(57)【要約】本発明は、ＧＨＤ療法のための、改良された治療レジメンに関する。詳細には、本発明は、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質のボーラス用量投与のための方法に関する。他の一態様では、本発明は、ヒト患者において、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投与を含むヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）療法の有効性を増加させる方法を提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有するヒト患者に、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として投与することを含む方法。
【請求項２】
前記ボーラス用量が、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ボーラス用量の投与が毎月である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の前記ボーラス用量が、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間、または約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．２ｍｇ／ｋｇの間にある、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ボーラス用量が皮下に投与される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ヒト患者が、投与の後、約−２．０から約２．０の間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳが、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超および約１．５超からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ヒト患者が前記ボーラス用量の投与の後に前記血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを示し、投与が毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ボーラス用量の投与が、前記ヒト患者において少なくとも約７日、少なくとも約１０日、少なくとも約１４日、少なくとも約１６日または少なくとも約２１日の間のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの正常化をもたらす、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ボーラス用量が、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇおよび約３．０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有するヒト患者に、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を、約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日から約２０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日の間のｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量と同等であるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として投与することを含む方法。
【請求項１３】
前記ボーラス用量が、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ボーラス用量の投与が毎月である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記ｈＧＨ／ｋｇ／日の投薬量が約３０日以上である、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ボーラス用量が皮下に投与される、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ヒト患者が、投与の後、約−２．０から約２．０の間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳが、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超および約１．５超からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒト患者が前記ボーラス用量の投与の後に前記血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを示し、投与が毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記ボーラス用量が、約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１８．６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日および約２０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日からなる群から選択されるｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量に同等である、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ヒト患者においてヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有する患者に、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を、ボーラス用量の投与後少なくとも７日の間、患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を約−２．０から約２．０の間に維持するのに有効である、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として投与することを含む方法。
【請求項２３】
前記ボーラス用量が、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間、約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．２ｍｇ／ｋｇの間または約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ボーラス用量が、前記ボーラス用量の投与後少なくとも２０日の間、前記患者の血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを約−２．０から約２．０の間に維持するのに有効である、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
ヒト患者においてヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有する患者に、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を、ボーラス用量の投与後少なくとも１０日の間、前記患者で前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１０ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として投与することを含む方法。
【請求項２６】
前記ボーラス用量が、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間、約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．２ｍｇ／ｋｇの間または約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ボーラス用量が、前記ボーラス用量の投与後少なくとも約１４日、少なくとも２０日、少なくとも約２８日または少なくとも約３０日の間、前記患者で前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１０ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ボーラス用量が、前記ボーラス用量の投与後少なくとも２０日または少なくとも約３０日の間、前記患者で前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１０ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ボーラス用量が、前記ボーラス用量の投与後少なくとも１０日の間、前記患者で前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１００ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項３０】
ヒト患者においてヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有する患者に、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を、ボーラス用量の投与後に、頭痛、関節痛、筋痛、浮腫、吐き気および筋肉疲労からなる群から選択される副作用を臨床的に有意なレベルで起こさずに、患者のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを対象のベースラインＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳより少なくとも０．５または少なくとも１．０高めるのに有効である、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として投与することを含む方法。
【請求項３１】
前記ボーラス用量が皮下に投与される、請求項２２、２５および３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項２２、２５および３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記ヒト患者が、前記ボーラス用量の投与後に、血清コレステロール、血清トリグリセリドおよび血清低密度リポプロテイン（ＬＤＬ）から選択される少なくとも１つのパラメータの臨床的に有意な低減を有し、前記投与が、毎週、２週ごと、３週ごとおよび毎月からなる群から選択される、請求項２２、２５および３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量であって、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を含む治療的に有効な体重で調整したボーラス用量。
【請求項３５】
必要とする対象でヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置するのに使用される、請求項３４に記載のボーラス用量。
【請求項３６】
前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項３４または３５に記載のボーラス用量。
【請求項３７】
皮下投与のために製剤化されている、請求項３４または３５に記載のボーラス用量。
【請求項３８】
ヒト患者におけるヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）の処置のための方法で使用するための、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質であって、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の用量で前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量を投与することを含む、ＸＴＥＮ融合タンパク質。
【請求項３９】
ＧＨＤの処置のための医薬の製造における、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の使用であって、前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の用量でヒト患者に投与される、使用。
【請求項４０】
前記ボーラス用量が、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与される、請求項３８に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
前記ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または請求項３９に記載の使用。
【請求項４２】
前記ボーラス用量が皮下に投与される、請求項３８に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または請求項３９に記載の使用。
【請求項４３】
前記ヒト患者が、前記ボーラス用量の投与の後、約−２．０から約２．０の間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する、請求項３８に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または請求項３９に記載の使用。
【請求項４４】
前記ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳが、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超および約１．５超からなる群から選択される、請求項４３に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または使用。
【請求項４５】
前記投与が毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月である、請求項４３に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または使用。
【請求項４６】
前記ヒト患者が、前記ボーラス用量の投与後に、血清コレステロール、血清トリグリセリドおよび血清ＬＤＬから選択される少なくとも１つのパラメータの臨床的に有意な低減を有し、前記投与が毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月である、請求項３８に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質または請求項３９に記載の使用。
【請求項４７】
ヒト患者においてヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）療法の有効性を高める方法であって、
（ａ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質の初回用量の投与の初回投薬期間中に、前記患者から得られる血漿または血清試料においてＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）をモニターするステップと、
（ｂ）前記初回投薬期間中に観察されるＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳに基づいて、後続投薬期間中に投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の後続用量を決定するステップとを含み、
前記後続用量は、前記後続投薬期間中の処置の有効性を向上させる、方法。
【請求項４８】
（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を含む医薬組成物を保持する容器と、
（ｉｉ）前記容器に付随する添付文書であって、前記添付文書は、前記組成物が、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の初回用量、および約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の複数の後続用量の投与による、成長ホルモン欠乏症の処置のためであることを示し、前記用量が、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与される、添付文書と
を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１２年６月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６８９，３９０号、２０１２年６月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／６６３，４７５号、および２０１３年２月１２日に出願された米国仮特許出願第６１／７６３，７５３号の利益を主張し、この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを通してＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含有し、ここに参照により完全に組み込まれる。２０１３年３月１３日に作製された前記ＡＳＣＩＩコピーは、３２８０８−７３８．２０１−ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、サイズは２５５，８２３バイトである。
【背景技術】
【０００３】
ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ：ｈｕｍａｎ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ）は、睡眠の間に一般的に起こる、数分から数時間持続する間欠パルスとしてヒト下垂体前葉から自然に分泌される。ｈＧＨ分泌の速度および程度は、加齢とともに減少し、正常で健康な栄養状態が良好な小児の思春期で最大である。ｈＧＨは、ＳＴＡＴ（シグナル伝達性転写因子：ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）、ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ：ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ）およびＰＩ３Ｋ（ホスホイノシチド−３キナーゼ：ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ−３  ｋｉｎａｓｅ）経路が関与するシグナル伝達過程を開始するｈＧＨ受容体に結合する。ｈＧＨ受容体シグナル伝達によってインスリン様増殖因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ：ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−Ｉ）遺伝子の発現が活性化され、それにより循環中にＩＧＦ−Ｉが分泌される。ＩＧＦ−Ｉは、インスリン様増殖因子結合タンパク質−３（ＩＧＦＢＰ−３：ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−３）および酸に不安定なサブユニット（ＡＬＳ：ａｃｉｄ  ｌａｂｉｌｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ）と複合体を形成する。ＩＧＦＢＰ−３およびＡＬＳ双方の発現も、ｈＧＨ受容体活性化によって調節される。
【０００４】
ｈＧＨの発現または分泌の欠乏に起因し、ｈＧＨ受容体の欠陥によらない成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ：ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）をもつ小児では、正常に近い成長および発達を促進するために、ｒｈＧＨの毎日の注射による補充療法がしばしば処方される。ｈＧＨおよびＩＧＦ−Ｉに応答して新しい骨が骨端に形成され、思春期の後に成長板が融合するまで線形成長をもたらす。毎日のｒｈＧＨ投与は、ＧＨＤではない小児でのｈＧＨの正常な内因性パルスを模倣するものではないが、成長の著しい増加をもたらし、処置後の一般的な初年度の成長速度は１１ｃｍ／年である。ｒｈＧＨをポンプで連続注入する臨床試験では、毎日のｒｈＧＨ注射で達成されるものと同等の成長速度およびＩＧＦ−Ｉレベルとなることが実証された（ＪｏｒｇｅｎｓｅｎらＪ．  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．７０巻（６号）、１６１６〜２３頁（１９９０年）；Ｌａｕｒｓｅｎ，  Ｔ．らＪ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．８０巻（８号）、２４１０〜８頁（１９９５年）；Ｔａｕｂｅｒ，  Ｍ．らＪ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．７６巻（５号）、１１３５〜９頁（１９９３年））。したがって、ｒｈＧＨの連続的、ならびにパルス状の投与は効果的である。
【０００５】
成人期では、ｈＧＨ分泌は低減されるが、適切なホルモン平衡を維持するために重要であることに変わりなく、脂肪質量および心血管危険因子の減少、ならびに除脂肪体質量、骨ミネラル密度および生活の質の転帰の向上を促進することが示されている。成人ＧＨＤは、脳への外傷性損傷または脳下垂体の、もしくはその近くの腫瘍の外科的切除の結果として起こることがある。小児期にＧＨＤを呈する患者は、成人期でも連続したｈＧＨ補充療法を必要とすることがある。一部の成人ＧＨＤ患者では、異常に低いＩＧＦ−Ｉレベルの場合があり得る。ＩＧＦ−Ｉレベルは年齢および性別によって異なるので、各成人患者は個々の年齢および性別で調整したＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳ：ＩＧＦ−Ｉ  ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｅｖｉａｔｉｏｎ  ｓｃｏｒｅ）で特徴付けなければならない。
【０００６】
通常、ｈＧＨ連日療法の目的は、患者が範囲の中央近くのＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを達成するまで、成人ＧＨＤ患者のｒｈＧＨ用量を調整することである（例えば０のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳ（Ｃｏｏｋら、２００９年最新版。Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｐｒａｃｔ．１５巻（増補２）、１〜２９頁（２００９年））。成人ＧＨＤ患者（１群に７人）で、ｒｈＧＨの連続注入が連日ｒｈＧＨ療法と６カ月間比較された（Ｌａｕｒｓｅｎら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．８６巻（３号）、１２２２〜８頁（２００１年））。この研究は、ｒｈＧＨの連続注入または連日ｒｈＧＨ療法で処置した患者の間で、安全性プロファイルおよびＩＧＦ−Ｉ応答に対する影響に有意差がないことを示した。
【０００７】
ＧＨＤの小児および成人両方で、連日ｒｈＧＨ療法の安全性が研究されている。一部の過体重であるか肥満の患者で、空腹時および食後のインスリンレベルの増加傾向が観察された。一般に良好な耐容性を示すけれども、連日ｒｈＧＨ療法は、軽度から中等度の頭痛、関節痛、吐き気、嘔吐および注射反応を引き起こすことがある。
【０００８】
他は、様々な徐放性ＧＨ調製物を報告した（Ｃｏｏｋ  ＤＭら２００２年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ８７巻（１０号）：４５０８〜４５１４頁；Ｂｉｌｌｅｒ  ＢＭら２０１１年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ９６巻（６号）：１７１８〜１７２６頁；Ｐｅｔｅｒ  Ｆ．ら、２０１２年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ９７巻（２号）：４００〜４０７頁；Ｆａｒｅｓ  Ｆ．ら、２０１０年。Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１５１巻（９号）：４４１０〜４４１７頁；Ｓｏｎｄｅｒｇａａｒｄ  Ｅら２０１１年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ９６巻（３号）：６８１〜６８８頁；ｄｅ  Ｓｃｈｅｐｐｅｒ  Ｊら２０１１年。Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１６５巻（３号）４０１〜４０９頁；  Ｂｉｄｌｉｎｇｍａｉｅｒ  Ｍら２００６年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ９１巻（８号）：２９２６〜２９３０頁）。しかし、代替のＧＨ療法、投薬量および処置レジメンの必要性があることに変わりはない。
【０００９】
ＶＲＳ−３１７は、ＧＨＤをもつ成人（小児期に成長ホルモン関連の障害を経験した成人を含む）のための長期補充療法のための、開発中の治験用持続性ｒｈＧＨである。ＶＲＳ−３１７は、投与頻度の低減（１年につき１２回対最高３６５回の注射）が処置厳守を増加させ、それによって全体の処置転帰を向上させるだろうとの予想の下に、月１回の投与を達成するように設計された。ＶＲＳ−３１７は、伸長組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ：ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）アミノ酸配列を生来のｈＧＨ配列のＮ末端およびＣ末端に遺伝的に融合させることによって、ｒｈＧＨの突然変異なしで達成される受容体結合の低減を通して、受容体によって媒介されるクリアランスを最小にするように設計された新規ｒｈＧＨ融合タンパク質である（Ｃｌｅｌａｎｄら２０１２年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．１０１巻（８号）：２７４４〜２７５４頁（Ｅｐｕｂ２０１２年６月７日）。機能的には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＸＴＥＮドメインは流体力学半径を増加させ、ＧＨ受容体（ＧＨＲ：ＧＨ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）への結合親和性を低減する。低減された結合親和性にもかかわらず、ｉｎ  ｖｉｖｏで永続的な薬力学応答が見られ、おそらく、受容体によって媒介されるＶＲＳ−３１７のクリアランス速度の低減に関係している（Ｃｌｅｌａｎｄら２０１２年、上記）。６０日間二重盲検無作為化プラセボ（ＰＢＯ）比較単回用量漸増ＶＲＳ−３１７／ｋｇ研究において、ＧＨＤを有する成人５０人で、ＶＲＳ−３１７を安全性、許容度および効能について評価した（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  ＮＣＴ０１３５９４８８）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】ＪｏｒｇｅｎｓｅｎらＪ．  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．７０巻（６号）、１６１６〜２３頁（１９９０年）
【非特許文献２】Ｌａｕｒｓｅｎ，  Ｔ．らＪ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．８０巻（８号）、２４１０〜８頁（１９９５年）
【非特許文献３】Ｔａｕｂｅｒ，  Ｍ．らＪ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．７６巻（５号）、１１３５〜９頁（１９９３年）
【非特許文献４】Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｐｒａｃｔ．１５巻（増補２）、１〜２９頁（２００９年）
【非特許文献５】Ｌａｕｒｓｅｎら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．８６巻（３号）、１２２２〜８頁（２００１年）
【非特許文献６】Ｃｏｏｋ  ＤＭら２００２年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ８７巻（１０号）：４５０８〜４５１４頁
【非特許文献７】Ｂｉｌｌｅｒ  ＢＭら２０１１年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ９６巻（６号）：１７１８〜１７２６頁
【非特許文献８】Ｐｅｔｅｒ  Ｆ．ら、２０１２年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ９７巻（２号）：４００〜４０７頁
【非特許文献９】Ｆａｒｅｓ  Ｆ．ら、２０１０年。Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１５１巻（９号）：４４１０〜４４１７頁
【非特許文献１０】Ｓｏｎｄｅｒｇａａｒｄ  Ｅら２０１１年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ９６巻（３号）：６８１〜６８８頁
【非特許文献１１】ｄｅ  Ｓｃｈｅｐｐｅｒ  Ｊら２０１１年。Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１６５巻（３号）４０１〜４０９頁
【非特許文献１２】Ｂｉｄｌｉｎｇｍａｉｅｒ  Ｍら２００６年。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ９１巻（８号）：２９２６〜２９３０頁
【非特許文献１３】Ｃｌｅｌａｎｄら２０１２年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．１０１巻（８号）：２７４４〜２７５４頁（Ｅｐｕｂ２０１２年６月７日
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、成長ホルモン欠乏症（「ＧＨＤ」）療法のための、改良された治療レジメンに関する。詳細には、本発明は、１つまたは複数の伸長組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に融合したヒト成長ホルモンを含む融合タンパク質（以下、この融合タンパク質を「ｈＧＨ−ＸＴＥＮ」と呼ぶ）の組成物のボーラス用量投与のための方法に関する。したがって、一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質でヒトＧＨＤを処置する方法に関する。
【００１２】
一態様では、本発明は、ボーラス用量としてｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質で、ヒト患者においてヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、ＧＨＤを有するヒト患者に、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することを含む。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として投与される。他の一実施形態では、ボーラス用量は、（ｉ）約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間；（ｉｉ）約０．０５ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間；または（ｉｉｉ）約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．２ｍｇ／ｋｇの間である。他の実施形態では、ボーラス用量は、１回、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与される。一実施形態では、ボーラス用量の投与は、月１回である。別の実施形態では、ボーラス用量は皮下に投与される。別の実施形態では、ヒト患者は、投与の後、約−２．０から約２．０の間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する。他の一実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳは、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超および約１．５超からなる群から選択される。追加の実施形態では、ヒト患者は、ボーラス用量の投与の後に前記血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを示し、そこにおいて、投与は、１回、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月である。一実施形態では、ボーラス用量の投与は、ヒト患者において少なくとも約７日、少なくとも約１０日、少なくとも約１４日、少なくとも約１６日または少なくとも約２１日の間のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの正常化をもたらす。他の一実施形態では、ボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇおよび約３．０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される。
【００１３】
別の態様では、本発明は、ボーラス用量としてｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量に同等であるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質で、ヒト患者のヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、ＧＨＤを有するヒト患者に、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することを含む。別の実施形態では、ボーラス用量は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量である。他の一実施形態では、ボーラス用量は、約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日から約２０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日の間のｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量に同等である。追加の実施形態では、ボーラス用量は、１回、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与される。一実施形態では、ボーラス用量の投与は毎月である。別の実施形態では、ボーラス用量は皮下に投与される。他の実施形態では、ボーラス用量は、約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１８．６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日および約２０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日からなる群から選択されるｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量に同等である。他の一実施形態では、ｈＧＨ／ｋｇ／日の投薬量が約３０日超である。別の実施形態では、ヒト患者は、投与の後に、約−２．０から約２．０の間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する。他の一実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳは、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超および約１．５超からなる群から選択される。追加の実施形態では、ヒト患者はボーラス用量の投与の後に前記血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを示し、投与は１回、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月である。
【００１４】
