(57)【要約】  本発明は、少なくとも１種の液体微生物の培養物および担体組成物を含む液体濃縮物から微生物を含有する多孔性粉末製品を製造する方法であって、担体組成物は少なくとも１種の炭水化物および少なくとも１種のタンパク質を含み、当該方法は、以下の工程：ｉ）〜４０℃の温度かつ１５０ｍＰａ．ｓを超える粘度の両方を有するように液体濃縮物を調製する工程；ｉｉ）食品グレードのガスを０．３ＭＰａを超える圧力で調製濃縮物に注入し、ガスを液体濃縮物に密に取り込んで密度が約０．６〜約１．２ｋｇ／ｌの安定した発泡体を形成する工程；ｉｉｉ）発泡体を噴霧装置に搬送し、そこで発泡体の圧力を０．３ＭＰａから大気圧に減じ部分的に乾燥した製品を設ける工程；ならびに、ｉｖ）部分的に乾燥した製品を乾燥媒体に曝し、２０℃で測定する場合の水分量を５％未満かつ水分活性を０．２５Ａw未満に下げて多孔性粉末製品を設ける、ここで工程（ｉｖ）における多孔性粉末製品の温度は５０℃を超えない工程；を含む方法を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の液体微生物の培養物および担体組成物を含む液体濃縮物から微生物を含有する多孔性粉末製品を製造する方法であって、担体組成物は少なくとも１種の炭水化物および少なくとも１種のタンパク質を含み、当該方法は以下の工程：
ｉ）５〜４０℃の温度かつ１５０ｍＰａ．ｓを超える粘度の両方を有するように液体濃縮物を調製する工程；
ｉｉ）食品グレードのガスを０．３ＭＰａを超える圧力で調製濃縮物に注入し、ガスを液体濃縮物に密に取り込んで密度が約０．６〜約１．２ｋｇ／ｌの安定した発泡体を形成する工程；
ｉｉｉ）発泡体を噴霧装置に搬送し、そこで発泡体の圧力を０．３ＭＰａから大気圧に減じ部分的に乾燥した製品を設ける工程；ならびに
ｉｖ）部分的に乾燥した製品を乾燥媒体に曝し、２０℃で測定する場合の水分量を５％未満かつ水分活性を０．２５Ａw未満に下げて多孔性粉末製品を設ける、ここで工程（ｉｖ）における多孔性粉末製品の温度は５０℃を超えない工程；を含む方法。
【請求項２】
前記調製濃縮物の温度が２５〜３５℃、好ましくは約３０℃である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記密度が０．８〜１．１ｋｇ／ｌ、より具体的には約０．８５ｋｇ／ｌである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
食品グレードのガスは、二酸化炭素、酸素、アルゴン、窒素、二酸化窒素、空気、またはそれらの混合物を含む群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
液体培養濃縮物を泡立ちやすくそしてガスを溶解しやすくするために、担体組成物は、マルトデキストリン、ラクトース、マルトース、およびスクロースといったガラス転移温度が５５℃を超える糖類、アラビアゴム、グアーガム、およびキサンタンといった水溶性ゴム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、アルギネート、ペクチン、粉乳、炭水化物、またはタンパク質、あるいはそれらの混合物を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
工程（ｉｖ）は、部分的に乾燥した製品を乾燥チャンバに吐出する第１サブ工程を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
工程（ｉｖ）は、第１サブ工程の後に流動床上で実施する第２サブ工程を更に含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
工程（ｉｖ）において、２０℃で測定する場合の部分的に乾燥した製品の水分活性を０．１〜０．２５Ａw、好ましくは約０．１５Ａwに下げる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
多孔性粉末製品のかさ密度が０．２ｇ／ｃｍ3〜０．６ｇ／ｃｍ3、好ましくは約０．３ｇ／ｃｍ3である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
多孔性粉末製品は、３０μｍ〜２００μｍの粒子サイズを有する自由流動性の粉末である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
微生物は、細菌、酵母、真菌、およびプロバイオティクスを含む群から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ｉｉ）を、バッチ処理で動作する密閉タンク内で実施する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
工程（ｉｉ）を、連続処理で動作する熱機械処理装置内で実施し、この熱機械処理装置は、単軸スクリュー押出機、二軸スクリュー押出機、ボテーター、およびスクレープ表面熱交換器を含む群から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
工程（ｉ）も熱機械処理装置内で実施し、工程（ｉ）および（ｉｉ）を連続的に実施するように構成する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
工程（ｉｖ）の後に凝集を行う、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞の生存率が高いプロバイオティック材料または他の微生物を含有する多孔性乾燥粉末製品の製造に関する。
【背景技術】
【０００２】
生存率の高い生物培養物の調製について熱心に研究開発がされている。継続して困難な問題の１つとして、如何にして生存率を損なうことなく生物培養物を加工して食品に加えるかということがある。プロバイオティック微生物とは、十分な量でかつ十分な期間にわたり摂取すれば消費者に有益な効果を与えることができる細菌のことである。食品中にプロバイオティクスを取り入れて機能性食品および／または栄養補助食品を製造することに強い関心が集まっている。プロバイオティック製品は、グラム当たり少なくとも１０7個つまり１０7ｃｆｕ／ｇ（ｃｆｕは、「コロニー形成単位」略称）の生きている微生物を含むことが推奨されているが、既存の方法では達成することは困難であった。加工の間にプロバイオティクスの生存率を維持することは、特に多孔性粉末製品が要求される場合、極めて困難であり資金が必要なことが分かっている。
