(57)【要約】本発明は、生体分子を含む乾燥製剤の再構成のための新規な方法の提供に関し、特には、乾燥タンパク質製剤、および本発明の新規な方法に従って調製された再構成済製剤を含有する、非経口的投与に適した薬学的または獣医学的製品に関する。
2015511129.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体分子を含む乾燥製剤の再構成のための方法であって、
（ｉ）適切な再構成容器中に生体分子を含む乾燥製剤を移送し、または適切な再構成容器中で前記乾燥製剤を調製するステップ、
（ｉｉ）再構成容器に適量の水性賦形剤を添加するステップ、ならびに
（ｉｉｉ）水性賦形剤への生体分子を含む前記乾燥製剤の完全またはほぼ完全な再構成を得るため、および発泡を最小限しか示さないまたは発泡を示さない生体分子溶液を生成するために十分な時間をかけて、適切な相対遠心力で再構成容器を遠心分離するステップ
を含む、方法。
【請求項２】
ステップ（ｉ）および（ｉｉ）の順序が逆転されているまたは組み合わせられている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（ｉｉｉ）で生成された生体分子溶液が、遠心分離機からの除去前、除去中または除去後に軸混合または緩やかな混合をさらに施される、請求項１から２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
再構成容器が、遠心分離機中で１０ｘｇから１０，０００ｘｇまでの相対遠心力において遠心分離される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
再構成容器が、バイアル、シリンジ、遠心分離管、マルチウェルプレート、マイクロタイタープレート、エッペンドルフ型チューブ、ボトル、チューブ、バケット、バッグ、小袋またはフラスコである、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
再構成が、３０分未満、好ましくは２０分未満、より好ましくは１０分未満で提供される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
生体分子がタンパク質である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
再構成済溶液が１００ｍｇ／ｍｌ超の生体分子濃度を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
臨床試験における使用に適した再構成済溶液の調製のための、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
再構成済溶液が実質的に泡を含まない、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
同じまたは異なる乾燥生体分子製剤の複数のサンプルが同時に再構成され得る、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
再構成混合物の遠心分離が１０００ｘｇまたは１００ｘｇ以下のＲＣＦで実施される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
静穏なまたは継続的もしくは断続的な手動かき混ぜプロトコルに関する再構成時間と比較したとき、再構成時間が少なくとも１０％から９５％まで低減される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
乾燥タンパク質の無菌再構成のための方法であって、
（ｉ）無菌再構成容器中への無菌タンパク質の移送、
（ｉｉ）再構成容器への適量の無菌水性賦形剤の添加、ならびに
（ｉｉｉ）水性賦形剤への無菌乾燥タンパク質製剤の完全またはほぼ完全な再構成を得て、最小限の発泡しか示さない無菌タンパク質溶液を生成するために十分な時間をかけた、適切な相対遠心力での再構成容器の遠心分離
による、方法。
【請求項１５】
乾燥タンパク質製剤の再構成のための方法であって、
ｉ）適切な再構成容器中への乾燥タンパク質製剤の移送、または適切な再構成容器中での乾燥タンパク質製剤の調製、
ｉｉ）再構成容器中への、ステップ（ｉ）で使用したのと同じタンパク質の適量の水溶液の添加、
ｉｉｉ）水性賦形剤中への乾燥タンパク質製剤の完全またはほぼ完全な再構成を得て、最小限の発泡しか示さないタンパク質溶液を生成するために十分な時間をかけた、適切な相対遠心力での再構成容器の遠心分離
を含み、ステップ（ｉ）および（ｉｉ）の順序を逆転させてまたは組み合わせてもよく、容器に賦形剤を移送させ次いで乾燥タンパク質を添加し、かつ乾燥タンパク質と賦形剤との既製混合物を容器に移送させ、
（ｉｉ）のタンパク質水溶液が、任意選択により１つまたは複数の緩衝液、界面活性剤、塩、安定剤、またはこれらの混合物を含み得る、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体分子を含む乾燥製剤の再構成のための新規な方法の提供に関し、特には、乾燥タンパク質製剤、および本発明の新規な方法に従って調製された再構成済製剤を含有する、非経口的投与に適した薬学的または獣医学的製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体分子が生物薬学的産業の中で潜在的な医薬品有効成分（ＡＰＩ）としてますます標的とされているため、このような材料の効果的な送達を可能にするのに適した製剤もまた必要とされている。数多くの生体分子は最初、溶液としての非経口投与前の再構成のために、乾燥状態にして配合される。しかしながら、数多くの生体分子含有製剤については、再構成は、生体分子自体の性質、例えばかさばる生体分子の乾燥粉末，または製剤、例えば所望の濃度レベルの観点からは、生成される泡のレベルもしくは再構成済製剤間の不整合からのいずれかのため問題となる。
【０００３】
モノクローナル抗体等の治療用タンパク質は、生物薬学的産業のために重要な生体分子薬物であり、幅広い範囲の指示において標的とされている開発中の数多くの治療用タンパクがある。典型的には、市販の治療用タンパク質は、溶液として非経口的に投与され、処置は、病院内で点滴または注射により医療専業者から対象に投与され得、さもなくば自己投与され得る。
【０００４】
溶液中で不良な安定性を示す治療用タンパク質は、しばしば乾燥状態にして安定化される。安定化効果はタンパク質毎に異なり得るが、移動性を低減すること、立体配座安定性を増大すること、および、水が触媒する分解経路を予防または低減することを含み得る。
【０００５】
凍結乾燥した粉末またはケーク等の乾燥タンパク質製剤としてタンパク質が乾燥状態で貯蔵される場合、それらは、最も一般的には、溶液として患者に投与され得る前に、再溶解して水性賦形剤にする必要がある。注射用水等の適量の賦形剤の添加により乾燥タンパク質製剤を可溶化されるときのタンパク質溶液の形成は、一般に再構成と呼称される。賦形剤の添加によって始まる再構成プロセスは、典型的には、乾燥タンパク質製剤を粉末またはケークからタンパク質の溶液に変換する。好ましくは、再構成プロセスの完了のとき、形成されたタンパク質溶液は、光学的に透明であり、さもなくば乳白色であるが、視認可能粒子を全く含有しないべきである。
【０００６】
視認可能粒子またはサブビジブル粒子の存在は、タンパク質凝集体の形成につながる分解プロセスが、充填処理、冷凍処理または乾燥処理等の製品製造ステップの１つまたは複数の間、または製造後の出荷および貯蔵の間、さもなくば再構成プロセス自体の間に起きたことを指し示し得る。製造、出荷および貯蔵中に粒子を生成するリスクを確実に最小化するために、市販の治療用タンパク質製品の開発中には多大な注意を払うことに留意すべきである。これは、投与される治療用タンパク質の溶液、特に変性タンパク質を含有する溶液中に存在する粒子が、タンパク質薬物に対する望ましくない免疫応答を患者が進行させるリスクをおそらくは顕著に増大させるためである。免疫原性に伴う問題には、治療用タンパク質の排出能を中和または増強し、さもなくば薬物の蓄積につながる、抗薬物性抗体の発生を挙げることができる。したがって、視認可能粒子を伴わず、好ましくは最小限しか泡を形成することなく光学的に透明な溶液を提供する、乾燥生体分子製剤、特に乾燥タンパク質製剤の再構成のプロセスに関する必要性がある。
【０００７】
乾燥タンパク質製剤を再構成する具体的なプロセスは、視認可能粒子またはサブビジブル粒子の形成をもたらし得る、タンパク質の凝集を引き起こすリスクを帯びていることが知られている。したがって、タンパク質／賦形剤混合物を振とうするまたは激しくかき回すことが、両方ともタンパク質の変性またはアンフォールディングを引き起こし得るせん断応力および／またはバブルの生成におそらくは起因して、不良に再構成された製品をもたらし得ることは、当技術分野において周知である。したがって、一般的に、治療用タンパク質の薬物製品挿入物に提供された再構成の指示は、「振とうするな」と具体的に述べている。あまりに激し振とうされたまたはかき回されたタンパク質溶液は、典型的には、気泡が乾燥タンパク質製剤粉末の再構成中に放出された、さもなくば振とうまたはかき回しにより直接形成された、持続的な泡の層を含有する。これらのバブルは、変性タンパク質の存在により安定化することができると考えられている。したがって、視認可能粒子およびサブビジブル粒子の形成を起こすリスクを抑制する、乾燥生体分子製剤、特に乾燥タンパク質製剤の再構成のための改善された方法用のプロセスに関する必要性がある。
【０００８】
乾燥タンパク質製剤用に提供された再構成の指示は、詳細にはタンパク質毎に異なるが、再構成ステップに共通の下記の例は、バイアル中の乾燥製品として調達される下記の薬物、Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）（パリビズマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラツズマブ）、Ｆｕｚｅｏｎ（登録商標）（エンフビルチド）、およびＸｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）の製品挿入物中（手動的再構成、（緩やかな）かき混ぜまたは（緩やかな）転がし、振とうなし、泡の回避、透明または乳白色の溶液、粒子状物質なし）に見出されることになる。
