(57)【要約】  不可逆的チロシンキナーゼ阻害活性を有する新規なトリアゾロピリジン誘導体、および該誘導体を含む炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療に用いることのできる医薬組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2015506974.tif 000022
［式中、
ＸはＯ、ＮＨ、ＣＨ２、Ｓ、ＳＯまたはＳＯ２であり；
Ｙはフェニルまたはピリジルであり；
Ｚは
【化２】
2015506974.tif 000023
であり；
ｎは０〜４の整数であり；
Ｒ１は、各々独立して、水素、Ｃ１−６アルコキシまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノメチルであり；および
Ｗは、フェニル、ピリジル、あるいは水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−６アルキルヘテロサイクリルアミノ、ジ（Ｃ１−６アルキル）アミノＣ１−６アルキル、ヘテロサイクル、ヒドロキシヘテロサイクル、Ｃ１−６アルキルヘテロサイクル、ヒドロキシＣ１−６アルキルヘテロサイクル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキルヘテロサイクル、ヘテロサイクリルカルボニル、およびヘテロサイクリルＣ１−６アルキルカルボニルからなる群より選択される１または複数の置換基で置換されるフェニルであり、ここで該ヘテロサイクルはＮ、ＯおよびＳより選択される１または複数のヘテロ原子を独立して含有する飽和した３ないし８員の単環式ヘテロ環である］
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｗが
【化３】
2015506974.tif 000024
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｎ−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド；
Ｎ−（３−（２−（３−フルオロ−４−（１−メチルピペリジン−４−イルアミノ）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド；
Ｎ−（３−（２−（４−（（ジメチルアミノ）メチル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド；
Ｎ−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド；および
Ｎ−（３−（２−（４−（４−イソプロピルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療用の医薬組成物であって、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を活性成分として含む、医薬組成物。
【請求項５】
炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍が、ヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、ＩＬ−２誘発性Ｔ細胞キナーゼ（ＩＴＫ）、静止リンパ球キナーゼ（ＲＬＫ）および骨髄チロシンキナーゼ（ＢＭＸ）からなる群より選択される１または複数のキナーゼによりもたらされる、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍が、異常に活性化されたＴ−リンパ球、Ｂ−リンパ球またはその両方によりもたらされる、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項７】
炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、あるいは免疫介在性疾患が、関節炎、関節リウマチ、脊椎関節症、痛風性関節炎、骨関節炎、若年性関節炎、他の関節炎状態、紅斑性狼瘡、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚関連性疾患、乾癬、湿疹、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、疼痛、肺障害、肺炎、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺サルコイドーシス、慢性肺炎症疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、うっ血性心不全、心臓の再灌流傷害、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性大腸症候群、喘息、シェーグレン症候群、自己免疫甲状腺疾患、蕁麻疹、多発性硬化症、強皮症、同種移植の拒絶反応、異種移植、突発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、糖尿病に伴う疾患、炎症、骨盤内炎症性疾患、アレルギー性鼻炎、アレルギー性気管支炎、アレルギー性副鼻腔炎、白血病、リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、骨髄腫、急性リンパ系白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ系白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および濾胞性リンパ腫からなる群より選択される、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項８】
細胞シグナル伝達阻害剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、挿入剤、トポイソメラーゼ阻害剤、免疫治療剤、抗ホルモン剤およびそれらの混合物からなる群より選択される、他の抗癌剤を活性成分としてさらに含む、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項９】
ステロイド、メトトレキセート、レフルノミド、抗ＴＮＦα剤、カルシニュリン阻害剤、抗ヒスタミン剤およびそれらの混合物からなる群より選択される、別の薬物を活性成分としてさらに含む、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項１０】
動物における炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療方法であって、該動物に請求項１に記載の有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含むことを特徴とする、方法。
