(57)【要約】（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形と、それを製造する方法とが開示される。この結晶形は、Ｘ線回折パターンが６．３±０．２及び１９．２±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又はＸ線回折パターンが６．５±０．２及び２２．０±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形である。本発明の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形には、優れた物理化学特性、良好な安定性、高純度、良好な再現性、さらに産業規模での生産により適しているという利点がある。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形であって、
（ａ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２及び１９．２±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２及び２２．０±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
である、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項２】
（ａ）Ｘ線回折パターンが３．２±０．２、６．３±０．２、１３．２±０．２、１４．６±０．２、１９．２±０．２及び３２．６±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２、１０．０±０．２、１３．７±０．２、１６．８±０．２、１７．１±０．２、２２．０±０．２及び２４．９±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
である、請求項１に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項３】
（ａ）Ｘ線回折パターンが３．２±０．１、６．３±０．１、１３．２±０．１、１４．６±０．１、１９．２±０．１及び３２．６±０．１の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．１、１０．０±０．１、１３．７±０．１、１６．８±０．１、１７．１±０．１、２２．０±０．１及び２４．９±０．１の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
である、請求項２に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項４】
（ａ）Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが図１に本質的に示されているものであるか、又は、
（ｂ）Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが図２に本質的に示されているものである、
請求項３に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項５】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形を製造する方法であって、該（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩は特に（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸アルカリ土類金属塩であり、該（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩は極性媒体から結晶化されたものであり、超音波が結晶化プロセスに使用される、方法。
【請求項６】
前記結晶化プロセスが３０℃〜６０℃又は６０℃〜１００℃の範囲の温度で行われる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記結晶化プロセスが、
ａ）（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸を極性媒体に添加するとともに、塩基で中和する工程と、
ｂ）アルカリ土類金属塩又はアルカリ土類金属塩溶液を添加する工程と、
ｃ）３０℃〜６０℃又は６０℃〜１００℃の範囲の温度まで加熱する工程と、
ｄ）結晶化するのに超音波を導入するとともに、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶を単離する工程と、
を含む、請求項５又は６に記載の方法。
【請求項８】
工程ａ）の前記極性媒体が水、脱イオン水、又は水及び水と均一に混合することが可能な有機溶媒により形成される溶液である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
工程ａ）の前記塩基が（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸とともに塩を形成することが可能な無機塩基又は有機塩基であり、該無機塩基が、アルカリ金属塩基又はアルカリ土類金属塩基、炭酸塩及び重炭酸塩から選択され、該有機塩基がアンモニア、アミン、ピリジン又はピペラジンから選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記無機塩基が、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、アンモニア、メチルアミン、４−ジメチル−ピリジン又はピペラジンから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
工程ｂ）の前記アルカリ土類金属塩がカルシウム塩、マグネシウム塩、ストロンチウム塩及びバリウム塩から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
工程ｂ）の前記アルカリ土類金属塩がカルシウム塩及びストロンチウム塩から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記超音波の出力密度が０．０１ｗ／ｍｌ〜１．０ｗ／ｍｌである、請求項５〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記超音波の出力密度が０．０４ｗ／ｍｌ〜０．６０ｗ／ｍｌである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
請求項５〜１４のいずれか一項に記載の方法により製造される、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項１６】
