(57)【要約】本発明は、アレルギー、自己免疫性のおよび炎症性疾病などの炎症性疾患の予防のための家畜の非ヒト哺乳動物の粘膜上への投与用の細菌性スーパー抗原の使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
生まれたばかりの家畜の非ヒト哺乳動物において、粘膜投与により家畜の非ヒト哺乳動物における炎症性疾患の予防または予防的治療において使用するための細菌性スーパー抗原を含む医薬組成物。
【請求項２】
エンテロトキシンを製造する少なくとも１つの黄色ブドウ球菌株を含む、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、Ｂ、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｄ、Ｅ、ＧもしくはＨ、エンテロトキシン様毒素Ｑ、ＭもしくはＫ、または毒素性ショック症候群毒素（ＴＳＳＴ）−１のうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の使用のための請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
スーパー抗原を製造する少なくとも１つの連鎖球菌株を含む、請求項１に記載の使用のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
少なくとも１つの連鎖球菌スーパー抗原を含む、請求項１に記載の使用のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記連鎖球菌スーパー抗原が、連鎖球菌発熱性外毒素Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｈ、もしくはＩ、連鎖球菌マイトジェン外毒素Ｚ１もしくはＺ２などの連鎖球菌マイトジェン外毒素、または連鎖球菌スーパー抗原Ａなどの連鎖球菌発熱性外毒素である、請求項１に記載の使用のための請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記医薬組成物中のスーパー抗原が、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＣ１、Ｃ２またはＣ３である、請求項１に記載の使用のための請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記医薬組成物中のスーパー抗原が黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＣ２である、請求項１に記載の使用のための請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
腸内粘膜上に投与される、請求項１に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
鼻内粘膜または口腔内粘膜上に投与される、請求項１に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
生後３月以内、具体的には生後２週以内、より具体的には生後１０日以内、さらにより具体的には生後７日以内の家畜の非ヒト哺乳動物の新生児に投与される、請求項１、９または１０のいずれか１項に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
複数回投与される、請求項１、９〜１１のいずれか１項に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記炎症性疾患がアレルギーである、請求項１、９〜１２のいずれか１項に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記アレルギーが、食物アレルギーまたはアトピー性皮膚炎、例えばイヌ科の動物のアトピー性皮膚炎である、請求項１３に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記炎症性疾患が炎症性疾病である、請求項１、または９〜１２のいずれか１項に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記炎症性疾患が自己免疫疾患である、請求項１、または９〜１２のいずれか１項に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記家畜がイヌ、ネコ、またはウマである、請求項１、または９〜１６のいずれか１項に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記家畜がイヌまたはネコである、請求項１７に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記家畜がイヌである、請求項１８に記載の使用のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギー、自己免疫疾患および炎症性疾病などの炎症性疾患を予防するための家畜の非ヒト哺乳動物の粘膜上へ投与するための細菌性スーパー抗原の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
いくつかの疾患は、無害な抗原に対する過剰なまたは厄介な免疫反応により特徴づけられている。そのような疾患は、アレルギー、自己免疫疾患および炎症性疾病を包含する。普通、無害な抗原に対する免疫応答は、抑制され、寛容と呼ばれているメカニズムである。特定の抗原に対する寛容性は、粘膜暴露または全身暴露のいずれかにより、外因性または内因性のいずれかで誘導されるかもしれない。寛容性は、ヘルパーＴ細胞が、他のＴ細胞、いわゆる制御性Ｔ細胞によって末梢され、無効化され、または抑制されて生じる。
【０００３】
アレルギー
アレルギーは、１つまたはいくつかの無害な環境抗原、いわゆるアレルゲンに対する増強された免疫反応として定義される。ＩｇＥ媒介アレルギーにおいて、アレルギー性の個体は、食品、花粉、動物の鱗屑などにおけるタンパク質に対してＩｇＥ抗体応答を増加する。ＩｇＥ抗体は、あるアレルゲンの特異性を有するＢ細胞から発生した血漿細胞によって製造される。ＩｇＥを製造する血漿細胞となるため、Ｂ細胞は、同じアレルゲンに対して特異的であるＴ細胞からの補助を受けなければならない。
【０００４】
アレルゲンによるＴ細胞の活性化は、ＩｇＥを製造する血漿細胞内でＢ細胞の成熟を促進するサイトカインの製造をもたらす。サイトカインＩＬ−４およびＩＬ−１３は、とりわけこの態様において重要である。このようなサイトカインを製造し、Ｂ細胞がＩｇＥを製造する血漿細胞となるのを補助するＴ細胞のサブセットは、「Ｔｈ２細胞」（Ｔｈ＝ヘルパーＴ細胞）と呼ばれる。それらは通常、ＩＬ−５（骨髄中の好酸球の成熟およびアレルギー反応が起こる組織に到達する好酸球などの活性化を促進するサイトカイン）を製造する。ＩｇＥ抗体が一度形成されると、例えば血管ならびに気道および消化管周りの組織におけるマスト細胞に接触する。アレルギー性の個体が、例えば、吸入または摂取を介してアレルゲンにさらされるとき、微量のインタクトなタンパク質のアレルゲンは、循環内に吸収され、マスト細胞に達し、ＩｇＥ抗体と結合する。これにより、マスト細胞は、花粉症、喘息、じんましん、アトピー性湿疹、食物アレルギーおよびアレルギーアナフィラキシーなどの疾病を形成する症状をもたらすアレルギー反応のきっかけとなる様々なメディエーターを活性化し、かつ分泌する。
【０００５】
