(57)【要約】  本発明は、高親和性脱感作（ＨＡＤ）機序によることが多い、伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体を介した疼痛の阻害（又はダウンレギュレーション）における使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
疼痛伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体の阻害における使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
ａ）（Ｐ２Ｘファミリーのうち）Ｐ２Ｘ３受容体に対してのみ作用し、又はこれに対してのみ選択的であり、
ｂ）Ｐ２Ｘ４、Ｐ２Ｘ７及び／又はＰ２Ｘ２受容体（単数又は複数）のいずれに対しても又はいずれかに対して作用せず、
ｃ）高親和性脱感作（ＨＡＤ）阻害機序を介して作用し、又は
ｄ）該Ｐ２Ｘ３受容体の部分アゴニスト又はスーパーアゴニストである、請求項１に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2015517565.tif 000030
又は薬学的に許容されるその塩であり、
式中、Ｘ、Ｘ’及びＺは、
【化２】
2015517565.tif 000031
（式中、Ｒ１及びＲ２は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、又はＣ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜４アミノアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択される非置換基から独立に選択され、ｎは、１、２、３、４、５及び６から選択される）から独立に選択され、
各Ｙは、＝Ｓ及び＝Ｏから独立に選択され、
Ｂ１及びＢ２は、縮合されていないか、又はさらなる５員〜７員の炭素−窒素ヘテロアリール基に縮合していてもよい、５員〜７員の炭素−窒素ヘテロアリール基から独立に選択され、
Ｓ１及びＳ２は、結合、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン及び式（ＩＩ）の部分
【化３】
2015517565.tif 000032
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ；又はＣ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜４アミノアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択される非置換基を表し、
ｐ及びｑは、独立に、０、１、２又は３を表し、好ましくは、０、１又は２を表し、
［リンカー］は、
（ｉ）−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ＝Ｏ−又は−ＮＨ−；
（ｉｉ）エーテル（−Ｏ−）、チオエーテル（−Ｓ−）、カルボニル（−Ｃ＝Ｏ−）又はアミノ（−ＮＨ−）連結を任意選択で含有し、又はこれらで終端しており、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、−ＮＲ５Ｒ６、又はＣ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜４アルケニルオキシ、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ２〜４ハロアルケニル、Ｃ１〜４アミノアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４アシル及びＣ１〜４アルキル−ＮＲ５Ｒ６基から選択される非置換基から選択される１つ又は複数の基で任意選択で置換され、Ｒ５及びＲ６は、同じ又は異なり、水素又は非置換Ｃ１〜２アルキルを表す、Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ２〜４アルケニレン又はＣ２〜４アルキニレン；又は
（ｉｉｉ）水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、−ＮＲ５Ｒ６、又はＣ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜４アルケニルオキシ、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ２〜４ハロアルケニル、Ｃ１〜４アミノアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４アシル及びＣ１〜４アルキル−ＮＲ５Ｒ６基から選択される非置換基から選択される１つ又は複数の基で任意選択で置換され、Ｒ５及びＲ６は、同じ又は異なり、水素又は非置換Ｃ１〜２アルキルを表す、５〜７員のヘテロシクリル、カルボシクリル又はアリール基
を表す）
から独立に選択され、
Ｖは、０、１、２、３、４及び５から選択され、
Ｕは、０、１、２、３、４及び５から選択され、
Ｗは、０、１、２、３、４及び５から選択され、
Ｖ＋Ｕ＋Ｗは、２〜７の整数である、請求項１又は請求項２に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項４】
Ｂ１及びＢ２が、プリン及びピリミジン核酸塩基から独立に選択される、請求項３に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項５】
Ｂ１及びＢ２が、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、１−メチルアデニン、７−メチルグアニン、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルグアニン、５−メチルシトシン及び５，６−ジヒドロウラシルから独立に選択される、請求項４に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項６】
Ｂ１及びＢ２の少なくとも１つが、アデニンである、請求項５に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項７】
Ｂ１及びＢ２が、両方ともアデニンであるか、或いはＢ１及びＢ２の１つがアデニンであり、他方がグアニンである、請求項６に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項８】
Ｓ１及びＳ２が、結合、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン及び式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の部分
【化４】
2015517565.tif 000033
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、又はＣ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜４アミノアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択される非置換基を表し、
ｐ及びｑは、独立に、０又は１を表し、
Ｑは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ＝Ｏ−、−ＮＨ−又はＣＨ２を表し、
Ａ及びＢは、独立に、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、又はＣ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アミノアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４アシル及び−ＮＲ５Ｒ６基から選択される非置換基を表し、Ｒ５及びＲ６は、同じ又は異なり、水素又は非置換Ｃ１〜２アルキルを表す）、
【化５】
2015517565.tif 000034
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立に、水素、ハロゲン、シアノ、又はＣ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜４アミノアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択される非置換基を表し、
Ｑは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ＝Ｏ−、−ＮＨ−又はＣＨ２を表し、
Ｒ７及びＲ８は、独立に、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、−ＮＲ５Ｒ６、又はＣ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜４アルケニルオキシ、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ２〜４ハロアルケニル、Ｃ１〜４アミノアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４アシル及びＣ１〜４アルキル−ＮＲ５Ｒ６基から選択される非置換基を表し、Ｒ５及びＲ６は、同じ又は異なり、水素又は非置換Ｃ１〜２アルキルを表し、
ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、独立に、０又は１を表す）
から独立に選択される、請求項３から７までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項９】
Ｓ１及びＳ２が、Ｄ−リボフラノース、２’−デオキシ−Ｄ−リボフラノース、３’−デオキシ−Ｄ−リボフラノース又はＬ−アラビノフラノースに対応する式（ＩＩＩ）の部分、或いはＤ−リボフラノース、２’−デオキシ−Ｄ−リボフラノース、３’−デオキシ−Ｄ−リボフラノース又はＬ−アラビノフラノースの開環形態に対応する式（ＩＶ）の部分から独立に選択される、請求項８に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１０】
Ｓ１及びＳ２が、同じである、請求項３から９までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１１】
Ｓ１及びＳ２が、Ｄ−リボフラノース又は開環Ｄ−リボフラノースである、請求項１０に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１２】
少なくとも１つのＸ又はＸ’部分が、−Ｏ−ではない、請求項３から１１までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１３】
Ｘ及びＸ’が、ＮＨ及び
【化６】
2015517565.tif 000035
から独立に選択され、
式中、好ましくは、Ｒ１及びＲ２は、両方ともＨであり、ｎは１又は２である、請求項３から１２までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１４】
各Ｙが＝Ｏであり、各Ｚが−Ｏ−である、請求項３から１３までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１５】
式（Ｉ’）の化合物であり、
【化７】
2015517565.tif 000036
式中、Ｘは−Ｏ−ではなく、Ｖ＋Ｗが２〜７の整数である、請求項３から１４までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１６】
Ｖ＋Ｗが４又は５である、請求項１５に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１７】
Ｖが２である、請求項１６に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１８】
Ｗが２である、請求項１６又は１７に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項１９】
ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ、ＡｐｐＮＨｐｐＡ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＡジオール、ＡジオールｐｐＮＨｐｐＡジオール、ＡジオールｐｐＮＨｐｐＡジオール、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＧ、ＡｐｐＮＨｐｐＧ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＧジオール及びＡジオールｐｐＮＨｐｐＧジオールからなる群から選択されるＡｐ４Ａ又はＡｐ４Ｇ類似体である、請求項１から１８までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ：
【化８】
2015517565.tif 000037
ＡｐｐＮＨｐｐＡ：
【化９】
2015517565.tif 000038
ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＡジオール：
