(57)【要約】ケモカインＣＸＣＬ１７レベルの増大に関連する疾患を処置する方法が提供される。本方法は、ＣＸＣＬ１７の活性レベルを低くする物質の治療上有効量を、このような処置を必要とする対象に投与することを含む。この物質は、ＣＸＣＬ１７抗体、または、アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはｓｉＲＮＡなどのＣＸＣＬ１７を標的化するアンチセンス化合物とすることができる。また、ＣＸＣＬ１７で腫瘍を処置する方法およびＣＸＣＬ１７レベルの増大に関連する疾患を診断する方法が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケモカインＣＸＣＬ１７レベルの増大に関連する疾患を処置する方法であって、
ＣＸＣＬ１７の活性レベルを低くする物質の治療上有効量をこのような処置を必要とする対象に投与すること
を含む、方法。
【請求項２】
前記物質が、抗ＣＸＣＬ１７抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記物質が、ＣＸＣＬ１７を標的化するアンチセンス化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記アンチセンス化合物が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記疾患が、炎症性疾患または癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記炎症性疾患が、肺または腸の疾患である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記肺または腸の疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、特発性肺線維症、過敏性間質性肺炎、非特異的間質性肺炎、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ヘリコバクター・ピロリ感染症により引き起こされる潰瘍、過敏性腸症候群、または直腸脱である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記癌が、小細胞肺癌もしくは非小細胞肺癌、頭頸部癌、胃癌、結腸直腸癌、膵臓癌、または肝細胞癌である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
このような処置を必要とする対象の腫瘍を処置する方法であって、
前記腫瘍におけるマクロファージ数を増加させるために有効な量のケモカインＣＸＣＬ１７を前記対象に投与すること
を含む、方法。
【請求項１１】
前記腫瘍が、結腸直腸、肝細胞、膵臓、神経膠芽腫、メラノーマ、軟部肉腫、リンパ腫、肺、乳癌（細胞腫）、前立腺、膀胱、頭頸部、または卵巣の腫瘍である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ケモカインＣＸＣＬ１７レベルの増大に関連する疾患を診断する方法であって、
前記疾患を有するリスクのある対象からの生物学的試料中のＣＸＣＬ１７のレベルを測定することと、
前記測定レベルが対照レベルを超える際に前記対象が前記疾患を有すると判定することと
を含む、方法。
【請求項１３】
前記生物学的試料が、生物学的体液または生物学的組織である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、特発性肺線維症、過敏性間質性肺炎、非特異的間質性肺炎、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ヘリコバクター・ピロリ感染症により引き起こされる潰瘍、過敏性腸症候群、または直腸脱である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記疾患が、小細胞肺癌もしくは非小細胞肺癌、頭頸部癌、胃癌、結腸直腸癌、膵臓癌、または肝細胞癌である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記測定が、核酸またはタンパク質レベルでＣＸＣＬ１７を測定することを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が、ヒトまたは動物である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
本発明は、国立アレルギーおよび感染症研究所／国立衛生研究所からの認可番号第１Ｒ０１ＡＩ０９３５４８−０１Ａ１号の下で、政府の援助を受けて作製されたものである。
【０００２】
配列表の参照
本願は、電子形態の配列表を含む。この配列表の内容は、本明細書に参照として援用される。
【背景技術】
【０００３】
本願は、走化性タンパク質ＣＸＣＬ１７に関与する障害を処置かつ診断する方法および組成物に関する。
【０００４】
免疫系は、侵入する病原体から体を守るために集合する細胞の複合ネットワークである。これらの細胞は、体内中に分散しており、相対的に遠く離れた距離を通して相互作用及び情報伝達しなければならない。これを達成するために、細胞は、サイトカインと呼ばれる可溶性の介在物質を介して情報伝達する。サイトカインは、免疫細胞の増殖および分化を誘導して効果的な免疫応答を確立することができる。これらの分泌型介在物質のサブセットは、同族の受容体を発現する免疫細胞の走化性を誘導できる。これらの走化性サイトカインをケモカインと呼ぶ。
【０００５】
ヒトのケモカインスーパーファミリーは、４８のリガンドを含み、１９の知られている受容体を含む［１、２］。ケモカインリガンドは、タンパク質内の４つの特徴的なシステイン分子の分布に基づき４つのサブクラス（ＣＣ、ＣＸＣ、Ｃ、およびＣＸ３Ｃ）に分けられる［１、２］。ケモカインリガンドの大部分は、ＣＣおよびＣＸＣサブクラスに属する。
【０００６】
ケモカインは、細胞により大量に分泌され、ケモカインの可溶性リガンドは、ケモカインの標的細胞を誘引する勾配を形成できる。細胞が同族の受容体を発現する場合、この勾配を検知し、かつ最も高いリガンド濃度の場所まで遊走することにより応答することができる。知られている全てのケモカイン受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）であり、大きな受容体ファミリーとして存在し、主要な機能は、細胞外の分子を検知し、続いて細胞内シグナル伝達経路を活性化することである。適切なリガンドと結合すると、ケモカイン受容体ＧＰＣＲは、細胞内Ｇタンパク質を活性化し、細胞の走化性を結果的に引き起こすシグナルカスケードを開始する［３〜１１］。
【０００７】
ケモカインは、発現パターンに基づき、炎症性または恒常性に分類できる。この命名が示すように、炎症性ケモカインは、炎症性の刺激が存在する際に産生され、従って、免疫応答の発生に重要な役目を有する［１、２］。このケモカインの特徴は、単一の受容体と結合するリガンドの数の冗長性である［１、２］。この冗長性は、より強い免疫応答を可能にし、幅広い範囲の細胞型を、より多数のリガンドにより誘引できることが示唆されてきた。この炎症性ケモカインは、種族間にて低いレベルで保存されており、このことにより、このケモカインの分類が、ある種族の感染の経験により形作られるといった事実を反映している可能性が高い［１］。たとえば、好中球、ＣＸＣＬ８を動員する炎症性ケモカインは、ヒトに存在するが、マウスに存在しない［２］。
【０００８】
逆に、恒常性ケモカインは、種族間でより高い割合で保存されている。この分類のケモカインは、恒常的に発現し、かつ。これらの発現は変化しない状態を保持するか、または炎症刺激の存在が減少する［１］。これらのリガンドは、より高い受容体の忠実度を実証し、かつ、発生および適切なＴ：Ｂ細胞相互作用を含む、重要な細胞工程において重要な細胞を誘引する［１２、１３］。この恒常性ケモカインの保存率が高いことは、進化の観点から重要であることを反映している［１２］。
【発明の概要】
【０００９】
一態様では、ケモカインＣＸＣＬ１７レベルの増大に関連する疾患を処置する方法が提供される。本方法は、ＣＸＣＬ１７の活性レベルを低くする物質の治療上有効量を、このような処置を必要とする対象に投与することを含む。ＣＸＣＬ１７の活性レベルを低くする物質は抗ＣＸＣＬ１７抗体とすることができ、モノクローナル抗体とすることができる。他の実施形態では、この物質は、ＣＸＣＬ１７を標的化するアンチセンス化合物とすることができ、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡとすることができる。
【００１０】
この疾患は、炎症性疾患または癌であり得る。炎症性疾患は、限定するものではないが、慢性閉塞性肺性疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、特発性肺線維症、過敏性間質性肺炎、または非特異的間質性肺炎などの肺疾患であり得る。あるいは、炎症性疾患は、限定するものではないが、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ヘリコバクター・ピロリ感染症により引き起こされる潰瘍、過敏性腸症候群、または直腸脱などの腸疾患であり得る。癌は、小細胞肺癌および非小細胞肺癌、頭頸部癌、胃癌、結腸直腸癌、膵臓癌、または肝細胞癌であり得る。
【００１１】
別の態様では、処置の必要のある対象の腫瘍を処置する方法が提供される。本方法は、ケモカインＣＸＣＬ１７を、腫瘍のマクロファージ数を増加させるのに有効な量で対象に投与することを含む。この腫瘍は、限定するものではないが、結腸直腸、肝細胞、膵臓、神経膠芽腫、メラノーマ、軟部肉腫、リンパ腫、肺、乳癌（細胞腫）、前立腺、膀胱、頭頸部、または卵巣の腫瘍とすることができる。ケモカインを投与することの抗腫瘍作用は、たとえば、腫瘍細胞死、腫瘍細胞増殖の阻害、転移の阻害、腫瘍の大きさの減少、および悪性形質腫瘍細胞の逆行もしくは低減、またはそれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。
【００１２】
さらなる態様では、ケモカインＣＸＣＬ１７レベルの増大に関連する疾患を診断する方法が提供される。本方法は、この疾患を発症するリスクのある対象由来の生物学的試料中のＣＸＣＬ１７のレベルを測定することと、測定レベルが対照レベルを超える際に、対象がこの疾患を有すると判定することとを含む。この生物学的試料は、生物学的体液または生物学的組織とすることができる。対照レベルは、疾患のない１または複数の対象の対照集合由来のＣＸＣＬ１７レベルの平均（ａｖｅｒａｇｅまたはｍｅａｎ）値とすることができる。この疾患は炎症性疾患または癌であり得る。炎症性疾患は、限定するものではないが、慢性閉塞性肺性疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、特発性肺線維症、過敏性間質性肺炎、または非特異的間質性肺炎などの肺疾患であり得る。あるいは、炎症性疾患は、限定するものではないが、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ヘリコバクター・ピロリ感染症により引き起こされる潰瘍、過敏性腸症候群、または直腸脱などの腸疾患であり得る。癌は、小細胞肺癌および非小細胞肺癌、頭頸部癌、胃癌、結腸直腸癌、膵臓癌、または肝細胞癌であり得る。
【００１３】
いずれかの本方法における対象は、ヒトまたは動物とすることができる。動物の対象としては、限定するものではないが、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、またはモルモットが挙げられる。
【００１４】
本発明をより完全に理解するために、参照として添付図面と併せて以下の記載を作成した。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、ＣＸＣＬ１７が粘膜性ケモカインであることを示すマイクロアレイのデータを示すチャートである。（Ａ）ＢＩＧＥ（遺伝子発現の身体指数（Ｂｏｄｙ  Ｉｎｄｅｘ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ））データベースからの１０５の正常なヒト組織に対するマイクロアレイデータの平均発現値（ｙ軸）。データは、臓器系にグループ分けしたＸ軸にわたり表示される。Ｙ軸は、平均発現値である。強調された臓器系は、最も高いＣＸＣＬ１７発現を有しており、この部分はＤＳ（消化器系）、ＲＳ（呼吸器系）、ＲＴ（生殖器系）である。ＣＸＣＬ１７の発現が最も高い組織の値を表１に示す。
【図２】図２は、ＣＸＣＬ１７の発現がヒトの粘膜組織に限定していることを示す表１の図である。１０５の異なるヒト組織および細胞を含むＢＩＧＥデータベースのＣＸＣＬ１７（２２６９６０＿ａｔ）に対応し、平均シグナル強度が最も高いプローブセットの組織が示されている。これらのデータのグラフィック表示を図１に示す。ＢＩＧＥヒト遺伝子発現データベース中で最も高いＣＸＣＬ１７発現は、粘膜組織に対応する。この平均強度シグナルは、ＢＩＧＥデータベースに含まれる各組織の複製物から平均化したマイクロアレイシグナルである。
