(57)【要約】  提供されるのは、治療、特に、癌の治療、好ましくは、薬剤抵抗性癌、および／または放射線抵抗性癌の治療に使用するための方法および組成物である。化合物は、哺乳動物の対象の腫瘍サイズを縮小するために、および腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するために、使用できる。方法は、テモゾロミド、ドキソルビシン、およびゲルダナマイシンなどの薬剤に抵抗性の腫瘍細胞、ならびに非抵抗性腫瘍細胞に有効である。さらに提供されるのは、癌の治療に使用するためのバルビツラートおよびチオバルビツラートジエン化合物、ならびにこれらの化合物に関する使用、方法および組成物である。【選択図】なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の対象の腫瘍細胞の腫瘍サイズの縮小、および／またはアポトーシスの誘導のための方法であって、前記哺乳動物の対象に治療有効量の式Ｉ：
【化１】
2015505530.tif 000066
の化合物であって、
式中、
ＸはＯまたはＳであり、
Ａはアルケニリデンであり、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択され、さらに
Ｒ３は、直鎖または分岐であってよいフェニルまたはヘテロアリールであり、直鎖または分岐であってよいヘテロアルキルで任意に置換されてもよい、
化合物またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩、を投与することを含み、
好ましくは、腫瘍が、薬剤抵抗性細胞、および／または放射線抵抗性細胞を含む、
方法。
【請求項２】
前記化合物が、式ＩＩ；
【化２】
2015505530.tif 000067
の化合物であって、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択され、さらに
Ｒ３は、直鎖または分岐であってよいフェニルまたはヘテロアリールであり、直鎖または分岐であってよいヘテロアルキルで任意に置換されてもよい、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物が、式ＩＩＩ：
【化３】
2015505530.tif 000068
の化合物であって、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択される、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩である請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物が、下記の化合物からなる群より選択される請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法：
【化４】
2015505530.tif 000069
2015505530.tif 000070
2015505530.tif 000071
【請求項５】
前記腫瘍が、細胞腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、黒色腫、中枢神経系腫瘍、末梢神経腫瘍、および転移性腫瘍、から成る腫瘍の種類から選択される請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記腫瘍が、頭蓋または脊柱内にある請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記腫瘍が、神経膠腫、脳幹神経膠腫、混合膠腫、視神経神経膠腫、星状細胞腫、髄膜腫、下垂体腺腫、庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性神経外胚葉性腫瘍、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、シュワン細胞腫、軟膜腫瘍瘍、胚細胞性腫瘍、絨毛癌、卵黄嚢腫瘍、脊索腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、上衣下腫、髄芽腫、乏突起神経膠腫、下垂体腫瘍、松果体腫瘍、ラブドイド腫瘍瘍および脳に転移した腫瘍、からなる群より選択される請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の腫瘍サイズを縮小する方法であって、前記化合物が、週１回、２回、または３回投与される方法。
【請求項９】
前記化合物が、週１回投与される請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の腫瘍サイズを縮小する方法であって、化合物の治療有効量が、１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである方法。
【請求項１１】
化合物の治療有効量が、週１回非経口投与量で、１０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記腫瘍細胞が、下垂体腺腫、庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性神経外胚葉性腫瘍、神経芽細胞腫、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、シュワン細胞腫、皮膚癌、肺癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、上皮癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫、血管肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、リンパ芽球性白血病骨髄性白血病、Ｔ細胞白血病、有毛細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ球増殖性リンパ腫、中枢神経系癌および転移性癌、からなる群より選択される請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、前記化合物が毎週投与される方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、化合物の治療有効量が、週１回非経口投与量で、１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、化合物の治療有効量が、週１回非経口投与量で、１０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇである方法。
【請求項１６】
前記腫瘍が、テモゾロミド、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシン誘導体、および／またはドキソルビシン、の内の１個または複数に対する抵抗性の細胞を含む請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
式ＸＩＩ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩：
【化５】
2015505530.tif 000072
2015505530.tif 000073
【請求項１８】
哺乳動物の対象に治療有効量の請求項１〜１７のいずれか１項で定義された化合物を投与することを含む癌の治療方法であって、好ましくは、前記癌が、薬剤抵抗性癌、および／または放射線抵抗性癌である方法。
【請求項１９】
前記疾患が、神経芽細胞腫、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、頭頸部癌、乳癌、卵巣癌、腎随様癌、前立腺癌、胃癌、子宮頸癌、脳癌、末梢神経腫瘍、肺癌、白血病、結腸直腸癌、結腸癌、脊髄腫瘍、骨癌、肝癌、リンパ腫、黒色腫、膵臓癌、甲状腺癌、子宮肉腫、精巣癌、および転移性癌、からなる群より選択される請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
医薬として使用される式ＸＩＩ〜ＸＸＩＩの内のいずれかの化合物。
【請求項２１】
癌の治療に使用される化合物であって、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかで定義される化合物であり、好ましくは、前記癌が薬剤抵抗性癌、および／または放射線抵抗性癌である化合物。
【請求項２２】
前記癌の治療が、（ｉ）腫瘍サイズを縮小すること、および（ｉｉ）細胞のアポトーシスを誘導すること、から選択される請求項２１に記載の使用のための化合物。
【請求項２３】
薬物の製造における式ＸＩＩ〜ＸＸＩＩの内のいずれかの化合物の使用。
【請求項２４】
癌の治療に有効な薬物の製造における式Ｉ〜ＸＸＩＩの内のいずれかの化合物の使用。
【請求項２５】
前記癌が、薬剤抵抗性癌、および／または放射線抵抗性癌である請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記癌の治療が、（ｉ）腫瘍サイズを縮小すること、および（ｉｉ）細胞のアポトーシスを誘導すること、から選択される請求項２４または２５に記載の使用。
【請求項２７】
式ＸＩＩ〜ＸＸＩＩの内のいずれかの化合物を含む医薬組成物。
【請求項２８】
式Ｉ〜ＸＸＩＩの内のいずれかの化合物を含む癌を治療するための医薬組成物。
【請求項２９】
前記癌が、薬剤抵抗性癌、および／または放射線抵抗性癌である請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記癌の治療が、（ｉ）腫瘍サイズを縮小すること、および（ｉｉ）細胞のアポトーシスを誘導すること、から選択される請求項２８または２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
癌の治療での使用のための化合物であって、次式：
【化６】
2015505530.tif 000074
を有し、
式中、
Ｘは、ＯまたはＳから選択され、
Ｒ４およびＲ５は、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルキル基、２〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルケニル基、３〜９個の炭素原子を有する置換または未置換シクロアルキル基、３〜９個の原子の環を有する置換または未置換ヘテロ環基、置換または未置換フェニル基、から独立に選択され、
Ｒ６およびＲ７は、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルキル基、２〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルケニル基、３〜９個の炭素原子を有する置換または未置換シクロアルキル基、３〜９個の原子の環を有する置換または未置換ヘテロ環基、および置換または未置換アリール基、から独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルキル基、２〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルケニル基、３〜９個の炭素原子を有する置換または未置換シクロアルキル基、３〜９個の原子の環を有する置換または未置換ヘテロ環基、および置換または未置換アリール基、から独立に選択され、
ただし、ＸがＯの場合であって、
Ｒ８およびＲ９の１個がＨであり、その他が未置換フェニル基である場合は、
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個がＨではなく、
ＸがＳの場合であって、
Ｒ８およびＲ９の１個がＨであり、その他が未置換フェニル基である場合は、
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個がＨでなく、また、
Ｒ８およびＲ９の１個がＨであり、その他が未置換フラニル基である場合は、
Ｒ４およびＲ５はＨ水素でも、Ｅｔでもなく、また、Ｒ４およびＲ５は、Ｈでも、ｐ−クロロフェニルでもない、
癌の治療での使用のための化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグ、溶媒和物、または医薬塩。
【請求項３２】
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個はＨ、またはメチル（Ｍｅ）基、またはエチル（Ｅｔ）基である請求項３１に記載の使用のための化合物。
【請求項３３】
Ｒ６がＨ、および／またはＲ７がＨであり、好ましくは、Ｒ６およびＲ７の両方がＨである請求項３１または３２に記載の使用のための化合物。
【請求項３４】
Ｒ８およびＲ９の内の少なくとも１個がＨである請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項３５】
Ｒ８およびＲ９の内の少なくとも１個が、置換もしくは未置換フェニル基、または置換もしくは未置換フラニル基、または置換もしくは未置換ピリジニル基、または置換もしくは未置換インドリル基である請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項３６】
前記置換基の置換成分が、ハロゲン基、好ましくは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉ；１〜６炭素原子を有する低級アルキル基、例えば、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（Ｐｒ）またはブチル（Ｂｕ）基；一級、二級または三級アミン基、例えば、−ＮＨ２基、−ＮＨＭｅ基および−ＮＭｅ２基；ＮＯ２基；１〜６炭素原子を有するアルコキシ基、例えば、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＯＰｒ、および−ＯＢｕ基；−ＣＮ基；テトラヒドロピラン基；およびシクロヘキシル基、から独立に選択される請求項３１〜３５のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項３７】
前記化合物が、次の式：
【化７】
2015505530.tif 000075
を有する請求項３１〜３６のいずれか１項に記載の使用のための化合物であって、
式中、Ｘは、ＯまたはＳであり、Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、ＭｅおよびＥｔから独立に選択され、Ｒ１２〜Ｒ１６は、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＨＭｅ、ＮＨＥｔ、ＮＭｅ２、ＮＭｅＥｔ、ＮＥｔ２、および−ＣＮ、から独立に選択される化合物。
【請求項３８】
ＸがＯである請求項３７に記載の使用のための化合物。
【請求項３９】
前記基のＲ１２〜Ｒ１６の内の１個または２個がＨではない請求項３７または３８に記載の使用のための化合物。
【請求項４０】
前記化合物が次の化合物の内の１個である請求項３１〜３９のいずれか１項に記載の使用のための化合物：
【化８】
2015505530.tif 000076
2015505530.tif 000077
2015505530.tif 000078
2015505530.tif 000079
2015505530.tif 000080
2015505530.tif 000081
2015505530.tif 000082
2015505530.tif 000083
2015505530.tif 000084
2015505530.tif 000085
2015505530.tif 000086
2015505530.tif 000087
【請求項４１】
前記癌が腫瘍を含み、前記腫瘍が、細胞腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、黒色腫、中枢神経系腫瘍、末梢神経腫瘍、および転移性腫瘍、から成る腫瘍の種類から選択される請求項３１〜４０のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項４２】
前記癌が腫瘍を含み、前記腫瘍が、神経膠腫、脳幹神経膠腫、混合膠腫、視神経神経膠腫、星状細胞腫、髄膜腫、下垂体腺腫、庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性神経外胚葉性腫瘍、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、シュワン細胞腫、軟膜腫瘍瘍、胚細胞性腫瘍、絨毛癌、卵黄嚢腫瘍、脊索腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、上衣下腫、髄芽腫、乏突起神経膠腫、下垂体腫瘍、松果体腫瘍、ラブドイド腫瘍瘍および脳に転移した腫瘍、から選択される請求項３１〜４１のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項４３】
前記癌が腫瘍細胞を含み、前記腫瘍細胞が、下垂体腺腫、庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性神経外胚葉性腫瘍、神経芽細胞腫、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、シュワン細胞腫、皮膚癌、肺癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、上皮癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫、血管肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、リンパ芽球性白血病骨髄性白血病、Ｔ細胞白血病、有毛細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ球増殖性リンパ腫、中枢神経系癌および転移性癌、から選択される請求項３１〜４２のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項４４】
前記癌が、神経芽細胞腫、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、頭頸部癌、乳癌、卵巣癌、腎随様癌、前立腺癌、胃癌、子宮頸癌、脳癌、末梢神経腫瘍、肺癌、白血病、結腸直腸癌、結腸癌、脊髄腫瘍、骨癌、肝癌、リンパ腫、黒色腫、膵臓癌、甲状腺癌、子宮肉腫、精巣癌、および転移性癌、から選択される癌である請求項３１〜４３のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項４５】
前記癌が、薬剤抵抗性癌、および／または放射線抵抗性癌である請求項３１〜４４のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項４６】
前記薬剤抵抗性癌が、テモゾロミド、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシン誘導体、および／またはドキソルビシン、の内の１個または複数に対して抵抗性である請求項４５に記載の使用のための化合物。
【請求項４７】
癌の治療用薬物の調製のための化合物の使用であって、前記化合物が、請求項３１〜４０のいずれか１項で定義の化合物である使用。
【請求項４８】
前記癌が、請求項４１〜４６のいずれか１項で定義の癌である請求項４６に記載の使用。
【請求項４９】
請求項３１〜４０のいずれか１項で定義の１個または複数の化合物を含む癌の治療のための医薬組成物。
【請求項５０】
前記癌が、請求項４１〜４６のいずれか１項で定義の癌である請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
薬学的に許容可能なキャリアを含む請求項４９または５０に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
次の式の内の１個を有する化合物：
【化９】
2015505530.tif 000088
2015505530.tif 000089
2015505530.tif 000090
2015505530.tif 000091
【請求項５３】
医薬に使用するための請求項５２に定義の化合物。
【請求項５４】
薬物の製造における請求項５２で定義の化合物の使用。
【請求項５５】
請求項５２で定義の化合物を含む医薬組成物。
【請求項５６】
請求項５３〜５５のいずれか１項で定義の、使用のための化合物、使用、または医薬組成物であって、前記医薬、薬物または組成物が、癌の治療のためであり、好ましくは、請求項４１〜４６のいずれか１項で定義の癌の治療のためである、使用のための化合物、使用、または医薬組成物。
【請求項５７】
請求項３１〜４６、４９〜５２、および５５〜５６のいずれか１項で定義の化合物または組成物を哺乳動物の対象に投与することを含む前記哺乳動物の対象の癌の治療方法。
【請求項５８】
前記癌が、請求項４１〜４６のいずれか１項で定義の癌である請求項５７に記載の癌の治療方法。
【請求項５９】
前記哺乳動物の対象がヒトである請求項５７または５８に記載の癌の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、治療、特に、癌治療のための化合物、組成物、使用および方法について記載する。特に、本出願は、全体として、癌の治療、ならびに、薬剤抵抗性癌および腫瘍、ならびに放射線抵抗性癌および腫瘍を含む既存治療に抵抗性を示す癌の治療に使用する化合物に関する。脳癌（脳腫瘍）および卵巣癌（卵巣腫瘍）は、特に関心のある対象である。
【背景技術】
【０００２】
癌の治療用の化学療法剤は、通常、悪性細胞の繁殖を抑制し、悪性細胞を死滅させ、それにより、腫瘍成長を防ぐか、または腫瘍サイズを小さくすることを目的としている。最もよく用いられる癌化学療法剤の内のいくつかには、アルキル化剤、アントラサイクリン抗生物質、タキサン、アルカロイド、およびトポイソメラーゼ阻害剤が含まれる。
【０００３】
アルキル化剤は、最も古い坑癌剤であり、多くのタイプの癌の治療に使用されている。アルキル化剤は、典型的な例としては、悪性細胞のアポトーシスを引き起こすメチル化剤またはクロロエチル化剤がある。テモゾロミド（商品名、テモダール（登録商標）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ  Ｃｏｒｐ．）は、脳癌（１〜３）、例えば、多形神経膠芽腫および乏突起神経膠腫、ならびに黒色腫（４、５）の治療に使用される経口アルキル化剤である。また、この薬剤は、前立腺癌、膵癌、軟部肉腫、および腎細胞癌の治療にも使用されてきた（６〜１２）。テモゾロミドは、ＤＮＡ複製を阻害することにより細胞繁殖を抑制する（１３）。
【０００４】