【０００９】
したがって、生体分子および治療用タンパク質の乾燥粉末製剤の再構成は、典型的には、手によって実施され、タンパク質が分解することなくプロセスを再現可能に確実に実施する責任者の技能および経験を頼りとする。３０分未満等の適度な時間で完全な再構成を達成するために、「バイアルを緩やかにかき混ぜる」ことが必要であるとしばしば述べられている。これは時間もかかるし主観的でもあり、医師等の管理者が、患者の処置の前に薬剤を用意するのに時間を費やすことを要求する。さらに、これが不正確に行われたならば、いくらかごくわずかなタンパク質が分解してしまった可能性を伴う、「過剰な発泡」の形成につながり得る。したがって、乾燥タンパク質製剤を再構成する責任者は、生成された泡のレベルが過剰であるか否かも判断しながら、緩やかなかき混ぜを達成するために適当な技法を適用しなければならない。さらに、投与のときに特定の治療用タンパク質溶液が免疫応答を発生させないならば、したがって、患者が薬物から最早いかなる治療的利益も得られなくなってしまうリスクがある。さらに、再構成済溶液は典型的に貯蔵されないため、処置が遅延されるならば、薬物は後の使用に適さなくなり得、したがって浪費されてしまっている。したがって、浪費を低減するためにより素早く再構成することができ、人毎の差異を最小化するためのより調節された方法により再構成することができ、かつ、発泡のリスクを低減しながら特にタンパク質用に再構成することができる、患者への投与に適した再構成済製剤を提供する、乾燥生体分子製剤、特に乾燥タンパク質製剤の再構成のための改善された方法用のプロセスに関する必要性がある。
【００１０】
乾燥した治療用タンパク質製剤またはその他の治療的生体分子製剤の再構成時の泡の生成は、典型的には新しい薬物用の臨床試験に使用される、二重盲検プロセスに伴う困難もまた生じさせ得る。再構成された活性薬物製剤におけるのと同様な再構成されたプラセボ製剤中に同じレベルおよび／または整合性の泡を再現することは困難であり、そのため、薬物を投与する熟練者は、どの患者がプラセボを受領しておりどの患者が薬物を受領しているかを認識できるようになり得る。したがって、乾燥生体分子製剤の再構成時に最小限の発泡しか起こさないまたは発泡を起こさない再構成方法は、臨床試験のより効果的な盲検化を容易にすることにより、明瞭な利益を提供し得る。
【００１１】
したがって、不良に再構成された治療的生体分子、特にタンパク質を軽率に投与するリスクを低減または取り除く、乾燥生体分子含有製剤、特に乾燥タンパク質製剤のための改善された再構成方法を開発する明瞭な必要性がある。
【００１２】
生体分子を含むかさばる乾燥製剤は、高濃度の再構成された生体分子含有溶液が必要とされる場合、再構成に関する特定の難点をもたらす。乾燥タンパク質製剤を再構成するための新しい方法の必要性は特に、単回の１ｍｌ注射での１００ｍｇ超の用量のタンパク質薬物の送達のために必要とされるもの等、高いタンパク質濃度溶液を考慮した場合に顕著に大きくなる。高濃度タンパク質溶液は、可逆的および不可逆的な会合プロセスに起因した問題となる傾向が本質的に増しており、これらは、長時間の期間の貯蔵後または凍結融解サイクル後は特に、可溶性および不溶性の凝集体の形成への経路を提供し得る。タンパク質を乾燥状態にして貯蔵しておき、使用のときにだけ再構成して高濃度溶液を形成することにより、ゆっくりとした凝集体形成により起きる問題を予防または緩和することができる。しかしながら、高濃度への乾燥タンパク質製剤の再構成は明快でない。これは、再構成時間が一般にタンパク質濃度と共に非線形に増大することが見出されているためである。異なる乾燥タンパク質製剤の多様性についての再構成時間に関する、２０１１年２月１０日に公開された出願ＷＯ２０１１／０１７０７０の図３Ａにより示されている通り、５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液に関する再構成時間は、２５秒から１１分３０秒までの範囲になり，７０ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液に関しては、再構成時間が１１秒から２２分までの範囲になり、１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液を調製するためには、再構成時間が５分４０秒から９０分の範囲になる。１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液を調製するための再構成時間は、５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液のためのものより約５倍から３０倍大きい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
はるかにより大きい再構成時間が高濃度の生体分子、特にタンパク質のために必要とされるこの現象は、患者への投与のために生体分子／タンパク質溶液を調製するとき、ことさらの困難をもたらし得る。手によって継続的または断続的にかき混ぜる必要があるバイアルは、許容不可な量の医療従事者の時間を奪ってしまう恐れがある。さらに、粉末と賦形剤との比が大きくなるほど、バイアルの側面に粘着させることなく粉末を濡らすために必要とされる技能レベルが大きくなる。溶解した粉末すなわちタンパク質の濃度が増大するにつれて、溶液もまたより粘性になり、したがって、より多くのエネルギーが溶液を混合するために費やされる必要があるが、そのときは、溶液をかき回し過ぎて発泡を起こさないように多大な注意を払う必要がある。したがって、現行の再構成方法を用いると、発泡の可能性および結果としてのタンパク質分解のリスクが、より高いタンパク質濃度においてはさらに大きくなる。
【００１４】
したがって、泡を形成することなくかつ最小限しか手動的介入せずに、高い生体分子濃度への乾燥生体分子製剤の再構成、特に高いタンパク質濃度への乾燥タンパク質製剤の再構成を低減された／適度な時間で達成することができる、１つまたは複数の方法に関する必要性がある。
【００１５】
非経口的投与用に適するようになるために、高い生体分子またはタンパク質濃度の溶液は、薬学的に許容可能な添加剤のみを含むこと、ならびに、タンパク質統合性の保持、注射可能性および許容可能な注射用の重量オスモル濃度等、その他のクライテリアを満たすこともまた必要とする。したがって、泡を形成することなくかつ最小限しか手動的介入せずに適度な時間で再構成することができ、良好な注射可能性および許容可能な重量オスモル濃度を有する高い統合性のタンパク質を含有する溶液を生成する、安定な乾燥粉末製剤を生成し得る方法に関する必要性も同様にある。不良に再構成された治療的生体分子を軽率に投与するリスクを低減または取り除く乾燥生体分子製剤の再構成のための方法を提供すること、適度な時間で再構成でき、泡を形成することなく再構成でき、最小限しか手動的介入せずに再構成できる安定な乾燥粉末製剤を生成すること、良好な注射可能性を有する溶液を生成し、許容可能な重量オスモル濃度を有する溶液を生成する高い統合性のタンパク質を含有するタンパク質溶液を生成することが、本発明の目的である。泡を形成することなくかつ最小限しか手動的介入せずに、高度に濃縮された生体分子溶液への乾燥生体分子製剤の再構成を低減された／適度な時間で達成することができる方法を提供することもまた、本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、
ｉ）適切な再構成容器中への生体分子（複数可）を含む乾燥製剤の移送、または適切な再構成容器中でのこのような乾燥製剤の調製、
ｉｉ）再構成容器への適量の水性賦形剤の添加、ならびに
ｉｉｉ）水性賦形剤への前記乾燥製剤の完全またはほぼ完全な再構成を得るため、および発泡を最小限しか示さないまたは発泡を示さない溶液を生成するために十分な時間をかけた、適切な相対遠心力での再構成容器の遠心分離
を含む、生体分子を含む乾燥製剤の再構成の方法であって、ステップ（ｉ）および（ｉｉ）の順序を逆転させてまたは組み合わせてもよく、容器に賦形剤を移送させ次いで乾燥製剤を添加し、かつ生体分子を含む乾燥製剤と賦形剤との既製混合物を容器に移送させる、方法を提供する。
【００１７】
生体分子を含む乾燥製剤を再構成容器中の賦形剤に添加するとき、本発明は、生体分子を含む乾燥製剤の再構成のための方法であって、
ｉ）適切な再構成容器への適量の水性賦形剤の添加、
ｉｉ）再構成容器中への生体分子を含む乾燥製剤の移送、ならびに
ｉｉｉ）水性賦形剤への前記製剤の完全またはほぼ完全な再構成を得るため、および発泡を最小限しか示さないまたは発泡を示さない溶液を生成するために十分な時間をかけた、適切な相対遠心力での再構成容器の遠心分離
を含む、方法を提供する。
【００１８】
本出願者は、本発明の再構成方法が、望ましい光学的特性を有する再構成済製剤を提供し、これまでに達成可能だったものより少ない時間で再構成済製剤を提供し、これまでに達成可能だったものより低減された変動性を有する再構成済製剤を提供することを見出した。
【００１９】
本発明の方法により提供される再構成済溶液は、好ましくは、均一で光学的に透明であり、視認可能粒子を含まない。
【００２０】
生体分子を含む乾燥製剤がタンパク質製剤であるとき、本出願者は、望ましいタンパク質統合性、望ましい光学的特性および望ましいタンパク質溶液濃度レベルを有する再構成済製剤を本発明の方法により調製できることを見出した。したがって、本発明は、タンパク質を含む乾燥製剤の再構成のための方法であって、
（ｉ）適切な再構成容器中へのタンパク質を含む乾燥製剤の移送、または適切な再構成容器中での前記乾燥製剤の調製、
（ｉｉ）再構成容器への適量の水性賦形剤の添加、ならびに
（ｉｉｉ）水性賦形剤への前記乾燥製剤の完全またはほぼ完全な再構成を得るため、および発泡を最小限しか示さないまたは発泡を示さないタンパク質溶液を生成するために十分な時間をかけた、適切な相対遠心力での再構成容器の遠心分離
を含み、
