(57)【要約】  本発明は、抗ＥＴＢＲ抗体および免疫複合体ならびにそれらを使用する方法を提供する。いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤に共有結合されたＥＴＢＲに結合する抗体を含む免疫複合体が提供され、この抗体は、配列番号１０のアミノ酸６４〜１０１内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン誘導体である。【選択図】  図９
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞傷害性薬剤に共有結合されたＥＴＢＲに結合する抗体を含む、免疫複合体であって、前記抗体は、配列番号１０のアミノ酸６４〜１０１内のエピトープに結合し、前記細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン誘導体である、免疫複合体。
【請求項２】
前記抗体は、（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項１に記載の免疫複合体。
【請求項３】
前記抗体は、（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項１または請求項２に記載の免疫複合体。
【請求項４】
前記抗体は、（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｖｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の免疫複合体。
【請求項５】
前記抗体は、（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項６】
前記抗体は、
ａ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、または
ｂ）配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または
ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列および（ｂ）に記載のＶＬ配列を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項７】
配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＨ配列を含む、請求項６に記載の免疫複合体。
【請求項８】
配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ配列を含む、請求項６に記載の免疫複合体。
【請求項９】
細胞傷害性薬剤に共有結合されたＥＴＢＲに結合する抗体を含む、免疫複合体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ配列および配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ配列を含み、前記細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン誘導体である、免疫複合体。
【請求項１０】
前記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、またはＩｇＧ２ｂ抗体である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項１１】
前記免疫複合体は、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、
（ａ）Ａｂは、前記抗体であり、
（ｂ）Ｌは、リンカーであり、
（ｃ）Ｄは、前記細胞傷害性薬剤であり、
（ｄ）ｐは、１〜８の範囲である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項１２】
Ｄは、ネモルビシン誘導体である、請求項１１に記載の免疫複合体。
【請求項１３】
Ｄは、
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から選択される構造を有する、請求項１２に記載の免疫複合体。
【請求項１４】
前記リンカーは、プロテアーゼによって切断可能である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項１５】
前記リンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔジペプチドまたはＰｈｅ−ホモＬｙｓジペプチドを含む、請求項１４に記載の免疫複合体。
【請求項１６】
前記リンカーは、酸不安定性である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項１７】
前記リンカーは、ヒドラゾンを含む、請求項１６に記載の免疫複合体。
【請求項１８】
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から選択される式を有し、式中、Ｒ１およびＲ２は独立して、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択される、請求項１２に記載の免疫複合体。
【請求項１９】
ｐは、１〜３の範囲である、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項２０】
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から選択される式を有し、式中、Ａｂは、（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｖｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体であり、ｐは、１〜３の範囲である、免疫複合体。
【請求項２１】
前記抗体は、配列番号８のＶＨ配列および配列番号７のＶＬ配列を含む、請求項２０に記載の免疫複合体。
【請求項２２】
前記抗体は、配列番号６の重鎖および配列番号５の軽鎖を含む、請求項２１に記載の免疫複合体。
【請求項２３】
前記抗体は、モノクローナル抗体である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項２４】
前記抗体は、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項２５】
前記抗体は、ＥＴＢＲに結合する抗体断片である、前請求項１〜２４のいずれか１項に記載の免疫複合体。
【請求項２６】
前記抗体は、ヒトＥＴＢＲに結合する、請求項１〜２５のいずれか１項の請求項に記載の免疫複合体。
【請求項２７】
ヒトＥＴＢＲは、配列番号１０または配列番号１１の配列を有する、請求項２６に記載の免疫複合体。
【請求項２８】
請求項１〜２７のいずれか１項に記載の免疫複合体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬製剤。
【請求項２９】
追加の治療剤をさらに含む、請求項２８に記載の医薬製剤。
【請求項３０】
ＥＴＢＲ陽性がんを有する個体を治療する方法であって、前記方法は、前記個体に、有効量の、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の免疫複合体を投与することを含む、方法。
【請求項３１】
前記ＥＴＢＲ陽性がんは、黒色腫である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
追加の治療剤を前記個体に投与することをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記追加の治療剤は、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記追加の治療剤は、細胞傷害性薬剤に共有結合されたＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む免疫複合体である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ＥＴＢＲ陽性細胞の増殖を阻害する方法であって、前記方法は、前記細胞を、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の免疫複合体に、前記細胞の表面上のＥＴＢＲへの前記免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって前記細胞の増殖を阻害することを含む、方法。
【請求項３６】
前記細胞は、黒色腫細胞である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＥＴＢＲ陽性がんを有する個体を治療する方法であって、前記ＥＴＢＲ陽性がんは、第１の治療薬に耐性であり、前記方法は、前記個体に、有効量の、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の免疫複合体を投与することを含む、方法。
【請求項３８】
前記ＥＴＢＲ陽性がんは、黒色腫である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記第１の治療薬は、ＥＴＢＲ以外の抗原に結合する第１の抗体を含む、請求項３７または請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記第１の治療薬は、ＥＴＢＲ以外の抗原に結合する第１の抗体と、第１の細胞傷害性薬剤とを含む、第１の免疫複合体である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記第１の抗体は、ＰＭＥＬ１７、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ）から選択される抗原に結合する、請求項３９または請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記第１の抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記第１の治療薬は、ＥＴＢＲに結合する第１の抗体を含む、請求項３７または請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
前記第１の治療薬は、ＥＴＢＲに結合する第１の抗体と、第１の細胞傷害性薬剤とを含む、第１の免疫複合体である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記第１の細胞傷害性薬剤と請求項１〜２７のいずれか１項に記載の免疫複合体の前記細胞傷害性薬剤とは、異なる、請求項４０〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記第１の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ＥＴＢＲ陽性がんを有する個体を治療する方法であって、前記個体に、有効量の、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の第１の免疫複合体を、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む第２の免疫複合体と組み合わせて投与することを含む、方法。
【請求項４８】
ＰＭＥＬ１７に結合する前記抗体は、配列番号２１の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２２の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２３の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２４の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２５の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および配列番号２６の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記第２の免疫複合体は、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン誘導体から選択される細胞傷害性薬剤を含む、請求項４７または請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記第２の免疫複合体は、オーリスタチンまたはピロロベンゾジアゼピンを含む、請求項４７〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記第２の免疫複合体は、ＭＭＡＥを含む、請求項４７〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記第２の免疫複合体は、構造、
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を有するＰＢＤ二量体を含み、式中、波線は、リンカーへの共有結合を示す、請求項４７〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
前記第２の免疫複合体は、ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを含むリンカー−薬物部分を含む、請求項４７〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記第２の免疫複合体は、ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢを含むリンカーを含む、請求項４７〜５０および５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＥＴＢＲ陽性がんは、黒色腫である、請求項４７〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＥＴＢＲ陽性がんは、さらにＰＭＥＬ１７陽性である、請求項４７〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ＥＴＢＲ抗体を含む免疫複合体およびにそれらを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
黒色腫は、最近、発生率が憂慮すべきほどに増加している、侵攻性型の皮膚がんである。治癒は、局所病変の外科的切除により達成し得るが、進行期の黒色腫は、現在認可されている治療法に対して応答性が不十分でしかない。第ＩＶ期転移性黒色腫の５年生存率は、およそ１０％である。Ｂｃｌ２に対するアンチセンス、ＣＴＬＡ４に対する抗体、小分子ＲＡＦキナーゼ阻害剤、および養子免疫療法を含む、新たな治療的アプローチが、現在、転移性黒色腫に対して臨床試験段階にある。これらの最近の研究のうちのいくつかによる結果は、有望であるように思われるが、全体的な生存率に対する永続的な影響には、追加の新たな治療剤を含む治療薬の組み合わせを必要とする可能性が高い。
【０００３】
２０年よりも前に、エンドセリン−１（ＥＴ−１）が大動脈内皮細胞から単離され、強力な血管収縮活性を有することが見出された。エンドセリンのための受容体が、その後間もなくクローニングされ、メラニン細胞および黒色腫細胞を含む、種々の細胞型におけるそれらの発現は、内皮におけるそれらの役割から独立した機能を指摘した。エンドセリンＢ受容体（ＥＴＢＲ、ＥＤＮＢＲ）が、胚発生中に神経堤から発出するメラニン細胞の忠実な誘導に必要不可欠であることは今ではよく認識されている。メラニン細胞前駆体は、増殖し、神経管からそれらの最終的な目的地へと遊走するために、ＥＴＢＲ活性に依存する。ＥＴＢＲまたはエンドセリン−３（ＥＴ−３）をコードする遺伝子の欠陥を有するマウスは、それらの毛並における色素形成の欠損、および同じく神経堤に由来する、腸管神経節細胞の不足を示す。これらの特徴は、ＥＴ−３またはＥＴＢＲのいずれかにおける生殖細胞突然変異に起因するとされてきた、ヒトにおけるワールデンブルグ症候群のＷＳ４変異形に関連する特徴と酷似する。この症候群の追加の変異形であるＷＳ２は、メラニン細胞発達の主要な調節因子および黒色腫のがん原遺伝子である、小眼球症関連転写因子（ＭＩＴＦ）における遺伝的突然変異にマッピングされた。
【０００４】
ＥＴＢＲ活性をメラニン芽細胞の結末に関連付ける強力な遺伝学的証明は、黒色腫の進行においてこの受容体ついての可能性のある役割を強調する。ＥＴＢＲ  ｍＲＮＡおよびタンパク質の発現は、異形成母斑から転移性黒色腫への疾患進行中に増加することが報告された。２つの独立した小分子阻害剤によるＥＴＢＲ活性の遮断は、黒色腫細胞および腫瘍異種移植片の成長および生存を干渉した。これらの前臨床研究は、ＥＴＢＲを、黒色腫進行の可能性のある駆動因子として関連付けている。
【０００５】
当該技術分野において、がん等のＥＴＢＲ関連病態の診断および治療のために、ＥＴＢＲを標的とする薬剤に対する必要性が存在する。本発明はその必要性を満たし、また他の便益を提供する。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、抗ＥＴＢＲ抗体および免疫複合体ならびにそれらを使用する方法を提供する。
【０００７】
いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤に共有結合されたＥＴＢＲに結合する抗体を含む、免疫複合体が提供され、この抗体は、配列番号１０のアミノ酸６４〜１０１内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕｂｉｃｉｎ）誘導体である。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本抗体は、（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｖｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、ａ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、またはｂ）配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、またはｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列および（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、またはＩｇＧ２ｂ抗体である。
【０００９】
いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤に共有結合されたＥＴＢＲに結合する抗体を含む、免疫複合体が提供され、この抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ配列および配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ配列を含み、この細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン誘導体である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本免疫複合体は、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、（ａ）Ａｂは、抗体であり、（ｂ）Ｌは、リンカーであり、（ｃ）Ｄは、細胞傷害性薬剤であり、（ｄ）ｐは、１〜８の範囲である。
【００１１】
いくつかの実施形態において、Ｄは、ネモルビシン誘導体である。いくつかのかかる実施形態において、Ｄは、
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から選択される構造を有する。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本免疫複合体は、プロテアーゼによって切断可能であるリンカーを含む。いくつかのかかる実施形態において、リンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔジペプチドまたはＰｈｅ−ホモＬｙｓジペプチドを含む。いくつかの実施形態において、免疫複合体は、酸不安定性であるリンカーを含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、
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から選択される式を有し、式中、Ｒ１およびＲ２は独立して、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択される。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜３の範囲である。
【００１４】
いくつかの実施形態において、免疫複合体が提供され、この免疫複合体は、
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から選択される式を有し、Ａｂは、（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｖｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体であり、ｐは、１〜８、または１〜７、または１〜６、または１〜５、または１〜４、または１〜３の範囲である。いくつかのかかる実施形態において、本抗体は、配列番号８のＶＨ配列および配列番号７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号６の重鎖および配列番号５の軽鎖を含む。
【００１５】
本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、本抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体であってもよい。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＥＴＢＲに結合する抗体断片である。いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒトＥＴＢＲに結合する。いくつかのかかる実施形態において、ヒトＥＴＢＲは、配列番号１０または配列番号１１の配列を有する。
【００１６】
いくつかの実施形態において、医薬製剤が提供され、この製剤は、本明細書に記載される免疫複合体と、薬学的に許容される担体とを含む。いくつかの実施形態において、医薬製剤は、追加の治療剤を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんを有する個体を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、個体に、有効量の本明細書に記載される免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、黒色腫および多発性骨髄腫から選択される。いくつかの実施形態において、本方法は、追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。いくつかのかかる実施形態において、追加の治療剤は、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、細胞傷害性薬剤に共有結合されたＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む、免疫複合体である。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんを有する個体を治療する方法であって、このＥＴＢＲ陽性がんが第１の治療薬に対して耐性である、方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、個体に、有効量の本明細書に記載される免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＥＴＢＲ以外の抗原に結合する第１の抗体を含む。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＥＴＢＲ以外の抗原に結合する第１の抗体と、第１の細胞傷害性薬剤とを含む、第１の免疫複合体である。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、メラニン細胞タンパク質ＰＭＥＬ１７、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ）から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＥＴＢＲに結合する第１の抗体を含む。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＥＴＢＲに結合する第１の抗体と、第１の細胞傷害性薬剤とを含む、第１の免疫複合体である。いくつかの実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤および本明細書に記載される免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、異なる。いくつかの実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥである。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんを有する個体を治療する方法が提供され、本方法は、個体に、本明細書に記載される有効量の第１の免疫複合体を、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む第２の免疫複合体と組み合わせて投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体は、配列番号２１の配列を含むＨＶＲ  Ｈ１、配列番号２２の配列を含むＨＶＲ  Ｈ２、配列番号２３の配列を含むＨＶＲ  Ｈ３、配列番号２４の配列を含むＨＶＲ  Ｌ１、配列番号２５の配列を含むＨＶＲ  Ｌ２、および配列番号２６の配列を含むＨＶＲ  Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、第２の免疫複合体は、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン、およびネモルビシン誘導体から選択される細胞傷害性薬剤を含む。いくつかの実施形態において、第２の免疫複合体は、オーリスタチンまたはピロロベンゾジアゼピンを含む。いくつかの実施形態において、第２の免疫複合体は、ＭＭＡＥを含む。いくつかのかかる実施形態において、第２の免疫複合体は、ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを含むリンカー−薬物部分を含む。いくつかの実施形態において、第２の免疫複合体は、構造、
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を有するＰＢＤ二量体を含み、式中、波線は、リンカーへの結合を示す。いくつかの実施形態において、第２の免疫複合体は、ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢを含むリンカーを含む。前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ＥＴＢＲ陽性がんは、黒色腫であり得る。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんはまた、ＰＭＥＬ１７陽性でもある。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性細胞の増殖を阻害する方法が提供される。いくつかのかかる実施形態において、本方法は、細胞を、本明細書に記載される免疫複合体に、細胞の表面上のＥＴＢＲへの免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。いくつかの実施形態において、細胞は、黒色腫細胞である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】マウス５Ｅ９モノクローナル抗体の完全長軽鎖（配列番号１）およびマウス５Ｅ９モノクローナル抗体の可変軽鎖（配列番号３）のアミノ酸配列を示す。
