(57)【要約】  本発明は、拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する、ＡβのＣ−末端及び中心エピトープに向けられた抗体を提供する。本発明は、Ａβの密集斑の存在及び関連する症状の軽減又は除去のための患者の処置方法も提供する。１つの側面において、本発明は中期又は後期アルツハイマー病と診断された患者の処置方法を提供し、それはＡβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して密集斑に優先的に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる。いくつかの場合に、患者は中期アルツハイマー病と診断されている。いくつかの場合に、患者は後期アルツハイマー病と診断されている。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
中期又は後期アルツハイマー病と診断された患者の処置方法であって、Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して密集斑に優先的に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる方法。
【請求項２】
患者が中期アルツハイマー病と診断されている請求項１の方法。
【請求項３】
患者が後期アルツハイマー病と診断されている請求項１の方法。
【請求項４】
抗体がＡβの中心エピトープに関する特異性を有する請求項１の方法。
【請求項５】
抗体が２６６抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１５Ｃ１１抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２２Ｄ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項４の方法。
【請求項６】
抗体が：３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：９のアミノ酸配列を含む請求項５の方法。
【請求項７】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：１４の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：１４の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：１４の残基９４−１０１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：１５の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：１５の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：１５の残基９９−１０１のアミノ酸配列を含む請求項５の方法。
【請求項８】
抗体が：２２Ｄ１２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び２２Ｄ１２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項５の方法。
【請求項９】
抗体がＡβのＣ−末端エピトープに関する特異性を有する請求項１の方法。
【請求項１０】
抗体が２Ｇ３抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１４Ｃ２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２１Ｆ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項９の方法。
【請求項１１】
抗体が：２Ｇ３の３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び２Ｇ３の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項１０の方法。
【請求項１２】
抗体が：１４Ｃ２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び１４Ｃ２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項１０の方法。
【請求項１３】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：３の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：３の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：３の残基９４−１０２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：２の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：２の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み
、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：２の残基９９−１０６のアミノ酸配列を含む請求項１０の方法。
【請求項１４】
抗体がキメラ抗体又はヒト化抗体である請求項１〜１３のいずれか１つの方法。
【請求項１５】
抗体がヒト化抗体である請求項１４の方法。
【請求項１６】
抗体がＩｇＧ１サブタイプのものである請求項１４の方法。
【請求項１７】
アルツハイマー病と診断され、且つ斑全体に対して拡散斑より高い密集斑の割合を有する患者の処置方法であって、Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑と比較して密集斑に優先的に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる方法。
【請求項１８】
密集斑の割合が斑全体の少なくとも４０％である請求項１７の方法。
【請求項１９】
斑全体に対する密集斑及び拡散斑の割合を、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）走査により決定する請求項１７の方法。
【請求項２０】
ＰＥＴ走査が［18Ｆ］ＡＶ−１４、［18Ｆ］ＡＶ−１４４、［11Ｃ］ＡＺＤ２９９５、［18Ｆ］ＡＺＤ４６９４及び［18Ｆ］−ＳＭＩＢＲ−Ｗ３７２より成る群から選ばれるＰＥＴリガンドの検出を含む請求項１９の方法。
【請求項２１】
抗体がＡβの中心エピトープに関する特異性を有する請求項１７の方法。
【請求項２２】
抗体が２６６抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１５Ｃ１１抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２２Ｄ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項２１の方法。
【請求項２３】
抗体が：３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：９のアミノ酸配列を含む請求項２２の方法。
【請求項２４】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：１４の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：１４の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：１４の残基９４−１０１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：１５の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：１５の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：１５の残基９９−１０１のアミノ酸配列を含む請求項２２の方法。
【請求項２５】
抗体が：２２Ｄ１２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び２２Ｄ１２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項２２の方法。
【請求項２６】
抗体がＡβのＣ−末端エピトープに関する特異性を有する請求項１７の方法。
【請求項２７】
抗体が２Ｇ３抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１４Ｃ２抗体
又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２１Ｆ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項２６の方法。
【請求項２８】
抗体が：２Ｇ３の３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び２Ｇ３の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項２７の方法。
【請求項２９】
抗体が：１４Ｃ２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び１４Ｃ２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項２７の方法。
【請求項３０】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：３の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：３の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：３の残基９４−１０２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：２の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：２の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：２の残基９９−１０６のアミノ酸配列を含む請求項２７の方法。
【請求項３１】
抗体がキメラ抗体又はヒト化抗体である請求項１７〜３０のいずれか１つの方法。
【請求項３２】
抗体がヒト化抗体である請求項３１の方法。
【請求項３３】
抗体がＩｇＧ１サブタイプのものである請求項３１の方法。
【請求項３４】
アルツハイマー病と診断され、且つてんかん発作の症状を有する患者の処置方法であって、Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる方法。
【請求項３５】
全体的なアミロイド斑負荷量及びてんかん発作の症状が減少する請求項３４の方法。
【請求項３６】
抗体がβ−アミロイドの中心エピトープに関する特異性を有する請求項３４の方法。
【請求項３７】
抗体が２６６抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１５Ｃ１１抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２２Ｄ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項３６の方法。
【請求項３８】
抗体が：３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：９のアミノ酸配列を含む請求項３７の方法。
【請求項３９】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：１４の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：１４の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：１４の残基９４−１０１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：１５の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：１５の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：１５の残基９９−１０１のアミノ酸配列を含む請求項３７の方法。
【請求項４０】
抗体が：２２Ｄ１２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び２２Ｄ１２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項３７の方法。
【請求項４１】
抗体がＡβのＣ−末端エピトープに関する特異性を有する請求項３４の方法。
【請求項４２】
抗体が２Ｇ３抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１４Ｃ２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２１Ｆ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項４１の方法。
【請求項４３】
抗体が：２Ｇ３の３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び２Ｇ３の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項４２の方法。
【請求項４４】
抗体が：１４Ｃ２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び１４Ｃ２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項４２の方法。
【請求項４５】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：３の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：３の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：３の残基９４−１０２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：２の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：２の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：２の残基９９−１０６のアミノ酸配列を含む請求項４２の方法。
【請求項４６】
抗体がキメラ抗体又はヒト化抗体である請求項３４〜４５のいずれか１つの方法。
【請求項４７】
抗体がヒト化抗体である請求項４６の方法。
【請求項４８】
抗体がＩｇＧ１サブタイプのものである請求項４６の方法。
【請求項４９】
アルツハイマー病と診断された患者の処置方法であって：
（ａ）拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体の有効な療法を患者に施し、ここで抗体はＡβの中心又はＣ−末端エピトープに関する特異性を有し；そして
（ｂ）ＰＥＴ走査を用いて患者の脳内の密集斑の１つもしくはそれより多くの特質を監視する
ことを含んでなる方法。
【請求項５０】
密集斑の１つもしくはそれより多くの特質を、放射性トレーサーＰｉＢを用いて同定する請求項４９の方法。
【請求項５１】
１つもしくはそれより多くの特質が、１つもしくはそれより多くの密集斑の寸法における前回のＰＥＴ走査に対する減少を含む請求項４９の方法。
【請求項５２】
抗体がＡβの中心エピトープに関する特異性を有する請求項４９の方法。
【請求項５３】
抗体が２６６抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１５Ｃ１１抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２２Ｄ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項５２の方法。
【請求項５４】
抗体が：３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は
配列番号：５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：９のアミノ酸配列を含む請求項５３の方法。
【請求項５５】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：１４の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：１４の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：１４の残基９４−１０１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：１５の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：１５の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：１５の残基９９−１０１のアミノ酸配列を含む請求項５３の方法。
【請求項５６】
抗体が：２２Ｄ１２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び２２Ｄ１２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項５３の方法。
【請求項５７】
抗体がＡβのＣ−末端エピトープに関する特異性を有する請求項４９の方法。
【請求項５８】
抗体が２Ｇ３抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１４Ｃ２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２１Ｆ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項５７の方法。
【請求項５９】
抗体が：２Ｇ３の３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び２Ｇ３の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項５８の方法。
【請求項６０】
抗体が：１４Ｃ２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び１４Ｃ２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項５８の方法。
【請求項６１】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：３の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：３の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：３の残基９４−１０２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：２の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：２の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：２の残基９９−１０６のアミノ酸配列を含む請求項５８の方法。
【請求項６２】
抗体がキメラ抗体又はヒト化抗体である請求項４９〜６１のいずれか１つの方法。
【請求項６３】
抗体がヒト化抗体である請求項６２の方法。
【請求項６４】
抗体がＩｇＧ１サブタイプのものである請求項６２の方法。
【請求項６５】
ＡβのＮ−末端エピトープに関する特異性を有する抗体を用いて以前に処置されたことがある、アルツハイマー病と診断された患者の処置方法であって、Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる方法。
【請求項６６】
患者の斑全体に対する密集斑の割合が、ＡβのＮ−末端エピトープに関して特異的な抗体を用いる以前の処置の間に増加した請求項６５の方法。
【請求項６７】
抗体がＡβの中心エピトープに関する特異性を有する請求項６５の方法。
【請求項６８】
抗体が２６６抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１５Ｃ１１抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２２Ｄ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項６７の方法。
【請求項６９】
抗体が：３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：９のアミノ酸配列を含む請求項６８の方法。
【請求項７０】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：１４の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：１４の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：１４の残基９４−１０１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：１５の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：１５の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：１５の残基９９−１０１のアミノ酸配列を含む請求項６８の方法。
【請求項７１】
抗体が：２２Ｄ１２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び２２Ｄ１２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項６８の方法。
【請求項７２】
抗体がＡβのＣ−末端エピトープに関する特異性を有する請求項６５の方法。
【請求項７３】
抗体が２Ｇ３抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１４Ｃ２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２１Ｆ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項７２の方法。
【請求項７４】
抗体が：２Ｇ３の３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び２Ｇ３の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項７３の方法。
【請求項７５】
抗体が：１４Ｃ２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び１４Ｃ２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項７３の方法。
【請求項７６】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：３の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：３の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：３の残基９４−１０２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：２の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：２の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：２の残基９９−１０６のアミノ酸配列を含む請求項７３の方法。
【請求項７７】
抗体がキメラ抗体又はヒト化抗体である請求項６５〜７６のいずれか１つの方法。
【請求項７８】
抗体がヒト化抗体である請求項７７の方法。
【請求項７９】
抗体がＩｇＧ１サブタイプのものである請求項７７の方法。
【請求項８０】
Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体を用いて以前に処置されたことがある、アルツハイマー病と診断された患者の処置方法であって、ＡβのＮ−末端エピトープに関する特異性を有する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる方法。
【請求項８１】
患者の斑全体に対する拡散斑の割合が、Ａβの中心又はＣ−末端エピトープに関して特異的な抗体を用いる以前の処置の間に増加した請求項８０の方法。
【請求項８２】
抗体がＡβの中心エピトープに関する特異性を有する請求項８０の方法。
【請求項８３】
抗体が２６６抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１５Ｃ１１抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２２Ｄ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項８２の方法。
【請求項８４】
抗体が：３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：９のアミノ酸配列を含む請求項８３の方法。
