(57)【要約】本発明は、ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）を含む前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ）、及び薬学上よく用いる生分解性高分子ＰＬＧＡ賦形剤との組成物であり、この組成物は体内投与が可能で、長期の効果を有する徐放性剤型に調製したもので、剤型としては、錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、ピル、懸濁剤、マイクロスフィア、口腔インプラント、乳化注射剤、埋植剤またはその他の剤型を含み、この徐放性剤型は従来のような注射器投与による用量を大幅に改善でき、一日に四回から六回の投与が必要であったところを、半月から数カ月の投与で十分なくらいまで改善していることを特徴及び効能としている。本発明は生体内実験を通して、本発明における徐放性剤型の薬剤動態学的な性質、及び効果の持続期間を評価しており、従来のような注射器投与によるナルブフィン用量を大幅に改善できることを確認した。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナルブフィン注射剤の用量を改善する徐放性剤型の医薬組成物で、
（ａ）前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン、及び
（ｂ）一種類以上の薬学上よく用いる生分解性高分子ＰＬＧＡ賦形剤との組成物
を含む医薬組成物。
【請求項２】
その化合物は、その化合物が薬学上許容されている塩、溶媒和物、または薬学的な機能を有する誘導体を含んでいることを特徴とする請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
そのＰＬＧＡが、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ＰＬＡ誘導体またはＰＬＧＡ誘導体及びその組合せのうち、一種類以上を含むことを特徴とする請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
そのＰＬＡ／ＰＧＡ比は、分子量で、ＰＬＡ：５０〜１００％  ／  ＰＧＡ：０〜５０％、組成の分子量は５ｋ〜２０ｋであることを特徴とする請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
このＰＬＡ誘導体またはＰＧＡ誘導体とは、ポリブチレンサクシネート（ＰＢＳ）、ポリヒドロキシアルカン酸（ＰＨＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリヒドロキシ脂肪酸、ポリヒドロキシ吉草酸（ＰＨＶ）、ポリヒドロキシ脂肪酸とＰＨＶの共重合体ポリマー、ポリ乳酸（ＰＬＧ）とポリエチレングリコールの共重合体ポリマーを指すことを特徴とする請求項３記載の医薬組成物。
【請求項６】
その組成物は、効果を長く持続させる徐放性剤型を含み、この徐放性剤型は、錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、ピル、懸濁剤、マイクロスフィア、口腔インプラント、乳化注射剤、埋植剤及び薬学上可能な徐放性剤型のうち、いずれかであることを特徴とする請求項１記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物の急性疼痛または慢性疼痛に用いる化合物である前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ）、及び薬学上よく使われる生分解性ＰＬＧＡ賦形剤による組成物であり、この組成物は体内投与が可能で、長期の効果を有する徐放性剤型に調製したものである。高分子ポリマーによって効果が長期に及ぶ徐放性を与えることで、血液中のナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）濃度を維持することができるので、従来のような注射剤型の用量を大幅に改善できる。
【背景技術】
【０００２】
疼痛は一種の感覚であり、身体末梢の侵害受容体（ｎｏｃｉｃｅｐｔｏｒｓ）が、外部からの個体に対する機械的刺激、熱刺激及び化学的刺激を受け、或いは体内において化学的または電気的な刺激を受けて、痛覚神経が興奮を感知する。これらの興奮は化学的または神経的な侵害受容経路（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｐａｔｈｗａｙｓ）を経て大脳皮質や中枢神経を刺激し、痛いという感覚を引き起こす。すべての脊椎動物、そしてイカなどの非脊椎動物でさえも、痛みを感知する能力を有し、これを警戒し、回避しようとする反応を示す。疼痛が制御または解除されなければ、血液中の副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、コルチゾール  （ｃｏｒｔｉｓｏｌ）、抗利尿ホルモン（ＡＤＨ）、カテコールアミン  （Ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅ）、グルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）の濃度が上昇するなど、生体にかなりの程度のストレス（ｓｔｒｅｓｓ）を与え、インスリン（ｉｎｓｕｌｉｎ）とテストステロン（ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）の分泌が減少して、さらに心血管、呼吸、代謝、組織癒合といった生理機能の発現に影響を与える。