アレルギーは発展途上国と比べて先進工業国においてなおさら一般的であり、自己免疫疾患および炎症性疾病にも当てはまる。これにより、微生物へさらされると、免疫系を発達させる適切な成熟がもたらされるという推論が導かれる。しかしながら、どの微生物種がこれを生じるのに重要であるかということは知られていない。細菌、ウイルスおよび寄生生物の無限の種類があり、いくつかは免疫系への正しい型の刺激を提供する点で重要であり、他は非効果的であり、さらにまたは過敏症もしくは炎症を高じる危険を増加するかもしれない。例えば、消化管のミクロフローラは数百種類からなり、いくつかは好気性であり、他方、ほとんどは偏性嫌気性菌である。コロニーを形成する細菌はグラム陽性とグラム陰性の両方であり得、それぞれは細胞壁構造および免疫系における効果において大きく異なる。
【０００６】
黄色ブドウ球菌エンテロトキシン−スーパー抗原
特定の細菌は、毒素、すなわち非常に有害な可能性のあるタンパク質分子を製造する。毒素を製造するほとんどの細菌は、病原性であり、すなわち疾病の原因となる。しかし、毒素を製造する細菌は、害を生じずに気道および／または消化管の通常の細菌叢にも存在するかもしれない。例えば、生まれたばかりのヒトの幼児は、一般的に、コロニー形成からのいかなる症候を示すことなく生まれた年の間に彼らの腸管において毒素を製造する黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）かコロニー形成する。これらの毒素株は、例えば、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、Ｂ、ＣもしくはＤ、またはＴＳＳＴ−１（毒素性ショック症候群毒素１）を製造し、いわゆるスーパー抗原機能を有する。
【０００７】
スーパー抗原は、二官能性の結合能を有し、それらは、抗原を提示する細胞の主な組織適合性複合体ＩＩ（ＭＨＣ  ＩＩ）分子およびＴ細胞受容体の両方に結合する。ところが、通常の抗原は、その抗原にのみ特異性を有するＴ細胞に結合するだけであり、「スーパー抗原」は、それらの受容体中にある１つの特定のβ鎖を共有する、すなわち、Ｖβ−ファミリーに属する全Ｔ細胞に結合する。これは、それらが、ヒトまたは動物中のＴ細胞の大きな割合（１０−３０％）に結合し、かつ活性化し、ショック、および重度の症候、死さえもたらす大量のサイトカインを生産することを意味する。これは、優れた吸収性を持つ（生理用）タンポンにより原因とされる毒素性ショック症候群の背後にあるメカニズムである。黄色ＴＳＳＴ−１を製造するブドウ球菌はタンポンにコロニー形成するかもしれず、膣内上皮にわたって吸収されるＴＳＳＴ−１を製造し、ショックの原因となる。スーパー抗原により誘発されたショックの発生を予防する方法は、チャレンジの前に、粘膜表面を特定のスーパー抗原に曝すことであり得、そのスーパー抗原に特定の寛容性をもたらす（他の抗原ではない）。この脱感作はＩＬ−１０の製造に帰する（非特許文献１）。
【０００８】
湿疹性皮膚病変は黄色ブドウ球菌によりしばしばコロニー形成されるので、毒素を製造する黄色ブドウ球菌は、湿疹の病変形成において関与している。黄色ブドウ球菌により産生される毒素は、Ｔ細胞を刺激することによって反応を悪化させた後、組織の損傷をもたらすということを示唆している。
【０００９】
しかしながら、Ｔ細胞を刺激するスーパー抗原のこの能力は、特異的な免疫応答を活性化するスーパー抗原を用いることにより、癌、感染およびアレルギー性疾患の治療的処置として提案されており（特許文献１）、そして、特許文献２において、ブドウ球菌エンテロトキシンおよびＴＳＳＴ−１を包含している改変スーパー抗原は癌の種々の形成の治療に用いられている。Ｌａｍｂらの特許文献３において、スーパー抗原は、感染病原体への拒絶反応、自己免疫疾患、アレルギー性疾患および有害な応答を予防し、治療するために、Ｔ細胞を包含している免疫応答を減少するために、非経口的に投与される。提案されているメカニズムは、Ｔ細胞の欠失を介してまたはＴ細胞の誘発された免疫反応不顕性を介する。しかしながら、Ｔ細胞の免疫反応不顕性または欠失となる治療は、減少したＴ細胞機能は感染に対する耐性を弱めるので、子供においてアレルギー用の予防として勧められないだろう。
【００１０】
制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）
アレルギー、自己免疫性および炎症性疾患は、いわゆる制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって予防されていると考えられている。これらの細胞はヘルパーＴ細胞の活性化を抑制し、これにより、多くの種の免疫応答を下方制御する。制御性Ｔ細胞の１つの集団は、ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ（またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＴＬＡ−４＋Ｔ細胞）と命名され、細胞内発現において機能する細胞質における高密度のＣＤ２５を有するＣＤ４陽性Ｔ細胞である。ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇは、ヘルパーＴ細胞の増殖および活性化を下方制御する能力を有する。ヘルパーＴ細胞は、Ｔ細胞媒介細胞毒性、遅延型過敏症および抗体産生などの免疫応答を増強するＴ細胞である。Ｔｒｅｇを確認するために使用することができる別のマーカーは、遺伝子Ｆｏｘｐ３用のメッセンジャーＲＮＡである。
【００１１】
Ｔｒｅｇは、胸腺において製造され、マウスにおいて生後数日で周辺へ抜け出る。ヒトにおいて、Ｔｒｅｇ表現型の細胞は生まれつき存在するが、成体の細胞と比べて、Ｆｏｘｐ３のレベルはより低く発現する。ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇの数および機能は、特異的な抗原と同様ポリクローナル活性化因子を用いたインビトロ刺激により増加し得、マウスへのこれらの抗原の増加した細胞の移入は、感受性のあるマウスにおいて自己免疫疾患の発生を遅らせるということが記載されている。スーパー抗原黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）のＶβ３−およびＶβ８トランスジェニックを導入したマウスへの反復注射は、ＣＤ２５Ｔ細胞（Ｔ細胞表面にＣＤ２５を発現しないＴ細胞およびヘルパーＴ細胞機能を抑制し得ないＴ細胞）における抑制機能の誘発およびＣＤ２５＋Ｔｒｅｇの有望な抑制機能となる。そのような方法において投与されたスーパー抗原は、活性化し、続いて動物においてＴ細胞の数を大きく減少させる（非特許文献２）。血液循環におけるスーパー抗原がショックをもたらすという事実と一緒に、この観測される活性化／減少は、血液に投与されたブドウ球菌エンテロトキシンが治療方法において不適切である主な理由である。
【００１２】
制御性Ｔ細胞、いわゆるＴｒｅｇは、最近注目されている。上で論じたように、Ｔｒｅｇは、アレルギー、自己免疫および炎症性腸疾患を包含している有害な免疫応答の多くの種を下方制御し得る。多くの方法は、これらの増加し、活性化した細胞を個体（それらの細胞は個体由来である）に写し戻す目的で、この細胞種をインビトロで増加し、活性化するように設計されている。
【００１３】
乳児期初期にインビボで、制御性Ｔ細胞を増殖かつ活性化するため、スーパー抗原機能を有する黄色ブドウ球菌毒素への粘膜暴露によるヒト免疫系の活性化は、アレルギーなどの炎症性疾患を防止するために用いられ得るということが以前から知られている。非特許文献３は、新生児における炎症性疾患の予防のための細菌性スーパー抗原の使用を開示する。さらに、Ｌｏｎｎｑｖｉｓｔら（すなわち、非特許文献３）は、ブドウ球菌スーパー抗原への新生児暴露が気道アレルギーのマウスモデルにおいて、経口免疫寛容の誘発を改善する。
【００１４】
ヒトにおけるアレルギーおよび他の炎症性疾患の治療は一般的によく研究されている。しかしながら、家畜哺乳類（犬、猫および馬）も、アレルギーなどの炎症性疾患に苦しむ。一般に、非ヒト哺乳動物における炎症性疾患を緩和するための選択肢は、非ヒト免疫系の理解不足のせいで非常に限られている。