他の一態様では、本発明は、患者においてＩＧＦ−１標準偏差スコア（ＳＤＳ）を維持するのに有効であるボーラス用量として、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質で、ヒト患者のヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、ＧＨＤを有するヒト患者に、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することを含む。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として投与される。追加の一実施形態では、ボーラス用量は、ボーラス用量の投与後から少なくとも７日の間、患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を約−２．０から約２．０の間に維持するのに有効である。他の実施形態では、ボーラス用量は、（ｉ）約０．０５ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間；（ｉｉ）約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．２ｍｇ／ｋｇの間；または（ｉｉｉ）約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間である。別の実施形態では、ボーラス用量は、ボーラス用量の投与後から少なくとも２０日の間、患者の血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを約−２．０から約２．０の間に維持するのに有効である。一実施形態では、ボーラス用量は皮下に投与される。別の実施形態では、ヒト患者は、ボーラス用量の投与後に、血清コレステロール、血清トリグリセリドおよび血清低密度リポプロテイン（ＬＤＬ）から選択される少なくとも１つのパラメータでの臨床的に有意な低減を有し、投与は、１回、毎週、２週ごと、３週ごとおよび毎月からなる群から選択される。
【００１５】
別の態様では、本発明は、患者で前記融合タンパク質の血漿中濃度を維持するのに有効であるボーラス用量として、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質で、ヒト患者のヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、ＧＨＤを有するヒト患者に、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することを含む。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として投与される。他の一実施形態では、ボーラス用量は、ボーラス用量の投与後から少なくとも１０日の間、患者で前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１０ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である。別の実施形態では、ボーラス用量は、（ｉ）約０．０５ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間；（ｉｉ）約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．２ｍｇ／ｋｇの間；または（ｉｉｉ）約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間である。他の一実施形態では、ボーラス用量は、ボーラス用量の投与後から少なくとも約１４日、少なくとも２０日、少なくとも約２８日または少なくとも約３０日の間、患者で前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１０ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である。他の実施形態では、ボーラス用量は、ボーラス用量の投与後から少なくとも２０日または少なくとも約３０日の間、患者で前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１０ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である。別の実施形態では、ボーラス用量は、ボーラス用量の投与後から少なくとも１０日の間、患者で前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１００ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である。一実施形態では、ボーラス用量は皮下に投与される。別の実施形態では、ヒト患者は、ボーラス用量の投与後に、血清コレステロール、血清トリグリセリドおよび血清低密度リポプロテイン（ＬＤＬ）から選択される少なくとも１つのパラメータでの臨床的に有意な低減を有し、投与は、１回、毎週、２週ごと、３週ごとおよび毎月からなる群から選択される。
【００１６】
追加の一態様では、本発明は、臨床的に有意なレベルの副作用なしに患者のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを増加させるのに有効であるボーラス用量として、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質でヒト患者のヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、ＧＨＤを有するヒト患者に、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することを含む。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量として投与される。他の一実施形態では、ボーラス用量は、投与後に患者のＩＧＦ−ＳＤＳを対象のベースラインＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳより少なくとも０．５または少なくとも１．０を上回って増加させるのに有効である。追加の一実施形態では、ＩＧＦ−ＳＤＳの増加は、臨床的に有意なレベルの副作用を伴わない。一実施形態では、副作用は、頭痛、関節痛、筋痛、浮腫、吐き気および筋疲労からなる群から選択される。一実施形態では、ボーラス用量は皮下に投与される。別の実施形態では、ヒト患者は、ボーラス用量の投与後に、血清コレステロール、血清トリグリセリドおよび血清低密度リポプロテイン（ＬＤＬ）から選択される少なくとも１つのパラメータでの臨床的に有意な低減を有し、投与は、１回、毎週、２週ごと、３週ごとおよび毎月からなる群から選択される。
【００１７】
他の一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ボーラス用量は、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量である。別の実施形態では、ボーラス用量は、（ｉ）約０．０５ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間；（ｉｉ）約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．２ｍｇ／ｋｇの間；または（ｉｉｉ）約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を含む。追加の一実施形態では、ボーラス用量は、必要とする対象（例えば、ヒト患者）でのヒトＧＨＤの処置で使用するためのものである。他の一実施形態では、ボーラス用量は、皮下投与のために製剤化される。
【００１８】
別の態様では、本発明は、ヒト患者におけるヒトＧＨＤの処置のための方法で使用するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供し、そこにおいて、その方法は、患者にｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を投与することを含む。他の一態様では、本発明は、ヒト患者におけるＧＨＤの処置のための医薬の製造におけるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の使用を提供し、そこにおいて、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、ボーラス用量として患者に投与される。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ボーラス用量は、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量である。追加の一実施形態では、ボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇを含む。他の一実施形態では、ボーラス用量は、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与される。一実施形態では、ボーラス用量は皮下に投与される。他の実施形態では、ヒト患者は、ボーラス用量の投与の後に、約−２．０から約２．０の間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する。別の実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳは、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超および約１．５超からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ボーラス用量の投与は、１回、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月である。一実施形態では、ヒト患者は、ボーラス用量の投与後に、血清コレステロール、血清トリグリセリドおよび血清ＬＤＬから選択される少なくとも１つのパラメータでの臨床的に有意な低減を有し、投与は、１回、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月である。
【００１９】
他の一態様では、本発明は、ヒト患者において、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投与を含むヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）療法の有効性を増加させる方法を提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む。他の一実施形態では、本方法は、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質の初回用量の投与の初回投薬期間中に、患者から得られた血漿または血清試料でＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を測定またはモニターするステップを含む。別の実施形態では、本方法は、初回投薬期間中に観察されたＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳに基づいて、後続投薬期間中に投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の後続用量を決定するステップをさらに含む。他の実施形態では、決定するステップは、初回投薬期間中に観察されるＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳに基づいて後続投薬期間を決定することを含む。追加の一実施形態では、後続用量および／または後続投与期間は、後続投薬期間中の処置の有効性を向上させる。
【００２０】
別の態様では、本発明は、ヒトＧＨＤの処置のためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を含む医薬組成物を含むキットを提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、キットは、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を含む医薬組成物を保持する容器を含む。追加の一実施形態では、キットは、前記容器に付随する添付文書をさらに含む。他の実施形態では、添付文書は、前記組成物が、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の初回用量およびｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の複数の後続用量の投与による、成長ホルモン欠乏症の処置のためであることを示す。別の実施形態では、初回用量および複数の後続ボーラス用量は、ボーラス用量を各々含む。他の一実施形態では、ボーラス用量は、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の初回用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間である。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の複数の後続用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間である。一実施形態では、用量は、１回、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与される。
参照による組込み
【００２１】
この明細書で指摘されるすべての刊行物、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれることが具体的および個々に示されるのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質（ｈＧＨ配列は下線を付された太字である）のアミノ酸配列（配列番号１）である。
【００２３】
【図２】図２は、ＶＲＳ−３１７第Ｉ相試験の試験相のまとめである。
【００２４】
【図３】図３は、患者素因のまとめである。
【００２５】
【図４】図４は、ＶＲＳ−３１７の様々な単回用量でのヒト薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示すグラフである。
【００２６】
【図５】図５は、各ｍｇ  ＶＲＳ−３１７／ｋｇ用量での用量応答：平均ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの変化を示すグラフである。
【００２７】
【図６】図６は、ＶＲＳ−３１７の単回用量に対するＩＧＦ−Ｉ応答の持続を示すグラフである。
【００２８】
【図７】図７は、ＶＲＳ−３１７の様々な単回用量の投与後に報告された有害事象のまとめである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明の実施形態を記載する前に、そのような実施形態は例として提供されるだけであり、本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代替物を本発明の実施で用いることができることを理解すべきである。本発明を逸脱しない範囲で、多くの変形、変化および置換が今では当業者に思いつく。
【００３０】
特に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、この発明が属する分野の当業技術者が通常理解するのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるそれらに類似するか同等である方法および材料は、本発明の実施または試験で使用することができるが、適する方法および材料が以下に記載される。相反する場合には、定義を含めた本特許の明細書が優先される。さらに、材料、方法および例は例示されるだけであり、限定するものではない。本発明を逸脱しない範囲で、多くの変形、変化および置換が今では当業者に思いつく。
定義
【００３１】
本明細書で使用されるように、以下の用語は、特に明記しない限りそれらに帰される意味を有する。
【００３２】
本明細書および請求項で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」には、文脈が明らかに別に指示しない限り、複数指示が含まれる。例えば、用語「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」には、その混合物を含む複数の細胞が含まれる。
【００３３】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は本明細書で互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸の重合体を指す。重合体は線状または分枝状であってもよく、それは改変アミノ酸を含むことができ、アミノ酸以外が割り込んでもよい。これらの用語は、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、リピド化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作、例えば標識構成成分とのコンジュゲーションによって改変されたアミノ酸重合体も包含する。
【００３４】
本明細書で使用されるように、用語「アミノ酸」は、それらに限定されないがグリシン、およびＤまたはＬの両光学異性体、ならびにアミノ酸類似体およびペプチド様物質を含む、天然および／または非天然もしくは合成のアミノ酸のいずれかを指す。アミノ酸を命名するのに、標準の１文字または３文字表記が使用される。
【００３５】
用語「天然のＬアミノ酸」は、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ヒスチジン（Ｈ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）およびトレオニン（Ｔ）のＬ光学異性体形を意味する。
【００３６】
本明細書で使用され、配列に適用される用語「天然に存在しない」は、哺乳動物で見出される野生型または天然に存在する配列と対応物を有しないか、相補的でないか、または高い程度の相同性を有しないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を意味する。例えば、天然に存在しないポリペプチドまたは断片は、適切に整列させたときに、天然の配列と比較して９９％、９８％、９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％以下、またはさらにより低いアミノ酸配列同一性を共有することができる。
【００３７】
用語「親水性」および「疎水性」は、物質が水と有する親和性の程度を指す。親水性の物質は水への強力な親和性を有し、水に溶解するか、水と混合するか、水によって湿る傾向があり、疎水性の物質は水への親和性を実質的に欠き、水に反発して吸収しない傾向、および水に溶解しないか、水と混合しないか、水によって湿らない傾向がある。アミノ酸は、それらの疎水性に基づいて特徴付けることができる。いくつかのスケールが開発されている。一例は、Ｌｅｖｉｔｔ，  Ｍら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９７６年）１０４巻：５９頁によって開発されたスケールであり、それはＨｏｐｐ、  ＴＰら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９８１年）７８巻：３８２４頁に掲載されている。「親水性アミノ酸」の例は、アルギニン、リシン、トレオニン、アラニン、アスパラギンおよびグルタミンである。特に興味が持たれるのは、親水性アミノ酸であるアスパラギン酸、グルタミン酸およびセリン、ならびにグリシンである。「疎水性アミノ酸」の例は、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、メチオニン、ロイシン、イソロイシンおよびバリンである。
【００３８】
「断片」は、治療的および／または生物学的活性の少なくとも一部を保持する生来の生物学的活性タンパク質のトランケーション型である。「変異体」は、生物学的活性タンパク質の治療的および／または生物学的活性の少なくとも一部を保持する、生来の生物学的活性タンパク質と配列相同性を有するタンパク質である。例えば、変異体タンパク質は、参照の生物学的活性タンパク質と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を共有することができる。本明細書で使用されるように、用語「生物学的活性タンパク質部分」には、故意に、例えば部位特異的突然変異誘発、挿入により、または突然変異を通して偶然に改変されたタンパク質が含まれる。
【００３９】
「宿主細胞」には、対象ベクターのレシピエントであってよいか、そうであった個々の細胞または細胞培養が含まれる。宿主細胞には、単一の宿主細胞の後代が含まれる。後代は、自然であるか、偶然であるか、故意の突然変異のために、元の親細胞と必ずしも完全に同一（全ＤＮＡ相補配列の形態またはゲノムにおいて）でなくてもよい。宿主細胞には、本発明のベクターによってｉｎ  ｖｉｖｏでトランスフェクトされる細胞が含まれる。
【００４０】
本明細書に開示される様々なポリペプチドを記載するために使用されるとき、「単離された」は、その天然の環境の構成成分から同定および分離され、および／または回収されたポリペプチドを意味する。その天然の環境の混入成分は、ポリペプチドの診断的または治療的使用を一般的に妨害するような物質であり、酵素、ホルモンおよび他のタンパク性または非タンパク性の溶質を含めることができる。当業者に明白であるように、天然に存在しないポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体またはその断片は、それをその天然に存在する対応物から区別するために「単離」を必要としない。さらに、「濃縮された」、「分離された」もしくは、「希釈された」ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体またはその断片は、濃度または容積あたりの分子の数がその天然に存在する対応物のそれより一般に大きいという点で、その天然に存在する対応物から区別可能である。一般に、組換え手段によって作製され、宿主細胞で発現されるポリペプチドは、「単離された」とみなされる。
【００４１】
「単離された」ポリヌクレオチドまたはポリペプチドをコードする核酸または他のポリペプチドをコードする核酸は、ポリペプチドをコードする核酸の天然の供給源中でそれが通常関連している少なくとも１つの混在核酸分子から同定および分離される核酸分子である。単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、それが天然に見出される形または設定以外にある。したがって、単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、天然の細胞中に存在するような、特定のポリペプチドをコードする核酸分子と区別される。しかし、単離されたポリペプチドをコードする核酸分子には、例えば核酸分子が天然の細胞のそれと異なる染色体または染色体外の位置にある、そのポリペプチドを通常発現する細胞に含有されるポリペプチドをコードする核酸分子が含まれる。
【００４２】
「キメラ」タンパク質は、配列中の天然に存在するのと異なる位置の領域を含む少なくとも１つの融合ポリペプチドを含有する。領域は、通例別々のタンパク質に存在することができ、融合ポリペプチドで一緒にされるか、または、それらは通例同じタンパク質に存在することができるが、融合ポリペプチドで新しい配置に置かれる。キメラタンパク質は、例えば、化学合成によって、またはペプチド領域が所望の関係でコードされるポリヌクレオチドを作製し、翻訳することによって作製することができる。
【００４３】
「コンジュゲートされた」、「連結された」、「融合された」および「融合」は、本明細書において互換的に使用される。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含むいかなる手段による、２つ以上の化学元素または構成成分の連結を指す。例えば、それが配列の転写に影響を及ぼす場合、プロモーターまたはエンハンサーはコード配列に作動可能に連結されている。一般に、「作動可能に連結される」は、連結されているＤＮＡ配列が連続しており、かつ読取り相またはインフレームにあることを意味する。「インフレーム融合」は、２つ以上の読取り枠（ＯＲＦ）が連結して、元のＯＲＦの正しい読み枠を維持する方法で、連続しているより長いＯＲＦを形成することを指す。したがって、生じる組換え融合タンパク質は、元のＯＲＦによってコードされるポリペプチドに対応する２つ以上のセグメントを含有する単一のタンパク質である（そのセグメントは天然では通例そのように連結されていない）。
【００４４】
ポリペプチドとの関連で、「線状配列」または「配列」は、ポリペプチドの一次構造において配列中の互いに隣り合う残基が連続している、アミノ末端からカルボキシル末端方向へのポリペプチド中のアミノ酸の順序である。「部分的配列」は、一方向または両方向で追加の残基を含むことが知られている、ポリペプチドの一部の線状配列である。
【００４５】
「異種」は、それが比較される実体の残りと遺伝子型的に異なる実体に由来することを意味する。例えば、その生来のコード配列から取り出され、生来の配列以外のコード配列に作動可能に連結されるグリシンに富む配列は、異種のグリシンに富む配列である。ポリヌクレオチド、ポリペプチドに適用される用語「異種」は、そのポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、それが比較される実体の残りと遺伝子型的に異なる実体に由来することを意味する。
【００４６】
用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」、「ヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」は、互換的に使用される。それらは、デオキシリボヌクレオチドであれ、リボヌクレオチドであれ、その類似体であれ、任意の長さのヌクレオチドの重合体形を指す。ポリヌクレオチドは任意の三次元構造を有することができ、公知または未知の任意の機能を果たすことができる。以下のものは、ポリヌクレオチドの非限定例である：遺伝子または遺伝子断片のコード領域または非コード領域、連鎖解析から規定される遺伝子座（複数遺伝子座）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝状ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブおよびプライマー。ポリヌクレオチドは、改変ヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体を含むことができる。存在するならば、ヌクレオチド構造の改変は重合体のアセンブリーの前後に付与することができる。ヌクレオチド配列は、非ヌクレオチド構成成分によって割り込まれてもよい。ポリヌクレオチドは、例えば標識構成成分とのコンジュゲーションによって、重合の後にさらに改変されてもよい。
【００４７】
用語「ポリヌクレオチドの相補配列」は、それが完全な忠実度で参照配列とハイブリダイズすることができるように、参照配列と比較して相補的な塩基配列および逆配向を有するポリヌクレオチド分子を表す。
【００４８】
ポリヌクレオチドに適用される「組換え体」は、そのポリヌクレオチドが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏクローニング、制限および／またはライゲーションステップ、ならびに宿主細胞で潜在的に発現可能である構築物をもたらす他の手法の様々な組合せの生成物であることを意味する。
【００４９】
用語「遺伝子」または「遺伝子断片」は、本明細書において互換的に使用される。それらは、転写および翻訳された後に特定のタンパク質をコードすることが可能である少なくとも１つの読取り枠を含有するポリヌクレオチドを指す。ポリヌクレオチドがコード領域全体またはそのセグメントをカバーすることができる少なくとも１つの読取り枠を含有する限り、遺伝子または遺伝子断片はゲノムであってもｃＤＮＡであってもよい。「融合遺伝子」は、互いに連結される少なくとも２つの異種ポリヌクレオチドで構成される遺伝子である。
【００５０】
「相同性」または「相同的」は、２つ以上のポリヌクレオチド配列または２つ以上のポリペプチド配列の間の配列類似性または互換性を指す。２つの異なるアミノ酸配列の間で配列同一性、類似性または相同性を判定するＢｅｓｔＦｉｔなどのプログラムを使用するとき、デフォルト設定を使用することができるか、ｂｌｏｓｕｍ４５またはｂｌｏｓｕｍ８０などの適当なスコアリングマトリックスを選択して同一性、類似性または相同性スコアを最適化することができる。好ましくは、相同的であるポリヌクレオチドは、本明細書に規定されるストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、それらの配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは９５％、より好ましくは９７％、より好ましくは９８％、さらにより好ましくは９９％の配列同一性を有するものである。
【００５１】
「ライゲーション」は、２つの核酸断片または遺伝子の間で、それらを互いに連結するホスホジエステル結合を形成する過程を指す。ＤＮＡ断片または遺伝子を互いにライゲーションするために、ＤＮＡの末端は互いに適合しなければならない。場合によっては、末端はエンドヌクレアーゼ消化の後に直接に適合する。しかし、それらをライゲーションに適合するようにするために、エンドヌクレアーゼ消化の後に一般的に生成される付着末端を平滑末端にまず変換することが必要かもしれない。
【００５２】
用語「ストリンジェント条件」または「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」には、他の配列より検出可能に大きな程度（例えば、バックグラウンドの少なくとも２倍）でポリヌクレオチドがその標的配列とハイブリダイズする条件への言及が含まれる。一般に、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、一部、洗浄ステップが実行される温度および塩濃度に関して表される。一般的に、ストリンジェントな条件は、塩濃度が約１．５Ｍ未満のＮａイオン、一般的にはｐＨ７．０から８．３において約０．０１から１．０ＭのＮａイオン濃度（または他の塩）であり、温度が、短いポリヌクレオチド（例えば、１０から５０ヌクレオチド）については少なくとも約３０℃、長いポリヌクレオチド（例えば、＞５０ヌクレオチド）については少なくとも約６０℃であるものである−例えば、「ストリンジェントな条件」は、３７℃で５０％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳでのハイブリダイゼーション、および６０℃から６５℃で０．１×ＳＳＣ／１％ＳＤＳでのそれぞれ１５分間の３回の洗浄を含むことができる。あるいは、約６５℃、６０℃、５５℃または４２℃の温度を使用することができる。ＳＳＣ濃度は約０．１から２×ＳＳＣまで変化してもよく、ＳＤＳは約０．１％で存在する。そのような洗浄温度は、一般に、規定のイオン強度およびｐＨでの特定の配列の熱的融点よりも約５℃から２０℃低いように選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が完全にマッチしたプローブとハイブリダイズする温度（規定のイオン強度およびｐＨの下の）である。Ｔｍを計算するための式および核酸ハイブリダイゼーションの条件は周知であり、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．ら（１９８９年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、２版、１〜３巻、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ  Ｎ．Ｙ．に見出すことができる；特に２巻および９章を参照する。一般的に、非特異的ハイブリダイゼーションをブロックするために、ブロッキング試薬が使用される。そのようなブロッキング試薬には、例えば、約１００〜２００μｇ／ｍｌの剪断、変性されたサーモン精液ＤＮＡが含まれる。特定の状況の下で、例えばＲＮＡ：ＤＮＡハイブリダイゼーションのために、有機溶媒、例えば約３５〜５０ｖ／ｖ％の濃度のホルムアミドを使用することもできる。これらの洗浄条件への有益な変更は、当業者に容易に明白になる。
【００５３】
ポリヌクレオチド配列に適用される用語「同一性パーセント」および「同一性％」は、規格化されたアルゴリズム使用して整列させた少なくとも２つのポリヌクレオチド配列の間で一致した残基の百分率を指す。そのようなアルゴリズムは、２つの配列の間でアラインメントを最適化し、それによって２つの配列のより意味がある比較を達成するために、規格化され、再現性のある方法で、比較されている配列にギャップを挿入することができる。同一性パーセントは、規定のポリヌクレオチド配列全体の長さにわたって測定することができるか、より短い長さにわたって、例えば、より大きな、規定のポリヌクレオチド配列からとられた断片、例えば、少なくとも４５、少なくとも６０、少なくとも９０、少なくとも１２０、少なくとも１５０、少なくとも２１０または少なくとも４５０個の連続した残基の断片の長さにわたって測定することができる。そのような長さは例示的なだけであり、同一性百分率を測定することができる長さを記載するために、本明細書、表、図面または配列表に示される配列によって支持される任意の断片長を使用することができるものと理解される。
【００５４】
本明細書で同定されるポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを達成するために配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなさない、クエリー配列中の、第２の参照ポリペプチド配列またはその一部のアミノ酸残基と同一であるアミノ酸残基の百分率と規定される。アミノ酸配列同一性パーセントを判定するためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内である様々な方法で、例えば公開されているコンピュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適当なパラメータを決定することができる。同一性パーセントは、規定のポリヌクレオチド配列全体の長さにわたって測定することができるか、より短い長さにわたって、例えば、より大きな、規定のポリヌクレオチド配列からとられた断片、例えば、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０または少なくとも１５０個の連続した残基の断片の長さにわたって測定することができる。そのような長さは例示的なだけであり、同一性百分率を測定することができる長さを記載するために、本明細書、表、図面または配列表に示される配列によって支持される任意の断片長を使用することができるものと理解される。
【００５５】
ポリペプチドとの関連で本明細書で使用される用語「非反復性」は、ペプチドまたはポリペプチド配列中の内部相同性の欠如または限定的な程度を指す。用語「実質的に非反復性の」は、例えば、配列中に同一のアミノ酸タイプである４つの連続したアミノ酸の場合がほとんどないこと、またはポリペプチドが１０以下の部分配列スコア（下に規定される）を有すること、またはＮ末端からＣ末端への順序で、ポリペプチド配列を構成する配列モチーフのパターンがないことを意味することができる。ポリペプチドとの関連で本明細書で使用される用語「反復性」は、ペプチドまたはポリペプチド配列中の内部相同性の程度を指す。対照的に、「反復性の」配列は、短いアミノ酸配列の複数の同一のコピーを含有することができる。例えば、対象のポリペプチド配列は、ｎ量体配列に分割することができ、同一の配列の数を計数することができる。高度に反復性の配列は大きな割合の同一配列を含有するが、非反復性の配列は同一の配列をほとんど含有しない。ポリペプチドとの関連で、配列は規定されたか可変性の長さのより短い配列の複数のコピーまたはモチーフを含有することができ、そこにおいて、モチーフ自体は非反復性の配列を有し、完全長ポリペプチドを実質的に非反復性にしている。非反復性を測定するポリペプチドの長さは、３アミノ酸から約２００アミノ酸、約６から約５０アミノ酸、または約９から約１４アミノ酸まで変化してもよい。ポリヌクレオチド配列との関連で使用される「反復性」は、配列中の内部相同性の程度、例えば所与の長さの同一のヌクレオチド配列の頻度などを指す。反復性は、例えば、同一の配列の頻度を分析することによって測定することができる。
【００５６】
「ベクター」は適当な宿主で好ましくは自己複製する核酸分子であり、それは挿入された核酸分子を宿主細胞の中および／または間に転移する。この用語には、細胞へのＤＮＡまたはＲＮＡの挿入のために主に機能するベクター、ＤＮＡまたはＲＮＡの複製のために主に機能するベクターの複製、ならびにＤＮＡまたはＲＮＡの転写および／もしくは翻訳のために機能する発現ベクターが含まれる。上の機能の２つ以上を提供するベクターも含まれる。「発現ベクター」は、適当な宿主細胞に導入されたとき、ポリペプチド（複数可）に転写および翻訳することができるポリヌクレオチドである。「発現系」は、所望の発現生成物を産する働きをすることができる発現ベクターで構成される、適する宿主細胞を通常意味する。
【００５７】
ポリペプチドに適用される「血清分解抵抗性」は、血清または血漿中のプロテアーゼが一般的に関与する、血液またはその構成成分中での分解に耐えるポリペプチドの能力を指す。血清分解抵抗性は、一般的に約３７℃で、タンパク質をヒト（または適宜、マウス、ラット、サル）の血清または血漿と、一般的に様々な日数（例えば０．２５、０．５、１、２、４、８、１６日）に対して合わせることによって測定することができる。これらの時点の試料はウエスタンブロットアッセイにかけることができ、タンパク質は抗体で検出される。抗体は、タンパク質中のタグに対してであってよい。タンパク質のサイズが注入されたタンパク質のそれに同一である、タンパク質がウエスタンで単一のバンドを示すならば、分解は起きていない。この例示的な方法では、ウエスタンブロットまたは同等の技術で判断されるように、タンパク質の５０％が分解する時点は、タンパク質の血清分解半減期または「血清半減期」である。
【００５８】
