医薬組成物および方法に関する。特に本発明は、乳牛における乳房炎の該治療に関する。該医薬組成物は、ホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤の混合物を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤から成る医薬組成物を含む、非ヒト哺乳動物における乳房炎の治療または予防における使用のための乳房内医薬組成物。
【請求項２】
該ホスホン酸がホスホマイシン、ホスミドマイシンおよびアラホスファリンから成る群より選択される請求項１の組成物。
【請求項３】
該抗菌剤がキノロン、β‐ラクタムおよびマクロライド‐ストレプトグラミン‐リンコサミドから成る群より選択される請求項１の組成物。
【請求項４】
該抗菌剤がキノロンである請求項３の組成物。
【請求項５】
該抗菌剤がフルオロキノロンである請求項４の組成物。
【請求項６】
該抗菌剤がβ‐ラクタムである請求項３の組成物。
【請求項７】
該β‐ラクタムがペニシリン、セファロスポリン、カルバペネムおよびペネム、およびβ‐ラクタマーゼ阻害剤から成る群より選択される請求項６の組成物。
【請求項８】
該β‐ラクタムがセファロスポリンである請求項７の組成物。
【請求項９】
該β‐ラクタムがペニシリンである請求項７の組成物。
【請求項１０】
該抗菌剤がマクロライド‐ストレプトグラミン‐リンコサミドである請求項３の組成物。
【請求項１１】
ホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤を含む医薬組成物の有効量を乳房炎に罹患している非ヒト哺乳動物に投与することを含む乳房炎を治療するための方法。
【請求項１２】
ホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤を含む医薬組成物の有効量を非ヒト哺乳動物に投与することを含む乳房炎を予防するための方法。
【請求項１３】
非ヒト哺乳動物の乳房炎の治療または予防のための、ホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤から成る医薬組成物の使用。
【請求項１４】
非ヒト哺乳動物の乳房炎の治療または予防のための乳房内医薬組成物の製造のためのホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非ヒト哺乳動物における乳房炎を治療または予防するための乳房内医薬組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ウシ乳房炎は、乳牛における最も一般的な疾病の一つである。乳房炎は、乳房が炎症を起こすときに生じる。炎症は、感染病原菌およびその毒素、肉体的外傷または化学刺激物質を含む多くの種類の損傷によって引き起こされ得る。多くの微生物すなわち細菌が乳房炎を引き起こすと特定されているが、ほとんどの場合乳房炎の重症例は、以下の病原菌、すなわちスタフィロコッカス・アウレウス（黄色ブドウ球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ、ストレプトコッカス・ディスガラクティエ、ストレプトコッカス・ウベリスおよび大腸菌のいずれかによって引き起こされると考えられている。
【０００３】
最も一般的な乳房炎の病原菌は、乳房（感染性病原菌）かまたは乳牛の環境（環境性病原菌）に見出される。例えばストレプトコッカス・アガラクティエおよびスタフィロコッカス・アウレウス等の感染性病原菌は、最初に例えば乳腺、乳頭管および乳頭等の宿主の組織部位に定着し、それから一般的に皮膚病変が搾乳工程の間に感染乳房から健常乳房に伝播される。これには、汚染されたティートカップライナー（搾乳筒ライナー）、搾乳者の手、二頭以上のウシを洗浄または乾燥するために用いられた紙またはタオル地、および場合によりハエによるものが含まれ得る。例えば連鎖球菌、腸球菌および大腸菌群等の環境性病原菌は、例えば乳牛の糞便、土壌、植物由来物質、敷きわらまたは水等の供給源由来の乳牛の環境内に通常存在しており；偶発的な動物との日和見接触により感染する。乳房炎の全ての症例において、いかなる原因菌であっても乳房への病原菌の感染経路は、乳頭の開口部および乳頭管を通してである。
【０００４】
乳房炎は、体細胞数（ＳＣＣ）の増加を含む乳における組成の変化を引き起こす。正常（未感染）乳牛由来の乳は、一般的に２００、０００体細胞／ｍｌ未満である。３００、０００体細胞／ｍｌを超えるＳＣＣの上昇は異常であり、乳房の炎症の徴候である。乳に含まれる体細胞の種類は、大部分が白血球に変わり、白血球は多数のタンパク質分解酵素および脂肪分解酵素を乳に加える。さらに、通常よりもより多くの血清が乳に漏れ出る。乳房炎に起因する乳製品の品質欠陥は、乳タンパク質および脂肪の酵素的分解のためである。高栄養価の主要乳タンパク質であるカゼインが減少し、より低品質の乳清タンパク質が増加し、そのことは例えばチーズの歩留り、フレーバーおよび品質等の乳製品の品質に悪影響を及ぼす。乳中のタンパク質分解は、臨床型または潜在性乳房炎に罹患した乳牛由来の乳中で、タンパク質分解酵素の存在のために生じ得る。プラスミンは、乳房炎の間にタンパク質分解活性を２倍以上に増加させる。プラスミンおよび体細胞由来の酵素は、乳房中のカゼインに対し搾乳前に損傷を与え得る。乳タンパク質の劣化は、また感染乳牛由来の乳の加工および貯蔵の間にも継続し得る。乳における他の組成の変化には、カリウムおよびカルシウム濃度の減少が含まれる。
