(57)【要約】  本発明は、複合体、海産物油由来であることを特徴とするリン脂質およびクルクミンを含む複合体に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン脂質およびクルクミンを含む複合体であって、前記リン脂質が海産物油由来のことを特徴とする、複合体。
【請求項２】
前記海産物油がイガイ油である、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
前記リン脂質がＤＨＡおよび／またはＥＰＡを含む、請求項１または２に記載の複合体。
【請求項４】
前記複合体中の前記リン脂質の少なくとも一部がホスファチジルコリンである、請求項１から３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５】
１から１５％ｗ／ｗの間のクルクミンを含む、請求項１から４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６】
およそ２から８％ｗ／ｗのクルクミンを含む、請求項１から５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７】
前記複合体中の前記クルクミンとポリ不飽和脂肪酸とのモル比が、約１：２から２０：１の範囲である、請求項１から６のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８】
前記複合体中の前記クルクミンとポリ不飽和脂肪酸とのモル比が、約１：２から５：１の範囲である、請求項１から７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９】
前記複合体中のクルクミンとリン脂質との比が、１：１００から１：５の間である、請求項１から８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０】
前記複合体中のクルクミンとリン脂質との比が、１：５から１：２０の間である、請求項１から９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１】
前記海産物油が、２０％ｗ／ｗ超のリン脂質を含有する、請求項１に記載の複合体。
【請求項１２】
前記海産物油が、およそ４０％ｗ／ｗのリン脂質を含有する、請求項１に記載の複合体。
【請求項１３】
前記複合体中のリン脂質のある量が、レシチンから供給される、請求項１から１２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１４】
ピペリンおよび／またはケルセチンも含む、請求項１から１３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１５】
請求項１から１４のいずれか１項に記載の複合体を含む、組成物。
【請求項１６】
海産物油を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
レシチンを含む、請求項１５または１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物中のレシチンと海産物油との比が１：３から３：１の間である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物中のレシチンと海産物油との比がおよそ２：１である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記レシチンが植物油である、請求項１７から１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
希釈剤を含む、請求項１５から２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
希釈剤：レシチン：イガイ油の比がおよそ１：１：１である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記希釈剤がオレイン酸である、請求項２１または２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
３５℃で１．５ｒｐｍでＳｐｉｎｄｌｅ  ２１において測定した場合、前記組成物の粘度が５０００ｃＰを下回る、請求項１５から２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
ポリ不飽和脂肪酸ＤＨＡおよび／またはＥＰＡのさらなる供給源を含む、請求項１５から２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
アジュバントを含む、請求項１５から２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
ケルセチンを含む、請求項１５から２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
ピペリンを含む、請求項１５から２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
軟質ゲルカプセル中の液体形態で提供される、請求項１５から２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３０】
固形投与錠剤形態で提供される、請求項１５から２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３１】
請求項１から１５のいずれか１項に記載の複合体を調製する方法であって、
ａ）第一の溶液を生成させるために、溶媒中である量のクルクミンを溶解させ；
ｂ）第二の溶液を生成させるために、海産物油由来のある量のリン脂質と前記第一の溶液を混合し；
ｃ）前記複合体を生成させるために、前記第二の溶液を処理し；
ｄ）前記溶媒から前記複合体を分離する
段階を含む、方法。
【請求項３２】
前記溶媒がプロトン性溶媒である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
溶媒がエタノールである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
段階ａ）が、およそ４０から５０部体積の溶媒を約１部のクルクミンに対して混合することを含む、請求項３１から３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
段階ａ）が、ケルセチンおよび／またはピペリンを添加することを含む、請求項３１から３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
段階ｂ）が、レシチンの添加を含む、請求項３１から３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
段階ｂ）が、希釈剤の添加を含む、請求項３１から３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
段階ａ）、ｂ）および／またはｃ）が、前記溶媒を還流させることを含む、請求項３１から３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
段階ｃ）が、４０から５０℃前後で１から２時間、スロー真空（ｓｌｏｗ  ｖａｃｕｕｍ）を適用し、次いで溶媒全てが前記溶液から沸騰除去されるまで完全真空を適用することを含む、請求項３１から３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
発明を実施するための形態セクション（Ｂｅｓｔ  Ｍｏｄｅ  Ｓｅｃｔｉｏｎ）の実施例１および実施例２を参照して本明細書中で記載され、説明されるとおりの複合体および／または組成物。
【請求項４１】
発明を実施するための形態セクション（Ｂｅｓｔ  Ｍｏｄｅ  Ｓｅｃｔｉｏｎ）の実施例１および実施例２を参照して本明細書中で記載され、説明されるとおりの複合体および／または組成物を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クルクミンのバイオアベイラビリティにおける、およびこれに関する改善、およびクルクミンのバイオアベイラビリティを改善する複合体および組成物を作製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
クルクミンは、スパイスターメリック中に存在する化合物である。クルクミンは、多くの研究において、抗酸化、抗炎症性、抗増殖性および抗血管形成活性などの薬理学的効果を有することが示されている。そのようなものとして、クルクミンは、癌、心疾患、糖尿病、クローン病および様々な神経性疾患などの疾患に対処するための標的に相当する。このため、過去２０から３０年間にわたりクルクミンに対する意義深い研究があった。
【０００３】
クルクミンの重要な長所は、カレーなどの食物中のスパイスとして数世紀にわたり使用されている天然化合物であるがゆえに幅広く受け入れられていることである。さらなる長所は、高用量であっても副作用がほぼないことである。また、これは、調達費用が比較的低く、室温で良好に保存される。
【０００４】
これらの長所にもかかわらず、まだ取り組むべき最重要課題は、動物においてバイオアベイラビリティが低いというクルクミンの周知の問題である。これは、溶解度に乏しく、ゆえに吸収性に乏しく、身体から排出されおよび／または迅速に代謝されることを含む要因の組み合わせのためであると考えられる。
【０００５】
過去には、この低溶解性が少なくともインビトロ実験において克服されたが、これは、クルクミンの溶解性向上を促進するＤＭＳＯまたはＴｗｅｅｎ  ８０などの担体を添加することによる。しかし、主にＤＭＳＯなどの担体は、味を不快なものとし、製造費用および工程を付加し、クルクミンが（消費者が好む）天然産物であるという長所を損なうので、治療薬におけるこれらの担体の添加は適切な道理ではない。
【０００６】
クルクミンと油を組み合わせることによって、クルクミンの全身系への取り込みが改善され得る。しかし、クルクミンは油と結合しないので、混合後に縣濁液から脱落する。クルクミンおよび油の混合物を激しく撹拌することにより、ごく一部が可溶化されるため、僅かに改善した生成物が提供され得る。しかし、クルクミンが時間経過とともに沈降するので保存可能期間は限定される。クルクミンおよび油の混合物をいかに激しく混合するかにかかわらず、生成物を遠心することにより、クルクミンおよび油の殆どが効率的に分離される。
【０００７】
吸収／安定性が乏しいという問題を克服し、クルクミンの有益な効果を最大化しようと、過去数十年にわたり多くのアプローチが研究されてきた。これらには、リポソーム性またはリン脂質構造、ナノ粒子および構造類似体の調製が含まれる。Ａｎａｎｄら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２００７，４（６），８０７−８１８は、これらの様々なアプローチの優れた概説を提供する。
【０００８】
例えば、ＷＯ２００７／１０１５５１は、植物または合成起源の脂質を用いたクルクミンとのリン脂質複合体を記載する。クルクミンと脂質とのモル比が高い場合、得られる複合体中でクルクミンが約１６．９％となった。しかし、得られる生成物は、粘性のあるろう状物質であった。このため、カプセル化するのは実質的に不可能となり、ゆえに、この生成物は殆ど確実に錠剤形態で提供される。錠剤は、製造の観点から複合体の送達に適切な形態であるものの、カプセル化は、特に油性の処方物に対してより魅力的な選択肢であり得る。カプセル化が容易に達成可能であるのは、得られる複合体溶液の粘性が高すぎない場合のみであることが多い。
