(57)【要約】  本発明は、以下の式の化合物：2015511232.tif 000057（式中、種々の置換基、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ＡおよびＸは本明細書に定義される通りである）およびその類似体；またはその薬学的塩；高トリグリセリド血症などの状態を治療する方法および該化合物の製造方法を提供する。
2015511232.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物：
【化１】
2015511232.tif 000055
（式中、
Ｒ１は、−ＣＨ３および−ＣＦ３から選択され、
Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３、および−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、−Ｃ１−２アルキル、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択され、
Ｒ４は、Ｈ、ハロ、および−ＯＣＨ３から選択され、
Ｒ５は、Ｈおよびハロから選択され、
Ａは、ＣＨ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−ＣＮおよびＮから選択され、
Ｘは、ＣＨ、Ｃ−Ｆ、Ｃ−ＯＣＨ３およびＮから選択され、
但し、ＸおよびＡのうちの１つのみはＮである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１が−ＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が−ＣＦ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３、および−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が、Ｈ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、および−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３が−ＣＨ２ＯＣＨ３である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ４がＨおよびＦから選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４がＦである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ５がＨである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ａが、ＣＨまたはＣ−Ｆから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
ＡがＮである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
ＸがＣ−ＦまたはＮである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
ＸがＣＨである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
以下の式の化合物：
【化２】
2015511232.tif 000056
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１７】
前記薬学的に許容可能な塩が塩化水素付加塩である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩である、化合物。
【請求項１９】
ａ）２θにおいて１４．９５°、１８．１３°、および２１．１４°＋／−０．２°、または
ｂ）２θにおいて１２．７１°、１４．９５°、１８．１３°、１８．６７°、２１．１４°、および２７．７６°＋／−０．２°、または
ｃ）２θにおいて５．４６°、１１．１０°、１２．７１°、１３．９７°、１４．９５°、１８．１３°、１８．６７°、２１．１４°、および２７．７６°＋／−０．２°
におけるピークを含む、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）から得られるＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる結晶形態のＮ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−エトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩である、化合物。
【請求項２０】
請求項１８に記載の結晶形態の実質的に純粋なＮ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−エトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤の少なくとも１つを含む、医薬組成物。
【請求項２２】
高トリグリセリド血症を治療する必要のある患者を治療する方法であって、有効量の請求項２１に記載の医薬組成物をその患者に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
高トリグリセリド血症を治療する必要のある患者を治療する方法であって、有効量の請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物をその患者に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
治療に使用するための請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
高トリグリセリド血症の治療に使用するための請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
高トリグリセリド血症を治療するための医薬の製造における請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＯＧＡＴ−２阻害剤として有用な新規ベンジルスルホンアミド誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
過剰な食事脂肪の摂取は食事誘導性肥満の主な原因であり、人々の健康に対して深刻な有害な作用を有し得る。ヒトについての食事脂肪の９０％より多くはトリアシルグリセロール（またはトリグリセリド）であり、これは小腸によりほぼ完全に吸収される。酵素アシルＣｏＡ：モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−２（ａｃｙｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−２）（ＭＯＧＡＴ−２）は小腸内の食事脂肪の吸収において重要な役割を果たすと考えられている。ＭＯＧＡＴ−２欠損マウスは、高脂肪食を与えられた場合、肥満の発生、グルコース不耐性、高コレステロール血症および脂肪肝の発生を防ぐことが実証されている。さらに、ＭＯＧＡＴ−２欠損マウスは食餌性オリーブオイルチャレンジ後に低い血漿トリアシルグリセロールレベルを表すことも示されている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｙｅｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００９、１５（４）、４４２−４４６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
高トリグリセリド血症を治療するためのさらなる薬物についての必要性が存在している。また、ＭＯＧＡＴ−２受容体の新規阻害剤についての必要性も存在している。本発明は、高トリグリセリド血症を治療するのに好適であり得る、代替の化合物および治療方法を提供することによってこれらの必要性の１つ以上に対処する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、式Ｉに係る化合物：
【化１】
2015511232.tif 000003
（式中、Ｒ１は、−ＣＨ３および−ＣＦ３から選択され、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｒ３は、Ｈ、−Ｃ１−２アルキル、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、および−ＯＣＨ３から選択され、Ｒ５は、Ｈおよびハロゲンから選択され、Ａは、ＣＨ、ＣＦ、ＣＣＮ、およびＮから選択され、Ｘは、ＣＨ、ＣＦ、ＣＯＣＨ３およびＮから選択され、但し、ＸおよびＡのうちの１つのみはＮである）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００６】
一実施形態において、Ｒ１は−ＣＨ３である。別の実施形態において、Ｒ１は−ＣＦ３である。
【０００７】
好ましくは、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される。より好ましくは、Ｒ２は、Ｈおよび−ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される。さらにより好ましくは、Ｒ２はＨである。
【０００８】
好ましくは、Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３、および−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択される。より好ましくは、Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、および−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択される。さらにより好ましくは、Ｒ３は−ＣＨ２ＯＣＨ３である。
【０００９】
好ましくは、Ｒ４はＨおよびＦから選択される。より好ましくは、Ｒ４はＦである。
【００１０】
好ましくは、Ｒ５はＨまたはＦである。より好ましくは、Ｒ５はＨである。
【００１１】
好ましくは、Ａは、ＣＨ、ＣＦ、およびＮから選択される。より好ましくは、Ａは、ＣＨおよびＮから選択される。さらにより好ましくは、ＡはＮである。
【００１２】
好ましくは、ＸはＣＨおよびＮから選択される。より好ましくは、ＸはＣＨである。
【００１３】
