(57)【要約】  本出願は、葉酸受容体ａに特異的に結合する抗体を使用する、葉酸受容体ａ発現胃癌の検出、診断、予後、予防、及び治療の方法を提供する。
2015518824.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
葉酸受容体α発現胃癌の治療を必要とする対象において、該葉酸受容体α発現胃癌を治療するための方法であって、葉酸受容体α又はその抗原結合フラグメントに特異的に結合する治療上有効な量の抗体を、前記対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項２】
前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＨ１）、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（ＣＤＲＨ２）、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（ＣＤＲＨ３）と、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＬ１）、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＬ２）、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（ＣＤＲＬ３）とを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記投与する工程が、静脈内注射を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記投与する工程が、前記対象への週１回の投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体又は抗原結合フラグメントが、約５０ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体又は抗原結合フラグメントが、約４００ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体が、ファルレツズマブ（farletuzumab）である、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年５月１５日出願の米国出願第６１／６４７，３８４号の利益を主張し、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本明細書に記載される主題は、葉酸受容体αに特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体及びその抗原結合フラグメント）を使用する、葉酸受容体α発現胃癌の検出、診断、予後、予防、及び治療の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
葉酸塩（葉酸又はビタミンＢ９）は、ヌクレオチド塩基の生合成及び多くの他のメチル化反応に必須である。癌細胞等の急速に分割する細胞によって、増加した量の葉酸が必要とされる。葉酸受容体は、葉酸塩の細胞への一方向輸送を媒介することができる。特定された葉酸受容体の４つのアイソフォーム（α、β、γ、及びδ）の中で、葉酸受容体のα及びβアイソフォームは、２つのＮ−グリコシル化部位を持つグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型タンパク質であり、双方が葉酸塩に対し高い親和性（約１ｎＭのＫＤ）を有する。Ｅｌｎａｋａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ２００４，５６：１０６７〜１０８４。
【０００４】
葉酸受容体α（ＦＲα、ＦＲ−α、ＦＲＡ、ＦＯＬＲ−１、又はＦＯＬＲ１とも呼ばれる）は、脈絡叢、肺、甲状腺、腎臓、子宮、乳房、卵管、精巣上体、及び唾液腺の上皮組織を含む、種々の上皮組織中で発現される。Ｗｅｉｔｍａｎ，ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５２：３３９６〜３４０１（１９９２）、Ｗｅｉｔｍａｎ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５２：６７０８〜６７１１。
【０００５】
胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ又はｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）は、胃の内膜組織中に形成する癌である。国立癌研究所によると、新たに２１，３２０件（男性１３，０００人及び女性８，０００人超）の胃癌症例が、２０１２年に米国内で診断されると推定される。診断された個体の大半は７０歳超である。更に、１０，５４０件の胃癌死亡例が、２０１２年に米国内で発生すると推定される。
【０００６】
世界保健機関によると、２００８年に新たに約９８８，０００件の胃癌症例が発生したことが推定され、胃癌は世界で４番目に一般的な悪性腫瘍となった。症例の７０％超（７１３，０００症例）が、発展途上国で発生した（男性４６７，０００人、女性２４６，０００人）。胃癌の発生率は、東アジア（中国、日本、及び韓国）で最高であった。胃癌は、両方の性別において世界の癌による死亡原因の第２位であった（約７３６，０００人が死亡）。最高の死亡率は、東アジアで推定される（男性１０万人当たり２８．１人、女性１０万人当たり１３．０人）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
胃癌の早期検出及び治療は、生存率及び生活の質を改善する。早期検出及び治療の可能性を改善するために、胃癌を診断するため、胃癌を発症する危険性のレベルを決定するため、胃癌の進行を予測するため、及び胃癌を治療するための非侵襲性方法に対する差し迫った必要性が存在する。本発明は、このような葉酸受容体α発現胃癌の必要性を満たす。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本明細書において、葉酸受容体α発現胃癌の治療を必要とする対象において、該葉酸受容体α発現胃癌を治療するための方法が提供される。これらの方法は、治療上有効な量の抗葉酸受容体抗体又はその抗原結合フラグメントの投与を伴う。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＨ１）、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（ＣＤＲＨ２）、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（ＣＤＲＨ３）と、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＬ１）、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＬ２）、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（ＣＤＲＬ３）とを含む。いくつかの好ましい実施形態において、抗体は、ファルレツズマブ（farletuzumab）である。好ましい実施形態において、抗体又は抗原結合フラグメントは、静脈内投与を介して送達される。抗体又は抗原結合フラグメントは、週１回投与されてよい。いくつかの実施形態において、抗体又はフラグメントは、約５０〜４００ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０００９】
本明細書において、生体試料中の葉酸受容体α発現胃癌を検出する方法も提供される。いくつかの実施形態において、これらの方法は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖とを含む、葉酸受容体αに特異的に結合する抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖とを含む、葉酸受容体αに特異的に結合する抗体によって結合される葉酸受容体αのエピトープに結合することができる、抗体若しくはその抗原結合フラグメントへの試料の曝露、続いて葉酸受容体αの検出を必要とする。いくつかの実施形態において、抗体又は抗原結合フラグメントは、固体支持体に固定される。
【００１０】
葉酸受容体α又はその抗原結合フラグメントに特異的に結合する第１の抗体に試料を曝露することによって生体試料中の葉酸受容体α発現胃癌を検出することと、葉酸受容体αを検出することと、葉酸受容体α又はその抗原結合フラグメントに特異的に結合する治療上有効な量の第２の抗体を対象に投与することと、によって葉酸受容体α発現胃癌の治療を必要とする対象において、該葉酸受容体α発現胃癌を治療するための方法が更に提供される。いくつかの実施形態において、葉酸受容体αに特異的に結合する第１の抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、葉酸受容体αに特異的に結合する第１の抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖とを含む、葉酸受容体αに特異的に結合する抗体によって結合される葉酸受容体αのエピトープに結合することができる抗体である。第１の抗体又は抗原結合フラグメントは、任意に、固体支持体に固定される。いくつかの実施形態において、葉酸受容体αに特異的に結合する第２の抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（ＣＤＲＨ１）、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（ＣＤＲＨ２）、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（ＣＤＲＨ３）を含む重鎖と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（ＣＤＲＬ１）、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（ＣＤＲＬ２）、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（ＣＤＲＬ３）を含む軽鎖とを含む。好ましい実施形態において、第２の抗体は、ファルレツズマブである。投与する工程は、該第２の抗体又は抗原結合フラグメントの静脈内注射を伴い得る。投与する工程は、第２の抗体又は抗原結合フラグメントの週１回の投与を含んでよい。いくつかの実施形態において、第２の抗体又は抗原結合フラグメントは、約５０ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２の投与量、好ましくは、約４００ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】胃癌患者＃１６における腫瘍の最長直径の和の変化、及び腫瘍マーカー癌胎児性抗原（ＣＥＡ）のレベルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
