(57)【要約】DN-DISC1マウス、主要な精神病のためのマウスモデルで、統合失調症、気分障害、嗜癖（耽溺）に関連する病理学的表現型を発現するモデルにおいては、本発明の発明者らは、同時に、前頭前野において酸化ストレスの顕著なレベルを見出したが、線条体では異なっていた。これらのマウスはまた、GAPDH-Siah1結合、酸化ストレスへの曝露下で活性化されるタンパク質-タンパク質相互作用のより多くの量を示した。本発明者らは、他の器官系における酸化ストレスの役割を研究した。ここで詳述するように、本発明者らは、GAPDH-Siah1結合が心不全のマウスモデルで増加することを見出した。さらに、デプレニルのある種の新規な類似体が、心臓組織においてGAPDH-Siah1結合を著しく抑制することを見出した。このように、ここで提供される実験データにより、このGAPDH-Siah1結合カスケードが、統合失調症、気分障害、および嗜癖のような主要な精神病において、ならびにGAPDHが発現される他の器官に関係するストレス関連疾患において関与する重要なメカニズムであることは明らかである。本発明は、デプレニルの類似体が含まれる化合物および組成物、ならびに核のGAPDH-Siah1結合の抑制、そしてp300およびMEF2の活性化におけるそれらの使用を提供する。また、ここでは、たとえば、主要な精神病で、たとえば、統合失調症、気分障害、および嗜癖のようなものの、ならびに他の器官が関与するストレス関連疾患で、たとえば、心肥大のようなものにおいてのものを含む、身体のストレス誘導障害を、インビボで防止し、および処置する方法を提供し、それには、哺乳動物に、デプレニルの類似体の治療上有効な量を施与することが含まれる。
2015529206.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2015529206.tif 000025
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物、および薬における使用のために、そして最も好ましくは、対象の細胞におけるGAPDH-Siah1の抑制用の薬としての使用のために有効な量において薬学的に許容可能な担体を含む、製薬上組成物。
【請求項２】
【化２】
2015529206.tif 000026
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物、および薬における使用のために、そして最も好ましくは、対象の細胞におけるp300 HATおよび/または筋細胞エンハンサー因子2（MEF）の抑制用の薬としての使用のために有効な量において薬学的に許容可能な担体を含む、製薬上組成物。
【請求項３】
【化３】
2015529206.tif 000027
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物、および薬における使用のために、そして最も好ましくは、対象の器官におけるストレス誘導障害の抑制用の薬としての使用のために有効な量において薬学的に許容可能な担体を含む、製薬上組成物。
【請求項４】
器官は脳である、請求項3の製薬上組成物。
【請求項５】
ストレス誘導障害は、気分障害、統合失調症、自閉症および嗜癖からなる群より選ばれる、請求項3または4のいずれかの製薬上組成物。
【請求項６】
組成物は少なくとも一種の追加の治療上組成物を含む、請求項3ないし5のいずれかの製薬上組成物。
【請求項７】
少なくとも一種の追加の治療上組成物は、抗うつ剤、複素環系抗うつ剤、モノアミンオキシダーゼインヒビター、選択的セロトニン再取込みインヒビター、三環系抗うつ剤、抗躁病剤、抗精神病剤、フェノチアジン抗精神病剤、不安緩解剤、鎮静剤、および催眠剤、バルビツール酸塩鎮静剤および催眠剤、ベンゾジアゼピン系抗不安剤、鎮静剤、および催眠剤、および精神興奮剤のような向精神剤からなる群より選ばれる、請求項6の製薬上組成物。
【請求項８】
器官は心臓である、請求項3の製薬上組成物。
【請求項９】
ストレス誘導障害は心肥大または心筋症からなる群より選ばれる、請求項3または8のいずれかの製薬上組成物。
【請求項１０】
組成物は少なくとも一種の追加の治療上組成物を含む、請求項8または9のいずれかの製薬上組成物。
【請求項１１】
少なくとも一種の追加の治療上組成物は、αブロッカー交感神経遮断剤、交感神経遮断剤、交感神経興奮剤、およびアドレナリンアゴニスト交感神経様作用薬剤；心血管系薬剤で、抗狭心症剤、抗狭心症剤、カルシウムチャネルブロッカー抗狭心症剤、硝酸抗狭心症剤、抗不整脈剤、強心配糖体抗不整脈剤、クラスI抗不整脈剤、クラス抗不整脈剤、クラス抗不整脈剤、クラスIV抗不整脈剤、抗高血圧剤、αブロッカー抗高血圧剤、アンジオテンシン変換酵素インヒビター（ACEインヒビター）抗高血圧剤、βブロッカー抗高血圧剤、カルシウムチャネルブロッカー抗高血圧剤、中枢作用性アドレナリン性抗抗高血圧剤、抗高血圧利尿剤、末梢血管拡張抗高血圧剤、抗高脂血症剤、胆汁酸金属イオン封鎖抗高脂血症剤、還元酵素インヒビター抗高脂血症剤、循環作用剤、強心配糖体循環作用剤、血栓溶解剤、アンジオテンシンII受容体ブロッカー、ジゴキシン、ジギトキシン、利尿剤、およびアルドステロンアンタゴニストのようなものからなる群より選ばれる、請求項6の製薬上組成物。
【請求項１２】
化合物は、
【化４】
2015529206.tif 000028
からなる群より選ばれる、請求項1ないし11のいずれかの方法。
【請求項１３】
化合物は、
【化５】
2015529206.tif 000029
((1R,3R)-1,3-ジメチル-2-プロパルギル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン)
である、請求項1ないし12のいずれかの方法。
【請求項１４】
【化６】
2015529206.tif 000030
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物。
【請求項１５】
化合物は、
【化７】
2015529206.tif 000031
((1R,3R)-1,3-ジメチル-2-プロパルギル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン)
である、式Iの化合物。
【請求項１６】
式II
【化８】
2015529206.tif 000032
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物。
【請求項１７】
化合物は、
【化９】
2015529206.tif 000033
((1S,3S)-1,3-ジメチル-2-プロパルギル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン)
である、式IIの化合物。
【請求項１８】
式I
【化１０】
2015529206.tif 000034
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む、製薬上組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願を参照する。
本出願は、2012年8月25日付け出願の米国特許仮出願第61/693266号の利益を請求し、それをここに参照することによりすべての目的についてまるでここに記載されているかのように組み込む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００２】
本発明の背景を説明する。
適切な環境刺激は器官および生体の恒常性を維持するために必要とされるが、過剰なストレス要因はそのような恒常性を崩壊させる。基礎となるメカニズムは、核因子および遺伝子転写に関係し、そこではヒストンアセチルトランスフェラーゼ（HATs）が本質的な役割を果たす。酵素p300は、心臓および脳の器官機能の維持に必須な代表的なHATであり、その一方でそれはまた病因に関わる。それゆえ、p300の活性が、生理機能または病態生理を媒介するために、どのようにして、たとえば、ストレスなどのような環境および内因子によって影響されるかは、本質的な生物学的問題である。
【０００３】
本発明者らは以前に、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（グリセルアルデヒド3リン酸脱水素酵素）（GAPDH）のユニークなプールがp300を活性化すること、それはGAPDHが酸化され/S-ニトロシル化され、およびストレスへの曝露の際にE3ユビキチン-タンパク質リガーゼ（Siah1）により核内に転座するときであり：このカスケードにおいて、GAPDHのわずか数パーセントだけがこの特定の翻訳後修飾に原因してシグナル伝達分子に変換され、そして細胞質ゾルおよび解糖GAPDHにおける全体的な変化が無視できることを報告した。
【０００４】
統合失調症を有するペイシェント（「患者」と言うことがある）での認識機能障害が前頭葉の機能不全の証拠となることは長く指摘されている。これらの異常は、罹患した個体の生涯を通して見出され、若干のケースでは前頭葉構造での変化と一致する神経発達の基礎が示唆される。剖検では、シナプスおよび細胞の完全性に影響を及ぼす統合失調症における神経病理学は、この病気のための前臨床モデルにおける前頭前野依存性行動にますます焦点が向けられた。
【０００５】
皮質非同期（cortical asynchrony）は患者に見出される認知障害の種類に寄与しうるので、たとえば、介在ニューロンの機能不全などのような同期皮質活性（synchronous cortical activity）のために必要なメカニズムの不全は特に興味がある。その意味では、統合失調症の患者からの剖検脳の研究が、パルブアルブミンの免疫反応性、同期（synchonous）皮質活性を調節する速いスパイク介在ニューロン（fast-spiking interneurons）のための関連するマーカーでの減少を示す。その介在ニューロンの集団に影響を及ぼす損なわれた完全性の考えられる原因の一つは、減少したパルブアルブミンの免疫反応性が、統合失調症に関連するマウスモデルにおいて酸化ストレスによって誘発されるという証拠から来ている。さらに、そのような前頭葉の機能不全の根拠を支持するように、最近発症した統合失調症を有する患者からの髄液の分析は、酸化ストレスの存在を示した。
【０００６】
ストレスは身体の器官系のすべてに影響を与えることが知られる。別の例では、心臓は様々な心疾患の病理学的ストレス要因に対しての肥大を発症し、それはさらなる障害に進行することがある。心肥大および不全は、死の主な原因であり、米国において社会に多大な負担をかけている。ストレス誘発性心疾患で、たとえば、肥大などのようなものの抑制は、心筋症および心不全の防止および処置のために極めて重要であろう。
