(57)【要約】  創傷治癒および/または組織修復の促進および/または改善における使用のための、また抗瘢痕、抗炎症、抗線維症および抗癒着適応症のための、ウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカイン組成物、それらを使用する治療の方法ならびにそれらを含有するキット。
2015520754.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
期待される速度で治癒しない創傷を有する対象を治療する方法であって、ウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインの有効量の創傷への投与を含む、方法。
【請求項２】
前記ウイルス性VEGFが、VEGF-Eである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記VEGF-Eが、パラポックスウイルスウイルスVEGF-Eである、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
前記ウイルス性抗炎症性サイトカインが、ウイルス性抗炎症性インターロイキンである、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ウイルス性抗炎症性インターロイキンが、ウイルス性IL-10である、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
前記ウイルス性IL-10が、パラポックスウイルスIL-10である、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
前記パラポックスウイルスIL-10が、オルフウイルスIL-10である、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
対象が、急性創傷、治癒の遅い創傷、不完全にしか治癒しない創傷、慢性創傷(任意選択で、糖尿病性潰瘍、静脈性潰瘍、圧迫性潰瘍、血管炎性潰瘍または動脈性潰瘍)および裂開創傷からなる群から選択される創傷を患っており、組成物が、任意選択で、創傷の修復または閉鎖の前に適用される、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
創傷治癒を促進するのに有効なウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインならびに医薬上許容される担体を含む組成物であって、任意選択で、局所投与および注射からなる群から選択される経路による投与のために製剤化される、組成物。
【請求項１０】
クリーム、軟膏、ゲル、エマルション、ローション、フォームまたはペイントの形態であり、組成物がゲルである場合に、ゲルが、任意選択で、非イオン性ポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレン共重合体ゲルを含む、請求項9に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ウイルス性VEGFが、VEGF-Eである、請求項9または請求項10に記載の組成物。
【請求項１２】
前記VEGF-Eが、パラポックスウイルスVEGF-Eである、請求項11に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ウイルス性抗炎症性サイトカインが、ウイルス性抗炎症性インターロイキンである、請求項9から12のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ウイルス性抗炎症性インターロイキンが、ウイルス性IL-10である、請求項13に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ウイルス性IL-10が、パラポックスウイルスIL-10である、請求項14に記載の組成物。
【請求項１６】
前記パラポックスウイルスIL-10が、オルフウイルスIL-10である、請求項15に記載の組成物。
【請求項１７】
単一または別個の容器において、創傷治癒を促進するのに有効なウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインの量および医薬上許容される担体を一緒にすることを含む、医薬を製造する方法。
【請求項１８】
前記ウイルス性VEGFが、VEGF-Eである、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
前記VEGF-Eが、パラポックスウイルスVEGF-Eである、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
前記ウイルス性抗炎症性サイトカインが、ウイルス性抗炎症性インターロイキンである、請求項17から19のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ウイルス性抗炎症性インターロイキンが、ウイルス性IL-10である、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
前記ウイルス性IL-10が、パラポックスウイルスIL-10である、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
前記パラポックスウイルスIL-10が、オルフウイルスIL-10である、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
ウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインの治療上有効な量を含む組成物を、それを必要とする対象に、創傷に投与する工程を含む、治療の方法。
【請求項２５】
前記ウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインが、組み合わせて投与されるか、または別個に、任意選択で、ほぼ同時にもしくは逐次投与される、請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
ウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインの治療上有効な量を含有するパッケージ材料を、対象における、または対象上の創傷の治療における使用のための説明書と一緒に含む製造品。
【請求項２７】
ウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインが、単一容器中に含有される、請求項26に記載の製造品。
【請求項２８】
ウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインが、別個の容器中に含有される、請求項26に記載の製造品。
【請求項２９】
前記ウイルス性VEGFが、VEGF-Eである、請求項26から28のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項３０】
前記VEGF-Eが、パラポックスウイルスVEGF-Eである、請求項29に記載の製造品。
【請求項３１】
前記ウイルス性抗炎症性サイトカインが、ウイルス性抗炎症性インターロイキンである、請求項26から30のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項３２】
前記ウイルス性抗炎症性インターロイキンが、ウイルス性IL-10である、請求項31に記載の製造品。
【請求項３３】
前記ウイルス性IL-10が、パラポックスウイルスIL-10である、請求項32に記載の製造品。
【請求項３４】
前記パラポックスウイルスIL-10が、オルフウイルスIL-10である、請求項33に記載の製造品。
【請求項３５】
対象が、急性創傷、治癒の遅い創傷、不完全にしか治癒しない創傷、慢性創傷(任意選択で、糖尿病性潰瘍、静脈性潰瘍、圧迫性潰瘍、血管炎性潰瘍または動脈性潰瘍)および裂開創傷からなる群から選択される創傷を患っており、組成物が、任意選択で、創傷の修復または閉鎖の前に適用される、請求項26から34のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項３６】
ウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインが、注射による投与のために製剤化される、請求項26から35のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項３７】
ウイルス性VEGFおよびウイルス性抗炎症性サイトカインが、局所投与のために製剤化される、請求項26から35のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項３８】
(i)VEGF、任意選択で、ウイルス性VEGF、任意選択で、パラポックスウイルスVEGF-E、任意選択で、オルフウイルスVEGF-E、および(ii)抗炎症性サイトカイン、任意選択で、ウイルス性抗炎症性サイトカイン、任意選択で、ウイルス性抗炎症性インターロイキン、任意選択で、ウイルス性IL-10の各々の有効量の、それを用いる治療を必要とする対象への投与を含む、方法。
【請求項３９】
(i)VEGF、任意選択で、ウイルス性VEGF、任意選択で、パラポックスウイルスVEGF-E、任意選択で、オルフウイルスVEGF-Eおよび(ii)抗炎症性サイトカイン、任意選択で、ウイルス性抗炎症性サイトカイン、任意選択で、ウイルス性抗炎症性インターロイキン、任意選択で、ウイルス性IL-10の各々の治療上有効な量を含有するパッケージ材料を、対象における、または対象上の創傷の治療における使用のための説明書と一緒に含む、物品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス性およびその他のタンパク質、例えば、ウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカインの組合せを含む、組成物および方法に関する。これらの発明は、創傷治癒を促進すること、また、創傷、特に、急性創傷ならびに治癒の遅い(delayed-healing)創傷、不完全にしか治癒しない(incompletely healing)創傷、慢性創傷および裂開創傷などの期待される速度で治癒しない創傷を治療することを含め、さまざまな状況で有用である。本発明はまた、線維症、癒着、炎症および瘢痕の低減においても有用である。
【背景技術】
【０００２】
以下は、本発明を理解するのに有用であり得る情報を含む。本明細書において提供される情報のいずれもが、本明細書に記載されるか、もしくは特許請求される発明の先行技術である、もしくは関連しているということ、または任意の具体的にもしくは黙示的に参照される刊行物もしくは文書が先行技術であるということの承認ではない。
【０００３】
ヒトおよびその他の哺乳動物では、創傷傷害は、細胞性および生化学的事象の組織化された複雑なカスケードを始動させ、ほとんどの場合、治癒した創傷をもたらす。理想的に治癒した創傷とは、細胞、組織、臓器および生物レベルで正常な解剖学的構造、機能および外観を回復するものである。創傷治癒は、外傷によって、微生物によって、または異物によって始まったものであれ、炎症、上皮化、血管新生およびマトリックス沈着を含めたいくつかの重複する相を包含する複雑なプロセスによって進行する。普通、これらのプロセスは、成熟創傷および特定の程度の瘢痕形成につながる。炎症および修復は、ほとんど所定の経過に沿って起こるが、プロセスの感受性は、例えば、調節性サイトカインおよび増殖因子のネットワークを含めた種々の創傷治癒分子のバランスに応じて異なる。
【０００４】
糖尿病性足部潰瘍、褥瘡および静脈性下肢潰瘍(VLU)などの慢性創傷を含めた、正常な、または期待される速度で治癒しない創傷は、増大している世界的問題である。例えば、西洋諸国では、その一生涯を通して人口の1〜2%が慢性創傷を発症すると推定されている。慢性創傷は、保健サービスにとって大きな経済的負担に相当しており、米国単独での推定される年間支出額は、最大250億ドルである。Kuehn BM, Chronic wound care guidelines issued. JAMA 297巻:938〜939頁、2007年。推定される130万から300万の米国人が、褥瘡を有すると考えられており、糖尿病を有する2000万人のうち10〜15%が慢性潰瘍を発症する危険にある。さらに多くのヒトが、静脈性潰瘍または動脈疾患に起因する創傷を有する。人口における高齢者および糖尿病患者の数が増大するにつれ、この支出額は今後上昇すると予測される。残念ながら、これらの消耗性創傷に対する有効な治療選択肢はほとんどなく、有効な新規治療が大いに求められている。ここ何年かの間に、基礎研究および臨床研究が、創傷治癒に関与する個々の分子的および細胞プロセスについて多くを示してきたが、創傷治癒過程の分離された態様を増強、阻害または改変することによって創傷治癒を加速および/または改善しようとする試みは、わずかな成功しか収めていない。
【０００５】
瘢痕は、治癒した創傷、疾患による病変部または外科手術の結果である。肥厚性およびケロイド瘢痕は、組織反応が、正常な修復および治癒にとって必要な瘢痕組織の量に対して不釣り合いである場合に生じる。背部、肩、胸骨および耳たぶを含めた身体の特定の領域は、特に、肥厚性瘢痕またはケロイドとして知られる異常な瘢痕を発生しやすい。これらの瘢痕は、コラーゲン線維の沈着の増大に相当する分厚い病変である。それらは同一の臨床的所見を有する:それらは、赤く、盛り上がっており、堅く、滑らかで、艶やかな表面を有する。肥厚性瘢痕は、1年から数年の間に自発的に平板化し得るが、ケロイドは持続し、元の傷害部位を越えて広がる。ケロイドとは、傷害の境界を超え、長期間増大し得る肥厚した赤色の瘢痕として、特定の感受性の個体において、通常、外傷後に、真皮および隣接する皮下組織に生じる過形成性結合組織塊である。ケロイド病変は、局所皮膚線維芽細胞が、局所刺激に応じて活発な過形成および増殖を経験する場合に形成される。瘢痕の大きさの増大は、組織への増大した量のコラーゲンの沈着による。アフリカ系アメリカ人は、遺伝的に、ケロイドを発生しやすい。ケロイド発生は、手術、耳介穿孔、裂創、火傷、ワクチン接種または炎症プロセスを含めた種々の種類の皮膚傷害と関連している。肥厚性瘢痕は、火傷または皮膚に対するその他の損傷に起因し得る塊である。このような瘢痕は、普通、永久性であり、既知療法に対して抵抗性である。肥厚性瘢痕またはケロイドを患っている患者は、局所疼痛、そう痒および局所感受性を訴え、そのすべてが彼らの生活の質を危険にさらし、ならびに個々の身体イメージに影響を及ぼす。
【０００６】
ケロイドのための種々の治療は、わずかしか成功していない。肥厚性瘢痕およびケロイドを管理するための既存の試みとして、手術、機械的圧力、ステロイド、X線照射および寒冷療法が挙げられる。いくつかの不都合がこれらの方法の各々と関連していると報告されている。例えば、瘢痕組織の外科的除去は、不完全である場合があり、切開および縫合点に肥厚性瘢痕およびケロイドの発生をもたらし得る、すなわち、ケロイドが外科的に除去された後に瘢痕が再発することがたびたび起こり、ステロイド治療は、予測不可能である場合があり、皮膚の色素脱失をもたらすことが多い。ケロイド瘢痕の簡単な外科的切除は、50%〜80%の再発のリスクを有する。手術と、病巣内コルチコステロイド注射または放射線療法のいずれかとの組合せが、通常治療である。しかし、病巣内コルチコステロイド注射は、合併症(脂肪萎縮症、皮膚の菲薄化および色素変化)を起こしやすい。
【０００７】
炎症エピソードに起因する萎縮性または陥凹瘢痕は、皮膚の収縮を特徴とし、美容上不愉快な、永久的瘢痕を残す。最もよくある例として、炎症性ざ瘡または水痘後に生じる瘢痕がある。鬱病は、創傷治癒の普通の結果として生じ、鬱病を引き起こす瘢痕組織は、主に、線維芽細胞増殖および代謝に起因するコラーゲンからなる。一部のざ瘡患者は、病変内に注射されるステロイド、局所液体窒素適用または皮膚切除術を使用して成功裏に治療される。しかし、多くの場合、いずれも改善せず、治療がその他の合併症をもたらす。
【０００８】
直角に関節または皮膚の皴を横断する瘢痕は、短縮または拘縮を発生しやすい。瘢痕拘縮は、瘢痕が十分に成熟していない場合に生じ、肥厚性の傾向があることが多く、通常、身体障害性であり、機能障害性である。それらは、関節または皮膚陥凹部を横切る火傷傷害後によく起こる。瘢痕拘縮のためには、スプリンティング、アクリル系キャスティングおよび圧迫療法を伴う外科的解放が必要である場合もある。困難な、広範な瘢痕および拘縮の再構築のためには、全層および分割または部分層皮膚移植ならびにおそらくはより効率的には、局所および遊離皮弁が使用される。
【０００９】
癒着形成は、普通は分離している身体組織が、瘢痕組織によって接続するようになるプロセスである。癒着は、最も一般的には、外科的切開、擦過または外傷に起因する。癒着は、ほとんどの種類の手術後に形成し得るが、一般的な腹部、婦人科、整形外科および心臓手術後に最高頻度で発生する。腹部手術後の、腹膜癒着形成の罹患率は、90%と高いものであり得ると報告されている。米国特許第6,613,325号を参照のこと。癒着形成の罹患率はまた、複数の手術をうけた患者においても90%と高いものであると考えられている。術後腹膜内および骨盤癒着は、腹腔における手術から回復する患者における主要な問題に相当し、これでは、罹患組織間で形成する癒着の傾向がある。米国特許第5,002,551号を参照のこと。この問題の広汎性はまた、重大な経済的結果を有する。
【００１０】
癒着は、最も一般的には、術後に起こるが、癒着はまた、外傷性傷害、炎症性疾患、腹膜内化学療法および放射線療法を含めた手術以外の組織損傷から起こり得る。その他の合併症の中でも、手術による癒着の存在は、疼痛、不快感および婦人科手術に起因する女性不妊症を伴うことがある。例えば、腸閉塞は、手術による癒着に起因する合併症である。癒着はまた、腸閉塞および不妊症の主要原因であると報告されており、関連合併症として、慢性骨盤疼痛、尿道閉塞および排尿障害が挙げられる。米国特許第6,689,803号参照のこと。癒着形成は、腹膜への傷害に起因し得、これは、次いで、傷害または外傷部位を炎症にさせ得る。炎症は、治癒プロセスの一部であるが、瘢痕組織の線維帯の発生に貢献することによって癒着形成に貢献し得る。線維素溶解と呼ばれるプロセスを通じて、線維素のバンドが最終的に溶解する。しかし、線維素のバンドが溶解しない場合には、普通は分離している臓器および組織を接続し、結合する、増殖する癒着に発達し得る。細胞外マトリックスの過剰な製造および沈着は、腹膜の癒着の発生を含めた身体中に組織線維症を生じさせる重要な因子であり得ると報告されている(米国特許第6,841,153号を参照のこと)。
【００１１】
癒着形成の防止のための種々のアプローチが報告されている。「The Peritoneum」、Dizerega, G. S. & Rodgers, K. E.編、Springer-Verlang, New York、307〜369頁(1992年)中、Dizerega, G. S. & Rodgers, K. E.、「Prevention of Postoperative Adhesions」を参照のこと。報告されている癒着の治療の一般的な種類として、1)腹膜浸出液における線維素沈着の防止、2)局所組織炎症の低減および3)線維素沈着物の除去が挙げられる。同著。しかし、長年の研究にも関わらず、術後癒着の防止のための製品となったものはほとんどないと報告されている。Johns, A.、Human Reproductive Update、7(6):577〜579頁(2001年)。その一方で、手術による癒着と関連する医学的問題は、いくつかの障害について、反復手術手順の全般的な上昇があるためにますます深刻になっている。したがって、手術による癒着を防止し、それらが引き起こす合併症を軽減するための化合物および方法の開発が絶対的に必要である。
【００１２】
肺線維症、全身性硬化症、肝硬変、心血管疾患、進行性腎臓疾患および黄斑変性症を含めた線維増殖性疾患は、罹病率および死亡率の主要原因であり、すべての組織および臓器系に影響を及ぼし得る。線維化組織リモデリングはまた、癌転移に影響を及ぼし、移植レシピエントにおいて慢性グラフト拒絶を加速し得る。それにもかかわらず、ヒトの健康に対する非常に大きな影響にもかかわらず、現在、線維症の機序を直接的に標的とする承認された治療がない。
【００１３】
線維症は、損傷した組織における創傷治癒プロセスの一部として起こり得る線維組織の異常な蓄積である。線維症の例として、肝臓線維症、肺線維症(例えば、ケイ肺症、石綿肺、特発性肺線維症)、経口線維症、心内膜心筋線維症、後腹膜線維症、三角筋線維症、腎臓線維症(糖尿病性腎症を含む)および糸球体硬化症が挙げられる。肝臓線維症は、例えば、慢性肝臓傷害に対する創傷治癒反応の一部として生じる。線維症は、ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、アルコール依存症、住血吸虫症、ウイルス性肝炎、胆管閉塞、毒素に対する曝露および代謝障害の合併症として生じ得る。この線維化組織の形成は、身体による、傷害を受けた組織を封入しようとする試みに相当すると考えられている。肝臓線維症は、正常な肝臓におけるものとは質的に区別され得る細胞外マトリックスの蓄積を特徴とする。検査を受けないままの肝線維症は、硬変(封入された小結節の存在によって定義される)、肝不全および死亡に進行する。心内膜心筋線維症は、拘束性心筋症の発生を特徴とする特発性障害である。心内膜心筋線維症では、根底にあるプロセスが、心臓の心内膜表面のパッチ状線維症をもたらし、コンプライアンスの低下、最終的には、心内膜心筋表面がより広く関与するようになるような拘束性生理学につながる。心内膜線維症は、右心室および左心室の流入路が主に関与しており、房室弁に影響を及ぼし、三尖弁および僧帽弁逆流につながり得る。口腔粘膜下線維症は、粘膜下組織(粘膜固有層および深部結合組織)の炎症および進行性線維症を特徴とする口腔の慢性、消耗性疾患である。著しい強剛性および最終的に口を開けることができないこととなる。口腔粘膜は、最も一般的に関与する部位であるが、口腔の任意の部分が、咽頭でさえが関与し得る。後腹膜線維症は、後腹膜中の広範な線維症の発生を特徴とし、通常、4番目および5番目の腰椎の前側表面を中心とする。この線維症は、後腹膜構造、特に、尿管の絞扼および閉塞につながる。ほとんどの場合、病因論はわかっていない。しかし、自己免疫疾患とのその偶発的関連性および副腎皮質ステロイドおよび免疫抑制療法に対するその反応は、免疫学的に媒介され得ることを示唆する。三角筋線維症は、三角筋の筋肉物質内の筋肉内線維帯を特徴とする筋肉障害である。これらの帯は、肩関節の機能に影響を及ぼす続発性拘縮につながる。翼状肩甲および続発性脊柱側弯症もこの状態と関連している場合がある。三角筋線維症は、臀部筋肉および四頭筋の線維性拘縮と関連があり、同様のプロセスである可能性が高い。
【００１４】
肝臓線維症の根底にある細胞的および生化学的機序の理解は、ここ数年で進んだ(LiおよびFriedman、J. Gastroenterol. Hepatol. 14:618〜633頁、1999年によって総説されている)。星状細胞は、肝臓における細胞外マトリックスの主要な供給源であると考えられている。星状細胞は、肝臓に存在する種々のサイトカインに応答し、その一部をそれらはまた産生する(Friedman、Seminars in Liver Disease 19:129〜140頁、1999年)。LiおよびFriedmanによって要約されるように、肝臓線維症のための実際の、提案される治療戦略として、根底にある原因(例えば、毒素または感染病原体)の除去、炎症の抑制(例えば、副腎皮質ステロイド、IL-1受容体アンタゴニストまたは炎症を抑制し得るその他の薬剤を使用する)、星状細胞活性化の下方制御(例えば、γインターフェロンまたは抗酸化剤を使用する)、マトリックス分解の促進または星状細胞アポトーシスの促進が挙げられる。最近の進歩にもかかわらず、これらの戦略の多くは、依然、実験段階にあり、既存の療法は、根底にある生化学的プロセスに対処することよりも炎症の抑制を目的としている。したがって、肝臓線維症を含めた線維症を治療するための材料および方法が、当技術分野で依然として必要である。
【００１５】
オルフウイルス、パラポックスウイルス属の基準種は、有蹄動物およびヒトにおいて局部的な増殖性皮膚病変を引き起こし(HaigおよびMercer、Vet Res 29巻、311〜26頁、1998年)、免疫力が低下した個体において途方もなく増殖性で、持続性の病変が報告されている(Gurelら、Eur J Dermatol 12巻、183〜5頁、2002年;Hunskaar, Br J Dermatol 114巻、631〜4頁、1986年;Savageら、Proc R Soc Med 65巻、766〜8頁、1972年;Tanら、Br J Plast Surg 44巻、465〜7頁、1991年)。オルフウイルス感染は、創傷を受けた皮膚の表皮の再生において始まり、病変は、紅斑、丘疹、小胞、膿疱、次いで、瘡蓋形成の段階を通して進行する(HaigおよびMercer、Vet Res 29巻、311〜26頁、1998年;Jenkinsonら、Vet Dermatol 1巻、189〜95頁、1990年)。オルフウイルス病変は、それらが広範な血管増殖および拡張ならびに表皮過形成を特徴とするので持続した創傷治癒反応を連想させるものとして記載されている(Grovesら、J Am Acad Dermatol 12巻、706〜11頁、1991年、Savoryら、J Virol 74巻、10699〜706頁、2000年)。
【００１６】
血管内皮増殖因子(VEGF)は、創傷治癒などの正常な生理学的プロセスおよび疾患プロセスの間の血管新生の重要な調節因子である(CarmelietおよびJain、Nature 473巻、298〜307頁、2011年、Ferrara、Endocr Rev 25巻、581〜611頁、2004年、McCollら、Apmis 112巻、463〜80頁、2004年)。VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-Dおよび胎盤由来増殖因子(PlGF)を含むVEGFファミリーは、高親和性VEGF受容体(VEGFR)、VEGFR-1、VEGFR-2およびVEGFR-3と相互作用する(Kochら、Biochem J 437巻、169〜83頁、2011年;Olssonら、Nat Rev Mol Cell Biol、7巻、359〜71頁、2006年)。VEGF-Aは、VEGFR-1およびVEGFR-2の両方と結合するが、PlGFおよびVEGF-Bは、もっぱらVEGFR-1と結合する。VEGF-CおよびVEGF-Dは、VEGFR-2およびVEGFR-3の両方と相互作用する。VEGFはまた、共受容体ニューロピリン(NRP)-1およびNRP-2と結合し、これは、VEGFRとの結合を増強する(Sokerら、J Cell Biochem 85巻、357〜68頁、2002年;Vadaszら、Autoimmun Rev 9巻、825〜829頁、2010年)。VEGF-Aは、内皮細胞増殖、遊走および生存を刺激することによって、また主にVEGFR-2を介して血管透過性を促進することによって血管新生を促進することがわかっている(Holmesら、Cell Signal 19巻、2003〜2012頁、2007年)。しかし、VEGFR-1は、おそらくは、リガンド結合分子として作用すること、VEGF-AをVEGFR-2シグナル伝達から隔離することによって内皮細胞分化および遊走において役割を果たすと思われる(Shibuya、Angiogenesis、9巻、225〜230頁、2006年)。皮膚組織修復の際に、VEGF-Aは、ケラチノサイトによって高度に発現され、創傷床における新規血管の形成を刺激し、皮膚の再生に必要とされる栄養分および酸素を供給する(Barrientosら、Wound Repair Regen 16、585〜601頁、2008年;Brownら、J Exp Med 176、1375〜1379頁、1992年;Nissenら、Am J Pathol 152、1445〜1452頁、1998年)。さらに、いくつかの研究によって、VEGF-Aはまた、創傷の再上皮化を促進することによって治癒を増強するということがわかっている(Bremら、J Invest Dermatol 129巻、2275〜2287頁、2009年;Liら、Diabetes 56巻、656〜665頁、2007年;Michaelsら、Wound Repair Regen 13、506〜512頁、2005年;Romano Di Peppeら、Gene Ther 9巻、1271〜1277頁、2002年)。VEGF-Aはまた、血管漏出を増大し、無秩序な血管の形成を促進する(Carmeliet、Nat Med 6巻、1102〜1103頁、2000年)。乾癬(Detmar、J Invest Dermatol 122巻、xiv〜xv、2004年)、皮膚癌(Weningerら、Lab Invest 75巻、647〜657頁、1996年)、ヘルペス状皮膚炎および多形性紅斑(Brownら、J Immunol 154、2801〜2807頁、1995年)などのいくつかのその他の皮膚障害は、VEGF-Aの多量の存在と関連している。表皮外傷を有するトランスジェニックマウスにおけるVEGF-A過剰発現は、顕著な血管新生、炎症および表皮過形成を特徴とする乾癬様病変を誘導する(Canaveseら、Histol Histopathol 26、285〜296頁、2011年;Eliasら、Am J Pathol 173、689〜699頁、2008年;Xiaら、Blood 102、161〜168頁、2003年)。
【００１７】
オルフウイルス病変の真下に見られる広範な血管病変は、単独ではないとしても幾分かは、このウイルスによってコードされるVEGF相同体の発現によると報告されている。機能的ウイルス性VEGFの不在下では、感染病変は、血管の著しい増殖および真皮浮腫だけでなく、表皮過形成の特有のパターンおよび野生型感染において見られる乳頭間突起形成も欠く(Savoryら、J Virol 74巻、10699〜10706頁、2000年;Wiseら、Virus Res 128、115〜125頁、2007年)。VEGF-Eと命名されている精製オルフウイルスVEGFは、VEGFR-2とのその相互作用によって血管新生および表皮再生を促進するが、VEGFR-1と結合できないので、無視できる血管漏出および組織炎症を示すということも報告されている(Inderら、Febs J 275、207〜217頁、2008年;Inoueら、Arterioscler Thromb Vasc Biol 27巻、99〜105頁、2007年;Kibaら、Biochem Biophys Res Commun 301巻、371〜377頁、2003年;Wiseら、J Biol Chem 278巻、38004〜38014頁、2003年;Wiseら、Cellular Microbiology14巻(9号)1376〜1390頁、2012年;Zhengら、Arterioscler Thromb Vasc Biol 26巻、2019〜2026頁、2006年;Zhengら、Arterioscler Thromb Vasc Biol 27巻、503〜511頁、2007年)。
【００１８】
インターロイキン-10(IL-10)は、ヒトサイトカイン合成阻害因子(CSIF)としても知られる、抗炎症性サイトカインである。ヒトでは、IL-10は、IL10遺伝子によってコードされる。このサイトカインは、単球によって主に産生され、リンパ球およびケラチノサイトによってより少ない程度に産生される。免疫調節および炎症において多面的効果を有する。Th1サイトカイン、MHCクラスII抗原およびマクロファージ上の共刺激分子の発現を下方制御する。また、B細胞生存、増殖および抗体製造を増強する。IL-10は、NF-κB活性を遮断し得、JAK-STATシグナル伝達経路の調節に関与している。IL-10は、マクロファージおよび調節性T細胞などの細胞によって製造されるIFN-γ、IL-2、IL-3、TNFαおよびGM-CSFなどの炎症促進性サイトカインの合成を阻害できる。抗原提示細胞の抗原提示能を抑制する強力な能力も示す。しかしまた、特定のT細胞および肥満細胞に向けて刺激性であり、B細胞成熟および抗体製造を刺激する。IL-10は、単球および2型Tヘルパー細胞(TH2)、肥満細胞、CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞において主に発現され、活性化T細胞およびB細胞の特定のサブセットにおいても発現される。細胞傷害性T細胞によって放出され、ウイルス性感染に対する免疫応答の際にNK細胞の作用を阻害する。
【００１９】
多数のウイルスが、免疫防御からウイルス感染細胞を遮蔽し、宿主におけるウイルス生存を増強するために、細胞性サイトカインまたはサイトカイン受容体の相同体を使用するという戦略を利用する。ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)は、世界の人口の大部分に感染する種特異的ベータヘルペスウイルスである。HCMVは、原始骨髄系細胞において生涯の潜在感染を確立し、維持している。これらの細胞の骨髄樹状細胞(DC)およびマクロファージへの末端細胞分化後、潜伏ウイルスは再活性化し、新規の感染性ビリオンの製造および免疫無防備状態の個体では、しばしば重度の疾患をもたらす能力を有する。潜時の間は、HCMV UL111A、強力な免疫調節性サイトカインヒトインターロイキン-10(hIL-10)の相同体をコードする遺伝子を含めたウイルス性遺伝子のサブセットのみが転写活性である。UL111Aは、感染の増殖相および潜在相の両方の間で転写活性であり、骨髄細胞によるサイトカイン合成および主要組織適合抗原複合体(MHC)発現の阻害、B細胞の刺激ならびにDC成熟および栄養膜細胞層機能の抑制を含めたさまざまな免疫調節性機能を発揮するいくつかのウイルス性IL-10タンパク質をコードする。Avdic, Sら、Viral Interleukin-10 Expressed by Human Cytomegalovirus during the Latent Phase of Infection Modulates Latently Infected Myeloid Cell Differentiation、J. Virol. July 2011年85巻、7465〜7471頁。いくつかのヘルペスウイルスはまた、IL-10の相同体を有する。エプスタイン・バーウイルス(EBV)によってコードされるIL-10(ebvIL-10)、同定されたIL-10の第1のウイルス性相同体は、細胞性IL-10の生物活性のすべてではないが多くを共有し、宿主-ウイルス相互作用において重要な役割を果たし得る。EBVに加えて、ヒトに感染し得るオーフポックスウイルス(OV)は、その自身のIL-10相同体、ovIL-10を有する。Kotenko, SVら、Human Cytomegalovirus harbors its own unique IL-10 homolog (cmvIL-10)、PNAS 97巻:1695〜1700頁(2000年)を参照のこと。ORFV-IL-10は、ヒト、ヒツジおよびマウス単球においてサイトカイン合成を阻害する能力を有するという点で細胞性IL-10と機能的に同様であり(Wiseら、J Gen Virol 88巻、1677〜1682頁、2007年;Flemingら、J Virol 71巻、4857〜4861頁、1997年;Haigら、Virus Res 88巻、3〜16頁、2002年;Imlachら、J Gen Virol 83巻、1049〜1058頁、2002年)、マウスおよびヒト樹状細胞の成熟を損なうだけでなく(Chanら、J Gen Virol 87巻、3177〜3181頁、2006年、Lateefら、J Gen Virol 84巻、1101〜1109頁、2003年)、肥満細胞および胸腺細胞を同時刺激する(Flemingら、J Virol 71、4857〜4861頁、1997年;Haigら、Virus Res 88巻、3〜16頁、2002年;Imlachら、J Gen Virol 83巻、1049〜1058頁、2002年)。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】米国特許第6,613,325号