この説明の態様に関する様々な用語は、明細書及び特許請求の範囲全体で使用される。そのような用語は、別段の指示がない限り、当該技術分野においてそれらの通常の意味が付与されるものとする。他の具体的に定義された用語は、本明細書に提供される定義と一致するように解釈されるものとする。
【００１３】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「細胞」への言及は、２つ以上の細胞の組合せ等を含み、その他も同様である。
【００１４】
用語「抗体」は、（ａ）免疫グロブリンポリペプチド、すなわち、特定の抗原（例えば、葉酸受容体α）に特異的に結合する抗原結合部位を含有する免疫グロブリンファミリーのポリペプチド（別途明記されない限り、全ての免疫グロブリンアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、サブクラス、並びに各アイソタイプの様々なモノマー及びポリマー形態を含む）、及び（ｂ）抗原（例えば、葉酸受容体α）に免疫特異的に結合するそのような免疫グロブリンポリペプチドの保存的に置換された変異型を指す。抗体は、概して、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８）において説明される。文脈から特に明らかでない限り、抗体への言及は、以下で更に詳述されるように抗体誘導体も含む。
【００１５】
「抗体フラグメント」は、全長抗体の一部分、概してその抗原結合又は可変領域、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；線形抗体；一本鎖抗体分子；及び抗体フラグメントから形成された多重特異的抗体を含む。宿主細胞における抗体のタンパク質分解及び組換え生成を含む抗体フラグメントの生成のために、様々な技法が開発されてきたが、抗体フラグメントの生成のための他の技法が、熟練した施術者に明らかとなるであろう。いくつかの実施形態において、最適な抗体フラグメントは、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、一本鎖ポリペプチド中に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーを更に含み、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成できるようにする。ｓｃＦｖ及び他の抗体フラグメントの考察については、Ｊａｍｅｓ  Ｄ．Ｍａｒｋｓ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５）（Ｃａｒｌ  Ｋ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，Ｅｄ．）を参照されたい。
【００１６】
「抗体誘導体」は、上に定義されるように、例えば、異種ポリペプチドの結合によって等の異種分子の共有結合によって、又は通常は抗体と関連付けられないグリコシル化、脱グリコシル化、アセチル化、若しくはリン酸化によって等で、修飾される抗体を意味する。
【００１７】
用語「モノクローナル抗体」は、任意の真核細胞若しくは原核細胞クローンを含む単細胞クローン、又はファージクローンから誘導される抗体を指し、それが生成される方法は指していない。したがって、用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術を通じて生成される抗体に限定されない。
【００１８】
「抗原」は、抗体が特異的に結合する実体である。葉酸受容体αは、抗葉酸受容体α抗体が特異的に結合する抗原である。
【００１９】
用語「癌」及び「腫瘍」は、当該技術分野において周知であり、例えば、対象における発癌性細胞に典型的な特徴（例えば、無制御増殖、不死性、転移可能性、急速成長及び増殖率、並びにある特徴的な形態的特徴）を有する細胞の存在を指す。癌細胞は、多くの場合、腫瘍の形態であるが、そのような細胞は、対象内で単独で存在し得るか、又は非腫瘍形成癌細胞、例えば、白血病細胞であり得る。本明細書において使用されるとき、用語「癌」は、前癌状態の癌並びに悪性癌を含む。
【００２０】
本明細書において使用されるとき、「葉酸受容体α発現胃癌」は、癌細胞が発現するか、又はそれらの表面葉酸受容体αを提示することを特徴とする、任意の型の胃癌を含む。葉酸受容体α発現胃癌としては、限定されないが、胃腺癌（例えば、腸型、拡散型、乳頭、管状、不良分化型、印環細胞、及び粘液腺癌）、軟組織肉腫（例えば、平滑筋肉腫及び消化管間質腫瘍）、リンパ腫（例えば、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫）、カルチノイド腫瘍、及び小細胞神経内分泌癌が挙げられる。
【００２１】
本明細書において使用されるとき、「葉酸受容体α発現胃癌に罹患した」対象は、有資格臨床医によって（例えば、本明細書に記載される方法によって）そのような癌を臨床的に診断された対象、又はそのような癌の１つ以上の兆候又は症状を呈し、後に有資格臨床医によって（例えば、本明細書に記載される方法によって）そのような癌を臨床的に診断された対象である。葉酸受容体α発現胃癌の動物モデルとして機能する非ヒト対象も、「葉酸受容体α発現胃癌に罹患した」対象の範囲内に含まれてよい。
【００２２】
用語「阻害する」又は「〜の阻害」は、測定可能な量だけ低減すること、又は全体的に予防することを意味する。
【００２３】
用語「激減」は、葉酸受容体α抗体の葉酸受容体α発現細胞への影響の文脈において、葉酸受容体α発現細胞の数の低減、又は排除を指す。
【００２４】
用語「機能的」は、本明細書に記載される方法に従い使用される抗葉酸受容体α抗体の文脈において、抗体が、（１）葉酸受容体αに結合することができること、及び／又は（２）葉酸受容体α発現細胞の増殖を激減させる若しくは阻害することを示す。
【００２５】
用語「予防」は、（ａ）葉酸受容体α発現胃癌若しくはその臨床症状若しくは診断症状の１つ以上の発生若しくは発症をブロックするか、（ｂ）葉酸受容体α発現胃癌の発症の重篤度を阻害するか、又は（ｃ）葉酸受容体α発現胃癌の発症の可能性を低減するように、葉酸受容体α発現胃癌の臨床症状又は診断症状の発症前に、抗葉酸受容体α抗体又はその抗原結合フラグメントを対象に投与すること（例えば、胃癌になる素因を持つか、又はその危険性が高い個体に投与すること）を指す。
【００２６】
用語「治療」又は「治療する」は、疾患の臨床症状又は診断症状の減少又は排除によって証明されるように、任意の臨床段階での葉酸受容体α発現胃癌の臨床症状又は診断症状の発症後、抗葉酸受容体α抗体又はその抗原結合フラグメントを対象に投与することによって、患者における葉酸受容体α発現胃癌の進行を減速、停止、又は反転させることを指す。治療は、例えば、症状の重篤度、症状の数、又は再発の頻度の減少を含み得る。
【００２７】
用語「薬学的に許容される」は、組成物、配合、安定性、患者許容性、及び生物学的利用能に関し、薬理学的／毒性学的観点から患者に許容され、身体的／化学的観点から製薬化学者に許容される特性及び／又は物質を指し、連邦若しくは州政府の規制当局によって承認されるか、又は米国薬局方若しくは動物、より具体的にはヒトにおける使用のために他の一般に認識される薬局方に列挙される特性及び／又は物質を含む。用語「薬学的に適合性のある成分」は、抗葉酸受容体α抗体が共に投与される、薬学的に許容される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。「薬学的に許容される担体」は、活性成分（複数可）の生物活性の有効性を干渉せず、それが投与される宿主に対し毒性でない媒体を指す。
【００２８】
用語「有効な量」及び「治療上有効な量」は、本明細書において同義に使用され、薬剤の投与の文脈において、患者における葉酸受容体α発現胃癌の１つ以上の臨床症状若しくは診断症状の発生を阻害するか、又は改善するのに十分な薬剤の量を指す。治療上有効な量の薬剤は、疾患状態、個体の年齢、性別、及び体重、並びに抗体又はその抗原結合フラグメントが個体において所望の反応を引き出す能力等の要因に従い変動してよい。そのような結果としては、限定されないが、当該技術分野において好適な任意の手段によって決定される、葉酸受容体α発現胃癌の治療が挙げられ得る。有効な量の薬剤は、「有効なレジメン」において、本明細書に記載される方法に従い投与される。用語「有効なレジメン」は、葉酸受容体α発現胃癌の治療を達成するのに適した薬剤の量と投与頻度の組合せを指す。
【００２９】
用語「患者」及び「対象」は、診断的、予防的、又は治療的処置を受けるヒト及び他の非ヒト動物（獣医対象を含む）を指すように同義に使用される。用語「非ヒト動物」としては、全ての脊椎動物、例えば、哺乳類及び非哺乳類、例えば、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類が挙げられる。好ましい実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、対象は日系である。
【００３０】
治療薬は、典型的に、望ましくない汚染物質から実質的に純粋である。これは、薬剤が、典型的に少なくとも約５０ｗ／ｗ（重量／重量）％純度であると同時に、干渉タンパク質及び汚染物質を実質的に含まないことを意味する。場合によっては、薬剤は、少なくとも８０ｗ／ｗ％純度であり、より好ましくは少なくとも９０又は約９５ｗ／ｗ％純度である。しかしながら、従来のタンパク質精製技法を使用し、少なくとも９９ｗ／ｗ％純度の均質ペプチドを得ることができる。
【００３１】
Ｉ．概説
本発明は、葉酸受容体αに対する抗体又はその抗原結合フラグメントを使用した、葉酸受容体α発現胃癌の検出、診断、予後、予防、及び治療の方法、並びにその治療を監視する方法を提供する。これらの方法は、実施例に提示される結果に部分的に基づき、葉酸受容体αが、ある胃癌において発現されること、及び葉酸受容体α発現胃癌の長期疾患安定化が、抗葉酸受容体α抗体の投与によって達成され得ることを示す。