【図３】図３は、ＣＸＣＬ１７がヒトの舌の上皮中に発現することを示す組織断面画像である。バーは４０ミクロンを示す。
【図４】図４は、ＣＸＣＬ１７がヒトの小腸（腸管を覆う上皮細胞）中に発現することを示す組織断面画像である。
【図５】図５は、ＣＸＣＬ１７が気管支肺胞の間隙を覆うように細胞中に発現することを示す組織断面画像である。気管支壁を４０倍にすることにより、気管支の偽重層上皮および粘膜産生細胞における不均一な強度での陽性ＣＸＣＬ１７染色を示す。また、内皮ならびにマクロファージおよび形質細胞の一部におけるＣＸＣＬ１７染色がある。
【図６】図６は、過敏性間質性肺炎および特発性肺線維症の気管支肺胞洗浄液中にＣＸＣＬ１７が発現することを示すチャートである。ＣＸＣＬ１７のレベルは、これらの症状を備えた患者の気管支肺胞洗浄液において、ＥＬＩＳＡにより検出した。
【図７（１）】図７Ａ〜７Ｈは、組み換えＣＸＣＬ１７の腹腔内注射により、注射から４８時間後におけるマクロファージの動員が増加することを示すフローサイトメトリーのプロットパネルである。３匹のマウスの腹腔にｒｍＣｘｃｌ１７を注射した後、ＰＢＳビヒクル（Ｃ〜Ｅ）を注射したマウスと比較して、小さいが有意なマクロファージ（Ｍφ）の増加が観察された。しかしながら、樹状細胞（ＤＣ）は増加しなかった（Ｆ〜Ｈ）。細胞特異的抗体（Ｆ４／８０、マクロファージ；ＣＤ１１ｃ、ＤＣ；Ｇｒ−１、顆粒球）で細胞を染色することにより、特異的な細胞集合を判定した。また、染色しない細胞も示す（Ａ〜Ｂ）。
【図７（２）】上述の通り。
【図７（３）】上述の通り。
【図８】図８Ａ〜８Ｄは、野生型（ＷＴ）マウスと比較して、Ｃｘｃｌ１７（−／−）マウスの肺のＦ４／８０+ＣＤ１１ｂhigh細胞のパーセンテージが減少したことを示すフローサイトメトリーのプロットパネルである。ＷＴマウスおよびＣｘｃｌ１７（−／−）マウスの肺から収集した細胞を、フローサイトメトリーにより分析するため、フルオロフォア複合抗体で染色した。マクロファージ集合（Ｆ４／８０+ＣＤ１１ｂhigh細胞）（Ｂ〜Ｄ）を分析した際、ＷＴマウスと比較してＣｘｃｌ１７（−／−）マウスの肺のマクロファージのパーセンテージが顕著に減少したことが観察された。プロットＡ〜Ｄは、群あたりｎ＝５の２つの別々の実験からのＦＡＣＳプロットを示す。
【図９】図９は、Ｃｘｃｌ１７（−／−）マウスでは、ＷＴマウスと比較して、肺のマクロファージの数が減少したことを示すグラフである。このグラフは、ＷＴマウスまたはＣｘｃｌ１７（−／−）マウスの肺から回収したＦ４／８０＋ＣＤ１１ｂ＋細胞の数を示す。後者のマウスは、肺のマクロファージを特徴付けるこれらのマーカーを発現する細胞が顕著に減少した。
【図１０】図１０は、他のケモカイン（成熟ペプチド）を備えたＣＸＣＬ１７のアライメントである。ＣＣＬ２８（配列番号１）、ＣＸＣＬ８（配列番号２）、ＣＸＣＬ１２（配列番号３）、ＣＸＣＬ１４（配列番号４）、およびＣＸＣＬ１７（配列番号５）のアミノ酸配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下に、２０１２年５月３日に出願した米国仮特許出願第６１／６４２，２０９号が、本明細書中に参照として援用される。
【００１７】
一態様では、ケモカインＣＸＣＬ１７レベルの増大に関連する疾患を処置する方法が提供される。本方法は、このような処置を必要とする対象に、対象のＣＸＣＬ１７の活性レベルを低くする物質の治療上有効量を投与することを含む。
【００１８】
本方法では、治療上有効量は、対象（彼／彼女）の症状の医学的処置に対して対象の健康状態（well-being）が促進または向上する量である。たとえば、対象の寿命の任意の期間の延長、対象の症状に起因する可能性のある対象の疼痛の減少、本疾患の重症度の減少、治療剤の治療効果の増大、症状または疾患の予後の改善、治療剤の投与量または投与頻度の減少、治療の侵襲性を低減する対象の処置レジメンの変化、および、治療剤由来の副作用の重症度または頻度の減少が挙げられる。また、癌の処置に関する治療上の利点として、本疾患の新生物の発生の減少または遅延、過剰増殖の減少、腫瘍増殖の低減、転移の遅延、および癌細胞または腫瘍細胞の増殖比の低減が挙げられる。対象に投与する活性物質の量は、対象の体重、投与様式、および本疾患の兆候および重症度により変動し、当業者はこれらから適切な用量を決定できる。
【００１９】
一部の実施形態では、対象のＣＸＣＬ１７活性レベルを低くする物質は抗ＣＸＣＬ１７抗体である。抗ＣＸＣＬ１７抗体は、特異的にケモカインＣＸＣＬ１７に結合し、またはケモカインＣＸＣＬ１７を認識するＣＸＣＬ１７に対して配向する抗体である。抗ＣＸＣＬ１７抗体は、ＣＸＣｌ１７の活性を遮断または阻害することにより、対象の組織または臓器の総合的なＣＸＣＬ１７活性レベルを低くすることができる。
【００２０】
本明細書で使用されるように、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥなどの免疫性結合剤のいずれかとすることができる。また、抗体は、抗原結合領域を有し、かつ、Ｆａｂ´、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）2、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ）、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単一鎖Ｆｖ）などの抗体フラグメントを含む抗体様分子とすることができる。多様な抗体系構築物およびフラグメントを調製し、使用する技術が当業者に良く知られている。また、抗体を調製し、特徴付ける手段も当業者に良く知られている（たとえば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  “Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  １９８８  ［４５］参照）。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、たとえば、再現性および大規模な産生といった特定の利点を有すると認識されている。従って、ヒト、マウス、サル、ラット、ハムスター、ウサギの他、ニワトリも含むモノクローナル抗体が考えられる。
【００２１】
ＣＸＣＬ１７に対するポリクローナル抗体を、幅広い範囲の動物種で調製できる。概して、抗血清の産生に使用する動物は、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモットまたはヤギである。免疫原性を高めるために、アジュバント、ならびに限定するものではないが、キーホールリンペットヘモシアニンまたはウシ血清アルブミンなどのキャリアータンパク質に対する結合を使用することは、良く知られた手順である。
【００２２】
モノクローナル抗体は、本明細書に参照として援用されている米国特許第４，１９６，２６５号に例示されるような良く知られた技術を使用して容易に調製することができる［４９〜５３］。概して、この技術は、たとえば、精製済み、または部分的に精製したポリペプチド、ペプチド、またはドメインといった選択性免疫原組成物で適切な動物を免疫化することを含む。この免疫化組成物を、抗体産生細胞を刺激するために有効な方法で投与する［５４〜５６］。
【００２３】
必要に応じて、濾過、遠心およびＨＰＬＣまたはアフィニティクロマトグラフィーなどの様々なクロマトグラフィー法を使用して、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体をさらに精製できる［５６］。
【００２４】
ヒト化モノクローナル抗体は、元の抗原特異性を保持しながら、ヒト配列と定常領域および／または可変領域のフレームワーク配列を置き換える遺伝子工学技術を使用して改変した動物由来の抗体である。一般的にこのような抗体は、ヒトの抗原に対して特異性を備えた齧歯類の抗体由来である。このような抗体は、概して、ｉｎ  ｖｉｖｏでの治療の応用に有益である。この戦略により、外来性抗体に応答する宿主を低減させ、かつ、ヒトのエフェクター機能を選択することが可能である。従って、ＣＸＣＬ１７に対するヒト化抗体は、ヒトの定常領域および／または可変領域のドメインを有する、マウス、ラットまたは他の種由来のキメラ抗体、二種特異性抗体、組み換え抗体および遺伝子工学抗体、ならびにそれらのフラグメントとして本発明の一部の実施形態に含まれている。ヒト化免疫グロブリンを産生する技術は、当業者に良く知られている［５３、５６〜６０］。たとえば、米国特許第５，６９３，７６２号は、１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するヒト化免疫グロブリンを産生する方法およびヒト化免疫グロブリンの組成物を開示している。無処置の抗体と組み合わせる際、このヒト化免疫グロブリンは、実質的にヒトで免疫応答を示さず、エピトープを含むタンパク質または他の化合物などの抗原に対するドナーの免疫グロブリンと同一の親和性を実質的に保持する。この分野の他の技術の例として、米国特許第６，０５４，２９７号、第５，８６１，１５５号、および第６，０２０，１９２号が挙げられており、これらは参照として本明細書に援用される。患者の疾患に「特別に合わせた」抗体の開発方法も同様に知られており、このような特別に合わせた抗体も考慮されている。
【００２５】
抗ＣＸＣＬ１７抗体は、ＣＸＣＬ１７の走化性活性を遮断または阻害することができる。ケモカインの走化性活性を阻害する抗体の使用は、広く実証されている。たとえば、ケモカインＣＣＬ２またはＣＣＬ５に対する抗体は、走化性活性を阻害することが示されている［６１］。ＣＸＣＬ１７の走化性活性を阻害する抗ＣＸＣＬ１７抗体の特質は、トランスウェル走化性アッセイにより判定することができる。このアッセイを使用して、ＣＸＣＬ１７に対する抗体を中和する有効性を試験することができる。簡潔に言えば、この抗体を、アッセイの開始前に、６０分間組み換えＣＸＣＬ１７（ｒＣＸＣＬ１７）によりインキュベートすることができる。その後、抗体／ｒＣＸＣＬ１７溶液をトランスウェルのチャンバーの底に充填することができる。ｒＣＸＣＬ１７に応答することが以前に示された細胞（初代細胞または細胞株）を、トランスウェルの導入部のチャンバー上部に充填することができる。３７℃で数時間インキュベートした後、（光学顕微鏡を介して）走化性を観察し、応答する（走化した）細胞数を、フローサイトメトリーを介して定量化できる。中和抗体を含むウェルには、含まれる走化細胞が顕著に少ない。
【００２６】
一部の実施形態では、ＣＸＣＬ１７の活性レベルを低くする物質は、ＣＸＣＬ１７を標的化するアンチセンス化合物である。アンチセンス化合物は、水素結合を介して核酸標的にハイブリダイズすることができるオリゴマー化合物またはポリマー化合物である。アンチセンス化合物の一例は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。アンチセンス化合物の別の例は、ｓｉＲＮＡである。
【００２７】
本明細書で使用されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、天然に存在するヌクレオチドおよび／または改変型もしくは置換型オリゴヌクレオチドを含み得るリボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）のオリゴマーまたはポリマーである。様々な実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＣＸＣＬ１７標的配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含み、たとえば、プライマー結合部位として使用するための追加的な５´および／または３´隣接配列を含むことができる。一部の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、限定するものではないが、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび他のアルキルホスホネート（たとえば、３′−アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネート）、ホスフィナート、ホスホルアミダート（たとえば、３′−アミノホスホルアミダートおよびアミノアルキルホスホルアミダート）、チオノホスホルアミダート（ｔｈｉｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、および正常な３´−５´結合を有するボラノホスフェート、ならびにそれらの２´−５´結合類似体およびヌクレオシド単位の隣接する対が、３´−５´〜５´−３´、または２´−５´〜５´−２´で連結する反転極性を有する類似体などの、修飾オリゴヌクレオチド骨格が挙げられる。同様に、様々な塩、混合塩、および遊離酸の形態も含まれる。このような修飾骨格オリゴヌクレオチドの調製を伝える参照として、たとえば、米国特許第４，４６９，８６３号および第５，７５０，６６６号において提供されており、この全ては本明細書中に参照により援用される。アンチセンスオリゴヌクレオチドの設計および合成は、当業者に良く知られている［６２］。アンチセンスオリゴヌクレオチド配列設計用のコンピュータプログラムもまた入手可能である［６３］。
