(57)【要約】  本発明は、一般式（I）【化１】2015535233.tif 000013の肺投与用化合物に関する。式（I）の化合物は、哺乳類における特発性肺線維症等の肺線維症を治療するために好適である。更に本発明は、ヒト被験者における特発性肺線維症等の肺線維症の治療のための方法に関する。
2015535233.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）
【化１】
2015535233.tif 000012
の化合物を含む、肺投与用組成物。
【請求項２】
前記式（I）の化合物は、遊離形態のビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンである、請求項１の組成物。
【請求項３】
前記式（I）の化合物は結晶形態である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記肺投与はネブライザによって実施される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ネブライザは、超音波式ネブライザ又はジェット式ネブライザから選択されるネブライザである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記式（I）の化合物は溶液である、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項７】
前記式（I）の化合物はナノ懸濁液等の懸濁液である、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項８】
前記式（I）の化合物はリポソーム製剤である、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項９】
前記肺投与は乾燥粉体吸入器によって実施される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記式（I）の化合物はナノ粒子として存在する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記式（I）の化合物はリポソーム製剤である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記肺投与は加圧定量吸入器によって実施される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記式（I）の化合物は溶液である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記式（I）の化合物は懸濁液である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
肺線維症の治療のための方法において使用するための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
肺線維症はＩＰＦである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記式（I）の化合物は、空気力学的直径の質量平均が０．１〜２０μｍである、例えばＭＭＡＤが０．５〜１０μｍ、１〜５μｍである粒子から選択される好適な粒径で存在する、請求項１〜５、７〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物は薬学的組成物である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
薬学的に許容可能な添加剤を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物を含む、肺投与用デバイス。
【請求項２１】
前記デバイスはネブライザ又は乾燥粉体吸入器である、請求項２０に記載のデバイス。
【請求項２２】
前記デバイスは、超音波式ネブライザ又はジェット式ネブライザから選択されるネブライザである、請求項２１に記載のデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の化合物、哺乳類の特発性肺線維症等の肺線維症の治療のための薬剤としての上記化合物の使用、及び哺乳類の特発性肺線維症等の肺線維症の治療のための薬剤を製造するための上記化合物の使用に関する。本発明はまた、上記新規の化合物を含む薬学的組成物にも関する。更に本発明は、ＩＰＦの最適な治療を提供するための肺内投与、特にネブライザの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
特発性肺線維症（Ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ：ＩＰＦ）は、全世界規模で健康に対する多大な負荷となっている。これは原因不明の慢性病状であり、急性肺損傷が繰り返されることで漸進的な線維症が引き起こされ、その結果肺の構造の破壊、肺機能の低下が起こり、これは呼吸不全及び死亡を伴う。特発性肺線維症（ＩＰＦ）は肺線維症の典型的かつ最も一般的な原因であり、多数の呼吸器疾患は肺線維症から進行し得、肺線維症の予後は通常、比較的悪い。診断から死亡までの時間の中央値は２．５年であり、ＩＰＦの発生率及び有病率は上昇し続ける。これは、効果的な治療法が存在せず、かつ疾患の進行を予測する信頼できるバイオマーカも存在しないいくつかの呼吸器病状の１つであり続けている。肺線維症において発生する機序は不明であるが、今のところ原因が不明の反復性上皮損傷の結果としての異常な創傷治癒に集中している。ＩＰＦは、形質転換増殖因子−β１（ＴＧＦ−β１）等の線維形成サイトカインに対して高い活性化応答を示す、線維芽細胞／筋線維芽細胞を含む線維芽細胞の増殖巣を特徴とする。ＩＰＦの多くのケースが現行の抗炎症治療に応答を示さないため、線維芽細胞増殖巣内の筋線維芽細胞は、潜在的な新規の治療標的となっている。特発性肺線維症の治療のための薬剤に対する需要は大きく、未だ達成されていない。
【０００３】
肺繊維症のブレオマイシンモデルは最も特徴的なげっ歯類モデルであり、業界標準モデルである。ブレオマイシン治療は、酸化剤媒介ＤＮＡ損傷を引き起こし、肺の初期炎症と、これに続く２〜４週間に亘る進行性線維症とを誘発する。このような損傷の後期段階において投与することにより、新規の化合物の抗線維症性能を評価できる。
【０００４】
本発明者らのうち数人は、以前に公開された特許出願において、ガレクチン阻害剤、特にＧａｌ−３阻害剤について記載している。これらガレクチン阻害剤はいずれも、ブレオマイシンモデルで試験されていない。従来技術のガレクチン阻害剤のうちのいくつかは、特許文献１に記載される
【０００５】
【化１】
2015535233.tif 000003
【０００６】
及び特許文献２に記載される
【０００７】
【化２】
2015535233.tif 000004
【０００８】
（ここでＲIはＤ−ガラクトースであってよい）、及び特許文献３に記載される
【０００９】
【化３】
2015535233.tif 000005
【００１０】
の一般式を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第２００５／１１３５６８号
【特許文献２】国際公開第２００５／１１３５６９号
【特許文献３】国際公開第２０１０／１２６４３５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ガレクチン−３は、様々な病因の線維症組織によく発現するβ−ガラクトシド結合性レクチンである。マウスにおける、ブレオマイシン及びＴＧＦ−β１−誘発性肺線維症におけるガレクチン−３の役割を調査し、ヒトＩＰＦにおけるその関連性を確立する。ガレクチン−３に関する研究は、ＭａｃＫｉｎｎｏｎらの「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦ−β１  ｄｒｉｖｅｎ  ｌｕｎｇ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｂｙ  ｇａｌｅｃｔｉｎ−３」（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１８５：５３７−５４６、２０１２年、初出はオンラインで２０１１年１１月１７日）に記載されている。特に、ガレクチン−３阻害は、肺線維症の治療のための新規の治療戦略を提示し得ることが示されている。新規の化合物が試験され、これがガレクチン−３の阻害剤であること、特にこの化合物がインビトロでのＴＧＦ−β誘発性β−カテニン活性化をブロックし、インビボでのブレオマイシンに続く肺線維症の後期段階の進行を弱めることが示された。
【００１３】
本発明を説明するために、特に実践に関する更なる詳細を提供するために本明細書において使用される、特許を含む公刊物及びその他の文献は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
従って、一般式（I）の化合物を提供する：
【００１５】
【化４】
2015535233.tif 000006
【００１６】
更なる態様では、ある組成物、特に式（I）の化合物と、任意に担体又は賦形剤といった薬学的に許容可能な添加剤とを含む薬学的組成物を提供する。
【００１７】
式（I）の化合物は、哺乳類の特発性肺線維症等の肺線維症を治療するための方法において使用するのに適している。典型的には上記哺乳類はヒト被験者である。投与形態は典型的には、経口、静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、肺投与から選択される。特に肺経路は、マウスにおいてｉ．ｖ．又はｓ．ｃ．経路よりも比較的長い半減期を提供することが示されている。肺線維症、特にＩＰＦを治療するにあたって、細気管支及び肺胞を含む肺組織の最も狭い部分において十分に高い局所濃度の治療を得ることが重要である。更に、治療が、肺組織内での作用部位において十分な滞留時間を得ることが重要である。更に、ＩＰＦ患者の線維症は肺のみに局在化しているため、最小限の全身性曝露又は非全身性曝露による肺の高レベルの曝露が得られることが好ましく、また特に超音波タイプの電気式ネブライザであるネブライザの使用が効果的である。しかしながら、肺線維症、特にＩＰＦの患者にとって咳は主要な症状であり、この症状は、刺激物を肺に導入すると悪化する可能性が高い。従って乾燥粉体吸入器等を用いた乾燥粉体による治療はこれらの患者には好適でない。しかしながら、電子ネブライザ等のネブライザを用いた化合物の送達は、肺にいずれの刺激を与えることなく、肺の最小区画に化合物を送達できるため、特に有益である。
【００１８】
また、更なる態様では、治療が必要な哺乳類に治療有効量の式（I）の化合物を投与することを含む、特発性肺線維症等の肺線維症の治療のための方法を提供する。
【００１９】
別の態様では、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の溶媒中で、任意にＣｕ（I）等の触媒の存在下で、ビス−（３−デオキシ−３−アジド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンを、３−フルオロフェニルアセチレン、及びトリエチルアミン等のアミンと反応させて、式（I）の化合物を得るステップを含む、式（I）の化合物を調製するプロセスを提供する。
【００２０】
更なる態様では、本発明は、肺線維症又は症状の悪化を示すガレクチン−３レベルを有するヒト被験者における、ヒト被験者に治療有効量のガレクチン−３阻害剤を投与することを含む、特発性肺線維症等の肺線維症の治療のための方法に関する。
【００２１】
上述の方法のいずれか１つは、被験者において肺線維症が発現する可能性に関する情報、又は上記被験者における肺線維症の重篤度を特徴決定するための情報を、伝送する、表示する、記憶する若しくは印刷する、又はユーザインタフェースデバイス、コンピュータ可読記憶媒体、ローカルコンピュータシステム若しくはリモートコンピュータシステムに出力するステップを含むことができる。
【００２２】
従って本明細書では特に、以下の実施形態を開示する：
１．一般式（I）：
【００２３】
【化５】
2015535233.tif 000007