本発明は、式Ｉに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３から選択され、Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３および−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｒ４は、ＨおよびＦから選択され、Ｒ５は、ＨおよびＦから選択され、Ａは、ＣＨ、ＣＦ、およびＮから選択され、Ｘは、ＣＨおよびＮから選択され、但し、ＸおよびＡのうちの１つのみがＮである）、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１４】
本発明は、式Ｉに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２は、Ｈおよび−ＣＨ２ＯＣＨ３から選択され、Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、および−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｒ４は、ＨおよびＦから選択され、Ｒ５は、ＨおよびＦから選択され、Ａは、ＣＨおよびＮから選択され、Ｘは、ＣＨおよびＮから選択され、但し、ＸおよびＡのうちの１つのみがＮである）、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１５】
本発明は、式Ｉに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３であり、Ｒ３は−ＣＨ２ＯＣＨ３であり、Ｒ４はＦであり、Ｒ５はＨであり、ＡはＮであり、ＸはＣＨであり、但し、ＸおよびＡのうちの１つのみはＮである）、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１６】
本発明は、式Ｉに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３から選択され、Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３および−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｒ４は、ＨおよびＦから選択され、Ｒ５は、ＨまたはＦから選択され、Ａは、ＣＨ、ＣＦ、およびＮから選択され、Ｘは、ＣＨおよびＮから選択され、但し、ＸおよびＡのうちの１つのみがＮである）、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１７】
本発明は、式Ｉに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は、Ｈおよび−ＣＨ２ＯＣＨ３から選択され、Ｒ３は、Ｈ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、および−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｒ４は、ＨおよびＦから選択され、Ｒ５は、ＨおよびＦから選択され、Ａは、ＣＨおよびＮから選択され、Ｘは、ＣＨおよびＮから選択され、但し、ＸおよびＡのうちの１つのみがＮである）、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１８】
本発明は、式Ｉに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３であり、Ｒ３は−ＣＨ２ＯＣＨ３であり、Ｒ４はＦから選択され、Ｒ５はＦであり、ＡはＮであり、ＸはＣＨであり、但し、ＸおよびＡのうちの１つのみがＮである）、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１９】
本発明は、式ＩＩに係る化合物
【化２】
2015511232.tif 000004
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。好ましくは、薬学的に許容可能な塩は、Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩である化合物を得るために塩化水素付加塩である。
【００２０】
本発明は、ａ）２θにおいて１４．９５°、１８．１３°、および２１．１４°＋／−０．２°；またはｂ）２θにおいて１２．７１°、１４．９５°、１８．１３°、１８．６７°、２１．１４°、および２７．７６°＋／−０．２°；またはｃ）２θにおいて５．４６°、１１．１０°、１２．７１°、１３．９７°、１４．９５°、１８．１３°、１８．６７°、２１．１４°、および２７．７６°、＋／−０．２°でのピークを含む、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）から得られるＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる結晶形態のＮ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−エトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩である化合物を提供する。
【００２１】
本発明は、結晶形態の実質的に純粋なＮ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−エトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩を含む組成物を提供する。本明細書で使用する場合、「実質的に純粋」とは、８０％ｗ／ｗ超の結晶性物質、より好ましくは９５％ｗ／ｗ超の結晶性物質、さらにより好ましくは９８％ｗ／ｗ超の結晶性Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−エトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩である組成物を指す。
【００２２】
本発明はまた、式ＩまたはＩＩの化合物のいずれか１つに係る化合物、またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００２３】
本発明はまた、高トリグリセリド血症を治療する必要のある患者を治療する方法を提供する。その方法は、式ＩまたはＩＩに係る化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、有効量の医薬組成物を患者に投与することを含む。
【００２４】
本発明はまた、高トリグリセリド血症を治療する必要のある患者を治療する方法であって、有効量の式ＩまたはＩＩに係る化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００２５】
本明細書で使用する場合、患者とは、治療を必要とする動物を指し、好ましくは哺乳動物に限らず、好ましくはヒト；またはイヌもしくはネコなどのペット；または家禽である。
【００２６】
本発明はまた、治療に使用するための、式ＩまたはＩＩに係る化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２７】
本発明はまた、高トリグリセリド血症の治療に使用するための、式ＩまたはＩＩに係る化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２８】
本発明はまた、高トリグリセリド血症を治療するための医薬の製造における、式ＩまたはＩＩに係る化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、臨床および／または獣医用途に許容可能であるとみなされる式ＩまたはＩＩに係る化合物の塩を指す。薬学的に許容可能な塩およびそれらを調製するための一般的な方法は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ、（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ．６６、Ｎｏ．１、１９７７年１月を参照のこと。
【００３０】
一般化学
本明細書に使用される場合、以下の用語は示した意味を有する：「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し；「ＤＥＡ」はジエチルアミンを指し；「Ｅｔ２Ｏ」はジエチルエーテルを指し；「ＤＭＥＡ」はジメチルエチルアミンを指し；「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指し；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し；「ｄｅ」はジアステレオマー過剰を指し；「ｅｅ」は鏡像異性体過剰を指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「ＥｔＯＨ」はエタノールを指し；「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールを指し；「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し；「異性体１」はクロマトグラフィーカラムからの第１の溶出異性体を指し；「異性体２」はクロマトグラフィーカラムからの第２の溶出異性体を指し；「ＬＣ／ＭＳ」は液体クロマトグラフィー、それに続く質量分析を指し；「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し；「メシル」はメチルスルホン酸の塩またはエステルを指し；「ＭＳ」は質量分析を指し；「ＮＭＲ」は核磁気共鳴を指し；「ＯＭｓ」はメチルスルホニルエステルを指し；「ＯＴｓ」は４−トルエンスルホン酸エステルを指し；「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを指し；「ＴＬＣ」は薄層クロマトグラフィーを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「トシル」は４−トルエンスルホン酸の塩またはエステルを指す。
【００３１】
反対に示さない限り、本明細書に例示した化合物は、ＡＣＤＬＡＢＳまたはＳｙｍｙｘ  Ｄｒａｗ  ３．２のいずれかを使用して命名され、番号付けされる。
【００３２】
スキーム１は式Ｉの化合物の一般的合成を示す。
【化３】
2015511232.tif 000005
【００３３】
