(57)【要約】  本発明は、バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株及びその培養液を有効成分として含有する植物病原菌防除用組成物に関するもので、より詳細には、土壌から分離したバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株が芝生の病害を誘発する病原体であるリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］を含む様々な植物病原菌に対して優れた抗真菌活性を示し、従来の有機合成農薬と比較して毒性が少なく、生態系と人畜に害を与えず、芝生や他の植物病原菌を防除することができる環境に優しい組成物として有用に用いることができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を有効成分として含有する植物病原菌防除用組成物。
【請求項２】
前記植物病原体が、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］、リゾクトニアケレアリス（Rhizoctonia cerealis）、リゾクトニアソラニＡＧ−１（ＩＡ）［Rhizoctonia solani AG-1(IA)］、ボトリティスシネリア（Botrytis cinerea）、コレトトリカムアキティタム（Colletotrichum acutatum）とスクレロチウムロルフシイ（Sclerotium rolfsii）からなる群から選択されるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項１に記載の植物病原菌防除用組成物。
【請求項３】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を有効成分として含有するリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）によって誘発される芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除用組成物。
【請求項４】
１）受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株を液体培地で培養し、培養物を製造する工程と、
２）前記工程１）で製造された培養物を乾燥し、粉末化して原剤を製造する工程を含む植物病原菌防除用組成物の製造方法。
【請求項５】
前記工程１）の培地が、デキストロース（dextrose）０．１〜１０．０重量部およびペプトン（peptone）０．１〜１０．０重量部を含むことを特徴とする、請求項４に記載の植物病原菌防除用組成物の製造方法。
【請求項６】
前記工程１）の培養が、２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養することを特徴とする、請求項４に記載の植物病原菌防除用組成物の製造方法。
【請求項７】
請求項４から請求項６の方法によって製造された菌株原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）と増量剤５０．０〜９５．０％（ｗ／ｗ）を混合した後、水を添加して製造することを特徴とする植物病原菌防除用製剤。
【請求項８】
請求項７の植物病原菌防除用製剤を水で２００倍〜１０００倍に希釈し、１Ｌ／ｍ２を土壌灌注することを特徴とする植物病原菌の防除方法。
【請求項９】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株をデキストロース０．１〜１０．０重量部およびペプトン０．１〜１０．０重量部を含む培地で、２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養して得られた培養物を乾燥し、粉末化した原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および増量剤を含む組成物を水で２００倍〜１０００倍に希釈し、１Ｌ／ｍ２を土壌灌注することを特徴とする植物病原菌防除のための水和剤組成物。
【請求項１０】
前記植物病原体が、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］、リゾクトニアケレアリス（Rhizoctonia cerealis）、リゾクトニアソラニＡＧ−１（ＩＡ）［Rhizoctonia solani AG-1(IA)］、コレトトリカムアキティタム（Colletotrichum acutatum）とスクレロチウムロルフシイ（Sclerotium rolfsii）からなる群から選択されるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項９に記載の植物病原菌防除のための水和剤組成物。
【請求項１１】
前記増量剤が、ナトリウムアルギネート、ゼラチン化デンプン、トウモロコシデンプン、大豆粕、ふすま、粒状食物繊維、硫安、珪藻土、ゼオライト、ベントナイト、タルク、カオリン、パイロフイライト、ホワイトカーボンと糖類からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、請求項９に記載の植物病原菌防除のための水和剤組成物。
【請求項１２】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を、植物や土壌に処理する工程を含む植物病原菌の防除方法。
【請求項１３】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を植物や土壌に処理する工程を含む、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）によって誘発される芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除方法。
【請求項１４】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株をデキストロース０．１〜１０．０重量部およびペプトン０．１〜１０．０重量部を含む培地で、２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養して得られた培養物を乾燥し、粉末化した原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および増量剤を含む組成物を水で２００倍〜１０００倍に希釈し、１Ｌ／ｍ２を土壌灌注する工程を含む植物病原菌の防除方法。
【請求項１５】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を植物病原菌防除用組成物に用いる用途。