本明細書で使用される用語「ｔ１／２」は、ｌｎ（２）／Ｋｅｌで計算される終端半減期を意味する。Ｋｅｌは、ログ濃度対時間曲線の終端線形部分の線形回帰によって計算される終端排出速度定数である。半減期は、生体に置かれた投与された物質の半量が、正常な生物学的過程によって代謝または排出されるのに必要とされる時間を一般的に指す。用語「ｔ１／２」、「終端半減期」、「排出半減期」および「循環半減期」は、本明細書において互換的に使用される。
【００５９】
「見かけの分子量係数」または「見かけの分子量」は、特定のアミノ酸配列によって示される見かけの分子量の相対的増加または減少の尺度を指す関連用語である。見かけの分子量は、球状タンパク質標準と比較してサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および類似した方法を使用して決定され、「見かけのｋＤ」単位で測定される。見かけの分子量係数は、見かけの分子量と実際の分子量の間の比である。後者は、アミノ酸組成に基づいて、組成物中の各タイプのアミノ酸の計算された分子量を加えることによって予測される。
【００６０】
「流体力学半径」または「ストークス半径」は、それが溶液中を移動し、溶液の粘度によって抵抗される物体であると仮定することによって測定される、溶液中の分子の有効半径（Ｒｈはｎｍで表す）である。本発明の実施形態では、ＸＴＥＮ融合タンパク質の流体力学半径の測定値は、より直観的な尺度である「見かけの分子量係数」と相関する。タンパク質の「流体力学半径」は、水溶液中のその拡散速度ならびに巨大分子のゲル中を移動するその能力に影響を及ぼす。タンパク質の流体力学半径は、その分子量ならびに形状およびコンパクトさを含むその構造によって判定される。流体力学半径を判定するための方法は当技術分野で周知であり、例えば米国特許第６，４０６，６３２号および第７，２９４，５１３号に記載されるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）の使用がある。ほとんどのタンパク質は球状構造を有し、それはタンパク質が最も小さな流体力学半径で有することができる最もコンパクトな三次元構造である。一部のタンパク質は、ランダムおよびオープンで、構造化されていないか「線状」の立体構造を採用し、その結果類似した分子量の一般的な球状タンパク質と比較して非常により大きな流体力学半径を有する。
【００６１】
「生理的条件」は、温度、塩濃度、ｐＨを含む、生物対象の条件を模倣する生物宿主における一組の条件ならびにｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件を指す。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで使用される多くの生理的に関連する条件が確立されている。一般に、生理的緩衝剤は生理的濃度の塩を含有し、約６．５から約７．８、好ましくは約７．０から約７．５の範囲内の中性ｐＨに調整される。様々な生理的緩衝剤がＳａｍｂｒｏｏｋら（１９８９年）に掲載されている。生理的に関連する温度は、約２５℃から約３８℃、好ましくは約３５℃から約３７℃の範囲内である。
【００６２】
「反応性基」は、第２の反応性基に結合することができる化学構造である。反応性基の例は、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、アルデヒド基、アジド基である。一部の反応性基は、第２の反応性基との結合を促進するために活性化することができる。活性化のための非限定例は、カルボジイミドとのカルボキシル基の反応、活性化エステルへのカルボキシル基の変換、またはアジド官能基へのカルボキシル基の変換である。
【００６３】
「制御放出剤」、「徐放性薬剤」、「デポ製剤」または「持続的放出剤」は互換的に使用され、ポリペプチドが薬剤の不在下で投与されるときの放出の持続時間に対して、本発明のポリペプチドの放出の持続時間を延長することが可能な薬剤を指す。本発明の異なる実施形態は、異なる放出速度を有することができ、結果として異なる治療量になる。
【００６４】
用語「抗原」、「標的抗原」または「免疫原」は本明細書で互換的に使用され、抗体断片または抗体断片に基づく治療薬が結合するか特異性を有する構造または結合決定因子を指す。
【００６５】
本明細書で使用される用語「ペイロード」は、生物学的または治療的な活性を有するタンパク質またはペプチド配列を指し；小分子のファルマコフォアへの対応物である。ペイロードの例には、サイトカイン、酵素、ホルモンならびに血液および増殖因子が含まれるが、これらに限定されない。ペイロードは、化学療法剤、抗ウイルス化合物、毒素または造影剤などの遺伝子的に融合したか化学的にコンジュゲートした部分をさらに含むことができる。これらのコンジュゲートした部分は、開裂可能か開裂不能であってもよいリンカーを通して、ポリペプチドの残りに連結されてもよい。
【００６６】
本明細書で使用される用語「アンタゴニスト」には、本明細書に開示される生来のポリペプチドの生物学的活性を部分的または完全にブロックするか、阻害するか、中和する任意の分子が含まれる。ポリペプチドのアンタゴニストを同定する方法は、生来のポリペプチドと候補アンタゴニスト分子を接触させ、生来のポリペプチドと通例関連している１つまたは複数の生物学的活性での検出可能な変化を測定することを含むことができる。本発明との関連で、アンタゴニストには、生物学的に活性なタンパク質の影響を減少させるタンパク質、核酸、炭水化物、抗体または任意の他の分子を含めることができる。
【００６７】
用語「アゴニスト」は、最も広い意味で使用され、本明細書に開示される生来のポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子を含む。適するアゴニスト分子には、具体的にはアゴニスト抗体または抗体断片、生来のポリペプチド、ペプチド、小有機分子などの断片またはアミノ酸配列変異体が含まれる。生来のポリペプチドのアゴニストを同定する方法は、生来のポリペプチドと候補アゴニスト分子を接触させ、生来のポリペプチドと通例関連している１つまたは複数の生物学的活性での検出可能な変化を測定することを含むことができる。
【００６８】
本明細書での目的のための「活性」は、対応する生来の生物学的に活性なタンパク質のそれと一貫した、融合タンパク質の構成成分の作用または影響を指し、「生物学的活性」は、それらに限定されないが、受容体結合、アンタゴニスト活性、アゴニスト活性または細胞性であるか生理的な応答を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの生物学的機能または影響を指す。
【００６９】
本明細書で使用されように、「処置」または「処置する」または「緩和する」または「寛解する」は、本明細書において互換的に使用される。これらの用語は、それらに限定されないが治療的有益性および／または予防的有益性を含む、有益または所望の結果を得るためのアプローチを指す。治療的有益性は、処置される根底にある障害の根絶または寛解を意味する。さらに、治療的有益性は、対象が根底にある障害でなお苦しむかもしれないが、対象で寛解が観察されるように、根底にある障害と関連する生理的症状の１つまたは複数の根絶または寛解で達成される。予防的有益性のためには、組成物は、この疾患の診断がされていなかったとしても、特定の疾患を起こす危険にある対象、または疾患の生理的症状の１つまたは複数を報告する対象に投与することができる。
【００７０】
本明細書で使用されるように「治療効果」は、それらに限定されないが、ヒトまたは他の動物での疾患の治癒、軽減、寛解または予防を含む生理的効果、またはさもなければ、生物学的に活性なタンパク質が保有する抗原エピトープに対する抗体の生産を誘導する能力以外に、本発明の融合ポリペプチドによってもたらされるヒトまたは動物の身体的または精神的な幸福を強化することを指す。治療的有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示を考慮すると、十分当業者の能力の範囲内である。
【００７１】
本明細書で使用されるように、用語「治療的有効量」および「治療的有効用量」は、対象に単回または反復用量で投与されるとき、疾患状態または病態の任意の症状、態様、測定されたパラメータまたは特徴に対して任意の検出可能で有益な効果を及ぼすことが可能である、単独で、または融合タンパク質組成物の一部として生物学的に活性であるタンパク質の量を指す。そのような効果は、有益であるために絶対的である必要はない。
【００７２】
「薬学的に許容される担体」は、医薬組成物中の、有効成分以外の対象に無毒である成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００７３】
本明細書で使用されるように、用語「治療的有効用量レジメン」は、生物学的に活性なタンパク質の、単独で、または融合タンパク質組成物の一部として連続的に投与される用量のスケジュールを指し、用量は、疾患状態または病態の任意の症状、態様、測定されるパラメータまたは特徴に対する持続的で有益な効果をもたらす治療的有効量で与えられる。
Ｉ）．一般技術
【００７４】
本発明の実施では、特に明記しない限り、当分野の技術の範囲内である、免疫学、生化学、化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、ゲノミックスおよび組換えＤＮＡの従来の技術を用いる。Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．ら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、３版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００１年；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｆ．  Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７年；シリーズ「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ．；「ＰＣＲ  ２：  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ」、Ｍ．Ｊ．  ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ．  ＨａｍｅｓおよびＧ．Ｒ．  Ｔａｙｌｏｒ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９５；「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ」Ｈａｒｌｏｗ，  Ｅ．およびＬａｎｅ，  Ｄ．編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８年；「Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、１１版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、２００５年；およびＦｒｅｓｈｎｅｙ，  Ｒ．Ｉ．、「Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」、４版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ、２０００年を参照、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる。
【００７５】
ＩＩ）．成長ホルモン
本発明は、ＧＨＤ療法のための改良された治療レジメンに関する。詳細には、本発明はＧＨＤを有する患者への、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量投与のための方法に関する。したがって、一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質でヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法に関する。
【００７６】
（ａ）成長ホルモンタンパク質
「成長ホルモン」または「ＧＨ」は、成長ホルモンタンパク質ならびにその種および配列変異体を意味し、ヒトＧＨの１９１単鎖アミノ酸配列を含むが、これに限定されない。ＧＨは生来の完全長タンパク質であってもよいか、生来のタンパク質の生物学的活性の少なくとも一部を保持するトランケーションされた断片または配列変異体であってもよい。下垂体に由来する、公知の２つのタイプのヒトＧＨ（以降「ｈＧＨ」）がある。１つは約２２，１２９ダルトンの分子量を有し（２２ｋＤ  ｈＧＨ）、他は約２０，０００ダルトンの分子量を有する（２０ｋＤ  ｈＧＨ）。２０ｋＤ  ＨＧＨは、２２ｋＤ  ｈＧＨの３２番目から４６番目の１５アミノ酸残基が欠落していること以外は、１９１アミノ酸からなる２２ｋＤ  ｈＧＨのそれに対応するアミノ酸配列を有する。一部の報告書は、２０ｋＤ  ｈＧＨが、２２ｋＤ  ｈＧＨより低い危険率およびより高い活性を示すことが見出されたことを示している。本発明は、２２ｋＤ、２０ｋＤ  ｈＧＨ、ならびにその種および配列変異体およびトランケーションされた断片がｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物のための本明細書に開示されるＸＴＥＮとの融合パートナーとして適当であるとして、その使用を企図する。ｈＧＨのクローン遺伝子は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉでは分泌形で発現され（米国特許第４，８９８，８３０号；Ｃｈａｎｇ，  Ｃ．  Ｎ．ら、Ｇｅｎｅ５５巻：１８９頁［１９８７年］）、そのＤＮＡおよびアミノ酸配列が報告されている（ＧｏｅｄｄｅｌらＮａｔｕｒｅ、２８１巻：５４４頁［１９７９年］）；  Ｇｒａｙら、Ｇｅｎｅ３９巻：２４７頁［１９８５年］）。
【００７７】
本発明は、ＧＨの生物活性もしくは生物学的機能の少なくとも一部を保持し、および／またはＧＨ関連の疾患、欠乏症、障害または状態を予防、処置、とりなすか、改善するのに有益である、ＧＨ配列と相同性を有する配列、天然である、例えばヒト由来の配列断片、および非天然の配列変異体の、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物への組入れを企図する。さらに、ヒトＧＨに相同的な生来の配列は、ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴなどの標準の相同性検索技術によって見出すことができる。
【００７８】
体組織へのＧＨの効果は、一般に同化作用であると記載することができる。ほとんどの他のタンパク質ホルモンのように、生来のＧＨは成長ホルモン受容体と呼ばれる特異的な原形質膜受容体と相互作用することによって作用する。ＧＨは肝臓および他の組織に作用して、ＧＨの成長促進効果を担い、かつ生成量も反映するＩＧＦ−Ｉの生成を刺激する。ＩＧＦ−Ｉは、次に、骨芽細胞および軟骨細胞活性に刺激効果を及ぼして骨の成長を促進する。一実施形態では、本発明は、本明細書の上文に記載される生来のＧＨの特性の少なくとも１つを示すｈＧＨ−ＸＴＥＮを提供する。
【００７９】
一実施形態では、対象組成物に組み込まれるＧＨは、天然に見出されるタンパク質に対応する配列による組換えポリペプチドである。別の実施形態では、ＧＨは、対応する生来のＧＨの生物学的活性の少なくとも一部を保持する、天然の配列の配列変異体、断片、同族体または模倣体である。他の一実施形態では、ＧＨは、以下のアミノ酸配列を含むヒトＧＨである：
ＦＰＴＩＰＬＳＲＬＦＤＮＡＭＬＲＡＨＲＬＨＱＬＡＦＤＴＹＱＥＦＥＥＡＹＩＰＫＥＱＫＹＳＦＬＱＮＰＱＴＳＬＣＦＳＥＳＩＰＴＰＳＮＲＥＥＴＱＱＫＳＮＬＥＬＬＲＩＳＬＬＬＩＱＳＷＬＥＰＶＱＦＬＲＳＶＦＡＮＳＬＶＹＧＡＳＤＳＮＶＹＤＬＬＫＤＬＥＥＧＩＱＴＬＭＧＲＬＥＤＧＳＰＲＴＧＱＩＦＫＱＴＹＳＫＦＤＴＮＳＨＮＤＤＡＬＬＫＮＹＧＬＬＹＣＦＲＫＤＭＤＫＶＥＴＦＬＲＩＶＱＣＲＳＶＥＧＳＣＧＦ（配列番号２）。
任意のヒトＧＨ配列または生来のＧＨの生物学的活性の少なくとも一部を保持するファミリーの間で個々の突然変異をシャフリングすることによって構築される相同的誘導体は、本発明の融合タンパク質のために役立つことができる。ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質に組み込むことができるＧＨには、配列番号２と少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を示すタンパク質を含めることができる。
【００８０】
ＩＩＩ）．ＧＨＤを処置するためのヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物
本発明は、成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）療法のための、改良された治療レジメンに関する。詳細には、本発明はＧＨＤを有する患者への、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量投与のための方法に関する。一態様では、本発明で使用するのに適するｈＧＨ融合タンパク質は、本明細書に記載され、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２およびＷＯ１０／０９１１２２に開示される通り、ヒト成長ホルモンポリペプチド、および１つまたは複数のＸＴＥＮ配列を含む。
【００８１】
他の一態様では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、１つまたは複数の伸長した組換えポリペプチド（「ＸＴＥＮ」または「ＸＴＥＮｓ」）に共有結合している、ＧＨの完全長配列または配列変異体を含むＧＨの単離された単量体融合タンパク質である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に示すアミノ酸配列（配列番号１）またはその薬理活性変異体を含む。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、表１から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００８２】
融合タンパク質ＶＲＳ−３１７は、各々参照により本明細書に完全に組み込まれる、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら（２００９年）、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２７巻、１１８６〜９０頁、ＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２、およびＷＯ１０／０９１１２２に記載される通り、組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ならびにＸＴＥＮと呼ばれる２つの組換えポリペプチドで構成される。ＸＴＥＮドメイン、２つの非構造化親水性アミノ酸鎖は、ｒｈＧＨのために半減期の延長を提供する。ＶＲＳ−３１７の分子量は１１８．９ｋＤａであり、ｒｈＧＨは２２．１ｋＤａに寄与し、残りの質量はＸＴＥＮ構築物によって寄与される。したがって、ｒｈＧＨ対ＶＲＳ−３１７の質量比は１：５．３７である。ＶＲＳ−３１７融合タンパク質のアミノ酸配列を、図１に提供する。
【表１−１】
2015520188.tif 000002
【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【表１−９】
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【表１−１０】
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【表１−１１】
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【表１−１２】
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【表１−１３】
2015520188.tif 000014
【００８３】
表１に提供される例示的なｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のさらなる特徴付けは、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の実施例（例えば、実施例２７〜３５）に見出すことができる。
【００８４】
本発明は、図１、表１に示し、またはＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２（参照により本明細書に完全に組み込まれる）に記載される、アミノ酸配列の１つを含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の使用を企図する。さらに、本明細書に記載され、言及されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のいずれかの薬理活性変異体も企図される。
【００８５】
より完全に下に記載されるように、融合タンパク質は、プロテアーゼが作用するときに融合タンパク質からＧＨを解放し、ＸＴＥＮ配列（複数可）からＧＨを解放する開裂配列をさらに含むスペーサー配列を任意選択で含む。
【００８６】
一態様では、本発明は、１つまたは複数の伸長した組換えポリペプチド（「ＸＴＥＮ」）に共有結合し、結果として成長ホルモン−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物（以降「ｈＧＨーＸＴＥＮ」）になっている第１の生物学的に活性な成長ホルモンタンパク質を少なくとも含む、単離された融合タンパク質を提供する。一実施形態では、成長ホルモンはヒト成長ホルモンまたはｈＧＨの配列変異体である。より完全に下に記載されるように、融合タンパク質は、プロテアーゼが作用するときに融合タンパク質からＧＨを解放する開裂配列をさらに含むスペーサー配列を任意選択で含む。
【００８７】
本明細書で使用される用語「ｈＧＨ−ＸＴＥＮ」は、成長ホルモンと関連する１つまたは複数の生物学的または治療的な活性を媒介する生物学的に活性なＧＨを含むペイロード領域、および担体の役目をする第１のＸＴＥＮポリペプチドを少なくとも含む少なくとも１つの他の領域を含む融合ポリペプチドを包含するものとする。一実施形態では、本発明は、表１に示す配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供する。
【００８８】
対象組成物のＧＨは、それらの対応する核酸およびアミノ酸配列と一緒に、当技術分野で周知であり、記載および配列は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ｄａｔａｂａｓｅｓ（例えば、ＣＡＳレジストリ）、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＵｎｉＰｒｏｔ）などの公開データベース、およびＧｅｎＳｅｑ（例えば、Ｄｅｒｗｅｎｔ）などの購読提供データベースで入手できる。ポリヌクレオチド配列は、所与のＧＨ（例えば、完全長または成熟）をコードする野生型ポリヌクレオチド配列であってよいか、または、一部の場合には、配列は、ポリヌクレオチドのＤＮＡ配列が、例えば特定の種での発現のために最適化されている野生型ポリヌクレオチド配列の変異体（例えば、野生型の生物学的に活性なタンパク質をコードするポリヌクレオチド）であってよいか；または、野生型タンパク質の変異体をコードするポリヌクレオチド、例えば部位特異的突然変異体もしくは対立遺伝子変異体であってもよい。当技術分野で公知である方法を使用して、および／または本明細書に提供され、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の実施例でより完全に記載される指針および方法と併用して、本発明によって企図される融合タンパク質構築物を作製するために、ＧＨの野生型もしくはコンセンサスｃＤＮＡ配列またはコドン最適化変異体を使用することは、十分に当業者の能力の範囲内にある。
【００８９】
本発明のｈＧＨ−ＸＴＥＮへの組入れのためのＧＨには、生物学的、治療的、予防的もしくは診断的関心もしくは機能の、または対象に投与されるとき、成長、成長ホルモン欠乏症もしくは欠陥と関連する疾患、障害もしくは状態をとりなすか、予防するか、改善するのに有益である、任意の成長ホルモンまたは配列変異体が含まれる。生来のＧＨと比較して薬物動態学的パラメータの増加、溶解性の増加、安定性の増加または一部の他の強化された医薬もしくは薬力学的特性が追及されるか、または、終端半減期を増加させることが有効性、安全性を向上させるか、結果的に投与頻度の低減および／もしくは患者の薬剤服用遵守を向上させる、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物が特に関心がある。したがって、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物は、例えば、対象に投与されるときに、ＸＴＥＮに連結されていないＧＨと比較して、ｈＧＨ−ＸＴＥＮが治療ウィンドウの中に留まるｉｎ  ｖｉｖｏでの曝露または長さを増加させることによって、生体活性ＧＨの治療的有効性を向上させることを含む、様々な目的を念頭に調製される。
【００９０】
一実施形態では、対象組成物に組み込まれるＧＨは、ヒト成長ホルモンなどの天然に見出されるタンパク質に対応する配列による組換えポリペプチドであってもよい。一実施形態では、ＧＨは、以下のアミノ酸配列を含むヒトＧＨである：
ＦＰＴＩＰＬＳＲＬＦＤＮＡＭＬＲＡＨＲＬＨＱＬＡＦＤＴＹＱＥＦＥＥＡＹＩＰＫＥＱＫＹＳＦＬＱＮＰＱＴＳＬＣＦＳＥＳＩＰＴＰＳＮＲＥＥＴＱＱＫＳＮＬＥＬＬＲＩＳＬＬＬＩＱＳＷＬＥＰＶＱＦＬＲＳＶＦＡＮＳＬＶＹＧＡＳＤＳＮＶＹＤＬＬＫＤＬＥＥＧＩＱＴＬＭＧＲＬＥＤＧＳＰＲＴＧＱＩＦＫＱＴＹＳＫＦＤＴＮＳＨＮＤＤＡＬＬＫＮＹＧＬＬＹＣＦＲＫＤＭＤＫＶＥＴＦＬＲＩＶＱＣＲＳＶＥＧＳＣＧＦ（配列番号２）。
【００９１】
別の実施形態では、ＧＨは、生来のＧＨの生物学的活性の少なくとも一部を保持する、天然の配列の配列変異体、断片、同族体または模倣体である。非限定例では、ＧＨは、配列番号２のタンパク質配列と少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％または１００％の配列同一性を示す配列である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、ＸＴＥＮに連結される単一のＧＨ分子を含む（下でより完全に記載される）。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、第１および第２のＸＴＥＮに連結され、Ｎ末端からＣ末端の立体構造がＸＴＥＮ−ＧＨ−ＸＴＥＮである単一のＧＨ分子を含み、そこで、ＧＨは、ヒト成長ホルモンタンパク質配列（配列番号２）と少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％または１００％の配列同一性を示す配列であり、第１および／または第２のＸＴＥＮは、表３から選択される配列と少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％または１００％の配列同一性を示す配列である。
【００９２】
一般に、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＧＨ融合パートナー構成成分は、ｉｎ  ｖｉｖｏで使用されるとき、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで利用されるとき、所与の標的への結合特異性または別の所望の生物学的特性を示す。例えば、ｈＧＨ−ＸＴＥＮは、成長ホルモンのための膜貫通受容体に結合する能力を有するアゴニストである。一実施形態では、成長受容体へのｈＧＨ−ＸＴＥＮの結合は、受容体二量体化につながり、生来の成長ホルモンと比較して細胞間シグナル伝達経路の活性化の少なくとも一部につながる。一実施形態では、成長ホルモンのための膜貫通受容体に結合したｈＧＨ−ＸＴＥＮは、ＸＴＥＮに連結していない生来の成長ホルモンと比較して、細胞間シグナル伝達経路の活性化の少なくとも約１％、または約５％、または約１０％、または約１５％、または約２０％、または約２５％、または約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または少なくとも約９５％を示すであろう。
【００９３】
本発明の対象ｈＧＨ−ＸＴＥＮは、１つまたは複数の薬物動態学的または薬力学的パラメータの強化を示し、それは、スペーサー配列の開裂による融合タンパク質からのＧＨの解放によって任意選択で強化される。強化された薬物動態学的パラメータを有するｈＧＨ−ＸＴＥＮは、より頻繁でない投与または強化された薬理学的効果、例えば、それに限定されないが、最小有効用量または血中濃度（Ｃｍｉｎ）と最大耐量または血中濃度（Ｃｍａｘ）の間の治療ウィンドウの中に生物学的活性ｈＧＨ−ＸＴＥＮを維持することを可能にする。さらに、強化された薬力学的パラメータを有するｈＧＨ−ＸＴＥＮは、より低いおよび／もしくはより少ない頻度の投与または強化された薬力学的効果、例えばそれに限定されないが、持続的または標準化されたＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳ）を可能にする。そのような場合、選ばれたＸＴＥＮ配列（複数可）を含む融合タンパク質へのＧＨの連結は、これらの特性の向上をもたらすことができ、ＸＴＥＮに連結されていないＧＨと比較してそれらを治療的または予防的薬剤としてより有益にする。
ＩＶ）．伸長組換えポリペプチド
【００９４】
本発明は、ＧＨＤ療法のための、改良された治療レジメンに関する。詳細には、本発明はＧＨＤを有する患者への、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質のボーラス用量投与のための方法に関する。したがって、一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組換えポリペプチドまたは融合タンパク質で、ヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法に関する。
【００９５】
別の態様では、本発明は、ＧＨが連結してｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質になる、融合タンパク質パートナーとして有益であるＸＴＥＮポリペプチド組成物を提供する。ＸＴＥＮは、一般に、小さな親水性アミノ酸で主に構成される、天然に存在しない、実質的に非反復性配列を有する伸長した長さのポリペプチドであり、その配列は、生理的条件下で低い程度の二次または三次構造を有するか全く有しない。
【００９６】
ＸＴＥＮは、ＧＨタンパク質に連結して融合タンパク質を形成するとき、それらが「担体」としての役目をし、特定の望ましい薬物動態学的、物理化学的および医薬特性を付与する点で、融合タンパク質パートナーとして有用性を有する。そのような望ましい特性には、本明細書に記載される他の特性の中でも、組成物の強化された薬物動態学的パラメータおよび溶解特性が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載されるように、そのような融合タンパク質組成物は、特定の成長ホルモン関連の疾患、障害または状態の処置で有用性を有する。本明細書で使用されるように、「ＸＴＥＮ」は、軽鎖または重鎖の単鎖抗体またはＦｃ断片などの抗体または抗体断片を特異的に除外する。
【００９７】
一部の実施形態では、担体として使用されるとき、または累積的に複数のＸＴＥＮ単位が単一の融合タンパク質で使用されるとき、ＸＴＥＮは、約１００超から約３０００のアミノ酸残基、好ましくは４００超から約３０００の残基を有する長いポリペプチドである。他の実施形態では、融合タンパク質構成成分間のリンカーとして使用されるとき、または融合タンパク質の半減期の増加は必要でないが、ＧＨ融合パートナー構成成分の溶解性もしくは他の物理的／化学的特性の増加が所望である場合は、特性を達成するために、約９６、または約８４、または約７２、または約６０、または約４８、または約３６アミノ酸残基などの１００アミノ酸残基より短いＸＴＥＮ配列がＧＨと融合タンパク質組成物に組み込まれる。
【００９８】
発明の融合タンパク質組成物を作製するために使用される生物学的活性タンパク質に連結されるＸＴＥＮの選択基準は、融合タンパク質に強化された医薬および薬物動態学的特性を付与するために次に使用されるＸＴＥＮの物理的／化学的特性および立体構造の属性に一般に関連する。本発明のＸＴＥＮは、以下の有利な特性の１つまたは複数を示す：立体構造柔軟性、強化された水溶性、高度のプロテアーゼ抵抗性、低免疫原性、哺乳動物の受容体への低結合、および増加した水力学的（または、ストークス）半径；それらを融合タンパク質パートナーとして特に有益にする特性。ＸＴＥＮによって強化されるＧＨを含む融合タンパク質の特性の非限定例には、全体的な溶解性および／または代謝安定性の増加、タンパク質分解への低減された感受性、低減された免疫原性、皮下もしくは筋肉内投与されるときの吸収速度の低減、ならびに、Ｃｍａｘがより低く、それは次にＧＨの有害作用の低減をもたらし、それは総合すると、対象に投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の融合タンパク質が治療活性を保持する期間の増加をもたらすような、強化された薬物動態学的特性、例えば、より長い終端半減期および増加した曲線下面積（ＡＵＣ）、皮下もしくは筋肉内注射の後のより遅い吸収（ＸＴＥＮに連結されず、類似した経路によって投与されるＧＨと比較して）が含まれる。
【００９９】
発明のＸＴＥＮを含む組成物などのタンパク質の物理的／化学的特性；二次または三次構造、溶解性、タンパク質凝集、融解特性、汚染および水分含有量などの特性を判定するために、様々な方法およびアッセイが当技術分野で公知である。そのような方法には、分析用遠心法、ＥＰＲ、ＨＰＬＣイオン交換、ＨＰＬＣサイズ排除、ＨＰＬＣ逆相、光散乱、毛細管電気泳動、円二色性、示差走査熱量測定、蛍光、ＨＰＬＣイオン交換、ＨＰＬＣサイズ排除、ＩＲ、ＮＭＲ、ラマン分光法、屈折率測定およびＵＶ／可視分光法が含まれる。追加の方法は、Ａｒｎａｕら、Ｐｒｏｔ  Ｅｘｐｒ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆ（２００６年）４８巻、１〜１３頁に開示される。本発明へのこれらの方法の適用は、当分野の技術者の理解力の範囲内であろう。
【０１００】
一般的に、ＸＴＥＮは、重合体の伸長にもかかわらず、生理的条件下で変性したペプチド配列のようにふるまうように設計されている。変性したとは、ペプチド骨格の大きな立体構造的自由を特徴とする溶液状のペプチドの状態を記載する。ほとんどのペプチドおよびタンパク質は、高濃度の変性剤の存在下で、または昇温状態で変性した立体構造を採用する。変性した立体構造のペプチドは、例えば、特徴的な円二色性（ＣＤ）スペクトルを有し、ＮＭＲによって判定される長距離相互作用の欠如によって特徴付けられる。「変性した立体構造」および「非構造化立体構造」は、本明細書において同義的に使用される。一部の実施形態では、本発明は、生理的条件下で、二次構造がほとんどない変性した配列に似ているＸＴＥＮ配列を提供する。他の場合には、ＸＴＥＮ配列は、生理的条件下で二次構造が実質的にない。この文脈で使用される「ほとんどない」は、本明細書に記載される手段によって測定または判定される通り、ＸＴＥＮ配列のＸＴＥＮアミノ酸残基の５０％未満が二次構造に寄与することを意味する。この文脈において使用される「実質的にない」は、本明細書に記載される方法によって測定または判定される通り、ＸＴＥＮ配列のＸＴＥＮアミノ酸残基の少なくとも約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または少なくとも約９９％が二次構造に寄与しないことを意味する。
【０１０１】
所与のポリペプチドで二次および三次構造の存在または不在を見分けるために、当技術分野で様々な方法が確立されている。詳細には、分光測光法、例えば「遠紫外」スペクトル領域（１９０〜２５０ｎｍ）での円二色性分光法によって、二次構造を測定することができる。二次構造要素、例えばαヘリックスおよびβシートは、ＣＤスペクトルの特徴的な形状および量を各々生成する。米国特許出願公開番号２００３０２２８３０９Ａ１に記載されるように、特定のコンピュータプログラムまたはアルゴリズム、例えば周知のＣｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズム（Ｃｈｏｕ，  Ｐ．  Ｙ．ら（１９７４年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１３巻：２２２〜４５頁）、およびＧａｒｎｉｅｒ−Ｏｓｇｕｔｈｏｒｐｅ−Ｒｏｂｓｏｎ（「ＧＯＲ」）アルゴリズム（Ｇａｒｎｉｅｒ  Ｊ、Ｇｉｂｒａｔ  ＪＦ、Ｒｏｂｓｏｎ  Ｂ．（１９９６年）、ＧＯＲ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｆｒｏｍ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ２６６巻：５４０〜５５３頁）によってポリペプチド配列の二次構造を予測することもできる。所与の配列について、アルゴリズムは、例えばαヘリックスもしくはβシートを形成する配列の残基の総計および／もしくは百分率、またはランダムコイル形成（二次構造を欠く）をもたらすと予測される配列の残基の百分率で表される、多少の二次構造が存在するか全く存在しないかを予測することができる。
【０１０２】