【請求項８５】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：１４の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：１４の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：１４の残基９４−１０１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：１５の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：１５の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：１５の残基９９−１０１のアミノ酸配列を含む請求項８３の方法。
【請求項８６】
抗体が：２２Ｄ１２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び２２Ｄ１２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項８３の方法。
【請求項８７】
抗体がＡβのＣ−末端エピトープに関する特異性を有する請求項８０の方法。
【請求項８８】
抗体が２Ｇ３抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１４Ｃ２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２１Ｆ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項８７の方法。
【請求項８９】
抗体が：２Ｇ３の３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び２Ｇ３の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項８８の方法。
【請求項９０】
抗体が：１４Ｃ２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び１４Ｃ２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項８８の方法。
【請求項９１】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：３の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：３の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：３の残基９４−１０２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：２の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：２の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：２の残基９９−１０６のアミノ酸配列を含む請求項８８の方
法。
【請求項９２】
抗体がキメラ抗体又はヒト化抗体である請求項８０〜９１のいずれか１つの方法。
【請求項９３】
抗体がヒト化抗体である請求項９２の方法。
【請求項９４】
抗体がＩｇＧ１サブタイプのものである請求項９２の方法。
【請求項９５】
アルツハイマー病と診断された患者の処置方法であって：
（ａ）Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する第１の抗体の有効な療法を患者に施し；そして
（ｂ）ＡβのＮ−末端エピトープに関する特異性を有する第２の抗体の有効な療法を患者に施す
ことを含んでなる方法。
【請求項９６】
第１及び第２の抗体を同時に投与する請求項９５の方法。
【請求項９７】
第２の抗体が３Ｄ６抗体、１２Ａ１１抗体、１０Ｄ５抗体、１２Ｂ４抗体、６Ｃ６抗体、２Ｈ３抗体又は３Ａ３抗体、あるいはこれらの抗体のいずれか１つのキメラ、ヒト化又は張り合わされた形態から選ばれる請求項９５の方法。
【請求項９８】
抗体がＡβの中心エピトープに関する特異性を有する請求項９５の方法。
【請求項９９】
抗体が２６６抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１５Ｃ１１抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２２Ｄ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項９８の方法。
【請求項１００】
抗体が：３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：９のアミノ酸配列を含む請求項９９の方法。
【請求項１０１】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：１４の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：１４の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：１４の残基９４−１０１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：１５の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：１５の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：１５の残基９９−１０１のアミノ酸配列を含む請求項９９の方法。
【請求項１０２】
抗体が：２２Ｄ１２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び２２Ｄ１２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項９９の方法。
【請求項１０３】
抗体がＡβのＣ−末端エピトープに関する特異性を有する請求項９５の方法。
【請求項１０４】
抗体が２Ｇ３抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１４Ｃ２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２１Ｆ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である請求項１０３の方法。
【請求項１０５】
抗体が：２Ｇ３の３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び２Ｇ３の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項１０４の方法。
【請求項１０６】
抗体が：１４Ｃ２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び１４Ｃ２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む請求項１０４の方法。
【請求項１０７】
抗体が：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：３の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：３の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：３の残基９４−１０２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：２の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：２の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：２の残基９９−１０６のアミノ酸配列を含む請求項１０４の方法。
【請求項１０８】
抗体がキメラ抗体又はヒト化抗体である請求項９５〜１０７のいずれか１つの方法。
【請求項１０９】
抗体がヒト化抗体である請求項１０８の方法。
【請求項１１０】
抗体がＩｇＧ１サブタイプのものである請求項１０８の方法。
【請求項１１１】
２Ｇ３、１４Ｃ２，２１Ｆ１２又は２２Ｄ１２抗体と称される抗体のヒト化、キメラもしくは張り合わされた形態。
【請求項１１２】
２Ｇ３、１４Ｃ２，２１Ｆ１２又は２２Ｄ１２抗体の６つのＫａｂａｔ  ＣＤＲｓを含んでなる請求項１１１の抗体。
【請求項１１３】
アルツハイマー病と診断され、且つ斑全体に対して拡散斑より高い密集斑の割合を有する患者の処置方法であって、Ａβの残基１−１１内のエピトープに結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる方法。
【請求項１１４】
密集斑の割合が斑全体の少なくとも４０％である請求項１１３の方法。
【請求項１１５】
斑全体に対する密集斑及び拡散斑の割合を陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）走査により決定する請求項１１３の方法。
【請求項１１６】
アルツハイマー病と診断され、且つ１〜９のＭＭＳＥ又は６〜７のＢｒａａｋを有する患者の処置方法であって、Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願へのクロスリファレンス
本出願は、３５  ＵＳＣ  １１９（ｅ）の下に、２０１２年７月３日に申請された米国暫定特許出願第６１／６６７，８９１号明細書の利益を主張し、その出願の全体は引用することにより本明細書の内容となる。
【背景技術】
【０００２】
背景
アルツハイマー病（ＡＤ）は、老年痴呆を生ずる進行性の疾患である。一般的に非特許文献１；特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４を参照されたい。おおまかに、疾患は２つの種類：老年（６５＋才）に起こる遅発性及び老年期より十分に前に、すなわち３５〜６０才に発症する若年性に分けられる。両方の型の疾患において、病理学は同じであるが、より若年に始まる場合に異常はより重症且つ広範囲である傾向がある。疾患は脳内の少なくとも２つの型の病変、神経原線維タングル及び老人斑により特徴付けられる。神経原線維タングルは、対になって互いに捩れ合う２つのフィラメントから成る微小管随伴タウタンパク質の細胞内沈着物である。老人斑（すなわちアミロイド斑）は、幅が最高で１５０μｍの（ｕｐ  ｔｏ  １５０μｍ  ａｃｒｏｓｓ）無秩序な神経網の領域であり、中心に細胞外アミロイド沈着物を有し、脳組織の切片の顕微鏡分析により見られ得る。脳内におけるアミロイド斑の蓄積は、ダウン症候群及び他の認知障害とも関連する。
【０００３】
斑の主な成分はＡβ又はβ−アミロイドペプチドと呼ばれるペプチドである。Ａβは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と命名されるより大きな貫膜糖タンパク質の３９〜４３個のアミノ酸の４−ｋＤａ内部フラグメントである。種々のセクレターゼ酵素によるＡＰＰのタンパク質分解的プロセシングの結果として、Ａβは最初に長さが４０個のアミノ酸の短い形態及び長さが４２〜４３個のアミノ酸の範囲の長い形態の両方において見出される。ＡＰＰの疎水性貫膜ドメインの部分はＡβのカルボキシ末端に見出され、特に長い形態の場合にＡβが斑に凝集し得ることを説明することができる。脳内におけるアミロイド斑の蓄積は、結果として神経細胞死に導く。この型の神経劣化と関連する身体的症状がアルツハイマー病を特徴付ける。
【０００４】
ＡＤ脳における斑の存在は、Ａβ特異的抗体を用いる免疫染色法を用いて最も確実に明らかになる（非特許文献５）。２つの最も普通に用いられる抗体（３Ｄ６及び１０Ｄ５）はＮ−末端Ａβエピトープ（それぞれ残基１−５及び３−７内）を認識する（非特許文献５；非特許文献６）。
【０００５】
ＡβのＣ−末端部分に対するいくつかの抗体がアミロイド沈着物に結合することが報告されている。しかしながらそのような抗体は、典型的にはホルマリン−もしくはパラホルムアルデヒド−固定され、パラフィンに埋め込まれた組織を使用しており、それらは多くの場合にＡβのＣ−末端エピトープを現すためにギ酸及び他の攻撃的な試薬を用いる攻撃的な予備−処理に供される（非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４）。かくしてこれらの研究は生理学的に斑に適切であり得ない。非特許文献１５及び非特許文献１６は、それぞれ２Ｈ６抗体（抗−Ａβ33-40；末端−特異的，マウスＩｇＧ２ｂイソタイプ）又は２２８６抗体（抗−Ａβ28-40；末端−特異的，マウスＩｇＧ１イソタイプ）の注入を受けたＴｇ２５７６マウスにおける斑の減少を報告した。１６Ｃ１１、２Ｇ３及び２１Ｆ１２を含むいくつかの他のＣ−末端抗体は、アルツハイマー病のＰＤＡＰＰ動物モデルに
おいて斑に結合するか又は斑を除去する（ｃｌｅａｒ）ことができないと報告されている（特許文献２）。
【０００６】
２６６抗体（抗−Ａβ16-23）は主にＡβの可溶性形態に結合し、斑への結合をほとんど示さないことが報告されている。そのような研究は、処理されたマウスの脳から斑を除去するこの抗体の能力に関する矛盾する結果も報告している。非特許文献１７は、ＰＤＡＰＰマウスに末梢血管から投与される２６６抗体が斑に結合せずに、又は脳内に入らずに、むしろ末梢血管中の可溶性Ａβを捕獲し、濃度勾配を生ぜしめ、それによりＡβを脳から去らせて血漿中に移動させることにより、脳の斑負荷量を減少させることによって斑を除去することを報告している（末梢沈没仮説（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｓｉｎｋ  ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ））。しかしながら、２６６抗体を用いて免疫化されたＰＤＡＰＰマウスにおける最近の研究は、斑の減少がないことを報告した（非特許文献１８）。第３の研究は、２６６抗体を用いるＰＤＡＰＰマウスの短期間処置が、斑に影響を与えずに彼らの認知欠損（ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｄｅｆｉｃｉｔｓ）を逆転させることを報告し、２６６抗体が脳からの可溶性神経毒性Ａβ種に結合し、中和すると提案した（非特許文献１９）。特許文献２は、２６６抗体及びＡβ中の中−領域エピトープに結合する２つの他の抗体（１８Ｇ１１及び２２Ｄ１２）がＰＤＡＰＰトランスジェニック動物モデルにおいて斑に結合もせず、それを除去もしないことを報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第９２／１３０６９号パンフレット（Ｈａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．）
【特許文献２】米国特許第２００６０２５７３９６号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｓｅｌｋｏｅ著，ＴＩＮＳ  １６：４０３，１９９３年
【非特許文献２】Ｓｅｌｋｏｅ著，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５３：４３８，１９９４年
【非特許文献３】Ｄｕｆｆ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎａｔｕｒｅ  ３７３：４７６，１９９５年
【非特許文献４】Ｇａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎａｔｕｒｅ  ３７３：５２３，１９９５年
【非特許文献５】Ｈｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２：３５８６−３５９０，１９９５年
【非特許文献６】Ｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １００：２０２３−２０２８，２００３年
【非特許文献７】Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．著，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １４４：１０８２−１０８８，１９９４年
【非特許文献８】Ｋｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔ  １９３：１０５−１０８，１９９５年
【非特許文献９】Ｆｕｋｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．著，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １４８：２５９−２６５，１９９６年
【非特許文献１０】Ｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １４８：１２５７−１２６６，１９９６年
【非特許文献１１】Ｔｅｋｉｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ  １７：２４９−２５７，１９９６年
【非特許文献１２】Ｌｉｐｐａ  ｅｔ  ａｌ．著，Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ  ５６：１１１１−１１１８，１９９９年
【非特許文献１３】Ｓｃｈｗａｂ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  １６１：５２７−５３４，２０００年
【非特許文献１４】Ａｘｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４６：２２６７−２２７３，２００９年
【非特許文献１５】Ｗｉｌｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２６：５３４０−５３４６，２００６年
【非特許文献１６】Ｗｉｌｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２４：６１４４−６１５１，２００４年
【非特許文献１７】ＤｅＭａｔｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：８８５０−８８５５，２００１年
【非特許文献１８】Ｓｅｕｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ  Ｄｉｓ  ５：６５−７１，２００８年
【非特許文献１９】Ｄｏｄａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ５：４５２−４５７，２００２年
【発明の概要】
【０００９】
発明の概略
本発明は、拡散斑に比較して優先的に密集斑（ｃｏｍｐａｃｔ  ｐｌａｑｕｅｓ）に結合する、ＡβのＣ−末端及び中心エピトープに向けられた抗体を提供する。本発明は、Ａβの密集斑の存在及び関連する症状の軽減又は除去のための患者の処置方法も提供する。
【００１０】
１つの側面において、本発明は中期又は後期アルツハイマー病と診断された患者の処置方法を提供し、それはＡβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して密集斑に優先的に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる。いくつかの場合に、患者は中期アルツハイマー病と診断されている。いくつかの場合に、患者は後期アルツハイマー病と診断されている。
【００１１】
別の側面において本発明は、アルツハイマー病と診断され、且つ拡散斑に比較してより大きい割合の密集斑を有する患者の処置方法を提供し、それはＡβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して密集斑に優先的に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる。いくつかの場合、密集斑の割合は斑全体の少なくとも４０％である。いくつかの場合、拡散斑に対する密集斑の割合は陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）走査により決定される。いくつかの場合にＰＥＴ走査は、［18Ｆ］ＡＶ−１４、［18
Ｆ］ＡＶ−１４４、［11Ｃ］ＡＺＤ２９９５、［18Ｆ］ＡＺＤ４６９４及び［18Ｆ］−ＳＭＩＢＲ−Ｗ３７２より成る群から選ばれるＰＥＴリガンドを検出することを含んでなる。
【００１２】
別の側面において本発明は、アルツハイマー病と診断され、且つてんかん発作の症状を有する患者の処置方法を提供し、それはＡβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる。いくつかの場合に、全体的なアミロイド斑負荷量及びてんかん発作の症状は減少する。
【００１３】
別の側面において本発明は、アルツハイマー病と診断された患者の処置方法を提供し、それは：（ａ）拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体の有効な療法を患者に施し、ここで抗体はＡβの中心又はＣ−末端エピトープに関する特異性を有し；そして（ｂ）ＰＥＴ走査を用いて患者の脳内の密集斑の１つもしくはそれより多くの特質を監視することを含んでなる。いくつかの場合、密集斑の１つもしくはそれより多くの特質は、放射性トレーサーＰｉＢを用いて同定される。いくつかの場合、１つもしくはそれより多くの特質は、１つもしくはそれより多くの密集斑の寸法における、前回のＰＥＴ走査に対する減少を含む。
【００１４】
別の側面において本発明は、ＡβのＮ−末端エピトープに関する特異性を有する抗体を用いて以前に処置されたことがある、アルツハイマー病と診断された患者の処置方法を提供し、それはＡβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる。いくつかの場合、患者の斑全体に対する密集斑の割合は、ＡβのＮ−末端エピトープに関して特異的な抗体を用いる以前の処置の間に増加した。
【００１５】
別の側面において本発明は、Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体を用いて以前に処置されたことがある、アルツハイマー病と診断された患者の処置方法を提供し、それはＡβのＮ−末端エピトープに関する特異性を有する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる。いくつかの場合、患者の斑全体に対する拡散斑の割合は、Ａβの中心又はＣ−末端エピトープに関して特異的な抗体を用いる以前の処置の間に増加した。
【００１６】
別の側面において本発明は、アルツハイマー病と診断された患者の処置方法を提供し、それは：（ａ）Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体の有効な療法を患者に施し；そして（ｂ）ＡβのＮ−末端エピトープに関する特異性を有する第２の抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる。いくつかの場合、第１及び第２の抗体を同時に投与する。いくつかの場合、第２の抗体は３Ｄ６抗体、１２Ａ１１抗体、１０Ｄ５抗体、１２Ｂ４抗体、６Ｃ６抗体、２Ｈ３抗体又は３Ａ３抗体あるいはこれらの抗体のいずれか１つのキメラ、ヒト化又は張り合わされた（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）形態から選ばれる。
【００１７】
前節で議論した方法のいずれか１つの種々の態様において、抗体はＡβの中心エピトープに関する特異性を有するか、あるいは抗体はＡβのＣ−末端エピトープに関する特異性を有する。
【００１８】
いくつかの場合に、抗体はＡβの中心エピトープに関する特異性を有し、抗体は２６６抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１５Ｃ１１抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２２Ｄ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である。いくつかの場合に、抗体は：３つの軽鎖可変領域相
補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：９のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合に、抗体は：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：１４の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：１４の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：１４の残基９４−１０１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：１５の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：１５の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：１５の残基９９−１０１のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合、抗体は：２２Ｄ１２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び２２Ｄ１２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む。
【００１９】