【０００７】
したがって、酸化ストレス誘導障害で、主要な心の病、たとえば、統合失調症、気分障害、および嗜癖などのようなものを含むもの、ならびに、他の器官で、たとえば、心臓などのようなものの障害の処置のための新しい治療法にとって不可欠な必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の概略を説明する。
本発明者らは、推定上のドミナントネガティブ（優性阻害）DISC1（DN-DISC1）を発現するトランスジェニックマウスの使用により神経精神病学の病気のためのモデルの前頭前野（前頭前皮質）において研究を行った。DN-DISC1のマウスでは、酸化ストレスの顕著なレベルが前頭前野で検出されたが、線条体ではそうでなかった。これらのマウスはまた、より一層多量のGAPDH-Siah1結合、酸化ストレスへの曝露下で活性化されるタンパク質-タンパク質相互作用を示した。
【０００９】
ある実施形態によれば、本発明者らは、この酸化ストレスが、コントロールと比較したとき、DN-DISC1マウスにおいてインビボで目に見える行動の効果を有すること、およびこれらの行動の効果が本発明の化合物および方法を用いることにより打ち消されることを見出した。
【００１０】
さらに、本発明者らは、他の器官系における酸化ストレスの役割を調べた。ここで詳述するように、本発明者らは、GAPDH-Siah1結合が心不全のマウスモデルにおいて増加することを見出した。また、デプレニルの一定の新規な類似体が、心臓組織においてGAPDH -Siah1結合を著しく抑制することが見出された。したがって、ここに提供する実験データにより、このGAPDH-Siah1結合カスケードが、主要な心の病、たとえば、統合失調症、気分障害、および嗜癖などのようなものに、ならびに他の器官で、そこではGAPDHが発現されるものに関与するストレス関連疾患に関わる重大なメカニズムであることは明らかである。
【００１１】
したがって、一またはそれよりも多く（一以上）の実施形態に従って、本発明は、哺乳動物に、薬物デプレニルの構造類似体である種々の化合物を含む製薬上組成物の治療上有効な量を施すことを含む、哺乳動物の細胞においてGAPDH-Siah1結合およびp300の活性化抑制の新規な方法を提供する。
【００１２】
一実施形態によれば、本発明は、哺乳動物の細胞においてGAPDH-Siah1結合の抑制のために、a）哺乳動物に、
【化１】
2015529206.tif 000003
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体（キャリヤー）を含む組成物の治療上有効な量を施すことを含む方法を提供する。
【００１３】
別の実施形態によれば、本発明は、哺乳動物の細胞におけるp300HATおよび/または筋細胞エンハンサー因子2（MEF）の抑制のために、a）哺乳動物に、
【化２】
2015529206.tif 000004
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を施すことを含む方法を提供する。
【００１４】
更なる実施形態によれば、本発明は、哺乳動物の脳におけるストレス誘導障害の抑制のために、a）哺乳動物に、
【化３】
2015529206.tif 000005
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を施すことを含む方法を提供する。
【００１５】
更なる実施形態によれば、本発明は、哺乳動物の脳におけるストレス誘導障害の抑制のために、a）哺乳動物に、
【化４】
2015529206.tif 000006
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を施すこと、およびb）哺乳動物に、少なくとも一の追加の治療上組成物を施すことを含む方法を提供する。
【００１６】
更なる実施形態によれば、本発明は、哺乳動物の器官におけるストレス誘導障害の抑制のために、a）哺乳動物に、
【化５】
2015529206.tif 000007
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を施すことを含む方法を提供する。
【００１７】
更なる実施形態によれば、本発明は、哺乳動物の器官におけるストレス誘導障害のために、a）哺乳動物に、
【化６】
2015529206.tif 000008
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を施すこと、およびb）哺乳動物に、少なくとも一の追加の治療上組成物を施すことを含む方法を提供する。
【００１８】
更なる実施形態によれば、本発明は、心筋症を患う哺乳動物の心臓細胞における心肥大の抑制のために、a）哺乳動物に、
【化７】
2015529206.tif 000009
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を施すことを含む方法を提供する。
【００１９】
更なる実施形態によれば、本発明は、心筋症を患う哺乳動物の心臓細胞における心肥大の抑制のために、a）哺乳動物に、
【化８】
2015529206.tif 000010
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を施すこと、およびb）哺乳動物に、少なくとも一の追加の治療上組成物を施すことを含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】前頭皮質における酸化ストレス関連病理を描写する。（A）カルボニルアッセイ、＃p=0.07によって示されるように、成体DN-DISC1マウスの前頭皮質における酸化ストレスの増加、（B）GAPDH-Siah1カスケードの活性化は、共免疫沈降によるGAPDH-Siah1タンパク質相互作用によってアッセイされ、酸化ストレスを反映する。このカスケードの活性化の増大は、野生型コントロールと比較して、DN-DISC1のマウスにおいて観察された、*p<0.005。増加した酸化ストレスは、カルボニルアッセイ（C）またはGAPDH-Siah相互作用（D）のいずれによっても線条体では検出されなかった。エラーバーはSEMを示す。
【図２】スリーチャンバー（三部屋）ソーシャル（社会性）・インタラクション（相互作用）パラダイムにおけるソーシャル・ノベルティ（新規性）のテストを描く。WT（n=5）およびRR（n=7）で処理したDISC1マウスはファミリアー（なじみの）マウスに対しストレンジャー（なじみでない）マウスを選択的に嗅ぎ、その一方、DISC1マウスはそうしなかった（n=3）。*p<0.05。
【図３】慢性の圧力過負荷（TAC）に曝露された肥大心における増大p300 HAT活性およびGAPDHの核蓄積を示す。図3Aは、TAC心臓においてP300-HAT活性を示す（各群でn=4）。図3Bは、TAC心臓の総断面（上パネル）およびTAC心臓から分離した心筋細胞におけるGAPDHについての免疫蛍光染色の写真である。図3Cは、TAC心臓からの分画したタンパク質を用いたウェスタンブロット（上パネル）および定量（棒グラフ、各群においてn=6）である。
【図４】GAPDH-Siah1結合をブロックする本発明のデプレニル誘導体化合物を描く。図4Aは、(1R,3R)-1,3-ジメチル-2-プロパルギル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン（RR化合物）の化学構造を、デプレニルと比較して示す。図4Bは、GAPDH-Siah1結合の、インビトロでのRR化合物による抑制を描くグラフである。GAPDHは、RR化合物とプレインキュベートされ、次いで、GST-Siah1が添加され、そしてウェスタンブロッティングが続くGSTアガロースプルダウンによって結合が評価された。グラフは、6回の実験からのブロットの定量結果を示す。図4Cは、インビトロのMAO活性を描く一対のグラフである。図4Dは、48時間について1nMのRRに曝露された培養ラット新生仔心臓細胞における解糖活性を示す棒グラフである、*p <0.05。
【図５】心臓の細胞肥大におけるGAPDH核カスケードの役割を描く。図5Aは、Siah1抗体で免疫沈降し、そしてGAPDH（上パネル）およびRR化合物の存在下または不存在下でエンドセリン1（ET1）に曝露された心筋細胞における定量結果（下のパネル、4回の実験からの結果）についてプローブした細胞溶解物の写真である。図5Bは、GAPDHのための代表的な免疫蛍光染色を示す一連の顕微鏡写真である。図5Cは、RR化合物の存在下または不存在下でET1に曝露された心筋細胞の核画分におけるGAPDHについてのウェスタンブロットの定量結果を示すグラフである。図5Dは、p300のアセチル化およびMEF2活性の定量結果を示すグラフである。図5Eは、細胞表面積（左）、タンパク質合成（中間）および肥大遺伝子（BNP）による心筋細胞肥大の評価を示すグラフである。図5Fは、野生型GAPDH（Ad-GAPDH-WT）または変異GAPDH（Ad-GAPDH-K227）によりアデノウイルスでトランスフェクトした心臓細胞における外因性GAPDH（HAタグ付き）についての代表的な免疫蛍光染色を示す一連の顕微鏡写真である。図5Gは、野生型GAPDH（Ad-GAPDH-WT）または変異GAPDH（Ad-GAPDH-K227）でトランスフェクトし、そしてRR化合物の存在下または不存在下で48時間ET1で刺激した心臓細胞におけるMEF2活性を描くグラフである。図5HはBNPmRNA発現のグラフである*p<0.05。
【図６】心臓肥大、リモデリング（改造）および機能におけるGAPDHの核カスケードのインビボの役割を描く。図6Aは、ビヒクル（Veh）またはRR（RR）処理（各群においてn=3-4）による核画分におけるGAPDH（左）およびTAC心臓におけるp300 HAT活性についてのウェスタンブロットの定量結果を示すグラフである。図6Bは、心臓の代表的な断面（上側パネル）および組織学〔Masson Trichrome Staining（マッソン三重染色）についての中間パネルおよびWGA染色についての下側パネル〕を示す一連の顕微鏡写真である。図6Cは、心肥大の評価（assessement）：脛骨長さで正規化した心臓重量（左）、心筋細胞の平均断面積（中央）および％線維症（右）（各群n=5-7）を描く一連のグラフである。図6Dは、心エコー図であり：代表的なMモード画像（左）、短縮率（FS）（中央）および拡張末期での左室腔サイズ（left ventricular chamber size at end-diastole 、LV-EDD）（右）（各群においてn=5-7）。図6Eは侵襲的圧力-容量ループ解析からの包括的心機能評価を示す三つのグラフ：前負荷の軽減（左）、収縮性パラメータ（dPdtmax）（中央）および緩和パラメータ（タウ）（右）の間の代表的ループ（各群においてn=5-7）である。図6Fは、既存の心肥大における遅延RR処理を示すグラフである。前（TAC1Wでの前処理）および後（TAC3Wにおける後処理）の処置で、エコー心電図からの算出した左室質量である（左のパネル）（各群においてn=5-7）。ビヒクルまたはRR処理による2wksに対する左室質量増加（ΔLV質量増加）（中央パネル）、および断面積（CSA）分析による末端筋細胞サイズ（右）*P<0.05である。
