(57)【要約】  本発明は、CD37陽性細胞（例えばB細胞）の枯渇を根幹とする免疫療法に関する。本発明は、1つの/複数のCD37抗体及びICEを併用してCD37陽性細胞（例えばB細胞）を個体/患者で減少させる方法を提供する。CD37抗体及びICEの併用は、単剤治療と比較して抗腫瘍有効性を改善することを示す。本出願はさらに、異常なB細胞活性を伴う疾患を治療する材料及び方法を提供する。
2015517511.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
CD37陽性悪性疾患、好ましくはB細胞悪性疾患、もっとも好ましくは慢性リンパ球性白血病（CLL）又はB細胞非ホジキンリンパ腫（B-NHL）を罹患する患者の治療方法で、ICE（3薬剤（イフォスファミド（ifosfamide）、カルボプラチン（carboplatin）及びエトポシド（etoposide）（又はリン酸エトポシド）を使用する組合せ化学療法レジメン）と併用して使用されるCD37抗体であって、該CD37抗体が、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む、前記CD37抗体。
【請求項２】
患者が、治療サイクル中に少なくとも1用量の該CD37抗体及び少なくとも1回のICE投与を受け、前記治療サイクルが、約1から6週間、好ましくは2から4週間、もっとも好ましくは3週間の期間である、請求項1に記載のCD37抗体。
【請求項３】
患者が、少なくとも1用量のCD20抗体（例えばリツキシマブ）を追加投与される、請求項1又は2に記載のCD37抗体。
【請求項４】
CD37抗体がICE投与と同時に前記患者に投与される、請求項1から3に記載のCD37抗体。
【請求項５】
CD37抗体が、ICEの投与後に、好ましくはICEの投与後24時間以内に又は36時間以内に前記患者に投与され、好ましくは該CD37抗体が、ICEの3日連続適用後に、好ましくは第三のエトポシド投薬の投与後24時間以内に又は36時間以内に前記患者に投与される、請求項1から3に記載のCD37抗体。
【請求項６】
CD37抗体が、ICEの投与前に、好ましくはICEの投与前24時間以内に又は36時間以内に前記患者に投与され、好ましくは該CD37抗体が、ICEの3日連続適用前に、好ましくは第一のエトポシド投薬の投与前24時間以内に又は36時間以内に前記患者に投与される、請求項1から3に記載のCD37抗体。
【請求項７】
CD37抗体が、治療サイクル中に、好ましくは該治療サイクルのまん中で、約2週間で又は1週間毎に1回、少なくとももう1回追加投与される、請求項1から6に記載のCD37抗体。
【請求項８】
CD37抗体が、約10μg/kgから40mg/kgの用量で、又は患者につき約1mgから2800mgの用量で投与される、請求項1から7に記載のCD37抗体。
【請求項９】
70kgの人の1週間の概算用量が、1mgから2800mgの範囲、好ましくは1mgから1400mg、又は10mgから1400mg、又は10mgから1000mg、又は100mgから1400mg、又は100mgから385mg、もっとも好ましくは10mgから1400mgの範囲であり、該CD37抗体が好ましくは配列番号：5及び6を含む、請求項1から8に記載のCD37抗体。
【請求項１０】
70kgの人の1週間の概算用量が、1mgから2800mgの範囲、好ましくは1mgから1400mg、又は10mgから1400mg、又は10mgから1000mg、又は100mgから1400mg、又はより具体的には100mgから385mgの範囲であり、該CD37抗体が好ましくは配列番号：11及び12を含む、請求項1から8に記載のCD37抗体。
【請求項１１】
ICEの各成分の用量範囲が好ましくは、
i）イフォスファミドについては3g/m2体表面から7g/m2体表面の間であり、好ましくは、イフォスファミド用量は5g/m2であり、イフォスファミドは好ましくは該治療サイクルの第二治療日に投与され、
ii）カルボプラチンについては200から800mgの間であり（用量はクリアランス及び曲線下面積（AUC）を基準にする）、カルボプラチンは好ましくは該治療サイクルの第二治療日に投与され、さらに
iii）エトポシドについては50 mg/m2から200mg/m2の間であり、好ましくは、エトポシド用量は100mg/m2であり、エトポシドは好ましくは該治療サイクルの第一、第二及び第三治療日に投与される、請求項1から10に記載のCD37抗体。
【請求項１２】
患者がB-NHLを罹患する患者であり、ICEの各成分の用量範囲が好ましくは、
i）イフォスファミドについては3g/m2体表面から7g/m2体表面の間であり、好ましくは、イフォスファミド用量は5g/m2であり、イフォスファミドは好ましくは治療サイクルの第二治療日に投与され、
ii）カルボプラチンについては200から800mgの間であり（用量はクリアランス及び曲線下面積（AUC）を基準にする）、カルボプラチンは好ましくは治療サイクルの第二治療日に投与され、さらに
iii）エトポシドについては50 mg/m2から200mg/m2の間であり、好ましくは、エトポシド用量は100mg/m2であり、エトポシドは好ましくは治療サイクルの第一、第二及び第三治療日に投与され、
治療サイクルが好ましくは2−3週間、もっとも好ましくは3週間である、請求項1から11に記載のCD37抗体。
【請求項１３】
CD37抗体及びICEの併用投与が第一線治療として実施される、請求項1から15に記載のCD37抗体。
【請求項１４】
CD37抗体及びICEの併用投与が第二線治療又はその後の治療として実施される、請求項1から15に記載のCD37抗体。
【請求項１５】
CD37陽性細胞を減少させる方法であって、
a）CD37陽性細胞をCD37抗体に曝露する工程、及び、
b）CD37陽性細胞をICEに曝露する工程、
を含み、工程a）の前記CD37抗体が、
i）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
ii）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む、前記方法。
【請求項１６】
CD37陽性細胞がCD20抗体（例えばリツキシマブ）に追加曝露される、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
CD37陽性細胞がCD37抗体及びICEに同時に曝露されるか、
又はCD37陽性細胞が、それらがICEに曝露された後、好ましくはそれらがICEに曝露された後24時間以内に又は36時間以内にCD37抗体に曝露されるか、
又はCD37陽性細胞が、それらがICEに曝露される前、好ましくはそれらがICEに曝露される前24時間以内に又は36時間以内にCD37抗体に曝露される、請求項15又は16に記載の方法。
【請求項１８】
CD37陽性細胞を減少させるためのキットであって、前記キットが、
a）CD37抗体を含む容器、及び、
b）a）のCD37抗体をICEと併用投与することによってCD37陽性細胞を減少させるために該キットを使用するための指示書、及び／又は、
c）場合によって、工程a）のCD37抗体をICE及びCD20抗体（例えばリツキシマブ）と併用投与することによってCD37陽性細胞を減少させるために該キットを使用するための指示書、
を含み、前記CD37抗体が、
iii）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
iv）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む、前記キット。
【請求項１９】
CD37陽性細胞を減少させるためのキットであって、前記キットが、
a）CD37抗体を含む第一の容器、
b）ICEを含む第二の容器、及び、
c）場合によってCD20抗体（例えばリツキシマブ）を含む第三の容器、及び、
d）CD37陽性細胞を減少させるために該キットを使用するための指示書、
を含み、前記CD37抗体が、
iii）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
iv）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む、前記キット。
【請求項２０】
指示書が、該CD37抗体及びICEを同時に投与するように指示するか、
又は該指示書が、ICEの前に、好ましくはICEの投与前24時間以内に又は36時間以内に該CD37抗体を投与するように指示するか、
又はc）の指示書が、ICEの後に、好ましくはICEの投与後24時間以内に又は36時間以内に該CD37抗体を投与するように指示する、請求項18又は19に記載のキット。
【請求項２１】
指示書が、CD37陽性悪性疾患、好ましくはB細胞悪性疾患、好ましくは慢性リンパ球性白血病（CLL）又はB-NHL、もっとも好ましくはB-NHLを罹患する患者に該キット成分を投与するように指示する、請求項18から20に記載のキット。
【請求項２２】
CD37抗体及びICE並びに請求項15−17に記載の方法を示した表示を含む製造物品であって、該CD37抗体が、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む、前記製造物品。
【請求項２３】
CD37抗体、ICE及び医薬的に許容できる担体を含む医薬組成物であって、該CD37抗体が、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む、前記医薬組成物。
【請求項２４】
CD37陽性悪性疾患、好ましくはB細胞悪性疾患を治療する方法であって、治療的に有効な量のi）CD37抗体及びii）ICE及び場合によってiii）CD20抗体（例えばリツキシマブ）をその必要がある患者に投与する工程を含み、該CD37抗体が、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む、前記方法。
【請求項２５】
CD37抗体が、
a）配列番号：2に示すアミノ酸配列を含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：4に示すアミノ酸配列を含む可変軽鎖、
によって規定されるキメラ抗体であり、該定常重鎖及び軽鎖が好ましくはヒト起源である、請求項1から14に記載のCD37抗体、請求項15から17に記載の方法、請求項18から21に記載のキット、請求項22に記載の製造物品、請求項23に記載の医薬組成物、又は請求項24に記載の治療方法。
【請求項２６】
抗体が、配列番号：5のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：6のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項1から14に記載のCD37抗体、請求項15から17に記載の方法、請求項18から21に記載のキット、請求項22に記載の製造物品、請求項23に記載の医薬組成物、及び請求項24に記載の治療方法。
【請求項２７】
抗体が、配列番号：2に融合された配列番号：7のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号：4に融合された配列番号：8のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項1から14に記載のCD37抗体、請求項15から17に記載の方法、請求項18から21に記載のキット、請求項22に記載の製造物品、請求項23に記載の医薬組成物、及び請求項24に記載の治療方法。