【００２８】
本明細書で使用されるように、ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）法に使用される二本鎖のｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）である。ＲＮＡｉは、二重鎖ＲＮＡを、より小さな二重鎖のセグメント（ｓｉＲＮＡ）に分割する天然に存在する遺伝子サイレンシング工程であり、標的ｍＲＮＡの分割を引き起こすタンパク質‐ＲＮＡ複合体（「ＲＩＳＣ」と呼ばれる）に関連する［６４］。多様な実施形態では、ｓｉＲＮＡのサイズは、標的ＣＸＣＬ１７ｍＲＮＡに対する相補性が変動する１８〜３０個の塩基対とすることができる。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、センス鎖およびアンチセンス鎖のいずれかまたは両方の５´末端および／または３´末端での不対塩基を含むことができる。一部の実施形態のｓｉＲＮＡは、２つの別々の鎖の二重鎖、または二重鎖領域を形成するためのヘアピン構造を形成する単一鎖であり得る。ｓｉＲＮＡの設計および合成は当業者に良く知られている［６５］。ｓｉＲＮＡの設計用のコンピュータプログラムもまた入手可能である［６６］。
【００２９】
別の態様では、このような処置を必要とする対象の腫瘍を処置する方法が提供される。本方法は、ケモカインＣＸＣＬ１７を、腫瘍中のマクロファージ数を増加させる有効量で対象に投与することを含む。本発明者らは、ＣＸＣＬ１７がマクロファージの走化性分子であることを見出した。マクロファージは、免疫応答および炎症反応で役割を果たすため、マクロファージの増加は、対象において抗腫瘍反応および他の有益な作用を引き起こす。この方法では、ＣＸＣＬ１７は商業的に入手でき（たとえば、Ｒ＆Ｄシステムズ（米国、ミソネタ州ミネアポリス）またはＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（米国、カリフォルニア州サンディエゴ）から）、または細菌（大腸菌）中でのＣＸＣＬ１７の発現により調製できる［３９、４０］。一部の実施形態では、ケモカインは、腫瘍への直接注射により投与できる。
【００３０】
さらなる態様では、ケモカインＣＸＣＬ１７レベルの増大に関連する疾患を診断する方法が提供される。本方法は、この疾患を有するリスクのある対象からの生物学的試料中のＣＸＣＬ１７のレベルを測定することと、測定レベルが対照レベルを超える際に対象がこの疾患を有していると判定することとを含む。この生物学的試料は、生物学的体液、生物学的組織、またはこれらの組み合わせとすることができる。生物学的体液は、限定するものではないが、尿、糞便、気管支肺胞洗浄液、唾液、精液、膣液、または母乳とすることができる。生物学的組織は、限定するものではないが、肺、消化管の組織、舌、口腔粘膜、膣または子宮頸部の組織とすることができる。本疾患の診断は、対照レベルを上回るＣＸＣＬ１７レベルの増加が、少なくとも２倍であり、かつ少なくともｐ＜０．０５の統計的有意性を備えている際に指し示される。
【００３１】
ＣＸＣＬ１７のレベルは、核酸またはタンパク質のレベルで測定できる。たとえば、細胞中に発現するＣＸＣＬ１７のｍＲＮＡ量、または気管支肺胞洗浄液中に存在するＣＸＣＬ１７タンパク質の量を測定できる。ｍＲＮＡの定量化は、限定するものではないが、ＰＣＲ、マイクロアレイ技術、またなノーザンブロットなどの方法を使用して実施できる［４６、４７］。タンパク質の定量化は、限定するものではないが、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫放射線アッセイ、蛍光免疫測定法、化学発光測定法、生物発光測定法、またはウエスタンブロッティング、（細胞により産生されるための）抗タンパク質特異性抗体を備えたＦＡＣＳなどの免疫検出法を使用して実施できる。ＲＮＡおよびタンパク質のレベルがほとんど相関しない場合、ＣＸＣＬ１７タンパク質の測定は想定される。対照レベルは、疾患を有していない１つまたは複数の対象の対照集合由来のＣＸＣＬ１７レベルの平均（ａｖｅｒａｇｅまたはｍｅａｎ）値となり得る。一部の実施形態では、対象が疾患を有しているとの診断の後に本明細書に記載される処置を行うことができる。たとえば、この診断の後に、過敏性間質性肺炎と診断された対象にステロイド化合物を投与することを含む処置を行い、または概してＣＸＣＬ１７の活性レベルを低くする物質の治療上有効量を対象に投与することを含む処置を行うことができる。
【００３２】
投与の目的のために、本発明のタンパク質および核酸化合物を、医薬組成物として製剤化してもよい。本化合物は、対象となる特定の障害を処置するのに有効であり、好ましくは、患者に対して許容可能な毒性を有する量でこの組成物中に存在することができる。また、本発明の医薬組成物は、薬学的に許容可能なキャリアーを含むことができる。このキャリアーは、溶媒、分散媒体、ビヒクル、コーティング剤、希釈剤、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝液、キャリアー溶液、懸濁液、コロイドなどの全てまたはいずれかとすることができる。薬学的活性物質用のこのような媒体および薬剤の使用は当業者に良く知られている。補助的活性成分もまた、本組成物に組み込むことができる。投与される化合物の量は、処置される対象、対象の重量、投与方法、および処方する医師の判断に依存する。製剤は、適切な方法で、かつ許容される手順に従い、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．  １９９０に開示されるような手順を参照して調製することができる。
【００３３】
投与経路は、経口、舌下、頬側、経鼻、吸引、非経口（腹腔内、臓器内、皮下、皮内、筋肉内、関節内、静脈内（中心静脈、肝静脈、末梢静脈）、リンパ内、心臓内、動脈内投与、またはそれらの組み合わせとすることができる。意図する投与様式に応じて、医薬組成物は、たとえば、錠剤、座薬、ピル、カプセル、粉剤、液剤、懸濁剤、軟膏、またはローションなどの固体、半固体、または液体の剤形の形態であってもよく、好ましくは、精確な用量の単一投与に適した剤形単位であってもよい。腫瘍内注射または腫瘍の脈管構造への注射は、分散した固体状のアクセス可能な腫瘍のために特異的に考慮されている。局所投与、領域投与、または全身投与もまた適切であってもよい。４ｃｍ超の腫瘍に、約４〜１０ｍｌの容量を投与でき、４ｃｍ未満の腫瘍に約１〜３ｍｌの容量を使用できる。
【００３４】
核酸化合物のｉｎ  ｖｉｖｏの投与では、核酸は、遊離（または「ネイキッド」）核酸として投与することができ、または細胞の標的への核酸の送達を増大させる送達剤と共に製剤化できる。送達剤の例は、限定するものではないが、リポソーム、陽イオン性脂質、ペグ化ポリカチオン、陽イオン性ブロックコポリマー、およびポリエチレンアミン複合体が挙げられる［４８］。
【００３５】
ＣＸＣＬ１７は、発見された最終的なケモカインであった［１、１４］。タンパク質スレッディング（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）技術を使用して、ＣＸＣＬ１７はＣＸＣＬ８およびＣＸＣＬ１４との構造上類似性に基づきケモカイン様構造を有することが発見された［１４］。ＣＸＣＬ１７は、他の大部分のケモカインの特徴であるタンパク質中の２つのジスルフィド結合を固着する４つの古典的なシステインを含む、６つのシステインを含む。さらに、ＣＸＣＬ１７は、第１の２つのシステインの間のグルタミン酸、ケモカインのＣＸＣサブファミリーの一員としてＣＸＣＬ１７を同定する因子を有する。その後のいくつかの研究で、肝細胞癌（ＨＣＣ）および膵のう胞性腫瘍（ＩＰＭＮ）を含む癌モデルにおいてＣＸＣＬ１７の相関が示された［１５〜１７］。
【００３６】
ＣＸＣＬ１７のアミノ酸配列は、マウスのオルソログと７１％の類似性を示し、ＣＸＣＬ８様フォールド（ｆｏｌｄ）を示す。第１の３つのシステインは、タンパク質のＣＸＣＬ８様フォールドを反映する、ＣＸＣＬ８の３つのシステインを整列させている。ＣＸＣＬ１７構造は、ＣＸＣＬ８様フォールドファミリーの一員であるＣＣＬ５およびＣＣＬ４の構造と比較される。多様な種由来のＣＸＣＬ１７配列は、以下の受入番号：ＨＧＮＣ：１９２３２（ヒトＣＸＣＬ１７）（ＨＵＧＯ  Ｇｅｎｅ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｄａｔａｂａｓｅ；ホモログ：ＭＧＩ：２３８７６４２（マウスＣｘｃｌ１７）（ＭＧＩデータベース）；ＲＧＤ：１３０４７１７（ラットＣｘｃｌ１７）（ＲＧＤデータベース）；ヌクレオチド配列：ＲｅｆＳｅｑ：ＮＭ１９８４７７（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ）；タンパク質配列：ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ６ＵＸＢ２（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅｂａｓｅ）を有する（全て参照として本明細書に援用される）。ケモカインＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１２およびＣＸＣＬ１４と比較したＣＸＣＬ１７のタンパク質配列アライメントを図１０に示す。
【００３７】
本発明者らの研究により、正常部位および疾患部位の両方の免疫系におけるＣＸＣＬ１７の機能的な走化性の役割といった最も徹底した特徴が示された。まず、本発明者らは、ＢＩＧＥ（遺伝子発現の身体指数）と呼ばれる総合ヒト遺伝子発現データベースにおいてＣＸＣＬ１７の発現を分析することにより、重要な粘膜性ケモカインとしてＣＸＣＬ１７を同定した。このスクリーニングでは、粘膜組織で非常にかつ特異的に発現する物質を探索する４８全てのヒトケモカインリガンドの発現を分析した。このスクリーニングから、３つの強力かつ特異的に発現する粘膜性ケモカインである、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１４およびＣＸＣＬ１７を同定した。ＣＣＬ２８およびＣＸＣＬ１４はいずれも広く研究されており、ヒトの疾患における走化性活性および役割により特徴付けられている。さらに、ＣＣＬ２８は、すでに粘膜性ケモカインとして同定されている。逆に、ＣＸＣＬ１７に関しては、本発明者らの研究の開始時では、文献中３つの論文のみがＣＸＣＬ１７について記載していた。ＢＩＧＥデータベース中の発現パターンは、ＣＸＣＬ１７が、腸および肺の組織中で強力かつ特異的に発現しており、気管、気管支、および胃で最も高く発現することが示された。このパターンにより、ＣＸＣＬ１７が消化系および呼吸器系の重要な粘膜性ケモカインであることが示された。
【００３８】
マイクロアレイ発現データを、正常なヒト粘膜組織の定量性リアルタイムＰＣＲ（Ｑ−ＰＣＲ）および免疫組織化学（ＩＨＣ）染色の両方を使用して確認した。これらの実験では、ＢＩＧＥデータベース（マイクロアレイデータ）からの知見を裏付け、発展させた。
【００３９】
従来の公報では、ＣＸＣＬ１７が、抗菌活性を有することが示された２つのケモカインである、ＣＣＬ２８およびＣＸＣＬ１４［１、１４］と構造的に関連することが示されていた［１８〜２０］。興味深いことに、本発明者らは、ＣＸＣＬ１７が広範囲の微生物に対して顕著な抗菌活性を有しており、このケモカインが粘膜部位のマイクロビオームの形成に関与することを示唆することを見出した［２１］。ＣＸＣＬ１７は、細菌膜を直接破壊することによりこの活性を媒介する［２１］。これらの知見により、ＣＸＣＬ１７のレベルがヘリコバクター・ピロリに感染することにより引き起こされる潰瘍など、微生物により媒介される腸または肺疾患の開始または進行に影響する可能性がある［２２］。
【００４０】