テモダール（登録商標）は、他のアルキル化剤に比べて、独特の特性を示す。例えば、この薬剤は、経口投与され、血液脳関門を通過する小さい親油性の分子を形成し、他のアルキル化剤より毒性が低く、ＤＮＡを化学的に架橋せず、さらに、各種の癌に対し有効である。しかし、テモダール（登録商標）は、現在の脳腫瘍治療用化学療法の標準ではあるが、５０％もの脳腫瘍が、テモダール（登録商標）による治療に抵抗性を示す（１４、１５）。テモダール（登録商標）に対する抵抗性は、黒色腫でも認められている（１６、１７）。
【０００５】
アントラサイクリン抗生物質は、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシンを含み、ほとんどのタイプの癌、例えば、白血病、ホジキンリンパ腫、膀胱、乳房、胃、肺、卵巣、および甲状腺の癌、軟部肉腫、多発性骨髄腫、その他の治療によく使われる。ドキソルビシンは、ＤＮＡ中にインターカレートし、転写およびＤＮＡ合成を抑制することにより効果を示す（１８）。また、ドキソルビシンは、トポイソメラーゼＩ阻害剤（１９）およびＩＩα毒でもある（２０）。
【０００６】
トポイソメラーゼ阻害剤は、ドキソルビシン、エトポシド、およびテニポシドを含み、通常、白血病、肺、卵巣、および胃腸癌（２１、２２）の治療に使われる。これらの薬剤は、トポイソメラーゼＩまたはトポイソメラーゼＩＩαもしくはＩＩβを阻害し、ＤＮＡ複製、組換え、転写および染色体分離を抑制することにより効果を示す（２３、２４）。
【０００７】
これらの薬剤は、最初は効果的であるが、腫瘍細胞は、これらの薬剤に対し、抵抗性を持っているか、または抵抗性を持つようになる可能性がある。癌細胞がトポイソメラーゼ阻害剤に対し抵抗性を持つようになる複数の機序が存在する。例えば、内因的に生成されたガングリオシドＧＭ３が、３ＬＬルイス肺がん由来細胞株のＢｃｌ−２発現を上方制御することによりエトポシドおよびドキソルビシン抵抗性に関与することが明らかになった（２５）。
【０００８】
２０１１年には、米国で原発性非悪性および悪性脳ならびに中枢神経系腫瘍の罹患者が、６４，０００人を超えると予測されている（２６）。神経膠腫は、全ての原発性脳および中枢神経系腫瘍の内の３１％を占め、神経膠腫の内の８０％を越える腫瘍が悪性である（２６）。原発性悪性脳およびＣＮＳ腫瘍の脂肪率は高く、２０１０年には、脳および他の神経系の癌の約２２，０２０の新しい成人症例が発生し、１３，１４０人が死亡した（２７）。悪性脳腫瘍は、全原発性悪性癌の１．４％を占め、全癌関連死亡の２．２％を占める（２８）。最先端の外科、放射線、および化学療法の利用にも関わらず、多形神経膠芽腫（最もよくある悪性神経膠腫）であると新規に診断された患者の生存割合は、極めて低かった。ＧＢＭ患者の生存期間中央値は、１４．６ヶ月であり、また、ＧＢＭ患者の２年生存率は、放射線療法単独の場合で１０．４％であり、テモダール（登録商標）と放射線の併用療法による治療を受けた場合でも２６．５％に過ぎない（２９）。悪性神経膠腫に対する２〜５年生存率は、過去３０年間、変わっていない。従って、通常、積極的な治療にも関わらず脳腫瘍は再発し、また、致命的である。
【０００９】
卵巣癌は、２番目に多い婦人科癌であり、欧米における婦人科癌関連死亡の主要な原因である（３０、３１）。２０１０年に米国で、２１，８８０件の新規症例、および１３，８５０人の卵巣癌による死亡が発生したと推定されている（２７）。卵巣癌の治療は、手術および化学療法であるが、放射線療法の場合もある。白金ベース化合物は、卵巣癌の標準的第一選択薬であり、初期奏効率は高い（３２）。しかし、その後の白金抵抗性を獲得した再発が起こることが多く、このことが、この癌に関連する低い生存と密接に関係している。
【００１０】
従って、広範な腫瘍および腫瘍細胞型、特に、放射線療法などの現在の治療に対する抵抗性、ならびに他の化学療法剤に対する抵抗性がある腫瘍および腫瘍細胞に毒性がある別の化学療法剤に対する大きな臨床的ニーズが存在する。従って、本発明の最初の実施形態では、このニーズに適合する解決策を提供するのが１つの目的である。
【００１１】
また、上述の治療の提供のみならず、あらゆる形態の癌に対する治療の改善という継続的ニーズが存在する。換言すれば、脳癌、卵巣癌、ならびに、さらに一般的には、他の癌の治療用の化合物および組成物の改善に対する臨床的ニーズが存在する。第２の実施形態では、癌一般、ならびに、特に、脳および卵巣腫瘍治療用のさらに進んだ化合物および組成物を提供することが１つの目的である。
【００１２】
長年、治療薬としての価値を持つバルビツール酸誘導体が知られている。過去においては、中枢神経系抑制作用のために採用され、特に、鎮静剤および抗痙攣薬としての用途が見出されている。このような治療では、その毒性のために、それらのほとんどがベンゾジアゼピンに取って代わられた。
【００１３】
しかし、つい最近、バルビツラートが、種々の疾患に対する潜在的治療薬としての新しい適応が発見された。例えば、Ｃｉｕｓｔｅａ、らは、特に、ワクチニアウイルス（天然痘）の治療用のバルビツラートを開示している（「ワクチニアウイルス非ヌクレオシドＤＮＡ合成阻害剤のハイスループットスクリーニングによる特定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ＤＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｖａｃｃｉｎｉａ  ｖｉｒｕｓ  ｂｙ  ｈｉｇｈ  ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）」、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５１、６５６３−６５７０、２００８）。
【００１４】
また、バルビツラートは、癌治療薬としても提案されている。例えば、国際公開第ＷＯ０１／９３８４１号は、ＨＩＦ−１活性を阻害する治療薬として特定のバルビツール酸類似体を開示している。これは、癌などの増殖状態を治療するために使用できる。
【００１５】
また、白血病治療へのメロシアニン色素（チオバルビツラート関連化合物）の使用も知られている（国際公開第ＷＯ８９／１２０８０号）。この治療は、白血病細胞に感光性を持たせる色素の使用、およびその後の露光を含む。メロシアニン５４０もまた、アポトーシス活性を持つことが示されている（ＣｈｅｎＹｅｎ−Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．、「光力学的抗癌剤メロシアニン５４０はアポトーシスにより細胞増殖を阻害する（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔ  ｍｅｒｏｃｙａｎｉｎｅ  ５４０  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｂｙ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）」、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１６、５Ａ、２７８１−２７８８、１９９６；Ｄ．Ｌ．Ｔｒａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、「メロシアニン５４０媒介ＰＤＴによる白血病および固形腫瘍細胞のアポトーシスならびに壊死の誘導（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｍｅｒｏｃｙａｎｉｎｅ  ５４０−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ＰＤＴ）」、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ、５９、Ｓｐｅｃ．Ｉｓｓｕｅ、７０Ｓ、１９９４；Ｓｈａｚｉｂ  ｅｔ  ａｌ．、「ヒト腫瘍細胞株中の予備活性化ＭＣ５４０抗癌剤により誘導されたカスパーゼプロテアーゼ媒介アポトーシス（Ｃａｓｐａｓｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅｓ  ｍｅｄｉａｔｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔ  ｐｒｅａｃｔｉｖａｔｅｄ  ＭＣ５４０  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ）」、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１２８、１、１１−２２、Ｊｕｎｅ  ５１９９８；Ｓｉｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、「光力学的治療用の第二世代メロシアニン光増感剤（Ｓｅｃｏｎｄ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｍｅｒｏｃｙａｎｉｎｅ  ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒｓ  ｆｏｒ  ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ）」、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ、１０、１−１３、２００３）。
【００１６】
一部のバルビツラート誘導体は、アポトーシスモジュレーターの可能性、従って、坑癌剤の可能性があるとして提案されている（国際公開第ＷＯ２０１１／０９４７０８号）。いくつかのものが、乳癌および前立腺癌治療薬としての可能性があるという提案がされている（国際公開第ＷＯ２００９／０６５８９７号）。さらに、提案された活性には、ＭＡＬＴ１タンパク分解性阻害剤および／または自己蛋白質分解剤（国際公開第ＷＯ２００９／０６５８９７号）；ＤＮＡ損傷に対し保護するためのＲＡＤ５１タンパク質モジュレーター（国際公開第ＷＯ２００９／０１８２１９号）；特に、癌の治療用のｃ−Ｒｅｌ活性阻害剤（国際公開第ＷＯ２００７／１２０８４２号）；特に、癌の治療用のＰｉｎ−１モジュレーター（国際公開第ＷＯ２００３／０７４４９７号）；インドールと組み合わされた場合の潜在的癌治療薬（Ｐａｌｗｉｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、「インドールおよびバルビツール酸の混合型の設計、合成、および抗癌活性−非常に有望なリード化合物の特定（Ｄｅｓｉｇｎ、ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｈｙｂｒｉｄｓ  ｏｆ  ｉｎｄｏｌｅ  ａｎｄ  ｂａｒｂｉｔｕｒｉｃ  ａｃｉｄ−ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｌｅａｄｓ）」、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９、１１、３０５４−３０５８、２００９）；および、子宮頸部癌細胞の増殖を漸減させる阻害剤（Ｓｈｕａｎｇｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、「ワクチニアＨ１−関連（ＶＨＲ）ホスファターゼの多座配位小分子阻害剤が子宮頸部癌細胞の増殖を減らす（Ｍｕｌｔｉｄｅｎｔａｔｅｓ  ｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｈ１−ｒｅｌａｔｅｄ（ＶＨＲ）  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｄｅｃｒｅａｓｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｒｖｉｘ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ）」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５２、２１、６７１６−６７２３、２００９）としての活性が挙げられる。
【００１７】
しかし、現在までに一部のバルビツラートおよびそれらの類似体が注目を集めているとはいっても、上記で考察の本発明の根底にある問題を解決するものは何も見つかっていない。驚いたことに、本発明者等は、癌用の、特に、テモダール（登録商標）などの現在の薬剤に抵抗性の癌用の治療、および放射線に抵抗性の癌用の治療などの治療法を提供できるバルビツラート類および関連化合物を発見した。これらの化合物を使用して、あらゆる形態の癌治療を改善できる。
【発明の概要】
【００１８】
本発明の第１の実施形態では、典型的な例では、（限定されないが）腫瘍サイズを縮小する、および／または腫瘍細胞にアポトーシスを誘導し、さらに疾患を治療することにより、治療、例えば、癌、好ましくは、薬剤抵抗性癌または放射線抵抗性癌の治療、に使用するための方法および組成物が提供される。方法は、哺乳動物の対象に治療有効量の本明細書記載の１個または複数の式Ｉ〜ＸＸＩＩの化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグ、溶媒和物、もしくは医薬塩を投与することを含む。
【００１９】
本発明の一態様では、哺乳動物の対象に治療有効量の式Ｉ：
【化１】
2015505530.tif 000002
の化合物であって、
式中、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ａは、アルケニリデンであり、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択され、さらに
Ｒ３は、直鎖または分岐であってよいフェニルまたはヘテロアリールであり、直鎖または分岐であってよいヘテロアルキルで任意に置換されてもよい、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩を投与することを含む哺乳動物の対象の腫瘍サイズを縮小する方法が提供され、好ましくは、腫瘍は、薬剤抵抗性腫瘍、および／または放射線抵抗性腫瘍である。
【００２０】
好ましくは、化合物は、式ＩＩ：
【化２】
2015505530.tif 000003
の化合物であって、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択され、さらに
Ｒ３は、直鎖または分岐であってよいフェニルまたはヘテロアリールであり、直鎖または分岐であってよいヘテロアルキルで任意に置換されてもよい、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩である。
【００２１】
好ましくは、化合物は、式ＩＩＩ：
【化３】
2015505530.tif 000004
の化合物であって、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択される、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩である。
【００２２】
好ましくは、化合物は、下記の化合物（ＩＶ）〜（ＸＸＩＩ）からなる群より選択される：
【化４】
2015505530.tif 000005
2015505530.tif 000006
2015505530.tif 000007
【００２３】
腫瘍は、細胞腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、中枢神経系腫瘍、末梢神経腫瘍、黒色腫および転移性腫瘍から構成される腫瘍の種類から選択されるのが好ましい。
腫瘍は、頭蓋または脊柱内に存在するのが好ましい。
【００２４】
腫瘍は、神経膠腫、脳幹神経膠腫、混合膠腫、視神経神経膠腫、星状細胞腫、髄膜腫、下垂体腺腫、庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性神経外胚葉性腫瘍、神経線維腫、
シュワン細胞腫、軟膜腫瘍瘍、胚細胞性腫瘍、絨毛癌、卵黄嚢腫瘍、脊索腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、上衣下腫、髄芽腫、乏突起神経膠腫、下垂体腫瘍、松果体腫瘍、ラブドイド腫瘍瘍および脳に転移した腫瘍、からなる群より選択されるのが好ましい。
【００２５】
好ましくは、腫瘍は、薬剤抵抗性細胞、および／または放射線抵抗性細胞を含む。好ましくは、腫瘍は、テモゾロミド、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシン誘導体、および／またはドキソルビシンに対し抵抗性の細胞を含む。
【００２６】
好ましくは、化合物は、週１、２、または３回、投与される。好ましくは、化合物は、週１回投与される。好ましくは、化合物の治療有効量は、週１回の非経口的投与用量で１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、化合物の治療有効量は、週１回の非経口的投与用量で１０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇである。
【００２７】
本発明の別の態様では、哺乳動物の対象に治療有効量の式Ｉ：
【化５】
2015505530.tif 000008
の化合物であって、
式中、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ａは、アルケニリデンであり、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択され、および
Ｒ３は、直鎖または分岐であってよいフェニルまたはヘテロアリールであり、直鎖または分岐であってよいヘテロアルキルで任意に置換されてもよい、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩、を投与することを含む哺乳動物の対象の腫瘍細胞にアポトーシスを誘導する方法が提供され、好ましくは、腫瘍細胞は、薬剤抵抗性腫瘍細胞、および／または放射線抵抗性腫瘍細胞である。
【００２８】
好ましくは、化合物は、式ＩＩ：
【化６】
2015505530.tif 000009
の化合物であって、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択され、さらに
Ｒ３は、直鎖または分岐であってよいフェニルまたはヘテロアリールであり、直鎖または分岐であってよいヘテロアルキルで任意に置換されてもよい、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩である。
【００２９】
好ましくは、化合物は、式ＩＩＩ：
【化７】
2015505530.tif 000010
の化合物であって、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択される、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩である。
【００３０】
好ましくは、化合物は、下記の化合物（ＩＶ）〜（ＸＸＩＩ）からなる群より選択される：
【化８】
2015505530.tif 000011
2015505530.tif 000012
【００３１】
好ましくは、腫瘍は、薬剤抵抗性細胞、および／または放射線抵抗性細胞を含む。好ましくは、腫瘍細胞は、テモゾロミド、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシン誘導体、および／またはドキソルビシンに対し抵抗性である。
【００３２】
好ましくは、腫瘍細胞は、下垂体腺腫、庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性神経外胚葉性腫瘍、神経芽細胞腫、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、シュワン細胞腫、皮膚癌、肺癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、上皮癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫、血管肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、リンパ芽球性白血病骨髄性白血病、Ｔ細胞白血病、有毛細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ球増殖性リンパ腫、中枢神経系癌および転移性癌、からなる群より選択される。
【００３３】
好ましくは、化合物は、毎週投与される。好ましくは、化合物の治療有効量は、週１回非経口投与用量で１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、化合物の治療有効量は、週１回非経口投与用量で１０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇである。
【００３４】
本発明の別の態様では、式ＸＩＩ：
【化９】
2015505530.tif 000013
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００３５】
本発明の別の態様では、式ＸＩＩＩ：
【化１０】
2015505530.tif 000014
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００３６】
本発明の別の態様では、式ＸＩＶ：
【化１１】
2015505530.tif 000015
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００３７】
本発明の別の態様では、式ＸＶ：
【化１２】
2015505530.tif 000016
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００３８】
本発明の別の態様では、式ＸＶＩ：
【化１３】
2015505530.tif 000017
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００３９】
本発明の別の態様では、式ＸＶＩＩ：
【化１４】
2015505530.tif 000018
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００４０】
本発明の別の態様では、式ＸＶＩＩＩ：
【化１５】
2015505530.tif 000019
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００４１】
本発明の別の態様では、式ＸＩＸ：
【化１６】
2015505530.tif 000020
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００４２】
