(57)【要約】  本発明は、脱毛症を治療するための医薬組成物であって、前記組成物が、フィナステリド、添加剤、および医薬品として許容される担体を含有するポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルを含む医薬組成物、ならびに脱毛症を治療するための前記組成物を調製するためのナノ粒子の使用を提供することを目標にする。本発明はさらに、脱毛症の治療用の局所施用のための組成物に適した、適切なフィナステリドナノカプセルの調製方法を含む。【選択図】  図１
2015526483.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性成分フィナステリドを含むポリマーナノ粒子であって、前記ナノ粒子が有機相および水相を調製することによって形成され：
（ａ）前記有機相は：（ｉ）疎水性ポリマー、（ｉｉ）油または油の混合物、（ｉｉｉ）少なくとも１種の親油性低ＨＬＢ界面活性剤、（ｉｖ）有機溶媒、および（ｖ）フィナステリドを含み；かつ
（ｉｉ）前記水相は：（ｖｉ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、および（ｖｉｉ）水を含む、
ポリマーナノ粒子。
【請求項２】
ナノカプセルの形をとる、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項３】
前記疎水性ポリマーが、ビニルポリマー、ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、アクリルポリマーおよびポリカーボネートからなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項４】
前記疎水性ポリマーが、１２０℃未満の融点を有するポリエステルの群からの生分解性ポリマーである、請求項３に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項５】
１２０℃未満の融点を有するポリエステルの群からの前記疎水性生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）のコポリマー、ポリカプロラクトン、およびポリカプロラクトンとポリエステル、ポリアミド、ポリウレタンまたはビニルポリマーとのコポリマーからなる群から選択される、請求項４に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項６】
前記ポリカプロラクトンがポリ（ε−カプロラクトン）である、請求項５に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項７】
前記油が、中鎖トリグリセリド、キャノーラ油、大豆油、オリーブ油、米ぬか油、ブドウ種子油、魚油、アマニ油、精油、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項８】
前記中鎖トリグリセリドが、カプリンおよびカプリル酸のトリグリセリド、プロピレングリコールジカプリル／カプレート、オレイルマクロゴールグリセリド、ラウレル、リナロール、およびこれらの混合物の群から選択される、請求項７に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項９】
前記精油が、リナロール、ファルネソール、およびこれらの混合物の群から選択される、請求項７に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１０】
前記油が、カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドである、請求項７に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１１】
前記油の混合物が、カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリド、ならびにリナロールとファルネソールとの混合物である、請求項７に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１２】
前記親油性界面活性剤が、３〜６の範囲の低ＨＬＢ値を有し、モノステアリン酸ソルビタン、ジステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、カプリルカプリル酸マクロゴールグリセリド、ラウリン酸プロピレングリコール、カプリル酸プロピレングリコール、モノステアリン酸グリセリル、オレイン酸ポリグリセリル、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１３】
前記親油性低ＨＬＢ界面活性剤がモノステアリン酸ソルビタンである、請求項１２に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１４】
前記有機溶媒が、水との分子間相互作用の物理化学的性質を有する溶媒であり、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジオキサン、炭酸プロピレン、ジエチルエーテル、有機ハロゲン化物、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、メチルエチルケトン、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１５】
前記有機溶媒がアセトンである、請求項１４に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１６】
前記親水性界面活性剤が、ポリオキシ化ポリマー、イオン性界面活性剤、および中性界面活性剤からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１７】
前記親水性界面活性剤が、ポリソルベート２０、６０または８０、ステアリン酸マクロゴール、マクロゴールセトステアリルエーテル、マクロゴールラウリルエーテル、マクロゴールオレイルエーテル、オレイン酸マクロゴール、ポリオキシルヒマシ油、ポリオキシ水素化ヒマシ油、およびこれらの混合物からなる群から選択された中性界面活性剤である、請求項１６に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１８】
前記中性親水性界面活性剤がポリソルベート８０である、請求項１７に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１９】
請求項１〜１８の何れか１項に定義されたポリマーナノ粒子の水性懸濁液であって、前記懸濁液が：
（ｉ）（ａ）フィナステリド０．００１％〜８０．０％（ｗ／ｗ）、（ｂ）疎水性ポリマー０．０１％〜３０．０％（ｗ／ｗ）、（ｃ）油または油の混合物０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、（ｄ）好ましくは固体の、少なくとも１種の親油性低ＨＬＢ界面活性剤を０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および（ｅ）有機溶媒１０％〜８０％（ｗ／ｗ）を含む有機相と；
（ｉｉ）（ｆ）少なくとも１種の親水性界面活性剤０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）、および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）を含む水相と
を含む、水性懸濁液。
【請求項２０】
前記懸濁液が：
（ｉ）（ａ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）ポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）中鎖トリグリセリド０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）モノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）アセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）を含む有機相と；
（ｉｉ）（ｆ）ポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）を含む水相と
を含む、請求項１９に記載のポリマーナノ粒子の水性懸濁液。
【請求項２１】
前記懸濁液が：
（ｉ）（ａ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）ポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドを含む油とリナロールおよびファルネソール（Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９）との混合物０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）モノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）アセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）を含む有機相と；
（ｉｉ）（ｆ）ポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）を含む水相と
を含む、請求項１９に記載のポリマーナノ粒子の水性懸液。
【請求項２２】
（Ａ）請求項１〜１８の何れかで定義されたポリマーナノ粒子であり、前記ナノカプセルが、（ａ）フィナステリド０．０１％〜２．５％（ｗ／ｗ）；（ｂ）疎水性ポリマー、好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）０．１％〜１０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）油および／または油の混合物、好ましくは、中鎖トリグリセリド、および／または中鎖トリグリセリドとＵｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９との混合物０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤、好ましくはモノステアリン酸ソルビタン０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｅ）親水性界面活性剤、好ましくはポリソルベート８０の０．００１％〜１０％（ｗ／ｗ）を含む、ポリマーナノ粒子と；
（Ｂ）医薬品として許容される担体とを含み、前記ナノカプセルの構成成分の量は、最終製剤中のパーセンテージで表されており、前記ナノカプセルが、前記医薬品として許容される賦形剤中に分散されている、脱毛症を治療するための医薬組成物。
【請求項２３】
フィナステリド０．０１〜１．０％を含有する、医薬品として許容される賦形剤中に分散されたナノカプセルを含む、請求項２０または２１に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
局所投与用であり、溶液、ゲルまたはローションの形をとる、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
分散剤、界面活性剤、湿潤剤、皮膚軟化薬、増粘剤、金属イオン封鎖剤、保存剤、酸化防止剤および香料などの群から選択された添加剤をさらに含む、請求項２２、２３または２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１〜１８の何れかに定義されたポリマーナノ粒子を調製するための方法であって、前記方法が：
（ｉ）疎水性ポリマーおよびフィナステリド、不揮発性油または油の混合物、少なくとも１種の低ＨＬＢ界面活性剤を、有機溶媒に溶解することによって、有機相を調製する工程；
（ｉｉ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、好ましくは中性の親水性界面活性剤を、水に混合することによって、水相を調製する工程；
（ｉｉｉ）前記有機相を前記水相に注入して、前記２相の界面でナノ粒子の１次エマルジョンを形成させる工程であり、前記混合物が、前記活性成分の適切なカプセル封入を行うのに十分な時間にわたり、撹拌した状態で維持される工程；
（ｉｖ）少なくとも１種の有機溶媒を除去し、前記ナノカプセルを含有する水相を回収する工程
を含む方法。
【請求項２７】
前記疎水性ポリマーが、ビニルポリマー、ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、アクリルポリマーおよびポリカーボネートからなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ポリエステルが、１２０℃未満の融点を有し、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）のコポリマー、ポリカプロラクトン、ポリカプロラクトンとポリエステル、ポリアミド、ポリウレタンまたはビニルポリマーとのコポリマーからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記フィナステリドナノカプセルが、予め形成されたポリマーの界面堆積方法により得られ、第１の工程では、フィナステリド、前記疎水性ポリマー、前記不揮発性油または油の混合物、および少なくとも１種の低ＨＬＢ界面活性剤を有機溶媒に溶解して、有機相を形成し；第２の工程では、少なくとも１種の親水性界面活性剤を水に混合して水相を形成する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
脱毛症の治療用の医薬組成物を調製するための、請求項１〜１８の何れか１項に定義されたナノカプセルの使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、脱毛症の治療に向けた局所施用のための医薬組成物であって、ポリマーナノ粒子、好ましくはフィナステリドを含有するナノカプセル、添加剤、および医薬品として許容される担体を含む前記組成物、ならびに脱毛症の治療に向けた前記組成物を調製するためのナノ粒子の使用に関する。本発明はさらに、脱毛症の治療に適した局所施用組成物に適切な、フィナステリドナノカプセルを調製するための方法を含む。
【発明の原理】
【０００２】
脱毛症とも呼ばれる抜け毛は、多くの形で現れる可能性がある。これは毛包の破壊がある瘢痕性脱毛症として分類される場合には不可逆的になる可能性があり；またはいくつかの原因があり、かつ薬理学的治療、食事、生理学的もしくは心理学的ストレス、真菌感染、化学療法、もしくは遺伝に由来する可能性がある非瘢痕性の場合には、可逆的になる可能性がある。この理由で、いくつかの薬理学的および非薬理学的治療（移植およびレーザー施用）が、この状況を覆そうとする際に使用されている。
【０００３】
キャピラリー療法では、薬物に所望の作用を発揮させるために、薬物は、毛包へ必要物を供給する毛細血管に浸透することなく（全身作用を回避する）、疾患を誘引させる原因となる酵素が見出される毛包（表皮中）に到達する必要がある。このように、製剤を有効にするには、薬物の作用部位で薬物の浸透および滞留を促進させることができるようにする必要がある（ＤＲＡＫＥ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｆｉｎａｓｔｅｉｒｄｅ  ｏｎ  ｓｃａｌｐ  ｓｋｉｎ  ａｎｄ  ｓｅｒｕｍ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ．”  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１９９９，ｖｏｌ．４１，ｎｏ．４，ｐ．５５０−５５４）。