【特許文献２】米国特許第5,002,551号
【特許文献３】米国特許第6,689,803号
【特許文献４】米国特許第6,841,153号
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Kuehn BM, Chronic wound care guidelines issued. JAMA 297巻:938〜939頁、2007年
【非特許文献２】「The Peritoneum」、Dizerega, G. S. & Rodgers, K. E.編、Springer-Verlang, New York、307〜369頁(1992年)中、Dizerega, G. S. & Rodgers, K. E.、「Prevention of Postoperative Adhesions」
【非特許文献３】Johns, A.、Human Reproductive Update、7(6):577〜579頁(2001年)
【非特許文献４】LiおよびFriedman、J. Gastroenterol. Hepatol. 14:618〜633頁、1999年
【非特許文献５】Friedman、Seminars in Liver Disease 19:129〜140頁、1999年
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【非特許文献８】Hunskaar, Br J Dermatol 114巻、631〜4頁、1986年
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【非特許文献３６】Eliasら、Am J Pathol 173、689〜699頁、2008年
【非特許文献３７】Xiaら、Blood 102、161〜168頁、2003年
【非特許文献３８】Wiseら、Virus Res 128、115〜125頁、2007年
【非特許文献３９】Inderら、Febs J 275、207〜217頁、2008年
【非特許文献４０】Inoueら、Arterioscler Thromb Vasc Biol 27巻、99〜105頁、2007年
【非特許文献４１】Kibaら、Biochem Biophys Res Commun 301巻、371〜377頁、2003年
【非特許文献４２】Wiseら、J Biol Chem 278巻、38004〜38014頁、2003年
【非特許文献４３】Wiseら、Cellular Microbiology14巻(9号)1376〜1390頁、2012年
【非特許文献４４】Zhengら、Arterioscler Thromb Vasc Biol 26巻、2019〜2026頁、2006年
【非特許文献４５】Zhengら、Arterioscler Thromb Vasc Biol 27巻、503〜511頁、2007年
【非特許文献４６】Avdic, Sら、Viral Interleukin-10 Expressed by Human Cytomegalovirus during the Latent Phase of Infection Modulates Latently Infected Myeloid Cell Differentiation、J. Virol. July 2011年85巻、7465〜7471頁。
【非特許文献４７】Kotenko, SVら、Human Cytomegalovirus harbors its own unique IL-10 homolog (cmvIL-10)、PNAS 97巻:1695〜1700頁(2000年)
【非特許文献４８】Wiseら、J Gen Virol 88巻、1677〜1682頁、2007年
【非特許文献４９】Flemingら、J Virol 71巻、4857〜4861頁、1997年
【非特許文献５０】Haigら、Virus Res 88巻、3〜16頁、2002年
【非特許文献５１】Imlachら、J Gen Virol 83巻、1049〜1058頁、2002年
【非特許文献５２】Chanら、J Gen Virol 87巻、3177〜3181頁、2006年
【非特許文献５３】Lateefら、J Gen Virol 84巻、1101〜1109頁、2003年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
創傷治癒プロセスの根底にある原理の理解の進歩にもかかわらず、治癒の遅い創傷、不完全にしか治癒しない創傷などの期待される速度で治癒しない創傷および慢性創傷において見られるような易感染性の創傷治癒、瘢痕ならびにケロイドおよび肥厚性瘢痕、萎縮性(atropic)瘢痕、広範な瘢痕および瘢痕拘縮を含めた異常なまたは過剰な瘢痕ならびに手術による癒着を含めた癒着を含めた、創傷ケアおよび組織修復のための、ならびに創傷治癒を改善および/または促進するための適した治療選択肢に対する、重大な未だ対処されていない必要性が依然としてある。急性および慢性創傷、炎症、線維症、瘢痕および癒着によって引き起こされるものなどの状態を治療するための、改善された方法および組成物が当技術分野では必要である。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本明細書において記載され、特許請求される発明は、それだけには限らないが、この簡単な概要において示されるか、記載されるか、または参照されるものを含めた多数の属性および実施形態を有する。包括的であるよう意図されず、本明細書において記載され、特許請求される本発明は、この簡単な概要において同定される特徴もしくは実施形態に、またはそれによって限定されず、この簡単な概要は、単に例示目的で含まれるのであって、制限ではない。
【００２４】
本発明は、概して、ウイルス性血管内皮増殖因子と、例えば、抗炎症性インターロイキンを含めた抗炎症性サイトカインの組合せに関する。
【００２５】
一実施形態では、本発明は、一緒に、または組み合わせて投与される、ウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカインを含む。別の実施形態では、本発明は、ウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカインを、医薬上許容される担体と一緒に含む組成物を提供する。一実施形態では、組み合わせた、または別個投与のためのウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカインの量は、創傷治癒を促進するのに、また創傷、特に、急性創傷ならびに治癒の遅い創傷、不完全にしか治癒しない創傷、慢性創傷および裂開創傷などの期待される速度で治癒しない創傷を治療するのに有効である。その他の実施形態では、組み合わせた、または別個投与のためのウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカインの量は、線維症、癒着、炎症または瘢痕を低減するのに有効である。
【００２６】
一実施形態では、本発明は、ウイルス性血管内皮増殖因子および哺乳動物の抗炎症性サイトカインを含む。別の実施形態では、本発明は、ウイルス性血管内皮増殖因子および哺乳動物の抗炎症性インターロイキンを含む。さらに別の実施形態では、本発明は、ウイルス性血管内皮増殖因子および哺乳動物のIL-10を含む。
【００２７】
一実施形態では、本発明は、ウイルス性血管内皮増殖因子およびウイルス性抗炎症性サイトカインを含む。別の実施形態では、本発明は、ウイルス性血管内皮増殖因子およびウイルス性抗炎症性インターロイキンを含む。さらに別の実施形態では、本発明は、ウイルス性血管内皮増殖因子およびウイルス性IL-10を含む。なお別の実施形態では、本発明は、ウイルス性血管内皮増殖因子およびパラポックスウイルスIL-10を含む。別の実施形態では、本発明は、ウイルス性血管内皮増殖因子およびオルフウイルスIL-10を含む。
【００２８】
一実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子は、VEGF-Eである。別の実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子は、パラポックスウイルスVEGF、例えば、パラポックスウイルスVEGF-Eである。なお別の実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子は、オルフウイルスVEGF、例えば、オルフウイルスVEGF-Eである。
【００２９】
したがって、本発明の一例は、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10を含み、一実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10のうち一方または両方が、オルフウイルス由来である。
【００３０】
一実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子およびウイルス性インターロイキンは、組合せとして使用され得る。別の実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子およびウイルス性インターロイキンは、組み合わせて別個に使用され得る。
【００３１】
別の態様では、本発明は、医薬担体と組み合わせてウイルス性血管内皮増殖因子およびウイルス性インターロイキンを含む。一実施形態では、本発明は、医薬担体と組み合わせてVEGF-Eおよびウイルス性IL-10を含む。一実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、オルフウイルス由来である。
【００３２】
別の態様では、本発明は、対象への治療適用のための使用説明書と一緒に、医薬担体と組み合わせてウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)を含むキットを含む。一実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子は、VEGF-Eであり、ウイルス性インターロイキンは、ウイルス性IL-10である。別の実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、パラポックスウイルス(parapaoxvirus)、例えば、オルフウイルス由来である。
【００３３】
別の態様では、本発明は、対象への治療適用のための使用説明書と一緒に、医薬担体と組み合わせてウイルス性血管内皮増殖因子および医薬担体と組み合わせて抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)を含むキットを含む。一実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子は、VEGF-Eであり、ウイルス性インターロイキンは、ウイルス性IL-10である。別の実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、パラポックスウイルス、例えば、オルフウイルス由来である。
【００３４】
本発明はまた、急性創傷、治療の遅い、治癒不良、治癒に時間かかる創傷、慢性創傷および裂開創傷の治療におけるウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の使用に関する。一実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10が、治療のために使用される。別の実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、パラポックスウイルス、例えば、オルフウイルス由来である。
【００３５】
本発明はまた、対象において線維症を低減するためのウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の使用に関する。一実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10が、線維症を低減するために使用される。別の実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、パラポックスウイルス、例えば、オルフウイルス由来である。
【００３６】
本発明はまた、対象において癒着または癒着の形成を低減するためのウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の使用に関する。一実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10が、癒着または癒着の形成を低減するために使用される。別の実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、パラポックスウイルス、例えば、オルフウイルス由来である。
【００３７】
本発明はまた、対象において炎症を低減するためのウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の使用に関する。一実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10は、炎症を低減するために使用される。別の実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、パラポックスウイルス、例えば、オルフウイルス由来である。
【００３８】
本発明はまた、対象において瘢痕を低減するためのウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の使用に関する。一実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10は、瘢痕を低減するために使用される。別の実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、パラポックスウイルス、例えば、オルフウイルス由来である。
【００３９】
一態様では、ウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)は、一緒に対象に投与される。この態様の一実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子は、VEGF-Eであり、ウイルス性インターロイキンは、ウイルス性IL-10である。本発明のこの態様の別の実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、パラポックスウイルス、例えば、オルフウイルス由来である。
【００４０】
別の態様では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10は、別個に対象に投与される。この態様の一実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子はVEGF-Eであり、ウイルス性インターロイキンは、ウイルス性IL-10である。本発明のこの態様の別の実施形態では、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の一方または両方が、パラポックスウイルス、例えば、オルフウイルス由来である。
【００４１】
本発明はまた、創傷治癒のために、または炎症、癒着、線維症および/もしくは瘢痕の低減のために有用な1種または複数のその他の薬剤と組み合わせた、ウイルス性血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の使用に関する。
【００４２】
このようなその他の薬剤の例として、抗コネキシン剤、例えば、抗コネキシンポリヌクレオチド(例えば、α-lコネキシンオリゴデオキシヌクレオチドなどのコネキシン阻害剤)、抗コネキシンペプチド(例えば、抗体および抗体結合断片)およびペプチドミメティック(例えば、α-l抗コネキシンペプチドまたはペプチドミメティック)、ギャップ結合閉鎖性または遮断性化合物、ヘミチャンネル閉鎖性または遮断性化合物およびコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド、例えば、オステオポンチンまたはオステオポンチン結合部位と結合するポリペプチド、抗オステオポンチンポリヌクレオチドならびに抗オステオポンチン(anti-ostepontin)剤、特に、抗オステオポンチンポリヌクレオチドが挙げられる。抗オステオポンチンペプチドミメティックは、膜輸送を促進するために、それ自体で、または1種もしくは複数のその他の薬剤、例えば、アンテナペディアと複合体を形成して投与され得る。
【００４３】
例えば、急性創傷、治癒の遅い創傷および慢性創傷の治療のための、1種または複数のウイルス性血管内皮増殖因子および1種または複数の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)種を使用する本発明の組成物および方法が、記載され、特許請求される。特定の実施形態では、組成物は、治療上有用な組成物、特に、対象において治癒または組織修復を促進するのに有効な量で、1種もしくは複数のウイルス性血管内皮増殖因子および/または1種もしくは複数の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)種を含む医薬組成物または獣医薬組成物を含む。結果として、傷害または創傷の治癒は、開始および/または増強され得、炎症、癒着、線維症および/または瘢痕は低減され得る。
【００４４】
本発明の実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子は、パラポックスウイルスVEGFである。特定の実施形態では、ウイルス性血管内皮増殖因子は、オルフウイルスVEGFである。
【００４５】
本発明の実施形態では、ウイルス性インターロイキン種は、ウイルス性IL-10を含む。その他の実施形態では、ウイルス性IL-10は、パラポックスウイルスIL-10である。一実施形態では、ウイルス性IL-10は、オルフウイルスIL-10である。
【００４６】
本発明の方法、組成物およびキットは、例えば、注射、局所および吸入送達形態および製剤を含む。このような送達形態および製剤として、本明細書において記載されるような、対象の治療のためのものが挙げられる。
【００４７】
医薬組成物はまた、組み合わされた調製物の形態で、例えば、単独で、1種または複数の治療薬、例えば、抗コネキシンならびに抗オステオポンチンポリヌクレオチド、ペプチドおよびもしくはペプチドミメティック種を含めた1種または複数の抗コネキシンまたは抗オステオポンチン剤と併せた、あるいは、それと組み合わせた、1種または複数のウイルス性血管内皮増殖因子と1種または複数の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)種の混合物として提供される。
【００４８】
用語「組み合わされた調製物」として、本明細書において定義される組合せパートナーが、独立に、または区別される量の2種以上の薬剤種との異なる固定された組合せの使用によって、すなわち、同時に、別個にまたは逐次投薬され得るという意味で「パーツのキット」が挙げられる。次いで、キットのパーツは、例えば、同時にまたは経時的に交互に、すなわち、パーツのキットの任意のパーツについて、異なる時点で、等しいかもしくは異なる時間間隔で、および/または同一もしくは異なる投薬数で、投与され得る。
【００４９】
いくつかの実施形態では、組み合わされた調製物が投与され、これでは、2種以上の別個の組成物が対象に投与され、第1の組成物は、1種または複数のウイルス性血管内皮増殖因子の治療上有効な量を含み、第2の組成物は、1種または複数の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)種の治療上有効な量を含む。その他の実施形態では、1種または複数の抗コネキシンまたは抗オステオポンチンポリヌクレオチド、ペプチドもしくはペプチドミメティックを含む第3の組成物が投与される。一実施形態では、抗コネキシン剤は、抗コネキシン43剤である。
【００５０】
組み合された投与、同時投与、別個の投与、逐次投与または持続投与のための医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、1種または複数のウイルス性血管内皮増殖因子および/または1種または複数の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)種を含む組成物が、1種または複数の抗コネキシン剤および/または抗オステオポンチン剤と同時に、またはほぼ同時に投与される。一実施形態では、1種または複数のウイルス性血管内皮増殖因子および/または1種または複数の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)種を含む組成物が、1種または複数の抗コネキシン剤および/または抗オステオポンチン剤の少なくとも約30、60、90もしくは120分、または約3、4、5、6、8、12、24、48もしくは168時間以内に投与される。
【００５１】
一態様では、本発明は、医薬上許容される担体と、1種もしくは複数のウイルス性血管内皮増殖因子および/または1種もしくは複数の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)種の治療上有効な量を単独で、または1種もしくは複数のその他の治療薬種、例えば、第1の抗コネキシン剤種、第2の抗コネキシン剤種、第1の抗オステオポンチン剤種および/または第2の抗オステオポンチン剤種と一緒に、またはそれと組み合わせて含む、注射、局所、全身および吸入送達形態ならびに製剤を含めた医薬組成物を含む。このような組成物は、例えば、創傷治癒および本明細書に記載されるようなその他の適用のために有用である。
【００５２】
ウイルス性血管内皮増殖因子の例として、パラポックスウイルスVEGFならびにVEGF-Eをコードするすべてのオルフウイルス株(例えば、NZ2、NZ10、NZ7、D1701など)に由来するVEGFが挙げられる。パラポックスウイルスVEGFとして、パラポックスウイルス株BPSV、PVNZおよびPCPVならびにVEGF-Eをコードするすべてのその他の株に由来するVEGFが挙げられる。その他のウイルス種に由来するVEGFが、本発明の範囲内に含まれる。その他の実施形態では、ウイルス性VEGFは、天然に存在するか、天然に存在しないかに関わらず((例えば、ランダムまたは部位指定突然変異誘発によって)設計または発見された天然に存在する分子の誘導体または変異体を含む)、VEGFR-1よりもVEGFR-2を活性化する任意の分子であり得る。その他の実施形態では、ウイルス性VEGFは、天然に存在するか、天然に存在しないかに関わらず((例えば、ランダムまたは部位指定突然変異誘発によって)設計または発見された天然に存在する分子の誘導体または変異体を含む)、VEGFR-2を活性化するが、VEGFR-1とはっきりと結合しないか、または活性化しない任意の分子であり得る。
【００５３】
ウイルス性インターロイキン種の例として、オルフウイルス、EBV、CMV由来のウイルス性インターロイキンが挙げられ、これらおよびその他のウイルス由来のIL-10を含む。ウイルス性インターロイキンとして、ポックスウイルスIL-17相同体、EBV CXCR相同体ならびにKSHV Il-6相同体およびIL-8R相同体が挙げられる。抗炎症活性を有するこれらおよびすべてのその他のウイルス性インターロイキンは、本発明の範囲内にある。ポックスウイルスはまた、抗炎症性ケモカインミミック、インターロイキン/TNF/ケモカイン結合タンパク質およびその他のIL-119/20/22様タンパク質も有する。抗炎症活性を有するすべてのこのようなタンパク質は、本発明の範囲内にある。
【００５４】
抗コネキシンおよび抗オステオポンチン(anti-ostepontin)剤の例として、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドを含めたポリヌクレオチドがある。抗コネキシンおよび抗オステオポンチン(anti-ostepontin)ポリヌクレオチドの例として、アンチセンス(修飾および非修飾主鎖アンチセンスを含む)、RNAiおよびmiRNAおよびsiRNAを含めた、抗コネキシンおよび抗オステオポンチン(anti-ostepontin)オリゴデオキシヌクレオチドが挙げられる。適した抗コネキシンペプチドとして、コネキシン細胞外ドメイン、例えば、またはコネキシン細胞内ドメインと結合するペプチドが挙げられる。ペプチドミメティックは、細胞内コネキシン領域およびドメインとの結合のための膜輸送を促進するために、1種または複数のその他の薬剤、例えば、アンテナペディアと複合体を形成され得る。
【００５５】
本発明は、同時に、別個にもしくは逐次投与される、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)(単独で、または1種または複数の治療薬種と組み合わせて)の使用によって、創傷治癒の速度、程度および/または質の増大を提供する。
【００５６】
本発明は、同時に、別個にもしくは逐次投与される、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)(単独で、または1種もしくは複数の治療薬種と組み合わせて)の使用によって、炎症の低減を提供する。
【００５７】
本発明は、同時に、別個にもしくは逐次投与される、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)単独で、または1種もしくは複数の治療薬種と組み合わせて)の使用によって、瘢痕の低減および/または瘢痕の質の上昇を提供する。
【００５８】
特定の実施形態では、同時に、別個にもしくは逐次投与される、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の組み合わされた使用は、このような組み合わされた使用の結果として、より少ない投与の時点および/またはより増大した投与の間の時間間隔を有する。その他のこのような実施形態では、組み合わされた使用によって、投与の頻度の低減が可能となる。その他の実施形態では、組み合わされた使用によって、薬剤が単独で投与される場合に有効であり得る用量(単数または複数)と比較して、このような薬剤の低減した用量の使用が可能となる。
【００５９】
特定のその他の実施形態では、1種または複数のその他の治療薬、例えば、1種もしくは複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、ペプチドもしくはペプチドミメティックおよび/または1種もしくは複数の抗オステオポンチンポリヌクレオチド、ペプチドもしくはペプチドミメティックと同時に、別個にもしくは逐次投与される、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の組み合わされた使用は、所望の治療成績、例えば、創傷治癒の促進において、または炎症、線維症、癒着形成および瘢痕の低減のために、相加効果、相乗効果または超相加効果を有する。これらの実施形態のうちいくつかでは、組み合わされた調製物の投与は、このような組み合わされた使用の結果として、より少ない投与の時点および/またはより増大した投与の間の時間間隔を有する。その他のこのような実施形態では、組み合わされた使用によって、投与の頻度の低減が可能となる。その他の実施形態では、組み合わされた使用によって、薬剤が単独で投与される場合に有効であり得る用量(単数または複数)と比較して、このような薬剤の低減した用量の使用が可能となる。
【００６０】
別の態様では、本発明は、同時に、別個にもしくは逐次投与される、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の治療上有効な量を投与するための方法を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、慢性創傷および全体的に、または部分的に、時間のかかる、遅いまたは不完全な創傷治癒を特徴とする創傷を含めた創傷を有する対象への投与に適した、遅延放出調製物、緩徐放出調製物、延長放出調製物、制御放出調製物で、および/または反復作用調製物で製剤化される。慢性創傷として、糖尿病性潰瘍(例えば、糖尿病性足部潰瘍)、静脈性潰瘍、静脈うっ血性潰瘍、褥瘡、褥瘡性潰瘍、血管炎性潰瘍、動脈性潰瘍、感染性潰瘍、火傷潰瘍、外傷誘発性潰瘍、炎症性潰瘍および壊疽性膿皮症と関連している潰瘍形成が挙げられる。慢性創傷としてまた、持続性上皮欠損を含めた眼部潰瘍が挙げられる。いくつかの実施形態では、対象は、糖尿病であり、その他では、対象は、心血管疾患または状態、例えば、静脈性高血圧症、静脈性機能不全および/または動脈性機能不全を有する。
【００６１】
特定のその他の態様では、本発明は、急性創傷ならびに治癒の遅い創傷および慢性創傷を含めた期待される速度で治癒しない創傷を含めた創傷と関連している種々の疾患、障害および状態を患うか、またはその危険にある対象を治療するための本発明の化合物および組成物を使用する方法に関する。1種または複数の本発明の医薬組成物を用いる、例えば、創傷または本明細書に示されるようなその他の適応症のための対象の治療は、その同時投与、別個投与、逐次投与または持続投与を含み得る。
【００６２】
さらに別の態様では、本発明は、全体的に、または部分的に、創傷または修復を必要とする組織を特徴とする任意の疾患、障害および/または状態を有するか、有すると疑われるか、その傾向がある、またはその危険にある対象を治療するための方法を含む。このような組成物として、例えば、局所および吸入送達形態ならびに製剤が挙げられる。
【００６３】
別の態様では、本発明は、例えば、急性ならびに治癒の遅い創傷および慢性創傷を含めた期待される速度で治癒しない創傷を含めた創傷の治療において使用するための、1種または複数の治療上有効な量の本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む治療の方法を提供する。
【００６４】
別の態様では、本発明は、同時に、別個にもしくは逐次投与された、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)治療上有効な量を単独で、または1種もしくは複数の抗コネキシンおよび/もしくは抗オステオポンチン剤と組み合わせて含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む治療の方法を提供する。また、本発明の範囲内に、手術に先立つ前治療がある。これは、切開、切除または修正点での局所損傷を低減する、例えば、細胞を治癒に向けて刺激する。
【００６５】
さらに別の態様では、本発明は、第1の組成物と、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)を含む、少なくとも1種のその他の治療用組成物(例えば、第2の組成物、第2および第3の組成物など)を、それを必要とする対象に投与することを含む治療の方法を提供する。この態様の実施形態では、「第1の」組成物は、同時に、別個にもしくは逐次投与された、または組み合わせて投与された、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および/または少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の治療上有効な量を含むが、これは、このような組成物が、その他の治療用組成物(複数可)よりも前に、それよりも頻繁に、またはそれとは異なる経路によって投与されることを意味するものではない。言い換えると、これらの実施形態の一部では、第1の組成物がまず投与され、その他の中では、第2の組成物がまず投与される。3種の異なる治療用組成物の投与が関与する実施形態では、このような方法は、例えば、同一または異なる投薬または投与計画に従う、組成物の各々の同時投与を含み得る。
【００６６】
さらなる態様において、本発明は、それを必要とする対象において瘢痕形成を改善または低減するための、対象において線維症を改善または低減するための、および対象において癒着形成を改善または低減するための方法を提供し、前記対象に、同時に、別個にもしくは逐次投与された、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)を単独で、または1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせて含む医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含む。
【００６７】
特定の実施形態では、組合せ治療の方法は、同時に、別個にもしくは逐次投与された、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の投与を含み、その一部またはすべては、薬剤(単数または複数)が単独で投与される場合、すなわち、物理的に、または創傷もしくは改善されるべきその他の状態の治療の過程においてのいずれかで、組み合わせて投与されない場合に使用されるもの未満である量または用量で提供される。投与される薬剤のこのようなより少ない量は、通常、単独で投与される量の約1/2、1/3、1/4、1/5、1/6、1/8、1/10または約1/12である。
【００６８】
さらなる態様において、本発明は、対象の皮膚と接着され得るか、またはそうでなければ関連し得る、経皮パッチ、ドレッシング、パッド、ラップ、マトリックスおよび絆創膏を含む。前記物品は、対象に、同時に、別個にもしくは逐次投与された、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の治療上有効な量を単独で、または1種もしくは複数の治療薬と組み合わせて送達し得る。
【００６９】
別の態様では、本発明は、同時投与、別個の投与または逐次投与または組合せ投与のための(単独または1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせた)、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の治療上有効な量を含有する容器(単数または複数)を含む製造品および対象の治療のための使用を含めた使用のための説明書を含む。
【００７０】
本発明は、同時に、別個にもしくは逐次投与される、または組み合わせて投与される、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)を単独または1種もしくは複数のその他の治療薬を含有する投与形と一緒に含有する1種または複数の投与形を含有するパッケージング材料を含む製造品を含み、ここで、パッケージング材料は、投与形が、全体的に、または部分的に、炎症による、瘢痕による、線維症による、または癒着による急性創傷治癒、障害のある創傷治癒、遅い創傷治癒または慢性創傷治癒を特徴とする疾患、障害および/または状態を含めた、本明細書において記載されるか、または参照される疾患、障害および/または状態のいずれかを有するか、または有する疑いのある、またはその傾向がある対象のために使用され得ることを示す表示を有する。このような投与形として、例えば、局所送達形態および製剤、粉末化送達形態および製剤、注射または注入に適した送達形態および製剤(投与に先立って適した希釈液で再構成されなくてはならない乾燥または粉末化組成物を含む)ならびに滴下注入に適した送達形態および製剤が挙げられる。適した製剤は、所望の治療効果を達成するのに適した治療薬の量を送達する。局所製剤の例として、フォーム剤、スプレー剤およびゲル剤が挙げられる。ゲル剤の例として、ポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンコポリマーベースのゲル剤およびカルボキシメチルセルロースベースおよび関連セルロースゲル剤ならびにアルギン酸ゲル剤が挙げられ、プルロニックゲル剤が特に有用である。
