(57)【要約】  本発明は、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体、およびＩｇＥ媒介障害の処置、予防でのそれらの使用、ならびに抗ＩｇＥ抗体を含むキットを提供する。
2015506950.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｇＥ媒介障害を処置または予防する方法において、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の治療的有効量をヒト患者に投与することを含み、抗体投与の間隔は約１カ月以上である、方法。
【請求項２】
投与の間隔が約２カ月である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
投与の間隔が約３カ月である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
投与の間隔が約４カ月である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
投与の間隔が約５カ月である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
投与の間隔が約６カ月である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
抗体が１投与当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投薬量で投与される、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
抗体が１投与当たり約１５０ｍｇ、約３００ｍｇまたは約４５０ｍｇの投薬量で投与される、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
抗体が皮下または静脈内に投与される、請求項１ないし８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
投与間隔が約３カ月であり、最初の投与から４週目に追加の投与がある、請求項１ないし９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
抗体処置の後、ヒト患者での血清中総ＩｇＥはベースラインに対して低減される、請求項１ないし１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
抗体処置の後、ヒト患者でのアレルゲン特異的ＩｇＥはベースラインに対して低減される、請求項１ないし１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
抗体処置の後、ヒト患者での血清中総ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加は防止または低減される、請求項１ないし１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
抗体処置の後、ヒト患者でのアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加は防止または低減される、請求項１ないし１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＩｇＥ媒介障害を処置または予防する方法において、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含み、抗体は、１投与当たり約１５０〜約４５０ｍｇの用量で投与される、方法。
【請求項１６】
抗体が、１投与当たり約１５０ｍｇ、約３００ｍｇまたは約４５０ｍｇの投薬量で投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
抗体が皮下または静脈内に投与される、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
ヒトで血清中総ＩｇＥをベースラインに対して低減させる方法であって、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含み、抗体投与の間隔は約１カ月以上である、方法。
【請求項１９】
血清中総ＩｇＥがベースラインレベルから少なくとも約２０％低減される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
血清中総ＩｇＥがベースラインレベルから少なくとも約２５％低減される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
血清中総ＩｇＥの低減が抗体の最後の投与から少なくとも１カ月間持続される、請求項１８ないし２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
血清中総ＩｇＥの低減が抗体の最後の投与から少なくとも２カ月間持続される、請求項１８ないし２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
血清中総ＩｇＥの低減が抗体の最後の投与から少なくとも３カ月間持続される、請求項１８ないし２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
血清中総ＩｇＥの低減が抗体の最後の投与から少なくとも４カ月間、少なくとも５カ月間または少なくとも６カ月間持続される、請求項１８ないし２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ヒト患者で血清中総ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加を防止または低減する方法であって、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含む、方法。
【請求項２６】
抗体投与の間隔は約１カ月以上である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
抗体投与の間隔は約３カ月である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
抗体が１投与当たり約１５０〜約４５０ｍｇの用量で投与される、請求項２５ないし２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
アレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加が防止または低減される、請求項２５ないし２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
アレルゲン特異的ＩｇＥの防止または低減が抗体の最後の投与から少なくとも１カ月間持続される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
アレルゲン特異的ＩｇＥの防止または低減が抗体の最後の投与から少なくとも２カ月間持続される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
アレルゲン特異的ＩｇＥの防止または低減が抗体の最後の投与から少なくとも３カ月間持続される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
アレルゲン特異的ＩｇＥの低減が抗体の最後の投与から少なくとも６カ月間持続される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
ＩｇＥ媒介障害がアレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息または非アレルギー性喘息である、請求項１ないし３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
ヒト患者が第２のコントローラーと組み合わせた高用量の吸入または経口用のコルチコステロイドによって不十分に制御されるアレルギー性喘息を有する、請求項１ないし３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
第２のコントローラーが気管支拡張剤または抗ロイコトリエン剤である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＩｇＥ媒介障害を処置または予防するための抗体と併用して、第２の薬物をヒト患者に投与することをさらに含み、第２の薬物は、抗ＩｇＥ抗体、抗ヒスタミン剤、気管支拡張剤、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤ、鬱血除去剤、咳抑制剤、鎮痛剤、ＴＮＦ−アンタゴニスト、インテグリンアンタゴニスト、免疫抑制剤、ＩＬ−４アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、二重ＩＬ−４／ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＤＭＡＲＤ、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体およびＢＡＦＦアンタゴニストからなる群から選択される、請求項１ないし３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
抗体が、ＩｇＥ媒介障害のための第２の処置方法と併用してヒト患者に投与される、請求項１ないし３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
第２の処置方法がアレルゲン減感作の処置レジメンを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
抗体が、キメラ、ヒト化またはヒト抗体である、請求項１ないし３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
抗体が、４７Ｈ４、７Ａ６、２６Ａ１１、４７Ｈ４ｖ５、７Ａ６ｖ１および２６Ａ１１ｖ６からなる群から選択される抗体が結合するものと同じエピトープに特異的に結合する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
エピトープが、配列番号４、配列番号５、配列番号６および配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対応する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
抗体が、配列番号１の残基３１７〜３５２によって規定されるＩｇＥのＭ１’セグメントのエピトープに特異的に結合する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
抗体が、配列番号１の残基３１７〜３５２によって規定されるＩｇＥのＭ１’セグメントのエピトープに特異的に結合し、マウス抗ＩｇＥ抗体４７Ｈ４のそれと同等のスキャッチャード結合親和性を有する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
親和性が０．３０から０．８３ｎＭの間である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
抗体が、配列番号１の残基３１７〜３５２によって規定されるＩｇＥのＭ１’セグメントのエピトープに特異的に結合し、マウス抗ＩｇＥ抗体４７Ｈ４ｖ５のそれと同等のスキャッチャード結合親和性を有する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４７】
親和性が約１．５ｎＭである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
抗体が、２６Ａ１１、２６Ａ１１ｖ．１〜１６、７Ａ６、７Ａ６ｖ１、４７Ｈ４および４７Ｈ４ｖ１〜６からなる群から選択される抗体またはその抗原結合性断片の重鎖および軽鎖ＨＶＲを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４９】
抗体が、２６Ａ１１、２６Ａ１１ｖ．１〜１６、７Ａ６、７Ａ６ｖ１、４７Ｈ４、４７Ｈ４ｖ１〜６からなる群から選択される抗体またはその抗原結合性断片の重鎖および軽鎖の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項５０】
抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は配列番号２９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項５１】
抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域はＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２およびＨＶＲ−Ｈ３を含み、軽鎖可変領域はＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２およびＨＶＲ−Ｌ３を含み、（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号２９の残基２６〜３５を含み、（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号２９の残基４９〜６６を含み、（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号２９の残基９７〜１０６を含み、（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号１９の残基２４〜３９を含み、（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号１９の残基５５〜６１を含み、（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号１９の残基９４〜１０２を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項５２】
抗体がヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
抗体の重鎖可変領域がサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
軽鎖可変領域がカッパサブグループＩコンセンサスフレームワークを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
抗体がＡＤＣＣ活性を有する、請求項１ないし５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
抗体がフコシル化されない、請求項１ないし５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
抗体がＩｇＥスイッチＢ細胞を特異的に減少させる、請求項１ないし５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
抗体が、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中にある、請求項１ないし５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体、および抗体がＩｇＥ媒介障害を処置または予防するためにヒト患者に投与されることを示す添付文書を含むキットであって、ヒト患者への抗体投与の間隔は約１カ月以上であるキット。
【請求項６０】
ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体、および抗体がＩｇＥ媒介障害を処置または予防するためにヒト患者に投与されることを示す添付文書を含むキットであって、抗体が１投与当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投薬量で投与されるキット。
【請求項６１】
添付文書が、ヒト患者において、ベースラインに対して血清中総ＩｇＥを低減させることにおいて処置が有効なことをさらに示す、請求項５９または６０に記載のキット。
【請求項６２】
添付文書が、ヒト患者において、ベースラインに対してアレルゲン特異的ＩｇＥを低減させることにおいて処置が有効なことをさらに示す、請求項５９または６０に記載のキット。
【請求項６３】
添付文書が、ヒト患者において、血清中総ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加を防止または低減することにおいて処置が有効なことをさらに示す、請求項５９または６０に記載のキット。
【請求項６４】
添付文書が、ヒト患者において、アレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加を防止または低減することにおいて処置が有効なことをさらに示す、請求項５９または６０に記載のキット。
【請求項６５】
抗体がバイアル中にある、請求項５９ないし６４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６６】
抗体がプレフィルドシリンジ中にある、請求項５９ないし６４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６７】
注射デバイスをさらに含む、請求項５９ないし６４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６８】
注射デバイスがオートインジェクターである、請求項６７に記載のキット。
【請求項６９】
抗ＩｇＥ抗体、抗ヒスタミン剤、気管支拡張剤、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤ、鬱血除去剤、咳抑制剤、鎮痛剤、ＴＮＦ−アンタゴニスト、インテグリンアンタゴニスト、免疫抑制剤、ＩＬ−４アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、二重ＩＬ−４／ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＤＭＡＲＤ、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体およびＢＡＦＦアンタゴニストからなる群から選択される第２の薬物、ならびにＩｇＥ媒介障害を処置するための第２の薬物と併用した、１カ月または四半期間隔でのヒト患者への抗体の投与を示す添付文書をさらに含む、請求項５９ないし６８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項７０】
第２の薬物が抗ＩｇＥ抗体ｒｈｕＭＡｂＥ２５である、請求項６９に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連特許出願への相互参照
本出願は、２０１２年１月３１日に出願の米国仮特許出願第６１／５９３，２８２号、２０１２年３月２０日に出願の米国仮特許出願第６１／６１３，４３４号、２０１２年４月６日に出願の米国仮特許出願第６１／６２１，４５３号および２０１２年４月１８日に出願の米国仮特許出願第６１／６３５，２５３号の優先権を主張し、その全ては完全に参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体、ならびにＩｇＥ媒介障害の処置および予防でのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
アレルギーは、環境抗原への免疫応答が組織炎症および器官機能不全を引き起こす特定の疾患を指す。各アレルギー疾患の臨床上の特徴は、関与する器官または組織で免疫的に誘導された炎症性応答を反映する。これらの特徴は、抗原の化学的または物理的性質から一般に独立している。アレルギー性応答の多様性は、異なる免疫エフェクター経路の関与から生じ、そのそれぞれは特異なパターンの炎症を発生させる。
【０００４】
アレルギーは、世界全体で普通に見られる。しかし、特定の疾患に対する偏向は、異なる年齢群、性別および人種の間で異なる。特定のアレルゲンへの感受性の発生率は、遺伝的偏向、ならびにアレルゲンへの曝露の原因となる地理的および文化的因子の両方によって決定される。アレルギーの臨床状態は、各アレルゲンに遭遇する一部の個体だけに影響を及ぼす。アレルゲンへの曝露によるアレルギー性疾患の発生は、事前の「感作」だけでなく、特定の器官への反応の局在化を決定する他の因子も必要とする。
【０００５】
アレルゲン曝露によるアレルギー疾患に先行する生物学的過程は、「感作」または感作相として知られる免疫応答である。感作が起こるならば、アレルゲンへの以降の曝露があるまで、個体は症状を示さない。感作作用は、免疫記憶としても知られる。
【０００６】
上昇したＩｇＥレベルは、アレルギー性喘息を含むアレルギー性疾患と関連している。ＩｇＥは、肥満細胞および好塩基球の表面でのアレルゲン受容体としてのそれらの役割によってアレルギーで中心的な役割を演ずる。ＩｇＥ抗体は、分子のＦｃ部分で、肥満細胞および好塩基球の表面のＦｃεＲＩと呼ばれる高親和性細胞表面受容体に固定される。これらの受容体を占めている抗体に多価アレルゲン分子が結合するときに、アレルギー性反応は開始される。結果はＦｃεＲＩの架橋であり、それは次に細胞内にシグナル伝達し、炎症媒介物であるヒスタミン、ロイコトリエン、走化因子、血小板活性化因子およびプロテイナーゼの放出および活性化を引き起こす。これらの活性化媒介物は局所的に作用し、血管透過性、血管拡張、平滑筋収縮および粘液腺分泌の増加をもたらす。そのような事象は臨床的には即時型または初期相と呼ばれ、アレルゲン曝露から最初の１５〜３０分以内に起こる。続く１２時間の間、まだ完全には理解されていない他のケミカルメディエーターに応じて、好中球から好酸球、単核細胞に進展する炎症性細胞の進行性の組織浸潤がある。アレルゲン曝露から６〜１２時間のこの期間は、後期相と称され、細胞性炎症の臨床症状を特徴とする。後期相反応が、特に肺では、初期相反応の不在下で起こることを考慮すると、後期相反応が必ずＩｇＥによって媒介されるかどうかはなお完全には理解されていない。この機構は、主にアナフィラキシー、じんま疹、ならびにアトピー性疾患、例えばアレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、アトピー皮膚炎およびアレルギー性胃腸病の原因となる。
【０００７】
ＩｇＥは、膜に結合した形、および分泌形で存在する。これらの異なる形は、スプライス変異体のようである。ＩｇＥを下方調節することによって治療効果を達成する以前のアプローチは、免疫系のさらなる「武装」を防止するか武装解除するために、主に分泌形を標的とする（例えば、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）オマリズマブ）。ＩｇＥの分泌形はより短い形であり、Ｆｃ領域は事実上ＣＨ４ドメインで終わるが、より長い形は、Ｍ１／Ｍ１’およびＭ２として知られるエクソンによってコードされるペプチドを含むさらなるＣ末端残基を含む。ＩｇＥの分泌形に結合する抗ＩｇＥ抗体による従来の療法は、分泌される血清ＩｇＥの減少をもたらす（全ＩｇＥはＸｏｌａｉｒと複合体化していない）。Ｃａｓａｌｅら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１００巻（１号）：１１０〜１２１頁（１９９７）。
【０００８】
Ｍ１’セクションを含む膜結合ＩｇＥは、ヒトＩｇＥスイッチＢ細胞、ＩｇＥ記憶Ｂ細胞およびＩｇＥ形質芽細胞に存在する。米国特許第８，０７１，０９７号（ＷＯ２００８／１１６１４９にも記載されており、その両開示は完全に参照により組み込まれる）は、膜結合ＩｇＥのＭ１’セグメントを標的にする抗体を開示する。これらの抗体は、アポトーシスおよび／または抗体依存性細胞媒介細胞毒性機構を通して、Ｍ１’発現Ｂ細胞を減少させることができる。
【０００９】
特許出願および公開を含む本明細書の全ての引用文献は、参照により完全に本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【００１０】