【化１０】
2015517565.tif 000039
ＡジオールｐｐＮＨｐｐＡジオール：
【化１１】
2015517565.tif 000040
ＡｐｐＣＨ２ｐｐＧ：
【化１２】
2015517565.tif 000041
ＡｐｐＮＨｐｐＧ：
【化１３】
2015517565.tif 000042
ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＧジオール：
【化１４】
2015517565.tif 000043
ＡジオールｐｐＮＨｐｐＧジオール：
【化１５】
2015517565.tif 000044
【請求項２０】
疼痛の治療における使用のための、請求項１から１９までのいずれか一項に記載のジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項２１】
ホモマーＰ２Ｘ３受容体の阻害又はダウンレギュレーションによる疼痛の治療における使用のための、請求項２０に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項２２】
炎症、背痛、圧迫神経(trapped nerve)、関節痛、がん関連疼痛、歯痛、子宮内膜症、出産に関連する疼痛、手術後疼痛又は外傷の１つ又は複数と関連する疼痛の治療における使用のための、請求項２０又は請求項２１に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項２３】
前記疼痛が、中等度から慢性の疼痛である、請求項２０から２２までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項２４】
前記中等度から慢性の疼痛が、炎症、背痛、関節痛、がん関連疼痛、歯痛、子宮内膜症及び手術後疼痛からなる群から選択される症状の少なくとも１つと関連する中等度から慢性の侵害受容性疼痛である、請求項２３に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項２５】
０．０１〜１０μｇ／ｋｇの量で投与される、請求項２０から２４までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項２６】
前記疼痛が、急性疼痛又は亜急性疼痛である、請求項２０から２２までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項２７】
１０〜５００μｇ／ｋｇの量で投与される、請求項２６に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項２８】
別の医薬活性剤と組み合わせて投与される、請求項１から２７までのいずれか一項に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項２９】
中等度から慢性の疼痛又は背痛の治療における使用のための、ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項３０】
請求項３から１９までのいずれか一項に記載するジヌクレオシドポリリン酸類似体である、請求項２９に記載の使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【請求項３１】
有効量の請求項１から１９まで、又は２９のいずれか一項に記載のジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、疼痛伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体の阻害又はダウンレギュレーション方法。
【請求項３２】
有効量の請求項１から１９まで、又は２９のいずれか一項に記載のジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、中等度から慢性の疼痛を治療する方法。
【請求項３３】
疼痛伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体の阻害のための医薬の製造における、請求項１から１９まで、又は２９のいずれか一項に記載のジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項３４】
中等度から慢性の疼痛の処置のための医薬の製造における、請求項１から１９まで、又は２９のいずれか一項に記載のジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項３５】
ａ）（Ｐ２Ｘファミリーのうち）Ｐ２Ｘ３受容体に対してのみ作用し、又はこれに対してのみ選択的であり、
ｂ）Ｐ２Ｘ４、Ｐ２Ｘ２及び／又はＰ２Ｘ７受容体（単数又は複数）のいずれに対しても又はいずれかに対して作用せず、
ｃ）高親和性脱感作（ＨＡＤ）阻害機序を介して作用し、又は
ｄ）該Ｐ２Ｘ３受容体の部分アゴニスト又はスーパーアゴニストである、ジヌクレオシドホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｓｅ）類似体など化合物。
【請求項３６】
式ＮＰｎＮ（式中、Ｎは、ヌクレオシド部分を表し、Ｐは、リン酸基を表し、ｎは、２〜７である）を有する、請求項３５に記載の化合物。
【請求項３７】
０．０１〜３５００μｇの量のジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩、及び薬学的に許容される添加剤を含む組成物。
【請求項３８】
前記ジヌクレオシドポリリン酸類似体の量が、０．５〜５００μｇである、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記ジヌクレオシドポリリン酸類似体が、請求項３から１９までのいずれか一項に記載されている類似体である、請求項３７又は請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
皮下注射用に製剤化される、請求項３７から３９までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
実施例のいずれか１つを参照して実質的に記載される使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｐ２Ｘ３受容体の強力で選択的な阻害剤又はダウンレギュレーターとしてのジヌクレオシドポリリン酸の（類似体）及び他の化合物の使用、特に、背痛などの（急性から慢性の）侵害受容性疼痛(nociceptive pain)の治療（又は予防若しくは軽減）のためのこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界で２億７千万を超える人々が慢性疼痛を患っているが、これは未だに主にオピオイド及び非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）によって治療されている。これらの領域の両方で小さな改善はあったものの、これらの人々は依然として相当な副作用及び依存性の問題に苦しんでいる。
【０００３】
Ｐ２Ｘ３受容体は炎症性疼痛及びがんが関連する疼痛を含む慢性疼痛の様々な状態に関与していることが示唆されている。従前の研究によって、Ｐ２Ｘ３アンタゴニスト又は遺伝子削除が、炎症性疼痛及び神経因性疼痛モデルに対して鎮痛効果を有し得ることが示されている。Ｐ２Ｘ３受容体の活性は、いくつかの非ヌクレオチドアンタゴニストによって阻害し得る。細菌性ＤＨＦＲ阻害剤であるＡＦ−３５３は、Ｐ２Ｘ３の強力で選択的な非競合的アンタゴニストである（Ｇｅｖｅｒら、２０１０）。これは、α，β−ｍｅＡＴＰの競合的アンタゴニストとなることなく、核酸とＰ２Ｘ３との相互作用をアロステリックに調節することが示されている。Ａ−３１７４９１は、Ｐ２Ｘ３及びＰ２Ｘ２／３の競合的アンタゴニストであり、マイクロモルレベルの濃度内でＰ２Ｘ３受容体に結合する（Ｊａｒｖｉｓら、２００２）。Ａ−３１７４９１の全身投与は、炎症性疼痛及び神経因性疼痛モデルにおいて侵害受容(nociception)を効果的に低減させた（Ｊａｒｖｉｓら、２００２；ＭｃＧａｒａｕｇｈｔｙら、２００３）。Ａ−３１７４９１はまた、ホルマリン及び酢酸で誘発する腹部圧迫試験(abdominal constriction tests)における持続性疼痛を効果的にブロックしたが、一般に急性侵害性刺激のモデルにおいて不活性であった。Ａ−３１７４９１は、末梢神経系におけるよりもくも膜下腔内(intrathecally)に注射したときにより効率的であり（Ｊａｒｖｉｓら、２００２）、これは中枢神経系内での作用を示す。Ｐ２Ｘ３受容体の非競合的アンタゴニストであるＲＯ−３は、動物モデルにおいて抗侵害受容を誘発することが見出されている（Ｇｅｖｅｒら、２００６）。クモ毒ペプチド性毒素であるプロトキシン−１は、Ｐ２Ｘ３に結合し、Ｐ２Ｘ３受容体に対して選択的阻害作用を発揮するが（Ｇｒｉｓｈｉｎら、２０１０）、その結合機序はよく知られていない。
【０００４】
しかし、妥当なバイオアベイラビリティーを有する強力なＰ２Ｘ３−選択的リガンドへのリサーチは未だに不足している。現在まで、慢性の侵害受容性疼痛又は神経因性疼痛の軽減について臨床において成功裏に評価された選択的Ｐ２Ｘ３受容体アンタゴニストはない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、現存するＰ２Ｘ３リガンドに対する有用で強力な代替手段を提示し、従来技術の問題（のいくつか）を軽減することができる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様において、本発明は、疼痛伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体（pain transducing ATP-gated P2X3 receptor）の（例えば、選択的）阻害（又はダウンレギュレーション）に使用するための、ジヌクレオシドポリリン酸（類似体）、又は薬学的に許容されるその塩を提供する。特に、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、疼痛、特に、中等度(moderate)から慢性の疼痛、又は背痛の治療に使用することができる。従って、本発明はまた、（中等度から慢性の）疼痛の治療に使用するための、ジヌクレオシドポリリン酸（類似体）、又は薬学的に許容されるその塩を提供する。
【０００７】
別の態様において、本発明は、有効量のジヌクレオシドポリリン酸（類似体）又は薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、疼痛伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体の阻害（又はダウンレギュレーション）方法を提供する。
【０００８】
本発明はさらに、疼痛伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体の阻害（又はダウンレギュレーション）のための医薬の製造におけるジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩の使用を提供する。
【０００９】
本発明はまた、選択した受容体に対して、且つ／又は新規な機序（例えば、ＨＡＤ）を介して作用することができる化合物、例えば、ジヌクレオシドリン酸に関する。
【００１０】
本発明において使用するジヌクレオシドポリリン酸類似体は特に強力であり、低濃度で投与したときに、疼痛（特に、中等度から慢性の疼痛）の阻害において有効である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ラットホモマーＰ２Ｘ３受容体におけるＡｐｐＮＨｐｐＡの部分アゴニスト活性。Ａ．ラットＰ２Ｘ３受容体を発現しているＨＥＫ細胞に２秒間接触させた異なる濃度のＡｐｐＮＨｐｐＡ（１μＭ〜１００μＭ）によって誘発される反応の例。Ｂ．同じ細胞におけるＰ２Ｘ３受容体の完全アゴニストであるα，β−ｍｅＡＴＰ（１０μＭ、左）及び飽和（１ｍＭ、右）濃度のＡｐｐＮＨｐｐＡによって誘発された電流の比較。後者の有意により小さな振幅に留意されたい。Ｃ．１０μＭでのα，β−ｍｅＡＴＰ及び異なる濃度（１０μＭ〜１ｍＭ）でのＡｐｐＮＨｐｐＡによって誘発される電流の振幅の平均±ＳＥＭを示す棒グラフ、ｎ＝７。ここ及び下記において、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図２】ＡｐｐＮＨｐｐＡによるラットＰ２Ｘ３受容体の活性化及び阻害。上部：実験プロトコル。１０μＭのα，β−ｍｅＡＴＰの試験パルスを、２分毎に送達した。２回の対照パルスの後、異なる濃度でのＡｐｐＮＨｐｐＡを６分間加えた。Ａ、Ｂ．対照、並びに２分後の１０ｎＭ（Ａ）及び３μＭ（Ｂ）のＡｐｐＮＨｐｐＡの添加におけるＰ２Ｘ３介在性電流のトレースの例（点線のボックスによって輪郭を描いた実験プロトコルの部分に対応する）。Ｃ．異なる（１ｎＭ〜３μＭ）濃度におけるＡｐｐＮＨｐｐＡによる電流阻害の時間経過（ｎ＝４〜６）。電流振幅は、対照に対して正規化している。Ｄ．ＡｐｐＮＨｐｐＡによるＰ２Ｘ３介在性電流の活性化及び阻害についての用量反応曲線。ＡｐｐＮＨｐｐＡについての阻害曲線（ＩＣ５０＝０．２±０．０４μＭ、ｎ＝３〜６）は、活性化についての用量反応曲線（ＥＣ５０＝４１．６±１．３μＭ；ｎＨ＝１．５８±０．０５；ｎ＝８）と重複しないことを留意されたい。
