(57)【要約】  本明細書に定義される、式（Ｉ）:2015519402.tif 000055のアゼチジンおよびピペリジン化合物、それを含有する組成物、ならびにそのような化合物およびその中間体を調製するためのプロセス。ＰＤＥ１０の阻害によって治療可能な、ハンチントン病、統合失調症、双極性障害、強迫性障害等といった認知障害または疾患を治療する方法もまた、本明細書に提供される。【選択図】  なし
2015519402.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物
【化１】
2015519402.tif 000041
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｘ１は、ＮまたはＣＲ４であり、
Ｘ２は、ＮまたはＣＲ５であり、
ここで、Ｘ１およびＸ２の０〜１つは、Ｎであり、
ｐおよびｑのそれぞれは、独立して、１または２であり、ここで、ｐおよびｑの和は、２または４であり、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素またはハロである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｘ１はＮであり、Ｘ２はＣＨである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｘ１はＣＨであり、Ｘ２はＮである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｘ１はＣＨであり、Ｘ２はＣＨである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
ｐおよびｑの和は、４である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
ｐおよびｑの和は、２である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ２はフルオロである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの１つは、水素である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの２つが、水素である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、水素である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｒ１およびＲ２のうちの１つが、フルオロである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
Ｒ１およびＲ２のうちの１つが、クロロである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
Ｒ１は、フルオロまたはクロロである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
Ｒ１は水素であり、Ｒ２はクロロまたはフルオロである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
Ｒ１はクロロまたはフルオロであり、Ｒ２は水素である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
以下である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩：
【表１】
2015519402.tif 000042
2015519402.tif 000043
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
ＰＤＥ１０阻害剤により治療することができる認知障害を治療する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１９】
前記状態は、統合失調症、ハンチントン病、肥満、双極性障害、または強迫性障害である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、式（Ｉ）の化合物を調製するために、
（ａ）  式３の化合物を、式５の化合物と反応させるステップであって、
【化２】
2015519402.tif 000044
式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｐ、およびｑは、式（Ｉ）の化合物において定義される通りであり、式中、ＬＧ１は、脱離基であり、Ｍは、金属部分であり、溶媒および触媒の存在下である、ステップ、
または
（ｂ）  式２の化合物を、式４の化合物と反応させるステップであって、
【化３】
2015519402.tif 000045
式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｐ、およびｑは、式（Ｉ）の化合物において
定義される通りであり、ＬＧ２は脱離基であり、溶媒および塩基の存在下である、
ステップを含む、方法。
【請求項２１】
式
【化４】
2015519402.tif 000046
（４）の化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、式中、ｐおよびｑのそれぞれは、独立して、１または２であり、ｐおよびｑの和は、２または４である、化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２２】
ｐおよびｑの和は、４である、請求項２１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２３】
ｐおよびｑの和は、２である、請求項２１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２４】
式
【化５】
2015519402.tif 000047
（５）の化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｘ１は、ＮまたはＣＲ４であり、
Ｘ２は、ＮまたはＣＲ５であり、
ここで、Ｘ１およびＸ２の０〜１つは、Ｎであり、
ｐおよびｑのそれぞれは、独立して、１または２であり、ここで、ｐおよびｑの和は、２または４であり、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素またはハロであり、ＬＧ１は脱離基である、化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２５】
ｐおよびｑの和は、４である、請求項２４に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２６】
ｐおよびｑの和は、２である、請求項２４に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２７】
【化６】
2015519402.tif 000048
である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２８】
【化７】
2015519402.tif 000049
である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２９】
【化８】
2015519402.tif 000050
である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３０】
【化９】
2015519402.tif 000051
である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３１】
【化１０】
2015519402.tif 000052
である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３２】
【化１１】
2015519402.tif 000053
である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３３】
【化１２】
2015519402.tif 000054
である、化合物、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３４】
請求項２７〜３３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項３５】
ＰＤＥ１０阻害剤により治療することができる認知障害を治療する方法であって、それを必要とする患者に、請求項２７〜３３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を投与するステップを含み、前記状態は、統合失調症、ハンチントン病、肥満、双極性障害、または強迫性障害である、方法。
【請求項３６】
請求項１９に記載のＰＤＥ１０阻害剤により治療することができる認知障害を治療する方法であって、前記状態は、統合失調症であり、前記阻害剤は好適な統合失調症薬と組み合わせられる、方法。
【請求項３７】
請求項３５に記載のＰＤＥ１０阻害剤により治療することができる認知障害を治療する方法であって、前記状態は、統合失調症であり、前記阻害剤は好適な統合失調症薬と組み合わせられる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年６月１４日に出願された、米国仮出願第６１／６５９，９１１号の利益を主張し、これは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＰＤＥ１０阻害剤である新規なアゼチジンおよびピペリジン化合物、そのような化合物を含有する薬学的組成物、ならびにそのような化合物を調製するためのプロセスが、本明細書に提供される。ＰＤＥ１０の阻害によって治療可能な、ハンチントン病、統合失調症、双極性障害、強迫性障害等といった認知障害または疾患を治療する方法もまた、本明細書に提供される。
【背景技術】
【０００３】
神経伝達物質およびホルモン、ならびに他の種類の細胞外シグナル、例えば光および匂いは、環状ヌクレオチド一リン酸（ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ）の量を細胞内で変化させることにより細胞内シグナルを生成させる。これらの細胞内メッセンジャーは、多くの細胞内タンパク質の機能を変化させる。環状ＡＭＰは、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＡ）の活性を制御する。ＰＫＡは、イオンチャネル、酵素、および転写因子を含む、多くの種類のタンパク質をリン酸化し、その機能を制御する。ｃＧＭＰシグナル伝達の下流メディエータもまた、キナーゼおよびイオンチャネルを含む。キナーゼにより媒介される作用に加えて、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰは、いくつかの細胞タンパク質に直接結合し、それらの活性を直接制御する。
【０００４】
環状ヌクレオチドはアデニリルシクラーゼおよびグアニリルシクラーゼの作用により生成され、これらはＡＴＰをｃＡＭＰに、ＧＴＰをｃＧＭＰに変換する。細胞外シグナルは、しばしばＧタンパク質共役受容体の作用を介して、シクラーゼの活性を制御する。あるいは、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの量は、環状ヌクレオチドを分解する酵素の活性を制御することにより変化させることができる。細胞恒常性は、刺激により誘導される増加後の環状ヌクレオチドの急速分解により維持される。環状ヌクレオチドを分解する酵素は、３’，５’−環状ヌクレオチド特異的ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）と呼ばれる。
【０００５】
１１のＰＤＥ遺伝子ファミリー（ＰＤＥ１〜ＰＤＥ１１）が、それらの明確なアミノ酸配列、触媒および制御特性、ならびに小分子阻害剤に対する感受性に基づいて特定されている。これらのファミリーは２１の遺伝子によりコードされ、さらに複数のスプライス変異体がこれらの遺伝子の多くから転写される。遺伝子ファミリーのそれぞれの発現パターンは互いに明確に異なる。ＰＤＥは、それらのｃＡＭＰおよびｃＧＭＰに対する親和性に関して異なっている。異なるＰＤＥの活性は、異なるシグナルにより制御される。例えば、ＰＤＥ１は、Ｃａ２＋／カルモジュリンにより刺激される。ＰＤＥ２活性は、ｃＧＭＰにより刺激される。ＰＤＥ３は、ｃＧＭＰにより阻害される。ＰＤＥ４は、ｃＡＭＰ特異的であり、ロリプラムにより特異的に阻害される。ＰＤＥ５は、ｃＧＭＰ特異的である。ＰＤＥ６は、網膜で発現される。
【０００６】
ＰＤＥ１０配列は、バイオインフォマティクスおよび他のＰＤＥ遺伝子ファミリーからの配列情報を用いて特定された（Ｆｕｊｉｓｈｉｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ  ｈｅｍ．２７４：１８４３８−１８４４５，１９９９；Ｌｏｕｇｈｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ２３４：１０９−１１７，１９９９；Ｓｏｄｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：７０７１−７０７６，１９９９）。ＰＤＥ１０遺伝子ファミリーは、そのアミノ酸配列、機能特性、および組織分布に基づいて区別される。ヒトＰＤＥ１０遺伝子は大きく、２００キロベースを超え、最大２４のエクソンがスプライス変異体のそれぞれをコードする。そのアミノ酸配列は、２つのＧＡＦドメイン（ｃＧＭＰに結合する）、触媒領域、ならびに選択的にスプライシングされたＮおよびＣ末端により特徴付けられる。少なくとも３つの選択できるエクソンがＮ末端をコードし、２つのエクソンがＣ末端をコードするため、多くのスプライス変異体が可能である。ＰＤＥ１０Ａ１はｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの両方を加水分解する７７９アミノ酸タンパク質である。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰに対するＫｍ値は、それぞれ、０．０５および３．０マイクロモルである。ヒト変異体に加えて、高い相同性を有するいくつかの変異体が、ラットおよびマウスの両方の組織および配列バンクから単離されている。
【０００７】
ＰＤＥ１０  ＲＮＡ転写物はヒト精巣および脳において最初に検出された。その後の免疫組織化学解析により、最高レベルのＰＤＥ１０が基底核で発現されることが明らかになった。具体的には、嗅結節、尾状核、および側坐核における線条体ニューロンはＰＤＥ１０に富む。ウェスタンブロットは、他の脳組織におけるＰＤＥ１０の発現を明らかにしなかったが、ＰＤＥ１０複合体の免疫沈降は海馬および皮質組織において可能であった。これにより、これらの他の組織におけるＰＤＥ１０の発現レベルは、線条体ニューロンよりも１００倍低いことが示唆される。海馬における発現は、細胞体に限定されるが、ＰＤＥ１０は、線条体ニューロンの末端、樹状突起、および軸索において発現される。
【０００８】
ＰＤＥ１０の組織分布は、ＰＤＥ１０阻害剤は、ＰＤＥ１０酵素を発現する細胞内、例えば、基底核を成すニューロンにおいてｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰのレベルを上昇させるために使用することができ、したがって、基底核が関連する様々な精神神経状態、例えば肥満、インスリン非依存性糖尿病、統合失調症、双極性障害、強迫性障害等を治療するのに有用であるであろうことを示す。
【０００９】
非侵襲的な核イメージング技術を使用して、実験動物、正常なヒト、および患者を含む、様々な生体の生理学および生化学についての基本的および診断的情報を得ることができる。これらの技術は、そのような生体に投与された放射性トレーサから放射される放射線を検出することができる精緻なイメージング機器類の使用に依存する。得られた情報は再構築され、放射性トレーサの分布を時間の関数として明らかにする平面および断層撮影画像を提供し得る。適切に設計された放射性トレーサを使用すると、対象の構造、機能、ならびに最も重要なことには生理学および生化学に関する情報を含む画像が得られる。この情報の多くは、他の手段により得ることができない。これらの試験で使用される放射性トレーサは、対象の生理学もしくは生化学に関する特定の情報または様々な疾患もしくは薬物が対象の生理学または生化学に対して有する効果の決定を可能にする、インビボで規定された挙動を有するように設計される。現在、放射性トレーサが、心機能、心筋血流、肺灌流、肝機能、脳血流、局所脳グルコース、および酸素代謝等の物事に関連する有用な情報を得るために利用可能である。
【００１０】
本発明の化合物は、ポジトロンまたはγ放出放射性核種のいずれかで標識することができる。イメージングのために、最も一般的に使用されるポジトロン放出（ＰＥＴ）放射性核種は１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ、１３Ｎ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、または１２５Ｉであり、ここで１１Ｃ、１８Ｆ、１２３Ｉ、または１２５Ｉが好ましく、これらはすべて加速器で生成されるものである。この２０年で、核医学研究の最も活発な領域の１つは受容体イメージング放射性トレーサの開発である。これらのトレーサは、高い親和性および特異性で、選択的受容体および神経受容体に結合する。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎは、１８Ｆ−ＪＮＪ４１５１０４１７を、ＰＥＴを使用するＰＤＥ１０Ａのインビボ脳イメージングのための選択的および高親和性放射性リガンドとして合成し、評価している（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；Ｖｏｌ．５１；Ｎｏ．１０；Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０１０）。
【００１１】
本発明者らは、認知障害、好ましくは統合失調症を治療するための化合物であって、統合失調症の陰性症状を改善するのに有効なだけでなく、陽性症状の改善にも有効であり、さらに、当該技術分野で既知の薬物によって示されるものと比較して副作用が少ないそのような化合物を開発する目的で、広範囲な研究を行ってきた。結果として、ＰＤＥ１０受容体に対して強力かつ選択的な阻害活性を有する、新規なアゼチジンおよびピペリジン化合物の発見に成功した。あるいは、新規なアゼチジンおよびピペリジン化合物が、ハンチントン病の治療のために開発され得ることもまた、好ましい。
【００１２】
ＷＯ２０１１／１４３３６５号に開示されるアゼチジンおよびピペリジン化合物は、本発明のアゼチジンおよびピペリジン化合物のものとは異なる置換基を有する。
【００１３】
神経科学は、薬物開発における特に困難な分野である。分子シグナル伝達および電気回路における複雑性により、疾患の理解および治療の設計が困難となっており、血液脳関門は、治療の妨げとなっている。脳が、ほぼ間違いなく最も重要な器官であり、その環境において化学物質に対して極めて敏感である。血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの外来および天然の分子の進入を防ぐことにより、脳を損傷から保護する。それは、脳に供給を行うすべての血管を包囲する。それは、ともに堅く結合した細胞の単一層から構成される。可能性のある神経治療剤が、ＢＢＢを通って移動するだけでは十分でなく、さらに、その所望される作用を発揮するために十分に長く脳内に留まる必要がある。これは、それが脳から化合物を排除するように作用する種々の輸送タンパク質の基質とならないようにする必要もあることを意味する。少なくとも６つのこのような外向きの活性な排出機序がＢＢＢに存在し（Ａｌａｖｉｊｅｈ  ｅｔ  ａｌ．ＮｅｕｒｏＲｘ．２００５  Ｏｃｔｏｂｅｒ；２（４）：５５４−５７１、ｐ．５６５、図３を参照されたい）、その最も顕著なものは、膜輸送体のＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）スーパーファミリーの１７０−ｋＤａのメンバーである、Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）と称されるリン酸化糖タンパク質であり、これは、ヒトでは多剤耐性遺伝子１（ＭＤＲ１）によってコードされる。Ｐ−ｇｐは、脳毛細血管から血管腔に向かって内皮細胞の先端面に位置し、多くの薬物の低いＢＢＢ通過性に寄与する。野生型および（Ｐ−ｇｐ）ノックアウトマウスの脳、血漿、およびＣＳＦにおける、３２個の構造的に多様なＣＮＳ薬物の濃度についての研究では、これらの薬物のうちの２９個が、ノックアウトマウスと野生型マウスとの間で、脳／血漿比の顕著な差を示した。Ｐ−ｇｐについて定量的な構造−活性の関係（ＱＳＡＲ）を確立する試みがなされてきたが、この問題は、この輸送体の広範な特異性により困難となっている。