【０００３】
プロバイオティック培養物を加工するための一つのアプローチは、培養物の水分量を大幅に減らす凍結乾燥技術を使用することである。乾燥プロバイオティック培養物を高いｃｆｕ値で調製することは可能であるものの、この技術にはエネルギーおよび資金が必要であり、そして１バッチ当たり２４〜４８時間がかかる。従って、この種の技術は、かなりの資本投資をしないと大規模製造に容易に適用できるものではない。
【０００４】
近代の噴霧乾燥技術は連続処理であり、迅速に多くの乾燥食品を調製するのに使用されている。これらの技術は、典型的には、微生物の大部分を殺菌するために高い粉体温度（＞６０℃）で行うが、これにより加工品のｃｆｕ値が低下してしまう。噴霧乾燥の他の欠点としては、エネルギー消費が高いということがあり、１ｋｇの蒸発水分あたり約１．８〜約３．８ｋｇの蒸気を伴い、粒径管理が制約される、動作容量が高くなる（設置面積が大きくなることにつながる）、そして、プロバイオティクスおよび他の微生物などの温度感受性の培養物の加工への柔軟度および適応度が低くなる。
【０００５】
商業的な観点から、高いｃｆｕ値を有する乾燥生物培養物を大規模製造するために改良された方法が非常に望ましく、大きな需要がある。したがって、添付の請求項１に記載の方法に最も近い先行技術とみなすことができるＵＳ−Ａ−６０１０７２５において、プロバイオティックを含有する多孔性粉末製品の製造方法が開示されている。ＵＳ−Ａ−６０１０７２５では、微生物、タンパク質、および炭水化物を含む液体濃縮物を噴霧乾燥装置で噴霧することによって粉末にする。ＵＳ−Ａ−６０１０７２５では、前記装置はＵＳ−Ａ−３０６５０７６の図１（ｃ）に記載のものを改変したものであると説明されている。図１（ｃ）に記載の装置では、噴霧するべき濃縮物は、ポンプおよびパイプラインを介して噴射ノズルに供給するよう液相状になっており、噴射ノズルからこの液体が乾燥チャンバに吐出される。乾燥粉末中で微生物が生存しやすくするために、ＵＳ−Ａ−６０１０７２５では、噴霧乾燥装置の動作パラメータを選択して、濃縮物の噴霧液滴の滞留時間を調整して噴霧液滴の内部温度が上昇して４０〜７０℃を超えないように液滴を乾燥することを提案している。噴霧を促進する、つまり液滴の形成を促進するために、噴霧ノズルの直前で不活性ガスを液体濃縮物に導入してもよい。いずれの場合においても、ＵＳ−Ａ−６０１０７２５の教示は濃縮物の液滴形成に基づいており、乾燥チャンバ内でこれら噴霧液滴の乾燥を制御することを目的としている。実際には、ＵＳ−Ａ−６０１０７２５で認めるように、この方法の実行にはいくつかの動作パラメータの微調整が必要であり、大規模製造が困難かつ高価になってしまう。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の目的は、プロバイオティックまたは他の微生物を含む多孔性乾燥粉末製品を製造するための改良方法を提案することである。
【０００７】
この目的のため、本発明の主題は、添付の請求項１に記載の方法である。この方法のさらなる有利な特徴を従属請求項に記載する。
【０００８】
調製粘性濃縮物から安定した発泡体を形成するおかげで、本発明に従って製造した多孔性乾燥製品は高温に曝されず、生存微生物の対数減少値は、典型的には約１以下である。３月の保存試験後でも許容レベルの生存率を示している。
【０００９】
図面を参照して説明する以下の記載を読めば、発明の実施形態がよりよく理解できるであろう。しかし、これらの記載は単なる一例に過ぎない。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、本発明に係る培養物を含む多孔性粉末の製造を示すフローチャートであり、ここでは培養物を凍結乾燥、ペレット化、または新鮮な状態で供給する。
【００１１】
【図２】図２は、本発明に係る培養物を含む多孔性粉末の製造を示すフローチャートであり、ここでは、培養物を乾燥する前に担体に懸濁する。
【００１２】
【図３】図３は、本発明に係る培養物を含む多孔性粉末の製造を示すフローチャートであり、ここでは、サイクロンおよび回収微粉を使用する。
【００１３】
【図４】図４は、本発明に係る培養物を含む多孔性粉末の製造を示すフローチャートであり、ここでは、加工を２つの異なる工程からなるバッチ処理により行う。
【００１４】
【図５】図５は、本発明に係る方法により得られた多孔性プロバイオティック粉末の走査型電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
図１を参照すると、フローチャートの形で本発明に係る加工を示す概略図で、使用する装置の構成を示す。約５ｂａｒの圧力かつ約５〜４０℃の温度で動作する熱機械処理装置に、次のいずれかを選択して添加できる：（ｉ）凍結乾燥培養物；（ｉｉ）融解したペレット化培養物；および（ｉｉｉ）細胞を培養物中で増殖させ、ショック処理およびその後の清澄化を行ったもの。この方法において使用する細胞は、余分な保護剤を添加していない加工前のものである。微生物培養物へのショック処理の適用は、その後の乾燥工程に対し微生物の抵抗性を高めるように設計する。その後、清澄化した培養物を、その培養物に応じ固形分が約１５％になるまで濃縮し、約５ｂａｒ（０．５ＭＰａ）の圧力かつ約１５℃の温度で動作する熱機械処理装置に加える。
【００１６】
その後、液状担体組成物を熱機械処理装置に添加し、成分を混合して約１５０ｍＰａ．ｓの粘度を有する培養濃縮物を形成する。したがって、本発明に係る方法の出発物質、すなわち液体培養物の濃縮物は、この濃縮物を形成する温度において十分な粘性を有するように調製する必要がある。図１の実施形態では、濃縮物を所定の温度の熱機械処理装置内で調製し、この濃縮物を当該装置で処理して１５０ｍＰａ．ｓの最小粘度を有するようにする。
【００１７】