いくつかの場合、抗体はＡβのＣ−末端エピトープに関する特異性を有し、抗体は２Ｇ３抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態、１４Ｃ２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態あるいは２１Ｆ１２抗体又はそのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である。いくつかの場合、抗体は：２Ｇ３の３つの軽鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び２Ｇ３の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む。いくつかの場合、抗体は：１４Ｃ２の３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び１４Ｃ２の３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含む。いくつかの場合、抗体は：３つの軽鎖可変領域ＣＤＲｓ及び３つの重鎖可変領域ＣＤＲｓを含み、ここでＣＤＲ  Ｌ１は配列番号：３の残基２４−３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ２は配列番号：３の残基５５−６１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｌ３は配列番号：３の残基９４−１０２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ１は配列番号：２の残基２６−３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ２は配列番号：２の残基５０−６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ  Ｈ３は配列番号：２の残基９９−１０６のアミノ酸配列を含む。
【００２０】
いくつかの場合、上記で議論した抗体のいずれの１つもキメラ抗体又はヒト化抗体である。好ましい態様において、抗体はヒト化抗体である。いくつかの場合、抗体はＩｇＧ１サブタイプのものである。
【００２１】
別の側面において、本発明は２Ｇ３、１４Ｃ２、２１Ｆ１２又は２２Ｄ１２と称される抗体のヒト化、キメラ又は張り合わされた形態を提供する。いくつかの場合、抗体は２Ｇ３、１４Ｃ２、２１Ｆ１２又は２２Ｄ１２抗体の６つのＫａｂａｔ  ＣＤＲｓを含む。
【００２２】
本発明はさらに、アルツハイマー病と診断され、且つ斑全体に対して拡散斑より高い密集斑の割合を有する患者の処置方法を提供し、それはＡβの残基１−１１内のエピトープに結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる。いくつかのそのような方法において、密集斑の割合は斑全体の少なくとも４０％である。いくつかのそのような方法において、斑全体に対する密集斑及び拡散斑の割合は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）走査により決定される。
【００２３】
本発明はさらに、アルツハイマー病と診断され、且つ１〜９のＭＭＳＥ又は６〜７のＢｒａａｋを有する患者の処置方法を提供し、その方法は、Ａβの残基１２−４３内のエピトープに結合し、且つ拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合する抗体の有効な療法を患者に施すことを含んでなる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
図面の簡単な記述
【図１Ａ】ＡｐｏＥ遺伝子型と無関係な固定されないＡＤ脳切片（後頭皮質）中の斑へのＣ−末端エピトープ特異的抗体２Ｇ３、１４Ｃ２及び２１Ｆ１２の結合を示す図。各列はａｐｏＥ３／Ｅ３遺伝子型を有する異なる患者からの切片を示す。３Ｄ６抗体は正の標準である。負の標準として用いられたＩｇＧは染色を示さなかった（示されていない）。
【図１Ｂ】ＡｐｏＥ遺伝子型と無関係な固定されないＡＤ脳切片（後頭皮質）中の斑へのＣ−末端エピトープ特異的抗体２Ｇ３、１４Ｃ２及び２１Ｆ１２の結合を示す図。各列はａｐｏＥ３／Ｅ４遺伝子型を有する異なる患者からの切片を示す。３Ｄ６抗体は正の標準である。負の標準として用いられたＩｇＧは染色を示さなかった（示されていない）。
【図２Ａ】ＰＤＡＰＰ、ＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウスの固定されない及び固定された脳切片中の斑への３Ｄ６抗体（正の標準）の相対的な結合を示す図。負の標準として用いられたＩｇＧは染色を示さなかった（示されていない）。
【図２Ｂ】ＰＤＡＰＰ、ＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウスの固定されない及び固定された脳切片中の斑へのＣ−末端エピトープ特異的抗体２Ｇ３の相対的な結合を示す図。負の標準として用いられたＩｇＧは染色を示さなかった（示されていない）。
【図２Ｃ】ＰＤＡＰＰ、ＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウスの固定されない及び固定された脳切片中の斑へのＣ−末端エピトープ特異的抗体１４Ｃ２の相対的な結合を示す図。負の標準として用いられたＩｇＧは染色を示さなかった（示されていない）。
【図２Ｄ】ＰＤＡＰＰ、ＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウスの固定されない及び固定された脳切片中の斑へのＣ−末端エピトープ特異的抗体２１Ｆ１２の相対的な結合を示す図。負の標準として用いられたＩｇＧは染色を示さなかった（示されていない）。
【図３Ａ】３Ｄ６、２１Ｆ１２及び２Ｇ３抗体ならびに３Ｄ６と２１Ｆ１２又は２Ｇ３の組み合わせに関する固定されないＡＤ脳切片の免疫染色を示す図であり、２Ｇ３及び２１Ｆ１２抗体が主に斑の高密度の芯に結合することを示す。
【図３Ｂ】３Ｄ６、２１Ｆ１２及び２Ｇ３抗体ならびに３Ｄ６と２１Ｆ１２又は２Ｇ３の組み合わせに関する固定されないＰＳＡＰＰマウス脳切片の免疫染色を示す図であり、２Ｇ３及び２１Ｆ１２抗体が主に斑の高密度の芯に結合することを示す。
【図４Ａ】ＩｇＧ（負の標準）、３Ｄ６抗体（正の標準）及びＣ−末端エピトープ特異的抗体２Ｇ３、１４Ｃ２及び２１Ｆ１２によるＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウス脳切片からの斑クリアランスの誘導を評価する生体外実験の結果を示す図。パネル中の白い点は３Ｄ６−染色斑からのシグナルを示す。
【図４Ｂ】ＩｇＧ（負の標準）、３Ｄ６抗体（正の標準）及びＣ−末端エピトープ特異的抗体２Ｇ３、１４Ｃ２及び２１Ｆ１２によるＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウス脳切片からの斑クリアランスの誘導を評価する図４Ａと別の生体外実験の結果を示す図。パネル中の白い点は３Ｄ６−染色された斑からのシグナルを示す。
【図５】生体外アッセイにおけるＰＳＡＰＰ（左のパネル）及びＬｉｎｅ  ４１（右のパネル）マウス脳切片からの斑の小グリア細胞食作用の誘導を示す図。下の６つのパネルのそれぞれにおいて、小グリア細胞内部におけるＡβの存在が見える。
【図６Ａ】ＡｐｏＥ遺伝子型と無関係な固定されないＡＤ脳切片（後頭皮質）中の斑への中心エピトープ特異的抗体２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２の結合を示す図。各列はａｐｏＥ３／Ｅ３遺伝子型を有する異なる患者からの切片を示す。３Ｄ６抗体は正の標準である。負の標準として用いられたＩｇＧは染色を示さなかった（示されていない）。
【図６Ｂ】ＡｐｏＥ遺伝子型と無関係な固定されないＡＤ脳切片（後頭皮質）中の斑への中心エピトープ特異的抗体２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２の結合を示す図。各列はａｐｏＥ３／Ｅ４遺伝子型を有する異なる患者からの切片を示す。３Ｄ６抗体は正の標準である。負の標準として用いられたＩｇＧは染色を示さなかった（示されていない）。
【図７】固定されないＰＤＡＰＰ及びＰＳＡＰＰマウス脳切片中の斑への３Ｄ６抗体（正の標準）ならびに中心エピトープ特異的抗体２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２の相対的な結合を示す図。負の標準として用いられたＩｇＧは染色を示さなかった（示されていない）。非−トランスジェニック標準マウスの背景画像も示す（Ｎｏｎ−Ｔｇ）。
【図８Ａ】３Ｄ６及び２２Ｄ１２抗体ならびに２つの抗体の組み合わせに関する固定されないＡＤ脳切片の免疫染色を示す図であり、２２Ｄ１２抗体が主に斑の高密度の芯に結合することを示す。
【図８Ｂ】３Ｄ６及び２２Ｄ１２抗体ならびに２つの抗体の組み合わせに関する固定されないＰＳＡＰＰマウス脳切片の免疫染色を示す図であり、２２Ｄ１２抗体が主に斑の高密度の芯に結合することを示す。
【図９】ＩｇＧ（負の標準）、３Ｄ６抗体（正の標準）ならびに中心エピトープ特異的抗体２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２によるＰＤＡＰＰ及びＰＳＡＰＰマウス脳切片からの斑クリアランスの誘導を評価する生体外実験の結果を示す図。各パネル中の白い点は３Ｄ６−染色された斑からのシグナルを示す。中心エピトープ特異的抗体は、ＰＤＡＰＰ切片において有意に斑を除去しないが、Ｌｉｎｅ  ４１マウスの切片において斑を除去した。
【図１０】生体外アッセイにおけるＰＤＡＰＰ（左のパネル）及びＰＳＡＰＰ（右のパネル）マウス脳切片からの斑の小グリア細胞食作用の誘導を示す図。３Ｄ６抗体（正の標準）の両パネル及びＰＳＡＰＰマウス切片中の２６６抗体に対応する右下のパネルにおいて、小グリア細胞内部におけるＡβの存在が見える。
【００２５】
配列の簡単な記述
【００２６】
【表１】
2015526409.tif 000003
【００２７】
定義
基本的な抗体構造単位は、サブユニットの四量体を含む。各四量体は２つの同じポリペプチド鎖の対から成り、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ−末端部分は、主に抗原認識を担う約１００〜１１０個かもしくはそれより多くのアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ−末端部分は、主にエフェクター機能を担う不変領域を区画する。重鎖不変領域はＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
【００２８】
軽鎖はカッパ又はラムダとして分類される。重鎖はガンマ、ミュウ、アルファ、デルタ又はイプシロンとして分類され、抗体のイソタイプをそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥとして定義する。軽鎖及び重鎖内で、可変及び不変領域は約１２個かもしくはそれより多いアミノ酸の「Ｊ」領域により連結され、重鎖は約１０個のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。（一般的にＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９），７章を参照されたい（引用することによりその全体がすべての目的のために本明細書の内容となる）。ヒトにおいては、４つのＩｇＧイソタイプ、ＩｇＧ１、２、３及び４がある。重鎖不変領域内のアミノ酸はＥＵナンバリング会議（ＥＵ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ）による番号である。
【００２９】
各軽／重鎖対の可変領域は抗体結合部位を形成する。かくして完全な（ｉｎｔａｃｔ）抗体は２つの結合部位を有する。二重機能性又は二重特異性抗体における場合を除いて、２つの結合部位は同じである。鎖はすべて、相補性決定領域又はＣＤＲｓとも呼ばれる３つの高頻度可変領域により連結した比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的な構造を示す。各対の２つの鎖からのＣＤＲｓはフレームワーク領域により整列し、特異的なエピトープへの結合を可能にする。Ｎ−末端からＣ−末端までに、軽鎖及び重鎖の両方はドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の指定は、好ましくはＫａｂａｔ著，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７  ａｎｄ  １９９１）又はＣｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ著，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７，１９８７年の定義に従う。しかしながら、ＣＤＲｓを代わりにＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３，１９８９年に従って、あるいはＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの定義の複合定義により定義することができ、その定義ではＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａにより定義されるＣＤＲ内に存在するいずれのアミノ酸もＣＤＲの一部と考えられ、他の残基はフレームワーク残基と考えられる。
【００３０】
抗体又は免疫グロブリンへの言及は、完全な抗体及びその結合フラグメントを含む。典型的には、フラグメントは、抗原への特異的な結合に関し、それらが由来する完全な抗体と競合する。フラグメントには分離された重鎖及び軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ及びＦｖが含まれる。分離された鎖にはＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳTM（すなわちラクダ又はラマからの抗体の重鎖の単離されたＶＨフラグメントであり、場合によりヒト化されていることができる）が含まれる。単離されたＶＨフラグメントを、ヒト抗体のような他の供給源から得ることもできる。フラグメントは組換えＤＮＡ法により、あるいは完全な免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的分離により作製される。「抗体」という用語は、他のタンパク質との融合タンパク質に化学的に共役した、あるいはそれらとして発現された１種もしくはそれより多い免疫グロブリン鎖も含む。「抗体」という用語は、二重特異性抗体も含む。二重特異性又は二重機能性抗体は、２つの異なる重／軽鎖対及び２つの異なる結合部位を有する人工のハイブリッド抗体である。ハイブリドーマの融合又はＦａｂ’フラグメントの連結を含む多様な方法により、二重特異性抗体を作製することができる（例えばＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ著，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１，１９９０年；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３，１９９２年を参照されたい。）。
【００３１】
モノクローナル抗体のその標的抗原への特異的な結合は、少なくとも１０6、１０7、１０8、１０9又は１０10Ｍ-1の親和性を意味する。特異的な結合は、少なくとも１種の無関係な標的に起こる非−特異的結合より、量において検出可能な程高く、それらと区別され
得る。特異的な結合は、特定の官能基又は特定の空間的はまり（ｆｉｔ）（例えば錠と鍵型）の間の結合の形成の結果であり得るが、非特異的な結合は通常、ファンデルワールス力の結果である。しかしながら特異的な結合は、モノクローナル抗体がたった１つのみの標的に結合することを必ずしも意味しない。
【００３２】
拡散斑に比較して密集斑に「優先的に結合する」抗体は、免疫染色アッセイにおいてより強力なシグナルを発生する抗体である（例えばＨｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．著，１９９５年，同上）。同じ組織切片（例えばヒトからの）において密集斑と拡散斑の間でそのような比較を行うことができる。あるいはまた、密集斑の異なる呈示量（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ）を含有する組織切片の間で比較を行うことができ、ＰＳＡＰＰマウス（Ｈｏｌｃｏｍｂ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ４：９７−１００，１９９８年；Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ  １７３：１８３−１９５，２００２年）からの組織切片と、より低い密集斑の呈示量を有するＰＤＡＰＰマウス（Ｇａｍｅｓ
ｅｔ  ａｌ．著，Ｎａｔｕｒｅ  ３７３：５２３−５２７，１９９５年）からの組織切片の比較が例である。密集斑でも拡散斑でも、個々の斑の染色の間でいくらかの変動があり得るので、比較は好ましくはいくつかの密集斑及びいくつかの拡散斑の平均（ａｖｅｒａｇｅ）もしくは平均（ｍｅａｎ）染色に基づき、差は、拡散斑に対する密集斑の染色の増加が拡散斑の染色の変動の合理的な尺度（すなわち平均プラス標準偏差）を超える程十分でなければならない。免疫染色は目により、あるいはもっと定量的に染色強度を表わす数値に染色をデジタル化することにより、比較され得る。
【００３３】
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン又は抗体（あるいはその抗原結合フラグメント）が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続アミノ酸及びタンパク質の三次おりたたみ（ｔｅｒｔｉａｒｙ  ｆｏｌｄｉｎｇ）により並置される不連続アミノ酸の両方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には変性性溶媒に暴露されても保存されるが、三次おりたたみにより形成されるエピトープは、典型的に変性性溶媒を用いて処理されると失われる。エピトープは、典型的には少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸を独特の空間的コンホーメーションで含む。エピトープの空間的コンホーメーションの決定方法は、例えばｘ−線結晶学及び２−次元核磁気共鳴を含む。例えばＥｐｉｔｏｐｅ
Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６年を参照されたい。
【００３４】
同じ又は重複するエピトープを認識する抗体を、１つの抗体が標的抗原への他の抗体の結合と競合する能力を示す簡単なイムノアッセイにおいて同定することができる。抗体のエピトープを、接触残基の同定のための、その抗原に結合した抗体のＸ−線結晶学により、定義することもできる。あるいはまた、１つの抗体の結合を減少させるか又は排除する抗原中のすべてのアミノ酸突然変異が他の抗体の結合を減少させるか又は排除する場合、２つの抗体は同じエピトープを有する。１つの抗体の結合を減少させるか又は排除するいくつかのアミノ酸突然変異が他の抗体の結合を減少させるか又は排除する場合、２つの抗体は重複するエピトープを有する。
【００３５】
抗体の間の競合は、試験下の抗体が共通の抗原への参照抗体の特異的な結合を妨げるアッセイにより決定される（例えばＪｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０年を参照されたい）。過剰の試験抗体（例えば少なくとも２ｘ、５ｘ、１０ｘ、２０ｘ又は１００ｘ）が、競合的結合アッセイにおいて測定される場合に、参照抗体の結合を少なくとも５０％、しかし好ましくは７５％、９０％又は９９％妨げる場合に、試験抗体は参照抗体と競合する。競合アッセイにおいて同定される抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体及び参照抗体が結合する
エピトープに立体障害が起こるのに十分に近接する隣接エピトープに結合する抗体が含まれる。
【００３６】
ＡＰＰの複数のイソタイプ、例えばＡＰＰ695、ＡＰＰ751及びＡＰＰ770が存在する。文脈から他であると明らかでなければ、ＡＰＰ内のアミノ酸はＡＰＰ770イソタイプの配列に従って番号を指定される（例えばＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｐ０５０６７を参照されたい）。Ａβペプチドの配列及びＡＰＰ前駆体へのそれらの関連性はＨａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．著，ＴＩＮＳ  ２０，１５５−１５８，１９９７年の図１により示されている。例えばＡβ４２は、配列：
【００３７】
【化１】
2015526409.tif 000004
【００３８】
を有する。
【００３９】
文脈から他であると明らかでなければ、Ａβへの言及は上記の配列の天然の対立遺伝子変異、特に遺伝性疾患と関連するもの、例えばＡｒｃｔｉｃ変異、Ｅ６９３Ｇ、ＡＰＰ  ７７０ナンバリング（ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）も含む。Ａβ４１、Ａβ４０及びＡβ３９は、Ｃ−末端からのそれぞれＡｌａ、Ａｌａ−Ｉｌｅ及びＡｌａ−Ｉｌｅ−Ｖａｌの脱落によりＡβ４２と異なる。Ａβ４３は、Ｃ−末端におけるトレオニン残基の存在によりＡβ４２と異なる。
【００４０】
ＡβのＮ−末端エピトープは、残基１−１１内のエピトープを意味する。Ｃ−末端領域内のエピトープは、残基２９−４３内のエピトープを意味し、中心又は中−領域内のエピトープは、残基１２−２８内のエピトープを意味する。エピトープがある範囲を以て存在する場合、それはその範囲を区画するアミノ酸ならびに間のアミノ酸を含むことができる。中心及びＣ−末端領域への抗体を集合的に指す場合、そのような抗体は中心又はＣ−末端領域内に、あるいは中心とＣ−末端領域の間の境界に及ぶエピトープを有することができる。すなわちエピトープはＡβの残基１２−４３内にある。
【００４１】
モノマーＡβ及びＡＤＤＬｓとして既知のこともある（Ｌａｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．著，ＰＮＡＳ  Ｍａｙ  ２６，１９９８  ｖｏｌ．９５ｎｏ．１１  ６４４８−６４５３）約４〜１０個のモノマーの小さいオリゴマー集合体は、ＣＳＦのような体液を含む水溶液中に可溶性である。試験管内凝集により、又は斑の形態で生体内において形成されるＡβのより高次の集合体は、実質的に水溶液中に不溶性である。凝集したＡβは、ペプチドのＣ−末端における疎水性残基（ＡＰＰの貫膜ドメインの一部）により、少なくとも部分的にまとまっている（ｈｅｌｄ  ｔｏｇｅｔｈｅｒ）と思われる。高次の不溶性の沈着物は、アミロイド原線維と呼ばれることもある。原線維はクロス−ベータ構造を特徴とし、洗剤及び変性性溶媒中でさえ実質的に不溶性である（Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．著，ＰＮＡＳ  １０６，１９８１３−１９８１８，２００９年；Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４，１９−５２，２００７年を参照されたい）。
【００４２】
斑は、Ｄｉｃｋｓｏｎ  ＆  Ｖｉｃｋｅｒｓ著，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．２００１；１０５（１）：９９−１０７の三部分案（ｔｒｉｐａｒｔｉｄｅ  ｓｃｈｅｍｅ）により分類される。「密集」又は「原線維状」斑という用語は、合流した外側の縁に導く密集したスポーク−様延長部分を有するＡβの中心塊の形態学的表現型を有する斑を指す（Ｄ
ｉｃｋｓｏｎ著，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．２００１；１０５（１）：９９−１０７）。
【００４３】
「拡散斑」という用語は、形態学的に同定可能な下部構造がない斑を指し、Ａβの実質的に均一な球として現れる。
【００４４】
「有芯斑（ｄｅｎｓｅ−ｃｏｒｅｄ  ｐｌａｑｕｅ）」という用語は、実質的に均一なＡβの外部球により囲まれたＡβの密集した中心塊の形態学的表現型を有する斑を指す。有芯斑は拡散斑及び密集斑の両方の特徴を有するので、有芯斑内の密集領域及び拡散領域の相対的な表面積又は体積に基づき、それらを密集斑及び拡散斑と異なるカテゴリーとして処理するか、あるいはこれらの斑の種類の間に配置することができる。
【００４５】
「Ｆｃ領域」という用語は、ＩｇＧ重鎖のＣ−末端領域を指す。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界はわずかに変わり得るので、Ｆｃ領域は、典型的にはＩｇＧ重鎖の大体アミノ酸残基Ｃｙｓ２２６からカルボキシル−末端に及ぶとして定義される。
【００４６】
「エフェクター機能」という用語は、抗体（例えばＩｇＧ抗体）のＦｃ領域内にある活性を指し、例えば補体及び／又はＦｃレセプターのようなエフェクター分子に結合する抗体の能力を含み、それは抗体のいくつかの免疫機能、例えばエフェクター細胞活性、ライシス、補体−媒介活性、抗体クリアランス及び抗体半減期を制御することができる。ヒンジ領域内の突然変異によってエフェクター機能に影響を及ぼすこともできる。
【００４７】
「Ｋａｂａｔナンバリング」という用語は、引用することにより記載事項が本明細書の内容となるＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．著（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ
Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１年）におけるような残基のナンバリングとして定義される。
