(57)【要約】本明細書において提供されるのは、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫などの血液悪性腫瘍を含む癌の処置のための新規な治療戦略に関する方法である。特に、該方法は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤およびＳｙｋ阻害剤の投与を含む。本明細書において提供されるのは、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、Ｓｙｋ阻害剤、およびＢｔｋ阻害剤から選択される２種以上の阻害剤の有効量を使用することによる癌を処置する方法、組成物、製造品およびキットである。一態様において、提供されるのは、こうした処置を必要としている被験体に化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の有効量、および化合物Ｂもしくは化合物Ｃまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の有効量を投与することによって、癌を有するまたは有する疑いのある被験体（例えば、ヒト）を処置する方法である。
2015529195.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を有するまたは有する疑いのあるヒトを処置する方法であって、化合物Ａ
【化４５】
2015529195.tif 000054
またはその薬学的に許容される塩の有効量、および化合物Ｂ
【化４６】
2015529195.tif 000055
またはその薬学的に許容される塩の有効量を前記ヒトに投与することを含む方法。
【請求項２】
癌を有するまたは有する疑いのあるヒトを処置する方法であって、化合物Ｄ
【化４７】
2015529195.tif 000056
またはその薬学的に許容される塩の有効量、および化合物Ｂ
【化４８】
2015529195.tif 000057
またはその薬学的に許容される塩の有効量を前記ヒトに投与することを含む方法。
【請求項３】
化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩が主として（Ｓ）−エナンチオマーである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩が、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物中に存在し、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物中に存在する、
請求項１または３に記載の方法。
【請求項５】
化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩が、５０ｍｇから２００ｍｇの用量で投与され、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が、１００ｍｇから１２００ｍｇの用量で投与される、
請求項１、３または４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩の用量が、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩１００ｍｇまたは１５０ｍｇを含む単位投与量として投与され、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の用量が、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩２５ｍｇ、１００ｍｇまたは２００ｍｇを各々独立して含む１つまたは複数の単位投与量として投与される、
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記単位投与量が錠剤である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩が、摂食状態下で投与される、請求項１、３から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
癌を有する前記ヒトが、（ｉ）少なくとも１つの化学療法処置に対して難治性であるか、もしくは（ｉｉ）化学療法を用いる処置の後に再発しているか、またはその組合せである、請求項１から８のいずれか一項の方法。
【請求項１０】
前記ヒトが、前記癌について以前に処置を受けたことがない、請求項１から８のいずれか一項の方法。
【請求項１１】
前記癌が白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である、請求項１から１０のいずれか一項の方法。
【請求項１２】
前記癌がバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である、請求項１から１１のいずれか一項の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１２年８月１４日に出願された米国仮特許出願第61/683,191号、２０１２年１１月９日に出願された同第61/724,870号および２０１３年３月１５日に出願された同第61/800,853号の利益を主張し、これらの出願の開示は本明細書においてその全体がこれにより参照として援用される。
【０００２】
分野
本開示は、一般に、治療法および医薬品化学の分野に、より詳細には、例えば白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫を含む癌の処置に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
癌は、一般に、標準的治療を用いては不治のままである。こうした癌の１つの例は、血液、骨髄、リンパ節、脾臓および肝臓における機能的に不全なモノクローナルＢリンパ球の進行性蓄積に起因する新生物の慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。
【０００４】
より若いおよび相対的に健康なＣＬＬ患者において、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、リツキシマブを含む化学免疫療法レジメンは、疾患顕在化を制御するために共通して用いられる。Gribben  &  O'Brien、J.  Clin.  Oncol.、２０１１年；２９巻（５号）：５４４〜５０頁を参照されたい。しかしながら、高齢患者または合併症状態を有する患者において、こうしたレジメンは、より少ない効力およびより大きな毒性を伴い、合併症を有するＣＬＬ患者を処置するという問題に対して注がれる注意が増加した。Tamら、Br.  J.  Haematol.、２００８年；１４１巻（１号）：３６〜４０頁；Eichhorstら、Leuk.  Lymphoma、２００９年；５０巻（２号）：１７１〜８頁；およびGoede  &  Hallek、Drugs  Aging、２０１１年；２８巻（３号）：１６３〜７６頁を参照されたい。相対的に遅い年齢の診断により、ＣＬＬ患者の大きな割合（約９０％）が合併症を有し、実質的な割合（約４５％）が冠動脈疾患、糖尿病または慢性閉塞性肺疾患などの主要な慢性状態を有する。疾患が最初に同定される時、ＣＬＬ患者の約２５％は、細胞毒性剤を含有する臨床研究に参加するための従来の基準に合わない。Thurmesら、Leuk.  Lymphoma、２００８年；４９巻（１号）：４９〜５６頁を参照されたい。
【０００５】
より老齢のまたは易感染性の患者におけるこれらの健康制限は、治療に対する無細胞毒性の手法を促進させた。モノクローナル抗体であるアレムツズマブまたはオファツムマブなどの代替の免疫療法が開発された。Keatingら、Blood、２００２年；９９巻（１０号）：３５５４〜６１頁；およびWierdaら、J.  Clin.  Oncol.、２０１０年；２８巻（１０号）：１７４９〜５５頁を参照されたい。しかしながら、２種の薬物の治療的有用性は中程度であり、再発性ＣＬＬ患者における中央無増悪生存期間（ＰＦＳ）値は、それぞれ４．７カ月および５．８カ月であった。さらに、これらの処置は、他の課題に至ることがある。例えば、アレムツズマブは、頻繁な日和見感染に至ることがある極度の免疫抑制を引き起こす恐れがある。オファツムマブについてラベルを付けている生成物において推奨されているタンパク質の大量の投与は、頻繁な注入反応および厄介な注入スケジュールをもたらす。
【０００６】
これらの条件を考慮して、リツキシマブ単独治療またはリツキシマブ−副腎皮質ステロイドの組合せの反復使用が、より老齢のまたは虚弱な再発性のＣＬＬ患者のための処置ガイドラインで提唱された。Eichhorstら、Ann.  Oncol.、２０１０年；２１巻、補足５：ｖ１６２−４；およびZelenetzら、J.  Natl.  Compr.  Canc.  Netw.２０１１年；９巻（５号）：４８４〜５６０頁を参照されたい。単一薬剤リツキシマブ使用は、前に処置されたＣＬＬを有する一部の患者において良好な耐容性など特定の利益を提供することができる一方で、殊にアデノパシーを有する患者において腫瘍制御が持続しない。Gentileら、Cancer  management  and  research、２０１０年；２巻：７１〜８１頁を参照されたい。リツキシマブへの高用量メチルプレドニゾンの添加は、中央ＰＦＳを１２カ月に延長することができるが、この組合せは共通して、重症の高血糖症、および頻繁な重篤または致死的な感染症を伴う。例えば、Bowenら、Leuk  Lymphoma、２００７年；４８巻（１２号）：２４１２〜７頁；およびDungarwallaら、Haematologica、２００８年；９３巻（３号）：４７５〜６頁を参照されたい。
【０００７】
それ故に、新たな無細胞毒性の、良好な耐容性のおよび好都合な治療が、合併症状態を有する患者における腫瘍制御を増強および延長するために必要とされる。癌の現在の処置の限界により、癌を処置し、安定化し、予防し、および／または遅延させる追加または代替の治療における有意な興味および必要性がまだ残っている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Gribben  &  O'Brien、J.  Clin.  Oncol.、２０１１年；２９巻（５号）：５４４〜５０頁
【非特許文献２】Tamら、Br.  J.  Haematol.、２００８年；１４１巻（１号）：３６〜４０頁
【非特許文献３】Eichhorstら、Leuk.  Lymphoma、２００９年；５０巻（２号）：１７１〜８頁
【非特許文献４】Goede  &  Hallek、Drugs  Aging、２０１１年；２８巻（３号）：１６３〜７６頁
【非特許文献５】Thurmesら、Leuk.  Lymphoma、２００８年；４９巻（１号）：４９〜５６頁
【非特許文献６】Keatingら、Blood、２００２年；９９巻（１０号）：３５５４〜６１頁
【非特許文献７】Wierdaら、J.  Clin.  Oncol.、２０１０年；２８巻（１０号）：１７４９〜５５頁
【非特許文献８】Eichhorstら、Ann.  Oncol.、２０１０年；２１巻、補足５：ｖ１６２−４
【非特許文献９】Zelenetzら、J.  Natl.  Compr.  Canc.  Netw.２０１１年；９巻（５号）：４８４〜５６０頁
【非特許文献１０】Gentileら、Cancer  management  and  research、２０１０年；２巻：７１〜８１頁
【非特許文献１１】Bowenら、Leuk  Lymphoma、２００７年；４８巻（１２号）：２４１２〜７頁
【非特許文献１２】Dungarwallaら、Haematologica、２００８年；９３巻（３号）：４７５〜６頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
要旨
本明細書において提供されるのは、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、Ｓｙｋ阻害剤、およびＢｔｋ阻害剤から選択される２種以上の阻害剤の有効量を使用することによる癌を処置する方法、組成物、製造品およびキットである。
【００１０】
一態様において、提供されるのは、こうした処置を必要としている被験体に化合物Ａもしくは化合物Ｄ
【化１】
2015529195.tif 000003
またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の有効量、および化合物Ｂもしくは化合物Ｃ
【化２】
2015529195.tif 000004
またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の有効量を投与することによって、癌を有するまたは有する疑いのある被験体（例えば、ヒト）を処置する方法である。
【００１１】
特定の実施形態において、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の有効量、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の有効量が、こうした処置を必要としている被験体に投与される。他の実施形態において、化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の有効量、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の有効量が、こうした処置を必要としている被験体に投与される。
【００１２】
一実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄ、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物は、主としてＳ−エナンチオマーである。
【００１３】
一部の実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物中に存在する。一部の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物中に存在する。なお他の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物は両方ともに、化合物Ａもしくは化合物Ｄ、化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物中に存在する。
【００１４】
一部の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩の前に投与される。他の実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、同時に投与される。特定の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂの各々、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの各々、またはその薬学的に許容される塩は、１日１回または１日２回独立して投与される。
【００１５】
一部の実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩は、５０ｍｇから２００ｍｇの用量で投与され、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、１００ｍｇから７５０ｍｇの用量で投与される。特定の実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の用量は、５０ｍｇから２００ｍｇの化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩を各々独立して含む１つまたは複数の単位投与量として投与され、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の用量は、１００ｍｇから３００ｍｇの化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩を各々独立して含む１つまたは複数の単位投与量として投与される。一実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の用量は、１００ｍｇまたは１５０ｍｇであり、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の用量は、２００ｍｇまたは６００ｍｇである。なお別の実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の用量は、１００ｍｇまたは１５０ｍｇの化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩を含む単位投与量として投与され、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の用量は、２５ｍｇ、１００ｍｇまたは２００ｍｇの化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩を各々独立して含む１つまたは複数の単位投与量として投与される。一実施形態において、単位投与量は錠剤である。
【００１６】
一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、摂食状態下で投与される。他の実施形態において、化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、摂食状態下で投与される。
【００１７】
他の実施形態において、癌を有する被験体は、（ｉ）少なくとも１つの化学療法処置に対して難治性であるか、もしくは（ｉｉ）化学療法を用いる処置の後に再発しているか、またはその組合せである。特定の実施形態において、被験体は、癌について以前に処置を受けたことがない。一実施形態において、被験体はヒト被験体である。
【００１８】
一部の実施形態において、癌はバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である。特定の実施形態において、癌は、白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である。特定の実施形態において、癌は、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ球性リンパ腫、リンパ性白血病、多発性骨髄腫、または慢性骨髄性白血病である。一実施形態において、癌は、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫である。一実施形態において、癌は、微小残存病変（ＭＲＤ）である。
【００１９】
特定の実施形態において、癌は、白血病またはリンパ腫である。具体的な実施形態において、癌は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンストレーム（Waldestrom）マクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。一実施形態において、癌は、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、またはＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）である。非ホジキンリンパ腫は、例えば濾胞性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症および辺縁帯リンパ腫が挙げられる無痛性Ｂ細胞疾患、ならびに例えばバーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）およびマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）が挙げられる中悪性度リンパ腫を包含する。一実施形態において、白血病は、微小残存病変（ＭＲＤ）である。
【００２０】
提供されるのは、また、ヒトの癌細胞における細胞生存性を減少させる方法であって、癌細胞における細胞生存性を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法である。提供されるのは、また、癌細胞における細胞生存性を減少させる方法であって、癌細胞における細胞生存性を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩と癌細胞とを接触させることを含む方法である。一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、もしくは化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩をヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞における細胞生存性は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩だけをヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞における細胞生存性と比較して少なくとも１０％減少する。一実施形態において、癌細胞における細胞生存性は、ＭＴＳアッセイなどの細胞生存性アッセイによって決定される。
【００２１】
提供されるのは、また、ヒトの癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物ＡもしくはＣまたはその薬学的に許容される塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法である。提供されるのは、また、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物ＡもしくはＣまたはその薬学的に許容される塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩と癌細胞とを接触させることを含む方法である。一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞におけるＳ６リン酸化は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩だけをヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の、または化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩だけをヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞におけるＳ６リン酸化と比較して、少なくとも１０％減少する。一実施形態において、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化は、フローサイトメトリーによって決定される。特定の実施形態において、癌細胞は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞である。
【００２２】
別の態様において、提供されるのは、ヒトの癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法である。別の態様において、提供されるのは、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩と癌細胞とを接触させることを含む方法である。一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞におけるＥＲＫリン酸化は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩だけをヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけをヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞におけるＥＲＫリン酸化と比較して少なくとも１０％減少する。一部の実施形態において、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化は、免疫ブロットすることによって決定される。一実施形態において、癌細胞は、バーキットリンパ腫細胞である。
【００２３】
なお別の態様において、提供されるのは、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ２２、またはその任意の組合せを発現する細胞を含む試料におけるケモカイン産生を減少させる方法であって、試料におけるケモカイン産生を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩と試料とを接触させることを含む方法である。一部の実施形態において、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の１つまたは複数が当てはまる：（ｉ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ２産生は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の細胞におけるＣＬＬ２産生と比較して少なくとも５％減少する、（ｉｉ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ３産生は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけのとの接触後の細胞におけるＣＬＬ３産生と比較して少なくとも５％減少する、（ｉｉｉ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ４産生は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の、または化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の細胞におけるＣＬＬ４産生と比較して少なくとも５％減少する、（ｉｖ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ２２産生は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後のＣＬＬ２２産生と比較して少なくとも５％減少する。一実施形態において、試料におけるケモカイン産生は、イムノアッセイによって決定される。
【００２４】
細胞生存性を減少させ、ＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を減少させ、ＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫのリン酸化を減少させ、細胞におけるケモカイン産生を減少させる方法に関連の前述の実施形態のいずれかにおいて、該方法は、インビトロ、インビボまたはエクスビボで行うことができる。該方法がインビボで行われる場合、一態様において、該方法は、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂを、それを必要としている被験体（例えば、ヒト）に投与することを含む。