【図７】シャム（偽）およびインビボでのTAC処理心臓（10日、21日、および63日目）におけるアポトーシスの、RT-PCRによって測定するような、p53アップレギュレートモジュレーター（PUMA）の発現を描く、*P<0.05。
【図８】図8Aは、GAPDH染色（図4Aでの代表的な染色）の定量結果のグラフである。核での平均強度の比をGAPDHのための細胞質ゾルの場合に対して示す。約30の細胞を各群で分析した。図8Bおよび8Cは、RRを伴うか、または伴わずにET1に曝露された培養ラット心筋細胞のスルホン酸（硫酸）化（s）GAPDH染色（B）を描く、および定量結果のグラフ（8D）である。図8Eは、RRの存在下または不存在下でET1に対する細胞肥大応答を描き、Ad-GAPDH-WTでか、またはAD-GAPDH-K227でトランスフェクトした細胞における細胞面積によって評価する、*p<0.05。
【図９】図9Aおよび9Bは、BNPおよびβ-MHC（9A）およびカルシウムハンドリングタンパク質（9B）の心筋mRNA発現レベルのグラフであり、各群においてn=4を有する。補足的に図9Cは、心拍数、ピーク左室圧（LVP）、駆出率（EF）およびパワーマックス（出力最大）インデックス（PMI）を含むPVループ解析からのヘモダイナミック（血行力学）パラメータを描く一連のグラフである。後者の二つのパラメータは、心収縮機能についての尺度である。心拍数または後負荷（ピークLVP）はRR化合物によって影響を受けなかったことが注目される。各群においてn=5-7。図9Dは代表的な心臓の断面（左上パネル）および、ビヒクルまたはRR化合物を用いて2週間処置後のWGA染色（左下パネル）、およびBNPの心筋mRNA発現（右の棒グラフ）である。各群においてn=4、*p<0.05。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明を詳細に説明する。
一以上の実施形態によれば、本発明は、新規化合物、および、哺乳動物に、薬物デプレニルの構造的類似体である様々な化合物が含まれる製薬上組成物を施すことを含む、哺乳動物の細胞におけるGAPDH-Siah1結合の抑制およびp300の活性化の方法を提供する。
【００２２】
一以上の実施形態において、本発明は、a）
【化９】
2015529206.tif 000011
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を、哺乳動物に施すことが含まれる哺乳動物の細胞におけるGAPDH-Siah1の抑制のための方法を提供する。
【００２３】
ある実施形態によれば、本発明は、
【化１０】
2015529206.tif 000012
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬における使用のために、そして最も好ましくは、対象の細胞におけるGAPDH-Siah1の抑制用の薬としての使用のために有効な量において薬学的に許容可能な担体を含む製薬上組成物を提供する。
【００２４】
別の実施形態によれば、上述の製薬上組成物は好適には、対象の細胞においてp300 HATおよび/または筋細胞エンハンサー因子2（MEF）の抑制用の薬として使用することができる。
【００２５】
さらなる実施形態によれば、上述の製薬上組成物は好適には、対象の器官においてストレス誘導障害の抑制のための薬に用いることができる。
【００２６】
若干の実施形態では、対象の器官におけるストレス誘導障害は、たとえば、脳または心臓のような器官にあることができる。
【００２７】
「処置する」または「処置」は、任意の状態または疾患の少なくとも一つの症状を治癒すること、ならびに改善することを含む、この技術分野で認識される用語である。処置には、疾患、障害および/または状態にかかり易いが、まだそれを有すると診断されていない動物で発生する疾患、障害または状態の可能性を減少させること；疾患、障害または状態を抑制すること、たとえば、その進行を妨げること；および疾患、障害または状態を軽減すること、たとえば、疾患の退行の何らかのレベルを引き起こすこと；疾患、障害または状態が抑制されること、たとえば、その進行が妨げられること；およびたとえ基礎となる病態生理が影響を受けず、または他の症状が同じレベルのままである場合でも、疾患、障害または状態が軽減されることを含む。
【００２８】
一以上の実施形態によれば、本発明の化合物および方法で処置することができる疾患または障害には、増加した酸化ストレスおよび増加したGAPDH-Siah1結合に誘導されるか、またはそれに関連する任意の疾患または障害が含まれる。一実施形態において、疾患には、たとえば、統合失調症、気分障害、自閉症および嗜癖（アディクション、耽溺）などのような主要な精神疾患が含まれる。
【００２９】
用語「治療上有効な量」は、投与される化合物または組成物の量を意味し、それは疾患、障害および/または状態を処置するために必要なものである。
【００３０】
「予防上」または「治療上」の処置は、技術的に認識されており、そしてそれには、宿主（ホスト）への一以上の対象組成物の施与が含まれる。それが望ましくない状態（たとえば、宿主動物の疾患または他の望ましくない状態）の臨床兆候前に施与される場合、そのときその処置は予防的であり、すなわち、それは望ましくない状態の発症に対して宿主を保護するが、その一方、それが望ましくない状態の兆候後に施与される場合、その処置は治療的である（すなわち、それは、既存の望ましくない状態またはその副作用を減少、改善、または安定化させることが意図される）。
【００３１】
用語「脂肪族」はこの技術分野で認識される用語であり、そしてそれには、線状、分枝状、および環状のアルカン、アルケンまたはアルキンが含まれる。一定の実施形態では、本発明における脂肪族基は、線状または分枝状であり、そして1から-約20個の炭素原子、できれば、約2ないし約10個の炭素原子を有する。
【００３２】
用語「アルキル」は技術的に認識され、そしてそれには、直鎖アルキル基、分枝鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、およびシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基が含まれる。一定の実施形態において、直鎖または分枝鎖アルキルは、そのバックボーン（主鎖）において約30個またはそれより少ない（30以下の）炭素原子を有し（たとえば、直鎖についてC1-C30、分枝鎖についてC3-C30）、そしてあるいはまた、約20個以下の炭素原子を有する。同様に、シクロアルキルはそれらの環構造において約3から約10個までの炭素原子を有し、そしてあるいはまた、環構造において約5、6または7個の炭素を有する。
【００３３】
さらに、用語「アルキル」（または「低級アルキル」）には、「非置換アルキル」および「置換アルキル」の双方ともが含まれ、その後者は炭化水素主鎖の一以上の炭素上の水素を置換する置換基を有するアルキル部分（アルキルモイエティー）に言及する。そのような置換基には、たとえば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（たとえば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミルまたはアシルなどのようなもの）、チオカルボニル（たとえば、チオエステル、チオアセタート、またはチオホルマートなどのようなもの）、アルコキシル、ホスホリル、ホスホナート、ホスフィナート、アミノ、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルファート、スルホナート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分が含まれてもよい。適切な場合には、炭化水素鎖上で置換された部分が、それら自体で置換されてもよいことをこの技術における熟練者（当業者）は理解するであろう。たとえば、置換アルキルの置換基には、アミノ、アジド、イミノ、アミド、ホスホリル（ホスホナートおよびホスフィナートを含む）、スルホニル（スルファート、スルホンアミド、スルファモイルおよびスルホナートを含む）、およびシリル基、ならびに、エーテル、アルキルチオ、カルボニル（ケトン、アルデヒド、カルボキシラート、およびエステルを含む）、--CF3、--CNおよび同類のものなどの置換および非置換の形態が含まれうる。模範的な置換アルキルを以下に説明する。シクロアルキルは、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノアルキル、カルボニル置換アルキル、--CF3、--CNおよび同類のものなどでさらに置換されていてもよい。
【００３４】
置換基は、たとえば、アミノアルケニル（aminoalkenyls）、アミノアルキニル、アミドアルケニル、イミノアルケニル、イミノアルキニル、チオアルケニル、チオアルキニル、カルボニル置換アルケニルまたはアルキニル類を生成するようにアルケニルおよびアルキニル基に対してなされてもよい。
【００３５】
ここに記載される組成物に関して、担体（キャリヤー）は、慣習的に使用されるいずれかのものとすることができ、そして、たとえば、溶解性および活性化合物（群、複数を含む意味で用いる）との反応性の欠如などのような物理化学的考慮によってだけ、および施与（管理）のルートによって制限される。ここに記載の担体、たとえば、ビヒクル、アジュバント、賦形剤、および希釈剤は、当業者によく知られており、そして公衆にとって難なく入手可能である。担体は、活性薬剤（群）に対して化学的に不活性であり、そして使用条件下で有害な副作用または毒性をほとんどまたは全く有さないものであることが好ましい。担体の例には、溶解性担体、たとえば、生理学的に許容可能であることができる既知の緩衝剤のようなもの（たとえば、リン酸緩衝液）、ならびに固形組成物、たとえば、ソリッドステート（固体状態）担体またはラテックスビーズなどのようなものが含まれる。