【００１５】
アレルギーの発生の上昇する傾向はヒトだけでなく、飼い犬の間でも明らかである。免疫調節の不足に起因して疾患に苦しんでいる飼い犬の数は増加している。今日のアレルギーは、犬の最も一般的な健康問題の１つであり、動物病院を訪れる原因の最も多い原因の１つである。すべての犬の１０−１５％は、品種に関係なく、アレルギーを発症していると見積もられている。世界有数の動物の保険業者の１つであるＡｇｒｉａ  Ｐｅｔ  Ｉｎｓｕｒａｎｃｅによると、アレルギーに関連する診断は最近１０年にわたって９０％も増加しており、全獣医を訪れるおよそ２０％はアレルギーに関している。
【００１６】
ヒトにおけるアレルギー障害の発生率の増加と関連する多くのファクターは、減少する初期の感染、食事の変化、都市環境などの犬の環境の変化および微生物の循環を減少させる他のファクターとも一致し、したがって、若年期におけるキーとなる刺激性シグナルの免疫系が得られない。
【００１７】
飼い犬における最も一般的なアレルギー障害の２つはイヌ科の動物アトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）および食物アレルギーである。イヌ科の動物アトピー性皮膚炎は、典型的な位置および外観でのかゆみを伴う皮膚疾患、すなわち、顔、耳、手足、四肢および／または胸腹部に影響する。しばしば、イヌは、環境アレルゲンに対するＩｇＥ抗体も有するが、これは、感作としても知られる症状と明確には結び付いていない。外耳炎および皮膚感染は、一般的にＣＡＤを伴うブドウ球菌および酵母に起因し、この疾患における正常に機能しない皮膚バリア防御に起因する。ＣＡＤの兆候の典型的な年齢は、６月から３年と報告されている。
【００１８】
ＣＡＤは、同様の組織病理学、重要な臨床症状としての掻痒および正常に機能しない皮膚バリア機能などのヒトアトピー性皮膚炎を含む多くの特徴部を共有する。ヒトアレルギーと同様に、これらの障害のために扱われる予防的または治療措置は存在しない。イヌ科の動物アレルギーは複雑で、一般的に生涯治療を必要とする生涯の疾患である。
【００１９】
アレルゲン回避および抗アレルギー薬は２つの治療の選択肢である。環境抗原は、めったに回避され得ないので、アレルゲン回避の戦略はあまり有効でない。症候は抗ヒスタミン薬によって緩和され得る；局所炎症は局所ステロイドにより抑制され、より厳しいケースにおいて、Ｔ細胞活性化はシクロスポリンによって損失を受けうる。ＣＡＤを有する多くのイヌにおいて、薬物療法への応答は満足できるものではない。これらの場合において、アレルゲン特異的免疫療法は、減感作としても知られ、用いられうる。これはヒトアレルギー患者用に設計された実務であり、アレルゲンへの暴露後に関連する症候を改善するためアレルギー患者に徐々に増やした量のアレルゲン抽出物を投与する。現時点では、ＣＡＤにかかっているイヌにおいて免疫療法を用いる時および方法についてほとんどガイドラインはない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００１／０４６５０１号明細書
【特許文献２】国際公開第２００３／００２１４３号
【特許文献３】国際公開第１９９１／１２８１８号
【特許文献４】欧州特許第１７８９０８３（Ｂ１）号明細書
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｃｏｌｌｉｎｓら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、第７９巻、第５号、２００２年
【非特許文献２】Ｇｒｕｎｄｓｔｒｏｍら、Ｊｏｕｒａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００３年、第１７０巻、５００８−５０１７頁
【非特許文献３】Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００９年、第３９巻、４４７−４５頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
したがって、家畜の非ヒト哺乳動物、特にイヌ、ネコおよびウマにおける炎症性疾患（アレルギーなど）を予防する改善した方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明は、以下に定義されるように、生まれたばかりの家畜の非ヒト哺乳動物において粘膜投与により家畜の非ヒト哺乳動物における炎症性疾患の予防または予防的治療において使用するための細菌性スーパー抗原を含む医薬組成物を開示する。スーパー抗原の例は、これらに限定されないが、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、Ｂ、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｄ、Ｅ、ＧもしくはＨ、エンテロトキシン様毒素Ｑ、ＭもしくはＫ、およびＴＳＳＴ−１、またはそれらの誘導体を包含する。炎症性疾患は、アレルギー（食物アレルギーまたはアトピー性皮膚炎）、炎症性の疾患または自己免疫疾患であってよい。
【００２４】
本発明の１つの態様において、スーパー抗原を含む医薬組成物は、生後３月以内、好ましくは生後２週間以内、より好ましくは生後１０日以内、さらにより好ましくは生後７日以内の生まれたばかりの非ヒト哺乳動物に投与される。
【００２５】
本発明の１つの態様において、スーパー抗原を含む医薬組成物は、鼻内粘膜または口腔内粘膜上に投与される。さらに、スーパー抗原を含む医薬組成物は、腸内粘膜上に投与されてもよい。
【００２６】
本発明のさらなる態様において、細菌性スーパー抗原を含む医薬組成物の使用は、予防方法、例えば、アレルギー発症、自己免疫性および炎症性疾患非ヒト哺乳動物の発生率を減少させる方法を提供する。
【００２７】
家畜の非ヒト哺乳動物は、イヌ、ネコ、またはウマであってよい。本発明の一態様において、家畜はイヌまたはネコである。
【００２８】
さらに、本発明の有利な特徴部は、従属請求項において定義される。加えて、本発明の有利な特徴部は、本願明細書に開示される実施形態において詳しく述べられている。
【００２９】
本発明は、アレルギーなどの炎症性疾患が、家畜の非ヒト哺乳動物、特に動物（イヌなど）において予防される利点を有する。ヒトにおいて予防効果は知られているが、ヒトと非ヒトで免疫系は異なるので、同じ効果が非ヒト哺乳動物において得られることは驚きである。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本願明細書および添付する特許請求の範囲において、用語「炎症性疾患または炎症反応」は、アレルギー（例えば、食物アレルギー、花粉症、喘息、じんましん、湿疹、およびアナフィラキシー反応）、炎症性疾病（例えば、潰瘍性大腸炎、およびＭｂクローン）、および自己免疫疾患（例えば、１型糖尿病、自己免疫性胃炎、自己免疫性甲状腺炎（ｔｈｙｒｅｏｉｄｉｔｉｓ）、自己免疫溶血性貧血血小板減少、および多発性硬化症）などの疾患を含む内因性抗原または外因性抗原への免疫の過剰反応により引き起こされる疾患および障害を意味する。
【００３１】
上記のとおり、黄色ブドウ球菌およびそのスーパー抗原生成物は、アレルギーの発症において有害であると考えられている。消化管および／または気道における粘膜表面のコロニー形成によるインビボでのブドウ球菌のスーパー抗原への暴露は、アトピーおよび湿疹からの保護を提供し、一般的な意見は、黄色ブドウ球菌によってコロニー形成されることは有害であり、それらの毒素は、それらのスーパー抗原機能により、アレルギー反応へ免疫系を至らせ得るので、色ブドウ球菌によってコロニー形成されることは驚きであるということが示されている。
【００３２】