ステップ（ｉ）および（ｉｉ）の順序を逆転させてまたは組み合わせてもよく、容器に賦形剤を移送させ次いで乾燥タンパク質を添加し、かつ乾燥タンパク質と賦形剤との既製混合物を容器に移送させる、方法を提供する。
【００２１】
乾燥タンパク質を再構成容器中の賦形剤に添加するとき、本発明は、
（ｉ）適切な再構成容器への適量の水性賦形剤の添加、
（ｉｉ）再構成容器中へのタンパク質を含む乾燥製剤の移送、または再構成容器中での前記乾燥製剤の調製、ならびに
（ｉｉｉ）水性賦形剤への乾燥製剤の完全またはほぼ完全な再構成を得るため、および発泡を最小限しか示さないまたは発泡を示さないタンパク質溶液を生成するために十分な時間をかけた、適切な相対遠心力での再構成容器の遠心分離
を含む、タンパク質を含む乾燥製剤の再構成のための方法を提供する。
【００２２】
本発明の方法により提供される再構成済溶液は、好ましくは、均一で光学的に透明であり、視認可能粒子を含まない。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、賦形剤の添加の１０分後に撮った実施例１のバイアルＡ、Ｂ、ＣおよびＤを示している写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明の方法は、生体分子を含む乾燥製剤からの生体分子溶液の再構成を提供し、特には、高度に望ましい時間枠内でタンパク質を含む乾燥製剤から再構成されたタンパク質溶液を提供する。本発明の方法によれば、タンパク質溶液を含む再構成された生体分子溶液は、典型的には、６０分未満または３０分で、好ましくは１０分から１５分の間で、より好ましくは５分から１０分の間で調製することができる。
【００２５】
本明細書で規定された生体分子を含む乾燥製剤には、純粋な生体分子の乾燥製剤と生体分子の混合物の乾燥製剤との両方を含める。生体分子の混合物の製剤には、乾燥製剤にされたバクテリアライセート等、細胞ソースに由来した複合混合物を挙げることができる。
【００２６】
本出願者は、本発明の遠心分離方法は、完全な再構成を達成するまでの時間の低減、発泡の低減もしくは排除、および／または手動的インプットの最小化を提供するために、生体分子を含む数多くの乾燥製剤の再構成に有利に適用することができることを見出した。疑義の回避のために、生体分子という用語が本明細書において一般的な意味で使用されるとき、前記用語は、具体的にはタンパク質を特に含める。
【００２７】
以下の実施例１は、本方法の迅速な再構成時間と、従来のプロトコルを用いて達成可能な再構成時間との対比を示している。
【００２８】
本発明の方法に従って再構成され得る生体分子を含む適切な乾燥製剤には、タンパク質、多糖類、核酸、脂質およびペプチド、天然バイオポリマーまたは合成ポリマー、ならびにこれらの混合物および組合せの製剤が挙げられる。適切な乾燥生体分子製剤には、無細胞性製剤、生細胞または死細胞、毒化細胞または溶解細胞、さもなくば生ウイルスまたは死ウイルスを含有する製剤も挙げることができる。疑義の回避のために、生体分子という用語が本明細書において一般的な意味で使用されるとき、前記用語は、具体的にはタンパク質を特に含める。
【００２９】
生体分子を含む何らかの特定の乾燥製剤を本発明の方法に従って再構成できるかどうかの決定は、実施例２で詳述されている簡単な実験により達成され得る。実施例２は、何らかの特定の再構成済溶液の潜在的な利点をどのようにして測ることができるかについての説明をさらに提供する。
【００３０】
任意選択により、遠心分離機からの再構成容器の取り外しのときに、緩やかな混合プロセスを溶液に適用して、均一性を確保してもよい。このような緩やかな混合は、遠心分離後に存在し得るあらゆる濃度勾配を除去するが、例えばバイアルまたはシリンジを用いて、手の間で５秒から３０秒まで等の短時間わずかに角度をつけて緩やかにかき混ぜるまたは転がすことにより実施することができる。したがって、本出願者は、本方法によるタンパク質またはその他の生体分子溶液の調製後、かつ、対象への送達のためもしくはシリンジを介した対象への送達のためバイアルからシリンジまでの溶液の移送または貯蔵のための適切な容器への移送のいずれかの前に、わずかに角度をつけて再構成容器を緩やかに回転させることは、濃度を隈なく有する溶液の提供のために有利だと証明できることをさらに見出した。この遠心分離後ステップのさらなる利益は、移送中に容器の側面に保持された何らかの最小限の量の乾燥タンパク質またはその他の生体分子製剤、すなわち残存の粉末片しか組み入れられないことであり得る。
【００３１】
したがって、本発明は、得られた溶液に緩やかな混合を施してあらゆる残存の濃度差異を取り除くステップを任意選択により含む、以上に規定された再構成方法をさらに提供する。
【００３２】
理解されよう通り、完全な再構成は、生体分子を含む乾燥製剤が完全に再構成されておりさらなる行為が必要とされないと当業者が判断したとき、言い換えると光学的に透明であるとみなされるときに達成されている。完全に再構成されたサンプルは、典型的には、均一な溶液または均一な分散液である。ほぼ完全な再構成は、生体分子を含む乾燥製剤が完全な再構成に非常に近いと当業者が判断した場合に起きることになる。例えば、ほぼ完全な再構成は、完全に再構成されていない少量の材料が残留している場合または溶液が均一でない場合に起き得る。典型的には元々存在していた乾燥製剤の合計量の５％未満または１％残留している少量の材料は、再構成容器の壁に付着して残留し得、溶液のレベルより高くあり得る。典型的には、光学的に透明な溶液を提供するためにかき混ぜ等のさらなる緩やかな混合プロセスを本明細書で記述した再構成容器に適用することにより、ほぼ完全な再構成に到達したサンプルの完全な再構成を達成することが可能である。
【００３３】
疑義の回避のために、完全な再構成および完全な溶解は、光学的に透明であるとみなされる溶液を提供する。同様に、ほぼ完全な再構成およびほぼ完全な溶解は、完全な再構成または完全な溶解に非常に近いと当業者が判断する溶液を提供する。本明細書で規定された再構成および溶解という用語は、相互変換可能である。本明細書で規定された完全な再構成／溶解は、乾燥製剤が完全に溶解して光学的に透明な溶液を生成する場合に起きることになる。この光学的に透明な溶液は、１０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度に希釈したとき、１０ＮＴＵ未満の濁度を示すべきである。好ましくは、完全な再構成／溶解は、本明細書で示した通り、初期処置のときまたは緩やかなかき混ぜの後のいずれかで得られる。
【００３４】
本明細書で規定された泡には、泡の完全な層と部分的な層の両方、または、再構成済溶液の表面周囲の泡の環が挙げられる。本発明の方法に従って調製された再構成済溶液は、発泡を最小限しか示さないまたは発泡を示さない。最小限の発泡は、実質的に泡を含まない溶液を含める。溶液表面上または溶液中のわずかなバブルの存在は、持続的な泡を構成しているとはみなされず、最小限もしくは皆無の泡または実質的に泡を含まない溶液の規定の中に含まれる。
【００３５】
有利なことに、本発明の方法は、最小限の発泡しか示さずかつ持続的な泡を含まない、タンパク質を含む乾燥生体分子から再構成された製剤を提供する。以上に示した通り、再構成済溶液中の持続的な泡の存在は、生体分子またはタンパク質統合性の低減すなわち凝集を伴う変性、および免疫応答の可能性に関連し得る。したがって、本方法は、現行の方法に対比して低減された変性のリスクを提供する。
【００３６】
乾燥タンパク質製剤または乾燥生体分子製剤の組合せを含めて、生体分子を含む任意の適切な乾燥製剤を本発明の再構成方法に使用することができ、スプレー乾燥された粉末またはケーク、凍結乾燥した粉末またはケーク、泡、冷凍スプレー乾燥された粉末、凍結乾燥タンパク質粉末またはケーク、沈降タンパク質粉末またはケーク、真空乾燥された粉末またはケーク、空気乾燥された粉末またはケーク、スプレー乾燥された粉末またはケーク、および超臨界流体乾燥された粉末またはケークが挙げられる。適切な乾燥タンパク質製剤は、当技術分野において公知な方法のいずれか、または後述する方法に従って調製することができる。
【００３７】
したがって、本発明の再構成方法は、スプレー乾燥された粉末またはケーク、凍結乾燥した粉末またはケーク、泡、冷凍スプレー乾燥された粉末、凍結乾燥タンパク質粉末またはケーク、沈降タンパク質粉末またはケーク、真空乾燥された粉末またはケーク、空気乾燥された粉末またはケーク、スプレー乾燥された粉末またはケーク、および超臨界流体乾燥された粉末またはケークが挙げられる、任意の適切な乾燥製剤の再構成のために使用することができる。
【００３８】
本発明は、ステップ（ｉ）または（ａ）が、適切な再構成容器中への１つまたは複数の乾燥タンパク質製剤の移送を含み、乾燥タンパク質製剤の前記混合物が、同じタンパク質の異なる乾燥製剤または１つを超えるのタンパク質の乾燥製剤であり得る、前述した方法をさらに提供する。
【００３９】
乾燥製剤に製剤できる任意のタンパク質が、本発明の再構成方法に従って使用され得る。
【００４０】
適切なタンパク質には、＜５ＫＤａのペプチド、５〜５０ＫＤａの小型タンパク質、５０〜２００ＫＤａの中型タンパク質、および＞２００ＫＤａの大型タンパク質が挙げられる。
【００４１】
乾燥粉末製剤として調製された下記の治療用または診断用タンパク質のいずれか１つまたは組合せが、本発明の再構成方法に従って使用され得る：抗体、非抗体タンパク質、免疫グロブリン、免疫グロブリン様タンパク質、成長因子、融合タンパク質、キメラタンパク質、酵素、ホルモン、サイトカイン、Ｆｃ誘導体化タンパク質または薬物、および組み換え抗原。適切な抗体は、ポリクローナル型、モノクローナル型、天然型、組み換え型、ヒト型、ヒト化型、キメラ型、多特異性型または単鎖型であってよい。クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭの免疫グロブリンが使用され得る。適切なＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含めた、任意のアイソタイプのものであってよい。抗体−薬物コンジュゲートも使用することができる。抗体の誘導体も使用することができ、これらには、組み換えＤＮＡ技法によりまたは完全な抗体の酵素式もしくは化学的開裂により生成された抗原結合部位を含める。抗原結合部位には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）．ｓｕｂ．２、Ｆｖ、ｄＡｂ、および相補性決定領域（ＣＤ）フラグメント、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ、ならびに、ポリペプチドに結合する特異的な抗原を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが特に挙げられる。