【０００５】
乳房炎は、米国酪農産業に毎年約１７〜２０億ドルすなわち全米産乳量の１１％を費やさせている。費用には、減少産乳量、廃棄乳、代替乳牛、薬剤、労力および獣医診療が含まれる。現在、急性乳房炎は抗生物質、抗炎症剤およびオキシトシンにより治療されている。しかし該治療法は、多くの場合手間がかかり（時には、数回連続の乳房内塗布が必要）、費用がかかり、完全には有効でない。現行基準の効力を改善する、または、例えば乳回収の減少、治療期間の短縮、および／またはより低費用の治療法の選択肢等の追加のポジティブな利点を有する許容可能な効力を提供する、治療法の選択肢および医薬組成物の必要性それ自体は存在する。
【発明の概要】
【０００６】
たとえ細菌の大集団がホスホマイシンに暴露されたとしても、１０ないし１０４ＣＦＵというごく一部はなお寒天上にコロニーを形成することができるであろう。黄色ブドウ球菌および大腸菌について明らかにされたように、再増殖したコロニー内で、多数の新規な細胞増殖巣の生育が肉眼で見えるようになる。このような表現型的に順応した新規なクローン（突然変異）は大量再増殖の原因となり、そのことは同じホスホマイシン濃度に保持された液体培地において普通に観察される。病原菌の大集団を効率的に制御するためには、この順応の過程が妨げられる必要がある。発明者らが大いに驚いたことには、エンロフロキサシン、セファゾリン、ピルリマイシンかまたはアモキシシリンの少量が、例えば、薬物選択圧に対応した分化のこの段階を完全に阻害することができた。したがって、ホスホマイシン活性を有する殺菌剤が最も有利に効果を表することができて、生残する変異株のクローン増殖が臨床的に達成可能な薬剤濃度で阻止される。抗生物質の効力のこのような相乗的な改善は、動物において引き続き、最初は乳房炎マウスモデルにおいて、その後、畜牛の感染乳房において観察することができた。この抗菌活性は、製剤化され保存されて以下に明らかにする医薬製剤から放出される。
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、非ヒト泌乳哺乳動物における乳房炎を予防または治療するための医薬製剤およびこれらの医薬製剤の使用を対象とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の一態様によれば、ホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤を含む、非ヒト哺乳動物の乳房炎の治療または予防における使用のための乳房内医薬組成物が提供される。
【０００９】
本発明の医薬組成物の一実施形態によれば、該ホスホン酸はホスホマイシン、ホスミドマイシンおよびアラホスファリンから成る群より選択される。
【００１０】
本発明の医薬組成物の好ましい一実施形態によれば、該ホスホン酸はホスホマイシンである。
【００１１】
本発明の医薬組成物の他の実施形態によれば、該抗菌剤はキノロン、β‐ラクタムおよびマクロライド‐ストレプトグラミン‐リンコサミドから成る群より選択される。
【００１２】
本発明の医薬組成物の好ましい一実施形態によれば、該抗菌剤はキノロンである。本発明の医薬組成物のより好ましい一実施形態によれば、該キノロンは、ベノフロキサシン、ビノフロキサシン、シノキサシン、シプロフロキサシン、クリナフロキサシン、ダノフロキサシン、ジフロキサシン、エノキサシン、エンロフロキサシン、フレロキサシン、ゲミフロキサシン、イバフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、マルボフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オルビフロキサシン、パズフロキサシン、プラドフロキサシン、ペルフロキサシン、テマフロキサシン、トスフロキサシン、サラフロキサシンおよびスパルフロキサシンから成る群より選択される。
【００１３】
本発明の医薬組成物の他の好ましい実施形態によれば、該抗菌剤はフルオロキノロンである。本発明の医薬組成物のより好ましい一実施形態によれば、該フルオロキノロンは、シプロフロキサシン、エンロフロキサシン、モキシフロキサシンおよびプラドフロキサシンから成る群より選択される。
【００１４】
本発明の医薬組成物のさらにより好ましい一実施形態によれば、該キノロンはエンロフロキサシンである。
【００１５】
本発明の医薬組成物の他の好ましい実施形態によれば、該抗菌剤はβ‐ラクタムである。本発明の医薬組成物のより好ましい一実施形態によれば、該β‐ラクタムはペニシリン、セファロスポリン、カルバペネムおよびペネム、およびβ‐ラクタマーゼ阻害剤から成る群より選択される。
【００１６】
本発明の医薬組成物のさらにいっそう好ましい一実施形態によれば、該β‐ラクタムはセファロスポリンである。本発明の医薬組成物のさらになおいっそう好ましい一実施形態によれば、該セファロスポリンはセファゾリンである。
【００１７】
本発明の医薬組成物のさらにいっそう好ましい一実施形態によれば、該β‐ラクタムはペニシリンである。本発明の医薬組成物のさらになおいっそう好ましい一実施形態によれば、該ペニシリンはアモキシシリンである。
【００１８】
本発明の医薬組成物の他の好ましい実施形態によれば、該抗菌剤はマクロライド‐ストレプトグラミン‐リンコサミドである。本発明の医薬組成物のより好ましい一実施形態によれば、該マクロライド‐ストレプトグラミン‐リンコサミドはマクロライド、リンコマイシン、クリンダマイシンおよびピルリマイシンから成る群より選択される。本発明の医薬組成物のさらにいっそう好ましい一実施形態によれば、該マクロライド‐ストレプトグラミン‐リンコサミドはピルリマイシンである。