スーパー抗原機能を伴う黄色ブドウ球菌毒素に、血液循環への注射を介して曝すことは、副作用の許容できないリスクを有する。対照的に、家畜のコロニー形成されていない非ヒト哺乳動物と比較して、毒を製造する黄色ブドウ球菌が腸管においてコロニー形成される家畜の非ヒト哺乳動物において胃腸または他の副作用の発症を増加させ得ない。
【００３３】
本発明は、強力なＴ細胞活性化効果により毒素を生み出す黄色ブドウ球菌が、ヒトだけでなく、家畜の哺乳動物においても、アレルギーおよび、予期しない免疫の活性化を原因とする他の疾患からの保護を後で可能とする制御性Ｔ細胞の増殖および／または成熟を誘発し得ることを開示する。１つにおいて、ヒトの新生児と他において、イヌなどの家畜の哺乳動物の新生児の免疫系との間の差異があることを考慮すると、この知見は予測からはほど遠い。
【００３４】
Ｂ細胞は、新生犬におけるリンパ球の大部分（すなわち約４０％）を構成し、それらはヒト新生児におけるリンパ球の１２％を形成するだけである（参照：Ｃｏｍａｎｓ−Ｂｉｔｔｅｒ  ＷＭら、“Ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ．  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｖａｌｕｅｓ  ｆｏｒ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ”、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．、第１３０巻、３８９−９３頁、１９９７年およびＦａｌｄｙｎａ  Ｍ．ら、“Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｉｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｏｆ  ｄｏｇｓ−ａ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｓｔｕｄｙ”、Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、第８２巻、２３−３７頁、２００１年のそれぞれ）。Ｔ細胞について、それらは、ヒト新生児においてリンパ球の６０−７０％を表すが、それに対してイヌにおいて約５０％のみである（参照：Ｏｔｔａｎｉ  Ｉ．ら、“Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃａｎｉｎｅ  ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．”、Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．、第７０巻、２８５−７頁、２００８年、およびＦａｌｄｙｎａ  Ｍ．ら、“Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ＩＮ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｏｆ  ｄｏｇｓ−ａ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｓｔｕｄｙ．”、Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、第８２巻、２３−３７頁、２００１年のそれぞれ）。
【００３５】
さらに重要なことに、イヌとヒトの間のＴ−リンパ球サブセットにおいて、およびこれらのサブセットが経時的に、年齢とともにどのように変化するかにおいて著しい差異もある。新生児において、ＣＤ４＋リンパ球は、絶対数および相対的割合の両方において、生後１週間の間実質的に増加する（参照：Ｃｏｍａｎｓ−Ｂｉｔｔｅｒ  ＷＭら、“Ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ．  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｖａｌｕｅｓ  ｆｏｒ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ”、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．、第１３０巻、３８９−９３頁、１９９７年）。ＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合は、新生児において約２であり、生後１週間増加する。これは、ＣＤ４＋Ｔリンパ球における増加が微生物刺激に応答して生じるようである。
【００３６】
しかしながら、完全に異なるパターンがイヌにおいて見られる。イヌは、絶対数および相対数の両方において生まれてから進行してＣＤ４＋Ｔ−リンパ球の進行性の減少を示す（Ｆａｌｄｙｎａ  Ｍ．ら、“Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｉｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｏｆ  ｄｏｇｓ  −  ａ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｓｔｕｄｙ．”、Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、第８２巻、２３−３７頁、２００１年）。ＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合は、臍帯血においてに７．６であり、生後すぐの子犬において７であり、その後、成犬において約２まで連続的に減少する（参照、Ｏｔｔａｎｉ  Ｉら、“Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃａｎｉｎｅ  ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｓ．”、Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．、第７０巻、８５−７頁、２００８年、およびＦａｌｄｙｎａ  Ｍ．ら、“Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｉｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｏｆ  ｄｏｇｓ  −  ａ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｓｔｕｄｙ．”、Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、第８２巻、２３−３７頁、２００１年のそれぞれ）。イヌにおいて、ＣＤ８＋Ｔ−リンパ球の数は、生後連続的に増加する。
【００３７】
これらの差異は、ヒトとイヌは生後、微生物刺激に反応する方法について根本的な差異があるということを示している。ヒトはＣＤ４＋Ｔ細胞の増加に優先的に応答するが、イヌはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖に応答するらしい。したがって、黄色ブドウ球菌スーパー抗原ＳＥＣ２の高用量に暴露されたイヌにおけるＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の増加が観測されたことは驚きである（本願明細書の以下の実施例２を参照）。この細胞集団は、新しく活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞を表し、したがって、微生物産物ＳＥＣ２による刺激の結果、この犬におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の刺激および活性化が起こる。さらに、インビトロ知見（本願明細書の以下の実施例１を参照）においても、Ｔｒｅｇは黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、Ｂ、Ｃ１、Ｃ２、およびＣ３ならびに毒素性ショック症候群毒素１（ＴＳＳＴ−１）を包含している他のスーパー抗原により刺激を誘発され得る。
