(57)【要約】本発明は、１種以上のリン脂質（コレステロールありもしくはなし）を含む脂質ケーキ混合物と、眼用ステロイド、その誘導体、その薬学的に受容可能な塩もしくはそのプロドラッグを含むステロイド溶液との組み合わせを含む、薬学的組成物に関し、ここで上記組成物中のリン脂質の総量は、５０μｌの薬学的組成物あたり約０．１μｍｏｌから約２．５μｍｏｌ未満であり、上記眼用ステロイドの副作用は低減される。上記薬学的組成物は、好ましくは、眼の疾患を処置するために眼に関する経路によって投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の組み合わせ：
（ａ）リン脂質もしくはリン脂質の混合物を含む脂質ケーキ混合物；および
（ｂ）眼用ステロイド、その誘導体、その薬学的に受容可能な塩、もしくはそのプロドラッグの有効量を含むステロイド溶液；
を含む、ステロイドの眼への送達に適した薬学的組成物であって、
ここで該組成物中のリン脂質の総量は、５０μｌの薬学的組成物あたり約０．１μｍｏｌから約２．５μｍｏｌ未満であり、該組成物の副作用プロフィールは、５０μｌの薬学的組成物あたり少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する組成物の副作用と比較して低減される、薬学的組成物。
【請求項２】
前記脂質ケーキ混合物は、コレステロールをさらに含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記眼用ステロイドは、水溶性ステロイドである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記眼用ステロイドは、リン酸デキサメタゾンナトリウムである、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記リン酸デキサメタゾンナトリウムの用量は、約０．６〜約０．７ｍｇのデキサメタゾンである、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記脂質ケーキ混合物は、凍結防止剤をさらに含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記凍結防止剤は、マンニトールである、請求項６に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記脂質ケーキ混合物は、緩衝化剤をさらに含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記緩衝化剤は、リン酸二水素ナトリウム二水和物およびリン酸水素二ナトリウム無水物を含む、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記脂質ケーキ混合物は、ＤＯＰＣおよびＤＯＰＧを含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
眼の疾患を処置する方法であって、該方法は、処置の必要な被験体に、有効量の請求項１に記載の薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１２】
前記眼の疾患は、後眼部に制限される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記眼の疾患は、黄斑浮腫である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記眼の疾患は、ブドウ膜炎である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記眼の疾患は、網膜静脈分枝閉塞症である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記眼の疾患は、網膜中心静脈閉塞症である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記眼の疾患は、加齢黄斑変性である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記薬学的組成物は、硝子体内注射によって投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記脂質ケーキ混合物は、コレステロールをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、ステロイドの副作用を低減するための、脂質ケーキとステロイド溶液との組み合わせを含む薬学的組成物、および眼の疾患を処置することにおけるそれらの使用法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
黄斑浮腫は、中心視野の喪失を生じ、糖尿病網膜症の臨床的発現である。それは、網膜の毛細血管変化に起因し、その病因は、ＶＥＧＦ依存性に関連するのみならず、コルチコステロイドによって抑制され得る他の炎症性サイトカインおよび血管新生サイトカインのレベルにも関連する（Ｓｏｈｎ  ＨＪ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｆｏｒ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍａｃｕｌａｒ  ｅｄｅｍａ．  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｏｃｔ  ２０１１；  １５２（４）：６８６−９４）。
【０００３】
