(57)【要約】本発明は、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬を含む組成物に関する。特定の実施形態では、本発明の組成物は、眼科疾患を治療または予防するために有用である。【選択図】図７７
2015519373.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物であって、有効量の
（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）前記組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、および
（ｄ）張性修飾剤のうちの一方または双方と、を含む、組成物。
【請求項２】
前記緩衝液は、約１ｍＭ〜約２０ｍＭのＬ−ヒスチジンまたは約１ｍＭ〜約２０ｍＭのリン酸ナトリウムであり、
前記張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌ、約１％〜約２０％（重量／体積）のソルビトール、または約１％〜約２０％（重量／体積）のトレハロースである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記緩衝液は、約１ｍＭ〜約２０ｍＭのＬ−ヒスチジンであり、
前記張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
（ｅ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｄ）約１３０ｍＭのＮａＣｌと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ６．０である、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
（ｅ）約０．０１％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約１０ｍＭのリン酸ナトリウムと、
（ｄ）約５％（重量／体積）のソルビトールと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ７．０である、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
（ｅ）約０．０１％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約１０ｍＭのリン酸ナトリウムと、
（ｄ）約１３０ｍＭのＮａＣｌと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ７．０である、請求項２に記載の組成物。
【請求項１０】
（ｅ）約０．０１％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約５ｍＭのリン酸ナトリウムと、
（ｄ）約５ｍＭのヒスチジンＨＣｌと、
（ｅ）約７５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｆ）約５％（重量／体積）のトレハロースと、を含み。
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ６．５である、請求項２に記載の組成物。
【請求項１２】
（ｇ）約０．００５％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
組成物であって、有効量の
（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）前記組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、および
（ｄ）張性修飾剤のうちの一方または双方と、を含む、組成物。
【請求項１４】
前記緩衝液は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭのリン酸ナトリウムまたは約５ｍＭ〜約２００ｍＭのトリス．ＨＣｌであり、
前記張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌ、約１％〜約２０％（重量／体積）のソルビトール、または約１％〜約２０％（重量／体積）のトレハロースである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記緩衝液は、約５ｍＭ〜約２００のｍＭのリン酸ナトリウムであり、
前記等張化剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌであり、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ７．０である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
（ｅ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤をさらに含む、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約５０ｍＭのリン酸ナトリウムと、
（ｄ）約１３０ｍＭのＮａＣｌと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ６．０である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
（ｅ）約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約５０ｍＭのリン酸ナトリウムと、
（ｄ）約５％（重量／体積）のソルビトールと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ６．０である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２０】
（ｅ）約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約５０ｍＭのリン酸ナトリウムと、
（ｄ）約５％（重量／体積）のソルビトールと、を含み。
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ７．０である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２２】
ｅ）約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約５０ｍＭのリン酸ナトリウムと、
（ｄ）約１５０ｍＭのＮａＣｌと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ７．０である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２４】
（ｅ）約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約５０ｍＭのトリス．ＨＣｌと、
（ｄ）約１３０ｍＭのＮａＣｌと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ８．０である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２６】
（ｅ）約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
（ａ）約１５ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約３０ｍＭのリン酸ナトリウムと、
（ｄ）約７５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｅ）約３％（重量／体積）のトレハロースと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ６．３である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２８】
（ｆ）約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約３０ｍＭのリン酸ナトリウムと、
（ｄ）約７５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｅ）約３％（重量／体積）のトレハロースと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ６．３である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項３０】
（ｆ）約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
組成物であって、有効量の
（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプトまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）前記組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、
（ｄ）張性修飾剤、および
（ｅ）０〜約１０％（重量／体積）のスクロースのうちの１つ以上と、を含む、組成物。
【請求項３２】
前記緩衝液は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸塩であり、
前記張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプトまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約５ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸塩と、
（ｄ）約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌと、
（ｅ）０〜約１０％（重量／体積）のスクロースと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ６．０〜約ｐＨ８．０である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
（ｆ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤をさらに含む、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
（ａ）約６ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプトまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約１０ｍＭのリン酸塩と、
（ｄ）約４０ｍＭのＮａＣｌと、
（ｅ）約５％（重量／体積）のスクロースと、を含み、
前記組成物のｐＨが、約ｐＨ６．２である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
（ｆ）約０．０３％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
組成物であって、有効量の
（ａ）約３ｍｇ／ｍＬ〜約９０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）前記組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、および
（ｄ）張性修飾剤のうちの一方または双方と、を含む、組成物。
【請求項３８】
前記緩衝液は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭのリン酸ナトリウムまたは約１．０ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジン．ＨＣｌを含み、
前記張性修飾剤は、約０．５％（重量／体積）〜約１０％（重量／体積）のトレハロースである、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
（ａ）約１５ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約５ｍＭのリン酸塩と、
（ｄ）約７５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｅ）約５ｍＭのヒスチジン．ＨＣｌと、
（ｆ）約５％（重量／体積）のトレハロースと、を含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
（ｇ）約０．００５％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
（ａ）約２４ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）約８ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、
（ｃ）約８ｍＭのリン酸塩と、
（ｄ）約１２０ｍＭのＮａＣｌと、
（ｅ）約２ｍＭのヒスチジン．ＨＣｌと、
（ｆ）約２％（重量／体積）のトレハロースと、を含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４２】
（ｇ）約０．００２％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
眼科疾患を治療または予防するための方法であって、それを必要とする哺乳類に請求項１、１３、３１、および３７のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４４】
前記眼科疾患は、加齢性黄斑変性、ポリープ状脈絡膜血管症、脈絡膜血管新生関連症状、高血圧性網膜症、糖尿病性網膜症、鎌状赤血球網膜症、周辺部網膜血管新生関連症状、未熟児網膜症、静脈閉塞症、動脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、嚢胞様黄斑浮腫、網膜末梢血管拡張、動脈瘤、網膜血管腫症、放射線誘発網膜症、虹彩ルベオーシス、または新生物である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記眼科疾患は、滲出型加齢性黄斑変性または委縮型加齢性黄斑変性である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記組成物は、薬物送達デバイス内に存在する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記組成物は、眼内投与される、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の方法。.
【請求項４８】
前記眼内投与は、硝子体内投与または前房投与である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記哺乳類は、ヒトである、請求項４３〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年６月１日に出願された米国仮出願第６１／６５４，６７２号および２０１３年３月１２日に出願された米国仮出願第６１／７７８，２０８号の利益を主張し、これらの各々はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
【０００２】
本出願に関連する配列表は、ハードコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、ＯＰＨＴ＿０１０＿０２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは、約３５ＫＢであり、２０１３年５月２９日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
【技術分野】
【０００３】
本発明は、抗血小板由来成長因子（抗ＰＤＧＦ）アプタマーおよび血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）拮抗薬を含む組成物に関する。本発明はまた、細胞の過増殖または異常な血管形成を阻害するための方法、ならびに眼科疾患を治療または予防するための方法であって、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬を含む組成物を投与することを含む方法に関する。さらに、本発明は、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬の持続性送達を提供する組成物および薬物送達デバイスに関する。
【背景技術】
【０００４】
眼の種々の障害は、脈絡膜、網膜、もしくは虹彩の血管新生または網膜浮腫によって特徴付けられ、引き起こされ、またはそれらをもたらす。これらの障害としては、黄斑変性、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、中心性漿液性脈絡網膜症、嚢胞様黄斑浮腫、コーツ病、ならびに脈絡膜血管腫、網膜色素上皮癌、および眼内リンパ腫等の眼または付属器の新生物が挙げられる。加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）は、６５歳超の米国人約１０名中１人に影響を及ぼす疾患である。ＡＭＤの１つの種類は、「滲出型ＡＭＤ」であり、「新生血管ＡＭＤ」および「滲出性ＡＭＤ」としても知られ、ＡＭＤ症例の僅か１０％しか占めないが、高齢者における黄斑変性に起因する法的失明症例の９０％をもたらす。糖尿病性網膜症は、１０年以上にわたって糖尿病に罹患している全患者のうちの最大８０％に影響を及ぼし得、成人の失明の３番目の原因であり、米国内の失明の約７％を占める。
【０００５】
血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）および血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）等の成長因子の役割を含む、眼の血管新生に付随、またはつながる分子事象の理解において、前進がなされてきた。これらの成長因子の活性を阻害する治療剤は、ＡＭＤおよび糖尿病性網膜症等の眼の血管障害に罹患している患者に治療的理恵系を提供することが示されており、合成オリゴヌクレオチドから成るアプタマーが挙げられる。より最近では、ＰＤＧＦかまたはＶＥＧＦかのいずれかを標的とする治療剤の併用が研究されている。
【０００６】
ＰＤＧＦおよびＶＥＧＦの双方の組み合わせた阻害は、脈絡膜、網膜、または虹彩の血管新生または網膜浮腫によって特徴付けられる、引き起こされる、またはそれらをもたらす種々の眼の障害の治療において、より大きな利益につながる可能性がある。各成長因子に特異的な個々の薬剤によるＰＤＧＦおよびＶＥＧＦとの双方の組み合わせた阻害は、両薬剤の同時共投与によって達成することができる。
【０００７】
残念ながら、ポリペプチド治療剤は、物理的および化学的劣化に敏感であり得る。ポリペプチド治療剤の安定性は、ポリペプチド自体、例えば、そのアミノ酸配列等を含む、種々の因子によって影響され得る。したがって、ポリペプチド治療薬を含む安定した薬学的組成物の開発は、大きな課題を有する。この課題は、ポリペプチド治療薬とポリヌクレオチド治療剤等の別の治療剤とを含む組成物の開発に関してより大きく、それは、２つの異なる治療剤を許容される適合性を有して安定させる賦形剤および条件の特定が必要とされるためである。
【０００８】
抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬を含む治療剤を含む、複数の治療剤を含む安定した組成物の必要性が、明確に存在する。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は、有効量の（ａ）抗ＰＤＧＦアプタマーまたはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）ＶＥＧＦ拮抗薬またはその薬学的に許容される塩とを含む組成物を提供する。有効量の（ａ）抗ＰＤＧＦアプタマーまたはその薬学的に許容される塩と（ｂ）ＶＥＧＦ拮抗薬またはその薬学的に許容される塩とを含む組成物は、「本発明の組成物」である。
【００１０】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、有効量の（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、および（ｄ）張性修飾剤のうちの一方または双方と、を含む。特定の実施形態では、緩衝液は、約１ｍＭ〜約２０ｍＭのＬ−ヒスチジンまたは約１ｍＭ〜約２０ｍＭのリン酸ナトリウムであり、また張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌ、約１％〜約２０％（重量／体積）のソルビトール、または約１％〜約２０％（重量／体積）のトレハロースである。具体的実施形態では、本発明の組成物は、（ｅ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤をさらに含む。
【００１１】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、有効量の（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、および（ｄ）張性修飾剤のうちの一方または双方とを含む。特定の実施形態では、緩衝液は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭのリン酸ナトリウムまたは約５ｍＭ〜約２００ｍＭのトリス．ＨＣｌであり、また張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌ、約１％〜約２０％（重量／体積）のソルビトール、または約１％〜約２０％（重量／体積）のトレハロースである。具体的実施形態では、本発明の組成物は、（ｅ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤をさらに含む。
【００１２】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、有効量の（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプトまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、（ｄ）張性修飾剤、および（ｅ）０〜約１０％（重量／体積）のスクロースのうちの１つ以上とを含む。特定の実施形態では、緩衝液は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸塩であり、また張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌである。具体的実施形態では、本発明の組成物は、（ｆ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤をさらに含む。
【００１３】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、有効量の（ａ）約３ｍｇ／ｍＬ〜約９０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、および（ｄ）張性修飾剤のうちの一方または双方とを含む。特定の実施形態では、緩衝液は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭのリン酸ナトリウムまたは約１．０ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジン．ＨＣｌを含み、また張性修飾剤は、約０．５％（重量／体積）〜約１０％（重量／体積）のトレハロースである。
【００１４】
本発明はさらに、眼科疾患を治療または予防するための方法であって、それを必要とする哺乳類に本発明の組成物を投与することを含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】３７℃で８週間にわたって保管した選択される本発明の組成物のＡＥＸ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２】３７℃で８週間にわたって保管した選択される本発明の組成物のＷＣＸ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３】３７℃で８週間にわたって保管した選択される本発明の組成物のＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４】３７℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５】３７℃で保管した選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図６】３７℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図７】３７℃で保管した選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図８】２５℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図９】２５℃で保管した選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図１０】２５℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図１１】２５℃で保管した選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図１２】４℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図１３】４℃で保管した選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図１４】４℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図１５】４℃で保管した選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図１６Ａ】３７℃で保管した、種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図１６Ａは、種々のｐＨでの５％のソルビトールを含む組成物における経時的な拮抗薬Ａのパーセント純度を示す。
【図１６Ｂ】３７℃で保管した、種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図１６Ｂは、種々のｐＨでの１３０ｍＭのＮａＣｌを含む組成物における経時的な拮抗薬Ａのパーセント純度を示す。
【図１７Ａ】３７℃で保管した、種々のｐＨを有する選択される組成物におけるラニビズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図１７Ａは、種々のｐＨでの５％のソルビトールを含む組成物における経時的なラニビズマブのパーセント純度を示す。
【図１７Ｂ】３７℃で保管した、種々のｐＨを有する選択される組成物におけるラニビズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図１７Ｂは、種々のｐＨでの１３０ｍＭのＮａＣｌを含む組成物における経時的なラニビズマブのパーセント純度を示す。
【図１８】３７℃で保管した、種々のｐＨを有する選択される組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図１９Ａ】３７℃で保管した、種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図１９Ａは、５％のソルビトールを含む組成物におけるラニビズマブのパーセント純度を示す。
【図１９Ｂ】３７℃で保管した、種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図１９Ｂは、１３０ｍＭのＮａＣｌを含む組成物におけるラニビズマブのパーセント純度を示す。
【図２０】３７℃で保管した種々のｐＨにおける、種々の張性修飾剤を含む選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２１】３７℃で保管したｐＨ８．０における、種々の張性修飾剤を含む選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２２】３７℃で保管した種々のｐＨにおける、種々の張性修飾剤を含む選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２３】３７℃で保管した種々のｐＨにおける、種々の張性修飾剤を含む選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２４】３７℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２５Ａ】２５℃（図２５Ａ）で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２５Ｂ】３７℃（図２５Ｂ）で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２６Ａ】２５℃（図２６Ａ）で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２６Ｂ】３７℃（図２６Ｂ）で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２７Ａ】３７℃（図２７Ａ）で８週間にわたって保管した選択される本発明の組成物のＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２７Ｂ】２５℃（図２７Ｂ）で８週間にわたって保管した選択される本発明の組成物のＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２７Ｃ】４℃（図２７Ｃ）で８週間にわたって保管した選択される本発明の組成物のＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２８】４℃、２５℃、および３７℃で保管した組成物Ｆ６における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図２９】４℃、２５℃、および３７℃で保管した組成物Ｆ６におけるラニビズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図３０】４℃、２５℃、および３７℃で保管した組成物Ｆ６における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図３１】４℃、２５℃、および３７℃で保管した選択される本発明の組成物におけるラニビズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図３２】３７℃で２週間にわたって保管した選択される本発明の組成物のＡＥＸ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３３】２５℃で８週間にわたって保管した選択される本発明の組成物のＷＣＸ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３４】３７℃で８週間にわたって保管した選択される本発明の組成物のＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３５】３７℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図３６】３７℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図３７】３７℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図３８】３７℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図３９】３７℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４０】３７℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４１】３７℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４２】３７℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４３】２５℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４４】２５℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４５】２５℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４６】２５℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４７】２５℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４８】２５℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図４９】２５℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５０】２５℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５１】４℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５２】４℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５３】４℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５４】４℃で保管した選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５５】４℃で保管した選択される本発明の組成物におけるベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５６】３７℃で保管した種々のｐＨを有する本発明の選択されるソルビトール含有組成物における、拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５７】３７℃で保管した種々のｐＨを有する本発明の選択されるソルビトール含有組成物における、ベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５８】３７℃で保管した種々のｐＨを有する本発明の選択されるソルビトール含有組成物における、拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図５９】３７℃で保管した種々のｐＨを有する本発明の選択されるソルビトール含有組成物における、ベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図６０Ａ】３７℃で保管した種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図６０Ａは、種々のｐＨでの５％のソルビトールを含む組成物における経時的な拮抗薬Ａのパーセント純度を示す。
【図６０Ｂ】３７℃で保管した種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図６０Ｂは、種々のｐＨでの１３０ｍＭのＮａＣｌまたは１５０ｍＭのＮａＣｌを含む組成物における経時的な拮抗薬Ａのパーセント純度を示す。
【図６１Ａ】３７℃で保管した種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における、ベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図６１Ａは、種々のｐＨでの経時的な、５％のソルビトールを含む組成物におけるベバシズマブのパーセント純度を示す。
【図６１Ｂ】３７℃で保管した種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における、ベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図６１Ｂは、１３０ｍＭのＮａＣｌまたは１５０ｍＭのＮａＣｌを含む組成物におけるベバシズマブのパーセント純度を示す。
【図６２Ａ】３７℃で保管した種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における、拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図６２Ａは、種々のｐＨでの経時的な、５％のソルビトールを含む組成物における拮抗薬Ａのパーセント純度を示す。
【図６２Ｂ】３７℃で保管した種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における、拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図６２Ｂは、１３０ｍＭのＮａＣｌまたは１５０ｍＭのＮａＣｌを含む組成物における拮抗薬Ａのパーセント純度を示す。
【図６３Ａ】３７℃で保管した種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における、ベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図６３Ａは、種々のｐＨでの経時的な、５％のソルビトールを含む組成物における拮抗薬Ａのパーセント純度を示す。
【図６３Ｂ】３７℃で保管した種々のｐＨを有する選択される本発明の組成物における、ベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。図６３Ｂは、１３０ｍＭのＮａＣｌまたは１５０ｍＭのＮａＣｌを含む組成物における拮抗薬Ａのパーセント純度を示す。
【図６４】３７℃で８週間にわたって保管した種々の濃度の拮抗薬Ａを含む選択される本発明の組成物における、拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図６５】３７℃で８週間にわたって保管した種々の濃度の拮抗薬Ａを含む選択される本発明の組成物における、ベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図６６】３７℃で保管した種々の濃度の拮抗薬Ａを含む選択される本発明の組成物における、拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図６７】３７℃で８週間にわたって保管した種々の濃度の拮抗薬Ａを含む選択される本発明の組成物における、ベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図６８】種々の保管温度での、組成物Ｆ１９における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図６９】種々の保管温度での、組成物Ｆ１９におけるベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図７０】種々の保管温度での、組成物Ｆ１９における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図７１】種々の保管温度での、組成物Ｆ１９におけるベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図７２】種々の保管温度での、組成物Ｆ２５と比較した組成物Ｆ１９における拮抗薬Ａ安定性のＡＥＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図７３】種々の保管条件での、組成物Ｆ２５と比較した組成物Ｆ１９における拮抗薬Ａ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図７４】種々の保管温度での、組成物Ｆ１８と比較した組成物Ｆ１９におけるベバシズマブ安定性のＷＣＸ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図７５】種々の保管条件での、組成物Ｆ１８と比較した組成物Ｆ１９におけるベバシズマブ安定性のＳＥ−ＨＰＬＣ傾向グラフを示す。
【図７６】種々の本発明の組成物によるＶＥＧＦ−誘発ＴＦ発現の抑制を表すグラフを示す。
【図７７】種々の本発明の組成物によるＰＤＧＦ−誘発ＢＴＧ２発現の抑制を表すグラフを示す。
【図７８Ａ】拮抗薬Ａの構造（パネルＡ〜Ｆ）を示し、記号
【００１６】
【化１】
2015519373.tif 000003
【００１７】
は、前のパネルからの続きを示す。
【図７８Ｂ】拮抗薬Ａの構造（パネルＡ〜Ｆ）を示し、記号
【００１８】
【化２】
2015519373.tif 000004
は、前のパネルからの続きを示す。
【図７８Ｃ】拮抗薬Ａの構造（パネルＡ〜Ｆ）を示し、記号
【００１９】
【化３】
2015519373.tif 000005
は、前のパネルからの続きを示す。
【図７８Ｄ】拮抗薬Ａの構造（パネルＡ〜Ｆ）を示し、記号
【００２０】
【化４】
2015519373.tif 000006
は、前のパネルからの続きを示す。
【図７８Ｅ】拮抗薬Ａの構造（パネルＡ〜Ｆ）を示し、記号
【００２１】
【化５】
2015519373.tif 000007
は、前のパネルからの続きを示す。
【図７８Ｆ】拮抗薬Ａの構造（パネルＡ〜Ｆ）を示し、記号
【００２２】
【化６】
2015519373.tif 000008
は、前のパネルからの続きを示す。
【図７９Ａ】多様な保管条件下での組成物Ｆ２７に関する減算したマイクロフローイメージング（ＭＦＩ）結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図７９Ａは、１μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる種々の範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図７９Ｂ】多様な保管条件下での組成物Ｆ２７に関する減算したマイクロフローイメージング（ＭＦＩ）結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図７９Ｂは、１０μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる選択される範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８０Ａ】多様な保管条件下での組成物Ｆ２８に関する減算したＭＦＩ結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８０Ａは、１μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる種々の範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８０Ｂ】多様な保管条件下での組成物Ｆ２８に関する減算したＭＦＩ結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８０Ｂは、１０μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる選択される範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８１Ａ】多様な保管条件下での組成物Ｆ２９に関する減算したＭＦＩ結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８１Ａは、１μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる種々の範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８１Ｂ】多様な保管条件下での組成物Ｆ２９に関する減算したＭＦＩ結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８１Ｂは、１０μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる選択される範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８２Ａ】多様な保管条件下での組成物Ｆ３０に関する減算したＭＦＩ結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８２Ａは、１μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる種々の範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８２Ｂ】多様な保管条件下での組成物Ｆ３０に関する減算したＭＦＩ結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８２Ｂは、１０μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる選択される範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８３Ａ】多様な保管条件下での組成物Ｆ３１に関する減算したＭＦＩ結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８３Ａは、１μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる種々の範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８３Ｂ】多様な保管条件下での組成物Ｆ３１に関する減算したＭＦＩ結果を表すグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８３Ｂは、１０μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる選択される範囲内の粒子数を提供する。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８４Ａ】多様な保管条件下での組成物Ｆ２７からＦ３１に関する減算したＭＦＩ結果を比較するグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８４Ａは、１μｍ〜１００μｍの円相当直径にわたる種々の範囲内の粒子数を提供する。図８４Ａにおいて、バイアル内で３０℃で保管した組成物Ｆ３１に関して獲得された＜１μｍ〜＜２μｍの円相当直径の範囲内の粒子数は、２１７，４０４であり、これはグラフのｙ軸に表される値を超過していたため、この値は対応するバーの上に示される。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８４Ｂ】多様な保管条件下での組成物Ｆ２７からＦ３１に関する減算したＭＦＩ結果を比較するグラフを示す。グラフは、バイアル内かまたはシリンジ内かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで保管したときの、列挙される円相当直径範囲のそれぞれに関して決定された粒子数（粒子の数／ｍＬ）を提供する。図８４Ｂは、１０μｍ〜７５μｍの円相当直径にわたる選択される範囲内の粒子数を提供する。図８４Ｂにおいて、バイアル内で３０℃で保管した組成物Ｆ３１に関して獲得された＜１０μｍ〜＜２５μｍの円相当直径の範囲内の粒子数は、３，０４４であり、これはグラフのｙ軸に表される値を超過していたため、この値は対応するバーの上に示される。凡例は上から下へ、各粒径範囲に関して左から右へのバーに対応する。
