(57)【要約】本発明は、（ｉ）Ｔ細胞抗原、および（ｉｉ）ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかの結合パートナーを含む作用物質であって、該作用物質がＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞に結合した後、該作用物質が内部移行し、該Ｔ細胞抗原が、Ｔ細胞によって認識されうる形態で該細胞の表面に提示される、作用物質に関する。【選択図】図２Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）Ｔ細胞抗原、および
（ｉｉ）ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかの結合パートナー
を含む作用物質であって、該作用物質がＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞に結合した後、該作用物質が内部移行し、該Ｔ細胞抗原が、Ｔ細胞によって認識されうる形態で該細胞の表面に提示される、作用物質。
【請求項２】
前記Ｔ細胞抗原が、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかの前記結合パートナーに付着し、その結果前記Ｔ細胞抗原が、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する前記細胞内で前記結合パートナーから放出されうる、請求項１に記載の作用物質。
【請求項３】
前記Ｔ細胞抗原が、細胞内プロテアーゼによって前記結合パートナーから放出されうる、請求項２に記載の作用物質。
【請求項４】
前記作用物質が、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞に結合した後、前記作用物質が内部移行し、前記Ｔ細胞抗原が、ＭＨＣ分子またはグループＩ  ＣＤ１分子に結合することによって前記細胞の表面に提示される、請求項２に記載の作用物質。
【請求項５】
ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかの前記結合パートナーが、抗体、ホルモン、増殖因子、サイトカイン、または受容体リガンドのいずれかである、請求項１から４のいずれかに記載の作用物質。
【請求項６】
前記結合パートナーが抗体である、請求項５に記載の作用物質。
【請求項７】
前記抗体が、ＢＵ６９またはＳＧＮ−７０またはＳＧＮ−７５などの抗ＣＤ７０抗体である、請求項６に記載の作用物質。
【請求項８】
前記抗体が、ミラツズマブなどの抗ＣＤ７４抗体である、請求項６に記載の作用物質。
【請求項９】
前記Ｔ細胞抗原が、対象における既存のＴ細胞応答を誘発することができるものである、請求項１から８のいずれかに記載の作用物質。
【請求項１０】
前記Ｔ細胞抗原が、ペプチド、ポリペプチド、ホスホペプチド、またはリン脂質もしくはスフィンゴ脂質などの脂質のいずれかである、請求項１から９のいずれかに記載の作用物質。
【請求項１１】
前記抗原がウイルス由来抗原である、請求項９または１０に記載の作用物質。
【請求項１２】
前記抗原が、エプスタインバーウイルス（例えば、ＨＨＶ４）、サイトメガロウイルス（例えば、ヒトサイトメガロウイルス）、水痘帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、ライノウイルス、インフルエンザウイルスのいずれかに由来し、または破傷風トキソイドなどのワクチンに由来する、請求項１から１１のいずれかに記載の作用物質。
【請求項１３】
前記Ｔ細胞抗原が、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性抗原、またはグループＩ  ＣＤ１分子に結合することができる抗原である、請求項１から１２のいずれかに記載の作用物質。
【請求項１４】
医療で使用するための、請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質。
【請求項１５】
請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１６】
ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置する方法であって、請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質を投与するステップを含む、方法。
【請求項１７】
ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態の予防または処置において使用するための、請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質。
【請求項１８】
ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するための医薬の調製における、請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質の使用。
【請求項１９】
前記対象に前記作用物質を投与するステップの前に、（ｉ）前記対象のＭＨＣ対立遺伝子、および（ｉｉ）Ｔ細胞抗原に対する前記対象の細胞傷害性Ｔ細胞応答の一方または両方が判定される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
さらなる治療剤を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項１６または１９に記載の方法。
【請求項２１】
（ｉ）請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質、および（ｉｉ）さらなる治療剤を含む組成物またはキットオブパーツ。
【請求項２２】
ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態の予防または処置において使用するための、請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質およびさらなる治療剤。
【請求項２３】
前記対象がさらなる治療剤も投与される、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態の予防または処置において使用するための請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質。
【請求項２４】
前記対象が請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質も投与される、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態の予防または処置において使用するための治療剤。
【請求項２５】
ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するための医薬の調製における、請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質およびさらなる治療剤の使用。
【請求項２６】
前記対象がさらなる治療剤も投与される、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するための医薬の調製における、請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質の使用。
【請求項２７】
前記対象が請求項１から１３のいずれかに記載の作用物質も投与される、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するための医薬の調製における治療剤の使用。
【請求項２８】
ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる前記状態が、腫瘍（良性もしくは悪性）または自己免疫状態のいずれかである、請求項１から１４、１７、および２２から２４のいずれかに記載の作用物質、請求項１６、１９、および２０のいずれかに記載の方法、請求項１５もしくは２１に記載の組成物もしくはキットオブパーツ、または請求項１８および２５から２７のいずれかに記載の使用。
【請求項２９】
ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる前記状態が腫瘍であり、前記作用物質中の前記Ｔ細胞抗原がペプチドである、請求項１から１４、１７、２２から２４、および２８のいずれかに記載の作用物質、請求項１６、１９、２０、および２８のいずれかに記載の方法、請求項１５、２１、および２８のいずれかに記載の組成物もしくはキットオブパーツ、または請求項１８および２５から２８のいずれかに記載の使用。
【請求項３０】
前記治療剤が、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７４、ＣＤ７０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ５９、ＣＤ５５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる前記状態を予防または処置するのに適しているものである、請求項２０、２８、および２９のいずれかに記載の方法、請求項２１、２８、および２９のいずれかに記載の組成物もしくはキットオブパーツ、請求項２２から２４、２８、および２９のいずれかに記載の作用物質、または請求項２５から２９のいずれかに記載の使用。
【請求項３１】
前記さらなる治療剤が、ワクチン、免疫刺激薬、生ウイルス、抗がん剤、本発明の作用物質に対する抗体応答の阻害剤、およびプロテアーゼ阻害剤のいずれか１種または複数である、請求項２０および２８から３０のいずれかに記載の方法、請求項２１および２８から３０のいずれかに記載の組成物もしくはキットオブパーツ、請求項２２から２４および２８から３０のいずれかに記載の作用物質、または請求項２５から３０のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫療法剤に関する。特に、本発明は、腫瘍または他の疾患を引き起こす細胞などの望まれない細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するのに使用されうる作用物質に関する。
【背景技術】
【０００２】
悪性疾患を標的にする免疫療法戦略は、トランスレーショナルな臨床研究の活発な分野であり、数十年にわたって存在している。現在のモデルは、がんが宿主の免疫療法操作で処置されうる機能的または体質的免疫不全症を代表することを指示している。これらの取り組みは、２つの群に広く分類されうる。第１の群は、ワクチン接種、サイトカインサポート（ＩＬ−２、ＩＦＮγ）、または免疫抑制環境の低減（イピリムマブ）などの対策によって内因性抗腫瘍免疫を増強またはサポートする機能を果たし、一方、第２の群は、機能的免疫応答の成分の絶対的欠乏を回復することを求める（抗体を用いた受動免疫療法、ＴＣＲ導入、幹細胞移植、および養子免疫療法）。これらの手法は、高度に有効な機能的抗腫瘍免疫応答が実際に可能であるという主張によって統一されている。いくつかの場合において、有効な抗腫瘍免疫応答についての議論の余地のない証拠が存在するが、腫瘍免疫学のこの心柱は、大きな取り組みにもかかわらず、がんを有する患者の大多数にとって利用可能な有効な免疫療法はまったくないという現在の臨床的現実によって圧倒的に論駁されている。ほとんどすべてのがんワクチン接種治験は、否定的な結果をもたらしており、陽性データをもたらすものは、最も頻繁には小さい効果を実証している。現実は、治療抗体は、わずかな例外があるものの、腫瘍学の分野では非常に少ない臨床的利益を提供するということである。
【０００３】
悪性組織を代わりに標的にするように内因性抗ウイルス免疫応答を効率的に分子的に再指向することができる治療戦略を開発することができれば、それは、悪性疾患を処置するための新しい強力で安全な手法を提供することができる。
【０００４】
大多数の細胞傷害性治療抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）などのその抗がん効果をもたらすのに免疫学的エフェクター機構を利用する。重要なことに、すべての細胞（健康および悪性の両方）は、自己免疫を防ぐために免疫応答による攻撃を制限する多数の機構を有する。これは、高レベルの組織反応性抗体が、しばしば臓器炎症を誘起するが、めったに完全な臓器破壊を誘導しない自己免疫疾患との関連で明白である。実際に、真性糖尿病などの完全な組織破壊が観察される自己免疫疾患は、抗体指向機構ではなくＣＴＬ応答に依存することが知られている。
【０００５】
治療抗体の芳しくない有効性を改善するために、細胞傷害性エフェクター機構（例えば、糖鎖工学）とより良好に関係する免疫複合体（放射性核種／毒素）および操作された抗体が使用されている。しかし、このような作用物質の臨床試験は、大部分は失望させるままであり、毒性に悩まされている。一例は、抗腫瘍剤に腫瘍を選択的に標的とするように開発された抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である（ＵＳ５，７７３，００１；ＵＳ５，７６７，２８５；ＵＳ５，７３９，１１６；ＵＳ５，６９３，７６２；ＵＳ５，５８５，０８９；ＵＳ２００６／００８８５２２；ＵＳ２０１１／０００８８４０；ＵＳ７，６５９，２４１；Ｈｕｇｈｅｓ（２０１０）、Ｎａｔ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ、９：６６５、Ｌａｓｈ（２０１０）；Ｉｎ  ｖｉｖｏ：Ｔｈｅ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ＆Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｒｅｐｏｒｔ、３２〜３８；Ｍａｈａｔｏら（２０１１）、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ、６３：６５９；Ｊｅｆｆｒｅｙら（２００６）、ＢＭＣＬ、１６：３５８；Ｄｒｕｇｓ  Ｒ  Ｄ、１１（１）：８５〜９５を参照）。ＡＤＣは一般に、腫瘍細胞に存在する標的に対するモノクローナル抗体、細胞傷害性薬、および抗体を薬物に付着させるリンカーを含む。しかし、ほんの数種のＡＤＣが現在、臨床開発の後期にあり、臨床的成功が達成しにくいことが証明されているものである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、より大きい有効性およびより低い毒性を有するより有効な免疫療法剤の要望が残っている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の作用物質は、再指向免疫療法（ｒｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）の一例である。これは、がんなどの状態における望まれない細胞を標的にするように外来抗原を持つ細胞を通常標的にする既存の免疫応答を再指向する概念に関する。この概念は、望まれない細胞が免疫細胞の標的になるように、望まれない細胞のマーカー抗原の提示を必要とする。
【０００８】
ＷＯ９５／１７２１２には、ペプチド性Ｔ細胞抗原および細胞結合パートナーからなるコンジュゲート、ならびに再指向免疫療法におけるこれらの使用が記載されている。コンジュゲートは、結合パートナーが表面受容体に結合した後、標的細胞内に内部移行すると言われ、Ｔ細胞抗原がコンジュゲートからプロセシングされ、ＭＨＣ分子との複合体の形態で細胞表面に発現される。Ｔ細胞受容体が複合体を認識すると、標的細胞に対する細胞毒性Ｔ細胞応答が誘導される。しかし、どの結合パートナーが内部移行、およびしたがって後続のＴ細胞抗原の提示を可能にし、どれが可能にしないかは、ＷＯ９５／１７２１２から予測することができない。有効にペプチド抗原を提示することが示された唯一の受容体は、Ｂ細胞の抗原受容体であった。その通常の役割は、ヘルパーＴ細胞を提示するために抗原に結合しそれを内部移行させることである。しかし、ＷＯ９５／１７２１２には、もしあればどの他の受容体が同じ結果をもたらすことが保証されているかについてのガイダンスが提供されていない。
【０００９】
驚くべきことに、かつ予想外に、本発明者らは、再指向免疫療法において有用性を有する特定の抗原、すなわちＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５を今では同定している。ウイルス由来ペプチドを有するこれらの抗原のそれぞれを標的にすると、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでウイルス特異的Ｔ細胞の活性化が増大し、驚くべきことに、抗原のそれぞれがペプチドの内部移行、および細胞表面での後続の提示を可能にすることを示す。
【００１０】
ＣＤ７０（ＴＮＦＳＦ７）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバーである。これは、ＩＩ型内在性膜タンパク質であり、ＣＤ２７のリガンドである。このタンパク質は、抗原活性化ＴおよびＢリンパ球内で一過性に発現され、ＣＤ２７とのその相互作用により、Ｔ−およびＢ−細胞機能が調節される。特に、このタンパク質は、標的細胞の死、生存、および同時刺激を制御するように作用する。ＣＤ７０は、正常リンパ球および樹状細胞の限られたサブセットによって発現されるが、広い範囲の血液悪性腫瘍および一部の固形腫瘍によって異常に発現される。
【００１１】
ＣＤ７４は、ＭＨＣクラスＩＩシャペロンであり、免疫細胞で炎症性サイトカインマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）の膜受容体として機能する。ＭＩＦがＣＤ７４に結合すると、ＭＡＰＫおよびＡｋｔ経路によって下流シグナル伝達が活性化され、細胞増殖および生存が促進される。免疫細胞による発現と並んで、ＣＤ７４過剰発現がいくつかの非ＣＮＳがんにおいて観察されており、これらの腫瘍中のＣＤ７４発現は一般に、攻撃的挙動および芳しくない患者予後に関連する。
【００１２】
ＣＤ２２は、そのＮ末端に位置した免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインを有するシアル酸に特異的に結合するレクチンのＳＩＧＬＥＣファミリーに属する分子である。これは、成熟Ｂ細胞の表面に見つかり、いくつかの未成熟Ｂ細胞により少ない程度に見つかる。ＣＤ２２は、免疫系の過剰活性化および自己免疫疾患の発症を予防する調節分子であると考えられている。これは、慢性リンパ球性白血病および非ホジキンリンパ腫を含めた多くのＢ細胞悪性腫瘍に存在する。
【００１３】
染色体６のヒト白血球抗原複合体によってコードされるＨＬＡ−ＤＲ  ＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体。ＨＬＡ−ＤＲおよびそのリガンドの複合体は、長さが９アミノ酸以上のペプチドであり、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のリガンドを構成する。ＨＬＡ−ＤＲ分子は、シグナル伝達に応答して上方制御される。ＨＬＡ−ＤＲは、ＨＬＡ−ＤＲ発現の増大がより良好な予後の転帰に関係する、結腸直腸癌を含めた様々ながんで見つかる。
【００１４】
ＣＤ２３は、アレルギー、および寄生虫に対する耐性に関与する抗体アイソタイプであるＩｇＥの「低親和性」受容体であり、ＩｇＥレベルの調節において重要である。抗体受容体の多くと異なり、ＣＤ２３は、Ｃ型レクチンである。これは、成熟Ｂ細胞、活性化マクロファージ、好酸球、濾胞樹状細胞、および血小板に見つかる。ＣＤ２３は、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病などにおいてＢ細胞に見つかる。