【図２】マウス５Ｅ９モノクローナル抗体の完全長重鎖（配列番号２）およびマウス５Ｅ９モノクローナル抗体の可変重鎖（配列番号４）のアミノ酸配列を示す。
【図３】ヒト化ｈｕ５Ｅ９．ｖ１抗体の完全長軽鎖（配列番号５）およびヒト化ｈｕ５Ｅ９．ｖ１抗体の可変軽鎖（配列番号７）のアミノ酸配列を示す。
【図４】ヒト化ｈｕ５Ｅ９．ｖ１抗体の完全長重鎖（配列番号６）およびヒト化ｈｕ５Ｅ９．ｖ１抗体の可変重鎖（配列番号８）のアミノ酸配列を示す。
【図５】ヒト化ｈｕ５Ｅ９．ｖ２抗体の可変重鎖（配列番号９）のアミノ酸配列を示す。
【図６】例となるヒトＥＴＢＲタンパク質のアミノ酸配列（配列番号１０）およびこのタンパク質の種々の特徴を示す。
【図７】（Ａ）Ａｂ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、（Ｂ）Ａｂ−ＭＣ−アセタール−ＰＮＵ−１５９６８２、（Ｃ）Ａｂ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＵ−１５９６８２、および（Ｄ）Ａｂ−ＰＮＵ−１５９６８２を含む、種々の抗体−薬物複合体の構造を示す。
【図８】実施例Ｂに記載される、（Ａ）ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２黒色腫細胞を接種され、様々な用量の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥ（「５Ｅ９ｖ１−ｖｃＥ」）投与されたマウスにおける経時的な腫瘍体積、ならびに（Ｂ）漸増濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥ  ＡＤＣの存在下で、体外で成長させられた親および耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を示す。
【図９】実施例Ｂに記載される、体内（Ａ）および体外（Ｂ）で誘導された親および耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞における、ＥＴＢＲ（「ＥＤＮＲＢ」とも称される）の発現を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
Ｉ．  定義
本明細書における目的のために、「アクセプターヒトフレームワーク」は、下に定義される、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれは、アミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免役グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００２３】
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、総計の非共有性相互作用の強度を指す。別途指定されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示説明および例となる実施形態が、以下に記載される。
【００２４】
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の変化を有し、かかる変化が抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす、抗体を指す。
【００２５】
「抗ＥＴＢＲ抗体」および「ＥＴＢＲに結合する抗体」という用語は、抗体が、診断剤および／または治療剤として、ＥＴＢＲを標的とすることにおいて有用であるように、ＥＴＢＲに十分な親和性で結合可能である抗体を指す。一実施形態において、無関係の非ＥＴＢＲタンパク質への抗ＥＴＢＲ抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定するとき、ＥＴＢＲへの抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態において、ＥＴＢＲに結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、、５Ｎｍ以下、、４ｎＭ以下、、３ｎＭ以下、、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体は、異なる種由来のＥＴＢＲの間で保存されるＥＴＢＲのエピトープに結合する。
【００２６】
「抗体」という用語は、本明細書で最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を含むが、これらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
【００２７】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；二重特異性抗体；線状抗体（ｌｉｎｅａｒ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）；１本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、その抗原への参照抗体の結合を５０％以上遮断する抗体、および逆に、競合アッセイにおいて、その抗原への抗体の結合を５０％以上遮断する参照抗体を指す。例となる競合アッセイが本明細書に提供される。
【００２９】
「がん」および「がん性」という用語は、未制御な細胞成長／増殖によって典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理的状態を指すか、または説明する。がんの例としては、黒色腫、がん腫、リンパ腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。かかるがんのより特定の例としては、扁平上皮細胞がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、肺の扁平上皮がん、腹膜のがん、肝細胞がん、消化器がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頚がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮がん腫、唾液腺がん、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝臓がん、白血病および他のリンパ増殖性障害、ならびに種々の種類の頭頸部がんが挙げられる。
【００３０】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来する一方で、重鎖および／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する、抗体を指す。
【００３１】
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。５つの主要な抗体クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちの数個は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分割され得る。免役グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
【００３２】
本明細書で使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害するもしくは阻止する、および／または細胞死もしくは破壊を引き起こす、物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体）；化学療法剤もしくは化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素等の酵素およびそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片および／または変異形を含む）等の毒素；ならびに下に記載される種々の抗腫瘍または抗がん薬剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００３３】
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、チオテパおよびシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファン、およびピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボクオン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、および９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドレゼシン、カルゼルシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）、およびビセレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード等の窒素マスタード類；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン等のニトロソ尿素類；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンγ１ＩおよびカリケアマイシンωＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連する色素タンパクエンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の、抗生物質；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗物質；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；葉酸等の葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフオルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）等のメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２−エチルヒドラジン；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）（特に、Ｔ−２トキシン、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ  Ａ）、およびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ���Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）クレモホールを含有しない、アルブミン操作されたパクリタキセルのナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）；Ｒｈoｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチンおよびカルボプラチン等の白金類似体；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボビン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸のレチノイド；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびにＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語）；ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語）；およびＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵおよびロイコボビンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ（商標））を用いた治療レジメンの略語）等の上記の２つ以上の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより様々である、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００３５】
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、必要な複数回投薬量で一定期間にわたる、所望の治療的または予防的結果を達成するために有効な量を指す。
【００３６】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。
【００３７】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する、免役グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域および変異形Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在することもあれば、しないこともある。本明細書で別途明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵ付番方式に従う。
【００３８】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）または相補性決定領域（ＣＤＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメインＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲおよびＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００３９】
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有する、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する、抗体を指すように交換可能に使用される。
【００４０】
「ＥＴＢＲのグリコシル化型」という用語は、炭水化物残基の付加によって翻訳後修飾されている、ＥＴＢＲの自然発生型を指す。
【００４１】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養物」という用語は、交換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞および継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれる。子孫は、核酸含量において親細胞と完全に同一でない場合があるが、突然変異を含有し得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体子孫が、本明細書に含まれる。
【００４２】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。
【００４３】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位集団から行われる。一般に、配列の下位集団は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３．にあるような下位集団である。一実施形態において、ＶＬについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団カッパＩである。一実施形態において、ＶＨについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団ＩＩＩである。
【００４４】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基およびヒトＦＲからのアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが、非ヒト抗体に対応し、そのＦＲの全てまたは実質的に全てが、ヒト抗体のそれらに対応する。ヒト化抗体は任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を経た抗体を指す。
【００４５】
本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が高度に変化する、かつ／または構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、天然４本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、このうち３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。ＨＶＲは一般に、超可変ループからのおよび／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、このうち後者が、配列可変性が最も高く、および／または抗原認識に関与する。例となる超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）において生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。例となるＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４〜３４、Ｌ２の５０〜５６、Ｌ３の８９〜９７、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜６５、およびＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原に接触する残基である、「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ）ＣＤＲ、またはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例となるａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、およびａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１〜３４、Ｌ２の５０〜５５、Ｌ３の８９〜９６、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜５８、およびＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）。別途指定されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基および他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において上記のＫａｂａｔらに従って付番される。
【００４６】
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むが、これらに限定されない１個以上の異種性分子（複数可）に複合される抗体である。
【００４７】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒト、およびサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、個体または対象は、ヒトである。
【００４８】
「単離抗体」は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定するとき、９５％超または９９％超の純度まで精製される。抗体の純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００４９】
「単離核酸」は、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離核酸には、核酸分子を通常含有する細胞内に含有される核酸分子が含まれるが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に、存在する。
【００５０】
「抗ＥＴＢＲ抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖および軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１個以上の核酸分子を指し、それには単一のベクターまたは別個のベクターにおけるかかる核酸分子（複数可）が含まれ、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
【００５１】
本明細書で使用される「ＥＴＢＲ」は、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒトおよびカニクイザル（ｃｙｎｏ））および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＥＴＢＲを指す。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＥＴＢＲ、ならびに細胞内のプロセシングからもたらされるＥＴＢＲの任意の形態を包含する。この用語はまた、ＥＴＢＲの自然発生変異形、例えば、スプライス変異形、対立遺伝子変異形、およびアイソフォームを包含する。例となるヒトＥＴＢＲ前駆体（シグナル配列を含む）のアミノ酸配列は、配列番号１０に示される。例となるヒト成熟ＥＴＢＲ（シグナル配列を含まない）のアミノ酸配列は、配列番号１１に示される。
【００５２】
「ＥＴＢＲ陽性がん」という用語は、細胞の表面上でＥＴＢＲを発現する細胞を含むがんを指す。
【００５３】
「ＥＴＢＲ陽性細胞」という用語は、その表面上でＥＴＢＲを発現する細胞を指す。
【００５４】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、可能性のある変異形抗体は例外であり、かかる変異形は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。故に、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。例えば、本発明による使用対象のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免役グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法および他の例となる方法が、本明細書に記載されている。
【００５５】
「裸の抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合されていない抗体を指す。裸の抗体は、医薬製剤中に存在してもよい。
【００５６】
「天然抗体」は、様々な構造を有する、自然発生免役グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つが割り当てられ得る。
【００５７】
「添付文書」という用語は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、および／またはその使用に関する警告を含有する、治療薬の商用のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【００５８】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアライメントし、配列同一性最大パーセントを得るのに必要な場合はギャップを導入した後に、配列同一性の部分としていかなる保存的置換も考慮に入れずに、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当該技術分野における技術の範囲内である種々の方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較されている配列の完全長にわたる最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアライメントするために適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ），Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であるか、またはソースコードから編集されてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用する場合は編集すべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更はない。
【００５９】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる場合、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比したある特定のアミノ酸配列同一性％を有する、またはそれを含む、所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、次のように算出される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡおよびＢのアライメントにおいて完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが理解されよう。特に別途定めのない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるように、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００６０】
「医薬製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、製剤が投与されるであろう対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有しない、調製物を指す。
【００６１】
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００６２】
本明細書で使用されるとき、「治療」（および「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形形態）は、治療されている個体の自然過程を変えることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程の間に行うことができる。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の低減、病状の回復または一次緩和、および寛解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の免疫複合体は、疾患の発症を遅延するために、または疾患の進行を緩徐にするために使用される。
【００６３】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合することに関与する、抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）は一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）および３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい）。抗原結合特異性を付与するためには、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、抗原に結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用して、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、特定の抗原に結合する抗体を単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００６４】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を増殖することが可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびに導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、作動的に連結された核酸の発現を導くことが可能である。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