【図８５】１．６５ｎＭのＰＤＧＦ−ＢＢおよび指示される濃度の拮抗薬Ａ（Ｆ３２）で処理されたＮＩＨ３Ｔ３細胞による相対的なＢＴＧ２遺伝子発現を表すグラフを示す。
【図８６】１．６５ｎＭのＰＤＧＦ−ＢＢ、および指示される濃度の拮抗薬Ａおよびアフリバーセプト（Ｆ３３）の組み合わせ、または拮抗薬Ａ単独（Ｆ３４）で処理されたＮＩＨ３Ｔ３細胞による相対的なＢＴＧ２遺伝子発現を表すグラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
定義および略語
本明細書で使用するとき、以下の用語および語句は、本明細書に記載される意味を有するものとする。
【００２４】
用語「約」は、参照される数的表記とともに使用するとき、参照される数的表記プラスマイナス該参照される数的表記の最大１０％を意味する。例えば、「約１００」は、９０〜１１０を意味する。
【００２５】
用語「拮抗薬」は、標的分子の活性または産生を部分的かまたは完全にかのいずれかで阻害する薬剤を指す。具体的には、本明細書で選択的に適用されるような用語「拮抗薬」は、遺伝子発現のレベル、ｍＲＮＡレベル、タンパク質発現レベル、または標的分子のタンパク質活性を減少させることが可能な薬剤を意味する。例証的な拮抗薬の形態としては、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド（環状ペプチド等）、抗体または抗体断片、ペプチド模倣薬、核酸分子、アンチセンス分子、リポザイム、アプタマー、ＲＮＡｉ分子、および小有機分子が挙げられる。拮抗薬阻害の例証的な非限定的メカニズムとしては、リガンドの合成または安定性のうちの一方または双方の抑止（例えば、リガンド遺伝子／核酸を標的するアンチセンス、リポザイム、またはＲＮＡｉ組成物を用いて）、リガンドのその同源受容体への結合の遮断（例えば、抗リガンドアプタマー、抗体、抗受容体抗体、または可溶性のデコイ同源受容体もしくはその断片を用いて）、受容体の合成および安定性のうちの一方または双方の抑止（例えば、リガンド受容体遺伝子／核酸を標的するアンチセンス、リポザイム、またはＲＮＡｉ組成物を用いて）、受容体のその同源応答要素への結合の遮断（例えば、抗受容体抗体を用いて）、ならびに受容体のその同源リガンドによる活性化の遮断（例えば、受容体チロシンキナーゼ阻害薬を用いて）が挙げられる。それに加えて、拮抗薬は、標的分子を直接的または間接的に阻害してもよい。
【００２６】
本明細書で使用するとき、「抗体」は、全抗体および任意の抗原結合断片またはその単鎖を含む。したがって、用語「抗体」は、抗原に対する結合の生物学的活性を有する免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む分子を含有する、任意のタンパク質またはペプチドを含む。かかる例は、重鎖もしくは軽鎖またはそのリガンド結合部分の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、またはその任意の部分、または結合タンパク質の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体は、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む。
【００２７】
用語「抗体断片」は、抗原結合断片である抗体またはその単鎖の一部分を含む。抗体断片は、合成的または遺伝子的に操作されたポリペプチドであり得る。抗体の「抗原結合部分」という用語内に包括される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインから成る一価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域にてジスルフィド架橋によって結合される２つのＦａｂ断片から成る二価断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから成るＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインから成るＦｖ断片、（ｖ）ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１  ５４４−５４６）、ＶＨドメインから成る、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組み換え方法を用いて、それらがＶＬおよびＶＨ領域が対になり一価分子を形成する単一タンパク質鎖として作成されることを可能にする合成リンカーによって、結び付けられることができる（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる、例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２  ４２３−４２６、およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５  ５８７９−５８８３を参照）。かかる単鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合断片」という用語内に包括されることを意図される。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来技術を用いて獲得され、また断片は、全抗体と同じ様式で有用性に関してスクリーニングすることができる。
【００２８】
用語「アプタマー」は、標的に対して阻害効果を有するペプチドまたは核酸を指す。アプタマーによる標的の阻害は、標的に結合することによって、標的を触媒的に変化させることによって、標的または標的の機能的活性を修飾する方法で標的と反応することによって、自殺型阻害薬において標的にイオン的もしくは共有的に付着することによって、または標的と別の分子との間の反応を促進することによって、生じることができる。アプタマーは、ペプチド、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、他の核酸、または異なる種類の核酸の混合物であることができる。アプタマーは、本明細書にさらに詳細に説明されるように、１つ以上の修飾されたアミノ酸、塩基、糖、ポリエチレングリコールスペーサー、またはリン酸骨格単位を含むことができる。アプタマーは、ペグ化であることができ、または非ペグ化であることができる。例えば、１つ以上のポリエチレングリコール鎖は、リンカーを介して核酸アプタマーの５’末端に結合されることができる。
【００２９】
「組成物」は、活性薬剤と、不活性または活性の担体とを含むことができる。組成物は、インビトロ、インビボ、または生体外での診断的または治療的使用に有用である。具体的実施形態では、組成物は、無菌であるか、実質的に内毒素を含まないか、または採用される投薬量または濃度において受容者に対して非毒性である。
【００３０】
用語「標識」として、放射性同位体、フルオロフォア、化学発光部分、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害薬、染料、金属イオン、リガンド（例えば、ビオチンまたはハプテン）等が挙げられるが、これらに限定されない。フルオロフォア標識の例としては、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、ウンベリフェロン、テキサスレッド、およびルミノールが挙げられる。標識の他の例としては、ＮＡＤＰＨ、α−β−ガラクトシダーゼ、および西洋ワサビペルオキシダーゼが挙げられる。
【００３１】
用語「核酸」は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）等のポリヌクレオチドを指す。この用語はまた、ヌクレオチド類似体から作成されるＲＮＡまたはＤＮＡの類似体、ならびに、説明される実施形態に応じて、一本鎖（センスまたはアンチセンス）および二本鎖ポリヌクレオチド、発現配列タグ（ＥＳＴ）、染色体、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、およびｒＲＮＡを含む。核酸は、標準的な構造単位に基づく天然起源核酸構造から構造的に逸脱した核酸の修飾された形態を含む（アデノシン、シチジン、グアノシン、チミジン、およびウリジン）を含む。修飾は、骨格、糖、または核酸塩基に対してであってもよく、また天然起源であることができ、または人工的に導入されることができる。例えば、核酸は、その骨格内で修飾されてもよい。例証的な修飾は、本明細書で開示される。核酸は、核酸アプタマーおよびスピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）を含むことができる。
【００３２】
幾つかの実施形態では、拮抗薬Ａは、修飾された形態で存在する。拮抗薬Ａの修飾された形態は、本明細書で説明されるような修飾された形態でヌクロチドを含むものであり、ヌクレオチドは、拮抗薬Ａ中に修飾されていない形態で存在する。
【００３３】
用語「ＲＮＡ干渉」、「ＲＮＡｉ」、「ｍｉＲＮＡ」、および「ｓｉＲＮＡ」は、それによって、遺伝子または遺伝子産生物の発現が、関心の遺伝子に（特に、関心の遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ、例えば、ＰＤＧＦまたはＶＥＧＦに）相同である１つ以上の二本鎖ＲＮＡを標的細胞内に導入することにより減少される、任意の方法を指す。
【００３４】
用語「血管新生」は、異常な組織または異常な位置における新しい血管形成を指す。
【００３５】
用語「血管形成」は、正常または異常な組織または位置における新しい血管の形成を指す。
【００３６】
用語「眼科疾患」は、眼の疾患および眼付属器の疾患を指す。
【００３７】
用語「眼の新生血管障害」は、血管新生によって特徴付けられる眼の障害を指す。特定の癌は、眼の新生血管障害である。一実施形態では、眼の新生血管障害は、癌以外の障害である。癌以外の眼の新生血管障害の例としては、糖尿病性網膜症および加齢性黄斑変性が挙げられる。
【００３８】
用語「哺乳類」は、ヒトおよび非ヒト哺乳類、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サル、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、イヌ、およびネコ等を含む。
【００３９】
用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、互換的に使用され、広範な意味で、２つ以上のサブユニットアミノ酸、アミノ酸類似体、またはペプチド模倣薬の化合物を指す。サブユニットは、ペプチド結合によって結合されてもよい。別の実施形態では、サブユニットは、他の結合、例えば、エステル、エーテル等によって結合されてもよい。タンパク質またはペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数は、制限されない。
【００４０】
本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸」は、天然または非天然または合成のアミノ酸を差し、グリシン、ならびにＤおよびＬ光学異性体の双方、アミノ酸類似体、およびペプチド模倣薬を含む。
【００４１】
用語「ＰＤＧＦ」は、細胞の成長または分裂を調節する血小板由来成長因子を指す。本明細書で使用するとき、用語「ＰＤＧＦ」は、ＰＤＧＦ−Ｂ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号Ｘ０２８１１およびＣＡＡ２６５７９）、ＰＤＧＦ−Ａ（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号Ｘ０６３７４およびＣＡＡ２９６７７）、ＰＤＧＦ−Ｃ（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ０１６２０５およびＮＰ０５７２８９）、ＰＤＧＦ−Ｄ、変異体１および２（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ０２５２０８、ＮＰ０７９４８４、ＮＭ０３３１３５、ＮＰ１４９１２６）を含む種々のＰＤＧＦのサブタイプ、ならびにＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、およびＰＤＧＦ−ＤＤを含むそれらの二量体化された形態を含む。血小板由来成長因子としては、２つの関連する受容体チロシンキナーゼ血小板由来成長因子細胞表面受容体（すなわち、ＰＤＧＦＲ）への結合および二量体化を介してそれらの作用を発揮するＡ鎖（ＰＤＧＦ−Ａ）およびＢ鎖（ＰＤＧＦ−Ｂ）のホモまたはヘテロ二量体、ＰＤＧＦＲ−α（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ００６２０６およびＮＰ００６１９７を参照）、ならびにＰＤＧＦＲ−β（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ００２６０９およびＮＰ００２６００を参照）が挙げられる。同様に、ＰＤＧＦ配列に関しては、その全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／１２７０２９号を参照されたい。それに加えて、ＰＤＧＦＲ複合体に関する２つのさらなるプロテアーゼ活性化リガンド、ＰＤＧＦ−ＣおよびＰＤＧＦ−Ｄが、特定されている（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２：３０２−９、Ｂｅｒｇｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：５１２−６、およびＵｕｔｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０３：２２４２−４７）。ＰＤＧＦＲの２つの異なるリガンド結合特異性のため、ＰＤＧＦＲ−α／αは、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、およびＰＤＧＦ−ＣＣを結合し、ＰＤＧＦＲ−β／βは、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＰＤＧＦ−ＤＤを結合し、一方ＰＤＧＦＲ−α／βは、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、およびＰＤＧＦ−ＤＤを結合することが知られている（Ｂｅｔｓｈｏｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）ＢｉｏＥｓｓａｖｓ  ２３：４９４−５０７）。本明細書で使用するとき、用語「ＰＤＧＦ」はまた、応答する細胞型上のＰＤＧＦＲの結合および活性化を通してＤＮＡ合成および有系分裂を誘発する、成長因子のクラスのメンバーを指す。ＰＤＧＦは、例えば、有向細胞移動（走化性）および細胞活性化、ホスホリパーゼ活性化、増大されたホスファチジルイノシトール代謝回転およびプロスタグランジン代謝、応答細胞によるコラーゲンおよびコラゲナーゼの双方の合成の刺激、マトリックス合成、サイトカイン産生、およびリポタンパク質取り込みを含む、細胞代謝活動の変更、ＰＤＧＦ受容体を欠損する細胞における増殖応答の間接的な誘発、ならびに強力な血管収縮活性をもたらすことができる。用語「ＰＤＧＦ」は、「ＰＤＧＦ」ポリペプチド、「ＰＤＧＦ」コード化遺伝子もしくは核酸、またはそれらの二量体化された形態を指すために使用され得る。用語「ＰＤＧＦ−Ａ」は、ＰＤＧＦのＡ鎖ポリペプチドまたはその対応するコード化遺伝子もしくは核酸を指す。用語「ＰＤＧＦ−Ｂ」は、ＰＤＧＦのＢ鎖ポリペプチドまたはその対応するコード化遺伝子もしくは核酸を指す。用語「ＰＤＧＦ−Ｃ」は、ＰＤＧＦのＣ鎖ポリペプチドまたはその対応するコード化遺伝子もしくは核酸を指す。用語「ＰＤＧＦ−Ｄ」は、ＰＤＧＦのＤ鎖ポリペプチドまたはその対応するコード化遺伝子もしくは核酸を指し、ＰＤＧＦのＤ鎖ポリペプチドの変異体１および２を含む。用語「ＰＤＧＦ−ＡＡ」は、２つのＰＤＧＦ−Ａ鎖ポリペプチドを有する二量体を指す。用語「ＰＤＧＦ−ＡＢ」は、１つのＰＤＧＦ−Ａ鎖ポリペプチドと１つのＰＤＧＦ−Ｂ鎖ポリペプチドとを有する二量体を指す。用語「ＰＤＧＦ−ＢＢ」は、２つのＰＤＧＦ−Ｂ鎖ポリペプチドを有する二量体を指す。用語「ＰＤＧＦ−ＣＣ」は、２つのＰＤＧＦ−Ｃ鎖ポリペプチドを有する二量体を指す。用語「ＰＤＧＦ−ＤＤ」は、２つのＰＤＧＦ−Ｄ鎖ポリペプチドを有する二量体を指す。
【００４２】
用語「ＶＥＧＦ」は、血管形成または血管形成プロセスを誘発する血管内皮成長因子を指す。本明細書で使用するとき、用語「ＶＥＧＦ」は、例えば、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、およびＶＥＧＦ１８９を含むＶＥＧＦ−Ａ／ＶＰＦ遺伝子の選択的スプライシングによって発生する、ＶＥＧＦの種々のサブタイプを含む（血管透過性因子（ＶＰＦ）およびＶＥＧＦ−Ａとしても既知である）（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｉｏｎ番号ＮＭ００３３７６およびＮＰ００３３６７を参照）。同様に、ＶＥＧＦ配列に関しては、その全体が本明細書に援用されるＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／１２７０２９号も参照されたい。さらに、本明細書で使用するとき、用語「ＶＥＧＦ」は、ＰＩＧＦ（胎盤成長因子）、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、およびＶＥＧＦ−Ｅ等のＶＥＧＦ関連血管形成因子を含み、それらは、同源ＶＥＦＧ受容体（すなわち、ＶＥＧＦＲ）を通して作用して、血管形成または血管形成プロセスを誘発する。用語「ＶＥＧＦ」は、ＶＥＧＦＲ−Ｉ（ＦＩｔ−Ｉ）（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＡＦ０６３６５７およびＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／１２７０２９号の配列番号８を参照）、ＶＥＧＦＲ−２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１）（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＡＦ０３５１２１およびＡＡＢ８８００５を参照）、またはＶＥＧＦＲ−３（ＦＬＴ−４）等、ＶＥＧＦ受容体に結合する成長因子のクラスの任意のメンバーを含む。用語「ＶＥＧＦ」は、「ＶＥＧＦ」ポリペプチドまたは「ＶＥＧＦ」コード化遺伝子もしくは核酸を指すために使用され得る。
【００４３】
用語「ＰＤＧＦ拮抗薬」は、概して、ＰＤＧＦの活性または産生を、部分的にかまたは完全にかのいずれかで低減または阻害する薬剤を指す。ＰＤＧＦ拮抗薬は、ＰＤＧＦ−Ｂ等の特定のＰＤＧＦの活性または産生を、直接的または間接的に低減または阻害することができる。さらに、上述の「拮抗薬」の定義に一致する「ＰＤＧＦ拮抗薬」は、ＰＤＧＦリガンドまたはその同源受容体に作用して、ＰＤＧＦに関連付けられる受容体シグナルを低減または阻害する薬剤を含む。「ＰＤＧＦ拮抗薬」の例としては、ＰＤＧＦ核酸を標的とする、アンチセンス分子、リポザイム、またはＲＮＡｉ、抗ＰＤＧＦアプタマー、ＰＤＧＦ自体またはその受容体に対する抗ＰＤＧＦ抗体、またはＰＤＧＦのその同源受容体への結合を防ぐ可溶性ＰＤＧＦ受容体デコイ、同源ＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）核酸を標的とする、アンチセンス分子、リポザイム、またはＲＮＡｉ、同源ＰＤＧＦＲ受容体に結合する抗ＰＤＧＦＲアプタマーまたは抗ＰＤＧＦＲ抗体、およびＰＤＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬が挙げられる。
【００４４】
用語「ＶＥＧＦ拮抗薬」は、概して、ＶＥＧＦの活性または産生を、部分的にかまたは完全にかのいずれかで低減または阻害する薬剤を指す。ＶＥＧＦ拮抗薬は、ＶＥＧＦ１６５等の特定のＶＥＧＦの活性または産生を、直接的または間接的に低減または阻害することができる。さらに、上述の「拮抗薬」の定義に一致する「ＶＥＧＦ拮抗薬」は、ＶＥＧＦリガンドまたはその同源受容体かのいずれかに作用して、ＶＥＧＦに関連付けられる受容体シグナルを低減または阻害する薬剤を含む。「ＶＥＧＦ拮抗薬」の例としては、ＶＥＧＦ核酸を標的とする、アンチセンス分子、リポザイム、またはＲＮＡｉ、抗ＶＥＧＦアプタマー、ＶＥＧＦ自体またはその受容体に対する抗ＶＥＧＦ抗体、またはＶＥＧＦのその同源受容体への結合を防ぐ可溶性ＶＥＧＦ受容体デコイ、同源ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）核酸を標的とするアンチセンス分子、リポザイム、またはＲＮＡｉ、同源ＶＥＧＦＲ受容体に結合する抗ＶＥＧＦＲアプタマーまたは抗ＶＥＧＦＲ抗体、およびＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬が挙げられる。本明細書で使用するとき、用語「ＶＥＧＦ拮抗薬」は、ラニビズマブ、ベバシズマブ、およびアフリバーセプトを集合的に指すために使用される。
【００４５】
「薬学的に許容される塩」としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソムコチネート、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩（ｔａｒｔｒａｔｅ）、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、糖酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、パモ酸塩、酢酸フェニル、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジミトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン−２−安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α−ヒドロキシ酪酸塩、ブチン−ｌ，４−ジカルボン酸塩、ヘキシン−ｌ，４−ジカルボン酸塩、カプリン酸塩、カプリル酸塩、桂皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、ヒプル酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩（ｈｙｄｒｏｘｙｍａｌｅａｔｅ）、マロン酸塩、マンデル酸、メシル酸塩、ムコチネート、フタル酸塩、テラフタレート、プロピオル酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ナフタレン−ｌ，５−スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩（ｔａｒｔａｒａｔｅ  ｓａｌｔ）が挙げられる。用語「薬学的に許容される塩」はまた、カルボン酸官能基等の酸性官能基、および塩基を有する本発明の拮抗薬の塩を指す。好適な塩基としては、ナトリウム、カリウム、およびリチウム等のアルカリ金属の水酸化物、カルシウムおよびマグネシウム等のアルカリ土類金属の水酸化物、アルミニウムおよび亜鉛等の他の金属の水酸化物、アンモニア、ならびに有機アミン、例えば、非置換またはヒドロキシ置換のモノ−、ジ−、またはトリ−アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ−メチル、Ｎ−エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン等、モノ−、ビス−、またはトリス−（２−ＯＨ−低級アルキルアミン）、例えば、モノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミン等、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシル−低級アルキル）−アミン、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン等、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ならびにアミノ酸、例えば、アルギニン、リシン等が挙げられるが、これらに限定されない。用語「薬学的に許容される塩」はまた、本発明の化合物の水和物を含む。
【００４６】
用語「有効量」は、本発明の組成物または眼科疾患の治療もしくは予防とともに使用されるとき、眼科疾患の治療または予防に有用であるＰＤＧＦ拮抗薬およびＶＥＧＦ拮抗薬の組み合わせた量を指す。「有効量」は、投与の方式、眼科疾患の特定の場所、年齢、体重、および哺乳類の健康全般に応じて変動し得る。本発明の組成物の各拮抗薬の有効量は、例えＶＥＧＦ拮抗薬の不在下でのＰＤＧＦ拮抗薬の量、またはＰＤＧＦ拮抗薬の不在下でのＶＥＧＦ拮抗薬の量が、眼科疾患を治療または予防するのに無効であったとしても、眼科疾患を組成物で治療または予防するために有用なそれぞれの量である。
【００４７】
ポリペプチドＸの「変異体」は、１つ以上のアミノ酸残基において変更されたポリペプチドＸのアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。「変異体」は、置換されたアミノ酸が類似の構造的または化学的特性を有する、「保守的」変化を有することができる（例えば、イソロイシンによるロイシンの置き換え）。より稀には、変異体は、「非保存的」変化を有することができる（例えば、トリプトファンによるグリシンの置き換え）。類似の僅かな変異はまた、アミノ酸の欠失、挿入、またはその双方を含んでもよい。生物学的または免疫学的活性を除去することなく、どのアミノ酸残基が、置換、挿入、または欠失され得るかを決定する手引きは、当該技術分野において周知のコンピュータプログラム、例えば、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ）を用いて、決定され得る。
【００４８】
用語「変異体」は、ポリヌクレオチド配列の文脈で使用するとき、遺伝子、そのコード化配列、アプタマー、または他のポリヌクレオチド配列のものに関連するポリヌクレオチド配列を包括することができる。変異体は、参照遺伝子、コード化配列、アプタマー、または他のポリヌクレオチド配列と比較して、１つ以上のヌクレオチドまたはヌクレオシドの置換、追加、または挿入を含んでもよい。この定義はまた、例えば、「対立遺伝子」、「スプライス」、「種」、または「多型」変異体を含む。スプライス変異体は、参照分子に対して著しい同一性を有し得るが、概して、ｍＲＮＡ処理中のエクソンの選択的スプライシングのために、より多数またはより少数のポリヌクレオチドを有するであろう。種変異体は、種によって異なるポリヌクレオチド配列である。多型変異体は、所与の種の個体間での特定の遺伝子のポリヌクレオチド配列における変異である。
【００４９】
本明細書で使用するとき、用語「賦形剤」は、希釈剤、ビヒクル、防腐剤、結合剤、または活性薬剤のための安定化薬剤として一般的に使用される、典型的には不活性の物質を指し、タンパク質（例えば、血清アルブミン等）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、アラニン等）、脂肪酸およびリン脂質（例えば、スルホン酸アルキル、カプリル酸塩等）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤等）、単糖類（例えば、スクロース、マルトース、トレハロース等）、ならびにポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトール等）が挙げられるが、これらに限定されない。また、その全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｂｙ  Ｊｏｓｅｐｈ  Ｐ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，１８ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（ｂｙ  Ｒａｙｍｏｎｄ  Ｃ．Ｒｏｗｅ，５ｔｈ  ｅｄ．，ＡＰｈＡ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）も参照されたい。特定の実施形態では、賦形剤（単数または複数）は、増大されたタンパク質、ポリヌクレオチド、アプタマー、もしくは小分子の安定性、増大されたタンパク質、ポリヌクレオチド、アプタマー、もしくは小分子の可溶性、または減少された粘度等、有益な物理的特性を組成物に付与する。幾つかの実施形態では、組成物は、複数の活性薬剤を含み、賦形剤（単数または複数）は、活性薬剤を安定化するのを助ける。
【００５０】
本明細書で使用するとき、用語「緩衝液」は、薬学的調製物のｐＨを安定化する薬学的に許容される賦形剤を表す。好適な緩衝液は、当該技術分野において周知である。好適な薬学的に許容される緩衝液としては、酢酸塩緩衝液、ヒスチジン緩衝液、クエン酸塩緩衝液、コハク酸塩緩衝液、トリス緩衝液、およびリン酸緩衝液が挙げられるが、これらに限定されない。かかる緩衝液を調製するための方法は、当該技術分野において既知である。使用される緩衝液とは独立して、ｐＨは、当該技術分野において既知の酸または塩基、例えば、コハク酸、塩酸、酢酸、リン酸、硫酸、およびクエン酸、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムを用いて、約４．５〜約７．０、または別法として約５．５〜約６．５、または別法として約６．０の値に調整され得る。好適な緩衝液としては、限定されないが、ヒスチジン緩衝液、２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、カコジル酸塩、リン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、およびクエン酸塩緩衝液が挙げられる。リン酸緩衝液のさらなる例としてはまた、限定されないが、リン酸ナトリウム緩衝液およびリン酸カリウム緩衝液が挙げられる。リン酸ナトリウム緩衝液は、例えば、ＮａＨ２ＰＯ４（一塩基性）の溶液をＮａ２ＨＰＯ４（二塩基性）の溶液と組み合わせ、次に、組み合わせた溶液のｐＨを、所望のｐＨに達成するようにリン酸かまたは水酸化ナトリウムかのいずれかで調整することによって、調製されてもよい。２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−プロパン−１，３−ジオール（トリス）緩衝液は、例えば、ＨＣｌを用いて、トリスの溶液のｐＨを所望のｐＨ、例えば、約ｐＨ７．０〜約ｐＨ９．０の範囲のｐＨに達成するように調整することによって、調製されてもよい。Ｌ−ヒスチジンもまた、本発明による緩衝液として使用されてよい。特定の実施形態では、緩衝液は、例えば、保管中、例えば、室温または４℃での少なくとも１週間、少なくとも１ヵ月、少なくとも２カ月、少なくとも４カ月、少なくとも６カ月、少なくとも１年、または少なくとも２年にわたる保管中に、本発明の組成物のｐＨを所望の範囲内または所望のｐＨ近くに達成または維持することが可能である。特定の実施形態では、緩衝液の濃度は、約０．０１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約０．１〜約２００ｍＭ、約０．１〜約１００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２ｍＭ〜約６０ｍＭ、約４ｍＭ〜約６０ｍＭ、または約４ｍＭ〜約４０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約２５ｍＭである。
【００５１】
薬学的に許容される「抗凍結剤」は、当該技術分野において既知であり、限定されないが、例えば、スクロース、トレハロース、およびグリセロール等が挙げられる。薬学的に許容される抗凍結剤は、組成物またはその中の１つ以上の活性成分の、凍結または凍結乾燥の効果からの安定性の保護を提供する。
【００５２】
本明細書で使用するとき、用語「等張化剤」または「張性修飾剤」は、組成物の張性を変調するために使用される、薬学的に許容される薬剤を表す。好適な等張化剤としては、塩化ナトリウム、ソルビトール、トレハロース、塩化カリウム、グリセリン、および本明細書で定義されるような、アミノ酸、糖の群からの任意の構成要素、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、等張化剤は、約１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約５ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約４５０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約４００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭ、または約１２５ｍＭ〜約１７５ｍＭの量で使用されてもよい。特定の実施形態では、等張化剤は、約５ｍＭ〜約５００ｍＭで組成物中に存在するアミノ酸を含む。
【００５３】
用語「安定剤」は、活性薬学的成分（単数または複数）または薬剤（単数または複数）または組成物を、製造、保管、または適用中に化学的または物理的劣化から保護する、薬学的な許容される賦形剤を示す。安定剤としては、糖、アミノ酸、ポリオール、界面活性剤、酸化防止剤、防腐剤、シクロデキストリン、例えば、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエチル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン等、ポリエチレングリコール、例えば、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ６０００等、アルブミン、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等、塩、例えば、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等、およびキレート剤、例えば、ＥＤＴＡ等が挙げられるが、これらに限定されない。安定剤は、約０．１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１０〜約３００ｍＭ、または約１００ｍＭ〜約３００ｍＭの量で、組成物中に存在してもよい。
【００５４】
本明細書で使用するとき、用語「界面活性剤」は、両親媒性構造を有する薬学的に許容される有機物質を指し、すなわち、それは、反対の可溶性傾向の群、典型的には、油溶性の炭化水素鎖と水溶性のイオン基とから成る。界面活性剤は、表面活性部分の電荷に応じて、アニオン性、カチオン性、および非イオン性界面活性剤に分類され得る。界面活性剤は、薬学的組成物および生物学的材料の調製物のための湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、および分散剤として使用されてもよい。本明細書で説明される組成物の幾つかの実施形態では、界面活性剤の量は、重量／体積パーセント（重量／体積％）で表される割合として説明される。好適な薬学的に許容される界面活性剤としては、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ）、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、またはドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の群が挙げられるが、これらに限定されない。ポリオキシエチレンソルビタン−脂肪酸エステルとしては、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０（商標）の商品名で販売されている）およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０（商標）の商品名で販売されている）が挙げられる。ポリエチレン−ポリプロピレンコポリマーとしては、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８またはＰｏｌｏｘａｍｅｒ１８８（商標）の名称で販売されているものが挙げられる。ポリオキシエチレンアルキルエーテルとしては、Ｂｒｉｊ（商標）の商品名で販売されているものが挙げられる。アルキルフェノールポリオキシエチレンエーテルとしては、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘの商品名で販売されているものが挙げられる。ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０（商標））およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））は、概して、組成物の総体積の約０．００１重量／体積％〜約１重量／体積％、もしくは約０．００２重量／体積％〜約０．１重量／体積％の範囲、または別法として、約０．００３重量／体積％〜約０．００７重量／体積％の濃度で使用される。幾つかの実施形態では、Ｔｗｅｅｎ８０（商標）は、約０．００３重量／体積％、約０．００４重量／体積％、約０．００４５重量／体積％、約０．００５重量／体積％、約０．００５５重量／体積％、約０．００６重量／体積％、または約０．００７重量／体積％で使用される。幾つかの実施形態では、Ｔｗｅｅｎ８０（商標）は、約０．００５重量／体積％で使用される。この態様では、「重量／体積」は、組成物の総体積当たりの界面活性剤の重量を意図する。
【００５５】
「リオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）」は、凍結乾燥中にタンパク質、核酸、または他の活性薬学的成分（単数または複数）もしくは薬剤（単数または複数）を安定化する、薬学的に許容される物質を指す。リオプロテクタントの例としては、限定されないが、スクロース、トレハロース、またはマンニトールが挙げられる。
【００５６】
「ポリオール」は、複数のヒドロキシル基を含有するアルコール、または糖アルコールを指す。糖アルコールは、そのカルボニル基（アルデヒドまたはケトン、還元糖）が第一級または第二級ヒドロキシル基（したがって、アルコール）に還元された、炭水化物の水素添加された形態である。糖アルコールは、一般式Ｈ（ＨＣＨＯ）ｎ＋１Ｈを有し、一方糖は、Ｈ（ＨＣＨＯ）ｎＨＣＯを有する。
【００５７】
「酸化防止剤」は、他の分子の酸化を減速させる、または防止することが可能な分子を指す。酸化防止剤は、還元剤、キレート剤、および、チオール、アスコルビン酸、またはポリフェノール等の脱酸素剤であることが多い。酸化防止剤の非限定的例としては、アスコルビン酸（ＡＡ、Ｅ３００）、チオ硫酸塩、メチオニン、トコフェロール（Ｅ３０６）、没食子酸プロピル（ＰＧ、Ｅ３１０）、三級ブチルヒドロキノン（ＴＢＨＱ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ、Ｅ３２０）、およびブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ、Ｅ３２１）が挙げられる。
【００５８】
「防腐剤」は、微生物成長または不要な化学変化による分解を防止するために、食品、薬学的組成物、塗料、生体試料、木等の製品に添加される、天然または合成の化学物質である。防腐剤添加物は、単独で、または他の保存方法とともに使用されることができる。防腐剤は、細菌または真菌の成長を阻害する抗菌性防腐剤であってもよく、または構成物質の酸化を阻害する、酸素吸収剤等の酸化防止剤であってもよい。抗菌性防腐剤の例としては、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、クロロヘキシジン、グリセリン、フェノール、ソルビン酸カリウム、チメロサール、亜硫酸塩（二酸化硫黄、重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素カリウム等）、および二ナトリウムＥＤＴＡが挙げられる。他の防腐剤としては、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、クロロブタノール、またはメチルパラベン等の、非経口タンパク質組成物に一般的に使用されるものが挙げられる。
【００５９】
本発明は、少なくとも１つの抗ＰＤＧＦアプタマーと少なくとも１つのＶＥＧＦ拮抗薬とを含む組成物、ならびに関連するその製造および使用の方法を提供する。
【００６０】
一実施形態では、本発明は、有効量の（ａ）抗ＰＤＧＦアプタマーまたはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）ＶＥＧＦ拮抗薬またはその薬学的に許容される塩とを含む組成物を提供する。具体的実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬のうちの一方または双方の少なくとも約９０％は、組成物を約２．０℃〜約８．０℃の温度で少なくとも約１２週間にわたって保管したときに、化学的に安定である。
【００６１】
本発明の種々の組成物および方法の具体的な実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態である。本発明の種々の組成物および方法の具体的な実施形態において、ＶＥＧＦ拮抗薬は、ラニビズマブ、ベバシズマブ、もしくはアフリバーセプト、またはその薬学的に許容される塩である。
【００６２】
別の実施形態では、本発明は、眼科疾患を治療または予防するための方法であって、それを必要とする哺乳類に本発明の組成物を投与することを含む方法を提供する。組成物は、眼科疾患を治療または予防するのに有効な量で投与される。種々の実施形態では、眼科疾患は、加齢性黄斑変性、ポリープ状脈絡膜血管症、脈絡膜血管新生に関連付けられる疾病、高血圧性網膜症、糖尿病性網膜症、鎌状赤血球網膜症、周辺部網膜血管新生に関連付けられる疾病、未熟児網膜症、静脈閉塞症、動脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、嚢胞様黄斑浮腫、網膜末梢血管拡張、動脈瘤、網膜血管腫症、放射線誘発網膜症、虹彩ルベオーシス、または新生物である。具体的実施形態では、眼科疾患は、加齢性黄斑変性であり、また加齢性黄斑変性は、滲出型加齢性黄斑変性または委縮型加齢性黄斑変性である。特定の実施形態では、組成物は、薬物送達デバイス中に存在する。特定の実施形態では、組成物は、眼内に投与される。特定の実施形態では、眼内投与は、硝子体内投与または前房投与である。他の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。