本発明の別の態様では、式ＸＸ：
【化１７】
2015505530.tif 000021
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００４３】
本発明の別の態様では、式ＸＸＩ：
【化１８】
2015505530.tif 000022
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００４４】
本発明の別の態様では、式ＸＸＩＩ：
【化１９】
2015505530.tif 000023
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩が提供される。
【００４５】
本発明のさらなる態様では、哺乳動物の対象に治療有効量の本明細書記載の化合物を投与することを含む疾患の治療方法が提供される。好ましくは、疾患は、癌である。好ましいタイプの癌の例は、本明細書の他の箇所に記載されている。好ましくは、疾患は、薬剤抵抗性癌、および／または放射線抵抗性癌である。好ましくは、疾患は、神経芽細胞腫、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、頭頸部癌、乳癌、卵巣癌、腎随様癌、前立腺癌、胃癌、子宮頸癌、脳癌、末梢神経腫瘍、中枢神経系癌、肺癌、白血病（例えば、リンパ性白血病）、結腸直腸癌、結腸癌、脊髄腫瘍（新生物）、骨癌、肝癌、リンパ腫、黒色腫、膵臓癌、甲状腺癌、子宮肉腫および精巣癌、からなる群より選択される。
【００４６】
本発明の一態様では、治療に使用するための本明細書記載の化合物または組成物が提供される。
【００４７】
本発明の別の態様では、治療薬効成分の製造における本明細書記載の化合物または組成物の使用が提供される。
【００４８】
好ましくは、治療は、癌の治療である。好ましいタイプの癌の例は、例えば、本発明の方法に関連して、本明細書の他の箇所に記載されている。
【００４９】
好ましくは、治療は、薬剤抵抗性癌、および／または放射線療法抵抗性癌の治療である。この点で、薬剤抵抗性癌は、１つまたは複数の既知の坑癌剤、例えば、テモダール（登録商標）に対して抵抗性を示した癌であることが理解されよう。示された抵抗性は、全体的でも、部分的でもよい。この点で、放射線療法抵抗性癌は、１つまたは複数の既知の放射線治療に対して抵抗性を示した癌である。抵抗性は、全体的でも、部分的でもよい。癌は、一部の症例では、薬剤抵抗性および放射線抵抗性の両方であってもよく、または、薬剤抵抗性のみであっても、もしくは放射線抵抗性のみであってもよい。
【００５０】
好ましくは、対象は、例えば、ヒト、伴侶動物、非飼育家畜または動物園動物、から選択される哺乳動物である。例えば、対象は、ヒト、イヌ、ネコ、雌ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、クマ、など、から選択されてもよい。
【００５１】
本発明の別の態様では、治療、好ましくは、癌、例えば、薬剤抵抗性癌および／または放射線抵抗性癌の治療用薬物の製造における本明細書記載の化合物または組成物の使用が提供される。好ましいタイプの癌の例は、本明細書の他の箇所で、例えば、本発明の方法に関連して記載されている。
【００５２】
本発明の別の態様では、対象に治療有効量の本明細書記載の化合物または組成物を投与することを含む疾患の治療方法が提供される。好ましくは、疾患は、癌である。好ましいタイプの癌の例は、本明細書の他の箇所で、例えば、本発明の方法に関連して記載されている。好ましくは、疾患は、薬剤抵抗性癌、および／または放射線抵抗性癌である。この点で、薬剤抵抗性癌は、１つまたは複数の既知の坑癌剤、例えば、テモダール（登録商標）に対し抵抗性を示した癌であることが理解されよう。示された抵抗性は、全体的でも、部分的でもよい。この点で、放射線療法抵抗性癌は、１つまたは複数の既知の放射線治療に対して抵抗性を示した癌である。抵抗性は、全体的でも、部分的でもよい。癌は、一部の症例では、薬剤抵抗性および放射線抵抗性の両方であってもよく、または、薬剤抵抗性のみであっても、もしくは放射線抵抗性のみであってもよい。
【００５３】
本明細書の他の箇所で記載されたように、明細書中で、「本明細書記載の化合物」への言及は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグ、溶媒和物、もしくは医薬塩を意味することが理解されよう。また、「本明細書記載の化合物」への言及は、本明細書内で記載のいずれかの化合物、例えば、下記の式：
【化２０】
2015505530.tif 000024
から得られる化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩を意味してもよく、
式中、Ｘは、ＯまたはＳから選択され、
Ｒ４およびＲ５は、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルキル基、２〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルケニル基、３〜９個の炭素原子を有する置換または未置換シクロアルキル基、３〜９個の原子の環を有する置換または未置換ヘテロ環基、から独立に選択され、
Ｒ６およびＲ７は、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルキル基、２〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルケニル基、３〜９個の炭素原子を有する置換または未置換シクロアルキル基、３〜９個の原子の環を有する置換または未置換ヘテロ環基、および置換または未置換アリール基、から独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルキル基、２〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルケニル基、３〜９個の炭素原子を有する置換または未置換シクロアルキル基、３〜９個の原子の環を有する置換または未置換ヘテロ環基、および置換または未置換アリール基、から独立に選択される。
ただし、ＸがＯの場合であって、
Ｒ８およびＲ９の１個がＨで、その他が、未置換フェニル基である場合は、
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個がＨではなく、
ＸがＳの場合であって、
Ｒ８およびＲ９の１個がＨで、その他が未置換フェニル基の場合は、
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個がＨではなく；さらに、
Ｒ８およびＲ９の１個がＨで、その他が未置換フラニル基である場合は、
Ｒ４およびＲ５はＨでもＥｔでもなく、また、Ｒ４およびＲ５はＨでもｐ−クロロフェニルでもない。
【００５４】
例えば、「本明細書記載の化合物」への言及は、下記の式：
【化２１】
2015505530.tif 000025
から得られる化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩を意味してもよく、
式中、
Ｘは、ＯまたはＳであり、Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、ＭｅおよびＥｔから独立に選択され、Ｒ１２〜Ｒ１６は、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＨＭｅ、ＮＨＥｔ、ＮＭｅ２、ＮＭｅＥｔ、ＮＥｔ２、および−ＣＮ、から独立に選択される。
【００５５】
「本明細書記載の化合物」への言及は、表２ｂに記載のいずれかの化合物を意味してもよい。
【００５６】
明細書中で、「本明細書記載の化合物」への言及は、本明細書記載の化合物を含む組成物を意味する。好ましくは、組成物は、医薬組成物である。
【００５７】
好ましくは、組成物は、治療有効量の本明細書記載の少なくとも１個の化合物または生理的に許容されるそれらの塩を含む。好ましくは、組成物は、生理的に許容されるキャリアを含む。
【００５８】
好ましくは、本発明の組成物は、１個または複数の追加の活性化合物を含む。好ましくは、１個または複数の追加の活性化合物は、例えば、本明細書記載の組成物との同時送達を目的とした追加の治療化合物形態の治療に有効な化合物である。
【００５９】
本発明の別の態様では、哺乳動物の対象の腫瘍サイズを縮小するために使用する本明細書記載の化合物が提供され、好ましくは、腫瘍は、薬剤抵抗性腫瘍、および／または放射線抵抗性腫瘍である。
【００６０】
本発明の別の態様では、哺乳動物の対象の腫瘍細胞にアポトーシスを誘導するために使用する本明細書記載の化合物が提供され、好ましくは、腫瘍は、薬剤抵抗性腫瘍、および／または放射線抵抗性腫瘍である。
【００６１】
この明細書中で、態様は、明確で、簡潔な明細書が書けるように説明されているが、態様は、本発明から逸脱することなく種々組み合わせるか、または分割できることが意図されており、また、理解されるであろう。例えば、本明細書記載の方法の好ましい特徴は、本明細書記載の化合物、組成物および使用に、等しく適用可能であることが理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】種々の神経膠腫細胞株に対する、（Ａ）放射線（ＧＹ＝Ｇｒａｙ単位）または（Ｂ）テモダール（登録商標）治療の細胞傷害性を示す図である（実施例１に記載の実験）。特定の細胞株で、薬剤抵抗性および放射線抵抗性が明確に示されている。
【図２】ケモタイプ化合物Ｉ（ＣＣ−Ｉ）の構造（Ａ）、およびヒト星状細胞腫（ＳＷ１０８８およびＣＣＦ−ＳＴＴＧ１）（Ｂ）、ヒト星状細胞（Ｃ）、およびウシ網膜内皮細胞（ＢＲＥＣ）（Ｄ）に対する細胞傷害性濃度を示す図である（実施例２に記載の実験）。
【図３】ヌードマウスの皮下に注射したＳＷ１０８８（Ａ）またはＣＣＦ−ＳＴＴＧ１（Ｂ）細胞から形成された腫瘍に対するＣＣ−Ｉの効果を示す図である（実施例３に記載の実験）。
【図４】ＣＣ−Ｉの頭蓋内腫瘍モデルに対する効果を示す図である（実施例４に記載の実験）。（Ａ）ＭＲＩ分析。矢印は、腫瘍組織を示す。（Ｂ）ＣＣ−Ｉ処置（中実記号）および対照（中空記号）ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１およびＵ８７−ＭＧ細胞腫瘍に対する生存曲線を示す。（ＣおよびＤ）肝および腎毒性の血液化学を示す。血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アスパルタートアミノトランスフェラーゼ（ＳＧＯＴ／ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＳＧＰＴ／ＡＬＴ）。
【図５】ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞のアポトーシスに与えるＣＣ−ＩおよびアクチノマイシンＤの効果を示す図である（実施例５に記載の実験）。
【図６】トポイソメラーゼＩＩα媒介ｋＤＮＡ脱連環に与えるＣＣ−Ｉの効果を示す図である（実施例６に記載の実験）。ＣＣ−Ｉは、濃度に依存して、ヒトトポイソメラーゼＩＩα媒介ｋＤＮＡ脱連環を阻害した。図からわかるように、異なるトポロジー型は、異なる移動度を示した。Ｌｉｎｅａｒ−直鎖ｋＤＮＡ；Ｃａｔ．−連鎖；Ｄｅｃａｔ．−脱連環；Ｎｉｃｋｅｄ−ニックの入った脱連環ｋＤＮＡ；Ｃｉｒｃｕｌａｒ−環状脱連環ｋＤＮＡ；ｋＤＮＡ−キネトプラストＤＮＡ。
【図７】スーパーコイルＤＮＡのトポイソメラーゼＩ（７Ａ）およびＩＩα（７Ｂ）媒介弛緩に与えるＣＣ−Ｉの効果を示す図である（実施例６に記載の実験）。（Ａ）陽性対照のカンプトテシン（Ｃａｍｐ．）とは対照的に、ＣＣ−Ｉは、試験最高濃度でもスーパーコイルｐＢＲ３２２  ＤＮＡプラスミドのヒトトポイソメラーゼＩ媒介弛緩を阻害しなかった。（Ｂ）ＣＣ−Ｉは、スーパーコイルｐＨＯＴ１  ＤＮＡプラスミドのトポイソメラーゼＩＩα−媒介弛緩を強く阻害した。陽性対照のエトポシド（ＶＰ−１６、１ｍＭ）と同様に、３μｇ／ｍｌを越える濃度で、ＣＣ−Ｉは、トポイソメラーゼＩＩα触媒ｐＨＯＴ１弛緩を完全に阻害した。図からわかるように、異なるトポロジー型のＤＮＡは、異なる移動度を示した。Ｌｉｎｅａｒ−直鎖ＤＮＡ；ｒｅｌａｘｅｄ−弛緩ＤＮＡ；ｓ．ｃ．−スーパーコイル。
【図８】Ｃ２８２ＹＨＦＥ変異のある神経芽細胞腫細胞由来の皮下腫瘍を有するＳＣＩＤマウスに与えるＣＣ−Ｉの効果を示す図である（実施例７に記載の実験）。（Ａ）ＣＣ−Ｉは、未処置対照に比較して、担腫瘍マウスにおける腫瘍増殖を完全に抑制した。（Ｂ）および（Ｃ）ＣＣ−Ｉを受けた動物で肝および腎毒性は、観察されなかった。
【図９】神経線維腫細胞株に与えるＣＣ−Ｉの効果を示す図である（実施例８に記載の実験）。ＳＴ８８およびＮＦ２１５神経線維腫細胞に対するＬＤ５０は、それぞれ、２．１μｇ／ｍｌおよび１．４μｇ／ｍｌである。
【図１０】テモダール（登録商標）抵抗性ヒト神経膠腫細胞株ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１の細胞生存に与えるＣＣ−ＩおよびＣＣ−Ｉ誘導体の効果を示すグラフである（実施例１０に記載の実験）。
【図１１】Ｕ８７−ＭＧ（１１Ａ）およびＣＣＦ−ＳＴＴＧ１（１１Ｂ）神経膠腫細胞株の細胞の細胞生存に与えるＣＣ−ＩおよびＣＣ−Ｉ誘導体の効果を示すグラフである（実施例１０に記載の実験）。
【図１２】Ｕ８７−ＭＧ（１２Ａ）およびＣＣＦ−ＳＴＴＧ１（１２Ｂ）神経膠腫細胞株の細胞の細胞生存に与えるＣＣ−Ｉ誘導体の効果を示すグラフである（実施例１０に記載の実験）。
【図１３】神経膠腫細胞株、Ｕ８７−ＭＧ（１３Ａ）およびＣＣＦ−ＳＴＴＧ１（１３Ｂ）に与えるＣＣ−Ｉ、メルバロン、およびＩＣＲＦ−１９３の効果を示すグラフである実施例１１に記載の実験）。
【図１４】Ａ５４９肺癌皮下ヌードマウス腫瘍モデルにおけるＣＣ−Ｉの坑腫瘍効果を示すグラフである（実施例１２に記載の実験）。
【発明を実施するための形態】
【００６３】
発明の詳細な説明
スクリーニング分析により、癌治療法を全体的に改善できる化合物、特に、脳腫瘍、神経線維腫および転移性脳癌の治療が改善できる化合物が明らかにされた。脳腫瘍の標準的化学療法治療としてのテモダール（登録商標）の位置にもかかわらず、全体の半分を越える脳腫瘍がテモダール（登録商標）化学療法に対し抵抗性である（１４、１５）。
【００６４】
従って、テモダール（登録商標）抵抗性細胞に対し細胞傷害性の化合物のスクリーニングを行った。実施例１および図２で記載のように、リード化合物のケモタイプ化合物Ｉ、（ＣＣ−Ｉ）は、テモダール（登録商標）抵抗性およびテモダール（登録商標）感受性細胞株の両方に対し毒性が示された。従って、ＣＣ−Ｉ、およびその誘導体ならびに同族体（本明細書では、まとめて、「ＣＣ−Ｉ化合物」）は、治療薬、特に癌の治療用の治療薬として、また、特に、より効果的な癌化学療法を与えるテモダール（登録商標）の代替薬または補助剤として、有用となる可能性がある。ＣＣ−Ｉおよびその誘導体は、脳腫瘍および卵巣腫瘍、ならびに、薬剤抵抗性腫瘍および／または放射線抵抗性腫瘍に対し特に有用である可能性がある。
【００６５】
下記の実施例で記載のように、ＣＣ−Ｉ化合物は、血液脳関門を通過し、薬剤抵抗性および放射線抵抗性、ならびに感受性腫瘍細胞の腫瘍成長を防ぐ。インビボで調査ではＣＣ−Ｉは、肝臓または腎臓への毒性はなく、腫瘍細胞に毒性である投与量で正常細胞に対しインビトロでは毒性ではなかった。表１に示すように、ＣＣ−Ｉは、神経膠腫、星状細胞腫、神経芽細胞腫、卵巣癌細胞に対し効果的であった。さらに、ＣＣ−Ｉは、化学療法治療が未知の末梢神経腫瘍を生じさせる神経線維腫癌細胞に対し細胞傷害性であった。後者の試験では、また、Ａ５４９細胞で試験して、ＣＣ−ＩのｐＸＣ５０は４．５であることが明らかになった。
【表１】
2015505530.tif 000026
2015505530.tif 000027
【００６６】
ＣＣ−Ｉ化合物は、実施例６に記載のように、トポイソメラーゼＩＩα阻害剤であり、実施例５に記載のように、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導できる。トポイソメラーゼＩＩαの発現は、卵巣癌、腎随様癌、胃癌および乳癌の進行に関与し（３３〜３６）、乏突起星細胞腫および神経膠芽細胞腫で増加している（３７、３８）。また、トポイソメラーゼＩＩαは、急性リンパ性白血病の再発に関与し（３９）、結腸直腸癌の薬剤応答に影響を与える（４０）。トポイソメラーゼＩＩαをコードする遺伝子は、いくつかの抗癌剤の標的であり、従って、ドキソルビシンなどのトポイソメラーゼＩＩα阻害剤または毒は、上述の癌の治療に使用される。しかし、テモダール（登録商標）と同じく、多くの腫瘍細胞は、ドキソルビシンに対し抵抗性である（４１〜４３）。
【００６７】
一態様では、本発明は、対象に治療有効量のＣＣ−Ｉ化合物を投与することを含む腫瘍サイズを縮小する方法に関する。別の態様では、本発明は、腫瘍細胞に治療有効量のＣＣ−Ｉ化合物を投与することを含む腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する方法に関する。これらの方法は、薬剤抵抗性癌、および放射線抵抗性癌の治療に有効である。投与されるＣＣ−Ｉ化合物は、下記の式Ｉ〜ＸＸＩＩの構造物の内の1つであっても、またはその誘導体であってもよい。
【００６８】
式Ｉ：
【化２２】
2015505530.tif 000028
の化合物であって、
式中、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ａは、アルケニリデンであり、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択され、さらに
Ｒ３は、直鎖または分岐であってよいフェニルまたはヘテロアリールであり、直鎖または分岐であってよいヘテロアルキルで任意に置換されてもよい、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩。
【００６９】
式ＩＩ：
【化２３】
2015505530.tif 000029
の化合物であって、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択され、さらに
Ｒ３は、直鎖または分岐であってよい、フェニルまたはヘテロアリールであり、任意に直鎖または分岐であってよいヘテロアルキルで置換されてもよい、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩。
【００７０】
式ＩＩＩ：
【化２４】
2015505530.tif 000030
の化合物であって、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）直鎖または分岐であってよい１〜１０個の炭素原子を含むアルキル、（ｉｉ）直鎖または分岐であってよい２〜１０個の炭素原子を含むアルケニル、および（ｉｉｉ）水素、からなる群より独立に選択される、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグもしくは医薬塩。
【００７１】
【化２５】
2015505530.tif 000031
2015505530.tif 000032
2015505530.tif 000033
【００７２】
定義
下記の定義が本明細書で適用される。
用語の「約」は、プラスまたはマイナス２０％、より好ましくは、プラスまたはマイナス１０％、さらにより好ましくは、プラスまたはマイナス５％、最も好ましくは、プラスまたはマイナス２％を意味する。
【００７３】
用語の「治療有効量」は、当該疾患に起因する少なくともに１つの状態または症状の重症度を低減させる、および／または、それらを回復させるために必要な化合物または組成物の量を意味する。
【００７４】
用語の「癌」は、調節が解除された、または無制御細胞増殖を特徴とする悪性腫瘍、例えば、細胞腫、肉腫、白血病、およびリンパ腫を含む。用語の「癌」は、原発性悪性腫瘍、例えば、細胞が元の腫瘍の部位以外の対象の身体の部位に転移していない癌、および２次悪性腫瘍、例えば、転移して元の腫瘍の部位とは異なる２次部位に移動することにより生じた癌を含む。
【００７５】
用語の「有効量」および「治療有効量」は、治療対象の疾患を治療するのに有効な薬剤または化合物の量を意味する。疾患が癌の場合、薬剤の有効量は、細胞数を減らす、腫瘍サイズを縮小する、末梢器官への癌細胞浸潤を抑制する（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは停止させる）、腫瘍転移を抑制する（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは停止させる）、ある程度腫瘍成長を抑制する、および／または１つまたは複数の癌関連症状をある程度軽減することができる。薬剤が成長を防ぐ、および／または既存癌細胞を死滅させることができる範囲で、薬剤は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性でありうる。有効量は、無増悪生存期間を延長し、客観的反応（部分反応または完全反応を含む）をもたらし、全生存時間を増やし、および／または１つまたは複数の癌症状を改善できる。
【００７６】
用語の「対象」は、動物、好ましくは、哺乳動物および、特にヒトを意味する。特定の態様では、対象は、疾患、例えば、癌に罹患している。
【００７７】
用語の「アルケニリデン」は、１個または複数の二重結合を有する炭化水素基を意味する。特定の態様では、アルケニリデン基は、１〜６個の炭素原子を有する。別の態様では、アルケニリデン基は、１、２、３、４または５個の炭素原子を有する。一態様では、アルケニリデンは、１個の二重結合を有する。別の態様では、アルケニリデンは、２個の二重結合を有する。代表的アルケニリデン基には、＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、＝ＣＨ−ＣＨ２−、＝Ｃ−、＝Ｃ＝ＣＨ−ＣＨ２−、＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−、＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、が含まれる。好ましい態様では、アルケニリデン基は、共役アルケニリデン基である。示された式では、アルケニリデン基は、二重結合によりコア６員環構造に結合されていることは理解されよう。
【００７８】
用語の「ヘテロアリール」は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される４個のヘテロ原子まで含む５または６員環を含む芳香族単環式または二環式基を意味する。ヘテロアリール基の例には、フラニル、ピロリル、チオフェニル、１，３−オキサゾリル、１，２−オキサゾリル、１，３−チアゾリル、１，２−チアゾリル、インドール、インドリンおよびベンゾフランが含まれる。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を介して分子の残部に結合されてもよい。
