(57)【要約】  本発明は、ａ）とりわけＨＣＶを阻害する化合物およびその塩、（ｂ）そのような化合物および塩の調製にとって有用な中間体、（ｃ）そのような化合物および塩を含む組成物、（ｄ）そのような中間体、化合物、塩および組成物の調製方法、（ｅ）そのような化合物、塩および組成物の使用方法、ならびに（ｆ）そのような化合物、塩および組成物を含むキットに関する。【選択図】図６
2015506987.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2015506987.tif 000036
を有し、かつ結晶形である化合物の固形。
【請求項２】
前記結晶形は、式Ｉの化合物のＡ型結晶形である、請求項１に記載の固形。
【請求項３】
前記固形は、
ａ）表１に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８またはその概位置の全てに位置するピーク、
ｂ）図６に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６またはその概位置の全てに位置するピーク、
ｃ）図８に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４またはその概位置の全てに位置するピーク、あるいは
ｄ）図１９に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８またはその概位置の全てに位置するピーク
を含むＸＲＰＤパターンを有する、請求項１に記載の固形。
【請求項４】
前記固形は、表２に特定されている１、２、３、４またはその概位置の全てに位置するピークを含むＸＲＰＤパターンを有する、前記請求項のいずれかに記載の固形。
【請求項５】
前記固形は、２θがＮＩＳＴまたは他の好適な標準物質で較正された回折計（Cu Kα）により収集された高品質パターンに基づき、周囲温度で１４．７±０．２、１７．４±０．２の２θ値に位置するピークと、１０．６±０．２、１２．７±０．２および１３．６±０．１のうちの１つ以上の２θ値に位置するピークとを含むＸＲＰＤパターンを有する、前記請求項のいずれかに記載の固形。
【請求項６】
実質的に図４、図１４、図２１または図２３のうちの１つのような示差走査熱量測定サーモグラムを有する、前記請求項のいずれかに記載の固形。
【請求項７】
前記請求項のいずれかに記載の固形を含む医薬組成物。
【請求項８】
前記請求項のいずれかに記載の固形を含むゲルカプセル。
【請求項９】
式（ＩＩ）：
【化２】
2015506987.tif 000037
を有し、かつ結晶形を有する化合物の固形。
【請求項１０】
前記結晶形は、式ＩＩの化合物のＩ型結晶形である、請求項９に記載の固形。
【請求項１１】
前記固形は、
表８に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６またはその概位置の全てに位置するピーク、または
表９に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはその概位置の全てに位置するピーク
を含むＸＲＰＤパターンを有する、請求項９に記載の固形。
【請求項１２】
前記固形は、表８のピーク番号１、３、１３および１７と、表８に特定されている残りのピークの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３とを含むＸＲＰＤパターンを有する、請求項９または１０のうちのいずれか１項に記載の固形。
【請求項１３】
請求項９〜１２のいずれか１項に記載の固形を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書では、式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物を含む固形、その固形を含む組成物、その固形の製造方法、ならびに、例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（「ＨＣＶ」）の非構造５Ａ（「ＮＳ５Ａ」）タンパク質の機能の阻害を含むＨＣＶ複製の阻害におけるその使用方法を提供する。
【化１】
2015506987.tif 000003
【化２】
2015506987.tif 000004
【背景技術】
【０００２】
ＨＣＶは、フラビウイルス科の一員である一本鎖ＲＮＡウイルスである。このウイルスは、現在７種の同定されている遺伝子型と５０種を超える同定されているサブタイプが存在するように、広範な遺伝的異質性を示す。ＨＣＶ感染細胞において、ウイルスのＲＮＡは、１０個の個々のタンパク質に切断されるポリタンパク質に翻訳される。アミノ末端には、構造タンパク質、すなわち、コア（Ｃ）タンパク質、外被糖タンパク質Ｅ１およびＥ２が存在する。ｐ７すなわち内在性膜タンパク質がＥ１およびＥ２に続く。さらに、６種の非構造タンパク質、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂが存在し、それらはＨＣＶライフサイクルにおいて機能的役割を担っている(例えば、Lindenbach, B.D. and C.M. Rice, Nature, (2005) 436:933-938を参照)。
【０００３】
ＨＣＶによる感染は、深刻な健康問題である。世界中で１億７０００万の人々が慢性的にＨＣＶに感染していると推定されている。ＨＣＶ感染は、慢性肝炎、肝硬変、肝不全および肝細胞癌を引き起す可能性がある。したがって、慢性ＨＣＶ感染は、肝臓関連若年死の世界的な主原因である。
【０００４】
ＨＣＶ感染のための現在の標準的な看護治療計画では、インターフェロンαを単独またはリバビリンと組み合わせて使用する。この治療は厄介であり、患者を衰弱させる重篤な副作用を有する場合があり、多くの患者は治療に対して永続的に応答しない。ＨＣＶ感染を治療する新しい有効な方法が緊急に必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書中の実施形態は、式（Ｉ）（「化合物（Ｉ）」）および式（ＩＩ）（「化合物（ＩＩ）」）の化合物の固形を提供する。
【０００６】
第１の態様では、式（Ｉ）：
【化３】
2015506987.tif 000005
を有する化合物の固形が提供される。
【０００７】
第１の態様の第１の実施形態では、本固形は結晶質である。
【０００８】
第２の実施形態では、該結晶形は、式Ｉの化合物のＡ型結晶形である。
【０００９】
第１の態様の第３の実施形態では、本固形は、
ａ）表１に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８またはその概位置の全てに位置するピーク、
ｂ）図６に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６またはその概位置の全てに位置するピーク、
ｃ）図８に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４またはその概位置の全てに位置するピーク、あるいは
ｄ）図１９に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８またはその概位置の全てに位置するピーク
を含むＸＲＰＤパターンを有する。
【００１０】
第１の態様の第４の実施形態では、本固形は、表２に特定されている１、２、３、４またはその概位置の全てに位置するピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。
【００１１】
第１の態様の第５の実施形態では、本固形は、ＮＩＳＴまたは他の好適な標準物質で較正された２θ回折計（Cu Kα）で収集された高品質パターンに基づき、周囲温度で１４．７±０．２、１７．４±０．２の２θ値に位置するピークと、１０．６±０．２、１２．７±０．２および１３．６±０．１のうちの１つ以上の２θ値に位置するピークとを含むＸＲＰＤパターンを有する。
【００１２】
第１の態様の第６の実施形態では、Ａ型を含む医薬組成物が提供される。
【００１３】
第１の態様の第７の実施形態では、前記実施形態のいずれかの固形を含むゲルカプセルが提供される。
【００１４】
第２の態様では、式（ＩＩ）：
【化４】
2015506987.tif 000006
を有し、かつ結晶質である化合物の固形が提供される。
【００１５】
第２の態様の第１の実施形態では、本固形は、式ＩＩの化合物のＩ型結晶形である。
【００１６】
第２の態様の第２の実施形態では、本固体は、表８に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６またはその概位置の全てに位置するピークあるいは表９に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはその概位置の全てに位置するピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。
【００１７】
第２の態様の第３の実施形態では、本固体は、表８のピーク番号１、３、１３および１７ならびに表８に特定されている残りのピークの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３を含むＸＲＰＤパターンを有する。
【００１８】
第２の態様の第４の実施形態では、Ｉ型を含む医薬組成物が提供される。
【００１９】
いかなる特定の理論によっても限定されるものではないが、本明細書に記載されている化合物ＩのＡ型および化合物ＩＩのＩ型の貯蔵安定性、圧縮率、嵩密度または溶解特性は、製造、製剤および生物学的利用能にとって有利であると考えられる。
【００２０】
本明細書に提供されている固形は、動物またはヒトに使用される製剤の調製のための医薬品有効成分として有用である。従って、本明細書中の実施形態は、最終製剤としてのこれらの固形の使用を包含する。特定の実施形態は、とりわけ最終製剤の製造、加工、製剤および／または貯蔵にとって必要な特性、例えば、粉末流動特性、圧縮特性、錠剤化特性、安定性特性および賦形剤適合性特性などが向上した最終剤形の調製において有用な固形を提供する。本明細書中の特定の実施形態は、式（Ｉ）の化合物を含む単一成分結晶形、多成分結晶形、単一成分非晶形および／または多成分非晶形と、薬学的に許容される希釈液、賦形剤または担体とを含む医薬組成物を提供する。本明細書に記載されている固形は、例えば、ＨＣＶ複製の阻害、ＮＳ５Ａの阻害、およびＨＣＶ感染の治療、予防または管理に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】化合物ＩのＡ型の代表的な1H NMRスペクトルである。
【図２】化合物ＩのＡ型の代表的な13C NMRスペクトルである。
【図３】化合物ＩのＡ型の代表的なＦＴ−ＩＲスペクトルである。
【図４】化合物ＩのＡ型の代表的なＤＳＣサーモグラムである。
【図５】化合物ＩのＡ型の代表的なＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンである。
【図６】図５に示されているピークの表である。
【図７】化合物ＩのＡ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図８】図７に示されているピークの表である。
【図９】化合物ＩのＡ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図１０】化合物ＩのＡ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図１１】化合物ＩのＡ型の代表的な1H NMRスペクトルである。
【図１２】化合物ＩのＡ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図１３】化合物ＩのＡ型の代表的な1H NMRスペクトルである。
【図１４】化合物ＩのＡ型の代表的なＤＳＣ曲線およびサーモグラムである。
【図１５】化合物ＩのＡ型について相対湿度に対する重量％をグラフ化したものである。
【図１６】化合物ＩのＡ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図１７】化合物ＩのＡ型の代表的なサーモグラムである。
【図１８】化合物ＩのＡ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図１９】図１８に示されているピークの表である。
【図２０】化合物ＩのＡ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図２１】化合物Ｉの型の代表的なＤＳＣ曲線およびサーモグラムである。
【図２２】材料に圧力を加える前後における化合物ＩのＡ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図２３】材料に圧力を加えた後の化合物Ｉの型の代表的なＤＳＣ曲線およびサーモグラムである。
【図２４】化合物ＩＩのＩ型の代表的なＸＲＰＤパターンを示す。
【図２５】化合物ＩＩのＩ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図２６】化合物ＩＩのＩ型結晶を示す。
【図２７】化合物ＩＩのＩ型の代表的なサーモグラムである。
【図２８】化合物ＩＩのＩ型の代表的なＤＳＣ曲線である。
【図２９】化合物ＩＩのＩ型のＤＶＳ等温線プロットである。
【図３０】非晶質化合物ＩＩのＤＶＳ等温線プロットである。
【図３１】化合物ＩＩのＩ型の代表的なＸＲＰＤパターンである。
【図３２】化合物Ｉ−ＦＢの各種塩の偏光顕微鏡画像である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
（ａ）定義
特に定めがない限り、本明細書で使用する「固形」という用語および関連用語は、大部分が液体もしくは気体状態ではない物理的形態を指す。特に定めがない限り、本明細書で使用する「固形」という用語および関連用語は、本明細書において化合物（Ｉ）について言及するために使用する場合、大部分が液体もしくは気体状態ではない化合物（Ｉ）を含む物理的形態を指す。固形は、結晶質、非晶質またはそれらの混合物であってもよい。特定の実施形態では、固形は液晶であってもよい。化合物（Ｉ）を含む「単一成分」固形は、本質的に化合物（Ｉ）からなる。化合物（Ｉ）を含む「多成分」固形は、本固形内にかなりの量のイオンおよび／または分子などの１種以上のさらなる化学種を含む。例えば、特定の実施形態では、化合物（Ｉ）を含む結晶質の多成分固形は、結晶格子内の規則的な位置に、非共有結合的に結合された１種以上の化学種をさらに含む。
【００２３】
特に定めがない限り、本明細書で使用する「結晶質」という用語および本明細書で使用する関連用語は、物質、修飾物質、材料、成分または生成物について述べるために使用する場合、特に定めがない限り、その物質、修飾物質、材料、成分または生成物が、Ｘ線回折によって測定した場合に実質的に結晶質であることを意味する。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st edition, Lippincott, Williams and Wilkins, Baltimore, MD (2005)、The United States Pharmacopeia, 23rd edition, 1843-1844 (1995)を参照されたい。
【００２４】
特に定めがない限り、本明細書で使用する「結晶形」という用語および本明細書中の関連用語は、結晶質である固形を指す。結晶形としては、単一成分結晶形および多成分結晶形が挙げられ、多形、溶媒和物、水和物および他の分子複合体ならびに塩、塩の溶媒和物、塩の水和物、塩の他の分子複合体およびそれらの多形が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、物質の結晶形は、実質的に非晶形および／または他の結晶形を含んでいなくてもよい。特定の実施形態では、物質の結晶形は、重量基準で約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％または５０％未満の１種以上の非晶形および／または他の結晶形を含んでいてもよい。特定の実施形態では、物質の結晶形は、物理的および／または化学的に純粋であってもよい。特定の実施形態では、物質の結晶形は、物理的および／または化学的に約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％または９０％純粋であってもよい。
【００２５】
特に定めがない限り、本明細書で使用する「多形」「多形体」という用語および本明細書中の関連用語は、本質的に同じ分子またはイオンからなる２種以上の結晶形を指す。異なる結晶形のように、異なる多形は、結晶格子内の分子および／またはイオンの配置または立体配座により、例えば、融解温度、融解熱、溶解度、溶解速度および／または振動スペクトルなどの異なる物理的特性を有し得る。物理的特性の違いは、貯蔵安定性、圧縮率および密度（製剤および製品製造において重要）、および溶解速度（生物学的利用能における重要な因子）などの医薬パラメータに影響を及ぼすことがある。安定性の違いは、化学反応性（例えば、ある多形からなる場合よりも別の多形からなる場合に剤形がより急速に変色するような酸化差）または力学的変化（例えば、動力学的に好ましい多形が熱力学的により安定な多形に変換すると貯蔵時に錠剤が砕ける）あるいは両方（例えば、ある多形からなる錠剤は、高湿度でより分解しやすくなる）における変化から生じ得る。溶解度／溶解の違いにより、極端な場合には若干の固体状態転移により効力の欠如が生じることがあり、他の極端な場合には毒性が生じることがある。また、物理的特性は、加工において重要であり得る（例えば、ある多形は、溶媒和物を形成しやすかったり、濾過および洗浄により不純物を除去することが困難であったりする場合があり、粒子形状や粒径が多形間で異なる場合がある）。