走化性アッセイは、免疫系細胞がＣＸＣＬ１７に特異的に応答するかどうかを判定するために実施された。これらアッセイは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方で実施した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、組み換えＣＸＣＬ１７に対する走化性応答に関する初代マウス細胞および細胞株の両方を試験するトランスウェル走化性アッセイを利用した。この結果により、単球性細胞株（単球、マクロファージ、樹状細胞）がＣＸＣＬ１７に応答して走化性を付与することが示された。この走化性応答は、プロスタグランジンＥ−２（ＰＧＥ−２）で細胞を前処置することにより増大する。さらに、これらに応答する細胞株の百日咳毒素（ＰＴＸ）の処置が走化性を良好に抑止することにより、ＣＸＣＬ１７が、他の知られているケモカイン受容体のように、Ｇαｉを介してシグナリングするクラスＡＧＰＣＲを介した走化性を媒介することが示唆された［７、８、２３］。さらなるｉｎ  ｖｉｖｏでの走化性アッセイの実験を、ＣＸＣＬ１７またはＰＢＳ（対照となる生理食塩水溶液）のいずれかをマウスの腹腔内注射により投与した後、腹腔に動員された細胞を収集かつ分析することにより実施した。動員した特異的細胞型は、細胞系譜特異的マーカーで染色し、フローサイトメトリーにより結果を分析することにより判定した。これらの実験から、ＣＸＣＬ１７の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を受けたマウスの腹腔は、対照の腹腔内注射を受けたマウスよりも４８時間後のマクロファージ数が顕著に多いことが見いだされた。このことは、ＣＸＣＬ１７がｉｎ  ｖｉｖｏでマクロファージの動員を媒介することを示唆するものである（図７）。
【００４１】
その後、細胞集合の変化について、Ｃｘｃｌ１７欠損（−／−）マウスを分析した。このことは、マウスの免疫臓器または粘膜組織中の細胞集合の総合的な分析に関するものであった。Ｃｘｃｌ１７（−／−）マウスは、野生型（ＷＴ）マウスと比較して肺のマクロファージが顕著に少ないことが見出された（図８および９）。まとめると、これらのデータは、ＣＸＣＬ１７が肺組織へ正常に戻るマクロファージの一部の集合に対する主要な動員因子であることを示唆するものである。これらのマクロファージは、ｉｎ  ｖｉｖｏで、炎症の調節に対する免疫応答の開始および癌または病原菌に対する免疫監視から、多様な機能を媒介する。
【００４２】
また、市販の試薬を使用して本発明者らが開発したＥＬＩＳＡを使用して、ＣＸＣＬ１７を測定した。（健常対象と比較して）特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する患者の気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬｆ）中でＣＸＣＬ１７の顕著な増大が観察された［２１］。興味深いことに、この疾患の特徴は、他の間質性肺疾患と比較して肺に動員されるマクロファージ数が大きく増加することである［２４、２５］。
【００４３】
まとめると、これらのデータは、ＣＸＣＬ１７が最も重要なマクロファージ走化性因子の１つであり、粘膜部位に対するマクロファージの主要な動員シグナルであることを示唆している。炎症性応答を制御し、かつ炎症性応答に関与する中心的な細胞としてマクロファージが重要であると仮定する場合、これらの知見により、たとえば、ＣＸＣＬ１７に対する抗体を患者に投与することによるＣＸＣＬ１７の作用の中和により、肺および腸を含む粘膜組織中の炎症反応の発生または過程が変化するべきであることが示唆される。
【００４４】
一部のケモカインは、特定のヒト疾患のバイオマーカーとして同定されてきた（１１５９０１９８［２５、２６］、２２１３６９７４）。ケモカインは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）により容易に測定できる小さな分泌型タンパク質であるため、優れたバイオマーカーに特に適している。さらにこれらの作用機構により、細胞は、勾配を産生するために、短い時間内に高濃度でケモカインを産生できる。このことから、ケモカインが多様な疾患との関連において示す多くの特異性と併せて、この分類の分子がヒト疾患のバイオマーカーの優れた候補となる。
【００４５】
ＣＸＣＬ１７の発現パターンおよびＣＸＣＬ１７がヒトの肺疾患で増加するという本発明者らの知見を考慮すると、ＣＸＣＬ１７をヒト疾患のバイオマーカー、または疾患を処置するための新薬開発用の標的として使用できる。
【００４６】
マイクロアレイ、遺伝子発現、および免疫組織化学的染色データで示されるように、ＣＸＣＬ１７は、いくつかの粘膜組織、特に消化管および肺（気管支および気管）の組織に強力に発現する。さらに、ＣＸＣＬ１７は重要なマクロファージ走化性因子であり、このケモカインが、発現レベルが上昇する疾患における浸潤性マクロファージ／単球の鍵となる修飾因子となりやすいことが示唆されている。これらのデータに基づき、ＣＸＣＬ１７の調節は、ＣＸＣＬ１７の発現を修飾する、またはＣＸＣＬ１７のタンパク質産物を標的化するかのいずれかにより、ＣＸＣＬ１７が増加する疾患を処置する新規治療手法を表す。
【００４７】
本発明者らは、ＣＸＣＬ１７が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）といった２つのヒト疾患状態において恒常性レベルを超えて増加することをすでに見出している。興味深いことに、ＩＰＦの特徴は、他の間質性肺疾患と比較して肺へのマクロファージの強力な流入である［２４］。同様に、研究により、マクロファージは、ＵＣの病因および発症において重要な役割を果たし得ることが示唆されてきた［２７〜２９］。依然として、ＵＣに関する新規の生物学に基づく治療が多く必要である［３０］。ＣＸＣＬ１７は、これらの疾患状態にマクロファージを動員する重要な因子である。従って、ＣＸＣＬ１７遺伝子またはタンパク質産物を標的化することは、これらの疾患に罹患する患者に有益な新規方法を提供する。特に、このことは、ＩＰＦ患者に適用可能なＦＤＡに認可された治療ではないことを考慮すると、極めて重要である。
【００４８】
ＣＸＣＬ１７を標的化する治療は、２つの方法で提供される。１つの実施形態では、ＣＸＣＬ１７に対して特異的に標的化するモノクローナル抗体を使用して、ＣＸＣＬ１７の走化性活性を防止することにより、間接的にマクロファージの動員を遮断する。モノクローナル抗体療法は、患者に対して顕著に臨床的な利益を提供することが以前より示されており、実際にいくつかの療法の抗体は、関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｒｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、クローン病、および乳癌などの兆候に関して米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により認可されている［３１〜３４］。現在、完全なヒトの抗体は、特定の抗原が既知であり、モノクローナル抗体の開発に利用可能である場合、当業者により開発できる［３５〜３８］。この場合、ＣＸＣＬ１７を、商業的に入手できるか、あるいは、細菌（大腸菌）中に発現させることにより調製できる［３９、４０］。治療用モノクローナル抗体は、概して静脈内（ｉ．ｖ．）に投与され、血流を介して体内中に広まる。この送達経路は、迅速に達成することのできる比較的簡単な投与方法である。さらに、この療法の気管内滴下は、ＩＰＦに特定の治療部位を提供できる。この抗体の用量は、１〜２０日ごとの点滴静注による、約１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重とすることができる［６８］。
【００４９】
第２の実施形態では、ＣＸＣＬ１７は、遺伝子発現レベル時に標的化される。アンチセンス療法では、細胞内転写機構によるｍＲＮＡへの有効な転写を遮断することにより遺伝子発現を調節する［４１〜４３］。この治療手法によりＣＸＣＬ１７タンパク質の盛んな産生を防止することができる。このため、疾患部位に動員される細胞の特質を完全に無効にすることができる。一部の実施形態では、この療法は、静脈内投与、または疾患部位（肺／気管、消化管）への直接投与により、これらの部位でのＣＸＣＬ１７媒介型走化性反応を特異的に遮断できる。この用量は、約１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重とすることができる［６９］。
【００５０】
また、組み換えＣＸＣＬ１７は、さらなる実施形態で癌療法として使用することもできる。この実施形態では、腫瘍に組み換えＣＸＣＬ１７を直接注入することにより、腫瘍部位に動員されるマクロファージ数を増大させることができる［２１］。これらのマクロファージは、免疫細胞に対する腫瘍抗原を取り込み、かつ提示する抗原提示細胞を増加させ、これにより、腫瘍と戦う体内の能力を増大させることが予測される［１７］。異なるマクロファージのサブセットは、炎症反応に差次的に関与する［４４］。従って、別の実施形態では、ＣＸＣＬ１７により動員されるマクロファージは、腫瘍に関連する炎症反応を調節し、かつ、腫瘍の発達に対する体内の抵抗を高めることができる。このＣＸＣＬ１７の用量は、腫瘍内投与あたり約１〜５ｍｇとすることができる［７０］。
【００５１】
本発明は、添付する実施例を参照することにより理解し得るが、この実施例は例示のみを目的とし、本発明の範囲を限定するものとはいかなる意味でも解釈されない。
【００５２】
実施例１
アッセイ
健常なまたは疾患のあるヒトの対象からの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬｆ）試料を、一次モノクローナル抗ヒトＣＸＣＬ１７抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ）で９６ウェルプレート（ＮＵＮＣ、ニューヨーク州ロチェスター）をコーティングすることによるサンドイッチＥＬＩＳＡにより、ＣＸＣＬ１７に関する分析を行った。組み換えヒトＣＸＣＬ１７（Ｒ＆Ｄシステムズ）を標準物質として使用した。その後、結合した標準物質および試料を、ポリクローナル抗ヒトＣＸＣＬ１７抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ）および西洋ワサビペルオキシダーゼ結合型マウス抗ヒト検出抗体（アブカム、マサチューセッツ州ケンブリッジ）と共にインキュベートすることにより検出した。この結合を、ＴＭＢ（ＫＰＬ、メリーランド州ゲイザースバーグ）を用いて視覚化した。この反応を、２Ｎ  Ｈ2ＳＯ4を用いて停止させ、４５０ｎｍで吸光度を読み取った。
【００５３】
結果
ＣＸＣＬ１７は、特徴的なケモカインフォールドを有する１３．８ｋＤａのタンパク質をコードする遺伝子産物である［１４］。この最初のＣＸＣＬ１７の発見では、胃および気管で発現したケモカインとして分類された［１４］。本発明者らは、この知見を確証し、かつ拡大した。遺伝子発現を試験する新規手法であるマイクロアレイ分析を使用して、１０５超の正常なヒトの組織および臓器のヒト遺伝子発現の総合的なデータベースを作成した。分析のために生物情報学的手法を使用して、このデータベースを、粘膜組織内に強力かつ特異的に発現するケモカインに関してスクリーニングした。このスクリーニングから、粘膜ケモカインとしてのＣＸＣＬ１７を同定した（図１および２）。特定の粘膜組織内に強力に発現することに加え、ＣＸＣＬ１７がこれら粘膜組織内部に分散して発現すると分析された。このことは、ＣＸＣＬ１７の発現を舌内部で分析する際に例示される。この時、舌のマイクロ発現データベースを使用して、ＣＸＣＬ１７が舌の上皮にのみ発現することが見出された（図３）。ＣＸＣＬ１７の発現を、マイクロアレイデータベース中で分析する際、本発明者らは、発現が最も高い部位は、気管および気管支であることを観察した（図１および５）。本発明者らは、ＣＸＣＬ１７が小腸にも発現することを確証した（図４）。この知見に基づき、ヒトの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬｆ）試料中のＣＸＣＬ１７のレベルを、健常な対照および間質性肺疾患（過敏性肺炎（ＨＰ）または間質性肺線維症（ＩＰＦ））と以前に診断された患者から分析した（図６）。驚くべきことに、ＣＸＣＬ１７は、肺疾患と知られていない患者と比較して間質性肺疾患を有する患者において増大した。ＣＸＣＬ１７は、ＨＰと比較してＩＰＦにおいて増大し、このことは、ＣＸＣＬ１７が２つの異なる間質性肺障害において異なる役割を果たし得ることを示唆している。現在、ＨＰとＩＰＦとを区別する信頼できる診断方法はない。これら両方の障害においてＣＸＣＬ１７のレベルが高く、ＣＸＣＬ１７が２つの疾患の間で差次的に検出されるため、ＣＸＣＬ１７を新規バイオマーカーとすることができる。
【００５４】
ＩＰＦを有する患者は概して、進行性の呼吸窮迫（呼吸困難（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ  ｂｒｅａｔｈｉｎｇ））を呈しており、また、咳およびラ音（吸引中の肺の雑音）を呈し得る。鑑別診断は、同様の症状を呈し得る他の潜在的な原因（アスベスト曝露、化学療法剤、関節リウマチ、強皮症、過敏性肺炎（ＨＰ）、混合性結合組織疾患、または放射線線維症）を除外することを目的とする。
【００５５】