【００４８】
「アジュバント」という用語は、抗原と一緒に投与されると抗原への免疫反応を引き出す及び／又は増大させるが、単独で投与されると抗原への免疫反応を発生させない化合物を指す。アジュバントは、リンパ球補充、Ｂ及び／又はＴ細胞の刺激ならびにマクロファージの刺激を含むいくつかの機構により、免疫反応を増大させることができる。
【００４９】
「ＡｐｏＥ４キャリヤ」という用語は、１つ又は２つのＡｐｏＥ４対立遺伝子を有する患者を指し、「ＡｐｏＥ４非キャリヤ」、「ＡｐｏＥ４非−キャリヤ」又は「非−ＡｐｏＥ４キャリヤ」という用語は、ＡｐｏＥ４対立遺伝子を有していない患者を指す。
【００５０】
アルツハイマー病又は脳内のＡβのアミロイド沈着を特徴とする他の疾患の危険の高い個体とは、５年のような限定された期間内に発病する患者の危険を一般的な集団より有意に高くする１つもしくはそれより多くの既知の危険因子（例えば７０才より高い年令、遺伝的、生化学的、家族歴、前駆症状）を有する個体である。
【００５１】
中期アルツハイマー病は、例えばＤＭＳ  ＩＶ  ＴＲに従い、１０〜２０のミニ−メンタル試験得点あるいは他のスケール上の同等の得点（例えばＢｒａａｋスケール上の３〜４）に従うアルツハイマー病の診断を意味する。
【００５２】
後期アルツハイマー病は、例えばＤＭＳ  ＩＶ  ＴＲに従い、９かもしくはそれより低いミニ−メンタル試験得点あるいは他のスケール上の同等の得点（例えばＢｒａａｋスケール上の５〜６）に従うアルツハイマー病の診断を意味する。
【００５３】
あるいはまた、中期及び後期アルツハイマー病を、Ｇｌｏｂａｌ  Ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ  Ｓｃａｌｅ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＧＤＳ）（Ｒｅｉｓｂｅｒｇ  Ｓｃａｌｅとしても既知）上の段階５〜７のいずれか又は全体として定義することができる。
【００５４】
統計的有意性はｐ＜０．０５を指す。マーカーのベースライン測定値に対するマーカーにおける変化は、変化が繰り返し測定における典型的な誤差の限界の外にある場合に、有意と考えられる。ＰＥＴ走査によるアミロイド沈着の測定に関し、典型的な誤差の限界（例えば同じ患者についての測定の再現性）は約５％である。
【００５５】
発明の詳細な記述
Ｉ．  一般
本発明は、Ａβの中−もしくはＣ−末端領域への抗体を用いる、Ａβのアミロイド沈着により特徴付けられる疾患の処置方法を提供する。機構の理解は本発明の実施に必要ではないが、抗体は少なくとも部分的に密集もしくは原線維状アミロイド斑の減少又は除去を含む機構により機能すると思われる。方法は、Ａβの中心及び／又はＣ−末端エピトープを認識する抗体が拡散斑に比較して優先的に密集斑に結合でき、それにより患者の脳からのそのような斑の除去を助長するという結果を部分的に前提とする。中−及び  −末端抗体が斑に結合して除去する能力を欠いており、少なくともいくつかのそのような抗体が主に可溶性Ａβに結合するという以前の報告を見ると、この結果は驚くべきである。先行データの多くはアルツハイマー病のＰＤＡＰＰマウスモデルからの斑を用いて作成され、それはアルツハイマー病患者又はある種の他のトランスジェニックモデルと比較して密集斑の割合を過少に示す点で、本データを先行データと融和させる（ｒｅｃｏｎｃｉｌｅｄ）ことができる。ＰＤＡＰＰマウス中の斑への中−及びＣ−末端抗体の全体的な結合を低い、又は有意でないとさえみなすことができるが、中及びＣ−末端抗体はアルツハイマー病患者及びある種の他のトランスジェニック動物モデル、例えばＰＳＡＰＰマウス中に存在する斑の小さい組、すなわち密集斑に強力に結合する。結局、中−及びＣ−末端抗体は斑の除去に用いられ得、中期から後期アルツハイマー病において多くの場合にそうであるように比較的高い高密度斑の割合を有する患者において特に有用である。中及びＣ−末端抗体は、それらの密集斑への優先的な結合の故に、異なる型の斑のより均一な認識を示すＮ−末端抗体との組み合わせにおいても有用である。
【００５６】
ＩＩ．  Ａベータ抗体
本発明は、場合によりＮ−末端抗体と組み合わされていることができる中−又はＣ−末端抗体を用いる。
【００５７】
Ａ．  Ｃ−末端抗体
本発明のＣ−末端抗体は、Ａβの残基２９−４３内のエピトープに結合する。抗体は末端−特異的であることができるか、あるいはそうでなくても良い。末端−特異的抗体は、そのエピトープが遊離のカルボキシル基を有するＣ−末端アミノ酸（すなわち別のアミノ酸に結合したペプチドではない）を含む抗体である。末端−特異的アミノ酸は、ＡＰＰ又はＡβのＣ−末端に及ぶＡＰＰの他のペプチドに比較して優先的にＡβに結合する。抗体はＡβのいずれの型（例えばＡβ  ３８、２９、４０、４１、４２、４３）に関して末端−特異的であることもできる。本発明のＣ−末端抗体は、拡散斑に比較して密集斑に結合する。いくつかの代表的なＣ−末端抗体は２Ｇ３抗体（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄ  ｅｔ
ａｌ．著，ＰＮＡＳ  ９４，１５５０−１５５５，１９９７年，残基Ａβ33-40内にエピトープ）、１４Ｃ２抗体（Ｅｌａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｌｏｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１９９７  Ａｐｒｉｌ  １５；９４（８）：４１０９−４１１２），残基Ａβ33-40内にエピ
トープ）、２１Ｆ１２抗体（残基Ａβ33-42内にエピトープ）である。２１Ｆ１２はＡβ４２に関して末端−特異的であり、２Ｇ３はＡβ４０に関して末端−特異的であり、Ａβのより長い形態ともっとずっと低い反応性を有する。１４Ｃ２の正確なエピトープ特異性は決定されていない。前記の抗体のいずれかのキメラ、ヒト化又は張り合わされた形態も含まれ、２Ｇ３、１４Ｃ２又は２１Ｆ１２のいずれかと同じ６つのＫａｂａｔ  ＣＤＲｓを共有するいずれの抗体も含まれる。
【００５８】
２１Ｆ１２モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列（Ｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００３  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １８；１００（４）：２０２３−２０２８）を下記に示す（シグナル配列をイタリック体で示し、且つ下線を引き、ＣＤＲｓを、下線を有するボールド体で示す：
重鎖可変領域：
【００５９】
【化２】
2015526409.tif 000005
【００６０】
軽鎖可変領域：
【００６１】
【化３】
2015526409.tif 000006
【００６２】
軽鎖可変領域のＣＤＲｓは、ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２及びＣＤＲ  Ｌ３に関して配列番号：３のそれぞれ残基２４から３９、残基５５から６１及び残基９４から１０２に対応する（シグナル配列は−１９から−１とナンバリングされる）。
【００６３】
重鎖可変領域のＣＤＲｓは、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２及びＣＤＲ  Ｈ３に関して配列番号：２のそれぞれ残基２６から３５、残基５０から６６及び残基９９から１０６に対応する（シグナル配列は−１９から−１とナンバリングされる）。
【００６４】
他のＣ−末端抗体には２Ｈ６又は９ＴＬ抗体（Ｗｉｌｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．著，２００６年，同上；米国特許第７，８０７，１６５号明細書及び米国特許第２００６００５７７０１号明細書）及び２２８６抗体（Ｗｉｌｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．著，２００４年，同上；国際公開第２００４０３２８６８号パンフレット）が含まれる。９ＴＬ抗体の重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡ配列は、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ  ６１２４及び６１２５として寄託されている。９ＴＬ抗体のヒト化形態は、ポネズマブ（ｐｏｎｅｚｕｍａｂ）として既知である。２２８６抗体は、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ  ５１９９として寄託されている。場合により、Ｃ−末端抗体は２Ｈ６、９ＴＬ、ポネズマブ又は２２８６以外の抗体であることができる。場合により、Ｃ−末端抗体は、２Ｈ６、９ＴＬ又は２２８６抗体の対応するＣＤＲｓと同一のＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲｓのいずれか又はすべてを有していない抗体であることができる。場合により、Ｃ−末端抗体は２Ｈ６、９ＴＬ又は２２８６抗体のＣＤＲｓへの少なくとも９０％の配列同一性を有するＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａ
ＣＤＲｓを有していない抗体であることができる。本発明のいくつかのＣ−末端抗体は、２Ｈ６、９ＴＬ抗体及び／又は２２８６抗体より高い程度で、拡散斑と比較して優先的に密集斑に結合する。
【００６５】
実施例に示す通り、斑、特に密集斑の除去のような免疫療法が必要な個体（例えばアルツハイマー病患者）の脳から斑、特に密集斑を除去するためにＣ−末端抗体を用いることができる。
【００６６】
本発明のいくつかの抗体は、２Ｇ３、１４Ｃ２又は２１Ｆ１２と称される抗体と同じか又は重複するエピトープに結合する。Ａβ又は所望のエピトープを含むその一部を用いてマウスを免疫化し、得られる抗体を場合により２Ｇ３、１４Ｃ２又は２１Ｆ１２との競合においてＣＤ１２２への結合に関してスクリーニングすることにより、そのような結合特異性を有する他の抗体を作製することができる。抗体をＡβの突然変異形態に対してスクリーニングし、突然変異的変化の集合への（ｔｏ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ）２Ｇ３、１４Ｃ２又は２１Ｆ１２と同じかもしくは類似の結合分布を示す抗体を同定することができる。突然変異は、一時に１個の残基の、あるいはより広い間隔で、Ａβ又はエピトープが存在することが知られているその切片全体を通じての、アラニン（又はすでにアラニンが存在する場合はセリン）を用いる系統的な置き換え置換であることができる。
【００６７】
選ばれるネズミ抗体（例えば２Ｇ３、１４Ｃ２又は２１Ｆ１２）の結合特異性を有する抗体を、ファージディスプレー法の変形を用いて作製することもできる。Ｗｉｎｔｅｒ、国際公開第９２／２０７９１号パフレットを参照されたい。この方法は、ヒト抗体の作製に特に適している。この方法においては、選ばれるネズミ抗体の重鎖又は軽鎖可変領域を出発材料として用いる。例えば出発材料として軽鎖可変領域が選ばれる場合、メンバーが同じ軽鎖可変領域（すなわちネズミ出発材料）及び異なる重鎖可変領域を示すファージライブラリを構築する。重鎖可変領域は、例えば転位ヒト重鎖可変領域のライブラリから得られ得る。Ａβに関する強い特異的結合（例えば少なくとも１０8そして好ましくは少なくとも１０9Ｍ-1）を示すファージを選択する。このファージからの重鎖可変領域は、次いでさらなるファージライブラリの構築のための出発材料として役立つ。このライブラリにおいて、各ファージは同じ重鎖可変領域（すなわち第１のディスプレーライブラリから同定される領域）及び異なる軽鎖可変領域を示す。軽鎖可変領域は、例えば転位ヒト軽鎖可変領域（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ  ｒｅｇｉｏｎｓ）のライブラリから得られ得る。この場合も、Ａβに関する強い特異的結合を示すファージを選択する。得られる抗体は、通常、ネズミ出発材料と同じか又は類似のエピトープ特異性を有する。
【００６８】
２Ｇ３、１４Ｃ２又は２１Ｆ１２のような代表的な抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｃＤＮＡの突然変異誘発により、他の抗体を得ることができる。成熟重鎖及び／又は軽鎖可変領域のアミノ酸配列において、２Ｇ３、１４Ｃ２又は２１Ｆ１２に少なくとも９０％、９５％又は９９％同一であり、且つその機能的性質を保持している、ならびに／あるいは少数の機能的に不合理なアミノ酸置換（例えば同類置換）、欠失又は挿入によりそれぞれの抗体と異なるモノクローナル抗体も、本発明に含まれる。２Ｇ３、１４Ｃ２又は２１Ｆ１２の対応するＣＤＲｓに９０％、９５％、９９％又は１００％同一であるＫａｂａｔにより定義されるＣＤＲ（ｓ）の少なくとも１つそして好ましくは６つすべてを有するモノクローナル抗体も含まれる。
【００６９】
Ｂ．  中心エピトープ抗体
本発明の中心−もしくは中−エピトープ抗体は、Ａβの残基１２−２９内のエピトープを認識し、拡散斑と比較して密集斑に優先的に結合する。いくつかの代表的な中心−エピトープ抗体は、２６６抗体（Ａβ16-23内のエピトープに特異的）、１５Ｃ１１抗体（Ａβ18-22内のエピトープに特異的）及び２２Ｄ１２抗体（Ｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００３  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １８；１００（４）：２０２３−２０２８，Ａβ18-22内のエピトープに特異的）ならびに前記の抗体のいずれか１つのキメラ、ヒト化もしくは張り合わされた形態である。
【００７０】
２６６モノクローナル抗体を生産する細胞系は、ブタペスト条約（Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙ）の約定の下に、２００４年７月２０日に寄託番号ＰＴＡ−６１２３としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された。場合により、２６６抗体のイソタイプはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４、好ましくはＩｇＧ１であることができる。
【００７１】
２６６モノクローナル抗体ＣＤＲｓのアミノ酸配列は以下の通りである（米国特許第７，８９２，５４５号明細書）：
【００７２】
【化４】
2015526409.tif 000007
【００７３】
２６６抗体のヒト化形態は、米国特許第２００４０２６５３０８号明細書、米国特許第２００４０２４１１６４号明細書、国際公開第０３／０１６４６７号パンフレット及び米国特許第７，１９５，７６１号明細書に記載されている。
【００７４】
代表的なヒト化２６６抗体の軽鎖及び重鎖可変領域配列を下記に示す（シグナル配列を含まない）：
軽鎖
【００７５】
【化５】
2015526409.tif 000008
【００７６】
ここで位置２におけるＸａａはＶａｌ又はＩｌｅであり；位置７におけるＸａａはＳｅｒ又はＴｈｒであり；位置１４におけるＸａａはＴｈｒ又はＳｅｒであり；位置１５におけるＸａａはＬｅｕ又はＰｒｏであり；位置３０におけるＸａａはＩｌｅ又はＶａｌであり；位置５０におけるＸａａはＡｒｇ、Ｇｌｎ又はＬｙｓであり；位置８８におけるＸａａはＶａｌ又はＬｅｕであり；位置１０５におけるＸａａはＧｌｎ又はＧｌｙであり；位置１０８におけるＸａａはＬｙｓ又はＡｒｇであり；そして位置１０９におけるＸａａはＶａｌ又はＬｅｕである；ならびに
重鎖
【００７７】
【化６】
2015526409.tif 000009
【００７８】
ここで位置１におけるＸａａはＧｌｕ又はＧｌｎであり；位置７におけるＸａａはＳｅｒ又はＬｅｕであり；位置４６におけるＸａａはＧｌｕ、Ｖａｌ、Ａｓｐ又はＳｅｒであり；位置６３におけるＸａａはＴｈｒ又はＳｅｒであり；位置７５におけるＸａａはＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ又はＴｈｒであり；位置７６におけるＸａａはＬｙｓ又はＡｒｇであり；位置８９におけるＸａａはＧｌｕ又はＡｓｐであり；そして位置１０７におけるＸａａはＬｅｕ又はＴｈｒである。
【００７９】
代表的なヒト化２６６抗体は、以下の軽鎖及び重鎖配列を含む（シグナル配列を含まない）：
軽鎖
【００８０】
【化７】
2015526409.tif 000010
【００８１】
重鎖
【００８２】
【化８】
2015526409.tif 000011
【００８３】
１５Ｃ１１モノクローナル抗体を生産する細胞系は、ブタペスト条約の約定の下に、２００５年１２月１２日に寄託番号ＰＴＡ−７２７０としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された。場合により、１５Ｃ１１抗体のイソタイプはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４、好ましくはＩｇＧ１であることができる。
【００８４】
１５Ｃ１１モノクローナル抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を下記に示す（シグナル配列を含まない）：
【００８５】
【化９】
2015526409.tif 000012
【００８６】
ＣＤＲｓは、ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２及びＣＤＲ  Ｌ３に関して配列番号：１４の
それぞれ残基２４から３９、残基５５から６１及び残基９４から１０１に対応する。
【００８７】
１５Ｃ１１モノクローナル抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を下記に示す：
【００８８】
【化１０】
2015526409.tif 000013
【００８９】
ＣＤＲｓは、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２及びＣＤＲ  Ｈ３に関して配列番号：１５のそれぞれ残基２６から３５、残基５０から６６及び残基９９から１０１に対応する。
【００９０】
１５Ｃ１１のヒト化形態の作製は、米国特許第７，６２５，５６０号明細書に記載されている。
【００９１】
本発明のいくつかの抗体は、２６６、１５Ｃ１１又は２２Ｄ１２と称される抗体と同じか又は重複するエピトープに結合する。Ａβ又は所望のエピトープを含むその一部を用いてマウスを免疫化し、得られる抗体を場合により２６６、１５Ｃ１１又は２２Ｄ１２との競合においてＡβへの結合に関してスクリーニングすることにより、そのような結合特異性を有する他の抗体を作製することができる。抗体をＡβの突然変異形態に対してスクリーニングし、突然変異的変化の集合への２６６、１５Ｃ１１又は２２Ｄ１２と同じかもしくは類似の結合分布を示す抗体を同定することができる。突然変異は、一時に１個の残基の、あるいはより広い間隔で、Ａβ又はエピトープが存在することが知られているその切片全体を通じての、アラニン（又はすでにアラニンが存在する場合はセリン）を用いる系統的な置き換え置換であることができる。
【００９２】
選ばれるネズミ抗体（例えば２６６、１５Ｃ１１又は２２Ｄ１２）の結合特異性を有する抗体を、ファージディスプレー法の変形を用いて作製することもできる。Ｗｉｎｔｅｒ、国際公開第９２／２０７９１号パフレットを参照されたい。この方法は、ヒト抗体の作製に特に適している。この方法においては、選ばれるネズミ抗体の重鎖又は軽鎖可変領域を出発材料として用いる。例えば出発材料として軽鎖可変領域が選ばれる場合、メンバーが同じ軽鎖可変領域（すなわちネズミ出発材料）及び異なる重鎖可変領域を示すファージライブラリを構築する。重鎖可変領域は、例えば転位ヒト重鎖可変領域のライブラリから得られ得る。Ａβに関する強い特異的結合（例えば少なくとも１０8そして好ましくは少なくとも１０9Ｍ-1）を示すファージを選択する。このファージからの重鎖可変領域は、次いでさらなるファージライブラリの構築のための出発材料として役立つ。このライブラリにおいて、各ファージは同じ重鎖可変領域（すなわち第１のディスプレーライブラリから同定される領域）及び異なる軽鎖可変領域を示す。軽鎖可変領域は、例えば転位ヒト軽鎖可変領域のライブラリから得られ得る。この場合も、Ａβに関する強い特異的結合を示すファージを選択する。得られる抗体は、通常、ネズミ出発材料と同じか又は類似のエピトープ特異性を有する。
【００９３】
２６６、１５Ｃ１１又は２２Ｄ１２のような代表的な抗体の重鎖及び軽鎖をコードするｃＤＮＡの突然変異誘発により、他の抗体を得ることができる。成熟重鎖及び／又は軽鎖可変領域のアミノ酸配列において、２６６、１５Ｃ１１又は２２Ｄ１２に少なくとも９０
％、９５％又は９９％同一であり、且つその機能的性質を保持している、ならびに／あるいは少数の機能的に不合理なアミノ酸置換（例えば同類置換）、欠失又は挿入によりそれぞれの抗体と異なるモノクローナル抗体も、本発明に含まれる。２６６、１５Ｃ１１又は２２Ｄ１２の対応するＣＤＲｓに９０％、９５％、９９％又は１００％同一であるＫａｂａｔにより定義されるＣＤＲ（ｓ）の少なくとも１つそして好ましくは６つすべてを有するモノクローナル抗体も含まれる。
【００９４】
実施例に示す通り、斑、特に密集斑の除去のような免疫療法が必要な個体（例えばアルツハイマー病患者）の脳から斑、特に密集斑を除去するために中心−エピトープ抗体を用いることができる。
【００９５】
Ｃ．  Ｎ−末端抗体
いくつかの方法において、中−もしくはＣ−末端抗体はＮ−末端抗体（すなわちＡβの残基１−１１内、好ましくはＡβの残基１−５又は３−７内のエピトープに結合する抗体）と組み合わせて用いられる。
【００９６】
３Ｄ６抗体、１０Ｄ５抗体及びその変形（例えばキメラ、ヒト化又は張り合わされた形態）は、用いられ得る抗体の例である。両者は、米国特許第２００３０１６５４９６号明細書、米国特許第２００４００８７７７７号明細書、国際公開第０２／４６２３７号パンフレット及び国際公開第０４／０８０４１９号パンフレット、国際公開第０２／０８８３０６号パンフレット及び国際公開第０２／０８８３０号パンフレット及び米国特許第７，３１８，９２３号明細書に記載されている。１０Ｄ５抗体は、米国特許第２００５０１４２１３１号明細書にも記載されている。追加の３Ｄ６抗体は、米国特許第２００６０１９８８５１号明細書及びＰＣＴ／ＵＳ０５／４５６１４号パンフレットに記載されている。３Ｄ６は、ヒトＡβ中に、特定的には残基１−５中に位置するＮ−末端エピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。１０Ｄ５は、ヒトＡβ中に、特定的には残基３−６内に位置するＮ−末端エピトープに特異的に結合するｍＡｂである。３Ｄ６モノクローナル抗体を生産する細胞系（ＲＢ９６  ３Ｄ６．３２．２．４）は、ブタペスト条約の約定の下に、２００３年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−５１３０としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された。１０Ｄ５モノクローナル抗体を生産する細胞系（ＲＢ４４  １０Ｄ５．１９．２１）は、ブタペスト条約の約定の下に、２００３年４月８日に寄託番号ＰＴＡ−５１２９としてＡＴＣＣに寄託された。
【００９７】
バピネウズマブ（ｂａｐｉｎｅｕｚｕｍａｂ）（世界保健機関により命名された国際一般名）は、配列番号：１６と称されるアミノ酸配列を有する成熟可変領域を有する軽鎖及び配列番号：１７と称されるアミノ酸配列を有する成熟可変領域を有する重鎖を含んでなるヒト化３Ｄ６抗体を意味する（ＷＨＯによりバピネウズマブと命名された抗体の重鎖及び軽鎖不変領域は、それぞれヒトＩｇＧ１及びヒトカッパである。）。
【００９８】
ヒト化３Ｄ６軽鎖可変領域
【００９９】
【化１１】
2015526409.tif 000014
【０１００】
ヒト化３Ｄ６重鎖可変領域
【０１０１】
【化１２】
2015526409.tif 000015
【０１０２】
配列番号：１８と称されるアミノ酸配列を有する成熟可変領域を有する軽鎖及び配列番号：１９と称されるアミノ酸配列を有する成熟可変領域を有する重鎖を含んで成るヒト化１０Ｄ５抗体の変形（ｖｅｒｓｉｏｎ）を下記に示す。
【０１０３】
ヒト化１０Ｄ５軽鎖可変領域
【０１０４】
【化１３】
2015526409.tif 000016
【０１０５】
ヒト化１０Ｄ５重鎖可変領域
【０１０６】
【化１４】
2015526409.tif 000017
【０１０７】
別の代表的なＮ−末端特異的抗体は、１２Ａ１１又はそのキメラ、ヒト化、張り合わされた又はナノボディー（ｎａｎｏｂｏｄｙ）形態である。１２Ａ１１抗体又はその変形は、米国特許第２００５０１１８６５１号明細書、米国特許第２００６０１９８８５１号明細書、国際公開第０４／１０８８９５号パンフレット及び国際公開第０６／０６６０８９号明細書に記載されており、それらのすべてはその記載事項全体が引用することによりすべての目的のために本明細書の内容となる。１２Ａ１１は、ヒトＡβ中、特定的に残基３−７内に位置するＮ−末端エピトープに特異的に結合するｍＡｂである。１２Ａ１１モノクローナル抗体を生産する細胞系は、ブタペスト条約の約定の下に、２００５年１２月１２日に寄託番号ＰＴＡ−７２７１としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された。
【０１０８】
代表的なヒト化１２Ａ１１抗体の軽鎖及び重鎖可変領域に関する配列（シグナル配列を含まない）を下記に示す。
【０１０９】
ヒト化１２Ａ１１軽鎖可変領域
【０１１０】
【化１５】
2015526409.tif 000018
【０１１１】
ヒト化１２Ａ１１重鎖可変領域（変形１）
【０１１２】
【化１６】
2015526409.tif 000019
【０１１３】
他の代表的なＮ−末端抗体には、米国特許第２００４００８２７６２Ａ１号明細書及び国際公開第０３／０７７８５８号パンフレットに記載されているような１２Ｂ４抗体又はその変形（例えばキメラ及びヒト化）が含まれる。１２Ｂ４は、ヒトＡβ中、特定的に残基３−７内に位置するＮ−末端エピトープに特異的に結合するｍＡｂである。