【００３８】
したがって、ＥＰ１７８９０８３Ｂ１に開示されている概念は家畜においても用いられてよく、すなわち、スーパー抗原の機能を有する黄色ブドウ球菌毒素による免疫系の活性化が家畜の非ヒト哺乳動物の免疫系の自然免疫活性化を与えるために利用され得ることは驚きの発見であった。スーパー抗原は、アミノ酸配列が、異なるサブグループの間に相対的に保存されている毒素のクラスである。さらに、毒素の結合特性に影響を及ぼすので配列相同性より重要である三次元構造は、異なるグループの間で同様の機能的効果を生じる異なるスーパー抗原の間で極めて同様である。したがって、ブドウ球菌以外のスーパー抗原も用いられてよい。
【００３９】
本発明の実施形態は、家畜の非ヒト哺乳動物における炎症性疾患の予防または予防的治療において使用するための細菌性スーパー抗原を含む医薬組成物に関する。家畜の非ヒト哺乳動物の典型例はイヌ、ネコおよびウマである。家畜の非ヒト哺乳動物の好ましい例はイヌである。そのような医薬組成物は、一般的なイヌはアレルギーを発症し得るような任意のイヌにおける炎症性疾患を予防または予防的に治療するために用いられるが、アレルギー反応は、テリヤ、セッター、レトリバー、およびのっぺりとした顔の種類においてとりわけ共通する。高リスクな種類は、ウェストハイランドホワイトテリア、ボストンテリア、ボクサー、スタッフォードシャー・ブル・テリアおよびフレンチ・ブルドッグを包含する。したがって、高リスクの種類を包含しているそれらの種類は、炎症性疾患を予防または予防的に治療するために本発明の医薬組成物を投与するための特別な対象となる。炎症性疾患の予防または予防的治療において、医薬組成物は家畜の哺乳動物の粘膜上に投与される。
【００４０】
副作用のリスクのせいで、安全の点では、注射による投与（例えば、静脈内、筋肉内または皮下注射）は、医薬組成物を投与するための受け入れられる方法でない。対照的に粘膜上への投与は、副作用のリスクの少ない所望の予防的効果を提供することが見いだされている。粘膜上への投与において、医薬組成物は、鼻内粘膜に投与されてよく、すなわち、経鼻的に、口腔内の粘膜（例えば、舌下にまたは口腔内）上に、または腸内粘膜上に（すなわち、経口で）投与されてもよい。予防的効果を発揮するため、医薬組成物は生後間もなく、すなわち生まれたばかりの家畜の非ヒト哺乳動物に投与されるべきである。好ましくは、したがって、医薬組成物は生後３月以内に投与される。
【００４１】
一実施形態によれば、医薬組成物は、生後３月のはるかに早く、具体的に生後２週間以内、より具体的には生後１０日以内、さらにより具体的には、生後７日以内で投与される。医薬組成物の早期の投与は免疫学的な耐性機構の活性化に必要であるとわかっている。このことは、イヌ科の動物の免疫系は生まれて間もなく耐性誘導をより受けやすいという事実に起因すると考えられている。
【００４２】
本発明の医薬組成物は、単回投与または複数回投与で投与されてよい。一実施形態によれば、医薬組成物は、複数回投与され、すなわち少なくとも２回、例えば、少なくとも３回、明らかに異なる場面で投与される。複数回投与において、投薬治療方式は、連日（例えば、それぞれ、０日目および１日目もしくは０日目、１日目および２日目）投与されてよく、１日おき（例えば、それぞれ、０日目および２日目もしくは０日目、２日目および４日目）に投与されてよく、または２日おき（例えば、それぞれ、０日目および３日目もしくは０日目、３日目および６日目）に投与されてよい。さらに、より長い間隔（例えば１または２週間）を複数回投与に用いてよい。
【００４３】
本願明細書で使用される場合、「予防／予防すること」は、状態および／または疾患が予防するために医薬組成物を使用した後に決して起こらないことを意味すると解釈されるべきではない。さらに、その語は、状態が、上記状態を予防するための使用などの後、少なくともある程度は起こらないことを意味すると解釈されるべきでもない。むしろ「予防／予防すること」は、そのような使用に関わらず生じる場合、予防されるべき状態はそのような使用をしない場合よりあまり深刻ではないだろうことを意味する。したがって、予防は与えられた状態と一致する状態を低下させることとして解釈されてよい。さらに、その語は予防的治療と解釈されてよい。
【００４４】
ヒト幼児は、彼らの腸管内を、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）によって共通してコロニー形成される。黄色ブドウ球菌は、スーパー抗原（ＳＡｇ）と示されている毒素を製造すると知られており、それは、公表されているＴ細胞活性化特性を有するタンパク質である。２０以上の明確なＳＡｇは、例えば、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン（ＳＥ）Ａ、Ｂ、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｄ、Ｅ、ＧおよびＨ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン様毒素（ＳＥ−ｌ）−Ｑ、−Ｍおよび−Ｋならびに毒素性ショック症候群毒素（ＴＳＳＴ）−１を包含している、異なる黄色ブドウ球菌株から特徴づけられている。黄色ブドウ球菌の大半の分離株は様々なＳＡｇを生み出す。
【００４５】
医薬組成物は、少なくとも２つの方法における細菌性スーパー抗原とともに提供されてよい。第一に、単離精製されたスーパー抗原（類）は担体に添加されてよい。
【００４６】
第二に、医薬組成物は、スーパー抗原（類）を生み出す菌種とともに提供されてよい。好ましい株の例は、スーパー抗原（類）（化膿連鎖球菌など）を生み出す黄色ブドウ球菌および連鎖球菌株である。
【００４７】
単離精製されたスーパー抗原（類）の使用において、スーパー抗原の正確な用量は簡単に制御できる。さらに、感染のリスクは、生存物質が投与されないので、除外される。他方、スーパー抗原（類）を製造する菌種の使用はスーパー抗原および他の構造のカクテルとして耐性を誘導するより効果的な方法を提供する可能性があり、そのスーパー抗原および他の構造は細菌により生成され、医薬組成物が投与される者に提供される。しかしながら、スーパー抗原（類）を生み出す菌類の使用は、感染のリスクを示し、その投薬計画をあまり制御できないことを暗に示す。
【００４８】
一実施形態によれば、本発明の医薬組成物は、スーパー抗原（類）を生み出す少なくとも１つの黄色ブドウ球菌株を含む。
【００４９】
一実施形態によれば、医薬組成物は、少なくとも１つの黄色ブドウ球菌スーパー抗原（少なくとも１つの黄色ブドウ球菌エンテロトキシン、少なくとも１つの黄色ブドウ球菌エンテロトキシン様毒素、および／または毒素性ショック症候群毒素（ＴＳＳＴ）−１など）を含む。一実施形態によれば、医薬組成物は、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、Ｂ、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｄ、Ｅ、ＧもしくはＨのうちの少なくとも１つ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｑ、ＭもしくはＫのうちの少なくとも１つ、ならびに／または毒素性ショック症候群毒素（ＴＳＳＴ）−１を含む。
【００５０】
黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡおよびＢ（ＳＥＡおよびＳＥＢ）は、一般的に、文献に十分記載されているそれらの高濃度の毒性について知られている。本願明細書に開示されるインビトロでのイヌ科の動物ＰＢＭＣの研究において（実施例１を参照）、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＣ２（ＳＥＣ２）は、十分な免疫の活性化をさらに示すＳＥＡおよびＳＥＢと比べて有効性が低いことがわかった。本願明細書に開示されるインビトロでの試験（実施例２参照）は、何ら副作用のないＳＥＣ２による免疫学的な活性化を確認している。毒性の少ないスーパー抗原の使用、さらに、十分な免疫活性化およびこれによる耐性の誘発を提供することは、副反応を回避するのに好ましい。したがって、一実施形態によれば、医薬組成物はＳＥＣ２を含む。
【００５１】
すでに記載されているように、ＳＡｇは、アミノ酸配列が異なるサブグループの間に相対的に保存されている毒素の部類である。さらに、毒素結合特性に影響を及ぼす三次元構造は、異なるスーパー抗原において同様な機能的効果を生じる、異なるＳＡｇ間で極めて同様である。一例として、ブドウ球菌ＳＡｇは、連鎖球菌発熱性外毒素Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｈ、もしくはＩ、連鎖球菌マイトジェン外毒素（ＳＭＥ）−Ｚ１およびＺ２、および連鎖球菌スーパー抗原Ａ（ＳＳＡ）を包含している、連鎖球菌発熱性外毒素（Ｓｐｅ）と称される連鎖球菌のＳＡｇを含む配列相同性および作用形態を共有する。図４に示されるように、連鎖球菌のＳＡｇ  ＳｐｅＨおよびＳｐｅＡは、ブドウ球菌ＳＡｇ  ＳＥＢおよびＳＥＣも含有しているグループＩＩに属する。さらに、連鎖球菌スーパー抗原Ｓｐｅｌは、ブドウ球菌スーパー抗原ＳＥ１−Ｑ、ＳＥ１−ＭおよびＳＥ１−Ｋも含有しているグループＶのメンバーである。
【００５２】
ブドウ球菌および連鎖球菌のＳＡｇの両方は、Ｔ細胞受容体の保存部分に結合することにより全Ｔ細胞の大部分に結合し、および活性化することにより作用する。天然抗原は、その抗原だけに特異性を有するＴ細胞とのみ結合するが、「スーパー抗原」は、その受容体内に１つの特定のβ鎖を共有する全Ｔ細胞と結合し、すなわち、特定のＶβ−ファミリーに属する。これは、ヒトまたは動物におけるＴ細胞の大部分（１０−３０％）に結合して活性化し、結果的に多くのサイトカインを産出するということを意味する。
【００５３】
これらの類似性のせいで、ブドウ球菌だけでなく連鎖球菌のＳＡｇも家畜の非ヒト哺乳動物における炎症性疾患の予防のために用いられてよい。したがって、一実施形態によれば、医薬組成物は、連鎖球菌発熱性外毒素Ａ（ＳｐｅＡ）または連鎖球菌発熱性外毒素Ｈ（ＳｐｅＨ）などの少なくとも１つの連鎖球菌スーパー抗原を含む。ＳｐｅＡおよびＳｐｅＨは、配列相同性およびＳＥＣ２を含む作用の型を共有し、同じ系統発生学的なグループに属する（図４におけるグループ２参照）。
【００５４】
すでに記載されているように、医薬組成物は、スーパー抗原を生み出す菌種を添加することにより、細菌性スーパー抗原とともに提供されてもよい。したがって、一実施形態によれば、医薬組成物は、スーパー抗原を生み出す少なくとも１つの連鎖球菌株を含む。
【００５５】
天然のスーパー抗原は、家畜の非ヒト哺乳動物における炎症性疾患を予防するために用いられるだけでなく、それらの誘導体は、スーパー抗原活性を有する限り、炎症性疾患を予防するために用いられる。スーパー抗原はタンパク質であるので、タンパク質のＮ末端またはＣ末端への付加だけでなくアミノ酸置換、欠失、または挿入など誘導体を得る種々の方法が当業者に知られている。置換、挿入および付加は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸を用いて行われる。注目する誘導体の１つの型は、天然のスーパー抗原のフラグメント、すなわち、全長タンパク質の配列の部分だけを含むタンパク質およびペプチドであってよい。さらに、天然のスーパー抗原は、精製を促進するためにＨＩＳ−ｔａｇや、タンパク質の溶解性に影響を与えるＰＥＧ部分および他の種の部分で置換されてよい。
【００５６】
炎症性疾患
炎症性疾患は、内因性抗原および外因性抗原への免疫性過敏症を原因とする障害である。それらはアレルギー、自己免疫疾患および炎症性疾病を包含する。
【００５７】
アレルギーの例は食物アレルギー、花粉症、喘息、じんましん、湿疹、アナフィラキシー反応、およびアトピー性皮膚炎（例えば、イヌ科の動物アトピー性皮膚炎）を包含する。
【００５８】
炎症性疾病の例は潰瘍性大腸炎およびＭｂクローンを包含する。
【００５９】
自己免疫疾患の例は、１型糖尿病、自己免疫性胃炎、自己免疫性甲状腺炎（ｔｈｙｒｅｏｉｄｉｔｉｓ）、自己免疫性溶血性貧血、血小板減少症、および多発性硬化症を包含する。
【００６０】
一実施形態によれば、細菌性スーパー抗原を含む医薬組成物の使用により予防される炎症性疾患は、食物アレルギーまたはアトピー性皮膚炎、例えばイヌ科の動物のアトピー性皮膚炎である。
【００６１】
医薬組成物
本願明細書に開示される株、毒素およびスーパー抗原（類）は、標準方法により任意レベルの純度で単離されてよく、精製は、蒸留、再結晶およびクロマトグラフィなどの当業者に公知の従来の手段により成し遂げることができる。
【００６２】
本願明細書に開示される株、毒素およびスーパー抗原（類）は、医薬組成物として投与され、すなわち薬学的に許容できる担体および／または希釈剤と組み合わせて投与される。投与は単回投与または複数回投与で実施されてよい。
【００６３】
医薬組成物は、例えば、錠剤、丸薬サシェ剤、バイアル、固カプセル剤または軟カプセル剤、水性懸濁液または油性懸濁液、水溶液または油性液体、エマルション、粉末、顆粒、シロップ、エリキシル剤、トローチ剤、再構成可能粉末、液体調剤、スプレー、クリーム、軟膏、ゼリー、ゲル、ペースト、軟膏剤、液体エアロゾル、乾燥粉末製剤、またはＨＦＡエアロゾルの形態であってよい。
【００６４】
医薬組成物は、経口、口腔内経路を用いた投与に好適な形態または吸入もしくはガス注入（例えば、鼻内、気管、気管支）経路による投与に適した形態であってよい。
【００６５】
疾患および治療される患者ならびに投与経路に応じて、医薬組成物は変動する用量で投与されてもよい。細菌性スーパー抗原（類）溶液または懸濁液の投与における提案される用量濃度は４０μｇ／ｍｌである。スーパー抗原（類）の用量は、実施形態において、１〜７５０μｇ／ｋｇ（体重）であり、例えば、１５〜３００μｇ／ｋｇ（体重）または３０〜１８０μｇ／ｋｇ（体重）である。
【００６６】
口腔、口腔内または舌下
口腔、口腔内または舌下投与のため、細菌性スーパー抗原は種々の賦形剤と混合されてよい。経口投与用の固体医薬組成物は、しばしば結合剤を包含する：例えば、シロップおよび糖類、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント、ポリビニルピロリドン、ラウリル硫酸ナトリウム、α化トウモロコシ澱粉、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、デンプン、加工でんぷん、アカシアゴム、ガムトラガント、グアーガム、ペクチン、ワックス結合剤、微結晶セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、コポリビドンおよびアルギン酸ナトリウム）、崩壊剤（デンプンおよび好ましくはトウモロコシ、ポテトまたはタピオカデンプン、アルギン酸および特定のケイ酸錯体、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン、アラビアゴム、ナトリウムデンプングリコレート、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースなど）、平滑剤（ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、シリカポリエチレングリコールワックス、ステアリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸カルシウム、カルナウバロウ、硬化植物油、鉱油、ポリエチレングリコールおよびステアリルフマル酸ナトリウムなど）および充填剤（高分子量ポリエチレングリコール、ラクトース、砂糖、リン酸カルシウム、ソルビトール、グリシンステアリン酸マグネシウム、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、米粉、胡粉、ゼラチン、微結晶セルロース、硫酸カルシウム、キシリトールおよびラクチトールを包含している）。そのような組成物は、防腐剤および抗酸化剤も包含してよい。