【請求項２８】
抗体が、配列番号：9のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：10のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項1から14に記載のCD37抗体、請求項15から17に記載の方法、請求項18から21に記載のキット、請求項22に記載の製造物品、請求項23に記載の医薬組成物、及び請求項24に記載の治療方法。
【請求項２９】
抗体が、ヒト抗体に由来するCDRの保持フレームワークによって規定されるヒト化抗体であり、さらに該定常重鎖及び軽鎖がヒト抗体由来である、請求項1から14に記載のCD37抗体、請求項15から17に記載の方法、請求項18から21に記載のキット、請求項22に記載の製造物品、請求項23に記載の医薬組成物、及び請求項24に記載の治療方法。
【請求項３０】
抗体が、配列番号：11のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：12のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項1から14に記載のCD37抗体、請求項15から17に記載の方法、請求項18から21に記載のキット、請求項22に記載の製造物品、請求項23に記載の医薬組成物、及び請求項24に記載の治療方法。
【請求項３１】
抗体が、配列番号：13のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：14のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項1から14に記載のCD37抗体、請求項15から17に記載の方法、請求項18から21に記載のキット、請求項22に記載の製造物品、請求項23に記載の医薬組成物、及び請求項24に記載の治療方法。
【請求項３２】
CD37陽性悪性疾患が、多発性骨髄腫、プラズマ細胞腫、T細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、及びB細胞悪性疾患、例えばB細胞リンパ腫、攻撃性B細胞リンパ腫、ホジキン病、B細胞非ホジキンリンパ腫（B-NHL）、リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症（リンパプラズマ細胞性リンパ腫又は免疫細胞腫とも称される）、中枢神経系リンパ腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、慢性リンパ球性白血病（CLL、B細胞慢性リンパ球性白血病（BCLL）とも称される）、ヘアリー・セル白血病、慢性骨髄性白血病、小リンパ球性リンパ腫、B細胞前リンパ球性白血病、リンパプラズマ細胞性リンパ腫、脾辺縁層リンパ腫、粘膜結合リンパ系組織（MALT）の節外辺縁層B細胞腫、リンパ節辺縁層B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、びまん性大B細胞リンパ腫、縦隔（胸線）大B細胞リンパ腫、血管内大B細胞リンパ腫、原発性浸出リンパ腫、バーキットリンパ腫/白血病、グレイゾーンリンパ腫、悪性性不確定B細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症、及び移植後リンパ球増殖性疾患から成る群から選択され、該B細胞悪性疾患が、好ましくはB細胞非ホジキンリンパ腫、B細胞慢性リンパ球性白血病であり、該B細胞悪性疾患がもっとも好ましくはB細胞非ホジキンリンパ腫である、請求項1から14に記載のCD37抗体、請求項15から17に記載の方法、請求項18から21に記載のキット、請求項22に記載の製造物品、請求項23に記載の医薬組成物、及び請求項24に記載の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、CD37陽性細胞（例えばB細胞）の枯渇を根幹とする免疫療法に関する。特に、本発明は、そのような免疫療法で、例えばB細胞悪性疾患、他のCD37陽性悪性疾患及び自己免疫症状の治療で使用される、CD37抗体（特にA2及びB2）及び化学療法（特にICE）の併用に関する。
【背景技術】
【０００２】
モノクローナル抗体（mAb）を用いる免疫療法は、癌及び他の疾患の安全で選択的な治療方法として出現した。特に、B細胞枯渇を基礎とする治療方法におけるモノクローナル抗体の役割、例えばB細胞悪性疾患の治療におけるモノクローナル抗体の役割は、リツキシマブ（Rituxan(商標)）（B細胞表面のCD20抗原に対抗する抗体）の導入以来高まった。多くの研究によって、低悪性度NHLにおける単剤療法としての及び併用療法におけるリツキシマブの有効性が確認された。シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニソロン（CHOP）の併用に加えてリツキシマブを用いる最前線療法は、CHOP単独療法と比較して進行期の濾胞性リンパ腫患者に対する成果を顕著に改善する（Hiddemann W, et al. Blood 2005; 106: 3725-3732 (2005)）。フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン（FCM）の併用へのリツキシマブの添加は、FCM単独と比較して、再発した難治性濾胞性及び外套細胞リンパ腫患者で応答率を顕著に高め、延命をもたらす（Forstpointner R, et al.,  Blood, 2004; 104: 3064-3071）。しかしながら、治療には部分的患者群しか応答せず、リツキシマブ治療後に当該患者の大半が最終的に再発を示す。したがって、CD20抗原に対抗する抗体（例えばリツキシマブ）よりも高い有効性を有する免疫療法を見つけることが希求される。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、3つの薬剤（イフォスファミド（ifosfamide）、カルボプラチン（carboplatin）及びエトポシド（etoposide）（“ICE”と略記される））を利用する組合せ化学療法レジメンと併用されるCD37抗体（好ましくはA2及びB2）を記載する。CD37抗体（好ましくはA2及びB2）とICEとの併用は抗腫瘍効果の改善をもたらす。前記2つの治療薬剤（CD37抗体及びICE）は同時に（場合によって同じ医薬調製物の成分として）投与してもよく、又はICEはCD37抗体の投与前若しくは投与後に投与することもできる。
本発明にしたがえば、本発明に記載する抗CD37抗体とICEとの新規な併用が提供される。したがって、本発明の抗CD37抗体とICEとの併用は、CD37陽性悪性疾患（例えばB細胞悪性疾患）に罹患する患者の治療に用いられる。
B細胞悪性疾患（例えばCLL及びB-NHL）の患者における高度な腫瘍増殖減速はそのような患者の治療に有益と考えられ、そのような薬剤で処置された患者に臨床成果の増大をもたらすと考えられる。ICEと併用されるCD37抗体（例えばA2）は、Ramosリンパ腫モデルで高度なin vivo腫瘍増殖減速を示す。CD37 mAb及びICEの併用における抗腫瘍効果は前記個々の薬剤単独の効果より優れている（本出願に開示したデータを参照されたい）。腫瘍増殖減速は治療有効性の代用パラメーターと考えられる。ICEとの併用におけるA2のこのすぐれた有効性は図1及び2で特に明瞭であり、個々の薬剤単独の有効性よりも優れている。
【０００４】
CD37抗体（特にmAb A2又はB2）及び化学療法（例えばICE）による併用治療の利点は、ICE単独療法の有効性とICE及びCD37抗体（特にmAb A2又はB2）併用の有効性とを比較する臨床試験でもさらに示される。前記試験は任意抽出態様で実施され、例えば患者は任意抽出によって当該試験で2つの異なる治療アームに割り当てられる。治療に対する応答は、対応する徴候のための標準化応答基準によって判定される。該治療の有効性は、代用パラメーター（例えば非進行生存（PFS）又は応答率）によって評価される。臨床的に対応する治療効果は、例えば、CD37陽性悪性疾患（例えば成熟B細胞悪性疾患、例えば再発B-NHL）の患者についてICE単独と比較してICE及びA2又はB2による50％完全応答率の増加である（例えば30％に対して45％）。
【０００５】
さらにまた、CD37抗体（特にmAb A2又はB2）、化学療法（例えばICE）及びCD20抗体（例えばリツキシマブ）による併用治療の利点もさらに臨床試験で示される（前記臨床試験では、抗CD20抗体（例えばリツキシマブ）と併用投与されるICE（R-ICEと称される）の有効性が、抗CD20抗体及び追加CD37抗体（特にmAb A2又はB2）と併用投与されるICE組合せの有効性と比較される）。そのような試験は任意抽出態様で実施され、例えば患者は任意抽出によって当該試験で2つの異なる治療アームに割り当てられる。治療に対する応答は、対応する徴候のための標準化応答基準によって判定される。該治療の有効性は、代用パラメーター（例えば非進行生存（PFS）又は応答率）によって評価される。臨床的に対応する治療効果は、例えば、CD37陽性悪性疾患（例えば成熟B細胞悪性疾患、例えば再発B-NHL）の患者についてR-ICE単独と比較してR-ICE及びA2又はB2による50％完全応答率の増加である（例えば30％に対して45％）。
治療に用いるには、CD37抗体は、動物又は人間への投与を容易にするために適切である医薬組成物に含められる。CD37抗体分子の典型的処方物は、該CD37抗体分子を生理学的に許容できる担体、賦形剤又は安定化剤とともに、凍結乾燥処方物或いは乾燥処方物又は水溶液又は水性若しくは非水性懸濁物の形態で混合することによって調製できる。
本発明のCD37抗体とともに使用される医薬的に許容できる担体及びアジュバントには、例えばイオン交換物質、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清蛋白質、緩衝物質、水、塩類又は電解質及びセルロース系物質が含まれる。
【０００６】
担体、賦形剤、改変剤又は安定化剤は用いられる投薬量及び濃度で非毒性である。それらには以下が含まれる：緩衝系（例えばリン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩及び他の無機若しくは有機酸及びそれらの塩）、抗酸化剤（アスコルビン酸及びメチオニンを含む）、保存料（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール、アルキルパラベン（例えばメチル若しくはプロピルパラベン）、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、3-ペンタノール及びm-クレゾール）、タンパク質（例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン）、親水性ポリマー（例えばポリビニルピロリドン又はポリエチレングリコール（PEG））、アミノ酸（例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン）、単糖類、二糖類、オリゴ糖、又は多糖類、及び他の炭水化物（グルコース、マンノース、シュクロース、トレハロース、デキストリン又はデキストランを含む）、キレート剤（例えばEDTA）、糖アルコール（例えばマンニトール又はソルビトール）、塩形成対イオン（例えばナトリウム）、金属複合体（例えばZn-タンパク質複合体）、及び／又はイオン性若しくは非イオン性界面活性剤、例えばTWEENTM（ポリソルベート）、PLURONICSTM又は脂肪酸エステル、脂肪酸エーテル若しくは糖エステル。有機溶媒（例えばエタノール又はイソプロパノール）もまた抗体処方物に含まれ得る。賦形剤はまた放出改変又は吸収改変機能を有し得る。前記は、医薬的に許容可能な考え得る担体及びアジュバントの完全なリストではなく、当業者は当業界で周知の他の可能なものを認識していよう。