【００４２】
天然に存在するタンパク質の類縁体も含まれ、例えば改質グリコシル化を有するポリペプチド、グリコシル化を有さない（グリコシル化されていない）ポリペプチド、例えば水溶性ポリマー（例えばペグ化されている）、放射性核種、またはその他の診断用もしくは標的化用もしくは治療用部分に結合するように化学的に改質された天然に存在するまたは類縁体のポリペプチドの誘導体等を挙げることができる。
【００４３】
記述した遠心分離機再構成プロセスから利益を得ることになり得る市販の乾燥タンパク質製剤には、Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）（パリビズマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラツズマブ）、Ｆｕｚｅｏｎ（登録商標）（エンフビルチド）、Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）、Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）（エファリズマブ）、およびＩｌａｒｉｓ（登録商標）（カナキヌマブ）が挙げられる。
【００４４】
本発明の再構成方法における使用に適した水性賦形剤には、注射用水（ＷＦＩ）、蒸留水、脱イオン水、注射用無菌水（ＳＷＦＩ）、および、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）すなわち適切な抗菌性保存剤を有する無菌水が挙げられる。水性賦形剤は、１つまたは複数の緩衝液、界面活性剤、塩、安定剤、またはこれらの混合物をさらに含んでいてもよい。これらは、再構成済溶液の張性を制御するためまたは溶液中の生体分子を安定化するために必要となり得る。本発明の再構成方法における使用に適した緩衝液、界面活性剤、塩および安定剤は、当技術分野において周知のものから選択することができる。存在する場合は緩衝液、界面活性剤、塩もしくは安定剤またはこれらの混合物を含め、水性賦形剤の相対量は、標的の再構成済タンパク質溶液の濃度に依存する。何らかの特定の水性賦形剤中への使用に適した緩衝液、界面活性剤、塩および安定剤の選択は、再構成しようとする特定の乾燥タンパク質製剤に依存する。
【００４５】
本出願者は、非常に高度に濃縮された生体分子特にタンパク質の再構成済溶液を調製するとき、再構成しようとするものと同じ生体分子の水溶液を含む水性賦形剤の使用が有利であることを見出した。したがって、本発明は、生体分子を含む乾燥製剤の再構成のための方法であって、
ｉ）適切な再構成容器中への生体分子を含む乾燥製剤、好ましくは乾燥タンパク質製剤の移送、または適切な再構成容器中での生体分子を含む乾燥製剤、好ましくは乾燥タンパク質製剤の調製、
ｉｉ）再構成容器中への、ステップ（ｉ）で使用したのと同じ生体分子またはタンパク質の適量の水溶液の添加、
ｉｉｉ）水性賦形剤への乾燥製剤の完全またはほぼ完全な再構成を得るため、および最小限の発泡しか示さない溶液を生成するために十分な時間をかけた、適切な相対遠心力での再構成容器の遠心分離
を含み、ステップ（ｉ）および（ｉｉ）の順序を逆転させてまたは組み合わせてもよく、容器に賦形剤を移送させ次いで乾燥製剤を添加し、かつ乾燥製剤と賦形剤との既製混合物を容器に移送させる、（ｉｉ）の水溶液が、１つまたは複数の緩衝液、界面活性剤、塩、安定剤、またはこれらの混合物を任意選択により含み得る、方法をさらに提供する。
【００４６】
ステップ（ｉ）、（ｉｉ）または（ａ）に関して記述した本発明の再構成方法に従って使用される乾燥生体分子、特にタンパク質製剤および水性賦形剤の量は、得られた溶液中の生体分子またはタンパク質の濃度を決定する。
【００４７】
本出願者はまた、溶液の標的濃度が増大し固体乾燥製剤の体積が大きくなるにつれて、本発明の再構成方法がますます有利になることも見出した。
【００４８】
約１００ｍｇ／ｍｌ超の高いタンパク質溶液の濃度、および約１４０ｍｇ／ｍｌから約３５０ｍｇ／ｍｌまでの非常に高いタンパク質溶液の濃度は、例えば単回の低容積注射を用いた送達等による非経口的投与用の薬物製剤の調製において特に望ましい。
【００４９】
このように濃縮された条件および高度に濃縮された条件においては、固体乾燥タンパク質製剤と添加された水性賦形剤との混合は、従来の再構成プロトコルを用いて達成することがより難しくなる。
【００５０】
本発明に従った改善された再構成方法を用いれば、従来のプロトコルに伴う困難は、遠心力式再構成により回避される。本出願者は、本明細書の改善された方法を用いれば、再構成容器中の非常に高い相対量の固体の場合でさえ効果的な再構成が達成されることを見出した。以下に示している通り、本発明の方法を使用して、生体分子を含む乾燥製剤の再構成時間を少なくとも２５％低減することもできる。したがって、本発明は、静穏なまたは継続的もしくは断続的な手動かき混ぜプロトコルに比較したとき、遠心分離により調製された再構成済生体分子溶液における少なくとも約１０％から少なくとも約９５％までの再構成時間の低減、より好ましくは少なくとも約２５％から少なくとも約９５％までの再構成時間の低減のための方法を提供する。最も好ましくは、再構成時間は、遠心分離を用いた場合、静穏なまたは継続的もしくは断続的な手動かき混ぜプロトコルと比較したときに少なくとも５０％低減される。低減のパーセンテージは、遠心分離を用いて測定された再構成時間を静穏なまたは継続的もしくは断続的な手動かき混ぜプロトコルを用いて測定された再構成時間から差し引き、この数値を、静穏なまたは継続的もしくは断続的な手動かき混ぜプロトコルを用いた再構成時間で割り、１００を掛けることにより計算することができる。例えば、遠心分離を用いた再構成時間が５分であり、かき混ぜを用いた再構成時間が１５分であるならば、％低減は、１００×（１５−５）／１５＝６６．７％である。
【００５１】
以下の実施例１は、従来のプロトコルにより提供されるものと比較した、本方法による高度に濃縮された（＞２００ｍｇ／ｍｌ）タンパク質溶液の再構成の利点を説明している。
【００５２】
したがって、本発明の方法は、タンパク質溶液への乾燥タンパク質製剤の迅速な再構成のために、約１００ｍｇ／ｍｌ超の高い濃度、特に約１４０ｍｇ／ｍｌから約３５０ｍｇ／ｍｌまでの、好ましくは約１９０ｍｇ／ｍｌから約３５０ｍｇ／ｍｌまでの、特に約２００ｍｇ／ｍｌから約３００ｍｇ／ｍｌまでの範囲の非常に高い濃度で有利に使用することができる。特に、本発明の方法は、静穏なまたは継続的もしくは断続的な手動かき混ぜプロトコルに比較したとき、非常に高いタンパク質濃度溶液の再構成時間の少なくとも２５％の低減を提供することができる。好ましくは、本発明の方法は、静穏な、継続的な、または断続的な手動かき混ぜプロトコルに比較したとき、非常に高いタンパク質濃度溶液の再構成時間の少なくとも５０％または９０％の低減を提供することができる。したがって、本発明は、静穏なまたは継続的もしくは断続的な手動かき混ぜプロトコルに比較したとき、非常に高度に濃縮されたタンパク質溶液の再構成時間の少なくとも約２５％から少なくとも約９０％までの低減、より好ましくは少なくとも約５０％から少なくとも約９０％までの低減のための方法を提供する。
【００５３】
本発明によれば、対応する乾燥タンパク質製剤から前述の再構成方法に従って調製したとき、高度に濃縮されたまたは非常に高度に濃縮されたタンパク質の迅速に再構成された泡を含まない溶液が提供される。
【００５４】
遠心分離機中の再構成容器に適用される相対遠心力は、乾燥生体分子製剤が水性賦形剤中に浸漬された状態に留まるまたは部分的にもしくは完全に浸漬された状態になり、好ましくは再構成プロセスを加速させるために十分である必要がある。重力の単位（倍重力またはｘｇ）にして表される相対遠心力（ＲＣＦ）は、遠心分離機のローター速度が増大するにつれて増大する。数多くのマイクロ遠心分離機は、相対遠心力用ではなく速度（回毎分、ＲＰＭ）用の設定のみを有する。その結果、転化用の式は、適当な設定が実験中に確実に使用されることを必要とする。ＲＰＭとＲＣＦとの関係は、次の通りである：
ＲＣＦ＝（１．１１８×１０−５）Ｒ  Ｓ２
式中、ＲＣＦは相対遠心力であり、Ｒは、センチメートルにしたローターの半径であり、Ｓは、回毎分（ＲＣＦ）にした遠心分離機の速度である。ＲＣＦの値は一般的に、倍重力（ｘｇ）の単位にして値を付けられる。例として、７ｃｍの半径のローターを有するマイクロ遠心分離機中での５，０００ＲＰＭにおけるサンプルの遠心分離は、１，９５７ｘｇの相対遠心力をもたらす。
【００５５】
適用する相対遠心力（ＲＣＦ）は最低でも、再構成容器がスイングアウトローター中で回転しているときに、賦形剤−乾燥製剤混合物の実質的にすべてを容器の基部の中に確実に留めるのに十分にすべきである。溶液への十分な相対遠心力（ＲＣＦ）の適用は、溶存空気の脱ガスにつながることが知られており、いかなる特定の理論にも拘束されることは望まないが、このプロセスは、観察される再構成時間の低減に寄与し得る。生体分子を含む乾燥製剤を再構成するのに適したＲＣＦは、おそらくは１０ｘｇ超のＲＣＦである。より高いＲＣＦにおいては、脱ガスがより迅速になり、これは、増大したＲＣＦに伴って乾燥製剤について観察される再構成時間の低減を説明し得る。血液用チューブローテーター（例えばＳｔｕａｒｔ  Ｒｏｔａｔｏｒ  ＳＢ３）等のデバイスは、それらが与えるＲＣＦが非常に低く（＜１ｘｇ）、混合物が各回転中にバイアルの一方の端部（または側面）から他方まで転落するため、本発明の方法に従った使用に適していない。これは、実施例１で実証されている、持続的な泡の有害な形成につながる。