【０１１４】
他の代表的なＮ−末端抗体は、米国特許第２００６０１６５６８２号明細書及び国際公開第０６／０６６０４号パンフレットに記載されているような、６Ｃ６抗体又はその変形（例えばキメラ及びヒト化）である。６Ｃ６は、ヒトＡβ中、特定的に残基３−７内に位置するＮ−末端エピトープに特異的に結合するｍＡｂである。抗体６Ｃ６を生産する細胞系は、ブタペスト条約の約定の下に、２００５年１１月１日に寄託番号ＰＴＡ−７２００としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された。
【０１１５】
他の代表的なＮ−末端抗体は、米国特許第２００６０２５７３９６号明細書に記載されているような、２Ｈ３抗体又はその変形（例えばキメラ又はヒト化）である。２Ｈ３は、ヒトＡβ中、特定的に残基２−７内に位置するＮ−末端エピトープに特異的に結合するｍＡｂである。抗体２Ｈ３を生産する細胞系は、ブタペスト条約の約定の下に、２００５年１２月１３日に寄託番号ＰＴＡ−７２６７としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された。
【０１１６】
他の代表的なＮ−末端抗体には、米国特許第２００６０２５７３９６号明細書に記載されているような、３Ａ３抗体又はその変形（例えばキメラ又はヒト化）が含まれる。３Ａ３は、ヒトＡβ中、特定的に残基３−７内に位置するＮ−末端エピトープに特異的に結合するｍＡｂである。抗体３Ａ３を生産する細胞系は、ブタペスト条約の約定の下に、２００５年１２月１３日に寄託番号ＰＴＡ−７２６９としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された。
【０１１７】
Ｄ．  一般的特性
以下の特性は、記載したばかりのＣ−末端、中又はＮ−末端抗体のいずれにも当てはまる。抗体はポリクローナル又はモノクローナルであることができる。ポリクローナル血清は、典型的にはＡＰＰの長さに沿ったいくつかのエピトープに特異的に結合する抗体の混合集団を含有する。しかしながら、ポリクローナル血清は、Ａβの他のセグメントに特異的に結合せずに、Ａβ１−１１）のようなＡβの特定のセグメントに特異的であることができる。好ましい抗体は、キメラ、ヒト化又は張り合わせ（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３，１９８９年ならびに国際公開第９０／０７８６１号パンフレット、米国特許第５，６９３，７６２号明細書、米国特許第５，６９３，７６１号明細書、米国特許第５，５８５，０８９号明細書、米国特許第５，５３０，１０１号明細書及びＷｉｎｔｅｒ，米国特許第５，２２５，５３９号明細書を参照されたい）あるいはヒト（Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９３／１２２２７号パンフレット（１９９３）；米国特許第５，８７７，３９７号明細書、米国特許第５，８７４，２９９号明細書、米国特許第５，８１４，３１８号明細書、米国特許第５，７８９，６５０号明細書、米国特許第５，７７０，４２９号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５，５４５，８０６号明細書、Ｎａｔｕｒｅ  １４８，１５４７−１５５３，１９９４年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８２６，１９９６年、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，国際公開第９１／１０７４１号パンフレット（１９９１））  欧州特許第１４８１００８号明細書、Ｂｌｅｃｋ著，Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｅｐｔ／Ｏｃｔ．２００５）、米国特許第２００４１３２０６６号明細書、米国特許第２００５００８６２５号明細書、国際公開第０４／０７２２６６号パンフレット、国際公開第０５／０６５３４８号パンフレット、国際公開第０５／０６９９７０号パンフレット及び国際公開第０６／０５５７７８号パンフレット）抗体である。
【０１１８】
Ａβに対する他のヒト以下の、例えばネズミ、モルモット、霊長類、ウサギ又はラットモノクローナル抗体の作製は、例えば動物をＡβ又はそのフラグメントで免疫化することにより行われ得る。Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ著，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（ＣＳＨＰ  ＮＹ  １９８８）（引用することにより記載事項がすべての目的のために本明細書の内容となる）を参照されたい。場合により、免疫原をアジュバントと一緒に投与することができる。下記の通り、いくつかの型のアジュバントを用いることができる。完全フロイントアジュバント及び続く不完全アジュバントは、実験動物の免疫化に好ましい。ウサギ及びモルモットは、典型的にはポリクローナル抗体の作製のために用いられる。マウスは、典型的にはモノクローナル抗体の作製のために
用いられる。抗体は、Ａβ内の所望のエピトープへの特異的結合に関してスクリーニングされる。
【０１１９】
ヒト化抗体は一般的に、ヒト以下の「ドナー」の抗体からのＣＤＲｓがヒト「アクセプター」抗体配列中にグラフトされている遺伝子操作された抗体である（例えばＱｕｅｅｎ，米国特許第５，５３０，１０１号明細書及び第５，５８５，０８９号明細書；Ｗｉｎｔｅｒ，米国特許第５，２２５，５３９号明細書、Ｃａｒｔｅｒ，米国特許第６，４０７，２１３号明細書、Ａｄａｉｒ，米国特許第５，８５９，２０５号明細書、Ｆｏｏｔｅ，米国特許第６，８８１，５５７号明細書を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば成熟ヒト抗体配列、ヒト抗体配列の共通配列又は生殖系列領域配列であることができる。かくしてヒト化抗体は、全体的又は実質的にドナー抗体からのいくつか又はすべてのＣＤＲｓならびに全体的又は実質的にヒト抗体配列からの可変領域フレームワーク配列及び不変領域を有する抗体である。類似して、ヒト化重鎖は、全体的又は実質的にドナー抗体重鎖からの少なくとも１つ、２つ及び通常は３つすべてのＣＤＲｓならびに、もし存在するなら実質的にヒト重鎖可変領域フレームワーク及び不変領域配列からの重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖不変領域を有する。類似して、ヒト化軽鎖は、全体的又は実質的にドナー抗体軽鎖からの少なくとも１つ、２つ及び通常は３つすべてのＣＤＲｓならびに、もし存在するなら実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び不変領域配列からの軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖不変領域を有する。ヒト化抗体は、ナノボディー及びｄＡｂｓの他にヒト化重鎖及びヒト化軽鎖を含む。ヒト化抗体中のＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔにより定義される）の少なくとも８５％、９０％、９５％又は１００％がそれぞれのＣＤＲｓの間で同一である場合に、実質的にヒト以下の抗体中の対応するＣＤＲからのものである。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列又は抗体鎖の不変領域は、Ｋａｂａｔにより定義される対応する残基の少なくとも８５、９０、９５又は１００％が同一である場合に、実質的にそれぞれヒト可変領域フレームワーク配列又はヒト不変領域からのものである。
【０１２０】
ヒト化抗体には、多くの場合にマウス抗体からの６つ全部のＣＤＲｓ（好ましくはＫａｂａｔにより定義される）が導入されるが、全部より少ないマウス抗体からのＣＤＲｓ（例えば少なくとも３、４、５つ）を用いてヒト化抗体を作製することもできる（例えばＰａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２年；Ｖａｊｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３２０：４１５−４２８，２００２年；Ｉｗａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９−１０９１，１９９９年；Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ
ａｌ．著，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６４：１４３２−１４４１，２０００年）。
【０１２１】
いくつかの抗体においては、ヒト化抗体における結合を保持するために、ＣＤＲｓの一部、すなわちＳＤＲｓと呼ばれる結合のために必要なＣＤＲ残基のサブセットのみが必要である。抗原と接触せず、ＳＤＲｓ中にないＣＤＲ残基を以前の研究に基づいてＣｈｏｔｈｉａ高頻度ループの外にあるＫａｂａｔ  ＣＤＲｓの領域から（例えばＣＤＲ  Ｈ２中の残基Ｈ６０−Ｈ６５は多くの場合に必要でない）（Ｃｈｏｔｈｉａ著，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７年）、分子モデリングにより、及び／又は実験的に、あるいはＧｏｎｚａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：８６３，２００４年に記載されている通りに同定することができる。そのようなヒト化抗体の場合、１つもしくはそれより多いドナーＣＤＲ残基が不在であるか、又は全部のドナーＣＤＲが脱落している位置において、その位置を占有するアミノ酸はアクセプター抗体配列中の対応する位置（Ｋａｂａｔナンバリングにより）を占有するアミノ酸であることができる。含まれる（ｔｏ  ｉｎｃｌｕｄｅ）ＣＤＲｓ中でアクセプターアミノ酸がドナーアミノ酸に取って替わるそのような置換の数は、競合する重要性のバランスを反映する。そのよ
うな置換は、おそらくヒト化抗体中のマウスのアミノ酸の数を減少させ、結局免疫原性の可能性を低下させるのに有利である。しかしながら、置換は親和性の変化も引き起こし得、親和性における有意な低下は、好ましくは避けられる。ＣＤＲｓ内の置換のための位置及び置換するべきアミノ酸を実験的に選択することもできる。
【０１２２】
ヒトアクセプター抗体配列を、場合により多くの既知のヒト抗体配列の中から選び、ヒトアクセプター配列可変領域フレームワークとドナー抗体鎖の対応する可変領域フレームワークの間に高度の配列同一性（例えば６５〜８５％の同一性）を与えることができる。
【０１２３】
ヒト可変領域フレームワーク残基からのある種のアミノ酸を、ＣＤＲコンホーメーション及び／又は抗原への結合へのそれらの影響の可能性に基づいて、置換のために選択することができる。そのような影響の可能性の研究は、モデリング、特定の位置におけるアミノ酸の特性の試験あるいは特定のアミノ酸の置換もしくは突然変異誘発の効果の実験的な観察による。
【０１２４】
例えばネズミ可変領域フレームワーク残基と選ばれるヒト可変領域フレームワーク残基の間でアミノ酸が異なる時、ヒトフレームワークアミノ酸をマウス抗体からの同等のフレームワークアミノ酸により、アミノ酸が：
（１）直接抗原に非共有結合的に結合する、
（２）ＣＤＲ領域に隣接する、
（３）他にＣＤＲ領域と相互作用する（例えばＣＤＲ領域の約６Ａ以内にある）
ことが合理的に予測される場合に、置換することができる。
【０１２５】
置換に関する他の候補は、その位置においてヒト免疫グロブリンとして異常であるアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸をマウスドナー抗体の同等の位置から、あるいはより典型的なヒト免疫グロブリンの同等の位置からのアミノ酸で置換することができる。置換に関する他の候補は、その位置においてヒト免疫グロブリンとして異常であるアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。
【０１２６】
キメラ抗体は、ヒト以下の抗体（例えばマウス）の軽鎖及び重鎖の成熟可変領域がヒト軽鎖及び重鎖不変領域と組み合わされた抗体である。そのような抗体は実質的に、又は全体的にマウス抗体の結合特異性を保持しており、ヒト配列の約３分の２である。
【０１２７】
張り合わされた抗体は少なくとも１つの張り合わされた抗体鎖（すなわち少なくとも１つの張り合わされた軽鎖又は重鎖、そして通常は両方）を含む。張り合わされた抗体鎖は、（ｉ）実質的にヒト以下の抗体（例えばネズミ及び場合によりマウス）からの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）（例えば少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは２つのＣＤＲｓ、より好ましくは３つのＣＤＲｓ）及び、可変領域フレームワークの表面露出残基（好ましくはすべてのそのような残基）が実質的にヒト抗体配列（例えば共通配列）からであることを除いて、実質的にヒト以下の抗体（例えばマウス）からの可変領域フレームワークを含む可変領域ならびに（ｉｉ）全体的に又は実質的にヒト抗体不変領域からの不変領域を有するｎ抗体鎖（ｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｈａｉｎ）（すなわちそれぞれ軽鎖又は重鎖）である。ＣＤＲｓは典型的にはＫａｂａｔにより定義される通りであるが、代わりにＣｈｏｔｈｉａにより定義される通りであるか又はＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａにより定義されるＣＤＲ領域の複合領域であることができる。Ａβに対するヒト抗体は、下記の多様な方法により与えられる。いくつかのヒト抗体は競合的結合実験により、上記のＷｉｎｔｅｒのファージディスプレー法により、あるいは他により、実施例中に記載されるマウスモノクローナルの１つのような特定のマウス抗体と同じエピトープ特異性を有するように選択される。免疫原としてＡβの１つのフラグメントのみを用いることにより、及び／又はＡβの欠失突然変異体の集合に対して抗体をスクリーニングすることにより、特定のエピ
トープ特異性に関してヒト抗体をスクリーニングすることもできる。
【０１２８】
ヒト抗体の作製方法には、Ｏｅｓｔｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：３６１−３６７，１９８３年；Ｏｅｓｔｂｅｒｇ，米国特許第４，６３４，６６４号明細書；及びＥｎｇｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，６３４，６６６号明細書のトリオーマ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスの使用（例えばＬｏｎｇｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９３／１２２２７号パンフレット（１９９３）；米国特許第５，８７７，３９７号明細書、米国特許第５，８７４，２９９号明細書、米国特許第５，８１４，３１８号明細書、米国特許第５，７８９，６５０号明細書、米国特許第５，７７０，４２９号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５，５４５，８０６号明細書、Ｎａｔｕｒｅ  １４８，１５４７−１５５３，１９９４年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８２６，１９９６年、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，国際公開第９１／１０７４１号パンフレット（１９９１）を参照されたい）ならびにファージディスプレー法（例えばＤｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９１／１７２７１号パンフレット及びＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９２／０１０４７号パンフレット、米国特許第５，８７７，２１８号明細書、米国特許第５，８７１，９０７号明細書、米国特許第５，８５８，６５７号明細書、米国特許第５，８３７，２４２号明細書、米国特許第５，７３３，７４３号明細書及び米国特許第５，５６５，３３２号明細書を参照されたい）が含まれる。
【０１２９】
本明細書に記載される抗体又は抗体フラグメントのいずれも、例えば米国特許第２００４００３８３０４号明細書、米国特許第２００７００２０６８５号明細書、米国特許第２００６０１６６０１８４号明細書、米国特許第２００６０１３４０９８号明細書、米国特許第２００５０２５５５５２号明細書、米国特許第２００５０１３０２６６号明細書、米国特許第２００４０２５３６３号明細書、米国特許第２００４００３８３１７号明細書、米国特許第２００３０１５７５７９号明細書及び米国特許第７，３３５，４７８号明細書に開示されている標準的な方法を用いて設計又は作製することができる。
【０１３０】
抗体又は抗体フラグメントのいずれも、リン酸化、カルボキシル化又はグリコシル化のような翻訳後修飾を加えるか又は取り除く処理に供することができる。例えばＮ−グリコシダーゼＦのようなグリコシダーゼを用いる処理により、あるいはグリコシル化に供される残基の突然変異誘発により、グリコシル化を取り除くことができる。
【０１３１】
上記の抗体のいずれも、種々のＦｃγレセプターへの結合の程度を制御するために種々のイソタイプ又は突然変異イソタイプを以て作製することができる。Ｆｃ領域がない抗体（例えばＦａｂフラグメント）は、Ｆｃγレセプターへの結合を欠く。イソタイプの選択はＦｃγレセプターへの結合に影響する。ヒト、キメラ又はヒト化抗体には、実質的に又は全体的にヒトである不変領域が導入される。最も普通のイソタイプはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４である。かくして２Ｇ３、１４Ｃ２、２１Ｆ１２、２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２のいずれかのヒト化、キメラ又は張り合わされた形態は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４イソタイプのいずれかを有することができる。３つのＦｃγレセプター、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩに関し、種々のヒトＩｇＧイソタイプのそれぞれの親和性が決定されている。（Ｒａｖｅｔｃｈ  ＆
Ｋｉｎｅｔ著，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９，４５７，１９９１年を参照されたい。）ＦｃγＲＩはモノマー形態においてＩｇＧｓに結合する高親和性レセプターであり、後者の２つは多量体形態においてのみＩｇＧｓに結合する低親和性レセプターである。一般にＩｇＧ１及びＩｇＧ３の両方はすべての３つのレセプターに対する有意な結合活性を有し、ＩｇＧ４はＦｃγＲＩに対する結合活性を有し、ＩｇＧ２はＩＩａLRと呼ば
れるＦｃγＲＩＩの１つの型のみに結合活性を有する（Ｐａｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，６９５，１９９２年を参照されたい）。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３は補体機能を支持するが、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４は支持しない。ヒトイソタイプＩｇＧ１は通常、エフェクター機能が望まれる場合に選択され、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４はそれらが望まれていない場合に選択される。ヒトＩｇＧ１は本方法において好ましい。
【０１３２】
すべてのイソタイプにおけるヒンジリンク領域（ｈｉｎｇｅ  ｌｉｎｋ  ｒｅｇｉｏｎ）内の部位上の、それに隣接する、又はそれに近い突然変異（例えば残基２３４、２３５、２３６及び／又は２３７の別の残基を用いる置き換え）は、Ｆｃγレセプター、特にＦｃγＲＩレセプターに関する親和性を低下させる（米国特許第６，６２４，８２１号明細書を参照されたい）。場合により、位置２３４、２３６及び／又は２３７をアラニンで置換することができ、位置２３５をグルタミンで置換することができる（例えば米国特許第５，６２４，８２１号明細書を参照されたい）。位置２３６は、ヒトＩｇＧ２イソタイプにおいて失われている。ヒトＩｇＧ２に関する位置２３４、２３５及び２３７のためのアミノ酸の代表的なセグメントはＡｌａ  Ａｌａ  Ｇｌｙ、Ｖａｌ  Ａｌａ  Ａｌａ、Ａｌａ  Ａｌａ  Ａｌａ、Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ及びＡｌａ  Ｇｌｕ  Ａｌａである。ヒトイソタイプＩｇＧ１のための好ましい突然変異体の組み合わせはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａである。特に好ましいＮ−末端抗体は、ヒトイソタイプＩｇＧならびにヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のこれらの３つの突然変異を有するバピネウズマブである。Ｆｃγレセプターへの結合を低下させる他の置換はＥ２３３Ｐ突然変異（特にマウスＩｇＧ１における）及びＤ２６５Ａ（特にマウスＩｇＧ２ａにおける）である。Ｆｃ及び／又はＣ１ｑ結合を低下させる突然変異及び突然変異の組み合わせの他の例には、Ｅ３１８Ａ／Ｋ３２０Ａ／Ｒ３２２Ａ（特にマウスＩｇＧ１における）ならびにＬ２３５Ａ／Ｅ３１８Ａ／Ｋ３２０Ａ／Ｋ３２２Ａ（特にマウスＩｇＧ２ａにおける）が含まれる。類似して、ヒトＩｇＧ４中の残基２４１（Ｓｅｒ）を、例えばプロリンで置き換え、Ｆｃ結合を崩壊させることができる。
【０１３３】
エフェクター活性を改変するために追加の突然変異を不変領域に起こさせることができる。例えばＡ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ又は両方において、ＩｇＧ２ａ不変領域に突然変異を起こさせることができる。ＩｇＧ４に関し、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ及びＬ２３５Ａにおいて突然変異を起こさせるか、Ｇ２３６を欠失させるか、あるいはそれらの組み合わせを行うことができる。ＩｇＧ４は以下の突然変異Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅの１つ又は両方を有することもできる。エフェクター機能の改変のための破壊された不変領域配列の使用はさらに、例えば国際公開第０６／１１８，９５９号パンフレット及び国際公開第０６／０３６２９１号パンフレットに記載されている。
【０１３４】
エフェクター活性の改変のために、ヒトＩｇＧの不変領域にさらなる突然変異を起こさせることができる（例えば国際公開第０６／０３２９１号パンフレットを参照されたい）。これらには以下の置換が含まれる：ヒトＩｇＧ１への（ｉ）Ａ３２７Ｇ，Ａ３３０Ｓ，Ｐ３３１Ｓ；（ｉｉ）Ｅ２３３Ｐ，Ｌ２３４Ｖ，Ｌ２３５Ａ，Ｇ２３６欠失；（ｉｉｉ）Ｅ２３３Ｐ，Ｌ２３４Ｖ，Ｌ２３５Ａ；（ｉｖ）Ｅ２３３Ｐ，Ｌ２３４Ｖ，Ｌ２３５Ａ，Ｇ２３６欠失，Ａ３２７Ｇ，Ａ３３０Ｓ，Ｐ３３１Ｓ；及び（ｖ）Ｅ２３３Ｐ，Ｌ２３４Ｖ，Ｌ２３５Ａ，Ａ３２７Ｇ，Ａ３３０Ｓ，Ｐ３３１Ｓ。
【０１３５】
重鎖不変領域のある残基を突然変異させることにより、ＦｃＲに関する抗体の親和性を変えることができる。例えばヒトＩｇＧ１のグリコシル化部位の崩壊は、抗体のＦｃＲ結合及びかくしてエフェクター機能を低下させる（例えば国際公開第０６／０３６２９１号パンフレットを参照されたい）。Ｘがプロリン以外のいずれかのアミノ酸であるトリペプチド配列ＮＸＳ、ＮＸＴ及びＮＸＣは、Ｎ残基のグリコシル化のための酵素認識部位であ
る。特にＩｇＧのＣＨ２領域中のトリペプチドアミノ酸の崩壊は、その部位におけるグリコシル化を妨げるであろう。例えばヒトＩｇＧ１のＮ２９７の突然変異はグリコシル化を妨げ、抗体へのＦｃＲ結合を低下させる。
【０１３６】
ヒト不変領域は、種々の個体間でアロタイプ的変動及びイソアロタイプ的変動を示し、すなわち不変領域は１つもしくはそれより多い多形位置において種々の個体で異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つもしくはそれより多い他のイソタイプの非−多形領域に結合する点で、アロタイプと異なる。ＩｇＧ１不変領域の好ましいアロタイプはＧ１ｍｚであり、それは位置３５６にＧｌｕ及び位置３５８にＭｅｔを有する。カッパ不変領域の好ましいアロタイプはＫｍ３であり、それは位置１５３にＡｌａ及び位置１９１にＶａｌを有する。異なるアロタイプＫｍ（１）は位置１５３及び１９１にそれぞれＶａｌ及びＬｅｕを有する。アロタイプ的変形はＪ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ  ３：３５７−３６２，１９７６年及びＬｏｇｈｅｍ著，Ｍｏｎｏｇｒ  Ａｌｌｅｒｇｙ  １９：４０−５１，１９８６年により概述されている。不変領域の他のアロタイプ的及びイソアロタイプ的変形は包含される。天然のアロタイプにおける多形位置を占有する残基の過突然変異（ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する不変領域も包含される。他の重鎖ＩｇＧ１アロタイプの例には：Ｇ１ｍ（ｆ）、Ｇ１ｍ（ａ）及びＧ１ｍ（ｘ）が含まれる。Ｇ１ｍ（ｆ）は、それが位置２１４にＬｙｓの代わりにＡｒｇを有する点でＧ１ｍ（ｚ）と異なる。Ｇ１ｍ（ａ）は位置３５５−３５８にアミノ酸Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕを有する。