【００３２】
ＩＩ．葉酸受容体αに対する抗体
続く説明は、最初に、胃癌における葉酸受容体αの検出及びその治療に適用できる葉酸受容体αに対する抗体の特性を考慮し、次いで、その適用に好ましい抗体の特性に注目する。
【００３３】
Ａ．一般的な葉酸受容体αに対する抗体
抗葉酸受容体α抗体としては、モノクローナル、キメラ（例えば、ヒト定常領域及びマウス可変領域を有する）、ヒト化、ベニヤ化、又はヒト抗体；一本鎖抗体等が挙げられる。免疫グロブリン分子は、任意の型、クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、又はサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）であり得る。
【００３４】
抗葉酸受容体α抗体は、抗原結合抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ鎖、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合されたＦｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ若しくはＶＨドメインのいずれかを含むフラグメント（ラクダ、ラマ等からのナノボディ又はフラグメントを含む）、又はＦａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメント、又は上に記載される上記抗体のいずれかの葉酸受容体α結合フラグメントであり得る。一本鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域（複数可）を単独で、又は次のもの、すなわち、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＬドメインの全体若しくは一部分と合わせて含むことができる。また抗原結合フラグメントは、可変領域（複数可）と、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＬドメインとの任意の組合せを含むことができる。典型的に、抗体は、ヒト、齧歯類（例えば、マウス及びラット）、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、又はニワトリである。
【００３５】
抗体は、単一特異的、二重特異的、三重特異的、又はそれを超える多重特異的であり得る。多重特異的抗体は、葉酸受容体αの異なるエピトープに特異的であり得るか、又は両方の葉酸受容体α並びに異種タンパク質に特異的であり得る。（例えば、国際公開第ＷＯ  ９３／１７７１５号、同第ＷＯ  ９２／０８８０２号、同第ＷＯ  ９１／００３６０号、同第ＷＯ  ９２／０５７９３号、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０〜６９、米国特許第４，４７４，８９３号、同第４，７１４，６８１号、同第４，９２５，６４８号、同第５，５７３，９２０号、及び同第５，６０１，８１９号、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７〜−１５５３を参照。）
【００３６】
抗葉酸受容体α抗体は、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、１０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×１０−１５Ｍ、又は１０−１５Ｍの葉酸受容体αに対するそれらの結合親和性に関して説明することもできる。
【００３７】
抗葉酸受容体α抗体は、キメラ抗体であり得る。キメラ抗体は、抗体の異なる部分が、異なる動物種から誘導される分子、例えば、マウスモノクローナル抗体から誘導される可変領域、及びヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体である。キメラ抗体を生成するための方法は、当該技術分野において既知である。（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２９：１２０２；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１〜２０２、米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、及び同第４，８１６，３９７号を参照。）
【００３８】
抗葉酸受容体α抗体は、ベニヤ化抗体を含むヒト化抗体でもあり得る。ヒト化抗体は、所望の抗原に結合し、非ヒト種からの１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク及び定常領域を有する抗体分子である。多くの場合、抗原結合を改変、又は好ましくは改善するように、ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基と置換される。これらのフレームワーク置換は、当該技術分野において周知の方法によって、例えば、ＣＤＲ及びフレームワーク残基の相互作用のモデリングによって特定され、特定の位置での異常なフレームワーク残基を特定するための抗原結合及び配列比較に重要なフレームワーク残基を特定する。（例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，５８５，０８９号、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３を参照。）抗体は、当該技術分野において既知の種々の技法、例えば、ＣＤＲ移植（欧州特許第ＥＰ  ０  ２３９  ４００号、国際公開第ＷＯ  ９１／０９９６７号、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第５，５８５，０８９号）、ベニヤ化又は再被覆（欧州特許第ＥＰ  ０  ５９２  １０６号、同第ＥＰ  ０  ５１９  ５９６号、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９１，２８（４／５）：４８９〜４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５〜８１４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ  ９１：９６９〜９７３）、及び鎖シャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を使用してヒト化することができる（これらの参照文献の全ては、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００３９】
抗葉酸受容体α抗体は、ヒト抗体でもあり得る。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列から誘導される抗体ライブラリーを使用するファージ表示法等の当該技術分野において既知の種々の方法によって作製することができる。例えば、米国特許第４，４４４，８８７号及び同第４，７１６，１１１号、国際公開第ＷＯ  ９８／４６６４５号、同第ＷＯ  ９８／５０４３３号、同第ＷＯ  ９８／２４８９３号、同第ＷＯ  ９８／１６６５４号、同第ＷＯ  ９６／３４０９６号、同第ＷＯ  ９６／３３７３５号、及び同第ＷＯ  ９１／１０７４１号も参照されたい。更に、選択されたエピトープを認識するヒト抗体は、「誘導選択」と呼ばれる技法を使用して生成することができ、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を使用し、同じエピトープを認識する完全なヒト抗体の選択を誘導する（例えば、Ｊｅｓｐｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２：８９９〜９０３を参照）。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニックマウスを使用して生成することもできる。抗原に対して向けられるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術を使用し、免疫付与されたトランスジェニックマウスから得ることができる。ヒト抗体を生成するための技術に関する概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５〜９３を参照されたい。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を生成するためのこの技術、並びにそのような抗体を生成するためのプロトコルに関する詳細な論考については、例えば、国際公開第ＷＯ  ９８／２４８９３号、同第ＷＯ  ９２／０１０４７号、同第９６／３４０９６号、同第ＷＯ  ９６／３３７３５号、欧州特許第０５９８８７７号、及び米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、同第５，８８５，７９３号、同第５，９１６，７７１号、及び同第５，９３９，５９８号を参照されたい。
【００４０】
抗体は、既知の方法、例えば、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体固定アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、タンパク質Ａイムノアッセイ等の技法を使用する拮抗及び非拮抗イムノアッセイシステムによって、葉酸受容体αへの特異的結合についてアッセイすることができる。（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，４ｔｈ  ｅｄ．１９９９）、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９９を参照。）
【００４１】
更に、葉酸受容体αに対する抗体の結合親和性及び抗体−葉酸受容体α相互作用のオフレートは、拮抗結合アッセイによって決定することができる。拮抗結合アッセイの一例は、漸増量の非標識葉酸受容体αの存在下での標識葉酸受容体α（例えば、３Ｈ又は１２５Ｉ）の関心対象の抗体でのインキュベーション、及び標識葉酸受容体αに結合された抗体の検出を含むラジオイムノアッセイである。次いで、葉酸受容体αに対する抗体の親和性及び結合オフレートは、スキャッチャードプロット分析によってデータから決定され得る。第２の抗体との拮抗は、ラジオイムノアッセイを使用して決定することもできる。この場合、葉酸受容体αは、漸増量の第２の非標識抗体の存在下、標識化合物（例えば、３Ｈ又は１２５Ｉ）に共役された関心対象の抗体でインキュベートされる。代替として、葉酸受容体αに対する抗体の結合親和性、並びに抗体−葉酸受容体α相互作用のオンレート及びオフレートは、表面プラズモン共鳴によって決定することができる。