【請求項１６】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液をリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）によって誘発される芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除用組成物に用いる用途。
【請求項１７】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株をデキストロース０．１〜１０．０重量部およびペプトン０．１〜１０．０重量部を含む培地で、２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養して得られた培養物を乾燥し、粉末化した原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および増量剤を含む組成物を植物病原体の防除のための水和剤組成物に用いる用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、松に生息する蝉の幼虫の腸内から分離したバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株及びその培養液を有効成分として含有する芝生およびその他植物病原菌防除用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
芝生は、元来野性が強く、病気に対する強い抵抗性を持っており、正常な発育状態の下では病気が発生しない。しかし、ゴルフ場など、特定の目的のために栽培管理され商業的に利用される場合、集約管理による栽培環境の変化、競技者によって踏まれると傷などのストレスを受けて発症環境が造成されると、正常の生育条件下では問題にならない病原体にも容易に発症する傾向がある。
【０００３】
韓国のゴルフ場で植栽されている芝生類に発生する病気は約１４種であり、関連病原体は、１７余種が知られている（韓国植物病理学会、２００９年。韓国植物病名目録）。主な病害としては、リゾクトニアソラニＡＧ−１（ＩＡ）［Rhizoctonia solani AG-1(IA)］によって誘発されるブラウンパッチ、スクレロチニアホモエオカルパ（Sclerotinia homoeocarpa）によって誘発されるダラースポット、ピシウム属（Pythium spp.）により誘発されるピシウム立枯病、コレトトリカムアキテイタム（Colletotrichum acutatum）により誘発される炭疽病、リゾクトニアケレアリス（Rhizoctonia cerealis）により誘発されるイエローパッチ、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］により誘発されるリゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）などがある。
【０００４】
これら芝生の病害の防除のために様々な種類の有機合成農薬を使用しますが、ゴルフ場周辺の住民だけでなく、競技者から農薬の土壌残留による生態系破壊などの問題として否定的な認識を受けている。したがって、環境にやさしい防除の一環として、無毒性の殺菌剤の開発が切実に求められている。国内外では、農業に適用していた微生物を用いて、様々な芝生病害用組成物が開発されているが、芝生の病害に対して優れた抗真菌活性を有する組成物は、不十分なのが実情である。
【０００５】
一方、バチルスサブチリスを用いた植物病原菌防除用組成物として、特許文献１では、新規なバチルスサブチリスＳ３７−２菌株およびそれを用いた微生物肥料がレタスの菌核菌に対して抗真菌活性を示すことが開示されており、特許文献２では、新規なバチルスサブチリスＤＢＢ１５０１菌株がキュウリうどん粉病、イチゴうどん粉病、真桑瓜うどん粉病、桃の穿孔細菌病と高麗人参斑点病に対する抗真菌活性を示すことが開示されており、特許文献３には、新規なバチルスサブチリスＫＫＧ−１およびそれを用いた微生物農薬がトウガラシ疫病に対する抗真菌活性を示すことが開示されている。また、特許文献４では、新規な高温性バチルスサブチリスＤＯＮＫ０３２７菌株がレタス菌核病に対する抗真菌活性を示すことが開示されているが、芝生の病害を誘発する病原体であるリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］により誘発されるリゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）に対する強力な抗真菌活性を示す微生物を用いた病原菌防除用組成物は、公知されていない。
【０００６】
そこで、本発明者らは様々な植物病原体に対する優れた抗真菌活性を有する組成物を開発するために努力した結果、受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株及びその培養液が、芝生病害を誘発する病原菌であるリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］を含む様々な植物病原菌に対して、優れた抗真菌活性を示すことを確認することにより、本発明を完成した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】韓国特許登録第７６９３６０号
【特許文献２】韓国特許登録第８２５６５２号
【特許文献３】韓国登録特許第８９００１３号
【特許文献４】韓国登録番号第１０９３５７９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株及びその培養液を有効成分として含有する芝生およびその他植物病原菌防除用組成物およびその製造方法を提供することである。
【０００９】
また、本発明の他の目的は、受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株及びその培養液を有効成分として含有する芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除用組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記目的を達成するために、本発明は、受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株及びその培養液を有効成分として含有する植物病原菌防除用組成物を提供する。
【００１１】
また、本発明は、受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株及びその培養液を有効成分として含有する芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除用組成物を提供する。
【００１２】
また、本発明は、
１）受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株を液体培地で培養し、培養物を製造する工程と、