一部の実施形態では、発明の融合タンパク質組成物で使用されるＸＴＥＮ配列は、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムで判定される０％から約５％未満の範囲のαヘリックス百分率を有することができる。他の場合には、融合タンパク質組成物のＸＴＥＮ配列は、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムで判定される０％から約５％未満の範囲のβシート百分率を有する。一部の実施形態では、融合タンパク質組成物のＸＴＥＮ配列は、０％から約５％未満の範囲のαヘリックス百分率およびＣｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムで判定される０％から約５％未満の範囲のβシート百分率を有する。一部の実施形態では、融合タンパク質組成物のＸＴＥＮ配列は、約２％未満のαヘリックス百分率および約２％未満のβシート百分率を有する。他の場合には、融合タンパク質組成物のＸＴＥＮ配列は、ＧＯＲアルゴリズムで判定される高い程度のランダムコイル百分率を有する。一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、ＧＯＲアルゴリズムで判定される少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９１％、より好ましくは少なくとも約９２％、より好ましくは少なくとも約９３％、より好ましくは少なくとも約９４％、より好ましくは少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６％、より好ましくは少なくとも約９７％、より好ましくは少なくとも約９８％、最も好ましくは少なくとも約９９％のランダムコイルを有する。
１．非反復性配列
【０１０３】
一部の実施形態では、組成物のＸＴＥＮ配列は、実質的に非反復性である。一般に、反復性のアミノ酸配列は、コラーゲンおよびロイシンジッパーなどの天然の反復配列によって例示されるように凝集するか高次構造を形成する傾向を有するか、または接触を形成して結晶性もしくは偽結晶性の構造になる傾向を有する。対照的に、非反復性配列の低い凝集傾向は、さもなければ配列が反復性であるならば凝集する可能性がある荷電アミノ酸の比較的低い頻度で、長い配列のＸＴＥＮの設計を可能にする。一般的に、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は約１００超えから約３０００アミノ酸残基、好ましくは４００超えから約３０００個の累積残基のＸＴＥＮ配列を含み、配列は実質的に非反復性である。一実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、約１００超えから約３０００アミノ酸残基、好ましくは４００超えから約３０００アミノ酸残基を有し、そこにおいて、アミノ酸がセリンで、３つ以下の連続したアミノ酸がセリン残基でない限り、配列中の３つの連続したアミノ酸も同一のアミノ酸タイプでない。前述の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、実質的に非反復性であろう。
ポリペプチドまたは遺伝子の反復性の程度は、コンピュータプログラムもしくはアルゴリズムによって、または当技術分野で公知である他の手段によって測定される。ポリペプチド配列中の反復性は、例えば、所与の長さのより短い配列がポリペプチドの中で出現する回数を判定することによって調査することができる。例えば、２００アミノ酸残基のポリペプチドは１９２個の重複する９アミノ酸配列（または９量体「フレーム」）および１９８個の３量体フレームを有するが、特異な９量体または３量体配列の数は配列内の反復量に依存する。全体のポリペプチド配列内での部分配列の反復程度を反映するスコア（以降「部分配列スコア」）が生成される。本発明との関連で、「部分配列スコア」は、ポリペプチドの２００連続アミノ酸配列にわたる各特異３量体フレームの出現数の合計を、２００アミノ酸配列中の特異３量体部分配列の絶対数によって割ったものを意味する。反復性および非反復性のポリペプチドの最初の２００アミノ酸に由来するそのような部分配列スコアの例は、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の実施例４４に提供されている。一部の実施形態では、本発明は、ＸＴＥＮが１２未満、より好ましくは１０未満、より好ましくは９未満、より好ましくは８未満、より好ましくは７未満、より好ましくは６未満、最も好ましくは５未満の部分配列スコアを有する、１つまたは複数のＸＴＥＮを各々含むｈＧＨ−ＸＴＥＮを提供する。この段落中の上に記載される実施形態では、約１０未満（すなわち、９、８、７など）の部分配列スコアを有するＸＴＥＮは、「実質的に非反復性」である。
【０１０４】
ＸＴＥＮの非反復性の特徴は、反復配列を有するポリペプチドと比較して、ＧＨを有する融合タンパク質により大きな程度の溶解性およびより少ない凝集傾向を付与する。これらの特性は、１００ｍｇ／ｍｌを場合によっては超える極めて高い薬物濃度を含有する、ＸＴＥＮを含む医薬調製物の製剤を容易にする。
【０１０５】
さらに、実施形態のＸＴＥＮポリペプチド配列は、哺乳動物に投与されるときの免疫原性を低減するか実質的に除去するために、低い程度の内部反復性を有するように設計される。ほとんど３つのアミノ酸、例えばグリシン、セリンおよびグルタミン酸に制限される短い、反復モチーフで構成されるポリペプチド配列は、これらの配列で予測されるＴ細胞エピトープの不在にもかかわらず、哺乳動物に投与されるときに比較的高い抗体価をもたらすことができる。タンパク質凝集体、架橋免疫原および反復性の炭水化物を含む反復エピトープを有する免疫原は高度に免疫原性で、例えばＢ細胞受容体の架橋をもたらし、Ｂ細胞活性化を引き起こすことができることがわかっているので、これはポリペプチドの反復的性質によって引き起こすことができる。（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，  Ｊ．ら（２００７年）Ｖａｃｃｉｎｅ、２５巻：１６７６〜８２頁；Ｙａｎｋａｉ，  Ｚ．ら（２００６年）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、３４５巻：１３６５〜７１頁；Ｈｓｕ，  Ｃ．  Ｔ．ら（２０００年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、６０巻：３７０１〜５頁）；Ｂａｃｈｍａｎｎ  ＭＦらＥｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５年）２５巻（１２号）：３４４５〜３４５１頁）。
２．例示的な配列モチーフ
【０１０６】
本発明は、複数単位のより短い配列またはモチーフを含むＸＴＥＮを包含し、そこにおいて、モチーフのアミノ酸配列は非反復性である。ＸＴＥＮ配列の設計において、ＸＴＥＮ配列を作製するために多量体化される配列モチーフのライブラリーを使用した「構成単位」アプローチの使用にもかかわらず、非反復性基準を満たすことができることが発見された。したがって、ＸＴＥＮ配列はわずか４種類の異なる配列モチーフの複数単位からなることができるが、モチーフ自身は非反復性のアミノ酸配列から一般になるので、全体的なＸＴＥＮ配列は実質的に非反復性になる。
【０１０７】
一実施形態では、ＸＴＥＮは約１００超えから約３０００アミノ酸残基、好ましくは４００超えから約３０００残基の非反復配列を有し、そこにおいて、ＸＴＥＮ配列の少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９７％、または約１００％が非重複配列モチーフからなり、モチーフの各々は約９から３６アミノ酸残基を有する。他の実施形態では、ＸＴＥＮ配列の少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９７％、または約１００％が非重複配列モチーフからなり、モチーフの各々は９から１４アミノ酸残基を有する。さらに他の実施形態では、ＸＴＥＮ配列構成成分の少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９７％、または約１００％が非重複配列モチーフからなり、モチーフの各々は１２アミノ酸残基を有する。これらの実施形態では、全体の配列が構造化されない柔軟な特徴を有するように、配列モチーフが小さな親水性アミノ酸で主に構成されることが好ましい。ＸＴＥＮに含まれるアミノ酸の例は、例えば、アルギニン、リシン、トレオニン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリンおよびグリシンである。コドン最適化、配列モチーフをコードするアセンブリーポリヌクレオチド、タンパク質の発現、電荷分布および発現タンパク質の溶解性、ならびに二次および三次構造などの変数を試験した結果、強化された特徴を有するＸＴＥＮ組成物はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）残基を主に含み、配列は実質的に非反復性になるように設計されていることが発見された。一実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、長さが約１００超えから約３０００アミノ酸残基、好ましくは４００超えから約３０００残基である、実質的に非反復性の配列に配置される、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）またはプロリン（Ｐ）から選択される４から６種類のアミノ酸を支配的に有する。一部の実施形態では、ＸＴＥＮは、約１００超えから約３０００アミノ酸残基、好ましくは４００超えから約３０００残基の配列を有し、そこにおいて、配列の少なくとも約８０％は非重複配列モチーフからなり、モチーフの各々は９から３６アミノ酸残基を有し、モチーフの各々は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）から選択される４から６種類のアミノ酸からなり、完全長ＸＴＥＮ中の任意の１種類のアミノ酸の含有量は３０％を超えない。他の実施形態では、ＸＴＥＮ配列の少なくとも約９０％は非重複配列モチーフからなり、そこにおいて、モチーフの各々は９から３６アミノ酸残基を有し、モチーフは、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）から選択される４から６種類のアミノ酸からなり、完全長ＸＴＥＮ中の任意の１種類のアミノ酸の含有量は３０％を超えない。他の実施形態では、ＸＴＥＮ配列の少なくとも約９０％は非重複配列モチーフからなり、そこにおいて、モチーフの各々は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）から選択される４から６種類のアミノ酸からなる１２アミノ酸残基を有し、完全長ＸＴＥＮ中の任意の１種類のアミノ酸の含有量は３０％を超えない。さらに他の実施形態では、ＸＴＥＮ配列の少なくとも約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％から約１００％は非重複配列モチーフからなり、そこにおいて、モチーフの各々は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）からなる１２アミノ酸残基を有し、完全長ＸＴＥＮ中の任意の１種類のアミノ酸の含有量は３０％を超えない。
【０１０８】
さらに他の実施形態では、ＸＴＥＮは、約１００超えから約３０００アミノ酸残基、好ましくは４００超えから約３０００アミノ酸残基の非反復配列を含み、配列の少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％は９から１４アミノ酸残基の非重複配列モチーフからなり、そこにおいて、モチーフは、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）から選択される４から６種類のアミノ酸からなり、任意の１モチーフ中の任意の２連続アミノ酸残基の配列は配列モチーフ中で二度を超えて反復されない。他の実施形態では、ＸＴＥＮ配列の少なくとも約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％は１２アミノ酸残基の非重複配列モチーフからなり、そこにおいて、モチーフは、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）から選択される４から６種類のアミノ酸からなり、任意の１配列モチーフ中の任意の２連続アミノ酸残基の配列は配列モチーフ中で二度を超えて反復されない。他の実施形態では、ＸＴＥＮ配列の少なくとも約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％は１２アミノ酸残基の非重複配列モチーフからなり、そこにおいて、モチーフは、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）からなり、任意の１配列モチーフ中の任意の２連続アミノ酸残基の配列は配列モチーフ中で二度を超えて反復されない。さらに他の実施形態では、ＸＴＥＮは１２アミノ酸配列モチーフからなり、アミノ酸はグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）から選択され、そこにおいて、任意の１配列モチーフ中の任意の２連続アミノ酸残基の配列は配列モチーフ中で二度を超えて反復されず、完全長ＸＴＥＮ中の任意の１種類のアミノ酸の含有量は３０％を超えない。この段落中の上に記載される前述の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は実質的に非反復性になる。
【０１０９】
一部の実施形態では、本発明は、約１００超えから約３０００アミノ酸残基、累積的に４００超えから約３０００残基の非反復ＸＴＥＮ配列（複数可）を含む組成物を提供し、そこにおいて、配列の少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％から約１００％は、表２のアミノ酸配列から選択される複数単位の２つ以上の非重複配列モチーフからなる。一部の実施形態では、ＸＴＥＮは、配列の約８０％、または少なくとも約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％から約１００％が、表２の単一モチーフファミリーから選択される２つ以上の非重複配列からなる、非重複配列モチーフを含み、全体的な配列が実質的に非反復性のままである「ファミリー」配列をもたらす。したがって、これらの実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、表２のＡＤモチーフファミリー、またはＡＥモチーフファミリー、またはＡＦモチーフファミリー、またはＡＧモチーフファミリー、またはＡＭモチーフファミリーの配列の複数単位の非重複配列モチーフを含む。他の実施形態では、ＸＴＥＮは、表２のモチーフファミリーの２つ以上からのモチーフ配列を含む。他の実施形態では、ＸＴＥＮは、表２のモチーフファミリーの２つ以上からのモチーフ配列を含む。
【表２】
2015520188.tif 000015
【０１１０】
様々な順列で一緒に使用するときに「ファミリー配列」をもたらす個々のモチーフ配列を表す
【０１１１】
他の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物は、約１００超えから約３０００アミノ酸残基、好ましくは４００超えから約３０００残基の非反復ＸＴＥＮ配列を含み、配列の少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％から約１００％は、ＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２（参照により本明細書に完全に組み込まれる）の表８〜１１のポリペプチド配列の１つまたは複数から選択される非重複３６アミノ酸配列モチーフからなる。
【０１１２】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＸＴＥＮ構成成分が、そのアミノ酸の１００％未満がグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）から選択される４から６アミノ酸からなるか、または配列の１００％未満が表２の配列モチーフからなるか、または表３からのＸＴＥＮと１００％未満の配列同一性を有するそれらの実施形態では、他のアミノ酸残基は１４個の天然のＬアミノ酸の任意の他のものから選択されるが、ＸＴＥＮ配列が少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の親水性アミノ酸を含有するように、親水性アミノ酸から優先的に選択される。グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）でないＸＴＥＮアミノ酸は、ＸＴＥＮ配列全体に散在するか、配列モチーフの中もしくはその間に位置するか、またはＸＴＥＮ配列の１つまたは複数の短いひと続きの配列に集中している。ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＸＴＥＮ構成成分がグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）以外のアミノ酸を含むような場合には、アミノ酸が疎水性残基でなく、ＸＴＥＮ構成成分の二次構造を実質的に付与しないのが好ましい。ＸＴＥＮの構築でより有利でない疎水性残基には、トリプトファン、フェニルアラニン、チロシン、ロイシン、イソロイシン、バリンおよびメチオニンが含まれる。さらに、以下のアミノ酸の少数（例えば５％未満）しかまたはいずれも含有しないようにＸＴＥＮ配列を設計することができる：システイン（ジスルフィド形成および酸化を避けるために）、メチオニン（酸化を避けるために）、アスパラギンおよびグルタミン（アミド分解を避けるために）。したがって、一部の実施形態では、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）に加えて他のアミノ酸を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＸＴＥＮ構成成分は、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムで測定される通り残基の５％未満がαヘリックスおよびβシートに寄与する配列を有し、ＧＯＲアルゴリズムで測定される通り、少なくとも９０％、または少なくとも約９５％以上のランダムコイル形成を有する。
３．配列の長さ
【０１１３】
本発明の別の態様では、本発明は、伸長配列を有するＸＴＥＮポリペプチドの担体を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物を包含する。本発明は、非反復性の非構造化ポリペプチドの長さを増加させることがＸＴＥＮの非構造化的性質を強化し、対応して、ＸＴＥＮ担体を含む融合タンパク質の生物学的および薬物動態学的特性を強化するとの発見を利用する。実施例でより完全に記載される通り、単一ファミリーの配列モチーフ（例えば、表２の４つのＡＥモチーフ）の固定された反復順序によって作製されたとしても、ＸＴＥＮの長さの比例増加は、ＧＯＲアルゴリズムで判定される通り、より短いＸＴＥＮ長と比較してより高い百分率のランダムコイル形成を有する配列をもたらす。一般に、実施例に記載する通り、非構造化ポリペプチド融合パートナーの長さを増加させることは、より短い配列長の非構造化ポリペプチドパートナーとの融合タンパク質と比較して、終端半減期の不釣合いな増加を有する融合タンパク質をもたらす。
【０１１４】
本発明のｈＧＨ−ＸＴＥＮへの組入れを企図するＸＴＥＮの非限定例を、表３に示す。一実施形態では、本発明は、融合タンパク質（複数可）のＸＴＥＮ配列長が約１００超えから約３０００アミノ酸残基であり、場合によっては４００超えから約３０００アミノ酸残基であるｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物を提供し、そこにおいて、ＸＴＥＮは、ＸＴＥＮに連結されないＧＨと比較して強化された薬物動態学的特性をｈＧＨ−ＸＴＥＮに付与する。一部の実施形態では、本発明のｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物のＸＴＥＮ配列は、長さが約１００、または約１４４、または約２８８、または約４０１、または約５００、または約６００、または約７００、または約８００、または約９００、または約１０００、または約１５００、または約２０００、または約２５００、または最高約３０００アミノ酸残基であってもよい。他の場合には、ＸＴＥＮ配列は、長さが約１００から１５０、約１５０から２５０、約２５０から４００、４０１から約５００、約５００から９００、約９００から１５００、約１５００から２０００、または約２０００から約３０００アミノ酸残基であってもよい。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮは、配列が、表３から選択されるＸＴＥＮと少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を示すＸＴＥＮ配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、融合タンパク質をコードする遺伝子のＸＴＥＮ部分での最適化されたＮ末端リーダー配列（ＮＴＳ）のためのコードヌクレオチドの組入れによる、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端構成成分としての最適化された発現のために設計される。別の実施形態では、発現されるｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端ＸＴＥＮ配列は、表３から選択される任意の配列との少なくとも９０％の配列同一性を有する。一実施形態では、発現されるｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端ＸＴＥＮ配列は、ＡＥ４８またはＡＭ４８、ＡＥ６２４、ＡＥ９１１、ＡＥ９１２またはＡＭ９２３の配列との少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【０１１５】
他の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は第１および第２のＸＴＥＮ配列を含み、ＸＴＥＮ配列中の残基の累計は約４００超えから約３０００アミノ酸残基である。上の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は第１および第２のＸＴＥＮ配列を含み、配列は、表３から選択される少なくとも第１の、または追加で第２のＸＴＥＮと少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を各々示す。複数のＸＴＥＮがｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物で使用される例には、限定されずに、少なくとも１つのＧＨのＮ末端およびＣ末端の両方に連結したＸＴＥＮを有する構築物が含まれる。
【０１１６】
より完全に下に記載される通り、本発明は、対象に投与される融合タンパク質に目標の半減期を付与するようにＸＴＥＮの長さを選択することによってｈＧＨ−ＸＴＥＮが設計される方法を提供する。一般に、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物に組み込まれる、累積で約４００残基より長いＸＴＥＮ長は、より短い、例えば約２８０残基より短い累積長と比較して、より長い半減期になる。しかし、別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、対象への皮下または筋肉内投与の後のより遅い速度の全身吸収をさらに付与するように選択される、より長い配列長を有するＸＴＥＮを含むように設計される。そのような実施形態では、ＣｍａｘはＸＴＥＮに連結されないＧＨの同等用量と比較して低減され、それによって、ｈＧＨ−ＸＴＥＮを組成物の治療ウィンドウの中に保つ能力に寄与する。したがって、本明細書に記載される他の物理的／化学的特性に加えて、ＸＴＥＮは投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮに貯蔵所としての特性を付与する。
【表３−１】
2015520188.tif 000016
【表３−２】
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【表３−３】
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【表３−４】
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【表３−５】
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【表３−６】
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【０１１７】
４．ＸＴＥＮセグメント
【０１１８】
一実施形態では、本発明は単離されたｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供し、そこにおいて、ＸＴＥＮ構成成分の累積長は、表３（ならびに、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の表８、９、１０、１１および１２）から選択される少なくとも１つのポリペプチド配列セグメントを含有する、約１００超えから約３０００アミノ酸残基であり、ＸＴＥＮ配列の残りの少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％以上は親水性アミノ酸を概して含有し、ＸＴＥＮの残りの約２％未満は、疎水性または芳香族のアミノ酸、またはシステインからなる。一部の実施形態では、ＸＴＥＮは、同一であるか異なる複数のセグメントを含有する。別の実施形態では、本発明は、単離されたｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供し、そこにおいて、ＸＴＥＮ構成成分の累積長は約１００超えから約３０００アミノ酸残基であり、少なくとも約１００から約９２３、または少なくとも約１００から約８７５、または少なくとも約１００から約５７６、または少なくとも約１００から約２８８、または少なくとも約１００から約１４４アミノ酸残基の少なくとも１つの配列セグメントを含み、配列セグメント（複数可）は少なくとも３種類の異なるアミノ酸からなり、配列セグメント（複数可）中のグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）残基の合計は、配列セグメントの全アミノ酸配列の少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を構成し、ＸＴＥＮ配列（複数可）の残りの少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％は親水性アミノ酸からなり、ＸＴＥＮ配列（複数可）の残りの約２％未満は、疎水性または芳香族のアミノ酸、またはシステインからなる。別の実施形態では、本発明は、単離されたｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供し、そこにおいて、ＸＴＥＮ構成成分の累積長は約１００超えから約３０００アミノ酸残基であり、少なくとも約２００から約９２３、または少なくとも約２００から約８７５、または少なくとも約２００から約５７６、または少なくとも約２００から約２８８アミノ酸残基の少なくとも１つの配列セグメントを含み、
配列セグメント（複数可）中のグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）残基の合計は、配列セグメントの全アミノ酸配列の少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を構成し、セグメントの部分配列スコアは、１２未満、より好ましくは１０未満、より好ましくは９未満、より好ましくは８未満、より好ましくは７未満、より好ましくは６未満、最も好ましくは５未満であり、ＸＴＥＮ配列（複数可）の残りの少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％は親水性アミノ酸からなり、ＸＴＥＮ配列（複数可）の残りの約２％未満は、疎水性、芳香族またはシステインアミノ酸からなる。
５．Ｎ末端ＸＴＥＮ発現強化配列
【０１１９】
一部の実施形態では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＮ末端部分として組み込まれる短い長さのＸＴＥＮ配列を提供する。融合タンパク質の発現は、結合性融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドに組み込まれる最適化されたＮ末端リーダーポリヌクレオチド配列（Ｎ末端ＸＴＥＮをコードする）を含む好適な発現ベクターで形質転換される宿主細胞で強化される。ＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２（参照により本明細書に完全に組み込まれる）の実施例１４〜１７に記載される通り、結合性融合タンパク質遺伝子に最適化されたＮ末端リーダー配列（ＮＴＳ）を含むそのような発現ベクターで形質転換された宿主細胞は、ＮＴＳを含まないポリヌクレオチドからの対応する融合タンパク質の発現と比較して、大いに強化された融合タンパク質の発現をもたらし、発現を強化するために使用される非ＸＴＥＮリーダー配列の組込みの必要性を不要にすることが発見された。一実施形態では、本発明はＮＴＳを含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供し、そこにおいて、宿主細胞中のコード遺伝子からの結合性融合タンパク質の発現は、Ｎ末端ＸＴＥＮ配列を含まない（コード遺伝子がＮＴＳを欠く）ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の発現と比較して、約５０％、または約７５％、または約１００％、または約１５０％、または約２００％、または約４００％強化される。
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端ＸＴＥＮポリペプチドは、ＡＥ４８、ＡＥ４８．１、ＡＭ４８またはＡＭ４８．１のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９１％、より好ましくは少なくとも約９２％、より好ましくは少なくとも約９３％、より好ましくは少なくとも約９４％、より好ましくは少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６％、より好ましくは少なくとも約９７％、より好ましくは少なくとも約９８％、より好ましくは少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を示す配列を含み、そのそれぞれのアミノ酸配列は以下の通りである：
ＡＥ４８：ＭＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳ（配列番号５４）
ＡＥ４８．１：ＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳ（配列番号８１）
ＡＭ４８：ＭＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳ（配列番号５５）
ＡＭ４８．１：ＡＥＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳ（配列番号８２）。
【０１２０】
別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＮ末端ＸＴＥＮポリペプチドは、本明細書に記載される通り、ＡＥ４８、ＡＭ４８またはＡＥ９１２と同一性％を示す配列を含み、そこにおいて、Ｎ末端Ｍ残基が不在である（例えば、ＡＥ４８．１−配列番号８１；ＡＭ４８．１−配列番号８２；およびＡＥ９１２．１−配列番号８３）。追加の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのＣ末端ＸＴＥＮポリペプチドは、本明細書に記載される通り、ＡＥ１４６と同一性％を示す配列を含む（例えば、ＡＥ１４６−配列番号５３；またはＡＥ１４６．１−配列番号８５）。
【０１２１】
別の実施形態では、短い長さのＮ末端ＸＴＥＮは、より長いＸＴＥＮに連結して、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＮ末端領域を形成し、そこにおいて、短い長さのＮ末端ＸＴＥＮをコードするポリヌクレオチド配列は、宿主細胞で強化された発現の特性を付与し、発現されるＸＴＥＮの長い長さは、上記の通り、融合タンパク質で強化されたＸＴＥＮ担体特性に寄与する。上で、短い長さのＸＴＥＮは、本明細書に開示されるＸＴＥＮのいずれか（例えば、表３のＸＴＥＮ）に連結され、生じるＸＴＥＮは、本明細書に開示されるＧＨのいずれか（例えば、配列番号２の配列を含むＧＨ）のＮ末端に融合タンパク質の構成成分として次に連結される。あるいは、短い長さのＸＴＥＮをコードするポリヌクレオチド（またはその相補配列）は、本明細書に開示されるＸＴＥＮのいずれかをコードするポリヌクレオチド（またはその相補配列）に連結され、Ｎ末端ＸＴＥＮをコードする生じた遺伝子は、本明細書に開示されるＧＨのいずれかをコードするポリヌクレオチドの５’末端（またはその相補配列の３’末端）に次に連結される。一部の実施形態では、長い長さのＮ末端ＸＴＥＮポリペプチドは、配列ＡＥ６２４、ＡＥ９１１、ＡＥ９１２およびＡＭ９２３からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を示す。
【０１２２】
上記の、前述のＮ末端ＸＴＥＮ実施形態のいずれかで、Ｎ末端ＸＴＥＮは、Ｎ末端ＸＴＥＮをコードするヌクレオチドを融合タンパク質のターゲッティング部分をコードする遺伝子に連結するために用いられるであろう制限酵素制限部位を収容するために、好ましくはＧＥＳＴＰＡから選択される約１つから約６つの追加のアミノ酸残基を有することができる。Ｎ末端配列の生成、および本発明の融合タンパク質への組込みのための方法は、実施例でより完全に記載される。
６．純電荷
【０１２３】
他の実施形態では、ＸＴＥＮポリペプチドは、純電荷を有するアミノ酸残基の組込み、および／またはＸＴＥＮ配列中の疎水性アミノ酸の割合の低減によって付与される非構造化特徴を有する。ＸＴＥＮ配列中の荷電アミノ酸の含有量を変更することによって、全体の純電荷および純電荷密度が制御される。一部の実施形態では、組成物のＸＴＥＮの純電荷密度は、＞＋０．１または＜−０．１電荷／残基であってもよい。他の実施形態では、ＸＴＥＮの純電荷は、約０％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％または約２０％以上であってもよい。
【０１２４】
ヒトまたは動物のほとんど組織および表面は純負電荷を有するので、一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、ＸＴＥＮ含有組成物と様々な表面、例えば血管、健全な組織または様々な受容体の間の非特異的相互作用を最小にするように、純負電荷を有するように設計される。特定の理論によって縛られないが、純負電荷を個々に運び、ＸＴＥＮポリペプチドの配列全体に分布するＸＴＥＮポリペプチドの個々のアミノ酸の間での静電反発力のために、ＸＴＥＮはオープン立体構造を採用することができる。ＸＴＥＮの伸長配列長での純負電荷のそのような分布は、非構造化立体構造に導くことができ、それは次に、流体力学半径の有効な増加をもたらすことができる。好ましい実施形態では、負電荷は、グルタミン酸残基の組込みによって付与される。したがって、一実施形態では、本発明は、ＸＴＥＮ配列が約８、１０、１５、２０、２５％、または約３０％のグルタミン酸さえ含有するＸＴＥＮを提供する。一般に、グルタミン酸残基は、ＸＴＥＮ配列全体に均一に間隔を置いて配置される。場合によっては、ＸＴＥＮは、２０ｋＤのＸＴＥＮにつき約１０〜８０、または約１５〜６０、または約２０〜５０グルタミン酸残基を含有することができ、それは、非常に類似したｐＫａを有する荷電残基を有するＸＴＥＮをもたらすことができ、それは、生成物の電荷均一性を増加させ、その等電位点を鋭くすることができ、それは、例えば精製手順を単純化するために、生じるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の物理化学的特性を強化する。
【０１２５】
本発明の組成物のＸＴＥＮは、正荷電アミノ酸を有しないか低い含有量の正荷電アミノ酸を一般に有する。一部の実施形態では、ＸＴＥＮは約１０％未満の正荷電アミノ酸残基、または約７％未満、または約５％未満、または約２％未満、または約１％未満の正荷電アミノ酸残基を有することができる。しかし、本発明は、限られた数の正荷電アミノ酸、例えばリシンがＸＴＥＮに組み込まれて、ペプチドの上でのリシンのイプシロンアミンと反応性基の間のコンジュゲーション、リンカー橋、または薬物もしくは小分子の上の反応性基とＸＴＥＮ骨格とのコンジュゲーションを可能にする構築物を企図する。前述の一実施形態では、ＸＴＥＮは、約１から約１００の間のリシン残基、または約１から約７０リシン残基、または約１から約５０リシン残基、または約１から約３０リシン残基、または約１から約２０リシン残基、または約１から約１０リシン残基、または約１から約５リシン残基、あるいはわずか１つのリシン残基を有する。前述のリシン含有ＸＴＥＮを使用して、ＸＴＥＮ、成長ホルモンに加えて化学療法剤を含む、成長関連の疾患または障害の処置に有益である融合タンパク質が構築され、そこにおいて、ＸＴＥＮ構成成分に組み込まれる薬剤の分子の最大数は、ＸＴＥＮに組み込まれるリシンまたは反応性側鎖を有する他のアミノ酸（例えば、システイン）の数によって決定される。
【０１２６】