その後、粘性のある培養濃縮物を熱機械装置で前進させ、約１．３ＭＰａ未満の圧力で食品グレードのガスを濃縮物に注入する。ガスを濃縮物中に部分的に溶解および／または分散させ、規定の多孔率かつ０．６〜１．２ｋｇ／ｌ、より典型的には０．８〜１．１ｋｇ／ｌ、そしてより具体的には約０．８５ｋｇ／ｌの密度を有する安定した泡を形成する。溶解液および／または分散液は、濃縮物の粘度に応じて激しく機械的な撹拌をし、粘性材料にガスを分散させ安定した泡の形成を促進する。発泡体をその後噴霧工程にかけ、噴霧物を形成し、これを直ちに乾燥チャンバに搬送する。乾燥チャンバは密閉空間であり、ここで噴霧物を乾燥媒体と混合する。乾燥媒体の入口温度は約１００〜約２００℃、出口温度は５０〜８０℃である。噴霧物は小さな泡状の液滴を形成し、噴霧物から水分が乾燥媒体へ移る。最も一般的な乾燥媒体は熱風であるが、酸素濃度を制御した嫌気性条件下でシステムを動作するように構成してもよい。チャンバの形状、製品の移動方向、使用する乾燥媒体に応じて、滞留時間を制御できる。製品の温度が約５０℃を超えないように製品をチャンバの底部、流動床、サイクロン、または集塵機に吐出する。当業者であれば、乾燥する製品の乾燥特性に基づいて、いつ噴霧が有効でなくなるか、そして多孔率がどのくらい低いと製品の機性（密度、湿潤性）に影響を与えるのかがわかるだろう。例えば、細胞の生存率、乾燥製品の再水和特性などがある。
【００１８】
乾燥工程を追加して、製品の水分量と水分活性をさらに低下させてもよい。この構成によれば、底部からトレイを通りぬけて吹きつける（熱い）空気と囲まれた多孔トレイを備える流動床を使用する。これを振動させて、空気クッションの上で湿潤製品を浮遊させる。製品の表面から水分を除去するため比較的高い温度で迅速に乾燥させる乾燥チャンバに比べ、流動床式の乾燥機は、あまり高くない温度で長時間かける穏やかな乾燥である。例えば、流動床中だと滞留時間は９０分まで可能である。
【００１９】
本発明の重要な利点の一つは、乾燥装置内における製品の滞留時間が短いので、処理した微生物の生存率が高くなることである。熱機械処理装置内の培養濃縮物の滞留時間は約１分、それに続いて乾燥チャンバでさらに約２分かかり、その後流動床乾燥機内で最大９０分かかる。したがって、多孔性粉末製品を製造するためにかかる合計時間は約９５分未満であり、これは凍結乾燥に基づいたシステムで必要な４８時間に比べ著しく短い。
【００２０】
図２を参照すると、フローチャートの形で一実施形態に係る加工を示す概略図で、使用する装置の構成を示す。本実施形態では、プロバイオティックまたは他の微生物培養物、ならびに少なくとも１種の炭水化物および少なくとも１種のタンパク質を含む適切な担体組成物を、ホッパーを介して熱機械処理装置に直接添加することにより培養濃縮物を形成するプロセスが示されている。装置内の培養濃縮物の温度を慎重に約５〜４０℃に制御して、プロバイオティックが継続的に生存できるようにし、装置内の培養濃縮物の粘度を１５０ｍＰａ．ｓより高くする。適切な熱機械処理装置の一例は、二軸スクリュー押出機（ＴＳＥ）である。使用できる他の装置としては、単軸スクリュー押出機、ボテーター、またはスクレープ表面熱交換器等が挙げられる。驚くべきことに、押出機で著しく剪断混合するにもかかわらず、培養物の生存率は維持されることが発見された。
【００２１】
加圧した食品グレードのガスを粘性培養濃縮物に注入し、安定した発泡物を形成する。圧力、滞留時間、温度、攪拌（又は混合）の程度、および濃縮物中に存在する水分量は、濃縮物中に溶解および／または分散するガスの量に関与する。その後発泡体を噴霧し、これにより発泡体からガスをほぼ瞬間的に放出させ、その結果水分の一部を除去し、そして規定の多孔率を有する多孔性粉末粒子を形成する。部分的に乾燥した粉末を乾燥チャンバに吐出し、そこで粉末物を回収し部分的に乾燥させる。例えば、熱風乾燥などの乾燥媒体を乾燥チャンバで使用して、粉末製品から水分をさらに除去する。必要な場合、流動床に部分的に乾燥した製品を搬送することによってさらなる乾燥をしてもよい。あるいは、サイクロンドライヤー、そしてその後小バッチ乾燥機を使用してもよい（図示せず）。これらの各工程における製品の滞留時間（図示せず）は、押出機の入口からプロバイオティックを含有する最終乾燥多孔性製品の完成までにかかる時間であり、約３０分である。
【００２２】
図３を参照すると、フローチャートの形で一実施形態に係る加工を示す概略図で、使用する装置の構成を示す。本実施形態では、食品グレードのガスの注入および混合の両方を二軸スクリュー押出機等の熱機械処理装置内で行い安定した発泡体を形成する。この構成は、押出機における剪断速度および通気装置における通気度などの処理パラメータが独立して操作可能であるという利点を有する。その後発泡体を噴霧し、これにより発泡体からガスをほぼ瞬間的に放出させ、その結果水分の一部を除去し、そして規定の多孔率を有する多孔性粉末粒子を形成する。部分的に乾燥した粉末を乾燥チャンバに吐出し、そこで粉末物を回収し部分的に乾燥させる。例えば、熱風乾燥などの乾燥媒体を乾燥チャンバで使用して、粉末製品から水分をさらに除去する。この実施形態では、部分的に乾燥した製品をサイクロンを介して流動床に搬送することによってさらなる乾燥をしてもよい。サイクロンから吐出される微粉は乾燥チャンバに再び還流され、そこでさらに固形分が回収される。
【００２３】
図４を参照すると、フローチャートの形で一実施形態に係るバッチ処理を示す概略図で、使用する装置の構成を示す。本実施形態では、バッチ処理を行うことにより、培養物、液状担体、および食品グレードのガスを密閉タンクに添加して安定した発泡体を形成する。その後発泡体を噴霧し、これにより発泡体からガスをほぼ瞬間的に放出させ、その結果水分の一部を除去し、そして部分的に乾燥した多孔性粉末粒子を形成する。部分的に乾燥した多孔性粉末を流動床乾燥機で更に乾燥させ、最終多孔性粉末製品を得る。
【００２４】
図５に、本発明の方法によって製造した多孔性プロバイオティック粉末の走査型電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。使用した株は、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ）ＢＢ１２である。画像の倍率は１８００倍である。粉末を粉砕し、粒子内部の多孔が見えるようにした。粉砕した粒子は、１μｍ未満の直径の孔を示す。写真は、粉砕中に破壊されなかった小さめの粒子（１〜５μｍ）の二次凝集も示す。
【００２５】
上述の実施形態に対し多くの変形および／または改変が、本発明の範囲から逸脱することなく可能であることが当業者によって理解されるであろう。したがって、本実施形態は、あらゆる点で例示的なものであり限定的なものではないと解するべきである。本発明のいくつかの実施形態では、本発明の方法の使用することにより細菌、酵母、真菌、またはこれらの微生物の混合物であり得る微生物の培養物が調製される。当業者は、微生物の増殖に最も適する培養培地を選択することができる。