【００６３】
ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬
本発明は、薬学的組成物を含む、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬を含む組成物を提供する。具体的実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態（またはその薬学的に許容される塩）であり、ＶＥＧＦ拮抗薬は、ラニビズマブ、ベバシズマブ、またはアフリバーセプト（またはその薬学的に許容される塩）である。本発明は、有効量の抗ＰＤＧＦアプタマーとＶＥＧＦ拮抗薬とを含む組成物をさらに提供する。
【００６４】
抗ＰＤＧＦアプタマー
特定の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、限定されないが、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８，０３９，４４３号で説明されるものを含み、それはＰＤＧＦ特異的アプタマーおよびＰＤＧＦ−ＶＥＧＦ特異的アプタマーの双方を含む。
【００６５】
抗ＰＤＧＦアプタマーの例としては、そのオリゴヌクレオチド配列が、以下の配列のうちの１つを含む、それから本質的に成る、またはそれから成る、アプタマーが挙げられる：
ＡＲＣ１２６：５’−（５’−ＮＨ２−ｄＣ−ｄＡ−ｄＧ−ｄＧ−ｄＣ−ｆＵ−ｄＡ−ｆＣ−ｍＧ−３’［配列番号１］）−ＨＥＧ−（５’−ｄＣ−ｄＧ−Ｔ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＣ−ｄＡ−ｆＵ−ｆＣ−ｍＡ−３’［配列番号２］）−ＨＥＧ−（５’−Ｔ−ｄＧ−ｄＡ−Ｔ−ｆＣ−ｆＣ−ｆＵ−ｍＧ−［３Ｔ］−３’［配列番号３］）−３’、式中、「ＨＥＧ」＝ヘキサエチレングリコールスペーサーであり、「ｍ」は、２’−メトキシ置換ヌクレオチドを表し、「ｆ」は、２’フルオロ置換ヌクレオチドを表し、「ｄ」は、デオキシヌクレオチドを表し、「［３Ｔ］」は、リボース糖上の３’位置にてオリゴヌクレオチドの３’末端に付着される逆方向チミジンヌクレオチドを指す。
ＡＲＣ１２７：５’−［４０Ｋ  ＰＥＧ］−（５’−ＮＨ２−ｄＣ−ｄＡ−ｄＧ−ｄＧ−ｄＣ−ｆＵ−ｄＡ−ｆＣ−ｍＧ−３’［配列番号１］）−ＨＥＧ−（５’−ｄＣ−ｄＧ−Ｔ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＣ−ｄＡ−ｆＵ−ｆＣ−ｍＡ−３’［配列番号２］）−ＨＥＧ−（５’−Ｔ−ｄＧ−ｄＡ−Ｔ−ｆＣ−ｆＣ−ｆＵ−ｍＧ−［３Ｔ］−３’［配列番号３］）−３’、式中、「ＨＥＧ」＝ヘキサエチレングリコールスペーサーであり、「ｍ」は、２’−メトキシ置換ヌクレオチドを表し、「ｆ」は、２’フルオロ置換ヌクレオチドを表し、「ｄ」は、デオキシヌクレオチドを表し、「［３Ｔ］」は、リボース糖上の３’位置にてオリゴヌクレオチドの３’末端に付着される逆方向チミジンヌクレオチドを指す。
ＡＲＣ２４０：５’−［２０Ｋ  ＰＥＧ］−（５’−ＮＨ２−ｄＣ−ｄＡ−ｄＧ−ｄＧ−ｄＣ−ｆＵ−ｄＡ−ｆＣ−ｍＧ−３’［配列番号１］）−ＨＥＧ−（５’−ｄＣ−ｄＧ−Ｔ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＣ−ｄＡ−ｆＵ−ｆＣ−ｍＡ−３’［配列番号２］）−ＨＥＧ−（５’−Ｔ−ｄＧ−ｄＡ−Ｔ−ｆＣ−ｆＣ−ｆＵ−ｍＧ−［３Ｔ］−３’［配列番号３］）−３’、式中、「ＨＥＧ」＝ヘキサエチレングリコールスペーサーであり、「ｍ」は、２’−メトキシ置換ヌクレオチドを表し、「ｆ」は、２’フルオロ置換ヌクレオチドを表し、「ｄ」は、デオキシヌクレオチドを表し、「［３Ｔ］」は、リボース糖上の３’位置にてオリゴヌクレオチドの３’末端に付着される逆方向チミジンヌクレオチドを指す。
ＡＲＣ３０８：５’−［３０Ｋ  ＰＥＧ］−（５’−ＮＨ２−ｄＣ−ｄＡ−ｄＧ−ｄＧ−ｄＣ−ｆＵ−ｄＡ−ｆＣ−ｍＧ−３’［配列番号１］）−ＨＥＧ−（５’−ｄＣ−ｄＧ−Ｔ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＣ−ｄＡ−ｆＵ−ｆＣ−ｍＡ−３［配列番号２］）−ＨＥＧ−（５’−Ｔ−ｄＧ−ｄＡ−Ｔ−ｆＣ−ｆＣ−ｆＵ−ｍＧ−［３Ｔ］−３’［配列番号３］）−３’、式中、「ＨＥＧ」＝ヘキサエチレングリコールスペーサーであり、「ｍ」は、２’−メトキシ置換ヌクレオチドを表し、「ｆ」は、２’フルオロ置換ヌクレオチドを表し、「ｄ」は、デオキシヌクレオチドを表し、「［３Ｔ］」は、リボース糖上の３’位置にてオリゴヌクレオチドの３’末端に付着される逆方向チミジンヌクレオチドを指す。
デオキシＡＲＣ１２６：５’−ｄＣｄＡｄＧｄＧｄＣｄＴｄＡｄＣｄＧｄＣｄＧｄＴｄＡｄＧｄＡｄＧｄＣｄＡｄＴｄＣｄＡｄＴｄＧｄＡｄＴｄＣｄＣｄＴｄＧ−［３Ｔ］−３’（配列番号７５）、式中、「ｄ」は、非修飾デオキシヌクレオチドを表し、「［３Ｔ］」は、リボース糖の３’位置にてオリゴヌクレオチドの３’末端に付着される逆方向チミジンヌクレオチドを指し、したがって、オリゴヌクレオチドは、２つの５’末端を有し、またしたがって、３’ヒドロキシル末端に作用するヌクレアーゼに耐性がある。また、
ＡＲＣ１２４：５’−ＣＡＣＡＧＧＣＴＡＣＧＧＣＡＣＧＴＡＧＡＧＣＡＴＣＡＣＣＡＴＧＡＴＣＣＴＧＴＧ［３Ｔ］−３’（配列番号６）、式中、「［３Ｔ］」は、リボース糖上の３’位置にてオリゴヌクレオチドの３’末端に付着される逆方向チミジンヌクレオチドを指す。
【００６６】
ＰＤＧＦ−ＶＥＧＦ結合多価アプタマーの例としては、ＰＤＧＦ−Ｂ−ＶＥＧＦアプタマーキメラＴＫ．１３１．１２．ＡおよびＴＫ．１３１．１２．Ｂが挙げられ、これらは、ＰＤＧＦ−ＢおよびＶＥＧＦの同時標的を可能にする。これらのアプタマラキメラは、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００６／０５０４９８号および同第ＷＯ２００４／０９４６１４号で説明されている。
【００６７】
ＴＫ．１３１．０１２．Ａの配列は、５’ｄＣｄＡｄＧｄＧｄＣｄＴｄＡｄＣｄＧｍＡｍＵｍＧｍＣｍＡｍＧｍＵｍＵｍＵｍＧｍＡｍＧｍＡｍＡｍＧｍＵｍＣｍＧｍＣｍＧｍＣｍＡｍＵｄＣｄＧｄＴｄＡｄＧｄＡｄＧｄＣｄＡｄＴｄＣｄＡｄＧｄＡｄＡｄＡｄＴｄＧｄＡｄＴｄＣｄＣｄＴｄＧ［３Ｔ］−３’（配列番号４）であり、式中、「ｍ」は、２’−ＯＭｅヌクレオチドを表し、「ｄ」および「［３Ｔ］」は、上で定義される通りであり、
またＴＫ．１３１．０１２．Ｂの配列は、５’ｄＣｄＡｄＧｄＧｄＣｄＴｄＡｄＣｄＧｍＵｍＧｍＣｍＡｍＧｍＵｍＵｍＵｍＧｍＡｍＧｍＡｍＡｍＧｍＵｍＣｍＧｍＣｍＧｍＣｍＡｄＣｄＧｄＴｄＡｄＧｄＡｄＧｄＣｄＡｄＴｄＣｄＡｄＧｄＡｄＡｄＡｄＴｄＧｄＡｄＴｄＣｄＣｄＴｄＧ−［３Ｔ］（配列番号５）であり、式中、「ｍ」、「ｄ」、および「［３Ｔ］」は、上で定義される通りである。
【００６８】
具体的実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、ＰＤＧＦを結合する。具体的実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、ＰＤＧＦ−ＡまたはＰＤＧＦ−Ｂに結合する。抗ＰＤＧＦアプタマーの例としては、ＰＤＧＦ−Ｂタンパク質にインビトロで特異的に結合し、またインビボおよび細胞ベース分析においてＰＤＧＦ−ＢＢの活性を機能的に遮断する、３１〜３５個のヌクレオチドの長さの一連の核酸アプタマーが挙げられる（米国特許第８，０３９，４４３号の配列番号１〜配列番号３、配列番号４〜配列番号３０、配列番号３１〜配列番号６８、配列番号６９、および配列番号７０〜配列番号７４）。具体的実施形態では、抗ＰＤＧＦ−Ｂアプタマーは、７個の個別の２’Ｆ含有残基を含有する親分子ＡＲＣ１２６，５’−（５’−ＮＨ２−ｄＣ−ｄＡ−ｄＧ−ｄＧ−ｄＣ−ｆＵ−ｄＡ−ｆＣ−ｍＧ−３’［配列番号１］）−ＨＥＧ−（５’−ｄＣ−ｄＧ−Ｔ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＡ−ｍＧ−ｄＣ−ｄＡ−ｆＵ−ｆＣ−ｍＡ−３’［配列番号２］）−ＨＥＧ−（５’−Ｔ−ｄＧ−ｄＡ−Ｔ−ｆＣ−ｆＣ−ｆＵ−ｍＧ−［３Ｔ］−３’［配列番号３］）−３’に由来し、式中、ＨＥＧ＝ヘキサエチレングリコールスペーサーであり、［３Ｔ］は、リボース糖上の３’位置にてオリゴヌクレオチドの３’末端に付着される逆方向チミジンヌクレオチドを指す。２’Ｆ含有残基は、血清エンドヌクレアーゼまたはエクソヌクレアーゼによるその劣化を遮断することによって、インビトロで血清を、およびインビボでアプタマーの安定性を増大することができる。具体的実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、強力なインビトロ結合および抗増殖性活性を保持し、また天然起源２’デオキシまたは２’ＯＭｅ置換ヌクレオチドを含有する、完全に２’Ｆを含まないアプタマーである。それに加えて、具体的実施形態では、これらのアプタマーは、インビトロ安定性分析におけるヌクレアーゼ劣化に対する耐性を通じて決定する際に、実質的な血清安定性を保持する。
【００６９】
特定の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、拮抗薬Ａまたはその薬学的に許容される塩である。拮抗薬Ａの化学名は、［（モノメトキシ２０Ｋポリエチレングリコールカルバモイル−Ｎ２−）（モノメトキシ２０Ｋポリエチレングリコールカルバモイル−Ｎ６−）］−リシン−アミド−６−ヘキサンジリル（ｈｅｘａｎｄｉｌｙｌ）−（１−５’）−２’−デオキシシチジリル−（３’−５’）−２’−デオキシアデニリル−（３’−５’）−２’−デオキシグアニリル−（３’−５’）−２’−デオキシグアニリル−（３’−５’）−２’−デオキシシチジリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−フルオロウリジリル−（３’−５’）−２’−デオキシアデニリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−フルオロシチジリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−メトキシグアニリル−（３’−ｌ）−ＰＯ３−ヘキサ（エチルオキシ）−（１８−５’）−２’−デオキシシチジリル−（３’−５’）−２’−デオキシグアニリル−（３’−５’）−チミジリル−（３’−５’）−２’−デオキシアデニリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−メトキシグアニリル−（３’−５’）−２’−デオキシアデニリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−メトキシグアニリル−（３’−５’）−２’−デオキシシチジリル−（３’−５’）−２’−デオキシアデニリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−フルオロウリジリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−フルオロシチジリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−メトキシアデニリル−（３’−ｌ）−ＰＯ３−ヘキサ（エチルオキシ）−（１８−５’）−チミジリル−（３’−５’）−２’−デオキシグアニリル−（３’−５’）−２’−デオキシアデニリル−（３’−５’）−チミジリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−フルオロシチジリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−フルオロシチジリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−フルオロウリジリル−（３’−５’）−２’−デオキシ−２’−メトキシグアニリル−（３’−３’）−チミジンである。
【００７０】
拮抗薬Ａの構造は、図７８Ａ〜Ｆに示され、またその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／１２７０２９号の図７にも説明されている。
【００７１】
拮抗薬Ａの配列は、
５’−［ｍＰＥＧ２  ４０ｋＤ］−［ＨＮ−（ＣＨ２）６Ｏ］ＣＡＧＧＣＵｆＡＣｆＧｍ（配列番号１）［ＰＯ３（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）６］ＣＧＴＡＧｍＡＧｍＣＡＵｆＣｆＡｍ（配列番号２）［ＰＯ３（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）６］ＴＧＡＴＣｆＣｆＵｆＧｍ［３Ｔ］（配列番号３）−３’であり、式中、［３Ｔ］は、リボース糖上の３’位置にてオリゴヌクレオチドの３’末端に付着される逆方向チミジンヌクレオチドを指し、［ｍＰＥＧ２  ４０ｋＤ］は、２つの２０ｋＤのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー鎖を表し、一実施形態では、カルバメート結合を介してリシン残基の２つのアミノ基に共有的に付着される、２つの約２０ｋＤのＰＥＧポリマー鎖を表す。この部分は次に、下に説明されるアミノリンカーを介してオリゴヌクレオチドと結合される。
【００７２】
［ＨＮ−（ＣＨ２）６Ｏ］は、アミド結合を介してＰＥＧポリマーに共有的に付着される二官能性α−ヒドロキシ−ω−アミノリンカーを表す。リンカーは、ホスホジエステル結合によって拮抗薬Ａの−５’末端にてオリゴヌクレオチドに付着される。
【００７３】
［ＰＯ３（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）６］は、ホスホジエステル結合を介してオリゴヌクレオチドのセグメントをつなぐ、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＸ）部分を表す。拮抗薬Ａは、リンカーとそれぞれのヌクレオチドとの間のホスホジエステル結合を介して、９番目と１０番目のヌクレオチド、および２１番目と２２番目のヌクレオチドとを一緒につなぐ、２つのＨＥＸ結合を有する。
【００７４】
Ｃ、Ａ、Ｇ、およびＴは、それぞれ、シトシン、アデノシン、グアノシン、およびチミジン核酸の２’−デオキシ誘導体に対する１文字記号を表す。拮抗薬Ａは、４個の２’−デオキシリボシトシン、６個の２’−デオキシリボアデノシン、４個の２’−デオキシリボグアノシン、および４個の２’−デオキシリボチミジンを有する。
【００７５】
ＧｍおよびＡｍは、それぞれ、グアノシンおよびアデノシンの２’−メトキシ置換形態を表す。拮抗薬Ａは、４個の２’−メトキシグアノシンおよび１個の２’−メトキシアデノシンを有する。ＣｆおよびＵｆは、それぞれ、シトシンおよびウリジンの２’−フルオロ置換形態を表す。拮抗薬Ａは、４個の２’−フルオロシトシンおよび３個の２’−フルオロウリジンを有する。
【００７６】
オリゴヌクレオチド内のホスホジエステル結合は、３’−末端を除き、標準ヌクレオシドまたはヌクレオチドホスホジエステル結合でリボース環の５’−および３’−酸素を接続する。３’−末端チミジンと最後から２番目のＧｍとの間のホスホジエステル結合は、そのそれぞれの３’−酸素を結合し、それは３’，３’−キャップと称される。
【００７７】
拮抗薬Ａは、分子全体（核酸、アミノリンカー、およびポリエチレングリコール部分を含む）について約４０，０００〜約６０，０００ダルトンの、一実施形態では、４０，０００〜６０，０００ダルトンの分子量を有し、溶液で無色から僅かに黄色であり得る。特定の実施形態では、拮抗薬Ａは、緩衝剤としての一塩基性リン酸ナトリウム一水和物および二塩基性リン酸ナトリウム七水和物の溶液中に、ならびに張性調整剤としての塩化ナトリウムの溶液中に、存在することができる。拮抗薬Ａは、親水性ポリマーである。拮抗薬Ａナトリウム塩は、水およびリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で、目視検査によって評価する際に、少なくとも約５０ｍｇ（オリゴヌクレオチド重量を基準とする）／ｍＬの溶液まで可溶性である。
【００７８】
一実施形態では、拮抗薬Ａは、オリゴヌクレオチド部分およびアミノリンカーを産生するための反復的化学合成手順を用いて製造することができ、該オリゴヌクレオチド部分およびアミノリンカーは次に、実施例５に説明されるように、および参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／１２７０２９号の実施例４に説明されるように、ペグ化試薬に共有結合される。
【００７９】
拮抗薬Ａは、任意の数の無機酸および有機酸と反応して、薬学的に許容される塩を形成することができる、十分に塩基性の官能基を有することができる。薬学的に許容される酸添加塩は、当該技術分野において周知であるとおり、薬学的に許容される酸から形成される。かかる塩としては、本明細書で説明されるもの、ならびに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）およびＴｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，Ｐ  Ｈ  Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ  Ｇ  Ｗｅｒｍｕｔｈ（ＥＤｓ），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２で列挙される薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００８０】
他の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、拮抗薬Ａ等のアプタマーの修飾された形態、または本明細書で説明される別のアプタマーであり、それは、本明細書で説明される修飾のうちの１つ以上を含んでもよい。拮抗薬Ａに関して具体的に述べられているが、本明細書で説明される修飾のうちのいずれも、本明細書で説明される任意の他の抗ＰＤＧＦアプタマーの修飾された形態内に存在してもよく、その各々は、本発明において有用であり得ることが理解される。具体的実施形態では、アプタマーの修飾された形態、例えば、拮抗薬Ａの修飾された形態は、該アプタマーと同じヌクレオチド配列および核酸を含むか、またはそれから成るが、該アプタマーと比較して１つ以上の異なるポリエチレングリコールポリマー鎖を含むか、またはポリエチレングリコールポリマー鎖のうちの１つ以上を該アプタマーの核酸部分に結合する１つ以上の異なるリンカーを含む。
【００８１】
幾つかの実施形態では、アプタマーの修飾された形態、例えば、拮抗薬Ａの修飾された形態は、該アプタマーと比較して化学的に修飾されたヌクレオチドを有することができ、ピリミジン塩基における５−Ｘまたは２’−Ｙ置換およびプリン塩基における８−Ｘまたは２’−Ｙ置換が挙げられる。２’−修飾、例えば、２’−フルオロおよび２’−Ｏ−Ｍｅは、標的とのアプタマー結合相互作用を損なうことなく、ヌクレアーゼに対する安定化のために利用され得る。例えば、Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２２，５２２９−５２３４（１９９４）、Ｊｅｌｌｉｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３４，１１３６３−１１３７（１９９５）、Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２２，５２２９−５２３４（１９９４）、Ｋｕｂｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５９（１），２５９−２６７（１９９７）、Ｐａｇｒａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１，６８−７３（１９９７）、およびＷｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ，１０（６），６０７−６１４（２００６）を参照されたい。幾つかの実施形態では、化学置換は、糖位置における化学置換、塩基位置における化学置換、またはリン酸塩位置における化学置換であり得る。
【００８２】
例えば、拮抗薬Ａ等のアプタマーの修飾された形態に存在することができる修飾としては、アプタマー塩基またはアプタマー全体に追加の電荷、分極性、疎水性、水素結合、静電相互作用、または流動性を組み込む他の化学基を提供する修飾が挙げられるが、これらだけに限定されない。かかる修飾としては、２’位の糖修飾、５位のピリミジン修飾、８位のプリン修飾、環外アミンにおける修飾、４−チオウリジンの置換、５−ブロモまたは５−ヨード−ウラシルの置換、骨格修飾、ホスホロチオエートまたはリン酸アルキル修飾、メチル化、イソ塩基イソシチジン（ｉｓｏｂａｓｅｓ  ｉｓｏｃｙｔｉｄｉｎｅ）およびイソグアニジン等の異例な塩基対合の組み合わせ等が挙げられるが、これらに限定されない。修飾はまた、キャッピングまたは糖部分による修飾等の、３’および５’修飾を含むこともできる。本発明の幾つかの実施形態では、アプタマーの修飾された形態、例えば、拮抗薬Ａの修飾された形態は、ピリミジン残基の糖部分上で修飾された２’−フルオロ（２’−Ｆ）である、ＲＮＡ分子である。アプタマーの修飾された形態、例えば、拮抗薬Ａの修飾された形態に存在することができる修飾、および本発明に従って使用されることができる安定化アプタマーの例は、米国特許第８，０３９，４４３号で説明され、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、抗ＰＤＧＦ−Ｂアプタマーであり、米国特許第８，０３９，４４３号で説明されるものを含むがこれに限定されない。
【００８３】
幾つかの実施形態では、アプタマーの安定性は、かかる修飾の導入によって、ならびにＲＮＡのリン酸骨格に沿った修飾および置換によって増大されることができ、それはまた、アプタマーの修飾された形態、例えば、拮抗薬Ａの修飾された形態にも存在してもよい。それに加えて、種々の修飾は、劣化を阻害し、また所望のヌクレオチド相互作用を増大させるか、または不要なヌクレオチド相互作用を減少させることができる、核酸塩基自体になされ得る。したがって、アプタマーの配列が既知となると、修飾または置換は、下に説明される合成手順によって、または当業者に既知の手順によってなされ得る。任意のかかる修飾は、拮抗薬Ａの修飾された形態に存在してもよい。
【００８４】
アプタマーの修飾された形態、例えば、拮抗薬Ａの修飾された形態に存在してもよい他の修飾としては、リボ核酸（すなわち、Ａ、Ｃ、Ｇ、およびＵ）およびデオキシリボ核酸（すなわち、Ａ、Ｃ、Ｇ、およびＴ）内に生じる標準塩基、糖、またはリン酸骨格化学構造の変異である、修飾された塩基（または修飾されたヌクレオシドもしくは修飾されたヌクレオチド）の組み込みが挙げられる。この範囲に含まれるものは、例えば、Ｇｍ（２’−メトキシグアニル酸）、Ａｍ（２’−メトキシアデニル酸）、Ｃｆ（２’−フルオロシチジル酸）、Ｕｆ（２’−フルオロウリジル酸）、Ａｒ（リボアデニル酸）である。拮抗薬Ａの修飾された形態は、５−メチルシトシン、４−アセチルシトシン、３−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、２−チオシトシン、５−ハロシトシン（例えば、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、５−クロロシトシン、および５−ヨードシトシン）、５−プロピニルシトシン、６−アゾシトシン、５−トリフルオロメチルシトシン、Ｎ４，Ｎ４−エタノシトシン、フェノキサジンシチジン、フェノチアジンシチジン、カルバゾールシチジン、またはピリドインドールシチジンを含む、シトシンまたは任意のシトシン関連塩基を含むことができる。拮抗薬Ａの修飾された形態は、６−メチルグアニン、１−メチルグアニン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルグアニン、７−メチルグアニン、２−プロピルグアニン、６−プロピルグアニン、８−ハログアニン（例えば、８−フルオログアニン、８−ブロモグアニン、８−クロログアニン、および８−ヨードグアニン）、８−アミノグアニン、８−スルフヒドリルグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、７−メチルグアニン、８−アザグアニン、７−デアザグアニン、または３−デアザグアニンを含む、グアニンまたは任意のグアニン関連塩基を含むことができる。アプタマーの修飾された形態、例えば、拮抗薬Ａの修飾された形態は、６−メチルアデニン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、Ｎ６−メチルアデニン、１−メチルアデニン、２−メチルアデニン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、８−ハロアデニン（例えば、８−フルオロアデニン、８−ブロモアデニン、８−クロロアデニン、および８−ヨードアデニン）、８−アミノアデニン、８−スルフヒドリルアデニン、８−チオアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、７−メチルアデニン、２−ハロアデニン（例えば、２−フルオロアデニン、２−ブロモアデニン、２−クロロアデニン、および２−ヨードアデニン）、２−アミノアデニン、８−アザアデニン、７−デアザアデニン、または３−デアザアデニンを含む、アデニンまたは任意のアデニン関連塩基を含んでもよい。また、５−ハロウラシル（例えば、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル）、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、１−メチルプソイドウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、５’−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メトキシウラシル、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、プソイドウラシル、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、５−メチルアミノメチルウラシル、５−プロピニルウラシル、６−アゾウラシル、または４−チオウラシルを含む、ウラシルまたは任意のウラシル関連塩基も含まれる。
【００８５】
アプタマーの修飾されたバージョン、例えば、拮抗薬Ａの修飾されたバージョンに存在し得る、当該技術分野において既知である他の修飾された塩基変異体の例としては、限定されないが、４−アセチルシチジン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウリジン、２’−メトキシシチジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、ジヒドロウリジン、２’−Ｏ−メチルプソイドウリジン、ｂ−Ｄ−ガラクトシルクエウオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、１−メチルアデノシン、１−メチルプソイドウリジン、１−メチルグアノシン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアノシン、２−メチルアデノシン、２−メチルグアノシン、３−メチルシチジン、５−メチルシチジン、Ｎ６−メチルアデノシン、７−メチルグアノシン、５−メチルアミノメチルウリジン、５−メトキシアミノメチル−２−チオウリジン、ｂ−Ｄ−マンノシルクエオシン、５−メトキシカルボニルメチルウリジン、５−メトキシウリジン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ−（（９−ｂ−Ｄ−リボフラノシル−２−メチルチオプリン−６−イル）カルバモイル）トレオニン、Ｎ−（（９−ｂ−Ｄ−リボフラノシルプリン−６−イル）Ｎ−メチル−カルバモイル）トレオニン、ウルジン−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウリジン−５−オキシ酢酸、ワイブトキソシン、プソイドウリジン、クエオシン、２−チオシチジン、５−メチル−２−チオウリジン、２−チオウリジン、４−チオウリジン、５−メチルウリジン、Ｎ−（（９−ｂ−Ｄ−リボフラノシルプリン−６−イル）カルバモイル）トレオニン、２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン、２’−Ｏ−メチルウリジン、ワイブトシン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジンが挙げられる。
【００８６】
当該技術分野において既知である修飾されたヌクレオシドおよびヌクレオチド糖骨格変異体の例としては、例えば、２’−リボシル置換基を有するもの、例えば、Ｆ、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２、ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２ＯＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、Ｏ（Ｃｌ−１０アルキル）、Ｏ（Ｃ２−１０アルケニル）、Ｏ（Ｃ２−１０アルキニル）、Ｓ（Ｃｌ−１０アルキル）、Ｓ（Ｃ２−１０アルケニル）、Ｓ（Ｃ２−１０アルキニル）、ＮＨ（Ｃ１−１０アルキル）、ＮＨ（Ｃ２−１０アルケニル）、ＮＨ（Ｃ２−１０アルキニル）、およびＯ−アルキル−Ｏ−アルキル等が挙げられるが、これらに限定されない。望ましい２’リボシル置換基としては、２’−メトキシ（２’−ＯＣＨ３）、２’−アミノプロポキシ（２’ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、２’−アリル（２’−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、２’−Ｏ−アリル（２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、２’−アミノ（２’−ＮＨ２）、および２’−フルオロ（２’−Ｆ）が挙げられる。２’−置換基は、アラビノ（上）位置にあってもよく、またはリボ（下）位置にあってもよい。これらは、拮抗薬Ａの修飾された形態に存在してもよい。
【００８７】
修飾の例としては、ピリミジンに対するプリン置換、ウリジンに対する２’−デオキシジヒドロウリジン置換、シチジンに対する２’−デオキシ−５−メチルシチジン、プリンに対する２−アミノプリン置換、ホスホジエステルに置換されたホスホロチオエート、ホスホジエステルに置換されたジチオリン酸、２’−ＯＨヌクレオチドに置換されたデオキシヌクレオチド、２’−ＯＨもしくはデオキシヌクレオチドに置換された２’−ＯＭｅヌクレオチド、２’−フルオロヌクレオチド、もしくは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチド、ＰＥＧもしくはＰＡＧポリマーの追加、大きい立体分子の追加、３’キャップの追加、またはヌクレアーゼ劣化を遮断することが知られている任意の他の修飾が挙げられる。例えば、その全体が参照により組み込まれる、米国特許公開第２００９００７５３４２号を参照されたい。
【００８８】
アプタマーの修飾された形態、例えば、拮抗薬Ａの修飾された形態は、ヌクレオチドもしくは本明細書で説明されるようなヌクレオチド類似体で、またはその双方の組み合わせで構成されてもよく、あるいはオリゴヌクレオチド類似体である。アプタマーの修飾された形態、例えば、拮抗薬Ａの修飾された形態は、例えば、ＰＤＧＦを結合する等のオリゴマーの機能に影響しない位置に、ヌクレオチド類似体を含有してもよい。
【００８９】
本明細書で説明される抗ＰＤＧＦアプタマーは、親油性化合物（例えば、コレステロール）等の１つ以上の非生理学的活性基と結合されることができ、１つ以上の非免疫原性高分子量化合物（例えば、ポリアルキレングリコール）と結合されることができ、または親油性構成要素（例えば、リポソーム）を含む複合体に付着もしくは封入されることができる。一実施形態では、結合されたアプタマーは、細胞内標的へのアプタマーの送達のための細胞によるアプタマーの細胞取り込みを強化する。米国特許第６，０１１，０２０号は、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、１つ以上の親油性化合物または非免疫原性の高分子量化合物と結合されるアプタマーを調製するための方法を説明している。
【００９０】
本明細書で説明される抗ＰＤＧＦアプタマーは、米国特許第６，０１１，０２０号で説明されるように、リンカーを介して、診断的または治療的複合体内の１つ以上の非生理学的活性基、例えば、親油性または非免疫原性の高分子量化合物等に付着されてもよい。診断的または治療的複合体内で、リンカーを介してジアシルグリセロールまたはジアルキルグリセロール等の親油性化合物に付着されるアプタマーは、米国特許第５，８５９，２２８号で説明されている。リンカーを介して、グリセロール脂質等の親油性化合物、またはポリアルキレングリコール等の非免疫原性の高分子量化合物に付着されるアプタマーは、米国特許第６，０５１，６９８号でさらに説明される。リンカーを介して非免疫原性高分子量化合物または親油性化合物に付着されるアプタマーはまた、１９９７年１０月１７日に出願された、「Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ」と題されるＰＣＴ／ＵＳ９７／１８９４４にもさらに説明される。本明細書で説明される特許および特許出願のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
【００９１】
１つ以上のアプタマー、例えば、拮抗薬Ａは、リンカーを介して非免疫原性高分子量化合物または親油性化合物に付着される。非免疫原性高分子量化合物は、約１００Ｄａ〜１，０００，０００Ｄａ、約１０００Ｄａ〜５００，０００Ｄａ、または約１０００Ｄａ〜２００，０００Ｄａの分子量を有する、典型的には免疫原性応答を生成しない、直鎖または分枝化合物であり得る。一実施形態では、非免疫原性高分子量化合物は、ポリアルキレングリコールであり得る。一実施形態では、非免疫原性高分子量化合物は、ポリアルキレングリコールを含む。一実施形態では、非免疫原性高分子量化合物は、複数のポリアルキレングリコールを含む。一実施形態では、非免疫原性高分子量化合物は、２つのポリアルキレングリコールを含む。別の実施形態では、ポリアルキレングリコールは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり得る。幾つかの実施形態では、ＰＥＧは、約１０〜約８０ｋＤａの分子量または約２０〜約４５ｋＤａの分子量を有する。幾つかの実施形態では、複数のＰＥＧは、組み合わされた約１０〜約８０ｋＤａの分子量または約２０〜約４５ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、非免疫原性高分子量化合物は、２つのポリアルキレングリコールを含み、その各々は、約２０ｋＤａの分子量を有する。
【００９２】
アプタマー、例えば、拮抗薬Ａは、リンカーを介して１つ以上の親油性化合物に付着されてもよい。親油性化合物は、脂質と会合する、または脂質に分解する傾向を有する化合物、または低誘電定数を有する他の材料もしくは相であり、主に親油性構成要素に基づく化合物を含む。親油性化合物としては、脂質、および脂質と会合するような傾向を有する非脂質含有化合物（または低誘電定数を有する他の材料もしくは相）が挙げられる。コレステロール、リン脂質、およびジアルキルグリセロール等のグリセロール脂質、ジアシルグリセロール、およびグリセロールアミド脂質は、親油性化合物のさらなる例である。一実施形態では、親油性化合物は、グリセロール脂質である。
【００９３】
非免疫原性高分子量化合物または親油性化合物は、リンカーを介して、例えば、ヌクレオチドの塩基上の環外アミノ基、ピリミジンヌクレオチドの５位、プリンヌクレオチドの８位、ヌクレオチドのリン酸塩のヒドロキシル基、またはアプタマーの５’もしくは３’末端のヒドロキシル基もしくは他の基等のアプタマー上の種々の位置に共有結合されることができる。親油性化合物がグリセロール脂質である、または非免疫原性高分子量化合物がポリアルキレングリコールもしくはポリエチレングリコールである幾つかの実施形態では、非免疫原性高分子量化合物は、リンカーを介して、そのリン酸基の５’または３’ヒドロキシルに結合されることができる。他の実施形態では、親油性化合物または非免疫原性高分子量化合物は、リンカーを介して、アプタマーの５’リン酸基に結合される。アプタマーへの非免疫原性高分子量化合物または親油性化合物の付着は、直接的に、またはアプタマーと親油性化合物または非免疫原性高分子量化合物との間に介在する１つ以上のリンカーを利用してなされることができる。付着が直接的でない場合、幾つかの実施形態では、リンカーは存在しない。
【００９４】
リンカーは、共有結合または非共有相互作用を通して２つ以上の分子実体を接続する分子実体であり、分子実体のうちの１つ以上の機能特性を保存する様式で分子実体の空間的分離を可能にすることができる。
【００９５】
本発明の一実施形態では、非免疫原性高分子量化合物は、ポリアルキレングリコールであり、構造Ｒ（Ｏ（ＣＨ２）ｘ）ｎＯ−を有し、式中、Ｒは独立して、ＨまたはＣＨ３であり、ｘ＝２〜５であり、ｎ＝はポリアルキレングリコール／（１６＋１４ｘ）のＭＷである。本発明の一実施形態では、ポリアルキレングリコールの分子量は、約１０〜８０ｋＤａの間である。別の実施形態では、ポリアルキレングリコールの分子量は、約２０〜４５ｋＤａの間である。また別の実施形態では、ｘ＝２であり、ｎ＝９Ｘ１０２である。リンカーを介して同一のアプタマーに付着される、１つ以上のポリアルキレングリコールが存在することができる。一実施形態では、複数のポリアルキレングリコールが、リンカーを介して同一のアプタマーに付着される。別の実施形態では、２つのポリアルキレングリコールが、リンカーを介して同一のアプタマーに付着される。別の実施形態では、ポリアルキレングリコールは、約４０ｋＤａの分子量を有するポリエチレングリコールである。
【００９６】
一実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、リンカーを介して、ポリアルキレングリコール等の非免疫原性高分子量化合物またはＰＥＧに、または複数の非免疫原性高分子量化合物に付着される。この実施形態では、結合されたＰＤＧＦアプタマーの薬物動態的特性は、抗ＰＤＧＦアプタマー単独と比較して改善される。ポリアルキレングリコールまたはＰＥＧは、リンカーを介して、ＰＤＧＦ上の種々の位置に共有結合されることができる。ポリアルキレングリコールまたはＰＥＧか使用される実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、リンカーを介し、ホスホジエステル結合を介して５’ヒドロキシル基を通して結合されることができる。
【００９７】
幾つかの実施形態では、複数のアプタマーは、ポリアルキレングリコールもしくはＰＥＧ等の単一の非免疫原性高分子量化合物、またはグリセロ脂質等の親油性化合物と会合されることができる。アプタマーは、全て１つの標的に対するものであるか、または異なる標的に対するものであることができる。化合物が複数の抗ＰＤＧＦアプタマーを含む実施形態では、標的であるＰＤＧＦとの複数の結合相互作用により、和合力が増大することができる。またさらなる実施形態では、複数の、ポリアルキレングリコール、ＰＥＧ、およびグリセロール脂質分子のうちの１つ以上は、互いに、同一のリンカーに、または複数のリンカーに付着されることができる。これらの実施形態では、１つ以上のアプタマーは、各ポリアルキレングリコール、ＰＥＧ、またはグリセロール脂質と会合されることができる。これは、各アプタマーのその標的への和合力の増大をもたらすことができる。それに加えて、ＰＤＧＦに対するアプタマー、またはＰＤＧＦおよびポリアルキレングリコール、ＰＥＧ、またはグリセロール脂質と会合する異なる標的に対するアプタマーが存在する実施形態では、薬物はまた、ポリアルキレングリコール、ＰＥＧ、またはグリセロール脂質と会合される、例えば、共有結合されることができる。したがって、化合物は、リンカーとして働くポリアルキレングリコール、ＰＥＧ、またはグリセロール脂質を伴い、所望により、１つ以上のさらなるリンカーを伴う、薬物の標的された送達を提供するであろう。
【００９８】
具体的実施形態では、アプタマーは、５’末端における５’−５’逆方向ヌクレオチドキャップ構造および／または３’末端における３’−３’逆方向ヌクレオチドキャップ構造で、５’−キャップおよび／または３’−キャップされることができる。特定の実施形態では、拮抗薬Ａ（または拮抗薬Ａの修飾された形態）は、５’または３’末端キャップされる。他の実施形態では、ヌクレオチドキャップは、逆方向チミジンである。
【００９９】
ＶＥＧＦ拮抗薬
本発明の組成物において有用なＶＥＧＦ拮抗薬としては、ラニビズマブ、ベバシズマブ、アフリバーセプト、およびその薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
特定の実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、ヒトＶＥＧＦを結合する抗体またはその断片であり、それは、ヒト化抗ＶＥＧＦ抗体またはヒト抗ＶＥＧＦ抗体であってもよい。具体的実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＸ１ＦＴＸ２ＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＸ３ＹＹＧ  Ｘ４ＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  （配列番号７６）を含み、式中、Ｘ１は、ＴまたはＤであり、Ｘ２は、ＮまたはＨであり、Ｘ３は、ＹまたはＨであり、Ｘ４は、ＳまたはＴである。具体的な実施形態では、重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬ（配列番号７７）を含む。これらの重鎖可変ドメイン配列は、そのように産生される抗体がヒトＶＥＧＦに結合するならば、次の軽鎖可変ドメイン配列または他の軽鎖可変ドメイン配列と組み合わせられてもよい。
【０１０１】
特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体軽鎖可変ドメインは、次のアミノ酸配列：ＣＤＲＬｌ（ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ［配列番号７８］）、ＣＤＲＬ２（ＦＴＳＳＬＨＳ［配列番号７９］）、およびＣＤＲＬ３（ＱＱＹＳＴＶＰＷＴ［配列番号８０］）を伴う超可変領域を含む。具体的な実施形態では、３つの軽鎖超可変領域は、ヒトフレームワーク領域内に、例えば、次の式：ＦＲ１−ＣＤＲＬ１−ＦＲ２−ＣＤＲＬ２−ＦＲ３−ＣＤＲＬ３−ＦＲ４によって表される連続した配列として、提供される。一実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：ＤＩＱＸ１ＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号８１）を含み、式中、Ｘ１はＭまたはＬである。具体的実施形態では、軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ（配列番号８２）を含む。これらの軽鎖可変ドメイン配列は、そのように産生される抗体がヒトＶＥＦＧに結合する能力を保持するならば、上述に示される重鎖可変ドメイン配列または他の重鎖可変ドメイン配列と組み合わされてもよい。
【０１０２】
一具体的実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、抗体ベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩であり、以下のそれぞれの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬ（配列番号７７）、およびＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ（配列番号８２）。ベバシズマブは、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓ．Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）の商品名で市販されており、また米国特許第６，０５４，２９７号でも説明されている。
【０１０３】