【００１４】
これらの状況において、高い透過性、低い排出、高い受容体または標的占有率、および高いＰＤＥ１０選択性プロファイルといった、改善された中枢神経系（ＣＮＳ）薬物プロファイルを有する、統合失調症等の認知障害を治療するための薬物の開発が、早急に必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】国際公開第２０１１／１４３３６５号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｆｕｊｉｓｈｉｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ  ｈｅｍ．２７４：１８４３８−１８４４５，１９９９
【非特許文献２】Ｌｏｕｇｈｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ２３４：１０９−１１７，１９９９
【非特許文献３】Ｓｏｄｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：７０７１−７０７６，１９９９
【非特許文献４】Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；Ｖｏｌ．５１；Ｎｏ．１０；Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０１０
【非特許文献５】Ａｌａｖｉｊｅｈ  ｅｔ  ａｌ．ＮｅｕｒｏＲｘ．２００５  Ｏｃｔｏｂｅｒ；２（４）：５５４−５７１、ｐ．５６５、図３
【発明の概要】
【００１７】
本発明は、認知疾患、例えばＰＤＥ１０媒介性疾患および他の病弊、例えば統合失調症、ハンチントン病、双極性障害、または強迫性障害の治療に有用な改善されたＣＮＳ薬物プロファイルを有する新規なアゼチジンおよびピペリジン化合物を含む。したがって、本発明はまた、化合物を含む薬学的組成物、本発明の化合物および組成物を使用した、ＰＤＥ１０媒介性認知疾患および他の病弊、例えば統合失調症、ハンチントン病、双極性障害、または強迫性障害の治療のための方法、ならびに本発明の化合物の調製に有用な中間体およびプロセスを含む。
【００１８】
本発明の別の態様には、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ、１３Ｎ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、または１２５Ｉから選択されるポジトロン放出放射性核種で放射標識された新規なアゼチジンおよびピペリジン化合物、放射標識された化合物を含む放射性薬学的組成物、ヒトを含む哺乳動物におけるＰＤＥ１０受容体またはヒトの脳を含む哺乳動物におけるＰＤＥ１０受容体を保持する組織の診断的イメージングのための方法であって、そのような診断的イメージングを必要とする哺乳動物に、放射標識された化合物の有効量を投与することを含む、方法、ならびにヒト組織を含む哺乳動物組織におけるＰＤＥ１０酵素の検出および定量化のための方法であって、そのような検出または定量化が所望されるそのような哺乳動物組織を、放射標識された化合物の有効量と接触させることを含む、方法が含まれる。
【００１９】
本発明の化合物は、次の一般構造
【化１】
2015519402.tif 000003
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、ｐ、ｑ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、およびＸ２は、以下に定義される。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の一態様は、式（Ｉ）の一般構造を有する化合物、
【化２】
2015519402.tif 000004
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｘ１は、ＮまたはＣＲ４であり、
Ｘ２は、ＮまたはＣＲ５であり、
ここで、Ｘ１およびＸ２の０〜１つは、Ｎであり、
ｐおよびｑのそれぞれは、独立して、１または２であり、ここで、ｐおよびｑの和は、２または４であり、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素またはハロである、化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００２１】
一実施形態において、Ｘ１はＮであり、Ｘ２はＣＨである。
【００２２】
別の実施形態において、Ｘ１はＣＨであり、Ｘ２はＮである。
【００２３】
別の実施形態において、Ｘ１はＣＨであり、Ｘ２はＣＨである。
【００２４】
別の実施形態において、ｐおよびｑの和は４である。
【００２５】
別の実施形態において、ｐおよびｑの和は２である。
【００２６】
別の実施形態において、ｓＲ２はフルオロである。
【００２７】
別の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの１つは、水素である。
【００２８】
別の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの２つは、水素である。
【００２９】
別の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、水素である。
【００３０】
別の実施形態において、Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、フルオロである。
【００３１】
別の実施形態において、Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、クロロである。
【００３２】
別の実施形態において、Ｒ１はクロロであり、Ｒ２はフルオロである。
【００３３】
別の実施形態において、Ｒ１は、フルオロまたはクロロである。
【００３４】
別の実施形態において、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はクロロまたはフルオロである。
【００３５】
別の実施形態において、Ｒ１はクロロまたはフルオロであり、Ｒ２は水素である。
【００３６】
本発明の別の態様は、以下の表に示される化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する（実施例番号は、実施例の番号である）。
【表１】
2015519402.tif 000005
2015519402.tif 000006
2015519402.tif 000007
【００３７】
本発明の別の態様は、上述の化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物に関する。
【００３８】
本発明の別の態様は、ＰＤＥ１０阻害剤で治療することができる認知障害または状態を治療する方法であって、それを必要とする患者に、上述の化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を投与するステップを含む、方法に関する。
【００３９】
本方法の一実施形態において、前記状態は、精神病、パーキンソン病、認知症、強迫性障害、遅発性ジスキネジア、舞踏病、鬱病、気分障害、衝動性、薬物依存、注意欠陥／過活動障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病状態を伴う鬱病、尾状核または被殻疾患を伴う人格変化、尾状核および淡蒼球疾患を伴う認知症および躁病、または淡蒼球疾患を伴う強迫である。
【００４０】
本方法の別の実施形態において、前記状態は、統合失調症、ハンチントン病、双極性障害、または強迫性障害である。
【００４１】
本方法の別の実施形態において、前記状態は、統合失調症である。
【００４２】
本発明の別の態様は、医薬品としての上述の化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩の使用に関する。
【００４３】
本発明の別の態様は、統合失調症、ハンチントン病、双極性障害、または強迫性障害の治療のための医薬品の製造における上述の化合物のうちのいずれか１つ、またはその薬学的に許容される塩の使用に関する。
【００４４】
本発明の別の態様は、上に定義される式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、式（Ｉ）の化合物を調製するために、
（ａ）  式３の化合物を、式５の化合物と反応させるステップであって、
【化３】
2015519402.tif 000008
式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｐ、およびｑは、式（Ｉ）の化合物において定義される通りであり、式中、ＬＧ１は、脱離基であり、Ｍは、金属部分であり、溶媒および触媒の存在下である、ステップ、または
（ｂ）  式２の化合物を、式４の化合物と反応させるステップであって、
【化４】
2015519402.tif 000009
式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｐ、およびｑは、式（Ｉ）の化合物において定義される通りであり、ＬＧ２は脱離基であり、溶媒および塩基の存在下である、ステップを含む、方法に関する。
【００４５】
本発明の別の態様は、式
【化５】
2015519402.tif 000010
（４）の化合物、またはその薬学的に許容される塩に関し、式中、ｐおよびｑのそれぞれは、独立して、１または２であり、ｐおよびｑの和は、２または４である。一実施形態において、ｐおよびｑの和は４である。別の実施形態において、ｐおよびｑの和は２である。
【００４６】
本発明の別の態様は、式
【化６】
2015519402.tif 000011
（５）の化合物、またはその薬学的に許容される塩に関し、
式中、
Ｘ１は、ＮまたはＣＲ４であり、
Ｘ２は、ＮまたはＣＲ５であり、
ここで、Ｘ１およびＸ２の０〜１つは、Ｎであり、
ｐおよびｑのそれぞれは、独立して、１または２であり、ここで、ｐおよびｑの和は、２または４であり、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素またはハロであり、ＬＧ１は、ハロ等の脱離基である。
【００４７】
式（５）の化合物の一実施形態において、ｐおよびｑの和は４である。
【００４８】
式（５）の化合物の別の実施形態において、ｐおよびｑの和は２である。
【００４９】
本発明のさらに別の態様は、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ、１３Ｎ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、または１２５Ｉから選択されるポジトロン放出放射性核種で放射標識された、本発明の任意の化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００５０】
本発明のさらに別の態様は、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ、１３Ｎ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、または１２５Ｉから選択されるポジトロン放出放射性核種で放射標識された、本発明の任意の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤と、を含む、放射性薬学的組成物に関する。
【００５１】
本発明のさらに別の態様は、ヒトを含む哺乳動物におけるＰＤＥ１０受容体、またはヒト脳を含む哺乳動物におけるＰＤＥ１０受容体を有する組織の診断イメージングのための方法であって、そのような診断イメージングを必要とする哺乳動物に、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ、１３Ｎ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、または１２５Ｉから選択されるポジトロン放出放射性核種で放射標識された本発明の任意の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法に関する。
【００５２】
本発明のさらに別の態様は、ヒト組織を含む哺乳動物組織におけるＰＤＥ１０受容体の検出または定量化のための方法であって、そのような検出または定量化が所望されるそのような哺乳動物組織を、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ、１３Ｎ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、または１２５Ｉから選択されるポジトロン放出放射性核種で放射標識された本発明の任意の化合物、またはその薬学的に許容される塩の有効量と接触させることを含む、方法に関する。
【００５３】
本発明のさらに別の態様は、本放射標識されたＰＤＥ１０阻害剤等のＰＥＴトレーサに関し、現在利用可能なＰＥＴ技術は、限定されないが、次の情報を得るために使用することができる：候補ＰＤＥ１０阻害剤による受容体または標的占有レベルと、患者における臨床的有効性との間の関係性；長期臨床試験の開始前の、ＰＤＥ１０阻害剤の臨床試験のための用量選択；構造的に新規なＰＤＥ１０阻害剤の相対的な強度；ＰＤＥ１０阻害剤および他の薬剤による臨床標的の治療中のインビボでの輸送体の親和性および密度に対するＰＤＥ１０阻害剤の影響についての研究；例えば、１）精神疾患もしくは状態の活動期中、２）治療中の有効性の評価、または３）寛解中のＰＤＥ１０の密度および分布の変化；ＣＮＳ障害におけるＰＤＥ１０発現および分布の変化；ＰＤＥ１０が上方制御される場合の神経変性疾患のイメージング；ＰＤＥ１０が関与する場合の神経変性疾患のイメージング等。
【００５４】
本発明は、１つ以上の原子が、同じ原子番号を有するが原子質量または質量数が本来優勢である原子質量または質量数とは異なる原子で置き換えられる、本発明のすべての薬学的に許容される同位体標識された化合物を含む。
【００５５】
本発明の化合物に含むことが好適な同位体の例には、水素の同位体、例えば２Ｈおよび３Ｈ、炭素の同位体、例えば１１Ｃ、１３Ｃ、および１４Ｃ、塩素の同位体、例えば３８Ｃｌ、フッ素の同位体、例えば１８Ｆ、ヨウ素の同位体、例えば１２３Ｉおよび１２５Ｉ、窒素の同位体、例えば１３Ｎおよび１５Ｎ、酸素の同位体、例えば１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、リンの同位体、例えば３２Ｐ、ならびに硫黄の同位体、例えば３５Ｓが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
本発明のある特定の同位体標識された化合物、例えば、放射性同位体を組み込むものは、薬物および／または基質の組織分布研究において有用である。放射性同位体トリチウム、すなわち３Ｈ、および炭素−１４、すなわち１４Ｃは、それらの組み込みの容易さおよび検出手段の簡易さを考慮すると、この目的に特に有用である。
【００５７】
重水素、すなわち２Ｈ等のより重い同位体との置換により、より優れた代謝安定性、例えば、インビボ半減期の増加または必要用量の低減からもたらされるある特定の治療的利点を得ることができ、したがって、いくつかの状況では好ましい場合がある。
【００５８】
１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ、および１３Ｎといったポジトロン放出同位体との置換は、基質受容体または標的占有率を試験するためのポジトロン放出トポグラフィー（ＰＥＴ）試験に有用であり得る。
【００５９】
本発明の同位体標識された化合物は、概して、当業者に既知の従来技術によって、または添付の実施例および調製に記載されるものに類似のプロセスによって、以前に利用されていた非標識試薬の代わりに適切な同位体標識された試薬を使用して、調製することができる。
【００６０】
本発明による薬学的に許容される溶媒和物には、結晶化の溶媒が同位体置換され得るもの、例えば、Ｄ２Ｏ、ｄ６−アセトン、ｄ６−ＤＭＳＯが挙げられる。
【００６１】
本発明の特定の実施形態には、以下の実施例に例証される化合物、ならびにそれらの薬学的に許容される塩、それらの複合体、溶媒和物、多形体、立体異性体、代謝産物、プロドラッグ、および他の誘導体が含まれる。別途示されない限り、以下の定義が、本明細書および特許請求の範囲に見られる用語に適用される。
【００６２】
「Ｃα−βアルキル」という用語は、分岐、環状、もしくは直線関係、またはこれら３つの任意の組み合わせで、最少α個および最大β個の炭素原子を含む、アルキル基を意味し、ここで、αおよびβは整数を表す。この節に記載されるアルキル基はまた、１つまたは２つの二重または三重結合を含有し得る。Ｃ０アルキルという表示は、直接結合を示す。Ｃ１−６アルキルの例には、次のものが挙げられるが、これに限定されない。
【化７】
2015519402.tif 000012
【００６３】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩから選択されるハロゲン原子を意味する。
【００６４】
「薬学的に許容される塩」という用語は、従来の手段で調製される塩を意味し、これらは、当業者に周知である。「薬学的に許容される塩」には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、リンゴ酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、マレイン酸、サリチル酸、安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸等を含むがこれらに限定されない、無機および有機酸の塩基性塩が挙げられる。「薬学的に許容される塩」のさらなる例については、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１（１９７７）。
【００６５】
「置換される」という用語は、分子または基上の水素原子が、基または原子で置き換えられることを意味する。典型的な置換基には、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、ヒドロキシル、Ｃ１−８アルコキシ、−ＮＲｘＲｘ、ニトロ、シアノ、ハロ、またはペルハロＣ１−８アルキル、Ｃ２−８アルケニル、Ｃ２−８アルキニル、−ＳＲｘ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｘ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｘ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｘが挙げられ、式中、各Ｒｘは、独立して、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルである。置換基が−ＮＲｘＲｘであるとき、Ｒｘ基は、窒素原子と一緒に結合して、環を形成し得ることに留意されたい。
【００６６】