（ａ）Ｘ線回折パターンが６．３±０．２及び１９．２±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２及び２２．０±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
である、請求項１５に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項１７】
主活性成分として請求項１〜４のいずれか一項に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１８】
主活性成分として請求項１〜４のいずれか一項に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形を含む製剤。
【請求項１９】
活性医薬成分としての薬剤又は食品添加物の調製における請求項１〜４のいずれか一項に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化合物の結晶形の分野に属するものであり、具体的には（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形と、それを製造する方法と、その使用とに関する。
【背景技術】
【０００２】
活性医薬成分の結晶形は、その生物活性、バイオアベイラビリティ、溶解性、安定性及び貯蔵寿命に密接に関連する。そのため、新たな薬物の研究及び開発中の結晶形のスクリーニングはもっとも重要なタスクの１つである。その薬物が長く市場に出回っているものだとしても、その薬物のより有効な結晶形の探求は依然として、製薬会社が強く追い求めている目標である。
【０００３】
５−メチルテトラヒドロ葉酸は、１９５９年、Donaldson et al.によってウマ肝臓からバリウム塩の形で初めて単離され、Ｐｒｅｆｏｌｉｃ−Ａと名付けられ、１９６１年、化学的方法によって合成された（非特許文献１）。
【０００４】
５−メチルテトラヒドロ葉酸分子は２つのキラル炭素原子を有し、そこではグルタミン酸部位でのキラル炭素原子の立体配置が確実に存在しており、６位のキラル炭素原子は２つの立体配置、Ｒ配置及びＳ配置を有することから、５−メチルテトラヒドロ葉酸はジアステレオマー混合物の形で使用されている。２つの異性体はｉｎ  ｖｉｖｏでの酵素による効果が異なっており、６位の炭素原子がＳ配置の化合物は良好な有効性を示すが、対して６位の炭素原子がＲ配置の化合物には有効性がないことが報告されている。
【０００５】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸の化学名は、（６Ｓ）−Ｎ［４−［［（２−アミノ−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキソ−５−メチル−６−プテリジニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸である（以下、省略して（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦと称する）。構造式を下記式１に示す：
【化１】
2015506941.tif 000002
【０００６】
（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦ及びその塩は非常に不安定で容易に分解するものであり、特に酸素及び水分に対する感受性が高い（非特許文献２）。空気中、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦ及びその塩は容易に、５−メチルジヒドロ葉酸及び／又は葉酸等へと酸化される。そのため、品質基準を満たすような高純度及び高安定性のバルク医薬化成品又は食品添加物を調製することは困難である。
【０００７】
（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦの物理特性及び化学特性に起因して、従来の結晶化プロセスでは（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦの安定な結晶形を調製することは困難である。（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦが製造され、その配合物が調製されてここ数十年は、抗酸化の目的を達成するのに、大抵の場合で還元剤、例えばビタミンＣ又は２−メルカプトエタノールが添加されている。
【０００８】
特許文献１では、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩の安定な結晶形を調製する方法が報告されている。この方法には、初めに非晶質（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩を準備する工程と、その後１００℃の沸騰水に移し溶液を形成する工程と、室温に冷却して一晩置く工程とが含まれる。回収された固体は安定な結晶生成物であるといえる。しかしながら、関連する結晶パラメータは特許文献１では報告されていない。
【０００９】
特許文献２では、安定性が極めて高い（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩の結晶形と、それを調製する方法とが開示されている。（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦナトリウム塩と塩化カルシウムとを約９０℃の極性溶媒中で熱処理に供することで、それぞれ６．３、１３．３、１６．８及び２０．１という２θ値を有するＩ型、５．３、６．９、５．７及び２１．１という２θ値を有するＩＩ型、６．８、１０．２、１５．４及び２２．５という２θ値を有するＩＩＩ型、並びに６．６、１５．９、２０．２及び２２．５という２θ値を有するＩＶ型である、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩の４種の安定な結晶形が得られる。
【００１０】
特許文献３では、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦの結晶形を原材料として使用し、塩化カルシウムを低速結晶化のために添加する、安定な非晶質（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩を調製する方法が開示されている。特許文献３における結晶化プロセス全体は非常に複雑であり、結晶化時間は１６時間〜１８時間であることから、製品手順における生産能力が低減している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第５２２３５００号
【特許文献２】米国特許第６４４１１６８号