【００２４】
の化合物。
【００２５】
２．遊離形態のビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンから選択される、実施形態１の化合物。
【００２６】
３．薬剤として使用するための、実施形態１又は２による化合物。
【００２７】
４．実施形態１〜３のいずれか１つの化合物と、任意に担体又は賦形剤等の薬学的に許容可能な添加剤とを含む、薬学的組成物。
【００２８】
５．肺経路で投与される、実施形態４の薬学的組成物。
【００２９】
６．肺経路による投与は、超音波式ネブライザ又はジェット式ネブライザ等のネブライザから選択される、実施形態５の薬学的組成物。
【００３０】
７．哺乳類における特発性肺線維症等の肺線維症を治療するための方法において使用するための、実施形態１〜３のいずれか１つの化合物。
【００３１】
８．肺経路で投与される、実施形態７の化合物。
【００３２】
９．肺経路による投与は、超音波式ネブライザ又はジェット式ネブライザ等のネブライザから選択される、実施形態８の化合物。
【００３３】
１０．上記哺乳類はヒト被験者である、実施形態７、８又は９の化合物。
【００３４】
１１．治療が必要な哺乳類に治療有効量の実施形態１〜３のいずれか１つの化合物を投与することを含む、特発性肺線維症等の肺線維症の治療のための方法。
【００３５】
１２．実施形態１〜３のいずれか１つの化合物は肺経路で投与される、実施形態１１の方法。
【００３６】
１３．肺経路による投与は、超音波式ネブライザ又はジェット式ネブライザ等のネブライザから選択される、実施形態１２の方法。
【００３７】
１４．溶媒中でビス−（３−デオキシ−３−アジド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンを３−フルオロフェニルアセチレン及びアミンと反応させて、式（I）の化合物を得るステップを含む、式（I）の化合物を調製するプロセス。
【００３８】
１５．アミンはトリエチルアミンであり、Ｃｕ（I）等の触媒が存在し、溶媒はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の有機溶媒である、実施形態１４のプロセス。
【００３９】
１６．実施形態１〜３のいずれか１つの化合物を含む、肺投与用のネブライザデバイス。
【００４０】
１７．化合物は遊離形態のビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンである、実施形態１６のネブライザデバイス。
【００４１】
１８．超音波式ネブライザ又はジェット式ネブライザから選択される、実施形態１６又は１７のネブライザ。
【００４２】
１９．実施形態１〜３のいずれか１つの化合物を含む、肺投与用の乾燥粉体デバイス。
【００４３】
２０．化合物は遊離形態のビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンである、実施形態１９の乾燥粉体デバイス。
【００４４】
２１．ａ）適切な試験方法を用いてヒト被験者から得た身体組織試料のガレクチン−３レベル（例えば濃度）を測定すること、ｂ）上記ガレクチン−３レベルを所定の基準レベルと比較すること、及びｃ）上記ガレクチン−３レベルが、被験者が肺線維症を有することを診断する指標となるかどうかを決定することを含む、ヒト被験者において肺線維症を診断する方法。
【００４５】
２２．ガレクチン−３の指標レベルは最低２２ｎｇ／ｍｌ、例えば最低２５ｎｇ／ｍｌ、最低３０ｎｇ／ｍｌ、最低４０ｎｇ／ｍｌ、最低５０ｎｇ／ｍｌ、最低６０ｎｇ／ｍｌ、最低７０ｎｇ／ｍｌである、実施形態２１の方法。
【００４６】
２３．ａ）適切な試験方法を用いてヒト被験者から得た身体組織試料のガレクチン−３レベル（例えば濃度）を測定すること、及びｂ）上記ガレクチン−３レベルが、予後が良好でないことの指標となること、又はヒト被験者に関するものでないことを決定することを含む、ヒト被験者において肺線維症の予後を予測する方法。
【００４７】
２４．ガレクチン−３の指標レベルは最低２２ｎｇ／ｍｌ、例えば最低２５ｎｇ／ｍｌ、最低３０ｎｇ／ｍｌ、最低４０ｎｇ／ｍｌ、最低５０ｎｇ／ｍｌ、最低６０ｎｇ／ｍｌ、最低７０ｎｇ／ｍｌである、実施形態２３の方法。
【００４８】
２５．ａ）被験者から得た身体組織試料のガレクチン−３レベルを、１つ又は複数の十分な間隔を空けて少なくとも２回測定することにより、臨床的に妥当な変化を測定すること、ｂ）上記ガレクチン−３レベルを所定の基準レベルと比較すること、並びにｃ）ステップａ）及びｂ）を１回以上繰り返して、ヒト被験者における肺線維症の発現又は進行を監視することを含む、ヒト被験者における肺線維症の発現又は進行を診断する方法。
【００４９】
２６．２つの測定の間の期間は、約２週間〜２年間、例えば２週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年又は２年から独立して選択される、実施形態２５の方法。
【００５０】
２７．ガレクチン−３の指標レベルが２２ｎｇ／ｍｌである場合、肺線維症の治療を中止、調整又は保留してよい、実施形態２５の方法。
【００５１】
２８．ガレクチン−３の指標レベルが最低２２ｎｇ／ｍｌ、例えば最低２５ｎｇ／ｍｌ、最低３０ｎｇ／ｍｌ、最低４０ｎｇ／ｍｌ、最低５０ｎｇ／ｍｌ、最低６０ｎｇ／ｍｌ、最低７０ｎｇ／ｍｌである場合、肺線維症の治療を開始又は増進させる、実施形態２５の方法。
【００５２】
２９．ａ）適切な試験方法を用いてヒト被験者から得た身体組織試料のガレクチン−３レベル（例えば濃度）を測定すること、ｂ）上記ガレクチン−３レベルを所定の基準レベルと比較すること、ｃ）症状の悪化の発現又は進行の指標となるガレクチン−３レベルが存在するかしないかを決定すること、及びｄ）ステップａ）〜ｃ）を繰り返して、ヒト被験者における症状の悪化の発現又は進行を監視又は予測することを含む、肺線維症を有するヒト被験者において症状の悪化を監視又は予測する方法。
【００５３】
３０．ガレクチン−３の指標レベルが２２ｎｇ／ｍｌである場合、肺線維症の治療を中止、調整又は保留してよい、実施形態２９の方法。
【００５４】
３１．ガレクチン−３の指標レベルが最低２２ｎｇ／ｍｌ、例えば最低２５ｎｇ／ｍｌ、最低３０ｎｇ／ｍｌ、最低４０ｎｇ／ｍｌ、最低５０ｎｇ／ｍｌ、最低６０ｎｇ／ｍｌ、最低７０ｎｇ／ｍｌである場合、肺線維症の治療を開始又は増進させる、実施形態２９の方法。
【００５５】
３２．ガレクチン−３の指標レベルが最低５０ｎｇ／ｍｌ、最低６０ｎｇ／ｍｌ、最低７０ｎｇ／ｍｌである場合、症状悪化の予防的治療を開始又は増進させる、実施形態２９の方法。
【００５６】
３３．肺線維症は特発性肺線維症である、実施形態１７〜２８のいずれか１つの方法。
【００５７】
３４．ガレクチン−３のレベルに従って、被験者を軽度、中度、重度の形態の肺線維症と診断する、実施形態２１〜３３のいずれか１つの方法。
【００５８】
３５．ステップａ）において更なるバイオマーカを測定し、この更なるバイオマーカは肺線維症に関連するものであり、ガレクチン−３レベルに関連するマーカを含み、より正確な診断、予測及び／又は監視をもたらす、実施形態２１〜３４のいずれか１つの方法。
【００５９】
３６．バイオマーカは、ＭＭＰ７、ｐｅｒＤＬＣＯ、ＫＬ−６、ＳＰ−Ａ、ＭＭＰ−７、ＣＣＬ−１８、ＩＬ１３、ＣＣ−ケモキン、ＩＬ１０、ＩＬ１レセプタアンタゴニスト、ＣＣＬ２、カルグラヌリンＢ（Ｓ１００Ａ９又はＭＲＰ１４）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、プロコラーゲン、プロコラーゲン３から選択される、実施形態３５の方法。
【００６０】
３７．バイオマーカは、上記ヒト被験者から得られる体液中の特定の細胞種の存在及び頻度の分析から選択される、実施形態３５の方法。
【００６１】
３８．バイオマーカは、上記ヒト被験者から得られる体液中の線維芽細胞及びＴ細胞亜集団の存在及び頻度の分析から選択される、実施形態３５の方法。
【００６２】
３９．ガレクチン−３の所定の基準レベルは、約１０．０ｎｇ／ｍＬ〜約２５．０ｎｇ／ｍＬの範囲、例えば約１３．０ｎｇ／ｍＬ〜約１９．２ｎｇ／ｍＬの範囲である、実施形態２１〜３８のいずれか１つの方法。
【００６３】
４０．身体組織試料は、血液、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、肺組織から選択される、実施形態２１〜３９のいずれか１つの方法。
【００６４】
４１．適切な試験方法は、免疫アッセイ、免疫組織化学アッセイ、比色アッセイ、比濁法アッセイ、フローサイトメトリから選択される、実施形態２１〜４０のいずれか１つの方法。
【００６５】
４２．被験者は、標的範囲内であることが決定されたガレクチン−３血中濃度を有する、実施形態１７又は２９の方法。
【００６６】
４３．標的範囲は約１０ｎｇ／ｍｌ〜約７０ｎｇ／ｍｌである、実施形態４２の方法。
【００６７】
４４．治療有効量のガレクチン−３阻害剤をヒト被験者に投与することを含む、肺線維症の指標又は症状の悪化の指標となるガレクチン−３レベルを有するヒト被験者における、特発性肺線維症等の肺線維症の治療のための方法。
【００６８】
４５．ガレクチン−３阻害剤は実施形態１〜３のいずれか１つの化合物から選択される、実施形態４４の方法。
【００６９】
４６．ガレクチン−３の指標レベルは、最低約２２ｎｇ／ｍｌ、例えば最低約２５ｎｇ／ｍｌ、最低約３０ｎｇ／ｍｌ、最低約４０ｎｇ／ｍｌ、最低約５０ｎｇ／ｍｌ、最低約６０ｎｇ／ｍｌ、最低約７０ｎｇ／ｍｌである、実施形態４４の方法。
【００７０】
４７．治療開始後に被験者のガレクチン−３血中濃度を監視する追加ステップを含む、実施形態４４の方法。
【００７１】
従って、本明細書では特に、以下の実施形態も開示する：
１．一般式（I）：
【００７２】
【化６】
2015535233.tif 000008
【００７３】
の化合物。
【００７４】
２．遊離形態のビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンから選択される、実施形態１の化合物。
【００７５】
３．実施形態１の化合物と、任意に薬学的に許容可能な添加剤とを含む、組成物。
【００７６】
４．治療が必要な哺乳類に治療有効量の実施形態１の化合物を投与することを含む、肺線維症の治療のための方法。
【００７７】
５．上記化合物は肺経路で投与される、実施形態４の方法。
【００７８】
６．溶媒中でビス−（３−デオキシ−３−アジド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンを３−フルオロフェニルアセチレン及びアミンと反応させて、式（I）の化合物を得るステップを含む、式（I）の化合物を調製するプロセス。
【００７９】
７．アミンはトリエチルアミンであり、Ｃｕ（I）等の触媒が存在し、溶媒はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の有機溶媒である、実施形態６のプロセス。
【００８０】
８．実施形態１の化合物を含むネブライザ又は乾燥粉体デバイスである、肺線維症のためのデバイス。
【００８１】
９．上記デバイスは、超音波式ネブライザ又はジェット式ネブライザから選択されるネブライザである、実施形態８のデバイス。
【００８２】
１０．ａ）適切な試験方法を用いてヒト被験者から得た身体組織試料のガレクチン−３レベルを測定すること、ｂ）上記ガレクチン−３レベルを所定の基準レベルと比較すること、及びｃ）上記ガレクチン−３レベルが、被験者が肺線維症を有することを診断する指標となるかどうかを決定することを含む、ヒト被験者において肺線維症を診断する及び／又は肺線維症の予後を予測するために、肺線維症の存在及び／又は程度を検知する方法。
【００８３】
１１．ガレクチン−３の指標レベルは最低約２２ｎｇ／ｍｌである、実施形態１０の方法。
【００８４】
１２．ａ）被験者から得た身体組織試料のガレクチン−３レベルを、１つ又は複数の十分な間隔を空けて少なくとも２回測定することにより、臨床的に妥当な変化を測定すること、ｂ）上記ガレクチン−３レベルを所定の基準レベルと比較すること、並びにｃ）ステップａ）及びｂ）を１回以上繰り返して、ヒト被験者における肺線維症の発現又は進行を監視することを含む、ヒト被験者における肺線維症の発現又は進行又は症状の悪化を監視する方法。