【０００７】
ある実施態様では、CD37抗体A2は、25mMクエン酸ナトリウム、115mM NaCl及び0.04％Tween80（pH6.0）を含むベヒクル中で処方され、PBSで稀釈される。
CD37抗体分子はまた乾燥させるか（凍結乾燥、噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥、近臨界若しくは超臨界気体による乾燥、真空乾燥、風乾）、沈殿若しくは結晶化させるか、又はマイクロカプセル中に（マイクロカプセルは例えばコアセルベーション技術又は界面重合により、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン及びポリ(メチルメタクリレート)を用いて調製される）、コロイド薬剤デリバリー系に（例えばリポソーム、アルブミン微小球、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）、マクロエマルジョン中に封入するか、又は担体若しくは表面上に（例えばpcmc（タンパク質被覆微晶質）技術によって）沈殿若しくは固定することができる。前述のような技術は当業界で公知である。
当然、in vivo投与に用いられる該医薬組成物／処方物は無菌的でなければならない。滅菌は、通常の技術、例えば無菌的なろ過膜を通してろ過することによって達成できる。
CD37抗体の濃度を高めていわゆる高濃度液体処方物（HCLF）を生成することは有用であり得る。そのようなHCLFを作製する多様な方法が記載されている。
【０００８】
CD37抗体分子はまた持続放出調製物中に含有させることができる。そのような調製物は、疎水性又は親水性ポリマーの固体、半固体又は液体マトリックスを含み、さらに成型物品の形状（例えばフィルム、スティック又はマイクロカプセル）を有することができ、適用装置により適用できる。持続放出マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ(2-ヒドロキシエチル-メタクリレート)又はシュクロースアセテートブチレート）、又はポリ(ビニルアルコール)、ポリラクチド（US3,773,919）、L-グルタミン酸とγエチル-L-グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン-ビニルアセテート、分解性乳酸-グリコール酸コポリマー（例えばLUPRON DEPOTTM（乳酸-グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドを含む注射可能微小球））、及びポリ-D-(-)-3-ヒドロキシ酪酸が含まれる。ポリマー（例えばエチレン-酢酸ビニル及び乳酸-グリコール酸）は100日間にわたって分子を放出できるが、ある種のヒドロゲルはより短い期間タンパク質を放出する。被包化抗体が長期間体内に留まるとき、それらは37℃で水分に曝露される結果として変性又は凝集することがあり、生物学的活性の低下及び免疫原性の変化の可能性をもたらす。関与するメカニズムに応じて安定化のために合理的対策を考案することができる。例えば、凝集メカニズムが、チオ-ジスルフィド相互変化による分子間S-S結合形成であることが判明したら、安定化は、スルフヒドリル残基の改変、酸性溶液からの凍結乾燥、適切な添加剤による水分含有量の制御、及び特殊なポリマーマトリックス組成の開発によって達成できる。
【０００９】
CD37抗体分子（特にA2及びB2）はまた、他の適用形（例えば分散物、懸濁物又はリポソーム、錠剤、カプセル、散剤、スプレー、経皮若しくは皮内パッチ又はクリーム（浸透強化装置を含む又は含まない）、ウェファース、鼻用、頬部用若しくは肺用処方物）に取り込むか、又は移植細胞によって若しくは遺伝子治療後に個体自身の細胞によって産生させることができる。
CD37抗体分子（特にA2及びB2）はまた、化学基（例えばポリエチレングリコール（PEG）、メチル若しくはエチル基、又は炭水化物基）を用いて誘導することができる。これらの基は該抗体の生物学的な特徴の改善、例えば血中半減期の延長又は組織結合の強化に有用であり得る。
適用の好ましい態様は、輸液又は注射（静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、皮内）による非経口適用であるが、他の適用態様（例えば吸入、経皮、鼻内、頬部、経口）もまた利用できる。
治療的使用のためには、該化合物は、任意の通常的な調剤形中の治療的に有効な量として任意の通常的な態様で投与できる。投与ルートには以下が含まれる（ただしこれらに限定されない）：静脈内に、筋肉内に、皮下に、滑膜内に、輸液により包膜内に、舌下に、経皮に、経口的に、局所的に又は吸入によって、錠剤、カプセル、カプレット、流動体、溶液、懸濁物、エマルジョン、ロゼンジ、シロップ、再構成可能散剤、顆粒、座薬及び経皮パッチ。そのような調剤形を調製する方法は公知である（例えば以下を参照されたい：H.C. Ansel and N.G. Popovish, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 5th ed., Lea and Febiger, 1990）。治療的に有効な量は、体重、代謝及び疾患の重篤度などの因子を基準に当業者が決定できる。
【００１０】
好ましくは、活性化合物は、体重1kg当たり約0.01μgから約500mgで、治療サイクルにつき少なくとも1回、例えば1週間毎に投与される（0.01μgから500mg/kg体重）。より好ましくは、活性化合物は、体重1kg当たり約0.01mgから約40mgで治療サイクルにつき少なくとも1回投与される。
疾患の予防又は治療のためには、抗体の適切な投薬量は、治療されるべき疾患のタイプ、疾患の重篤度及び進行過程、該抗体投与が予防目的又は治療目的か、以前の治療、患者の臨床歴及び当該抗体の応答、並びに主治医の判断に左右されよう。該抗体は、適切には1回又は一連の治療にわたって患者に投与される。
疾患のタイプ及び重篤度に応じて、CD37抗体（特にA2及びB2）の約0.01μg/kgから40mg/kgが、例えば1回以上別々の投与であれ、又は輸液（例えば連続輸液）であれ、患者への投与の最初の投薬候補量である。数日又はそれ以上に及ぶ反復投与のために、症状に応じて、疾患の症状群の所望の抑制が生じるまで、治療が維持される。しかしながら他の投薬スケジュールも有用であり得る。この治療方法の進み具合は、通常的技術及びアッセイによって、例えばB細胞枯渇の程度を決定することによって（例えばフローサイトメトリーを用いる）容易にモニターできる。
【００１１】
A2（配列番号：5及び6を含むCD37抗体）に関しては、70kgの人の概算用量は1mgから2800mgの範囲、好ましくは1mgから1400mg、又は10mgから1400mg、又は10mgから1000mg、又は100mgから1400mg、又は100mgから385mg、もっとも好ましくは10mgから1400mgの範囲である。前記用量は好ましくは1週間の用量である。A2が2週間毎に投与される場合は、70kgの人には1mgから2800mg、又は2mgから800mg、又はより具体的には200mgから770mgの用量範囲が好ましい。70kgの人のためのB2（配列番号：11及び12を含むCD37抗体）の人間用概算用量は1mgから2800mgの範囲、好ましくは1mgから1400mgの範囲、又は10mgから1400mg、又は10mgから1000mg、又は100mgから1400mg、又はより具体的には100mgから385mgの範囲である。前記用量は好ましくは1週間の用量である。B2が2週間毎に投与される場合は、70kgの人には1mgから2800mg、又は2mgから800mg、又はより具体的には200mgから770mgの用量範囲が好ましい。
【００１２】
治療サイクル：治療サイクルは、1から6週間、好ましくは2から4週間、もっとも好ましくは3週間の期間で、ここで患者は少なくとも1用量のCD37抗体及び少なくとも1用量のICEを投与される。
ICEは、好ましくは1治療サイクル（好ましくは長さが2−3週間（14−21日））において連続して3日投与される。ICEの各成分の用量は以下の範囲である：1）イフォスファミドについては3−7g/m2（好ましくは5g/m2）体表面が第二治療日に投与され、2）カルボプラチンについては200−800mg（用量はクリアランス及び曲線下面積（AUC）を基準にする）が第二治療日に投与され、さらにエトポシドについては50−200mg/m2（好ましくは100mg/m2）が第一、第二及び第三治療日に投与される。
NHL患者の治療のためには、ICEが好ましくは治療サイクルで投与され、治療サイクルは、長さが好ましくは2−4週間（14から28日）又は2−3週間（14−21日）、もっとも好ましくは3週間（21日）である。
別の治療サイクルスケジュールでは、ICEはリツキシマブ又はCD20を標的とする別の抗体と一緒に投与される。この治療選択肢はR-ICEと称される。R-ICEのための好ましい治療サイクルスケジュールでは、リツキシマブ（また別にはCD20を標的とする任意の他の抗体）は、好ましくは第一治療日にエトポシドと一緒にCD20を標的とする抗体（例えばリツキシマブ）を投与することによって、ICE治療サイクル及び投与スケジュール（上記のパラグラフに記載したスケジュール/治療サイクル）にはめ込まれる。リツキシマブの好ましい用量は、100−500mg/m2体表面、好ましくは375−500mg/m2、もっとも好ましくは375mg/m2である。
ICE又はR-ICE治療サイクル時のCD37併用療法のためには、少なくとも1つのCD37抗体（好ましくはA2又はB2）が、上記に記載の用量でICE又はR-ICE投与の前、後又は前記と同時に投与される。同時とは同じ日を意味する。さらにまた、NHLのための別の好ましい治療サイクルスケジュールは、約2週間の治療サイクルの中間、例えばまん中でのCD37抗体の追加投与を含む。
投与されるべき抗体の“治療的に有効な量”は疾患又は異常を予防、緩和又は治療するために必要な最少量である。
【００１３】