ＩｇＥ媒介障害を処置または予防する方法であって、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含み、そこで、抗体投与の間隔は約１カ月以上である方法が本明細書で提供される。一部の実施形態では、投与間隔は、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、またはそれより長い。一部の実施形態では、投与間隔は約３カ月であり、最初の投与から４週目に追加の投与がある。一部の実施形態では、抗体は、１投与当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投薬量で投与される。一部の実施形態では、抗体は、１投与当たり約１５０ｍｇ、約３００ｍｇまたは約４５０ｍｇの投薬量で投与される。一部の実施形態では、抗体は皮下または静脈内に投与される。一部の実施形態では、抗体処置の後、ヒト患者での血清中総ＩｇＥはベースラインに対して低減される。一部の実施形態では、抗体処置の後、ヒト患者でのアレルゲン特異的ＩｇＥはベースラインに対して低減される。一部の実施形態では、抗体処置の後、ヒト患者での血清中総ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加は防止または低減される。一部の実施形態では、抗体処置の後、ヒト患者でのアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加は防止または低減される。一部の実施形態では、抗体処置の後、新しいＩｇＥの生成は防止または低減される。
【００１１】
ＩｇＥ媒介障害を処置または予防する方法であって、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含み、そこで、抗体は、１投与当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇの用量で投与される方法も本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗体は、１投与当たり約１５０ｍｇ、約３００ｍｇまたは約４５０ｍｇの投薬量で投与される。一部の実施形態では、抗体は皮下または静脈内に投与される。
【００１２】
ヒトにおいて、ベースラインに対して血清中総ＩｇＥおよび／またはアレルゲン特異的ＩｇＥを低減させる方法であって、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含み、そこで、抗体投与の間隔は約１カ月以上である方法も本明細書で提供される。一部の実施形態では、血清中総ＩｇＥは、ベースラインレベルから少なくとも約２０％低減される。一部の実施形態では、血清中総ＩｇＥは、ベースラインレベルから少なくとも約２５％低減される。一部の実施形態では、血清中総ＩｇＥの低減は、抗体の最後の投与後少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月または少なくとも６カ月の間持続する。新しいＩｇＥの生成を防止する方法であって、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含む方法も本明細書で提供される。
【００１３】
ヒト患者において、血清中総ＩｇＥおよび／またはアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加を防止または低減させる方法であって、ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含む方法も本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗体投与の間隔は約１カ月以上である。一部の実施形態では、抗体投与の間隔は約２カ月である。一部の実施形態では、抗体投与の間隔は約３カ月である。一部の実施形態では、抗体投与の間隔は約４カ月である。一部の実施形態では、抗体投与の間隔は約５カ月である。一部の実施形態では、抗体投与の間隔は約６カ月である。一部の実施形態では、抗体は、１投与当たり約１５０〜約４５０ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、アレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加は、防止または低減される。一部の実施形態では、血清中総ＩｇＥおよび／またはアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加の防止または低減は、抗体の最後の投与後少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月または少なくとも６カ月の間持続する。
【００１４】
本明細書に記載される方法の一部の実施形態では、以下からなる群から選択されるＩｇＥ媒介障害を処置するために抗体は投与される：アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、アトピー皮膚炎、アレルギー性胃腸病、アナフィラキシー、じんま疹、食物アレルギー、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、寄生虫疾患、間質性膀胱炎、過ＩｇＥ症候群、毛細血管拡張性運動失調、ウィスコットアルドリッチ症候群、胸腺欠損リンパ球形成、ＩｇＥ骨髄腫、移植片対宿主反応およびアレルギー性紫斑病。一部の実施形態では、ＩｇＥ媒介障害は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息または非アレルギー性喘息である。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、医療標準、例えば第２のコントローラーと組み合わせた高用量の吸入または経口用のコルチコステロイドによって不十分にコントロールされるアレルギー性喘息を有するヒト患者を処置するためのものである。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、重度、中等度または軽度の喘息を有するヒト患者を処置するためのものである。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、高用量の吸入コルチコステロイド（ＩＣＳ）（プロピオン酸フルチカゾン（ＦＰ）または同等物の≧４００μｇ／日の総日用量）および第２のコントローラー（例えば、少なくとも１２週または少なくとも３６週の処置後）にもかかわらず不十分にコントロールされるアレルギー性喘息を有するヒト患者を処置するためのものである。一部の実施形態では、第２のコントローラーは、気管支拡張剤または抗ロイコトリエン剤である。
【００１５】
一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ＩｇＥ媒介障害を処置または予防するための抗体と併用して、第２の薬物をヒト患者に投与することをさらに含み、そこで、第２の薬物は、抗ＩｇＥ抗体、抗ヒスタミン剤、気管支拡張剤、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤ、鬱血除去剤、咳抑制剤、鎮痛剤、ＴＮＦ−アンタゴニスト、インテグリンアンタゴニスト、免疫抑制剤、ＩＬ−４アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、二重ＩＬ−４／ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＤＭＡＲＤ、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体およびＢＡＦＦアンタゴニストからなる群から選択される。本明細書に記載される方法の一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＥ媒介障害のための第２処置方法と併用してヒト患者に投与される。一部の実施形態では、第２の処置方法は、アレルゲン減感作の処置レジメンを含む。
【００１６】
本明細書に記載される方法では、本明細書に記載される抗ＩｇＥ抗体のいずれかをヒト患者に投与することができる。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体はキメラ、ヒト化またはヒトの抗体である。一部の実施形態では、抗体は、図１４に示すヒトＩｇＥのＭ１’セグメントのエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、４７Ｈ４、７Ａ６、２６Ａ１１、４７Ｈ４ｖ５、７Ａ６ｖ１および２６Ａ１１ｖ６からなる群から選択される抗体に結合するものと同じエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号４、配列番号５、配列番号６および配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対応する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１の残基３１７〜３５２によって規定されるＩｇＥのＭ１’セグメントのエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１の残基３１７〜３５２によって規定されるＩｇＥのＭ１’セグメントのエピトープに特異的に結合し、マウス抗ＩｇＥ抗体４７Ｈ４のそれと同等のスキャッチャード結合親和性を有する。一部の実施形態では、親和性は０．３０から０．８３ｎＭの間である。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１の残基３１７〜３５２によって規定されるＩｇＥのＭ１’セグメントのエピトープに特異的に結合し、抗ＩｇＥ抗体４７Ｈ４ｖ５のそれと同等のスキャッチャード結合親和性を有する。一部の実施形態では、親和性は約１．５ｎＭである。一部の実施形態では、抗体は、２６Ａ１１、２６Ａ１１ｖ．１〜１６、７Ａ６、７Ａ６ｖ１、４７Ｈ４および４７Ｈ４ｖ１〜６からなる群から選択される抗体またはその抗原結合性断片の重鎖ＨＶＲおよび軽鎖ＨＶＲを含む。一部の実施形態では、抗体は、２６Ａ１１、２６Ａ１１ｖ．１〜１６、７Ａ６、７Ａ６ｖ１、４７Ｈ４および４７Ｈ４ｖ１〜６からなる群から選択される抗体またはその抗原結合性断片の重鎖および軽鎖の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【００１７】
一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は配列番号２９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域はＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２およびＨＶＲ−Ｈ３を含み、軽鎖可変領域はＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２およびＨＶＲ−Ｌ３を含み、（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号２９の残基２６〜３５を含み、（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号２９の残基４９〜６６を含み、（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号２９の残基９７〜１０６を含み、（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号１９の残基２４〜３９を含み、（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号１９の残基５５〜６１を含み、（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号１９の残基９４〜１０２を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。一部の実施形態では、抗体の重鎖可変領域は、サブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークを含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域はカッパサブグループＩコンセンサスフレームワークを含む。一部の実施形態では、ヒト患者に投与される抗ＩｇＥ抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は配列番号３９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体の抗原結合性断片がヒト患者に投与され、そこで、抗ＩｇＥ抗体は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は配列番号３９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
【００１８】
一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、ＡＤＣＣ活性を有する。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体はフコシル化されていない。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、ＩｇＥスイッチＢ細胞を減少させる。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、ＩｇＥ記憶Ｂ細胞を減少させる。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、ＩｇＥ形質芽細胞を減少させる。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中にある。
【００１９】
ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体、および抗体がＩｇＥ媒介障害を処置するためにヒト患者に投与されることを示す添付文書を含むキットも本明細書で提供され、そこで、ヒト患者への抗体投与の間隔は約１カ月以上である。
【００２０】
ヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体、および抗体がＩｇＥ媒介障害を処置するためにヒト患者に投与されることを示す添付文書を含むキットも本明細書で提供され、そこで、抗体は、１投与当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投薬量で投与される。
【００２１】
一部の実施形態では、キットの添付文書は、ヒト患者において、処置がベースラインに対して血清中総ＩｇＥを低減させることにおいて有効なことをさらに示す。一部の実施形態では、キットの添付文書は、ヒト患者において、処置がベースラインに対してアレルゲン特異的ＩｇＥを低減させることにおいて有効なことをさらに示す。一部の実施形態では、添付文書は、ヒト患者において、処置が血清中総ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加を防止または低減することにおいて有効なことをさらに示す。一部の実施形態では、添付文書は、ヒト患者において、処置がアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加を防止または低減することにおいて有効なことをさらに示す。一部の実施形態では、ヒト患者は、重度、中等度または軽度の喘息を有する。一部の実施形態では、キットの抗体は、バイアル中にある。一部の実施形態では、キットの抗体は、プレフィルドシリンジ中にある。一部の実施形態では、キットは、注射デバイス（オートインジェクターなど）をさらに含む。
【００２２】
一部の実施形態では、キットは、抗ＩｇＥ抗体、抗ヒスタミン剤、気管支拡張剤、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤ、鬱血除去剤、咳抑制剤、鎮痛剤、ＴＮＦ−アンタゴニスト、インテグリンアンタゴニスト、免疫抑制剤、ＩＬ−４アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、二重ＩＬ−４／ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＤＭＡＲＤ、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体およびＢＡＦＦアンタゴニストからなる群から選択される第２の薬物、ならびにＩｇＥ媒介障害を処置するための第２の薬物と併用した、１カ月または四半期間隔でのヒト患者への抗体の投与を示す添付文書をさらに含む。一部の実施形態では、第２の薬物は、抗ＩｇＥ抗体ｒｈｕＭＡｂＥ２５である。
【００２３】
一部の実施形態では、本発明は、先に記載の方法のいずれかで用いるための先に記載の抗ＩｇＥ−Ｍ１’抗体のいずれかを提供し、そこで、抗体は先に記載の投与間隔、量またはレジメンのいずれかによって投与される。
【００２４】
一部の実施形態では、本発明は、先に記載の方法のいずれかで用いるための先に記載の抗ＩｇＥ−Ｍ１’抗体のいずれかを提供し、そこで、抗体は、先に記載の投与間隔、量またはレジメンのいずれかによって投与されるように調製される。
【００２５】
一部の実施形態では、本発明は、先に記載の方法のいずれかでの先に記載の抗ＩｇＥ−Ｍ１’抗体のいずれかの使用を提供し、そこで、抗体は先に記載の投与間隔、量またはレジメンのいずれかによって投与される。
【００２６】
本明細書に記載される様々な実施形態の性質の１つ、いくつかまたは全てを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成することができることを理解すべきである。本発明のこれらおよび他の態様は、当業者に明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】健康なボランティアにおけるフェーズ１ａ単純用量漸増試験の図である。
【図２】軽度の喘息を有する患者におけるフェーズ１ｂ多重用量漸増試験の図である。
【図３】フェーズ１ａ試験での全てのコホートにおける経時的平均血清濃度を実証するグラフである。
【図４】フェーズ１ｂ試験での全てのコホートにおける経時的平均血清濃度を実証するグラフである。
【図５】ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置から８５日後および１６８日後の血清中総ＩｇＥを実証するグラフである。データは試験の８５日目（Ａ）および１６８日目（Ｂ）について提示され、試験の１日目は単回投与の日と規定される。データはベースラインからの変化％で表され、そこで、ベースラインは投与前診察の平均と規定される；平均±ＳＤ、０．００３、０．０３および０．３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ群の患者数ｎ＝３〜４、１、３、５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶおよび３ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ群ではｎ＝５、プラセボ群ではｎ＝１４。
【図６】ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置後のアレルギー性鼻炎患者における血清中総ＩｇＥを実証するグラフである。データはベースラインからの変化％で表され、ベースラインは投与前診察の平均と規定される； 平均±ＳＤ、ＭＥＭＰ１９７２Ａ群の患者数ｎ＝８、プラセボ群ではｎ＝１２（ＩＶおよびＳＣを合わせる）。
【図７】軽度の喘息患者におけるフェーズ２ａ活性証明アレルゲンチャレンジ試験の図である。
【図８】抗Ｍ１プライム抗体（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）が初期喘息反応（ＥＡＲ）と後期喘息反応（ＬＡＲ）の両方を低減させたことを実証するグラフであり、これは、フェーズ２ａ試験において、アレルゲン吸入の後の１秒努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）の経時的低下パーセントによって測定された。Ａ）は、プラセボまたは薬物投与前のスクリーニング時の、患者におけるアレルゲン吸入の後のベースライン（チャレンジ前）と比較した経時的平均ＦＥＶ１パーセントを示す。Ｂ）は、プラセボまたは薬物（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）を有する患者における、８６日目のアレルゲン吸入の後のベースライン（チャレンジ前）と比較した経時的平均ＦＥＶ１パーセントを示す。
【図９】フェーズ２ａ試験で、軽度の喘息患者において、抗Ｍ１プライム抗体がアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導された増加を防止し、総ＩｇＥを低減させたことを実証するグラフである。Ａ）は、プラセボまたは抗Ｍ１プライム（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）で処置された患者におけるアレルゲン特異的ＩｇＥ（チャレンジアレルゲンに対する）を示す。＊ｐ≦０．０１；†ｐ≦０．０５。Ｂ）は、全肺アレルゲンチャレンジを受け、プラセボまたは抗Ｍ１プライム（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）で処置された患者におけるアレルゲン特異的ＩｇＥ（無関係なアレルゲン（すなわち、非チャレンジアレルゲン）に対する）を示す。Ｃ）は、プラセボまたは抗Ｍ１プライムで処置された患者における総ＩｇＥを中間結果で示す。Ｄ）は、プラセボまたは抗Ｍ１プライムで処置された患者における総ＩｇＥを示す。試験開始前のＩｇＥレベルが１００％のベースラインと設定される（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）。＊ｐ≦０．０１。データは平均±ＳＥＭで表される。Ａ）〜Ｃ）については、後期時点に全ての対象が含まれているとは限らない；１９７日目には、１処置群についてｎ＝４〜５。
【図１０】ＭＥＭＰ１９７２Ａが好酸球でアレルゲンチャレンジによって誘導された増加を低減したことを示すグラフである。Ａ）は、スクリーニング時の痰好酸球レベルを示す。Ｂ）は、試験の１２週時の痰好酸球レベルを示す。データは、平均±標準誤差で提供される。
【図１１】ＭＥＭＰ１９７２Ａで処置された患者における末梢血好酸球の低減を示すグラフである。Ａ）は、好酸球のベースライン（スクリーニング）の百分率（％）を示す。＊ｐ≦０．１０；†ｐ≦０．１５。Ｂ）は、好酸球のベースライン（スクリーニング）の百分率（絶対数）を示す。＊ｐ≦０．１０；†ｐ≦０．１５。データは、平均±標準誤差で提供される。
【図１２】アレルゲンによって誘導されるＣＣＬ１７レベルの増加をＭＥＭＰ１９７２Ａがブロックすることを示すグラフである。Ａ）は、試験コースにわたるベースラインの百分率としてＣＣＬ１７レベルを示す。Ｂ）は、スクリーニング時および８６日目のベースラインの百分率としてＣＣＬ１７レベルを示す。データは、平均±標準誤差で提供される。
【図１３】喘息患者におけるフェーズ２ｂ試験の図である。プラセボ群の患者は、１カ月間隔で（０、４、８、１２、１６、２０、２４、２８および３２週目に）、合計９回のプラセボ投与を受ける。３００ｍｇ抗Ｍ１プライム抗体群の患者は、１カ月間隔で（０、４、８、１２、１６、２０、２４、２８および３２週目に）、合計９回の抗体投与を受ける。１５０ｍｇおよび４５０ｍｇ抗Ｍ１プライム抗体群の患者は、四半期間隔（０、１２および２４週目）の３回の投与を含む合計４回の活性抗体投与ならびに４週目の追加の投与を受け、残りの５回の投与はプラセボである。
【図１４Ａ】ヒト（配列番号１）、アカゲザル（配列番号２）およびカニクイザル（配列番号３）のＩｇＥの選択された定常鎖領域のアラインメントである。ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、Ｍ１’、膜貫通および細胞内ドメインのおよその位置が示される。
【図１４Ｂ】ヒト（配列番号１）、アカゲザル（配列番号２）およびカニクイザル（配列番号３）のＩｇＥの選択された定常鎖領域のアラインメントである。ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、Ｍ１’、膜貫通および細胞内ドメインのおよその位置が示される。