【００２５】
なお別の態様において、提供されるのは、以下を含むキットである：（ｉ）化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物、および（ｉｉ）化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物。一部の実施形態において、該方法は、以下をさらに含む：癌を処置する際の医薬組成物の使用のための指示を含有する添付文書。一実施形態において、各医薬組成物は、独立して錠剤である。
【００２６】
本明細書において提供されるのは、また、以下を含む製造品である：（ｉ）化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルの単位剤形、（ｉｉ）化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルの単位剤形、および（ｉｉｉ）癌を処置する際における、化合物Ａおよび化合物Ｂの使用のための指示、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の使用のための指示を含有するラベル。一部の実施形態において、各単位剤形は、錠剤である。
【００２７】
別の態様において、提供されるのは、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の処置を受けるヒトの癌細胞を感受性化する方法であり、ここで、該方法は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩でヒトを処置する前または同時に、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む。別の態様において、提供されるのは、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の処置を受ける癌細胞を感受性化する方法であり、ここで、該方法は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩で癌細胞を処置する前または同時に、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩と癌細胞とを接触させることを含む。
【００２８】
なお別の態様において、提供されるのは、（ｉ）少なくとも１つの化学療法処置に対して実質的に難治性である被験体、もしくは（ｉｉ）化学療法を用いる処置の後に再発している被験体、または（ｉ）および（ｉｉ）の両方である被験体を感受性化する方法であり、ここで、該方法は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の有効量、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の有効量を被験体に投与することを含む。
【００２９】
本出願は、添付の図と併せた以下の記載への参照によって最もよく理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、化合物Ｂおよび化合物Ａを組合せで投与することによる、ヒト好塩基球上のＣＤ６３発現の阻害を示すグラフを描写する図である。
【００３１】
【図２】図２は、化合物Ｂおよび化合物Ａを組合せで投与することによる、ＤＨＬ−４細胞におけるｐＭｅｋの阻害を示すグラフを描写する図である。
【００３２】
【図３】図３は、化合物Ｂおよび化合物Ａを組合せで投与することによる、ＣＣＲＦ−ＳＢ細胞からのＣＣＬ４放出のインビトロ阻害を示すグラフを描写する図である。
【００３３】
【図４−１】図４Ａ、Ｂ、Ｅ〜Ｏは、末梢血液試料についての薬物応答曲線を描写する図である。図４Ｃ、Ｐ〜Ｒは、骨髄試料についての薬物応答曲線を描写する図である。特に、図４Ａおよび４Ｂは、個々の試料についての薬物応答曲線を描写している：複数の相乗点（図４Ａ）および相加応答（図４Ｂ）。図４Ｃは、骨髄から単離されたＣＬＬ細胞の試料についての薬物応答曲線を描写する図である。図４Ｄは、試験された各試料についての相互作用指数を示すグラフを描写する図であり、ここで、＜１の相互作用指数は、相乗作用を表す。アスタリスク（＊）は、９５％信頼区間内の相乗濃度を示す。
【図４−２】図４Ａ、Ｂ、Ｅ〜Ｏは、末梢血液試料についての薬物応答曲線を描写する図である。図４Ｃ、Ｐ〜Ｒは、骨髄試料についての薬物応答曲線を描写する図である。特に、図４Ａおよび４Ｂは、個々の試料についての薬物応答曲線を描写している：複数の相乗点（図４Ａ）および相加応答（図４Ｂ）。図４Ｃは、骨髄から単離されたＣＬＬ細胞の試料についての薬物応答曲線を描写する図である。図４Ｄは、試験された各試料についての相互作用指数を示すグラフを描写する図であり、ここで、＜１の相互作用指数は、相乗作用を表す。アスタリスク（＊）は、９５％信頼区間内の相乗濃度を示す。
【図４−３】図４Ａ、Ｂ、Ｅ〜Ｏは、末梢血液試料についての薬物応答曲線を描写する図である。図４Ｃ、Ｐ〜Ｒは、骨髄試料についての薬物応答曲線を描写する図である。特に、図４Ａおよび４Ｂは、個々の試料についての薬物応答曲線を描写している：複数の相乗点（図４Ａ）および相加応答（図４Ｂ）。図４Ｃは、骨髄から単離されたＣＬＬ細胞の試料についての薬物応答曲線を描写する図である。図４Ｄは、試験された各試料についての相互作用指数を示すグラフを描写する図であり、ここで、＜１の相互作用指数は、相乗作用を表す。アスタリスク（＊）は、９５％信頼区間内の相乗濃度を示す。
【００３４】
【図５】図５Ａおよび５Ｂは、それぞれＡＫＴおよびＳ６のリン酸化の阻害を示すグラフを描写する図である。
【００３５】
【図６】図６は、化合物Ａおよび化合物Ｂを単独または組合せで用いて２４時間の間Ｒａｍｏｓ細胞を培養した後の免疫ブロットＡＫＴおよびＥＲＫの発現プロファイルを描写する図である。
【００３６】
【図７−１】図７Ａ〜Ｄは、ＣＬＬ−ＨＳ−５共培養後のＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４およびＣＣＬ２２分泌に対する化合物Ａおよび／または化合物Ｂの効果を示すグラフを描写する図である。
【００３７】
【図７−２】図７Ｅは、ＣＣＲＦ−ＳＢ細胞系におけるＣＣＬ４ケモカイン放出に対する化合物Ｂおよび化合物Ａの効果を示すグラフを描写する図である。図７Ｆ〜Ｉは、患者一致初代ＢＭストロマ細胞において培養されたＣＬＬ細胞の処置後のＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４およびＣＣＬ２２の分泌に対する化合物Ａおよび化合物Ｂの効果を示すグラフを描写する図である。アスタリスク（＊）は、示されている通りの単一薬剤処置と組合せとの間の有意な（ｐ＜０．０５）差異を表示している。
【００３８】
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、それぞれ主にＣＬＬおよびｉＮＨＬ（ＦＬ）の試料に対する、単独または組合せのいずれかで投与される化合物Ａおよび化合物Ｂの効果を示すグラフを描写する図である。
【００３９】
【図９】図９は、単独または組合せのいずれかで投与される化合物Ａおよび化合物Ｂによる好塩基球活性化の阻害を示すグラフを描写する図である。
【００４０】
【図１０】図１０Ａおよび１０Ｂは、Ｓｙｋ阻害剤（化合物Ｃ）をＷＳＵ−ＦＳＣＣＬの親細胞および抵抗性細胞に投与することの効果を示すグラフを描写する図である。
【００４１】
【図１１】図１１Ａおよび１１Ｂは、ＤＨＬ−４細胞からのＣＣＬ３およびＣＣＬ４の分泌に対する化合物Ｄおよび／または化合物Ｂの効果を示す２つのグラフを描写する図である。
【００４２】
【図１２】図１２Ａおよび１２Ｂは、ＤＨＬ−４細胞におけるｐＭＥＫおよびｐＥＲＫに対する化合物Ｄおよび／または化合物Ｂの効果を示す２つのグラフを描写する図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
以下の記載で、癌の処置のための例示的な方法、組成物、キットおよび製造品を説明する。しかしながら、こうした記載は、本開示の範囲に対する限定として意図されているのではなく、代わりに、例証的な実施形態の記載として提供されていることが認識されるべきである。
【００４４】
提供されるのは、小分子キナーゼ阻害剤の組合せを投与することによって被験体における癌を処置する方法である。癌は、白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫などの血液悪性腫瘍であり得る。被験体は、ヒトであってよい。例えば、一部の実施形態において、提供されるのは、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）媒介シグナル伝達経路を阻害することができるとともに必要不可欠な慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞−微小環境相互作用を妨害することができる小分子キナーゼ阻害剤の組合せを投与することによって白血病を処置する方法である。本明細書において提供されている方法は、ＢＣＲ経路における多発性結節を阻害する効果を有し得る。ＢＣＲの下流の複数の経路の同時阻害は、単一化合物使用で観察される抵抗性を克服するのに役立つことができる相乗応答をもたらし得る。したがって、二重阻害は、例えば慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含む白血病における抗腫瘍効果を増強することができる。
【００４５】
提供されるのは、また、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、Ｓｙｋ阻害剤およびＢｔｋ阻害剤から選択される２種以上の阻害剤を含む組成物（医薬組成物、処方物、または単位投与量を含む）、製造品およびキットである。例えば、２種以上の阻害剤は、以下の２種の阻害剤である：（ｉ）ＰＩ３Ｋδ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）Ｓｙｋ阻害剤またはその薬学的に許容される塩。
【００４６】
各々が癌細胞に対するＰＩ３Ｋδ阻害剤である（Ｓ）−２−（１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）プロピル）−５−フルオロ−３−フェニルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン（化合物ＡのＳ−エナンチオマー）または（Ｓ）−２−（１−（（９Ｈ−プリン−６−イル）アミノ）エチル）−６−フルオロ−３−フェニルキナゾリン−４（３Ｈ）−オン（化合物ＤのＳ−エナンチオマー）およびＳｙｋ阻害剤である６−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）−Ｎ−（４−モルホリノフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−８−アミン（化合物Ｂ）の投与は、各化合物単独での投与と比較して予想外の相乗効果に至った。予想外の相乗効果としては、これらに限定されないが、例えば癌細胞における減少した細胞生存性、ＢＣＲシグナル伝達経路（ＭＥＫおよびＥＲＫのリン酸化を含む）への阻害もしくは干渉、および／またはケモカイン産生（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＬＬ４およびＣＬＬ２２の産生）における低減が挙げられる。さらに、癌細胞への両化合物の投与は、予想外にも、いずれかの化合物単独に対する抵抗性を発達させたような癌細胞の感受性または応答を回復した；または予想外にも、いずれかの化合物単独に対する抵抗性を発達させたような癌細胞の感受性または応答を増加させた。
キナーゼ阻害剤
【００４７】
本明細書に記載されている方法、組成物、キットおよび製造品に使用されるまたは含まれる小分子キナーゼ阻害剤は、ＰＩ３キナーゼデルタ特異的アイソフォーム（ＰＩ３Ｋδ）阻害剤、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）阻害剤、およびブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）阻害剤から選択することができる。
【００４８】
一部の実施形態において、ＰＩ３Ｋδ阻害剤およびＳｙｋ阻害剤は、本明細書に記載されている方法、組成物、キットおよび製造品に使用されるまたは含まれる。
【００４９】
特定の実施形態において、ＰＩ３Ｋδ阻害剤は、以下の構造を有する化合物Ａである：
【化３】
2015529195.tif 000005
【００５０】
一実施形態において、化合物Ａは、主として、以下の構造を有するＳ−エナンチオマーである：
【化４】
2015529195.tif 000006
化合物Ａの（Ｓ）−エナンチオマーは、それの化合物名：（Ｓ）−２−（１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）プロピル）−５−フルオロ−３−フェニルキナゾリン−４（３Ｈ）−オンによっても称される。
【００５１】
特定の実施形態において、ＰＩ３Ｋδ阻害剤は、以下の構造を有する化合物Ｄである：
【化５】
2015529195.tif 000007
【００５２】
一実施形態において、化合物Ｄは、主として、以下の構造を有するＳ−エナンチオマーである：
【化６】
2015529195.tif 000008
【００５３】
提供されている化合物名は、ＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  １２．０を使用して名付けられており、当業者は、化合物構造が、他の共通認識されている命名法体系および記号を使用して名付けるまたは同定することができることを理解している。例として、化合物は、共通の名前、系統的または非系統的名前を用いて名付けるまたは同定することができる。化学の技術分野において共通して認識されている命名法体系および記号としては、例えば、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）およびＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  ＰｕｒｅおよびＡｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＩＵＰＡＣ）が挙げられる。よって、化合物Ａについて上記に提供されている化合物構造は、ＩＵＰＡＣ下では５−フルオロ−３−フェニル−２−［（１Ｓ）−１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）プロピル］キナゾリン−４（３Ｈ）−オンとして、およびＣＡＳ下では５−フルオロ−３−フェニル−２−［（１Ｓ）−１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）プロピル］−４（３Ｈ）−キナゾリノンとして名付けるまたは同定することもできる。
【００５４】
化合物ＡおよびＣを合成する方法は、米国特許第７，９３２，２６０号において以前に記載されている。この文献を本明細書によって、それを全体でならびに化合物ＡおよびＣの合成に関して詳細に、参照により本明細書に組み込む。
【００５５】
一実施形態において、Ｓｙｋ阻害剤は、以下の構造を有する化合物Ｂである：
【化７】
2015529195.tif 000009
【００５６】
化合物Ｂは、それの化合物名：６−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）−Ｎ−（４−モルホリノフェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−８−アミンによっても称され得る。提供されている化合物名は、ＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  １２．０を使用して名付けられており、当業者は、化合物構造が、ＣＡＳおよびＩＵＰＡＣを含めて、他の共通認識されている命名法体系および記号を使用して名付けるまたは同定することができることを理解している。
【００５７】
化合物Ｂを合成するための１つの方法は、米国特許第８，４５０，３２１号において以前に記載されている。この文献は本明細書によって、それを全体でおよび化合物Ｂの合成に関して詳細に、参照により本明細書に組み込む。
【００５８】
他の実施形態において、Ｓｙｋ阻害剤は、Ｒ４０６、ホスタマチニブ、ＢＡＹ−６１−３６０６、ＮＶＰ−ＱＡＢ  ２０５  ＡＡ、Ｒ１１２もしくはＲ３４３、またはその薬学的に許容される塩である。Kaurら、European  Journal  of  Medicinal  Chemistry  ６７巻、（２０１３年）４３４〜４４６頁を参照されたい。そのため、１つの変形形態において、本明細書に記載されている方法、組成物、キットおよび製造品は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩などのＳｙｋ阻害剤およびＰＩ３Ｋδ阻害剤として、Ｒ４０６、ホスタマチニブ、ＢＡＹ−６１−３６０６、ＮＶＰ−ＱＡＢ  ２０５  ＡＡ、Ｒ１１２もしくはＲ３４３、またはその薬学的に許容される塩を使用するまたは含むことが理解される。
【００５９】
一部の実施形態において、本明細書に記載されている方法、組成物、キットおよび製造品は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤として化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、およびＳｙｋ阻害剤として化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩を使用するまたは含む。一部の実施形態において、本明細書に記載されている方法、組成物、キットおよび製造品は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤として化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、およびＳｙｋ阻害剤として化合物Ｃまたはその薬学的に許容される塩を使用するまたは含む。
【００６０】
提供されている方法、組成物、キットおよび製造品は、化合物（例えば、化合物Ａまたは化合物Ｄ、および化合物Ｂ）、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物を使用しまたは含み得るが、ここで、炭素原子に付着されている１個からｎ個の水素原子は、重水素原子またはＤによって置き換えることができ、ここで、ｎは、分子中の水素原子の数である。当技術分野において公知の通り、重水素原子は、水素原子の非放射性同位元素である。こうした化合物は、代謝に対する抵抗性を増加させることができ、したがって、哺乳動物に投与される場合、化合物（例えば、化合物Ａまたは化合物Ｄ、および化合物Ｂ）、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の半減期を増加させるのに有用であり得る。例えば、Foster、「Deuterium  Isotope  Effects  in  Studies  of  Drug  Metabolism」、Trends  Pharmacol.  Sci.、５巻（１２号）：５２４〜５２７頁（１９８４年）を参照されたい。こうした化合物は、当技術分野において周知である手段によって、例えば１個または複数の水素原子が重水素によって置き換えられた出発材料を用いることによって合成される。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」によって、生物学的にまたはその他で望ましくないことがない材料を指し、例えば、材料は、いかなる有意な望ましくない生物学的影響も引き起こすことなく、またはそれが含有される組成物の他の構成成分のいずれかと、有害な方式において相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に組み込むことができる。薬学的に許容される担体または賦形剤は、毒物学的試験および製造試験の必要とされる標準を好ましくは満たし、および／または米国食品医薬品局によって作成された非活性成分ガイドに挙げられている。
【００６２】
「薬学的に許容される塩」としては、例えば、無機酸との塩および有機酸との塩が挙げられる。塩の例としては、ヒドロクロレート、リン酸塩、二リン酸、臭化水素酸塩、硫酸塩、スルフィン酸塩、硝酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メシル酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩およびアルカン酸塩（例えば酢酸塩、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、ここでｎは０〜４である）が挙げられ得る。加えて、本明細書に記載されている化合物が酸付加塩として得られるならば、遊離塩基は、酸性塩の溶液を塩基化することによって得ることができる。逆に、生成物が遊離塩基ならば、付加塩、特に薬学的に許容される付加塩は、塩基化合物から酸付加塩を調製するための従来の手順に従って、適当な有機溶媒中に遊離塩基を溶解させることおよび溶液を酸で処理することによって生成することができる。当業者は、非毒性の薬学的に許容される付加塩を調製するために使用することができる様々な合成方法論を認識する。
【００６３】
「プロドラッグ」としては、被験体に投与されると、例えばプロドラッグの代謝プロセス直後に化合物Ａもしくは化合物Ｄまたは化合物Ｂになる任意の化合物が挙げられる。
【００６４】
「溶媒和物」は、溶媒および化合物の相互作用によって形成される。方法および組成物（例えば医薬組成物、製造品およびキットを含む）において使用される化合物は、化合物Ａもしくは化合物Ｄおよび／または化合物Ｂの塩の溶媒和物を使用し得るか、または含み得る。一実施形態において、溶媒は、化合物Ａもしくは化合物Ｄおよび／または化合物Ｂの水和物であってよい。
【００６５】
提供されている方法、組成物、キットおよび製造品は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の光学異性体、ラセミ体、またはそれらの他の混合物を使用し得るか、またはこれらを含み得る。それらの状況において、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマー、即ち光学活性形態は、不斉合成によってまたはラセミ体の分割によって得ることができる。ラセミ体の分割は、例えば、従来の方法、例えば分割剤の存在下における結晶化、または例えばキラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）カラムを使用するクロマトグラフィーによって達成することができる。加えて、提供されるのは、また、炭素−炭素二重結合を有する化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物のＺおよびＥ形態（またはシスおよびトランス形態）である。提供されている方法、組成物、キットおよび製造品は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の任意の互変異性体形態を使用し得るか、またはこれらを含み得る。
【００６６】
一部の実施形態において、提供されている方法、組成物、キットおよび製造品は、ラセミ混合物、または化合物Ａもしくは化合物Ｄの１つのエナンチオマーのエナンチオマー過剰率（ｅ．ｅ．）を含有する混合物を使用しまたは含み得る。化合物Ａまたは化合物Ｄの全てのこうした異性体形態としては、ありとあらゆる異性体形態が具体的におよび個々にリストされているかのように同じく本明細書において明確に挙げられる。一部の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄは、それの（Ｓ）−エナンチオマーの少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のエナンチオマーの過剰率を有する。
【００６７】
例えば、提供されている方法、組成物、キットおよび製造品の特定の実施形態において、以下を使用しまたは含み得る：（ｉ）化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の（Ｓ）−エナンチオマーのエナンチオマー過剰率を含有する混合物、および（ｉｉ）化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩。提供されている方法、組成物、キットおよび製造品の他の実施形態において、以下を使用しまたは含み得る：（ｉ）化合物Ａまたは化合物Ｄの（Ｓ）−エナンチオマーのエナンチオマー過剰率を含有する混合物、および（ｉｉ）化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩。
癌を処置する方法
【００６８】
本明細書において提供されるのは、被験体（例えば、ヒト）における癌を処置する方法であって、ＰＩ３Ｋδ阻害剤の治療有効量およびＳｙｋ阻害剤の治療有効量、またはその薬学的に許容される塩を被験体（例えば、ヒト）に投与することを含む方法である。一部の実施形態において、該方法は、化合物Ａもしくは化合物Ｄの治療有効量またはその薬学的に許容される塩、およびＳｙｋ阻害剤の治療有効量またはその薬学的に許容される塩を被験体（例えば、ヒト）に投与することを含む。一実施形態において、該方法は、化合物Ａもしくは化合物Ｄの治療有効量またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂの治療有効量またはその薬学的に許容される塩を被験体（例えば、ヒト）に投与することを含む。他の実施形態において、該方法は、化合物Ａもしくは化合物Ｄの治療有効量またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂの治療有効量またはその薬学的に許容される塩を、それを必要としているヒトに投与することを含み、ヒトは癌を有するまたは有する疑いがある。
癌の型
【００６９】
本明細書に記載されている方法は、様々な型の癌を処置するために使用することができる。一部の実施形態において、癌は、再発したまたは難治性の血液悪性腫瘍を含む血液悪性腫瘍であってよい。本明細書に記載されている方法を使用する処置を受け入れ可能な癌としては、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫が挙げられ得る。白血病としては、例えば、リンパ性白血病および慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）（骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ））白血病が挙げられ得る。リンパ腫としては、例えば、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、無痛性非ホジキンリンパ腫を含む）、およびリンパ球性リンパ腫などのリンパ系および細網内皮性の組織の悪性新生物が挙げられ得る。