【０００９】
多くの研究グループが探索している異なる手段は、クルクミンをアジュバントと合わせることである。ピペリン、ケルセチンまたはオメガ−３ポリ不飽和脂肪酸、例えばドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）および／またはエイスコサペンタエン酸（ｅｉｓｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（ＥＰＡ）などのような化合物は、最近、クルクミンと組み合わせて使用される場合、相乗的な治療効果を生じさせることが示されたが、正確な作用機構はまだ不明である。これらのアプローチはＡｎａｎｄら、２００７でも概説されている。
【００１０】
クルクミンの相乗作用は、ＤＨＡおよびＥＰＡを含むポリ不飽和脂肪酸の比較的小さいサブセット（約８）に限定されるとも考えられているが、それは、これらの脂肪酸の炭素鎖長が２０以上であるからである。これにより、身体がそれらを容易に吸収できるようになる。これは、１８の炭素鎖長を有するリノール酸などの他の脂肪酸と同等である。
【００１１】
例えば、Ａｌｔｅｎｂｕｒｇら、ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１１，１１；１４９は、多数の乳癌細胞株の阻害におけるＤＨＡおよびクルクミンの相乗作用を記載する。ここで、阻害されている乳癌細胞株のタイプに依存して、ＤＨＡとクルクミンとの最適比がおよそ２：１から１：１であったことが報告された。
【００１２】
さらなる研究において、Ｓｗａｍｙら、Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００８，６０：Ｓ１，８１−８９は、約２．５：１（ＤＨＡ対クルクミン）の比で、膵臓癌細胞の一形態であるＢｘＰＣ−３細胞におけるアポトーシスに対して最大効果が示されたことを報告した。
【００１３】
従って、クルクミンとアジュバント、例えばＤＨＡなどとの最適比に対して処方者に指針を与える理論的な情報があるものの、（所望される的確な治療効果に依存して異なり得る）所望の比を保持し、同時にクルクミンの不安定性、不溶性および乏吸収性、ならびに好ましい粘度の要件など、組成物の他の要因の周辺の問題にも対応しようとする組成物を処方することは困難であり得ることが多い。
【００１４】
例えば、ＤＨＡとクルクミンとの間の所望のモル比（および濃度）を達成しようとする試みにおいて、これにより粘度がより高くなり得、同様に製造に対してカプセル化を選択することが困難となり得る。
【００１５】
従って、ある一定の長所にもかかわらず、クルクミンのバイオアベイラビリティおよび治療効果、クルクミンの負荷量向上能、得られる組成物の安定性ならびに好都合な剤形で薬剤を製造する簡便性／費用について改善することが依然として非常に必要とされている。
【００１６】
本発明の目的は、前述の問題の１以上に対処すること、または少なくとも公衆に有用な選択肢を提供することである。
【００１７】
本明細書中で引用するあらゆる特許または特許出願を含め、参考文献は全て、参照により本明細書によって組み込まれる。何らかの参考文献が先行技術を構成することを受け入れるものではない。参考文献の論考はそれらの著者が主張することを述べ、出願者は、引用する書類の正確性および適切性に疑義を唱える権利を保有する。多くの先行技術刊行物が本明細書中に対して参照されるものの、この参考文献をもって、これらの書類の何れかが、ニュージーランドにおける、または何らかの他の国における当技術分野での共通の一般的知識の一部を形成することにはならないことが明らかに理解されよう。
【００１８】
本明細書を通じて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語またはその変形物、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などは、述べられる要素、整数もしくは段階または要素整数もしくは段階の群を含むことを意味するものであり、あらゆる他の要素、整数もしくは段階または要素、整数もしくは段階の群の排除を意味するものではないことを理解されたい。
【００１９】
本発明のさらなる態様および長所は、単なる例として与えられる次の記載から明らかになろう。
【発明の概要】
【００２０】
本発明の第一の態様によると、リン脂質およびクルクミンを含む複合体であって、リン脂質が海産物油由来であることを特徴とする複合体が提供される。
【００２１】
本発明のさらなる態様によると、リン脂質およびクルクミンを含む複合体であって、リン脂質が海産物油およびレシチン由来であることを特徴とする複合体が提供される。
【００２２】
本発明のさらなる態様によると、リン脂質およびクルクミンを伴う複合体を含む組成物であって、複合体中のリン脂質が海産物油由来であることを特徴とする組成物が提供される。
【００２３】
本発明のさらなる態様によると、実質的に本明細書中の上記のような複合体または組成物を調製する方法であって、
ａ）溶媒中である量のクルクミンを溶解させることによって第一の溶液を生成させ；
ｂ）海産物油由来のある量のリン脂質と第一の溶液を混合することによってさらなる溶液を生成させ；
ｃ）複合体を生成させるために、そのさらなる溶液を処理し；
ｄ）溶媒から複合体を分離する、
段階を含む、方法を提供する。
【００２４】
本発明のさらなる態様によると、実質的に本明細書中の上記のような組成物を用いた処置の方法が提供され、その組成物は、次の状態のうち１つに対して、処置もしくは予防を行うために、または少なくとも補完処置または予防を提供するために使用される：
・癌、
・心疾患、
・糖尿病、
・クローン病および
・様々な神経性疾患。
【００２５】
本発明は、驚くべきことに、および有利に、リン脂質含量が高く、ＤＨＡおよびＥＰＡなどのポリ不飽和脂肪酸に天然に富む海産物油由来のリン脂質の巧妙な使用の恩恵を受ける。簡潔には、本発明は、
−海産物油由来のリン脂質を用いて安定な複合体の形成を可能にし、安定な複合体を形成させることによって成分の分離を阻止し（従って、本発明はクルクミンの効果的な吸収を確実にする。）、
−高レベルのリン脂質および、同様に高レベルのポリ不飽和脂肪酸、例えばＤＨＡおよびＥＰＡなどを提供する（海産物油リン脂質の尾部においてのように本質的に存在する。）。これは、脂肪酸レベルを向上させ、従ってクルクミンと脂肪酸との所望のモル比の達成を促し、同様にこれは、これらの脂肪酸とクルクミンとの間で見られる相乗的効果を提供するために有益である。
【００２６】
この明細書を通じて、海産物油という用語は、魚類および甲殻類などの海産生物由来の何らかの油を意味すると解釈すべきであり、この油は、ポリ不飽和脂肪酸の少なくとも１つのタイプを含有するリン脂質（単数または複数）を含む。
【００２７】
このような海産物油のいくつかの具体例としては、イガイ油、オキアミ油、サーモン油、イカ油などが挙げられる。海産物油の別の例は、魚卵、繰り返しになるがおそらく魚類または甲殻類由来の油であり得る。
【００２８】
上記で例示されたこれらなどの海産物油は、有益に、比較的高いリン脂質含量を有する。従って、これらは、有益に、下記でさらに論じるように、クルクミンとリン脂質および脂肪酸との好ましいモル比の達成を促すために本発明に対して使用され得る。上記で例示されるものなどの海産物油を用いることによって、本複合体はまた、有益に、海産物油由来の脂質中に存在するクルクミンとともにＤＨＡまたはＥＰＡなどのオメガ−３脂肪酸によってもたらされる相乗的治療効果も提供する。
【００２９】
当然のことながら、最初に（例えばアセトン沈殿により）海産物油からリン脂質を抽出し、次いで続いてクルクミンに添加して（海産物油の残存成分を差し引く。）、複合体を形成させることが可能である。このような場合において、リン脂質の沈殿後、ろう状の物質が生じ得、次にこれを希釈剤で薄め得、その後クルクミンと複合体化させる。
【００３０】
好ましくは、本組成物は海産物油を含む。これは、海産物油の成分の多くがクルクミンの治療有効性または安定性を改善し得る可能性があるので、好ましい選択肢である。例えば、イガイ油は、約９１種類の様々なタイプの脂肪酸を有する。
【００３１】
脂肪酸ＤＨＡおよび／またはＥＰＡとクルクミンとの間のこの相乗作用が非常に長い間知られているにもかかわらず、産業界では、クルクミンを海産物油起源のリン脂質と実際に複合体化するという本発明に至った者はいなかった。今まで、研究者らが明らかにしたのはＤＨＡ／オメガ３をクルクミンと組み合わせることのみであり、しかし、このような成分に富むリン脂質とクルクミンを実際に複合体化させ、それによって単一成分で２つの有益な効果を達成すること（すなわち、脂肪酸の間の相乗作用およびまたリン脂質との複合体形成から利益を得ること）は考えていなかった。
【００３２】
一方で、研究者らは、最初に、クルクミンを複合体化するためにダイズレシチン油などの植物油を使用することを検討した。ダイズリン脂質は、ヒトにおいて非常によく吸収されることが知られており、高投与量でもインビボで動物において慢性効果が全く示されないので、このクルクミン複合体化の要となるものであったと考えられる。また、それは、ダイズ油に存在するリノール酸のような豊富な量のポリ不飽和脂肪酸によって、心疾患のような疾患のリスクを低下させるための魅力的な選択肢となった。けれども、大きな欠点は、植物油中の（リノール酸酸のような）短鎖の脂肪酸およびクルクミンとの相乗作用が報告されていないことである。
【００３３】
本明細書を通じて、リン脂質という用語は、疎水性の尾部および親水性の頭部を含む何らかのタイプの脂質を意味すると解釈すべきである。本発明の文脈において、リン脂質は、クルクミンを保護するため、ミセル複合体を形成させるために使用される。
【００３４】
好ましくは、海産物油は、２０％ｗ／ｗを超えるリン脂質を含有する。サーモン油、イガイ油、オキアミ油およびイカ油などの海産物油は全て、リン脂質含量が２０％を上回ることが知られている。リン脂質レベルが高いある特に好ましい海産物油は、約６５％ｗ／ｗリン脂質レベルであるイガイ油である。
【００３５】
最も好ましくは、海産物油は、およそ４０％ｗ／ｗのリン脂質を含有する。
【００３６】
より好ましくは、リン脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトールリン酸（ＰＩＰ）、ホスファチジルイノシトール２リン酸（ＰＩＰ２）およびホスファチジルイノシトール３リン酸（ＰＩＰ３）からなる群から選択される。
【００３７】
最も好ましくは、本複合体中のリン脂質の少なくとも一部はホスファチジルコリン（ＰＣ）である。これは、ＰＣが一般に使用されるリン脂質であり、産業界でよく理解されているからである。しかし、潜在的にリン脂質の何れか１つまたは組み合わせを本発明とともに使用し得る。
【００３８】
繰り返しになるが、ＰＣおよびＰＩの両方を有する海産物油の良好な例としては、イガイ油、オキアミ油およびサーモン油が挙げられる。
【００３９】
あるいは、リン脂質は、幅広いクラスのホスホスフィンゴ脂質から選択される。
【００４０】
この代替的な実施形態において、リン脂質は、セラミドホスホリルコリンまたはセラミドホスホリルエタノールアミン（それぞれ、スフィンゴミエリン、ＳＰＨまたはＣｅｒ−ＰＥ）およびセラミドホスホリリピッド（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｉｐｉｄ）からなる群から選択される。