硝子体内コルチコステロイド注射は、レーザー光凝固術、眼周囲ステロイドおよび全身ステロイドもしくはカルボニックアンヒドラーゼインヒビターのような古典的処置に反応しない慢性黄斑浮腫のうちのいくつかの症例に関する処置選択肢であり得る。
【０００４】
硝子体内コルチコステロイド注射はまた、ブドウ膜炎を処置し、網膜静脈分枝閉塞症もしくは網膜中心静脈閉塞症を有する患者の視力を改善するために使用され得る。しかし、硝子体内注射の反復には、眼において最適かつ有効なコルチコステロイド濃度を維持することが必要とされ、このことは、感染性眼内炎、網膜剥離、外傷性白内障のような合併症と関連し、眼内圧（ＩＯＰ）を亢進させる。一研究から、硝子体内ステロイド注射後のＩＯＰ亢進の発生率は、１ヶ月で５７．６９％、３カ月および６カ月でそれぞれ７５％および４７．０５％であり、白内障の進行は上記患者のうちの２２．７２％において見出されたことが示されている（Ｇａｒｃｉａ  Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍａｃｕｌａｒ  ｅｄｅｍａ．  Ａｒｃｈ  Ｓｏｃ  Ｅｓｐ  Ｏｆｔａｌｍｏｌ  ２０１１  Ｏｃｔ；  ８６（１０）：３１４−３１９）。
上記で概説された不十分さに鑑みて、副作用を低減させた硝子体内ステロイド注射が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｏｈｎ  ＨＪ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｆｏｒ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍａｃｕｌａｒ  ｅｄｅｍａ．  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｏｃｔ  ２０１１；  １５２（４）：６８６−９４
【非特許文献２】Ｇａｒｃｉａ  Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍａｃｕｌａｒ  ｅｄｅｍａ．  Ａｒｃｈ  Ｓｏｃ  Ｅｓｐ  Ｏｆｔａｌｍｏｌ  ２０１１  Ｏｃｔ；  ８６（１０）：３１４−３１９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、リン脂質もしくはリン脂質の混合物（コレステロールありもしくはなし）を含む脂質ケーキ混合物と；眼用ステロイド（ｏｃｕｌａｒ  ｓｔｅｒｏｉｄ）、その誘導体、その薬学的に受容可能な塩もしくはそのプロドラッグを含むステロイド溶液との組み合わせを含む薬学的組成物に関し；ここで上記リン脂質の総量は、５０μｌの上記薬学的組成物あたり約２．５μｍｏｌ未満であり、５０μｌの薬学的組成物あたり少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する組成物と比較して、上記眼用ステロイド、上記誘導体、上記薬学的に受容可能な塩もしくは上記プロドラッグの副作用を低下させる。
【０００７】
上記薬学的組成物は、上記脂質ケーキとステロイド溶液（ここで上記ステロイド溶液は、眼用ステロイド、その誘導体、その薬学的に受容可能な塩、もしくはそのプロドラッグを含む）とを混合することによって調製され得る。
【０００８】
本発明はまた、処置の必要な被験体において眼の疾患を処置する方法に関する。上記方法は、上記被験体に、本明細書に記載される薬学的組成物を投与し、それによって、上記被験体における症状を低下させる工程を包含する。本発明は、眼への送達によって、後眼部に制限される眼の疾患を処置するために特に有用である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
（発明の詳細な説明）
（定義）
上記でおよび本開示全体を通して使用されるように、以下の用語は、別段示されなければ、以下の意味を有することが理解されるものとする。
【００１０】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別の意味が明確に示されなければ、複数形への参照を含む。
【００１１】
本明細書で使用される場合、用語「約」とは、量、時間（ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｕｒａｔｉｏｎ）などのような測定可能な値に言及する場合、別段特定されなければ、変動がステロイドの副作用を低減させるために適切であるように、特定された値から±１０％、好ましくは、±５％、より好ましくは、±１％、およびさらにより好ましくは、±０．１％の変動を包含することが意味される。本明細書で使用される場合、用語「約」とは、範囲に言及される場合、他に特定されなければ、変動がステロイドの副作用を低減させるために適切であるように、上記範囲の差分内で、特定された値から±１０％、好ましくは、±５％、より好ましくは、±１％、およびさらにより好ましくは、±０．１％の変動を包含することが意味される。
【００１２】
用語「リポソーム」とは、本明細書で使用される場合、水相を被包している同心状に並んだ脂質二重層から構成される小胞、または小さなもしくは大きな単一ラメラ小胞を意味する。
【００１３】
「有効量」とは、本明細書で使用される場合、眼の疾患の症状もしくは徴候（例えば、ぼやけ、色あせた視野（ｗａｓｈｅｄ  ｏｕｔ  ｖｉｓｉｏｎ））を低減させるために十分な上記薬学的組成物の用量をいう。
【００１４】
用語「処置する」、「処置される」、もしくは「処置」とは、本明細書で使用される場合、防止的（例えば、予防的）、一時抑制的、および治癒的な使用もしくは結果を含む。