【０００４】
アンドロゲン性脱毛症は、発育時相が短い連続キャピラリー周期を経た成熟毛包（硬毛）から未成熟毛包（軟毛）への変質である。このように、毛幹の成長および発育の時間の短縮により、毛幹は次第に短くなり、細くなり、しばしば色がなくなる（ＩＮＵＩ，Ｓ．；ＩＴＡＭＩ，Ｓ．；“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ：Ｆｒｏｍ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｔｏ  ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｅｒｍａｌ  ｐａｐｉｌｌａ．”  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１，ｖｏｌ．６１，ｐ．１−６）。これは最も一般的なタイプの脱毛症であり、主に、様々な要因の中でも性ホルモンの調節に関連して男性で発症する。アンドロゲン性脱毛症のより深い理解は、アンドロゲンの影響下で生じる毛包の遺伝的素因に結び付いたプロセスとして、抜け毛のパターンおよび生理について記述したＨａｍｉｌｔｏｎ（１９４２）の研究に由来した（Ｔｒｕｅｂ，ＲＭ；“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ．”  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ，２００２  ｖ．３７，ｎｏ．８−９，ｐ．９８１−９９０）。しかし、アンドロゲン性脱毛症と、テストステロンレベル、遊離テストステロンおよび生体内利用テストステロンとの間に相関関係はない。禿頭症の病原的機序は、毛包における細胞内シグナル伝達を通して媒介される可能性がある（ＩＮＵＩ，Ｓ．；ＩＴＡＭＩ，Ｓ．；“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ：Ｆｒｏｍ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｔｏ  ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｅｒｍａｌ  ｐａｐｉｌｌａ．”  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１，ｖｏｌ．６１，ｐ．１−６）。
【０００５】
５α−レダクターゼ酵素の作用を経て、テストステロンは、より強力なホルモンであるジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）に変換される。その作用は、下記の２つの主な理由でテストステロンの場合よりも大きいと考えられる：（ｉ）ＤＨＴは、その純粋にアンドロゲン様の活性のみを維持した状態で、アロマターゼによってエストロゲンに変換されることができず、（ｉｉ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究は、ＤＨＴが、テストステロンよりもアンドロゲン受容体に、より高い親和性で結合することを実証している（ＬＩＵ，Ｓ．；ＹＡＭＡＵＣＨＩ，Ｈ．；“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ５α−ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｄｅｒｍａｌ  ｐａｐｉｌｌａ  ｃｅｌｌｓ．”  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００８，３６８  ｐ．８５８−８６４）。これらのアンドロゲンホルモンの作用は、細胞内アンドロゲン受容体に結合する目的で細胞膜を経てこれらのホルモンを播種することによって、生じる。この結合の結果、ホルモン−受容体複合体は立体構造変化を受け、したがって複合体がＤＮＡのプロモーター部位に結合し、遺伝的応答を転写するメッセンジャーＲＮＡの産生を誘引する（ＩＮＵＩ，Ｓ．；ＩＴＡＭＩ，Ｓ．；“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ：Ｆｒｏｍ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｔｏ  ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｅｒｍａｌ  ｐａｐｉｌｌａ．”  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１，ｖｏｌ．６１，ｐ．１−６）。ＤＨＴと、毛包内に存在するアンドロゲン受容体との結合により、応答は、育毛周期の成長期において低減し、したがって毛髪は初期休止期に移行する（Ｅｌｌｉｓ，ＪＡ；Ｈａｒｒａｐ，ＳＢ；“Ｔｈｅ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ．”  Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２００１，ｖｏｌ．１９，ｐ．１４９−１５４）。
【０００６】
アンドロゲン性脱毛症は抜け毛のパターンを呈示し、診断を容易にし、その他のタイプと容易に区別される。既定では、毛幹の初期の損失が前頭部または頭頂部にのみ生じ、その他の領域へと拡がる可能性がある。脱毛症の程度は、Ｎｏｒｗｏｏｄ−Ｈａｍｉｌｔｏｎスケールにより決定することができる。このスケールは、抜け毛パターンの３つのタイプ：頭頂部パターン（毛幹の損失が後部から始まる）、前頭部パターン（毛幹の損失が前部から始まる）、および通常パターン（前部と後部の両方で損失が開始される）を特定し、全てのパターンは、抜け毛が７段階に分けられる（Ｓｉｎｃｌａｉｒ，ＲＤ；“Ｍａｌｅ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ．”  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎ’ｓ  Ｈｅａｌｔｈ  ＆  Ｇｅｎｄｅｒ，２００４  ｖ．１，ｎｏ．４，ｐ．３１９−３２７）。
【０００７】
現在、脱毛症の治療は、局所と全身の両方とすることができる。ＡＮＶＩＳＡ（ブラジル）により認可された薬物の中から、以下のものを挙げることができる：（ｉ）全身用としては、ＤＨＴホルモンの遮断薬として作用する、商品名Ｐｒｏｐｅｃｉａ（登録商標）で販売される経口使用のための、フィナステリド（１ｍｇ）で作製された薬品と；（ｉｉ）局所用としては：（ａ）２％（女性用）および５％（男性用）の、商品名Ｒｅｇａｉｎ（登録商標）／Ｒｏｇａｉｎ（登録商標）ムースで販売される、ミノキシジル基剤を有する薬物、ならびに（ｂ）０．０２５％溶液の形をとる、商品名Ａｖｉｃｉｓ（登録商標）で販売される、αエストラジオールをベースにした薬物。
【０００８】
活性成分（フィナステリド）は、その物理化学的および生物学／生理学的性質からもたらされる、安定性、生体内利用性および製剤に関するいくつかの問題を提示する。活性成分の負の特性を解決しまたは低減させるため、「成分を分解から保護し」または「成分の溶解度を増大させる」代替物について研究した。
【０００９】
新しい薬物送達系の開発は、薬物動態的および薬力学的な側面を変化させることによって、その療法上の効力および使用の安全性の増強を狙った改善を目標としてきた。コロイド状薬物送達系の中に、ポリマーナノ粒子およびリポソームがある（Ａｖｎｅｓｈ  Ｋｕｍａｒｉ，Ｓｕｄｅｓｈ  Ｋｕｍａｒ  Ｙａｄａｖ，Ｓｕｂｈａｓｈ  Ｃ．Ｙａｄａｖ，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｂａｓｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ  Ｂ：Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ，Ｖｏｌｕｍｅ  ７５，Ｉｓｓｕｅ  １，Ｊａｎｕａｒｙ  １，２０１０，Ｐａｇｅｓ  １−１８；Ｖｌａｄｉｍｉｒ  Ｐ．Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，ＲＥＣＥＮＴ  ＡＤＶＡＮＣＥＳ  ＷＩＴＨ  ＬＩＰＯＳＯＭＥＳ  ＡＳ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＣＡＲＲＩＥＲＳ，ＮＡＴＵＲＥ  ＲＥＶＩＥＷＳ，ＶＯＬＵＭＥ  ４，ＦＥＢＲＵＡＲＹ  ２００５，ｐ  １４５）。それらの療法上の潜在性と、貯蔵中および体液との接触時での改善された安定性とにより、生分解性ポリマーにより形成されたポリマーナノ粒子は、リポソームに比べて研究者らの高い関心を集めてきた（ＳＣＨＡＦＦＡＺＩＣＫ，ＳＨ，ｅｔ  ａｌ．；“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．”  Ｎｅｗ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，Ｖｏｌ．２６，ｎｏ．５，ｐ．７２６−７３７）。
【００１０】
ポリマーナノ粒子は、直径が１０乃至１０００ｎｍでありかつそれらの超分子構成に応じて小胞または基質に分けられる、コロイド状薬物担体系である。ナノカプセル（小胞性）は、ポリマー基質に囲まれた油状コアを有し、薬物をコア内に分散させかつ／またはポリマー壁に吸着させる。ナノ球体（基質）は油状コアを持たず、ポリマー構造のみであり、したがって薬物はポリマー基質に吸着されていてもよくまたはポリマー基質内に保持されていてもよい。生分解性ポリマーで作製されたナノ粒子は、潜在的により療法に適しておりかつ生体液中および貯蔵中において高い安定性を有するので、好ましいものである（ＳＣＨＡＦＦＡＺＩＣＫ，ＳＨ，ｅｔ  ａｌ．；“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．”  Ｎｅｗ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，Ｖｏｌ．２６，ｎｏ．５，ｐ．７２６−７３７）。
【００１１】
これらのナノ粒子系を調製するために、種々の物理化学的プロセス、たとえば：（ｉ）予め形成されたポリマーの界面堆積、（ｂ）塩析、および（ｃ）乳化拡散を用いてもよい。ナノカプセル調製のための主な技法の中では、Ｆｅｓｓｉらにより１９８９年に提示された、予め形成されたポリマーの界面堆積が抜きん出ており（ＦＥＳＳＩ，Ｈ．；ｅｔ  ａｌ；“Ｎａｎｏｃａｐｓｕｌｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ．”  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１９８９，ｖｏｌ．５５，ｎｏ．１，ｐ．Ｒ１−Ｒ４）、この技法においては、ポリマーを、油状構成成分と一緒に有機溶媒に溶解し、親油性界面活性剤および薬物または活性成分をカプセル封入する。この有機／油状相を、穏やかな撹拌の下で、水および親水性界面活性剤から構成された水相上に注入する。この混合物は、平均直径が２００乃至５００ｎｍのナノカプセルを自然発生的にもたらす。最後に、有機溶媒および過剰な水を除去する。
【００１２】
脱毛症の治療のために入手可能なほとんどの局所用生成物は、水−アルコール溶液に溶解した活性成分と共に処方される。しかし、ケラチン層内でのいくつかの薬物の低浸透性により、施用された用量の一部しか作用部位に到達せず、それが細孔および毛包に浸透する（ＴＳＵＪＩＭＯＴＯ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．；“Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｈａｉｒ  ｇｒｏｗｉｎｇ  ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ＰＬＧＡ  ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ  ｔｏ  ｈａｉｒ  ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｈａｉｒ  ｇｒｏｗｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ．”  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００７，ｖｏｌ．１７，ｐ．４７７１−４７７７）。その結果、これらの生成物を使用した育毛は、消費者の期待を超えることがなく、治療への固執の欠如をもたらす。最近の研究は、ナノ粒子が毛包に効果的に浸透し（Ｌａｄｅｍａｎｎ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．；“Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ−Ａｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｈａｉｒ  ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ．”  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２００７，ｖｏｌ．６６，ｎｏ．２，ｐ．１５９−１６４）、深い機能的構造に到達してそこで数日間貯蔵されたままにすることができるという仮説について確認した。非粒状物質の場合、そのような長期的な作用は、毛包内でまたは角質層内で観察されなかった。原則として、角質層は、局所的に施用される物質のリザーバー特性に欠けるが、それはこれらの物質が皮膚の表面または上方細胞層（これらは剥皮によって継続的に除去される）内に局在化されたままであるからである。したがって毛包は、長期間、局所使用の非粒状物質の唯一のリザーバーになる。これらの観察内容は、毛包が、毛細血管および樹状細胞（ランゲルハンス細胞）の稠密な網状構造により囲まれるので、薬物送達の重要な標的であることを示す。
【００１３】
たとえば、育毛のための３種の異なる活性成分（ヒノキチオール、グリシルリチン酸、および６−ベンジルアミノプリン）を含有するポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）のナノ球体の効果が、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価された（ＴＳＵＪＩＭＯＴＯ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．；“Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｈａｉｒ  ｇｒｏｗｉｎｇ  ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ＰＬＧＡ  ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ  ｔｏ  ｈａｉｒ  ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｈａｉｒ  ｇｒｏｗｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ．”  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００７，ｖｏｌ．１７，ｐ．４７７１−４７７７）。ヒト頭皮生検でのこれら活性成分の蛍光強度を分析することにより、筆者らは、ナノ球体が、緩衝溶液（ＰＢＳ）中の同じ活性成分の対照群と比べた場合に細孔内で２〜２．５倍の浸透効果を発揮することを見出した。キャピラリー活性の増大を見ることも可能であり、その周期は休止期から成長期へと移行し、ＰＬＧＡナノ球体が毛包内の薬物に関して将来性ある担体である可能性があることを示唆している。