【００１５】
ＣＤ３０は、腫瘍壊死因子受容体ファミリーの細胞膜タンパク質および腫瘍マーカーである。この受容体は、活性化ＴおよびＢ細胞によって発現されるが、休止ＴおよびＢ細胞によって発現されない。ＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ５は、この受容体と相互作用することができ、ＮＦ−カッパＢを活性化するシグナル伝達を媒介する。これは、アポトーシスの正の調節因子であり、自己反応性ＣＤ８エフェクターＴ細胞の増殖能を制限し、自己免疫に対して体を保護することも示されている。ＣＤ３０は、未分化大細胞リンパ腫を含めたＴ細胞リンパ腫に見つかり、ホジキンリンパ腫を含めたＢ細胞リンパ腫によって発現されている。
【００１６】
ＣＤ４３は、ヒトＴリンパ球、単球、顆粒球、およびいくつかのＢリンパ球の表面の主要なシアロ糖タンパク質であり、これは、免疫機能に重要であると思われ、Ｔ細胞活性化に関与する生理学的リガンド−受容体複合体の一部でありうる。ＣＤ４３は、Ｔ細胞リンパ腫の９０％超で存在し、Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫を実証するパネルの一部としても有用であり得、理由は、この状態における悪生細胞がＣＤ４３陽性であることが多いためである。これはまた、顆粒球およびこれらの前駆体を染色し、したがって、骨髄腫瘍の有効なマーカーでありうる。
【００１７】
ＣＤ４４は、細胞間相互作用、細胞接着、および遊走に関与する細胞表面糖タンパク質である。これは、ヒアルロン酸の受容体であり、他のリガンド、例えば、オステオポンチン、コラーゲン、およびマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）などと相互作用することもできる。これは、リンパ球活性化、再循環およびホーミング、造血、および腫瘍転移を含めた多種多様な細胞機能に参加する。ＣＤ４４は、様々なスプライス形式で見つかり、ＣＤ４４のバリエーションは、いくつかの乳がんおよび前立腺がんの幹細胞の細胞表面マーカーとして報告されている。これは、上皮性卵巣がん患者の生存時間の延長の指標としても見られている。ＣＤ４４バリアントアイソフォームはまた、頭頸部扁平上皮癌の進行に関連している。
【００１８】
ＣＤ４７は、細胞外マトリックスへの細胞接着後に起こる細胞内カルシウム濃度の増大に関与する膜タンパク質である。このタンパク質は、トロンボスポンジンのＣ末端細胞結合性ドメインの受容体でもあり、膜輸送およびシグナル伝達において役割を果たすことができる。ＣＤ４７は、多くのタイプのがんで見つかる分子であり、マクロファージによる通常のスカベンジングから隠すために膀胱がん細胞によって使用される。
【００１９】
ＣＤ５４（細胞内接着分子１としても公知）は、一般に内皮細胞および免疫系の細胞で発現される細胞表面糖タンパク質である。これは、タイプＣＤ１１ａ／ＣＤ１８またはＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８のインテグリンに結合する。ＣＤ５４は、転移において役割を果たすことと関係付けられているＢ細胞リンパ芽球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、および他の内皮がんで見つかる。
【００２０】
ＣＤ５５（補体崩壊促進因子としても公知）は、細胞表面の補体系を調節する７０ｋＤａの膜タンパク質である。Ｃ３ｂＢｂ複合体（第２経路のＣ３−コンバターゼ）のアセンブリーを防止し、または事前に形成されたコンバターゼの解体を促進し、したがって細胞膜傷害複合体の形成を遮断する。この糖タンパク質は、造血および非造血細胞の中で広く分布している。これは、結腸直腸および前立腺を含めた多くの内皮癌で見つかる。
【００２１】
ＣＤ５８は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特にマクロファージに発現される細胞接着分子である。これは、Ｔ細胞のＣＤ２に結合し、Ｔ細胞とプロフェッショナル抗原提示細胞との間の接着の強化に重要である。この接着は、Ｔ細胞がペプチド：ＭＨＣ複合体のＡＰＣの表面を見てリンパ節を放浪しているとき、Ｔ細胞活性化の前のＴ細胞と抗原提示細胞との間の一過性の最初の遭遇の一部として起こる。これは、Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫および粘膜関連リンパ組織リンパ腫を含めた多くのリンパ腫で発現される。
【００２２】
ＣＤ５９は、Ｃ５ｂ６７８に結合し、Ｃ９が結合および重合するのを防止することによって補体膜侵襲複合体を阻害する。これは、「自己」細胞上に、補体がこれらに損傷を与えるのを防止するために存在する。これは、広い組織分布を有し、乳がんおよび前立腺がんと関係付けられている。
【００２３】
ＣＤ６２Ｌは、リンパ球に見つかる細胞接着分子である。これは、シアル化炭水化物基を認識するタンパク質のセレクチンファミリーに属する。これは、ＡＤＡＭ１７によって切断される。これは、リンパ球が高内皮細静脈を介して二次リンパ組織に入るための「ホーミング受容体」として作用する。これは、慢性リンパ球性白血病を含めたＢ細胞リンパ腫、および成人Ｔ細胞リンパ腫を含めたＴ細胞リンパ腫で見つかっている。
【００２４】
ＣＤ９５（Ｆａｓリガンドとしても公知）は、プログラム細胞死（アポトーシス）に導く細胞表面の細胞死受容体である。これは、多くの細胞型で見つかり、卵巣癌および結腸直腸癌を含めた多くのタイプのがんにおいて関係付けられている。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
したがって、本発明の第１の態様は、
（ｉ）Ｔ細胞抗原、および
（ｉｉ）ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナー
を含む作用物質であって、作用物質がＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞に結合した後、作用物質が内部移行し、Ｔ細胞抗原が、Ｔ細胞によって認識されうる形態で細胞の表面に提示される、作用物質を提供する。
【００２６】
疑義を回避するために、結合パートナーがＣＤ７０に対するものであるとき、作用物質は、ＣＤ７０を発現する細胞に結合するなどである。
【００２７】
Ｔ細胞抗原
「Ｔ細胞抗原」とは、Ｔ細胞応答を誘発するようにＴ細胞に提示されうる任意の抗原の意味を含む。例えば、Ｔ細胞抗原は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の表面でＭＨＣ分子またはグループＩ  ＣＤ１分子によってＴ細胞に提示されうる。抗原が細胞の表面に提示された後、細胞は、異質なものとして認識され、Ｔ細胞の標的となり、Ｔ細胞の一部は、異質な生物、例えば、ウイルス、真菌、細菌、マイコバクテリア、もしくは原生動物などによって感染された、またはがん性（例えば、悪性）となった異質細胞を排除する自然の機能を有する。したがって、Ｔ細胞抗原は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する望まれない細胞の分子によって提示されうるものであってもよいことが理解されるであろう。
【００２８】
Ｔ細胞抗原は、本発明の作用物質が投与される対象において既存のＴ細胞応答を誘発することができるものであることが理解されるであろう。一般に、Ｔ細胞抗原は、ＡＰＣ内の交差提示を介してその抗原の新しい一次Ｔ細胞応答を生じるものではない。別の言い方をすれば、Ｔ細胞抗原は、対象内のいくつかのＴ細胞が既に感作されているものである。対象の細胞が所与の抗原に対して感作されているか否かの判定は、以下および実施例でさらに記載するように、対象に由来する単離された末梢血単核細胞を抗原と接触させ、細胞増殖の標準アッセイを使用することによって行うことができる。
【００２９】
一実施形態では、本発明の作用物質は、その中に含まれているＴ細胞抗原に特異的な新しいＴ細胞応答を生じるものではない。したがって、本発明は、Ｔ細胞抗原、およびＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーを含む作用物質であって、作用物質がＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞に結合した後、作用物質が内部移行し、Ｔ細胞抗原が、Ｔ細胞によって認識されうる形態で細胞の表面に提示され、Ｔ細胞抗原が対象における既存のＴ細胞応答を誘発することができる、作用物質を含む。
【００３０】
「Ｔ細胞」とは、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、γδＴ細胞、およびＮＫ−Ｔ細胞を含めたすべてのタイプのＴ細胞を含む。好ましくは、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞であり、このうち、ヘルパーおよび細胞傷害性ＣＤ４＋Ｔ細胞の両方が公知である（Ａｐｐａｙ  Ｖ（２００４）、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３８（１）：１０〜１３）。
【００３１】
当技術分野で知られているように、抗原提示の機構は、Ｔ細胞のタイプに依存することとなる。任意の提示ルートを使用してもよく、ただし抗原は、Ｔ細胞応答を誘発することが理解される。言い換えれば、本発明の作用物質が内部移行した後、Ｔ細胞抗原は、Ｔ細胞応答を誘発することができるように細胞の表面に提示され得なければならない。好ましくは、以下でさらに記載するように、Ｔ細胞抗原は、ＭＨＣクラスＩＩプロセシング機構に入り、ＭＨＣクラスＩＩ分子に提示される。
【００３２】
好ましくは、Ｔ細胞抗原は、免疫優勢抗原（例えば、既存の免疫優性応答を誘発する抗原）である。「免疫優性」とは、抗原が抗原を持つ細胞を殺すことにおいて高い規模、感度、組織ホーミング特性、および効率を伴ってＴ細胞応答を誘発する意味を含む。一般に、免疫優性応答は、対象のＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の０．１％超を占める。所与の抗原に対するＴ細胞応答の程度の判定は、例えば対象に由来する単離された末梢血単核細胞を抗原と接触させ、当技術分野で公知の細胞増殖の標準アッセイを使用することによって行うことができる。免疫応答の程度を判定するのに適当なアッセイとしては、ＥＬＩＳｐｏｔ、細胞内サイトカイン染色、ＨＬＡ−ペプチド四量体染色、増殖アッセイ、活性化アッセイ（例えば、ＣＤ６９）、ＣＤ１０７動員アッセイ、または代謝アッセイ（例えば、ＭＴＴ）がある。
【００３３】
適当なＴ細胞抗原の例としては、ペプチド、ポリペプチド、ホスホペプチド、またはリン脂質もしくはスフィンゴ脂質などの脂質のいずれかがあり、これらのそれぞれのさらなる例を以下に示す。最も好ましくは、Ｔ細胞抗原は、ペプチドまたはポリペプチドである。
【００３４】
Ｔ細胞抗原がペプチドまたはポリペプチドである場合、一般にこれは、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合しているとき、Ｔ細胞受容体によって認識されうるものである。Ｔ細胞抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ分子のみに結合するＭＨＣクラスＩＩ拘束性抗原でありうる。抗原は、特定のバリアントＭＨＣクラスＩＩ分子（例えば、特定の対象において見つかる天然バリアント）のみに結合する場合があり、または抗原は、任意のＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができる場合がある（すなわち、抗原は、無差別である）ことが理解される。
【００３５】
一実施形態では、Ｔ細胞抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ分子、例えば、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、またはＨＬＡ−ＤＲのいずれかなどに結合することができる。一般的なＭＨＣクラスＩＩタイプとしては、ＤＲ１、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ７、ＤＲ５２、ＤＱ１、ＤＱ２、ＤＱ４、ＤＱ８、およびＤＰ１がある。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、抗原提示細胞、例えば、樹状細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージなどを含めた免疫細胞に発現される。したがって、Ｔ細胞抗原がＭＨＣクラスＩＩに拘束されている場合、本発明の作用物質は、リンパ腫または自己免疫疾患などの症状を処置するのに使用することができる。しかし、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、非免疫細胞で上方制御され得（例えば、ＩＦＮ−ガンマで刺激された後）、したがって他の状態も処置されうることが理解されるであろう。
【００３６】
使用することができる無差別ペプチドの一例は、Ａｌｅｘａｎｄｅｒら（２０００）、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６４：１６２５〜１６３３で定義されたＰＡＤＲＥ  ＭＨＣクラス−ＩＩエピトープ；ａＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡａＺＣ（ａ＝ｄ−アラニン、Ｘ＝Ｌ−シクロヘキシルアラニン、Ｚ＝アミノカプロン酸））（配列番号１）である。このエピトープは、人工物であるので、これは、本発明の作用物質を投与する前に免疫応答を生じさせるためにワクチンで患者に最初に導入される必要がある。使用することができる別の無差別ペプチドは、破傷風断片Ｃペプチドである。
【００３７】
好都合なことには、Ｔ細胞抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ分子によって認識される免疫原性ペプチドである。このようなペプチドは通常、９〜２２アミノ酸の長さを有する。好ましくは、ペプチドは、免疫優性ペプチドである。
【００３８】
免疫優性ペプチドの例には、内因性抗ウイルス応答を誘発するウイルス由来ペプチドが含まれる。したがって、ペプチドは、内因性ウイルス、例えば、水痘−帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス、またはインフルエンザなどに由来しうる。本明細書に記載の結合パートナーのいずれか（例えば、ＣＤ２２結合パートナー）と組み合わせて使用することができる特に好適な例は、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶもしくはヒトヘルペスウイルス５／ＨＨＶ５）またはエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶもしくはＨＨＶ４）；ヘルペスウイルス、例えば、ＨＨＶ１、ＨＨＶ２、およびＨＨＶ３など；インフルエンザウイルスＡ；インフルエンザウイルスＢ；ライノウイルス；アデノウイルス；ならびにヘパドナウイルスに由来するペプチドがあり、これらの具体例は、以下に示されている。
【００３９】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＨＶ５）については、免疫優勢抗原は、よく特徴付けられており（参照により本明細書に組み込まれているＳｙｌｗｅｓｔｅｒ  ＡＷら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．、２００５年９月５日；２０２（５）：６７３〜８５を参照）、したがってＳｙｌｗｅｓｔｅｒらに記載されている抗原を本発明で使用することができる。特に、Ｓｙｌｅｓｔｅｒらは、２１３の予測されたヒトＣＭＶタンパク質について、１０アミノ酸が重複している連続した１５ｍｅｒのペプチドを合成した。これにより、ＯＲＦまたはサブＯＲＦ特異的ミックスに配列された１３，６８７ペプチドが生成された。ＯＲＦ  ＵＬ５５（ｇＢ）、ＵＬ８３（ｐｐ６５）、ＵＬ８６、ＵＬ９９（ｐｐ２８）、ＵＬ１２２（ＩＥ２）、ＵＬ３６、ＵＬ４８、ＵＬ３２（ｐｐ１５０）、ＵＬ１１３、ＩＲＳ−１、ＵＬ１２３（ＩＥ１）、ＵＬ２５、ＵＬ１４１、ＵＬ５２、およびＵＬ８２（ｐｐ７１）に由来するペプチドは、ほとんどのＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発することが見出された。したがって、ペプチドがこれらのＯＲＦの１つに由来する場合、これは特に好適である。
【００４０】
使用することができる特定のサイトメガロウイルスＴ細胞抗原を以下に列挙する。
【００４１】
ｐｐ６５などのサイトメガロウイルス抗原のＣＤ４＋  Ｔ細胞エピトープは、ＰＱＹＳＥＨＰＴＦＴＳＱＹＲＩＱ（配列番号１）、ＦＴＳＱＹＲＩＱＧＫＬＥＹＲＨＴ（配列番号２）、ＬＬＱＴＧＩＨＶＲＶＳＱＰＳＬ（配列番号４３）、ＮＰＱＰＦＭＲＰＨＥＲＮＧＦＴ（配列番号４）、ＥＰＤＶＹＹＴＳＡＦＶＦＰＴＫ（配列番号５）、ＩＩＫＰＧＫＩＳＨＩＭＬＤＶＡ（配列番号６）、ＡＧＩＬＡＲＮＬＶＰＭＶＡＴＶ（配列番号７）、ＫＹＱＥＦＦＷＤＡＮＤＩＹＲＩ（配列番号８）を含み、；ｇＢについて、これらは、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）、ＣＭＬＴＩＴＴＡＲＳＫＹＰＹＨ（配列番号１０）、およびＶＦＥＴＳＧＧＬＶＶＦＷＱＧＩ（配列番号１１）を含み；ＩＥ１について、これらは、ＶＲＶＤＭＶＲＨＲＩＫＥＨＭＬＫＫＹＴＱ（配列番号１２）およびＮＹＩＶＰＥＤＫＲＥＭＷＭＡＣＩＫＥＬＨ（配列番号１３）を含み；ｇＨについて、これらは、ＨＥＬＬＶＬＶＫＫＡＱＬ（配列番号１４）を含む。
【００４２】
エプスタインバーウイルス（ＥＢＶまたはＨＨＶ４）について、免疫優性タンパク質もよく特徴付けられており、Ｈｉｓｌｏｐ  ＡＤら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００７；２５：５８７〜６１７（参照により本明細書に組み込まれている）に示されている。Ｈｉｓｌｏｐらから適応させた適当なＴ細胞エピトープのリストを以下に示す。
【００４３】
【表１】
2015529676.tif 000003
2015529676.tif 000004
2015529676.tif 000005
【００４４】
Ｔ細胞抗原（例えば、ペプチド）は、生きたワクチン、例えば、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹（ＭＭＲ）、もしくはＨＨＶ３などに由来するもの；またはマイコバクテリア、特にＢＣＧでの免疫化によって誘起されるものなどの細胞内細菌に由来するものでありうることが理解される。このようなペプチドは、当技術分野で周知である。同様に、Ｔ細胞抗原（例えば、ペプチド）は、破傷風トキソイド、例えば、Ｐ２、Ｐ４、またはＰ３０などに由来しうる。したがって、Ｔ細胞抗原（例えば、ペプチド）は、感染性病原体に対する先のワクチン接種によって生じた対象における既存の免疫応答を誘発するものでありうることが理解されるであろう。Ｔ細胞抗原に対して感作されたＴ細胞の数を増やすために、Ｔ細胞抗原を含むワクチンで対象をワクチン接種または追加免疫することが望ましい場合があるということになる。例えば、対象は、関連したＴ細胞抗原を含む本発明の作用物質を投与される前に、破傷風毒素でワクチン接種されてもよい。
【００４５】
多くの人は、これらのワクチンで小児期にワクチン接種されるので、彼らは、これらのＴ細胞抗原に対して感作されているＴ細胞を含んでいる可能性があることが理解されるであろう。したがって、一実施形態では、Ｔ細胞抗原は、小児期ワクチンに見つかるもの、好ましくは日常的に使用されるもの、例えば、ＭＭＲ、麻疹、ＢＣＧ、黄熱病、ポリオ、Ｖ２Ｖ、およびインフルエンザなどである。