【００７１】
本発明は、例えば、局所送達形態および製剤を含めた医薬の製造における本発明の組成物の治療上有効な量の使用のための方法も含む。このような医薬として、急性創傷、治癒の遅い、治癒不良および治癒に時間のかかる創傷、慢性創傷ならびに裂開創傷の治療を含めた、本明細書において記載されるような対象の治療のためのものが挙げられる。
【００７２】
別の態様では、本発明は、それを必要とする患者における、創傷治癒の促進、改善された、および/もしくは低減された瘢痕、改善された、および/もしくは低減された炎症、低減された線維症または低減された癒着形成のための医薬製剤の製造における、同時に、別個にもしくは逐次投与される、または組み合わせて投与されるべき、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)の使用を提供する。これらの実施形態の一部では、製品は、創傷ドレッシングまたは創傷治癒促進マトリックスを含む。例えば、創傷ドレッシングまたはマトリックスは、少なくとも1種のウイルス性血管内皮増殖因子および少なくとも1種の抗炎症性サイトカイン(例えば、ウイルス性インターロイキン)を含む組成物が、固体基板上または固体基板中に分散された固体基板の形態で提供される。
【００７３】
さらに別の実施形態では、本発明は、結合組織増殖因子(CTGF)阻害剤、例えば、CTGFアンチセンス化合物と併せた、またはそれと組み合わせた本発明の化合物および組成物の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、例えば、線維症を治療するための、ならびに/または癒着および瘢痕形成を低減するための、PDGF受容体阻害剤と併せた、またはそれと組み合わせた本発明の化合物および組成物の使用を提供する。PDGF受容体阻害剤として、例えば、受容体遮断薬、受容体アンタゴニストが挙げられる。CTGFおよびPDGF受容体阻害剤としてまた、CTGFまたはPDGF受容体を対象とする抗体および抗体結合断片を含めた特定の抗体またはその他の結合分子と接触させる抗原決定基(例えば、エピトープ)と結合できる、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片(例えば、Fab、F(ab')2およびFv断片;一本鎖抗体;一本鎖Fv;ならびに例えば、結合ドメイン、ヒンジ、CH2およびCH3ドメインを含むものなどの一本鎖結合分子)、組換え抗体および抗体断片が挙げられる。別の実施形態では、本発明は、例えば、創傷を治療するためのPDGF受容体アゴニストと併せた、またはそれと組み合わせた、またはそれと組み合わせた、本発明の化合物および組成物の使用を提供する。
【００７４】
さらに別の実施形態では、本発明は、例えば、Dermagraft(登録商標)(ヒト線維芽細胞、細胞外周囲物質および生体吸収性フレームワークからなる単層低温保存代用真皮)、Apligraf(登録商標)(生存している、ヒトケラチノサイトによって形成される表皮層と、ウシ1型コラーゲンウェブ中のヒト線維芽細胞からなる真皮層を有する二層皮膚構築物)、Integra(登録商標)(ウシ腱コラーゲンの線維の多孔性鋳型およびグリコサミノグリカン(コンドロイチン-6-スルフェート)からなる真皮代用物層ならびに水分喪失を制御するための薄いシリコンからなる代用表皮層を含む皮膚代用物のための二層膜系)、AlloDerm(登録商標)(無細胞真皮マトリックス)、Cyzact(商標)(線維素によって送達されるヒト真皮線維芽細胞)、ICX-SKN(コラーゲンマトリックスを製造するよう再構築される線維芽細胞および線維素マトリックスの組合せ)、Keragraft(商標)(自己表皮等価物として創傷ケアのために開発されているヒト幹細胞由来製品)、OASIS(登録商標)Wound Matrix(ブタ由来無細胞小腸粘膜下組織から作製された、生物学的に誘導された細胞外マトリックスベースの創傷製品)、OrCel(商標)(ヒト表皮ケラチノサイトおよび真皮線維芽細胞が、ウシコラーゲンスポンジ上の2つの別個の層で培養されている二層細胞鋳型)、TransCyte(登録商標)(ポリマー膜および新生児ヒト線維芽細胞からなるヒト線維芽細胞由来一時的代用皮膚)などを含めた人工皮膚製品の適用と併せた、またはそれと組み合わせた、本発明の化合物および組成物の使用を提供する。例えば、BioBraneを含めた創傷治癒を促進するためのその他のドレッシングの適用と併せた、またはそれと組み合わせた、本発明の化合物および組成物はまた有用である。本発明の化合物および組成物はまた、創傷治癒を促進するために、例えば、HealthPoint(治療の時点で創傷床上に逐次噴霧される2種の成分:フィブリノゲン溶液および成長が停止した、生存している、同種異系の表皮ケラチノサイトおよび真皮線維芽細胞の混合物を含有する細胞調製物からなる、HP802-247として知られる細胞療法スプレー懸濁液)によって生じた細胞および培養された同種異系のケラチノサイトに対するスプレーを含めたその他の種類の足場またはドレッシングの適用と併せて、またはそれと組み合わせて使用され得る。
【００７５】
本発明はまた、ペプチドおよびペプチドミメティック、例えば、抗オステオポンチンポリヌクレオチド種を含めた抗オステオポンチン剤の単独での、または急性損傷、治癒の遅い創傷および慢性創傷の治療において有用な1種もしくは複数のその他の薬剤と組み合わせた使用に関する。
【００７６】
この簡単な概要における情報に、またはそれによって制限されない本発明のこれらおよびその他の態様は、以下に提供する。
【００７７】
各図の簡単な概要を以下に提供する。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療が、皮膚組織修復を個々の治療またはその哺乳動物の等価物よりも大きく加速することを示す図である。(A)種々のウイルス性および哺乳動物性因子を用いる治療の間の示された時点での4mmの真皮全層パンチ創傷の治癒プロセスの写真。治療のタイミングは、右に示されている。(B)創傷部位への示されたウイルス性および哺乳動物性因子の局所投与を用いたマウスの群(n=群あたり8匹)における皮膚創傷閉鎖の速度論。モック治療された創傷よりも有意に小さい値(P≦0.05)は、アステリスクによって示されている。所与の時点での競合治療間の有意差は、ナンバー記号で示されている。
【図２】ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療は、個々の治療同様、創傷閉鎖を、その哺乳動物性等価物よりも大きく加速することを示す図である。各治療群(n=8)の閉鎖の平均日数は、菱形で示されている。上位および下位四分位点は、それぞれ中白および中黒四角で示されている。異常値は、上および下に示されている。モック治療された創傷よりも有意に小さい値(P≦0.05)は、アステリスクによって示されている。特定の治療間の有意差は、ナンバー記号で示されている。
【図３Ａ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、表皮再生を個々の治療よりも大きく増強することを示す図である。表皮再生を、種々のウイルス性および哺乳動物性因子を用いて治療された創傷を受けた皮膚において調べた。3、6および9日目に採取された皮膚生検を、亜鉛塩溶液中で固定し、パラフィン包埋し、次いで、4μmの切片をMSBトリクロームで染色し、写真撮影した。スケールが示されている。
【図３Ｂ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、表皮再生を個々の治療よりも大きく増強することを示す図である。組織学的特徴が表示された創傷切片の模式図。各切片における再上皮化は、示されるように新生表皮によって覆われた総創傷幅のパーセンテージとして算出されている。
【図３Ｃ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、表皮再生を個々の治療よりも大きく増強することを示す図である。創傷再上皮化の速度は、ImageJを使用して4匹のマウス各々から得た2つの創傷から得られた6つの連続切片において定量化され、平均±SEとして表されている。未治療皮膚のものよりも有意に大きい値(P≦0.05)は、アステリスクによって示されている。個々の哺乳動物性およびウイルス性治療間または個々のおよび組合せ治療間または哺乳動物性およびウイルス性組合せ治療間の有意差は、ナンバー記号で示されている。
【図３Ｄ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、表皮再生を個々の治療よりも大きく増強することを示す図である。新生表皮の面積(2/切片)は、平均±SEとして表されている。未治療皮膚のものよりも有意に大きい値(P≦0.05)は、アステリスクによって示されている。個々の哺乳動物性およびウイルス性治療間または個々のおよび組合せ治療間または哺乳動物性およびウイルス性組合せ治療間の有意差は、ナンバー記号で示されている。
【図４】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、表皮回復を、個々のVEGF治療よりも大きく促進することを示す図である。(A)表皮回復を、種々のウイルス性および哺乳動物性因子で治療された、創傷を受けた皮膚において調べた。9日目に採取された創傷生検から得られた、亜鉛固定された、パラフィン包埋された皮膚切片は、MSBトリクロームで染色し、写真撮影した。スケールは、下の右側のパネルに示されており、乳頭間突起(RR)の例が表示されている。乳頭間突起形成の変化は、ImageJを使用して4匹のマウス各々から得た2つの創傷から得られた6つの連続切片において定量化した。(B)新生表皮から突き出る乳頭間突起の長さが、平均±SEとして表されている。未治療の、またはモック治療された皮膚のものよりも有意に大きい値(P＜0.05)は、それぞれ、アステリスクまたはナンバー記号によって示されている。
【図５】ウイルス性VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、表皮修復の重要な調節因子のタイミングおよびレベルを変更することによって表皮回復を促進することを示す図である。種々のウイルス性および哺乳動物性因子で治療された、創傷を受けた皮膚における重要な表皮調節因子の発現を、定量的RT-PCRを使用して経時的に調べた。cDNAは、全RNAの逆転写によって調製した(組み合わされた4つの左側腹部創傷/治療群)。創傷を受けた3日後のすべての治療について、(A)コネキシン43、(C)BMP-6、(E)EGFおよび(G)KGF mRNAのレベルが、左側のパネルに示されている。治癒の過程にわたる、組合せ治療についての(B)コネキシン43、(D)BMP-6、(F)EGFおよび(H)KGF mRNAのレベルが、右側のパネルに示されている。すべてのmRNAレベルは、GAPDHおよび創傷を受けていない皮膚のレベルに対する相対的なものである。値は、平均±SE(n=3)を表し、手順が、各治療群から得られた4つの右側腹部創傷を用いて反復された場合に決定された値と一致した。
【図６Ａ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、創傷への炎症細胞動員を、個々のIL-10治療と同様の程度に低減することを示す図である。6日目に採取した創傷生検から得た亜鉛固定し、パラフィン包埋した皮膚切片を、マクロファージマーカーF4/80(緑色染色;青色、核染色)について染色した。種々のウイルス性および哺乳動物性因子を用いて治療された、創傷を受けた皮膚の代表的な画像が示されている。スケールは、下の右側のパネルに示されており、F4/80+ve細胞の例が拡大されている。
【図６Ｂ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、創傷への炎症細胞動員を、個々のIL-10治療と同様の程度に低減することを示す図である。4匹のマウス各々から得た2つの創傷に由来する0.57mmの創傷境界内の炎症細胞数を定量化した。値は、1000mm2あたりの平均F4/80+veマクロファージ±SEとして表されている。未治療創傷のものよりも有意に低い値は、アステリスクによって示されている(P≦0.05)。
【図７】ウイルス性VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、炎症細胞遊走および活性化の重要な調節因子のタイミングおよびレベルを変更することによって創傷炎症を低減することを示す図である。種々のウイルス性および哺乳動物性因子で治療された、創傷を受けた皮膚における重要な炎症調節因子の発現を、定量的RT-PCRを使用して経時的に調べた。cDNAは、全RNAの逆転写によって調製した(組み合わされた4つの左側腹部創傷/治療群)。創傷を受けた3日後のすべての治療について、(A)IL-1β、(B)IL-6、(C)CCL2/MCP-1、(D)CXCL2/MIP-2α、(E)IL-10および(F)オステオポンチン/SPP-1 mRNAのレベルが示されている。すべてのmRNAレベルは、GAPDHおよび創傷を受けていない皮膚のレベルに対する相対的なものである。値は、平均±SE(n=3)を表し、手順が、各治療群から得られた4つの右側腹部創傷を用いて反復された場合に決定された値と一致した。
【図８Ａ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、筋線維芽細胞分化を低減することを示す図である。そのそれぞれのIL-10へのVEGFの添加は、ウイルス性または哺乳動物性IL-10の、筋線維芽細胞分化を低減する能力を減少しなかった。6日目に採取した創傷生検から得た亜鉛固定し、パラフィン包埋した皮膚切片を、線維芽細胞マーカービメンチン(緑色染色)および筋線維芽細胞マーカーαSMA(赤色染色;青色、核染色)について染色した。種々のウイルス性および哺乳動物性因子で治療された、創傷を受けた皮膚の代表的な画像が示されている。スケールが示されており、染色された細胞の例が拡大されている。
【図８Ｂ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、筋線維芽細胞分化を低減することを示す図である。そのそれぞれのIL-10へのVEGFの添加は、ウイルス性または哺乳動物性IL-10の、筋線維芽細胞分化を低減する能力を減少しなかった。肉芽組織内の赤色αSMA染色の強度を、4匹のマウス各々から得た2つの創傷から定量化した。値は、総αSMA強度±SEとして表されている。未治療創傷のものより有意に低い値は、アステリスクによって示されている(P≦0.05)。
【図９】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、血管再生を、個々のVEGF治療と同様の程度に促進することを示す図である。(A)新生真皮の再血管化を、種々のウイルス性および哺乳動物性因子で治療された、創傷を受けた皮膚において調べた。9日目に採取した創傷生検から得た亜鉛固定された、パラフィン包埋された皮膚切片を、MSBトリクロームで染色し、写真撮影した。スケールは、下の右側のパネルに示されており、血管(BV)の例が表示されている。(B)真皮血管化の程度は、血液を含有する真皮の割合を決定することによって、4匹のマウス各々から得た2つの創傷から得られた6つの連続切片において定量化した。値は、平均面積割合±SEとして表されている。未治療の創傷のものを有意に上回る面積割合は、アステリスクによって示されている(P≦0.05)。
【図１０Ａ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、創傷において血管成熟を、個々のVEGF治療と同様の程度に加速することを示す図である。9日目に採取した創傷生検から得た亜鉛固定された、パラフィン包埋された皮膚切片を、内皮細胞マーカーvWFおよび周皮細胞(periocyte)マーカーαSMA(緑色、vWF染色;赤色、αSMA染色;青色、核染色)について染色した。種々のウイルス性および哺乳動物性因子で治療された、創傷を受けた皮膚の代表的な画像が示されている。スケールは、下の右側のパネルに示されており、赤血球(自己蛍光橙色/黄色)未熟vWF+ve内皮細胞(ECのみ)およびαSMA+ve周皮細胞(EC/周皮細胞)によって囲まれたvWF+ve内皮細胞を含有する成熟血管の例が拡大され、表示されている。
【図１０Ｂ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、創傷において血管成熟を、個々のVEGF治療と同様の程度に加速することを示す図である。新生真皮内のvWF+ve細胞の総数およびαSMA+ve細胞と関連している割合は、4匹のマウス各々から得た2つの創傷から定量化した。値は、1000μm2あたりの平均vWF+ve細胞±SEとして表されている。各治療について、αSMA+ve細胞に隣接して見られる総vWF+ve細胞の平均割合は、暗灰色で影が付けられている。未治療創傷のものを有意に超える値は、アステリスクによって示されている(P≦0.05)。
【図１０Ｃ】VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、創傷において血管成熟を、個々のVEGF治療と同様の程度に加速することを示す図である。新生真皮内の赤血球の総数もまた、4匹のマウス各々から得た2つの創傷から定量化した。値は、1000μm2あたりの平均赤血球±SEとして表されている。未治療創傷のものを有意に下回る値は、アステリスクによって示されている(P≦0.05)。
【図１１】ウイルス性VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、血管形成の重要な調節因子のタイミングおよびレベルを変更することによって血管再生を促進することを示す図である。種々のウイルス性および哺乳動物性因子で治療された、創傷を受けた皮膚における重要な血管調節因子の発現は、定量的RT-PCRを使用して経時的に調べた。cDNAは、全RNAの逆転写によって調製した(組み合わされた4つの左側腹部創傷/治療群)。創傷を受けた3日後のすべての治療について、(A)VEGF-A、(B)PDGF-ββ、(C)CXCL4/PF4および(D)タンパク質C mRNAのレベルが、左側のパネルに示されている。治癒の過程にわたる、組合せ治療についての(E)VEGF-A、(F)PDGF-ββ、(G)CXCL4/PF4および(H)タンパク質C mRNAのレベルが、右側のパネルに示されている。すべてのmRNAレベルは、GAPDHおよび創傷を受けていない皮膚のレベルに対する相対的なものである。値は、平均±SE(n=3)を表し、手順が、各治療群から得られた4つの右側腹部創傷を用いて反復された場合に決定された値と一致した。
【図１２Ａ】ウイルス性VEGFおよびIL-10を用いる組合せ治療が、真皮創傷閉鎖を、個々の因子または哺乳動物性組合せよりも大きく促進するが、すべてのその他の治療よりも少ない肉芽組織形成をもたらすことを示す図である。真皮再生は、種々のウイルス性および哺乳動物性因子で治療された、創傷を受けた皮膚において調べた。3、6および9日目に採取された皮膚生検を、亜鉛塩溶液中で固定し、パラフィン包埋し、次いで、4μmの切片をMSBトリクロームで染色し、写真撮影した。スケールが、下の右側のパネルに示されている。
【図１２Ｂ】ウイルス性VEGFおよびIL-10を用いる組合せ治療が、真皮創傷閉鎖を、個々の因子または哺乳動物性組合せよりも大きく促進するが、すべてのその他の治療よりも少ない肉芽組織形成をもたらすことを示す図である。組織学的特徴が表示された創傷切片の模式図。真皮被覆度は、示されるように肉芽組織によって覆われた創傷床の面積のパーセンテージとして算出されている。
【図１２Ｃ】ウイルス性VEGFおよびIL-10を用いる組合せ治療が、真皮創傷閉鎖を、個々の因子または哺乳動物性組合せよりも大きく促進するが、すべてのその他の治療よりも少ない肉芽組織形成をもたらすことを示す図である。真皮被覆度は、ImageJを使用して4匹のマウス各々から得た2つの創傷から得られた6つの連続切片において定量化され、平均±SEとして表されている。未治療皮膚のものよりも有意に大きい値(P≦0.05)は、アステリスクによって示されている。個々の哺乳動物性およびウイルス性治療間または個々および組合せ治療間または哺乳動物性およびウイルス性組合せ治療間の有意差は、ナンバー記号で示されている。
【図１２Ｄ】ウイルス性VEGFおよびIL-10を用いる組合せ治療が、真皮創傷閉鎖を、個々の因子または哺乳動物性組合せよりも大きく促進するが、すべてのその他の治療よりも少ない肉芽組織形成をもたらすことを示す図である。肉芽組織の面積(2/切片)は、平均±SEとして表されている。未治療皮膚のものよりも有意に大きい値(P≦0.05)は、アステリスクによって示されている。個々の哺乳動物性およびウイルス性治療間または個々および組合せ治療間または哺乳動物性およびウイルス性組合せ治療間の有意差は、ナンバー記号で示されている。
【図１３】ウイルス性VEGFおよびIL-10を用いる組合せ治療が、肉芽組織リモデリングを、個々の治療および哺乳動物性等価物よりも大きく促進することを示す図である。9日目に採取された皮膚生検から得られたMSBトリクローム染色された切片の肉芽組織内のコラーゲン含量は、ピクセルあたりの青色染色の強度として算出し、平均±SEとして表されている。未治療皮膚よりも有意に大きい値(P≦0.05)は、アステリスクによって示されている。治療間の有意差は、ナンバー記号によって示されているか、またはP値が記載されている。
【図１４】ウイルス性VEGFおよびIL-10の組合せ治療が、真皮成熟の重要な調節因子のタイミングおよびレベルを変更することによって、肉芽組織リモデリングを増強することを示す図である。種々のウイルス性および哺乳動物性因子で治療された、創傷を受けた皮膚における重要な真皮調節因子の発現を、定量的RT-PCRを使用して経時的に調べた。cDNAは、全RNAの逆転写によって調製した(組み合わされた4つの左側腹部創傷/治療群)。治癒の過程にわたる、組合せ治療についての(A)αSMA、(B)TGF-β1、(C)TGF-β3、(D)p53、(E)III型コラーゲンおよび(F)I型コラーゲンmRNAのレベルが示されている。すべてのmRNAレベルは、GAPDHおよび創傷を受けていない皮膚のレベルに対する相対的なものである。値は、平均±SE(n=3)を表し、手順が、各治療群から得られた4つの右側腹部創傷を用いて反復された場合に決定された値と一致した。
【図１５】ウイルス性VEGF-EおよびIL-10の組合せ治療が、瘢痕回復を、個々の治療または哺乳動物性等価物よりも大きく増強することを示す図である。(A)種々のウイルス性および哺乳動物性因子での治療後の示された時点での治癒したパンチ創傷の写真。(B)外部創傷(13日目)を1:5のスケールで可視的にスコア化し、これでは、1は、十分に回復した創傷に相当し、5は、明らかな瘢痕を表し、平均±SEとして示されている(n=群あたり8創傷、6人の観察者によってスコア化された)。(C)Image Jを使用して内部瘢痕の面積(16日目)を測定し、平均±SEとして示されている(n=8)。モック治療された創傷よりも有意に小さい値(P≦0.05)は、アステリスクによって示されている。特定の治療間の有意差は、ナンバー記号で示されている。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
簡単な概要において示され、本明細書において詳細に記載されるように、本発明は、瘢痕および炎症を低減しながら、創傷治癒を加速/改善するための、組み合わせた、再生特性を有するウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性インターロイキンの使用に関する。一実施形態では、ウイルス性VEGFはVEGF-Eであり、ウイルス性インターロイキンはIL-10である。例えば、オルフウイルス由来のVEGF-Eおよびウイルス性IL-10が使用され得る。種々の例によって、再生特性を有するウイルス性VEGFを用いる治療および抗炎症性ウイルス性インターロイキンを用いる治療の組合せの驚くべき属性が示される。
【００８０】
実施例2では、ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療は、創傷の大きさを、個々のウイルス性治療または細胞性組合せよりも大きく低減する(図1を参照のこと)。ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療は、創傷閉鎖を、哺乳動物性(「細胞性」とも呼ばれる)組合せよりも大きく増強するということも実証される(図2を参照のこと)。実施例3および5に示されるように、ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療はまた、表皮再生も、個々の治療よりも大きく増強する(図3および5を参照のこと)。実施例4および5は、さらに、ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療が、VEGF治療単独によって誘発される表皮過形成を防止することを実証する(図4および5を参照のこと)。
【００８１】
実施例6および7では、ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療が、創傷炎症を低減し、重要なことに、VEGF治療単独によって誘発される炎症反応を防止すると示されている(図6および7を参照のこと)。実施例8は、ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療はまた、筋線維芽細胞分化を低減し、創傷収縮を制限すると実証する(図8を参照のこと)。実施例9、10および11は、ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療は、創傷再血管化を促進し得ると示す(図9〜11を参照のこと)。ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療はまた、実施例12〜14において、真皮再生および肉芽組織リモデリングを、個々のウイルス性治療または哺乳動物性/細胞性組合せよりも大きく増強すると示された(図12〜14を参照のこと)。
【００８２】
実施例15は、ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療は、個々のウイルス性治療または哺乳動物性/細胞性組合せよりも大きく、瘢痕回復を視覚的に改善し、瘢痕の大きさを低減することを実証する(図15を参照のこと)。
【００８３】
要約すると、実施例2および12〜15ならびに関連する図1および12〜15に示されるように、VEGF-Eおよびウイルス性IL-10などの、再生特性を有するウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性インターロイキンを組み合わせることによって、例えば、個々のウイルス性治療または哺乳動物性/細胞性組合せよりも大きく、創傷閉鎖および真皮再生/リモデリングが増強され、瘢痕が制限される。さらに、実施例3〜5および図3〜5に示されるように、ウイルス供給源に由来する、再生特性を有するVEGFおよび抗炎症性インターロイキンの組合せを用いる治療は、表皮再生および回復を、個々の治療よりも大きく増強する。重要なことに、ウイルス供給源のVEGFおよび抗炎症性インターロイキンを組み合わせることは、インターロイキン、例えば、vIL-10の、炎症および筋線維芽細胞分化を低減する能力を損なわず、VEGF治療の炎症性副作用を防止する。これは、実施例6〜8において実証される(関連する図6〜8を参照のこと)。本発明の別の重要な態様は、VEGF-EおよびvIL-10などのウイルス性VEGFおよびウイルス性インターロイキンを組み合わせることは、例えば、VEGFの創傷再血管化を増強する能力を損なわない、ということである(実施例9〜11および図9〜11を参照のこと)。
【００８４】
定義
本明細書において、「障害」とは、創傷治癒(急性創傷、裂開創傷ならびに治癒に時間のかかる治癒の遅いおよび慢性創傷を含む)を開始し、加速し、促進し、増強し、炎症を低減し、瘢痕を低減または軽減し、瘢痕の質を改善し、線維症を低減し、および/または癒着を低減する薬剤から利益を受ける任意の障害、疾患または状態である。例えば、疾患または障害および状態として、急性創傷が挙げられる。疾患、障害および状態としてまた、裂開創傷ならびに治癒に時間のかかる治癒の遅いおよび慢性創傷が挙げられる。また、細胞外マトリックス内の線維性物質の過剰製造を含めた線維性物質の過剰製造を特徴とする、疾患、障害および状態も含まれる。また、正常な組織要素の、マトリックス関連成分の異常な、非機能的および/または過剰な蓄積による置換を特徴とする、疾患、障害および状態も含まれる。また、癒着形成を特徴とする疾患、障害および状態も含まれる。また、創傷治癒を促進し、および/または膨潤、炎症および/または瘢痕形成(ケロイド瘢痕、肥厚性瘢痕、広範な(広がった)瘢痕および萎縮性(陥凹した)瘢痕を含めた、異常な瘢痕および過剰な瘢痕を含む)を低減する薬剤から利益を受ける任意の障害、疾患または状態も含まれる。例えば、手術または外傷に起因する創傷、期待される速度で治癒しない創傷(治癒の遅い創傷、不完全にしか治癒しない創傷、慢性創傷および裂開創傷など)ならびに神経因性、虚血性、微小血管病理、骨領域(尾骨(仙骨)、臀部(hip)(転子部)、臀部(buttocks)(坐骨)または足の踵)上の圧力、再潅流傷害および弁還流病因論および状態と関連する異常性と関連する創傷が含まれる。また、本明細書において記載されるような、増強された細胞性遊走、軽減された細胞性癒着、瘢痕および炎症から利益を受ける、疾患、障害および状態も含まれる。
【００８５】
本明細書において、「対象」とは、ヒト、家畜(domestic animals)および家畜(farm animals)ならびにイヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウシなどといった、動物園の動物、スポーツ用動物およびペット動物を含めた任意の哺乳動物を指す。本明細書における好ましい哺乳動物は、成人、小児および高齢者を含めたヒトである。対象はまた、動物園のトリ、スポーツ用のトリおよびペットのトリを含めたトリであり得る。好ましいスポーツ用の動物として、ウマおよびイヌがある。好ましいペット動物として、イヌおよびネコがある。
【００８６】
本明細書において、「防止すること」とは、物事もしくは事象、例えば、防止されるべき疾患、障害または状態の生成もしくは出現を、全体的にまたは部分的に防止することまたは寛解させることもしくは制御することまたは低減させることもしくは停止させることを意味する。
【００８７】
本明細書において、本発明の化合物または組成物に関連して「治療上有効な量」または「有効な量」とは、所望の生物学的、医薬的または治療的結果を誘導するのに十分な量を指す。結果は、疾患もしくは障害もしくは状態の徴候、症状もしくは原因の軽減または生物学的系の任意のその他の所望の変更であり得る。本発明では、結果は、線維症を防止することを含む。本発明の別の態様では、結果は、癒着の防止および/または低減を含む。本発明の別の態様では、結果は、瘢痕および異常な瘢痕の防止および/または低減ならびに過剰な瘢痕形成およびケロイド瘢痕、肥厚性瘢痕、広範な瘢痕および萎縮性瘢痕を含めたその他の種類の組織の異常な増殖の防止および/または低減を含む。本発明の別の態様では、結果は、任意の組織または臓器における炎症の防止および/または低減を含む。
【００８８】
さらなる態様によれば、結果は、治癒の速度における改善を含めた、全体的な、または部分的な、創傷治癒および創傷の閉鎖の促進および/または改善を含む。その他の利点として、全体的な、または部分的な、膨潤、炎症および/または瘢痕形成の低減が挙げられる。
【００８９】
本明細書において、用語「治療すること」および「治療」とは、治療的治療および予防的または防止的手段の両方を指す。治療を必要とするものとして、疾患、障害もしくは状態をすでに有するものならびに疾患、障害もしくは状態を有する傾向があるものまたは疾患、障害もしくは状態を有すると診断されたものまたは疾患、障害もしくは状態が防止されるべきものが挙げられる。したがって、例として、創傷治癒の促進、炎症の低減、細胞遊走の促進、細胞性癒着の低減、線維症または線維化組織の形成に先立って投与される、本発明の化合物および組成物および製剤の抗線維化適用が、本発明の範囲内にあり、癒着の形成に先立って投与される、本発明の化合物および組成物および製剤の抗癒着適用ならびに例えば、瘢痕低減手術または手順(または外科的前治療)において瘢痕形成に先立って投与される、本発明の化合物および組成物および製剤の抗瘢痕適用も同様である。
【００９０】
本明細書において、「ウイルス性VEGF」は、ウイルス起源の血管内皮増殖因子を含み、再生特性を有するウイルス性VEGFならびにウイルス起源の血管内皮増殖因子の再生特性を模倣する天然に存在するまたは天然に存在しない分子(例えば、VEGF-E)を含む。例えば、血管新生を促進するウイルス性VEGFが含まれ、表皮再生を促進するウイルス性VEGFも同様である。一実施形態では、ウイルス性VEGFは、VEGF-Eであり得る。別の実施形態では、ウイルス性VEGFは、オルフウイルスVEGFである。その他のウイルス性血管内皮増殖因子の例として、パラポックスウイルスVEGFならびにVEGF-Eをコードするすべてのオルフウイルス株(例えば、NZ2、NZ10、NZ7、D1701など)由来のVEGFが挙げられる。パラポックスウイルスVEGFとして、パラポックスウイルス株BPSV、PVNZおよびPCPVならびにVEGF-Eをコードするすべてのその他の株由来のVEGFが挙げられる。その他のウイルス種に由来するVEGFが含まれる。その他の実施形態では、ウイルス性VEGFは、天然に存在するか、天然に存在しないかに関わらず((例えば、ランダムまたは部位指定突然変異誘発によって)設計または発見された天然に存在する分子の誘導体または変異体を含む)、VEGFR-2をVEGFR-1よりも活性化する任意の分子であり得る。その他の実施形態では、ウイルス性VEGFは、天然に存在するか、天然に存在しないかに関わらず((例えば、ランダムまたは部位指定突然変異誘発によって)設計または発見された天然に存在する分子の誘導体または変異体を含む)、VEGFR-2を活性化するが、VEGFR-1とはっきりと結合しないか、または活性化しない任意の分子であり得る。
【００９１】
本明細書において、「抗炎症性サイトカイン」は、炎症を制御することまたは寛解させることにおいて有用である、ウイルスまたは哺乳動物起源のサイトカインである。  
【００９２】
本明細書において、「ウイルス性抗炎症性サイトカイン」は、炎症を制御することまたは寛解させることにおいて有用である、ウイルス起源のサイトカインである。同様に、「哺乳動物性抗炎症性サイトカイン」は、炎症を制御することまたは寛解させることにおいて有用である、哺乳動物起源のサイトカインである。
【００９３】
本明細書において、「哺乳動物性抗炎症性インターロイキン」は、炎症を制御することまたは寛解させることにおいて有用である、哺乳動物起源のインターロイキンである
【００９４】
本明細書において、例えば、抗炎症性サイトカインまたは抗炎症性インターロイキンとの関連で、用語「哺乳動物性」および「細胞性」は、同一のことを意味するものとする。すなわり、(例えば)サイトカインまたはインターロイキンは、細胞性であるか、または哺乳動物起源である。
【００９５】