水素原子を置き換える基または原子はまた、置換基と称される。
【００６７】
任意の特定の分子または基は、置き換えられ得る水素原子の数に応じて、１つ以上の置換基を有し得る。
【００６８】
「−」という記号は、共有結合を表し、また、ラジカル基において別の基への結合点を示すために使用され得る。化学構造では、この記号は、分子中のメチル基を表すために広く使用される。
【００６９】
「脱離基」という用語は、概して、アミン、チオール、もしくはアルコール求核試薬といった求核試薬、または遷移金属に触媒される結合状態下ではボロン酸もしくはボロネートといった金属性薬剤によって、容易に置換可能な基を指す。そのような脱離基は、当該技術分野で周知である。そのような脱離基の例には、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ハロゲン化物、トリフレート、トシレート等が挙げられるがこれらに限定されない。好ましい脱離基は、必要に応じて本明細書に示される。
【００７０】
「保護基」という用語は、一般に、カルボキシ、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト等といった選択される反応基が、求核、求電子、酸化、還元等といった望ましくない反応を受けることを阻止するために使用される、当該技術分野で周知の基を指す。好ましい保護基は、必要に応じて本明細書に示される。アミノ保護基の例には、アラルキル、置換アラルキル、シクロアルケニルアルキルおよび置換シクロアルケニルアルキル、アリル、置換アリル、アシル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、シリル等が挙げられるが、これらに限定されない。アラルキルの例には、ベンジル、オルト−メチルベンジル、トリチル、およびベンズヒドリルが挙げられるがこれらに限定されず、これらは、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、ニトロ、アシルアミノ、アシル等、ならびに塩、例えば、ホスホニウムおよびアンモニウム塩で任意に置換され得る。アリール基の例には、フェニル、ナフチル、インダニル、アントラセニル、９−（９−フェニルフルオレニル）、フェナントレニル、デュレニル（ｄｕｒｅｎｙｌ）等が挙げられる。シクロアルケニルアルキルまたは置換シクロアルキレニルアルキルラジカルの例は、好ましくは、６〜１０個の炭素原子を有し、シクロヘキセニルメチルが挙げられるが、これに限定されない。好適なアシル、アルコキシカルボニル、およびアラルコキシカルボニル基の例には、ベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、イソ−ブトキシカルボニル、ベンゾイル、置換ベンゾイル、ブチリル、アセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタロイル等が挙げられる。保護基の混合物を、同じアミノ基の保護に使用することができ、例えば、一級アミノ基を、アラルキル基およびアラルコキシカルボニル基の両方によって保護することができる。アミノ保護基はまた、それらが結合する窒素とともに複素環式環、例えば、１，２−ビス（メチレン）ベンゼン、フタルイミジル、スクシンイミジル、マレイミジル等を形成し得、これらの複素環式基は、さらに、隣接するアリールおよびシクロアルキル環を含み得る。さらに、ヘテロ環式基は、一、二、または三置換され得、例えば、ニトロフタルイミジルである。アミノ基はまた、塩酸塩、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の付加塩を形成することにより、酸化等の望ましくない反応から保護され得る。アミノ保護基の多くはまた、カルボキシ、ヒドロキシ、およびメルカプト基を保護するのに好適である。例えば、アラルキル基である。アルキル基はまた、ヒドロキシおよびメルカプト基を保護するのに好適であり、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルである。
【００７１】
保護基は、分子の残りの部分に影響を及ぼさない条件下で除去される。これらの方法は、当該技術分野で周知であり、酸加水分解、水素分解等が挙げられる。好ましい方法には、アルコール、酢酸等、またはそれらの混合物といった好適な溶媒系において炭素上のパラジウムを用いた水素分解によるベンジルオキシカルボニル基の除去といった、保護基の除去が含まれる。ｔ−ブトキシカルボニル保護基は、ジオキサンまたは塩化メチレン等の好適な溶媒系において、ＨＣｌまたはトリフルオロ酢酸等の無機または有機酸を用いて除去され得る。結果として得られるアミノ塩は、容易に中和させ、遊離アミンを得ることができる。メチル、エチル、ベンジル、ｔｅｒｔ−ブチル、４−メトキシフェニルメチル等のカルボキシ保護基は、当該技術分野で周知の加水分解および水素分解条件下で除去することができる。
【００７２】
本発明の化合物は、環状および非環状アミジンおよびグアニジン基、ヘテロ原子置換芳香族複素環式基（Ｙ’＝Ｏ、Ｓ、ＮＲ）等といった、互変異性体形態で存在し得る基を含有し得、これらは、以下の例に示され、
【化８】
2015519402.tif 000013
１つの形態が、本明細書に命名、記載、表示、および／または特許請求されるが、すべての互変異性体形態が、そのような名称、説明、表示、および／または特許請求の範囲に本質的に含まれることを意図することに留意されたい。
【００７３】
本発明の化合物のプロドラッグもまた、本発明によって企図される。プロドラッグは、患者へのプロドラッグの投与後に、加水分解、代謝等のインビボ生理作用により化学的に修飾されて本発明の化合物となる、活性または不活性な化合物である。プロドラッグの製造および使用に関する適合性および技術は、当業者に周知である。エステルを含むプロドラッグの一般論については、Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  ａｎｄ  Ｔｕｎｅｋ  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６５（１９８８）およびＢｕｎｄｇａａｒｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５）を参照されたい。マスクされたカルボン酸アニオンの例には、アルキル（例えば、メチル、エチル）、シクロアルキル（例えば、シクロヘキシル）、アラルキル（例えば、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル）、およびアルキルカルボニルオキシアルキル（例えば、ピバロイルオキシメチル）といった、種々のエステルが挙げられる。アミンは、アリールカルボニルオキシメチル置換誘導体としてマスクされており、これらは、インビボでエステラーゼによって切断され、遊離薬物およびホルムアルデヒドを放出する（Ｂｕｎｇａａｒｄ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２５０３（１９８９））。さらに、イミダゾール、イミド、インドール等といった、酸性ＮＨ基を含有する薬物は、Ｎ−アシルオキシメチル基でマスクされている（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５））。ヒドロキシ基は、エステルおよびエーテルとしてマスクされている。ＥＰ０３９，０５１号（Ｓｌｏａｎ  ａｎｄ  Ｌｉｔｔｌｅ，４／１１／８１）は、マンニッヒ塩基ヒドロキシム酸プロドラッグ、それらの調製、および使用を開示する。
【００７４】
「治療有効量」という用語は、特定の疾患もしくは状態の１つ以上の症状を緩和、軽減、もしくは排除するか、または特定の疾患もしくは状態のさらなる症状のうちの１つの発症を予防もしくは遅延させる、化合物の量を意味する。
【００７５】
「患者」という用語は、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、およびヒトといった、動物を意味する。特定の患者は、哺乳動物である。患者という用語は、雄および雌を含む。
【００７６】
「薬学的に許容される」という用語は、式Ｉの化合物、または式Ｉの化合物の塩、または式Ｉの化合物を含有する製剤、または特定の賦形剤といった、言及される物質が、患者への投与に好適であることを意味する。
【００７７】
「治療すること」、「治療する」、「治療」等の用語には、防止的（例えば、予防的）および緩和的治療が含まれる。
【００７８】
「賦形剤」という用語は、活性な薬学的成分（ＡＰＩ）以外の、任意の薬学的に許容される添加剤、担体、希釈剤、アジュバント、または他の成分を意味し、これらは、典型的に、製剤化および／または患者への投与のために含まれる。
【００７９】
効用および使用方法
ＰＤＥ１０酵素を阻害することによって認知障害または疾患を治療するための方法が、本明細書に提供される。本方法は、概して、本発明の化合物、またはその個々の立体異性体、立体異性体の混合物、または薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療有効量を、それを必要とする患者に投与して、認知障害または疾患を治療するステップを含む。
【００８０】
ある特定の実施形態において、本発明は、ＰＤＥ１０の阻害によって治療可能な認知障害または疾患を治療するための医薬品の製造における、本明細書に記載の化合物の使用を提供する。
【００８１】
本発明の化合物は、ＰＤＥ１０酵素活性を阻害し、したがって、ＰＤＥ１０を発現する細胞内のｃＡＭＰまたはｃＧＭＰのレベルを上昇させる。したがって、ＰＤＥ１０酵素活性の阻害は、細胞内の不十分な量のｃＡＭＰまたはｃＧＭＰによって引き起こされる疾患の治療に有用であろう。ＰＤＥ１０阻害剤はまた、ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰの量を正常レベルよりも高く上昇させることが治療効果をもたらす場合にも、有用であろう。ＰＤＥ１０の阻害剤は、末梢および中枢神経系の障害、心血管疾患、癌、消化器疾患、内分泌疾患、ならびに泌尿器疾患の治療に使用することができる。
【００８２】
単独または他の薬剤と組み合わせて、ＰＤＥ１０阻害剤により治療され得る適応症には、基底核、前頭前皮質、および海馬によって部分的に媒介されると考えられる疾患が挙げられるが、これらに限定されない。これらの適応症には、精神病、パーキンソン病、認知症、強迫性障害、遅発性ジスキネジア、舞踏病、鬱病、気分障害、衝動性、薬物依存、注意欠陥／過活動障害（ＡＤＨＤ）、パーキンソン病状態を伴う鬱病、尾状核または被殻疾患を伴う人格変化、尾状核および淡蒼球疾患を伴う認知症および躁病、ならびに淡蒼球疾患を伴う強迫が挙げられる。
【００８３】
精神病は、個体の現実の認識に影響を及ぼす障害である。精神病は、妄想および幻覚によって特徴付けられる。本発明の化合物は、統合失調症、遅発性統合失調症、統合失調感情障害、前駆統合失調症、および双極性障害を含むがこれらに限定されない、すべての形態の精神病を患う患者の治療における使用に好適である。治療は、統合失調症の陽性症状、ならびに認知障害および陰性症状に対するものであり得る。ＰＤＥ１０阻害剤の他の適応症には、薬物乱用（アンフェタミンおよびＰＣＰを含む）、脳炎、アルコール依存症、癲癇、ループス、サルコイドーシス、脳腫瘍、多発性硬化症、レビー小体型認知症、または低血糖症に起因する精神病が挙げられる。他の精神障害、例えば、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および統合失調質人格もまた、ＰＤＥ１０阻害剤により治療することができる。
【００８４】
強迫性障害（ＯＣＤ）は、前頭線条体ニューロン経路の欠損と関連付けられている（Ｓａｘｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｓｕｐｐｌ，３５：２６−３７，１９９８）。これらの経路内のニューロンは、ＰＤＥ１０を発現する線条体ニューロンに突出する。ＰＤＥ１０阻害剤は、これらのニューロン内のｃＡＭＰを上昇させ、ｃＡＭＰの上昇は、ＣＲＥＢリン酸化の増加をもたらし、それによって、これらのニューロンの機能的状態が改善される。本発明の化合物は、したがって、ＯＣＤの兆候における使用に好適である。ＯＣＤは、いくつかの場合では、基底核において自己免疫反応を引き起こす連鎖球菌感染症からもたらされる場合がある（Ｇｉｅｄｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．１５７：２８１−２８３，２０００）。ＰＤＥ１０阻害剤は、神経保護の役割を果たし得るため、ＰＤＥ１０阻害剤の投与は、繰り返される連鎖球菌感染症後の基底膜への損傷を予防し、それによって、ＯＣＤの発症を予防することができる。
【００８５】
脳では、ニューロン内のｃＡＭＰまたはｃＧＭＰのレベルが、記憶、特に長期記憶の質と関連すると考えられている。いずれの特定の機序にも束縛されることを望むものではないが、ＰＤＥ１０がｃＡＭＰまたはｃＧＭＰを分解するため、この酵素のレベルは、動物、例えば、ヒトにおいて記憶に影響を及ぼすことが提案されている。ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）を阻害する化合物は、そうすることによって、ｃＡＭＰの細胞内レベルを増加させ得、これが、ひいては、転写因子（ｃＡＭＰ応答結合タンパク質）をリン酸化するタンパク質キナーゼを活性化する。リン酸化された転写因子は、次いで、ＤＮＡプロモーター配列に結合して、長期記憶に重要な遺伝子を活性化する。そのような遺伝子がより活性であるほど、長期記憶がより良好である。したがって、ホスホジエステラーゼを阻害することにより、長期記憶が強化され得る。
【００８６】
認知症は、記憶喪失および記憶とは別の追加の知能障害を含む疾患である。本発明の化合物は、すべての形態の認知症における記憶障害を患う患者の治療における使用に好適である。認知症は、それらの原因に従って分類され、次のものが含まれる：神経変性認知症（例えば、アルツハイマー、パーキンソン病、ハンチントン病、ピック病）、血管性（例えば、梗塞、出血、心臓障害）、混合血管およびアルツハイマー、細菌性髄膜炎、クロイツフェルト・ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄ−Ｊａｃｏｂ  Ｄｉｓｅａｓｅ）、多発性硬化症、外傷性（例えば、硬膜下血腫または外傷性脳損傷）、感染性（例えば、ＨＩＶ）、遺伝的（ダウン症候群）、毒性（例えば、重金属、アルコール、一部の薬物）、代謝性（例えば、ビタミンＢ１２または葉酸欠乏）、ＣＮＳ低酸素、クッシング病、精神性（例えば、鬱病および統合失調症）、ならびに水頭症。
【００８７】
記憶障害の状態は、新しい情報を学習する能力の障害および／または以前に学習した情報を思い出すことができないことによって現れる。本発明は、軽度認知障害（ＭＣＩ）および加齢関連認知低下を含む、認知症とは別の記憶喪失に対応するための方法を含む。本発明は、疾患の結果としての記憶障害の治療の方法を含む。記憶障害は、認知症の主要な症状であり、アルツハイマー病、統合失調症、パーキンソン病、ハンチントン病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ＨＩＶ、心臓血管疾患、および頭部外傷、ならびに加齢関連認知低下等の疾患と関連する症状でもあり得る。本発明の化合物は、例えば、アルツハイマー病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｌｏｌａｔｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）（ＡＬＳ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、統合失調症、パーキンソン病、ハンチントン病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、鬱病、加齢、頭部外傷、脳卒中、脊髄損傷、ＣＮＳ低酸素症、脳老化、糖尿病関連認知障害、麻酔剤の早期曝露による記憶障害、多発脳梗塞性認知症、および急性ニューロン性疾患を含む他の神経学的状態、ならびにＨＩＶおよび心臓血管疾患に起因する記憶障害の治療における使用に好適である。
【００８８】
本発明の化合物はまた、ポリグルタミンリピート疾患として知られるクラスの障害の治療における使用に好適である。これらの疾患は、共通の病因性突然変異を共有する。ゲノム内のアミノ酸グルタミンをコードするＣＡＧリピートの伸長は、伸長ポリグルタミン領域を有する突然変異体タンパク質の生成をもたらす。例えば、ハンチントン病は、タンパク質ハンチンチンの突然変異と関連付けられている。ハンチントン病を有さない個体では、タンパク質ハンチンチンは、約８〜３１個のグルタミン残基を含有するポリグルタミン領域を有する。ハンチントン病を有する個体では、タンパク質ハンチンチンは、３７個を超えるグルタミン残基を有するポリグルタミン領域を有する。ハンチントン病（ＨＤ）に加えて、他の既知のポリグルタミンリピート疾患および関連タンパク質には、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ＤＲＰＬＡ（アトロフィン−１）；脊髄小脳失調症１型（アタキシン−１）；脊髄小脳失調症２型（アタキシン−２）；脊髄小脳失調症３型（マシャド・ジョセフ病またはＭＪＤとも称される）（アタキシン−３）；脊髄小脳失調症６型（α１ａ−電位依存性カルシウムチャネル）；脊髄小脳失調症７型（アタキシン−７）；および球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ、ケネディ病としても知られる）が挙げられる。
【００８９】
基底核は、運動ニューロンの機能を制御するのに重要であり、基底核の障害は、運動障害をもたらす。基底核機能に関連する運動障害の中で最も顕著なのは、パーキンソン病である（Ｏｂｅｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．６２（１  Ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ１７−３０，２００４）。基底核の機能障害に関連する他の運動障害としては、遅発性ジスキネジア、進行性核上性麻痺および脳性麻痺、皮質基底核変性症、多系統萎縮症、ウィルソン病、ジストニア、チック、および舞踏病が挙げられる。本発明の化合物はまた、基底核ニューロンの機能障害に関連する運動障害を治療するための使用に好適である。
【００９０】
ＰＤＥ１０阻害剤は、ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰレベルを上昇させるのに有用であり、ニューロンがアポトーシスを受けるのを予防する。ＰＤＥ１０阻害剤は、グリア細胞におけるｃＡＭＰを上昇させることにより抗炎症性となり得る。抗アポトーシスおよび抗炎症特性、ならびにシナプス可塑性および神経発生へのプラス効果の組み合わせにより、これらの化合物は、脳卒中、脊髄損傷、アルツハイマー病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、および多系統萎縮症（ＭＳＡ）を含む、任意の疾患または損傷に起因する神経変性を治療するのに有用である。
【００９１】
基底核に影響を及ぼす自己免疫疾患または感染性疾患は、ＡＤＨＤ、ＯＣＤ、チック、トゥーレット病、シデナム舞踏病を含む、基底核の障害をもたらす可能性がある。さらに、脳卒中、代謝異常、肝臓疾患、多発性硬化症、感染症、腫瘍、薬物過剰投与または副作用、および頭部外傷を含む、脳への傷害はいずれも、基底核を損傷する可能性がある。したがって、本発明の化合物は、シナプス可塑性の増加、神経発生、抗炎症、神経細胞再生、およびアポトーシスの減少を含む、効果の組み合わせによって、疾患の進行を停止させるか、または脳内の損傷した回路を回復させるために使用することができる。
【００９２】
試験
本発明の化合物のＰＤＥ１０阻害活性は、例えば、以下の生物学的実施例に記載されるインビトロおよびインビボならびにエキソビボアッセイを用いて試験することができる。
【００９３】
投与および薬学的組成物