【００１５】
用語「被験体」とは、眼の疾患を有する脊椎動物を包含する。好ましくは、上記被験体は、温血動物（哺乳動物（好ましくは、ヒト）を含む）である。
【００１６】
本明細書で使用される場合、用語「プロドラッグ」とは、投与後に、ある種の化学的プロセスもしくは生理学的プロセスを介してインビボで生物学的に活性な化合物を放出する前駆化合物（例えば、生理学的ｐＨに達した際に、または上記生物学的に活性な化合物に変換される酵素作用を介したプロドラッグ）をいう。プロドラッグ自体は、所望の生物学的活性を欠いていても、有していても、どちらでもよい。
【００１７】
本発明の眼用ステロイドの「薬学的に受容可能な塩」とは、塩基と形成された酸性ステロイドの塩、すなわち、塩基付加塩（例えば、アルカリ金属およびアルカリ土類金属の塩（例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム）、および４級アンモニウム塩（例えば、アンモニウム、トリメチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、およびトリス−（ヒドロキシメチル）−メチル−アンモニウム塩））である。
【００１８】
同様に、酸付加塩（例えば、無機酸、有機カルボン酸および有機スルホン酸（例えば、塩酸、メタンスルホン酸、マレイン酸）の）はまた、塩基性眼用ステロイドに提供されることも考えられる。
【００１９】
一局面において、本発明は、リン脂質もしくはリン脂質の混合物（コレステロールありもしくはなし）を含む脂質ケーキ混合物と；眼用ステロイド、その誘導体、その薬学的に受容可能な塩、もしくはそのプロドラッグを再蒸留水（ｄｄＨ２Ｏ）もしくは適切な緩衝液中に含むステロイド溶液との組み合わせを含む薬学的組成物を提供し、ここで上記組成物中のリン脂質の総量は、５０μｌの薬学的組成物あたり約２．５μｍｏｌ未満であり、５０μｌの薬学的組成物あたり少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する組成物と比較して、上記ステロイド、上記誘導体、上記薬学的に受容可能な塩もしくは上記プロドラッグの副作用を低減する。本発明の別の局面は、有効量の本明細書で記載される薬学的組成物を処置の必要な被験体に投与し、それによって、上記被験体における眼の疾患の症状および徴候が低減されることを含む、眼の疾患を処置する方法に関する。
【００２０】
（脂質ケーキ）
本発明における脂質ケーキは、ケーキ、フィルムもしくは粉末の状態にある固体脂質混合物に言及する。
【００２１】
一実施形態において、上記リン脂質もしくはリン脂質の混合物（コレステロールありもしくはなし）は、脂質ケーキへとさらに加工処理される前に、リポソームへと予備形成される。
【００２２】
別の実施形態において、上記リン脂質もしくはリン脂質の混合物（コレステロールありもしくはなし）は、脂質ケーキへとさらに加工処理される前に、リポソームへと予備形成されない。
【００２３】
上記リポソームは、ナノサイズにされ、粒子形成成分および薬剤運搬成分を含む。上記粒子形成成分は、被包された脂質障壁を形成する。
【００２４】
上記脂質ケーキは、単層もしくは二層構造を形成するかまたは組み込まれるかのいずれかであり得る種々の脂質から調製され得る。本発明において使用される脂質は、１種以上のリン脂質（コレステロールありもしくはなし）を含む。本発明において使用されるリン脂質の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、卵由来ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、卵由来ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）、卵由来ホスファチジルエタノールアミン（ＥＰＥ）、卵由来ホスファチジルセリン（ＥＰＳ）、卵由来ホスファチジン酸、（ＥＰＡ）、卵由来ホスファチジルイノシトール（ＥＰＩ）、ダイズ由来ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、ダイズ由来ホスファチジルグリセロール（ＳＰＧ）、ダイズ由来ホスファチジルエタノールアミン（ＳＰＥ）、ダイズ由来ホスファチジルセリン（ＳＰＳ）、ダイズ由来ホスファチジン酸（ＳＰＡ）、ダイズ由来ホスファチジルイノシトール（ＳＰＩ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ヘキサデシルホスホコリン（ＨＥＰＣ）、ダイズ由来水素化ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、パルミトイルステアロイルホスファチジルグリセロール（ＰＳＰＧ）、モノオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＯＰＥ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ポリエチレングリコールジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＯＰＡ）、ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（ＤＰＰＩ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルイノシトール（ＤＯＰＩ）、ジミリストイルホスファチジルイノシトール（ＤＭＰＩ）、ジステアロイルホスファチジルイノシトール（ＤＳＰＩ）、およびこれらの混合物。特に好ましいリン脂質は、ＤＯＰＣおよびＤＯＰＧからなる群より選択される。