本明細書において、「抗炎症性ウイルス性インターロイキン」は、炎症を制御することまたは寛解させることにおいて有用である、ウイルス起源のインターロイキンである。抗炎症性ウイルス性インターロイキンは、ウイルス起源のIL-10を含む。例えば、抗炎症性ウイルス性インターロイキンは、オルフウイルス由来のIL-10を含む。ウイルス性インターロイキン種のその他の例として、オルフウイルス、EBV、CMV由来のウイルス性インターロイキンが挙げられ、これらおよびその他のウイルス由来のIL-10を含む。ウイルス性インターロイキンとして、ポックスウイルスIL-17相同体、EBV CXCR相同体ならびにKSHV IL-6相同体およびIL-8R相同体が挙げられる。抗炎症活性を有するこれらおよびすべてのその他のウイルス性インターロイキンは、本発明の範囲内にある。ポックスウイルスはまた、抗炎症性ケモカインミミック、インターロイキン/TNF/ケモカイン結合タンパク質およびその他のIL-119/20/22様タンパク質も有する。抗炎症活性を有するすべてのこのようなタンパク質は、本発明の範囲内にある。
【００９６】
用語「ペプチドミメティック」および「ミメティック」は、模倣するタンパク質領域の実質的に同一の構造的および機能的特徴を有し得る天然に存在する化合物および合成化合物を含む。コネキシンタンパク質の場合には、これらは、例えば、コネキシンリピート結合、接着結合形成および維持ならびに細胞間癒着に関与するコネキシンタンパク質の細胞外領域中のコネキシンリピートドメインの細胞外ループを模倣し得る。
【００９７】
「ペプチド類似体」とは、鋳型ペプチドのものに類似の特性を有する化合物を指し、非ペプチド薬であり得る。ペプチドベースの化合物を含む「ペプチドミメティック」(「ミメティックペプチド」としても知られる)はまた、ペプチド類似体などのこのような非ペプチドベースの化合物も含む。治療上有用なペプチドと構造的に同様であるペプチドミメティックは、同等のまたは増強された治療効果または予防効果をもたらすために使用され得る。一般に、ペプチドミメティックは、パラダイムポリペプチド(すなわち、生物学的または薬理学的機能または活性を有するポリペプチド)と構造的に同一または同様であるが、例えば、-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH=CH-(シスおよびトランス)、-COCH2-、-CH(OH)CH2-および-CH2SO-からなる群から選択される結合によって、任意選択で置換されてもよい1種または複数のペプチド結合も有し得る。ミメティックは、完全に天然アミノ酸またはアミノ酸の非天然類似体のいずれかからなり得るか、または部分的に天然のペプチドアミノ酸および部分的にアミノ酸の非天然類似体のキメラ分子である。ミメティックはまた、このような置換がまた、ミメティック活性を実質的に変更しない限りは、任意の量の天然アミノ酸保存的置換を含み得る。例えば、一実施形態では、ミメティック組成物は、コネキシンタンパク質、コネキシン複合体または接着結合の生物活性(単数または複数)、例えば、隣接する細胞上の反対のコネキシン細胞外ドメインのコネキシンリピートのヘッドトゥーヘッドの結合、同一細胞中のコネキシンタンパク質の結合、細胞中のコネキシン複合体の形成、アクチン細胞骨格とのコネキシン複合体の結合および/または接着結合形成を防止することなどを下方制御できる場合には、抗コネキシン剤として有用である。
【００９８】
本明細書において、用語、活性の「モジュレーター」および「調節」は、その種々の形態で、化合物、例えば、コネキシンタンパク質、コネキシン複合体または接着結合の発現または作用または活性の全体的な、または部分的な阻害を指し、抗コネキシン剤として機能し得る。
【００９９】
一般に、用語「タンパク質」は、あるアミノ酸(またはアミノ酸残基)のα炭素と結合しているカルボン酸基のカルボキシル炭素原子が、隣接するアミノ酸のα炭素と結合しているアミノ基のアミノ窒素原子と共有結合するようになる場合に生じるような、ペプチド結合によって連結された2個以上の個々のアミノ酸(天然に存在するか否かに関わらず)の任意のポリマーを指す。これらのペプチド結合およびそれらを含む原子(すなわち、α炭素原子、カルボキシル炭素原子(およびその置換基酸素原子)およびアミノ窒素原子(およびその置換基水素原子))は、タンパク質の「ポリペプチド主鎖」を形成する。さらに、本明細書において、用語「タンパク質」は、用語「ポリペプチド」および「ペプチド」(時折、本明細書において同義的に使用され得る)を含むと理解される。同様に、タンパク質断片、類似体、誘導体および変異体は、本明細書において、「タンパク質」と呼ばれることがあり、特に断りのない限り「タンパク質」と見なされなければならない。用語、タンパク質の「断片」とは、タンパク質のアミノ酸残基のすべてよりも少ないものを含むポリペプチドを指す。タンパク質の「ドメイン」もまた、断片であり、活性または機能を付与するためにしばしば必要とされるタンパク質のアミノ酸残基を含む。
【０１００】
本明細書において、「同時に」は、本発明の1種または複数の薬剤、例えば、血管内皮増殖因子および抗炎症性サイトカインが、同時的に投与されることを意味するために使用されるのに対し、用語「組み合わせて」は、それらが、同時にではなく、物理的な組合せ中ではない場合に、それらが両方とも治療的に作用するために利用可能である時間枠内で「逐次」投与されることを意味するために使用される。したがって、「逐次」投与することは、両方とも有効量で存在するという条件で、1種の薬剤が、その他のものの後、数分(例えば、1、2、3、4、5、10、15、20、25、30)分または数時間、数日、数週間、または数ヶ月内に投与されることを可能にし得る。成分の投与(単数または複数)間の時間遅延は、成分の正確な性質、それらの間の相互作用およびそれらそれぞれの半減期に応じて変わる。
【０１０１】
用語「ドレッシング」とは、創傷(または組織または臓器)に局所適用するためのドレッシングを指し、全身投与に適した組成物を排除する。例えば、1種または複数のウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性ウイルス性インターロイキンは、織布または不織布材料などの創傷接触材料の固体シート中またはその上に分散され得るか、またはポリウレタンフォームなどのフォームの層中に、またはポリウレタンヒドロゲル、ポリアクリレートヒドロゲル、ゼラチン、カルボキシメチルセルロース、ペクチン、アルギン酸および/またはヒアルロン酸ヒドロゲルなどのヒドロゲル中に、例えば、ゲルまたは軟膏中に分散され得る。特定の実施形態では、1種または複数のウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性ウイルス性インターロイキンは、創傷への有効成分の持続放出を提供する生分解性シート材料、例えば、凍結乾燥コラーゲン、凍結乾燥コラーゲン/アルギン酸混合物(Johnson & Johnson Medical Limitedから登録商標FIBRACOLの下で入手可能)または凍結乾燥コラーゲン/酸化再生セルロース(Johnson & Johnson Medical Limitedから登録商標PROMOGRANの下で入手可能)のシート中にまたはその上に分散される。
【０１０２】
本明細書において、「マトリックス」は、例えば、コラーゲン、無細胞マトリックス、架橋している生物学的スキャフォールド分子、組織ベースのマトリックス(ブタベースの創傷治癒マトリックスを含む)、培養表皮自家グラフト、培養表皮同種グラフト、組織工学によって作られた皮膚、自己線維芽細胞およびケラチノサイトが播種されたコラーゲンおよびグリコサミノグリカン真皮マトリックス、AlloDerm(登録商標)(無傷の基底膜複合体を有する非生存同種異系の無細胞真皮マトリックス)、生存皮膚等価物(例えば、Dermagraft(登録商標)(分解性スキャフォールド上で増殖させた生存同種異系真皮線維芽細胞)、TransCyte(登録商標)(同種異系ヒト真皮線維芽細胞によって作製された細胞外マトリックス)、Apligraf(登録商標)(ケラチノサイト、線維芽細胞およびウシI型コラーゲンを含有する生存同種異系二層構築物)、Integra(登録商標)(ウシ腱コラーゲンの線維の多孔性鋳型およびグリコサミノグリカン(コンドロイチン-6-スルフェート)からなる真皮代用物層ならびに水分喪失を制御するための薄いシリコンからなる代用表皮層を含む、皮膚代用物のための二層膜系)、Cyzact(商標)(線維素によって送達されるヒト真皮線維芽細胞)、ICX-SKN (コラーゲンマトリックスを製造するよう再構築される線維芽細胞および線維素マトリックスの組合せ)、Keragraft(商標)(自己表皮等価物として創傷ケアのために開発されているヒト幹細胞由来製品)、OASIS(登録商標)Wound Matrix(ブタ由来無細胞小腸粘膜下組織から作製された、生物学的に誘導された細胞外マトリックスベースの創傷製品)およびOrCel(商標)(ウシコラーゲンの2層マトリックスの反対側に播種された同種異系線維芽細胞およびケラチノサイト)、BioBrane、培養同種異系ケラチノサイト、動物由来ドレッシング(例えば、Oasisのブタ小腸粘膜下組織無細胞コラーゲンマトリックス;およびE-Z Dermの無細胞の異種コラーゲンマトリックス)、組織ベースの生物工学によって作られた構造的フレームワーク、足場、生物製造された(biomanufactured)バイオプロテーゼおよび例えば、創傷治癒の促進において有用な細胞浸潤および増殖に適した血管グラフトなどのその他の埋め込まれるか、または適用される構造などのマトリックスを含む。マトリックスはまた、HealthPointによって開発されている、治療の時点で創傷床上に逐次噴霧される2種の成分:フィブリノゲン溶液および成長が停止した、生存している、同種異系の表皮ケラチノサイトおよび真皮線維芽細胞の混合物を含有する細胞調製物からなる、HP802-247としても知られている細胞療法スプレー懸濁液によっても提供される。
【０１０３】
さらなる適したバイオマトリックス材料として、抗原性および免疫原性を低減するよう化学修飾されたコラーゲン性組織を挙げることができる。その他の適した例として、創傷ドレッシングのためのコラーゲンシート、抗原不含または抗原が低減された無細胞マトリックス(Wilsonら、Trans Am Soc Artif Intern 1990年;36巻:340〜343頁)または異種移殖片材料に対する抗原反応を低減するよう操作されているその他のバイオマトリックスが挙げられる。創傷治癒の促進において有用なその他のマトリックスとして、例えば、不溶性コラーゲンおよびエラスチンを含む加工されたウシ心膜タンパク質(Courtmanら、J Biomed Mater Res 1994年;28巻:655〜666頁)および組織再生を加速するために宿主細胞遊走のための天然微小環境を提供するのに有用であり得るその他の無細胞組織(Maloneら、J Vasc Surg 1984年;1巻:181〜91頁)を挙げることができる。特定の実施形態では、マトリックス材料は、1種もしくは複数の抗コネキシン剤、抗オステオポンチン剤、抗コネキシン43剤および/またはこのような薬剤の部位特異的放出のための1種もしくは複数の治療薬および/またはウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性ウイルス性インターロイキンを補給され得る。
【０１０４】
創傷および創傷分類
慢性創傷、治癒に時間のかかる創傷および不完全にしか治癒しない創傷は、感染をもたらすことが多く、切断または死亡につながり得る。本明細書において記載または参照されるものを含めた特定の化合物の使用は、細胞間情報伝達を遮断、阻害または変更し得、これが慢性、治癒に時間のかかるおよび不完全にしか治癒しない創傷において閉鎖および治癒を促進し得るということが発見された。
【０１０５】
「創傷」とは、例えば、急性、治癒の遅い、治癒に時間のかかるまたは治癒が困難である創傷および慢性創傷を含めた、任意の組織に対する傷害を意味する。創傷の例として、開口および閉鎖創傷の両方を挙げることができる。創傷は、例えば、火傷、切開、切除、裂創、擦過、穿刺または穿通性創傷、手術による創傷、挫傷、血腫、圧挫損傷および潰瘍を含む。また、期待される速度で治癒しない創傷も含まれる。
【０１０６】
「期待される速度で治癒しない創傷」とは、治癒の遅い、治癒に時間のかかるまたは治癒が困難である創傷(治癒に時間のかかるまたは不完全にしか治癒しない創傷を含む)および慢性創傷を含めた、期待される、または通常の時間枠で治癒しない任意の組織への傷害を意味する。期待される速度で治癒しない創傷の例として、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、血管炎性潰瘍、動脈性潰瘍、静脈性潰瘍、静脈うっ血性潰瘍、褥瘡、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、外傷誘発性潰瘍、火傷潰瘍、壊疽性膿皮症と関連する潰瘍形成および混合潰瘍が挙げられる。
【０１０７】
本明細書において記載されるように、治癒の遅い、または治癒が困難である創傷として、例えば、少なくとも部分的に、1)長期炎症相、2)時間がかかって形成する細胞外マトリックスおよび3)上皮化の失速した速度または低下した速度のうち1種または複数を特徴とする創傷を挙げることができる。
【０１０８】
当技術分野では、用語「慢性創傷」とは、一般に、約3か月以内に治癒しなかった創傷を指すが、約1または2か月以内に治癒しなかった創傷である場合もある。慢性皮膚創傷として、例えば、褥瘡、糖尿病性潰瘍、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍、炎症性潰瘍および混合潰瘍が挙げられる。慢性創傷は、完全または部分的な動脈遮断に起因する潰瘍形成を含み得る動脈性潰瘍であり得る。慢性創傷は、静脈うっ血性潰瘍であり得、これは、静脈弁の機能不全および関連する血管疾患に起因する潰瘍形成を含み得る。慢性創傷は、外傷誘発性潰瘍であり得る。
【０１０９】
本明細書において、慢性創傷としてまた、例えば、少なくとも部分的に、1)創傷炎症の慢性自己永続化状態、2)欠損および欠陥のある創傷細胞外マトリックス(ECM)、3)不十分にしか応答しない(老化)創傷細胞(例えば、線維芽細胞)、制限されたECM製造ならびに4)幾分かは、必要なECM組織化の不足および遊走のための足場の不足による再上皮化の失敗を特徴とする創傷を挙げることができる。
【０１１０】
慢性創傷はまた、例えば、1)例えば、糖尿病性潰瘍、褥瘡(pressure ulcers)(褥瘡性潰瘍(decubitus ulcers))、静脈性および動脈性潰瘍を含めた潰瘍性病変につながる、長期炎症およびタンパク質分解活性、2)瘢痕につながる、創傷における長期線維症、3)罹患領域におけるマトリックスの進行性沈着、4)長い修復時間、5)少ない創傷収縮、6)時間のかかる再上皮化および7)肉芽組織の厚みの増大を特徴とし得る。
【０１１１】
例示的慢性創傷としてまた、「褥瘡」が挙げられる。例示的褥瘡は、AHCPR(米国医療政策研究機構(Agency for Health Care Policy and Research)、米国保健社会福祉省(U.S. Department of Health and Human Service))ガイドラインに基づいた、例えば、ステージ1を含めた創傷分類の4種のステージすべてを含み得る。ステージ1褥瘡は、その身体の隣接する領域または反対側の領域と比較されるその指標が、皮膚温度(温感または冷感)、組織堅牢性(堅いか、または沼地のような感触)および/または感覚(疼痛、そう痒)のうち1つまたは複数において変化を含み得る、無傷の皮膚の観察可能な圧力関連変更である。潰瘍は、軽く色素性の皮膚では、持続性発赤の定義される領域として現れるのに対し、より暗い皮膚の色では、潰瘍は、持続性の赤、青または紫の色相で現れ得る。ステージ1潰瘍形成は、無傷の皮膚の消退できない紅斑および皮膚潰瘍形成の先触れ病変を含み得る。より暗い皮膚を有する個体では、皮膚の変色、温感、浮腫、硬化または硬度もまた、ステージ1潰瘍形成の指標であり得る。ステージ2潰瘍形成は、表皮、真皮または両方を含む部分層皮膚喪失を特徴とし得る。潰瘍は、表面的なものであり、擦過、疱疹または浅いクレーターとして臨床的に見つかる。ステージ3潰瘍形成は、根底にある筋膜にまで広がり得るが、それを通してではない、皮下組織への損傷または皮下組織の壊死を含む全層皮膚喪失を特徴とし得る。潰瘍は、隣接する組織の侵食を伴うか伴わない深いクレーターとして臨床的に見つかる。ステージ4潰瘍形成は、広範な破壊、組織壊死または筋肉、骨または支持構造(例えば、腱、関節包など)への損傷を伴う全層皮膚喪失を特徴とし得る。
【０１１２】
例示的慢性創傷としてまた、「褥瘡性潰瘍」が挙げられる。例示的褥瘡性潰瘍は、虚血につながる、骨ばった隆起への長期の、軽減されない圧迫の結果として発生し得る。創傷は、麻痺した、意識不明の、または重度に衰弱した人など、体重を外すよう自身で体位を変えることができない患者において生じる傾向がある。米国保健社会福祉省によって定義されるように、主要な防止手段として、ハイリスク患者の同定;頻度評価;および予定された体位変換、適当な圧迫軽減寝具、防湿層および適切な栄養状態などの予防的手段が挙げられる。治療選択肢として、例えば、圧迫軽減、外科的および酵素的デブリードマン、湿性創傷ケアおよび細菌負荷管理を挙げることができる。本発明の特定の実施形態は、虚血につながる、骨ばった隆起への長期の、軽減されない圧迫に起因する、褥瘡性潰瘍または潰瘍形成を特徴とする慢性創傷を治療することを含む。
【０１１３】
例示的慢性創傷としてまた、「動脈性潰瘍」が挙げられる。動脈性潰瘍として、完全または部分的な動脈遮断を特徴とするものが挙げられ、これは、組織壊死および/または潰瘍形成につながり得る。動脈性潰瘍の徴候として、例えば、四肢の無脈;有痛性潰瘍形成;普通、境界が明らかな、小さい、点状潰瘍;冷たいまたは低温の皮膚;遅延した毛細血管回復時間(手短には、足指の末端を押し、解放し、正常な色が、約3秒以内に足指に戻らなければならない);萎縮性が現れる皮膚(例えば、輝いた、薄い、乾燥した);ならびに指および足の毛の喪失を挙げることができる。
【０１１４】
例示的慢性創傷としてまた、「静脈性潰瘍」が挙げられる。例示的静脈性潰瘍として、下肢に影響を及ぼす潰瘍の最も一般的な種類が挙げられ、静脈弁の機能不全を特徴とし得る。正常な静脈は、血液の逆流を防止する弁を有する。これらの弁が能力がなくなると、静脈血の逆流が静脈性鬱血を引き起こす。赤血球からヘモグロビンが逃れ、管外空間に漏れ、よく見られる褐色を帯びた変色を引き起こす。静脈性潰瘍の周囲の皮膚の経皮的酸素圧が低下することがわかっており、これは、その領域の正常な血管増生を妨げる力があることを示す。リンパ排出および流れもまた、これらの潰瘍において役割を果たす。静脈性潰瘍は、内果の近くに現れることがあり、普通、浮腫性の、硬化した下肢と組み合わせて生じる;浅い、あまりにも有痛性ではないものであり得、罹患部位からの浸潤性分泌とともに存在し得る。
【０１１５】
例示的慢性創傷としてまた、「静脈うっ血性潰瘍」が挙げられる。例示的静脈うっ血性潰瘍は、局所低酸素症をもたらす下肢の慢性受動性静脈性鬱血を特徴とする。これらの創傷の病変形成の1つの可能性ある機序として、厚い血管周囲線維素腱板を通る組織への酸素拡散の妨害が挙げられる。別の機序として、皮膚完全性の維持に必要とされる血管周囲組織トラップ増殖因子中に漏出する高分子がある。さらに、大きな白血球の流れは、静脈性鬱血、毛細血管の閉塞、活性化されることおよび潰瘍形成させるよう血管内皮に損傷を与えることのために遅くなる。
【０１１６】
例示的慢性創傷として、さらに、「糖尿病性足部潰瘍」が挙げられる。例示的糖尿病性足部潰瘍を有する糖尿病患者は、神経学的合併症および血管合併症の両方によって足部潰瘍形成する傾向がある。末梢神経障害は、足部および/または下肢における感覚の変更された、または完全な喪失を引き起こし得る。進行した神経障害を有する糖尿病性患者は、鋭い-鈍い識別についてすべての能力を失う。神経障害を有する患者では、足部への任意の傷口または外傷は、数日間または数週間完全に気づかないまま進行し得る。進行した神経障害を有する患者は、持続した圧力侵襲に気付く能力を失うことがあり、結果として、例えば、足底潰瘍形成につながる、組織虚血および壊死が起こり得る。さらに、足部の骨の微小骨折は、気づかれず、未治療である場合には、美観を損なうこと、慢性膨潤およびさらなる骨ばった隆起をもたらし得る。微小血管疾患とは、潰瘍形成につながり得る糖尿病の重大な合併症の1種である。
【０１１７】
例示的慢性創傷として、「外傷性潰瘍」を挙げることができる。例示的外傷性潰瘍の形成は、身体への外傷性傷害の結果として起こり得る。これらの傷害は、例えば、動脈、静脈またはリンパ系を危険にさらすこと;骨格の骨ばった構造の変化;組織層-表皮、真皮、皮下軟組織、筋肉または骨の喪失;身体部分または臓器の損傷および身体部分または臓器の喪失を含む。
【０１１８】
例示的慢性創傷として、例えば、第1級の火傷(すなわち、皮膚の表面的な、発赤領域);第2級の火傷(疱疹液が除去された後に自発的に治癒し得る水ぶくれのできた傷害部位);第3級の火傷(皮膚全体中の、普通は、創傷治癒のために外科的介入を必要とする火傷);熱湯火傷(湯、潤滑油またはラジエーター液での熱湯火傷から起こり得る);熱傷(炎から起こり得る、普通、深い火傷);化学火傷(酸およびアルカリから起こり得る、普通、深い火傷);電気的火傷(家の中での低電圧または仕事中の高電圧のいずれか);爆発による引火(普通、表面的な傷害);および接触火傷(普通、深い、マフラー排気管、熱いアイロンおよびストーブから起こり得る)を含めた火傷傷害の結果として生じる潰瘍形成を含めた「火傷潰瘍」を挙げることができる。
【０１１９】
本明細書において、治癒の遅い、または治癒の困難な創傷は、例えば、少なくとも部分的に、1)長期炎症相、2)時間がかかって形成する細胞外マトリックス(ECM)および3)上皮化の低下した速度を特徴とする創傷を含み得る。
【０１２０】
本明細書において、「線維化」疾患、障害または状態は、本明細書に記載されたものを含み、線維形成性の関連する生物学または病理学が明らかである、急性および慢性、臨床的または亜臨床的症状をさらに含む。線維化疾患、障害または状態は、全体的に、または部分的に、細胞外マトリックス内の線維化物質の過剰製造を含めた線維性物質の過剰製造または正常な組織要素の、マトリックス関連成分の異常な、非機能的および/もしくは過剰な蓄積による置換を特徴とする、疾患、障害または状態を含む。線維化疾患、障害または状態は、例えば、線維症に特徴的な線維形成性の関連する生物学または病理学を含む。
【０１２１】
例示的線維化疾患、障害または状態として、例えば、強皮症(モルフェア、全身性モルフェアまたは線状強皮症を含む)、腎臓線維症(糸球体硬化症、腎尿細管間質性線維症、進行性腎疾患または糖尿病性腎症を含む)、心臓線維症(例えば、心筋線維症)、肺線維症(例えば、糸球体硬化症肺線維症、特発性肺線維症、ケイ肺症、石綿肺、間質性肺疾患、間質性線維化肺疾患および化学療法/放射線誘発性肺線維症)、経口線維症、心内膜心筋線維症、三角筋線維症、膵炎、炎症性腸疾患、クローン病、結節性筋膜炎、好酸球性筋膜炎、正常な筋肉組織の、種々の程度の線維組織による置換を特徴とする全身線維症症候群、後腹膜線維症、肝臓線維症、肝硬変、慢性腎不全;骨髄線維症(骨髄線維症)、薬物誘発性麦角病、リー・フラウメニ症候群における膠芽腫、弧発性膠芽腫、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性症候群、婦人科癌、カポジ肉腫、ハンセン病、コラーゲン性大腸炎および急性線維症が挙げられる。
【０１２２】
線維化疾患、障害および状態はまた、拘縮を含み得る。術後拘縮を含めた拘縮は、硬直性痙攣もしくは線維症による、または正常組織コンプライアンス、動きもしくは平衡(例えば、筋肉、腱、靭帯、筋膜、滑膜、関節包、その他の結合組織または脂肪)の喪失による可動域の永久のまたは長期の低減を指す。一般に、拘縮の状態は、急性および慢性両方の、炎症性成分との線維化反応を含み得る。その一部は、解放手順を含めた手術と関連し得る。デュピュイトラン拘縮、ペロニー病およびレダーホーゼ疾患などの遺伝性拘縮も含まれる。
【０１２３】
線維症は、慢性または急性のいずれかであり得る。線維化状態は、組織内の過剰な量の細胞外マトリックス蓄積を含めた過剰な量の線維組織を含み、機能不全、潜在的に、臓器不全を引き起こす組織を形成する。慢性線維症は、主要な臓器、最も一般的には、肺、肝臓、腎臓および/または心臓の線維症を含む。急性線維症(普通は、突然の、重度な発症を有し、短期間のもの)は、通常、種々の形態の傷害を含めた外傷、虚血性疾病(例えば、心臓発作後の心臓瘢痕)、環境汚染物質、アルコールおよびその他の種類の毒素、急性呼吸窮迫症候群、放射線照射ならびに化学療法治療に対する一般的な反応として起こる。外傷によって損傷したすべての組織は、特に、損傷が反復される場合には、線維化になり得る。
【０１２４】
傷害に対する反応は、傷害後の組織における、協調した、時間的に調節されたメディエーターのパターンおよび細胞事象の順序を含む。最初の傷害が、血液凝固カスケードおよび急性局所炎症反応と、それに続く間葉系細胞動員、増殖およびマトリックス合成を誘発する。異常なサイトカイン経路を含むことが多い制御されないマトリックス蓄積は、線維化状態または障害につながり得る。肺、腎臓、肝臓、心臓、脳および骨髄などの重要臓器における進行性の線維症は、疾病および死亡両方の主要な原因である。
【０１２５】
癒着
本発明のその他の態様内で、患者に、ウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性インターロイキンを投与することによって、癒着、手術による癒着および/または続発性の手術による癒着の罹患率または重症度を、治療、低減するための、および/または防止または遅延するための方法が提供される。
【０１２６】
癒着形成は、普通は別個である身体組織が一緒に成長する複雑なプロセスである。例えば、術後癒着は、主要な婦人科手術を受けた患者の約60%〜90%において起こると報告されている。組織(例えば、上皮、結合、筋肉および神経組織)乾燥、虚血、熱傷害、感染または異物の存在の結果としての手術による外傷は、組織癒着形成の刺激として長く認識されてきた。これらの癒着は、不成功に終わった外科的療法の主要な原因であり、腸閉塞および不妊症の主要原因である。その他の癒着治療された合併症として、慢性骨盤疼痛、尿道閉塞および排尿障害が挙げられる。
【０１２７】
一般に、癒着形成は、因子が放出され、血管透過性が増大し、フィブリノゲン流入および線維素沈着をもたらす炎症反応である。この沈着は、隣接する組織を架橋するマトリックスを形成する。線維芽細胞は、蓄積し、マトリックスに付着し、コラーゲンを沈着させ、血管新生を誘発する。この事象のカスケードが、手術後4〜5日内に防止され得る場合には、癒着形成は阻害され得る。
【０１２８】
続発性の手術による癒着はまた、修正するよう設計された修正手術手順および既存の癒着の結果として形成し得る。手順は、解放または分離手順であり得る。
【０１２９】
特定の治療用組成物または治療計画をその治療可能性について評価するために、さまざまな動物モデルが使用され得る。手短には、普通、2種の隣接する表面を含む被害的な重度の損傷の結果として腹膜の癒着が生じることが動物において観察された。傷害は、虚血のために、または異物の導入の結果として器質的であり得る。器質的傷害は、腸の挫滅および腸壁の外層を剥ぎ取ることまたはこすって取り除くことを含む。主要な血管を腸のループに分割することによって虚血が誘導される。領域中に導入され得る異物として、タルク、ガーゼスポンジ、毒性化学物質、細菌および糞便が挙げられる。
【０１３０】
現在、癒着の形成の防止を評価するための通常の動物モデルとして、ウサギ子宮の擦過を含むウサギ子宮角モデル、子宮の擦過、脈管遮断を含むウサギ子宮角脈管遮断修飾モデルならびに盲腸の壁側腹膜のパッチの切除および擦過を含むウサギ盲腸側壁モデルが挙げられる。それらおよびその他の報告された評価モデルは、本明細書に記載されている。
【０１３１】
抗コネキシン剤
本明細書に記載された本発明の抗コネキシン剤は、コネキシン活性および機能、コネキシン複合体形成および維持、接着結合形成および維持ならびに細胞間癒着を調節(例えば、遮断または阻害または下方制御)または影響を及ぼし得る。したがって、本明細書において記載される特定の抗コネキシン剤は、細胞性癒着(すなわち、細胞間癒着)を調節する。特定の抗コネキシン剤は、接着結合調節剤である。このような抗コネキシン剤は、一般に、翻訳されると、コネキシンタンパク質合成および細胞膜への局在性をもたらすメッセンジャーRNA(mRNA)分子(またはそれをコードする遺伝子)にターゲッティングされ、これでは、それらは、接着結合形成に利用可能である。その他の抗コネキシン剤は、コネキシン複合体および/または接着結合形成を干渉する。したがって、本明細書において提供される抗コネキシン剤は、細胞間のカップリングおよび情報伝達を直接的または間接的に低減し得るか、または隣接する細胞間の情報伝達(または分子の伝達)を低減もしくは遮断し得る。コネキシンは、例えば、N-コネキシンである。
【０１３２】
コネキシン活性、コネキシン複合体形成および/または接着結合形成の所望の調節を誘発できる任意の抗コネキシン剤が、本発明の実施において使用され得る。このような化合物として、例えば、タンパク質およびポリペプチド、ポリヌクレオチドおよびその他の有機化合物が挙げられ、それらは、例えば、接着結合の機能または発現を、全体的にまたは部分的に遮断し得るか、または1種または複数のコネキシンタンパク質、コネキシン複合体および/または接着結合の生成を、全体的にまたは部分的に、下方制御し得る。このような薬剤は、科学文献および特許文献に記載されている。
【０１３３】
特定の抗コネキシン剤は、コネキシン発現の下方制御(例えば、mRNA転写または翻訳の下方制御によって)を提供するか、そうでなければ、コネキシンタンパク質、コネキシン複合体または接着結合の活性を低減もしくは阻害する。下方制御の場合には、これは、接着結合によって媒介される直接細胞間接着を低減する効果を有する。
【０１３４】
抗コネキシン剤の例として、コネキシンmRNAおよび/もしくはタンパク質の発現もしくは機能を低減もしくは阻害するか、またはコネキシンタンパク質種、コネキシン複合体もしくは接着結合の活性、発現もしくは形成を低減する薬剤が挙げられる。抗コネキシン剤として、アンチセンスポリヌクレオチドなどの抗コネキシンポリヌクレオチドおよびその他のポリヌクレオチド(siRNAまたはリボザイム官能基を有するmiRNAおよびポリヌクレオチドなど)ならびに抗体およびその抗原結合断片ならびにコネキシンもしくは接着結合活性もしくは機能を調節するペプチドミメティックおよびペプチド類似体を含めたペプチドおよびポリペプチドならびにデオキシリボザイムが挙げられる。抗コネキシン剤として、例として、抗N-コネキシン剤がある。
【０１３５】
アンチセンスポリヌクレオチドならびにmiRNA、RNAi、siRNAおよびリボザイムポリヌクレオチドなどの抗コネキシンポリヌクレオチドとして働き得るその他のポリヌクレオチドならびに修飾された、混合された主鎖を有するポリヌクレオチドの合成は、当業者に公知である。例えば、Stein C.A.およびKrieg A.M.(編)、Applied Antisense Oligonucleotide  Technology、1998年(Wiley-Liss)を参照のこと。所望の抗体および抗原結合断片ならびに所望の、ペプチドミメティックおよびペプチド類似体を含めたペプチドおよびポリペプチドを合成する方法は、当業者に公知である。例えば、Lihu Yangら、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、1巻; 95(18):10836〜10841頁(1998年9月1日);Harlow and Lane (1988年)「Antibodies: A Laboratory Manuel」Cold Spring Harbor Publications、New York; Harlow and Lane (1999年)「Using Antibodies」A Laboratory Manuel、Cold Spring Harbor Publications、New Yorkを参照のこと。
【０１３６】
ペプチド、ペプチドミメティック、抗体、抗原結合抗体断片などを含めたコネキシン結合タンパク質はまた、接着結合の適したモジュレーターである。このような薬剤はまた、科学文献および特許文献に記載されている。
【０１３７】
抗コネキシン剤として、コネキシンタンパク質(例えば、E-コネキシン、N-コネキシンなど)に由来するコネキシンドメインモチーフに対応するアミノ酸配列を含むペプチドが挙げられる。その他の実施形態は、コネキシン遺伝子、例えば、以下の実施例1に示されるようなN-コネキシン遺伝子によってコードされる、少なくとも約5、少なくとも約6、少なくとも約7、少なくとも約8、少なくとも約9、少なくとも約10、少なくとも約11、少なくとも約12、少なくとも約13、少なくとも約14、少なくとも約15、少なくとも約20、少なくとも約25または少なくとも約30個の連続するアミノ酸を含むを含むアミノ酸配列を有するペプチドである、抗コネキシン剤を対象とする。本明細書において提供される特定の抗コネキシン剤では、特定のペプチド配列を開発するためにN-コネキシンの細胞外ドメインが使用され得る。ペプチドは、天然に存在するN-コネキシンの一部と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するような保存的アミノ酸変更がなされてもよい。あるいは、ペプチドは、細胞外ドメインのその他の領域にターゲッティングされ得る。
【０１３８】
本明細書に記載される特定の抗コネキシン剤は、細胞間の癒着を調節または影響を及ぼし得る(例えば、遮断または阻害)。したがって、本明細書に記載される特定の接着結合調節剤は、細胞性癒着を調節する。本明細書において、「接着結合調節剤」とは、接着結合の活性、機能、形成または安定性を、全体的にまたは部分的に、防止、低減または調節する任意の薬剤または化合物を広く含む。特定の実施形態では、接着結合調節剤は、接着結合の機能を全体的にまたは部分的に、防止または低減する。例示的接着結合調節剤として、制限するものではないが、ポリヌクレオチド、ポリペプチド(例えば、ペプチドミメティック(peptiditomimetics)、抗体、その結合断片および合成構築物)およびその他の接着結合調節剤を挙げることができる。
【０１３９】
投与形および製剤および投与
本発明の薬剤の各々の治療上有効な量は、同時に、別個にまたは逐次、任意の順序で投与され得る。薬剤は、別個に、または固定された組合せとして投与され得る。固定された組合せとして投与されない場合には、方法は、ウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性インターロイキンの逐次投与を含む。
【０１４０】
ウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性インターロイキンが組み合わせて投与される場合には、いずれかまたは両方は、薬剤(単数または複数)が単独で投与される場合に、すなわち、それらが、物理的にまたは創傷の治療の過程において、組み合わせて投与されない場合に使用されるものより少ない量または用量で提供され得る。投与される薬剤のこのようなより少ない量は、通常、単独で投与される場合の薬剤の約1/12〜約1/10の量(単数または複数)であり、または単独で投与される場合の約1/8の量、約1/6の量、約1/5の量、約1/4の量、約1/3の量および約1/2の量であり得る。特定の実施形態では、薬剤は、互いに、少なくとも約1/2時間以内で逐次投与される。薬剤はまた、互いに約1時間を用いて、互いに約1日〜約1週間を用いて、またはそうでなければ適当と見なされるように投与され得る。
【０１４１】
本発明の薬剤は、本明細書に記載される疾患または状態のいずれかを有する対象などの治療を必要とする対象に投与され得る。したがって、対象の状態は、改善され得る。したがって、ウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性インターロイキンが、療法による対象の身体の治療において使用され得る。それらは、本明細書に記載される状態のいずれかを治療するための医薬の製造において使用され得る。