【００１９】
本発明の他の態様によれば、ホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤を含む医薬組成物の有効量を乳房炎に罹患した非ヒト哺乳動物に投与することを含む、乳房炎を治療するための方法が提供される。
【００２０】
本発明のさらなる他の態様によれば、ホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤を含む医薬組成物の有効量を非ヒト哺乳動物に投与することを含む、乳房炎を予防する方法が提供される。
【００２１】
本発明の方法のそれぞれの一実施形態によれば、該ホスホン酸は前記の医薬組成物の実施形態のいずれか一において定義された通りである。
【００２２】
本発明の方法の他のそれぞれの実施形態によれば、該抗菌剤は前記の医薬組成物の実施形態のいずれか一において定義された通りである。
【００２３】
本発明の他の態様によれば、非ヒト哺乳動物の乳房炎の治療または予防のためのホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤から成る医薬組成物の使用が提供される。
【００２４】
本発明のさらなる他の態様によれば、非ヒト哺乳動物における乳房炎の治療または予防のための乳房内医薬組成物の製造のためのホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤の使用が提供される。製造のための使用の好ましい一実施形態によれば、ホスホン酸および少なくとも一の抗菌剤からなる組成物、好ましくは医薬組成物が使用される。
【００２５】
本発明の使用のそれぞれの一実施形態によれば、該ホスホン酸は前記の医薬組成物の実施形態のいずれか一において定義された通りである。
【００２６】
本発明の使用の他のそれぞれの実施形態によれば、該抗菌剤は前記の医薬組成物の実施形態のいずれか一において定義された通りである。
Ｉ．医薬組成物
ａ．活性成分
【００２７】
本発明に従って、本治療法において用いられる医薬組成物は、一の抗菌剤を含む少なくとも一の追加の活性成分と組み合わせたホスホン酸の混合物を含む。適したホスホン酸には、ホスホマイシン（［（２Ｒ，３Ｓ）‐３‐メチルオキシラン‐２‐イル］ホスホン酸）、ホスミドマイシンおよびアラホスファリンが含まれる。好ましいホスホン酸はホスホマイシンである。
【００２８】
ホスホマイシンと組み合される該抗菌剤は、医薬分野において乳房炎の局所療法（すなわち、乳房内または嚢内塗布）に適していると知られているいずれの抗菌剤であって良い。該抗菌剤は、以下のキノロン系、好ましくはフルオロキノロン系、β‐ラクタム系およびマクロライド‐ストレプトグラミン‐リンコサミド系（ＭＬＳ）抗生物質を含む周知の抗菌剤の種類の一または複数より選択され得る。
【００２９】
適したキノロン類には、ベノフロキサシン、ビンフロキサシン、シノキサシン、シプロフロキサシン、クリナフロキサシン、ダノフロキサシン、ジフロキサシン、エノキサシン、エンロフロキサシン、フレロキサシン、ゲミフロキサシン、イバフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、マルボフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オルビフロキサシン、パズフロキサシン、プラドフロキサシン、ペルフロキサシン、テマフロキサシン、トスフロキサシン、サラフロキサシン、ゲミフロキサシンおよびスパルフロキサシンが含まれる。好ましいフルオロキノロン類には、シプロフロキサシン、エンロフロキサシン、モキシフロキサシン、ダノフロキサシンおよびプラドフロキサシンが含まれる。適したナフチリドン類にはナリジクス酸が含まれる。
【００３０】
適したβ‐ラクタム類には、例えば、ベンザチンペニシリン、ベンジルペニシリン（ペニシリンＧ）、フェノキシメチルペニシリン（ペニシリンＶ）、プロカインペニシリン、メチシリン、オキサシリン、ナフシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、テモシリン、アモキシシリン、アンピシリン、ｃｏ‐アモキシクラブ（アモキシシリンおよびクラブラン酸）、アズロシリン、カルベニシリン、チカルシリン、メズロシリン、ピペラシリン等のペニシリン類；例えば、セファロニウム、セファレキシン、セファゾリン、セファピリン、セフキノム、セフチオフル、セファロチン、セファクロル、セフロキシム、セファマンドール、セフォテタン、セフォキシチン、セフトリアキソン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフィキシム、セフタジジム、セフェピム、セフピロム等のセファロスポリン類；例えば、イミペネム、メロペネム、エルタペネム、ファロペネム、ドリペネム等のカルバペネム類およびペネム類、例えば、アズトレオナム（アザクタム）、チゲモナム、ノカルディシンＡ、タブトキシニン‐β‐ラクタム等のモノバクタム類；およびクラブラン酸、タゾバクタムおよびスルバクタム等のβ‐ラクタマーゼ阻害剤が含まれる。好ましいβ‐ラクタム類には、ペニシリン類、特にアモキシシリン、およびセファロスポリン類、特にセファゾリンが含まれる。