【特許文献３】国際公開第２００８１４４９５３号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】K.O. Donaldson et al., Fed.Proc, (1961), 20, 453
【非特許文献２】A. L. Fitzhugh, Pteridines 1993, 4(4), 187-191
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
驚くべきことに今回、塩の形成中に結晶化を補助するのに超音波を用いることによって、安定性が高く、化学的純度及び光学純度が良好な（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形を得ることができることが見出された。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の目的は、従来技術の不利点を克服するために、良好な安定性、高純度及び良好な再現性を有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の新規の結晶形を提供することである。
【００１５】
好ましくは、本発明は、Ｘ線回折パターンが６．３±０．２及び１９．２±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形を説明する。
【００１６】
好ましくは、本発明は、Ｘ線回折パターンが６．５±０．２及び２２．０±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形を説明する。
【００１７】
Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが３．２±０．２、６．３±０．２、１３．２±０．２、１４．６±０．２、１９．２±０．２及び３２．６±０．２の角度２θで回折ピークを有するのが好ましい。
【００１８】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが６．５±０．２、１０．０±０．２、１３．７±０．２、１６．８±０．２、１７．１±０．２、２２．０±０．２及び２４．９±０．２の角度２θで回折ピークを有するのが好ましい。
【００１９】
好ましくは、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが３．２±０．１、６．３±０．１、１３．２±０．１、１４．６±０．１、１９．２±０．１及び３２．６±０．１の角度２θで回折ピークを有し、又は好ましくは、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが６．５±０．１、１０．０±０．１、１３．７±０．１、１６．８±０．１、１７．１±０．１、２２．０±０．１及び２４．９±０．１の角度２θで回折ピークを有する。
【００２０】
本発明の別の目的は、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の上記結晶形を製造する方法を提供することである。
【００２１】
本発明の第３の目的は、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の上記結晶形の医薬組成物を提供することである。
【００２２】
本発明の第４の目的は、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の上記結晶形の使用を提供することである。
【００２３】
本発明の目的は下記の方法に従って達成することができる：
【００２４】
Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形である、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形を提供する。
【００２５】
一態様において、本発明はＣ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形を提供し、ここでＣｕ−Ｋａ放射線を使用することにより、そのＸ線回折パターンは、６．３±０．２度及び１９．２±０．２度の２θで回折ピークを有し、特に３．２±０．２、６．３±０．２、１３．２±０．２、１４．６±０．２、１９．２±０．２及び３２．６±０．２の２θで１つ又は複数の回折ピークを有し、好ましくは３．２±０．１、６．３±０．１、１３．２±０．１、１４．６±０．１、１９．２±０．１及び３２．６±０．１の２θで１つ又は複数の回折ピークを有する。Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形のＸ線回折パターンは、高結晶度を示唆する強い回折ピーク及び低いバックグランドスペクトルを示す。
【００２６】
Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の更なるＸ線回折パターンを図１に本質的に示す。Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形の化学的純度は更に９９．０％を上回る。
【００２７】
別の態様において、本発明は（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形を提供し、ここでＣｕ−Ｋａ放射線を使用することにより、そのＸ線回折パターンは、６．５±０．２度及び２２．０±０．２度の２θで回折ピークを有し、特に６．５±０．２、１０．０±０．２、１３．７±０．２、１６．８±０．２、１７．１±０．２、２２．０±０．２及び２４．９±０．２の２θで１つ又は複数の回折ピークを有し、好ましくは６．５±０．１、１０．０±０．１、１３．７±０．１、１６．８±０．１、１７．１±０．１、２２．０±０．１及び２４．９±０．１の２θで１つ又は複数の回折ピークを有する。（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形のＸ線回折パターンは、高結晶度を示唆する強い回折ピーク及び低いバックグランドスペクトルを示す。
【００２８】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の更なるＸ線回折パターンを図２に本質的に示す。
【００２９】
本発明では、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形の含水率は１０％〜１８％、更には１５％〜１７％である。
【００３０】
更に別の態様では、本発明は超音波の補助によって極性媒体から（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩を結晶化することを含む、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩を製造する方法を提供する。