【００２６】
特に定めがない限り、本明細書で使用する「溶媒和物」および「溶媒和された」という用語は、溶媒を含む物質の結晶形を指す。「水和物」および「水和された」という用語は、溶媒が水を含む溶媒和物を指す。「溶媒和物の多形」とは、特定の溶媒和物組成物に２種以上の結晶形が存在することを指す。同様に、「水和物の多形」とは、特定の水和物組成物に２種以上の結晶形が存在することを指す。本明細書で使用する「脱溶媒和された溶媒和物」という用語は、溶媒和物から溶媒を除去して調製することができる物質の結晶形を指す。
【００２７】
特に定めがない限り、本明細書で使用する「非晶質」「非晶形」という用語および本明細書で使用する関連用語は、当該物質、成分または生成物がＸ線回折によって測定した場合に実質的に結晶質でないことを意味する。特に、「非晶形」という用語は、無秩序な固形、すなわち、長距離の結晶秩序が欠如した固形を表す。特定の実施形態では、物質の非晶形は、他の非晶形および／または結晶形を実質的に含んでいなくてもよい。他の実施形態では、物質の非晶形は、重量基準で約１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％または５０％未満の１種以上の他の非晶形および／または結晶形を含んでいてもよい。特定の実施形態では、物質の非晶形は、物理的におよび／または化学的に純粋であってもよい。特定の実施形態では、物質の非晶形は、物理的および／または化学的に約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％または９０％純粋であってもよい。
【００２８】
結晶形および非晶形の特性評価技術としては、熱重量分析法（ＴＧＡ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、Ｘ線粉末回折法（ＸＲＰＤ）、単結晶Ｘ線回折法、振動分光法（例えば、赤外線（ＩＲ）分光法およびラマン分光法）固体／溶液核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、光学顕微鏡法、ホットステージ光学顕微鏡法、走査型電子顕微鏡法（ＳＥＭ）、電子線結晶学および定量分析、粒径分析（ＰＳＡ）、表面積分析、溶解度測定、溶解測定、元素分析およびカールフィッシャー法が挙げられるが、これらに限定されない。特徴的な単位格子パラメータは、限定されるものではないが、単結晶回折および粉末回折を含むＸ線回折および中性子回折などの１つ以上の技術を用いて決定してもよい。粉末回折データを分析するのに有用な技術としては、例えば、２種以上の固相を含む試料中の単相に関連する回折ピークを分析するために使用することができるリートベルト法などのプロファイル法が挙げられる。粉末回折データを分析するのに有用な他の方法としては、当業者が結晶質粉末を含む試料から単位格子パラメータを決定することができる単位格子の指数付けが挙げられる。
【００２９】
特に定めがない限り、本明細書で使用する「約」および「およそ」という用語は、例えば、融解温度、脱水温度、脱溶媒和温度またはガラス転移温度を記述するような具体的な温度または温度範囲、例えば、温度または湿度の関数としての質量変化などの質量変化、例えば、質量または割合に換算した溶媒または水の含有量、あるいは例えばＩＲもしくはラマン分光法またはＸＲＰＤによる分析などにおけるピーク位置などの、特定の固形を特徴づけるために提供される数値または値の範囲に関連して使用する場合、その値または値の範囲が、当業者によって妥当であるとみなされる程度まで逸脱し得るが、なお特定の固形を表していることを示す。例えば、特定の実施形態では、「約」および「およそ」という用語は、本文脈で使用する場合、数値または値の範囲が、列挙されている値または値の範囲の２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１．５％、１％、０．５％または０．２５％以内で変化し得ることを示す。本明細書で使用されている、数値または値の範囲の前のチルダ（すなわち、「〜」）は、「約」または「およそ」を意味する。
【００３０】
特に定めがない限り、本明細書で使用する、「実質的に純粋」、例えば、実質的に他の固形および／または他の化学物質を含まない、あるいは「実質的に」結晶形または非晶形であると記述されている特定の結晶形または非晶形を含む試料は、特定の実施形態では、約２５重量％、２０重量％、１５重量％、１０重量％、９重量％、８重量％、７重量％、６重量％、５重量％、４重量％、３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．２５重量％または０．１重量％未満の１種以上の他の固形および／または他の化学物質を含有する。特に定めがない限り、本明細書で使用する、１種以上の他の固形および／または他の化学物質を「実質的に含まない」試料または組成物とは、その組成物が、特定の実施形態では、約２５重量％、２０重量％、１５重量％、１０重量％、９重量％、８重量％、７重量％、６重量％、５重量％、４重量％、３重量％、２重量％、１重量％、０．７５重量％、０．５重量％、０．２５重量％または０．１重量％未満の１種以上の他の固形および／または他の化学物質を含有していることを意味する。
【００３１】
特に定めがない限り、本明細書で使用する「治療する」「治療すること」および「治療」という用語は、疾患または障害あるいはその疾患または障害に伴う１つ以上の症状の根絶または寛解を指す。特定の実施形態では、この用語は、そのような疾患または障害を有する対象に１種以上の予防薬または治療薬を投与することにより、疾患または障害の拡大または悪化を最小限に抑えることを指す。いくつかの実施形態では、この用語は、特定の疾患の症状の発症後に、他のさらなる活性薬剤を含めるか含めずに本明細書に提供されている化合物を投与することを指す。
【００３２】
特に定めがない限り、本明細書で使用する「予防する」「予防すること」および「予防」という用語は、疾患または障害あるいはその１つ以上の症状の発症、再発または拡大の予防を指す。特定の実施形態では、この用語は、特に本明細書に提供されている疾患または障害のリスクのある患者に、症状の発症前に、他のさらなる活性化合物を含めるか含めずに本明細書に提供されている化合物を用いて治療することまたはそれを投与することを指す。この用語は、特定の疾患の症状の阻害または軽減を包含する。特に疾患の家族歴を有する患者は、特定の実施形態では予防療法の候補である。また、症状の再発歴を有する患者も予防の有力な候補である。この点に関しては、「予防」という用語は、「予防的治療」という用語と言い換え可能である。特に定めがない限り、本明細書で使用する「管理する」「管理すること」および「管理」という用語は、疾患または障害またはその１つ以上の症状の進行、拡大または悪化を予防または遅らせることを指す。多くの場合、対象が予防薬および／または治療薬から得られる有益な効果により、疾患または障害の治癒は生じない。この点に関して、「管理すること」という用語は、疾患の再発を予防または最小限に抑える試みにおいて過去に特定の疾患に苦しんでいた患者を治療することを包含する。
【００３３】
固形の変化が様々な物理的および化学的特性に影響を与えることがあり、それにより、加工、製剤、安定性および生物学的利用能、とりわけ重要な医薬特性において利点または欠点が生じることを考えると、医薬化合物の固形の調製および選択は複雑である。可能な医薬固体としては、結晶質固体および非晶質固体が挙げられる。非晶質固体は長距離の構造秩序の欠如を特徴とし、結晶質固体は構造的周期性を特徴とする。所望のクラスの医薬品固体は、特定の用途によって決まり、非晶質固体は、例えば溶解プロファイルの向上に基づいて選択されることがあるが、結晶質固体は、例えば、物理的または化学的安定性などの特性にとって望ましいものであればよい（例えば、S. R. Vippagunta et al., Adv. Drug. Deliv. Rev., (2001) 48:3-26、L. Yu, Adv. Drug. Deliv. Rev., (2001) 48:27-42を参照）。
【００３４】
結晶質であるか非晶質であるかに関わらず、医薬化合物の可能な固形としては、単一成分および多成分固体が挙げられる。単一成分固体は、本質的に他の化合物が存在しない医薬化合物からなる。単一成分結晶質材料における多様性は、潜在的に多形性の現象から生じ得、特定の医薬化合物に対して複数の３次元配置が存在する（例えば、S. R. Byrn et al., Solid State Chemistry of Drugs, (1999) SSCI, West Lafayetteを参照）。
【００３５】
医薬化合物の可能な固形におけるさらなる多様性は、多成分固体の可能性により生じ得る。２種以上のイオン種を含む結晶質固体は塩と呼ばれる（例えば、Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, P. H. Stahl and C. G. Wermuth, Eds., (2002), Wiley, Weinheimを参照）。潜在的に医薬化合物またはその塩に対して他の特性改善を与えることができるさらなる種類の多成分固体としては、とりわけ、例えば、水和物、溶媒和物、共結晶および包接体が挙げられる（例えば、S. R. Byrn et al., Solid State Chemistry of Drugs, (1999) SSCI, West Lafayetteを参照）。さらに、多成分結晶形は、潜在的に多形性を呈しやすく、ここでは、所与の多成分組成物が２種以上の３次元結晶配置で存在し得る。固形の発見は、安全で有効かつ安定な市場性の高い医薬化合物の開発において非常に重要である。
【００３６】
固形は、本明細書に記載されている結晶形などの特定の固形に固有な異なる物理的特性評価データを示し得る。これらの特性評価データは、例えばＸ線粉末回折法、示差走査熱量測定法、熱重量分析法および核磁気共鳴分光法などの当業者に知られている各種技術によって得ることができる。これらの技術によって得られたデータを使用して、特定の固形を同定することができる。当業者は、これらの特性評価技術のうちの１つを行い、得られたデータが、特定の固形の特性であることが特定されている本明細書に提供されている参照データに「一致」するか否かを決定することにより、固形が本明細書に記載されている形態のうちの１つであるか否かを決定することができる。参照固形のデータに「一致」する特性評価データは、当業者によって、参照固形と同じ固形に相当すると理解される。データが「一致」するか否かの分析では、当業者は、例えば、日常的な試料間分析における実験誤差および予想されるばらつきにより、特定の特性評価データ点が妥当な程度に変動しても所与の固形をなお表し得ることを理解している。化合物（Ｉ）または化合物（ＩＩ）を含む固形に加えて、化合物（Ｉ）または化合物（ＩＩ）のプロドラッグを含む固形が本明細書に提供されており、化合物（Ｉ）または化合物（ＩＩ）および化合物（Ｉ）または化合物（ＩＩ）を生じる重要な中間体の製造方法も本明細書に提供されている。
【００３７】
高い効力および最も一般的なＨＣＶ遺伝子型の幅広い遺伝子型適用範囲、他の標的に対する選択性または低毒性ならびに経口的生物学的利用能などの所望の抗ＨＣＶ治療特性を有する化合物が必要とされている。このような化合物は、最長１年間の慢性投与に適した安全性プロファイルを有する必要がある。
【００３８】
これらの化合物を治療薬として有効に使用するためには、容易に製造することができ、許容される化学的および物理的安定性を有する固形を有することが望ましい。非晶質固形は、予測不可能に水を吸収するという欠点を有する。非晶形は、医薬品として有用であるように製造するのに十分な純度、安定性または予測可能性を提供しない。
【００３９】
ここに提供されている固形（化合物ＩのＡ型および化合物ＩＩのＩ型）は、ヒトに投与する場合に血液中へ適切な曝露を可能にするのに十分な程に水溶液に可溶である。さらに、化合物ＩのＡ型および化合物ＩＩのＩ型は、再現可能な製造にとって十分な程に安定であることが分かった。化合物ＩのＡ型および化合物ＩＩのＩ型の薬物動態特性は、医薬品として使用されるこれらの型にとって有用であることが分かった。
【００４０】
本明細書には化合物ＩのＡ型が提供されている。Ａ型の代表的なＸＲＰＤパターンは、図５、７、９、１０、１２、１６、１８、２０および２２に示されている。特定の実施形態では、化合物（Ｉ）のＡ型は、ａ）表１に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８またはその概位置の全てに位置するピーク、ｂ）図６に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６またはその概位置の全てに位置するピーク、ｃ）図８に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４またはその概位置の全てに位置するピーク、またはｄ）図１９に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８またはその概位置の全てに位置するピークによって特徴づけられる。特定の実施形態では、化合物（Ｉ）のＡ型は、表２に特定されている１、２、３、４またはその概位置の全てによって特徴づけられる。化合物ＩのＡ型の代表的な1H NMRスペクトルは、図１１および図１３に示されている。化合物ＩのＡ型の代表的なＤＳＣデータおよびサーモグラムは、図４、図１４、図２１および図２３に示されている。
【００４１】
特定の実施形態では、化合物（ＩＩ）のＩ型結晶形が本明細書に提供されており、それについて以下により詳細に記載する。
【００４２】
化合物ＩＩのＩ型の代表的なＸＲＰＤパターンは、図２４、図２５および図３１に示されている。特定の実施形態では、化合物（ＩＩ）のＩ型は、表８に特定されている１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６またはその概位置の全てに位置するＸＲＰＤピークよって特徴づけられる。化合物ＩＩのＩ型の代表的なＤＳＣ曲線は、図２８に示されている。化合物ＩＩのＩ型の代表的なサーモグラムは、図２７に示されている。化合物ＩＩのＩ型の代表的なＤＶＳ等温線プロットは、図２９に示されている。
【００４３】
また、本明細書に提供されている固形は、化合物（Ｉ）または化合物（ＩＩ）の中の１つ以上の原子に非天然の割合の原子の同位体を含んでいてもよい。例えば、本化合物を、例えば重水素（２Ｈ）、三重水素（３Ｈ）、ヨウ素１２５（１２５Ｉ）、硫黄３５（３５Ｓ）または炭素１４（１４Ｃ）などの放射性同位体で放射標識してもよい。放射標識した化合物は、治療薬、例えば、癌治療薬、研究試薬（例えば、結合アッセイ試薬）および診断薬（例えば、生体内造影剤）として有用である。化合物（Ｉ）または化合物（ＩＩ）の全ての同位体変形形態は、放射性であるか否かに関わらず、本明細書に提供されている実施形態の範囲内に包含されるものとする。
【００４４】
（ｂ）化合物（Ｉ）および（ＩＩ）の合成および特性評価
本出願全体にわたって以下の略語を使用する。
ＡＣＮ：アセトニトリル
ＡｃＯＨ：酢酸
ａｑ：水溶液
Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボニル
ＤＣＥ：ジクロロエタン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＥＡ（ＤＩＰＥＡ）：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＥ：１，２−ジメトキシエタン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ｄｐｐｆ：１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン
ＥＤＣＩ：１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミド塩酸塩
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＥＣ５０：最大効果の５０％を生じる有効濃度
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
Ｅｔ３Ｎ、ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＥｔＯＡｃ、ＥｔＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ｇ：グラム
ｈまたはｈｒ：時間
ＨＡＴＵ：ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム
ＨＢＴＵ：ヘキサフルオロリン酸Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム
Ｈｅｘ：ヘキサン
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＩＣ５０：測定された活性において５０％の低下を引き起こす阻害剤の濃度