【００７０】
一部の実施形態において、癌はバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である。一実施形態において、癌は、微小残存病変（ＭＲＤ）である。
【００７１】
特定の実施形態において、癌は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性ＮＨＬ（ｉＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｂ細胞リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。
【００７２】
一部の実施形態において、提供されるのは、化合物Ａもしくは化合物Ｄの治療有効量またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂの治療有効量またはその薬学的に許容される塩を被験体に投与することによって、被験体（例えば、ヒト）における癌を処置する方法であり、ここで、癌は白血病である。一部の実施形態において、白血病は慢性白血病である。慢性白血病の例は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。一実施形態において、白血病は、微小残存病変（ＭＲＤ）である。
【００７３】
他の実施形態において、提供されるのは、また、化合物Ａもしくは化合物Ｄの治療有効量またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂの治療有効量またはその薬学的に許容される塩を被験体（例えば、ヒト）に投与することによって、被験体における癌を処置する方法であり、ここで、癌はリンパ腫である。一部の実施形態において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。非ホジキンリンパ腫の例は、無痛性ＮＨＬ（ｉＮＨＬ）、または難治性ｉＮＨＬである。
【００７４】
提供される処置の方法のいずれも、進行した段階での癌を処置するために使用することができる。本明細書において提供される処置の方法のいずれも、局所的に進行した段階での癌を処置するために使用することができる。本明細書において提供される処置の方法のいずれも、早期段階癌を処置するために使用することができる。本明細書において提供される処置の方法のいずれも、寛解中の癌を処置するために使用することができる。本明細書において提供される処置の方法のいずれかの実施形態の一部において、癌は、寛解後に再発生していた。本明細書において提供される処置の方法のいずれかの一部の実施形態において、癌は進行性癌であった。
被験体
【００７５】
提供される処置の方法のいずれも、癌と診断されたまたは癌を有する疑いのある被験体（例えば、ヒト）を処置するために使用することができる。本明細書で使用される場合、「被験体」としては、例えばヒトを含む哺乳動物が挙げられる。
【００７６】
一部の実施形態において、被験体は、癌に関連する１つまたは複数の症状を呈するヒトであってよい。一部の実施形態において、被験体は、癌の早期段階である。他の実施形態において、被験体は、癌の進行した段階である。
【００７７】
本明細書において提供される処置の方法のいずれかの実施形態の一部において、被験体は、癌と診断されたかまたは診断されなかった、癌を発症するリスクのあるまたは遺伝的に発症するもしくはそうでなければ発症しやすい（例えば、危険因子）ヒトであってよい。本明細書で使用される場合、「リスクのある」被験体は、癌を発症させるリスクのある被験体である。被験体は、検出可能な疾患を有する恐れがあるかまたは恐れがなく、本明細書に記載されている処置方法より前に検出可能な疾患を呈することがあるかまたは呈することがない。リスクのある被験体は、本明細書に記載されている、癌の発症と相関する測定可能なパラメータである１つまたは複数のいわゆる危険因子を有する恐れがある。これらの危険因子の１つまたは複数を有する被験体は、これらの危険因子（単数または複数）がない個体より癌を発症させる確率が高い。
【００７８】
一部の実施形態において、これらの危険因子としては、例えば年齢、性別、人種、食餌、前疾患の履歴、前駆疾患の存在、遺伝子（例えば、遺伝的）考慮、および環境曝露が挙げられ得る。一部の実施形態において、癌のリスクがある被験体としては、例えば、この疾患を経験した親戚を有する人々、およびリスクが遺伝子的または生化学的なマーカーの分析によって決定される人々が挙げられる。
【００７９】
一部の実施形態において、被験体は、化学療法、放射線治療、免疫治療および／または外科手術など、癌を処置するための１つまたは複数の標準的治療を受けているヒトであってよい。したがって、一部の前述の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂは、化学療法、放射線治療、免疫治療および／または外科手術の適用前、適用中または適用後に投与することができる。
【００８０】
特定の実施形態において、被験体は、（ｉ）少なくとも１つの化学療法処置に対して実質的に難治性であるヒト、もしくは（ｉｉ）化学療法を用いる処置の後に再発しているヒト、または（ｉ）および（ｉｉ）の両方であるヒトであってよい。実施形態の一部において、被験体は、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの化学療法処置（標準的または実験的化学療法を含む）に対して難治性である。
【００８１】
特定の実施形態において、被験体は、フルダラビン、リツキシマブ、オビヌツズマブ、アルキル化試薬、アレムツズマブおよび他の化学療法処置、例えばＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン）；Ｒ−ＣＨＯＰ（リツキシマブ−ＣＨＯＰ）；ｈｙｐｅｒＣＶＡＤ（過剰画分化されたシクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシン、デキサメタゾン、メトトレキセート、シタラビン）；Ｒ−ｈｙｐｅｒＣＶＡＤ（リツキシマブ−ｈｙｐｅｒＣＶＡＤ）；ＦＣＭ（フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン）；Ｒ−ＦＣＭ（リツキシマブ、フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン）；ボルテゾミブおよびリツキシマブ；テムシロリムスおよびリツキシマブ；テムシロリムスおよびＶｅｌｃａｄｅ（登録商標）；ヨウ素−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））およびＣＨＯＰ；ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン）；Ｒ−ＣＶＰ（リツキシマブ−ＣＶＰ）；ＩＣＥ（イホスファミド、カルボプラチン、エトポシド）；Ｒ−ＩＣＥ（リツキシマブ−ＩＣＥ）；ＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミド、リツキシマブ）；ＦＲ（フルダラビン、リツキシマブ）；およびＤ．Ｔ．ＰＡＣＥ（デキサメタゾン、サリドマイド、シスプラチン、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、シクロホスファミド、エトポシド）から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの化学療法処置（標準的または実験的化学療法を含む）に対して難治性である。
【００８２】
化学療法処置（標準的または実験的化学療法を含む）の他の例は、下に記載されている。加えて、特定のリンパ腫の処置は、Cheson、B.D.、Leonard,J.P.、「Monoclonal  Antibody  Therapy  for  B-Cell  Non-Hodgkin’s  Lymphoma」  The  New  England  Journal  of  Medicine、２００８年、３５９巻（６号）、６１３〜６２６頁；およびWierda,W.G.、「Current  and  Investigational  Therapies  for  Patients  with  CLL」  Hematology、２００６年、２８５〜２９４頁に概説されている。合衆国におけるリンパ腫発生率パターンは、Morton、L.  M.ら、「Lymphoma  Incidence  Patterns  by  WHO  Subtype  in  the  United  States,  1992-2001」  Blood、２００６年、１０７巻（１号）、２６５〜２７６頁にプロファイルされている。
【００８３】
例えば、殊にＢ細胞起源の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の処置は、モノクローナル抗体、標準的な化学療法手法（例えば、ＣＨＯＰ、ＣＶＰ、ＦＣＭおよびＭＣＰなど）、放射免疫療法、およびその組合せ、殊に抗体治療と化学療法との統合の使用を含む。非ホジキンリンパ腫／Ｂ細胞癌に対する非コンジュゲートモノクローナル抗体の例としては、リツキシマブ、アレムツズマブ、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ２０抗体、ルミリキシマブ、抗ＴＲＡＩＬ、ベバシズマブ、ガリキシマブ、エピラツズマブ、ＳＧＮ−４０、および抗ＣＤ７４が挙げられる。非ホジキンリンパ腫／Ｂ細胞癌の処置において使用される実験的抗体薬剤の例としては、オファツムマブ、ｈａ２０、ＰＲＯ１３１９２１、アレムツズマブ、ガリキシマブ、ＳＧＮ−４０、ＣＨＩＲ−１２．１２、エピラツズマブ、ルミリキシマブ、アポリズマブ、ミラツズマブ、およびベバシズマブが挙げられる。非ホジキンリンパ腫／Ｂ細胞癌のための化学療法の標準的レジメンの例としては、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン）、ＦＣＭ（フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン）、ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）、ＭＣＰ（ミトキサントロン、クロランブシルおよびプレドニゾロン）、Ｒ−ＣＨＯＰ（リツキシマブプラスＣＨＯＰ）、Ｒ−ＦＣＭ（リツキシマブプラスＦＣＭ）、Ｒ−ＣＶＰ（リツキシマブプラスＣＶＰ）、およびＲ−ＭＣＰ（Ｒ−ＭＣＰ）が挙げられる。非ホジキンリンパ腫／Ｂ細胞癌のための放射免疫療法の例としては、イットリウム−９０標識化イブリツモマブチウキセタン、およびヨウ素−１３１標識化トシツモマブが挙げられる。
【００８４】
別の例において、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）の治療的処置としては、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン）、ｈｙｐｅｒＣＶＡＤ（過剰画分化されたシクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシン、デキサメタゾン、メトトレキセート、シタラビン）およびＦＣＭ（フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン）などの組合せ化学療法が挙げられる。加えて、これらのレジメンは、組合せ治療Ｒ−ＣＨＯＰ、ｈｙｐｅｒＣＶＡＤ−ＲおよびＲ−ＦＣＭを形成するためにモノクローナル抗体リツキシマブ（リツキサン）を補充することがある。他の手法としては、上述されている治療のいずれかと、ＩＣＥ（イホスファミド、カルボプラチンおよびエトポシド）を用いる幹細胞移植または処置とを組み合わせることが挙げられる。マントル細胞リンパ腫を処置するための他の手法としては、リツキシマブ（リツキサン）のようなモノクローナル抗体を使用するなどの免疫治療が挙げられる。リツキシマブは、辺縁帯リンパ腫、ＷＭ、ＣＬＬおよび小リンパ球性リンパ腫を含む無痛性Ｂ細胞癌を処置するために使用することができる。リツキシマブおよび化学療法薬剤の組合せは、殊に有効である。修飾された手法は、モノクローナル抗体がヨウ素−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））およびイットリウム−９０イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））などの放射性同位体粒子と組み合わされる放射免疫療法である。別の例において、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）は、ＣＨＯＰを用いる逐次処置において使用される。別の免疫治療例としては、個々の患者の腫瘍の遺伝子的構造に基づく癌ワクチンを使用することが挙げられる。リンパ腫ワクチン例は、ＧＴＯＰ−９９（ＭｙＶａｘ（登録商標））である。マントル細胞リンパ腫を処置するためのなお他の手法としては、高用量化学療法とカップリングされる自家幹細胞移植が挙げられ、またはマントル細胞リンパ腫を処置することとしては、プロテアソーム阻害剤、例えばＶｅｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブまたはＰＳ−３４１）を投与すること、または抗血管新生剤、例えばサリドマイドを、殊にリツキサンとの組合せで投与することが挙げられる。別の処置手法は、Ｂｃｌ−２タンパク質の分解に至るとともに化学療法に対する癌細胞感受性を増加させる薬物、例えばオブリメルセン（ゲナセンス）を他の化学療法剤との組合せで投与することである。別の処置手法としては、細胞成長の阻害および細胞死にすら至ることがあるｍＴＯＲ阻害剤を投与することが挙げられ、非限定的な例は、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９）、およびＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）または他の化学療法剤との組合せでのテムシロリムスである。
【００８５】
ＭＣＬのための、他の近年の治療が開示された（Nature  Reviews;  Jares,  P、２００７年）。こうした例としては、フラボピリドール、ＰＤ０３３２９９１、Ｒ−ロスコビチン（Ｓｅｌｉｃｉｌｉｂ、ＣＹＣ２０２）、スチリルスルホン、オバトクラックス（ＧＸ１５−０７０）、ＴＲＡＩＬ、抗ＴＲＡＩＬ  ＤＲ４およびＤＲ５抗体、テムシロリムス（ＣＣｌ−７７９）、エバロリムス（ＲＡＤ００１）、ＢＭＳ−３４５５４１、クルクミン、ボリノスタット（ＳＡＨＡ）、サリドマイド、レナリドミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）、ＣＣ−５０１３）、およびゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）が挙げられる。
【００８６】
ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）を処置するために使用される他の治療剤の例としては、ペリホシン、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））、ＣＣ−５１０３、サリドマイド、エピラツズマブ（ｈＬＬ２−抗ＣＤ２２ヒト化抗体）、シンバスタチン、エンザスタウリン、キャンパス−１Ｈ、デキサメタゾン、ＤＴ  ＰＡＣＥ、オブリメルセン、アンチネオプラストンＡ１０、アンチネオプラストンＡＳ２−１、アレムツズマブ、ベータアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組換えインターフェロンアルファ、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン１０、インジウムＩｎ  １１１モノクローナル抗体ＭＮ−１４、イットリウムＹ９０ヒト化エピラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、治療的同種異系リンパ球、イットリウムＹ９０イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組換えインターフェロンアルファ、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組換えインターロイキン−１２、組換えインターロイキン−１１、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質阻害剤ＡＢＴ−２６３、デニロイキンディフチトクス、タネスピマイシン、エバロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組換えｆｌｔ３リガンド、組換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、カスポファンギン酢酸塩、クロファラビン、エポエチンアルファ、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、酒石酸ビノレルビン、ＷＴ−１類似体ペプチドワクチン、ＷＴ１  １２６〜１３４ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体ＣＤ１９、モノクローナル抗体ＣＤ２０、オメガ３脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ−１３１トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、チピファルニブ、自家ヒト腫瘍誘導ＨＳＰＰＣ−９６、ベルツズマブ、ブリオスタチン１、およびペグ化リポソームドキソルビシンヒドロクロリド、ならびにその任意の組合せが挙げられる。
【００８７】
ＷＭを処置するために使用される治療手順の例としては、末梢血幹細胞移植、自家造血幹細胞移植、自家骨髄移植、抗体治療、生物学的治療、酵素阻害剤治療、全身照射、幹細胞の注入、幹細胞支持体を用いる骨髄除去、インビトロ処置の末梢血幹細胞移植、臍帯血移植、免疫酵素法、薬理学的研究、低ＬＥＴコバルト６０ガンマ線治療、ブレオマイシン、従来の外科手術、放射線治療、および骨髄非破壊的な同種異系間の造血幹細胞移植が挙げられる。
【００８８】
薬物治療（Blood  ２００５年、Abramson,J.）においてびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を処置するために使用される他の治療剤の例としては、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、エトポシド、ブレオマイシン、ワルデンストレーム用にリストされている薬剤の多く、および任意のその組合せ、例えばＩＣＥおよびＲ−ＩＣＥが挙げられる。
【００８９】
慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（Spectrum、２００６年、Fernandes,D.）を処置するために使用される他の治療剤の例としては、クロランブシル（ロイケラン）、シクロホスファミド（シロキサン、エンドキサン、エンドキサナ、シクロスチン）、フルダラビン（フルダラ）、ペントスタチン（Pentstatin）（Ｎｉｐｅｎｔ）、クラドリビン（ロイスタチン（Leustarin））、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、アドリブラスチン）、ビンクリスチン（オンコビン）、プレドニゾン、プレドニゾロン、アレムツズマブ（キャンパス、マブキャンパス）、ワルデンストレーム用にリストされている薬剤の多く、ならびに共通の組合せレジメン：ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン）；Ｒ−ＣＶＰ（リツキシマブ−ＣＶＰ）；ＩＣＥ（イホスファミド、カルボプラチン、エトポシド）；Ｒ−ＩＣＥ（リツキシマブ−ＩＣＥ）；ＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミド、リツキシマブ）；およびＦＲ（フルダラビン、リツキシマブ）を含む組合せの化学療法および化学免疫療法が挙げられる。
【００９０】
したがって、提供されるのは、（ｉ）少なくとも１つの化学療法処置に対して実質的に難治性である被験体、もしくは（ｉｉ）化学療法を用いる処置の後に再発している被験体、または（ｉ）および（ｉｉ）の両方である被験体を感受性化する方法であり、ここで、該方法は、化合物Ａの有効量および化合物Ｂの有効量、またはその薬学的に許容される塩を被験体に投与することを含む。感受性化される被験体は、化合物Ａおよび化合物Ｂの投与を伴う処置に応答性である被験体、またはこうした処置に対する抵抗性を発達させていない被験体である。
【００９１】
化合物Ａおよび化合物Ｂの投与を伴う処置は、他の方法では抵抗性である細胞、発達した抵抗性を有する細胞、または化学療法処置によるもしくはＰＩ３Ｋ−δ阻害剤（化合物Ａまたは化合物Ｄなど）単独での投与による死滅またはアポトーシスに応答性でない細胞を感受性化するか、またはその感受性を回復することもできる。感受性化されている癌細胞または回復した感受性を有する癌細胞は、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの投与を伴う処置に応答性である癌細胞である。一部の実施形態において、両化合物の投与は、細胞生存性における低減のレベルを増加させることによって、こうした癌細胞を感受性化するか、またはその感受性を回復する。特定の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの投与は、細胞生存性における低減のレベルを、化合物Ａもしくは化合物Ｄだけとの接触または化合物Ｂだけとの接触と比較して少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％増加させる。他の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの投与は、細胞生存性における低減のレベルを、１０％から９９％、１０％から９０％、１０％から８０％、１０％から７０％、２０％から９９％、２０％から９０％、２０％から８０％、２５％から９５％、２５％から９０％、２５％から８０％、２５％から７５％、または３０％から９０％増加させる。
処置
【００９２】
本明細書で使用される場合、「処置」または「処置する」は、臨床的結果を含む有益なまたは所望の結果を得るための手法である。例えば、有益なまたは所望の臨床的結果としては、以下の１つまたは複数が挙げられ得る：
（ｉ）疾患を起因とする１つまたは複数の症状を減少させること、
（ｉｉ）疾患の程度を軽減すること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を予防または遅延させること）、
（ｉｉｉ）疾患の拡散（例えば、転移）を予防または遅延させること、
（ｉｖ）疾患の発生または再発を予防または遅延させること、疾患の進行遅延または減速させること、
（ｖ）疾患状態を寛解させること、疾患の寛解（部分的または全体的のいずれでも）を提供すること、疾患を処置するために必要とされる１つまたは複数の他の医薬品の用量を減少させること；
（ｖｉ）疾患の進行を遅延させること、生活の質を増加させること、および／または
（ｖｉｉ）生存を延長すること。
【００９３】
１つの変形形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の投与は、癌の重症度を減少させる。一態様において、癌の重症度における減少は、本明細書に記載されている方法によってケモカインレベル（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ２２）で判定することができる。
【００９４】
一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の投与は、癌に伴う１つまたは複数の症状の重症度を、処置より前の同じ被験体における対応の１つまたは複数の症状と比較して、または組成物を受けない他の被験体における対応の症状と比較して少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％のいずれかで低減することができる。特定の実施形態において、処置または処置することには、癌の病理結果の低減も含む。提供されている方法は、処置のこれらの態様のいずれか１つまたは複数を企図する。
【００９５】
本明細書で使用される場合、癌の発症を「遅延させる」ことは、疾患の発症を延期、阻止、緩徐、抑制、安定化および／または引き延ばすことを意味する。この遅延は、処置される疾患および／または被験体の病歴に依存して、変動する時間長さであり得る。当業者に明らかである通り、充分なまたは有意な遅延は、事実上、個体が疾患を発症しないという点において予防を包含する。癌の発症を「遅延させる」方法は、該方法を使用しないのと比較した場合、所定の時間枠における疾患発症の確率を低減し、および／または所定の時間枠における疾患の程度を低減する方法である。こうした比較は、典型的に、統計的に有意な数の被験体を使用する臨床研究に基づく。癌発症は、ルーチン的物理的検査、マンモグラフィー、撮像または生検などの標準的方法を使用して検出可能であり得る。発症は、初期に検出不可能であり得る疾患進行も指すことができ、発生、再発および発病を含む。
【００９６】
特定の実施形態において、該方法は、造血起源の癌細胞の成長または増殖を処置するために使用することができる。例えば、癌細胞は、リンパ系起源であり得る。一実施形態において、癌細胞は、Ｂリンパ球またはＢリンパ球前駆体に関連するか、またはそれから誘導される。
【００９７】
化合物Ａおよび化合物Ｂの両方、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの両方またはその薬学的に許容される塩の投与は、癌細胞の細胞生存性を減少させ、特定の代謝経路におけるリン酸化を妨害または阻害し、および／または疾患重症度を低減することと相関し得る特定のケモカイン産生を低減または阻害することができる。
【００９８】