【００７９】
用語の「ヘテロアルキル」は、１〜６個の炭素原子を含み、その内の１個または複数の炭素原子が酸素、窒素または硫黄原子で置換されているアルキルまたはアルケニル基を意味する。ヘテロアルキル基は、直鎖または分岐であってよい。ヘテロアルキル基の例には、メチル、カルボン酸およびヒドロキシル基が含まれる。
【００８０】
上述のように、本明細書で開示の活性化合物は、それらの薬学的に許容可能な塩の形で調製できる。薬学的に許容可能な塩は、所望の親化合物の生物活性を保持し、望ましくない中毒学的影響を与えない塩である。薬学的に許容可能な塩の例は、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９７７、「薬学的に許容可能な塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｓａｌｔｓ）」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、Ｖｏｌ．６６、ｐｐ．１−１９（４４）で考察されている。
【００８１】
また、開示活性化合物は、それらの溶媒和物の形で調製されてもよい。本明細書では、用語の「溶媒和物」は、通常の意味で使われ、溶質（例えば、活性化合物、活性化合物の塩）および溶媒の錯体を意味する。溶媒が水の場合は、溶媒和物は、便宜的に、水和物、例えば、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物、などと呼ぶことができる。
【００８２】
本発明は、さらに、本明細書記載の化合物のプロドラッグまで包含する。用語の「プロドラッグ」は、生物学的に不活性であるが、代謝されて活性な治療薬剤を生成する化合物を意味する。
【００８３】
用語の「誘導体」は、本明細書記載の化合物から誘導された分子を意味する。このような誘導体は、例えば、これらの化合物の合成化学手法で変えられた誘導体であってもよい。
【００８４】
用語の「同族体」は、本明細書記載の化合物に対し実質的な構造類似性を有する分子を意味する。
【００８５】
この明細書中で、用語の「治療」は、既存の疾患の治療、および／または疾患の発生を防ぐための予防的治療を意味する。このように、本発明の方法は、治療、予防、進行の抑制または疾患の発症の遅延の目的に使用できる。
【００８６】
本発明の第２の実施形態は、全体的として、有益な坑癌特性を有することが新規に明らかとなった一群の化合物の採用による癌の治療に関する。この本発明の実施形態は、癌の治療に使用するための化合物を提供し、この化合物は、次式：
【化２６】
2015505530.tif 000034
を有する化合物であって、
式中、Ｘは、ＯまたはＳから選択され、
Ｒ４およびＲ５は、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルキル基、２〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルケニル基、３〜９個の炭素原子を有する置換または未置換シクロアルキル基、３〜９個の原子の環を有する置換または未置換ヘテロ環基、置換または未置換フェニル基、から独立に選択され、
Ｒ６およびＲ７は、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルキル基、２〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルケニル基、３〜９個の炭素原子を有する置換または未置換シクロアルキル基、３〜９個の原子の環を有する置換または未置換ヘテロ環基、および置換または未置換アリール基、から独立に選択され、
Ｒ８およびＲ９は、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルキル基、２〜１０個の炭素原子を有する置換または未置換アルケニル基、３〜９個の炭素原子を有する置換または未置換シクロアルキル基、３〜９個の原子の環を有する、置換または未置換ヘテロ環基、置換または未置換アリール基、から独立に選択され、
ただし、ＸがＯの場合であって、
Ｒ８およびＲ９の１個がＨで、残りが未置換フェニル基の場合は、
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個がＨではなく、
ＸがＳの場合であって、
Ｒ８およびＲ９の１個がＨで、残りが未置換フェニル基の場合は、
Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個がＨではなく、さらに、
Ｒ８およびＲ９の１個がＨで、残りが未置換フラニル基の場合は、
Ｒ４およびＲ５は、Ｈでも、Ｅｔでもなく、また、Ｒ４およびＲ５は、Ｈでも、ｐ−クロロフェニルでもない、
化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグ、溶媒和物、または医薬塩である。
【００８７】
この第２の実施形態では、ＸがＯであるのが好ましいが、ＸがＳであってもよい。また、一部の態様では、Ｘは、Ｓｅであってもよい。
【００８８】
第２の実施形態の式のいずれかで、置換または未置換アルキル基および置換または未置換アルケニル基は、好ましくは、未置換である。それらは、直鎖基でも、分岐基でもよいが、好ましくは、直鎖（非分岐）基である。これらの基は、好ましくは、１〜６個の炭素原子を有する、典型的な例では、１、２、３、４または５個の炭素原子（典型的な例では、アルケニル基に対しては２、３、４または５個の炭素原子）を有する低級アルキルまたは低級アルケニル基である。典型的な例では、アルケン基が存在する場合、その基は、ただ１個の不飽和の結合を有する。最も好ましい基には、メチル、エチル、プロピルおよびエテニル基が含まれる。
【００８９】
第２の実施形態のいずれかの式の置換または未置換シクロアルキル基は、好ましくは、未置換である。環系は、典型的な例では、３、４、５、６、７、８、または９個の原子を含むことができる。従って、環は、好ましくは、５〜９個の原子、５〜７個の原子、または５〜６個の原子を含むことができる。環系は、縮合環（例えば、二環系）を含んでもよく、または単環であってもよい。シクロヘキシル基が好ましい。環系は、不飽和の炭素と炭素の結合、典型的な例では、１個又は２個のこのような不飽和結合を含んでもよく、これは、共役でも、非共役でもよい。
【００９０】
第２の実施形態のいずれかの式の置換または未置換ヘテロ環基は、芳香族ヘテロ環基でも、非芳香族ヘテロ環基でもよい。環系は、典型的な例では、３、４、５、６、７、８、または９個の原子を含むことができる。従って、環系は、好ましくは、５〜９個の原子、５〜７個の原子、または５〜６個の原子を含むことができる。環系は、縮合環（例えば、二環系）、例えば、６員環に縮合した５員環を含んでもよく、または単環であってもよい。
【００９１】
置換または未置換ヘテロ環基は、芳香族ヘテロ環基でもよい。芳香族ヘテロ環基は、典型的な例では、Ｎ、ＯおよびＳから選択される４個までのヘテロ原子を含む５または６員環を含む芳香族単環式または二環式基である。芳香族ヘテロ環基の例には、フラニル、ピロリル、チオフェニル、１，３−オキサゾリル、１，２−オキサゾリル、１，３−チアゾリル、１，２−チアゾリル、インドール、インドリンおよびベンゾフラン、が含まれる。芳香族ヘテロ環基は、ヘテロ原子を介して残りの分子に結合されてもよい。
【００９２】
あるいは、置換または未置換ヘテロ環基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される４個までのヘテロ原子を含む５または６員環を含む脂肪族ヘテロ環、例えば、単環式または二環式脂肪族ヘテロ環基であってもよい。脂肪族ヘテロ環の例には、限定されないが、テトラヒドロピラン、ジヒドロピラン、ピラン、ピロリジン、ピロリン、ピペリジン、ピペラジンおよびモルホリン、が含まれる。脂肪族ヘテロ環基は、ヘテロ原子を介して残りの分子に結合されてもよい。
【００９３】
Ｒ４および／またはＲ５がヘテロ環基の場合には、基は環構造中に３〜９個の原子をもつことができるが、３〜６原子が好ましい。理由は、窒素原子への置換基は、化合物中で他の位置よりも立体障害が少ないのが好ましいからである。
【００９４】
第２の実施形態のいずれかの式の置換または未置換アリール基は、どの非ヘテロ環式芳香族基であってもよいが、典型的な例では、置換または未置換フェニル基である。他の代表的基には、ナフタレン、アントラセンまたはビフェニル基を含んでもよい。
【００９５】
第２の実施形態で使用される化合物は、第１の実施形態で採用されたものに類似の化合物群であるが、バルビツラートまたはチオバルビツラート誘導体のジエンである。これらのジエンは、癌の治療に特に活性であることが明らかになった（下記の実施例１３参照）。最高の活性を得るためには、ジエン系の２つのアルケンのどちらも、環系の一部ではないことが好ましい。従って、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のそれぞれは、一緒に、ジエン系のアルケンの１つを含む環を形成しないのが好ましい。しかし、一部の態様では、特に、それらが芳香族ではない場合に、このような環系が可能である。これらのケースでは、典型的な例では、Ｒ７は、ジエン系の２番目のアルケンが環系中で束縛されるようにＲ９（またはＲ８）と環を形成できる。これらのケースでは、この環系は、置換または未置換６員環であるのが好ましい。この環系は、６員炭素環（シクロヘキセン環など）であっても、または環中に５個の炭素原子および１個の酸素原子を有する６員環であっても、または環中に５個の炭素原子および１個の窒素原子を有する６員環であってもよい。
【００９６】
第２の実施形態の上記化合物で、典型的な例では、Ｒ４およびＲ５の内の少なくとも１個はＨ、またはメチル（Ｍｅ）基、またはエチル（Ｅｔ）基である。Ｒ４およびＲ５の内の少なくとも１個は、立体障害のないのが好ましい。理由は、立体障害は、活性を妨害する場合があるからである。しかし、他の基がＨなどの小さい基の場合は、多少の大きさの単一基が問題になることはなく、テトラヒドロピランまたはシクロヘキシル基は許容可能であろう。このような状況で立体障害のあるのは、７個、望ましくは、６個を越える非水素原子を有するいずれかの基を意味する。
【００９７】
上記の第２の実施形態の化合物で、典型的な例では、Ｒ６はＨ、および／またはＲ７はＨであり、好ましくは、Ｒ６およびＲ７の両方がＨである。他の置換基が可能であるが、活性に対し大きく影響を与えない。従って、これらの基のより単純な置換パターン（例えば、Ｈまたは低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）が好ましい。
【００９８】
上記の第２の実施形態の化合物で、典型的な例では、Ｒ８およびＲ９の内の少なくとも１個はＨである。典型的な例では、また、Ｒ８およびＲ９の内の少なくとも１個は、置換または未置換フェニル基、または置換または未置換フラニル基、または置換または未置換ピリジニル基、または置換または未置換インドリル基であるのが好ましい。ほかの置換基であってもよいが、ジエン系と共役可能な基が好ましく、特に、芳香族基が好ましい。
【００９９】
第１および第２の実施形態の化合物で、上述の置換基は、それらが上記定義の範囲に適合し、また、それらが活性を妨害しないという条件に従う限り、特に制限されない。従って、これまで、およびこれ以降の両方で記載の全ての本発明に関連する実施形態で、用語の「置換基」は、特に限定されず、任意の官能基またはいずれの原子であってよく、特に、有機化学で一般的な任意の官能基または原子であってよい。従って、置換基は、以下の意味のいずれであってもよい。置換基は、いずれの有機基、および／または周期律表のいずれのＩＩＩＡ、ＩＶＡ、ＶＡ、ＶＩＡまたはＶＩＩＡ族の１個または複数の原子、例えば、Ｂ、Ｓｉ、Ｎ、Ｐ、Ｏ、もしくはＳ原子（例えば、ＯＨ、ＯＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、ＳＨ、ＳＲ、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ２、など）またはハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）を含んでもよい。上記で、Ｒは、低級炭化水素（１〜６個のＣ原子）または高級炭化水素（７個以上のＣ原子、例えば、７〜４０個のＣ原子）である。
【０１００】
置換基が有機基を含む場合には、有機基は、好ましくは、炭化水素基を含む。炭化水素基は、直鎖、分岐鎖または環状基を含んでもよい。炭化水素基は、脂肪族または芳香族基を独立に含んでもよい。また、炭化水素基は、飽和または不飽和基を独立に含んでもよい。
【０１０１】
炭化水素が不飽和基を含む場合、それは、１つまたは複数のアルケン官能性および／または１つまたは複数のアルキン官能性であってもよい。炭化水素が直鎖または分岐鎖基を含む場合、それは、１個または複数の一級、二級および／または三級アルキル基であってもよい。炭化水素が環状基を含む場合、それは、芳香環、脂肪族環、ヘテロ環基、および／またはこれらの縮合環誘導体であってもよい。従って、環状基は、ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、インデン、フルオレン、ピリジン、キノリン、チオフェン、ベンゾチオフェン、フラン、ベンゾフラン、ピロール、インドール、イミダゾール、チアゾール、および／またはオキサゾール基、ならびに、上記基の位置異性体を含んでもよい。
【０１０２】
炭化水素基の炭素原子の数は、特に限定されないが、好ましくは、炭化水素基は、１〜４０個のＣ原子を含む。従って、炭化水素基は、低級炭化水素（１〜６個のＣ原子）または高級炭化水素（７個以上のＣ原子、例えば、７〜４０個のＣ原子）であってもよい。低級炭化水素基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルもしくはヘキシル基またはこれらの位置異性体、例えば、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、などであってよい。環状基の環中の原子の数は、特に限定されないが、好ましくは、環状基の環は、３〜１０原子、例えば、３、４、５、６または７原子を含む。
【０１０３】
上述のヘテロ原子を含む基、ならびに上記で定義の他のいずれの基も、周期律表のＩＩＩＡ、ＩＶＡ、ＶＡ、ＶＩＡまたはＶＩＩＡ族の１個または複数のヘテロ原子、例えば、Ｂ、Ｓｉ、Ｎ、Ｐ、Ｏ、もしくはＳ原子、またはハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）を含んでもよい。従って、置換基は、有機化学で一般的ないずれかの官能基の内の１個または複数、例えば、ヒドロキシ基、カルボン酸基、エステル基、エーテル基、アルデヒド基、ケトン基、アミン基、アミド基、イミン基、チオール基、チオエーテル基、スルファート基、スルホン酸基、およびリン酸基、などを含んでもよい。また、置換基は、これらの基の誘導体、例えば、カルボン酸無水物およびカルボン酸ハライドを含んでもよい。
【０１０４】
さらに、いずれの置換基も、上で定義の２個以上の置換基および／または官能基の組み合わせを含んでもよい。
【０１０５】
通常、最も好ましい実施形態では、置換される基に対する置換基は、ハロゲン基、好ましくは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉ；１〜６個の炭素原子の低級アルキル基、例えば、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（Ｐｒ）またはブチル（Ｂｕ）基；一級、二級または三級アミン基、例えば、−ＮＨ２基、−ＮＨＭｅ基および−ＮＭｅ２基；ＮＯ２基、ＯＨ基、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ基、例えば、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＯＰｒ、および−ＯＢｕ基、−ＣＮ基、テトラヒドロピラン基ならびにシクロヘキシル基、から独立に選択される。
【０１０６】
第２の実施形態の好ましい態様では、本発明で使用される化合物は、下記の式：
【化２７】
2015505530.tif 000035
を有し、
式中、ＸはＯまたはＳであり、Ｒ１０およびＲ１１は、Ｈ、ＭｅおよびＥｔから独立に選択され、Ｒ１２〜Ｒ１６は、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＮＨＥｔ、−ＮＭｅ２、−ＮＭｅＥｔ、−ＮＥｔ２、および−ＣＮ、から独立に選択される。
【０１０７】
第２の実施形態のこの態様では、通常、ＸはＯである。通常、Ｒ１２〜Ｒ１６の１または２個のみがＨではなく、すなわち、通常、フェニル基は、モノまたはジ置換である。好ましい態様では、Ｒ１２〜Ｒ１６は、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＮＯ２、−ＮＭｅ２、−ＮＥｔ２、および−ＣＮ、から独立に選択される。
【０１０８】
典型的な例では、本発明で使用される化合物は、下記の化合物の内の１個である：
【化２８】
2015505530.tif 000036
2015505530.tif 000037
2015505530.tif 000038
2015505530.tif 000039
2015505530.tif 000040
各化合物に付与されたコード番号（ＤＤＤ番号）は、本出願中の適切な箇所で特定の化合物に言及する際の略記として使用される。
【０１０９】
本発明のこの第２の実施形態では、癌は、特に限定されない。しかし、典型的な例では、癌は、腫瘍を含み、腫瘍は、細胞腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、黒色腫、中枢神経系腫瘍、末梢神経腫瘍、および転移性腫瘍から構成される腫瘍の種類から選択される。癌は、典型的な例では、神経膠腫、脳幹神経膠腫、混合膠腫、視神経神経膠腫、星状細胞腫、髄膜腫、下垂体腺腫、庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性神経外胚葉性腫瘍、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、シュワン細胞腫、軟膜腫瘍瘍、胚細胞性腫瘍、絨毛癌、卵黄嚢腫瘍、脊索腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、上衣下腫、髄芽腫、乏突起神経膠腫、下垂体腫瘍、松果体腫瘍、ラブドイド腫瘍瘍および脳に転移した腫瘍、から選択される腫瘍を含む。癌は、下垂体腺腫、庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性神経外胚葉性腫瘍、神経芽細胞腫、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、シュワン細胞腫、皮膚癌、肺癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、上皮癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫、血管肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、リンパ芽球性白血病骨髄性白血病、Ｔ細胞白血病、有毛細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ球増殖性リンパ腫、中枢神経系癌および転移性癌、から選択される癌などの腫瘍細胞を含んでもよい。
【０１１０】
従って、典型的な例では、癌は、神経芽細胞腫、神経線維腫、悪性末梢神経鞘腫、頭頸部癌、乳癌、卵巣癌、腎随様癌、前立腺癌、胃癌、子宮頸癌、脳癌、末梢神経腫瘍、肺癌、白血病、結腸直腸癌、結腸癌、脊髄腫瘍、骨癌、肝癌、リンパ腫、黒色腫、膵臓癌、甲状腺癌、子宮肉腫、精巣癌、および転移性癌、から選択される癌である。
【０１１１】
本発明の第１の実施形態と同様に、第２の実施形態の癌は、薬剤抵抗性癌および／または放射線抵抗性癌（抵抗性は、全体的でも、部分的でもよい）であってよいが、この第２の実施形態は、また、非薬剤抵抗性癌および非放射線抵抗性癌に対しても使用できる。薬剤抵抗性癌は、典型的な例では、テモゾロミド、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシン誘導体、および／またはドキソルビシンの内の１個または複数に対して抵抗性であるが、どのような薬剤抵抗性も想定されうる。放射線抵抗性癌は、典型的な例では、１つまたは複数の既知の放射線治療に対して抵抗性を示した癌である。癌は、薬剤抵抗性および放射線抵抗性の両方である場合もあり、または薬剤抵抗性のみ、もしくは放射線抵抗性のみの場合もある。
【０１１２】
また、本発明の第２の実施形態は、癌の治療用薬物の調製のための化合物の使用を提供し、化合物は、上記で定義の化合物である。
【０１１３】
第２の実施形態は、癌の治療用の医薬組成物をさらに提供し、組成物は、１個または複数の上記で定義の化合物を含む。
【０１１４】
また、第２の実施形態は、次の式：
【化２９】
2015505530.tif 000041
2015505530.tif 000042
2015505530.tif 000043
2015505530.tif 000044
の化合物、またはそれらの誘導体、同族体、プロドラッグ、溶媒和物、もしくは医薬塩を提供する。また、この実施形態は、１個または複数のこのような化合物を含む医薬組成物を提供する
【０１１５】
第２の実施形態は、哺乳動物の対象の癌の治療方法をさらに提供し、この方法は、上記で定義の化合物または組成物を哺乳動物の対象に投与することを含む。この方法では、癌は、上記で定義の癌である。
【０１１６】
第２の実施形態では、好ましくは、対象は、哺乳動物、例えば、ヒト、伴侶動物、非飼育家畜または動物園動物から選択される。例えば、対象は、ヒト、イヌ、ネコ、雌ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、クマ、などから選択できる。
【０１１７】
本発明の実施形態の全てにおいて、哺乳動物の対象は、通常、ヒトである。
【０１１８】
全ての本発明の実施形態において、化合物がキラルであってよい場合は、本発明には、ＳおよびＲ鏡像異性体の両方、ならびにこれら異性体のラセミ混合物が包含される。さらに、全ての本発明の実施形態において、化合物が１個または複数の二重結合の存在の結果として位置異性を持つことができる場合には、本発明には、ＥおよびＺ異性体、ならびにこれらの混合物が包含される。
【０１１９】
合成と調製