現在、認知されたものの中で満足できる処置は存在せず、従って、この作用の一部は、患者が確立した処置が存在する異なる疾患（すなわち、ＨＰ）を有さないことを確認することを意図する。ＨＰでは、コルチステロイドを処置のために使用してきた。除外するべき別の疾患は、非特異的間質性肺炎（ＮＳＩＰ）である。
【００５６】
潜在的な処置を試験する現在の研究は、シクロホスファミド、ピルフェニドン、アザチオピン（ａｚａｔｈｉｏｐｉｎｅ）が挙げられる。しかしながら、ＩＰＦの重症度は、予後が非常に悪い。大部分の患者は、診断から３年以内に死亡する。別のより抜本的な選択肢として肺移植が挙げられる。
【００５７】
ＣＸＣＬ１７の標的化は、これらの疾患の処置の補助を目的とする。これらの障害を有する患者では、細菌感染症が増大することが観察されてきた。興味深いことに、本発明者らは、ＣＸＣＬ１７が抗菌活性を有することを見出した。従って、間質性肺疾患のＣＸＣＬ１７レベルの変化は、これらの微生物感染症の状態を有する患者の肺の感受性に影響し、本明細書中に提供される処置を導くことが見出されると考えられる。
【００５８】
実施例２
組み換えＣＸＣＬ１７の腹腔内注射
３匹の組み換えマウスＣｘｃｌ１７の腹腔に、マウス１匹あたり１００ｎｇを注射した後、ＰＢＳビヒクルを注射したマウス（図Ｃ〜Ｅ）と比較して、４８時間後に少量ではあるが、顕著なマクロファージ（Ｍφ）の増大が観察されたが、樹状細胞（ＤＣ）の増加は観察されなかった（図Ｆ〜Ｈ）。これらの特異的細胞の集合は、細胞特異的抗体（Ｆ４／８０、マクロファージ；ＣＤ１１ｃ、ＤＣ；Ｇｒ−１、顆粒球）で細胞を染色することにより判定した。
【００５９】
実施例３
図８を参照して、肺細胞を野生型またはＣｘｃｌ１７（−／−）のマウスから収集した。肺組織を機械的に破壊し、次いでコラゲナーゼで処置することにより肺リンパ系細胞を取得した。この結果として得られる細胞懸濁液をふるいにかけた後、単一細胞を収集した。その後、フローサイトメトリーによる分析のため、蛍光色素結合型抗体で細胞を染色した。前方散乱対側方散乱によりリンパ系細胞を同定した。マクロファージの集合（Ｆ４／８０＋ＣＤ１１ｂｈｉｇｈ細胞）（Ｂ〜Ｄ）を分析し、ＷＴマウスの肺と比較してＣｘｃｌ１７（−／−）の肺のマクロファージのパーセンテージが顕著に減少していることが観察された。図８Ａ〜Ｄのプロットは、一群あたりｎ＝５で、２つの別々の実験のＦＡＣＳプロットを表している。
【００６０】
図９は、ＷＴマウスと比較して、Ｃｘｃｌ１７（−／−）マウスでは肺のマクロファージ数が減少したことを示すグラフである。このグラフは、ＷＴまたはＣｘｃｌ１７（−／−）マウスの肺から回収したＦ４／８０＋ＣＤ１１ｂ＋細胞の数を示す。後者のマウスは、肺のマクロファージを特徴付けるこれらのマーカーを発現する細胞が顕著に少ない。
【００６１】
実施例４
患者の治療のために、ＣＸＣＬ１７に対するモノクローナル抗体は、ヒトＣＸＣＬ１７でマウスを免疫化することにより産生できる。いくつかの免疫化の後に、マウスの血清中の抗ＣＸＣＬ１７抗体の存在を、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）により血清を試験することによりアッセイできる。抗ＣＸＣＬ１７抗体の存在を所定のマウスの血清中に確認すると、このマウスの脾臓は、ＰＥＧ駆動融合または電気的技術のようないくつかの技術を使用するモノクローナル抗体の産生に適した骨髄腫と融合している可能性がある。この結果として得られる雑種細胞を、ＨＡＴ培地において選択し、かつＥＬＩＳＡにより抗ＣＸＣＬ１７抗体の産生のためにスクリーニングすることができる。また、陽性抗体では、ＴＨＰ−１細胞のＣＸＣＬ１７−駆動走化性の阻害により中和活性が試験される。抗−ＣＸＣＬ１７は、正常なヒトの気管、気管支、舌、結腸、または小腸の免疫組織化学染色によりスクリーニングすることができる。また、抗体を、ＴＨＰ−１細胞中のＣＸＣＬ１７駆動型カルシウム流を阻害する能力に関してスクリーニングすることもできる。
【００６２】
マウス抗体のＦｃ領域とヒトのＦｃ領域を置換することにより、マウス抗体をヒト化することができる。あるいは、この抗体の結合部位の配列決定を行うことができ、その後、分子生物学的な技術（たとえば、クローニング）を使用して、結合部位を完全にヒトの抗体に配置することができる。これらの抗体発現を、哺乳類細胞培養物中で実施することができ、抗体はアフィニティクロマトグラフィーにより精製できる。精製した抗体のエンドトキシン含有量を試験することができ、また、Ｂｉａｃｏｒｅの器具を使用して、品質管理のためにモニタリングすることもできる。
【００６３】
有害反応をモニタリングするために、医学的な監督の下、１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で抗ＣＸＣＬ１７モノクローナル抗体を所定の患者に３時間静脈内投与できる。この用量／レジメンを、２週間から２ヶ月ごとに繰り返すことができる。炎症反応、疼痛、膨潤、血液の単球数の変化、炎症性浸潤の低減、疾患スコア（症状）の低減といった結果が予測される。
【００６４】
実施例５
ＣＸＣＬ１７を標的化するアンチセンス化合物で患者を処置することができる。ＲＮＡｉ技術に基づくこの方法は、特定の遺伝子発現を標的化し、かつ発現停止させるものである［７１］。このことは、小さな二重鎖の低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が、短い単一鎖に処置された際に達成される。この細胞自身のＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を使用して、単一鎖は、切断のためにタグ化される相補的な標的ｍＲＮＡと結合し、このことにより、好結果のｍＲＮＡの鋳型の翻訳を防止する［７１］。治療の設定の際、ＲＮＡｉ療法を使用して、腫瘍の生存／増殖に必要とされる特異的な遺伝子発現プログラムを遮断し、または自己免疫疾患を媒介する細胞の動員または機能を遮断することにより、癌または自己免疫疾患などの疾患を処置することができる。
【００６５】
Ｔａｂｅｒｎｅｒｏらは、近年、成功したフェーズＩの臨床試験において子宮内膜癌の肝臓の転移を処置する臨床試験でＲＮＡｉを使用した［６９］。また、Ｔｅｋｍｉｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎは、固形腫瘍を処置するためのＲＮＡｉ療法（ＰＬＫ−１（ポロ様キナーゼ１）を標的化するＴＫＭ−ＰＬＫ１またはＴＫＭ−０８０３０１と呼ばれる化合物）を現在試験している。このフェーズＩの臨床試験結果はまだ公開されていないが、この企業は、好ましい結果を公開している（ウェブサイト：ｔｅｋｍｉｒａｐｈａｒｍ．ｃｏｍ／Ｐｒｏｇｒａｍｓ／Ｐｒｏｄｕｃｔｓ．ａｓｐ＃ｐｌｋ１より）。ＲＮＡｉ療法はまた、メラノーマ患者でのフェーズＩ臨床試験において好ましい結果となることが報告されている［７２］。
【００６６】
これらの各試験は、治療化合物の投与経路として静脈内（ｉ．ｖ．）の注入を使用した。ＲＮＡｉ療法の送達経路は、ＲＮＡｉがｉｎ  ｖｉｖｏの設定［７１．７２，６９］で利用したナノ粒子をうまく阻害して癌へのＲＮＡｉの送達を確実にすることが重要である。
【００６７】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの効果的な遺伝子サイレンシングに関する主要な課題は、サイトゾル中のＲＩＳＣ（ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体）の関与を引き起こす増殖性細胞の取り込みによる適切な臓器（複数可）へのｓｉＲＮＡの送達である。送達の成功は、非経口投与の後の送達および取り込みに好ましい「薬剤様」特性を与えるｓｉＲＮＡ製剤に依存する。
【００６８】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を使用してｓｉＲＮＡを送達させることができ、多様な種における遺伝子発現をサイレンシングすることが示されている［７３］。ＣＸＣＬ１７のｓｉＲＮＡを使用するために、［６６］に記載されるアルゴリズムを使用して［６５］に記載されるようにこれらを設計することができる。［６３］に記載されるアルゴリズムを使用したアンチセンスオリゴヌクレオチド［６２］を用いて同様の手法を使用することができる。これらのＣＸＣＬ１７のｓｉＲＮＡの活性を、（ＣＸＣＬ１７のｍＲＮＡで遺伝子導入したＨＥＫ−２９３細胞のような）ＣＸＣＬ１７産生細胞でＣＸＣＬ１７脂質ナノ粒子を共培養することによりｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験することができる。ＣＸＣＬ１７を産生するＨＥＫ−２９３細胞の能力を、これら細胞の培養液の上清中のＣＸＣＬ１７のレベルを定量化することにより測定することができる。
【００６９】
ＣＸＣＬ１７のアンチセンスオリゴヌクレオチド配列およびｓｉＲＮＡ配列の例は以下の通りである。
ａ．＊により記載されるホスホロチオエート骨格を産生するために合成したオリゴ
部位１
５’  Ａ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ａ  ３’（配列番号６）
部位２
５’  Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ａ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ａ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ  ３’（配列番号７）
ｂ．ＣＸＣＬ１７のｓｉＲＮＡ配列；上部‐ＲＮＡ，下部‐ＤＮＡ
部位１
５’  ＧＵＡＧＣＡＡＡＣＡＧＡＡＧＵＣＡＡＵＡＡＡＵａｔ（配列番号８）
ＵＵＣＡＵＣＧＵＵＵＧＵＣＵＵＣＡＧＵＵＡＵＵＵＡＵＡ  ５’（配列番号９）
部位２
５’  ＧＡＡＵＧＵＧＡＧＵＧＣＡＡＡＧＡＵＵＧＧＵＵｃｃ（配列番号１０）
ＵＵＣＵＵＡＣＡＣＵＣＡＣＧＵＵＵＣＵＡＡＣＣＡＡＧＧ  ５’（配列番号１１）
【００７０】
ｓｉＲＮＡを、免疫賦活性の潜在力を低減するように改変することができる［７４］。脂質ナノ粒子は、非経口投与の後に腹腔周辺で分布できる、８０〜１００ｎｍの粒径を有する［７５］。これらのＣｘｃｌ１７‐脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、［７６］に記載されるようにマウス中の大腸炎のＤＳＳモデルで試験することができ、この療法の利点は、処置したマウス中の大腸炎の発症（または発症なし）により容易に明らかとなることである。
【００７１】
患者に使用する場合は、１ヶ月にわたり２用量として規定される療法周期で、２週間ごとに、１．２ミクロンフィルターの増設装置を使用する制御式注入装置を介して、１５分の静脈内注入を中心とする用量（０．１〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重）でＣＸＣＬ１７−ＬＮＰを使用できる。リポソーム産物を用いて観察することのできる融合関連反応のリスクを低減する融合の３０分前に、デキサメタゾン（２０ｍｇ、ｉｖ）、アセトアミノフェン（６５０ｍｇ、経口）、ジフェンヒドラミン（５０ｍｇ、ｉｖ）およびラニチジン（５０ｍｇ、ｉｖ）を患者に前投与することができる。
【００７２】
本疾患の症状の改善を含む結果が予測される。肺の間質性または炎症性疾患の場合、患者は、呼吸機能の向上を示すことが予測される。炎症性消化管疾患の場合、様々な部位に観察される炎症の低減が予測される。これらのパラメータを、確立した技術（たとえば、腸の場合には大腸内視鏡検査、肺の場合にはＸ線および他の放射線系イメージング技術、ならびに肺機能の物理的な測定）によりモニタリングすることができる。腫瘍の発達は、ＣＴスキャンによりモニタリングできる。
【００７３】
実施例６
患者の腫瘍の処置のために、ＣＸＣＬ１７は、バキュロウイルス発現系（昆虫細胞）の発現により産生することができる。ＣＸＣＬ１７遺伝子を適切な発現ベクターにクローニングした後、細胞を、３７℃でインキュベーションする。細胞からのＣＸＣＬ１７タンパク質産物をＥＬＩＳＡによりモニタリングできる。ＣＸＣＬ１７活性を、ＴＨＰ−１細胞のカルシウム流および走化性により評価できる。組み換えＣＸＣＬ１７タンパク質を、高圧液体クロマトグラフィーにより精製できる。組み換えＣＸＣＬ１７を、２週間〜２ヶ月ごとに１ｍｇ／ｋｇ体重で腫瘍部位に注入できる。腫瘍量を、ＣＴスキャンによりモニタリングすることができ、生検を介してマクロファージの浸潤をモニタリングできる。生検のマクロファージの含有量を、ＣＤ６８などのマクロファージに特異的な表面マーカーを使用した免疫組織化学的検査によりモニタリングできる。腫瘍の寸法の縮小、転移性病巣の阻害、および患者の生活の質の総合的な改善などの結果が予測される。
【００７４】
消化器系（口腔から結腸まで）および肺の癌では、ＣＸＣＬ１７は、抗原提示の増大、腫瘍の細胞傷害性、および一般的な免疫監視を含む抗腫瘍作用を増大するマクロファージを動員することによる陽性の治療作用を有することが予測される。