【００３６】
ここに使用される担体または希釈剤は、固形調剤物のための固形担体または希釈剤、液状調剤物のための液状担体または希釈剤、またはそれらの混合物であってよい。
【００３７】
固形担体または希釈剤には、制限されないが、ガム、澱粉（スターチ）（たとえば、コーンスターチ、アルファ化でんぷん）、糖（たとえば、ラクトース、マンニトール、スクロース、デキストロース）、セルロース系物質（たとえば、微結晶性セルロース）、アクリラート（たとえば、ポリメチルアクリラート）、炭酸カルシウム、酸化マグネシウム、タルク、またはそれらの混合物が含まれる。
【００３８】
液状調剤物について、薬学的に許容可能な担体は、たとえば、水性または非水性の溶液、または懸濁物であってもよい。非水性溶媒の例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、およびたとえば、オレイン酸エチルなどのような注射可能な有機エステルがある。水性担体には、たとえば、セーリーン（塩類溶液）および緩衝化媒体を含め、水、アルコール性/水性の溶液、シクロデキストリン、エマルジョンまたは懸濁液が含まれる。
【００３９】
非経口ビヒクル（皮下、静脈内、動脈内、または筋肉内注射用）には、たとえば、塩化ナトリウム溶液、リンゲル（Ringer’s）デキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル（lactated Ringer’s）、および固定油が含まれる。非経口施与に適した調剤物には、たとえば、水性および非水性の、等張性滅菌注射溶液が含まれ、それには、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および調剤物を、意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質類、および、水性および非水性の滅菌懸濁物が含まれ、それらには、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および防腐剤が含まれることがある。
【００４０】
上述の製薬上組成物に加えて、本発明の組成物が、たとえば、シクロデキストリン包接複合体、またはリポソームなどのような封入複合体として調剤することができることは、この技術での熟練の者によって、理解されるであろう。
【００４１】
静脈内ビヒクルには、たとえば、流体および栄養補給剤（nutrient replenishers）、電解質補充剤で、たとえば、リンゲルデキストロース、および同類のものなどに基づくものなどのようなものが含まれる。例は、たとえば、水および油などのような、滅菌液体であり、界面活性剤および他の薬学的に許容可能なアジュバントの添加を伴い、または伴わない。概して、水、塩類溶液、水性デキストロースおよび関連する糖溶液類、およびグリコールで、たとえば、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール類などのようなものは、特に注射可能な溶液のための好適な液状担体である。
【００４２】
一以上の好ましい実施形態において、上記の製薬上組成物、本発明の組成物の施与の経路は、経口である。
【００４３】
加えて、ある実施形態において、上述の化合物またはその誘導体を含む組成物にはさらに、バインダー（結合剤）（例は、アカシア、コーンスターチ、ゼラチン、カルボマー、エチルセルロース、グアールガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン）、崩壊剤（例は、コーンスターチ、ジャガイモでんぷん、アルギン酸、二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グアールガム、デンプングリコール酸ナトリウム）、緩衝剤（例は、トリス-HCl、アセタート、ホスファート）の様々なpHおよびイオン強度のもの、添加剤で、たとえば、アルブミンまたはゼラチンなどのような、表面への吸収を防止するためのもの、洗浄剤〔例は、Tween（ツイーン）20、ツイーン80、Pluronic（プルロニック）F68、胆汁酸塩〕、プロテアーゼインヒビター、界面活性剤（例は、ラウリル硫酸ナトリウム）、透過促進剤、可溶化剤〔例は、クレモフォール、グリセロール、ポリエチレングリセロール、ベンザルコニウム塩化物（benzlkonium chloride）、安息香酸ベンジル、シクロデキストリン、ソルビタンエステル、ステアリン酸〕、抗酸化剤〔例は、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム（二亜硫酸ナトリウム）、ブチル化ヒドロキシアニソール〕、安定剤（例は、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、粘度増加剤（viscosity increasing agents）（例は、カルボマー、コロイド状二酸化ケイ素、エチルセルロース、グアールガム）、甘味料（sweetners）（例は、アスパルテーム、クエン酸）、保存剤（例は、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、滑沢剤（例は、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、流動助剤（例は、コロイド状二酸化ケイ素）、可塑剤（例は、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル）、乳化剤（例は、カルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム）、ポリマーコーティング（例は、ポロキサマーまたはポロキサミン）、コーティングおよびフィルムの形成剤（例は、エチルセルロース、アクリラート、ポリメタクリラート）、および/またはアジュバントが含まれうる。
【００４４】
担体の選定は、部分的には、投与される特定の組成物によって、ならびに組成物を施与するために使用される特定の方法によって決定される。したがって、本発明の製薬上組成物の様々な好適な調剤物が存在する。非経口、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内および腹腔内（interperitoneal）の施与のための以下の調剤物が模範的なものであり、そして決して制限されない。一よりも多くの経路を、本発明の組成物を施与するために使用することができ、そして一定の場合には、特定の経路が別の経路よりも迅速かつ効果的な反応を提供することができる。
【００４５】
注射可能な調剤物は本発明に従うものである。注射可能な組成物のための効果的な薬学的な担体の必要条件は、この技術における通常の知識の者によく知られている〔たとえば、Pharmaceutics and Pharmacy Practice（薬学および薬局実務）、J.B. Lippincott Company（リッピンコット・カンパニー）、Philadelphia（フィラデルフィア）、PA（ペンシルベニア州）、Banker（バンカー）およびChalmers（チャルマーズ）編、ページ238-250（1982）、およびASHP Handbook on Injectable Drugs（注射薬のASHPハンドブック）、Trissel（トリッセル）、第15版、ページ622-630（2009）参照〕。
【００４６】
ここで使用されるように、用語「処置」、ならびに、それからステミング（由来）する語には、原因分析（診断）および予防、ならびに、障害寛解性処置（disorder remitative treatment）が含まれる。
【００４７】
一実施形態では、用語「施与」は、本発明の化合物が対象、好ましくは、増殖性疾患の処置を受ける対象体に導入されることを意味し、およびそれらの化合物は、一以上の疾患関連細胞またはインビボの細胞集団と接触することになる。
【００４８】
ここで規定されるように、別の実施形態において、用語「接触」は、本発明の一以上の化合物が、試験管、フラスコ、組織培養、チップ、アレイ、プレート、マイクロプレート、毛細管、および同類のものなどにおいて、少なくとも一つの癌（ガン）細胞および適切な酵素または試薬を有するサンプル（試料）に導入されることを意味し、そして少なくとも一つの化合物の癌細胞への結合および取り込みを可能にするのに十分な温度および時間でインキュベートされる。サンプルを化合物と接触させるための方法、および他の特異的結合成分は、当業者に知られており、そして実行されるべきアッセイプロトコルの種類に応じて選定することができる。インキュベーション方法もまた標準的であり、そして当業者に知られている。
【００４９】
ここで使用されるように、用語「対象」は、任意の哺乳動物に言及し、制限されるものではないが、たとえば、マウスおよびハムスターなどのような、齧歯目の種類の哺乳動物、およびたとえば、ラビットなどのような、ウサギ目（Logomorpha）の種類の哺乳動物が含まれる。哺乳動物は、猫科の動物（キャット類）および犬科の動物（ドッグ類）を含む、食肉目の種類からのものであることが好ましい。さらに、哺乳動物は、牛亜科の動物（カウ類）および猪科の動物（ピッグ類）を含む、偶蹄目の種類からのもの、または馬科の動物（ホース類）を含む、奇蹄目（Perssodactyla）の種類からのものであることがより一層好ましい。哺乳動物は、霊長目の動物、オマキザル科（Ceboids）、またはシモイド（Simoids）（モンキー類）の、または類人猿類（ヒトおよびエイプ類）のものであるのが最も好ましい。特に好ましい哺乳動物はヒトである。
【００５０】
治療上採用される本発明の組成物またはその誘導物の有効量は、たとえば、治療上および処置の目的、施与の経路、齢、状態、および処置または療法を受ける対象の体重、および対象に提供される補助またはアジュバント療法に応じて依存するであろう。したがって、開業者（特に医師）が最適な治療効果を得るために、必要に応じて、施与の投薬量を滴定し、そして施与の経路を修飾することが必要であり、そしてルーチンであろう。典型的な一日の投薬量は、上記の要因に応じて、約0.01mg/kgから最大で約100mg/kgまでまたはそれよりも多く、好ましくは、約0.1から約10mg/kg/日までの範囲であるかもしれない。典型的には、投薬量が望ましい効果を達成するのに至るまで、臨床医は抗体を施与するであろう。この療法の進行は慣習的なアッセイによって楽に監視される。若干の実施形態において、本発明の化合物の投薬量は約0.1mg/kg/日から約10mg/kg/日まで、好ましくは、約0.2mg/kg/日ないし約0.5mg/kg/日である。好適な実施形態において、投薬量は約0.25mg/kg/日である。