【００４１】
本明細書を通じて、クルクミンという用語は、何らかのクルクミノイドを意味するものと解釈すべきである。クルクミノイドは、単純に、下記の構造で示されるようなクルクミンであり得るか、または化合物の安定性または他の薬物動態学的特性を改善する様々な化学基を有するクルクミンの誘導体であり得る。
【化１】
2015518862.tif 000003
【００４２】
クルクミンは、ターメリックなどの天然源から単離され得るか、または一連の技術を通じて合成により調製され得る。
【００４３】
最も好ましくは、デメトキシクルクミンが使用される。Ｃｕｏｍｏら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２０１１，７４  ６６４−６６９において、リン脂質処方物が、クルクミンの場合よりもデメトキシル化クルクミノイドの吸収を顕著に向上させたことが示され、従って、本発明での使用に特に適用可能である。一般に使用されるさらなる代替的クルクミンは、ビスデメトキシクルクミンである。
【００４４】
しかし、現在公知であるにせよまたは将来開発されるにせよ、クルクミンのあらゆる他の形態を本発明の範囲から逸脱することなく本発明の一部として使用し得る。
【００４５】
好ましくは、本複合体は１％ｗ／ｗを上回るクルクミンを含む。
【００４６】
好ましくは、本複合体は、１から１５％ｗ／ｗの間のクルクミンを含む。
【００４７】
既に論じたように、より高い濃度および負荷量のクルクミンは、身体へのクルクミンの吸収を向上させるという最終目的を改善するための１つのストラテジーである。
【００４８】
より好ましくは、本複合体は、およそ２から８％ｗ／ｗの間のクルクミンを含む。本発明の複合体内で８％超にクルクミンレベルを向上させることが確かに可能である。これは、本明細書中でさらに論じる。
【００４９】
本複合体中のモル比の好ましい例
最も好ましくは、本複合体中のクルクミンとポリ不飽和脂肪酸とのモル比は、約１：２から２０：１の範囲である。
【００５０】
最も好ましくは、本複合体中のクルクミンとポリ不飽和脂肪酸とのモル比は、約１：２から５：１の範囲である。
【００５１】
ＡｌｔｅｎｂｕｒｇおよびＳｗａｍｙを参照して既に論じたように、実験が行われた癌細胞株に対して最も有効な相乗作用をもたらす最も好ましいモル比が約２．５対１（ＤＨＡ対クルクミン）であったことを示す報告がある。しかし、２０：１を上回るより高い比（ＤＨＡおよび／またはＥＰＡなどの他の脂肪酸対クルクミン）も相乗作用を示すことが明らかであるが、それほどではない。特定の治療用途（例えば標的としようとする癌細胞のタイプ）に依存して、相乗作用を増強するモル比が変動し得る可能性は十分にある。
【００５２】
最も好ましくは、クルクミンと海産物油由来のリン脂質との比は、およそ１：５から１：２０の間である。
【００５３】
このような好ましい比は、発明者により行われた試行例で効果的に作用することが分かっており、クルクミンとリン脂質との適切な複合体化をもたらすことがよく示されているので有益である。例えば、ＷＯ２００７／１０１５５１は、クルクミンとリン脂質との比が１：４という高いものである場合、安定な複合体において最大１６％ｗ／ｗのクルクミンが達成され得ることを実施例４で示すことを提供する。明らかに、リン脂質の量をこの比で増加させる場合、安定な複合体を達成し得る。
【００５４】
クルクミンとリン脂質との１：１０の比がいかに特に好ましいかの例を下記で提供する。
【００５５】
イガイ油は、およそ６５％ｗ／ｗリン脂質を有し、約２４％ｗ／ｗＥＰＡおよび１３％ＤＨＡも含有し、全部で約３７から３８％のポリ不飽和脂肪酸であり、その大部分がリン脂質に結合する。従って、４ｋｇのクルクミンを１００ｋｇ（およそ１００Ｌ）のイガイ油に添加することであった場合、得られる複合体においておよそ１：１６（クルクミン対リン脂質）の比が達成され得、その複合体中で約４０ｇ／Ｌ（または４％ｗ／ｗ）クルクミンを提供し得る。
【００５６】
研究から、（インビトロでの試行により示唆される）身体におけるクルクミンの治療効果は僅か約１０μＭ（３ｍｇ／Ｌクルクミン）であることが示される。従って、この組成物は、大幅に過剰なクルクミンを提供し得、またこの大部分が、すでに論じられるとおりインビボで吸収され得ない。これは、発明者らにより行われた研究に基づき、添加されるクルクミンの１００％近くがリン脂質と複合体化可能であることを想定する。
【００５７】
同様に、この例は、約１１：１の脂肪酸（すなわちＤＨＡおよびＥＰＡを合わせたもの）とクルクミンのモル比を提供する。ＤＨＡとクルクミンとの具体的なモル比は、約４：１であり、ＥＰＡとクルクミンの場合は８：１である。上述のとおり、これは、相乗的効果をもたらすことが示される、ＤＨＡとクルクミンとの、例示される好ましいモル比内である。しかし、例えば、最も有効な相乗効果を有することが示される、約２．５：１  ＤＨＡ対クルクミンへとこれらのモル比を向上させることも依然として好ましい。
【００５８】
例えば、この最も好ましいモル比は、単純に、複合体中のクルクミンの量を約１２％ｗ／ｗに増量する（すなわちＤＨＡに対する比を２．５：１に近付ける。）ことによって達成され得る。これは、安定な複合体を達成するのに必要とされる（イガイ油により提供される）クルクミンとリン脂質との好ましい比内で「動く余地」があるので達成可能である。しかし、このように行うことにおいて、本組成物は、イガイ油由来のリン脂質中の脂肪酸量が多いために非常に粘性またはろう状になり得る。これは油性の液体とともにカプセル形態で提供することが困難であり得るが、より高い粘性ゆえに、なお、これを錠剤形態で提供し得る。
【００５９】
レシチンを含む複合体の好ましい実施形態
クルクミンと脂肪酸との所望のモル比の達成およびまたは維持を促し、また脂肪酸により引き起こされ得る粘性上昇に伴う問題の回避を促すために、発明者らは、特に好ましく独創的な構想に到達した。これは、複合体および／または本発明の複合体を含有する粘性が低い油性液体のカプセル化に対して特に好ましい構想である。
【００６０】
好ましくは、本複合体は、ある量のレシチンを含む。
【００６１】
本明細書を通じて、レシチンという用語は、リン酸、コリン、脂肪酸、グリセロール、糖脂質および／またはトリグリセリドなどの他の成分と一緒にリン脂質を含む動物または植物組織由来の物質の何らかの混合物を意味するものと解釈すべきである。レシチンという用語は、同様に、本明細書を通じて、それが本発明の海産物油とは異なる物質であり、リン脂質源を提供するがＤＨＡおよびＥＰＡなどのオメガ−３脂肪酸を欠いているものであるということが理解されるべきである。
【００６２】
このような実施形態において、当然のことながら、リン脂質の全体量は同じままであり得（例えば好ましくは１：１００から１：５の間のクルクミン対リン脂質）、一方でレシチンは、クルクミンに対するこの好ましい比についてリン脂質の一部を提供している。
【００６３】
発明者らは、レシチンを組み込んだ際にクルクミンとリン脂質とのモル比が過度に変化しないので、リン脂質およびクルクミンとの本複合体の安定性が妨げられなかったことを見出した。
【００６４】
同様に、レシチンからおよび海産物油リン脂質からのリン脂質により維持される複合体および組成物中でクルクミンの量を増量させ得る。
【００６５】
結果として、複合体中で脂肪酸量が増量されないので、複合体内でクルクミンと脂肪酸（海産物油リン脂質由来）とのモル比を向上させることができるようになる。これにより、処方者がクルクミンと脂肪酸とのモル比を向上させることができるようになるだけでなく、脂肪酸に起因する粘度の好ましくない上昇も回避される。
【００６６】
従って、レシチンを含むことによって、巧みに、さらなるオメガ３脂肪酸の添加という欠点（すなわち粘度上昇）なく、複合体の安定性およびクルクミンの保護のための欠くことのできないリン脂質源が依然として提供される。ゆえに、レシチン添加によって、複合体および／または組成物の粘性に過度に影響を与えることなく、クルクミンと脂肪酸とのモル比を所望のレベルまで有利に向上させることができるようになる。
【００６７】
好ましくは、本組成物中のレシチンと海産物油との比は１：３から３：１の間である。最も好ましくは、本組成物中のレシチンと海産物油との比はおよそ２：１である。
【００６８】
好ましい実施形態において、レシチンは植物レシチン油である。例えば、植物レシチン油は、発明者らが、本発明に特に適用できると考える、ダイズレシチン油またはヒマワリレシチン油であり得る。これは、ヒマワリレシチン油およびダイズレシチン油の両方が、脳機能に対する健康補助食品としてコリンを提供するからである。
【００６９】
しかし、他のレシチン源も本発明の範囲内である。
【００７０】
発明者らは、粘性が不利におよび不必要に上昇することを回避するために、レシチンが、粉末形態とは別物である、液体形態で最良に提供されることを予見する。
【００７１】
好ましくは、本組成物は希釈剤を含む。
【００７２】
発明者らは、ＷＯ２００７／１０１５５１で明らかにされるように、海産物油およびレシチンにより提供されるリン脂質の量が、クルクミン濃度が最大５％ｗ／ｗ、潜在的にはより高いものである、安定な複合体を維持するのに十分であることを予見する。また、約５％ｗ／ｗを上回る、これらのより高いクルクミン濃度では、海産物油リン脂質の一部の代わりに本組成物にレシチンが添加されても、本複合体の粘性がカプセル化にとって実際的であるものを超えて上昇し得る。
【００７３】
好ましくは、本組成物は希釈剤を含む。これは、カプセル化に実際的なレベルに粘度を維持しながら、およびクルクミンと脂肪酸との所望のモル比も有利に達成しながら、本複合体中のクルクミン濃度をＷＯ２００７／１０１５５１で論じられる濃度へとより容易に上昇させ得るため、レシチン添加よりも特に好都合な特性である。この巧妙なアプローチは、クルクミンとリン脂質との比を１：５を上回るところに押し上げることができるゆえに、リン脂質量がイガイ油またはレシチンの何れかにより容易に提供され得るという、知識および発明者により行われた予備的な試験に依存する。従って、ある量のレシチン（例えば１部のレシチン）を希釈剤で置き換えることによって、本組成物の全体的な粘性を低下させ得るが、本複合体は依然として安定なままであり得る。
【００７４】
例えば、１：１：１（希釈剤：レシチン：イガイ油）のおおよその比が発明者により予測される。しかし、当然のことながら、処方者が複合体中でクルクミンを安定に維持する限り、希釈剤とレシチンおよびイガイ油との代替的な比または量を使用し得る。これは、単純な試行を通じて判定することが容易であり、従って本発明の範囲を超えるものとみなされるべきものではない。
【００７５】
好ましくは、希釈剤はオレイン酸である。オレイン酸などの希釈剤の長所は、それが、本組成物の残余として同じ油性ベースを提供するが、有利にリン脂質を欠き、従って他の成分に対して粘性が低くなることである。当然ではあるが、他のタイプの希釈剤が可能であり得るが、発明者らは、オメガ６に富むものは心疾患と関連付けられているため、オメガ６に富むものを含まないものを好む。
【００７６】
好ましくは、本組成物の粘度は、３５℃で、Ｓｐｉｎｄｌｅ２１上で１．５ｒｐｍで測定して５０００ｃＰを下回る。
【００７７】
好ましくは、本組成物にさらなる成分が組み込まれ得る。これらの成分は、複合体に必ずしも結合する必要はないが、安定性の向上を促し得るか、または例えば本組成物の治療効果を向上させるためにアジュバントとして添加され得る。
【００７８】