一般に、本発明の化合物は、同様の有用性を与える薬剤に許容される投与方式のいずれかにより、治療的有効量で投与することができる。本発明の化合物、すなわち活性成分の実際の量は、治療される疾患の重篤度、対象の年齢および相対的な健康、使用される化合物の効力、投与の経路および形態、ならびに他の要因といった、多くの要因に依存する。
【００９４】
式（Ｉ）の化合物の治療有効量は、１日当たりおおよそ０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは０．５〜２５０ｍｇ／日、より好ましくは１日当たり３．５ｍｇ〜７０ｍｇの範囲であり得る。
【００９５】
一般に、本発明の化合物は、次の経路のうちのいずれか１つによって、薬学的組成物として投与することができる：経口、全身（例えば、経皮、経鼻、もしくは坐剤による）、非経口（例えば、筋肉内、静脈内、もしくは皮下）投与。好ましい投与様式は、簡便な一日投与量レジメンを使用する経口であり、これは、疾患の程度に応じて調節することができる。組成物は、錠剤、丸剤、カプセル、半固体、粉末、徐放製剤、溶液、懸濁液、エリキシル、エアロゾル、または任意の他の適切な組成物の形態をとることができる。
【００９６】
製剤の選択は、薬物投与様式（例えば、経口投与のためには、錠剤、丸剤、またはカプセルの形態の製剤が好ましい）および原薬のバイオアベイラビリティといった様々な要因に依存する。近年、バイオアベイラビリティは、表面積を増加させる、すなわち、粒子寸法を減少させることにより増加させることができるという原理に基づき、とりわけ、よくないバイオアベイラビリティを示す薬物に対し、薬学的製剤が開発されている。例えば、米国特許第４，１０７，２８８号は、１０〜１，０００ｎｍの寸法範囲の粒子を有し、活性材料が高分子の架橋マトリクス上に支持される、薬学的製剤について記載する。米国特許第５，１４５，６８４号は、薬学的製剤の製造を記載し、ここでは、原薬が表面改質剤の存在下で微粉砕されナノ粒子（４００ｎｍの平均粒子寸法）となり、その後、液体媒質中に分散され、非常に高いバイオアベイラビリティを示す薬学的製剤が得られる。
【００９７】
本組成物は、概して、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた、本発明の化合物から構成される。許容される賦形剤は、非毒性であり、投与を助け、本発明の化合物の治療効果に悪影響を及ぼさない。そのような賦形剤は、任意の固体、液体、半固体であり得、または、エアロゾル組成物の場合、一般に当業者が入手できるガス状賦形剤であり得る。
【００９８】
固体薬学的賦形剤には、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳等が挙げられる。液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、および様々な油、例えば石油、動物、植物、もしくは合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油等から選択され得る。特に注射溶液のための好ましい液体担体としては、水、生理食塩水、水性デキストロース、およびグリコールが挙げられる。
【００９９】
本発明の化合物をエアロゾル形態で分散させるためには圧縮ガスが使用され得る。この目的で好適な不活性ガスは、窒素、二酸化炭素等である。
【０１００】
他の好適な薬学的賦形剤およびそれらの製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１８ｔｈ  ｅｄ．，１９９５）に記載される。
【０１０１】
製剤中の化合物のレベルは、当業者が使用する全範囲内で変動し得る。典型的には、製剤は、重量パーセント基準で、総製剤に基づいて、約０．０１〜９９．９９重量％の本発明の化合物を含み、残りは１つ以上の好適な薬学的賦形剤である。好ましくは、化合物は約１〜８０重量％のレベルで存在する。
【０１０２】
本化合物は、単独の活性剤として、または他の医薬品、例えば、精神病、とりわけ統合失調症および双極性障害、強迫性障害、パーキンソン病、アルツハイマー病、認知障害、ならびに／または記憶喪失の治療において使用される他の薬剤、例えば、ニコチンα−７アゴニスト、ＰＤＥ４阻害剤、他のＰＤＥ１０阻害剤、カルシウムチャネル遮断薬、ムスカリンｍ１およびｍ２調節剤、アデノシン受容体調節剤、アンパカイン、ＮＭＤＡ−Ｒ調節剤、ｍＧｌｕＲ調節剤、ドーパミン調節剤、セロトニン調節剤、カンナビノイド調節剤、ならびにコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ドネペジル、リバスチグミン、およびガランタミン）と組み合わされて投与することができる。そのような組み合わせでは、各活性成分は、それらの通常の投与量範囲またはそれらの通常の投与量範囲より低い用量のいずれかに従って投与することができ、同時または順次のいずれかで投与することができる。
【０１０３】
本発明の化合物と組み合わせるのに好適な薬物には、次のものが挙げられるが、これらに限定されない：他の好適な統合失調症薬、例えば、クロザリル、ジプレキサ、リスペリドン、およびセロクエル；双極性障害薬、例えば、限定されないが、リチウム、ジプレキサ、およびデパコテ；パーキンソン病薬、例えば、限定されないが、レボドバ、パーロデル、ペルマックス、ミラペックス、タスマール、コンタン、ケマジン、アーテン、およびコゲンチン；アルツハイマー病の治療において使用される薬剤、例えば、限定されないが、レミニール、コグネックス、アリセプト、イクセロン、アカチノール、ネオトロピン、エルデプリル、エストロゲンおよびクリキノール；認知症の治療において使用される薬剤、例えば、限定されないが、チオリダジン、ハロペリドール、リスペリドン、コグネックス、アリセプト、およびイクセロン；癲癇の治療において使用される薬剤、例えば、限定されないが、ジランチン、ルミノール、テグレトール、デパコテ、デパケン、ザロンチン、ニューロンチン、バルビタ、ソルフェトン、およびフェルバトール；多発性硬化症の治療において使用される薬剤、例えば、限定されないが、デトロール、ジトロパンＸＬ、オキシコンチン、ベタセロン、アボネックス、アゾチオプリン、メトトキサート、およびコパクソン；ハンチントン病の治療において使用される薬剤、例えば、限定されないが、アミトリプチリン、インプラミン、デシプラミン、ノルトリプチリン、パロキセチン、フルオキセチン、セトラリン、テラベナジン、ハロペリドール、クロロプロマジン、チオリダジン、スルプリド、クエチアピン、クロザピン、およびリスペリドン；糖尿病の治療に有用な薬剤、例えば、限定されないが、ＰＰＡＲリガンド（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、例えばロシグリタゾン、トログリタゾン、およびピオグリタゾン）、インスリン分泌促進物質（例えば、スルホニル尿素薬物、例えばグリブリド、グリメピリド、クロロプロパミド、トルブタミド、およびグリピジド、および非スルホニル分泌促進物質）、α−グルコシダーゼ阻害剤（例えばアカルボース、ミグリトール、およびボグリボース）、インスリン感受性改善薬（例えばＰＰＡＲ−γアゴニスト、例えば、グリタゾン；ビグアナイド、ＰＴＰ−１Ｂ阻害剤、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、および１１β−ＨＳＤ阻害剤）、肝グルコース産出量低下化合物（例えば、グルカゴンアンタゴニストおよびメタフォルミン、例えば、グルコファージおよびグルコファージＸＲ）、インスリンおよびインスリン誘導体（長期および短期作用形態の両方ならびにインスリン製剤）：ならびに抗肥満薬、例えば、限定されないが、β−３アゴニスト、ＣＢ−１アゴニスト、神経ペプチドＹ５阻害剤、毛様体神経栄養因子および誘導体（例えば、アクソキン）、食欲抑制薬（例えば、シブトラミン）、およびリパーゼ阻害剤（例えば、オルリスタット）。
【０１０４】
実験
別途記載されない限り、すべての材料は、Ｓｉｎｏｐｈａｒｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄから購入し、さらなる精製なしに使用した。すべてのマイクロ波補助反応は、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）からのＩｎｉｔｉａｔｏｒ（登録商標）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて実施した。すべての化合物が、それらの割り当てられた構造と一致するＮＭＲスペクトルを示した。融点は、Ｂｕｃｈｉ装置で判定したものであり、補正されていない。質量スペクトルデータを、エレクトロスプレーイオン化技術により判定した。すべての実施例は、高速液体クロマトグラフィーにより判定した場合、９０％を上回る純度まで精製した。別途記載されない限り、反応は室温で行った。
【０１０５】
一般スキーム
本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物の調製のための手順を含む。式（Ｉ）の化合物は、以下のスキームＡまたはＢに記載される手順に従って合成することができ、式中、ｐ、ｑ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、およびＸ２は、さらに注記される場合を除き、本明細書に定義される。以下に記載される合成方法は、単なる例示であり、本発明の化合物はまた、当業者に理解される代替的な手順で合成されてもよい。
一般スキームＡ：
【化９】
2015519402.tif 000014
化合物２の調製：
【化１０】
2015519402.tif 000015
化合物１Ａの調製：
式１ａの化合物（式中、１ａのＧは、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）等のアミノ保護基である）は、ＷＯ２０１１／１４３３６５号に記載のプロセスに従って調製することができ、これに続いて、脱保護剤との反応によって式１ａの化合物を得ることができ、式中、Ｇは、当該技術分野で既知の脱保護方法に従ったＨである。
【０１０６】
式（Ｉ）の化合物は、概して一般スキームＡに記載される方法によって調製することができる。示されるように、式（Ｉ）の化合物は、式２の化合物（式中、ＬＧ２は、トリフレート（ＣＦ３ＳＯ３もしくはＯＴｆ）、ハロ（クロロ等）、またはノナフルオロブタンスルホネート等の脱離基である）を、式４の化合物と、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、またはアセトニトリル等の溶媒の存在下で、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、または炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）等の塩基の存在下で、室温または最大１２０℃で反応させることによって、調製することができる。式４の化合物は、式１ａの化合物（式中、ＬＧ１は、ハロ、好ましくは、クロロ等の脱離基であり、Ｇは、水素、またはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）もしくはカルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）等のアミノ保護基である）を、式３の化合物（式中、Ｍは式−Ｂ（ＯＨ）２もしくは−Ｂ（ＯＲ）２（式中、Ｒは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである）のボロン酸部分またはボロン酸エステル部分である）、Ｚｎハロゲン化物等と、鈴木反応または根岸反応といったカップリング反応条件下で触媒の存在下において反応させることによって、調製することができる。Ｇが、式１ａの化合物においてアミノ保護基である場合、カップリング反応に続いて、化合物４を、濃縮された強酸、例えばＨＣｌまたはＣＦ３ＣＯＯＨといったアミノ脱保護剤と反応させること、または加水分解による脱保護ステップにより、式４の化合物が得られる。
【０１０７】
化合物２の調製：
市販入手可能ではない式２の化合物は、式６の化合物を、適切な試薬および条件で反応させて、好適な脱離基ＬＧ２を得ることにより、一般スキームＡに従って作製することができる。例えば、式２ａの化合物（ＬＧ２がトリフレート（ＣＦ３ＳＯ３またはＯＴｆ）である）は、式６の化合物を、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（Ｔｆ２Ｏ）と反応させることによって作製することができる。あるいは、式２ｂの化合物（ＬＧ２が、ハロ（クロロ等）である）は、式６の化合物をオキシ塩化リン（Ｖ）（ＰＯＣｌ３）と反応させることによって作製することができる。あるいは、式２ｃの化合物（ＬＧ２が、ノナフルオロブタンスルホネートである）は、式６の化合物を、１−ブタンスルホニルフルオリド（Ｃ４Ｆ９ＳＯ２Ｆ）と反応させることによって作製することができる。化合物６は、市販入手可能であるか、または本明細書に記載の方法に従って容易に調製することができる。
【０１０８】
化合物３の調製：
式３の化合物（Ｍが−Ｂ（ＯＨ）２である）は、市販入手可能である。また、対応する市販入手可能なクロロまたはブロモ前駆体化合物を、適切な触媒およびメタル化剤と、適切な条件下で反応させて、好適な金属（Ｍ）部分を得ることによって作製することもできる。例えば、式３の化合物（Ｍが−Ｂ（ＯＨ）２である）は、対応するブロモ前駆体化合物を、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ）３触媒と、ジオキサン等の非極性溶媒中、ビス（ピナコラト）ジボロン（Ｃ１２Ｈ２４Ｂ２Ｏ４）および酢酸カリウムの存在下で、昇温で反応させた後、結果として得られるボロン酸ピナコールを対応するボロン酸に変換させることによって、作製することができる。
一般スキームＢ：式（Ｉ）の化合物の代替的な合成
【化１１】
2015519402.tif 000016
【０１０９】
代替として、式（Ｉ）の化合物は、概して一般スキームＢに記載される方法によって作製することができる。示されるように、式（Ｉ）の化合物は、式５の化合物（ＬＧ１が、トリフレート（ＣＦ３ＳＯ３もしくはＯＴｆ）またはハロ（クロロ等）等の脱離基である）を、式３の化合物（Ｍが、式−Ｂ（ＯＨ）２または−Ｂ（ＯＲ）２（式中、Ｒは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルである）のボロン酸部分またはボロン酸エステル部分である）、Ｚｎハロゲン化物等と、鈴木反応または根岸反応等のカップリング反応条件下で、触媒の存在下において反応させることによって、作製することができる。式５の化合物は、式１ｂの化合物（ＬＧ１が、トリフレート（ＣＦ３ＳＯ３もしくはＯＴｆ）またはハロ（クロロ等）等の脱離基である）を、式２の化合物（ＬＧ２が、トリフレート（ＣＦ３ＳＯ３もしくはＯＴｆ）、ハロ（クロロ等）、またはノナフルオロブタンスルホネート等の脱離基である）と、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、またはアセトニトリル等の溶媒の存在下において、ＤＩＰＥＡ、ＴＥＡ、またはＫ２ＣＯ３等の塩基の存在下で、室温または最大１２０℃で反応させることによって、作製することができる。
【０１１０】
式１ｂ、２、３の化合物は、一般スキームＡに従って調製することができる。
【０１１１】
合成の実施例
本明細書全体で使用または広く使用される略語の以下の一覧は、次のものを表し、本発明の理解を助けるものである：
【表２】
2015519402.tif 000017
2015519402.tif 000018
【０１１２】
式（Ｉ）の化合物および中間体（参照）の以下の調製は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することができるように提供される。これらは、本発明の範囲を制限するものと見なされるべきではなく、その単なる例示および代表例である。
【０１１３】
実施例１：４−（３−（１−（７−クロロキノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド。
【化１２】
2015519402.tif 000019
ステップ１：ＴＥＲＴ−ブチル４−（３−（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ピラジン−２−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート。
丸底フラスコ（ＲＢＦ）に、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−クロロピラジン−２−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２ｇ、６．７２ｍｍｏｌ）、（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ボロン酸（１．６４ｇ、８．３３ｍｍｏｌ、Ｃｏｍｂｉ−Ｂｌｏｃｋｓ）、リン酸カリウム（３．５６ｇ、１６．７９ｍｍｏｌ）、ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４−ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．４７６ｇ、０．６７２ｍｍｏｌ）、およびジオキサン（２０ｍＬ）：水（２ｍＬ）を添加した。混合物を９０℃で撹拌した。１６時間後、反応物を室温に冷却し、水（５０ｍＬ）に注ぎ入れた。水溶液を、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）で抽出した（３×２５ｍＬ）。合わせたＥｔＯＡｃ層を、真空下で濃縮し、シリカゲルのプラグに吸着させ、ヘキサン中３０〜１００％のＥｔＯＡｃで溶出する、Ｒｅｄｉ−Ｓｅｐ（登録商標）事前充填シリカゲルカラム（４０ｇ）を通してクロマトグラフィーにかけて、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ピラジン−２−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２．４６ｇ、５．９４ｍｍｏｌ、収率８８％）を、黄色の固体として得た。
【０１１４】
ステップ２：２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド三塩酸塩。
丸底フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ピラジン−２−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２．４０ｇ、５．７９ｍｍｏｌ）を添加し、メタノール（２０ｍＬ）を、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（５ｍＬ、２０．００ｍｍｏｌ）に添加した。この溶液を室温で撹拌した。９６時間後、反応物を真空下で濃縮して、２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド三塩酸塩（２．４６ｇ、５．８１ｍｍｏｌ、収率１００％）を、黄色の泡として得た。３ＨＣｌ相当物は、さらなる特徴付けなしに、化合物の重量により判定した。
【０１１５】
ステップ３：４−（３−（１−（７−クロロキノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド。