【００４６】
好適ではないが、Ｔ細胞抗原（例えば、ペプチド）は、対象のＴ細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで抗原に曝露することによって生じた対象における既存の免疫応答を誘発するものであってもよい。
【００４７】
ペプチドは、周知の化学手順、例えば、溶液もしくは固相合成、または当技術分野で公知である従来の溶液法によってカップリングされたタンパク質断片から開始する溶液中での半合成などによって生成することができる。代わりに、ペプチドは、組換え法を含めた確立された方法によって合成することができる。
【００４８】
Ｔ細胞抗原は、ポリペプチドまたはペプチドであることが好適であるが、他の抗原も免疫応答を誘発することができ、したがって本発明において有用性を有することが分かる。例えば、γδＴ細胞は、ＭＨＣ関連ペプチド抗原を認識せず、ＭＨＣに拘束されない。いくつかのγδＴ細胞クローンは、小リン酸化分子、ピロリン酸化化合物（例えば、ＨＭＢＰＰ（Ｅ−４−ヒドロキシ−３−メチル−ブタ−２−エニル−ピロリン酸）およびＩＰＰ（イソペンテニルピロリン酸））、アルキルアミン、またはＣＤ１分子と呼ばれる「非古典的な」クラスＩ  ＭＨＣ様分子によって提示されうる脂質（例えば、リン酸化脂質）を認識する。同様に、ＮＫ−Ｔ細胞（例えば、Ｖα２４Ｖβ１１細胞）は、ＣＤ１分子に結合した脂質（例えば、α−ｇａｌ−セラミドなどのセラミド）を認識する。したがって、Ｔ細胞抗原は、Ｔ細胞応答を誘発することが知られているこれらの分子のいずれであってもよい。もちろん、Ｔ細胞抗原は、細胞内に作用物質が内部移行した後、これらの分子のいずれかに提示されうるものでなければならない。
【００４９】
作用物質が、自己免疫性またはアレルギー性疾患を処置するために以下に記載するように使用される場合、Ｔ細胞抗原は、それぞれ自己抗原またはアレルゲンでありうることが理解されるであろう。このように、障害の一因となっている免疫応答は、障害と闘うように望まれない細胞に再指向される。
【００５０】
Ｔ細胞抗原は、Ｔ細胞応答を依然として誘発することができるという条件で化学修飾することができることが理解される。このような化学修飾として、例えば、ニッケルなどの金属の付加を挙げることができ、理由は、ある特定のアレルギー患者において、結合したニッケル原子を有するペプチドを認識するＴ細胞があることが示されているためである（Ｒｏｍａｇｎｏｌｉら、１９９１、ＥＭＢＯ  Ｊ、１０：１３０３〜１３０６）。Ｔ細胞抗原は、免疫原性を増強する有機分子によって修飾することもできる（Ｒｏｍｅｒｏら、１９９３、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５０：３８２５〜３８３１）。他の修飾としては、リン酸化、アセチル化、アルキル化、アシル化、アミド化、グリコシル化、メチル化、シトルリン化、ニトロ化、硫酸化、およびヒドロキシル化、酸または塩基との塩の形成、末端カルボキシル基のエステルまたはアミドの形成、およびＮ−ｔ−ブトキシカルボニルなどのアミノ酸保護基の付着がある。
【００５１】
Ｔ細胞抗原がペプチドであるとき、これは、ＤＮＡによってコードされる天然に存在するアミノ酸および／あるいは「Ｄ」異性型でのアミノ酸を含み、またはＮ−メチル化アミノ酸、もしくはベータアミノ酸、もしくはペプトイドの使用を組み込んでいる１つまたは複数の非天然アミノ酸を含むことができ、ただしこれは、対応するＴ細胞によって認識されることが理解される。したがってペプチドは、上述したペプチドのいずれかの構造的フィーチャーを模倣するペプチド「模倣体」、すなわち、ペプチド模倣体でありうる。例えば、Ｔ細胞抗原は、レトロ−インベルソペプチドでありうる。
【００５２】
同様に、Ｔ細胞抗原は、ペプチドであるとき、ミモトープ、すなわち、天然エピトープの構造を模倣する天然または非天然アミノ酸から構成されるペプチドでありうる。ミモトープは、Ｔ細胞をより強力に刺激することが多い。
【００５３】
好ましくは、Ｔ細胞抗原は、Ｔリンパ球の非存在下で実質的に無毒性である。「実質的に無毒性」とは、抗原が、シュードモナス外毒素などの毒素と比較して、相当に低い毒性を有し、または好ましくは、検出可能な毒性をまったく有さないことを意味する。
【００５４】
当業者は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｅｅｐｉｔｏｐｅ．ｏｒｇ（Ｖｉｔａ  Ｒ、Ｚａｒｅｂｓｋｉ  Ｌ、Ｇｒｅｅｎｂａｕｍ  ＪＡ、Ｅｍａｍｉ  Ｈ、Ｈｏｏｆ  Ｉ、Ｓａｌｉｍｉ  Ｎ、Ｄａｍｌｅ  Ｒ、Ｓｅｔｔｅ  Ａ、Ｐｅｔｅｒｓ  Ｂ．、Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｄａｔａｂａｓｅ  ２．０．、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２０１０年１月；３８（データベース版）：Ｄ８５４−６２．、Ｅｐｕｂ、２００９年１１月１１日）で利用可能なデータベースを使用して、本発明で使用されうるさらなるＴ細胞抗原を同定することができるであろう。
【００５５】
結合パートナー
「ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナー」とは、それぞれ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかに結合する任意の分子の意味を含む。このように、本発明の作用物質は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の表面に結合することができる。
【００５６】
「ＣＤ７０」とは、そのアミノ配列が図１Ａに示されており、受託番号Ｐ３２９７０を有するヒトＣＤ７０を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ７０の結合パートナーは、図１Ａに列挙された配列を有するヒトＣＤ７０の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ７０の結合パートナーには、図１Ａ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ７０、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ７０の結合パートナーも含まれる。
【００５７】
「ＣＤ７４」とは、そのアミノ配列が図１Ｂに示されており、受託番号Ｐ０４２３３を有するヒトＣＤ７４を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ７４の結合パートナーは、図１Ｂに列挙された配列を有するヒトＣＤ７４の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ７４の結合パートナーには、図１Ｂ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ７４、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ７４の結合パートナーも含まれる。
【００５８】
「ＣＤ２２」とは、そのアミノ配列が図１Ｂに示されており、受託番号Ｐ２０２７３を有するヒトＣＤ２２を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ２２の結合パートナーは、図１Ｃに列挙された配列を有するヒトＣＤ２２の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ２２の結合パートナーには、図１Ｃ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ２２、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ２２の結合パートナーも含まれる。
【００５９】
「ＨＬＡ−ＤＲ」とは、そのアミノ配列が図１Ｄに示されており、受託番号Ｑ２９７６９を有するヒトＨＬＡ−ＤＲを含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＨＬＡ−ＤＲの結合パートナーは、図１Ｄに列挙された配列を有するヒトＨＬＡ−ＤＲの結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＨＬＡ−ＤＲの結合パートナーには、図１Ｄ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＨＬＡ−ＤＲ、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＨＬＡ−ＤＲの結合パートナーも含まれる。
【００６０】
「ＣＤ２３」とは、そのアミノ配列が図１Ｅに示されており、受託番号Ｐ０６７３４を有するヒトＣＤ２３を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ２３の結合パートナーは、図１Ｅに列挙された配列を有するヒトＣＤ２３の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ２３の結合パートナーには、図１Ｅ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ２３、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ２３の結合パートナーも含まれる。
【００６１】
「ＣＤ３０」とは、そのアミノ配列が図１Ｆに示されており、受託番号Ｐ２８９０８を有するヒトＣＤ３０を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ３０の結合パートナーは、図１Ｆに列挙された配列を有するヒトＣＤ３０の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ３０の結合パートナーには、図１Ｆ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ３０、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ３０の結合パートナーも含まれる。
【００６２】
「ＣＤ４３」とは、そのアミノ配列が図１Ｇに示されており、受託番号Ｐ１６１５０を有するヒトＣＤ４３を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ４３の結合パートナーは、図１Ｇに列挙された配列を有するヒトＣＤ４３の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ４３の結合パートナーには、図１Ｇ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ４３、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ４３の結合パートナーも含まれる。
【００６３】
「ＣＤ４４」とは、そのアミノ配列が図１Ｈに示されており、受託番号Ｐ１６０７０を有するヒトＣＤ４４を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ４４の結合パートナーは、図１Ｈに列挙された配列を有するヒトＣＤ４４の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ４４の結合パートナーには、図１Ｈ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ４４、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ４４の結合パートナーも含まれる。
【００６４】
「ＣＤ４７」とは、そのアミノ配列が図１Ｉに示されており、受託番号Ｐ０８７２２を有するヒトＣＤ４７を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ４７の結合パートナーは、図１Ｉに列挙された配列を有するヒトＣＤ４７の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ４７の結合パートナーには、図１Ｉ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ４７、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ４７の結合パートナーも含まれる。
【００６５】
「ＣＤ５４」とは、そのアミノ配列が図１Ｊに示されており、受託番号Ｐ０５３６２を有するヒトＣＤ５４を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ５４の結合パートナーは、図１Ｊに列挙された配列を有するヒトＣＤ５４の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ５４の結合パートナーには、図１Ｊ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ５４、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ５４の結合パートナーも含まれる。
【００６６】
「ＣＤ５５」とは、そのアミノ配列が図１Ｋに示されており、受託番号Ｐ０８１７４を有するヒトＣＤ５５を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ５５の結合パートナーは、図１Ｋに列挙された配列を有するヒトＣＤ５５の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ５５の結合パートナーには、図１Ｋ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ５５、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ５５の結合パートナーも含まれる。
【００６７】
「ＣＤ５８」とは、そのアミノ配列が図１Ｌに示されており、受託番号Ｐ１９２５６を有するヒトＣＤ５８を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ５８の結合パートナーは、図１Ｌに列挙された配列を有するヒトＣＤ５８の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ５８の結合パートナーには、図１Ｌ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ５８、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ５８の結合パートナーも含まれる。
【００６８】
「ＣＤ５９」とは、そのアミノ配列が図１Ｍに示されており、受託番号Ｐ１３９８７を有するヒトＣＤ５９を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ５９の結合パートナーは、図１Ｍに列挙された配列を有するヒトＣＤ５９の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ５９の結合パートナーには、図１Ｍ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ５９、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ５９の結合パートナーも含まれる。
【００６９】
「ＣＤ６２Ｌ」とは、そのアミノ配列が図１Ｎに示されており、受託番号Ｐ１４１５１を有するヒトＣＤ６２Ｌを含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ６２Ｌの結合パートナーは、図１Ｎに列挙された配列を有するヒトＣＤ６２Ｌの結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ６２Ｌの結合パートナーには、図１Ｎ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ６２Ｌ、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ６２Ｌの結合パートナーも含まれる。
【００７０】
「ＣＤ９５」とは、そのアミノ配列が図１Ｏに示されており、受託番号Ｐ２５４４５を有するヒトＣＤ９５を含む。しかし、ある特定のポリペプチドは、多型であることが周知であり、この配列のいくつかの天然バリエーションが存在しうることが理解される。したがって、一実施形態では、ＣＤ９５の結合パートナーは、図１Ｏに列挙された配列を有するヒトＣＤ９５の結合パートナーに限定されず、アミノ酸残基の１つまたは複数が別のアミノ酸と置き換えられているその天然に存在するバリアントへの結合パートナーを含む。ＣＤ９５の結合パートナーには、図１Ｏ中のものに対するオルソロガス配列を有する他の種におけるＣＤ９５、例えば、他の哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモット、または霊長類などに由来するＣＤ９５の結合パートナーも含まれる。
【００７１】
以下でさらに記載するように、本発明の作用物質は、医療で使用するために対象に投与してもよい。作用物質が投与される対象に関して、作用物質は、その種のＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかに結合する結合パートナーを含むことが好適である。例えば、対象がヒトであるとき、作用物質は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかのヒトの結合パートナーを含むなどである。
【００７２】
好ましくは、結合パートナーは、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかに選択的に結合する。例えば、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーが、その細胞によって発現される少なくとも１種の他の実体についてより、大きくとも５分の１、または１０分の１であり、好ましくは１００分の１または５００分の１より低いＫｄ値（解離定数）（すなわち、より高い親和性）を有する場合、好適である。より好ましくは、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーは、その細胞によって発現される少なくとも１種の他の実体についてより、１０００分の１または５０００分の１より低いＫｄ値を有する。Ｋｄ値は、当技術分野で周知の方法を使用して容易に決定することができる。
【００７３】
結合パートナーは、ポリペプチド、ペプチド、小分子、またはペプチド模倣体のいずれかでありうる。
【００７４】
好適な実施形態では、結合パートナーは、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５に結合する抗体である。
【００７５】
結合パートナーは、ＢＵ６９もしくはＳＧＮ−７０もしくはＳＧＮ−７５のいずれかなどの抗ＣＤ７０抗体、またはｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ７４、クローンＬＮ２）であってもよい（Ｅｐｓｔｅｉｎら、１９８４、Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３（２）：１０２８；Ｌａｍｂら、１９９１、ＰＮＡＳ、８８（１４）：５９９８）。
【００７６】
結合パートナーは、ミラツズマブなどの抗ＣＤ７４抗体であってもよい（Ｂｅｃｋｅｒ−Ｈｅｒｍａｎら、２００５、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．、１６（１１）：５０６１）。
【００７７】