特定の実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、変異体がヒトＶＥＧＦを結合し、また親抗ＶＥＧＦ抗体の重鎖または軽鎖可変ドメインの超可変領域内にアミノ酸置換を含む、親抗ＶＥＧＦ抗体の変異体である（親は、所望により、ヒト化またはヒト抗ＶＥＧＦ抗体である）。具体的実施形態では、変異体は、１つ以上の抗ＶＥＧＦ抗体の超可変領域（単数または複数）内に、１つ以上の置換（単数または複数）を有する。より具体的な実施形態では、置換（単数または複数）は、親抗体の重鎖可変ドメイン内である。例えば、アミノ酸置換（単数または複数）は、重鎖可変ドメインのＣＤＲＨ１もしくはＣＤＲＨ３内であってもよく、またはこれらの双方の超可変領域内に置換が存在してもよい。特定の実施形態では、かかる「親和性成熟した」変異体は、それらが生成される親抗ＶＥＧＦ抗体よりも強くヒトＶＥＧＦを結合し、すなわち、親抗ＶＥＧＦ抗体のＫｄ値より著しく低いＫｄ値を有する。特定の実施形態では、変異体は、インビトロで内皮細胞のＶＥＧＦ−誘発増殖を阻害するためのＥＤ５０値を有し、それは、親抗ＶＥＧＦ抗体のＥＤ５０値より少なくとも約１０倍低い、少なくとも約２０倍低い、または少なくとも約５０倍低い。一実施形態では、変異体は、アミノ酸配列：ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号８３）を含むＣＤＲＨ１、およびアミノ酸配列：ＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶ（配列番号８４）を含むＣＤＲＨ３を有する。これらの超可変領域およびＣＤＲＨ２は、ヒトフレームワーク領域内に提供されてもよく、例えば、次のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬ（配列番号７７）を含む重鎖可変ドメインをもたらす。かかる重鎖可変ドメイン配列は、所望により、次のアミノ酸配列：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ（配列番号８２）を含むアミノ酸ドメインを含む軽鎖可変ドメインと組み合わされる。
【０１０４】
一実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、抗体断片ラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩であり、それは、次のそれぞれの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬ（配列番号７７）およびＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ（配列番号８２）を含む。ラニビズマブは、硝子体内投与用に製剤化されて商品名Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓ．Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）の名で市販されており、また米国特許第７，０６０，２６９号にも説明されている。
【０１０５】
別の実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、アフリバーセプトまたはその薬学的に許容される塩等のＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ（商標）である（Ｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｂｒ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．９３：１４４−９を参照、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。アフリバーセプトはまた、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ−Ｅｙｅ（商標）の名称でも知られ、また商品名Ｅｙｌｅａ（商標）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，ＮＹ）の商品名で市販されている。具体的実施形態では、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ（商標）は、２つの融合ポリペプチドを含む二量体融合ポリペプチドを含み、各融合ポリペプチドは、第１のＶＥＧＦ受容体ヒトＦｌｔ１の免疫グロブリン様（Ｉｇ）ドメイン２および第２のＶＥＧＦ受容体ヒトＦｌｋ１またはヒトＦｌｔ４のＩｇドメイン３から成るＶＥＧＦ受容体構成要素を含む。アフリバーセプトは、ＶＥＧＦ受容体１ドメイン２およびＶＥＧＦ受容体２ドメイン３に融合されたＩｇＧのＦｃ断片を含む融合タンパク質であり、ＶＥＧＦ−Ａおよび胎盤成長因子（ＰｌＧＦ）の双方を結合する。アフリバーセプトは、９７キロダルトン（ｋＤａ）のタンパク質分子量を有する二量体糖タンパク質であり、総分子質量のさらに１５％を構成して１１５ｋＤａの分子量をもたらすグリコシル化を含有する。アフリバーセプトを含む例証的なＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ、およびそれを生産する方法は、米国特許第７，３０６，７９９号、同第７，５３１，１７３号、同第７，６０８，２６１号、同第７，０７０，９５９号、同第７，３７４，７５７号、および同第７，３７４，７５８号に説明されている。具体的実施形態では、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ（商標）は、以下のアミノ酸配列を含む、または以下のアミノ酸配列から成るポリペプチドである：ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８５）。
【０１０６】
組成物
本発明は、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬を含む、薬学的組成物を含む組成物を提供する。幾つかの実施形態では、組成物は、抗ＰＤＧＦアプタマーもしくはＶＥＧＦ拮抗薬に、または抗ＰＤＧＦアプタマーとＶＥＧＦ拮抗薬との双方に安定性を提供し、眼科疾患を治療または予防するのに有用な安定性を含む。特定の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、ＶＥＧＦ拮抗薬の活性に悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、抗ＰＤＧＦアプタマーの活性に悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、ＶＥＧＦ拮抗薬の活性を強化する。特定の実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、抗ＰＤＧＦアプタマーの活性を強化する。特定の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、ＶＥＧＦ拮抗薬の活性に統計的に有意な範囲には悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、抗ＰＤＧＦアプタマーの活性に統計的に有意な範囲には悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、ＶＥＧＦ拮抗薬の活性を統計的に有意な範囲で強化する。他の実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、抗ＰＤＧＦアプタマーの活性を統計的に有意な範囲で強化する。具体的実施形態では、組成物中に存在する１つ以上の抗ＰＤＧＦアプタマーは、アプタマー拮抗薬Ａまたはその修飾された形態である。具体的実施形態では組成物中に存在する１つ以上のＶＥＧＦ拮抗薬は、ラニビズマブ、ベバシズマブ、およびアフリバーセプトのうちの１つ以上である。具体的実施形態では、本発明の組成物は、（ｉ）拮抗薬Ａ（またはその修飾された形態）およびラニビズマブ、（ｉｉ）拮抗薬Ａ（またはその修飾された形態）およびベバシズマブ、または（ｉｉｉ）拮抗薬Ａ（またはその修飾された形態）およびアフリバーセプトを含む。特定の実施形態では、組成物は、抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬のうちのいずれかの薬学的に許容される塩を含む。具体的実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬の少なくとも約９０％は、組成物を、約２．０℃〜約８．０℃の温度で少なくとも約１２週間にわたって保管したときに、化学的に安定している。
【０１０７】
本発明の組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬の相対的な濃度は、これらの拮抗薬の強度および特異性、ならびにそれらの結合標的の種類および濃度に基づいて決定されてもよい。一実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬は、実質的に等しい濃度で組成物中に存在する。別の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬は、他方より実質的に高い濃度で存在し、例えば、組成物中の抗ＰＤＧＦアプタマー：ＶＥＧＦ拮抗薬濃度の比は、約１．５：１、約２：１、約２．５：１、約３：１、約４：１、もしくは約５：１であり、または組成物中のＶＥＧＦ拮抗薬：抗ＰＤＧＦアプタマー濃度の比は、約１．５：１、約２：１、約２．５：１、約３：１、約４：１、もしくは約５：１である。特定の実施形態では、組成物中の抗ＰＤＧＦアプタマー：ＶＥＧＦ拮抗薬濃度の比は、約１：１〜約５：１、約１．５：１〜約５：１、または約２．０：１〜約５：１の範囲であり、他の実施形態では、組成物中のＶＥＧＦ拮抗薬：抗ＰＤＧＦアプタマー濃度の比は、約１：１〜約５：１、約１．５：１〜約５：１、または約２．０：１〜約５：１の範囲である。別段に指定されない限り、アプタマーの濃度は、アプタマーの核酸部分の分子量のみを基準とし、それは所望により、短鎖ポリエチレングリコールを含むことができる。核酸部分が短鎖ポリエチレングリコールを含む場合、核酸部分の分子量は、短鎖ポリエチレングリコール残基全ての分子量を含む。
【０１０８】
幾つかの実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬はそれぞれ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ〜約８０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、または約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で本発明の組成物中に存在する。幾つかの実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ〜約８０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、または約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で本発明の組成物中に存在する。幾つかの実施形態では、ＶＥＧＦ拮抗薬は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ〜約８０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、または約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で本発明の組成物中に存在する。幾つかの実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬はそれぞれ、少なくとも約０．１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。幾つかの実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬のうちの少なくとも１つは、少なくとも約０．１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
【０１０９】
本発明の組成物はまた、本明細書で説明されるもののいずれか等の、１つ以上の賦形剤、緩衝液（すなわち、緩衝剤）、抗凍結剤、等張化剤（すなわち、張性修飾剤）、液体、安定剤、界面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤）、リオプロテクタント、酸化防止剤、アミノ酸、ｐＨ−調整剤、または防腐剤を含んでもよい。好適な緩衝剤としては、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、および酢酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、緩衝液は、組成物のｐＨを所望のｐＨに、もしくは所望のｐＨ範囲内に調整することが可能であり、および／または組成物のｐＨを所望のｐＨに、もしくは所望のｐＨ範囲内に達成もしくは維持することが可能である。好適な非イオン性界面活性剤としては、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルが挙げられるが、これらに限定されない。好適な防腐剤としては、ベンジルアルコールが挙げられるが、これらに限定されない。好適な等張化剤としては、塩化ナトリウム、マンニトール、およびソルビトールが挙げられるが、これらに限定されない。好適なリオプロテクタントとしては、スクロース、トレハロース、およびマンニトールが挙げられるが、これらに限定されない。好適なアミノ酸としては、グリシンおよびヒスチジンが挙げられるが、これらに限定されない。好適なｐＨ−調整剤（または、所望のｐＨまたはｐＨ範囲に達成または維持することが可能な薬剤）としては、塩酸、酢酸、および水酸化ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、ｐＨ−調整剤または薬剤（または、所望のｐＨまたはｐＨ範囲に達成または維持することが可能な薬剤（単数または複数））は、約３〜約８、約４．０〜約８．０、約４〜約７、約５〜約６、約６〜約７、約６〜約８、または約７〜約７．５のｐＨを有する組成物を提供するのに有効な量で存在する。また、組成物に好適な賦形剤としては、米国特許第７，３６５，１６６号に説明されるものが挙げられ、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１１０】
具体的実施形態では、本発明の組成物は、次の（１）抗ＰＤＧＦアプタマーと、（２）ＶＥＧＦ拮抗薬と、（３）緩衝液と、所望により（４）張性修飾剤と、所望により（５）界面活性剤とを含む。具体的実施形態では、本発明の組成物は、次の（１）抗ＰＤＧＦアプタマーと、（２）ＶＥＧＦ拮抗薬と、（３）張性修飾剤と、所望により（４）緩衝液と、所望により（５）界面活性剤とを含む。具体的実施形態では、本発明の組成物は、次の（１）抗ＰＤＧＦアプタマーと、（２）ＶＥＧＦ拮抗薬と、（３）緩衝液と、（４）張性修飾剤と、所望により（５）界面活性剤とを含む。かかる組成物の特定の実施形態では、緩衝液は、酢酸塩、リン酸塩、トリス、もしくはヒスチジン緩衝液、またはそれらの混合物であり、張性修飾剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、もしくはトレハロース、またはそれらの混合物であり、界面活性剤は、ポリソルベート２０である。種々の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーは、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で本発明の組成物中に存在し、ＶＥＧＦ拮抗薬は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し、緩衝液は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度で存在し、張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ（塩化ナトリウム）、約１％〜約１０％（重量／体積）（ソルビトール）、または約１％〜約２０％（重量／体積）（トレハロース）の濃度で存在し、また界面活性剤は、存在する場合、約０．００５％〜約０．０５％の濃度または約０．００１％〜約０．０５％の濃度で存在する。
【０１１１】
本発明の組成物は、１つの有用な態様において、非経口に（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、眼内、硝子体内、眼球後、結膜下、眼球鞘下、または皮下注射またはインプラントによって）、または全身に投与される。非経口または全身投与用の組成物は、無菌の水性もしくは非水性溶液、懸濁液、または乳剤を含んでもよい。種々の水性担体、例えば、水、緩衝水、生理食塩水、および同類のものを使用することができる。他の好適なビヒクルの例としては、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、ヒドロゲル、水素添加されたナファレン（ｎａｐｈａｌｅｎｅ）、およびオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが挙げられる。かかる組成物はまた、保存剤、湿潤剤、緩衝剤、乳化剤、または分散剤等の補助物質を含有してもよい。生体適合性、生分解性のラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーが、活性成分の放出を制御するために使用されてもよい。一実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーとＶＥＧＦ拮抗薬とを含む組成物は、注射に好適な水性溶液の形態である。一実施形態では、組成物は、抗ＰＤＧＦアプタマー、ＶＥＧＦ拮抗薬、緩衝剤、ｐＨ−調整剤（または所望のｐＨまたはｐＨ範囲に達成または維持することが可能な薬剤）、および注射用の水を含む。
【０１１２】
幾つかの例では、本発明の組成物はまた、局所的に、例えば、パッチによって、または新生血管障害に罹患しやすいもしくは罹患する上皮もしくは眼等の領域への直接適用によって、またはイオン導入法によって投与されることができる。
【０１１３】
本発明の組成物は、眼内への硝子体内注射によって、ならびに結膜下および眼球鞘下注射によって、眼内に投与されてもよい。他の投与経路としては、経強膜、眼球後、腹腔内、筋肉内、および静脈内が挙げられる。別法として、組成物は、薬物送達デバイスまたは眼内インプラントを用いて投与されることができる。眼科使用に有用な組成物としては、本明細書で説明されるものを含む薬学的に許容される賦形剤と混ぜて抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬を含む薬学的組成物が挙げられる。これらの賦形剤は、例えば、緩衝液、不活性希釈剤または充填剤（例えば、スクロースおよびソルビトール）、平滑剤、流動促進剤、および抗接着剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素添加された植物油、またはタルク）であってよい。
【０１１４】
具体的実施形態では、本発明の組成物は、組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬のうちの１つ以上に、物理的または化学的な安定性を付与する。これらの実施形態では、本発明の組成物は、物理的または化学的に安定した組成物である。例えば、本発明の組成物は、保管中、組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマー（単数または複数）またはＶＥＧＦ拮抗薬（単数または複数）を物理的または化学的に安定させることができる。抗ＰＤＧＦアプタマー（単数または複数）およびＶＥＧＦ拮抗薬（単数または複数）の安定性の評定に有用な種々の分析技術は、当該技術分野で利用可能であり、添付の実施例で説明されるもの、ならびに目視検査、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＩＥＦ、（高圧）サイズ排除クロマトグラフィ（ＨＰＳＥＣ）、ＲＦＦＩＴ、カッパ／ラムダＥＬＩＳＡを含むＲｅｕｂｓａｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．１７（６−７）：９５５−７８およびＷａｎｇ（１９９９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１８５（２）：１２９−８８で概説されるものが挙げられる。添付の実施例で説明される方法としては、ＳＥ−ＨＰＬＣ、ＡＥＸ−ＨＰＬＣ、およびＷＣＸ−ＨＰＬＣが挙げられる。
【０１１５】
本発明の組成物における抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬の物理的安定性は、アプタマーもしくは拮抗薬の物理完全性の状態の測定、凝集の兆候を示すかどうかの決定、色もしくは清澄性の目視検査における降下もしくは変性、またはＵＶ光散乱の実施によって、またはサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）もしくは示差走査熱量計（ＤＳＣ）によって決定することができるが、これらに限定されない。例えば、マイクロフロー分析を使用して、例えば、実施例４で説明されるように、組成物中の肉眼で見えない粒子の存在およびサイズを測定することができる。
【０１１６】
本発明の組成物における抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬の化学安定性は、その化学完全性の状態を測定すること、または新規の化学成分の形成をもたらす分解もしくは修飾の任意の兆候を示すかどうかを決定することによって決定することができるが、これらに限定されない。化学完全性は、アプタマーまたは拮抗薬の化学的に変化された形態を検出および定量化することによって、評価することができる。化学変化は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＨＰＬＣを伴うサイズ排除クロマトグラフィ（ＬＭＷおよびＨＭＷ種の存在を決定する）、またはマトリックス補助レーザー脱離イオン化／飛行時間質量分析（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ  ＭＳ）を用いて評定され得るサイズ修飾（例えば、クリッピング）を含んでもよい。かかる測定値を作成するのに好適なシステムは、当該技術分野において既知であり、例えば、ＨＰＬＣシステム（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓ．）およびカチオン交換ＨＰＬＣ（変異体を検出する、および表面電荷をモニタリングするためのＣＥＸ−ＨＰＬＣ）である。それに加えて、抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬の安定性を測定するのに有用な添付の実施例で説明される方法が、使用されてもよい。これらとしては、ＳＥ−ＨＰＬＣ、ＷＣＸ−ＨＰＬＣ、およびＡＥＸ−ＨＰＬＣが挙げられる。他の種類の化学変化としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィによって評定され得る（例えば、脱アミドの結果として生じる）電荷変化が挙げられる。酸化は、本明細書で開示される方法または当業者に既知の方法を用いて検出され得る別の化学的修飾である。
【０１１７】
具体的実施形態では、本発明の組成物は、組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％が、色もしくは清澄性の目視検査の際に、またはＵＶ光散乱によって、またはサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）もしくは示差走査熱量計（ＤＳＣ）によって測定した際に、凝集、降下、もしくは変性の兆候を示さなければ、物理的に安定である。具体的実施形態では、組成物は、組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマー（単数または複数）およびＶＥＧＦ拮抗薬（単数または複数）の双方の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％が、色もしくは清澄性の目視検査の際に、またはＵＶ光散乱によって、またはサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）もしくは示差走査熱量計（ＤＳＣ）によって測定した際に、凝集、降下、もしくは変性の兆候を示さなければ、物理的に安定である。
【０１１８】
特定の実施形態では、物理的安定性は、マイクロフローイメージングによって決定されてもよく、該マイクロフローイメージングでは、検出されるより多数の粒子またはより大きいサイズの粒子が、低減された物理的安定性と相関する。具体的実施形態では、本発明の組成物は、例えば、実施例４で説明される通り、マイクロフローイメージングによって決定されるその粒子数が、例えば、約５００，０００未満、約１００，０００未満、もしくは約５０，０００未満の総粒子／ｍＬであり、粒子が、０μｍ〜約１００μｍの範囲内、または別の実施形態では、０μｍ〜約２５μｍの範囲内に円相当直径を有する場合、物理的に安定である。別の実施形態では、本発明の組成物は、例えば、実施例４で説明される通り、マイクロフローイメージングによって決定されるその粒子数が、例えば、約１００，０００未満、約５０，０００未満、約２０，０００未満、約１０，０００未満、約５，０００未満、約２，５００未満、約１，０００、または約５００未満の粒子／ｍＬであり、粒子が、約１μｍ〜約２μｍの範囲内、または別の実施形態では、約１μｍ〜約５μｍの範囲内の円相当直径を有する場合、物理的に安定であると見なされる。
【０１１９】
具体的実施形態では、本発明の組成物は、組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％が、新規の化学成分の形成をもたらす分解または修飾を示さないとき、化学的に安定である。
【０１２０】
具体的実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬は、抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％が、新規の化学成分の形成をもたらす分解または修飾を示さないとき、化学的に安定である。具体的実施形態では、本発明の組成物は、組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマー（単数または複数）およびＶＥＧＦ拮抗薬（単数または複数）の双方の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％が、新規の化学成分の形成をもたらす分解または修飾を示さなければ、化学的に安定である。特定の実施形態では、分解または修飾は、例えば、化学結合開裂による、新規の化学成分の形成をもたらすものである。
【０１２１】
具体的実施形態では、本発明の組成物は、組成物中の抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬のうちの１つ以上の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％が、約室温で、少なくとも５日間、少なくとも７日間、少なくとも１０日間、少なくとも１４日間、少なくとも２０日間、少なくとも３０日間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも１６週間、もしくは少なくとも２４週間、少なくとも２カ月間、少なくとも３カ月間、少なくとも４カ月間、少なくとも６カ月間、もしくは少なくとも約１年間、もしくは別法として少なくとも約２年間、もしくは別法として少なくとも約３年間、もしくは別法として少なくとも約４年間、もしくは別法として少なくとも約５年間にわたって、または別法として約２．０℃〜約８．０℃の室温で少なくとも５日間、少なくとも７日間、少なくとも１０日間、少なくとも１４日間、少なくとも２０日間、少なくとも３０日間、少なくとも３０日間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも１６週間、少なくとも２４週間、少なくとも２カ月間、少なくとも３カ月間、少なくとも４カ月間、少なくとも６カ月間、もしくは少なくとも約１年間、もしくは別法として少なくとも約２年間、もしくは別法として少なくとも約３年間、もしくは少なくとも約４年間、もしくは少なくとも少なくとも約５年間にわたって、または別法として約５．０℃の室温で少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、少なくとも１６週間、少なくとも２４週間、少なくとも約１年間、もしくは少なくとも約２年間、もしくは別法として少なくとも約３年間、もしくは別法として少なくとも約４年間、もしくは別法として少なくとも約５年間にわたって保管したときに、新規の化学成分の形成をもたらす分解または修飾を示さないとき、化学的に安定である。具体的実施形態では、組成物は、組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマー（単数または複数）およびＶＥＧＦ拮抗薬（単数または複数）が化学的に安定であれば、物理的または化学的に安定である。幾つかの実施形態では、本発明の組成物は、約４０℃で、最大もしくは少なくとも１週間、最大もしくは少なくとも２週間、または最大もしくは少なくとも１カ月間にわたって安定である、すなわち、物理的または化学的に安定である。幾つかの実施形態では、組成物は、約−２０℃で、最大もしくは少なくとも１年間、または別法として最大もしくは少なくとも２年間、３年間、４年間、もしくは５年間にわたって安定である。幾つかの実施形態では、組成物は、約−８０℃で、最大もしくは少なくとも１年間、または別法として最大もしくは少なくとも２年間、３年間、４年間、もしくは５年間にわたって安定である。特定の実施形態では、本発明の組成物は、例えば、実施例４で説明される通り、マイクロフローイメージングによって決定されるその粒子数が、例えば、約５℃〜約３０℃で、約４時間にわたって保管した後に、約５００，０００未満、約１００，０００未満、もしくは約５０，０００未満の総粒子／ｍＬであり、粒子が、０μｍ〜約１００μｍの範囲内、もしくは別の実施形態では、０μｍ〜約２５μｍの範囲内の円相当直径を有するか、または約１００，０００未満、約５０，０００未満、約２０，０００未満、約１０，０００未満、約５，０００未満、約２，５００未満、約１，０００未満、または約５００未満の粒子／ｍＬであり、粒子が、１μｍ〜２μｍの範囲内、もしくは別の実施形態では、１μｍ〜５μｍの範囲内の円相当直径を有する場合、物理的または化学的に安定である。
【０１２２】
具体的実施形態では、本発明の組成物は、（７８８）Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  Ｍａｔｔｅｒ  ｉｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ，Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｏｃｔｏｂｅｒ  １，２０１１，Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎで説明される光暗化粒子数試験（ｔｈｅ  Ｌｉｇｈｔ  Ｏｂｓｃｕｒａｔｉｏｎ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｃｏｕｎｔ  Ｔｅｓｔ）によって測定する際に、保管後、検出される粒子の平均数が、約５０粒子／ｍＬを超過せず、粒子が＞約１０μｍの直径を有し、また５粒子／ｍＬを超過せず、粒子が＞２５μｍの直径を有する場合、物理的または化学的に安定であると見なされる。その中で説明される通り、この試験は、粒子のサイズおよびサイズに従った粒子の数の自動決定を可能にする光遮断の原理に基づく好適な装置を用いて、実施される。装置は、１０μｍ〜２５μｍの既知のサイズの球状粒子の分散を用いて較正される。これらの標準粒子を、粒子を含まない水の中に分散させる。分散中は、粒子の凝集を回避するように配慮する。試験は、外部の粒子状物質への曝露を制限する条件下、例えば、ラミナーフローキャビネット中で実施する。使用するガラス器具、および薄膜フィルタを除く濾過設備を、温洗浄液で慎重に洗浄し、大量の水で濯いで、全ての洗剤の跡を除去する。使用の直前に、設備を上から下へ、外側、および次に内側へと粒子を含まない水で濯ぐ。測定する試料中に気泡が入らないように、特に、調製物の画分をその中で測定を実施する容器へと移すときに、配慮する。環境が、試験に好適であること、ガラス器具が適切に洗浄されていること、および使用される水が粒子を含まないことを確認するために、各々５ｍＬの粒子を含まない水の５つの試料中の粒子状物質を、直後に決定する。１０μｍ以上の粒子の数が、合わせた２５ｍＬに対して２５個を超える場合、試験に対してとられた事前の注意は、十分ではない。調製ステップは次に、環境、ガラス器具、および水が好適になるまで反復される。
【０１２３】
環境、ガラス器具、および水が試験に好適となった後、試験を、試験試料上で行う。試料の内容物を、試料の容器を連続して２０回ゆっくりと逆さにすることによって、混合する。必要に応じて、存在する場合、容器の密封閉止を慎重に除去する。容器の外面を、粒子を含まない水のジェットを用いて洗浄し、また存在する場合、容器の密封閉止を、内容物の汚染を回避して除去する。気泡を、適切な測定、例えば、容器を２分間静止させること、または超音波等によって除去する。
【０１２４】
２５ｍＬ以上の体積の大容量試料に関しては、単一の単位を試験する。２５ｍＬ未満の体積の少容量試料に関しては、１０以上の単位の内容物を、２５ｍＬ以上の体積を獲得するように洗浄した容器内で組み合わせ、試験溶液は、好適な数のバイアルの内容物を混合し、結果として得られる混合物を、粒子を含まない水で、または粒子を含まない水が好適でない場合は適切な粒子を含まない溶媒で、２５ｍＬに希釈することによって、調製してもよい。２５ｍＬ以上の体積を有する少容量の非経口剤を、個別に試験してもよい。粉末は、粒子を含まない水で、または粒子を含まない水が好適でない場合は適切な粒子を含まない溶媒でもどす。試験試料の数は、統計的に有意な評価を提供するのに十分であるべきである。大容量試料または２５ｍＬ以上の体積を有する少容量試料に関して、適切な試料抽出計画を用いて１０未満のユニットを試験してもよい。
【０１２５】
それぞれ５ｍＬ以上である４つの部分を、各試料から取り出し、１０μまたは２５μｍ以上の粒子の数を計測する。第１の部分に関して得られた結果は無視し、検査している調製物に関する平均粒子数を計算する。
【０１２６】
１００ｍＬ超の公称体積を有する容器中の試料に関しては、本明細書で説明される試験１．Ａの基準が考慮されるべきである。
【０１２７】
１００ｍＬ以下の公称体積を有する容器中の試料に関しては、本明細書で説明される試験１．Ｂの基準が考慮されるべきである。
【０１２８】
粒子の平均数が試験の限界を超える場合、試料は、顕微鏡的粒子数試験を用いて試験されるべきである。
【０１２９】
試験１．Ａ。試料は、粒子が１０μｍ以上の直径を有する場合に、試験される試料容器中に存在する粒子の平均数が１ｍＬ当たり２５個を超えなければ、または粒子が２５μｍ以上の直径を有する場合に、試験される試料容器中に存在する粒子の平均数が１ｍＬ当たり３個を超えなければ、試験限界に従う。
【０１３０】
試験１．Ｂ。試料は、粒子が１０μｍ以上の直径を有する場合に、試験される試料容器中に存在する粒子の平均数が１容器当たり６０００個を超えなければ、または粒子が２５μｍ以上の直径を有する場合に、試料容器中に存在する粒子の平均数が１容器当たり６００を超えなければ、試験限界に従う。
【０１３１】
具体的実施形態では、組成物は、（７８８）Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  Ｍａｔｔｅｒ  ｉｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ，  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｏｃｔｏｂｅｒ  １，２０１１，Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎで説明される顕微鏡的試験数方法によって測定する際に、保管後、検出される粒子の平均数が、粒子が＞１０μｍの直径を有する場合に５０粒子／ｍＬを超えない、粒子が＞２５μｍの直径を有する場合に５粒子／ｍＬを超えない、および粒子が＞５０μｍの直径を有する場合に２粒子／ｍＬを超えなければ、物理的または化学的に安定であると見なされる。
【０１３２】
顕微鏡的粒子数試験は、好適な双眼顕微鏡、粒子状物質を保持するためのフィルタアセンブリ、および検査のための薄膜フィルタを用いて実施される。顕微鏡は、１００±１０の倍率に調整され、対物ミクロメータで較正した接眼ミクロメータ、薄膜フィルタの濾過面積全体を保持および横断することが可能な機械台、ならびに斜照明に加えて落射照明を提供するための２つの好適な照明器を装備する。接眼ミクロメータは、円形直径グラチクルであり、また十字線によって４分割される大きい円１００倍率で直径が１０μｍおよび２５μｍである透明な黒色の参照円、ならびに１０μｍ増分の目盛り付の線形目盛で構成される。これは、国内規格協会かまたは国際規格協会かのいずれかによって認定される台上ミクロメータを用いて較正される。±２％以内グラチクルの線形目盛の相対誤差は、許容される。大きい円は、指定グラチクル視野（ＧＦＯＶ）である。２つの照明器を使用する。１つは、顕微鏡内部への落射明視野照明器であり、他方は、１０°〜２０°の角度の反射斜照明を付与するように調整することができる焦点合わせが可能な外部補助照明器である。粒子状物質を保持するためのフィルタアセンブリは、ガラスまたは他の好適な材料で作成されたフィルタホルダで構成され、真空源および好適な薄膜フィルタを備える。薄膜フィルタは、好適なサイズで黒または濃い灰色のグリッド無しまたはグリッド付の公称孔サイズが１．０μｍまたはそれより細かいものである。
【０１３３】
試験は、外部の粒子状物質への曝露を制限する条件下、例えば、ラミナーフローキャビネット中で実施する。使用するガラス器具、および薄膜フィルタを除くフィルタアセンブリを、温洗浄液で慎重に洗浄し、大量の水で濯いで、全ての洗剤の跡を除去する。使用の直前に、薄膜フィルタと設備との双方を、上から下へ、外側、および次に内側へと粒子を含まない水で濯ぐ。
【０１３４】
環境が試験に好適であること、ガラス器具および薄膜フィルタが適切に洗浄されていること、ならびに使用される水が粒子を含まないことを確認するために、次の試験を実施する：５０ｍＬの体積の粒子を含まない水の粒子状物質を、下記の方法によって決定する。サイズが１０μｍ以上の２０個超の粒子、またはサイズが２５μｍ以上の５個超の粒子が濾過面積内に存在する場合、試験に対してとられた事前の注意は、十分ではない。調製ステップは、環境、ガラス器具、薄膜フィルタ、および水が試験に好適になるまで反復される。
【０１３５】
試料の内容物を、試料の容器を連続して２０回ゆっくりと逆さにすることによって、混合する。必要に応じて、存在する場合、容器の密封閉止を慎重に除去する。容器開口部の外面を、粒子を含まない水のジェットを用いて洗浄し、また存在する場合、密封閉止を、内容物の汚染を回避して除去する。
【０１３６】
大容量試料に関しては、単一の単位を試験する。体積が２５ｍＬ未満の少容量試料に関しては、１０個以上の試料容器の内容物を、洗浄した容器内で組み合わせ、試験溶液は、好適な数のバイアルの内容物を混合し、粒子を含まない水で、または粒子を含まない水が好適でない場合は適切な粒子を含まない溶媒で、２５ｍＬに希釈することによって、調製してもよい。２５ｍＬ以上の体積を有する少容量試料を、個別に試験してもよい。非経口用使用のための粉末は、粒子を含まない水で、または粒子を含まない水が好適でない場合は適切な粒子を含まない溶媒で構成される。試験試料の数は、統計的に有意な評価を提供するのに十分であるべきである。大容量試料または２５ｍＬ以上の体積を有する少容量試料に関して、適切な試料抽出計画を用いて１０未満のユニットを試験してもよい。
【０１３７】
薄膜フィルタを取り付けたフィルタホルダの内側を、数ｍＬの粒子を含まない水で湿潤させる。溶液プールまたは単一の試料容器の総体積を、濾過用漏斗に移し、真空を適用する。必要に応じて、試料の一部分を、総体積が濾過されるまで段階的に添加する。試料の最後の添加の後、フィルタホルダの内壁を、粒子を含まない水のジェットを用いて濯ぐ。真空は、薄膜フィルタの表面が液体を含まなくなるまで維持する。薄膜フィルタを、ペトリ皿内に定置し、薄膜フィルタを、カバーを僅かに開けて空気乾燥させる。薄膜フィルタを乾燥させた後、ペトリ皿を顕微鏡の台上に定置し、薄膜フィルタ全体を、照明デバイスからの反射光下でスキャンし、１０μｍ以上である粒子の数および２５μｍ以上である粒子の数を計数する。別法として、計算による部分的な薄膜フィルタ計数および総フィルタ計数の決定を、実施することができる。調べる調製物に関する粒子の平均数を決定する。
【０１３８】
円形直径グラチクルの使用による粒子サイズ決めを、グラチクル上の１０μｍおよび２５μｍの参照円と比較して粒子の相当直径を推定することによって、実施する。したがって、粒子は、グラチクル視野内でその初期位置から移動されず、また比較用の参照円に重ね合わせられない。透明なグラチクル参照円の内径を、白色および透明な粒子をサイズ決めするために使用し、一方色の濃い粒子は、黒色の不透明なグラチクル参照円の外径を用いることによってサイズ決めする。
【０１３９】
薄膜フィルタ状に染みまたは変色した外観を有する非結晶質、半液体、ないしは形態学的に不定の材料は、これらの材料は、表面レリーフをほとんどまたは全く示さず、また世ゼラチン質またはフィルム様の外観を示すため、サイズ決めまたは計数されるべきではない。かかる場合、計数の解釈は、光暗化粒子数試験によって溶液の試料を試験することによって補助してもよい。
【０１４０】
１００ｍＬ超の公称値を有する容器中の試料に関しては、試験２．Aの基準を適用する。
【０１４１】
１００ｍＬ未満の公称値を有する容器中の試料に関しては、試験２．Ｂの基準を適用する。
【０１４２】
試験２．Ａ。試料は、試験される試料容器中に存在する粒子の平均数が１ｍＬ当たり１２個を超えず、また粒子が１０μｍ以上の直径を有する場合に、または試験される試料容器中に存在する粒子の平均数が１ｍＬ当たり２個を超えず、また粒子が２５μｍ以上の直径を有する場合に、試験限界に従う。
【０１４３】
試験２．Ｂ。試料は、試験される試料容器中に存在する粒子の平均数が１容器当たり３０００個を超えず、また粒子が１０μｍ以上の直径を有する場合に、または試験される試料容器中に存在する粒子の平均数が１容器当たり３００を超えず、また粒子が２５μｍ以上の直径を有する場合に、試験限界に従う。
【０１４４】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、凍結乾燥された形態である。
【０１４５】
拮抗薬Ａおよびラニビズマブを含む組成物
特定の実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびラニビズマブを含む。具体的実施形態では、組成物中に存在する拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度（その−Ｒ基の質量を差し引いた拮抗薬Ａの質量／組成物の体積）のラニビズマブの濃度（質量／組成物の体積）に対する比は、２５．０未満、１０．０未満、９．０未満、８．０未満、７．０未満、６．０未満、５．０未満、４．０未満、３．０未満、２．０未満、または１．０未満である。具体的実施形態では、組成物中に存在する拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度（その−Ｒ基の質量を差し引いた拮抗薬Ａの質量／組成物の体積）のラニビズマブの濃度（質量／組成物の体積）に対する比は、２５．０以下、１０．０以下、９．０以下、８．０以下、７．０以下、６．０以下、５．０以下、４．０以下、３．０以下、２．０以下、または１．０以下である。具体的実施形態では、組成物中に存在する拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度（その−Ｒ基の質量を差し引いた拮抗薬Ａの質量／組成物の体積）のラニビズマブの濃度（質量／組成物の体積）に対する比は、約１〜約１０、約２〜約５、約３〜約４、または約５の範囲内である。
【０１４６】
拮抗薬Ａの−Ｒ基は、図７８Ａで表される。
【０１４７】
具体的実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびラニビズマブを含み、また組成物は、特定のｐＨにおいて両活性薬剤に関して安定であるか、または非経口投与に好適である。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態は、ラニビズマブの活性に悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、ラニビズマブは、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の活性に悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態は、ラニビズマブの活性を強化する。特定の実施形態では、ラニビズマブは、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の活性を強化する。拮抗薬ＡおよびＶＥＧＦ拮抗薬の活性を決定する方法は、当該技術分野において既知であり、また例えば、実施例３および６で説明される通り、それぞれ、ＰＤＧＦまたはＶＥＧＦ調節された遺伝子発現の発現に対する拮抗薬ＡまたはＶＥＧＦ拮抗薬の効果を測定することが挙げられる。