【００２５】
一実施形態において、上記脂質ケーキ混合物は、モル比  ２９．５％〜９０％：  ３％〜３７．５％：  １０％〜３３％において、ＤＯＰＣ、ＤＯＰＧおよびコレステロールを含む。別の実施形態において、上記脂質ケーキ混合物は、約１５％から約３０％未満のモル比のコレステロールを含む。別の実施形態において、上記脂質ケーキ混合物は、約１８〜約２８％  モル比のコレステロールを含む。さらに別の実施形態において、上記脂質ケーキ混合物は、約２０〜約２５％  モル比のコレステロールを含む。
【００２６】
一実施形態において、上記粒子形成成分は、脂肪酸もカチオン性脂質（すなわち、生理学的ｐＨにおいて正味の正電荷を有する脂質）も含まない。
【００２７】
別の実施形態において、上記粒子形成成分は、リン脂質分子に結合された、非常に水和した可撓性の中性ポリマーの長い鎖を有する親水性ポリマーを含む。いかなる理論にも拘束されないが、上記親水性ポリマーは、上記リポソームを安定化し、インビボでより長い循環時間を生じると考えられる。上記親水性ポリマーの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：分子量  約２，０００〜約５，０００ダルトンを有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、ガングリオシドＧＭ１、ポリシアル酸、ポリ乳酸（ポリラクチドともいわれる）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドともいわれる）、ポリ乳酸ポリグリコール酸（ａｐｏｌｙｌａｃｔｉｃｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン（ｐｏｌｙｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｉｎｅ）、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾリン、ポリアスパルタミド（ｐｏｌｙａｓｐａｒｔａｍｉｄｅ）、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルメチルエーテル、ポリヒドロキシエチルアクリレート、誘導体化セルロース（例えば、ヒドロキシメチルセルロースもしくはヒドロキシエチルセルロース）、および合成ポリマー。
【００２８】
上記粒子形成成分は、上記リポソームを標的分子を有する標的細胞に特異的に結合させるために、標的化部分として作用する、抗体もしくはペプチドの脂質結合体をさらに含み得る。上記標的分子の例としては、上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ）、血管内皮増殖因子レセプター（ＶＥＧＦ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、およびｅｒｂＢ−２／ｎｅｕ（ＨＥＲ２）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
本発明において調製されるリポソームは、小胞を調製するために使用される従来技術によって精製され得る。これら技術としては、以下が挙げられる：エーテル注射法（Ｄｅａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （１９７８）  ３０８：  ２５０）、界面活性剤法（Ｂｒｕｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ  （１９７６）  ４５５：  ３２２）、凍結融解法（Ｐｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ，  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  （１９８１）  ２１２：  １８６）、逆相エバポレーション法（Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ．  （１９８０）  ６０１  ：  ５５９  ７１）、超音波処理法（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （１９６９）  ８：  ３４４）、エタノール注射法（Ｋｒｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （１９７７）  １６：  ３９３２）、押し出し法（Ｈｏｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ  （１９８５）  ８１２：５５  ６５）、フレンチプレス法（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  （１９７９）  ９９：  ２１０）およびＳｚｏｋａ，  Ｆ．，  Ｊｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ９：４６７  （１９８０）に詳述される方法。上記プロセスの全ては、リポソーム小胞の形成のための基本的技術であり、これらプロセスは、本明細書に参考として援用される。滅菌後、上記予備形成されたリポソームは、容器の中に無菌的に入れられ、次いで、凍結乾燥されて、粉末もしくはケーキを形成する。本発明における予備形成されたリポソームを含む上記脂質ケーキ混合物は、凍結乾燥されるので、上記脂質ケーキの調製のために少なくとも１種の凍結防止剤が必要とされる。一実施形態において、上記脂質ケーキ混合物は、１種以上の緩衝化剤をさらに含む。