したがって、本明細書において提供されるのは、また、ヒトの癌細胞における細胞生存性を減少させる方法であって、癌細胞における細胞生存性を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法である。本明細書において提供されるのは、また、癌細胞における細胞生存性を減少させる方法であって、癌細胞における細胞生存性を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することまたは癌細胞と接触させることを含む方法である。一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞における細胞生存性は、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での癌細胞における細胞生存性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少する。特定の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞における細胞生存性は、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での癌細胞における細胞生存性と比較して、１０％から９９％、１０％から９０％、１０％から８０％、２０％から９０％、２０％から８０％、２０％から７０％減少する。前述の方法の一実施形態において、癌細胞は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞である。
【００９９】
当技術分野において公知の任意の適当な方法、技法およびアッセイは、細胞生存性を測定するために使用することができる。例えば、一実施形態において、ＣＬＬ細胞などの癌細胞における細胞生存性は、ＭＴＳアッセイなどの細胞生存性アッセイによって決定することができる。他の適当なアッセイには、例えば、適当な染色、色素、ポリヌクレオチド、ポリペプチドまたはバイオマーカーの使用が含まれ得る。
【０１００】
本明細書において提供されるのは、また、ヒトの癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法である。本明細書において提供されるのは、また、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することまたは癌細胞と接触させることを含む方法である。一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞におけるＳ６リン酸化は、化合物Ａおよび化合物Ｂの非存在下、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での癌細胞におけるＳ６リン酸化と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少する。特定の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞におけるＳ６リン酸化は、化合物Ａおよび化合物Ｂの非存在下、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での癌細胞におけるＳ６リン酸化と比較して、１０％から９９％、１０％から９０％、１０％から８０％、２０％から９０％、２０％から８０％、２０％から７０％減少する。前述の方法の一実施形態において、癌細胞は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞である。
【０１０１】
本明細書において提供されるのは、また、ヒトの癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量のヒト化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法である。本明細書において提供されるのは、また、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩を癌細胞と接触させることを含む方法である。一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞におけるＥＲＫリン酸化は、化合物Ａおよび化合物Ｂの非存在下、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での癌細胞におけるＥＲＫリン酸化と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少する。特定の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与した後または癌細胞と接触させた後の癌細胞におけるＥＲＫリン酸化は、化合物Ａおよび化合物Ｂの非存在下、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での癌細胞におけるＥＲＫリン酸化と比較して、１０％から９９％、１０％から９０％、１０％から８０％、２０％から９０％、２０％から８０％、２０％から７０％減少する。前述の方法の一実施形態において、癌細胞は、バーキットリンパ腫細胞である。
【０１０２】
当技術分野において公知の任意の適当な方法、技法およびアッセイは、ＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、およびＥＲＫリン酸化を測定するために使用することができる。例えば、一実施形態において、ＣＬＬ細胞またはバーキットリンパ腫細胞などの癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、および／またはＥＲＫリン酸化は、フローサイトメトリーまたは免疫ブロッティングによって決定することができる。
【０１０３】
本明細書において提供されるのは、また、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ２２、またはその任意の組合せを発現する細胞を含む試料におけるケモカイン産生を減少させる方法であって、試料におけるケモカイン産生を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩と試料とを接触させることを含む方法である。
【０１０４】
一部の実施形態において、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の１つまたは複数が当てはまる：
（ｉ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後のＣＬＬ２産生は、化合物Ａおよび化合物Ｂの非存在下、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での細胞におけるＣＬＬ２産生と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少する、
（ｉｉ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後のＣＬＬ３産生は、化合物Ａおよび化合物Ｂの非存在下、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での細胞におけるＣＬＬ３産生と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少する、
（ｉｉｉ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後のＣＬＬ４産生は、化合物Ａおよび化合物Ｂの非存在下、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での細胞におけるＣＬＬ４産生と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少する、
【０１０５】
（ｉｖ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後のＣＬＬ２２産生は、化合物Ａおよび化合物Ｂの非存在下、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、もしくはその薬学的に許容される塩の非存在下での細胞におけるＣＬＬ２２産生と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少する。
【０１０６】
上記で提供されるケモカインのいずれか１つの産生における減少のありとあらゆる変動は、ありとあらゆる組合せが個々に記載されているかのように、他のケモカインのありとあらゆる変動と組み合わせ得ることが意図および理解される。例えば、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、腫瘍壊死因子アルファ、およびｃ反応性（creative）タンパク質は、適当なケモカインであり得る。
【０１０７】
当技術分野において公知の任意の適当な方法、技法およびアッセイは、試料におけるケモカインのレベルを決定するために使用することができる。例えば、イムノアッセイ（または免疫結合アッセイ）は、試料におけるケモカインレベルを質的または定量的に分析するために使用することができる。適用可能な技術の一般的概要は、多くの容易に利用可能なマニュアル、例えば、Harlow  &  Lane、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、Using  Antibodies:  A  Laboratory  Manual（１９９９年）において見出すことができる。イムノアッセイは、典型的に、選択のタンパク質または抗原に特異的に結合する抗体を使用する。抗体は、当業者に周知である多くの手段のいずれかによって生成することができる。
投薬レジメン、投与の順序、および投与の経路
【０１０８】
化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩、およびその医薬組成物としては、それの意図される目的を達成するための治療有効量で化合物が投与されるものが挙げられ得る。本明細書で使用される場合、「治療有効量」は、ＰＩ３Ｋδおよび／またはＳｙｋの発現もしくは活性をモジュレートするとともに、それによって適応症を患う被験体（ヒトなど）を処置するのに充分な量、または適応症の現存の症状を軽減するのに充分な量を意味する。治療有効量の決定は、殊に本明細書において提供される詳述の開示に照らして、充分に当業者の能力内である。一部の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの治療有効量および化合物Ｂの治療有効量は、（ｉ）癌細胞の数を低減することができる；（ｉｉ）腫瘍サイズを低減することができる；（ｉｉｉ）末梢器官中への癌細胞浸潤を阻害、阻止、ある程度緩徐、および好ましくは停止することができる；（ｉｖ）腫瘍転移を阻害する（例えば、ある程度緩徐、および好ましくは停止する）ことができる；（ｖ）腫瘍成長を阻害することができる；（ｖｉ）腫瘍の発生および／または再発を予防または遅延させることができる；および／または（ｖｉｉ）癌に伴う症状の１つまたは複数をある程度を解放することができる。各種実施形態において、量は、癌の症状の１つまたは複数を寛解、緩和、和らげるおよび／または遅延させるのに充分である。
【０１０９】
本明細書において提供されている方法における、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の投薬レジメンは、例えば、適応症、投与の経路、および状態の重症度に依存して変動することができる。投与の経路に依存して、適当な用量は、体重、体表面積または臓器サイズに従って算出することができる。最終の投薬レジメンは、薬物の作用を修飾する様々な因子、例えば、化合物の比活性、疾患状態の同一性および重症度、患者の応答性、患者の年齢、状態、体重、性別および食餌、ならびに任意の感染の重症度を考慮して、良好な医療実施の観点から主治医によって決定される。考慮に入れることができる追加の因子としては、投与の時間および頻度、薬物組合せ、反応感受性、および治療の耐性／応答が挙げられる。本明細書において記述されている処方物のいずれかを伴う処置に適切な用量のさらなる精密化は、殊に開示されている投薬の情報およびアッセイならびにヒト臨床試験において観察される薬物動態学的データに照らして、過度の実験法をすることなく熟練した実務者によって日常的に行われる。適切な用量は、用量応答データと一緒に体液または他の試料における薬剤の濃度を決定するための確立したアッセイの使用を介して確かめることができる。
【０１１０】
選択される投与の処方および経路は、個々の被験体、被験体において処置されるべき状態の性質、および一般には担当実務者の判断に合わせることができる。例えば、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの治療指数は、細胞をそのように同定するマーカーを発現する癌細胞への標的化送達のための化合物を修飾または誘導体化することによって増強することができる。例えば、化合物は、癌細胞に対して選択的または特異的であるマーカーを認識する抗体に連結されることで、化合物が細胞の近傍に運ばれて、すでに記載されている通りにそれらの効果を局所的に及ぼすことができる。例えば、Pieterszら、Immunol.  Rev.、１２９巻：５７号（１９９２年）；Trailら、Science、２６１巻：２１２号（１９９３年）；およびRowlinson-Buszaら、Curr.  Opin.  Oncol.、４巻：１１４２号（１９９２年）を参照されたい。
投薬レジメン
【０１１１】
化合物Ａまたは化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の治療有効量は、所望の処置エンドポイントを達成するために、単回用量または複数用量で提供することができる。本明細書で使用される場合、「用量」は、被験体（例えば、ヒト）によって各回に摂取されるべき活性成分（例えば、化合物Ａまたは化合物Ｄ、化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩）の合計量を指す。
【０１１２】
ヒト被験体に対する化合物Ａもしくは化合物Ｄ、またはその薬学的に許容される塩の例示的な用量は、約０．０１ｍｇから約１５００ｍｇの間、または約５０ｍｇから約２００ｍｇの間、または約７５ｍｇ、または約１００ｍｇ、または約１２５ｍｇ、または約１５０ｍｇ、または約１７５ｍｇ、または約２００ｍｇ、または約２２５ｍｇ、または約２５０ｍｇ、または約２７５ｍｇ、または約３００ｍｇ、または約３２５ｍｇ、または約３５０ｍｇ、または約３７５ｍｇ、または約４００ｍｇ、または約４２５ｍｇ、または約４５０ｍｇ、または約４７５ｍｇ、または約５００ｍｇであってよい。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータそれ自体を対象とする実施形態を含む（およびそれを記載する）と理解されるべきである。例えば、「約ｘ」に言及する記載は、「ｘ」それ自体の記載を含む。
【０１１３】
ヒト被験体に対する化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の例示的な用量は、約０．０１ｍｇから約１８００ｍｇの間、または約０．０１ｍｇから約１５００ｍｇの間、または約１０ｍｇから約１５００ｍｇの間、または約１０ｍｇから約１３００ｍｇの間、または約１０ｍｇから約１０００ｍｇの間、または約１０ｍｇから約８００ｍｇの間、または約１０ｍｇから約６００ｍｇの間、または約１０ｍｇから約３００ｍｇの間、または約１０ｍｇから約２００ｍｇの間、または約１０ｍｇから約１００ｍｇの間、または約１００ｍｇから約８００ｍｇの間、または約１００ｍｇから約６００ｍｇの間、または約１００ｍｇから約３００ｍｇの間、または約１００ｍｇから約２００ｍｇの間、または約２００ｍｇから約３５０ｍｇの間、または約２５０ｍｇから約３００ｍｇの間、または約２００ｍｇから約４００ｍｇの間、または約４００ｍｇから約６００ｍｇの間、または約４００ｍｇから約８００ｍｇの間、または約６００ｍｇまたは約８００ｍｇの間、または約８００ｍｇから約１２００ｍｇの間、または約１２００ｍｇから約１６００の間、または約５０ｍｇから約２００ｍｇの間、または約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、または約１５０ｍｇ、または約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇ、または約７５０ｍｇ、または約８００ｍｇ、または約８５０ｍｇ、または約９００ｍｇ、または約９５０ｍｇ、または約１０００ｍｇ、または約１１００ｍｇ、または約１２００ｍｇ、または約１３００ｍｇ、または約１４００ｍｇ、または約１５００ｍｇ、または約１６００ｍｇ、または約１８００ｍｇであってよい。
【０１１４】
化合物Ａまたは化合物Ｄの用量のありとあらゆる変動は、ありとあらゆる組合せが個々に記載されているかのように、化合物Ｂの用量のありとあらゆる変動と組み合わせ得ることが意図および理解される。例えば、一実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの１００ｍｇ用量は、化合物Ｂの２００ｍｇ用量とともに投与することができる。別の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの１００ｍｇ用量は、化合物Ｂの６００ｍｇ用量とともに投与することができる。なお別の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの１５０ｍｇ用量は、化合物Ｂの６００ｍｇ用量とともに投与することができる。他の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの１５０ｍｇ用量は、化合物Ｂの９００ｍｇ用量とともに投与することができる。なお他の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの１５０ｍｇ用量は、化合物Ｂの９００ｍｇ用量とともに投与することができる。一部の他の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの３００ｍｇ用量は、化合物Ｂの２００ｍｇ用量とともに投与することができる。一部の他の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの３００ｍｇ用量は、化合物Ｂの９００ｍｇ用量とともに投与することができる。特定の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの１００ｍｇ用量は、化合物Ｂの９００ｍｇ用量とともに投与することができる。
【０１１５】
他の実施形態において、提供されている方法は、臨床的効力が達成される化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の用量を投与すること、あるいは効力が維持され得るレベルへの増分により用量を低減することによって、被験体（例えば、ヒト）を処置し続けることを含む。特定の実施形態において、提供されている方法は、化合物Ａもしくは化合物Ｄ、またはその薬学的に許容される塩の２０ｍｇから５００ｍｇの初期の日用量を被験体（例えば、ヒト）に投与すること、および前記用量を少なくとも６日にわたって１日当たり５０ｍｇから４００ｍｇの合計投与量に増加させることを含む。任意選択により、投与量は、１日当たり約７５０ｍｇにさらに増加させることができる。別の実施形態において、提供されている方法は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の１００ｍｇから１０００ｍｇの初期の日用量を被験体（例えば、ヒト）に投与すること、および前記用量を少なくとも６日にわたって１日当たり５０ｍｇから４００ｍｇの合計投与量に増加させることを含む。したがって、化合物Ａおよび／もしくは化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび／もしくは化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の用量（単数または複数）は、臨床的効力が達成されるまでの増分によって増加させ得ることも理解されるべきである。約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、または約１２５ｍｇ、または約１５０ｍｇ、または約２００ｍｇ、または約２５０ｍｇ、または約３００ｍｇの増分が、用量を増加させるために使用され得る。用量は、毎日、隔日毎に、１週当たり２回、３回、４回、５回もしくは６回、または１週当たり１回増加することができる。
【０１１６】
投薬する頻度は、投与される化合物および投与の経路の薬物動態学的パラメータに依存する。化合物Ａまたは化合物Ｄについての投薬頻度は、化合物Ｂについての投薬頻度と同じまたは異なってよい。一部の実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩は、１日１回または１日２回投与される。一部の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、１日１回または１日２回投与される。一実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂの両方、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの両方、またはその薬学的に許容される塩は、両方独立して、１日２回投与される。他の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩および化合物Ａは、両方独立して、１日２回投与される。他の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩および化合物Ｄは、両方独立して、１日２回投与される。
【０１１７】
投薬する用量および頻度は、薬物動態学的および薬力学的ならびに毒性および治療の効率データに依存することができる。例えば、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂについての薬物動態学的および薬力学的情報、ならびに化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの処方物は、前臨床のインビトロおよびインビボの研究を介して回収することができ、後に臨床試験の過程中でヒトにおいて確認することができる。したがって、提供されている方法において使用される化合物Ａおよび化合物Ｂについて、または提供されている方法において使用される化合物Ｄおよび化合物Ｂについて、治療有効量は、生化学的アッセイおよび／または細胞に基づくアッセイから初期に概算することができる。次いで、投与量は、ＰＩ３Ｋδおよび／またはＳｙｋの発現または活性をモジュレートする望ましい循環濃度範囲を達成するために、動物モデル中に処方することができる。ヒト研究が行われると、様々な疾患および状態についての適切な投与レベルおよび処置期間に関して、さらなる情報が現れる。
【０１１８】
化合物Ａおよび化合物Ｂならびに化合物Ｄおよび化合物Ｂの毒性および治療的有効性は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に対する致死的用量）およびＥＤ５０（集団の５０％における治療上有効な用量）を決定するため、細胞培養または実験動物における標準的医薬手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は、典型的にＬＤ５０／ＥＤ５０比として表される「治療的指数」である。大治療指数を呈する化合物、即ち、毒性用量が有効量より実質的に高い化合物が好ましい。こうした細胞培養アッセイおよび追加の動物研究から得られるデータは、ヒトの使用のための投与量の範囲を処方するのに使用することができる。こうした化合物の用量は、好ましくは、ほとんどまたは全く毒性がないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。
【０１１９】
化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の投与は、摂食状態下で投与することができる。摂食状態という用語またはその変形は、化合物またはその医薬組成物が投与される前または同時に、任意の適当な形態において、固体もしくは液状形態またはカロリーのいずれかにおける食料の消費または取込みを指す。例えば、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、カロリー（例えば、食事）を消費する数分または数時間内に被験体（例えば、ヒト）に投与することができる。一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、カロリーを消費する５〜１０分内、約３０分内、または約６０分内に被験体（例えば、ヒト）に投与することができる。
投与の順序
【０１２０】
化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩を投与する順序も、変動することができる。一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、逐次に投与（例えば、逐次投与）または同時に投与（例えば、同時投与）することができる。例えば、一部の実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の前に投与される。他の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の前に投与される。なお他の実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、同時に投与される。
【０１２１】
一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、逐次に投与することができる。特定の実施形態において、逐次投与は、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩が、数分、数時間、数日または数週の時間を隔てて投与されることを意味する。特定の実施形態において、化合物は、少なくとも１５分、少なくとも３０分、少なくとも６０分、または１日、２日、３日、４日、５日、６日もしくは７日、または２週、３週、４週、５週、６週、７週もしくは８週の時間を隔てて投与される。一実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の前に投与することができる。別の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の前に投与することができる。逐次に投与される場合、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、２回以上の投与で投与することができる。逐次に投与される場合、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、同じまたは異なるパッケージに含有することができる別々の組成物に含有される。
【０１２２】
他の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、同時に投与することができる。特定の実施形態において、同時投与は、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩が、数分または数秒以下の時間を隔てて投与されることを意味する。特定の実施形態において、化合物は、約１５分、約１０分、約５分または１分以下の時間を隔てて投与される。同時に投与される場合、特定の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、同じまたは異なるパッケージに含有することができる別々の組成物に含有される。他の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、同じ組成物に含有される。