２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド三塩酸塩（３１５ｍｇ、０．７４３ｍｍｏｌ）、２，７−ジクロロキノリン（１９２ｍｇ、０．９６９ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１２１１ｍｇ、３．７２ｍｍｏｌ）、ジオキサン（４ｍＬ）、およびビス（トリ−ｔ−ブチルホスフィン）パラジウム（０）（８９ｍｇ、０．１７４ｍｍｏｌ）の混合物に。この溶液を９０℃で撹拌した。５時間撹拌した後、反応物を室温に冷却し、濾過した。固体をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を、その元の体積の１／２まで濃縮し、水（０．１％ＴＦＡ）中、１０〜６０％の線形勾配のＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で９０ｍＬ／分で溶出するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉカラム（１０ミクロン、Ｃ１８、１１０Å、Ａｘｉａ、１００×５０ｍｍ）における逆相分取ＨＰＬＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）によって２０分間にわたり精製した。所望される画分を１０％Ｎａ２ＣＯ３に注ぎ入れ、ジクロロメタン（ＤＣＭ）で抽出した（８×１０ｍＬ）。合わせたＤＣＭ層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮して、４−（３−（１−（７−クロロキノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド（１３５ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ、収率３８．２％）を、オフホワイトの固体として得た。ｍ／ｚ＝４７６（Ｍ＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．５４（ｄ，Ｊ＝２．３４Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝２．３４Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｔ，Ｊ＝８．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝９．３５Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝２．０５Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．６２Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝１．４６，８．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．４６，１２．４２Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝２．０５，８．４８Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝９．３５Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝６．２８Ｈｚ，１Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝１３．３０Ｈｚ，２Ｈ），３．１６−３．３１（ｍ，１Ｈ），３．０９（ｄｄ，Ｊ＝０．８０，４．７５Ｈｚ，３Ｈ），２．８６−３．０２（ｍ，２Ｈ），２．０１−２．１９（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｄ，Ｊ＝１１．５５Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１１６】
実施例２：２−フルオロ−４−（３−（１−（７−フルオロキノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド
【化１３】
2015519402.tif 000020
ステップ１．（Ｅ）−メチル３−（２−アミノ−４−フルオロフェニル）アクリレート。
室温でアセトニトリル（３５０ｍｌ）中の２−ブロモ−５−フルオロアニリン（３５．００ｇ、１８４ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２．０６ｇ、９．１８ｍｍｏｌ、Ｓｔｒｅｍ）、およびトリ（ｏ−トリル）ホスフィン（５．６０ｇ、１８．４０ｍｍｏｌ、Ｓｔｒｅｍ）の混合物に、アクリル酸メチル（３３．００ｍｌ、３６５ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）およびトリエチルアミン（６４．００ｍｌ、４６０ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した。反応物を８０℃で２４時間加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、結果として得られた無色の結晶固体を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。有機溶液を濃縮乾燥させ、固体を、６０℃で１時間、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン中でスラリー形成させた。スラリーを室温に冷却し、濾過した。固体を１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄し、空気吸引乾燥させ、１８．３０ｇ（５１％）の淡黄色の結晶固体を得た。ｍ／ｚ＝１９５．９（Ｍ＋１）。
【０１１７】
ステップ２．７−フルオロキノリン−２（１Ｈ）−オン。
ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の（Ｅ）−メチル３−（２−アミノ−４−フルオロフェニル）アクリレート（３０．３８ｇ、１５６ｍｍｏｌ）および３Ｍ塩酸（４００ｍＬ）の混合物を、６５℃で２０時間加熱した。混合物を室温に冷却し、氷上に注いだ。結果として得られた沈殿物を濾過し、多量の水で洗浄し、真空下で乾燥させて、２０．６５ｇ（８１％）の淡黄色の非結晶固体を得た。ｍ／ｚ＝１６４（Ｍ＋１）。
【０１１８】
ステップ３．７−フルオロキノリン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート。
ピリジン（４０ｍＬ）中の７−フルオロキノリン−２（１Ｈ）−オン（１．６０ｇ、９．８１ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（２．２ｍＬ、１３．１０ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を、シリンジを介して添加した。添加が完了した後、反応物を室温に温め、１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣を、トルエンと共に共沸混合物を形成させた。残渣をＥｔ２Ｏ上で激しく撹拌し、濾過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄した。濾液を濃縮乾燥させて、２．５０ｇ（８６％）の橙色の油を得た。ｍ／ｚ＝２９５．９（Ｍ＋１）。
【０１１９】
ステップ４．２−フルオロ−４−（３−（１−（７−フルオロキノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド。
ＤＭＳＯ（１０ｍｌ）中の２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド三塩酸塩（１．００ｇ、３．１８ｍｍｏｌ、実施例１のステップ２に従って調製した）およびトリエチルアミン（２．００ｍｌ、１４．３５ｍｍｏｌ）の室温溶液に、ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中の７−フルオロキノリン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート（１．１０ｇ、３．７３ｍｍｏｌ、実施例２のステップ３に従って調製した）を添加した。反応混合物を６０℃で２．５時間加熱した。反応物を室温に冷却し、水で希釈した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３回）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶液を濾過し、溶液をシリカゲル上で蒸発させ、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（０：１から３：１）で溶出するフラッシュクロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ（８０グラム））によって精製した。生成物を含有する画分を真空下で濃縮し、残渣をＥｔ２Ｏ上で３時間激しく撹拌した。固体を濾過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、６７４ｍｇ（４６％）の所望の生成物を得た。ｍ／ｚ＝４６０（Ｍ＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ８．６２（ｄ，Ｊ＝２．３４Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝２．３４Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝９．２１Ｈｚ，１Ｈ），７．６９−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．４５−７．５８（ｍ，２Ｈ），７．１８−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｔｄ，Ｊ＝８．７７，２．６３Ｈｚ，１Ｈ），４．６６（ｄ，Ｊ＝１３．３０Ｈｚ，２Ｈ），３．１３−３．２９（ｍ，１Ｈ），２．８６−３．０３（ｍ，２Ｈ），２．８２（ｄ，Ｊ＝４．６８Ｈｚ，３Ｈ），１．７２−１．９７（ｍ，４Ｈ）。
【０１２０】
実施例３：２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（１−（キノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド。
【化１４】
2015519402.tif 000021
表題化合物を、実施例１に類似の方式で、ステップ３で２，７−ジクロロキノリンの代わりに７−クロロキノリンを使用して、２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（１−（キノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド（４９ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ、収率２３．５％）を淡黄色の固体として得ることによって、調製した。ｍ／ｚ＝４４２（Ｍ＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ８．５４（ｄ，Ｊ＝２．３４Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝２．３４Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｔ，Ｊ＝８．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝９．２１Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．３３Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄｔ，Ｊ＝１．４６，７．６７Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝１．５３，７．９７Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝１．５３，１２．３５Ｈｚ，１Ｈ），７．１５−７．２５（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝９．２１Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝１３．１５Ｈｚ，２Ｈ），３．１４−３．２９（ｍ，１Ｈ），３．０３−３．１４（ｍ，３Ｈ），２．８２−３．０３（ｍ，２Ｈ），２．０３−２．２３（ｍ，２Ｈ），１．８３（ｄ，Ｊ＝１１．８４Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１２１】
実施例４：２−フルオロ−４−（３−（１−（６−フルオロキノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド。
【化１５】
2015519402.tif 000022
２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド（１５５ｍｇ、０．４９３ｍｍｏｌ、実施例１のステップ２に従って調製した）、２−クロロ−６−フルオロキノリン（１０８ｍｇ、０．５９５ｍｍｏｌ、Ｃｏｍｂｉ−ｂｌｏｃｋｓ）、およびＤＭＳＯ（２ｍＬ）の溶液に、炭酸カリウム（２４０ｍｇ、１．７３７ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を１００℃で撹拌した。７２時間後、反応物を室温に冷却し、水（５０ｍＬ）で希釈した。３０分間撹拌した後、溶液を濾過し、濾過した固体をシリカゲルのプラグに吸着させ、ヘキサン中０〜８０％のＥｔＯＡで溶出するＲｅｄｉ−Ｓｅｐ（登録商標）事前充填シリカゲルカラム（１２ｇ）を通してクロマトグラフィーにかけて、淡黄色の固体を得、これは、ＮＭＲによって測定すると残留ＤＭＳＯを含有していた。この固体をジメチルエーテル中に再溶解させ、水、ブラインで洗浄し、真空下で濃縮して、２−フルオロ−４−（３−（１−（６−フルオロキノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド（９０ｍｇ、０．１９６ｍｍｏｌ、収率３９．７％）を淡黄色の固体として得た。ｍ／ｚ＝４６０（Ｍ＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ８．５５（ｄ，Ｊ＝２．４８Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝２．４８Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｔ，Ｊ＝８．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝９．２１Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄｄ，Ｊ＝５．２６，９．０６Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝１．６１，８．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝１．６１，１２．４２Ｈｚ，１Ｈ），７．２８−７．３２（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝２．９２，８．９２Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝９．２１Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝１３．４５Ｈｚ，２Ｈ），３．１４−３．３１（ｍ，１Ｈ），３．０３−３．１４（ｍ，３Ｈ），２．８１−３．０２（ｍ，２Ｈ），２．０５−２．２１（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｄ，Ｊ＝１１．６９Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１２２】
実施例５：２−フルオロ−４−（３−（１−（８−フルオロキノリン−２−イル）ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド。
【化１６】
2015519402.tif 000023
表題化合物を、実施例８に類似して、ステップ３で２−クロロ−８−フルオロキノリン（Ｃｏｍｂｉ−ｂｌｏｃｋｓ）および２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（ピペリジン−４−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド三塩酸塩（実施例１のステップ２に従って調製した）を使用して、調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ１．８５（ｄ，Ｊ＝１１．９３Ｈｚ，２Ｈ）２．０４−２．１９（ｍ，２Ｈ）２．９１−３．０３（ｍ，２Ｈ）３．０９（ｄ，Ｊ＝４．５０Ｈｚ，３Ｈ）３．２２（ｔｔ，Ｊ＝１１．６１，３．７４Ｈｚ，１Ｈ）４．７２（ｄ，Ｊ＝１３．５０Ｈｚ，２Ｈ）６．８０（ｄ，Ｊ＝７．４３Ｈｚ，１Ｈ）７．０５（ｄ，Ｊ＝９．１９Ｈｚ，１Ｈ）７．０８−７．１５（ｍ，１Ｈ）７．２０−７．２５（ｍ，１Ｈ）７．３２−７．３９（ｍ，２Ｈ）７．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．０２，１．３７Ｈｚ，１Ｈ）７．８８（ｄｄ，Ｊ＝９．１９，１．１７Ｈｚ，１Ｈ）８．２７（ｔ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，１Ｈ）８．５０（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ）８．５５（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ）。ｍ／ｚ＝４６０（Ｍ＋１）。
【０１２３】
実施例６：２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（１−（キナゾリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド。
【化１７】
2015519402.tif 000024
2015519402.tif 000025
ステップ１．２−（３−（３−クロロピラジン−２−イル）アゼチジン−１−イル）キナゾリン：  ２−（アゼチジン−３−イル）−３−クロロピラジン塩酸塩（１．５０ｇ、７．２８ｍｍｏｌ）、２−クロロキナゾリン（１．２０ｇ、７．２８ｍｍｏｌ、Ｐａｒｋｗａｙ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、および炭酸セシウム（５．２２ｇ、１６．０ｍｍｏｌ、Ｆｌｕｋａ）を、窒素雰囲気下で丸底フラスコにおいてＤＭＦ（３０ｍＬ）中で混合した。混合物を１１０℃で１７時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２回）で抽出した。合わせた有機抽出物を、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。結果として得られた粗製混合物を、ヘキサン中０％〜１００％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、１．０２ｇ（４７％）の黄色の非結晶固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ４．４１−４．５０（ｍ，１Ｈ）４．５８−４．６３（ｍ，２Ｈ）４．６５−４．７２（ｍ，２Ｈ）７．２２−７．２８（ｍ，１Ｈ）７．６１−７．７２（ｍ，３Ｈ）８．２８（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ）８．５１（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ）９．０４（ｓ，１Ｈ）。ｍ／ｚ＝２９８（Ｍ＋１）。
【０１２４】
ステップ２．２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（１−（キナゾリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド：