【００５１】
上記の組成物またはその誘導物の施与のための投薬量範囲は、疾患の徴候が改善、または酵素活性または結合が抑制されるという望ましい効果をもたらすのに十分な大きさのものである。投薬量は、たとえば、不必要な交差反応、アナフィラキシー反応、および同類のものなどのような有害な副作用を引き起こすようなほど大きくなってはならない。概して、投薬量は、ペイシェントの齢、状態、性および疾患の程度によって変動し、そしてこの技術における熟練の者によって定めることができる。投薬量は、任意の合併症の事象において個々の医師によって調整することができる。
【００５２】
ある実施形態によれば、本発明は、a）
【化１１】
2015529206.tif 000013
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものとしての化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を、哺乳動物に施すことが含まれる、哺乳動物の細胞におけるp300 HATおよび/またはMEFの抑制のための方法を提供する。
【００５３】
さらなる実施形態によれば、本発明は、a）
【化１２】
2015529206.tif 000014
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものとしての化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を、哺乳動物に施すことが含まれる、哺乳動物の脳におけるストレス誘導障害の抑制のための方法を提供する。
【００５４】
また別の実施形態によれば、本発明は、a）
【化１３】
2015529206.tif 000015
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものとしての化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を、哺乳動物に施すこと、およびb）少なくとも一の追加の治療上の組成物を哺乳動物にさらに施すことが含まれる、哺乳動物の脳におけるストレス誘導障害の抑制のための方法を提供する。
【００５５】
さらなる実施形態によれば、本発明は、a）
【化１４】
2015529206.tif 000016
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものとしての化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を、哺乳動物に施すことが含まれる、哺乳動物の器官におけるストレス誘導障害の抑制のための方法を提供する。
【００５６】
さらなる実施形態によれば、本発明は、a）
【化１５】
2015529206.tif 000017
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を、哺乳動物に施すこと、およびb）少なくとも一の追加の治療上の組成物を哺乳動物にさらに施すことが含まれる、哺乳動物の脳におけるストレス誘導障害の抑制のための方法を提供する。
【００５７】
さらに別の実施形態によれば、本発明は、a）
【化１６】
2015529206.tif 000018
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものの化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を、哺乳動物に施すこと、およびb）少なくとも一の追加の治療上の組成物を哺乳動物にさらに施すことが含まれる、哺乳動物の器官におけるストレス誘導障害の抑制のための方法を提供する。
【００５８】
ここで用いられるように、用語「ストレス誘導障害」には、生物がその恒常性を乱す環境に置かれたときに発生するものが含まれる。たとえば、病気、疾患、生命を脅かす事象、飢餓、疲労、などのようなもののイベント（事象）は、すべてが生物に対してストレッサー（ストレス要因）であると理解される。
【００５９】
一以上の実施形態によれば、本発明の化合物および方法によって処置されるストレス誘導障害は、GAPDH-Siah1結合に関連し、およびまた増加したp300発現とも関連するものである。
【００６０】
他の例において、たとえば、統合失調症、気分障害、自閉症およびアディクション（嗜癖）などのような主要な精神疾患の病因は、部分的には、たとえば、思春期の脳を含む脳のストレッサーの結果であると考えられてきている。
【００６１】
DN-DISC1マウスでは、酸化ストレスの顕著なレベルは、前頭前野（前頭前皮質）において検出されたが、線条体はそうでなかった。これらのマウスはまた、Siah1によるグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ結合、酸化ストレスへの曝露下で活性化されるタンパク質-タンパク質相互作用のより一層多くの量を示した。DN-DISC1マウスでは、行動の欠陥が、逆転学習および報酬の切り下げパラダイム（reward devaluation paradigms）を使用する適応行動の認知制御のために明確に定義されたテストにおいて観察された。たとえば、DN-DISC1のマウスは、スリーチャンバーソーシャルノベルティーテストにおけるファミリアーマウスに対してストレンジャーマウスについて選択（優先）性がないことによって示されるように、損なわれた社会認識が含まれる種々の行動異常（障害）を表示する〔Johnson（ジョンソン）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA（プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシーズ・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ）、2013；110(30)：12462-7〕。このように、一以上の実施形態に従い、用語「ストレス誘導障害」には、たとえば、気分障害、統合失調症、自閉症、および嗜癖を含む、主要な精神疾患の多くの種類が含まれる。それゆえ、この技術における通常の技量の者は、ここにおいて提供される組成物および方法が、上述したように、脳のストレス誘導障害を処置するのに有用であることができることを理解するであろう。
【００６２】
ストレッサーには、たとえば、心臓、および脳を含め、器官に対して有害な影響を有することがあるコルチゾールおよびエピネフリンを誘導することができる。ストレッサーは、様々な物理的な症状、-たとえば、喘息、背痛、不整脈、疲労、頭痛、過敏性腸症候群、潰瘍を引き起こさせることがあり、および免疫系を抑止する。ストレス誘導障害にはまた、ここで使用されるように、心臓肥大を含め、心臓病が含まれる。このように、この技術における通常の技量の者は、ここで提供される組成物および方法が、心臓および他の器官におけるストレス誘導障害を処置するのに有用でありえることを理解するであろう。
【００６３】
別の実施形態によれば、本発明は、a）
【化１７】
2015529206.tif 000019
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものとしての化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を、哺乳動物に施すことが含まれる、心筋症を患う哺乳動物の心臓細胞における心肥大の抑制のための方法を提供する。
【００６４】
ここで用いられるように、用語「心肥大」または「病的な肥大」は左心室と右心室を含む心臓のチャンバー（室）のサイズの減少をもたらす心臓の筋肉（心筋）の肥厚を意味する。心臓肥大の普通の原因は、高血圧（高血圧症）および心臓弁狭窄である。
【００６５】
ここで用いられるように、用語「心筋症」は、心臓の筋肉の疾患および/または何らかの理由による心筋の機能の測定可能な悪化に言及する。これらの疾患には、多くの原因、徴候および症状、および処置がある。心筋症が悪化するにつれて、心臓がより一層弱くなる。心臓は、血液を、体を介して圧送すること、および通常の電気的なリズムを維持することができなくなる。このことにより、心不全または不整脈と呼ばれる不規則な心拍につながる可能性がある。次には、心不全は、流体を、肺、足首、足、脚、または腹部に蓄積させることになりうる。
【００６６】
さらなる実施形態によれば、本発明は、a）
【化１８】
2015529206.tif 000020
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものとしての化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物の治療上有効な量を、哺乳動物に施すこと、およびb）少なくとも一の追加の治療上の組成物を哺乳動物にさらに施すことが含まれる、心筋症を患う哺乳動物の心臓細胞における心肥大の抑制のための方法を提供する。
【００６７】
ここで使用されるように、用語「薬学的に活性な化合物」または「治療上活性な化合物」または「治療上組成物」は、疾患または状態に苦しむ対象における疾患または状態の処置または調整のために有用な化合物または組成物を意味する。薬学的に活性な化合物の例には、疾患の兆候（disease indications）の処置のための当技術分野で既知の任意の薬物を含むことができる。好ましい実施形態において、追加の治療上組成物は、心臓の病気のために適応されるものである。そのような化合物の例には、制限されないが、α-ブロッカー交感神経遮断薬剤、交感神経遮断薬剤、交感神経様作用薬剤、およびアドレナリンアゴニスト交感神経様作用薬（アドレナリン作動薬交感神経興奮薬剤）；たとえば、抗狭心症薬剤（antianginals）、抗狭心症薬剤、カルシウムチャネルブロッカー抗狭心症薬剤（calcium-channel blocker antianginals）、硝酸（ナイトラート）抗狭心症薬剤、抗不整脈薬剤、強心配糖体抗不整脈薬剤、クラスI抗不整脈薬剤、クラス抗不整脈薬剤、クラス抗不整脈薬剤、クラスIV抗不整脈薬剤、抗高血圧薬剤（降圧薬剤）、α-ブロッカー抗高血圧薬剤、アンジオテンシン変換酵素インヒビター（抑制薬剤）（ACEインヒビター）抗高血圧薬剤、β-ブロッカー抗高血圧薬剤、カルシウムチャネルブロッカー抗高血圧薬剤、中枢作用性（中枢作用型、central-acting）アドレナリン抗高血圧薬剤（adrenergic antihypertensives）、抗高血圧利尿薬剤、末梢血管拡張抗高血圧薬剤、抗高脂血症（抗脂質異常症）薬剤（antilipemics）、胆汁酸金属イオン封鎖抗高脂血症薬剤（bile acid sequestrant antilipemics）、還元酵素インヒビター抗高脂血症薬剤、循環作用薬剤（変力物質、循環作動薬、強心剤、inotropes）、強心配糖体循環作用薬剤、血栓溶解薬剤、アンジオテンシンII受容体ブロッカー、ジゴキシン、ジギトキシン、利尿薬剤、およびアルドステロンアンタゴニストなどのような、心・血管作用薬が含まれる。