【０１４２】
本発明のウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性インターロイキンは、本発明の種々の組成物および方法において、実質的に単離された形態で使用されることが多い。製品は、製品の意図される目的を干渉しない担体または希釈剤と混合され得、依然として、実質的に単離されているとみなされ得るということは理解されよう。本発明の製品はまた、実質的に精製された形態であり得、この場合には、一般に、タンパク質または調製物の乾燥質量の、約、例えば、少なくとも約80%、85%または90%、例えば、少なくとも約95%、少なくとも約98%または少なくとも約99%を含む。
【０１４３】
投与の意図される経路に応じて、本発明の医薬製剤、医薬組成物、組み合わされた調製物および医薬は、例えば、溶液剤、懸濁液剤、滴下注入剤、膏薬、クリーム剤、ゲル剤、フォーム剤、軟膏剤、乳剤、ローション剤、ペイント剤、持続放出製剤または散剤の形態をとり得、通常、例えば、約0.l%〜95%の有効成分(複数可)、より通常は、約0.2%〜70%を含有し得る。その他の適した製剤として、プルロニックゲルベースの製剤、カルボキシメチルセルロース(CMC)ベースの製剤およびヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)ベースの製剤が挙げられる。プルロニックゲルを含む適した製剤は、例えば、約10〜約15パーセント、約15〜20パーセント、約20〜25パーセントおよび約25〜30パーセント、適切に、約22パーセントのプルロニックゲルを有する。その他の有用な製剤として、持続放出または遅延放出調製物および滴下注入剤が挙げられる。
【０１４４】
ゲルまたはゼリー剤は、それだけには限らないが、ゼラチン、トラガカント、アルギン酸またはセルロース誘導体を含めた適したゲル化剤を使用して製造され得、保湿剤としてのグリセロール、皮膚軟化剤および防腐剤を含み得る。軟膏剤は、脂肪性、ワックス性または合成基剤中に組み込まれた有効成分からなる半固体調製物である。適したクリーム剤の例として、それだけには限らないが、油中水および水中油型乳剤が挙げられる。油中水型クリーム剤は、制限されるものではないが、セチルアルコールまたはセトステアリル-アルコールなどの脂肪アルコールのものと、乳化ワックスと同様の特性を有する適した乳化剤を使用して製剤化され得る。水中油型クリーム剤は、セトマクロゴール乳化ワックスなどの乳化剤を使用して製剤化され得る。適した特性として、エマルションの粘度ならびに広範なpHにわたって物理的および化学的安定性の両方を修飾する能力が挙げられる。水溶性または混和性クリーム基剤は、防腐剤系を含有し得、また、許容される生理学的pHを維持するよう緩衝され得る。
【０１４５】
フォーム調製物は、不活性の噴霧剤を使用して、適した塗布器によって加圧エアゾールキャニスターから送達されるよう製剤化され得る。フォーム基剤の製剤のための適した賦形剤として、それだけには限らないが、プロピレングリコール、乳化ワックス、セチルアルコールおよびステアリン酸グリセリルが挙げられる。可能性ある防腐剤として、メチルパラベンおよびプロピルパラベンが挙げられる。
【０１４６】
特定の実施形態では、本発明の薬剤は、医薬組成物を製造するために医薬上許容される担体または希釈液と組み合わされる。適した担体および希釈剤として、等張性生理食塩水溶液、例えば、リン酸緩衝生理食塩水が挙げられる。適した希釈剤および賦形剤としてまた、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールなどおよびそれらの組合せが挙げられる。さらに、必要に応じて、湿潤剤または乳化剤、安定化剤またはph緩衝剤などの物質も存在し得る。
【０１４７】
用語「医薬上許容される担体」とは、組成物を受け取る個体に対して有害な抗体の製造をそれ自体で誘導しない医薬担体を指し、これは、過度の毒性を伴わずに投与され得る。適した担体とは、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合体アミノ酸およびアミノ酸コポリマーなどの大きな、ゆっくりと代謝される高分子であり得る。
【０１４８】
医薬上許容される塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などといった無機酸塩;および酢酸、プロピオン酸、マロン酸、安息香酸などといった有機酸の塩もまた存在し得る。
【０１４９】
適した担体物質として、局所投与のためのクリーム剤、ローション剤、ゲル剤、乳剤、ローション剤またはペイント剤の基剤としてよく使用される任意の担体または媒体が挙げられる。例として、炭化水素基剤、乳化基剤、非毒性溶媒または水溶性基剤を含めた乳化剤、不活性担体が挙げられる。特に適した例として、プルロニック、HPMC、CMCおよびその他のセルロースベースの成分、ラノリン、ハードパラフィン、液体パラフィン、ソフト黄色パラフィンまたはソフト白色パラフィン、白色蜜蝋、黄色蜜蝋、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ジメチコン、乳化ワックス、ミリスチン酸イソプロピル、微晶質ワックス、オレイルアルコール、蜂蜜(マヌカ蜂蜜を含む)およびステアリルアルコールが挙げられる。
【０１５０】
特定の実施形態では、医薬上許容される担体または媒体は、ゲル、適宜非イオン性のポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体ゲル、例えば、プルロニックF-127(BASF Corp.)などのプルロニックゲルである。このゲルは、低温では液体であるが、生理学的温度に迅速に設定され、これが、薬剤の放出を、適用部位またはその部位に直接隣接するものに限局するので、特に有用である。医薬担体はまた、リポソーム、ナノソームなども含み得る。
【０１５１】
カゼイン、ゼラチン、アルブミン、接着剤、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースまたはポリビニルアルコールなどの補助剤も、本発明の製剤中に含まれ得る。
【０１５２】
その他の適した製剤として、プルロニックゲルベースの製剤、カルボキシメチルセルロース(CMC)ベースの製剤およびヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)ベースの製剤が挙げられる。組成物は、局所、滴下注入、非経口、筋肉内、皮下または経皮投与を含めた任意の所望の送達形態のために製剤化され得る。その他の有用な製剤として、持続放出または遅延放出調製物が挙げられる。
【０１５３】
経皮送達は、例えば、1)化学的浸透増強剤または皮膚増強剤の使用;2)リポソーム媒介性送達;3)イオン泳動;4)エレクトロポレーション;5)超音波導入法;6)機械的(例えば、マイクロポレーション)装置を対象とする方法を含めた、当技術分野で公知の、または後に発見された方法によって実施され得る。本明細書において開示された薬剤の経皮送達に適した例示的方法として、例えば、既存の孔を越える輸送の速度を高めることによる、または人工孔の作製によって利用可能な皮膚孔数を増幅することによる、皮膚孔を越える物質の輸送の増強を対象とする方法を挙げることができる。
【０１５４】
経皮送達は、例えば、エミューオイル、エトキシ化オイル、PEG、リノール酸、エタノール、1-メタノールおよび/または角質層を脱脂化する薬剤を含めた、医薬上許容される植物、ナッツ、合成または動物起源の油を含めた、化学的増強剤または浸透増強剤の使用によって実施され得る。適した油として、メドウフォーム油、ヒマシ油、ホホバ油、コーン油、ヒマワリ油、ゴマ油およびエミューオイルが挙げられ、そのすべては、任意選択で、エトキシ化されてもよい。例として、米国特許第7291591号、同7201919号、同7052715号、同7033998号、同6946144号;同6951658号、同6759056号、同6720001号、同6224853号、同5695779号および同6750291号に記載されるものが挙げられる。さらに、経皮パッチは、乾燥粉末または凍結乾燥薬物の送達に適応され得、例として、米国特許第5,983,135号に記載されるものが挙げられる。
【０１５５】
経皮送達は、リポソーム媒介性送達方法(例えば、親油性膜活性剤の適用よって促進される送達)によって実施され得る。適した例として、米国特許第5910306号、同5718914号および同5064655号に記載されるものを挙げることができる。
【０１５６】
経皮送達系はまた、さまざまなイオン泳動または電気輸送システムと併せて、またはそれと組み合わせて使用され得る。例示的電気輸送薬物送達システムは、米国特許第5,147,296号、同5,080,646号、同5,169,382号および同5,169383号に開示されている。
【０１５７】
用語「電気輸送」とは、一般に、皮膚、粘膜、爪などといった身体表面を通る、有益な薬剤、例えば、薬物または薬物前駆体の通過を指す。薬剤の輸送は、電位の適用によって誘導され、増強され、これは、電流の適用をもたらし、薬剤を送達するか、または薬剤の送達を増強するか、または「逆の」電気輸送のために、薬剤をサンプリングするか、または薬剤のサンプリングを増強する。ヒト身体への、またはそれからの薬剤の電気輸送は、種々の方法によって達成され得る。
【０１５８】
経皮送達は、イオン電気導入法(例えば、皮膚への経時的な低レベルの電場の適用によって促進される送達)によって実施され得る。適した例として、米国特許第6731987号、同6391015号、同6553255号、同4940456号、同5681580号および同6248349号に記載されるものを挙げることができる。
【０１５９】
また、経皮送達は、エレクトロポレーション法(例えば、皮膚中に一過性の孔を作製するための高圧パルスの短時間の適用によって促進される送達)によって実施され得る。適した例として、米国特許第7008637号、同6706032号、同6692456号、同6587705号、同6512950号、同6041253号、同5968006号および同5749847号を挙げることができる。
【０１６０】
経皮送達は、超音波導入法方法(例えば、皮膚透過性を高めるための低周波数超音波のパルスの適用によって促進される送達)によって実施され得る。適した例として、米国特許第7232431号、同7004933号、同6842641号、同6868286号、同6712805号、同6575956号、同6491657号、同6487447号、同623499号および同6190315号を挙げることができる。
【０１６１】
経皮送達は、機械的装置の使用および/または真皮構造および下部構造の、構造要素、熱安定性特性、膜流動性および完全性において機械的変更または破壊を誘導することによる人工微小孔または微小チャンネル(例えば、顕微鏡投影)の作製を含む方法によって実施され得る。適した例として、MicroPor(Altea Therapeutics)、MacroFlux(Alza Corporation)ならびに米国特許第6893655号、同6730318号、同5484604号、同5362308号、同5320850号および同5279544号および米国再審査証明書RE35474に記載されるものを挙げることができる。
【０１６２】
その他の適した製剤として、吸入され得る製剤がある。さらにその他の適した製剤として、注入され得る製剤がある。
【０１６３】
所与の対象または状態のための有効な用量は、通常、集団の少なくとも50%に対して治療上有効であり、このレベルで毒性をほとんど示さないか、または全く示さない用量内にある。
【０１６４】
本発明の方法および組成物において使用されるウイルス性VEGFおよび抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)(および/またはその他の治療薬(複数可)、あれば)の各々の有効な投与量は、使用される特定のウイルス性VEGFおよび抗炎症性インターロイキン、コンビナトリアルパートナー(あれば)、投与様式、投与の頻度、治療されている状態、治療されている状態の重症度、投与の経路、治療される患者亜集団の需要または種々の需要が、年齢、性別、体重、患者に特有の関連する医学的状態によるものであり得る個々の患者の需要を含めたいくつかの因子に応じて変わり得る。
【０１６５】
ウイルス性VEGFおよび抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)(および/またはその他の治療薬(複数可)、あれば)が、患者に投与される用量は、患者の年齢、体重および状態、治療されている状態および投与されている特定の薬剤などの種々の因子に応じて変わる。
【０１６６】
ウイルス性VEGFの適した治療上有効な用量は、例えば、約1〜約312.5μg/cm2または約0.2〜約40μMolであり得る。抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)の適した治療上有効な用量は、約15ng〜約80μg/cm2または約もしくは2nMol〜約10μMolであり得る。
【０１６７】
用量は、局所的に、および注射または滴下注入によってを含めた任意の形態で投与され得る。注射または滴下注入によって投与される場合には、用量(単数または複数)は、組織標的、例えば、創傷の直線センチメートルあたりおよそ1回投与される。
【０１６８】
用量は、毎日、またはその他の投与計画で、例えば、1日2回、2日に1回、週に1回などで投与され得る。用量はまた、約2〜約7〜14日間またはこの範囲内の任意の日数の間、毎日投与または適用され得る。
【０１６９】
抗コネキシン剤(複数可)(および/またはその他の治療薬(複数可)、あれば)の治療上有効な用量は、当技術分野で発表されている。
【０１７０】
あるいは、組成物(単数または複数)中のウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)(および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)の各々の投与量は、大きさ、長さ、深さ、面積または適用される面積の容量に対して組成物または組成物濃度を参照することによって決定され得る。例えば、特定の局所適用では、医薬組成物の投薬は、長さ、深さ、面積または適用される面積の容量あたりの、医薬組成物中の質量(例えば、グラム)または医薬組成物中の濃度に基づいて算出され得る。(例えば、μg/ul)。有用な用量は、創傷の大きさの平方センチメートルあたり約1〜約10マイクログラムの範囲である。特定の用量は、創傷の大きさの平方センチメートルあたり、約1〜2、約1〜5、約2〜4、約5〜7および約8〜10マイクログラムとなる。その他の有用な用量は、創傷の大きさの平方センチメートルあたり約10マイクログラム、例えば、創傷の大きさの平方センチメートルあたり少なくとも約15マイクログラム、創傷の大きさの平方センチメートルあたり少なくとも約20マイクログラム、創傷の大きさの平方センチメートルあたり少なくとも約25マイクログラム、創傷の大きさの平方センチメートルあたり少なくとも約30マイクログラム、創傷の大きさの平方センチメートルあたり少なくとも約35マイクログラム、創傷の大きさの平方センチメートルあたり少なくとも約40マイクログラム、創傷の大きさの平方センチメートルあたり少なくとも約50マイクログラム、および創傷の大きさの平方センチメートルあたり少なくとも約100〜少なくとも約150マイクログラムより多い。その他の用量として、平方センチメートルあたり約150〜200マイクログラム、平方センチメートルあたり約200〜250マイクログラム、平方センチメートルあたり約250〜300マイクログラム、平方センチメートルあたり約300〜350、平方センチメートルあたり約350〜400マイクログラムおよび平方センチメートルあたり約400〜500マイクログラムならびに平方センチメートルあたり500〜1000マイクログラムならびに平方センチメートルあたり少なくとも約600〜1000マイクログラムが挙げられる。
【０１７１】
特定の実施形態では、ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)組成物(単数または複数)(および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)が、治療部位で、および/または治療部位に隣接して、約0.01マイクロモル(μM)または0.05μM〜約200μMまたは最大300μMまたは最大400、500、600、700、800、900μMまたは最大1000μMまたは最大2000μMまたは最大3200μMまたはそれより多い最終濃度およびこれらの用量数内の任意の用量および用量範囲で適用され得る。特定の実施形態では、ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)組成物(単数または複数)(および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)は、約0.05μM〜約100μMまたはそれより多い最終濃度で適用され、より通常は、ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)組成物(単数または複数)(および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)は、約1.0μM〜約50μM最終濃度で、さらにより通常は、約5〜10μM〜約30〜50μM最終濃度で適用される。さらに、ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)組成物(単数または複数) (および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)は、約8μM〜約20μM最終濃度で適用されてもよく、あるいは、ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)組成物(単数または複数)(および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)は、約10μM〜約20μM最終濃度で、または約10〜約15μM最終濃度で適用される。特定のその他の実施形態では、ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)組成物(単数または複数)(および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)は、約10μM最終濃度で適用される。さらに別の実施形態では、ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)組成物(単数または複数)(および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)は、約1〜15μM最終濃度で適用される。その他の実施形態では、ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)組成物(単数または複数)(および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)は、約20μM、30μM、40μM、50μM、60μM、70μM、80μM、90μM、100μM.、10〜200μM、200〜300μM、300〜400μM、400〜500μM、500〜600μM、600〜700μM、700〜800μM、800〜900μM、900〜1000または1000〜1500μMまたは1500μM〜2000μMまたは2000μM〜3000μMまたはそれ以上で適用される
【０１７２】
ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)用量量はまた、例えば、約0.1〜1、1〜2、2〜3、3〜4または4〜5マイクログラム(μg)、約5〜約10μg、約10〜約15μg、約15〜約20μg、約20〜約30μg、約30〜約40μg、約40〜約50μg、約50〜約75μg、約75〜約100μg、約100μg〜約250μgおよび250μg〜約500μgを含む。上記のように、0.5〜約1.0ミリグラムまたはそれ以上の用量量も提供される。用量容積は、治療されるべき部位の大きさに応じて変わり、例えば、約25〜100μLから約100〜200μL、約200〜500μLから約500〜1000μLの範囲であり得る。大きな治療部位には、ミリリットル用量もまた適当である。
【０１７３】
さらにその他の投与量は、本明細書に記載される薬剤の各々の、1日あたり約1ナノグラム(ng)/kgおよび約1mg/kg体重の間のレベルになる。特定の実施形態では、各対象化合物の投与量は、一般に、体重1kgあたり約1ng〜約1マイクログラム、体重1kgあたり約1ng〜約0.1マイクログラム、体重1kgあたり約1ng〜約10ng、体重1kgあたり約10ng〜約0.1マイクログラム、体重1kgあたり約0.1マイクログラム〜約1マイクログラム、体重1kgあたり約20ng〜約100ng、体重1kgあたり約0.001mg〜約0.01mg、体重1kgあたり約0.01mg〜約0.1mgまたは体重1kgあたり約0.1mg〜約1mgの範囲となる。特定の実施形態では、各対象化合物の投与量は、一般に、体重1kgあたり約0.001mg〜約0.01mg、体重1kgあたり約0.01mg〜約0.1mg、体重1kgあたり約0.1mg〜約1mgの範囲となる。2種以上のウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)が使用される場合には、各ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)の投与量は、その他のものと同一範囲にある必要はない。例えば、あるウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)の投与量が、体重1kgあたり約0.01mg〜約10mgの間であり得、別のウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)(またはその他の治療薬)の投与量は、体重1kgあたり約0.1mg〜約1mgの間であり得る。
【０１７４】
本明細書において参照されるすべての用量および用量範囲は、例えば、本明細書において参照されるウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性ウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)に、ならびにオリゴヌクレオチドを含む抗コネキシン剤を含めたポリヌクレオチド治療薬に適用可能である。これらの用量範囲はまた、例えば、ウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性ウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)ならびにタンパク質およびペプチドならびにミメティックペプチドおよびペプチドミメティックを含む抗コネキシン剤を含めた治療薬に適用可能である。
【０１７５】
本明細書に記載されるように、組み合わせて投与されるウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)組成物(単数または複数)(および/またはその他の治療薬組成物(複数可)、あれば)の用量は、単独で与えられる場合に投与される用量から少なく調整され得る。いくつかの薬剤の組み合わされた使用は、異なる薬剤の効果の発生および期間が相補的であり得るので、任意の個々の薬剤の必要な投与量を低減し得る。一実施形態では、2種以上のウイルス性VEGFおよび/または抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)の組み合わされた使用は、相加効果、相乗効果または超相加効果を有する。いくつかの場合には、いずれか、または両方との組合せ中の、1種または複数のウイルス性VEGFおよび/または1種または複数の抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)の組合せは、相加効果を有する。その他の場合には、組合せは、相加効果より大きい効果を有し得る。このような効果は、本明細書において、「超相加的」効果と呼ばれ、相乗的であるか、または増強された相互作用によるものであり得る。
【０１７６】
用語「超相加的」とは、いずれかまたは両方との組み合わせ中で投与される、1種または複数のウイルス性VEGFの、1種または複数の抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)との組合せの投与によってもたらされる、創傷治癒の平均加速または炎症、瘢痕、線維症もしくは癒着形成の低減を指し、いずれかの薬剤単独の個々の投与による、創傷治癒の加速または炎症、瘢痕、線維症もしくは癒着形成の低減の合計よりも統計的に有意に高い。結果が、個々の化合物の予測される相加的値よりも「統計的に有意に高い」かどうかは、本明細書に記載される、および/または当業者に公知の種々の統計的手法によって決定され得る。用語「相乗的」とは、例えば、創傷治癒を加速するか、または炎症、瘢痕、線維症もしくは癒着形成を低減する能力を有する超相加的阻害の種類を例えば指す。用語「増強された」とは、例として、組合せ中で個々に投与される治療薬が、創傷治癒を加速するか、または炎症、瘢痕、線維症もしくは癒着形成を低減する増大された能力を有する超相加的効果の種類を指す。
【０１７７】
一般に、増強は、組合せ治療が、例として、それぞれのその治療群における個々の治療によってもたらされる、創傷治癒の加速または炎症、瘢痕、線維症もしくは癒着形成における平均的な低減の合計と比較した場合に、統計的に有意に超相加的である治療群において、創傷治癒の加速または炎症、瘢痕、線維症もしくは癒着形成の低減において、平均的な低減をもたらすかどうかを決定することによって評価され得る。創傷治癒の平均加速または増強または改善は、例えば、対照群と治療群の創傷治癒の平均加速または増強または改善の間の相違として算出され得る。創傷治癒の割合加速、例えば、「影響を受けた割合」(Fa)は、創傷治癒の治療群平均加速を、対照群の創傷治癒の平均加速または増強または改善で除することによって算出され得る。統計的に有意な増強についての試験には、各治療群のFaの算出が必要である。組合せ治療の予測される相加的Faは、組合せの要素のいずれかを投与されている群から得た平均Faの合計であるととられ得る。例えば、p値によって測定されるような、実験によって得られた結果が、変化単独によるものである可能性がどの程度かを評価するために両側1サンプルT試験が使用され得る。0.05未満の値は、統計的に有意と考えられる、すなわち、変化単独によるものである可能性は低い。したがって、組合せ治療群のFaは、組合せを、増強された超相加的効果をもたらすと見なすためには、単一要素治療群の予想される相加的Faよりも統計的に有意に高くなくてはならない。
【０１７８】
相乗作用が組合せ治療に起因するかどうかは、中央値効果/組合せ指数アイソボログラム法(Chou, T.およびTalalay, P.(1984年) Ad. Enzyme Reg. 22巻:27〜55頁)によって評価され得る。この分析は、CalcuSyn、用量効果分析のためのウィンドウズ(登録商標)
ソフトウェア  (Biosoft(D、Cambridge UK)などのコンピュータソフトウェアツールを使用して実施され得る。組合せ療法について超相加的効果が存在するかどうかを分析するために、当技術分野で公知の、または後に開発される任意の方法が、本明細書に記載されるような組合せにおいて使用するのに適した薬剤のスクリーニングにおいて使用するために考慮される。
【０１７９】
別の実施形態では、1種または複数のウイルス性VEGFの、1種または複数の抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)との組み合わされた使用は、前記薬剤が単独で投与された場合の有効な用量と比較して、任意のこのような薬剤の有効な用量を低減する。特定の実施形態では、組合せ中で使用される場合の薬剤の有効な用量は、単独で使用される場合の薬剤の用量の約1/15〜約1/2、約1/10〜約1/3、約1/8〜約1/6、約1/5、約1/4、約1/3または約1/2である。
【０１８０】
別の実施形態では、1種または複数のウイルス性VEGFの、1種または複数の抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)との組み合わされた使用は、前記薬剤が投与される頻度を、前記薬剤が単独で投与される場合の頻度と比較して低減する。したがって、これらの組合せは、各薬剤の、所望の治療目的を達成するためにこれまでに必要とされたものよりも低いおよび/または少ない用量の使用を可能にする。
【０１８１】
用量は、単回または分割適用で投与され得る。用量は、1回投与され得るか、または適用は反復され得る。上記で示されるように、適用は、例えば、創傷治癒が促進されるまで毎日または毎週またはより頻繁に反復され得るか、または反復適用は、例えば、創傷治癒に時間がかかるか、または失速した事象において行われ得る。用量は、1〜7日目に、またはより離れて適用され得る。慢性創傷の場合には、例えば、反復適用が、例えば、毎週、または隔週で、または例えば創傷治癒に時間がかかるか、または失速した場合には、例えば毎日または他の頻度で、行われ得る。特定の眼部使用など一部の適応症には、最大で毎時のより頻繁な投薬が使用され得る。
【０１８２】
組合せ療法では、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))は、同一または異なる経路によって投与され得る。種々の薬剤が、療法の過程の間の異なる時点で別個に、または分割されたか、もしくは単一の組合せ形態で同時に投与され得る。
【０１８３】
いくつかの組合せ療法実施形態では、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))は、2種以上の別個の組成物で投与される。これらの実施形態の一部では、第1の組成物は、第2の組成物の前に投与される。その他の実施形態では、第1の組成物は、第2の組成物の後に投与される。さらにその他の実施形態では、第1の組成物は、第2の組成物の前後に投与される。さらにその他の実施形態では、第2の組成物は、第1の組成物の前後に投与される。さらなるこのような実施形態では、第1の組成物は、第2の組成物とほぼ同一時間に投与される。
【０１８４】
一実施形態では、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性ウイルス性インターロイキン(複数可)は、注射(末梢性に、または部位に直接的に)によって送達される。一態様では、注射は、部位または創傷で、またはそれに隣接する部分、例えば、部位または創傷境界から1〜10mmで行われる。その他の実施形態では、注射は、部位または創傷境界から約1〜8、1〜7、1〜6、1〜5、1〜4、1〜3および1〜2mmで行われる。さらにその他の(othe)実施形態では、注射は、部位または創傷境界から約2〜8、2〜7、2〜6、2〜5、2〜4および2〜3mmで行われる。一実施形態では、注射は、部位または創傷境界から2〜4または2〜5mmで行われる。約1cmより長い長さを有する創傷を含めた投与の部位では、注射は、直線センチメートル毎に約1回行われる。一実施形態では、注射は、創傷またはその他の投与部位に向かって角度がある、別の実施形態では、注射(複数可)は、創傷の真皮中に、または皮内、組織内または臓器内注射によって行われる。
【０１８５】
別の実施形態では、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性ウイルス性インターロイキン(複数可)は、それだけには限らないが、固相支持体(ドレッシングおよびその他のマトリックスなど)および医薬製剤(ゲル、混合物、懸濁液および軟膏など)を使用する局所投与を含めた局所投与(末梢性に、または部位に直接的に)によって送達される。一実施形態では、固相支持体は、生体適合性膜または治療部位への挿入部分を含む。別の実施形態では、固相支持体は、ドレッシングまたはマトリックスを含む。本発明の一実施形態では、固相支持体組成物は、単独または1種もしくは複数のさらなる治療薬との混合物中もしくはそれとの組み合わせ中の、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))が、アルギン酸、コラーゲンまたは合成生体吸収性ポリマーのマトリックスなどの緩徐放出固体マトリックス中に分散されている、緩徐放出固相支持体組成物であり得る。特定の実施形態では、固相支持体組成物は、無菌であるか、または低バイオバーデンである。一実施形態では、ウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)を含む洗浄溶液が使用され得る。
【０１８６】
一定期間にわたる、いくつかの例では、約1〜2時間、約2〜4時間、約4〜6時間、約6〜8または約12〜24時間またはそれ以上の間の1種または複数の有効成分を含む本発明の製剤の送達は、より重度の傷害または状態において特に有利であり得る。
【０１８７】
送達期間は、創傷治癒の加速または炎症、瘢痕、線維症もしくは癒着形成の低減が誘導されるべきである両方の部位に応じて変わるが、約0.5〜1時間、約1〜2時間、約2〜4時間、約4〜6時間、約6〜8または約12〜24時間またはそれ以上の連続または緩徐放出送達が提供される。本発明に一致して、これは、医薬上許容される担体または媒体と一緒に製剤中に、特に、連続または緩徐放出投与用製剤の形態で、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性ウイルス性インターロイキン(複数可)を、単独または組み合わせ中で含むことによって達成される。
【０１８８】
記載されるように、本発明のウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))は、創傷を受ける前、その間またはその直後、例えば、または、例えば、炎症、瘢痕、癒着または線維症をもたらす可能性が高いか、またはもたらすと疑われる手順の後に、または創傷を受けた後または例えば、癒着をもたらす可能性が高いか、またはもたらすと疑われる手順の後、約180もしくは約120もしくは約90もしくは約60もしくは約30日内に、ただし通常は、例えば、約10、約9、約8、約7、約6、約5、約4、約3または約2日以下内、最も通常は、約24、約12、約10、約9、約8、約7、約6、約5、約4、約3、約2時間内もしくは約60、約45、約30、約15、約10、約5、約4、約3、約2、約1分以内に投与され得る。本発明の1種または複数の薬剤はまた、例えば、癒着をもたらす可能性が高いか、またはもたらすと疑われる手順の前および/またはその間に投与され得る。
【０１８９】
本発明の薬剤および薬剤組合せは、所望の結果を達成する任意の方法で投与され得る。例示的方法として、尿細管周囲投与(手術の時点での直接適用または内視鏡、超音波、CT、MRIもしくは蛍光透視ガイダンスを用いて);外科的移植片を「被覆すること」;および手術部位での薬物溶出ポリマー移植片の置換が挙げられる。一実施形態では、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性ウイルス性インターロイキン(複数可)の0.5重量%〜20重量%が、ポリマー担体中に負荷され、尿細管周囲(腸間膜)表面に一定期間にわたって薬物を放出し、その結果、手術による癒着の罹患率が低下する、「ペースト」、「フィルム」または「ラップ」として適用される。内視鏡手順の間に、ポリマー調製物は、手術の間操作されている腹部および骨盤臓器の腸間膜へ、内視鏡中の送達ポートによって「スプレー」として適用され得る。別の実施形態では、尿細管周囲組成物は、約0.1重量%〜約5重量%の有効成分である。別の実施形態では、約0.1%〜約20%またはそれ以上の活性薬剤(複数可)を含有するポリマー被膜が、例えば、移植片の近くの被包/不適切な瘢痕を防止するために、手術移植片(例えば、乳房移植片、人工関節、血管グラフトなど)の表面に適用される。さらに別の実施形態では、約0.01重量%〜約20重量%またはそれ以上の活性薬剤(単数または複数)を含有するポリマー移植片が、例えば、癒着形成が、防止されるか、低減されるように、手術部位に(例えば、鼻腔、胸腔、腹腔中に直接的に、または神経系外科手術の際の手術部位に)直接的に適用される。一実施形態では、1種または複数の活性薬剤が蛍光顕微鏡で導かれる関節内注射によって投与され得る。