【００１４】
今日まで、ナノ粒子系におけるフィナステリドの配合について報告する文献の中には、少数の論文しかなかった。Ｅｌａｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｍｉｔｅｄが所有する文献ＵＳ２００６０２０４５８８は、ナノ粒子フィナステリド（２０００ｎｍ未満の平均サイズを有する）と、活性成分の表面に吸着されまたは会合してもよい少なくとも１種の表面安定化剤とを含有する、医薬組成物を開示している。ナノ粒子フィナステリド製剤の調製方法に関し、この方法は、フィナステリドを液体分散媒体に分散させること、およびその粒度を機械的に低減させることからなる。
【００１５】
富士フィルム株式会社が所有する特許出願ＵＳ２０１１０１１７０４５は、毛髪治療のための活性成分を含有するタンパク質ナノ粒子をベースにした生成物であり；生成物は、育毛を促進させる活性成分も含有し、これらの活性成分の１種としてフィナステリドおよびミノキシジルを含む、タンパク質（とりわけ、カゼイン、コラーゲン、ゼラチン、アルブミンなど）から生成されたナノ粒子からなる。
【００１６】
Ａｍｏｒｅｐａｃｉｆｉｃ  Ｃｏｒｐｏｒｔａｔｉｏｎが所有する文献ＷＯ２００５０００２５８は、両親媒性ポリマーおよび生理学的に活性な成分を含む、自己組織化ポリマーナノ粒子について記載しており；この両親媒性ポリマーは、ポリカプロラクトンおよびポリエチレングリコールを疎水性および親水性ブロックとして含み、生理学的に活性な成分は、前記両親媒性ポリマーに含まれる。生理学的に活性な成分は、フィナステリド（請求項１０で特定されるように；例４５〜４７も参照）またはミノキシジル（８頁、８〜１８行参照）とすることができる。請求項に記載された改善点の、即ち、活性成分を含有するナノ粒子の形成で両親媒性ポリマーを使用する動機付けは、疎水性ポリマーをナノ粒子の調製で使用する場合に生じる沈殿または凝集を引き起こす、コロイドの不安定性を低減させることである。
【００１７】
しかし、親水性および親油性部分の比を制御するのが難しく、したがって後続のナノ粒子の形成、特にナノカプセルの形成で問題が生じるような、実際にはポリマーブロックの１つの構造であるコポリマーよりも、技術的に複雑ではなくかつ得ることが簡単なホモポリマーを使用することが望ましい。
【００１８】
さらに、親水性および親油性部分が１：１の比で調製されたブロックコポリマーの使用は、親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）の柔軟性の欠如を引き起こし、それがナノテクノロジー製剤の品質を制限する可能性がある。安定化剤（親水性乳化剤または界面活性剤）の濃度を変化させることができることは、ナノ粒子を調製する際の利点である。親油性ホモポリマーは、製剤中で様々な割合で安定化剤を用いることにより、ナノ粒子として処方することができ、ナノコロイドの物理的安定性を最適化させる。
【発明の概要】
【００１９】
本発明は、ポリマーナノ粒子、好ましくはフィナステリドを含有するナノカプセル、添加剤、および医薬品として許容される担体を含む、脱毛症の局所治療のための医薬組成物を提供することを目標とするものである。本発明はさらに、脱毛症を治療するための局所施用組成物に適した、フィナステリドナノカプセルを調製するための方法を含む。
【００２０】
本発明の第１の態様は、医薬品として許容される担体中に安定して分散される、療法上有効な量のポリマーナノ粒子、好ましくはフィナステリドナノカプセルを含み；添加剤を任意に含有してもよい、局所用医薬組成物に関する。
【００２１】
第２の態様では、前記ポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルは、有機相および水相を調製することによって形成され：
−  有機相は：（ａ）疎水性ポリマー、（ｂ）油または油の混合物、（ｃ）少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤、（ｄ）溶媒、および（ｅ）フィナステリドを含み；
−  水相は：（ａ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、および（ｂ）水を含む。
【００２２】
第３の態様では、本発明は、脱毛症の治療用の医薬組成物を調製するための、ポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルの使用を含む。
【００２３】
本発明の組成物を調製するための方法は、２段階を含む。第１の段階は、本発明のポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルの調製に関し：（ｉ）疎水性ポリマーおよびフィナステリド、油または油の混合物、少なくとも１種の低ＨＬＢ界面活性剤を、有機溶媒に溶解することによって、有機相を調製する工程；（ｉｉ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、好ましくは中性の親水性界面活性剤を、水に混合することによって、水相を調製する工程；（ｉｉｉ）有機相を水相に注入して、有機相を媒体中に拡散させることによりナノ構造を瞬時に形成させ、それと共に混合物を十分な時間撹拌して、そのような散在がフィナステリドの適正なカプセル封入をもたらすようにする工程；（ｉｖ）有機溶媒を除去して、ナノカプセルを含有する水相を回収させる工程を含む。
【００２４】
ナノカプセルの調製後、これらのカプセルを、添加剤、たとえば、分散剤、湿潤剤、皮膚軟化薬、増粘剤、金属イオン封鎖剤、保存剤、酸化防止剤および香料などを任意に含有する、適切な担体中に懸濁させる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、フィナステリドを含有するナノカプセル（ＮＦ２５）の、透過型電子顕微鏡法を示す。画像の右隅にある黒いバーは、０．２マイクロメートルである。
【図２】図２は、収集前の、静止時のアリコート（灰色）および撹拌されたアリコート（黒色）において決定された、ナノカプセルの３０日にわたるフィナステリドの濃度を示す（共に同じロットから）。
【図３】図３は、ＮＦ２５（Ａ）；ＮＥＦ２５（Ｂ）；水に懸濁した薬物（Ｃ）、および水（Ｄ）で治療した治療群に関する、１日目（列１）、１５日後（列２）、および２３日後（列３）の動物の写真を示す。
【図４】図４は、群：ＮＦ２５（Ａ）、ＮＥＦ２５（Ｂ）、Ｃ２＋（Ｃ）、およびＣ−（Ｄ）の組織学的分析を示す。
【図５】図５は、治療Ｃ−（水）、Ｃ２＋（遊離薬物）、ＮＥＦ２５（ナノエマルジョン）、およびＮＦ２５（ナノカプセル）に関して分析された組織学的視野（ｎ＝１２）当たりの成熟毛包の数を示す。
【図６】図６は、ＮＰＸＦ０５製剤に関する、体積による粒度（レーザー回折）の分布を示す。
【図７】図７は、３０日間静置させた、製剤（３つのバッチ）ＮＦ２５（Ａ）およびＮＰＸＦ０５（Ｂ）の上澄みに残された薬物のパーセンテージの分析を示す。
【図８】図８は、ＮＦ２５（Ａ）およびＮＰＸＦ０５（Ｂ）で治療した治療群の、０日（写真１）および１５日目（写真２）および２３日目（写真３）の動物の写真を示す。
【図９】図９は、ＮＰＸＦ０５（Ａ）およびＮＦ２５（Ｂ）による治療から２３日後に、動物の背中から切除された皮膚の、組織病理学的分析を示す。
【図１０】図１０は、ＮＦ２５製剤（Ａ）およびＮＰＸＦ０５製剤（Ｂ）で治療した動物に関する、組織学的に検査された視野当たりの成熟毛包の平均数を示す。
【発明の詳細な説明】
【００２６】
本発明は、脱毛症の局所治療に有効な医薬組成物に関し、前記組成物は、ナノ粒子系、好ましくはフィナステリドのナノカプセル、医薬品として許容される担体を含み；任意に添加剤を含有してもよい。
【００２７】
本発明は、前記組成物に含まれる、ポリマーナノ粒子、好ましくはフィナステリドナノカプセルを調製するための方法も含む。
【００２８】
フィナステリドは、５α−レダクターゼ２型酵素に対して強力な選択的拮抗作用を発揮する合成アゾステロイドである。フィナステリドは、酵素に不可逆的に結合し、テストステロンからその活性代謝産物ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）への変換を防止することによって、作用する。フィナステリドの使用は、当初は、尿路閉塞に伴う前立腺サイズの縮小に関連して認可されたが（良性前立腺肥大症）、それは男性におけるＤＨＴが、前立腺の成長の原因となるが過形成の発症に関与する可能性があるからである。しかし、この薬物を摂取する患者は、脱毛症の症状の逆転も示すことが観察された。この理由のため、禿頭症の治療におけるフィナステリドの潜在能力を調査する研究の進展が始まった（Ｓｉｎｃｌａｉｒ，ＲＤ，“Ｍａｌｅ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ：Ｐａｒｔ  ＩＩ．”  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎ’ｓ  Ｈｅａｌｔｈ  ＆  Ｇｅｎｄｅｒ，２００５，ｖｏｌ．２，ｎｏ．１，ｐ．３８−４４）。年齢１８〜４１才の男性１５５３人に関するＫａｕｆｍａｎｎら（２００８）による研究は、５年にわたり、プラセボに対する毎日１ｍｇ用量のフィナステリドの作用について評価した。フィナステリドによる治療の結果、プラセボで治療した患者では目に見える抜け毛の可能性が高いのに比べ、目に見える抜け毛の確率が低減した。この研究では、５年目の終わりに、プラセボで治療した患者の７５％が禿頭症を発症し、フィナステリドで治療した患者は１０％のみが疾患を発症した。女性のアンドロゲン性脱毛症を治療するための、フィナステリドの使用の安全性および効力の調査は、結論として、この薬物を、ミノキシジルによる局所治療が有効ではない場合に安全にかつ有効に使用できることを示した（Ｓｔｏｕｔ，ＳＭ；ＳＴＵＭＰＦ，ＪＬ；“Ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈａｉｒ  Ｌｏｓｓ  ｉｎ  Ｗｏｍｅｎ．”  Ｔｈｅ  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１０，ｖｏｌ．４４，ｎｏ．６，ｐ．１０９０−１０９７）。
【００２９】
本発明は、脱毛症を治療するための、フィナステリドの局所施用医薬組成物を提示することによって、フィナステリドの全身投与に関連した欠点および副作用を回避する。
【００３０】
本発明は、予め形成されたポリマーの界面堆積の方法を用いたフィナステリドナノカプセルの調製をベースにし、最初に、フィナステリド、疎水性ポリマー、少なくとも１種の油または油のブレンド、および低ＨＬＢ（親水性−親油性バランス）である少なくとも１種の界面活性剤を、有機溶媒に溶解して有機相を形成し；少なくとも１種の親水性界面活性剤、好ましくは中性の親水性界面活性剤を水に混合して水相を形成する。
【００３１】
本発明は、コロイド状分散体の内相と外相の両方におけるその不溶性に起因して、溶液からナノカプセルを自己組織化しその結果として界面ポリマー堆積がなされる方法によって好ましくは行われたポリマーナノ粒子の調製を、特に対象とする。しかし、本発明のナノカプセルを生成するのにその他の方法を使用できることを明らかにすべきである。
【００３２】
前記ポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルは、下記の通り、有機相および水相から形成される：
−  有機相は：（ａ）疎水性ポリマー、（ｂ）油または油の混合物、（ｃ）少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤、（ｄ）溶媒、および（ｅ）フィナステリドを含み；
−  水相は：（ａ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、および（ｂ）水を含む。
【００３３】
フィナステリドをカプセル封入するのに使用される前記ポリマーは、ビニルポリマー、ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、アクリルポリマーおよびポリカーボネートからなる群から選択された疎水性ポリマーである。好ましくは、使用された疎水性ポリマーは、融点が１２０℃未満のポリエステルの群から得た生分解性ポリマーである。より好ましくは、ポリエステルの群からの生分解性疎水性ポリマーは、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）のコポリマー、ポリカプロラクトン、ポリカプロラクトンとポリエステル、ポリアミド、ポリウレタンまたはビニルポリマーとのコポリマーであり、最も好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）である。
【００３４】
本発明のナノカプセルの有機相の調製で使用される、油または油の混合物は、中鎖トリグリセリド、キャノーラ油、大豆油、オリーブ油、米ぬか油、ブドウ種子油、魚油、アマニ油および精油からなる群から選択される。
【００３５】
中鎖トリグリセリドが好ましくは使用され；中鎖トリグリセリドの中には、カプリルおよびカプリン酸トリグリセリド、プロピレングリコールジカプリレート−カプレート、オレイルマクロゴールグリセリド、ラウリオラ、リノレオイル、およびこれらの混合物の群から選択されたものがある。精油の中には、リナロール、ファルネソール、およびこれらの混合物の群から選択されたものがある。
【００３６】
本発明の第１の態様では、カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドが好ましく使用される。
【００３７】
本発明の第２の態様では、カプリルおよびカプリン酸とＵｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９とのトリグリセリド混合物が好ましく使用される。Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９は、リナロールとファルネソールとの混合物であり、精油の混合物は市場で入手可能である。
【００３８】