【００６８】
別の好ましい実施形態では、追加の治療上組成物は、たとえば、鎮静薬剤（また精神安定薬剤、催眠薬剤、および/または抗不安薬剤とも呼ばれる）、抗うつ薬剤、およびバルビツール酸系催眠鎮静薬剤などのような、ストレスの軽減の治療に適応されるものである。若干の実施形態において、治療上組成物には、たとえば、抗うつ薬剤、複素環系抗うつ薬剤、モノアミンオキシダーゼインヒビター（モノアミン酸化酵素抑制薬剤）、選択的セロトニン再取込みインヒビター、三環系抗うつ薬、抗躁病薬（剤）（anti-manics）、抗精神病薬、フェノチアジン（系）抗精神病薬剤（フェノチアジン系精神安定薬剤）、不安緩解薬剤（抗不安薬剤）、鎮静薬剤、および催眠薬剤、バルビツール酸塩鎮静薬剤（バルビツール系鎮静薬剤）および催眠薬剤、ベンゾジアゼピン系抗不安薬剤、鎮静薬剤、および催眠薬剤、および精神興奮薬剤（精神刺激薬剤、神経興奮薬剤、覚醒剤）などのような向精神薬剤が含まれることができる。
【００６９】
ある実施形態によれば、本発明は、
【化１９】
2015529206.tif 000021
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものとしての化合物を提供する。
【００７０】
一実施形態によれば、本発明は、
【化２０】
2015529206.tif 000022
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものとしての化合物を提供する。
【００７１】
別の実施形態において、本発明は、化合物が
【化２１】
2015529206.tif 000023
((1R,3R)-1,3-ジメチル-2-プロパルギル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン)
である、式Iの化合物を提供する。
【００７２】
さらなる実施形態において、本発明はまた、
【化２２】
2015529206.tif 000024
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8、アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができるものとしての化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む製薬上組成物を提供する。
【００７３】
この技術における通常の技量の者は、上述の化合物および組成物が、一以上の追加の治療上の薬剤と合わせて、本発明の化合物および組成物と同時にか、またはプレ施与またはポスト施与のいずれかの特定の時間帯の間のいずれかで施与することができることを理解するであろう。
【実施例】
【００７４】
試薬：特に断りのない限り、すべての試薬はシグマ社（Sigma）から購入した。
【００７５】
心臓の動物モデル：すべてのプロトコルは、ジョンズホプキンス大学のアニマル・ケア・アンド・ユース・コミッティー（動物実験委員会）によって承認された。TACは、以前に説明したようにC57/BL6マウス〔Jackson Laboratory（ジャクソン研究所）〕において行った〔Nat. Med.（ネイチャー・メディシン）、11、214-222（2005）、J. Clin. Invest.（ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション）、119、408-420（2009）、J. Am. Coll. Cardiol.（ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー）、56、2021-2030（2010）〕。
【００７６】
DN-DISC1マウスは、αCaMKIIプロモーターの発現制御下に推定されるドミナントネガティブC末端切断DISC1を発現する。ホモ接合DN-DISC1マウスは、ジョンズホプキンス医科大学でのホモ接合体の同系交配が続くヘテロ接合体の体系的な交配によって作出された。本研究では唯一のホモ接合の雄性を使用した。3ないし6月の齢で、マウスを行動試験のために、the Neurogenetics and Behavior Center（神経遺伝と行動センター）、ジョンズホプキンス大学に移した。それらは、12時間の明/暗サイクル（7:00AMないし7:00PMに点灯）下にケージに3または4匹を収容し、そして絶食に先立ち25および35グラムの間で検量した。
【００７７】
生理学的分析、組織学的分析：心エコー法および圧-容量ループの研究を前述のように行った〔Takimoto（タキモト）ら、Nat. Med.、11、214-222（2005）〕。10％ホルマリン固定した心臓サンプルを、パラフィン中に包埋し、切片をつくり、そして筋細胞サイズ（WGA染色）および線維症〔Masson Trichrome（マッソン・トリクローム）染色〕について前述のように染色した〔Zhang（チャン）ら、J. Am. Coll. Cardiol.、56、2021-2030（2010）〕。分離された成体心筋細胞またはラット新生仔の心筋細胞を、前述のように、50％メタノール/50％アセトンで固定し、そしてGAPDH〔Millipore（ミリポア社製）〕、スルホン化GAPDHまたはHAに対する抗体で染色した。
【００７８】
ラット新生仔の心筋細胞培養：ラット新生仔心筋細胞（RNCM）は1-2日齢のスプラーグドーリー（Sprague-Dawley）ラット、および0.05μMエンドセリン-1で、1nMのRR化合物を伴ってか、または伴わずに48時間刺激した培養細胞から分離した。タンパク質合成は[3H]ロイシンの取り込みによって評価した。野生型GAPDHおよびK227A変異GAPDHのアデノウイルストランスフェクションは、前述のように、10-30 moi（感染効率）で行った。
【００７９】
HAT活性アッセイ、MEF2活性アッセイ、MAO活性アッセイ、GAPDHアッセイ：p300 HAT活性は、商業上入手可能なキット〔Biovision（バイオビジョン）〕を用い、p300抗体による免疫沈降を使用して測定した〔Circulation（サーキュレーション）118、934-946（2008）〕。MEF2活性はルシフェラーゼレポーターアッセイ〔Panomics（パノミクス社）〕を用いて測定した。MAO活性アッセイは市販のキット〔Peninsula Laboratory（ペニンシュラ・ラボラトリー社）〕を用いて測定した。GAPDH活性は、以前に記載されているように測定した〔Nat. Cell Biol.（ネイチャー・セル・バイオロジー）、7、665-674（2005）〕。PUMA mRNA発現は、LightCycler instrument（ライトサイクラー機器）〔Roche Applied Science（ロシュ・アプライド・サイエンス）〕にてSYBRグリーン蛍光を用いてリアルタイムRT-PCRによって決定した。目的の遺伝子の発現は、ハウスキーピング遺伝子グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）で除算し、そしてコントロールの誘導倍率として表した。
【００８０】
タンパク質およびRNA解析：合計RNAを、トライゾール（Trizol）〔Molecular Research Center, Inc（モレキュラー・リサーチ・センター、インコーポレーション）、Cincinnati（シンシナティ）、Ohio（オハイオ州）〕を用いて細胞または左室心筋から分離し、そしてTaqMan（タックマン）プローブ〔Applied Biosystems（アプライド・バイオシステムズ社）、Foster City（フォスターシティー）、Calif（カリフォルニア州）〕でのリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（PCR）によって分析した。結果をGAPDHまたは18S RNAに対して標準化した。細胞溶解物または核抽出物を、培養された筋細胞または心室組織から得、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分離し、免疫ブロット法に供し、そして前述のように化学発光（化学ルミネセンス）によって画像化した。
【００８１】
酸化ストレスの評価：二つの方法が前頭前皮質において、および線条体において酸化ストレスを評価するために使用された。大抵の測定のために、ドットブロット手順を、酸化されたタンパク質から生じるカルボニル基を免疫検出する（immunodetects）OxyBlotTM〔オキシブロット（商品名）〕Protein Oxidation Detection Kit（タンパク質酸化検出キット）（ミリポア社製S7150）と共に使用した。この実験は、若い成体DN-DISC1マウス（n =7）および野生型コントロールマウス（n=8）を用いて行った。グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）-Siah1相互作用にて特異的に見られるように、沈殿による免疫沈降を、抗Siah1抗体〔Santa Cruz（サンタクルーズ）、SC-5506）〕および抗GAPDH抗体〔AbD Serotec（AbDセロテック社）〕を用いてイムノブロットを行った。この実験は、若い成体DN-DISC1マウス（n=5）およびC57コントロールマウス（n=3）で行い、若い成体DN-DISC1マウス（n=5）、およびC57コントロールマウス（n=3）を用いて行った。
【００８２】
ソーシャルノベルティテストの測定：WtおよびDN-DISC1マウスを、RR化合物またはコントロールで処置し、生後35日目で開始し〔0.25mg/kg、i.p.（腹腔内）/日〕、そして成体期においてスリーチャンバーソーシャルインターラクションテスト中、Johnsonら、前掲に記載のように継続した。
【００８３】
統計解析：データを平均±SEMとして示す。複数のグループの比較は、一元配置分散分析により行い、次いで手段の比較のためのボンフェローニの手順（Bonferroni procedure）を続けた。
例1
【００８４】
脳の大脳皮質における酸化ストレスに関連する病態。
【００８５】