【００６５】
「アルキル」は、直鎖（ｎｏｒｍａｌ）、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、Ｃ１〜Ｃ１８炭化水素である。例としては、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３がある。
【００６６】
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」基には、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチル、−ｎ−オクチル、−ｎ−ノニルおよび−ｎ−デシルが含まれるが、これらに限定されない一方で、分岐鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルには、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、２−メチルブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１〜Ｃ８アルキルには、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、−３−メチル−１ブチニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない１個以上の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
【００６７】
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」基には、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、および−ｎ−ヘキシルが含まれるが、これらに限定されない一方で、分岐鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキルには、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、および２−メチルブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１〜Ｃ６アルキルには、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、および−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、および３−ヘキシルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ１〜Ｃ６アルキル基は、置換されていないか、またはＣ１〜Ｃ８アルキル基について上述される、１個以上の基で置換されている可能性がある。
【００６８】
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」基には、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチルが含まれるが、これらに限定されない一方で、分岐鎖Ｃ１〜Ｃ４アルキルには、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１〜Ｃ４アルキルには、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、および−イソブチレニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ１〜Ｃ４アルキル基は、置換されていないか、またはＣ１〜Ｃ８アルキル基について上述される、１個以上の基で置換されている可能性がある。
【００６９】
「アルコキシ」は、酸素に単結合されたアルキル基である。例となるアルコキシ基には、メトキシ（−ＯＣＨ３）およびエトキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ３）が含まれるが、これらに限定されない。「Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ」は、１〜５個の炭素原子を有するアルコキシ基である。アルコキシ基は、置換されていないか、またはアルキル基について上述される、１個以上の基で置換されている可能性があり得る。
【００７０】
「アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する直鎖、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、Ｃ２〜Ｃ１８炭化水素である。例としては、エチレンまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）、および５−ヘキセニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２〜Ｃ８アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する２〜８個の直鎖、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、炭化水素である。
【００７１】
「アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する直鎖、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、Ｃ２〜Ｃ１８炭化水素である。例としては、アセチレン系（−Ｃ≡ＣＨ）およびプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２〜Ｃ８アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する２〜８個の直鎖、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有する、炭化水素である。
【００７２】
「アルキレン」は、１〜１８個の炭素原子からなり、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によってもたらされる２つの一価ラジカル中心を有する、飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルキレンラジカルには、メチレン（−ＣＨ２−）１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等が含まれるが、これらに限定されない。
【００７３】
「Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン」は、式−（ＣＨ２）１−１０−の直鎖、飽和炭化水素基である。Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン（ｏｃｙｔｙｌｅｎｅ）、ノニレン、およびデカレンが挙げられる。
【００７４】
「アルケニレン」は、２〜１８個の炭素原子からなり、親アルケンの同じまたは２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によってもたらされる２つの一価ラジカル中心を有する、不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルケニレンラジカルには、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）が含まれるが、これらに限定されない。
【００７５】
「アルキニレン」は、２〜１８個の炭素原子からなり、親アルキンの同じまたは２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によってもたらされる２つの一価ラジカル中心を有する、不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルキニレンラジカルには、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）、および４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）が含まれるが、これらに限定されない。
【００７６】
「アリール」は、炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。炭素環式芳香族基または複素環式芳香族基は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない１個以上の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
【００７７】
「Ｃ５〜Ｃ２０アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜２０個の炭素原子を有する、アリール基である。Ｃ５〜Ｃ２０アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５〜Ｃ２０アリール基は、アリール基について上述されるように、置換されているか、または置換されていない可能性がある。「Ｃ５〜Ｃ１４アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜１４個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５〜Ｃ１４アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５〜Ｃ１４アリール基は、アリール基について上述されるように、置換されているか、または置換されていない可能性がある。
【００７８】
「アリーレン」は、２つの共有結合を有するアリール基であり、次の構造、
2015529656.tif 000009
に示されるオルト、メタ、またはパラ配置にあり得、そのフェニル基は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大４個の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
【００７９】
「アリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子のうちの１個が、アリールラジカルと置き換えられている、非環状アルキルラジカルを指す。典型的なアリールアルキル基には、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イル等が含まれるが、これらに限定されない。アリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含む、アルキル部分は、１〜６個の炭素原子であり、アリール部分は、５〜１４個の炭素原子である。
【００８０】
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子のうちの１個が、ヘテロアリールラジカルと置き換えられている、非環状アルキルラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基には、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチル等が含まれるが、これらに限定されない。ヘテロアリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含む、アルキル部分は、１〜６個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分は、５〜１４個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３〜７個の環員を有する単環（２〜６個の炭素原子、または７〜１０環員を有する二環（４〜９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）、例えば、ビシクロ  ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であり得る。
【００８１】
「置換アルキル」、「置換アリール」、および「置換アリールアルキル」は、１個以上の水素原子が各々独立して置換基と置き換えられている、それぞれ、アルキル、アリール、およびアリールアルキルを意味する。典型的な置換基には、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ−３、ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２が含まれるが、これらに限定されず、式中、各Ｘは独立して、ハロゲン、すなわちＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり、各Ｒは独立して、−Ｈ、Ｃ２〜Ｃ１８アルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ３〜Ｃ１４複素環、保護基、またはプロドラッグ部分である。上述のアルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基もまた、同様に置換され得る。
【００８２】
「ヘテロアリール」および「複素環」は、１個以上の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素、および硫黄である、環系を指す。複素環ラジカルは、３〜２０個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む。複素環は、３〜７個の環員を有する単環（２〜６個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）、または７〜１０環員を有する二環（４〜９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、およびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）、例えば、ビシクロ  ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であり得る。
【００８３】
例となる複素環は、例えば、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６８）の特に第１、３、４、６、７、および９章、“Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（ＪＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０〜現在）の特に第１３、１４、１６、１９、および２８巻、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載される。
【００８４】
複素環の例としては、限定ではなく例として、ピリジル、ジヒドロイピリジル（ｄｉｈｙｄｒｏｙｐｙｒｉｄｙｌ）、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化型テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル（ａｚｏｃｉｎｙｌ）、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソキサゾリル、オキシンドリル、ベンゾキサゾリニル、およびイサチノイル（ｉｓａｔｉｎｏｙｌ）が挙げられる。
【００８５】
限定ではなく例として、炭素が結合する複素環は、ピリジンの２、３、４、５、もしくは６位、ピリダジンの３、４、５、もしくは６位、ピリミジンの２、４、５、もしくは６位、ピラジンの２、３、５、もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの２、３、４、もしくは５位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４、もしくは５位、イソキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４、もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３、もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、もしくは８位において結合される。さらにより典型的に、炭素が結合した複素環には、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、または５−チアゾリルが含まれる。
【００８６】
限定ではなく例として、窒素が結合した複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、インダゾールの１位、イソインドール、またはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、およびカルバゾールまたはβ−カルボリンの９位において結合される。さらにより典型的に、窒素が結合した複素環には、１−アジリジル、１−アゼテジル（ａｚｅｔｅｄｙｌ）、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、および１−ピペリジニルが含まれる。
【００８７】
「Ｃ３〜Ｃ８複素環」は、環炭素原子のうちの１〜４個が独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮからなる群からのヘテロ原子と置き換えられている、芳香族または非芳香族Ｃ３〜Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３〜Ｃ８複素環の代表的な例としては、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、およびテトラゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ３〜Ｃ８複素環は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大７個の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
【００８８】
「Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子のうちの１個が結合と置き換えられている、上に定義されるＣ３〜Ｃ８複素環基を指す。Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロは、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大６個の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
【００８９】
「炭素環」は、単環として３〜７個の炭素原子、または二環として７〜１２個の炭素原子を有する、飽和または不飽和の環を意味する。単環式炭素環は、３〜６個の環原子、さらにより典型的には５または６個の環原子を有する。二環式炭素環は、例えば、ビシクロ  ［４，５］、［５，５］、［５，６］、もしくは［６，６］系として配置される、７〜１２個の環原子、またはビシクロ  ［５，６］もしくは［６，６］系として配置される、９もしくは１０個の環原子を有する。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。
【００９０】
「Ｃ３〜Ｃ８炭素環」は、３、４、５、６、７、または８員の飽和または不飽和の非芳香族炭素環式環である。代表的なＣ３〜Ｃ８炭素環には、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチル、および−シクロオクタジエニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ３〜Ｃ８炭素環基は、置換されていないか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、および−ＣＮを含むが、これらに限定されない１個以上の基で置換されている可能性があり、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、およびアリールから選択される。
【００９１】
「Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ」は、炭素環基の水素原子のうちの１個が結合と置き換えられている、上に定義されるＣ３〜Ｃ８炭素環基を指す。
【００９２】
「リンカー」は、共有結合、または抗体を薬物部分に共有結合する原子の鎖を含む、化学部分を指す。種々の実施形態において、リンカーには、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイル等の二価ラジカル、−（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ−等の部分、アルキルオキシ（例えば、ポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）およびアルキルアミノ（例えば、ポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の反復単位、ならびにコハク酸塩、コハク酸アミド、ジグリコール酸塩、マロン酸塩、およびカプロアミドを含む二酸エステルおよびアミドが含まれる。種々の実施形態において、リンカーは、バリン、フェニルアラニン、リジン、およびホモリジン等の１個以上のアミノ酸残基を含むことができる。
【００９３】
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合せできない（ｎｏｎ−ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓａｂｉｌｉｔｙ）特性を有する分子を指し、一方で「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーと重ね合せできる（ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓａｂｉｌｉｔｙ）分子を指す。
【００９４】
「立体異性体」という用語は、同一の化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置に関して異なる、化合物を指す。
【００９５】
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル性の中心を有し、それらの分子が互いの鏡像でない、立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、および反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動法およびクロマトグラフィー等の高解像度分析手順の下で分離されてもよい。
【００９６】
「鏡像異性体」は、互いに重ね合せできない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。
【００９７】
本明細書で使用される立体化学的な定義および慣例は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、およびＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性型で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞ＤおよびＬ、またはＲおよびＳは、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表すように使用される。接頭辞ｄおよびｌまたは（＋）および（−）は、化合物による平面偏光の回転の徴候を表記するために用いられ、このうち（−）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、鏡像異性体とも称され得、かかる異性体の混合物は、しばしば鏡像異性体混合物と呼ばれる。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、それらは化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性が存在していない場合に生じ得る。「ラセミ混合物」および「ラセミ体」という用語は、光学活性を欠く２つの鏡像異性体種の等モル混合物を指す。
【００９８】
「脱離基」は、別の官能基によって置換され得る官能基を指す。ある特定の脱離基は、当該技術分野で周知であり、例としては、ハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、メタンスルホニル（メシル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフル酸塩）、およびトリフルオロメチルスルホン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
「保護基」という用語は、特定の官能性を、化合物上の他の官能基を反応させながら、ブロッキングするまたは保護するために一般的に用いられる置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物中のアミノ官能性をブロッキングするまたは保護する、アミノ基に結合した置換基である。好適なアミノ保護基には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｅｎｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（Ｆｍｏｃ）が含まれるが、これらに限定されない。保護基の一般的な説明およびそれらの使用については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１、またはより新しい版を参照されたい。
【０１００】
ＩＩ．  組成物および方法
一態様において、本発明は、部分的に、ＥＴＢＲに結合する抗体およびかかる抗体を含む免疫複合体に基づく。本発明の抗体および免疫複合体は、例えば、ＥＴＢＲ陽性がんの診断または治療に有用である。
【０１０１】
Ａ．  例となる抗ＥＴＢＲ抗体
いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲに結合する単離抗体が提供される。ＥＴＢＲは、メラニン細胞内で発現されるＧタンパク質共役受容体である。
【０１０２】
シグナル配列（アミノ酸１〜２６）を含む、例となる自然発生ヒトＥＴＢＲ前駆体配列は、配列番号１０に提供され、対応する成熟ＥＴＢＲ配列は、配列番号１１（配列番号１０のアミノ酸２７〜４４２に対応する）に示される。
【０１０３】
ある特定の実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体は、配列番号１０のアミノ酸６４〜１０１内のエピトープに結合する。非限定的な例となるかかる抗体には、５Ｅ９およびそのヒト化バージョンが含まれる。いくつかの実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体は、ヒトＥＴＢＲに結合する。いくつかの実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体は、ヒトＥＴＢＲおよびカニクイザルＥＴＢＲに結合する。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体は、ヒトＥＴＢＲに、１０ｎＭ以下、または７ｎＭ以下、または６ｎＭ以下、または５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下、かつ任意に０．０００１ｎＭ以上、または０．００１ｎＭ以上、または０．０１ｎＭ以上の親和性で結合する。非限定的な例となるかかる抗体には、ｍｕ５Ｅ９およびｈｕ５Ｅ９．ｖ１が含まれ、それは、ヒトＥＴＢＲに、それぞれ５ｎＭおよび３．７ｎＭの親和性で結合する。
【０１０５】
アッセイ