ＩＰＡ：２−プロパノール
ＩＰＯＡｃ：酢酸イソプロピル
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィ質量分析
ＭＥＫ：メチルエチルケトン
ＭｅＯＨ：メタノール
ｍｉｎ：分
ｍｍｏｌ：ミリモル
Ｍｏｃ：メトキシルカルボニル
ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
Ｎ．Ａ．：開口数
ＰＧ：保護基
１−ＰｒＯＨ：１−プロパノール
ｒｔ：室温
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィ
【００４５】
化合物Ｉおよび化合物ＩＩの固形を、各種技術および機器を用いて特性評価する。それらの操作および生データの分析方法は当業者によく知られている。特性評価方法の例としては、Ｘ線粉末回折法、示差走査熱量測定法、熱重量分析法およびホットステージ法が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
当業者であれば、Ｘ線回折パターンなどのこれらの測定結果はいずれも、測定が行われる条件、機器モデルの変更に依存する測定誤差と共に得られることを理解しているであろう。複数の分析手段で収集されたデータに基づく固形の実質的な同一性の確認能力は、当業者の技能の範囲内である。
【００４７】
機器技術
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）
冷蔵冷却システム（ＲＣＳ）を備えたTA Instruments 2920（またはＱ２０００などの他のモデル）示差走査熱量計を用いてＤＳＣ分析を行った。ＮＩＳＴトレーサブルなインジウム金属を用いて温度較正を行った。試料をアルミニウム製ＤＳＣパンに入れ、その重量を正確に記録した。このパンを蓋で覆い、蓋を圧着した。重量を測って圧着したアルミニウム製パンをセルの基準側面に置いた。この試料セルを−３０℃で平衡化し、最終温度の２５０℃になるまで２〜１０℃／分の速度の窒素パージ下で加熱した。報告されている温度は転移最大値である。
【００４８】
−５０から２００℃まで２℃／分の基礎加熱速度で、±０．８℃の振幅変調および６０秒間の周期を用いて、変調したＤＳＣ（「ＭＤＳＣ」）データが得られた。
【００４９】
繰り返しのＤＳＣ分析のために、試料セルを周囲温度で平衡化した後、２０℃／分の速度で−６０℃に窒素下で冷却した。試料セルをこの温度で保持した後、放置して加熱し、１２５℃で平衡化した。２０℃／分の速度で−６０℃まで再び冷却した。試料セルをこの温度で保持し、最終温度の２５０℃まで２０℃／分の速度で再び加熱した。
【００５０】
動的蒸気吸着／脱着（ＤＶＳ）
VTI SGA-100蒸気吸着分析装置(Vapor Sorption Analyzer)で、動的蒸気吸着／脱着（ＤＶＳ）データを収集した。ＮａＣｌおよびＰＶＰを較正標準物質として使用した。分析前に試料を乾燥しなかった。窒素パージ下で１０％ずつ相対湿度を増加させて５〜９５％の相対湿度範囲にわたって吸着および脱着データを収集した。分析のために使用した平衡基準は、５分で０．０１００重量％未満の変化であり、最大平衡時間は３時間であった。試料の最初の含水量に関するデータは収集しなかった。
【００５１】
ホットステージ顕微鏡法
SPOT Insight（商標）カラーデジタルカメラを備えたLeica DM LP顕微鏡に取り付けた
Ｌｉｎｋａｍホットステージ（ＦＴＩＲ６００モデル）を用いて、ホットステージ顕微鏡法を行った。ＵＳＰ融点標準物質を用いて温度較正を行った。試料をカバーガラスの上に置き、別のカバーガラスを試料の上に置いた。ステージを加熱している間に、交差偏光子および一次赤色補償板を備えた２０×０．４０開口数の作動距離対物レンズを用いて、各試料を目視で観察した。ＳＰＯＴソフトウェア（バージョン４．５．９）を用いて画像を取得した。
【００５２】
熱重量分析法（ＴＧＡ）
TA Instruments 2950熱重量分析器を用いてＴＧＡ分析を行った。ニッケルおよびＡｌｕｍｅｌ（商標）を用いて温度較正を行った。各試料をアルミニウム製パンに入れ、ＴＧＡ炉に挿入した。この炉を最終温度の３５０℃まで窒素下、１０℃／分の速度で加熱した。
【００５３】
Ｘ線粉末回折法（ＸＲＰＤ）
Inel XRG-3000回折計
１２０°の２θ範囲を有する湾曲した位置有感検出器を備えたInel XRG RG-3000回折計を用いて、ＸＲＰＤパターンを収集した。Cu Kα放射線（４０ｋＶ、３０ｍＡ）の入射ビームを使用して、０．０３°の２θ分解能でデータをリアルタイムで収集した。分析前に、ケイ素標準物質(NIST SRM 640c)を分析して、Ｓｉ（１１１）ピーク位置を確認した。それらを薄壁ガラス毛管に充填して、分析用試料を調製した。各毛管を角度計の頭部に取り付け、データを取得している間に回転させた。一般に、モノクロメータのスリットを５ｍｍ×１６０μｍに設定し、試料を５分間分析した。
【００５４】
Ｂｒｕｋｅｒ社製D-8 Discover回折計
また、Ｂｒｕｋｅｒ社製D-8 Discover回折計およびＢｒｕｋｅｒ社製General Detector System（ＧＡＤＤＳ、バージョン４．１．２０）を用いて、ＸＲＰＤパターンを収集した。微小焦点Ｘ線管、Ｇｏｂｅｌ鏡および０．５ｍｍダブルピンホールコリメータを用いて、Cu Kα放射線の入射マイクロビームを生成した（４０ｋＶ、４０ｍＡ）。分析前に、ケイ素標準物質(NIST SRM 640c)を分析して、Ｓｉ（１１１）ピーク位置を確認した。試料を３μｍ厚さの膜の間に挟んで、持ち運び可能な円盤型の標本を形成した。調製した標本を並進ステージに固定された保持装置に装着した。ビデオカメラおよびレーザーを使用して、透過幾何学的形状の入射ビームと交差するように目的の領域を位置決めした。入射ビームをラスター走査して、配向統計（orientation statistics）を最適化した。ビームストップを使用して、入射ビームからの空中散乱を最小限に抑えた。試料から１５ｃｍの位置に配置したＨｉ−Ｓｔａｒ面検出器を用いて回折パターンを収集し、ＧＡＤＤＳを用いて処理した。回折パターンのＧＡＤＤＳ画像中の強度を０．０４°の２θのステップサイズを用いて積分した。積分したパターンは、２θの関数として回折強度を表す。
【００５５】
PANalytical EXPERT Pro MPD回折計
PANalytical X'Pert Pro回折計を用いて、ＸＲＰＤパターンを収集した。Ｏｐｔｉｘ社製の長焦点微小焦点線源を用いて、Cu Kα放射線の入射ビームを生成した。楕円状に漸変した(elliptically graded)多層膜鏡を使用して、線源のCu KαＸ線の焦点を、標本を通して検出器上に合わせた。X'Pert Pro Data Collectorソフトウェア（バージョン２．２ｂ）を用いて、データを収集および分析した。分析前に、ケイ素標本(NIST SRM 640c)を分析して、Ｓｉ（１１１）ピーク位置を確認した。標本を３μｍの厚さの膜の間に挟み、透過幾何学で分析し、回転させて配向統計を最適化した。ビームストップ、短い散乱防止伸長部および散乱防止ナイフエッジを使用して、空中散乱により生成されるバックグラウンドを最小限に抑えた。入射および回折ビームのためのソーラースリットを使用して、入射および回折ビームの軸発散を最小限に抑えた。標本から２４０ｍｍの位置に配置した走査位置有感検出器（Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ）およびData Collectorソフトウェア（バージョン２．２ｂ）を用いて、回折パターンを収集した。
【００５６】
Ｓｈｉｍａｄｚｕ社製ＸＲＰＤ−６０００回折計
Ｓｈｉｍａｄｚｕ社製ＸＲＰＤ−６０００Ｘ線粉末回折計を用いて、ＸＲＰＤパターンを収集した。長焦点微小焦点Ｘ線管および湾曲したグラファイトモノクロメータを用いて、Cu Kα放射線の入射ビームを生成した（４０ｋＶ、４０ｍＡ）。発散スリットおよび散乱スリットを１°に設定し、受光スリットを０．１５ｍｍに設定した。ＮａＩシンチレーション検出器によって回折した放射線を検出した。ＸＲＰＤ−６１００／７０００ソフトウェア（バージョン５．０）を用いて、データを収集および分析した。分析前に、ケイ素標準物質（NIST SRM 640c）を分析して、Ｓｉ（１１１）ピーク位置を確認した。アルミニウム製保持装置内のそれらをケイ素ゼロバックグラウンド挿入物で置き換えて、分析用の試料を調製した。パターンは典型的に、２．５〜４０°の２θの間で３°／分のθ−２θ連続走査（０．４秒／０．０２°のステップ）を用いて収集した。
【００５７】
プロトン核磁気共鳴（ＮＭＲ）
およそ４００ＭＨｚの１Ｈラーモア周波数でVarian UNITYINOVA-400分光計を用い、周囲温度で、主に溶液1H NMRスペクトルを取得した。試料を典型的に、基準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を含有するｄ６−ＤＭＳＯまたはＣＤ３ＯＤに溶解した。
実施例
実施例：化合物Ｉと化合物Ｉの遊離塩基（「化合物Ｉ−ＦＢ」）の他の塩形態との比較
【００５８】
化合物Ｉに達するために、化合物Ｉ−ＦＢ：
【化５】
2015506987.tif 000007
のいくつかの塩を調製した。化合物Ｉ−ＦＢの溶解度スクリーニングに基づき、原液を調製するための溶媒として４種の混合溶媒：エタノール／ヘプタン（１／０．５（ｖ／ｖ））、ＥｔＯＡｃ／ＭＴＢＥ（１／０．５（ｖ／ｖ））、ＡＣＮ／水（１／０．５（ｖ／ｖ））およびアセトン／トルエン（１／１６（ｖ／ｖ））を選択し、塩スクリーニングのために使用した。およそ２５ｍｇの化合物Ｉ−ＦＢを３２個のバイアルのそれぞれに秤量し、次いで、各混合溶媒を使用してバイアルのうち８個のバイアル中の試料を溶解した。試験用対イオンの当量モル比の対イオン（ＨＣｌ、２ＨＣｌ、リン酸、ＨＢｒ、２ＨＢｒ、スルホン酸、フェニルスルホン酸およびメシル酸）を添加した。２ＨＣｌおよび２ＨＢｒについてはこの比を１に対して２に設定した。各試料の物理的観察結果を以下の表１６に示す。
【表１】
2015506987.tif 000008
【００５９】
エタノール／ヘプタン＝１／０．５（ｖ／ｖ）およびＥｔＯＡｃ／ＭＴＢＥ＝１／０．５（ｖ／ｖ）により、硫酸塩の固体を生成することができた。アセトン／トルエン＝１／１６（ｖ／ｖ）により、２ＨＢｒ塩、硫酸塩、フェニルスルホン酸塩およびメシル酸塩の固体を得ることができた。ゆっくりと蒸発させた後に得られた固体を顕微鏡観察によってさらに特性評価した。２．５倍、１０倍および２０倍の対物レンズと、粒子形状、大きさ、および結晶化度を示す画像を取得するためのデジタルカメラとを備えたLeica DMLP偏光顕微鏡を用いて顕微鏡法を行った。液浸油に分散させた試料の複屈折および晶癖を得るために、交差偏光子を使用した。図２６に見られるように、複屈折のない固体のみを観察することができた。結晶形成に関するさらなる評価または多形スクリーニングのために、化合物Ｉ−ＦＢの２ＨＣｌ塩（従って、化合物Ｉ）を選択した。
実施例：化合物Ｉ（別名：化合物３−３の２ＨＣｌ塩）の合成
【化６】
2015506987.tif 000009
【００６０】
工程１：スキーム１を参照。ＤＣＭ（３５．０Ｌ、１０．０体積）を、窒素雰囲気下で１００ＬのＱＶＦ反応器に充填した。反応物質を１０〜１５℃に冷却した後、無水ＡｌＣｌ３（２．６５ｋｇ、１．１当量）を９０〜１２０分かけて数回に分けて添加した。その後、反応混合物を０℃に冷却し、完全溶解のために撹拌しながらＣｌＣＨ２ＣＯＣｌ（１．５１Ｌ、１．０５当量）を９０〜１２０分かけてゆっくりと添加した。別々に、ＤＣＭ（３５．０Ｌ、１０．０体積）および２−ブロモナフタレン（３．５０ｋｇ、１．０当量）を、窒素雰囲気下で２００Ｌのガラス被覆反応器（ＧＬＲ：Glass Lined Reactor）に充填し、得られた物質を０〜５℃に冷却した。次に、１００ＬのＱＶＦに入れた最初に調製した溶液を、内部温度を０〜５℃に維持しながら、滴下漏斗を通して２〜３時間かけて２００ＬのＧＬＲにゆっくりと添加した。反応物質を、この温度で６０分間を超えて撹拌し、ＨＰＬＣ分析によって監視した。ＨＰＬＣ分析によって測定した際に９５％を超える２−ブロモナフタレンが消費された後、冷水（７０．０Ｌ、２．０体積）を撹拌しながら２００ＬのＧＬＲ反応器に慎重に添加して反応を止めた。ＣＨ２Ｃｌ２層を分離し、精製水で３回（５０Ｌ×３、１４．０体積）、飽和塩水で１回（５０Ｌ×１、１４．０体積）洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧下（６００ｍｍＨｇ）で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（１７．５Ｌ）に６０〜６５℃で溶解した。次いで、透明な溶液にヘキサン（３５．０Ｌ、１０．０体積）を６５〜７０℃で添加した。混合物を１時間撹拌し、２５〜３０℃に徐々に冷却した。得られた混合物を濾過し、固体をヘキサン（１．７５Ｌ×２）で洗浄し、真空棚段乾燥器内で４０〜４５℃で１２時間乾燥して、化合物１−２（１．８８ｋｇ、４０％の収率）をＨＰＬＣによって測定した９５％超の純度を有する灰色がかった白色の固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 283.9 [M + H]+。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.44 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.04 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.81 (s, 2H) ppm。
【００６１】
工程２：化合物１−２（３．７ｋｇ、１．０当量）およびＣＨ３ＣＮ（７４．０Ｌ、２０．０体積）を、窒素雰囲気下で２００Ｌのステンレス鋼製反応器（ＳＳＲ：Stainless Steel Reactor）に充填した。この溶液にＥｔ３Ｎ（９．１０Ｌ、５．０当量）を２５〜３０℃で３０〜４５分かけてゆっくりと添加した後、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリン（３．２３ｋｇ、１．１５当量）を数回に分けて９０分かけて添加した。得られた反応物質を２５〜３０℃で撹拌し、ＨＰＬＣで監視した。１２時間撹拌した後、ＨＰＬＣ分析により９７％超の化合物１−２が消費されたことを確認した。次に、反応物質を真空中（６００ｍｍＨｇ）、４０〜４５℃で濃縮してＣＨ３ＣＮを除去し、得られたシロップ状物を精製水（５０．０Ｌ）と共に添加し、ＥｔＯＡｃで２回（２５Ｌ×２）抽出した。有機抽出物を精製水で２回（２５Ｌ×２）、飽和塩水で１回（２５．０Ｌ）洗浄した。その後、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、最初にハウス真空（house vacuum）（６００ｍｍＨｇ）中、最後に高真空中で濃縮して、化合物１−３（５．５０ｋｇ、９１％の収率）をＨＰＬＣ分析によって測定した９２．０％超の純度を有する褐色の半固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 463.1 [M + H]+。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 8.74 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.91 ‐ 8.07 (m, 3H), 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.54 ‐ 5.73 (m, 2H), 4.34 (m, 1H), 3.30 ‐ 3.37 (m, 3H), 2.23 ‐ 2.29 (m, 1H), 2.12 ‐ 2.15 (m, 1H), 1.81 ‐ 1.95 (m, 2H), 1.30 (m, 9H) ppm。
【００６２】
工程３：化合物１−３（５．５０ｋｇ、１．０当量）およびトルエン（５５Ｌ、１０．０体積）を、窒素雰囲気下で２００ＬのＳＳＲに充填した。得られた反応物質に、ＮＨ４ＯＡｃ（９．２０ｋｇ、１０．０当量）を窒素雰囲気下、２５〜３０℃で添加した。次に、反応物質を１１０〜１１５℃で加熱し、反応で生成した水を共沸除去した。ＨＰＬＣ分析によって測定した際に９７％を超える化合物１−３が消費された後、反応物質を減圧下（６００ｍｍＨｇ）で濃縮してトルエンを完全に除去し、約２５〜３０℃に冷却した。残留物を撹拌しながらＥｔＯＡｃ（５５．０Ｌ、１０．０体積）および精製水（５５．０Ｌ、１０．０体積）で希釈した。有機層を分離し、精製水で２回（２５Ｌ×２）、飽和塩水で１回（２５Ｌ×１）洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。乾燥剤の除去後すぐに、溶媒を真空中（６００ｍｍＨｇ）、４０〜４５℃で除去して粗製生成物を得、これをＭＴＢＥ（２．０体積）と共に１時間撹拌し、濾過した。固体を冷たいＭＴＢＥ（２．７５Ｌ、０．５体積）で洗浄し、真空棚段乾燥器内で４０〜４５℃で１２時間乾燥して、化合物１−４ａ（３．８５ｋｇ、７３％の収率）を、ＨＰＬＣ分析によって測定した９９．０％超の純度を有し、かつキラルＨＰＬＣ分析（Chiralpak AD-H（２５０×４．６ｍｍ）、溶離液：ヘキサン／ＥｔＯＨ＝８０／２０（ｖ／ｖ）、流速：０．７ｍＬ／分）によって測定した９９．７％超の鏡像異性体純度を有する淡黄色の固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 443.1 [M + H]+。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 8.23 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.93 (m, 1H), 7.84 (m, 2H), 7.54 - 7.56 (m, 2H), 4.77 ‐ 4.85 (, 1H), 3.53 (m, 1H), 3.36 (m, 1H), 2.16 ‐ 2.24 (m, 1H), 1.84 ‐ 1.99 (m, 3H), 1.39および1.10 (s, s, 9H) ppm。