【００５６】
小規模においては、適切な相対遠心力は、ベンチトップ遠心分離機またはマイクロ遠心分離機等の実験室遠心分離機中で再構成容器を遠心分離することにより、好都合に達成することができる。タンパク質を濃縮するため等のより大きな規模のプロセスについては、デカンター式遠心分離機等の工業的な遠心分離機が使用され得る。当業者には、遠心分離機は再構成プロセス中に均衡される必要があることが理解されよう。これは、製剤および賦形剤を含有する再構成容器と同じ質量の容器を遠心分離機ローター中で反対側の位置に導入することにより達成され得る。濃縮されたタンパク質溶液を含めた生体分子またはバイオポリマー溶液を本発明の方法に従って形成するための、生体分子を含む乾燥製剤の再構成は、約１０ｘｇから１０，０００ｘｇまでの、好ましくは約２５０ｘｇから約５０００ｘｇまでの相対遠心力における遠心分離によりもたらすことができる。実施例６は、ＲＣＦが１５ｘｇから１０００ｘｇまで増大するときの、生体分子を含む乾燥製剤の再構成時間の低減を説明している。したがって、従来のかき混ぜ方法を上回る低減された再構成時間の利点は、遠心分離機により適用されるＲＣＦが増大するにつれて大きくなり得る。しかしながら、非常に高いＲＣＦにおいては、再構成前の乾燥製剤の過剰なコンパクト化、さもなくば再構成済溶液中での望ましくない濃度勾配の生成により起きる問題があり得る。したがって、使用されるＣＦを５０００ｘｇ未満に限定することが、ここでは好ましい。
【００５７】
生体分子またはバイオポリマーを含む乾燥製剤の大規模再構成のためには、発泡の予防が再構成時間の低減より重要であり得る。したがって、生体分子またはバイオポリマーを含む乾燥製剤の再構成は、１０００ｘｇまたは１００ｘｇ以下のＲＣＦにおける再構成混合物の遠心分離を含む方法により、発泡が最小限しか生成せずにまたは発泡することなく、有利に実施することができる。
【００５８】
再構成容器がシリンジ、デュアルチャンバシリンジまたは予備充填シリンジ等の珍しい形状であるならば、適切な挿入物が、ローター中に再構成容器を安全に保持するために必要とされ得る。このような適切な挿入物に関する必要性および調製は、熟練配合者の付託事項に含まれているとみなされる。代替的には、特注のデバイスを使用して、適切な求心力式加速を再構成容器に適用してもよい。このデバイスは、再構成容器をしっかり所定位置に保持すべきであるが、容易な導入およびローターからの取り外しを可能にすべきでもある。シリンジの場合、デバイスにより遠心分離機中でのプランジャーの移動が予防されることは、さらに有用であり得る。完全な再構成が達成され得るように、シリンジがローター中で反転されることをデバイスが可能にするならば、同様に有利であり得る。これは、シリンジのチャンバ中の混合物をかき混ぜて、溶液のレベルより高く残留しているあらゆる材料を除去すること、さもなくば可能な濃度勾配を排除することが困難なためである。
【００５９】
本方法の適用のために必要とされる遠心力が適度であるとき、数多くの種類の再構成容器が、バイアル、プラスチック、マルチウェルプレート、マイクロタイタープレート、エッペンドルフ型チューブ、トレー、ボトル、遠心分離管、チューブ、バケット、バッグ、小袋、フラスコおよびシリンジを含めた使用に適している。好ましい再構成容器は、バイアル、デュアルチャンバシリンジまたは予備充填シリンジ等、乾燥タンパク質製品用の充填仕上げプロトコルと適合できるものである。
【００６０】
予備充填されたシングルおよびデュアルチャンバシリンジまたはカートリッジの使用は、バイアルとシリンジとの間での賦形剤または再構成済溶液の複数の移送を実施する必要性を無くし、したがって時間を節約し、損失を回避し、リスクを低下させるため、特定の利益を患者に提供し得る。予備充填されたシングルおよびデュアルチャンバシリンジおよびカートリッジはまた、より多くの溶液を注射に利用できるため、用量当たりに必要とされる高価な治療的生体分子の量も低減し得る。再構成方法としての遠心分離の使用は、再構成前に１つのチャンバ中に賦形剤を含有し別のチャンバ中に乾燥製剤を含有する、デュアルチャンバシリンジに有利に適用することができる。例えば、Ｌｙｏ−Ｊｅｃｔ（登録商標）（Ｖｅｔｔｅｒ）デュアルチャンバシリンジ。一般に、これらのシリンジは、乾燥製剤を非常に速く溶解させながら使用され、その結果、乾燥製剤を含有するチャンバに賦形剤が入り込むことが可能になったらただちに、乾燥製剤が完全に再構成する。高い生体分子濃度まで再構成される必要がある生体分子を含む乾燥製剤については、再構成は、シリンジの細いチャンバ直径での賦形剤−乾燥製剤混合物のかき混ぜに関する極度の困難のため、非常にゆっくりになると予想される。さらに、広範なかき混ぜまたは振とうが適用される場合、それは、持続的な泡の形成をもたらし得、注射に利用できる溶液の量を低下させ得、患者の中に気泡が注入されるリスクにつながり得る。対照的に、賦形剤−乾燥製剤混合物が形成されたデュアルチャンバシリンジは、それおよびプランジャーを安全に所定位置に保持する適切なアダプターの使用により、遠心分離機のローター中に容易に配置できる。適切な期間の時間をかけた遠心分離の適用のとき、混合物は次いで、シリンジチャンバ中で最小限の泡の形成を伴って再構成され得る。これは、溶液のすべてが迅速に注射用に利用できるため、保持しようとする予備充填シリンジの使用の数多くの利点を可能にしている。さらに、生体分子を含む乾燥製剤は、おそらくは、長期的な貯蔵に関して高濃度液体製剤よりはるかに安定である。
【００６１】
当業者ならば、シリンジまたはデュアルチャンバシリンジの遠心分離に当てはまるのと同じ利点は、乾燥製剤用の再構成容器がカートリッジ システムまたは同様のデバイスの形態である場合にも得ることができることを理解されよう。実施例７は、賦形剤と生体分子を含む乾燥製剤との混合物を含有するシリンジが遠心分離されたときには、速い再構成時間および最小限の泡が起きることを実証している。
【００６２】
生体分子を含む乾燥製剤の再構成を増強するために遠心分離を用いる特定の利点は、複数の同様または異なるサンプルを一度に容易に加工できることである。したがって、数多くの遠心分離機のローターにはまり込むアダプターは、非常に多くの場合、数多くのバイアルを一度に収容するように設計されている。同様に、遠心分離機は、多重壁プレートを収容できるものより入手し易い。したがって、乾燥製剤および賦形剤を含有する複数の再構成容器を同時に遠心分離することが可能である。これは、再構成に関する従来のかき混ぜ方法を上回る、遠心分離方法のさらに大きな利点を提供する。例えば、１人の医療従事者でも、同じまたは異なる製剤の複数のバイアルを同時に調製できるであろう。サンプルへの賦形剤の添加と、遠心分離機からのサンプルの装入および取り出しとの両方を自動化してもよい。これを用いて、高いスループットになるように設計され得る、多重化された再構成プロセスを提供することができる。ロボットアームベース型システムに関する利点は、生体分子を含む乾燥製剤の再構成の後に、泡が存在しないまたは最小限の泡しか存在しないことである。
【００６３】
したがって、本発明は、生体分子を含む１つまたは複数の乾燥製剤の再構成のための方法であって、
ｉ）適切な再構成容器中への生体分子を含む少なくとも１つの乾燥製剤の移送、または適切な再構成容器中での生体分子を含む少なくとも１つの乾燥製剤の調製、
ｉｉ）再構成容器（複数可）への適量の水性賦形剤の添加、ならびに
ｉｉｉ）水性賦形剤（複数可）への生体分子を含む乾燥製剤（複数可）の完全またはほぼ完全な再構成を得て、発泡を最小限しか示さないまたは発泡を示さない溶液（複数可）を生成するために十分な時間をかけた、適切な相対遠心力での再構成容器（複数可）の遠心分離
を含み、
ステップ（ｉ）および（ｉｉ）の順序を逆転させてまたは組み合わせてもよく、賦形剤を容器（複数可）に移送させ次いで乾燥製剤（複数可）を添加し、かつ乾燥製剤（複数可）と賦形剤（複数可）との既製混合物を容器（複数可）に移送させ、１つを超える乾燥製剤が使用されたときに、生体分子が同じであってもよくまたは異なっていてもよく、賦形剤が同じであってもよくまたは異なっていてもよい、方法をさらに提供する。
【００６４】
遠心分離の使用は、生体分子を含む適切な乾燥製剤の再構成時間を再現可能により低下させることが見出されている。起き得る１つの問題は、使用される液体賦形剤の体積が、再構成しようとする乾燥製剤の体積に比較して非常に低い場合である。このような場合、少量の乾燥製剤が再構成容器の壁に付着することになり、その結果、乾燥製剤が遠心分離プロセス中にバルク溶液に溶解せず、さらなる最終的なかき混ぜステップが必要とされることがあり得る。この問題は、遠心分離機再構成プロセスが開始される前に、希薄な賦形剤によって容器の壁全体が湿潤状態になるように賦形剤をゆっくりと添加しながら再構成容器を確実に回転する（または操作する）することにより改善できる。賦形剤の添加は、例えば５秒から３０秒かかり得る。代替的なアプローチは、実施例４で示されているように、遠心分離前に短く強烈な軸回転を再構成容器に適用することである。当業者ならば、再構成容器が円筒形である場合（バイアル等）、その縦軸の周りに再構成容器を迅速に回すことは、容器の側面に賦形剤を押し上げるのに役立つことを理解されよう。これはやはり、遠心分離される前での賦形剤による壁の湿潤につながる。賦形剤による乾燥製剤の再構成用のこのようなデュアルステップ プロセスは、再構成容器を同時に回転させて遠心分離できる遊星型遠心力式混合機の使用により、組み合わせることができる。しかしながら、生体分子の損傷につながる高いせん断力を迅速な軸回転が再構成容器の壁に生じさせる恐れがあるため、注意すべきである。
【００６５】
無菌の製品の調製においては、無菌再構成容器中に密封された無菌乾燥タンパク質製剤に、無菌水性賦形剤を無菌状態で添加することが好ましい。
【００６６】