（０．４００ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）、（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ボロン酸（０．３１８ｇ、１．６１ｍｍｏｌ、Ｃｏｍｂｉ−Ｂｌｏｃｋｓ）、およびトランス−ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ｉｉ）（０．０１９ｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、Ｓｔｒｅｍ）を、アルゴン雰囲気下で丸底フラスコにおいて１，４−ジオキサン（６ｍＬ）中で混合した。炭酸ナトリウム（２．０２ｍＬ、４．０３ｍｍｏｌ、２．０Ｍ水溶液）を添加し、反応混合物を、８０℃で３．５時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。結果として得られた粗製混合物を、ヘキサン中５０％〜１００％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、５５７ｍｇ（８６％）の表題化合物を淡黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ３．０９（ｄ，Ｊ＝４．６９Ｈｚ，３Ｈ）４．２９−４．３９（ｍ，１Ｈ）４．４８−４．５８（ｍ，４Ｈ）６．７５−６．８６（ｂｒ．ｍ．，１Ｈ）７．２２−７．２８（ｍ，１Ｈ）７．３６（ｄ，Ｊ＝１２．５２Ｈｚ，１Ｈ）７．４１（ｄｄ，Ｊ＝８．０２，１．１７Ｈｚ，１Ｈ）７．６０−７．７２（ｍ，３Ｈ）８．２７（ｔ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，１Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，１Ｈ）８．６５（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，１Ｈ）９．０２（ｓ，１Ｈ）。ｍ／ｚ＝４１５（Ｍ＋１）。
【０１２５】
実施例７：２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（３−（１−（キノリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド。
【化１８】
2015519402.tif 000026
２−（３−（３−クロロピラジン−２−イル）アゼチジン−１−イル）キノリン（０．０７２ｇ、０．２４３ｍｍｏｌ、ＷＯ２０１１１４３３６５号における調製を参照されたい）、（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ボロン酸（０．０７６ｇ、０．３８８ｍｍｏｌ、Ｃｏｍｂｉ−ｂｌｏｃｋｓ）、リン酸カリウム（０．１２９ｇ、０．６０７ｍｍｏｌ、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）、ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４−ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．０１７ｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）、水（０．３ｍＬ）、およびジオキサン（１．２ｍＬ）の混合物を、アルゴンガスでパージした。混合物を１００℃で３０分間マイクロ波反応器において加熱し、次いで、加熱を停止し、混合物を室温に冷却した。混合物を飽和Ｎａ２ＣＯ３で希釈し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗製物質をシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇ、０％〜１００％ＥｔＯＡｃ−ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製した。生成物を、逆相ＨＰＬＣ（Ｓｈｉｍａｚｕ；Ｇｅｍｉｎｉ  １０μＭ  Ｃ１８  １１０Ａ  ＡＸＩＡ、１００×５０ｍｍカラム、水中１０〜５５％のＭｅＣＮ、０．１％ＴＦＡ、２６分）によってさらに精製した。収集した画分を固体Ｎａ２ＣＯ３で中和し、ＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮した。生成物を、白色の固体（７３ｍｇ、７３％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ３．１０（ｄ，Ｊ＝４．６９Ｈｚ，３Ｈ）４．３０−４．５５（ｍ，５Ｈ）６．６３（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）６．８３（ｄ，Ｊ＝７．０４Ｈｚ，１Ｈ）７．２３（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．３７（ｄ，Ｊ＝１２．３２Ｈｚ，１Ｈ）７．４２（ｄｄ，Ｊ＝８．０２，１．１７Ｈｚ，１Ｈ）７．５０−７．５７（ｍ，１Ｈ）７．６１（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．７３（ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ，１Ｈ）７．８９（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）８．２８（ｔ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，１Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ）８．６４（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ）。ｍ／ｚ＝４１４（Ｍ＋１）。
【０１２６】
実施例８：２−フルオロ−４−（３−（１−（７−フルオロキノリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド。
【化１９】
2015519402.tif 000027
ステップ１：ＴＥＲＴ−ブチル３−（３−（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ピラジン−２−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート：  化合物を、実施例１に類似して、（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ボロン酸（Ｃｏｍｂｉ  Ｂｌｏｃｋｓから購入した）およびｔｅｒｔ−ブチル３−（３−クロロピラジン−２−イル）アゼチジン−１−カルボキシレートを使用して、調製した。ｍ／ｚ＝２８７（Ｍ＋１−１００）。
【０１２７】
ステップ２：４−（３−（アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミドトリス（２，２，２−トリフルオロ酢酸）：
実施例８のステップ１に従って調製したｔｅｒｔ−ブチル３−（３−（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ピラジン−２−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート（５．１９ｇ、１３．４３ｍｍｏｌ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）の混合物に、トリルオロ酢酸（７．２４ｍＬ、９４．００ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、生成物を示した。混合物を真空下で濃縮した。ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、蒸発させて余分なＴＦＡを除去した。エーテルを添加し、蒸発させた。生成物は、一晩真空乾燥させた後に黄色の油として得られ、さらなる精製なしに次のステップで使用した。ｍ／ｚ＝２８７（Ｍ＋１）。
【０１２８】
ステップ３：２−フルオロ−４−（３−（１−（７−フルオロキノリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド：
４−（３−（アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミドトリス（２，２，２−トリフルオロ酢酸）（０．９５３ｇ、１．５１７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．８３９ｇ、６．０７０ｍｍｏｌ）、７−フルオロキノリン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート（０．５３７ｇ、１．８２１ｍｍｏｌ、実施例２のステップ３に従って調製した）、およびＤＭＳＯ（１０ｍＬ）の混合物を、５０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは生成物を示し、アゼチジン出発物質はもはや示されなかった。混合物を水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗製物質をシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇ、５〜１００％のＥｔＯＡｃ−ヘキサン）によって精製した。不純物２−ヒドロキシキノリンを、ＣＨ２Ｃｌ２およびヘキサンで２回粉砕することによってさらに除去した。生成物を、白色の固体（５１０ｍｇ、７８％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ３．０９（ｄ，Ｊ＝４．５０Ｈｚ，３Ｈ）４．３３−４．５０（ｍ，５Ｈ）６．５６（ｄ，Ｊ＝９．００Ｈｚ，１Ｈ）６．８１（ｄ，Ｊ＝７．０４Ｈｚ，１Ｈ）６．９８（ｔｄ，Ｊ＝８．６１，２．５４Ｈｚ，１Ｈ）７．３１−７．４５（ｍ，３Ｈ）７．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．７１，６．３６Ｈｚ，１Ｈ）７．８４（ｄ，Ｊ＝９．００Ｈｚ，１Ｈ）８．２８（ｔ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，１Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，１Ｈ）８．６４（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ）。ｍ／ｚ＝４３２（Ｍ＋１）。
【０１２９】
実施例９：２−フルオロ−４−（３−（１−（７−フルオロキナゾリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド。
【化２０】
2015519402.tif 000028
表題化合物を、実施例８に類似して、ステップ３で２−クロロ−７−フルオロキナゾリン（Ａｃｔｉｖａｔｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ３．０１−３．１５（ｍ，３Ｈ）４．２５−４．４０（ｍ，１Ｈ）４．４３−４．６１（ｍ，４Ｈ）６．９９（ｔｄ，Ｊ＝８．７１，２．１５Ｈｚ，１Ｈ）７．２３（ｄｄ，Ｊ＝１０．６６，１．８６Ｈｚ，１Ｈ）７．３１−７．４５（ｍ，２Ｈ）７．６７（ｄｄ，Ｊ＝８．６１，６．２６Ｈｚ，１Ｈ）８．２７（ｔ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，１Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，１Ｈ）８．６６（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，１Ｈ）８．９６（ｓ，１Ｈ）。ｍ／ｚ＝４３３（Ｍ＋１）。
【０１３０】
実施例１０：４−（３−（１−（７−クロロキナゾリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド
【化２１】
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ステップ１〜４：２，７−ジクロロキナゾリン
【０１３１】
ステップ１：（２−アミノ−４−クロロフェニル）メタノール  ５００ｍＬの丸底フラスコにおいて、２−アミノ−４−クロロ安息香酸（４２．８ｇ、２５０．２９ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）の撹拌溶液に無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）を溶解し、この溶液を、氷浴で冷却した。水素化アルミニウムリチウム（１１．７６ｇ、３１２．８６ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下で氷浴温度において、上述の溶液に少量ずつ添加した。結果として得られた混合物を室温で８時間撹拌した。反応が完了した際、反応混合物を氷浴温度に冷却し、冷水（１２ｍＬ）、１５％ＮａＯＨ（１２ｍＬ）、および水（３６ｍＬ）の逐次添加によって反応停止処理を行った。結果として得られたスラリーを室温で３０分間撹拌し、ＣＥＬＩＴＥ（商標）パッドを通して濾過した。固体残渣を酢酸エチル（１０００ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を減圧下で濃縮して、（２−アミノ４−クロロフェニル）メタノールをオフホワイトの固体として得た。収量：３２ｇ（８１．６％）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：１８１（Ｍ＋２３）＋
【０１３２】
ステップ２．２−アミノ−４−クロロベンズアルデヒド
２Ｌの３つ口丸底フラスコにおいて、ＤＣＭ（７６５ｍＬ）中の（２−アミノ−４−クロロフェニル）メタノール２（３２ｇ、２０３．８２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液、酸化マンガン（ＩＶ）（１５０ｇ、１．７２４ｍｏｌ）を、室温で添加した。結果として得られた反応混合物を、アルゴン雰囲気下において室温で４０時間撹拌した。反応が完了した際、反応混合物を、ＣＥＬＩＴＥ（商標）パッドを通して濾過し、固体残渣をＤＣＭ（１０００ｍＬ）で十分に洗浄した。合わせた濾液を減圧下で濃縮して、２−アミノ−４−クロロベンズアルデヒドを橙色の固体として得た。収量：２４ｇ（７６．２％）。
【０１３３】
ステップ３：７−クロロキナゾリン−２−オール
５００ｍＬの丸底フラスコにおいて、２−アミノ−４−クロロベンズアルデヒド（１６ｇ、１０３．２２ｍｍｏｌ）および尿素（１２３．８ｇ、２０６３ｍｍｏｌ）の均一混合物を、激しく撹拌しながら１７０℃で２時間加熱した。反応が完了した際、反応混合物を室温に冷却し、氷冷水で希釈した。形成された固体を濾過により収集し、氷冷水で洗浄した。固体を減圧下で乾燥させ、粗製７−クロロキナゾリン−２−オールを黄色の固体として得た。収量：１９ｇ。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：１８１（Ｍ＋１）＋
【０１３４】
ステップ４：２，７−ジクロロキナゾリン
２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコにおいて、７−クロロキナゾリン−２−オール（１９ｇ、１０５．５５ｍｍｏｌ）を、室温で、新たに蒸留したＰＯＣｌ３（１９０ｍＬ）中に懸濁した。結果として得られた懸濁液を、１１０℃で４時間加熱した。反応が完了した際、反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を酢酸エチル（２００ｍＬ）および冷水（２００ｍＬ）で希釈した。有機層を分離し、水相を酢酸エチル（５００ｍＬ×２）で再抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物をブラインで洗浄し、減圧下で濃縮した。得られた残渣（薄茶色）をシリカゲル（６０〜１２０メッシュ）カラムクロマトグラフィーによって精製し、１２〜２０％酢酸エチル−ヘキサンでの勾配溶出により、２，７−ジクロロキナゾリンを淡黄色の固体として得た。収量：７ｇ（３３．５％）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：１９９（Ｍ＋１）＋。
【０１３５】
ステップ５：４−（３−（アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミドトリス（２，２，２−トリフルオロ酢酸）
ｔｅｒｔ−ブチル３−（３−（３−フルオロ−４−（メチルカルバモイル）フェニル）ピラジン−２−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート（５．１９ｇ、１３．４３ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）の混合物に、２，２，２−トリフルオロ酢酸（７．２４ｍＬ、９４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮した。ＤＣＭを添加し、蒸発させて、余分なＴＦＡを除去した。エーテルを添加し、蒸発させた。生成物は、一晩真空乾燥させた後に黄色の油として得られた。ＭＳ：２８７（Ｍ＋１）。
【０１３６】
ステップ６：４−（３−（１−（７−クロロキナゾリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド
４−（３−（アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミドトリス（２，２，２−トリフルオロ酢酸）（０．１５０ｇ、０．２３９ｍｍｏｌ）、２，７−ジクロロキナゾリン（０．０６２ｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（０．１６５ｇ、１．１９ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を、封管においてブタン−１−オール（２ｍＬ）中で混合した。反応混合物を１１０℃で１８時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。結果として得られた粗製混合物を、ヘキサン中５０％〜１００％のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、９９ｍｇ（９２％）の淡黄色の固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ３．０９（ｄ，Ｊ＝４．５０Ｈｚ，３Ｈ）４．２９−４．３８（ｍ，１Ｈ）４．４６−４．５８（ｍ，４Ｈ）６．７５−６．８５（ｂｒ．ｍ．，１Ｈ）７．１８（ｄｄ，Ｊ＝８．６１，１．５６Ｈｚ，１Ｈ）７．３６（ｄ，Ｊ＝１２．３２Ｈｚ，１Ｈ）７．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．１２，１．２７Ｈｚ，１Ｈ）７．６０（ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ，１Ｈ）７．６３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）８．２７（ｔ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，１Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，１Ｈ）８．６５（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，１Ｈ）８．９７（ｓ，１Ｈ）。ｍ／ｚ＝４４９（Ｍ＋１）。
【０１３７】
実施例１１：２−フルオロ−４−（３−（１−（６−フルオロキナゾリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド。
【化２２】
2015519402.tif 000031