【０１３７】
ＩＩＩ．  活性免疫化
Ｃ−末端、中又はＮ−末端エピトープへの抗体を、Ａβの免疫原性フラグメント又はそのような抗体を誘導するその類似物を用いる活性免疫化により、患者においてその場で作製することもできる。好ましいフラグメントは、Ａβの約５〜１２個、５〜１０個そしてより好ましくは６〜９個の連続残基を有する。中心エピトープへの抗体の作製のために、５〜１２個、５〜１０個又はより好ましくは６〜９個の連続残基は、Ａβの残基１２−２８内にある。Ｃ−末端エピトープへの抗体の作製のために、５〜１２個、５〜１０個又はより好ましくは６〜９個の連続残基は、Ａβの残基２９−４３内にある。Ｎ−末端エピトープへの抗体の作製のために、５〜１２個又は６〜９個の連続残基は、Ａβの残基１−１１内にある。
【０１３８】
Ａβの中心エピトープへの抗体の誘導のために好ましいフラグメントには、Ａβ１５−２１、Ａβ１６−２２、Ａβ１７−２３、Ａβ１８−２４、Ａβ１９−２５、Ａβ１５−２２、Ａβ１６−２３、Ａβ１７−２４、Ａβ１８−２５、Ａβ１５−２３、Ａβ１６−２４、Ａβ１７−２５、Ａβ１８−２６、Ａβ１５−２４、Ａβ１６−２５及びＡβ１５−２５が含まれる。Ａβ１６−２３は、Ａβの残基１６−２３を含み、Ａβの他の残基がないフラグメントを意味し、特に好ましい。そのようなフラグメントにより誘導される抗体の少なくともいくつかは、２６６のような代表的な中心領域モノクローナル抗体の場合にそうであるように、拡散斑より密集斑に優先的に結合する。
【０１３９】
Ｃ−末端エピトープへの抗体の誘導のために好ましいフラグメントは、Ａβの残基２９と４３の間の５〜１２個そして好ましくは６〜９個の連続アミノ酸のＡβ３９、４０、４１、４２又は４３のＣ−末端フラグメントを含む。そのようなフラグメントにより誘導される抗体の少なくともいくつかは、代表的なＣ−末端抗体の場合にそうであるように、拡散斑より密集斑に優先的に結合する。
【０１４０】
Ｎ−末端抗体の誘導のために好ましいフラグメントには、Ａβの１−３の間の残基において始まり、Ａβの７−１１の間の残基において終わるフラグメントが含まれる。代表的なＮ−末端フラグメントにはＡβ１−５、１−６、１−７、１−１０及び３−７が含まれ
、１−７が特に好ましい。
【０１４１】
フラグメントは、好ましくはＡβに対するＴ−細胞を誘導するＴ−細胞エピトープを欠いている。一般にＴ−細胞エピトープは１０個の連続アミノ酸より大きい。従ってＡβの好ましいフラグメントは５〜１０個又は好ましくは６〜９個の連続アミノ酸の寸法；すなわちＴ−細胞反応を起こさずに抗体反応を起こすのに十分な長さのものである。Ｔ−細胞エピトープの不在は、これらのエピトープがフラグメントの免疫原活性に必要でなく、且つ患者の小さい組において望ましくない炎症反応を引き起こし得る故に、好ましい。
【０１４２】
フラグメントは、通常は天然のＡβのフラグメント（例えば配列番号：１中に示されるＡβ１−４２）であるが、１、２、５、１０個の位置又はすべての位置においてさえ、非天然のアミノ酸あるいはＮもしくはＣ末端アミノ酸の改変を含むことができる。例えばＡβの位置１及び／又は７における天然のアスパラギン酸残基をイソ−アスパラギン酸で置き換えることができる。非天然のアミノ酸の例はＤ，アルファ，アルファ−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、イプシロン−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、イプシロン−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、オメガ−Ｎ−メチルアルギニン、β−アラニン、オルニチン、ノルロイシ、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、チロキシン、γ−アミノ酪酸、ホモセリン、シトルリン及びイソアスパラギン酸である。いくつかのフラグメントは全−Ｄペプチド、例えば全−Ｄ  Ａβ又は全−Ｄ  Ａβフラグメント及び全−Ｄペプチド類似物である。フラグメントを、未処置又はプラシーボ標準と比較されるトランスジェニック動物モデルにおける予防又は治療的有効性に関してスクリーニングすることができる。
【０１４３】
フラグメントは、典型的には担体分子、典型的にはＴ−細胞エピトープを与え、且つかくして担体に複合体化されたフラグメントに対する免疫反応を引き出すのを助ける担体ポリペプチドに複合体化される。１つの薬剤を１つの担体に連結させることができるか、１つの薬剤の多数のコピーを１つの担体の多数のコピーに連結させ、それを今度は互いに連結させることができるか、１つの薬剤の多数のコピーを１つの担体の１つのコピーに連結させることができるか、あるいは１つの薬剤の１つのコピーを１つの担体又は種々の担体の多数のコピーに連結させることができる。適した担体には血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、チログロブリン、オボアルブミン、破傷風トキソイド又は他の病原性バクテリア、例えばジフテリア（例えばＣＲＭ197）、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、コレラ又はＨ．ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）、からのトキソイドあるいは減衰毒素誘導体が含まれる。Ｔ細胞エピトープも適した担体分子である。本発明の薬剤を免疫刺激性ポリマー分子（例えばトリパルミトイル−Ｓ−グリセリンシステイン（Ｐａｍ3Ｃｙｓ）、マンナン（マンノースポリマー）又はグルカン（β１→２ポリマー）、サイトカイン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ及びβペプチド、ＩＬ−２、γ−ＩＮＦ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ）及びケモカイン（例えばＭＩＰ１−α及びβならびにＲＡＮＴＥＳ））に連結することにより、いくつかの複合体を形成することができる。Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ，国際公開第９７／１７６１３号パンフレット及び国際公開第９７／１７６１４号パンフレットに記載されているように、組織を横切る輸送を強化するペプチドに免疫原性薬剤を連結することもできる。スペーサーアミノ酸（例えばｇｌｙ−ｇｌｙ）を用いて、又は用いずに免疫原を担体に連結することができる。
【０１４４】
追加の担体にはウイルス−様粒子が含まれる。擬ビリオン又はウイルス−由来粒子とも呼ばれるウイルス−様粒子（ＶＬＰｓ）は、生体内で規定された球対称のＶＬＰｓに自己集合できるウイルスキャプシド及び／又はエンベロープタンパク質の多数のコピーから成るサブユニット構造を呈する。（Ｐｏｗｉｌｌｅｉｔ，ｅｔ  ａｌ．著，（２００７）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ２（５）：ｅ４１５）。これらの粒子は抗原送達系として有用である
ことが見出されている。ＶＬＰｓは、それらの粒子状の性質及び高い分子量の故に、大量に生産され、且つ容易に精製され得る。ＶＬＰｓは、追加のアジュバントの適用なしで免疫反応を誘導する。（Ｕｌｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．著，（１９９６）  Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３９：１２６−１３２）。ＶＬＰ抗原送達系として有用な代表的なキメラ粒子には、Ｂ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、酵母レトロトランスポゾン  Ｔｙ、酵母トティウイルス  Ｌ−Ａ、パルボウイルス、インフルエンザウイルス、ノーウォークウイルス、ロタウイルス、アデノ−関連ウイルス、ブルータングウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、麻疹ウイルス、ポリオーマウイルス及びＲＮＡファージウイルスに基づくものならびに種々のレトロウイルス及びレンチウイルスに基づくものが含まれる。総説に関し、Ｌｅｃｈｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．著，（２００２）Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ  ４５：２１２−２１７を参照されたい。
【０１４５】
Ｂ型肝炎ウイルスのコアタンパク質（ＨＢｃＡｇ）は、異種抗原を運ぶために用いられる共通のＶＬＰである（Ｋｏｌｅｔｚｋｉ  ｅｔ  ａｌ．著，（１９９７）  Ｊ  Ｇｅｎ
Ｖｉｒ  ７８：２０４９−２０５３を参照されたい）。要するに、長い異種タンパク質セグメントを与えるＶＬＰｓの構築のための芯としてＨＢｃＡｇを用いることができる。その方法は、Ｃ−末端が切断された（Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）ＨＢｃＡｇと停止コドンを含有する異種タンパク質配列の間にリンカー配列を有する構築物を用いる。Ｅ．コリサプレッサー株中における発現のためのオパールＴＧＡ−Ｔｒｐ突然変異に基づくリードスルー機構を用いて、切断（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）ＨＢｃＡｇ／異種タンパク質キメラを発現させる。Ｋｏｌｅｔｚｋｉ  ｅｔ  ａｌ．により記載されている方法は、ＶＬＰｓ中への長い異種タンパク質配列の導入を可能にし、より多様な抗原をＶＬＰにより運ぶことを可能にする。
【０１４６】
ＨＩＶウイルスＧａｇタンパク質を抗原担体系として用いることができる（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．著，（１９９３）  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．６７（６）：３１９１−３１９８を参照されたい）。Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓは、ＨＩＶエンベロープの主な（ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）中和決定因子であるＨＩＶのＶ３ループを用いた。Ｇａｇ：Ｖ３融合タンパク質は、ウイルス−由来粒子（ＶＤＰｓ）と称されるハイブリッドＧａｇ粒子に生体内で集合した。ＶＤＰｓは体液性及び細胞性反応の両方を誘導する。Ｖ３ループはＣＴＬエピトープを含有するので、Ｇａｇ：Ｖ３を用いる免疫化はＶＬＰのＶ３タンパク質部分へのＣＴＬ反応を誘導する。
【０１４７】
ハイブリッドＨＩＶ：Ｔｙ  ＶＬＰを用いることもできる（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．著，（１９８７）  Ｎａｔｕｒｅ  ３２９（３）：６８−７０を参照されたい）。ＨＩＶ：Ｔｙ  ＶＬＰは、酵母トランスポゾンＴｙのｐ１タンパク質を用いる。ｐ１の最初の３８１個のアミノ酸は、ＶＬＰ形成に十分である。ＨＩＶ：Ｔｙ融合タンパク質は生体内でＶＬＰｓに集合することができ、ならびにＶＬＰにより運ばれるＨＩＶ抗原への免疫反応を誘導することができる。Ｔｙ  ｐ１タンパク質を用いるＶＬＰｓは、アルファ２−インターフェロンの全体、ウシ乳頭腫ウイルスＥ１及びＥ２遺伝子の産物ならびにインフルエンザ血球凝集素の一部に融合したｐ１も含有することができる。これらのＴｙ融合物のそれぞれはＶＬＰｓを形成し、且つ非−Ｔｙ  ＶＬＰ成分への抗血清の生産を誘導することができた。
【０１４８】
酵母トティウイルスＬ−Ａの変異体からＶＬＰｓを設計することもできる（Ｐｏｗｉｌｌｅｉｔ  ｅｔ  ａｌ．著，（２００７）ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ  ２（５）：ｅ４１５を参照されたい）。Ｌ−ＡウイルスのＰｏｌ遺伝子を、特異的な免疫反応を誘導するために適した抗原で置き換え、酵母ＶＬＰｓが有効な抗原担体であることを示すことができる。
【０１４９】
組換え、非複製性パルボウイルス−様粒子を抗原担体として用いることもできる。（Ｓ
ｅｄｌｉｋ，ｅｔ  ａｌ．著（１９９７）  ＰＮＡＳ  ９４：７５０３−７５０８．）これらの粒子は運ばれる抗原を細胞質ゾル中に与えるので、それらはクラスＩ−制限免疫経路（ｃｌａｓｓ  Ｉ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐａｔｈｗａｙ）に入り、かくして細胞障害性Ｔ−リンパ球（ＣＴＬ）媒介反応を刺激する。Ｓｅｄｌｉｋは特定的にＰＰＶ：ＶＬＰを使用し、それはパルボウイルスのＶＰ２キャプシドタンパク質を含有し、リンパ球性脈絡膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）からの残基１１８−１３２がＶＰ２キャプシドタンパク質中に挿入された。ＬＣＭＶを含有するＰＰＶ：ＶＬＰはＬＣＭＶへの免疫反応を誘導することができ、予備−免疫化されたマウスにおいて致死的ウイルス投与量に対して免疫学的防御を引き出した。
【０１５０】
ＶＬＰｓは、ウイルス複製のために必須の遺伝子であるインフルエンザＮＳ２遺伝子を欠いている複製不全インフルエンザを含むこともできる。（Ｗａｔａｎａｂｅ，ｅｔ  ａｌ著（１９９６）  Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６（２）：７６７−７７３．）これらのＶＬＰｓは哺乳動物細胞に感染し、異種タンパク質の発現を可能にする。
【０１５１】
ノーウォークウイルス（ＮＶ）に基づくＶＬＰｓを免疫原送達のためのビヒクルとして用いることもできる。（Ｂａｌｌ，ｅｔ  ａｌ．著（１９９９）  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１７：４０−４８．）ＮＶゲノムは３つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦｓ  １−３）を有する。ＯＲＦｓ  ２及び３の組換えバクロウイルス発現は、高収率の組換えノーウォークウイルス（ｒＮＶ）ＶＬＰｓの自然の集合を可能にする。
【０１５２】
フラグメントは多くの場合に製薬学的に許容され得るアジュバントと一緒に投与される。アジュバントは、ペプチドが単独で用いられる場合の状況と比較して、誘導される抗体の力価及び／又は誘導される抗体の結合親和性を向上させる。免疫反応を引き出すために、多様なアジュバントをＡβの免疫原性フラグメントと組み合わせて用いることができる。好ましいアジュバントは、反応の質的な形態に影響する免疫原におけるコンホーメーション的変化を引き起こすことなく、免疫原への固有の反応を増大させる。好ましいアジュバントには水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウム、３  Ｄｅ−Ｏ−アセチル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬTM）（英国特許第２２２０２１１号明細書（ＲＩＢＩ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔａｎａ，現在はＣｏｒｉｘａの一部）を参照されたい）が含まれる。ＳｔｉｍｕｌｏｎTM  ＱＳ−２１は、南アメリカで見出されるシャボンノキ（Ｑｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ  ｔｒｅｅ）の樹皮から単離されるトリテルペングリコシド又はサポニンである（Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ  ＆  Ｎｅｗｍａｎ，Ｐｌｅｎｕｍ
Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９５）におけるＫｅｎｓｉｌ  ｅｔ  ａｌ．；米国特許第５，０５７，５４０号明細書）、（Ａｑｕｉｌａ  ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ：現在はＡｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）を参照されたい）。他のアジュバントは、場合により免疫刺激剤、例えばモノホスホリルリピドＡ（Ｓｔｏｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６−９１，１９９７年を参照されたい）、プルロニックポリマー及び殺害されたマイコバクテリア（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）と組み合わされていることができる水中油型エマルション（例えばスクアレン又はピーナツ油）である。別のアジュバントはＣｐＧ（国際公開第９８／４０１００号パンフレット）である。アジュバントを、活性薬剤を含む治療用組成物の成分として投与することができるか、あるいは治療薬の投与の前に、それと同時に、又はその後に別々に投与することができる。
【０１５３】
好ましい種類のアジュバントはアルミニウム塩（ａｌｕｍ）、例えば水酸化ａｌｕｍ、リン酸ａｌｕｍ、硫酸ａｌｕｍである。そのようなアジュバントを、ＭＰＬ又は３−ＤＭＰ、ＱＳ−２１、ポリマー性もしくはモノマー性アミノ酸、例えばポリグルタミン酸又は
ポリリシンのような他の特定の免疫刺激剤と一緒に、又はそれらなしで用いることができる。別の種類のアジュバントは水中油型エマルション調剤である。そのようなアジュバントを他の特定の免疫刺激剤、例えばムラミルペプチド（例えばＮ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）、Ｎ−アセチルグルクサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌ−Ｄ−イソｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ−ＤＰＰ）テラミドＴＭ）あるいは他のバクテリア細胞壁成分と一緒に、又はそれらなしで用いることができる。水中油型エマルションには（ａ）Ｍｏｄｅｌ  １１０Ｙ微細流動装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ  ＭＡ）のような微細流動装置を用いてミクロン以下の粒子に調製される、５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０及び０．５％Ｓｐａｎ  ８５を含有する（場合により種々の量のＭＴＰ−ＰＥを含有することができる）ＭＦ５９（国際公開第９０／１４８３７号パンフレット）、（ｂ）ミクロン以下のエマルションに微細流動化されるか、又は渦動されてより大きな粒度のエマルションを生成する、１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ  ８０、５％プルロニック−ブロックポリマーＬ１２１及びｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ及び（ｃ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ  ８０ならびにモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコーレート（ＴＤＭ）及び細胞壁骨格（ＣＷＳ）より成る群から選ばれる１つもしくはそれより多くのバクテリア細胞壁成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘTM）を含有するＲｉｂｉTMアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）が含まれる。
【０１５４】
別の種類の好ましいアジュバントはサポニンアジュバント、例えばＳｔｉｍｕｌｏｎTM（ＱＳ−２１，Ａｑｕｉｌａ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）あるいはそれから生成する粒子、例えばＩＳＣＯＭｓ（免疫刺激性複合体）及びＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸである。他のアジュバントにはＲＣ−５２９、ＧＭ−ＣＳＦ及び完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）が含まれる。他のアジュバントにはサイトカイン、例えばインターロイキン（例えばＩＬ−１  α及びβペプチド、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３及びＩＬ−１５）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ケモカイン、例えばＭＩＰ１α及びβならびにＲＡＮＴＥＳが含まれる。別の種類のアジュバントは、Ｎ−グリコシルアミド、Ｎ−グリコシルウレア及びＮ−グリコシルカルバメートを含む糖脂質類似物であり、それらのそれぞれはイムノ−モジュレーター（ｉｍｍｕｎｏ−ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ）又はアジュバントとして糖残基においてアミノ酸により置換されている（米国特許第４，８５５，２８３号明細書を参照されたい）。熱ショックタンパク質、例えばＨＳＰ７０及びＨＳＰ９０をアジュバントとして用いることもできる。
【０１５５】
アジュバントを１つの組成物として免疫原と一緒に投与することができるか、あるいは免疫原の投与の前に、それと同時に、又はその後に投与することができる。免疫原及びアジュバントを同じバイアル中に包装し、供給することができるか、あるいは別々のバイアル中に包装して使用前に混合することができる。免疫原及びアジュバントは、典型的には意図される治療的用途を示すラベルと一緒に包装される。免疫原及びアジュバントを別々に包装する場合、包装は、典型的には使用前の混合に関する指示書を含む。アジュバント及び／又は担体の選択は、アジュバントを含有する免疫原性調製物の安定性、投与経路、投薬スケジュール、ワクチン接種されている種に関するアジュバントの有効性に依存し、ヒトにおいて、製薬学的に許容され得るアジュバントは、関連する規制機関によりヒトへの投与に関して承認されているかあるいは承認され得るものである。例えば完全フロイントアジュバントはヒトへの投与に適していない。ａｌｕｍ、ＭＰＬ及びＱＳ−２１は好ま
しい。場合により、２種もしくはそれより多種のアジュバントを同時に用いることができる。好ましい組み合わせにはａｌｕｍとＭＰＬ、ａｌｕｍとＱＳ−２１、ＭＰＬとＱＳ−２１、ＭＰＬ又はＲＣ−５２９とＧＭ−ＣＳＦならびに一緒にａｌｕｍ、ＱＳ−２１及びＭＰＬが含まれる。また、不完全フロイントアジュバント（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．著，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３２，１７３−１８６，１９９８年）を、場合によりａｌｕｍ、ＱＳ−２１及びＭＰＬのいずれか及びそれらのすべての組み合わせと組み合わせて用いることができる。
【０１５６】
ＩＶ．  処置を受け得る（ａｍｅｎａｂｌｅ）患者
Ｃ−末端及び中心−エピトープ抗体又はそのような抗体を誘導するＡβのフラグメントを、Ａβの密集斑と関連する疾患及び／又は状態（例えばアルツハイマー病、ダウン症候群及びパーキンソン病のいくつかの形態）の処置のために有効な療法において用いることができる。症状発現前のＡＤにおいて、斑全体に対する「原線維状斑」とも呼ばれる密集斑の割合は２２％であるが、末期ＡＤにおいては４９％に上昇する。Ｄｉｃｋｓｏｎ  ａｎｄ  Ｖｉｃｋｅｒｓ著，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １０５：９９−１０７，２００１年。これらの密集斑の大部分（８２％）はジストロフィー性神経炎（ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｃ  ｎｅｕｒｉｔｉｓ）と関連する。同上。かくしてＡＤ痴呆の進行は、密集斑のより高い割合への移行と関連し、それは局所的神経炎性ジストロフィーを誘起する。
【０１５７】
密集斑の呈示量は疾患の進行と共に増加するので、中から後期アルツハイマー病に苦しむ患者は比較的高い密集斑の呈示量を有する傾向がある。かくして例えば認知尺度から診断される中から後期アルツハイマー病を有する患者を、密集斑の呈示量の個別的な評価を用いて、又はそれらなしで、中心もしくはＣ−末端抗体あるいはそのような抗体を誘導するＡβのフラグメントを用いて処置することができる。
【０１５８】
あるいはまた、必ずしも認知尺度に基づくような他の方法で患者の疾患の進行の段階を評価せずに、彼らの密集斑の呈示量から、中心もしくはＣ−末端抗体又はそのような抗体を誘導するＡβのフラグメントを用いる処置に関して患者を評価することができる。下記にさらに詳細に議論するようなＰＥＴ走査により、密集斑の呈示量を決定することができる。比の算出のために、密集斑の数を斑の合計数（すなわち密集斑、拡散斑及び高密度コアプラーク（ｄｅｎｓｅ  ｃｏｒｅ  ｐｌａｑｕｅｓ））と比較する。高密度芯斑は斑全体に含まれるが、密集斑として計算されない。（すべての型の）斑は、脳の区画された断面又は体積又は領域内で測定される。処置の開始を知らせる密集斑の割合は、斑全体の少なくとも２５％であることができる。いくつかの方法において、斑全体に対する密集斑の割合は、中心もしくはＣ−末端抗体を用いる処置の開始の前に、斑全体の少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％又は少なくとも５０％である。何人かの患者において、斑全体に対する密集斑の割合は、中心もしくはＣ−末端抗体を用いる処置の開始の前に、斑全体の少なくとも２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％又は５０％である。
【０１５９】