【００７５】
参照資料
以下の出版物が参照として本明細書に援用される。
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１０．Ｚｌｏｔｎｉｋ，  Ａ．，  Ｊ．  Ｍｏｒａｌｅｓ，  ａｎｄ  Ｊ．  Ａ．  Ｈｅｄｒｉｃｋ．  １９９９．  Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：１−４７．
１１．Ｈｏｒｕｋ，  Ｒ．  ２００１．  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ  １２：３１３−３３５．
１２．Ｋｎａｕｔ，  Ｈ．，  Ｃ．  Ｗｅｒｚ，  Ｒ．  Ｇｅｉｓｌｅｒ，  ａｎｄ  Ｃ．  Ｎｕｓｓｌｅｉｎ−Ｖｏｌｈａｒｄ．  ２００３．  Ａ  ｚｅｂｒａｆｉｓｈ  ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｃｘｃｒ４  ｉｓ  ａ  ｇｅｒｍ−ｃｅｌｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４２１：２７９−２８２．
１３．Ｚｏｕ，  Ｙ．  Ｒ．，  Ａ．  Ｈ．  Ｋｏｔｔｍａｎｎ，  Ｍ．  Ｋｕｒｏｄａ，  Ｉ．  Ｔａｎｉｕｃｈｉ，  ａｎｄ  Ｄ．  Ｒ．  Ｌｉｔｔｍａｎ．  １９９８．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４  ｉｎ  ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：５９５−５９９．
１４．Ｐｉｓａｂａｒｒｏ，  Ｍ．  Ｔ．，  Ｂ．  Ｌｅｕｎｇ，  Ｍ．  Ｋｗｏｎｇ，  Ｒ．  Ｃｏｒｐｕｚ，  Ｇ．  Ｄ．  Ｆｒａｎｔｚ，  Ｎ．  Ｃｈｉａｎｇ，  Ｒ．  Ｖａｎｄｌｅｎ，  Ｌ．  Ｊ．  Ｄｉｅｈｌ，  Ｎ．  Ｓｋｅｌｔｏｎ，  Ｈ．  Ｓ．  Ｋｉｍ，  Ｄ．  Ｅａｔｏｎ，  ａｎｄ  Ｋ．  Ｎ．  Ｓｃｈｍｉｄｔ．  ２００６．  Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：  ｎｏｖｅｌ  ｈｕｍａｎ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ−  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ａｔｔｒａｃｔｉｎｇ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｂｙ  ｆｏｌｄ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７６：２０６９−２０７３．
１５．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ，  Ｅ．  Ｊ．，  Ｒ．  Ｈｅａｄ，  Ｄ．  Ｗ．  Ｇｒｉｇｇｓ，  Ｄ．  Ｓｕｎ，  Ｒ．  Ｊ．  Ｅｖａｎｓ，  Ｍ．  Ｌ．  Ｓｗｅａｒｉｎｇｅｎ，  Ｍ．  Ｍ．  Ｗｅｓｔｌｉｎ，  ａｎｄ  Ｒ．  Ｍａｚｚａｒｅｌｌａ．  ２００６．  ＶＣＣ−１，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ，  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３５０：７４−８１．
１６．Ｍｕ，  Ｘ．，  Ｙ．  Ｃｈｅｎ，  Ｓ．  Ｗａｎｇ，  Ｘ．  Ｈｕａｎｇ，  Ｈ．  Ｐａｎ，  ａｎｄ  Ｍ．  Ｌｉ．  ２００９．  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＶＣＣ−１  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｖａｓｉｏｎ．  Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｓｉｎ  （Ｓｈａｎｇｈａｉ）  ４１：６３１−６３７．
１７．Ｈｉｒａｏｋａ，  Ｎ．，  Ｒ．  Ｙａｍａｚａｋｉ−Ｉｔｏｈ，  Ｙ．  Ｉｎｏ，  Ｙ．  Ｍｉｚｕｇｕｃｈｉ，  Ｔ．  Ｙａｍａｄａ，  Ｓ．  Ｈｉｒｏｈａｓｈｉ，  ａｎｄ  Ｙ．  Ｋａｎａｉ．  ２０１２．  ＣＸＣＬ１７  ａｎｄ  ＩＣＡＭ２  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｓｔａｇｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １４０：３１０−３２１．
１８．Ｈｉｅｓｈｉｍａ，  Ｋ．，  Ｈ．  Ｏｈｔａｎｉ，  Ｍ．  Ｓｈｉｂａｎｏ，  Ｄ．  Ｉｚａｗａ，  Ｔ．  Ｎａｋａｙａｍａ，  Ｙ．  Ｋａｗａｓａｋｉ，  Ｆ．  Ｓｈｉｂａ，  Ｍ．  Ｓｈｉｏｔａ，  Ｆ．  Ｋａｔｏｕ，  Ｔ．  Ｓａｉｔｏ，  ａｎｄ  Ｏ．  Ｙｏｓｈｉｅ．  ２００３．  ＣＣＬ２８  ｈａｓ  ｄｕａｌ  ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｓ  ａ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｗｉｔｈ  ｂｒｏａｄ−ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７０：１４５２−１４６１．
１９．Ｌｉｕ，  Ｂ．，  ａｎｄ  Ｅ．  Ｗｉｌｓｏｎ．  ２０１２．  Ｔｈｅ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＣＣＬ２８  ｉｓ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｎ  Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ−ｃｈａｒｇｅｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４０：１８６−１９６．
２０．Ｍａｅｒｋｉ，  Ｃ．，  Ｓ．  Ｍｅｕｔｅｒ，  Ｍ．  Ｌｉｅｂｉ，  Ｋ．  Ｍｕｈｌｅｍａｎｎ，  Ｍ．  Ｊ．  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，  Ｎ．  Ｙａｗａｌｋａｒ，  Ｂ．  Ｍｏｓｅｒ，  ａｎｄ  Ｍ．  Ｗｏｌｆ．  ２００９．  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｂｒｏａｄ−ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＣＸＣＬ１４  ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ａｎ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｓｋｉｎ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８２：５０７−５１４．
２１．Ｂｕｒｋｈａｒｄｔ，  Ａ．  Ｍ．，  Ｋ．  Ｐ．  Ｔａｉ，  Ｊ．  Ｐ．  Ｆｌｏｒｅｓ−Ｇｕｉｔｅｒｒｅｚ，  Ｎ．  Ｖｉｌｃｈｅｓ−Ｃｉｓｎｅｒｏｓ，  Ｋ．  Ｋａｍｄａｒ，  Ｏ．  Ｂａｒｂｏｓａ−Ｑｕｉｎｔａｎａ，  Ｒ．  Ｖａｌｌｅ−Ｒｉｏｓ，  Ｐ．  Ａ．  Ｈｅｖｅｚｉ，  Ｊ．  Ｚｕｎｉｇａ，  Ｍ．  Ｓｅｌｍａｎ，  Ａ．  Ｊ．  Ｏｕｅｌｌｅｔｔｅ，  ａｎｄ  Ａ．  Ｚｌｏｔｎｉｋ．  ２０１２．  ＣＸＣＬ１７  ｉｓ  ａ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｉｎ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｔｈａｔ  ｅｘｈｉｂｉｔｓ  ｂｒｏａｄ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８８：６３９９−６４０６．
２２．Ｍａｌｆｅｒｔｈｅｉｎｅｒ，  Ｐ．，  Ｍ．  Ｓｅｌｇｒａｄ，  ａｎｄ  Ｊ．  Ｂｏｒｎｓｃｈｅｉｎ．  ２０１２．  Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ：  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ２８：６０８−６１４．
２３．Ｖａｓｓｉｌａｔｉｓ，  Ｄ．  Ｋ．，  Ｊ．  Ｇ．  Ｈｏｈｍａｎｎ，  Ｈ．  Ｚｅｎｇ，  Ｆ．  Ｌｉ，  Ｊ．  Ｅ．  Ｒａｎｃｈａｌｉｓ，  Ｍ．  Ｔ．  Ｍｏｒｔｒｕｄ，  Ａ．  Ｂｒｏｗｎ，  Ｓ．  Ｓ．  Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，  Ｊ．  Ｒ．  Ｗｅｌｌｅｒ，  Ａ．  Ｃ．  Ｗｒｉｇｈｔ，  Ｊ．  Ｅ．  Ｂｅｒｇｍａｎｎ，  ａｎｄ  Ｇ．  Ａ．  Ｇａｉｔａｎａｒｉｓ．  ２００３．  Ｔｈｅ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １００：４９０３−４９０８．
２４．Ｍｅｙｅｒ，  Ｋ．  Ｃ．，  Ｇ．  Ｒａｇｈｕ，  Ｒ．  Ｐ．  Ｂａｕｇｈｍａｎ，  Ｋ．  Ｋ．  Ｂｒｏｗｎ，  Ｕ．  Ｃｏｓｔａｂｅｌ，  Ｒ．  Ｍ．  ｄｕ  Ｂｏｉｓ，  Ｍ．  Ｄｒｅｎｔ，  Ｐ．  Ｌ．  Ｈａｓｌａｍ，  Ｄ．  Ｓ．  Ｋｉｍ，  Ｓ．  Ｎａｇａｉ，  Ｐ．  Ｒｏｔｔｏｌｉ，  Ｃ．  Ｓａｌｔｉｎｉ，  Ｍ．  Ｓｅｌｍａｎ，  Ｃ．  Ｓｔｒａｎｇｅ，  ａｎｄ  Ｂ．  Ｗｏｏｄ．  ２０１２．  Ａｎ  ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ：  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｔｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ  ｌａｖａｇｅ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １８５：１００４−１０１４．
２５．Ｐａｒｄｏ，  Ａ．，  Ｋ．  Ｍ．  Ｓｍｉｔｈ，  Ｊ．  Ａｂｒａｍｓ，  Ｒ．  Ｃｏｆｆｍａｎ，  Ｍ．  Ｂｕｓｔｏｓ，  Ｔ．  Ｋ．  ＭｃＣｌａｎａｈａｎ，  Ｊ．  Ｇｒｅｉｎ，  Ｅ．  Ｅ．  Ｍｕｒｐｈｙ，  Ａ．  Ｚｌｏｔｎｉｋ，  ａｎｄ  Ｍ．  Ｓｅｌｍａｎ．  ２００１．  ＣＣＬ１８／ＤＣ−ＣＫ−１／ＰＡＲＣ  ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｐｎｅｕｍｏｎｉｔｉｓ．  Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  ７０：６１０−６１６．
２６．Ｂｅｒｅｎｇｕｅｒ，  Ｊ．，  Ａ．  Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，  Ｍ．  Ａ．  Ｊｉｍｅｎｅｚ−Ｓｏｕｓａ，  Ｊ．  Ｃｏｓｉｎ，  Ｐ．  Ｚａｒａｔｅ，  Ｄ．  Ｍｉｃｈｅｌｏｕｄ，  Ｊ．  Ｃ．  Ｌｏｐｅｚ，  Ｐ．  Ｍｉｒａｌｌｅｓ，  Ｐ．  Ｃａｔａｌａｎ，  ａｎｄ  Ｓ．  Ｒｅｓｉｎｏ．  Ｈｉｇｈ  ｐｌａｓｍａ  ＣＸＣＬ１０  ｌｅｖｅｌｓ  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＨＣＶ−ｇｅｎｏｔｙｐｅ  １，  ａｎｄ  ｈｉｇｈｅｒ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，  ｆｉｂｒｏｓｉｓ，  ａｎｄ  ＨＩＶ  ｖｉｒａｌ  ｌｏａｄ  ｉｎ  ＨＩＶ／ＨＣＶ  ｃｏｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ５７：２５−２９．
２７．Ｍｅｕｒｅｔ，  Ｇ．，  Ａ．  Ｂｉｔｚｉ，  ａｎｄ  Ｂ．  Ｈａｍｍｅｒ．  １９７８．  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ  ｉｎ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ７４：５０１−５０３．