本発明の第２の態様は、溶解度がカプリルおよびカプリントリグリセリドにおいてよりも大きい新しい油を製剤の脂質コア組成物に添加することによって、フィナステリドのカプセル封入を増加させることである。このために、Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９という市販の混合物を優先的に用い、またこれはファルネソールおよびリナロールからなるものであり、フィナステリドの溶解度が約９０ｍｇ／ｍＬである（投薬はＨＰＬＣによって行われた）。ファルネソールはセスキテルペンアルコールであり、リナロールはテルペン系アルコールであり、共に様々な精油中で確認され、水に不溶であるが、油およびその他の有機溶媒、たとえばアセトンおよびエタノールと混和性がある。揮発性にするために、Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９とトリグリセリドとを、２．３：１（ｖ／ｖ）の比（Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９：トリグリセリド）で混合した。しかしこの割合は、Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９にフィナステリドが飽和すると見なして、薬物濃度が２．０ｍｇ／ｍｌである製剤の調製に用いることができるものであり、Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９の揮発性と、減圧下での溶媒蒸発のプロセス中に水蒸気により引き起こされる引っ張りに起因する、結果として生じる油の損失とに起因して、製剤は、系のナノメートル形体を確実にするためにフィナステリド濃度０．５ｍｇ／ｍｌで調製した。新しい脂質コアを含むこの製剤は、本発明の第２の態様を表す。
【００３９】
本発明のポリマーナノ粒子の調製物の有機相で使用される前記親油性界面活性剤は、低ＨＬＢ界面活性剤であり、好ましくは値が３〜６の範囲であり、固体または液体であり、好ましくは固体であり、モノステアリン酸ソルビタン、ジステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、カプリルカプロイルマクロゴールグリセリド、ラウリン酸プロピレングリコール、カプリル酸プロピレングリコール、モノステアリン酸グリセリル、オレイン酸ポリグリセリル、またはこれらの混合物からなる群から選択される。好ましくは、本発明の有機相で使用される親油性界面活性剤は、モノステアリン酸ソルビタンである。
【００４０】
本発明のこれらのポリマーナノ粒子の調製物の、有機相で使用される溶媒は、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジオキサン、炭酸プロピレン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、有機ハロゲン化物、酢酸エチル、アセトニトリル、メチルエチルケトン、これらの混合物、または水との分子間相互作用の物理化学的性質を示す任意のその他の溶媒からなる群から選択された、有機溶媒である。本発明の好ましい態様では、有機溶媒は、好ましくはアセトンである。
【００４１】
水相は、本発明のナノ粒子を調製するために、少なくとも１種の親水性界面活性剤を含有し、この活性剤は好ましくは、乳化剤、たとえばポリオキシ化ポリマー、またはイオン性界面活性剤、たとえばレシチン、または中性界面活性剤、たとえば、ポリソルベート２０、６０もしくは８０、ステアリン酸マクロゴール、マクロゴールセトステアリルエーテル、マクロゴールラウリルエーテル、マクロゴールオレイルエーテル、オレイン酸マクロゴール、ポリオキシルヒマシ油、水素化ポリオキシルヒマシ油、またはこれらの混合物からなる群から選択されたものである。好ましくは、ポリソルベートが用いられ、より好ましくは、ポリソルベート８０が本発明のナノ粒子調製物の水相用に用いられる。
【００４２】
下記は、本発明の特定の態様である。しかし、そのような例は例示する目的でのみ提供されるものであること、ならびに、様々な修正または変更が、ここに開示される態様に照らして当業者に示唆され、様々な修正または変更は、本開示の趣旨および範囲内と添付される特許請求の範囲内に含まれなければならないことを理解すべきである。
【００４３】
ポリマーナノ粒子の水性懸濁液は、下記を含む：
−  有機相に、（ａ）フィナステリド０．００１％〜８０．０％（ｗ／ｗ）、（ｂ）疎水性ポリマー０．０１％〜３０．０％（ｗ／ｗ）、（ｃ）油または油の混合物０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、（ｄ）好ましくは固体の、少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および（ｅ）有機溶媒１０％〜８０％（ｗ／ｗ）；ならびに
−  水相に、（ａ）少なくとも１種の親水性界面活性剤０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）、および（ｂ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）。
【００４４】
水性懸濁液の第１の好ましい製剤では、ポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルは、下記を含む：
−  有機相に、（ａ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）疎水性ポリマー、好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）油、好ましくは中鎖トリグリセリド０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）少なくとも１種の親油性界面活性剤、好ましくはモノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）有機溶媒、好ましくはアセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）；ならびに
−  水相に、（ａ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、好ましくはポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｂ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）。
【００４５】
水性懸濁液の第２の好ましい製剤では、ポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルは、下記を含む：
−  有機相に、（ａ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）疎水性ポリマー、好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）油の混合物、好ましくはカプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドとファルネソールおよびリナロール（Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９）との混合物０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）少なくとも１種の親油性界面活性剤、好ましくはモノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）有機溶媒、好ましくはアセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）；ならびに
−  水相には、（ａ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、好ましくはポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｂ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）。
【００４６】
脱毛症を治療するための医薬組成物は：（Ａ）（ａ）フィナステリド０．０１％〜２．５％（ｗ／ｗ）；（ｂ）疎水性ポリマー、好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）０．１％〜１０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）油および／または油の混合物、好ましくは、中鎖トリグリセリド、および／または中鎖トリグリセリドとＵｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９との混合物０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤、好ましくはモノステアリン酸ソルビタン０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｅ）親水性界面活性剤、好ましくはポリソルベート８０の０．００１％〜１０％（ｗ／ｗ）を含む、本発明のナノカプセルと；（Ｂ）医薬品として許容される担体とを含有し、ナノカプセルの構成成分の量は、最終製剤中のパーセンテージで表されており、前記ナノカプセルは前記医薬品として許容される賦形剤中に分散されている。
【００４７】
本発明の、脱毛症を治療するための好ましい医薬組成物は、医薬品として許容される担体に分散された、ポリマーナノ粒子の形をとる、好ましくはナノカプセルの形をとるフィナステリド０．０１〜１．０％（ｗ／ｗ）を含む。
【００４８】
脱毛症を治療するための医薬組成物は、添加剤、たとえば、分散剤、界面活性剤、湿潤剤、皮膚軟化薬、増粘剤、金属イオン封鎖剤、保存剤、酸化防止剤および香料などを任意に含有してもよい。
【００４９】
下記は、本発明の特定の態様である。しかし、そのような例は例示する目的でのみ提供されるものであること、ならびに、様々な修正または変更が、ここに開示される態様に照らして当業者に示唆され、様々な修正または変更は、本開示の趣旨および範囲内と添付される特許請求の範囲内に含まれなければならないことを理解すべきである。
【００５０】
例１：  フィナステリド０．２５％を含有する本発明のナノカプセル−本発明の第１の態様
例１．１：  本発明の第１の態様によるフィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）の調製
フィナステリドナノカプセルの懸濁液を、表１に記述される組成を使用して、有機相および水相から調製した。
【表１】
2015526483.tif 000003
【００５１】
ポリマー（ポリ（ε−カプロラクトン））を、フィナステリド、カプリン酸およびカプリル酸のトリグリセリド、ならびに低ＨＬＢ界面活性剤（モノステアリン酸ソルビタン）と共に、２０℃乃至４０℃、好ましくは４０℃で穏やかに加熱した状態で、溶媒としてアセトンを用いて有機相に可溶化した。中性界面活性剤（ポリソルベート８０）を水中に溶解して、水相を形成した。有機相および水相の全ての構成成分を溶解した後、有機相を、漏斗を使用して水相上に注入した。
【００５２】
本発明のナノカプセルの１次エマルジョンを形成した後、エマルジョンを１０分間穏やかに撹拌しながら維持し、次いで１０℃乃至８０℃、好ましくは３０℃乃至４５℃の蒸発フラスコ内で、恒温浴内の減圧下のロータリーエバポレーター内で濃縮して最終体積１００ｍｌにすることにより、溶媒および過剰な水を排除して、フィナステリドの最終濃度を調節した。この製剤を、ＮＦ２５と呼んだ。
【００５３】
例１．２：  ナノエマルジョンフィナステリドの調製（ＮＥＦ２５）
比較の目的で、フィナステリドナノエマルジョン製剤も０．２５％の濃度に調製した。調製方法は、フィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）の場合と同一であるが、（ポリ（ε−カプロラクトン））ポリマーは除外した。表２は、ＮＥＦ２５と命名されたこの製剤の組成を示す。
【表２】
2015526483.tif 000004
【００５４】
例１．３：  本発明の第１の態様によるフィナステリドナノカプセル０．２５％の物理的および化学的特性
Ａ．  ｐＨの決定
ｐＨの決定は、ｐＨ４．０および７．０の緩衝溶液で較正された電位差計により、懸濁液中で直接行った。
【００５５】
Ｂ．  多重光散乱による粒子径および多分散指数の決定
ナノ−Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（登録商標）設備モデルＺＥＮ  ３６００  ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＳＡを使用して、動的光散乱によりナノ粒子懸濁液の直径および多分散性を決定した。この目的のため、サンプルをｍｉｌｌｉＱ（登録商標）水（０．４５ミクロンフィルター、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｅｘ−ＨＰに通して濾過）で、室温で５００倍に希釈し、その結果は、３回の反復の平均により決定した。
【００５６】
Ｃ．  レーザー回折による粒度分布の決定
付随するマイクロメートル集団がナノ粒子製剤中にあるか否かを評価するために、分析を、広範な直径（０．０２〜２０００ミクロン）の粒子を測定することが可能な技法であるレーザー回折（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）によって行った。分析は、蒸留水約１００ｍｌを含有する分散付属製剤のサンプルを添加することによって実施した。添加された量は、０．０２乃至０．１０のオブスキュレーションを実現するのに十分であった。干渉を防止するために、バックグラウンドシグナルを分析前に測定した。
【００５７】
Ｄ．  ζ電位
ナノカプセル懸濁液のζ電位を、ナノ−Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（登録商標）設備モデルＺＥＮ  ３６００  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＳＡ）を用いる電気泳動法により決定した。決定は、１０ｍＭ  ＮａＣｌの溶液（０．４５ミクロンフィルター、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｅｘ−ＨＰに通して濾過）中５００倍希釈から開始して実施し、得られた結果は、３つの測定値の平均とした。
【００５８】
Ｅ．  粘度
懸濁液の粘度は、振動式粘度計（ＳＶ−１０、Ａ＆Ｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、日本）を使用して測定した。これを実現するために、粘度は、温度２５±１．０℃で５秒ごとにデータ収集しながら３０秒間、懸濁液中で直接測定した。
【００５９】
結果：
以下の表（表３）は、本発明の第１の態様のフィナステリドナノカプセル製剤（ＮＦ２５）に関して得られた、ｐＨ値、直径、多分散指数、ζ電位および粘度を示す。製剤（同じ３つのバッチ）は、巨視的に均質であり、乳状の外観を有し、希釈すると青味がかった色になり（チンダル効果）、少なくとも１種のナノ粒子集団の存在を示唆している。
【表３】
2015526483.tif 000005
【００６０】
フィナステリドを含有するナノカプセル懸濁液（ＮＦ２５）のｐＨは、約４．５に留まった。さらに、このｐＨ範囲は、文献（ＳＺＮＩＴＯＷＳＫＡ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）による局所投与に適している。
【００６１】
懸濁液は、約２２０ｎｍの直径を有し、多分散性は０．１４である。今日まで、フィナステリドを含有する毛包局所施用のための粒子系の、文献におけるいくつかの報告の１つは、それぞれ１．９および４．４μｍの粒度を呈するリポソームおよびリソソームの微粒子製剤を指す（ＴＡＢＢＡＫＨＩＡＮ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。このように、本発明で開発されたフィナステリドを含有する製剤（ＮＦ２５）は、減じられた直径（ナノメートル規模に）と、より低い多分散指数（＜０．２）により示されるような狭い粒子分布とを有する。