疼痛の発生は、一種の保護的な反射作用であり、個体が望まざる状態にあり、組織が傷つけられたことを警告する反応である。患者が長期の痛みに見舞われているとき、長期の効果を有する鎮痛剤が不可欠で、長期の鎮痛作用は、急性または慢性の疼痛に襲われている患者に対しては特に必要である。こうした疼痛は数日から数カ月持続する。たとえば、手術後の痛み、外傷ややけどによる痛みなど、急性疼痛は４日から６日間持続し、非悪性疼痛や癌性疼痛などの慢性疼痛は、数週間から数カ月持続することもある。
鎮痛と鎮痛薬の歴史は、十九世紀末に大きく発展し、科学者はアスピリンとモルヒネの純化に成功した。いずれも文献に記載されている効果的な鎮痛剤である。しかし、アスピリンの鎮痛効果は弱く、しかも胃を傷め、血小板凝集を抑制し、胃出血の危険性がある。モルヒネは鎮痛効果は良好だが、副作用の関係で使用上数々の制限が課される。よって、両者は厳しい管理下のもとに慎重に使われた。二十世紀以降に開発された新薬は基本的に、アスピリン系、非ステロイド性抗炎症薬（消炎鎮痛作用）、モルヒネ様（中枢神経系統のモルヒネ受容体に作用する）に分かれる。
【０００３】
現在使用されているオピオイド系鎮痛剤は、スフェンタニル（Ｓｕｆｅｎｔａｎｉｌ）、レミフェンタニル（Ｒｅｍｉｆｅｎｔａｎｉｌ）、フェンタニル（Ｆｅｎｔａｎｙｌ）、モルヒネ（Ｍｏｒｐｈｉｎ）の注射剤などであり、効果が長く持続せず、副作用が強い。長期の効果を得ようと思えば、一日に二、三回は注射しなければならないため、使いやすいとは言えず、用量が多すぎると薬物依存症などの副作用をともなう。
効果が長く持続し、副作用が比較的軽いオピオイド系鎮痛剤というのが、本発明のポイントである。ナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）は強力な鎮痛剤で、患者における中度から重度の疼痛を治療するのに用いられる。術後の疼痛治療と比較すると、ナルブフィンはモルヒネと同様の効果を有すると同時に副作用も軽く、呼吸抑制、依存症といった副作用も軽い。ナルブフィンは薬理学上、オピオイド系受容体（Ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）  ｋａｐｐａ活性剤、μ受容体（Ｍｕ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ）部分拮抗薬（Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｗ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，１９８５）に属し、メカニズム的には天井効果（ｃｅｉｌｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）を有し、用量３０ｍｇ以上を用いても呼吸抑制が強まることはない。
世界十大製薬国のレベルに合わせるため、台湾は行政院「台衛字第０９６０００４２６４号」文書によりナルブフィンを非管制薬品とした。今のところ、薬物治療の用量から言って、ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）の鎮痛効果は三時間（血液中の濃度約１０  ｎｇ／ｍｌ）から六時間（血液中の濃度約２．５  ｎｇ／ｍｌ）であり、患者は入院して何度も注射されることになり、医療資源を浪費し、患者に苦痛をもたらしている。薬物の半減期を改善するよう設計された前駆性ソフトドラッグ（ｐｒｏｓｏｆｔ−ｄｒｕｇ）は、すでに広く臨床に用いられ、品質も確認されている。ナルブフィンは親水性の薬物で、前駆性ソフトドラッグと比較すると、鎖の長い炭酸のエステル化によって脂溶性を高め、油性組成物にしたり、生分解性を付与して、筋肉注射したとき、徐放性を高めてその効果を長期化できる。エステル分解酵素は、血液、脳、肝臓、心臓、肺、腎臓、筋肉といった生体組織や器官に存在する。この前駆性ソフトドラッグの薬理作用と安全性はすでに報告されており、先発の医薬品として確認されている。
【０００４】
セバシン酸ジナルブフィン（ＳＤＥ）は、ナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）の前駆性ソフトドラッグで、急性、慢性及び術後の疼痛を治療できる。本発明者は以前の特許案である中国台湾出願番号第０８９１０９２９３号（エステル化ナルブフィン前駆性ソフトドラッグ（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ  ｐｒｏｄｒｕｇ）経口医薬組成物）の発明を踏襲し、ナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）の効果を大幅に延長できなかった点に鑑みて独自に改良を加え、中華民国特許出願番号第０８５１０６１５６号（エステル化ナルブフィン）において、生分解性のあるＰＬＧＡ賦形剤とともに組成した前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ）を発表し、半月から数カ月に一回の投与で、体内において効果が長く持続する徐放性剤とした。