市販されているかまたは公知の文献の方法により合成される置換アミン１は、当業者に公知の還元的アミノ化条件下でアルデヒド２と反応して式Ｉの化合物を生じる。還元的アミノ化条件の代表的な例については、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ：ａ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｒｏｕｐ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎs、第２版、８３５−８４６ページ、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、（１９９９）を参照のこと。より具体的には、アミン１は、ジクロロメタンなどの溶媒中で、トリアセトキシボロヒドリドなどの還元剤、および酢酸などの酸の存在下でアルデヒド２と反応して式Ｉの化合物を生じ、それは塩酸またはマレイン酸などの酸の付加により適切な塩に変換できる。
【００３４】
スキーム２は式１の化合物の代替的合成を示す。
【化４】
2015511232.tif 000006
【００３５】
市販されているかまたは公知の文献の方法により合成される、適切に置換されたアミノアルコール５は、上記の還元的アミノ化条件下でアルデヒド２と反応して化合物３を生じる。化合物３は、ジオキサンなどの溶媒中で、高温下で、脱離基（ＬＧ）を有する、置換された（ヘテロ）アリール４および水素化ナトリウムなどの塩基と混合されて、式Ｉの化合物を生じる。脱離基（ＬＧ）の例としては、ＦまたはＣｌなどのハロゲンが挙げられる。式Ｉの化合物はさらに、塩酸、マレイン酸、リン酸などの酸の付加により薬学的に許容可能な塩に変換され得る。
【００３６】
スキーム３は本発明に使用するための中間体化合物の合成を示す。
【化５】
2015511232.tif 000007
置換されたオキシラン６は、メタノールなどの溶媒中でアンモニアと反応してアミノアルコール５を生じる。アミノアルコール５はさらに、通常、ジオキサンなどの溶媒中で、高温で、水素化ナトリウムなどの塩基の存在下で、フッ素または塩素などの脱離基（ＬＧ）を有する（ヘテロ）アリール４と反応して中間体化合物１を生じる。
【実施例】
【００３７】
調製例１
（Ｎ−Ｚ）−Ｎ−［（４−ブロモフェニル）メチレン］−（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド
【化６】
2015511232.tif 000008
（Ｒ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（４０．５ｇ、０．３３ｍｏｌ）をトルエン（２８３ｍＬ）中の４−ブロモベンズアルデヒド（６５．５７ｇ、０．３５ｍｏｌ）の溶液に少しずつ加える。周囲温度にて１５分間混合物を撹拌し、次いで水酸化ナトリウム（１．３４ｇ、０．３３ｍｏｌ）を加える。周囲温度にて１２時間懸濁液を撹拌する。硫酸ナトリウム（１６ｇ）およびセライト（登録商標）（１６ｇ）を加え、１５分間懸濁液を撹拌する。濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１００％〜７０％ヘキサン）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、白色の固体（８５．５ｇ、８８％収率）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８８（Ｍ＋１）。
【００３８】
調製例２
Ｎ−［（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチル］−（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド
【化７】
2015511232.tif 000009
０℃にて未希釈の（トリフルオロメチル）トリメチルシラン（１０９ｍＬ、０．７４ｍｏｌ）を、０℃にてＤＭＦ（１．２Ｌ）中のテトラブチルアンモニウムアセテート（８８ｇ、０．２９ｍｏｌ）および（Ｎ−Ｚ）−Ｎ−［（４−ブロモフェニル）メチレン］−（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド（８５ｇ、０．２９ｍｏｌ）の撹拌溶液に加える。混合物を０〜５℃にて９０分間撹拌する。飽和塩化アンモニウム水溶液（１．２Ｌ）を加え、ＥｔＯＡｃ（４×４００ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合わせ、水、次いでブライン（２×１Ｌ）で抽出物を連続して洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。残留物を１０分間ヘキサン（２００ｍＬ）で粉砕し、濾過し、真空下で濾液を乾燥させて、黄色の固体（８１ｇ、７６％収率、＞９８ｄｅ）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５８（Ｍ＋１）。
【００３９】
調製例３
（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロエタンアミン
【化８】
2015511232.tif 000010
ＨＣｌ（ジオキサン中に４Ｍ、２２６ｍＬ、０．９ｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（６７０ｍＬ）中のＮ−［（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチル］−（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド（８１ｇ、０．２３ｍｏｌ）の懸濁液に加える。混合物を周囲温度にて１時間撹拌する。減圧下で溶媒を除去し、残留物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２００ｍＬ）で１０分間粉砕して、茶色の固体としてＨＣｌ塩を得る。水（１．２）に塩を溶解し、２ＮのＮａＯＨ溶液を加えて、ｐＨを１０に上昇させる。混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×５００ｍＬ）で抽出する。有機相を水、次いでブライン（各々５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濾液を濃縮して、黄色の固体（４６ｇ、８０％収率、９８％ｅｅ）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５８（Ｍ＋１）。
【００４０】
調製例４
Ｎ−［（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチル］メタンスルホンアミド
【化９】
2015511232.tif 000011
メタンスルホニルクロリド（１６．４２ｍＬ、０．２１ｍｏｌ）を、０℃にてＤＣＭ（２５０ｍＬ）中の（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロエタンアミン（４９ｇ、０．１９ｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１．１８ｇ、９．０ｍｍｏｌ）、２，６−ルチジン（６７ｍＬ、０．５７ｍｏｌ）の混合物に滴下して加える。混合物を周囲温度まで加温し、その温度にて２０時間撹拌する。反応混合物をＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈し、それを２ＭのＨＣｌ（２×２００ｍＬ）、水（２５０ｍＬ）、次いでブライン（２５０ｍＬ）で連続して洗浄する。有機相を回収し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。残留物をヘキサン（２００ｍＬ）で１０分間粉砕し、濾過し、減圧下で固体を乾燥させて、薄茶色の固体（６０ｇ、９３％収率、９８％ｅｅ）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３２（Ｍ＋１）。
【００４１】
調製例５
Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−ホルミルフェニル）エチル］メタンスルホンアミド
【化１０】
2015511232.tif 000012
トルエン（１．５ｍＬ）中のＮ−［（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチル］メタンスルホンアミド（３０ｇ、９０ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．８１ｇ、３．６ｍｍｏｌ）、ブチルジ−１−アダマンチルホスフィン（３．８９ｇ、１０．８４ｍｍｏｌ）およびテトラメチルエチレンジアミン（１０．５０ｇ、９０ｍｍｏｌ）を、２ＬのＰＡＲＲリアクタに加える。リアクタを密閉し、合成ガス（１：１のＣＯ／Ｈ２）を用いてリアクタに７５ｐｓｉまで圧力をかける。９５℃にて反応混合物を１６時間撹拌する。混合物を冷却し、通気し、リアクタを開口する。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（８：２〜１：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより粗残留物を精製して、標題化合物（２２．８ｇ、９０％、８０％ｅｅ）を得る。キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳ−Ｈ（２．１×２５ｃｍ、５μＭ）ＣＯ２／ＥｔＯＨ（９：１）を使用することにより化合物のキラル純度を高めて、標題化合物（１９ｇ、７５％収率、９８％ｅｅ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８２（Ｍ＋１）。
【００４２】
調製例６
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）エチル］メタンスルホンアミド
【化１１】
2015511232.tif 000013
メタンスルホニルクロリド（１３．４４ｍＬ、０．１７ｍｍｏｌ）を、０℃にてＤＣＭ（２５０ｍＬ）中の（１Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミン（２５ｇ、０．１２ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５１ｍＬ、０．３６ｍｏｌ）の混合物に加える。混合物を周囲温度に加温し、２．５時間撹拌する。反応混合物を２ＭのＨＣｌ水溶液（１００ｍｌ）で洗浄する。有機相を水、次いでブライン（２×１００ｍＬ）で連続して洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮して、残留物を得る。残留物をヘキサン（１５０ｍＬ）で粉砕し、濾過し、減圧下で乾燥させて、黄色の固体（３３．２４ｇ、９６％、ｅｅ＞９８％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７８（Ｍ＋１）。