一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、セリンまたはグリシンなどの他の残基によって隔てられる荷電残基を含み、それは、より優れた発現または精製挙動につながる。純電荷に基づいて、一部のＸＴＥＮは、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０または６．５の等電位点（ｐＩ）さえも有する。好ましい実施形態では、ＸＴＥＮは、１．５から４．５の間の等電位点を有する。これらの実施形態では、本発明のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物に組み込まれるＸＴＥＮは、非構造化立体構造ならびに哺乳動物のタンパク質および組織へのＸＴＥＮ構成成分の結合の低減に寄与する生理的条件の下で、純負電荷を運ぶ。
【０１２７】
疎水性アミノ酸はポリペプチドに構造を付与するので、本発明は、ＸＴＥＮ中の疎水性アミノ酸の含有量が一般的に５％未満、または２％未満、または１％未満の疎水性アミノ酸含有量であると定める。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＸＴＥＮ構成成分中のメチオニンおよびトリプトファンのアミノ酸含有量は、一般的に５％未満、または２％未満、最も好ましくは１％未満である。別の実施形態では、ＸＴＥＮは、１０％未満の正荷電アミノ酸残基、または約７％未満、または約５％未満、または約２％未満の正荷電アミノ酸残基を有する配列を有し、メチオニンおよびトリプトファン残基の合計は全ＸＴＥＮ配列の２％未満であり、アスパラギンおよびグルタミン残基の合計は１０％未満である。
７．低免疫原性
【０１２８】
別の態様では、本発明は、ＸＴＥＮ配列が低い免疫原性度を有するか、実質的に非免疫原性である組成物を提供する。いくつかの因子、例えば、非反復配列、非構造化立体構造、高い溶解度、低い程度の自己凝集またはその欠如、配列内の低い程度のタンパク分解性部位またはその欠如、およびＸＴＥＮ配列中の低い程度のエピトープまたはその欠如が、ＸＴＥＮの低免疫原性に寄与することができる。
【０１２９】
立体構造のエピトープは、タンパク質抗原の複数の不連続なアミノ酸配列で構成されるタンパク質表面の領域によって形成される。タンパク質の正確な折畳みは、これらの配列を宿主の体液性免疫系が「外来である」と認識することができる明確な、安定した空間立体配置またはエピトープに導き、そのタンパク質に対する抗体の生成または細胞媒介免疫応答の活性化をもたらす。後者の場合、個体でのタンパク質への免疫応答は、その個体のＨＬＡ−ＤＲアロタイプのペプチド結合特異性の関数であるＴ細胞エピトープ認識によってかなり影響される。Ｔ細胞の表面の同族Ｔ細胞受容体によるＭＨＣクラスＩＩペプチド複合体の組込みは、ＣＤ４分子などの特定の他の補助受容体の交差結合と一緒に、Ｔ細胞内で活性化状態を誘導することができる。活性化はサイトカインの放出につながり、Ｂ細胞などの他のリンパ球をさらに活性化させ、抗体を生成するか、完全細胞免疫反応としてキラーＴ細胞を活性化させる。
【０１３０】
ＡＰＣ（抗原提示細胞）の表面での提示のための所与のＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するペプチドの能力は、いくつかの因子に依存し、特筆すべきはその一次配列である。一実施形態では、より低い免疫原性度は、抗原提示細胞での抗原処理に抵抗するＸＴＥＮ配列を設計することによって、および／またはＭＨＣ受容体に良く結合しない配列を選択することによって達成される。本発明は、ＭＨＣ  ＩＩ受容体との結合を低減するだけでなく、Ｔ細胞受容体のためのエピトープの形成または抗体結合を避け、低い免疫原性度をもたらすように設計された、実質的に非反復性のＸＴＥＮポリペプチドを有するｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供する。免疫原性の回避は、一部、ＸＴＥＮ配列の立体構造的柔軟性、すなわち、アミノ酸残基の選択および順序による二次構造の欠如の直接の結果である。例えば、水溶液で、または立体構造エピトープをもたらすことができる生理的条件下で、コンパクトに折り畳まれた立体構造を適合させる傾向の低い配列に、特に興味がある。従来の治療行為および投与を使用する、ＸＴＥＮを含む融合タンパク質の投与は、ＸＴＥＮ配列に対する中和抗体の形成を一般にもたらさず、さらに、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物中のＧＨ融合パートナーの免疫原性を低減する。
【０１３１】
一実施形態では、対象の融合タンパク質で利用されるＸＴＥＮ配列は、ヒトＴ細胞によって認識されるエピトープを実質的に含まなくてもよい。免疫原性のより低いタンパク質を生成するためのそのようなエピトープの消去は、以前に開示されている。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ９８／５２９７６、ＷＯ０２／０７９２３２およびＷＯ００／３３１７を参照。ヒトＴ細胞エピトープのアッセイが記載されている（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ，  Ｍ．ら（２００３年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８１巻：９５〜１０８頁）。Ｔ細胞エピトープまたはヒト以外の配列を生成することなく、オリゴマー形成させることができるペプチド配列に、特に興味がある。これは、これらの配列の直列反復配列を、Ｔ細胞エピトープの存在について、およびヒトではない６から１５量体、特に９量体の配列の発生について試験し、次に、エピトープ配列を除去するか破壊するようにＸＴＥＮ配列の設計を変更することによって達成される。一部の実施形態では、ＸＴＥＮ配列は、ＭＨＣ受容体に結合すると予測されるＸＴＥＮのエピトープの数の制限によって、実質的に非免疫原性である。ＭＨＣ受容体への結合が可能なエピトープの数の低減と同時に、Ｔ細胞活性化ならびにヘルパーＴ細胞機能の可能性の低減、Ｂ細胞活性化または上方制御の低減、および抗体産生の低減がある。低い程度の予測されるＴ細胞エピトープは、実施例４５に示す通り、エピトープ予測アルゴリズム、例えばＴＥＰＩＴＯＰＥ（Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏ，  Ｔ．ら（１９９９年）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１７巻：５５５〜６１頁）によって判定することができる。Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏ，  Ｔ．ら（１９９９年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１７巻：５５５頁）に開示される通り、タンパク質の中の所与のペプチドフレームのＴＥＰＩＴＯＰＥスコアは、最も一般的なヒトＭＨＣ対立遺伝子の複数へのそのペプチドフレームの結合のＫｄ（解離定数、親和性、オフレート）の対数である。スコアは、約１０から約−１０（１０ｅ１０Ｋｄから１０ｅ−１０Ｋｄの結合制約に対応する）まで少なくとも２０対数の範囲にわたり、ＭＨＣの上でのペプチド提示の間にアンカー残基の役割をするＭ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ｆなどの疎水性アミノ酸を避けることによって低減することができる。一部の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮに組み込まれたＸＴＥＮ構成成分は、約−５以上、または−６以上、または−７以上、または−８以上のＴＥＰＩＴＯＰＥスコアで、または−９以上のＴＥＰＩＴＯＰＥスコアで、予測されるＴ細胞エピトープを有しない。本明細書で使用されるように、「−９以上」のスコアは、両端を含めて１０から−９のＴＥＰＩＴＯＰＥスコアを包含するが、−１０は−９未満であるので−１０のスコアを包含しない。
【０１３２】
別の実施形態では、対象のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質に組み込まれるものを含む発明のＸＴＥＮ配列は、ＭＨＣ  ＩＩ受容体に結合することができる小さなペプチドへのＸＴＥＮの処理を低減する、ＸＴＥＮの配列からの公知のタンパク分解性部位の制限によって、実質的に非免疫原性にされる。別の実施形態では、構造の高エントロピーのために多くのプロテアーゼへの抵抗性を付与する二次構造を実質的に欠く配列の使用によって、ＸＴＥＮ配列は実質的に非免疫原性にされる。したがって、低減されるＴＥＰＩＴＯＰＥスコアおよびＸＴＥＮからの公知のタンパク分解性部位の除去は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物のＸＴＥＮを含むＸＴＥＮ組成物を、免疫系のそれらを含む哺乳動物の受容体が結合することが実質的にできないようにする。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のＸＴＥＮは、哺乳動物の受容体への＞１００ｎＭ  Ｋｄの結合、または哺乳動物細胞表面もしくは循環ポリペプチド受容体に対して＞５００ｎＭ  Ｋｄもしくは＞１μＭ  Ｋｄを有することができる。
【０１３３】
さらに、ＸＴＥＮの非反復性の配列およびエピトープの対応する欠如は、ＸＴＥＮに結合するかそれによって活性化されるＢ細胞の能力を制限する。反復性の配列は認識され、２、３のＢ細胞とさえ多価性接触を形成することができ、複数のＴ細胞非依存性受容体の架橋の結果として、Ｂ細胞増殖および抗体生成を刺激することができる。対照的に、ＸＴＥＮはその伸長配列にわたって多くの異なるＢ細胞と接触することができるが、配列の反復性の欠如のために個々のＢ細胞は個々のＸＴＥＮと１つまたは少数の接触を形成することができるだけである。いかなる理論によっても縛られないが、ＸＴＥＮは、Ｂ細胞の増殖、したがって免疫応答を刺激する傾向が一般的に非常により低い。一実施形態では、融合していない対応するＧＨと比較して、ｈＧＨ−ＸＴＥＮは低減された免疫原性を有する。一実施形態では、哺乳動物へのｈＧＨ−ＸＴＥＮの最高３回の非経口用量の投与は、１：１００の血清希釈で検出可能な抗ｈＧＨ−ＸＴＥＮ  ＩｇＧをもたらすが、１：１０００の希釈ではもたらさない。別の実施形態では、哺乳動物へのｈＧＨ−ＸＴＥＮの最高３回の非経口用量の投与は、１：１００の血清希釈で検出可能な抗ＧＨ  ＩｇＧをもたらすが、１：１０００の希釈ではもたらさない。別の実施形態では、哺乳動物へのｈＧＨ−ＸＴＥＮの最高３回の非経口用量の投与は、１：１００の血清希釈で検出可能な抗ＸＴＥＮ  ＩｇＧをもたらすが、１：１０００の希釈ではもたらさない。前述の実施形態では、哺乳動物はマウス、ラット、ウサギまたはカニクイザルであってもよい。
【０１３４】
高度の反復性を有する配列に対して非反復性の配列を有するＸＴＥＮの追加の特色は、非反復性のＸＴＥＮが抗体とより弱い接触を形成することである。抗体は、多価分子である。例えば、ＩｇＧは２つの同一の結合部位を有し、ＩｇＭは１０個の同一の結合部位を含む。したがって、反復配列に対する抗体は、そのような反復配列と高い結合力で多価性接触を形成することができ、それは、そのような反復配列の効力および／または除去に影響を及ぼすことができる。対照的に、非反復性のＸＴＥＮに対する抗体は一価の相互作用を与えることができ、より低い可能性の免疫クリアランスをもたらし、その結果ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物はより長い期間、循環していることができる。
８．流体力学半径の増加
【０１３５】
別の態様では、本発明は、ＸＴＥＮを組み込むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質に対して、対応する増加した見かけの分子量を付与する高い流体力学半径をＸＴＥＮポリペプチドが有するＸＴＥＮを提供する。実施例３７に詳述されるように、ＧＨ配列へのＸＴＥＮの連結は、ＸＴＥＮに連結されないＧＨと比較して、増加した水力学的半径、増加した見かけの分子量、および増加した見かけの分子量係数を有することができるｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物をもたらす。例えば、半減期の延長が望まれる治療適用では、高い流体力学半径を有するＸＴＥＮが１つまたは複数のＧＨを含む融合タンパク質に組み込まれる組成物は、組成物の流体力学半径を、およそ３〜５ｎｍ（約７０ｋＤａの見かけの分子量に対応する）の球状孔径を越えて効果的に拡大することができ（Ｃａｌｉｃｅｔｉ．２００３年。Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ。Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ５５巻：１２６１〜１２７７頁）、循環タンパク質の腎クリアランスの低減をもたらす。タンパク質の流体力学半径は、その分子量ならびに形状およびコンパクトさを含むその構造によって判定される。特定の理論によって縛られないが、ペプチドの個々の電荷の間での静電反発、または二次構造を付与する可能性を欠く配列中の特定のアミノ酸によって付与される固有の柔軟性のために、ＸＴＥＮはオープン立体構造を採用することができる。ＸＴＥＮポリペプチドのオープンで伸長した非構造化立体構造は、一般的な球状タンパク質などの、二次および／または三次構造を有する同等の配列長および／または分子量のポリペプチドと比較して、より大きな比例する流体力学半径を有することができる。流体力学半径を判定するための方法は当技術分野で周知であり、例えば米国特許第６，４０６，６３２号および第７，２９４，５１３号に記載されるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）の使用がある。ＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２（参照により本明細書に完全に組み込まれる）の実施例３７の結果が実証する通り、増加する長さのＸＴＥＮの添加は、流体力学半径、見かけの分子量および見かけの分子量係数のパラメータの比例する増加をもたらし、所望の特徴的カットオフの見かけの分子量または水力学的半径へのｈＧＨ−ＸＴＥＮの調整を可能にする。したがって、ある特定の実施形態では、融合タンパク質が少なくとも約５ｎｍ、または少なくとも約８ｎｍ、または少なくとも約１０ｎｍ、または１２ｎｍ、または少なくとも約１５ｎｍの流体力学半径を有することができるように、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質をＸＴＥＮで構成することができる。前述の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質中のＸＴＥＮによって付与される大きな流体力学半径は、生じる融合タンパク質の腎クリアランスの低減に導くことができ、対応する終端半減期の増加、平均滞留時間の増加および／または腎クリアランス速度の減少につながる。
【０１３６】
別の実施形態では、生理的条件下で、少なくとも約１５０ｋＤａ、または少なくとも約３００ｋＤａ、または少なくとも約４００ｋＤａ、または少なくとも約５００ｋＤａ、または少なくとも約６００ｋＤａ、または少なくとも約７００ｋＤａ、または少なくとも約８００ｋＤａ、または少なくとも約９００ｋＤａ、または少なくとも約１０００ｋＤａ、または少なくとも約１２００ｋＤａ、または少なくとも約１５００ｋＤａ、または少なくとも約１８００ｋＤａ、または少なくとも約２０００ｋＤａ、または少なくとも約２３００ｋＤａ以上の見かけの分子量を有する融合タンパク質を作製するために、選択された長さおよび配列のＸＴＥＮをｈＧＨ−ＸＴＥＮに選択的に組み込むことができる。別の実施形態では、生理的条件下で、少なくとも３、あるいは少なくとも４、あるいは少なくとも５、あるいは少なくとも６、あるいは少なくとも８、あるいは少なくとも１０、あるいは少なくとも１５の見かけの分子量係数、または少なくとも２０以上の見かけの分子量係数を有するｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質をもたらすために、選択された長さおよび配列のＸＴＥＮをＧＨに選択的に連結することができる。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、生理的条件下で、融合タンパク質の実際の分子量に対して約４から約２０、または約６から約１５、または約８から約１２、または約９から約１０である見かけの分子量係数を有する。
Ｖ）．ｈＧＨ−ＸＴＥＮ構造立体配置および特性
【０１３７】
対象組成物のヒト成長ホルモン（ＧＨ）には、生来の完全長ポリペプチドに限定されずに、組換えバージョンならびに生物学的および／または薬理学的に活性なその変異体または断片も含まれる。例えば、ＧＨの生物学的活性または薬理学的特性に関して本発明の精神から逸脱しない範囲で変異体を作製するために、様々なアミノ酸欠失、挿入および置換をＧＨに加えることができることが理解される。ポリペプチド配列中のアミノ酸の保存的置換の例を、表４に示す。しかし、本明細書に開示される具体的な配列と比較してＧＨの配列同一性が１００％未満であるｈＧＨ−ＸＴＥＮの実施形態では、本発明は、隣接したアミノ酸残基を含むＧＨ配列中の任意の位置にあってもよい、所与のＧＨの所与のアミノ酸残基のための、他の１９個の天然のＬ−アミノ酸のいずれかの置換を企図する。任意の１つの置換が生物学的活性の望ましくない変化をもたらすならば、代替アミノ酸の１つを用いることができ、構築物は、本明細書に記載される方法によって、または例えば、その内容は参照により完全に組み込まれる米国特許第５，３６４，９３４号に示す保存的および非保存的な突然変異の技術およびガイドラインのいずれかを使用して、または当技術分野で公知の方法を使用して評価することができる。さらに、変異体には、例えば、生来のペプチドの生物学的活性のすべてではないにしてもいくつかを保持するＧＨの完全長の生来のアミノ酸配列のＮ末端またはＣ末端において、１つまたは複数のアミノ酸残基が付加されるか削除されるポリペプチドを含めることができる。
【表４】
2015520188.tif 000022
【０１３８】
（ａ）融合タンパク質立体配置
本発明は、特異的なＮ末端からＣ末端への立体配置で連結されるＧＨおよびＸＴＥＮ構成成分を有する融合タンパク質組成物を提供する。一部の実施形態では、スペーサーの有り無しで、Ｎ末端またはＣ末端において１つまたは複数のＧＨが１つまたは複数のＸＴＥＮに連結されてブロックコポリマーを形成し、融合タンパク質でのＧＨおよびＸＴＥＮの逐次的配置は、ブロックコポリマー化学で公知である立体配置と同じである。１つを超えるＧＨ、ＸＴＥＮまたはスペーサーがあるときは、ＧＨ、ＸＴＥＮまたはスペーサーの各々は同じか異なる配列を有し、ＧＨおよび／またはＸＴＥＮは連続的または交互（規則的または不規則）に連結される。したがって、本明細書に提供される式のすべてにおいて、１つを超えるＧＨ、ＸＴＥＮまたはスペーサーがあるときは、ＧＨ、ＸＴＥＮおよびスペーサーの各々は同じであるか異なる。一部の実施形態では、融合タンパク質は、１つのＸＴＥＮポリペプチドにＧＨが連結する単量体の融合タンパク質である。他の実施形態では、融合タンパク質は、２つ以上のＸＴＥＮポリペプチドにＧＨが連結する単量体の融合タンパク質である。さらに他の実施形態では、融合タンパク質は、１つのＸＴＥＮポリペプチドに２つ以上のＧＨが連結する単量体の融合タンパク質である。さらに他の実施形態では、融合タンパク質は、２つ以上のＸＴＥＮポリペプチドに２つ以上のＧＨが連結する単量体の融合タンパク質である。表５は、本発明によって包含される立体配置の非限定例を提供する。本明細書に開示されるか当技術分野で公知であるスペーサーおよび開裂配列の組込みを含む、多数の他の変形物が当業技術者に明らかになる。
【表５】
2015520188.tif 000023
＊１構成成分の場合は単一と、または２つ以上の構成成分の場合は複数と特徴付けられる
＊＊成長因子およびＸＴＥＮ構成成分のＮ末端からＣ末端への立体配置を反映する
【０１３９】
本発明は、表５に示す立体配置にあり、ＸＴＥＮに連結されない対応するＧＨの生物学的活性の少なくとも一部を保持する融合タンパク質組成物を企図する。他の実施形態では、下により完全に記載される通り、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ中のスペーサー配列内に組み込まれる任意選択の開裂配列の開裂による、ＸＴＥＮからのその放出の結果、ＧＨ構成成分は生物学的に活性になるか、活性が増加する。
【０１４０】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の一実施形態では、本発明は式Ｉの融合タンパク質を提供し：
（ＸＴＥＮ）ｘ−ＧＨ−（ＸＴＥＮ）ｙ  Ｉ
式中、各出現につき独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；ｘは０または１であり、ｙは０または１であり、ｘ＋ｙ≧１であり；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドである。
【０１４１】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の別の実施形態では、本発明は式ＩＩの融合タンパク質を提供し：
（ＸＴＥＮ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＸＴＥＮ）ｙ  ＩＩ
式中、各出現につき独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；Ｓは、開裂配列を任意選択で含むことができる１から約５０の間のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１であり、ｙは０または１であり、ｘ＋ｙ≧１であり；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドである。
【０１４２】
別の実施形態では、本発明は単離された融合タンパク質を提供し、そこで、融合タンパク質は式ＩＩＩのものであり：
（ＧＨ）−（Ｓ）ｘ−（ＸＴＥＮ）−（Ｓ）ｙ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｚ−（ＸＴＥＮ）ｚ  ＩＩＩ
式中、各出現につき独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；Ｓは、開裂配列を任意選択で含むことができる１から約５０の間のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１であり、ｙは０または１であり、ｚは０または１であり；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドである。
【０１４３】
別の実施形態では、本発明は単離された融合タンパク質を提供し、そこで、融合タンパク質は式ＩＶのものであり：
（ＸＴＥＮ）ｘ−（Ｓ）ｙ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｚ−（ＸＴＥＮ）−（ＧＨ）  ＩＶ
式中、各出現につき独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；Ｓは、開裂配列を任意選択で含むことができる１から約５０の間のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１であり、ｙは０または１であり、ｚは０または１であり；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドである。
【０１４４】
別の実施形態では、本発明は単離された融合タンパク質を提供し、そこで、融合タンパク質は式Ｖのものであり：
（ＧＨ）ｘ−（Ｓ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＸＴＥＮ）  Ｖ
式中、各出現につき独立して、ＧＨは成長ホルモンであり；Ｓは、開裂配列を任意選択で含むことができる１から約５０の間のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１であり、ｙは０または１であり；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドである。
【０１４５】
別の実施形態では、本発明は単離された融合タンパク質を提供し、そこで、融合タンパク質は式ＶＩのものであり：
（ＸＴＥＮ）−（Ｓ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＧＨ）  ＶＩ
式中、各出現につき独立して、ＧＨは成長ホルモンであり；Ｓは、開裂配列を任意選択で含むことができる１から約５０の間のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１であり、ｙは０または１であり；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドである。
【０１４６】
別の実施形態では、本発明は単離された融合タンパク質を提供し、そこで、融合タンパク質は式ＶＩＩのものであり：
（ＸＴＥＮ）−（Ｓ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＧＨ）−（ＸＴＥＮ）  ＶＩＩ
式中、各出現につき独立して、ＧＨは成長ホルモンであり；Ｓは、開裂配列を任意選択で含むことができる１から約５０の間のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１であり、ｙは０または１であり；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドである。
【０１４７】
別の実施形態では、本発明は単離された融合タンパク質を提供し、そこで、融合タンパク質は式ＶＩＩＩのものであり：
（（Ｓ）ｍ−（ＧＨ）ｘ−（Ｓ）ｎ−（ＸＴＥＮ）ｙ−（Ｓ）ｏ）ｔ  ＶＩＩＩ
式中、ｔは＞０（１、２、３など）の整数であり；ｍ、ｎ、ｏ、ｘおよびｙの各々は独立して整数（０、１、２、３など）であり、ＧＨは成長ホルモンであり；Ｓはスペーサーであり、任意選択で開裂部位を含み；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドであり、ただし：（１）ｘ＋ｙ＞１であり、（２）ｔ＝１の場合、ｘ＞０、およびｙ＞０であり、（３）複数のＧＨ、ＳまたはＸＴＥＮがある場合、各ＧＨ、ＸＴＥＮまたはＳは同じであるか、独立して異なり；（４）ｔ＞１の場合、各サブユニット内の各ｍ、ｎ、ｏ、ｘまたはｙは同じであるか、独立して異なる。
【０１４８】
別の実施形態では、本発明は単離された融合タンパク質を提供し、そこで、融合タンパク質は式ＩＸのものであり：
（ＸＴＥＮ）ｘ−（Ｓ）ｘ−（ＧＨ）−（Ｓ）ｙ−（ＸＴＥＮ）ｙ  ＩＸ
式中、各出現につき独立して、ＧＨはヒト成長ホルモンであり；Ｓは、開裂配列を任意選択で含むことができる１から約５０の間のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；ｘは０または１であり、ｙは０または１であり、ｘ＋ｙ≧１であり；ＸＴＥＮは伸長組換えポリペプチドである。
【０１４９】
一部の実施形態では、それを必要とする対象への式Ｉ〜ＶＩＩＩの実施形態の融合タンパク質の治療的有効量の投与は、ＸＴＥＮに連結されずに対象に投与される同等の量で投与される対応するＧＨと比較して、融合タンパク質の治療ウィンドウの中で費やされる時間の少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも１００倍以上の増加をもたらす。他の実施形態では、それを必要とする対象への式Ｉ〜ＶＩＩＩの実施形態の融合タンパク質の治療的有効用量の投与は、治療的有効用量レジメンを維持するために必要とされる連結されないＧＨの投与スケジュールと比較して、治療的有効用量レジメンを維持するのに必要な連続投与の間の時間の少なくとも４８時間、または少なくとも７２時間、または少なくとも約９６時間、または少なくとも約１２０時間、または少なくとも約７日、または少なくとも約１４日、または少なくとも約２１日、または少なくとも約２８日の増加、または少なくとも約１カ月間隔の連続投与をもたらすことができる。
【０１５０】
本発明によって包含される融合タンパク質では、任意のスペーサー配列基を任意に選択できる。宿主細胞からの融合タンパク質の発現を強化するか、立体障害を減少させてＧＨ構成成分がその所望の三次構造をとるように、および／またはその標的受容体と適切に相互作用することができるように、スペーサーが提供される。スペーサーおよび望ましいスペーサーの同定方法については、例えば、具体的に参照により本明細書に特に組み込まれるＧｅｏｒｇｅら（２００３年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１５巻：８７１〜８７９頁を参照。一実施形態では、スペーサーは、長さが１〜５０アミノ酸残基、または約１〜２５残基、または長さが約１〜１０残基の１つまたは複数のペプチド配列を含む。開裂部位を除くスペーサー配列は、２０個の天然のＬアミノ酸のいずれかを含むことができ、好ましくは、それらに限定されないが、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）を含めることができる、立体配置的に妨害されない親水性アミノ酸を含む。場合により、スペーサーはポリグリシンもしくはポリアラニンであってもよく、または主に、グリシンおよびアラニン残基の組合せの混合物である。開裂配列を除くスペーサーポリペプチドは、二次構造をほとんどから実質的に欠き、例えば、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎおよび／またはＧＯＲアルゴリズムで判定される通り、約１０％未満、または約５％未満である。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物中の一方または両方のスペーサー配列は、開裂配列を各々さらに含有し、それらは同一であるか異なり、開裂配列にプロテアーゼを作用させて融合タンパク質からＧＨを放出することができる。
【０１５１】
一部の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮへの開裂配列の組込みは、ＸＴＥＮからのその放出の結果活性になるかより活性になるＧＨの放出を可能にするように設計される。開裂配列は、ＧＨ配列の十分近くに、一般にＧＨ配列末端から１８アミノ酸の範囲内、または１２アミノ酸の範囲内、または６アミノ酸の範囲内、または２アミノ酸の範囲内に位置し、その結果、開裂後にＧＨに付着しているいかなる残りの残基もＧＨの活性（例えば、受容体への結合など）にあまり干渉しないが、開裂配列の開裂を実行することができるようにプロテアーゼへの十分なアクセスを提供する。一部の実施形態では、開裂部位は、対象への投与後にｈＧＨ−ＸＴＥＮが開裂することができるように、哺乳動物対象に内因性であるプロテアーゼによって開裂することができる配列である。そのような場合、ｈＧＨ−ＸＴＥＮはＧＨのためのプロドラッグまたは循環貯蔵所の役割をすることができる。本発明によって企図される開裂部位の例には、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩａ、カリクレイン、ＦＶＩＩａ、ＦＩＸａ、ＦＸａ、ＦＩＩａ（トロンビン）、エラスターゼ−２、グランザイムＢ、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１７もしくはＭＭＰ−２０から選択される哺乳動物の内因性プロテアーゼ、またはＴＥＶ、エンテロキナーゼ、ＰｒｅＳｃｉｓｓｉｏｎ（商標）プロテアーゼ（ライノウイルス３Ｃプロテアーゼ）、およびソルターゼＡなどの非哺乳動物プロテアーゼによって開裂可能なポリペプチド配列が含まれるが、これに限定されない。前述のプロテアーゼおよび他によって開裂することが公知である配列は、当技術分野で公知である。例示的な開裂配列および配列中の切断部位、ならびにその配列変異体を、表６に示す。例えば、トロンビン（活性化凝固因子ＩＩ）は配列ＬＴＰＲＳＬＬＶ（配列番号５６）に作用し［Ｒａｗｌｉｎｇｓ  Ｎ．Ｄ．ら（２００８年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、３６巻：Ｄ３２０頁］、それは配列中の４位のアルギニンの後ろで切断されるであろう。活性ＦＩＩａは、リン脂質およびカルシウムの存在下でＦＸａによるＦＩＩの開裂によって生成され、凝固経路の第ＩＸ因子の下流にある。活性化されると、凝固でのその本来の役割はフィブリノゲンを開裂させることであり、それは次にクロット形成を開始する。ＦＩＩａ活性は厳しく制御され、適切な止血のために凝固が必要なときに起こるだけである。しかし、哺乳動物で凝固は進行中の過程であるので、ＧＨとＸＴＥＮの間へのｈＧＨ−ＸＴＥＮへのＬＴＰＲＳＬＬＶ配列（配列番号５７）の組込みにより、凝固が生理的に必要とされるとき、外因性または内因性の凝固経路の活性化と同時に、ＸＴＥＮドメインは隣接するＧＨから除去され、それによって経時的にＧＨを放出する。同様に、ｈＧＨ−ＸＴＥＮへの、内因性のプロテアーゼが作用する他の配列の組込みは、ある特定の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮの「プロドラッグ」形からのＧＨのより高い活性度を提供するＧＨの持続的放出を可能にするであろう。
【０１５２】
一部の実施形態では、切断された部位の両側に連なる２つまたは３つのアミノ酸（合計４つから６つのアミノ酸）だけが、開裂配列に組み込まれる。他の実施形態では、公知の開裂配列は、公知の配列の任意の１、２または３つのアミノ酸について１つまたは複数の欠失もしくは挿入、または１、２または３つのアミノ酸置換を有し、そこにおいて、欠失、挿入または置換はプロテアーゼへの感受性の低減または強化をもたらすが、感受性の欠如はもたらさず、ＸＴＥＮからのＧＨの放出速度を調整する能力をもたらす。例示的な置換を表６に示す。
【表６】
2015520188.tif 000024
【０１５３】
↓は開裂部位を示す
ＮＡ：該当なし
＊スラッシュの前、間または後の複数のアミノ酸の列挙は、その位置で置換することができる代替アミノ酸を示す；「−」は、中央の欄に示す対応するアミノ酸の代わりに、任意のアミノ酸で置換することができることを示す。
【０１５４】
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質に組み込まれるＧＨは、配列番号２に示す配列と少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは、配列番号２の配列と比較して、少なくとも約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％、または約１００％の配列同一性を示す配列を有する。前述の実施形態のＧＨは、本明細書に記載されるアッセイまたは測定もしくは判定されたパラメータを使用して、活性について評価することができ、対応する生来のＧＨ配列と比較して少なくとも約４０％、または約５０％、または約５５％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％以上の活性を保持する配列が、対象のｈＧＨ−ＸＴＥＮへの組入れに適するとみなされよう。適する活性レベルを保持することが見出されたＧＨは、上に記載される１つまたは複数のＸＴＥＮポリペプチドに連結することができる。一実施形態では、適する活性レベルを保持することが見出されたＧＨは、表３からの配列と少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは、表３の配列と比較して少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％の配列同一性を有する１つまたは複数のＸＴＥＮポリペプチドに連結し、キメラ融合タンパク質をもたらすことができる。
【０１５５】
単一のＸＴＥＮに連結される単一のＧＨを含有する融合タンパク質の配列の非限定例は、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の表３５に提示される。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物は、（参照により本明細書に完全に組み込まれる）ＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の表３５からのｈＧＨ−ＸＴＥＮと少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の表３５からのｈＧＨ−ＸＴＥＮと比較して、少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％の配列同一性を有する融合タンパク質を含むであろう。１つまたは複数のＧＨに連結されるＸＴＥＮの２分子を含有する融合タンパク質の配列の非限定例は、（参照により本明細書に完全に組み込まれる）ＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の表３６に提示されるが、本発明は、表３から選択される、少なくとも約９０％の配列同一性を示す、同じか異なってもよい１、２個のＸＴＥＮに連結される、配列番号２の配列と少なくとも約９０％の配列同一性を示す配列による、他のＧＨの置換も企図する。この段落の上に記載される前述の融合タンパク質では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、表６からの開裂配列をさらに含むことができ、開裂配列はＧＨとＸＴＥＮの間、または隣接するＧＨの間に位置する（複数のＧＨがｈＧＨ−ＸＴＥＮに含まれる場合）。場合によっては、プロテアーゼのアクセスを促進するために、開裂配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮは、ＧＨと開裂配列の間またはＸＴＥＮと開裂配列の間に１つまたは複数のスペーサー配列アミノ酸も有し、スペーサーアミノ酸は、好ましいアミノ酸としてグリシンおよびアラニンを含む任意の天然のアミノ酸を含む。ＧＨ、ＸＴＥＮ、開裂配列（複数可）およびスペーサーアミノ酸を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮの非限定例は、参照により本明細書に完全に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の表３７に提示される。しかし、本発明は、表３７のＧＨ配列の代わりの、配列番号２の配列と少なくとも約９０％の配列同一性を示す任意のＧＨ配列の置換、表３７のＸＴＥＮ配列の代わりの表３の任意のＸＴＥＮ配列の置換、および参照により本明細書に完全に組み込まれるＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらＷＯ１０／１４４５０２Ａ２の表３７の開裂配列の代わりの表６の任意の開裂配列の置換も企図する。