【００８５】
１３．２つの測定の間の期間は約２週間〜約２年間から独立して選択される、実施形態１２の方法。
【００８６】
１４．ガレクチン−３の指標レベルが２２ｎｇ／ｍｌである場合、肺線維症の治療を中止、調整又は保留する、実施形態１２の方法。
【００８７】
１５．肺線維症は特発性肺線維症である、実施形態１２の方法。
【００８８】
１６．ガレクチン−３のレベルに従って、被験者を軽度、中度、重度の形態の肺線維症と診断する、実施形態１２の方法。
【００８９】
１７．ステップａ）において更なるバイオマーカを測定し、上記マーカはガレクチン−３レベルに関連する、実施形態１２の方法。
【００９０】
１８．バイオマーカは、ＭＭＰ７、ｐｅｒＤＬＣＯ、ＫＬ−６、ＳＰ−Ａ、ＭＭＰ−７、ＣＣＬ−１８、ＩＬ１３、ＣＣ−ケモキン、ＩＬ１０、ＩＬ１レセプタアンタゴニスト、ＣＣＬ２、カルグラヌリンＢ（Ｓ１００Ａ９又はＭＲＰ１４）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、プロコラーゲン、プロコラーゲン３から選択される、実施形態１７の方法。
【００９１】
１９．バイオマーカは、上記ヒト被験者から得られる体液中の特定の細胞型の存在及び頻度の分析から選択される、実施形態１７の方法。
【００９２】
２０．バイオマーカは、上記ヒト被験者から得られる体液中の線維芽細胞及びＴ細胞亜集団の存在及び頻度の分析から選択される、実施形態１７の方法。
【００９３】
２１．ガレクチン−３の所定の基準レベルは、約１０．０ｎｇ／ｍＬ〜約２５．０ｎｇ／ｍＬの範囲である、実施形態１２の方法。
【００９４】
２２．身体組織試料は、血液、血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、肺組織から選択される、実施形態１２の方法。
【００９５】
２３．適切な試験方法は、免疫アッセイ、免疫組織化学アッセイ、比色アッセイ、比濁法アッセイ、フローサイトメトリから選択される、実施形態１０の方法。
【００９６】
２４．被験者は、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約７０ｎｇ／ｍｌの標的範囲内であることが決定されたガレクチン−３血中濃度を有する、実施形態１０の方法。
【００９７】
２５．被験者は、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約７０ｎｇ／ｍｌの標的範囲内であることが決定されたガレクチン−３血中濃度を有する、実施形態１２の方法。
【発明を実施するための形態】
【００９８】
広範な態様では、一般式（I）：
【００９９】
【化７】
2015535233.tif 000009
【０１００】
の化合物を提供する。
【０１０１】
更なる態様では、本発明は肺投与用組成物に関し、上記組成物は式（I）の化合物を含む。
【０１０２】
式（I）の化合物は、ビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンという化学名（ＩＵＰＡＣ）を有し、本出願で使用される場合、固体若しくは液体、塩、溶媒和物又は遊離形態等のいずれの可能な形態の式（I）の化合物を包含することを意図したものである。
【０１０３】
典型的には、式（I）の化合物は、遊離形態としてのビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンである。
【０１０４】
更なる実施形態では、式（I）の化合物は、いずれの溶媒和物を有さない、例えば無水化された、遊離形態としてのビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンである。
【０１０５】
更なる実施形態では、式（I）の化合物は、非晶質形態のビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンである。
【０１０６】
更なる実施形態では、式（I）の化合物は、結晶質形態のビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンである。
【０１０７】
また更なる実施形態では、式（I）の化合物は、肺線維症を治療するために有用であり、従って薬剤としての使用に好適である。
【０１０８】
更なる実施形態では、肺投与は、超音波式ネブライザ又はジェット式ネブライザから選択されたネブライザ等のネブライザによって実施される。ネブライザによって投与を実施する場合、式（I）の化合物は、溶液、ナノ懸濁液等の懸濁液、又はリポソーム製剤であってよい。
【０１０９】
更なる実施形態では、肺投与は乾燥粉体吸入器によって実施される。乾燥粉体吸入器によって投与を実施する場合、式（I）の化合物は、ナノ粒子又はリポソーム製剤として存在してよい。
【０１１０】
また更なる実施形態では、肺投与は加圧定用量吸入器によって実施される。加圧定用量吸入器によって投与を実施する場合、式（I）の化合物は、溶液又はナノ懸濁液等の懸濁液中に存在してよい。
【０１１１】
更なる実施形態では、肺投与用組成物は、ＩＰＦ等の肺線維症の治療のための方法において使用するためのものである。
【０１１２】
式（I）の化合物が懸濁液若しくはナノ懸濁液又はリポソーム製剤である場合、これは、空力学的直径の質量平均が０．１〜２０μｍである、例えばＭＭＡＤが０．５〜１０μｍ、１〜５μｍである粒子から選択される好適な粒径で存在してよい。上記選択される範囲は、これらの範囲外の粒径の存在を排除するものではないが、上記選択される範囲は、本明細書で説明するような所望の効果を提供する範囲である。
【０１１３】
また更なる実施形態では、肺投与用組成物は薬学的組成物である。
【０１１４】
薬学的組成物は、賦形剤及び／又は担体といった、当業者に公知の薬学的に許容可能な添加剤を含む。
【０１１５】
更なる態様では、本発明は、肺投与用組成物を含む、肺投与のためのデバイスに関する。典型的には上記デバイスは、超音波式ネブライザ若しくはジェット式ネブライザから選択されたネブライザ等のネブライザ、又は乾燥粉体吸入器である。
【０１１６】
更なる態様では、哺乳類における特発性肺線維症等の肺線維症を治療するための方法において使用するための式（I）の化合物を提供する。上記哺乳類は典型的にはヒト被験者であり、好ましくはＩＰＦを有すると診断されたヒト被験者である。
【０１１７】
また更なる態様では、治療有効量の式（I）の化合物を哺乳類に投与することを含む、特発性肺線維症等の肺線維症の治療のための方法を提供する。
【０１１８】
本明細書で開示される化合物及び薬学的組成物を上述の治療のために使用する場合、治療有効量の少なくとも１つの化合物を、上記治療が必要な哺乳類に投与する。
【０１１９】
本明細書で使用される用語「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」及び「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾患又は障害等の状態に対抗する目的での患者の管理及び保護を意味する。この用語は、症状若しくは合併症を緩和するため、疾患、障害若しくは状態の進行を遅延させるため、症状若しくは合併症を緩和若しくは軽減するため、並びに／又は疾患、障害若しくは状態を治癒若しくは排除するため、並びにこのような状態を予防するための、活性化合物の投与といった、患者が患っている所定の状態に対するあらゆる方面の治療を含むことを意図しており、予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）は、疾患、状態又は障害に対抗する目的での患者の管理及び保護として理解されるべきものであり、また症状又は合併症の発生を予防するための活性化合物の投与を含む。治療は急性的又は慢性的な様式で実施してよい。治療対象の患者は好ましくは哺乳類であり、特にヒトであるが、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ及びブタ等の動物も含んでよい。
【０１２０】
本明細書で使用される用語、本発明の式（I）の化合物の「治療有効量（ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」は、所定の疾患及びその合併症の臨床的兆候を治癒、緩和又は部分的に阻止するために十分な量を意味する。これを達成するために十分な量を「治療有効量」と定義する。各目的のために有効な量は、疾患又は創傷の重篤度並びに被験者の体重及び一般的状態に左右されることになる。適切な用量の決定は、複数の値のマトリクスを構成し、このマトリクス内の様々な点を試験することにより、慣用の実験法を用いて達成でき、これらは全て、熟達した医師又は獣医師の通常の技術の範囲内である。
【０１２１】
また更なる態様では、本発明は、式（I）の化合物と、任意に担体又は賦形剤といった薬学的に許容可能な添加剤とを含む、薬学的組成物に関する。
【０１２２】
本明細書で使用される「薬学的に許容可能な添加剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  ａｄｄｉｔｉｖｅ）」は、以下に限定されるものではないが、薬学的組成物を作製するために本発明の化合物を処方する際に当業者が使用を考える担体、賦形剤、希釈剤、補助剤、着色料、香料、保存料等を含むことを意図している。
【０１２３】
本発明の組成物中に使用され得る補助剤、希釈剤、賦形剤及び／又は担体は、式（I）の化合物及び薬学的組成物のその他の成分に対して適合性を有するという意味で薬学的に許容可能なものでなければならず、また受容者にとって有害でないものでなければならない。本組成物は、アレルギ反応等の不利な反応を引き起こし得るいずれの材料を含有しないものとするのが好ましい。本発明の組成物中に使用され得る補助剤、希釈剤、賦形剤及び／又は担体は、当業者に公知のものである。
【０１２４】
上述のように、本明細書で開示される組成物及び特に薬学的組成物は、本明細書で開示される化合物に加えて、少なくとも１つの薬学的に許容可能な補助剤、希釈剤、賦形剤及び／又は担体を更に含んでよい。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、上記少なくとも１つの薬学的に許容可能な補助剤、希釈剤、賦形剤及び／又は担体を１〜９９重量％、並びに本明細書で開示される化合物を１〜９９重量％含む。活性成分と薬学的に許容可能な補助剤、希釈剤、賦形剤及び／又は担体との合計量は、組成物、特に薬学的組成物の１００重量％超を構成し得ない。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、上述の目的のために、本明細書で開示される組成物を１つだけ使用する。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、上述の目的のために、本明細書で開示される組成物を２つ以上組み合わせて使用する。
【０１２７】
本明細書に記載の化合物を含む組成物、特に薬学的組成物は、経口、静脈内、局所、腹腔内、鼻腔、口腔、舌下若しくは皮下投与に適合させてよく、又は例えばエアロゾル若しくは空気懸濁微粉体の形態で気道を介しての投与に適合させてよい。従ってこの薬学的組成物は、例えば錠剤、カプセル、粉体、ナノ粒子、結晶、非晶質物質、溶液、経皮パッチ又は座薬の形態であってよい。
【０１２８】
よって、また更なる態様では、肺内投与用の組成物、特に薬学的組成物を提供する。典型的には、このような組成物はネブライザ又は吸入器によって送達され、好ましくはネブライザによって送達される。
【０１２９】
Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍは１９９７年、Ｒｅｓｐｉｍａｔという名称の新規技術を提供した。これはソフトミスト吸入器型の機械式ネブライザである。この機械式ネブライザは、ガス推進剤及び電力を全く必要とすることなく、手動で操作される。別の機械式ネブライザは、マルケット大学（Ｍａｒｑｕｅｔｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）のチームによって開発された人力ネブライザである。このネブライザは電気式コンプレッサによって操作できるが、患者の肺にミストを供給するための単純な機械式ポンプにも適している。電気式タイプの更なるネブライザは、特にＰＡＲＩ、Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ、Ｏｍｒｏｎ、Ｂｅｕｒｅｒ，Ａｅｒｏｇｅｎによって開発された振動メッシュ技術に基づく超音波式ネブライザ、又は特にＯｍｒｏｎ、Ｂｅｕｒｅｒによって開発された高周波超音波を生成する電子発振器に基づく超音波式ネブライザである。更なる電気式ネブライザは、アトマイザとしても公知であるジェット式ネブライザである。更なる実施形態では、ネブライザは、ソフトミスト吸入器又は人力ネブライザ等の機械式ネブライザから選択される。別の実施形態では、ネブライザは、超音波振動メッシュ技術に基づくネブライザ、ジェット式ネブライザ又は超音波式ネブライザ等の電気式ネブライザから選択される。特に好適なネブライザは、ＰＡＲＩ製のｅＦｌｏｗ等の、振動メッシュ技術に基づくものである。肺線維症、特に特発性肺線維症を治療するにあたって、細気管支及び肺胞を含む肺組織の最も狭い部分において十分に高い局所濃度の治療を得ることが重要である。更に、治療が、肺組織内での作用部位において十分な滞留時間を得ることが重要である。しかしながら、肺線維症、特にＩＰＦの患者にとって咳は主要な症状であり、この症状は、刺激物を肺に導入すると悪化する可能性が高い。従って乾燥粉体吸入器等を用いた乾燥粉体による治療はこれらの患者には好適でない。しかしながら、電子ネブライザ等のネブライザを用いた化合物の送達は、肺にいずれの刺激を与えることなく、肺の最小区画に化合物を導入できるため、特に有益である。このような妥当なネブライザシステムは、米国公開特許出願第２００４００８９２９５号、米国公開特許出願第２００５００５６２７４号、米国公開特許出願第２００６００５４１６６号、米国公開特許出願第２００６００９７０６８号、米国公開特許出願第２００６０１０２１７２号、米国公開特許出願第２００８００６０６４０号、米国公開特許出願第２０１１０１５５７６８号、米国公開特許出願第２０１２０１６７８７７号に記載されており、これらは全て参照により本明細書に援用される。その他の好適なネブライザは、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ製のＴｙｖａｓｏ吸入システム、Ｇｉｌｅａｄ製のＡｌｌｅｒａネブライザ、Ｐｈａｒｍａｘｉｓ製のＢｒｏｎｃｈｉｔｏｌ吸入器、ＧＳＫ製のＤｉｓｋｈａｌｅｒ、Ａｃｔｅｌｉｏｎ及びＰｒｏｆｉｌｅ  Ｐｈａｍａ製のジェット及び超音波式ネブライザである。
【０１３０】
肺送達デバイスには以下の特徴が必要である：特定用量を正確に繰り返し供給できる；例えば用量供給を繰り返すことによって、又は患者に供給される用量を調整することによって、２つ以上の異なる用量レベルを供給できる；デバイスは、肺の細気管支空間又は好ましくは細気管支及び肺胞空間に、肺組織全体に亘って好ましくは均一に薬剤を送達することを保証する；従ってデバイスは、このような送達を保証できる十分に小さなサイズのエアロゾル又は乾燥粉体を生成する一方で、即座に吐出されて肺組織内に残らない程小さい粒子を送達しない。
【０１３１】
吸入ネブライザは、容易に吸入可能なサイズの粒子を含むエアロゾルを形成することにより、治療有効量の医薬を送達する。エアロゾルは例えば、吸入治療の範囲内の患者によって使用でき、これによって治療に有効な医薬又は薬剤は、吸入後すぐに患者の気管に到達する。
【０１３２】
空力学的直径の質量平均（ＭＭＡＤ）が０．１〜２０μｍ、例えば０．５〜１０μｍ、例えば１〜５μｍ（マイクロメートル）である粒子は、気管支及び肺胞の末端領域に堆積する見込みが高まることは、当業者にとって公知である。この粒径範囲は、材料の一部が気道の上部にも同様に堆積する（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｓｍｉｔｈ及びＨｉｃｋｅｙ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、２０１１年、第１３章参照）ため、肺薬剤送達における多くの要求にとって理想的である。
【０１３３】
当業者は、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｓｍｉｔｈ及びＨｉｃｋｅｙ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、２０１１年の特に第１３、１４、１５章に従って、肺薬剤送達のための式（I）の化合物等の化合物を処方する方法を得ることができる。典型的には、リポソーム、ナノ粒子及びミクロ粒子が懸濁液及び乾燥粉体に好適である。
【０１３４】
様々な吸入ネブライザが公知である。欧州特許第０１７０７１５Ａ１号は、エアロゾルを形成するために圧縮ガス流を使用する。ノズルは、吸入ネブライザのアトマイザチャンバ内のエアロゾル生成器として配設され、圧縮ガスチャネルに隣接して配設される２つの吸引ダクトを有する。圧縮空気が圧縮ガスチャネルを通して流れる際、噴霧される液体は、液体貯蔵コンテナからの吸引ダクトを通って引き込まれる。
【０１３５】
欧州特許第０４３２９９２Ａ号は、液体貯蔵コンテナ、穴付き膜及び振動機を有するエアロゾル生成器を備えるネブライザを開示している。振動機を動作させることによって膜を振動させることができ、これにより膜に設けられた液体通過穴からエアロゾルが分配される。
【０１３６】
米国特許第５９１８５９３号は、ある量の液体と圧電素子との相互作用によってエアロゾルを生成する超音波式ネブライザに関する。振動エネルギが圧電素子から液体に伝達されると、バルク液体の表面から様々なサイズの液滴が排出される。患者が吸入するためのエアロゾルを生成するために、上記表面から排出された液滴から過大サイズの液滴を除去しなければならないため、このようにして生成された液滴はアトマイザチャンバ内でフィルタリングされる。このネブライザは、吸入中だけでなく患者が息を吐く間にもエアロゾル生成器がエアロゾルを生成する、連続的に動作する吸入ネブライザの代表例である。
【０１３７】
定量吸入器等の乾燥粉体吸入器（ｄｒｙ  ｐｏｗｄｅｒ  ｉｎｈａｌｅｒ：ＤＰＩ）は、患者の肺に薬剤を分配するために公知である。いくつかの従来の吸入器は、加圧エアロゾル分配コンテナを備えており、エアロゾルは、粉末状薬剤が懸濁されたガス推進剤を含む。吸入器を作動させると、計量弁を通して患者の肺へとエアロゾルの含有物が排出される。
【０１３８】
現行の設計は、事前計量ＤＰＩ又はデバイス計量ＤＰＩを含み、これらは共に、患者の吸気のみによって、又は何らかの種類のパワーアシストを用いて駆動できる。事前計量ＤＰＩは、事前に計量された用量又は用量の一部を、後に製造中又は使用前に患者によってデバイスに挿入される何らかの種類の単位（例えばブリスタ、カプセル又はその他のキャビティ内の単一又は複数の形態）で含有する。従って、用量を事前計量単位から直接吸入できるか、又は患者が吸入するまでにチャンバから用量を移送できる。デバイス計量ＤＰＩは、患者によって作動される間にデバイス自体が計量する複数の用量に十分な処方を含有する内部リザーバを有する。多様なＤＰＩの設計は、その多くが各設計に独自の特徴を有し、これは、ある用途をサポートする情報を開発することに課題を示すことになる。ＤＰＩの設計にかかわらず、最も重要な属性は、用量及び粒径分布の再現性である。使用有効期間全体に亘って上記品質を維持し、患者に使用されている条件下においてデバイスの寿命全体を通してデバイスの機能を保証することは恐らく、最も解決困難な課題を示すことになる。
【０１３９】
加圧定量吸入器（ｐｒｅｓｓｕｒｉｚｅｄ  Ｍｅｔｅｒｅｄ−Ｄｏｓｅ  Ｉｎｈａｌｅｒ：ｐＭＤＩ）もまた、式（I）の本発明の化合物のための好適な送達デバイスとなり得、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｓｍｉｔｈ及びＨｉｃｋｅｙ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、２０１１年の第８章に記載されている。
【０１４０】
従って、いくつかのタイプの非エアロゾル性の呼吸作動式乾燥粉体吸入器が提供されている。例えばＢａｃｏｎによる米国特許第５５０３１４４号は、呼吸作動式乾燥粉体吸入器を示している。このデバイスは、乾燥粉末化された薬剤を含有する乾燥粉体リザーバと、粉末化された薬剤を別個の分量でリザーバから取り出すための計量チャンバと、取り出した粉末化された薬剤を、マウスピースを通して患者の吸入に含ませるための空気流入口とを含む。
【０１４１】
米国特許第５４５８１３５号は、後続の患者の吸入のためにエアロゾル化された１用量の薬剤を生成するための方法及び装置を開示している。この方法はまず、通常は空気である所定の体積のガスに、事前に選択された量の薬剤を分散させることを含む。この分散は液体又は乾燥粉体から形成してよい。この方法は、最初は空気で充填され、マウスピースを通して周囲へと開いているチャンバ内に、エアロゾル化された用量の略全てが流入することによって実現される。エアロゾル化された薬剤がチャンバ内に移送された後、患者は全用量を１回の呼吸で吸入することになる。
【０１４２】
米国特許第６０６５４７２号は、薬理学的活性化合物を含有するハウジングと、ハウジング内へと延在する流出口を有する導管（この流出口を通してユーザは吸気でき、この導管を通る空気流を生成できる）と、１用量の化合物を導管に送達するための用量分割ユニットと、上記空気流に含まれた粉体の凝集物の崩壊を支援する、上記導管内に配設されたバッフルとを備える、粉体吸入デバイスを開示している。
【０１４３】
エアロゾル吸入器を使用するか非エアロゾル吸入器を使用するかに関わらず最も重要なのは、分配された乾燥粉体薬剤の粒子が、吸入中に患者の肺の気管支領域中に十分な量の薬剤が確実に入り込めるよう、十分に小さいことである。しかしながら、乾燥粉体薬剤は極めて小さい粒子からなり、場合によってはラクトース等の担体を含む組成物として提供されるため、分配前に、定義されていない薬剤の凝集物又は集合体がランダムに形成される。従って、薬剤の吸入前に薬剤の又は薬剤及び担体の凝集物を崩壊させるための手段を呼吸作動式乾燥粉体吸入器に設けることが好ましいことが分かっている。
【０１４４】
本組成物及び特に薬学的組成物は任意に、２つ以上の本発明の化合物を含んでよい。この組成物はまた、関連する障害の治療のための当該技術分野の範囲内のその他の薬剤と共に使用してもよい。
【０１４５】
本明細書に記載した化合物の典型的な投薬量は広い範囲で変化し、投与経路、治療が必要な個人の要求、個人の体重、年齢及び一般的状態といった多くの因子に左右される。
【０１４６】
式（I）の化合物は、以下の実験に関する節で説明されるように調製できる。
【０１４７】
従って、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の溶媒中で、任意にＣｕ（I）等の触媒の存在下で、ビス−（３−デオキシ−３−アジド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンを、３−フルオロフェニルアセチレン、及びトリエチルアミン等のアミンと反応させて、式（I）の化合物を得るステップを含む、式（I）の化合物を調製するプロセスを提供する。特定の実施形態では、実験に関する節のスキーム１で説明されるようなステップを含む、式（I）の化合物を調製するプロセスを提供する。更に本発明は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の溶媒中で、任意にＣｕ（I）等の触媒の存在下で、ビス−（３−デオキシ−３−アジド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンを、３−フルオロフェニルアセチレン、及びトリエチルアミン等のアミンと反応させて、式（I）の化合物を得るステップによって得られる式（I）の化合物、例えば実験に関する節のスキーム１で説明されるようなステップによって得られる式（I）の化合物に関する。
【０１４８】
典型的には、肺線維症は特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。
【０１４９】
更なる実施形態では、ヒト被験者は、ガレクチン−３のレベルに従って、軽度、中度、重度の形態の肺線維症と診断される。
【０１５０】