【００６７】
経口投与用液体医薬組成物は例えば、エマルション、シロップ、もしくはエリキシル剤の形態であり、または使用前に水もしくは他の好適なビヒクルと再構成するための乾燥生成物として存在してよい。そのような液体組成物は、懸濁剤（例えば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、水素化食用脂、ゼラチン、ヒドロキシアルキルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、水素化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチン、モノオレイン酸ソルビタン、またはアラビアゴム）、水溶性媒体または非水溶性媒体（食用油（例えば、アーモンド油、ヤシ油）を包含している）、油性エステル（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールまたはエチルアルコールのエステル）、グリセリン、水または生理食塩水；防腐剤（例えば、メチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸またはソルビン酸）ならびに従来の香味物質、防腐剤、甘味剤または着色剤などの従来の添加剤を含有してよい。
【００６８】
水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンおよびそれらの性質を有するなどの希釈剤も包含されてよい。
【００６９】
他の好適な充填剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤および添加賦形剤は、当業者にとっては周知である。
【００７０】
一般に、治療剤の経口デリバリーは、よりよい患者のコンプライアンスに寄与する簡便さおよび簡易さに起因して、好ましい投与方法である。組み換え技術は、治療薬として使用するためのタンパク質およびポリペプチドの広い選択肢を利用し、タンパク質およびポリペプチドの経口デリバリーは注目と価値を増加している。しかしながら、タンパク質およびポリペプチドは貯蔵中に不安定であり、生活性の喪失をもたらすので、経口製剤は貯蔵中および投与において活性を保持するための安定性の最適化を好ましくは設計される。一実施形態によれば、細菌性スーパー抗原を含む医薬組成物は、経口投与される。
【００７１】
タンパク質またはポリペプチドの経口製剤のデザインの考察を必要とする製剤因子は、水性溶媒および非水性溶媒におけるタンパク質またはポリペプチドの溶媒挙動や安定性におけるイオン強度、溶液のｐＨの効果、および溶媒種ならびにタンパク質またはポリペプチドの構造の溶媒挙動を包含する。安定性およびタンパク質またはポリペプチドの構造における製剤の間の温度の効果も、経口投薬剤形、特に経口液体投薬剤形（ゼラチンカプセルまたはシロップなど）への取り込みのための製剤の全体的な適合性として、考えられなければならない。
【００７２】
鼻内投与
鼻内投与または吸入投与のため、細菌性スーパー抗原は、溶液、乾燥粉末または懸濁液の形態で運ばれてよい。投与は、好適な噴霧剤（例えば、ジクロロジフロロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素もしくは他の好適な気体）を使用して、投与者によって圧縮されもしくは送り込まれるポンプ式スプレー容器を介して行われるか、または圧力容器もしくはネブライザーからのエアロゾルスプレー提供を通して行われてよい。細菌性スーパー抗原は、担体物質（例えば、サッカリド）と組み合わせた微粉粉末としてまたはミクロスフェアとしてのいずれかで乾燥粉末吸入器を介して投与されてもよい。
【００７３】
吸入器、ポンプ式スプレーまたはエアロゾルスプレーは単一用量または複数用量であってよい。投薬量は活性な化合物の測定量を運ぶ弁を介して制御されてよい。
【００７４】
実施形態において、細菌性スーパー抗原を含む医薬組成物は、非ヒト哺乳動物（家畜など）におけるアレルギー発症、自己免疫性および炎症性疾患を予防する方法において用いられてよい。当該方法は、医薬組成物を生まれたばかりの家畜の非ヒト哺乳動物の粘膜投与に投与する段階を含む。
【００７５】
医薬組成物、粘膜、投与経路、および家畜の哺乳動物の明細はこれまでに記載されたとおりであってよい。
【００７６】
実施形態において、炎症性疾患の予防のための生まれたばかりの家畜の非ヒト哺乳動物における粘膜投与用の医薬組成物の製造用の細菌性スーパー抗原の使用が提供される。
【００７７】
医薬組成物、粘膜、投与経路、および家畜の哺乳動物の明細はこれまでに記載されたとおりであってよい。
【００７８】
さらなる労作をすることなく、当業者は、前述の説明を用いて、本発明の完全な範囲で本発明を利用することができると考えられる。本願明細書に記載される好ましい特定の実施形態は、それゆえ、単なる説明であると解釈され、形はどうあれ、本願明細書の残りを限定するものではない。さらに、本発明は特定の実施形態を参照しているが、本願明細書に説明する特異的なものに限定することを意図しない。むしろ、本発明は、添付する請求項によってのみ限定され、上記の具体例以外の他の実施形態はこれらの添付する請求項の範囲内で、例えば、上記のものと異なるものであっても、等価に可能である。
【００７９】
請求項において、用語「含む／含んでいる」は他の成分または段階の存在を排除しない。さらに、個々の特徴部は異なる請求項において包含されてよいが、これらは、可能な場合、有益に組み合わされてもよく、異なる請求項への包含は、特徴部の組み合わせが、実現可能でないおよび／または有利でないことを暗に意味しない。
【００８０】
加えて、単一の言及は、複数を排除しない。用語「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、「第一」、「第二」などは、いずれも複数を除外しない。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
以下の図面は、本願明細書の部分を形成し、本発明の特定の態様をさらに説明するために包含される。本発明は、その詳細な説明と組み合わせてこれらの図面の１以上を参照することによりよく理解されるだろう。
【００８２】
【図１】スーパー抗原をインビトロで用いた刺激６日後のＦＡＣＳ分析されたイヌ科の動物ＰＢＭＣのゲーティングストラトジーを示す図である。
【図２Ａ】増殖を示すグラフである。
【図２Ｂ】スーパー抗原刺激のイヌ科の動物ＰＢＭＣにおけるＦｏｘＰ３  Ｔｒｅｇ誘発を示すグラフである。
【図３Ａ】ＣＤ４陽性Ｔ細胞の部分が、ＳＥＣ２（ＬｏｋｅおよびＬｅｘｉ）またはプラセボ（ＬｏｖｉｓおよびＬｏｐｐａｎ）による刺激後に時間とともにＦｏｘＰ３＋となることを示すグラフである。
【図３Ｂ】ＣＤ４陽性Ｔ細胞の部分が、ＳＥＣ２（ＬｏｋｅおよびＬｅｘｉ）またはプラセボ（ＬｏｖｉｓおよびＬｏｐｐａｎ）による刺激後に時間とともにＦｏｘｐ３＋ＣＤ２５＋となることを示すグラフである。
【図４】種々のスーパー抗原の系統発生解析を示す図である。
【実施例】
【００８３】