２）前記工程１）で製造された培養物を乾燥し、粉末化して原剤を製造する工程を含む植物病原菌防除用組成物の製造方法を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株またはその培養液は、芝生の病害を誘発する病原体であるリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］を含む様々な植物病原菌に対して優れた抗真菌活性を示すので、環境にやさしい植物病原菌防除用組成物として有用に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】多様な植物病原体とバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）を対峙培養した後、生成された阻止帯（Inhibition zone）を示した図である。１）は、ボトリティスシネリア（Botrytis cinerea）とバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０を対峙培養した後、生成された阻止帯を示した図である。２）は、リゾクトニアケレアリス（Rhizoctonia cerealis）とバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０を対峙培養した後、生成された阻止帯を示した図である。３）は、コレトトリカムアキティタム（Colletotrichum acutatum）とバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０を対峙培養した後、生成された阻止帯を示した図である。４）は、スクレロチウムロルフシイ（Sclerotium rolfsii）とバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０を対峙培養した後、生成された阻止帯を示した図である。５）は、リゾクトニアソラニＡＧ−１（ＩＡ）［Rhizoctonia solani AG-1(IA)］とバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０を対峙培養した後、生成された阻止帯を示した図である。６）は、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］とバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０を対峙培養した後、生成された阻止帯を示した図である。
【図２】バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株の芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除効果を舗装実験を通じて確認した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１６】
本発明は、受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株またはその培養液を有効成分として含有する植物病原菌防除用組成物を提供する。
【００１７】
また、本発明は、バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を植物や土壌に処理する工程を含む植物病原菌の防除方法を提供する。
【００１８】
また、本発明は、バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を植物病原菌防除用組成物に用いる用途を提供する。
【００１９】
また、本発明は、バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株をデキストロース（dextrose）０．１〜１０．０重量部およびペプトン（peptone）０．１〜１０．０重量部を含む培地で２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養して得られた培養物を乾燥し、粉末化した原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および増量剤を含む組成物を水に２００倍〜１０００倍に希釈し、１Ｌ／ｍ２を土壌灌注する工程を含む植物病原体の防除方法を提供する。
【００２０】
また、本発明は、バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株をデキストロース０．１〜１０．０重量部およびペプトン０．１〜１０．０重量部を含む培地で２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養して得られた培養物を乾燥し、粉末化した原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および増量剤を含む組成物を植物病原体の防除のための水和剤組成物に用いる用途を提供する。
【００２１】
前記バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株は、本発明者によって２００２年０７月１８日、韓国生命工学研究院遺伝子銀行に受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されている。
【００２２】
前記の植物病原体は、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］、リゾクトニアケレアリス（Rhizoctonia cerealis）、リゾクトニアソラニＡＧ−１（ＩＡ）［Rhizoctonia solani AG-1(IA)］、ボトリティスシネリア（Botrytis cinerea）、コレトトリカムアキティタム（Colletotrichum acutatum）とスクレロチウムロルフシイ（Sclerotium rolfsii）からなる群から選択されるいずれか一つ以上であることが好ましく、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］であることがより好ましい。
【００２３】
本発明の具体的な実施形態において、本発明者らはバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株の植物病原菌に対する生育阻止効果を確認した結果、本発明のバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株は、６種の植物病原体に対して有意な抗真菌効果を示すことを確認し、特に芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）を誘発する病原体であるリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］には、顕著な抗真菌効果を示すことを確認した（表１および図１を参照）。