【００６２】
平均ζ電位（同じ３つの製剤）は、約−１４ｍＶであった。これらの値は、粒子を、製剤の水相で使用されるポリソルベート８０界面活性剤でコーティングすることによって誘導され、立体障害を経た系の融合が防止される。
【００６３】
例１．４：  透過型電子顕微鏡法
フィナステリドナノカプセルの懸濁液の形態特性の、より良好な評価のために、透過型電子顕微鏡法を行った。
【００６４】
分析は、透過型電子顕微鏡（ＪＥＯＬ、ＪＥＭ  １２００  Ｅｘｌｌ、Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｃｅｎｔｅｒ−ＵＦＲＧＳ）で、８０ｋＶで動作させて行った。希釈した懸濁液を、格子状に炭素支持被膜上に堆積し、酢酸ウラニル溶液（２％ｗ／ｖ）でネガティブ染色し、２５０，０００倍の倍率で観察した（図１）。
【００６５】
例１．５：  本発明の第１の態様のフィナステリドナノカプセルの、安定性の研究
フィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）の安定性を決定するために、下記を評価した：
Ａ．  ナノカプセルでのフィナステリドの投与
ナノカプセル懸濁液を、アセトニトリル中で、超音波で処理し（３０分間）、製剤の構成成分を溶解させた。フィナステリドの投薬量決定は、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して行った。
【００６６】
分析は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒクロマトグラフシリーズ２００で、２１０ｎｍ可視ＵＶ検出器、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ  １００ＲＰ−１８（５μｍ、２５０×４ｍｍ）カラム、同じ材料のプレ−カラム（５μｍ）、およびアセトニトリル：水（７５：２５）のイソクラティック移動相を使用して、１ｍＬ／分の流量および１００μＬの注入体積で行った。
【００６７】
Ｂ．  結晶の存在の検証
薬物の濃度が、ナノカプセル核で使用される油中でのその溶解度を超えた場合、ナノ結晶の同時形成が生じる可能性があり、これは形成されたナノカプセルと同じ流体力学半径を有する可能性があり、それによって狭いサイズ分布が発生するが、これはナノカプセルに関して異なるものではない。さらに、時間と共に、これらの結晶は、沈殿によってサイズの増加を受ける可能性がある。
【００６８】
このように、製剤の安定性と、ナノ結晶の可能性のある同時存在の特定とのモニタリングは、２つの技法を使用した、懸濁液中のフィナステリドの定量によって行った。各バッチを２つのサンプルに分け：一方は沈降させ、他方は分析までフリーな状態のままにし、その間撹拌を行った。分析では、アリコートサンプルを、静止サンプルの上澄みおよびフリーサンプル（１５秒間掻き混ぜた後）のアリコートから採取し（０日および３０日目）、静止サンプルでの薬物含量の低減により沈殿した結晶の存在と、撹拌サンプルのアリコートによる可能性のある薬物の分解との区別（ＨＰＬＣにより測定）が可能になるようにした。
【００６９】
結果：
ナノカプセル製剤の安定性をチェックするために、３つのバッチについて、０日および貯蔵（４０℃および相対湿度７５％）の３０日後に、直径、多分散性、ζ電位、およびこれらの系の挙動を特徴付けるフィナステリドの決定に関して評価した。結果を表４に示す。
【表４】
2015526483.tif 000006
【００７０】
３０日の貯蔵の間、直径、多分散指数、またはζ電位の値に有意な変化はなかった。投薬量に関し、３０日目に示される薬物濃度は、最初に使用された濃度に等しかった。即ち、ナノカプセルは、調製物（０．２５％）で使用された場合に類似したフィナステリド濃度を有しており、サイズに変化はなく、ＨＰＬＣ分析の分解クロマトグラムには追加のピークが現れなかった。この実験では、貯蔵時間の関数としてのフィナステリド濃度の決定を、撹拌後の懸濁液のアリコートで行ったことに留意されたい。図２は、この検証の結果を示す。
【００７１】
投与前に撹拌したサンプルでは、貯蔵の３０日間にわたってフィナステリドの含量が低下しなかったことがわかり、これらの貯蔵条件下では分解がなかったことを示している。
【００７２】
例１．６：  毛の回復能力を決定するためのｉｎ  ｖｉｖｏ研究
実験では、Ｖａｌｅ  ｄｏ  Ｉｔａｊａｉ大学（ＵＮＩＶＡＬＩ）の動物施設からの、混成Ｂ６ＣＢＡＦ１メスマウスを使用した。マウスのＢ６ＣＢＡＦ１株は、Ｃ５７ＢＬ株のメスとＣＢＡ株のオスとの交配から得られる。混成Ｂ６ＣＢＡＦ１は突然変異を呈して、動物は、テストステロンまたはジヒドロテストステロンの栄養補助剤を毎日投与された場合にアンドロゲン性脱毛症の病的状態を発症する。アンドロゲン性脱毛症は自発的に生じ、背側の毛が薄くなることによって認識される。毛の拡散低減は、テストステロンまたはジヒドロテストステロンの最小濃度１％の懸濁液０．１ｍＬを皮下から投与することによって、定期的に実現されてもよい（ＭＡＴＩＡＳ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；．Ｓｕｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ，１９９９）。このように、株Ｂ６ＣＢＡＦ１の動物は、脱毛症を誘発させるこの投薬量を用いた研究に合わせて選択した。
【００７３】
動物を、実験の全体を通して温度および相対湿度の標準条件下に置き、昼夜周期はそれぞれ１２時間であった。全ての動物に、ポリソルベート８０を水（１００ｍｇ／ｍｌ）に混合した混合物に分散させた１％テストステロンの皮下注射を、１ｍｇ／日の用量で行った。
【００７４】
１週目、動物にはテストステロンの皮下注射のみを行った（１）。実験の２週目の初日に、毛の全体の除去のため、全ての動物の背中からそれらの毛をＶｅｅｔ（登録商標）脱毛クリームで除去した。脱毛後、テストステロンの注射は毎日続け、治療群（プラセボ、治療、対照）に応じて製剤の毎日の局所施用を付加した。群は、下記の製剤で治療した：水（陰性対照）、水およびポリソルベート８０に懸濁させたフィナステリド懸濁液（陽性対照１）、フィナステリドナノエマルジョン（ＮＥＦ２５−２陽性対照）、およびフィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）。
【００７５】
この試験では、２つの陽性対照の使用を選択した。一方は、粗製分散体中（ポリソルベート８０が０．７７％の水中）の薬物から構成され、凝集体は平均直径（Ｄ［４．３］）が３．２ミクロンでありスパンが１．４８１であり、他方は、ナノエマルジョン製剤（ＮＥＦ２５）から構成され、ナノメートル集団の直径は２７６ｎｍでありスパンが１．５２３であった（平均直径１２．８μｍの小さいマイクロメートル集団が存在する）。ナノエマルジョン製剤との比較は、ナノカプセルがその構成（ポリマーシェル）によりその効果を発揮するか否か、または作用が薬物の（部分の）ナノカプセル封入によってのみ生ずるか否かを検証することを意図するものである。毛の成長をモニターするために、１日目、１５日目、および２３日目に写真を撮影した。
【００７６】
結果：
図３でわかるように、フィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）による治療は、加速した毛の成長を示し、２３日後には動物の背中全体をほとんど覆った。残りの治療では、皮膚のごく小さい面積で回復し、水による治療は成長の開始のみを示した。結果は、ナノエマルジョン製剤（ＮＥＦ２５）とは対照的に、フィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）を有する製剤の優位性も実証した。
【００７７】
例１．７：  組織病理学的分析
毛の回復能力を決定するためのｉｎ  ｖｉｖｏ研究から２４日後に、動物を頚椎脱臼により犠牲にして、組織病理学的検査を行った。皮膚の小片を動物（各群を表す）の背中から切除し、各群の毛の成長段階を可視化するために組織学的分析に供した。
【００７８】
これを実現するために、スライドを準備し、ヘマトキシリンエオシンで染色した。次いで分析を進めて（Ｚｅｉｓｓ光学顕微鏡−Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔａｒ連結Ｃａｎｏｎ  Ｐｏｗｅｒ  Ｓｈｏｔカメラ、ＰＣ１２５０）、どの成長段階が毛に見出されたかを決定した。
【００７９】
組織学により得られたデータを定量するために、各群から得た組織学的スライドのそれぞれの成熟毛包（着色され、脂肪組織に挿入された）のカウントを進めた。そのために、群当たり４枚のスライドを分析し、カウントは、同じスライドの３つの異なる焦点をベースにし、群当たり合計１２の分析視野とした。群同士の比較のため、ＡＮＯＶＡによる統計分析（α＝０．０５）を進めた。図４は、群の組織病理学的検査の結果を示す。
【００８０】
組織学的分析は、フィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）による治療の効力を裏付ける。図４において、Ａ（ＮＦ２５による治療）では、メラニンの強力な存在（毛包の暗い中心によって表される）に起因した豊富な硬毛毛包（成熟／発育）の存在、および、硬毛毛包が発育中であることを表す、脂肪組織に基礎を置いた硬毛毛包の発育（皮膚内への深い挿入）を、観察することができる。この解釈は、科学文献で裏付けられる（Ｍｅｉｄａｎ  ｅｔ  ａｌ，２００５；．ＶＯＧＴ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；ＯＴＢＥＲＧ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【００８１】
次に、ＮＥＦ２５およびＣ２＋では、着色が少ししかない（または全くない）毛包の存在の減少であって、真皮近くでより多くの量が位置付けられているものが観察され、これは硬毛毛包の軟毛毛包への退縮（着色なし、真皮の上層で発育）を特徴付ける。この解釈は、科学文献で裏付けられる（Ｓｉｎｃｌａｉｒ  ｅｔ  ａｌ．２００３；Ｍｅｉｄａｎ  ｅｔ  ａｌ，２００５；．ＶＯＧＴ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；ＯＴＢＥＲＧ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【００８２】
さらに、スライド観察に基づいて、視野当たりの成熟毛包のカウントを分析した。図５は、評価された群による、視野（ｎ＝１２視野）当たりの毛包の平均数に基づいた結果を示す。
【００８３】
図５でわかるように、水、フリー、およびフィナステリドナノエマルジョン（ＮＥＦ２５）群の間で有意差はなく、それぞれ視野当たり１１±１５、４±８、および１８±１３個の細胞を示した。次にフィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）の製剤は、視野当たり８２±１４個の細胞を示し、他よりも著しく高かった（ＡＮＯＶＡ、α  ０．０５）。これらの結果は、フィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）の局所製剤が、アンドロゲン性脱毛症の素因により毛の成長および毛包の発育を加速させることを実証し、それに対してフィナステリドナノエマルジョン製剤（ＮＥＦ２５）は、満足のいく結果を示さなかった。
【００８４】
例２：  フィナステリド０．０５％を含有する本発明のナノカプセル−本発明の第２の態様
例２．１：  本発明の第２の態様によるフィナステリドナノカプセル（ＮＰＸＦ０５）の調製
フィナステリドナノカプセルの懸濁液を、有機相および水相から、表５に記述される組成を使用して調製した。
【表５】
2015526483.tif 000007
【００８５】
ポリマー（ポリ（ε−カプロラクトン））を、フィナステリド、中鎖トリグリセリド、Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９、および低ＨＬＢ界面活性剤（モノステアリン酸ソルビタン）と共に、２０℃乃至４０℃、好ましくは４０℃で穏やかに加熱した状態で、溶媒としてアセトンを用いて有機相に可溶化した。中性界面活性剤（ポリソルベート８０）を水中に溶解して、水相を形成した。有機相および水相の全ての構成成分を溶解した後、有機相を、漏斗を使用して水相上に注入した。
【００８６】
本発明のナノカプセルの１次エマルジョンを形成した後、エマルジョンを１０分間穏やかに撹拌しながら維持し、次いで１０℃乃至８０℃、好ましくは３０℃乃至４５℃の蒸発フラスコ内で、恒温浴内の減圧下のロータリーエバポレーター内で濃縮して最終体積１００ｍｌにすることにより、溶媒および過剰な水を排除して、フィナステリドの最終濃度を調節するようにした。この製剤を、ＮＰＸＦ０５と呼んだ。
【００８７】
例２．２：  本発明の第２の態様による、フィナステリドナノカプセル０．０５％（ＮＰＸＦ０５）の物理化学的特性
Ａ．  ｐＨの決定
ｐＨの決定は、ｐＨ４．０および７．０の緩衝溶液で較正された電位差計により、懸濁液中で直接行った。
【００８８】
Ｂ．  多重光散乱による粒子径および多分散指数の決定
動的光散乱によってナノ粒子懸濁液の直径および多分散性を決定するために、ナノ−Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（登録商標）設備モデルＺＥＮ  ３６００  ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＳＡを使用した。この目的のため、サンプルをｍｉｌｌｉＱ（登録商標）水（０．４５ミクロンフィルター、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｅｘ−ＨＰに通して濾過）で、室温で５００倍に希釈し、その結果は、３回の反復の平均により決定した。
【００８９】
Ｃ．  レーザー回折による粒度分布の決定
付随するマイクロメートル集団がナノ粒子製剤中にあるか否かを評価するために、分析を、広範な直径（０．０２〜２０００ミクロン）の粒子を測定することが可能な技法であるレーザー回折（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）によって行った。分析は、蒸留水約１００ｍｌを含有する付属分散製剤のサンプルを添加することによって実施した。添加された量は、０．０２乃至０．１０のオブスキュレーションを実現するのに十分であった。干渉を防止するために、バックグラウンドシグナルを分析前に測定した。
【００９０】
Ｄ．  ζ電位
ナノカプセル懸濁液のζ電位を、ナノ−Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（登録商標）設備モデルＺＥＮ  ３６００  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＳＡ）を用いる電気泳動法により決定した。決定は、１０ｍＭ  ＮａＣｌ溶液（０．４５ミクロンフィルター、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｅｘ−ＨＰに通して濾過）中５００倍希釈から開始して実施し、得られた結果は、３つの測定値の平均とした。
【００９１】
Ｅ．  粘度