結合パートナーは、エプラツズマブなどの抗ＣＤ２２抗体であってもよい（Ｓｔｅｉｎ  Ｒ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ、３７：２９３〜２９８（１９９３年１０月））。
【００７８】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（抗ヒトＨＬＡ−ＤＲ、クローンＬ２４３）などの抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体であってもよい（Ｂｒｏｄｓｋｙ  ＦＭ．Ａ．、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、１９８４；１９（３）：１７９〜９４；Ｅｎｇｌｅｍａｎ  ＥＧ、Ｗａｒｎｋｅ  Ｒ、Ｆｏｘ  ＲＩ、Ｄｉｌｌｅｙ  Ｊ、Ｂｅｎｉｋｅ  ＣＪ、Ｌｅｖｙ  Ｒ．、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１９８１年３月；７８（３）：１７９１〜５）。
【００７９】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ２３、クローンＥＢＶＣＳ２）などの抗ＣＤ２３抗体であってもよい（Ｋｎａｐｐ，Ｗ．、Ｂ．Ｄｏｒｋｅｎら編（１９８９）、Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＶ：Ｗｈｉｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，Ａ．Ｊ．、Ｐ．Ｃ．Ｌ．Ｂｅｖｅｒｌｙら編（１９８７）、Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ：Ｗｈｉｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｂｅｒｎａｒｄ，Ａ．ら編（１９８１）、Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）。
【００８０】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ３０、クローンＢｅｒＨ２）などの抗ＣＤ３０抗体であってもよい（Ｔａｍｉｏｌａｋｉｓ  Ｄら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ、２００５年；１：１３５〜１４０；Ｐｏｌｓｋｉ  ＪＭ、Ｊａｎｎｅｙ  ＣＧ．、Ｂｅｒ−Ｈ２  Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ．、１９９９年９月；１２（９）：９０３〜６；Ｈｏｒｉｅ  Ｒ、Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｔ．、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８；１０：４５７〜４７０）。
【００８１】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ４３、クローンｅＢｉｏ８４−３Ｃ１）などの抗ＣＤ４３抗体であってもよい（Ｂｏｒｃｈｅ  Ｌ、Ｌｏｚａｎｏ  Ｆ、Ｖｉｌｅｌｌａ  Ｒ、Ｖｉｖｅｓ  Ｊ．、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８７年１０月；１７（１０）：１５２３〜６；Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，Ｓ．、Ｌ．Ｂｌｏｕｍｓｅｌｌら編、１９９５、Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｖ：Ｗｈｉｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【００８２】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ４４、クローンＩＭ７）などの抗ＣＤ４４抗体であってもよい（Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ，Ｉ．Ｓ．、Ｊ．Ｌｅｓｌｅｙら、１９８２、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、１５（３）：２９９〜３１２；Ｌｅｓｌｅｙ，Ｊ．およびＩ．Ｓ．Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ、１９８２．、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、１５（３）：３１３〜２０；Ｍａｉｔｉ  Ａ、Ｍａｋｉ  Ｇ、Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｐ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９８年１０月３０日；２８２（５３９０）：９４１〜３）。
【００８３】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ４７、クローンＢ６Ｈ１２）などの抗ＣＤ４７抗体であってもよい（Ｇｒｉｍｂｅｒｔ  Ｐ、Ｂｏｕｇｕｅｒｍｏｕｈ  Ｓら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００６年９月１５日；１７７（６）：３５３４〜４１；Ｌａｇａｄｅｃ  Ｐ、Ｄｅｊｏｕｘ  Ｏら、２００３年６月１５日；１０１（１２）：４８３６〜４３）。
【００８４】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ５４、クローンｅＢｉｏ  ＫＡＴ１）などの抗ＣＤ５４抗体であってもよい（Ｌｅｈｍａｎｎ  ＪＣら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００３年９月１日；１７１（５）：２５８８〜９３；Ａｒａｉ  Ｋら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐａｎｃｒｅａｔｏｌ．、１９９９年８月；２６（１）：２３〜３１）。
【００８５】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ５５、クローン１４３−３０）などの抗ＣＤ５５抗体であってもよい（Ｋｎａｐｐ，Ｗ．、Ｂ．Ｄｏｒｋｅｎら編（１９８９）、Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＶ：Ｗｈｉｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【００８６】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ５８、クローンＴＳ２／９）などの抗ＣＤ５８抗体であってもよい（Ａｒｉｅｌ  Ｏら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２００９：２１：１１００〜１１０８；Ｏｓｂｏｒｎ  Ｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９９５年１月；１８１：４２９〜４３４）。
【００８７】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ５９、クローンＯＶ９Ａ２）などの抗ＣＤ５９抗体であってもよい（Ａｌｅｇｒｅｔｔｉ  ＡＰら、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１０；２６５（２）：１２７〜３２；Ｄｅｃｋｅｒｔ  Ｍら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９２年１１月；２２（１１）：２９４３〜７）。
【００８８】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ５９、クローンＤＲＥＧ−５６）などの抗ＣＤ６２Ｌ抗体であってもよい（Ｊｕｔｉｌａ  ＭＡら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、８月１５日；１６９（４）：１７６８〜７３；Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，Ｓ．、Ｌ．Ｂｌｏｕｍｓｅｌｌら編、１９９５、Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｖ：Ｗｈｉｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【００８９】
結合パートナーは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製市販抗体（精製された抗ヒトＣＤ５９、クローンＡＰＯ−１−１）などの抗ＣＤ９５抗体であってもよい（Ｒａｊａｓａｇｉ，Ｍら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２００９；８５：２５１〜２６１；Ｆｌｕｈｒ，Ｈら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００７；１２０：４１２６〜４１３３）。
【００９０】
代わりに、結合パートナーは、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかに非免疫センス（ｎｏｎ−ｉｍｍｕｎｅ  ｓｅｎｓｅ）で特異的に結合する任意の分子またはその部分であってもよい。したがって、特異的結合パートナーは、ホルモン、増殖因子、サイトカイン、または受容体リガンド（例えば、アゴニストもしくはアンタゴニスト）のいずれかでありうる。
【００９１】
ＣＤ７０は、ＣＤ２７に結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ７０の結合パートナーは、ＣＤ２７である。
【００９２】
ＣＤ７４は、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）に結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ７４の結合パートナーは、ＭＩＦである。
【００９３】
ＣＤ２３は、ＩｇＥに結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ２３の結合パートナーは、ＩｇＥである。
【００９４】
ＣＤ３０は、ＣＤ３０Ｌに結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ３０の結合パートナーは、ＣＤ３０Ｌである。
【００９５】
ＣＤ４３は、シアル酸残基に結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ４３の結合パートナーは、シアル酸である。
【００９６】
ＣＤ４４は、ヒアルロン酸、コラーゲン、およびオステオポンチンに結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ４４の結合パートナーは、ヒアルロン酸、コラーゲン、およびオステオポンチンのいずれかである。
【００９７】
ＣＤ４７は、トロンボスポンジンに結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ４７の結合パートナーは、トロンボスポンジンである。
【００９８】
ＣＤ５４は、ＬＦＡ−２に結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ５４の結合パートナーは、ＬＦＡ−２である。
【００９９】
ＣＤ５８は、ＣＤ２に結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ５８の結合パートナーは、ＣＤ２である。
【０１００】
ＣＤ６２Ｌは、末梢リンパ節アドレシンに結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ６２Ｌの結合パートナーは、末梢リンパ節アドレシンである。
【０１０１】
ＣＤ９５は、ＦａｓＬ（ＣＤ９５Ｌ）に結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＣＤ９５の結合パートナーは、ＦａｓＬ（ＣＤ９５Ｌ）である。
【０１０２】
ＨＬＡ−ＤＲは、ＣＤ４に結合することが知られており、したがって一実施形態では、ＨＬＡ−ＤＲの結合パートナーは、ＣＤ４である。
【０１０３】
本明細書において、用語「抗体」は、それだけに限らないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、単鎖、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって生成される断片、および二重特異性抗体を含む。このような断片としては、標的物質についてその結合活性を保持する全抗体の断片、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）、およびＦ（ａｂ’）２断片、ならびに単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、融合タンパク質、および抗体の抗原結合部位を含む他の合成タンパク質がある。抗体の一部のみを含む結合パートナーは、血液からのクリアランスの速度を最適化することによって有利となり得、Ｆｃ部分に起因する非特異的結合を受ける可能性が低い場合がある。ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、ラクダ抗体、および操作されたラクダ抗体も含まれる。さらに、ヒトに投与するために、抗体およびこれらの断片は、現在当技術分野で周知であるヒト化抗体であってもよい（Ｊａｎｅｗａｙら（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ、５版、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）；Ａｎら（２００９）、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃ、ＩＳＢＮ：９７８−０−４７０−１１７９１−０）。
【０１０４】
非対称ＩｇＧ様抗体（例えば、トリオマブ／クアドローマ、Ｔｒｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；ノブイントゥホール、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｃｒｏｓｓ  ＭＡｂｓ、Ｒｏｃｈｅ；静電的マッチ抗体（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃａｌｌｙ  ｍａｔｃｈｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ＡＭＧＥＮ；ＬＵＺ−Ｙ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）ボディ、ＥＭＤ  Ｓｅｒｏｎｏ；バイオロニック（ｂｉｏｌｏｎｉｃ）、Ｍｅｒｕｓ；およびＦａｂ交換抗体、Ｇｅｎｍａｂ）、対称ＩｇＧ様抗体（例えば、デュアルターゲティング（ＤＴ）−Ｉｇ、ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ；ツーインワン抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；架橋ＭＡｂ、ｋａｒｍａｎｏｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｎｔｅｒ；ｍＡｂ２、Ｆ−ｓｔａｒ；およびＣｏｖ  Ｘ−ｂｏｄｙ、Ｃｏｖ  Ｘ／Ｐｆｉｚｅｒ）、ＩｇＧ融合物（例えば、デュアル可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、Ａｂｂｏｔｔ；ＩｇＧ様二重特異性抗体、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ；Ｔｓ２Ａｂ、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡＺ；ＢｓＡｂ、ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ；ＨＥＲＣＵＬＥＳ、Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ；ＴｖＡｂ、Ｒｏｃｈｅ）、Ｆｃ融合物（例えば、ＳｃＦｖ／Ｆｃ融合物、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ；ＳＣＯＲＰＩＯＮ、Ｅｍｅｒｇｅｎｔ  ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ、ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ；デュアル親和性リターゲティング技術（Ｆｃ−ＤＡＲＴ）、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ；デュアル（ＳｃＦｖ）２−Ｆａｂ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、Ｆａｂ融合物（例えば、Ｆ（ａｂ）２、Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ；デュアルアクションまたはＢｉｓ−Ｆａｂ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ドックアンドロック（ＤＮＬ）、ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ；二価二重特異性、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ；およびＦａｂ−Ｆｖ、ＵＣＢ−Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）、ＳｃＦｖ−およびダイアボディベース抗体（例えば、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ｅｎｇａｇｅｒ）（ＢｉＴＥ：ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ）、Ｍｉｃｒｏｍｅｔ；タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂ）、Ａｆｆｉｍｅｄ；ＤＡＲＴ、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ；単鎖ダイアボディ、Ａｃａｄｅｍｉｃ；ＴＣＲ様抗体、ＡＩＴ、Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｌｏｇｉｃｓ；ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合物、Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ；およびＣＯＭＢＯＤＩＥＳ、Ｅｐｉｇｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＩｇＧ／ｎｏｎ−ＩｇＧ融合物（例えば、免疫サイトカイン、ＥＭＤＳｅｒｏｎｏ、Ｐｈｉｌｏｇｅｎ、ＩｍｍｕｎＧｅｎｅ、ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ；スーパー抗原融合タンパク質、Ａｃｔｉｖｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；およびがんに対する免疫動員ｍＴＣＲ、ＩｍｍＴＡＣ）、ならびにオリゴクローナル抗体（例えば、ＳｙｍｐｈｏｇｅｎおよびＭｅｒｕｓ）も含まれる。