更なる態様では、本発明は、治療有効量のガレクチン−３阻害剤をヒト被験者に投与することを含む、肺線維症の指標又は症状の悪化の指標となるガレクチン−３レベルを有するヒト被験者における、特発性肺線維症等の肺線維症の治療のための方法に関する。特定の実施形態では、ガレクチン−３阻害剤は式（I）の化合物から選択される。
【０１５１】
ある実施形態では、ガレクチン−３の指標レベルは、最低約２２ｎｇ／ｍｌ、例えば最低約２５ｎｇ／ｍｌ、最低約３０ｎｇ／ｍｌ、最低約４０ｎｇ／ｍｌ、最低約５０ｎｇ／ｍｌ、最低約６０ｎｇ／ｍｌ、最低約７０ｎｇ／ｍｌである。
【０１５２】
ガレクチン−３レベルは、免疫アッセイを実施することによって定量化できる。ガレクチン−３免疫アッセイは、試験対象の被験者から得た試料を、ガレクチン−３が存在すれば免疫特異的結合が起こり得る条件下で、適切な抗体に接触させ、抗体によるいずれの免疫特異的結合の量を検知又は測定することを含む。ウェスタンブロット、放射免疫アッセイ、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線アッセイ、蛍光免疫アッセイ、タンパク質Ａ免疫アッセイ等の技術を用いた競合及び非競合免疫アッセイを含むがこれらに限定されない、いずれの好適な免疫アッセイを使用できる。
【０１５３】
最も一般的な酵素免疫アッセイは、「酵素結合免疫吸着アッセイ（Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ：ＥＬＩＳＡ）」である。ＥＬＩＳＡは、抗体の標識（例えば酵素結合）形態を用いて抗原の濃度を検知及び測定するための技術である。様々な形態のＥＬＩＳＡが存在し、これらは当業者には公知である。標準的なＥＬＩＳＡ技術は、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ」第２版、Ｒｏｓｅ及びＢｉｇａｚｚｉ編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９８０年；Ｃａｍｐｂｅｌｌら「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｉｎｃ．、１９６４年；並びにＯｅｌｌｅｒｉｃｈ，Ｍ．（１９８４年）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：８９５−９０４に記載されている。ガレクチン−３を検知するための好ましい酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キットは市販されている（ＢＧ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、マサチューセッツ州ウォルサム）。
【０１５４】
免疫学的アッセイの設計、理論、プロトコルの詳細な報告は、Ｂｕｔｔ，Ｗ．Ｒ．、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ編、ニューヨーク（１９８４年）及びＨａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ編（１９８８）を含む、当該技術の多数の文献に見ることができる。
【０１５５】
プロセスのさらなる実施形態を、本明細書の実験に関する節において説明し、個々のプロセスそれぞれ及び各開始材料は実施形態を構成し、これら実施形態は、実施形態の一部を形成し得る。
【０１５６】
上述の実施形態は、ある実施形態が本発明の１つ又は複数の特定の態様に関するものであることが明記されていない場合は、本明細書で説明する複数の態様（「治療のための方法」、「薬学的組成物」、「薬剤として使用するための化合物」又は「ある方法において使用するための化合物」）のいずれか１つ、及び本明細書で説明する複数の実施形態のいずれか１つを指すものとして理解されたい。
【０１５７】
公刊物、特許出願及び特許を含む、本明細書で引用される全ての引用文献は、各引用文献が参照によって本明細書に個別にかつ具体的に援用されており、なおかつ本明細書にその全体が記載されている場合と同程度に、参照によって本明細書に援用されるものとする。
【０１５８】
本明細書において、全ての見出し及び副題は単に利便性のために使用されており、本発明をいかなる様式で限定するものとして解釈してはならない。
【０１５９】
上述の要素のいずれの可能な変形例におけるいずれの組み合わせは、本明細書にそうでないことが示されていない限り、又は文脈からそうでないことが明らかでない限り、本明細書に包含せれる。
【０１６０】
本発明を説明する文脈で使用される用語「ある（ａ、ａｎ）」、「その、上記（ｔｈｅ）」及び同等の指示物は、本明細書にそうでないことが示されていない限り、又は文脈からそうでないことが明らかでない限り、単数と複数の両方を包含するものと解釈されたい。
【０１６１】
本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書にそうでないことが示されていない限り、その範囲内にある別個の値それぞれに独立して言及するのを省略した方法として用いられており、上記別個の値それぞれは、独立して本命細書中に列挙されているかのように、本明細書に援用される。本明細書で提供される全ての正確な値は、本明細書にそうでないことが示されていない限り、対応する近似値を代表するものである（例えば、特定の因子又は測定に対して与えられた全ての正確な例示的値は、必要に応じて、「約（ａｂｏｕｔ）」で修飾された対応する近似値も提供するものと見做すことができる）。
【０１６２】
本明細書で説明する全ての方法は、本明細書にそうでないことが示されていない限り、又は文脈からそうでないことが明らかでない限り、いずれの好適な順序で実施できる。
【０１６３】
あらゆる全ての例の使用、又は本明細書で使用される例示を意味する語句（例えば「…等（ｓｕｃｈ  ａｓ）」は、単に本発明をより明瞭にすることを意図したものであり、本明細書にそうでないことが示されていない限り、本発明の範囲を限定するものではない。明細書中のいずれの語句も、それが明記されている場合を除いて、本発明の実施にあたっていずれの要素が必須であることを示すものとして解釈されたい。
【０１６４】
本明細書における特許文献の引用及び援用は、単に利便性のために行われており、これら特許文献の有効性、特許性及び／又は執行力に関するいずれの意見も反映していない。
【０１６５】
１つ又は複数の要素に関して「備える、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」等の用語を使用する、本発明のいずれの態様又は実施形態に関する本明細書における説明は、本明細書にそうでないことが示されていない限り、又は文脈からそうでないことが明らかでない限り、上記１つ又は複数の要素「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｏｆ）」、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」又は「実質的に備える（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」発明の同様の態様又は実施形態のための土台を提供することを意図したものである（例えば、特定の要素を含むものとして本明細書において説明されている組成物は、本明細書にそうでないことが示されていない限り、又は文脈からそうでないことが明らかでない限り、上記要素からなる組成物も説明しているものとして理解されるものとする）。
【０１６６】
本発明は、本明細書に提示された態様又は請求項に列挙された主題の全ての修正例及び均等物を、準拠法が許容する限り含む。
【０１６７】
以下の実施例によって本発明を更に実証するが、これら実施例は保護範囲を制限するものとして解釈されるべきものではない。ここまでの説明で開示された特徴及び以下の実施例で開示される特徴は、別個に及びいずれの組み合わせで、本発明を多様な形態で実現するための素材となり得る。
【０１６８】
実験
ビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンの合成
一般的方法
融点はコフラー装置（Ｒｅｉｃｈｅｒｔ）に記録され、これは補正されていない。プロトン核磁気共鳴（１Ｈ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ４００（４００ＭＨｚ）又はＢｒｕｋｅｒ  ＡＲＸ３００（３００ＭＨｚ）分光計に記録された。多重度は、シングレット（ｓ）、ダブレット（ｄ）、ダブレットのダブレット（ｄｄ）、トリプレット（ｔ）、見かけのトリプレット（ａｔ）又はダブレットの見かけのトリプレット（ａｔｄ）として示される。炭素核磁気共鳴（１３Ｃ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ４００（１００．６ＭＨｚ）分光計に記録された。スペクトルは、ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ及びＤＥＰＴの実験を使用して割り当てられた。全ての化学シフトは、ｄを尺度として百万分率（ｐｐｍ）で示される。低解像度及び高解像度（ＦＡＢ−ＨＲＭＳ）高速原子衝撃質量スペクトルは、ＪＥＯＬ  ＳＸ−１２０機器を使用して記録し、低解像度及び高解像度（ＥＳ−ＨＲＭＳ）は、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑ−ＴＯＦ機器に記録した。旋光度は、１ｄｍの経路長を有するＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ３４１旋光計で測定し、濃度は１００ｍＬあたりのｇで与えられる。薄層クロマトグラフィ（ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：ＴＬＣ）は、６０Ｆ２５４シリカで事前にコーティングしたＭｅｒｃｋＫｉｅｓｅｌｇｅｌシート上で実施した。プレートは、１０％の硫酸を用いて現像された。フラッシュカラムクロマトグラフィは、シリカ（Ｍａｔｒｅｘ、６０オングストローム、３５−７０μｍ、ＧｒａｃｅＡｍｉｃｏｎ）上で実施した。水素化カルシウムからアセトニトリルを蒸留し、４オングストローム分子篩上で貯蔵した。４オングストローム分子篩からＤＭＦを蒸留し、４オングストローム分子篩上で貯蔵した。
【０１６９】
ビス（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンは、以下の反応スキーム１に従って調製された。
【０１７０】
【化８】
2015535233.tif 000010
【０１７１】
化合物（１）（上記の反応スキームを参照）は、Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（８＆９  Ｏｌｄ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｐａｒｋ、Ｃｏｍｐｔｏｎ、Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ、ＲＧ２０  ６ＮＥ、ＵＫ）又は３つの略定量的なステップでＤ−ガラクトースから合成できる（例えばＬｉ，Ｚ．及びＧｉｌｄｅｒｓｌｅｅｖｅ，Ｊ．Ｃ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６，１２８，１１６１２−１１６１９を参照）。
【０１７２】
フェニル２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−３−Ｏ−トリフルオロメタンスルホニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（２）