【００３０】
上記凍結防止剤としては、マンニトール、グリセロール、デキストロース、スクロース、および／もしくはトレハロースが挙げられるが、これらに限定されない。１つの好ましい凍結防止剤は、マンニトールである。
【００３１】
上記緩衝化剤としては、リン酸二水素ナトリウム二水和物およびリン酸水素二ナトリウム無水物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
上記脂質ケーキがリポソームへと予備形成されない脂質を含む実施形態において、上記脂質ケーキは、適切な有機溶媒（エタノール、メタノール、ｔ−ブチルアルコール、エーテルおよびクロロホルムが挙げられるが、これらに限定されない）中に溶解することによって調製され得、加熱、真空エバポレーション、窒素エバポレーション、凍結乾燥、もしくは溶媒除去の他の従来の手段によって乾燥され得る。
【００３３】
本発明を支援する脂質ケーキ調製の具体例は、以下に記載される。
【００３４】
（ステロイド溶液）
本発明におけるステロイド溶液は、眼用ステロイド、その誘導体、その薬学的に受容可能な塩、もしくはそのプロドラッグから構成される。
【００３５】
本発明において有用な眼用ステロイドは、任意の天然に存在するステロイドホルモン、合成ステロイドおよびそれらの誘導体を含む。上記眼用ステロイドの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：コルチゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、チキソコルトールピバレート、フルオシノロン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロン、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ハルシノニド、ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム（ＤＳＰ）、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン−１７−ブチレート、ヒドロコルチゾン−１７−バレレート、アクロメタゾンジプロピオネート（ａｃｌｏｍｅｔａｓｏｎｅ  ｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、ベタメタゾンバレレート、ベタメタゾンジプロピオネート、プレドニカルベート、クロベタゾン−１７−ブチレート、クロベタゾン−１７−プロピオネート、フルオコルトロンカプロエート、フルオコルトロンピバレート、フルプレドニデンアセテート、ジフルプレドナート、ロテプレドノール、フルオロメトロン、メドリゾン  リメキソロン、ベクロメタゾン、クロプレドノール、コルチバゾール、デオキシコルトン、ジフルオロコルトロン、フルクロロロン、フルオロコルチゾン、フルメタゾン、フルニソリド、フルオロコルトロン、フルランドレノロン、メプレソニゾン、メチルプレソニゾロンおよびパラメタゾン。好ましい実施形態において、上記眼用ステロイドは、水溶性ステロイドである。より好ましい実施形態において、上記眼用ステロイドは、ＤＳＰである。
【００３６】
上記眼用ステロイドの薬学的に受容可能な塩は、非毒性の無機塩基もしくは有機塩基から形成された非毒性の塩を含む。例えば、非毒性の塩は、無機塩基（例えば、アルカリ金属水酸化物もしくはアルカリ土類金属水酸化物、例えば、カリウム、ナトリウム、リチウム、カルシウム、もしくはマグネシウム）と；およびアミンなどのような有機塩基と、形成され得る。
【００３７】
上記眼用ステロイドの薬学的に受容可能な塩はまた、非毒性の無機酸もしくは有機酸から形成された非毒性の塩を含む。有機酸および無機酸の例は、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コール酸、パモ酸、粘液酸、Ｄ−グルタミン酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、ソルビン酸、安息香酸などである。
【００３８】
本発明のステロイド溶液は、ｄｄＨ２Ｏもしくは適切な緩衝液のいずれかの中でに調製され得る。
【００３９】
（薬学的組成物）
本発明の薬学的組成物は、ステロイドの眼への送達に適しており、リン脂質もしくはリン脂質の混合物（コレステロールありもしくはなし）を含む脂質ケーキ混合物と；眼用ステロイドもしくはその薬学的に受容可能な塩を含むステロイド溶液との組み合わせを含み；ここでリン脂質の総量は、５０μｌの薬学的組成物あたり約０．１μｍｏｌから約２．５μｍｏｌ未満であり、上記組成物の副作用は、５０μｌの薬学的組成物あたり少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する薬学的組成物の副作用と比較して、低減される。
【００４０】
一実施形態において、リン脂質の総量は、５０μｌの薬学的組成物あたり約０．５μｍｏｌから約２．０μｍｏｌ未満である。別の実施形態において、リン脂質の総量は、５０μｌの薬学的組成物あたり約１μｍｏｌから約１．５μｍｏｌ未満である。
【００４１】
一実施形態において、上記薬学的組成物は、上記活性成分のための少なくとも１種の薬学的に受容可能な賦形剤、希釈剤、ビヒクル、キャリア、媒体、保存剤、凍結防止剤もしくはこれらの組み合わせをさらに含む。
【００４２】