好ましくは、本組成物は、オメガ３脂肪酸のさらなる供給源を含む。例えば、本組成物に個別にＤＨＡを添加し得る。癌の処置または予防に対する様々な科学研究において、ＤＨＡはクルクミンとともに相乗的に作用することが示されている。この相乗作用がクルクミンの他の治療用途に対しても明らかになる可能性がある。
【００７９】
好ましくは、本組成物はケルセチンを含む。
【００８０】
好ましくは、本組成物はピペリンを含む。
【００８１】
ケルセチンおよびピペリンは両者とも、クルクミンに対するアジュバントであること、例えば治療効果改善のためにクルクミンの吸収または効力を向上させることが知られている。
【００８２】
好ましくは、アジュバントの一部または全てがリン脂質とともに同時に複合体化される。下記で論じるように、ケルセチンおよびピペリンは、好ましくは、溶媒中での溶解前に、および海産物油由来のリン脂質（およびいくつかの実施形態において好ましくはレシチン／希釈剤）の添加前に、クルクミンと一緒に添加される。このようにして、ケルセチンは、クルクミンと同様にしてリン脂質と複合体化できると考えられる。
【００８３】
製造方法
本発明のさらなる態様によると、実質的に本明細書中の上記のような組成物を調製する方法が提供され、本方法は、
ａ）第一の溶液を生成させるために、溶媒中である量のクルクミンを溶解させ；
ｂ）第二の溶液を生成させるために、海産物油由来のある量のリン脂質と第一の溶液を混合し；
ｃ）複合体を生成させるために、第二の溶液を処理し；
ｄ）溶媒から複合体を分離する、
段階を含む。
【００８４】
本発明で使用される溶媒は、使用されるクルクミンのタイプまたは量、および組成物または複合体に対して意図されるリン脂質および／または他の成分のタイプまたは量に依存して変動し得る。従って、溶媒の正確な組成は、限定するものとみなすべきものではない。
【００８５】
第一の構成成分が天然の植物または動物に基づく抽出物である好ましい実施形態は、次のリストからの１以上の溶媒を利用し得るが、しかし、当然のこととして、このリストは網羅的なものではなく、従って、限定するものとみなすべきものではない。
・ヘキサン
・ベンゼン
・トルエン
・ジエチルエーテル
・クロロホルム
・酢酸
・ブタノール
・イソプロパノール
・プロパノール
・エタノール
・メタノール
・ギ酸
・ジメチルスルホキシド，
・アセトン。
【００８６】
好ましくは、溶媒はプロトン性溶媒である。この明細書を通じて、プロトン性溶媒という用語は、酸素に結合している（すなわちヒドロキシル基）かまたは窒素に結合している（すなわちアミン基）水素原子を有する何らかの溶媒を意味するものと解釈すべきである。上記リストから、プロトン性溶媒としては、酢酸、ブタノール、イソプロパノール、エタノール、メタノールおよびギ酸が挙げられる。
【００８７】
最も好ましくは、溶媒はエタノールである。
【００８８】
好ましくは、段階ａ）は、およそ４０から５０部体積の溶媒を約１部のクルクミンに混合することを含む。
【００８９】
この比によって、クルクミンが適切に溶解し、混合過程中の沈殿を阻止することを確実にすることを促す。この過程は、より高温で溶解段階を行うことによっても促進され得る。
【００９０】
エタノールなどの溶媒は、食品グレードの品質のエタノールがこれなどの処理技術のために市販されているので有利であり得る。
【００９１】
多くの方法を通じて、複合体を生成させるために、第二の溶液を処理する段階を達成し得る。リン脂質および薬物または化合物、例えばＷＯ２００７／１０１５５１で実証されているものなどを用いて、ミセル複合体を生成させるための多くの公知の技術がある。また複合体の生成なしでは、クルクミンおよびリン脂質は不安定であり、急速に分離する。これは、保存可能期間の安定性に対する問題であるだけでなく、背景技術で述べられるように、これによってクルクミンのバイオアベイラビリティも低下する。吸収を改善するために、複合体を形成することを含む技術によって、身体での吸収改善のためにクルクミンのリン脂質への結合の維持を促す。
【００９２】
好ましくは、段階ｃ）は、蒸発による分離を含む。
【００９３】
好ましくは、段階ｃ）は、溶媒の沸点よりも高いが、第二の溶液の残りの成分の沸点よりも低い温度まで第二の溶液の温度を上昇させるために第二の溶液を加熱することを含む。
【００９４】
好ましくは、段階ｃ）は、圧力容器中で第二の溶液を加熱することを含む。
【００９５】
最も好ましくは、大気圧を下回る気圧で第二の溶液を加熱する。これにより、溶媒および流体の沸点が低下し、より低い温度で効率的に蒸発が起こるようになる。
【００９６】
いくつかの実施形態において、室温で溶媒の蒸発を促進するために、圧力容器中の圧力を十分に低下させ得、それにより加熱の必要性がなくなる。
【００９７】
いくつかの実施形態において、溶媒および流体の沸点を上昇させるために、圧力容器中の圧力を上昇させ得、それにより、溶媒を蒸発させるために加熱レベルを上げることが必要となる。
【００９８】
段階ａ）から段階ｃ）が、例えば３０分間の還流時間を含むこともまた有益である。還流は、溶媒中でクルクミンを溶解する過程中および続いてリン脂質を溶液に添加した後に起こり得る。これらの段階中、エタノールは「沸騰して除去される」が、一方で圧力容器中には依然として含有され、蒸発したエタノールが、この間中、循環方式で再び溶液に戻るようになる。この還流は複合体の形成に有用である。
【００９９】
製造方法の特に好ましい実施形態において、本方法は、
ａ）第一の溶液を生成させるために、エタノール中である量のクルクミンを溶解させ；
ｂ）第二の溶液を生成させるために、リン脂質を含有するある量の海産物油と第一の溶液を混合し；
ｃ）リン脂質とクルクミンとの間の複合体を得るために、第二の溶液からエタノールを沸騰除去する、
段階を含む。
【０１００】
いくつかの実施形態において、クルクミン、エタノールおよび、海産物油由来のリン脂質を一緒に合わせ、この第二の溶液を形成させるために混合することによって、段階ａ）およびｂ）を同時に行う。
【０１０１】
さらなる好ましい実施形態として、段階ｂ）は、ある量のレシチンを第一の溶液に添加することを含む。この実施形態において、レシチンと海産物油との最も好ましい比はおよそ２：１である。
【０１０２】
さらなる好ましい実施形態として、段階ｂ）は、ある量の希釈剤を第一の溶液に添加することを含む。当然ではあるが、レシチンおよび／または希釈剤の添加は、異なる段階で添加され得、本発明の結果への顕著な影響はない。
【０１０３】
いくつかの好ましい実施形態において、沸騰させる段階を大気圧以上で行い得、それによって、エタノールの沸点を上回るためにさらなる溶液が加熱される。
【０１０４】
好ましい実施形態において、蒸発器を通じて、沸騰除去されるエタノールを集め、回収する。
【０１０５】
いくつかの好ましい実施形態において、さらなる溶液を含有する容器中の圧力を低下させることによって沸騰させる段階を行い得、圧力低下によってエタノールの有効沸点が低下する。
【０１０６】
真空にすることによって蒸発の温度を低下させることは、油が変敗する機会を減少させるので有利である。油は、熱、光および酸素への曝露に感受性がある。真空の使用によって、油の変性に対する熱のおよび酸素の寄与の両方が減少する。
【０１０７】
好ましくは、段階ｃ）は、１から２時間にわたり４０から５０℃前後でスロー真空（ｓｌｏｗ  ｖａｃｕｕｍ）を適用し、次いで全エタノールが沸騰除去されるまで完全真空にすることを含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、エタノールを蒸発させて除去するために、圧力低下およびさらなる溶液の加熱の組み合わせを利用し得る。
【０１０９】
真空にすることにより蒸発温度を低下させることは、油が変敗する機会を減少させるので有利である。油は、熱、光および酸素への曝露に感受性がある。真空の使用によって、油の変性に対する熱のおよび酸素の寄与の両方が減少する。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、圧力を上昇させ得、それによりエタノールの沸点が上昇し、それによりエタノールを蒸発させるために加熱度を高くすることが必要になる。
【０１１１】
当然のことながら、さらなる溶液が含有される圧力容器内の圧力を増減することによって蒸発速度を調節し得る。
【０１１２】
好ましい実施形態において、圧力容器中の真空圧力は１から２０ｔｏｒｒの範囲である。
【０１１３】
本発明の長所：
−海産物油リン脂質とクルクミンを複合体化することによって、クルクミンが複合体により保護されるのでバイオアベイラビリティが改善される。
−リン脂質と複合体化することによって、油と組み合わせてクルクミンが単純に添加される（複合体化しない）場合に見られる分離を防ぐ。
−海産物油からリン脂質を得ることによって、複合体中のクルクミンと脂質との好ましいモル比を達成できるようになる。
−海産物油由来リン脂質を用いることによって、クルクミンとのオメガ３脂肪酸の間で見られる相乗的効果が有益に維持される。オメガ３脂肪酸は海産物油リン脂質中に存在する。
−治療組成物中で使用される海産物油が広く一般から受容され、信頼性が良好である。
−海産物油由来リン脂質の一部の代わりにレシチンを添加することによって、有益に、海産物油由来リン脂質の脂肪酸に起因する、対応する粘性上昇なく、クルクミンと脂肪酸とのモル比を特定の好ましい比（例えば、２．５：１  ＤＨＡ対クルクミン）に上昇させることができるようになる。これは、複合体中のクルクミン濃度を約２％ｗ／ｗより上に上昇させるために特に有益であり得、カプセルに処方することが依然として可能である。
−海産物油および／またはレシチンの何れかの一部の代わりにさらなる希釈剤を添加することは、処方者が８％を上回りレシチン濃度をさらに上昇させ、またカプセル化法に対して使用可能な粘性を依然として維持することに役立ち得る。
−本発明はまた、約２０％クルクミンまで濃度を向上させることによって、安定な複合体の提供およびクルクミンと脂肪酸とのより高いモル比ももたらす。しかし、このような実施形態において、最も好ましい選択肢は、組成物の粘性がより高いため、錠剤化することである。
【０１１４】
本発明のさらなる態様は、単に例として与える次の記載から、および添付の図面を参照して、明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】図１は、本発明による組成物を調製するある好ましい方法の流れ図である。
【図２】図２は、本発明による組成物を調製するある好ましい方法のさらなるより詳細な流れ図である。
【発明を実施するための形態】
【０１１６】
図１は、本発明による特に好ましい組成物を作製する全体的な段階を説明する流れ図である。図１のボックス１は、様々な成分、例えばクルクミン、エタノール、海産物油およびレシチンなどを合わせる段階を示す。当然のことながら、本発明の範囲から逸脱することなく何らかの順序で組み合わせることを行い得る。
【０１１７】
図１のボックス２は、様々な成分を均一に分布させるためにさらなる溶液が混合される混合段階を示す。当然のことながら、この段階は、ボックス１の合わせる段階および／または段階３の還流／蒸発と組み合わせられ得る。均一な混合を確実にするために還流／蒸発段階３の前に一定時間にわたり混合段階２を行い得る。
【０１１８】
図１のボックス３は還流／蒸発段階を示す。次のものを含む多くの方法で還流／蒸発を達成し得る：
・溶媒が蒸発して除去されるまで、混合したさらなる溶液を周囲圧力で沸騰させること；
・混合したさらなる溶液を、高温、周囲圧力を上回る圧力で沸騰させること；
・混合したさらなる溶液を、低温、周囲圧力を下回る圧力で沸騰させること。
【０１１９】