【０００５】
本発明者はかつて国際的なジャーナルにおいて、前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ）徐放性剤−電気刺激をともなう経皮投与（Ｊｅｎｇ−Ｆｅｎ  Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）、注射用植物油剤（Ｐａｏ  Ｌ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，２００５）、及び、その他のナルブフィン系前駆性ソフトドラッグであるデカン酸ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｄｅｃａｎｏａｔｅ）、エナント酸ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｎａｎｔｈａｔｅ）、ピバル酸ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｐｉｖａｌａｔｅ）、プロピオン酸ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）と、薬学上よく使用され、本案でも用いている生分解性ＰＬＧＡ賦形剤により組成された移植剤（Ｓｕｎｇ  Ｋ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）、徐放性マイクロスフィア剤（Ｆａｎｇ−Ｉ．  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）を発表した。
しかし、半月から数カ月に一回の投与という目標を達成することはできなかった。たとえば、発表済み内容のように、プロピオン酸ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、ピバル酸ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｐｉｖａｌａｔｅ）またはデカン酸ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｄｅｃａｎｏａｔｅ）といったナルブフィン（５０  ｍｇ／ｒａｂｂｉｔ）のＰＬＧＡ徐放性マイクロスフィア剤を皮下注射したところ、血液中濃度２．５  ｎｇ／ｍｌを維持できたのは四日間のみであり、目標とかなり隔たりがあった（Ｆａｎｇ−Ｉ．  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
これは上記前駆性ソフトドラッグの脂溶性が不足していると推測されるが、本発明者の後続研究によると（表１参照）、脂溶性の高い前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ）−ＰＬＧＡ徐放性剤を用い、ラット体内に１５０  ｍｇ／ｋｇ  ｏｆ  ＳＤＥで注射し（ｎ＝７）、ナルブフィン４０  ｍｇ／ｒａｔとした。その結果、ＰＬＧＡ高分子の特性（ＰＬＡ／ＰＧＡ比、平均分子量など）により血液中の薬物濃度の調節が可能となり、血液中濃度２．５  ｎｇ／ｍｌを半月から数カ月維持できた。よってこの実験結果に基づき、哺乳動物の急性または慢性の疼痛を治療する化合物に特化した、前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ）、及び薬学上よく使用される生分解性ＰＬＧＡ賦形剤により組成された徐放性剤である本発明は、新規制、進歩性を備えていると思われる。  
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ナルブフィン徐放性剤型を提供して、ナルブフィン（ｎａｌｂｕｐｈｉｎ）の効果を延長できなかった問題を解決し、治療効果を従来の単回投与よりも長く持続させることを目的としている。この目的を達成するため、本発明は適切な前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ）徐放性剤を提供する。薬学上よく用いる生分解性高分子ＰＬＧＡ賦形剤との組成物とし、従来における注射剤としてのナルブフィン用量を改善している。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ナルブフィン注射剤の用量を改善する徐放性剤型の医薬組成物で、この組成物は下記を含んでいる。
（ａ）前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン、及び
（ｂ）一種類以上の薬学上よく用いる生分解性高分子ＰＬＧＡ賦形剤との組成物
【０００８】
いくつかの実施例における化合物は、この化合物が薬学上許容されている塩、溶媒和物、または薬学的な機能を有する誘導体を含む。
【０００９】