【００２４】
また、本発明は、
１）受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株を液体培地で培養し、培養物を製造する工程と
２）前記工程１）で製造された培養物を乾燥し、粉末化して原剤を製造する工程を含む植物病原菌防除用組成物の製造方法を提供する。
【００２５】
前記の工程１）の培地は、デキストロース０．１〜１０．０重量部およびペプトン０．１〜１０．０重量部を含むことが好ましいが、これに限定されない。
【００２６】
前記の工程１）の培養は、２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養することが好ましいが、これに限定されない。
【００２７】
前記の工程２）の乾燥粉末化は、噴霧乾燥または凍結乾燥機を用いて培養液を粉末化することが好ましいが、これに限定されない。
【００２８】
前記組成物は、前記の菌株またはその培養液を有効成分として含むことができる。
【００２９】
本発明による組成物は、通常の方法で植物病原菌の防除用に製剤化することができ、乾燥粉末の形態または液状形態で製造することができる。
【００３０】
具体的には、本発明による組成物は、液状生物農薬の形態で製造することができ、増量剤を添加して粉末の形態で利用したり、またはそれを剤形化し、顆粒化することもできる。しかし、その剤形には特に限定されない。
【００３１】
本発明の具体的な実施形態において、本発明者らは、本発明の菌株を液体培養した後、粉末原剤を製造した後、前記培養液と粉末原剤の温度およびｐＨによる生胞子数を調査した結果、１．０×１０９ｃｆｕ／ｍｌおよび１．０×１０９ｃｆｕ／ｇ以上の含有量を示し、一般的なバチルス菌株と同様の生産性を示すことを確認した（表２および表３を参照）。
【００３２】
また、本発明者らは、本発明のバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株原剤および増量剤などを混合して水和剤として製剤し、理化学的特性と胞子数の含有量を調査した結果、本発明の水和剤は、粉末度および水和性が良好で有意な胞子数含有量を有することを確認した（表４参照）。
【００３３】
前記組成物に添加される増量剤は、微生物のような有効成分組成において適切な割合で含有することができるように、生物農薬組成物の全体量を調節する役割をする。本発明で使用することができる増量剤には、ナトリウムアルギネート、ゼラチン化デンプン、トウモロコシデンプン、大豆粕、ふすま、粒状繊維質、硫安、珪藻土、ゼオライト、ベントナイト、タルク、カオリン、パイロフイライト、ホワイトカーボン、糖類などを使用することができる。
【００３４】
前記したように、本発明のＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株及びその培養液を有効成分として含有する組成物は、様々な剤形に製造することができ、前記の様々な剤形には、有意な生胞子数を含有しているので、芝生の病害を誘発する病原体であるリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］を含む様々な植物病原菌に対して、環境にやさしい植物病原菌防除用組成物として有用に用いることができる。
【００３５】
前記の植物病原菌防除用組成物を用いた防除方法は、通常、一般的に行なわれている方法、すなわち、散布（例えば、噴霧、ミスティング、アトマイジング、粉末スプレー、顆粒散布、水面施用、床施用など）、土壌施用（例えば、混入、灌注など）、表面施用（例えば、塗布、塗抹法、被覆等）、浸漬、燻煙施用等により行うことができる。その使用量は、被害状況、適用方法、適用場所等に応じて適切に決定することができる。
【００３６】
また、本発明は、ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰで寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株またはその培養液を有効成分として含有する芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除用組成物を提供する。
【００３７】
また、本発明は、バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を植物や土壌に処理する工程を含む、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）によって誘発された芝生のリゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除方法を提供する。
【００３８】
また、本発明は、バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液をリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）によって誘発される芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除用組成物に用いる用途を提供する。
【００３９】
前記芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）は、国内のゴルフ場の韓国芝で最も多く発生する病気であり、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］の病原体により誘発されるものであり、本発明の組成物は、顕著な芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）の防除効果を示すことを確認した（図２および表５を参照）。
【００４０】
したがって、本発明の受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株及びその培養液は、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］、病原体により誘発される芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）に対して優れた抗真菌活性を示すので、芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除用組成物の有効成分として有用に用いることができる。
【００４１】
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
【００４２】
但し、下記の実施例は本発明を具体的に例示するものであり、本発明の内容が実施例により限定されるものではない。
【００４３】