【００３１】
適したＭＬＳ系抗生物質には、いかなるマクロライド、リンコマイシン、クリンダマイシン、ピルリマイシンも含まれる。好ましいリンコサミドはピルリマイシンである。
【００３２】
他の抗菌剤には、２‐ピリドン類、テトラサイクリン類、スルホンアミド類、アミノグリコシド類、トリメトプリム、ジメトリダゾール、エリスロマイシン、フラマイセチン、フラゾリドン、例えばチアムリン、バルネムリン等の種々のプロイロムチリン類、種々のストレプトマイシン、クロピドール、サリノマイシン、モネンシン、ハロフジノン、ナラシン、ロベニジン等が含まれる。
【００３３】
ホスホマイシン、ホスミドマイシンまたはアラホスファリンおよびそれが組み合される抗菌剤は、その遊離酸または遊離塩基の形態でも、鏡像異性体、薬剤的に許容可能な塩または付加物の形態でも使用され得る。用語、薬剤的に許容可能とは、比較的に無毒の無機および有機の酸および塩基の付加塩および付加物を表す。本明細書で用いる場合、ホスホマイシン、ホスミドマイシンまたはアラホスファリンおよび他の抗生活性成分に言及するときは、これらの薬剤的に許容可能な形態を含むことを意図している。代表的な塩には、例えば、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩およびラウリルスルホン酸塩、およびその他が含まれる。他のこのような従来の無毒の塩には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸、およびその他の無機酸に由来する塩；および例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２‐アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、およびその他の有機酸から調製された塩が含まれる。ホスホマイシン、ホスミドマイシンまたはアラホスファリンも抗菌剤も一または複数の酸性官能基を含んでおり、従って薬剤的に許容可能な塩基と薬剤的に許容可能な塩を形成することができる。これらの例における用語、薬剤的に許容可能な塩とは、本発明の抗菌剤の比較的に無毒な無機および有機の塩基付加塩を表す。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウム塩、およびその他が含まれる。塩基付加塩の形成のために有用な代表的有機アミンには、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミンン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トロメタモール（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ピペラジン、およびその他が含まれる。いくつかの好ましい薬剤的に許容可能な塩には、セファゾリンナトリウム、ピルリマイシン塩酸塩、ホスホマイシン（ジ）ナトリウム、ホスホマイシンカルシウムおよびホスホマイシントロメタモールが含まれる。
【００３４】
本発明の医薬組成物は、乳房内用製品または全身用製品であり得る。一実施形態において医薬組成物は、非ヒト哺乳動物の乳房炎を治療または予防するときに乳頭の開口部に投与される乳房内製品である。
【００３５】
一実施形態において医薬組成物は、エンロフロキサシン、セファゾリン、ピルリマイシン、アモキシシリンおよびその組み合せから成る群より選択された少なくとも一の抗菌剤と組み合わせたホスホマイシンの混合物を含む。他の実施形態において医薬組成物は、ホスホマイシンとエンロフロキサシンの混合物を含む。さらなる他の実施形態において医薬組成物は、ホスホマイシンとセファゾリンの混合物を含む。さらなる実施形態において医薬組成物は、ホスホマイシンとピルリマイシンの混合物を含む。その上にさらなる実施形態において医薬組成物は、ホスホマイシンとアモキシシリンの混合物を含む。
【００３６】
本発明に従って医薬組成物は、ホスホマイシンと少なくとも一の抗菌剤の混合物の薬剤的に有効な量を含む。本明細書で用いる場合、用語「薬剤的に有効な量」とは、医薬組成物が投与される被験動物における乳房炎を予防するかまたは治療するために十分な用量を表す。用量は、活性成分、治療を受ける動物、病態の状態および病態の重症度に依存する。これらの要因を特定することは、十分に当業者のレベルの範囲内である。
【００３７】
一般的に有効な用量は、投与方式に依存して変動する。乳房内医薬組成物においてホスホマイシンとエンロフロキサシンの比は、遊離酸に基づいて５：１から５：４である。乳房内医薬組成物の他の実施形態においてホスホマイシンとセファゾリンの比は、遊離酸に基づいて５：１から５：４である。乳房内医薬組成物のさらなる他の実施形態においてホスホマイシンとピルリマイシンの比は、遊離酸および遊離塩基に基づいてそれぞれ約１０：１から４０：１である。
【００３８】
本発明は、好ましくは乳房内軟膏剤、懸濁剤、液剤またはゲル剤として調製される。
ＩＩ．方法
ａ．治療法
【００３９】
本発明の医薬組成物は、動物における乳房炎の予防においてまたは治療のために使用され得る。乳房炎は、大腸菌、クレブシエラ属菌、エンテロバクター属菌、サルモネラ属菌、シトロバクター属菌、セラチア属菌、シゲラ属菌、エドワードジエラ属菌、ハフニア属菌、モルガネラ属菌、プロビデンシア属菌、エルシニア属菌、スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス属菌、シュードモナス属菌、ストレプトコッカス・アガラクティエ、ストレプトコッカス・ディスガラクティエ、ストレプトコッカス属菌、腸球菌、コリネバクテリウム属菌、アルカノバクテリウム属菌、アクチノミセス属菌、マイコバクテリウム属菌、プロトテカ属菌、マイコプラズマ属菌およびエルウィニア属菌等を含む種々の病原菌と関連し得る。