CD37陽性悪性疾患にはCD37を発現する全ての悪性疾患（ただしこれらに限定されない）が含まれる。B細胞悪性疾患はCD37陽性悪性疾患グループに属する。B細胞悪性疾患には以下が含まれる（ただしこれらに限定されない）：B細胞リンパ腫（例えば種々の形態のホジキン病、B細胞非ホジキンリンパ腫（NHL）及び関連リンパ腫（例えばヴァルデンストレームマクログロブリン血症（リンパプラズマ細胞性リンパ腫又は免疫細胞腫とも称される）又は中枢神経系リンパ腫））、白血病（例えば急性リンパ芽球性白血病（ALL）、慢性リンパ球性白血病（CLL、B細胞慢性リンパ球性白血病とも称される）、ヘアリー・セル白血病及び慢性骨髄性白血病）。追加されるB細胞悪性疾患には以下が含まれる：小リンパ球性リンパ腫、B細胞前リンパ球性白血病、リンパプラズマ細胞性リンパ腫、脾辺縁層リンパ腫、プラズマ細胞骨髄腫、骨の孤立性プラズマ細胞腫、骨外プラズマ細胞腫、粘膜結合リンパ系組織（MALT）の節外辺縁層B細胞腫、リンパ節辺縁層B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、びまん性大B細胞リンパ腫、縦隔（胸線）大B細胞リンパ腫、血管内大B細胞リンパ腫、原発性浸出リンパ腫（primary effusion lymphoma）、バーキットリンパ腫/白血病、グレイゾーンリンパ腫、悪性性不確定B細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症、及び移植後リンパ球増殖性疾患。さらにまた、CD37陽性悪性疾患にはT細胞リンパ腫、多発性骨髄腫及び急性リンパ球性白血病が含まれるが、ただしこれらに限定されない。
CD37抗体は、単独でも又はアジュバントと併用して投与してもよい。前記アジュバントは、安定性を強化し、ある種の実施態様では前記を含む医薬組成物の投与を容易にし、溶解又は分散の増進を提供し、活性を高め、補助療法を提供などする。有利には、そのような併用は該活性成分のより低い投薬量の利用を可能にし、したがって生じ得る毒性及び有害な副作用を軽減することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】Ramos異種移植片のin vivo腫瘍増殖カイネティクス：Ramos腫瘍保持マウスをmAb A2、ICE、又はICEとmAb A2との併用により処置する。各処置グループの腫瘍体積中央値が時間経過にしたがって示される。1日目が当該実験の初日であり、24日目が最終日である。記号は処置を示し、投与用量は図の説明文に示される。
【図２】腫瘍体積が500mm3を超える時点（日）−確率曲線：Ramos腫瘍保持マウスをICE、A2、又はICEとA2との併用により処置する。時間経過に対する確率曲線が示される。この曲線は500mm3の体積を超えない腫瘍体積の確率を示す。個々の処置グループは説明文で示されている。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
配列表の説明
配列番号：1（可変重鎖（Vh）核酸配列）
配列番号：2（可変重鎖アミノ酸配列）
配列番号：3（可変軽鎖（Vl）核酸配列）
配列番号：4（可変軽鎖アミノ酸配列）
配列番号：5（A2重鎖アミノ酸配列）
配列番号：6（A2軽鎖アミノ酸配列）
配列番号：7（定常重鎖アミノ酸配列）
配列番号：8（定常軽鎖アミノ酸配列）
配列番号：9（A4重鎖アミノ酸配列）
配列番号：10（A4軽鎖アミノ酸配列）
配列番号：11（B2重鎖アミノ酸配列）
配列番号：12（B2軽鎖アミノ酸配列）
配列番号：13（B4重鎖アミノ酸配列）
配列番号：14（B4軽鎖アミノ酸配列）
配列番号：15（CDR1重鎖（H1））
配列番号：16（CDR2重鎖（H2））
配列番号：17（CDR3重鎖（H3））
配列番号：18（CDR1軽鎖（L1））
配列番号：19（CDR2軽鎖（L2））
配列番号：20（CDR3軽鎖（L3））
配列番号：21（代替CDR2重鎖（H2b））
【００１６】
発明の詳細な説明
本実験では、2サイクルのICE及びA2の併用療法によって、単剤処置と比較して有効性の改善が示される（TGI＝84％）。単剤として投与されたmAb A2はリンパ腫（Ramosリンパ腫）の増殖を有意に抑制する。ICE化学療法へのA2の添加は有効性を改善し、前記併用は単剤A2より優れている。A2及びICE化学療法の併用における有効性改善は、そのような併用の累積的又は相乗的効果の指標である。A2及びICEの併用処置の抗腫瘍有効性の改善は、単一療法を超える潜在的臨床成果をCD37陽性悪性疾患罹患患者に提供する。
in vivo SHO免疫不全マウスモデルでは、CD37抗体（例えばmAb A2又はB2、好ましくはmAb A2）及びICEの併用は、単剤処置の抗腫瘍効果を超える改善された当該効果を示す。これらの結果は、CD37抗体（例えばmAb A2又はB2、好ましくはmAb A2）とICEとの併用は、単剤処置と比較して優れた抗腫瘍有効性をもたらすことを示している。
【００１７】
定義
本明細書で特段に規定されない用語には、当該開示及び当該文脈に照らして当業者がそれらに与える意味が与えられるべきである。一般的な表現“comprising”又は“comprised”は、より具体的な表現“consisting of”を包含する。さらにまた、単数形及び複数形は限定的態様では用いられない。しかしながら、本明細書で用いられるように、特段の規定がなければ以下の用語は当該指定された意味を有し、さらに以下の申し合わせにしたがう。
“ICE”という用語は、3薬剤（イフォスファミド（ifosfamide）、カルボプラチン（carboplatin）及びエトポシド（etoposide）（又はリン酸エトポシド））を利用する組合せ化学療法レジメンを指す。本レジメンは再発リンパ腫の治療に通例的に用いられる。
イフォスファミドは癌治療に用いられるアルキル化剤である。イフォスファミドの化学質量式はC7H15Cl2N2O2Pで、分子質量は261.1g/molである。系統（IUPAC）名称はN-3-ビス(2-クロロエチル)-1,3,2-オキサザホスフィナン-2-アミド-2-オキシドである。イフォスファミドの化学構造は以下のとおりである：
【００１８】
2015517511.tif 000003
（式I）
【００１９】
カルボプラチン、又はシス-ジアミン(1,1-シクロブタンジカルボキシレート)白金(II)（商品名パラプラチン及びパラプラチン-AQ）はアルキル化剤であることが公知の化学療法剤である。カルボプラチンの化学質量式はC6H12N2O4Ptであり、分子質量は371.249g/molである。系統（IUPAC）名称はシス-ジアミン(シクロブタン-1,1-ジカルボキシレート-O,O’)白金(II)である。カルボプラチンの化学構造は以下のとおりである：
【００２０】
2015517511.tif 000004
（式II）
【００２１】
リン酸エトポシド（商標名：エポシン（Eposin）、エトポフォス（Etopophos）、ヴェペシド（Vepesid）、VP-16）はトポイソメラーゼII阻害剤である。リン酸エトポシドの化学質量式はC29H32O13であり、分子質量は588.557g/molである。系統（IUPAC）名称は4’-デメチル-エピポドフィロトキシン9-[4,6-O-(R)-エチリデン-ベータ-D-グルコピラノシド], 4’-(二水素リン酸塩)である。リン酸エトポシドの化学構造は以下のとおりである：
【００２２】
2015517511.tif 000005
（式III）
【００２３】
又はリン酸基を有する構造は以下のとおりである：
【００２４】
2015517511.tif 000006
（式IV）
【００２５】
“リツキシマブ”はタンパク質CD20に対するキメラモノクローナル抗体である。リツキシマブの化学式はC6416H9874N1688O1987S44であり、分子量は143859.7g/molである。
“CD37”（テトラスパニンスーパーファミリーのメンバーである）は、高度にグリコシル化された細胞表面分子であり、4つのトランスメンブレンドメイン及び2つの細胞外ループを有する。CD37はB細胞及びB細胞悪性疾患で顕著に発現され、低レベルのCD37発現がT細胞、顆粒球及び単球で報告されている。高レベルのCD37発現が、慢性リンパ球性白血病（CLL）及び異なるサブタイプの非ホジキンリンパ腫（NHL）（外套細胞リンパ腫（MCL）を含む）の患者サンプルで観察されている（Schwartz-Albiez et al, Journal Immunol 140: 905-914, 1988；Barrena et al., Leukemia 19: 1376-1383, 2005）。この発現パターンがCD37を抗体媒介癌療法の重要な標的にしている。CD37特異的mAbと癌細胞との結合は多様な作用メカニズムを始動させ得る。第一に、抗体がCD37抗原の細胞外ドメインと結合した後、該抗体は補体カスケードを活性化し標的細胞を溶解させることができる。第二に、抗CD37抗体は、標識細胞に対する抗体依存細胞媒介性細胞傷害（ADCC）を媒介することができる。前記細胞傷害は、結合抗体のFc部分が免疫系の細胞傷害性細胞上の適切なレセプターによって認識された後で生じる。第三に、該抗体はB細胞が抗原又は他の刺激に応答する能力を変化させることができる。最後に、抗CD37抗体はプログラムされた細胞死（アポトーシス）を開始させることができる。
【００２６】
“CD37陽性”、“CD37陽性細胞”又は“CD37陽性悪性疾患”は、CD37の検出が、免疫組織化学、フローサイトメトリー（例えばFACS（蛍光活性化細胞分類装置）分析（例えば血液、骨髄又は細胞懸濁物のFACS分析））又は代替技術によって可能であるか、実現できることを意味する。CD陽性細胞/悪性疾患を検出する適切なアッセイは当業者には周知である。
本発明で用いられる“CD37抗体”、“CD37抗体分子”、“抗CD37抗体”及び“抗CD37抗体分子”という用語は、具体的にはCD37抗原に対して結合特異性を有する抗体に関する。そのような抗体の例は当業界で公知であり、下記でさらに詳細に述べる。
“抗CD37抗体分子”、“抗CD37抗体”、“CD37抗体”及び“CD37抗体分子”という用語は互換的に用いられる。
“CD37抗体”又は“抗CD37抗体分子”という用語は、複数の抗CD37抗体及び抗CD37抗体フラグメント並びに抗体分子との複合物を包含する。本発明の趣旨では、抗体にはキメラモノクローナル抗体及びヒト化モノクローナル抗体が含まれる。「抗体」という用語（前記は「抗体分子」と互換的に用いることができる）は以下を包含するであろう：完全な免疫グロブリン（それらはリンパ球によって産生され、例えば血液の血清中に存在する）、ハイブリドーマ細胞株によって分泌されるモノクローナル抗体、宿主細胞で組換え体発現によって生成されるポリペプチド（免疫グロブリン又はモノクローナル抗体の結合特異性を有する）、及び改変又は更なるプロセッシングによってそのような抗体から誘導されてあるが、なおそれらの結合特異性を保持する分子。
【００２７】
ある種の実施態様では、本発明の抗体分子はCD37特異的キメラ抗体であり、前記は、ヒト重鎖定常領域IgG1と融合したa）又はb）で規定される非ヒト抗体の重鎖可変領域、及びヒト軽鎖定常領域カッパと融合したa）又はb）で規定される非ヒト抗体の軽鎖可変領域を有する。該CD37抗体はまた複合物の形態にあってもよい。すなわち前記複合物は、細胞傷害性薬剤、特に腫瘍細胞の細胞傷害（例えばアポトーシス又は有糸分裂停止）を誘発する細胞傷害性薬剤と化学的に結合した抗体分子である。正常な薬理学的クリアランスメカニズムの結果として、医薬複合物（“免疫複合体”）で用いられる抗体は、限定された量だけが標的細胞と接触し、これと結合する。したがって、該複合物で用いられる該傷害性薬剤は、十分な細胞殺滅をもたらし治療効果を引き出すために高度に細胞傷害性でなければならない。US2004/0241174に記載されているように、そのような細胞傷害性薬剤の例には以下が含まれる：タキサン（例えばWO01/38318及びWO03/097625を参照されたい）、DNAアルキル化剤（例えばCC-1065アナローグ）、アントラサイクリン、チュブリシンアナローグ、デュオカルマイシンアナローグ、ドキソルビシン、オーリスタチンE、リシンAトキシン、及び反応性ポリエチレングリコール部分を含む細胞傷害性薬剤（例えば以下を参照されたい：Sasse et al., 2000；Suzawa et al., 2000；Ichimura et al., 1991；Francisco et al., 2003；US  5,475,092；US  6,340,701；US  6,372,738；並びにUS  6,436,931；US  2001/0036923；US  2004/0001838；US  2003/0199519；及びWO01/49698）。