抗ＥＴＢＲ抗体が「配列番号１０のアミノ酸６４〜１０１内のエピトープに結合する」かどうかを決定するために、Ｎ末端およびＣ末端欠失を伴うＥＴＢＲポリペプチドを、哺乳類細胞（ＣＨＯ細胞または２９３細胞等）内で発現させ、切頭型ポリペプチドへの抗体の結合をＦＡＣＳによって試験する。細胞内で発現される完全長ＥＴＢＲへの結合と比べた、切頭型ポリペプチドへの抗体の結合の実質的な低減（７０％以上の低減）または排除は、抗体がその切頭型ポリペプチドに結合しないことを示す。代替的に、いくつかの実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体が「配列番号１０のアミノ酸６４〜１０１内のエピトープに結合する」かどうかは、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定される。細胞外ドメイン等の、ＥＴＢＲのより長い部分への結合と比べた、切頭型ポリペプチドへの抗体の結合の実質的な低減（７０％以上の低減）または排除は、抗体がその切頭型ポリペプチドに結合しないことを示す。
【０１０６】
抗ＥＴＢＲ抗体が１０ｎＭ以下、または７ｎＭ以下、または６ｎＭ以下、または５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下「の親和性で結合する」かどうかは、表面上でＥＴＢＲを発現する哺乳類細胞（ＣＨＯ細胞または２９３細胞等）を使用して、段階希釈された未標識抗ＥＴＢＲ抗体を使用する競合アッセイにおいて、決定されてもよい。抗体の結合親和性、ＫＤは、非線形曲線当てはめプログラムを利用して行われる標準のスキャッチャード解析に従って決定されてもよい（例えば、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０７：２２０−２３９，１９８０を参照されたい）。いくつかの実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体が１０ｎＭ以下、または７ｎＭ以下、または６ｎＭ以下、または５ｎＭ以下、または４ｎＭ以下「の親和性で結合する」かどうかは、Ｂｉａｃｏｒ（商標）アッセイ等の表面プラスモン共鳴アッセイ、または結合平衡除外アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）を使用して、決定されてもよい。
【０１０７】
抗体５Ｅ９および他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体を提供する。
【０１０８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、抗体または免疫複合体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、本抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１０９】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、抗体または免疫複合体を提供する。別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、抗体または免疫複合体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１１０】
別の態様において、本発明の抗体または免疫複合体は、（ａ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または全ての３つのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または全ての３つのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。別の態様において、本発明の抗体または免疫複合体は、（ａ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号１４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または全ての３つのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または全ての３つのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１１１】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体または免疫複合体を提供する。別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体または免疫複合体を提供する。
【０１１２】
上の実施形態のいずれにおいても、抗ＥＴＢＲ抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体は、上の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩＶコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワークおよび／またはＶＨフレームワークＶＨＩＩＩである。いくつかの実施形態において、ヒト化抗ＥＴＢＲ抗体は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗ＥＴＢＲ抗体は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１１３】
別の態様において、抗ＥＴＢＲ抗体は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する、ＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＥＴＢＲ抗体は、ＥＴＢＲに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号８において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号８において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。
【０１１４】
任意に、抗ＥＴＢＲ抗体は、配列番号４、８、および９から選択されるＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体が提供され、この抗体は、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する、ＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＥＴＢＲ抗体は、ＥＴＢＲに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号７において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、総計１〜５個のアミノ酸が、配列番号７において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＥＴＢＲ抗体は、配列番号３または配列番号７のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１１６】
別の態様において、抗ＥＴＢＲ抗体が提供され、この抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、および上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号８および配列番号７におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号９および配列番号７におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号６および配列番号５における重鎖および軽鎖配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号６および配列番号１８における重鎖および軽鎖配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１９および配列番号５における重鎖および軽鎖配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号２０および配列番号５における重鎖および軽鎖配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
【０１１７】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗ＥＴＢＲ抗体と同じエピトープに結合する、抗体または免疫複合体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号８のＶＨ配列および配列番号７のＶＬ配列を含む抗ＥＴＢＲ抗体と同じエピトープに結合する、抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸６４〜１０１からの、その内の、またはそれと重複する、配列番号１０のエピトープに結合する、抗体が提供される。
【０１１８】
本発明のさらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＥＴＢＲ抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１１９】
上述の免疫複合体のうちのいずれにおいても、本抗体は、薬物部分に複合され得る。いくつかの実施形態において、本抗体は、細胞傷害性薬剤に複合される。いくつかのかかる実施形態において、細胞傷害性薬剤は、ＰＮＵ−１５９６８２等のネモルビシン誘導体である。種々の非限定的な例となるネモルビシン誘導体が、本明細書で考察される。
【０１２０】
さらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体は、下の第１〜７節に記載される特長のうちのいずれをも、単独でまたは組み合わせて、組み込んでもよい。
【０１２１】
１．  抗体親和性
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下の、および任意に、１０−１３Ｍ以上である、解離定数（Ｋｄ）を有する。（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）。
【０１２２】
一実施形態において、Ｋｄは、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原と共に行われる、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、次のアッセイによって記載されるように測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンにより、室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ  ［１２５Ｉ］−抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における、抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致）。目的のＦａｂを次いで一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡に到達することを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、捕捉プレートに移す。溶液を次いで除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したとき、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）γ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）により１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおいて使用するために選定する。
【０１２３】
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用した表面プラスモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて測定される。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＮＨＳ）により、供給業者の指示に従って活性化する。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈した後、５μＬ／分の流速で注射して、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注射後、１Ｍのエタノールアミンを注射して、未反応の基をブロッキングする。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流速で注射する。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して、会合センサグラムおよび解離センサグラムを同時に適合することによって、算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出する。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。オン速度が、上の表面プラスモン共鳴アッセイによって、１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、決定することができる。
【０１２４】
２．  抗体断片
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ断片、ならびに下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載される。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈuｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、また、国際公開第９３／１６１８５号、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加した体内半減期を有する、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０１２５】
ダイアボディは、二価性または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ（Ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）およびテトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）もまた、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載される。
【０１２６】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部分または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部分を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６  Ｂ１号を参照されたい）。
【０１２７】
抗体断片は、本明細書に記載される、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、種々の技法によって作製することができる。
【０１２８】
３．  キメラおよびヒト化抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載される。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類に由来する可変領域）およびヒト定常領域を含む。さらなる実施例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれから変更された、「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体には、それらの抗原結合断片が含まれる。
【０１２９】
ある特定の実施形態において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。任意にヒト化抗体はまた、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元するまたは改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０１３０】
ヒト化抗体およびそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説され、また例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、および同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記載する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチを記載する）にさらに記載される。
【０１３１】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、次のものが含まれるが、これらに限定されない：「最良適合（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、およびＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞株フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）およびＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３２】
４．  ヒト抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載される。
【０１３３】
ヒト抗体は、免疫原を、抗原投与に応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を含むインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に投与することによって、調製されてもよい。かかる動物は典型的に、内因性免役グロブリン遺伝子座を置き換える、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体中に無作為に組み込まれる、ヒト免役グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免役グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する）、米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する）、米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ  ２００７／００６１９００号（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する）を参照されたい。かかる動物によって生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾されてもよい。
【０１３４】
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞株およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、およびＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体もまた、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載される。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、およびＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）およびＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）にも記載される。
【０１３５】
ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって、生成されてもよい。かかる可変ドメイン配列は次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わされてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が、下に記載される。
【０１３６】
５．  ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、コンビナトリアルライブラリを、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてスクリーニングすることによって、単離されてもよい。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、かかるライブラリを、所望の結合特性を保有する抗体についてスクリーニングするための、多様な方法が当該技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、またさらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、およびＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載される。
【０１３７】
ある特定のファージディスプレイ法において、ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ中で無作為に組み換えられ、それを次いで、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは典型的に、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片としてまたはＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫された源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）、いかなる免疫化も伴わずに、広範な非自己抗原およびまた自己抗原に対する抗体の単一の源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、体外で再配列を達成することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリを記載する特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、および米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、および同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０１３８】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０１３９】
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有する、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの一方は、ＥＴＢＲに対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ＥＴＢＲの２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体をまた使用して、細胞傷害性薬剤を、ＥＴＢＲを発現する細胞に限局させてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
【０１４０】
多重特異性抗体を作製するための技法には、異なる特異性を有する２つの免役グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））、国際公開第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、および１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体を調製することによって、作製されてもよい。
【０１４１】
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、米国公開特許第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照されたい）。
【０１４２】
本明細書における抗体または断片にはまた、ＥＴＢＲならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」が含まれる（例えば、米国公開特許第２００８／００６９８２０号を参照されたい）。
【０１４３】
７．抗体変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異形が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。抗体のアミノ酸配列変異形は、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列中に導入することによって、またはペプチド合成によって、調製されてもよい。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、および／またはそこへ残基の挿入、および／またはその内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせを作製して、最終構築物に到達することができるが、但し、その最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合性を保有することを条件とする。
【０１４４】
ａ）  置換、挿入、および欠失変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異形が提供される。置換型突然変異生成に対する目的の部位には、ＨＶＲおよびＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例となる置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して下にさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され、産物が、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについて、スクリーニングされてもよい。
【表１】
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アミノ酸は、次の一般的な側鎖特性に従って分類されてもよい：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１４５】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うであろう。
【０１４６】
置換型変異形の１つの種類は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１個以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される、結果として生じる変異形（複数可）は、親抗体と比べて、ある特定の生物学的特性における修飾（例えば、改善）（例えば、増加した親和性、低減された免疫原性）を有することになり、および／または親抗体の、実質的に保持されたある特定の生物学的特性を有することになる。例となる置換型変異形は、例えば、本明細書に記載されるもの等のファージディスプレイベースの親和性成熟技法を使用して、好都合に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１個以上のＨＶＲ残基が突然変異させられ、変異形抗体がファージ上で提示され、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０１４７】