化合物１（１０．５ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン（４．７３ｍＬ、５８．４ｍｍｏｌ）及び乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（１３２ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を撹拌しながら−２０℃まで冷却した（氷及びＮａＣｌ浴、３：１）。Ｎ2雰囲気下でＴｆ2Ｏ（５．６８ｍＬ、３３．６ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。反応混合物をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１、トルエン：アセトン＝１０：１）で監視した。反応終了後、ＡｃＣｌ（２．２９ｍＬ、３２．１ｍｍｏｌ）を添加して撹拌し続け、温度を室温まで上昇させた。この混合物を再びＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１、トルエン：アセトン＝１０：１）で監視した。反応終了後、ＣＨ2Ｃｌ2を用いてクエンチし、５％ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3（飽和、これ以降「ｓａｔ」で表す）及びＮａＣｌ（ｓａｔ）で洗浄した。ＭｇＳＯ4上で有機層を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。
【０１７３】
フェニル２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−グロピラノシド（３）
ＤＭＦ（１１０ｍＬ）中の化合物２（１５．６ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）の溶液にテトラブチルアンモニウム亜硝酸塩（２５．３ｇ、８７．７ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ2雰囲気下で５０℃で撹拌し続けた。（開始した反応は紫色であり、深紅色に変化した。）反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１、トルエン：アセトン＝１０：１）で監視し、ＣＨ2Ｃｌ2を用いてクエンチした。混合物を５％ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3（ｓａｔ）及びＮａＣｌ（ｓａｔ）で洗浄した。ＭｇＳＯ4上で有機層を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、その後フラッシュクロマトグラフィ（溶離剤ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１、ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：２）によって精製し、ＥｔＯＡｃ及びヘプタン（１：３）の混合物から再結晶化した。ＣＤＣｌ3における1Ｈ  ＮＭＲ：δ７．６０−７．５７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．４３−７．４０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．３７−７．３４（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），７．２９−７．２５（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），５．５０（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ），５．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２９Ｈｚ，Ｈ−ｌ），５．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２７Ｈｚ，２．８５Ｈｚ，Ｈ−２），４．３６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．４９Ｈｚ，１．４Ｈｚ，Ｈ−６），４．１８（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｈ−３），４．０８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５９Ｈｚ，１．０４Ｈｚ，Ｈ−６），４．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５３Ｈｚ，１．７５Ｈｚ，Ｈ−４），３．８８（ｓ，２Ｈ，Ｈ−５＋ＯＨ），２．１２（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）。
【０１７４】
フェニル２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−３−Ｏ−トリフルオロメタンスルホニル−β−Ｄ−グロピラノシド（４）
化合物３（１．００ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）を、乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（１２．５ｍＬ）及び乾燥ピリジン（０．４０ｍＬ、４．９６ｍｍｏｌ）に溶解させた。反応混合物を撹拌しながら−２０℃まで冷却した（氷及びＮａＣｌ浴、３：１）。Ｎ2雰囲気下でＴｆ2Ｏ（０．４８ｍＬ、２．８５ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。反応混合物をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１、トルエン：アセトン＝１０：１）で監視し、反応終了後、ＣＨ2Ｃｌ2を用いてクエンチし、５％ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3（ｓａｔ）及びＮａＣｌ（ｓａｔ）で洗浄した。ＭｇＳＯ4上で有機層を乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥するまで濃縮した。
【０１７５】
フェニル２−Ｏ−アセチル−３−アジド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（５）
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物４（１．３２５６ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の溶液にテトラブチルアンモニウムアジド（２．１２ｇ、７．４４ｍｍｏｌ）を注意深く添加し、Ｎ2雰囲気下で５０℃で撹拌し続けた。反応をＴＬＣ（Ｅ：Ｈ＝１：１）で監視し、減圧下で濃縮し、その後フラッシュクロマトグラフィ（溶離剤ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝２：１、ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１）によって精製した。ＣＤＣｌ3における1Ｈ  ＮＭＲ：δ７．６１−７．５８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．４４−７．４１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．３９−７．３６（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），７．３０−７．２４（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），５．５９（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ），５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．９５Ｈｚ，Ｈ−２），４．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６３Ｈｚ，Ｈ−ｌ），４．４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，１．６０Ｈｚ，Ｈ−６），４．３５−４．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３３Ｈｚ，０．８８Ｈｚ，Ｈ−４），４．１１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．４８Ｈｚ，１．６７Ｈｚ，Ｈ−６），３．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１５Ｈｚ，Ｈ−５），３．４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２１Ｈｚ，３．２９Ｈｚ，Ｈ−３），２．１７（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）。
【０１７６】
フェニル２−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（６）
化合物５（４７０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を８０％酢酸（７５ｍＬ）中に溶解させ、混合物を６０℃で加熱した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１）で監視した。反応終了後、混合物を減圧及び加熱下で濃縮した。
【０１７７】
フェニル２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（７）
乾燥ピリジン（３０ｍＬ）中の化合物６（３７３ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に無水酢酸（３０ｍＬ）を添加した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１）で監視し、反応終了後、減圧下で濃縮した。ＣＤＣｌ3における1Ｈ  ＮＭＲ：δ７．５４−７．５１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．３５−７．３０（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），５．４６（ｄｄ，ＩＨ，Ｈ−４），５．２３（ｔ，ＩＨ，Ｈ−２），４．７３（ｄ，ＩＨ，Ｈ−１），４．１５（ｄ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−６），３．９４（ｄｔ，ＩＨ，Ｈ−５），３．６８（ｄｄ，ＩＨ，Ｈ−３），２．１８（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．１５（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０６（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）。
【０１７８】
２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド（８）
化合物７（２３７．４ｍｇ、５６０μｍｏｌ）を、乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）に溶解し、ブロミン（３２μＬ、６２０μｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１）で監視した。反応終了後、反応混合物に少量のシクロヘプタンを添加してＢｒ2の残りを除去した。混合物を減圧下で濃縮し、迅速なフラッシュクロマトグラフィ（溶離剤：５００ｍＬ、ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝２：１）によって精製した。
【０１７９】
２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノース−１−イソチオウロニウムブロミド（９）
感受性ブロミド８（７０．６ｍｇ、１８０μｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（１．７ｍＬ）中に即座に溶解させ、Ｎ2下でチオウレア（１３．７ｍｇ、１８０μｍｏｌ）を用いて４時間還流した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１）で監視し、反応終了後、混合物を冷却した。