【図１５Ａ】マウス抗体２６Ａ１１、７Ａ６および４７Ｈ４ならびにその様々なヒト化変異体の可変軽鎖および重鎖配列を示す図である。位置はＫａｂａｔに従って番号をつけられ、可変コンセンサスネットワークに接がれた超可変領域（軽鎖はカッパＩ、重鎖はサブグループＩＩＩ）は四角で囲まれる。Ａ）は、ヒトカッパＩ軽鎖（配列番号８）に対して、２６Ａ１１の可変軽鎖（配列番号９）およびヒト化変異体１、４（配列番号１０）、変異体２、５（配列番号１１）、変異体３、６（配列番号１２）、変異体１３、１５（配列番号１３）および変異体１４、１６（配列番号１４）を示す。
【図１５Ｂ】マウス抗体２６Ａ１１、７Ａ６および４７Ｈ４ならびにその様々なヒト化変異体の可変軽鎖および重鎖配列を示す図である。位置はＫａｂａｔに従って番号をつけられ、可変コンセンサスネットワークに接がれた超可変領域（軽鎖はカッパＩ、重鎖はサブグループＩＩＩ）は四角で囲まれる。Ｂ）は、ヒトカッパＩ軽鎖（配列番号８）に対して、７Ａ６の可変軽鎖（配列番号１５）およびヒト化変異体１（配列番号１６）を示す。
【図１５Ｃ】マウス抗体２６Ａ１１、７Ａ６および４７Ｈ４ならびにその様々なヒト化変異体の可変軽鎖および重鎖配列を示す図である。位置はＫａｂａｔに従って番号をつけられ、可変コンセンサスネットワークに接がれた超可変領域（軽鎖はカッパＩ、重鎖はサブグループＩＩＩ）は四角で囲まれる。Ｃ）は、ヒトカッパＩ軽鎖（配列番号８）に対して、４７Ｈ４の可変軽鎖（配列番号１７）ならびにヒト化変異体１、３（配列番号１８）および変異体２、４〜６（配列番号１９）を示す。
【図１５Ｄ】マウス抗体２６Ａ１１、７Ａ６および４７Ｈ４ならびにその様々なヒト化変異体の可変軽鎖および重鎖配列を示す図である。位置はＫａｂａｔに従って番号をつけられ、可変コンセンサスネットワークに接がれた超可変領域（軽鎖はカッパＩ、重鎖はサブグループＩＩＩ）は四角で囲まれる。Ｄ）は、ヒトＩＩＩ重鎖（配列番号２０）に対して、２６Ａ１１の可変重鎖（配列番号２１）ならびにヒト化変異体１〜３、１３、１４（配列番号２２）および変異体４〜６、１５、１６（配列番号２３）を示す。
【図１５Ｅ】マウス抗体２６Ａ１１、７Ａ６および４７Ｈ４ならびにその様々なヒト化変異体の可変軽鎖および重鎖配列を示す図である。位置はＫａｂａｔに従って番号をつけられ、可変コンセンサスネットワークに接がれた超可変領域（軽鎖はカッパＩ、重鎖はサブグループＩＩＩ）は四角で囲まれる。Ｅ）は、ヒト重鎖（配列番号２０）に対して、７Ａ６の可変重鎖（配列番号２４）およびヒト化変異体１（配列番号２５）を示す。
【図１５Ｆ】マウス抗体２６Ａ１１、７Ａ６および４７Ｈ４ならびにその様々なヒト化変異体の可変軽鎖および重鎖配列を示す図である。位置はＫａｂａｔに従って番号をつけられ、可変コンセンサスネットワークに接がれた超可変領域（軽鎖はカッパＩ、重鎖はサブグループＩＩＩ）は四角で囲まれる。Ｆ）は、ヒトＩＩＩ重鎖（配列番号２０）に対して、４７Ｈ４の可変重鎖（配列番号２６）、ならびにヒト化変異体１、２（配列番号２７）、変異体３〜４（配列番号２８）、変異体５（配列番号２９）および変異体６（配列番号３０）を示す。
【図１６Ａ】フェーズ２ａ試験で、軽度の喘息患者において、抗Ｍ１プライム抗体がチャレンジおよび非チャレンジ特異的ＩｇＥを低減させたことを実証するグラフである。Ａ）は、プラセボまたは抗Ｍ１プライム（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）で処置された患者におけるチャレンジアレルゲンに対するアレルゲン特異的ＩｇＥを示す。Ｂ）は、プラセボまたは抗Ｍ１プライム（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）で処置された患者における非チャレンジアレルゲンに対するアレルゲン特異的ＩｇＥを示す。ＩｇＥレベルはベースラインのパーセントとして示され、試験開始前のＩｇＥレベルがベースライン（１００％）である。データは、平均または中央値として示される。
【図１６Ｂ】フェーズ２ａ試験で、軽度の喘息患者において、抗Ｍ１プライム抗体がチャレンジおよび非チャレンジ特異的ＩｇＥを低減させたことを実証するグラフである。Ａ）は、プラセボまたは抗Ｍ１プライム（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）で処置された患者におけるチャレンジアレルゲンに対するアレルゲン特異的ＩｇＥを示す。Ｂ）は、プラセボまたは抗Ｍ１プライム（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）で処置された患者における非チャレンジアレルゲンに対するアレルゲン特異的ＩｇＥを示す。ＩｇＥレベルはベースラインのパーセントとして示され、試験開始前のＩｇＥレベルがベースライン（１００％）である。データは、平均または中央値として示される。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本出願は、ＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体を用いる、ＩｇＥ媒介障害を処置または予防する方法を提供する。発明者らは、臨床試験において、健康対象およびアレルギー性鼻炎またはアレルギー性喘息患者で血清中総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥを低減させることにおいてヒト化抗Ｍ１’抗体が有効であり、総ＩｇＥのそのような低減は、単回および多回投与試験の両方で、最終投与後少なくとも３カ月持続したことを示した。さらに、別の試験で発明者らは、血清中総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加が、抗ＩｇＥ抗体処置の後に患者で防止または低減されたことを示した。
【００２９】
Ｉ．一般技術
本明細書で記載または参照される技術および手順は一般によく理解されており、当業者によって従来の方法を用いて、例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ第３版（２００１）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編（２００３））；シリーズＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ  ２：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．Ｍａｃｐｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＧ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ編（１９９５））、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ編（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、およびＡｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８７））；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４年）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８年）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）編、１９８７年）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８年）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜８年）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７年）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４年）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１年）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９年）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７年）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７年）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９年）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００年）；Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９年）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５年）；およびＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａら編、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９３年）に記載される広く利用される方法を用いて普通に採用される。
【００３０】
ＩＩ．定義
「アレルゲン」または「免疫原」は、免疫応答を誘発することができる任意の分子である。本明細書で用いるように、この用語は抗原性分子それ自体かその供給源、例えば花粉粒、動物の鱗屑、昆虫毒または食品を包含する。これは、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体が特異的に認識することができる分子を指す用語である抗原と対比される。免疫応答を誘導することが可能ないかなる外来物質も、潜在的アレルゲンである。天然および合成起源の両方の多くの異なる化学物質が、アレルゲン性であることが公知である。複雑な天然有機化学物質、特にタンパク質は、抗体媒介性のアレルギーを引き起こす可能性があるが、単純な有機化合物、無機化学物質および金属は、Ｔ細胞媒介性のアレルギーをより優先的に引き起こす。場合によっては、同じアレルゲンが複数の型のアレルギーの原因となることがある。アレルゲンへの曝露は、吸入、注射、注射または皮膚接触を通すものであってよい。
【００３１】
用語「抗体」は、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体、ダイアボディおよび単鎖分子、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ）を含む。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書で「抗体」と互換的に用いられる。
【００３２】
基本的な４鎖抗体単位は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成されるヘテロテトラマー糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体はＪ鎖と呼ばれるさらなるポリペプチドと一緒の基本的ヘテロテトラマー単位の５個からなり、１０個の抗原結合部位を有するが、ＩｇＡ抗体は、重合してＪ鎖と一緒に多価集合を形成することができる基本的４鎖単位の２〜５個を含む。ＩｇＧの場合、４鎖単位は、一般に約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は１つの共有結合性ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結し、２つのＨ鎖はＨ鎖アイソタイプに従って１つまたは複数のジスルフィド結合によって互いに連結する。各Ｈ鎖およびＬ鎖は、規則的に間隔のあいた鎖内部のジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖はＮ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いて、αおよびγ鎖の各々のために３つの定常ドメイン（ＣＨ）を、μおよびεアイソタイプのために４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖はＮ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、続いてその他端に定常ドメインを有する。ＶＬはＶＨと整列し、ＣＬは重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列する。軽鎖と重鎖の可変ドメインの間で、特定のアミノ酸残基が界面を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬの対形成は、単一の抗原結合部位を一緒に形成する。異なるクラスの抗体の構造および性質については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第８版、Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｅｓ、Ａｂｂａ  Ｉ．ＴｅｒｒおよびＴｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ、１９９４年、７１頁、第６章を参照。
【００３３】
任意の脊椎動物種からのＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる２つの明らかに異なる型の１つに割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に従い、免疫グロブリンは異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。５つのクラスの免疫グロブリンがある：それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる重鎖を有する、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ。γおよびαクラスは、ＣＨ配列および機能の比較的軽微な差に基づいてサブクラスにさらに分類され、例えばヒトは以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２。
【００３４】
「単離された」抗体は、その生成環境（例えば、天然または組換え）の成分から同定、分離および／または回収されたものである。好ましくは、単離されたポリペプチドは、その生成環境からの他の全ての構成成分と結合していない。その生成環境の混入構成成分、例えば組換え体トランスフェクション細胞からもたらされるものは、抗体の研究、診断または治療用途に一般的に干渉する物質であり、酵素、ホルモンおよび他のタンパク性または非タンパク性の溶質を例に含めることができる。好ましい実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えばローリー法で測定して抗体の９５重量％を超えるまで、一部の実施形態では９９重量％を超えるまで、（２）回転カップシークエネーターを用いてＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー、もしくは好ましくは銀染色を用いて非還元条件か還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一性まで精製される。抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないので、単離された抗体には、組換え細胞中のｉｎ  ｓｉｔｕ抗体が含まれる。しかし、通常は、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
【００３５】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」と呼ぶことができる。これらのドメインは一般に抗体の最可変部分（同じクラスの他の抗体に対して）であり、抗原結合部位を含有する。
【００３６】
用語「可変」は、可変ドメインの特定のセグメントが抗体の間で配列が大きく異なるという事実を指す。Ｖドメインは抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を規定する。しかし、変動性は可変ドメインの全スパンにわたって均一に分布していない。代わりに、それは、軽鎖および重鎖両方の可変ドメインの超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは４つのＦＲ領域を各々含み、その多くはβシート立体配置を採用し、３つのＨＶＲによって接続され、それらは、βシート構造を接続し、場合によってはその一部を形成するループを形成する。各鎖のＨＶＲはＦＲ領域によって非常に近接して一緒に保持され、他方の鎖のＨＶＲと一緒に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）を参照）。定常ドメインは抗体を抗原に結合することに直接的に関与しないが、様々なエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞毒性への抗体の関与を示す。
【００３７】
本明細書で用いる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量存在するかもしれない可能な天然に存在する突然変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に向けられる。さらに、異なる決定因子（エピトープ）に向けられる異なる抗体を一般的に含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定因子に向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらがハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンによって汚染されないという点で有利である。修飾子「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とすると解釈されるべきでない。例えば、本発明に従って用いられるモノクローナル抗体は、例えばハイブリドーマ法を含む、様々な技術、によって作製することができる（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ．、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５〜９７頁（１９７５）；Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１４巻（３号）：２５３〜２６０頁（１９９５）、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、第２版１９８８年）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、出典：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３〜６８１頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．１９８１年））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４〜６２８頁（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９２）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８巻（２号）：２９９〜３１０頁（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０巻（５号）：１０７３〜１０９３頁（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１巻（３４号）：１２４６７〜１２４７２頁（２００４）；およびＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４巻（１〜２号）：１１９〜１３２頁（２００４）を参照）、ならびに、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部もしくは全体またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子を有するヒトまたはヒト様抗体を動物で生成するための技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；ＷＯ１９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０巻：２５５１頁（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６２巻：２５５〜２５８頁（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７巻：３３頁（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；第５，５４５，８０６号；第５，５６９，８２５号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３���４２５号および第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：７７９〜７８３頁（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻：８５６〜８５９頁（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻：８１２〜８１３頁（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４巻：８４５〜８５１頁（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４巻：８２６頁（１９９６）；およびＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３巻：６５〜９３頁（１９９５）を参照）。
【００３８】
用語「裸の抗体」は、細胞毒性部分または放射標識とコンジュゲートしていない抗体を指す。
【００３９】
用語「完全長抗体」、「無傷の抗体」または「全抗体」は互換的に用いられ、抗体断片とは対照的にその実質的に無傷の形の抗体を指す。具体的には、全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖および軽鎖を有するものが含まれる。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異体であってよい。場合によっては、無傷の抗体は、１つまたは複数のエフェクター機能を有することができる。
【００４０】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいてその抗原への参照抗体の結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、反対に、参照抗体は競合アッセイにおいてその抗原へのその抗体の結合を５０％以上ブロックする。競合アッセイは当技術分野で公知である。
【００４１】
例示的な競合アッセイでは、固定化されたＩｇＥのＭ１’セグメントは、Ｍ１’セグメントに結合する第１の標識抗体（例えば、抗体４７Ｈ４、４７Ｈ４  ｖ１、ｖ２、ｖ３、ｖ４、ｖ５またはｖ６）、およびＭ１’セグメントへの結合に関して第１の抗体と競合するその能力について試験される第２の非標識抗体を含む溶液でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＭ１’セグメントは、第１の標識抗体を含んでいるが第２の非標識抗体を含まない溶液でインキュベートされる。Ｍ１’セグメントへの第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーションの後、過剰な未結合の抗体は除去され、固定化されたＭ１’セグメントに結合している標識の量が測定される。固定化されたＭ１’セグメントと結合している標識の量が対照試料に対して試験試料で実質的に低減されている場合は、それは、Ｍ１’セグメントへの結合に関して第２の抗体が第１の抗体と競合していることを示す。ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）を参照。