【００４０】
該医薬組成物は、搾乳頻度および／または動物の乳腺の状態によって決定づけられる適用経路および投与計画を有する種々の外用薬用に使用し得る。
【００４１】
該医薬組成物は、乳房炎の治療または予防を必要とする、例えば、牛、ラクダ、水牛、山羊または羊等のすべての非ヒト泌乳哺乳動物に適用し得るが、しかし食用に供する乳の製造のために使用される、例えば、牛、水牛、羊および山羊等の反芻動物において特に重要である。
【００４２】
乳房炎の治療とは、乳房炎に罹患した動物を治癒または回復させること、すなわち乳房炎の少なくとも一症状を軽減させることである。乳房炎とは、乳腺の炎症を表す。乳中の物理的、化学的および通常は微生物的な変化ならびに腺組織における病理学的変化が乳房炎を特徴づける。腺の変化はしばしば、例えば、乳の変色、血餅の存在および多数の白血球の存在等のいくつかの症候症状をもたらす。臨床的に乳房炎は、腫脹、熱、痛みおよびたびたび乳房の変形をもたらす乳腺の硬結として観察される。炎症した乳房は、肉眼で観察し得て、または乳房の触診により判定し得る。多くの場合、潜在性感染の診断は、乳（フレーク、血餅または漿液性乳）の白血球含量に基づく間接試験におおいに依存するようになったが、乳房由来の乳の少なくとも１００μＬ中に少なくとも１の細菌が検出されると、体細胞数（ＳＣＣ）を通常３００、０００細胞／ｍＬ以上に増加させおよび／または乳の電気伝導度が正常から増加する。乳房炎の予防とは、感染の発生を防止することを意味する。予防にはまた、ある乳牛から他の乳牛へ乳房炎の感染または潜在性感染を最小限化または防止するために、いかなる乳房炎の一徴候も示さないが、乳房炎の少なくとも一徴候を有する他の乳牛の存在下にいる乳牛の治療が含まれる。
【００４３】
動物の乳房炎の治療における医薬組成物の有効性は、除菌された乳腺（すなわち、乳１μＬがいかなる細菌も含まない）のパーセントとして定量化した。一実施形態において該医薬組成物は、動物の乳腺の少なくとも５０％を除菌する。他の実施形態において該医薬組成物は、動物の乳腺の約５０％から約９０％を除菌する。さらなる他の実施形態において該医薬組成物は、動物の乳腺の約７０％から約９０％を除菌する。
【００４４】
該医薬組成物は、乳房内で乳頭の開口部を通して乳腺の内部腔および乳腺に関連する管系の中に投与され得る。該医薬組成物は、軟膏剤、懸濁剤、液剤またはゲル剤の剤形であり得る。あるいは該医薬組成物は、また静脈、皮下および筋肉内投与により全身的にも投与され得る。
【００４５】
乳房の一の四分房の治療のための有効成分の組み合わせの用量は、ホスホマイシンまたはホスホマイシン塩の約１００から約３０００ｍｇ（遊離酸に基づく）、好ましくは約５００から約２０００ｍｇを、βラクタム系抗生物質、好ましくはセファロスポリン、より好ましくはセファゾリンの遊離酸換算で約５０から約１０００ｍｇ、好ましくは約２００から約８００ｍｇと組み合わせて含み得る。他の実施形態において乳房の一の四分房の治療のための有効成分の組み合わせの用量は、ホスホマイシンの約１００から約３０００ｍｇ（遊離酸に基づく）、好ましくは約５００から約２０００ｍｇを、キノロン、好ましくはフルオロキノロン、より好ましくはエンロフロキサシンの遊離酸換算で約５０から約１０００ｍｇ、好ましくは約２００から約８００ｍｇと組み合わせて含み得る。さらなる他の実施形態において乳房の一の四分房の治療のための有効成分の組み合わせの用量は、ホスホマイシンまたはホスホマイシン塩の約１００から約３０００ｍｇ（遊離酸に基づく）、好ましくは約５００から約２０００ｍｇを、リンコサミド、好ましくはピルリマイシンの遊離塩基換算で約１０から約５００ｍｇ、好ましくは約２５から約１００ｍｇと組み合わせて含み得る。
【００４６】
有効成分の組み合わせ（治療または予防用）の用量は、２から８日の期間にわたって繰り返し投与され得る。一実施形態において用量は、２から８日の期間にわたって日に１回または２回投与される。他の実施形態において有効成分の組み合わせの用量は、４ないし６日の期間にわたって日に１回または２回投与される。用量と投与時期の的確な組合せが広範囲のバリエーションになりやすいと、および疾病の治療または予防に有効である膨大な組み合せが、本開示を勘案して当業者によって容易に確立され得ると考えられている。
【００４７】
上記を勘案して、本発明の幾つかの目的が達成され、しかも他の有利な結果も達成されることが分かる。本発明の範囲から逸脱することなく、上記の製剤、製品および過程において種々の変更が成され得るので、上記の記載に含まれたおよび下表で示される全てのことがらは、例示的であり限定的な意味ではないと解釈されるべきである。
【００４８】
本発明の要素または発明の好ましい実施形態を紹介するとき、冠詞「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および「ｓａｉｄ」は、一または複数の要素が存在することを意味することを意図している。用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」および「ｈａｖｉｎｇ」は、包括的である事を意図していて、しかも収載された要素以外の追加要素が存在し得ることを意味する。