変化（例えば、置換）をＨＶＲにおいて行って、例えば、抗体親和性を改善してもよい。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、および／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行われてもよく、結果として生じる変異形ＶＨまたはＶＬが、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態において、多様性が、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性突然変異生成）のうちのいずれかによって、成熟のために選定された可変遺伝子中に導入される。二次ライブラリが次いで作り出される。ライブラリは次いで、所望の親和性を有する任意の抗体変異形を特定するために、スクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６個の残基）が無作為化される、ＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異生成またはモデリングを使用して、具体的に特定されてもよい。特にＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３が、しばしば標的とされる。
【０１４８】
ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、かかる変化が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減しない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的変化（例えば、本明細書に提供される保存的置換）が、ＨＶＲにおいて行われてもよい。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側にあってもよい。上に提供される変異形ＶＨおよびＶＬ配列のある特定の実施形態において、各ＨＶＲは、変化させられないか、またはわずか１つ、２つ、もしくは３つのアミノ酸置換を含有するにすぎないかのいずれかである。
【０１４９】
突然変異生成のための標的とされ得る、抗体の残基または領域の特定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって記載される、「アラニンスキャニング変異生成」と呼ばれるものである。この方法において、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ等の荷電残基）のうちのある残基または基が特定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体の抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の場所に導入されてもよい。代替的に、または追加的に、抗原−抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点が特定される。かかる接触残基および隣接する残基は、置換の候補として標的とされるか、または排除されてもよい。変異形をスクリーニングして、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定してもよい。
【０１５０】
アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲の長さである、アミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一のまたは多数のアミノ酸残基の配列内（ｉｎｔｒａｓｅｑｕｅｎｃｅ）挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入型変異形には、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端もしくはＣ末端への融合が含まれる。
【０１５１】
ｂ）  グリコシル化変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変化させられる。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるように、アミノ酸配列を変化させることによって、好都合に遂行されてもよい。
【０１５２】
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物が変化させられてもよい。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、典型的に、一般にＮ−結合によって、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖類には、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれる。いくつかの実施形態において、抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の改善された特性を有する抗体変異形を作り出すために行われてもよい。
【０１５３】
一実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的にまたは間接的に）結合されるフコースを欠いた炭水化物構造を有する、抗体変異形が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定するとき、Ａｓｎ  ２９７に結合した全ての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、および高マンノース構造）の合計と比べた、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を算出することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間にも位置する。かかるフコシル化変異形は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ  ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ  ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異形に関連する刊行物の例としては、米国公開特許第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国公開特許第２００３／０１１５６１４号、米国公開特許第２００２／０１６４３２８号、米国公開特許第２００４／００９３６２１号、米国公開特許第２００４／０１３２１４０号、米国公開特許第２００４／０１１０７０４号、米国公開特許第２００４／０１１０２８２号、米国公開特許第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ  ２００３／０１５７１０８  Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、および国際公開第２００４／０５６３１２  Ａ１号（Ａｄａｍｓら）（特に実施例１１で））、およびα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、および国際公開第２００３／０８５１０７号を参照されたい）が挙げられる。
【０１５４】
二分されたオリゴ糖類を有する、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖類がＧｌｃＮＡｃによって二分される、抗体変異形がさらに提供される。かかる抗体変異形は、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、および米国公開特許第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載される。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖類において少なくとも１個のガラクトース残基を有する、抗体変異形もまた提供される。かかる抗体変異形は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌ  ら）、国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、および国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載される。
【０１５５】
ｃ）  Ｆｃ領域変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによってＦｃ領域変異形を生成してもよい。Ｆｃ領域変異形は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含んでもよい。
【０１５６】
ある特定の実施形態において、本発明は、いくつかのエフェクター機能を保有するが、全てのエフェクター機能は保有せず、それにより、体内での抗体の半減期が重要であるが、なおもある特定のエフェクター機能（補体およびＡＤＣＣ等）が不必要または有害である場合の適用に対する望ましい候補となる、抗体変異形を企図する。体外および／または体内細胞傷害性アッセイを実行して、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（よって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページの表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するための体外アッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。代替的に、非放射性アッセイ法が用いられてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、およびＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー細胞が含まれる。代替的に、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、体内で、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるもの等の動物モデルにおいて、評価されてもよい。Ｃ１ｑ結合アッセイをまた行って、抗体がＣ１ｑに結合不可能であり、よってＣＤＣ活性を欠いていることを確認してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号および国際公開第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を���照されたい）。ＦｃＲｎ結合および体内クリアランス／半減期決定もまた、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０１５７】
低減されたエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、および３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、アラニンへの残基２６５および２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７、および３２７位のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる。
【０１５８】
ＦｃＲへの改善されたまたは減少した結合を有する、ある特定の抗体変異形が記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、国際公開第２００４／  ０５６３１２号、およびＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい）。
【０１５９】
ある特定の実施形態において、抗体変異形は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、および／または３３４位（残基のＥＵ付番）における置換を有する、Ｆｃ領域を含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、変化した（すなわち、改善されたかまたは減少したかのいずれか）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす変化が、Ｆｃ領域において行われる。
【０１６１】
母体ＩｇＧの胎児への移入に関与する、増加した半減期および新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）および  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、米国公開特許第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載される。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異形には、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものが含まれる。
【０１６２】
また、Ｆｃ領域変異形の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、および国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
【０１６３】
ｄ） システイン操作された抗体変異形
ある特定の実施形態において、抗体の１個以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオＭａｂ」を作り出すことが望ましい場合がある。特に実施形態において、置換残基は、抗体の利用しやすい部位において生じる。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基はそれによって、抗体の利用しやすい部位に位置付けられ、それを使用して、抗体を、薬物部分またはリンカー−薬物部分等の他の部分に複合して、本明細書にさらに記載される、免疫複合体を作り出してもよい。ある特定の実施形態において、次の残基のうちの任意の１個以上が、システインで置換されてもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）。非限定的な例となるシステイン操作された抗ＥＴＢＲ抗体の重鎖および軽鎖は、配列番号１８、１９、および２０に示される。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成されてもよい。
【０１６４】
ｅ）  抗体誘導体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐していても非分岐であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は、様々であってもよく、１つを超えるポリマーが結合される場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、改善対象の抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法において使用されるかどうか等を含むが、これらに限定されない考慮に基づいて、決定することができる。
【０１６５】
別の実施形態において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体および非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態において、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブ（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５）である。放射線は、任意の波長のものであってもよく、一般の細胞を害さないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞が死滅させられる温度まで加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６６】
Ｂ．  組み換え法および組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え法および組成物を使用して産生されてもよい。一実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＴＢＲ抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体を作製する方法が提供され、本方法は、上に提供される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
【０１６７】
抗ＥＴＢＲ抗体の組み換え産生のために、例えば、上述の、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニングおよび／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、慣例の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能である、オリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
【０１６８】
抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌において産生されてもよい。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、および同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、大腸菌における抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい）。発現後、抗体は、可溶性画分において細菌細胞ペーストから単離されてもよく、またさらに精製することができる。
【０１６９】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌および酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、およびＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０１７０】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために、使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０１７１】
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、および同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬ抗体（商標）技術を記載している）を参照されたい。
【０１７２】
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される、２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載される、ＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頚がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝がん細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載される、ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ  ５細胞；およびＦＳ４細胞がある。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０）を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹ０、ＮＳ０、およびＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０１７３】
Ｃ．  アッセイ
本明細書に提供される抗ＥＴＢＲ抗体は、それらの物理／化学特性および／または生物活性について、当該技術分野で既知の種々のアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
【０１７４】
一態様において、本発明の抗体は、その抗原結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ、またはウェスタンブロット等の既知の方法によって、試験される。
【０１７５】
別の態様において、競合アッセイを使用して、ＥＴＢＲへの結合に対して本明細書に記載される抗体のいずれかと競合する抗体を特定してもよい。ある特定の実施形態において、かかる競合抗体は、本明細書に記載される抗体によって結合される、同じエピトープ（例えば、直線状または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例となる方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
【０１７６】
例となる競合アッセイにおいて、固定化されたＥＴＢＲは、ＥＴＢＲに結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか）、およびＥＴＢＲへの結合に対して第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体を含む、溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＥＴＢＲが、第１の標識抗体を含むが、第２の未標識抗体を含まない、溶液中でインキュベートされる。ＥＴＢＲへの第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰の非結合抗体が除去され、固定化されたＥＴＢＲに関連する標識の量が測定される。固定化されたＥＴＢＲに関連する標識の量が、対照試料と比べて試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＥＴＢＲへの結合に対して第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０１７７】
Ｄ．  免疫複合体
本発明はまた、本明細書において、化学療法剤もしくは化学療法薬、成長阻害性薬剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体（すなわち、放射性物質複合体（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））等の、１つ以上の細胞傷害性薬剤に複合される抗ＥＴＢＲ抗体を含む、免疫複合体も提供する。
【０１７８】
免疫複合体は、腫瘍への薬物部分の標的化された送達を可能にし、いくつかの実施形態においては、複合されていない薬物の全身投与が、正常な細胞にとって許容できないレベルの毒性をもたらし得る場合に、腫瘍中の細胞内蓄積を可能にする（Ｐｏｌａｋｉｓ  Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ５：３８２−３８７）。
【０１７９】
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、強力な細胞傷害性薬物の標的を抗原発現腫瘍細胞に定め（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ９：９８２−１００４）、それによって、有効性を最大限にし、オフターゲット毒性を最小限にすることにより治療指数を増強することによって、抗体および細胞傷害性薬物の両方の特性を組み合わる、標的を定められた化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓｅｎｔｅｒ  Ｐ．Ｄ．（２００８）Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４−１６９、Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．（２００８）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１：９８−１０７。
【０１８０】
本発明のＡＤＣ化合物には、抗がん活性を有するものが含まれる。いくつかの実施形態において、ＡＤＣ化合物には、薬物部分に複合された、すなわち、共有結合された、抗体が含まれる。いくつかの実施形態において、本抗体は、リンカーを通じて薬物部分に共有結合される。本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、有効用量の薬物を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、より高い選択性、すなわちより低い効果的用量が、達成され得る。
【０１８１】
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の薬物部分（Ｄ）は、細胞傷害性または細胞静止効果を有する任意の化合物、部分、または基を含んでもよい。例となる薬物部分には、細胞傷害性活性を有する、ＰＮＵ−１５９６８２等の、ネモルビシンおよびその誘導体が含まれるが、これらに限定されない。かかる免疫複合体の非限定的な例が、下にさらに詳細に考察される。
【０１８２】
１．  例となる抗体−薬物複合体
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物の例となる実施形態は、腫瘍細胞を標的とする抗体（Ａｂ）、薬物部分（Ｄ）、およびＡｂをＤに結合するリンカー部分（Ｌ）を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、リジンおよび／またはシステイン等の１個以上のアミノ酸残基を通じて、リンカー部分（Ｌ）に結合される。
【０１８３】
例となるＡＤＣは、式Ｉ、
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐＩ
を有し、式中、ｐは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、抗体に複合され得る薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって限定される。いくつかの実施形態において、遊離システイン残基は、本明細書に記載される方法によって抗体アミノ酸配列中に導入される。式Ｉの例となるＡＤＣには、１、２、３、または４個の操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が含まれるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３−１３８）。いくつかの実施形態において、１個以上の遊離システイン残基が、操作を使用することなく、抗体においてすでに存在しており、その場合、既存の遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物に複合してもよい。いくつかの実施形態において、本抗体は、１個以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体の複合前に還元条件に曝露される。
【０１８４】
ａ）  例となるリンカー
「リンカー」（Ｌ）は、１個以上の薬物部分（Ｄ）を抗体（Ａｂ）に連結して、式Ｉの抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を形成するために使用することができる、二機能性または多機能性部分である。いくつかの実施形態において、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、薬物におよび抗体に共有結合するための反応性官能基を有するリンカーを使用して、調製することができる。例えば、いくつかの実施形態において、抗体の（Ａｂ）システインチオールは、リンカーの反応性官能基または薬物−リンカー中間体との結合を形成して、ＡＤＣを作製することができる。
【０１８５】