いくつかの実施例におけるＰＬＧＡ賦形剤は、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ＰＬＡ誘導体またはＰＬＧＡ誘導体及びその組合せのうち、一種類以上を含む。
【００１０】
いくつかの実施例におけるＰＬＡ／ＰＧＡ比は、分子量で、ＰＬＡ：５０〜１００％  ／  ＰＧＡ：０〜５０％、組成の分子量は５ｋ〜２０ｋとする。
【００１１】
いくつかの実施例におけるＰＬＡ誘導体またはＰＧＡ誘導体とは、ポリブチレンサクシネート（ＰＢＳ）、ポリヒドロキシアルカン酸（ＰＨＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリヒドロキシ脂肪酸、ポリヒドロキシ吉草酸（ＰＨＶ）、ポリヒドロキシ脂肪酸とＰＨＶの共重合体ポリマー、ポリ乳酸とポリエチレングリコールの共重合体ポリマーを指す。
【００１２】
いくつかの実施例における組成物は、効果を長く持続させる徐放性剤を含み、この徐放性剤は、錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、ピル、懸濁剤、マイクロスフィア、口腔インプラント、乳化注射剤、埋植剤及び薬学上可能な徐放性剤のうち、いずれかである。
【００１３】
本発明におけるセバシン酸ジナルブフィン徐放性剤には以下のような長所がある。
本発明は、ナルブフィン系前駆性ソフトドラッグ（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｐｒｏｓｏｆｔ−ｄｒｕｇ）セバシン酸ジナルブフィン（ＳＤＥ）、及び生体相容性があり、生分解性のポリマー重合徐放性剤型である。徐放性剤型とするのは、治療効果を従来の単回投与よりも長く持続させることを目的としている。その長所としては、投与の回数を減らし、患者が服薬するのを忘れる確率を減らし、投薬後における血液中の濃度を安定させて治療効果を改善でき、鎮痛剤を長期にわたり用いる患者が、頻繁に通院することなく家庭や社会で活動する時間を増やせる点が挙げられる。
【００１４】
以下、本発明の技術的な内容、目的、効果に対する理解を深めるため、図面を添えて本発明に関する代表的な実施例の詳細説明を行う。実施例の図面は以下のとおりである。  
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】画像：マイクロスフィア徐放性剤型
【図２】実験群（７５／２５  １０ｋ）、（７５／２５  １５ｋ）、（７５／２５  １８ｋ）、（７５／２５  ２０ｋ）徐放性剤の溶出状況、分子量が異なる場合の薬の溶け出し方（ｍｅａｎ±ＳＤ，ｎ＝３）。
【図３】実験群（７５／２５  １０ｋ）、（１００／０  １０ｋ）徐放性剤の溶出状況（ｍｅａｎ±ＳＤ，ｎ＝３）、ＰＬＡ含有量が異なる場合の薬の溶け出し方。
【図４】実験群（５０／５０  ５ｋ）、（７５／２５  １０ｋ）徐放性剤の溶出状況（ｍｅａｎ±ＳＤ，ｎ＝３）、分子量とＰＬＡ含有量が異なる場合の薬の溶け出し方。
【図５】体内におけるナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）濃度と時間の関係を示すグラフ。実験動物ＳＤ−ｒａｔに、５０：５０  ５ｋ（１５０  ｍｇ／ｋｇ  ＳＤＥ）、７５：２５  １０ｋ（１５０  ｍｇ／ｋｇ  ＳＤＥ）、７５：２５  １８ｋ（１５０  ｍｇ／ｋｇ  ＳＤＥ）で徐放性剤を筋肉内注射した場合。（Ａ）デカルト座標（Ｂ）片対数グラフ
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の詳細説明を行うが、以下の実施例は本発明に制限を加えるものではない。
【００１７】
以下、本発明の詳細説明を行うが、以下の実施例は具体的な説明を行うためのものであり、本発明に制限を加えるものではない。
【００１８】
実施例１    ＳＤＥ−  ＰＬＧＡ徐放性剤の調製
実験の設計と内容
１．  ＳＤＥ−ＰＬＧＡ徐放性剤の調製−マイクロスフィアの場合（図１参照）
活性物質
セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ、ＳＤＥ）はナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）系前駆性ソフトドラッグの一種であり、前駆性ソフトドラッグは薬物の半減期を改善して臨床にも応用でき、現実に使用可能であるよう設計されている。
賦形剤
良好な生体相容性、生分解性を得るため、ポリ乳酸（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ、ＰＬＡ）とポリグリコール酸（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ、ＰＧＡ）を異なる比率で重合する。
ｉ．きれいなガラス瓶に、ＰＬＧＡ重合体９００ｍｇ、活性成分ＳＤＥ粉末１，２００ｍｇを入れ、有機溶剤ジクロロメタン９ｍｌを加えると（磁石を加えて混合すると溶出しやすい）、油相を呈する。
ｉｉ．水相０．５％  ＰＶＡ  ９００ｍｌを用意する。水相を温度設定可能な水ジャケット反応容器（温度８−１０℃を維持、温度が高すぎると薬物が劣化し、穴が発生する）に入れ、ホモジナイザー１，８００  ＲＰＭで均一になるまで攪拌する。；