発泡することなく／実質的に泡を含まず／最小限しか発泡することなく、高濃度送達用に治療用タンパク質を再構成するための簡単な自動式プロセスを使用できることは、医療従事者または自己投与している慢性容態の患者に主要な潜在的な利益を提供するが、本発明のさらなる態様である。再構成が完了するまでバイアルまたはシリンジを断続的にかき混ぜるのに時間を費やさなければならない、再現可能に実施するのが非常に困難かつしばしばいくらかの潜在的に有害な発泡を生成してしまうプロセスの代わりに、患者または従事者は、提供される製品再構成ガイドラインに従って、水性賦形剤を乾燥タンパク質製剤に簡単に添加し、所定時間をかけて特定の温度でバイアルまたはシリンジを遠心分離機に入れることができる。警告シグナルは、再構成が完了したこと、および、遠心分離機からの除去のときには高濃度タンパク質溶液が例えば皮下注射によりすぐに投与される準備ができていることを、例えば看護師、患者または医者に警報するために使用することができる。好ましくは、遠心分離機は、薬物の供給を受けており、最も適当な条件を用いて再構成を実施するようにあらかじめプログラムされている。交互に、複数製品遠心分離機は、各製品用にプログラムされた具体的な遠心分離機再構成プロトコルと一緒に使用することができる。賦形剤が自動式デバイスを用いて乾燥タンパク質製剤に同様に添加され得ること、および最終的な緩やかな混合ステップが同様に自動化され得ることもまた、予測されている。これは、手動的介入なしで完全な再構成プロセスを実施可能にするであろう。
【００６７】
本発明の再構成方法は、高度に感温性の分子の再構成のために有利に使用することができる。したがって、温度制御可能な遠心分離機を用いれば、再構成は、４℃等の低温で有利に実施することができ、これは、従来の手動かき混ぜプロトコルを用いて達成するのが非常に困難であろう。
【００６８】
特に非経口的投与による送達用に高濃度溶液を調製することへの使用に適するためには、乾燥タンパク質製剤が、迅速な時間で再構成され得るだけでなく、
ｉ）加工後のタンパク質統合性およびバイオ活性の望ましい保持、および貯蔵時の分解に対する高い抵抗性を示すこと、
ｉｉ）良好な透明度とタンパク質乾燥処理前に存在するタンパク質凝集状態への最小限の変化とを示す再構成のとき、高度に濃縮されたタンパク質溶液を生成すること、
ｉｉｉ）投与しようとするタンパク質濃度において約８００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ未満、好ましくは約６００Ｏｓｍｏｌ／ｋｇ未満の重量オスモル濃度を有する溶液を添加剤の濃度が提供する再構成のとき、高度に濃縮されたタンパク質溶液を生成すること、
ｉｖ）２７Ｇまたは好ましくはより細いもの等の適当な内径の皮下針を使用して適度な速度および力を用いて注射できるようになる良好な注射可能性を示す、高度に濃縮されたタンパク質溶液を生成すること
もまた望ましい。これは、標的シリンジおよび針を介して実際の滑走力を測定することにより決定できる。
【００６９】
これらの要件のいくつかまたはすべては、凍結乾燥した粉末をベースとした乾燥タンパク質製剤により満足することができる。
【００７０】
前述した通り、本発明の方法に従って提供される再構成済溶液は、病院、診療所または家庭のいずれかでの使用の時点での医師または介護者による、患者の自己投与による臨床試験を含めた数多の状況下で、非経口的投与に適した生体分子溶液を提供するために有利に用いることができる。
【実施例】
【００７１】
下記の実施例は、本発明の具体的な実施形態についての説明用であり、それに対して制限的になることは意図されていない。
【実施例１】
【００７２】
４つの同一の６ｍｌ透明ガラスバイアル（ｃｈｒｉｍａｃｏｌ、ｃｒｉｍｐ  ｔｏｐ、６−ＣＶ）の中に、大体同じ測定質量（３０２ｍｇ）の凍結乾燥した乾燥アルブミン粉末（ウシ血清からのアルブミン、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ａ７９０６）を入れ、それぞれに、大体同じ体積（７５０μｌ）の注射用水道水（ＷＦＩ）を添加した。バイアルＡは、手付かずなままにしておいた。バイアルＢをＡＬＣ  Ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｅｄ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ＰＫ１３０Ｒ遠心分離機（Ｐ５１０カップおよび４ピース型Ｆａｌｃｏｎチューブアダプター付きのＴ５３５  ４倍型スイングアウトローター）に入れ、１０分間２５００ｒｐｍにおいて約２２℃の温度で遠心分離した。遠心分離中のバイアルの基部にクッションを置くために、丸めた紙の詰め物をアダプターの基部の中に置いた。バイアルに適用された相対遠心力は、約１０００ｘｇであると見積もった。バイアルＣを３０秒間置いておき、次いで手で１０回緩やかにかき混ぜ、次いで交互に５分間置いておき、次いで再構成が完了するまでさらに１０回かき混ぜた。バイアルＤを血液用ローテーター（Ｓｔｕａｒｔ  Ｒｏｔａｔｏｒ  ＳＢ３）上で２０ｒｐｍにおいて継続的に回転させた。再構成時間は、賦形剤の添加から認識可能な未溶解または部分的に溶解したタンパク質粉末がバイアル中で目によって観察できなくなった時点までに測定された時間期間とみなした。バイアル壁上の泡および／または微量スメアが消えるまでのさらなる時間は、再構成時間に含めなかった。
【００７３】
実験の結果は、表１および図１で記述されている。
【００７４】
図１は、賦形剤の添加の１０分後に撮った実施例１のバイアルＡ、Ｂ、ＣおよびＤを示している写真である。写真は、約３００ｍｇの凍結乾燥したアルブミンの再構成が、本発明の遠心分離法に従って処置したバイアルＢ中でのみ完了していることを示している。図１のバイアルＡ、Ｂ、ＣおよびＤの内容物の比較から、バイアルＢのみが本質的に泡を含まない。
【００７５】
【表１】
2015511129.tif 000003
【００７６】
この実験は、凍結乾燥した乾燥タンパク質製剤および水性賦形剤を含有するバイアルＢを本方法に従って処置した場合、透明な高濃度タンパク質溶液を得るのにかかる再構成時間は、既存のプロトコルに従った処置したバイアルＡ、ＣまたはＤのために必要とされた再構成時間より驚異的かつ有利に短いことを実証した。さらに、この実験は、本方法に従った乾燥タンパク質粉末の再構成が泡を含まない再構成済溶液を提供することを実証している。
【実施例２】
【００７７】
実施例２は、乾燥タンパク質製剤等の生体分子を含む任意の例示用の乾燥製剤が本発明の遠心分離方法に従った再構成に適しているかどうかを決定するための、明快な方法を提供する。
【００７８】
第１のステップは、当業者により一般的に用いられる従来の方法のいずれかを用いて、目的とする乾燥製剤を再構成することである。好都合なことに、これは、再構成容器としてバイアルまたは遠心分離管を用いて室温で実施することができるが、その他の容器を使用してもよい。１つの適切な方法または技術は、再構成容器中の乾燥製剤に規定量の賦形剤を添加し、１０秒間かき混ぜてから容器を５分間静置しておき、次いで１０秒間再びかき混ぜ、完全な再構成に到達したと判断されるまでかき混ぜおよび静置プロセスを繰り返すものである。好ましくは、壁および壁に接着しているあらゆる材料が濡れるように、再構成容器を回転させながら賦形剤を乾燥製剤にゆっくりと添加すべきである。完全な再構成に到達したと判断される時点は、検討中の乾燥製剤の種類および乾燥製剤を使用しようとする用途に応じて変化し得るが、特定の当業者により再現可能に確認できるようにすべきである。乾燥製剤への賦形剤の添加から完全な再構成が達成された時点までに経過した時間を測定し、記録すべきである。これが再構成時間である。サンプルもまた、存在し得る泡の程度を測定するために慎重に検査すべきである。これは、写真を撮ることにより好都合に記録することができる。溶液に視認可能層として明瞭に存在し、かつサンプルが完全に再構成されたと判断してから約１５分より長く残留する、持続的な泡が特に適している。視認可能な層または環を形成しない少数のバブルしか観察されないならば、これは、持続的な泡であるとみなさない。持続的な泡が存在するならば、これは留意すべきである。所望ならば、従来の再構成方法の性能は、再構成プロセスを３回繰り返すことによってより正確に測定してもよい。次いで、測定した再構成時間を平均化すると、持続的な泡の形成の再現性を決定することができる。従来のプロセスを用いて再構成するのに標的最大時間より長くかかってしまう（例えば９０分）サンプルの場合、プロセスが放棄されたときの再構成時間を記録しておいて、比較のために使用することができる。
【００７９】
典型的には、本発明の遠心分離方法により提供される利点の規模は、このような測定が１回しか必要にならないほど十分に明白である。
【００８０】
生体分子を含む乾燥製剤が遠心分離による再構成に適しているかどうかを評価する第２のステップは、遠心分離機に再構成容器を入れ、賦形剤を添加した後に適切な相対遠心力を混合物に適用することにより、遠心分離アセスメントを実施することである。遠心分離機は一般的な実験室装置であり、当業者ならば、再構成容器を入れることができるローターおよびアダプターを選択すること、ならびにローターを確実に均衡させることが必要になることは理解されよう。柔らかいパディングをアダプターの底部において、再構成容器の損傷を予防してもよい。再構成プロセスの初期ステップは、再構成容器中の乾燥製剤の同一のサンプルに同じ量の賦形剤を添加して、従来式に再構成されたサンプルについて上述したものと全く同じに実施すべきである。次いで、賦形剤と乾燥製剤との混合物を含有する再構成容器を遠心分離機に入れ、５０ｘｇから２０００ｘｇの間等の好都合な相対遠心力（ＲＣＦ）において室温で遠心分離すべきである。当業者ならば、ｒｐｍにしていくらの速度を適用するかは、式
ＲＣＦ＝（１．１１８×１０−５）ＲＳ２
を用いて遠心分離機ローターの半径から決定することができ、式中、ＲＣＦは相対遠心力であり、Ｒは、センチメートルにしたローターの半径であり、Ｓは、回毎分（ＲＰＭ）にした遠心分離機の速度である。ＲＣＦの値は一般的に、倍重力（ｘｇ）の単位にして値を付けられる。
【００８１】
遠心分離機を停止させ、再構成容器をローターから５分または１０分のインターバルで取り外して、従来式に再構成されたサンプルに使用したのと同じ基準に従って乾燥製剤の完全な再構成を達成したと判断されるかどうかを確かめることができる。もしそうでないならば、再構成容器をローター中で置き換え、必要に応じて遠心分離を継続してもよい。乾燥製剤の完全な再構成が得られたらすぐに、再構成時間を記録し、最小限または皆無の泡が存在するかを確かめるために写真を撮るべきである。必要ならば、実験を３回繰り返して再現性を評価し、平均再構成時間を得ることができる。