【００２８】
好ましい実施態様では、該細胞傷害性薬剤は、メイタンシノイド、すなわちメイタンシンの誘導体（CAS35846538）である。メイタンシノイドは当業界で公知であり、メイタンシン、メイタンシノール、メイタンシノールのC-3エステル、並びに他のメイタンシノールアナローグ及び誘導体を含む（例えばUS  5,208,020及びUS  6,441,163を参照されたい）。
抗CD37抗体免疫複合体は、抗FAP免疫複合体についてWO2007/077173に記載されているように設計及び合成することができる。
さらに別の実施態様では、本発明の抗CD37分子は放射能標識して放射性免疫複合体を形成することができ、前記は抗CD37抗体MB-1について推奨されたアプローチである（Buchsbaum et al., 1992（上記参照））。有利な放射能特性を有する放射性核種は当業界で公知であり、例えばリン-32、ストロンチウム-89、イットリウム-90、ヨウ素-131、サマリウム-153、エルビウム-169、イットリビウム-175、レニウム-188であり、前記は首尾よくかつ安定的にMAbに結合させることができる。本発明のCD37抗体は、US6,241,961に記載されたように、当業界で公知の直接標識又は間接標識方法を用いて多様な放射性核種で標識できる。本発明で役立つ、新規な放射能標識抗体複合物を作製し利用する技術に関する概説は“Goldenberg and Sharkey”（2007）で提供される。
本発明の抗体分子はまた（Fcが操作されているか否かにかかわらず）二特異性であり得る。すなわち2つの異なる標的と結合する抗体分子であって、該標的の一方はCD37であり、他方は、例えばT細胞によって発現される表面抗原（例えばCD3、CD16及びCD56）から選択される。
【００２９】
“抗体”という用語は、モノクローナル、ポリクローナル、マルチ特異性抗体、及び単鎖抗体、並びに前記のフラグメント、例えばFab、Fab’、F(ab’)2、Fc及びFc’フラグメント、軽鎖（L）及び重鎖（H）免疫グロブリン鎖、並びにその定常、可変又は超可変領域、並びにFv及びFdフラグメントを含む。“抗体”という用語は、ヒト又は非ヒト起源抗体（ヒト化及びキメラ抗体）、さらにFc操作抗体又はFc融合分子を含む。Fab（fragment antigen binding＝Fab）フラグメントは、隣接する定常領域によって一緒に保持される両鎖の可変領域から成る。それらは、例えばプロテアーゼ（例えばパパイン）による処理又はDNAクローニングによって通常の抗体から生成できる。他の抗体フラグメントはF(ab’)2フラグメントであり、前記はペプシンによるタンパク分解消化によって生成できる。
重鎖可変（VH）及び軽鎖可変（VL）領域のみから成る短縮抗体フラグメントを遺伝子クローニングによって作製することもまた可能である。前記はFv（fragment variable＝可変部分のフラグメント）フラグメントとして公知である。定常鎖のシステイン基を介する共有結合はこれらのFvフラグメントではあり得ないので、それらはしばしば何らかの他の方法によって安定化される。この目的のために、重鎖及び軽鎖の可変領域はしばしば、約10から30アミノ酸（好ましくは15アミノ酸）の短いペプチドフラグメントの手段によって結合される。前記によって、VH及びVLがペプチドリンカーによって結合された単一ポリペプチド鎖が生成される。そのような抗体フラグメントはまた単鎖Fvフラグメント（scFv）と称される。scFv抗体の例は当業界で公知である。
【００３０】
これまで何年かにわたって、多量体scFv誘導体を作製するために多様な方法が開発された。その目的は、薬理学的特性が改善され結合アビジチーが高められた組換え抗体を作製することである。scFvフラグメントのマルチマー化を達成するために、それらフラグメントは多量体化ドメインを有する融合タンパク質として生成される。多量体化ドメインは、例えばIgGのCH3領域又はヘリックス構造（“コイルドコイル構造”）、例えばロイシンジッパードメインであり得る。他の方法では、scFvフラグメントのVHとVL領域間の相互作用が多量体化に用いられる（例えばジアボディ、トリボディ及びペンタボディ）。
“ジアボディ”という用語は、当業界では二価ホモダイマーscFv誘導体を指すために用いられる。scFv分子のペプチドリンカーの5から10アミノ酸への短縮は、VH/VL鎖の重ね合わせによってホモダイマーを生じる。このジアボディは挿入二亜硫酸塩架橋によってさらに安定化させることができる。ジアボディの例は文献で見出すことができる。
【００３１】
“ミニボディ”という用語は、当業界では二価ホモダイマーscFv誘導体を指すために用いられる。前記は、ダイマー化領域として免疫グロブリン、好ましくはIgG、もっとも好ましくはIgG1のCH3領域を含む融合タンパク質から成る。ダイマー化領域は、ヒンジ領域（同じくIgGのヒンジ領域）及びリンカー領域の手段によって該scFvフラグメントを結びつける。そのようなミニボディの例は当業界で公知である。
“トリアボディ”という用語は当業界では三価ホモトリマーscFv誘導体を指すために用いられる。リンカー配列を用いないVH-VLの直接融合はトリマーの形成をもたらす。
二価、三価又は四価構造を有する、当業界でミニ抗体として公知のこのフラグメントもまたscFvフラグメントの誘導体である。この多量体化は、ダイマー、トリマー又はテトラマーコイルドコイル構造の手段によって達成される。
さらにまた、当業界で公知の“スキャフォールドタンパク質”又は“スキャフォールド抗体”が存在する。前記用語を用いるとき、スキャフォールドタンパク質は、遺伝子クローニングによって、又は別のタンパク質若しくは別の機能を有するタンパク質の一部分との共同翻訳プロセスによって結合させた、タンパク質（特に抗体）の任意の機能的ドメインを意味する。
【００３２】
抗体／抗体分子の“相補性決定領域”又は“CDR”という用語は、免疫グロブリンの超可変領域（相補性決定領域とも称され、“CDR”と略記される）を意味する。CDRは最初Kabatらによって、多数の抗体配列の配列多様性の程度を基準にして定義された（“Sequences of Proteins of Immunological Interest” Kabat, E., of al., U.S. Department of Health and Human Services, 1983；及びKabat E. A., Wu T. T., Perry H. M., Gottesman K. S. and Foeller C. Sequences of Proteins of Immunological Interest (5th Ed.). NIH Publication No. 91-3242. U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 1991）。CDRはある抗体の標的抗原と接触し、主として結合に必要であると考えられている。Chothiaらは、超可変領域又はCDRのまた別の定義を提供した（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196:901- 917, 1987）。Chothiaの定義は抗体の三次元構造でループを構成する残基を基準にする。
【００３３】
具体的には、本発明ではKabatシステムを基準にしてCDRが決定される。配列番号：2及び配列番号：4に示される可変領域の配列から、CDR配列は、Kabata配列データベースを配列の特色について検索することによって日常的手順で決定できる。配列番号：2に示される可変重鎖内に含まれる3つのCDRは、好ましくは31−35位（H1、配列番号：15）、50−66位（H2、配列番号：16）又は50−62位（H2b、配列番号：21）、及び99−105位（H3、配列番号：17）を含み、配列番号：4に示される可変軽鎖内に含まれる3つのCDRは、好ましくは24−34位（L1、配列番号：18）、50−56位（L2、配列番号：19）、及び89−97位（L3、配列番号：20）を含む。
“治療サイクル”という用語は1から6週間、好ましくは2から4週間、もっとも好ましくは3週間の期間を指し、ここで患者は少なくとも1用量のCD37抗体及び少なくとも1用量のICEを投与される。
“用量”及び“投薬量”という用語は互換的に用いられる。
“NHL”及び“B-NHL”という用語は互換的に用いられる。
【００３４】
実施態様
本発明は、CD37陽性悪性疾患、好ましくはB細胞悪性疾患、もっとも好ましくは慢性リンパ球性白血病（CLL）又はB細胞非ホジキンリンパ腫（B-NHL）を罹患する患者の治療方法で、ICE（＝3薬剤（イフォスファミド、カルボプラチン及びエトポシド（又はリン酸エトポシド）を利用する組合せ化学療法レジメン）と併用して用いられるCD37抗体に関し、該CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
本発明はさらに、CD37陽性悪性疾患、好ましくはB細胞悪性疾患、もっとも好ましくは慢性リンパ球性白血病（CLL）又はB細胞非ホジキンリンパ腫（B-NHL）を罹患する患者の治療方法で、ICE及びCD20抗体（例えばリツキシマブ）（R-ICEと称される）と併用して用いられるCD37抗体に関し、該CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
本発明はさらに、CD37陽性悪性疾患、好ましくはB細胞悪性疾患、もっとも好ましくは慢性リンパ球性白血病（CLL）又はB細胞非ホジキンリンパ腫（B-NHL）を罹患する患者の治療方法で、化学療法剤（例えばアルキル化剤）及びCD20抗体（例えばリツキシマブ）（R-化学療法と称される）と併用して用いられるCD37抗体に関し、該CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
【００３５】
具体的な実施態様では、CD37抗体はキメラ抗体である。好ましくは、前記キメラ抗体はヒト定常重鎖アミノ酸配列、配列番号：7及びヒト定常軽鎖アミノ酸配列、配列番号：8を含む。
好ましい実施態様では、CD37抗体は、重鎖アミノ酸配列、配列番号：5及び軽鎖アミノ酸配列、配列番号：6を含む（＝＞A2）。
具体的な実施態様では、CD37抗体はヒト化抗体である。好ましくは、前記ヒト化CD37抗体は、重鎖アミノ酸配列、配列番号：11及び軽鎖アミノ酸配列、配列番号：12を含む（＝＞B2）。