ｉｉｉ．気密注射器の針で油相を吸い取ってから水相に入れ、一定のせん断応力でマイクロスフィアを成型させ（ホモジナイザー４分間）、さらに２０℃、回転数３００ＲＰＭで２時間攪拌してマイクロスフィアを固形化させてから、さらに３０℃、回転数３００ＲＰＭで２時間攪拌して、有機溶剤を揮発させる。
ｉｖ．スクリーニング（メッシュ１５０μｍ、アンダーサイズ３５μｍ）して水相を除去し、冷凍乾燥する（フリーズドライ条件：−４０．０℃）。
１．０ｘ１０−１  ｐｓｉのＳＤＥ−ＰＬＧＡマイクロスフィアを得る。
配合例１
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配合例２（ＰＬＧＡ  分子量５ｋＤａ）
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配合例３（ＰＬＧＡ  分子量１０ｋＤａ）
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配合例４（ＰＬＧＡ  分子量１５ｋＤａ）
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配合例５（ＰＬＧＡ  分子量１８ｋＤａ）
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配合例６（ＰＬＧＡ  分子量２０ｋＤａ）
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配合例７（ＰＬＧＡ  分子量１０ｋＤａ）
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２．ＳＤＥ−ＰＬＧＡカプセル化効率（Ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ、％）とカプセル化成功率（Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ、％）の測定、マイクロスフィアの場合。
ｉ．ＳＤＥ−ＰＬＧＡマイクロスフィア（＞１０  ｍｇ）を取り、このｍｇ数と同じｍｌ数のアセトニトリル溶出剤に入れる（例：ＳＤＥ−ＰＬＧＡマイクロスフィア１１．２  ｍｇの場合、アセトニトリル１１．２  ｍｌ）、Ｎ＝３；
ｉｉ．上記の溶出液を、アセトニトリルで１００倍に希釈し、１００μｌを取ってＨＰＬＣに注入し、定量の標準曲線とする；
ｉｉｉ．カプセル化効率（Ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ、％）＝（ＡＰＩ  ／（ＡＰＩ  ＋  ＰＬＧＡ））＊１００  ％；
ｉｖ．カプセル化成功率（Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ％）＝（カプセル化効率／理論上の薬物負荷率）＊１００％
３．レーザーによる粒子径分析
ｉ．マイクロスフィアを適量取って水中に入れてから、ゆっくりとサンプル槽に入れ、サンプル槽内で攪拌器を用いてマイクロスフィアを水中に均一に分散させる。
ｉｉ．このサンプル槽に対し、Ｈｅ−Ｎｅレーザー光源（６３３  ｎｍ）の赤外線分散分析装置で、マイクロスフィア粒子径分布を測定する。
ｉｉｉ．この実験を三重複して得たデータをもとに、平均値と標準偏差を求める。
実験結果：
六種類の生分解性ＰＬＧＡ賦形剤（５０：５０  ５ｋ、７５：２５  １０ｋ、７５：２５  １５ｋ、７５：２５  １８ｋ、７５：２５  ２０ｋ、１００：０  １０ｋ）を用い、同じホモジナイザーの回転数１８００ＲＰＭ、同じＡＰＩと重合体の比４００ｍｇ／３００ｍｇで、薬物のカプセル化効率、カプセル化成功率と平均粒子径との関係について考察した。その結果、同じ回転数、同じＡＰＩ／重合体比（４００ｍｇ／３００ｍｇ）で、重合体の種類が異なる状況下において、カプセル化効率（４５−６０％）と平均粒子径（６０−７０μｍ）Ｒ及びカプセル化成功率（８１−１００％）に顕著な変化がないことを示している（表２）。
表１  ナルブフィンと他の前駆性ソフトドラッグ、分子量（Ｍｗ）、油水分配係数（ｌｏｇＰ）、水中における薬物の水溶解度（Ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｉｅｓ）の相関関係
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表２  異なる重合体ごとの平均粒子径、カプセル化効率、カプセル化成功率    
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【００１９】
実施例２    ＳＤＥ−  ＰＬＧＡ徐放性剤のｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験
１．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験−マイクロスフィアの場合：
ｉ．１６  ｘ  １２５ｍｍスクリューキャップチューブを洗浄滅菌し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出バッファー液０．０２５  Ｍ  ＰＢＳ＋０．５  ％Ｔｗｅｅｎ２０  ４００  ｍｌを、５００  ｍｌの滅菌血清瓶に入れ、磁石を入れて攪拌する。