【請求項１１】
炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療用の医薬の製造のための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、不可逆的チロシンキナーゼ阻害活性を有する新規なトリアゾロピリジン誘導体、および該誘導体を活性成分として含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質キナーゼは、リン酸化反応を介してリン酸基をその特異的残基に化学的に付加することにより、他のタンパク質を修飾する酵素である。ヒトゲノムは約５００のタンパク質キナーゼ遺伝子を有し、それらはヒト遺伝子全体の約２％を占める。一般に、タンパク質キナーゼは、その基質に応じて、３つの型：すなわちセリンおよび／またはスレオニン残基をリン酸化するセリン／スレオニン特異的タンパク質キナーゼ；チロシン残基をリン酸化するチロシン特異的タンパク質キナーゼ；ならびにチロシンおよびセリン／スレオニン残基をリン酸化するタンパク質キナーゼに分類され得る。タンパク質キナーゼは、様々な細胞外刺激に応えて、細胞表面から核にシグナル伝達を媒介するのに一の重要な役割を果たす。該タンパク質キナーゼは、細胞分裂、増殖、分化、アポトーシス、細胞運動性、有糸分裂誘発等を含む、数種の生理学的および病理学的細胞現象を調節し、そのために該キナーゼは多種の疾患と密接に関連付けられる。かかるキナーゼ関連疾患の例として、アトピー性皮膚炎、喘息、関節リウマチ、クローン病、乾癬、クルーゾン症候群、軟骨形成不全症および致死性異形成症などの自己免疫障害；前立腺癌、結腸直腸癌、乳癌、脳および咽頭癌癌、白血病およびリンパ腫などの癌；糖尿病；再狭窄；アテローム性動脈硬化症；腎臓および肝臓線維症；骨髄増殖性障害およびリンパ増殖性障害；および眼疾患が挙げられる。かかる疾患は、キナーゼ酵素の変異、過剰発現または異常活性化などのキナーゼ調節機構の中断により、ならびに上流または下流のシグナル伝達に影響を及ぼす成長因子またはサイトカインの産生過剰または産生不足により、直接的または間接的に惹起されることが知られている。したがって、かかる疾患はキナーゼの作用機構を選択的に阻害することで防止または治療され得ると考えられ、そのため医学および化学の分野で効果的なタンパク質キナーゼ阻害剤を発見するための様々な試みがなされてきた。
【０００３】
一方で、炎症は関節リウマチ等などの疾患の一の原因である。近年の生物治療の発見にも拘わらず、炎症を治療するのに効果的な医薬を開発する試みが継続してなされている。Ｔ細胞（またはＴリンパ球）およびＢ細胞（またはＢリンパ球）が炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性または過増殖性疾患および／または免疫介在性疾患の発症と関連して重要な役割を果たすことを支持する多くの証拠が見つかった。
【０００４】
かかるＴ細胞は、シグナルをエフェクターに転送するために、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）などの種々のキナーゼを活性化する、抗原提示細胞表面に位置するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を介してシグナルを該提示細胞から受けることにより、シグナル伝達を媒介する。この点、チロシンキナーゼとしてのＪＡＫタンパク質は、造血性サイトカインならびにインターフェロンにより活性化されてもよく、このプロセスは転写レギュレータ、ＳＴＡＴタンパク質の活性化を調節しうる。ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路の阻害（または促進）に基づく治療の可能性は、免疫修飾の分野にて効力のある医薬を提供するかもしれない。
【０００５】
ＪＡＫタンパク質の４つの型のうち、ＪＡＫ３はＴ細胞だけで発現され、ＩＬ−２によって活性化されるため、炎症と関与していると考えられる。造血活性および赤血球ホメオスタシスに関与するＪＡＫ２、または異なる型の組織で発現され得るＪＡＫ１と異なり、ＪＡＫ３は主にリンパ球で発現され、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５等を含む種々のサイトカインを用いることでシグナル伝達に極めて重要な役割を果たしており、したがってＪＡＫ３は副作用の点でより多くの注目を集めている（Flanaganら、Journal of Medicinal Chemistry、 ５３、 ８４６８、 ２０１０）。動物実験によれば、ＪＡＫ３はＢ細胞およびＴ細胞の成熟だけでなく、Ｔ細胞の機能維持にも重要な役割を果たしている。したがって、ＪＡＫ阻害剤、特にＪＡＫ３阻害剤は、自己免疫障害、例えば関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病および糖尿病性合併症、癌、喘息、甲状腺自己免疫疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、アルツハイマー病、白血病等、ならびに免疫抑制が必要とされる様々な症状、例えば同種移植の拒絶反応および異種移植の治療に有用である（Pesu M、Laurence A、Kishore Nら、Immunol. Rev, 223, 132, 2008；Kawahara A、Minami Y、Miyazaki Tら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 8724, 1995；Nosaka T、van Deursen JMA、Tripp RAら、Science, 270, 800, 1995；およびPapageorgiou AC、Wikman LEK.ら、Trends Pharm. Sci., 25, 558, 2004）。
【０００６】
一方で、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）は、Ｂ細胞の活性化ならびにシグナル伝達にて重要な役割を果たす、ＴＥＣキナーゼファミリーの一員である。１９９３年に、ＢＴＫの変異がメジャーＢ細胞免疫不全、すなわちＸ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）およびマウスＸ連鎖免疫不全（ＸＩＤ）と関連することが判明した。また、ＢＴＫがシグナル伝達経路、Ｂリンパ球の成長および分化の制御と関連する非受容体型タンパク質チロシンキナーゼ（ＮＲＰＴＫ）であることも判明した。
【０００７】