＜実施例１＞植物病原体に対する生育阻止効果の確認
本発明者らは、受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０の植物病原体に対する生育阻止効果を確認するために、殺菌したジャガイモ寒天培地上に様々な植物病原体とバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０を培養した。ここで、植物病原体は、ジャガイモ寒天培地で継代培養した個体群を直径５ｍｍのサイズの円形切片にしたものを使用し、ＬＢ培地で培養したバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０を用いて接種した。次に、様々な病原菌の生育に良い温度である２８℃で１０日間培養した後、阻止帯(Inhibition zone)の直径を測定した。
【００４４】
前記の植物病原菌には、作物に大きな被害を与える病原体である芝生植物病原菌としてリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］、リゾクトニアケレアリス（Rhizoctonia cerealis）、リゾクトニアソラニＡＧ−１（ＩＡ）［Rhizoctonia solani AG-1(IA)］、その他一般的な植物病原菌としてボトリティスシネリア（Botrytis cinerea）、コレトトリカムアキティタム（Colletotrichum acutatum）およびスクレロチウムロルフシイ（Sclerotium rolfsii）の６種を使用した。
【００４５】
その結果、図１および表１に示したように、バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株は、前記の植物病原体すべてに対して有意な抗真菌効果を示すことを確認し、特に、芝生病害を誘発する病原体であるリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］に対しては、顕著な抗真菌活性を示すことを確認した（表１、図１）。
【００４６】
【表１】
2015503548.tif 000003
【００４７】
＋：０＜Ｘ≦２ｍｍ
＋＋：２ｍｍ＜Ｘ≦５ｍｍ
＋＋＋：５ｍｍ＜Ｘ≦１０ｍｍ
＋＋＋＋：１０ｍｍ＜Ｘ≦１５ｍｍ
＋＋＋＋＋：１５ｍｍ＜Ｘ
【００４８】
＜実施例２＞バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株の液体培養および粉末原剤製造
本発明のバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株を１．２ＫＬインキュベーターを用いて液体培養を行った。
【００４９】
具体的には、培地成分（ｗ／ｖ）にデキストロース０．１〜１０．０％、ペプトン０．１〜１０．０％を含む液体培地にバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株を、温度２５〜３５℃、ｐＨ５．５〜８．５に調節して１．２ＫＬ発酵器を用いて培養した。
【００５０】
また、全培養時間は４８時間にし、培養終了後、前記培養液、および噴霧乾燥や凍結乾燥をした粉末原剤を、温度およびｐＨによる生胞子数の含量を調査した結果、いずれも１．０×１０９ｃｆｕ／ｍｌおよび１．０×１０９ｃｆｕ／ｇ以上の含有量を示し、一般的なバチルス菌株と類似の生産性を示すことを確認した（表２および表３）。
【００５１】
【表２】
2015503548.tif 000004
【００５２】
【表３】
2015503548.tif 000005
【００５３】
＜実施例３＞バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０を含有する組成物の製造
前記＜実施例２＞で製造されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）と増量剤５０．０〜９５．０％（ｗ／ｗ）を混合した後、水和剤を製造した。前記のように水和剤として製剤化した結果、本発明の水和剤の製剤は、農村振興庁告示「農薬の検査方法」に開示された粉末度および水和性が良好な結果を示し、水和剤内のバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０胞子数の含量は、５．１×１０７ｃｆｕ／ｇ以上を示し、適切な有効量を有することを確認した（表４）。
【００５４】
【表４】
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【００５５】
＜実施例４＞バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０の植物病原体の防除効果
慶尚南道宣寧で芝生（品種：韓国芝）を対象に、芝生のリゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）発生初期に、前記＜実施例３＞で製造した本発明の水和剤を水に２００倍〜１０００倍に希釈して１Ｌ／ｍ２で、土壌灌注処理を１回実施した（２０１１年８月３０日）。最終的な薬剤処理の９、２１日と一ヶ月後の芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）試験群の写真を撮影し、一ヶ月後の被害面積率を調査し、防除効果を評価した。
【００５６】
その結果、図２および表５に示したように、本発明のＫＢＣ１０１０水和剤は、最大８９．４％の高い防除価を示し、生物農薬としての実用性が高いことを確認した（図２および表５）。 
【００５７】
【表５】
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【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明のバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０菌株及びその培養液を有効成分として含有する植物病原菌防除用組成物は、芝生の病害を誘発する病原体であるリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］を含む様々な植物病原菌に対して優れた抗真菌活性を示すことにより、芝生のリゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）を含む様々な植物の病気のための環境にやさしい植物病原菌防除用組成物の開発に有用に用いることができる。したがって、化学農薬による生態系の破壊と人畜毒性の問題を解消することができるので、農薬産業、環境産業上非常に有用に用いることができる。  
【受託番号】
【００５９】
寄託機関名：韓国生命工学研究院
受託番号：ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ
受託日：２００２．０７．２０
【図１】