【００４２】
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部、好ましくは無傷の抗体の抗原結合および／または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁［１９９５］）；抗体断片から形成される単鎖抗体分子および多重特異的抗体が含まれる。
【００４３】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、および、その呼称は容易に結晶化するその能力を反映する残りの「Ｆｃ」断片を生成する。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体と共にＨ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、および１本の重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は抗原結合に関して一価であり、すなわち、それは単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィドで連結されたＦａｂ断片におおよそ対応し、抗原を架橋することがなお可能である単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を与える。ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含む２、３のさらなる残基を有することによって、Ｆａｂ’断片はＦａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書において、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’のための呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、それらの間でヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として当初生成された。抗体断片の他の化学的結合も、公知である。
【００４４】
Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一緒に保持される両Ｈ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、特定の型の細胞で見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識される領域であるＦｃ領域の配列によって判定される。「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を有する最小限の抗体断片である。この断片は、タイトな非共有結合にある１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基を供与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖から各々３つのループ）が出る。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲだけを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体より低い親和性であるが、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００４５】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されるＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨとＶＬドメインの間にさらに含む。ｓＦｖのレビューについては、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、ＮｅｗＹｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４）のＰｌｕｃｋｔｈｕｎを参照。
【００４６】
本発明の抗体の「機能的断片」は、無傷の抗体の一部を含み、無傷の抗体の抗原結合性もしくは可変領域、または改変されたＦｃＲ結合能力を保持するか有する抗体のＦ領域が一般に含まれる。抗体断片の例には、抗体断片から形成される線状抗体、単鎖抗体分子および多重特異的抗体が含まれる。
【００４７】
用語「ダイアボディ」は、鎖内部でなく鎖間でのＶドメインの対形成が達成され、それによって二価断片、すなわち２つの抗原結合部位を有する断片がもたらされるように、ＶＨとＶＬドメインの間で短いリンカー（約５〜１０残基）を有するｓＦｖ断片（前段落を参照）を構築することによって調製される小さな抗体断片を指す。二重特異的ダイアボディは、２つの抗体のＶＨおよびＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖の上に存在する２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロダイマーである。ダイアボディは、例えばＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３）でより詳細に記載される。
【００４８】
本明細書のモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種に由来するか特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応配列と同一であるか相同的であり、鎖の残りは別の種に由来するか別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応配列と同一であるか相同的である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびに所望の生物学的活性を示す限りそのような抗体の断片が含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１巻：６８５１〜６８５５頁（１９８４））。本明細書で対象のキメラ抗体にはＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれ、そこでは、抗体の抗原結合性領域は、例えば対象の抗原でマカクザルを免疫化することによって生成される抗体に由来する。本明細書で用いるように、「ヒト化抗体」は「キメラ抗体」のサブセットとして用いられる。
【００４９】
ヒト以外の（例えば、ネズミの）抗体の「ヒト化」形は、ヒト以外の免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲからの残基が、所望の特異性、親和性および／または能力を有する、マウス、ラット、ウサギまたはヒト以外の霊長類などのヒト以外の種（ドナー抗体）のＨＶＲからの残基によって置換される、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応するヒト以外の残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体で見出されない残基を含むことができる。これらの改変は、結合親和性などの抗体性能をさらに洗練するために加えられてもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つおよび一般的に２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そこでは、超可変ループの全部または実質的に全部がヒト以外の免疫グロブリン配列のそれらに対応し、ＦＲ領域の全部または実質的に全部がヒト免疫グロブリン配列のそれらであるが、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体性能を向上させる１つまたは複数の個々のＦＲ残基置換を含むことができる。
【００５０】
ＦＲ中のこれらのアミノ酸置換の数は、Ｈ鎖では一般的に６個以下であり、Ｌ鎖では３個以下である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、一般的にヒト免疫グロブリンのそれの少なくとも一部を任意選択でさらに含む。さらに詳細には、例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２巻：５９３〜５９６頁（１９９２）を参照。さらに、例えば、ＶａｓｗａｎｉおよびＨａｍｉｌｔｏｎ、Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ、Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１巻：１０５〜１１５頁（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３巻：１０３５〜１０３８頁（１９９５）；ＨｕｒｌｅおよびＧｒｏｓｓ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５巻：４２８〜４３３頁（１９９４）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号および第７，０８７，４０９号を参照。
【００５１】
「ヒト抗体」は、ヒトによって生成される抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有するもの、および／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製する技術のいずれかを用いて作製されたものである。ヒト抗体のこの定義は、ヒト以外の抗原結合性残基を含むヒト化抗体を特異的に排除する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当技術分野で公知である様々な技術を用いて生成することができる。ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７巻：３８１頁（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１頁（１９９１）。ヒトモノクローナル抗体の調製のためには、Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻（１号）：８６〜９５頁（１９９１）に記載される方法も利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋおよびｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、５巻：３６８〜７４頁（２００１）も参照。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応じてそのような抗体を生成するように改変されたが、その内在性遺伝子座が不能にされたトランスジェニック動物、例えば免疫化ゼノマウスに抗原を投与することによって調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号および第６，１５０，５８４号を参照）。さらに、例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されたヒト抗体に関する、Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３巻：３５５７〜３５６２頁（２００６）を参照。
【００５２】
本明細書で用いられるとき、用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」は、配列が超可変であり、および／または構造的に規定されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は６つのＨＶＲを含み、それらは、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）である。天然の抗体では、Ｈ３およびＬ３は６つのＨＶＲの最も多様性を提示し、特にＨ３は抗体に微細な特異性を付与する特異な役割をすると考えられている。例えば、Ｘｕら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３巻：３７〜４５頁（２０００）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８巻：１〜２５頁（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３年）のＪｏｈｎｓｏｎおよびＷｕを参照。実際、重鎖だけからなる天然に存在するラクダの抗体は、軽鎖の不在下において機能的で安定している。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６３巻：４４６〜４４８頁（１９９３）およびＳｈｅｒｉｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３巻：７３３〜７３６頁（１９９６）を参照。
【００５３】
いくつかのＨＶＲ描写が使用され、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔの相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは配列変動性に基づいており、最も一般的に用いられる（Ｋａｂａｔら、上記）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに構造ループの位置を参考にする（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７））。ＡｂＭ  ＨＶＲはＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造ループの間の妥協に相当し、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ  ＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェアで用いられる。「コンタクト（ｃｏｎｔａｃｔ）」ＨＶＲは、利用できる複雑な結晶構造の分析に基づく。これらのＨＶＲの各々からの残基を、下に記す。
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【００５４】
ＨＶＲは、以下の通りに「延長ＨＶＲ」を含むことができる：ＶＬでは２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、ＶＨでは２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４７〜６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）および９３〜１０２（Ｈ３）。これらの延長ＨＶＲ定義の各々について、可変ドメイン残基はＫａｂａｔら、上記、に従って番号をつけられる。
【００５５】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００５６】
表現「Ｋａｂａｔにおける可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位置番号付け」およびその変形は、Ｋａｂａｔら、上記、における抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインのために用いられる番号付け体系を指す。この番号付け体系を用いて、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮またはそれへの挿入に対応するより少ないか追加のアミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含むことができる。所与の抗体のためのＫａｂａｔによる残基の番号付けは、「標準」のＫａｂａｔによって番号付けられた配列との抗体配列の相同領域での整列によって決定することができる。
【００５７】
本明細書において、「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含むことができるか、それは既存のアミノ酸配列変化を含有することができる。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下または２以下である。
【００５８】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンのＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択で最も一般的に見られるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンのＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）におけるサブグループである。一実施形態では、ＶＬについては、サブグループは、Ｋａｂａｔら、上記、におけるサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨについては、サブグループは、Ｋａｂａｔら、上記、におけるサブグループＩＩＩである。
【００５９】
「ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔら、上記、の重鎖可変サブグループＩＩＩのアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施形態では、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークのアミノ酸配列は、以下の配列の各々の少なくとも一部または全てを含む：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(配列番号31)(H1)、
WVRQAPGKGLEWVA(配列番号32)(H2)、
RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(配列番号33)(H3)、
WGQGTLVTVSS(配列番号34)(H4)。
【００６０】
「ＶＬサブグループＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔら、上記、の軽鎖可変カッパサブグループＩのアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施形態では、ＶＨサブグループＩコンセンサスフレームワークのアミノ酸配列は、以下の配列の各々の少なくとも一部または全てを含む：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(配列番号35)(L1)、
WYQQKPGKAPKLLIY(配列番号36)(L2)、
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(配列番号37)(L3)、
FGQGTKVEIKR(配列番号38)(L4)。
【００６１】
例えばＦｃ領域の特定の位置での「アミノ酸改変」は、特定の残基の置換もしくは欠失、または特定の残基に隣接する少なくとも１つのアミノ酸残基の挿入を指す。特定の残基に「隣接する」挿入は、その１〜２残基以内の挿入を意味する。挿入は特定の残基のＮ末端側またはＣ末端側であってよい。本明細書で好ましいアミノ酸改変は置換である。
【００６２】
「親和性成熟」抗体は、それらの変更を有しない親抗体と比較して、抗原への抗体の親和性の向上をもたらす、その１つまたは複数のＨＶＲでの１つまたは複数の変更を有するものである。一実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対するナノモルの親和性またはピコモルの親和性でさえも有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の手順によって生成される。例えば、Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：７７９〜７８３頁（１９９２）は、ＶＨおよびＶＬドメインシャフリングによる親和性成熟を記載する。ＨＶＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えば：Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１巻：３８０９〜３８１３頁（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ  １６９巻：１４７〜１５５頁（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５巻：１９９４〜２００４頁（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４巻（７号）：３３１０〜９頁（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６巻：８８９〜８９６頁（１９９２）に記載される。
【００６３】
特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチドの上のエピトープに「特異的に結合する」か「特異的である」抗体は、他のいかなるポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、その特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチドの上のエピトープに結合するものである。例えば、本発明のＭ１’特異的抗体は、Ｂ細胞の膜ＩｇＥの上で見出されるが分泌されたＩｇＥの上に存在しない、ＩｇＥのＭ１’細胞外セグメントに特異的である。一部の実施形態では、ＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【００６４】
「アポトーシスを誘導する」か、「アポトーシス性である」抗体は、標準のアポトーシスアッセイ、例えばアネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス体と呼ばれる）の形成によって判定されるプログラム細胞死を誘導するものである。例えば、本発明の抗ＩｇＥ抗体のアポトーシス活性は、表面結合ＩｇＥを有する細胞をアネキシンＶで染色することによって示すことができる。
【００６５】
用語「総血清中ＩｇＥ」または「血清中総ＩｇＥ」は、血清試料中に存在するＩｇＥの総量を指す。
【００６６】
用語「アレルゲン特異的ＩｇＥ」は、アレルギー感作として知られる過程でのアレルゲンへの初期曝露からもたらされる特定の抗原に特異的であり、肥満細胞および好塩基球の表面に結合し、それが同じアレルゲンへの以降の曝露によって肥満細胞および好塩基球の活性化をもたらすことができるＩｇＥを指す。ウイルス（例えば、サイトメガロウイルス（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）−ＣＭＶ）、細菌（例えば、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ））、蠕虫（例えば、回虫（Ａｓｃａｒｉｓ）、住血吸虫属（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ））のいくつかのマイトジェン因子および大気汚染中のアジュバント因子（例えば、たばこの煙およびディーゼル排気）は、いかなるアレルゲン特異的ＩｇＥ感作を開始することなしにＩｇＥ分子の生成を刺激する。したがって、必ずしも宿主をＩｇＥ媒介障害に対してより感受性になるようにしむけない方法でＩｇＥレベルが上昇することができるので、アレルゲン特異的ＩｇＥレベルは臨床評価で時には用いられる。
【００６７】