【００２６】
微生物の培養物は、グラム当たり少なくとも１０7個のコロニーつまり１０7ｃｆｕ／ｇ（ｃｆｕは、「コロニー形成単位」略称）の生きている微生物を含むことが好ましい。また、生きた細胞の力価を少なくとも１０8ｃｆｕ／ｇ、好ましくは１０8〜１０11ｃｆｕ／ｇに増加するために、例えば、遠心分離によってこの培養物を濃縮することを選択してもよい。
【００２７】
好ましくは，以下からなる群から選択した少なくとも１種の微生物の培養物を調製するがこれらの微生物に限定されない：ヒトの健康に有益な乳酸菌、例えばビフィズス菌、例えばビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ・ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ラクトコッカス菌、例えば、ラクトコッカス・ラクティス亜種ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）ラクトコッカス・ラクティス亜種クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカス・ラクティス亜種ラクチスバイオバラエティージアセチラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｌａｃｔｉｃ  ｂｉｏｖａｒ  ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）、レンサ球菌、例えば、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・フェカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ラクトバチルス菌、例えば、ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・アリメンタリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ亜種カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ラクチス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｃｋｉｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・サケ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｋｅ）、ラクトバチルス・クルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ペディオコッカス菌、例えば、ペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ハロフィルス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ブドウ球菌、例えば、スタフィロコッカス・キシロサス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｘｙｌｏｓｕｓ）、スタフィロコッカス・カルノサス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｒｎｏｓｕｓ）、マイクロコッカス菌、例えば、マイクロコッカス・バリアンス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｖａｒｉａｎｓ）；酵母、特にデバロマイセス属、カンジダ属、ピチア属、トルロプシス属、およびサッカロミケス属、例えば、デバロマイセス・ハンセニイ（Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ  ｈａｎｓｅｎｉｉ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ）、ピチア・サイトイ（Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｉｔｏｉ）、トルロプシス・ホルミイ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ  ｈｏｌｍｉｉ）、トルロプシス・ベルサチリス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ  ｖｅｒｓａｔｉｌｉｓ）、トルロプシス・エッチェルシイ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ  ｅｔｃｈｅｌｌｓｉｉ）、サッカロミケス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、例えばＳ．セレビシエＮＣＩＭＢ４０６１２株（Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＮＣＩＭＢ  ４０６１２）、サッカロミケス・ロウキシイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｕｘｉｉ）；および真菌、特にアスペルギルス属、クモノスカビ属、ケカビ属、およびペニシリウム属、例えば、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・フェニシス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｐｈｏｅｎｉｃｉｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、リゾプス・オリゴスポラス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓ）、リゾプス・ジャポニカス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、リゾプス・フォルモサエンシス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｆｏｒｍｏｓａｅｎｓｉｓ）、ムコール・サルシネロイデス（Ｍｕｃｏｒ  ｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄｅｓ）、ムコール・ヤポニカス（Ｍｕｃｏｒ  ｊａｐａｎｉｃｕｓ）、ペニシリウム・グラウカム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｇｌａｕｃｕｍ）、およびペニシリウム・フスカム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｆｕｓｃｕｍ）。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本発明の方法に従って使用する微生物（複数可）は以下の種からなる群から選択される：Ｌ．クリスパータス（Ｌ．ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、Ｌ．ガゼリ（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ）、Ｌ．サリバリウス（Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、Ｌ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、Ｌ．プランタラムの群（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ｇｒｏｕｐ）、Ｌ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）、Ｌ．ブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）、Ｌ．ブフネリ（Ｌ．ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、Ｌ．ファーメンタム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、Ｂ．アドレセンティス（Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、Ｂ．アングラータム（Ｂ．ａｎｇｕｌａｔｕｍ）、Ｂ．ビフィダム（Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ）、Ｂ．ブレーベ（Ｂ．ｂｒｅｖｅ）、Ｂ．カテヌラータム（Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、Ｂ．ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）、およびＢ．シュードカテヌラツム（Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）。
【００２９】
本発明は、従来の噴霧乾燥条件に感受性の微生物、とりわけ熱に感受性がある（熱感受性）および／または空気の存在に感受性がある（優先的嫌気性菌）微生物に特に適切である。特に感受性微生物の中に、プロバイオティック乳酸菌が含まれてもよい。一例として、菌株ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）を用いてもよい。
【００３０】
この微生物の培養物は、本発明の方法の実施および／または粉末の保存の間に、微生物の生存を増強することが知られている少なくとも１種の保護化学剤をさらに、発酵の前または後に含んでいてもよい。当業者は、これらの保護剤についての文献を豊富に有する。一般的なガイドとして、これらの保護剤は、典型的には、アスコルビン酸等のビタミン類、リジン、システイン、グリシン、およびグルタミン酸ナトリウム等のアミノ酸またはそれらの塩、ミルクまたは大豆から得られるタンパク質またはタンパク質加水分解物、ラクトース、トレハロース、スクロース、デキストリン、マルトデキストリン等の糖、そしてバター脂肪（バターオイル）、ヤシ、落花生、ココア、菜種、または大豆脂肪等の脂肪である。これらの保護剤は、例えば約０．１〜８０重量％の量で培養物に添加してもよい。本特許に記載しないが、コア処理工程（例えば、均質化）では、これらの保護剤を培養物に取り入れることが必要なこともある。
【００３１】
主に微生物からなる粉末を所望する場合、本発明の方法によって微生物の培養物を処理してよい。一方、上述の生きた微生物を含み容易に水に分散可能な脱水食品組成物を所望する場合、既に乾燥形態になっている種々の成分を混合して調製するよりも、組成物の全ての成分を同時に乾燥することが好ましい。そうすると塊または望ましくない析出物の形成が回避される。
【００３２】
本発明の一実施形態では、プロバイオティック成分は、上述のプロバイオティック種の中から選択した１〜６種の菌株、好ましくは、１〜３種の菌株を含有する。
【００３３】
プロバイオティックは、プレバイオティック物質と混合するか、または共生（ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ）もしくはシンバイオティック（ｓｙｎｂｉｏｔｉｃ）物質の一部であってもよい。
【００３４】
プレバイオティックという用語は、プロバイオティックに栄養を供給するまたはプロバイオティックを補助するタンパク質、ペプチド、または炭水化物等の物質を意味する。
【００３５】
通常、プレバイオティクスは、上部腸管で消化することができない。プレバイオティクスの伝統的な栄養源としては、大豆、イヌリン源（例えば、キクイモ、クズイモ、およびチコリの根など）、生のオート麦、未精製小麦、未精製大麦、およびヤーコンが挙げられる。プレバイオティックの炭水化物としては、難消化性デンプン、ジャガイモデンプン、またはＳｔａｒｐｌｕｓなどの高アミロースデンプン、加工デンプン（カルボキシル化デンプン、アセチル化、プロピル化、およびブチル化デンプンを含む）、非消化性オリゴ糖、例えば、フラクト、グルコ、キシロ、大豆、ガラクト、乳、イヌリン、アラビノキシラン、アラビノガラクタン、ガラクトマンナン、またはこれらの消化性製品が挙げられるが、プレバイオティック効果を発揮できる他のオリゴ糖を除外するものではない。
【００３６】
本明細書を通して、共生（ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ）またはシンバイオティクス（ｓｙｎｂｉｏｔｉｃ）という用語は、ヒトの健康に対し一緒になって相乗的に有益な効果を奏するプロバイオティックとプレバイオティックの組み合わせを意味する。