【００４９】
以下の実施例は、ただ本発明をさらに例証し説明することのみを意図する。実施例は、従って本発明の範囲または発明が実施され得る方法の範囲を限定するものとはみなされない。
【実施例】
【００５０】
2015521644.tif 000002
【００５１】
流動パラフィン、白色ワセリンおよびセテアリルアルコールを適切な容器内で融解した。賦形剤を１６０℃で１２０分間加熱することによって混合物を殺菌した。次に混合物を４０〜５０℃に冷却し、無菌かつ微粒子化したセファゾリンナトリウムおよびホスホマイシンナトリウムを無菌条件下で添加した。次に混合物を１５分間均質化した。最終医薬組成物１０ｍｌを無菌条件下で無菌注射器に充填した。
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【００５２】
流動パラフィン、白色ワセリンおよびセテアリルアルコール・セテアリル硫酸ナトリウムを適切な容器内で融解した。次に賦形剤を１６０℃で１２０分間加熱することによって混合物を殺菌した。次に混合物を４０〜５０℃に冷却し、無菌かつ微粒子化したセファゾリンおよびホスホマイシントロメタモールを無菌条件下で添加した。次に混合物を１５分間均質化した。最終医薬組成物１０ｍｌを無菌条件下で無菌注射器に充填した。
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【００５３】
流動パラフィン、白色ワセリンおよびセテアリルアルコール・セテアリル硫酸ナトリウムを適切な容器内で融解した。賦形剤を１６０℃で１２０分間加熱することによって混合物を殺菌した。次に混合物を４０〜５０℃に冷却し、無菌かつ微粒子化したエンロフロキサシンおよびホスホマイシンナトリウムを無菌条件下で添加した。次に混合物を１５分間均質化した。最終医薬組成物１０ｍｌを無菌条件下で無菌注射器に充填した。
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【００５４】
流動パラフィン、白色ワセリンおよびセテアリルアルコールを適切な容器内で融解した。賦形剤を１８０℃で３０分間加熱することによって混合物を殺菌した。次に混合物を４０〜５０℃に冷却し、無菌かつ微粒子化したエンロフロキサシンおよびホスホマイシンナトリウムを無菌条件下で添加した。次に混合物を１５分間均質化した。最終医薬組成物１０ｍｌを無菌条件下で無菌注射器に充填した。
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【００５５】
適切な容器を注射用水で充填する。ピルリマイシンＨＣｌおよびホスホマイシンナトリウムを撹拌下溶解する。クエン酸ナトリウムで溶液のｐＨを７．３に調整する。溶液をさらに１５分間撹拌する。溶液を滅菌槽内で細菌濾過器を通して濾過する。最終医薬組成物１０ｍｌを無菌条件下で無菌注射器に充填する。
実施例６−インビボでのマウスのデータ
【００５６】
本研究は、本明細書で参照して援用される、カナダのシャーブルック大学で樹立されたＳ．アウレウス・マウス乳腺炎モデル（ＭＭＡ）（Ｂｒｏｕｉｌｌｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）を使用して実施した。
【００５７】
ＣＤ‐１泌乳マウスの両方の腹部乳腺（Ｌ４およびＲ４）を、スタフィロコッカス・アウレウスＮｅｗｂｏｕｌｄ  ３０５（ＡＴＣＣ  ２９７４０）の１００ＣＦＵ（コロニー形成単位）により乳房内で感染させた。
【００５８】
表１で詳しく述べるように、接種４時間後にマウスをエンロフロキサシン、ホスホマイシンおよびエンロフロキサシンとホスホマイシンの組み合せにより乳房内で（ＩＭＡＭ）治療した。各治療群には少なくとも３頭のマウス（６個の乳腺）を含めた。１４時間後（接種１８時間後）にマウスを屠殺し、乳腺を回収し、乳腺ホモジネートの平板培養１０倍段階希釈によってＣＦＵ含量を評価した。ＣＦＵ含量はｌｏｇ１０（計数）として表した。検出限界は２００ＣＦＵ／ｇ乳腺であった。２００ＣＦＵ／ｇ未満の乳腺は、Ｓ．セレウスが除菌されたとみなした（表１を参照されたい）。
【００５９】
各治療群についてのｌｏｇ１０（ＣＦＵの減数）の中央値は、ｌｏｇ１０（未治療群のＣＦＵ数値）の中央値からｌｏｇ１０（各群のＣＦＵ数値）の中央値を減じて求めた。
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【００６０】
表１から分かる通り、エンロフロキサシン１００マイクログラムの乳房内への注入はＣＦＵ含量の中央値をｌｏｇ１０（常用対数）で１．４だけ減少させるが、感染乳腺の感染を除去しない。また、ホスホマイシン５００または１０００マイクログラムの乳房内への注入もＣＦＵ含量の中央値をｌｏｇ１０で３．３または５．１  だけ減少させるが、感染乳腺の感染を除去しない。しかしながら、エンロフロキサシン１００マイクログラムとのホスホマイシン５００および１０００マイクログラムの乳房内への同時注入が、それぞれ感染乳腺の３７％および８３％から感染を除去するので、エンロフロキサシン‐ホスホマイシンの組み合わせ治療については相乗効果が認められる。
実施例７−エンロフロキサシン‐ホスホマイシンのＭＰＣ、セファゾリン‐ホスホマイシンのＭＰＣ、ピルリマイシン‐ホスホマイシンのＭＰＣ
【００６１】