【０１２３】
さらに、一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の投与は、化合物Ａおよび化合物Ｂのいずれかまたは両方、またはその薬学的に許容される塩の補充用量と組み合わせることができる。他の実施形態において、化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の投与は、化合物Ｄおよび化合物Ｂのいずれかまたは両方、またはその薬学的に許容される塩の補充用量と組み合わせることができる。
【０１２４】
化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の投与は、予想外の「相乗」または「相乗効果（単数または複数）」、即ち、一緒に使用される活性成分が、化合物を別々に使用することからもたらされる効果の和より大きいか、または化合物から単独でもたらされる相加効果より大きい場合に達成される効果を提供することができる。相乗効果は、活性成分（例えば、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩）が（１）共処方され、組み合わせられた処方物において同時に投与または送達される場合、（２）別々の処方物として逐次または同時に送達される場合、または（３）ある他のレジメンによる場合に達成される。特定の実施形態において、相乗効果は、化合物が、例えば別々の錠剤、丸剤もしくはカプセル中で、または別々のシリンジ中の異なる注射によって、逐次に投与または送達される場合に達成することができる。
【０１２５】
化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、同じまたは別々の組成物中で投与することができる。同様に、化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、同じまたは別々の組成物中で投与することができる。例えば、一部の実施形態において、活性成分は、化合物Ａまたは化合物Ｄを含む医薬組成物、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物中で別々に投与することができる。
投与のモード
【０１２６】
化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、非経口的および経腸的技法を含む任意の従来の方法によって投与することができる。非経口投与様式としては、消化管以外の経路、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、髄内、筋肉内、関節内、くも膜下腔内および脳室内の注射によって組成物が投与されるものが挙げられる。経腸的投与様式としては、例えば、経口、バッカル、舌下および直腸の投与が挙げられる。経上皮投与様式としては、例えば、経粘膜投与および経皮投与が挙げられる。経粘膜投与としては、例えば、経腸投与ならびに経鼻、吸入および深肺の投与；腟内投与；ならびにバッカルおよび舌下の投与が挙げられる。経皮投与としては、例えばパッチおよびイオントフォレーシス装置、ならびにペースト、膏薬または軟膏の局所適用を含む受動的または能動的な経皮的または経皮性の様式が挙げられる。非経口投与は、高圧技法、例えば、ＰＯＷＤＥＲＪＥＣＴ（商標）を使用して達成することもできる。
【０１２７】
一部の実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、独立して、経口的に、静脈内に、または吸入によって投与することができる。一実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、および化合物Ａまたは化合物Ｄは、両方とも、経口的に投与される。
【０１２８】
一実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩は、経口的に投与される。一部の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄは、約５０ｍｇＢＩＤ、約１００ｍｇＢＩＤ、約１５０ｍｇＢＩＤ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、または約７００ｍｇＢＩＤ、または約８００ｍｇ、または約９００ｍｇ、または約１１００ｍｇ、または約１２００ｍｇの投与量で経口的に投与される。一部の実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄは、約５０ｍｇＢＩＤ、約１００ｍｇＢＩＤ、または約１５０ｍｇＢＩＤの投与量で経口的に投与される。
【０１２９】
一実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、経口的に投与される。一部の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇＢＩＤ、約１００ｍｇＢＩＤ、約１５０ｍｇＢＩＤ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇＢＩＤ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、または約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、または約１８００ｍｇの投与量で経口的に投与される。他の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、約２００ｍｇ、約６００ｍｇ、または約８００ｍｇ、または約９００ｍｇ、または約１２００ｍｇの投与量で経口的に投与される。一部の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、約２００ｍｇまたは約６００ｍｇの投与量で経口的に投与される。
医薬組成物
【０１３０】
化合物Ａおよび化合物Ｂならびに化合物Ｄおよび化合物Ｂは、各々、無希釈の化学物質として投与または提供することができるが、医薬組成物または処方物の形態で化合物を投与または提供するのが典型的であるとともに好ましい。よって、提供されるのは、化合物Ａおよび／もしくは化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび／もしくは化合物Ｂ、ならびに生体適合性の医薬用ビヒクル（例えば、担体、アジュバント、および／または賦形剤）を含む医薬組成物である。組成物は、唯一の活性薬剤（単数または複数）として、または１つもしくは複数の薬学的に許容されるビヒクルと混合されるオリゴもしくはポリヌクレオチド、オリゴもしくはポリペプチド、薬物またはホルモンなどの他の薬剤との組合せでの化合物を含み得る。薬学的に許容されるビヒクルは、薬学的に許容される担体、アジュバントおよび／または賦形剤を含んでよく、他の成分は、それらが処方物の他の成分と適合性があるとともにそのレシピエントに有害でない限り、薬学的に許容されると見なすことができる。
【０１３１】
化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩は、同じまたは別々の処方物で投与することができる。特定の実施形態において、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩は、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物で存在する。特定の実施形態において、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物で存在する。一実施形態において、活性成分（例えば、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩）は、別々の単位投与量で（例えば、別々の錠剤、丸剤またはカプセルで、または別々のシリンジにおける異なる注射によって）投与される。
【０１３２】
医薬組成物の処方および投与のための技法は、Remington's  Pharmaceutical  Sciences、第１８版、Mack  Publishing  Co、Easton、Pa.、１９９０年；およびModern  Pharmaceutics、Marcel  Dekker,Inc.、第３版（G.S.  Banker  &  C.T.  Rhodes編）において見出すことができる。本明細書に記載されている医薬組成物は、任意の従来の方法、例えば混合プロセス、溶解プロセス、顆粒化プロセス、糖衣錠作製プロセス、水簸プロセス、乳化プロセス、被包プロセス、取り込みプロセス、メルトスピニングプロセス、スプレー乾燥プロセスまたは凍結乾燥プロセスを使用して製造することができる。最適な医薬処方は、投与の経路および所望の投与量に依存して、当業者によって決定することができる。こうした処方物は、物理的状態、安定性、インビボ放出の速度、および投与薬剤のインビボクリアランスの速度に影響を及ぼすことがある。処置されている状態に依存して、これらの医薬組成物は、全身または局所的に処方および投与することができる。
【０１３３】
医薬組成物は、例えば、不活性な固体希釈剤および充填剤、滅菌水溶液および様々な有機溶媒を含む希釈剤、浸透エンハンサー、可溶化剤、ならびにアジュバントが挙げられ得る適当な薬学的に許容されるビヒクルを含有するように処方することができる。例えば、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含むことができ、任意選択により、化合物Ａ、化合物Ｂ、または化合物Ａおよび化合物Ｂの両方を処理して、薬学的に使用することができる調製物にするのを容易にする賦形剤および助剤を含んでよい。別の例において、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含むことができ、任意選択により、化合物Ｄ、化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの両方を処理して、薬学的に使用することができる調製物にするのを容易にする賦形剤および助剤を含んでよい。投与のモードは、一般に、担体の性質を決定する。例えば、非経口投与の処方物としては、水溶性形態における活性化合物の水溶液が挙げられ得る。非経口投与に適当な担体は、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、および他の生理的に適合性のある溶液の中から選択することができる。一実施形態において、非経口投与のための担体としては、ハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理的緩衝生理食塩水などの生理的に適合性のある緩衝剤が挙げられる。組織的または細胞的投与のため、透過される特定の障壁に適切な浸透剤が処方物に使用される。こうした浸透剤は一般に、当技術分野において公知である。タンパク質を含む調製物のため、処方物は、ポリオール（例えば、スクロース）および／または界面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤）などの安定化材料を含み得る。
【０１３４】
代替として、非経口的使用のための処方物としては、適切な油性注射懸濁液として調製される化合物Ａ、化合物Ｂ、または化合物Ａおよび化合物Ｂの両方の分散液または懸濁液が挙げられ得る。同様に、非経口的使用のための処方物としては、適切な油性注射懸濁液として調製される化合物Ｄ、化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの両方の分散液または懸濁液が挙げられ得る。適当な親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油、例えばゴマ油、および合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド、またはリポソームが挙げられる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、デキストラン、およびその混合物など、懸濁液の粘度を増加させる物質を含有することができる。任意選択により、懸濁液は、適当な安定剤、または化合物の可溶性を増加させることで高濃縮溶液の調製を可能にする薬剤も含有することができる。ｐＨ感受性可溶化および／または活性薬剤の徐放性を提供する水性ポリマー、例えば、Ｒｏｈｍ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）から利用可能なＥＵＤＲＡＧＩＴ（商標）シリーズなどのメタクリルポリマーは、コーティングまたはマトリックス構造としても使用することができる。任意選択により乳化剤または分散剤（表面活性材料；界面活性剤）によって安定化されたエマルジョン、例えば水中油型および油中水型分散液も使用することができる。懸濁液は、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレン（polyoxyethlyene）ソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、トラガカントガム、ならびにその混合物などの懸濁剤を含有することができる。
【０１３５】
化合物Ａ、化合物Ｂ、または化合物Ａおよび化合物Ｂの両方を含有するリポソームも、非経口投与のために用いることができる。化合物Ｄ、化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの両方を含有するリポソームも、非経口投与のために用いることができる。リポソームは、一般に、リン脂質または他の脂質物質から誘導される。リポソーム形態における組成物は、安定剤、保存料および賦形剤などの他の成分も含有することができる。好ましい脂質には、天然および合成の両方のリン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）が含まれる。リポソームを形成する方法は、当技術分野において公知である。例えば、Prescott(編)、Methods  in  Cell  Biology、ＸＩＶ巻、３３頁、Academic  Press、New  York（１９７６年）を参照されたい。
【０１３６】
一部の実施形態において、化合物Ａ、化合物Ｂ、または化合物Ａおよび化合物Ｂの両方、またはその組成物は、当技術分野において周知である薬学的に許容される担体を使用して、経口投与のために処方することができる。他の実施形態において、化合物Ｄ、化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂの両方、またはその組成物は、当技術分野において周知である薬学的に許容される担体を使用して、経口投与のために処方することができる。経口投与のために処方される調製物は、錠剤、丸剤、カプセル、カシェ、糖衣錠、ロゼンジ、液体、ゲル、シロップ、スラリー、エリキシル、懸濁液、または粉末の形態であってよい。例示するため、経口使用のための医薬調製物は、活性化合物と固体賦形剤とを組み合わせること、任意選択により、結果として得られる混合物を粉砕すること、および所望であれば適当な助剤を添加した後、錠剤または糖衣錠コアを得るために顆粒の混合物を処理することによって得ることができる。経口処方は、非経口的使用について記載されているのと同様の型における液体担体、例えば、緩衝液で処理した水溶液および懸濁液などを用いることができる。
【０１３７】
一部の実施形態において、経口処方としては、錠剤、糖衣錠およびゼラチンカプセルが挙げられる。これらの調製物は、例えば以下が挙げられる１つまたは複数の賦形剤を含有することができる：
（ｉ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含めて、微結晶性セルロースおよび糖類、
（ｉｉ）バインダー、例えばデンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、コーン、小麦、コメ、ジャガイモなど由来のデンプン、
（ｉｉｉ）セルロース材料、例えばメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、ガム、例えばアラビアガムおよびトラガカントガム、ならびにタンパク質、例えばゼラチンおよびコラーゲン、
（ｉｖ）崩壊剤または可溶化剤、例えば架橋ポリビニルピロリドン、デンプン、寒天、アルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウム、または発泡性組成物、
（ｖ）滑沢剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸またはそれのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、およびポリエチレングリコール、
（ｖｉ）風味料および甘味料、
（ｖｉｉ）例えば生成物を同定するため、または活性化合物の定量（投与量）を特徴付けるための着色料または顔料、ならびに
（ｖｉｉｉ）他の成分、例えば保存料、安定剤、腫脹剤、乳化剤、溶液促進剤、浸透圧を調節するための塩、および緩衝剤。
【０１３８】
ゼラチンカプセルとしては、ゼラチンで作製された押込みばめカプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどのコーティングで作製された軟質の密封カプセルが挙げられ得る。押込みばめカプセルは、充填剤、バインダー、滑沢剤、および／または安定剤などと混合された活性成分（単数または複数）を含有することができる。軟カプセルにおいて、活性化合物は、安定剤を用いるまたは用いない、脂肪油、流動パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールなどの適当な流体中に溶解または懸濁させることができる。
【０１３９】
糖衣錠コアには、濃縮糖溶液などの適当なコーティングを設けることができ、これには、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適当な有機溶媒または溶媒混合物を含有することもできる。
【０１４０】
本明細書において提供されるのは、また、化合物Ａおよび化合物Ｂ、もしくは化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の単位剤形である。本明細書で使用される場合、「単位剤形」は、単位投与量として適当な物理的に別個の単位を指し、各単位は、活性成分の所定の定量、または薬学的に許容される担体の状態であり得る化合物を含有する。当業者は、単位剤形が投与のモードに依存して変動することがあることを認識する。一実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の単位剤形は、錠剤である。
【０１４１】
ヒト被験体のための、化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の例示的単位投与量レベルは、約０．０１ｍｇから約１０００ｍｇの間、または約５０ｍｇから約２００ｍｇの間、または約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、または約１５０ｍｇ、または約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、または約２５０ｍｇであってよい。
【０１４２】
ヒト被験体のための、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の例示的単位投与量レベルは、約０．０１ｍｇから約１６００ｍｇの間、または約５０ｍｇから約２００ｍｇの間、または約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、または約１５０ｍｇ、または約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約６００ｍｇ、約９００ｍｇ、または約１２００ｍｇであってよい。
【０１４３】
化合物Ａ、化合物Ｂ、または化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩は、１つまたは複数の単位剤形として投与することができる。例えば、一実施形態において、化合物Ａまたは化合物Ｄの１００ｍｇの用量は、１つの１００ｍｇ錠剤中で被験体（例えば、ヒト被験体）に経口的に投与することができる。一実施形態において、化合物Ｂの２００ｍｇの用量は、１つの２００ｍｇ錠剤中で被験体（例えば、ヒト被験体）に経口的に投与することができる。別の実施形態において、化合物Ｂの６００ｍｇの用量は、３つの２００ｍｇ錠剤中で被験体（例えば、ヒト被験体）に経口的に投与することができる。
製造品およびキット
【０１４４】
化合物Ａもしくは化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩を含む組成物（例えば、処方物および単位投与量を含む）および化合物Ｂを含む組成物は、適切な容器中に調製および配置され、表示されている状態の処置についてラベルを付けることができる。よって、提供されるのは、また、化合物Ａまたは化合物Ｄの単位剤形および化合物Ｂの単位剤形、ならびに化合物の使用のための指示を含有するラベルを含む容器などの製造品である。一部の実施形態において、製造品は、（ｉ）化合物Ａまたは化合物Ｄおよび１つまたは複数の薬学的に許容される担体、アジュバントまたは賦形剤の単位剤形、および（ｉｉ）化合物Ｂおよび１つまたは複数の薬学的に許容される担体、アジュバントまたは賦形剤の単位剤形を含む容器である。一実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂの両方のための単位剤形は、錠剤である。別の実施形態において、化合物Ｄおよび化合物Ｂの両方のための単位剤形は、錠剤である。
【０１４５】
キットも企図される。例えば、キットは、化合物Ａおよび化合物Ｂ、または化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の単位剤形、および病状の処置における組成物の使用のための指示を含有する添付文書を含むことができる。一部の実施形態において、キットは、（ｉ）化合物Ａまたは化合物Ｄ、および１つまたは複数の薬学的に許容される担体、アジュバントまたは賦形剤の単位剤形、ならびに（ｉｉ）化合物Ｂおよび１つまたは複数の薬学的に許容される担体、アジュバントまたは賦形剤の単位剤形を含む。一実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂの両方のための単位剤形は、錠剤である。別の実施形態において、化合物Ｄおよび化合物Ｂの両方のための単位剤形は、錠剤である。キットにおける使用のための指示は、例えば血液悪性腫瘍を含む癌を処置するためであってよい。一部の実施形態において、キットにおける使用のための指示は、再発したおよび難治性の白血病またはリンパ腫を含む白血病またはリンパ腫などの癌を処置するためであってよい。特定の実施形態において、キットにおける使用のための指示は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性ＮＨＬ（ｉＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｂ細胞リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を処置するためであってよい。一実施形態において、キットにおける使用のための指示は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を処置するためであってよい。特定の実施形態において、ラベル上に表示されている状態としては、例えば癌の処置が挙げられ得る。
実施形態の列挙
【０１４６】
以下の列挙されている実施形態は、本発明の一部の態様の代表である。
１．癌を有するまたは有する疑いのあるヒトを処置する方法であって、化合物Ａ
【化８】
2015529195.tif 000010
またはその薬学的に許容される塩の有効量、および化合物Ｂ
【化９】
2015529195.tif 000011
またはその薬学的に許容される塩の有効量をヒトに投与することを含む方法。
２．化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩が主として（Ｓ）−エナンチオマーである、実施形態１の方法。
３．化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩が、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物中に存在し、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物中に存在する、
実施形態１または２の方法。
４．化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩の前に投与される、実施形態１から３のいずれか１つの方法。
５．化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が同時に投与される、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
６．化合物Ａおよび化合物Ｂの各々またはその薬学的に許容される塩が、独立して１日２回投与される、実施形態１から５のいずれか１つの方法。
７．化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩が、５０ｍｇから２００ｍｇの用量で投与され、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が、１００ｍｇから１２００ｍｇの用量で投与される、
実施形態１から６のいずれか１つの方法。
８．化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩の用量が、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩１００ｍｇまたは１５０ｍｇを含む単位投与量として投与され、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の用量が、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩２５ｍｇ、１００ｍｇまたは２００ｍｇを各々独立して含む１つまたは複数の単位投与量として投与される、
実施形態７の方法。
９．単位剤形が錠剤である、実施形態８の方法。
１０．化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩が、摂食状態下で投与される、実施形態１から９のいずれか１つの方法。