当然のことながら、さらなる溶液の沸騰は、さらなる流体中に含有される１以上の流体の沸騰を含み得る。例えば、このような温度／圧力を溶媒のみが沸騰除去されるように調節し得るので、溶媒の沸点は、さらなる流体中の他の流体よりも実質的に低いものであり得る。
【０１２０】
蒸発速度を調節するために、手動でまたは調節系によるかの何れかで蒸発段階を調節し得る。
【０１２１】
図２は、上記方法のより詳細な流れ図を示す。
【０１２２】
一般的には、使用しようとするクルクミンは最初に粉末である。粉末を溶媒中で溶解し得、得られた溶液を少なくとも１以上のさらなる化合物に添加し得る。１以上のさらなる化合物が粉末化化合物を含む場合、他の化合物と合わせる前に溶媒中でこれらも溶解させ得る。粘性のある流体をより滑らかにするため、溶媒を特に粘性のある流体とも合わせ得る。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、少なくとも第一の構成要素と少なくとも１つのさらなる構成要素のうち少なくとも１つとの間の結合度を確認するために、還流／蒸発段階中に流体の試料を採取し、試料を遠心することを含む、さらなる段階が含まれ得る。当然のことながら、結合が起こらなかった場合、遠心の結果、形成する第一の構成要素の沈殿が起こる。強い結合が起こった場合は、遠心中に沈殿はほぼ形成されない。
【０１２４】
（実施例）
次の実施例を参照することによって本発明をさらに記載する。しかしこれらの実施例は、限定するものと解釈してはならない。
【０１２５】
（実施例１）製造方法
この実施例において、添加される各成分の量は、実施例２で説明されるように「重量による」量に基づく。
段階１：真空タンクにおいて、４０から５０部のエタノールをある量のクルクミン、ケルセチンおよびピペリンと混合する。
段階２：混合は、全成分が溶解されるまで、還流下で、およそ４０から５０℃の温度で行う。
段階３：ある量のイガイ油およびレシチンを最初に一緒に予混合し、次いで段階２により生成される溶液に添加する。
段階４：還流３０分後、スロー真空（ｓｌｏｗ  ｖａｃｕｕｍ）下で、４０から５０℃前後で１から２時間、次いで全エタノールが沸騰除去され、蒸発器中で回収されるまで完全真空下で、段階３からの混合物をさらに混合するが、クルクミンは複合体としてリン脂質に結合したままとなる。
【０１２６】
（実施例２）−本発明の代表的な組成
【表１】
2015518862.tif 000004
【０１２７】
（実施例３）
安定性におけるクルクミン−リン脂質複合体を形成することの有効性を説明するために、次の実験を行った。
【０１２８】
ブレンダーを用いて４重量％クルクミン粉末を５００ｍＬのイガイ油と直接混合することによって、対照組成物を作製した。ブレンダー中で混合物を２０分間激しく混合した。
【０１２９】
次に、実施例１（製造方法）および実施例２（実施例組成物）で概説する方法に従い、および本発明に従い、比較実験組成物（４％クルクミン）を作製した。
【０１３０】
対照および実験組成物の両方をＩＥＣ  ＤＰＲ６０００遠心機に入れ、５，４００Ｇに１時間、供した。対照混合物のそれぞれについて、得られた沈殿物の重量を測定した。
【０１３１】
この結果から、対照組成物が可溶性クルクミンとして僅か０．３重量％を有したことが示された。これは、０．２から０．５％ｗ／ｗの間のクルクミンの可溶化の既知の比と相関する。逆に、実験組成物は沈殿物を全く生じさせず、このことから、４％ｗ／ｗクルクミン全てがイガイ油またはレシチン由来の何れかのリン脂質に結合していたことが示される。
【０１３２】
（実施例４）
発明者らは、海産物油およびレシチンの両方を有する組成物と、海産物油のみを有する組成物を比較した。クルクミンの濃度は両組成物に対して４％ｗ／ｗに維持された。レシチンを有する組成物において複合体の安定性には影響がなかったことが分かった。これは、クルクミン負荷量を４％ｗ／ｗ超に増量した場合でも、レシチン含有組成物に対して、好都合なカプセル化技術が依然として達成され得ることを意味した。
【０１３３】
本発明の態様は単なる例として記載されるものであり、当然のことながら、本発明の範囲から逸脱することなく、それに対して改変および付加がなされ得る。
【図１】
2015518862.tif 000005
【図２】
2015518862.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成27年2月12日(2015.2.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン脂質およびクルクミンを含む複合体であって、前記リン脂質の一部または全てが海産リン脂質であることを特徴とする、複合体。
【請求項２】
前記リン脂質がＤＨＡおよび／またはＥＰＡを含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
前記複合体中の前記リン脂質の少なくとも一部がホスファチジルコリンを含む、請求項１から２の何れか１項に記載の複合体。
【請求項４】
１から１５％ｗ／ｗの間のクルクミンを含む、請求項１から３の何れか１項に記載の複合体。
【請求項５】
およそ２から８％ｗ／ｗのクルクミンを含む、請求項１から４の何れか１項に記載の複合体。
【請求項６】
前記複合体中の前記クルクミンとリン脂質とのモル比が、約１：２から１：２０の範囲である、請求項１から５の何れか１項に記載の複合体。
【請求項７】
前記複合体中の前記クルクミンとリン脂質とのモル比が、約１：１から１：５の範囲である、請求項１から６の何れか１項に記載の複合体。
【請求項８】
前記複合体中のクルクミンとリン脂質との比（ｗ／ｗ）が、１：１００から１：２の間である、請求項１から７の何れか１項に記載の複合体。
【請求項９】
前記複合体中のクルクミンとリン脂質との比（ｗ／ｗ）が、１：２．５から１：２０の間である、請求項１から８の何れか１項に記載の複合体。
【請求項１０】
ピペリンおよび／またはケルセチンも含む、請求項１から９の何れか１項に記載の複合体。
【請求項１１】
請求項１から１０の何れか１項に記載の複合体を含む、組成物。
【請求項１２】
海産物油を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記海産物油が、２０％ｗ／ｗを超えるリン脂質を含有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記海産物油が、およそ４０％ｗ／ｗのリン脂質を含有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
ポリ不飽和脂肪酸ＤＨＡおよび／またはＥＰＡのさらなる供給源を含む、請求項１１から１４の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
アジュバントを含む、請求項１１から１５の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
ケルセチンを含む、請求項１１から１６の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
ピペリンを含む、請求項１１から１７の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
軟質ゲルカプセル中の液体形態で提供される、請求項１１から１８の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
固形投与錠剤形態またはハードゲル中で提供される、請求項１１から１８の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１から１０の何れか１項に記載の複合体を調製する方法であって、
ａ）第一の溶液を生成させるために、溶媒中である量のクルクミンを溶解させ；
ｂ）第二の溶液を生成させるために、ある量の海産リン脂質と前記第一の溶液を混合し；
ｃ）前記複合体を生成させるために、前記第二の溶液を処理し；
ｄ）前記溶媒から前記複合体を分離する、
段階を含む、方法。
【請求項２２】
前記溶媒がプロトン性溶媒である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
溶媒がエタノールである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
段階ａ）が、およそ４０から５０部体積の溶媒を約１部のクルクミンに対して混合することを含む、請求項２１から２３の何れか１項に記載の方法。
【請求項２５】
段階ａ）が、ケルセチンおよび／またはピペリンを添加することを含む、請求項２１から２４の何れか１項に記載の方法。
【請求項２６】
段階ａ）、ｂ）および／またはｃ）が、前記溶媒を還流させることを含む、請求項２２から２５の何れか１項に記載の方法。
【請求項２７】
段階ｃ）が、４０から５０℃前後で１から２時間、スロー真空（ｓｌｏｗ  ｖａｃｕｕｍ）を適用し、次いで溶媒全てが前記溶液から沸騰除去されるまで完全真空を適用することを含む、請求項２１から２６の何れか１項に記載の方法。
【請求項２８】
発明を実施するための形態セクションの実施例２を参照して本明細書中で記載され、説明されるとおりの複合体または複合体を含む組成物。
【請求項２９】
発明を実施するための形態セクションの実施例２を参照して本明細書中で記載され、説明されるとおりの複合体および／または複合体を含む組成物を製造する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クルクミンのバイオアベイラビリティにおける、およびこれに関する改善、およびクルクミンのバイオアベイラビリティを改善する複合体および組成物を作製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
クルクミンは、スパイスターメリック中に存在する化合物である。クルクミンは、多くの研究において、抗酸化、抗炎症性、抗増殖性および抗血管形成活性などの薬理学的効果を有することが示されている。そのようなものとして、クルクミンは、癌、心疾患  糖尿病、クローン病および様々な神経性疾患などの疾患に対処するための標的に相当する。このため、過去２０から３０年間にわたりクルクミンに対する意義深い研究があった。
【０００３】
クルクミンの重要な長所は、カレーなどの食物中のスパイスとして数世紀にわたり使用されている天然化合物であるがゆえに幅広く受け入れられていることである。さらなる長所は、高用量であっても副作用がほぼないことである。また、これは、調達費用が比較的低く、室温で良好に保存される。
【０００４】
これらの長所にもかかわらず、まだ取り組むべき最重要課題は、動物においてバイオアベイラビリティが低いというクルクミンの周知の問題である。これは、溶解度に乏しく、ゆえに吸収性に乏しく、身体から排出されおよび／または急速に代謝されることを含む要因の組み合わせのためであると考えられる。
【０００５】
過去には、クルクミンの溶解性向上を促進するＤＭＳＯまたはＴｗｅｅｎ  ８０などの担体を添加することによって、この低溶解性が少なくともインビトロ実験において克服された。しかし、主にＤＭＳＯなどの担体は、味を不快なものとし、製造費用および工程を付加し、クルクミンが（消費者が好む）天然産物であるという長所を損なうので、治療薬におけるこれらの担体の添加は適切な道理ではない。
【０００６】
クルクミンと油を組み合わせることによって、クルクミンの全身系への取り込みが改善され得る。しかし、クルクミンは油と結合しないので、混合後に縣濁液から大部分が脱落する。
【０００７】