ＢＴＫは、Ｂ細胞の成長、活性化、シグナル伝達、および生存の重要なレギュレータである（Kurosaki、Curr. Op. Imm., 276-281, 2000；ならびにSchaefferおよびSchwartzberg、Curr. Op. Imm., 282-288, 2000）。さらに、ＢＴＫは、多くの他の造血細胞のシグナル伝達経路、例えばマクロファージにおけるトール様受容体（ＴＬＲ）介在性またはサイトカイン受容体介在性のＴＮＦ−α産生、肥満細胞におけるＩｇＥ受容体（ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲｉ）のシグナル伝達、Ｂ−リンパ球におけるＦａｓ／ＡＰＯ−１アポトーシス・シグナル伝達の阻害、およびコラーゲン刺激性血小板凝集にて一の役割を果たす。
【０００８】
ＢＴＫは種々の細胞外リガンドとその細胞表面にある受容体とが結合することで惹起されるシグナル伝達経路に関与する。抗原によるＢ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）のライゲーションの後に、ホスホリパーゼＣ−γ２介在性カルシウム動員を誘発するのに、タンパク質チロシンキナーゼＬｙｎおよびＳｙｋの関連作用によるＢＴＫの活性化が必要とされる（Kurosaki, T.、 Curr. Opin. Immunol., 9, 309-318, 1997）。したがって、ＢＴＫの阻害はＢ細胞介在性疾患の発症を防止するため、その阻害は有用な治療選択肢となりうる。
【０００９】
例えば、ＢＴＫ欠損マウスはコラーゲン誘発性関節炎における疾患の徴候に対して耐性であることが明らかにされており、ＢＴＫ阻害剤がマウスでのコラーゲン誘発性関節炎に対して用量依存的に効果的であることが知られている（JanssonおよびHolmdahl、Clin. Exp. Immunol., 94, 459, 1993；およびPanら、Chem. Med Chem., 2, 58, 2007）。従って、効果的なＢＴＫ阻害剤は関節リウマチの治療に有用であり得る。
【００１０】
さらには、ＢＴＫ活性化の阻害は、自己免疫疾患および／または炎症疾患および／またはアレルギー性疾患、限定されるものではないが、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、若年性関節炎、糖尿病、重症筋無力症、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、強直性脊椎炎、血管炎、炎症性腸疾患、乾癬、全身性脱毛症、突発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、重症筋無力症、アレルギー、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎および喘息の治療に有用であり得る。また、ＢＴＫが細胞のアポトーシスを調節することが分かっており、そのためにＢＴＫ活性化の阻害はＢ細胞リンパ腫を、ならびに白血病も同様に治療するのに使用され得る。
【００１１】
上記されるように、ＪＡＫ３などのヤヌスキナーゼおよびＢＴＫなどのＴＥＣキナーゼは、炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患および免疫介在性疾患の発症と密接に関連付けられるＴ細胞および／またはＢ細胞の活性化にて重要な役割を果たす。かくして、かかるキナーゼの効果的な阻害剤を開発することは、様々な炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患および免疫介在性疾患の治療用の強力な薬物を発見することに至りうる。
【００１２】
現在、ファイザー（Pfizer）が、トファシチニブ（ＣＰ−６９０５５０）（ＪＡＫ３の阻害剤）を、経口薬として開発中であり、フェーズＩＩＩ試験が進行している。ＰＣＩ−３２７６５（ファルマサイクリックス（Pharmacyclics））（ＢＴＫの阻害剤）がフェーズＩ臨床試験段階にあるが、該薬物は異なる標的を活性化し、皮膚発疹および下痢を含む有害な副作用を伴いうると報告されている。したがって、ヤヌスキナーゼおよびＴＥＣキナーゼを安全かつ効果的な方法で阻害し得る新規な薬物に関して強い要求がある。
【発明の概要】
【００１３】
したがって、異常に活性化されたリンパ球（Ｔ−リンパ球および／またはＢ−リンパ球）で主に発現されるキナーゼ（ＪＡＫ３などのヤヌスキナーゼ、ならびにＢＴＫ（ブルトンチロシンキナーゼ）、ＩＴＫ（ＩＬ−２誘発性Ｔ細胞キナーゼ）、ＢＭＸ（骨髄チロシンキナーゼ）、ＲＬＫ（静止リンパ球キナーゼ）等などのＴＥＣキナーゼを含む）を阻害する新規な化合物を提供することが本発明の目的である。
【００１４】
該化合物を含む、炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療用の医薬組成物を提供することが本発明の別の目的である。
【００１５】
該化合物を用いることを特徴とする、炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療方法を提供することが本発明のさらなる目的である。
【００１６】
炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療用の医薬の製造のための、該化合物の使用を提供することが本発明のよりさらなる目的である。
【００１７】
本発明の一の態様によれば、式（Ｉ）：
【化１】
2015506974.tif 000002
［式中、
ＸはＯ、ＮＨ、ＣＨ２、Ｓ、ＳＯまたはＳＯ２であり；
Ｙはフェニルまたはピリジルであり；
Ｚは
【化２】
2015506974.tif 000003
であり；
ｎは０〜４にある整数であり；
Ｒ１は、各々独立して、水素、Ｃ１−６アルコキシまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノメチルであり；および
Ｗは、フェニル、ピリジル、あるいは水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−６アルキルヘテロサイクリルアミノ、ジ（Ｃ１−６アルキル）アミノＣ１−６アルキル、ヘテロサイクル、ヒドロキシヘテロサイクル、Ｃ１−６アルキルヘテロサイクル、ヒドロキシＣ１−６アルキルヘテロサイクル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキルヘテロサイクル、ヘテロサイクリルカルボニル、およびヘテロサイクリルＣ１−６アルキルカルボニルからなる群より選択される１または複数の置換基で置換されるフェニルであり、ここで該ヘテロサイクルはＮ、ＯおよびＳより選択される１または複数のヘテロ原子を独立して含有する飽和した３ないし８員の単環式ヘテロ環である］
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩が提供される。
【００１８】
本発明の別の態様によれば、炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療用の医薬組成物であって、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、医薬組成物が提供される。