１１．癌を有するヒトが、（ｉ）少なくとも１つの化学療法処置に対して難治性であるか、もしくは（ｉｉ）化学療法を用いる処置の後に再発しているか、またはその組合せである、実施形態１から１０のいずれか１つの方法。
１２．ヒトが、癌について以前に処置を受けたことがない、実施形態１から１０のいずれか１つの方法。
１３．癌が白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である、実施形態１から１２のいずれか１つの方法。
１４．癌がバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である、実施形態１から１２のいずれか１つの方法。
１５．ヒトの癌細胞の細胞生存性を減少させる方法であって、癌細胞における細胞生存性を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａ
【化１０】
2015529195.tif 000012
またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂ
【化１１】
2015529195.tif 000013
またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法。
１６．化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の癌細胞における細胞生存性が、化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後の癌細胞における細胞生存性と比較して、少なくとも１０％減少する、実施形態１５の方法。
１７．癌細胞における細胞生存性がＭＴＳアッセイによって決定される、実施形態１５または１６の方法。
１８．ヒトの癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａ
【化１２】
2015529195.tif 000014
またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂ
【化１３】
2015529195.tif 000015
またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法。
１９．化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の癌細胞におけるＳ６リン酸化が、化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後の癌細胞におけるＳ６リン酸化と比較して、少なくとも１０％減少する、実施形態１８の方法。
２０．癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化がフローサイトメトリーによって決定される、実施形態１８または１９の方法。
２１．癌細胞が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞である、実施形態１５から２０のいずれか１つの方法。
２２．ヒトの癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａ
【化１４】
2015529195.tif 000016
またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂ
【化１５】
2015529195.tif 000017
またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法。
２３．化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の癌細胞におけるＥＲＫリン酸化が、化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の癌細胞におけるＥＲＫリン酸化と比較して、少なくとも１０％減少する、実施形態２２の方法。
２４．癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化が免疫ブロッティングによって決定される、実施形態２２または２３の方法。
２５．癌細胞がバーキットリンパ腫細胞である、実施形態２２から２４のいずれか１つの方法。
２６．ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ２２、またはその任意の組合せを発現する細胞を含む試料におけるケモカイン産生を減少させる方法であって、試料におけるケモカイン産生を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ａ
【化１６】
2015529195.tif 000018
またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂ
【化１７】
2015529195.tif 000019
またはその薬学的に許容される塩と試料とを接触させることを含む方法。
２７．以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の１つまたは複数が当てはまる、実施形態２６の方法：
（ｉ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ２産生は、化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の細胞におけるＣＬＬ２産生と比較して、少なくとも５％減少する、
（ｉｉ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ３産生は、化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の細胞におけるＣＬＬ３産生と比較して、少なくとも５％減少する、
（ｉｉｉ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ４産生は、化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の細胞におけるＣＬＬ４産生と比較して、少なくとも５％減少する、
（ｉｖ）化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ２２産生は、化合物Ａもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後のＣＬＬ２２産生と比較して、少なくとも５％減少する。
２８．試料におけるケモカイン産生がイムノアッセイによって決定される、実施形態２６または２７の方法。
２９．以下を含むキット：
（ｉ）化合物Ａ
【化１８】
2015529195.tif 000020
またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物、ならびに
（ｉｉ）化合物Ｂ
【化１９】
2015529195.tif 000021
またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物。
３０．癌を処置する際の医薬組成物の使用のための指示を含有する添付文書をさらに含む、実施形態２９のキット。
３１．各医薬組成物が独立して錠剤である、実施形態２９または３０のキット。
３２．癌がバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である、実施形態２９から３１のいずれか１つのキット。
３３．以下を含む製造品：
（ｉ）化合物Ａ
【化２０】
2015529195.tif 000022
またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルの単位剤形、
（ｉｉ）化合物Ｂ
【化２１】
2015529195.tif 000023
またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルの単位剤形、ならびに
（ｉｉｉ）癌を処置する際の、化合物Ａおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の使用のための指示を含有するラベル。
３４．各単位剤形が錠剤である、実施形態３３の製造品。
３５．癌がバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である、実施形態３３または３４のいずれかの製造品。
３６．化合物Ａ
【化２２】
2015529195.tif 000024
またはその薬学的に許容される塩の処置を受けるヒトの癌細胞を感受性化する方法であって、化合物Ａ、またはその薬学的に許容される塩でヒトを処置する前または同時に、化合物Ｂ
【化２３】
2015529195.tif 000025
またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法。
３７．（ｉ）少なくとも１つの化学療法処置に対して実質的に難治性であるか、もしくは（ｉｉ）化学療法を用いる処置の後に再発しているか、または（ｉ）および（ｉｉ）の両方であるヒトを感受性化する方法であって、化合物Ａ
【化２４】
2015529195.tif 000026
またはその薬学的に許容される塩の有効量、および化合物Ｂ
【化２５】
2015529195.tif 000027
またはその薬学的に許容される塩の有効量をヒトに投与することを含む方法。
３８．癌を有するまたは有する疑いのあるヒトを処置する方法であって、化合物Ｄ
【化２６】
2015529195.tif 000028
またはその薬学的に許容される塩の有効量、および化合物Ｂ
【化２７】
2015529195.tif 000029
またはその薬学的に許容される塩の有効量をヒトに投与することを含む方法。
３９．化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩が主として（Ｓ）−エナンチオマーである、実施形態３８に記載の方法。
４０．化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩が、化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物中に存在し、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物中に存在する、
実施形態３８または３９に記載の方法。
４１．化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が、化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の前に投与される、実施形態３８から４０のいずれか１つの方法。
４２．化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が同時に投与される、実施形態３８から４０のいずれか１つの方法。
４３．化合物Ｄおよび化合物Ｂの各々またはその薬学的に許容される塩が、独立して１日２回投与される、実施形態３８から４２のいずれか１つの方法。
４４．化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩が、５０ｍｇから２００ｍｇの用量で投与され、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩が、１００ｍｇから１２００ｍｇの用量で投与される、
実施形態３８から４３のいずれか１つの方法。
４５．化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩の用量が、化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩１００ｍｇまたは１５０ｍｇを含む単位投与量として投与され、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩の用量が、化合物Ｂまたはその薬学的に許容される塩２５ｍｇ、１００ｍｇまたは２００ｍｇを各々独立して含む１つまたは複数の単位投与量として投与される、
実施形態４４の方法。
４６．単位投与量が錠剤である、実施形態４５の方法。
４７．化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩が、摂食状態下で投与される、実施形態３８から４６のいずれか１つの方法。
４８．癌を有するヒトが、（ｉ）少なくとも１つの化学療法処置に対して難治性であるか、もしくは（ｉｉ）化学療法を用いる処置の後に再発しているか、またはその組合せである、実施形態３８から４７のいずれか１つの方法。
４９．ヒトが、癌について以前に処置を受けたことがない、実施形態３８から４８のいずれか１つの方法。
５０．癌が白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である、実施形態３８から４９のいずれか１つの方法。
５１．癌がバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である、実施形態３８から５０のいずれか１つの方法。
５２．ヒトの癌細胞の細胞生存性を減少させる方法であって、癌細胞における細胞生存性を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ｄ
【化２８】
2015529195.tif 000030
またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂ
【化２９】
2015529195.tif 000031
またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法。
５３．化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の癌細胞における細胞生存性が、化合物Ｄもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後の癌細胞における細胞生存性と比較して、少なくとも１０％減少する、実施形態５２の方法。
５４．癌細胞における細胞生存性がＭＴＳアッセイによって決定される、実施形態５２または５３の方法。
５５．ヒトの癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ｄ
【化３０】
2015529195.tif 000032
またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂ
【化３１】
2015529195.tif 000033
またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法。
５６．化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の癌細胞におけるＳ６リン酸化が、化合物Ｄもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩を投与する接触後の癌細胞におけるＳ６リン酸化と比較して、少なくとも１０％減少する、実施形態５５の方法。
５７．癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、Ｓ６リン酸化、またはＡＫＴおよびＳ６のリン酸化がフローサイトメトリーによって決定される、実施形態５５または５６の方法。
５８．癌細胞が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞である、実施形態５５から５７のいずれか１つの方法。
５９．ヒトの癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を減少させる方法であって、癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ｄ
【化３２】
2015529195.tif 000034
またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂ
【化３３】
2015529195.tif 000035
またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与することを含む方法。
６０．化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の癌細胞におけるＥＲＫリン酸化が、化合物Ｄもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけを投与した後の癌細胞におけるＥＲＫリン酸化と比較して、少なくとも１０％減少する、実施形態５９の方法。
６１．癌細胞におけるＡＫＴリン酸化、ＥＲＫリン酸化、またはＡＫＴおよびＥＲＫリン酸化が免疫ブロッティングによって決定される、実施形態５９または６０の方法。
６２．癌細胞がバーキットリンパ腫細胞である、実施形態５９から６１のいずれか１つの方法。
６３．ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ２２、またはその任意の組合せを発現する細胞を含む試料におけるケモカイン産生を減少させる方法であって、試料におけるケモカイン産生を検出可能に減少させるのに充分な量の化合物Ｄ
【化３４】
2015529195.tif 000036
またはその薬学的に許容される塩、および化合物Ｂ
【化３５】
2015529195.tif 000037
またはその薬学的に許容される塩と試料とを接触させることを含む方法。
６４．以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の１つまたは複数が当てはまる、実施形態６３の方法：
（ｉ）化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ２産生は、化合物Ｄもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の細胞におけるＣＬＬ２産生と比較して、少なくとも５％減少する、
（ｉｉ）化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ３産生は、化合物Ｄもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の細胞におけるＣＬＬ３産生と比較して、少なくとも５％減少する、
（ｉｉｉ）化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ４産生は、化合物Ｄもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後の細胞におけるＣＬＬ４産生と比較して、少なくとも５％減少する、
（ｉｖ）化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩との接触後の細胞におけるＣＬＬ２２産生は、化合物Ｄもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後、または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容される塩だけとの接触後のＣＬＬ２２産生と比較して、少なくとも５％減少する。
６５．試料におけるケモカイン産生がイムノアッセイによって決定される、実施形態６３または６４の方法。
６６．インビトロ、インビボまたはエクスビボで行われる、実施形態６３から６５のいずれか１つの方法。
６７．以下を含むキット：
（ｉ）化合物Ｄ
【化３６】
2015529195.tif 000038
またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物、ならびに
（ｉｉ）化合物Ｂ
【化３７】
2015529195.tif 000039
またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを含む医薬組成物。
６８．癌を処置する際の医薬組成物の使用のための指示を含有する添付文書をさらに含む、実施形態６７のキット。
６９．各医薬組成物が独立して錠剤である、実施形態６７または６８のキット。
７０．癌がバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である、実施形態６７から６９のいずれか１つのキット。
７１．以下を含む製造品：
（ｉ）化合物Ｄ
【化３８】
2015529195.tif 000040
またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルの単位剤形、
（ｉｉ）化合物Ｂ
【化３９】
2015529195.tif 000041
またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルの単位剤形、ならびに
（ｉｉｉ）癌を処置する際の、化合物Ｄおよび化合物Ｂ、またはその薬学的に許容される塩の使用のための指示を含有するラベル。
７２．各単位剤形が錠剤である、実施形態７１の製造品。
７３．癌がバーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、難治性ｉＮＨＬ、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）または辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である、実施形態７１または７２のいずれかの製造品。
７４．化合物Ｄ
【化４０】
2015529195.tif 000042
またはその薬学的に許容される塩の処置を受ける癌細胞を感受性化する方法であって、
化合物Ｄまたはその薬学的に許容される塩で癌細胞を処置する前または同時に、化合物Ｂ
【化４１】
2015529195.tif 000043
またはその薬学的に許容される塩と癌細胞とを接触させることを含む方法。
７５．（ｉ）少なくとも１つの化学療法処置に対して実質的に難治性であるか、または（ｉｉ）化学療法を用いる処置の後に再発しているか、または（ｉ）および（ｉｉ）の両方であるヒトを感受性化する方法であって、化合物Ｄ
【化４２】
2015529195.tif 000044
またはその薬学的に許容される塩の有効量、および化合物Ｂ
【化４３】
2015529195.tif 000045
またはその薬学的に許容される塩の有効量をヒトに投与することを含む方法。
【実施例】
【０１４７】
以下の実施例は、本出願に開示されている実施形態を理解するのにさらに役立つために提供され、実施例に関する当業者に周知である従来の方法の理解を前提とする。下文に記載されている特定の材料および条件は、本明細書において開示されている実施形態の特定の態様を実証すると意図され、この妥当な範囲を限定すると解釈されるべきでない。
（実施例１）
ＣＬＬ細胞上の化合物Ａおよび化合物Ｂの組合せ
【０１４８】
生存し、増殖し、標準的治療に抵抗する悪性細胞の能力における微小環境シグナルの重要性を前提とし、ストロマ−馴化培地の存在下におけるＣＬＬ細胞上での使用のためのＰＩ３Ｋδ阻害剤およびＳｙｋ阻害剤を組み合わせる効果を調べた。この実施例において、テトラゾリウム系ＭＴＳアッセイ、ＥＬＩＳＡ、およびフローサイトメトリーをそれぞれ使用して、ＣＬＬ患者試料を成長阻害、ケモカイン放出、および経路活性化状態について判定した。フィコール−パック勾配を使用して、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を初代患者試料から単離した。それらのＩＣ５０（０．６ｎＭから１０ｕＭ）に及ぶことが知られている濃度において単独で、または９６ウェルプレート中において各化合物の等モル濃度（０．６ｎＭから１０ｕＭ）を使用する組合せのいずれかで、化合物Ａ（ＰＩ３Ｋδ阻害剤）および化合物Ｂ（Ｓｙｋ阻害剤）を平板培養した。５×１０５個の初代細胞をＨＳ−５ストロマ細胞馴化培地中において三連で培養し、成長阻害を７２時間後に決定した。
【０１４９】
化合物Ａと化合物Ｂとの間の潜在的な相加的、相乗的または拮抗的な相互作用を探索するため、Ｒを使用して用量応答および相互作用指数を算出した（Leeら、２００７年）。免疫ブロッティングおよびフローサイトメトリーを使用することで、Ｒａｍｏｓ細胞のバーキットリンパ腫細胞系におけるおよび初代ＣＬＬ細胞におけるＡＫＴ、ＥＲＫおよびＳ６を含む、ＢＣＲ活性化と関連することが知られている下流標的に対する、単独または組合せのいずれかでの各化合物の阻害効果を測定した。
【０１５０】
単一薬剤の化合物Ｂで処理された１４個の初代ＣＬＬ試料のうち、全ての試料について中央細胞生存性ＩＣ５０は３．７μＭであり、≦２μＭのＩＣ５０は、７個の試料で得られた（５０％）。７個の試料において化合物Ａおよび化合物Ｂを使用する組合せ研究から、相互作用指数を算出した。化合物Ａおよび化合物Ｂの組合せの少なくとも１つの有意に相乗的な濃度を、７個の試料のうち５つにおいて見出された。２個の残っているＣＬＬ試料は、組合せを用いて処置された場合に相加応答を示した。馴化培地の存在下で培養された患者試料は、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３およびＣＣＬ４のレベルの増加をもたらした。ＣＬＬ細胞によるこれらのケモカインの産生は、単独および組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂの両方によって低減された。さらに、個々の阻害剤を用いる処置がＳ６およびＥＲＫのリン酸化を減少させ、ＰＩ３Ｋδ阻害およびＳｙｋ阻害の組合せによって効果がさらに増強された。
【０１５１】
したがって、この実施例からの結果は、ＰＩ３Ｋδ阻害およびＳｙｋ阻害の両方がＣＬＬ生存を低減することを表している。二重の標的化は、また、相乗的な成長阻害を誘発することができ、さらにケモカインシグナル伝達を妨害することもできる。ＢＣＲシグナル伝達経路の複雑性を前提として、複数のキナーゼの同時標的化は、臨床活性を有意に増加させる潜在性を有する。ＢＣＲ媒介キナーゼの阻害が、良好な患者耐容性を実証したので、ＰＩ３ＫδおよびＳｙｋの両方を標的にする組合せ治療は、殊に単一薬剤に対して最適に応答しない恐れがあるプアリスク疾患を有する患者において、新規な処置手法を提供することができる。
（実施例２）
ヒトにおいて単独または組合せで投与される場合の、化合物Ａおよび化合物Ｂの安全性、薬物動態および薬力学の評価
【０１５２】
この実施例において、単独でまたは化合物Ａと一緒に与えられた化合物Ｂの安全性、薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）を、健康なヒト被験体において評価した。
処置の計画およびレジメン
【０１５３】
化合物Ｂおよび化合物Ａを各々、毎日２回（ＢＩＤ）、４日間食料とともに（４日目：ＡＭ用量だけ）、単独または一緒のいずれかで与えた。健常者の３つの群は、化合物Ｂを２００ｍｇおよび化合物Ａを１００ｍｇ、化合物Ｂを６００ｍｇおよび化合物Ａを１００ｍｇ、または化合物Ｂを６００ｍｇおよび化合物Ａを１５０ｍｇのいずれかを受けた。両化合物を毎日２回（ＢＩＤ）経口的に投与した。
【０１５４】