一態様において、リンカーは、抗体上に存在する遊離システインと反応して、共有結合を形成することが可能である、官能性を有する。非限定的な例となるかかる反応性官能基には、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、コハク酸イミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル等の活性化エステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアン酸塩、およびイソチオシアン酸塩が含まれる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ  ａｌ（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １５（４）：７６５−７７３の７６６ページにおける複合方法、およびその中の実施例を参照されたい。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、リンカーは、抗体上に存在する求電子基と反応することが可能である、官能性を有する。例となるかかる求電子基には、アルデヒド基およびケトンカルボニル基が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子が、抗体上の求電子基と反応し、抗体単位との共有結合を形成することができる。非限定的な例となるかかる反応性官能基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、およびアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。
【０１８７】
リンカーは、１つ以上のリンカー構成要素を含んでもよい。例となるリンカー構成要素には、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ−コハク酸イミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタン酸塩（「ＳＰＰ」）、および４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボン酸塩（「ＭＣＣ」）が含まれる。種々のリンカー構成要素が当該技術分野で知られており、このうちのいくつかが下に記載される。
【０１８８】
リンカーは、薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。非限定的な例となる切断可能なリンカーには、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンを含む）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、感光性リンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）、米国公開特許第５２０８０２０号）が含まれる。
【０１８９】
ある特定の実施形態において、リンカーは、次の式ＩＩ、
2015529656.tif 000011
を有し、式中、Ａは、「ストレッチャー（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）単位」であり、ａは、０〜１の整数であり、Ｗは、「アミノ酸単位」であり、ｗは、０〜１２の整数であり、Ｙは、「スペーサ単位」であり、ｙは、０、１、または２である。式ＩＩのリンカーを含むＡＤＣは、式Ｉ（Ａ）、すなわちＡｂ−（Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−Ｄ）ｐを有し、式中、Ａｂ、Ｄ、およびｐは、式Ｉについて上にあるように定義される。かかるリンカーの例となる実施形態は、米国特許第７，４９８，２９８号に記載され、それは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、抗体を別のリンカー構成要素にまたは薬物部分に連結する、「ストレッチャー単位」（Ａ）を含む。非限定的な例となるストレッチャー単位が下に示される（ここで波線は、抗体、薬物、または追加のリンカー構成要素への共有結合の部位を示す）：
2015529656.tif 000012
【０１９１】
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、「アミノ酸単位」（Ｗ）を含む。いくつかのかかる実施形態において、アミノ酸単位は、プロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、それによって、リソソーム酵素等の細胞内プロテアーゼへの曝露時に免疫複合体からの薬物の放出を容易にする（Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８−７８４）。例となるアミノ酸単位には、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、およびペンタペプチドが含まれるが、これらに限定されない。例となるジペプチドには、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）、フェニルアラニン−リジン（ｆｋまたはｐｈｅ−ｌｙｓ）、フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）、およびＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が含まれるが、これらに限定されない。例となるトリペプチドには、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）およびグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれるが、これらに限定されない。アミノ酸単位は、自然発生アミノ酸残基、ならびに／または微量アミノ酸、および／もしくはシトルリン等の非自然発生アミノ酸類似体を含んでもよい。アミノ酸単位は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、およびＤ、またはプラスミンプロテアーゼによる、酵素的切断のために設計し、最適化することができる。
【０１９２】
典型的に、ペプチド型リンカーは、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって、調製することができる。かかるペプチド結合は、例えば、液相合成法に従って、調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒoｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．Ｌuｂｋｅ（１９６５）“Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ  ７６−１３６，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、直接、またはストレッチャー単位および／もしくはアミノ酸単位を通じてのいずれかで、抗体を薬物部分に連結する、「スペーサ単位」（Ｙ）を含む。スペーサ単位は、「自己犠牲型（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）」または「非自己犠牲型」であり得る。「非自己犠牲型」スペーサ単位は、ＡＤＣの切断時にスペーサ単位の一部または全てが薬物部分に結合したままであるものである。非自己犠牲型スペーサ単位の例としては、グリシンスペーサ単位およびグリシン−グリシンスペーサ単位が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞関連プロテアーゼによる、グリシン−グリシンスペーサ単位を含有するＡＤＣの酵素的切断は、ＡＤＣの残りの部分からのグリシン−グリシン−薬物部分の放出をもたらす。いくつかのかかる実施形態において、グリシン−グリシン−薬物部分は、腫瘍細胞内で加水分解ステップを受け、故にグリシン−グリシンスペーサ単位を薬物部分から切断する。
【０１９４】
「自己犠牲型」スペーサ単位は、薬物部分の放出を可能にする。ある特定の実施形態において、リンカーのスペーサ単位は、ｐ−アミノベンジル単位を含む。いくつかのかかる実施形態において、ｐ−アミノベンジルアルコールは、アミド結合を介してアミノ酸単位に結合し、カルバミン酸塩、メチルカルバミン酸塩、または炭酸塩が、ベンジルアルコールと薬物との間に作製される（Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００５）１５：１０８７−１１０３）。いくつかの実施形態において、スペーサ単位は、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態において、自己犠牲型リンカーを含むＡＤＣは、構造、
2015529656.tif 000013
を有し、式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロ、または−シアノであり、ｍは、０〜４範囲の整数であり、Ｘは、１つ以上の追加のスペーサ単位であり得るか、または不在であり得、ｐは、１〜約２０の範囲である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４の範囲である。非限定的な例となるＸスペーサ単位には、
2015529656.tif 000014
式中、Ｒ１およびＲ２は独立して、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は各々、−ＣＨ３である。
【０１９５】
自己犠牲型スペーサの他の例としては、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体等の、ＰＡＢ基と電子的に同様である芳香族化合物（米国特許第７，３７５，０７８号、Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）およびオルト−またはパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、置換および非置換４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ  ｅｔ  ａｌ（１９７２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）、ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）等の、アミド結合加水分解時に環化を経るスペーサを使用することができる。グリシン残基のα−炭素への薬物の結合は、ＡＤＣにおいて有用であり得る自己犠牲型スペーサの別の例である（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、リンカーＬは、分岐する多機能性リンカー部分を通じた、抗体への１つを超える薬物部分の共有結合のための、樹状型リンカーであり得る（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：２２１３−２２１５、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１：１７６１−１７６８）。樹状リンカーは、ＡＤＣの効力に関連する、薬物対抗体のモル比、すなわち、負荷を増加させることができる。故に、抗体が１個のみの反応性システインチオール基を担持する場合、多数の薬物部分が、樹状リンカーを通じて結合され得る。
【０１９７】
非限定的な例となるリンカーが、式ＩのＡＤＣの関連において下に示される：
2015529656.tif 000015
（式中、Ｒ１およびＲ２は独立して、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は各々、−ＣＨ３である。
2015529656.tif 000016
（式中、ｎは、０〜１２である）。いくつかの実施形態において、ｎは、２〜１０である。いくつかの実施形態において、ｎは、４〜８である。
【０１９８】
さらなる非限定的な例となるＡＤＣには、次の構造が含まれる：
2015529656.tif 000017
各Ｒは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、ｎは、１〜１２である）。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、リンカーは、溶解度および／または反応性を調節する基で置換される。非限定的な例として、スルホン酸塩（−ＳＯ３−）またはアンモニウム等の荷電置換基は、リンカー試薬の水溶性を増加させ、抗体および／もしくは薬物部分とのリンカー試薬のカップリング反応を促進し得るか、またはＡＤＣを調製するために用いられる合成経路に応じて、ＤとのＡｂ−Ｌ（抗体−リンカー中間体）、もしくはＡｂとのＤ−Ｌ（薬物−リンカー中間体）のカップリング反応を促進し得る。いくつかの実施形態において、リンカーの一部分が抗体にカップリングされ、リンカーの一部分が薬物にカップリングされ、次いでＡｂ−（リンカー部分）ａが薬物−（リンカー部分）ｂにカップリングされて、式ＩのＡＤＣを形成する。
【０２００】
本発明の化合物は、次のリンカー試薬、すなわちビス−マレイミド−トリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）コハク酸イミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］コハク酸イミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、コハク酸イミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロン酸塩）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、コハク酸イミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオン酸塩（ＳＢＡＰ）、コハク酸イミジルヨード酢酸塩（ＳＩＡ）、コハク酸イミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ＳＩＡＢ）、Ｎ−コハク酸イミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、Ｎ−コハク酸イミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタン酸塩（ＳＰＰ）、コハク酸イミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、コハク酸イミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸塩（ＳＭＰＢ）、コハク酸イミジル６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサン酸塩］（ＳＭＰＨ）、イミノチオラン（ＩＴ）、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、およびスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにコハク酸イミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩（ＳＶＳＢ）を用いて、また次のビス−マレイミド試薬、すなわちジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）２（下に示される）、およびＢＭ（ＰＥＧ）３（下に示される）；イミドエステルの二機能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムンゾイル等）−エチレンジアミン）、ジイソシアン酸塩（トルエン２，６−ジイソシアン酸塩等）、およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）を含めて、調製される、ＡＤＣを明示的に企図するが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ビス−マレイミド試薬は、チオール含有薬物部分、リンカー、またはリンカー−薬物中間体への、抗体におけるシステインのチオール基の結合を可能にする。チオール基と反応性である他の官能基には、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアン酸塩、およびイソチオシアン酸塩が含まれるが、これらに限定されない。
2015529656.tif 000018
【０２０１】
ある特定の有用なリンカー試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）等の、種々の商業的供給源から得るか、または当該技術分野において、例えば、Ｔｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：５２５７−６０、Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：５３５２−５３５５、Ｆｒｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．７：１８０−１８６、米国公開特許第６２１４３４５号、国際公開第０２／０８８１７２号、米国公開特許第２００３１３０１８９号、米国公開特許第２００３０９６７４３号、国際公開第０３／０２６５７７号、国際公開第０３／０４３５８３号、および国際公開第０４／０３２８２８号に記載される手順に従って、合成することができる。
【０２０２】
炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの複合のための、例となるキレート剤である。例えば、国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。
【０２０３】
ｂ）  例となる薬物部分
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、アントラサイクリンを含む。アントラサイクリンは、細胞傷害性活性を示す抗生物質化合物である。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、研究は、アントラサイクリンが、１）細胞のＤＮＡ中への薬物分子のインターカレーションによって、ＤＮＡ依存性核酸合成を阻害すること、２）薬物により遊離ラジカルが産生され、それが次いで細胞巨大分子と反応して、細胞への損傷を引き起こすこと、および／または３）薬物分子の細胞膜との相互作用を含む、いくつかの異なる機構によって、細胞を死滅させるように作動し得ることを示してきた（例えば、Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  Ａｎｄ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｏｆ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ”  ｉｎ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ；Ｎ．Ｒ．Ｂａｃｈｕｒ，“Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｄａｍａｇｅ”  ｉｄ．ａｔ  ｐｐ．９７−１０２を参照されたい）。それらの細胞傷害性の可能性のために、アントラサイクリンは、白血病、乳がん、肺がん腫、卵巣腺がん、および肉腫等の多数のがんの治療において使用されてきた（例えば、Ｐ．Ｈ−  Ｗｉｅｒｎｉｋ，ｉｎ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ  Ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｐ  １１を参照されたい）。
【０２０４】
非限定的な例となるアントラサイクリンには、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノマイシン、ネモルビシン、およびそれらの誘導体が含まれる。ダウノルビシンおよびドキソルビシンの免疫複合体およびプロドラッグが、調製され、研究されてきた（Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３、Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８−３６２、Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１２：１５２９−１５３２、Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３、欧州特許第０３２８１４７号、米国公開特許第６６３０５７９号）。抗体−薬物複合体ＢＲ９６−ドキソルビシンは、腫瘍関連抗原Ｌｅｗｉｓ−Ｙと特異的に反応し、第Ｉ相およびＩＩ相研究において評価されてきた（Ｓａｌｅｈ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １８：２２８２−２２９２、Ａｊａｎｉ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．６：７８−８１、Ｔｏｌｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ１７：４７８−４８４）。
【０２０５】
ＰＮＵ−１５９６８２は、ネモルビシンの強力な代謝産物（または誘導体）である（Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １１（４）：１６０８−１６１７）。ネモルビシンは、ドキソルビシンのグリコシドアミノ上に２−メトキシモルホリノ基を有する、ドキソルビシンの半合成類似体であり、臨床評価段階にあり（Ｇｒａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．１７：１３３、Ｒｉｐａｍｏｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ６５：７０３；）、それには肝細胞癌に対する第ＩＩ／ＩＩＩ相治験が含まれる（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２２，Ａｂｓ１４４８、Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４：１ｓｔ  Ｅｄ，Ａｂｓ  ４６４９、Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｊｏｕｒ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２４：１４１１６）。
【０２０６】
ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含む非限定的な例となるＡＤＣは、式Ｉａ、
2015529656.tif 000019
に示され、式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、またはメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基であるか、またはその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ１およびＺは共に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は両方とも、メトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０２０８】
ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含むさらなる非限定的な例となるＡＤＣは、式Ｉｂ、
2015529656.tif 000020
に示され、式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、またはメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基であるか、またはその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ２およびＺは共に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は両方とも、メトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、ネモルビシン含有ＡＤＣのネモルビシン構成要素は、ＰＮＵ−１５９６８２である。いくつかのかかる実施形態において、ＡＤＣの薬物部分は、次の構造のうちの１つを有し得る：
2015529656.tif 000021
（式中、波線は、リンカー（Ｌ）への結合を示す）。
【０２１１】
ＰＮＵ−１５９６８２を含む、アントラサイクリンは、数個の結合部位、および本明細書に記載されるリンカーを含む多様なリンカー（米国公開特許第２０１１／００７６２８７号、国際公開第２００９／０９９７４１号、米国公開特許第２０１０／００３４８３７号、国際公開第２０１０／００９１２４号）を通じて、抗体に複合されてもよい。 
【０２１２】
ネモルビシンおよびリンカーを含む例となるＡＤＣには、次のものが含まれるが、これらに限定されない：
2015529656.tif 000022
2015529656.tif 000023
【０２１３】
ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂのリンカーは、酸不安定性である一方で、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサ−Ａｂ、およびＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサ（Ｒ１Ｒ２）−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能である。
【０２１４】
ｃ）  薬物負荷
薬物負荷は、式Ｉの分子における１抗体当たりの薬物部分の平均数である、ｐによって表される。薬物負荷は、１抗体当たり１〜２０個の薬物部分（Ｄ）の範囲であり得る。式ＩのＡＤＣは、１〜２０個の範囲の薬物部分と共に複合された抗体の集団を含む。複合反応からのＡＤＣの調製における、１抗体当たりの薬物部分の平均数は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、およびＨＰＬＣ等の従来の手段によって特徴付けられてもよい。ｐの単位でのＡＤＣの定量分布がまた決定されてもよい。いくつかの事例において、ｐがある特定の値である同種のＡＤＣの、他の薬物負荷を有するＡＤＣからの分離、精製、および特性評価は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動等の手段によって達成されてもよい。
【０２１５】
いくつかの抗体−薬物複合体について、ｐは、抗体上の結合部位の数によって限定され得る。例えば、上のある特定の例となる実施形態にあるように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１個のみもしくは数個のシステインチオール基を有し得るか、または、１個のみもしくは数個の十分に反応性のチオール基を有し得、それを通じてリンカーが結合され得る。ある特定の実施形態において、より高い薬物負荷、例えば、５超のｐは、ある特定の抗体−薬物複合体において凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。ある特定の実施形態において、ＡＤＣについての平均薬物負荷は、１〜約８、すなわち約２〜約６、または約３〜約５の範囲である。実際、ある特定のＡＤＣについて、１抗体当たりの薬物部分の最適な比率は、８未満であり得、また約２〜約５であり得ることが示されてきた（米国公開特許第７４９８２９８号）。
【０２１６】