本明細書で用いるように、ヒトにおける「ベースライン」レベル（血清中総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥのベースラインレベルなど）は、本明細書に記載される抗ＩｇＥ抗体のヒトへの投与の前のレベルを指す。
【００６８】
用語「ＩｇＥ−Ｍ１プライムを発現するＢ細胞を減少させる」とは、ＩｇＥスイッチＢ細胞、ＩｇＥ形質芽細胞またはＩｇＥ記憶Ｂ細胞の１つまたは複数を減少させ、その結果として、ＩｇＥを特異的に分泌するＢ細胞（すなわち、形質細胞）の集団またはその効果を低減するが、他の免疫グロブリン、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＭを分泌するＢ細胞の集団または効果に有意に影響を及ぼさない能力を意味する。
【００６９】
用語「固相」は、本発明の抗体が付着することができる非水性基質を言う。本明細書に包含される固相の例には、ガラス（例えば、コントロールされた細孔ガラス）、多糖（例えば、アガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコールおよびシリコーンで部分的にまたは全体が形成されるものが含まれる。特定の実施形態では、文脈に従い、固相はアッセイプレートのウェルを含むことができ、他の実施形態では、それは精製カラム（例えば、親和性クロマトグラフィーカラム）である。この用語には、米国特許第４，２７５，１４９号に記載されるものなどの分散粒子の不連続な固相も含まれる。
【００７０】
抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列の変異体Ｆｃ領域）に帰せられる生物学的活性を指し、抗体アイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例には、以下のものが含まれる：Ｃ１ｑ結合および補体依存細胞毒性；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節；およびＢ細胞活性化。
【００７１】
「抗体依存性細胞媒介細胞毒性」またはＡＤＣＣは、特定の細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合している分泌されたＩｇが、これらの細胞毒性エフェクター細胞が抗原を運ぶ標的細胞に特異的に結合し、その後細胞毒で標的細胞を死滅させることを可能にする細胞毒性の形態を指す。抗体は細胞毒性細胞を「武装させ」、この機構によって標的細胞を死滅させるために必要とされる。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩだけを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９巻：４５７〜９２頁（１９９１）の４６４頁の表３で要約される。対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイ、例えば米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載のものを実施することができる。そのようなアッセイのための有益なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、対象の分子のＡＤＣＣ活性は、例えばＣｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８）に開示されているものなどの動物モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで評価されてもよい。
【００７２】
本明細書で特に明記しない限り、免疫グロブリン重鎖中の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、上記、におけるようなＥＵ指数のそれである。「ＫａｂａｔにおけるようなＥＵ指数」とは、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。
【００７３】
本明細書の用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために用いられ、天然配列のＦｃ領域および変異体Ｆｃ領域を含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は異なることもあるが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、通常Ｃｙｓ２２６位置のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端に及ぶと定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付け体系による残基４４７）は、例えば、抗体の生成もしくは精製の間に、または、抗体の重鎖をコードする核酸を組換えで操作することによって除去することができる。したがって、無傷の抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されない抗体集団、およびＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体の混合物を有する抗体集団を含むことができる。本発明の抗体で用いるのに適する天然配列Ｆｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が含まれる。
【００７４】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を言う。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が含まれ、対立遺伝子の変異体、あるいはこれらの受容体のスプライシング形を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「抑制受容体」）が含まれ、それらはその細胞質ドメインが主に異なる類似したアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体のチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。抑制受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体のチロシンベースの抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５巻：２０３〜２３４頁（１９９７）を参照）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９巻：４５７〜９２頁（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４巻：２５〜３４頁（１９９４）；およびｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６巻：３３０〜４１頁（１９９５）でレビューされる。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書の用語「ＦｃＲ」に包含される。
【００７５】
用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」には、新生児受容体ＦｃＲｎも含まれ、それは胎児への母体のＩｇＧの移動を担う。Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７巻：５８７頁（１９７６）およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４巻：２４９頁（１９９４）。ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は、公知である（例えば、ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １８巻：（１２号）：５９２〜８頁（１９９７）；Ｇｈｅｔｉｅら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５巻（７号）：６３７〜４０頁（１９９７）；Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９巻（８号）：６２１３〜６頁（２００４）；ＷＯ２００４／９２２１９（Ｈｉｎｔｏｎら）を参照）。
【００７６】
ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏでのＦｃＲｎへの結合および血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくはトランスフェクトされたヒト細胞系で、または、変異体Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類で試験することができる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合を向上または低減させた抗体変異体を記載する。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９巻（２号）：６５９１〜６６０４頁（２００１）も参照。
【００７７】
「ヒトエフェクター細胞」は、１つまたは複数のＦｃＲを発現してエフェクター機能を発揮する白血球である。好ましくは、この細胞は少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現してＡＤＣＣエフェクター機能を発揮する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞毒性Ｔ細胞および好中球が含まれ、ＰＢＭＣおよびＭＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、天然の供給源、例えば血液から単離することができる。
【００７８】
「補体依存細胞毒性」または「ＣＤＣ」は、補体存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、それらの同族抗原に結合する抗体（適切なサブクラスの）への、補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）の結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２巻：１６３頁（１９９６）に記載されているようなＣＤＣアッセイを実施することができる。
【００７９】
変更されたＦｃ領域アミノ酸配列および増加または低下したＣ１ｑ結合能力を有するポリペプチド変異体が、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号およびＷＯ９９／５１６４２に記載される。それらの特許公報の内容は、参照により具体的に本明細書に組み込まれる。Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４巻：４１７８〜４１８４頁（２０００）も参照。
【００８０】
Ｆｃ領域に付着する炭水化物は、変更することができる。哺乳動物細胞によって生成される天然の抗体は、Ｎ連結によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に付着する、分枝状、二触覚オリゴ糖を一般的に含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら（１９９７）ＴＩＢＴＥＣＨ  １５巻：２６〜３２頁を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧＩｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸、ならびに二触覚オリゴ糖構造の「ステム」のＧＩｃＮＡｃに付着したフコースを含むことができる。一部の実施形態では、特定のさらに向上した性質を有するＩｇＧを作製するために、ＩｇＧのオリゴ糖の改変を加えることができる。
【００８１】
例えば、Ｆｃ領域に付着する（直接または間接的に）フコースを欠く炭水化物構造を有する、抗体改変形が提供される。そのような改変形は、向上したＡＤＣＣ機能を有することができる。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．、  Ｌｔｄ）を参照。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体改変形に関する刊行物の例には、以下のものが含まれる：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．ＭｏＬ  Ｂｉｏｌ．３３６巻：１２３９〜１２４９頁（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４頁（２００４）。脱フコシル化抗体を生成することが可能な細胞系の例には、タンパク質フコシル化を欠くＬｅｅ  １３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９巻：５３３〜５４５頁（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；およびＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１で）、およびノックアウト細胞系、例えばアルファ−１，６−フコシル基転移酵素遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４頁（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４巻（４号）：６８０〜６８８頁（２００６）；およびＷＯ２００３／０８５１０７を参照）が含まれる。
【００８２】
「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）の間の非共有相互作用全体の強度を一般に指す。特に明記しない限り、本明細書で用いるように、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）の間の１：１の相互作用を反映する内在性の結合親和性を指す。そのパートナーＹへの分子Ｘの親和性は、解離定数（Ｋｄ）によって一般的に表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む当技術分野で公知の一般方法を用いて測定することができる。低親和性抗体は抗原に一般に遅く結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は抗原に一般により速く結合し、結合をより長く保つ傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法は当技術分野で公知であり、そのいずれかを本発明のために用いることができる。結合親和性を測定するための具体的な例証的および例示的な実施形態は、以下で記載される。
【００８３】
一実施形態では、本発明による「Ｋｄ」または「Ｋｄ値」は、以下のアッセイで記載される対象の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原で実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原へのＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定シリーズの存在下で最小限の濃度の（１２５Ｉ）標識抗原でＦａｂを平衡させ、結合した抗原を次に抗Ｆａｂ抗体でコーティングしたプレートで捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３巻：８６５〜８８１頁（１９９９）を参照）。アッセイの条件を確立するために、マイクロタイタープレート（ＤＹＮＥＸ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後室温（およそ２３℃）で２〜５時間、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンでブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）で、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を対象のＦａｂの連続希釈と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７巻：４５９３〜４５９９頁（１９９７）の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２、の評価と一貫する）。対象のＦａｂを、次に一晩インキュベートする。しかし、平衡に到達するように、インキュベーションはより長い期間（例えば、約６５時間）続けることができる。
【００８４】
その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために、混合液を捕捉プレートに移す。溶液を次に除去し、ＰＢＳ中０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（商標）界面活性剤でプレートを８回洗浄する。プレートが乾燥したとき、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、１０分間、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）で計数する。最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度が、競合結合アッセイで使用するために選択される。
【００８５】
別の実施形態により、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００機器（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を、約１０応答単位（ＲＵ）の固定化抗原ＣＭ５チップと２５℃で用いる表面プラスモン共鳴アッセイを用いて測定される。簡潔には、供給業者の指示に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。結合タンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成するために、抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム，ｐＨ４．８で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈してから、５μｌ／分の流量で注射する。抗原の注射の後、１Ｍのエタノールアミンを注射して未反応基をブロックする。動態測定のために、Ｆａｂの二倍連続希釈（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、２５℃の０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商標）界面活性剤を含有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）でおよそ２５μｌ／分の流量により注射する。会合および解離センサーグラムを同時に取り付け、簡単な１対１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を用いることによって、会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３巻：８６５〜８８１頁（１９９９）を参照。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによってオンレートが１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合は、オンレートは、ＰＢＳ中２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ形）ｐＨ７．２の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または低下を、ストップフローを備えた分光計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などのスペクトロメータで測定されるような増加する抗原濃度の存在下において２５℃で測定する蛍光失活技術を用いて判定することができる。
【００８６】
本発明による「オンレート」、「会合の速度」、「会合速度」または「ｋｏｎ」は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００システム（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて上記のように判定することもできる。
【００８７】
本明細書で用いられる語句「実質的に低減される」または「実質的に異なる」は、２つの値の間の差が前記値（例えば、Ｋｄ値）で測定される生物学的特性の面で統計的に有意であると当業者がみなすような、２つの数値（一般に１つは分子と関連し、他は参照／コンパレーター分子と関連する）の間の差の十分に高い程度を表す。前記２つの値の間の差は、例えば、参照／コンパレーター分子の値の関数として、約１０％を超え、約２０％を超え、約３０％を超え、約４０％を超えおよび／または約５０％を超える。
【００８８】
本明細書で用いられる用語「実質的に類似した」または「実質的に同じ」は、２つの値の間の差が前記値（例えば、Ｋｄ値）で測定される生物学的特性の面で生物学的および／または統計的にほとんど有意でないと当業者がみなすような、２つの数値（例えば、１つは本発明の抗体と関連し、他は参照／コンパレーター抗体と関連する）の間の類似性の十分に高い程度を表す。前記２つの値の間の差は、例えば、参照／コンパレーターの値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満および／または約１０％未満である。
【００８９】
ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」および「相同性」は、最大の配列同一性パーセントを達成するために配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の、特定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の百分率と規定され、いかなる保存的な置換も配列同一性の一部とみなされない。アミノ酸配列同一性パーセントを判定するためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内である様々な方法で、例えば公開されているコンピュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを用いて達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適当なパラメータを判断することができる。しかし、本明細書において、アミノ酸配列同一性％値は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって書かれた配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を用いて生成される。ＡＬＩＧＮ−２のソースコードはＵ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．２０５５９の利用者文書に出願され、そこで、それは米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａで公開されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ＵＮＩＸオペレーティングシステム、好ましくはデジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄで用いるためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータはＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更されない。