具体的な実施態様では、患者は少なくとも1用量のCD37抗体及び少なくとも1用量のICEを1治療サイクル中に投与され、1治療サイクルは約1から6週間、好ましくは2から4週間、もっとも好ましくは3週間である。
さらに別の具体的な実施態様では、CD37抗体はICE投与と同時に前記患者に投与される。
別の実施態様では、CD37抗体は、ICEの投与後に、好ましくはICE投与後24時間以内又は36時間以内に該患者に投与される。
さらに別の実施態様では、CD37抗体は、ICEの投与前に、好ましくはICE投与前24時間以内又は36時間以内に該患者に投与される。
別の好ましい実施態様では、CD37抗体は、ICEの3日連続適用後に、好ましくは最後のICE投薬（前記は通常3日目のエトポシドである）の投与後24時間以内に又は36時間以内に該患者に投与される。好ましくは、ICEは、1から6週間の治療サイクル、より好ましくは2−4週間の治療サイクル、もっとも好ましくは3週間の治療サイクルの1、2及び3日目に該患者に投与され、CD37抗体は、3日目に最後のICE投与後に、又は該治療サイクルの4日目に、又は3日連続ICE処置後数日して投与される。
【００３６】
さらに別の好ましい実施態様では、CD37抗体は、ICEの3日連続適用前に、好ましくは最初のICE投薬（前記は通常イフォスファミドである）の投与前24時間以内に又は36時間以内に該患者に投与される。好ましくは、CD37抗体は該治療サイクルの1日目に投与され、ICEは、1から6週間の治療サイクル、より好ましくは2−4週間の治療サイクル、もっとも好ましくは3週間の治療サイクルの2、3及び4日目に該患者に投与される。
具体的な実施態様では、CD37抗体は少なくとももう1回、該治療サイクルの中間で、好ましくは該治療サイクルのまん中で約1−2週間又は1.5週間に追加投与される。別の実施態様では、CD37抗体は1週間に1回追加投与される。該治療サイクルは、1から6週間、好ましくは2−4週間、もっとも好ましくは3週間の期間であり、患者は少なくとも1用量のCD37抗体及び少なくとも1用量のICEを投与される。
CD37抗体、好ましくはA2（配列番号：5及び6を含むCD37抗体）及びB2（配列番号：11及び12を含むCD37抗体）、もっとも好ましくはA2であるが、これらは約0.01μg/kgから40mg/kgの用量で、又は約10μg/kgから40mg/kgの用量で、又は患者につき約1mgから2800mgの用量で投与される。患者への投与は、1回以上の別々の投与によってもたらされ得る。例えば前記は輸液（例えば連続輸液）によってもたらされ得る。
【００３７】
A2（配列番号：5及び6を含むCD37抗体）については、70kgの人の概算用量は、1mgから2800mgの範囲、好ましくは1mgから1400mg、又は10mgから1400mg、又は10mgから1000mg、又は100mgから1400mg、又は100mgから385mg、もっとも好ましくは10mgから1400mgの範囲である。前記用量は、好ましくは1週間の用量である。A2が2週間毎に投与される場合、70kgの人のためには1mgから2800mg、又は2mgから800mg、又はより具体的には200mgから770mgの用量範囲が好ましい。B2（配列番号：11及び12を含むCD37抗体）の概算ヒト用量は、70kgの人のためには1mgから2800mgの範囲、好ましくは1mgから1400mg、又は10mgから1400mg、又は10mgから1000mg、又は100mgから1400mg、又はより具体的には100mgから385mgの範囲である。前記用量は、好ましくは1週間の用量である。B2が2週間毎に投与される場合、70kgの人のためには1mgから2800mg、又は2mgから800mg、又はより具体的には200mgから770mgの用量範囲が好ましい。
ICEは、好ましくは1治療サイクルの3日間連続で投与され、前記サイクルは好ましくは長さが2−3週間（14−21日）、もっとも好ましくは長さが3週間（21日）である。
ICEの各成分の用量は、好ましくは以下の範囲である：
i）イフォスファミドについては3g/m2体表面から7g/m2体表面の間であり、好ましくは、イフォスファミド用量は5g/m2であり、イフォスファミドは好ましくは第二治療日に投与され、
ii）カルボプラチンについては200から800mgの間であり（用量はクリアランス及び曲線下面積（AUC）を基準にする）、カルボプラチンは好ましくは第二治療日に投与され、さらに
iii）エトポシドについては50 mg/m2から200mg/m2の間であり、好ましくは、エトポシド用量は100mg/m2であり、エトポシドは好ましくは第一、第二及び第三治療日に投与される。
【００３８】
上記のICE用量は、好ましくは2−3週間の治療サイクルの1、2及び3日目に投与される。さらにまた、好ましくは2−3週間の長さの治療サイクルでCD37抗体投与に続いて3日間連続で上記の投与用量でICEを投与するのが好ましい（例えば1日目＝上記投薬量のいずれかでのCD37投与、2＋3＋4日目＝上記投薬量のいずれかでのICE投与）。
該ICE投与用量は任意の態様、例えば輸液、非経口又は経口投与によって投与できる。該CD37抗体用量は、任意の態様、例えば輸液（例えば連続輸液）、皮下注射、吸入、非経口又は経口投与によって投与できる。
本発明の具体的な実施態様では、CD37抗体は第一線治療としてICEと併用して投与される。第一線治療は第一の治療選択肢を意味する（他の治療選択肢の前に実施又は用いられる）。
本発明の好ましい実施態様では、CD37抗体は、CLL又はB-NHLの第二線治療としてICEと併用して投与される。
本発明の別の具体的な実施態様では、CD37抗体は、第二線又は第三線又は第四線又はその後の治療としてICEと併用して投与される。第二線又は第三線又は第四線又はその後の治療とは、既に実施された/用いられた1つ以上の他の治療の後の第二線、第三線、第四線又はその後の/更なる治療選択肢としての投与を意味する。
【００３９】
NHL罹患患者の治療のために、好ましい治療サイクルスケジュールは2−4週間続き、ICEは好ましくは1日目から3日目に投与され、さらに少なくとも1つのCD37抗体（好ましくはA2又はB2）が上記の用量でICE投与の前、後又は同時に投与される。同時とは同じ日を意味する。さらにまた、NHLのための別の好ましい治療サイクルスケジュールは、中間で、例えば週に1回CD37抗体の追加投与を含み、したがって、各治療サイクル当たり数回、好ましくは2から4回、もっとも好ましくは3回のCD37抗体の投与がもたらされる。
本発明の具体的な実施態様では、上記パラグラフに記載したICEのための処置サイクルスケジュールのいずれかが、CD20標的抗体（例えばリツキシマブ）の投与と組み合わされる。この治療選択肢はR-ICEと称される。
本発明の好ましい実施態様では、上記パラグラフに記載したICE＋CD37 mAbのための治療サイクルスケジュールのいずれかが、CD20標的抗体（例えばリツキシマブ）の投与と組み合わされる。この治療選択肢はR-ICE＋CD37 mAbと称される。
R-ICEのための好ましい治療サイクルスケジュールでは、リツキシマブ（或いは任意の他のCD20標的抗体）は、好ましくは第一治療日にエトポシドと一緒にCD20標的抗体（例えばリツキシマブ）を投与することによってICE治療サイクル及び投与スケジュール（上記パラグラフに記載の投与スケジュール）にはめ込まれる。リツキシマブの好ましい用量は、100−500mg/m2体表面、好ましくは375−500mg/m2、もっとも好ましくは375mg/m2である。
R-ICE治療サイクル時のCD37併用療法のためには、少なくとも1つのCD37抗体（好ましくはA2又はB2）が、上記に記載の用量でR-ICE投与の前、後又は前記と同時に投与される。同時とは同じ日を意味する。さらにまた、NHLのための別の好ましい治療サイクルスケジュールは、該治療サイクルの中間で、例えば該治療サイクルのまん中で、約1−2週間、好ましくは1.5週間にCD37抗体の追加投与を含む。
【００４０】
本発明はさらにCD37陽性細胞、より具体的にはB細胞を減少させる方法に関し、前記方法は、CD37抗体及びICE又はR-ICEの組合せにB細胞を暴露する工程を含み、
前記CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
本発明はさらにCD37陽性細胞、より具体的にはB細胞を減少させる方法に関し、前記方法は、CD37抗体、化学療法剤（例えばアルキル化剤）及びCD20抗体（例えばリツキシマブ）の組合せにB細胞を暴露する工程を含み、前記CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
本発明はさらに細胞集団からCD37発現B細胞を枯渇させる方法に関し、前記方法は、
a）CD37抗体又はCD37抗体を含む医薬組成物、及び、
b）ICE又はR-ICE、
を前記細胞集団に投与する工程を含み、前記方法は好ましくはin vitroで実施され、
さらに前記CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
【００４１】
本発明はさらにCD37陽性細胞を減少させる方法に関し、前記方法は、
a）CD37陽性細胞をCD37抗体に曝露する工程、及び、
b）CD37陽性細胞をICE又はR-ICEに暴露する工程、
を含み、工程a）のCD37抗体は、
i）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
ii）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
本発明はさらに付け加えればCD37陽性細胞を減少させる方法に関し、前記方法は、
a）CD37陽性細胞をCD37抗体に曝露する工程、及び、
b）CD37陽性細胞を化学療法剤（例えばアルキル化剤）に暴露する工程、及び、
c）CD37陽性細胞をCD20抗体（例えばリツキシマブ）に曝露する工程、
を含み、
工程a）のCD37抗体は、
i）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
ii）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
本発明はさらにまたB細胞を減少させる方法に関し、前記方法は、
a）B細胞をCD37抗体に曝露する工程、及び、
b）B細胞をICE又はR-ICEに暴露する工程、
を含み、工程a）のCD37抗体は、
i）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
ii）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
【００４２】
具体的な実施態様では、CD37抗体はキメラ抗体である。好ましくは、前記キメラ抗体はヒト定常重鎖アミノ酸配列、配列番号：7及びヒト定常軽鎖アミノ酸配列、配列番号：8を含む。
好ましい実施態様では、CD37抗体は、重鎖アミノ酸配列、配列番号：5及び軽鎖アミノ酸配列、配列番号：6を含む（＝＞A2）。
具体的な実施態様では、CD37抗体はヒト化抗体である。好ましくは、前記ヒト化CD37抗体は、重鎖アミノ酸配列、配列番号：11及び軽鎖アミノ酸配列、配列番号：12を含む（＝＞B2）。
前記方法のいずれかの具体的な実施態様では、該CD37陽性細胞はCD37抗体及びICEに同時に曝露される。前記CD37陽性細胞は好ましくはB細胞である。