【０１９０】
別の実施形態では、約1〜約100μg/cm2(通常、約10〜約50μg/cm2)のウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))を含有する洗浄液が、手術の時点または直後に使用され、手術の間に、または医師によって腹膜内に投与される。実施形態のすべてにおいて、これらの薬剤は、単独またはその他の治療薬との組み合わせ中で、薬剤の効力および耐容性について調整された同等の用量で投与される。
【０１９１】
当業者ならば、最適投与経路を決定し、任意の特定の患者および状態に対して投与量を調整し得るので、本明細書に記載される投与経路および投与量は、単に案内として意図される。
【０１９２】
本明細書において参照または記載される、疾患、障害または状態を有する対象を治療する、また手術手順の前または後に対象を治療する薬剤および方法のいずれも、本明細書に記載される用量、投与形、製剤および/または組成物のいずれかの投与を利用し得る。
【０１９３】
ドレッシングおよびマトリックス
一態様では、ドレッシングまたはマトリックスの形態の1種または複数の活性薬剤が提供される。特定の実施形態では、液体、半固体または固体組成物の形態の本発明の1種または複数の薬剤が直接適用されるために提供され、または組成物は、ドレッシングガーゼまたはマトリックスなどの固体接触層の表面に、またはその中に組み込まれて適用される。ドレッシング組成物は、例えば、流体またはゲルの形態で提供され得る。1種または複数の活性薬剤は、局所適用用の従来の医薬賦形剤と組み合わせて提供され得る。適した担体として、プルロニックゲル、ポロキサマーゲル、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびそれらの混合物を含めたセルロース誘導体を含有するヒドロゲルならびにポリアクリル酸を含有するヒドロゲル(Carbopols)が挙げられる。適した担体としてまた、局所医薬調製物のために使用されるクリーム/軟膏、例えば、セトマクロゴール乳化軟膏をベースとするクリームが挙げられる。上記の担体は、アルギン酸(増粘剤または刺激物質として)、ベンジルアルコールなどの防腐剤、リン酸水素二ナトリウム/リン酸二水素ナトリウムなどのpHを制御するためのバッファー、塩化ナトリウムなどの浸透圧を調整するための薬剤およびEDTAなどの安定化剤を含み得る。
【０１９４】
これまでに記載された生物学的マトリックスに加えて、適したドレッシングまたはマトリックスとして、例えば、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))(または単独またはそれと組み合わせて投与されるべきその他の活性薬剤)を有する以下のものを挙げることができる:
【０１９５】
1)吸収体:適した吸収体として、例えば、セルロース、綿またはレーヨンなどの線維の高度に吸収性の層と組み合された、例えば、半接着品質または非接着層を提供し得る吸収性ドレッシングが挙げられる。あるいは、吸収体は、一次または二次ドレッシングとして使用され得る。
【０１９６】
2)アルギン酸:適したアルギン酸として、例えば、不織、非接着性パッドおよび天然多糖線維または海藻由来のキセロゲルからなるリボンであるドレッシングが挙げられる。適したアルギン酸ドレッシングは、例えば、浸出液との接触の際にイオン交換のプロセスによって湿潤ゲルを形成し得る。特定の実施形態では、アルギン酸ドレッシングは、柔らかく、心地よいものであり、包装し、タックをとり、不規則な形状の領域上に適用することが容易であるよう設計される。特定の実施形態では、アルギン酸ドレッシングは、第2のドレッシングとともに使用され得る。
【０１９７】
3)抗菌性ドレッシング:適した抗菌性ドレッシングとして、例えば、銀およびポリヘキサメチレンビグアニド(PHMB)などの生物活性剤の送達を促進して、必要とされるか、望ましい場合には感染に対する有効性を維持し得るドレッシングを例えば挙げることができる。特定の実施形態では、適した抗菌ドレッシングは、例えば、スポンジ、含浸させた織られたガーゼ、フィルムドレッシング、吸収性製品、島状ドレッシング、ナイロン織物、非接着性バリアまたは材料の組合せとして利用可能であり得る。
【０１９８】
4)生物学&生合成:適した生物学的ドレッシングまたは生合成ドレッシングとして、例えば、天然供給源、例えば、ブタまたはウシ由来のゲル、溶液または半透性シートを挙げることができる。特定の実施形態では、ゲルまたは溶液は、治療部位に適用され、バリア保護のためにドレッシングで覆われる。別の実施形態では、生物学ベースの(例えば、ブタ腸管粘膜または膀胱組織)または生合成ベースのシートは、生体内原位置に置かれ、これは膜として作用し得、単回適用後に適所に残るか、または生物学的ドレッシングであり得るか、または生合成ドレッシングは前もって治療薬を含むよう調製され得る。
【０１９９】
5)コラーゲン:適したコラーゲンドレッシングとして、例えば、ウシ、ブタまたは鳥類供給源またはその他の天然供給源またはドナー由来の、例えば、ゲル、パッド、粒子、ペースト、粉末、シートまたは溶液を挙げることができる。特定の実施形態では、コラーゲンドレッシングは、治療部位浸出液と相互作用して、ゲルを形成し得る。特定の実施形態では、コラーゲンドレッシングは、第2のドレッシングと組み合わせて使用され得る。
【０２００】
6)複合材料:適した複合材料ドレッシングとして、例えば、物理的に個々の成分を、単一製品中に混合して、例えば、細菌バリア、吸収および癒着などの複数の機能を提供するドレッシングを挙げることができる。特定の実施形態では、複合材料ドレッシングは、例えば、複数の層からなり、半接着性または非接着性パッドを組み込む。特定の実施形態では、複合材料はまた、例えば、不織布テープまたは透明フィルムの接着性境界を含み得る。特定のその他の実施形態では、複合材料ドレッシングは、例えば、一次または二次ドレッシングのいずれかとして機能し得、さらに別の実施形態では、ドレッシングは、局所医薬組成物と組み合わせて使用され得る。
【０２０１】
7)接触層:適した接触層ドレッシングは、例えば、組織を例えば、治療部位に適用されるその他の薬剤またはドレッシングとの直接接触から保護するために、領域上に置かれた薄い、非接着性シートを含み得る。特定の実施形態では、接触層は、治療部位の領域の形状に適合するよう配置され得、覆っている二次ドレッシングによる吸収のために浸出液が通過することを可能にするよう多孔性である。さらに別の実施形態では、接触層ドレッシングは、局所医薬組成物と組み合わせて使用され得る。
【０２０２】
8)弾性絆創膏:適した弾性絆創膏は、例えば、伸び、体輪郭に適合するドレッシングを含み得る。特定の実施形態では、織物組成物として、例えば、綿、ポリエステル、レーヨンまたはナイロンを挙げることができる。特定のその他の実施形態では、弾性絆創膏は、カバーを適所に維持し、治療部位に圧力をかけるか、または治療部位を和らげるよう、例えば、二次層またはドレッシングとして吸収を提供し得る。
【０２０３】
9)フォーム:適したフォームドレッシングは、例えば、流体を保持できる小さい、オープンセルを有する、シートおよびその他の形状の発泡ポリマー溶液(ポリウレタンを含む)を含み得る。例示的フォームは、例えば、その他の材料と組み合わせて含浸され、層にされ得る。特定の実施形態では、吸収能は、フォームの厚みおよび組成に基づいて調整され得る。特定のその他の実施形態では、治療部位と接触する領域は、簡単な除去のために非接着性であり得る。さらに別の実施形態では、フォームは、接着性境界および/または抗感染薬バリアとして働き得る透明フィルム被膜と組み合わせて使用され得る。
【０２０４】
10)ガーゼ&不織ドレッシング:適したガーゼドレッシングおよび織られたドレッシングは、例えば、種々の吸収性の程度を有する、乾燥した織られたものまたは不織スポンジおよびラップを含み得る。例示的織物組成物として、例えば、綿、ポリエステルまたはレーヨンを挙げることができる。特定の実施形態では、ガーゼおよび不織ドレッシングは、バルクで利用可能な滅菌または非滅菌であり得、接着性境界を有するか、または有さない。例示的ガーゼドレッシングおよび織物ドレッシングは、種々の治療部位を清浄し、パックし、覆うために使用され得る。
【０２０５】
11)親水コロイド:適した親水コロイドドレッシングは、例えば、ゼラチン、ペクチンまたはカルボキシメチルセルロースからなるウエハー、粉末またはペーストを含み得る。特定の実施形態では、ウエハーは、自己接着性であり、接着性境界を有するか、または有さず利用可能であり、さまざまな形状および大きさである。例示的親水コロイドは、輪郭削りを必要とする領域上で有用である。特定の実施形態では、粉末およびペースト親水コロイドは、二次ドレッシングと組み合わせて使用され得る。
【０２０６】
12)ヒドロゲル(非晶質):適した非晶質ヒドロゲルドレッシングは、例えば、水分を供与し、湿潤治癒環境を維持し、または治療部位に水分補給するよう設計された、形状のない、水、ポリマーおよびその他の成分の製剤を含み得る。特定の実施形態では、ヒドロゲルは、二次ドレッシングカバーと組み合わせて使用され得る。
【０２０７】
13)ヒドロゲル:含浸されるドレッシング:適した含浸されるヒドロゲルドレッシングは、例えば、非晶質ヒドロゲルで飽和した、ガーゼおよび不織スポンジ、ロープおよびストリップを含み得る。非晶質ヒドロゲルは、例えば、乾燥治療部位に水分を供与し、湿潤治癒環境を維持するよう設計された、形状のない、水、ポリマーおよびその他の成分の製剤を含み得る。
【０２０８】
14)ヒドロゲルシート:適したヒドロゲルシートは、例えば、水に不溶性であり、膨潤によって水溶液と相互作用する架橋した親水性ポリマーの3次元ネットワークを含み得る。例示的ヒドロゲルは、高度に適合し、透過性であり、その組成に応じて種々の量の排出液を吸収し得る。特定の実施形態では、ヒドロゲルは、治療部位に対して非接着性であり、または容易な除去のために処理される。
【０２０９】
15)含浸されたドレッシング:適した含浸されたドレッシングは、例えば、生理食塩水、オイル、亜鉛塩、ワセリン、ゼロフォルム(xeroform)およびスカーレットレッドならびに本明細書に記載された化合物を含めた、溶液、エマルション、オイル、ゲルまたはその他の医薬上活性な化合物または担体物質の一部で飽和された、例えば、ガーゼおよび不織スポンジ、ロープおよびストリップを含み得る。
【０２１０】
16)シリコンゲルシート:適したシリコンゲルシートドレッシングは、例えば、メッシュまたは織物を用いて強化された、またはそれらと結合している架橋ポリマーからなるソフトカバーを含み得る。
【０２１１】
17)溶液:適した液体ドレッシングは、例えば、マルチタンパク質物質および細胞外マトリックス中に見られるその他の要素の混合物を含み得る。特定の実施形態では、例示的溶液は、デブリードマンおよび清浄後に治療部位に適用され得、次いで、吸収性ドレッシングまたは非接着性パッドで覆われる。
【０２１２】
18)透明フィルム:適した透明フィルムドレッシングは、接着剤で片側が覆われた種々の厚みのポリマー膜を含み得る。特定の実施形態では、透明フィルムは、液体、水および細菌に対して不透過性であるが、水蒸気および大気気体に対して透過性である。特定の実施形態では、透明性によって、治療部位の可視化が可能となる。
【０２１３】
19)フィラー:適したフィラードレッシングとして、例えば、ビーズ剤、クリーム剤、フォーム剤、ゲル剤、軟膏剤、パッド剤、ペースト剤、ピロー剤、粉末剤、ストランド剤またはその他の製剤を挙げることができる。特定の実施形態では、フィラーは、非接着性であり、時限放出される抗菌剤を含み得る。例示的フィラーは、水分環境を維持し、浸出液を管理するのに、例えば、部分および全層創傷、感染性創傷、排出性創傷ならびにパックすることを必要とする深部創傷の治療のため有用であり得る。
【０２１４】
創傷治療
一般的な態様
本発明は、組成物(複数可)が、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の治療上有効な量(単独または1種または複数の治療薬と組み合わせて)を含む医薬組成物およびその使用方法を対象とする。組成物は、例えば、急性創傷ならびに慢性創傷および治癒に時間がかかり得るか、または従来の創傷治療もしくは創傷治癒促進療法に不応性であり得るその他の創傷などの期待される速度で治癒しない創傷を含めた創傷ならびに炎症または不要な炎症を特徴とする疾患、障害および状態を含めた本明細書に記載されるその他の疾患、障害および状態の治癒の増強または促進において、例えば、有用である。慢性創傷は、不要の炎症を特徴とすることが多い。
【０２１５】
同等に、その他の組織損傷(特に、創傷)の場合には、本発明の方法および組成物は、創傷治癒プロセスの促進、膨潤および炎症の低減において、および瘢痕形成の最小化において有効である。これらの形成(formations)は、線維化疾患、障害および状態の治療において、また癒着、手術による癒着および/または続発性の手術による癒着の治療、罹患率もしくは重症度の低減において、または癒着、手術による癒着および/または続発性の手術による癒着の防止もしくは遅延において有用である。製剤は、外部外傷(火傷を含む)、内部外傷または外科的介入ならびに慢性創傷の結果であるかに関わらず、創傷の治療において明確な利益を有する。
【０２１６】
組成物
一態様では、本発明は、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))を含む、治療的創傷治療において使用するための組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))および少なくとも1種のその他の治療薬、例えば、抗コネキシン剤および/または抗オステオポンチン剤を含む、治療的創傷治療において使用するための組成物を提供する。特定の実施形態では、組成物は、医薬上許容される担体または媒体をさらに含む。
【０２１７】
一実施形態では、抗コネキシン剤は、創傷治療のための、抗コネキシンポリヌクレオチド、抗コネキシンペプチドまたはペプチドミメティック、接着結合モジュレーターおよびコネキシン複合体モジュレーターからなる群から選択される。別の実施形態では、抗オステオポンチン剤は、創傷治療のための、抗オステオポンチンポリヌクレオチド、抗オステオポンチンペプチドまたはペプチドミメティックからなる群から選択される。
【０２１８】
その他の実施形態では、抗コネキシンまたは抗オステオポンチンポリヌクレオチドは、アンチセンスポリヌクレオチドである。一形態では、組成物は、1種のコネキシンタンパク質または1種のオステオポンチンタンパク質のみのmRNAに対する1種または複数のアンチセンスポリヌクレオチドを含有する。例えば、コネキシンタンパク質は、コネキシン43である。別の形態では、組成物は、抗コネキシンペプチドまたはペプチドミメティックおよびコネキシンまたはオステオポンチンタンパク質のmRNAに対するアンチセンスポリヌクレオチドを含む。やはり、コネキシンは、例えば、コネキシン43である。
【０２１９】
したがって、一態様では、本発明は、慢性創傷および治癒に時間がかかるまたは治癒が遅い創傷を含めた創傷の治療において使用するための組成物を提供する。別の態様では、本発明は、線維症または線維化疾患、障害もしくは状態の治療において使用するための組成物を提供する。代替態様では、本発明は、異常なまたは過剰な瘢痕および/または過剰な組織増殖ならびに関連する障害および状態の防止および/または治療において使用するための組成物を提供する。さらなる態様において、本発明は、手術による癒着を含めた癒着の防止および/または低減において使用するための組成物および方法を提供する。さらなる態様において、本発明は、炎症の防止および/または低減において使用するための組成物および方法を提供する。
【０２２０】
キット、医薬および製造品
いずれか単独または1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせた任意選択で、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))はまた、医薬の製造において使用され得る。
【０２２１】
一態様では、本発明は、記載される1種または複数の組成物または製剤を含むキットを提供する。例えば、キットは、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の治療上有効な量を、いずれか単独でまたは一緒に、任意選択で、1種もしくは複数のその他の治療薬、例えば、抗コネキシン剤種および/または抗オステオポンチン剤と組み合わせて含む組成物(単数または複数)を含み得る。
【０２２２】
本明細書において記載されるような本発明の組成物または製剤を含有する容器および対象の治療のための使用のための説明書を含む製造品はまた、提供される。例えば、別の態様では、本発明は、1種または複数の抗コネキシン剤の治療上有効な量を、いずれか単独で、または1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせて含有する容器ならびに対象の治療のための使用を含めた使用のための説明書を含む製造品を含む。一実施形態では、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))は、別個の容器中で提供される。別の実施形態では、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))は、同一容器中で提供される。
【０２２３】
一態様では、本発明は、慢性創傷および治癒に時間がかかる創傷または治癒の遅い創傷を含めた創傷を治療するためのキットを提供する。別の態様では、本発明は、線維症または線維化疾患、障害もしくは状態を治療するためのキットを提供する。代替態様によれば、本発明は、記載される1種または複数の製剤を含む、異常なまたは過剰な瘢痕および/または過剰な組織増殖および状態を防止および/または治療するためのキットを提供する。別の態様では、本発明は、記載される1種または複数の組成物または製剤を含む、癒着を防止および/または低減するためのキットを提供する。別の態様では、本発明は、記載される1種または複数の組成物または製剤を含む、炎症を防止および/または低減するためのキットを提供する。
【０２２４】
慢性創傷および治癒に時間がかかる創傷または治癒の遅い創傷を含めた創傷を防止および/または治療するための製造品が提供される。別の態様では、線維症または線維化疾患、障害もしくは状態を防止および/または治療するための製造品が提供される。異常なまたは過剰な瘢痕および/または過剰な組織増殖および関連する障害および状態を防止および/または治療するための製造品もまた、提供される。本明細書に記載されるような癒着を防止および/または低減するためのさらなる製造品が提供される。本明細書に記載される炎症を防止および/または低減するためのさらなる製造品が提供される。
【０２２５】
治療
本発明の組成物および製剤は、創傷の治癒を促進するための組成物と併せて、またはそれと組み合わせて使用され得、例えば、膨潤、炎症および/または瘢痕を低減するために使用され得る。本発明の組成物および製剤はまた、治癒に時間がかかる創傷および治癒が遅い創傷を含めた急性または慢性創傷の治癒を促進および/または改善するための組成物と併せて、またはそれと組み合わせて使用され得る。一態様では、創傷は、手術または外傷または根底にある医学的状態、例えば、糖尿病、末梢の浮腫、脈管炎もしくは心血管疾患の結果となる。
【０２２６】
一態様では、本発明は、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の治療上有効な量を、いずれか単独で、または互いとの物理的組合せで投与することを含む、対象において創傷治癒を促進または改善する方法が対象とされる。特定の実施形態では、このような投与は、炎症を低減し、細胞遊走を促進して、創傷閉鎖を加速し、そうでなければ、治癒を改善し、および/または表皮成長および表面回復を促進するのに有効である。特定の実施形態では、本発明の1種または複数の組成物の投与は、異常な瘢痕形成を含めた瘢痕形成を低減または防止するのに有効である。
【０２２７】
一態様では、本発明は、単独または一緒に、任意選択で、創傷治癒を改善するのに有効な量の1種もしくは複数のその他の治療薬と協力して、またはそれと組み合わせて、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))を投与することを含む、対象において創傷治癒を促進または改善する方法を対象とする。
【０２２８】
なおさらなる態様では、本発明は、単独または一緒に、任意選択で、治癒を改善するのに有効な量の1種もしくは複数のその他の治療薬と協力して、またはそれと組み合わせて、前記創傷部位にすぐ隣接して、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))を投与するステップを含む、創傷、例えば、手術による創傷(例えば、美容、瘢痕修正およびその他の手術においてなど)を受けた患者において、瘢痕形成を低減する、および/または瘢痕出現を改善する方法を提供する。やはり、創傷は、外傷または例えば、手術による修復および/またはその閉鎖の直前に創傷に適用される製剤を用いる手術の結果であり得る。本明細書に記載されるように、瘢痕形成または出現を低減もしくは改善する、または炎症を防止もしくは低減する方法では、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))は、適した量の別の創傷治癒剤、例えば、抗コネキシン剤または抗オステオポンチン剤の投与と組み合わせて、またはその後またはその前に投与され得る。
【０２２９】
一態様では、本発明は、単独または一緒の、任意選択で、組織損傷(炎症損傷を含む)を低減、防止または寛解させるのに有効な量の1種もしくは複数のその他の治療薬と協力した、またはそれと組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の投与を含む、対象において組織損傷(炎症損傷を含む)を低減、防止または寛解させる方法を対象とする。
【０２３０】
さらなる態様において、本発明は、例えば、急性または慢性創傷および/または組織(物理的外傷を受けた組織を含む)の治療の一部として、膨潤および/または炎症を低減する方法を対象とし、これは、単独または一緒に、任意選択で、1種または複数のその他の治療薬と協力して、またはそれと組み合わせて、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))を、前記創傷または組織に、またはその最も近くに投与する工程を含む。一実施形態では、創傷は、真皮組織(例えば、圧迫性潰瘍または糖尿病性潰瘍またはその他の潰瘍につながる)および脳、脊髄または視神経または皮膚または眼などの神経組織を含めた組織への物理的外傷の結果である。
【０２３１】
一態様では、本発明は、いずれか単独または1種もしくは複数のその他の治療薬、例えば、1種もしくは複数の抗コネキシン剤および/もしくは抗オステオポンチン剤と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の持続投与を対象とする。一実施形態では、薬剤(単数または複数)は、少なくとも少なくとも約0.5時間、約1〜24時間、少なくとも約2時間、少なくとも約3時間、少なくとも約4時間、少なくとも約5時間、少なくとも約6時間、少なくとも約7時間、少なくとも約8時間、少なくとも約9時間、少なくとも約10時間、少なくとも約11時間、少なくとも約12時間または少なくとも約24時間の間投与される。一実施形態によれば、創傷は、慢性創傷である。適した対象として、糖尿病性対象が挙げられる。その他の対象として、例えば、末梢の浮腫、脈管炎または心血管疾患を有するものが挙げられる。その他の対象として、例えば、静脈性機能不全を含めた静脈性疾患または動脈性機能不全を含めた動脈疾患を有するものが挙げられる。
【０２３２】
一態様では、本発明は、創傷への、いずれか単独または1種もしくは複数のその他の治療薬、例えば、1種もしくは複数の抗コネキシン剤および/もしくは抗オステオポンチン剤と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の有効量の持続投与を含む、創傷を有する対象を治療する方法を提供する。
【０２３３】
別の態様では、慢性創傷を有する対象を治療するための方法が提供される。このような方法は、対象に、いずれか単独または1種もしくは複数のその他の治療薬、例えば、1種もしくは複数の抗コネキシン剤および/もしくは抗オステオポンチン剤と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))を投与することを含む。
【０２３４】
一態様では、本発明は、それを必要とする対象に、いずれか単独または1種もしくは複数のその他の治療薬、例えば、1種もしくは複数の抗コネキシン剤および/もしくは抗オステオポンチン剤と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の有効量を投与することを含む、慢性創傷を治療または予防するための方法を対象とする。一実施形態では、慢性創傷は、慢性皮膚創傷であり、本発明の組成物は、前記対象の皮膚または皮膚と関連している組織に、有効な期間投与される。治療に適した慢性皮膚創傷は、例えば、褥瘡、糖尿病性潰瘍、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍、血管炎性潰瘍および混合潰瘍および本明細書に記載されるその他のものからなる群から選択され得る。慢性創傷は、動脈性潰瘍であり得、これは、完全または部分的な動脈性遮断に起因する潰瘍形成を含む。慢性創傷は、静脈うっ血性潰瘍であり得、これは、静脈弁の機能不全および関連する血管疾患に起因する潰瘍形成を含む。慢性創傷は、外傷誘発性潰瘍であり得る。慢性の、治癒に時間がかかるまたは治癒の遅い創傷は、例えば、別の臓器組織(例えば、腎臓、腸、肝臓、肺)と関連する、真皮または眼部、またはCNSにおけるものであり得る。
【０２３５】
特定の組合せ治療法は、固定組合せとして投与されない場合には、任意選択で、1種または複数のその他の治療薬、例えば、1種または複数の抗コネキシン剤および/または抗オステオポンチン剤と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の逐次投与を含む。例えば、薬剤は、互いに少なくとも約1/2時間内に逐次投与される。薬剤はまた、互いに約1〜12時間内、互いに約12〜24時間内、互いに約1日〜約1週間内またはそうでなければ適当と見なされるように投与され得る。
【０２３６】
一実施形態では、慢性創傷の治療または予防のための方法は、いずれか単独または1種もしくは複数のその他の治療薬、例えば、1種もしくは複数の抗コネキシン剤および/もしくは抗オステオポンチン剤と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の持続投与を含む。一実施形態では、組成物(単数または複数)は、持続放出製剤で投与される。別の実施形態では、組成物(単数または複数)は、長時間投与される。治療され得る対象として、糖尿病性対象ならびに静脈性潰瘍および本明細書に記載され、当技術分野で公知のその他のものを含めたその他の潰瘍を有する患者が挙げられる。
【０２３７】
一態様では、本発明は、本発明の組成物の治療上有効な量の投与を含む、対象において線維症または線維化疾患、障害もしくは状態を防止および/または治療する方法を対象とする。特定の実施形態では、投与は、線維症を低減するのに有効である。特定の実施形態では、投与は、拘縮を防止または低減するのに有効である。
【０２３８】
一態様では、本発明は、いずれか単独または組み合わせて一緒の、任意選択で、線維症を低減するのに有効な、1種もしくは複数のその他の治療薬、例えば、1種もしくは複数の抗コネキシン剤および/もしくは抗オステオポンチン剤と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の治療上有効な量の投与を含む、対象において線維症または線維化疾患、障害もしくは状態を防止および/または治療する方法を対象とする。一実施形態では、いずれか単独または組み合わせて一緒の、任意選択で、1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の投与は、拘縮を防止または低減するのに有効である。
【０２３９】
方法の一実施形態によれば、対象は、強皮症、腎臓線維症(糖尿病性腎症を含む)、心臓線維症(例えば、心筋線維症)、肺線維症(例えば、糸球体硬化症肺線維症、特発性肺線維症、ケイ肺症、石綿肺、間質性肺疾患および線維化肺疾患および化学療法/放射線誘発性肺線維症)、経口線維症、心内膜心筋線維症、三角筋線維症、膵炎、炎症性腸疾患、クローン病、結節性筋膜炎、好酸球性筋膜炎、種々の程度の線維組織による正常筋肉組織の置換を特徴とする全身線維症症候群、後腹膜線維症、肝臓線維症、肝硬変、慢性腎不全;骨髄線維症(myelofibrosis)(骨髄線維症(bone marrow fibrosis))、薬物誘発性麦角病、リー・フラウメニ症候群における膠芽腫、弧発性膠芽腫、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性症候群、婦人科癌、カポジ肉腫、ハンセン病、コラーゲン性大腸炎および急性線維症からなる群から選択される疾患を有する。この実施形態によれば、強皮症は、モルフェア、全身性モルフェアまたは線状強皮症であり得る。また、この実施形態によれば、腎臓線維症は、糸球体硬化症、腎尿細管間質性線維症または進行性腎疾患であり得る。この実施形態に加えて、肺線維症は、びまん性間質性肺線維症であり得る。
【０２４０】
方法の別の実施形態によれば、線維症は、急性線維症である。急性線維症は、事故による傷害、感染症、放射線または化学療法治療を含めた種々の形態の外傷に応じたものであり得る。
【０２４１】
方法の別の実施形態によれば、線維症は、慢性線維症である。本発明はまた、いずれか単独または組み合わせて一緒に、任意選択で、1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の有効量を投与することを含む、例えば、カプセル拘縮、デュプイトラン拘縮、フォルクマン拘縮、レダーホーゼ拘縮、ペロニー拘縮またはそれらの再発を含めた種々の疾患、障害および状態を、全体的にまたは部分的に、治療および/または防止する方法を含む。特定の実施形態では、組成物は、瘢痕組織および異常な組織の再発および/またはさらなる拘縮を防止するために、解放手順(例えば、強制処置、開放型解放、関節鏡下解放または瘢痕の減量)の前、その時点で、および/またはその後に傷害の部位へ投与される。
【０２４２】
一態様では、本発明は、いずれか単独または組み合わせて一緒の、任意選択で、1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の治療上有効な量の投与を含む、対象において、異常なまたは過剰な瘢痕および/または過剰な組織増殖ならびに関連する障害および状態を防止および/または治療する方法を対象とする。特定の実施形態では、投与は、異常なまたは過剰な瘢痕および/または過剰な組織増殖ならびに関連する障害および状態を低減するのに有効である。
【０２４３】
一態様では、本発明は、いずれか単独または組み合わせて一緒の、任意選択で、1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせた、ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))の治療上有効な量の投与を含む、対象において、異常なまたは過剰な瘢痕および/または過剰な組織増殖ならびに関連する障害および状態を防止および/または治療する方法を対象とする。一実施形態では、いずれか単独または組み合わせて一緒の、任意選択で、1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせた、ウイルス性VEGFおよび抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)は、異常なまたは過剰な瘢痕および/または過剰な組織増殖ならびに関連する障害および状態を低減するのに有効である。
【０２４４】
一態様では、本発明は、いずれか単独または組み合わせて一緒の、任意選択で、1種もしくは複数のその他の治療薬と組み合わせた、ウイルス性VEGFおよび抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)の持続性同時投与を対象とする。
【０２４５】
一実施形態によれば、対象は、ケロイド瘢痕、肥厚性瘢痕、広範な瘢痕および萎縮性瘢痕からなる群から選択される異常な瘢痕を有する。
【０２４６】
別の実施形態によれば、治療されるべき対象として、外傷、外科的介入、火傷および異常なまたは過剰な瘢痕ならびに過剰な瘢痕形成ならびにケロイド瘢痕、肥厚性瘢痕、広範な瘢痕および萎縮性瘢痕を含めたその他の種類の組織の異常な増殖につながるか、つながり得るその他の種類の傷害を経験したものが挙げられる。
【０２４７】
特定の実施形態では、いずれか単独または組み合わせて一緒の(任意選択で、1種または複数のその他の治療薬と組み合わせた)ウイルス性VEGF(複数可)および抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(複数可)(例えば、インターロイキン(複数可))は、手術の間に、または外傷の結果として曝露されたか、または創傷を受けた、上皮、結合、筋肉および神経組織またはその他の組織に投与される。いくつかの実施形態では、ウイルス性VEGFおよび抗炎症性ウイルス性インターロイキンは、局所投与される。その他の実施形態では、ウイルス性VEGFおよび抗炎症性哺乳動物性またはウイルス性サイトカイン(例えば、インターロイキン)は、埋め込まれるか、滴下注入されるかまたは注射される。
【０２４８】
特定の実施形態では、本発明は、異常なまたは望ましくないコネキシン活性と関連している疾患または状態の治療において、本明細書に記載される組成物を使用する方法を含み、これでは、疾患または状態は、任意選択で、急性創傷、慢性創傷、炎症性疾患、肺疾患(任意選択で、喘息)、腎疾患、肝臓疾患(任意選択で、NASH)、関節炎(任意選択で、若年性関節炎、変形性関節症および慢性関節リウマチ)、炎症性腸疾患(任意選択で、クローン病および潰瘍性大腸炎)、皮膚疾患、感染、虚血(任意選択で、再潅流傷害)および心臓疾患(任意選択で、アテローム性動脈硬化症)からなる群から選択される。
【０２４９】
以下の実施例は、単に例示として提供されるのであって、本発明の範囲に対する制限を構成するものではないと理解されよう。
【実施例】
【０２５０】
(実施例1)
治療用タンパク質の調製および試験手順
組換えタンパク質
組換えFLAGタグを付けたVEGF-AおよびVEGF-E(ORFVNZ2VEGF)およびマウス(m)IL-10およびオルフウイルスIL-10(vIL-10)を、先に記載されるように、293-EBNA細胞において発現させ、精製し、定量化した(Wiseら、J Biol Chem 278巻、38004〜38014頁、2003年、Imlachら、J Gen Virol 83巻、1049〜1058頁、2002年)。
【０２５１】
マウス
特異的病原体のない雌のC57BL/6マウス(6〜8週齢)を、University of Otago Animal Facilityから入手し、施設内倫理承認を受けて使用した。