【０１０５】
抗体は、本明細書に記載の特異性決定領域と一緒に、参照により本明細書に組み込まれているＣａｒｔｅｒ（２００６）、「Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｂｙ  ｄｅｓｉｇｎ」、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６（５）：３４３〜５７、およびＣａｒｔｅｒ（２０１１）、「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：ａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ」、Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．、３１７（９）：１２６１〜９によって記載された抗体様足場のいずれかを有することができる。したがって、用語「抗体」は、アフィボディおよび非免疫グロブリンベース骨格も含む。例としては、アドネクチン、アンチカリン、アフィリン、トランスボディ、ダルピン、三量体Ｘ、マイクロプロテイン、フィノマー、アビマー、セントグリン、およびカルビトール（エカランチド）がある。
【０１０６】
全抗体ではなく抗体断片を使用する利点は、数倍である。より小さいサイズの断片は、固体組織のより良好な浸透などの薬理学的性質を改善しうる。さらに、抗原結合性断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、およびｄＡｂ抗体断片などは、Ｅ．ｃｏｌｉまたは酵母内で発現され、これらから分泌され得、したがって、実験室での好都合な生産および工業規模での経済的な生産を可能にする。また、このような断片は、Ｆｃ成分を欠いているため毒物学的安全性の増大を可能にする。
【０１０７】
抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＤクラスのいずれかのものであり得、任意の種に由来しうる。抗体がＩｇＧである場合、これは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のいずれかでありうる。しかし、作用物質が特定の宿主に投与するためであるとき、抗体、または少なくともその定常領域は、その宿主に由来することが好適である。例えば、作用物質がヒトに投与されることになるとき、抗体は好ましくは、ヒト抗体またはヒト化抗体であるなど。
【０１０８】
ＣＤ７０またはＣＤ７４に結合する適当な抗体は、当技術分野で長い歴史を持つ技術を使用して当業者によって作製することができる。モノクローナル抗体および抗体断片を調製する方法は、当技術分野で周知であり、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）、「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｆｕｓｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｆ  ｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．」、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９７）；抗体ファージディスプレイ（Ｗｉｎｔｅｒら（１９９４）、「Ｍａｋｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．」、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３〜４５５）；リボソームディスプレイ（Ｓｃｈａｆｆｉｔｚｅｌら（１９９９）、「Ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｄｉｓｐｌａｙ：ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ．」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２３１：１１９〜１３５）；および反復コロニーフィルタースクリーニング（Ｇｉｏｖａｎｎｏｎｉら（２００１）、「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｌａｒｇｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｂｙ  ｃｏｌｏｎｙ  ｆｉｌｔｅｒ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．」Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２９：Ｅ２７）を含む。さらに、本発明で使用するのに適している抗体および抗体断片は、例えば、以下の刊行物に記載されている：「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９８２）；「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｈ．Ｚｏｌａ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７、ＩＳＢＮ：０−８４９３６−４７６−０；「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、１版、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８、ＩＳＢＮ０−８７９６９−３１４−２；「Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、２版、Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９９、ＩＳＢＮ０−８７９６９−５４３−９；および「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｓｔｅｆａｎ  Ｄｕｂｅｌ編、１版、−Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、２００７．ＩＳＢＮ：３−５２７−３１４５３−９。
【０１０９】
内部移行および細胞の表面での提示
「作用物質が内部移行し、Ｔ細胞抗原が、Ｔ細胞によって認識されうる形態で細胞の表面に提示される」とは、作用物質が細胞内に取り込まれ（例えば、エンドサイトーシスによって）、Ｔ細胞抗原が、Ｔ細胞による認識を可能にする形態で細胞の表面で引き続いて提示される意味を含む。このような認識は、例えば、Ｔ細胞をＴ細胞抗原を提示している細胞と接触させ、当技術分野で公知の細胞増殖についての標準アッセイを使用した後、Ｔ細胞の活性化を評価することによって容易に判定することができる。免疫応答の程度を判定するための適当なアッセイとしては、ＥＬＩＳｐｏｔ、細胞内サイトカイン染色、増殖アッセイ、活性化アッセイ（例えば、ＣＤ６９）、ＣＤ１０７動員アッセイ、または代謝アッセイ（例えば、ＭＴＴ）がある。例えば、ＥＬＩＳＡまたは多重化ビーズ技術を使用して活性化誘導分泌型サイトカインを検出するアッセイも適している。
【０１１０】
内部移行は、フローサイトメトリーベースアッセイなどの当技術分野で公知の任意の適当なアッセイを使用して評価することができる。例えば、作用物質をフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）などの蛍光色素とカップリングすることができ、標的細胞を作用物質で標識することができる。１〜２４時間後、弱酸（例えば、クエン酸）が標的細胞に添加され、洗浄後、細胞がフローサイトメーターで分析される。蛍光色素が細胞表面に依然としてある場合、酸が蛍光色素を消光することになり、フローサイトメーターでシグナルがまったくないはずであり、それによって作用物質が内部移行していないことを実証する。作用物質の内部移行がある場合、蛍光色素は、酸にとってアクセス可能でなく、消光効果はまったくないはずである。これは、フローサイトメーターで陽性シグナルがあることを意味するはずであり、それによって作用物質の内部移行を実証する。
【０１１１】
慣例的な手順を使用して、Ｔ細胞抗原が、細胞の表面への抗原の外側ローディングではなく、Ｔ細胞抗原の内部移行の後にＴ細胞に提示されているか否かを判定することができることが理解されるであろう。例えば、細胞を、内部移行が防止される条件下で本発明の作用物質に曝露することができる。適当な条件は、作用物質、例えば、パラホルムアルデヒドもしくはグルタルアルデヒドなどを使用して細胞を軽く固定すること、または約４℃以下の温度で実験を実施することであってもよい。内部移行が、提示されるＴ細胞抗原にとって必要条件である場合、内部移行が抑制された後、Ｔ細胞の活性化はまったくないはずである。代わりに、細胞内プロセシング経路の阻害剤を使用して、Ｔ細胞抗原の提示が内部移行に続くのか、または外側ローディングの結果であるのかを確認することができる。例えば、ＭＨＣクラスＩＩ細胞内プロセシング経路の阻害剤を、当技術分野で周知であり、以下でさらに記載するように使用することができる。
【０１１２】
好適な実施形態では、Ｔ細胞抗原は、内部移行し、古典的ＭＨＣクラスＩＩプロセシング経路に入るものである。例えば、Ｔ細胞抗原ペプチドは、エンドサイトーシス小胞内のタンパク質分解によって作用物質から放出され、細胞表面に搬出される前にＭＨＣクラスＩＩ分子に結合した状態になることができる。Ｔ細胞抗原がＭＨＣクラスＩＩ経路によってプロセシングされるか否かの評価は、当技術分野で標準的な業務であり、経路の公知の阻害剤、例えば、クロロキノンおよびモネンシンなどの存在下および非存在下でプロセシングについて試験することを含みうる。
【０１１３】
細胞内部でのＴ細胞抗原のプロセシングを促進するために、Ｔ細胞抗原が、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーに付着し、その結果Ｔ細胞抗原が、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞内で結合パートナーから放出されうる場合、好適である。適当な付着は、以下に示されており、様々なヘテロ二官能性架橋剤、例えば、ペプチドを、例えば、抗体の外部表面の遊離アミン基に付着させることができるスルホ−ＳＭＣＣなどを含む。他の架橋剤を使用して、ペプチドを他の官能基（例えば、カルボキシル、ヒドロキシル部分）または炭水化物基に付着させることができる。一般に、付着は、共有結合性であるが、強い非共有結合性付着、例えば、ビオチン−アビジンまたはハプテン−特異的抗体（例えば、ジゴキシゲニン）などを使用してもよい。
【０１１４】
一実施形態では、Ｔ細胞抗原は、細胞内プロテアーゼによって結合パートナーから放出されうる。
【０１１５】
いずれの理論にも束縛されることを望むことなく、本発明者らは、ＭＨＣクラスＩＩ拘束ペプチドを含む作用物質が細胞内に内部移行した後、作用物質は、エンドリソソームが酸性化された状態になるＭＨＣクラスＩＩプロセシング経路と同じ様式でプロセシングされることになると考える。酸性化により、カテプシンなどの様々なエンドソームおよびリソソームベースプロテアーゼが活性化され、これらは一緒に、作用物質を分解し、それによって作用物質からペプチドを放出する。タンパク質分解は、ペプチド自体に作用しないことが理解されるであろう。次いでペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ分子にロードされ、細胞表面に提示されうる。
【０１１６】
結合パートナーからのＴ細胞抗原の放出は、細胞表面に提示されるＴ細胞抗原を認識するＴ細胞抗原特異的Ｔ細胞を使用して試験することができる。Ｔ細胞抗原が放出された場合、Ｔ細胞は、細胞表面のＴ細胞抗原を認識するはずであり、これは、先述したＴ細胞認識アッセイにおける陽性シグナルによって判定される。Ｔ細胞抗原が放出されなかった場合、Ｔ細胞認識アッセイにおいて陰性シグナルがあるはずである。Ｔ細胞抗原は、フルオロフォアを使用して標識することもでき、直接的な細胞イメージングなどの技法を使用してＴ細胞抗原の分布を評価することもできる。
【０１１７】
Ｔ細胞抗原は、Ｔ細胞抗原が結合パートナーから細胞外に放出されうる様式でＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーに付着しないことが理解されるであろう。むしろ、Ｔ細胞抗原は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞内に内部移行し、その表面に提示されなければならない。したがって、好ましくは、Ｔ細胞抗原は、Ｔ細胞抗原が、例えば、細胞外プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、リパーゼ、リアーゼ、ホスファターゼ、またはカルボヒドラーゼの任意の１種または複数によって細胞外に結合パートナーから放出されうる様式でＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーに付着しない。これを保証するために、作用物質が、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーからＴ細胞抗原を放出するように作用する細胞外分子（例えば、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、リパーゼ、リアーゼ、ホスファターゼ、カルボヒドラーゼ）によって切断可能な部位を含まない場合、好適である。例えば、作用物質は、がん細胞などのＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の近傍に存在する細胞外分子（例えば、特定のプロテアーゼ）によって切断可能な部位（例えば、特定のプロテアーゼ切断部位）を含まない場合がある。これにより、本発明の作用物質の必要なサイズが低減されることになることが理解されるであろう。例えば、Ｔ細胞抗原がペプチドである場合、本発明の作用物質は一般に、（ｉ）２２アミノ酸未満（例えば、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、または１０アミノ酸未満）の長さを有し、Ｔ細胞抗原を含み、またはそれからなるペプチド、および（ｉｉ）ペプチドに付着する結合パートナー（例えば、抗体）を含む。
【０１１８】
所与の配列がプロテアーゼによって切断されうるか否か、切断されうる場合、どのプロテアーゼであるかを判定することは、当業者の通常の業務である。タンパク質分解的切断配列の多数の研究があり、所与の配列に向けたタンパク質分解活性を判定するのに多くのプログラムが利用可能である（例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈプログラム）。タンパク質分解およびプロテアーゼ認識配列についての豊富な情報を含有するデータベース（例えば、ＭＥＲＯＰおよびＰＭＡＰ）も存在する。任意の適当な方法を使用することができる。
【０１１９】
発明の作用物質の合成
好都合なことには、Ｔ細胞抗原は、リンカーによってＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーに接合される。「リンカー」とは、結合パートナーをＴ細胞抗原に付着させる化学部分の意味を含む。
【０１２０】
一実施形態では、リンカーは、細胞外プロテアーゼなどの細胞外分子によって切断可能な部位を含まない。したがって、一実施形態では、結合パートナーをＴ細胞抗原に接合する任意の部分は、細胞外プロテアーゼなどの細胞外分子によって切断可能な部位を含まない。
【０１２１】
Ｔ細胞抗原は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーに共有結合的に、または非共有結合的に結合されうることが理解される。好ましくは、Ｔ細胞抗原は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーに共有結合的に付着している。
【０１２２】
一実施形態では、Ｔ細胞抗原およびＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーは、リンカーによって共有結合的に付着している。
【０１２３】
したがって、Ｔ細胞抗原（例えば、ペプチド）およびＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーは、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、（１９７９）１００、１００〜１０８に一般に記載されているものなどの分子を架橋する従来の様式のいずれかによって好都合なことには連結することができる。例えば、Ｔ細胞抗原（例えば、ペプチド）またはＣＤ７０もしくはＣＤ７４の結合パートナーの一方を、チオール基で富化させることができ、他方を、これらのチオール基と反応することができる二官能性剤、例えば、ヨード酢酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＩＡ）、またはＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、コンジュゲートされる種間にジスルフィド架橋を組み込むヘテロ二官能性架橋剤と反応させることができる。例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルで実現されるアミドおよびチオエーテル結合は、一般に、ジスルフィド結合よりｉｎ  ｖｉｔｒｏで安定である。
【０１２４】
ビス−マレイミド試薬は、チオール基（例えば、抗体のシステイン残基のチオール基）を別のチオール含有部分（例えば、Ｔ細胞抗原またはリンカー中間体のチオール基）に、逐次または同時様式で付着させることが知られている。チオール基と反応性である、マレイミドを除く他の官能基としては、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート、およびイソチオシアネートがある。
【０１２５】
さらなる有用な架橋剤としては、穏やかな条件下でスルフィドリル基の脱保護を可能にする一級アミンのチオール化試薬であるＳ−アセチルチオグリコール酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＳＡＴＡ）（Ｊｕｌｉａｎら（１９８３）、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１３２、６８）、スベルイミノ酸ジメチル二塩酸塩、およびＮ，Ｎ’−ｏ−フェニレンジマレイミドがある。
【０１２６】
特に好適な架橋剤としては、スルホスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル６−（３’−［２−ピリジルジチオ］−プロピオンアミド）ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ）、およびＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド、トリフルオロ酢酸塩（ＢＭＰＨ）がある。
【０１２７】
多数のホモ二官能性およびヘテロ二官能性架橋化学反応が、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーをＴ細胞抗原に接合するのに適切であるはずであり、任意のこのような化学反応を使用することができることが理解されるであろう。例えば、シュタウディンガーライゲーション化学反応（ホスフィン−アジド化学反応）を使用するクリック化学を使用することができる。
【０１２８】