以下の実施例は、好ましい本発明の実施形態を説明するために包含されている。以下の実施例に開示される技術は説明のためのみに与えられ、本発明の範囲を限定することを意図しないということを当業者に理解されるはずである。
【００８４】
実施例１
スーパー抗原刺激により促進されたイヌ科の動物の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）へのＦｏｘＰ３＋刺激性Ｔ細胞の導入
ＰＢＭＣをパーコール勾配で遠心分離により、健康なイヌ（ボーダーテリア）から回収した。当該細胞を、細胞増殖を測定するために、取扱い説明書（幹細胞技術）にしたがって、ＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔｔで色を付けた。染色した細胞（１００．０００／ウェル）を、異なるスーパー抗原、すなわち、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン（ＳＥ）Ａ、Ｂ、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３および毒素性ショック症候群毒素−１（ＴＳＳＴ−１）を５％のＣＯ２下３７℃において、１μｇ／ウェル〜１ｐｇ／ウェルの用量範囲で刺激した。細胞を６日後回収し、フローサイトメトリによりＣＤ４およびＦｏｘＰ３の増殖および発現を分析した。全細胞を、当業者にとって周知であるＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて取得し、ＦｌｏｗＪｏ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ  ｉｎｃ．（オレゴン州アシュランド））を用いて分析した。
【００８５】
図１を参照して、細胞をリンパ球（図１Ａ）上に最初にゲーティングし、リンパ球ゲート（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｇａｔｅ）から、ＣＤ４＋Ｔ細胞をさらに分析するために選択し、用いた（図１Ｂ−Ｃ）。異なるスーパー抗原によって媒介された増殖によって測定されるように、ＣＤ４＋Ｔ細胞刺激効果は変動した。図２Ａに示すように、ＳＥＡ、ＳＥＢおよびＴＳＳＴ−１は、最も可能性のある刺激剤であり、ＳＥＣ、とりわけＳＥＣ３はあまり有効性がない。ＦｏｘＰ３を発現する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の存在を分析するとき、ＣＤ４＋Ｔ細胞の間のＴｒｅｇの割合が増殖の程度に対応することが見られうる（図２Ｂ）。これらの結果は、Ｔｒｅｇが、スーパー抗原による刺激によりイヌ科の動物ＰＢＭＣから誘発され得ることを示す。
【００８６】
したがって、スーパー抗原による暴露は、家畜の非ヒト哺乳動物（イヌなど）における炎症性疾患および免疫性過敏症の誘発を妨げることが期待されている。
【００８７】
実施例２
方法論
生まれたばかりの子犬の治療
スウェーデンの大学の農学部（スウェーデン、ウプサラ）の動物施設で生まれた、一腹４匹のビーグルの子犬を本研究に用いた。生後１週の子犬に黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＣ２（米国、フロリダ州、サラソータ、Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）またはプラセボ（ＰＢＳ）を０．５ｍｌ用量の経口投与により与えた。２匹の子犬にＳＥＣ２を摂取し、１匹に低用量（０．５μｇ）、他の１匹に１０倍高い用量（５μｇ）を投与し、残りの２匹にプラセボを投与した。当該治療を一日おきに２回繰り返し、すなわち、各子犬に合計３回投与した（それぞれ、生後７日、９日、１１日）。その子犬を治療中、継続して観察し（嘔吐、下痢、直腸温度）、悪条件は見られなかった。
【００８８】
フローサイトメトリー分析
血液サンプルを、最初の投与後、時間点０、ＳＥＣ２またはプラセボの第一投与の直前、および１、２、３、および４時間後に子犬からそれぞれ収集した。血液をヘパリン化したチューブに抜出し、収集後４８時間以内にフローサイトメトリにより分析した。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋ＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ細胞の同定のため、細胞表面ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ４５ＲＡおよび細胞内ＦｏｘＰ３を染色し、標準手順（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅプロトコール）に従って行った。以下、抗イヌ抗体（Ｆ４８８複合抗ＣＤ４（ＹＫＩ３０２．９）、ＰＥ複合抗ＣＤ２５（Ｐ４Ａ１０）、およびＡＦ６４７複合体抗ＦｏｘＰ３（ＦＪＫ−１６ｓ）（全てｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）、ならびに抗ＣＤ４５ＲＡ（ＣＡ４．１Ｄ３）続けてａ−ｍＲＰＥ（両方ともＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ製））を用いた。フローサイトメトリをＦＡＣＳＣａｎｔｏ（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）において行い、そのデータをＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ（オレゴン州アシュランド））ソフトウェアを用いて分析した。
【００８９】
ＦｏｘＰ３は、制御性Ｔ細胞用マーカーであり、最近の強く活性化されたヘルパーＴ細胞である。ＣＤ２５は、活性化されたＴ細胞および制御性Ｔ細胞の両方のマーカーでもある。
【００９０】
図３Ａおよび３Ｂの両方において、より高い用量のスーパー抗原（Ｌｅｘｉ、ｓｑｕａｒｅｓ）を接種されたイヌは、最大の割合のＦｏｘＰ３＋を有し、スーパー抗原の最後の用量が投与された後直接摂取された第一サンプル（「１−ｐｒｏｖ」）におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞のＦｏｘｐ３＋ＣＤ２５＋も同じであった。これは、このイヌにおけるＴ細胞の強い活性化の兆候が経口のスーパー抗原治療に応答すると解釈され得る。
【００９１】
サンプル番号４（「４−ｐｒｏｖ」）は、スーパー抗原の最後の投与の３週間後に記録された。ここで、スーパー抗原（Ｌｅｘｉ、ｓｑｕａｒｅｓ）の最大の用量を摂取したイヌは血液のリンパ球の中で、ＦｏｘＰ３＋を最も高い割合で有している。同様に、このイヌは、最後のスーパー抗原の投与の３週間後ＣＤ４陽性Ｔ細胞の中で最も高い割合のＦｏｘｐ３＋ＣＤ２５＋を有している。最後のサンプルはスーパー抗原の最後の投与の３週間後に摂取されたので、これらの細胞は、ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋の割合が他のイヌの中で同じ期間の間鋭く減少したので、活性化された「通常」Ｔ細胞より制御性Ｔ細胞を表すと解釈される。
【００９２】
したがって、スーパー抗原による新生児治療は、結果的に直接Ｔ細胞を活性化し、推定制御性Ｔ細胞を増加させるので、アレルギー、炎症性疾患および自己免疫疾患などの不都合な免疫反応を抑制し得た。
【図１】
2015506975.tif 000002
【図２Ａ】
2015506975.tif 000003
【図２Ｂ】
2015506975.tif 000004
【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【国際調査報告】
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