【０２５２】
創傷治癒アッセイ
0日目に、マウスをケタミン/ドミトール/アトロピン(それぞれ、75/1/0.05mg/体重1kg)の皮下(SC)注射によって麻酔し、背側を剪毛し、Veetクリーム(Reckitt Benckiser)を用いて脱毛し、生理食塩水で清浄した。滅菌、ディスポーザブル4mm直径生検パンチ(Kruuse)を使用して、各動物に、2つの全層切除創傷を作製し、各側腹部に1つとした。マウスに、疼痛軽減のためのブピバカイン(2mg/体重1kg)のSC注射および創傷感染を防ぐためのストレプシン(Strepsin)を施した。マウスを、Antisedan(5mg/体重1kg)のSC注射によって生き返らせ、次いで、ケージに戻し、動けるようになるまで、ケージを加温パッド上に置くことによって温かく維持した。各創傷は、示された時間間隔でデジタル写真をとった。創傷の変化は、デジタルノギスを使用して測定し(4点をわたる創傷直径)、元の創傷のパーセンテージとして表した。創傷は、表皮によって完全に覆われた時点で閉じたと考えた。2日目に、マウスを8群に分けた。7つの治療群に、VEGF-AまたはVEGF-E(50μLリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中、1μg)、mIL-10またはvIL-10(50μL PBS中、100ng)、VEGF-AおよびmIL-10(50μL PBS中、それぞれ、1μgおよび100ng)、VEGF-AおよびmIL-10(50μL PBS中、それぞれ、1μgおよび100ng)またはPBS単独を、各側腹部上の創傷(群あたり4匹のマウスに由来する2つの創傷)に隣接した部分への(約3mm離れた、創傷に対して角度をつけて)単回SC注射によって投与した。マウスの各群に、4、6および8日目に、各創傷に同一治療の追加注射を施した。最終群は未処置のままとした。各群から4匹のマウスを3、6、9および16日目の各々で安楽死させた。
【０２５３】
各創傷の周囲の1cm2の皮膚生検を、鋭いはさみで切り出し、次いで、極小直径に沿って半分に分けた。16日目に、切除後に、各創傷の内側を清浄し、次いで、写真を撮った。各創傷の半分を0.5%亜鉛塩溶液中で固定し、パラフィンワックス中で処理した。固定された塊から、およそ50μm離して6つの4μmの連続切片をとった。各群からの残りの創傷を2つのサンプルに組み合わせ(4つの左側および4つの右側)、次いで、RNAlater RNA安定化試薬(Qiagen)中で製造業者の説明書に従って保存した。
【０２５４】
組織学的解析
連続切片をMSBトリクロームで染色した、全切片のデジタル写真を撮り、Photoshopを使用してパノラマ画に変換した。
【０２５５】
Image Jを使用して、新生表皮および肉芽組織(新生真皮)の面積および真皮への表皮突起(乳頭間突起)の長さ、各切片中の創傷の幅および総面積を測定した。コラーゲン含量は、RGB Measure(個々のピクセルでの青色染色の強度)を使用して評価し、同時に染色された創傷を受けていない皮膚のものに対して標準化した。再上皮化は、新生表皮によって覆われた総創傷幅のパーセンテージとして算出した。真皮閉鎖は、肉芽組織によって覆われた総創傷面積のパーセンテージとして算出した。4匹の異なる動物に由来する2つの創傷から得た6つの連続切片から得られた、平均表皮または肉芽組織面積、再上皮化パーセンテージ、乳頭間突起数または長さを、解析のために使用した。
【０２５６】
肉芽組織内の血管新生は、新生真皮にかぶせている格子を使用して定量化し、腺および毛包を避けた。格子は、0.024mm離れた等距離線によって分けられていた。染色された血管が、格子の交差点を横切る点をカウントし(各血管は1回のみカウントした)血管新生化された新生真皮の面積割合を、染色された細胞が入る交差点の割合として表した。平均面積割合血管新生は、4匹の異なる動物に由来する2つの創傷から得た6つの連続切片から決定した。
【０２５７】
免疫蛍光解析
免疫蛍光染色は、標準方法論に従った。手短には、代表的な切片を、1種または複数の一次抗体(抗-マウスF4/80抗原AlexaFluor(登録商標)488(PAB49、eBioscience、1:100希釈、抗α-平滑筋アクチン(αSMA)Cy3コンジュゲート(PAB53、Sigma-Aldrich、希釈1:400)、抗ビメンチンXP(登録商標)488コンジュゲート(D21H3、Cell Signalling technology、希釈1:100)またはポリクローナルウサギ抗ヒトフォンウィルブランド因子(vWF、PAB52、DakoCytomation、希釈1:200)とともに、tris緩衝生理食塩水(TBS)中、室温(RT)で2時間インキュベートした。このおよびその後の抗体インキュベーションの後、スライドをTBS中で15分間洗浄した。スライドを、抗vWFポリクローナルとともにインキュベートし、次いで、ヤギ抗ウサギIgG AlexaFluor(登録商標)488(SAB10、Invitrogen、1:500希釈)とともに、TBS中、RTで2時間インキュベートした。4',6-ジアミジノ-2-フェノールインドール(DAPI、D3571、Invitrogen、75nM)もまた、抗体インキュベーションの最後の30分間スライドに添加した。スライドをSlowFade Goldアンチフェード試薬(S36936、Invitrogen)を用いて標本にし、次いで、蛍光顕微鏡を使用して可視化した。赤および緑色のフィルターを使用して全切片のデジタル写真を撮り、ホワイトバランスを調整し、その結果、バックグラウンド蛍光は黄色に現れた。続いて、Photoshopを使用して画像を混合し、パノラマ画に変換した。
【０２５８】
創傷境界のいずれかの側0.57mmの真皮および皮下組織領域内の創傷あたりのF4/80+veマクロファージの数を定量化した。vWF+ve内皮細胞およびαSMA+ve周皮細胞と関連するものの数および肉芽組織領域内の赤血球数を、腺および毛包を避けて新生真皮において定量化した。結果は、染色された細胞の平均数/1000μm2として表されており、4匹の異なる動物に由来する2つの創傷から得た代表的な切片を使用して決定した。Adobe Photoshopを使用して、α-SMA染色の強度を肉芽組織内で定量化した。結果は、平均総α-SMA強度(ピクセルの平均赤色ピクセル強度X数)として表されており、4匹の異なる動物に由来する2つの創傷から得た代表的切片を使用して決定した。
【０２５９】
定量的RT-PCR
マウス皮膚を、液体窒素中に入れ、モーターおよび乳棒を用いて完全に粉砕し、次いで、ニードルおよびシリンジを使用してホモジナイズした。次いで、Trizol精製(Invitrogen)と、それに続くプロテイナーゼK消化、次いで、さらなるRNeasy(登録商標)Miniキット(Qiagen)を使用する精製ステップによって全RNAを単離し、各場合において製造業者の説明書に従った。cDNAの合成は、全RNA、オリゴ(dT)15およびスーパースクリプトIII(Invitrogen)を使用するランダムヘキサマープライマーを用い、製造業者の説明書に従って実施した。リアルタイム定量的PCRは、SYBR(登録商標)Green PCR Master Mix(Applied Biosystems)を使用し、ABI PRISM7700 Sequnce Detection Systemにおいて、製造業者の説明書に従って実施した。PCRプライマーセットは、文献、qPrimerDepot(primerdepot.nci.nih.gov/)製か、またはInvitrogen製のLUXTM Designerソフトウェアを使用して設計し、87〜129bpのアンプリコンが得られた。プライマー効率を決定し、定量的RT-PCRデータ解析は、PE Applied Biosystems User Bulletin 2巻、1997年に記載のように実施した。
【０２６０】
瘢痕回復の測定
13日目に、各マウスの創傷を受けた側腹部上の瘢痕を写真に撮り(群あたり8)、次いで、6人の独立した観察者によって盲検法でスコア化した。1:5のスケールを使用し、これでは、1は十分に回復した創傷に相当し、5は明らかな瘢痕が残ったことを表す。外部瘢痕スコアは、治療群あたり8個の創傷について6人の観察者から得られた平均スコアに相当した。
【０２６１】
16日目に、毛のない皮膚の内側上の、各マウスの創傷を受けた側腹部上の瘢痕も写真を撮り、それらが最も目に見えた。次いで、瘢痕面積を、2人の独立した観察者によってImage Jソフトウェアを使用して盲検法で測定した。内部瘢痕面積は、治療群あたり4匹の動物に由来する2つの創傷の平均面積に相当し、観察者間で一致していた。
【０２６２】
統計解析
分散解析(一元配置ANOVA)を使用して、各アッセイから得られたデータの統計解析を実施し、ボンフェローニ法を使用して有意な相違点を決定した(P≦0.05)。
【０２６３】
(実施例2)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、創傷閉鎖を加速する
ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せを用いる治療は、創傷閉鎖を、個々の治療またはその哺乳動物性等価物よりも大きく促進する。
【０２６４】
ウイルス性因子の、皮膚創傷治癒のマウスモデルにおいて組織修復を調節する能力を、この実施例において調べた。切除創傷を、2、4、6および8日目に、単独または組み合わせた、ウイルス性または哺乳動物性VEGFまたはIL-10の等用量の皮下(SC)注射によって治療し、未治療またはモック治療した創傷と比較した。
【０２６５】
創傷治癒の間の示された時点で撮られた写真および創傷の大きさの測定値は、治療群間で、治癒速度論および創傷閉鎖までの時間において相違を示した(図1)。PBSのSC注射を用いる創傷のモック治療は、未治療創傷と比較して、8日目に創傷の大きさの有意な低減を誘導したが、これは、創傷閉鎖までの時間における有意な増大に変換されなかった(図2;9.3日対9.4日)。
【０２６６】
哺乳動物性またはウイルス性VEGFのいずれかを用いる治療は、モック治療した創傷と比較して、6日目に創傷の大きさの有意な低減を誘導したのに対し、ウイルス性VEGF(本明細書において、VEGF-E)治療は、8日目の創傷領域の有意な低減を誘導し続けた。VEGF-E治療された創傷はまた、VEGF-A治療された創傷よりも有意に早く閉じた(図2;8.0日対9.25日)。
【０２６７】
哺乳動物性またはウイルス性IL-10のいずれかを用いる治療はまた、6日目に、モック治療した創傷と比較して創傷の大きさの有意な低減を誘導したのに対し、ウイルス性IL-10治療は、8日目に創傷面積の有意な低減を誘導し続けた。ウイルス性IL-10治療された創傷はまた、mIL-10治療された創傷と比較して早く閉じた(図2;8.5日対8.75日)。
【０２６８】
VEGF-AおよびmIL-10を用いる創傷の治療は、いずれかの因子単独を用いる治療と比較して、創傷の大きさをさらに低減せず、創傷閉鎖を加速しなかった。
【０２６９】
しかし、VEGF-EおよびvIL-10を用いる創傷の治療は、早期創傷閉鎖を個々の治療を上回って増強し、4日目に創傷の大きさを有意に低減した。VEGF-EおよびvIL-10を用いる治療は、4日目から、モック治療した創傷と比較して創傷の大きさの有意な低減を誘導した。ウイルス性組合せを用いて治療された創傷は、4日目から哺乳動物性等価物を用いて治療された創傷よりも小さく、8日目に有意差があった。さらに、VEGF-EおよびvIL-1を用いて治療された創傷は、その哺乳動物性等価物を用いて治療された創傷よりも有意に早く閉じた(図2;8.2日対9.0日)。
【０２７０】
これらの結果は、哺乳動物またはウイルス供給源由来のVEGFまたはIL-10を用いる創傷の治療は、創傷の大きさを低減するということを実証する。さらに、ウイルス性因子を用いる治療は、創傷閉鎖の加速をもたらした。ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を組み合わせることで、初期創傷閉鎖が、個々の因子のものを上回って増強された。
【０２７１】
(実施例3)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、表皮再生を増強する
VEGFおよびIL-10の組合せを用いる治療は、表皮再生を、因子単独を用いる治療のものを上回って増強する。
【０２７２】
この実施例は、ウイルス性因子を用いて治療された創傷において観察された創傷閉鎖の加速が、再上皮化の増強によるものであるかどうかを調べるために実施した。創傷作成後の種々の日数で、各創傷の周囲の皮膚を切除し、組織学的に、または定量的RT-PCRによって新生表皮を解析した。
【０２７３】
創傷新生表皮に対する、単独または組み合わせた、ウイルス性または哺乳動物性VEGFまたはIL-10の単回治療の直接的効果を、3、6および9日後に、治療された、および未治療の創傷から得られた切片のMSBトリクローム染色によって調べた。図3Aに示される代表的な切片は、VEGF-EおよびVEGF-A治療が、対照創傷と比較して創傷再上皮化を増大したことを例示する。次いで、図3Bに例示されるように、新生表皮によって覆われた総創傷幅のパーセンテージを決定することによって、再上皮化を定量化した。3日目までに、VEGF-Eを用いて治療された創傷では、表皮が創傷床の53%を覆い、これは、モック治療した、および未治療の創傷において見られる再上皮化パーセンテージ(それぞれ、33%および31%、P≦0.05、図3C)よりも有意に高かった。VEGF-A治療された創傷は、3日目にVEGF-E治療された創傷のものと同様のレベルの再上皮化を示した(45%、図3C)。VEGF-Eを用いる創傷の治療は、6日目まで創傷再上皮化を、モック治療した、および未治療の創傷と比較して(それぞれ、81%および82%、P≦0.05、図3C)有意に増大し続け、表皮は創傷床の99%を覆った。6日目に、VEGF-A治療された創傷は、VEGF-E治療された創傷のものよりも有意に少ない上皮化(86%、P≦0.05、図3C)を示した。9日目までに、すべての創傷が100%の再上皮化を示した(図3C)。全体として、3日目に、VEGF-Eで治療された創傷の新生表皮は、5026μm2の面積を有しており、これは、モック治療した、および未治療の創傷の面積(それぞれ、2798μm2および2663μm2、P≦0.05、図3D)よりも有意に大きかった。VEGF-E治療された創傷において見られた新生表皮の面積もまた、VEGF-A治療された創傷のもの(4270μm2、P≦0.05、図3D)よりも有意に大きかった。6日目までに、VEGF-E治療された創傷の新生表皮の面積は、7795μm2に増大し、これは、モック治療した、および未治療の創傷の面積(それぞれ、5991μm2および6067μm2、P≦0.05、図3D)よりも有意に大きかった。6日目には、VEGF-A治療された創傷の新生表皮は、VEGF-E治療された創傷のものと同様の面積であった(8046μm2、P≦0.05、図3D)。9日目には、VEGF-EまたはVEGF-Aを用いて治療された創傷における新生表皮の面積は、大きさが有意に低減した(それぞれ、5231μm2および5619μm2、図3D)が、モック治療した、および未治療の創傷の面積(P≦0.05、それぞれ、2815μm2および4252μm2、図3D)よりも依然として有意に大きかった。
【０２７４】
いずれかのIL-10を用いた創傷の治療は、3日目に、対照創傷と比較して創傷再上皮化を有意に増大し、表皮は、それぞれ、vIL-10およびmIL-10を用いて治療された創傷において創傷床の46%および50%を覆った(P＜0.05、図3A、C)。いずれかのIL-10を用いた創傷の治療は、6日目まで創傷再上皮化を有意に増大し続け、表皮は、それぞれ、vIL-10およびmIL-10を用いて治療された創傷において創傷床の97.0および98.1%を覆った(P≦0.05、図3C)。3日目には、vIL-10およびmIL-10を用いて治療された創傷の新生表皮面積は、それぞれ、4619μm2および4583μm2に有意に増大した(P＜0.05、図3D)。6日目までに、新生表皮の面積は、vIL-10およびmIL-10治療した創傷において、それぞれ、5875μm2および5438μm2に増大したが、今では、モック治療した、および未治療の創傷のものにおいてと同様であった(図3D)。9日目には、IL-10治療された創傷における新生表皮の面積は、大きさが低減したが、mIL-10治療された創傷における新生表皮面積は、mIL-10治療された創傷のものよりも有意に小さかった(それぞれ、2649μm2および5619μm2、図3D)。mIL-10治療された創傷の新生表皮面積は、未治療の皮膚のもの(2815μm2、図3D)と同様であったのに対し、vIL-10治療された創傷の面積は、モック治療した創傷と同様であった(4252μm2、図3D)。
【０２７５】
VEGFおよびIL-10の組合せを用いる創傷の治療はまた、3日目に、対照創傷と比較して創傷再上皮化を有意に増大し、表皮は、それぞれ、VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療された創傷において創傷床の74%および70%を覆った(P≦0.05、図3A、C)。いずれかのVEGFおよびIL-10の組合せを用いて治療された創傷はまた、3日目に、いずれかのVEGFまたはIL-10単独を用いて治療された創傷のものよりも有意に高いレベルの再上皮化を示した(P≦0.05、図3C)。いずれかのVEGFまたはIL-10の組合せを用いた創傷の治療は、6日目まで創傷再上皮化を有意に増大し続け、表皮は、それぞれ、VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療された創傷において創傷床の95.9および98.2%を覆った(P≦0.05、図3C)。いずれかのVEGFおよびIL-10の組合せを用いて治療された創傷は、6日目に、いずれかのVEGFまたはIL-10を単独で用いて治療された創傷のものよりも有意に高いレベルの再上皮化を有さなかった(図3C)。3日目には、VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療された創傷の新生表皮の平均面積は、それぞれ、7950μm2および7988μm2に有意に増大した(P≦0.05、図3D)。いずれかのVEGFおよびIL-10の組合せを用いて治療された創傷において見られた新生表皮の面積は、VEGFまたはIL-10単独を用いて治療された創傷のものよりも有意に大きかった(P≦0.05、図3D)。6日目までに、VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10治療された創傷では、新生表皮の面積は、それぞれ、5515μm2および5663μm2に低減したが、今では、モック治療した、および未治療の創傷のものと面積が同様であった(図3D)。9日目には、組合せ治療された創傷では、新生表皮の面積は、大きさが低減し、新生表皮面積は、VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10治療された創傷において、それぞれ2780μm2および3247μm2であった(図3D)。組合せ治療された創傷の新生表皮面積は、モック治療した皮膚のものよりも有意に小さかった(図3D)。
【０２７６】
これらの結果は、哺乳動物またはウイルス供給源由来のVEGFまたはIL-10を用いる創傷の治療が、表皮の面積および創傷再上皮化の速度を増大することを実証する。哺乳動物またはウイルス供給源由来のVEGFを用いる創傷の継続治療は、表皮過形成をもたらした。しかし、哺乳動物またはウイルス供給源由来のいずれかのVEGFを、そのそれぞれのIL-10と組み合わせることによってこの効果は低減し、個々のVEGF治療によって誘発される表皮過形成を制限した。
【０２７７】
(実施例4)
ウイルス性VEGおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、表皮再生を増強する
VEGFおよびIL-10の組合せを用いる治療は、表皮再生を、VEGF治療単独よりも大きく増強する。
【０２７８】
創傷新生表皮に対する、単独または組み合わせたウイルス性または哺乳動物性VEGFまたはIL-10の反復治療の効果を、9日後に、治療された、および未治療の創傷から得られた切片のMSBトリクローム染色によって調べた。図4Aに示される代表的な切片は、VEGF治療された創傷において観察された表皮過形成および乳頭間突起形成の増大を例示する。VEGF治療された創傷は、モック治療した、および未治療の創傷における乳頭間突起と比較して(それぞれ、25.9μmおよび21.36μm、P≦0.05、図4B)、乳頭間突起の長さの有意な増大を示した(VEGF-E;37.1μmおよびVEGF-A、32.5μm、図4C)。
【０２７９】
vIL-10またはmIL-10を用いて治療された創傷は、乳頭間突起の長さの増大を示さなかった(それぞれ、23.1μmおよび23.2μm、図4B)。
【０２８０】
VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療された創傷もまた、乳頭間突起の長さにおいて対照創傷と異ならなかった(それぞれ、23.1μmおよび24.4μm、図4B)。
【０２８１】
これらの結果は、哺乳動物またはウイルス供給源由来のVEGFを用いる創傷の反復治療が、乳頭間突起の真皮への突起を増大することを実証する。しかし、いずれかのVEGFを、そのそれぞれのIL-10と組み合わせることにいよって、この効果が低減され、それによって個々のVEGF治療によって誘発される表皮過形成が制限される。
【０２８２】
(実施例5)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、表皮修復の重要な調節因子のタイミングを変更する
【０２８３】
この実施例では、創傷再上皮化および回復の重要な調節因子に対する、VEGFおよびIL-10の組合せを用いる治療の効果を調べた。表皮増殖、分化または情報伝達を調節するとわかっている増殖因子およびギャップ結合タンパク質の発現に対する治療の効果を、定量的リアルタイム(RT)-PCRを使用して治療された、および未治療の創傷において調べた。
【０２８４】
コネキシン43は、創傷を受けた表皮において発現され、ケラチノサイト増殖および創傷閉鎖の制御に関与している(GoligerおよびPaul、Mol Biol Cell、6巻、1491〜501頁、1995年;Moriら、J Cell Sci、119巻、5193〜203頁、2006年;QiuらCurr Biol、13巻、1697〜703頁、2003年)。コネキシン43発現は、3日目まで、および9〜16日目に、創傷を受けた皮膚において増大した(図5A〜B)。VEGF-AまたはVEGF-Eを用いる創傷の治療は、3日目に、モック治療した創傷と比較してコネキシン43発現に対してほとんど効果がなかったが、mIL-10またはvIL-10を用いて治療された創傷では、コネキシン43発現は低減した(図5A)。VEGF-EおよびvIL-10を用いる創傷の治療もまた、3日目に、コネキシン43の発現を低下させたが、次いで、9日目からその発現を増大させた(図5A〜B)。対照的に、VEGF-AおよびmIL-10を用いる治療は、すべての時点で、コネキシン43の発現をモック治療した創傷のものを上回って増大させた(図5A〜B)。
【０２８５】
BMP-6は、ケラチノサイトの分化を、その増殖を阻害しながら促進する(Gosseletら、Cell Signal 19巻、731〜9頁、2007年;Kaiserら、J Invest Dermatol 111巻、1145〜52頁、1998年)。BMP-6発現は、3日目に創傷を受けた皮膚において下方制御されたが、6〜9日目に増大した(図5C〜D)。哺乳動物性またはウイルス性VEGFまたはIL-10を用いる創傷の治療は、3日目に、BMP-6の発現を、モック治療した創傷と比較して低下させた(図5C)。VEGFおよびIL-10両方の組合せを用いる創傷の治療は、3日目にBMP-6の発現を低下させ、次いで、6日目から、その発現をモック治療した創傷を上回って増大させた(図5C〜D)。
【０２８６】
EGFは、ケラチノサイト増殖および遊走を促進し、それによって、早期の創傷再上皮化に貢献する(Andoら、J Invest Dermatol、100巻、633〜9頁、1993年;Barrientosら、Wound Repair Regen 16巻、585〜601頁、2008年;Rheinwaldら、Nature 265巻、421〜424頁、1977年)。EGFは、創傷を受けた皮膚では、3日目に発現を低下させ、次いで、9日目までに増大させ始めた(図5E〜F)。VEGF-AまたはVEGF-Eを用いる創傷の治療は、3日目に、EGF発現をモック治療した創傷と比較してわずかに増大させたが、EGF発現は、mIL-10またはvIL-10を用いて治療された創傷ではわずかに低下した(図5E)。VEGF-EおよびvIL-10を用いる創傷の治療は、3日目から、EGFの発現を、6日目からEGF発現を上方制御した哺乳動物の組合せと比較して、モック治療した創傷のものを上回って増強した(図5E〜F)。
【０２８７】
KGFは、後期治癒の間にケラチノサイト遊走および分化を促進し、それによって、創傷を受けた表皮の再生に貢献する(Barrientosら、Wound Repair Regen 16巻、585〜601頁、2008年;Niuら、J Biol Chem 282巻、6001〜6011頁、2007年)。KGF発現は、6日目まで創傷を受けた皮膚において低下し、次いで、9日目まで増大した(図5G〜H)。VEGF-A、VEGF-EまたはvIL-10を用いる創傷の治療は、3日目に、モック治療した創傷と比較して、KGF発現に対してほとんど効果がなかったが、KGF発現は、mIL-10を用いて治療された創傷において低下した(図5G)。VEGF-EおよびvIL-10を用いる創傷の治療は、モック治療した創傷と比較して、3日目にKGFの発現を最初に低下させ、次いで、6日目からその発現を増大させた(図5G〜H)。VEGF-AおよびmIL-10を用いる治療はまた、3日目にKGFの発現を低下させたが、後期の時点では、その発現をモック治療した創傷のものを上回って実質的に増大させなかった(図5G〜H)。
【０２８８】
これらの結果は、ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せが、再上皮化およびケラチノサイト分化の重要な調節因子の発現を増強し、加速することを示し、ウイルス性組合せが、創傷を受けた皮膚において表皮再生および回復を、哺乳動物性組合せまたは個々の因子を用いる治療よりも大きく促進するという考えを支持する。
【０２８９】
(実施例6)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、炎症細胞動員を低減する
VEGFおよびIL-10の組合せの治療は、創傷への炎症細胞動員を、IL-10治療単独と同様の程度に低減する。
【０２９０】
創傷炎症に対する、単独または組み合わせた、ウイルス性または哺乳動物性VEGFまたはIL-10の反復治療の効果を、6日後に治療された、および未治療の創傷から得た切片のF4/80+veの免疫蛍光染色によって調べた。図6Aに示される代表的な切片は、VEGF-E、IL-10またはVEGFおよびIL-10の組合せを用いて治療された創傷と比較した、モックおよびVEGF-A治療された創傷において観察された炎症細胞数の増大を例示する。
【０２９１】
創傷境界に隣接する炎症細胞数を定量化した。VEGF-Aを用いて治療した創傷は、モック治療した、および未治療の創傷のもの(それぞれ、1.32および1.21 F4/80+ve細胞/1000μm2、図6B)と同様の数のマクロファージを有していた(1.05 F4/80+ve細胞/1000μm2、図6B)。しかし、VEGF-Eを用いて治療された創傷は、対照創傷と比較した場合に、創傷に隣接するマクロファージ数の有意な低減を示した(0.79 F4/80+ve細胞/1000μm2、P＜0.05、図6B)。vIL-10およびmIL-10を用いて治療された創傷もまた、創傷マクロファージ数の有意な低減を示した(それぞれ、0.42および0.49 F4/80+ve細胞/1000μm2、P≦0.05、図6B)。VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療した創傷はまた、モック治療した、および未治療の創傷と比較して、マクロファージ数の有意な低減を示し(それぞれ、0.60および0.34 F4/80+ve細胞/1000μm2、P≦0.05、図6B)、これらは個々のIL-10治療を用いた場合に見られた低減のものと同様であった。
【０２９２】
これらの結果は、哺乳動物またはウイルス供給源に由来するIL-10を用いる創傷の反復治療は、創傷への炎症細胞流入を低減させることを実証する。VEGF-Aを用いる治療は、マクロファージ動員に影響を及ぼさなかったが、VEGF-Eは、創傷へのマクロファージ動員を低減した。重要なことに、そのそれぞれのIL-10へのVEGFの付加は、ウイルス性または哺乳動物性IL-10の、創傷炎症を低減する能力を低下させなかった。
【０２９３】
(実施例7)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、創傷炎症を低減する
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10の組合せを用いる治療は、炎症細胞遊走および活性化の重要な調節因子のタイミングおよびレベルを変更することによって、創傷炎症を低減する。
【０２９４】
この実施例では、炎症細胞遊走および活性化の重要な調節因子に対する、VEGFおよびIL-10の組合せを用いる治療の効果を調べた。組織修復の炎症相を調節するサイトカインおよびケモカインの発現に対する治療の効果を、治療された、および未治療の創傷において、定量的リアルタイム(RT)-PCRを使用して調べた。
【０２９５】
炎症促進性サイトカインインターロイキン(IL)-1βおよびIL-6は、浸潤性好中球およびマクロファージによって発現され、創傷再上皮化および再血管新生の制御に関与している(Barrientosら、Wound Repair Regen 16巻、585〜601頁、2008年に概説されている)。IL-10およびIL-6発現は、創傷を受けた皮膚では、3日目に上方制御された(図7A、B)。VEGF-AまたはVEGF-Eを用いる創傷の治療は、両炎症促進性サイトカインの発現レベルを、モック治療した創傷と比較して2倍超に増大したが、mIL-10またはvIL-10を用いて治療された創傷では、サイトカインの発現は実質的に低減した(図7A、B)。VEGF-EおよびvIL-10を用いる創傷の治療は、IL-10およびIL-6の発現を低減させたが、VEGF-AおよびmIL-10を用いる治療は、その発現を、モック治療した創傷のものを上回って増大させた(図7A、B)。
【０２９６】
炎症促進性ケモカインCCL2(マクロファージ走化性タンパク質(MCP)-1)およびCXCL2(マクロファージ炎症性タンパク質(MIP)-2a)は、それぞれ、創傷を受けた内皮および浸潤性マクロファージおよびマクロファージの走化性因子および好中球動員によって発現される(DiPietroら、Am J Pathol、146巻、868〜75頁、1995年; Seoら、Am J Physiol Cell Physiol、281巻、C1568〜78頁、2001年)。CCL2はまた、炎症の際に線維芽細胞を動員し、創傷内にコラーゲン線維および構造的組織を産生するようそれらを刺激する(Gharee-Kermaniら、J Biol Chem 271巻、17779〜84頁、1996年。ケモカインCXCL2は、表皮再生に貢献し、血管新生促進性である(Devalaraja、J Invest Dermatol 115巻、234〜44頁、2000年)。CCL2およびCXCL2発現は、創傷を受けた皮膚において3日目に上方制御された(図7C、D)。VEGF-AまたはVEGF-Eを用いる創傷の治療は、両炎症促進性ケモカインの発現レベルを、モック治療した創傷と比較して2倍超に増大したが、mIL-10またはvIL-10を用いて治療された創傷では、ケモカインの発現は実質的に低減した(図7C、D)。VEGFおよびIL-10のいずれかの組合せを用いる創傷の治療は、CCL2およびCXCL2の発現を、VEGFまたはIL-10いずれかを用いて個々に治療された創傷のものの中間のレベルに低下させた(図7C、D)。
【０２９７】
抗炎症性サイトカインIL-10は、創傷を受けた表皮および浸潤性好中球およびマクロファージによって発現され、瘢痕形成の制御に関与してきた(Peranteauら、J Invest Dermatol、128巻、1852〜60頁、2008年)。IL-10発現は、創傷を受けた皮膚では3日目に上方制御された(図7E)。VEGF-AまたはVEGF-Eを用いる創傷の治療は、IL-10の発現を、モック治療した創傷と比較して増大したが、mIL-10またはvIL-10を用いて治療された創傷では、ほとんど相違が見られなかった(図7A、B)。VEGF-EおよびvIL-10を用いる創傷の治療は、IL-10の発現を、モック治療した創傷のものを上回って実質的に増大させたが、VEGF-AおよびmIL-10を用いる治療はほとんど効果がなかった(図7E)。
【０２９８】
オステオポンチン(分泌性リン酸化タンパク質(secreted phospoprotein)(SPP)-1)、細胞外マトリックスとの癒着に関与している糖タンパク質は、炎症細胞および線維芽細胞輸送ならびに生存を調節し、瘢痕形成に貢献すると考えられている(Moriら、J Exp, Med、205巻、43〜51頁、2008年)。オステオポンチン発現は、創傷を受けた皮膚では3日目に上方制御された(図7F)。VEGF-AまたはVEGF-Eを用いる創傷の治療は、モック治療した創傷と比較して、オステオポンチンの発現に対しては効果がなかったが、mIL-10またはvIL-10を用いて治療された創傷では、オステオポンチン発現は、実質的に低減した(図7F)。VEGFおよびIL-10のいずれかの組合せを用いる創傷の治療は、オステオポンチンの発現を、IL-10を用いて個々に治療された創傷のものと同様のレベルに低減させた(図7F)。
【０２９９】
これらの結果は、哺乳動物またはウイルス供給源に由来するIL-10を用いる創傷の反復治療が、炎症促進性サイトカイン、ケモカインおよび糖タンパク質発現レベルを低減させることを実証する。対照的に、いずれかのVEGFを用いる治療は、炎症促進性遺伝子発現レベルを増大した。しかし、そのそれぞれのIL-10へのVEGFの付加は、ウイルス性または哺乳動物性IL-10の、炎症促進性遺伝子発現を制限する能力を低減させなかった。IL-10および組合せで治療された創傷における変更された炎症性発現レベルは、炎症細胞流入の低減に貢献する。ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せ治療は、哺乳動物性組合せまたは個々の治療を用いる治療よりも大きな程度に、創傷内のIL-6の発現を低減させ、IL-10の発現を増大させた。瘢痕におけるこれらの重要なメディエーターの役割を考えると、これらの結果は、ウイルス性組合せは、瘢痕を、その他の治療よりも大きく制限するという考えを支持する。
【０３００】
(実施例8)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、筋線維芽細胞分化を低減する
VEGFおよびIL-10の組合せの治療は、筋線維芽細胞分化を低減する。そのそれぞれのIL-10へのVEGFの付加は、ウイルス性または哺乳動物性IL-10の、筋線維芽細胞分化を低減する能力を低下させなかった。
【０３０１】
単独または組み合わせた、ウイルス性または哺乳動物性VEGFまたはIL-10の反復治療の、筋線維芽細胞分化に対する効果を、6日目での肉芽組織内のビメンチンおよびαSMAについての、治療された、および未治療の創傷から得た切片の免疫蛍光染色によって調べた。図8Aに示される代表的な切片は、VEGF-E、IL-10またはVEGFおよびIL-10の組合せを用いて治療された創傷と比較した、モックおよびVEGF-A治療された創傷において観察されたビメンチン+ve線維芽細胞によって産生されたαSMAの程度を例示する。