ｉｉ．無菌操作台で、マイクロスフィア粉末（滅菌でマイクロスフィアの性質が変化しないこと−約５ｍｇ）を溶出バッファー液４００ｍｌの中に加え、マグネットスターラーに加え、８００ＲＰＭで攪拌してマイクロスフィアをバッファー液上に均一に懸濁させる。
ｉｉｉ．懸濁液５ｍｌを吸い取り、１６  ｘ  １２５ｍｍスクリューキャップチューブに入れ、それぞれ時間を標示する（Ｎ＝３）。スクリューキャップチューブのキャップにテープを貼る（飛び散った水の混入と長時間の振動によるキャップの落下を防止するため）。
ｉｖ．３７℃の水槽の中に置き、１００ＲＰＭの反応時間で取り出す。
ｖ．これはマイクロスフィア内の薬剤の放出量を求める方法である。異なる日付が標示されている試験管の上清４．５ｍｌを吸い取り、アセトニトリル４．５ｍｌを加えてマイクロスフィアを破壊し、１０分間揺らす。マイクロスフィアが完全に溶出後、サンプルを０．４５μｍ以上の薄膜（ＰＶＤＦ）にかけた後、２００μｌの上清を吸い取り、ＨＰＬＣ装置に注入し、次の式により放出量を求める。
薬剤放出量（％）＝１００（％）−薬剤残余量（％）
２．高性能液体クロマトグラフィー分析条件
ＳＤＥ−ＰＬＧＡカプセル化効率（Ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ、％）とカプセル化成功率（Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ、％）の測定、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験など、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験を用いて、薬剤濃度を正確に定量化する。
移動相（ｍｏｂｉｌｅ  ｐｈａｓｅ）は２５％酢酸ナトリウムバッファー液（５ｍｍｏｌ／ｌ）及び７５％アセトニトリルに、０．０７％（体積比Ｖ／Ｖ）と０．１％トリエチルアミン（Ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）の構成とし、カラム（ｃｏｌｕｍｎ）：サーモ  ハイパーシル  ベタシル  シリカ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  Ｂｅｔａｓｉｌ  Ｓｉｌｉｃａ）  １５０  ｘ  ４．６ｍｍ、３μｍ、温度３０℃、紫外線探知装置の波長２１０ｎｍ、流速は毎分１．３ｍｌ、７分ごとに分析サンプルを取る。
３．  標準曲線
アセトニトリル（ＡＣＮ）の中に、前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィンとナルブフィンを、濃度２５０、５００、１０００、１５００、２０００、３５００、５０００、７５００、１００００（ｎｇ／ｍｌ）となるように混合して標準液を得る。
高性能液体クロマトグラフィー分析を経て、分析図の中におけるセバシン酸ジナルブフィンとナルブフィン、それぞれのピーク面積と相対濃度をグラフに描き、二本の検量線を得た後、標準偏差（Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｅｖｉａｔｉｏｎ、ＳＤ）、変動係数（％  ＣＶ）及び誤差（％  ｅｒｒｏｒ）で正確度を確認する。
実験結果：
同じＰＬＡ／ＰＧＡ比、異なる分子量（７５／２５  １０ｋ）、（７５／２５  １５ｋ）、（７５／２５  １８ｋ）、（７５／２５  ２０ｋ）のＳＤＥ−ＰＬＧＡマイクロスフィアで溶出を比較した結果、分子量が低いほど薬剤の放出が速いのがわかった。三十日間の薬剤放出量は、７５／２５  １０ｋ（８７．７１％±１３．８１％）、７５／２５  １５ｋ（５６．６４％±６．４０％）、７５／２５  １８ｋ（５７．３０％±１４．３３％）、７５／２５  ２０ｋ（４２．７８％±５．４２％）、データ（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝３）（図２）。異なるＰＬＡ／ＰＧＡ比、同じ分子量（７５／２５  １０ｋ）、（１００／０  １０ｋ）のＳＤＥ−ＰＬＧＡマイクロスフィアで溶出を比較した結果、ＰＬＡ含有量が低いほど薬剤の放出が速いのがわかった。三十日間の薬剤放出量は、７５／２５  １０ｋ（８７．７１％±１３．８１％）、１００／０  １０ｋ（２８．１６％±６．３１％）、データ（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝３）（図３）。異なるＰＬＡ／ＰＧＡ比、異なる分子量（５０／５０  ６ｋ）、（７５／２５  １０ｋ）のＳＤＥ−ＰＬＧＡマイクロスフィアで溶出を比較した結果、上記と同じ結果で、分子量が低く、ＰＬＡ含有量が低いほど、薬剤の放出が速いのがわかった。三十日間の薬剤放出量は、７５／２５  １０ｋ  １００／０  １０ｋ（８８．５４％±６．４７％）、（８７．７１％±１３．８１％）、データ（ｍｅａｎ±ＳＤ、ｎ＝３）（図４）。
【００２０】
実施例３  ＳＤＥ−  ＰＬＧＡ徐放性剤の生体薬剤動態試験
実験の設計と内容：