一実施形態において、本発明の薬学的組成物は、１種以上のリン脂質（コレステロールありもしくはなし）および１種以上の緩衝化剤を混合して、リポソームを形成し、上記リポソームを１種以上の凍結防止剤とともに凍結乾燥して、粉末形態にある脂質ケーキを形成することによって、調製される。上記粉末化脂質ケーキは、上記ステロイド溶液で再構成されて、水性の懸濁物を形成する。
【００４３】
別の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、１種以上のリン脂質（コレステロールありもしくはなし）を溶媒中で混合し、次いで、上記溶媒を除去して、脂質ケーキを形成することによって調製される。上記脂質ケーキは、上記ステロイド溶液で再構成されて、水性懸濁物を形成する。
【００４４】
好ましい実施形態において、上記薬学的組成物は、約０．６〜約０．７ｍｇのデキサメタゾンを含む。別の好ましい実施形態において、上記薬学的組成物は、約０．１９〜約０．５９ｍｇのフルオシノロンアセトニドを含む。さらに別の好ましい実施形態において、上記薬学的組成物は、約４ｍｇのトリアムシノロンアセトニドを含む。
【００４５】
本発明の薬学的組成物は、約１０％〜約５０％の脂質会合ＤＳＰもしくは約５０％〜約９０％に非会合ＤＳＰを含む。非会合ＤＳＰは、硝子液中で容易に除去され、半減期は、約３．５時間である一方で、上記脂質会合ＤＳＰは、硝子液中では容易に除去されず、上記薬学的組成物に依存して、数ヶ月間にわたって硝子液中にとどまり得る。
【００４６】
本発明の薬学的組成物は、眼の疾患に罹患している患者を処置するために使用され得る。好ましい実施形態において、上記眼の疾患は、後眼部に制限される。より好ましい実施形態において、上記眼の疾患は、以下のうちのいずれか１つである：黄斑浮腫、ブドウ膜炎、網膜静脈分枝閉塞症もしくは網膜中心静脈閉塞症、および加齢黄斑変性。
【００４７】
（眼の疾患を処置する方法）
本発明の別の局面は、被験体における眼の疾患を処置する方法であり、上記方法は、有効量の本明細書で記載されるとおりの薬学的組成物を処置の必要な被験体に投与し、それによって、上記被験体における眼の疾患の症状および徴候が低減されることを包含する。
【００４８】
上記薬学的組成物は、選択される投与様式に適した任意の形態へと構成され得る。一実施形態において、上記薬学的組成物は、眼への投与のために処方される。別の実施形態において、上記薬学的組成物は、硝子体内投与のために処方される。別の実施形態において、上記薬学的組成物は、局所投与のために処方される。
【００４９】
本発明の薬学的組成物の投与量は、上記実施形態に従って、当業者によって決定され得る。単位用量もしくは複数用量の形態が企図され、各々、特定の臨床状況において利点を提供する。本発明によれば、投与される上記薬学的組成物の実際の量は、処置される予定の被験体の年齢、体重、状態に従って変動し得、医療専門家の裁量に依存する。
【００５０】
以下の実施例は、本発明をさらに例証する。これら実施例は、本発明を例証することが意図されるにすぎず、限定すると解釈されるべきではない。
【実施例】
【００５１】
実施例１：脂質ケーキの調製
【００５２】
上記脂質ケーキを、エタノール注射法によって調製した。上記脂質（ＤＯＰＣ、ＤＯＰＧ（ともに、ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  ＪａｐａｎおよびＬｉｐｏｉｄ  ＬＬＣ，  ＵＳＡから市販されている）およびコレステロール（ＭＩＮＡＫＥＭ，  Ｆｒａｎｃｅ）から市販されている）を含む）を、モル比  ６７．５：７．５：２５において合わせ、フラスコの中で９９．９％  エタノール中、約４０℃において溶解させた。卓上型超音波処理バスを脂質溶解に使用した。
【００５３】
上記溶解した脂質溶液を、蠕動ポンプによって１００ｍＬ／分でリン酸ナトリウム溶液に添加し、上記２種の溶液を混合した。次いで、上記脂質混合物を、孔サイズ  ０．２μｍを有するポリカーボネート膜に６〜１０回通過させた。リポソーム（もしくは大きな単ラメラ小胞）を形成したところ、平均小胞直径は、約１２０〜１４０ｎｍであった（Ｍａｌｖｅｒｎ  ＺｅｔａＳｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ−９０で測定した）。
【００５４】
上記リポソーム混合物を透析し、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ  ２  Ｍｉｎｉ  Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｕｌｅ  Ｂｉｏｍａｘ−１００Ｃ（０．１ｍ２）を備えた接線流濾過システムによって濃縮し、マンニトールを添加して、最終マンニトール濃度  ２０ｍｇ／ｍＬを得た。次いで、上記リポソーム混合物を、０．２μｍ滅菌フィルタを使用して滅菌し、上記滅菌したリポソーム混合物を、バイアルの中へと無菌的に濾過し、次いで、凍結乾燥して脂質ケーキを形成した。上記脂質ケーキの主要な組成を、表１にまとめる。
【表１】
2015506983.tif 000002
【００５５】
実施例２：薬学的組成物の調製
上記薬学的組成物を、実施例１において凍結乾燥した脂質ケーキをＤＳＰ溶液で再構成してマルチラメラ小胞を形成することによって調製した。
【００５６】
０．６ｍｇのＤＳＰおよび５μｍｏｌ  リン脂質を有する５０μｌの薬学的組成物について、実施例１の凍結乾燥脂質ケーキの１バイアルを、０．３ｍｌのＤＳＰ溶液で再構成した。ここでＤＳＰの濃度は、１３．２ｍｇ／ｍｌである。
【００５７】
０．６ｍｇのＤＳＰおよび２．５μｍｏｌ  リン脂質を有する５０μｌの薬学的組成物については、実施例１の凍結乾燥脂質ケーキの１バイアルを、０．６ｍｌのＤＳＰ溶液で再構成した。ここでＤＳＰの濃度は、１３．２ｍｇ／ｍｌである。