【００６３】
工程４：化合物１−４ａ（３．８５ｋｇ、１．０当量）および１，４−ジオキサン（５８．０Ｌ、１５．０体積）を、窒素雰囲気下で２００ＬのＳＳＲに充填した。次に、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．４３ｋｇ、１．１当量）、ＫＯＡｃ（２．５６ｋｇ、３．０当量）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２８５．０ｇ、０．０４当量）を、窒素雰囲気下、２５〜３０℃でＳＳＲに充填した。得られた反応物質を２５〜３０℃で３０〜４５分間窒素で脱気した。その後、反応物質を７５〜８０℃で４〜５時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析で監視した。９７％超の化合物１−４ａが消費された後、反応物質を濃縮して、最初に真空中（６００ｍｍＨｇ）、最後に高真空中、４５〜５０℃でジオキサンを除去した。水（３５．０Ｌ）およびＥｔＯＡｃを撹拌しながら添加した。層を分離し、有機層を飽和塩水溶液（２５．０Ｌ）で洗浄し、活性炭で処理し、セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）（商標）５４５パッドで濾過した。濾液を濃縮し、次いで残留物をＭＴＢＥ（５．０Ｌ、１０．０体積）からの沈殿により精製して、化合物１−５ａ（３．１０ｋｇ、７３％の収率）をＨＰＬＣ分析によって測定した９６．０％超の純度を有する淡黄色の固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 490.3 [M + H]+。
【００６４】
化合物１−４ｂの合成：化合物１−４ａ（２．０ｇ、４．５ｍｍｏｌ）のジオキサン（２５ｍＬ）溶液に４．０ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（２５ｍＬ）を添加した。室温で４時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、残留物を真空乾燥して、化合物１−４ｂ（２．１ｇ）を黄色の固体として得、これをさらに精製することなく使用した。LC-MS (ESI): m/z 342.1 [M+H]+。
【００６５】
化合物１−４ｃの合成：化合物１−４ｂ（２ＨＣｌ塩、１．８７ｇ、４．５ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（２５ｍＬ）との混合物を、ＨＡＴＵ（２．１ｇ、５．４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３．７ｍＬ、２２．５ｍｍｏｌ）およびＮ−Ｍｏｃ−Ｌ−バリン（９４５ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）に添加した。室温で１５分間撹拌した後、反応混合物を冷水（４００ｍＬ）にゆっくりと添加した。得られた懸濁液を濾過し、固体を冷水で洗浄し、真空乾燥して、化合物１−４ｃ（２．２ｇ、９８％の収率）を白色の固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 500.1 [M + H]+。
【００６６】
化合物１−４ｄの合成：化合物１−４ｃの合成について記載されている手順に従い、Ｎ−Ｍｏｃ−Ｌ−バリンをＮ−Ｍｏｃ−Ｏ−Ｍｅ−Ｌ−トレオニンで置き換えて、化合物１−４ｄを得た。LC-MS (ESI): m/z 516.1 [M + H]+。
【００６７】
化合物１−５ｂの合成：化合物１−５ａの合成について記載されている手順に従い、化合物１−４ａを１−４ｃで置き換えて、化合物１−５ｂを得た。LC-MS (ESI): m/z 547.3 [M + H]+。
【００６８】
化合物１−５ｃの合成：化合物１−５ａの合成について記載されている手順に従い、化合物１−４ａを１−４ｄで置き換えて、化合物１−５ｃを得た。LC-MS (ESI): m/z 563.3 [M + H]+。
【化７】
2015506987.tif 000010
【００６９】
工程１：スキーム２を参照。Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリン（４．０２ｋｇ、１．０当量）およびＴＨＦ（５２．５Ｌ、１５．０体積）を、窒素雰囲気下で２００Ｌの反応器に充填した。混合物を２０〜２５℃に冷却し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．８Ｌ、１．５当量）を６０分かけて添加した。次に、ＨＡＴＵ（７．１１ｋｇ、１．０当量）を、窒素雰囲気下、２０〜２５℃で９０〜１２０分かけて数回に分けてゆっくりと添加した。同じ温度で１５分間撹拌した後、４−ブロモ−１，２−ジアミノベンゼン（３．５０ｋｇ、１．０当量）を９０〜１２０分かけて数回に分けて反応器に添加した。得られた反応物質を同じ温度で撹拌した。４〜５時間撹拌した後、ＨＰＬＣ分析により９７％超の４−ブロモ−１，２−ジアミノベンゼンが消費されたことを確認した。反応物質を減圧下（６００ｍｍＨｇ）で濃縮してＴＨＦを４０℃未満で除去し、残留物を酢酸エチル（４０．０Ｌ、１０．０体積）および精製水（２５．０Ｌ、７．０体積）で希釈した。得られた混合物を十分に撹拌し、有機層を分離した。その後、有機層を精製水（２５Ｌ×３、７．０体積）および飽和塩水溶液（２５Ｌ×１、７．０体積）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を高真空中、４０℃未満で除去して中間体を得、これを氷ＡｃＯＨ（２４．５Ｌ、７．０体積）に溶解した。得られた混合物を４０〜４２℃で撹拌し、ＨＰＬＣで監視した。１０〜１２時間撹拌した後、ＨＰＬＣ分析により９７％超の中間体が消費されたことを確認した。ＡｃＯＨを高真空中、４０〜４５℃で完全に留去した。得られたシロップ状の物質をＥｔＯＡｃ（５０．０Ｌ、１４．０体積）で希釈し、撹拌しながら水（２５．０Ｌ、７．０体積）で洗浄して精製した。有機層を分離し、５．０％（ｗ／ｗ）のＮａＨＣＯ３水溶液で２回（２５．０Ｌ×２、７．０体積）、精製水で２回（２５．０Ｌ×２）、飽和塩水で１回（２５Ｌ×１、７．０体積）洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。この溶液を活性炭で処理した後、濾過し、真空下（６００ｍｍＨｇ）、４０〜４５℃で濃縮して、粗製生成物を泡状の固体（５．２０ｋｇ）として得た。残留物を撹拌しながらＭＴＢＥ（５．２Ｌ、１．５体積）に懸濁させ、固体を濾過により回収し、ＭＴＢＥ（１．７５Ｌ、０．５体積）で洗浄し、真空棚段乾燥器内で４０〜４５℃で１２時間乾燥して、化合物２−２ａ（４．２０ｋｇ、６３％の収率）を、ＨＰＬＣ分析によって測定した９８．０％超の純度を有する淡褐色の固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 366.1 [M + H]+。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 12.40 (m, 1H), 7.58 ‐ 7.70 (m, 1H), 7.37 ‐ 7.46 (m, 1H), 7.24 (m, 1H), 4.85 ‐ 4.94 (m, 1H), 3.54 (, 1H), 3.35 ‐ 3.53 (m, 1H), 2.20 -2.32 (m, 1H), 1.88 ‐ 1.96 (m, 3H), 1.38および0.98 (s, s, 9H) ppm。
【００７０】
工程２：化合物２−２ａ（５．０５ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（７．１ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）およびＫＯＡｃ（３．２ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）の混合物の１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）溶液に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で添加した。窒素雰囲気下、８０℃で３時間撹拌した後、反応混合物を濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２／１（ｖ／ｖ））で精製して、化合物２−３ａ（３．０ｇ、５３％の収率）を灰色の固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 414.2 [M + H]+。
【００７１】
化合物２−２ｂの合成：化合物２−２ａ（４．０ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）のジオキサン（４０ｍＬ）溶液に、４ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（４０ｍＬ）を添加した。室温で一晩撹拌した後、反応混合物を濃縮した。残留物をＤＣＭで洗浄し、濾過し、真空乾燥して、塩酸塩を定量的収率で得た。その後、この塩（１０．９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液をＤＩＰＥＡ（５．８ｍＬ、３３．０ｍｍｏｌ）に添加し、次いで、Ｎ−Ｍｏｃ−Ｌ−バリン（２．１ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４．６ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１時間撹拌した後、反応混合物をＨ２ＯとＤＣＭとの間で分配した。その後、有機相をＨ２Ｏおよび塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過および濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ＤＣＭ／石油エーテル＝４／１（ｖ／ｖ））で精製して、化合物２−２ｂ（３．０ｇ、６５％の収率）を得た。LC-MS (ESI): m/z 424.1 [M + H]+。
【００７２】
化合物２−ｃの合成：化合物２−２ｂを調製するための手順と同じ手順に従い、Ｎ−Ｍｏｃ−Ｌ−バリンをＮ−Ｍｏｃ−Ｌ−イソロイシンで置き換えて、化合物２−２ｃを得た。LC-MS (ESI): m/z 438.1 [M + H]+。
【００７３】
化合物２−３ｂの合成：化合物２−３ａの合成について記載されている手順に従い、化合物２−２ａを２−２ｂで置き換えて、化合物２−３ｂを得た。LC-MS (ESI): m/z 471.3 [M + H]+。
【００７４】
化合物２−３ｃの合成：化合物２−３ａの合成について記載されている手順に従い、化合物２−２ａを２−２ｃで置き換えて、化合物２−３ｃを得た。LC-MS (ESI): m/z 485.3 [M+H]+。
【化８】
2015506987.tif 000011
【００７５】
工程１：スキーム３を参照。化合物１−５ａ（１．３ｋｇ、１．０当量）、２−２ａ（９７５．０ｇ、１．０当量）、ＮａＨＣＯ３（８６０．０ｇ、３．８０当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１２１．７ｇ、０．０５当量）、精製水（５．２Ｌ、４．０体積）および１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ）（２４．７Ｌ、１９．０体積）を、アルゴン雰囲気下で５０．０Ｌの四つ口丸底フラスコに充填した。アルゴンで３０分間脱気した後、反応物質を約８０℃にゆっくりと加熱し、この温度で１２〜１４時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析により、９７％超の化合物２−２ａが消費されたことを確認した。次に、反応物質を濃縮して、真空中（６００ｍｍＨｇ）、４０〜４５℃でＤＭＥを完全に除去し、残留物を撹拌しながら２０％（ｖ／ｖ）のＭｅＯＨのＤＣＭ溶液（１３．０Ｌ、１０体積）および精製水（１３．０Ｌ、１０．０体積）で希釈した。有機層を分離し、水層を２０％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨのＤＣＭ（６．５Ｌ×２、１０．０体積）溶液で抽出した。１つにまとめた有機抽出物を水で２回（６．５Ｌ×２、１０．０体積）、飽和塩水で１回（６．５Ｌ、５．０体積）洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空中（６００ｍｍＨｇ）で除去し、残留物をヘキサン／ＥｔＯＡｃを溶離液とするシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィで精製して、化合物３−１（１．０ｋｇ、６３％の収率）をＨＰＬＣ分析によって測定した９８．０％超の純度を有する灰色がかった白色の固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 649.3 [M + H]+。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 12.26 ‐ 12.36 (m, 1H), 11.88 ‐ 11.95 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.91 (m, 3H), 7.85 ‐ 7.87 (m, 2H), 7.51 ‐ 7.81 (m, 3H), 4.78 -4.99 (m, 2H), 3.55 ‐ 3.59 (m, 2H), 3.35 ‐ 3.44 (m, 2H), 2.30 ‐ 2.47 (m, 2H), 1.85 ‐ 2.01 (m, 6H), 1.39, 1.14, 1.04 (s, s, s, 18H) ppm。あるいは、同じ手順に従い、鈴木カップリング成分として化合物１−５ａおよび２−２ａの代わりに化合物１−４ａおよび２−３ａを用いて、化合物３−１を得ることができる。
【００７６】
工程２：化合物３−１（１．０ｋｇ、１．０当量）およびＩＰＡ（７．０Ｌ、７．０体積）を、窒素雰囲気下で２０．０Ｌの四つ口ＲＢフラスコに充填した。反応物質を１８〜２０℃に冷却し、３．０ＮのＨＣｌのイソプロピルアルコール溶液（７．０Ｌ、７．０体積）を、窒素雰囲気下で９０〜１２０分かけて添加した。窒素雰囲気下、２５〜３０℃で１０〜１２時間撹拌した後、ＨＰＬＣ分析により、９８％超の化合物３−１が消費されたことを確認した。次に、反応物質を濃縮して、真空中、４０〜４５℃でＩＰＡを除去した。得られた半固体を撹拌しながらアセトン（２．０Ｌ、２．０体積）に添加し、得られた懸濁液を窒素雰囲気下で濾過した。固体をアセトン（２．０Ｌ、２．０体積）で洗浄し、真空棚段乾燥器内で４０〜４５℃で１０時間乾燥して、化合物３−２（８６０ｇ、９４％の収率）を、ＨＰＬＣ分析によって測定した９８．０％超の純度を有する淡黄色の固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 449.2 [M + H]+。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 10.49 ‐ 10.59 (m, 2H), 10.10および9.75 (m, m, 2H), 8.60 (s, 1H), 8.31 (s, 2H), 8.15 (m, 1H), 8.13 ‐ 8.15 (m, 2H), 7.96 ‐ 8.09 (m, 2H), 7.82 (s, 2H), 5.08 (m, 2H), 3.39 ‐ 3.53 (m, 4H), 2.47 ‐ 2.54 (m, 3H), 2.37 (m, 1H), 2.14 ‐ 2.21 (m, 2H), 2.08 (m, 2H) ppm。
【００７７】