ある特定の実施形態において、理論上の最大数よりも少ない薬物部分が、複合反応中に抗体に複合される。抗体は、下に考察されるように、例えば、薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しないリジン残基を含有し得る。一般に、抗体は、薬物部分に連結し得る多くの遊離および反応性システインチオール基を含有せず、実際、抗体におけるほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態において、抗体は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤により、部分または完全還元条件下で還元されて、反応性システインチオール基を生成し得る。ある特定の実施形態において、本抗体は、リジンまたはシステイン等の反応性求核基を現わすために、変性条件に供される。
【０２１７】
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、異なる方式で、ならびに例えば、（ｉ）抗体と比べてモル過剰の薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬を限定すること、（ｉｉ）複合反応時間または温度を限定すること、および（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分または限定的還元条件によって、制御されてもよい。
【０２１８】
１個を超える求核基が薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応する場合、結果として生じる生成物は、１個以上の薬物部分の分布が抗体に結合した、ＡＤＣ化合物の混合物であることを理解されたい。１抗体当たりの平均数薬物は、抗体に特異的および薬物に特異的である、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から算出されてもよい。個々のＡＤＣ分子は、質量分析法によって混合物中で特定され、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、分離されてもよい（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  １９（７）：２９９−３０７、Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４、Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４を参照されたい）。ある特定の実施形態において、単一の負荷値を有する同種のＡＤＣが、電気泳動またはクロマトグラフィーによって複合混合物から単離されてもよい。
【０２１９】
ｄ）  免疫複合体を調製するある特定の方法
式ＩのＡＤＣは、（１）抗体の求核基を二価リンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＡｂ−Ｌを形成し、続いて薬物部分Ｄと反応させることと、（２）薬物部分の求核基を二価リンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＤ−Ｌを形成し、続いて抗体の求核基と反応させることとを含む、いくつかの経路によって、当業者に既知の有機化学反応、条件、および試薬を用いて調製されてもよい。後者の経路を介して式ＩのＡＤＣを調製するための例となる方法は、米国公開特許第７４９８２９８号に記載され、それは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０２２０】
抗体上の求核基には、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えば、リジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えば、システイン、および（ｉｖ）抗体がグリコシル化される糖ヒドロキシルまたはアミノ基が含まれるが、これらに限定されない。アミン、チオール、およびヒドロキシル基は、求核性であり、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート（ｈａｌｏｆｏｒｍａｔｅｓ）、および酸ハロゲン化物等の、活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキルおよびベンジルハロゲン化物、ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、およびマレイミド基を含む、リンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能である。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体は、抗体が完全または部分還元されるように、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤での処理によって、リンカー試薬との複合に対して反応性にされ得る。各システイン架橋はこのようにして、理論上、２つの反応性のチオール求核剤を形成するであろう。追加の求核基は、リジン残基の修飾を通じて、例えば、リジン残基を２−イミノチオラン（トラウト試薬（Ｔｒａｕｔ’ｓ  ｒｅａｇｅｎｔ））と反応させて、アミンのチオールへの変換をもたらすことによって、抗体中に導入することができる。反応性のチオール基もまた、１個、２個、３個、４個、またはそれよりも多いシステイン残基を導入することによって（例えば、１個以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異形抗体を調製することによって）、抗体中に導入され得る。
【０２２１】
本発明の抗体−薬物複合体はまた、アルデヒドまたはケトンカルボニル基等の抗体上の求電子基と、リンカー試薬または薬物上の求核基との間の反応によって産生されてもよい。リンカー試薬上の有用な求核基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、およびアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、本抗体は、リンカー試薬または薬物上の求核置換基と反応可能である求電子部分を導入するように修飾される。別の実施形態において、グリコシル化抗体の糖を、例えば、過ヨウ素酸塩酸化試薬で酸化させて、リンカー試薬または薬物部分のアミン基と反応し得るアルデヒド基またはケトン基を形成してもよい。結果として生じるイミンシッフ塩基群は、安定した結合を形成し得るか、または例えば、水素化ホウ素試薬によって還元されて、安定したアミン結合を形成し得る。一実施形態において、グリコシル化された抗体の炭水化物部分の、ガラクトースオキシダーゼまたはメタ過ヨウ素酸ナトリウムのいずれかとの反応は、抗体において、薬物上の適切な基と反応することができるカルボニル（アルデヒドおよびケトン）基を生み出し得る（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）。別の実施形態において、Ｎ末端セリンまたはスレオニン残基を含有する抗体は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応して、第１のアミノ酸の代わりにアルデヒドの産生をもたらすことができる（Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ＆Ｓｔｒｏｈ、（１９９２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：１３８−１４６、米国公開特許第５３６２８５２号）。かかるアルデヒドは、薬物部分またはリンカー求核剤と反応させることができる。
【０２２２】
薬物部分上の例となる求核基には、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物等の、活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキルおよびベンジルハロゲン化物、ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、およびマレイミド基を含む、リンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能な、アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、およびアリールヒドラジド基が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２３】
ＡＤＣを調製するために使用され得る、非限定的な例となるクロスリンカー試薬は、本明細書における「例となるリンカー」と題される節に記載される。かかるクロスリンカー試薬を使用して、タンパク質性部分および化学部分を含む、２つの部分を連結する方法は、当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、抗体および細胞傷害性薬剤を含む融合タンパク質は、例えば、組み換え技法またはペプチド合成によって作製されてもよい。組み換えＤＮＡ分子は、互いに隣接しているか、または複合体の所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって隔離されているかのいずれかの、複合体の抗体および細胞傷害性部分をコードする領域を含んでもよい。
【０２２４】
なおも別の実施形態において、抗体は、腫瘍の事前標的化（ｐｒｅ−標的ｉｎｇ）において利用するために「受容体」（ストレプトアビジン等）に複合されてもよく、その腫瘍の事前標的化において抗体−受容体複合体が、患者に投与され、続いて除去剤を使用した血液循環からの非結合複合体の除去、次いで細胞傷害性薬剤（例えば、薬物または放射性ヌクレオチド）に複合されている「リガンド」（例えば、アビジン）の投与が行われる。
【０２２５】
Ｅ．  診断および検出のための方法および組成物
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗ＥＴＢＲ抗体のいずれも、生体試料中のＥＴＢＲの存在を検出するために有用である。本明細書で使用される「検出すること」という用語は、定量または定性検出を包含する。「生体試料」は、例えば、細胞または組織（例えば、黒色腫を有するかまたはそれを有することが疑われる対象からの組織を含む、癌性のまたは癌性の可能性がある皮膚組織を含む、生検材料）を含む。
【０２２６】
一実施形態において、診断または検出方法において使用するための抗ＥＴＢＲ抗体が提供される。さらなる態様において、生体試料中のＥＴＢＲの存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態において、本方法は、生体試料を、本明細書に記載される抗ＥＴＢＲ抗体と、ＥＴＢＲへの抗ＥＴＢＲ抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、複合体が、生体試料中で、抗ＥＴＢＲ抗体とＥＴＢＲとの間で形成されるかどうかを検出することとを含む。かかる方法は、体外方法であっても、体内方法であってもよい。一実施形態において、例えば、ＥＴＢＲが患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗ＥＴＢＲ抗体を使用して、抗ＥＴＢＲ抗体での治療法にふさわしい対象を選択する。さらなる実施形態において、生体試料は、例えば、細胞または組織（例えば、黒色腫を有するかまたはそれを有することが疑われる対象の組織を含む、癌性のまたは癌性の可能性がある皮膚組織を含む）である。
【０２２７】
さらなる実施形態において、抗ＥＴＢＲ抗体は、例えば、がんを診断する、がんの予後を判定する、もしくはがんを病期分類する、適切な治療過程を決定する、または治療法に対するがんの反応を監視する目的のために、体内で使用されて、例えば、体内画像法によって、対象におけるＥＴＢＲ陽性がんを検出する。体内検出のための当該技術分野で既知の１つの方法は、例えば、ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  １２：１３７９−１３８９（２００７）およびＶｅｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載される、免疫−陽電子放出断層撮影（免疫−ＰＥＴ）である。かかる実施形態において、対象においてＥＴＢＲ陽性がんを検出するための方法が提供され、本方法は、標識された抗ＥＴＢＲ抗体を、ＥＴＢＲ陽性がんを有するかまたはそれを有することが疑われる対象に投与することと、対象における標識された抗ＥＴＢＲ抗体を検出することとを含み、その標識された抗ＥＴＢＲ抗体の検出は、対象におけるＥＴＢＲ陽性がんを示す。かかる実施形態のある特定のものにおいて、標識された抗ＥＴＢＲ抗体は、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、および１２４Ｉ等の陽電子放出体に複合される抗ＥＴＢＲ抗体を含む。特定の実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【０２２８】
さらなる実施形態において、診断または検出方法は、基質に固定化された第１の抗ＥＴＢＲ抗体を、ＥＴＢＲの存在について試験されるべき生体試料と接触させることと、その基質を第２の抗ＥＴＢＲ抗体に曝露することと、その第２の抗ＥＴＢＲが、生体試料中で、第１の抗ＥＴＢＲ抗体とＥＴＢＲとの間の複合体に結合されるかどうかを検出することとを含む。基質は、任意の支持培地、例えば、ガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ、および他の基質であってもよい。ある特定の実施形態において、生体試料は、細胞または組織（例えば、黒色腫を有するかまたはそれを有することが疑われる対象からの組織を含む、癌性のまたは癌性の可能性がある皮膚組織を含む、生検材料）を含む。ある特定の実施形態において、第１または第２の抗ＥＴＢＲ抗体は、本明細書に記載される抗体のいずれかである。
【０２２９】
上の実施形態のいずれかにより診断または検出され得る、例となる障害には、ＥＴＢＲ陽性黒色腫等の、ＥＴＢＲ陽性がんが含まれる。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、「０」（腫瘍細胞の９０％超における非常に弱いまたはゼロの染色に対応する）を超える、抗ＥＴＢＲ免疫組織化学（ＩＨＣ）スコアを受けるがんである。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、１＋、２＋、または３＋レベルでＥＴＢＲを発現し、ここで１＋は、新生物細胞の５０％超における弱い染色に対応し、２＋は、新生物細胞の５０％超における中程度の染色に対応し、３＋は、新生物細胞の５０％超における強い染色に対応する。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、インサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）アッセイに従って、ＥＴＢＲを発現するがんである。いくつかのかかる実施形態において、ＩＨＣについて使用されるものと同様のスコアリング体系が使用される。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、ＥＴＢＲ  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、ＥＴＢＲを発現するがんである。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０２３０】
ある特定の実施形態において、標識された抗ＥＴＢＲ抗体が提供される。標識には、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、および放射性標識等）、ならびに例えば、酵素反応または分子相互作用を通じて、間接的に検出される酵素またはリガンド等の部分が含まれるが、これらに限定されない。例となる標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、および１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセインおよびその誘導体等のフルオロフォア、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、およびグルコース−６−リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼ等の複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態において、標識は、陽電子放出体である。陽電子放出体には、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、および１２４Ｉが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【０２３１】
Ｆ．  医薬製剤
本明細書に記載されるＥＴＢＲ抗体または免疫複合体の医薬製剤抗は、所望の程度の純度を有するかかる抗体または免疫複合体を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量および濃度で、受容者に対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム等；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免役グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート薬剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。本明細書における例となる薬学的に許容される担体には、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の、介在性（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例となるｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
【０２３２】
例となる凍結乾燥抗体または免疫複合体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載される。水性抗体または免疫複合体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号および国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されるものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０２３３】
本明細書における製剤はまた、治療されている特定の適応症に対する必要に応じて、１つを超える活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。
【０２３４】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製される、マイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）中またはマクロエマルション中の、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に、封入されてもよい。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示される。
【０２３５】
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例としては、抗体または免疫複合体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、そのマトリクスは、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
【０２３６】
体内投与のために使用されるべき製剤は、一般に滅菌されている。滅菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、容易に遂行され得る。
【０２３７】
Ｇ．  治療方法および組成物
本明細書に提供される抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体のいずれも、方法、例えば、治療方法において使用され得る。
【０２３８】
一態様において、本明細書に提供される抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体は、ＥＴＢＲ陽性細胞の増殖を阻害する方法において使用され、本方法は、細胞を、抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体に、細胞の表面上のＥＴＢＲへの抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。ある特定の実施形態において、本方法は、体外方法または体内方法である。いくつかの実施形態において、細胞は、黒色腫細胞である。
【０２３９】
体外での細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイを使用してアッセイされてもよい。そのアッセイは、代謝的に活性な細胞を示す、存在するＡＴＰの定量に基づいて、培養物中の生存細胞の数を決定する。Ｃｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７号を参照されたい。アッセイは、自動化高処理スクリーニング（ＨＴＳ）を受けやすくする、９６ウェルまたは３８４ウェル形式で行われてもよい。Ｃｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを伴う。これは、細胞溶解およびルシフェラーゼ反応によって生み出される発光シグナルの生成をもたらす。発光シグナルは、培養物中に存在する生存細胞の数に直接比例する、存在するＡＴＰの量に比例する。データは、ルミノメーターまたはＣＣＤカメラ画像化デバイスによって記録することができる。発光出力は、相対発光量（ＲＬＵ）として表される。
【０２４０】
別の態様において、薬として使用するための抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体が提供される。さらなる態様において、治療方法において使用するための抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんを治療することにおいて使用するための抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、ＥＴＢＲ陽性がんを有する個体を治療する方法において使用するための抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体を提供し、本方法は、個体に、有効量の抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、例えば、下に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
【０２４１】
さらなる態様において、本発明は、薬の製造または調製における、抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体の使用を提供する。一実施形態において、薬は、ＥＴＢＲ陽性がんの治療のためのものである。さらなる実施形態において、薬は、ＥＴＢＲ陽性がんを治療する方法において使用するためのものであり、本方法は、ＥＴＢＲ陽性がんを有する個体に、有効量の薬を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、例えば、下に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
【０２４２】
さらなる態様において、本発明は、ＥＴＢＲ陽性がんを治療するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、かかるＥＴＢＲ陽性がんを有する個体に、有効量の抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
【０２４３】
上の実施形態のいずれかによるＥＴＢＲ陽性がんは、例えば、黒色腫であり得る。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、「０」（腫瘍細胞の９０％超における非常に弱いまたはゼロの染色に対応する）を超える、抗ＥＴＢＲ免疫組織化学（ＩＨＣ）またはインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受けるがんである。別の実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、１＋、２＋、または３＋レベルでＥＴＢＲを発現し、ここで１＋は、新生物細胞の５０％超における弱い染色に対応し、２＋は、新生物細胞の５０％超における中程度の染色に対応し、３＋は、新生物細胞の５０％超における強い染色に対応する。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、ＥＴＢＲ  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、ＥＴＢＲを発現するがんである。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんを有する個体を治療する方法が提供され、このＥＴＢＲ陽性がんは、第１の治療薬に対して耐性である。いくつかの実施形態において、本方法は、個体に、ＥＴＢＲに結合する抗体を含む有効量の免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＥＴＢＲ陽性がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＥＴＢＲ以外の抗原に結合する第１の抗体を含む。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、ＥＴＢＲ以外の抗原に結合する第１の抗体と、第１の細胞傷害性薬剤とを含む、第１の免疫複合体である。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、メラニン細胞タンパク質ＰＭＥＬ１７、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ）から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する。いくつかの実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤およびＥＴＢＲに結合する抗体を含む免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、異なる。いくつかのかかる実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥ、カリケアマイシン、およびピロロベンゾジアゼピンから選択される。いくつかのかかる実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥであり、ＥＴＢＲに結合する抗体を含む免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン誘導体である。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、第１の抗体は、ＥＴＢＲに結合する。いくつかのかかる実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥ、カリケアマイシン、およびピロロベンゾジアゼピンから選択され、本明細書に記載される免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン誘導体である。いくつかの実施形態において、第１の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥであり、本明細書に記載される免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ネモルビシン誘導体である。
【０２４６】