【００５８】
実施例３．ステロイドの目に関する副作用を低減することにおける薬学的組成物のインビボ評価
眼用ステロイドの副作用を低減することにおける上記薬学的組成物の効果のインビボ評価を、Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄアルビノウサギ集団を使用して行った。２５羽の雄性ウサギ（年齢１０〜１２週齢の間）をこの研究に入れた。上記ウサギの平均体重は、ベースラインで２．３ｋｇであった。
【００５９】
ウサギには、この試験の間は常に、飲料水および飼料に自由にアクセスさせた。
【００６０】
研究設計は、以下のように５研究群を要した：
【００６１】
群１：  ５羽のウサギ各々に、予備形成されたリポソームおよび０．０５ｍｇのＤＳＰを含む５０μｌの上記薬学的組成物を与えた（ここで上記薬学的組成物の総リン脂質は、約５μｍｏｌであった）。
【００６２】
群２：  ５羽のウサギ各々に、予備形成されたリポソームおよび０．２ｍｇのリン酸デキサメタゾンナトリウム（ＤＳＰ）を含む５０μｌの上記薬学的組成物を与えた（ここで上記薬学的組成物の総リン脂質は、約５μｍｏｌであった）。
【００６３】
群３：  ５羽のウサギ各々に、予備形成されたリポソームおよび０．６ｍｇのＤＳＰを含む５０μｌの上記薬学的組成物を与えた（ここで上記薬学的組成物の総リン脂質は、約５μｍｏｌであった）。
【００６４】
群４：  ５羽のウサギを、硝子体内注射の前に麻酔下で１羽のウサギが死んだ以外は、この群に最初に割り当てた。よって、４羽のウサギ各々に、予備形成されたリポソームおよび０．６ｍｇのＤＳＰを含む５０μｌの上記薬学的組成物を与えた（ここで上記薬学的組成物の総リン脂質は、約２．５μｍｏｌであった）。
【００６５】
群５：  ５羽のウサギを、硝子体内注射の前に麻酔下で１羽のウサギが死んだ以外は、この群に最初に割り当てた。よって、４羽のウサギ各々に、予備形成されたリポソームおよび０．６ｍｇのＤＳＰを含む５０μｌの上記薬学的組成物を与えた（ここで上記薬学的組成物の総リン脂質は、約１．２５μｍｏｌであった）。
【００６６】
上記薬学的組成物を、硝子体内注射によって上記ウサギに投与した。各眼に投与されるＤＳＰの用量およびリン脂質の総量、注射した眼の数、上記薬学的組成物のＤＳＰ強度およびリン脂質濃度、ならびに各眼に投与される上記薬学的組成物の体積を、表２にまとめる。
【表２】
2015506983.tif 000003
【００６７】
１８０日間という試験期間の間に、上記ウサギを以下の結果について規則的な間隔で調べた：
・眼の有害な徴候（例えば、中程度の角膜浮腫、角膜混濁、角膜軟化（角膜に眼圧計を使用して、角膜弾性の喪失として定義される）、および結膜充血。上記ウサギの眼を、以下の日に調べた：０、４、７、１１、１４、２１、２５、２８、３２、３５、３９、４２、４６、４９、５３、５６、６０、６３、６７、７０、７４、７７、８２、８５、８９、９２、９６、９９、１０３、１０６、１１０、１１３、１１７、１２０、１２４、１２７、１３１、１３４、１３８、１４１、１４５、１４８、１５２、１５５、１５９、１６２、１６６、１６９、１７３、１７６および１８０。
・眼内圧（ＩＯＰ）亢進。上記ＩＯＰを、Ｒｅｉｃｈｅｒｔ  Ｔｏｎｏ−Ｐｅｎ（登録商標）  ＸＬ  Ｔｏｎｏｍｅｔｅｒ  （Ｒｅｉｃｈｅｒｔ，  Ｉｎｃ．  ３３６２  Ｗａｌｄｅｎ  Ａｖｅｎｕｅ，  Ｄｅｐｅｗ，  ＮＹ  １４０３４  ＵＳＡ）によって、上記薬学的組成物の硝子体内投与前および硝子体内投与後の以下の日に測定した：０、４、７、１１、１４、１８、２１、２５、２８、３２、３５、３９、４２、４６、４９、５３、５６、６０、６３、６７、７０、７４、７７、８２、８５、８９、９２、９６、９９、１０３、１０６、１１０、１１３、１１７、１２０、１２４、１２７、１３１、１３４、１３８、１４１、１４５、１４８、１５２、１５５、１５９、１６２、１６６、１６９、１７３、１７６および１８０。上記ＩＯＰが１５ｍｍＨｇより高かった場合、マウスがＩＯＰを亢進したと決定した。
・硝子体透明性の変化。リポソームは、硝子体透明性に影響を及ぼすことが公知であった（Ｂ  Ｓｈｏｒｔ．  Ｓａｆｅｔｙ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ：  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ．  Ｊａｎ  ２００８；  ３６（１）：  ４９−６２の５２）。上記ウサギにおける硝子体透明性を、直像検眼鏡（ＰａｎＯｐｔｉｃ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｓｃｏｐｅ  １１８シリーズ；  Ｍｏｄｅｌ  １１８２０：  Ｔｙｐｅ  ７１０００Ａ；  Ｗｅｌｃｈ  Ａｌｌｙｎ  Ｉｎｃ．  ４３４１  Ｓｔａｔｅ  ｓｔｒｅｅｔ  ｒｏａｄ  Ｓｋａｎｅａｔｅｌｅｓ，  ＮＹ  １３１５３−０２２０）によって評価した。上記硝子体透明性に、スコア０〜４を与えた（０は、網膜血管の明瞭な像を示す；１は、網膜血管が上記薬学的組成物を通して容易に見えることを示す；２は、網膜血管の像が曇っていることを示す。ここで血管は、容易に識別できない；３は、像がより曇っていることを示す。ここでごくわずかな網膜血管が識別できる；そして４は、上記薬学的組成物によって硝子体混濁が引き起こされたことを示す）。
【００６８】