工程３：化合物３−２（２．２ｋｇ、１．０当量）を、窒素雰囲気下でＤＭＦ（４．４Ｌ、２０．０体積）を充填した四つ口丸底フラスコに添加した。１５分間撹拌した後、混合物を２５〜３０℃でＮ−Ｍｏｃ−Ｌ−バリン（２２６．２ｇ、３．５２当量）に一度で添加した。次に、混合物を−２０〜−１５℃に冷却し、次いで、ＨＡＴＵ（３７２．９ｇ、２．０当量）を３０分かけて数回に分けて添加した。１０分間撹拌した後、ＤＩＰＥＡ（２３８．９ｇ、５．０当量）のＤＭＦ（１．１Ｌ、５．０体積）溶液を４５分かけて添加した。その後、反応物質を撹拌しながら２５〜３０℃に温めた。１時間撹拌した後、ＨＰＬＣ分析により、９９％超の化合物３−２が消費されたことを確認した。反応混合物を水（３８．０Ｌ）に入れ、混合物をＤＣＭ（１０．０Ｌ×３、４５．０体積）で抽出した。１つにまとめた有機抽出物を水（１０．０Ｌ×３、４５．０体積）および飽和塩水（１０Ｌ、４５．０体積）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空中（６００ｍｍＨｇ）、４０〜４５℃で除去し、残留物をＤＣＭおよびＭｅＯＨを溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して、化合物３−３（１．５２ｋｇ、４７％の収率）を、ＨＰＬＣ分析によって測定した９７．０％超の純度を有する灰色がかった白色の固体として得た。LC-MS (ESI): m/z 763.4 [M + H]+。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 8.60 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.09 ‐ 8.14 (m, 2H), 7.99 ‐ 8.05 (m, 2H), 7.86 ‐ 7.95 (m, 3H), 7.20-7.21  (m, 2H), 5.24 ‐ 5.33 (m, 2H), 4.06 ‐ 4.18 (m, 4H), 3.83 (m, 2H), 3.53 (m, 6H), 2.26 ‐ 2.55 (m, 10H), 0.85 (m, 6H), 0.78 (m, 6H) ppm。３−２から３−３（化合物Ｉ）への変換は、ある範囲の条件により達成することができる。これらの条件のうちの１つを以下に記載する。
【００７８】
反応器にＮ−Ｍｏｃ−バリン（３７．１５ｇ、０．２１１ｍｏｌ）、アセトニトリル（７５０ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（２２．５ｇ）を充填した。反応混合物を１０分間撹拌し、温度を２℃未満に維持しながら、ＨＯＢＴ（３５．３ｇ、０．３６１モル）およびＥＤＣＩ（４２．４ｇ、０．２２１モル）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、ＤＩＰＥＡ（２２．５ｇ）および化合物３−２（４８．０ｇ、０．０９２モル）を３０分かけて反応器にゆっくりと添加して、温度を３℃未満に維持した。反応混合物を２０〜２５℃で４時間撹拌し、試料をＨＰＬＣによる反応完了分析(reaction completion analysis)に供した（ＩＰＣ仕様：１．０％未満の面積に３−２が残留）。ＨＰＬＣ分析によって反応の完了を確認して、酢酸イソプロピル（７５０ｍＬ）を反応器に添加し、１０分間撹拌した。有機層（生成物層）を塩水（３００ｍＬ×２）および２％のＮａＯＨ（２００ｍＬ）で洗浄した。有機溶液をシリカゲルパッドで濾過して不溶性物質を除去した。シリカゲルパッドを酢酸イソプロピルで洗浄し、最小の体積になるまで真空中（４００ｍｍ／Ｈｇ）で濃縮した。粗製生成物を、酢酸エチルおよびメタノーを溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して、９５％超の純度を有する化合物３−３（３８．０ｇ、６５％の収率）を得た。LC-MS (ESI): m/z 763.4 [M + H]+。
【００７９】
工程４：化合物３−３（１３２．０ｇ、１．０当量）およびエタノール（３２４．０ｍＬ、２．０体積）を、窒素雰囲気下で１０Ｌの四つ口丸底フラスコに充填した。１５分間撹拌した後、懸濁液を５〜１０℃に冷却し、それを２．０ＮのＨＣｌのエタノール溶液（１９０ｍＬ、１．５体積）に３０分かけて添加した。得られた溶液を放置して２５〜３０℃に温めた。アセトン（３．９６Ｌ、３０．０体積）を９０分かけてその中に添加して、ゆっくりと沈殿を生じさせた。次に、懸濁液を６０℃に温め、別のバッチのアセトン（３．９６Ｌ、３０．０体積）を９０分かけて添加した。その温度を５５〜６０℃に１時間維持した後、放置して２５〜３０℃に冷却した。２５〜３０℃で８〜１０時間撹拌した後、混合物を濾過した。固体をアセトン（６６０．０ｍＬ、５．０体積）で洗浄し、真空棚段乾燥器内で５０〜５５℃で１６時間乾燥して、ＨＰＬＣ分析によって測定した９６．６％超の純度を有する化合物３−３（化合物Ｉ）の２ＨＣｌ塩（１０１ｇ、７１％の収率）を淡黄色の固体として得た。
【００８０】
Ｎ−Ｍｏｃ−Ｌ−バリンの調製
Ｎ−Ｍｏｃ−Ｌ−バリンは購入可能であるが調製することもできる。１．０当量のＬ−バリン塩酸塩を水酸化ナトリウムおよび炭酸ナトリウムを含む２−メチルテトラヒドロフラン（２−ＭｅＴＨＦ）／水に溶解し、次いで１．０当量のクロロギ酸メチルで０〜５℃で６時間処理して、Ｍｏｃ−Ｌ−バリンを調製した。反応混合物を２−ＭｅＴＨＦで希釈し、ＨＣｌで酸性にし、有機層を水で洗浄した。２−ＭｅＴＨＦ溶液を濃縮し、本化合物をｎ−ヘプタンで沈殿させた。固体を２−ＭｅＴＨＦ／ｎ−ヘプタンで洗い流し、真空乾燥して、Ｎ−Ｍｏｃ−Ｌ−バリンを６８％の収率で得た。
【００８１】
Ａ型を得るための化合物Ｉの結晶化
化合物Ｉの塩の形成および結晶化（実施例１）
エタノール（３．１９Ｌ、１．０体積、２００プルーフ）を、窒素雰囲気下で２３０Ｌのガラス被覆反応器に充填した。遊離塩基型の化合物３−３（３．１９ｋｇ、４．１８ｍｏｌ）を撹拌しながらフラスコに添加し、さらに２０〜３０分間撹拌し続けた。高濃度の３−３のエタノール溶液に、２．６ＮのＨＣｌのエタノール溶液（３．１９Ｌ、１．０体積）を窒素雰囲気下、２０〜２５℃で上記物質にゆっくりと添加した。物質全体を室温で２０分間撹拌し、次いで４５〜５０℃に加熱した。アセトン（１２８．０Ｌ、４０．０体積）を３〜４時間かけて４５〜５０℃で上記反応物質に添加した後、約２５℃に冷却し、約１５時間撹拌した。沈殿した固体を濾過により回収し、アセトン（６．４Ｌ×２、４．０体積）で洗浄し、１時間吸引乾燥し、真空棚段乾燥器内で４０〜４５℃で１２時間さらに乾燥した。収率：２．５ｋｇ（７１．０％の収率）、ＨＰＬＣによる純度：９７．７０％、ＸＲＰＤ：非晶質。
【００８２】
イソプロピルアルコール（７．５Ｌ、３．０体積）を、窒素雰囲気下で保護された５０．０Ｌのガラス製反応器に充填した。３−３（２．５ｋｇ）の非晶質２ＨＣｌ塩を撹拌しながら上記反応器に添加した。物質全体を６０〜６５℃に加熱して、透明な溶液を得た。６５±２℃で約１５時間撹拌し続け、この間に固体形成が始まった。加熱温度を３時間かけて約５０℃まで低下させ、メチル第三ブチルエーテル（１２．５Ｌ、５．０体積）を穏やかに撹拌しながら約３時間かけて上記物質にゆっくりと添加した。上記反応物質を２〜３時間かけて２５〜３０℃にさらに冷却した。固体を濾過により回収し、１０．０％のイソプロピルアルコールのメチル第三ブチルエーテル溶液（６．２５Ｌ、２．５体積）で洗浄し、１時間吸引乾燥し、棚段乾燥器内で真空中（６００ｍｍ／Ｈｇ）、４５〜５０℃で７０〜８０時間さらに乾燥した。収率：２．１３ｋｇ（８５．０％の回収、遊離塩基型化合物３−３の投入量に基づき６１．０％の収率）、ＨＰＬＣによる純度：９７．９％。
【００８３】
図１：1H NMR (500 MHz, d6-DMSO): δ 15.6 (bs, 2H), 14.7 (bs, 2H), 8.58 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.18 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.98 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.31 (m, 1H), 5.26 (m, 1H), 4.16 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.04 (m, 2H), 3.87 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 2.42 (m, 2H), 2.22-2.26 (m, 4H), 2.07-2.14 (m, 4H), 0.86 (d, J = 2.6 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 2.6 Hz, 3H), 0.78 (d, J = 2.2 Hz, 3H), 0.77 (d, J = 2.2 Hz, 3H), 3.06 (s, MTBEのOMe), 1.09 (s, MTBEのt-Bu), 1.03 (d, IPAの2Me) ppm。
【００８４】
図２：13C NMR (500 MHz, d6-DMSO): δ 171.6, 171.5, 157.4, 156.1, 150.0, 138.2, 138.0, 133.5, 132.5, 131.3, 129.8, 129.4, 128.0, 127.0, 126.4, 125.6, 125.3, 124.4, 124.2, 115.8, 115.0, 112.5, 58.37, 58.26, 54.03, 53.34, 52.00 (2個の炭素), 47.71 (2個の炭素), 31.52, 31.47, 29.42 (2個の炭素), 25.94, 25.44, 20.13, 20.07, 18.37, 18.36 ppm。
【００８５】
図３：ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒペレット）: 3379.0, 2963.4, 2602.1, 1728.4, 1600.0, 1523.4, 1439.7, 1420.6, 1233.2, 1193.4, 1100.9, 1027.3 cm-1。
【００８６】
元素分析：Ｃ４２Ｈ５２Ｃｌ２Ｎ８Ｏ６についての分析計算値：C, 60.35; H, 6.27; N, 13.41; Cl, 8.48。実測値：C, 58.63; H, 6.42; N, 12.65, Cl, 8.2。
【００８７】
図４：ＤＳＣ：ピーク値、２５６．４８℃。カールフィッシャー法による水分＝１．０％。
【００８８】
図５：ＸＲＰＤ：結晶質。図５のピークは図６に列挙されている。ＸＲＰＤの手順は、化合物Ｉの実施例２に示されている。
【００８９】
化合物Ｉの結晶化条件（実施例２）
化合物３−３の非晶質２ＨＣｌ塩の試料（２．０ｇ）を撹拌および６５℃で加熱しながら６．０ｍＬのイソプロピルアルコール（３．０体積）に溶解した。この溶液をこの温度で２０時間撹拌すると、この間に結晶化が始まった。この物質を約５０℃に冷却し、この温度で３時間維持した後、６．０ｍＬのＩＰＡ（３．０体積）を１時間かけて添加した。この温度をさらに５０℃に１時間維持した後、それを濾過し、固体を６．０ｍＬ（３．０体積）の冷却したＩＰＡで洗浄し、真空棚段乾燥器内で４０〜４５℃で１０時間乾燥した。収率：５０．０％で１．０ｇ。微小焦点Ｘ線管（４０ｋＶ、４０ｍＡ）を用いて生成したCu Kα放射線の入射マイクロビーム、Ｇｏｂｅｌ鏡および０．５ｍｍのダブルピンホールコリメータを備えたＢｒｕｋｅｒ社製D-8 Discover回折計およびBruker社製General Detector System（ＧＡＤＤＳ、バージョン４．１．２０）を用いるＸＲＰＤにより、試料の結晶化度を分析した。試料から１５ｃｍの位置に配置したＨｉ−Ｓｔａｒ面検出器を用いて回折パターンを収集し、ＧＡＤＤＳで処理した。０．０４°の２θのステップサイズを用いて回折パターンのＧＡＤＤＳ画像における強度を積分した。積分したパターンは、２θの関数として回折強度を表す。データ取得パラメータは、得られたスペクトルとして図７に示されており、図７のピークは図８に示されている。
【００９０】
化合物Ｉの結晶化条件（実施例３）
およそ２ｇの非晶質化合物Ｉを一晩真空乾燥し、次いで、５０ｍＬの丸底フラスコ（約３４４ｍｇ／ｍＬ）に入れた６ｍＬのＩＰＡに添加した。このフラスコを冷水凝縮器に取り付け、この溶液を窒素下で２０時間撹拌しながら、約６０℃の油浴で加熱した。灰色がかった白色の固体が一晩で沈殿した。この溶液を、４５℃までは約６℃／時間、４５℃〜３２．５℃の間は約１２℃／時間、３２．５℃〜室温の間は約２４℃／時間の速度で、約６０℃〜周囲温度に冷却した。周囲温度で、冷水凝縮器および窒素流を除去し、計１０ｍＬ（ＩＰＡ／ＭＴＢＥ＝３／５（ｖ／ｖ））のために、ＭＴＢＥを３０分間滴下した。この溶液を一晩撹拌し、固体を真空濾過により回収し、５０ｍＬのフラスコを約５ｍＬのＩＰＡで洗浄した。固体を周囲温度で約２．５時間真空乾燥し、ＸＲＰＤにより分析した(PANalytical X'PERT Pro MPD回折計の手順を参照）。Ａ型の収率は約８８％であった。データ取得パラメータは、鏡および入射ビーム散乱防止スリット（ＳＳ）の前に発散スリット（ＤＳ）を含む図９の得られたスペクトルに示されている。Ａ型。
【００９１】
化合物Ｉの結晶化（実施例４）
また、化合物３−３の非晶質２ＨＣｌ塩の試料を２日間にわたって高温（約６０℃）でメタノールおよびジエチルエーテル（１：４の比）の混合物中でスラリー化させて、Ａ型を得た。
【００９２】
PANalytica l X'PERT Pro MPD回折計を用いてＸＲＰＤを取得した（上記手順を参照）。各パターンに関するデータ収集パラメータは、発散スリット（ＤＳ）および入射ビーム散乱防止スリット（ＳＳ）を含む図１０の得られたスペクトルに示されている。
【００９３】
図１０の観察されたピークは付録Ａの表１に示されており、図１０の顕著なピークは付録Ａの表２に示されている。これらの図および表の両方のｘ軸（２θ（°））に沿ったピーク位置は、ＰＡＴＴＥＲＮＭＡＴＣＨ（商標）ソフトウェアのバージョン３．０．４を用いて自動的に決定されたものであり、上記判断基準に基づいて小数点以下１桁または２桁の有効数字に四捨五入されている。ピーク位置のばらつきは、米国薬局方(United States Pharmacopeia), USP 33再発行(USP 33 reissue), NF 28, <941>, R-93, 10/1/2010のＸ線粉末回折におけるばらつきに関する考察にまとめられている勧告に基づいて±０．２°の２θ以内に定められている。
【００９４】
この試料をプロトンＮＭＲでも分析し、これによりＡＰＩおよび微量のＥｔ２Ｏを同定した。この溶液1H NMRスペクトルを、およそ４００ＭＨｚの１Ｈラーモア周波数でVarian UNITYINOVA-400分光計を用いて周囲温度で取得した。この試料を、ＴＭＳを含むｄ６−ＤＭＳＯに溶解した。その結果および試料取得パラメータは、図１１に示されている。
【００９５】
化合物Ｉの結晶化（実施例５）
また、Ａ型を以下の手順によって得た。２．０ｇの非晶質２ＨＣｌ塩の試料を加熱しながら６．０ｍＬのＩＰＡに溶解した。この混合物を穏やかに撹拌しながら６５℃に約２０時間維持した。固体が析出し、それを高温および真空乾燥しながら濾過して、約２５％の回収収率でＡ型を得た。PANalytica l X'Pert PRO MPD回折計を用いてＸＲＰＤパターンを収集した（上記手順を参照）。データ取得パラメータは、鏡および入射ビーム散乱防止スリット（ＳＳ）の前に発散スリット（ＤＳ）を含む図１２の得られたスペクトルに示されている。
【００９６】
この試料をプロトンＮＭＲでも分析し、これにより、上に示したＮＭＲ手順によりＡＰＩ、ＩＰＡ（０．２モル、１．３重量％）および水を同定した。その結果および試料取得パラメータは、図１３に示されている。
【００９７】
この試料を、変調した示差走査熱量測定法および上記手順による熱重量分析法でも分析した。
【００９８】
得られたＤＳＣ曲線およびサーモグラムは、図１４に示されている。
【００９９】
VTI SGA-IOO蒸気吸着分析装置を用いて、この試料の水分吸着／脱着データを収集した。較正標準物質としてＮａＣｌおよびＰＶＰを使用した。分析前に試料を真空乾燥した。窒素パージ下で１０％ずつ相対湿度を増加させて５〜９５％の相対湿度範囲にわたって吸着および脱着データを収集した。分析のために使用した平衡基準は５分で０．０１００重量％未満の変化であり、最大平衡時間は３時間であった。試料の最初の含水量についてのデータは収集しなかった。図１５は、相対湿度に対する重量％をグラフ化したものを示す。付録Ａの表３は、収集したデータを示す。
【０１００】
化合物Ｉの結晶化（実施例６）
また、Ａ型をＩＰＡ／ＭＴＢＥ（１／１（ｖ／ｖ））から結晶化し、空気乾燥した。上記手順を用いてInel XRG-3000回折計でＸＲＰＤパターンを収集した。データ−取得パラメータは、図１６内のスペクトルの上に示されている。
【０１０１】
試料を熱重量分析法でも分析した。得られたサーモグラムは、図１７に示されている。
【０１０２】
この試料をカールフィッシャー法にも供した。Mettler Toledo DL39 KF滴定装置を用いて、水分測定のためのカールフィッシャー（ＫＦ）電量滴定法を行った。分析前にブランク滴定を行った。この試料を乾燥窒素雰囲気下で調製し、ここでは、９０〜１００ｍｇの試料を、予備乾燥したバイアルに入れたおよそ１ｍＬの乾燥Hydranal-Coulomat ADに溶解した。この溶液全体を、セプタムを介してＫＦ電量計に添加し、１０秒間混合した。次いで、この試料を発生電極により滴定すると、電気化学的酸化：２Ｉ−→Ｉ２＋２ｅ−によりヨウ素が生成した。２つの複製物を得た。得られたデータは、以下の付録Ａに添付されている表４および表５に示されている。
【０１０３】
ＩＰＡ／ＭＴＢＥから結晶化した別の試料により、図１８に示されているＸＲＰＤパターンが得られた。ＸＲＰＤ手順は、化合物Ｉ（実施例２）のための手順と同じである。ピークの一覧は、図１９に示されている。