【図３】ホモマーＰ２Ｘ３受容体に対するＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの阻害及びアゴニスト効果。Ａ．対照及び１μＭのＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの添加の後のＰ２Ｘ３介在性電流のトレースの例。図２において示したのと同じ実験プロトコル。１０μＭα，β−ｍｅＡＴＰの試験パルスは、２分毎に加えた（低速度）。Ｂ．Ａにおけるのと同じであるが、試験α，β−ｍｅＡＴＰパルスは、３０秒毎に加えた（高速度）。Ｃ．低速度及び高速度の活性化でのＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの阻害作用を示す棒グラフ。Ｄ．ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡによるＰ２Ｘ３介在性電流の活性化及び阻害についての用量反応曲線。ＩＣ５０＝０．５５±０．２μＭ、（ｎ＝４〜７）、ＥＣ５０＝９．３０±１．７μＭ；ｎＨ＝２．２７±０．５６；（ｎ＝５）。
【図４】ホモマーＰ２Ｘ２、Ｐ２Ｘ４及びＰ２Ｘ７受容体に対するＡｐｐＮＨｐｐＡの非阻害効果。Ａ．１μＭのＡｐｐＮＨｐｐＡの存在下及び非存在下でのラットホモマーＰ２Ｘ２受容体を発現しているＨＥＫ細胞に２秒間２分毎に加えた１０μＭのＡＴＰによって誘発された反応のトレースの例。Ｂ．１μＭのＡｐｐＮＨｐｐＡの存在下（右）及び非存在下（左）でのＰ２Ｘ２受容体の完全アゴニスト、ＡＴＰによって誘発される電流の比較。Ｃ．１μＭのＡｐｐＮＨｐｐＡの存在下及び非存在下での電流の時間経過。Ｄ．１μＭのＡｐｐＮＨｐｐＡの存在下（右）及び非存在下（左）でのラットホモマーＰ２Ｘ４及びＰ２Ｘ７受容体の完全アゴニスト、ＡＴＰによって誘発される電流の比較。実験は、図２におけるように行った。
【図５】ラット感覚ニューロンにおけるＡｐｐＮＨｐｐＡによるＰ２Ｘ３サブユニット含有受容体の選択的阻害。Ａ．ＴＧ、ＤＲＧ又はＮＧニューロンにおける、α，β−ｍｅＡＴＰによって生じた速い、混合及び遅い電流タイプを伴う細胞の相対的割合。速い、混合及び遅い電流の典型的な例を、それぞれ、パネルＢ〜Ｄにおいて示す。Ｂ〜Ｄ．それぞれ、三叉神経節（ＴＧ）、後根神経節（ＤＲＧ）及び下神経節（ＮＧ）ニューロンにおいて、１０μＭのα，β−ｍｅＡＴＰによって誘起された反応に対するＡｐｐＮＨｐｐＡ（１μＭ、６分の添加）の阻害作用を示す例。速い電流の優先的阻害に留意されたい。Ｅ〜Ｇ．ＴＧ（Ｅ）、ＤＲＧ（Ｆ）又はＮＧ（Ｇ）ニューロンにおける異なる神経節における速い（ピーク）及び遅い（残り、α，β−ｍｅＡＴＰの添加の終わり）電流に対するＡｐｐＮＨｐｐＡの阻害作用を示す棒グラフ。
【図６】足底内（右後足）へのホルマリン注射によって誘発された疼痛反応に対する皮下Ａｐ４Ａ類似体の効果。ラットに、ホルマリン溶液単独（０．５％、５０μＬ、対照）を皮下注射するか、又はホルマリン溶液及びＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ（１μＭ〜１００μＭ、１００μＬ）又はＡｐｐＮＨｐｐＡ（０．１μＭ〜１００μＭ、１００μＬ）を有する溶液を一緒に皮下注射した。同齢の対照動物に、生理食塩水を注射した。Ａ．注射された足の自発的痙動の数に対する皮下ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ（ａ）及びＡｐｐＮＨｐｐＡ（ｂ）の効果の時間経過。Ｂ．自発的痙動の整数に対するＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ（ａ、ｂ）及びＡｐｐＮＨｐｐＡ（ｃ、ｄ）の効果の棒グラフ。ホルマリン反応の急性相（０〜６分）及び強直相（７〜４５分）の間、測定を行った。Ｃ．強直相及び急性相の間のＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ（ａ）及びＡｐｐＮＨｐｐＡ（ｂ）についての用量反応曲線。
【図７】１００μＭ（１００μＬ）のＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ及びＡｐｐＮＨｐｐＡの対照注射。侵害受容行動の欠如。Ａ．注射された足の自発的痙動の数に対する皮下ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ及びＡｐｐＮＨｐｐＡの効果の時間経過。Ｂ．自発的痙動の整数に対するＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ、ＡｐｐＮＨｐｐＡ及び生理食塩水の効果の棒グラフ。
【図８】皮下Ａｐ４Ａ類似体はフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）によって誘発される温熱性痛覚過敏を低減させた。Ａ．足引っ込め潜時（ＰＷＬ）に対する１μＭ及び２０μＭ（１００μＬ）のＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ及びＡｐｐＮＨｐｐＡの効果の時間経過。Ｂ．ＰＷＬ数（integral PWL）に対するＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ及びＡｐｐＮＨｐｐＡの効果の棒グラフ。
【図９】ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの皮下投与（５０μＭ、１００μＬ）は部分的坐骨神経結紮（ＰＳＮＬ）を有するラットにおける温熱性痛覚過敏を低減させた。ＰＷＬに対する５０μＭ（１００μＬ）のＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの効果の時間経過。
【図１０】ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡのくも膜下腔内投与（２０μＭ、１００μＬ）は、足底内注射と比較して、より顕著ではない無痛を誘発した。Ａ．フロイント完全アジュバントが誘発する温熱性痛覚過敏（ハーグリーブス足底試験）に対するｉ．ｔ．ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの効果の時間経過。Ｂ．ラットＰＷＬに対するｉ．ｔ．ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの効果の棒グラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、ポリリン酸架橋によって連結している２つのヌクレオシド部分を含む化合物のファミリーであるジヌクレオシドポリリン酸を使用する。これらは、ＮｐｎＮによって表すことができ、式中、Ｎは、ヌクレオシド部分を表し、ｐは、リン酸基を表し、ｎは、リン酸基の数（例えば、２〜７）である。ジヌクレオシドポリリン酸の類似体は、ジヌクレオシドポリリン酸の構造に基づいた構造を有する（典型的には合成された）化合物であり、構造の１つ又は複数の部分が変更されている。例えば、核酸塩基、糖及び／又はリン酸の骨格は、修飾されているか、或いは別の適切な部分で部分的又は完全に置き換え得る。
【００１３】
例えば、１つ又は複数のポリリン酸鎖オキソ架橋は、化合物のインビボでの生物学的半減期を増加するために、異なる架橋で置き換えられてもよい。このような類似体は、安定性及び／又は生体適合性を実現するように設計することができる。これを達成するために、類似体は、インビボでの生体系による分解に耐性であるべきである。例えば、類似体は、増加した加水分解安定性、すなわち、特異的酵素切断（例えば、１つ若しくは複数のタイプのヌクレオチダーゼによる）及び／又は非特異的加水分解による分子の分解に対する耐性を有し得る。
【００１４】
好ましくは、化合物は、ジアデノシンポリリン酸（例えば、ＡｐｎＡタイプのもの；ｎは、２〜７である）であり、例えば、各リボース環の５’位に結合している２つ以上のホスファート残基の鎖によって架橋している２つのアデノシン部分からなる天然のプリン作動性リガンドである。特に、Ｐ１，Ｐ４−ジアデノシン四リン酸（Ａｐ４Ａ）及びＰ１，Ｐ５−ジアデノシン五リン酸（Ａｐ５Ａ）が意図される。これらは、クロム親和性細胞の分泌顆粒及びラット脳のシナプス終末において内因的に高濃度で存在する。脱分極すると、ＡｐｎＡはＣａ２＋依存性の様式で放出され、神経伝達物質としてのこれらの潜在的な役割が提案されてきた。しかし、何年の間よく知られていたにも拘らず、ＡｐｎＡの純粋な機能は、特異的酵素的切断及び非特異的加水分解性分解の両方の原因で、定義することが困難であった。ＡｐｎＡ類似体は、特異的酵素的分解及び非特異的加水分解性分解の両方に対して天然のジアデノシンポリリン酸より安定である。
【００１５】
好ましい化合物
好ましくは、本発明において用いられるジヌクレオシドポリリン酸（ＮＰｎＮタイプの）は、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2015517565.tif 000002
又は薬学的に許容されるその塩であり、
式中、Ｘ、Ｘ’及びＺは、
【化２】
2015517565.tif 000003
（式中、Ｒ１及びＲ２は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ；又はＣ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜４アミノアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択される非置換基から独立に選択され、ｎは、１、２、３、４、５及び６から選択される）から独立に選択され、
各Ｙは、＝Ｓ及び＝Ｏから独立に選択され、
Ｂ１及びＢ２は、５員〜７員の炭素−窒素ヘテロアリール基から独立に選択され、これらは、縮合されていなくともよいが、さらなる５員〜７員の炭素−窒素ヘテロアリール基に縮合していてもよく、
Ｓ１及びＳ２は、結合、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン及び式（ＩＩ）の部分
【化３】
2015517565.tif 000004
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ；又はＣ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜４アミノアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択される非置換基を表し、
ｐ及びｑは、独立に、０、１、２又は３、好ましくは０、１又は２を表し、
［リンカー］は、
（ｉ）−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ＝Ｏ−又は−ＮＨ−；
（ｉｉ）エーテル（−Ｏ−）、チオエーテル（−Ｓ−）、カルボニル（−Ｃ＝Ｏ−）又はアミノ（−ＮＨ−）連結を任意選択で含有し、又はこれらで終端しており、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、−ＮＲ５Ｒ６；又はＣ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜４アルケニルオキシ、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ２〜４ハロアルケニル、Ｃ１〜４アミノアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４アシル及びＣ１〜４アルキル−ＮＲ５Ｒ６基から選択される非置換基から選択される１つ又は複数の基で任意選択で置換され、Ｒ５及びＲ６は、同じ又は異なり、水素又は非置換Ｃ１〜２アルキルを表す、Ｃ１〜４アルキレン、Ｃ２〜４アルケニレン又はＣ２〜４アルキニレン；又は
（ｉｉｉ）水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、−ＮＲ５Ｒ６；又はＣ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜４アルケニルオキシ、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ２〜４ハロアルケニル、Ｃ１〜４アミノアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４アシル及びＣ１〜４アルキル−ＮＲ５Ｒ６基から選択される非置換基から選択される１つ又は複数の基で任意選択で置換され、Ｒ５及びＲ６は、同じ又は異なり、水素又は非置換Ｃ１〜２アルキルを表す、５〜７員のヘテロシクリル、カルボシクリル又はアリール基を表す）
から独立に選択され、
Ｖは、０、１、２、３、４及び５から選択され、
Ｕは、０、１、２、３、４及び５から選択され、
Ｗは、０、１、２、３、４及び５から選択され、
Ｖ＋Ｕ＋Ｗは、２〜７の整数である。
【００１６】
本明細書において使用する場合、Ｃ１〜４アルキル基又は部分は、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖状又は分岐状アルキル基又は部分である。Ｃ１〜４アルキル基としては、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル及びｔ−ブチルが挙げられる。
【００１７】