【００３１】
更に別の態様では、本発明は特に下記の工程を含む（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩を製造する方法を提供する：
（１）完全に溶解するまでの極性媒体中での（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸の塩基による中和。極性媒体は水、脱イオン水、又は水及び水と均一に混合することが可能な有機溶媒により形成される溶液であっても、塩であってもよく、極性媒体は水及び脱イオン水であるのが好ましい。塩基は（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸とともに塩を形成することが可能な無機塩基又は有機塩基であり、無機塩基はアルカリ金属塩基又はアルカリ土類金属塩基、炭酸塩及び重炭酸塩から選択され、有機塩基はアンモニア、アミン、ピリジン又はピペラジンから選択され、ここでは水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、アンモニア、メチルアミン、４−ジメチル−ピリジン又はピペラジンが好ましい。
（２）アルカリ土類金属塩又はアルカリ土類金属塩溶液の添加。アルカリ土類金属塩は、極性媒体に可溶性であるか又は一部溶解している無機塩又は有機塩、例えばカルシウム塩、マグネシウム塩、ストロンチウム塩、バリウム塩を指し、塩化カルシウム、塩化カルシウム六水和物及び塩化ストロンチウム六水和物が好ましい。
（３）３０℃を超える温度、特に３０℃〜６０℃又は６０℃〜１００℃の温度への加熱。
（４）超音波及び結晶化の導入、並びに（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩結晶の単離。
【００３２】
超音波技術は単純で費用のかからない技法であり、安全かつ便利に用いられる。一方で、超音波は結晶の核形成及び成長を増強することができる。結晶化プロセスでは、超音波の導入によって、キャビテーション現象が引き起こされ、キャビテーション気泡が破裂すると、或る特定のマイクロジェットが生じ、そのマイクロジェットによって或る特定サイズの結晶粒が粉砕され、粉砕された結晶の一部が結晶成長の種として働くことで、結晶の成長が促される。他方では、結晶化プロセスにおいて、超音波は触媒に相当するものであり、並進運動、回転運動及び反転運動によって分子運動を活発化させることで、系全体の結晶化速度が増大し、結晶化時間が短縮される。超音波は生成物の粒径分布を改善することもでき、超音波の出力を増大させることで、結晶粒子は縮小傾向を示す。他の試薬を添加せず、また汚染物質が結晶化プロセスに導入されないことから、超音波を用いることで、非常に純粋な結晶性物質を調製することができ、これは純度要件が非常に厳格な一部の物質、特に薬剤製品及び食品にとって非常に重要なことである。刺激による結晶化開始方法及び種装入による結晶化開始方法等の他の結晶化開始方法と比べて、超音波結晶化に要求される過飽和の程度は低く、成長速度が高速であり、得られる結晶が均一であり、完全なものであり、かつ清浄であり、結晶サイズ分布範囲が小さく、変動係数が低い。
【００３３】
超音波は結晶分野において１９２７年より使用されている。近年では、更に医薬産業及び精密化学産業において超音波の利用が推進されている。Ishtiaq et al.は、医薬分野における超音波の適用を検討している（World Applied sciences Journal (2009), 6(7), 856-893）。しかしながら今までのところ、医薬産業では僅か数件の文献及び特許、例えばパロキセチン、アスパルテーム、アジピン酸、臭化水素酸フェノテロールでしか、超音波結晶化技法は開示及び適用されていない（Organic Process Research & Development 2005, 9, 923-932）。
【００３４】
本発明者らは、５−メチルテトラヒドロ葉酸及びその塩の結晶化の分野において初めて超音波を適用している。本発明者らは、実験において超音波の出力を０．０１Ｗ／ｍｌ〜１．０Ｗ／ｍｌにすると、得られる結晶が均一であり、完全なものであり、かつ清浄であり、結晶サイズ分布範囲が小さく、純度が高く最大で９９．０％を超えることを見出している。超音波の出力は０．０４Ｗ／ｍｌ〜０．６０Ｗ／ｍｌであるのが好ましい。
【００３５】
工程（１）における塩基による中和は一般的に、約７．０のｐＨ値への中和、一般的に６．５〜８．５のｐＨ値への中和、好ましくは７．０〜７．５のｐＨ値への中和、最も好ましくは７．０のｐＨ値への中和を指す。塩基は直接添加しても、溶液（例えば水溶液）の形で添加してもよい。この方法には極性媒体の量に関する特別な要件はなく、一般的な反応又は結晶化媒体に係る量が適している。
【００３６】
アルカリ土類金属塩溶液を工程（２）で使用する場合、概して５％〜５０％のアルカリ土類金属塩の水溶液、好ましくは２５％〜５０％のアルカリ土類金属塩の水溶液が使用される。
【００３７】
工程（３）における加熱温度は３０℃〜６０℃又は６０℃〜１００℃、好ましくは４０℃〜８０℃、より好ましくは６５℃〜７０℃である。
【００３８】
工程（４）では、超音波結晶化及び結晶の単離後、水による洗浄及び乾燥（２０℃〜４０℃の温度での真空乾燥）の工程が行われる。
【００３９】
超音波を用いた（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形の調製は自然状態で行うことも又は対応する（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩種を導入することにより行うこともできる。
【００４０】
別の態様では、本発明は、当業者が、当該技術分野における知識に基づき、本発明の組成物に更に、薬学的に許容可能な賦形剤又は担体を含ませることができることを理解することができることから、少なくとも１つの上記の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩を含む組成物に関する。担体には、希釈剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤及び抗酸化剤が含まれ、これらの賦形剤は既存の従来的な賦形剤である。本組成物の製剤形態は、対応する配合物に合わせた方法を採用することにより調製された経口用固形製剤又は注射液、例えば錠剤、カプセル、口腔崩壊錠、ロゼンジ、持続放出製剤、注射液及び凍結乾燥粉末である。
【００４１】
有効量の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形を含む製剤が提供される。
【００４２】