【００４２】
抗体は、抗体の型に従って標準手順により葉酸受容体αタンパク質の抗原含有フラグメントから作製することができる（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５，（１９７５）、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｐ．，ＮＹ，１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９〜１００３３（１９８９）及び国際公開第ＷＯ  ９０／０７８６１号、Ｄｏｗｅｒらの同第ＷＯ  ９１／１７２７１号、及びＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらの同第ＷＯ  ９２／０１０４７号を参照（それぞれが参照によりあらゆる目的で組み込まれる）。一例として、モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマの使用、組換え、及びファージディスプレイ技術、又はそれらの組合せを含む、多種多様の技法を使用して調製することができる。ハイブリドーマ技法は、概して、例えば、上記Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．、及びＨａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，ｐｐ．５６３〜６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）において論じられる。抗葉酸受容体α抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ法の例としては、例えば、Ｂｒｉｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１〜５０；Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７〜１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２〜９５８；Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｅ  １８７：９〜１８；Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７：１９１〜２８０；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１  １３４号、ＰＣＴ公開第ＷＯ  ９０／０２８０９号、同第ＷＯ  ９１／１０７３７号、同第ＷＯ  ９２／０１０４７号、同第ＷＯ  ９２／１８６１９号、同第ＷＯ  ９３／１１２３６号、同第ＷＯ  ９５／１５９８２号、同第ＷＯ  ９５／２０４０１号、及び米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、及び同第５，９６９，１０８号に開示されるものが挙げられる（これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００４３】
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントを生成するための技法も、概して当該技術分野において既知である。例えば、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを生成するため）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生成するため）等の酵素を使用し、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生成され得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、可変領域、軽鎖定常領域、及び重鎖のＣＨ１ドメインを含有する。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え的に生成する技法は、例えば、国際公開第ＷＯ  ９２／２２３２４号、Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４〜８６９；Ｓａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＡＪＲＩ  ３４：２６〜３４、及びＢｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１〜１０４３（これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）において開示される方法を使用して用いることもできる。
【００４４】
一本鎖Ｆｖ及び抗体を生成するために使用され得る技法の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，２５８，４９８号、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２０３：４６〜８８；Ｓｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：７９９５〜７９９９、及びＳｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８〜１０４０に記載されるものが挙げられる。
【００４５】
本方法において有用な抗葉酸受容体α抗体及びそれらの誘導体は、組換え発現技術によって生成することもできる。葉酸受容体αに結合する、及び／又は葉酸受容体α発現細胞の増殖を激減若しくは阻害する抗体又はその誘導体の組換え発現は、抗体又はその誘導体をコードする核酸を含有する発現ベクターの構築を必要とする。一旦そのようなタンパク質をコードする核酸が得られると、タンパク質分子の生成のためのベクターは、当該技術分野において周知の技法を使用し、組換えＤＮＡ技術によって生成されてよい。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，３ｒｄ  ｅｄ．，２００１）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２ｎｄ  ｅｄ．，１９８９）、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，４ｔｈ  ｅｄ．，１９９９）、及びＧｌｉｃｋ  ＆  Ｐａｓｔｅｒｎａｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ（ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，２ｎｄ  ｅｄ．，１９９８）に記載されるもの等の標準技法は、組換え核酸法、核酸合成、細胞培養、導入遺伝子の組込み、及び組換えタンパク質発現に使用することができる。
【００４６】
例えば、抗葉酸受容体α抗体の組換え発現の場合、発現ベクターは、その重鎖及び／若しくは軽鎖、又はプロモーターに操作可能に結合される重鎖及び／若しくは軽鎖可変ドメインをコードし得る。発現ベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含んでよく（例えば、国際公開第ＷＯ  ８６／０５８０７号、同第８９／０１０３６号、及び米国特許第５，１２２，４６４号を参照）、抗体の可変ドメインは、重鎖又は軽鎖全体の発現のためにそのようなベクターにクローン化されてよい。発現ベクターは、既知の技法によって宿主細胞に移され、次いで、形質転換細胞を培養し、抗葉酸受容体α抗体を生成する。典型的に、二本鎖抗体の発現の場合、重鎖及び軽鎖の両方をコードするベクターは、免疫グロブリン分子全体の発現のための宿主細胞中で共発現され得る。
【００４７】
種々の原核及び真核宿主発現ベクター系を利用し、抗葉酸受容体α抗体又はその誘導体を発現することができる。特に、組換え抗葉酸受容体α抗体分子全体の場合、典型的に、真核細胞が組換えタンパク質の発現に使用される。例えば、ＮＳ０細胞又はチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）等の哺乳類細胞（例えば、ＤＧ４４又はＣＨＯ−Ｓ）は、ヒトサイトメガロウイルス又はチャイニーズハムスター卵巣ＥＦ−１αプロモーターからの主な中間体初期遺伝子プロモーター要素等のプロモーター要素と併せて、抗葉酸受容体α抗体及びその誘導体の生成に有効な発現系である（例えば、Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ  ４５：１０１；Ｃｏｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：２；Ａｌｉｓｏｎの米国特許第５，８８８，８０９号を参照）。
【００４８】
他の宿主発現系としては、細菌細胞中のプラスミドに基づく発現系（例えば、Ｒｕｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，ＥＭＢＯ  １，２：１７９１；Ｉｎｏｕｙｅ  ＆  Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１３：３１０１〜３１０９；Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  ＆  Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３〜５５０９を参照）、スポドプテラフルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞中のキンウワバ科核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）発現ベクターの使用等の昆虫系、及びアデノウイルに基づく系等の哺乳類細胞中のウイルスに基づく発現系（例えば、Ｌｏｇａｎ  ＆  Ｓｈｅｎｋ，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３５５〜３５９；Ｂｉｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１〜５４４を参照）が挙げられる。