表題化合物を、実施例８に類似して、ステップ３で７−フルオロキノリン−２−イルトリフルオロメタンスルホネートの代わりに６−フルオロキナゾリン−２−イルトリフルオロメタンスルホネートを使用し、逆相ＨＰＬＣによって精製することによって、調製した。純粋な画分を最小限のＨ２Ｏに濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和した。固体を濾過によって収集し、Ｈ２Ｏで洗浄して、表題化合物（４９ｍｇ、５１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ９．１９（１Ｈ，ｓ），８．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），８．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），８．３２−８．４５（１Ｈ，ｍ），７．７８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６２−７．７１（２Ｈ，ｍ），７．５１−７．６２（２Ｈ，ｍ），７．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．５Ｈｚ），４．２３−４．４７（５Ｈ，ｍ），２．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）。ｍ／ｚ＝４３３（Ｍ＋１）。
【０１３８】
実施例１２：４−（３−（１−（７−クロロ−６−フルオロキナゾリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド。
【化２３】
2015519402.tif 000032
2015519402.tif 000033
ステップ１および２：４−クロロ−５−フルオロ−２−ニトロベンズアルデヒド
ステップ１．ボランメチルスルフィド、複合体（２．８１ｍＬ、２９．７ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で、ＴＨＦ（７５ｍＬ）中のホウ酸トリメチル（２６．５ｍＬ、２３７ｍｍｏｌ）および４−クロロ−５−フルオロ−２−ニトロ安息香酸（６．５１ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）の溶液にシリンジで添加した。混合物を６時間還流で撹拌し、次いで、０℃に冷却した。ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）を滴下添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、溶媒を真空下で除去し、結果として得られた油をシリカゲルによって精製して、アルコールを固体として得、これを次のステップに直接用いた。
【０１３９】
ステップ２．上で生成した材料を、ＤＣＭ１００ｍＬ中に溶解し、酸化マンガン（ｉｖ）（２．５８ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一晩撹拌し、次いで、酸化マンガン（ｉｖ）を、ＣＥＬＩＴＥ（商標）と通した濾過によって除去した。次いで、濾液を真空下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、４−クロロ−５−フルオロ−２−ニトロベンズアルデヒドを黄色の固体として得た。（１．３２ｇ、２つのステップで収率７８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ７．９４（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）８．５５（ｄ，Ｊ＝６．２６Ｈｚ，１Ｈ）１０．１８（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１４０】
ステップ３．２−アミノ−４−クロロ−５−フルオロベンズアルデヒド。
ＥｔＯＨ（１８ｍＬ）、ＡｃＯＨ（１８ｍＬ）、および水（９ｍＬ）中の４−クロロ−５−フルオロ−２−ニトロベンズアルデヒド（１．５０ｇ、７．３７ｍｍｏｌ）、濃塩酸（０．３０ｍｌ、３．６８ｍｍｏｌ）、および鉄（１．３２ｇ、２３．６ｍｍｏｌ）の混合物を、３０分間加熱還流し、次いで、室温に冷却した。結果として得られた懸濁液を、ＣＥＬＩＴＥ（商標）を通して濾過し、次いで、ＥｔＯＡｃと水とに分割した。相を分離し、有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、２−アミノ−４−クロロ−５−フルオロベンズアルデヒドを黄色の固体として得た（１．１５ｇ、収率９０％）。ｍ／ｚ＝１７４（Ｍ＋１）。
【０１４１】
ステップ４．２，７−ジクロロ−６−フルオロキナゾリン。
２−アミノ−４−クロロ−５−フルオロベンズアルデヒド（０．３０ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）および尿素（１．０４ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）の混合物を、１８０℃で１時間加熱し、次いで、室温に冷却した。次いで、固体をＥｔＯＡｃおよび水の混合物中に懸濁し、次いで、これを濾過し、収集した固体を水で数回洗浄した後、空気乾燥させた。この中間体キナゾリノンを、次いで、オキシ塩化リン（３．０ｍＬ、３２．２ｍｍｏｌ）中に懸濁した後、１００℃で１時間加熱した。室温に冷却した後、混合物を、氷水混合物に滴下添加した。混合物を５分間撹拌し、次いで、生成物をＥｔＯＡｃ（３回）中に抽出した。合わせた抽出物を、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、油を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、２，７−ジクロロ−６−フルオロキナゾリンを白色の固体として得た（４６ｍｇ、収率１２％）。ｍ／ｚ＝２１７（Ｍ＋１）。
【０１４２】
ステップ５．４−（３−（１−（７−クロロ−６−フルオロキナゾリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド。
ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中の２，７−ジクロロ−６−フルオロキナゾリン（４６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、４−（３−（アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミドトリス（２，２，２−トリフルオロ酢酸）（０．１５ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（０．１５ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の混合物を、１時間、１００℃に加熱し、次いで、室温に冷却した。水を添加し、次いで、生成物をＥｔＯＡｃ中に抽出した。合わせた抽出物を、水（２回）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空下で濃縮して、油を得た。この油を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、４−（３−（１−（７−クロロ−６−フルオロキナゾリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミドを淡黄色の固体として得た（６９ｍｇ、収率７０％）。ｍ／ｚ＝４６７（Ｍ＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ３．０９（ｄ，Ｊ＝４．７０Ｈｚ，３Ｈ）４．２８−４．３８（ｍ，１Ｈ）４．４５−４．５４（ｍ，４Ｈ）６．８０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．３２−７．４２（ｍ，３Ｈ）７．７１（ｄ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，１Ｈ）８．２７（ｔ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ）８．５８（ｄ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，１Ｈ）８．６５（ｓ，１Ｈ）８．９４（ｓ，１Ｈ）。
【０１４３】
実施例１３：２−フルオロ−４−（３−（１−（６−フルオロキノリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド。
【化２４】
2015519402.tif 000034
表題化合物を、実施例８に類似して、ステップ３で２−クロロ−６−フルオロキノリン（Ｃｏｍｂｉ−ｂｌｏｃｋｓ）を使用して調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ３．０９（ｄｄ，Ｊ＝４．７９，０．６８Ｈｚ，３Ｈ）４．２０−４．５６（ｍ，５Ｈ）６．６５（ｄ，Ｊ＝９．００Ｈｚ，１Ｈ）６．８０（ｄ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，１Ｈ）７．２１−７．３３（ｍ，２Ｈ）７．３６（ｄｄ，Ｊ＝１２．３２，１．５７Ｈｚ，１Ｈ）７．４２（ｄｄ，Ｊ＝８．１２，１．６６Ｈｚ，１Ｈ）７．７０（ｄｄ，Ｊ＝９．１０，５．１８Ｈｚ，１Ｈ）７．８３（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）８．２８（ｔ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，１Ｈ）８．５６（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ）８．６４（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ）。ｍ／ｚ＝４３２（Ｍ＋１）。
【０１４４】
実施例１４：４−（３−（１−（７−クロロ−１，５−ナフチリジン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド。
【化２５】
2015519402.tif 000035
2015519402.tif 000036
ステップ１．（Ｅ）−メチル３−（３−アミノ−５−クロロピリジン−２−イル）アクリレート。  ５ｍＬのＤＭＦ中の３−アミノ−２−ブロモ−５−クロロピリジン（２．２５７ｍｌ、１９．９６ｍｍｏｌ）、反応物質２（０．２８３ｇ、０．３９９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３．０３ｇ、２９．９ｍｍｏｌ）、およびアクリル酸メチル（３．４４ｇ、３９．９ｍｍｏｌ）の溶液を、マイクロ波照射下で３５分間、１４５℃で加熱した。反応混合物を、蒸発乾燥させ、フラッシュカラム（ＤＣＭ対ＤＣＭ／ＥＡ＝１０：１）に充填して、１．９８ｇの純粋な（Ｅ）−メチル３−（３−アミノ−５−クロロピリジン−２−イル）アクリレート（２．７ｇ、１２．７０ｍｍｏｌ、収率６３．６％）を淡黄色の固体として、および８２０ｍｇのあまり純粋でない生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ＝８．０１（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）。
【０１４５】
ステップ２および３．２，７−ジクロロ−１，５−ナフチリジン。
２０ｍＬのエタノール中の（Ｅ）−メチル３−（３−アミノ−５−クロロピリジン−２−イル）アクリレート（１．２ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）およびナトリウムメトキシド（０．７８６ｍｌ、１４．１１ｍｍｏｌ）の懸濁液を、出発物質がなくなるまで３時間還流させた。反応混合物を蒸発乾燥させて、粗生成物７−クロロ−１，５−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オンを得た。この粗製残渣に、オキシ塩化リン（５．１７ｍｌ、５６．４ｍｍｏｌ）を添加し、結果として得られた混合物を７０℃で４時間撹拌した。余分なＰＯＣｌ３を減圧下で除去し、残渣を直接フラッシュカラム（ＤＣＭ）に供して、２，７−ジクロロ−１，５−ナフチリジン（５４０ｍｇ、２．７１ｍｍｏｌ、収率４８．１％）をオフホワイトの固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ＝８．９０（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）。ｍ／ｚ＝１９９（Ｍ＋１）。
【０１４６】
ステップ４．４−（３−（１−（７−クロロ−１，５−ナフチリジン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド。
１ｍＬのジオキサン中の４−（３−（アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミドテトラキス（２，２，２−トリフルオロ酢酸）（１６０ｍｇ、０．２１６ｍｍｏｌ）、２，７−ジクロロ−１，５−ナフチリジン（４７．２ｍｇ、０．２３７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（８６μｌ、１．０７８ｍｍｏｌ）、およびビス（トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン）パラジウム（０）（３．３０ｍｇ、６．４７μｍｏｌ）の混合物を、５分間、Ｎ２を通気することによって脱気した。反応混合物を密封し、１００℃の油浴で１時間加熱した。反応混合物を、フラッシュカラム（ＤＣＭ対ＥＡ対ＥＡ／ＭｅＯＨ＝１００：２）に充填して、４−（３−（１−（７−クロロ−１，５−ナフチリジン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド（７０ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ、収率７２．４％）を淡黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ＝８．６５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．４７−７．３２（ｍ，２Ｈ），６．８８−６．８１（ｍ，１Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５６−４．４３（ｍ，４Ｈ），４．４３−４．３３（ｍ，１Ｈ），３．０９（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，３Ｈ）。ｍ／ｚ＝４４９（Ｍ＋１）。
【０１４７】
生物学的実施例：
ＣＮＳ障害の治療法の世界市場は５００億ドルを上回る規模であり、今後数年間で実質的に増加すると見られる。これは、１）多くのＣＮＳ障害（例えば、アルツハイマー病、脳卒中、およびパーキンソン病）の発症が、６５歳を超えると急激に増加すること、および２）第二次世界大戦後の出生率の著しい上昇のため、６５歳を超える世界中の人口が、まさに急激に増加するところであること、に起因する。しかしながら、ＣＮＳの研究および開発は、重大な課題を伴う：ＣＮＳ薬は、非ＣＮＳ薬（１０〜１２年）と比較して、市場に出るまでにより時間がかかり（１２〜１６年）、ＣＮＳ薬物候補は、非ＣＮＳ薬物候補よりも漸減率が高い。これは、脳の複雑性、ＣＮＳ薬が血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する必要性、およびＣＮＳ薬がＣＮＳ副作用を引き起こす不利益性を含む、様々な要因に起因する。本発明の化合物は、ＣＮＳ障害のための安全で効果的な薬の発見および開発のプロセスにおいて、適切な官能基を付加することによって、ＢＢＢ通過性等の選択的な生物学的特性を、薬物動態および薬物代謝とともに強化するように修飾することができる。
【０１４８】
驚くべきことに、本発明の化合物は、改善された薬物動態および薬力学を呈し、これらは、直接的および間接的に、化合物がその意図され用途に有効となる能力に関連する。例えば、本化合物は、驚くべきことに、ＩＣ５０（μＭ）に関して表１に示されるように、ＰＤＥ２Ａに対する改善された選択性とともに、改善された受容体占有率（エキソビボＲＯ）を有することが発見されている。さらに、本発明の化合物はまた、所望されるクリアランスおよび透過性／排出特性を有するため、それらは、インビボＰＫおよびＰＤ特性を予測するのに容易に役立ち、これが、インビボ吸収、分布、代謝、および排出特性を通じて、治療標的の適応範囲および有効な投与量の予測を助ける。所与の生物学的部分（例えば、血液、リンパ系、中枢神経）への生物学的通過性の増加、経口アベイラビリティの増加、可溶性の増加、ならびにクリアランス、代謝、および／、または排出率の変化は、どの化合物が有用な薬物であり、どれがそうでないかを判定するための重要な要因である。
【表３】
2015519402.tif 000037
2015519402.tif 000038
2015519402.tif 000039
【０１４９】
上述の生物学的活性データは、以下の実施例Ａ、Ｂ、Ｆ、およびＧのアッセイを用いて得られた。化合物１５、１６、および１７は、それぞれ、以下の構造：
【化２６】
2015519402.tif 000040
を有し、４−（３−（１−（２−キノリニル）−３−アゼチジニル）−２−ピラジニル）ベンズアミド、２−フルオロ−４−（３−（１−（キノリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミド、およびＮ−メチル−３−（３−（１−（キノリン−２−イル）アゼチジン−３−イル）ピラジン−２−イル）ベンズアミドと称される。
【０１５０】
実施例Ａ
ＰＤＥ１０Ａ酵素活性および阻害
酵素活性
ＩＭＡＰ  ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイを用いて、酵素活性を分析した（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ  ＣＡ）。１０μＬの連続希釈したＰＤＥ１０Ａ（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）または組織ホモジネートを、等量の希釈フルオレセイン標識化ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰとともに、３８４ウェルのポリプロピレンアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｍｏｎｒｏｅ，ＮＣ）において、室温で９０分間インキュベートした。インキュベーション後、５５μＬの希釈結合試薬を添加して反応を停止させ、室温で４時間から一晩インキュベートした。プレートを、時間分解された蛍光共鳴エネルギー移動に関してＥｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）で読み取った。データを、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）（Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）で分析した。
【０１５１】
酵素阻害。
阻害プロファイルを調べるために、０．２μＬの連続希釈化合物を、１０μＬの希釈ＰＤＥ１０酵素（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）または組織ホモジネートとともに、３８４ウェルポリプロピレンアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｍｏｎｒｏｅ，ＮＣ）において、室温で６０分間インキュベートした。インキュベーション後、１０μＬの希釈フルオレセイン標識化ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰ基質を添加し、室温で９０分間インキュベートした。５５μＬの希釈結合試薬を添加して反応を停止させ、プレートを、時間分解された蛍光共鳴エネルギー移動に関してＥｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）で読み取った。データを、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）（Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）で分析した。