Ｔ細胞抗原およびＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーは、互いに直接架橋される必要はないが、１つまたは複数のスペーサー部分を介して付着してもよいことが理解される。例えば、Ｔ細胞抗原は、さらにＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーと架橋される化学部分と架橋されてもよい。一般に、スペーサー部分は、立体障害を防止する機能を果たすことができるが、作用物質は、Ｔ細胞抗原が放出されるように細胞内に分解されることが期待されているので、１つまたは複数のスペーサー部分は要求されないことが理解されるであろう。
【０１２９】
特定の実施形態では、Ｔ細胞抗原およびＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーが共有結合的に付着しており、抗原および結合パートナーがともにペプチドまたはポリペプチドである場合、２つの成分は、核酸分子によってコードされうる融合ポリペプチドの一部でありうることが理解される。本発明は、核酸分子およびこれらを含有する宿主細胞を含む。例えば、抗体結合パートナーは、当技術分野で十分確立された遺伝子操作技法を使用してＴ細胞抗原を含有するように遺伝子操作することができる。したがって、Ｔ細胞抗原は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーのポリペプチド配列内に埋め込まれ、またはその末端にある場合があり、ただし、これは、内部移行後にＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の表面に提示されうるように放出されうることが理解されるであろう。適切には、Ｔ細胞抗原およびＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーは、両部分がこれらのそれぞれの活性を保持するように接合され、その結果、作用物質は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞を標的にすることができ、Ｔ細胞抗原は、免疫応答を誘発するように細胞によって提示されうる。Ｔ細胞抗原および結合パートナーは、リンカーペプチドによって接合されうる。適当なリンカーペプチドは、一般にランダムコイルコンホメーションを採るものであり、例えば、ポリペプチドは、アラニンもしくはプロリン、またはアラニンとプロリン残基の混合物を含有することができる。好ましくは、リンカーは、２から１００の間のアミノ酸残基、より好ましくは２から５０の間、さらにより好ましくは４から２０の間のアミノ酸残基を含有する。しかし、上記に論じたように、Ｔ細胞抗原が放出されるように作用物質が細胞内に分解されることを考慮するとリンカーペプチドは、本質的でないことに気付くであろう。
【０１３０】
ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの適当な結合パートナーをコードするポリヌクレオチドは、当技術分野で公知であり、またはＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかと相互作用することが知られているタンパク質の配列、もしくはヌクレオチド配列データベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、およびｄｂＥＳＴデータベースなどに含まれている配列からなど、公知の配列から容易に設計することができる。適当なＴ細胞抗原をコードするポリヌクレオチドは、当技術分野で公知であり、または公知の配列から容易に設計し、作製することができる。
【０１３１】
適当なリンカーペプチドをコードするポリヌクレオチドは、リンカーペプチド配列から容易に設計し、作製することができる。
【０１３２】
したがって、本発明で使用される作用物質をコードするポリヌクレオチドは、周知の遺伝子操作技法を使用して容易に構築することができる。
【０１３３】
次いで核酸が適当な宿主内で発現されて、本発明の作用物質を生成する。したがって、本発明の作用物質をコードする核酸を、本明細書に含まれる教示を考慮して適切に改良された公知の技法に従って使用して発現ベクターを構築することができ、次いでこれが使用されて、本発明の作用物質の発現および生成のために適切な宿主細胞が形質転換される。
【０１３４】
本発明の作用物質をコードする核酸を、適切な宿主内に導入するために、多種多様な他の核酸配列と接合することができることが理解される。コンパニオン核酸は、当技術分野で周知であるように、宿主の性質、宿主内に核酸を導入する様式、およびエピソームの維持または組込みが望まれるか否かに依存することになる。
【０１３５】
代替の実施形態では、Ｔ細胞抗原およびＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーは、非共有結合的に付着している。しかし、非共有結合性付着は、対象に作用物質を投与した後、作用物質が細胞に局在化されるのを可能にし、Ｔ細胞抗原がその表面に提示されるのを可能にするように十分に安定でなければならないことが理解されるであろう。一般に、非共有結合は、Ｋｄ＜１０−９の親和性を有するべきである。非共有結合については、免疫学的結合、またはビオチン／アビジンもしくはストレプトアビジンを介した結合がそれぞれ好適である。例えば、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５の結合パートナーは、その一つの特異性が望まれない細胞によって発現される実体に指向し、その１つの特異性がＴ細胞抗原またはその部分に指向している二重特異性抗体とすることができる。また、Ｔ細胞抗原を、ひいては二重特異性抗体の特異性が指向する別の物質にカップリングすることが可能である。例えば、Ｔ細胞抗原は、二重特異性抗体によって認識されるさらなるペプチド配列を含有してもよい。別の可能性は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーを、例えば、ストレプトアビジンにカップリングし、一方Ｔ細胞抗原は、ビオリンにカップリングされることを伴い、逆の場合も同様である。非共有結合性相互作用が形成されうる他の手段としは、ロイシンジッパー配列または親和性結合がある。いずれにしても、Ｔ細胞抗原とＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーとの間の付着は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかをそれぞれ発現する細胞内に作用物質が内部移行した後、Ｔ細胞抗原がＴ細胞によって認識されうる形態で細胞の表面に提示されうるようなものでなければならない。
【０１３６】
本明細書に記載のアミノ酸残基は一般に、天然「Ｌ」異性型である。しかし、「Ｄ」異性型の残基を、ある特定の状況では、Ｌ−アミノ酸残基と置換することができ、ただし作用物質のＴ細胞抗原は、Ｔ細胞によって認識されうる形態でＣＤ７０またはＣＤ７４を発現する細胞の表面に依然として提示されうる。この定義には、別段の具体的な指示のない限り、アミノ酸類似体（ペニシラミン、３−メルカプト−Ｄ−バリンなど）、天然に存在する非タンパク質新生アミノ酸（ノルロイシンなど）、ベータ−アミノ酸、アザペプチド、Ｎ−メチル化アミノ酸、およびアミノ酸の特徴であることが当技術分野で知られている性質を有する化学合成化合物を含めた化学修飾アミノ酸も含まれる。用語「タンパク質新生」は、アミノ酸が、周知の代謝経路によって細胞内のタンパク質中に組み込まれうることを示す。この定義には、官能性側基が化学的に誘導体化されているアミノ酸も含まれる。このような誘導体化分子としては、例えば、遊離アミノ基が誘導体化されてアミン塩酸塩、ｐ−トルエンスルホニル基、カルボベンゾキシ基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基、またはホルミル基を形成している分子がある。遊離カルボキシル基を誘導体化して、塩、メチルおよびエチルエステル、または他のタイプのエステルもしくはヒドラジドを形成することができる。遊離水酸基を誘導体化して、Ｏ−アシルまたはＯ−アルキル誘導体を形成することができる。２０の標準アミノ酸のうちの１つまたは複数の天然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチド部分も誘導体として含まれる。
【０１３７】
したがって本発明の作用物質のペプチド部分は、本明細書に記載のアミノ酸配列を含み、またはそれからなるペプチドの構造的フィーチャーを模倣するペプチド「模倣体」、すなわち、ペプチド模倣体でありうることが理解される。ペプチド模倣体は、治療的使用、分解に対する耐性、浸透性、または経口投与の可能性においてさらにより有利となりうる。
【０１３８】
ペプチド模倣体の設計における主要目的は、ペプチダーゼによる切断および不活化に対する模倣体の感受性を低減することであった。Ｓｈｅｒｍａｎら（１９９０）が開示したものなどの一手法では、１つまたは複数のアミド結合が本質的に等比体積の様式で様々な化学官能基によって置き換えられている。この段階的な手法は、活性類似体が得られたという点でいくらかの成功をもたらした。場合によっては、これらの類似体は、その天然に存在する対応物より長い生物学的半減期を有することが示された。別の手法では、様々な非コードまたは修飾アミノ酸、例えば、Ｄ−アミノ酸およびＮ−メチルアミノ酸などが、哺乳動物ペプチドを修飾するのに使用された。代わりに、推定生理活性配座が、環化などの共有結合修飾、またはγ−ラクタムもしくは他のタイプの架橋の組込みによって安定化された（Ｖｅｂｅｒら、１９７８、およびＴｈｏｒｓｅｔｔら、１９８３）。Ｒｉｃｈ（１９８６）が開示した別の手法は、酵素阻害剤設計において遷移状態類似体概念を適用することによってペプチド模倣体を設計することであった。例えば、スタチンの２級アルコールは、ペプシン基質の固着アミド結合（ｓｅｓｓｉｌｅ  ａｍｉｄｅ  ｂｏｎｄ）の四面体遷移状態を模倣することが知られている。他の手法には、アザペプチドおよびベータ−アミノ酸の使用が含まれる。
【０１３９】
レトロ−インベルソペプチドも「ペプチド模倣体」の定義に含まれる。レトロ−インベルソペプチド（全−Ｄ−レトロまたはレトロ−エナンチオペプチドとしても公知）とは、Ｌ−アミノ酸のすべてがＤ−アミノ酸と置き換えられており、ペプチド結合が保存されているペプチドの意味を含む。したがって、このペプチドは、親Ｌ−配列のものと逆順序でアセンブルされたＤ−アミノ酸から構成されている。レトロ−インベルソペプチドは、当技術分野で公知の方法、例えば、Ｍｅｚｉｅｒｅら（１９９７）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５９、３２３０〜３２３７に記載されたものなどによって合成することができる。この手法では、骨格を伴い、親ペプチドと非常に同様のままである側鎖の配向を伴わない変化を含有する擬ペプチドが作製される。レトロ−逆ペプチドは、タンパク質分解に対してはるかにより耐性である。
【０１４０】
したがって、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナー、Ｔ細胞抗原、および本明細書に記載のスペーサー部分のいずれかがペプチドまたはポリペプチドであるとき、これらのペプチドまたはポリペプチドの任意の１つまたは複数を、親ペプチドまたはポリペプチドのそれぞれの活性を保持する対応するペプチド模倣体と置換することができることが理解されるであろう。これは、本発明の作用物質にプロテアーゼ耐性を付与し、それによってその安定性を改善するのに役立つことができる。したがって、例えば、Ｔ細胞抗原がＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの結合パートナーに、１つまたは複数のペプチドスペーサー部分を介して付着しているとき、これらのスペーサー部分の１つまたは複数がペプチド模倣体である、例えば、スペーサー部分の天然に存在するアミノ酸の１つまたは複数が、例えば、安定性を改善するために置き換えられ、または修飾されていることが望ましい場合がある。
【０１４１】
本発明の作用物質のペプチド部分の安定性を増大させる別の手法は、一方または両方の末端に安定化基を有することである。一般的な安定化基としては、アミド、アセチル、ベンジル、フェニル、トシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、および同様の末端基修飾がある。追加の修飾には、エキソペプチダーゼ活性を阻害するために、末端において「Ｌ」アミノ酸の代わりに「Ｄ」アミノ酸、およびアミノもしくはカルボキシ末端ではなくアミド、またはアミノ末端ではなくアセチルを使用することが含まれる。したがって、本発明の作用物質が露出したペプチド末端を有するときはいつでも、その末端は、キャッピング部分、好ましくは分子量が２００Ｄａ未満である部分を有しうることが理解される。さらなるキャッピング部分としては、ナフチル基またはポリエチレングリコール基がある。レトロ−インベルソペプチドは、既に相対的に安定であり、したがって追加のキャッピング部分を必要としない場合があることが理解される。
【０１４２】
好ましくは、本発明の作用物質は、３７℃で少なくとも２４時間の血漿中の半減期を有する。
【０１４３】
本発明の作用物質を、これが容易に検出されうるように、例えば、これをビオチン化することによって、または当技術分野で公知の任意の検出可能標識、例えば、放射標識、蛍光標識、または酵素標識などを組み込むことによって修飾することが望ましい場合がある。
【０１４４】
上述したように、本発明者らは、本発明の作用物質を、特定の様式でＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する特定の細胞を殺すように既存の免疫応答を再指向するのに使用することができることを示した。ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞は、生物学的または医学的状態または障害の病理を少なくとも部分的に媒介する細胞であることが多いので、本発明の作用物質は、大きな治療可能性を提供する。
【０１４５】
したがって、本発明の第２の態様は、医療で使用するための本発明の第１の態様による作用物質を提供する。
【０１４６】
本発明の第３の態様は、本発明の第１の態様による作用物質、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物も提供する。
【０１４７】
本発明の第４の態様は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置する方法であって、本発明の第１の態様による作用物質を投与するステップを含む、方法を提供する。このように、本発明の作用物質は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞に結合し、内部移行の後、Ｔ細胞抗原が細胞の表面に提示され、これらをＴ細胞の標的にする。疑義を回避するために、特定の標的（例えば、ＣＤ７０）の結合パートナーを含む作用物質が、特定の標的（例えば、ＣＤ７０）を発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するのに使用されることになる。
【０１４８】
したがって、本方法は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかによって特徴付けられる状態（例えば、がん）を有する、またはその状態を発症するリスクのある対象を同定するステップ、対象に本発明の第１の態様による作用物質を投与するステップ、およびＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の数を判定する試験を行うことによって、または対象の臨床症状を監視することによって、対象におけるＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞のレベルを監視するステップを伴うことができる。監視ステップの結果に応じて、より多くの作用物質を投与する必要がある場合がある。
【０１４９】
本発明は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するのに使用するための本発明の第１の態様による作用物質を含む。
【０１５０】
本発明は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するための医薬の調製における本発明の第１の態様による作用物質の使用を含む。
【０１５１】
「ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態」とは、病理の少なくとも一部がＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって媒介される任意の生物学的または医学的状態または障害を含む。この状態は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって引き起こされる場合があり、あるいはＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在が状態の効果でありうる。
【０１５２】
ＣＤ７０およびＣＤ７４は一般に、Ｂ細胞によって発現され、したがって一般に状態は、病理の少なくとも一部がＢ細胞によって媒介されるものである。例えば、ＣＤ７０（ＣＤ２７Ｌ）は、いくつかの血液悪性腫瘍およびいくつかの癌腫（例えば、腎細胞癌；Ｊｉｌａｖｅａｎｕら、Ｈｕｍａｎ  Ｐａｌｈｏｌ、４３（９）：１３９４）で異常に発現される腫瘍壊死因子ファミリーのメンバーである。ＣＤ７４は、ＭＨＣクラス−ＩＩ分子と並行して発現され、プロフェッショナル抗原提示細胞、例えば、Ｂ−細胞、単球、マクロファージ、および樹状細胞などで発現される。状態は、これらの細胞の１種または複数に影響するものでありうる。
【０１５３】
ＣＤ７０またはＣＤ７４を発現する細胞はしばしば、リンパ腫およびいくつかのタイプの癌腫に関与する。したがって、状態が腫瘍（例えば、悪性疾患）であり、ＣＤ７０またはＣＤ７４を発現する細胞が、腫瘍細胞または腫瘍関連組織（例えば、腫瘍線維芽細胞または腫瘍血管）である場合、特に好適である。状態は、任意のがん、例えば、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膀胱がん、腎がん、黒色腫、肺がん、前立腺がん、精巣がん、甲状腺がん、脳腫瘍、食道がん、胃がん、膵がん、結腸直腸がん、肝がん、白血病、骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、リンパ球増殖性障害、骨髄異形成障害、骨髄増殖性疾患、および前癌性疾患などでありうる。
【０１５４】
ＣＤ７４を発現する細胞は、アレルギー性および自己免疫疾患にも関連しており、したがってさらなる好適な実施形態では、結合パートナーがＣＤ７４に対するものであるとき、状態は、アレルギー性または自己免疫疾患である。例としては、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、および免疫性血小板減少性紫斑病がある。
【０１５５】
本明細書に開示の他の標的のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態には、これらの標的の上記考察において述べたものが含まれる。
【０１５６】
以下の表は、本明細書に開示の標的のそれぞれについての細胞発現データ、および各標的に関連した状態を提供する。したがって、本発明の作用物質が特定の標的の結合パートナーを含むとき、作用物質は、以下の表に示したその標的に関連する状態の１つを予防または処置するのに使用することができる。
【０１５７】
【表２】
2015529676.tif 000006
2015529676.tif 000007
2015529676.tif 000008
【０１５８】
ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる他の状態は、当業者によって容易に判定することができる。例えば、細胞でのＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの発現プロファイルは、核酸（例えば、ＤＮＡもしくはＲＮＡ転写物）またはタンパク質レベルを測定するための慣例的なアッセイを使用して生検試料（例えば、がん患者からの）で実施してもよい。トランスクリプトミクスまたはプロテオミクス技法を使用することができる。また、免疫組織化学検査および免疫蛍光を使用して、組織内の抗原発現を定量化することができる。
【０１５９】
状態の予防または処置とは、患者における症状の低減もしくは軽減（すなわち、対症的使用）、悪化もしくは進行からの症状の予防、障害の処置（例えば、原因物質の阻害もしくは排除による）、または状態もしくは障害の、これらがない対象における予防の意味を含む。
【０１６０】
本発明の作用物質は、診療所における個別化医療に適しており、それによって患者に投与されるべき最も適切な作用物質が、診療所において判定され、かつ選択または調製されることが理解されるであろう。例えば、対象に作用物質を投与するステップの前に、以下のいずれかを判定してもよい：（ｉ）対象のＭＨＣ対立遺伝子および／または（ｉｉ）Ｔ細胞抗原に対する対象のＴ細胞応答（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞応答）。対象のＭＨＣ対立遺伝子は、抗原レベルで血清学的アッセイによって、または遺伝子レベルでＤＮＡアッセイを使用することによって評価することができる。所与の抗原が、対象における特定のＴ細胞応答（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞応答）を刺激するか否かの判定は、対象から単離された末梢血単核細胞を抗原と接触させ、細胞増殖の標準アッセイを使用することによって行うことができる。
【０１６１】
したがって、本発明の第４の態様の方法は、（ｉ）ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態（例えば、がん）を有する、またはその状態を発症するリスクのある対象を同定するステップ、（ｉｉ）対象から試料を採取するステップ、（ｉｉｉ）試料を分析して、その対象における状態を予防または処置する最適のＴ細胞抗原を同定するステップ、（ｉｉｉ）本発明の作用物質を調製するステップ、（ｉｖ）対象に作用物質を投与するステップ、および（ｖ）ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の数を判定する試験を行うことによって、または対象の臨床症状を監視することによって、対象におけるＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞のレベルを監視するステップを含みうる。
【０１６２】
特定の患者に使用されるべき最も適切な作用物質を選択および任意選択で調製するのに装置を使用してもよいことが理解される。例えば、装置は、対象からの１つまたは複数の試料の自動分析を実施し、この分析に基づいて、その対象の特定の要求に合わせた作用物質を選択および任意選択で調製することができる。したがって、装置は、試料に対して血清学的アッセイを実施して対象のＭＨＣ対立遺伝子を判定し、この試験に基づいて、様々なペプチドを、Ｔ細胞応答（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞応答）の誘発におけるこれらの効率について判定し、その結果その患者に使用するのに最良のＴ細胞抗原を同定することができる。同様に、装置は、対象に由来する（例えば、生検試料に由来する）細胞の発現プロファイルを実施し、その結果、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかの適当な結合パートナーを判定することができる。
【０１６３】
診療所でこれらのステップの任意の１つまたは複数を実施することによって、特定の対象のために適応させた作用物質を調製することができる。例えば、作用物質は、患者のＭＨＣ分子に結合し、強いＴ細胞応答を誘発することが分かっているＴ細胞抗原を含有することができる。
【０１６４】
一実施形態では、対象は、本発明の第１の態様による作用物質に加えてさらなる治療剤を投与される。例えば、特定の状態を予防または処置するのに作用物質を投与するとき、その状態と闘うのに有用であることが分かっているさらなる治療剤を投与してもよい。一例として、作用物質が、がんを処置するためのものであるとき、さらなる抗がん剤（例えば、抗新生物化学療法）を、本発明の作用物質とともに対象に投与してもよい。同様に、さらなる治療剤は、アレルギー性疾患、炎症疾患、再生医療、および神経再生疾患（ｎｅｕｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）において治療用途を有することが分かっているものでありうる。
【０１６５】
さらなる治療剤は、本発明の作用物質と同じ時間に（すなわち、任意選択で共製剤での同時投与）、または本発明の作用物質と異なる時間に（すなわち、逐次投与）投与してもよいことが理解される。
【０１６６】
さらなる治療剤は、ワクチン；免疫刺激薬；抗がん剤；本発明の作用物質に対する抗体応答を阻害する作用物質；および／またはプロテアーゼ阻害剤の任意の１種または複数でありうる。
【０１６７】
例えば、使用される特定のＴ細胞抗原に対するエフェクター免疫応答を追加免疫するために、対象にＴ細胞抗原をワクチン接種し、かつ／または免疫賦活剤、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＦＮα、ＧＭ−ＣＳＦ、メトホルミン、レナリドミドなどを投与し、かつ／またはイピリムマブなどの抗免疫調節剤を投与することが望ましい場合があり、これらのすべては、さらなる治療剤と見なすことができる。同様に、さらなる治療剤は、Ｔ細胞抗原に対する免疫応答を刺激するのに使用されるＣＭＶなどの生ウイルスであってもよい。これは、例えば、輸血によって実施されうる。
【０１６８】
対象が免疫抑制剤を投与されている者である場合、これらの免疫抑制剤は、本発明の作用物質を投与されるとき、または投与される前に対象から取り除かれる（例えば、処置を中止することによって）ことも理解される。
【０１６９】
同様に、有害な抗体応答がｉｎ  ｖｉｖｏで誘発される、本発明の作用物質に関するいずれの免疫原性の問題も回避することを目的とした方法を使用することが望ましい場合がある。例えば、対象に、Ｂ細胞の活性を阻害することが分かっている１種または複数の作用物質、例えば、リツキシマブ、シクロホスファミド、Ｓｙｋ阻害剤、抗ＢＡＦＦ抗体（例えば、ベリムマブ）、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体、および抗ＣＤ１９抗体のいずれかなどを投与することもでき、これらのすべては、さらなる治療剤と見なすことができる。この場合、例えば、Ｂ細胞を除去するための前処置として、本発明の作用物質の前にＢ細胞の阻害剤が対象に投与される場合、特に好適である。
【０１７０】
したがって、本発明は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するのに使用するための、（ｉ）本発明の第１の態様による作用物質、および（ｉｉ）さらなる治療剤を含む組成物を含む。本発明の作用物質およびさらなる治療剤が同時にまたは順次投与されうることを考慮すると、本発明は、さらなる治療剤を投与される対象におけるＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するのに使用するために、本発明の第１の態様による作用物質を含むことが理解されるであろう。本発明は、本発明の第１の態様による作用物質を投与される対象におけるＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するのに使用するために治療剤を含むことにもなる。
【０１７１】
同様に、本発明は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するための医薬の製造における（ｉ）本発明の第１の態様による作用物質、および（ｉｉ）さらなる治療剤を含む組成物の使用を含む。やはり、本発明の作用物質およびさらなる治療剤が同時にまたは順次投与されうることを考慮すると、本発明は、さらなる治療剤を投与される対象におけるＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するための医薬の製造における、本発明の第１の態様による作用物質を含む組成物の使用を含むことが理解されるであろう。本発明は、本発明の第１の態様による作用物質を投与される対象におけるＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる状態を予防または処置するための医薬の製造における治療剤の使用を含むことにもなる。
【０１７２】
本発明は、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５のいずれかを発現する細胞の存在によって特徴付けられる同じ状態を予防または治療するのに適した、（ｉ）本発明の第１の態様による作用物質、および（ｉｉ）さらなる治療剤を含む組成物も提供する。直前の２つの段落で述べた治療剤は、本発明の作用物質によって処置可能である場合、望まれない細胞の存在によって特徴付けられる同じ状態を処置するのに適した作用物質でありうることが理解される。
【０１７３】
本発明の作用物質を単独で投与することが可能であるが、１種または複数の許容される担体と一緒に医薬製剤としてこれを提供することが好ましい。担体は、治療剤と適合性であり、そのレシピエントに有害でないという意味で「許容され」なければならない。一般に、担体は、滅菌されており、無発熱物質である水または生理食塩水となる。
【０１７４】
適切な場合、製剤は、好都合なことには単位剤形で提供することができ、薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。このような方法は、活性成分（望まれない細胞によって特徴付けられる状態を処置または予防するための作用物質）を１種または複数の副成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般に、製剤は、活性成分を液体担体もしくは微粉化した固体担体、または両方と均一かつ密接に会合させ、次いで必要であれば、生成物を成形することによって調製される。
【０１７５】
経口投与に適した本発明による製剤は、それぞれ所定量の活性成分を含有する別個の単位、例えば、カプセル、カシェ剤、または錠剤などとして；粉末もしくは顆粒として；水性液体もしくは非水液体中の溶液もしくは懸濁液として；または水中油型液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして提供することができる。活性成分は、ボーラス、舐剤、またはペーストとしても提供することができる。
【０１７６】
錠剤は、任意選択で１種または複数の副成分とともに圧縮または成型によって作製されうる。圧縮錠剤は、任意選択で結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性な希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、ナトリウムデンプングリコレート、架橋ポビドン、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース）、表面活性剤または分散剤と混合して、粉末または顆粒などの自由流動形での活性成分を適当な機械で圧縮することによって調製することができる。湿製錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を適当な機械で成型することによって作製することができる。錠剤は、任意選択で被覆し、または刻み目をつけてもよく、例えば、所望の放出プロファイルをもたらす様々な比率でヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、中の活性成分が徐放または制御放出されるように製剤化してもよい。
【０１７７】
口内局部投与に適した製剤としては、風味主成分、通常スクロースとアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；不活性主成分、例えば、ゼラチンとグリセリンまたはスクロースとアカシアなどの中に活性成分を含む香錠；および適当な液体担体中に活性成分を含むマウスウォッシュがある。
【０１７８】
非経口投与に適した製剤としては、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬、および製剤を意図されたレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有しうる水性および非水性滅菌注射液；ならびに懸濁剤および増粘剤を含みうる水性および非水性滅菌懸濁液がある。製剤は、単位用量または複数回用量容器、例えば、密閉されたアンプルおよびバイアルで提供してもよく、使用直前に滅菌液体担体、例えば、注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）条件で貯蔵してもよい。即席の注射液および懸濁液は、先に記載した種類の滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調製されうる。
【０１７９】
本発明の作用物質は、坐剤もしくはペッサリーの形態で投与することができ、またはこれらは、ローション剤、溶液、クリーム、軟膏、もしくは粉剤の形態で局部的に塗布されてもよい。作用物質は、例えば、皮膚パッチの使用によって経皮投与されてもよい。
【０１８０】
好適な単位投与製剤は、活性成分の一日用量もしくは単位、一日サブ用量、またはこれらの適切な画分を含有するものである。
【０１８１】
特に上述した成分に加えて、本発明の製剤は、対象になっている製剤のタイプを考慮して当技術分野で慣例的な他の作用物質を含んでもよく、例えば、経口投与に適したものは、香味剤を含みうることが理解されるべきである。
【０１８２】
個体に投与される作用物質の量は、特定の個体の状態と闘うのに有効な量である。量は、医師によって決定されうる。
【０１８３】
好ましくは、本明細書に記載の発明の任意の態様との関連で、処置される対象はヒトである。代わりに、対象は、動物、例えば、飼いならされた動物（例えば、イヌもしくはネコ）、実験動物（例えば、実験用げっ歯類、例えば、マウス、ラット、もしくはウサギ）、または農業で重要な動物（すなわち、家畜）、例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、もしくはヤギであってもよい。
【０１８４】
本発明の好適な実施形態では、作用物質中のＴ細胞抗原はペプチドであり、作用物質は、がんを予防または処置するのに使用される。
【０１８５】
一実施形態では、ＣＤ７０の結合パートナーは、ＢＵ６９抗体（抗ＣＤ７０、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）などの抗ＣＤ７０抗体であり（Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｖ（１９９５）：ＳＦ  Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ編、ＯＵＰ、Ｏｘｆｏｒｄ）、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１８６】
一実施形態では、ＣＤ７４の結合パートナーは、抗ＣＤ７４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（精製された抗ヒトＣＤ７４、クローン：ＬＮ２）などの抗ＣＤ７４抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１８７】
一実施形態では、ＣＤ７０の結合パートナーは、ＢＵ６９抗体（抗ＣＤ７０、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）などの抗ＣＤ７０抗体であり（Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｖ（１９９５）：ＳＦ  Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ編、ＯＵＰ、Ｏｘｆｏｒｄ）、Ｔ細胞抗原は、ＰＲＳＰＴＶＦＹＮＩＰＰＭＰＬＰＰＳＱＬ（配列番号４９）を含む。
【０１８８】
一実施形態では、ＣＤ２２の結合パートナーは、抗ＣＤ２２（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ２２、クローン：ＨＩＢ２２）などの抗ＣＤ２２抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１８９】
一実施形態では、ＣＤ２３の結合パートナーは、抗ＣＤ２３（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ２３、クローン：Ｍ−Ｌ２３３）などの抗ＣＤ２３抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９０】
一実施形態では、ＣＤ３０の結合パートナーは、抗ＣＤ３０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ３０、クローン：ＢｅｒＨ８）などの抗ＣＤ３０抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９１】
一実施形態では、ＣＤ４３の結合パートナーは、抗ＣＤ４３（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ４３、クローン：１Ｇ１０）などの抗ＣＤ４３抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９２】
一実施形態では、ＣＤ４４の結合パートナーは、抗ＣＤ４４（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ４４、クローン：５１５）などの抗ＣＤ４４抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９３】
一実施形態では、ＣＤ４７の結合パートナーは、抗ＣＤ４７（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ４７、クローン：Ｂ６Ｈ１２）などの抗ＣＤ４７抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９４】
一実施形態では、ＣＤ５４の結合パートナーは、抗ＣＤ５４（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ５４、クローン：２８／ＣＤ５４）などの抗ＣＤ５４抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９５】
一実施形態では、ＣＤ５５の結合パートナーは、抗ＣＤ５５（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ５５、クローン：ＩＡ１０）などの抗ＣＤ５５抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９６】
一実施形態では、ＣＤ５８の結合パートナーは、抗ＣＤ５８（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ５８、クローン：１Ｃ３（ＡＩＣＤ５８．６））などの抗ＣＤ５８抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９７】