本明細書において使用する場合、Ｃ２〜４アルケニル基又は部分は、適用可能な場合、少なくとも１つのＥ又はＺ立体配置のどちらかの二重結合を有し、２〜４個の炭素原子を含有する、直鎖状又は分岐状アルケニル基又は部分であり、例えば、−ＣＨ＝ＣＨ２又は−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ３及び−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２である。
【００１８】
本明細書において使用する場合、Ｃ１〜６アルキレン基又は部分は、直鎖状又は分岐状アルキレン基又は部分であり、例えば、Ｃ１〜４アルキレン基又は部分である。例えば、メチレン、ｎ−エチレン、ｎ−プロピレン及び−Ｃ（ＣＨ３）２−基及び部分が挙げられる。
【００１９】
本明細書において使用する場合、Ｃ２〜６アルケニレン基又は部分は、直鎖状又は分岐状アルケニレン基又は部分であり、例えば、Ｃ２〜４アルケニレン基又は部分である。例えば、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−及び−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−が挙げられる。
【００２０】
本明細書において使用する場合、Ｃ２〜６アルキニレン基又は部分は、直鎖状又は分岐状アルキニレン基又は部分であり、例えば、Ｃ２〜４アルキニレン基又は部分である。例えば、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−及び−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−が挙げられる。
【００２１】
本明細書において使用する場合、ハロゲン原子は、塩素、フッ素、臭素又はヨウ素である。
【００２２】
本明細書において使用する場合、Ｃ１〜４アルコキシ基又はＣ２〜４アルケニルオキシ基は典型的には、それぞれ、酸素原子に結合している、前記Ｃ１〜４アルキル基又は前記Ｃ２〜４アルケニル基である。
【００２３】
ハロアルキル又はハロアルケニル基は典型的には、それぞれ、１個又は複数個の前記ハロゲン原子で置換されている、前記アルキル又はアルケニル基である。典型的には、これは１個、２個又は３個の前記ハロゲン原子で置換されている。好ましいハロアルキル基としては、−ＣＸ３（Ｘは、前記ハロゲン原子、例えば、塩素又はフッ素である）などのパーハロアルキル基が挙げられる。
【００２４】
本明細書において使用する場合、Ｃ１〜４又はＣ１〜３ハロアルキル基は、好ましくはＣ１〜３フルオロアルキル又はＣ１〜３クロロアルキル基であり、より好ましくはＣ１〜３フルオロアルキル基である。
【００２５】
本明細書において使用する場合、Ｃ１〜４アミノアルキル基は、１つ又は複数のアミノ基で置換されているＣ１〜４アルキル基である。典型的には、１つ、２つ又は３つのアミノ基で置換されている。好ましくは、単一のアミノ基で置換されている。
【００２６】
本明細書において使用する場合、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル基は、１つ又は複数のヒドロキシ基で置換されているＣ１〜４アルキル基である。典型的には、１つ、２つ又は３つのヒドロキシ基で置換されている。好ましくは、単一のヒドロキシ基で置換されている。
【００２７】
本明細書において使用する場合、Ｃ１〜４アシル基は、基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒであり、Ｒは、前記Ｃ１〜４アルキル基である。
【００２８】
本明細書において使用する場合、５〜７員のヘテロシクリル基は、ヘテロアリール基を含み、その非芳香族の意味においては、５個、６個又は７個の環原子を有し、Ｓ、Ｎ及びＯから選択される１個以上、例えば、１個又は２個のヘテロ原子、好ましくはＯを含有する飽和又は不飽和の非芳香族部分に関する。このような部分の例としては、テトラヒドロフラニル及びテトラヒドロピラニルが挙げられる。複素環式環としては、例えば、フラノース又はピラノース環がある。
【００２９】
本明細書において使用する場合、５員〜７員の炭素−窒素ヘテロアリール基は、少なくとも１個の窒素原子、例えば、１個、２個、３個又は４個の窒素原子を含有する、単環式５員〜７員の芳香族環、例えば、５員又は６員環である。５員〜７員の炭素−窒素ヘテロアリール基は、別の５員〜７員の炭素−窒素ヘテロアリール基に縮合していてもよい。
【００３０】
本明細書において使用する場合、５〜７員のカルボシクリル基は、５〜７個の炭素原子を有する非芳香族で飽和又は不飽和の炭化水素環である。好ましくは、これは５〜７個の炭素原子を有する飽和又は一不飽和の炭化水素環（すなわち、シクロアルキル部分又はシクロアルケニル部分）である。例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンテニル及びシクロヘキセニルが挙げられる。
【００３１】
本明細書において使用する場合、５〜７員のアリール基は、５〜７個の炭素原子を有する単環式５員〜７員の芳香族炭化水素環、例えば、フェニルである。
【００３２】
一態様において、Ｘ及びＸ’は、独立に、
【化４】
2015517565.tif 000005
である。
【００３３】
一態様において、Ｘ及びＸ’は、独立に、
【化５】
2015517565.tif 000006
である。
【００３４】
一態様において、Ｘ及びＸ’は、独立に、
【化６】
2015517565.tif 000007
であり、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つは、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＦである。
【００３５】
好ましくは、両方のＲ１及びＲ２は、Ｈである。
【００３６】
好ましくは、ｎは、１、２又は３であり、好ましくは１又は２である。
【００３７】
好ましくは、Ｘ及びＸ’の少なくとも１つは−Ｏ−ではない。すなわち、Ｘ及びＸ’の全てが−Ｏ−とはならない。
【００３８】
好ましくは、Ｘ及びＸ’は、ＮＨ及び
【化７】
2015517565.tif 000008
から独立に選択され、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨであり、ｎは１又は２である。
【００３９】
一態様において、少なくとも１つのＹは＝Ｓである。
【００４０】
一態様において、各Ｙ基は＝Ｓである。
【００４１】
一態様において、少なくとも１つのＹは＝Ｏである。
【００４２】
好ましくは、各Ｙ基は＝Ｏである。
【００４３】
一態様において、少なくとも１つのＺは、
【化８】
2015517565.tif 000009
である。
【００４４】
一態様において、各Ｚは、
【化９】
2015517565.tif 000010
であり、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つは、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＦである。
【００４５】
好ましくは、Ｒ１及びＲ２の両方がＨである。従って、一態様において、Ｚは、
【化１０】
2015517565.tif 000011
であり、Ｒ１及びＲ２は、両方ともＨである。
【００４６】
好ましくは、ｎは１、２又は３であり、好ましくは１又は２である。
【００４７】
一態様において、少なくとも１つのＺは−ＮＨ−である。
【００４８】
一態様において、各Ｚは−ＮＨ−である。
【００４９】
一態様において、少なくとも１つのＺは−Ｏ−である。
【００５０】
好ましくは、各Ｚは−Ｏ−である。
【００５１】
Ｂ１及びＢ２は好ましくは、プリン及びピリミジン核酸塩基、好ましくは、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、１−メチルアデニン、７−メチルグアニン、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルグアニン、５−メチルシトシン又は５，６−ジヒドロウラシルから独立に選択される。ウラシルは、Ｎ（すなわち、ウリジン構造）又はＣ（すなわち、プソイドウリジン構造）を介してＳ１又はＳ２に結合し得る。
【００５２】
好ましくは、Ｂ１及びＢ２は、アデニン、グアニン、及びウラシルから独立に選択される。
【００５３】
好ましくは、Ｂ１及びＢ２の少なくとも１つはアデニンである。
【００５４】
従って、例えば、Ｂ１及びＢ２の少なくとも１つはアデニンであり、Ｂ１及びＢ２の他方はグアニンであってもよく、或いはＢ１及びＢ２の少なくとも１つはアデニンであり、Ｂ１及びＢ２の他方はウラシルであってもよい。
【００５５】
好ましくは、Ｂ１及びＢ２は、両方ともアデニンであるか、或いはＢ１及びＢ２の１つはアデニンであり、他方はグアニンである。
【００５６】
Ｓ１及びＳ２は好ましくは、結合、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン及び式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の部分
【化１１】
2015517565.tif 000012
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ；又はＣ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜４アミノアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択される非置換基を表し、
ｐ及びｑは、独立に、０又は１を表し、
Ｑは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ＝Ｏ−、−ＮＨ−又はＣＨ２を表し、
Ａ及びＢは、独立に、水素、ヒドロキシル、ハロゲン；又はＣ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アミノアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４アシル及び−ＮＲ５Ｒ６基から選択される非置換基を表し、Ｒ５及びＲ６は、同じ又は異なり、水素又は非置換Ｃ１〜２アルキルを表す）、
【化１２】
2015517565.tif 000013
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立に、水素、ハロゲン、シアノ；又はＣ１〜３ハロアルキル、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜４アミノアルキル及びＣ１〜４ヒドロキシアルキルから選択される非置換基を表し、
Ｑは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ＝Ｏ−、−ＮＨ−又はＣＨ２を表し、
Ｒ７及びＲ８は、独立に、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、−ＮＲ５Ｒ６；又はＣ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ２〜４アルケニルオキシ、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ２〜４ハロアルケニル、Ｃ１〜４アミノアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜４アシル及びＣ１〜４アルキル−ＮＲ５Ｒ６基から選択される非置換基を表し、Ｒ５及びＲ６は、同じ又は異なり、水素又は非置換Ｃ１〜２アルキルを表し、
ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、独立に、０又は１を表す）
から独立に選択される。
【００５７】
Ｓ１及びＳ２は好ましくは、上記で述べたような式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の部分から独立に選択され、好ましくは、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立に、水素、フルオロ、クロロ、又は非置換Ｃ１〜３アルキルを表し、より好ましくは、水素を表し、
Ｑは、−Ｏ−を表し、
Ａ及びＢは、独立に、水素、ヒドロキシル、フルオロ、クロロ、メトキシ、ホルミル又はＮＨ２を表し、より好ましくは、水素又はヒドロキシルを表し、
Ｒ７及びＲ８は、独立に、水素、ヒドロキシル、フルオロ、クロロ；又はＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４ハロアルキル、Ｃ１〜４ヒドロキシアルキル及びＣ１〜４アルキル−ＮＨ２から選択される非置換基を表し、より好ましくは、水素、ヒドロキシル、又は非置換メチル、エチル、−ＣＨ２ＯＨ若しくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨを表す。
【００５８】
Ｓ１及びＳ２は好ましくは、Ｄ−リボフラノース、２’−デオキシ−Ｄ−リボフラノース、３’−デオキシ−Ｄ−リボフラノース、Ｌ−アラビノフラノース（式（ＩＩＩ）の部分に対応する）、及びこれらの開環形態（式（ＩＶ）の部分に対応する）から独立に選択し得る。
【００５９】