前記方法のいずれかの別の実施態様では、CD37陽性細胞は、それらがICEに曝露された後で、好ましくはそれらがICEに曝露された後24時間以内に又は36時間以内にCD37抗体に曝露される。前記CD37陽性細胞は好ましくはB細胞である。
前記方法のいずれかのさらに別の実施態様では、CD37陽性細胞は、それらがICEに曝露される前に、好ましくはそれらがICEに曝露される前24時間以内に又は36時間以内にCD37抗体に曝露される。前記CD37陽性細胞は好ましくはB細胞である。
具体的な実施態様では、前記方法はin vivoで実施される。
具体的な実施態様では、前記方法はin vitroで実施される。
【００４３】
本発明はさらにCD37陽性細胞を減少させるためのキットに関し、前記キットは、
a）CD37抗体を含む容器、及び、
b）化学療法剤/化学療法的処置（例えばICE又はR-ICE）と併用して工程a）のCD37抗体を投与することによってCD37陽性細胞を減少させるために該キットを用いるための指示書、
を含み、
前記CD37抗体は、
i）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
ii）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
前記CD37陽性細胞は好ましくはB細胞である。
本発明は具体的にはCD37陽性細胞を減少させるためのキットに関し、前記キットは、
a）CD37抗体を含む容器、及び、
b）ICEと併用してa）のCD37抗体を投与することによってCD37陽性細胞を減少させるために該キットを用いるための指示書、及び／又は、
c）場合によってICE及びCD20抗体（例えばリツキシマブ）と併用してa）のCD37抗体を投与することによってCD37陽性細胞を減少させるために該キットを用いるための指示書、
を含み、前記CD37抗体は、
i）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
ii）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
【００４４】
本発明はさらにまたCD37陽性細胞を減少させるためのキットに関し、前記キットは、
a）CD37抗体を含む第一の容器、
b）化学療法剤/化学療法的処置（例えば）ICEを含む第二の容器、及び、
c）場合によってCD20抗体（例えばリツキシマブ）を含む第三の容器、及び、
d）CD37陽性細胞を減少させるために該キットを使用するための指示書、
を含み、
前記CD37抗体は、
i）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
ii）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
前記CD37陽性細胞は好ましくはB細胞である。
具体的な実施態様では、c）の指示書は該CD37抗体及びICE又はR-ICEを同時に投与するように指示する。
別の実施態様では、c）の指示書は、ICE又はR-ICEの前に、好ましくはICE又はR-ICEの投与前24時間以内に又は36時間以内に該CD37抗体を投与するように指示する。
さらに別の実施態様では、c）の指示書は、ICE又はR-ICEの後に、好ましくはICE又はR-ICEの投与後24時間以内に又は36時間以内に該CD37抗体を投与するように指示する。
具体的な実施態様では、c）の指示書は、CD37陽性悪性疾患、好ましくはB細胞悪性疾患、好ましくは慢性リンパ球性白血病（CLL）又はB-NHL、もっとも好ましくはCLLを罹患する患者に該キット成分を投与するように指示する。
さらに別の具体的な実施態様では、c）の指示書は、1治療サイクル中に少なくとも1用量のCD37抗体及び少なくとも1用量のICE又はR-ICEを患者に投与するように指示し、1治療サイクルは約1から6週間、好ましくは2から4週間、もっとも好ましくは3週間の期間である。
さらに別の具体的な実施態様では、c）の指示書は、記載のCD37抗体の第二の医療的使用のために、上記の治療サイクル及び／又は投薬スケジュールを指示する。
【００４５】
本発明はさらにまた、CD37抗体及び化学療法剤/化学療法的処置（例えばICE又はR-ICE）並びに上記に記載の方法を示した表示を含む製造物品に関し、該CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖を含む。
本発明はさらにまた、CD37抗体、ICE又はR-ICE及び医薬的に許容できる担体を含む医薬組成物に関し、該CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
具体的な実施態様では、該医薬組成物は、活性成分としてCD37抗体及びICE並びに追加的な医薬的に許容できる担体を含み、該CD37抗体は、
a）配列番号：2に示される可変重鎖内に含まれるCDR（前記CDRは好ましくは配列番号：15、16又は21及び17を有する）、及び、
b）配列番号：4に示される可変軽鎖内に含まれるCDR（前記CDRは好ましくは配列番号：18、19及び20を有する）、
を含む。
本発明はさらに、医薬として使用される上記に記載の医薬組成物に関する。
本発明はさらにまた、B細胞悪性疾患罹患患者の治療方法で使用される、好ましくはB細胞非ホジキンリンパ腫（B-NHL）又は慢性リンパ球性白血病（CLL）患者の治療方法で使用される、上記に記載の医薬組成物に関する。
【００４６】
本発明はさらにB細胞悪性疾患を治療する方法に関し、前記方法は、その必要がある患者に治療的に有効な量のCD37抗体をICE又はR-ICEと併用して投与する工程を含み、該CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
本発明はさらに付け加えればB細胞悪性疾患を治療する方法に関し、前記方法は、その必要がある患者に治療的に有効な量のCD37抗体を化学療法剤/化学療法的処置及びCD20抗体（例えばリツキシマブ）と併用して投与する工程を含み、該CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
本発明はさらにまた、B細胞非ホジキンリンパ腫、B細胞慢性リンパ球性白血病及び多発性骨髄腫から選択されるB細胞悪性疾患を罹患する患者を治療する方法に関し、前記方法は、本発明の医薬組成物の有効量を前記患者に投与する工程を含む。
本発明はさらにB細胞悪性疾患を治療する方法に関し、前記方法は、その必要がある患者に治療的に有効な量のa）CD37抗体及びb）ICE又はR-ICEを投与する工程を含み、該CD37抗体は、
a）配列番号：15、16又は21及び17を有するCDRを含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：18、19及び20を有するCDRを含む可変軽鎖、
を含む。
【００４７】
前記治療方法の具体的な実施態様では、患者は、1治療サイクル中に少なくとも1用量のCD37抗体及び少なくとも1用量のICE又はR-ICEを投与され、1治療サイクルは約1から6週間、好ましくは2から4週間、もっとも好ましくは3週間の期間である。
前記方法のいずれかの具体的な実施態様では、B細胞はCD37抗体及びICE又はR-ICEに同時に曝露される。
前記方法のいずれかの別の実施態様では、B細胞は、それらがICE又はR-ICEに曝露された後で、好ましくはそれらがICE又はR-ICEに曝露された後24時間以内に又は36時間以内にCD37抗体に曝露される。
前記方法のいずれかのさらに別の実施態様では、B細胞は、それらがICE又はR-ICEに曝露される前に、好ましくはそれらがICE又はR-ICEに曝露される前24時間以内に又は36時間以内にCD37抗体に曝露される。
具体的な実施態様では、前記方法はin vivoで実施される。
具体的な実施態様では、前記方法はin vitroで実施される。
ICE又はR-ICEと併用されるCD37抗体の第二の医療的使用のために上記に記載した投薬スケジュールは、本発明の記載の治療方法のために同様に適用される。
【００４８】
本発明はさらに、該CD37抗体が、
a）配列番号：2に示すアミノ酸配列を含む可変重鎖、及び、
b）配列番号：4に示すアミノ酸配列を含む可変軽鎖、
によって規定されるキメラ抗体であり、該定常重鎖及び軽鎖が好ましくはヒト起源である、該記載のCD37抗体、該記載の任意の方法、該記載のキット、該記載の製造物品、該記載の医薬組成物、及び該記載の治療方法に関する。
本発明はさらに、該抗体が、配列番号：5のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：6のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、該記載のCD37抗体、該記載の任意の方法、該記載のキット、該記載の製造物品、該記載の医薬組成物、及び該記載の治療方法に関する。
本発明はさらにまた、該抗体が、配列番号：2に融合された配列番号：7のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号：4に融合された配列番号：8のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、該記載のCD37抗体、該記載の任意の方法、該記載のキット、該記載の製造物品、該記載の医薬組成物、及び該記載の治療方法に関する。
本発明はさらにまた、該抗体が、配列番号：9のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：10のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、該記載のCD37抗体、該記載の任意の方法、該記載のキット、該記載の製造物品、該記載の医薬組成物、及び該記載の治療方法に関する。
本発明はさらにまた、前記抗体が、ヒト抗体に由来する前記CDRの保持フレームワークによって規定されるヒト化抗体であり、さらに該定常重鎖及び軽鎖がヒト抗体由来である、該記載のCD37抗体、該記載の任意の方法、該記載のキット、該記載の製造物品、該記載の医薬組成物、及び該記載の治療方法に関する。
本発明はさらにまた、  該抗体が、配列番号：11のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：12のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、該記載のCD37抗体、該記載の任意の方法、該記載のキット、該記載の製造物品、該記載の医薬組成物、及び該記載の治療方法に関する。
本発明はさらにまた、該抗体が、配列番号：13のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：14のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、該記載のCD37抗体、該記載の任意の方法、該記載のキット、該記載の製造物品、該記載の医薬組成物、及び該記載の治療方法に関する。
【００４９】