ＶＩ）  本発明の組成物の使用
【０１５６】
一態様では、本発明は、これに限定されないが、ヒト患者における成長ホルモン欠乏症を含めたＧＨにより媒介される疾患、障害または状態において有益効果を達成するための方法を提供する。別の態様では、本発明は、これに限定されないが、成人における成長ホルモン欠乏症（小児期に成長ホルモン関連障害を経験した成人を含む）を含めたＧＨによって媒介される疾患、障害または状態において有益効果を達成するための方法を提供する。有益効果には、限定ではないが、ＧＨ関連疾患、欠乏症、障害または状態の処置、調整または寛解が含まれる。本発明は、比較的短い終端半減期（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ）および／または狭い治療ウィンドウを有するＧＨの不利益および／または限界に対処するものである。
【０１５７】
「成長ホルモン欠乏症」または「ＧＨＤ」は、本明細書で使用する場合、成長ホルモンでの処置によって利益を得るであろうヒト患者における疾患、欠乏症、障害または状態を指す。ＧＨＤには、ＧＨ欠乏症の原因に基づいて分類される複数の障害が含まれる（例えば、下垂体性ＧＨＤ、視床下部性ＧＨＤ、機能性ＧＨＤおよび特発性ＧＨＤ）。下垂体性または「古典的」ＧＨＤは、下垂体の成長ホルモン産生不能状態である。「視床下部性ＧＨＤ」は、ＧＨを産生するように下垂体を適正に機能させる神経内分泌メッセージングホルモンである成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）の産生および／または伝達の視床下部における不全であり；「機能性ＧＨＤ」は、ＧＨの産生、取り込みおよび／または利用の下垂体における不全に関連する他のホルモンおよび代謝機能の不全である。
【０１５８】
一実施形態では、ＧＨＤを有するヒト患者は成人である。ＧＨＤには、ＧＨ欠乏症が顕現したライフステージに基づいて分類され得る「成人成長ホルモン欠乏症」または「ＡＧＨＤ」が含まれる。例えば、成人によっては、乳児期または小児期に開始した小児発症型ＧＨＤ（小児発症型ＧＨＤおよび小児発症型特発性ＧＨＤを含む）の継続であるＡＧＨＤを有することがある。小児発症型ＡＧＨＤの原因には、限定ではないが、下垂体内または下垂体付近の発生欠損；ＧＨ産生についての遺伝的問題；プラーダー−ヴィリ症候群；ターナー症候群；正中顔面欠損（ｍｉｄｌｉｎｅ  ｆａｃｉａｌ  ｄｅｆｅｃｔｓ）；および腫瘍、感染、放射線治療または重症の頭部損傷による下垂体または周辺領域の損傷が含まれる。小児期に脳腫瘍から生還した成人は、外科手術、脳照射または化学療法の作用によってＧＨＤを発生させるリスクを有し得る。
【０１５９】
ＡＧＨＤは、小児期にＧＨ欠乏症と診断されなかった成人において発症し得る、すなわち、成人発症型ＧＨＤ（成人発症型ＧＨＤおよび特発性成人発症型ＧＨＤを含む）である。成人発症型ＡＧＨＤは、下垂体の損傷または外傷に起因し得る。損傷は典型的には、腫瘍に起因する（例えば、下垂体内および／または下垂体周囲の腫瘍；または視床下部内の腫瘍）。下垂体腫瘍は腺を圧迫し得るか、または腫瘍が脳神経外科手術で除去された場合に損傷が起こり得る。下垂体は、感染、血管疾患、重症の頭部損傷または頭頸部の腫瘍を処置するための脳照射もしくは化学療法によっても損傷され得る。ＡＧＨＤは、成人におけるその誕生時もしくは誕生直後に起こった外傷；中枢神経系の感染；視床下部もしくは下垂体の腫瘍；浸潤性もしくは肉芽腫性疾患；脳照射；外科手術；または特発性の原因に起因し得る。高齢者におけるＧＨＤは、生活の質の低下、疲労および身体組成の変化において顕現する。ＧＨ欠乏症および下垂体機能低下症の成人における身体組成、骨代謝および脂質プロファイルの異常は、正常な加齢の結果として起こる異常とは別個のものである。ＡＧＨＤには、成人における先天性または後天性ＧＨ欠乏症、さらには、ＧＨを利用することができる任意の他の成人適応症（対象における内因性成長ホルモンレベルが必ずしも欠乏していない場合を含む）が含まれる。
【０１６０】
身体の成長に関係する多くのプロセスは、多数のペプチドおよびホルモンによって調節され、そのようなペプチドおよびホルモン、さらにはその類似体は、成長ホルモン関連疾患、障害および状態の処置において有用性が見出されている。しかしながら、市販の成長ホルモンの使用は、そのような疾患、障害および状態に苦しむ対象の管理において最善の成功を収めてはいない。特に、用量最適化および投与頻度は、成長ホルモン関連疾患および障害の処置において使用されるペプチドおよびホルモン生物製剤にとって重要である。成長ホルモンが短い半減期（例えば、通常は、皮下投与した場合で４時間未満）を有するという事実によって、臨床的有用性を達成するためには、頻繁な（例えば、連日）投与が必要であり、このことが結果として、そのような患者の管理を困難にしている。連日成長ホルモン（ＧＨ）注射が服薬遵守されないことは、処置効果の喪失につながり得る。
【０１６１】
本発明は、長時間作用性ｒｈＧＨ類似体、ＶＲＳ−３１７（その配列は、図１に示されている（配列番号１））の単回用量の投与後の、ＧＨ欠乏症（ＧＨＤ）を有する成人における安全性および忍容性、ならびに標的範囲内のＩＧＦ−Ｉレベルを達成する能力の増強に関する。実施例において詳述する通り、無作為化二重盲検プラセボ対照単回漸増用量試験において、ＧＨＤ成人５０名（平均年齢４５歳）をそれぞれ対象１０名からなる５つの処置群において試験した（１群あたり活性８名、プラセボ２名）。主な評価項目には、有害事象、安全性研究室値（ｓａｆｅｔｙ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＶＲＳ−３１７薬物動態および薬力学（これらに限定されないが、ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦＢＰ−３濃度の決定を含む）が含まれた。結果は、０．８０ｍｇ／ｋｇのＶＲＳ−３１７の単回用量投与を使用すると、１３１時間の平均終端排出半減期が対象において達成されることを示している。０．０５、０．１０、０．２０、０．４０および０．８０ｍｇ／ｋｇの単回ＶＲＳ−３１７用量（３０日間にわたる０．３〜５．０μｇ／ｋｇの連日ｒｈＧＨ用量にほぼ同等）は、用量依存的に、ＩＧＦ−Ｉ応答の大きさおよび期間を安全に増大させた。単回０．８０ｍｇ／ｋｇ用量後に、血清ＩＧＦ−Ｉは、３週間の平均で、−１．５から１．５の間の標準偏差（ＳＤ）の正常範囲に維持された。ＶＲＳ−３１７を投与された対象において、予期せぬ、または重篤な有害事象は観察されなかった。ＶＲＳ−３１７の排出半減期は、以前に試験されたｒｈＧＨ生成物と比較すると３０〜６０倍長く、より永続的なＩＧＦ−Ｉ応答を刺激する。ＩＧＦ−Ｉ応答の遷延は、高いＩＧＦ−Ｉレベルへの過剰曝露を代償とするものではない。薬物動態および薬力学は、観察された安全性プロファイルと共に、ＶＲＳ−３１７を使用しての安全かつ有効な毎月投与の可能性を示している。この試験のプロトコール、結果および分析は、実施例１および２においてさらに検討する。
【０１６２】
一態様では、本発明は、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を患者に投与することによって、ヒト患者において成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法を提供する。一実施形態では、この方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を患者に、ボーラス用量として投与することを含む。別の実施形態では、ボーラス用量は、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量である。他の一実施形態では、ボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１６３】
一態様では、ボーラス用量を、様々な用量で投与することができる。概数の第１のｍｇ／ｋｇと概数の第２のｍｇ／ｋｇとの間にあるボーラス用量の投与について言及する場合、その用語「第１のｍｇ／ｋｇ」は、その第１のｍｇ／ｋｇ値を含んでよく、かつその用語「第２のｍｇ／ｋｇ」は、その第２のｍｇ／ｋｇ値を含んでよいことに注意すべきである。
【０１６４】
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、（ｉ）配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列；（ｉｉｉ）配列番号７と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号７のアミノ酸配列；（ｖ）配列番号８３と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または（ｖｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
【０１６５】
一実施形態では、ヒト患者においてＧＨＤを処置する方法は、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の単回用量を投与することを含む。別の実施形態では、単回用量は、治療的に有効な体重で調整したｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を含む。他の一実施形態では、ボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間または約０．０５ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間にある。別の実施形態では、ボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇまたは約０．８ｍｇ／ｋｇである。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１６６】
他の一態様では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量を、ヒト患者に定期的に、有限または無期限であってよい適切な期間にわたって投与する。一実施形態では、ボーラス用量を毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与する。他の実施形態では、ボーラス用量を、月に１回、月に２回、月に３回または月に４回投与する。別の実施形態では、ボーラス用量を約７日ごと、約１０日ごと、約１４日ごと、約２１日ごと、約２８日ごとまたは約３０日ごとに投与する。一実施形態では、ボーラス用量は、非連日ベースで投与されるか、非連日ボーラス用量である。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１６７】
別の態様では、ヒト患者にはｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の追加のボーラス用量および一連のボーラス用量が適切である。一実施形態では、ボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間、約０．８ｍｇ／ｋｇから約１．２ｍｇ／ｋｇの間または約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある。別の実施形態では、ボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇおよび約３．０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１６８】
本発明の方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質での処置後のヒト患者におけるＩＧＦ−Ｉレベルに関して有利である。高いＩＧＦ−Ｉは、がんの危険因子であると考えられているので、高い血中ＩＧＦ−Ｉレベルは望ましくない（Ｓｖｅｎｓｓｏｎら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ  Ｍｅｔａｂ．、２０１２年９月２６日にｄｏｉ：１０．１２１０／ｊｃ．２０１２−２３２９として電子出版）。ヒトにおけるＩＧＦ−Ｉ生成は主として、ＧＨシグナル伝達の結果であり、ＩＧＦ−Ｉは、ＧＨ療法の間に観察される蛋白同化作用のための重要なメディエーターである（Ｌｅ  Ｒｏｉｔｈら、（２００１年）、Ｅｎｄｏｃｒ  Ｒｅｖ  ２２巻、５３〜７４頁）。したがって、ＩＧＦ−Ｉは、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質生体活性のための重要な薬力学的マーカーである。実際問題としては、ＧＨに対するＩＧＦ−Ｉ応答（例えば、連日ｒｈＧＨ療法）は、年齢特異的および性別特異的規範データの見地から解釈される（Ｖａｎｃｅら、（１９９９年）、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４１巻、１２０６〜１６頁；Ｍｏｌｉｔｃｈら、（２０１１年）、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９６巻、１５８７〜６０９頁）。この解釈は最も容易には、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳ）を利用して行われる。さらに、ＧＨ欠乏症を有する成人は、健康な成人と同様に、様々なベースラインＩＧＦ−Ｉ値を示す。したがって、０時点でのベースラインについて補正されたＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを利用して、起こり得るｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質用量効果をＩＧＦ−Ｉ応答で調査することができる。例えば、ＶＲＳ−３１７の用量群ごとのベースライン補正されたＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの変化の時間経過を図５に示す。
【０１６９】
一態様では、本発明は、ＧＨＤの処置方法であって、ヒト患者が、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投与後に、ＩＧＦ−Ｉ応答（例えば、平均ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳによって測定）を正常範囲に維持する方法を提供する。ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳについては、正常範囲は一般に、約−１．５から約１．５の間にあるが、約−２．０から約２．０の間であってもよい。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１７０】
概数の第１の値（例えば、−２．０）と概数の第２の値（例えば、２．０）との間にあるＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳについて言及する場合、その「第１の値」は、その第１の値を含んでよく、かつその「第２の値」は、その第２の値を含んでよいことに注意すべきである。
【０１７１】
一実施形態では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を患者に投与することによって、ヒト患者において成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ヒト患者が、投与後に、約−２．０から約２．０の間の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を有する方法を提供する。一実施形態では、方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を患者にボーラス用量として投与することを含む。別の実施形態では、ボーラス用量は、治療的に有効な体重で調整したボーラス用量である。別の実施形態では、ボーラス用量は、ボーラス用量の投与から（ｉ）少なくとも７日の間；（ｉｉ）少なくとも約１０日の間；または（ｉｉｉ）少なくとも約２０日の間、患者の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）を約−２．０から約２．０の間に維持するのに有効である。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１７２】
一実施形態では、本発明は、ヒト対象でヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有する対象に、図１に明示されているアミノ酸配列（配列番号１）を有する有効な量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを含み、前記量が、単回ボーラス用量において少なくとも約０．０５ｍｇ／ｋｇであり、さらに、前記量が、融合タンパク質の単回ボーラス用量の投与から（ｉ）少なくとも７日の間；（ｉｉ）少なくとも約１０日の間；または（ｉｉｉ）少なくとも約２０日の間、対象の血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを約−１．５から約１．５の間に維持するのに有効である方法を提供する。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１７３】
方法のさらなる実施形態では、ヒト患者に投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の有効な量は、少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２．８ｍｇ／ｋｇまたは少なくとも３．０ｍｇ／ｋｇである。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１７４】
方法の別の実施形態では、ヒト患者に投与される有効な量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある。方法の別の実施形態では、投与される有効な量は、約０．２ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間にある。方法の別の実施形態では、投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の量は、融合タンパク質の単回用量の投与から少なくとも約１５日の間または少なくとも約２０日の間、対象の血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを約−１．５から約１．５の間に維持するのに有効である。例えば、ＶＲＳ−３１７の投与後の用量群ごとの平均ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを図６に示す。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１７５】
本発明の方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投与が、望ましくない高いＩＧＦ−Ｉレベルへの過剰曝露を伴ったり、またはそれを代償とするものではなく、観察可能なＩＧＦ−Ｉ応答の遷延をヒト患者においてもたらす（例えば、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳによって測定）という特別な利点を提供する。言い換えると、ＩＧＦ−Ｉ応答が、例えば、１．５以下のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳまたは２．０以下のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳによって示されるような、現行の標準によっていまだ許容されると判断される高いレベルで維持される。
【０１７６】
一実施形態では、本発明は、成長ホルモン欠乏症を有するヒト患者において有益効果を達成するための方法であって、対象に、治療的に有効な量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与するステップであって、前記投与が、成長ホルモン関連疾患、障害または状態に関連する１種または複数の生化学的もしくは生理学的パラメータまたは臨床的エンドポイントの改善を結果としてもたらすステップを含む方法を提供する。有効な量は、成長ホルモン関連疾患、障害または状態の有害作用の処置（例えば、治癒またはその重症度の低下）の助けとなる有益効果をもたらす。場合によっては、有益効果を達成するためのこの方法は、これらに限定されないが、成人（ターナー症候群、プラーダー−ヴィリ症候群、特発性低身長または子宮内成長遅滞などの成長ホルモン関連障害を小児期に経験した成人を含む）；および慢性腎不全、ＡＩＤＳ消耗、肥満、多発性硬化症、加齢、線維筋痛症、クローン病、潰瘍性大腸炎、筋ジストロフィー、低筋肉量（例えば、ボディビルディング）、低骨密度またはＧＨを利用することができる任意の他の適応症（ただし、対象における内因性成長ホルモンレベルは必ずしも欠乏していない）を経験している成人における先天的また後天的ＧＨ欠乏症を含めた成長ホルモン関連疾患、障害または状態を有する対象を処置するために治療的に有効な量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質組成物を投与することを含む。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１７７】
本発明の方法は、ヒト患者に、治療的に有効な量のｈＧＨ−ＸＴＥＮの連続的または継続的用量を、所望のパラメータまたは臨床的効果を達成および／または維持するために十分な期間にわたって投与することを含み、治療的に有効な量のそのような継続的用量は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮのための治療的に有効な用量レジメンを；すなわち、融合タンパク質組成物の継続投与用量についてのスケジュールを確立し、その用量は、これに限定されないが、本明細書に記載のものを含めた代謝性疾患状態または病態の任意の臨床的徴候もしくは症状、態様、測定パラメータまたは特徴について持続的な有益効果を結果としてもたらすのに治療的に有効な量で与えられる。この方法の一実施形態では、パラメータには、これらだけに限定されないが、ＩＧＦ−Ｉ濃度、ＩＧＦ−Ｉ／ＩＧＦＢＰ−３の比、ＩＧＦＢＰ３濃度、体重の変化、除脂肪体重、肥満指数の変化、総体脂肪（脂肪（ａｄｉｐｏｓｅ  ｆａｔ）／組織）、体幹脂肪、インスリンチャレンジに対する応答、軟骨細胞の分裂速度、軟骨細胞数、骨密度、骨年齢、骨成長、骨代謝、骨端線幅の増大、コレステロールの低減、トリグリセリドの低減およびＬＤＬの低減が含まれる。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１７８】
一実施形態では、医薬組成物を、治療的に有効な用量で投与する。別の実施形態では、医薬組成物を、複数の継続的用量を使用し、治療的に有効な用量レジメン（本明細書において定義する通りの）を使用して投与期間の間、投与する。
【０１７９】
ｈＧＨ−ＸＴＥＮの治療的に有効な量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する抗体または抗体部分の能力などの因子によって変化する。治療的に有効な量とは、ｈＧＨ−ＸＴＥＮの何らかの毒性または有害な作用が、治療的有益効果に劣る量でもある。
【０１８０】
一実施形態では、この方法は、ＧＨＤを有するヒト患者に、図１に明示されている通りの配列（配列番号１）と少なくとも約９０％または少なくとも約９５％または少なくとも約９６％または少なくとも約９７％または少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヒト成長ホルモンｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の少なくとも２つの治療的に有効な体重で調整したボーラス用量を投与することを含み、前記ボーラス用量それぞれの前記投与を少なくとも約７日、少なくとも約１０日、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日または少なくとも約１か月離し、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇおよび３．０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１８１】
別の実施形態では、ｈＧＨ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量をヒト患者に皮下投与する。一部の実施形態では、ヒト患者は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮの投与後に約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超または約０超、約０．５超、約１．０超、約１．５超、約１．６超、約１．７超、約１．８超または約１．９超の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差（ＳＤ）スコアを有する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に明示されている通りに示されるアミノ酸配列（配列番号１）を有する。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１８２】
一実施形態では、本発明は、ヒト対象でヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有する対象に、図１に明示されているアミノ酸配列（配列番号１）を有するｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の有効な量を含む医薬組成物を投与することを含み、前記量が、単回ボーラス用量において少なくとも約０．０５ｍｇ／ｋｇであり、さらに、前記量が、融合タンパク質の単回ボーラス用量の投与から少なくとも１０日の間、対象の血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤスコアを約−１．５から約１．５の間に維持するのに有効である方法を提供する。方法のさらなる実施形態では、投与量は、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇである。方法の別の実施形態では、投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある。方法の別の実施形態では、投与量は、約０．２ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間にある。方法の別の実施形態では、投与量は、融合タンパク質の単回用量の投与から少なくとも２０日の間、対象の血清ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤスコアを約−１．５から約１．５の間に維持するのに有効である。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１８３】
別の実施形態では、本発明は、ヒト対象でヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有する対象に、図１に明示されているアミノ酸配列（配列番号１）を有するｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の有効な量を含む医薬組成物を投与することを含み、前記量が、単回ボーラス用量において少なくとも０．０５ｍｇ／ｋｇであり、融合タンパク質の単回ボーラス用量の投与から少なくとも１０日の間、前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１０ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である方法を提供する。方法のさらなる実施形態では、投与量は、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇである。方法の別の実施形態では、投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある。方法の別の実施形態では、投与量は、約０．２ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間にある。方法の別の実施形態では、投与量は、融合タンパク質の単回ボーラス用量の投与から少なくとも２０日の間、前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１０ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である。方法の別の実施形態では、投与量は、融合タンパク質の単回ボーラス用量の投与から少なくとも３０日の間、前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１０ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である。方法の別の実施形態では、投与量は、融合タンパク質の単回ボーラス用量の投与から少なくとも１０日の間、前記融合タンパク質の血漿中濃度を約１００ｎｇ／ｍＬを超えて維持するのに有効である。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１８４】
一実施形態では、本発明は、ヒト対象でヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有する対象に、図１に明示されているアミノ酸配列（配列番号１）を有するｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の有効な量を含む医薬組成物を投与することを含み、前記量が、単回ボーラス用量において少なくとも０．０５ｍｇ／ｋｇであり、融合タンパク質の単回ボーラス用量の投与後に、頭痛、関節痛、筋痛、浮腫、吐き気および筋肉疲労からなる群から選択される副作用を臨床的に有意なレベルで起こさずに、対象の血漿中ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤスコアを対象のベースラインＩＧＦ−Ｉ  ＳＤスコアより少なくとも０．５高めるのに有効である方法を提供する。本明細書で使用する場合、「臨床的に有意なレベルの副作用」は、その副作用が予期されないものではないか、または重篤な有害事象ではないことを意味する。軽度で一過性の副作用は、頭痛、関節痛、筋痛、浮腫、吐き気および筋肉疲労または成長ホルモンの投与に関連することが別段に公知のもののいずれであっても、臨床的に有意なレベルとは判断されないであろう。ＧＨＤを処置する方法の別の実施形態では、投与量は少なくとも約０．２ｍｇ／ｋｇである。ＧＨＤを処置する方法の別の実施形態では、投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある。ＧＨＤを処置する方法の別の実施形態では、投与量は、約０．２ｍｇ／ｋｇから約０．８ｍｇ／ｋｇの間にある。ＧＨＤを処置する方法の別の実施形態では、投与量は、約０．２ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある。ＧＨＤを処置する方法の別の実施形態では、単回ボーラス用量を皮下投与する。ＧＨＤを処置する方法の別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を含む医薬組成物を、２つ以上の継続的用量を使用して投与する。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１８５】
他の一態様では、ＧＨＤ療法のための治療レジメンの改善に関する本発明の方法は、必要とする対象、例えば、ＧＨＤを有するヒト患者において脂質代謝パラメータを改善することを含む。一実施形態では、必要とする対象で脂質パラメータを改善する方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の少なくとも２つの治療的に有効な体重で調整したボーラス用量を投与することを含み、前記ボーラス用量それぞれの投与を少なくとも約７日または少なくとも約１０日、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日または少なくとも約１か月離し、これらのボーラス用量が、前記対象における脂質パラメータの改善をもたらす。一実施形態では、脂質パラメータの改善は、トリグリセリドレベルの低減、コレステロールの低減およびＬＤＬレベルの低減からなる群から選択される改善である。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１８６】
本発明は、本発明のｈＧＨ−ＸＴＥＮ医薬組成物のための用量レジメンをヒト患者のために確立する方法を提供する。この方法は、治療的に有効な量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の継続的用量を、用量間の可変的な期間を使用して投与して、所望のパラメータ、血中濃度または臨床的作用を達成および／または維持するのに十分な投与時限を決定することを含み；有効な時限での治療的に有効な量のそのような継続的用量が、ＧＨＤ状態のためのｈＧＨ−ＸＴＥＮでの治療的に有効な用量レジメンを確立する。したがって、一態様では、本発明は、ヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）に治療的に有効である処置レジメンにおいて使用するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物を提供する。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１８７】
別の態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質をヒト患者に投与することを含むヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）のための処置レジメンにおいて使用するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供する。
【０１８８】
一実施形態では、この処置レジメンは、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量をヒト患者に投与することを含む。別の実施形態では、ボーラス用量は、（ｉ）治療的に有効な体重で調整したボーラス用量であり；かつ／または（ｉ）約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間にある。他の一実施形態では、この処置レジメンは、ボーラス用量を毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月投与することを含む。追加の一実施形態では、この処置レジメンは、ボーラス用量の皮下投与を含む。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１８９】
一実施形態では、このレジメンは、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の少なくとも２つのボーラス用量をヒト患者に投与することを含み、投薬量は約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇおよび３．０ｍｇ／ｋｇである。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。別の実施形態では、投薬量を少なくとも２つのボーラス用量として投与し、前記ボーラス用量それぞれの投与を少なくとも約７日または少なくとも約１０日、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日または少なくとも約１か月離す。
【０１９０】
処置レジメンの一実施形態では、前記ボーラス用量それぞれの投与を少なくとも約１か月、少なくとも約３１日、少なくとも約３０日、少なくとも約２９日、少なくとも約２８日、少なくとも約２７日、少なくとも約２６日、少なくとも約２５日、少なくとも約２４日、少なくとも約２３日、少なくとも約２２日、少なくとも約２１日、少なくとも約２０日、少なくとも約１９日、少なくとも約１８日、少なくとも約１７日、少なくとも約１６日、少なくとも約１５日、少なくとも約１４日、少なくとも約１３日、少なくとも約１２日、少なくとも約１１日、少なくとも約１０日、少なくとも約９日、少なくとも約８日、少なくとも約７日、少なくとも約６日、少なくとも約５日、少なくとも約４日、少なくとも約３日または少なくとも約２日離す。別の実施形態では、本発明は、各ボーラス用量を１週ごと（または毎週）、２週ごと、３週ごと、４週ごとまたは毎月投与する継続的用量レジメンを提供する。
【０１９１】