Ｃ−末端及び中心−エピトープ抗体は、Ｎ−末端抗体と異なる密集斑及び拡散斑への結合分布を有する（すなわちＣ−末端及び中心エピトープ抗体は密集斑に優先的に結合する）。また、ＡＤ脳内の多くのアミロイド斑は、位置３におけるピログルタメートで始まってＮ−末端が切断されて改変されている。Ｈａｒｉｇａｙａ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２７６：４２２−４２７，２０００年；Ｇｕｎｔｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １４３：４６１−４７５，２００６年。かくしてＣ−末端又は中心エピトープを認識する抗体は、Ｎ−末端エピトープ抗体により認識されないＡβの切断された分子を認識する。異なる結合特異性の故
に、Ｃ−末端もしくは中心エピトープ抗体又はそのような抗体を誘導するＡβのフラグメントを用いる処置を、いくつかの方法において、Ｎ−末端抗体又はそのような抗体を誘導するＡβのフラグメントを用いる処置と組み合わせることができる。抗体の組み合わせは、個別の抗体の使用より多くのアミロイド沈着物の除去を生ずることができる。種々の抗体を逐次的又は同時に投与することができる。
【０１６０】
いくつかの方法において、最初にＮ−末端エピトープ抗体又はそのような抗体を誘導するフラグメントを用いて患者を処置する。Ｎ−末端エピトープ抗体を用いる処置が密集斑のクリアランスの欠除、最適より低いもしくは不完全なクリアランスを生じたら、そのような患者を次いでＣ−末端もしくは中心エピトープ抗体を用いて処置することができる。クリアランスの欠除、最適より低いもしくは不完全なクリアランスは、下記で議論するＰＥＴイメージングにより決定され得るか、あるいは他のバイオマーカー又は認知低下の不十分な抑制から推定的に決定され得る。認知尺度にはＡＤＡＳ−ＣＯ１１、ＡＤＡＳ−ＣＯ１２、ＤＡＡＳＤ、ＣＤＲ−ＳＢ、ＮＴＢ、ＮＰＩ、ＭＭＳＥが含まれ、バイオマーカーには［１８Ｆ］ＦＤＧ、ＭＲＩマーカー（ＢＢＳＩ及びＶＢＳＩ）ならびにＣＳＦマーカーＡβ＞４２、タウ及びホスホ−タウが含まれる。しかしながら、ＰＥＴイメージングにより検出される変化は、多くの場合にバイオマーカー又は認知試験における変化に先行する。
【０１６１】
いくつかの方法において、最初にＣ−末端もしくは中心−エピトープ抗体又はそのような抗体を誘導するＡβのフラグメントを用いて患者を処置する。処置が拡散斑のクリアランスの欠除、不完全なもしくは最適より低いクリアランスを生じたら、次いでＮ−末端エピトープ抗体を投与することができる。拡散斑のクリアランスの欠除、不完全なもしくは最適より低いクリアランスは、ＰＥＴイメージングにより決定され得るか、あるいはバイオマーカーから、又は認知低下の不十分な抑制から推定され得る。
【０１６２】
他の方法において、Ｎ−末端抗体又はそのような抗体を誘導するＡβのフラグメント及びＣ−末端もしくは中心−エピトープ抗体又はそのような抗体を誘導するＡβのフラグメントを同時に投与する。同時投与は、抗体を同じ時点に（例えば混合調製物として）投与すること、あるいは別々であるが重なる療法において投与し、治療的濃度の両抗体が長時間（例えば少なくとも１、３、６又は１２カ月）血清中に存在するようにすることを含む。そのような方法においては、抗体の種々の特異性を組み合わせて、密集斑及び拡散斑の両方を減少させるか、又は少なくともそれらのさらなる増加を抑制することができる。
【０１６３】
本発明のＣ−末端及び中心−エピトープ抗体又はそのような抗体を誘導するＡβのフラグメントを、アルツハイマー病及び併発性のてんかんを有する患者の処置に用いることもできる。動物モデルにおいて、密集斑は、ＡＤ−特異的てんかん性発作に寄与し得る異常なニューロン性多動（ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ）（Ｂｕｓｃｈｅ
ｅｔ  ａｌ．著，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１：１６８６−１６８９，２００８年）、軸索消失、変性神経突起ならびにニューロン損傷及び死を誘起する。Ｓｈａｈ  ｅｔ  ａｌ．著，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １７７：３２５−３３３，２０１０年；Ｓｈｅｎｇ  ｅｔ
ａｌ．著，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  ５７：７１４−７１７，１９９８年。従って密集斑に優先的に結合する抗体は、併発性のてんかんを有するアルツハイマー病患者のために特に有用である。本発明の中心及びＣ−末端抗体を用いる密集斑の除去は、そのような患者においててんかん性発作の症状を軽減することができ、ならびにアルツハイマー病自身の症状のさらなる発現を軽減するかもしくは抑制することができる。
【０１６４】
本発明のＣ−末端及び中心−エピトープ抗体を、いずれのＡｐｏＥ遺伝子型における患者でも有効に用いることができる。特に、本発明の抗体をＥ３／Ｅ３、Ｅ３／Ｅ４又はＥ
４／Ｅ４  ＡｐｏＥ遺伝子型を有する患者において用いることができる。
【０１６５】
Ｖ．  処置及び投薬量
「有効な療法」は、患者において望ましい結果を生む投薬量ならびに投与の頻度及び経路である。予防的用途においては、薬剤又はそれを含有する製薬学的組成物もしくは医薬品（ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｓ）を、疾患（例えばアルツハイマー病）にかかり易いか又はそうでなくてもその危険にある患者に、危険を低下させるか、重度を低下させるか、あるいは疾患の少なくとも１つの徴候もしくは症状の開始を遅らせるのに有効な療法（投薬量、投与の頻度及び経路）において投与する。特に療法は、好ましくは患者の脳中のアミロイド沈着物（特に密集斑）の量を減少させるか、少なくともアミロイド沈着物（特に密集斑）の量の増加を抑制するのに有効である。アルツハイマー病の危険にある患者は、アルツハイマー病と診断されたことがない脳中に正常なレベルより多いアミロイド沈着物を有する患者ならびにアルツハイマー病と診断されたことがない穏やかな認知損傷を有する患者を含む。治療的用途においては、アルツハイマー病と思われるか、又はすでにアルツハイマー病に苦しむ患者に薬剤組成物又は医薬品を、疾患の少なくとも１つの徴候又は症状を改善するか、又は少なくともさらなる悪化を抑制するのに有効な療法（投薬量、投与の頻度及び経路）において投与する。特に療法は、好ましくは患者におけるアミロイド沈着物（特に密集斑）を減少させるか、又は少なくともそのさらなる増加を抑制するのに有効である。
【０１６６】
上記の状態の処置のために有効な本発明の組成物の投薬量は、投与の手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか又は動物であるか、投与されている他の医薬品ならびに処置が予防的であるか又は治療的であるかを含む多種の因子に依存して変わる。
【０１６７】
場合により、抗体を投与して、投与される抗体の０．１〜６０、０．４〜２０又は１〜１５μｇ／ｍｌの平均血清濃度を患者において達成する。血清濃度は実際の測定により決定され得るか、あるいは投与された抗体の量、投与の頻度、投与の経路及び抗体の半減期に基づいて標準的な薬物動態学（例えばＷｉｎＮｏｎｌｉｎｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．０．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃａｒｙ，ＵＳＡ）から予測され得る。
【０１６８】
血清中の平均抗体濃度は、場合により１〜１０、１〜５又は２〜４μｇ／ｍｌの範囲内であることができる。起こり得る副作用、特に血管性水腫の発生に対して治療的利益を最大にするために、患者における抗体の最大血清濃度を血清のｍｌ当たり約２８μｇの抗体より低く保持するのも任意である。好ましい最大血清濃度は、血清のｍｌ当たり約４〜２８μｇの抗体の範囲内である。血清のｍｌ当たり約２８μｇの抗体より低い最大血清と患者における抗体の平均血清濃度が血清のｍｌ当たり約７μｇの抗体より低いことの組み合わせが特に有益である。場合により、平均濃度は血清のｍｌ当たり約２〜７μｇの抗体の範囲内であることができる。
【０１６９】
抗体の投与後の血漿中のＡβの濃度は、おおまかに抗体血清濃度の変化と平行して変化する。言い換えると、Ａβの血漿濃度は抗体の投薬後に最高であり、次いで投薬間で抗体の濃度が下降すると共に下降する。投薬量及び抗体投与の療法を変えて、血漿中のＡβの所望のレベルを得ることができる。そのような方法において、抗体の平均血漿濃度は少なくとも４５０ｐｇ／ｍｌ又は例えば６００〜３０００ｐｇ／ｍｌ又は７００〜２０００ｐｇ／ｍｌ又は８００〜１０００ｐｇ／ｍｌの範囲内であることができる。
【０１７０】
抗体に関する代表的な投薬量範囲は宿主の体重のｋｇ当たり約０．０１〜１０ｍｇ、ｋｇ当たり０．０１〜５ｍｇ、そしていくつかの場合にはｋｇ当たり０．１〜３ｍｇ又はｋｇ当たり０．１５〜２ｍｇ又はｋｇ当たり０．１５〜１．５ｍｇである。いくつかの場合
、投薬量は０．０１、０．０５、０．１、０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９又は１０ｍｇ／ｋｇである。そのような投薬量を患者に毎日、隔日に、毎週、隔週に、毎月、毎季あるいは実験的分析により決定される他のスケジュールに従って投与することができる。代表的な処置は、例えば少なくとも３カ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも９カ月又は少なくとも１年の長期間に及ぶ多数回の投薬における投与を要する。追加の代表的な処置療法は、２週間毎に１回又は１ヶ月毎に１回又は３〜６ヶ月毎に１回の投与を要する。投薬量を例えば静脈内に又は皮下に投与することができる。
【０１７１】
静脈内投与のために、静脈内に毎季投与される０．１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、そして好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ又は１．５ｍｇ／ｋｇの投薬量が適している。毎月の静脈内投与のための好ましい抗体の投薬量は、０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇの抗体又は好ましくは０．５〜１．０ｍｇ／ｋｇの抗体の範囲内にある。
【０１７２】
より頻繁な投薬、例えば毎週から毎月の投薬のためには皮下投与が好ましい。皮下投薬は投与がより容易であり、静脈内投薬と比較して最大血清濃度を下げることができる。皮下投薬のための代表的な投薬量は、通常０．０１〜０．６ｍｇ／ｋｇ又は０．０１〜０．３５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０５〜０．２５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。毎週又は隔週投薬のために、投薬量は好ましくは０．０１５〜０．２ｍｇ／ｋｇ又は０．０５〜０．１５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。毎週の投薬のために、投薬量は好ましくは０．０５〜０．０７ｍ／ｋｇ、例えば約０．０６ｍｇ／ｋｇである。隔週の投薬のために、投薬量は好ましくは０．１〜０．１５ｍｇ／ｋｇである。毎月の投薬のために、投薬量は好ましくは０．１〜０．３ｍｇ／ｋｇ又は約０．２ｍｇ／ｋｇである。毎月の投薬は、暦月又は太陰月（すなわち４週間毎）による投薬を含む。出願中の他の場合と同様にこの場合も、ｍｇ／ｋｇにおいて表わされる投薬量を、典型的に整数にまるめて典型的な患者の体重（ｍａｓｓ）（例えば７０又は７５ｋｇ）倍することにより、絶対投薬質量（ａｂｓｏｌｕｔｅ
ｍａｓｓ  ｄｏｓａｇｅｓ）に転換することができる。他の療法は例えばＰＣＴ／ＵＳ２００７／００９４９９に記載されている。上記で議論した通り、患者のＡｐｏＥ事情に基づいて投薬量及び頻度をこれらの指針内で変えることができる。
【０１７３】
活性投与のための薬剤の量は、患者当たり１〜５００μｇで変わり、より普通にはヒトへの投与のための注入当たりに５〜１００μｇで変わる。注入当たりの代表的な投薬量は、ヒトへの注入毎に３、１０、３０又は９０μｇである。免疫原の質量は、免疫原内の免疫原性エピトープ対全体としての免疫原の質量の質量比にも依存する。典型的に、免疫原の免疫化毎に１０-3〜１０-5マイクロモルの免疫原性エピトープが用いられる。注入のタイミングは、１日１回から１年に１回まで、１０年に１回までで有意に変わり得る。ある投薬量の免疫原が与えられるいずれの与えられた日にも、アジュバントも投与される場合、投薬量は患者当たり１μｇより多く、通常は患者当たりに１０μｇより多く、そしてアジュバントの不在下で患者当たりに１０μｇより多く、通常は患者当たりに１００μｇより多い。典型的な療法は、免疫化及びそれに続く６週間間隔のような時間間隔をおいたブースター注入から成る。別の療法は、免疫化及びそれに続く１、２及び１２カ月後のブースター注入から成る。別の療法は、２ヶ月毎の終生の注入を要する。あるいはまた、ブースター注入は免疫反応の監視により示される通りの不規則を基本とすることができる。活性薬剤により誘導される抗体が、受動的投与（ｐａｓｓｉｖｅ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）におけるように０．１〜６０、０．４〜２０又は１〜１５又は２〜７μｇ／ｍｌの範囲内の平均血清濃度を有するように、投薬量及び頻度を変えることができる。
【０１７４】
ＶＩ．  製薬学的組成物
本発明の薬剤（例えば抗体）は、多くの場合に活性治療薬及び多様な他の製薬学的に許容され得る成分を含んでなる製薬学的組成物として投与される。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１５ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（１９８０））を参照されたい。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療的用途に依存する。組成物は、望まれる調製物に依存して、製薬学的に許容され得る無毒性の担体又は希釈剤も含むことができ、それは動物又はヒトへの投与のための製薬学的組成物を調製するために通常用いられるビヒクルとして定義される。希釈剤は、組み合わせの生物学的活性に影響を与えないように選択される。そのような希釈剤の例は蒸留水、生理学的ホスフェート緩衝食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液及びハンクス溶液である。さらに製薬学的組成物又は調製物は他の担体、添加剤又は無毒性、非治療性、非免疫原性安定剤などを含むこともできる。
【０１７５】
製薬学的組成物は大きくて代謝の遅い巨大分子、例えばタンパク質、キトサンのような多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸及びコポリマー（例えばラテックス官能基化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＴＭ）、アガロース、セルロースなど）、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー及び脂質凝集物（例えば油滴又はリポソーム）を含むこともできる。さらに、これらの担体は免疫刺激剤（すなわちアジュバント）としても機能することができる。
【０１７６】
薬剤は、典型的には非経口的に投与される。抗体は通常静脈内に、又は皮下に投与される。活性免疫反応を誘導するための薬剤は、通常は皮下に又は筋肉内に投与される。非経口的投与のために、本発明の薬剤を、水、油、食塩水、グリセロール又はエタノールのような無菌の液体であることができる製薬学的担体を含む生理学的に許容され得る希釈剤中の物質の溶液又は懸濁液の注入可能な投薬物（ｄｏｓａｇｅｓ）として投与することができる。さらに、湿潤剤又は乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などのような補助的物質が組成物中に存在することができる。製薬学的組成物の他の成分は、石油、動物、植物又は合成起源のもの、例えばピーナツ油、大豆油及び鉱油である。一般に、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールのようなグリコールは、特に注入可能な溶液のために好ましい液体担体である。抗体を、活性成分の持続的な放出を可能にするようなやり方で調製され得る蓄積注射又は体内埋植調製物の形態で投与することができる。
【０１７７】
典型的に組成物は注入剤（ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅｓ）として、液体ビヒクル中の液体溶液又は懸濁剤のいずれかとして調製され、注入の前に調製することもできる。抗体を、使用前の再構築用の凍結された形態で与えることもできる。抗体調製物を乳化するか、あるいはリポソーム又は微小カプセル、例えばポリラクチド、ポリグリコリド又は上記で議論したようなアジュバント効果の増強のためのコポリマー中にカプセル封入することもできる（Ｌａｎｇｅｒ著，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７，１９９０年及びＨａｎｅｓ著，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２８：９７，１９９７年を参照されたい）。本発明の薬剤を、活性成分の持続的な又はパルス的な放出を可能にするやり方で調製され得る蓄積注射又は体内埋植調製物の形態で投与することもできる。
【０１７８】
投与の他の様式のために適した追加の調製物には、経口用、鼻内用及び肺用調製物、座薬及び経皮的適用が含まれる。座薬のために、結合剤及び担体には、例えばポリアルキレングリコール又はトリグリセリドが含まれ；そのような座薬を０．５％〜１０％、好ましくは１％〜２％の範囲内で活性成分を含有する混合物から調製することができる。経口用調製物は賦形剤、例えば製薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース及び炭酸マグネシウムを含む。これらの組成物は溶液、懸濁剤、錠剤、丸薬、カプセル、除放性調製物又は散剤の形態をとることができ、１０％〜９５％、好ましくは２５％〜７０％の活性成分を含有する。
【０１７９】
ＶＩＩ．  監視
患者におけるアミロイド沈着物の生体内イメージングの方法を用い、アルツハイマー病を診断するか又は診断を確証するか、斑全体に対する密集斑又は拡散斑の割合を同定するか、あるいは本明細書で議論される免疫療法（ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｒｅｇｉｍｅ）を受けている患者における疾患の進行及び／又は処置への反応（例えば密集斑のクリアランス）を監視することができる。いくつかの場合、監視は、患者の脳中の密集斑の寸法あるいは、同じ患者の以前の走査と比較されるか、又は既存対照と比較される相対的な割合の評価を含む。
【０１８０】
ラジオイメージングにおける最近の進歩は、ＡＤ患者における生体内でのＡβ斑のイメージングを可能にした。Ｋｌｕｎｋ  ａｎｄ  Ｍａｔｈｉｓ著，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌ  ２１：６８３−６８７，２００８年。この方法のための代表的な化合物は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）の放射性トレーサー“Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ−Ｂ”（ＰｉＢ）であり、それは凝集したＡβに高い親和性を以て結合する（同上）が、下記でもっと詳細に議論する通り、他のＰＥＴリガンドも利用可能である。ＡＤを有する人々の脳内のＰｉＢの生体内保持は、死後に組織学的に染色されたＡＤ脳組織上で観察される斑の分布と非常に類似した局部的分布を示す。Ｉｋｏｎｏｍｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｂｒａｉｎ  １３１：１６３０−１６４５，２００８年。ＰｉＢの蛍光性誘導体を用い、ＰｉＢがＡＤ死後の組織上の密集斑に優先的に結合するが、拡散斑はあまり顕著に標識されないことが示された。同上。かくしてＰＥＴ走査を用いて、拡散斑と比較して高い割合の密集斑を有するＡＤ患者を同定することができる。
【０１８１】
例えば通常のＰＥＴイメージャー及び補助的装置を用いてＰＥＴ走査を行うことができる。走査は、典型的には一般にアルツハイマー病における沈着物と関連することが知られている脳の１つもしくはそれより多い領域ならびにもしあるとしても一般にほとんど沈着物が存在しておらず、標準として働く１つもしくはそれより多い領域を含む。アルツハイマー病におけるアミロイド沈着物の存在と関連する脳の領域には、例えば脳の前帯状、後帯状、前頭、側頭、頭頂又は後頭皮質が含まれる。沈着物の欠除と関連する脳の領域には、例えば皮質下白質、脳橋及び小脳が含まれる。
【０１８２】
典型的には、免疫療法を開始する前にベースライン測定を行う。次いで処置の開始後に１回もしくはそれより多い連続する走査を行う。処置の開始後の１回目のそのような走査を、処置の開始から約３〜２４ヶ月後に行うことができる。通常、処置の開始から６〜１８又は９〜１８ヶ月以内に、例えば約６、９、１２、１５又は１８ヶ月にそのような走査を行う。いくつかの方法において、走査は処置から７８週間後に行われる。連続する走査（すなわち３回目及び続く走査）を例えば毎季、６ヶ月毎、毎年又は２年毎の間隔で行うことができる。
【０１８３】
免疫療法の開始後、アミロイド沈着物への免疫療法の効果を約３〜２４ヶ月、そしてより典型的には６〜１８ヶ月の期間内に最初に見出すことができる。アミロイド沈着物の全体的な減少として、ある型のアミロイド沈着物（例えば密集斑）の減少としてあるいは拡散斑に対する密集斑の呈示量又は斑全体に対する密集斑もしくは拡散斑の比における変化として効果を評価することができる。そのような変化は、免疫療法の開始前のベースライン測定に対して評価される。そのような効果を、沈着物が生成することが知られている脳の１つもしくはそれより多い領域において測定することができるか、あるいはそのような領域の平均から測定することができる。アミロイド沈着物ならびに密集斑対拡散斑の比又は斑全体に対する密集斑の割合は、通常処置の不在下で減少しないので、アミロイド全体又は密集斑又は密集斑対拡散斑の比又は斑全体に対する密集斑の割合における減少はほとんど常に処置の効果として帰せられ得る。
【０１８４】
全体的なアミロイド沈着物又は密集斑又は密集斑対拡散斑の比又は密集斑対斑全体の比
の大体一定のレベルにおける保持あるいはアミロイド沈着物のわずかな増加さえ、最適より低い反応とは言え、処置への反応の指標であることができる。そのような反応を、処置を受けていないアルツハイマー病を有する患者におけるアミロイド沈着物のレベルの時間経過と比較し、アミロイド沈着物全体、密集斑又は密集斑対拡散斑の比のさらなる増加の抑制において免疫療法が効果を有しているかどうかを決定することができる。
【０１８５】
検出されるシグナルを、多次元イメージとして表わすことができる。多次元イメージは、脳を通る断面を表わす二次元、三次元的脳を表わす三次元又は三次元的脳における時間を経た変化を表わす四次元にあることができる。検出される標識の、及び推定的にアミロイド沈着物の種々の量を示す種々の色を有するカラースケールを用いることができる。走査の結果を、検出される標識の量及び結局アミロイド沈着物の量に関連する数字を用いて数値的に与えることもできる。アルツハイマー病における沈着物と関連することが知られている脳の領域内に存在する標識を、沈着物と関連しないことが知られている領域内に存在する標識と比較し、前者の領域内の沈着物の程度を示す比を与えることができる。同じ放射性標識リガンドに関し、そのような比はアミロイド沈着物又は密集斑又は密集斑対拡散斑の比ならびに異なる患者間のそれらの変化の比較可能な尺度を与える。
【０１８６】
いくつかの方法において、ＰＥＴ走査はＭＲＩ又はＣＡＴ走査と同時に、又は患者の同じ来院時に行われる。ＭＲＩ又はＣＡＴ走査は、ＰＥＴ走査より多くの脳の解剖学的詳細を与える。しかしながらＰＥＴ走査からのイメージをＭＲＩ又はＣＡＴ走査イメージ上に重ね、脳における解剖学的構造に対するＰＥＴリガンド及び推定的にアミロイド沈着物の位置をより正確に示すことができる。
【０１８７】
ＰＥＴリガンドは通常患者に、末梢経路により体循環に投与され、静脈内投与が好ましい。かくして体循環により血液脳関門を横切ってＰＥＴリガンドを送達し、アミロイド斑と接触させることができる。脳内におけるアミロイド沈着物へのＰＥＴリガンド結合は固定され、その後のＰＥＴ走査においてそれを検出することができる。非結合ＰＥＴリガンド又は可溶性Ａβに結合したＰＥＴリガンドは、結合ＰＥＴ走査より速く脳から除去され、検出されないか又は同じ量の結合ＰＥＴリガンドと比較してより低い程度に検出される。
【０１８８】
Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ−Ｂ（［11Ｃ］ＰｉＢ）（Ｋｌｕｎｋ  ｅｔ
ａｌ．著，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ  ５５（３）：３０６−３１９，２００４年；Ｉｋｏｎｏｍｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｂｒａｉｎ；１３１：１６３０−１６４５，２００８年）は代表的なＰＥＴリガンドである。ＰｉＢは、Ａβの凝集した原線維状沈着物に低いナノモル親和性で結合し、ＰＥＴを用いるイメージングに十分な量で脳に入り、正常な脳組織から迅速に除去されるチオフラビン−類似物である。（Ｐｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．２５：１５２８−１５４７，２００５年）。ＰＥＴ研究において典型的に用いられる低いナノモル濃度において、死後のヒトの脳へのＰｉＢの結合は原線維状沈着物に関して選択的であることが示されている。（Ｉｋｏｎｏｍｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．著，同上；Ｆｏｄｅｒｏ−Ｔａｖｏｌｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ；２７：１０３６５−１０３７１，２００７年）。ＡＤ患者は、標準と比較して、病理学的にＡβが標的とすることが知られている脳関連皮質の領域における［11Ｃ］ＰｉＢの約２倍の保持を示す。［11Ｃ］ＰｉＢの保持は、ＡＤ患者及び標準において、Ａβ沈着により比較的影響を受けないことが知られている領域（例えば皮質下白質、脳橋及び小脳）内で同等である。投与されるＰＥＴリガンドの投薬量は、放射性により測定され得る。特に［11Ｃ］ＰｉＢに関する代表的な投薬量は、１２〜１８μＣｉである。