別の態様では、本発明は薬剤、食品添加物又は栄養補助食品の調製における上で規定された少なくとも１つの（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩及び／又は組成物の使用を開示しており、ここで薬剤、食品添加物又は栄養補助食品は５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の投与によってプラスの影響を受ける欠陥又は疾患の予防及び／又は治療に使用される。
【００４３】
単なる例示的なものではあるが、上で規定される本発明の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩及び／又は組成物を、薬剤、食品添加物又は栄養補助食品の調製に使用することができる。薬剤、食品添加物又は栄養補助食品は、神経疾患、例えば認知症及び空胞性脊髄症に伴う亜急性脳炎；生理的及び病理的な血管障害及び心血管障害、例えば早発性閉塞性動脈疾患、幼少年期の重度な血管疾患、進行性動脈狭窄、間欠性跛行、腎血管性高血圧、虚血性脳血管疾患、早発性の閉塞性網膜動脈及び網膜静脈疾患、閉塞性大脳動脈疾患、閉塞性末梢動脈疾患、並びに血栓塞栓症及び／又は虚血性心疾患により引き起こされる早死；自己免疫疾患、例えば乾癬、セリアック病、関節炎及び炎症状態；葉酸欠乏、腸吸収不良により引き起こされる巨赤芽球性貧血の予防及び／又は治療に使用され、葉酸拮抗薬（例えばメトトレキサート、ピリメタミン又はトリメトプリム）用の解毒剤として使用され；メトトレキサート過剰投与又は高用量治療により引き起こされる深刻な毒性効果の予防、女性の流産リスク及び／又は神経管欠損、裂溝（cleft）欠損及び／又は口蓋欠損を抱える胎児の発生リスクの低減、ホモシステインレベル及び／又は代謝の維持及び／又は正常化に使用され；ＤＮＡ及びＲＮＡの合成及び／又は機能及び／又は変異の変化、並びに細胞の合成の変化；並びにうつ病の予防／治療に使用される。
【００４４】
本発明の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩は長期持続性の化学的安定性を示し、４０℃の温度及び６０％の相対湿度で空気中に長期間曝された後、結晶形の色はほとんど変化せず、これは医薬製剤における（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の適用に非常に重要なことである。
【００４５】
稀有に高い化学的安定性に加えて、本発明の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩は良好な溶解速度を有し、２５℃の温度の水中において、１分以内に迅速に飽和状態に達することができることにも留意されたい。高い溶解速度は、注射液等の非経口投与用の製剤の生産性を改善することにより、工業生産を促進させることができるだけでなく、活性薬剤の高い溶解速度が胃腸管壁を通した活性薬剤の吸収速度を改善させることから、経口製剤にすることにより、薬剤の経口投与において重要な生物薬剤的利点をもたらすこともできる。さらに、本発明の結晶形には、高結晶度、均一な粒子分布、平滑表面、及び最大で９９．０％を超える高い化学的純度という利点がある。
【００４６】
本発明の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形を製造する方法には、反応工程が単純であり、汚染が起こらず、得られる（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の新規の結晶形が、高い化学的安定性、高純度、高い溶解速度及び高いバイオアベイラビリティを有するという利点があり、このことから結晶性の（６Ｓ）−５−メチル−テトラヒドロ葉酸塩を製造する新規の方法が提供される。
【００４７】
本発明の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形には、優れた物理化学特性、良好な安定性、高純度、良好な再現性、さらに産業規模での生産により適しているという利点がある。
【００４８】
本開示は、例示のみを目的とし、本開示を限定するものではない本明細書の下記に与えられる詳細な説明からより完全に理解される。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形のＸ線回折パターンを示す図である。
【図２】（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形のＸ線回折パターンを示す図である。
【図３】本発明の製造方法によって得られるＣ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形の粒径分布を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
更なる記載なしで、これまでの記載を踏まえて、当業者は本発明を最大限に実行することができる。下記の好ましい具体的な実施形態は例示に過ぎず、本発明の開示を限定するものでは決してない。
【００５１】
実施形態１
１５．０ｇの（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦを３２５ｍｌの脱イオン水に添加して、７．８のｐＨ値まで中和するために、１０％  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら添加したところ、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦが完全に溶解した。次に、３７．５ｇの塩化カルシウム溶液（９．０ｇの塩化カルシウムを含有する）を添加して、得られる反応溶液を７２℃の温度で出力密度が０．０４Ｗ／ｍｌの超音波反応器に移し、４０分の超音波反応後、反応溶液を濾過し、水、エタノール及びアセトンでそれぞれ洗浄した。２５℃で真空乾燥した後、１３．５ｇの白色のＣ型の（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩を得た。化学的純度は９９．２５％（ＨＰＬＣにより検出）であり、含水率は１０．６７％である。
【００５２】
実施形態２
１０．０ｇの（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦを２５０ｍｌの水に添加して、７．４のｐＨ値まで中和するために、１０％  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら添加したところ、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦが完全に溶解した。次に、２５ｇの塩化カルシウム溶液（６．０ｇの塩化カルシウムを含有する）を添加して、得られる反応溶液を６０℃の温度で出力密度が０．０３Ｗ／ｍｌの超音波反応器に移し、４０分の超音波反応後、反応溶液を濾過し、水及びアセトンで洗浄した。３０℃で真空乾燥した後、９．２ｇの白色のＣ型の（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩を得た。化学的純度は９９．０１％（ＨＰＬＣにより検出）であり、含水率は１５．８％である。