【０１０４】
化合物Ｉの結晶化（実施例７）
化合物３−３（遊離塩基、１．７１ｋｇ）およびエタノール（８．９０ｋｇ）を凝縮器および蒸留装置を備えた反応器に充填した。そこに、測定ｐＨが３未満になるまで十分な体積のＨＣｌのエタノール溶液（１．２５Ｍ、約３．５ｋｇ）を撹拌しながら添加し、さらに３０分間撹拌し続けた。溶媒を真空中、４０±５℃未満で留去した。メタノール（２０ｋｇ）を反応器に充填し、混合した後、溶媒を真空中、４０℃未満で再び留去した（約１８ｋｇ）。溶媒追跡プロセス(solvent chasing process)をメタノールでもう１回、ＩＰＡ（１５ｋｇ）で１回繰り返した。新しいＩＰＡ（１４ｋｇ）を反応器に再度充填し、真空中、４０±５℃未満で部分的に留去した（約７ｋｇ）。反応器の内容物を６５±５℃に加熱し、結晶化が生じるように、この温度で４７時間維持した。この物質を６時間かけて徐々に２５±５℃に冷却し、この温度でさらに２０時間撹拌し続けた。固体生成物を濾過により単離して第１の生成物を得た。
【０１０５】
濾液をＩＰＡ（２．５ｋｇ×２）で支援される反応器に戻した。ＩＰＡを真空中４０±５℃未満で、部分的に（約６ｋｇ）留去した。混合物を穏やかに撹拌しながら（９０ｒｐｍ）、６５±５℃になるまで６０時間加熱し、６時間かけて２５±５℃に冷却し、さらに２０時間冷却した。さらなる固体生成物を濾過により回収し、冷たいＩＰＡで洗い流して第２の生成物を得た。２つの生成物を１つにまとめ、真空中、４０±５℃で乾燥して、ＩＰＡを除去し、計１．２９４ｋｇの生成物を得、ＸＲＰＤにより結晶質のＡ型を確認した（図２０）。熱重量分析は、図２１に示されている。
【０１０６】
ＨＰＬＣ純度を高めるために、同様の手順を用いてこの材料を再結晶化した。
【０１０７】
上記（５５９ｇ）およびメタノール（３．０ｋｇ）から得られた塩生成物を、蒸留装置を備えた反応器に充填した。メタノールを真空中、４０℃未満で留去した（約２．８ｋｇ）。ＩＰＡ（２．８６ｋｇ）を添加し、真空中、４０±５℃未満で留去した（約２．４６ｋｇ）。新しいＩＰＡ（３．５８ｋｇ）を添加し、真空中、４０±５℃で部分的に留去した（２．４３ｋｇ）。その内容物を穏やかに撹拌しながら（９０ｒｐｍ）、６５±５℃で４５時間加熱し、９時間かけて２５±５℃に冷却し、さらに３２時間冷却した。固体を濾過により回収し、一定の重量まで、真空乾燥器内で４０±５℃の温度で２日間乾燥した。４９３ｇの化合物Ｉを得、さらに特性評価した。
【０１０８】
Ａ型の加圧
Ａ型試料に約４０℃／約７５％の相対湿度（ＲＨ）で２５〜２７日間圧力を加えた。この試料をガラス製バイアルに添加し、次いで、飽和食塩水を含む広口瓶に蓋をせずに入れた。この広口瓶を密閉し、乾燥器に入れた。２５日後、ＸＲＰＤ分析（図２２に示されている）により、この材料がＡ型のままであることを確認した。図２２は、上側の（ｉ）圧力を加える前および下側の（ｉｉ）圧力を加えた後のＡ型のスペクトルを示す。長焦点微小焦点線源およびニッケルフィルタを用いて生成したCu Kα放射線の入射ビームを用いるPANalytical X'Pert PRO MPD回折計で、この試料のＸＲＰＤパターンを収集した。この回折計は、対称的配置のＢｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ型を用いて構成されていた。分析前に、ケイ素標本(NIST SRM 640d)を分析して、Ｓｉ（１１１）ピーク位置を確認した。試料の標本をニッケル被覆した銅製のウェルに充填した。散乱防止スリット（ＳＳ）を使用して、空気によって生じるバックグラウンドを最小限に抑えた。入射および回折ビームのためのソーラースリットを使用して、軸発散による広幅化を最小限に抑えた。試料から２４０ｍｍの位置に配置した走査位置有感検出器（Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ）およびData Collectorソフトウェアのバージョン２．２ｂを用いて、回折パターンを収集した。２種類のスペクトルのデータ取得パラメータは、図２２の上に示されている。
【０１０９】
２７日後、熱重量分析（図２３に示されている）により、２５〜２２５℃の間で約１０％の重量減少（５モルの水に相当）を確認した。圧力を加えていない材料と比べた場合のこの増加により、Ａ型は高い相対湿度において吸湿性であることが分かった。TA Instruments Q5000 IRおよび２９５０熱重量分析器を用いてＴＧ分析を行った。ニッケルおよびＡｌｕｍｅｌ（商標）を用いて温度較正を行った。各試料をアルミニウム製パンに入れた。TA Instruments 2950で実験を行う試料は蓋をしないままにし、Ｑ５０００で実験を行う試料は密閉し、その蓋に穴をあけ、次いで、ＴＧ炉に挿入した。この炉を窒素中で加熱した。この試料を１０℃／分で０℃から３５０℃に加熱した。
【０１１０】
Ａ型の溶解度
一定分量の各種溶媒を、目視による判断で完全な溶解が達成されるまで、周囲温度または高温で撹拌しながら（典型的には超音波処理）、一定量のＡ型に添加した。一定分量の添加によって行われた溶解度の評価により、Ａ型が周囲温度および高温ではＩＰＡおよびＩＰＡ／ＭＴＢＥ（２／１（ｖ／ｖ））混合物に難溶性であることが分かった。試料を周囲温度および高温で数日間放置してスラリー化したが、さらなる溶解は観察されなかった。さらに、Ａ型は、純粋なＩＰＡと比べて（３ｍｇ／ｍＬ未満と比べて３３ｍｇ／ｍＬ）、周囲温度でＩＰＡ／水（９５／５（ｖ／ｖ））に有意により溶解性であった。結果は、付録Ａの中の表７に示されている。
実施例：化合物ＩＩの合成（別名：化合物４−３の２ＨＣｌ塩）
【化９】
2015506987.tif 000012
【０１１１】
工程１：スキーム４を参照。スキーム３（化合物Ｉの合成）の中の化合物３−１の合成について先に記載した手順に従い、２−２ａを２−２ｃで置き換えて、ＨＰＬＣ分析によって測定した９４．０％超の純度を有する灰色がかった白色の固体として化合物４−１を得た（３．４ｋｇ、５４％の収率）。LC-MS (ESI) m/z 720.4 [M+H]+。あるいは、同じ鈴木カップリング条件に従い、化合物１−５ａおよび２−２ｃを化合物１−４ａおよび２−３ｃで置き換えて、化合物４−１を得ることができる。
【０１１２】
工程２：スキーム３の中の化合物３−２の合成について先に記載した手順に従い、化合物３−１を４−１で置き換えて、ＨＰＬＣ分析によって測定した９５．０％超の純度を有する黄色の固体として化合物４−２を得た（２．２ｋｇ、８５％の収率）。LC-MS (ESI) m/z 620.3 [M + H]+。
【０１１３】
工程３：スキーム３の中の化合物３−３の合成について先に記載した手順に従い、化合物３−２を４−２で置き換えて、ＨＰＬＣ分析によって測定した９２％超の純度を有する淡黄色の固体として化合物４−３を得た（６５ｇ、５７％の収率）。LC-MS (ESI) m/z 793.4 [M + H]+。
【０１１４】
工程４：ＨＣｌ塩の形成および結晶化。化合物４−３（遊離塩基、５．０ｇ）を撹拌しながら１５．０ｍＬのＭｅＯＨに６５℃で溶解した。２．５ＮのＨＣｌのＥｔＯＨ溶液（６．３ｍＬ）を添加した後、得られた透明な溶液を６５℃で１５分間撹拌した。次に、曇点に到達するまでアセトン（１５０ｍＬ）を１．５時間かけて滴下した。この懸濁液を６５℃で１時間撹拌し続けた後、ゆっくりと（約５℃／３０分間で）室温（約３０℃）に冷却した。室温で一晩撹拌した後、固体を濾過により回収し、アセトン（３×５ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して、化合物４−３の２ＨＣｌ塩（化合物ＩＩ）（４．４ｇ、８０％の収率）を淡黄色の固体として得た。固体をさらに特性評価し、結晶質であることが分かった。1H NMR (500 MHz, d6-DMSO): δ 15.5 (bs, 2H), 15.0 (bs, 2H), 8.63 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.17 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.08 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.98 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.31 (m, 1H), 5.25 (m, 1H), 4.31 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 4.07 (m, 2H), 3.93 (m, 2H), 3.87 (m, 2H), 3.55 (s, 6H), 3.20 (9s, 3H), 2.42 (m, 2H), 2.22-2.26 (m, 4H), 2.07-2.14 (m, 4), 1.81 (m, 1H0, 1.33 (m, 1H), 1.05 (d, J = 2.6 Hz, 3H), 0.80 (m, 6H) ppm。
【化１０】
2015506987.tif 000013
【０１１５】
工程１：スキーム５を参照。スキーム３の中の化合物３−１の合成について記載されている手順に従い、化合物１−５ａを１−５ｃで置き換えて、化合物５−１を得た。LC-MS (ESI): m/z 722.4 [M+H]+。あるいは、同じ鈴木カップリング条件を用い、化合物１−５ｃおよび２−２ａを化合物１−４ｄおよび２−３ａで置き換えて、化合物５−１を得ることができる。
【０１１６】
工程２：スキーム３の中の化合物３−２の合成について記載されている手順と同じ手順に従い、化合物３−１を５−１で置き換えて、化合物５−２を得た。LC-MS (ESI): m/z 622.3 [M + H]+。
【０１１７】
工程３：スキーム３の中の化合物３−３の合成について記載されている手順と同じ手順に従い、化合物３−２を５−２で置き換えて、化合物４−３を得た。LC-MS (ESI): m/z 793.4 [M + H]+。
【化１１】
2015506987.tif 000014
【０１１８】
スキーム６、７および８に記載されている経路のように、他の経路により化合物４−３を調製してもよい。
【０１１９】
スキーム６を参照。スキーム３に記載されている化合物１−５ａおよび２−２ａのための鈴木カップリング条件に従い、化合物１−５ｃおよび２−２ｃまたは化合物１−４ｄおよび２−３ｃのいずれか一方のカップリングにより、化合物４−３を得た。
【０１２０】
化合物３−３のさらなる合成
スキーム４に記載されている化合物４−３に対する手法に従い、化合物２−２ｃを２−２ｂで置き換えるか、化合物２−３ｃを２−３ｂで置き換え、かつＮ−Ｍｏｃ−Ｏ−Ｍｅ−Ｌ−Ｔｈｒ−ＯＨをＮ−Ｍｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ−ＯＨで置き換えて、化合物３−３を得ることができる。
【０１２１】
スキーム５に記載されている化合物４−３に対する手法に従い、化合物１−５ｃを１−５ｂで置き換えるか、化合物１−４ｄを１−４ｃで置き換え、かつＮ−Ｍｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＯＨをＮ−Ｍｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ−ＯＨで置き換えて、化合物３−３を得ることができる。
【０１２２】
スキーム６に記載されている化合物４−３に対する手法に従い、化合物２−２ｃを２−２ｂで置き換え、かつ化合物１−５ｃを１−５ｂで置き換えるか、化合物２−３ｃを２−３ｂで置き換え、かつ化合物１−４ｄを１−４ｃで置き換えて、化合物３−３が得られる。
【化１２】
2015506987.tif 000015
【０１２３】
工程１：スキーム７を参照。スキーム３に記載されている化合物１−５ａおよび２−２ａのカップリングのために使用される鈴木カップリング条件に従い、化合物７−１と、化合物１−５ａ、１−５ｂおよび１−５ｃのそれぞれとのカップリングにより、化合物７−２ａ、７−２ｂおよび７−２ｃがそれぞれ得られた。
【０１２４】
工程２：典型的な水素化（Ｐｄ／Ｃ、Ｐｄ（ＯＨ）２、ＰｔＯ２またはラネーニッケルなどによる媒介）または他の−ＮＯ２還元条件（例えば、ＳｎＣｌ２／ＤＣＭまたはＺｎ／ＡｃＯＨなど）により化合物７−２ａ、７−２ｂおよび７−２ｃのそれぞれの中の−ＮＯ２基を還元した後、スキーム２の中の化合物２−１から２−２ａへの合成について記載されている二工程変換により、化合物３−１、５−１および７−１がそれぞれ得られる。
【化１３】
2015506987.tif 000016
【０１２５】
工程１：スキーム８を参照。スキーム３に記載されている化合物１−５ａおよび２−２ａのカップリングのために使用される鈴木カップリング条件に従い、化合物８−１を化合物２−３ａ、２−３ｂおよび２−３ｃのそれぞれとカップリングさせて、化合物８−２ａ、８−２ｂおよび８−２ｃがそれぞれ得られる。
【０１２６】
工程２：スキーム１に記載されている化合物１−４ａを１−５ａに変換するために使用される条件に従い、化合物１−４ａを化合物８−２ａ、８−２ｂおよび８−２ｃでそれぞれ置き換えて、化合物８−３ａ、８−３ｂおよび８−３ｃがそれぞれ得られる。
【０１２７】
工程３：スキーム３に記載されている化合物１−５ａと２−２ａとのカップリングのために使用される鈴木カップリング条件に従い、化合物１−５ａおよび２−２ａを、化合物８−３ａおよび８−４ａ（国際公開第２０１００６５６６８号）、化合物８−３ｂおよび８−４ａ、化合物８−３ｃおよび８−４ａ、化合物８−３ｃおよび８−４ｂ、化合物８−３ａおよび８−４ｃ、化合物８−３ａおよび８−４ｂでそれぞれ置き換えて、化合物３−１、３−３、４−１、４−３、５−１および７−３がそれぞれ得られる。
【０１２８】
（ｆ）Ｉ型を得るための化合物ＩＩの結晶化
化合物ＩＩの結晶化（実施例１）
１１３．１ｍｇの化合物４−３（化合物ＩＩの遊離塩基型）をバイアルに秤量し、１ｍＬのメタノールで溶解した。４７．６μＬの６ＭのＨＣｌを撹拌しながら６０℃で添加した。次いで、この溶液を窒素流下で蒸発させた。
【０１２９】
このバイアルに、１ｍＬのメタノールを撹拌しながら６０℃で添加した。８ｍＬのアセトンを添加した。透明な溶液が形成された。曇点になるまで１．９ｍＬのＭＴＢＥを添加した。この試料をゆっくりと室温に冷却した。多くの粒子が析出した。固体を真空濾過により回収し、減圧下で乾燥した。収率は８８．２％であった。得られた固体をＸＲＰＤで分析した。Bruker D8 Advanceを用いてＸＲＰＤパターンを得た。最小限の４０ｋＶおよび４０ｍＡで作動するCu Kα源（＝１．５４０５６オングストローム）により、４〜４０°の２θで各試料を走査する。そのスペクトルは、図２４に線Ａとして示されている。
【０１３０】
化合物ＩＩの結晶化（実施例２）
１０６．０ｍｇの化合物４−３（化合物ＩＩの遊離塩基型）をバイアルに秤量し、１ｍＬのメタノールで溶解した。４４．６μＬの６ＭのＨＣｌを撹拌しながら６０℃で添加した。次いで、この溶液を窒素流下で蒸発させた。
【０１３１】
このバイアルに、１ｍＬのメタノールを撹拌しながら６０℃で添加した。８ｍＬのアセトンを添加した。透明な溶液が形成された。曇点になるまで２．２ｍＬのＭＴＢＥを添加した。試料をゆっくりと室温に冷却した。多くの粒子が析出した。固体を真空濾過により回収し、減圧下で乾燥した。収率は８０．３％であった。得られた固体を、化合物ＩＩの結晶化（実施例１）の手順に従ってＸＲＰＤで分析した。そのスペクトルは、図２４に線Ｂとして示されている。
【０１３２】
化合物ＩＩの結晶化（実施例３）
３０３．５ｍｇの化合物４−３（化合物ＩＩの遊離塩基型）をバイアルに秤量し、撹拌しながら６０℃で１ｍＬのＭｅＯＨにより溶解した。１５３μＬの５ＭのＨＣｌ（ＥｔＯＨ溶液）を添加した。このバイアルの中に、１０ｍＬのアセトンをゆっくりと添加した。この試料を３℃／時間の速度でゆっくりと室温に冷却した。固体を真空濾過により回収し、減圧下で一晩乾燥した。収率は６９．５％であった。得られた固体を、化合物ＩＩの結晶化（実施例１）の手順に従ってＸＲＰＤで分析した。そのスペクトルは、図２４に線Ｃとして示されている。
【０１３３】
化合物ＩＩの結晶化（実施例４）
３１１．２ｍｇの化合物４−３（化合物ＩＩの遊離塩基型）をバイアルに秤量し、１ｍＬのＭｅＯＨを撹拌しながら６０℃で添加することにより溶解した。１５７μＬの５ＭのＨＣｌ（ＥｔＯＨ溶液）を添加した。このバイアルの中に、１０ｍＬのアセトンをゆっくりと添加した。この試料を３℃／時間の速度でゆっくりと室温に冷却した。固体を真空濾過により回収し、減圧下で一晩乾燥した。収率は５９．４％であった。得られた固体を、化合物ＩＩの結晶化（実施例１）の手順に従ってＸＲＰＤで分析した。そのスペクトルは、図２４に線Ｄとして示されている。
【０１３４】
化合物ＩＩの結晶化（実施例５）
３３３．５ｍｇの化合物ＩＩをバイアルに秤量し、１ｍＬのＭｅＯＨを撹拌しながら５５℃で添加することにより溶解した。１６８μＬの５ＭのＨＣｌ（ＥｔＯＨ溶液）を添加した。このバイアルの中に、８ｍＬのアセトンおよび０．５ｍＬのＭＴＢＥをゆっくりと添加した。この試料を３℃／時間の速度でゆっくりと室温に冷却した。ゲルが形成された。この試料を窒素流下で乾燥した。
【０１３５】
このバイアルに、１ｍＬのＭｅＯＨを撹拌しながら５０℃で添加した。透明な溶液が形成された。曇点になるまで１０ｍＬのアセトンを撹拌しながら添加した。この試料をゆっくりと室温に冷却した。多くの粒子が析出した。固体を真空濾過により回収し、減圧下で一晩乾燥した。収率は７３．９％であった。得られた固体を、化合物ＩＩの結晶化（実施例１）の手順に従ってＸＲＰＤで分析した。そのスペクトルは、図２４に線Ｅとして示されている。