【０１５２】
実施例Ｂ
ＰＤＥ  ＩＭＡＰアッセイプロトコル
精製したヒトＰＤＥ２Ａ１およびＰＤＥ１０Ａ２酵素を、ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。ＩＭＡＰ（商標）ＴＲ−ＦＲＥＴプログレッシブ結合システム、ＦＡＭ−ｃＡＭＰ基質は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）からのものであった。
【０１５３】
ＰＤＥ  ＩＭＡＰアッセイを、３８４ウェルの黒色Ｇｒｅｉｎｅｒポリプレピレンプレート（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）において行った。ＰＤＥ阻害剤を１００％ＤＭＳＯ中に連続希釈し、ＬＡＢＣＹＴＥからのＥｃｈｏ（商標登録）Ｌｉｑｕｉｄ  Ｈａｎｄｌｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して、１ウェル当たり２００ｎＬでアッセイプレートに分注した。ＩＭＡＰ反応緩衝液（１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０５％ＮａＮ３、および０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０）中の１０μＬのＰＤＥ酵素を、アッセイウェルに添加した。使用したＰＤＥ酵素濃度は、酵素反応がアッセイ条件下で線形範囲内に入ることを確実にするため、各ロットの酵素活性に基づくものであった。１．４ｎＭのＰＤＥ２または８ｐＭのＰＤＥ１０を、アッセイシステムに使用した。酵素は、１０μＬの基質添加の添加前に、室温で６０分間阻害剤とともに事前インキュベートし、これにより、反応物中１００ｎＭのＦＡＭ−ｃＡＭＰがもたらされた。酵素反応を室温で９０分間進行させ、反応を、製造業者の推奨に従って、結合試薬を５５μｌ添加することによって停止させる。さらに、混合物をさらに４時間室温でインキュベートし、シグナルをＥｎｖｉｓｉｏｎ多重モード読み取り装置（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で読み取った。蛍光シグナルを５２０ｎｍおよび４８５ｎｍで測定した。５２０／４８５ｎｍでのシグナル比は、ＡＭＰの反応生成物の生成に対応し、これをすべてのデータの分析に使用した。ＤＭＳＯ処理したウェルからの値を、ＰＯＣ＝１００に正規化し、非酵素ウェルをＰＯＣ＝０に正規化した。ＩＣ５０値は、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ  Ｖ９．０．１を使用して判定した。Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒでの用量応答データの分析に使用した曲線適合アルゴリズムは、ＲＯＵＴ（異常値の検出を伴うロバスト回帰）と称されるロバスト曲線適合アルゴリズムのカスタム実装形態であり、４パラメータのロジスティカル（４ＰＬ）ヒルモデルを使用する。
【０１５４】
実施例Ｃ
ラットにおける驚愕応答のプレパルス阻害のアポモルフィンに誘導される欠損、抗精神病活性のインビボ試験
統合失調症の特徴である思考障害は、感覚運動情報の分類または出し入れができないことに起因し得る。感覚運動情報を出し入れする能力は、多数の動物、ならびにヒトにおいて試験することができる。広く使用される試験は、驚愕応答のプレパルス阻害のアポモルフィンに誘導される欠損の逆転である。驚愕応答は、雑音バースト等の突然の激しい刺激に対する反射である。この実施例では、ラットを、１２０ｄｂのレベルで４０ミリ秒間、突然の雑音バーストに曝露させることができ、例えば、ラットの反射活性を測定することができる。雑音バーストに対するラットの反射は、バックグラウンド（６５ｄｂ）よりも３ｄｂ〜１２ｄｂ高い、より低い強度の刺激を驚愕刺激に先行させることによって軽減され得、これにより、驚愕反射が２０％〜８０％軽減される。
【０１５５】
上に記載の驚愕反射のプレパルス阻害は、ＣＮＳにおける受容体シグナル伝達経路に影響を及ぼす薬物によって軽減され得る。１つの一般に使用される薬物は、ドーパミン受容体アゴニストであるアポモルフィンである。アポモルフィンの投与は、プレパルスによって引き起こされる驚愕反射の阻害を低減させる。ハロペリドール等の抗精神病薬は、アポモルフィンが驚愕反射のプレパルス阻害を低減するのを防ぐ。このアッセイは、ＰＤＥ１０阻害剤が驚愕のプレパルス阻害のアポモルフィンに誘導される欠損を低減させるため、ＰＤＥ１０阻害剤の抗精神病効果を試験するために使用することができる。
【０１５６】
実施例Ｄ
ラットにおける条件回避応答（ＣＡＲ）、抗精神病活性のインビボ試験
条件回避応答（ＣＡＲ）は、例えば、動物が、音および光が軽度のフットショックの発生を予測することを学習すると、発生する。対象は、音および光が作動すると、チャンバから出て安全な領域に入らなければならないことを学習する。すべての既知の抗精神病薬は、鎮静をもたらさない用量で、この回避応答を低減する。試験化合物が条件回避を抑制する能力を試験することは、有用な抗精神薬特性を有する薬物のスクリーニングに、５０年近く広く使用されている。
【０１５７】
この実施例では、動物を、２つのチャンバのシャトルボックスに入れ、それらに、光および音からなる中性条件刺激（ＣＳ）、続いてシャトルボックスのチャンバ内の床グリッドを通じた軽度のフットショックからなる嫌悪無条件刺激（ＵＳ）を与えることができる。動物は、一方のチャンバから、グリッドに電気が通っていない他方のチャンバへと移動することにより、ＵＳから自由に逃避することができる。ＣＳ−ＵＳの対を複数回与えた後、動物は、典型的に、ＣＳを与えている間にそのチャンバから出て、ＵＳを完全に回避することを学習する。臨床的に関連する用量の抗精神病薬で処理した動物は、ショックそのものに対する逃避応答は影響されないが、ＣＳの存在下における回避率の抑制を有する。
【０１５８】
具体的には、条件回避訓練は、シャトルボックス（Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｔ．Ａｌｂａｎｓ，ＶＴ）を使用して行うことができる。このシャトルボックスは、典型的には、それぞれが、光源、作動時に８５ｄＢの音を出すスピーカー、およびスクランブルフットショックの送達が可能な電気が通ったグリッドを有する、２つの等しい区画に区切られている。セッションは、１日当たり２０回の試験（試験間の間隔２５〜４０秒）からなり得、その間に、１０秒間の照明および同時に１０秒間の音が、最大１０秒間適用される０．５ｍＡのショックが続いて送達されることを示唆する。１０秒間の条件刺激（光および音）の間に反対側の区画に移動することとして定義される能動的回避は、ショックの送達を防ぐ。ショック送達後に他方の区画へ移動するとショックの送達は終了され、これは、逃避応答として記録される。動物が、ショック送達中に条件チャンバから退出しない場合、これは、逃避失敗として記録される。訓練は、２日間連続して、２０回の試験のうち１６回以上の回避（８０％回避）が達成されるまで、毎日継続され得る。この基準に達した後、ラットは、１日の薬物動態試験を受け得る。試験日に、ラットを、実験群に無作為に割り当て、体重を量り、対照または化合物のいずれかの溶液を、腹腔内（ｉ．ｐ．）（１ｃｃツベルクリンシリンジ、２６  ３／８ゲージ針）または経口（ｐ．ｏ．）（１８ゲージの給餌針）で注入することができる。化合物は、腹腔内投与では１．０ｍｌ／ｋｇで、経口投与では１０ｍＬ／ｋｇで注入され得る。化合物は、急性的または慢性的のいずれかで投与することができる。試験のために、各ラットをシャトルボックスに入れ、訓練試験に関して上述されたものと同じパラメータで、２０回の試験を行うことができる。回避、逃避、および逃避失敗の回数を記録することができる。
【０１５９】
実施例Ｅ
ＰＣＰ誘導型過活動（ＰＣＰ−ＬＭＡ）
使用した装置：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓからの４×８ホームケージ光ビーム活性システム（ＰＡＳ）フレームＰＡＳプログラムを開き、次の変数を用いて実験セッションを準備する：
多段階実験
３００秒／間隔（５分間）
１２回の間隔（１時間）
個別の画面上スイッチ。
最初のビーム遮断後に記録を開始する。
間隔の終了後にセッションを終了する。
【０１６０】
ケージの準備：
フィルタトップを有するが、ワイヤリッドを有さなないＴｅｃｈｎｉｐｌａｓｔ（商標）ラットケージ。約４００ｍＬの床敷および１つの食餌ペレットをケージに入れ、２５０ｍＬのｔｅｃｈｎｉｐｌａｓｔ給水ボトルをフィルタトップのホルダに設置する。準備したケージをＰＡＳフレームに設置する。床敷またはペレットが、ビームを遮断しないことを確認する。
【０１６１】
動物の準備：
ラットに印を付け、体重を記録する。ラットを試験室に入れる。
【０１６２】
段階Ｉ：馴化
実験セッションを開始する。ラットを囲いの中に入れる。コンピュータは、ラットがビームを遮断したことを検出すると、記録を開始するはずである。コンピュータは、１時間記録する。馴化段階の間にリスペリドン（陽性対照）を調製する：リスペリドンを量り分け、１ｍｇ／ｍＬの濃度で最終体積を計算し、最終体積の１％の氷酢酸を添加して、リスペリドンを溶解させる。リスペリドンが溶解されると、生理食塩水を最終体積に添加して、１ｍｇ／ｍＬの濃度にする。シリンジ（２３ｇ１／２の針または経口強制給餌針を有する３ｍＬのシリンジ）に、Ａｍｇｅｎ化合物溶液（５ｍＬ／ｋｇ）または皮下リスペリドン（２３ｇ１／２の針を有する１ｍＬのシリンジ）対照（１ｍＬ／ｋｇ）を充填する。
【０１６３】
段階ＩＩ：化合物の事前処理
段階Ｉが終了していることを確認する。ラットを囲いから取り出し、画面上の個別のスイッチを使用して次の段階を開始し、化合物を経口もしくは腹腔内に、または対照を皮下に投与し、ラットを囲いの中に戻す。コンピュータは、ラットがビームを遮断したことを検出すると、記録を開始するはずである。コンピュータは、１時間記録する。
【０１６４】
段階ＩＩの間に、ｐｃｐを調製する：ｐｃｐを生理食塩水中に溶解し、５ｍｇ／ｍＬの濃度にする。
【０１６５】
シリンジ（２６ｇ３／８の針を有する１ｍＬのシリンジ）に、ｐｃｐ溶液（１ｍＬ／ｋｇ）を充填する。
【０１６６】
段階ＩＩＩ：ＰＣＰの投与。
段階ＩＩが終了していることを確認する。ラットを囲いから取り出し、画面上の個別のスイッチを使用して次の段階を開始し、ｐｃｐを皮下投与し、ラットを囲いの中に戻す。コンピュータは、１時間記録する。
【０１６７】
クリーンアップ：
実験を終了させ、コンピュータがデータをまとめることができるようにするための終了セッション。データ分析のために、未加工データを表計算ファイルにエクスポートする。ラットを安楽死させ、ＰＫに必要な組織／試料を採取する。
【０１６８】
データの生成：
データ分析のために、未加工データを表計算ファイルにエクスポートする。合計の移動時間を、光ビームの遮断回数として、コンピュータにより記録する。合計の移動時間（秒）を、５分間のビンに合わせ、各処理群について７〜１０匹の動物のＮに対して平均化する。データは、二元配置ＡＮＯＶＡ、続いて多重比較にボンフェローニのポストホック検定を使用して、統計学的有意性について分析する。
【０１６９】
実施例Ｆ
ＰＤＥ１０エキソビボ受容体占有（ＲＯ）スクリーニング手順
エキソビボスクリーニング手順は、Ａｍｇｅｎ’ｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって承認されており、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＡＡＬＡＣ）によって認可を受けた施設において、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従った。
【０１７０】
ＰＤＥ１０阻害剤を、メタンスルホン酸とともに、２％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、１％Ｔｗｅｅｎ−８０、ｐＨ２．２中に溶解した。体重１８０〜２２５ｇの雄性スプラーグドーリー（登録商標）ラット（１群当たり４匹）に、ビヒクルまたはＰＤＥ１０阻害剤（３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを経口投与し、次いで、ホームケージに戻し、化合物を吸収させた。１時間後（１０ｍｇ／ｋｇのＰＤＥ１０阻害剤）または４時間後（３ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇのＰＤＥ１０阻害剤）に、ラットをＣＯ２吸入によって殺処理した。血液を心穿刺によって採取し、血漿を、曝露分析のために凍結させ、−８０℃で保管した。脳を取り出しし、冷却したメチルブタン中で即座に凍結させ、切断するまで−８０℃で保管した。１つの脳につき３つの冠状の脳切片（線条体を含有）を、低温槽を使用して２０ｍｍに切断し、顕微鏡スライドに設置し、空気乾燥させ、−２０℃で保管した。放射性リガンド結合実験のために、スライドを室温で解凍し、次いで、結合緩衝液（２ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１００ｍＭ  ＤＴＴを含有する１５０ｍＭリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）中、１ｎＭのトリチウム標識トレーサ化合物（引用を挿入）とともに４℃で１分間インキュベートした。非特異的な結合を評価するために、隣接する脳の切片を含有するスライドを、１０ｍＭの標識されていない構造的に関連のないＰＤＥ１０アンタゴニストを添加して、同じ溶液中でインキュベートした。その後、スライドを氷冷結合緩衝液で３回洗浄し、蒸留水に浸して、緩衝塩を除去し、低温の空気流下で乾燥させた。切片からのβ粒子の放出を、Ｂｅｔａ  Ｉｍａｇｅｒ  ２０００（Ｂｉｏｓｐａｃｅ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）において８時間計数し、Ｍ３  Ｖｉｓｉｏｎソフトウェア（Ｂｉｏｓｐａｃｅ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）を使用してデジタル化し、分析した。線条体における総結合放射活性を、手書きの目的の領域におけるｃｐｍ／ｍｍ２として測定し、１つの脳につき３つの切片にわたり平均化した。非特異的な結合を差し引いて、特異的な結合の値を得、ビヒクル特異的結合を０％占有として設定することによって、占有パーセントを計算した。
【０１７１】
実施例Ｇ
透過性および細胞間輸送プロトコル
材料
ジゴキシンおよびマンニトールを、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。３Ｈ−ジゴキシンおよび１４Ｃ−マンニトールを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）から購入した。輸送緩衝液を、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、および０．１％ＢＳＡを補充したハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）を用いて調製した（ＨＨＢＳＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ、ＢＳＡ、ウシ血清アルブミン、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）。
【０１７２】
細胞系および細胞培養物。
培養物を、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿（９５％相対湿度）雰囲気下において３７℃でインキュベートした。親細胞系ＬＬＣ−ＰＫ１（ブタ腎臓上皮細胞）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。ＬＬＣ−ＰＫ１中のヒトＭＤＲ１およびスプラーグドーリーラットｍｄｒａ１トランスフェクタントを、Ａｍｇｅｎ（Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）において生成した。細胞を、２ｍＭのＬ−グルタミン、ペニシリン（５０単位／ｍＬ）、ストレプトマイシン（５０μｇ／ｍＬ）、および１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（すべてＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから）を補充したＭｅｄｉｕｍ  １９９で培養した（Ｓｃｈｉｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９５）。
【０１７３】
試験化合物の透過性および細胞間輸送
ＬＬＣ−ＰＫ１、ＭＤＲ１−ＬＬＣ−ＰＫ１、およびｍｄｒ１ａ−ＬＬＣ−ＰＫ１細胞単層を、細孔性（１．０μｍ）ポリカーボネート９６ウェルのトランスウェル膜フィルタ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）に播種し、トランスウェル実験の前に、４日目に培地を置き換えて、６日間培養した。細胞を、トランスウェル実験の前に、温めたＨＨＢＳで洗浄した。実験は、三連のウェルにおいて、各区画の緩衝液を、５μＭの試験化合物ありおよびなしで、０．１％ＢＳＡを含有する０．１５ｍＬのＨＢＳＳと置き換えることによって開始した。プレートを３７℃で２時間、ＥＶＯインキュベーターにおいて振盪させながらインキュベートした。ドナーおよびレシーバーの両方のチャンバからのアリコート（１００μｌ）を、９６ウェルプレートまたはシンチレーションバイアルに移した。０．１％のギ酸およびプラゾシン（２５ｎｇ／ｍＬ）を中間標準物質として含有する２００μＬのアセトニトリルを添加することによってタンパク質を沈殿させた。ボルテックスおよび３０００ｒｐｍで２０分間の遠心分離の後、１５０μＬの上清試料を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析のために、５０μＬの水を含有する新しいプレートに写した。３Ｈ−ジゴキシンの細胞間輸送を、Ｐｇｐの陽性対照として使用した。１４Ｃ−マンニトールの傍細胞透過性を使用して、単層の完全性を測定した。試料の放射活性を、液体シンチレーション計を使用して測定した（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｔｒｉ−Ｃａｒｂ  ２９１０ＴＲ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）。
【０１７４】
すべての試験薬剤の見かけの透過性係数（Ｐａｐｐ）を、薬剤の累積量（ｄＱ）と時間（ｄｔ）の傾き、および等式：
Ｐａｐｐ＝（ｄＱ／ｄｔ）／（Ａ＊Ｃ０）
から推定し、式中、ｄＱ／ｄｔは、薬剤の透過率（μｍ／秒）であり、Ａは、トランスウェルの細胞層の表面積（０．１１ｃｍ２）であり、Ｃ０は、試験化合物の最初の濃度（μＭ）である。
【０１７５】
前述のものは、単に本発明の例示であり、本発明を開示される化合物に制限することを意図するものではない。当業者には明らかである変形および変化は、本発明の範囲および性質に含まれることが意図され、これらは添付の特許請求の範囲で定義される。本明細書に引用されるすべての特許、特許出願、および他の出版物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【国際調査報告】
2015519402.tif 000056
2015519402.tif 000057
2015519402.tif 000058