【００５３】
実施形態３
１０．０ｇの（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦを１５０ｍｌの水に添加して、７．４のｐＨ値まで中和するために、アンモニアを撹拌しながら添加したところ、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦが完全に溶解した。次に、１２ｇの塩化カルシウム溶液（３．０ｇの塩化カルシウムを含有する）を添加して、得られる反応溶液を４０℃の温度で出力密度が０．０５Ｗ／ｍｌの超音波反応器に移し、１００分の超音波反応後、反応溶液を濾過し、水及びアセトンで洗浄した。２５℃で真空乾燥した後、９．０ｇの白色のＣ型の（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩を得た。化学的純度は９９．６０％（ＨＰＬＣにより検出）であり、含水率は１７．７６％である。
【００５４】
実施形態４
４０．０ｇの（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦを１０００ｍｌの水に添加して、７．８のｐＨ値まで中和するために、１０％  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら添加したところ、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦが完全に溶解した。次に、９６ｇの塩化カルシウム溶液（２４ｇの塩化カルシウムを含有する）を添加して、得られる反応溶液を９０℃の温度で出力密度が０．５６Ｗ／ｍｌの超音波反応器に移し、３０分の超音波反応後、反応溶液を濾過し、水及びアセトンで洗浄した。２５℃で真空乾燥した後、３６．０ｇの白色のＣ型の（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩を得た。化学的純度は９９．７７％（ＨＰＬＣにより検出）であり、含水率は１６．３９％である。
【００５５】
実施形態５：ストロンチウム塩
６．０ｇの（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦを１５０ｍｌの水に添加して、７．３のｐＨ値まで中和するために、１０％  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら添加したところ、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦが完全に溶解した。次に、７．２９ｇの塩化ストロンチウム溶液（１．８ｇの塩化ストロンチウムを含有する）を添加して、得られる反応溶液を７０℃の温度で出力密度が０．３０Ｗ／ｍｌの超音波反応器に移し、２０分の超音波反応後、反応溶液を濾過し、水及びアセトンで洗浄した。２５℃で真空乾燥した後、４．２ｇの白色の（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦストロンチウム塩を得た。化学的純度は９７．５７％（ＨＰＬＣにより検出）であり、含水率は１５．０２％である。
【００５６】
実施形態６
９．０ｇの（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦを２２５ｍｌの水に添加して、７．１のｐＨ値まで中和するために、１０％  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら添加したところ、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦが完全に溶解した。次に、１０．２ｇの塩化カルシウム溶液（２．７ｇの塩化カルシウムを含有する）を添加して、得られる反応溶液を７０℃の温度で出力密度が０．２０Ｗ／ｍｌの超音波反応器に移し、２０分の超音波反応後、反応溶液を濾過し、水及びアセトンで洗浄した。２５℃で真空乾燥した後、６．１ｇの白色のＣ型の（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩を得た。化学的純度は９９．０８％（ＨＰＬＣにより検出）であり、含水率は１５．２０％である。
【００５７】
実施形態７
１８．０ｇの（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦを４５０ｍｌの水に添加して、７．３のｐＨ値まで中和するために、１０％  ＮａＯＨ溶液を撹拌しながら添加したところ、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦが完全に溶解した。次に、２１．６ｇの塩化カルシウム溶液（５．４ｇの塩化カルシウムを含有する）を添加して、得られる反応溶液を７０℃の温度で出力密度が０．０４Ｗ／ｍｌの超音波反応器に移し、３０分の超音波反応後、反応溶液を濾過し、水及びアセトンで洗浄した。２５℃で真空乾燥した後、１３．９ｇの白色のＣ型の（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩を得た。化学的純度は９９．５３％（ＨＰＬＣにより検出）であり、含水率は１６．４％である。
【００５８】
実施形態８
２．０ｇの（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦを５０ｍｌの水に添加して、７．２のｐＨ値まで中和するために、水酸化ナトリウムを撹拌しながら添加したところ、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦが完全に溶解した。次に、２ｇの塩化カルシウム溶液（０．５ｇの塩化カルシウムを含有する）を添加して、得られる反応溶液を５０℃の温度で出力密度が０．０５Ｗ／ｍｌの超音波反応器に移し、６０分の超音波反応後、反応溶液を濾過し、水及びアセトンで洗浄した。４０℃で真空乾燥した後、１．０ｇの白色のＣ型の（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩を得た。化学的純度は９９．０１％（ＨＰＬＣにより検出）であり、含水率は１５．６％である。
【００５９】
上記の具体的な実施形態は（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩結晶及び（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩結晶の製造方法を単に開示するものであるが、当業者はこの製造方法の教示に従って他のタイプの（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩結晶、詳細には（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸アルカリ土類金属塩結晶を調製することができる。