【００４９】
Ｂ．葉酸受容体α発現胃癌の検出のための抗体
胃癌における葉酸受容体αの検出のための好ましい抗体は、モノクローナル抗体２６Ｂ３である。胃癌における葉酸受容体αの検出のための他の好ましい抗体は、葉酸受容体αへの特異的結合のために２６Ｂ３と拮抗する。胃癌における葉酸受容体αの検出のための他の好ましい抗体は、表１に示される２６Ｂ３の重鎖からの３つのＣＤＲを含む重鎖と、２６Ｂ３の軽鎖からの３つのＣＤＲを含む軽鎖とを含む。
【００５０】
【表１】
2015518824.tif 000003
【００５１】
胃癌における葉酸受容体αの検出のための他の好ましい抗体は、２６Ｂ３の成熟重鎖可変領域に対し少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、２６Ｂ３の成熟軽鎖可変領域に対し少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。
【００５２】
Ｃ．治療適用のための葉酸受容体αに対する抗体
治療適用に使用される抗体は、胃癌細胞上の葉酸受容体αに特異的に結合する。例えば、抗体は、
（ａ）配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）をＣＤＲＨ１として、配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）をＣＤＲＨ２として、配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）をＣＤＲＨ３として、配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）をＣＤＲＬ１として、配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）をＣＤＲＬ２として、及び配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）をＣＤＲＬ３として含む抗体、又は
（ｂ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体からなる群から選択される。
【００５３】
いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む成熟軽鎖可変領域を含む。
【００５４】
【表２】
2015518824.tif 000004
【００５５】
（ＣＤＲは下線部）
いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号８のアミノ酸を含む成熟重鎖可変領域を含む。
【００５６】
【表３】
2015518824.tif 000005
【００５７】
（ＣＤＲは下線部）
いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む成熟軽鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む成熟重鎖可変領域とを含む。そのような抗体の一例は、ＭＯＲＡｂ−００３である。ＭＯＲＡｂ−００３を生成するＣＨＯ細胞（ＵＳＡＮ：ファルレツズマブ）は、２００６年４月２４日にＡＴＣＣ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０）に寄託され、受託番号ＰＴＡ−７５５２が割り当てられた。
【００５８】
他の有用な抗体は、それぞれ配列番号７及び配列番号８に対して少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％又は９９％の配列同一性を有する成熟軽鎖及び重鎖可変領域を含む。他の有用な抗葉酸受容体α抗体又はその誘導体は、例えば、イムノアッセイにより決定されるように、葉酸受容体αへのＭＯＲＡｂ−００３の結合を拮抗的に阻害することができる。拮抗阻害は、抗体が、少なくとも２倍及び好ましくは５倍過剰で存在するとき、葉酸受容体αへのＭＯＲＡｂ−００３の結合を少なくとも５０％、より典型的には少なくとも６０％、更により典型的には少なくとも７０％、及び最も典型的には少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％阻害することを意味する。
【００５９】
抗葉酸受容体α抗体の誘導体は、本方法の実施に使用することもできる。典型的な修飾としては、例えば、グリコシル化、脱グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンド又は他のタンパク質への結合等が挙げられる。更に、誘導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含有してよい。
【００６０】
記載される抗ＦＲＡ抗体及び抗原結合フラグメントは、検出可能に標識されてよい。いくつかの実施形態において、標識抗体及び抗原結合フラグメントは、本明細書に記載される方法を介して検出ＦＲＡを促進してもよい。多くのそのような標識は、当業者に容易に知られる。例えば、好適な標識としては、限定されるものと見なされてはならないが、放射性標識、蛍光標識（例えば、ＤｙＬｉｇｈｔ（登録商標）６４９）、エピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、又は酵素が挙げられる。より具体的に、記載される標識としては、ルテニウム、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ、１１１Ｉｎ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びβ−ガラクトシダーゼ、ポリ−ヒスチジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン染料、シアニン染料、フルオロン染料、オキサジン染料、フェナントリジン染料、ローダミン染料、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ（登録商標）染料等が挙げられる。
【００６１】
ＩＩＩ．葉酸受容体αの検出
診断適用についてアッセイされる試料は、外科手順、例えば、生検によって得ることができる。葉酸受容体αは、典型的に、イムノアッセイによって検出され、癌（例えば、胃癌）に由来することが知られているか、又は疑いのある細胞を含有する試料を、抗体又は抗原結合フラグメントと接触させる。接触後、標本中の細胞への抗体又は抗原結合フラグメントの結合事象の存在又は非存在が決定される。結合は、この標本中の癌細胞上で発現した抗原の存在又は非存在に関連する。一般に、試料を、検出可能なシグナルを生成することができる抗葉酸受容体α抗体又は抗原結合フラグメントの標識された特異的結合パートナーと接触させる。代替として、抗葉酸受容体α抗体又はそのフラグメントを標識することができる。標識の型の例としては、酵素標識、放射性同位体標識、非放射活性標識、蛍光標識、毒素標識、及び化学発光標識が挙げられる。標識からのシグナルの検出は、試料中の葉酸受容体αに特異的に結合した抗体又はフラグメントの存在を示す。
【００６２】
記載される抗ＦＲＡ抗体及び抗原結合フラグメント抗体及び抗原結合フラグメントは、試料中のＦＲＡを検出するために、種々のアッセイにおいて使用されてよい。いくつかの好適なアッセイとしては、限定されるものと見なされてはならないが、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光定量、免疫沈降、均衡透析、免疫拡散、電気化学発光（ＥＣＬ）イムノアッセイ、免疫組織化学、蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイが挙げられる。
【００６３】
本明細書に記載されるいくつかの実施形態において、対象におけるＦＲＡ発現胃癌細胞の検出は、対象がＦＲＡに対して向けられる治療薬で治療され得ることを決定するために使用されてよい。いくつかの実施形態において、ＦＲＡに対して向けられる治療薬は、ファルレツズマブ等の抗体であってよい。
【００６４】
いくつかの実施形態において、組織学試料、細針吸引試料、切除された腫瘍組織、循環細胞、循環主要細胞等の試料中のＦＲＡを検出することは、試料が得られた対象におけるＦＲＡ発現胃癌を診断する能力を提供する。いくつかの実施形態において、試料が得られた対象が癌を有することは既に知られているが、対象が罹患している癌の型が未だ診断されていないか、又は予備的診断が不明である場合があり、したがって、対象から得られた試料中のＦＲＡを検出することにより、癌の診断を可能にするか、又は明白にすることができる。
【００６５】
アッセイが行われる試料は、組織学的切片法を許容するように固定又は凍結され得る。好ましくは、切除された組織試料は、ホルムアルデヒド、パラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド等のアルデヒド固定液、又は塩化第二水銀等の重金属固定液中に固定される。より好ましくは、切除された組織試料は、抗体でのインキュベーション前にホルマリン中に固定され、パラフィン蝋中に埋め込まれる。任意に、ＦＦＰＥ標本をクエン酸、ＥＤＴＡ、酵素消化又は熱で処置し、エピトープの利用性を高めることができる。
【００６６】
代替として、タンパク質分画を既知又は疑いのある胃癌からの細胞から単離し、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット法、免疫沈降等によって分析することができる。別の変化形において、細胞は、ＦＡＣＳ分析により、好ましくは別の胃癌細胞マーカーと併せて葉酸受容体αの発現について分析することができる。
【００６７】
更なる変化形において、ｍＲＮＡは、既知又は疑いのある胃癌からの細胞から抽出することができる。次いで、ｍＲＮＡ又はそこから誘導される核酸、例えばｃＤＮＡは、葉酸受容体αをコードするＤＮＡに対する核プローブ結合へのハイブリダイゼーションによって分析することができる。
【００６８】
別の変化形において、胃癌は、標識された抗葉酸受容体α抗体又はその抗原結合フラグメントを患者に投与すること、及び抗体又はフラグメントをインビボ撮像によって検出することにより、インビボで検出することができる。
【００６９】