以前の行動の所見は、前頭葉前部の回路構成（prefrontal circuitry）に対する機能障害を示唆し、そしてDN-DISC1マウスにおける内側前頭前皮質の介在ニューロンでのパルブアルブミンの免疫反応性の低下と一致する。前頭葉前部の回路構成に対する病理学の本発明者らの評価を拡大するために、本発明者らはDN-DISC1のマウスでの前頭葉前部のネットワークに影響を与える酸化ストレスの存在を調べる方法を使用した。まず、本発明者らは、タンパク質の不可逆的な酸化的修飾が定量されたタンパク質のカルボニルアッセイを使用して肉眼的測定を検討した。ここでは、本発明者らは、野生型コントロールと比較してDN-DISC1マウスでの酸化的修飾における増加傾向を観察した（図1A；p=0.07）。酸化ストレスによって誘発される起こりうる下流のシグナル伝達に対処するために、本発明者らは、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）に焦点を当てた。過剰酸化ストレスへの曝露下では、GAPDHは、特定のシステイン残基、C150にて翻訳後修飾され、それはGAPDHが強い核局在化シグナルを有するSiah1と結合するのを可能にする。次に、GAPDH-Siah1複合体は、それがエピジェネティック（後成的）な、および転写の機構に影響を与える可能性がある核にトランスロケート（移動）する。したがって、GAPDH-Siah1タンパク質相互作用のレベルは、酸化ストレスによって誘発されるこのシグナル伝達カスケードの活性化をモニターするために利用することができる。ほとんど10倍のGAPDH-Siah1結合のアップレギュレーションがコントロールと比較してDN-DISC1マウスにおいて観察された（図1B；p<0.01）。注目すべきことに、酸化修飾およびGAPDH-Siah1結合におけるこれらの変化は、前頭前皮質に局在したが、線条体では観察されなかった（図1C、D；p’s>0.05）。
例2
【００８６】
本発明の化合物を用いたマウスモデルにおける精神疾患の治療のための予備的な結果。
【００８７】
本発明者らは、先に、DN-DISC1マウスが、スリーチャンバーソーシャルノベルティテストにおいてファミリアーマウスに対してのストレンジャーマウスについての選択性がないことによって実証されるように、損なわれた社会的認識を含むさまざまな行動異常を表示することを示した（Johnsonら、前出）。本発明者らは、DN-DISC1マウスをRRで処置し、生後35日目（0.25mg/kg、i.p./日）で開始し、そして成体期においてスリーソーシャルインターラクションテスト中に継続した。RR処理は、これらの条件の下で社会的欠損を改善することが見出された（図2）。
例3
【００８８】
心肥大の基礎となる病理を理解するために、横方向の大動脈狭窄（TAC）によって誘発される慢性圧負荷を、確立された実験動物モデルとして使用する。心肥大は緊縮後7ないし10日で明らかであり、それは9週間において不可逆的な機能欠陥をもたらす。本研究では、TACモデルを採用し、そして核のp300への病的なストレスシグナルの重要なコンベアとしてGAPDHを識別し、インビボ（生体内）で重大な恒常性の破壊がもたらされた。
【００８９】
心臓肥大の恒常性の制御を解明するために、p300のHAT活性がインビボでのTACの心臓において変化したかどうかを決定し、そして活性は緊縮が実行された10日後に劇的に増加し（TAC 10D）、それが63日後に再試験したときに高いままであることがわかった（図3A）。
例4
【００９０】
本発明者らは以前に、核の移動GAPDHが、少なくとも、たとえば、RAW264.7細胞などのような培養細胞において、p300を活性化することができたことを報告したように、TACの心臓におけるGAPDHの細胞内局在性を調べた。GAPDHの核内蓄積は、処理後10および63日にTAC処理心臓から分離された心筋細胞において免疫染色することにより明らかであったが、シャム（偽）手術で心臓から分離されたそれらの筋細胞には存在しなかった（図3B）。この観察結果を確認するために、本発明者らは、心臓組織における核のGAPDHを生化学的細胞下分画により定量的に評価した（図3C）。核画分におけるGAPDHは、両方の時点で、TAC処理心臓で増加したが、シャム（模擬）心臓ではそうではなく、その一方、細胞質ゾル画分でのGAPDHはすべての条件において変動しなかった。これらの結果は、TACがGAPDHの核移行を誘発し、次いでp300の活性化が続き、それが心肥大のための基本的なメカニズムであるという本発明のものと一致する。このことはさらに、PUMAの発現が緊縮後10日目にTAC処理心臓において変化しなかったという事実によって支持され（図7）、TAC心臓において核GAPDHが関与するメカニズムは、脳内のものとは異なることが示される。
例5
【００９１】
TACがGAPDHの核移行を誘発し、およびp300を活性化させるかどうかをテストするために、GAPDH核移行を干渉するのに特定のツールが必要とされる。GAPDH-Siah1結合および核GAPDHカスケードがブロックされたデプレニルのいくつかの構造的類似体は、以前にスクリーニングされた（データは示さず）。最も強力な化合物の一つは、RRであった（図4A）。精製した組換えGAPDHおよびGST-Siah1タンパク質を用いたインビトロ結合実験の間、RRはナノモル濃度で相互作用をブロックした（図4B）。
例6
【００９２】
核GAPDHカスケードを選択的にブロックする化合物を識別するための主要な課題は、モノアミンオキシダーゼ（MAOs）のそれらの潜在的な抑制であり、それはデプレニルが元々含む。したがって、RRが培養筋細胞においてMAO-A/Bを抑制し、そして劇的なコントラストがRRおよびデプレニルの間で観察されたかどうかを調べた。0.1nMおよび105nMの濃度の広い範囲の濃度でRRによってMAOsの抑制は認められなかった（図4C）。また、RRは、1nMでは心筋細胞におけるGAPDH解糖活性に影響を示さず（図4D）、その用量はその後の研究で採用した。要約すれば、RRが、強力にGAPDH-Siah1タンパク質相互作用をブロックすることができる化合物であり、そして高い特異性を有し、MAO活性およびGAPDH解糖活性に影響を与えないことがわかった。
例7
【００９３】
心肥大におけるGAPDH-p300シグナル伝達についての役割をテストするために、GqアゴニストET1をトリガーとして使用した。ET1は、NADPDオキシダーゼを活性化することにより、酸化ストレスを誘発することが報告されており、そしてストレスは、TACモデルでのように、圧力負荷肥大を含め、心臓肥大応答に対する中心的な一因として知られている。したがって、心筋細胞を約48時間0.05μMでET1に曝露し、そしてGAPDHシグナル伝達に対する影響を調べた。GADPH-Siah1結合はET1施与後に増強され、およびRRの同時投与によって正規化した。免疫蛍光細胞染色および生化学的分画の両方は、GAPDHの核移行がET1に対応して発生したことを示した（図5A、B；図8A）。1nMでのRR化合物による同時処理は、核移行をブロックし増大した（図5B、C；図8A）。転位と一致して、スルホン化GAPDHの蓄積およびp300アセチル化の増大は（p300 HAT活性を反映し）、核で観察され、その双方はET1曝露の際にRRでの同時処理によってブロックされた（図8B、C）。
例8
【００９４】
増大されたp300活性は、筋細胞エンハンサー因子2（MEF2）、不適応（mal-adaptive）心臓肥大のマスター転写因子の活性化を介して心臓肥大応答につながると報告されている。したがって、p300のアシル化、およびMEF2の活性を、肥大応答のためのいくつかの結果判定法（outcome measure）と一緒に試験した。ET1で処理した心筋細胞において、p300のアシル化の増大（p300 HAT活性を反映）、MEF2の増大活性、および細胞表面積の増加、3H-ロイシンの取り込みによってアッセイされるタンパク質合成、およびBタイプナトリウム利尿ペプチド（BNP）の発現が観察された（図5D、E）。非常に重要なことは、これらの変化のすべてが1nMでのRR化合物によって明らかにブロックされ（図5D、E）、その一方、PUMA発現は変化しなかった（図8D）。これらの結果は、GAPDH-p300-MEF2カスケードが、PUMA媒介細胞死とは無関係であり、心臓肥大応答に重要な役割を果たしていることの薬理学的証拠を提供する。
例9
【００９５】
さらに、このメカニズムを検証するために、分子干渉も検討した。GAPDHの核移行は、Siah1の相互作用によって媒介され、そしてGAPDHの一つの重要なリジン残基（ヒトでK227、ラットでK225）がタンパク質相互作用の原因である。このリジン残基の置換を有する変異体GAPDHの発現は、Siah1との内因性GAPDH結合、およびこのカスケードにおけるドミナントネガティブ（優性阻害）としての機能を妨げる。それゆえ、このドミナントネガティブなヒトGAPDH-K227がET1に曝露下で心筋細胞における細胞質にとどまっていることが最初に確認された（図5F）。薬理学的介入と一致して、このドミナントネガティブなGAPDHの発現は、BNP発現の増加を含む、心臓肥大応答のためのMEF2活性の増加（図5G）および結果判定法類をブロックした（図5H；図8E）。
例10
【００９６】
本発明では、インビボでの核GAPDHカスケードの重要性が示された。このような理解と共に、たとえば、心肥大を含めて、ストレス誘導障害の処置の新規な治療上の方法が提供され、それらには、緊急、かつ、非常に重要な医学的ニーズがある。TACモデルは、p300 HAT活性の増強およびGAPDHの核移行が実証されたことを示す（図3）。RR化合物の毎日の施与（0.25mg/kg/日i.p.）は、緊縮の時に、同時に開始され、投与10日目の後に測定したとき、p300 HAT活性および核GAPDHのレベルを劇的に低下させた（TAC10）（図6A）。
【００９７】
心筋細胞を用いた研究から得られた見解と一致し（図5）、薬物施与は心肥大リモデリング（心肥大構造変化）を改善し、それは、生体内での心臓重量、心筋細胞の細胞サイズ、および線維症によって評価された（図6B、C）。病理学的な遺伝子発現プロファイルはまた、著しく改善または正規化され、そしてそれには、胎仔遺伝子の再発現（図9A）およびカルシウムハンドリング（処理）タンパク質のダウンレギュレーション（図9B）が含まれた。最も重要なことには、これらの抗リモデリング効果もまた改善された心臓機能に関連する。心エコーによる心機能は、RR化合物が短縮率（％FS、収縮機能を反映した尺度）および左心室拡張（LV-EDD、左室拡張末期径寸法）においてTAC誘発性の減少を著しく抑制したことを示した（図6D）。侵襲性血行力学的研究はまた、圧力容量ループ解析を用いて実行し、持続的な圧力過負荷ストレスにもかかわらず、心機能の改善が実証された〔図6E左の代表的なループのトレース図（透写図）、右のパラメータ棒グラフ；図9C〕。双方の収縮機能（dPdtmx）および拡張期弛緩特性（タウ）は、RR処理での心臓においてビヒクル処理のものよりも著しく良好であった（図6E）。これらの結果は、RRの化合物が核GAPDHカスケード、およびストレス誘発性障害において、および特に、インビボでの心臓肥大および機能において結果として起こる変化をブロックするのに有効であることを示す。