一実施形態では、ＣＤ５９の結合パートナーは、抗ＣＤ５９（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ５９、クローン：ｐ２８２（Ｈ１９））などの抗ＣＤ５９抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９８】
一実施形態では、ＣＤ６２Ｌの結合パートナーは、抗ＣＤ６２Ｌ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ６２Ｌ、クローン：ＳＫ１１）などの抗ＣＤ６２Ｌ抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０１９９】
一実施形態では、ＣＤ９５の結合パートナーは、抗ＣＤ９５（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＣＤ９５、クローン：ＥＯＳ９．１）などの抗ＣＤ９５抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０２００】
一実施形態では、ＨＬＡ−ＤＲの結合パートナーは、抗ＨＬＡ−ＤＲ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（精製された抗ヒトＨＬＡ−ＤＲ、クローン：Ｇ４６−６）などの抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体であり、Ｔ細胞抗原は、ＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号９）またはＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）を含む。
【０２０１】
本発明を、以下の図面および実施例を活用してさらに詳細に記載する。
【図面の簡単な説明】
【０２０２】
【図１】ヒトＣＤ７０、ＣＤ７４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６２Ｌ、またはＣＤ９５（配列番号：９３〜１０７）のアミノ酸配列を示す図である。
【図２】抗体ペプチド−エピトープコンジュゲートの内部移行後の再指向されたウイルス特異的Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性を実証するデータを示す図である。（Ａ）ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ（配列番号１０８）ペプチドのＢＵ６９抗体（抗ＣＤ７０、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）へのコンジュゲーションを通じたＣＤ４＋サイトメガロウイルス特異的Ｔ細胞によるリンパ芽球様細胞株の認識。標的細胞の認識は、抗体が特定のペプチドとコンジュゲートしているときのみ存在する。対照は、外因性ペプチドの存在下でのみ標的細胞に対するＴ細胞の特異性を実証する。（Ｂ）５個のＴ細胞と１個の標的細胞の比でウイルスペプチドＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶとコンジュゲートしたＢＵ６９で標識された標的細胞の細胞傷害性。ペプチドがコンジュゲートしたＢＵ６９抗体は、ウイルスペプチドで外因的にパルスされた標的細胞の５５％の細胞傷害性と比較して４０％の細胞傷害性を媒介する。ＢＵ６９抗体が無関係のウイルスペプチドとコンジュゲートしていたとき、毒性はほとんど見られなかった。（Ｃ）ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶペプチドの抗ＣＤ７４抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）へのコンジュゲーションを通じたＣＤ４＋サイトメガロウイルス特異的Ｔ細胞によるリンパ芽球様細胞株の認識。標的細胞の認識は、抗体が特定のペプチドとコンジュゲートしているときのみ存在する。対照は、外因性ペプチドの存在下でのみ標的細胞に対するＴ細胞の特異性を実証する。（Ｄ）ヘテロ二官能性架橋剤スルホ−ＳＭＣＣの存在下または非存在下でのＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶペプチドのＢＵ６９抗体へのコンジュゲーションを通じたＣＤ４＋サイトメガロウイルス特異的Ｔ細胞によるリンパ芽球様細胞株の認識。標的細胞の認識は、架橋剤が存在しないときの応答の欠如と比較して、抗体が架橋剤の存在下でコンジュゲートしているときのみ存在する。対照は、外因性ペプチドの存在下でのみ標的細胞に対するＴ細胞の特異性を実証する。（Ｅ）ＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩ抗原プロセシング経路の阻害剤の存在下または非存在下でのＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶペプチドのＢＵ６９抗体へのコンジュゲーションを通じたＣＤ４＋サイトメガロウイルス特異的Ｔ細胞によるリンパ芽球様細胞株の認識。標的細胞の認識は、細胞が、未処置の対照（ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ）と比較して、ＭＨＣクラスＩＩプロセシング経路の阻害剤（クロロキンおよびモネンシン）の存在下で培養されているときのみ低減される。ＭＨＣクラスＩプロセシング経路の阻害剤の存在下で培養された細胞に向けたＴ細胞応答の差異はまったくない。（Ｆ）同族抗原ＰＲＳＰＴＶＦＹＮＩＰＰＭＰＬＰＰＳＱＬペプチドのＢＵ６９抗体（抗ＣＤ７０、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）へのコンジュゲーションを通じたＣＤ４＋エプスタインバーウイルス特異的Ｔ細胞によるリンパ芽球様細胞株の認識。標的細胞の認識は、抗体が特定のペプチドとコンジュゲートしているときのみ存在する。対照は、外因性ペプチドの存在下でのみ標的細胞に対するＴ細胞の特異性を実証する。（Ｇ〜Ｓ）二次抗体にコンジュゲートしたペプチド抗原ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶの認識を通じたＣＤ４＋サイトメガロウイルス特異的Ｔ細胞によるリンパ芽球様細胞株の認識。標的細胞を、標的細胞の表面で発現されるタンパク質（例えば、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＨＬＡ−ＤＲなど）に結合することができる一次抗体で最初に標識した。次いでペプチドＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶとコンジュゲートした二次抗体（抗マウスＩｇＧ）を使用して、標的細胞に結合した抗体を標識した。ＡＰＥＣ複合体で標識された標的細胞は、ＩＦＮ−ｙの生成によって判定されるように、ペプチド特異的Ｔ細胞によって認識される。対照は、外因性ペプチドの存在下でのみ標的細胞に対するＴ細胞の特異性を実証する。
【実施例】
【０２０３】
実施例１：抗体ペプチドエピトープコンジュゲート（ＡＰＥＣ）によるＴ細胞の刺激
本発明者らは、Ｔ細胞抗原を特定の細胞表面標的に標的化することによって、Ｔ細胞抗原は、Ｔ細胞応答が開始されるように内部移行し、細胞の表面に提示されうることを示した。
【０２０４】
図２Ａは、作用物質で標識された標的細胞のＴ細胞認識を実証する。抗ＣＤ７０抗体をペプチド（ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ）と、またはペプチドを用いずに（ＤＭＳＯ）コンジュゲートし、標的細胞を標識するのに使用する。ペプチドを含まない抗体で標識された細胞は、Ｔ細胞によって認識されず、標的細胞およびＴ細胞を一晩インキュベートした後、培養上清中にＩＦＮ−ｙが存在しないことによって実証される。免疫原性ペプチドとコンジュゲートされた抗体で標識された細胞は、培養上清中のＩＦＮ−ｙの存在に起因してＴ細胞によって強く認識される。これらの結果は、ペプチドが抗体から放出され、ＭＨＣクラスＩＩ分子と複合体を形成して細胞表面に提示されたことを示唆する。
【０２０５】
対照細胞は、標的細胞単独による、または免疫原性ペプチドとのインキュベーションに応答したＩＦＮ−ｙ放出はまったくないことを実証する。また、免疫原性ペプチドの非存在下でＴ細胞によるＩＦＮ−ｙ放出はまったくないが、標的細胞が外因性免疫原性ペプチドで標識された後、Ｔ細胞の強い認識があり、Ｔ細胞がペプチド特異的であり、標的細胞によって天然に発現される任意の他のペプチドを認識しないことを実証する。最後に、培養中の時間全体にわたって、Ｔ細胞によるＩＦＮ−ｙの自然放出はまったくない。
【０２０６】
図２Ｂでは、標的細胞は、対照ペプチド（ビオチン−ＲＰＨＥＲＮＦＧＴＶＬ）または試験ペプチド（ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ）を含有する抗ＣＤ７０  ＡＰＥＣで標識されている。標識された標的細胞をペプチド特異的Ｔ細胞とともに６時間インキュベートし、抗ＣＤ２０抗体で染色し、フローサイトメトリー分析をする。ＣＤ７０−ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ  ＡＰＥＣで標識された標的細胞は、Ｔ細胞によって認識され、ビオチン−ＲＰＨＥＲＮＦＧＴＶＬで標識された標的細胞と比較して、６時間後にウェル中に残っている標的細胞の数の低減がある。ここでの結果は、ＡＰＥＣで標識された標的細胞に対するＴ細胞細胞傷害性の間接法を実証する。
【０２０７】
対照細胞をペプチドでパルスし、または未処置のままにし、Ｔ細胞とともに６時間培養した。フローサイトメーターでの分析により、外因性ペプチドをロードされた標的細胞は、Ｔ細胞によって標的化され、一方、未処置のままにされた標的細胞は、Ｔ細胞によって無視されることが実証された。
【０２０８】
図２Ｃでは、標的細胞は、ペプチドなし（ＤＭＳＯ）、対照ペプチド（ビオチン−ＲＰＨＥＲＮＦＧＴＶＬ）、または試験ペプチド（ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ）を含有する抗ＣＤ７４  ＡＰＥＣで標識されている。ペプチド特異的Ｔ細胞とともに培養した後、試験ペプチドを含有するＡＰＥＣで標識された標的細胞は、ＩＦＮ−ｙの放出によって実証されたように認識され、一方、ペプチドを有さない、または対照ペプチドを有するＡＰＥＣで標識された標的細胞は認識されなかった。
【０２０９】
図２Ｄでは、スルホ−ＳＭＣＣを添加して、または添加しないで、ペプチドなし対照としてのＤＭＳＯ、および試験ペプチドＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶを使用して抗ＣＤ７０  ＡＰＥＣを生成した。これは、ペプチドの抗体へのコンジュゲーションは、ヘテロ二官能性架橋剤を利用しており、いずれの他の化学的相互作用も介していないことを実証するためであった。標的細胞をＡＰＥＣで標識し、Ｔ細胞とともに１６時間培養した。細胞培養液の上清をＩＦＮ−ｙの存在についてアッセイした。コンジュゲーションがスルホ−ＳＭＣＣの非存在下で行われるとき、対照または試験ＡＰＥＣで標識された標的細胞の認識はまったくなく、細胞の表面に提示されるペプチドはまったくないことを示唆する。コンジュゲーションがスルホ−ＳＭＣＣの存在下で行われるとき、試験ＡＰＥＣ（ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ）で標識された標的細胞に対するＴ細胞応答があり、対照ＡＰＥＣ（ＤＭＳＯ）で標識された標的細胞に対するＴ細胞応答はまったくない。この結果は、ＡＰＥＣを生成するためのペプチドの抗体へのコンジュゲーション中のＳＭＣＣの要件を実証する。
【０２１０】
図２Ｅでは、標的細胞を、ＨＬＡクラスＩおよびクラスＩＩプロセシング経路の阻害剤の存在下で抗ＣＤ７０−ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ  ＡＰＥＣで標識した。Ｔ細胞を標識された標的細胞に添加し、引き続いて６時間培養した後、上清をＩＦＮ−ｙの存在についてアッセイした。ラクタシスチン、ペプスタチン、または３−メチルアデニン（クラスＩプロセシング経路の阻害剤）の添加は、阻害剤の非存在下（ＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶ）で培養された細胞と比較して同様のレベルのＴ細胞認識を実証する。モネンシン、クロロキン、およびロイペプチン（クラスＩＩプロセシング経路の様々な態様の阻害剤）の添加は、生成されるＩＦＮ−ｙの量の減少を実証し、ＡＰＥＣは、ＨＬＡクラスＩＩプロセシング経路を介してプロセシングされることを示唆する。
【０２１１】
図２Ｆでは、ＥＢＶ由来ペプチドＰＲＳＰＴＶＦＹＮＩＰＰＭＰＬＰＰＳＱＬおよびＡＰＥＣで標識された標的細胞を使用して抗ＣＤ７０  ＡＰＥＣを生成した。ペプチド特異的Ｔ細胞を標的細胞に添加し、１６時間一緒に培養し、上清をＩＦＮ−ｙの存在についてアッセイした。試験ＡＰＥＣ（ＰＲＳＰＴＶＦＹＮＩＰＰＭＰＬＰＰＳＱＬ）で標識された標的細胞は、Ｔ細胞によって認識され、一方、対照ＡＰＥＣ（ＤＭＳＯまたはビオチン−ＲＰＨＥＲＮＦＧＴＶＬ）で標識された標的細胞は、Ｔ細胞によって認識されなかった。
【０２１２】
外因性ペプチドでパルスされた対照細胞は、Ｔ細胞によって強く認識され、一方、未処置の標的細胞は、Ｔ細胞によって認識されなかった。Ｔ細胞によるＩＦＮ−ｙの自然放出は、これらが単独で培養されたとき、まったくなかった。
【０２１３】
図２Ｇ〜図２Ｓでは、抗マウスＩｇＧ二次抗体をＣＭＶ由来ペプチドＰＤＤＹＳＮＴＨＳＴＲＹＶとコンジュゲートした。標的細胞を、様々な細胞表面分子を標的にする一次抗体で最初に標識し、次いでペプチドでコンジュゲートされた二次抗体を使用して二度標識した。ペプチド特異的Ｔ細胞を標的細胞に添加し、１６時間一緒に培養し、上清をＩＦＮ−ｙの存在についてアッセイした。様々な一次抗体で染色した後試験ＡＰＥＣで標識した標的細胞は、Ｔ細胞によって認識された。
【０２１４】
外因性ペプチドでパルスされた対照細胞は、Ｔ細胞によって強く認識され、一方、未処置の標的細胞は、Ｔ細胞によって認識されなかった。Ｔ細胞によるＩＦＮ−ｙの自然放出は、これらが単独で培養されたとき、まったくなかった。
【０２１５】
実施例２：システイン化ペプチドの抗体への化学的コンジュゲーションの標準操作手順
１．システイン化ペプチドを１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度までＤＭＳＯに溶解させる。
２．スルホスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）１ｍｇを秤量し、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）２００μｌ中に溶解させる。
ａ．スルホ−ＳＭＣＣの代わりに他のヘテロ二官能性架橋剤、例えば、とりわけ、スルホスクシンイミジル６−（３’−［２−ピリジルジチオ］−プロピオンアミド）ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ）、およびＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド、トリフルオロ酢酸塩（ＢＭＰＨ）を使用することができる。
３．抗体５０μｌ（１０ｍｇ／ｍｌ、抗体５００μｇ）を溶解したスルホ−ＳＭＣＣに添加し、室温で３０分間インキュベートする。
４．カラムを１，５００ｇで１分間最初に回転させることによってＺｅｂａＳｐｉｎ脱塩カラム（７ｋＤａの分子量）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を洗浄して、エタノール（貯蔵緩衝液）を除去する。
５．ＰＢＳ  ３００μｌを添加し、１，５００ｇで１分間回転させる。溶出液を取り出し、さらに２回繰り返す。
６．抗体−ＳＭＣＣ  １２５μｌをカラムに添加し、十分に混合し、２分間インキュベートする。
７．結合した抗体を溶出するために、１，５００ｇで２分間遠心分離し、溶出液を収集する。
８．ＤＭＳＯ中に先に溶解させたペプチド５μｌをＳＭＣＣ活性化抗体に添加し、室温で３０分間インキュベートする。
９．カラムを１３，０００ｒｐｍで３０秒間最初に回転させることによってプロテインＧカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を洗浄して、エタノール（貯蔵緩衝液）を除去する。
１０．ＰＢＳ  ５００μｌを添加し、プロテインＧビーズを十分に混合した後、１３，０００ｒｐｍで３０秒間回転させる。溶出液を取り出し、洗浄をさらに２回繰り返す。
１１．抗体−ＳＭＣＣをプロテインＧカラムに添加し、十分に混合し、５分間インキュベートする。１３，０００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、溶出液を取り出す。
１２．ＰＢＳ  ５００μｌを添加することによって抗体を洗浄し、ビーズを十分混合した後、１３，０００ｒｐｍで３０秒間回転させ、溶出液を取り出す。このステップをさらに２回繰り返す。
１３．結合した抗体を溶出するために、０．１Ｍクエン酸１２５μｌをビーズに添加し、室温で２分間インキュベートする。カラムを１．５ｍｌのエッペンドルフ内に入れ、１３，０００ｒｐｍで３０秒間回転させ、溶出液を収集する。
１４．溶出を２回繰り返し、総溶出体積を２５０μｌにする。
１５．０．２Ｍ  Ｎａ２ＨＣＯ３  ７５０μｌを添加してｐＨを約７に上げる。室温で１０分間放置する。これで抗体−ペプチドコンジュゲートを、細胞を染色するのに使用することができる。
１６．抗体を４℃で貯蔵する。
【図１ＡＢＣ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１ＦＧ】
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【図１Ｈ】
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【図１ＩＪ】
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【図１ＫＬＭ】
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【図１ＮＯ】
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【図２ＡＢ】
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【図２ＣＤ】
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【図２ＥＦ】
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【図２ＧＨＩ】
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【図２ＪＫＬ】
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【図２ＭＮ】
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【図２ＯＰＱ】
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【図２ＲＳ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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