【００４３】
調製例７
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−ホルミルフェニル）エチル］メタンスルホンアミド
【化１２】
2015511232.tif 000014
３００ｍＬのＰＡＲＲリアクタにＮ−［（１Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）エチル］−メタンスルホンアミド（１０ｇ、３５ｍｍｏｌ）、（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（７３３ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３．８１ｇ、３５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５０ｍＬ）を入れる。トリエチルシラン（１１．６ｍＬ、０．７２ｍｍｏｌ）を加え、一酸化炭素で３回リアクタをパージする。ＰＡＲＲリアクタに一酸化炭素（５０ｐｓｉ）を加圧し、９０℃にて１５時間混合物を撹拌する。リアクタを周囲温度に冷却し、セライト（登録商標）パッドで濾過し、パッドをＤＣＭ（１５０ｍＬ）で洗浄する。濾液を水、次いでブライン（２×８０ｍＬ）で連続して洗浄する。有機相を減圧下で濃縮して、橙色の油状の残留物を得る。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（０〜３０％のＥｔＡｃ）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製して、標題化合物（５．６ｇ、７０％、ｅｅ＞９８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２２８（Ｍ＋１）。
【００４４】
調製例８
（２Ｓ）−１−アミノ−３−メトキシ−２−プロパノール
【化１３】
2015511232.tif 000015
Ｓ−メチルグリシジルエーテル（２５ｍＬ、２７８．７ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ中のアンモニア溶液（７Ｍ、７９６ｍＬ、５．６ｍｏｌ）に加え、周囲温度にて１４時間撹拌する。２０℃にて減圧下で濃縮して無色の油（３１．０ｇ）として標題化合物を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ３．８６−３．８１（ｍ，１Ｈ），３．３８−３．３３（ｍ，５Ｈ），２．８１−２．６４（ｍ，２Ｈ），２．１７（ｓ，４Ｈ）。
【００４５】
表１の以下の化合物を実質的に調製例８の方法によって調製する。
【００４６】
【表１】
2015511232.tif 000016
【００４７】
調製例１１
（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロパン−１−アミン
【化１４】
2015511232.tif 000017
水素化ナトリウム（鉱油中に６０％、１３．５６ｇ、３３９．１ｍｍｏｌ）をジメチルアセトアミド（２４５．７ｍＬ）に懸濁し、３０分にわたって、ジメチルアセトアミド（５９．０ｍＬ）中の（２Ｓ）−１−アミノ−３−メトキシ−２−プロパノール（３１．０ｇ、１４７．４ｍｍｏｌ）の溶液を加える。１時間撹拌し、次いで２，５−ジフルオロピリジン（１７．０３ｍＬ、１６２．１７ｍｍｏｌ）を３０分間隔にわたって加え、さらに１．５時間、周囲温度にて撹拌する。水（９３０ｍＬ）をゆっくり加えて反応をクエンチする。得られた混合物をＥｔｏＡｃ（４×３００ｍＬ）で抽出し、有機抽出物を合わせる。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。ＤＣＭ中の０〜１０％のＥｔＯＡｃの勾配を使用してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、茶色の油（１２．０ｇ）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０１（Ｍ＋１）。
【００４８】
表２の以下の化合物を実質的に調製例１１の方法によって調製する。
【００４９】
【表２】
2015511232.tif 000018
【表３−１】
2015511232.tif 000019
【００５０】
調製例２４
２−［（４−フルオロフェノキシ）メチル］オキシラン
【化１５】
2015511232.tif 000020
４−フルオロフェノール（５ｇ、４３．３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１８．８ｍＬ）に溶解し、水酸化カリウム（１４．２８ｇ、２１６．３２ｍｍｏｌ）、続いてクロロメチルオキシラン（６１．０６ｍＬ、２６４．８ｍｍｏｌ）を加える。周囲温度にて撹拌し、反応を完了するまでＴＬＣ（５０％ＤＣＭ／ヘキサン）によりモニタする。混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機抽出物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液、次いでブラインで洗浄する。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。ヘキサン中の１０％のＥｔＯＡｃ溶液を用いてシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーを使用して精製して溶出する。５０％ＤＣＭ／ヘキサンによるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、得られた生成物を再精製して、透明な油（３．６２ｇ、４９．８％）として生成物を得る。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．９６−６．９２（ｍ，２Ｈ），６．８５−６．８１（ｍ，２Ｈ），４．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．１，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３２−３．３０（ｍ，１Ｈ），２．８７（ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７１（ｄｄ，Ｊ＝２．６，４．９Ｈｚ，１Ｈ）。
【００５１】
調製例２５
１−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロパン−２−オール
【化１６】
2015511232.tif 000021
２−［（４−フルオロフェノキシ）メチル］オキシラン（３．６２ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（７１．７ｍＬ）に溶解し、モノ過硫酸カリウム（１５．８８ｇ、２５．８３ｍｍｏｌ）、続いてモリブデンジクロリドジオキシド（６０ｍｇ、０．３２ｇ）を加える。３時間、空気下で撹拌しながら混合物を還流で加熱し、次いで周囲温度に冷却し、混合物を一晩撹拌する。モノ過硫酸カリウムの追加量（１５．８８ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を３時間還流する。混合物を濾過し、ＭｅＯＨで濾過ケーキを洗浄する。回収した濾液を減圧下で濃縮し、次いで得られた物質をＤＣＭに溶解する。ＤＣＭ混合物を水、次いでブラインで洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。ヘキサン中の２０％ＥｔＯＡｃを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、透明な油（２．７３ｇ、６３．４％）として標題生成物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１８（Ｍ＋ＮＨ４）。
【００５２】
調製例２６
１−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロパン−２−オン
【化１７】
2015511232.tif 000022
１−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロパン−２−オール（２．６ｇ、１２．９９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２６ｍＬ）に溶解し、モレキュラーシーブ、クロロクロム酸ピリジニウム（７．１４ｇ、３２．４７ｍｍｏｌ）、およびピリジン（５．２５ｍＬ、６４．９３ｍｍｏｌ）を加える。混合物を周囲温度にて一晩撹拌する。混合物をセライト（登録商標）プラグで濾過し、そのプラグをＥｔ２Ｏで洗浄する。濾液を濃縮し、次いでヘキサン中の２５％ＥｔＯＡｃを使用してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、透明な油（８７２ｍｇ、３３．９％）として生成物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１６（Ｍ＋ＮＨ４）。
【００５３】
調製例２７
１−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロパン−２−アミン
【化１８】
2015511232.tif 000023
１−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロパン−２−オン（８６０ｍｇ）をアンモニア（ＭｅＯＨ中に７Ｍ、１４．５ｍＬ）に溶解し、モレキュラーシーブ（１ｇ）を加える。混合物を周囲温度にて一晩撹拌する。反応物を０℃に冷却し、ナトリウムテトラヒドロボレート（０．６６ｇ、１７．３６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を周囲温度にて２時間撹拌する。混合物をセライト（登録商標）プラグで濾過し、ＭｅＯＨでリンスする。回収した濾液を濃縮し、ＤＣＭに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄する。濾液を減圧下で濃縮する。混合物を、７ＮのＮＨ３／ＭｅＯＨで溶出する、ＳＣＸカラムにより精製して、標題化合物（６８０ｍｇ、７８．６％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２００（Ｍ＋１）。
【００５４】
調製例２８
ジエチル２−（４−フルオロフェノキシ）プロパンジオエート