【００９０】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が使用される状況では、所与のアミノ酸配列Ｂ（それは、代わりに所与のアミノ酸配列Ｂに、それと、またはそれに対して特定のアミノ酸配列同一性％を有するか含む所与のアミノ酸配列Ａと言い表してもよい）への、それとの、またはそれに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％は、以下の通りに計算され：
１００×分数Ｘ／Ｙ
上式で、ＸはＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により同一の組合せとして評価されるアミノ酸残基の数であり、ＹはＢにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ａ対Ｂのアミノ酸配列同一性％はＢ対Ａのアミノ酸配列同一性％に等しくないことが理解される。
【００９１】
特記されていない限り、本明細書で用いられる全てのアミノ酸配列同一性％値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを用いて直前の段落に記載の通りに得られる。
【００９２】
本明細書の抗体をコードする「単離された」核酸分子は、それが生成された環境中でそれが通常関連している少なくとも１つの混在核酸分子から同定および分離される核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、その生成環境と関連している全ての構成成分と関連していない。本明細書のポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸分子は、それが本来見出される形または状況以外の形である。したがって、単離された核酸分子は、細胞に天然に存在する本明細書のポリペプチドおよび抗体をコードする核酸と区別される。
【００９３】
用語「制御配列」は、特定の宿主生物体での作動可能に連結されたコード配列の発現のために必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に好適な制御配列には、例えば、プロモーター、任意選択でオペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを利用することが知られている。
【００９４】
別の核酸配列と機能的関係に置かれるとき、核酸は「作動可能に連結される」。例えば、シグナルペプチドまたは分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するタンパク質前駆体として発現されるとき、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結され；プロモーターまたはエンハンサーは、その配列の転写に影響を及ぼすとき、コード配列に作動可能に連結され；あるいは、リボソーム結合部位は、翻訳を促進するように置かれるとき、コード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結される」は、連結されるＤＮＡ配列が連続していること、および分泌リーダーの場合には、連続し、かつ読取相にあることを意味する。しかし、エンハンサーは連続している必要はない。連結は、都合のよい制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合には、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが従来の慣行に従って利用される。
【００９５】
「安定した」製剤は、その中のタンパク質が保管後にその物理化学的安定性および完全性を事実上保持するものである。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当技術分野で入手でき、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７〜３０１頁、Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０巻：２９〜９０頁（１９９３）でレビューされている。安定性は、選択された温度で選択された時間、測定することができる。迅速スクリーニングのために、製剤を２週〜１カ月の間４０℃に保つことができ、そのときに安定性が測定される。製剤を２〜８℃に保存する予定の場合には、一般に、製剤は３０℃もしくは４０℃で少なくとも１カ月、および／または２〜８℃で少なくとも２年間安定であるべきである。製剤を３０℃に保存する予定の場合には、一般に、製剤は３０℃で少なくとも２年間、および／または４０℃で少なくとも６カ月の間安定であるべきである。例えば、保存中の凝集の程度を、タンパク質安定性の指標として用いることができる。したがって、「安定した」製剤は、製剤中にタンパク質の約１０％未満、好ましくは約５％未満が凝集体として存在するものであってよい。他の実施形態では、製剤の保存中の凝集体形成の任意の増加を測定してもよい。
【００９６】
「再構成された」製剤は、タンパク質が全体に分散するように、凍結乾燥されたタンパク質または抗体製剤を希釈剤に溶解することによって調製されたものである。再構成された製剤は、対象のタンパク質で処置する患者への投与（例えば非経口投与）のために適し、本発明の特定の実施形態では、皮下投与のために適するものであってよい。
【００９７】
「等張性」製剤は、ヒト血液と事実上同じ浸透圧を有するものである。等張性製剤は、約２５０〜３５０ｍＯｓｍの浸透圧を一般に有する。用語「低張性」は、ヒト血液のそれより下の浸透圧を有する製剤を言う。対応して、用語「高張性」は、ヒト血液のそれより上の浸透圧を有する製剤を記載するために用いられる。等張性は、例えば、蒸気圧または氷結型浸透圧計を用いて測定することができる。本発明の製剤は、塩および／または緩衝剤の添加の結果、高張性である。
【００９８】
本明細書で用いられる「担体」には、使用される投薬量および濃度で、それに曝露させられる細胞または哺乳動物に無毒である薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤が含まれる。しばしば、生理的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。
【００９９】
生理的に許容される担体の例には、緩衝剤、例えばリン酸、クエン酸および他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化物；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン；単糖、二糖およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート化剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトールまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；および／または非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）が含まれる。
【０１００】
「添付文書」は、適応症、用法、投薬量、投与、禁忌症、パッケージ製品と組み合わされる他の医薬、および／またはそのような医薬の使用に関する警告などに関する情報を含む市販の医薬パッケージに慣例的に含まれる説明書を指す。
【０１０１】
「薬学的に許容される酸」には、それらが製剤化される濃度および様式で無毒である、無機および有機酸が含まれる。例えば、適する無機酸には、塩酸、過塩素酸、臭化水素、ヨウ化水素、硝酸、硫酸、スルホン酸、スルフィン酸、スルファニル酸、リン酸、炭酸などが含まれる。適する有機酸には、直鎖および分岐鎖アルキル、芳香族、環式、脂環式、アリール脂肪族、複素環式、飽和、不飽和、モノ、ジ−およびトリカルボン酸、例えば、ギ酸、酢酸、２−ヒドロキシ酢酸、トリフルオロ酢酸、フェニル酢酸、トリメチル酢酸、ｔ−ブチル酢酸、アントラニル酸、プロパン酸、２−ヒドロキシプロパン酸、２−オキソプロパン酸、プロパン二酸、シクロペンタンプロピオン酸、シクロペンタンプロピオン酸、３−フェニルプロピオン酸、ブタン酸、ブタン二酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、アスコルビン酸、桂皮酸、ラウリル硫酸、ステアリン酸、ムコン酸、マンデル酸、コハク酸、エムボン酸、フマル酸、リンゴ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、マロン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、グリコール酸、グリコン酸、グルコン酸、ピルビン酸、グリオキサル酸、シュウ酸、メシル酸、コハク酸、サリチル酸、フタル酸、パルモ酸、パルメ酸、チオシアン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、樟脳スルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、４，４’−メチレンビス−３−（ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）、ヒドロキシナフトエ酸が含まれる。
【０１０２】
「薬学的に許容される塩基」には、それらが製剤化される濃度および様式で無毒である無機および有機の塩基が含まれる。例えば、適する塩基には、無機塩基形成金属、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムから形成されるもの、Ｎ−メチルグルカミン、モルホリン、ピペリジン、ならびに有機無毒塩基、例えば、一級、二級および三級アミン、置換されたアミン、環状アミンおよび塩基性のイオン交換樹脂［例えば、Ｎ（Ｒ’）４＋（式中、Ｒ’は独立してＨまたはＣ１〜４アルキルである、例えばアンモニウム、Ｔｒｉｓ）］、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などが含まれる。特に好ましい有機無毒塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、コリンおよびカフェインである。
【０１０３】
本発明で用いることができる追加の薬学的に許容される酸および塩基には、アミノ酸、例えばヒスチジン、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジンおよびアスパラギンに由来するものが含まれる。
【０１０４】
「薬学的に許容される」緩衝剤および塩には、上に示す酸および塩基の酸および塩基付加塩に由来するものが含まれる。具体的な緩衝剤および／または塩には、ヒスチジン、コハク酸塩および酢酸塩が含まれる。
【０１０５】
「薬学的に許容される糖」は、対象のタンパク質と組み合わせたときに、保存後のタンパク質の化学的および／または物理的不安定性を有意に防止するか低減する分子である。製剤を凍結乾燥し、次に再構成する予定の場合は、「薬学的に許容される糖」は「凍結乾燥保護剤」として知られることもある。例示的な糖およびそれらの対応する糖アルコールには、以下のものが含まれる：グルタミン酸一ナトリウムまたはヒスチジンなどのアミノ酸；ベタインなどのメチルアミン；硫酸マグネシウムなどの離液性の塩；ポリオール、例えば三水素化合物またはより高分子量の糖アルコール、例えばグリセリン、デキストラン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）；ならびにその組合せ。さらなる例示的な凍結乾燥保護剤には、グリセリンおよびゼラチン、ならびに糖のメリビオース、メレチトース、ラフィノース、マンノトリオースおよびスタキオースが含まれる。還元糖の例には、グルコース、マルトース、乳糖、マルツロース、イソマルツロースおよびラクツロースが含まれる。非還元糖の例には、糖アルコールおよび他の直鎖多価アルコールから選択されるポリヒドロキシ化合物の非還元グリコシドが含まれる。好ましい糖アルコールはモノグリコシドであり、特に乳糖、マルトース、ラクツロースおよびマルツロースなどの二糖の還元によって得られる化合物である。グリコシド側鎖基はグルコシド、またはガラクトシドであってよい。糖アルコールのさらなる例は、グルシトール、マルチトール、ラクチトールおよびイソマルツロースである。好ましい薬学的に許容される糖は、非還元糖トレハロースまたはスクロースである。薬学的に許容される糖は、タンパク質が保存中（例えば、再構成および保存の後）にその物理化学的安定性および完全性を事実上保持することを意味する「保護量」（例えば凍結乾燥前）で製剤に加えられる。
【０１０６】
本明細書の対象の「希釈剤」は、薬学的に許容され（ヒトへの投与のために安全で無毒）、液体製剤の調製、例えば凍結乾燥後に再構成される製剤のために有益なものである。例示的な希釈剤には、無菌水、静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えばリン酸緩衝食塩水）、無菌食塩水溶液、リンガー液またはブドウ糖溶液が含まれる。代替実施形態では、希釈剤には塩および／または緩衝剤の水溶液を含めることができる。
【０１０７】
「保存剤」は、細菌活動を低減するために本明細書の製剤に加えることができる化合物である。保存剤の添加は、例えば、多回使用（多回用量）製剤の生産を容易にすることができる。可能性がある保存剤の例には、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム（アルキル基が長鎖化合物であるアルキルベンジルジメチルアンモニウムクロリドの混合物）および塩化ベンゼトニウムが含まれる。他の型の保存剤には、芳香族アルコール、例えばフェノール、ブチルおよびベンジルアルコール、アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノールおよびｍ−クレゾールが含まれる。本明細書の最も好ましい保存剤は、ベンジルアルコールである。
【０１０８】
本明細書で用いるように、用語「処置」は、臨床病理の過程で処置される個体または細胞の自然過程を変更するように設計された臨床的介入を指す。処置の望ましい作用には、疾患進行の速度を低下させること、疾患状態を改善または緩和すること、および寛解または予後診断の向上が含まれる。一部の実施形態では、処置は、喘息コントロールを向上させ、喘息増悪を低減し、肺機能を向上させ、および／または患者の報告症状を改善する。例えばＩｇＥ媒介障害と関連する１つまたは複数の症状が軽減されるか除去されるとき、個体は成功のうちに「処置される」。本明細書で用いるように、「と併用」は、別の処置療法に加えた１つの処置療法の投与を指す。このように、「と併用」は、他の処置療法の投与の前、その間またはその後の、個体への１つの処置療法の投与を指す。
【０１０９】
本明細書で用いるように、用語「予防」は、個体での疾患の発生または再発に関して予防処置を提供することを含む。個体は、ＩｇＥ媒介障害の素因があり、感受性であってよいか、またはＩｇＥ媒介障害を起こす危険があってもよいが、まだその障害と診断されていない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩｇＥ抗体は、ＩｇＥ媒介障害の発達を遅らせるために用いられる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩｇＥ抗体は、喘息増悪および／または肺機能の低下または喘息状態を予防する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩｇＥ抗体は、ＩｇＥ媒介免疫応答を予防する。
【０１１０】
本明細書で用いるように、ＩｇＥ媒介障害を起こす「危険がある」個体は、本明細書に記載される処置方法の前に、検出可能な疾患もしくは疾患の症状を有しても有しなくてもよく、検出可能な疾患もしくは疾患の症状を提示していても提示していなくてもよい。「危険がある」は、当技術分野で公知であるように、個体が、ＩｇＥ媒介障害の発達と相関する測定可能なパラメータである１つまたは複数の危険因子を有することを意味する。これらの危険因子の１つまたは複数を有する個体は、これらの危険因子の１つまたは複数を有しない個体よりも、その障害を起こす高い可能性を有する。
【０１１１】
「有効量」は、必要な投薬量および期間で、治療または予防結果を含む所望であるか指示された効果を達成するのに有効な量を少なくとも指す。有効量は、１投与または複数投与で提供することができる。
【０１１２】
「治療的有効量」は、特定の障害の測定可能な向上を成就するために必要とされる少なくとも最小限の濃度である。本明細書において治療的有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別および体重などの因子、ならびに個体で所望の応答を導き出す抗体の能力によって異なってよい。治療的有効量は、抗体のいかなる毒性または有害作用をも、治療的に有益な作用が上回るものでもある。「予防的有効量」は、必要な投薬量および期間で、所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。一般的に、しかし必ずしもそうとは限らないが、疾患の前かより初期の段階で予防用量が対象で用いられるので、予防的有効量は治療的有効量未満であってよい。
【０１１３】
「慢性」投与とは、初期治療効果（活性）を長期間維持するために、急性と対照的に連続的な医薬の投与を指す。「間欠」投与は、間断なく連続して行われるのでなく、周期性の処置である。
【０１１４】
本明細書で用いるように、「個体」または「対象」は哺乳動物である。処置のための「哺乳動物」は、ヒト、家畜および飼育動物、ならびに動物園、スポーツまたは愛玩動物、例えばイヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【０１１５】
用語「医薬製剤」は、有効成分の生物学的活性を有効にするような形であり、製剤が投与される対象に容認できないほど毒性であるさらなる構成成分を含有しない調製物を指す。そのような製剤は無菌である。
【０１１６】
「無菌」製剤は無菌であるか、全ての生きている微生物およびそれらの胞子を含まない。本明細書で用いられる「抗ヒスタミン剤」は、ヒスタミンの生理作用と拮抗する薬剤である。その受容体、Ｈ１およびＨ２へのヒスタミンの結合は、特徴的なアレルギー症状および作用、またはかゆみ、発赤、腫脹などをもたらす。多くの抗ヒスタミン剤は、その受容体、Ｈ１、Ｈ２へのヒスタミンの結合をブロックすることによって作用する。しかし、他は、ヒスタミンの放出を阻害することによって作動すると考えられている。抗ヒスタミン剤の例は、クロルフェニラミン、ジフェンヒドラミン、プロメタジン、クロモリンナトリウム、アステミゾール、マレイン酸アザタジン、マレイン酸ブロフェニラミン、マレイン酸カルビノキサミン、塩酸セチリジン、フマル酸クレマスチン、塩酸シプロヘプタジン、ｄ−マレイン酸ブロムフェニラミン、ｄ−マレイン酸クロルフェニラミン、ジメンヒドリネート、塩酸ジフェンヒドラミン、琥珀酸ドキシラミン、塩酸フェキソフェンダジン、塩酸テルフェナジン、塩酸ヒドロキシジン、ロラチジン、塩酸メクリジン、クエン酸トリペラナミン、塩酸トリペレナミン、塩酸トリプロリジンである。
【０１１７】
本明細書で用いられる「気管支拡張剤」は、初期段階の喘息反応で一般的に起こり、肺容量の低下および息切れをもたらす生理的事象である、気管支収縮に拮抗するかそれを元に戻す薬剤を言う。気管支拡張剤の例には、エピネフリン、広範囲作用性のアルファおよび１つまたは複数のベータアドレナリン作動薬、アルブテロール、ピルブテロール、メタプロテレノール、サルメテロールおよびイソエタリンが含まれる。気管支拡張は、アミノフィリンおよびテオフィリンを含むキサンチンの投与を通して達成することもできる。
【０１１８】
本明細書で用いる「非ステロイド性抗炎症薬」または「ＮＳＡＩＤ」は、ステロイドをベースにしない抗炎症活性を有する薬剤を言う。ＮＳＡＩＤの例には、アセマタシン、アセトアミノフェン、アスピリン、アザプロパゾン、ベノリレート、ブロムフェナクナトリウム、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−２阻害剤、例えばＧＲ  ２５３０３５、ＭＫ９６６、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）；４−（５−（４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンゼン−スルホンアミド）およびバルデコキシブ（ＢＥＸＴＲＡ（登録商標））、ジクロフェナク、ジクロフェナク遅延型、ジクロフェナクナトリウム、ジフルニサル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェンカルシウム、フルルビプロフェン、イブプロフェン、イブプロフェン遅延型、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸ナトリウム、メフェナム酸、メロキシカム（ＭＯＢＩＣ（登録商標））、ナブメトン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、テノキシカム、チアプロフェン酸、トルメチン、トルメチンナトリウム、その塩および誘導体などが含まれる。
【０１１９】
用語「ＩｇＥ媒介障害」は、ＩｇＥのレベルのために非典型的症状が局所的および／または全身的に体に現れることがある、過剰なＩｇＥレベルまたは活性に関連する障害である。そのような障害には、喘息、アトピー皮膚炎、アレルギー性鼻炎、線維症（例えば、ＩＰＦなどの肺線維症）が含まれる。ＩｇＥ媒介障害には、多くの天然に存在する普通の吸入および摂取された抗原に免疫的に応答する一般的な遺伝的傾向、ならびにＩｇＥ抗体の継続的な生成を特徴とするアトピー性障害が含まれる。
【０１２０】
具体的なアトピー性障害には、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎（結膜炎）、アトピー皮膚炎、食物アレルギー、アナフィラキシー、接触性皮膚炎、アレルギー性胃腸病、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症およびアレルギー性紫斑病（ヘノッホ−シェーンライン）が含まれる。アトピー性患者は多重アレルギーをしばしば有し、それは、彼らが季節性、超季節性および職業性のアレルゲンを含む多くの環境アレルゲンへのＩｇＥ抗体およびそれらに起因する症状を有することを意味する。季節性アレルゲンの例には花粉（例えば、草、樹木、ライ麦、オオアワガエリ、ブタクサ）が含まれ、超季節性アレルゲンの例には真菌類（例えば、カビ、カビ胞子）、羽、動物（例えば、ペットまたは他の動物の鱗屑）および昆虫（例えば、チリダニ）残骸が含まれる。職業性アレルゲンの例には、動物（例えばマウス）および植物性の抗原、ならびに薬物、洗浄剤、金属および免疫増強剤、例えばイソシアン酸塩も含まれる。ＩｇＥ媒介反応をもたらすことができる非抗原特異的刺激には、感染、刺激物、例えば煙、燃焼煙霧、ディーゼル排気微粒子および二酸化硫黄、運動、寒さならびに情動ストレスが含まれる。特定の遺伝的背景をもつアトピー性および非アトピー性個体における特定の過敏性反応は、食物（例えば、豆類、ナッツ類）中のタンパク質、毒（例えば、昆虫、ヘビ）、ワクチン、ホルモン、抗血清、酵素、ラテックス、抗生物質、筋弛緩薬、ビタミン、細胞毒、アヘンならびに多糖、例えばデキストリン、鉄デキストランおよびポリゲリンへの曝露から生じることができる。
【０１２１】
ＩｇＥによって媒介されるようであり、本発明の製剤で処置可能な、高いＩｇＥレベルと関連する他の障害には以下のものが含まれる：毛細血管拡張性運動失調、チャーグ−ストラウス症候群、湿疹、腸炎、胃腸病、移植片対宿主反応、過ＩｇＥ（ジョブ）症候群、過敏性（例えば、アナフィラキシー型過敏症、カンジダ症、血管炎）、ＩｇＥ骨髄腫、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎および感染性大腸炎）、粘膜炎（例えば、口粘膜炎、胃腸粘膜炎、鼻粘膜炎および直腸炎）、壊死性全腸炎および食道炎、寄生虫疾患（例えば、トリパノソーマ症）、過敏性血管炎、じんま疹およびウィスコット−アルドリッチ症候群。
【０１２２】