【０１４８】
特定の実施形態では、組成物は、張性修飾剤、界面活性剤、および特定のｐＨに達成もしくは維持するのに好適な、または非経口投与に好適な緩衝液のうちの１つ以上を含む。適切な緩衝液としては、本明細書で説明されるもの、および例えば、グッドの緩衝液、例えば、ＭＥＳ等の当該技術分野において既知である他のものが挙げられる。
【０１４９】
特定の実施形態では、本発明の組成物中の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１００ｍｇ／ｍＬまたは１００ｍｇ／ｍＬ未満、約５０ｍｇ／ｍＬ未満、約４０ｍｇ／ｍＬ未満、約３０ｍｇ／ｍＬ未満、約２５ｍｇ／ｍＬ未満、約２０ｍｇ／ｍＬ未満、約１５ｍｇ／ｍＬ未満、約１０ｍｇ／ｍＬ未満、または約５ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．３〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、または約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬである。
【０１５０】
特定の実施形態では、本発明の組成物中のラニビズマブの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、または約１２ｍｇ／ｍＬである。
【０１５１】
特定の実施形態では、本発明の組成物中のラニビズマブの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、または約１２ｍｇ／ｍＬであり、また組成物中の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１００ｍｇ／ｍＬ未満、約５０ｍｇ／ｍＬ未満、約４０ｍｇ／ｍＬ未満、約３０ｍｇ／ｍＬ未満、約２５ｍｇ／ｍＬ未満、約２０ｍｇ／ｍＬ未満、約１５ｍｇ／ｍＬ未満、約１０ｍｇ／ｍＬ未満、または約５ｍｇ／ｍＬ未満である。
【０１５２】
特定の実施形態では、本発明の組成物中のラニビズマブの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、または約１２ｍｇ／ｍＬであり、また拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．３〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１  ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、または約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬである。
【０１５３】
特定の実施形態では、本発明の組成物中のラニビズマブの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、または約１０ｍｇ／ｍＬであり、また拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約３ｍｇ／ｍＬであり、またラニビズマブの濃度は、約５ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約６ｍｇ／ｍＬであり、またラニビズマブの濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬであり、またラニズマブの濃度は、約５ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約２４ｍｇ／ｍＬであり、またラニズマブの濃度は、約８ｍｇ／ｍＬである。
【０１５４】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびラニビズマブを含む組成物の特定の実施形態では、組成物は、ソルビトールもしくは塩化ナトリウム、またはそれらの混合物である張性修飾剤をさらに含む。具体的実施形態では、張性修飾剤は、ソルビトールであり、また組成物のｐＨは、約５．０〜約８．０、約５．０〜約７．０、約６．０、または約７．０である。具体的実施形態では、張性修飾剤は、塩化ナトリウムであり、また組成物のｐＨは、約５．０〜約８．０、約５．０〜約７．０、約５．５〜約７．５、約６．０〜約８．０、約８．０、約７．０、または約６．０である。特定の実施形態では、張性修飾剤は、約１％〜約１０％（重量／体積）、または約１％（重量／体積）、約２％（重量／体積）、約３％（重量／体積）、約４％（重量／体積）、約５％（重量／体積）、約６％（重量／体積）、約７％（重量／体積）、約８％（重量／体積）、約９％（重量／体積）、約１０％（重量／体積）におけるソルビトールである。具体的実施形態では、張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜２００ｍＭ、約７５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、または約１５０ｍＭの濃度における塩化ナトリウムである。一実施形態では、張性修飾剤は、約１３０ｍＭの濃度における塩化ナトリウムある。他の実施形態では、張性修飾剤は、約７５ｍＭまたは約１２０ｍＭの濃度における塩化ナトリウムである。張性修飾剤濃度に関して、「ｍＭ」は、１リットルの組成物当たりの張性修飾剤のミリモルを指す。
【０１５５】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびラニビズマブを含む本発明の組成物の特定の実施形態では、組成物は、組成物のｐＨを所望の範囲内に達成または維持することが可能な緩衝液をさらに含む。特定の実施形態では、組成物は、緩衝液として、ヒスチジン（例えば、Ｌ−ヒスチジンまたはその薬学的に許容される塩）、または例えば、リン酸カリウムのリン酸ナトリウムリン酸塩等を（またはヒスチジンおよびリン酸塩の双方を）を含む。特定の実施形態では、緩衝液は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１ｍＭ〜約２０ｍＭ、約１ｍＭ〜約１０ｍＭ、約２ｍＭ〜約１００ｍＭ、約２ｍＭ〜約２０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約１０ｍＭの濃度で存在する。具体的実施形態では、緩衝された組成物のｐＨは、約５．０〜約８．０、約５．０〜約７．０、約５．５〜約７．５、約５．５〜約７．０、または約６．０である。一実施形態では、緩衝された組成物は、約５．５〜約７．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、緩衝液は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約２ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約１０ｍＭの濃度でヒスチジンを含み、また緩衝された組成物は、約５．５〜約７．０、または約６．０のｐＨを有する。具体的な一実施形態では、緩衝液は、約１０ｍＭの濃度でヒスチジンを含み、またヒスチジンで緩衝された組成物のｐＨは、約６．０である。緩衝液濃度に関して、「ｍＭ」は、１リットル組成物当たりの緩衝液（例えば、ヒスチジン）のミリモルを指す。
【０１５６】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびラニビズマブを含む組成物の特定の実施形態では、緩衝液は、リン酸塩を、単独でまたはヒスチジンと組み合わせて含む。リン酸緩衝液は、例えば、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム緩衝液であってよい。特定の実施形態では、緩衝液は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２ｍＭ〜約２００ｍＭ、約２ｍＭ〜約５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ〜約５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２５ｍＭ、または約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を含む。具体的実施形態では、緩衝された組成物のｐＨは、約５．０〜約８．０、約６．０〜約８．０、約５．５〜約７．５、約５．５〜約７．０、約６．０、約７．０、約または約８．０である。一実施形態では、緩衝液は、リン酸塩を含み、また緩衝された組成物は、約６．０〜約８．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、緩衝液は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ、約８ｍＭ、約１０ｍＭ、約２５ｍＭ、または約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を含み、また緩衝された組成物は、約５．５〜約７．５、約５．５〜約７．０、または約６．０のｐＨを有する。具体的な一実施形態では、緩衝液は、約１０ｍＭの濃度でリン酸塩を含み、また緩衝された組成物は、約６．２のｐＨを有する。
【０１５７】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびラニビズマブを含む組成物の特定の実施形態では、組成物は、界面活性剤をさらに含む。具体的実施形態では、界面活性剤は、約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）、約０．００２％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）、約０．００５％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）、約０．０１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）、または約０．０２％（重量／体積）の濃度でのポリソルベート２０である。
【０１５８】
一実施形態では、組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、ラニビズマブ、ヒスチジン、およびＮａＣｌを含む。組成物は、ポリソルベートをさらに含んでもよい。
【０１５９】
具体的な一実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾されたベリオンおよびラニビズマブを含み、拮抗薬Ａ（またはその修飾された形態）の濃度のラニビズマブの濃度に対する比は、２未満であり、また組成物は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度でヒスチジン、および約０．００５％〜約０．０５％の濃度でポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）をさらに含み、組成物のｐＨは、約５．５〜７．０である。
【０１６０】
特定の実施形態では、本発明は、拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、ラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩とを含む組成物を提供する。特定の実施形態では、本発明の組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくは修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩とを含む。他の実施形態では、組成物は、（ｃ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭのＬ−ヒスチジンおよび（ｄ）約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌのうちの一方または双方をさらに含む。さらなる実施形態では、組成物は、（ｅ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤をさらに含み、それは所望により、ポリソルベートである。具体的な実施形態では、組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｄ）約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌとを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ７．０である。さらなる実施形態では、組成物は、（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）約１０ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｄ）約１３０ｍＭのＮａＣｌとを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０である。特定の実施形態では組成物は、（ｅ）約０．０１％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む。
【０１６１】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、（ａ）約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、または約５．０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩とを含む。他の実施形態では、組成物は、（ｃ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭのＬ−ヒスチジンおよび（ｄ）約１０ｍＭ〜約２００ｍＭＮａＣｌのうちの一方または双方をさらに含む。さらなる実施形態では、組成物は、（ｅ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤をさらに含み、それは所望により、ポリソルベートである。具体的な実施形態では、組成物は、（ａ）約５．０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｄ）約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌとを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０または約ｐＨ５．５〜約ｐＨ７．５である。さらなる実施形態では、組成物は、（ａ）約１５ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）約５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｄ）約７５ｍＭのＮａＣｌとを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ５．５〜約ｐＨ７．５または約ｐＨ６．０である。特定の実施形態では、組成物は、（ｅ）約０．００５％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む。さらなる実施形態では、組成物は、（ａ）約２４ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約８ｍｇ／ｍＬのラニビズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）約２ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｄ）約１２０ｍＭのＮａＣｌとを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ５．５〜約ｐＨ７．５または約ｐＨ６．０である。特定の実施形態では、組成物は、（ｅ）約０．００２％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む。
【０１６２】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブと、（ｃ）組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、および（ｄ）張性修飾剤のうちの一方または双方とを含む。具体的実施形態では、緩衝液は、存在する場合、約１ｍＭ〜約２０ｍＭのＬ−ヒスチジンまたは約１ｍＭ〜約２０ｍＭのリン酸ナトリウムであり、また張性修飾剤は、存在する場合、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌ、約１％〜約２０％（重量／体積）のソルビトール、または約１％〜約２０％（重量／体積）のトレハロースである。特定の実施形態では、緩衝液は、約１ｍＭ〜約２０ｍＭのＬ−ヒスチジンであり、または張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌであり、組成物のｐＨは、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ７．０である。
【０１６３】
本発明の組成物のいずれかはまた、界面活性剤、例えば、約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤を含んでもよい。
【０１６４】
本発明の組成物の例としては、表１、表３、または表８で説明される組成物が挙げられる。他の実施形態では、本発明は、表１で説明されるがポリソルベートを含まない組成物を含む。
【０１６５】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約５ｍｇ／ｍＬの濃度でラニビズマブを、約１０ｍＭの濃度でヒスチジンを、約１３０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．０２％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、組成物のｐＨは、約６．０である。
【０１６６】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその修飾された形態と、約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブと、約１０ｍＭのリン酸ナトリウムと、約５％（重量／体積）のソルビトールと、約０．０１％（重量／体積）のポリソルベート２０とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．０である。
【０１６７】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその修飾された形態と、約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブと、約１０ｍＭのリン酸ナトリウムと、約１３０  ｍＭのＮａＣｌと、約約０．０１％（重量／体積）のポリソルベート２０とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．０である。
【０１６８】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその修飾された形態と、約５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブと、約５ｍＭのリン酸ナトリウムと、約５ｍＭのヒスチジンＨＣｌと、約７５ｍＭのＮａＣｌと、約５％（重量／体積）のトレハロースと、約０．００５％（重量／体積）のポリソルベート２０とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．５である。
【０１６９】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、（ａ）約３ｍｇ／ｍＬ〜約９０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその修飾された形態と、（ｂ）約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブと、（ｃ）組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、および（ｄ）張性修飾剤のうちの一方または双方とを含む。具体的実施形態では、緩衝液は、存在する場合、約１ｍＭ〜約１００ｍＭのリン酸ナトリウムまたは約１．０ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジン．ＨＣｌを含み、また張性修飾剤は、存在する場合、約０．５％（重量／体積）〜約１０％（重量／体積）のトレハロースである。
【０１７０】
一実施形態では、本発明の組成物は、約１５ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約５ｍｇ／ｍＬの濃度でラニビズマブを、約５ｍＭの濃度でヒスチジンを、約７５ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．００５％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、組成物のｐＨは、約５．５〜約７．５である。
【０１７１】
一実施形態では、本発明の組成物は、約２４ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、約８ｍｇ／ｍＬの濃度でラニビズマブを、約２ｍＭの濃度でヒスチジンを、約１２０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．００２％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、組成物のｐＨは、約５．５〜約７．５である。
【０１７２】
具体的実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびラニビズマブを含む組成物は、２５℃で少なくとも８週間もしくは少なくとも１２週間にわたって、または４℃で少なくとも１２週間もしくは少なくとも１６週間もしくは少なくとも２４週間にわたって、化学的に安定である。具体的実施形態では、拮抗薬Ａおよびラニビズマブのそれぞれの少なくとも８０％は、これらの条件のうちの少なくとも１つの条件下で、新規の化学成分の形成をもたらす分解または修飾の兆候を示さない。
【０１７３】
拮抗薬Ａおよびベバシズマブを含む組成物
特定の実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびベバシズマブを含む。具体的実施形態では、組成物中に存在する拮抗薬Ａ（またはその修飾された形態）の濃度（その−Ｒ基の質量を差し引いた拮抗薬Ａの質量／組成物の体積）のベバシズマブの濃度（質量／組成物の体積）に対する比は、２５．０未満、１０．０未満、９．０未満、８．０未満、７．０未満、６．０未満、５．０未満、４．０未満、３．０未満、２．０未満、１．０、または０．５未満である。
【０１７４】
拮抗薬Ａの−Ｒ基は、図７８Ａで表される。
【０１７５】
具体的実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびベバシズマブを含み、また組成物は、非経口投与に好適な特定のｐＨにて、両活性薬剤に関して安定である。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態は、ベバシズマブの活性に悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、ベバシズマブは、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の活性に悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態は、ベバシズマブの活性を強化する。特定の実施形態では、ベバシズマブは、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の活性を強化する。拮抗薬ＡおよびＶＥＧＦ拮抗薬の活性を決定する方法は、当該技術分野において既知であり、また例えば、実施例３および６で説明される通り、それぞれ、ＰＤＧＦまたはＶＥＧＦ調節された遺伝子発現の発現に対する拮抗薬ＡまたはＶＥＧＦ拮抗薬の効果を測定することが挙げられる。
【０１７６】
特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の張性修飾剤、界面活性剤、および非経口投与に好適な特定のｐＨを達成または維持するのに好適な緩衝液を含む。適切な緩衝液としては、本明細書で説明されるもの、および例えば、グッドの緩衝液、例えば、ＭＥＳ等の当該技術分野において既知である他のものが挙げられる。
【０１７７】
特定の実施形態では、組成物中の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ未満、約４０ｍｇ／ｍＬ未満、約３０ｍｇ／ｍＬ未満、約２５ｍｇ／ｍＬ未満、約２０ｍｇ／ｍＬ未満、約１５ｍｇ／ｍＬ未満、約１０ｍｇ／ｍＬ未満、または約５ｍｇ／ｍＬ未満である。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．３〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬである。
【０１７８】
特定の実施形態では、ベバシズマブの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１．０〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１．０〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬである。
【０１７９】
特定の実施形態では、ベバシズマブの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１．０〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１．０〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬであり、また拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ未満、約４０ｍｇ／ｍＬ未満、約３０ｍｇ／ｍＬ未満、約２５ｍｇ／ｍＬ未満、約２０ｍｇ／ｍＬ未満、約１５ｍｇ／ｍＬ未満、約１０ｍｇ／ｍＬ未満、または約５ｍｇ／ｍＬ未満である。
【０１８０】
特定の実施形態では、ベバシズマブの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１．０〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１．０〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬであり、また拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．３〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬである。
【０１８１】
特定の実施形態では、ベバシズマブの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１．０〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１．０〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬであり、また拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約３ｍｇ／ｍＬであり、またベバシズマブの濃度は、約１２．５ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約６ｍｇ／ｍＬであり、またベバシズマブの濃度は、約２５ｍｇ／ｍＬまたは約５０ｍｇ／ｍＬである。
【０１８２】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびベバシズマブを含む組成物の特定の実施形態では、組成物は、ソルビトール、塩化ナトリウム、およびトレハロースから選択される張性修飾剤をさらに含む。他の実施形態では、組成物は、ソルビトールと塩化ナトリウムとの双方、塩化ナトリウムおよびトレハロースの双方、またはソルビトールとトレハロースとの双方を含む。具体的実施形態では、組成物は、ソルビトールを含み、また組成物のｐＨは、約７．０〜約８．０である。具体的実施形態では、組成物は、塩化ナトリウムを含み、また組成物のｐＨは、約６．０〜約８．０である。特定の実施形態では、組成物は、トレハロースを含み、また組成物のｐＨは、約６．０〜約７．０である。特定の実施形態では、組成物は、約１％〜約１０％（重量／体積）、または約１％（重量／体積）、約２％（重量／体積）、約３％（重量／体積）、約４％（重量／体積）、約５％（重量／体積）、約６％（重量／体積）、約７％（重量／体積）、約８％（重量／体積）、約９％（重量／体積）、または約１０％（重量／体積）でソルビトールを含む。具体的実施形態では、組成物は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜２００ｍＭ、約７５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、または約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを含む。一実施形態では、組成物は、約１３０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを含む。特定の実施形態では、組成物は、約１％〜約１０％（重量／体積）、または約１％（重量／体積）、約２％（重量／体積）、約３％（重量／体積）、約４％（重量／体積）、約５％（重量／体積）、約６％（重量／体積）、約７％（重量／体積）、約８％（重量／体積）、約９％（重量／体積）、または約１０％（重量／体積）でトレハロースを含む。
【０１８３】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびベバシズマブを含む組成物の特定の実施形態では、組成物は、組成物のｐＨを所望の範囲内に達成または維持することが可能な緩衝液をさらに含む。特定の実施形態では、組成物は、酢酸塩、リン酸塩、およびトリスのうちの１つ以上を緩衝液として含む。特定の実施形態では、緩衝液は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、約２５ｍＭ〜約１００ｍＭ、または約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を含む。リン酸緩衝液は、例えば、リン酸ナトリウム緩衝液またはリン酸カリウム緩衝液であってもよい。具体的実施形態では、緩衝された組成物のｐＨは、約５．０〜約８．０、約６．０〜約８．０、約５．５〜約７．０、約６．０、約７．０、または約８．０である。一実施形態では、緩衝液は、リン酸塩を含み、また緩衝された組成物のｐＨは、約５．５〜約７．０である。特定の実施形態では、緩衝液は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜約１００ｍＭ、または約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を含み、また緩衝された組成物は、約５．５〜約７．０、または約６．０のｐＨを有する。具体的な一実施形態では、緩衝液は、約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を含み、また緩衝された組成物は、約６．０のｐＨを有する。
【０１８４】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびベバシズマブを含む組成物の特定の実施形態では、組成物は、界面活性剤をさらに含む。具体的実施形態では、界面活性剤は、約０．００５％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）、約０．０１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）、または約０．０２％（重量／体積）の濃度でのポリソルベート２０である。
【０１８５】
一実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびベバシズマブを含む組成物は、拮抗薬Ａ、ベバシズマブ、塩化ナトリウム、およびリン酸塩を含む。組成物は、ポリソルベートをさらに含んでもよい。
【０１８６】
具体的な一実施形態では、組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびベバシズマブを含み、拮抗薬Ａ（またはその修飾された形態）の濃度のベバシズマブの濃度に対する比は、１．５未満、１．２未満、または１未満であり、また組成物は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、約５ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度でリン酸塩を、および約０．００５％〜約０．０５％の濃度でポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）をさらに含み、組成物のｐＨは、約５．５〜約７．０である。
【０１８７】
特定の実施形態では、本発明は、拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、ベバシズマブ、またはその薬学的に許容される塩とを含む組成物を提供する。特定の実施形態では、本発明の組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩とを含む。他の実施形態では、組成物は、（ｃ）約５ｍＭ〜約２００ｍＭのフォヘイト緩衝液、および（ｄ）約１０ｍＭのＮａＣｌ〜約２００のｍＭのＮａＣｌのうちの一方または双方をさらに含む。他の実施形態では、組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）約５ｍＭ〜約２００ｍＭのリン酸緩衝液（例えば、約５ｍＭ〜約２００ｍＭのリン酸ナトリウム）と、（ｄ）約１０ｍＭのＮａＣｌ〜約２００ｍＭのＮａＣｌとを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ７．０である。ベバシズマブを含む組成物の具体的実施形態では、組成物は、（ｅ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤をさらに含み、それは所望により、ポリソルベートである。具体的な実施形態では、組成物は、（ａ）約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）約５０ｍＭのリン酸緩衝液と、（ｄ）約１３０ｍＭのＮａＣｌとを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０である。別の実施形態では、組成物は、（ｅ）約０．０１％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む。
【０１８８】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその修飾された形態と、（ｂ）約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブと、（ｃ）組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、および（ｄ）張性修飾剤とのうちの一方または双方とを含む。具体的実施形態では、緩衝液は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭのリン酸ナトリウムまたは約５ｍＭ〜約２００ｍＭのリス．ＨＣｌであり、また張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌ、約１％〜約２０％（重量／体積）のソルビトール、または約１％〜約２０％（重量／体積）のトレハロースである。特定の実施形態では、緩衝液は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭのリン酸ナトリウムであり、また等張化剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌであり、組成物のｐＨは、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ７．０である。具体的実施形態では、本発明の組成物は、界面活性剤、例えば、約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤を含む。
【０１８９】
本発明の組成物の例としては、表３で説明される組成物、および界面活性剤を含まないこれらの組成物が挙げられる。
【０１９０】
一実施形態では、組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約１２．５ｍｇ／ｍＬの濃度でベバシズマブを、約５０ｍＭの濃度でリン酸ナトリウムを、約１３０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．０２％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、組成物のｐＨは、約６．０である。
【０１９１】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその修飾された形態と、約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブと、約５０ｍＭのリン酸ナトリウムと、約５％（重量／体積）のソルビトールと、約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０である。
【０１９２】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａ、またはその修飾された形態と、約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブと、約５０ｍＭのリン酸ナトリウムと、約５％（重量／体積）のソルビトールと、約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．０である。
【０１９３】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａ、またはその修飾された形態と、約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブと、約５０ｍＭのリン酸ナトリウムと、約１５０ｍＭのＮａＣｌと、約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ７．０である。
【０１９４】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａまたはその修飾された形態と、約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブと、約５０ｍＭのトリス．ＨＣｌと、約１３０ｍＭのＮａＣｌと、約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ８．０である。
【０１９５】
一実施形態では、本発明の組成物は、約１５ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａ、またはその修飾された形態と、約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブと、約３０ｍＭのリン酸ナトリウムと、約７５ｍＭのＮａＣｌと、約３％（重量／体積）のトレハロースと、約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．３である。
【０１９６】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａ、またはその修飾された形態と、約１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブまたはその薬学的に許容される塩と、約３０ｍＭのリン酸ナトリウムと、約７５ｍＭのＮａＣｌと、約３％（重量／体積）のトレハロースと、約０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．３である。
【０１９７】
具体的実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびベバシズマブを含む組成物は、２５℃で少なくとも４週間もしくは少なくとも８週間にわたって、または４℃で少なくとも１２週間もしくは少なくとも２４週間にわたって、化学的に安定である。具体的実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびベバシズマブのそれぞれの少なくとも７０％は、これらの条件下で、新規の化学成分の形成をもたらす分解または修飾の兆候を示さない。
【０１９８】
拮抗薬Ａおよびアフリバーセプトを含む組成物
特定の実施形態では、組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびアフリバーセプトを含む。具体的実施形態では、組成物中に存在する拮抗薬Ａの濃度（その−Ｒ基の質量を差し引いた拮抗薬Ａの質量／組成物の体積）のアフリバーセプトの濃度（質量／組成物の体積）に対する比は、２５．０、未満１０．０、未満９．０、未満８．０、未満７．０、未満６．０、未満５．０、未満４．０、未満３．０、未満２．０、未満１．０、未満０．５、または０．２５未満である。
【０１９９】
拮抗薬Ａの−Ｒ基は、図７８Ａで表される。
【０２００】
具体的実施形態では、組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびアフリバーセプトを含み、また組成物は、特定のｐＨにおいて両活性薬剤に関して安定であるか、または非経口投与に好適である。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態は、アフリバーセプトの活性に悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、アフリバーセプトは、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の活性に悪影響を及ぼさない。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態は、アフリバーセプトの活性を強化する。特定の実施形態では、アフリバーセプトは、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の活性を強化する。拮抗薬ＡおよびＶＥＧＦ拮抗薬の活性を決定する方法は、当該技術分野において既知であり、また例えば、実施例３および６で説明される通り、それぞれ、ＰＤＧＦまたはＶＥＧＦ調節された遺伝子発現の発現に対する拮抗薬ＡまたはＶＥＧＦ拮抗薬の効果を測定することが挙げられる。
【０２０１】
特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の張性修飾剤、界面活性剤、および非経口投与に好適な特定のｐＨを達成または維持するのに好適な緩衝液を含む。適切な緩衝液としては、本明細書で説明されるもの、および例えば、グッドの緩衝液、例えば、ＭＥＳ等の当該技術分野において既知である他のものが挙げられる。
【０２０２】
特定の実施形態では、組成物中の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ未満、約４０ｍｇ／ｍＬ未満、約３０ｍｇ／ｍＬ未満、約２５ｍｇ／ｍＬ未満、約２０ｍｇ／ｍＬ未満、約１５ｍｇ／ｍＬ未満、約１０ｍｇ／ｍＬ未満、または約５ｍｇ／ｍＬ未満である。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．３〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬである。
【０２０３】
特定の実施形態では、アフリバーセプトの濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、または約４０ｍｇ／ｍＬである。
【０２０４】