【化１９】
2015511232.tif 000024
ジエチル２−ブロモプロパンジオエート（２．５ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（８０ｍＬ）に溶解し、１  ４−フルオロフェノール（１２ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１．３８ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を周囲温度にて５時間撹拌する。ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）を加え、３×５０ｍＬのＨ２Ｏで洗浄する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。濾過し、減圧下で濃縮する。分取ＨＰＬＣ（ＰＲＣ−ＯＤＳカラム／２０×２５０ｍｍ、１５μＭ；アセトニトリル中の３５〜５０％の水の勾配（１０ｍｍｏｌ／ＬのＮＨ４ＨＣＯ３）で溶出、２１４ｎｍで回収）により精製して残留物を得る。残留物を減圧下で濃縮して、無色の油（９２０ｍｇ、３４．１％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７１（Ｍ＋１）。
【００５５】
調製例２９
２−（４−フルオロフェノキシ）プロパン−１，３−ジオール
【化２０】
2015511232.tif 000025
ジエチル２−（４−フルオロフェノキシ）プロパンジオエート（３６０ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、水素化アルミニウムリチウム（ＴＨＦ中に１．０Ｍ、３．６ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、周囲温度にて３０分間撹拌する。Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）の添加により反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。得られた物質を、石油エーテル中の１０％〜５０％のＥｔＯＡｃの勾配を使用してシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（１２ｇ）により精製する。減圧下で所望の画分を濃縮して無色の油（１９５ｍｇ、７８．６％）として標題化合物を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．０（ｍ，４Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），２．４（ｂｓ，２Ｈ）。
【００５６】
調製例３０
２−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロパン−１−オール
【化２１】
2015511232.tif 000026
２−（４−フルオロフェノキシ）プロパン−１，３−ジオール（１８６ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（鉱油中の６０％分散、２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加える。混合物を周囲温度にて３０分間撹拌し、次いでヨードメタン（０．４ｍＬ、４．０９ｍｍｏｌ）を加える。反応物を周囲温度にて１６時間撹拌する。溶媒を減圧下で除去して残留物に水を加える。ＥｔＯＡｃで３回抽出し、ＥｔＯＡｃ抽出物を回収し、乾燥させ、減圧下で溶媒を除去する。１：１のＥｔＯＡｃ：石油エーテルを使用して分取ＴＬＣにより残留物を精製して標題化合物（５０ｍｇ、３１．０％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．０（ｍ，４Ｈ），４．２−４．５（ｍ，２Ｈ），３．８（ｍ，２Ｈ），３．５５（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｂｓ，１Ｈ），２．０（ｓ，３Ｈ）。
【００５７】
調製例３１
１−エトキシ−３−（４−フルオロフェノキシ）プロパン−２−オール
【化２２】
2015511232.tif 000027
ナトリウム（１ｇ、４３．５ｍｍｏｌ）を無水ＥｔＯＨ（８０ｍＬ）にゆっくり加え、混合物を周囲温度にて２時間撹拌する。２−［（４−フルオロフェノキシ）メチル］オキシラン（２．０ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）を一回で加え、周囲温度にて１６時間撹拌する。３０ｍＬのＥｔＯＡｃを加え、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で３回洗浄し、次いで有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して黄色の油として標題化合物（２．５５ｇ、８６．３％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ７．１５（ｍ，２Ｈ），６．９５（ｍ，２Ｈ），５．０５（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｍ，３Ｈ），３．４９（ｍ，４Ｈ），１．０５（ｔ，３Ｈ）。
【００５８】
調製例３２
［１−（エトキシメチル）−２−（４−フルオロフェノキシ）エチル］メタンスルホネート
【化２３】
2015511232.tif 000028
１−エトキシ−３−（４−フルオロフェノキシ）プロパン−２−オール（２．２ｇ、１０．２７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１１０ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（３０ｍＬ）およびメタンスルホニルクロリド（１．１８ｇ、１０．２７ｍｍｏｌ）を反応容器に入れる。周囲温度にて１６時間撹拌する。溶媒を減圧下で除去する。１００ｍＬのＥｔＯＡｃを加え、有機層をＨ２Ｏ（２０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して茶色の油（２．３０ｇ、７６．６％）として標題化合物を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ７．０（ｍ，２Ｈ），６．９５（ｍ，２Ｈ），５．０（ｍ，１Ｈ），４．１８（ｄ，２Ｈ），３．８０（ｄ，２Ｈ），３．６０（ｍ，２Ｈ），３．１０（ｓ，３Ｈ），１．１０（ｔ，３Ｈ）。
【００５９】
調製例３３
［２−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロピル］メタンスルホネート
【化２４】
2015511232.tif 000029
［２−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロピル］メタンスルホネートを実質的に調製例３２の方法によって調製する。ＧＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２７８（Ｍ＋）。
【００６０】
調製例３４
１−エトキシ−３−（４−フルオロフェノキシ）プロパン−２−アミン
【化２５】
2015511232.tif 000030
［１−（エトキシメチル）−２−（４−フルオロフェノキシ）エチル］メタンスルホネート（２．３ｇ、７．８７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（１ｇ、１５．３８ｍｍｏｌ）を混合物に加える。混合物を７０℃にて３時間撹拌する。Ｅｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）を加え、水（３×１０ｍＬ）で洗浄する。相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で有機相を乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して透明な油を得る。その油をＴＨＦ（５０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１２．５ｍＬ）の混合物に溶解する。トリフェニルホスフィン（３．０ｇ、１１．４４ｍｍｏｌ）を加え、３０℃にて２時間撹拌する。１ＮのＮＨ３／ＭｅＯＨを用いてＳＣＸ−イオン交換クロマトグラフィーにより反応混合物を精製して、生成物画分を得る。選択した画分を減圧下で濃縮し、次いでＤＣＭ中の１％〜１０％のＭｅＯＨの勾配を使用してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、２１４ｎｍの波長にて画分を回収する。減圧下で濃縮して、無色の油（８８０ｍｇ、３３．５％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１４（Ｍ＋１）。
【００６１】
調製例３５
１−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロパン−２−アミン
【化２６】
2015511232.tif 000031
１−（４−フルオロフェノキシ）−３−メトキシ−プロパン−２−アミンを実質的に調製例３４の方法によって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２００（Ｍ＋１）。
【００６２】
調製例３６
３−エトキシ−２−（２−ピリジルオキシ）プロパン−１−アミン
【化２７】
2015511232.tif 000032
３−エトキシ−Ｎ，Ｎ−ビス［（４−メトキシフェニル）メチル］−２−（２−ピリジルオキシ）プロパン−１−アミン（１．０５ｇ、２．４１ｍｍｏｌ）、パラジウム／炭素（５％、０．１１ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、およびｔｅｒｔ−ブチルアルコール（１５ｍＬ）を合わせる。水素ガスで３回パージし、次いで混合物を５０℃にて水素ガスの雰囲気下で４日間撹拌する。反応物をセライト（登録商標）プラグで濾過し、そのプラグをＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）でリンスする。濾液を回収し、減圧下で濃縮して、黄色の油として標題化合物（０．４２ｇ、８９．０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９７（Ｍ＋１）。
【００６３】
調製例３７
３−エトキシ−２−［（５−フルオロ−２−ピリジル）オキシ］プロパン−１−アミン
【化２８】