【００１９】
本発明のさらなる態様によれば、動物での炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療方法であって、該動物に有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含む、方法が提供される。
【００２０】
本発明のよりさらなる態様によれば、炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療用の医薬の製造のための、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩の使用が提供される。
【００２１】
本発明に係る新規なトリアゾロピリジン誘導体は、異常に活性化されたリンパ球（Ｔ−リンパ球および／またはＢ−リンパ球）で主に発現されるキナーゼ（ＪＡＫ３などのヤヌスキナーゼ、ならびにＢＴＫ、ＩＴＫ、ＢＭＸおよびＲＬＫ等などのＴＥＣキナーゼを含む）を選択的かつ効果的に阻害しうる。したがって、本発明に係るチロシンキナーゼ阻害剤としての新規なトリアゾロピリジン誘導体は、炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍などの、異常に活性化されたＴ−リンパ球またはＢ−リンパ球あるいはその両方によりもたらされる疾患の予防または治療に有用であり得る。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
式（Ｉ）にて、置換基Ｗの具体例は、Ｗ１〜Ｗ１８からなる、好ましくはＷ２、Ｗ４、Ｗ９、Ｗ１２またはＷ１７からなる群より選択され得るが、これらに限定されない。
【００２３】
【化３】
2015506974.tif 000004
【００２４】
本発明に係る化合物の例は次のとおりである：
Ｎ−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド；
Ｎ−（３−（２−（３−フルオロ−４−（１−メチルピペリジン−４−イルアミノ）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド；
Ｎ−（３−（２−（４−（（ジメチルアミノ）メチル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド；
Ｎ−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド；および
Ｎ−（３−（２−（４−（４−イソプロピルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミド。
【００２５】
本発明の式（Ｉ）の化合物は、以下の反応スキームＩに示される方法によって調製されてもよい：
【００２６】
【化４】
2015506974.tif 000005
ここで、
Ｘ、Ｙ、ＺおよびＷは上記と同意義である。
【００２７】
この反応プロセスは次の段階的反応にて説明される。
【００２８】
式（９）の化合物を、例えば、ジクロロメタン条件下で式（８）の化合物との縮合反応に供し、式（７）の縮合化合物を生成する。ついで、ヒドロキシルアミン塩酸塩およびジイソプロピルエチルアミンをメタノールとエタノールの混合溶媒などの溶媒に加え、つづいて上記にて調製した式（７）の化合物を添加し、式（６）の化合物を得る。
【００２９】
次に、式（６）の化合物を、Ｘ−Ｙ−ＮＯ２（例えば、３−フルオロニトロベンゼン）と、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドまたはＮ−メチルピロリジンなどの有機溶媒中、炭酸セシウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムなどの無機塩基の存在下、１４０〜１５０℃で攪拌しながら反応させ、ニトロ基を含有する式（５）の化合物を得る。臭化銅および臭素酸を式（５）の化合物に加え、つづいて−１０〜０℃で亜硝酸ナトリウム水溶液を滴下し、臭素基を含有する式（４）の化合物を得る。
【００３０】
上記にて調製される式（４）の化合物を、Ｗ−ＮＨ２と、１，４−ジオキサンなどの有機溶媒中、パラジウム触媒またはトリフルオロ酢酸の存在下、１００〜１１０℃で８時間攪拌しながら反応させ、Ｗ−ＮＨ２基を含有する式（３）の化合物を得る。
【００３１】
式（３）の化合物のニトロ基は、該化合物を鉄介在性還元反応に、または触媒としてパラジウム／炭素を用いる水素添加反応に付すことでアミノ基に変換され、式（２）のアニリン化合物を得てもよい。
【００３２】
その後で、式（２）の化合物を、Ｒ１で置換されている塩化アクリロイルと、ジクロロメタンまたはテトラヒドロフランなどの有機溶媒中、または５０％テトラヒドロフラン水溶液などの混合溶媒中、炭酸水素ナトリウムなどの無機塩基またはトリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの有機塩基の存在下、−１０℃〜１０℃の範囲にある低温で反応させるか；あるいは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）または２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートメタナミニウム（ＨＡＴＵ）などの結合剤をピリジン中で利用することでＲ１で置換されているアクリル酸と反応させ、アクリルアミド基を含有する式（１）の所望の化合物を得る。
【００３３】
本発明における式（Ｉ）の化合物はまた、医薬的に許容される無機または有機酸付加塩を形成してもよい。かかる塩の例が、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、マンデル酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸等などの酸より形成される酸付加塩である。
【００３４】
具体的には、本発明における医薬的に許容される塩は、式（Ｉ）の化合物を、水混和性有機溶媒、 例えば、アセトン、メタノール、エタノールまたはアセトニトリルに溶かし、つづいて有機または無機酸を加え、沈殿結晶を濾過することにより調製され得る。また、該塩は、溶媒または過剰量の酸を減圧下でその酸を添加した反応混合物より除去し、つづいて残留物を乾燥させるか、異なる有機溶媒で抽出を行い、ついで沈殿した塩を濾過することで調製されてもよい。
【００３５】
本発明における式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩は溶媒和物または水和物の形態であってもよく、かかる化合物も本発明の範囲内に含まれる。
【００３６】