さらに、硝子体液中の上記薬学的組成物の分布を、検眼鏡を使用して評価した。０（眼底が見え、上記薬学的組成物によって覆われていない）、１（眼底の１／６が上記薬学的組成物によって覆われた）、２（眼底の１／３が上記薬学的組成物によって覆われた）、３（眼底の１／２が上記薬学的組成物によって覆われた）、４（眼底の２／３が上記薬学的組成物によって覆われた）、５（眼底の５／６が上記薬学的組成物によって覆われた）から６（眼底が上記薬学的組成物によって完全に覆われて、見えなかった）の間の眼底スコアを与えた。
【００６９】
上記１８０日間の研究の結果を、表３にまとめる。これら結果は、約２．５μｍｏｌ未満のリン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群４および群５）が、少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群３）と比較して、より少ない眼への副作用を示したことを示す。
【００７０】
さらに、約２．５μｍｏｌ未満のリン脂質を有する上記薬学的組成物（群４および群５）は、少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する上記薬学的組成物（群３）と比較して、硝子体液におけるより迅速な除去に起因して、硝子体液中により良く分布する。
【表３】
2015506983.tif 000004
【００７１】
表３の結果のより詳細なまとめは、以下のとおりである：
【００７２】
中程度の角膜浮腫
結果から、群１、群２および群３のウサギ（これらウサギは、２．５μｍｏｌより多くのリン脂質を有する薬学的組成物を受けた）における中程度の角膜浮腫の発生率は、それぞれ、５０％、８０％および４０％であることが示される。群４のウサギにおいて中程度の角膜浮腫の発生は認められず、群５のウサギのうちの５０％は、中程度の角膜浮腫を発生させた。
【００７３】
角膜混濁
群１のウサギのうちの５０％、群２のウサギのうちの８０％および群３のウサギのうちの２０％は、角膜混濁を発生させたのに対して、群４および群５のウサギはいずれも、角膜混濁を有しなかった。まとめると、約２．５μｍｏｌ未満のリン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群４および群５）は、少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群３）と比較して、より少ない網膜混濁を示した。
【００７４】
角膜軟化
角膜軟化の発生率は、群１、群２および群３のウサギにおいて５０％を超えたのに対して、群４および群５のウサギにおいては、角膜軟化の発生率は５０％未満であった。まとめると、約２．５μｍｏｌ未満のリン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群４および群５）は、少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群３）と比較して、より少ない角膜軟化を示した。
【００７５】
結膜充血
群１および群２におけるウサギのうちの６０％、ならびに群３におけるウサギのうちの３０％は、結膜充血を発生させた。群４のウサギのうちのわずか１２．５％が結膜充血を有し、および群５のウサギはいずれも結膜充血を有しなかった。まとめると、約２．５μｍｏｌ未満のリン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群４および群５）は、少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群３）と比較して、より少ない角膜充血を示した。
【００７６】
ＩＯＰ亢進
ＩＯＰ亢進は、眼用ステロイド注射の周知の副作用である。ＩＯＰ亢進の徴候は、群１のウサギのうちの６０％、群２のウサギのうちの８０％および群３のウサギのうちの４０％で検出されたのに対して、群４のウサギにおいてはＩＯＰ亢進は検出されず、群５のウサギのうちの３７．５％においてＩＯＰ亢進が検出された。まとめると、約２．５μｍｏｌ未満の総リン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群４および群５）は、少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する薬学的組成物を受けたウサギ（群３）と比較して、より少ないＩＯＰ亢進を示した。
【００７７】
硝子体透明性の低下
群１および群２のウサギのうちの２０％、ならびに群３のウサギのうちの１０％は、硝子体透明性の低下を有した（スコア３またはそれより上を有する）。群４および群５のウサギにおいては、硝子体透明性の低下（スコア３またはそれより上を有する）は見いだされなかった。まとめると、約２．５μｍｏｌ未満の総リン脂質を有する上記薬学的組成物（群４および群５）は、少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する上記薬学的組成物（群３）と比較して、硝子体透明性を損なう可能性が低い。
【００７８】
眼底スコア
上記群１のウサギのうちの４０％、ならびに上記群２および群３のウサギのうちの２０％は、４より大きな眼底スコアを有したのに対して、上記群４および群５のウサギはいずれも、４より大きな眼底スコアを有しなかった。まとめると、約２．５μｍｏｌ未満のリン脂質を有する上記薬学的組成物（群４および群５）は、少なくとも約５μｍｏｌのリン脂質を有する上記薬学的組成物（群３）と比較して、ウサギの硝子体液中によりよく分布する。
【国際調査報告】
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