クルクミンおよび油の混合物を激しく撹拌することにより、ごく一部が可溶化されるため、僅かに改善した生成物が提供され得る。クルクミンおよび油の混合物をいかに激しく混合するかにかかわらず、生成物を遠心することにより、クルクミンの殆どが油から効率的に沈殿する。
【０００８】
吸収／安定性が乏しいという問題を克服し、クルクミンの有益な効果を最大化しようと、過去数十年にわたり多くのアプローチが研究されてきた。これらには、リポソーム性またはリン脂質構造、ナノ粒子および構造類似体の調製が含まれる。Ａｎａｎｄら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２００７，４（６），８０７−８１８は、これらの様々なアプローチの優れた概説を提供する。
【０００９】
例えば、ＷＯ２００７／１０１５５１は、植物または合成起源のリン脂質を用いたクルクミンとのリン脂質複合体を記載する。クルクミンと脂質とのモル比が１：２または１：４であった場合、得られる複合体中でクルクミンが約１６．９％となった。しかし、得られる生成物は、粘性のあるろう状物質であった。このため、ソフトゲル中でカプセル化するのは実質的に不可能となり、ゆえに、この生成物は殆ど確実に錠剤形態で提供される。錠剤は、製造の観点から複合体の送達に適切な形態であるものの、カプセル化は、特に油性の処方物に対してより魅力的な選択肢であり得る。ソフトゲル中でのカプセル化が容易に達成可能であるのは、得られる複合体溶液の粘性が高すぎない場合のみである。代替的な方法は、ハードゲルカプセルを使用し、それにより僅かに高温でゼラチンカプセルにペーストを注入することである。
【００１０】
多くの研究グループが探索している異なる手段は、クルクミンをアジュバントと合わせることである。ピペリン、ケルセチンおよび／またはオメガ−３ポリ不飽和脂肪酸、例えばドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）および／またはエイスコサペンタエン酸（ｅｉｓｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（ＥＰＡ）などのような化合物は、最近、クルクミンと組み合わせて使用される場合、相乗的な治療効果を生じさせることが示されたが、正確な作用機構はまだ不明である。これらのアプローチはＡｎａｎｄら、２００７でも概説されている。
【００１１】
クルクミンのこの相乗作用は、ＤＨＡおよびＥＰＡを含むオメガ３ポリ不飽和脂肪酸の比較的小さいサブセット（約８）に限定されるとも考えられる。例えば、Ａｌｔｅｎｂｕｒｇら、ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１１，１１；１４９は、多数の乳癌細胞株の阻害におけるＤＨＡおよびクルクミンの相乗作用を記載する。
【００１２】
さらなる研究において、Ｓｗａｍｙら、Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００８，６０：Ｓ１，８１−８９は、約２．５：１（ＤＨＡ対クルクミン）の比で、膵臓癌細胞の一形態であるＢｘＰＣ−３細胞におけるアポトーシスに対して最大効果が示されたことを報告した。
【００１３】
したがって、クルクミンとアジュバント、例えばＤＨＡなどとの最適比に対して処方者に指針を与える理論的な情報があるものの、（所望される的確な治療効果に依存して異なり得る）所望の比を保持し、同時にクルクミンの不安定性、不溶性および乏吸収性、ならびに好ましい粘度の要件など、組成物の他の要因の周辺の問題にも対応しようとする組成物を処方することは困難であり得ることが多い。
【００１４】
したがって、ある一定の長所にもかかわらず、クルクミンのバイオアベイラビリティおよび治療効果、クルクミンの負荷量向上能、得られる組成物の安定性ならびに好都合な剤形で薬剤を製造する簡便性／費用について改善することが依然として非常に必要とされている。
【００１５】
本発明の目的は、前述の問題の１以上に対処すること、または少なくとも公衆に有用な選択肢を提供することである。
【００１６】
本明細書中で引用するあらゆる特許または特許出願を含め、参考文献は全て、参照により本明細書によって組み込まれる。何らかの参考文献が先行技術を構成することを受け入れるものではない。参考文献の論考はそれらの著者が主張することを述べ、出願者は、引用する書類の正確性および適切性に疑義を唱える権利を保有する。多くの先行技術刊行物が本明細書中に対して参照されるものの、この参考文献をもって、これらの書類の何れかが、ニュージーランドにおける、または何らかの他の国における当技術分野での共通の一般的知識の一部を形成することにはならないことが明らかに理解されよう。
【００１７】
本明細書を通じて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語またはその変形物、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などは、述べられる要素、整数もしくは段階または要素整数もしくは段階の群を含むことを意味するものであり、あらゆる他の要素、整数もしくは段階または要素、整数もしくは段階の群の排除を意味するものではないことを理解されたい。
【００１８】
本発明のさらなる態様および長所は、単なる例として与えられる次の記載から明らかになろう。
【発明の概要】
【００１９】
本発明の第一の態様によると、リン脂質およびクルクミンを含む複合体であって、リン脂質の一部または全てが海産リン脂質であることを特徴とする複合体が提供される。
【００２０】
本発明のさらなる態様によると、リン脂質およびクルクミンとの複合体を含む組成物であって、複合体中のリン脂質の一部または全てが海産リン脂質であることを特徴とする組成物が提供される。
【００２１】
本発明のさらなる態様によると、実質的に本明細書中の上記のような複合体または組成物を調製する方法であって、
ａ）溶媒中である量のクルクミンを溶解させることによって第一の溶液を生成させ；
ｂ）適切な量の海産リン脂質を第一の溶液にゆっくりと添加することによってさらなる溶液を生成させ；
ｃ）複合体を生成させるために、そのさらなる溶液を処理し；
ｄ）蒸留により溶媒から複合体を分離する、
段階を含む、方法を提供する。
【００２２】
本発明のさらなる態様によると、実質的に本明細書中の上記のような組成物を用いた処置の方法が提供され、その組成物は、次の状態のうち１つに対して、処置もしくは予防を行うために、または少なくとも補完処置または予防を提供するために使用される：
・癌、
・心疾患、
・糖尿病、
・クローン病および
・様々な神経性疾患。
【００２３】
本発明は、驚くべきことに、および有利に、リン脂質含量が高く、ＤＨＡおよびＥＰＡなどのポリ不飽和脂肪酸に天然に富む海産生物の巧妙な使用の恩恵を受ける。簡潔には、本発明は、
−海産リン脂質を用いて安定な複合体の形成を可能にし、安定な複合体を形成させることによって成分の分離を阻止し（したがって、本発明はクルクミンの効果的な吸収の改善を促す。）、
−高レベルのリン脂質および、標準的に高レベルのポリ不飽和脂肪酸、例えばＤＨＡおよびＥＰＡなどを提供する（海産リン脂質の尾部においてのように本質的に存在する。）。これは、脂肪酸レベルを向上させ、したがってクルクミンと脂肪酸との所望のモル比の達成を促し、同様にこれは、これらの脂肪酸とクルクミンとの間で見られる相乗的効果を提供するために有益である。
【００２４】
この明細書を通じて、海産リン脂質という用語は、魚類および甲殻類などの海産生物由来の何らかのリン脂質を意味すると解釈すべきであり、このリン脂質（単数または複数）は、ポリ不飽和脂肪酸の少なくとも１つのタイプを含有し、最も好ましくはＤＨＡおよび／またはＥＰＡの何れかである。
【００２５】
このような海産リン脂質のいくつかの具体例は、海産物油由来であり、イガイ油、オキアミ油、サーモン油、イカ油などが挙げられる。海産物油の別の例は、魚卵、繰り返しになるがおそらく魚類または甲殻類由来の油であり得る。
【００２６】
ＥＰ１８７１３９９などの他の書類でも強調されるように、これらのポリ不飽和脂肪酸にも富む海産リン脂質（一般には海産物油由来）としては、藻類、植物性プランクトンおよび他の植物性の生物が挙げられる。これらの海産リン脂質源は本発明により明らかに包含される。
【００２７】
上記で例示されたこれらなどの海産物油は、有益に、比較的高いリン脂質含量を有する。したがって、これらは、有益に、下記でさらに論じるように、クルクミンとリン脂質および脂肪酸との好ましいモル比の達成を促すために本発明に対して使用され得る。上記で例示されるものなどの海産物油を用いることによって、本複合体はまた、有益に、海産物油由来の脂質中に存在するクルクミンとともにＤＨＡまたはＥＰＡなどのオメガ−３脂肪酸によってもたらされる相乗的治療効果も提供する。
【００２８】
当然のことながら、最初に（例えばアセトン沈殿により）海産物油からリン脂質を抽出し、次いで続いてクルクミンに結合させて複合体を形成させることが可能である。抽出過程中、リン脂質の上記のアセトン沈殿後、ろう状の物質が生じ得、次にこれを希釈剤で薄め得、その後クルクミンと複合体化または結合させる。
【００２９】
本明細書を通じて、複合体という用語は、化学的相互作用または化学的力のいくつかの形態を通じて、リン脂質の少なくとも１つの部分および少なくとも１つのクルクミン化合物を一緒に結合することであると一般的に理解されるべきである。理論により縛られることを望むものではないが、発明者らは、複合体を形成させるために、リン脂質のコリン頭部基へのクルクミンの結合を通じて結合が生じることを予測する。
【００３０】
あるいは、リン脂質は、数体積の冷エタノールをオキアミ油などの適切な油に添加することにより得られ得るが、この場合、ホスファチジルコリン（下記でさらに論じるようなリン脂質の好ましいタイプ）は上清中で可溶性になり、このようにして取り出され、得られ得る。
【００３１】
好ましくは、本組成物は海産物油を含む。これは、海産物油の成分の多くがクルクミンの治療有効性または安定性を改善し得る可能性があるので、好ましい選択肢である。例えば、イガイ油は、約９１種類の様々なタイプの脂肪酸を有する。
【００３２】
脂肪酸ＤＨＡおよび／またはＥＰＡとクルクミンとの間のこの相乗作用が非常に長い間知られているにもかかわらず、産業界では、クルクミンを海産物由来のリン脂質と実際に結合させて複合体を形成させるという本発明に至った者はいなかった。
【００３３】
今まで、研究者らが明らかにしたのはＤＨＡ／オメガ３をクルクミンと組み合わせることのみであり、しかし、このような成分に富む海産リン脂質とクルクミンを結合させることによって実際に複合体を形成させ、それによって単一成分で２つの有益な効果を達成すること（すなわち、脂肪酸とクルクミンとの間の相乗作用から利益を得ることおよびまた複合体を形成させるために海産リン脂質を使用すること）は考えていなかった。
【００３４】
一方で、研究者らは、最初に、クルクミンを関連リン脂質頭部基に結合させるためにダイズレシチン油などの植物油を使用することを検討した。ダイズリン脂質は、ヒトにおいて非常によく吸収されることが知られており、高投与量でもインビボで動物において慢性効果が全く示されないので、このクルクミン複合体化の要となるものであったと考えられる。また、それは、ダイズ油に存在するリノール酸のような豊富な量のポリ不飽和脂肪酸によって、心疾患のような疾患のリスクを低下させるための魅力的な選択肢となった。けれども、大きな欠点は、植物油中の（リノール酸酸のような）短鎖の脂肪酸およびクルクミンとの相乗作用が報告されていないことである。
【００３５】