本発明の実施形態１の代表的化合物の調製および使用について、以降でさらに記載される。
【０１２０】
本発明で使われる全ての化合物、例えば、式Ｉ〜ＸＸＩＩ、および第２の実施形態で使われる全ての化合物は、当技術分野で既知の技術を使って調製できる。例えば、ＣＣ−Ｉ（式ＩＶ）は、下記の反応（スキーム１）を使って調製できる：
スキーム１
【化３０】
2015505530.tif 000045
【０１２１】
重要な中間体Ｎ−エチルチオバルビツール酸（４）は、チオ尿素とＮ−エチルカルボジイミド（２）との反応から出発して、Ｎ−エチルチオ尿素（３）を得て（４５、４６）、続けて、ナトリウムエトキシドの存在下で（３）をエタノール中のジエチルマロナートで処理して合成できる。触媒量のピリジンの存在下での（４）のエタノール中のｔｒａｎｓ−３−（２−フリル）−アクロレインとの反応により、最終的に所望の化合物ＣＣ−Ｉ（式ＩＶ）が得られる。
【０１２２】
本発明の他の化合物（式Ｘ、ＸＩ、ＸＶＩ、ＸＶＩＩ、およびＸＶＩＩＩ）は、類似の方法に従い、Ｎ−エテニル／アリル置換チオバルビツール酸類似体を適宜処理することにより、合成できる。前駆物質Ｎ−アルキルチオバルビツール酸（１０）は、チオ尿素、およびスキーム２に示す概略図のようにして合成された適宜置換カルボジイミドから出発して合成できる。置換カルボジイミド（５〜９）のジエチルマロナートの反応により、Ｎ−アルキル／アリルチオバルビツール酸が得られ、これと、ｔｒａｎｓ−３−（２−フリル）−アクロレインとの反応により、ＣＣ−Ｉ誘導体が生成される。
スキーム２
【化３１】
2015505530.tif 000046
【０１２３】
他のＣＣ−Ｉ誘導体（式Ｖ、ＩＸ、ＸＩＸ、ＸＸ、ＸＸＩ、およびＸＸＩＩ）は、ＣＣ−Ｉに適用されたものと類似の方法に従って、スキーム３の概略図に示すように、チオバルビツール酸または適宜置換チオバルビツール酸（１０）をシンナムアルデヒドで処理することにより、合成できる。
スキーム３
【化３２】
2015505530.tif 000047
【０１２４】
式ＸＩＩは、チオバルビツール酸をアルデヒド（１１）と、触媒量のピリジンを含むエタノール中、約６０℃で縮合することに代より合成できる（スキーム４）。
スキーム４
【化３３】
2015505530.tif 000048
【０１２５】
式ＸＩＶおよびＸＶは、チオバルビツール酸とアリールジアゾニウム塩（１２）をスキーム５に示すようにカップリングすることにより合成できる。簡単に説明すると、エタノール中のチオバルビツール酸を、酢酸ナトリウムおよび１Ｍ水酸化ナトリウムの存在下、０〜５℃で適宜置換ジアゾニウム塩（１２）で処理することにより、式ＸＩＶおよびＸＶが得られる。
スキーム５
【化３４】
2015505530.tif 000049
【０１２６】
式ＸＩＩＩは、スキーム６に示すように、チオバルビツール酸とアセチル塩化物を縮合し、続いて、アニリンで処理することにより合成できる。
スキーム６
【化３５】
2015505530.tif 000050
【０１２７】
式ＶＩ〜ＶＩＩＩは、下記スキーム７に示すように、上述と類似の合成方法に従って、チオバルビツール酸またはＮ−アリルチオバルビツール酸を適切なアルデヒドと縮合して合成できる。
スキーム７
【化３６】
2015505530.tif 000051
【０１２８】
最終的生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製でき、それらの純度は、分析用高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定できる。精製された化合物は、それらのＮＭＲおよび質量スペクトルに基づいて特徴付けられる。さらなる精製、例えば、クロマトグラフィー、またはクロマトグラフィーとそれに続く結晶化後の最終化合物に対し、９８％を越える純度レベルが期待される。
本発明の第２の実施形態の代表的化合物の合成と調製は、以下で考察される。
【０１２９】
設備
Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  ｍｉｃｒｏｗａｖｅでマイクロ波照射を使って反応を行った。プレコートシリカプレート（Ｋｉｅｓｅｌｇｅ  ｌ６０  Ｆ２５４、ＢＤＨ）を使って順相ＴＬＣを行い、Ｕ．Ｖ．光、および／またはＫＭｎＯ４溶液により可視化した。Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  Ｒｆ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ）およびＧｒａｃｅ  Ｄａｖｉｓｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅから購入したプレパック型シリカゲルカラムを使って、フラッシュクロマトグラフィーを行った。Ｗａｔｅｒｓ  ２９９８フォトダイオードアレイおよびＷａｔｅｒｓ  ３１００質量検出器に連結されたＷａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣ（２５４５バイナリ勾配ポンプ、５１５ＨＰＬＣ補給ポンプ、２７６７サンプルマネージャー）を使って質量分析器直結分取ＨＰＬＣ分離を行った。Ｇｉｌｓｏｎ  １５５  ＵＶ／ｖｉｓ検出器に連結されたＧｉｌｓｏｎ  ＨＰＬＣ（３２１ポンプ、８１９注入モジュール、２１５液体ハンドラー／インジェクター）を使って分取ＨＰＬＣ分離を行った。両方の装置では、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム、１９ｘ１００ｍｍ、５ｕｍ粒径を使い、さらに、水中０．１％アンモニアまたは０．１％ギ酸（溶媒Ａ）および移動相としてアセトニトリル（溶媒Ｂ）を使って、ＨＰＬＣクロマトグラフ分離を行った。適用溶媒を内部標準として同時に使用して、Ｂｒｕｃｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＤＰＸ５００スペクトロメーターで１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを記録した。低解像度エレクトロスプレー（ＥＳ）質量スペクトルをＢｒｕｃｋｅｒ  ＭｉｃｒｏＴｏｆ質量分析計を使ってポジティブモードで操作して記録した。直列のダイオードアレイ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣ１１００を使ってＢｒｕｃｋｅｒ  ＭｉｃｒｏＴｏｆ質量分析計でＬＣ−ＭＳ分析およびクロマトグラフ分離を行った。使用カラムを、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅカラム（５ｘ５０ｍｍ）とし、化合物を５〜９５％アセトニトリル／水＋０．１％アンモニアの勾配で溶出した。低解像度エレクトロスプレー（ＥＳ）質量スペクトルも、Ａｇｉｌｅｎｔ  ６１３０四重極質量分析計で、ポジティブまたはネガティブモードで操作して記録した。直列ダイオードアレイ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣ１２００を使って、Ａｇｉｌｅｎｔ  ６１３０四重極質量分析計でＬＣ−ＭＳ分析およびクロマトグラフ分離を行った。使用カラムをＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅカラム（５ｘ５０ｍｍ）とし、化合物を５または２０〜９５％アセトニトリル／水＋０．１％ギ酸の勾配で溶出した。
【０１３０】
本明細書中で特に記載していない場合は、反応を最適化しなかった。溶剤および試薬は、市販品供給業者から購入し、それ以上精製をしないで使用した。
調製物および化合物は、ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  １２．０命名アプリケーションを使って命名した。
【０１３１】
シンナムアルデヒド合成
方法例Ａ：（Ｅ）−３−（ｏ−トリル）アクリルアルデヒド−ＪＡＣＳ、１３３、２０１１、６６４２−６６５６、の経路に従って合成
【化３７】
2015505530.tif 000052
【０１３２】
ステップ１
氷浴中で冷却されたＮａＨ（ミネラルオイル中６０％分散液、１．４ｇ、３６．７５ｍｍｏｌ）の１００ｍｌの無水ＴＨＦ中懸濁液に、エチル２−（ジエトキシホスホリル）アセタート（９．８８ｇ、４４．１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液が透明になった後、２−メチルベンズアルデヒド（１．７６ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（５０ｍｌ）中溶液として加え、反応物を室温で２時間攪拌した。水の添加により反応停止し、有機分を酢酸エチル（２ｘ１５０ｍｌ）で抽出し、乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過後、ＳｉＯ２に吸収させた。フラッシュクロマトグラフィー（勾配：ヘキサン中０〜１０％ＥｔＯＡｃ）による精製で標記化合物を得た。ＲＴ＝２．６１分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）＝２０７．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３３】
ステップ２
−７８℃に冷却した（Ｅ）−エチル３−（ｏ−トリル）アクリラート（３．８ｇ、２０ｍｍｏｌ）の１５０ｍｌの無水ＤＣＭ中溶液に、ヘプタン（１Ｍ）中ＤＩＢＡＬ−Ｈ溶液（６０ｍｌ、６０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を−７８℃で３０分間攪拌後、ＭｅＯＨの添加により反応を停止させ、室温まで温めた。その後、ナトリウムカリウム酒石酸塩の飽和水溶液（１５０ｍｌ）を反応混合物に加え、有機分を酢酸エチル（２ｘ１５０ｍｌ）で抽出し、乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過後、ＳｉＯ２に吸収させた。フラッシュクロマトグラフィー（勾配：ヘキサン中０〜３０％ＥｔＯＡｃ）による精製により標記化合物を得た。
【０１３４】
ステップ３
活性化ＭｎＯ２（４．９ｇ、５７．４ｍｍｏｌ）を（Ｅ）−３−（ｏ−トリル）プロパ−２−エン−１−オール（１．７ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）の溶液に加え、反応混合物を室温で１８時間攪拌した。反応混合物をセライトを通し濾過し、減圧濃縮して標記化合物を得た。ＲＴ＝２．４２分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）＝１４７．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３５】
方法例Ｂ：（Ｅ）−３−（３−クロロフェニル）アクリルアルデヒド−ＪＯＣ、２０１１、７６、８９８６−８９９８、から採用した方法。
【化３８】
2015505530.tif 000053
Ｐｄ（ＯＡｃ２）（２２．４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびネオクプロイン（ｄｍｐｈｅｎ）（２５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（５ｍｌ）中で混合し、３０分間攪拌して、完全な溶液を得た。別のフラスコ中で、アクロレイン（３１５μｌ、５ｍｍｏｌ）、ベンゾキノン（５４０ｍｇ、５ｍｍｏｌ）および３−Ｃ１フェニルボロン酸（１．５６ｇ、１０ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１５ｍｌ）中で混合した。触媒／リガンド混合物をこの第２のフラスコに加え、反応物を室温で一晩攪拌した。反応混合物をＳｉＯ２に吸収させ、２５ｇ  ＳｉＯ２カートリッジ上で精製し、ヘキサン中１０〜５０％Ｅｔ２Ｏで溶出した。生成物をオレンジ色のオイルとして単離し、これを静置により固化させた。
【０１３６】
方法例Ｃ：（Ｅ）−２−（３−オキソプロパ−ｌ−エン−ｌ−イル）ベンゾニトリルの合成
【化３９】
2015505530.tif 000054
２−ブロモベンゾニトリル（５００ｍｇ、２．７５ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（５ｍｌ）中溶液に、３、３−ジエトキシプロパ−１−エン（１．０７ｇ、８．２４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５ｍｌ）およびハーマン触媒（５１．６ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を９０℃で１８時間加熱した。冷却時、混合物を１Ｎ  ＨＣ１を使って酸性化し、有機分を酢酸エチル（１５ｍｌ）で抽出した。有機分をブライン（２０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過後ＳｉＯ２に吸収させた。フラッシュクロマトグラフィー（勾配：ヘキサン中０〜２０％ＥｔＯＡｃ）による精製後、標記化合物を得た。ＲＴ＝４．４分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）＝１５８．０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３７】
方法例Ｄ：（Ｅ）−３−（４−フルオロフェニル）アクリルアルデヒド−Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、Ｖｏｌ．５、Ｎｏ．５、２００３、から採用した方法。
【化４０】
2015505530.tif 000055
１−ブロモ−４−フルオロベンゼン（３．０ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１１５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムアセタート（１２．４ｇ、３４、２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２、４３ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）、塩化カリウム（１．２７ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）およびアクロレインジエチルアセタール（６．６８ｇ、５１．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６８．４ｍｌ）に加えた。反応物をアルゴン雰囲気下、９０℃で２８時間加熱した。反応物を室温まで冷却した後、２Ｎ  ＨＣｌ（ａｑ）を加えてｐＨを１に調節した。混合物を室温で２０分間攪拌後、ジエチルエーテル（Ｘ３）中で抽出した。合わせた有機分を水（Ｘ２）で洗浄し、続けて、ブライン（Ｘ２）で洗浄した。有機分を硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下除去した。粗製物をシリカカラムクロマトグラフィー（ヘキサン＞２０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製し、溶媒を留去後、極淡黄色オイルとして標記化合物を得た。オイルを静置により固化させた（１．８２ｇ、７１％）。
【０１３８】
ｌ−エチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオンの合成
【化４１】
2015505530.tif 000056
エチル尿素（５ｇ、５７ｍｍｏｌ）およびマロン酸（６．２２ｇ、６０ｍｍｏｌ）をＡｃＯＨ（１２ｍｌ）中で混合し、８０℃に加熱した。次に、無水酢酸（１２ｍｌ）を２時間かけて加えた。反応混合物を９０℃で一晩加熱した。反応混合物を冷却し、減圧下留去した。残渣をＥｔＯＨでトリチュレートし、得られた固形物を濾別後ＥｔＯＨでよく洗浄し、乾燥して、標記化合物を淡黄色固体として得た（３．５ｇ、４０％）。
【０１３９】
１−エチル−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）ピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオンの合成−国際公開第ＷＯ２００７１５００１１Ａ２号から採用した方法。
【化４２】
2015505530.tif 000057
テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−アミン（５１６μｌ、５ｍｍｏｌ）をＣＨＣｌ３中で混合し、エチルイソシアナート（３９５μｌ、５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２時間攪拌した。マロニルジクロリド（４９１μｌ、５．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２時間加熱した。反応混合物を冷却し、１Ｎ  ＨＣ１で洗浄後、疎水性フリットを通過させ、ＳｉＯ２に吸収させた。その後、粗製物を４０ｇＳｉＯ２カートリッジで精製し、ヘキサン中２０〜１００％ＥｔＯＡｃで溶出した。これにより、標記化合物を固化した無色ガムとして得た（８２８ｍｇ、６９％）。
【０１４０】
クネーフェナーゲル法Ａ：（Ｅ／Ｚ）−ｌ−エチル−５−（（Ｅ）−３−（フラン−２−イル）アリリデン）ピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン
【化４３】
2015505530.tif 000058
１−エチルバルビツール酸（１ｇ、６．４ｍｍｏｌ）、３−（２−フリル）アクロレイン（０．７８ｇ、６．４ｍｍｏｌ）、ピペリジン（６３μ１、０．６４ｍｍｏｌ）および安息香酸（７８ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）をトルエン（７０ｍｌ）中で混合し、ディーンスタークヘッドを使って１２時間加熱還流した。反応混合物を冷却し、トルエンを留去した。残渣をブラインとＥｔＯＡｃの間で分配し、３回抽出した。合わせた有機分をブラインで洗浄後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン中２０〜５０％ＥｔＯＡｃで溶出した。分取ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ、０．１％ＨＣＯ２Ｈ修飾剤）でさらに精製し、生成物をオレンジ色の固体として得た（１１５ｍｇ、７％）。Ｍ．Ｓ．（ＥＳＩ）（ｍ／ｚ）：２６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４１】
クネーフェナーゲル法Ｂ：Ｅ−５−（３−フラン−２−イル）アリリデン）ピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン
【化４４】
2015505530.tif 000059
バルビツール酸（５５０ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ）、３−（２−フリル）アクロレイン（５２４ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ）およびピリジン（４滴）をＥｔＯＨ（１０ｍｌ）中で混合し、９０℃で２０分間、マイクロウエーブ処理を行った。得られた明るいオレンジ色の固形物を５０：５０Ｈ２Ｏ／ＥｔＯＨ混合物で希釈し、濾別後、ＥｔＯＨとＥｔ２Ｏでよく洗浄し、乾燥した（８５０ｍｇ、８５％）。Ｍ．Ｓ．（ＥＳＩ）（ｍ／ｚ）：２３３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４２】
本発明のさらなる化合物は、クネーフェナーゲル法Ｂを使い、バルビツール酸またはチオバルビツール酸を置換シンナムアルデヒドまたはアルデヒド（購入または方法Ａ、ＢまたはＣにより合成）と反応させて作られる。
【０１４３】
投与
第１および第２の実施形態の化合物は、薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、またはプロドラッグの形で投与できる。化合物は、腫瘍サイズを縮小し、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する、または全体として癌を治療するために使用できる。治療される腫瘍には、限定されないが、細胞腫（例えば、皮膚、肺、結腸、膵臓、卵巣癌、上皮癌、扁平上皮癌、基底細胞癌）、黒色腫、肉腫（例えば、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫、血管肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫）、白血病（例えば、リンパ芽球性白血病、骨髄性白血病、Ｔ細胞白血病、有毛細胞白血病）、リンパ腫、ならびに骨髄腫（例えば、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ球増殖性リンパ腫）、中枢神経系癌（例えば、神経膠腫、髄膜腫、下垂体腺腫、庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性神経外胚葉性腫瘍）、神経腫瘍（例えば、神経芽細胞腫、悪性末梢神経鞘腫、神経線維腫、シュワン細胞腫）および転移性癌を含めることができる。
【０１４４】
化合物は、有効量を達成するために種々の投与計画および投与量で投与できる。化合物は、毎週投与されるのが好ましいが、必要に応じ、さらに多い頻度で、またはさらに少ない頻度で投与してもよい。選択される投与量は、選択化合物の活性および排出速度、投与経路、投与タイミング、治療持続期間、選択化合物と組み合わせて使用される他の薬剤または材料、治療される対象の年齢、性別、体重、状態、総体的な健康および病歴ならびに医学分野で既知の類似の因子、などの因子に依存する。化合物は、医薬組成物として投与されるのが好ましい。
【０１４５】
当技術分野で通常の技術を持つ医師または獣医師なら、投与用の治療有効量の医薬組成物を容易に決定し、処方できる。通常、有効量の本発明の化合物は、約０．０００１〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは、約１．０〜１００ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約１０〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲である。週１回の投与が好ましいが、化合物は、毎週よりさらに多い頻度で、またはさらに少ない頻度で、例えば、毎日、隔日、隔週、隔月、などの頻度で投与してもよい。
【０１４６】