好ましい一実施形態において、Ｓ１及びＳ２の少なくとも１つは、Ｄ−リボフラノース、すなわち、式（ＩＩＩ’）の部分であり、Ｒ１及びＲ２は水素であり、ｐは１であり、ｑは０であり、Ｑは−Ｏ−であり、Ａ及びＢはヒドロキシルである。
【化１３】
2015517565.tif 000014
【００６０】
Ｓ１及び／又はＳ２が、開環形態であるとき、開環は好ましくは、Ｄ−リボフラノース、２’−デオキシ−Ｄ−リボフラノース、３’−デオキシ−Ｄ−リボフラノース又はＬ−アラビノフラノース環の２’及び３’位の間である。
【００６１】
好ましい一実施形態において、Ｓ１及びＳ２の少なくとも１つは、Ｄ−リボフラノースの開環形態、例えば、式（ＩＶ）において、Ｒ１及びＲ２は水素であり、ｐは１であり、ｑは０であり、Ｑは−Ｏ−であり、ｒは１であり、ｓは１であり、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＯＨである、式（ＩＶ）の部分である。
【００６２】
好ましくは、Ｓ１及びＳ２は、同じである。従って好ましくは、Ｓ１及びＳ２は、両方ともＤ−リボフラノース、又は両方とも上記のようなＤ−リボフラノースの開環形態である。
【００６３】
Ｖ、Ｕ及びＷの合計は、２、３、４、５、６又は７であり得る。
【００６４】
好ましくは、Ｖ＋Ｕ＋Ｗは４又は５である。
【００６５】
好ましくは、Ｕは０、１又は２である。
【００６６】
好ましくは、Ｖは２である。
【００６７】
好ましくは、Ｗは２である。
【００６８】
好ましい実施形態において、Ｕは、０である。従って、本発明において用られるジヌクレオシドポリリン酸は好ましくは、式（Ｉ’）の化合物であり、
【化１４】
2015517565.tif 000015
式中、全ての記号は、上記に定義されている通りであり、Ｘは−Ｏ−ではなく、Ｖ＋Ｗは２〜７の整数である。
【００６９】
従って、式（Ｉ’）におけるＶ及びＷの合計は、２、３、４、５、６又は７であり得る。好ましくは、Ｖ＋Ｗは４又は５である。好ましくは、Ｖは２であり、且つ／又はＷは２である。
【００７０】
好ましい実施形態において、各Ｙは＝Ｏであり、各Ｚは−Ｏ−である。
【００７１】
さらに好ましい実施形態において、各Ｙは＝Ｏであり、各Ｚは−Ｏ−であり、両方のＳ１及びＳ２は、上記で示したような式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の部分である。好ましくは、両方のＳ１及びＳ２は同じであり、両方ともＤ−リボフラノースであるか、或いは両方ともＤ−リボフラノースの開環形態である。従って、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は好ましくは、式（ＩＡ）又は（ＩＢ）の化合物である。
【化１５】
2015517565.tif 000016
【００７２】
好ましくは、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は、式（ＩＡ）又は（ＩＢ）においてＶ＋Ｗが４又は５である、式（ＩＡ）又は（ＩＢ）の化合物である。より好ましくは、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は、Ｂ１及びＢ２の少なくとも１つは、アデニンであるか、或いはＢ１及びＢ２の１つはアデニンであり、他方はグアニンである、式（ＩＡ）又は（ＩＢ）の化合物である。
【００７３】
従って、さらに好ましい実施形態において、各Ｙは＝Ｏであり、各Ｚは−Ｏ−であり、両方のＳ１及びＳ２は同じであり、両方ともＤ−リボフラノースであるか、或いは両方ともＤ−リボフラノースの開環形態であり、Ｂ１及びＢ２は、両方ともアデニンであるか、或いはＢ１及びＢ２の１つはアデニンであり、他方はグアニンである。よって、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は好ましくは、式（ＩＣ）〜（ＩＦ）のジヌクレオシドポリリン酸化合物である。
【化１６】
2015517565.tif 000017
【００７４】
好ましくは、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、式（ＩＣ）〜（ＩＦ）においてＶ＋Ｗが４又は５である、式（ＩＣ）〜（ＩＦ）の化合物である。従って、本発明の好ましい態様において、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、Ａｐ４Ａ類似体、Ａｐ５Ａ類似体、Ａｐ４Ｇ類似体及びＡｐ５Ｇ類似体からなる群から選択される。
【００７５】
好ましい実施形態において、Ｖ及びＷは同じである。従って、式（Ｉ’）及び（ＩＡ）〜（ＩＦ）の上記の化合物において、Ｖ及びＷは好ましくは、それぞれ２である。さらなる好ましい実施形態において、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、対称的である。
【００７６】
本発明の好ましい態様において、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ、ＡｐｐＮＨｐｐＡ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＡジオール、ＡジオールｐｐＮＨｐｐＡジオール、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＧ、ＡｐｐＮＨｐｐＧ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＧジオール及びＡジオールｐｐＮＨｐｐＧジオールからなる群から選択される。
ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ：
【化１７】
2015517565.tif 000018
ＡｐｐＮＨｐｐＡ：
【化１８】
2015517565.tif 000019
ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＡジオール：
【化１９】
2015517565.tif 000020
ＡジオールｐｐＮＨｐｐＡジオール：
【化２０】
2015517565.tif 000021
ＡｐｐＣＨ２ｐｐＧ：
【化２１】
2015517565.tif 000022
ＡｐｐＮＨｐｐＧ：
【化２２】
2015517565.tif 000023
ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＧジオール：
【化２３】
2015517565.tif 000024
ＡジオールｐｐＮＨｐｐＧジオール：
【化２４】
2015517565.tif 000025
【００７７】
本出願の実施例において示されるように、このようなジヌクレオシドポリリン酸類似体は、脱感作の増強を介してＰ２Ｘ３受容体を強力に阻害又はダウンレギュレートし、インビボで炎症性疼痛の動物モデルに対して強力な抗侵害受容活性(antinociceptive activities)を発揮する。
【００７８】
一般式（Ｉ）のジヌクレオシドポリリン酸及びこれらの調製は、ＷＯ２００６／０８２３９７に開示されている。
【００７９】
しかし、ＷＯ２００６／０８２３９７は、Ｐ２Ｘ３受容体に対するジヌクレオシドポリリン酸類似体の結合特性、特に、Ｐ２Ｘ３受容体に対するジヌクレオシドポリリン酸類似体の阻害及び部分（又はスーパー）アゴニスト特性を開示していない。ＷＯ２００６／０８２３９７は、急性痛覚過敏と比較したとき、慢性痛覚過敏に対するこれらの特異的作用を開示していない。また、ＷＯ２００６／０８２３９７は、海馬調製物によって中枢神経系に対するＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの効果を開示しているが、末梢神経系に対するジヌクレオシドポリリン酸類似体の特異的効果を開示していない。
【００８０】
機序
本発明の化合物は、（例えば、もっぱら）Ｐ２Ｘ３受容体に作用することができ、その（Ｐ２Ｘ３）受容体（のみ）について選択的であるようである。換言すると、本化合物は、（Ｐ２Ｘ受容体ファミリーを考えるとき）Ｐ２Ｘ３受容体に対してのみ作用し、或いはＰ２Ｘ３受容体に対してのみ選択的であり得る。本化合物は、Ｐ２Ｘ４及び／若しくはＰ２Ｘ７受容体に適切に結合せず、Ｐ２Ｘ４及び／若しくはＰ２Ｘ７受容体に対して選択的でなく、並びに／又はＰ２Ｘ４及び／若しくはＰ２Ｘ７受容体のどちらに対しても又はどちらかに対して作用しない。本化合物は同様に、Ｐ２Ｘ２受容体に対して実際に作用又は結合のどちらもしない。
【００８１】
本化合物は、アンタゴニストとして作用し得ない。代わりに、本化合物はアゴニスト、又はスーパーアゴニストとして作用することができる。本化合物は、高親和性脱感作（ＨＡＤ）方式を介して又は使用して、関連する受容体に対して作用すると考えられる。本化合物は受容体に結合すると考えられるが、受容体から特に急速に脱離又は離脱しない。従って、作用機序は、受容体が一度興奮し、次いで、例えば、かなりの期間遮断され得ることを意味すると考えられる。したがって、これは、従来技術の知見、及び典型的な受容体拮抗阻害を示す従来技術の（疼痛阻害）化合物とは異なる。
【００８２】
このように、本化合物は、高親和性脱感作（ＨＡＤ）阻害機序を介して作用するように思われる。これは、特に、疼痛を阻害（したがって、疼痛の治療において使用）することができ得る化合物についての新規な機序であるように思われる。従って、本発明はさらに、ＨＡＤ機序を介して作用することができ、又は（１つ若しくは複数の受容体で）ＨＡＤ機序に関与する化合物に関する。このように、本発明において使用される疼痛阻害性化合物は、これらのクラスにおける最初のものであり、完全に新規な機序を介して作用すると考えられ、これにより、従来技術の疼痛阻害方法と区別される。ＨＡＤ機序を例２で詳述していることに留意されたい。
【００８３】
本発明の化合物は、Ｐ２Ｘ３に対する高度の親和性を有し、恐らく従来技術における他の同様の化合物よりも親和性が高いと考えられる。本発明の化合物はＰ２Ｘ４及び／若しくはＰ２Ｘ７受容体のどちらに対しても又はどちらかに対して作用せず、Ｐ２Ｘ２受容体に対してさえも作用しないようであるため、本発明の化合物は疼痛を治療するのに特に適したものとなる。化合物及び治療はＣＮＳに関連するものではなく、局所処置において使用できることに留意されたい。
【００８４】
本発明者らはこの度、種々のジヌクレオシドポリリン酸類似体がＰ２Ｘ３受容体をインビトロで強力に阻害できることを示した。本発明者らはまた、種々のジヌクレオシドポリリン酸類似体が、炎症性疼痛の異なるインビボでの動物モデルに基づいて、中等度から慢性の疼痛に対する抗侵害受容活性を発揮し、末梢神経系に対して作用できることを示した。これらのデータを、本出願の「実施例」セクション、特に、ＨＡＤ機序を詳述している例２においてより詳細に記載する。
【００８５】
Ｐ２Ｘ３サブユニットを含む受容体の群は、ホモマーＰ２Ｘ３受容体及びヘテロマーＰ２Ｘ２／３受容体を含み、本出願において「Ｐ２Ｘ３受容体」と称する。好ましくは、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は、Ｐ２Ｘ３受容体を標的とし、他のＰ２Ｘ受容体、例えば、ホモマーＰ２Ｘ２受容体、及び／又はＰ２Ｘ４若しくはＰ２Ｘ７受容体に対して殆ど又は全く活性を示さない。
【００８６】
本出願の実施例において示されるように、安定なジヌクレオシドポリリン酸類似体は、痛覚を誘発する巨視的受容体介在性電流(macroscopic receptor-mediated currents)を生じさせるのに必要とされる閾値未満の濃度で投与されたとき、疼痛伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体を阻害した。理論に束縛されるものではないが、これらの結果は、これらの類似体が、脱感作した受容体の状態を安定化するのを誘発することによって効果を媒介し、ＨＡＤ阻害機序を介して作用することを示唆する。インビトロでの試験の結果は、行動試験(behavioural tests)において炎症性疼痛を低減させるこれらの２つの安定なジヌクレオシドポリリン酸類似体の能力と相関した。
【００８７】
好ましい態様において、本明細書に記載する使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体は、Ｐ２Ｘ３受容体の部分又はスーパーアゴニストである。本類似体が示す部分アゴニスト活性は、例えば、公知の完全Ｐ２Ｘ３アゴニスト、例えば、α，β−メチレン−ＡＴＰより低い活性であり得る（例えば、公知の完全Ｐ２Ｘ３アゴニストの活性の５０％未満の活性）。
【００８８】
特に、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は、より高い濃度でＰ２Ｘ３受容体の部分（又はスーパー）アゴニスト活性を示し、より低い濃度でアンタゴニスト（又は阻害）活性を示し得る。このように、例えば、本類似体は、飽和濃度までの濃度で部分アゴニスト活性を示し得る。他方、本類似体は、より低い濃度で、例えば、痛覚を誘発する巨視的受容体介在性電流を生じさせるのに必要とされる閾値未満の濃度で投与されたとき（例えば、本明細書に記載された量で投与されたとき）、Ｐ２Ｘ３受容体の阻害活性を示し得る。
【００８９】
Ｗｉｌｄｍａｎら（１９９９）及びＭｃＤｏｎａｌｄら（２００２）は、ジアデノシンポリリン酸が、Ｐ２Ｘ３受容体の完全アゴニストであり得ることを教示する。これらの文献は、本発明において示すような、Ｐ２Ｘ３受容体に対するＮｐｎＮ類似体の部分アゴニスト特性を開示していない。