この実験は、異なる処方、剤型、薬剤を単回投与して、ラット体内における薬剤の吸収、分布、排除の状況を測定、比較する。ＳＤＥ−ＰＬＧＡ徐放性剤を筋肉内注射して単回投与した後、ラット血漿中のナルブフィンとＳＤＥを分析することで、剤型ごとのラット体内吸収、代謝、排除の状況を知ることができるとともに、一カ月効果持続する配合を確認する。
１．小形動物のラットにＳＤＥ−ＰＬＧＡ徐放性剤を筋肉内注射して行う薬剤動態試験
実験動物
ｉ．種類：ラット（Ｒａｔ）
ｉｉ．系：Ｓｐｒａｇｅ−Ｄａｗｌｅｙ
ｉｉｉ．出所：国科会実験動物中心
ｉｖ．実験開始時の週齢：若幼期、６−９週齢
ｖ．実験開始時の体重：ラットの体重は軽いほどよく、理想的には２００−３００ｇ
ｖｉ．標示方法：尾に標示
ｖｉｉ．実験数：毎群メス６−７匹
実験期間：ラットに薬剤投与後、ナルブフィンが測定できなくなるまでサンプリングして観察（約一カ月）
薬剤投与方法：ＳＤＥ−ＰＬＧＡ徐放性剤を右大腿部に筋肉内注射、体重により用量を調整し、単回投与する
剤型の分析：調製後の剤型の化学的強度をあらかじめ分析し、製剤の均一性、安定性を確認する
実験方法：
ｉ．実験動物の適応と選択：約２５匹のメスラットがラボに届けられた後、一週間の適応期、観察期を設け、その期間中における健康状態、病態の有無をチェックする。実験動物に対するワクチンはサプライヤーが投与する。実験開始前、獣医が一通りの物理的検査を実施する。
ｉｉ．実験動物の選択：観察期を経て、病態または異常な生理現象を示すラットは実験に用いない。
ｉｉｉ．飼育環境：実験動物飼育環境：ラットは温度２０−３０℃、湿度３０−７０％の環境で飼育し、一日１２時間の明暗サイクルを施す。
ｉｖ．飼料：品質保証されたＰｕｒｉｎａ  Ｍｉｌｌｓ社製
Ｒｏｄｅｎｔ  ＣｈｏｗO  ＃５００２、給餌は無制限、実験前の絶食は不要。
ｖ．飲料水：飲料水は無制限に供給する。
ｖｉ．ランダム化比較試験：実験動物は体重を基準に、Ｘｙｂｉｏｎランダム化プロセスにより無作為にグループ分けし、ラット体重を実験群に均一に分散させる。ラットは二群に分け、一群当たりメスラット６匹以上とする。
ｖｉｉ．薬剤投与：薬剤１５０  ｍｇ／ｋｇ  ＳＤＥ  ＳＤＥ−ＰＬＧＡマイクロスフィア（１．２５％ＣＭＣ中に懸濁）を、右大腿部に筋肉内注射する。
ｖｉｉｉ．サンプル採取：血漿
ここではラットの尾静脈から血液サンプルを採取する。投薬の量とサンプル採取時のラットに与えるストレスを抑えるため、ラットは単独で制限装置に入れてから１５０  ｍｇ／ｋｇ  ＳＤＥ−ＰＬＧＡマイクロスフィアを投与する。投薬後、０．５，１，２，６，２４，３０，４８，５４，７２，９６，１０２，１２０，１６８，２４０時間、及び１２，１４，１６，１８，２０，２４，２６，２８日を経過した時点で０．５ｍｌの血液サンプルを採取し、ヘパリン適量（体重の１／１０）を加える。これを遠心分離機にかけた後、上清の全血血漿を採取し、すべての血漿サンプルは−８０℃のフリーザーで保存する。実験中、ラットが重篤に陥った場合、人道的見地から二酸化炭素により安楽死させる。
サンプル分析：さまざまなサンプルは、高性能液体クロマトグラフィーを通して、ナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）とＳＤＥの質量分析（ＵＰＬＣ／Ｍｓ／Ｍｓ）を行う。
データ分析：血漿中における投与薬剤の変化状況をグラフと表で示すとともに、ソフトウェアを用いて、ラット生体内におけるナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）とＳＤＥの薬剤動態学的パラメータ（生物学的利用能を含む）を計算する。
２．  ＵＰＬＣ／Ｍｓ／Ｍｓ分析条件：
高性能液体クロマトグラフィー・タンデム型質量分析装置（Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＵＰＬＣ））：／Ｍａｓｓ／  Ｍａｓｓ  ＵＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ、（ＡＰＩ  ３０００  Ａｐｐｌｉｅｄ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｎｓ、米国）トリプル四重極（ｔｒｉｐｌｅ−ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ）分析装置、イオンスプレー（ｉｏｎｓｐｒａｙ）配備  ＬＣ／ＭＳ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ）にて分析を行う。