特定の実施形態では、アフリバーセプトの濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、または約４０ｍｇ／ｍＬであり、また拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ未満、約４０ｍｇ／ｍＬ未満、約３０ｍｇ／ｍＬ未満、約２５ｍｇ／ｍＬ未満、約２０ｍｇ／ｍＬ未満、約１５ｍｇ／ｍＬ未満、約１０ｍｇ／ｍＬ未満、または約５ｍｇ／ｍＬ未満である。
【０２０５】
特定の実施形態では、アフリバーセプトの濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、または約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬであり、また拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．３〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬである。
【０２０６】
特定の実施形態では、アフリバーセプトの濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、または約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬであり、また拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、拮抗薬Ａの濃度は、約３ｍｇ／ｍＬであり、またアフリバーセプトの濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、拮抗薬Ａの濃度は、約６ｍｇ／ｍＬであり、またアフリバーセプトの濃度は、約４０ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度は、約１２ｍｇ／ｍＬであり、またアルフィバーセプトの濃度は、約８０ｍｇ／ｍＬである。
【０２０７】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびアフリバーセプトを含む組成物の特定の実施形態では、組成物は、ソルビトールおよび塩化ナトリウムから選択される１つ以上の張性修飾剤（単数または複数）をさらに含む。具体的実施形態では、張性修飾剤は、ソルビトールを含み、また組成物のｐＨは、約６．０〜約８．０である。具体的実施形態では、張性修飾剤は、塩化ナトリウムを含み、また組成物のｐＨは、約６．０〜約８．０である。特定の実施形態では、張性修飾剤は、ソルビトールを、約１％〜約１０％（重量／体積）、または約１％（重量／体積）、約２％（重量／体積）、約３％（重量／体積）、約４％（重量／体積）、約５％（重量／体積）、約６％（重量／体積）、約７％（重量／体積）、約８％（重量／体積）、約９％（重量／体積）、または約１０％（重量／体積）で含む。具体的実施形態では、張性修飾剤は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜２００ｍＭ、約７５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、または約１５０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムである。一実施形態では、張性修飾剤は、約４０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムである。
【０２０８】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびアフリバーセプトを含む組成物の特定の実施形態では、組成物は、ｐＨを所望の範囲内に達成または維持することが可能な緩衝液をさらに含む。特定の実施形態では、組成物は、酢酸塩、リン酸塩、ヒスチジン、およびトリスから選択される１つ以上の緩衝液（単数または複数）を含む。特定の実施形態では、緩衝液は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ〜約５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２５ｍＭ、または約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を含む。特定の実施形態では、リン酸緩衝液は、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムである。具体的実施形態では、緩衝された組成物のｐＨは、約５．０〜約８．０、約６．０〜約８．０、約５．５〜約７．０、約６．０、約７．０、または約８．０である。一実施形態では、緩衝液は、リン酸塩を含み、また緩衝された組成物は、約６．０〜約８．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、緩衝液は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２５ｍＭ、または約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を含み、また緩衝された組成物は、約５．５〜約７．０、または約６．０のｐＨを有する。具体的な一実施形態では、緩衝液は、約１０ｍＭの濃度でリン酸塩を含み、また緩衝された組成物は、約６．２のｐＨを有する。
【０２０９】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびアフリバーセプトを含む組成物の特定の実施形態では、組成物は、スクロースをさらに含む。具体的実施形態では、スクロースは、約０％（重量／体積）〜約１０％（重量／体積）、約１％（重量／体積）〜約１０％（重量／体積）、約２％（重量／体積）〜約１０％（重量／体積）、または約５％（重量／体積）の濃度で組成物中に存在する。
【０２１０】
拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびアフリバーセプトを含む組成物の特定の実施形態では、組成物は、界面活性剤をさらに含む。具体的実施形態では、界面活性剤は、約０．００５％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）、約０．０１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）、約０．０３％（重量／体積）、または約０．０２％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含む。
【０２１１】
一実施形態では、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびアフリバーセプトを含む組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、アフリバーセプト、塩化ナトリウム、およびリン酸塩を含む。組成物は、ポリソルベートまたはスクロース（またはその双方）をさらに含んでもよい。
【０２１２】
具体的な一実施形態では、組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態およびアフリバーセプトを含み、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度のアフリバーセプトの濃度に対する比は、１未満であり、また組成物は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、約５ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を、約０％（重量／体積）〜約１０％（重量／体積）の濃度でスクロースを、および約０．００５％〜約０．０５％の濃度でポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）をさらに含み、組成物のｐＨは、約６．０〜約８．０である。
【０２１３】
特定の実施形態では、組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプトまたはその薬学的に許容される塩とを含む。具体的実施形態では、組成物は、（ｃ）約５ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸緩衝液（例えば、約５ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸ナトリウム）、および（ｄ）約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌのうちの一方または双方をさらに含む。さらなる実施形態では、組成物は、（ｅ）０〜約１０％（重量／体積）スクロースをさらに含む。特定の実施形態では、組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態、またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプトまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）約５ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸緩衝液と、（ｄ）約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌと、（ｅ）０〜約１０％（重量／体積）のスクロースとを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０〜約ｐＨ８．０である。別の実施形態では、組成物は、（ｆ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）のポリソルベートをさらに含む。具体的な一実施形態では、組成物は、（ａ）約６ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）約４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプトまたはその薬学的に許容される塩と、（ｃ）約１０ｍＭのリン酸緩衝液と、（ｄ）約４０ｍＭのＮａＣｌと、（ｅ）約５％（重量／体積）のスクロースとを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．２である。さらなる実施形態では、組成物は、（ｆ）約０．０３％（重量／体積）のポリソルベート２０をさらに含む。
【０２１４】
特定の実施形態では、本発明の組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａ、またはその修飾された形態と、（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプトと、（ｃ）組成物のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０に達成または維持することが可能な緩衝液、（ｄ）張性修飾剤、および（ｅ）０〜約１０％（重量／体積）のスクロースのうちの１つ以上とを含む。具体的実施形態では、緩衝液は、存在する場合、約５ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸塩であり、また張性修飾剤は、存在する場合、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌである。
【０２１５】
具体的実施形態では、本発明の組成物は、（ａ）約０．３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａ、またはその修飾された形態と、（ｂ）約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプトと、（ｃ）約５ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸塩と、（ｄ）約１０ｍＭ〜約２００ｍＭのＮａＣｌと、（ｅ）０〜約１０％（重量／体積）のスクロースと、（ｆ）約０．００１％（重量／体積）〜約０．０５％（重量／体積）の界面活性剤とを含み、組成物のｐＨは、約ｐＨ６．０〜約ｐＨ８．０である。
【０２１６】
本発明の組成物はまた、界面活性剤を含まずに、本明細書で説明される組成物のうちのいずれかを含む。
【０２１７】
一実施形態では、本発明の組成物は、約６ｍｇ／ｍＬの濃度で、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約４０ｍｇ／ｍＬの濃度でアフリバーセプトを、約１０ｍＭの濃度でリン酸塩を、約４０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．０３％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、また組成物は、約６．２のｐＨを有する。
【０２１８】
別の実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度でアフリバーセプトを、約１０ｍＭの濃度でリン酸塩を、約４０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．０３％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、また組成物は、約６．２のｐＨを有する。
【０２１９】
具体的実施形態では、拮抗薬Ａおよびアフリバーセプトを含む組成物は、２５℃で少なくとも４週間もしくは少なくとも８週間にわたって、または４℃で少なくとも１２週間もしくは少なくとも２４週間にわたって、化学的に安定である。具体的実施形態では、両拮抗薬の少なくとも７０％は、これらの条件下で、新規の化学成分の形成をもたらす分解または修飾の兆候を示さない。
【０２２０】
本発明の組成物を作成するための方法
本明細書で説明されるものを含む、本発明の組成物は、拮抗薬（例えば、１つ以上の抗ＰＤＧＦアプタマーおよび１つ以上のＶＥＧＦ拮抗薬）と有効量の緩衝液、例えば、ヒスチジン、リン酸塩、酢酸塩、またはトリス緩衝液とを混合すること、ならびに所望により、結果として生じる混合物のｐＨを、約５．５〜約８．０のｐＨおよび本明細書で説明されるようなその間の変動に調整することと、を含むか、それから本質的に成るか、またはそれから成る方法によって、調製されてもよい。
【０２２１】
幾つかの実施形態では、方法はさらに、抗ＰＤＧＦアプタマーとＶＥＧＦ拮抗薬と有効量の等張化剤とを混合することを含む、それから本質的に成る、またはそれから成る。具体的態様では、等張化剤は、塩化ナトリウムまたはソルビトールである。
【０２２２】
幾つかの実施形態では、方法はさらに、抗ＰＤＧＦアプタマーとＶＥＧＦ拮抗薬と有効量の界面活性剤とを混合することを含むか、それから本質的に成るか、またはそれから成る。具体的態様では、界面活性剤は、ポリソルベート、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０またはＴｗｅｅｎ８０である。
【０２２３】
幾つかの実施形態では、方法はさらに、抗ＰＤＧＦアプタマーと、ＶＥＧＦ拮抗薬と、有効量の安定剤、抗凍結剤、またはリオプロテクタントとを混合することを含むか、それから本質的に成るか、またはそれから成る。安定剤は、少なくとも１つの糖、アミノ酸、ポリオール、界面活性剤、酸化防止剤、防腐剤、シクロデキストリン、ポリエチレングリコール、アルブミン、または塩であり得る。
【０２２４】
本発明の具体的態様では、組成物は、本明細書で説明される種々の組成で、また本明細書で説明される濃度の範囲で存在する、抗ＰＤＧＦアプタマーとＶＥＧＦ拮抗薬と種々の賦形剤とを混合することによって調製され、それは、ベバシズマブか、ラニビズマブか、またはアフリバーセプトかのいずれかと組み合わせて拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を含む、上で説明される具体的な組成物の各々を含む。
【０２２５】
したがって、一実施形態では、本発明の組成物は、次のものを混合することによって調製される：約３ｍｇ／ｍＬの最終濃度の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、約１２．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度のベバシズマブ、約５０ｍＭの最終濃度のリン酸塩、約１３０ｍＭの最終濃度の塩化ナトリウム、および約０．０２％（重量／体積）の最終濃度のポリソルベート２０。別の実施形態では、本発明の組成物は、次のものを混合することによって調製される：約６ｍｇ／ｍＬの最終濃度の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、約２５ｍｇ／ｍＬの最終濃度のベバシズマブ、約５０ｍＭの最終濃度のリン酸塩、約１３０ｍＭの最終濃度の塩化ナトリウム、および約０．０２％（重量／体積）の最終濃度のポリソルベート２０。特定の実施形態では、組成物のｐＨは、約６．０に調整される。
【０２２６】
別の実施形態では、組成物は、次のものを混合することによって調製される：約３ｍｇ／ｍＬの最終濃度の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、約５ｍｇ／ｍＬの最終濃度のラニビズマブ、約１０ｍＭの最終濃度のヒスチジン、約１３０ｍＭの最終濃度の塩化ナトリウム、および約０．０２％（重量／体積）の最終濃度のポリソルベート２０。別の実施形態では、組成物は、次のものを混合することによって調製される：約６ｍｇ／ｍＬの最終濃度の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、約１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度のラニビズマブ、約１０ｍＭの最終濃度のヒスチジン、約１３０ｍＭの最終濃度の塩化ナトリウム、および約０．０２％（重量／体積）の最終濃度のポリソルベート２０。特定の実施形態では、組成物のｐＨは、約６．０に調整される。
【０２２７】
別の実施形態では、組成物は、次のものを混合することによって調製される：約６ｍｇ／ｍＬの最終濃度の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、約４０ｍｇ／ｍＬの最終濃度のアフリバーセプト、約１０ｍＭの最終濃度のリン酸塩、約４０ｍＭの最終濃度の塩化ナトリウム、約５％（重量／体積）の最終濃度のスクロース、および約０．０３％（重量／体積）の最終濃度のポリソルベート２０。別の実施形態では、組成物は、次のものを混合することによって調製される：約３ｍｇ／ｍＬの最終濃度の拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、約２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度のアフリバーセプト、約１０ｍＭの最終濃度のリン酸塩、約４０ｍＭの最終濃度の塩化ナトリウム、約５％（重量／体積）の最終濃度のスクロース、および約０．０３％（重量／体積）の最終濃度のポリソルベート２０。特定の実施形態では、組成物のｐＨは、約６．２に調整される。
【０２２８】
特定の実施形態では、組成物は、ガラスバイアルもしくはまたはシリンジの中で混合されるか、またはガラスバイアブルもしくはシリンジの中で混合された後に保管される。
【０２２９】
眼科疾患を治療または予防する方法
本発明の組成物は、種々の眼科疾患を治療または予防するのに有用である。幾つかの実施形態では、眼科疾患は、新生血管障害である。他の実施形態では、眼科疾患は、網膜浮腫をもたらす。本発明によって治療または予防され得る例証的な眼科疾患は、本明細書で説明される。
【０２３０】
特定の実施形態では、本発明は、眼科疾患を治療または予防するための方法であって、それを必要とする哺乳類に本発明の組成物を投与することを含む、方法を提供する。具体的実施形態では、組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマーは、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態である。具体的実施形態では、組成物中に存在するＶＥＧＦ拮抗薬は、ラニビズマブ、ベバシズマブ、またはアフリバーセプトである。具体的実施形態では、本発明の組成物中に存在する治療剤は、有効量の（ｉ）拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態とラニビズマブ、（ｉｉ）拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態とベバシズマブ、または（ｉｉｉ）拮抗薬Ａもしくはその修飾された形態とアフリバーセプトとを含む。
【０２３１】
一実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、ラニビズマブ、ヒスチジン、および塩化ナトリウムを含む。組成物は、ポリソルベートをさらに含んでもよい。
【０２３２】
具体的な一実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度のベバシズマブの濃度に対する比が２未満で、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態とラニビズマブとを、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度でヒスチジンを、および約０．００５％〜約０．０５％または０．００１％〜約０．０５％の濃度でポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）を含み、組成物のｐＨは、約５．５〜約７．０である。
【０２３３】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約５ｍｇ／ｍＬの濃度でラニビズマブを、約１０ｍＭの濃度でヒスチジンを、約１３０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．０２％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、組成物のｐＨは、約６．０である。さらなる実施形態では、組成物は、約６ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度でラニビズマブを、約１０ｍＭの濃度でヒスチジンを、約１３０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．０２％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、組成物のｐＨは、約６．０である。
【０２３４】
一実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたは修飾された形態、ベバシズマブ、塩化ナトリウム、リン酸塩、およびポリソルベートを含む。組成物は、ポリソルベートをさらに含んでもよい。
【０２３５】
具体的な一実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度のベバシズマブの濃度に対する比が１未満で、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態とベバシズマブとを、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、約５ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度でリン酸塩を、および約０．００５％〜約０．０５％の濃度でポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）を含み、組成物のｐＨは、約５．５〜約７．０である。
【０２３６】
一実施形態では、本発明の組成物は、約３ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約１２．５ｍｇ／ｍＬの濃度でベバシズマブを、約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を、約１３０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．０２％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、組成物のｐＨは、約６．０である。別の実施形態では、組成物は、約６ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約２５ｍｇ／ｍＬの濃度でベバシズマブを、約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を、約１３０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．０２％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、組成物のｐＨは、約６．０である。
【０２３７】
一実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態、アフリバーセプト、塩化ナトリウム、およびリン酸塩を含む。組成物は、ポリソルベートまたはスクロース（またはその双方）をさらに含んでもよい。
【０２３８】
具体的な一実施形態では、本発明の組成物は、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態の濃度のアフリバーセプトの濃度に対する比が１未満で、拮抗薬Ａまたはその修飾された形態とアフリバーセプトとを、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、約５ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度でリン酸塩を、約０％（重量／体積）〜約１０％（重量／体積）の濃度でスクロースを、および約０．００５％〜約０．０５％の濃度でポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）を含み、組成物は、約６．０〜約８．０のｐＨを有する。
【０２３９】
一実施形態では、本発明の組成物は、約６ｍｇ／ｍＬの濃度で拮抗薬Ａまたはその修飾された形態を、約４０ｍｇ／ｍＬの濃度でアフリバーセプトを、約１０ｍＭの濃度でリン酸塩を、約４０ｍＭの濃度で塩化ナトリウムを、および約０．０３％（重量／体積）の濃度でポリソルベート２０を含み、組成物は、約６．２のｐＨを有する。
【０２４０】
眼科疾患
特定の実施形態では、眼科疾患は、加齢性黄斑変性である。加齢性黄斑変性の例は、非新生血管（「委縮型」としても既知である）および新生血管（「滲出型」としても既知である）黄斑変性である。一実施形態では、委縮型加齢性黄斑変性は、ドルーゼンの形成に関連付けられる。幾つかの実施形態では、委縮型黄斑変性を治療または予防することは、網膜色素上皮の異常を治療または予防することを含む。網膜色素上皮の異常の例としては、地図状委縮、非地図状委縮、限局性低色素沈着、および限局性高色素沈着が挙げられる。幾つかの実施形態では、滲出型加齢性黄斑変性を治療または予防することは、脈絡膜血管新生または色素上皮剥離を治療または予防することを含む。
【０２４１】
他の実施形態では、眼科疾患は、ポリープ状脈絡膜血管症である。ポリープ状脈絡膜血管症は、動脈瘤膨隆または外向き突出をもたらす血管の内脈絡膜血管網による損傷によって特徴付けられる（Ｃｉａｒｄｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ４９  ２５−３７）。
【０２４２】
特定の実施形態では、眼科疾患は、脈絡膜血管新生に関連付けられる疾病である。脈絡膜血管新生に関連付けられる疾病の例としては、変性、炎症性、外傷性、または特発性の疾病が挙げられる。幾つかの実施形態では、脈絡膜血管新生に関連付けられる変性障害を治療または予防することは、遺伝変性障害を治療または予防することを含む。遺伝変性障害の例としては、卵黄様黄斑ジストロフィ、黄色斑眼底、および視神経乳頭ドルーゼンが挙げられる。脈絡膜血管新生に関連付けられる変性疾病の例としては、近視性変性または色素線条が挙げられる。他の実施形態では、脈絡膜血管新生に関連付けられる炎症性障害を治療または予防することは、眼ヒストプラズマ症候群、多巣性脈絡膜炎、匍行性脈絡膜炎、トキソプラズマ症、トキソカラ症、風疹、フォークト・小柳・原田症候群、ベーチェット症候群、または交感性眼炎を治療または予防することを含む。また他の実施形態では、脈絡膜血管新生に関連付けられる外傷性障害を治療または予防することは、強い光凝固によって引き起こされる脈絡膜破裂または外傷性を治療または予防することを含む。
【０２４３】
他の実施形態では、眼科疾患は、高血圧性網膜症または鎌状赤血球網膜症である。
【０２４４】
一実施形態では、眼科疾患は、糖尿病性網膜症である。糖尿病性網膜症は、非増殖性または増殖性糖尿病性網膜症であり得る。非増殖性糖尿病性網膜症の例としては、黄斑浮腫および黄斑虚血が挙げられる。
【０２４５】
具体的実施形態では、眼科疾患は、周辺部網膜血管新生に関連付けられる疾病である。周辺部網膜血管新生に関連付けられる疾病の例としては、虚血性血管疾患、潜在的な虚血を伴う炎症性疾患、色素失調症、網膜色素変性、網膜分離、または慢性網膜剥離が挙げられる。虚血性血管疾患の例としては、増殖性糖尿病性網膜症、網膜分枝静脈閉塞症、網膜分枝細動脈閉塞症、頸動脈海綿静脈洞瘻、鎌状化異常ヘモグロビン症、非鎌状化異常ヘモグロビン症、ＩＲＶＡＮ症候群（特発性網膜血管炎、動脈瘤、および視神経網膜炎によって特徴付けられる網膜血管障害）、網膜塞栓形成、未熟児網膜症、家族性滲出性硝子体網膜症、過粘稠度症候群、大動脈弓症候群、またはイールズ病が挙げられる。鎌状化異常ヘモグロビン症の例としては、ＳＳ異常ヘモグロビン症およびＳＣ異常ヘモグロビン症が挙げられる。非鎌状化異常ヘモグロビン症の例としては、ＡＣ異常ヘモグロビン症およびＡＳ異常ヘモグロビン症が挙げられる。過粘稠度症候群の例としては、白血病、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、多発性骨髄腫、赤血球増多症、または骨髄増殖性障害が挙げられる。
【０２４６】
幾つかの実施形態では、潜在的な虚血を伴う炎症性疾患を治療または予防することは、全身性疾患に関連付けられる網膜血管炎、感染性病原体、ブドウ膜炎、または散弾状網膜症（ｂｉｒｄｓｈｏｔ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）に関連付けられる網膜血管炎を治療または予防することを含む。全身性疾患の例としては、全身性紅斑性狼瘡、ベーチェット病、炎症性腸疾患、サルコイドーシス、多発性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、および結節性多発動脈炎が挙げられる。感染性病原体の例としては、梅毒、結核、ライム病、もしくは猫引っ掻き病に関する原因病原体である細菌性病原体、ヘルペスウイルス等のウイルス、またはイヌ回虫もしくはトキソプラズマ等の寄生生物が挙げられる。ブドウ膜炎の例としては、扁平部炎またはフックスブドウ膜炎症候群（Ｆｕｃｈｓ  ｕｖｅｉｔｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）が挙げられる。
【０２４７】
特定の実施形態では、眼科疾患は、未熟児網膜症である。未熟児網膜症は、発達途中の網膜を支持する血管床における血管の異常成長から生じ得る（Ｐｏｌｌａｎ  Ｃ（２００９）Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｎｅｔｗ．２８：９３−１０１）。
【０２４８】
他の実施形態では、眼科疾患は、静脈閉塞症または動脈閉塞症である。静脈閉塞症の例としては、網膜分枝静脈閉塞症および網膜中心静脈閉塞症が挙げられる。網膜分枝静脈閉塞症は、網膜を流れる血液の循環の一部分の遮断であり得る。遮断は、毛細血管中で背圧を生じさせ得、これは、出血、ならびに流体および他の血液構成物質の漏出にもつながり得る。動脈閉塞症の例としては、網膜動脈分枝閉塞症、網膜中心動脈閉塞症、または眼虚血性症候群が挙げられる。網膜動脈分枝閉塞症（ＢＲＡＯ）は、網膜への動脈供給の分岐のうちの１つが閉塞されたときに生じ得る。
【０２４９】
具体的実施形態では、眼科疾患は、中心性漿液性脈絡網膜症（ＣＳＣ）である。一実施形態では、ＣＳＣは、黄斑中心部における液体の漏出によって特徴付けられる。
【０２５０】
一実施形態では、眼科疾患は、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）である。特定の実施形態では、ＣＭＥは、中心網膜または黄斑に影響を及ぼす。別の実施形態では、ＣＭＥは、白内障手術の後に生じる。
【０２５１】
他の実施形態では、眼科疾患は、網膜末梢血管拡張である。一実施形態では、網膜末梢血管拡張は、網膜血管の拡張およびねじれ、ならびに多発性動脈瘤の形成によって特徴付けられる。特発性ＪＸＴ、レーバー粟粒動脈瘤、およびコーツ病が、網膜末梢血管拡張の３つの種類である。
【０２５２】
一実施形態では、眼科疾患は、動脈瘤である。
【０２５３】
一実施形態では、眼科疾患は、網膜血管腫症である。一実施形態では、網膜血管腫症は、眼血管が多発性血管種を形成するときに生じる。
【０２５４】
一実施形態では、眼科疾患は、放射線誘発網膜症（ＲＩＲＰ）である。一実施形態では、ＲＩＲＰは、黄斑浮腫ならびに非増殖性および増殖性の網膜症等の症状を示す場合がある。
【０２５５】
特定の実施形態では、眼科疾患は、虹彩ルベオーシスである。一実施形態では、虹彩ルベオーシスは、新生血管緑内障の形成をもたらす。別の実施形態では、虹彩ルベオーシスは、糖尿病性網膜症、網膜中心静脈閉塞症、眼の虚血性症候群、または慢性網膜剥離によって生じる。
【０２５６】
特定の実施形態では、眼科疾患は、新生物である。新生物の例としては、瞼腫瘍、結膜腫瘍、脈絡膜腫瘍、虹彩腫瘍、視神経腫瘍、網膜腫瘍、浸潤性眼内腫瘍、または眼窩内腫瘍が挙げられる。瞼の腫瘍の例としては、基本細胞癌、扁平上皮癌、皮脂腺癌、悪性黒色腫、毛細管血管腫、汗腺嚢腫、母斑、または脂漏性角化症が挙げられる。結膜腫瘍の例としては、結膜のカポジ肉腫、扁平上皮癌、結膜の上皮内新形成、眼球上類皮腫、結膜のリンパ腫、黒色腫、瞼裂斑、または翼状片が挙げられる。脈絡膜腫瘍の例としては、脈絡膜母斑、脈絡膜血管腫、転移性脈絡膜腫瘍、脈絡膜骨腫、脈絡膜黒色腫，毛様体黒色腫、または太田母斑が挙げられる。虹彩腫瘍の例としては、前方ブドウ膜転移、虹彩嚢胞、虹彩褐色細胞腫、虹彩黒色腫、または虹彩の真珠嚢胞が挙げられる。視神経腫瘍の例としては、視神経褐色細胞腫、視神経鞘髄膜腫、視神経に影響を及ぼす脈絡膜黒色腫、または視神経障害を伴う周辺乳頭転移が挙げられる。網膜腫瘍の例としては、網膜色素上皮（ＲＰＥ）肥大、ＲＰＥ腺腫、ＲＰＥ癌、網膜芽腫、ＲＰＥの過誤腫、またはフォン・ヒッペル血管腫（ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ  ａｎｇｉｏｍａ）が挙げられる。浸潤性眼内腫瘍の例としては、慢性リンパ球性白血病、浸潤性脈絡膜症、または眼内リンパ腫が挙げられる。眼窩内腫瘍の例としては、涙腺の腺様嚢胞癌、眼窩の海綿状血管腫、眼窩のリンパ管腫、眼窩内粘液嚢胞、眼窩内偽腫瘍、眼窩内横紋筋肉腫、小児期眼周囲血管腫、または硬化性眼窩内偽腫瘍が挙げられる。
【０２５７】
本発明の組成物は、単独で、または他の療法と組み合わせて投与されることができ、また自宅、医院、診療所、病院外来部、または病院で提供されることができる。投与の期間は、治療または予防される眼科疾患の種類、哺乳類の年齢および条件、哺乳類の疾患の段階および種類、ならびに哺乳類が治療にどのように応答するかに依存することができる。具体的実施形態では、哺乳類は、ヒトである。それに加えて、眼科疾患を発症するより高い危険性を有する哺乳類（例えば、糖尿病患者）は、症状の開始を阻害または遅延するための治療を受けることができる。一実施形態では、本方法または本組成物は、治療剤を単独で使用するときに利用される用量と比較して相対的に低用量の、組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマー（単数または複数）およびＶＥＧＦ拮抗薬（単数または複数）のうちの１つ以上の投与を可能にする。
【０２５８】
本発明の組成物の投与は、眼科疾患の治療または予防に有効な抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬の量をもたらす任意の好適な手段によってもよい。一実施形態では、組成物は、眼科疾患を治療または予防するのに有効な量で投与される。
【０２５９】
投与される組成物の投薬量は、疾病の重篤度、疾病を治療するのか、または予防するのかどうか、ならびに治療される人物の年齢、体重、および健康を含む、複数の因子に依存し得る。それに加えて、特定の患者に関する薬理ゲノム学（治療薬の薬物動態的、薬力学的、または薬効プロファイルに対する遺伝子型の効果）情報が、使用される投薬量に影響を及ぼすこともある。さらに、個々の正確な投薬量は、組成物中に存在する治療剤の具体的な組み合わせ、投与の時間、投与の経路、組成物の性質、排泄率、治療されている具体的な眼科疾患、障害の重篤度、および障害の解剖学的位置を含む、種々の因子に多少応じて調製され得る。単回投薬量を生産するために担体材料と混合される各拮抗薬の量は、治療されている哺乳類および投与の具体的な様式に応じて変動し得る。
【０２６０】
非経口注射による組成物の投与に関して、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬の各々の投薬量は、典型的には、１日当たり０．１ｍｇ〜２５０ｍｇ、１日当たり１ｍｇ〜２０ｍｇ、または１日当たり３ｍｇ〜５ｍｇである。注射は、１日当たり最大４回付与されてもよい。概して、非経口投与されるとき、本発明における使用のための抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬の投薬量は、典型的には、１日当たり０．１ｍｇ〜１５００ｍｇ、または１日当たり０．５ｍｇ〜１０ｍｇ、または１日当たり０．５ｍｇ〜５ｍｇである。１日当たり少なくとも最大３０００ｍｇの投薬量が、投与され得る。
【０２６１】
ヒトに眼科学的に、例えば、硝子体内に投与されるとき、本発明の組成物中に存在する抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬の各々の投薬量は、典型的には、投与１回当たり片目につき０．００３ｍｇ〜５．０ｍｇ、または投与１回当たり片目につき０．０３ｍｇ〜３．０ｍｇ、または投与１回当たり片目につき０．１ｍｇ〜１．０ｍｇである。一実施形態では、組成物中の１つ以上の抗ＰＤＧＦアプタマーの投薬量は、片目につき０．０３ｍｇ、０．３ｍｇ、１．５ｍｇ、または３．０ｍｇである。別の実施形態では、組成物中のＶＥＧＦ拮抗薬の投薬量は、片目につき約０．５ｍｇである。投薬量は、片目につき０．０１ｍＬ〜０．２ｍＬ投与、または片目につき０．０３ｍＬ〜０．１５ｍＬ投与、または片目につき０．０５ｍＬ〜０．１０ｍＬ投与の範囲にわたることができる。例えば、特定の実施形態では、抗ＰＤＧＦアプタマー拮抗薬Ａは、最大１００μＬの注入量で最大３０ｍｇ／ｍＬまで硝子体内に送達される。
【０２６２】
本発明の組成物の投与は、１日１〜４回、または１ヵ月当たり１〜４回、または１年当たり１〜６回、または２年おき、３年おき、４年おき、もしくは５年おきに１回であってもよい。投与は、１日、または１ヵ月、２カ月、３カ月、６カ月、１年、２年、３年の期間にわたることができ、またさらには患者の一生にわたることもある。一実施形態では、投与は、月に１回、３カ月間にわたって実施される。長期間の慢性投与が、多くの場合に指示されるであろう。投薬量は、単回用量として、または多回用量に分割されて投与されてもよい。概して、所望の投薬量は、長期間にわたる設定された間隔で投与されるべきであり、通常、少なくとも数週間または数カ月にわたるが、ただし、数カ月または数年またはそれを超えるより長期の投与が必要とされることもある。
【０２６３】
既存の眼科疾患を治療することに加えて、組成物は、これらの障害の開始を予防または遅らせるために、予防的に投与されることができる。予防的用途では、組成物は、特定の眼科疾患に罹患しやすい、ないしは特定の眼科疾患の危険性のある哺乳類に投与されることができる。
【０２６４】
一実施形態では、本発明の組成物は、その治療を必要とする哺乳類に、典型的には注射可能な薬学的組成物の形態で、投与される。投与は、例えば、眼内注射等の注射による、または薬物送達デバイスを用いることによることができる。非経口、全身、または経皮投与もまた、本発明の範囲内である。
【０２６５】
組成物は、抗ＰＤＧＦアプタマーまたはＶＥＧＦ拮抗薬を、投与後、実質的に即時に、または制御放出性組成物を用いて投与後の任意の所定の期間に放出するように、製剤化されてもよい。例えば、組成物は、持続放出性形態で提供され得る。即時放出性または持続放出性組成物の使用は、治療されている疾病の性質に依存する。例えば、疾病が急性障害から成る場合、長期放出性組成物よりも、即時放出性形態を用いた治療が使用されてもよい。特定の予防的または長期間の治療に関して、持続放出性組成物も、使用され得る。
【０２６６】
制御された放出を得るために、放出速度が治療剤の劣化または代謝の速度を上回る多数の戦略が追求され得る。例えば、制御放出は、例えば、適切な制御放出性組成物およびコーティングを含む、組成物のパラメータおよび成分の適切な選択によって、獲得され得る。例としては、油溶液、懸濁液、乳剤、マイクロカプセル、ミクロスフェア、ナノ粒子、パッチ、およびリポソームが挙げられる。同様に、デポー製剤も、例えば、ミクロ粒子、インプラント、またはその場で形成する固体大丸薬の形態で、使用されてよい。デポー製剤は、薬物放出の間または後に薬物の放出および再吸収の速度を制御する、生分解性ポリマー賦形剤を含んでもよい。生分解性ポリマーの１つの種類は、ラクチド／グリコリドポリマーである。これらの再吸収可能なポリマーは、生体適合性であり、また、初めに乳酸およびグリコール酸へ、ならびに最終的には二酸化炭素および水への加水分解によって、再吸収するとみられる。
【０２６７】
本発明の組成物はまた、インプラント等の薬物送達デバイスを用いて送達されることもできる。かかるインプラントは、生分解性もしくは生体適合性であり得るか、または非生分解性であり得る。インプラントは、抗ＰＤＧＦアプタマーもしくはＶＥＧＦ拮抗薬に透過性である、または生体浸食によって薬剤を送達することができる。眼科用薬物送達デバイスは、前房もしくは後房等の眼房内へ挿入されることができ、または、強膜、脈絡膜腔、もしくは硝子体外部の駆血された領域の、中もしくは上に埋め込まれることができる。一実施形態では、インプラントは、所望の治療部位、例えば、眼内腔および目の黄斑等への、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬の経強膜的拡散を可能にするように、強膜等の無血管領域上に位置付けられることができる。さらに、経強膜的拡散の部位は、黄斑に近接する部位等、血管新生の部位に近接し得る。好適な薬物送達デバイスは、例えば、米国公開第２００８／０２８６３３４号、同第２００８／０１４５４０６号、同第２００７／０１８４０８９号、同第２００６／０２３３８６０号、同第２００５／０２４４５００号、同第２００５／０２４４４７１号、および同第２００５／０２４４４６２号、ならびに米国特許第６，８０８，７１９号および同第５，３２２，６９１号で説明され、その各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２６８】
一実施形態では、インプラントは、生分解性ポリマーマトリックス内に分散された本発明の組成物を含む。マトリックスは、ＰＬＧＡ（ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー）、エステルエンドキャップ・ポリマー、酸エンドキャップ・ポリマー、またはそれらの混合物を含み得る。別の実施形態では、インプラントは、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬と、界面活性剤と、親油性化合物とを含む組成物を含む。親油性化合物は、インプラントの重量を基準として約８０〜９９％の量で存在し得る。好適な親油性化合物としては、パルミチン酸ステアリン酸グリセリル、モノステアリン酸ジエチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノステアリン酸グリセリル、モノリノール酸グリセリル、モノオレイン酸グリセリル、モノパルミチン酸グリセリル、モノラウリン酸グリセリル、ジラウリン酸グリセリル、モノミリスチン酸グリセリル、ジミリスチン酸グリセリル、モノパルミチン酸グリセリル、ジパルミチン酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、モノオレイン酸グリセリル、ジオレイン酸グリセリル、モノリノール酸グリセリル、ジリノール酸グリセリル、モノアラキン酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｍｏｎｏａｒａｃｈｉｄａｔｅ）、ジアラキン酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｄｉａｒａｃｈｉｄａｔｅ）、モノベヘン酸グリセリル、ジベヘン酸グリセリル、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６９】