２８．Ａｈｒｅｎｓ，  Ｒ．，  Ａ．  Ｗａｄｄｅｌｌ，  Ｌ．  Ｓｅｉｄｕ，  Ｃ．  Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，  Ｒ．  Ｃａｒｅｙ，  Ｅ．  Ｆｏｒｂｅｓ，  Ｍ．  Ｌａｍｐｉｎｅｎ，  Ｔ．  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｅ．  Ｃｏｈｅｎ，  Ｋ．  Ｓｔｒｉｎｇｅｒ，  Ｅ．  Ｂａｌｌａｒｄ，  Ａ．  Ｍｕｎｉｔｚ，  Ｈ．  Ｘｕ，  Ｎ．  Ｌｅｅ，  Ｊ．  Ｊ．  Ｌｅｅ，  Ｍ．  Ｅ．  Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ，  Ｌ．  Ｄｅｎｓｏｎ，  ａｎｄ  Ｓ．  Ｐ．  Ｈｏｇａｎ．  ２００８．  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ／ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ＣＣＬ１１／ｅｏｔａｘｉｎ−１  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８１：７３９０−７３９９．
２９．Ｒａｈｍａｎ，  Ｆ．  Ｚ．，  Ａ．  Ｍ．  Ｓｍｉｔｈ，  Ｂ．  Ｈａｙｅｅ，  Ｄ．  Ｊ．  Ｍａｒｋｓ，  Ｓ．  Ｌ．  Ｂｌｏｏｍ，  ａｎｄ  Ａ．  Ｗ．  Ｓｅｇａｌ．  ２０１０．  Ｄｅｌａｙｅｄ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｏｆ  ＴＬＲ４．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ５：ｅ９８９１．
３０．Ｆｉｏｒｉｎｏ，  Ｇ．，  Ｍ．  Ｃｅｓａｒｉｎｉ，  ａｎｄ  Ｓ．  Ｄａｎｅｓｅ．  ２０１１．  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ：  ｗｈａｔ  ｉｓ  ａｆｔｅｒ  ａｎｔｉ−ＴＮＦ．  Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  １２：１４３３−１４３９．
３１．Ｈｕｄｉｓ，  Ｃ．  Ａ．  ２００７．  Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−−ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５７：３９−５１．
３２．Ｍｏｊａ，  Ｌ．，  Ｌ．  Ｔａｇｌｉａｂｕｅ，  Ｓ．  Ｂａｌｄｕｚｚｉ，  Ｅ．  Ｐａｒｍｅｌｌｉ，  Ｖ．  Ｐｉｓｔｏｔｔｉ，  Ｖ．  Ｇｕａｒｎｅｒｉ，  ａｎｄ  Ｒ．  Ｄ’Ａｍｉｃｏ．  ２０１２．  Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｍｅｎｓ  ｆｏｒ  ｅａｒｌｙ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｙｓｔ  Ｒｅｖ  ４：ＣＤ００６２４３．
３３．Ｋｅｍｐｅｎｉ，  Ｊ．  １９９９．  Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｆｕｌｌｙ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ＴＮＦａｌｐｈａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄ２Ｅ７．  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ５８  Ｓｕｐｐｌ  １：Ｉ７０−７２．
３４．Ｒａｕ，  Ｒ．  ２００２．  Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ  （ａ  ｆｕｌｌｙ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｕｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｃｔｉｖｅ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：  ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ｆｉｖｅ  ｔｒｉａｌｓ．  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ６１  Ｓｕｐｐｌ  ２：ｉｉ７０−７３．
３５．Ｂｕｔｌｅｒ，  Ｍ．，  ａｎｄ  Ａ．  Ｍｅｎｅｓｅｓ−Ａｃｏｓｔａ．  ２０１２．  Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．  Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ９６：８８５−８９４．
３６．Ｒｉｔａ  Ｃｏｓｔａ，  Ａ．，  Ｍ．  Ｅｌｉｓａ  Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ，  Ｍ．  Ｈｅｎｒｉｑｕｅｓ，  Ｊ．  Ａｚｅｒｅｄｏ，  ａｎｄ  Ｒ．  Ｏｌｉｖｅｉｒａ．  ２００９．  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｔｏ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｆｏｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ  ７４：１２７−１３８．
３７．Ｌｉｕ，  Ｈ．  Ｆ．，  Ｊ．  Ｍａ，  Ｃ．  Ｗｉｎｔｅｒ，  ａｎｄ  Ｒ．  Ｂａｙｅｒ．  ２０１０．  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．  ＭＡｂｓ  ２：４８０−４９９．
３８．Ｌｉ，  Ｆ．，  Ｎ．  Ｖｉｊａｙａｓａｎｋａｒａｎ，  Ａ．  Ｙ．  Ｓｈｅｎ，  Ｒ．  Ｋｉｓｓ，  ａｎｄ  Ａ．  Ａｍａｎｕｌｌａｈ．  ２０１０．  Ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｆｏｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．  ＭＡｂｓ  ２：４６６−４７９．
３９．Ｑｉａｎ，  Ｌ．，  Ｓ．  Ｚｈｕ，  Ｊ．  Ｓｈｅｎ，  Ｘ．  Ｈａｎ，  Ｊ．  Ｇａｏ，  Ｍ．  Ｗｕ，  Ｙ．  Ｙｕ，  Ｈ．  Ｌｕ，  ａｎｄ  Ｗ．  Ｈａｎ．  ２０１２．  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  Ｍｉｇ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｗｉｔｈ  ｍｕｒｉｎｅ  Ｍｉｇ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ  ８２：２０５−２１１．
４０．Ｌｕ，  Ｈ．，  Ｍ．  Ｙｕ，  Ｙ．  Ｓｕｎ，  Ｗ．  Ｍａｏ，  Ｑ．  Ｗａｎｇ，  Ｍ．  Ｗｕ，  ａｎｄ  Ｗ．  Ｈａｎ．  ２００７．  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｈｉｇｈ−ｐｕｒｉｔｙ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｎｏｋｉｎｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ＩＦＮ−ｇａｍｍａ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ  ５５：１３２−１３８．
４１．Ｆｏｒｂｅｓ，  Ｄ．  Ｃ．，  ａｎｄ  Ｎ．  Ａ．  Ｐｅｐｐａｓ．  ２０１２．  Ｏｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ＲＮＡ  ａｎｄ  ＤＮＡ．  Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １６２：４３８−４４５．
４２．Ｓｐｕｒｇｅｒｓ，  Ｋ．  Ｂ．，  Ｃ．  Ｍ．  Ｓｈａｒｋｅｙ，  Ｋ．  Ｌ．  Ｗａｒｆｉｅｌｄ，  ａｎｄ  Ｓ．  Ｂａｖａｒｉ．  ２００８．  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ａｎｄ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ＲＮＡ  ｖｉｒｕｓｅｓ．  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ  ７８：２６−３６．
４３．Ｄａｌｌａｓ，  Ａ．，  ａｎｄ  Ａ．  Ｖ．  Ｖｌａｓｓｏｖ．  ２００６．  ＲＮＡｉ：  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ｍｏｎｉｔ  １２：ＲＡ６７−７４．
４４．Ｈｅｉｎｅ，  Ｇ．  Ｈ．，  Ａ．  Ｏｒｔｉｚ，  Ｚ．  Ａ．  Ｍａｓｓｙ，  Ｂ．  Ｌｉｎｄｈｏｌｍ，  Ａ．  Ｗｉｅｃｅｋ，  Ａ．  Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｃａｓｔｅｌａｏ，  Ａ．  Ｃｏｖｉｃ，  Ｄ．  Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ，  Ｇ．  Ｓｕｌｅｙｍａｎｌａｒ，  Ｇ．  Ｍ．  Ｌｏｎｄｏｎ，  Ｇ．  Ｐａｒａｔｉ，  Ｒ．  Ｓｉｃａｒｉ，  Ｃ．  Ｚｏｃｃａｌｉ，  ａｎｄ  Ｄ．  Ｆｌｉｓｅｒ．  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ単球  ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｉｓｋ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ８：３６２−３６９．
４５．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  “Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  １９８８．
４６．Ｐａｓｃａｌ，  Ｌ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２００８，  ９：２４６．
４７．Ｇｒｙ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２００９，  １０：３６５．
４８．Ｊｕｌｉａｎｏ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２００８  Ｊｕｌｙ；  ３６（１２）：  ４１５８−４１７１．
４９．Ｎａｋａｍｕｒａ  ＲＭ  （１９８３）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｃｌｉｎ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １：  １６０−１７２．
５０．Ｌｅｅｎａａｒｓ  Ｍ，  Ｈｅｎｄｒｉｋｓｅｎ  ＣＦ  （２００５）  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｓｔｅｐｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ．  ＩＬＡＲ  Ｊ  ４６：  ２６９−２７９．
５１．Ｔｏｍｉｔａ  Ｍ，  Ｔｓｕｍｏｔｏ  Ｋ  （２０１１）  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：  ３７１−３８０．
５２．Ｓｉｅｇｅｌ  ＤＬ  （２００２）  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．  Ｔｒａｎｓｆｕｓ  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｌ  ９：  １５−２２．
５３．Ｇｌａｓｓｙ  ＭＣ  （１９９３）  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ４：  １５４−１６５．
５４．Ｂｕｔｌｅｒ  Ｍ，  Ｍｅｎｅｓｅｓ−Ａｃｏｓｔａ  Ａ  （２０１２）  Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．  Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ９６：  ８８５−８９４．