カラム（Ｃｏｌｕｍｎ）は、ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ／ＢＥＨ  ＨＩＬＩＣ／２．１  ｘ  １００ｍｍ／１．７３μｍ／４０℃とし、移動相（Ｍｏｂｉｌｅ  ｐｈａｓｅ）は、２ｍＭ酢酸アンモニウム（Ａｍｍｏｎｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）及び０．１％ギ酸（ｆｏｒｍｉｃ  ａｃｉｄ）を、水（１３％）及びアセトニトリル（Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）（８７％）に加えたもの、流速（Ｆｌｏｗ）は毎分０．２５ｍｌ、注射量（Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｖｏｌｕｍｅ）は５μｌとする。セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ）分析にはプリカーサーイオン４４１．５（ｍ／ｚ）、プロダクトイオン４２３．５（ｍ／ｚ）を選び、ナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）分析にはプリカーサーイオン３５８．３（ｍ／ｚ）、プロダクトイオン３４０．３（ｍ／ｚ）を選ぶ。内部標準分析においては、エチルモルヒネ（Ｅｔｈｙｌｍｏｒｐｈｉｎｅ）分析はプリカーサーイオン３１４．２（ｍ／ｚ）、プロダクトイオン１８３．１（ｍ／ｚ）を選び、ナロキソン（Ｎａｌｏｘｏｎｅ）分析はプリカーサーイオン３２８．３（ｍ／ｚ）、プロダクトイオン３１０．３  （ｍ／ｚ）を選ぶ。
３．血漿サンプル処理：
ｉ．１６  ｘ  １２５ｍｍ試験管の底に、内部標準（エチルモルヒネ（Ｅｔｈｙｌ−ｍｏｒｐｈｉｎｅ）  ２μｇ／ｍｌ  ＆  Ｎａｌｏｘｏｎｅ  ２００ｎｇ／ｍｌ  ５０μｌ）を加える。
ｉｉ．０．５  Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３  ｐＨ＝１０．０  ５０μｌを加える（アルカリ性薬剤をイオン状態から分子状態に変換）。
ｉｉｉ．抽出液（Ｅｔｈｅｒ：ＤＣＭ＝７：３）４ｍｌを加え、４℃に空調された部屋で氷の上に置く（前駆性ソフトドラッグＳＤＥが血漿中で劣化するのを防ぐため）。
ｉｖ．血漿１００μｌを加え、１０分間揺すってから、回転数３，０００  ＲＰＭで１０分間、遠心分離機にかける。
ｖ．−８０℃のフリーザーに入れて水を凝固させ、上清を１３  ｘ  １００ｍｍの新しい試験管に入れる。
ｖｉ．圧力１０  ｐｓｉ、４０℃で２０分間、窒素ガスを吹きかけて乾燥させる（時間が長すぎると、熱により前駆性ソフトドラッグＳＤＥが劣化する可能性がある）。
ｖｉｉ．希釈液２００μｌ（ＡＣＮ：Ｑ  ｗａｔｅｒ浄水＝８５：１５）を試験管に入れて溶出させ、５μｌを注射器に取ってＵＰＬＣ／Ｍｓ／Ｍｓに注ぐ。
４．標準曲線の描画：
アセトニトリル（ＡＣＮ）の中に、前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィンとナルブフィンを、濃度１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１０００、２５００、５０００（ｎｇ／ｍｌ）となるように混合して標準液を得てから、１０μｌを取って９０μｌのブランク血漿に入れ（１０倍希釈）、サンプル処理する。
ＵＰＬＣ／Ｍｓ／Ｍｓ分析後、分析図の中におけるセバシン酸ジナルブフィンとナルブフィン、それぞれのピーク面積と相対濃度をグラフに描き、二本の検量線を得た後、標準偏差（Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｅｖｉａｔｉｏｎ、ＳＤ）、変動係数（％  ＣＶ）及び誤差（％  ｅｒｒｏｒ）で正確度を確認する。
実験結果：
結果は、重合体の性質（ＰＬＡ／ＰＧＡ比、平均分子量）を調整すれば、薬剤の血液中濃度を調節でき、しかも結果は理論と一致していることを示している。薬剤放出速度は（５０：５０  ５ｋ）＞（７５：２５  １０ｋ）＞（７５：２５  １８ｋ）を示し、薬剤の血液中濃度は調整可能であり、且つ有効濃度２．５ｎｇ／ｍｌを半月から数カ月維持できる（図５）。薬剤放出量は（５０：５０  ５ｋ）＞（７５：２５  １０ｋ）＞（７５：２５  １８ｋ）を示していることから、ＰＬＡ／ＰＧＡ比、平均分子量によって薬剤の血液中濃度を調節でき、しかも結果は理論と一致している。パラメータについては表３参照。
【００２１】
実験動物ＳＤ−ｒａｔに徐放性剤を、５０：５０  ５ｋ（１５０ｍｇ／ｋｇ  ＳＤＥ）、７５：２５  １０ｋ（１５０ｍｇ／ｋｇ  ＳＤＥ）、７５：２５  １８ｋ（１５０ｍｇ／ｋｇ  ＳＤＥ）で投与したとき、ナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎ）の生体内薬剤動態学的パラメーターを表３に示す。
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【００２２】
以上を総合すると、本発明の前駆性ソフトドラッグ・セバシン酸ジナルブフィン（Ｓｅｂａｃｏｙｌ  ｄｉｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ  ｅｓｔｅｒ）、及び薬学上よく使われる生分解性ＰＬＧＡ賦形剤を組み合わせると、生体内で徐々に放出される徐放性剤を調製できる。重合体の働きで、薬剤が徐々に放出されることで効果を長く持続させる目的を達することができ、ナルブフィン（Ｎａｌｂｕｐｈｉｎｅ）の血液中濃度を維持するとともに、従来のような注射剤の用量を大幅に改善することができる。
【図５】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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