【００３７】
本発明の実施において有用な微生物培養物は、以下を含む種々の供給源から得られるが、これらに限定されない：
清澄化、遠心分離、または限外ろ過後に供される液体の微生物培養物；
凍結乾燥、真空乾燥、またはマイクロ波乾燥後に供される微生物培養物；および 
貯蔵タンク、熱機械処理装置、表面熱交換器、攪拌／掻き混ぜ容器等内で増殖した微生物培養物。
【００３８】
本発明の実施に有用な熱機械処理装置は、二軸スクリュー押出機、単軸スクリュー押出機、ボテーター、スクレープ表面熱交換器等の形態をとることができる。特定の実施形態では、熱機械処理装置は、温度および剪断速度の良好な制御が可能な二軸スクリュー押出機（ＴＳＥ）である。共回転二軸スクリュー押出機の場合には、装置の設計に、同じ機械内で様々な加工オプションを可能にするモジュール形式の交換可能なねじ部分を有してもよい。少なくとも１つの輸送および／または混合ゾーンを有するように構成できるなら、単軸スクリュー押出機（ＳＳＥ）として他の装置を使用することもできる。好ましい実施形態では、熱機械処理装置は密閉容器である。例えば、二軸スクリュー押出機を使用すると、温度の微調整が可能になり、剪断して粘性を下げることが必要な液体濃縮物に対し剪断速度を制御できる。
【００３９】
熱機械処理装置の内部温度は５〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃、より好ましくは約３０℃に維持する。
【００４０】
担体組成物は、約７０℃未満のＴｇを有する任意の適切な材料とすることができる。担体組成物中に含みうる適切な材料としては、例えば、以下のものが挙げられる：マルトデキストリン、高ガラス転移温度の糖、すなわち５５℃を超えるガラス転移温度を有する糖（ラクトース、マルトース、およびスクロース）、水溶性ゴム（アラビアゴム、グアーガム、キサンタン）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、アルギネート、ペクチン、粉乳、炭水化物、タンパク質等。好ましくは、担体組成物は、少なくとも１種の炭水化物および少なくとも１種のタンパク質を含む。担体組成物に、例えば、微生物または製品をさらに安定化するための賦形剤を追加的に添加してもよい。適切な賦形剤の選択は、微生物に依存し、当業者に公知であろう。例えば、適切な賦形剤として、全脂粉乳（ＦＣＭＰ）、脱脂粉乳（ＳＭＰ）およびマルトデキストリンが挙げられる。
【００４１】
担体組成物は、粉末として、適切な量の水と一緒に添加して必要な粘度を有する培養濃縮物を形成してもよい。あるいは、担体組成物を、乳化による濃縮物、蒸発物、または再水和物として添加してもよい。また、担体組成物は、熱機械処理装置内で混合した液体および固形物から製造してもよい。
【００４２】
液体培養物の粘度は、最初は少なくとも約５０ｍＰａ．ｓであればよい。本発明の方法によると、濃縮物を適切に調製した後、例えば、加工助剤および賦形剤を添加した後、および／または第１回目の熱機械処理の実施後に、動作温度での濃縮物の粘度は１５０ｍＰａ．ｓ〜１００００ｍＰａ．ｓであり、このとき濃縮物の動作温度が５〜４０℃である。実際には、粘度の値は、ＲＶＡ測定値、すなわちラピッドビスコアナライザー（Ｒａｐｉｄ  Ｖｉｓｃｏ  Ａｎａｌｙｓｅｒ）による測定結果に対応する。
【００４３】
本発明の方法で使用する食品グレードのガスは、好ましくは加工中の微生物に対し実質的に非反応性で、食品の調製に適しているべきである。食品グレードのガスは、二酸化炭素、酸素、アルゴン、窒素、二酸化窒素、空気、またはこれらの混合物を含む群から選択し得る。好ましい実施形態では、食品グレードのガスは二酸化炭素である。
【００４４】
注入するガスの圧力は、得られる多孔性製品に所望の特性に依存する。好ましい実施形態では、注入した食品グレードのガスの圧力は、熱機械処理装置の内部圧力に応じて変化する。内部圧力の最小値は０．３ＭＰａ（３ｂａｒ）で、典型的な圧力は１．３ＭＰａ（１３ｂａｒ）である。
【００４５】
ガスは、熱機械処理装置、または別個の通気装置、あるいは両方の装置に注入してもよい。注入するガスは、両方の装置で、種類や量が異なってもよい。
【００４６】
その後、発泡体を乾燥チャンバに搬送し、そこで、圧力が少なくとも約０．２ＭＰａ（２ｂａｒ）に低下するとフラッシュガスの膨張が起こる。この時点で、発泡体をまず噴霧工程に供し、そこで強制的に小さな孔に通して乾燥チャンバ内の熱気流中に噴霧することにより迅速な乾燥を行う。
【００４７】
続いて乾燥チャンバ内で発泡体の水分量を低減する。発泡体を強制的にノズルに通す。発泡体を小さな泡状の液滴に破壊するエネルギーは０．３〜１．５ＭＰａ（３〜１５ｂａｒ）の噴霧ガスによってもたらされる。出口空気温度が約６０〜７０℃となるように入口空気温度は約１００〜２００℃である。この段階で、粉末の温度は約４０〜５０℃を超えない。ノズルから出る間に、発泡体の圧力は約０．３ＭＰａ〜１．２ＭＰａ（０．３〜１２ｂａｒ）からほぼ大気圧になり、ガスの一部が発泡体から放出され、フラッシュガスの膨張を引き起こす。この膨張に伴い、ガスにより製品から水分の一部が抜け、粒子のサイズが増大し、そしてガスの放出により多孔性の構造が作られる。結果、熱により除去しなくてはならない水分量が減り、そして粒子の表面が大きくなるので、乾燥機中で粉末粒子を乾燥させるのに必要なのはわずか数秒になる。粒子の露出表面積は、噴霧乾燥した粒子の表面積の最大２倍になり得る。この工程後の粉末の水分量は５〜１０％で、全固形分の割合は約９０〜９５％になる。
【００４８】
続いて方法の最終工程で、水分レベルが５％未満、好ましくは３％未満、かつ水分活性が０．２５Ａw未満、好ましくは０．１〜０．２５Ａw、より好ましくは約０．１５Ａwになるまで粉末を乾燥する。ここで、水分活性は、２０℃で測定する場合のものである。温度は、粉末の温度が加工の最終段階で周囲温度に下がるような設定にする。この工程は、粉末を回収しながら乾燥と同時に行ってもよく、あるいは流動床で行ってもよい。
【００４９】