例11
【００９８】
ほとんどの臨床設定において、投薬および処置は、病理学的変化が少なくともある程度発生した後に初めて開始される。このように、本発明でのRR処理が橋渡し（トランスレーション）のための可能性を有するかどうかを証明するために、心エコー図によって推定された左心室（LV）質量がシャムコントロールに対して50％よりも高い増加（約120-130mg）を示したとき、圧力荷重の誘導後1週間で開始されたRR処理の有効性を試験した（図6F、左）。RR処理の約二週間は持続的な圧負荷からのさらなるLV質量増加を大幅にブロックした（図6F、中央）。末端事後評価（Terminal postmortem assessment）はRR処理がより一層小さい心筋細胞のサイズをもたらしたことを明らかにした（図6F、右）。これらの観察結果と一致して、有意な改善はまた、ビヒクル群と比較してRR処理群における心臓胎仔遺伝子の発現プロファイル（BNP）において見出された（図9D）。これらの結果は、本発明のRR化合物および方法が確立された心臓肥大の処置において高い可能性を有することを示唆する。
【００９９】
ここに引用する、刊行物、特許出願、および特許を含む、すべての参考文献は、ここに参照することにより、まるで、各文献が、参照によって個々に、かつ、具体的に組み入れられるように示され、そして、その全体がここに記載されているかのように、同じ程度まで組み込まれる。
【０１００】
用語「ある一つ（a）」および「母音の前の不定冠詞（an）」および「その（the）」の使用、本発明を説明する関連においての類似の指示（特に以下の請求の範囲の文脈において）は、ここに別段の指示があるか、または明らかに文脈と矛盾しない限り、単数および複数の双方をカバーすると解釈されるべきである。「包含する」、「有する」、「含む」、および「含有する」という用語は、特に断りのない限り、オープンエンドの用語（すなわち、「含む」の意味であるが、これらに制限されない」）として解釈されるべきである。ここでは、値の範囲の列挙は、本明細書において他に示されない限り、単に、範囲内に入るそれぞれ別個の値を個々に言及する簡便な方法として役立つことを意図するだけであり、そして各個別の値は、まるで、それが個別に本明細書に列挙されているかのように明細書に組み込まれる。本明細書において他に示され、またはそうでなければ文脈によって明らかに矛盾しない限り、ここに記載のすべての方法は、任意の適切な順序で行うことができる。ここに提供する任意の、およびすべての例、または模範的な言葉の使用、（例は、「のような」）は、単に、本発明をより一層良好に明らかにするためだけを意図し、特に断らない限り、本発明の範囲に制限を与えるものではない。明細書中の何らの言葉づかいも、本発明の実行に不可欠なものとして何らかの請求しない要素を示すものと解釈されるべきではない。
【０１０１】
本発明の好ましい実施形態は、本発明を実施するために本発明者に知られている最良の形態を含め、ここに記載されている。これらの好ましい実施形態の変形は、前述の説明を読めばこの技術における通常の技量の者に明らかになるであろう。本発明者らは、熟練者が適宜にそのような変形を採用することを予期し、そして本発明者らは本発明がここに具体的に記載したもの以外の方法で実施されることを予定する。したがって、この発明には、準拠法が許容するように、ここに添付の請求の範囲に記載された主題のすべての修飾および等価物が含まれる。また、本明細書において別段の指示がない限り、またはそうでなければ文脈に明らかに矛盾しない限り、すべての可能な変形における上記要素の任意の組合せは本発明によって包含される。
【図１】
2015529206.tif 000035
【図２】
2015529206.tif 000036
【図３】
2015529206.tif 000037
【図４】
2015529206.tif 000038
【図５】
2015529206.tif 000039
【図６】
2015529206.tif 000040
【図７】
2015529206.tif 000041
【図８】
2015529206.tif 000042
【図９】
2015529206.tif 000043
【手続補正書】
【提出日】平成27年6月4日(2015.6.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2015529206.tif 000044
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物、および薬における使用のために、そして最も好ましくは、対象の細胞におけるGAPDH-Siah1の抑制用の薬としての使用のために有効な量において薬学的に許容可能な担体を含む、製薬上組成物。
【請求項２】
【化２】
2015529206.tif 000045
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物、および薬における使用のために、そして最も好ましくは、対象の細胞におけるp300 HATおよび/または筋細胞エンハンサー因子2（MEF）の抑制用の薬としての使用のために有効な量において薬学的に許容可能な担体を含む、製薬上組成物。
【請求項３】
【化３】
2015529206.tif 000046
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物、および薬における使用のために、そして最も好ましくは、対象の器官におけるストレス誘導障害の抑制用の薬としての使用のために有効な量において薬学的に許容可能な担体を含む、製薬上組成物。
【請求項４】
器官は脳である、請求項3の製薬上組成物。
【請求項５】
ストレス誘導障害は、気分障害、統合失調症、自閉症および嗜癖からなる群より選ばれる、請求項3または4のいずれかの製薬上組成物。
【請求項６】
組成物は少なくとも一種の追加の治療上組成物を含む、請求項3ないし5のいずれかの製薬上組成物。
【請求項７】
少なくとも一種の追加の治療上組成物は：抗うつ剤；複素環系抗うつ剤；モノアミンオキシダーゼインヒビター；選択的セロトニン再取込みインヒビター；三環系の抗うつ剤、抗躁病剤、抗精神病剤；フェノチアジンの抗精神病剤、不安緩解剤、鎮静剤、および催眠剤；バルビツール酸塩の鎮静剤および催眠剤；ベンゾジアゼピン系の抗不安剤、鎮静剤、および催眠剤；および精神興奮剤のような向精神剤からなる群より選ばれる、請求項6の製薬上組成物。
【請求項８】
器官は心臓である、請求項3の製薬上組成物。
【請求項９】
ストレス誘導障害は心肥大または心筋症からなる群より選ばれる、請求項3または8のいずれかの製薬上組成物。
【請求項１０】
組成物は少なくとも一種の追加の治療上組成物を含む、請求項8または9のいずれかの製薬上組成物。
【請求項１１】
少なくとも一種の追加の治療上組成物は、αブロッカー交感神経遮断剤、交感神経遮断剤、交感神経興奮剤、およびアドレナリンアゴニスト交感神経様作用薬剤；心血管系薬剤で、抗狭心症剤、カルシウムチャネルブロッカー抗狭心症剤、硝酸抗狭心症剤、抗不整脈剤、強心配糖体抗不整脈剤、クラスI抗不整脈剤、クラスII抗不整脈剤、クラスIII抗不整脈剤、クラスIV抗不整脈剤、抗高血圧剤、αブロッカー抗高血圧剤、アンジオテンシン変換酵素インヒビター（ACEインヒビター）抗高血圧剤、βブロッカー抗高血圧剤、カルシウムチャネルブロッカー抗高血圧剤、中枢作用性アドレナリン性抗抗高血圧剤、抗高血圧利尿剤、末梢血管拡張抗高血圧剤、抗高脂血症剤、胆汁酸金属イオン封鎖抗高脂血症剤、還元酵素インヒビター抗高脂血症剤、循環作用剤、強心配糖体循環作用剤、血栓溶解剤、アンジオテンシンII受容体ブロッカー、ジゴキシン、ジギトキシン、利尿剤、およびアルドステロンアンタゴニストのようなものからなる群より選ばれる、請求項6の製薬上組成物。
【請求項１２】
化合物は、
【化４】
2015529206.tif 000047
からなる群より選ばれる、請求項1ないし11のいずれかの製薬上組成物。
【請求項１３】
化合物は、
【化５】
2015529206.tif 000048
((1R,3R)-1,3-ジメチル-2-プロパルギル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン)
である、請求項1ないし12のいずれかの製薬上組成物。
【請求項１４】
【化６】
2015529206.tif 000049
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物。
【請求項１５】
化合物は、
【化７】
2015529206.tif 000050
((1R,3R)-1,3-ジメチル-2-プロパルギル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン)
である、式Iの化合物。
【請求項１６】
【化８】
2015529206.tif 000051
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、およびH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物。
【請求項１７】
化合物は、
【化９】
2015529206.tif 000052
((1S,3S)-1,3-ジメチル-2-プロパルギル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン)
である、式IIの化合物。
【請求項１８】
【化１０】
2015529206.tif 000053
式中、R1ないしR３は、同じか、または異なることができ、そしてH、OH、C2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、C2-C8アルキニル、置換されたC2-C8アルキル、C2-C8アルケニル、およびC2-C8アルキニルを含むことができる化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む、製薬上組成物。
【国際調査報告】
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