組織試料中の葉酸受容体αの検出は、定性的若しくは定量的、又は両方であり得る。定性的検出は、葉酸受容体α発現の存在又は非存在を検出することを意味する。定量的発現は、葉酸受容体αの発現レベルを決定することを意味する。問題の胃組織試料中の葉酸受容体αの存在及び／又はレベルは、１つ以上の基準に関して決定され得る（が必要ではない）。これらの基準は、歴史的又は同時代的に決定され得る。基準は、例えば、異なる対象からの癌性でないことが知られている胃組織試料、葉酸受容体αを発現しないことが知られている患者又は他の対象のいずれかからの組織、又は胃細胞株であり得る。基準は、無関係の抗体（例えば、細菌抗原に対し産生された抗体）と接触させた分析下の患者試料でもあり得る。
【００７０】
基準（使用される場合）に対し、葉酸受容体αへの抗葉酸受容体α抗体又はフラグメントの結合からの検出可能なシグナルの存在は、組織試料中の葉酸受容体αの存在を示し、検出可能な結合レベルは、葉酸受容体αの発現レベルの指標を提供する。組織切片上で行われるアッセイにおいて、発現レベルは、試料の表面積のパーセンテージとして表すことができ、葉酸受容体αの検出可能な発現を示す。代替又は追加として、発現のレベル（強度）は、試料中の総発現又は試料中の葉酸受容体α発現細胞の尺度として使用することができる。
【００７１】
ＩＶ．診断、予後、設計、及び治療の監視
胃組織の試料中の葉酸受容体αの発現の検出は、試料が癌性であるという指標である。葉酸受容体αの存在及び／又はレベルによって提供される癌の指標は、医師による患者の内診又は外診、便中の血液をチェックする検便、貧血をチェックする全血球数、生検による食道十二指腸鏡検査、Ｘ線、ＣＴ走査（コンピュータ断層撮影）、ＰＥＴ走査（陽電子放出断層撮影）、ＰＥＴ／ＣＴ走査、超音波、ＭＲＩ（磁気共鳴映像法）、β−ヒト柔毛膜性生殖腺刺激ホルモン、ＣＡ１２５、及び／又は血液中の癌胎児抗原、内視鏡、腹腔鏡検査、組織学的審査、及び全体診断に到達した際の組織培養等の診断手段と合わせることができる。
【００７２】
恐らく医師と最も関連が深いこととして、葉酸受容体αの存在及びレベルは、患者に対する治療プロトコルを設計するために、特に葉酸受容体αに対する抗体又はその抗原結合フラグメントとを患者に投与するために有用な情報を提供する。葉酸受容体α発現のレベルが高いほど、及び／又は葉酸受容体αを発現する腫瘍のパーセンテージが高いほど、治療がより有効になる可能性がある。治療後の葉酸受容体αの継続分析は、治療が有効であるかどうかを監視する手段を提供し、葉酸受容体α陽性シグナルのレベルの安定化又は低減は（すなわち、葉酸受容体α−陽性癌細胞の存在についての代理として）、治療が有効であることの指標である。
【００７３】
Ｖ．治療の影響を受け易い患者
これらの方法による治療の影響を受け易い患者は、通常、上記の癌の他の兆候又は症状を伴う胃組織中に検出可能なレベルの葉酸受容体αを有する。胃癌の種々の亜型及び病期は、以下で更に詳述されるように存在する。
【００７４】
場合によっては、本方法により治療された患者は、以前に他種の治療を受けたことがある（例えば、手術、化学療法、及び／又は放射線）。場合によっては、前治療は、寛解を誘導しないか、又は癌の成長を更に減速させる場合がある。そのような患者の一部において、癌は、１つ以上のそのような治療による処置に対し不応性である。
【００７５】
胃癌の危険性のある一部の患者は、疾患の兆候及び症状が出現する前に予防的に治療することもできる。そのような個体としては、疾患を経験した親戚を有する者、遺伝的又は生化学的マーカーの分析により危険性が決定される者、胃のペリコバクターピロリ感染を有する者、２センチメートルを超える胃のポリープを有した者、長期間にわたり胃の炎症及び膨張を有していた者（慢性萎縮性胃炎）、習慣的に塩分摂取する者、タバコ製品を使用する者、アルコールを消費する者、及び悪性貧血を有すると特定される者が挙げられる。
【００７６】
胃癌を患う個体は、病理報告において得られる腫瘍の組織学に従い認識され得る。組織学は、臨床治療、管理、及び予後の多くの態様を示す。大部分の胃腫瘍は、腺癌である（例えば、腸型、拡散型、乳頭状、管状、不良分化型、印環細胞、及び膠様腺癌）。他の胃腫瘍としては、軟組織肉腫（例えば、平滑筋肉腫及び消化管間質腫瘍）、リンパ腫（例えば、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫）、カルチノイド腫瘍、小細胞神経内分泌癌が挙げられる。
【００７７】
胃癌の病期分類は、ＴＮＭシステムに従い行うことができる。病期０において（上皮内癌）、異常細胞は、胃壁の粘膜（最内層）の内側に見出される。これらの異常細胞は、癌になり、付近の正常細胞に拡散する場合がある。病期Ｉにおいて、癌は、胃壁の粘膜（最内層）の内側に形成する。病期Ｉは、癌が拡散した場所に応じて病期ＩＡ及び病期ＩＢに分割される。病期ＩＡにおいて、癌は、胃壁の粘膜下（粘膜の次の組織層）に拡散するが、病期ＩＢにおいて、癌は胃壁の粘膜下に拡散して腫瘍付近の１個又は２個のリンパ節中に見出され得るか、又は癌は胃壁の筋肉層に拡散する。病期ＩＩの胃癌は、癌が拡散した場所に応じて病期ＩＩＡ及び病期ＩＩＢに分割される。病期ＩＩＡにおいて、癌は、胃壁の粘膜下に拡散するか、胃壁の筋肉層に拡散して腫瘍付近の１個又は２個のリンパ節中に見出されるか、又は胃の粘膜下に拡散して腫瘍付近の３〜６個のリンパ節中に見出され得る。病期ＩＩＢにおいて、癌は、胃壁の漿膜に拡散するか、胃壁の漿膜下に拡散して腫瘍付近の１個又は２個のリンパ節中に見出されるか、胃壁の筋肉層に拡散して腫瘍付近の３〜６個のリンパ節中に見出されるか、又は胃壁の粘膜下に拡散して腫瘍付近の７個以上のリンパ節中に見出される。病期ＩＩＩの胃癌は、癌が拡散した場所に応じて、病期ＩＩＩＡ、病期ＩＩＩＢ、及び病期ＩＩＩＣに分割される。病期ＩＩＩＡにおいて、癌は、胃壁の漿膜層に拡散して腫瘍付近の１個又は２個のリンパ節中に見出されるか、胃壁の漿膜下に拡散して腫瘍付近の３〜６個のリンパ節中に見出されるか、又は胃壁の筋肉層に拡散して腫瘍付近の７個以上のリンパ節中に見出される。病期ＩＩＩＢにおいて、癌は、脾臓、横断結腸、肝臓、隔膜、膵臓、腎臓、副腎、又は小腸等の器官付近に拡散して腫瘍付近の１個又は２個のリンパ節中に見出され得るか、胃壁の漿膜に拡散して腫瘍付近の３〜６個のリンパ節中に見出されるか、又は胃壁の漿膜下に拡散して腫瘍付近の７個以上のリンパ節中に見出される。病期ＩＩＩＣにおいて、癌は、脾臓、横断結腸、肝臓、隔膜、膵臓、腎臓、副腎、又は小腸等の器官付近に拡散して腫瘍付近の３個以上のリンパ節中に見出され得るか、胃壁の漿膜に拡散して腫瘍付近の７個以上のリンパ節中に見出される。病期ＩＶにおいて、癌は身体の遠位部に拡散した。ＴＮＭ病期系に対する代替は、３つの病期分類（潜在的に切除可能、局所的に進展、及び転移性）であり、これは放射線学的所見に基づく。他の予後要素も考慮される。胃癌悪性度分類は、細胞が顕微鏡下でどの程度異常に見えるかの指標も提供する。悪性度は、癌細胞がどの程度迅速に発達し得るかの指標を提供し、悪性度１は遅い成長を示し（すなわち、細胞は良好に分化される）、高次悪性度よりも拡散する可能性が低く、悪性度２は、より異常な外観及びわずかに速い成長を示し、悪性度３は、癌細胞がより迅速に成長する傾向があり、極めて異常に見え（「不良に分化される」）、拡散する可能性が高い。手術（すなわち、胃切除）を受ける患者の場合、切除の程度、すなわち、腫瘍の全てが切除されるか否かも外観に関して重要である。これは、場合によっては、Ｒ０〜Ｒ２のスケール上で、見ることができる腫瘍の全てが除去されたことを示すＲ０として列挙され、Ｒ２は、見ることができる一部の腫瘍を除去することができないことを示す。
【００７８】
早期胃癌症状は非特異的である。一般症状としては、軽食後に発生し得る膨満感又は疼痛、黒い便、経時的に悪化する嚥下困難、過剰なげっぷ、健康の全般的な衰退、食欲喪失、悪心、血液を含有し得る嘔吐、虚弱又は疲労、及び／又は体重減少が挙げられる。
【００７９】
ＶＩ．治療の方法及び薬学的組成物
本発明は、上記第２部Ｃに記載されるものに限定されないが、本明細書に開示される抗体及び抗原結合フラグメント（本明細書では集合的に「薬剤」と呼ばれる）により胃癌の治療又は予防の方法を提供する。
【００８０】
経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻孔内、硬膜外、及び経口経路を含む様々な送達系を使用し、薬剤を投与することができる。薬剤は、例えば、点滴又はボーラス注射によって、上皮又は皮膚粘膜内層（例えば、経口粘膜、直腸及び小腸粘膜等）を通じた吸収によって投与することができる。投与は全身又は局所であり得る。
【００８１】
薬剤は、注射、カテーテル手段、坐薬手段、又は埋込み手段によって投与することができ、埋込みは、シラスティック膜等の膜又は繊維を含む、多孔質、非多孔質、又はゼラチン状材料である。
【００８２】
代替として、薬剤は、制御放出系で送達され得る。例えば、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３、Ｓｅｆｔｏｎ，１９８９，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ  Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１、Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７、Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照）。代替として、ポリマー材料を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｌａｎｇｅｒ  ＆  Ｗｉｓｅ  ｅｄｓ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｓｍｏｌｅｎ  ＆  Ｂａｌｌ  ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ  ＆  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照されたい。Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１、Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｓｕｒｇ．７１：１０５も参照されたい。）他の制御放出系は、例えば、上記Ｌａｎｇｅｒにおいて論じられている。
【００８３】