本発明の化合物の医薬組成物は、意図された投与経路、例えば、経口、直腸、非経口、静脈内、鞘内、鼻腔内またはその他の投与モードに適合するように処方される。医薬製剤は、通常、活性物質を通常の薬学的に許容可能な希釈剤またはキャリアと混合することにより調製される。キャリアおよび希釈剤は、製剤の成分と適合性があり、治療される対象に対し傷害性でない場合は、薬学的に許容可能である。本明細書で使用される「キャリア」には、いずれかの、および全ての溶剤、分散媒、ビークル、コーティング剤、希釈剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張性および吸収遅延剤、緩衝剤、キャリア溶液、懸濁液、コロイド、などが含まれる。医薬品化合物に対して、このような媒体および薬剤の使用は、当技術分野でよく知られている。また、補助的有効成分も、組成物に組み込むことができる。キャリアに例には、糖類、例えば、ラクトース、グルコースおよびショ糖；デンプン類、例えば、コーンおよびバレイショデンプン；セルロースおよびその誘導体、粉末トラガント；モルト；ゼラチン；滑石；賦形剤、例えば、ココアバターおよび坐剤ろう；オイル、例えば、ピーナッツ、綿実、ベニバナ、ゴマ、オリーブ、コーン、および大豆油；グリコール類；ポリオール類、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール；エステル、例えば、エチルオレアートおよびエチルラウラート；寒天；緩衝剤；アルギン酸；発熱性物質不含水；等張性食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸塩緩衝液；および医薬製剤に用いられるその他の適合する非毒性の物質、が含まれる。また、医薬製剤は、追加の成分、例えば、安定剤、湿潤剤、乳化剤、潤滑剤、着色料、甘味料および調味料、芳香剤、防腐剤、潤滑剤、放出剤、および抗酸化剤を含んでもよい。
【０１４７】
組成物は、投与の容易さ、および投与量の一貫性を得るために、単位剤形で調製されてもよい。「単位剤形」は、治療される対象に対する投与単位量として最適な物理的に別々の単位を意味し、各単位は、必要とされる医薬品キャリアと連携して所望の治療効果を生み出すように計算された所定の量の活性化合物を含む。組成物は、当技術分野で既知の方法、例えば、造粒、圧縮、マイクロカプセル化、スプレーコーティング、などの方法で調製できる。製剤は、通常の方法、例えば、錠剤、カプセル剤、粒剤、粉剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、および注射可能溶液を調製する方法を使って、調製されてもよい。
【０１４８】
例えば、水溶液での非経口の投与に対しては、溶液は、必要に応じ、適切に緩衝されるべきであり、液体希釈剤は、最初に十分な食塩水またはグルコースで等張性になるようにされるべきである。これらの特定の水溶液は、特に、皮下、筋肉内、および腫瘍内投与に適する。希釈剤には、水、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶剤；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば、アセタート、シトラートまたはホスファートおよび浸透圧調節剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース、が含まれる。その溶液のｐＨは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムで調節できる。非経口の製剤は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、ディスポーザブル注射器または複数用量バイアル中に封入できる。ヒト投与に対しては、製剤は、ＦＤＡ生物薬剤部基準（ＦＤＡ  Ｏｆｆｉｃｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｅｓ  ｓｔａｎｄａｒｄｓ）により要求される無菌性、発熱性、一般安全性および純度基準に適合する必要がある。
【０１４９】
注射可能な用途に適する医薬組成物は、無菌の注射可能溶液または分散液の即時的調製用の無菌の水溶液（水溶性の場合は）または分散液、および無菌粉末を含む。静脈内投与に対しては、適するキャリアには、生理的食塩水、静菌性水、クレモホールＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）または燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。いずれの場合でも、組成物は、無菌でなければならず、注射が容易にできる程度の流動性がなければならない。組成物は、製造および貯蔵条件下で安定であり、細菌や真菌などの微生物の汚染作用に対し保護されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール、など）、およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であってよい。適切な流動度は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合は必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、維持できる。微生物の作用の予防は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール、などにより実現できる。多くの場合、組成物中に等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、を含むのが好ましいであろう。持続的吸収用の注射可能組成物は、組成物中に吸収を遅らせる薬剤、例えば、アルミニウムモノステアリン酸塩およびゼラチンを含むことにより、実現することができる。
【０１５０】
無菌の注射可能溶液は、必要に応じ、上で列挙された成分の１種または組み合わせを含む適切な溶媒中の必要な量の活性化合物（例えば、本発明の態様による化合物）を組み込み、続けて、濾過滅菌を行うことにより調製できる。通常、分散液は、活性化合物を基本的な分散媒および上で列挙されたものの内の必要な他の成分を含む無菌のビークル中に組み込むことにより調製される。無菌の注射可能溶液調製用の無菌の粉末の場合には、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥で、これにより、有効成分に、前もって除菌濾過された溶液からのいずれかの追加の所望の成分を加えた粉末が得られる。
【０１５１】
経口組成物は、通常、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。それらは、ゼラチンカプセル剤中に封入されるか、または錠剤に圧縮成形できる。経口治療用投与のために、活性化合物は、賦形剤と共に組み込まれ、錠剤、トローチ、またはカプセル剤の形で使用できる。また、経口組成物は、うがい薬としての使用のために液体キャリアを使って調製でき、この場合、液体キャリア中の化合物は、経口的に適用され、口の中でごろごろさせて、吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合する結合剤、および／またはアジュバント材料は、組成物に一部として含めることができる。錠剤、ピル、カプセル剤、トローチ、などは、類似の性質の次の成分、または化合物のいずれかを含んでもよい：バインダー、例えば、結晶セルロース、ガムトラガントまたはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプンまたはラクトース、崩壊剤、例えば、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、またはコーンデンプン；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ（登録商標）；滑剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素；甘味料、例えば、ショ糖またはサッカリン；または香味料、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ調味料。
【０１５２】
吸入による投与に対しては、化合物は、適切な噴霧剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含む圧力容器もしくはディスペンサー、または噴霧器からのエアロゾル噴霧の形で送達される。
【０１５３】
また、全身投与は、経粘膜的または経皮手段により可能である。経粘膜的または経皮投与では、製剤中に透過されるバリアに適する浸透剤が使用される。このような浸透剤は、通常、当技術分野で既知であり、例えば、経粘膜的投与には、デタージェント、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜的投与は、点鼻薬または坐剤の使用により実現できる。経皮投与では、活性化合物は、当技術分野で通常知られている、軟膏、膏薬、ゲル、またはクリーム剤として処方される。
【０１５４】
また、化合物は、直腸送達のための坐剤（例えば、通常の坐剤ベース、例えば、ココアバターやその他のグリセリドを使って）または停留かん腸の形で調製できる。
【０１５５】
また、化合物は、活性化合物の身体からの急速除去を防ぐキャリアと併せて、インプラントおよびマイクロカプセル化デリバリーシステムを含む徐放製剤、などとして調製できる。エチレン酢酸ビニール、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸、などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用できる。
【０１５６】
化合物の毒性および治療有効性、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％の致死用量）およびＥＤ５０（集団の５０％で治療的に有効な用量）は、細胞培養または実験動物を使った標準的製薬手順により決定できる。毒性と治療効果の間の用量比は治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０として表される。広い範囲の治療指数を示す化合物が好ましい。毒性副作用を示す化合物を使用可能であるが、非感染細胞に対する起こりうる損傷を最小限にするために、このような化合物に対し、罹患した組織部位を特異的に標的にさせるデリバリーシステムを設計し、それにより、副作用を減らす配慮が必要である。
【０１５７】
本明細書記載の治療処理を、追加の治療薬と組み合わせて使って、さらに効果的に癌を治療することができる。追加の治療薬には、通常の抗癌治療剤が含まれる。抗癌剤には、限定されないが、癌／腫瘍細胞を標的とする放射線治療、化学療法剤、遺伝子治療剤、ホルモン療法剤または免疫療法剤、を含めることができる。
【０１５８】
下記の実施例により本発明の態様がさらに説明される。当業者なら、本明細書記載の特定の態様および方法に対し多くの等価物に気付くと思われるから、これらの実施例は、限定するものと解釈されるべきではない。実施例で使われる動物モデルは、当技術分野で承認された動物モデルであり、これらの動物モデルでの有効性の実証は、ヒトでの有効性を予測させるものである。
【０１５９】
実施例
細胞培養の方法
ヒト神経芽細胞腫細胞株をダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）／Ｆ１２培地中で培養した。ヒト神経膠腫細胞をアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から入手し、４ｘ１０−３Ｍ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、および１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＤＭＥＭ中で維持した。全実験を３７℃、５％ＣＯ２雰囲気の細胞培養条件下で行った。γ線照射または化学療法剤暴露の前に、成長速度の差異を説明し、実験操作のために類似の細胞密度を得るために、神経膠腫細胞を１５６〜８，０００細胞／ウエルの密度で９６ウエルプレートに播種し、一晩培養した。その後、さらに２〜６日間、細胞は、６０Ｃｏ源ＧａｍｍａＣｅｌｌ２２０（Ｎｏｒｄｉｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ、Ｏｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ）から異なる投与量のγ線照射、または化学療法剤を受けた。暴露期間の最後に、ＭＴＳ［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、分子内塩］細胞増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）またはスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイにより細胞傷害性アッセイを行った（４７、４８）。
【０１６０】
死亡した筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）患者由来のヒト星状細胞を培養した（統一死体提供法（１９８７））。大脳を他の脳領域および髄膜から分離し、カルシウムおよびマグネシウム不含ハンクス緩衝液（ＣＭＦ−ＨＢＳＳ）中に置いた。大脳をさいの目に切り、トリプシン／ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）でインキュベートし、ＤＮアーゼでトリチュレートした。組織を１３５μｍのＮｉｔｅｘ篩（ＳＥＦＡＲ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｄｅｐｅｗ、ＮＹ）を通し、ＣＭＦ−ＨＢＳＳで２回洗浄した後、培地（ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ、７．５ｍＭグルコース、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１，０００Ｕ／ｍＬペニシリン、１ｎｇ／ｍＬストレプトマイシン、２．５μｇ／ｍＬアンホテリシンＢ）中に再懸濁し、遠心分離して、２セットの３５μｍのＮｉｔｅｘ篩を通した。解離細胞をポリ−Ｄ−リシンプレコート１７５ｃｍフラスコ中に蒔いて培養した。混合神経膠培養液を１４日間成長させ、その後、振盪して、廃棄されるミクログリア細胞および乏突起膠細胞を遊離させた。純粋な星状細胞をフラスコの底に付着させた。
【０１６１】
ウシ網膜内皮細胞（ＢＲＥＣ）を分離し、以前に報告した方法に従って処理した（４９、５０）。簡単に説明すると、ＢＲＥＣを、１０％ＦＢＳ、１０ｎｇ／ｍＬ  ＥＧＦ、０．２ｍｇ／ｍＬ  ＥＮＤＯ  ＧＲＯ（ＶＥＣ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．）、０．０９ｍｇ／ｍｌヘパリン、および抗生物質／抗真菌剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したＭＣＤＢ−１３１培地（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ）中で成長させた。
【０１６２】
実施例１：テモダール（登録商標）抵抗性細胞株の選択
テモダール（登録商標）抵抗性細胞に対して細胞傷害性を有する化合物のスクリーニングを行った。ＨＦＥ（血色素症遺伝子）多型を発現する樹立神経膠腫細胞株に対し、最初に、テモダール（登録商標）および放射線処理による細胞傷害性を測定した。細胞を、１０００μＭまでの一連の用量のテモダール（登録商標）、または一連の線量のγ線照射（５Ｇｙ、７５Ｇｙ）に３〜６日間暴露した（図１）。図１Ａは、ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞株が放射線に対し最も抵抗性であったことを示す。図ＩＢに示されるように、ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞は、Ｔ９８ＧおよびＵ−３４３ＭＧ（これらは、テモダール（登録商標）抵抗性のモデルとして現在使われている神経膠腫細胞株である（５１、５２））よりもテモダール（登録商標）毒性に対しさらに抵抗性であることが示された。
【０１６３】
実施例２：ケモタイプ化合物Ｉ（ＣＣ−Ｉ）の特定
テモダール（登録商標）抵抗性細胞株を使って、テモダール（登録商標）抵抗性細胞の成長を減速させる、またはこの細胞を死滅させる能力を有する化合物のスクリーニングを行った。Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  Ｓｔａｔｅ  Ｈｅｒｓｈｅｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＣｅｎｔｅｒのＤｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃｏｒｅで、比色定量細胞傷害性アッセイのスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを使って、テモダール（登録商標）抵抗性ヒト神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙおよびヒト神経膠腫ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞株に対し、１５，０００を越える種々の化合物の有効性を試験した（５３）。図２Ａに示すリード化合物のケモタイプ化合物−Ｉ（ＣＣ−Ｉ）がこのスクリーニングから特定された。
ＣＣ−Ｉは、テモダール（登録商標）抵抗性細胞に対し毒性が高いチオバルビツール酸類似体である。ＣＣ−Ｉの構造は、図２Ａに示されている。図２Ｂは、ＣＣ−Ｉの毒作用は、テモダール（登録商標）抵抗性およびテモダール（登録商標）感受性神経膠腫細胞の両方で、用量依存性であったことを示す。ＣＣ−Ｉは、テモダール（登録商標）抵抗性ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１神経膠腫細胞株に対し細胞傷害性（ＬＤ５０：１．２μｇ／ｍｌ（４．３μＭ））であったが、ＳＷ−１０８８星状細胞腫細胞に対してはさらに強い細胞傷害性（ＬＤ５０：約０．５μｇ／ｍｌ（１．７μＭ））を示した。しかし、図２Ｃに示すように、ＣＣ−Ｉは、テモダール（登録商標）抵抗性神経膠腫細胞に対し毒性のある濃度で、正常なヒト星状細胞に対しては毒性ではなかった。さらに、ＣＣ−Ｉは、血液脳関門のモデルであるウシ網膜内皮細胞（ＢＲＥＣ）に対しても毒性ではなかった（図２Ｄ）。
【０１６４】
実施例３：ＣＣ−Ｉは、インビボモデルの神経膠腫細胞腫瘍を抑制する。
無胸腺ヌードマウス皮下腫瘍モデルを使って、ＣＣ−Ｉの有効性および毒性をインビボで試験した。１千万細胞のテモダール（登録商標）感受性（ＳＷ１０８８）またはテモダール（登録商標）抵抗性（ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１）悪性神経膠腫細胞株を１ヶ月齢の雌無胸腺ヌードマウスの側腹部に注射した。腫瘍が３２ｍｍ３のサイズに達すると（グラフの１週目）、ＣＣ−Ｉ（２５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に週１回、７週間注射した。ＣＣ−Ｉがテモダール（登録商標）抵抗性ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞腫瘍の成長を完全に抑制したので、この腫瘍の成長を示す線が図３のグラフ上で見えないほどであった。さらに、ＣＣ−Ｉを中断すると、テモダール（登録商標）抵抗性神経膠腫注射ヌードマウスで腫瘍が再発する（７週を過ぎて）（図３）。マウスの体重は、ＣＣ−Ｉにより影響を受けなかった（データは示さず）。ＣＣ−Ｉで治療したマウスで肝または腎毒性は観察されなかった（データは示さず）。
【０１６５】
実施例４：ＣＣ−Ｉは、インビボモデルの頭蓋内腫瘍成長を抑制する。
頭蓋内の同所性異種移植脳腫瘍モデル中のＣＣ−Ｉの効果を分析した。雌無胸腺のヌードマウスの尾状核被殻領域に、１０μｌの容量の１０６ヒトＵ８７−ＭＧ（テモダール（登録商標）感受性）またはＣＣＦ−ＳＴＴＧ１（テモダール（登録商標）抵抗性）神経膠腫細胞を注射した。注射１週後、Ｔ１加重ＭＲＩコントラスト（７ＴＭＲ画像処理システム）を使って腫瘍体積を測定した。その後、２５ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で週１回、７週間、ＣＣ−Ｉを腹腔内に注射した。腫瘍サイズを毎週測定した。図４Ａおよび４Ｂに示すように、ＣＣ−Ｉは、テモダール（登録商標）抵抗性およびテモダール（登録商標）感受性腫瘍の両方で腫瘍成長を抑制し、担腫瘍マウスの生存を延長した。図中の矢印は、脳腫瘍を示す。燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）のみで治療された担腫瘍マウス（非治療対照マウス）では、２７日後以降に生存しているマウスはなく、また、生存期間中央値は、２０日（カプラン・マイヤー生存グラフ）であった。図３、４Ａおよび４Ｂに示すように、ＣＣ−Ｉでの治療は、マウスの腫瘍サイズの縮小、および生存の延長の両方に有効であった。ＣＣ−Ｉを受けたマウスの体重は、影響を受けなかった（データは示さず）。肝臓および腎臓毒性（合計ビリルビン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチン、アスパルタートアミノトランスフェラーゼ（ＳＧＯＴ／ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＳＧＰＴ／ＡＬＴ）、およびアルカリフォスファターゼ）もまた、自動化学分析機（Ｒｏｃｈｅ  Ｃｏｂａｓｅ  ＭＩＲＡ）およびＴｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎで製造されたキットを使って分析した。データは、ＣＣ−Ｉ治療マウスで肝または腎毒性がないことを示している（図４Ｃ）。
【０１６６】
実施例５：ＣＣ−Ｉは、ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１星状細胞腫細胞のアポトーシスを誘導する。