【０１８９】
用いられ得る他のＰＥＴリガンドにはＴｈ−Ｔ  ＰＥＴリガンド、18Ｆ−ＡＨ１１０６
９０（フルテメタモル（ｆｌｕｔｅｍｅｔａｍｏｌ）としても知られるＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅからのＰＩＢの３’−フルオロ類似物）；及び２つのＣＲ  ＰＥＴリガンド：スチルベン誘導体，18Ｆ−ＢＡＹ９４−９１７２（Ｂａｙｅｒ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａ）（ＡＤ及び標準における予備研究で11Ｃ−ＰＩＢと同等に働いた［Ｒｏｗｅ著．Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００８；７（２）：１２９−３５３５］）及び（Ｅ）−４−（２−（６−（２−（２−（２−（２−１８Ｆ−フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン−３−イル）ビニル）−Ｎ−メチルベンゼンアミン（Ａｖｉｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｅｕｔｉｃａｌｓからの18Ｆ−ＡＶ−４５）［Ｋｌｕｎｋ著，Ｃｕｒｒ
Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００８；２１（６）：６８３−７３２，Ｒｏｗｅ著，同上，Ｎｏｒｄｂｅｒｇ著，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉａ．２００８；４６（６）：１６３６−４１］が含まれる。
【０１９０】
ＰＥＴリガンドの投与と走査の実行の間の間隔は、ＰＥＴリガンド及び特にその脳中への吸収及び除去の速度ならびにその放射性標識の半減期に依存し得る。間隔は、例えば１０〜１２０分又は３０〜９０分であることができる。
【発明を実施するための形態】
【０１９１】
ＶＩＩＩ．  実施例
実施例１−４：材料及び方法
抗体：すべての抗体は、ＩｇＧ１イソタイプのものであった。正の標準は、３Ｄ６（Ａβ1-5）及び１２Ａ１１（Ａβ3-7）であった。ＩｇＧ１は負の標準であった。Ｃ−末端Ａβ抗体は、２Ｇ３及び１４Ｃ２（Ａβ40に関して）ならびに２１Ｆ１２（Ａβ42に関して）であった。
【０１９２】
組織：ＰＤＡＰＰマウス（Ｇａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎａｔｕｒｅ  ３７３：５２３−５２７，１９９５年）をインハウスコロニー（ｉｎ−ｈｏｕｓｅ  ｃｏｌｏｎｙ）から得た。ＰＳＡＰＰマウス（二重に突然変異したｈＡＰＰ及びＰｒｅｓｅｎｉｌｉｎ  １に関してビゲニック（ｂｉｇｅｎｉｃ），Ｈｏｌｃｏｍｂ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ４：９７−１００，１９９８年；Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  １７３：１８３−１９５，２００２年）をＤｒ．Ｓｅｔｅｖｅ  Ｊａｃｏｂｓｏｎ（Ｗｙｅｔｈ）から得、Ｌｉｎｅ  ４１マウス（Ｔｈｙ１−プロモーターを有するＳｗｅｄｉｓｈ  ａｎｄ  Ｌｏｎｄｏｎ  突然変異ｈＡＰＰ，（Ｒｏｃｋｅｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ  ６６：５７３−５８２，２００１年）はＤｒ．Ｅｌｉｅｚｅｒ  Ｍａｓｌｉａｈ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＣＡ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）からの寛大な贈り物であった。マウスを安楽死させ、迅速に脳を取り出し、ドライアイス上で凍結した。ＡＤ患者からの新鮮凍結組織は、Ｄｒ．Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ
Ｈｅａｄ（Ｂｒａｉｎ  Ｂａｎｋ  ａｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＣＡ，Ｉｒｖｉｎｅ）からの寛大な贈り物であった。
【０１９３】
切断（ｓｅｃｔｉｏｎｉｎｇ）：Ｍｉｃｒｏｍ  ＨＭ  ５５０クリオ−カッター（ｃｒｙｏ−ｃｕｔｔｅｒ）を用いて１０ミクロンのクリオ−カット切片（ｃｒｙｏ−ｃｕｔ  ｓｅｃｔｉｏｎ）を新鮮凍結組織から作製し、免疫染色のためにＳｕｐｅｒｆｒｏｓｔ−Ｐｌｕｓスライド上に、あるいは生体外アッセイのために小さいＶｅｃｔａｂｏｎｄ−コーティングされ且つ高圧滅菌されたカバーガラス（ｃｌａｓｓ  ｃｏｖｅｒｓｌｉｐｓ）上に乗せた。いずれの処理の前にも、すべての切片を室温で終夜乾燥した。
【０１９４】
免疫染色のための切片は固定せずに、あるいはアセトン７５％／エタノール２５％ミックス中で、又はホスフェート−緩衝４％パラホルムアルデヒド中で５分間固定して処理された。
【０１９５】
免疫染色：イムノペルオキシダーゼ染色のために、一次抗体を改変しないで（ｕｎｍｏｄｉｆｉｅｄ）又はビオチンにカップリングさせて、それぞれ２及び３μｇ／ｍｌの濃度で用いた。二次抗体は、用いられる場合、Ｖｅｃｔｏｒからのものであり、ビオチンにカップリングし、１：２００希釈において用いられた。ＶｅｃｔｏｒからのＡＢＣ“Ｅｌｉｔｅ”ペルオキシダーゼキットを最後の段階として用い、ペルオキシダーゼ基質としてジアミノベンジジン及びＨ2Ｏ2を用いて抗原−結合抗体を可視化した。ヘマトキシリン（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ）を用いてすべての切片を対比染色した。
【０１９６】
Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔスライド上又はカバーガラス上に乗せられた切片への免疫蛍光染色のために、一次抗体を１〜２μｇ／ｍｌで用い、二次抗体を１：２００希釈で用いた。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓからのキットを用いて抗−Ａβ抗体をＡｌｅｘａ−５９４（赤色蛍光）にカップリングさせた。上記の抗体の他に、市販の抗体、抗−ＣＤ１１ｂ（ラット抗体、Ｓｅｒｏｔｅｃ）を、生体外アッセイ後に小グリア細胞の検出のために用い、それはＡｌｅｘａ−４８８（緑色蛍光）の使用により現れた。Ｈｏｅｃｈｓｔ核染色（青色蛍光）も細胞核を現すために用いられた。
【０１９７】
生体外アッセイ（Ａβ食作用アッセイ）：このアッセイは、Ｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．著，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ６：９１６−９１９，２０００年において以前に記載された通り行われた。要するに、カバーガラス上の新鮮なクリオ−切片を、２４−ウェル培養プレートのウェル中にそれぞれに置き、３μｇ／ｍｌの濃度における標準抗体（３Ｄ６、ＩｇＧ）又は１つのＣ−末端Ａβ抗体（２Ｇ３、１４Ｃ２又は２１Ｆ１２）のいずれかと一緒にインキュベーションした。マウスＰ１  ｐｕｐｓから１週間前に調製され、ウェル当たり５ｘ１０5個の細胞の密度で加えられるネズミ小グリア細胞を加える３０分前に、抗体を切片に加えた。小グリア細胞を加えた後、切片を５％ＣＯ2雰囲気中で３７℃において８時間〜１４時間インキュベーションした。その期間の後、抗体／小グリア細胞溶液を切片から吸引し、ホスフェート−緩衝４％−パラホルムアルデヒドを用いて切片を固定してから上記の免疫染色に用いた。
【実施例１】
【０１９８】
Ｃ−末端抗体２Ｇ３、１４Ｃ２及び２１Ｆ１２は、固定されないＡＤ脳切片上の斑を認識する
固定されないＡＤ組織（後頭皮質）についての染色実験の結果を図１（パネルＡ及びＢ）に、ならびにそれらの半−定量的視覚評価（２人の研究者により独立して行われ；結果を平均化した）の結果を下記の表２（Ａ及びＢ）に示す。固定されない切片を用いて、治療を受けている患者におけるＡβ抗体への暴露を模し、すなわち典型的に組織切片中のタンパク質の架橋（ホルマリン又はパラホルムアルデヒド）又は脱水及び沈殿（エタノール、アセトン、メタノール）を誘導する固定法により、抗体は改変されない抗原と相互作用し得る。３Ｄ６及び１２Ａ１１抗体は正の標準として役立った。染色法において無関係のＩｇＧ（負の標準）を用いると、全く染色されないことを検出することができた。評価されたＣ−末端抗体のそれぞれは、３Ｄ６又は１２Ａ１１のように強くではなかったが、ＡＤ斑に結合した。ＡＤ斑へのＣ−末端抗体の結合は、アポリポタンパク質Ｅ３／Ｅ３及びアポリポタンパク質Ｅ３／Ｅ４遺伝子型の両方のＡＤ患者からの切片において観察された。これらの結果は、Ｃ−末端抗体２Ｇ３、１４Ｃ２及び２１Ｆ１２がＡβ斑に結合することを示す。
【０１９９】
【表２】
2015526409.tif 000020
【実施例２】
【０２００】
Ｃ−末端抗体２Ｇ３、１４Ｃ２及び２１Ｆ１２は、ＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１の固定されない及び固定された切片上の斑を認識するが、ＰＤＡＰＰマウスの切片上の斑を認識しない
ｈＡＰＰトランスジェニックマウスの切片上のＣ−末端Ａβ抗体２Ｇ３、１４Ｃ２及び２１Ｆ１２の結合を研究するために、以下のモデルのクリオ−切片を作製した（各抗体及び染色条件に関し、遺伝子型当たりに３個のマウス、マウス当たりに１〜２個の切片）：ＰＤＡＰＰ（ホモ接合マウス、２４月令）；ＰＳＡＰＰ（ヘテロ接合、１３月令）；及びＬｉｎｅ  ４１（ヘテロ接合、１８月令）。
【０２０１】
２種の固定条件（アセトン７５％／エタノール２５％ミックス、４％ホスフェート−緩衝パラホルムアルデヒド）を固定されない切片と比較した。すべてのＡβ抗体をビオチニル化した。抗体３Ｄ６は標準として役立ち、ＩｇＧは負の標準として役立った。ＩｇＧを用いてシグナルは見られなかった（示されていない）。
【０２０２】
３個のマウスモデルの前頭皮質に関し、結果を表２に示す（Ａ：３ＤＦ６，Ｂ：２Ｇ３，Ｃ：１４Ｃ２，Ｄ：２１Ｆ１２）。３Ｄ６は、すべてのモデルにおいて、且つすべての条件下で斑を重度に標識した。３Ｄ６と比較すると、Ｃ−末端抗体は斑の小さいサブセットを標識したのみであった。Ａβ（４０）抗体２Ｇ３及び１４Ｃ２は、ＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１中の斑のみを標識し、２Ｇ３は３つのすべての条件において類似の程度まで斑を標識したが、１４Ｃ２はアセトン／エタノール固定後のみに標識した。Ａβ（４２）抗体２１Ｆ１２はＰＤＡＰＰマウス中の少数の斑ならびにＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウス中の多数の斑を標識した。この抗体を用いる染色は、アセトン／エタノール固定の後にいくらかより強かった。
【０２０３】
これらの結果は、Ａβ（４０）及びＡβ（４２）抗体がＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウスのようないくつかのマウスモデルにおいて斑を認識することを示す。
【実施例３】
【０２０４】
Ｃ−末端抗体は、ＡＤ及びＰＳＡＰＰマウスにおける密集外観（ｃｏｍｐａｃｔ  ａｐｐｅａｒａｎｃｅ）を有する斑に主に結合する
３Ｄ６の斑結合とＣ−末端Ａβ抗体の斑結合の間の重複を決定するために、固定されないＡＤ及びＰＳＡＰＰ切片について蛍光二重−標識染色を行った。結果を図３に示す。二重染色は、ＡＤにおける３Ｄ６＋２１Ｆ１２の二重標識ならびにＰＳＡＰＰ切片における３Ｄ６と２Ｇ３又は３Ｄ６と２１Ｆ１２に関してのみ、説明可能な結果を与えた。
【０２０５】
結果は、２１Ｆ１２がＡＤ切片中の斑の高密度の芯に強く結合し（図３Ａ，上及び中の列）、より拡散された外観を有する斑により低い程度で結合する（図３Ａ，下の列）ことを示す。ＰＳＡＰＰマウス切片において、２Ｇ３及び２１Ｆ１２は主に斑の高密度の芯に結合する（図３Ｂ）。
【実施例４】
【０２０６】
Ｃ−末端抗体は、生体外アッセイにおいてＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウス切片からのＡβ斑の小グリア細胞食作用を助長する
Ｃ−末端Ａβ抗体が斑を除去できるかどうかを決定するために、我々はＰＳＡＰＰ及びＬｉｎｅ  ４１マウスからのクリオ−切片についての生体外アッセイにおいてそれらを用いた。
【０２０７】
脳半球からの切片を１つのＡβ抗体（３Ｄ６、２Ｇ３、１４Ｃ２、２１Ｆ１２、すべてのＩｇＧ１イソタイプ）と一緒に、又はイソタイプを調和させた（ｍａｔｃｈｅｄ）ＩｇＧ負の標準ならびに材料及び方法において上記に記載した一次ネズミ小グリア細胞（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａ）と一緒にインキュベーションした。次いで３Ｄ６（レッドチャンネル（ｒｅｄ  ｃｈａｎｎｅｌ））、小グリア細胞マーカーＣＤ１１ｂ（グリーンチャンネル（ｇｒｅｅｎ  ｃｈａｎｎｅｌ））及び核染色Ｈｏｅｃｈｓｔ（ブルーチャンネル（ｂｌｕｅ  ｃｈａｎｎｅｌ））を用いて切片を三重染色した。その後、Ａβ抗体が斑のクリアランスを引き出すかどうかを決定するために、全切片からのレッドチャンネルシグナル（３Ｄ６，斑に関する）を、１０倍の対物レンズを用いるＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ６１顕微鏡に結合されたＲｅｔｉｇａカメラ（ＱＩｍａｇｉｎｇ）を用いてデジタル的に走査した。Ｍｅｔａｍｏｒｐｈ（登録商標）ソフトウェアを用いて全
切片のイメージを白黒でデジタル的に再構築し、３Ｄ６染色により現れた斑シグナルを示した。２つのそのような実験の結果を図４Ａ及び４Ｂに示す。結果は、すべてのＡβ抗体が斑シグナルの減少に導くことを示し、それらすべてが生体外アッセイにおいて斑を除去できること示している。
【０２０８】
Ｃ−末端Ａβ抗体を用いるこれらの生体外実験に小グリア細胞食作用が含まれることを示すために、次いで切片を高性能（４０倍の対物レンズ）で見、３つのすべてのチャンネル（レッド、グリーン及びブルー）を同時にイメージングした。３Ｄ６、２Ｇ３、１４Ｃ２及び２１Ｆ１２抗体に関する小グリア細胞内のＡβの存在を示す結果を、図５に示す。
【０２０９】
実施例５−８：材料及び方法
抗体：すべての抗体は、ＩｇＧ１イソタイプのものであった。３Ｄ６（Ａβ1-5）は正の標準であった。ＩｇＧ１は負の標準であった。中心−エピトープＡβ抗体は２６６（Ａβ16-23）、１５Ｃ１１（Ａβ18-22）及び２２Ｄ１２（Ａβ18-22）であった。
【０２１０】
組織：ＰＤＡＰＰマウス（Ｇａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．著，１９９５年，同上）をインハウスコロニーから得た。ＰＳＡＰＰマウス（二重に突然変異したｈＡＰＰ及びＰｒｅｓｅｎｉｌｉｎ  １に関してビゲニック，Ｈｏｌｃｏｍｂ  ｅｔ  ａｌ．著，１９９８年，同上；Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．著，２００２年，同上）をＤｒ．Ｓｅｔｅｖｅ  Ｊａｃｏｂｓｏｎ（Ｗｙｅｔｈ）から得た。ＣＯ2暴露によりマウスを安楽死させ、迅速に脳を抽出し、ドライアイス上で凍結した。ＡＤ患者からの新鮮凍結組織は、Ｄｒ．Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ  Ｈｅａｄ（Ｂｒａｉｎ  Ｂａｎｋ  ａｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＣＡ，Ｉｒｖｉｎｅ）からの寛大な贈り物であった。
【０２１１】
切断：Ｍｉｃｒｏｍ  ＨＭ  ５５０クリオ−カッターを用いて１０ミクロンのクリオ−カット切片を新鮮凍結組織から作製し、免疫染色のためにＳｕｐｅｒｆｒｏｓｔ−Ｐｌｕｓ（登録商標）スライド上に、あるいは生体外アッセイのために小さいＶｅｃｔａｂｏｎｄ（登録商標）−コーティングされ且つ高圧滅菌されたカバーガラス上に乗せた。いずれの処理の前にも、すべての切片を室温で終夜乾燥した。
【０２１２】
免疫染色：イムノペルオキシダーゼ染色のために、一次抗体を３μｇ／ｍｌの濃度で用いた。二次抗体はＶｅｃｔｏｒからのものであり、ビオチンにカップリングし、１：２００希釈において用いられた。ＶｅｃｔｏｒからのＡＢＣ“Ｅｌｉｔｅ”ペルオキシダーゼキットを最後の段階として用い、ペルオキシダーゼ基質としてジアミノベンジジン及びＨ2Ｏ2を用いて抗原−結合抗体を可視化した。ヘマトキシリンを用いてＡＤ切片を対比染色した。
【０２１３】
Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔスライド上又はカバーガラス上に乗せられた切片への免疫蛍光染色のために、一次抗体を１〜２μｇ／ｍｌで用い、二次抗体を１：２００希釈で用いた。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓからのキットを用いて抗−Ａβ抗体をＡｌｅｘａ−５９４（赤色蛍光）にカップリングさせた。上記の抗体の他に、市販の抗体、抗−ＣＤ１１ｂ（ラット抗体、Ｓｅｒｏｔｅｃ）を、生体外アッセイ後に小グリア細胞の検出のために用い、それはＡｌｅｘａ−４８８（緑色蛍光）の使用により現れた。Ｈｏｅｃｈｓｔ核染色（青色蛍光）も細胞核を現すために用いられた。
【０２１４】
生体外アッセイ（Ａβ食作用アッセイ）：このアッセイは、Ｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．著，２０００年，同上において以前に記載された通り行われた。要するに、カバーガラス上の新鮮なクリオ−切片を、２４−ウェル培養プレートのウェル中にそれぞれに置き、３μｇ／ｍｌの濃度における標準抗体（３Ｄ６、ＩｇＧ）又は１つの中心Ａβ抗体（２６６、１５Ｃ１１又は２２Ｄ１２）のいずれかと一緒にインキュベーションした。マウスＰ１  
ｐｕｐｓから１週間前に調製され、ウェル当たり５ｘ１０5個の細胞の密度で加えられるネズミ小グリア細胞を加える３０分前に、抗体を切片に加えた。小グリア細胞を加えた後、切片を５％ＣＯ2雰囲気中で３７℃において８時間〜１４時間インキュベーションした。その期間の後、抗体／小グリア細胞溶液を切片から吸引し、ホスフェート−緩衝４％−パラホルムアルデヒドを用いて切片を固定してから上記の免疫染色に用いた。
【実施例５】
【０２１５】
中心−エピトープ抗体２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２は、固定されないＡＤ切片上の斑を認識する
固定されないＡＤ組織（後頭皮質）についての染色実験の結果を図６Ａ、Ｂに、ならびにそれらの半−定量的視覚評価（２人の研究者により独立して行われ；結果を平均化した）の結果を下記の表３（Ａ及びＢ）に示す。固定されない切片を用いて、治療を受けている患者におけるＡβ抗体への暴露を模し、すなわち典型的に組織切片中のタンパク質の架橋（ホルマリン又はパラホルムアルデヒド）又は脱水及び沈殿（エタノール、アセトン、メタノール）を誘導する固定法により、抗体は改変されない抗原と相互作用し得る。３Ｄ６抗体は正の標準として役立った。染色法において無関係のＩｇＧ（負の標準）を用いると、全く染色されないことを検出することができた。評価された中心−エピトープＡβ抗体のそれぞれは、３Ｄ６のように強くではなかったが、ＡＤ斑に結合した。ＡＤ斑への中心−エピトープ抗体の結合は、アポリポタンパク質Ｅ３／Ｅ３及びアポリポタンパク質Ｅ３／Ｅ４遺伝子型の両方のＡＤ患者からの切片において観察された。これらの結果は、中心−エピトープＡβ抗体２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２がＡβ斑に結合することを示す。
【０２１６】
【表３】
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【実施例６】
【０２１７】
中心−エピトープＡβ抗体２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２は、ＰＳＡＰＰの固定されない切片上の斑を認識するが、ＰＤＡＰＰマウスの切片上の斑を認識しない
ｈＡＰＰトランスジェニックマウスの切片上の中心−エピトープＡβ抗体２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２の結合を研究するために、以下の２つのモデルのクリオ−切片を作製した（各抗体及び染色条件に関し、遺伝子型当たりに３個のマウス、マウス当たりに１〜２個の切片）：ＰＤＡＰＰ（ヘミ接合マウス、２０月令）；及びＰＳＡＰＰ（ヘテロ接合、１３月令）。
【０２１８】
材料及び方法において上記に記載した通りに、切片を固定せずに処理した。ＩｇＧを用いてシグナルは見られなかった（示されていない）。非−トランスジェニック標準マウスの切片において非−特異的なバックグラウンドが観察された。
【０２１９】
２個のマウスモデルの前頭皮質に関し、結果を表７に示す。３Ｄ６は、すべてのモデルにおいて斑を重度に標識した。中心−エピトープＡβ抗体は３Ｄ６により標識された斑のサブセットを標識した。これらの結果は、中心−エピトープＡβ抗体がＰＳＡＰＰのようないくつかのマウスモデルにおいて斑を認識することを示す。
【実施例７】
【０２２０】
中心−エピトープ抗体は、ＡＤ及びＰＳＡＰＰマウスにおいて主に密集斑に結合する
３Ｄ６の斑結合と中心−エピトープＡβ抗体の斑結合の間の重複を決定するために、２２Ｄ１２と組み合わせて３Ｄ６を用い、固定されないＡＤ及びＰＳＡＰＰ切片について蛍光二重−標識染色を行った。結果を図８Ａ及び８Ｂに示す。
【０２２１】
結果は、２２Ｄ１２がＡＤ及びＰＳＡＰＰ切片において斑の高密度の芯に強力に結合することを示す。
【実施例８】
【０２２２】
中心−エピトープＡβ抗体は、生体外アッセイにおいてＰＳＡＰＰマウス切片からのＡβ斑の小グリア細胞食作用を助長するが、ＰＤＡＰＰマウス切片からの斑の食作用を助長しない
中心−エピトープＡβ抗体が斑を除去できるかどうかを決定するために、我々はＰＤＡＰＰ及びＰＳＡＰＰマウスからのクリオ−切片についての生体外アッセイにおいて２６６、１５Ｃ１１及び２２Ｄ１２抗体を用いた。
【０２２３】
脳半球からの切片をＡβ抗体（３Ｄ６（正の標準）あるいは２６６（Ａβ16-23）、１５Ｃ１１（Ａβ18-22）、２２Ｄ１２（Ａβ18-22）、すべてのＩｇＧ１イソタイプ）抗体と一緒に、又はイソタイプを調和させたＩｇＧ負の標準ならびに材料及び方法において上記に記載した一次ネズミ小グリア細胞と一緒にインキュベーションした。次いで３Ｄ６（レッドチャンネル）、小グリア細胞マーカーＣＤ１１ｂ（グリーンチャンネル）及び核染色Ｈｏｅｃｈｓｔ（ブルーチャンネル）を用いて切片を三重染色した。その後、Ａβ抗体が斑のクリアランスを引き出すかどうかを決定するために、全切片からのレッドチャンネルシグナル（３Ｄ６，斑に関する）を、１０倍の対物レンズを用いるＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ６１顕微鏡に結合されたＲｅｔｉｇａカメラ（ＱＩｍａｇｉｎｇ）を用いてデジタル的に走査した。Ｍｅｔａｍｏｒｐｈ（登録商標）ソフトウェアを用いて全切片のイメージを白黒でデジタル的に再構築し、３Ｄ６染色により現れた斑シグナルを示した。そのような実験の結果を図９に示す。結果は、正の標準３Ｄ６のみがＰＤＡＰＰマウス切片における斑シグナルを減少させるが、すべてのＡβ抗体はＰＳＡＰＰ切片における斑シグナルの減少に導くことを示し、中心−エピトープＡβ抗体はＰＳＡＰＰマウス中の斑を除去できるが、ＰＤＡＰＰマウス中の斑を除去できないことを示している。
【０２２４】
中心−エピトープＡβ抗体を用いるこれらの生体外実験において、小グリア細胞食作用が斑の除去に関係することを示すために、次いで切片（負の標準ＩｇＧ、正の標準３Ｄ６又は２６６抗体を含む）を高性能（４０倍の対物レンズ）で見、３つのすべてのチャンネル（レッド、グリーン及びブルー）を同時にイメージングした。結果を図１０に示す。Ａβの小グリア細胞食作用は、３Ｄ６を用いる生体外実験の後に両方のマウスモデル（ＰＤＡＰＰ及びＰＳＡＰＰ）からの切片において観察されたが、中心−エピトープ抗体２６６を用いる生体外実験の後にＰＳＡＰＰマウスの切片においてのみ観察された。
【０２２５】
特許、特許出願、雑誌論文、ウェブサイト、寄託番号などを含む、本明細書で引用されたすべての参照文献は、引用することによりそれらの記載事項全体が、個別にそのように注記されている場合と同じ程度まで、すべての目的のために本明細書の内容となる。文脈から他であると明らかにならなければ、本発明のいずれの段階、要素、特徴、態様又は側
面も、互いと組み合わせて用いることができる。本発明をその特定の態様と結び付けて記載してきたが、さらなる修正が可能である。本出願は、一般的に本発明の原理に従っており、本発明が関連する技術分野内の既知のもしくは通常の実施内に含まれる、ならびに本明細書で前に示した必須の特徴に適用され得る本開示からの逸脱を含む本発明のいずれの変形、使用又は応用も包含することが意図されている。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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