薬剤は、治療上又は予防上有効な量の薬剤及び１つ以上の薬学的に適合性のある成分を含む薬学的組成物として投与することができる。例えば、薬学的組成物は、典型的に、１つ以上の薬学的担体を含む（例えば、水及び油等の滅菌液、石油、動物性、植物性、又は合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油等を含む）。水は、薬学的組成物が静脈内に投与されるとき、より典型的な担体である。生理食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）及び水性デキストロース及びグリセロール溶液は、特に注射可能な溶液の液体担体として用いることもできる。好適な薬学的賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が挙げられる。必要に応じて、組成物は、少量の湿潤剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤（例えば、アミノ酸）、及び／又は可溶化若しくは安定化剤（例えば、ｔｗｅｅｎ等の非イオン性界面活性剤又はスクロース、トレハロース等の糖）を含有することもできる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、ピル、カプセル、粉末、徐放性配合物等の形態をとることができる。使用の直前に液体調製物に変換されることが意図される固体形態調製物も含まれる。
【００８４】
組成物は、伝統的な結合剤及び担体、例えば、トリグリセリドと共に、坐薬として配合され得る。経口配合物は、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の基準担体を含むことができる。好適な薬学的担体の例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載される。そのような組成物は、適切な投与の形態を患者に提供するように、治療上有効な量の核酸又はタンパク質を、典型的に精製形態で、好適な量の担体と一緒に含有する。配合物は、投与方法に対応する。
【００８５】
典型的に、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、医薬品は、注射部位の疼痛を緩和するために、可溶化剤及びリグノカイン等の局所麻酔を含むこともできる。一般に、成分は、別個に供給されるか、又は例えば、活性成分の量を示すアンプル若しくは小袋等の密閉された容器中の凍結乾燥粉末又は濃縮物として、単位投与形態に一緒に混合されるかのいずれかである。薬学的組成物が点滴により投与されるとき、薬学的等級の滅菌水又は生理食塩水を含有する点滴ボトルで分注することができる。薬学的組成物が注射により投与されるとき、成分が投与前に混合され得るように、注射用滅菌水又は生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【００８６】
本明細書に記載されるように使用するための抗体及び抗原結合フラグメント、並びに薬学的組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁液、溶液等の任意の許容される投与形態で経口投与されてよい。抗体及び抗原結合フラグメント、並びに薬学的組成物は、非経口投与されてもよく、限定されないが、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、鼻孔内、局所的、髄腔内、肝内、病巣内、及び頭蓋内注射、又は点滴技法が挙げられる。一般に、抗体及び抗原結合フラグメント、並びに薬学的組成物は、例えば、注射により静脈内又は腹腔内に投与される。
【００８７】
胃癌の治療又は予防に有効な薬剤の量は、標準臨床技法によって決定され得る。更に、インビトロアッセイは、最適な投与量範囲を特定するのを助けるために、任意に用いられてよい。配合物に用いられる正確な用量は、投与経路及び癌の病期にも依存し、施術者の判断及び各患者の状況に従い決定されなければならない。有効な用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から誘導される用量反応曲線から外挿されてよい。用量は、細胞培養において決定されるように、ＩＣ５０（すなわち、症状の半最大阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように、動物モデルにおいて配合することができる。
【００８８】
例えば、薬剤の毒性及び治療有効性は、細胞培養物又は実験動物において、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するための標準薬学的手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。高い治療指数を呈する薬剤が好ましい。薬剤が毒性副作用を呈するとき、薬剤を罹患組織に標的する送達系を使用し、非葉酸受容体α発現細胞への潜在的な損傷を最小限にし、それにより副作用を低減することができる。
【００８９】
いくつかの実施形態において、対象は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１μｇ〜約５００ｍｇの１日用量範囲で本明細書に記載される抗体、抗原結合フラグメント、又は薬学的組成物を投与され得る。典型的に、葉酸受容体α発現胃癌と共に患者に投与される薬剤の投与量は、対象の体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜１００ｍｇである。より典型的には、対象に投与される投与量は、対象の体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜１０ｍｇであり、更により典型的には、対象の体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜５ｍｇ、又は０．１ｍｇ〜３ｍｇである。いくつかの実施形態において、葉酸受容体α発現胃癌を有する対象に投与される薬剤（例えば、ファルレツズマブ）の投与量は、対象の体重１ｋｇ当たり約２．５ｍｇ〜約１０ｍｇである。一般に、ヒト抗体は、外来タンパク質に対する免疫反応に起因し、他の種からの抗体よりもヒトの体内で長い半減期を有する。したがって、ヒト化、キメラ、又はヒト抗体を含むより低い投与量の薬学的組成物、及びより低頻度の投与が可能である場合が多い。
【００９０】
対象に投与される用量は、１日当たりに投与される少なくとも１つの抗原結合タンパク質の総量に関して測定することもできる。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり約５〜約５０００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約１０ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約１００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約２５０ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約５００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約７５０ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約１０００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約１５００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約２０００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約２５００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約３０００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約３５００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約４０００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約４５００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１日当たり最大約５０００ミリグラムの少なくとも１つの抗原結合タンパク質を投与される。いくつかの実施形態において、抗体、抗原結合フラグメント、又は薬学的組成物は、週１回又は週２回対象に投与される。
【００９１】
有効な治療のために、当業者は、治療される対象に適切な投与スケジュール及び投与量を推奨してよい。投与は、１日１回〜４回以上、必要な限り実施することが好ましい場合がある。投与は、組成物が持続送達ビヒクル中に配合される場合、より低頻度で実施されてよい。投与スケジュールは、活性薬物濃度に依存して変動してもよく、対象の必要性に依存し得る。
【００９２】
本方法は、手術、放射線、標的治療、化学療法、免疫療法、成長因子阻害剤の使用、又は抗血管新生因子等の他の治療手段と合わせることができる。抗葉酸受容体α抗体又はその抗原結合フラグメントは、手術、化学療法、又は放射線治療を受ける患者に同時に投与することができる。代替として、患者は、手術、化学療法、又は放射線治療を、抗葉酸受容体α抗体又はその抗原結合フラグメントの投与前又は投与後に受けることができ、抗体又は抗原結合フラグメントの投与の少なくとも１時間〜最長数ヶ月、例えば、少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１ヶ月、又は３カ月前又は後に受けることができる。
【００９３】
ＶＩＩ．キット
本発明は、葉酸受容体α発現胃癌を検出するための上記方法とともに使用するための診断キットを提供する。このキットは、典型的に、上記のような検出に有用な葉酸受容体α（例えば、２６Ｂ３）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する。１つ以上の追加の容器は、アッセイに使用される試薬又は緩衝液等の要素を包んでよい。又は代替として、そのようなキットは、抗体結合の直接又は間接的検出に好適なレポーター基を含有する検出試薬を含有することもできる。
【００９４】