本発明はさらにまた、該CD37陽性悪性疾患が、B細胞リンパ腫、攻撃性B細胞リンパ腫、ホジキン病、B細胞非ホジキンリンパ腫（NHL）、リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症（リンパプラズマ細胞性リンパ腫又は免疫細胞腫とも称される）、中枢神経系リンパ腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、慢性リンパ球性白血病（CLL、B細胞慢性リンパ球性白血病（BCLL）とも称される）、ヘアリー・セル白血病、慢性骨髄芽細胞性白血病、骨髄腫、多発性骨髄腫、T細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、B細胞前リンパ球性白血病、リンパプラズマ細胞性リンパ腫、脾辺縁層リンパ腫、プラズマ細胞骨髄腫、骨の孤立性プラズマ細胞腫、骨外プラズマ細胞腫、粘膜結合リンパ系組織（MALT）の節外辺縁層B細胞腫、リンパ節辺縁層B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、びまん性大B細胞リンパ腫、縦隔（胸線）大B細胞リンパ腫、血管内大B細胞リンパ腫、原発性浸出リンパ腫（primary effusion lymphoma）、バーキットリンパ腫/白血病、グレイゾーンリンパ腫、悪性性不確定B細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症、及び移植後リンパ球増殖性疾患から成る群から選択され、該CD37陽性悪性疾患が、好ましくはB細胞悪性疾患、好ましくはB細胞非ホジキンリンパ腫、B細胞慢性リンパ球性白血病であり、該B細胞悪性疾患がもっとも好ましくは慢性リンパ球性白血病（CLL）である、該記載のCD37抗体、該記載の任意の方法、該記載のキット、該記載の製造物品、該記載の医薬組成物、及び該記載の治療方法に関する。
本発明の実施には、特段の指定がなければ、医学、薬学、化学、生物学、腫瘍学、細胞生物学、分子生物学、細胞培養、免疫学などにおける、当業者の技量範囲内である通常的技術が用いられるであろう。これらの技術は最新の文献に十全に開示されている。
以下の実施例は限定的なものではない。それらは単に本発明の可能な実施態様を示す。当業者は条件を容易に調整して、当該条件を他の実施態様に適合させることができよう。
【００５０】
実験
材料と方法
抗体及び試薬
抗体A2はDHFR欠損チャイニーズハムスター卵巣（CHO）DG44懸濁細胞で無血清条件下にて発現させ、MabSelectタンパク質Aアフィニティークロマトグラフィー（GE Healthcare）により精製する。該抗体はクエン酸緩衝液にて10mg/mLの濃度で処方し、4℃から8℃で保存する。ホロキサン(商標)（Holoxan(商標)（イフォスファミド））はバクスターオンコロジー社（Baxter Oncology GmbH, Halle, Germany）から、カルボプラチン“EBEWE(商標)”（10mg/mL）及びエトポシド“EBEWE(商標)”（2mg/mL）はEBEWEアルツナイミッテル社（EBEWE Arzneimittel GmbH, Unterach, Austria）から購入する。イフォスファミド（滅菌水に溶解）、カルボプラチン（0.9％食塩水に溶解）及びエトポシド（0.9％食塩水に溶解）を混合し、0.9％食塩水で稀釈し、カクテル（“ICE”）として投与する。
【００５１】
in vivo腫瘍モデル
マウスは、チャールズリバー（Charles River）から購入した11週齢の雌Crl:SHO-PrkdcscidHrhrである。到着後、実験に使用する前に少なくとも5日間マウスを周囲の状態に慣れさせる。それらマウスを、21.5+/-1.5℃の温度及び55+/-10％の湿度の標準的な条件下で、7匹（コントロールのためには8匹）のグループとしてケージ（MakrolonタイプIII）に収容する。標準的飼料（PROVIMI KLIBA）及びオートクレーブした水道水を随時与えた。（イソフルラン麻酔下にて）皮下移植したマイクロチップを利用して各マウスを識別する。実験番号を示すケージカード、動物識別番号、化合物及び用量レベル、投与ルート並びにスケジュールは、実験を通して該当動物で同じである。
皮下腫瘍を樹立させるために、Ramos（ATCC #CRL-1596）細胞を遠心分離によって採集し、洗浄してPBS＋5％FCSに1ｘ107細胞/mLで再懸濁する。続いて5ｘ106細胞を含む100μLの細胞懸濁物をマウスの右大腿部外側に皮下注射する（各マウスに1部位）。腫瘍が良好に樹立され、3から8mmの直径に達したとき、マウスを任意抽出して処置及びベヒクルコントロールグループに割り当てる（細胞注射後13日）。
腫瘍の直径をノギスで週に3回（月曜日、水曜日、及び金曜日）測定する。各腫瘍の体積（mm3）を以下の式にしたがって計算する：腫瘍体積＝長さ*直径2*π/6。処置の副作用をモニターするために、異常についてマウスを毎日精査し、さらに週に3回（月曜日、水曜日、及び金曜日）体重を測定する。コントロール腫瘍が平均して約1000mm3のサイズに達したとき動物をサクリファイスする。さらに、直径が1.5cmを超える腫瘍サイズを有するか又は20％の体重低下を示す動物は、倫理的理由により安楽死させる。
TGI（腫瘍増殖抑制）値は以下のように計算する：
TGI＝100ｘ{1−[(処置最終日−処置初日)/(コントロール最終日−コントロール初日)]}
【００５２】
統計分析
統計評価は、15日目の腫瘍体積及び体重パラメーターについて実施する。腫瘍体積については絶対値が、体重については1日目の最初の重さに対するパーセンテージ変化が用いられる。変動が観察されるので、非パラメーター的方法を適用する。記述的考察のために、観察数、中央値、最少量及び最大量を計算する。処置のあり得る効果を迅速に概観するために、各処置グループの腫瘍体積の中央値Tをコントロールの中央値Cに対して以下のように示す：
1日目からd日目までの腫瘍増殖抑制(TGI)は、TGI＝100*[(Cd−C1)−(Td−T1)]/(Cd−C1)
式中、C1、T1＝実験開始1日目のコントロール及び処置グループの腫瘍体積の中央値、
Cd、Td＝15日目のコントロール及び処置グループの腫瘍体積の中央値
片側減少(one-sided decreasing)ウィルコクソン検定を適用して各処置グループをコントロールと比較するとともに、単一療法を対応する併用療法と比較して、効果としての腫瘍体積の減少及び有害事象としての体重増加の低下を探索する。腫瘍体積及び体重について同じ比較が、腫瘍体積が500mm3を超えるまで複数の時点について含まれる。前記時点は、規定値未満の腫瘍体積を有する最後の時点と規定値を超える体積を有する最初の時点の間で直線的補間法の手段によって決定される。ここでログランク検定が適用される。腫瘍が実験終了又は当該動物の死亡まで規定体積を超えない場合には、最後の観察時点は検閲観察として該分析に含まれる。
各処置グループについて中央値を計算し、対応する療法によって達成された遅延Δの概算としてコントロールグループの中央値と比較する。
腫瘍体積（有効性パラメーター）のp値は、予め規定した決定的腫瘍体積を超える時点のp値と同様に、ボンフェローニー-ホームにしたがって各サブトピック内で多数の比較について調整されるが（コントロールに対する比較、単一療法と併用療法の比較）、体重（寛容性パラメーター）のp値は、あり得る副作用を見過ごさないように調整せずにおく。
有意さのレベルはα＝5％で固定される。0.05未満の（調整済み）p値は、グループ間の統計的に有意な相違を示すと考えられ、p値が0.05以上0.10未満である場合はいつでも相違は暗示的と考えられる。
統計的評価は、ソフトウェアパッケージSASバージョン9.2（SAS Institute Inc., Cary NC, USA）及びProc StatXactバージョン8.0（Cytel Software Corporation, Cambridge MA, USA）を用いて実施される。
実施例
【実施例１】
【００５３】
ヒト異種移植片腫瘍モデルにおけるICE併用mAb A2の抗腫瘍効果
ヒト異種移植片腫瘍モデルを利用して、ヒト腫瘍細胞に対する抗癌剤の有効性を免疫低下マウスで評価する。ヌードマウスで増殖するヒトバーキットリンパ腫Ramosの皮下異種移植片を用いて、化学療法レジメンICE（イフォスファミド、カルボプラチン、エトポシド）と組み合わせた抗CD37 mAb（mAb A2）併用における抗腫瘍効果を示す。以下の実験設計を適用する：
【００５４】
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15日の処置期間の間、コントロール腫瘍は、76mm3の中央値体積から1084mm3の体積に増殖する。1週間に3回、2週間の間腹腔内投与ICE処置は、腫瘍増殖を有意に遅延させる（TGI中央値＝65％、p＝0.0012）。15日後に500mm3の腫瘍体積に到達し、コントロールと比較して有意な相違である（p＝0.0093）。
1mg/kgのmAb A2による1週間に2回、2週間の静脈内処置は、腫瘍増殖を有意に遅延させる（TGI中央値＝70％、p＝0.0012）。500mm3の腫瘍体積には16日後に到達し、コントロールと比較して有意な相違である（p＝0.0093）。
A2及びICEの併用処置は、腫瘍増殖を有意に遅延させる（TGI中央値＝84％、p＝0.0009）。24日目（実験最終日）にもなお500mm3の腫瘍体積に到達しない（p＝0.0050）。
2サイクルのA2及びICEの併用療法は、A2（TGI＝70％）又はICE（TGI＝65％）による単剤処置と比較して有効性の改善を示す（TGI＝84％）。併用療法は、単剤mAb A2と比較して（16日に対して24日超、p＝0.0649）、さらにICE単独と比較して（15日に対して24日超、p＝0.0690）、腫瘍進行（グループの腫瘍体積中央値が500mm3を超える時間）を遅らせる。
本実験では、至適用量より低い1mg/kgで週に2回のA2による2サイクル処置が腫瘍増殖を有意に遅延させる（TGI＝70％）。ICEによる処置のために、イフォスファミド、カルボプラチン及びエトポシドの比率は人で用いられる比率にしたがって選択し、選択用量レベルは、以前の実験で決定したMTDを表す。ICE処置は顕著な有効性をもたらし（TGI＝65％）、良好な寛容を示す。ICE及びA2による2サイクルの併用療法は、単剤処置と比較して有効性の改善を示す（TGI＝84％）。
大きな腫瘍サイズのためにコントロールグループを終了させた後（15日目）、残りの動物で3回目の治療サイクルを実施し、腫瘍体積中央値が500mm3を超えるまでの推移時間を計算することによって有効性を決定する。単剤処置グループではそれぞれ15日目及び16日目にこの終末点に到達するが、併用グループの中央値は24日目（実験最終日）でもなお前記終末点体積未満である。統計的に、この相違は単剤A2に対して有意である（p＝0.0469）。
結論すれば、単剤として投与されるmAb A2はRamosリンパ腫の増殖を有意に抑制する。A2のICE化学療法への付加は有効性を改善し、該併用は単剤A2よりも優れている。A2及びICE化学療法の併用における有効性の改善は、そのような併用の累積的又は相乗的効果を暗示する。A2及びICEの併用処置における抗腫瘍有効性の改善は、CD37陽性悪性疾患を罹患する患者に単一療法を超える潜在的な臨床成果を提供する。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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