【０１８０】
ビス−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン（１０）
最終混合物（９）に、感受性ブロミド８（７７．０ｍｇ、１９６μｍｏｌ）及びＥｔ3Ｎ（６０μｌ、４３０μｍｏｌ）を添加した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１）で監視した。反応終了後、反応混合物を減圧下で加熱せずに濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（溶離剤：ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１；１）によって精製した。ＣＤＣｌ3における1Ｈ  ＮＭＲ：δ５．５０（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ−４），５．２３（ｔ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−２’），４．８３（ｄ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−１’），４．１５（ｄｄ，４Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−６，Ｈ−６’，Ｈ−６’），３．８９（ｄｔ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−５’），３．７０（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−３’），２．１９（ｓ，６Ｈ，２ＯＡｃ），２．１５（ｓ，６Ｈ，２ＯＡｃ），２．１８（ｓ，６Ｈ，２ＯＡｃ）。
【０１８１】
ビス−（３−アジド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン（１１）
乾燥ＭｅＯｈ（２．６ｍＬ）及び乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（１．６ｍＬ）中に化合物１０（１６０ｍｇ、０．０００２４ｍｏｌ）を溶解させ、ＮａＯＭｅ（１Ｍ、２４μＬ、２４μｍｏｌ）を添加した。反応物をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝１：１、Ｄ：Ｍ＝５：１）で監視した。反応終了後、混合物をＤｕｏｌｉｔｅ  Ｃ４３６でｐＨ７まで中和し、濾過し、ＭｅＯＨを用いて洗浄した。濾過した溶液を減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（溶離剤：ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ＝５：１）によって精製し、純粋な１１（７４．１ｍｇ、７５％）を得た。ＣＤＣｌ3における1Ｈ  ＮＭＲ：δ４．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−ｌ，Ｈ−ｌ’），３．９５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−４’），３．８４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−２，Ｈ−２’），３．７４（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．４７Ｈｚ，７．２３Ｈｚ，Ｈ−６，Ｈ−６’），３．６４（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．４８Ｈｚ，４．７２Ｈｚ，Ｈ−６，Ｈ−６’），３．６０−３．５５（ｄｄｄ，２Ｈ，７．１５Ｈｚ，４．６７Ｈｚ，０．９３Ｈｚ，Ｈ−５，Ｈ−５’），３．３６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ，３．０５Ｈｚ，Ｈ−３，Ｈ−３’）。
【０１８２】
ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン（ＴＤ１３９と呼ばれる）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１００ｍＬ／ｍｍｏｌスルファン）中における、Ｃｕ（I）（０．２当量）、トリエチルアミン（２当量）を用いた、ビス−（３−アジド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン（１１）と３−フルオロフェニルアセチレン（３当量）との間のＣｕ（I）触媒付加環化によって、ＴＤ１３９を周囲温度で合成した。反応を反応終了までＴＬＣを用いて監視し、濃縮し、まずフラッシュクロマトグラフィ（溶離剤：ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ＝８：１）によって精製し、続いて分取ＨＰＬＣによって最終精製を行い、ＴＤ１３９を白色の非晶質固体として収率７６％で得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，４００ＭＨｚ）ｄ８．５９（ｓ，２Ｈ，トリアゾール−Ｈ），７．６３（ｂｒ  ｄ，２Ｈ，７．６Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．５７（ｂｒ  ｄ，２Ｈ，８．４Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．４１（ｄｔ，２Ｈ，６，０及び８．０Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．０５（ｂｒ  ｄｔ，２Ｈ，２．４及び６．４Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），４．９３（ｄｄ，２Ｈ，２，４及び１０．４Ｈｚ，Ｈ３），４．９２（ｄ，２Ｈ，１０．４Ｈｚ，Ｈ１），４．８４（２Ｈ，１０．４Ｈｚ，Ｈ２），４．１８（ｄ，２Ｈ，２．４Ｈｚ，Ｈ４），３．９２（ｄｄ，２Ｈ，４．２及び７．６Ｈｚ，Ｈ５），３．８４（ｄｄ，２Ｈ，７．６及び１１．４Ｈｚ，Ｈ６），３．７３（ｄｄ，２Ｈ，４．２及び１１．４Ｈｚ，Ｈ６）；Ｃ28Ｈ30Ｆ2Ｎ6ＮａＯ8Ｓ（Ｍ＋Ｎａ+）に関して算出したＦＡＢ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ＝６７１．１７１２；実測値６７１．１７０５。
【０１８３】
ブレオマイシン誘発性肺線維症のモデル
メスのＣ５７／Ｂ１６マウス（１０〜１４週齢）をハロタンで麻酔し、ブレオマイシン又は生理食塩水を気管内投与し（５０μｌの生理食塩水中に３３μｇ）、２６日目に肺を採取した。１８日目、２０日目、２２日目、２４日目に、ＴＤ１３９をブレオマイシン誘発性肺損傷のマウスの肺に注入した。コラーゲン染色した肺切片の組織学的スコアと、Ｓｉｒｃｏｌアッセイによるコラーゲン総含有量とによって、線維症を評価した。
【０１８４】
マウスをブレオマイシン（ｂｌｅｏ）又は生理食塩水（対照）で処置し、ブレオマイシンで処置したマウスを２００ｍｇ／ｋｇのピルフェニドンで１８〜２４日目に１日２回処置した。１８日目、２０日目、２２日目、２４日目にＴＤ１３９を気管内投与した。２６日目に肺を採取した。
【０１８５】
図１は：（Ａ）Ｓｉｒｃｏｌアッセイによって測定された肺の総コラーゲン；（Ｂ）線維症スコア；（Ｃ）炎症スコアを示す。結果は、１グループあたりマウス数ｎ＝８（ｂｌｅｏ数ｎ＝７）の平均及びＳＥＭ（Ａ）又は箱ひげ（中央値、四分位範囲、最小値から最大値、Ｂ及びＣ）を表す。***Ｐ＜０．００５、**Ｐ＜０．０１、*Ｐ＜０．０５。図１Ｅでは、ブレオマイシン処置マウスの肺の切片を抗活性βカテニンで染色してスコアリングすることによって、インビボでのβ−カテニン活性化を評価した。
【０１８６】
肺胞上皮細胞への影響
ＷＴマウス由来の初代肺胞上皮細胞を播種し、１０μＭ  ＴＤ１３９の存在下又は非存在下でＴＧＦ−β１を用いて処置した。図１Ｄでは、細胞を溶解し、活性β−カテニン、総β−カテニン及びβ−アクチンについてウェスタンブロットによって分析した。
【０１８７】
結論として、ＴＤ１３９はガレクチン−３阻害剤であり、インビトロでのＴＦＧ−β誘発性β−カテニン活性化及びインビボでのブレオマイシン誘発性肺線維症をブロックした。これは哺乳類、特にヒトにおける線維症の治療のための新規の治療戦略を提示するものと考えられる。
【０１８８】
薬剤処置
表１に記載した複数の群にマウスを分けた。
【０１８９】
免疫組織化学
マウス組織のパラフィン包埋切片を、マッソントリクローム染色並びにヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）を用いて、製造者の指示に従って染色した。切片を免疫組織化学のために処置し、次の一次抗体：マウス抗活性β−カテニン（ＡＢＣ）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用し、切片を可視化して定量化した。
【０１９０】
【表１】
2015535233.tif 000011
【０１９１】
肺線維症及び炎症の決定
肺炎症及び線維症の組織学的スコアリングを、マッソントリクローム染色した切片について実施した。炎症（細気管支周囲、血管周囲及び肺胞壁厚さ）を、＞５のランダムなフィールドにおいて、倍率Ｘ６３０で以下のシステムを用いてスコアリングした（細気管支周囲及び血管周囲：１＝細胞なし、２＝＜２０細胞、３＝２０〜１００細胞、４＝＞１００細胞；肺胞壁厚さ：１＝細胞なし、２＝２〜３細胞分の厚さ、３＝４〜５細胞分の厚さ、４＝＞５細胞分の厚さ）。合成炎症スコアは、これらのスコアの合計であった。線維症スコアは、コラーゲンに関して陽染性の切片領域として評価した（１＝なし、２＝＜１０％、３＝＜５０％、４＝＞５０％）。フィールドの大部分が肺胞からなるフィールドのみをスコアリングした。
【０１９２】
Ｓｉｒｃｏｌアッセイによる肺コラーゲンの決定
左肺葉のコラーゲン含有量をＳｉｒｃｏｌアッセイによって、製造者の指示に従って決定した。左肺葉を０．５Ｍ酢酸中の３ｍｇ／ｍｌペプシン５ｍｌ中で細分化し、４℃で２４時間振盪しながらインキュベートした。清澄な肺抽出物（０．２ｍｌ）を室温において０．８ｍｌのＳｉｒｃｏｌ試薬で１時間インキュベートし、沈殿したコラーゲンを４℃において１００００ｇで５分間遠心分離した。ペレットを１ｍｌの１Ｍ  ＮａＯＨ中に可溶化し、コラーゲンの基準に従って吸光度を５７０ｎｍにおいて測定した。
【０１９３】
一次II型肺胞上皮細胞の単離
処置したマウス及び対照マウスのII型肺胞上皮細胞（ＡＥＣ）を、標準的な方法に従って抽出した。簡潔に記載すると、５０Ｕ／ｍｌのディスパーゼ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）１ｍｌを還流された肺に気管内投与し、続いて１％低融点アガロース０．５ｍｌを注入した。気道上部内のアガロースを２分間氷上に載置し、肺を５０Ｕ／ｍｌのディスパーゼ４ｍｌ中に室温で４５分間配置した。肺葉から気道上部を除去したものを、５０μｇ／ｍｌのＤＮＡｓｅ  I（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＫ）を含有するＤＭＥＭ中に分散させた。細胞懸濁液を１００μｍ細胞ストレーナに通し、細胞をＤＭＥＭ中で洗浄した後、１０％のＦＣＳを含有するＤＭＥＭ中に再懸濁した。細胞懸濁液を組織培養プラスチック上に１時間播種して、いずれの汚染された線維芽細胞及びマクロファージを付着させた。付着のない上皮細胞を計数し、５μｇ／ｍｌのコラーゲン（ＡＭＳ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及び１０μｇ／ｍｌのフィブロネクチン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で事前にコーティングした組織培養プラスチック又はカバースリップ上で２日間培養した。細胞をＰＢＳ中で３回洗浄した後、処置した。上皮細胞は、５０Ｕ／ｍｌのペニシリン、５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン及び５μｇ／ｍｌのＬ−グルタミンを含有するＤＭＥＭ中でインキュベートするか又は形質転換して、マウス媒質を完成させた（０．２５％のＢＳＡ、１０ｎＭのヒドロコルチゾン、５μｇ／ｍｌのインスリン−トランスフェリン−亜セレン酸ナトリウム（ＩＴＳ）を含有し、０．１ｍｇ／ｍｌのコハク酸ナトリウム、７５μｇ／ｍｌのコハク酸および１．８μｇ／ｍｌの酒石酸水素コリンを追加されたＤＭＥＭ／Ｆ−１２）。