別の実施形態では、インプラントは、中空スリーブ内に格納される本発明の組成物を含む。抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬を含む組成物は、スリーブを目の中に挿入し、インプラントをスリーブから目の中へと解除し、次にスリーブを目から除去することによって、目に送達される。この送達デバイスの例は、米国公開第２００５／０２４４４６２号で説明され、それは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２７０】
一実施形態では、インプラントは、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬の目の中への制御された持続放出に適合された、可撓性の眼挿入デバイスである。一実施形態では、デバイスは、抗ＰＤＧＦアプタマーおよびＶＥＧＦ拮抗薬を含む組成物を含有し、また本体から半径方向に外向きに延在する少なくとも２つの固着用突起を有するロッドまたは管の形式の、ポリマー材料の細長い本体を含む。デバイスは、少なくとも８ｍｍの長さを有することができ、また突起を含むその本体部分の直径は、１．９ｍｍを超えない。持続放出メカニズムは、例えば、拡散によることができ、または浸透作用もしくは生体浸食によることができる。挿入デバイスは、円蓋部の生体構造により目の動きと独立するように、目の上または下円蓋部内に挿入され得る。突起は、例えば、リブ、ねじ山、くぼみもしくは隆起、円錐形状部分、または巻取り紐部分等の種々の形状のものであり得る。さらなる実施形態では、本体用のポリマー材料は、液体環境で膨張するものとして選択される。したがって、より小さい初期サイズのデバイスが採用され得る。挿入デバイスは、上または下円蓋部内への挿入に際し、デバイスが、視野の外に留まって、定位置に良好に保持され、また長期間の使用にわたり受容者によって感知されないようなサイズおよび構成のものであり得る。デバイスは、上または下円蓋部内に７〜１４日間以上にわたって保持され得る。このデバイスの例は、米国特許第５，３２２，６９１号で説明され、それは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２７１】
特定の実施形態では、本発明の組成物はまた、エクソプラント等の薬物送達デバイス、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＰｏｎｔｅｓ  ｄｅ  Ｃａｒｖａｌｈｏ，Ｒ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２００６，４７（１）：４５３２−９で説明されるもの等の上強膜オクソプラントを用いて、送達されることもできる。かかるエクソプラントは、生分解性もしくは生体適合性であり得るか、または非生分解性であり得る。
【０２７２】
他の実施形態では、本発明の組成物はまた、再充填可能な眼内デポー等の薬物送達デバイスを用いて、送達されることもできる。
【０２７３】
投薬は概して、治療される疾病の重篤度および応答性に依存し、治療コースは、数日から数カ月間、または治癒がもたらされるか、もしくは病状の縮小が達成されるまで続く。最適な投薬スケジュールは、体内もしくは局所的部位における薬物蓄積の測定値から、または患者の応答に基づいて、計算され得る。当業者は、投薬量、投薬方法論、および反復率を最適化することができる。最適な投薬量は、抗ＰＤＧＦ作動薬およびＶＥＧＦ拮抗薬の潜在力に応じて変動してもよく、またインビトロおよびインビボ動物研究におけるＥＣ５０に基づいて推定されてもよい。
【実施例】
【０２７４】
実施例１
拮抗薬Ａおよびラニビズマブを含む組成物の安定性
種々の組成物における、拮抗薬Ａと、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）としてＧｅｎｅｎｔｅｃｈ（Ｓ．Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）から市販されているラニビズマブとの組成物安定性を、広範な条件下で調べた。種々のｐＨ（５．０〜８．０）および張性修飾剤（塩化ナトリウム、ソルビトール、およびトレハロース）を使用して、種々の保管条件（４℃、２５℃、および３７℃）にて、また物理的ストレス（撹拌）下で、組成物安定性を最適化した。拮抗薬Ａおよびラニビズマブの組成物安定性は、目視観察、ｐＨ測定、および種々のＨＰＬＣ方法（アニオン交換［ＡＥＸ−ＨＰＬＣ］、弱カチオン交換［ＷＣＸ−ＨＰＬＣ］、およびサイズ排除［ＳＥ−ＨＰＬＣ］）によって特徴付けた。
【０２７５】
１６週間の研究を通して、調べた組成物の中で、３ｍｇ／ｍＬで拮抗薬Ａおよび５ｍｇ／ｍＬでのラニビズマブを、ｐＨ６．０の１０ｍＭでのＬ−ヒスチジン、１３０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％（重量／体積）のポリソルベート２０の中で含む組成物（Ｆ６）が、最も安定であり、拮抗薬Ａおよびラニビズマブの劣化に対する最も大きい保護を提供したことが決定された。実施された実験の詳細な説明は、本明細書で提供される。
【０２７６】
組成物パラメータ
次の組成物パラメータを調べた：
（１）ｐＨ：４．０、５．０、６．０、６．５、７．０、７．３、８．０
（２）緩衝液：酢酸塩、リン酸塩、ヒスチジン、および２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−プロパン−１，３−ジオール（「トリス」）
（３）張性修飾剤：塩化ナトリウム、ソルビトール、およびトレハロース
（４）界面活性剤：ポリソルベート２０［０．０１％および０．００５％（％重量／体積）］
【０２７７】
次のパラメータは、固定であった：
（１）充填体積は、Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐ．（Ｍｇｌａｓ  ＡＧ，Ｍｕｎｎｅｒｓｔａｄｔ、ドイツから入手）によって提供される改良３ｃｃバイアル中で、３００μＬであった  
（２）ラニビズマブの濃度は、５ｍｇ／ｍＬであった
（３）拮抗薬Ａの濃度は、３ｍｇ／ｍＬに固定した
【０２７８】
下の表１は、本研究で使用した組成物マトリックスの要約である。
【０２７９】
【表１】
2015519373.tif 000009
【０２８０】
試料調製
３ｍｇ／ｍＬの濃度の組成物中の拮抗薬Ａを得るために、拮抗薬Ａ原液を、１０ｍＭのリン酸塩、１５０ｍＭのＮａＣｌ中で６ｍｇ／ｍＬで、およびｐＨ７．３で調製した。得られた原液を、商業用Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（１０ｍｇ／ｍＬ）の希釈した形態と１：１で混合し、３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａおよび５ｍｇ／ｍＬのラニビズマブの最終濃度を得た（Ｆ１１）。組成物を、１０ｋＤａ分子量のカットオフ透析用カセット内に定置し、表１に列挙される種々の組成物緩衝液に対して約１，０００，０００倍透析した（組成物番号Ｆ２〜Ｆ３、Ｆ５〜Ｆ１０）。
【０２８１】
組成物研究
組成物を、次の条件下で試験した（ただし、特定の組成物は、より早い時点での劣化のために、全ての時点では試験されなかった）：
【０２８２】
【表２】
2015519373.tif 000010
【０２８３】
分析方法
種々の組成物におけるストレス下で生成された任意の劣化産物の濃度を測定するために、次の安定性指標分析を用いた：
（１）ＳＥ−ＨＰＬＣ（拮抗薬Ａおよびラニビズマブの分析）
・移動相：５０ｍＭのリン酸緩衝液、１００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０
・カラム：Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬ  ７．８ｍｍｘ３００ｍｍ、５μｍ粒子
・カラム温度：周囲温度
・流速：１．０ｍＬ／分
・波長：シグナル、２８０ｎｍ；参照、３６０ｎｍ
・注入量：５μＬ
・試料調製：希釈無し
・パーセント純度は、拮抗薬Ａおよびラニビズマブの双方に関して特定された主ピークの統合した面積率に基づいて報告した。
（２）ＷＣＸ−ＨＰＬＣ（ラニビズマブの分析）
・移動相Ａ：１０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．０
・移動相Ｂ：１０ｍＭのリン酸緩衝液、５００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０
・カラム：Ｄｉｏｎｅｘ  ＰｒｏＰａｃ  ＷＣＸ−１０、４ｘ２５０ｍｍ
・カラム温度：周囲温度
・流速：１．０ｍＬ／分
・波長：シグナル、２１４ｎｍ；参照、３６０ｎｍ
・注入量：５μＬ
・試料調製：希釈無し
・パーセント純度は、拮抗薬Ａおよびラニビズマブの双方に関して特定された主ピークの統合した面積率に基づいて報告した。
（３）ＡＥＸ−ＨＰＬＣ（拮抗薬Ａの分析）
・移動相Ａ：１０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．０
・移動相Ｂ：１０ｍＭのリン酸緩衝液、５００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０
・カラム：Ｄｉｏｎｅｘ  ＤＮＡ  Ｐａｃ  ＰＡ−１００、４ｘ２５０ｍｍ
・カラム温度：４０℃
・流速：１．２ｍＬ／分
・波長：シグナル、２５８ｎｍ；参照、３６０ｎｍ
・注入量：５μＬ
・試料調製：希釈無し
・パーセント純度は、拮抗薬Ａおよびラニビズマブの双方に関して特定された主ピークの統合した面積率に基づいて報告した。
（４）ｐＨ
・ＶＷＲ  ｓｙｍｐｈｏｎｙ  ＳＢ７０Ｐ
（５）目視観察
・写真は、Ｓｏｎｙ  Ｃｙｂｅｒ−ｓｈｏｔ  ＤＳＣ−Ｈ９  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｓｔｉｌｌ  Ｃａｍｅｒａ（８．１メガピクセル）で撮影した。
（６）浸透圧濃度
・Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．のＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ３Ｄ３
【０２８４】
安定性の概説
種々の拮抗薬Ａおよびラニビズマブ組成物に対する、撹拌（４時間）と種々の保管温度  （４℃、２５℃、および３７℃）との双方の効果を分析した。この研究を通して、試験した組成物の全ては、その標的ｐＨ値、すなわち、滴定した初期ｐＨを、全ての保管およびストレス条件を通して維持することが可能であった。
【０２８５】
安定性指標分析
組成物Ｆ２は、３７℃での保管中に２週間後に目に見える降下を示した（データ表示無し）。降下の定量的測定に関して、他の分析は実施しなかった。
【０２８６】
保管中の拮抗薬Ａの劣化は、ＡＥＸ−ＨＰＬＣによって有効に分析された（図１）。プレピークおよびポストピークの形成は、試料を高温で定温放置したときに観察された（図１）。組成物Ｆ２では、拮抗薬ＡのＡＥＸ−ＨＰＬＣ純度は、３７℃で８週間にわたる保管中に２０％近く減少した。
【０２８７】
ＷＣＸ−ＨＰＬＣはまた、保管中のラニビズマブの劣化を特徴付けるのに有効であった（図２）。プレピークおよびポストピークの双方の形成は、ラニビズマブを高温で定温放置したときに観察された（図２）。
【０２８８】
ＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、ラニビズマブの可溶性凝集または断片化を特徴付けるために有用であった（図３）。拮抗薬Ａは、ＳＥ−ＨＰＬＣによって有意な変化を示さなかったが、ただしその凝集した形態の解明は、Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬカラムの性能を超えている可能性がある。ラニビズマブは、３７℃での保管中に、組成物Ｆ３  および組成物Ｆ５において凝集  または断片化を受けた（図３）。
【０２８９】
安定性に対する撹拌の効果
表１に列挙される全ての組成物は、４時間の攪拌を受け、また一組の攪拌されていない対照組成物を室温で放置した。対照試料と撹拌した試料との間に、いずれの分析方法においても差は見られなかった（データ表示無し）。
【０２９０】
安定性に対する保管温度の効果
３７℃での保管は、調査した種々の組成物中において、拮抗薬Ａおよびラニビズマブの双方の著しいが多様なレベルの劣化を生み出した。２週までに、組成物Ｆ２は、降下を示した（データ表示無し）。他の全ての組成物は、８週を通して、また幾つかの組成物（組成物Ｆ１、Ｆ４、Ｆ６、Ｆ８、およびＦ１１）に関しては最大１２週を通して、透明なままであった。
【０２９１】
３７℃で２週間後、組成物Ｆ２における拮抗薬Ａ  純度は、ＡＥＸ−ＨＰＬＣに基づいて２０％近く減少した。組成物Ｆ３およびＦ５も、同一の保管条件下で、４週間後に増大された拮抗薬Ａの劣化を見せた（図４）。８週で、組成物Ｆ８は、Ｆ６およびＦ７よりも拮抗薬Ａに対してより大きい保護を提供することが分かった。１２週で、Ｆ８は、より高い拮抗薬Ａの純度を示した（図４）。
【０２９２】
組成物Ｆ２はまた、ＷＣＸ−ＨＰＬＣが、２週までに２０％近くの純度の損失を検出したように、ラニビズマブの劣化を防ぐことができなかった（図５）。第４週で、多くの組成物（Ｆ３、Ｆ５、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ９、およびＦ１０）は、Ｆ６と比較して著しいラニビズマブの劣化を示した（図５）。組成物Ｆ６は、最大１２週間にわたり、最大のラニビズマブ純度を維持した（図５）。
【０２９３】
ラニビズマブの天然形態に関する単一ピークを示した４℃での２、８、および１２週の結果に基づき、全ての組成物は、最大４週間にわたり、ＳＥ−ＨＰＬＣによる拮抗薬Ａおよびラニビズマブの同様の純度プロファイルを示した（図１４および図１５）。拮抗薬Ａに関して、３７℃で１２週間を含む全ての保管条件において、著しい変化は観察されなかった（図６）。しかしながら、ラニビズマブは、２５℃および３７℃での保管中、凝集を経験した。同一の保管条件下で、商業用Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）の希釈した形態（Ｆ４）について凝集は観察されなかった（図７）。
【０２９４】
全ての組成物は、３７℃より２５℃での保管において、良好な視覚的安定性を示した。８週にわたり、全ての組成物は、透明なままであった。２つの組成物（Ｆ６およびＦ８）は、さらに１２週間の時点で透明なままであった。
【０２９５】
２５℃で初めの４週間にわたって、全ての組成物は、ＡＥＸ−ＨＰＬＣによって特徴付けた際に同等の拮抗薬Ａを維持した（図８）。組成物Ｆ２は、８週までに拮抗薬Ａにおける著しい増大を経験した（図８）。同様に、組成物Ｆ３およびＦ５は、同一の時間枠にわたって純度における相当な減少を示した（図８）。組成物Ｆ６、Ｆ７、およびＦ８は、最大１２週間にわたって拮抗薬Ａの純度を維持することが可能であった（図８）。
【０２９６】
ラニビズマブのＷＣＸ−ＨＰＬＣ分析は、組成物間で、純度プロファイルにおいて僅かであるが独特の変化を示した。２５℃で２週間保管した後、組成物Ｆ２は、ラニビズマブの相当な劣化を示した（図９）。残りの組成物は、８週まで同等のラニビズマブの純度を維持し、８週で、ｐＨ８．０の組成物（Ｆ９およびＦ１０）は、ラニビズマブの純度における相当な減少を見せた（図９）。組成物Ｆ６は、ＷＣＸ−ＨＰＬＣ分析によって決定した際に、２５℃でラニビズマブの劣化を防ぐことが可能であった（図９）。
【０２９７】
その固有の変動以外に、ＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、２５℃での保管中に拮抗薬Ａプロファイルの著しい変化を示さなかった（図１０）。概して、全ての組成物は、８週間にわたって、また組成物Ｆ６およびＦ８に関しては１２週間にわたって、拮抗薬Ａの凝集または断片化を防ぐことが分かった（図１０）。組成物Ｆ８およびＦ６は、２５℃で１２週間にわたって良好なラニビズマブ純度を維持した（図１１）。
【０２９８】
拮抗薬Ａおよびラニビズマブは、４℃において、ほとんどの組成物中で安定したままであった。全ての組成物は、目視検査によって透明なままであった。さらに、ほとんどの組成物は、全てのＨＰＬＣ方法によって開始材料と同等の純度を維持し（図１２〜１５）、ただしＦ２、Ｆ３、およびＦ５は例外であり、それらは、実質的な量のラニビズマブの可溶性凝集体を生じさせた（図１５）。
【０２９９】
安定性に対する組成物特性／構成要素の効果
ｐＨおよび異なる組成物構成要素が持つ、拮抗薬Ａおよびラニビズマブの安定性に対する効果を決定するために、拮抗薬Ａおよびラニビズマブを、種々のｐＨレベル（５．０〜８．０）および異なる張性修飾剤（塩化ナトリウムおよびソルビトール）で共製剤化した。本章は、種々の温度で保管したときの、拮抗薬Ａおよびラニビズマブのうちの一方または双方の安定性に対するｐＨおよび組成物構成要素の効果を説明する。
【０３００】
安定に対するｐＨの効果
拮抗薬Ａおよびラニビズマブの安定性に対するｐＨの効果は、ソルビトール含有組成物およびＮａＣｌ含有組成物の双方において、３７℃での保管で最も良く異なった（図１６）。ＡＥＸ−ＨＰＬＣに基づくと、拮抗薬Ａの劣化は、ｐＨと逆相関し、ｐＨ５．０において最大の劣化を伴った（図１６）。ｐＨにおける変化は、ソルビトール含有 組成物において、ラニビズマブの純度プロファイルに対してあまり顕著ではない変化を引き起こした。ＷＣＸ−ＨＰＬＣに基づくと、ｐＨ５．０での製剤化は、３７℃で４週間後にラニビズマブのより速い劣化を生じさせるが、３７℃で８週間後にはｐＨ６．０の組成物と同様の劣化を生じさせた（図１７）。ラニビズマブは、ＮａＣｌ含有組成物の中でｐＨ６．０にて最も劣化が少なく、一方ｐＨ７．０は、ソルビトール含有組成物の中で最良であった。拮抗薬Ａ（図１８）およびラニビズマブ（図１９）の双方の評定のためにＳＥ−ＨＰＬＣを用いると、ラニビズマブの凝集速度は、ｐＨ７．０の組成物において最も遅く、一方拮抗薬Ａの劣化に関しては、変化は観察されなかった。
【０３０１】
安定性に対する張性修飾剤の効果
拮抗薬Ａおよびラニビズマブの安定性に対する張性修飾剤の効果は、３７℃での保管の結果と比較することによって区別された。ＡＥＸ−ＨＰＬＣによって特徴付けた際に、拮抗薬Ａは、ｐＨ５．０〜７．０において８週間にわたり、ソルビトール組成物よりもＮａＣｌ組成物において安定したままであった（図２０）。ｐＨ８．０では、４週間にわたり、塩化ナトリウムまたはソルビトールを含有する組成物間で、識別可能な差は生じ得なかった（図２１）。ラニビズマブ組成物に関して、ＷＣＸ−ＨＰＬＣによって特徴付けた際、塩化ナトリウム組成物は、試験したｐＨ範囲（ｐＨ５．０〜８．０）を通してソルビトール組成物より優れていた（図２２）。ラニビズマブの安定化における塩化ナトリウム組成物の優れた性能はまた、ＳＥ−ＨＰＬＣによっても示された（図２３）。双方の張性修飾剤を有する組成物に関して、可溶性凝集のレベルは、ｐＨ７．０で最も低く、またｐＨ５．０で最も高かった（図２３）。
【０３０２】
拮抗薬ＡおよびＬｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）の１：１混合物の安定性
この研究の別の態様は、拮抗薬Ａと商業用Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）との混合の効果を特徴付けることに関した。これを達成するために、拮抗薬Ａを、ｐＨ７．３の１０ｍＭのリン酸ナトリウムおよび１５０ｍＭのＮａＣｌの組成物中でその元の濃度３０ｍｇ／ｍＬから６ｍｇ／ｍＬに希釈した後、得られた組成物を、同体積（１：１）の商業用Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（１０ｍｇ／ｍＬ）と組み合わせた。１：１混合物（Ｆ１１）の安定性を、３７℃での保管によって調べ、また同様の濃度および保管温度におけるＦ１およびＦ４単独と比較した。
【０３０３】
拮抗薬Ａに関して、ＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、１：１混合物、Ｆ１１中での拮抗薬Ａの安定性が、３７℃で１２週にわたってＦ１単独と同等であることを示した（図２４）。ＡＥＸ−ＨＰＬＣによって、拮抗薬Ａは、３７℃での保管中により早い時点で１：１混合物中においてより早い劣化を経験したことが分かるが、Ｆ１および１：１混合物（Ｆ１１）の双方は、１２週まで同等の純度を示した（図２５）。試料を２５℃で保管したとき、ＡＥＸ−ＨＰＬＣ純度プロファイルにおいて差は観察されなかった（図２５）。
【０３０４】
ラニビズマブは、１：１混合物中において、同様の保管条件で拮抗薬Ａが直面するよりも大きい安定性の問題に直面した。Ｆ１１中のラニビズマブは、３７℃で最大４週間の保管において、Ｆ４におけるラニビズマブと同等のＷＣＸ−ＨＰＬＣプロファイルを維持し、その後、ラニビズマブは、混合物（Ｆ１１）においてより速い劣化を経験した（図２６）。しかしながら、ラニビズマブは、試料を２５℃で保管したとき、混合物中で極めて安定したままであった（図２６）。２５℃において、混合物とＦ４との間で、ラニビズマブのＷＣＸ−ＨＰＬＣ純度プロファイルに著しい差は観察されなかった。ＳＥ−ＨＰＬＣは、３７℃で８週間保管した後、Ｆ４と比較して１：１混合物中の凝集したラニビズマブにおける顕著な増大を見せた（図２７ａ）。混合物中の凝集は、２５℃で保管したときに実質的により低く、また４℃では観察されなかった（図２７ｂ〜ｃ）。
【０３０５】
組成物Ｆ６の安定性
拮抗薬ＡのＡＥＸ−ＨＰＬＣ分析は、Ｆ６組成物は、２５℃で最大１２週まで、また４℃で少なくとも最大１６週（試験された最終の時点）まで、拮抗薬Ａの純度を維持したことを示した（図２８）。３７℃において、拮抗薬Ａの劣化は、早くて２週で観察された（図２８）。Ｆ６との製剤化は、ＷＣＸ−ＨＰＬＣによる純度における著しい減少が８週までに示される前に、３７℃で最大４週間にわたって、ラニビズマブを劣化から保護するのに役立った（図２９）。しかしながら、ラニビズマブは、２５℃で少なくとも最大１２週間にわたって、また４℃で少なくとも最大１６週間にわたって、ＷＣＸ−ＨＰＬＣによる純度におけるいかなる実質的な損失も伴わずに、組成物Ｆ６中で安定であった（図２９）。
【０３０６】
ＳＥ−ＨＰＬＣの結果は、拮抗薬Ａは、全ての保管条件において１６週間にわたって安定したままであることを示した（図３０）。ラニビズマブに関して、Ｆ６組成物中で３７℃で１２週間定温放置したとき、著しい凝集は観察されなかった（図３１）。Ｆ６組成物は、４℃かまたは２５℃かのいずれかで保管したときにより良好に機能し、両温度において８週間にわたって同等な純度を有した。２５℃および３７℃でのラニビズマブの凝集は、Ｆ６組成物においてＦ４におけるよりも速かった。
【０３０７】
これらの広範な研究から、組成物Ｆ６は概して、この研究に採用された全ての保管温度および分析方法にわたって最良の安定性を示した。
【０３０８】
実施例２
拮抗薬Ａおよびベバシズマブを含む組成物の安定性
抗VＥＧＦモノクローナル抗体（ｍＡｂ）ベバシズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ（Ｓ．Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）から市販されているＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）を同様に含む組成物における拮抗薬Ａの安定性を、広範な条件下で調べた。種々のｐＨ（４．０〜８．０）および張性修飾剤（塩化ナトリウム、ソルビトール、およびトレハロース）を使用して、種々の温度（４℃、２５℃、および３７℃）にて保管したときの、また物理的ストレス（撹拌）に対する拮抗薬Ａおよびベバシズマブの組成物安定性を最適化した。拮抗薬Ａおよびベバシズマブの安定性は、目視観察、ｐＨ測定、および種々のＨＰＬＣ方法（アニオン交換［ＡＥＸ−ＨＰＬＣ］、弱カチオン交換［ＷＣＸ−ＨＰＬＣ］、およびサイズ排除［ＳＥ−ＨＰＬＣ］）によって特徴付けた。
【０３０９】
拮抗薬Ａは、双方を特定の試験組成物において組み合わせたときに、識別可能な安定性の問題を有さずにベバシズマブと適合した。２４週間の安定性研究の結果に基づくと、最良の安定性が組成物Ｆ１９に観察された。Ｆ１９組成物において、拮抗薬Ａおよびベバシズマブの双方は、４℃で２４週間を通して、また２５℃で最大で少なくとも４週間にわたって、安定したままであった。
【０３１０】
組成物パラメータ
次の組成物パラメータを調べた：
（１）ｐＨ：４．０、５．０、６．０、６．２、６．３、７．０、７．３、８．０
（２）緩衝液：酢酸塩、リン酸塩、およびトリス
（３）張性修飾剤：塩化ナトリウム、ソルビトール、およびトレハロース
（４）界面活性剤：ポリソルベート２０
（５）拮抗薬Ａ濃度：３０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、および３ｍｇ／ｍＬ
【０３１１】
次のパラメータは、固定であった：
（１）充填体積は、Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐ．（Ｍｇｌａｓ  ＡＧ，Ｍｕｎｎｅｒｓｔａｄｔ、ドイツから入手）によって提供される改良３ｃｃバイアル中で、３００μＬであった。
（２）ベバシズマブの濃度は、１２．５ｍｇ／ｍＬであった。
【０３１２】
下の表３は、本研究で使用した組成物マトリックスの要約である。
【０３１３】
【表３】
2015519373.tif 000011
【０３１４】
試料調製
拮抗薬Ａ原液を、１０ｍＭのリン酸塩、１５０ｍＭのＮａＣｌ中で、６ｍｇ／ｍＬで、ｐＨ７．３で調製した。得られた原液を、商業用Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（２５ｍｇ／ｍＬ）と１：１で混合し、３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａおよび１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブの最終濃度を得た（組成物Ｆ２６）。組成物を、１０ｋＤａ分子量のカットオフ透析用カセット内に定置し、表３に列挙される種々の組成物緩衝液に対して約１，０００，０００倍透析した（組成物番号Ｆ１３〜Ｆ１７、Ｆ１９〜Ｆ２３）。例外は、次のものを含む：
・組成物Ｆ１２は、追加の希釈または透析を必要としなかった。
・組成物Ｆ１８を提供するために、商業用Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）は、６％（重量／体積）のトレハロースおよび０．０２％（重量／体積）のポリソルベート２０を含有する５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．２）で１：１に希釈した。
・組成物Ｆ２４は、組成物Ｆ１２を商業用Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）と１：１で混合することによって作成した。
・組成物Ｆ２５は、１５０ｍＭのＮａＣｌを含有する１０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）を用いた組成物Ｆ１２の１０倍希釈によって作成した。
【０３１５】
ストレス研究
表３の組成物を、次のストレス条件下で試験した：
【０３１６】
【表４】
2015519373.tif 000012
【０３１７】
分析方法
ストレス下で生成された劣化産物を分析するために、次の安定性指標分析を開発し、本研究で使用した。
（１）ＳＥ−ＨＰＬＣ（拮抗薬Ａおよびベバシズマブの分析）
・移動相：５０ｍＭのリン酸緩衝液、１００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０
・カラム：ＴＯＳＯＨ  ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬ
・カラム温度：周囲温度
・流速：１．０ｍＬ／分
・波長：シグナル、２１４ｎｍ；参照、３６０ｎｍ
・注入量：１μＬ
・試料調製：
−  ３０ｍｇ／ｍＬのアプタマー試料に関して、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中で１０倍希釈
−  他の試料に関しては、希釈無し
・パーセント純度は、拮抗薬Ａおよびベバシズマブの双方に関して特定された主ピークの統合した面積率に基づいて報告した。
（２）ＷＣＸ−ＨＰＬＣ（ベバシズマブの分析）
・移動相Ａ：１０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．０
・移動相Ｂ：１０ｍＭのリン酸緩衝液、５００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０
・カラム：Ｄｉｏｎｅｘ  ＰｒｏＰａｃ  ＷＣＸ−１０，４ｘ２５０ｍｍ
・カラム温度：周囲温度
・流速：１．０ｍＬ／分
・波長：シグナル、２１４ｎｍ；参照、３６０ｎｍ
・注入量：１０μＬ
・試料調製：Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中で１０倍希釈
・パーセント純度は、ベバシズマブに関して特定された主ピークの統合した面積率に基づいて報告した。
（３）ＡＥＸ−ＨＰＬＣ（拮抗薬Ａの分析）
・移動相Ａ：１０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．０
・移動相Ｂ：１０ｍＭのリン酸緩衝液、５００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０
・カラム：  Ｄｉｏｎｅｘ  ＤＮＡ  Ｐａｃ  ＰＡ−１００、４ｘ２５０ｍｍ
・カラム温度：４０℃
・流速：１．２ｍＬ／分
・波長：シグナル、２５８ｎｍ；参照、３６０ｎｍ
・注入量：５μＬ
・試料調製：
−  ３．０ｍｇ／ｍＬのアプタマー試料に関して、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中で１０倍希釈
−  １５ｍｇ／ｍＬのアプタマー試料に関して、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中で５０倍希釈
−  ３０ｍｇ／ｍＬのアプタマー試料に関して、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中で１００倍希釈
・パーセント純度は、拮抗薬Ａに関して特定された主ピークの統合した面積率に基づいて報告した。
（４）ｐＨ
・ＶＷＲ  ｓｙｍｐｈｏｎｙ  ＳＢ７０Ｐ
（５）目視観察
・写真は、Ｓｏｎｙ  Ｃｙｂｅｒ−ｓｈｏｔ  ＤＳＣ−Ｈ９  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｓｔｉｌｌ  Ｃａｍｅｒａ（８．１メガピクセル）で撮影した
（６）浸透圧濃度（０時点における）
・Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．のＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ３Ｄ３
【０３１８】
安定性の概説
本章は、拮抗薬Ａおよびベバシズマブに対する撹拌（４時間）と種々の温度（４℃、２５℃、および３７℃）での保管の効果を説明する。この研究を通して、各組成物は、全ての物理的ストレスを通して標的ｐＨ値を維持することが可能であった。
【０３１９】
安定性指標分析
目視観察によって、組成物Ｆ１５、Ｆ１６、およびＦ２４は、３７℃での２週間の保管中に降下を示したことが示された（データ表示無し）。研究に利用可能な体積が限られているため、降下の定量的測定に関して他の分析は実施しなかった。
【０３２０】
保管中の拮抗薬Ａの安定性は、ＡＥＸ−ＨＰＬＣによって有効に分析された。プレピークおよびポストピークの双方の形成は、特定の組成物中の拮抗薬Ａを３７℃の高温で定温放置したときに観察された。例えば、組成物Ｆ１４において、拮抗薬ＡのＡＥＸ−ＨＰＬＣ純度は、３７℃での２週間の保管中、５０％近く減少した（図３２）。
【０３２１】
WCＸ−ＨＰＬＣもまた、ベバシズマブの安定性を特徴付けるのに有効であった。プレピークおよびポストピークの双方の形成は、特定の組成物中のベバシズマブを２５℃の温度で定温放置したときに観察された。例えば、組成物Ｆ２２において、ベバシズマブ純度は、２５℃での８週間の保管中、３０％近く減少した（図３３）。
【０３２２】
ＳＥ−ＨＰＬＣは、ベバシズマブの可溶性凝集または断片化を特徴付けるのに有用であることが示された。拮抗薬Ａは、ＳＥ−ＨＰＬＣによる著しい変化を示さなかったが、ただし、その凝集した形態の解明は、安定性に対する分析感受性のためＴＳＫｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬカラムの性能を超えている可能性がある。ベバシズマブの劣化は、３７℃で８週間保管した後、組成物Ｆ１５において見られた（図３４）。
【０３２３】
安定性に対する撹拌の効果
拮抗薬Ａおよびベバシズマブのうちの一方または双方に対する撹拌の効果を、評価した。表３で列挙される組成物を、インハウス攪拌器を用いて４時間にわたって攪拌し、一方、対照セットの組成物は、攪拌せず室温で放置した。撹拌した試料と対照との間で、目視観察、ｐＨ、ＡＥＸ−ＨＰＬＣ、およびＷＣＸ−ＨＰＬＣにおいて差は観察されなかった（データ表示無し）。しかしながら、拮抗薬Ａおよびベバシズマブのうちの一方または双方の凝集または断片化を評価するＳＥ−ＨＰＬＣは、Ｆ２３およびＦ２４試料において、攪拌した試料と対照試料との間に僅かな変動を示した（表５および表６）。４時間の撹拌後、より多くの可溶性凝集体（プレ−拮抗薬Ａピークおよびプレ−ベバシズマブピーク）が、Ｆ２３試料、および３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａと２５ｍｇ／ｍＬのＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）との直接１：１混合物（Ｆ２４）において形成した。これは、ｐＨ８．０で塩化ナトリウムを用いて製剤化すること、またはベバシズマブと共製剤化されたより高い濃度の拮抗薬Ａを有することは、剪断ストレス中に、可溶性凝集体または断片を形成する拮抗薬Ａまたはベバシズマブにつながることを示唆する。他の組成物は、ＳＥ−ＨＰＬＣによって決定した際に、拮抗薬Ａおよびベバシズマブの完全性を維持するように見えた。これらの結果は、上に記載した条件下でを除き、共製剤化された拮抗薬Ａまたはベバシズマブの明らかな劣化は、攪拌によって誘発されなかったことを示唆する。
【０３２４】
【表５】
2015519373.tif 000013
【０３２５】
【表６】
2015519373.tif 000014
【０３２６】
安定性に対する保管温度の効果
２４週間の研究の間、表３で列挙される組成物は、４℃、２５℃、および３７℃の安定室内に定置して、拮抗薬Ａおよびベバシズマブの安定性のうちの一方または双方に対する温度の効果を研究した。拮抗薬Ａおよびベバシズマブの双方は、クロマトグラフィ分析に基づき、保管温度が増大するにつれ、より大きい劣化を示した。
【０３２７】
３７℃での保管は、著しく上昇したレベルの拮抗薬Ａおよびベバシズマブの劣化を誘発した。２週までに、拮抗薬Ａまたはベバシズマブの降下が、Ｆ１５、Ｆ１６、およびＦ２４で見られた（データ表示無し）。４週までに、Ｆ１４また、拮抗薬Ａまたはベバシズマブの不溶性凝集を示し始めた（データ表示無し）。他の全て組成物は、１２週を通して透明なままであった。
【０３２８】
ＡＥＸ−ＨＰＬＣは、ｐＨ４．０および５．０の組成物試料（Ｆ１３、Ｆ１４、Ｆ１５、およびＦ１６）において著しい拮抗薬Ａの劣化を見せ、一方、Ｆ１７における共製剤化された試料は、より良好な安定性を示した（図３５）。拮抗薬Ａは、３７℃での１２週間の保管を通して、ｐＨ６．０〜７．０で同等な純度を維持したが、ただし、Ｆ２０およびＦ２６は例外であり、拮抗薬Ａ純度における減少が１２週で観察された（図３６）。
【０３２９】
３７℃で２週間にわたって保管した後、ＷＣＸ−ＨＰＬＣは、ｐＨ４．０の組成物（Ｆ１３およびＦ１４）においてベバシズマブ純度の著しい減少を見せ、損なわれていないベバシズマブがほとんどまたは全く残っていないことを示した（図３７）。加速した劣化は、３７℃での１２週間の保管を通してＦ１９を除くすべての他の組成物で観察され、Ｆ１９は、他の組成物より低い劣化を一貫して見せた（図３８）。
【０３３０】
ＳＥ−ＨＰＬＣは、ストレスを受けた試料における可溶性凝集体の形成を見せた。拮抗薬Ａに関して、３７℃での２週間の保管は、ｐＨ４．０〜５．０の組成物に可溶性凝集体を素早く形成させた（図３９）。Ｆ１７において製剤化された拮抗薬Ａもまた、可溶性凝集を示したが、より低速であった（図３９）。第４週までに、拮抗薬Ａ組成物のほとんどは、より低い拮抗薬Ａ純度を示したが、ただしＦ１９および２つの１：１混合物（Ｆ２４およびＦ２６）は例外であり、それらは、高い拮抗薬Ａ純度を維持することが可能であった（図４０）。したがって、傾向は、Ｆ２６が僅かに低減された拮抗薬Ａ純度を見せる第１２週まで維持され、Ｆ１９が安定性に関して拮抗薬Ａのための最適な組成物として残った。ベバシズマブに関して、ｐＨ６．０以外に製剤化することは、ｍＡｂ純度における著しい減少を引き起こした（図４１）。この傾向は、３７℃での１２週間の保管を通して継続し、Ｆ１９が、最も高い安定性を有するベバシズマブを提供する組成物として残った（図４２）。
【０３３１】
幾つかの組成物は、２５℃での保管中、より良好な安定性を提供した。組成物の全ては、２５℃で２４週間後、Ｆ１４を除いて透明なままであり、Ｆ１４では、８週で降下が観察された（データ表示無し）。
【０３３２】
ＡＥＸ−ＨＰＬＣに基づくと、拮抗薬ＡをｐＨ４．０に製剤化すること（Ｆ１３およびＦ１４）は、僅か２週間の保管後にアプタマーの劣化を引き起こした（図４３）。Ｆ１５は、２５℃での４週間の保管において劣化を見せたが、しかしながら、Ｆ１６は、最大８週まで改善された安定性を示した（図４３）。拮抗薬ＡをｐＨ６．０〜８．０に製剤化することは、２５℃での８週間の保管を通して、また組成物Ｆ１９、Ｆ２０、Ｆ２１、およびＦ２３に関して４℃での少なくとも最大２４週間の保管まで、同等の安定性を維持した（図４４）。
【０３３３】
ＷＣＸ−ＨＰＬＣは、ｐＨは、ベバシズマブの安定性に対して拮抗薬Ａと比較して反対の効果を有したことを示唆している。２５℃で２週間後、ｐＨ８．０の試料は、ベバシズマブの実質的な劣化を見せた（図４５および図４６）。２５℃で４週までに、ｐＨ４．０およびｐＨ７．０の組成物は、ベバシズマブ劣化の兆候を示し始めた（図４５および図４６）。ｐＨ５．０〜６．０の組成物は、２５℃で最大１２週まで同等のベバシズマブの安定性を提供し、その時点で、全ての有力候補は、加速された劣化の兆候を示した。しかしながら、Ｆ１９組成物は、ｐＨ６．０で、２５℃での１２〜２４週間の保管において、ベバシズマブのさらなる加速した劣化を受けなかった（図４５および図４６）。
【０３３４】
ＡＥＸ−ＨＰＬＣおよびＷＣＸ−ＨＰＬＣに見られた同様の劣化傾向が、ＳＥ−ＨＰＬＣによって観察された。ｐＨ４．０に製剤化した拮抗薬Ａは、２５℃で保管したとき、拮抗薬Ａ純度を維持することができなかった（図４７）。８週までに、ｐＨ５．０に製剤化した拮抗薬Ａは、著しい凝集または断片化を経験した（図４７）。拮抗薬Ａを６．０〜８．０の範囲のｐＨに製剤化することは、２５℃の少なくとも最大２４週間の保管を通して、同等の純度を提供した（図２１）。ベバシズマブの純度は、組成物のｐＨおよび組成物中の拮抗薬Ａの濃度に依存した。２５℃で４週間にわたって保管した後、ｐＨ４．０およびｐＨ８．０での製剤化は、ベバシズマブの純度における加速された減少を引き起こした（図４９および図５０）。同一の時間および保管条件下で、１５ｍｇ／ｍＬで共製剤化した拮抗薬Ａは、ベバシズマブの純度に悪影響を及ぼすことが分かった（図４９）。ｐＨ５．０〜７．０の組成物は、２５℃で８週間にわたってより良好な安定性を提供した（図４９および図５０）。以降の時点は、有力な組成物（ｐＨ６．０および７．０）は、同等の純度を維持することが可能であることを示した（図５０）。
【０３３５】
４℃での保管は、この研究の間、ほとんどの組成物に関して最良の安定性を提供した。目視観察は、組成物Ｆ１９、Ｆ２０、Ｆ２１、およびＦ２３に関して少なくとも最大２４週間にわたる４℃での保管中に、不溶性凝集を示さなかった。
【０３３６】
拮抗薬Ａに関して、全ての組成物が、８週間の保管後、および組成物Ｆ１９、Ｆ２０、Ｆ２１、およびＦ２３に関して４℃で２４週間を通して、ＡＥＸ−ＨＰＬＣによる同等の純度を維持した（図５１）。しかしながら、ＷＣＸ−ＨＰＬＣによって観察した際、ベバシズマブをｐＨ８．０に製剤化することは、４℃で８週間後、劣化における相当な増大を引き起こし、この傾向は２４週間を通して継続した（図５２）。
【０３３７】
ＳＥ−ＨＰＬＣは、幾つかの組成物において、拮抗薬Ａの断片化またはベバシズマブの凝集を見せた。拮抗薬Ａに関して、ほとんどの組成物は、４℃で最大８週間、その純度を維持し、一方、ｐＨ４．０〜５．０の組成物は、著しい純度の損失を見せた（図５３）。組成物Ｆ１９、Ｆ２０、Ｆ２１、およびＦ２３は、４℃での最大１２週間の保管で同等の拮抗薬Ａ純度を維持したが、しかしながら、１２および２４週間後、Ｆ２３における拮抗薬Ａ純度は、実質的に減少し、他の３つの選択された組成物の拮抗薬Ａ純度は、同様に高いままであった（図５４）。ｐＨ８．０に製剤化することは、初期の透析中にベバシズマブの可溶性凝集体の形成を引き起こすが、しかしながら、４℃での保管は、少なくとも８週間、ベバシズマブの純度を他の組成物と同様に維持した（図５５）。例外は組成物Ｆ２４であり、１５ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａの濃度は、８週間の保管にわたってベバシズマブの純度に影響を及ぼした（図５５）。
【０３３８】
安定性に対する組成物特性／構成要素の効果
安定性に対するこれらの因子の効果を決定するために、拮抗薬Ａおよびベバシズマブを、多様なｐＨで、および異なる張性修飾剤と共に共製剤化した。本章は、拮抗薬Ａおよびベバシズマブのうちの一方または双方の安定性に対する組成物の効果を説明する。
【０３３９】
安定に対するｐＨの効果
拮抗薬Ａおよびベバシズマブの安定性に対するｐＨの効果は、３７℃での保管で異なった。ＡＥＸ−ＨＰＬＣによって観察した際、拮抗薬Ａは、３７℃において、加速された劣化が生じたｐＨ４．０〜６．０のソルビトール含有組成物Ｆ１３、Ｆ１５、およびＦ１７と対照的に、ｐＨ７．０およびｐＨ８．０のソルビトール含有組成物Ｆ２０およびＦ２２で安定であった（図５６）。ベバシズマブに関して、ＷＣＸ−ＨＰＬＣによって観察した際、ｐＨ５．０〜６．０以外のソルビトール含有組成物（Ｆ１３、Ｆ２０、およびＦ２２）は、３７℃でベバシズマブの加速された劣化を示した（図５７）。ＡＥＸ−ＨＰＬＣの結果と同様に、ＳＥ−ＨＰＬＣは、ソルビトール含有組成物Ｆ１３およびＦ１５（ｐＨ４．０〜５．０）中の拮抗薬Ａは、３７℃で断片化または凝集を経験したことを示した（図５８）。しかしながら、ｐＨ５．０〜６．０の範囲外のソルビトール含有組成物に関してＷＣＸ−ＨＰＬＣによって示された劣化にも関わらず、ＳＥ−ＨＰＬＣは、ベバシズマブが、３７℃で保管したときに、ｐＨ５．０〜８．０のソルビトール含有組成物においてより低速の凝集または断片化を経験したことを示した（図５９）。３７℃で保管したｐＨ４．０のソルビトール含有組成物Ｆ１３のＳＥ−ＨＰＬＣは、ベバシズマブの実質的な劣化を示した。ｐＨ６．０に製剤化すること（Ｆ１７）は、ソルビトール含有組成物に関して分析した他のｐＨレベルより、ベバシズマブの純度を良好に維持することが分かった（図５８および図５９）。
【０３４０】
安定性に対する張性修飾剤の効果
拮抗薬Ａおよびベバシズマブの安定性に対する張性修飾剤の効果は、３７℃での保管で異なった。ソルビトールか塩化ナトリウムかのいずれかの利益は、組成物のｐＨに依存した。
【０３４１】
ｐＨ５．０および６．０において、拮抗薬Ａは、ＡＥＸ−ＨＰＬＣによって観察した際、８週間の研究を通してソルビトール組成物（Ｆ１５およびＦ１７）において劣化を経験した（図６０）。しかしながら、塩化ナトリウムを張性修飾剤として有するこれらのｐＨレベルの組成物（Ｆ１６およびＦ１９）は、かかる劣化を経験しなかった（図６０）。塩化ナトリウムを含有するｐＨ４．０の組成物（Ｆ１４）は、４週間の加速されたストレス後、低減された安定性を有することが示され、ｐＨ４．０における優れた張性修飾剤であるソルビトールをもたらした（図６０）。ｐＨ７．０およびｐＨ８．０において、塩化ナトリウムかまたはソルビトールのいずれかを張性修飾剤として有する組成物（Ｆ２０、Ｆ２１、Ｆ２２、およびＦ２３）は、同等の安定性を維持した。ＷＣＸ−ＨＰＬＣによるベバシズマブ分析は、ｐＨ６．０〜７．０の塩化ナトリウムを伴う製剤化は、ソルビトールと比較して安定性を改善することを示した（図６１）。しかしながら、ｐＨ５．０の組成物に関してはこの逆が真であり、ソルビトールは、３７℃での４週間の保管の間、塩化ナトリウムと比較して劣化を制限する（図６１）。ＳＥ−ＨＰＬＣによって、拮抗薬Ａ安定性は、塩化ナトリウムまたはソルビトールの存在によって影響を受け、一方ベバシズマブの安定性は、双方の張性修飾剤の間で同等のままであった。ｐＨ５．０〜６．０の組成物に関して、塩化ナトリウムの存在は、ソルビトールより良好に拮抗薬Ａを凝集または断片化から保護した（図６２）。他のｐＨ分析により、拮抗薬Ａは、ソルビトールを伴ってｐＨ４．０でより低い純度を示した（図６２）。ｐＨ７．０およびｐＨ８．０に製剤化した拮抗薬Ａ（図６２）ならびにｐＨ４．０、ｐＨ７．０、およびｐＨ８．０に製剤化したベバシズマブ（図６３）は、張性修飾剤としてソルビトールかまたは塩化ナトリウムかのいずれかを伴って、同等の純度を維持した。