【００９０】
脱感作の促進によって作動する有望な鎮痛剤の主要な必要条件は、アゴニスト活性を低減させ、安定な効果を誘発することである。本発明者らはいくつかの安定なＮｐｎＮ類似体を調製し、これらが天然及び組換えＰ２Ｘ３受容体の単なる部分アゴニストであることを示した。対照的に、上で述べたように、これらは、痛覚を誘発する巨視的受容体介在性電流を生じさせるのに必要とされる閾値未満の濃度で投与されたとき、Ｐ２Ｘ３受容体を効率的に阻害した。この阻害作用は、ＡＴＰ又はα，β−ｍｅＡＴＰアゴニストがホモマーＰ２Ｘ２受容体又はヘテロマーＰ２Ｘ２／Ｐ２Ｘ３受容体によって媒介される主に遅いタイプの電流を生じさせることができる下神経節ニューロン（nodose ganglia neurons）において殆ど存在しなかった。対照的に、阻害は、ホモマーＰ２Ｘ３受容体サブタイプを優先的に発現している三叉神経節ニューロン(trigeminal ganglia neurons)において強力であった。したがって、この実験において、ＮｐｎＮ類似体は、ホモマーＰ２Ｘ３サブユニット含有受容体に対して選択的阻害効果を媒介するようであった。
【００９１】
上記の効果を考慮して、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は好ましくは、疼痛の治療に使用される。例えば、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、ヒト又は動物体における疼痛を治療するために、薬学的に許容される媒体と共に投与することができる。
【００９２】
特に、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は、ホモマーＰ２Ｘ３受容体の阻害に使用することができる。従って、本発明の類似体は、ホモマーＰ２Ｘ３受容体の阻害による疼痛の治療に使用することができる。
【００９３】
本発明はまた、有効量の（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、うまく伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体（好ましくは、ホモマーＰ２Ｘ３受容体）を介して、疼痛を阻害（予防及び／又は低減を含めた）する方法、並びに疼痛伝達ＡＴＰ−開口型Ｐ２Ｘ３受容体（好ましくは、ホモマーＰ２Ｘ３受容体）を阻害するための医薬の製造における（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。本発明はまた、有効量の（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、疼痛を治療する方法、及び疼痛を治療するための医薬の製造における（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００９４】
疼痛のタイプ及び治療
疼痛は、異なるタイプに分類することができる。侵害受容性疼痛は、傷害、疾患又は炎症に反応して疼痛受容体によって媒介される。神経因性疼痛は、末梢から脳への疼痛伝播系への損傷によってもたらされる神経障害である。心因性疼痛は、実際の精神障害と関連する疼痛である。
【００９５】
疼痛は、その持続時間によって慢性又は急性であり得る。慢性疼痛は一般に、長期間、例えば、治癒の予想される期間を超えて継続した疼痛と説明することができる。典型的には、慢性疼痛は、３カ月以上継続する疼痛である。３０日未満継続する疼痛は、急性疼痛として分類することができ、中間の持続時間の疼痛は、中等度又は亜急性疼痛として説明することができる。
【００９６】
本発明によって処置される疼痛は、例えば、炎症（例えば、がん、関節炎又は外傷から）、背痛（坐骨神経痛による背痛を含めた）、圧迫神経（trapped nerve）、関節痛、がん関連疼痛、歯痛、子宮内膜症、出産に関連する疼痛（例えば、分娩前及び／又は分娩後）、手術後疼痛又は外傷の１つ又は複数と関連する症状に関連し得る。
【００９７】
上記のように、本明細書に記載されたジヌクレオシドポリリン酸類似体は、Ｐ２Ｘ３受容体（特に、ホモマーＰ２Ｘ３受容体）に対して特に活性である。したがって、これらは、疼痛の治療のための公知の薬剤と比較して、低量で投与することができる。
【００９８】
従って、疼痛の治療（予防及び／又は軽減を含む）のために、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は好ましくは、約０．０１〜１０００ｎｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは、０．１〜５００ｎｍｏｌ／ｋｇの量で投与され、例えば、０．０１〜５００μｇ／ｋｇ、好ましくは、０．１〜２５０μｇ／ｋｇの量で投与される。一実施形態において、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は好ましくは、０．０１〜１０μｇ／ｋｇ、好ましくは、０．０５〜５μｇ／ｋｇ、より好ましくは、０．１〜２μｇ／ｋｇの量で投与される。
【００９９】
本発明の１つの好ましい実施形態において、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、中等度から慢性の疼痛の治療に使用される。中等度から慢性の疼痛は、侵害受容性機序及び／又は神経因性機序によって媒介し得る。好ましくは、中等度から慢性の疼痛は、例えば、炎症（例えば、がん又は関節炎からの）、背痛、関節痛、がん関連疼痛、歯痛、子宮内膜症及び手術後疼痛からなる群から選択される症状の少なくとも１つと関連する侵害受容性疼痛であり得る。特に、中等度から慢性の疼痛は、炎症、背痛、関節炎又はがん関連疼痛、特に、炎症又はがん関連疼痛と関連し得る。
【０１００】
従って、本発明はまた、中等度から慢性の疼痛、特に、中等度から慢性の神経因性疼痛又は中等度から慢性の侵害受容性疼痛、例えば、炎症（例えば、がん又は関節炎からの）、背痛、関節痛、がん関連疼痛、歯痛、子宮内膜症及び手術後疼痛からなる群から選択される症状の少なくとも１つと関連する中等度から慢性の侵害受容性疼痛の治療において使用するための、（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩に関する。特に、中等度から慢性の疼痛は、炎症、背痛、関節炎又はがん関連疼痛、特に、炎症又はがん関連疼痛と関連し得る。
【０１０１】
本発明はまた、有効量の（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩を投与することを含む中等度から慢性の疼痛を治療する方法、及び中等度から慢性の疼痛の治療のための医薬の製造における（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。特に、中等度から慢性の疼痛は、中等度から慢性の神経因性疼痛、又は中等度から慢性の侵害受容性疼痛、例えば、炎症（例えば、がん又は関節炎からの）、背痛、関節痛、がん関連疼痛、歯痛、子宮内膜症及び手術後疼痛からなる群から選択される症状の少なくとも１つと関連する中等度から慢性の侵害受容性疼痛である。中等度から慢性の疼痛は、特に、炎症、背痛、関節炎又はがん関連疼痛に関連し、特に、炎症又はがん関連疼痛と関連し得る。
【０１０２】
投与量
中等度から慢性の疼痛の治療のために、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は好ましくは、約０．０１〜１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは、０．１〜１０ｎｍｏｌ／ｋｇの量で投与される。従って、本化合物は、０．０１〜１０μｇ／ｋｇ、好ましくは、０．０５〜５μｇ／ｋｇ、より好ましくは、０．１〜２μｇ／ｋｇの量で投与し得る。
【０１０３】
ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、好ましくは、上述した好ましい類似体の１つである。本発明は、特に、中等度から慢性の疼痛の治療において使用するためのジヌクレオシドポリリン酸類似体にあって、好ましくは、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ、ＡｐｐＮＨｐｐＡ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＡジオール、ＡジオールｐｐＮＨｐｐＡジオール、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＧ、ＡｐｐＮＨｐｐＧ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＧジオール及びＡジオールｐｐＮＨｐｐＧジオールからなる群から選択されるジヌクレオシドポリリン酸類似体に関する。
【０１０４】
中等度から慢性の疼痛の治療に使用されるとき、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ、ＡｐｐＮＨｐｐＡ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＡジオール、ＡジオールｐｐＮＨｐｐＡジオール、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＧ、ＡｐｐＮＨｐｐＧ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＧジオール及びＡジオールｐｐＮＨｐｐＧジオールからなる群から選択される化合物は好ましくは、薬学的に許容される媒体と共に投与され、治療を必要としている対象に投与される化合物の用量は、約０．０１〜１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは、０．１〜１０ｎｍｏｌ／ｋｇである。従って、本化合物は、０．０１〜１０μｇ／ｋｇ、好ましくは、０．０５〜５μｇ／ｋｇ、より好ましくは、０．１〜２μｇ／ｋｇの量で投与し得る。
【０１０５】
例えば、約７０ｋｇの典型的なヒトのために投与される化合物の量は、約１〜約１００ｎｍｏｌ、より好ましくは約１０〜約１００ｎｍｏｌ、さらにより好ましくは約１０〜約５０ｎｍｏｌであり得る。
【０１０６】
別の実施形態において、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は、急性疼痛又は亜急性疼痛の治療に使用される。従って、本発明はまた、有効量の（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、急性疼痛又は亜急性疼痛を治療する方法、及び急性疼痛又は亜急性疼痛の治療のための医薬の製造における（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【０１０７】
本発明はまた、急性疼痛又は亜急性疼痛の治療に使用するための、（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩に関する。
【０１０８】
急性疼痛又は亜急性疼痛は好ましくは、手術後疼痛、歯痛、出産に関連する疼痛、外傷又は炎症（例えば、外傷からもたらされる）と関連し得る。
【０１０９】
急性疼痛又は亜急性疼痛の治療のためには、本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は好ましくは、約５０〜１０００ｎｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは、５０〜５００ｎｍｏｌ／ｋｇ、より好ましくは、７５〜３００ｎｍｏｌ／ｋｇの量で投与される。従って、本化合物は、約１０〜５００μｇ／ｋｇ、好ましくは、５０〜２５０μｇ／ｋｇの量で投与し得る。
【０１１０】
ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、好ましくは、上述した好ましい類似体の１つである。本発明は、特に、急性疼痛又は亜急性疼痛の治療に使用するためのジヌクレオシドポリリン酸類似体にあっては、好ましくは、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ、ＡｐｐＮＨｐｐＡ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＡジオール、ＡジオールｐｐＮＨｐｐＡジオール、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＧ、ＡｐｐＮＨｐｐＧ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＧジオール及びＡジオールｐｐＮＨｐｐＧジオールからなる群から選択されるジヌクレオシドポリリン酸類似体であり、これらは、好ましくは上述した量で投与される。
【０１１１】
本発明のジヌクレオシドポリリン酸類似体は、種々の剤形で投与し得る。従って、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、経口的に、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、水性若しくは油性の懸濁剤、分散性粉末剤又は顆粒剤として投与し得る。ジヌクレオシドポリリン酸類似体はまた、非経口的に、皮下、経皮的（注射による）、静脈内、筋肉内、胸骨内又は注入技術のいずれによっても投与し得る。ジヌクレオシドポリリン酸類似体はまた、直腸に、例えば、坐剤の形態で投与し得る。医師は、それぞれの特定の患者について必要とされる投与経路を決定することができる。好ましくは、ジヌクレオシドポリリン酸類似体は、皮下注射によって投与される。