【００６０】
実施形態９：安定性試験
Ｃ型という（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩の新規の結晶形の安定性を求めるために、結晶形を４０℃の温度及び６０％の相対湿度で空気中に置き、（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩の残存含有量を定期的に測定した。
【００６１】
【表１】
2015506941.tif 000003
【００６２】
この結果から、Ｃ型の（６Ｓ）−５−ＭＴＨＦカルシウム塩は良好な安定性を有することが示され、このことは医薬製剤の生産及び貯蔵に有益である。
【００６３】
実施形態１０：Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形の粒径分布
図３に、本発明の製造方法によって得られるＣ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形の粒径分布を示す。図３から分かるように、粒径は正常な分布にあり、そのことから超音波によって処理された結晶は比較的均一な粒径を有することが示唆される。
【００６４】
実施形態１１：結晶形の状態及びＸ線回折パターンのデータ
機器：Bruker製のＤＳ  ａｄｖａｎｃｅ  ＸＲＤ
回折光：ＣｕＫα（４０ｋＶ、４０ｍＡ）
走査速度：８０度／分（２θ値）
走査範囲：２度〜４５度（２θ値）
ピークサーチレポート（３７のピーク、最大Ｐ／Ｎ＝４６．１）
ピーク：３５ｐｔｓ／Ｐａｒａｂｏｌｉｃ  Ｆｉｌｔｅｒ、閾値＝３．０、カットオフ＝０．１％、ＢＧ＝３／１．０、ピーク−トップ＝Ｓｕｍｍｉｔ
【００６５】
【表２】
2015506941.tif 000004
【００６６】
実施形態１２：ストロンチウム塩の結晶形の状態及びＸ線回折パターンのデータ
機器モデル：Bruker製のＤ８  ａｄｖａｎｃｅ  ＸＲＤ
回折光：ＣｕＫα（４０ｋｖ、４０ｍＡ）
走査速度：８度／分（２θ値）
走査範囲：５度〜４５度（２θ値）
ピークサーチレポート（３６のピーク、最大Ｐ／Ｎ＝２０．９）
ピーク：２９ｐｔｓ／Ｐａｒａｂｏｌｉｃ  Ｆｉｌｔｅｒ、閾値＝３．０、カットオフ＝０．１％、ＢＧ＝３／１．０、ピーク−トップ＝Ｓｕｍｍｉｔ
【００６７】
【表３】
2015506941.tif 000005
【００６８】
このことから、本発明は上記方法によって製造される（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形に関する。
【００６９】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形は、
（ａ）Ｘ線回折パターンが６．３±０．２及び１９．２±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２及び２２．０±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
である。
【００７０】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形は、
（ａ）Ｘ線回折パターンが３．２±０．２、６．３±０．２、１３．２±０．２、１４．６±０．２、１９．２±０．２及び３２．６±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２、１０．０±０．２、１３．７±０．２、１６．８±０．２、１７．１±０．２、２２．０±０．２及び２４．９±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
であるのが好ましい。
【００７１】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形は、
（ａ）Ｘ線回折パターンが３．２±０．１、６．３±０．１、１３．２±０．１、１４．６±０．１、１９．２±０．１及び３２．６±０．１の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．１、１０．０±０．１、１３．７±０．１、１６．８±０．１、１７．１±０．１、２２．０±０．１及び２４．９±０．１の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
であるのが好ましい。
【００７２】
具体的には、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形は、
（ａ）Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが図１に本質的に示されているものであるか、又は、
（ｂ）（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが図２に本質的に示されているものである。
【００７３】
本発明の好ましい又は具体的な実施形態を上記で詳細に記載している。当業者は何ら創作業務を伴うことなく本発明の設計思想に従って様々な修正及び変更を行うことができることを理解されたい。そのため、本発明の設計思想に従う従来技術に基づく論理的分析、推論又は限定実験により当業者が得ることができる技術的解決策は全て、本発明の範囲及び／又は特許請求の範囲によって規定される保護範囲内である。
【図１】
2015506941.tif 000006
【図２】
2015506941.tif 000007
【図３】
2015506941.tif 000008
【手続補正書】
【提出日】平成25年5月13日(2013.5.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形であって、
（ａ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２及び１９．２±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２及び２２．０±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
である、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項２】
（ａ）Ｘ線回折パターンが３．２±０．２、６．３±０．２、１３．２±０．２、１４．６±０．２、１９．２±０．２及び３２．６±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２、１０．０±０．２、１３．７±０．２、１６．８±０．２、１７．１±０．２、２２．０±０．２及び２４．９±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