耐性菌出願阻止濃度（ＭＰＣ）とは、非感受性の単一段階突然変異菌の生育を阻止する薬剤濃度である。これより高い濃度では、細胞増殖には二以上の耐性突然変異の存在が必要とされる。二の同時的な突然変異はめったに生じないと見られるので、薬剤濃度がＭＰＣより高く保たれているとき、耐性はめったに発生しないと見られる。ＭＰＣに関するさらなる情報については、一例としてＤｒｌｉｃａ，Ｋ．（２００３）．Ｔｈｅ  ｍｕｔａｎｔ  ｓｅｌｅｃｒｔｉｏ  ｗｉｎｄｏｗ  ａｎｄ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（耐性菌選択域および抗菌薬剤耐性）．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，５２（１），１１‐１７；およびＢｌｏｎｄｅａｕ，Ｊ．Ｍ．（２００９）．Ｎｅｗ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｉｎ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｅｓｔｉｎｇ：ｔｈｅ  ｍｕｔａｎｔ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｕｔａｎｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｎｄｏｗ  ａｐｐｒｏａｃｈ（抗菌剤感受性試験における新概念：耐性菌出願阻止濃度および耐性菌選択域法）．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２０（５‐６），３８３‐３９６に記載されている。
【００６２】
Ｓ．アウレウスに対するエンロフロキサシンのＭＰＣは３μｇ／ｍＬであり、一方ではＳ．アウレウスに対するホスホマイシンのＭＰＣは１５００マイクロｇ／ｍＬに達する。エンロフロキサシンとホスホマイシンの併用のＭＰＣは、エンロフロキサシンおよびホスホマイシンのそれぞれ０．１２μｇ／ｍＬおよび１００μｇ／ｍＬと低いので、相乗効果、つまり１４日間にわたる肉眼で見えるＳ．アウレウスの増殖の阻止がエンロフロキサシン‐ホスホマイシンの組み合せに認められる。
【００６３】
Ｓ．アウレウスに対するセファゾリンのＭＰＣは１．２５μｇ／ｍＬであり、一方ではＳ．アウレウスに対するホスホマイシンのＭＰＣは１５００μｇ／ｍＬに達する。セファゾリンとホスホマイシンの併用のＭＰＣは、セファゾリンおよびホスホマイシンのそれぞれ０．０５μｇ／ｍＬおよび１００μｇ／ｍＬと低いので、相乗効果、つまり１４日間にわたる目に見えるＳ．アウレウスの増殖の阻止がセファゾリン‐ホスホマイシンの組み合せに認められる。大腸菌に対するセファゾリンのＭＰＣは６４μｇ／ｍＬであり、一方では大腸菌に対するホスホマイシンのＭＰＣは２００μｇ／ｍＬに達する。セファゾリンとホスホマイシンの組み合せのＭＰＣは、セファゾリンおよびホスホマイシンのそれぞれ０．８μｇ／ｍＬおよび５μｇ／ｍＬと低いので、相乗効果、つまり１４日間にわたる肉眼で見える大腸菌の増殖の阻止がセファゾリン‐ホスホマイシンの組み合せに認められる。
【００６４】
Ｓ．アウレウスに対するピルリマイシンのＭＰＣは２μｇ／ｍＬであり、一方ではＳ．アウレウスに対するホスホマイシンのＭＰＣは１５００μｇ／ｍＬに達する。ピルリマイシンとホスホマイシンの組み合せのＭＰＣは、ピルリマイシンおよびホスホマイシンのそれぞれ０．１μｇ／ｍＬおよび１００μｇ／ｍＬと低いので、相乗効果、つまり１４日間にわたる肉眼で見えるＳ．アウレウスの増殖の阻止がピルリマイシン‐ホスホマイシンの組み合せに認められる。
実施例８−セファゾリン‐ホスホマイシンのインビボでのマウスのデータ
【００６５】
エンロフロキサシンではなくセファゾリンを用いて実施例６と同じ実験を行った。
【００６６】
セファゾリン５０または１００マイクログラムの乳房内点滴注入は、ＣＦＵ含量の中央値をｌｏｇ１０で４．５または５．１だけ減少させるが、感染乳腺の感染を除去しない。また、ホスホマイシン１００、５００または１０００マイクログラムの乳房内点滴注入も、ＣＦＵ含量の中央値をｌｏｇ１０で２．０、３．３または５．１だけ減少させるが、感染乳腺の感染を除去しない。しかしながら、セファゾリン５０イクログラムとのホスホマイシン２５０、５００および１０００マイクログラムの同時の乳房内点滴注入が、それぞれ感染乳腺の１００、８３および２００％の感染を除去し、セファゾリン１００イクログラムとのホスホマイシン１００、５００および１０００マイクログラムの同時の乳房内点滴注入が、それぞれ感染乳腺の１４、５７および１００％の感染を除去するので、セファゾリン‐ホスホマイシンを組み合わせた治療については相乗効果が認められる。
実施例９−アモキシシリン‐ホスホマイシンのインビボでのマウスのデータ
【００６７】
エンロフロキサシンではなくアモキシシリンを用いて実施例６と同じ実験を行った。
【００６８】
アモキシシリン１００マイクログラムの乳房内点滴注入は、ＣＦＵ含量の中央値をｌｏｇ１０で１．６だけ減少させるが、感染乳腺の感染を除去しない。また、ホスホマイシン１０００マイクログラムの乳房内点滴注入も、ＣＦＵ含量の中央値をｌｏｇ１０で５．１だけ減少させるが、感染乳腺の感染を除去しない。しかしながら、アモキシシリン１００マイクログラムとのホスホマイシン１０００マイクログラムの同時の乳房内点滴注入が、感染乳腺の８７％の感染を除去するので、アモキシシリンを組み合わせた治療については相乗効果が見られる。