【０１９４】
ウェスタンブロッティング
ｐＨ７．４の２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．３ＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ2、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、０．５％のｔｒｉｔｏｎＸ−１００、０．５ｍＭのジチオスレイトール、１ｍＭのオルトバナジン酸ナトリウム及びプロテアーゼ阻害剤（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ、サセックス、ＵＫ；製造者の指示に従って調製）中に細胞を溶解させた。Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡタンパク質アッセイ試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてライセートをタンパク質に対して平衡させ、１２％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに溶解させた。以下の一次抗体を使用してウェスタンブロット分析を実施した：ウサギ抗β−カテニン（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ウサギポリクローナル抗β−アクチン抗体（Ｓｉｇｍａ、ＵＫ）、マウス抗活性β−カテニン（ＡＢＣ）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）。
【実施例】
【０１９５】
実施例１  ヒト肺組織診におけるガレクチン−３レベルの測定
ＩＰＦの最も一般的な原因である通常型間質性肺炎（ｕｓｕａｌ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔａｌ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ：ＵＩＰ）の患者から組織診材料を採取した。組織診材料を中性緩衝ホルマリン中に１２〜２４時間固定し、その後切片を作製するためにパラフィンワックスに包埋した。５μｍの切片を切断し、ガラススライド上に移動させた。切片をキシレン中で１０分間脱脂し、スライドを段階的な濃度のエタノール（１００％−９５％−８０％−７０％−５０％−水）中にそれぞれ２分間配置することによって再水和した。切片をｐＨ６．０の０．０１Ｍのクエン酸中で１５分間マイクロ波処理することによって、抗原の回収を実施した。水道水の流水で冷却した後、１％過酸化水素溶液中で１５分間インキュベートすることにより、ペルオキシダーゼをブロックした。スライドをリン酸緩衝生理食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ：ＰＢＳ）ですすぎ、血清非含有タンパク質ブロック及びアビジン／ビオチンブロックキット（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＳＡ）を用いて、非特異的結合をブロックした。切片を、Ｎｏｖｏｃａｓｔｒａ製のマウスモノクローナル抗ヒトガレクチン−３クローン９Ｃ４（抗体希釈剤（ＤＡＫＯ、ＵＫ）中で１：１００に希釈）を用いて、４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳで３回洗浄した後、切片を、ビオチン化ウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体（抗体希釈剤中で１：２００に希釈）を用いて、室温で３０分間インキュベートした。スライドをＰＢＳで３回すすぎ、３滴のアビジン：ビオチン化酵素複合体（Ｒ．Ｔ．Ｕ．Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  Ｅｌｉｔｅ  ＡＢＣ試薬、ＰＫ−７１００、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ、バーリンゲーム、カリフォルニア州、ＵＳＡ）を用いて３０分間インキュベートし、続いて液状ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）（液体ＤＡＢ＋基質発色剤システム、Ｋ３４６８（Ｄａｋｏ  ＵＫ  Ｌｔｄ、ケンブリッジシャー）を用いて暗所で１０分間インキュベートした。
【０１９６】
スライドをＰＢＳで３回すすぎ、Ｍａｙｅｒｓ  ｈａｅｍａ−ｔｏｘｙｌｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｈａｎｄｏｎ、ＵＫ）で３０秒間及びＳｃｏｔｔ’ｓ  ｔａｐ  ｗａｔｅｒ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ（水道水中に８３ｍＭのＭｇＳＯ4、７．１ｍＭのＮａＨＣＯ4）を用いて３０秒間対比染色し、段階的な濃度のエタノール（７０％、９０％、１００％をそれぞれ２分）によって脱水し、キシレンで清澄化した。スライドをＰｅｒｔｅｘ設置用溶液（ＣｅｌｌＰａｔｈ  Ｈｅｍｅｌ  Ｈｅｍｐｓｔｅａｄ、ＵＫ）を用いて設置した。
【０１９７】
切片を光学顕微鏡で可視化した。
【０１９８】
ＵＩＰ患者の肺の線維増殖性領域において、ガレクチン−３の発現は顕著に増加する。
【０１９９】
実施例２  ヒト血清又はヒト気管支肺胞洗浄液中のガレクチン−３レベルの測定方法
プレートの調製
１．担体タンパク質を含まないＰＢＳ中で捕捉抗体を作業濃度に希釈する。９６ウェルマイクロプレート６を、１ウェルあたり１００μＬの希釈された捕捉抗体で直ちにコーティングする。プレートを密封し、室温で一晩インキュベートする。
２．各ウェルを吸引し、洗浄緩衝液を用いて洗浄し、このプロセスを２回繰り返し、合計３回洗浄する。噴出ボトル、マニフォールドディスペンサ又は自動洗浄機を用いて各ウェルに洗浄緩衝液（４００μＬ）を充填することによって洗浄する。良好なパフォーマンスを得るために、各ステップにおいて液体を完全に除去することが重要である。最後の洗浄の後、プレートを吸引することによって、又はプレートを反転させて清浄なペーパータオルに吸い取らせることによって、いずれの残留した洗浄緩衝液を除去する。
３．各ウェルに３００μＬの試薬希釈剤を添加することにより、プレートをブロックする。室温で最低１時間インキュベートする。
４．ステップ２と同様に吸引／洗浄を繰り返す。こうしてプレートは試料を添加できる状態となる。
【０２００】
アッセイ手順
１．試薬希釈剤又は適切な希釈剤中の試料又は標準体を、１ウェルあたり１００μＬ添加する。接着性ストリップで覆い、室温で２時間インキュベートする。
２．プレートの調製のステップ２と同様に、吸引／洗浄を繰り返す。
３．試薬希釈剤中に希釈された検出用抗体を、各ウェルに１００μＬ添加する。新たな接着性ストリップで覆い、室温で２時間インキュベートする。
４．プレートの調製のステップ２と同様に、吸引／洗浄を繰り返す。
５．ストレプトアビジン−ＨＲＰの作業用希釈剤を各ウェルに１００μＬ添加する。プレートを覆い、室温で２０分間インキュベートする。プレートを直射光中に配置しないようにする。
６．ステップ２と同様に、吸引／洗浄を繰り返す。
７．基質溶液を各ウェルに１００μＬ添加する。室温で２０分間インキュベートする。プレートを直射光中に配置しないようにする。
８．停止溶液を各ウェルに５０μＬ添加する。プレートを軽く叩き、確実に全体を混合する。
９．４５０ｎｍに設定したマイクロプレートリーダを使用して、直ちに各ウェルの光学密度を決定する。波長補正が利用可能な場合は、５４０又は５７０ｎｍに設定する。波長補正が利用できない場合は、４５０ｎｍでの読み取り値から５４０ｎｍ又は５７０ｎｍでの読み取り値を差し引く。この減算は、プレート内の光の不完全性を補正する。補正なしで４５０ｎｍで直接得られた読み取り値は大きくなることがあり、精度が低くなることがある。
【０２０１】
実施例３  患者及び対照から得られた血清におけるガレクチン−３レベルの測定
ＵＩＰの患者、非特異的間質性肺炎（ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ：ＮＳＩＰ）の患者、同年齢の対照から血清を採取した。実施例２で説明したＥＬＩＳＡ法を用いてガレクチン−３レベルを測定した。アッセイの前に血清を回収し、−８０℃で保存した。アッセイの前に、試料を通常、ＰＢＳ中で１：１０に希釈した。製造者のプロトコルに記載されているようにＥＬＩＳＡを実施した。
【０２０２】
安定したＩＰＦ（ＵＩＰ）患者６名の血清中のガレクチン−３を連続的に（２〜５回）測定した。安定したＩＰＦを、運動耐性、息切れ又は肺機能に有意な変化がないものとして定義した。ガレクチン−３は、ＩＰＦ患者の血清中で上昇した（対照：１７．９±０．９５ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝８；ＩＰＦ：２６．７±４．７ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝６、Ｐ＜０．０５）が、非特異的間質性肺炎（ＮＳＩＰ）患者では上昇しなかった（血清濃度１４．５７±０．８４ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝１０））。
【０２０３】
これらの患者において、ガレクチン−３の血清レベルは長期間に亘って顕著に一定のままである（血清ガレクチン−３：２５．５±０．８ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝２３）。本発明者らは、ＩＰＦの急性増悪が見られる患者から得られた５つの血清試料を試験した。これらの患者は、運動耐性の低下、肺機能の低下及び息切れの増加によって、急性増悪を有するものとして定義された。これらの患者では、血清ガレクチン−３は劇的に上昇し、７３．８±１２．２ｎｇ／ｍｌとなった。更に本発明者らは、ＩＰＦの急性増悪前及び急性増悪中に連続的なガレクチン−３の測定を受けた２人の患者を同定した。これらの患者はいずれも、肺機能が安定している期間中は安定したガレクチン−３血清レベルを示す。しかしながら、急性増悪中に肺機能が低下すると、血清ガレクチン−３が急激に上昇した。
【０２０４】
実施例４  患者及び対照から得られたＢＡＬ液中のガレクチン−３レベルの測定
標準的な技術を用いて、ＩＰＦ患者及び同年齢の対照から気管支肺胞洗浄（Ｂｒｏｎｃｈｏ−ａｌｖｅｏｌａｒ  ｌａｖａｇｅ：ＢＡＬ）液を採取した。簡潔に記載すると、気管支鏡を口又は鼻から肺へと通し、特定量の生理食塩水を用いて小さな肺切片を洗い流した。ＢＡＬ液を回収し、−８０℃で保存した。実施例２で説明したＥＬＩＳＡ法を用いてガレクチン−３レベルを測定した。
【０２０５】
同年齢の対照と比べて、ＩＰＦ患者から得られたＢＡＬ試料ではガレクチン−３レベルが有意に上昇した（対照：１８．８±３．６ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１６；ＩＰＦ：３９．７±３．７ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１５、Ｐ＜０．０１）。
【図面の簡単な説明】
【０２０６】
図１（Ａ）は肺の総コラーゲン量の説明図、図１（Ｂ）は線維症スコアを示す図、図１（Ｃ）は炎症スコアを示す図、図１（Ｄ）はインビボでのβ−カテニン活性化評価図である。
【図１】
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【国際調査報告】
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