2015511232.tif 000033
３−エトキシ−２−［（５−フルオロ−２−ピリジル）オキシ］プロパン−１−アミンを実質的に調製例３６の方法によって調製する。
【００６４】
調製例３８
Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−［４−［［［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］メチル］フェニル］エチル］メタンスルホンアミド
【化２９】
2015511232.tif 000034
（２Ｒ）−１−アミノプロパン−２−オール（０．４ｇ、５．３３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０．６ｍＬ）に溶解し、次いで酢酸（３６６．２μＬ、６．３９ｍｍｏｌ）およびＮ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−ホルミルフェニル）−エチル］−メタンスルホンアミド（１．６５ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物を周囲温度にて２時間撹拌し、次いでナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２．８２ｇ、１３．３１ｍｍｏｌ）を加え、周囲温度にて一晩撹拌する。ＭｅＯＨ（１ｍＬ）を加え、減圧下で溶媒の一部を蒸発させる。２ＭのＮＨ３／ＭｅＯＨで溶出するＳＣＸカラムクロマトグラフィーにより精製する。適切な画分を減圧下で濃縮して標題化合物（１．７ｇ、９３．８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４１（Ｍ＋１）。
【００６５】
調製例３９
Ｎ−［（１Ｒ）−１−［４−［［［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］メチル］フェニル］エチル］メタンスルホンアミド
【化３０】
2015511232.tif 000035
Ｎ−［（１Ｒ）−１−［４−［［［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］メチル］フェニル］エチル］メタンスルホンアミドを実質的に調製例３８の方法によって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）２８７（Ｍ＋１）。
【００６６】
実施例１
Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩
【化３１】
2015511232.tif 000036
方法１：
（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロパン−１−アミン（２５．０ｇ、１２４．９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４１６．２ｍＬ）に溶解し、Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−ホルミルフェニル）エチル］メタンスルホンアミド（３５．１２ｇ、１２４．８７ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。混合物を２時間撹拌し、それを０℃に冷却し、次いでテトラヒドロホウ酸ナトリウム（１４．１７ｇ、３７４．６ｍｍｏｌ）を、周囲温度以下の温度に維持するために添加速度を制御しながら、５０分にわたって少しずつ加える。混合物を周囲温度にて１．５時間撹拌し、次いでそれを０℃に冷却し、水（９０ｍＬ）をゆっくり加えて反応をクエンチする。混合物を周囲温度に加温し、減圧下で濃縮する。水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出する。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。５０〜８０％のＥｔＯＡｃ／ＤＣＭの勾配で溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーを使用して粗物質を精製して、油（４６．５ｇ、７８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６６（Ｍ＋１）。
【００６７】
その油（４６ｇ、９８．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２７６ｍＬ）に溶解する。塩化水素（Ｅｔ２Ｏ中に５Ｍ、４９４．１ｍＬ、４９４．１ｍｍｏｌ）を加える。スパチュラで粉砕し、次いで真空下で濃縮し、真空オーブン中で４５℃にて一晩、次いで５０℃にて２４時間、乾燥させて、白色の固体（４８．０ｇ、９０．２％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６６（Ｍ＋１−Ｃｌ）。
【００６８】
方法２：
（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロパン−１−アミン（１００．０ｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．６Ｌ）に溶解し、周囲温度の水浴により一定の温度を維持しながらＮ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−ホルミルフェニル）−エチル］−メタンスルホンアミド（１４０ｇ、０．５ｍｏｌ）を少しずつ加える。混合物を２．５時間撹拌する。１５℃に冷却し、周囲温度以下の温度を維持するために添加速度を制御しながら、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２１１ｇ、１ｍｏｌ）を少しずつ加える。混合物を周囲温度にて２時間撹拌する。ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、１Ｌの水中の０℃の炭酸水素ナトリウム（２０９ｇ）溶液に注ぐ。層を分離し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。８：２〜２：８の勾配でＤＣＭ／ＥｔＯＡＣを用いてフラッシュカラムクロマトグラフィーを使用して精製して、粘稠な油（１７５ｇ、７５％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６６（Ｍ＋１）。
【００６９】
１７５ｇ（０．３４ｍｏｌ）の油をＥｔＯＨ（４７０ｍＬ）およびヘプタン（６９０ｍＬ）に溶解し、１０℃に冷却する。塩化水素（ジオキサン中に４Ｍ、１．２５ｅｑ、０．４２ｍｍｏｌ、１０５ｍＬ）を加える。周囲温度にして、２時間撹拌する。濾過により固体を回収し、真空オーブン中で６０℃にて一晩乾燥させて、白色の固体（１５０ｇ、８９％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６６（Ｍ−Ｃｌ）。
【００７０】
以下の表３の化合物を実質的に実施例１の方法１によって調製する。以下の表３の実施例は全て、キラル開始物質から開始して、および／または以下に示したクロマトグラフィーカラムおよび条件を使用して単一異性体として単離する。分離は遊離塩基またはその塩形態で実施され得る。
【表４−１】
2015511232.tif 000037
【表５】
2015511232.tif 000038
【表６−１】
2015511232.tif 000039
【表６−２】
2015511232.tif 000040
【表６−３】
2015511232.tif 000041
【表６−４】
2015511232.tif 000042
【表６−５】
2015511232.tif 000043
【表６−６】
2015511232.tif 000044
【表６−７】
2015511232.tif 000045
【表６−８】
2015511232.tif 000046
【００７１】
実施例３５
Ｎ−（１−｛４−［（｛３−エトキシ−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］プロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル）メタンスルホンアミド塩酸塩
【化３２】
2015511232.tif 000047
Ｎ−（１−｛４−［（｛３−エトキシ−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］プロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル）メタンスルホンアミド塩酸塩をジアステレオマーの混合物として実質的に実施例１の方法１によって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）４２６（Ｍ−Ｃｌ）。
【００７２】
実施例３６
Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２ｒ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］プロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］−メタンスルホンアミド塩酸塩
【化３３】
2015511232.tif 000048
Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−［４−［［［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］メチル］フェニル］エチル］メタンスルホンアミド（１．６０ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（２０６．８ｍｇ、５．１７ｍｍｏｌ）をゆっくり加える。周囲温度にて窒素雰囲気下で２０分間撹拌する。２，４−ジフルオロピリジン（５４０．９８ｍｇ、４．７０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１０５℃で１８時間加熱する。Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）を加え、ＤＣＭで３回抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。５％（２Ｎ  ＮＨ３／ＭｅＯＨ）／ＤＣＭで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより残留物を精製する。適切な画分を減圧下で濃縮し、残留物（４２６ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解する。ＨＣｌ（Ｅｔ２Ｏ中に２Ｍ、９７８．３μＬ、１．９６ｍｍｏｌ）を加え、周囲温度にて５分間撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、真空オーブン中で４０℃にて乾燥させて標題化合物（４６０ｍｇ、９９．６％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３６（Ｍ−Ｃｌ）。