実施例１０−ピルリマイシン‐ホスホマイシンのインビボでのマウスのデータ
【００６９】
エンロフロキサシンではなくピルリマイシンを用いて実施例６と同じ実験を行った。
【００７０】
Ｓ．アウレウス感染起因の乳房炎に罹患したマウスにおいて、ピルリマイシン１０マイクログラムの乳房内点滴注入は、ＣＦＵ含量の中央値をｌｏｇ１０で３．３だけ減少させるが、感染乳腺の感染を除去しない。また、ホスホマイシン１００、５００および１０００マイクログラムの乳房内点滴注入も、ＣＦＵ含量の中央値をｌｏｇ１０で２．０、３．３または５．１だけ減少させるが、感染乳腺の感染を除去しない。しかしながら、ピルリマイシン１０マイクログラムとのホスホマイシン１００、５００および１０００マイクログラムの同時の乳房内点滴注入が、感染乳腺のそれぞれ５０、６０および１００％の感染を除去するので、ピルリマイシンを組み合わせた治療については相乗効果が認められる。
実施例１１−セファゾリン‐ホスホマイシンのインビボでのウシのデータ−臨床型乳房炎
【００７１】
最初の野外試験において、臨床型乳房炎に罹患した乳牛を、野外条件下でセファゾリン、ホスホマイシンかまたは両化合物の組み合せにより治療した。例えば、乳房の腫脹、乳房の痛みおよび異常乳等の乳房炎の臨床症状が観察されるとすぐに、パラフィンを含む軟膏剤に製剤化された化合物を、１１０の罹患した乳房分房に、分房当たりセファゾリン４００ｍｇ（３５分房）で、または分房当たりホスホマイシン１０００ｍｇ（３７分房）で、または分房当たりホスホマイシン１０００ｍｇと一緒にセファゾリン４００ｍｇ（３８分房）で無作為に注入した。罹患分房は、各適用の間に２４時間の間隔をおいて３回連続してこの軟膏剤により治療した。乳のサンプルを、乳房炎感染診断のための処置前に罹患した乳房分房から採取したところ、臨床型乳房炎に固有の病原性細菌、すなわちストレプトコッカス・ウベリス、スタフィロコッカス・アウレウス、大腸菌、他の連鎖状球菌および前記の菌種の混合感染が単離された。治療の約１週間、２週間および３週間後に乳のサンプルを再度採取した。罹患した乳房分房は、乳房炎の臨床症状が新たな抗生物質治療を必要とせずに一週間以内に消失したとき、かつ治療直前の診断用乳サンプルに見出された原因病原菌が、治療の一から三週間後に採取されたいかなる乳サンプルからも単離されなかったときに治癒したとみなした。乳房炎感染の治癒率は、セファゾリンを単独で（１１／３５、３１％）またはホスホマイシンを単独で（１３／３７、３５％）含む軟膏剤により治療した分房においてよりも、組み合せた軟膏剤（ホスホマイシンと一緒にセファゾリン）により治療した乳房分房においてより高く、すなわち１７／３８（４５％）であった。
実施例１２−セファゾリン‐ホスホマイシンのインビボでのウシのデータ−潜在性乳房炎
【００７２】
他の野外試験において、潜在性乳房炎、つまりスタフィロコッカス・アウレウスに起因する持続性の慢性乳房感染に罹患した乳牛を、セファゾリン、ホスホマイシンかまたは両化合物の組み合せにより治療した。乳房炎症の主要パラメータおよび劣化乳質の指標である体細胞数が増加した（ｍＬ当たり３００、０００細胞より高いＳＣＣ）乳を産生する泌乳牛は、Ｓ．アウレウス感染について選別した。感染が確認されると、パラフィンを含む軟膏剤に製剤化された化合物を、１３２の罹患した乳房分房に、分房当たりセファゾリン４００ｍｇ（４３分房）でｗ、または分房当たりホスホマイシン１０００ｍｇ（４７分房）で、または分房当たりホスホマイシン１０００ｍｇと一緒にセファゾリン４００ｍｇ（４２分房）で無作為に注入した。罹患分房は、各適用の間に１２時間の間隔をおいて６回連続してこの軟膏剤で治療した。治療の約３週間後および４週間後に乳のサンプルを採取した。感染乳房分房は、３および４週間後に採取された乳サンプルから、治療直前の診断乳サンプルに見出された、Ｓ．アウレウスがもはや単離され得なかったときに、治癒したとみなされた。Ｓ．アウレウス感染の治癒率は、セファゾリンを単独で（２０／４３、４６％）またはホスホマイシンを単独で（２７／４７、５７％）含む軟膏剤により治療した分房においてよりも、組み合せた軟膏剤（ホスホマイシンと一緒にセファゾリン）により治療した乳房分房においてより高く、すなわち２８／４２（６７％）であった。治療後、治療後に乳サンプル中の体細胞数によって測定される乳房炎症のレベルは、セファゾリン単独で（３００、０００細胞／ｍＬ未満のＳＣＣを有する乳サンプルは３０％）またはホスホマイシン単独で（３００、０００細胞数／ｍＬ未満のＳＣＣを有する乳サンプルは２４％）治療した乳房においてよりも、セファゾリン‐ホスホマイシンの組み合せにより治療した乳房においてより低くかった（３００、０００細胞数／ｍＬ未満のＳＣＣを有する乳サンプルは４６％）。さらに治癒分房の間で、セファゾリン単独での（１０／４３、２３％）またはホスホマイシン単独での（９／４７、１９％）治療と比較して、セファゾリン‐ホスホマイシンの組み合せの治療が適用されたときに（１５／４２、３６％）、それ由来の乳の炎症レベルが正常（ｍＬ当たり３００，０００細胞未満のＳＣＣ）に戻った分房がより多く存在した。
【００７３】
結論として、臨床型または潜在性乳房炎に罹患した乳牛は、同じ用量で与えられた単独の化合物によってよりもセファゾリンとホスホマイシンの組み合せによってより良く治癒され、従ってこのことは単一化合物に比較しての組み合せの相乗作用を明らかにしている。
【国際調査報告】
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