処置レジメンにおいて使用するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ組成物の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に明示されている通りに示されるアミノ酸配列（配列番号１）を含む。一実施形態では、治療的に有効な用量処置レジメンは、少なくとも２つの治療的に有効な体重で調整したボーラス用量を対象に投与することを含み、それらの用量を皮下投与する。
【０１９２】
一般に、「ボーラス用量」は、短期間内で投与される用量である。別の実施形態では、ボーラス用量を約１分から約３０分以内、約１分から約２０分以内、約１分から約１５分以内、約１分から約１０分以内または約１分から約５分以内に投与する。一実施形態では、ボーラス用量を約１分から約５分以内に投与する。他の一実施形態では、ボーラス用量は皮下ボーラス用量である。
【０１９３】
別の態様では、この処置レジメンによって、ヒト患者は、ボーラス用量の投与後に、血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）の改善を示すこととなる。一実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳは、ボーラス用量の投与後に、患者において約−２．０から約２．０の間にある。別の実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳは、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超および約１．５超からなる群から選択される。追加の一実施形態では、ヒト患者は、ボーラス用量の投与後に前記ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを示し、この投与は、毎週、２週ごと、３週ごとおよび毎月からなる群から選択される。
【０１９４】
別の態様では、処置レジメンは、投与後に、ヒト患者においてＩＧＦ−Ｉ濃度の正常化をもたらす。一実施形態では、このレジメンは、第１または第２の用量の投与から少なくとも約７日または少なくとも約１０日または少なくとも約１４日、少なくとも約１６日、少なくとも約１７日または少なくとも約２１日の間、正常化したＩＧＦ−Ｉ濃度をもたらす。
【０１９５】
一実施形態では、このレジメンは、第１または第２の用量の投与から少なくとも約７日または少なくとも約１０日または少なくとも約１４日、少なくとも約１７日または少なくとも約２１日の間、正常化した血清ＩＧＦ−Ｉ濃度をもたらす。当業者には分かるであろうように、「正常化」は、個体の病態、年齢、性別および体重などの因子によって変動するであろう。別の実施形態では、このレジメンは、第１または第２の用量の投与後に、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超または約０超の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差（ＳＤ）スコアをもたらす。
【０１９６】
他の一態様では、処置レジメンは、患者において、ボーラス用量の投与後に、ＧＨＤ評価に関する少なくとも１つのパラメータの臨床的に有意な低減をもたらす。一実施形態では、処置レジメンは、患者において、ボーラス用量の投与後に、血清コレステロール、血清トリグリセリドおよび血清低密度リポプロテイン（ＬＤＬ）から選択される少なくとも１つのパラメータの低減をもたらす。別の実施形態では、処置レジメンは、毎週、２週ごと、３週ごとまたは毎月のボーラス用量の投与を含む。
【０１９７】
別の実施形態では、このレジメンは、患者において、第１または第２のボーラス用量の投与後に、血清コレステロール、血清トリグリセリドおよび血清ＬＤＬから選択される少なくとも１つのパラメータの臨床的に有意な低減をもたらす。別の実施形態では、このレジメンは、第１または第２のボーラス用量の投与後に、少なくとも約１１，８６１ｎｇ・ｈｒ／ｍＬまたは少なくとも約３３，３７５ｎｇ・ｈｒ／ｍＬまたは少なくとも約９１，００６ｎｇ・ｈｒ／ｍＬまたは少なくとも約２４１，２８８ｎｇ・ｈｒ／ｍＬまたは少なくとも約４０２，５４３ｎｇ・ｈｒ／ｍＬのＡＵＣをもたらす。レジメンの別の実施形態では、ヒト患者は、２回以上のボーラス用量後に、骨密度、骨成長および骨端線幅の増大から選択される少なくとも１つのパラメータの改善を達成する。他の一実施形態では、上述の改善（複数可）は、少なくとも約１０％または少なくとも約２０％または少なくとも約３０％または少なくとも約４０％または少なくとも約５０％または少なくとも約６０％または少なくとも約７０％または少なくとも約８０％または少なくとも約９０％の改善である。別の実施形態では、上述の改善（複数可）％は、ＸＴＥＮに連結してなく、かつｈＧＨの連日投薬同等量を使用して連日投与されるｈＧＨによって達成される改善と同様であるか、またはそれに劣るものではない。
【０１９８】
別の態様では、本発明は、ヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を、連日投与される対応するｈＧＨ（ＸＴＥＮに連結していない）の有効な量と同等であるか、またはそれ未満と同等である投薬量である治療的に有効な量のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質で処置する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、ヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ヒト患者に、治療的に有効な量のヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）−ＸＴＥＮ融合タンパク質を投与することを含み、ｈＧＨ融合タンパク質の投薬量が、約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日から約１２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満である量と同等である方法を提供する。一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０１９９】
追加の一態様では、本発明は、ヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有するヒト患者に、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、組換えｈＧＨの同等の１日用量（例えば、ｒｈＧＨの推奨１日用量）未満である投薬量で投与することを含む方法を提供する。
【０２００】
一実施形態では、この方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、（ｉ）約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日から約２０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日の間；または（ｉｉ）約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日から約１２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日の間にあるｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量と同等であるボーラス用量として投与することを含む。
【０２０１】
一態様では、ボーラス用量を、ｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量と同等である様々な用量で投与することもできる。概数の第１のμｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日から概数の第２のμｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日の間にあるｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量と同等であるボーラス用量について言及する場合、その用語「第１のμｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日」は、その第１のμｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日値を含んでよく、その用語「第２のμｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日」は、その第２のμｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日値を含んでよいことに注意すべきである。
【０２０２】
別の実施形態では、ボーラス用量は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量である。他の一実施形態では、ボーラス用量は、約７日、約１４日、約２１日、約２８日または約３０日にわたって投与されるｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量と同等である。一実施形態では、本発明は、ヒト成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を処置する方法であって、ＧＨＤを有するヒト患者に、ヒト成長ホルモンｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の少なくとも２つの治療的に有効な体重で調整したボーラス用量を投与することを含み、前記ボーラス用量それぞれの投与を、少なくとも約１週間離し、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投薬量が（ｉ）約０．３μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日〜約１８．０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満と同等；または（ｉｉ）約０．３μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日〜約１８．６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満と同等である方法を提供する。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投薬量は、（ｉ）約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日〜約１２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満と同等；または（ｉｉ）約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日〜約２０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満と同等である。別の実施形態では、前記ボーラス用量それぞれの投与を、少なくとも約７日、少なくとも約１０日、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日または少なくとも約１か月離す。一実施形態では、ｈＧＨの投薬同等量は、約４．８μｇ／ｋｇ／日未満である。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０２０３】
別の実施形態では、ボーラス用量は、約２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満であるｈＧＨ／ｋｇ／日投薬量と同等である。別の実施形態では、投薬量は、約０．３μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約０．６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１．２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約２．０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約２．４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約４．０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約４．８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約６．０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約６．２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約７．４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約８．０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約８．６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約９．８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１１．１μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１２μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１２．４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１３．６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１４．８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１６．０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１６．８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１７．４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１８μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日、約１８．６μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日または約２０μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日未満と同等である。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０２０４】
他の一実施形態では、ボーラス用量は、約７日、約１４日、約２１日、約２８日または約３０日にわたって投与されるｈＧＨ／ｋｇ／日未満の投薬量と同等である。
【０２０５】
他の一実施形態では、方法は、患者に、図１に明示されている配列（配列番号１）と少なくとも約９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量を投与することを含み、患者に投与するヒト成長ホルモンの量は、０．００６ｍｇ／ｋｇ／日未満と同等である。別の実施形態では、患者に投与するヒト成長ホルモンの量は、約０．０００３ｍｇ／ｋｇ／日から約０．００５ｍｇ／ｋｇ／日の間と同等である。他の一実施形態では、この方法は、患者にｈＧＨ−ＸＴＥＮを毎月投与することを含む。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０２０６】
さらに別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に明示されている通りに示されるアミノ酸配列（配列番号１）を含む。他の実施形態では、投与は皮下投与である。
【０２０７】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象で血清ＩＧＦ−Ｉレベルを正常化する方法を提供する。一実施形態では、この方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質をヒト患者に、患者のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを対象のベースラインＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳより少なくとも０．５または少なくとも１．０高めるのに有効なボーラス用量として投与することを含む。別の実施形態では、ボーラス用量の投与後に、頭痛、関節痛、筋痛、浮腫、吐き気および筋肉疲労からなる群から選択される副作用を臨床的に有意なレベルで起こさずに、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの上昇を達成する。追加の一実施形態では、ボーラス用量は、（ｉ）治療的に有効な体重で調整したボーラス用量であり；かつ／または（ｉｉ）皮下投与される。
【０２０８】
他の一実施形態では、この方法は、ＧＨＤを有する対象に、ヒト成長ホルモンｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の少なくとも２つの治療的に有効な体重で調整したボーラス用量を投与することを含み、ボーラス用量は、前記対象において正常な血清ＩＧＦ−Ｉレベルをもたらす。別の実施形態では、前記ボーラス用量それぞれの投与を、少なくとも約７日または少なくとも約１０日、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日または少なくとも約１か月離す。この方法の他の一実施形態では、前記ボーラス用量の投与は、対象において、少なくとも約５日または少なくとも約１０日または少なくとも約１４日または少なくとも約１７日または少なくとも約２１日の間、血清ＩＧＦ−Ｉレベルの正常化をもたらす。図６は、様々な患者におけるＩＧＦ−Ｉの正常化を示している。他の一実施形態では、正常な血清ＩＧＦ−Ｉレベルは、約−２．０超；約−１．５超；約−１．０超；約０超；約０．５超；約１．０超；または約１．５超である血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差（ＳＤ）によって特徴付けられる。別の実施形態では、正常な血清ＩＧＦ−Ｉレベルは、約−１．５から約１．５の間；約−１．５から約１．０の間；約−１．５から約０．５の間；約−１．５から約０の間；約−１．５から約−０．５の間；および約−１．５から約−１．０の間にある血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差（ＳＤ）によって特徴付けられる。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０２０９】
別の実施形態では、この対象は、ＧＨＤを有するヒト対象である。追加の実施形態では、投与は皮下投与である。他の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇおよび３．０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。追加の実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ血清レベルの正常化の程度は、ｈＧＨ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量の用量に依存している。他の一実施形態では、ＩＧＦ−Ｉ正常化の期間は、ｈＧＨ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量と共に増大する。
【０２１０】
別の実施形態では、本発明は、医薬として使用するための、またはＧＨＤを処置するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＨＤを有するヒト患者においてＧＨＤを処置するための医薬を製造するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の使用を提供する。他の一実施形態では、本発明は、ＧＨＤの処置のための医薬の製造における、図１に明示されている配列（配列番号１）を有する融合タンパク質の使用を提供する。他の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、ボーラス投与に適した治療的に有効な体重で調整した用量で提供する。一部の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラス用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇおよび３．０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の治療的に有効な体重で調整したボーラスを皮下投与する。一部の実施形態では、ヒト患者は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の投与後に、約−２．０超、約−１．５超、約−１．０超、約−０．５超、約０超、約０．５超、約１．０超、約１．５超、約１．６超、約１．７超、約１．８超または約１．９超の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差（ＳＤ）スコアを有する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に明示されている通りに示されるアミノ酸配列（配列番号１）を含む。
【０２１１】
別の態様では、本発明は、成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）に関連する疾患または状態を処置するためのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質ベースの治療剤を提供する。所与の疾患または状態の防止、処置またはその重症度の低減では、本発明の治療剤の適切な投薬量は、上記で定義した通りの処置する疾患または状態の種類、その疾患または状態の重症度および経過、薬剤を治療目的で投与するかどうか、先行する療法、薬剤に対する患者の臨床履歴および応答、ならびに主治医の判断に依存するであろう。
【０２１２】
別の態様では、本発明は、ＧＨＤに関連する疾患または状態の進行を遅延または減速させるための方法を提供する。一実施形態では、この方法は、疾患、状態または障害を有すると診断された対象に、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の有効な量を投与することを含む。別の態様では、本発明は、ＧＨＤに関連する疾患または状態の兆候を処置または寛解するための方法を提供する。一実施形態では、この方法は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の有効な量を、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質が、その疾患または状態の兆候の発生に対して有効である疾患または状態のリスクを有する対象に投与することを含む。
【０２１３】
追加の一態様では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、ヒト対象におけるＧＨＤに関連する疾患または状態の臨床的および／または組織学的および／または生化学的および／または病的兆候（症状および徴候の両方を含む）の発生または進行に対して寛解作用をもたらす。一実施形態では、この疾患または状態はＧＨＤである。一実施形態では、兆候には、体脂肪レベルの上昇（特に、中心部または体幹、すなわち、ウエストの脂肪蓄積）、不安およびうつ病、嗜眠、気分変化、他者からの孤立感、無気力、血中コレステロールレベルの上昇（例えば、高密度リポプロテインと比較して低密度リポプロテインの異常に高いレベル）、血中トリグリセリドレベルの上昇、性的機能および関心の低下、疲労、除脂肪筋肉量の減少、細胞外液量の減少、筋肉強度の低下、身体的エネルギーおよびスタミナの減少、ならびに骨密度の低下が含まれる。別の実施形態では、対象は、ＧＨＤに関連する状態の疾患のリスクを有する対象である。一般に、リスクを有する対象は、下垂体および／または視床下部に多少の損傷を以前に受けているであろう。一実施形態では、リスクを有する対象は、下垂体と関連する腫瘍を有すると以前に診断され、かつ／またはその腫瘍を処置するために、外科手術、化学療法または放射線療法を施された。別の実施形態では、リスクを有する対象は、下垂体への血液供給が以前に低減したか、または現在、低減している。他の一実施形態では、リスクを有する対象は、頭蓋剥離を以前に受けたか、または頭部外傷の履歴を有する。一部の実施形態では、リスクを有する対象は、視床下部−下垂体疾患または障害を以前に経験したか、または現在経験している。
【０２１４】
本明細書に記載の疾患および状態（ＧＨＤを含む）の処置の有効性は、ＧＨＤを評価する際に一般に使用される様々な評定によって測定することができる。例えば、ホルモン分泌腺の健康は、これらに限定されないが、例えば、ＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）、成長ホルモン刺激検査（ＧＨＳＴ）、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、刺激検査、内因性ｈＧＨパルス、ＩＧＦ−Ｉレベル、ＩＧＦ−Ｉ結合タンパク質レベルのモニターまたは測定、他の血液または生化学検査（例えば、総コレステロール、低密度リポプロテイン（ＬＤＬ）コレステロール、高密度リポプロテイン（ＨＤＬ）コレステロール、トリグリセリドおよび脂質）によって評価することができる。
【０２１５】
追加の一態様では、本発明は、ヒト患者においてヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）療法の有効性を高める方法を提供する。別の態様では、本発明は、ＧＨＤを有するヒト患者をｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質で治療する場合に、後続投薬期間中に投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の後続用量を決定する方法を提供する。「投薬期間」は、ボーラス用量（例えば、初回用量）の投与と、ボーラス用量（例えば、後続用量）の次の連続的投与との間の時間を意味する。投薬期間は、１つまたは複数のさらなる連続的用量（複数可）と共に変化してもよいし、一定のままであってもよい。
【０２１６】
一実施形態では、有効性を高める上述の方法は、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質の初回用量の投与の初回投薬期間中に、患者から得られる血漿または血清試料においてＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）をモニターするステップを含む。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、配列番号１と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、この方法は、初回投薬期間中に観察されるＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳに基づいて、後続投薬期間中に投与されるｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の後続用量を決定するステップをさらに含む。追加の一実施形態では、この方法は、後続用量を後続投薬期間中に投与することをさらに含む。他の一実施形態では、後続用量は、後続投薬期間中の処置の有効性を改善する。別の実施形態では、後続用量は、初回用量よりも多いか、少ないか、または同等である。初回用量または後続用量は、本明細書に記載のボーラス用量のいずれであってもよい。追加の一実施形態では、後続投薬期間は、初回投薬期間よりも長いか、短いか、または同等である。初回投薬期間または後続投薬期間は、本明細書に記載の期間のいずれであってもよい（例えば、毎週、２週ごとなど、または７日ごと、１０日ごと、１４日ごとなど）。
ＶＩＩ）  剤形および医薬組成物
【０２１７】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を含むボーラス用量または剤形を提供する。
【０２１８】
一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量または投薬量は、ヒト患者のために治療的に有効な体重で調整したボーラス用量を含む。他の一実施形態では、ボーラス用量または投薬量は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間を含む。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０２１９】
他の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質のボーラス用量または投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．２ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇおよび３．０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０２２０】
他の実施形態では、ボーラス用量または投薬量は、（ｉ）必要とする対象、例えば、ヒト患者においてヒトＧＨＤを処置する際に使用するためのものであり；かつ／または（ｉｉ）皮下投与のために製剤化される。他の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に明示されている通りに示されるアミノ酸配列（配列番号１）を含む。一実施形態では、ボーラス用量または剤形は、図１に明示されている通りの配列（配列番号１）を有する融合タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物である。
【０２２１】
別の実施形態では、本発明は、包装材料と、上述の実施形態の医薬組成物を含む少なくとも第１の容器と、医薬組成物ならびに貯蔵および取扱い条件を同定するラベルと、調製および／または対象への医薬組成物の投与を指示するシートとを含むキットを提供する。
【０２２２】
追加の一態様では、本発明は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の組成物、医薬組成物および投与量を提供する。他の一実施形態では、医薬組成物または投与量は、図１に明示されている通りの配列（配列番号１）または配列番号１の配列と少なくとも約９０％の配列同一性を有する配列を有する融合タンパク質を含む。別の実施形態では、投与量は、ヒト患者では、患者の体重に基づく。他の一実施形態では、ヒト患者は成人である。成人ヒト患者の体重は、約４５ｋｇ〜約１２０ｋｇの範囲であってよい。追加の一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、医薬組成物、組成物または投与量で、特定の量として提供する。別の実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を、（ｉ）約２．２５ｍｇから約６ｍｇの間；（ｉｉ）約４．５ｍｇから約１２ｍｇの間；（ｉｉｉ）約９ｍｇから約２４ｍｇの間；（ｉｖ）約１８ｍｇから約４８ｍｇの間；（ｖ）約３６ｍｇから約９６ｍｇの間；（ｖｉ）約４５ｍｇから約１２０ｍｇの間；（ｖｉｉ）約５４ｍｇから約１４４ｍｇの間；（ｖｉｉｉ）約６３ｍｇから約１６８ｍｇの間；（ｉｘ）約７２ｍｇから約１９２ｍｇの間；（ｘ）約８１ｍｇから約２１６ｍｇの間；（ｘｉ）約９０ｍｇから約２４０ｍｇの間；（ｘｉｉ）約９９ｍｇから約２６４ｍｇの間；（ｘｉｉｉ）約１０８ｍｇから約２８８ｍｇの間；（ｘｉｖ）約１１７ｍｇから約３１２ｍｇの間；（ｘｖ）約１２１．５ｍｇから約３２４ｍｇの間；（ｘｖｉ）約１２６ｍｇから約３３６ｍｇの間；または（ｘｖｉｉ）約１３５ｍｇから約３６０ｍｇの間の量で提供する。他の一実施形態では、医薬組成物または投与量は、薬学的に許容される担体をさらに含む。
【０２２３】
概数の第１のｍｇから概数の第２のｍｇの間のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の量を含む組成物、医薬組成物または投与量について言及する場合、その用語「第１のｍｇ」は、その第１のｍｇ値を含んでよく、その用語「第２のｍｇ」は、その第２のｍｇ値を含んでよいことに注意すべきである。
ＶＩＩＩ）  製品
【０２２４】
一態様では、本発明はまた、疾患（例えば、ＧＨＤ）の処置、防止および／または診断に有用な材料を含有するキットおよび製品を提供する。別の実施形態では、本発明は、包装材料と、上述の実施形態の剤形または医薬組成物を含む少なくとも第１の容器と、その剤形または医薬組成物ならびに貯蔵および取扱い条件を同定するラベルと、再構成および／または対象への剤形または医薬組成物の投与を指示するシートとを含むキットを提供する。他の一実施形態では、このキットは、容器と、容器の上に位置しているか、または容器に付随していてよいラベルとを含む。この容器は、ボトル、バイアル、シリンジ、カートリッジ（オートインジェクターカートリッジを含む）または任意の他の適切な容器であってよく、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されていてよい。容器は、本明細書に記載の通りのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を有する組成物を保持し、かつ滅菌アクセスポートを有してよい。容器の例には、皮下注射針で穴を開けることができるストッパーを備えたバイアルが含まれる。キットは、様々な試薬、例えば、希釈剤、保存剤および緩衝剤を保持する追加の容器を有してよい。ラベルは、組成物の説明、さらには意図されている使用についての指示を提示するものであってよい。
【０２２５】
他の一態様では、容器は、プレフィルドシリンジである。一実施形態では、このシリンジは、本明細書に記載の通りのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を有する組成物をあらかじめ充填されている。追加の一態様では、本発明は、本明細書に記載の通りのｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を有する組成物の容器を提供し、この容器は、組成物の自動注射に適している。一実施形態では、容器はカートリッジである。別の実施形態では、容器は、自動注射ペン内のカートリッジである。当業者であれば、他の適切な自動注射デバイスを本発明のために使用することができることを認めるであろう。一部の実施形態では、自動注射デバイスは、注射前に針の先端を保護しておく円柱状ハウジング内にばね式シリンジを含む。一実施形態では、患者がデバイス上のボタンを押し下げると、シリンジ針が自動的に挿入されて、内容物を送達する。
【０２２６】
別の実施形態では、デバイスは、ガスジェット自動注射デバイスである。他の実施形態では、このガスジェットデバイスは、加圧ガスのシリンダーを含むが、針は含まない。活性化すると、このデバイスは、針を使用することなく、液体の微細噴流を皮膚を通して推進させる。他の一実施形態では、デバイスは、イオン泳動デバイスまたは起電薬投与（ＥＭＤＡ）デバイス（例えば、針を使用することなく皮膚を通して薬剤を送達するために、小さな電荷を使用する）である。
【０２２７】
このキットは、本明細書に記載のｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質を含む分子を活性薬剤として包含する少なくとも１個の容器を有する。この容器は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質の剤形または医薬組成物を含むことができる。この剤形または組成物は疾患を処置するために使用することができることを示すラベルが装備されていてよい。このラベルはまた、処置を必要とする対象に投与するための指示を提示することもできる。このキットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびデキストロース液などの薬学的に許容される緩衝剤を有する追加の容器をさらに含有することができる。最後に、キットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針およびシリンジを含む任意の他の適切な材料を含むこともできる。
【０２２８】
一態様では、本発明は、ヒト成長ホルモン−ＸＴＥＮ（ｈＧＨ−ＸＴＥＮ）融合タンパク質を含む、ヒト患者に投与するための医薬組成物を保持している容器を含むキットを提供する。一実施形態では、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ融合タンパク質は、図１に明示されている配列（配列番号１）と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、キットは、前記容器に付随する添付文書をさらに含む。他の一実施形態では、添付文書は、前記組成物が、組成物の１つより多い用量を投与することによって成長ホルモン欠乏症を処置するためのものであることを示している。一実施形態では、この投与は、ｈＧＨ−ＸＴＥＮ約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の初回用量および約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の量でのｈＧＨ−ＸＴＥＮの複数の後続用量の投与である。別の実施形態では、これらの用量を時間的に互いに、少なくとも約７日離す。添付文書は、本明細書に記載の通りの種々の用量、用量範囲および用量の間の時間をさらに示していてよい。追加の一実施形態では、ヒト患者は成人である。