懸濁液の粘度は、振動式粘度計（ＳＶ−１０、Ａ＆Ｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、日本）を使用して測定した。このために、粘度は、温度２５±１．０℃で５秒ごとにデータ収集しながら３０秒間、懸濁液中で直接測定した。
【００９２】
結果：
本発明の第２の態様により調製されたナノカプセルの製剤は、巨視的に均質であり、Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標Ｓ−６９）に典型的な臭いを持つことが証明された。以下の表（表６）は、本発明の第２の態様のフィナステリドナノカプセル製剤（ＮＰＸＦ０５）の、ｐＨ値、直径、多分散指数、ζ電位および粘度を示す。比較の目的で、製剤ＮＰＸＦ０５の結果を製剤ＮＦ２５の結果と一緒に示す。
【表６】
2015526483.tif 000008
【００９３】
物理化学的分析から、変性しているが、製剤は類似の特性を示したことがわかる。しかしレーザー回折直径分析は、Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９およびカプリル酸トリグリセリドおよびカプリンの混合物で調製された、フィナステリド０．０５％を含有する製剤が（ＮＰＸＦ０５）、ナノサイズの集団のみ示すことを示した（図６）。
【００９４】
例２．３：  本発明の第２の態様のフィナステリドナノカプセルの、安定性の研究
フィナステリドナノカプセル（ＮＰＸＦ０５）の安定性を決定するために、下記を評価した：
Ａ．  ナノカプセルでのフィナステリドの投与
ナノカプセル懸濁液を、超音波の中で（３０分間）アセトニトリルで処理し、製剤の構成成分を溶解させた。フィナステリドの投薬量は、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して行った。
【００９５】
分析は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒクロマトグラフシリーズ２００で、２１０ｎｍ可視ＵＶ検出器、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ  １００ＲＰ−１８（５μｍ、２５０×４ｍｍ）、同じ材料のプレ−カラム（５ミクロン）、およびアセトニトリル：水（７５：２５）のイソクラティック移動相を使用して、１ｍＬ／分の流量および１００μＬの注入体積で行った。
【００９６】
Ｂ．  結晶の存在の検証
外相に分散された薬物の存在を検証するために、フィナステリドの定量を、新たに調製された製剤からＨＰＬＣによって行った。製剤を２つのサンプルに分け、前者はそのままにし、２番目は、その調製から３０日後にアッセイを実施する前に撹拌した。そのまま維持されたサンプルからは、上澄みアリコートのみ収集した（いかなる運動も防止）。他のサンプルからは、１５秒間掻き混ぜた後にアリコート（上澄みの２０％に相当）を収集した。
【００９７】
結果：
さらに、３０日間にわたり静置したままの、同じ３つのＮＰＸＦ２５製剤の結晶沈降の評価を行った（上澄みのＨＰＬＣアッセイ）。結果を、ＮＦ２５製剤の結果と比較し、図７に示す。
【００９８】
示されるように、カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドへのＵｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９の添加は、系のナノテクノロジー特性を失うことなく、より多量のフィナステリドのカプセル封入を可能にした。示されるように、ＮＰＸＦ０５製剤での活性成分濃度に有意な減衰はなく、当初に比べてわずかに４．１±０．４％であった。
【００９９】
例２．４：  毛の回復能力を決定するためのｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ
実験では、Ｖａｌｅ  ｄｏ  Ｉｔａｊａi大学（ＵＮＩＶＡＬＩ）の動物施設からの、混成Ｂ６ＣＢＡＦ１メスマウスを使用した。動物を、実験中は温度および相対湿度の従来条件の下に置き、昼夜周期はそれぞれ１２時間であった。全ての動物に、ポリソルベート８０を水（１００ｍｇ／ｍｌ）に混合した混合物に分散させた１％テストステロンの皮下注射を、１ｍｇ／日の用量で行った。週当たり５回の注射を４週間行った。
【０１００】
もう一度、加速毛髪成長試験を実施し、今回はフィナステリドのナノカプセル製剤（ＮＰＸＦ０５）を試験した。１週目、動物にはテストステロン注射のみ行った。実験の２週目の初日に、毛の全体の除去のため、全ての動物はそれらの背中の毛をＶｅｅｔ（登録商標）脱毛クリームで除去された。毛の除去後、テストステロンの毎日の注射は続け、治療群（プラセボ、治療、対照）に応じて製剤の毎日の局所施用を治療に付加した。試験群は、本発明の第２の態様により調製された０．０５％のフィナステリドを有するナノカプセル製剤（ＮＰＸＦ０５）であり、これを、本発明の第１の態様により調製された０．２５％を含有するフィナステリドナノカプセル製剤（ＮＦ２５）の結果と比較した。
【０１０１】
毛の成長をモニターするために、０日、１５日目、および２３日目に写真を撮影した。
【０１０２】
結果：  図８からわかるように、Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９とカプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドとの組合せにより調製された、フィナステリドが０．０５％のナノカプセル製剤（ＮＰＸＦ０５）は、フィナステリドが０．２５％のナノカプセル製剤（ＮＦ２５）よりも大幅な成長を示した。１５日目の写真を分析することにより、フィナステリドが０．０５％のナノカプセル製剤（ＮＰＸＦ０５）で治療された動物は、より大きく成長したことが観察される。
【０１０３】
例２．５：  組織病理学的分析
毛の回復能力を決定するためのｉｎ  ｖｉｖｏ研究から２４日後に、動物を頚椎脱臼により犠牲にして、組織病理学的検査を行った。皮膚の小片を動物（各群を表す）の背中から切除し、各群の毛の成長段階を可視化するために組織学的分析に供した。
【０１０４】
これを実現するために、スライドを準備し、ヘマトキシリンエオシンで染色した。次いで分析を行って（Ｚｅｉｓｓ光学顕微鏡−Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔａｒ連結Ｃａｎｏｎ  Ｐｏｗｅｒ  Ｓｈｏｔカメラ、ＰＣ１２５０）、毛がどの成長段階にあるかを決定した。
【０１０５】
組織学により得られたデータを定量するために、各群の組織学的スライドのそれぞれの成熟毛包（着色され、脂肪組織に挿入された）のカウントを行った。したがって、群当たり４枚のスライドを分析し、カウントは、同じスライドの３つの異なる焦点をベースにし、群当たり合計１２の分析視野とした。群同士の比較のため、ＡＮＯＶＡによる統計分析（α＝０．０５）を行った。
【０１０６】
図９は、群の組織病理学的検査の結果を示す。図９でわかるように、Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９と、カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドとの組合せにより調製されたナノカプセル製剤（ＮＰＸＦ０５）は、フィナステリドのナノカプセル製剤（ＮＦ２５）よりも大きく成長した。１５日目の写真を分析することにより、ＮＰＸＦ０５製剤で治療された動物は、他よりも大きい成長を示すことが観察された。
【０１０７】
図１０は、分析された組織学的視野当たりの成熟毛包の平均数を示す。これらの分析は、分析された組織学的視野による成熟毛包がより少ないにも関わらず、ＮＰＸＦ０５製剤が加速成長を示し、見た目にはＮＦ２５製剤よりも大きい成長を示すことを明らかにした。
【０１０８】
例３：  フィナステリドナノカプセルを含む医薬組成物
例３．Ａ−  局所溶液の形をとる製剤
フィナステリドナノカプセルを、例１．１および２．１で記述したように調製する。局所溶液は、表７の製剤が得られるように調製する。
【表７】
2015526483.tif 000009
【０１０９】
例３．Ｂ−  局所ゲル製剤
フィナステリドナノカプセルを、例１．１および２．１で記述したように調製する。
【０１１０】
例３．Ａで記述したように調製されたナノカプセルの懸濁液を、０．２％Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９４０で濃厚にした。十分量のトリエタノールアミンを添加して、局所施用に適した粘度を得た。得られたゲルは、表８に示される製剤を有する。
【表８】
2015526483.tif 000010
【０１１１】
例３．Ｃ：  局所ローションの形をとる製剤
最初に、表９の相１から得た組成物を使用して、例３．Ａで記述したように相１を調製した。別に、相２からの構成成分を５０℃の水浴中で溶かし、融解後に加熱から取り出した。相３を相１に添加し、一定の磁気撹拌の下で分散させた。相１および３のこの混合物を、融解相２に添加し、穏やかに機械的に撹拌した状態で４０℃に冷却して、空気の取込みを回避した。
【表９】
2015526483.tif 000011
【０１１２】
本明細書で述べた全ての刊行物および特許出願は、本発明が関係する当業者のレベルを示す。全ての刊行物および特許出願は、それぞれ個々の刊行物または特許出願が、参照を容易にするためにそれぞれ具体的にかつ個別に示されて組み込まれているのと同程度まで、参照によりここに組み込まれる。
【０１１３】
ある態様について記述してきたが、それらは単なる例示的な様式として提示されており、本発明の範囲を限定するものではない。事実、ここに記載される新しい態様は、様々なその他の形で実施されてもよく；それよりむしろ、ここに記載される態様の形をとる様々な省略、置換および変更を、本発明の趣旨から逸脱することなく行ってもよい。そのような形または修正例は本発明の範囲および趣旨に含まれるため、この明細書に添付される特許請求の範囲およびその均等物は、そのような形または修正例を包含すると見なされる。
【図１】
2015526483.tif 000012
【図２】
2015526483.tif 000013
【図３】
2015526483.tif 000014
【図４】
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【図５】
2015526483.tif 000016
【図６】
2015526483.tif 000017
【図７】
2015526483.tif 000018
【図８】
2015526483.tif 000019
【図９】
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【図１０】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年7月17日(2015.7.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマーナノ粒子であって、前記ナノ粒子は活性成分フィナステリドを含むナノカプセルの形をとり、前記ナノ粒子が有機相および水相を調製することによって形成され：
（ｉ）前記有機相は：（ａ）疎水性ポリマー、（ｂ）油または油の混合物、（ｃ）少なくとも１種の親油性低ＨＬＢ界面活性剤、（ｄ）有機溶媒、および（ｅ）フィナステリドを含み；かつ
（ｉｉ）前記水相は：（ｆ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、および（ｇ）水を含む、
ポリマーナノ粒子。
【請求項２】
前記疎水性ポリマーが、ビニルポリマー、ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、アクリルポリマーおよびポリカーボネートからなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項３】
前記疎水性ポリマーが、１２０℃未満の融点を有するポリエステルの群からの生分解性ポリマーである、請求項２に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項４】
１２０℃未満の融点を有するポリエステルの群からの前記疎水性生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド）；ポリ（グリコリド）；ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）のコポリマー；ポリカプロラクトン；およびポリカプロラクトンとポリエステル、ポリアミド、ポリウレタンまたはビニルポリマーとのコポリマーからなる群から選択される、請求項３に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項５】
前記ポリカプロラクトンがポリ（ε−カプロラクトン）である、請求項４に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項６】
前記油または油の混合物が、中鎖トリグリセリド、キャノーラ油、大豆油、オリーブ油、米ぬか油、ブドウ種子油、魚油、アマニ油、精油、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項７】
前記中鎖トリグリセリドが、カプリンおよびカプリル酸のトリグリセリド、プロピレングリコールジカプリル／カプレート、オレイルマクロゴールグリセリド、ラウレル、リナロール、およびこれらの混合物の群から選択される、請求項６に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項８】
前記精油が、リナロール、ファルネソール、およびこれらの混合物の群から選択される、請求項６に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項９】
前記油が、カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドである、請求項６に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１０】
前記油の混合物が、カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリド、ならびにリナロールとファルネソールとの混合物である、請求項６に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１１】
前記親油性界面活性剤が、３〜６の範囲の低ＨＬＢ値を有し、モノステアリン酸ソルビタン、ジステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、カプリルカプリル酸マクロゴールグリセリド、ラウリン酸プロピレングリコール、カプリル酸プロピレングリコール、モノステアリン酸グリセリル、オレイン酸ポリグリセリル、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１２】
前記親油性低ＨＬＢ界面活性剤がモノステアリン酸ソルビタンである、請求項１１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１３】
前記有機溶媒が、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジオキサン、炭酸プロピレン、ジエチルエーテル、有機ハロゲン化物、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、メチルエチルケトン、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１４】