【０３４２】
安定性に対する１：１混合物の効果
別の分析パラメータは、拮抗薬Ａと商業用ベバシズマブとの混合の効果であった。同様に、固定された濃度のベバシズマブと共に異なる濃度の拮抗薬Ａを含有する組成物（１：１混合（Ｆ２４）および１：１混合（Ｆ２６）を、分析した。同様に、組成物を３７℃でストレス付加することは、拮抗薬Ａおよびベバシズマブの双方の劣化に関する情報を提供した。
【０３４３】
拮抗薬Ａ単独に関して、３０ｍｇ／ｍＬ（Ｆ１２）または３ｍｇ／ｍＬ（Ｆ２５）で製剤化することは、ＡＥＸ−ＨＰＬＣおよびＳＥ−ＨＰＬＣによる安定性プロファイルにおいて差を生じなかった。商業用Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）を多様な拮抗薬Ａ濃度（１５ｍｇ／ｍＬおよび３ｍｇ／ｍＬ）と混合するとき、両組成物中の拮抗薬Ａは、３７℃で最大８週間、同等の安定性を維持し、一方、拮抗薬Ａを１５ｍｇ／ｍＬで１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブと共に製剤化することは、ＡＥＸ−ＨＰＬＣによって観察した際に僅かな劣化を生み出した（図６４）。
【０３４４】
ベバシズマブの濃度は本研究の全ての組成物において一定であったが、拮抗薬Ａの多様な濃度は、ベバシズマブの安定性に影響を及ぼした。３７℃で８週間保管した後、ＷＣＸ−ＨＰＬＣは、３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａ（Ｆ２６）かまたは１５ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａ（Ｆ２４）かのいずれかと共に製剤化したときに、ベバシズマブの劣化プロファイルにおいて僅かな差を見せた（図６５）。ＳＥ−ＨＰＬＣによって、純度プロファイルにおける著しい差は、３０ｍｇ／ｍＬおよび３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａの間で、２つの濃度の直接１：１混合（Ｆ２４およびＦ２６）と比較して見られなかった（図６６）。しかしながら、ベバシズマブに関して、１５ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａを有する組成物（Ｆ２４）は、３ｍｇ／ｍＬの組成物１：１混合（Ｆ２６）、および商業用Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）の希釈した形態（Ｆ１８）と比較して、より多くのベバシズマブの可溶性凝集および断片化を生み出した（図６７）。
【０３４５】
Ｆ１９組成物の安定性
２４週間の研究を通して、組成物Ｆ１９は、分析した組成物の全ての中で最良の安定性を示した。本研究を通して、全てのＦ１９組成物は、視覚的に透明なままであり、標的のｐＨ値を維持した。この章は、この組成物の安定性プロファイルを強調する。
【０３４６】
ＡＥＸ−ＨＰＬＣ分析によって、Ｆ１９組成物は、４℃および２５℃の双方において、２４週間を通して同等の拮抗薬Ａ純度を維持した（図６８）。しかしながら、３７℃で保管したとき、拮抗薬Ａの純度は、第２週までに約５％より低かった（図６８）。３７℃でのこの傾向は、その後の１２週間にわたって継続し、拮抗薬Ａ純度は、拮抗薬Ａの他の保管条件と比較して、約２０％降下した（図６８）。
【０３４７】
ＷＣＸ−ＨＰＬＣ分析は、Ｆ１９組成物において保管温度とベバシズマブ劣化の速度との間に相関を示した。３７℃で２週間後、ベバシズマブ純度は、４℃の試料と比較して約１０％降下した（図６９）。この傾向は、最大１２週間継続し、３７℃で保管したベバシズマブの純度は、４℃と比較して約５０％降下した（図６９）。２５℃での保管は、最大４週間、４℃と同等の純度を維持した（図４２）。しかしながら、８週までに、２５℃の試料は、４℃の試料と比較して純度において７％の降下を経験した（図６９）。２５℃で保管したベバシズマブの増大された劣化は、本研究の残りの２４週間にわたって継続し、２４週間の最後に、ベバシズマブ純度は、４℃で保管した試料より約２０％低かった（図６９）。４℃での保管は、２４週間の本研究を通して開始値と同等の純度を維持することが分かった（図６９）。
【０３４８】
ＳＥ−ＨＰＬＣによって、組成物Ｆ１９は、拮抗薬Ａのさらなる可溶性凝集または断片化を、開始値と同等に防いだ（図７０）。３７℃で保管したＦ１９中のベバシズマブは、４℃および２５℃での保管と同等の純度を最大２週間にわたって維持し、その後、可溶性凝集が、４週までに生じた（図７１）。ベバシズマブ純度は、１２週までに著しい可溶性凝集が生じる前に、２５℃で最大８週間にわたって維持された（図７１）。４℃では、ベバシズマブは、２４週間にわたって初期時点と同等の純度値を維持した（図７１）。
【０３４９】
拮抗薬Ａとベバシズマブとの間の純度の対比は、組成物F１９を、拮抗薬Ａまたはベバシズイマブのみを含む組成物と比較したときに見られた。３７℃で２〜８週において、組成物Ｆ２５は、ＡＥＸ−ＨＰＬＣ分析によってＦ１９より５〜８％高い拮抗薬Ａ純度を維持した。しかしながら、１２週までに、両組成物は、同様の純度レベルに降下した（図７２）。さらに、４℃および２５℃において、両組成物は、同等の純度レベルを維持した（図７２）。ＳＥ−ＨＰＬＣによって、組成物Ｆ１２は、各保管条件においてＦ１９より良好であることが分かり、４℃において最も大きい差があったが、ただし幾つかの分析変数が観察された（図７３）。
【０３５０】
Ｆ１９中においてベバシズマブを製剤化することは、商業用Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）の希釈した形態（Ｆ１８）と比較してより良好な安定性を提供した。ＷＣＸ−ＨＰＬＣに基づくと、Ｆ１９は、２５℃、また特に３７℃においてＦ１８より良好にベバシズマブを安定化し、２〜１２週において８％〜１１％の改善を示した（図７４）。同様に、ＳＥ−ＨＰＬＣ分析は、３７℃で保管したＦ１８と比較して、ベバシズマブの凝集または断片化のより良好な防止を示した（図７５）。
【０３５１】
２４週間にわたる安定性試験にて収集したデータに基づき、Ｆ１９は、最も安定した拮抗薬Ａおよびベバシズマブの組成物であることが決定された。試験した組成物中、Ｆ１９は、４℃で少なくとも最大２４週間にわたって保管したとき、３ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａおよび１２．５ｍｇ／ｍＬのベバシズマブの双方を安定化するのに役立った。また、Ｆ１９組成物中の拮抗薬Ａおよびベバシズマブの双方の純度は、２５℃で少なくとも最大４週間にわたって維持された。
【０３５２】
実施例３
ラニビズマブおよび拮抗薬Ａの双方を含む組成物の生物学的活性
本研究の目的は、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））かまたは拮抗薬Ａかのみを含む組成物と比較して、ラニビズマブおよび拮抗薬Ａの双方を含む組成物の生物学的活性を評定することであった。活性は、リアルタイムＰＣＲを用いて、そのそれぞれの細胞受容体へのＶＥＧＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢ結合の阻害の関数として、遺伝子発現のレベルを介して測定した。３つの異なるラニビズマブ＋拮抗薬Ａ組成物、Ｆ６、Ｆ８、およびＦ１１を分析した（実施例１を参照）。これらの組成物は、本研究での使用の前に４℃で１２カ月間にわたって保管した。
【０３５３】
単独の、または拮抗薬Ａも含む組成物中に存在するラニビズマブの抗ＶＥＧＦ活性を、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）中の組織因子（ＴＦ）遺伝子のＶＥＧＦ誘発を阻害するその能力によって決定した。試料は、三連で分析し、全てのデータを、ＶＥＧＦ単独処理に関して獲得したものに対して正規化した。図７６で示される通り、全ての組成物に関して、およびＬｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）単独に関して決定された抗ＶＥＧＦ  ＥＣ５０（ｎＭ）値は、９５％信頼区間内で同一であった。
【０３５４】
単独の、またはラニビズマブも含む組成物中に存在する拮抗薬Ａの抗ＰＤＧＦ活性を、３Ｔ３線維芽細胞中のＢＴＧ２遺伝子発現のＰＤＧＦ−ＢＢ誘発を阻害するその能力によって決定した。試料は、二連で分析し、全てのデータは、ＰＤＧＦ−ＢＢ単独処理に関して獲得したものに対して正規化した。図７７で示される通り、全ての組成物に関して、および拮抗薬Ａ単独に関して決定した抗ＰＤＧＦ  ＥＣ５０（ｎＭ）値は、９５％信頼区間内で同一であった。これらの結果は、ラニビズマブおよび拮抗薬Ａの双方を含む組成物は、４℃で保管したとき、各薬剤に関して少なくとも１２週間にわたって活性を示すことを実証する。
【０３５５】
具体的には、拮抗薬Ａおよびラニビズマブの共製剤は、拮抗薬Ａかまたはラニビズマブかのいずれかの活性に悪影響を及ぼさないことを実証するために、４℃で１２カ月間にわたって保管した共製剤中に存在する拮抗薬Ａの抗ＰＤＧＦ活性およびラニビズマブの抗ＶＥＧＦ活性を、決定した。拮抗薬Ａおよびラニビズマブの双方を含む３つの異なる組成物を、本研究における使用の前に４℃で１２カ月間にわたって保管した後、分析した：Ｆ６、Ｆ８、およびＦ１１（実施例１を参照）。それに加えて、拮抗薬Ａかまたはラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））かのいずれかを含む組成物を、対照として分析した。
【０３５６】
ラニビズマブ 活性
ラニビズマブの抗ＶＥＧＦ活性を、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）中のＶＥＧＦ誘発性遺伝子、組織因子（ＴＦ）遺伝子のＶＥＧＦ誘発を阻害するその能力として測定した。
【０３５７】
ＨＵＶＥＣ（８〜９代継代、Ｌｏｎｚａ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ．，Ｂａｓｅｌ、スイス）を、２４ウエルプレート（５０，０００細胞／ウエル）上に播種し、ヒドロコルチゾンを伴わない内皮成長培地（ＥＧＭ２；Ｌｏｎｚａ）中で３７℃、５％ＣＯ２で成長させた。翌日、細胞を、０．５％のＦＢＳおよび５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを含有するＥＧＭ基本培地（飢餓培地）中で、処理前に４時間にわたって血清飢餓状態にした。
【０３５８】
ラニビズマブのＥＣ５０を決定するために、細胞を、ＶＥＧＦのみ（陽性対照；３２８ｐＭヒトＶＥＧＦ１６５（Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ））で、またはＦ６、Ｆ８、Ｆ１１、拮抗薬Ａ、もしくはＬｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）と組み合わせたＶＥＧＦで処理した。これらの処理に関して、次の組成物の各々の連続希釈を飢餓培地中で調製し、試験した：Ｆ６、Ｆ８、Ｆ１１、およびＬｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）。それぞれの連続希釈におけるラニビズマブおよび拮抗薬Ａの濃度は、次の通りであった：ラニビズマブ＝２００ｎＭ、４０ｎＭ、８ｎＭ、１．６ｎＭ、０．３２ｎＭ（９．６、１．９２、０．３８、０．０７７、０．０１５μｇ／ｍｌ）、および拮抗薬Ａ＝５８０ｎＭ、１１６ｎＭ、２３．２ｎＭ、４．６４ｎＭ、０．９２８ｎＭ（５．９７、１．１９、０．２４、０．０４８、０．００９μｇ／ｍｌ）。ＶＥＧＦ＋拮抗薬Ａ処理に関しては、１つの濃度の拮抗薬Ａのみを試験した（５８０ｎＭ＝５．９７μｇ／ｍｌ）。細胞を、ＶＥＧＦと、単独で、または上に説明される連続希釈のうちの１つと組み合わせて、上で説明される濃度で３７℃、５％ＣＯ２にて１．５時間にわたって処理した。さらなる対照細胞は、未処理のままであった。
【０３５９】
処理の直後に、ＲＮＡ試料を、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  ｓｐｉｎ  ｃｏｌｕｍｎ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて製造者プロトコルにしたがって、各ウエルから採取した。得られた総ＲＮＡを、ＤＮＡｓｅ  Ｉで処理して、混入ゲノムＤＮＡを除去し、光学密度（Ｏ．Ｄ．）によって２６０ｎｍで定量化した。次に、総ＲＮＡを、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  ＲＴ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて製造者の手引きに従って、逆転写のために使用した。ＶＥＧＦ活性を阻害する組成物の能力を評価するために、定量的リアルタイムＰＣＲを、特定のヒトＴａｑＭａｎプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＴＦ遺伝子上に実施した。ヒトＨＰＲＴ  ＴａｑＭａｎ遺伝子分析を、対照ハウスキーピング遺伝子として使用した。（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
【０３６０】
実験は、三連で実施し、データは、平均±ＳＥＭを表す。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｓｏｆｔｗａｒｅを、統計的分析および非線形回帰分析のために使用した。リアルタイムＰＣＲからの全データを、ＶＥＧＦのみの処理（陽性対照）に対して正規化して、各条件に関するＴＦ遺伝子発現の変化（すなわち、ＶＥＧＦ−誘発遺伝子発現の阻害）のレベルを決定した。試験された異なる濃度の各組成物に関して決定された相対的なＴＦ遺伝子発現レベルは、図７６で示される。表７で示される通り、拮抗薬Ａの不在下でのラニビズマブに関して、および全ての共製剤化した試料に関して決定された抗ＶＥＧＦ  ＥＣ５０（ｎＭ）値は、９５％信頼区間内で同一であった。ＶＥＧＦ活性の抑制は、拮抗薬Ａ単独（すなわち、ラニビズマブの不在下）によっては観察されなかった（データ表示無し）。
【０３６１】
【表７】
2015519373.tif 000015
【０３６２】
拮抗薬Ａ活性
拮抗薬Ａの抗ＰＤＧＦ活性を、ＮＩＨ−３Ｔ３線維芽細胞中でのＰＤＧＦ−誘発性遺伝子、Ｂ細胞転座遺伝子２（ＢＴＧ２）のＰＤＧＦ−ＢＢ誘発を阻害する能力によって決定した。
【０３６３】
ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞を、２４ウエルプレート（５００００細胞／ウエル）上に播種し、ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン中で、３７℃、５％ＣＯ２にて成長させた。翌日、細胞を、ＤＭＥＭ１％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（飢餓培地）中で、処理前に１６時間にわたって血清飢餓状態にした。
【０３６４】
拮抗薬ＡのＥＣ５０を決定するために、細胞を、ＰＤＧＦ−ＢＢのみ（陽性対照）で、またはＦ６、Ｆ８、Ｆ１１、拮抗薬Ａ、またはＬｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）と組み合わせたＰＤＧＦ−ＢＢで処理した。ＰＤＧＦ−ＢＢは、１．６５ｎＭの濃度で使用した（４０ｎｇ／ｍｌ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）。これらの処理に関して、次の組成物の各々の連続希釈を、飢餓培地中で調製し、試験した：Ｆ６、Ｆ８、Ｆ１１、および拮抗薬Ａ。それぞれの連続希釈における拮抗薬Ａおよびラニビズマブの濃度は、次の通りであった：拮抗薬Ａ＝５８０ｎＭ、１１６ｎＭ、２３．２ｎＭ、４．６４ｎＭ、０．９２８ｎＭ（５．９７、１．１９、０．２４、０．０４８、０．００９μｇ／ｍｌ）、およびラニビズマブ＝２００ｎＭ、４０ｎＭ、８ｎＭ、１．６ｎＭ、０．３２ｎＭ（９．６、１．９２、０．３８、０．０７７、０．０１５μｇ／ｍｌ）。ＰＤＧＦ−ＢＢ＋Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）処理に関しては、１つの濃度のラニビズマブのみを試験した（２００ｎＭ＝９．６μｇ／ｍｌ）。細胞を、PDGF-BBと、単独で、または上に説明される連続希釈のうちの１つと組み合わせて、上で説明される濃度で３７℃、５％ＣＯ２にて１．５時間にわたって処理した。さらなる対照細胞は、未処理のままであった。
【０３６５】
処理の直後に、ＲＮＡ試料を、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  ｓｐｉｎ  ｃｏｌｕｍｎ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて製造者プロトコルにしたがって、各ウエルから採取した。得られた総ＲＮＡを、ＤＮＡｓｅ  Ｉで処理して、混入ゲノムＤＮＡを除去し、Ｏ．Ｄ．によって２６０ｎｍで定量化した。次に、総ＲＮＡを、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  ＲＴ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて製造者の手引きに従って、逆転写のために使用した。ＰＤＧＦ−ＢＢ活性を阻害する組成物の能力を評価するために、定量的リアルタイムＰＣＲを、特定のマウスＴａｑＭａｎプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＢＴＧ２遺伝子上に実施した。マウスＧＡＰＤＨ遺伝子分析を、対照ハウスキーピング遺伝子として使用した（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）。
【０３６６】
実験は、二連で実施し、データは、平均±ＳＥＭを表す。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｓｏｆｔｗａｒｅを、統計的分析および非線形回帰分析のために使用した。リアルタイムＰＣＲからの全データを、ＰＤＧＦのみの処理（陽性対照）に対して正規化して、各条件に関するＢＴＧ２遺伝子発現の変化（すなわち、ＰＤＧＦ−誘発遺伝子発現の阻害）のレベルを決定した。試験された異なる濃度の各組成物に関して決定された相対的なＢＴＧ２遺伝子発現は、図７７で示される。表８で示される通り、拮抗薬Ａの単独に関して、および全ての共製剤化した試料に関して決定された抗ＰＤＧＦ  ＥＣ５０（ｎＭ）値は、９５％信頼区間内で同一であった。ＰＤＧＦ−ＢＢ活性の抑制は、ラニビズマブ単独（すなわち、拮抗薬Ａの不在下）によっては観察されなかった（データ表示無し）。
【０３６７】
【表８】
2015519373.tif 000016
【０３６８】
これらの研究は、拮抗薬Ａおよびラニビズマブの例証的な共製剤を、４℃で少なくとも１２カ月間にわたって保管した後でさえも、拮抗薬Ａは、ＶＥＧＦ活性を阻害するラニビズマブの能力に悪影響を有さないこと、ならびにラニビズマブは、ＰＤＧＦ−ＢＢ活性を阻害する拮抗薬Ａの能力に悪影響を有さないことを実証する。
【０３６９】
実施例４
拮抗薬Ａおよびラニビズマブを含む組成物の安定性に対する保管条件の効果
異なる保管温度および異なる保管容器の効果を評定するために、種々の組成物中の拮抗薬Ａおよびラニビズマブの安定性を、肉眼で見えない粒子の分析を用いて調べた。肉眼で見えない粒子の分析を、拮抗薬Ａ（３０ｍｇ／ｍＬ）、ラニビズマブ（１０ｍｇ／ｍＬおよび４０ｍｇ／ｍＬ）、および拮抗薬Ａとラニビズマブとの種々の組み合わせに関して、マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）を用いて実施した。合計で５つの別個の組成物を、次の異なる保管条件で分析して、肉眼で見えない粒子の数に対する保管温度（５℃および３０℃で４時間）および保管容器（２ｃｃバイアルおよび１ｍＬシリンジ）の効果を各製剤に関して評定した。各試料に関するＭＦＩ結果は、特定の粒子サイズ範囲（合計、≧２μｍ、≧５μｍ、≧１０μｍ、および≧２５μｍを含む）で提示した。粒子数の幾つかの相対的な相関が、同一条件下で保管した異なる試料に関して観察された。
【０３７０】
材料
次の拮抗薬Ａおよびラニビズマブ組成物を、本研究で使用した：
（１）ｐＨ７．３の、１０ｍＭのリン酸ナトリウムおよび１５０ｍＭのソディウムクロリド中の３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａを０．２３ｍＬ含有する、３０個のバイアル（組成物Ｆ２７）。
（２）ｐＨ５．５の、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、１０％のα，α−トレハロース、および０．０１％のポリソルベート２０中の、１０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブを０．５ｍＬ含有する、９個のバイアル（組成物Ｆ２８；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）。
（３）ｐＨ５．５の、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、１０％のα，α−トレハロース、および０．０１％のポリソルベート２０の中の、４０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブを０．５ｍＬ含有する、７個のバイアル（組成物Ｆ２９；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）。
【０３７１】
組成物調製に使用される容器材料は、表９に列挙される。
【０３７２】
【表９】
2015519373.tif 000017
【０３７３】
組成物調製
本研究で調べる組成物を調製するために、同一試料すなわち、拮抗薬またはラニビズマブのバイアルを、一緒にプールした。このプロセスでは、３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａの３０個のバイアル（０．２０ｍＬ／バイアル）を、５ｃｃガラスバイアル内へプールし、１０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブの７個のバイアル（０．５ｍＬ／バイアル）を、別の５ｃｃガラスバイアル内へプールし、また４０ｍｇ／ｍＬのラニビズマブの７個のバイアル（０．５ｍＬ／バイアル）を、第３の５ｃｃガラスバイアル内へプールした。３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａのバイアルは、０．２３ｍＬを含有することが意図されたが、プール時に、各バイアル当たり約０．２ｍＬのみが回収された。プールは、各バイアルから蓋を取り外し、内容物をピペットを介して無菌様式で移すことによって実施した。２つのさらなる試料を、プールした材料の種々の組み合わせを用いて、清潔なガラスバイアル中で調製した。表１０は、本研究のために調整した５個の試料の各々に関する内容物を詳述する。試料の清潔さを確実にし、粒子混入を防ぐために、全てのプールおよび試料調製は、ｃｌａｓｓ１００  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓａｆｅｔｙ  Ｃａｂｉｎｅｔ（Ｎｕａｉｒｅ  ＮＵ−４２５−６００）内で実施した。
【０３７４】
【表１０】
2015519373.tif 000018
【０３７５】
このプロセスでは、各試料を、Ｆ３１を除いて、合計で２個の１ｍＬシリンジおよび３個の２ｃｃガラスバイアル中で０．５ｍＬの充填体積で調製し、Ｆ３１は、２個のシリンジおよび２個のバイアル中で調製した。種々の組成物は、ＭＦＩ計器での正確な時点分析を可能にするように個別に調製した。調製後、各容器に、栓を取り付け、試料を安定性研究条件に供した。
【０３７６】
保管条件
各組成物の試料を、バイアル中かまたはシリンジ中かのいずれかで、５℃かまたは３０℃かのいずれかで４時間にわたって保管して、肉眼で見えない 粒子のレベルに対する保管温度および容器種類の影響を決定した。Ｔ＝０分析は、ガラスバイアル中の試料上で充填の直後に実施した。本研究のための温度条件および分析時点は、表１１で示される。
【０３７７】
【表１１】
2015519373.tif 000019
【０３７８】
解析的分析およびデータ処理
サイズ測定値および肉眼で見えない粒子の数を、Ｂｒｉｇｈｔｗｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製のＭＦＩ計器モデル番号ＤＰＡ−４２００を用いて収集した。分析のために、０．５ｍＬの各試料を、フローセルの上部に装着された入口を介してピペットチップを用いて直接適用した。このプロセスでは、フローセルは、０．１７ｍＬの試料でパージされ、したがって粒子評定のために約０．３０ｍＬを利用することができた。
【０３７９】
総粒子数に含まれる気泡および非タンパク質性粒子の数を低減させるため、ＭＦＩデータに減算を適用した。このプロセスでは、各試料中のオリゴヌクレオチドまたはタンパク質性粒子を単離および評定するために、張り付いた粒子、低速で移動する粒子、および高い真円度を有する泡様粒子を、データから除去した。各粒子の特性が適正にスクリーニングされ得るように、端部の粒子も、同様にこの減算にて除去した。
【０３８０】
ＭＦＩ分析の結果を、一試料当たりの粒子数として獲得した。これらのデータを、取得した粒子数を分析する正確な体積（約０．３０ｍＬ）で除することによって、試料１ｍＬ当たりの粒子の単位に変換した。試料１ｍＬ当たりの粒子の値を、最も近い整数に丸めた。
【０３８１】
結果および考察
表１２は、本研究で分析した５個の組成物、Ｆ２７〜Ｆ３１に関するＭＦＩ分析の結果を要約する。各保管条件下での組成物に関する未加工および減算したＭＦＩデータの双方は、合計粒子数／ｍＬ、ならびに≧２μｍ、≧５μｍ、≧８μｍ、≧１０μｍ、および≧２５μｍの粒子数における粒子数／ｍＬを単位として提示される。種々の結果が、異なる温度および容器条件中で観察された。
【０３８２】
【表１２】
2015519373.tif 000020
【０３８３】
異なる保管条件後の組成物Ｆ２７〜Ｆ３１に関する減算したＭＦＩの結果は、それぞれ図７９〜８３でヒストグラムとしてグラフ表示される。これらのヒストグラムは、１〜２μｍ、２〜５μｍ、５〜１０μｍ、１０〜２５μｍ、２５〜５０μｍ、５０〜７５μｍ、および７５〜１００μｍを含む、種々のサイズ範囲での各試料に関する粒子数を表す。これらの図はまた、異なる保管条件の後での組成物に関する多様な結果を示す。
【０３８４】
図８４は、異なる保管条件における各試料に関する減算したＭＦＩ結果を比較する。この図では、粒子数は、１〜２μｍ、２〜５μｍ、５〜１０μｍ、１０〜２５μｍ、２５〜５０μｍ、および５０〜７５μｍで評定された。３０℃で４時間後にガラスバイアル中でＦ３１に関して観察された高い粒子数は、試料の取り扱いの問題に由来する可能性がある。しかしながら、追加の試料は、再分析のために利用可能でなかった。
【０３８５】
結論
拮抗薬Ａ、ラニビズマブ、および拮抗薬Ａとラニビズマブとの種々の組み合わせに関する粒子分析の実行を、ＭＦＩによって実施した。合計で２４個の５個の組成物の異なる試料を、２ｃｃバイアル中かまたは１ｍＬシリンジ中かのいずれかで、５℃および３０℃で４時間にわたって保管した後、本研究で分析した。各試料に関する結果を、≧２μｍ、≧５μｍ、≧１０μｍ、≧２５μｍ、および合計粒子数を含む特定の粒子サイズにおいて示した。顕著な差は観察されなかったが、しかしながら、３０℃での保管の後のガラスバイアル中のＦ３１に関して、より高い粒子数が検出された。
【０３８６】
実施例５
拮抗薬Ａの合成
拮抗薬Ａの３２−ｍｅｒオリゴヌクレオチドの反復的な化学合成を、フロー型反応器設計を用いて、固体相逆方向デオキシリボチミジン細孔性ガラス（ＣＰＧ）担体上で実施した。オリゴヌクレオチド合成プロセスは、次の流れで行われる４つの化学反応で構成された：（ａ）ジメチオキシトリチル（ＤＭＴ）保護ヌクレオシドまたは新生オリゴヌクレオチドの非ブロック化（脱トリチル）、（ｂ）入来するホスホラミダイト（アミダイト）の活性化および結合、（ｃ）結果として生じる亜リン酸トリエステルの五価リン酸塩結合への酸化、ならびに（ｄ）結合に成功し損なったオリゴヌクレオチド鎖のキャッピング。
【０３８７】
逆方向チミジンＣＰＧ担体（３’−ＤＭＴ−５’−ｄＴ−ＣＰＧ）で開始して、ヘキシルアミノリンカーで終結する所望のオリゴヌクレオチドが合成されるまで、上の４つのステップを繰り返して、配列の順番でホスホラミダイトを追加した。内部ヘキサエチレングリコールスペーサーは、他のホスホラミダイトと同様の様式で結合された。
【０３８８】
サイクルの第１のステップは、新生オリゴヌクレオチド鎖の末端ヒドロキシル基上のジメチオキシトリチル保護基の除去を含んだ。これは、ＣＰＧ上でＤＭＴ保護オリゴヌクレオチドをジクロロメタン中のジクロロ酢酸の溶液で処理することによって達成された。この反応は、非保護末端ヒドロキシル基を生じさせた。開裂したＤＭＴ基は、ジクロロ酢酸／ジクロロメタン（ＤＣＡ／ＤＣＭ）溶媒を用いて除去した。次に、ＣＰＧを、アセトニトリル（ＡＣＮ）で洗浄した。
【０３８９】
第２のステップは、先行ステップにて生じた末端ヒドロキシル基と素早く結合する種を生じさせるような、エチルチオテトラゾール（ＥＴＴ）による入来するホスホラミダイトの活性化を含んだ。得られた亜リン酸トリエステルは、ＡＣＮで洗浄して、活性化因子および未反応ホスホラミダイトを除去した。
【０３９０】
第３のステップは、新規に形成された亜リン酸トリエステルの五価リン酸塩へ酸化 であった。これは、亜リン酸トリエステルを、ヨードおよびピリジンの水中での混合物と反応させるによって達成された。未使用の酸化剤は、ＡＣＮを用いてＣＰＧから洗浄した。
【０３９１】
第４のステップは、結合し損なった未反応ヒドロキシルのキャッピングを含んだ。ＣＰＧは、ＣＡＰＮＭＩ（ＡＣＮ中のＮ−メチルイミダゾール）およびＣＡＰＡＬＡ（無水酢酸、２，６−ルチジン、ＡＣＮ）の混合物で処理した。これらの試薬は、ＡＣＮを用いてＣＰＧから洗浄した。
【０３９２】
この４つの反応のサイクルを、正しい長さおよび配列のオリゴヌクレオチドが固体担体上に組み立てられるまで反復した。最後のホスホラミダイト（オリゴヌクレオチドの５’末端におけるヘキシルアミノリンカー）は、合成に使用される他のホスホラミダイトと同じ様式で反応したが、しかしながら、このリンカーは、キャップされなかった。
【０３９３】
オリゴヌクレオチドを、固体担体を、粗合成オリゴヌクレオチドを含有するｔ−ブチルアミン／水酸化アンモニウム溶液で処理することによって、脱保護および開裂した。ＣＰＧを、脱保護および開裂させたオリゴヌクレオチドから分離した。粗完全脱保護オリゴヌクレオチドの純度を、解析的アニオン交換クロマトグラフィによって決定し、５０％超の使用に適合させた。
【０３９４】
得られたオリゴヌクレオチドを、塩化ナトリウムに対して透析濾過して、アミン塩を低減させた。
【０３９５】
次に、共有結合を、オリゴヌクレオチドの５’末端の第一級アミンとペグ化試薬（ｍＰＥＧ２−ＮＨＳエステル）との間に形成した。反応は、ホウ酸ナトリウム緩衝液中でｐＨ９にて行った。反応は、オリゴヌクレオチドの５’末端のヘキシルアミノリンカーに対して部位特異的であることが、説明されるペグ化条件を用いて実証された。
【０３９６】
ペグ化されたオリゴヌクレオチドを、調製的アニオン交換クロマトグラフィ（ＡＸＨＰＬＣ）によって、非共役ＰＥＧ試薬、非ペグ化アプタマー、および他の副産物から精製した。個々の画分を、解析的ＡＸＨＰＬＣによって分析した。全長ペグ化オリゴヌクレオチドの選択された画分をプールし、得られたプールを脱塩、濃縮、および濾過した。
【０３９７】
得られた拮抗薬Ａを、真空凍結乾燥して、含水量を低減させた。
【０３９８】
実施例６
拮抗薬Ａによる、および拮抗薬Ａ＋アフリバーセプト共製剤による、３Ｔ３線維芽細胞中のＰＤＧＦ−ＢＢ−誘発ＢＴＧ２発現の阻害
拮抗薬Ａのアフリバーセプトとの共製剤は、拮抗薬Ａの活性に悪影響を及ぼさないことを実証するために、拮抗薬Ａかまたは拮抗薬Ａおよびアフリバーセプトの双方かのいずれかを含む組成物の、ＰＤＧＦ−ＢＢ活性を阻害する能力を決定した。
【０３９９】
材料および方法
拮抗薬Ａの抗ＰＤＧＦ  活性を、ＮＩＨ３Ｔ３細胞中のＰＤＧＦ−ＢＢ応答遺伝子、Ｂ−細胞転座遺伝子２（ＢＴＧ２）のＰＤＧＦ−ＢＢ誘発を阻害するその能力によって決定した。
【０４００】
ＮＩＨ３Ｔ３細胞を、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ；Ｇｉｂｃｏ）、１０％の仔ウシ血清（ＣＳ）、２ｍＭのグルタミン、および１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含有する０．５ｍｌの培地中で、２４ウエルプレート（４ｘ１０４細胞／ウエル）上に播種し、３７℃、５％ＣＯ２で成長させた。２４時間後、細胞を、処理前に９時間にわたって、１％のＣＳ、２ｍＭのグルタミン、および１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ（飢餓培地）中で血清飢餓状態にした。
【０４０１】
拮抗薬ＡのEC50を決定するために、細胞を、ＰＤＧＦ−ＢＢ（陽性対照）で、または次の組成物：拮抗薬Ａ（組成物Ｆ３２）、拮抗薬Ａ＋アフリバーセプト（組成物Ｆ３３）、または拮抗薬Ａ＋ＰＢＳ（組成物Ｆ３４）のうちの１つと組み合わせたＰＤＧＦ−ＢＢで処理した。ＰＤＧＦ−ＢＢは、１．６５ｎＭの濃度にて使用した（ヒトＰＤＧＦ−ＢＢ；Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）。組成物を調製するために使用した拮抗薬Ａの原液は、ｐＨ７．３の１０ｍＭのＮａリン酸塩および１５０ｍＭのＮａＣｌ中での３０ｍｇ／ｍＬの拮抗薬Ａであった。市販のＥｙｌｅａ（登録商標）（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、４０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０３％のポリソルベート  ２０、および５％のスクロース中の、４０ｍｇ／ｍＬのアフリバーセプト、ｐＨ６．２）を、組成物Ｆ３３を調製するために原液として使用した。組成物Ｆ３３に関して、拮抗薬Ａおよびアフリバーセプトを、等モルの濃度で定温放置し、使用前に４℃で一晩保管した。組成物Ｆ３３に対する対照として、拮抗薬Ａを、ＰＢＳと共に４℃で一晩、定温放置した（組成物Ｆ３４）。これらの処理に関して、組成物Ｆ３２、Ｆ３３、およびＦ３４の連続希釈を、使用の直前に飢餓培地中で調製した。連続希釈における拮抗薬Ａ濃度は、次の通りであった：それぞれ、４００ｎＭ、８０ｎＭ、１６ｎＭ、３．２ｎＭ、および０．６４ｎＭ。組成物Ｆ３３の連続希釈におけるアフリバーセプトのモル濃度は、組成物Ｆ３３の連続希釈の各々において、拮抗薬Ａのモル濃度と同一であった。細胞を、ＰＤＧＦと、単独で、または上に説明される連続希釈のうちの１つと組み合わせて、上で説明される濃度で３７℃、５％ＣＯ２にて１時間にわたって処理した。さらなる対照細胞は、未処理のままであった。
【０４０２】
処理の直後に、細胞を、ＲＮＡ単離  のために、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  ｓｐｉｎ  ｃｏｌｕｍｎ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＭＤ）を用いて製造者プロトコルに従って採取した。得られた総ＲＮＡを、光学密度（Ｏ．Ｄ．）によって２６０ｎｍで定量化した後、ＤＮＡｓｅ  Ｉで処理して、混入ゲノムＤＮＡを除去した。次に、ｃＤＮＡ合成を、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ（登録商標）Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて製造者の手引きに従って、逆転写によって実施した。アフリバーセプトの不在下での拮抗薬Ａ（組成物Ｆ３２およびＦ３４）および拮抗薬Ａ＋アフリバーセプト混合物（組成物Ｆ３３）の、ＰＤＧＦ−ＢＢ活性を阻害する能力を評価するために、定量的リアルタイムＰＣＲを、特定のマウスＴａｑＭａｎプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いることによって、ＢＴＧ２遺伝子上で実施した。マウスβ−アクチンＴａｑＭａｎ遺伝子分析を、内部対照として使用した（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）。
【０４０３】
実験は、三連で実施され、データは平均値±標準偏差（ＳＤ）を表す。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを、統計的分析および非線形回帰分析のために使用した。リアルタイムＰＣＲ実験から獲得された全てのデータを、拮抗薬Ａの不在下でＰＤＧＦ−ＢＢ処理した試料（陽性対照）に対して正規化して、各条件に関するＢＴＧ２遺伝子発現における相対的な変化を決定した。
【０４０４】
結果
拮抗薬Ａは、３Ｔ３細胞中でのＰＤＧＦ−ＢＢ−誘発ＢＴＧ２遺伝子発現を有効に阻害することが可能であった（図８５）。さらに、ＢＴＧ２発現を阻害する拮抗薬Ａの能力は、アフリバーセプトを伴う予備定温放置によって損なわれなかった（図８６）。拮抗薬Ａに関して決定されたＥＣ５０値は、表１３で示される。
【０４０５】
【表１３】
2015519373.tif 000021
【０４０６】
これらの研究は、拮抗薬Ａおよびアフリバーセプトの共製剤は、その抗ＰＤＧＦ生物学的活性によって測定した際に、４℃で一晩保管したときに拮抗薬Ａの安定性を維持することが可能であったことを実証する。アフリバーセプトとの拮抗薬Ａの共製剤は、拮抗薬Ａの活性に悪影響を有さなかった。
【０４０７】
本明細書で参照される、または出願データシート内で列挙される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、および非特許出版物の全ては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０４０８】
前述から、本発明の特定の実施形態が、例証の目的のために本明細書で説明されてきたが、種々の修正が、本発明の精神および範囲から逸脱することなくなされ得ることが理解されるであろう。
【図１】
2015519373.tif 000022
【図２】
2015519373.tif 000023
【図３】
2015519373.tif 000024
【図４】
2015519373.tif 000025
【図５】
2015519373.tif 000026
【図６】
2015519373.tif 000027
【図７】
2015519373.tif 000028
【図８】
2015519373.tif 000029
【図９】
2015519373.tif 000030
【図１０】
2015519373.tif 000031
【図１１】
2015519373.tif 000032
【図１２】
2015519373.tif 000033
【図１３】
2015519373.tif 000034
【図１４】
2015519373.tif 000035
【図１５】
2015519373.tif 000036
【図１６Ａ】
2015519373.tif 000037
【図１６Ｂ】
2015519373.tif 000038
【図１７Ａ】
2015519373.tif 000039
【図１７Ｂ】
2015519373.tif 000040
【図１８】
2015519373.tif 000041
【図１９Ａ】
2015519373.tif 000042
【図１９Ｂ】
2015519373.tif 000043
【図２０】
2015519373.tif 000044
【図２１】
2015519373.tif 000045
【図２２】
2015519373.tif 000046
【図２３】
2015519373.tif 000047
【図２４】
2015519373.tif 000048
【図２５Ａ】
2015519373.tif 000049
【図２５Ｂ】
2015519373.tif 000050
【図２６Ａ】
2015519373.tif 000051
【図２６Ｂ】
2015519373.tif 000052
【図２７Ａ】
2015519373.tif 000053
【図２７Ｂ】
2015519373.tif 000054
【図２７Ｃ】
2015519373.tif 000055
【図２８】
2015519373.tif 000056
【図２９】
2015519373.tif 000057
【図３０】
2015519373.tif 000058
【図３１】
2015519373.tif 000059
【図３２】
2015519373.tif 000060
【図３３】
2015519373.tif 000061
【図３４】
2015519373.tif 000062
【図３５】
2015519373.tif 000063
【図３６】
2015519373.tif 000064
【図３７】
2015519373.tif 000065
【図３８】
2015519373.tif 000066
【図３９】
2015519373.tif 000067
【図４０】
2015519373.tif 000068
【図４１】
2015519373.tif 000069
【図４２】
2015519373.tif 000070
【図４３】
2015519373.tif 000071
【図４４】
2015519373.tif 000072
【図４５】
2015519373.tif 000073
【図４６】
2015519373.tif 000074
【図４７】
2015519373.tif 000075
【図４８】
2015519373.tif 000076
【図４９】
2015519373.tif 000077
【図５０】
2015519373.tif 000078
【図５１】
2015519373.tif 000079
【図５２】
2015519373.tif 000080
【図５３】
2015519373.tif 000081
【図５４】
2015519373.tif 000082
【図５５】
2015519373.tif 000083
【図５６】
2015519373.tif 000084
【図５７】
2015519373.tif 000085
【図５８】
2015519373.tif 000086
【図５９】
2015519373.tif 000087
【図６０Ａ】
2015519373.tif 000088
【図６０Ｂ】
2015519373.tif 000089
【図６１Ａ】
2015519373.tif 000090
【図６１Ｂ】
2015519373.tif 000091
【図６２Ａ】
2015519373.tif 000092
【図６２Ｂ】
2015519373.tif 000093
【図６３Ａ】
2015519373.tif 000094
【図６３Ｂ】
2015519373.tif 000095
【図６４】
2015519373.tif 000096
【図６５】
2015519373.tif 000097
【図６６】
2015519373.tif 000098
【図６７】
2015519373.tif 000099
【図６８】
2015519373.tif 000100
【図６９】
2015519373.tif 000101
【図７０】
2015519373.tif 000102
【図７１】
2015519373.tif 000103
【図７２】
2015519373.tif 000104
【図７３】
2015519373.tif 000105
【図７４】
2015519373.tif 000106
【図７５】
2015519373.tif 000107
【図７６】
2015519373.tif 000108
【図７７】
2015519373.tif 000109
【図７８Ａ】
2015519373.tif 000110
【図７８Ｂ】
2015519373.tif 000111
【図７８Ｃ】
2015519373.tif 000112
【図７８Ｄ】
2015519373.tif 000113
【図７８Ｅ】
2015519373.tif 000114
【図７８Ｆ】
2015519373.tif 000115
【図７９Ａ】
2015519373.tif 000116
【図７９Ｂ】
2015519373.tif 000117
【図８０Ａ】
2015519373.tif 000118
【図８０Ｂ】
2015519373.tif 000119
【図８１Ａ】
2015519373.tif 000120
【図８１Ｂ】
2015519373.tif 000121
【図８２Ａ】
2015519373.tif 000122
【図８２Ｂ】
2015519373.tif 000123
【図８３Ａ】
2015519373.tif 000124
【図８３Ｂ】
2015519373.tif 000125
【図８４Ａ】
2015519373.tif 000126
【図８４Ｂ】
2015519373.tif 000127
【図８５】
2015519373.tif 000128
【図８６】
2015519373.tif 000129
【配列表】
2015519373000001.app
【国際調査報告】
2015519373.tif 000130
2015519373.tif 000131
2015519373.tif 000132
2015519373.tif 000133