本発明における式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩は、タンパク質キナーゼを選択的かつ効果的に阻害しうる。一の実施態様にて、かかる化合物は、異常に活性化されたリンパ球（Ｔ−リンパ球および／またはＢ−リンパ球）で主に発現されるキナーゼ（ヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、ＩＬ−２誘発性Ｔ細胞キナーゼ（ＩＴＫ）、静止リンパ球キナーゼ（ＲＬＫ）および骨髄チロシンキナーゼ（ＢＭＸ）を含む）を選択的かつ効果的に阻害することができ、かくして炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍などの、異常に活性化されたＢ−リンパ球、Ｔ−リンパ球あるいはその両方でもたらされる疾患の予防または治療に有用である。
【００３７】
したがって、本発明は、炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療用の医薬組成物であって、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を活性成分として含む、医薬組成物を提供する。
【００３８】
該炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、または免疫介在性疾患の例は、関節炎、関節リウマチ、脊椎関節症、痛風性関節炎、骨関節炎、若年性関節炎、他の関節炎状態、紅斑性狼瘡、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚関連性疾患、乾癬、湿疹、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、疼痛、肺障害、肺炎、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺サルコイドーシス、慢性肺炎症疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、うっ血性心不全、心臓の再灌流傷害、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性大腸症候群、喘息、シェーグレン症候群、自己免疫甲状腺疾患、蕁麻疹、多発性硬化症、強皮症、同種移植の拒絶反応、異種移植、突発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、糖尿病に伴う疾患、炎症、骨盤内炎症性疾患、アレルギー性鼻炎、アレルギー性気管支炎、アレルギー性副鼻腔炎、白血病、リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、骨髄腫、急性リンパ系白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ系白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および濾胞性リンパ腫からなる群より選択されてもよいが、これらに限定されない。
【００３９】
さらには、該癌および腫瘍の例は、肝臓癌、肝細胞癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、精巣癌、骨癌、口腔癌、基底細胞癌、卵巣癌、脳腫瘍、胆汁膀胱癌、胆管癌、頭頚部癌、膀胱癌、舌癌、食道癌、神経膠腫、神経膠芽腫、腎臓癌、悪性メラノーマ、胃癌、乳癌、肉腫、咽頭癌、子宮癌、子宮頸癌、前立腺癌、直腸癌、膵臓癌、肺癌、皮膚癌および他の充実性腫瘍からなる群より選択されてもよいが、これらに限定されない。
【００４０】
本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩は、炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、または免疫介在性疾患の治療における効力を強化するのに、他の薬物と組み合わせて使用されてもよい。
【００４１】
炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、または免疫介在性疾患を治療するのに、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩と組み合わせて用いられてもよい薬物の例は、ステロイド（プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、コルチゾン、ヒドロキシコルチゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン等）、メトトレキセート、レフルノミド、抗ＴＮＦα剤（エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ等）、カルシニュリン阻害剤（タクロリムス、ピメクロリム等）および抗ヒスタミン剤（ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、ロラタジン、エバスチン、ケトチフェン、セチリジン、レボセチリジン、フェキソフェナジン等）からなる群より選択される１または複数の薬物であるが、これらに限定されない。
【００４２】
癌または腫瘍を治療するのに、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩と組み合わせて用いられてもよい薬物の例は、細胞シグナル伝達阻害剤（グリベック、イレッサ、タルセバ等）、有糸分裂阻害剤（ビンクリスチン、ビンブラスチン等）、アルキル化剤（シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン等）、代謝拮抗剤（テガフール、メトトレキセート、ゲムシタビン等）、トポイソメラーゼ阻害剤（イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、テニポシド等）、免疫治療剤（インターフェロンα、β、γ、インターロイキン等）および抗ホルモン剤（タモキシフェン、リュープロレリン、アナストロゾール等）からなる群より選択される１または複数の薬物を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩は、活性成分として、ヒト（体重が約７０ｋｇのヒト）の場合で、一日に１ないし４回または投与計画通りに／または計画から外れて、単回用量で、または細分割された用量で、約０.１〜２０００ｍｇ／日、好ましくは１〜１０００ｍｇ／日の範囲にある有効量で経口または非経口投与されてもよい。活性成分の投与量は、治療される対象の状態、病気の型および重篤度、投与速度、医師の見解などの種々の関連する因子を考慮して調整され得る。ある場合には、上記した投与量よりも少量が適切であるかもしれない。有害な副作用が惹起されない限り、上記した投与量よりも多くの量を用いてもよく、かかる量は一日に細分割された用量で投与され得る。
【００４４】