５５．Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ  ＳＫ，  Ｎａｅｓｔｅｄ  Ｈ，  Ｍｕｌｌｅｒ  Ｃ，  Ｔｏｌｓｔｒｕｐ  ＡＢ，  Ｆｒａｎｄｓｅｎ  ＴＰ  （２０１２）  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｉｘｔｕｒｅｓ：  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｓｔ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ．  Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  ５２６：  １３９−１４５．
５６．Ｍａｒｉｃｈａｌ−Ｇａｌｌａｒｄｏ  ＰＡ，  Ａｌｖａｒｅｚ  ＭＭ  （２０１２）  Ｓｔａｔｅ−ｏｆ−ｔｈｅ−ａｒｔ  ｉｎ  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ  ２８：  ８９９−９１６．
５７．Ｃｈｏｎ  ＪＨ，  Ｚａｒｂｉｓ−Ｐａｐａｓｔｏｉｔｓｉｓ  Ｇ  （２０１１）  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２８：  ４５８−４６３．
５８．Ｄｉ  Ｆｅｄｅ  Ｇ，  Ｂｒｏｎｔｅ  Ｇ，  Ｒｉｚｚｏ  Ｓ，  Ｒｏｌｆｏ  Ｃｅｒｖｅｔｔｏ  Ｃ，  Ｃｏｃｏｒｕｌｌｏ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ：  ｓｔａｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｔ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｎ−ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｕｍｏｒｓ．  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  １１：  １４３３−１４４５．
５９．Ｃｈｉａｒｅｌｌａ  Ｐ  （２０１１）  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，  ｎｏｖｅｌ  ａｓｓａｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐａｔ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ６：  ２５８−２６７．
６０．Ｋａｎｅｋｏ  Ｅ，  Ｎｉｗａ  Ｒ  （２０１１）  Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ：  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｗｉｔｈ  Ｆｃ  ｄｏｍａｉｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．  ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５：  １−１１．
６１．Ｃａｓｔｅｌｌａｎｉ  ＭＬ，  Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ  Ｋ，  Ｔａｇｅｎ  Ｍ，  Ｋｅｍｐｕｒａｊ  Ｄ，  Ｐｅｒｒｅｌｌａ  Ａ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ａｎｔｉ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２０：  ４４７−４５３．
６２．Ｓｃｚａｋｉｅｌ  Ｇ  （２０００）  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｄｅｓｉｇｎ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．  Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ  ５：  Ｄ１９４−２０１．
６３．Ｆａｒ  ＲＫ，  Ｌｅｐｐｅｒｔ  Ｊ，  Ｆｒａｎｋ  Ｋ，  Ｓｃｚａｋｉｅｌ  Ｇ  （２００５）  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｔａｒｇｅｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １５：  ２２３−２３３．
６４．Ｂａｋｈｔｉｙａｒｉ  Ｓ，  Ｈａｇｈａｎｉ  Ｋ，  Ｂａｓａｔｉ  Ｇ，  Ｋａｒｉｍｆａｒ  ＭＨ  （２０１３）  ｓｉＲＮＡ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．  Ｔｈｅｒ  Ｄｅｌｉｖ  ４：  ４５−５７．
６５．Ｐｅｅｋ  ＡＳ，  Ｂｅｈｌｋｅ  ＭＡ  （２００７）  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａｃｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ９：  １１０−１１８．
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６７．Ｐｉｓａｂａｒｒｏ  ＭＴ，  Ｌｅｕｎｇ  Ｂ，  Ｋｗｏｎｇ  Ｍ，  Ｃｏｒｐｕｚ  Ｒ，  Ｆｒａｎｔｚ  ＧＤ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：  ｎｏｖｅｌ  ｈｕｍａｎ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ−  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ単球−ａｔｔｒａｃｔｉｎｇ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｂｙ  ｆｏｌｄ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７６：  ２０６９−２０７３．
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６９．Ｔａｂｅｒｎｅｒｏ  Ｊ，  Ｓｈａｐｉｒｏ  ＧＩ，  Ｌｏｒｕｓｓｏ  ＰＭ，  Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ  Ａ，  Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ＧＫ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−Ｈｕｍａｎｓ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ａｎ  ＲＮＡ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＶＥＧＦ  ａｎｄ  ＫＳＰ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３：  ４０６−４１７．
７０．Ｌｅｃｈｎｅｒ  ＭＧ，  Ｒｕｓｓｅｌｌ  ＳＭ，  Ｂａｓｓ  ＲＳ，  Ｅｐｓｔｅｉｎ  ＡＬ  （２０１１）  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ，  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ａｎｄ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：  １３１７−１３４０．
７１．Ｇａｖｒｉｌｏｖ  Ｋ，  Ｓａｌｔｚｍａｎ  ＷＭ  （２０１２）  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｉＲＮＡ：  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ，  ａｎｄ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．  Ｙａｌｅ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  ８５：  １８７−２００．
７２．Ｄａｖｉｓ  ＭＥ，  Ｚｕｃｋｅｒｍａｎ  ＪＥ，  Ｃｈｏｉ  ＣＨ，  Ｓｅｌｉｇｓｏｎ  Ｄ，  Ｔｏｌｃｈｅｒ  Ａ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ＲＮＡｉ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ  ｆｒｏｍ  ｓｙｓｔｅｍｉｃａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｓｉＲＮＡ  ｖｉａ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４６４：  １０６７−１０７０．
７３．Ｗｏｌｆｒｕｍ  Ｃ，  Ｓｈｉ  Ｓ，  Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈ  ＫＮ，  Ｊａｙａｒａｍａｎ  Ｍ，  Ｗａｎｇ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｓｉＲＮＡｓ．  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５：  １１４９−１１５７．
７４．Ｊｕｄｇｅ  ＡＤ，  Ｓｏｏｄ  Ｖ，  Ｓｈａｗ  ＪＲ，  Ｆａｎｇ  Ｄ，  ＭｃＣｌｉｎｔｏｃｋ  Ｋ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｂｙ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｓｉＲＮＡ．  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２３：  ４５７−４６２．
７５．Ｓｅｎｉｏｒ  ＪＨ  （１９８７）  Ｆａｔｅ  ａｎｄ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｏｆ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ：  ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒｓ．  Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ  ３：  １２３−１９３．
７６．Ｐｅｒｓｅ  Ｍ，  Ｃｅｒａｒ  Ａ  （２０１２）  Ｄｅｘｔｒａｎ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓｕｌｐｈａｔｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ：  ｔｒａｐｓ  ａｎｄ  ｔｒｉｃｋｓ．  Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１２：  ７１８６１７
【００７６】
本発明は、好ましい実施形態に関して記載されているが、修正および変動が、本発明の原理および範囲を逸脱することなく利用されてもよく、当業者はこのことを容易に理解するものである。従って、そのような修正は、本発明および以下の特許請求の範囲内にて実施されてもよい。
【図２】
2015520744.tif 000002
【図６】
2015520744.tif 000003
【図１０】
2015520744.tif 000004
【図１】
2015520744.tif 000005
【図３】
2015520744.tif 000006
【図４】
2015520744.tif 000007
【図５】
2015520744.tif 000008
【図７（１）】
2015520744.tif 000009
【図７（２）】
2015520744.tif 000010
【図７（３）】
2015520744.tif 000011
【図８】
2015520744.tif 000012
【図９】
2015520744.tif 000013
【配列表】
2015520744000001.app