【００７３】
実施例３７
Ｎ−［（１Ｒ）−１−｛４−［（｛（２Ｒ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］プロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩
【化３４】
2015511232.tif 000049
Ｎ−［（１Ｒ）−１−｛４−［（｛（２Ｒ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］プロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩を実質的に実施例３６の方法によって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）４１８（Ｍ−Ｃｌ）。
【００７４】
実施例３８
Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２ｒ）−２−［（５−フルオロピリジン−３−イル）オキシ］プロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩
【化３５】
2015511232.tif 000050
Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２ｒ）−２−［（５−フルオロピリジン−３−イル）オキシ］プロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩を実質的に実施例３６の方法１によって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）４３６（Ｍ−Ｃｌ）。
【００７５】
クロマトグラフィー条件を上記の実施例から変更する場合、表４に示す。
【００７６】
【表７】
2015511232.tif 000051
【００７７】
実施例３９
結晶性Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩
【化３６】
2015511232.tif 000052
１７５．２４ｇのＮ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド（実施例１）を４７０．２９ｍＬのＥｔＯＨに溶解する。この溶液を１０℃に冷却する。１．２５当量のＨＣｌを滴下漏斗によりゆっくり加え、溶液を室温に加温する。得られた固体を濾過により回収し、真空オーブン中で６０℃にて一晩乾燥させて、８９．３６％の収率で１５０．９７ｇの標題化合物を得る。
【００７８】
Ｘ線粉末回折
結晶性Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−エトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩（実施例３９）の固体のＸ線回折（ＸＲＤ）パターンは、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）を備えた、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｘ線粉末回折計ならびに３５ｋＶおよび５０ｍＡにて作動するＶａｎｔｅｃ検出器で得ることができる。試料は、２θにおいて０．００９°のステップサイズおよび０．５秒／ステップの走査速度で、ならびに０．６ｍｍの発散、５．２８の固定散乱防止、および９．５ｍｍの検出スリットで２θにおいて４から４０°で走査する。乾燥粉末を石英試料ホルダに充填し、スライドグラスを使用して平滑な表面を得る。結晶形態回折パターンを周囲温度および相対湿度にて回収する。存在する場合、２θにおいて０．２のピーク位置変動性は、示した結晶形態の明確な識別を妨げずにこれらの潜在的な変動を考慮に入れる。結晶形態の確認は、識別ピーク（°２θの単位において）の任意の特有の組み合わせに基づいて行われ得る（米国薬局方＃３５、国民医薬品集＃３０、９４１章、４２７−４３２ページ（２０１２））。周囲温度および相対湿度にて収集した結晶形態回折パターンは、８．８５３°２θにてピークを有するＮＢＳ標準参照物質６７５（雲母）に基づいて調整した。
【００７９】
結晶性塩酸塩
１７５．２４ｇのＮ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミドを溶解した結晶性Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［（｛（２Ｓ）−２−［（５−フルオロピリジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシプロピル｝アミノ）メチル］フェニル｝エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩の調製した試料を、以下の表５に記載した回折ピーク（２θ値）を有するとして、特に、０．２°の回折角に対する許容度で１８．１３、１４．９５および１８．６７からなる群から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて２１．１４にてピークを有するとして、ＣｕＫａ放射線を使用してＸ線回折パターンにより特徴付ける。
【００８０】
【表８】
2015511232.tif 000053
【００８１】
ＭＯＧＡＴ−２阻害アッセイ
ヒトＭＯＧＡＴ−２に対する化合物のインビトロ阻害活性をこのアッセイで評価する。ＭＯＧＡＴ−２は、オレオイル基を、オレオイル−ＣｏＡ由来のモノオレオイル−グリセロール（「ＭＡＧ」）に変換して、腸トリグリセリド再合成経路においてジオレオイル−グリセロール（「ＤＡＧ」）を形成する。このアッセイは、１４Ｃ−ＤＡＧから１４Ｃ−オレオイル−ＣｏＡを分離するために、親水性分子より疎水性分子を選択的に抽出するＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎを利用する。
【００８２】
遺伝子操作した昆虫ＳＦ９細胞はヒトＭＯＧＡＴ−２を発現する。プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅカタログ番号１１８７３５８０００１）を有する２０ｍＭのＮａＣｌ中で細胞溶解物を調製する。２０×２秒間、１５，０００ｒｐｍにてヒトＭＯＧＡＴ−２を発現するＳＦ９細胞をホモジナイズする（ＰＴ−３１００  Ｐｏｌｙｔｒｏｎｅ）。４℃にて１０分間、１０００ｇでホモジネートを遠心分離する。タンパク質定量および活性試験のために分離管内に上清を回収する。グリセロールモノオレエート基質（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ＣＡＳ＃２５４９６−７２−４）をクロマトグラフィーにより精製する。リン脂質ベシクル（ジオレオイルホスファチジルコリン「ＤＯＰＣ」）中でモノアシルグリセロール（ＭＡＧ）基質を調製する。２０ｍＭの総脂質（ＭＡＧおよびＤＯＰＣ）の濃度にてＭＡＧ／ＤＯＰＣベシクルを調製する。化合物スクリーニング（８．９％）または化合物動力学的研究（２．６〜４０％）のいずれかのために異なるモル比のＭＡＧ対総脂質を調製する。ガラス管内のクロロホルム中で適切な量の精製したＭＡＧおよびＤＯＰＣ（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ＃８５０３７５Ｃ）を混合する。続いてＮ２ガス流下でクロロホルムを蒸発させ、次いで３０分間減圧下で乾燥させる。所望の総脂質濃度のために適切な量の緩衝液（Ｔｒｉｓ−Ｃｌ  ｐＨ７．４、２５０ｍＭのスクロース、１ｍＭのＥＤＴＡ）を乾燥したＭＡＧ／ＤＯＰＣ混合物に加える。溶液が透明になるまでＭＡＧ／ＤＯＰＣ溶液を超音波処理する。均一性を確認するために動的光散乱を使用してベシクルのサイズを測定する。
【００８３】
アッセイ緩衝液は、１００ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １５５６７−０２２）、１１％のＤＭＳＯ、２５０ｍＭのスクロース（Ｓｉｇｍａ  Ｓ−０３８９）、１ｍＭのＥＤＴＡ、および完全プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  １２４５４８００）からなる。試験化合物を基質および酵素と一緒に緩衝液に加える。反応についての最終濃度は、８．９：９１．１（モル比）のＭＡＧ：ＤＯＰＣからなる、超音波処理したベシクルの形態で、０．０１６ｍｇ／ｍＬのＳＦ９細胞抽出物、２０μＭのオレオイル−ＣｏＡ（３．５μＭの１４Ｃ−オレオイル−ＣｏＡ）、１．２６ｍＭの総脂質である。容量でＡＥＳＳＭ（１２．５％の１００％変性ＥｔＯＨ；１１％のＤＩ  Ｈ２Ｏ；２．５％の１．０Ｎ  ＮａＯＨ；５９％のイソプロパノール（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ  ３０３１−０８）；１５％のヘプタン（Ｏｍｎｉ  Ｓｏｌｖ  ＨＸ００７８））を加えることによって室温にて９０分のインキュベーション後、反応を停止させる。Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  Ｅを加え、次いでプレートを密閉し、室温にて少なくとも４時間の平衡後、シンチレーションカウンタでカウントする。濃度対相対ＭＯＧＡＴ−２活性をプロットすることによってＥｘｃｅｌ  Ｆｉｔソフトウェア（バージョン４；４−パラメータ非線形ロジスティック式（ＡＢａｓｅ  Ｅｑｕａｔｉｏｎ  ２０５）を使用したデータ分析）を使用してＩＣ５０（最大値の半分の阻害に到達する濃度）を計算する。
【００８４】
このＭＯＧＡＴ−２インビトロ阻害アッセイにおいて、本明細書に例示した全ての化合物は５０ｎＭ以下のＩＣ５０を有し、実施例１は２ｎＭのＩＣ５０を示す。この結果は、例示した化合物がこのアッセイにおいてＭＯＧＡＴ−２の阻害剤であることを実証する。
【００８５】
ＭＯＧＡＴ−２細胞アッセイにおける阻害活性