【０１３６】
化合物ＩＩの結晶化（実施例６）
１２１．２ｍｇの化合物４−３（化合物ＩＩの遊離塩基型）をバイアルに秤量し、１ｍＬのＩＰＡで溶解した。５１μＬの６ＭのＨＣｌを撹拌しながら６５℃で添加した。透明な溶液が形成された。曇点になるまで３．６ｍＬのアセトンを撹拌しながら添加した。この試料を３℃／時間でゆっくりと室温に冷却した。有意な変化は全く観察されなかった。この試料を窒素流下で乾燥した。
【０１３７】
このバイアルの中に、０．５ｍＬのＥｔＯＨを撹拌しながら６０℃で添加した。透明な溶液が形成された。曇点になるまで４ｍＬのアセトンを添加した。この試料を３℃／時間の速度でゆっくりと室温に冷却した。有意な変化は全く観察されなかった。この試料を窒素流下で乾燥した。このバイアルの中に、１ｍＬのＭｅＯＨを６５℃で添加した。透明な溶液が形成され、曇点になるまで８ｍＬのアセトン、１．０ｍＬのＭＴＢＥを撹拌しながら添加した。この試料をゆっくりと室温に冷却した。有意な変化は全く観察されなかった。このバイアルの中に、１ｍＬのＭｅＯＨを６０℃で添加した。透明な溶液が形成された。８ｍＬのアセトンを抗溶媒として添加した。この試料を３℃／時間の速度でゆっくりと室温に冷却した。有意な変化は全く観察されなかった。この系を撹拌しながら６０℃に再度温めながら、曇点になるまで１．２ｍＬのＭＴＢＥを添加した。この試料を３℃／時間の速度でゆっくりと室温に冷却した。多くの粒子が析出した。固体を真空濾過により回収し、減圧下で３日間乾燥した。収率は７８．７％であった。得られた固体を、化合物ＩＩの結晶化（実施例１）の手順に従ってＸＲＰＤで分析した。そのスペクトルは、図２４に線Ｆとして示されている。さらに、この試料のスペクトルは、図２５により詳細に示されている。図２５の番号を付したピークに関するデータは、表８に示されている。
【０１３８】
化合物ＩＩの結晶化（実施例７）
１０１．０ｍｇの化合物４−３（化合物ＩＩの遊離塩基型）をバイアルに秤量し、１ｍＬのエタノール／ＩＰＡ（１１／４（ｖ／ｖ））で溶解した。４２．５μＬの６ＭのＨＣｌを撹拌しながら５０℃で添加した。次いで、この溶液を窒素流下で蒸発させた。ゲル状の固体が形成された。
【０１３９】
このバイアルに、２ｍＬのＥｔＯＨ／ＩＰＡ（１１／４（ｖ／ｖ））を撹拌しながら５０℃で添加した。透明な溶液が形成された。５ｍＬのＭＴＢＥを撹拌しながら添加し、接触後すぐに少量の沈殿物が生じた。この試料をゆっくりと室温に冷却した。多くの粒子が析出した。固体を真空濾過により回収し、減圧下で２日間乾燥した。収率は４６．２％であった。得られた固体を、化合物ＩＩの結晶化（実施例１）の手順に従ってＸＲＰＤで分析した。そのスペクトルは、図２４に線Ｇとして示されている。
【０１４０】
化合物ＩＩの結晶化（実施例８）
１００．９ｍｇの化合物４−３をバイアルに秤量し、撹拌しながら６５℃で１．０ｍＬのＥｔＯＨにより溶解した。４３μＬの６ＭのＨＣｌを撹拌しながら６０℃で添加した。曇点になるまで２ｍＬのＭＴＢＥを添加した。この試料をゆっくりと室温に冷却した。ゲルが形成された。この試料を窒素流下で乾燥した。
【０１４１】
このバイアルの中に、２．０ｍＬのＥｔＯＨを撹拌しながら６５℃で添加した。透明な溶液が形成された。曇点になるまで２．５ｍＬのＭＴＢＥを添加した。この試料をゆっくりと室温に冷却した。ゲルが形成された。この試料を窒素流下で乾燥した。
【０１４２】
このバイアルの中に、２．０ｍＬのＭｅＯＨを撹拌しながら６５℃で添加した。透明な溶液が形成された。曇点になるまで３．０ｍＬのジイソプロピルエーテルを添加した。この試料をゆっくりと室温に冷却した。ゲルが形成された。
【０１４３】
このバイアルの中に、１．０ｍＬの８８％のアセトンを撹拌しながら６０℃で添加した。透明な溶液が形成された。曇点になるまで２．５ｍＬのＡＣＮを添加した。この試料をゆっくりと室温に冷却した。ゲルが形成された。
【０１４４】
このバイアルの中に、１．０ｍＬのＭｅＯＨを撹拌しながら６０℃で添加した。透明な溶液が形成された。８．０ｍＬのアセトンを添加した。この試料をゆっくりと（３℃／時間で）室温に冷却した。多くの細かい結晶が形成され、これらは偏光顕微鏡により非常に吸湿性であることが分かった。固体を真空濾過により回収し、真空乾燥器で週末にわたって４５℃で乾燥し、５７．６％の回収が得られた。
【０１４５】
その固体を、化合物ＩＩの結晶化（実施例１）の手順に従ってＸＲＰＤで分析した。そのスペクトルは、図２４に線Ｈとして示されている。
【０１４６】
この試料を顕微鏡で分析した。２．５倍、１０倍および２０倍対物レンズを備えたLeica DMLP偏光顕微鏡と、粒子形状、大きさおよび結晶化度を示す画像を取得するためのデジタルカメラとを用いて、顕微鏡法を行った。液浸油に分散させた試料の複屈折および晶癖を得るために、交差偏光子を使用した。この試料の晶癖は、図２６に示すように不規則であった。
【０１４７】
この試料を熱重量分析法により分析した。TA Instrument TGA装置（ＴＧＡ５００モデル）で熱重量分析を行った。試料を白金製パン内で５０ｍＬ／分の窒素パージを用いて１０℃／分で２５〜３００℃に加熱した。ＴＧＡ温度をニッケル標準物質（融点＝３５４．４℃）で較正した。製造業者から提供された標準物質で重量較正を行い、クエン酸ナトリウム二水和物の脱溶媒和に対して確認した。得られたサーモグラムは、図２７に示されている。この試料は、２５．０〜１２０℃で１．７５１％、２５．０〜２１０℃で３．４８５％の重量％損失を示している。
【０１４８】
この試料を熱量測定法により分析した。TA Instrument DSC装置（ＤＳＣ１０００モデル）で示差走査熱量測定分析を行った。この試料を、非気密性のアルミニウム製パン内で５０ｍＬ／分の窒素パージを用いて、１０°Ｃ／分で２５〜３００℃に加熱した。ＤＳＣ温度をインジウム標準物質、１５６〜１５８℃の開始温度、２５〜２９Ｊ／ｇのエンタルピーで較正した。図２８に示すように、この試料は、揮発性物質の損失と、その後の２４６．５４℃での融解分解により、３７．６３℃の吸熱開始温度を有していた。
【０１４９】
この試料ならびに非晶質化合物ＩＩの試料の水分吸着プロファイルを、試料の大きさがおよそ１０ｍｇ、２５℃で６０分間の乾燥、０％〜９５％の相対湿度の吸着範囲、９５％〜０％の相対湿度の脱着範囲および５％のステップ間隔という条件で、DVS Moisture Balance Flow System (Model Advantage)を用いて２５℃で生成した。平衡基準は、最大１２０分間の間に５分で０．０１重量％未満の変化であった。図２９に示すように、この試料は中程度の吸湿性であり、０〜７５％の相対湿度で４．３４重量％の変化が生じた。この試料は、約８５％の相対湿度および上記相対湿度で非常に素早く水を吸収した。図３０に示すように、非晶質化合物ＩＩは対照的に、０〜７５％の相対湿度で１３．５７％の水を吸収した。
【０１５０】
化合物ＩＩの結晶化（実施例９）
化合物４−３（遊離塩基、５．０ｇ）を撹拌しながら１５．０ｍＬのＭｅＯＨに６５℃で溶解した。ＨＣｌのＥｔＯＨ溶液（５Ｍ、３．７５ｍＬ）を添加し、得られた溶液を透明な溶液になるまで６５℃で１５分間撹拌した。曇点に達するまでアセトン（１５０ｍＬ）を１．５時間かけて滴下した。この試料を６５℃で１時間撹拌し続けた後、徐々に（約１０℃／時間で）室温（３０℃）に冷却した。混合物をこの温度で一晩撹拌した。固体を濾過により回収し、アセトン（５ｍＬ×３）で洗浄し、真空乾燥して、４．４ｇの生成物を淡黄色の固体として得、収率は８０．４％であった。化合物ＩＩの結晶化（実施例１）に記載されているように得られた固体をＸＲＰＤで分析した。そのスペクトルは、図３１に示されており、番号を付したピークは付録Ａの中の表９に特定されている。
【０１５１】
Ｉ型の溶解度
Ｉ型および遊離塩基化合物４−３の溶解度を試験した。少量の分析用化合物をガラス製バイアルに入れ、蓋をし、バイアルを周囲条件で一晩（２４時間）回転させて、溶解度を測定した。標的濃度は２．０ｍｇ／ｍＬであった。この試料を０．４５μｍのフィルタで濾過した。得られた濾液をＨＰＬＣアッセイのために回収した。ＨＰＬＣ条件は、付録Ａの中の表１０に示されている。Ｉ型の溶解度は表１１に示されており、遊離塩基化合物４−３の溶解度は付録Ａの中の表１２に示されている。
【０１５２】
生物学的活性の実施例
ここに開示されている化合物のＨＣＶ複製阻害能力を生体外アッセイで実証することができる。ＨＣＶレプリコンアッセイを用いて、本発明の化合物の生物学的活性を測定した。Ｈｕｈ７細胞においてバイシストロン性遺伝子型１ｂレプリコンを持続的に発現する１ｂ＿Ｈｕｈ−Ｌｕｃ／Ｎｅｏ−ＥＴ細胞株を、ＲｅＢＬｉｋｏｎ社から入手した。この細胞株を使用して、レプリコンレベルの化合物阻害の測定値としてルシフェラーゼ酵素活性値を用いて化合物阻害を試験した。
【０１５３】
１日目（細胞播種の翌日）に、各化合物を細胞に３連で添加した。ルシフェラーゼアッセイを行う前にプレートを７２時間インキュベートした。Ｐｒｏｍｅｇａ社によって製造されたＢｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏキット（ＣＡＴ番号：Ｅ２６２０）を用いて酵素活性を測定した。以下の方程式を使用して、各化合物の対照値に対する割合（％）を得た。
対照値に対する割合（％）＝（化合物値の平均／対照値の平均）×１００
GraphPad Prismおよび以下の方程式を用いてＥＣ５０値を求めた。
Ｙ＝下限値＋（上限値−下限値）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）×傾き））
レプリコンアッセイで化合物のＥＣ５０値を数回繰り返して求めた。
【０１５４】
ここに開示されている化合物は、限定されるものではないが、１ａ、１ｂ、２ａ、３ａ、４ａおよび５ａを含むＨＣＶの複数の遺伝子型を阻害することができる。上記ＨＣＶ−１ｂレプリコンアッセイに類似した対応するレプリコンアッセイでＥＣ５０を求めた。
【表２】
2015506987.tif 000017
【０１５５】
臨床前の生物種における化合物Ｉおよび化合物ＩＩの薬物動態研究およびデータ
ＳＤラット、ビーグル犬、カニクイザルを含む臨床前の生物種における一連の包括的な実験で、化合物ＩのＡ型および化合物ＩＩのＩ型の薬物動態（ＰＫ）特性を決定した。
【０１５６】
これらの研究では、化合物ＩのＡ型結晶質塩（および化合物ＩＩのＩ型結晶質塩）を、生理食塩水、０．５％のＭＣを含む生理食塩水または透明な溶液を得るのに適した他の一般に使用される製剤媒体に入れて、あるいは目的の到達濃度および媒体の選択に応じて懸濁液またはペースト剤として製剤化した。投与は強制経口投与により行った。血液試料を採取し、Ｋ２ＥＤＴＡを含む個々の管に入れた。血液試料を氷の上に置いて遠心分離（２０００ｇ、５分間、４℃）して、採取後１５分以内に血漿を得た。血漿試料を分析までおよそ−８０℃の冷凍庫に保存した。
【０１５７】
これらの分析の大部分では、化合物Ｉ（および化合物ＩＩ）および内部標準物質（ＩＳ）を、タンパク質沈殿によりラット、サルまたはイヌの血漿から抽出し、抽出物を蒸発させ、再構成し、タンデム質量分析検出（ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を含むＨＰＬＣで分析した（さらなる詳細は実施例を参照）。検体のピーク面積と添加した内部標準物質（ＩＳ）のピーク面積との比の重み付き線形回帰により較正を達成した。ラットおよびサルのＥＤＴＡ血漿における有効なアッセイのために、化合物１および化合物２の両方の定量下限（ＬＬＯＱ）は５．００ｎｇ／ｍＬであり、本アッセイは、５．００〜１，０００ｎｇ／ｍＬの間で線形であった。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（バージョン４．１〜６．１）を用いる非コンパートメント解析により、ＰＫパラメータを計算した。
【０１５８】
実施例１：ラットにおける化合物ＩのＰＫ研究
投与製剤の調製：１）９２２．８０ｍｇの化合物ＩのＡ型（８２４．６０３ｍｇの遊離塩基に相当）を無菌管に秤量し、２）０．５％のメチルセルロース含む生理食塩水５４．９７４ｍＬを化合物ＩのＡ型を含む管に添加し、ボルテックスで３〜５分間撹拌し、１０〜１５分間超音波処理した。投与溶液は淡黄色の透明な溶液であった。
【０１５９】
約７〜９週齢で体重が約２１０〜２７０ｇのＳＤラットに、５ｍＬ／ｋｇで上記投与溶液を投与した。投与前、投与から０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間後の時点で、Ｋ２ＥＤＴＡを含む個々の管に血液試料を採取した。
【０１６０】
分析用の試料の調製：一定分量の３０μＬの血漿試料を、３０μＬのＩＳ（２００ｎｇ／ｍＬ）と混合し、次いでタンパク質沈殿のために１５０μＬのＡＣＮと混合した。混合物をボルテックスで２分間撹拌し、１２０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。さらなる希釈が必要でなければ、一定分量の１μＬの上澄みをＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注入した。１０倍希釈した血漿試料を調製するために、一定分量の１０μＬの血漿試料を９０μＬのブランク血漿と混合して、希釈した血漿試料を得た。希釈した試料の抽出手順は、希釈していない試料に使用される手順と同じであった。
【表３】
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【０１６１】
ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（バージョン５．３、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社、米国カリフォルニア州）を用いて薬物動態分析を行った。非コンパートメントモデルの薬物動態パラメータを推定し、表に示す。ＬＬＯＱ（ＬＬＯＱ＝ラットの血漿中に１．００ｎｇ／ｍＬ、ラット肝臓ホモジネート中に３．００ｎｇ／ｍＬ）以下のあらゆる濃度データを「ＢＱＬ」で置き換えた。
【表４】
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【０１６２】
実施例２：イヌにおける化合物ＩのＡ型のＰＫ研究
この研究では未使用の体重８．０〜９．５ｋｇのビーグル犬を使用した。１．９０ｇの化合物ＩのＡ型（１．６７ｇの遊離塩基に相当）を２２２．２３７ｍＬの０．５％のＭＣに溶解し、ボルテックスで２０分間撹拌し、２分間超音波処理して無色の透明な溶液を得ることにより、投与溶液を調製した。この動物を手で抑えて、橈側皮静脈または伏在静脈から１時点につきおよそ０．６〜１ｍＬの血液を、予め冷却したＥＤＴＡ管に採取した。血液試料を氷の上に置き、４℃で遠心分離して、試料採取後３０分以内に血漿を得た。分析までおよそ−７０℃で血漿試料を保存した。
【表５】
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【０１６３】
【表６】
2015506987.tif 000021
【０１６４】
実施例３：サルにおける化合物ＩＩのＩ型のＰＫ研究
未使用のカニクイザル、体重３．２〜３．５ｋｇ、雄
６８２．９６ｍｇの化合物ＩＩのＩ型を８２．５５８ｍＬの０．５％ＭＣを含む生理食塩水に溶解し、ボルテックスで５分間撹拌し、１８分間超音波処理して均質な溶液を得ることで、投与溶液を調製した。上記溶液を、胃内投与により上記動物に１０ｍＬ／ｋｇで投与した。
【０１６５】
血液試料を採取するために、上記動物を手で抑えて、橈側皮静脈または伏在静脈から１時点につきおよそ０．６〜１ｍＬの血液を予め冷却したＥＤＴＡ管に採取した。血液試料を氷の上に置き、４℃で遠心分離して、試料採取後３０分以内に血漿を得た。分析まで血漿試料を−７０℃で保存した。
【表７】
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【表８】
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【０１６６】
（Ｃ）医薬組成物
本明細書に提供されている特定の実施形態は、本明細書に記載されている固形を含む医薬組成物である。第１の実施形態では、本医薬組成物は、１種以上の薬学的に許容される賦形剤または媒体と、任意に他の治療成分および／または予防成分とをさらに含む。そのような賦形剤は当業者に知られている。
【０１６７】
意図した投与様式に応じて、本医薬組成物は、例えば、錠剤、坐薬、丸剤、カプセル、粉末、懸濁液、クリーム、軟膏またはローションなどの固体または半固体の剤形の形態であってもよく、いくつかの実施形態では、正確な用量の単回投与に適した単位剤形であってもよい。本組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わせた有効量の選択された薬物を含み、また、他の医薬品、補助剤、希釈液、緩衝液なども含んでいてもよい。
【０１６８】
本発明は、１種以上の薬学的に許容される担体と任意に他の治療成分および／または予防成分と共に、本明細書に記載されている固形を含む医薬組成物を含む。
【０１６９】
固体の組成物のための従来の非毒性固体担体としては、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。