ＦＩＴＣ標識Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ／ヨウ化プロピジウムアポトーシスアッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使って、ＣＣ−Ｉが星状細胞腫細胞株のアポトーシスを誘導するか否かを測定した。図５に示すように、ＣＣ−Ｉは、インビトロでＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞のアポトーシスを用量依存的に誘導した。ＣＣ−Ｉ治療によるＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞中のアポトーシス性細胞のパーセンテージは、１０．９±０．１６％（５μｇ／ｍｌ（１８．１μＭ））〜４８．７±０．３３％（１０μｇ／ｍｌ（３６．２μＭ））である。比較してみると、陽性対照のアクチノマイシンＤは、０．０５μｇ／ｍｌ（３９．８ｎＭ）で細胞中の４７．８±０．０４％のアポトーシスを誘導した。
【０１６７】
実施例６：ＣＣ−Ｉは、トポイソメラーゼＩＩαを特異的に阻害する。
ＣＣ−ＩがヒトトポイソメラーゼＩＩα阻害剤であるか否かを評価するために、われわれは、ｋＤＮＡ脱連環アッセイを使ってＣＣ−ＩのトポイソメラーゼＩＩα活性を阻害する能力を測定した。図６Ａに示すように、６μｇ／ｍｌを越える濃度で、ＣＣ−Ｉは、トポイソメラーゼＩＩα触媒ｋＤＮＡ脱連環を完全に阻害した。分子モデリングにより、ＣＣ−ＩのトポイソメラーゼＩＩαに対する阻害効果が最適化できることが実証された。図６Ｂは、結合を強化するために追加の基を収容できるＣＣ−Ｉの両側の空隙を示す。図６Ｂに示すように、結合部位の残基の極性および疎水性に基づいて、結合部位の残った空隙に別の基を選択的に付加することにより、さらに多くの効果的な阻害剤が開発可能である。
【０１６８】
ＣＣ−ＩがトポイソメラーゼＩまたはＩＩαの特異的阻害剤か否かを判定するために、トポイソメラーゼＩおよびＩＩα活性を阻害するＣＣ−Ｉの能力をスーパーコイルＤＮＡ弛緩アッセイを使って試験した。図７Ａに示す結果は、ＣＣ−Ｉが、トポイソメラーゼＩ媒介スーパーコイルｐＢＲ３２２ＤＮＡの弛緩を阻害しなかったことを示す。対照的に、ＣＣ−Ｉは、トポイソメラーゼＩＩαに対する強力な阻害効果を示した（図７Ｂ）。トポイソメラーゼＩＩα活性に対する最も効果的なＣＣ−Ｉの濃度は、３μｇ／ｍｌであったが（図７Ｂ）、一方、５０μｇ／ｍｌの高い濃度でも、トポイソメラーゼＩ活性に対しては効果を示さず（図７Ａ）、ＣＣ−ＩがトポイソメラーゼＩＩα特異的阻害剤であることを示している。
【０１６９】
実施例７：ＣＣ−Ｉの神経芽細胞腫に対するインビボ効果。
神経芽細胞腫に対するＣＣ−Ｉの効果を判定するために、ＳＣＩＤマウスのインビボ皮下腫瘍モデルを試験した。テモダール（登録商標）抵抗性および放射線抵抗性神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞発現Ｃ２８２ＹＨＦＥ変異体を、１ヶ月齢の雌ＳＣＩＤマウスの側腹部領域に皮下注射した。腫瘍が３２ｍｍ３の容量に達した後、ＣＣ−Ｉ（２５ｍｇ／ｋｇ）を、腹腔内に、週１回、７週間注射した。図８Ａに示すように、ＣＣ−Ｉは、腫瘍成長を完全に抑制した。治療マウスで肝または腎毒性は観察されず（図８、ＢおよびＣ）、また、体重は、ＣＣ−Ｉの影響を受けなかった（データは示さず）。
【０１７０】
実施例８：ＣＣ−Ｉの神経線維腫細胞に対するインビトロ効果。
樹立神経線維腫細胞株の細胞を２０００〜４０００細胞／ウエルの密度で９６ウエルプレートに標準的細胞培養条件下で播種し（５４）、その後、２日間、ＣＣ−Ｉに暴露した。図９に示すように、ＣＣ−Ｉは、試験した全神経線維腫株に対し細胞傷害性であった。ＳＴ８８およびＮＦ２１５神経線維腫細胞のＬＤ５０は、それぞれ、２．１μｇ／ｍｌおよび１．４μｇ／ｍｌである。
【０１７１】
実施例９：ＣＣ−Ｉは、卵巣癌細胞に対しインビトロで細胞傷害性である。
ヒト卵巣の腺癌ＳＫＯＶ−３細胞株をアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から入手し、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、および１０％ＦＢＳを含むマッコイ５Ａ培地中で維持した。ＣＣ−Ｉの卵巣癌細胞に対する効果を評価するために、細胞を５，０００〜１０，０００細胞／ウエルの密度で、９６ウエルプレートを使って一晩培養した。その後、細胞を種々の濃度のＣＣ−Ｉ（式ＩＶ）または式Ｖでさらに３〜６日間治療した後、ＭＴＳまたはＳＲＢアッセイを使って細胞傷害性アッセイを行った。また、統計的ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使って、毒性の一般指標として、化合物のＩＣ５０またはＬＤ５０（５０％抑制または致死用量）を測定した。ＩＣ５０データは、ＣＣ−Ｉが、神経膠腫に対してのみでなく、他のタイプの癌、例えば、神経線維腫、卵巣癌、および神経芽細胞腫に対しても、細胞傷害性であることを示している。表１に示すように、例えば、ＣＣ−Ｉは、卵巣（ＯＶＣＡＲ−３、ＩＣ５０＝３．５／４．３μＭ）癌および乳癌細胞株に対して毒性であった。
【０１７２】
実施例１０：ＣＣ−Ｉおよびそのケモタイプ部分化合物は、ゲルダナマイシンおよびテモダール（登録商標）に対し抵抗性のＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞、ならびにテモダール（登録商標）感受性Ｕ８７−ＭＧ細胞株に対し細胞傷害性である。
ゲルダナマイシンは、固形腫瘍および非ホジキンリンパ腫の治療用に現在試験されている抗生物質である。ゲルダナマイシンは、Ｈｓｐ９０に結合し、細胞増殖、細胞生存およびアポトーシスに影響を与える。我々は、以前、テモダール（登録商標）またはゲルダナマイシン化合物に抵抗性の神経芽細胞腫細胞株（Ｃ２８２Ｙ−ＳＨ−ＳＨ５Ｙ）および神経膠腫細胞株（ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１）を示した（４８）。しかし、表１に示されるように、ＣＣ−Ｉは、これらの神経芽細胞腫細胞に対し、少ない用量で細胞傷害性である。
【０１７３】
また、ＣＣ−Ｉのケモタイプ部分化合物を、テモダール（登録商標）抵抗性ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１およびテモダール（登録商標）感受性Ｕ８７−ＭＧ細胞株を使って試験した。神経膠腫細胞培養および治療は、上述の通り。図１０に示すように、試験した化合物の中で、式Ｖ〜ＶＩＩＩは、テモダール（登録商標）抵抗性ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞株に対し細胞傷害性であった。式Ｖは、最大の毒性を示した。式Ｖの毒作用は、テモダール（登録商標）抵抗性ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１およびテモダール（登録商標）感受性Ｕ８７−ＭＧ神経膠腫細胞に対し用量依存的であった。式Ｖは、テモダール（登録商標）抵抗性神経膠腫ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞株に対し、約０．８μｇ／ｍｌ（３．０μＭ）のＬＤ５０の細胞傷害性であり、ＳＷ−１０８８星状細胞腫細胞に対してはさらに強い細胞傷害性（ＬＤ５０：０．３μｇ／ｍｌまたは１．２μＭ）であった。他の細胞株に対するＩＣ５０は、表１に示す。
【０１７４】
追加のＣＣ−Ｉのケモタイプ部分化合物［２−チオキソジヒドロピリミジン−４，６−ジオン］をテモダール（登録商標）抵抗性ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１およびテモダール（登録商標）感受性Ｕ８７−ＭＧ細胞株の両方に対し試験した。図１１に示すように、式ＩＸ、Ｘ、およびＸＩは、両細胞株に対するＣＣ−Ｉと類似の、またはＣＣ−Ｉよりもさらに強い効果を示した。さらに、図１２に示すように、式ＸＩＩ〜ＸＶは、ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞株に対し、特異的細胞傷害性を示した。
【０１７５】
実施例１１：ＣＣ−Ｉおよび他のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤のヒト神経膠腫ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１およびＵ８７−ＭＧ細胞株に対する細胞傷害性の比較。
ヒト神経膠腫ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１細胞株を、５，０００細胞／ウエルの密度で、標準的ＤＭＥＭ細胞培養条件下、９６ウエルプレートを使って播種し、その後、種々の濃度のＣＣ−Ｉ、メルバロン、またはＩＣＲＦ−１９３に５日間、暴露した。メルバロンおよびＩＣＲＦ−１９３は、両方共トポイソメラーゼＩＩ阻害剤である（５５、５６）。図１２に示すように、ＣＣ−Ｉは、メルバロンまたはＩＣＲＦ−１９３よりも、ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１およびＵ８７−ＭＧ細胞株に対しより強い細胞傷害性であった。これは、ＣＣ−ＩがメルバロンまたはＩＣＲＦ−１９３よりも優れた坑腫瘍化合物であることを示唆している。
【０１７６】
実施例１２：Ａ５４９皮下肺癌マウスモデルに対するＣＣ−Ｉの坑腫瘍効果。
肺癌に対するＣＣ−Ｉの坑腫瘍効果を測定するために、雌無胸腺ヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ、１６週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の皮下に、７ｘ１０６細胞／マウスの濃度のＡ５４９肺癌細胞株を移植した。腫瘍が約１００ｍｍ３のサイズに達すると（注射後約７〜１０日）、１２．５％エタノール中２００μＬの容量の２５ｍｇ／ｋｇ体重の濃度のＣＣ−Ｉを週１回、７週間、腹腔内に注射した。ストック濃度のＣＣ−Ｉ（１００％ＤＭＳＯ中５０ｍｇ／ｍｌ）をリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中１２．５％エタノールを使って２０倍に希釈した。対照マウス群に、ＰＢＳ中５％ＤＭＳＯおよび１２．５％エタノールを同じ容量および用量計画で投与した。実験条件に対し盲検の研究者が、腫瘍サイズを毎週、７週間ノギスを使って測定した。腫瘍体積（Ｖ）を式Ｖ＝ａ２ｘｂ／２に従い計算した。式中、ａおよびｂは、それぞれ、腫瘍病巣の短径および長径である。マウスの腫瘍サイズ、健康、および生存を毎日モニターし、腫瘍サイズを、毎週測定した。化合物の毒性をモニターするために、動物を毎週秤量した。図１４は、対照群と比較して、ＣＣ−Ｉ治療マウスの腫瘍サイズを示す。
【０１７７】
実施例１３：実施形態２−Ｕ８７−ＭＧ細胞に対する試験および比較化合物の抗腫瘍効果。
細胞
Ｕ８７−ＭＧ細胞をＡＴＣＣ、ＬＧＣ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ（＃ＨＴＢ−１４）から入手した。細胞をマイコプラズマの検査を行い（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ）、ＢｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒアルファＭＥＭ（Ｌｏｎｚａ＃ＢＥ０２−００２Ｆ）＋１０％透析ＵＳ  ＦＢＳ血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃２６４００−０４４）、１％Ｐｅｎｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ＃１５１４０−１２２）中で維持した。
【０１７８】
アッセイ
試験化合物をヒットプレートのカラム１に移した（９６ウエルＰＰＶ  Ｇｒｅｉｎｅｒ＃６５１２０１）。２０μｌのＤＭＳＯをカラム２〜１１に加えた。最高濃度は、１０ｍＭであった。
Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｊａｎｕｓ（２０μｌの透明Ｒｏｂｏｐａｃｋディスポーザブルチップ＃６０００６７７使用）を使って１０点の系列希釈の３本の希釈曲線を作成した。
【０１７９】
２μｌのそれぞれの化合物をＰｌａｔｅｍａｔｅ  ２ｘ２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ    Ｄａｒｔｓ＃５５０６）を使って、プリディスペンスすることにより黒色の透明底９６ウエルＣｅｌｌＢＩＮＤ  Ｃｏｒｎｉｎｇプレート（Ｆｉｓｈｅｒ＃ＤＰＳ−１８４−０３０Ｒ）に移した。
２００μｌのＵ８７−ＭＧ細胞を１０００細胞／ｍｌの密度でカラム１〜１１に加え、培地のみをＷｅｌｌｍａｔｅ（小径チュービングセット＃２０１−３０００２）を使って対照カラム１２に分注した．
【０１８０】
３７℃、５％ＣＯ２、加湿インキュベーター中での５日間（１２０時間）のインキュベーション後、０．５ｍＭ最終濃度のレサズリンナトリウム塩（Ｓｉｇｍａ  Ｒ７０１７）を添加することにより、アッセイを「停止した」。プレートをさらに４時間インキュベートした後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ、５５０ｎｍ励起（ｐｈｏｔｏ５５０、Ｂａｒｃｏｄｅ  ３１２）、５８０ｎｍ発光（Ｍ５８０、Ｂａｒｃｏｄｅ  ２３３）、Ｔｏｐ  Ｍｉｒｒｏｒ  ＢＯＤＩＰＹ（Ｄ５５５、Ｂａｒｃｏｄｅ  ４０５）からレゾルフィンの読み取りを行った。
【０１８１】
結果を下表２ｂに示す。活性スコアは、表２ａのスコア基準に基づいて割り付けた。
【表２】
2015505530.tif 000060
【表３】
2015505530.tif 000061
2015505530.tif 000062
【０１８２】
活性化合物に対する化合物ＩＤ（ＤＤＤ番号）は、すでに、上記で化合の物構造と関連付けられている。表２ｂの比較化合物（不活性）は、次の構造を有する。
【化４５】
2015505530.tif 000063
2015505530.tif 000064
【０１８３】
データは、ジエンモチーフを有するバルビツラートおよびチオバルビツラート化合物が良好な活性を有し、一方、ジエンモチーフが単一アルケン置換基で置換されると、バルビツラート系と共役であっても、そうでなくても、活性が失われることを明確に示している。
【０１８４】
実施例１４：実施形態２−他の細胞に対する試験および比較化合物の抗腫瘍効果。
このアッセイでは、実施例１３のＵ８７細胞株アッセイと同じ方法を広範囲に使って、細胞株を試験する。ＮＣＩ−Ｈ１２９９、ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１およびＨｅｐＧ２細胞をＡＴＣＣから入手した。これらの細胞株を前に記載のように試験したが、下記の点については修正を行った。ＮＣＩ−Ｈ１２９９、ＣＣＦ−ＳＴＴＧ１をＲＰＭＩ−１６４０培地＋１０％ウシ胎仔血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシン中で維持し、一方、ＨｅｐＧ２細胞は、イーグル最小必須培地＋１０％ウシ胎仔血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシン中で維持した。ＣＦＦ−ＳＴＴＧ１以外の細胞を１ｘｌＯ４／ｍｌの密度で播種し、ＣＦＦ−ＳＴＴＧ１細胞を２．５ｘ１０４／ｍｌの密度で播種した。
【０１８５】
試験化合物を市販の治療薬に相当するテモダール（登録商標）に対して比較した。結果を表３に示す。スコアは、表２ａの場合と同様である。
【表４】
2015505530.tif 000065
【０１８６】
実施例１３の表２ａと同じ活性スケールを採用することで、これらの試験の結果から、化合物が種々の異なる癌に対して活性を有することが明確に示される（ｎｄ＝試験を行わなかった）。
【０１８７】
また、一部の試験化合物は、一部のケースでは、テモダール（登録商標）の使用認可対象である神経膠腫に対しても、市販のテモダール（登録商標）よりも、高い活性であることを知ることは興味深いことである。テモダール（登録商標）は、肺、肝臓および星状細胞腫細胞に対し検出可能な活性を持たないが、一方、本発明の化合物は、非常に良好な活性を示し、多くのケースで、テモダール（登録商標）がその認可用途に対し示すよりもずっと高い活性を示す。これらの結果は、本発明の化合物の各種の癌に対する使用での有用性を実証している。
【０１８８】
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１１．  Ｐａｒｋ  ＤＫ、Ｒｙａｎ  ＣＷ、Ｄｏｌａｎ  ＭＥ、Ｖｏｇｅｌｚａｎｇ  ＮＪ、Ｓｔａｄｌｅｒ  ＷＭ．２００２．「転移性腎細胞癌の患者に対する経口テモゾロミドの第２相臨床試験（Ａ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ）」．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ５０：１６０−１６２．
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２３．  ＭｃＣｌｅｎｄｏｎ、Ａ．Ｋ．、ａｎｄ  Ｏｓｈｅｒｏｆｆ、Ｎ．２００７．「ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ、遺伝毒性、および癌（ＤＮＡ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ、ｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙ、ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ）」．Ｍｕｔａｔ  Ｒｅｓ  ６２３：８３−９７．
２４．  Ｃａｐｒａｎｉｃｏ  Ｇ、Ｚａｇｏｔｔｏ  Ｇ、Ｐａｌｕｍｂｏ  Ｍ．２００４．「ＤＮＡトポイソメラーゼ関連治療薬の開発：新たな挑戦の短期展望（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ＤＮＡ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：ａ  ｓｈｏｒｔ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｎｅｗ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ）」．Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  ４：３３５−３４５．
２５．  Ｎｏｇｕｃｈｉ  Ｍ、２００６、「３ＬＬ  Ｌｅｗｉｓ肺癌細胞中のＢｃｌ−２発現増加により内因的産生ガングリオシドＧＭ３がエトポシドおよびドキソルビシン抵抗性を与える（Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｌｙ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ  ＧＭ３  ｅｎｄｏｗｓ  ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ  ａｎｄ  ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｂｙ  ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  Ｂｃｌ−２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ３ＬＬ  Ｌｅｗｉｓ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ）」．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １６：６４１−６５０．
２６．  ＣＢＴＲＵＳ：２０１ｌ．「ＣＢＴＲＵＳ統計レポート：米国脳腫瘍統計２００４〜２００７年のＮＰＣＲおよびＳＥＥＲデータ（ＣＢＴＲＵＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ：ＮＰＣＲ  ａｎｄ  ＳＥＥＲ  ｄａｔａ  ｆｒｏｍ  ２００４−２００７、ｉｎ：Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ）」．
２７．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．「癌の現状と図２０１０．アトランタ：米国がん協会；２０１０（Ｃａｎｃｅｒ  Ｆａｃｔｓ  ＆  Ｆｉｇｕｒｅｓ  ２０１０．Ａｔｌａｎｔａ：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）」．
２８．  Ｒｉｅｓ、Ｌ．Ａ．Ｇ．、Ｍｅｌｂｅｒｔ、Ｄ．、Ｋｒａｐｃｈｏ、Ｍ．、Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ、Ｄ．Ｇ．、Ｈｏｗｌａｄｅｒ、Ｎ．、Ｈｏｍｅｒ、Ｍ．Ｊ．、Ｍａｒｉｏｔｔｏ、Ａ．、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｂ．Ａ．、Ｆｅｕｅｒ、Ｅ．Ｊ．、Ａｌｔｅｋｒｕｓｅ、Ｓ．Ｆ．、  ｅｔ  ａｌ．２００８．「ＳＥＥＲ癌統計概説（ＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）」、１９７５−２００５、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、ｈｔｔｐ：／／ｓｅｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｃｓｒ／１９７５＿２００５／：ＳＥＥＲウエブサイトに掲示の２００７年１１月のＳＥＥＲデータに基づく。
２９．  Ｓｔｕｐｐ  Ｒ、Ｍａｓｏｎ  ＷＰ、ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｎｔ  ＭＪ、ｅｔ  ａｌ．２００５．「神経膠芽細胞腫に対する放射線療法プラス併用およびアジュバントテモゾロミド（Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ｐｌｕｓ  ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ  ａｎｄ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ  ｆｏｒ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）」．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５２：９８７−９９６．