本明細書を通じて、リン脂質という用語は、疎水性の尾部および親水性の頭部を含む何らかのタイプの脂質を意味すると解釈すべきである。本発明の文脈において、リン脂質は、ミセルを形成させるために使用され、それによってコリン基（ホスファチジルコリンを使用した場合）頭部がクルクミンと結合し、一方でホスファチジル部分は結合部を覆い隠す。
【００３６】
好ましくは、海産物油は、２０％ｗ／ｗを超えるリン脂質を含有する。サーモン油、イガイ油、オキアミ油およびイカ油などの海産物油は全て、リン脂質含量が２０％を上回ることが知られている。リン脂質レベルが高いある特に好ましい海産物油は、最大で約６５％ｗ／ｗリン脂質レベルを有するイガイ油である。
【００３７】
最も好ましくは、海産物油は、およそ４０％ｗ／ｗのリン脂質を含有する。
【００３８】
より好ましくは、リン脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトールリン酸（ＰＩＰ）、ホスファチジルイノシトール２リン酸（ＰＩＰ２）およびホスファチジルイノシトール３リン酸（ＰＩＰ３）からなる群から選択される。
【００３９】
最も好ましくは、本複合体中のリン脂質の少なくとも一部はホスファチジルコリン（ＰＣ）である。
【００４０】
これは、ＰＣが、ヒトの身体における膨大な細胞全ての外膜の少なくとも５０％を占めるからである。海産リン脂質としてのＰＣの選択は、ヒト身体の細胞におけるそれらの広がりを考慮すると、クルクミンおよび脂肪酸の、それらがその治療的役割および相乗作用を遂行し得る細胞への吸収改善を促し得る可能性がある。
【００４１】
しかし、潜在的にリン脂質の何れか１つまたは組み合わせを本発明とともに使用し得る。
【００４２】
繰り返しになるが、ＰＣおよびＰＩの両方を有する海産物油の良好な例としては、イガイ油、オキアミ油およびサーモン油が挙げられる。
【００４３】
あるいは、リン脂質は、幅広いクラスのホスホスフィンゴ脂質から選択される。
【００４４】
この代替的な実施形態において、リン脂質は、セラミドホスホリルコリンまたはセラミドホスホリルエタノールアミン（それぞれ、スフィンゴミエリン、ＳＰＨまたはＣｅｒ−ＰＥ）およびセラミドリン脂質からなる群から選択される。
【００４５】
本明細書を通じて、クルクミンという用語は、何らかのクルクミノイドを意味するものと解釈すべきである。クルクミノイドは、単純に、下記の構造で示されるようなクルクミンであり得るか、または化合物の安定性または他の薬物動態学的特性を改善する様々な化学基を有するクルクミンの誘導体であり得る。
【化１】
2015518862.tif 000007
【００４６】
クルクミンは、ターメリックなどの天然源から単離され得るか、または一連の技術を通じて合成により調製され得る。
【００４７】
最も好ましくは、デメトキシクルクミンが使用される。Ｃｕｏｍｏら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２０１１，７４  ６６４−６６９において、リン脂質処方物が、クルクミンの場合よりもデメトキシル化クルクミノイドの吸収を顕著に向上させたことが示され、したがって、本発明での使用に特に適用可能である。一般に使用されるさらなる代替的クルクミンは、ビスデメトキシクルクミンである。
【００４８】
しかし、現在公知であるにせよまたは将来開発されるにせよ、クルクミンのあらゆる他の形態を本発明の範囲から逸脱することなく本発明の一部として使用し得る。
【００４９】
好ましくは、本複合体は１％ｗ／ｗを上回るクルクミンを含む。
【００５０】
好ましくは、本複合体は、１から４０％ｗ／ｗの間のクルクミンを含む。
【００５１】
既に論じたように、より高い濃度および負荷量のクルクミンは、身体へのクルクミンの吸収を向上させるという最終目的を改善するための１つのストラテジーである。
【００５２】
より好ましくは、本複合体は、およそ２から８％ｗ／ｗの間のクルクミンを含む。本発明の複合体内で８％超にクルクミンレベルを向上させることが確かに可能である。これは、本明細書中でさらに論じる。
【００５３】
本複合体中のモル比の好ましい例
好ましくは、本複合体中のクルクミンとリン脂質とのモル比は、約１：１から１：２０の範囲である。
【００５４】
好ましくは、本複合体中のクルクミンとリン脂質とのモル比は、約１：１から１：５の範囲である。
【００５５】
ＡｌｔｅｎｂｕｒｇおよびＳｗａｍｙを参照して既に論じたように、実験が行われた癌細胞株に対して最も有効な相乗作用をもたらす最も好ましいモル比が約２．５対１（ＤＨＡ対クルクミン）であったことを示す報告がある。しかし、２０：１を上回るより高い比（ＤＨＡおよび／またはＥＰＡなどの他の脂肪酸対クルクミン）も相乗作用を示すことが明らかであるが、それほどではない。特定の治療用途（例えば標的としようとする癌細胞のタイプ）に依存して、相乗作用を増強するモル比が変動し得る可能性は十分にある。
【００５６】
このような好ましい比は、発明者により行われた試行例で効果的に作用することが分かっており、クルクミンとリン脂質との適切な複合体化をもたらすことがよく示されているので有益である。例えば、ＷＯ２００７／１０１５５１は、クルクミンとリン脂質との比が１：４という高いものである場合、安定な複合体において最大１６％ｗ／ｗのクルクミンが達成され得ることを実施例４で示すことを提供する。明らかに、リン脂質の量をこの比で増加させる場合、安定な複合体を達成し得る。
【００５７】
クルクミンとリン脂質との１：１０の比がいかに特に好ましいかの例を下記で提供する。
【００５８】
イガイ油は、およそ６５％ｗ／ｗリン脂質を有し、約２４％ｗ／ｗＥＰＡおよび１３％ＤＨＡおよび約４から５％の６種類の他のオメガ３酸も含有し、全部で約４１から４２％のオメガ３ポリ不飽和脂肪酸であり、その大部分がリン脂質に結合する。したがって、４ｋｇのクルクミンを１００ｋｇ（およそ１００Ｌ）のイガイ油に添加することであった場合、得られる複合体においておよそ１：１６（クルクミン対リン脂質）の比が達成され得、その複合体中で約４０ｇ／Ｌ（または４％ｗ／ｗ）クルクミンを提供し得る。
【００５９】
研究から、僅か約１０μＭのクルクミンとリン脂質とのモル比で（インビトロでの試行により示唆される）身体におけるクルクミンの治療効果があり得ることが示される。
【００６０】
好ましくは、本複合体は、ある量のレシチンを含む。
【００６１】
これは、クルクミンとリン脂質との好ましいモル比（これは変動し得るが）の達成／およびまたは維持を促し、また海産リン脂質由来の脂肪酸により起こり得る粘性上昇に伴う問題の回避も促すことであり得る。これは、本発明の複合体を含有する粘性が低い油性液体のカプセル化に対して特に好ましい構想である。
【００６２】
本明細書を通じて、レシチンという用語は、リン酸、コリン、脂肪酸、グリセロール、糖脂質および／またはトリグリセリドなどの他の成分と一緒にリン脂質を含む動物または植物組織由来の物質の何らかの混合物を意味するものと解釈すべきである。レシチンという用語は、同様に、本明細書を通じて、それが本発明の海産リン脂質とは異なる物質であり、リン脂質源を提供してもよいしまたはしなくてもよいが、ＤＨＡおよびＥＰＡなどの、すなわち２０以上の炭素鎖の、長鎖オメガ−３脂肪酸を欠くということが理解されるべきである。
【００６３】
ある１つの想定は、レシチンからおよび海産物油リン脂質からのリン脂質により維持される複合体および組成物中でクルクミンの量を増量させ得るということである。結果として、複合体中でポリ不飽和脂肪酸量が増量されないので、複合体内でクルクミンと脂肪酸（海産物油リン脂質由来）とのモル比を向上させることができるようになる。これにより、必要に応じて処方者がクルクミンと脂肪酸とのモル比を向上させることができるようになるだけでなく、脂肪酸に起因する粘度の好ましくない上昇も回避される。モル比は、常に、リン脂質に対するものでなければならず、脂肪酸は、単にホスファチジルコリンの伸長部（尾部）として存在する。
【００６４】
好ましくは、本組成物中のレシチンと海産物油との比は１：３から３：１の間である。最も好ましくは、本組成物中のレシチンと海産物油との比はおよそ２：１である。
【００６５】
好ましい実施形態において、レシチンは植物レシチン油である。例えば、植物レシチン油は、発明者らが、本発明に特に適用できると考える、ダイズレシチン油またはヒマワリレシチン油であり得る。これは、ヒマワリレシチン油およびダイズレシチン油の両方が、脳機能に対する健康補助食品としてコリンを提供するからである。しかし、他のレシチン源も本発明の範囲内である。
【００６６】
発明者らは、粘性が不利におよび不必要に上昇することを回避するために、レシチンが、粉末形態とは別物である、液体形態で最良に提供されることを予見する。
【００６７】
好ましくは、本組成物は希釈剤を含む。
【００６８】
発明者らは、ＷＯ２００７／１０１５５１で明らかにされるように、海産物油およびレシチンにより提供されるリン脂質の量が、クルクミン濃度が最大５％ｗ／ｗ、潜在的にはより高いものである、安定な複合体を維持するのに十分であることを予見する。また、約５％ｗ／ｗを上回る、これらのより高いクルクミン濃度では、海産物油リン脂質の一部の代わりに本組成物にレシチンが添加されても、本複合体の粘性がソフトゲル中でのカプセル化にとって実際的であるものを超えて上昇し得る。
【００６９】
好ましくは、本組成物にさらなる成分が組み込まれ得る。これらの成分は、複合体に必ずしも結合する必要はないが、安定性の向上を促し得るか、または例えば本組成物の治療効果を向上させるためにアジュバントとして添加され得る。
【００７０】
好ましくは、本組成物は、リン脂質と結合し、これと複合体を形成し得るケルセチンを含む。
【００７１】
好ましくは、本組成物はピペリンを含む。
【００７２】
ケルセチンおよびピペリンは両者とも、クルクミンに対する有益なアジュバントであること、例えば治療効果改善のためにクルクミンの吸収または効力を向上させることが知られている。
【００７３】
好ましくは、アジュバントの一部または全てがリン脂質とともに同時に複合体化される。下記で論じるように、ケルセチンおよびピペリンは、好ましくは、溶媒中での溶解前に、および海産物油由来のリン脂質の添加前に、クルクミンと一緒に添加される。このようにして、ケルセチンは、クルクミンと同様にしてリン脂質と複合体化できる。
【００７４】
製造方法
本発明のさらなる態様によると、実質的に本明細書中の上記のような組成物を調製する方法が提供され、本方法は、
ａ）第一の溶液を生成させるために、溶媒（好ましくは温かいもの）中である量のクルクミンを溶解させ、その溶液を穏やかな還流状態になるまで真空下、４０から５０℃に置き；
ｂ）第二の溶液を生成させるために、ある量の海産リン脂質を上記溶液にゆっくりと混合し；
ｃ）複合体を生成させるために、第二の溶液を処理し；
ｄ）好ましくは真空蒸留によって、溶媒から複合体を分離する、
段階を含む。
【００７５】
本発明で使用される溶媒は、使用されるクルクミンのタイプまたは量、および組成物または複合体に対して意図されるリン脂質および／または他の成分のタイプまたは量に依存して変動し得る。したがって、溶媒の正確な組成は、限定するものとみなすべきものではない。
【００７６】
第一の構成成分が天然の植物または動物に基づく抽出物である好ましい実施形態は、次のリストからの１以上の溶媒を利用し得るが、しかし、当然のこととして、このリストは網羅的なものではなく、したがって、限定するものとみなすべきものではない。
・ヘキサン
・ベンゼン
・トルエン
・ジエチルエーテル
・クロロホルム
・酢酸
・ブタノール
・イソプロパノール
・プロパノール
・エタノール
・メタノール
・ギ酸