【０１１２】
別の実施形態において、本発明は、０．０１〜３５００μｇの量の（本明細書に記載された）ジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩、及び薬学的に許容される添加剤を含む組成物に関する。組成物中のジヌクレオシドポリリン酸類似体の最大量は、好ましくは、１５００μｇ、好ましくは、１０００μｇ、より好ましくは、５００μｇ、特に好ましくは、２５０μｇ又は１５０μｇである。
【０１１３】
ヒトへの投与のために、７０ｋｇの体重に基づくと、本組成物は好ましくは、０．５〜３５００μｇの量のジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩を含む。好ましい最大量は、上記の通りである。ｎｍｏｌで表現すると、本組成物中のジヌクレオシドポリリン酸類似体の量は、０．５〜５０００ｎｍｏｌ、好ましくは、１〜２５００ｎｍｏｌ、好ましくは、５〜１０００ｎｍｏｌ、より好ましくは、５〜５００ｎｍｏｌ、特に好ましくは、１０〜１００ｎｍｏｌであり得る。
【０１１４】
当然ながら動物へ使用するためには、動物の体重に応じて上記の量を再較正することが必要である。例えば、動物用の典型的な組成物は、０．０１〜２００μｇ、好ましくは、０．０５〜１００μｇの量でジヌクレオシドポリリン酸類似体又は薬学的に許容されるその塩を含み得る。
【０１１５】
好ましくは、組成物中のジヌクレオシドポリリン酸類似体は、上述した好ましい類似体の１つであり、特に、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ、ＡｐｐＮＨｐｐＡ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＡジオール、ＡジオールｐｐＮＨｐｐＡジオール、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＧ、ＡｐｐＮＨｐｐＧ、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＧジオール又はＡジオールｐｐＮＨｐｐＧジオールである。
【０１１６】
組成物
好ましくは、本組成物は、皮下注射用に製剤化される。
【０１１７】
ジヌクレオシドポリリン酸類似体の製剤は、例えば、まさにその薬剤の性質、医薬又は動物薬としての使用の何れが意図されているかなどの要因によって決まる。本発明における使用のための薬剤は、同時、別々又は逐次使用のために製剤化し得る。
【０１１８】
ジヌクレオシドポリリン酸類似体は典型的には、薬学的に許容される添加剤（例えば、担体又は賦形剤）と共に、本発明における投与のために製剤化される。医薬担体又は賦形剤は、例えば、等張液であり得る。例えば、固体経口形態は、活性化合物と一緒に、賦形剤、例えば、ラクトース、デキストロース、サッカロース、セルロース、トウモロコシ若しくはジャガイモデンプン；滑沢剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム又はステアリン酸カルシウム、及び／又はポリエチレングリコール；結合剤；例えば、デンプン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース又はポリビニルピロリドン；脱凝集剤、例えば、デンプン、アルギン酸、アルギネート又はデンプングリコール酸ナトリウム；飽和剤（effervescing mixtures）；色素；甘味剤；湿潤剤、例えば、レシチン、ポリソルベート、ラウリルスルファート；並びに、一般に、医薬製剤において使用される無毒性で薬理学的に不活性の物質を含有し得る。このような医薬調製物は、例えば、混合、顆粒化、錠剤化、糖コーティング、又はフィルムコーティングプロセスによって公知の方法で製造できる。
【０１１９】
経口投与のための液体分散物は、シロップ剤、乳剤又は懸濁剤であり得る。シロップ剤は、担体として、例えば、サッカロース、又はグリセリン及び／若しくはマンニトール及び／若しくはソルビトールを有するサッカロースを含有し得る。
【０１２０】
懸濁剤及び乳剤は、担体として、例えば、天然ガム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又はポリビニルアルコールを含有し得る。筋肉内注射のための懸濁剤又は溶液剤は、活性化合物と一緒に、薬学的に許容される担体、例えば、滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール（例えば、プロピレングリコール）、及び必要に応じて、適切な量の塩酸リドカインを含有し得る。
【０１２１】
経口投与のための製剤は、制御放出製剤として製剤し得、例えば、これらは、大腸における制御放出用に製剤化し得る。
【０１２２】
静脈内投与又は注入のための溶液剤は、担体として、例えば、滅菌水を含有し得、好ましくは、これらは、無菌の等張生理食塩水の形態であり得る。
【０１２３】
ジヌクレオシドポリリン酸類似体の用量は、様々なパラメーターによって、特に、使用される物質；治療される患者の年齢、体重及び状態；投与経路；並びに必要とされるレジメンによって決定し得る。
【０１２４】
さらに、医師は任意の特定の患者のための必要とされる投与経路及び投与量を決定することができる。典型的な１日用量は、処置される個体の年齢、体重及び状態、状態（例えば、疼痛）のタイプ及び重症度、並びに投与頻度及び経路によって、体重１ｋｇ毎に約０．０１〜１０００μｇである。毎日の投与量レベルは、例えば、０．０１〜５００μｇ／ｋｇであり得る。中等度から慢性の疼痛の治療において、適切な毎日の投与量レベルは、約０．０１〜２０μｇ／ｋｇ、好ましくは、０．０５〜１５μｇ／ｋｇ、好ましくは、０．１〜１０μｇ／ｋｇであり得る。急性疼痛又は亜急性疼痛の治療において、適切な毎日の投与量レベルは、約１０〜１０００μｇ／ｋｇ、好ましくは、５０〜５００μｇ／ｋｇであり得る。
【０１２５】
本明細書に記載のジヌクレオシドポリリン酸類似体は、単独で又は組み合わせて投与し得る。これらはまた、別の薬理学的活性剤、例えば、疼痛の治療のための別の薬剤（例えば、オピオイド、非オピオイド又はＮＳＡＩＤ）と組み合わせて投与し得る。例えば、本発明による使用のためのジヌクレオシドポリリン酸類似体は、オピオイド、例えば、オキシコドン（例えば、ＯｘｙＣｏｎｔｉｎ（登録商標）；制御放出オキシコドンＨＣｌ；Ｐｕｒｄｕｅ  Ｐｈａｒｍａ  Ｌ．Ｐ．）と組み合わせることができる。薬剤の組合せは、同時、別々又は逐次使用のために製剤化し得る。
【０１２６】
この明細書において記載した全ての公開資料及び特許出願は、本発明が属する技術分野の当業者のレベルを示す。全ての公開資料及び特許出願は、それぞれの個々の公開資料又は特許出願が参照により具体的且つ個別に組み込まれているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２７】
上記の発明を、理解の目的のために例示及び例によって少し詳しく記載したが、特定の変更及び修正を添付の特許請求の範囲内で行い得ることは当業者には明らかである。
【０１２８】
下記の実施例は、本発明を例示する。
［実施例］
Ａｐ４Ａ類似体の合成
ＡｐｐＮＨｐｐＡ及びＡｐｐＣＨ２ｐｐＡは、ＨＰＬＣによる厳密な精製を伴う（Ｗｒｉｇｈｔら、２００３、２００４及び２００６）、従前に記載されているＬｙｓＵが媒介する生合成過程の発展を使用して調製した（Ｍｅｌｎｉｋら、２００６、ＷＯ２００６／０８２３２９７）。
【０１２９】
細胞培養及びトランスフェクション
培養液中のラットの三叉神経節（ＴＧ）、下神経節（ＮＧ）又は後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンは、従前に記載されているようにして調製した（Ｓｏｋｏｌｏｖａら、２００１；Ｓｉｍｏｎｅｔｔｉら、２００６）。ニューロンをポリ−Ｌ−リシン（０．２ｍｇ／ｍＬ）でコーティングしたペトリ皿上に蒔き、５％ＣＯ２を含有する雰囲気下で１〜２日間培養した。細胞は、処理をしないときは、細胞を蒔いた２日以内に使用した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、従前に報告したように調製し（Ｆａｂｂｒｅｔｔｉら、２００４；Ｓｏｋｏｌｏｖａら、２００４）、ｐＩＲＥＳ２−ＥＧＦＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）にサブクローニングしたラット完全長Ｐ２Ｘ３ｃＤＮＡでトランスフェクトした。
【０１３０】
電気生理学的記録
（ｍＭで）１５２のＮａＣｌ、５のＫＣｌ、１のＭｇＣｌ２、２のＣａＣｌ２、１０のグルコース、及び１０のＨＥＰＥＳを含有する対照溶液で連続的に灌流（２ｍＬ／分で）させる間に、三叉神経節、下神経節、ＤＲＧニューロン又はＨＥＫ細胞を、全細胞構成で記録した。ＮａＯＨでｐＨを７．４に調節し、グルコースでモル浸透圧濃度を３２０ｍＯｓＭに調節した。パッチピペットは、（ｍＭで）１３０のＣｓＣｌ、０．５のＣａＣｌ２、５のＭｇＣｌ２、５のＫ２ＡＴＰ、０．５のＮａＧＴＰ、１０のＨＥＰＥＳ及び５のＥＧＴＡを含有する細胞内液で充填したとき３〜４ＭＷの抵抗を有した。ＣｓＯＨでｐＨを７．２に調節した。選択的Ｐ２Ｘ３受容体アゴニストであるα，β−メチレン−ＡＴＰ（α，β−ｍｅＡＴＰ；外部ＡＴＰアーゼ加水分解に対して耐性、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）への反応を、ＥＰＣ−９増幅器及びＨＥＫＡ  Ｐａｔｃｈ  Ｍａｓｔｅｒソフトウェア（ＨＥＫＡ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して測定した。細胞を、−７０ｍＶで電位固定した。大部分の細胞において、直列抵抗は８０％補償した。アゴニストの半有効濃度（ＥＣ５０）を決定するために、α，β−ｍｅＡＴＰについての用量反応曲線を、同じ細胞に異なるアゴニスト用量を添加し、これらを論理方程式に当て嵌めることによって構築した（Ｏｒｉｇｉｎ８．０、Ｍｉｃｒｏｃａｌ、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ）。
【０１３１】
薬物送達
アゴニスト及びアンタゴニストを、細胞の１００〜１５０μｍ近くに置いた急速な灌流系（Ｒａｐｉｄ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｈａｎｇｅｒ  ＲＳＣ−２００；ＢｉｏＬｏｇｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｇｒｅｎｏｂｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）によって通常２秒間加えた。細胞を横切る溶液交換についての時間は、液間電位差測定で判断すると概ね３０ミリ秒であった。細胞培養のための酵素を含めて全ての化学物質は、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）からであった。培養培地は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）から得た。
【０１３２】
データ分析
反応のピーク振幅を、ＨＥＫＡ  Ｐａｔｃｈ  Ｍａｓｔｅｒソフトウェアを使用して測定した。各アゴニストについて、用量反応プロットを、最大反応に関してデータを正規化(normalizing)することによって構築した。全てのデータは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．（ｎ＝細胞の数）として提示し、統計的有意性は、対応のあるｔ検定（パラメトリックデータについて）又はマンホイットニー順位和検定（ノンパラメトリックデータについて）によって評価する。シグモイド関数を伴うデータの最良適合を、Ｏｒｉｇｉｎ８．０ソフトウェアを使用してそれぞれの対照適合と比較した。Ｐ＜０．０５の値は、統計的有意差を示すものとして許容した。
【０１３３】
ホルマリン試験における侵害受容行動の測定
ホルマリン試験の実験を、従前に記載されている方法によって４０±５ｇの体重の２１日齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラットで行った（Ｓｉｍｏｎｅｔｔｉら、２００６；Ｙｅｇｕｔｋｉｎら、２００８）。手短に言えば、右後足の背面へのホルマリンの注射（０．９％生理食塩水中の２５μＬの０．５％溶液）の前に、動物をアクリルの観察チャンバーに少なくとも１時間順化させた。同齢の対照動物に生理食塩水（１００μＬ）を注射した。注射の直後に、各動物を観察チャンバーに戻し、その行動の特徴を４５分間記録した。本発明者らは、一貫して観察されるタイプの反応である注射された足の自発的痙動に気づいた。自己開発したコンピュータソフトウェアを使用して、痙攣の数をそれぞれ５分のブロックについて測定した。
【０１３４】
（例１）
ラットホモマーＰ２Ｘ３受容体に対して作用するＡｐｐＮＨｐｐＡのアゴニスト活性
ラットホモマーＰ２Ｘ３受容体をインビトロで発現しているＨＥＫ細胞を使用した実験において、類似体ＡｐｐＮＨｐｐＡは、０．１μＭ又は１μＭの濃度で膜電流を誘発しないことが見出された。しかし、小さな遅い脱感作電流は、１０μＭ又は１００μＭのＡｐｐＮＨｐｐＡによって生じた（図１Ａ）。