【００８２】
生体分子を含む乾燥製剤は、下記の片方または両方が観察されるならば、遠心分離方法を用いた再構成に適しているとみなすことができる：
ａ）遠心分離されたサンプル（複数可）について測定された再構成時間が、従来の方法を用いて再構成されたサンプル（複数可）の再構成時間より少なくとも２５％低いこと、および／または
ｂ）遠心分離機中で再構成されたサンプル（複数可）が最小限または皆無の泡を含有する一方、従来の方法により再構成されたサンプル（複数可）が持続的な泡の層または環を示していること。
【００８３】
例として、生体分子を含む乾燥製剤の再構成時間は、撹拌および静置を伴う従来の再構成方法を用いて２０分であると測定された。同じ乾燥製剤は、１０００ｘｇのＲＣＦで遠心分離したときに１４分の再構成時間を有することが見出された。したがって、再構成時間の３０％の低減があったため、この乾燥製剤は、遠心分離による再構成に適しているとみなされるであろう。
【００８４】
さらなる例として、生体分子を含む別の乾燥製剤は、継続的な緩やかな振とうにより再構成されたときに１０分の再構成時間を有していたが、これは、さらなる２０分の静置後にも存在することになった持続的な泡の層の形成をもたらした。同じ乾燥製剤を１０００ｘｇのＲＣＦでの１０分間の遠心分離により再構成したとき、完全に再構成されることもまた見出されたが、溶液は、ごく少数のバブルを含有し持続的な泡は含有しないことが見出された。したがって、この乾燥製剤もまた、遠心分離による再構成に適しているとみなされるであろう。
【実施例３】
【００８５】
遠心分離による再構成における生体分子を含む乾燥製剤の適切性の評価
遠心分離を用いた再構成における生体分子を含む乾燥製剤の適切性を、従来のかき混ぜ手順を用いて得られるものと再構成時間を比較することにより評価した。使用した製剤は、ＩｇＧ２ヒトモノクローナル抗体（ＸｍＡｂ）の凍結乾燥調製物だった。凍結乾燥のために使用したＸｍＡｂ溶液の組成物は、８８ｍｇ／ｍｌのＸｍＡｂ、８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、２０ｍＭヒスチジン緩衝液、ｐＨ５．５中の０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０だった。各場合において、２．５ｍｌの溶液を１０ｍｌ容量バイアルに装入した。バイアルは、ＤＳＣ結果に基づいた自動プログラミングのもとで、標準的なサイクルを用いて凍結乾燥した。乾燥処理は２４時間後に大部分が完了したが、バイアル製品の安全を確保するために、一晩運転を５℃に保持したままにしておいた後、２０℃の最終的な二次的乾燥処理条件まで傾けていった。バイアルは、ろ過した窒素を（９８５ｍｂａｒと記録された）大気圧の９５％の標的まで再充填し、水圧ラムシステムを用いて栓をして、乾燥機から除去した。
【００８６】
再現性について試験するために、凍結乾燥したＩｇＧ２モノクローナル抗体（ＸｍＡｂ）の４つのサンプルを、従来のかき混ぜ方法を用いて再構成し、４つのサンプルを、遠心分離を用いて再構成した。各サンプルについては、２００ｍｇのＸｍＡｂを含有する凍結乾燥したケークが存在していた１０ｍｌバイアルに７５０μｌの脱イオン水を添加することにより、再構成プロセスを開始した。従来式に再構成されたサンプルについては、バイアル基部をベンチに保持した状態でバイアルを、約１０ｃｍの半径方向円弧を用いた軌道的な様式にて１０回転かき混ぜ、次いで静置しておいた。このプロセスを、完全な再構成が達成されるまで５分毎に繰り返した。遠心分離されたサンプルについては、バイアルを遠心分離機のローター中のアダプターに移し、約１００ｘｇの相対遠心力に対応する７５０ｒｐｍで遠心分離した。かき混ぜたサンプルについての結果は表３．１に示されており、遠心分離されたサンプルについては表３．２に示されている。
【００８７】
【表２】
2015511129.tif 000004
【００８８】
【表３】
2015511129.tif 000005
【００８９】
結果は、この乾燥製剤が遠心分離を用いた再構成に適していることを明瞭に示している。１００ｘｇの相対遠心力をバイアルに適用したときの３９分の平均再構成時間は、従来のかき混ぜ再構成方法を用いた場合に測定される１３５分の平均再構成時間より約７０％低い。さらに、遠心分離されたサンプル中には泡が存在せずまたは最小限しか存在しない。結果はまた、遠心分離方法を用いた場合、％ＲＳＤ＝１２を伴う良好な再構成時間の再現性を実証している。これは、％ＲＳＤ＝２２のかき混ぜ方法に関するものより明瞭に優れている。さらなる興味深い観察は、遠心分離されたサンプル中での再現可能により高い測定タンパク質濃度である。この可溶性タンパク質のより高い保持は驚異的であり、明瞭に有利である。いかなる特定の理論にも拘束されることは望まないが、いくらかのタンパク質が、従来のかき混ぜ方法により再構成された高濃度サンプルにおいて観察される持続的な泡から消え去っていることを示唆している。
【実施例４】
【００９０】
これは、遠心分離を用いた多糖類を含む乾燥製剤の再構成を示している。
【００９１】
ジャガイモデンプンの酵素転化により得られた多糖類バイオポリマーのマルトデキストリンを、Ｌｙｃｋｅｂｙ  Ｓｔａｒｋｅｌｓｅｎから調達した。５００ｍｇの粉末を含有する２つの乾燥したサンプルバイアルを、２．５ｍＬの脱イオン水（１８．２ＭＱ）で希釈した。バイアル底部がベンチ表面との接触を維持している状態で１つのサンプルをかき混ぜ、サンプルを、約１０ｃｍの半径方向円弧を用いた軌道的な様式にて１０回転を用いてかき混ぜ、次いで静置しておいた。このプロセスを５分毎に繰り返した。他のサンプルには、約２６００ｘｇのＲＣＦに等価である、１５ｃｍのローター半径を有し４０００ｒｐｍで動作する遠心分離機を用いて遠心分離を施した。かき混ぜたサンプルは、＞１５分後でも完全に再構成されなかった一方、遠心分離を施したサンプルは、１５分後に完全に再構成されて泡を含まなかった。
【００９２】
再構成プロセスをさらに加速できるかどうかを調査するために、第３の同一のマルトデキストリンサンプルを調製した。遠心分離機への挿入前に、賦形剤および乾燥製剤を含有するバイアルの基部を遠心分離機ローターの軸の頂上部に取り付け、バイアルを４０００ｒｐｍで３０秒間その縦軸において回した。このステップは、賦形剤をバイアルの側面に押し上げて表面を濡らした。この予備処置したバイアルに約２６００ｘｇで遠心分離を施したとき、再構成時間を１０分に低減した。したがって、軸回転を遠心分離と有利に組み合わせて、生体分子を含む乾燥製剤の再構成時間をより低下させることができる。
【００９３】
本発明式の方法を用いれば、マルトデキストリン粉末に関する再構成時間は、従来の方法を用いてかかる時間に比較して少なくとも３３％低減される。
【実施例５】
【００９４】
これは、遠心分離を用いた生体分子を含むスプレー乾燥製剤の再構成を示している。
【００９５】
スプレー乾燥されたスキムドミルク粉末は、ＢＤ（Ｂｅｃｔｏｎ  ＆  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）から調達しており、ＤｉｆｃｏＴＭ  Ｓｋｉｍ  Ｍｉｌｋ（Ｒｅｆ２３２１００、Ｌｏｔ７２４２７０４）である。１ｍｌの脱イオン水（１８．２ＭＱ）中に希釈した２５０ｍｇをそれぞれが含有する、２つのサンプルを調製した。バイアル底部がベンチ表面との接触を維持している状態で１つのサンプルをかき混ぜ、サンプルを、約１０ｃｍの半径方向円弧を用いた軌道的な様式にて１０回転を用いてかき混ぜ、次いで５分間静置しておいた。このかき混ぜおよび静置プロセスを５分毎に繰り返した。他のサンプルは、約２６００ｘｇのＲＣＦに等価である、１５ｃｍのローター半径を有し４０００ｒｐｍで動作する遠心分離機内で再構成された。かき混ぜたサンプルは、＞２０分後でも完全に再構成されなかった一方、遠心分離を施したサンプルは、１０分後に完全に再構成された。
【００９６】
本発明式の方法を用いれば、スプレー乾燥されたミルク粉末は、従来の方法を用いて達成されるものより少なくとも５０％低い再構成時間を有する。
【実施例６】
【００９７】
凍結乾燥したモノクローナル抗体製剤の再構成時間への異なる相対遠心力の効果
ＩｇＧ２ヒトモノクローナル抗体（ＸｍＡｂ）の凍結乾燥調製物を調製した。凍結乾燥のために使用したＸｍＡｂ溶液の組成物は、８８ｍｇ／ｍｌのＸｍＡｂ、８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、２０ｍＭヒスチジン緩衝液、ｐＨ５．５中の０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０だった。各場合において、２．５ｍｌの溶液を１０ｍｌ容量バイアルに装入した。バイアルは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）結果に基づいた自動プログラミングのもとで、標準的なサイクルを用いて凍結乾燥した。乾燥処理は２４時間後に大部分が完了したが、バイアル製品の安全を確保するために、運転を一晩５℃に保持したままにしておいた後、２０℃の最終的な二次的乾燥処理条件まで傾けていった。バイアルは、ろ過した窒素を大気圧の９５％の標的まで再充填し、水圧ラムシステムを用いて栓をした後、乾燥機から除去した。
【００９８】