前記有機溶媒がアセトンである、請求項１３に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１５】
前記親水性界面活性剤が、ポリオキシ化ポリマー、イオン性界面活性剤、および中性界面活性剤からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１６】
前記中性界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ステアリン酸マクロゴール、マクロゴールセトステアリルエーテル、マクロゴールラウリルエーテル、マクロゴールオレイルエーテル、オレイン酸マクロゴール、ポリオキシルヒマシ油、ポリオキシ水素化ヒマシ油、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１５に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１７】
前記中性親水性界面活性剤がポリソルベート８０である、請求項１６に記載のポリマーナノ粒子。
【請求項１８】
請求項１〜１７の何れか１項に定義されたポリマーナノ粒子の水性懸濁液であって、前記懸濁液が：
（ｉ）有機相に（ａ）疎水性ポリマー０．０１％〜３０．０％（ｗ／ｗ）、（ｂ）油または油の混合物０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、（ｃ）好ましくは固体の、少なくとも１種の親油性低ＨＬＢ界面活性剤を０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、（ｄ）有機溶媒１０％〜８０％（ｗ／ｗ）、および（ｅ）フィナステリド０．００１％〜８０．００％（ｗ／ｗ）；並びに
（ｉｉ）水相に（ｆ）少なくとも１種の親水性界面活性剤０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）、および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）、
を含む、水性懸濁液。
【請求項１９】
前記懸濁液が：
（ｉ）有機相に（ａ）ポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）中鎖トリグリセリド０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）モノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）アセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）、および（ｅ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；並びに
（ｉｉ）水相に（ｆ）ポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）、
を含む、請求項１８に記載のポリマーナノ粒子の水性懸濁液。
【請求項２０】
前記懸濁液が：
（ｉ）有機相に（ａ）ポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドを含む油とリナロールおよびファルネソール（Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９）との混合物０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）モノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）アセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；並びに
（ｉｉ）水相に（ｆ）ポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）
を含む、請求項１８に記載のポリマーナノ粒子の水性懸液。
【請求項２１】
（Ａ）請求項１〜１７の何れかで定義されたポリマーナノ粒子であり、前記ナノカプセルが、（ａ）フィナステリド０．０１％〜２．５％（ｗ／ｗ）；（ｂ）疎水性ポリマー、好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）０．１％〜１０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）油および／または油の混合物、好ましくは、中鎖トリグリセリド、および／または中鎖トリグリセリドとリナロールおよびファルネソール（Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９）との混合物０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤、好ましくはモノステアリン酸ソルビタン０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｅ）親水性界面活性剤、好ましくはポリソルベート８０の０．００１％〜１０％（ｗ／ｗ）を含む、ポリマーナノ粒子と；
（Ｂ）医薬品として許容される担体とを含み；前記ナノカプセルの構成成分の量は、最終製剤中のパーセンテージで表されており、前記ナノカプセルが、前記医薬品として許容される賦形剤中に分散されている、脱毛症を治療するための医薬組成物。
【請求項２２】
フィナステリド０．０１〜１．０％を含有する、医薬品として許容される賦形剤中に分散されたナノカプセルを含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
局所投与用であり、溶液、ゲルまたはローションの形をとる、請求項２１または請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
分散剤、界面活性剤、湿潤剤、皮膚軟化薬、増粘剤、金属イオン封鎖剤、保存剤、酸化防止剤および香料などの群から選択された添加剤をさらに含む、請求項２２または請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
請求項１〜１７の何れかに定義されたポリマーナノ粒子を調製するための方法であって、前記方法が：
（ｉ）疎水性ポリマーおよびフィナステリド、不揮発性油または油の混合物、少なくとも１種の低ＨＬＢ界面活性剤を、有機溶媒に溶解することによって、有機相を調製する工程；
（ｉｉ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、好ましくは中性の親水性界面活性剤を、水に混合することによって、水相を調製する工程；
（ｉｉｉ）前記有機相を前記水相に注入して、前記溶媒中で前記有機相の拡散によって、ナノ構造を即時に形成させる工程であり、前記混合物が、前記拡散がフィナステリドの適切なカプセル封入を提供するのに十分な時間にわたり、撹拌した状態で維持される工程；
（ｉｖ）前記有機溶媒を除去し、前記ナノカプセルを含有する水相の回収を許容する工程
を含む方法。
【請求項２６】
前記フィナステリドナノカプセルが、予め形成されたポリマーの界面堆積方法により得られる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
脱毛症の治療用の医薬組成物を調製するための、請求項１〜１７の何れか１項に定義されたナノカプセルの使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
第２の態様では、前記ポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルは、有機相および水相を調製することによって形成され：
−  （ｉ）有機相は：（ａ）疎水性ポリマー、（ｂ）油または油の混合物、（ｃ）少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤、（ｄ）溶媒、および（ｅ）フィナステリドを含み；
−  （ｉｉ）水相は：（ｆ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、および（ｇ）水を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
本発明は、コロイド状分散体の内相と外相の両方におけるその不溶性に起因して、溶液からのナノカプセルを自己組織化しその結果として界面ポリマー堆積がなされる方法による、ポリマーナノ粒子、好ましくはポリマーナノカプセルの調製を、特に対象とする。しかし、本発明のナノカプセルを生成するのにその他の方法を使用できることを明らかにすべきである。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
前記ポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルは、下記の通り、有機相および水相から形成される：
−  （ｉ）有機相は：（ａ）疎水性ポリマー、（ｂ）油または油の混合物、（ｃ）少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤、（ｄ）溶媒、および（ｅ）フィナステリドを含み；
−  （ｉｉ）水相は：（ｆ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、および（ｇ）水を含む。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
フィナステリドをカプセル封入するのに使用される前記ポリマーは、ビニルポリマー、ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、アクリルポリマーおよびポリカーボネートからなる群から選択された疎水性ポリマーである。好ましくは、使用された疎水性ポリマーは、融点が１２０℃未満のポリエステルの群から得た生分解性ポリマーである。より好ましくは、１２０℃未満の融点を有するポリエステルの群からの生分解性疎水性ポリマーは、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）のコポリマー、ポリカプロラクトン、ポリカプロラクトンとポリエステル、ポリアミド、ポリウレタンまたはビニルポリマーとのコポリマーからなる群から選択され、最も好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
本発明のナノカプセルの有機相の調製で使用される、油または油の混合物は、中鎖トリグリセリド、キャノーラ油、大豆油、オリーブ油、米ぬか油、ブドウ種子油、魚油、アマニ油、精油およびそれらの混合物からなる群から選択される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
本発明のこれらのポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルの調製物の、有機相で使用される溶媒は、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジオキサン、炭酸プロピレン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、有機ハロゲン化物、酢酸エチル、アセトニトリル、メチルエチルケトン、これらの混合物、または水との分子間相互作用の物理化学的性質を示す任意のその他の溶媒からなる群から選択された、有機溶媒である。本発明の好ましい態様では、有機溶媒は、好ましくはアセトンである。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
水相は、ポリオキシ化ポリマー、イオン性界面活性剤、および中性界面活性剤からなる群から選択された少なくとも１種の親水性界面活性剤を含有する。本発明のポリマーナノ粒子を調製するために、好ましくは、水相は少なくとも１種の親水性界面活性剤を含有し、この親水性界面活性剤は、好ましくはポリオキシ化ポリマーなどの乳化剤であり、またはイオン性界面活性剤、たとえばレシチン、または中性界面活性剤、たとえば、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、もしくはポリソルベート８０、ステアリン酸マクロゴール、マクロゴールセトステアリルエーテル、マクロゴールラウリルエーテル、マクロゴールオレイルエーテル、オレイン酸マクロゴール、ポリオキシルヒマシ油、水素化ポリオキシルヒマシ油、およびこれらの混合物からなる群から選択されたものである。好ましくは、ポリソルベートが用いられ、より好ましくは、ポリソルベート８０が本発明のナノ粒子の調製の水相のために用いられる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
ポリマーナノ粒子の水性懸濁液、好ましくナノカプセルは、下記を含む：
−  （ｉ）有機相に（ａ）疎水性ポリマー０．０１％〜３０．０％（ｗ／ｗ）、（ｂ）油または油の混合物０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、（ｃ）好ましくは固体の、少なくとも１種の親油性低ＨＬＢ界面活性剤０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、（ｄ）有機溶媒１０％〜８０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）フィナステリド０．００１％〜８０．００％（ｗ／ｗ）；ならびに
−  （ｉｉ）水相に（ｆ）少なくとも１種の親水性界面活性剤０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）、および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
水性懸濁液の第１の好ましい製剤では、ポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルは、下記を含む：
−  （ｉ）有機相に、（ａ）疎水性ポリマー、好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）油、好ましくは中鎖トリグリセリド０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）少なくとも１種の親油性界面活性剤、好ましくはモノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）有機溶媒、好ましくはアセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；ならびに
−  （ｉｉ）水相に、（ｆ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、好ましくはポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
水性懸濁液の第２の好ましい製剤では、ポリマーナノ粒子、好ましくはナノカプセルは、下記を含む：