細胞環境内のヒトＭＯＧＡＴ−２に対する化合物の阻害活性をこのアッセイにおいて評価する。Ｃａｃｏ−２は、ヒト結腸癌細胞株であり、多くの場合、腸上皮細胞のためのモデルとして使用される。Ｃａｃｏ−２はＭＯＧＡＴ−２を発現しないので、ヒトＭＯＧＡＴ−２を安定なトランスフェクションにより細胞株内で操作する。ＭＡＧ類似体、２−Ｏ−ヘキサデシルグリセロール（ＨＤＧ）を利用して細胞ＭＯＧＡＴ−２活性を検出する。なぜなら、ＨＤＧは加水分解されず、得られた生成物は質量分析により容易にモニタされるからである。基質は、超音波処理したベシクルの形態のＤＯＰＣと共に混合物として使用して細胞に送達される。
【００８６】
完全培地（３／１ＤＭＥＭ：Ｆ１２＋１０％ＦＢＳ＋２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋ゲンタマイシン）中で２４時間後、８０％コンフルエントになるようにＣａｃｏ２細胞を１００ｍｍディッシュ上に播種する。リポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して細胞にｈＭＯＧＡＴ−２プラスミド（ＭＯＧＡＴ−２−ｐＣＤＮＡ３．１−Ｈｙｇｒｏ）をトランスフェクトする。トランスフェクション混合物に対する６時間の曝露後、ＰＢＳ中で細胞を３回洗浄し、次いで培地に加える。さらに１８時間のインキュベーションのために細胞をインキュベートし、細胞をトリプシン処理し、それらを１００ｍｍディッシュ中で連続希釈する。完全培地＋４００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンに加え、クローンが現れるまでインキュベートする。クローンを単離し、２４ウェルディッシュ内に移し、コンフルエンシーまで増殖させる。Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮＡｅａｓｙキットを使用してこれらのクローンからＲＮＡを調製する。７９００配列検出システム（ＡＢＩ）でＡＢＩ  ｉｎｖｅｎｔｏｒｉｅｄアッセイ（ＨＳ００２２８２６２）を使用してＴａｑｍａｎ分析を実施する。ヤギポリクローナル抗体（ＭＯＧＡＴ−２に対応する３８ｋＤタンパク質のヒトＭＯＧＡＴ−２発現を確認するためのＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＳＣ−３２３９２）を使用したウェスタンブロット分析によりこれらのクローンから溶解物を分析する。
【００８７】
ガラス管内のクロロホルム中で２−Ｏ−ヘキサデシルグリセロール（「ＨＤＧ」、Ｂｉｏｓｙｎｔｈ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ、＃Ｈ−１８０６、２０ｍｇ／ｍｌの５６２．７μｌ）およびＤＯＰＣ（２０ｍｇ／ｍｌの１４．３ｍｌ）を混合し、Ｎ２ガス下で最初に乾燥させ、次いでさらに３０分間減圧下で乾燥させる。溶液が透明になるまで超音波処理しながら、２０ｍｌの緩衝液（１５０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ  ｐＨ７．４、２５０ｍＭのスクロース、１ｍＭのＥＤＴＡ）を乾燥したＨＤＧ／ＤＯＰＣ混合物に加える。３７℃、５％ＣＯ２にて一晩、ポリ−Ｄ−リシンでコーティングした９６ウェルプレート（「細胞プレート」）内にＣａｃｏ２細胞を播種する。増殖培地を除去し、２％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）を含有するＤＭＥＭＦ１２（３：１）培地（ＧＩＢＣＯ  ９３−０１５２ＤＫ）中の試験化合物で細胞を３０分間、前処理する。４０μＭのオレイン酸および８００μＭの８．９：９１．９（モル比）のＨＤＧ／ＤＯＰＣを含有する２％ＢＳＡ  ＤＭＥＭＦ１２（３：１）培地中で１つの試験化合物を用いて細胞を４時間処理する。５０μｌのトリプシン溶液で細胞をトリプシン処理し、５０μｌのＰＢＳを加える。乾燥氷上ですぐに細胞を凍結し、ＬＣ−ＭＳ分析のために−２０℃に保存する。以下のようにクロロホルム／メタノールで細胞を抽出する：細胞を２ｍｌプレートに移し、その細胞プレートを２００μＬのメタノールで洗浄し、次いでメタノール洗浄液を２ｍｌプレートに移し、２００μＬのＰＢＳで再び細胞プレートを洗浄し、ＰＢＳ洗浄液を２ｍｌプレートに移す。内部標準（１９．５２ｎｇ／ｍｌ）ＤＡＧ（１５：０、１５：０（Ｓｉｇｍａ））、Ｄ５−ＴＡＧ（３９．０３ｎｇ／ｍＬ）ＣＤＮ（１６，１６，１６）と共にクロロホルム（４００μＬ）を２ｍＬプレートに加える。密閉した２ｍＬプレートを上下にひっくり返し（１０回）、次いでボルテックスし、回転させる。２ｍＬプレートから４００μＬの下層を除去し、別のプレート「最終プレート」のウェルに加える。ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（４００μＬ  ２：１）を２ｍＬプレートに加える。密閉した２ｍＬプレートを再び上下にひっくり返し（１０回）、ボルテックスし、回転させる。２ｍＬプレートから２２０μＬの下層を除去し、最終プレートに加える。最終プレートを乾燥させ、５００ｍＬのＩＰＡで再構成する。最終プレートを密閉し、５分間振盪する。Ｓｈｉｍａｄｚｕ溶媒送達システムに接続した、１０μＬループを備えるＬｅａｐ自動サンプラを使用して、６０℃に保持したＨａｌｏ  Ｃ８カラム（２．１×５０、２．７μＬ粒径）上に最終プレートから１０μｌの試料を注入する。Ｄ５  Ｃ１６  ＴＡＧ内部標準ならびにエーテルＴＡＧ、およびＣ５２およびＣ５４天然ＴＡＧについてのデータを収集するためにチャネルをモニタする。溶媒Ａは２０μＭの酢酸アンモニウムを有する８０／２０のＨ２Ｏ／メタノールである。溶媒Ｂは２０μＭの酢酸アンモニウムを有する５０／５０のＩＰＡ／ＴＨＦである。流速は０．４ｍＬ／分である。洗浄溶媒はＨ２Ｏ／ＭｅＯＨおよびＤＣＭであった。Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアを使用して、対象のピーク面積を抽出し、以下の式：（エーテルＴＡＧの面積／Ｃ５４天然ＴＡＧの面積）／ＩＳの面積を使用するＥｘｃｅｌにデータをエクスポートする。この比率は各ウェル内の細胞数の相違を効果的に考慮に入れる。このＭＯＧＡＴ−２細胞系アッセイについての結果を以下の表６に与える。ＭＯＧＡＴ−２細胞系アッセイの結果は、表６に記載した実施例が細胞環境内のヒトＭＯＧＡＴ−２を阻害することを実証する。
【００８８】
【表９】
2015511232.tif 000054
【００８９】
イヌのオイルボーラスモデルにおける薬理学的効果
小腸内に見られたＭＯＧＡＴ−２を阻害することは、過剰な脂肪摂取により引き起こされる高トリグリセリド血症を治療するのに有用であり得る。ＭＯＧＡＴ−２の阻害は、トリグリセリドの再合成を攪乱し、腸からのトリグリセリドの分泌を減少させる。したがって、ＭＯＧＡＴ−２阻害は、最終的な身体全体の循環のために腸内へのトリグリセリドの最終的な分泌につながる特定のプロセスを妨げる。血液系で測定される、ＭＯＧＡＴ−２により誘導される腸内へのＴＡＧ分泌を阻害する、例示した化合物の１つ以上の能力を評価するために、以下のプロトコルに従うことができる。
【００９０】
各実験について、２１匹のオスのビーグル犬（ｎ＝７／治療群）を登録し、各イヌが９〜１３ｋｇの体重を有するように選択した。標準的な明周期（１２時間の明および１２時間の暗）；室温：７２＋８°Ｆ；および３０％〜７０％の相対湿度でケージ内にイヌを収容する。実験の開始前に１６時間イヌを絶食させ、次いで絶食したイヌにビヒクル（１％ＨＥＣ、０．２５％Ｔｗｅｅｎ８０、Ａｎｔｉｆｏａｍ）またはそのビヒクル内の試験化合物の１つを投与する。０時の試料のために投与の１時間後、イヌを出血させる（頸静脈から０．５ｍｌ）。０時での試料の採取後すぐにイヌにオリーブオイル（Ｓｉｇｍａカタログ番号：Ｏ−１５１４、５ｍｌ／ｋｇ）を投与する。化合物／ビヒクル投与の１．５、２、３、５、７および９時間後、氷上でＥＤＴＡ管内に試料を採取する。試料を１５分間９０００ｃｐｍにて遠心分離し、Ｒｏｃｈｅ  Ｈｉｔａｃｈｉ９１７を使用して血漿総トリグリセリドについて分析する（Ｒｏｃｈｅカタログ番号１８７７７７１）。血漿ＴＡＧ１８．１＿１８．１＿１８．１測定のために、試料を抽出し、１０μＬの血漿を使用したＭＯＧＡＴ−２細胞アッセイにおける上記のものと同様のＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を実施する。
【００９１】
検体は、９０２．８ｍ／ｚの質量を有する、ＴＡＧ１８：１  １８：１  １８：１の［Ｍ＋ＮＨ４］＋イオンであり、内部標準は、８２９．８ｍ／ｚの質量を有する、Ｄ５  ＴＡＧ１６：０  １６：０  １６：０である。ＴＡＧ  １８：１  １８：１  １８：１相対量において６０３．５ｍ／ｚ娘イオンの９０２．８ｍ／ｚ（ＴＡＧ  １８：１  １８：１  １８：１）および５５６．５ｍ／ｚ娘イオンの８２９．８ｍ／ｚ（Ｄ５  ＴＡＧ  １６：０  １６：０  １６：０内部標準）の割合の変化が現れる。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ４：（正味のＡＵＣＴＡＧ＝ＡＵＣＴＡＧオイルボーラス後−０時間でのＡＵＣＴＡＧ）を使用して全ＴＡＧ  ＡＵＣからベースラインＴＡＧ  ＡＵＣを引いて正味の血漿ＴＡＧ  ＡＵＣを算出する。血漿トリグリセリドの阻害パーセントを以下のように計算する：（正味のＴＡＧ  ＡＵＣのオイルボーラス群平均−化合物処置した正味のＴＡＧ  ＡＵＣのオイルボーラス群平均／正味のＴＡＧ  ＡＵＣのオイルボーラス群平均）＊１００。最後の統計的解析は、対照との比較のためにＯｎｅ  ｗａｙ  Ａｎｏｖａのダネット法を使用する。全ての正味のＴＡＧ  ＡＵＣ値は、実験内の変動性を限定するために比較のためのランク付けした平均化ＡＵＣに変換する。
【００９２】
３０ｍｇ／ｋｇにて投与した実施例１は、腸内でＴＡＧ分泌を６１％（６４％の１８：１ＴＡＧ）減少させ、６０ｍｇ／ｋｇでは、７７％阻害（７６％の１８：１ＴＧ）によりＴＡＧ吸収を減少させた。６０ｍｇ／ｋｇにて投与した実施例３６はＴＡＧ分泌を３８％（４３％の１８：１  ＴＡＧ）減少させた。これらのデータは、実施例１および３６が腸からのＴＡＧ分泌についてのＭＯＧＡＴ−２活性を阻害することを実証する。
【００９３】
本発明の例示した化合物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．１９９０に見出されるものなどの許容される手順に従って医薬組成物に容易に製剤化され得る。治療医師または他の医療専門家は、特に高トリグリセリド血症を治療するために、必要とするヒトを治療するための化合物の有効量を決定できる。好ましい医薬組成物は経口投与のための錠剤またはカプセル剤として製剤化され得る。錠剤またはカプセル剤は、治療を必要とする患者を治療するのに有効な量で本発明の化合物を含んでもよい。
【国際調査報告】
2015511232.tif 000058
2015511232.tif 000059