多孔率および全固形量が粉末製品のかさ密度を制御する。よって、Ｓｃｈｕｃｋ  Ｐ．，Ｄｏｌｉｖｅｔ  Ａ．，Ｊｅａｎｔｅｔ  Ｒ．（２０１２）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｆｏｏｄ  ａｎｄ  ｄｉａｒｙ  ｐｏｗｄｅｒｓ（Ｗｉｌｅｙ−Ｂｌａｃｈｗｅｌｌ，  Ｏｘｆｏｒｄ），ｐａｇｅｓ  １４５−１５４に記載の方法を用いて有利に製品のかさ密度を０．２〜０．６ｇ／ｃｍ3、好ましくは約０．３ｇ／ｃｍ3にする。また、粉末製品は、３０μｍ〜２００μｍの粒子サイズを有する自由流動性の粉末であってもよい。熱機械処理装置などの押出機を使用すると、濃縮物の熱機械的な可塑化／混合作業、特に、最終的に均質な濃縮物になるような濃縮物の混合、ブレンド、および剪断を行うことが可能になる。押出機は、連続処理プロセスを可能にするという利点もある。
【００５０】
場合により、この方法の最終段階の後に凝集を行い、凝集粉末にする。
【実施例】
【００５１】
本発明を、以下の非限定的な実施例を用いてより詳細に記載する。特に明記しない限り、パーセントは重量基準である。しかし、これらの実施例は、本発明を例示するためのものに過ぎず、いかなる場合も限定的に解釈するものではないことは言うまでもない。
【００５２】
実施例１：多孔性ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）粉末の調製
ラクトバチルス・ヘルベティカスの細菌培養物（２３ｋｇ／ｈ（４％の全固形分（ＴＳ））、および全脂粉乳からなる担体（３５ｋｇ／ｈ（９５％ＴＳ））をそれぞれポンプおよびホッパーを介して、４５０ｒｐｍ、０．５ＭＰａ（５ｂａｒ）の圧力かつ１５℃で動作している二軸スクリュー押出機（ＴＳＥ）に加え、５９％ＴＳの細菌培養濃縮物を形成した。二軸スクリュー押出機内で濃縮物を完全に混合および機械的に剪断してから通気装置に少なくとも１．３ＭＰａ（１３ｂａｒ）の圧力のＣＯ2を注入して、安定した発泡体を形成した。その後発泡体を噴霧工程を介して乾燥チャンバに搬送し、そこで圧力をほぼ大気圧に減じて多孔性粉末を形成した。熱風を乾燥媒体として用いて粉末の水分を除去した。熱風の初期温度は入口温度が１４０〜１５０℃、出口温度が６８℃であった。粉末の温度を測定したところ４６℃であった。特に好ましい粉末の水分活性は０．１５Ａwであり、得られる多孔性プロバイオティック粉末は４．３％の水分量を有するものである。
【００５３】
実施例２：多孔性ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓＧＧ）粉末の調製
細菌（ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ、５％ＴＳ）ならびにタンパク質および炭水化物の混合物を含む担体組成物（再構成した全粉乳、９５％ＴＳ）をそれぞれ２４ｋｇ／ｈおよび３０ｋｇ／ｈの速度で二軸スクリュー押出機に加えた。二つの成分を、３２０ｒｐｍのスクリュー速度、０．１ＭＰａ（１０ｂａｒ）の圧力、かつ２０℃の温度の押出機中で混合、剪断し、５５％の全固形分かつ粘度が約２００ｍＰａ．ｓを超える培養濃縮物を形成した。次いで、１．３ＭＰａ（１３ｂａｒ）の圧力に加圧した二酸化炭素を濃縮物中に注入し、その結果得られた発泡体を、噴霧器を介して乾燥チャンバに搬送し、ここで乾燥チャンバ内を大気圧に減圧した。入口温度が１４０〜１７０℃で、出口温度が６８℃の熱風を乾燥媒体として使用し、細菌を含有する多孔性粉末を形成した。
【００５４】
実施例３：多孔性乾燥プロバイオティック：Ｂｂ１２、Ｌ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、およびＬ．アシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）の生存率
以下の６種のプロバイオティック試料の生存率を調べた。
・３種の液体試料：それぞれ、乾燥前のＢｂ１２、Ｌ．カゼイ、およびＬ．アシドフィルス（〜１６％ＴＳ、ＭＧより入手）
・３種の多孔乾燥試料：それぞれ粉末のＢｂ１２、Ｌ．カゼイ、およびＬ．アシドフィルス
【００５５】
Ｂｂ１２は、強化クロストリジウム寒天（ＲＣＡ、ｐＨ６．８）に接種した。Ｌ．カゼイおよびＬ．アシドフィルスはｄｅ  Ｍａｎ，  Ｒｏｇｏｓａ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ寒天（ＭＲＳ、ｐＨ６．２）に接種した。コロニーを４８時間３７℃の嫌気性条件下で増殖させた。生存率は、液体試料については１ｍｌ当たりのコロニー形成単位（ＣＦＵ）（ＣＦＵ／ｍｌ）、乾燥試料については１ｇ当たりのＣＦＵ（ＣＦＵ／ｇ）として表した。乾燥によるプロバイオティックの生存率の低下を計算するために、以下の式に液体試料の全固形分（ＴＳ）を代入して液体試料でカウントしたＣＦＵ／ｍｌをＣＦＵ／ｇに変換した。
（ＣＦＵ／ｇ）乾燥前＝（ＣＦＵ／ｍｌ）乾燥前／ＴＳ
次に、乾燥による生存率の低下を、以下の式を用いて計算した。
乾燥による生存率の低下＝Ｌｏｇ10（ＣＦＵ／ｇ）乾燥前-Ｌｏｇ10（ＣＦＵ／ｇ）乾燥後
【００５６】
乾燥前後のＢｂ１２、Ｌ．カゼイおよびＬ．アシドフィルスの生存率を調べた結果を表１に示す。
【００５７】
【表１】
2015519069.tif 000003
【００５８】
乾燥前後のＢｂ１２の生存率は、それぞれ（１．２７±０．０９）×１０11ＣＦＵ／ｍｌおよび（２．５６±０．２０）×１０11ＣＦＵ／ｇであった。乾燥前後のＬ．カゼイの生存率は、それぞれ（１．１３±０．３３）×１０9ＣＦＵ／ｍｌおよび（１．６３±０．０４）×１０10ＣＦＵ／ｇであった。
【００５９】
実施例４：多孔乾燥したプロバイオティックを９０日間４℃で保存した後の生存率
多孔乾燥したプロバイオティクスを９０日間４℃で保存した後の生存率を表２に示す。９０日間４℃で保存した後の粉末の対数減少値は０．４０であった。
【００６０】
【表２】
2015519069.tif 000004
【００６１】
実施例５：バッチ処理における多孔性ビフィドバクテリウム・アニマリスの調製
細菌の凍結ペレット（１０11〜１０12ｃｆｕ／ｇ）を４０℃の水浴中で融解し、乳製品ベースのＵＨＴ濃縮物およびｐＨ緩衝液（ｐＨ＝６．２）とともに混合した。混合物の比率は１：１で、最終濃度の全固形分は１８％である。３リットルの濃縮液を調製し、５Ｌのキャニスタに注ぐ。キャニスタを密閉したら、圧力が０．５ＭＰａに達するまでＣＯ2ガスを注入する。その後キャニスタを振とうして泡立てる。キャニスタは、出口ラインを介し乾燥チャンバ内の製品を噴霧するノズルに接続されている。乾燥粉末を回収し、さらに小さなベンチ流動床乾燥機で乾燥させ０．１５の水分活性にする。次いで、粉末を窒素とともにアルミ袋に詰める。濃縮物および粉末の両方で生きている細胞を計数したところ、数値は８．１×１０11ｃｆｕ／ｇおよび３．２×１０11ｃｆｕ／ｇであった。生存率の対数減少値は０．４０であった。