さらに、障害自体が高いＩｇＥと関連しているか否かを問わず、ＩｇＥレベルを低下させることによって処置可能であり、したがって「ＩｇＥ媒介障害」の範囲内とみなすべき障害には、以下のものが含まれる：アジソン病（慢性副腎皮質不全）、脱毛症、遺伝性血管性水腫、血管性水腫（バニスター病、血管運動神経性浮腫）、強直性脊椎炎、無形成性貧血、動脈炎、アミロイド症、免疫障害、例えば自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性多内分泌不全、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血球減少、自己免疫性糸球体腎炎、ベーチェット病、気管支炎、バーガー病、水疱性類天疱瘡、キャプラン症候群（リウマチ様じん肺）、心炎、セリアック病、チェジアック−東症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、コーガン−リース症候群（虹彩角膜内皮症）、ＣＲＥＳＴ症候群、疱疹状皮膚炎（デューリング病）、真性糖尿病、好酸性筋膜炎、好酸性腎炎、上強膜炎、外因性アレルギー性肺胞炎、家族性発作性多漿膜炎、フェルティーの症候群、線維化性肺胞炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、顆粒球減少、肉芽腫、肉芽腫症、肉芽腫筋炎、グレーブス病、ギランバレー症候群（多発性神経炎）、橋本甲状腺炎（リンパ腫性甲状腺腫）、ヘモクロマトーシス、組織球増殖、高好酸球症候群、過敏性腸症候群、若年性関節炎、角膜炎、ハンセン病、紅斑性狼蒼、ライエル病、ライム病、混合型結合組織病、単神経炎、多発性単神経炎、マックル−ウェルズ症候群、粘膜皮膚リンパ系症候群（川崎病）、多中心性網状組織球増殖、多発性硬化症、重症筋無力症、菌状息肉腫、皮下脂肪組織炎、類天疱瘡、天疱瘡、心外膜炎、多発性神経炎、結節性多発性動脈炎、乾癬、乾癬性関節炎、肺関節炎、肺腺腫症、肺線維症、再発性多発性軟骨炎、リウマチ熱、慢性関節リウマチ、副鼻腔炎（副鼻腔炎）、サルコイドーシス、強膜炎、硬化性胆管炎、血清病、セーザリー症候群、シェーグレン症候群、スティーヴンズ−ジョンソン症候群、全身肥満細胞症、移植拒絶、血小板減少性紫斑病、胸腺リンパ形成不全、ブドウ膜炎、白斑、ヴェーゲナー肉芽腫症。
【０１２３】
用語「喘息」は、基礎をなす炎症と関連しているか関連していなくてもよい、可変性および再発性の症状、可逆的空気流閉塞（例えば、気管支拡張剤による）ならびに気管支応答性亢進を特徴とする複合障害を指す。
【０１２４】
喘息の例には、アスピリン感受性／憎悪喘息、アトピー性喘息、重度の喘息、軽度の喘息、中等度ないし重度の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド抗療性喘息、新たに診断された未処置の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドでコントロールできない喘息、およびＪ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１０）１２６巻（５号）：９２６〜９３８頁で指摘される他の喘息が含まれる。
【０１２５】
喘息様症状には、息切れ、咳（痰生成および／または痰の質および／または咳の頻度の変化）、喘鳴、胸部締めつけ、気管支狭窄、および上の症状の１つまたはこれらの症状の組合せに帰される夜間覚醒からなる群から選択される症状が含まれる（Ｊｕｎｉｐｅｒら（２０００）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．、１６２巻（４号）、１３３０〜１３３４頁）。
【０１２６】
用語「軽度の喘息」は、１週につき２回未満の症状または増悪、１カ月につき２回未満の夜間症状を一般に経験する患者を指し、増悪の間は無症状である。軽度の間欠的な喘息は、必要に応じてしばしば以下によって処置される：吸入気管支拡張剤（短時間作用型吸入ベータ２−アゴニスト）；既知のトリガーの回避；年１回のインフルエンザワクチン接種；６〜１０年おきの肺炎球菌ワクチン接種、および場合によっては、特定されたトリガーへの曝露の前に吸入ベータ２−アゴニスト、クロモリンまたはネドクロミル。患者が短時間作用性ベータ２−アゴニストの必要性が増加する（例えば、急性増悪のために１日に３〜４回より多く短時間作用性ベータ２−アゴニストを用いるか、症状のために１カ月に複数のキャニスターを用いる）場合は、患者は療法のステップアップを必要とすることがある。
【０１２７】
用語「中等度の喘息」は、患者が１週につき２回より多く増悪を経験し、増悪が睡眠および活動に影響を及ぼし；患者が、１カ月につき２回より多く喘息による夜間覚醒を有し；患者が、短時間作用型吸入ベータ２−アゴニストを毎日または１日おきに必要とする慢性喘息症状を有し；患者の処置前のベースラインＰＥＦまたはＦＥＶ１が予測される６０〜８０パーセントであり、ＰＥＦ変動性は２０〜３０パーセントである喘息を一般に指す。
【０１２８】
用語「重度の喘息」は、患者がほとんど連続的な症状、頻繁な増悪、喘息による頻繁な夜間覚醒、制限された活動、予測される６０パーセント未満のＰＥＦまたはＦＥＶ１ベースライン、および２０〜３０パーセントのＰＥＦ変動性を有する喘息を一般に指す。
【０１２９】
用語「コルチコステロイド」には、グルココルチコイドおよび鉱質コルチコイドが含まれる。例えば、コルチコステロイドには、それらに限定されないが、フルチカゾン（プロピオン酸フルチカゾン（ＦＰ）を含む）、ベクロメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、モメタゾン、フルニソリド、ベタメタゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロンおよびトリアムシノロンが含まれる。「吸入可能なコルチコステロイド」は、吸入による送達に適するコルチコステロイドを意味する。例示的な吸入可能なコルチコステロイドは、フルチカゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデノシド、フロ酸モメタゾン、シクレソニド、フルニソリド、トリアムシノロンアセトニドおよび今日利用できるか将来利用できるようになる他の任意のコルチコステロイドである。吸入することができ、長時間作用型のベータ２−アゴニストと併用されるコルチコステロイドの例には、限定されずにブデソニド／ホルモテロールおよびフルチカゾン／サルメテロールが含まれる。
【０１３０】
本明細書で用いられる「グルココルチコイド」は、抗炎症性活性を有するステロイドをベースにした薬剤を言う。グルココルチコイドは、後期喘息反応を弱め、喘息増悪を処置するために一般的に用いられる。グルココルチコイドの例には、プレドニゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、トリアムシノロンアセトニド、フルニソリド、ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、デサメタゾントリアムシノロン、酢酸フルドロコルチゾン、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン［メチルプレドニゾロン（例えば、ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム）を含む］およびトリアムシノロンが含まれる。
【０１３１】
用語「ＦＥＶ１」は、強制呼気の最初の１秒で吐き出される空気の量を指す。それは、気道閉塞の測定手段である。ＦＥＶ１の２０％低下（ＰＣ２０）を誘導するために必要とされるメタコリンの刺激濃度は、気道応答性亢進の測定手段である。ＦＥＶ１は他の類似した方法、例えばＦＥＶ１で記すことができ、全てのそのような類似した変形物は同じ意味を有することを理解すべきである。
【０１３２】
用語「ＦＥＶ１の相対的変化」＝（処置の第１２週目のＦＥＶ１−処置開始前のＦＥＶ１）÷ＦＥＶ１。
【０１３３】
本明細書の「自己免疫性障害」は、個体自身の組織もしくは器官から生じ、それを標的にする疾患もしくは障害、またはその同時分離もしくは出現、またはそこから生じる状態である。これらの自己免疫性および炎症性障害の多くでは、いくつかの臨床および検査マーカー、例えば、それらに限定されないが、高ガンマグロブリン血、高レベルの自己抗体、組織中の抗原抗体複合体堆積、コルチコステロイドまたは免疫抑制薬処置による恩恵、および患部組織でのリンパ細胞凝集が存在することがある。Ｂ細胞媒介自己免疫障害に関するいかなる１つの理論に限定されることなく、自己抗体生成、免疫複合体形成、樹状およびＴ細胞活性化、サイトカイン合成、直接的ケモカイン放出、ならびに異所性新リンパ球新生のための場所の提供を含む多数のメカニズム経路を通して、Ｂ細胞がヒト自己免疫疾患で病原性作用を実証すると考えられている。これらの経路の各々は、自己免疫疾患の病理に異なる程度で関与することができる。
【０１３４】
「自己免疫疾患」は、器官特異的疾患（すなわち、免疫応答が内分泌系、造血系、皮膚、心肺系、胃腸肝臓系、腎臓系、甲状腺、耳、神経筋系、中枢神経系などの器官系に特異的に向けられる）または複数の器官系に影響を及ぼすことができる全身疾患（例えば、全身紅斑性狼蒼（ＳＬＥ）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発筋炎など）であってよい。好ましいそのような疾患には、自己免疫性リウマチ障害（例えば、ＲＡ、シェーグレン症候群、強皮症、狼瘡、例えばＳＬＥおよび狼瘡性腎炎、多発筋炎−皮膚筋炎、寒冷グロブリン血、抗リン酸脂質抗体症候群および乾癬性関節炎など）、自己免疫性胃腸肝臓障害（例えば炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病）、自己免疫性胃炎および悪性貧血、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎および腹腔疾患など）、血管炎（例えば、ＡＮＣＡ陰性血管炎およびＡＮＣＡ関連血管炎、例えばチャーグ−ストラウス血管炎、ヴェーゲナー肉芽腫症および顕微鏡的多発血管炎など）、自己免疫性神経障害（例えば多発性硬化症、眼球クローヌスミオクロヌス症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病および自己免疫性多発性ニューロパシーなど）、腎臓障害（例えば糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群およびベルジェ病など）、自己免疫性皮膚障害（例えば乾癬、じんま疹、発疹、尋常天疱瘡、水疱性類天疱瘡および皮膚エリテマトーデスなど）、血液障害（例えば血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後紫斑病および自己免疫性溶血性貧血など）、アテローム硬化症、ブドウ膜炎、自己免疫性聴力疾患（例えば内耳疾患および難聴など）、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植および自己免疫性内分泌障害（例えば糖尿病関連の自己免疫性疾患、例えばインスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）、アジソン病および自己免疫性甲状腺疾患など（例えば、グレーブス病および甲状腺炎））が含まれる。
【０１３５】
さらに好ましいそのような疾患には、例えば、ＲＡ、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、狼瘡、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎および糸球体腎炎が含まれる。
【０１３６】
本明細書で用いられる用語「細胞毒性剤」は、細胞の機能を阻害するか阻止し、および／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。本用語には、放射性同位体（例えばＡｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２およびＬｕの放射性同位体）、および細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素などの毒素、またはその断片が含まれる。
【０１３７】
用語「サイトカイン」は、細胞間媒介物として別の細胞に作用する１つの細胞集団によって放出されるタンパク質の総称語である。そのようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５など、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βなどの腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本明細書で用いるように、用語サイトカインには、天然供給源または組換え体細胞培養からのタンパク質、および天然配列のサイトカインの生物学的に活性な同等物、例えば合成された小分子実体ならびに薬学的に許容されるその誘導体および塩が含まれる。
【０１３８】
用語「ホルモン」は、管を有する腺器官によって一般に分泌されるポリペプチドホルモンを指す。ホルモンには、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；エストラジオール；ホルモン補充療法；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタンまたはテストラクトン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパクホルモン；プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、ゴナドトロピン放出ホルモン；インヒビン；アクチビン；ミュラー阻害物質；ならびにトロンボポエチンが含まれる。本明細書で用いるように、用語ホルモンには、天然供給源または組換え体細胞培養からのタンパク質、および天然配列のホルモンの生物学的に活性な同等物、例えば合成された小分子実体ならびに薬学的に許容されるその誘導体および塩が含まれる。
【０１３９】
用語「増殖因子」は、増殖を促進するタンパク質を指し、例えば、肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；血管内皮細胞増殖因子；ＮＧＦ−βなどの神経成長因子；血小板由来増殖因子；ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βなどのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子ＩおよびＩＩ；エリスロポイエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロンα、βおよびγ；ならびにコロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばマクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）が含まれる。本明細書で用いるように、用語増殖因子には、天然供給源または組換え体細胞培養からのタンパク質、および天然配列の増殖因子の生物学的に活性な同等物、例えば合成された小分子実体ならびに薬学的に許容されるその誘導体および塩が含まれる。
【０１４０】
用語「インテグリン」は、細胞外基質に細胞を結合および応答させ、創傷治癒、細胞分化、腫瘍細胞のホーミングおよびアポトーシスなどの様々な細胞機能に関与する受容体タンパク質を指す。それらは、細胞−細胞外基質および細胞間相互作用に関与する細胞接着受容体の大きなファミリーの一部である。機能的インテグリンは、非共有結合している、アルファおよびベータと呼ばれる２つの膜貫通糖タンパク質サブユニットからなる。ベータサブユニットがそうするように、アルファサブユニットは互いとの多少の相同性を全て共有する。受容体は、１つのアルファ鎖および１つのベータ鎖を常に含有する。例には、アルファ６ベータ１、アルファ３ベータ１、アルファ７ベータ１、ＬＦＡ−１などが含まれる。本明細書で用いるように、用語「インテグリン」には、天然供給源または組換え体細胞培養からのタンパク質、および天然配列のインテグリンの生物学的に活性な同等物、例えば合成された小分子実体ならびに薬学的に許容されるその誘導体および塩が含まれる。
【０１４１】
「ＴＮＦアンタゴニスト」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕおよび／または好ましくはｉｎ  ｖｉｖｏでＴＮＦα活性を低下、ブロック、阻害、抑止または干渉する分子と本明細書で定義される。適するＴＮＦアンタゴニストは、ＴＮＦのＲＮＡ、ＤＮＡまたはタンパク質の合成、ＴＮＦα放出、ＴＮＦα受容体シグナル伝達、膜ＴＮＦα開裂、ＴＮＦα活性、ＴＮＦαの生成および／または合成を低下、ブロック、抑止、干渉、阻止および／または阻害することもできる。そのようなＴＮＦアンタゴニストには、それらに限定されないが、抗ＴＮＦα抗体、その抗原結合性断片、ＴＮＦαとの結合により哺乳動物でＴＮＦαを発現する細胞を破壊するか減少させ、および／またはそれらの細胞の１つまたは複数の機能に干渉する、ＴＮＦαに特異的に結合するその特定された突然変異体またはドメイン、可溶性ＴＮＦ受容体（例えば、ｐ５５、ｐ７０またはｐ８５）またはその断片、融合ポリペプチド、小分子ＴＮＦアンタゴニスト、例えばＴＮＦ結合タンパク質ＩまたはＩＩ（ＴＢＰ−ＩまたはＴＢＰ−ＩＩ）、ネレリモンマブ、ＣＤＰ−５７１、インフリキシマブ、エンテラセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標））、アダリムラブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標））、ＣＤＰ−５７１、ＣＤＰー８７０、アフェリモマブ、レネルセプトなど）、その抗原結合性断片、およびＴＮＦαに特異的に結合する受容体分子；ＴＮＦα合成、ＴＮＦα放出または標的細胞に対するその作用を阻止および／または阻害する化合物、例えばサリドマイド、テニダプ、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、ペントキシフィリンおよびロリプラム）、Ａ２ｂアデノシン受容体アゴニストおよびＡ２ｂアデノシン受容体エンハンサー；ＴＮＦα受容体シグナル伝達を阻止および／または阻害する化合物、例えばマイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼ阻害剤；膜ＴＮＦα開裂をブロックおよび／または阻害する化合物、メタロプロテイナーゼ阻害剤など；ＴＮＦα活性をブロックおよび／または阻害する化合物、例えばアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えば、カプトプリル）；ならびに、ＴＮＦαの生成および／または合成をブロックおよび／または阻害する化合物、例えばＭＡＰキナーゼ阻害剤が含まれる。好ましいアンタゴニストは、抗体を含む。
【０１４２】
「腫瘍壊死因子アルファ」、「ＴＮＦアルファ」または「ＴＮＦα」は、Ｐｅｎｎｉｃａら、Ｎａｔｕｒｅ、３１２巻：７２１頁（１９８４）またはＡｇｇａｒｗａｌら、ＪＢＣ、２６０巻：２３４５頁（１９８５）のアミノ酸配列を含むヒトＴＮＦα分子を指す。本明細書の「ＴＮＦα阻害剤」は、一般にＴＮＦαとの結合およびその活性の中和を通して、ＴＮＦαの生物学的機能をある程度阻害する薬剤である。本明細書のＴＮＦα阻害剤の例には、エタナーセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））およびアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標））が含まれる。
【０１４３】
本明細書の「インテグリンアンタゴニストまたは抗体」の例には、ＬＦＡ−１抗体、例えばＧｅｎｅｎｔｅｃｈから市販されているエファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標））、またはアルファ４インテグリン抗体、例えばＢｉｏｇｅｎから入手可能なナタリズマブ（ＡＮＴＥＧＲＥＮ（登録商標））、またはジアザ環状フェニルアラニン誘導体（ＷＯ２００３／８９４１０）、フェニルアラニン誘導体（ＷＯ２００３／７０７０９、ＷＯ２００２／２８８３０、ＷＯ２００２／１６３２９およびＷＯ２００３／５３９２６）、フェニルプロピオン酸誘導体（ＷＯ２００３／１０１３５）、エナミン誘導体（ＷＯ２００１／７９１７３）、プロパン酸誘導体（ＷＯ２０００／３７４４４）、アルカノン酸誘導体（ＷＯ２０００／３２５７５）、置換されたフェニル誘導体（米国特許第６，６７７，３３９号および第６，３４８，４６３号）、芳香族アミン誘導体（米国特許第６，３６９，２２９号）、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド（ＵＳ２００２／００４２３６８）、アルファｖベータ３インテグリンに対する抗体（ＥＰ６３３９４５）、アザ架橋二環式アミノ酸誘導体（ＷＯ２００２／０２５５６）などが含まれる。
【０１４４】
用語「免疫抑制剤」は、本明細書において処置される対象の免疫系を抑制するか覆い隠す作用をする物質を指す。これには、サイトカイン生成を抑制するか、自己抗原発現を下方調節もしくは抑制するか、またはＭＨＣ抗原を覆い隠す物質が含まれよう。そのような薬剤の例には、２−アミノ−６−アリール−５置換ピリミジン（Ｕ．Ｓ．４，６６５，０７７を参照）；非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；ガンシクロビル、タクロリムス、グルココルチコイド、例えばコルチゾルまたはアルドステロン、抗炎症剤、例えばシクロオキシゲナーゼ阻害薬、５−リポオキシゲナーゼ阻害剤またはロイコトリエン受容体アンタゴニスト；プリンアンタゴニスト、例えばアザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）；ｔｒｏｃａｄｅ（Ｒｏ３２−３５５）；ＩＳＲ−３１７４７などの末梢シグマ受容体アンタゴニスト；シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（ＭＨＣ抗原を覆い隠す、Ｕ．Ｓ．４，１２０，６４９に記載）；ＭＨＣ抗原およびＭＨＣ断片に対する抗イディオタイプ抗体；サイクロスポリンＡ；ステロイド、例えばコルチコステロイドまたは糖質ステロイドまたはグルココルチコイドの類似体、例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、例えばＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、リメキソロンおよびデキサメタゾン；メトトレキセート（経口または皮下）などのジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤；クロロキンおよびヒドロキシクロロキンなどの抗マラリア剤；スルファサラジン；レフルノミド；サイトカイン放出阻害剤、例えばＳＢ−２１０３９６およびＳＢ−２１７９６９モノクローナル抗体、ならびにＭＨＣＩＩアンタゴニスト、例えばＺＤ２３１５；ＺＤ４９５３などのＰＧ１受容体アンタゴニスト；ＺＤ７３４９などのＶＬＡ４接着ブロッカー；抗サイトカインまたは抗サイトカイン受容体抗体、例えば抗インターフェロン−アルファ、−ベータまたは−ガンマ抗体、抗ＴＮＦα抗体（インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ）、抗ＴＮＦαイムノアドヘシン（エタナーセプト）、抗ＴＮＦベータ抗体、インターロイキン１（ＩＬ−１）ブロッカー、例えば組換え体ＨｕＩＬ−１ＲａおよびＩＬ−１Ｂ阻害剤、抗インターロイキン２（ＩＬ−２）抗体および抗ＩＬ−２受容体抗体；ＩＬ−２融合体毒素；抗Ｌ３Ｔ４抗体；レフルノミド；非相同抗リンパ球グロブリン；ＯＰＣ−１４５９７；ＮＩＳＶ（免疫応答調整剤）；ガンマリノレン酸またはエイコサペンタエン酸などの必須脂肪酸；ＣＤ−４ブロッカー、汎Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；副刺激調整剤（例えば、ＣＴＬＡ４−Ｆｃ融合体、ＡＢＡＴＡＣＥＰＴ（商標）としても知られる；抗インターロイキン６（ＩＬ−６）受容体抗体およびアンタゴニスト；抗ＬＦＡ−１抗体、例えば抗ＣＤ１１ａおよび抗ＣＤ１８抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド（ＷＯ１９９０／０８１８７）；ストレプトキナーゼ；ＩＬ−１０；抗ＩＬ−４アンタゴニスト、抗ＩＬ−１３アンタゴニストおよび二重特異的抗ＩＬ−４／ＩＬ−１３アンタゴニ��ト抗体、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦベータ）；ストレプトドルナーゼ；宿主からのＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；エンリモマブ；ＣＤＰ−８５５；ＰＮＰ阻害剤；ＣＨ−３２９８；ＧＷ３５３４３０；４１６２Ｗ９４、クロラムブシル；デオキシスペルグアリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（ＵＳ５，１１４，７２１）；Ｔ細胞受容体断片（Ｏｆｆｎｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１巻：４３０〜２頁（１９９１）；ＷＯ１９９０／１１２９４；Ｊａｎｅｗａｙ、Ｎａｔｕｒｅ、３４１巻：４８２〜４８３頁（１９８９）；およびＷＯ１９９１／０１１３３）；ＢＡＦＦアンタゴニスト、例えばＢＡＦＦ抗体およびＢＲ３抗体；ｚＴＮＦ４アンタゴニスト（ＭａｃｋａｙおよびＭａｃｋａｙ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３巻：１１３〜５頁（２００２））；Ｔ細胞ヘルパーシグナルに干渉する生物薬剤、例えば抗ＣＤ４０受容体または抗ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）、例えばＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドに対する遮断抗体（例えば、Ｄｕｒｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６１巻：１３２８〜３０頁（１９９３）；Ｍｏｈａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４巻：１４７０〜８０頁（１９９５））、およびＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ｆｉｎｃｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６５巻：１２２５〜７頁（１９９４））；ならびにＴ１０Ｂ９などのＴ細胞受容体抗体（ＥＰ３４０，１０９）が含まれる。本明細書の一部の好ましい免疫抑制剤には、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン、レフルノミド、ＭＭＦまたはメトトレキセート（ＭＴＸ）が含まれる。