・ジメチルスルホキシド，
・アセトン。
【００７７】
好ましくは、溶媒はプロトン性溶媒である。この明細書を通じて、プロトン性溶媒という用語は、酸素に結合している（すなわちヒドロキシル基）かまたは窒素に結合している（すなわちアミン基）水素原子を有する何らかの溶媒を意味するものと解釈すべきである。上記リストから、プロトン性溶媒としては、酢酸、ブタノール、イソプロパノール、エタノール、メタノールおよびギ酸が挙げられる。
【００７８】
最も好ましくは、溶媒はエタノールである。
【００７９】
好ましくは、段階ａ）は、およそ４０から５０部体積の溶媒を約１部のクルクミンに混合することを含む。
【００８０】
この比によって、クルクミンが適切に溶解し、混合過程中の沈殿を阻止することを確実にすることを促す。この過程は、より高温で溶解段階を行うことによっても促進され得る。
【００８１】
エタノールなどの溶媒は、食品グレードの品質のエタノールがこれなどの処理技術のために市販されているので有利であり得る。
【００８２】
多くの方法を通じて、複合体を生成させるために、第二の溶液を処理する段階を達成し得る。リン脂質および薬物または化合物、例えばＷＯ２００７／１０１５５１で実証されているものなどを用いて、ミセル複合体を生成させるための多くの公知の技術がある。また複合体の生成なしでは、クルクミンおよびリン脂質は不安定であり、急速に分離する。これは、保存可能期間の安定性に対する問題であるだけでなく、背景技術で述べられるように、これによってクルクミンのバイオアベイラビリティも低下する。吸収を改善するために、複合体を形成することを含む技術によって、身体での吸収改善のためにクルクミンのリン脂質への結合の維持を促す。
【００８３】
好ましくは、段階ｃ）は、蒸発による分離を含む。
【００８４】
好ましくは、段階ｃ）は、溶媒の沸点よりも高いが、第二の溶液の残りの成分の沸点よりも低い温度まで第二の溶液の温度を上昇させるために第二の溶液を加熱することを含む。
【００８５】
好ましくは、段階ｃ）は、圧力容器中で第二の溶液を加熱することを含む。
【００８６】
最も好ましくは、大気圧を下回る気圧で第二の溶液を加熱する。これにより、溶媒および流体の沸点が低下し、より低い温度で効率的に蒸発が起こるようになる。例えば、本方法は、真空下で行われ得る。
【００８７】
いくつかの実施形態において、室温で溶媒の蒸発を促進するために、圧力容器中の圧力を十分に低下させ得る。
【００８８】
いくつかの実施形態において、溶媒および流体の沸点を上昇させるために、圧力容器中の圧力を上昇させ得る。
【００８９】
製造方法の特に好ましい実施形態において、本方法は、
ａ）第一の溶液を生成させるために、エタノール中である量のクルクミンを溶解させ；
ｂ）第二の溶液を生成させるために、ある量の海産リン脂質と第一の溶液を混合し；
ｃ）リン脂質とクルクミンとの間で形成される複合体を得るために、第二の溶液からエタノールを沸騰除去する、
段階を含む。
【００９０】
いくつかの好ましい実施形態において、沸騰させる段階を大気圧以上で行い得、それによって、エタノールの沸点を上回るためにさらなる溶液が加熱される。
【００９１】
好ましい実施形態において、沸騰除去されるエタノールを凝縮し、回収する。
【００９２】
いくつかの好ましい実施形態において、さらなる溶液を含有する容器中の圧力を低下させることによって沸騰させる段階を行い得、圧力低下によってエタノールの有効沸点が低下する。
【００９３】
真空にすることによって蒸発の温度を低下させることは、油が変敗する機会を減少させるので有利である。油は、熱、光および酸素への曝露に感受性がある。真空の使用によって、油の変性に対する熱のおよび酸素の寄与の両方が減少する。
【００９４】
好ましくは、段階ｃ）は、１から２時間にわたり４０から５０℃前後でスロー真空（ｓｌｏｗ  ｖａｃｕｕｍ）を適用し、次いで全エタノールが沸騰除去されるまで完全真空にすることを含む。
【００９５】
いくつかの実施形態において、エタノールを蒸発させて除去するために、圧力低下およびさらなる溶液の加熱の組み合わせを利用し得る。
【００９６】
いくつかの実施形態において、圧力を上昇させ得、それによりエタノールの沸点が上昇し、それによりエタノールを蒸発させるために加熱度を高くすることが必要になる。
【００９７】
当然のことながら、さらなる溶液が含有される圧力容器内の圧力を増減することによって蒸発速度を調節し得る。
【００９８】
好ましい実施形態において、圧力容器中の真空圧力は１から１００ｔｏｒｒの範囲である。
【００９９】
本発明の長所：
−リン脂質にクルクミン海産物を結合させることによって、クルクミンが複合体により保護されるのでバイオアベイラビリティが改善される。
−リン脂質にクルクミンを結合させることによって、油と組み合わせてクルクミンが単純に添加される（複合体化しない）場合に見られる分離を防ぐ。
−海産生物からリン脂質を得ることによって、複合体中のクルクミンとオメガ３との好ましいモル比を達成できるようになる。
−海産物油由来リン脂質を用いることによって、クルクミンとのオメガ３脂肪酸の間で見られる相乗的効果が有益に維持される。オメガ３脂肪酸は海産リン脂質中に標準で常に存在する。
−治療組成物中で使用される海産物油が広く一般から受容され、信頼性が良好である。
−本発明はまた、濃度を向上させることによって、安定な複合体の提供およびクルクミンと脂肪酸とのより高いモル比を達成する能力ももたらす。しかし、このような実施形態において、最も好ましい選択肢は、組成物の粘性がより高いため、錠剤化することまたはハードゲルの使用である。
【０１００】
本発明のさらなる態様は、単に例として与える次の記載から、および添付の図面を参照して、明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【０１０１】
【図１】図１は、本発明による組成物を調製するある好ましい方法の流れ図である。
【発明を実施するための形態】
【０１０２】
図１は、本発明による特に好ましい組成物を作製する全体的な段階を説明する流れ図である。図１のボックス１は、様々な成分、例えばクルクミン、エタノール、海産リン脂質などを合わせる段階を示す。当然のことながら、本発明の範囲から逸脱することなく何らかの順序で合わせることを行い得るが、しかし、好ましい選択肢は、クルクミンおよびエタノールにリン脂質を添加することである。
【０１０３】
図１のボックス２は、様々な成分を均一に分布させるためにさらなる溶液が混合される混合段階を示す。当然のことながら、この段階は、ボックス１の合わせる段階および／または段階３の還流／蒸発と組み合わせられ得る。均一な混合を確実にするために還流／蒸発段階３の前に一定時間にわたり混合段階２を行い得る。
【０１０４】
図１のボックス３は還流／蒸発段階を示す。次のものを含む多くの方法で還流／蒸発を達成し得る：
・溶媒が蒸発して除去されるまで、混合したさらなる溶液を周囲圧力で沸騰させること；
・混合したさらなる溶液を、高温、周囲圧力を上回る圧力で沸騰させること；
・混合したさらなる溶液を、低温、周囲圧力を下回る圧力で沸騰させること。
【０１０５】
このような温度／圧力を溶媒のみが沸騰除去されるように調節し得るので、溶媒の沸点は、さらなる流体中の他の流体よりも実質的に低いものであり得る。
【０１０６】
蒸発速度を調節するために、手動でまたは調節系によるかの何れかで蒸発段階を調節し得る。
【０１０７】
一般的には、使用しようとするクルクミンは最初に粉末である。粉末を溶媒中で溶解し得、得られた溶液を少なくとも１以上のさらなる化合物に添加し得る。１以上のさらなる化合物が粉末化化合物を含む場合、他の化合物と合わせる前に溶媒中でこれらも溶解させ得る。粘性のある流体をより滑らかにするため、溶媒を特に粘性のある流体とも合わせ得る。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、少なくとも第一の構成要素と少なくとも１つのさらなる構成要素のうち少なくとも１つとの間の結合度を確認するために、還流／蒸発段階中に流体の試料を採取し、試料を遠心することを含む、さらなる段階が含まれ得る。当然のことながら、結合が起こらなかった場合、遠心の結果、形成する第一の構成要素の沈殿が起こる。強い結合が起こった場合は、遠心中に沈殿はほぼ形成されない。
【０１０９】
（実施例）
次の実施例を参照することによって本発明をさらに記載する。しかしこれらの実施例は、限定するものと解釈してはならない。
【０１１０】
（実施例１）製造方法
この実施例において、添加される各成分の量は、実施例２で説明されるように「重量による」量に基づく。
段階１：真空タンクにおいて、４０から５０部の温かいエタノールをある量のクルクミン、ケルセチンおよびピペリンと混合する。
段階２：混合は、全成分が懸濁されるまで、還流および真空下で（１００ｍＢａｒ未満）、およそ４０から５０℃の温度で行う。
段階３：ある量のイガイ油を段階２により生成される溶液にゆっくりと添加する。
段階４：還流３０分後、スロー真空（ｓｌｏｗ  ｖａｃｕｕｍ）下で、４０から５０℃前後で１から２時間、次いで全エタノールが沸騰除去され、蒸発器中で回収されるまで完全真空下で、段階３からの混合物をさらに混合するが、クルクミンは複合体としてリン脂質に結合したままとなる。
段階５（任意）：次いで、必要に応じてレシチンを最終組成物に添加し得る。
【０１１１】
（実施例２）−本発明の代表的な組成
【表１】
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【０１１２】
（実施例３）
安定性におけるクルクミン−リン脂質複合体を形成することの有効性を説明するために、次の実験を行った。
【０１１３】
ブレンダーを用いて４重量％クルクミン粉末を５００ｍＬのイガイ油と直接混合することによって、対照組成物を作製した。ブレンダー中で混合物を２０分間激しく混合した。
【０１１４】
次に、実施例１（製造方法）および実施例２（実施例組成物）で概説する方法に従い、および本発明に従い、比較実験組成物（４％クルクミン）を作製した。
【０１１５】
対照および実験組成物の両方をＩＥＣ  ＤＰＲ６０００遠心機に入れ、４５００ｒｐｍ（５５５０Ｇ）に１時間、供した。対照混合物のそれぞれについて、得られた沈殿物の重量を測定した。
【０１１６】
この結果から、対照組成物が可溶性クルクミンとして僅か０．３重量％を有したことが示された。これは、０．２から０．５％ｗ／ｗの間のクルクミンの可溶化の既知の比と相関する。逆に、実験組成物は沈殿物を全く生じさせず、このことから、４％ｗ／ｗクルクミン全てがイガイ油由来のリン脂質に結合していたことが示される。
【０１１７】
（実施例４）
発明者らは、海産物油およびレシチンの両方を有する組成物と、海産物油のみを有する組成物を比較した。クルクミンの濃度は両組成物に対して４％ｗ／ｗに維持された。レシチンを有する組成物において複合体の安定性には影響がなかったことが分かった。これは、クルクミン負荷量を４％ｗ／ｗ超に増量した場合でも、レシチン含有組成物に対して、好都合なカプセル化技術が依然として達成され得ることを意味した。
【０１１８】
本発明の態様は単なる例として記載されるものであり、当然のことながら、本発明の範囲から逸脱することなく、それに対して改変および付加がなされ得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
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【国際調査報告】
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