本発明は、葉酸受容体α発現胃癌を治療するための薬学的キットを提供する。典型的に、そのようなキットは、本明細書に記載される治療組成物として配合された試薬（例えば、ＭＯＲＡｂ−００３）を含有し、キットでの配布に好適な種々の形態のいずれかであり得る。そのような形態は、抗葉酸受容体α抗体又は抗原結合フラグメントを提供するために、液体、粉末、錠剤、懸濁液、及び同様の配合物を含み得る。これらのキットは、凍結乾燥された抗体又はフラグメントの注射、再構築、又は希釈のために、薬学的に許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含むこともできる。
【００９５】
本発明は、診断及び治療のための複合キットを更に提供する。そのようなキットは、典型的に、固定組織切片中の検出に使用するための葉酸受容体αに結合する少なくとも１つの抗体（例えば、２６Ｂ３）と、治療に使用するための葉酸受容体αに結合する異なる抗体（例えば、ＭＯＲＡｂ−００３）とを含む。
【００９６】
キットは、典型的に、本明細書に記載される検出及び／又は治療の方法に使用するためのラベル又は指示書も含有する。このラベル又は指示書は、その製造、輸送、販売、又は使用中の任意の時点でキットに取り付けられるか、ないしは別の方法で付随する任意の文書又は記録された材料を指す。薬学的又は生物学的生成物の製造、使用、又は販売を規制する政府機関により規定された形態の通知であり得、この通知は、ヒト投与のための製造、使用、又は販売に関する機関の承認を反映する。ラベル又は指示書は、広告チラシ及びパンフレット、包装材料、指示書、オーディオ又はビデオカセット、コンピューターディスク、並びに薬学的キット上に直接印刷された文章を包含することもできる。
【００９７】
以下の実施例は、本明細書に開示される実施形態のいくつかについて更に記載するように提供される。これらの実施例は、限定されないが、開示される実施形態を説明することが意図される。
【実施例】
【００９８】
実施例１−抗体２６Ｂ３を使用するＦＲＡ発現胃癌の検出
免疫組織化学（ＩＨＣ）研究を行い、ホルマリンで固定したパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料への結合を決定した。表２は、分析に含まれる組織試料を特定する。特に、他の特定の組織に転移した胃癌の試料（「胃転移」）が挙げられる。例えば、標本＃４は、膀胱に転移した胃癌の試料である。ＦＦＰＥ漿液性卵巣癌組織を陽性対照として使用した。ＭＡＣＨ４（商標）汎用ＨＲＰ−ポリマー検出キット（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ）を使用し、ＦＲαに対し間接的ＩＨＣ試験を行った。ホルマリンで固定したパラフィン包埋標本を、正電荷ガラススライド上で５ミクロンに切片化し、約６０分間６０℃で加熱した。スライドをキシレンの３連続浴中でそれぞれ３分間脱パラフィン化し、１００％アルコールの３連続浴にそれぞれ３分間、続いて９５％アルコールの３連続浴にそれぞれ３分間移し、次いで脱イオン化（ＤＩ）水中で５分間洗浄した。次いで、調製試料を、ＤＩ水中で１：１０に希釈したＤｉｖａ熱誘導型エピトープ賦活液（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ）で前処置し、５００ｍｌのＤＩ水を既に充填した加圧脱クローキングチャンバ内に配置した。脱クローキングチャンバ内で試料を１５分間インキュベートし、加圧インキュベーションは、０．１１ＭＰａ（１６ＰＳＩ）で３０秒間、最大１２５℃に到達した後、１５分間９５℃に冷却した。次いで、スライドを室温で１５分間冷却した。冷却後、スライドをトリス緩衝生理食塩水／０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０（登録商標）洗浄緩衝液（ＴＢＳＴ）の３連続浴中でそれぞれ３分間洗浄した。全ての後次緩衝液洗浄もこのように行った。次いで、スライドを、ペルオキシダーゼ−１（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ）ブロッキング液中、室温で５分間ブロックし、ＴＢＳＴで洗浄した後、Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  Ｓｎｉｐｅｒ（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ）無血清汎用ブロッキング試薬を１０分間室温で適用した。試料をブロックした後、抗体希釈液（Ｄａｋｏ）中に希釈された２．５μｇ／ｍＬの２６Ｂ３抗体、又は汎用陰性対照−マウスのすぐに使える陰性対照抗体（Ｄａｋｏ、陰性アイソタイプ組織用）で６０分間室温でスライドをインキュベートした。次いで、スライドをＴＢＳＴで洗浄し、ＭＡＣＨ４（商標）マウスプローブ一次抗体エンハンサー（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＭＡＣＨ４（商標）キットで提供される）で１５分間室温でインキュベートした。次いで、スライドをＴＢＳＴで再度洗浄し、ポリマー−ＨＲＰ試薬（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＭＡＣＨ４（商標）キットで提供される）で２０分間室温でインキュベートした。インキュベーションに続いて、スライドをＴＢＳＴで洗浄し、３，３’−ジアミノベンジジンテトラヒドロクロリド（ＤＡＢ）溶液（Ｄａｋｏ）で５分間室温でインキュベートした。次いで、スライドをＤＩ水で３回、それぞれ３０〜６０秒間完全に洗浄し、ヘマトキシリン（Ｄａｋｏ）で２分間対比染色し、ＴＢＳＴで洗浄し、９５％及び１００％アルコールそれぞれの３連続浴中でそれぞれ３０秒間脱水し、キシレンの３連続浴中でそれぞれ３０秒間清浄した。最後に、分析前にカバースリップをスライドに適用した。ＦＲＡの発現を、免疫組織化学染色の半定量的スコアリングにより分析した。結果は表２に示される。
【００９９】
この実施例により実証されるように、抗体２６Ｂ３を使用し、ＦＲＡ発現胃癌を検出することができる。
【０１００】
実施例２−ＭＯＲＡｂ−００３を使用する胃癌の治療
ファルレツズマブは、葉酸受容体α（ＦＲＡ）に対して配向されたヒト化モノクローナル抗体である。ＦＲＡ発現ヒト卵巣癌細胞株の抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を介して主要細胞毒性をインビトロで媒介すること、及び異種移植モデルにおけるＦＲＡ発現ヒト卵巣癌細胞中の腫瘍成長をインビボで低減することが示された（Ｅｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎ  ７：６）。ＦＲＡの発現は、胃癌の４０％であることが報告されている。
【０１０１】
日本の埼玉医科大学国際医療センター及び国立がん研究センター中央病院において、書面によるインフォームドコンセントを得た後、ＦＲＡ発現固体腫瘍の治療に関する第Ｉ相オープンラベルの用量増加研究を行い、主目的として、用量限定毒性（ＤＬＴ）を監視し、最大耐性用量（ＭＴＤ）を推定した。この研究の主な包含基準は、２０歳以上＜８０歳の不応性であるか、又は標準治療に耐性であり、他の適切な治療を受けていない固体腫瘍を持つ患者、ＩＨＣにより確認されたＦＲＡ陽性腫瘍を持つ患者、正常な主要臓器機能を持つ患者、前治療（複数可）の持ち越し効果及び薬物の副作用を有しない患者、米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）による一般状態（ＰＳ）が０〜１である患者を含んだ。この研究の主な除外基準としては、臨床症状を呈するか、若しくは医療治療を必要とする脳転移；ＨＩＶ、ＨＣＶ抗体若しくはＨＢ抗原陽性；医療治療を必要とする深刻な感染；モノクローナル抗体若しくはタンパク質配合物に対する過敏症の履歴；同期の他の活性悪性腫瘍；又は胸水滲出若しくは排出を要する腹水が挙げられる。
【０１０２】
標準治療に耐性であるＦＲＡ発現固体腫瘍を持つ２名の胃癌患者がこの研究に参加した。薬物動態学的評価のための単一ファルレツズマブ投与後、疾患が進行するまで毎週繰り返し、静脈内注射によりファルレツズマブを投与した。具体的に、サイクル０（単回投与）において、４００ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内点滴によりファルレツズマブを投与し、サイクル１（繰り返し投与）から週１回４週間（１日目、８日目、１５日目、及び２２日目）を１つのサイクルとして投与した。ファルレツズマブ投与は、対象が、疾患の進行の証拠又は新たな病巣（複数可）の出現を含む、中止基準を満たすまで継続した。血清ファルレツズマブ濃度は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により決定した。薬物動態学的パラメータは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標）（バージョン６．２．１）を使用して分析した。血清ヒト抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）レベルは、ＥＬＩＳＡによりアッセイした。ＦＲＡ発現は、ＩＨＣにより評価した。免疫反応性強度は、反応なし（−）、弱（＋：細胞膜に沿って薄い周縁を持つ明るい茶色）、中度（＋＋：細胞膜に沿って薄い周縁を持つ濃い茶色）、又は強（＋＋＋：細胞膜に沿って薄い周縁を持つ濃い茶色又はより高い強度）として分類した。
【０１０３】
結果：２名の胃癌患者（患者＃１０：男性、７１歳、ＦＲＡ染色強度＋；患者＃１６：男性、６３歳、ＦＲＡ染色強度＋）は、ファルレツズマブ注入を受けた。患者＃１６のＦＲＡ発現固体腫瘍は、第１の治療Ｓ−１（大鵬薬品工業株式会社、日本）及び第２のドセタキセル治療を含む、標準治療に対し耐性であった。胃癌を持つ１名の患者（患者＃１６）において、２０ヶ月の長期疾患安定化が観察された。この患者において蓄積毒性は観察されなかった。図１は、胃癌患者＃１６における腫瘍の最長直径の和の変化、及び腫瘍マーカー癌胎児性抗原（ＣＥＡ）のレベルを示す。
【０１０４】
結論：腫瘍収縮は観察されなかったが、１名のＦＲＡ発現胃癌患者において、有意な腫瘍安定化が特定された。長期疾患安定化は、胃癌の亜集団において観察された。
【０１０５】
【表４−１】
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【０１０６】
【表４−２】
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【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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