化合物Ｂを、２５ｍｇ、１００ｍｇおよび２００ｍｇの強度の錠剤として提供した。化合物Ａを、経口投与が意図された錠剤中で提供した。各錠剤は、活性化合物Ａを１００ｍｇまたは１５０ｍｇ含有していた。
【０１５５】
各コホートのため、各コホートについての処置スケジュールは以下の通りであった：１〜４日目：化合物ＢをＢＩＤで用いて摂食状態下で処置；５〜１４日目：観察；１５〜１８日目：化合物ＡをＢＩＤで用いて摂食状態下で処置；１９〜２８日目：観察；２９〜３２日目：化合物Ａおよび化合物ＢをＢＩＤで用いて摂食状態下で処置；および３３〜４２日目：観察。
【０１５６】
コホートによる用量漸増およびコホート内の投薬継続を、安全性および耐容性に基づいて管理した。各コホートにおいて、全ての８人の被験体は、化合物Ｂおよび化合物Ａを最初に単独でおよび次いで組合せで受けた。用量を摂食状態下で与えた。
【０１５７】
経口研究薬物の全ての用量を、毎日２回およそ同時に投与した。標準化した食事は３０分以下の内に消費された。標準化した食事を消費した後、処置が５分以内に行われた。食料は、投薬後およそ４時間の間消費されず、標準化した昼食（約５００カロリーおよび約１３ｇの脂肪）を、試料回収後に提供した。
薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）および安全性
【０１５８】
ＰＫおよびＰＤを、好塩基球上でのエクスビボαＩｇＥ刺激ＣＤ６３発現の機能阻害について判定した。研究の全体にわたって、安全性を判定した。
薬物動態
【０１５９】
１日目に、投薬前、投薬後２時間、４時間、８時間および１２時間でＰＫ試料を回収した。４日目に、以下の時点で研究薬物（単数または複数）のＡＭ用量に対して、試料を回収した：投薬前、投薬後１時間、２時間、２．５時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間および４８時間。投薬前の３日目に、トラフＰＫ試料を回収した。
【０１６０】
化合物Ｂおよび化合物Ａについて、以下の血漿ＰＫパラメータを算出した：Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、Ｃｌａｓｔ、Ｔｌａｓｔ、ＡＵＣ０−ｌａｓｔ、ＡＵＣｔａｕ、λｚ、Ｔ１／２、ＣＬ／Ｆ、およびＶｚ／Ｆ。加えて、化合物Ｂおよび化合物Ａの代謝物も評価した。
【０１６１】
この研究の主要ＰＫエンドポイントは、単独でおよび組合せで投与された化合物Ｂおよび化合物Ａの単回用量および定常状態の血漿ＰＫパラメータの特徴付けであった。
薬力学
【０１６２】
１日目に、投薬前、投薬後２時間、４時間、８時間および１２時間でＰＤ試料を回収した。４日目に、投薬前、投薬後２時間、４時間、８時間、１２時間、２４時間および４８時間でＰＤ試料を回収した。投薬前３日目に、ＰＤ試料を回収した（同時に、ＰＫ試料を回収した）。
【０１６３】
以下の血液ＰＤパラメータを測定した：細胞数（#  cells）、ＣＤ１２３＋／ＨＬＡ−細胞（好塩基球）の数、ＣＤ６３＋好塩基球の数（#  CD63+  basophils）、ホスホＳＹＫ（Ｙ５２５）、およびホスホＡＫＴ。算出したパラメータは、陽性対照と対比した％ＣＤ６３＋好塩基球、％ホスホＳＹＫ（Ｙ５２５）、およびホスホＡＫＴである。加えて、活性化ＢＴＫおよび活性化ＴＯＲＣ１／２などの下流マーカーも評価した。
【０１６４】
ＰＫ活性およびＰＤ活性における化合物Ｂと化合物Ａとの間の関係も探索した。化合物Ｂおよび化合物Ａ曝露（Ｃｔａｕ、Ｃｍａｘ、およびＡＵＣを含めて、ＰＫパラメータ概算によって判定された通り）と、ＰＤ活性（ＣＤ６３、ｐＳＹＫおよびｐＡＫＴによって判定された通り）との相関関係も評価した。
安全性
【０１６５】
単独でおよび組合せで投与された場合の化合物Ｂおよび化合物Ａの安全性および耐容性を判定した。評価されたエンドポイントとしては、ＡＥ、理学的検査および臨床実験室試験の所見、１２誘導ＥＣＧの異常および間隔測定、ならびにバイタルサイン測定が挙げられる。
【０１６６】
各コホートについての安全性データを、各４日処置期間に続いて、１０日観察期間後に審査した。投薬後安全性判定に続いて、各コホートにおける後続の処置だけを開始した。
結果
【０１６７】
一般に、有害事象（ＡＥ）は、軽度から中程度であり：一部の個体が頭痛および傾眠を報告し、１人の個体は、化合物Ａの１５０ｍｇ投薬中にグレード１のＡＬＴ／ＡＳＴ上昇により処置を中断した。表３に示されている通り、化合物Ｂの曝露は、化合物Ａ（ＡＵＣｔａｕについては５１％から６４％；Ｃｔａｕについては７４％から９６％）の曝露があるほうが高く、化合物Ａの曝露は軽微な変動を有していた。化合物Ｂ（６００ｍｇ）プラス化合物Ａ（≧１００ｍｇ）の投薬は、投薬間隔にわたってＣＤ６３発現の完全に近い阻害を提供した。結果は、実施例１および２における予想外の相乗的結果と一致している。
【表１】
2015529195.tif 000046
【０１６８】
この実施例における結果に基づき、化合物Ｂおよび化合物Ａは、一般に、評価された用量範囲にわたって良好な耐容性を示した。組合せでの化合物Ｂおよび化合物Ａの投与は、投薬間隔にわたって実質的ＰＤ応答を提供した。
（実施例３）
ヒト全血液好塩基球における抗ＩｇＥ刺激ＣＤ６３発現の阻害
【０１６９】
この実施例で、３人の正常ドナーからのヒト全血液好塩基球における抗ＩｇＥ（αＩｇＥ）刺激ＣＤ６３発現の阻害についてインビトロ活性を評価した。
【０１７０】
化合物ＡおよびＢを、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の１０ｍＭのストックとして調製した。この実施例において、化合物を０．７５ｍＬのポリプロピレンチューブ中にて−２０℃で凍結された１０ｍＭのＤＭＳＯストックから解凍するか、または室温でガラス貯蔵バイアルに貯蔵された１０ｍＭのＤＭＳＯストックから分取する（aliquote）かのいずれかにした。
【０１７１】
ヒト全血液好塩基球におけるＣＤ６３アッセイ：ヒト全血液をヘパリン化バキュテナー内に回収し、回収の６時間以内に使用した。化合物Ｂおよび化合物Ａを希釈し、下に記載されている通り血液中に添加し、１００μＬを９６ディープウェルＶ底プレート中にて１時間の間３７℃でインキュベートした。インキュベーションに続いて、Ｂａｓｏｔｅｓｔキットからの強力緩衝剤Ｂ  ２０μＬを各ウェルに添加し、さらに１０分３７℃でインキュベートした。引き続いて、１０μｇ／ｍＬの最終濃度まで１００μＬのαＩｇＥを添加することによってＦｃεＲを架橋し、２０分３７℃でインキュベートした。プレートを氷上に５分間配置することによって、脱顆粒化を止めた。ＣＤ１２３−ＰＥ／ＣＤ６３−ＦＩＴＣ／ＨＬＡ−ＤＲ−Ｐｅｒｃｅｐを含有する染色カクテル２０μＬで細胞を染色し、２０分氷上でインキュベートした。Ｂａｓｏｔｅｓｔキットからの赤血球溶解緩衝剤Ｇ  ２ｍＬを各ウェルに添加し、室温で１０分間インキュベートした。プレートを３６５×ｇにて１０分間２０℃で遠心分離し、上清をデカントした。細胞ペレットを洗浄溶液（Ｂａｓｏｔｅｓｔキットからの緩衝剤Ａ）２ｍＬで洗浄し、３６５×ｇにて１０分間２０℃で遠心分離した。細胞をＢａｓｏｔｅｓｔキットからの緩衝剤Ａ中に再懸濁し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣａｎｔｏまたはＣａｌｉｂｕｒ機器上で多色フローサイトメトリーによって読み取られるまで２５０μＬの９６ウェルＵ底プレート中の氷上に保持した。
【０１７２】
薬物組合せアッセイ：９６ウェルプレートフォーマットにおいて２化合物組合せを試験するため、化合物Ａの１００％ＤＭＳＯ中の２倍系列希釈物（１μＭまたは５μＭで出発する７つの濃度）を、化合物Ｂの１００％ＤＭＳＯ中の２倍系列希釈物（３μＭまたは１０μＭで出発する９つの濃度）と組み合わせた。加えて、化合物Ａ単独での系列希釈物、化合物Ｂ単独での系列希釈物、αＩｇＥを有するＤＭＳＯ（１００％脱顆粒化対照）、およびＤＭＳＯだけ（０％脱顆粒化対照）を試験した。希釈物２μＬを全血液に添加し、上に記載されている通りに処理した。
【０１７３】
データ分析：ＰｒｉｃｈａｒｄおよびＳｈｉｐｍａｎによって開発されたＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩプログラム（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｈｉｇａｎ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）を使用して、ＣＤ６３アッセイからのデータの分析によって組合せ効果を決定した。Prichard  MN、Shipman  C、Jr.、Antiviral  Res、１９９０年；１４巻（４〜５号）：１８１〜２０５頁を参照されたい。ソフトウェアで、化合物間の相加的相互作用を想定する理論阻害を算出し（Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅモデルに基づく）、理論と観察された阻害値との間の統計的に有意な差異を定量化する。３次元においてこれらの差異をプロットすることで、Ｚ平面における上昇が相乗作用を表すとともに下降が化合物間の拮抗作用を表す表面をもたらす。表面偏差の算出体積は、μＭ２．％で表されている。該プログラムは、試験された対組合せについて相乗作用、相加性、または拮抗作用の程度の判定を可能にし、阻害データから算出された組合せｌｏｇ体積（μＭ２．％）の具体的数値に従って組合せ効果を定義する。分析された相互作用の性質および程度を決定するため、ボンフェローニ（Bonferonni）調整を用いる組合せ体積値を、それらの９５％信頼レベルで算出した。組合せ効果のいくつかのカテゴリーがあった：高度に拮抗的、わずかに拮抗的、相加的、わずかに相乗的、および高度に相乗的。各カテゴリーの基準を表２に要約した。
【表２】
2015529195.tif 000047
【０１７４】
この実施例において、化合物Ｂを化合物Ａとの対組合せにおいて試験した。変動する用量での化合物組合せを、３人の個体ドナーからの全血液において三連で行われた３つの独立した実験で判定した。ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩプログラムを使用して、データを処理し、阻害組合せ効果を決定した。３個のドナー試料における化合物Ｂの組合せ体積値は、ヒト全血液におけるＣＤ６３阻害の発現について１１０μＭ２．％、４９９μＭ２．％および１８３μＭ２．％であり、平均ｌｏｇ体積は２６４±２６７．２μＭ２．％であった。全ての三連の試料において、組合せｌｏｇ体積値の値は１００超であった。これは、化合物Ａと組み合わされる場合に化合物Ｂが高度に相乗的な阻害効果を呈したことを示唆している。さらに、化合物Ｂおよび化合物Ａの組合せは、試験されたいずれの試料においても拮抗作用の徴候を示さなかった。
【表３】
2015529195.tif 000048
【０１７５】
組合せ化合物処置からの阻害曲線を、各個体ドナーについて生成した。単一ドナーからの代表的組合せ曲線データセットを図１に描写する。
結論
【０１７６】
この実施例は、組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂの投与が、ヒト好塩基球におけるＣＤ６３発現の高度に相乗的なインビトロ阻害を呈したことを実証している。特に、組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂの投与は、３人の個体からのボンフェローニ調整ｌｏｇ体積（２６４．０±２６７．２μＭ２．％）を使用する統計分析に基づくαＩｇＥ刺激に続いて、ＣＤ６３発現を阻害する相乗効果を呈した。さらに、化合物Ｂと化合物Ａとの間の拮抗作用は検出されなかった。
（実施例４）
化合物Ａとの組合せで投与された化合物Ｂによる、Ｂ細胞リンパ腫細胞系のＤＨＬ−４におけるホスホＭｅｋおよびホスホＥｒｋの阻害
【０１７７】
この実施例において、化合物Ｂのインビトロ活性を、化合物Ａとの組合せで、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞系のＤＨＬ−４におけるホスホＭｅｋ（ｐＭｅｋ）およびホスホＥｒｋ（ｐＥｒｋ）発現の抗ＩｇＧ（αＩｇＧ）刺激リン酸化の阻害について試験した。組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂの投与は、３つの独立した実験からのボンフェローニ調整ｌｏｇ体積（ｐＥｒｋおよびｐＭｅｋについて、それぞれ１９７．３±１２５．４μＭ２．％および１００．２±３６．１μＭ２．％）を使用する統計分析に基づいて、ＭｅｋおよびＥｒｋリン酸化の両方を阻害する高度相乗効果を呈した。
【０１７８】
化合物：上記実施例３に記載されている手順に従って、化合物試料を調製した。
【０１７９】
試薬：この実施例において使用される試薬は、市販の供給源から得た。
【０１８０】
細胞系：ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞系を、ＤＳＭＺ（Ｌｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ）から得た。１０％のＦＢＳ、１％のペニシリン−ストレプトマイシン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１％のＧｌｕｔａＭａｘを含有するＲＰＭＩ−１６４０ベースの培地中に、ＤＨＬ−４を維持した。
【０１８１】
薬物組合せアッセイ：９６ウェルプレートフォーマットにおいて特定の２薬物組合せを試験するため、化合物Ａの２倍系列希釈物（ＤＭＳＯ中）（１０ｍＭで出発する７つの濃度）を、化合物Ｂの２倍系列希釈物（ＤＭＳＯ中）（１０ｍＭで出発する９つの濃度）と組み合わせた。１０００Ｘ化合物混合物４μＬをＲＰＭＩ−１６４０中に１：１００で希釈し、１：１０でさらに希釈して最終アッセイプレートに入れた。２種の化合物の各組合せを三連で試験した（並行して設置された３つの同一プレート）。無刺激ＩｇＧまたは抗ＩｇＧを単独で含有する対照が各アッセイプレート上でＤＭＳＯ中に含まれ、０％および１００％シグナルを表した。
【０１８２】
Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅアッセイ：ｌｏｇ相において成長させたＤＨＬ−４細胞を、１％のペニシリン−ストレプトマイシンおよび１０ｍＭのＨＥＰＥＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０ベースの培地において６×１０６細胞／ｍＬにて１時間の間、３７℃および５％のＣＯ２で飢餓状態にさせた。追加の培地（ＲＰＭＩ−１６４０）を用いる９６ウェルアッセイプレート中で、１ウェル当たり２〜５×１０５細胞で、細胞を播種した。化合物を細胞に１時間の間３７℃および５％のＣＯ２で添加した。細胞を５分間αＩｇＧ（１０μｇ／ｍＬ）で刺激した。細胞を３００×ｇにて５分間室温で遠心分離し、上清を捨て、１０分間氷上における５０μＬの１Ｘ  ＲＩＰＡ緩衝剤中に細胞ペレットを溶解した。溶解産物を次いで、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ（ＭＳＤ）プレート中で直ちにアッセイするか、または使用するまで−８０℃で凍結するかのいずれかをした。ｐＥｒｋおよびｐＭｅｋのアッセイを、製造者の指示による通りに行った。プレートを直ちにＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｓｅｃｔｏｒ  ２４００  Ｉｍａｇｅｒ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）上で読み取った。
【０１８３】
データ分析：阻害剤の各試験対の組合せ効果を、上記実施例３に記載されているソフトウェアおよび手順を使用して、この実施例のアッセイからのデータセットの分析によって決定した。
【０１８４】
この実施例において、化合物Ｂを、化合物Ａとの対組合せで試験した。ＤＨＬ−４細胞において三連で行われた３つの独立した実験において、化合物組合せを判定した。ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩプログラムを使用して、データを処理し、阻害組合せ効果を決定した。全ての３つの独立した実験において、ｐＥｒｋおよびｐＭｅｋについての組合せ体積（μＭ２．％）の値は、それぞれ１９７．３±１２５．４μＭ２．％および１００．２±３６．１μＭ２．％であった（平均ボンフェローニ（Boneferoni）調整ｌｏｇ体積）。結果は、化合物Ａと組み合わせた場合に、化合物Ｂが、予想外であった高度に相乗的な阻害効果を呈すると観察されたことを示唆している。表４を参照されたい。さらに、化合物Ｂおよび化合物Ａの組合せは、試験されたいずれの試料においても拮抗作用の徴候を示さなかった。
【表４】
2015529195.tif 000049
【０１８５】
組合せ薬物処置からの阻害曲線を、ＤＨＬ−４細胞におけるｐＭｅｋおよびｐＥｒｋについて生成した。代表的組合せｐＭｅｋ曲線データセットを図２に描写する。
【０１８６】
この実施例は、組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂの投与が、ＢＣＲのαＩｇＧ刺激に続いてＤＨＬ−４細胞におけるｐＭｅｋおよびｐＥｒｋ発現の高度に相乗的なインビトロ阻害を呈することを実証している。さらに、化合物Ｂと化合物Ａとの間の拮抗的相互作用は検出されなかった。
（実施例５）
化合物Ａとの組合せで投与された化合物Ｂによる、悪性Ｂ細胞系におけるケモカイン放出の阻害
【０１８７】
この実施例において、化合物Ｂのインビトロ活性を、化合物Ａとの組合せで、３つの別個のヒトＢ細胞悪性細胞系：ＤＨＬ４（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫株）、Ｍｉｎｏ（マントル細胞リンパ腫株）およびＣＣＲＦ−ＳＢ（Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病株）からのケモカインＣＣＬ３およびＣＣＬ４の放出の阻害について試験した。相乗作用評価は、３つの独立した実験からのボンフェローニ調整ｌｏｇ体積を使用する統計分析に基づいていた。相乗作用は、試験された全ての３つの細胞系において、ＣＣＬ３よりＣＣＬ４産生についてのほうが強いと観察された。最も強い相乗作用は、ＤＨＬ−４細胞系における薬物組合せについて検出され、１６７１．７±１２２８．１μＭ２．％（ｎ＝３）のＣＣＬ４平均ボンフェローニ調整ｌｏｇ体積をもたらした。最も弱い相乗作用は、ＣＣＲＦ−ＳＢ細胞におけるＣＣＬ３産生について観察され、ここで、平均ボンフェローニ調整ｌｏｇ体積は、８８．０±６６．８μＭ２．％であった。
【０１８８】
化合物：上記実施例３に記載されている手順に従って、化合物試料を調製した。
【０１８９】
試薬：この実施例において使用された試薬は、市販の供給源から得た。
【０１９０】
細胞系：ＳＵ−ＤＨＬ−４（ＤＨＬ−４）細胞は、ＤＳＭＺ（Ｌｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ）から得て、Ｍｉｎｏ、ＣＣＲＦ−ＳＢおよびＭ２−１０Ｂ４の細胞系は、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｙｐｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から得た。全ての細胞系を、成長培地（１０％のＦＢＳ、１％のペニシリン−ストレプトマイシン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１％のＧｌｕｔａＭａｘを含有するＲＰＭＩ−１６４０ベースの培地）中で維持した。
【０１９１】
薬物組合せアッセイ：ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｓｈｅｌｔｏｎ、ＣＴ）を使用して、ＣＣＬ３およびＣＣＬ４のレベルを決定した。９６ウェルプレートフォーマット中で特定の２薬物組合せを試験するため、化合物Ａの１００％ＤＭＳＯ中の２倍系列希釈物（Ａ列からＧ列、１行から１０行中へ、垂直の上部から底部方向にピペットで取った、１０μＭで出発する７つの濃度）を、化合物Ｂの１００％ＤＭＳＯ中の２倍系列希釈物（１０行から２行、Ａ列からＨ列中へ、水平の右から左方向にピペットで取った、５μＭで出発する９つの濃度）と組み合わせた。単独での各薬物のため、Ａ列における化合物Ａの系列希釈物は、化合物Ｂを含有しておらず、Ｈ列における化合物Ｂの系列希釈物は、化合物Ａを含有していなかった。１１行はＤＭＳＯだけを含有しており（１００％ケモカイン放出対照）、１２行はスタウロスポリン１００ｍＭ（１０００Ｘ）を含有していた（０％ケモカイン放出対照）。最終調製化合物系列希釈プレートの各ウェルは、記載されている通り、薬物組合せとＤＭＳＯとの合計体積４μＬを含有していた。
【０１９２】
ケモカイン放出：成長培地１００μＬ中に１ウェル当たり１．０×１０４細胞の細胞密度にて９６ウェルアッセイプレート中で、マウスストロマ細胞系Ｍ２−１０Ｂ４を平板培養した。アッセイプレートを３７℃にて５％のＣＯ２インキュベーター内で４８時間の間インキュベートすることで、コンフルエント単層を形成した。付着したストロマ細胞を培地からピペットで穏やかに取ることによって、培地を除去した。浮遊細胞系ＤＨＬ−４、ＭｉｎｏおよびＣＣＲＦ−ＳＢを成長培地中で１回洗浄し、三連プレート中において成長培地１３５μＬ中に１ウェル当たり５×１０４細胞の細胞密度にてストロマ層の上部で平板培養した。１ウェル当たり４μＬを有する上に記載されている通りの化合物系列希釈プレートを、添加剤を用いない１９６μＬのＲＰＭＩ−１６４０中に再懸濁し（各化合物１：２００の希釈度）、この希釈物１５μＬを、Ｂおよびストロマ細胞を含有する１３５μＬに添加した。アッセイプレートを３７℃にて５％のＣＯ２インキュベーター内で１８〜２４時間の間インキュベートし、３００×ｇにて５分間室温で遠心分離し、各ウェルからの上清７５μＬを除去した。上清をＡｌｐｈａＬＩＳＡ検出システムで直ちにアッセイするか、または−８０℃にて１〜２日間、箔で覆われた９６ウェルＶ底プレート中に、使用するまで貯蔵するかのいずれかをした。
【０１９３】
ＡｌｐｈａＬｉｓａ検出：製造者の指示に従って、ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイを行った。アッセイウェルからの上清５μＬを用いて、高度感受性プロトコールを行った。ＡｌｐｈａＬＩＳＡ検出カートリッジ付のＰａｒａｄｉｇｍ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を用いて、ＣＣＬ３およびＣＣＬ４の放出を検出した。
【０１９４】
データ分析：阻害剤の各試験対の組合せ効果を、上記実施例３に記載されているソフトウェアおよび手順を使用して、この実施例のアッセイからのデータセットの分析によって決定した。
【０１９５】
この実施例において、化合物Ｂを、化合物Ａとの対組合せにおいて試験した。化合物組合せを、三連で行われた３つの独立した実験において判定した。３つの別個のＢ細胞悪性腫瘍を表す３つの細胞系において、実験を行った。ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩプログラムを使用して、データを処理し、阻害組合せ効果を決定した。組合せｌｏｇ体積（μＭ２．％）の値に基づき、化合物Ｂは、化合物Ａと組み合わせた場合に高度に相乗的な阻害効果を呈し、ＤＨＬ−４、ＣＣＲＦ−ＳＢおよびＭｉｎｏの細胞系におけるＣＣＬ４阻害について、それぞれ１６７２μＭ２．％、２３６μＭ２．％および６７１μＭ２．％の組合せｌｏｇ体積値を示しているのが観察された。下記表５を参照されたい。同様に、ＤＨＬ−４およびＭｉｎｏの細胞系において、ＣＣＬ３産生について高度に相乗的な組合せ効果があり、９７５μＭ２．％および４３８μＭ２．％の体積値であった。下記表５を参照されたい。化合物Ｂおよび化合物Ａの組合せは、ＣＣＲＦ−ＳＢ細胞系におけるＣＣＬ３のわずかに相乗的な阻害を生成した。下記表５を参照されたい。さらに、化合物Ｂおよび化合物Ａの組合せは、試験された細胞系のいずれにも拮抗作用の徴候を示さなかった。
【表５】
2015529195.tif 000050
【０１９６】
組合せ薬物処置からの阻害曲線を、試験された各細胞系について生成した。各細胞系についてのＣＣＲＦ−ＳＢにおけるＣＣＬ４産生の阻害についての代表的な化合物Ｂおよび化合物Ａの組合せ曲線データセットを、図３に描写する。
【０１９７】
この実施例は、組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂの投与が、マウスのストロマ細胞系のＭ２−１０Ｂ４で共培養されたＤＨＬ−４およびＭｉｎｏの細胞系からのＣＣＬ３およびＣＣＬ４の放出の高度に相乗的なインビトロ阻害を呈したことを実証している。加えて、高度に相乗効果をＣＣＬ４の阻害についてＣＣＲＦ−ＳＢ細胞系において観察し、ＣＣＬ３産生に対してわずかな相乗効果があった。さらに、化合物Ｂと化合物Ａとの間の拮抗的相互作用は、検出されなかった。
（実施例６）
化合物Ａおよび化合物Ｂの投与を組み合わせる効果
【０１９８】
この実施例は、ＰＩ３ＫδおよびＳｙｋを一緒に標的にする相乗効果を実証する。化合物Ａおよび化合物Ｂの両方の投与は、予想外にもＣＬＬ細胞生存性における減少をもたらした。
【０１９９】
末梢血液（ＰＢ）または骨髄（ＢＭ）を、未処置、再発したまたは難治性の疾患を有する１４ＣＬＬ患者から回収した。フィコール−パック勾配を使用して、単核細胞を単離し、化合物Ａおよび化合物ＢのＨＳ−５馴化培地プラス等モル濃度（１０μＭから０．６１ｎＭ）を含有する９６ウェル中にて三連で平板培養した。７２時間後に、生存性をＭＴＳアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６、Ｐｒｏｍｅｇａ）によって決定した。Ｒを使用して、相互作用指数を算出し、相乗作用を決定するための９５％信頼区間を作成した。
【０２００】
この研究の結果を図４Ａ〜Ｒに要約した。図４Ａおよび４Ｃ、ならびに図４Ｅ〜Ｒにおける他のグラフに示されている通り、ＣＬＬ試料における予想外の相乗効果を、表示されている化合物Ａおよび化合物Ｂの組合せのいくつかの濃度で観察した（例えば、図中のアスタリスク（＊）を用いて示されている）。図４Ｃは、単独での各化合物に抵抗性である骨髄から単離された試料において検出された予想外の相乗効果を示した。図４Ｄにおいて、化合物Ａおよび化合物Ｂの両方で処置された細胞は、いずれかの化合物単独で処置された細胞と比較して、アポトーシスの増加を呈した。これらの結果は、ＰＩ３ＫδおよびＳｙｋの両方の阻害が、ＣＬＬの生存および生存性を低減することを示唆している。
（実施例７）
ＡＫＴおよびＳ６のリン酸化の阻害
【０２０１】
この実施例は、単独または組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂが、ＡｋｔおよびＳ６のリン酸化を含めて、ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）の下流のシグナル伝達を阻害しまたは減少させたことを実証する。さらに、化合物Ａおよび化合物Ｂの組合せは、単独での各個々の化合物と比較した場合に、予想外にもＳ６リン酸化の低減または阻害をもたらした。