本発明の医薬組成物は、典型的には、医薬的に許容される添加剤、担体または賦形剤を含んでもよい。本発明の医薬組成物は、従来の方法に従って処方されてもよく、錠剤、ピル、散剤、カプセル、シロップ、エマルジョン、マイクロエマルジョン等などの経口用製剤の形態にて、あるいは筋肉内、静脈内または皮下投与などの非経口用製剤の形態にて調製されてもよい。
【００４５】
経口用製剤では、セルロース、ケイ酸カルシウム、コーンデンプン、ラクトース、シュークロース、デキストロース、リン酸カルシウム、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ゼラチン、タルク、界面活性剤、沈殿防止剤、乳化剤、希釈剤等などの担体または添加剤が使用されてもよい。注射用製剤では、水、生理食塩水、グルコース溶液、グルコース溶液アナログ、アルコール、グリコール、エーテル（例えば、ポリエチレングリコール４００）、油類、脂肪酸、脂肪酸エステル、グリセリド、界面活性剤、沈殿防止剤、乳化剤等などの担体または添加剤が使用されてもよい。
【００４６】
また、本発明は、動物での炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療方法であって、該動物に有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含むことを特徴とする、方法を提供する。
【００４７】
本発明は、炎症疾患、自己免疫疾患、増殖性疾患または過増殖性疾患、免疫介在性疾患、癌あるいは腫瘍の予防または治療用医薬の製造のための、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩の使用を提供する。
【００４８】
本発明の式（Ｉ）の化合物は、キナーゼの生物現象および病理現象の研究に、キナーゼによってもたらされる細胞内シグナル伝達経路の研究に、ならびに新たなキナーゼ阻害剤との比較評価に使用されてもよい。
【００４９】
実施例
次の実施例は、本発明の好ましい実施態様を説明するのに提供されるが、本発明の範囲を限定することを意図とするものではない。
【００５０】
実施例１：Ｎ−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミドの調製
【化５】
2015506974.tif 000006
【００５１】
工程１）Ｎ−（３−ヒドロキシ−２−ピリジニル）−Ｎ’−カルボエトキシ−チオウレアの調製
【化６】
2015506974.tif 000007
【００５２】
ジクロロメタン（１００ｍＬ）を２−アミノ−３−ヒドロキシピリジン（１０.０ｇ、０.０９１モル）に添加した。反応溶液を０℃に冷却し、そこにエトキシカルボニルイソチオシアネート（１１.３ｍＬ、０.１モル）を滴下して加えた。該混合物の温度を室温にまで上げ、該混合物を１２時間攪拌した。形成した固体を０℃に冷却し、２０ｍＬのジクロロメタンで洗浄し、減圧下で濾過した。こうして得られた固体を減圧下で乾燥させ、表題化合物（８.４ｇ、収率：３８％）を得た。
【００５３】
工程２）２−アミノ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−オールの調製
【化７】
2015506974.tif 000008
【００５４】
エタノール：メタノール（１：１）の混合溶媒（３０ｍＬ）をヒドロキシルアミン塩酸塩（４.６ｇ、０.０６６モル）に室温で添加した。ジイソプロピルエチルアミン（１１.６ｍＬ、０.０６６モル）を該混合物に加え、つづいて１時間攪拌した。工程１で得られた化合物（８.４ｇ、０.０３５モル）を該反応溶液に加え、つづいて８０℃以上で２時間還流した。該反応溶液を０℃に冷却し、１時間攪拌し、形成した固体を蒸留水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濾過した。こうして得られた固体を減圧下で乾燥させ、表題化合物（３.２ｇ、収率：５４％）を得た。
【００５５】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ５.８０（ｓ，２Ｈ）、６.６８（ｍ，２Ｈ）、８.０１（ｄ，１Ｈ）
【００５６】
工程３）８−（３−ニトロフェノキシ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミンの調製
【化８】
2015506974.tif 000009
【００５７】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）を工程２で得られた化合物（３.２ｇ、０.０２１モル）に加えた。３−フルオロニトロベンゼン（２.７ｍＬ、０.０２６モル）および炭酸セシウム（１３.９ｇ、０.０４３ モル）を該反応溶液に添加した。得られた混合物を１５０℃で６時間攪拌し、ついでジクロロメタン、蒸留水および塩化アンモニウム水溶液で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸留させた。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝６０：１（ｖ：ｖ））で分離し、表題化合物（１.７ｇ、収率：３０％）を得た。
【００５８】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ６.１４（ｓ，２Ｈ）、６.９４（ｔ，１Ｈ）、７.３５（ｄ，２Ｈ），７.４７（ｍ，１Ｈ）、７.６４（ｍ，２Ｈ）、７.９６（ｄ，１Ｈ）、８.５２（ｄ，１Ｈ）
【００５９】
工程４）２−ブロモ−８−（３−ニトロフェノキシ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジンの調製
【化９】
2015506974.tif 000010
【００６０】
臭素酸（１７ｍＬ、４７〜４９％）を工程３で得られた化合物（１.７ｇ、０.００６モル）および臭化銅（０.４２ｇ、０.００２モル）の混合物に加えた。反応溶液を０℃に冷却し、亜硝酸ナトリウム（０.５２ｇ、０.００８モル）を蒸留水（３.５ｍＬ）に溶かして調製した溶液をその中にゆっくりと滴下した。該反応溶液を室温で１５時間攪拌し、ついでジクロロメタン、蒸留水および塩化アンモニウム水溶液で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸留させた。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝４０：１（ｖ：ｖ））で分離し、表題化合物（１.８ｇ、収率：８６％）を得た。
【００６１】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７.１０（ｍ，２Ｈ）、７.４８（ｍ，１Ｈ）、７.６０（ｔ，１Ｈ）、７.９０（ｍ，１Ｈ）、８.０６（ｄｄ，１Ｈ）、８.４３（ｄｄ，１Ｈ）
【００６２】