である、請求項１に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項３】
（ａ）Ｘ線回折パターンが３．２±０．１、６．３±０．１、１３．２±０．１、１４．６±０．１、１９．２±０．１及び３２．６±０．１の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．１、１０．０±０．１、１３．７±０．１、１６．８±０．１、１７．１±０．１、２２．０±０．１及び２４．９±０．１の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
である、請求項２に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項４】
（ａ）Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが図１に本質的に示されているものであるか、又は、
（ｂ）Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形のＸ線回折パターンが図２に本質的に示されているものである、
請求項３に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項５】
（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形を製造する方法であって、該（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩は（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸アルカリ土類金属塩であり、該（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩は極性媒体から結晶化されたものであり、超音波が結晶化プロセスに使用される、方法。
【請求項６】
前記結晶化プロセスが３０℃〜６０℃又は６０℃〜１００℃の範囲の温度で行われる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記結晶化プロセスが、
ａ）（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸を極性媒体に添加するとともに、塩基で中和する工程と、
ｂ）アルカリ土類金属塩又はアルカリ土類金属塩溶液を添加する工程と、
ｃ）３０℃〜６０℃又は６０℃〜１００℃の範囲の温度まで加熱する工程と、
ｄ）結晶化するのに超音波を導入するとともに、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶を単離する工程と、
を含む、請求項５又は６に記載の方法。
【請求項８】
工程ａ）の前記極性媒体が水、脱イオン水、又は水及び水と均一に混合することが可能な有機溶媒により形成される溶液である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
工程ａ）の前記塩基が（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸とともに塩を形成することが可能な無機塩基又は有機塩基であり、該無機塩基が、アルカリ金属塩基又はアルカリ土類金属塩基、炭酸塩及び重炭酸塩から選択され、該有機塩基がアンモニア、アミン、ピリジン又はピペラジンから選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記無機塩基が、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、アンモニア、メチルアミン、４−ジメチル−ピリジン又はピペラジンから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
工程ｂ）の前記アルカリ土類金属塩がカルシウム塩、マグネシウム塩、ストロンチウム塩及びバリウム塩から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
工程ｂ）の前記アルカリ土類金属塩がカルシウム塩及びストロンチウム塩から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記超音波の出力密度が０．０１ｗ／ｍｌ〜１．０ｗ／ｍｌである、請求項５〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記超音波の出力密度が０．０４ｗ／ｍｌ〜０．６０ｗ／ｍｌである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記加熱する工程の温度が３０℃〜９０℃である、請求項７に記載の方法。
【請求項１６】
前記加熱する工程の温度が４０℃〜７０℃である、請求項７に記載の方法。
【請求項１７】
前記加熱する工程の温度が５０℃〜６０℃である、請求項７に記載の方法。
【請求項１８】
請求項５〜１７のいずれか一項に記載の方法により製造される、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項１９】
（ａ）Ｘ線回折パターンが６．３±０．２及び１９．２±０．２の角度２θで回折ピークを有する、Ｃ型の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩の結晶形、又は、
（ｂ）Ｘ線回折パターンが６．５±０．２及び２２．０±０．２の角度２θで回折ピークを有する、（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸ストロンチウム塩の結晶形、
である、請求項１８に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形。
【請求項２０】
主活性成分として請求項１〜４のいずれか一項に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項２１】
主活性成分として請求項１〜４のいずれか一項に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形を含む製剤。
【請求項２２】
活性医薬成分としての薬剤又は食品添加物の調製における請求項１〜４のいずれか一項に記載の（６Ｓ）−５−メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶形の使用。
【国際調査報告】
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