３０．  Ｆｅｒｌａｙ  Ｊ、Ａｕｔｉｅｒ  Ｐ、Ｂｏｎｉｏｌ  Ｍ、Ｈｅａｎｕｅ  Ｍ、Ｃｏｌｏｍｂｅｔ  Ｍ、Ｂｏｙｌｅ  Ｐ．２００７．「２００６年の欧州の癌発生率および死亡率の推定（Ｅｓｔｉｍａｔｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  Ｅｕｒｏｐｅ  ｉｎ  ２００６）」．Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ１８：５８１−５９２．）
３１．  Ｊｅｍａｌ  Ａ、Ｓｉｅｇｅｌ  Ｒ、Ｗａｒｄ  Ｅ、Ｈａｏ  Ｙ、Ｘｕ  Ｊ、Ｍｕｒｒａｙ  Ｔ、ＴｈｕｎＭ  Ｊ．２００８．「癌統計、２００８（Ｃａｎｃｅｒ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ、２００８）」．ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  ５８：７１−９６．
３２．  Ｈｅｒｚｏｇ  ＴＪ．２００４．「再発性卵巣癌：疾患進行の処置はどれほど重要か？（Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ：ｈｏｗ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｉｓ  ｉｔ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ  ｔｏ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ？）」Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １０：７４３９−７４４９．
３３．  Ｆｅｒｒａｎｄｉｎａ  Ｇ、Ｐｅｔｒｉｌｌｏ  Ｍ、Ｃａｒｂｏｎｅ  Ａ、Ｚａｎｎｏｎｉ  Ｇ、Ｍａｒｔｉｎｅｌｌｉ  Ｅ、ＰｒｉｓｃｏＭ、Ｐｉｇｎａｔａ  Ｓ、Ｂｒｅｄａ  Ｅ、Ｓａｖａｒｅｓｅ  Ａ、Ｓｃａｍｂｉａ  Ｇ．２００８．「進行性卵巣癌患者のトポイソメラーゼＩＩαの予後的役割（Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ−ＩＩ  ａｌｐｈａ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ）」．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ９８：１９１０−１９１５．
３４．  Ｆａｇｇａｄ  Ａ、Ｄａｒｂ−Ｅｓｆａｈａｎｉ  Ｓ、Ｗｉｒｔｚ  Ｒ、Ｓｉｎｎ  Ｂ、Ｓｅｈｏｕｌｉ  Ｊ、Ｋｏｎｓｇｅｎ  Ｄ、Ｌａｇｅ  Ｈ、Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  Ｗ、Ｎｏｓｋｅ  Ａ、Ｂｕｄｃｚｉｅｓ  Ｊ、Ｍｕｌｌｅｒ  ＢＭ、Ｂｕｃｋｅｎｄａｈｌ  ＡＣ、Ｒｏｓｋｅ  Ａ、ＥｌｄｉｎＥｌｗａｌｉ  Ｎ、Ｄｉｅｔｅｌ  Ｍ、Ｄｅｎｋｅｒｔ  Ｃ．２００９．「卵巣細胞腫中のトポイソメラーゼＩＩαｍＲＮＡおよびタンパク質発現：臨床病理学的因子および予後との相関（Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ａｌｐｈａ  ｍＲＮＡ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ）」．Ｍｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ２２：５７９−５８８．
３５．  Ａｌｂａｄｉｎｅ  Ｒ、Ｗａｎｇ  Ｗ、Ｂｒｏｗｎｌｅｅ  ＮＡ、Ｔｏｕｂａｊｉ  Ａ、Ｂｉｌｌｉｓ  Ａ、Ａｒｇａｎｉ  Ｐ、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ＪＩ、Ｇａｒｖｉｎ  ＡＪ、Ｃｏｕｓｉ  Ｒ、Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ  ＥＭ、Ｐａｖｌｏｖｉｃｈ  Ｃ、Ｎｅｔｔｏ  ＧＪ．２００９．「腎随様癌中のトポイソメラーゼＩＩαの状態：有望な治療標的の免疫発現および遺伝子コピーの変化（Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ａｌｐｈａ  ｓｔａｔｕｓ  ｉｎ  ｒｅｎａｌ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｉｍｍｕｎｏ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｃｏｐｙ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｙ）」．Ｊ  Ｕｒｏｌ  １８２：７３５−７４０．
３６．  ＭａｃＧｒｏｇａｎ  Ｇ、Ｒｕｄｏｌｐｈ  Ｐ、Ｍａｓｃａｒｅｌ  Ｉｄ  Ｉ、Ｍａｕｒｉａｃ  Ｌ、Ｄｕｒａｎｄ  Ｍ、Ａｖｒｉｌ  Ａ、Ｄｉｌｈｕｙｄｙ  ＪＭ、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｊ、Ｍａｔｈｏｕｌｉｎ−Ｐｅｌｉｓｓｉｅｒ  Ｓ、Ｐｉｃｏｔ  Ｖ、Ｆｌｏｑｕｅｔ  Ａ、Ｓｉｅｒａｎｋｏｗｓｋｉ  Ｇ、Ｃｏｉｎｄｒｅ  ＪＭ．２００３．「ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩα発現および乳癌の１次化学療法に対する反応（ＤＮＡ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ａｌｐｈａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）」．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ８９：６６６−６７１．
３７．  Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ  ＨＥ、Ｊａｒｖｉｎｅｎ  ＴＡ、Ｋｅｌｌｎｅｒ  Ｕ、ａｕｒａｎｉｅｍｉ  Ｐ、Ｐａｒｗａｒｅｓｃｈ  Ｒ、Ｒａｎｔａｌａ  Ｉ、ａｌｉｍｏ  Ｈ、Ｐａｌｊａｒｖｉ  Ｌ、Ｉｓｏｌａ  Ｊ、Ｈａａｐａｓａｌｏ  Ｈ．２０００．「高トポイソメラーゼＩＩα発現は、乏突起神経膠腫の高増殖速度および予後不良と関連する（Ｈｉｇｈ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ａｌｐｈａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ａｎｄ  ｐｏｏｒ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｇｌｉｏｍａｓ）」．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  ２６：５０４−５１２．
３８．  Ｂｒｅｄｅｌ  Ｍ、Ｐｉｒｉｂａｕｅｒ  Ｍ、Ｍａｒｏｓｉ  Ｃ、Ｂｉｍｅｒ  Ｐ、Ｇａｔｔｅｒｂａｕｅｒ  Ｂ、Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｉ、Ｓｔｒｏｂｅｌ  Ｔ、Ｒｏｓｓｌｅｒ  Ｋ、Ｂｕｄｋａ  Ｈ、Ｈａｉｎｆｅｌｌｎｅｒ  ＪＡ．２００２．「ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩαおよびＫｉ−６７抗原の高発現は、神経膠芽細胞腫患者の長期生存と関連する（Ｈｉｇｈ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＤＮＡ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ａｌｐｈａ  ａｎｄ  Ｋｉ−６７  ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ）」．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ３８：１３４３−１３４７．
３９．  Ｗａｎｇ  ＹＨ、Ｔａｋａｎａｓｈｉ  Ｍ、Ｔｓｕｊｉ  Ｋ、Ｔａｎａｋａ  Ｎ、Ｓｈｉｓｅｋｉ  Ｍ、Ｍｏｒｉ  Ｎ、Ｍｏｔｏｊｉ  Ｔ．２００９．「ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩαｍＲＮＡのレベルは、再発性急性白血病患者の治療応答を予測させる（Ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  ＤＮＡ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ａｌｐｈａ  ｍＲＮＡ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ）」．Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ  ３３：９０２−９０７．
４０．  Ｃｏｓｓ  Ａ、Ｔｏｓｅｔｔｏ  Ｍ、Ｆｏｘ  ＥＪ、Ｓａｐｅｔｔｏ−Ｒｅｂｏｗ  Ｂ、Ｇｏｒｍａｎ  Ｓ、Ｋｅｎｎｅｄｙ  ＢＮ、Ｌｌｏｙｄ  ＡＴ、Ｈｙｌａｎｄ  ＪＭ、Ｏ´Ｄｏｎｏｇｈｕｅ  ＤＰ、Ｓｈｅａｈａｎ  Ｋ、Ｌｅａｈｙ  ＤＴ、Ｍｕｌｃａｈｙ  ＨＥ、Ｏ´Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ＪＮ．２００９．「結腸直腸癌中のトポイソメラーゼＩＩα発現の増加は、アポトーシスの抑制を介して進行性疾患および化学療法抵抗性に関与する（Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ａｌｐｈａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｖｉａ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）」．Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ  ２７６：２２８−２３８．
４１．  Ｓｍｉｔｈ  Ｌ、Ｗａｔｓｏｎ  ＭＢ、Ｏ’Ｋａｎｅ  ＳＩ、Ｄｒｅｗ  ＰＪ、Ｌｉｎｄ  ＭＪ、Ｃａｗｋｗｅｌｌ  Ｌ．２００６．「抗体マイクロアレイを使ったヒト乳癌細胞中のドキソルビシン抵抗性の分析（Ｔｈｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ）」．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ５：２１１５−２１２０．
４２．  Ｌｏｐｅｚ  ＪＰ、Ｗａｎｇ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  Ｊ、Ｃｈａｎｇ  Ｃ、Ｃｈｅｎ  ＪＳ、Ｐａｒｄｏ  ＦＳ、Ａｇｕｉｌｅｒａ  Ｊ、Ｏｎｇｋｅｋｏ  ＷＭ．２００７．「甲状腺癌細胞株中のＡＢＣＧ２の不活化によるドキソルビシンに対する薬剤耐性のゲフィチニブ抑制（Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｂｙ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ＡＢＣＧ２  ｉｎ  ｔｈｙｒｏｉｄｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ）」．Ａｒｃｈ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  Ｈｅａｄ  Ｎｅｃｋ  Ｓｕｒｇ  １３３：１０２２−１０２７．
４３．  Ｇａｒｉｂｏｌｄｉ  ＭＢ、Ｒａｖｉｚｚａ  Ｒ、Ｒｉｇａｎｔｉ  Ｌ、Ｍｅｓｃｈｉｎｉ  Ｓ、Ｃａｌｃａｂｒｉｎｉ  Ａ、Ｍａｒｒａ  Ｍ、Ａｒａｎｃｉａ  Ｇ、Ｄｏｌｆｉｎｉ  Ｅ、Ｍｏｎｔｉ  Ｅ．２００３．「ヒト癌細胞株におけるドキソルビシンに対する固有抵抗性の分子決定基（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ）」．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  ２２：１０５７−１０６４．
４４．  Ｂｅｒｇｅ、Ｓ．Ｍ．、Ｂｉｇｈｌｅｙ、Ｌ．Ｄ．、Ｍｏｎｋｈｏｕｓｅ、Ｄ．Ｃ．１９７７．「医薬塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ）」．Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ６６：１−１９．
４５．  Ｍａｕｔｎｅｒ、Ｈ．Ｇ．、ａｎｄ  Ｃｌａｙｔｏｎ、Ｅ．Ｍ．１９５９．「２−セレノバルビツラート。いくつかの類似の酸素、硫黄およびセレン化合物の調査（２−Ｓｅｌｅｎｏｂａｒｂｉｔｕｒａｔｅｓ．Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｓｏｍｅ  ａｎａｌｏｇｏｕｓ  ｏｘｙｇｅｎ、ｓｕｌｆｕｒ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｎｉｕｍ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）」．Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  ８１：６２７０−６２７３．
４６．  Ｓｃｈｍｉｄｔ、Ｈ．１９２１．「エチルおよびアリルセレノ尿素およびそれらのアルキルハライド（Ｅｔｈｙｌ−ａｎｄ  ａｌｌｙｌｓｅｌｅｎｏｕｒｅａ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｌｋｙｌ  ｈａｌｉｄｅｓ）」．Ｂｅｒｉｃｈｔｅ  ｄｅｒ  Ｄｅｕｔｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅｎ  Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ［Ａｂｔｅｉｌｕｎｇ］Ｂ：Ａｂｈａｎｄｌｕｎｇｅｎ  ５４Ｂ、２０６７−２０７０．
４７．  Ｌｅｅ  ＳＹ、Ｐａｔｔｏｎ  ＳＭ、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ＲＪ、ａｎｄ  Ｃｏｎｎｏｒ  ＪＲ．２００７．「血色素症遺伝子（ＨＦＥ）の内在性ＨＦＥ欠乏ヒト神経細胞株中への変異体発現の影響（Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｍｕｔａｎｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ  ｇｅｎｅ（ＨＦＥ）ｉｎｔｏ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ｌａｃｋｉｎｇ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ＨＦＥ）」．ＦＡＳＥＢ  Ｊ２１（２）：５６４−５７６．
４８．  Ｌｅｅ  ＳＹ、Ｌｉｕ  Ｓ、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ＲＭ、Ｓｌａｇｌｅ−ＷｅｂｂＢ、Ｈｏｎｇ  Ｙ−Ｓ、Ｓｈｅｅｈａｎ  ＪＭ．、Ｃｏｎｎｏｒ  ＪＲ．２０１１．「ＨＦＥ多型がｐｌ６ＩＮＫ４Ａの誘導を介して化学療法剤に対する反応に影響を与える（ＨＦＥ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｖｉａ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌ６ＩＮＫ４Ａ）」．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｐｒｅｓｓ．
４９．  Ｍａｉｎｅｓ  ＬＷ、Ａｎｔｏｎｅｔｔｉ  ＤＡ、Ｗｏｌｐｅｒｔ  ＥＢ、Ｓｍｉｔｈ  ＣＤ．２００５．「ウシ網膜内皮細胞によるパロキセチン、クロザピン、フェニトインおよびカルバマゼピンの取り込みにおけるＰ−糖タンパク質の役割の評価（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｉｎ  ｔｈｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｏｆ  ｐａｒｏｘｅｔｉｎｅ、ｃｌｏｚａｐｉｎｅ、ｐｈｅｎｙｔｏｉｎ  ａｎｄ  ｃａｒｂａｍａｚａｐｉｎｅ  ｂｙ  ｂｏｖｉｎｅ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ）」．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４９：６１０−６１７．
５０．  Ｃｅｃｃｈｅｌｌｉ  Ｒ、Ｄｅｈｏｕｃｋ  Ｂ、Ｄｅｓｃａｍｐｓ  Ｌ、Ｆｅｎａｒｔ  Ｌ、Ｂｕｅｅ−Ｓｃｈｅｒｒｅｒ  ＶＶ、Ｄｕｈｅｍ  Ｃ、Ｌｕｎｄｑｕｉｓｔ  Ｓ、Ｒｅｎｔｆｅｌ  Ｍ、Ｔｏｒｐｉｅｒ  Ｇ、Ｄｅｈｏｕｃｋ  ＭＰ．１９９９．「血液脳関門通過薬剤輸送の評価用インビトロモデル（Ｉｎｖｉｔｒｏ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｄｒｕｇ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ）」．Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ３６：１６５−１７８．
５１．  Ｋａｎｚａｗａ  Ｔ、Ｇｅｒｍａｎｏ  ＩＭ、Ｋｏｎｄｏ  Ｙ、Ｉｔｏ  Ｈ、Ｋｙｏ  Ｓ、Ｋｏｎｄｏ  Ｓ．２００３．「悪性神経膠腫細胞のテロメラーゼ活性の阻害は、テモゾロミドに対するそれらの感受性と相関する（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｇｌｉｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅｉｒ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）」．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ８９：９２２−９２９．
５２．  Ｕｚｚａｍａｎ  Ｍ、Ｋｅｌｌｅｒ  Ｇ、Ｇｅｒｍａｎｏ  ＩＭ．２００７．「テモゾロミド抵抗性神経膠腫細胞に対する腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンドのアポトーシス促進効果の強化（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｐｒｏａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｌｉｇａｎｄ  ｏｎ  ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｇｌｉｏｍａ  ｃｅｌｌｓ）」．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  １０６：６４６−６５１．
５３．  Ｓｋｅｈａｎ、Ｐ．、Ｓｔｏｒｅｎｇ、Ｒ．、Ｓｃｕｄｉｅｒｏ、Ｄ．、Ｍｏｎｋｓ、Ａ．、ＭｃＭａｈｏｎ、Ｊ．、Ｖｉｓｔｉｃａ、Ｄ．、Ｗａｒｒｅｎ、Ｊ．Ｔ．、Ｂｏｋｅｓｃｈ、Ｈ．、Ｋｅｎｎｅｙ、Ｓ．、ａｎｄ  Ｂｏｙｄ、Ｍ．Ｒ．１９９０．「抗癌剤スクリーニング用新比色定量細胞傷害性アッセイ（Ｎｅｗ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ−ｄｒｕｇ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）」．Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  ８２：１１０７−１１１２．
５４．  Ｄｉｌｗｏｒｔｈ  ＪＴ、Ｗｏｊｔｋｏｗｉａｋ  ＪＷ、Ｍａｔｈｉｅｕ  Ｐ、Ｔａｉｎｓｋｙ  ＭＡ、Ｒｅｉｎｅｒｓ  ＪＪ  Ｊｒ、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ  ＲＲ、Ｈａｎｃｏｃｋ  ＣＮ．２００８．「ｐａｎ−ＥｒｂＢ阻害剤ＣＩ−１０３３による２種の独立ＮＦ１悪性末梢神経鞘腫細胞株の増殖の抑制（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＮＦ１  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｒｖｅ  ｓｈｅａｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｐａｎ−ＥｒｂＢ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＣＩ−１０３３）」．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ７：１９３８−１９４６．
５５．  Ｗａｎｇ、Ｌ、ａｎｄ  Ｅａｓｔｍｏｎｄ、Ｄ．Ａ．２００２．「トポイソメラーゼＩＩの触媒的阻害剤は、ＤＮＡに有害な薬剤である：メルバロンおよびＩＣＲＦ−１８７による染色体損傷の誘導（Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ  ａｒｅ  ＤＮＡ−ｄａｍａｇｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ：ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｄａｍａｇｅ  ｂｙ  ｍｅｒｂａｒｏｎｅ  ａｎｄ  ＩＣＲＦ−１８７）」．Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｏｌ  Ｍｕｔａｇｅｎ  ３９：３４８−３５６．
５６．  Ｇｅｒｍｅ  Ｔ、Ｈｙｒｉｅｎ  Ｏ．２００５．「ＩＣＲＦ−１９３に捕捉されたトポイソメラーゼＩＩ−ＤＮＡ複合体は、クロマチン構造を乱す（Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ−ＤＮＡ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｔｒａｐｐｅｄ  ｂｙ  ＩＣＲＦ−１９３  ｐｅｒｔｕｒｂ  ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）」．ＥＭＢＯ  Ｒｅｐ  ６：７２９−７３５．
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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