【０２０２】
１５人の患者から得られたフィコール精製ＣＬＬ細胞を、ＨＳ５ストロマ細胞と共培養し、次いで、単独または組合せでの各化合物で処置した。抗ＣＤ５−ＦＩＴＣ、および抗ホスホＡｋｔ  Ｓ４７３（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８）、ホスホＳ６または同位体マッチした対照抗体（マウスＩｇＧ１−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８コンジュゲート、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）のいずれかを用いて、ＣＬＬ細胞を染色し、２色フローサイトメトリーによって分析した。
【０２０３】
結果を図５に要約した。図５Ａに示されている通り、化合物Ａおよび化合物Ｂの両方で処置されたＣＬＬ細胞は、未処置細胞と比較した場合にＡＫＴリン酸化の減少を呈した。図５Ｂにおいて、化合物ＡおよびＢの両方で処置されたＣＬＬ細胞は、予想外にもＳ６リン酸化を低減し、低減は、いずれかの化合物単独による低減と比較して、より高いレベルであった。したがって、これらの結果は、両化合物の組合せが、Ｓ６リン酸化の予想外の相乗的阻害をもたらしたことを示す。
（実施例８）
ＡＫＴおよびＥＲＫのリン酸化の阻害
【０２０４】
この実施例は、単独または組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂが、ＩｇＭ媒介ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）刺激後に、Ｒｏｍａｓ細胞におけるＡＫＴリン酸化を阻害または減少させたことを実証する。また、単独または化合物Ａとの組合せでの化合物Ｂは、ＥＲＫリン酸化を阻害または低減した。
【０２０５】
５×１０６個のＲａｍｏｓ（無傷のＢＣＲを有するバーキット細胞系）を平板培養し、１ｕＭの化合物Ａ、１ｕＭの化合物Ｂを単独または組合せで用いて２５時間の間処置した。２０μｇのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加することで、ＢＣＲを３０分間刺激した。タンパク質を単離し、ホスホＡｋｔ（Ｓ４７３）、ホスホＥｒｋ（Ｔ２０２／Ｙ２０４）、およびホスホＳ６での免疫ブロッティングを使用して分析した。
【０２０６】
図６に示されている通り、いずれかの化合物または両化合物で処置された細胞は、ＡＫＴリン酸化における完全に近い阻害または低減を呈した。追加として、化合物Ｂおよび両化合物の組合せで処置された細胞は、ＥＲＫリン酸化における完全に近い阻害または低減を呈した。
（実施例９）
ケモカインシグナル伝達の阻害
【０２０７】
この実施例は、ＣＬＬ−ＨＳ−５共培養後のＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４およびＣＣＬ２２の分泌に対する、単独または組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂの効果を実証する。
【０２０８】
２４時間後に、上清を収集し、製造者（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の指示に従い、定量ＥＬＩＳＡによって、ケモカインタンパク質（−／＋ＨＳ−５共培養）の各々についてアッセイした。結果を図７に要約した。
【０２０９】
単独での各化合物を用いる処置と比較した場合、化合物Ａ（５００ｎＭ）および化合物Ｂ（５０ｎＭまたは５００ｎＭ）の組合せで処置された細胞は、ＣＣＬ２（図７Ａ）、ＣＣＬ３（図７Ｂ）、ＣＣＬ４（図７Ｃ）およびＣＣＬ２２（図７Ｄ）における有意な（両側ｔ検定）減少を示した。
【０２１０】
また、図７Ｅは、ストロマ細胞とのＣＲＦ−ＳＢ共培養において、両化合物の組合せを用いる処置が、ＣＣＬ４放出において、より大きい低減をもたらしたことを示した。組合せ処置によって誘発された低減のレベルは、単独でのいずれかの化合物で処置されたものより高かった。両化合物の組合せで処置された細胞におけるものと同様の低減レベルが、より高い濃度で化合物Ｂ単独で処置された細胞において検出された。
【０２１１】
また、単独または組合せでの化合物Ａおよび化合物Ｂの効果を、初代ＢＭストロマ細胞中で培養されたＣＬＬ細胞上で試験した。図７Ｆ〜７Ｉにおいて見られる通り、化合物Ａおよび化合物Ｂが組合せで投与された場合、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４およびＣＣＬ２２のケモカインレベルにおける、より大きな減少が観察された。バーダイアグラムは、２４時間で判定されたＣＣＬ２（Ｆ）、ＣＣＬ３（Ｇ）、ＣＣＬ４（Ｈ）およびＣＣＬ２２（Ｉ）の平均（±ＳＥＭ）上清濃度を表す。
【０２１２】
ＣＬＬおよび他のＢ細胞悪性腫瘍におけるＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４およびＣＣＬ２２の増加は、疾患重症度と相互に関連した。したがって、このインビトロ研究におけるこれらのケモカインの放出の低減は、両化合物の組合せで個体を処置することが、それらの疾患重症度を低減することができることを示唆している。
（実施例１０）
初代ＣＬＬおよびｉＮＨＬの試料における化合物Ａのアポトーシス促進活性に対する化合物Ｂの効果
【０２１３】
この実施例は、初代ＣＬＬおよびｉＮＨＬの試料における化合物Ａのアポトーシス促進活性に対する化合物Ｂの効果を実証する。細胞をＣＬＬ患者の末梢血液から得て、化合物Ａ、化合物Ｂ、または化合物Ａおよび化合物Ｂの組合せのいずれかで処置した。化合物を用いて０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭおよび１０μＭで、細胞を処置した。図８に示されている通り、両化合物の組合せで処置されたＣＬＬおよびｉＮＨＬの初代細胞は、単独でのいずれかの化合物で処置された細胞と比較して、より低い生存性を呈した。低減のレベルは、いずれかの化合物単独の相加効果より大きく、したがって、両化合物の組合せは、ＣＬＬおよびｉＮＨＬの細胞における予想外の相乗的な細胞死またはアポトーシスをもたらした。この相乗効果は、初代のＣＬＬ細胞において、より有意であった。追加として、図８における結果は、相乗効果が、化合物Ａおよび化合物Ｂの濃度の増加とともに増加することを示した。この研究の結果は、化合物Ｂの存在が、化合物Ａによって誘発されたアポトーシス活性を増加させること示唆している。
（実施例１１）
化合物Ａおよび化合物Ｂによる好塩基球活性化の阻害
【０２１４】
この実施例は、ＣＤ６３発現によって測定される場合の、抗ＩｇＥを用いる末梢血好塩基球のエクスビボ活性化の阻害を実証する。
【０２１５】
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を実施例１からの被験体から、彼らが研究化合物を受ける前および受けている最中に得た。ＣＤ６３発現によって測定された場合の、抗ＩｇＥを用いる末梢血好塩基球のエクスビボ活性化は、活性化の対照予備研究薬物レベルの百分率として表した。図９に示されている通り、スケジュール通りに完全な処置を受けたコホート２および３における個体は、両化合物とともに投与された場合、化合物Ａおよび化合物Ｂのいずれか単独とともに投与されたのと比較して、トラフレベルで好塩基球活性化の阻害の増加を呈した。
（実施例１２）
抵抗性細胞系における化合物Ａへの感受性に対するＳｙｋ阻害剤の効果
【０２１６】
この実施例は、化合物Ａの前に投与されたＳｙｋ阻害剤が、抵抗性ヒトＢ細胞系のＷＳＵ−ＦＳＣＣＬにおいて化合物Ａに対する感受性または敏感性を回復することを実証する。この実施例において使用されたＳｙｋ阻害剤は、以下の構造を有する化合物Ｃであった：
【化４４】
2015529195.tif 000051
【０２１７】
ＷＳＵ−ＦＳＣＣＬ親細胞は、初期に、化合物Ａの処置に応答性であった（図１０Ａ）。しかしながら、該化合物を用いる長い間のインキュベーション後、ＷＵＳ−ＦＳＣＣＬ親細胞は、該処置に抵抗性になった（データは示されていない）。こうした細胞を培養し、ＷＳＵ−ＦＳＣＣＬ抵抗性細胞と称した。これは、患者が抵抗性になるか、または現存の処置に対してもはや応答しないという、共通して観察された臨床的な状況を反映している。ＷＳＵ−ＦＳＣＣＬの親細胞および抵抗性細胞の両方を、この研究に使用した。
【０２１８】
１０ｍＭ（ＤＭＳＯ）のストックからの化合物Ａおよび化合物Ｃの７×系列希釈物を、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ（２７０μＭ）を使用して調製した。該系列希釈における化合物とともにＷＳ−ＦＳＣＣＬ細胞を添加し、３７℃で７２時間の間インキュベートし、その後、１２．５μＬのＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ番号ＤＡＬ１１００）を添加した。プレートを次いで３７℃で４時間の間インキュベートした。
【０２１９】
該生細胞における染色の取込みからの色の変化を、吸光度について測定した。Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｍ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）上の蛍光Ｅｘ５３０、Ｅｍ５９０、Ｃｕｔｏｆｆ５７０を決定した。成長の５０％阻害（ＧＩ５０）を算出するため、試料からの読取りを、対照（１００％または０％の吸収）と比較した。
【０２２０】
図１０Ｂに示されている通り、両化合物の組合せは、抵抗性を除去すること、またはＷＳＵ−ＦＳＣＣＬ抵抗性細胞の感受性を回復することができた。追加として、化合物Ａおよび化合物Ｃの両方の組合せで処置された抵抗性細胞は、化合物Ａまたは化合物Ｃのいずれか単独で処置された細胞と比較して、細胞生存性における低減のより高いレベルを呈した。このデータは、Ｓｙｋ阻害剤およびＰＩ３Ｋ−δ阻害剤の組合せが、細胞生存性を低減する際に予想外の相乗効果をもたらしたこと、およびＳｙｋ阻害剤が、ＰＩ３Ｋ−δ阻害剤によって誘発された死滅またはアポトーシスに対する応答における細胞への感受性を回復する際に予想外の効果を有することを示唆した。
（実施例１３）
再発したまたは難治性の血液悪性腫瘍を有する被験体における、化合物Ａとの組合せでの化合物Ｂの効力、安全性、耐容性および薬力学の評価
【０２２１】
この実施例において、単独でまたは化合物Ａと一緒に与えられた化合物Ｂの効力を、再発したまたは難治性の血液悪性腫瘍を有する個体において評価する。再発したまたは難治性の血液悪性腫瘍を有する個体における化合物Ｂおよび化合物Ａの組合せの安全性および耐容性、被験体についての最大耐量レベルの分布、および薬力学的測定も評価する。
【０２２２】
無痛性非ホジキンリンパ腫（ｉＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する被験体からなる５つのコホートを同時に研究する。各々４０人の被験体の２つのコホートにおいてｉＮＨＬを研究し、１つは、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）を有する被験体からなり、他方は、リンパ形質細胞様リンパ腫（ＬＰＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）および辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）を有する被験体からなる。
【０２２３】
再発したまたは難治性のリンパ系悪性腫瘍を有する被験体において複数の２８日サイクルにわたり毎日２回（ＢＩＤ）、化合物Ｂおよび化合物Ａを投与する。全ての被験体が、化合物Ｂおよび化合物ＡをＢＩＤで用いる処置を絶食条件下で受ける。被験体最大耐量レベル（ｓＭＴＤ）を各被験体について、患者内用量漸増スキームを使用して決定する。研究目的のため、１サイクルは２８日であると考える。用量制限性毒性の非存在下、投薬は中断なく続く。個体を安全性について評価し、処置より前に曝露および薬力学のモニタリングをするために血液をサンプリングする。処置は以下の通りのスケジュールである：サイクル１中では毎週、サイクル２中では２週毎、および次いでその後の各サイクル中では１回。個体は、最初の２４週中では８週毎、および次いでその後は１２週毎に、処置に対するそれらの腫瘍応答を決定するための判定を受ける。
【０２２４】
化合物Ｂは、２００ｍｇ強度の錠剤として利用可能である。化合物Ａは、１５０ｍｇおよび１００ｍｇの強度の錠剤として利用可能である。
【０２２５】
化合物Ｂの生物学的影響を評価するため、薬物活性および抵抗性の薬力学的評価のための試料を、処置の開始前、最初の投薬の１．５時間後および４．０時間後、サイクル１中では毎週、サイクル２中では２週毎、全ての後続のサイクルの１日目および疾患進行時に得る。
【０２２６】
血清サイトカインおよびケモカイン：最小限でも、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、腫瘍壊死因子α、およびＣ反応性タンパク質を含む試料を、疾患関連の全身的サイトカインおよびケモカインについて分析する。初期に、ＳＬＬ、ＣＬＬおよびＭＣＬだけを有する被験体における薬力学（pharmcodynamic）測定のために循環腫瘍細胞を得る。
【０２２７】
循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）−ＰｈｏｓＦｌｏｗ分析：ＳＬＬ、ＣＬＬおよびＭＣＬの被験体について、循環細胞を探索バイオマーカーについて判定することで、化合物Ｂを用いる処置に続く悪性細胞の分子シグネチャーにおける変化を評価し、化合物Ｂに対する抵抗性の機序を同定する。これらは、最小限でも、ｐＡｋｔ、ｐＢｌｎｋ、ｐＳｙｋ、ｐＥｒｋ、ｐＳ６およびｐＮＦｋＢについてのＰｈｏｓＦｌｏｗ分析を含む。他のシグナル伝達ノードを判定することで、ＳＹＫ阻害の下流効果、およびＳＹＫ阻害に対する応答における他の経路に発生する変化を評価することができる。
【０２２８】
循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）−ＰＢＭＣ分析：ＳＬＬ、ＣＬＬおよびＭＣＬの被験体だけについて、プロテオミクス手法および分子手法を使用してＰＢＭＣ試料を判定することで、最小限でも、ＢＴＫ、Ｂｌｎｋ、Ｐｙｋ２、Ｍｅｋ、ＥＲＫ、Ｐ３８、ＰＩ３Ｋ  ｐ８５α、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ、ＰＩ３ＫγおよびＮＦｋＢのリン酸化状態；Ｂｃｌ−２発現；ＰＴＥＮ変異およびタンパク質発現；ならびにｍｙｃタンパク質発現、遺伝子増幅および転座を決定する。
【０２２９】
循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）−ＲＮＡ分析：ＳＬＬ、ＣＬＬおよびＭＣＬの被験体だけについて、ＲＮＡ試料判定は、最小限でも、ｃ−ｍｙｃ、ＰＴＥＮ、ｐ５３、ＺＡＰ−７０およびｂｃｌ−２の発現を含む。
【０２３０】
ＳＬＬ／ＣＬＬ／ＭＣＬ分子特徴付け：サイクル２の１５日目および疾患進行時にスクリーニングでＳＬＬ、ＣＬＬおよびＭＣＬの被験体から末梢血液を回収して、疾患進行、処置に対する応答、および全体的な生命予後についての分子マーカーを判定する。ベースライン状態ならびにこれらの分子マーカーにおける任意の変化は、化合物Ｂおよび化合物Ａに対する応答と相互に関連する。
【０２３１】
腫瘍制御変数の算出：腫瘍制御判定は、化合物Ｂおよび化合物Ａの薬理を考えるこの研究のために特に修飾された通りの、ＮＨＬに関する標準化した応答および進行の基準（Chesonら、J  Clin  Oncol、２００７年；２５巻（５号）：５７９〜８６頁）およびＣＬＬ（Hallekら、Blood、２００８年）に基づく。応答および進行の個々および複合のエンドポイント（リンパ節部位、肝臓および脾臓のサイズ、骨髄、血小板数、ヘモグロビン、好中球数および末梢血液リンパ球数における変化を考える）を決定する。腫瘍制御を、各判定で、各応答パラメータ、ＳＰＤ値、ベースラインまたは最下点からのＳＰＤ値における百分率変化、応答が最初に記録される日付、応答が確認される日付、および疾患進行の日付について定義されている通りの応答カテゴリー（例えば、ＣＲ、ＰＲ、ＳＤ、確定ＰＤ）別に記録する。
（実施例１４）
化合物Ｄとの組合せでの化合物Ｂによる、悪性Ｂ細胞系におけるケモカイン放出の阻害
【０２３２】
この実施例において、脾臓チロシンキナーゼ阻害剤の化合物Ｂのインビトロ活性を、ホスホイノシチド−３−キナーゼデルタ阻害剤の化合物Ｄとの組合せで、３つの別個のヒトＢ細胞悪性細胞系：ＤＨＬ４（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫株）、Ｍｉｎｏ（マントル細胞リンパ腫株）およびＣＣＲＦ−ＳＢ（Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病株）からのケモカインＣＣＬ３およびＣＣＬ４の放出の阻害について試験した。
【０２３３】
化合物：化合物ＢおよびＤを、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭストックとして調製した。
【０２３４】
細胞系：ＳＵ−ＤＨＬ−４（ＤＨＬ−４）細胞を、ＤＳＭＺ（Ｌｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ）から得て、Ｍｉｎｏ、ＣＣＲＦ−ＳＢおよびＭ２−１０Ｂ４の細胞系を、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｙｐｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から得た。全ての細胞系を、成長培地（１０％のＦＢＳ、１％のペニシリン−ストレプトマイシン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１％のＧｌｕｔａＭａｘを含有するＲＰＭＩ−１６４０ベースの培地）中で維持した。
【０２３５】
組合せアッセイ：ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｓｈｅｌｔｏｎ、ＣＴ）を使用して、ＣＣＬ３およびＣＣＬ４のレベルを決定した。１０ｍＭで出発する化合物Ｄの１００％ＤＭＳＯ中の２倍系列希釈を、５ｍＭで出発する化合物Ｂの１００％ＤＭＳＯ中の２倍系列希釈と組み合わせた。また、ＤＭＳＯおよびスタウロスポリン１００μＭを、それぞれ１００％および０％のケモカイン放出対照として使用した。ＣＣＲＦ−ＳＢおよびＭｉｎｏの細胞において、１０μＭの化合物Ｂを、０％ケモカイン放出対照として使用した。
【０２３６】
ケモカイン放出：マウスストロマ細胞系Ｍ２−１０Ｂ４を、成長培地１００μＬ中において１ウェル当たり１．０×１０４細胞の細胞密度にて９６ウェルアッセイプレート中で平板培養した。アッセイプレートを３７℃にて５％のＣＯ２インキュベーター内で４８時間の間インキュベートすることで、コンフルエント単層を形成した。培地を除去し、細胞を成長培地中で１回洗浄した後、三連プレート中において成長培地１３５μＬ中に１ウェル当たり５×１０４細胞の細胞密度にてストロマ層上で平板培養した。化合物系列希釈物を１９６μＬのＲＰＭＩ−１６４０中に再懸濁し、該希釈物１５μＬを、Ｂおよびストロマ細胞を含有する１３５μＬに添加した。３７℃にて５％のＣＯ２インキュベーター中で１８〜２４時間の間インキュベートした後、プレートを３００×ｇにて５分間室温で遠心分離した。各ウェルからの上清７５μＬを、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ検出システム内で使用した。
【０２３７】
ＡｌｐｈａＬＩＳＡ検出：製造者の指示に従って、ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイを行った。アッセイウェルからの上清１０μＬを用いて、高度感受性プロトコールを行った。Ｅｎｓｐｉｒｅ  ＡｌｐｈａＬＩＳＡ検出機器（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を用いて、ＣＣＬ３およびＣＣＬ４の放出を検出した。
【０２３８】
ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩプログラムを使用して、データを処理し、阻害組合せ効果を決定した。結果を表６に要約する。組合せｌｏｇ体積（μＭ２．％）の値は、化合物Ｄと組み合わされた場合の化合物Ｂが、全ての試験された細胞系において高度に相乗的な阻害効果を呈することを示唆した。加えて、化合物Ｂおよび化合物Ｄの組合せは、試験された細胞系にいずれにおいても拮抗作用を示さなかった。
【表６】
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【０２３９】
組合せ薬物処置からの阻害曲線を、試験された各細胞系について作成した。ＤＨＬ−４におけるＣＣＬ３およびＣＣＬ４の産生を阻害する際の化合物Ｂおよび化合物Ｄの代表的組合せを、図１１Ａおよび１１Ｂに描写する。
【０２４０】
これらの結果は、化合物Ｂおよび化合物Ｄの組合せが、マウスのストロマ細胞系のＭ２−１０Ｂ４と共培養されたＣＣＲＦ−ＳＢ、ＤＨＬ−４およびＭｉｎｏの細胞系からのＣＣＬ３およびＣＣＬ４の放出の高度に相乗的なインビトロ阻害であったことを表している。相乗作用評価は、２つの独立した実験からのボンフェローニ調整ｌｏｇ体積を使用する統計分析に基づいていた。相乗作用は、試験された全ての３つの細胞系において、ＣＣＬ４およびＣＣＬ３について同様であった。最も高い相乗効果は、ＤＨＬ４細胞系における薬物組合せについて検出され、１５１２．４±２９４．７μＭ２．％（ｎ＝２）のＣＣＬ４平均ボンフェローニ調整ｌｏｇ体積をもたらした。最も低い相乗効果は、ＣＣＲＦ−ＳＢ細胞におけるＣＣＬ３産生について見られ、ここで、平均ボンフェローニ調整ｌｏｇ体積は、２０６．１±１２５μＭ２．％（ｎ＝２）であった。また、化合物Ｄと化合物Ｂとの間の拮抗作用は観察されなかった。
（実施例１５）
化合物Ｄとの組合せでの化合物Ｂによる、Ｂ細胞リンパ腫細胞系におけるホスホＭｅｋおよびホスホＥｒｋの阻害
【０２４１】
この実施例は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞系のＤＨＬ−４におけるホスホＭｅｋ（ｐＭｅｋ）およびホスホＥｒｋ（ｐＥｒｋ）の発現の抗ＩｇＧ（αＩｇＧ）刺激リン酸化を阻害する化合物Ｄとの組合せでの化合物Ｂのインビトロ活性を実証する。
【０２４２】
化合物：上記実施例１４に記載されている手順に従って、化合物試料を調製した。
【０２４３】
細胞系：ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞系を、ＤＳＭＺ（Ｌｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ）から得た。１０％のＦＢＳ、１％のペニシリン−ストレプトマイシン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１％のＧｌｕｔａＭａｘを含有するＲＰＭＩ−１６４０ベースの培地中に、ＤＨＬ−４を維持した。
【０２４４】
組合せアッセイ：Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅアッセイ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を使用して、ｐＭｅｋおよびｐＥｒｋのレベルを決定した。１０ｍＭで出発する化合物Ｄの１００％ＤＭＳＯ中の２倍系列希釈物を、１０ｍＭで出発する化合物Ｂの１００％ＤＭＳＯ中の２倍系列希釈物と組み合わせた。１０μｇ／ｍＬでαＩｇＧを含有するＤＭＳＯを、１００％のｐＭｅｋまたはｐＥｒｋのシグナル対照として使用し、刺激を含有しないＤＭＳＯを、０％のｐＭｅｋまたはｐＥｒｋのシグナル対照として使用した。
【０２４５】
Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅアッセイ：ｌｏｇ相において成長させたＤＨＬ−４細胞を、１％のペニシリン−ストレプトマイシンおよび１０ｍＭのＨＥＰＥＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０ベースの培地中に、６×１０６細胞／ｍＬにて１時間の間３７℃および５％のＣＯ２で飢餓状態にさせた。新鮮培地（ＲＰＭＩ−１６４０）を有する９６ウェルアッセイプレート中に１ウェル当たり５×１０５細胞で、細胞を播種した。化合物系列希釈物４μＬを、１９６μＬのＲＰＭＩ−１６４０中に再懸濁した後、さらなる１：１０希釈物としてアッセイプレートに添加した。化合物を細胞に添加し、１時間の間３７℃および５％のＣＯ２でインキュベートした。０％対照細胞を除いて、細胞を５分間αＩｇＧ（１０μｇ／ｍＬ）で刺激し、３００×ｇにて５分間室温で遠心分離した。上清を捨て、細胞ペレットを、１０分間氷上における５０μＬの１Ｘ  ＲＩＰＡ緩衝剤中に溶解した。溶解産物をＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ（ＭＳＤ）プレート中でアッセイするか、または使用するまで−８０℃で凍結した。製造者の指示による通りに、ｐＥｒｋおよびｐＭｅｋのＭＳＤアッセイを行った。プレートを直ちにＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｓｅｃｔｏｒ  ２４００  Ｉｍａｇｅｒ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）上で読み取った。データを１ウェルごとに標準化した。
【０２４６】
ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩプログラムを使用して、データを処理し、阻害組合せ効果を決定した。組合せ体積（μＭ２．％）の値は、化合物Ｂが、化合物Ｄと組み合わせた場合に高度に相乗的な阻害効果を呈することを示した。表７で、２つの個々の実験から、それぞれｐＥｒｋおよびｐＭｅｋについて、２７９．４±２１１．１μＭ２．％および１３５．５±２９．２μＭ２．％の平均ボンフェローニ調整ｌｏｇ体積を要約した。化合物Ｂおよび化合物Ｄは、試験されたいずれの試料においても拮抗作用の徴候を示さなかった。
【表７】
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【０２４７】
組合せ処置からの阻害曲線を、ＤＨＬ−４細胞におけるｐＭｅｋおよびｐＥｒｋについて作成した。ｐＭｅｋおよびｐＥＲＫの曲線データセットの代表的組合せを、図１２Ａおよび１２Ｂに描写する。
【０２４８】
この実施例は、化合物Ｂおよび化合物Ｄの組合せが、この実施例における統計分析によって示された通り、ＢＣＲのαＩｇＧ刺激に続いてＤＨＬ−４細胞におけるｐＭｅｋおよびｐＥｒｋの発現の高度に相乗的なインビトロ阻害を呈したことを実証している。化合物Ｂと化合物Ｄとの間の拮抗作用は観察されなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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