工程５）Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル−８−（３−ニトロフェノキシ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミンの調製
【化１０】
2015506974.tif 000011
【００６３】
１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）を、工程４で得られた化合物（１.８ｇ、０.００５モル）および４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（１.０３ｇ、０.００５モル）の混合物に加えた。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０.４９ｇ、０.００１モル）および２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（０.３３ｇ、０.００１モル）を該混合物に加え、つづいて室温で５分間攪拌した。炭酸セシウム（３.５ｇ、０.０１１モル）を該反応混合物に加え、つづいて１００℃で８時間攪拌した。反応混合液を室温に冷却し、セライトフィルターを介して濾過し、濾液をジクロロメタンで希釈し、水で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸留させた。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１（ｖ：ｖ））で分離し、表題化合物（０.９１ｇ、収率：３８％）を得た。
【００６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ２.３１（ｓ，３Ｈ）、２.６２（ｍ，４Ｈ）、３.１０（ｍ，４Ｈ）、６.９７（ｍ，３Ｈ）、７.２３（ｄ，１Ｈ）、７.４４（ｍ，３Ｈ）、７.５８（ｔ，１Ｈ）、７.８５（ｍ，１Ｈ）、８.００（ｍ，１Ｈ）、８.４１（ｄ，１Ｈ）
【００６５】
工程６）８−（３−アミノフェノキシ）−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミンの調製
【化１１】
2015506974.tif 000012
【００６６】
鉄（０.５７ｇ、０.０１０モル）および１２Ｎ塩酸水溶液（６８μＬ、０.００１モル）を５０％エタノール水溶液中に希釈し、つづいて１００℃で１時間攪拌した。工程５で得られた化合物を（０.９１ｇ、０.００２モル）を５０％エタノール水溶液（１０ｍＬ）に溶かし、活性鉄を含有する反応フラスコに加え、つづいて１００℃で１時間攪拌した。反応混合液を鉄を除去するのにセライトフィルターを介して濾過し、濾液を減圧下で蒸留させた。残渣をジクロロメタンで希釈し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸留させた。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１（ｖ：ｖ））で分離し、表題化合物（０.７６ｇ、収率：９０％）を得た。
【００６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ２.２１（ｓ，３Ｈ）、２.４４（ｍ，４Ｈ）、３.０２（ｍ，４Ｈ）、５.２２（ｓ，２Ｈ）、６.１８（ｍ，２Ｈ）、６.３２（ｍ，１Ｈ）、６.９９（ｍ，４Ｈ）、７.１２（ｄ，１Ｈ）、７.５２（ｄ，２Ｈ）、８.５７（ｄ，１Ｈ）、９.３８（ｓ，１Ｈ）
【００６８】
工程７）Ｎ−（３−（（２−（（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）アミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イル）オキシ）フェニル）アクリルアミドの調製
【００６９】
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）および蒸留水（２ｍＬ）を工程６で得られた化合物（０.７６ｇ、０.００２モル）および炭酸水素ナトリウム（０.４６ｇ、０.００６モル）に添加した。塩化アクリロイル（０.１８ｍＬ、０.００２モル）を該反応溶液に０℃でゆっくりと滴下し、つづいて室温で２時間攪拌した。反応混合液をジクロロメタンで希釈し、ついで炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸留させた。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１（ｖ：ｖ））で分離し、表題化合物（０.３４ｇ、収率：４０％）を得た。
【００７０】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ２.２２（ｓ，３Ｈ）、２.５０（ｍ，４Ｈ）、３.０３（ｍ，４Ｈ）、５.７３（ｄｄ，１Ｈ）、６.２３（ｄｄ，１Ｈ）、６.３３（ｍ，１Ｈ）、６.８９（ｍ，４Ｈ）、７.３８（ｍ，５Ｈ）、８.６５（ｄ，１Ｈ）、９.４０（ｓ，１Ｈ）、１０.１９（ｓ，１Ｈ）
【００７１】
実施例２：Ｎ−（３−（２−（３−フルオロ−４−（１−メチルピペリジン−４−イルアミノ）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミドの調製
【化１２】
2015506974.tif 000013
【００７２】
実施例１の工程４で得られた化合物（０.２１ｇ、約０.００１モル）および２−フルオロ−Ｎ’−（１−メチルピペリジン−４−イル）ベンゼン−１，４−ジアミン（０.１４ｇ、０.００１モル）を用いることを除けば、実施例１の工程５、６および７の操作をその順序通りに繰り返し、表題化合物（０.１ｇ、収率：３２％）を得た。
【００７３】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.４３（ｍ，１Ｈ）、１.８２（ｍ，２Ｈ）、１.９５（ｍ，２Ｈ）、２.１５（ｓ，３Ｈ）、２.７２（ｍ，２Ｈ）、３.１３（ｍ，１Ｈ）、４.５３（ｄ，１Ｈ）、５.７３（ｄｄ，１Ｈ）、６.２４（ｄｄ，１Ｈ）、６.３５（ｄｄ，１Ｈ）、６.７９（ｍ，２Ｈ）、６.９９（ｔ，１Ｈ）、７.１２（ｄｄ，１Ｈ）、７.４０（ｍ，５Ｈ）、８.６６（ｄ，１Ｈ）、９.４５（ｓ，１Ｈ）、１０.２２（ｓ，１Ｈ）
【００７４】
実施例３：Ｎ−（３−（２−（４−（（ジメチルアミノ）メチル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミドの調製
【化１３】
2015506974.tif 000014
【００７５】
実施例１の工程４で得られた化合物（０.４５ｇ、０.００１モル）および４−（（ジメチルアミノ）メチル）アニリン（０.２ｇ、０.００１モル）を用いることを除けば、実施例１の工程５、６および７の操作をその順序通りに繰り返し、表題化合物（０.１１ｇ、収率：２３％）を得た。