【０１７０】
経口投与のために、本組成物は一般に、錠剤、カプセルまたは懸濁液の形態をとる。錠剤およびカプセルが好ましい経口投与形態である。経口使用のための錠剤およびカプセルは一般に、ラクトースおよびコーンスターチなどの１種以上の一般に使用される担体を含む。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も典型的に添加される。液体懸濁液を使用する場合、活性薬剤を乳化剤および懸濁化剤と組み合わせてもよい。また、所望であれば、着香料、着色料および／または甘味料を添加してもよい。本明細書中の経口製剤に組み込まれる他の任意成分としては、防腐剤、懸濁化剤、増粘剤などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、本固形のみからなる剤形、すなわち、どの賦形剤も含まない固形からなる剤形が本明細書に提供されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている固形を含む無菌剤形が本明細書に提供されている。
【０１７２】
一実施形態では、化合物Ｉは、賦形剤を全く含めずに、サイズゼロのスウェーデンのオレンジ色の不透明なヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセルに入れて投与される。およそ４４ｍｇの化合物Ｉの粉末が各ＨＰＭＣカプセルに充填される。
【０１７３】
本明細書中の特定の実施形態は、薬の製造における本明細書に記載されている固形の使用を提供する。さらなる実施形態では、上記薬は、Ｃ型肝炎の治療用である。
【０１７４】
（ｄ）使用方法
本明細書中の特定の実施形態は、任意に医薬組成物として治療的有効量の本明細書に記載されている固形を、それを必要としている対象に投与することを含む、Ｃ型肝炎の治療方法を提供する。薬学的または治療的有効量の本組成物が対象に送達される。正確な有効量は対象ごとに異なり、生物種、年齢、対象の大きさおよび健康状態、治療される病気の性質および程度、治療する医師の推奨、および投与のために選択された治療法または治療法の組み合わせによって決まる。従って、所与の状況のための有効量は、日常的な実験法によって決定することができる。兆候、症状または当該疾患の原因を軽減および／または緩和するか生物系のあらゆる他の所望の変化をもたらすのに必要な多くの用量を対象に投与してもよい。そのような疾患を治療する当業者であれば、過度の実験をすることなく、個人的知識および本出願の開示内容を信頼して、所与の疾患のための本発明の化合物の治療的有効量を確かめることができるであろう。
【０１７５】
（ｅ）併用療法
本明細書に記載されている固形および医薬組成物は、単独で、あるいはウイルスもしくは細胞要素またはＨＣＶライフサイクルに関与する機能を標的とする他の化合物と組み合わせた場合に、ＨＣＶ感染を治療および予防するのに有用である。本発明において有用な化合物のクラスとしては、ＨＣＶ抗ウイルス薬の全てのクラスが挙げられるが、これらに限定されない。併用療法のために、組み合わせた場合に有用になり得る薬剤の機構クラス(mechanistic class)としては、例えば、ＨＣＶポリメラーゼのヌクレオシドおよび非ヌクレオシド阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、ＮＳ４Ｂ阻害剤、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を機能的に阻害する薬剤ならびにＨＣＶ細胞接着またはウイルス侵入、ＨＣＶのＲＮＡ翻訳、ＨＣＶのＲＮＡ転写、複製またはＨＣＶ成熟、構築またはウイルス放出を阻害する他の薬が挙げられる。これらのクラスにおける具体的な化合物としては、テラプレビル（ＶＸ−９５０）、ボセプレビル（ＳＣＨ−５０３０３４）、ナルラプレビル（Ｎａｒｌａｐｒｅｖｉｒ）（ＳＣＨ−９００５１８）、ＩＴＭＮ−１９１（Ｒ−７２２７）、ＴＭＣ−４３５３５０（別名：ＴＭＣ−４３５）、ＭＫ−７００９、ＢＩ−２０１３３５、ＢＩ−２０６１（シルプレビル）、ＢＭＳ−６５００３２（アスナプレビル）、ＡＣＨ−１６２５、ＡＣＨ−１０９５（HCV NS4Aプロテアーゼ補因子阻害剤）、ＶＸ−５００、ＶＸ−８１３、ＰＨＸ−１７６６、ＰＨＸ２０５４、ＩＤＸ−１３６、ＩＤＸ−３１６、ＡＢＴ−４５０、ＥＰ−０１３４２０（および同種のもの）およびＶＢＹ−３７６などの大環状、複素環状および直鎖状ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されず、本発明において有用なヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ（レプリカーゼ）阻害剤としては、Ｒ７１２８、ＰＳＩ−７８５１、ＩＤＸ−１８４、ＩＤＸ−１０２、Ｒ１４７９、ＵＮＸ−０８１８９、ＰＳＩ−６１３０、ＰＳＩ−９３８、ＰＳＩ−８７９およびＰＳＩ−７９７７（ＧＳ−７９７７、ソフォスブビア（Ｓｏｆｏｓｂｕｖｉｒ））ならびに（限定されるものではないが）２’−Ｃ−メチル修飾ヌクレオシド（ヌクレオチド）、４’−アザ修飾ヌクレオシド（ヌクレオチド）および７’−デアザ修飾ヌクレオシド（ヌクレオチド）として得られたものを含む様々な他のヌクレオシドおよびヌクレオチド類似体およびＨＣＶ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。本発明において有用な非ヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ（レプリカーゼ）阻害剤としては、ＰＰＩ−３８３、ＨＣＶ−７９６、ＨＣＶ−３７１、ＶＣＨ−７５９、ＶＣＨ−９１６、ＶＣＨ−２２２、ＡＮＡ−５９８、ＭＫ−３２８１、ＡＢＴ−３３３、ＡＢＴ−０７２、ＰＦ−００８６８５５４、ＢＩ−２０７１２７、ＧＳ−９１９０、Ａ−８３７０９３、ＪＫＴ−１０９、ＧＬ−５９７２８およびＧＬ−６０６６７が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７６】
また、本明細書に記載されている固形および組成物を、シクロフィリンおよびイムノフィリン拮抗薬(例えば、限定されるものではないが、ＤＥＢＩＯ化合物、ＮＭ−８１１ならびにシクロスポリンおよびその誘導体）、キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤（例えば、ＨＳＰ９０およびＨＳＰ７０）、他の免疫調節剤、例えば、限定されるものではないが、イントロンＡ(Intron A)（商標）、ロフェロンＡ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ）（商標）、キャンフェロンＡ３００（Ｃａｎｆｅｒｏｎ−Ａ３００）（商標）、アドバフェロン（Ａｄｖａｆｅｒｏｎ）（商標）、インファーゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ）（商標）、フモフェロン（Ｈｕｍｏｆｅｒｏｎ）（商標）、スミフェロンＭＰ(Sumiferon MP)(商標)、アルファフェロン（Ａｌｆａｆｅｒｏｎｅ）（商標）、ＩＦＮ−β（商標）、フェロン（Ｆｅｒｏｎ）（商標）などのインターフェロン（−α、−β、−ω、−γ、−λまたは合成物）；ペグインターフェロン−α−２ａ（ペガシス（Ｐｅｇａｓｙｓ）（商標））、ペグインターフェロン−α−２ｂ（ペグイントロン（ＰＥＧＩｎｔｒｏｎ）（商標））、ペグ化ＩＦＮ−α−ｃｏｎ１などのポリエチレングリコール誘導体化（ペグ化）インターフェロン化合物；アルブミン融合インターフェロン、アルブフェロン（Ａｌｂｕｆｅｒｏｎ）（商標）、ロクテロン（Ｌｏｃｔｅｒｏｎ）（商標）などのインターフェロン化合物の長時間作用性製剤および誘導体化物；各種制御送達システムによるインターフェロン（例えば、ＩＴＣＡ−６３８すなわちデュロス（ＤＵＲＯＳ）（商標）皮下送達システムによって送達されるインターフェロン−ω）；レシキモドなどの細胞内でのインターフェロン合成を刺激する化合物；インターロイキン；ＳＣＶ−０７などの１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を高める化合物；ＣｐＧ−１０１０１（アクチロン（ａｃｔｉｌｏｎ））、イソトラビン（ｉｓｏｔｏｒａｂｉｎｅ）、ＡＮＡ７７３などのＴＯＬＬ様受容体作動薬；サイモシンα−１；ＡＮＡ−２４５およびＡＮＡ−２４６；ヒスタミン二塩酸塩；プロパゲルマニウム；テトラクロロデカオキシド；アンプリゲン（ａｍｐｌｉｇｅｎ）；ＩＭＰ−３２１；ＫＲＮ−７０００；シバシル（ｃｉｖａｃｉｒ）、ＸＴＬ−６８６５などの抗体ならびにInnoVac C、HCV E1E2/MF59などの予防用および治療用ワクチンと組み合わせて使用してもよい。また、ＮＳ５Ａ阻害剤、Ｉ型インターフェロン受容体作動薬（例えば、ＩＦＮ−α）およびＩＩ型インターフェロン受容体作動薬（例えば、ＩＦＮ−γ）の投与を伴う上記方法のいずれも、有効量のＴＮＦ−α拮抗薬の投与によって増強することができる。そのような併用療法での使用に適した例示的で非限定的なＴＮＦ−α拮抗薬としては、エンブレル（ＥＮＢＲＥＬ）（商標）、レミケード（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）（商標）およびフミラ（ＨＵＭＩＲＡ）（商標）が挙げられる。
【０１７７】
また、本明細書に記載されている固形および組成物を、限定されるものではないが、プロドラッグニタゾキサニドなどのＨＣＶ感染の治療において有効であると考えらている抗原虫薬および他の抗ウイルス薬と組み合わせて使用してもよい。本発明に開示されている化合物と組み合わせられる薬剤として、ならびにペグインターフェロンα−２ａおよびリバビリンなどのＨＣＶ感染を治療するのに有用な他の薬剤と組み合わせられる薬剤として、ニタゾキサニドを使用することができる（例えば、Rossignol, JF and Keeffe, EB, Future Microbiol. 3:539-545, 2008を参照）。
【０１７８】
また、本明細書に記載されている固形および組成物を、インターフェロンの他の形態およびペグ化インターフェロン、リバビリンまたはその類似体（例えば、タラババリン（ｔａｒａｂａｖａｒｉｎ）、レボビロン（ｌｅｖｏｖｉｒｏｎ）、ミクロＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ化合物（例えば、ＳＩＲＰＬＥＸ−１４０−Ｎなど）、ヌクレオチドまたはヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、肝臓保護剤、抗炎症薬およびＮＳ５Ａの他の阻害剤と共に使用してもよい。ＨＣＶライフサイクルにおける他の標的の阻害剤としては、ＮＳ３ヘリカーゼ阻害剤；ＮＳ４Ａ補因子阻害剤；ＩＳＩＳ−１４８０３、ＡＶＩ−４０６５などのアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤；ベクターにコードされた低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）；ヘプタザイム（ｈｅｐｔａｚｙｍｅ）、ＲＰＩ−１３９１９などのＨＣＶ特異的リボザイム；ＨｅｐｅＸ−Ｃ、ＨｕＭａｘ−ＨｅｐＣなどの侵入阻害剤；セルゴシビル、ＵＴ−２３１Ｂなどのαグルコシダーゼ阻害剤；ＫＰＥ−０２００３００２およびＢＩＶＮ４０１およびＩＭＰＤＨ阻害剤が挙げられる。他の例示的なＨＣＶ阻害化合物としては、米国特許第５，８０７，８７６号、米国特許第６，４９８，１７８号、米国特許第６，３４４，４６５号、米国特許第６，０５４，４７２号、国際公開第９７／４００２８号、国際公開第９８／４０３８１号、国際公開第００／５６３３１号、国際公開第０２／０４４２５号、国際公開第０３／００７９４５号、国際公開第０３／０１０１４１号、国際公開第０３／０００２５４号、国際公開第０１／３２１５３号、国際公開第００／０６５２９号、国際公開第００／１８２３１号、国際公開第００／１０５７３号、国際公開第００／１３７０８号、国際公開第０１／８５１７２号、国際公開第０３／０３７８９３号、国際公開第０３／０３７８９４号、国際公開第０３／０３７８９５号、国際公開第０２／１００８５１号、国際公開第０２／１００８４６号、欧州特許第１２５６６２８号、国際公開第９９／０１５８２号、国際公開第００／０９５４３号、国際公開第０２／１８３６９号、国際公開第９８／１７６７９号、国際公開第００／０５６３３１号、国際公開第９８／２２４９６号、国際公開第９９／０７７３４号、国際公開第０５／０７３２１６号、国際公開第０５／０７３１９５号および国際公開第０８／０２１９２７号（その開示内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている化合物が挙げられる。
【０１７９】
さらに、例えば、リバビリンとインターフェロンとの組み合わせを、本明細書に記載されている固形または組成物のうちの少なくとも１種との複数併用療法として投与してもよい。組み合わせ可能な薬剤は、上記クラスまたは化合物に限定されず、公知の化合物および新しい化合物ならびに生物学的に活性な薬剤の組み合わせを意図している（Strader, D.B., Wright, T., Thomas, D.L. and Seeff, L.B., AASLD Practice Guidelines. 1-22, 2009およびManns, M.P., Foster, G.R., Rockstroh, J.K., Zeuzem, S., Zoulim, F. and Houghton, M., Nature Reviews Drug Discovery. 6:991-1000, 2007、Pawlotsky, J-M., Chevaliez, S. and McHutchinson, J.G., Gastroenterology. 132:179-1998, 2007、Lindenbach, B.D. and Rice, C.M., Nature 436:933-938, 2005、Klebl, B.M., Kurtenbach, A., Salassidis, K., Daub, H. and Herget, T., Antiviral Chemistry & Chemotherapy. 16:69-90, 2005、Beaulieu, P.L., Current Opinion in Investigational Drugs. 8:614-634, 2007、Kim, S-J., Kim, J-H., Kim, Y-G., Lim, H-S. and Oh, W-J., The Journal of Biological Chemistry. 48:50031-50041, 2004、Okamoto, T., Nishimura, Y., Ichimura, T., Suzuki, K., Miyamura, T., Suzuki, T., Moriishi, K.and Matsuura, Y., The EMBO Journal. 1-11, 2006、Soriano, V., Peters, M.G. and Zeuzem, S. Clinical Infectious Diseases. 48:313-320, 2009、Huang, Z., Murray, M.G. and Secrist, J.A., Antiviral Research. 71:351-362, 2006およびNeyts, J., Antiviral Research. 71:363-371, 2006を参照されたく、それらの各開示内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）。本明細書に記載されている併用療法は、上記組み合わせにより、本発明のグループの化合物の抗ウイルス活性または本医薬組成物自体の抗ウイルス活性が失われない限り本発明のグループの化合物と本発明のグループの他の化合物または本発明のグループ以外の他の化合物との任意の化学的に適合可能な組み合わせを含むことが意図されている。
【０１８０】
併用療法は、最初に一方の薬剤で治療した後に第２の薬剤で治療する連続的治療法または同時に両方の薬剤を用いる治療法であってもよい。連続的治療法は、第１の治療法の完了後から第２の治療法の開始前までの間に妥当な時間を含むことができる。同時に両方の薬剤を用いる治療は、同じ１日用量であっても別々の用量であってもよい。併用療法は、２種類の薬剤に限定される必要はなく、３種類以上の薬剤を含んでもよい。同時的および連続的併用療法のどちらの投与量も、併用療法の成分の吸収、分布、代謝および排出速度ならびに当業者に知られている他の因子によって決まる。投与量の値は、緩和される病気の重症度によっても異なる。任意の特定の対象のための具体的な投与計画およびスケジュールは個々の必要性および併用療法の投与を行うか監視する人の専門的判断に従って経時的に調整し得ることをさらに理解されたい。
付録Ａ
【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【表１９】
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【表２０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【国際調査報告】
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