−  （ｉ）有機相に、（ａ）疎水性ポリマー、好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）油の混合物、好ましくはカプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドと、ファルネソール、リナロールおよび（Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９）との混合物０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）少なくとも１種の親油性界面活性剤、好ましくはモノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）有機溶媒、好ましくはアセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；ならびに
−  （ｉｉ）水相には、（ｆ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、好ましくはポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
脱毛症を治療するための医薬組成物は：（Ａ）（ａ）フィナステリド０．０１％〜２．５％（ｗ／ｗ）；（ｂ）疎水性ポリマー、好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）０．１％〜１０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）油および／または油の混合物、好ましくは、中鎖トリグリセリド、および／または中鎖トリグリセリドと、ファルネソールおよびリナロール（Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９）との混合物０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤、好ましくはモノステアリン酸ソルビタン０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｅ）親水性界面活性剤、好ましくはポリソルベート８０の０．００１％〜１０％（ｗ／ｗ）を含む、本発明のポリマーナノ粒子、好ましくナノカプセルと；（Ｂ）医薬品として許容される担体とを含有し、ナノカプセルの構成成分の量は、最終製剤中のパーセンテージで表されており、前記ナノカプセルは前記医薬品として許容される賦形剤中に分散されている。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
脱毛症を治療するための本発明の医薬組成物は、局所投与を意図しており、溶液、ゲルまたはローションの形をとる。脱毛症を治療するための医薬組成物は、添加剤、たとえば、分散剤、界面活性剤、湿潤剤、皮膚軟化薬、増粘剤、金属イオン封鎖剤、保存剤、酸化防止剤および香料などを任意に含有してもよい。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
例１．５：  本発明の第１の態様のフィナステリドナノカプセルの、安定性の研究
フィナステリドナノカプセル（ＮＦ２５）の安定性を決定するために、下記を評価した：
ナノカプセル懸濁液を、アセトニトリル中で、超音波で処理し（３０分間）、製剤の構成成分を溶解させた。フィナステリドの投薬量決定は、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して行った。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
Ａ．  結晶の存在の検証
薬物の濃度が、ナノカプセル核で使用される油中でのその溶解度を超えた場合、ナノ結晶の同時形成が生じる可能性があり、これは形成されたナノカプセルと同じ流体力学半径を有する可能性があり、それによって狭いサイズ分布が発生するが、これはナノカプセルに関して異なるものではない。さらに、時間と共に、これらの結晶は、沈殿によってサイズの増加を受ける可能性がある。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
ある態様について記述してきたが、それらは単なる例示的な様式として提示されており、本発明の範囲を限定するものではない。事実、ここに記載される新しい態様は、様々なその他の形で実施されてもよく；それよりむしろ、ここに記載される態様の形をとる様々な省略、置換および変更を、本発明の趣旨から逸脱することなく行ってもよい。そのような形または修正例は本発明の範囲および趣旨に含まれるため、この明細書に添付される特許請求の範囲およびその均等物は、そのような形または修正例を包含すると見なされる。
以下に本願発明の態様を付記する。
［１］活性成分フィナステリドを含むポリマーナノ粒子であって、前記ナノ粒子が有機相および水相を調製することによって形成され：
（ａ）前記有機相は：（ｉ）疎水性ポリマー、（ｉｉ）油または油の混合物、（ｉｉｉ）少なくとも１種の親油性低ＨＬＢ界面活性剤、（ｉｖ）有機溶媒、および（ｖ）フィナステリドを含み；かつ
（ｉｉ）前記水相は：（ｖｉ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、および（ｖｉｉ）水を含む、
ポリマーナノ粒子。
［２］ナノカプセルの形をとる、［１］に記載のポリマーナノ粒子。
［３］前記疎水性ポリマーが、ビニルポリマー、ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、アクリルポリマーおよびポリカーボネートからなる群から選択される、［１］に記載のポリマーナノ粒子。
［４］前記疎水性ポリマーが、１２０℃未満の融点を有するポリエステルの群からの生分解性ポリマーである、［３］に記載のポリマーナノ粒子。
［５］１２０℃未満の融点を有するポリエステルの群からの前記疎水性生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）のコポリマー、ポリカプロラクトン、およびポリカプロラクトンとポリエステル、ポリアミド、ポリウレタンまたはビニルポリマーとのコポリマーからなる群から選択される、［４］に記載のポリマーナノ粒子。
［６］前記ポリカプロラクトンがポリ（ε−カプロラクトン）である、［５］に記載のポリマーナノ粒子。
［７］前記油が、中鎖トリグリセリド、キャノーラ油、大豆油、オリーブ油、米ぬか油、ブドウ種子油、魚油、アマニ油、精油、およびこれらの混合物からなる群から選択される、［１］に記載のポリマーナノ粒子。
［８］前記中鎖トリグリセリドが、カプリンおよびカプリル酸のトリグリセリド、プロピレングリコールジカプリル／カプレート、オレイルマクロゴールグリセリド、ラウレル、リナロール、およびこれらの混合物の群から選択される、［７］に記載のポリマーナノ粒子。
［９］前記精油が、リナロール、ファルネソール、およびこれらの混合物の群から選択される、［７］に記載のポリマーナノ粒子。
［１０］前記油が、カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドである、［７］に記載のポリマーナノ粒子。
［１１］前記油の混合物が、カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリド、ならびにリナロールとファルネソールとの混合物である、［７］に記載のポリマーナノ粒子。
［１２］前記親油性界面活性剤が、３〜６の範囲の低ＨＬＢ値を有し、モノステアリン酸ソルビタン、ジステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、カプリルカプリル酸マクロゴールグリセリド、ラウリン酸プロピレングリコール、カプリル酸プロピレングリコール、モノステアリン酸グリセリル、オレイン酸ポリグリセリル、およびこれらの混合物からなる群から選択される、［１］に記載のポリマーナノ粒子。
［１３］前記親油性低ＨＬＢ界面活性剤がモノステアリン酸ソルビタンである、［１２］に記載のポリマーナノ粒子。
［１４］前記有機溶媒が、水との分子間相互作用の物理化学的性質を有する溶媒であり、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジオキサン、炭酸プロピレン、ジエチルエーテル、有機ハロゲン化物、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、メチルエチルケトン、およびこれらの混合物からなる群から選択される、［１］に記載のポリマーナノ粒子。
［１５］前記有機溶媒がアセトンである、［１４］に記載のポリマーナノ粒子。
［１６］前記親水性界面活性剤が、ポリオキシ化ポリマー、イオン性界面活性剤、および中性界面活性剤からなる群から選択される、［１］に記載のポリマーナノ粒子。
［１７］前記親水性界面活性剤が、ポリソルベート２０、６０または８０、ステアリン酸マクロゴール、マクロゴールセトステアリルエーテル、マクロゴールラウリルエーテル、マクロゴールオレイルエーテル、オレイン酸マクロゴール、ポリオキシルヒマシ油、ポリオキシ水素化ヒマシ油、およびこれらの混合物からなる群から選択された中性界面活性剤である、［１６］に記載のポリマーナノ粒子。
［１８］前記中性親水性界面活性剤がポリソルベート８０である、［１７］に記載のポリマーナノ粒子。
［１９］［１］〜［１８］の何れか１に定義されたポリマーナノ粒子の水性懸濁液であって、前記懸濁液が：
（ｉ）（ａ）フィナステリド０．００１％〜８０．０％（ｗ／ｗ）、（ｂ）疎水性ポリマー０．０１％〜３０．０％（ｗ／ｗ）、（ｃ）油または油の混合物０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、（ｄ）好ましくは固体の、少なくとも１種の親油性低ＨＬＢ界面活性剤を０．０１％〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および（ｅ）有機溶媒１０％〜８０％（ｗ／ｗ）を含む有機相と；
（ｉｉ）（ｆ）少なくとも１種の親水性界面活性剤０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）、および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）を含む水相と
を含む、水性懸濁液。
［２０］前記懸濁液が：
（ｉ）（ａ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）ポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）中鎖トリグリセリド０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）モノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）アセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）を含む有機相と；
（ｉｉ）（ｆ）ポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）を含む水相と
を含む、［１９］に記載のポリマーナノ粒子の水性懸濁液。
［２１］前記懸濁液が：
（ｉ）（ａ）フィナステリド０．００５％〜５０．０％（ｗ／ｗ）；（ｂ）ポリ（ε−カプロラクトン）０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）カプリルおよびカプリン酸のトリグリセリドを含む油とリナロールおよびファルネソール（Ｕｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９）との混合物０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）モノステアリン酸ソルビタン０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｅ）アセトン１０％〜８０％（ｗ／ｗ）を含む有機相と；
（ｉｉ）（ｆ）ポリソルベート０．０５％〜２０．０％（ｗ／ｗ）；および（ｇ）水１０％〜９０％（ｗ／ｗ）を含む水相と
を含む、［１９］に記載のポリマーナノ粒子の水性懸液。
［２２］（Ａ）［１］〜［１８］の何れかで定義されたポリマーナノ粒子であり、前記ナノカプセルが、（ａ）フィナステリド０．０１％〜２．５％（ｗ／ｗ）；（ｂ）疎水性ポリマー、好ましくはポリ（ε−カプロラクトン）０．１％〜１０．０％（ｗ／ｗ）；（ｃ）油および／または油の混合物、好ましくは、中鎖トリグリセリド、および／または中鎖トリグリセリドとＵｎｉｓｔａｂ（登録商標）Ｓ−６９との混合物０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｄ）少なくとも１種の低ＨＬＢ親油性界面活性剤、好ましくはモノステアリン酸ソルビタン０．１％〜５．０％（ｗ／ｗ）；（ｅ）親水性界面活性剤、好ましくはポリソルベート８０の０．００１％〜１０％（ｗ／ｗ）を含む、ポリマーナノ粒子と；
（Ｂ）医薬品として許容される担体とを含み、前記ナノカプセルの構成成分の量は、最終製剤中のパーセンテージで表されており、前記ナノカプセルが、前記医薬品として許容される賦形剤中に分散されている、脱毛症を治療するための医薬組成物。
［２３］フィナステリド０．０１〜１．０％を含有する、医薬品として許容される賦形剤中に分散されたナノカプセルを含む、［２０］または［２１］に記載の医薬組成物。
［２４］局所投与用であり、溶液、ゲルまたはローションの形をとる、［２３］に記載の医薬組成物。
［２５］分散剤、界面活性剤、湿潤剤、皮膚軟化薬、増粘剤、金属イオン封鎖剤、保存剤、酸化防止剤および香料などの群から選択された添加剤をさらに含む、［２２］、［２３］または［２４］に記載の医薬組成物。
［２６］［１］〜［１８］の何れかに定義されたポリマーナノ粒子を調製するための方法であって、前記方法が：
（ｉ）疎水性ポリマーおよびフィナステリド、不揮発性油または油の混合物、少なくとも１種の低ＨＬＢ界面活性剤を、有機溶媒に溶解することによって、有機相を調製する工程；
（ｉｉ）少なくとも１種の親水性界面活性剤、好ましくは中性の親水性界面活性剤を、水に混合することによって、水相を調製する工程；
（ｉｉｉ）前記有機相を前記水相に注入して、前記２相の界面でナノ粒子の１次エマルジョンを形成させる工程であり、前記混合物が、前記活性成分の適切なカプセル封入を行うのに十分な時間にわたり、撹拌した状態で維持される工程；
（ｉｖ）少なくとも１種の有機溶媒を除去し、前記ナノカプセルを含有する水相を回収する工程
を含む方法。
［２７］前記疎水性ポリマーが、ビニルポリマー、ポリエステル、ポリアミド、ポリウレタン、アクリルポリマーおよびポリカーボネートからなる群から選択される、［２６］に記載の方法。
［２８］前記ポリエステルが、１２０℃未満の融点を有し、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）のコポリマー、ポリカプロラクトン、ポリカプロラクトンとポリエステル、ポリアミド、ポリウレタンまたはビニルポリマーとのコポリマーからなる群から選択される、［２７］に記載の方法。
［２９］前記フィナステリドナノカプセルが、予め形成されたポリマーの界面堆積方法により得られ、第１の工程では、フィナステリド、前記疎水性ポリマー、前記不揮発性油または油の混合物、および少なくとも１種の低ＨＬＢ界面活性剤を有機溶媒に溶解して、有機相を形成し；第２の工程では、少なくとも１種の親水性界面活性剤を水に混合して水相を形成する、［２８］に記載の方法。
［３０］脱毛症の治療用の医薬組成物を調製するための、［１］〜［１８］の何れか１項に定義されたナノカプセルの使用。
【国際調査報告】
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