【０３０２】
肉芽組織内のαSMA染色の強度を定量化した。VEGF-Aを用いて治療した創傷は、モック治療した、および未治療の創傷のもの(それぞれ、110×107および109×107総赤色強度、図8B)と同様のαSMA染色を有していた(99×107総赤色強度、図8B)。しかし、VEGF-Eで治療された創傷は、対照創傷と比較した場合にαSMA染色の有意な低減を示した(54×107総赤色強度、P＜0.05、図8B)。vIL-10およびmIL-10を用いて治療した創傷もまた、創傷マクロファージの数の有意な低減を示した(それぞれ、76×107および64×107総赤色強度、P≦0.05、図8B)。VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療した創傷もまた、モック治療した、および未治療の創傷と比較して、マクロファージ数の有意な低減を示し(それぞれ、58×107および55×107総赤色強度、P≦0.05、図8B)、これらは、個々のIL-10治療を用いた場合に見られた低減のものと同様であった。
【０３０３】
これらの結果は、哺乳動物またはウイルス供給源に由来するIL-10を用いる創傷の反復治療は、創傷において筋線維芽細胞分化を低減することを実証する。VEGF-Aを用いる治療は、αSMA産生に影響を及ぼさなかったが、VEGF-Eは、創傷内におけるその産生を低下させた。しかし、そのそれぞれのIL-10へのVEGFの付加は、ウイルス性または哺乳動物性IL-10の、筋線維芽細胞分化を低減する能力を低減させなかった。
【０３０４】
(実施例9)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、創傷再血管新生を増強する
VEGFおよびIL-10の組合せの治療は、創傷再血管新生を、VEGF治療単独と同様の程度に増強する。
【０３０５】
単独または組み合わせた、ウイルス性または哺乳動物性VEGFまたはIL-10の反復治療の、創傷血管新生に対する効果を、9日後に、治療された、および未治療の創傷から得られた切片のMSBトリクローム染色によって調べた。図9Aに示される代表的な切片は、単独またはIL-10と組み合わせた、VEGFを用いて治療した創傷において観察された真皮血管の増大を例示する。
【０３０６】
真皮血管新生の程度は、各切片の新生真皮にかぶせている格子と交差した新生真皮中の血管の面積割合を決定することによって定量化した。VEGF-EまたはVEGF-Aを用いて治療した創傷(それぞれ、0.111および0.098の面積割合、図9B)は、モック治療した、および未治療の創傷を上回って血管新生の有意な増大を有していた(それぞれ、0.067および0.044の面積割合、P≦0.05、図9B)。しかし、vIL-10およびmIL-10を用いて治療した創傷(それぞれ、0.038および0.054の面積割合、図9B)は、対照創傷と比較した場合に血管新生の有意な変化を示さなかった。VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療した創傷(それぞれ、0.091および0.098の面積割合、P≦0.05、図9B)はまた、モック治療した、および未治療の創傷と比較して、真皮血管新生の有意な増大を示し、これらは、個々のVEGF治療を用いた場合に見られた増大のものと同様であった。
【０３０７】
これらの結果は、哺乳動物またはウイルス供給源に由来するVEGFを用いる創傷の反復治療が、真皮血管新生を増大することを実証する。いずれかのIL-10を用いる治療は、血管形成を調節しなかった。重要なことに、そのそれぞれのVEGFへのIL-10の付加は、ウイルス性または哺乳動物性VEGFの、創傷再血管新生を促進する能力を損なわなかった。
【０３０８】
(実施例10)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、創傷再血管新生を加速する
VEGFおよびIL-10の組合せの治療は、創傷再血管新生を、VEGF治療単独よりも大きく加速する。
【０３０９】
9日後の、創傷血管新生に対する、単独または組み合わせた、ウイルス性または哺乳動物性VEGFまたはIL-10の反復治療の効果を、vWFおよびαSMAについて、切片を免疫蛍光染色して、肉芽組織内の血管の成熟状態を調べることによって調べた。成熟した血管壁は、vWF+ve内皮細胞で裏打ちされており、これはαSMA+ve周皮細胞によって囲まれており、これらが構造的支持体を提供し、血管機能を調節する。血管成熟の不全は、腫瘍形成および糖尿病性創傷を含めた多数のヒト障害と関連している(Jainら、Nat Med、9巻、685〜93頁、2003年)。図10Aに示される代表的な切片は、VEGFを用いて治療した損傷において観察された真皮内皮細胞の増大を例示するが、血管成熟は、IL-10を含有する治療において増大することを示す。
【０３１０】
肉芽組織領域内の内皮細胞数を定量化した。VEGF-EまたはVEGF-Aを用いて治療した創傷(それぞれ、0.68および0.72 vWF+ve細胞/1000μm2、図10B)は、モック治療した、および未治療の創傷のもの(それぞれ、0.42および0.50vWF+ve細胞/1000μm2、P≦0.05、図10B)を上回る内皮細胞の有意な増大を有していた。しかし、vIL-10およびmIL-10を用いて治療した創傷(それぞれ、0.51および0.58vWF+ve細胞/1000μm2、図10B)は、対照創傷と比較した場合に、内皮細胞数の有意な変化を示さなかった。VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療した創傷(それぞれ、0.70および0.75vWF+ve細胞/1000μm2、図10B)はまた、モック治療した、および未治療の創傷と比較して、内皮細胞数の有意な増大を示し、これは、個々のVEGF治療を用いた場合に見られる増大のものと同様であった。
【０３１１】
周皮細胞を伴う内皮細胞の割合も調べた。VEGF-EまたはVEGF-Aを用いて治療した創傷(それぞれ、0.34および0.24vWF+ve/αSMA+ve細胞/1000μm2、図10B)は、モック治療した、および未治療の創傷のもの(それぞれ、0.28および0.25vWF+ve/αSMA+ve細胞/1000μm2、図10B)と比較して、周皮細胞を伴う内皮細胞のわずかな増大を有していた。vIL-10およびmIL-10を用いて治療した創傷(それぞれ、0.38および0.37vWF+ve/αSMA+ve細胞/1000μm2、図10B)も、周皮細胞を伴う内皮細胞の大きな増大を示した。周皮細胞を伴う内皮細胞の増大は、VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療した創傷においても観察された(それぞれ、0.37および0.34vWF+ve/αSMA+ve細胞/1000μm2、図10B)。
【０３１２】
肉芽組織領域内の赤血球数を定量化した。vIL-10またはVEGF-Aを用いて治療した創傷(それぞれ、0.94および0.72赤血球/1000μm2、図10C)は、モック治療した、および未治療の創傷(それぞれ、1.05および1.31赤血球/1000μm2、図10C)と比較して、赤血球数の有意差を示さなかった。VEGF-EおよびmIL-10を用いて治療した創傷(それぞれ、0.46および0.45赤血球/1000μm2、図10C)は、対照創傷と比較した場合に、赤血球数の有意な低減を示した。VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療した創傷(それぞれ、0.46および0.36赤血球/1000μm2、図10C)はまた、モック治療した、および未治療の創傷と比較して、赤血球数の有意な低減を示した。
【０３１３】
これらの結果はさらに、哺乳動物またはウイルス供給源に由来するVEGFを用いる創傷の反復治療は、内皮細胞数を増大させるが、IL-10を用いる治療は、周皮細胞を伴う内皮細胞を増大させたことを実証する。そのそれぞれのVEGFへのIL-10の付加は、内皮細胞数および周皮細胞とのその関連両方を増大させ、これは、VEGFおよびIL-10の組合せを用いる治療は、血管成熟を促進しており、それによって、創傷再血管新生を加速するということを示唆する。これらの結果はまた、VEGFおよびIL-10を用いる創傷の治療は、肉芽組織への赤血球漏出を低減させることを示し、これは、組合せ治療が創傷浮腫を制限し得ることを示唆する。
【０３１４】
(実施例11)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、創傷再血管新生の重要な調節因子のタイミングを変更する
VEGFおよびIL-10の組合せを用いる創傷を受けた皮膚の治療は、創傷再血管新生の重要な調節因子のタイミングを変更する。この実施例では、創傷を受けた血管新生および成熟の重要な調節因子に対するこれらの治療の効果に対する、VEGFおよびそれらのIL-10の組合せを用いる治療の効果を調べた。創傷内の血管形成を調節するとわかっている増殖因子およびケモカインおよびセリンプロテアーゼの発現に対する治療の効果を、治療された、および未治療の創傷において調べた。
【０３１５】
VEGF-Aは、創傷を受けた表皮および浸潤性マクロファージによって発現される。創傷を受けた皮膚では、VEGF-Aの発現は、6日目にピークに達し、16日目までに創傷を受けていない皮膚のレベルに戻った(図11-B)。VEGF-AまたはVEGF-Eを用いる創傷の治療は、その発現をさらに増大したが、mIL-10およびvIL-10は、その発現を低減させた(図11A)。VEGF-A発現は、創傷がVEGF-AおよびmIL-10の組合せを用いて治療された場合には、3日目に実質的に増大した。対照的に、VEGF-EおよびvIL-10を用いて治療した創傷におけるVEGF-A発現レベルは、3日目にはモック治療した創傷のものより低いが、次いで、6日目からモック治療した創傷のものを上回って増大した(図11A-B)。
【０３１６】
PDGF-ββは、周皮細胞動員を調節し、それによって、血管成熟を促進する(Barrientosら、Wound Repair Regen 16巻、585〜601頁、2008年)。創傷を受けた皮膚では、PDGF-ββ発現は、6日目にピークに達した(図11C-D)。VEGF-AまたはVEGF-Eを用いる創傷の治療は、PDGF-ββ発現をさらに増大したが、mIL-10およびvIL-10は、その発現に対してほとんど効果がなかった(図11C)。PDGF-ββ発現は、創傷をVEGF-AおよびmIL-10の組合せを用いて治療した場合には、試験されたいずれの時点でも増大しなかったが、VEGF-EおよびvIL-10を用いて治療した創傷では、実質的に増大し、3日目にピークに達した(図11C-D)。
【０３１７】
CXCL4、抗血管新生ケモカインは、血管細胞上でのヘパリン硫酸との相互作用を通して増殖因子の作用を干渉する(AidoudiおよびBikfalvi、Thromb Haemost、104巻、941〜8頁、2010年)。創傷を受けた皮膚では、CXCL4発現は3日目に増大し、次いで、安定化した(図11E-F)。VEGFまたはIL-10のいずれかを用いる創傷の治療は、CXCL4発現の中程度の増大を引き起こした(図11E)。VEGF-EおよびvIL-10を用いる創傷の治療は、CXCL4発現の発現を、3〜9日目からモック治療した、ならびにVEGF-AおよびmIL-10で治療した創傷のものを上回って実質的に増大した(図11E-F)。
【０３１８】
活性化されたプロテインCは、マトリックスメタロプロテイナーゼ、アンギオポエチン(angiopoetin)およびVEGF発現の調節によって血管形成および成熟を促進する(Jacksonら、Wound Repair Regen、13巻、284〜94頁、2005年;Minhasら、FASEB J、24巻、873〜81頁、2010年)。創傷を受けた皮膚では、プロテインC発現は、3日目に増大し、次いで、徐々に低下した(図11G-H)。VEGFまたはIL-10のいずれかを用いる創傷の治療の結果、プロテインC発現はほとんど変化しなかったか、まったく変化しなかった(図11G)。しかし、VEGF-EおよびvIL-10を用いる創傷の治療は、すべての時点でプロテインC発現の発現を実質的に増大し、3日目にピークに達した(図11G-H)。VEGF-AおよびmIL-10治療はまた、すべての時点でプロテインC発現の発現を増大したが、発現は16日目にピークに達した(図11G-H)。
【０３１９】
これらの結果は、ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せは、血管形成の重要な調節因子の発現を調節し、その結果、血管新生促進因子および抗血管新生因子発現の時系列が加速されることおよびウイルス性組合せを用いる治療が、創傷を受けた皮膚において血管再生および成熟を、哺乳動物性組合せまたは個々の治療よりも大きく増強することを示す。
【０３２０】
(実施例12)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、真皮創傷閉鎖を加速し、肉芽組織形成は少ない
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10の組合せを用いる治療は、真皮創傷閉鎖を加速するが、哺乳動物性治療よりも少ない肉芽組織形成をもたらし、これは、瘢痕の低減を示す。
【０３２１】
この実施例は、ウイルス性因子を用いて治療した創傷において観察された加速された創傷閉鎖が、加速された真皮再生によるものであったかどうかを実証するために実施した。単独または組み合わせた、ウイルス性または哺乳動物性VEGFまたはIL-10の単回治療の、創傷新生真皮に対する直接的効果を、3、6および9日後に、治療された、および未治療の創傷から得られた切片のMSBトリクローム染色によって調べた。図12Aに示される代表的な切片は、ウイルス性因子を用いて治療した創傷が、対照創傷よりも大きな真皮被覆度を有していたことを例示するが、哺乳動物性因子を用いて治療した創傷は、肉芽組織沈着が増大していた。
【０３２２】
本発明者らは、図12Bに例示されるように、肉芽組織によって覆われた総創傷床のパーセンテージを決定することによって真皮閉鎖を定量化した。3日目までに、肉芽組織は、VEGF-Eを用いて治療した創傷において、創傷床の32%を覆い、これは、モック治療した、および未治療の創傷(それぞれ、14%および9%、P≦0.05、図12C)において見られる真皮閉鎖パーセンテージよりも有意に高かった。VEGF-Eで治療した創傷はまた、3日目までに、VEGF-Aで治療した創傷のものよりも有意に高いレベルの真皮閉鎖(16%、図12C)を示した。VEGF-Eを用いる創傷の治療は、6日目まで真皮閉鎖を有意に増大し続け、肉芽組織は、モック治療した、および未治療の創傷(それぞれ、52%および43%、P≦0.05、図12C)と比較して、創傷床の74%を覆った。6日目に、VEGF-Eで治療した創傷はまた、VEGF-Aで治療した創傷のもの(65%、P≦0.05、図12C)よりも有意に高い真皮閉鎖を示した。9日目までに、すべての創傷が、100%の真皮閉鎖を示した(図2E)。
【０３２３】
3日目までに、肉芽組織は、それぞれ、vIL-10およびmIL-10で治療した創傷において、創傷床の25%および23%を覆い、両方が、モック治療した、および未治療の創傷において見られた真皮閉鎖パーセンテージよりも有意に高かった(P≦0.05、図12C)。vIL-10を用いる創傷の治療は、6日目まで、真皮閉鎖を有意に増大し続け、肉芽組織は、モック治療した、および未治療の創傷(それぞれ、52%および43%、P≦0.05、図12C)と比較して、創傷床の70%を覆った。6日目に、vIL-10で治療した創傷は、mIL-10で治療した創傷のもの(66%、P≦0.05、図12C)と同等のレベルの真皮閉鎖を示した。vIL-10およびmIL-10両方を用いる創傷の治療はまた、対照創傷と比較して、真皮被覆度を有意に増大し、肉芽組織は、それぞれ、創傷床の69%および66%を覆った(P≦0.05、図12C)。
【０３２４】
VEGF-EおよびvIL-10の組合せを用いる創傷の治療は、3日目に、真皮被覆度を、VEGF-AおよびmIL-10の組合せで治療した、およびモック治療した創傷(それぞれ、28%および14%、(P≦0.05、図12C)と比較して有意に増大した(46%)。6日目までに、VEGFおよびIL-10の組合せを用いる創傷の治療は、モック治療した創傷と比較して、真皮被覆度の同様に有意な増大を示し、肉芽組織は、それぞれ、VEGF-EおよびvIL-10またはVEGF-AおよびmIL-10を用いて治療した創傷において、創傷床の72%および61%を覆った(P≦0.05、図12C)。ウイルス性組合せを用いて治療した創傷は、6日目に、哺乳動物性組合せを用いて治療した創傷よりも有意に高い真皮被覆度を示した(P≦0.05、図12C)。全体的に、3日目に、VEGF-Eを用いて治療した創傷内の肉芽組織は、13368μm2の面積を有しており、これは、モック治療した、および未治療の創傷の面積(それぞれ、7852μm2および5016μm2、P≦0.05、図12D)よりも有意に大きかった。しかし、VEGF-Eで治療した創傷において見られた肉芽組織の面積は、VEGF-Aで治療した創傷のもの(13047μm2、図12D)よりも有意に大きかった。6日目までに、VEGF-Eで治療した創傷の肉芽組織の面積は、21067μm2に増大し、これは、モック治療した、および未治療の創傷(それぞれ、20116μm2および18255μm2、図12D)と同様であった。6日目に、VEGF-Aで治療した創傷における肉芽組織の面積は、VEGF-Eで治療した創傷のものよりも有意に大きかった(26663μm2、P≦0.05、図12D)。9日目に、VEGF-Aを用いて治療した創傷において、肉芽組織の面積は、大きさが増大し続け(57712μm2、図12D)、モック治療した、および未治療の創傷の面積(それぞれ、52100μm2および42372μm2、図12D)を有していた。対照的に、VEGF-Eで治療した創傷において、9日目での肉芽組織の面積は、ここで、対照およびVEGF-Aで治療した創傷(33927μm2、P≦0.05、図12D)よりも有意に小さかった。
【０３２５】
3日目に、vIL-10を用いて治療した創傷内の肉芽組織は、15419μm2の面積を有していたが、これは、モック治療した、および未治療の創傷の面積よりも有意に大きかった(P≦0.05、図12D)。vIL-10で治療した創傷において見られる肉芽組織の面積もまた、mIL-10で治療した創傷のもの(12408μm2、図12D)よりも有意に大きかった。6日目までに、vIL-10で治療した創傷の肉芽組織の面積は、23986μm2に増大し、これはモック治療した、および未治療の創傷の面積と同様であったが(図12D)、mIL-10で治療した創傷における面積(28012μm2、P≦0.05、図12D)よりも有意に小さかった。9日目には、vIL-10およびmIL-10を用いて治療した創傷における肉芽組織の面積は、大きさの増大を停止し(それぞれ、30362μm2および31482μm2、図12D)、これは、モック治療した、および未治療の創傷の面積よりも有意に小さかった(図12D)。
【０３２６】
VEGF-EおよびvIL-10の組合せを用いて治療した創傷では、3日目での、肉芽組織の面積(27962μm2、P≦0.05、図12D)は、個々のウイルス性因子を用いて治療した創傷またはモック治療した創傷においてよりも有意に大きかった。対照的に、VEGF-AおよびmIL-10の組合せを用いて治療した創傷では、3日目での肉芽組織の面積(12004μm2、P≦0.05、図12D)は、モック治療した創傷よりも有意に大きかったが、個々の哺乳動物性因子を用いて治療した創傷においてはそうではなかった。ウイルス性組合せを用いて治療した創傷における肉芽組織面積はまた、哺乳動物性組合せを用いて治療した創傷よりも有意に大きかった(P≦0.05、図12D)。6日目までに、VEGF-EおよびvIL-10を用いて治療した創傷における肉芽組織の面積は、大きさが低減し(23121μm2、図12D)、モック治療した創傷と面積が同様であった。VEGF-AおよびVEGF-Eを用いて治療した創傷の肉芽組織面積は、大きさが増大し続け(24898μm2、図12D)、これはまた、モック治療した創傷と同様であった。9日目に、VEGF-EおよびvIL-10を用いて治療した創傷は、VEGF-AおよびmIL-10を用いて治療した創傷(それぞれ、25070μm2および32078μm2、P≦0.05、図12D)よりも実質的に小さい肉芽組織面積を有していたが、両組合せとも、モック治療した創傷よりも有意に小さい肉芽組織を有していた。
【０３２７】
これらの結果は、単独または組み合わせた、哺乳動物性VEGF-AまたはIL-10を用いる創傷の治療が、肉芽組織沈着および真皮閉鎖を増大することを実証する。ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10を用いる創傷の治療は、最初に、肉芽組織沈着を、哺乳動物性組合せまたは個々の治療よりも大きく増大し、次いで、実質的に低減した肉芽組織面積をもたらし、これは、真皮治癒の加速が最終的に瘢痕面積を制限することを示す。
【０３２８】
(実施例13)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、肉芽組織リモデリングを加速する
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10の組合せを用いる治療は、線維素からコラーゲンマトリックスへの肉芽組織リモデリングを、個々のまたは哺乳動物性治療よりも大きく促進する。
【０３２９】
この実施例は、ウイルス性因子を用いて治療した創傷において観察された肉芽組織沈着の低減および真皮閉鎖の増強が真皮リモデリングに影響を及ぼしたかどうかを実証するために実施した。コラーゲン含量は、9日後に創傷から得た切片のMSBトリクローム染色を使用して定量化した。染色データは、ウイルス性VEGF-EまたはIL-10を用いて治療した創傷が、肉芽組織創傷内の青色ピクセル染色の強度を増大したことを示し(それぞれ、162および160、図13)、これは、モック治療した、および未治療の創傷におけるコラーゲン染色(それぞれ、156および157、P≦0.05、図13)よりも有意に高かった。VEGF-EおよびvIL-10の組合せを用いる治療はまた、対照創傷(72、P≦0.05、図13)と比較して肉芽組織のコラーゲン含量を有意に増大した。しかし、VEGF-AまたはmIL-10のいずれかを用いる創傷の治療は、コラーゲン含量の相違をほとんどもたらさなかった(それぞれ、64および66、図13)が、組み合わされた治療は、対照創傷(150、P≦0.05、図13)よりも有意に少ないコラーゲン染色を有していた。各ウイルス性因子または組合せを用いて治療した創傷は、同等の哺乳動物性因子または組合せを用いて治療した創傷を上回るコラーゲン含量の有意な増大を示した(P≦0.05、図13)。ウイルス性組合せを用いて治療した創傷におけるコラーゲン含量はまた、ウイルス性IL-10を用いて治療した創傷よりも有意に高く(P≦0.05、図13)、また、VEGF-Eだけを用いて治療した創傷よりも実質的に高かった(P=0.068、図13)。
【０３３０】
これらの結果は、組み合わせたウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10を用いる創傷の治療は、肉芽組織内のコラーゲン沈着を、その他の治療よりも大きく増大することを実証し、これは、ウイルス性組合せ治療が、真皮リモデリングを加速するという考えを支持する。
【０３３１】
(実施例14)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、真皮成熟の重要調節因子のタイミングを変更することによって肉芽組織リモデリングを増強する
この実施例は、治療VEGFおよびそのIL-10の組合せの、肉芽形成真皮閉鎖および肉芽組織リモデリングの重要な調節因子に対する効果を評価するために実施した。創傷収縮および肉芽組織代謝回転を調節するとわかっている因子の発現に対する治療の効果を、治療した、および未治療の創傷において調べた。
【０３３２】
真皮創傷閉鎖は、αSMA線維を発現する筋線維芽細胞によって増強され、それらは、創傷境界をつかみ、自身が収縮し、創傷を小さくさせる(Wernerら、J Invest Dermatol、127巻、998〜1008頁、2007年)。創傷を受けた皮膚では、αSMAの発現は、6日目にピークに達し、試験されたすべての時点で創傷を受けていない皮膚のレベルの上を維持した(図14A)。創傷を、VEGF-AおよびmIL-10またはVEGF-EおよびvIL-10の組合せを用いて治療した場合には、6日目および9日目で、αSMAの発現は、モック治療した創傷と比較して実質的に低減した(図14A)。
【０３３３】
創傷マクロファージによるTGF-β1の産生は、創傷収縮および閉鎖を補助する筋線維芽細胞への線維芽細胞分化を促進する(Chalmers、Int Wound J、8巻、218〜23頁、2011年;Shihら、Wound Repair Regen、18巻、139〜53頁、2010年)。TGF-β1はまた、線維芽細胞によるI型コラーゲン合成を刺激し、その分解を防ぐ。TGF-β1発現の増大は、線維症および瘢痕の増大と相関するようである。創傷を受けた皮膚では、TGF-β1の発現は、3〜9日に増大し、16日目までに創傷を受けていない皮膚のレベルに戻った(図14B)。VEGF-AおよびmIL-10の哺乳動物性組合せを用いて治療した創傷では、TGF-β1発現がまず、モック治療した創傷のものを越えて増大した(図14B)。対照的に、VEGF-EおよびvIL-10のウイルス性組合せを用いて治療した創傷はまず、モック治療した創傷と比較してTGF-β1の発現の低減を示した(図14B)。
【０３３４】
別のTGF-βアイソフォーム、TGF-β3は、瘢痕の低減と関連しており、受容体アンタゴニストとして作用する可能性があり、それによって、コラーゲン沈着を低減する(Shihら、Wound Repair Regen、18巻、139〜53頁、2010年)。創傷を受けた皮膚では、TGF-β3の発現は、6日目にピークに達し、16日目までに創傷を受けていない皮膚のレベルに戻った(図14C)。VEGF-AおよびmIL-10の哺乳動物性組合せを用いて治療した創傷では、TGF-β3発現はまず、モック治療した創傷のものより少ないが、9日目までには実質的に高かった(図14C)。対照的に、VEGF-EおよびvIL-10のウイルス性組合せを用いて治療した創傷は、調べたすべての時点で、モック治療した創傷と比較してTGF-β3の発現の増大を示した(図14C)。
【０３３５】
アポトーシスは、創傷治癒への重要な局面であり、それによって、マクロファージおよび線維芽細胞などの各細胞集団が、ひとたび、それらの課題が完了すると、創傷部位から除去される手段である(Shihら、Wound Repair Regen、18巻、139〜53頁、2010年)。マトリックス代謝回転の不均衡につながるアポトーシスの低減は、瘢痕形成に貢献すると考えられている。p53癌抑制遺伝子は、組織修復の間のアポトーシスの重要なインデューサーである。創傷を受けた皮膚では、p53の発現は3日目に低減し、6日目に創傷を受けていない皮膚のレベルに戻り、次いで。9日目までに再度低下していた(図14D)。VEGF-AおよびmIL-10の哺乳動物性組合せを用いて治療した創傷では、p53発現はまず、モック治療した創傷のもののように低減したが、次いで、6および9日目に増大した(図14D)。VEGF-EおよびvIL-10のウイルス性組合せを用いて治療した創傷はまた、モック治療した創傷と比較して、最初に低減したが、次いで、遅い時点で、p53の発現のより実質的な増大を示した(図14D)。
【０３３６】
創傷が成熟するにつれ、肉芽組織のマトリックスが、線維素から未熟なIII型コラーゲンへ代謝回転され、これが、瘢痕を強化する成熟I型コラーゲンに変換されることになる(Olivveiraら、Int Wound J、6巻、445〜52頁、2009年)。創傷を受けた皮膚では、III型およびI型コラーゲンの発現は、両方とも6日目にピークに達し、次いで、16日目までに創傷を受けていない皮膚のレベルに戻った(図14E、F)。VEGFおよびIL-10のいずれかの組合せを用いた創傷の治療(Treated)は、6日目に、IIIおよびI型両方のコラーゲンの発現を、モック治療した創傷のものを超えるレベルに増大した(図14E、F)。VEGF-EおよびvIL-10のウイルス性組合せで治療した創傷では、成熟I型コラーゲンの発現の増大は、9日目まで維持されたが、VEGF-AおよびmIL-10の哺乳動物性組合せを用いて治療した創傷では、未熟III型コラーゲンの発現の増大が、9日目まで維持された(図14E、F)。
【０３３７】
これらの結果は、VEGF-EおよびvIL-10のウイルス性組合せを用いる創傷の治療は、マトリックス代謝回転に影響を及ぼしており、コラーゲンおよびTGF-β3発現が増大したということを示す。ウイルス性VEGF-E/vIL-10組合せを用いる創傷の治療は、細胞性アポトーシスを増強すると思われ、これは、加速された創傷成熟を示唆する。哺乳動物性組合せはまた、創傷内でコラーゲン、TGF-β3およびp53発現を増大したが、ウイルス性組合せで示された程度ではない。ウイルス性組合せで治療された創傷は、加速された創傷閉鎖を有すると思われるが、これは、αSMAおよびTGF-β1、筋線維芽細胞活性化および創傷収縮に関与している重要な分子の発現の低減と一致せず、それらは治癒の初期相の間にピークに達する。しかし、組合せで治療した創傷におけるαSMA発現は、この研究で調べられたものよりも早い時点でピークに達し得るということはあり得、これでは、加速された創傷収縮と一致する。
【０３３８】
(実施例15)
ウイルス性VEGFおよびウイルス性IL-10を用いる治療は、瘢痕回復を増強する
ウイルス性VEGF-Eおよびウイルス性IL-10の組合せを用いる治療は、個々のまたは哺乳動物性治療よりも大きく瘢痕回復を増強する。
【０３３９】
この実施例では、単独または組み合わせたウイルス性または哺乳動物性VEGFまたはIL-10を用いて治療した創傷から生じた瘢痕を、未治療またはモック治療した創傷のものと比較した。
【０３４０】
治癒した創傷の撮影された写真は、治療群間の瘢痕回復の相違を示し、それらを瘢痕重症度の視覚的スコア化によって、また、内部瘢痕面積の測定によって定量化した(図15A)。単独またはvIL-10と組み合わせてVEGF-Eを用いる創傷の治療は、13日目に、モック治療した創傷と比較して外部瘢痕スコアの有意な低減をもたらした(図15B)。単独またはVEGF-Eと組み合わたvIL-10を用いた創傷の治療は、16日目に、モック治療した創傷と比較して内部瘢痕面積の有意な低減をもたらした(図15C)。単独または組み合わせた哺乳動物性VEGF-AまたはIL-10を用いる治療は、瘢痕スコアまたは大きさに対してほとんど正の効果がないか、全くなかった。
【０３４１】
本明細書において参照または記載される、すべての特許、刊行物、科学論文、ウェブサイトならびにその他の文書および材料は、本発明が属する技術分野の当業者の技能のレベルを示し、このような参照される文書および材料の各々は、ここにその全文が参照により組み込まれた、またはその全文が本明細書に記載されたのと同様の程度に、参照により本明細書に組み込まれる。出願人は、いずれかのこのような特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、電子的に入手可能な情報およびその他の参照される材料または文書から得た、ありとあらゆる材料および情報を本明細書中に物理的に組み込む権利を留保する。
【０３４２】
本明細書に記載された特定の方法および組成物は、実施形態の代表的なものであり、例示的であり、本発明の範囲に対する制限として意図されない。その他の目的、態様および実施形態は、本明細書の考慮の際に当業者には自明となり、特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨内に包含される。本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、本明細書に開示される本発明に種々の置換および改変がなされ得るということは当業者には容易に明らかとなる。本明細書において例示的に記載された本発明は、適宜、必要不可欠であると、本明細書において具体的に開示されていない、任意の要素(単数または複数)または制限(単数または複数)の不在下で実施され得る。したがって、例えば、本明細書における各例では、本発明の実施形態または実施例では、用語「含んでいる(comprising)」、「本質的にからなる(consisting essentially of)」および「からなる(consisting of)」のいずれも、本明細書において他の2つの用語のいずれかと置換され得る。また、用語「含んでいる(comprising)」、「含んでいる(including)」、「含有している(containing)」などは広く読まれるべきであり、制限はない。本明細書において例示的に記載された方法およびプロセスは、異なる工程の順序で適宜、実施され得、それらは、本明細書において、または特許請求の範囲に示された工程の順序に必ずしも制限されない。また、本明細書において、添付の特許請求の範囲において、単数形「1つの(a)」、「1つの(an)」および「その(the)」は、特に文脈が明確に別のものを示さない限り、複数形の参照を含む。いかなる事情があろうとも、本特許は、本明細書に記載された特定の実施例または実施形態または方法に制限されると解釈されてはならない。いかなる事情があろうとも、本特許は、特許庁の任意の審査官またはその他の当局者または雇用者によってなされた任意の声明によって制限されると解釈されてはならない。ただし、このような声明が、明確に、資格または留保なく、発明者(複数可)によって、または発明者の代わりに応答書面において明確に承認される場合を除く。
【０３４３】
使用されている用語および表現は、説明の用語として使用され、制限ではなく、このような用語および表現の使用に、示され、記載される特徴またはその一部の任意の等価物を排除する意図はないが、特許請求される本発明の範囲内で種々の改変が可能であるということは認識される。したがって、本発明は、好ましい実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示されているが、開示される本明細書における概念の改変および変法は当業者によってなされ得るということおよびこのような改変および変法は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内にあると考慮されるということは理解されよう。
【０３４４】
本発明は、本明細書において、広く、一般的に記載されている。属の開示内に入る下位種および亜属集団の各々もまた、本発明の一部を形成する。これは、本発明の属の記載、ただし、切り出された材料が本明細書に具体的に列挙されるか否かに関わらず、属から任意の対象を除去する負の制限を含む。
【０３４５】
その他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。さらに、本発明の特徴または態様が、マーカッシュ群の観点で記載される場合には、当業者は、本発明はまた、それによってマーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループの観点で記載されると認識されよう。
【図１】
2015520754.tif 000003
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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