いくつかの実施形態において、がんを有する個体を治療する方法が提供され、このがんは、第１の治療薬に対して耐性である。いくつかの実施形態において、第１の治療薬は、第１のリンカーを通じて第１の細胞傷害性薬剤に連結された第１の抗体を含む、第１の免疫複合体である。いくつかの実施形態において、第１の治療薬（第１の免疫複合体等）に対して耐性であるがんを有する個体を治療する方法は、第２のリンカーを通じて第２の細胞傷害性薬剤に連結された第２の抗体を含む、第２の免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、異なる抗原に結合し、第１の細胞傷害性薬剤および第２の細胞傷害性薬剤は、同じであるか、または異なる。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、同じ細胞のうちの少なくともいくつかの上に存在する、異なる抗原に結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、異なる抗原に結合し、第１の細胞傷害性薬剤および第２の細胞傷害性薬剤は、異なる。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、同じ抗原に結合し、第１の細胞傷害性薬剤および第２の細胞傷害性薬剤は、異なる。前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第１のリンカーおよび第２のリンカーは、同じであっても、異なってもよい。いくつかの実施形態において、第１の抗体および第２の抗体は、異なる抗原に結合し、第１および第２のリンカーは、異なり、第１および第２の細胞傷害性薬剤は、異なる。
【０２４７】
上の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０２４８】
さらなる態様において、本発明は、例えば、上の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体のいずれかを含む、医薬製剤を提供する。一実施形態において、医薬製剤は、本明細書に提供される抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体のいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む。別の実施形態において、医薬製剤は、本明細書に提供される抗ＥＴＢＲ抗体または免疫複合体のいずれかと、例えば、下に記載される、少なくとも１つの追加の治療剤とを含む。
【０２４９】
本発明の抗体または免疫複合体は、治療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、本発明の抗体または免疫複合体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されてもよい。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、がんを治療する方法は、本明細書に記載される免疫複合体を、メラニン細胞タンパク質ＰＭＥＬ１７、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ）から選択される抗原抗原に結合する抗体を含む第２の免疫複合体と組み合わせて、投与することを含む。いくつかのかかる実施形態において、第２の免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥ、カリケアミシン、ネモルビシン誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンから選択される。いくつかのかかる実施形態において、第２の免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥ、カリケアマイシン、およびピロロベンゾジアゼピンから選択される。いくつかの実施形態において、第２の免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥである。例となるＭＭＡＥ構造が図７Ａに示される。ＭＭＡＥ含有免疫複合体のリンカー部分は、図７Ａに示されるＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢリンカーであってもよく、または本明細書に記載されるリンカーのうちのいずれか等の異なるリンカーであってもよい。いくつかの実施形態において、第２の免疫複合体の細胞傷害性薬剤は、ピロロベンゾジアゼピンである。非限定的な例となるピロロベンゾジアゼピンには、次の構造、
2015529656.tif 000024
を有するＰＢＤ二量体が含まれ、式中、波線は、リンカー（Ｌ）への結合を示す。例えば、国際公開第２００９／０１６５１６号、米国公開特許第２００９／３０４７１０号、米国公開特許第２０１０／０４７２５７号、米国公開特許第２００９／０３６４３１号、米国公開特許第２０１１／０２５６１５７号、および国際公開第２０１１／１３０５９８号を参照されたい。ＰＢＤ含有免疫複合体のリンカー部分は、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるリンカーであってもよい。いくつかの実施形態において、リンカーは、例えば、次の構造におけるような、ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢを含む：
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【０２５１】
いくつかの実施形態において、がんを治療する方法は、本明細書に記載される免疫複合体を、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体を含む第２の免疫複合体と組み合わせて、投与することを含む。いくつかのかかる実施形態において、がんは、ＥＴＢＲ陽性がん、およびまたＰＭＥＬ１７陽性がんでもある。がんがまたＰＭＥＬ１７陽性でもあるかどうかの決定は、がんがＥＴＢＲ陽性であるかどうかを決定することについて本明細書に記載される方法、および米国公開第ＵＳ  ２０１１／０２０６７０２号に記載される方法を含むが、これらに限定されない任意の方法によって行われてもよい。いくつかの実施形態において、ＰＭＥＬ１７に結合する抗体は、配列番号２１の配列を含むＨＶＲ  Ｈ１、配列番号２２の配列を含むＨＶＲ  Ｈ２、配列番号２３の配列を含むＨＶＲ  Ｈ３、配列番号２４の配列を含むＨＶＲ  Ｌ１、配列番号２５の配列を含むＨＶＲ  Ｌ２、および配列番号２６の配列を含むＨＶＲ  Ｌ３を含む。
【０２５２】
「併用」投与は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、および別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の抗体または免疫複合体の投与は、追加の治療剤（抗ＰＭＥＬ１７免疫複合体等）および／またはアジュバントの投与の前、それと同時、および／またはその後に生じ得る。いくつかの実施形態において、抗ＥＴＢＲ免疫複合体の投与および抗ＰＭＥＬ１７免疫複合体の投与は、互いの約１ヶ月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に生じる。本発明の抗体または免疫複合体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０２５３】
本発明の抗体または免疫複合体（および任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、および鼻腔内、ならびに局所両方のために所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、任意の好適な経路による、例えば、投与が短時間であるか慢性的であるかに部分的に応じて、静脈内または皮下注射等の、注射によるものであり得る。単回または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むが、これらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。
【０２５４】
本発明の抗体または免疫複合体は、良好な医療行為と一致した様式で、製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この文脈における考慮の要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的病態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、および医療従事者に既知の他の要因が含まれる。抗体または免疫複合体は、必要ではないが、任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤と共に製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または免疫複合体の量、障害または治療の種類、および上に考察された他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量で、本明細書に記載される投与経路により、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量で、任意の経路によって、使用される。
【０２５５】
疾患の予防または治療のために、本発明の抗体または免疫複合体の適切な投薬量（単独でまたは１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用されるとき）は、治療対象の疾患の種類、抗体または免疫複合体の種類、疾患の重症度および経過、抗体または免疫複合体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の治療法、患者の病歴および抗体または免疫複合体への反応、ならびに主治医の裁量に依存するであろう。抗体または免疫複合体は、患者に、１回で、または一連の治療にわたって、好適に投与される。疾患の種類および重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によってであれ、連続注入によってであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体または免疫複合体が、患者への投与のための初回の候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。病態に応じて数日間またはより長い日数にわたる反復投与について、治療は、一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるであろう。抗体または免疫複合体の１つの例となる投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。故に、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）の１回以上の用量が患者に投与されてもよい。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週または３週間毎に（例えば、患者が抗体の約２〜約２０回、または例えば、約６回用量を受容するように）投与されてもよい。初回よりも高い負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投薬レジメンが有用な場合がある。この治療法の進行は、従来の技術およびアッセイによって容易に監視される。
【０２５６】
上の製剤または治療方法のうちのいずれも、本発明の免疫複合体および抗ＥＴＢＲ抗体の両方を使用して行われ得ることが理解される。
【０２５７】
Ｈ．  製品
本発明の別の態様において、上述の障害の治療、予防、および／または診断に有用な物質を含有する製品が提供される。製品は、容器、および容器上のまたは容器と関連したラベルまたは添付文書を含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の多様な材料から形成され得る。容器は、組成物を、それ自体で、または障害を治療する、予防する、および／もしくは診断するのに有効な別の組成物と組み合わせて保有し、また滅菌アクセスポートを有し得る（例えば容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤は、本発明の抗体または免疫複合体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が選定した病態を治療するために使用されることを表示する。さらに、製品は、（ａ）組成物がその中に含有された第１の容器（この組成物は本発明の抗体または免疫複合体を含む）、および（ｂ）組成物がその中に含有された第２の容器（この組成物はさらなる細胞傷害性薬剤または治療剤を含む）を含んでもよい。本発明のこの実施形態の製品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを表示する、添付文書をさらに含んでもよい。代替的に、または追加的に、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液等の、薬学的に許容される緩衝液を含む、第２の（または第３の）容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザの立場から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
【０２５８】
ＩＩＩ．  実施例
以下は、本発明の方法および組成物の実施例である。上に提供される一般的説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施され得ることが理解される。
【０２５９】
Ａ．  抗ＥＴＢＲ抗体薬物複合体の産生
抗ＥＴＢＲ抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、ｈｕ５Ｅ９．ｖ１（配列番号５および６）またはｃｈ５Ｅ９（配列番号２７および２８）を、本明細書に描写される薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥに複合することによって産生した。便宜上、薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥはときに、これらの実施例においておよび図において、「ｖｃＭＭＡＥ」または「ＶＣＥ」と称される。
【０２６０】
複合前に、抗体を、ＴＣＥＰにより、国際公開第２００４／０１０９５７  Ａ２号に記載される手法に従った標準方法を使用して、部分的に還元した。部分的に還元された抗体を、例えば、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８−７８４および米国公開特許第２００５／０２３８６４９  Ａ１号に記載される手法に従った標準方法を使用して、薬物−リンカー部分に複合した。簡潔に述べると、部分的に還元された抗体を薬物−リンカー部分と組み合わせて、抗体の還元されたシステイン残基への薬物−リンカー部分の複合を可能にした。複合反応を、いずれの遊離リンカー−薬物部分とも反応する過剰のＮ−アセチル−システインを添加することによって反応停止処理し、ＡＤＣを精製した。抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥ（抗ＥＴＢＲ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥとも称される）の構造が図７Ａに示される。また、米国公開第ＵＳ  ２０１１／０２０６７０２号も参照されたい。
【０２６１】
プロテアーゼ切断可能なｖａｌ−ｃｉｔリンカーおよび薬物ＰＮＵ−１５９６８２を含む、抗ＥＴＢＲ抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、実質的に上述されるように、ｃｈ５Ｅ９を薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＰＮＵ−１５９６８２に複合することによって産生した。抗ＥＴＢＲ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＵ−１５９６８２の構造が図７Ｃに示される。
【０２６２】
酸不安定性アセタールリンカーおよび薬物ＰＮＵ−１５９６８２を含む、抗ＥＴＢＲ抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、実質的に上述されるように、ｃｈ５Ｅ９を薬物−リンカー部分ＭＣ−アセタール−ＰＮＵ−１５９６８２に複合することによって産生した。抗ＥＴＢＲ−ＭＣ−アセタール−ＰＮＵ−１５９６８２の構造が図７Ｂに示される。
【０２６３】
切断不可能なリンカーおよび薬物ＰＮＵ−１５９６８２を含む、抗ＥＴＢＲ抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、実質的に上述されるように、ｃｈ５Ｅ９を薬物−リンカー部分ＭＣ−ＰＮＵ−１５９６８２に複合することによって産生した。抗ＥＴＢＲ−ＰＮＵ−１５９６８２の構造が図７Ｄに示される。
【０２６４】
Ｂ．  抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対して耐性のＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２黒色腫細胞における、ネモルビシン誘導体を含む抗ＥＴＢＲ免疫複合体の有効性
抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対して耐性を発達した黒色腫における、ネモルビシン誘導体を含む抗ＥＴＢＲ免疫複合体の有効性を決定するために、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥ（抗ＥＤＮＲＢ−ｖｃ−ＭＭＡＥ、抗ＥＴＢＲ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ等とも称される；例えば、米国公開第ＵＳ  ２０１１／０２０６７０２号を参照されたい）に対して耐性であるＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２黒色腫細胞を体内および体外で発達させた。
【０２６５】
体内で発達する耐性について、ＮＣｒヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｈｕｄｓｏｎ，ＮＹ）に、マトリゲルを含むＨＢＳＳ中、５００万個のＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を背側右脇腹から皮下接種した。ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、ＵＡＣＣ−２５７細胞（国立癌研究所）に由来し、それを体内成長のために次のように最適化する。ＵＡＣＣ−２５７細胞をメスＮＣｒヌードマウスの右脇腹から皮下注射して、腫瘍成長を誘導した。１つの腫瘍を採取し、体外で成長させた（ＵＡＣＣ−２５７Ｘ１．２細胞株と称される）。ＵＡＣＣ−２５７Ｘ１．２株をメスＮＣｒヌードマウスの右脇腹から再び皮下注射して、体内の細胞株の成長を改善させた。第２回目の注射からの腫瘍を収集し、体外成長のために再び適応させてＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２を生成した。ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞株およびこの株に由来する腫瘍は、親細胞株ＵＡＣＣ−２５７と同等のレベルでＥＴＢＲを発現する。
【０２６６】
ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を接種した１０匹のマウスに、３ｍｇ／ｋｇのｈｕ５Ｅ９．ｖ１−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを、０日目に静脈内投薬した。マウスにいつ再投薬するか、およびどの用量で投薬するかを決定するために、次の事項を考慮した：腫瘍が最初の処置後に再成長（すなわち、成長して０日目の最初の腫瘍体積まで戻った腫瘍）するか否か、および再成長の速度。投与された用量の頻度は、経時的に様々であったが、２回用量／週を超えることはなかった。静脈内投薬は、３００μＬを超えることはなかった。投与された用量の範囲は、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇであった。腫瘍が、一連の漸増用量に対してもはや反応しなくなる（すなわち、それが耐性を示す）と、投薬を中止した。
【０２６７】
図８Ａに示されるように、ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２腫瘍番号３５９は、約１２０日後に抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対して耐性を発達したが、一方で腫瘍番号３６８は、より緩徐に耐性を発達した。腫瘍番号３５９を採取し、細胞を体外成長のために分離した（本明細書で体内由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞と称される）。
【０２６８】
体外で発達する耐性について、ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を、培養皿中、漸増濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに２か月間の経過にわたって適応させた。図８Ｂは、最大で少なくとも１０μｇ／ｍＬの濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥによって比較的影響を受けなかった、体外由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞株（本明細書で体外由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞と称される）を示す。図８Ｂはまた、対照ＡＤＣであるα−ｇＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥと共にインキュベートした体外由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞、およびα−ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥと共にインキュベートした親ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞も示す。
【０２６９】
体内由来および体外由来のＵＡＣＣ−２５７細胞および親ＵＡＣＣ−２５７細胞の表面上でのＥＴＢＲの発現を次いで、ＦＡＣＳによって決定した。細胞を抗ＥＴＢＲ抗体（ｈｕ５Ｅ９．ｖ１またはｃｈ５Ｅ９）で染色し、続いて抗ヒトＡｌｅｘａ  ４８８抗体複合体で染色した。図９ＡおよびＢに示されるように、体内由来および体外由来の両方の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞は、親細胞株と比べて細胞の表面上でＥＴＢＲの減少した発現を有した。各図における対照ピークは、二次抗体のみでの染色を示す。
【０２７０】
体内由来および体外由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を次いで、漸増濃度の抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥに対する感受性についてアッセイした。
【０２７１】
免疫複合体の存在下での細胞株の体外細胞増殖を評価した。細胞を、９６ウェルの透明底プレート中、５０μＬの通常の成長培地中に１ウェル当たり１，５００細胞でプレートした。２４時間後、免疫複合体（ｃｈ５Ｅ９−ｖｃ−ＭＭＡＥまたは対照抗ｇＤ−ｖｃ−ＭＭＡＥ）の段階希釈液を含む追加の５０μＬの培養培地を３連のウェルに添加した。５日後、細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇ７５７２，Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用し、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０１  Ｍｕｔｉｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して決定した。
【０２７２】
表２は、細胞株の各々に関して、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＭＭＡＥおよびリンカー−薬物（抗体を含まない）について観察されたＥＣ５０を示す。
【表２】
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【０２７３】
この実験の結果は、耐性の少なくともいくらかがＡＤＣの薬物部分に対して発達することを示唆することから、この薬物を異なる薬物と置き換えることにより、耐性細胞内でいくらかの感受性が回復し得ることが示唆される。
【０２７４】
ＡＤＣの薬物部分を変更することによっていくらかの感受性が回復され得るかどうかを決定するために、体内および体外由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を、耐性細胞を発達させるために使用されたものとは異なるリンカーおよび異なる薬物を含むＡＤＣに対する感受性についてアッセイした。この実験において試験されたＡＤＣは、切断不可能なリンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された抗ＥＴＢＲ（ｃｈ５Ｅ９−ＰＮＵ）であった。図７Ｄを参照されたい。表３は、細胞株の各々に関して、抗ＥＴＢＲ−ＰＮＵおよびリンカー−薬物（抗体を含まない）について観察されたＥＣ５０を示す。
【表３】
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【０２７５】
この実験の結果は、少なくともいくらかの感受性が、ＡＤＣの薬物部分を置き換えることによって耐性細胞内で回復され得ることを実証する。
【０２７６】
体内由来および体外由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を、酸不安定性アセタールリンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された抗ＥＴＢＲ（ｃｈ５Ｅ９−アセタール−ＰＮＵ）に対する感受性についてアッセイした。図７Ｂを参照されたい。表４は、細胞株の各々に関して、抗ＥＴＢＲ−アセタール−ＰＮＵおよびリンカー−薬物（抗体を含まない）について観察されたＥＣ５０を示す。
【表４】
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【０２７７】
上記のように、この実験の結果は、少なくともいくらかの感受性が、ＡＤＣの薬物部分を置き換えることによって耐性細胞内で回復され得ることを実証する。
【０２７８】
体内由来および体外由来の耐性ＵＡＣＣ−２５７Ｘ２．２細胞を、ＭＭＡＥ免疫複合体において使用されたｖｃリンカーを通じてＰＮＵ−１５９６８２に連結された抗ＥＴＢＲ（ｃｈ５Ｅ９−ｖｃ−ＰＮＵ）に対する感受性についてアッセイした。図７Ｃを参照されたい。表５は、細胞株の各々に関して、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＰＮＵおよびリンカー−薬物（抗体を含まない）について観察されたＥＣ５０を示す。
【表５】
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【０２７９】
上記のように、この実験の結果は、少なくともいくらかの感受性が、ＡＤＣの薬物部分を置き換えることによって耐性細胞内で回復され得ることを実証する。加えて、この結果は、いくらかの耐性がまた、ＡＤＣのリンカー部分にも起因することを示唆する。体外由来の耐性細胞に関して、抗ＥＴＢＲ−ＰＮＵおよび抗ＥＴＢＲ−アセタール−ＰＮＵについてのＥＣ５０を、抗ＥＴＢＲ−ｖｃ−ＰＮＵについてのＥＣ５０と比較されたい。
【０２８０】
上述の発明は、明確な理解のための例示説明および例としてある程度詳細に記載されたが、これらの説明および例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許および科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ−Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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