【０１３５】
ＡｐｐＮＨｐｐＡがＰ２Ｘ３受容体の完全又は部分アゴニストであるかを試験するために、本発明者らは、誘発された反応を、完全Ｐ２Ｘ３アゴニストであるα，β−ｍｅＡＴＰからの反応と比較した（図１Ｂ）。同じ細胞において、たとえ１ｍＭの飽和濃度でもＡｐｐＮＨｐｐＡによって生じる電流応答は、１０μＭのα，β−ｍｅＡＴＰによって誘発された反応の４１．２±１３％であることが観察された（ｎ＝３、対応のあるｔ検定によってＰ＝０．００９）（図１Ｃ）。これらの結果は、ＡｐｐＮＨｐｐＡが、高濃度でホモマーＰ２Ｘ３受容体の部分アゴニスト活性を有するにすぎないことを示す。
【０１３６】
（例２）
Ｐ２Ｘ３受容体活性に対するＡｐｐＮＨｐｐＡ及びＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの阻害（ダウンレギュレート）効果
高親和性脱感作（ＨＡＤ）によるＡｐｐＮＨｐｐＡ及びＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの阻害（抑制）効力を評価した。本発明者らは、１０μＭのα，β−ｍｅＡＴＰを使用するＰ２Ｘ３受容体の周期的な２秒長（２分のインターパルス間隔）の活性化の間に、異なる実験において両方の合成類似体を加えた（プロトコルについては、図２の上部を参照されたい）。１０ｎＭのＡｐｐＮＨｐｐＡをα，β−ｍｅＡＴＰの第２の試験パルスの後６分間適用したとき、それに続く反応の振幅は殆ど未変化であったためＨＡＤは誘発されないようであった（図２Ａ）。しかし、３μＭのＡｐｐＮＨｐｐＡが投与されたとき、試験反応に対して強力（殆ど完全）な阻害（抑制）が誘発された（図２Ｂ）。とりわけ、ＡｐｐＮＨｐｐＡが活性化閾値未満の濃度（１００ｎＭ；図２Ｄを参照されたい）で投与されたとき、強力なＨＡＤ反応が誘発され、試験反応は３８．２±８．５％（ｎ＝７、Ｐ＝０．００２）に低減した。ＡｐｐＮＨｐｐＡのこれらの阻害効果についての時間経過も示され（図２Ｃ）、飽和（薬物添加の６分後）において測定した濃度依存性は、０．２０μＭのＩＣ５０値を示す（図２Ｄ）。重要なことに、ＡｐｐＮＨｐｐＡによって媒介されるＰ２Ｘ３受容体の活性化は非常により高い濃度の類似体を必要とするようであったため、ＡｐｐＮＨｐｐＡについての阻害曲線は活性化曲線と重複しなかった（ＥＣ５０＝４１．６±１．３μＭ；ｎＨ＝１．５８±０．０５；ｎ＝８；図２Ｄ）。
【０１３７】
これらの研究と並行に、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの阻害（ダウンレギュレート）効果も、１０μＭのα，β−ｍｅＡＴＰを２分間適用した試験によって調査した（ＩＣ５０＝０．５５μＭ）。ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡを投与する効果は、ＡｐｐＮＨｐｐＡを投与する効果と同様であった（図３）が、アゴニスト効果はより強力であった（ＥＣ５０＝９．３０±１．７μＭ；ｎＨ＝２．２７±０．５６；ｎ＝５；図３Ｄ）。アゴニスト添加の頻度の増加に伴って（３０秒の間隔；図３Ｂ、Ｃ）、脱感作状態にあるＰ２Ｘ３受容体の画分が増加したとき、ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの阻害（ダウンレギュレート）効果も有意に増加し（低速度での６１．３±５％に対して８１±３％の抑制、Ｐ＝０．０１４、ｎ＝７）、ＨＡＤ機序を介して作動するＰ２Ｘ３受容体に対する使用依存性の抑制効果と一致したことにも留意すべきである。
【０１３８】
ＨＥＫ２９３細胞において発現している組換えホモマーＰ２Ｘ２受容体による別のセットの実験において、ＡｐｐＮＨｐｐＡの添加は、Ｐ２Ｘ２受容体介在性電流に対して（又は、Ｐ２Ｘ４若しくはＰ２Ｘ７に対して）効果を生じさせることは観察されなかった。したがって本発明者らが観察したＡｐ４Ａ類似体の効果における選択性を示す（図４）。
【０１３９】
全体で、これらのデータは、Ａｐ４Ａの類似体が、脱感作状況の受容体の安定化によって組換えＰ２Ｘ３受容体の選択的阻害（ダウンレギュレーション）を誘発することを示す。
【０１４０】
（例３）
ラット培養感覚ニューロンにおける天然Ｐ２Ｘ３受容体のモデュレーション
ＡｐｐＮＨｐｐＡの作用を、三叉神経節（ＴＧ）、後根神経節（ＤＲＧ）及び下神経節（ＮＧ）ニューロンにおいて別々に、α，β−ｍｅＡＴＰが誘発する電流に対して試験した。１μＭで投与したＡｐｐＮＨｐｐＡの阻害効果を、３種の神経節ニューロンの全てを使用して評価した。
【０１４１】
インサイチュでのＡＴＰへの反応の時間経過は、Ｐ２Ｘ２及びＰ２Ｘ３サブユニットの差別的な寄与に強く依存する。速い脱感作（速い）反応は、推定するところ、Ｐ２Ｘ３受容体の寄与を反映し、一方、遅延（遅い）及び複合（混合）反応は、Ｐ２Ｘ２Ｒ及び／又はヘテロマーＰ２Ｘ２／Ｐ２Ｘ３受容体の寄与を反映する。α，β−ｍｅＡＴＰの添加によって、速い、混合及び遅い反応を示す細胞の割合は、ニューロン細胞集団によって異なった。ＴＧニューロンでは、α，β−ｍｅＡＴＰは、主に速い（細胞の５６％）及び混合反応を誘発した（細胞の４４％）が、遅いタイプの反応を誘発しなかった（細胞の０％、ｎ＝１８細胞）。速い、混合及び遅い反応を伴う細胞の割合は、ＤＲＧにおいて５０％、５０％、及び０％（ｎ＝８）であり、ＮＧニューロンにおいて２２％、０％、７８％（ｎ＝１１）であった（図５Ａ）。ＡｐｐＮＨｐｐＡ（１μＭ）の投与は、速い反応を選択的に阻害（抑制）し（図５Ｂ、Ｃ）、遅延反応に対して控えめな阻害効果のみであった（図５Ｄ）。ピーク電流の阻害（抑制）は、ＴＧにおいて８０．３±４．４％（ｎ＝９、Ｐ＝０．０００４）、ＤＲＧにおいて７９．２±５．６％（ｎ＝６、Ｐ＝０．０２）、及びＮＧニューロンにおいて１６．８±１１．８％のみ（ｎ＝９、Ｐ＞０．０５）であった（図５Ｅ〜Ｇ）。これは、ＴＧ及びＤＲＧニューロンの集団におけるＰ２Ｘ３Ｒサブユニットによって媒介される速い電流を伴う細胞の相対的により大きな割合と一致する。この知見と一致して、遅延残留成分は、より阻害されなかった（阻害は、それぞれ、ＴＧ、ＤＲＧ及びＮＧニューロンにおいて１５±６％、１８±６％及び２±４％であった；図５Ｅ〜Ｇ）。したがって、天然ニューロンについてのデータは、組換えホモマーＰ２Ｘ３受容体で得た結果と一致している。
【０１４２】
（例４）
ホルマリン試験における加水分解耐性Ａｐ４Ａ類似体の抗侵害受容効果
ＡｐｐＮＨｐｐＡ及びＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの効果を、炎症性疼痛モデルにおいてラットの行動学的反応について検査した。げっ歯類の後足への希釈されたホルマリンの注射は、即時（急性相）及び強直（炎症相）成分からなる二相性侵害受容反応を生じさせる。ホルマリン反応の第１相（すなわち、注射の０〜５分後）は、疼痛受容体に対するホルマリンの直接の効果が関与し、一方、第２の強直相（すなわち、注射の７〜４５分後）の間の動物の行動の変化は、第１相の間の反復刺激によって誘発される機序を介した侵害受容性ニューロン及び脊髄ニューロンの感作によって発生する痛覚過敏によってもたらされる。
【０１４３】
ラットの炎症を起こした足中へのＡｐｐＮＨｐｐＡ又はＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ（１００μＬ）及びホルマリンの同時注射は、ホルマリンの注射によって誘発される侵害防御事象(nocifensive events)の数を強力に低減させた。第２（強直）相におけるＡｐｐＮＨｐｐＡについてのＩＣ５０値は０．２５±０．０６μＭ、ｋＨ＝０．８９±０．１８であり、一方、第１（急性）相におけるＩＣ５０値は＞１００μＭであった。比較すると、第２の相におけるＡｐｐＣＨ２ｐｐＡについてのＩＣ５０値は、０．５±０．０６μＭ、ｋＨ＝０．８９±０．１８であり、一方、第１相におけるＩＣ５０値は３１．９±２２μＭ；ｋＨ＝０．８２±０．０９であることが見出された。特にＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ投与の後に、侵害防御行動は、ホルマリンアッセイの第１（急性）相（図６）と比較して、第２（強直）相において６０倍より効果的に低減した。対照条件下で、化合物自体の注射の後、侵害受容行動の兆候は観察されなかった（図７）。
【０１４４】
別の関連する実験において、ＡジオールｐｐＣＨ２ｐｐＡジオール及びＡｐｐＣＨ２ｐｐＧを、ホルマリン疼痛試験におけるこれらの抗侵害受容能力について試験した。
【０１４５】
データを下記の表１において要約する、ＩＣ５０は濃度として表し、ｎｍｏｌ／ｋｇで計算する。
【０１４６】
【表１】
2015517565.tif 000026
【０１４７】
実際に、４０ｇのラット体重を想定したＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ及びＡｐｐＮＨｐｐＡの有効濃度を再計算すると、それぞれ、１．２８±０．０６ｎｍｏｌ／ｋｇ及び０．６３±０．２３ｎｍｏｌ／ｋｇであり、これらによって、本発明の化合物が、Ａ−３１７４９１などの他のＰ２Ｘ３アンタゴニストより約５，０００倍強力であることが明確に実証される（Ｊａｒｖｉｓら、２００２）。
【０１４８】
約４０ｇであるラットの体重から約７０ｋｇである平均的なヒトの体重へと計算すると、治療を必要としているヒトに投与される化合物の概ねの指標的な用量は、表２において示すように推定することができた。
【０１４９】
【表２】
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【０１５０】
（例５）
ハーグリーブス試験における加水分解耐性Ａｐ４Ａ類似体の抗侵害受容効果
ハーグリーブス足底試験において、抗侵害受容効果を、フロイント完全アジュバントで誘発した温熱性痛覚過敏下にあるラットの炎症を起こした後足へＡｐｐＮＨｐｐＡ及びＡｐｐＣＨ２ｐｐＡを足底内注射（１００μＬ）した後に観察した（図８）。
【０１５１】
（例６）
部分的坐骨神経結紮（ＰＳＮＬ）試験におけるＡｐｐＣＨ２ｐｐＡの抗侵害受容効果
坐骨神経幹の３３〜５０％のきつい結紮を伴うＰＳＮＬは、神経因性疼痛モデルである。本発明者らは、ＰＳＮＬを有するラットの温熱性痛覚過敏に対して５０μＭのＡｐｐＣＨ２ｐｐＡ（１００μＬ）を皮下注射した。図９は、足引っ込め潜時(paw withdrawal latency)（ＰＷＬ）の時間経過測定を示し、化合物の抗侵害受容効果及び抗神経因性効果を示す。結果は、平均＋／−Ｓ．Ｅ．Ｍとして表す。このモデルにおいて、抗侵害受容効果は、６２％である。
【０１５２】
（例７）
ＡｐｐＣＨ２ｐｐＡのくも膜下腔内及び足底内投与の抗侵害受容効果の比較
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）下のハーグリーブス足底試験において、２０μＭのＡｐｐＣＨ２ｐｐＡのくも膜下腔内注射は、足底内オプションの後に観察されるものよりも弱い遅延した抗侵害受容効果を示した。図１０Ａは、ＣＦＡが誘発する温熱性痛覚過敏に対するＡｐｐＣＨ２ｐｐＡのくも膜下腔内注射の効果の時間経過を示す。図１０Ｂは、ラットＰＷＬに対するＡｐｐＣＨ２ｐｐＡのくも膜下腔内投与の効果の棒グラフの表示を示す。
【０１５３】
それぞれ、２７％及び５３％の抗侵害受容効果を、くも膜下腔内及び足底内投与後に測定した。これらのデータは、化合物の局所末梢作用と一致し、効果がＣＮＳにおいて発現しているＰ２Ｘ３受容体によって媒介されないという事実と一致する。
【０１５４】
Ｐ２Ｘ３受容体を標的とする重要な利点は、これらが感覚神経を超える限定された分布を有し、脳の高次中枢(the higher centres of the brain)において有意な発現を有さないことである。これに基づいて、本化合物は、多くの疼痛治療の利用をさもなければ実質的に制限する厄介又は重大なＣＮＳ副作用を生じさせないことが期待されている。Ａｐ４Ａ類似体は、侵害受容経路の活性化を末梢で防止し、それによって慢性疼痛における疼痛信号の増幅に寄与し得る高次構造における病的な順応（pathologic plasticity）及び感作(sensitization)への進展をもたらす、下流のシナプスへの疼痛信号の伝播を防止することは非常に重要であるように思われる。
【０１５５】
本実験において、局所末梢足底内注射は、くも膜下腔内注射に続いて観察されるものより２倍高い効果を誘発した。これらのデータは、末梢Ｐ２Ｘ３が媒介する機序の関与と一致する。
【０１５６】
上記の明細書に記載されている全ての公開資料は、参照により本明細書に組み込まれている。本発明の記載した方法及び系の様々な改変及び変形は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなしに当業者には明らかであろう。本発明を特定の好ましい実施形態に関連して記載してきたが、特許請求された本発明は特定のこのような実施形態に過度に限定されるではないと理解すべきである。実際に、化学、生物学又は関連する分野における当業者には明らかである本発明を行うための記載したモードの様々な修正は、下記の特許請求の範囲内であることが意図される。
【０１５７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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