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【図２】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年6月30日(2014.6.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を有効成分として含有する植物病原菌防除用組成物。
【請求項２】
前記植物病原体が、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］、リゾクトニアケレアリス（Rhizoctonia cerealis）、リゾクトニアソラニＡＧ−１（ＩＡ）［Rhizoctonia solani AG-1(IA)］、ボトリティスシネリア（Botrytis cinerea）、コレトトリカムアキティタム（Colletotrichum acutatum）とスクレロチウムロルフシイ（Sclerotium rolfsii）からなる群から選択されるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項１に記載の植物病原菌防除用組成物。
【請求項３】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を有効成分として含有するリゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）によって誘発される芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除用組成物。
【請求項４】
１）受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰとして寄託されたバチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010）菌株を液体培地で培養し、培養物を製造する工程と、
２）前記工程１）で製造された培養物を乾燥し、粉末化して原剤を製造する工程を含む植物病原菌防除用組成物の製造方法。
【請求項５】
前記工程１）の培地が、デキストロース（dextrose）０．１〜１０．０重量部およびペプトン（peptone）０．１〜１０．０重量部を含むことを特徴とする、請求項４に記載の植物病原菌防除用組成物の製造方法。
【請求項６】
前記工程１）の培養が、２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養することを特徴とする、請求項４に記載の植物病原菌防除用組成物の製造方法。
【請求項７】
請求項４から請求項６の方法によって製造された菌株原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）と増量剤５０．０〜９５．０％（ｗ／ｗ）を混合した後、水を添加して製造することを特徴とする植物病原菌防除用製剤。
【請求項８】
請求項７の植物病原菌防除用製剤を水で２００倍〜１０００倍に希釈し、１Ｌ／ｍ２を土壌灌注することを特徴とする植物病原菌の防除方法。
【請求項９】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株をデキストロース０．１〜１０．０重量部およびペプトン０．１〜１０．０重量部を含む培地で、２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養して得られた培養物を乾燥し、粉末化した原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および増量剤を含む組成物を水で２００倍〜１０００倍に希釈し、１Ｌ／ｍ２を土壌灌注することを特徴とする植物病原菌防除のための水和剤組成物。
【請求項１０】
前記植物病原体が、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）［Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)］、リゾクトニアケレアリス（Rhizoctonia cerealis）、リゾクトニアソラニＡＧ−１（ＩＡ）［Rhizoctonia solani AG-1(IA)］、コレトトリカムアキティタム（Colletotrichum acutatum）とスクレロチウムロルフシイ（Sclerotium rolfsii）からなる群から選択されるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項９に記載の植物病原菌防除のための水和剤組成物。
【請求項１１】
前記増量剤が、ナトリウムアルギネート、ゼラチン化デンプン、トウモロコシデンプン、大豆粕、ふすま、粒状食物繊維、硫安、珪藻土、ゼオライト、ベントナイト、タルク、カオリン、パイロフイライト、ホワイトカーボンと糖類からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、請求項９に記載の植物病原菌防除のための水和剤組成物。
【請求項１２】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を、植物や土壌に処理する工程を含む植物病原菌の防除方法。
【請求項１３】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株またはその培養液を植物や土壌に処理する工程を含む、リゾクトニアソラニＡＧ−２−２（ＩＶ）によって誘発される芝生リゾクトニア葉腐病（ラージパッチ）防除方法。
【請求項１４】
バチルスサブチリスＫＢＣ１０１０（Bacillus subtilis KBC1010；受託番号ＫＣＴＣ１０３０４ＢＰ）菌株をデキストロース０．１〜１０．０重量部およびペプトン０．１〜１０．０重量部を含む培地で、２５〜３５℃およびｐＨ５．５〜８．５で培養して得られた培養物を乾燥し、粉末化した原剤５．０〜５０．０％（ｗ／ｗ）、および増量剤を含む組成物を水で２００倍〜１０００倍に希釈し、１Ｌ／ｍ２を土壌灌注する工程を含む植物病原菌の防除方法。 
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
【表２】
2015503548.tif 000010
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
【表３】
2015503548.tif 000011
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
【表５】
2015503548.tif 000012
【国際調査報告】
2015503548.tif 000013
2015503548.tif 000014
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