【００６２】
特許請求の範囲に記載の発明の範囲から逸脱することなく、特定の実施例に示すような多くの変形および／または改変が本発明に対してなされ得ることが当業者によって理解されるであろう。したがって、本実施形態は、あらゆる点で例示的なものであり限定的なものではないと解するべきである。
【図１】
2015519069.tif 000005
【図２】
2015519069.tif 000006
【図３】
2015519069.tif 000007
【図４】
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【図５】
2015519069.tif 000009
【手続補正書】
【提出日】平成27年2月16日(2015.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の液体微生物の培養物および担体組成物を含む液体濃縮物から微生物を含有する多孔性粉末製品の製造方法であって、担体組成物は少なくとも１種の炭水化物および少なくとも１種のタンパク質を含み、当該方法は以下の工程：
ｉ）５〜４０℃の温度および１５０ｍＰａ．ｓを超える粘度の両方を有するように液体濃縮物を調製する工程；
ｉｉ）食品グレードのガスを０．３ＭＰａを超える圧力で調製濃縮物に注入し、ガスを液体濃縮物に深く取り込んで密度が約０．６〜約１．２ｋｇ／ｌの安定した発泡体を形成する工程；
ｉｉｉ）発泡体を噴霧装置に搬送し、そこで発泡体の圧力を０．３ＭＰａから大気圧に減じ部分的に乾燥した製品を設ける工程；ならびに
ｉｖ）部分的に乾燥した製品を乾燥媒体に曝し、２０℃で測定する場合の水分量を５％未満かつ水分活性を０．２５Ａw未満に下げて多孔性粉末製品を設ける、ここで工程（ｉｖ）における多孔性粉末製品の温度は５０℃を超えない工程；を含む、微生物を含有する多孔性粉末製品の製造方法。
【請求項２】
前記調製濃縮物の温度が２５〜３５℃である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記調製濃縮物の温度が約３０℃である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記密度が０．８〜１．１ｋｇ／ｌである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記密度が約０．８５ｋｇ／ｌである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
食品グレードのガスは、二酸化炭素、酸素、アルゴン、窒素、二酸化窒素、空気、またはそれらの混合物を含む群から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
液体培養濃縮物を泡立ちやすくそしてガスを溶解しやすくするために、担体組成物は、マルトデキストリン、ラクトース、マルトース、およびスクロースといったガラス転移温度が５５℃を超える糖類、アラビアゴム、グアーガム、およびキサンタンといった水溶性ゴム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、アルギネート、ペクチン、粉乳、炭水化物、またはタンパク質、あるいはそれらの混合物を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
工程（ｉｖ）は、部分的に乾燥した製品を乾燥チャンバに吐出する第１サブ工程を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
工程（ｉｖ）は、第１サブ工程の後に流動床上で実施する第２サブ工程を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
工程（ｉｖ）において、２０℃で測定する場合の部分的に乾燥した製品の水分活性を０．１〜０．２５Ａwに下げる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ｉｖ）において、２０℃で測定する場合の部分的に乾燥した製品の水分活性を０．１５Ａwに下げる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
多孔性粉末製品のかさ密度が０．２ｇ／ｃｍ3〜０．６ｇ／ｃｍ3である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
多孔性粉末製品のかさ密度が約０．３ｇ／ｃｍ3である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
多孔性粉末製品は、３０μｍ〜２００μｍの粒子サイズを有する自由流動性の粉末である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
微生物は、細菌、酵母、真菌、およびプロバイオティクスを含む群から選択される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
工程（ｉｉ）を、バッチ処理で動作する密閉タンク内で実施する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
工程（ｉｉ）を、連続処理で動作する熱機械処理装置内で実施する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
熱機械処理装置は、単軸スクリュー押出機、二軸スクリュー押出機、ボテーター、およびスクレープ表面熱交換器を含む群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
工程（ｉ）も熱機械処理装置内で実施し、工程（ｉ）および（ｉｉ）を連続的に実施するように構成する、請求項１７または１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
工程（ｉｖ）の後に凝集を行う、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【国際調査報告】
2015519069.tif 000010
2015519069.tif 000011
2015519069.tif 000012