【０２２９】
以下は、本発明の方法、処置レジメンおよび組成物の例である。上記で提示した概説によって、様々な他の実施形態を実施することができることは理解されるであろう。
【実施例】
【０２３０】
（実施例１）
第Ｉ相  予備調査結果
成長ホルモン欠乏症を有するヒト成人における皮下投与でのヒト成長ホルモン類似体（ＶＲＳ−３１７）の単回用量の安全性、薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）の第１相試験を完了しており、本明細書において詳述する。その配列が図１に示されているＶＲＳ−３１７、長時間作用性ｒｈＧＨ融合タンパク質を、ＧＨＤを有する成人５０名で、６０日間二重盲検無作為化プラセボ（ＰＢＯ）対照単回漸増用量試験（０．０５、０．１０、０．２０、０．４０および０．８０ｍｇ  ＶＲＳ−３１７／ｋｇ）において評価した（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  ＮＣＴ０１３５９４８８）。ＶＲＳ−３１７は、ｒｈＧＨ半減期を延長するためにＮ末端およびＣ末端ＸＴＥＮアミノ酸を付加していることによって、ｒｈＧＨの質量の約５倍である。サルにおいて、ＶＲＳ−３１７は、完全な生物学的利用能、迅速な吸収、約１１０時間の半減期を有し、単回投与から１か月の間、ＩＧＦ−Ｉ応答の持続をもたらす。
【０２３１】
最初は、対象の血清ＩＧＦ−Ｉ標準偏差（ＳＤ）スコアが−１．５から＋１．５の範囲で安定するまで、対象にｒｈＧＨを連日投与した（最低２８日；０．２〜１．２ｍｇ／日の用量範囲）。次いで、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳが−１未満になり、０．７５以下、下がるまで、対象をｒｈＧＨから休薬させ、その後、ＶＲＳ−３１７で処置した。対象を、ＶＲＳ−３１７またはＰＢＯを投与してから４８時間観察した。ＰＫ、ＰＤ（ＩＧＦ−Ｉ）および対の空腹時／食後血糖を投与前、およびＶＲＳ−３１７またはＰＢＯの単回ＳＣ用量後３０日にわたる様々な時点で測定した。対象２８名での安全性データおよびＶＲＳ−３１７またはＰＢＯ処置対象２４名でのＰＫ／ＰＤを含めた試験からの予備調査結果を評価した。ＰＫ／ＰＤ対象（男性１５名、女性９名）は４６（１２）歳の平均（ＳＤ）年齢および３２（７）ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有した。
【０２３２】
ＶＲＳ−３１７は、ＳＣ投与から２〜３日後にＴｍａｘを達成し、毎月投与で十分な可能性のある長い循環半減期を有する。ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの平均最大上昇は、ＰＢＯ、０．０５、０．１０および０．２０ｍｇ／ｋｇ／月投与群においてそれぞれ、０．３３、０．３２、０．９６＊および１．３２＊＊であった（＊  ｐ＝０．０１２、＊＊  ｐ＝０．０００５（ＰＢＯに対して））。当初２週の間、ＶＲＳ−３１７前のレベルを超えるＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを有する対象のパーセンテージは、０．０５、０．１０および０．２０ｍｇ／ｋｇ／月群についてそれぞれ１６、６６および１００％であった。これらの単回ＶＲＳ−３１７用量は、０．３１、０．６２および１．２４μｇ  ｈＧＨ／ｋｇ／日と同等である（連日ｒｈＧＨでの典型的なＡＧＨＤ投与範囲は２〜１２μｇ／ｋｇ／日である）。
【０２３３】
薬物に関連する重篤な有害事象、投薬後の中止例または予期せぬ関連有害事象もしくは注射部位の脂肪組織萎縮は対象において存在しなかった。平均空腹時血糖、食後血糖および空腹時から食後への変化は、有意な投与後変化を対象において示さなかった。安全性実験室シグナル（ｓａｆｅｔｙ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｓｉｇｎａｌｓ）は対象において観察されなかった。まとめると、ＧＨＤを有する成人におけるＶＲＳ−３１７の単回ＳＣ用量のこの試験において、ＩＧＦ−Ｉ生成の段階的応答が、１か月の経過中にｒｈＧＨの連日投与で典型的に使用される用量よりも低い用量で安全に達成された。
（実施例２）
第Ｉ相試験の完了
【０２３４】
実施例１は、成長ホルモン欠乏症を有する成人における毎月皮下投与での新規なヒト成長ホルモン類似体（ＶＲＳ−３１７）の単回用量の安全性、薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）の第１相試験の予備調査結果を記載している。この試験を終え、その最終結果をここでは報告する。
【０２３５】
ＶＲＳ−３１７を、ＧＨＤを有する成人５０名（プラセボ処置１０名／活性処置４０名）において、６０日間二重盲検無作為化プラセボ（ＰＢＯ）対照単回漸増用量研究（０．０５、０．１０、０．２０、０．４０および０．８０ｍｇ  ＶＲＳ−３１７／ｋｇ）で試験した（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  ＮＣＴ０１３５９４８８）。試験設計は、以下に示す通りにまとめられる。
【化１】
2015520188.tif 000025
患者を、投与後に続く４８時間は、臨床ユニット内に滞在させた。免疫原性（抗体試料）を以下の時点で評価した：投与前、投与後３０日および６０日。図２は、第１相試験での試験相を示している。
【０２３６】
目的：試験の目的には以下が含まれる：ＧＨＤ患者における単回皮下（ＳＣ）用量の安全性および忍容性の評価；ＳＣ投与されたＶＲＳ−３１７の単回用量薬物動態の決定；インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−Ｉ）および結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ−３）および骨代謝（骨アルカリホスファターゼ）におけるベースラインからの変化による、ＶＲＳ−３１７生体活性の証拠の評価；ならびに成人患者で、単回用量の投与から１か月の間、ＩＧＦ−Ｉレベルの正常範囲（適正な年齢／性別で）を維持する用量の決定。
【０２３７】
投与：ＶＲＳ−３１７を投与されたサルにおいてＧＨのｉｎ  ｖｉｖｏ効力の増大が実証されているので（Ｃｌｅｌａｎｄら、２０１２年、前出）、ヒトにおける第１の用量のためのＶＲＳ−３１７用量範囲を、各３０日時限で典型的な投与範囲の半分未満の連日ｒｈＧＨ用量（すなわち、０．０３〜０．５ｍｇ  ｒｈＧＨ／日または約０．３〜５．０μｇ／ｋｇ／日）に近似するように選択した。選択されたＶＲＳ−３１７用量は、単回皮下注射として投与される０．０５、０．１０、０．２０、０．４０および０．８０ｍｇ／ｋｇであった。
【０２３８】
以下の表２．１に示す通り、ＶＲＳ−３１７単回ＳＣ用量レベルは、５μｇ／ｋｇ／日の同等の平均的成人ＧＨＤ用連日ｒｈＧＨ用量のレベルか、またはそれ未満のレベルであった。
【表２−１】
2015520188.tif 000026
【０２３９】
患者素因：登録対象は、インスリンに対する陰性応答（ピークＧＨ＜５．０ｎｇ／ｍＬ）、アルギニン−ＧＨＲＨ（ＢＭＩに対するピークＧＨ）（Ｍｏｌｉｔｃｈ  ＭＥら、２０１１年、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９６巻（６号）：１５８７〜１６０９頁；Ｃｏｏｋ  ＤＭら、２００９年、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ：  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｉｓｔｓ  １５巻  Ｓｕｐｐｌ  ２：１〜２９頁）、グルカゴン（ＧＨピーク＜３．０ｎｇ／ｍＬ）（Ｙｕｅｎ  ＫＣら、２００９年、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９４巻（８号）：２７０２〜２７０７頁）または少なくとも３種の他の下垂体ホルモン欠乏症および年齢および性別に対して低いＩＧＦ−Ｉ（Ｍｏｌｉｔｃｈ  ＭＥら、２０１１年、前出）によって確認される通り、成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）であった。ＧＨＤがトルコ鞍部病変によるものであった場合、スキャンは、少なくとも６か月の安定性を示した。他の下垂体ホルモン欠乏症のための処置は、治験薬の投与前に２か月間にわたって安定していた。ＶＲＳ−３１７を投与した場合、遊離Ｔ４は、すべての対象について正常範囲にあった。連日グルココルチコイド処置を受けていなかった各対象は、副次的な副腎機能不全を除外するための標準用量（２５０μｇ）ＡＣＴＨ検査に対して正常な応答を示した。エストロゲンを投与されている女性患者では、経皮処置を使用し、試験を通じて維持した。連日ｒｈＧＨに対するＩＧＦ−Ｉ応答を、すべての対象において、治験薬投与の前に特性決定した。重大な除外基準には、重大な併発症（例えば、糖尿病）、活性な悪性疾患、スクリーニングでの抗ｈＧＨ抗体、妊娠、授乳または経口エストロゲンの使用があることが含まれた。
【０２４０】
図３には、試験における患者の素因をまとめている。ＶＲＳ−３１７（またはプラセボ）での処置後に、試験から脱落した患者はいなかった。
【０２４１】
試験手順および試験方法：初めに、すべての対象を、最低２８日の間、かつ少なくとも１週おいて出した２回の連続するＩＧＦ−Ｉ標準偏差スコア（ＳＤＳ）が−１．５〜１．５（男性では＋２．０）の範囲内になるまで、連日ｒｈＧＨで維持した。次いで、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳが少なくとも０．７５低下し、−１．０以下に低下するまで、対象を連日ｒｈＧＨから休薬させた。次いで、対象をその時点で、登録する処置コホートに無作為化した。１日目に、すべての対象が、２９ゲージ針を備えたインスリンシリンジで投与されるＶＲＳ−３１７またはプラセボの単回皮下（ＳＣ）用量を投与された。薬物動態および薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）試料を、投与前、および投与から０．５、１．０、２、４、８、１２、２４、３６および４８時間目に収集した。追加のＰＫ／ＰＤサンプリングを、投与から４、８、１１、１５、１８、２２、２５および３０日目に行った。グルコースおよび脂質代謝を投与前および投与から８、１５、２２、３０、４４および６０日目に評定した。抗ＶＲＳ−３１７抗体の検査を、投与前および投与から３０および６０日目に行った。次の投与レベルに進む前に、安全性データを検討した。実験室安全性評定を、投与前および投与後の選択された時点で行った。検査には、標準的な血球数、生化学、食後血糖、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）および空腹時血糖レベル、コレステロール、ＬＤＬ、ＨＤＬおよびトリグリセリドが包含された。
【０２４２】
患者集団の定義：安全性集団は、全部で無作為化対象５０名からなった。ＰＫ／ＰＤ集団は、ＶＲＳ−３１７またはプラセボのいずれかを投与された対象４８名からなり、その体重に対して不適切な用量が投与された対象２名が除外された（０．８０ｍｇ／ｋｇ用量群の対象１名およびプラセボ群の対象１名）。
【０２４３】
アッセイ：収集された血漿中のＶＲＳ−３１７濃度を、ＥＬＩＳＡを使用して測定した。このアッセイでは、ＸＴＥＮおよびｒｈＧＨドメインに対する捕捉抗体および検出抗体をそれぞれ使用して、無傷の分子の検出を保証した。抗ＶＲＳ−３１７抗体を、投与前ならびに３０日目および６０日目に採取した試料で測定した。高いＶＲＳ−３１７濃度からの干渉の可能性によって、試料を投与時限の終了時に採取し、アッセイを、酸解離での固相抽出を使用して行い、直接電気化学ルミネセンスアッセイを続けた。抗ｒｈＧＨ抗体を直接ＥＬＩＳＡで測定した。ＩＧＦ−Ｉを、酸抽出、ＩＧＦ−ＩＩ遮断ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を使用して生化学分析標準に対して測定したが、これはＥｓｏｔｅｒｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｃａｌａｂａｓａｓ  Ｈｉｌｌｓ、ＣＡ）が行った。ＩＧＦ−Ｉアッセイでの定量の下限は１５ｎｇ／ｍｌである。ＩＧＦＢＰ−３を、ＥｓｏｔｅｒｉｘでＲＩＡによっても測定した。ＩＧＦＢＰ−３アッセイでの定量の下限は０．３ｍｇ／Ｌである。ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦＢＰ−３のアッセイ特異的標準偏差スコア（ＳＤＳ）を、使用したアッセイについてのパワー変換規範データ（ｐｏｗｅｒ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｎｏｒｍａｔｉｖｅ  ｄａｔａ）（Ｅｓｏｔｅｒｉｘ、Ｃａｌａｂａｓａｓ  Ｈｉｌｌｓ、ＣＡ）を使用して生じさせた。
【０２４４】
ＰＫ／ＰＤ分析：ＶＲＳ−３１７  ＰＫパラメータを、ＷｉｎＮｏｎＬｉｎ（商標）ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  ｖ５．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）を使用する非コンパートメント技法で推定した。ＶＲＳ−３１７の単回ＳＣ用量後の曲線下ＩＧＦ−Ｉ面積を、直線台形則（ｌｉｎｅａｒ  ｔｒａｐｅｚｏｉｄ  ｒｕｌｅ）を使用して算出し、平均ＩＧＦ−Ｉを、ＩＧＦ−Ｉ  ＡＵＣを投与時限の時間で割ることによって算出した。
【０２４５】
統計的解析：記述統計および多変量解析を、データベースのロック前に完成させた統計的解析プランに従って行った。実験室パラメータを投与前ベースラインからの変化について、ＡＮＣＯＶＡによって、変化を従属変数として、処置を補因子として、かつベースライン値を共変数として用いて解析した。Ｐ−値＜０．０５を、統計的有意と定義した。
結果
【０２４６】
患者素因および特性決定：対象６９名を、登録についてスクリーニングした；１９名のスクリーニング不良があり、対象５０名を、それぞれ活性処置対象８名およびプラセボ処置対象２名からなる５つの群に無作為化した。無作為化の後に、対象による中止例は存在せず；無作為化対象５０名すべてが、６０日の用量評価期間を終えた。女性２１名および男性２９名がおり、平均年齢は４４．７歳であった（表２．２）。年齢分布は、５つの投与コホートのそれぞれで同様であったが；投与アーム間で、多少の性別アンバランスが生じた（プラセボおよび０．１０ｍｇ／ｋｇコホートは男性６名および女性２名を含み；０．８０ｍｇ／ｋｇコホートは、男性３名および女性５名を有した）。安定相における連日ｒｈＧＨ用量は、すべての用量群での平均で０．４〜０．６ｍｇ／日（４．１〜５．８μｇ／ｋｇ／日）の範囲であった。ＶＲＳ−３１７に無作為化された対象では、ｒｈＧＨ休薬後のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの平均変化は、−１．７〜−２．４の範囲であった。
【０２４７】
以下の表２．２は、無作為化対象の特徴を示している。特記されている値を除いて、値は平均（最小、最大）である。ベースラインは、治験薬投与前の最終測定と定義する。
【表２−２】
2015520188.tif 000027
【０２４８】
薬物動態：図４は、ＶＲＳ−３１７の様々な単回用量でのヒト薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示している。図４は、１日目に単回皮下用量を投与された成人ＧＨＤ対象における平均ＶＲＳ−３１７濃度の時間経過を示している。分散棒（ｖａｒｉａｎｃｅ  ｂａｒｓ）は、明瞭にするために省略する；ＶＲＳ−３１７のＣｍａｘでの平均変動係数（ＳＤ／平均）は５７％であった（全用量）。以下の表２．３は、単回皮下注射後の成長ホルモン欠乏症の成人におけるＶＲＳ−３１７の薬物動態パラメータ（平均±標準偏差）を示している。単回ＳＣ用量は、ＶＲＳ−３１７の迅速な吸収およびそれに対する血清曝露の遷延をもたらした（図４）。平均最大ＶＲＳ−３１７血漿中濃度（Ｃｍａｘ）は、４４〜８２時間目に達成された（表２．３）。ＶＲＳ−３１７曝露は、用量に正比例した。ＶＲＳ−３１７排出半減期（ｔ１／２）が用量の漸増と共に増大する一般的な傾向が存在した。平均ｔ１／２は、検査した最高用量（０．８０ｍｇ／ｋｇ）で１３１時間であった（表２．３）。多変量解析において、ＶＲＳ−３１７でのＡＵＣ０−ｔは、用量と高度に相関したが（ｐ＜０．０００１）、この集団において、有意な年齢または性別作用は観察されなかった。
【表２−３】
2015520188.tif 000028
＊単位±Ｓ．Ｄ．
Ｃｍａｘ＝最大濃度；Ｔｍａｘ＝最大濃度までの時間；ＡＵＣ０−ｔ＝０時点から最終計測可能時点までの曲線下面積；ＡＵＣ０−∞＝０時点から無限大までの曲線下面積；ｔ１／２＝終端半減期。用量比例性相関係数（ｌｏｇ：ｌｏｇ）は、Ｃｍａｘで０．８７であり、かつＡＵＣ０−ｔで０．９３であった。
【０２４９】
性別に基づくＰＫ作用は観察されなかった。ｔ１／２の有意な（ｐ＝０．０１６）直線的上昇が、用量の増大と共に観察された。ＣｍａｘおよびＡＵＣの用量比例的増大が観察された。
【０２５０】
薬力学：ＩＧＦ−Ｉ濃度は、この試験で使用した主要な薬力学的マーカーであった。ＩＧＦ−Ｉ曝露の大きさおよび期間は、ＶＲＳ−３１７用量に正比例した（図５、表２．４）。図５は、０．０５、０．１０、０．２０、０．４０および０．８０ｍｇ  ＶＲＳ−３１７／ｋｇでの平均ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの用量応答変化を示している。図５は、プラセボおよび５つの活性投与群でのＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの平均変化を示している（注：用量投与の誤りによって、０．８０ｍｇ／ｋｇ用量群の対象１名は、この図から除外した）。分散棒は、明瞭にするために省略する；５つの活性用量群でのＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳのＣｍａｘの標準偏差は、０．７〜１．３の範囲であった。
【表２−４】
2015520188.tif 000029
【０２５１】
図６は、ＶＲＳ−３１７の単回用量に対するＩＧＦ−Ｉ応答の持続を示している（−１．５未満のベースラインＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを有する患者）。図６は、ＶＲＳ−３１７の単回ＳＣ用量投与後のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの正常化程度を示している（注：図４における対象３９名のうちの５名についてのデータを、図５〜６から除外したが、その原因は、それらのベースラインＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳが−１．５以上であり、それらを含めると、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの正常化期間が誇張されるであろうためであった）。
【０２５２】
重要な観察は、ＩＧＦ−Ｉ濃度およびＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳの平均変化の最大が、０．４０ｍｇ／ｋｇおよび０．８０ｍｇ／ｋｇ群で同様であると考えられたことであった。この類似性は、ＶＲＳ−３１７に対するＩＧＦ−Ｉ応答に影響を及ぼす対象の特徴の不均一な分布に起因した可能性がある。したがって、ＡＮＣＯＶＡを使用して、一群の投与後ＩＧＦ−Ｉ濃度の値すべてを、年齢、性別、処置日、ＶＲＳ−３１７用量、日中処置相互作用（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｂｙ  ｄａｙ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）（因子として）およびベースライン（投与前）ＩＧＦ−Ｉ濃度（共変数として）に対する依存性について調査した。用量、日および用量ならびに日中処置相互作用はすべて、有意であり（ｐ＜０．０００１）、同様に、年齢（ｐ＝０．００３４）および性別（ｐ＝０．０２２４）も有意であった。より高い用量、男性および若年はすべて、より高いＩＧＦ−Ｉ応答と関連した。
【０２５３】
ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳが正常化する程度および期間も、ＶＲＳ−３１７用量依存的であった。投与の際に−１．５未満のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを有する対象の解析によって、ＶＲＳ−３１７は、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳを−１．５〜１．５の正常範囲に、用量依存的に高めることが示された（図６）。ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳは、０．８０ｍｇ／ｋｇ群では平均約３週の間、正常化された。この正常化期間の遷延は、ＩＧＦ−Ｉへの過剰曝露を代償とするものではなかった。ＶＲＳ−３１７処置された患者４０名は、合計５１３回の投与後ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳ決定を有し、６名の患者におけるわずか８つの値のみ（１．６％）が、正常範囲を超えるものであった（ＳＤＳ＞＋２）。＋２を超える個々のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳ値は、０．４０および０．８０ｍｇ／ｋｇ群でのみ起こった２．０１〜３．５９の範囲であり、これらは、投与から７２時間以内に通常観察され、その後の試料採取時間までに正常化した。
【０２５４】
ＩＧＦＢＰ−３  ＳＤＳは、ベースラインでは低かったが（平均−１．２８、ＳＤ  １．８２）、ＶＲＳ−３１７投与と共に高まった。ＩＧＦＢＰ−３の変化の時間経過は、ＩＧＦ−Ｉの変化の時間経過と同様であった。最大ＩＧＦＢＰ−３応答は一般に、４日目または８日目に観察された。ＩＧＦＢＰ−３の変化は用量依存的であった。８日目には、ＩＧＦＢＰ−３の最小二乗平均変化は、０．０５、０．１０、０．２０、０．４０および０．８０ｍｇ／ｋｇ投与群でそれぞれ、０．０５、０．１７、０．５５、０．８０および１．４１ｍｇ／Ｌ（−０．６〜２．６のＩＧＦＢＰ−３  ＳＤＳ  Ｃｍａｘ）であった。ＡＮＣＯＶＡにおいて、ＩＧＦＢＰ−３応答は、ＶＲＳ−３１７用量、日およびベースライン値に依存していたが（すべてｐ＜０．０００１）、年齢または性別による作用は観察されなかった。ベースラインでは、ＩＧＦ−Ｉ／ＩＧＦＢＰ−３モル比は０．２２±０．０５であり、用量群の間で統計的に差異はなかった（ｐ＝０．４９）。平均最大モル比値は４日目に観察され、ＶＲＳ−３１７用量が増大するにつれて高まった（ｐ＜０．０００１）。０．８０ｍｇ／ｋｇ群での最大平均モル比は０．４７±０．１１であった。あらゆる対象での最大モル比値は０．６５であった。
安全性結果：
【０２５５】
最低７日にわたって曝露された患者最低８名からの安全性データを検討した後に、患者を、５つすべての計画投与レベルに登録させたが、治験薬に関連する予期せぬ有害事象（ＡＥ：ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｖｅｎｔ）は存在しなかった。治験責任医師によって治験薬に関連すると判断された非実験室ＡＥは一過性かつ軽度のものであり（ＣＴＣＡＥ  Ｇｒａｄｅ  ２の２例を除いて、ＣＴＣＡＥ  Ｇｒａｄｅ  １）、少数の対象において起こった（図７）。
【０２５６】
図７は、ＧＨＤ成人の安全性集団（ｎ＝５０）における治験薬投与に関連しているかもしれない、おそらく関連している、または明らかに関連している処置によって出現した有害事象を示している。注射部位反応および実験室事象を本明細書では検討する。多くの関連事象（頭痛（４）、関節痛（３）、筋痛（１）および浮腫（１））が、ｒｈＧＨを成人ＧＨＤ患者において開始した場合に典型的に観察される種類の事象であった。０．４０および０．８０ｍｇ／ｋｇ投与群は、最多数のいずれかの関連ＡＥ（各群で７）を有したが、特定の事象が、明確な用量関係性を有するものではなかった。
【０２５７】
注射部位反応は、最も一般的に報告される薬物関連有害事象であった。注射部位紅斑が、ＶＲＳ−３１７処置対象のうちの３０％およびプラセボ処置対象のうちの１０％で認められた。注射部位浮腫は、ＶＲＳ−３１７処置対象のうちの１０％およびプラセボ処置対象のうちの１０％で認められた。注射部位疼痛または圧痛は、ＶＲＳ−３１７処置対象の１５％で観察された。一般に、プラセボおよび治験薬処置患者では、注射部位反応は２４時間以内に現れ、軽度（Ｄｒａｉｚｅ  Ｉ、かろうじて知覚可能）かつ一過性であった。処置後観察の６０日を通じて、注射部位脂肪組織萎縮または過敏の例は報告されなかった。
【０２５８】
グルコースおよび脂質の代謝：ｒｈＧＨの安全性は、動物およびヒトにおいて広範に特性決定されており、グルコース不耐性がｒｈＧＨのいくつかの用量で観察および報告されている。ＶＲＳ−３１７の投与後に、グルコースおよび脂質代謝を、フォローアップ期間中を含めて定期的に評定した。日または用量による有意な変化は観察されなかった（空腹時血糖、食後血糖、空腹時インスリンおよびＨｂＡ１ｃ）。臨床的に有意なコレステロール、トリグリセリドおよびＬＤＬの低減が、０．８ｍｇ／ｋｇ  ＶＲＳ−３１７用量で観察された（データは図示せず）。あらゆるグルコース代謝パラメータに関連する安全性事象または臨床的に意味のある変化の報告はなかった。糖尿病範囲の血糖結果を有した患者はいなかった（空腹時≧１２６ｍｇ／ｄＬ、食後≧２００ｍｇ／ｄＬ）。ＨｂＡ１ｃについてのすべての平均値および個別値は、正常範囲内に維持された。いずれの処置群においても、プラセボに対するベースラインＨｂＡ１ｃからの変化において、臨床的に意味のある変化（≧０．２％）は認められなかった。０．１０および０．２０ｍｇ／ｋｇ投与群からの患者各１名が、関連があるかもしれないＡＥとして、以前から高い血清コレステロール、ＬＤＬおよびトリグリセリドレベルの悪化を有した。しかしながら、最高のＶＲＳ−３１７用量（０．８０ｍｇ／ｋｇ）では、コレステロール、ＬＤＬおよびトリグリセリドが低減する一過性パターンが存在し、その際、８日目が最高で、２２日目まで持続した。ベースラインからの最大低下パーセントは、コレステロール、ＬＤＬおよびトリグリセリドについてそれぞれ１１．３（ｐ＝０．００２６）、１４．６（ｐ＝０．０１４）および１４．５％（ｐ＝０．１９）であった。まとめると、グルコースおよび脂質代謝に関連して観察されたデータが、安全性の懸念をもたらすことはなかった。
【０２５９】
抗体の評定：非特異的結合が、抗ｈＧＨ抗体アッセイにおいて認められた。特異的抗ｒｈＧＨ抗体の有意な力価（≧１：１０）をスクリーニングの際に有した対象はおらず、連日ｒｈＧＨ休薬後７日目に、陽性と検査された対象はいなかった。連日ｒｈＧＨで事前に処置された成人ＧＨＤ患者に対するＶＲＳ−３１７の単回皮下投与は、少数の対象（４０名中４名）において、抗ＶＲＳ−３１７抗体応答を低い力価で生じさせた（１：５で対象４名中３名、１：２５で対象１名）。これら４名のうちの３名は、抗ｈＧＨ抗体アッセイにおいて非特異的な結合を有した。臨床的または薬理学的エンドポイントに対して起こり得る抗体作用の分析は、抗ＶＲＳ−３１７について陽性と検査された対象の人数が少なかったため排除した；これらの対象４名のＩＧＦ−Ｉ応答において、特記可能な差異は存在しなかった。
【０２６０】
まとめると、成人ＧＨＤ患者におけるこの試験は、ＶＲＳ−３１７についてのいくつかの安全性、薬物動態および薬力学的（ＰＤ）情報をもたらす。ＶＲＳ−３１７の単回用量は、安全で、忍容性が良好なことが見出された（図７を参照されたい）。ＰＫプロファイルに関して、ＶＲＳ−３１７のＡＵＣ、Ｃｍａｘおよび半減期は、用量に比例することが見出された。加えて、ＶＲＳ−３１７に対する曝露期間は、用量の増大と共に増大することが見出された。ＰＤプロファイルに関して、血清ＩＧＦ−Ｉは、用量依存的に正常化し、ＩＧＦ−Ｉ正常化の期間は、用量の増大と共に増大した。加えて、連日ｒｈＧＨ用量範囲の中間点まで用量を増加させると、３週間までのＩＧ−１の正常化が結果として生じた。
【０２６１】
ＶＲＳ−３１７は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて流体力学的半径を増大させ、かつＧＨ受容体（ＧＨＲ）への結合親和性を低下させるＸＴＥＮドメインを含有する。結合親和性の低下にも関わらず、永続的な薬力学的応答がｉｎ  ｖｉｖｏで見られ、これは、ＶＲＳ−３１７の受容体媒介性クリアランスの速度低下に関連しているかもしれない（Ｃｌｅｌａｎｄら、２０１２年、前出）。クリアランス速度の低下が、ＶＲＳ−３１７の血清中滞留時間を遷延し、標的上での連結時間（ｌｉｇａｎｄ  ｔｉｍｅ）の増大を結果としてもたらした。最高用量でのＶＲＳ−３１７の終端排出半減期は１３１時間であった；これは、連日ｒｈＧＨ製品について添付文書において報告されている終端排出半減期を３０〜６０倍上回る増大を表している。
【０２６２】
本研究は、ＶＲＳ−３１７についてヒトにおいては初めての研究であり、ＧＨＤを有する成人を処置する際に、任意のｒｈＧＨ類似体のうちで最も遷延された作用持続時間を示すので、長時間作用性ｒｈＧＨについての以前の知識を広げるものである。すべての対象は、Ｔｈｅ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｉｓｔｓおよびｔｈｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｏｃｉｅｔｙの現行のコンセンサスガイドラインに従って診断されたＧＨＤを有する成人であった。男性対象がやや多かったが（男性２９名、女性２１名）、各性別の人数は、薬物分布および薬力学的作用に対する性別の作用を検査するには適切であった。各対象はまず連日ｒｈＧＨ注射剤で安定化され、正常範囲内の安定したＩＧＦ−Ｉ  ＳＤスコアを達成するために、０．２〜１．０ｍｇ  ｈＧＨ／日（平均０．６ｍｇ／日）または１．５〜１０．５μｇ／ｋｇ／日を摂取していた。連日ｒｈＧＨの中断後に、ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳは、すべての対象において、１．７〜２．５ＳＤの群平均減少分で低下した。ｒｈＧＨ（例えば、インスリン、経口エストロゲン、グルココルチコイドの抗炎症用量）に対する感受性を変化させ得る連日薬物投与が必要な対象は、ＶＲＳ−３１７のこの第１の投与試験から除外した。
【０２６３】
ＶＲＳ−３１７投与範囲全体で、薬物曝露パラメータ（ＣｍａｘおよびＡＵＣ）は、用量に高度に正比例した。一般に、曝露の大きさおよび期間の両方が、ＶＲＳ−３１７用量の増大と共に増大する。性別または年齢による作用は、ＶＲＳ−３１７用量−曝露の関係性においては検出されなかった。ＶＲＳ−３１７は、すべての用量レベルで安全かつ良好に許容され、このことは、より高い用量曝露を、ヒト研究において将来調査することができることを示唆している。ＶＲＳ−３１７に対する薬力学的（ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦＢＰ−３）応答も、用量に正比例し、大きさおよび期間は、用量の増大と共に増大した。最高用量では、平均ＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳは、−１．５超で約３週間にわたって維持された。用量と期間との間に比例関係の実証があるとすれば、ＩＧＦ−Ｉ正常化の期間を、ＶＲＳ−３１７用量の増大によって延長することができるであろう。この研究において評定された用量範囲全体で、結果は、ＩＧＦ−Ｉ正常化の期間が、ＩＧＦ−Ｉに対する過剰曝露を代償としたものではないことを裏付けている：観察したＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳのうちの１．６％のみが≧２であり、これらの上昇は一過性であった。女性および高齢対象は、男性よりも低い応答性を示すような、ＶＲＳ−３１７に対するＩＧＦ−Ｉ応答への年齢および性別による作用が存在した。これらの解析に基づいて、女性および高齢対象は、ＶＲＳ−３１７に対してより低いＩＧＦ−Ｉ応答を有すると予期される。ＩＧＦ−Ｉ誘導についての性差は、連日ｒｈＧＨで周知であり、ＩＧＦ−Ｉ産生細胞へのエストロゲンの作用による可能性がある。連日ｒｈＧＨの作用と同様に、成人におけるＶＲＳ−３１７によるＩＧＦ−Ｉ誘導は、男性においてよりも女性において低い可能性がある。
【０２６４】
ＶＲＳ−３１７を、３０日にわたる０．３〜５μｇ／ｋｇ／日の連日ｒｈＧＨ用量に近似する０．０５〜０．８０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与した。この範囲全体で、ＶＲＳ−３１７の単回用量は安全で、よく許容された。処置によって出現する重篤な有害事象または疑われる予期せぬ重篤な有害反応は存在しなかった。投与後に試験から脱落した対象はいなかった；すべての対象が、プロトコールが規定する６０日の安全性観察期間を完了した。注射部位（複数可）での軽微な一過性の紅斑が、報告された最も一般的な有害事象であった。治験薬に関連があるかもしれないか、おそらく関連があるか、または明らかに関連があると判断される他の事象は、成人ＧＨＤ患者が補充療法を投与される場合に見られるものの典型であった。これらの事象は一過性であり、軽度から中程度と分類された。注射部位での脂肪組織萎縮は観察されなかった。炭水化物代謝のＶＲＳ−３１７による変化についてのサーベイランスには、空腹時血糖およびインスリン、食後血糖およびＨｂＡ１ｃの連続的測定が含まれた。臨床的に意味のある一時的または用量関連変化は、これらのパラメータのいずれにおいても観察されず、このことは、ＶＲＳ−３１７の作用の遷延およびクリアランスの遅延は、これらの患者において、血糖安全性全体に対してどのような追加のリスクも付与しなかったことを示している。これらの所見は、低用量連日ｒｈＧＨを用いる以前の研究と一致しているが（Ｙｕｅｎ  ＫＣら、２００９年、前出；Ｓｐｉｎａ  ＬＤＣら、２００４年、Ｇｒｏｗｔｈ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  ＆  ＩＧＦ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １４巻（１号）：４５〜５１頁；Ｈａｎａ  Ｖら、２００４年、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ６０巻（４号）：４４２〜４５０頁；Ｂｕｌｏｗ  Ｂら、２００４年、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ６１巻（６号）：６８３〜６９１頁；Ｙｕｅｎ  ＫＣら、２００７年、Ｄｉａｂｅｔｅｓ，  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ＆  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ９巻（１号）：１１〜２２頁）、長期連日ｒｈＧＨ処置中に、インスリン感受性指数の低下と共に、グルコースおよびインスリンの上昇を示す他の研究とは対照的である（Ｂｏｇｕｓｚｅｗｓｋｉ  ＣＬら、２００５年、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １５２巻（１号）：６７〜７５頁；Ｍｏｌｌｅｒ  Ｎら、２００９年、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３０巻（２号）：１５２〜１７７頁；Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｍら、１９９８年、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ８３巻（５号）：１６６８〜１６８１頁）。低用量群の対象２名は、以前から高かったＬＤＬ、総コレステロールおよびトリグリセリドレベルの上昇を示したが、最高ＶＲＳ−３１７用量レベル（０．８０ｍｇ／ｋｇ）では、これらのパラメータにおいて一時的な低下パターンが存在した。ｒｈＧＨ用量および期間の作用、さらには個々の感受性は、グルコース、脂質およびインスリン応答に影響を及ぼす可能性があると判断される。脂質およびグルコースパラメータの変化についての継続的なサーベイランスは、その後の長期投与試験中に保証される。
【０２６５】
ＶＲＳ−３１７処置対象４０名のうちの４名は、検出可能な抗ＶＲＳ−３１７抗体を有し、これはＶＲＳ−３１７投与後３０日目および／または６０日目に出現した。これらの対象は、０．２ｍｇ／ｋｇ（対象１名）、０．４０ｍｇ／ｋｇ（対象２名）または０．８０ｍｇ／ｋｇ（対象１名）のＶＲＳ−３１７用量を投与されていた。これら４名のうちの３名は、抗ｒｈＧＨ抗体スクリーニングアッセイにおいて非特異的結合を有していた。
【０２６６】
結論として、ＶＲＳ−３１７の単回用量投与は、研究された一連の用量にわたって安全で、かつ忍容性が良好であり、ＧＨＤを有する成人においてＩＧＦ−Ｉ応答の正常化の遷延をもたらす。この安全性およびＰＫ／ＰＤプロファイルは、ＶＲＳ−３１７用量をさらに増大させて、この集団におけるＩＧＦ−Ｉ応答を遷延させることができることを示唆している。ＶＲＳ−３１７のクリアランスの遅延があるとすれば、ＶＲＳ−３１７は、ＧＨＤを有する成人において、毎月投与の可能性を有する。
【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図２】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年2月9日(2015.2.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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