室温の水（Ｍｉｌｌｌｉ−Ｑ、１８．２ΜΩ）を、乾燥製剤を含有するバイアルに賦形剤として添加して、再構成プロセスを開始した。４つのサンプルの第１の低濃度シリーズにおいては、十分な賦形剤を添加して、５０ｍｇ／ｍｌの最終的なＸｍＡｂ濃度を生成した。４つのサンプルの第２の高濃度シリーズにおいては、十分な賦形剤を添加して、２００ｍｇ／ｍｌの最終的なＸｍＡｂ濃度を生成した。各シリーズにおいて、１つのサンプルを、標準的な従来の再構成プロセス（Ｓｗｉｒｌ）を用いて再構成した。したがって、バイアル基部がベンチ表面との接触を維持している状態で、サンプルを、約１０ｃｍの半径方向円弧を用いた軌道的な様式にて１０回転を用いてかき混ぜ、次いで静置しておいた。このプロセスを、完全な再構成が達成される（材料の＞９９％が明瞭に溶液になる）まで５分毎に繰り返した。各シリーズの他の３つのサンプルは、賦形剤の添加の直後に遠心分離機に入れ、完全な再構成が達成されるまで１５ｘｇ、１００ｘｇまたは１０００ｘｇのいずれかの相対遠心力で遠心分離した。使用した遠心分離機は、ＡＬＣ  ＰＫ１３０Ｒ遠心分離機（Ｐ５１０カップおよび４ピース型Ｆａｌｃｏｎチューブアダプター付きのＴ５３５  ４倍型スイングアウトローター）だった。賦形剤の添加から完全な再構成の達成までの時間、再構成時間を測定した。４つのサンプルの２つのシリーズについての結果が、表４に示されている。
【００９９】
【表４】
2015511129.tif 000006
【０１００】
結果は、最終的な標的濃度が増大するにつれて乾燥製剤の再構成時間が非常に顕著に増大していくことを第一に実証している。従来のかき混ぜにより再構成されたサンプルについては、再構成時間は、５０ｍｇ／ｍｌ溶液の調製における２０分から２００ｍｇ／ｍｌ溶液の調製における１４０分まで増大する。
【０１０１】
結果は、低濃度シリーズと高濃度シリーズの両方において、本発明に従って遠心分離機中で再構成プロセスを実施する明瞭で驚異的に大きな有益な効果があることを示している。各場合において、再構成時間は遠心分離機内だとより低く、持続的な泡が観察されない。再構成時間はまた、バイアルに適用される相対遠心力が増大するにつれて顕著に減少することが見受けられる。実用的な観点において、これは、遠心分離機がより高い速度で回転するほど、再構成プロセスがより速くなることを意味している。したがって、最も好都合な再構成時間を提供するＲＣＦを選択することが可能である。しかしながら、より高い回転速度は、増大していく応力を再構成容器に及ぼすこと、および再構成済溶液中に濃度勾配を生じさせる傾向もあることに留意すべきである。この理由のため、適用することになる好ましいＲＣＦは、２５０ｘｇから５０００ｘｇの範囲である。
【０１０２】
本発明式の方法を用いれば、ＩｇＧ２ヒトモノクローナル抗体（ＸｍＡｂ）の乾燥製剤は、従来の方法を用いてかかる時間より約２５％少ない、または約５０％少ない、さらには最大約７５％少ない時間で低濃度溶液中に完全に再構成することができる。
【０１０３】
本発明式の方法を用いれば、ＩｇＧ２ヒトモノクローナル抗体（ＸｍＡｂ）の乾燥製剤は、従来の方法を用いてかかる時間より約７５％少ない、または約８２％少ない、さらには最大約８９％少ない時間で高濃度溶液中に完全に再構成することができる。
【実施例７】
【０１０４】
生体分子を含む乾燥製剤の再構成は、従来のかき混ぜ方法を用いてシリンジチャンバ内で実施することが困難である。これは、シリンジチャンバの細い内径が混合物を効果的にかき混ぜることを困難にするため高い濃度の生体分子が必要とされる場合、とりわけである。遠心分離は、再構成時間を低減するために有利に使用することができるが、シリンジチャンバ内での泡の形成を最小化するためにも非常に重要である。最小限の泡が生成されるならば、再構成済溶液の実質的にすべてを投与することができる。これは、高価な治療的生体分子の浪費につながるシリンジの過充填の要件を最小化する。この例において、同じ質量の乾燥した沈降ウシ血清アルブミン粉末（２００ｍｇのＢＳＡを含めて３３０ｍｇ）を、バイアルまたはシリンジ（Ｇｅｒｒｅｓｈｅｉｍｅｒ２．２５ｍＬ  ＬＬ  ＲＴＦ（登録商標）−充填準備済ガラスシリンジ）のチャンバのいずれかに入れ、同じ量の賦形剤（脱イオン水、０．７５ｍｌ）を添加した。ローター中の所定位置にシリンジをしっかりと保持するために、簡単なアダプターをティッシュペーパーで作製した。次いで、遠心分離したシリンジもしくは遠心分離したバイアルのいずれかまたはかき混ぜたバイアルの中での再構成プロセスを比較し、結果を表５に示した。乾燥した粉末によりほとんどすべてのチャンバ体積が占められていること、およびシリンジを回転させたときに混合物が静止したままになっていることのため、シリンジ中で賦形剤−乾燥製剤混合物をかき混ぜる効果を評価することは、実行可能でなかった。
【０１０５】
【表５】
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【０１０６】
遠心分離方法を用いれば、バイアルまたはシリンジチャンバのいずれかの中での再構成時間は、泡が生成されないまたは最小限の泡しか生成されないことも同然であることが、この実験により実証された。バイアル中でのかき混ぜにより再構成された同じサンプルは多量の泡を生じさせ、再構成時間は、ほぼ３倍大きくなっていた。
【０１０７】
本発明式の方法を用いれば、沈降ウシ血清アルブミンの乾燥製剤は、シリンジチャンバまたは凍結乾燥したバイアルのいずれかの中で、約１０分で完全に再構成することができる。
【実施例８】
【０１０８】
遠心分離を用いた再構成による極度に高い濃度の溶液の調製
凍結乾燥したＸｍＡｂを実施例６に従って調製した。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の凍結乾燥調製物を調製した。凍結乾燥のために使用したＢＳＡ溶液の組成物は、８５ｍｇ／ｍｌのＸｍＡｂ、８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、２０ｍＭヒスチジン緩衝液、ｐＨ５．５中の０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０だった。各場合において、２．５ｍｌの溶液を１０ｍｌ容量バイアルに装入した。バイアルは、ＤＳＣ結果に基づいた自動プログラミングのもとで、標準的なサイクルを用いて凍結乾燥した。乾燥処理は２４時間後に大部分が完了したが、バイアル製品の安全を確保するために、一晩運転を５℃に保持したままにしておいた後、２０℃の最終的な二次的乾燥処理条件まで傾けていった。バイアルは、ろ過した窒素を（９８５ｍｂａｒと記録された）大気圧の９５％の標的まで再充填し、水圧ラムシステムを用いて栓をして、乾燥機から除去した。
【０１０９】
賦形剤（１８．２ＭΩ水）を、乾燥製剤を含有するＸｍＡｂまたはＢＳＡのバイアルに添加して、再構成プロセスを開始した。凍結乾燥ケークはそれ自体が顕著な体積を有するため、各バイアルの中には、３００ｍｇ／ｍＬを達成するために必要とされる体積の見積もり分として４００μＬを添加した。この実験においては、１つのサンプルを、標準的な従来の再構成プロセス（Ｓｗｉｒｌ）を用いて再構成し、このサンプルを次の通りかき混ぜた。バイアル底部がベンチ表面との接触を維持している状態で、サンプルを、約１０ｃｍの半径方向円弧を用いた軌道的な様式にて１０回転を用いてかき混ぜ、次いで静置しておいた。このプロセスを、完全な再構成が達成される（材料の＞９９％が明瞭に溶液になる）まで５分毎に繰り返した。各シリーズの他のサンプルは、賦形剤の添加の直後に遠心分離機に入れ、完全な再構成が達成されるまで２７００ｘｇのいずれかの相対遠心力で遠心分離した。使用した遠心分離機は、ＡＬＣ  ＰＫ１３０遠心分離機（Ｐ５１０カップおよび４ピース型Ｆａｌｃｏｎチューブアダプター付きのＴ５３５  ４倍型スイングアウトローター）であった。賦形剤の添加から完全な再構成の達成までの時間を測定した。結果は表６に示されている。
【０１１０】
【表６】
2015511129.tif 000008
【０１１１】
遠心分離方法は、非常に高い濃度へのタンパク質の再構成を加速させるために明瞭に使用することができる。ＢＳＡについては、９５％より低い再構成時間が観察された。この高濃度においては、ＸｍＡｂサンプルが極度に粘性であり、従来のかき混ぜ方法を用いて再構成プロセスを完了させることができなかったことに留意すべきである。遠心分離を用いると、３１０ｍｇ／ｍｌへのＸｍＡｂの再構成が４５分で完了した。
【実施例９】
【０１１２】
賦形剤として生体分子溶液を用いた乾燥生体分子製剤の再構成
タンパク質等の生体分子の高濃度溶液は、生体分子の溶液を同じ乾燥生体分子製剤のための賦形剤として用いることにより調製することができる。この方法は、製品製造プロセス中に非常に高濃度の生体分子の溶液を生成する必要性を有利に回避する。この方法は、例えば高い粘度のため生体分子を大規模に濃縮することが困難であるとき、さもなくば長期間高濃度で貯蔵される場合に生体分子が不満足な安定性を示すとき、特に有用であり得る。代替的には、この方法は、生体分子溶液を濃縮するための好都合な経路として、簡単に使用することができる。いかなる用途でも、かき混ぜおよび撹拌等の従来の再構成方法を使用して溶液を調製するならば、顕著な問題は泡の生成である。
【０１１３】
この例において、本発明者らは、遠心分離を使用すれば、タンパク質溶液を賦形剤として使用した場合でさえ凍結乾燥したタンパク質を迅速に再構成できること、および泡を生成することなくこれが達成され得ることを示している。使用した乾燥製剤は、実施例６に従って調製した凍結乾燥ＸｍＡｂであり、約２００ｍｇのＸｍＡｂを含有するバイアル中に乾燥製剤が存在していた。
【０１１４】
使用した賦形剤は、ＸｍＡｂの４７．６ｍｇ／ｍｌ溶液だった。３．８ｍｌのこのＸｍＡｂ賦形剤溶液を、別のバイアル中の乾燥ＸｍＡｂ製剤に添加し、４０００ｒｐｍ、ＲＣＦ＝２６８３ｘｇにおいてＡＬＣ  ＰＫ１３０Ｒ遠心分離機を用いて混合物を遠心分離した。透明で完全に泡を含まずかつ完全に再構成されたＸｍＡｂ溶液は、７分で生成された。生成されたＸｍＡｂ溶液のタンパク質濃度は、９３ｍｇ／ｍｌだった。濃度は、添加剤およびタンパク質により占められた体積のため、１００ｍｇ／ｍｌよりわずかに低いと予想される。乾燥ＸｍＡｂ製剤に添加されるＸｍＡｂ賦形剤溶液の量を低減することにより、本発明の方法は、はるかにより高いタンパク質濃度の明快な生成を可能にする。
【０１１５】
したがって、本発明の方法は、賦形剤生体分子溶液を用いて乾燥生体分子製剤を迅速に再構成して、泡を形成することなく高濃度生体分子溶液を形成するために有利に使用することができる。
【図１】
2015511129.tif 000009
【国際調査報告】
2015511129.tif 000010
2015511129.tif 000011