【００７６】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ２.１０（ｓ，６Ｈ）、３.２８（ｓ，２Ｈ）、５.７３（ｄｄ，１Ｈ）、６.２４（ｄｄ，１Ｈ）、６.３３（ｄｄ，１Ｈ）、６.８０（ｄｄ，１Ｈ）、７.００（ｔ，１Ｈ）、７.１５（ｍ，２Ｈ）、７.３２（ｍ，４Ｈ）、７.５６（ｄ，２Ｈ）、８.６９（ｄ，１Ｈ）、９.７０（ｓ，１Ｈ）、１０.２２（ｓ，１Ｈ）
【００７７】
実施例４：Ｎ−（３−（２−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミドの調製
【化１４】
2015506974.tif 000015
【００７８】
実施例１の工程４で得られた化合物（０.３５ｇ、０.００１モル）および（４−アミノフェニル）（４−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（０.２３ｇ、０.００１モル）を用いることを除けば、実施例１の工程５、６および７の操作をその順序通りに繰り返し、表題化合物（０.１３ｇ、収率：２５％）を得た。
【００７９】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ２.１９（ｓ，３Ｈ）、２.３０（ｍ，４Ｈ）、３.４８（ｍ，４Ｈ）、５.７４（ｄｄ，１Ｈ）、６.２２（ｄｄ，１Ｈ）、６.３７（ｄｄ，１Ｈ）、６.８０（ｄ，１Ｈ）、７.０４（ｔ，１Ｈ）、７.３２（ｍ，４Ｈ）、７.４１（ｍ，２Ｈ）、７.６６（ｄ，２Ｈ）、８.７１（ｄ，１Ｈ）、１０.２１（ｓ，１Ｈ）、１０.２９（ｓ，１Ｈ）
【００８０】
実施例５：Ｎ−（３−（２−（４−（４−イソプロピルピペラジン−１−イル）フェニルアミノ）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−８−イルオキシ）フェニル）アクリルアミドの調製
【化１５】
2015506974.tif 000016
【００８１】
実施例１の工程４で得られた化合物（０.３７ｇ、０.００１モル）および４−（４−イソプロピルピペラジン）（０.２４ｇ、０.００１モル）を用いることを除けば、実施例１の工程５、６および７の操作をその順序通りに繰り返し、表題化合物（０.１５ｇ、収率：２７％）を得た。
【００８２】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.０２（ｄ，６Ｈ）、２.５０（ｓ，３Ｈ）、２.６０（ｍ，４Ｈ）、３.０２（ｍ，４Ｈ）、３.４０（ｍ，１Ｈ）、５.７３（ｄｄ，１Ｈ）、６.２３（ｄｄ，１Ｈ）、６.３３（ｍ，１Ｈ）、６.８９（ｍ，４Ｈ）、７.３８（ｍ，５Ｈ）、８.６４（ｄ，１Ｈ）、９.４１（ｓ，１Ｈ）、１０.１９（ｓ，１Ｈ）
【００８３】
調製例１：錠剤の調製
従来の方法に従って、実施例１〜５で得られた式（Ｉ）の化合物の各々を活性成分として含む経口投与用の単一錠を、表１に示される組成および配合量に基づいて調製した。
【００８４】
【表１】
2015506974.tif 000017
【００８５】
調製例２：カプセルの調製
従来の方法に従って、実施例１〜５で得られた式（Ｉ）の化合物の各々を活性成分として含む経口投与用のハードゼラチンカプセルを、表２に示される組成および配合量に基づいて調製した。
【００８６】
【表２】
2015506974.tif 000018
【００８７】
調製例３：注射用製剤の調製
従来の方法に従って、実施例１〜５で得られた式（Ｉ）の化合物の各々を活性成分として含む注射用製剤を、表３に示される組成および配合量に基づいて調製した；ここで、式（Ｉ）の化合物の塩が用いられた場合、ｐＨ値は調整されなかった。
【００８８】
【表３】
2015506974.tif 000019
【００８９】
調製例４：注射用製剤の調製
従来の方法に従って、実施例１〜５で得られた式（Ｉ）の化合物の各々を活性成分として含む注射用製剤を、表４に示される組成および配合量に基づいて調製した。
【００９０】
【表４】
2015506974.tif 000020
【００９１】
試験例１：ＪＡＫ３およびＢＴＫ阻害活性の評価
実施例１〜５で調製した化合物をＪＡＫ３およびＢＴＫキナーゼ阻害活性について試験した。キナーゼ阻害活性をＺ−Ｌｙｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（インビトロジェン社（Invitrogen））を用いて測定し、ＪＡＫ３およびＢＴＫ酵素はインビトロジェン社より購入した（ＰＶ３８５５、ＰＶ３１９０）。
【００９２】
詳細には、実施例１〜５の化合物を４％ＤＭＳＯ水溶液で希釈し、濃度が１〜０．０００１μＭの範囲にある溶液を得た。各キナーゼを１〜１０ｎｇ／アッセイに希釈し、Ｋｄの概算値を計算することでＡＴＰを希釈してキナーゼバッファー（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４；１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２；１ｍＭ  ＥＧＴＡ；および０．０１％ＢＲＩＪ−３５）を形成させた。アッセイを３８４ウェルのポリスチレン製平底プレートで行った。適当な濃度のペプチド基質、キナーゼ混合溶液（１０μＬ）およびＡＴＰ溶液（濃度：５〜３００μＭ；５μＬ）を化合物の希釈溶液（５μＬ）に加え、混合器中、室温で６０分間反応させた。６０分後、ペプチド基質を蛍光標識させるために、蛍光標識試薬（１０μＬ）を各混合物に加え、つづいて仕上げの溶液を添加し、反応を終わらせた。蛍光レベルをモレキュラー・デバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を用いて４００ｎｍ（励起フィルター）および５２０ｎｍ（発光フィルター）で測定した。化合物のキナーゼ阻害活性を、該キットの参考となるプロトコルに従って、対照群（スタウロスポリンまたは各キナーゼ阻害剤）に対して０〜１００％の間にあるリン酸化率で算定し、阻害パーセントを決定し、濃度（ｘ軸）に対してプロットし、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を算定した。ＩＣ５０の算定および解析はマイクロソフトエクセル（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ）を用いて行われた。結果を表５に示す。
【００９３】
表５中、ＡはＩＣ５０＜１００ｎＭを意味し：ＢはＩＣ５０＝１００〜５００ｎＭを意味し；ＣはＩＣ５０＝５００〜１０００ｎＭを意味し；およびＤはＩＣ５０＞１０００ｎＭを意味する。
【００９４】
【表５】
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【国際調査報告】
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