【０１４５】
「疾患改変抗リウマチ薬」または「ＤＭＡＲＤ」には、例えば、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ミオクリシン、オーラノフィン、スルファサラジン、メトトレキセート、レフルノミド、エタナーセプト、インフリキシマブ（ならびに経口および皮下ＭＴＸ）、アザチオプリン、Ｄ−ペニシラミン、金塩（経口）、金塩（筋肉内）、ミノサイクリン、シクロスポリン、例えばシクロスポリンＡおよび局所シクロスポリン、ブドウ球菌プロンテインＡ（ＧｏｏｄｙｅａｒおよびＳｉｌｖｅｒｍａｎ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９７巻：１１２５〜３９頁（２００３））、ならびにその塩および誘導体などが含まれる。
【０１４６】
「Ｂ細胞」は、骨髄の中で成熟するリンパ球であり、ナイーブＢ細胞、記憶Ｂ細胞またはエフェクターＢ細胞（形質細胞）が含まれる。本明細書でＢ細胞は、正常または非悪性であってよい。
【０１４７】
本明細書で「Ｂ細胞表面マーカー」または「Ｂ細胞表面抗原」は、それに結合するアンタゴニストの標的にすることができるＢ細胞の表面で発現される抗原である。例示的なＢ細胞表面マーカーには、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６白血球表面マーカーが含まれる（記載については、Ｔｈｅ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ、第２版。１９９７編、Ｂａｒｃｌａｙら、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｈａｒｃｏｕｒｔ  Ｂｒａｃｅ  ＆  Ｃｏ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照）。他のＢ細胞表面マーカーには、ＲＰ１０５、ＦｃＲＨ２、Ｂ細胞ＣＲ２、ＣＣＲ６、Ｐ２Ｘ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＣＸＣＲ５、ＦＣＥＲ２、ＢＲ３、Ｂｔｉｇ、ＮＡＧ１４、ＳＬＧＣ１６２７０、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ＡＴＷＤ５７８、ＦｃＲＨ３、ＩＲＴＡ１、ＦｃＲＨ６、ＢＣＭＡおよび２３９２８７が含まれる。好ましいＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較してＢ細胞の上で優先的に発現され、前駆体と成熟Ｂ細胞の両方の上で発現させることができる。最も好ましいそのようなマーカーは、ＣＤ２０およびＣＤ２２である。
【０１４８】
「ＣＤ２０」抗原または「ＣＤ２０」は、末梢血またはリンパ器官からの９０％を超えるＢ細胞の表面で見出される、約３５ｋＤａの非グリコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は正常なＢ細胞と悪性のＢ細胞の両方に存在するが、幹細胞では発現されない。文献中のＣＤ２０の他の名称には、「Ｂリンパ球制限抗原」および「Ｂｐ３５」がある。ＣＤ２０抗原は、例えば、Ｃｌａｒｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８２巻：１７６６頁（１９８５）に記載される。
【０１４９】
ＢＬ−ＣＡＭまたはＬｙｂ８としても知られる「ＣＤ２２」抗原または「ＣＤ２２」は、約１３０（還元型）〜１４０ｋＤ（未還元型）の分子量の１型膜内在性糖タンパク質である。それは、Ｂリンパ球の細胞質と細胞膜の両方で発現される。ＣＤ２２抗原は、Ｂ細胞リンパ球分化の早期に、ＣＤ１９抗原とほぼ同じ段階で出現する。
【０１５０】
他のＢ細胞マーカーと異なって、ＣＤ２２膜発現は、成熟Ｂ細胞（ＣＤ２２＋）と形質細胞（ＣＤ２２）の間に含まれる後期分化段階に限定される。ＣＤ２２抗原は、例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３巻：１３７頁（１９９１）およびＷｉｌｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０巻：５０１３頁（１９９３）に記載される。
【０１５１】
「Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体」は、Ｂ細胞表面マーカーとの結合の結果、哺乳動物でＢ細胞を破壊するか減少させる分子、および／または、例えばＢ細胞によって導き出される体液性応答を低減するか阻止することによって、１つまたは複数のＢ細胞機能に干渉する分子である。抗体は好ましくは、それで処置される哺乳動物においてＢ細胞を減少させること（すなわち、循環するＢ細胞レベルを低減すること）ができる。そのような減少は、様々な機構、例えば抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害および／またはＢ細胞死の誘導（例えばアポトーシスを通しての）を通して達成することができる。
【０１５２】
ＣＤ２０抗体の例には、以下のものが含まれる：今では「リツキシマブ」（「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」）と呼ばれる「Ｃ２Ｂ８」（米国特許第５，７３６，１３７号）；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販されている「Ｙ２Ｂ８」または「イブリツモマブチウキセタン」（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））と呼ばれるイットリウム［９０］標識２Ｂ８マウス抗体（米国特許第５，７３６，１３７号；２Ｂ８は１９９３年６月２２日に受託番号ＨＢ１１３８８の下でＡＴＣＣに寄託された）；「トシツモマブ」とも呼ばれるマウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」、任意選択で１３１Ｉによって標識されて「１３１Ｉ−Ｂ１」または「ヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ」抗体（ＢＥＸＸＡＲ（商標））を生成し、Ｃｏｒｉｘａから市販されている（米国特許第５，５９５，７２１号も参照）；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」（Ｐｒｅｓｓら、Ｂｌｏｏｄ  ６９巻（２号）：５８４〜５９１頁（１９８７）、および「フレームワークパッチ」またはヒト化１Ｆ５を含むその変異体（ＷＯ２００３／００２６０７、Ｌｅｕｎｇ，Ｓ．；ＡＴＣＣ寄託ＨＢ−９６４５０）；マウス２Ｈ７およびキメラ２Ｈ７抗体（米国特許第５，６７７，１８０号）；ヒト化２Ｈ７（ＷＯ２００４／０５６３１２（Ｌｏｗｍａｎら）、下記）；完全にヒトのＨＵＭＡＸ−ＣＤ２０（商標）、Ｂ細胞の細胞膜内のＣＤ２０分子を標的にする高親和性抗体（Ｇｅｎｍａｂ、Ｄｅｎｍａｒｋ；例えば、Ｇｌｅｎｎｉｅおよびｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ８巻：５０３〜５１０頁（２００３）およびＣｒａｇｇら、Ｂｌｏｏｄ  １０１巻：１０４５〜１０５２頁（２００３）を参照）；ＷＯ０４／０３５６０７（Ｔｅｅｌｉｎｇら）に示されるヒトモノクローナル抗体；ＡＭＥ−１３３（商標）抗体（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）；Ａ２０抗体またはその変異体、例えばキメラまたはヒト化Ａ２０抗体（それぞれｃＡ２０、ｈＡ２０）（ＵＳ２００３／０２１９４３３、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；ならびに、モノクローナル抗体Ｌ２７、Ｇ２８−２、９３−１Ｂ３、Ｂ−Ｃ１またはＮＵ−Ｂ２、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐから入手可能（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅら、典拠：Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ編、４４０頁、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７））。本明細書の好ましいＣＤ２０抗体は、キメラ、ヒト化またはヒトのＣＤ２０抗体であり、より好ましくはリツキシマブ、ヒト化２Ｈ７、キメラまたはヒト化Ａ２０抗体（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、およびＨＵＭＡＸ−ＣＤ２０（商標）ヒトＣＤ２０抗体（Ｇｅｎｍａｂ）である。
【０１５３】
本明細書の用語「リツキシマブ」または「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」は、ＣＤ２０抗原を標的にし、米国特許第５，７３６，１３７号で「Ｃ２Ｂ８」と命名された遺伝子操作キメラマウス／ヒトモノクローナル抗体を指し、ＣＤ２０に結合する能力を保持するその断片を含む。
【０１５４】
本明細書の目的のためだけに、および特に明記しない限り、「ヒト化２Ｈ７」はヒト化ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片を指し、そこにおいて、抗体はｉｎ  ｖｉｖｏで霊長類Ｂ細胞を減少させるのに有効である。抗体には、ＵＳ２００６／００６２７８７およびその図面に示されるものが含まれ、バージョン１１４を含み、その配列はＵＳ２００６／０１８８４９５で提供される。ＵＳ２００６／００３４８３５およびＵＳ２００６／００２４３００も参照。本発明の様々な好ましい実施形態の要約では、ＵＳ２００６／００６２７８７で開示される２Ｈ７バージョン１６に基づく変異体のＶ領域は、下の表で示されるアミノ酸置換の位置以外は、ｖ１６のアミノ酸配列を有する。特に明記しない限り、２Ｈ７変異体は、ｖ１６のそれと同じＬ鎖を有する。
2015506950.tif 000004
【０１５５】
１つの好ましいヒト化２Ｈ７は、バージョン１６の配列を有する無傷の抗体または抗体断片である。別の好ましいヒト化２Ｈ７は、バージョン１１４の配列を有する。
【０１５６】
「ＢＡＦＦアンタゴニスト」は、ＢＡＦＦまたはＢＲ３の活性をブロックする任意の分子である。それらには、ＢＡＦＦに結合するＢＲ３、ＴＡＣＩもしくはＢＣＭＡの一部、またはＢＡＦＦに結合するその変異体を含むイムノアドヘシンが含まれる。他の態様では、ＢＡＦＦアンタゴニストは、ＢＡＦＦ抗体である。「ＢＡＦＦ抗体」は、ＢＡＦＦに結合し、好ましくはヒトＢＡＦＦの残基１６２〜２７５を含むヒトＢＡＦＦの領域内でＢＡＦＦに結合する抗体である。別の態様では、ＢＡＦＦアンタゴニストは、ＢＲ３抗体である。「ＢＲ３抗体」は、ＢＲ３に結合し、好ましくはヒトＢＲ３の残基２３〜３８を含むヒトＢＲ３の領域内でＢＲ３に結合する抗体である。ヒトＢＡＦＦおよびヒトＢＲ３の配列は、例えば、ＵＳ２００６／００６２７８７に見出される。ＢＡＦＦ結合性ポリペプチドまたはＢＡＦＦ抗体の他の例は、例えば、ＷＯ２００２／０９２６２０、ＷＯ２００３／０１４２９４、Ｇｏｒｄｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４２巻（２０号）：５９７７〜８３頁（２００３）、Ｋｅｌｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９巻：１６７２７〜３５頁（２００４）、ＷＯ１９９８／１８９２１、ＷＯ２００１／１２８１２、ＷＯ２０００／６８３７８およびＷＯ２０００／４０７１６に見出すことができる。
【０１５７】
「抗ＩｇＥ抗体」には、ＩｇＥが肥満細胞および好塩基球の上の高親和性受容体に結合するときに架橋を誘導しないような様式でＩｇＥに特異的に結合する任意の抗体が含まれる。例示的な抗体には、本発明の抗体に加えて、ｒｈｕＭａｂＥ２５（Ｅ２５、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））、Ｅ２６、Ｅ２７ならびにＣＧＰ−５１０１（Ｈｕ−９０１）およびＨＡ抗体が含まれる。ヒト化抗ＩｇＥ抗体Ｅ２５、Ｅ２６およびＥ２７の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、例えばＵ．Ｓ．Ｐ．６，１７２，２１３およびＷＯ９９／０１５５６に開示されている。ＣＧＰ−５１０１（Ｈｕ−９０１）抗体は、Ｃｏｒｎｅら、（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９９巻（５号）：８７９〜８８７頁、ＷＯ９２／１７２０７、ならびにＡＴＣＣ寄託番号ＢＲＬ−１０７０６、ＢＲＬ−１１１３０、ＢＲＬ−１１１３１、ＢＲＬ−１１１３２およびＢＲＬ−１１１３３に記載される。ＨＡ抗体は、ＵＳＳＮ６０／４４４，２２９、ＷＯ２００４／０７００１１およびＷＯ２００４／０７００１０に記載される。
【０１５８】
本明細書で用いられる用語「約」は、この技術分野の当業者に容易に分かる、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書で「約」のついた値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（および記載する）。
【０１５９】
本明細書および添付の請求項で用いるように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」には、文脈が明らかに別に指示しない限り、複数形が含まれる。例えば、「抗体」への言及は、１つから多くの抗体、例えばモル量への言及であり、当業者に公知であるその同等物、その他を含む。
【０１６０】
本明細書に記載される本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態を「含み」、それら「からなり」、それら「から事実上なる」ことを含むものと理解される。
【０１６１】
ＩＩＩ．本発明の組成物および方法
ＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体、およびＩｇＥ媒介障害を処置または予防するための抗ＩｇＥ抗体を用いる方法が本明細書で提供される。
【０１６２】
本明細書に記載される全ての方法に関して、抗ＩｇＥ／Ｍ’抗体への言及には、それらの薬剤の１つまたは複数を含む組成物も含まれる。そのような組成物は、適する賦形剤、例えば緩衝液、酸、塩基、糖、希釈剤、保存料などを含む薬学的に許容される賦形剤（担体）をさらに含むことができ、それらは当技術分野で周知であり、本明細書に記載される。本方法は、単独で、または他の従来の処置方法と一緒に用いることができる。
【０１６３】
Ａ．抗ＩｇＥ抗体
本明細書に記載される方法で用いることができる抗体には、ＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体が含まれる。本明細書に記載される抗ＩｇＥ抗体は、以下の特性の１つまたは複数を有する：（ａ）ＩｇＥ（ヒトＩｇＥなど）のＭ１’セグメントに特異的に結合する；（ｂ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏでＩｇＥ発現Ｂ細胞のアポトーシスを誘導する；（ｃ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでアポトーシスおよび／または抗体依存性細胞媒介細胞毒性を通してＩｇＥ−Ｍ１’発現細胞（ＩｇＥスイッチＢ細胞、ＩｇＥ形質芽細胞およびＩｇＥ記憶Ｂ細胞など）を減少させる；（ｄ）哺乳動物でＩｇＥ−Ｍ１’発現細胞を減少させる；（ｅ）哺乳動物で血清中総ＩｇＥを低減する；（ｆ）哺乳動物でアレルゲン特異的ＩｇＥを低減する；（ｇ）哺乳動物で血清中総ＩｇＥまたはアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加を防止または低減する；（ｈ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏでＩｇＥ発現Ｂ細胞のカルシウム流を誘導する；ならびに、（ｉ）ＩｇＥ媒介障害（例えば、アレルギー性鼻炎およびアレルギー性喘息）を処置および／または予防する。
【０１６４】
ＩｇＥ−Ｍ１’発現細胞（ＩｇＥスイッチＢ細胞、ＩｇＥ形質芽細胞およびＩｇＥ記憶Ｂ細胞など）の減少を測定する方法は当技術分野で公知であり、米国特許第８，０７１，０９７号に記載される。Ｍ１’発現Ｂ細胞は、ヒト末梢血で定量的ＰＣＲによって検出することができる。手短に言えば、ＰａｘＧｅｎｅ捕集管で収集される全血からＲＮＡを抽出する。
【０１６５】
ＲＮＡをｃＤＮＡに変換し、リバース（ＧＴＧＧＣＡＧＡＧＣＡＣＣＣＴＡＴＣＣ）（配列番号４１）およびフォワード（ＣＡＧＣＧＡＧＣＧＧＴＧＴＣＴＧＴ）（配列番号４２）プライマー、ならびに蛍光性プローブ（ＣＣＡＧＣＣＣＧＧＧＡＴＴＴ）（配列番号４３）を用いて、ＴａｑＭａｎによりＭ１’ｍＲＮＡを増幅する。Ｍ１’発現Ｂ細胞は、ヒト末梢血でフローサイトメトリーによって検出することもできる。簡潔には、ＲｏｓｓｅｔｔｅＳｅｐキットを用いておよそ４０〜５０ｍｌの全血からＢ細胞を濃縮する。記憶Ｂ細胞およびＭ１’の表面マーカーのために、濃縮されたＢ細胞をその後染色する。
【０１６６】
血清中総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥのレベルを測定するために、当技術分野で公知の方法（ＥＬＩＳＡなど）を用いることができる。総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥの標準臨床アッセイは、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｉｍｍｕｌｉｔｅ  ２０００アッセイ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ  ＣＡ）およびＰｈａｄｉａ  ＩｍｍｕｎｏＣＡＰアッセイ（Ｐｈａｄｉａ  Ｉｎｃ．）である。Ｌｉら、Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｓｃｉ．、３４巻（１号）：６７〜７４頁（２００４）およびＬｉｂｅｅｒら、Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｌａｂ  Ｍｅｄ．、４５巻（３号）：４１３〜４１５頁を参照。
【０１６７】
抗ＩｇＥ抗体によって誘導されるＩｇＥ発現Ｂ細胞でのカルシウム流を測定する方法は、当技術分野で公知である。例えば、米国特許第８，０７１，０９７号、実施例７を参照。
【０１６８】
一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、図１４に示すヒトＩｇＥ、アカゲザルＩｇＥ、および／またはＣｙｎｏ  ＩｇＥのＭ１’セグメントの中の任意のエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、４７Ｈ４、７Ａ６、２６Ａ１１、４７Ｈ４ｖ１、４７Ｈ４ｖ２、４７Ｈ４ｖ３、４７Ｈ４ｖ４、４７Ｈ４ｖ５、４７Ｈ４ｖ６、７Ａ６ｖ１および２６Ａ１１ｖ６からなる群から選択される抗体が結合するものと同じエピトープに特異的に結合する。これらの抗体は、米国特許第８，０７１，０９７号に記載される。
【０１６９】
これらの抗体の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列を、図１５Ａ〜１５Ｆに示す。一部の実施形態では、抗体は、ＳＡＱＳＱＲＡＰＤＲＶＬＣＨＳ（配列番号４）、ＲＡＰＤＲＶＬＣＨＳＧＱＱＱＧ（配列番号５）、ＧＱＱＱＧＬＰＲＡＡＧＧＳＶＰ（配列番号６）またはＰＲＡＡＧＧＳＶＰＨＰＲＣＨ（配列番号７）からなる群から選択されるペプチドに対応するエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は抗原結合性断片である。一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体、ヒト抗体またはキメラ抗体である。一部の実施形態では、抗体はフコシル化されない。
【０１７０】
一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、図１５Ａ〜１５Ｆに示す抗体の重鎖ＨＶＲおよび軽鎖ＨＶＲ（例えば、１、２、３、４、５または６個のＨＶＲ）を含む。一部の実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、図１５Ａ〜１５Ｃに示す抗体の軽鎖のＨＶＲ１、ＨＶＲ２およびＨＶＲ３（例えば、３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲまたはコンタクトＣＤＲ）を含む軽鎖、ならびに／または図１５Ｄ〜１５Ｆに示す抗体の重鎖のＨＶＲ１、ＨＶＲ２およびＨＶＲ３（例えば、３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲまたはコンタクトＣＤＲ）を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、図１５Ａ〜１５Ｆに示す抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列および軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体４７Ｈ４ｖ５の重鎖ＨＶＲおよび軽鎖ＨＶＲを含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体４７Ｈ４ｖ５の重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、２６Ａ１１ｖ１〜１６、７Ａ６ｖ１および４７Ｈ４ｖ１〜６からなる群から選択される抗体である。一部の実施形態では、抗体はフコシル化されない。
【０１７１】
一部の実施形態では、抗体は、抗体４７Ｈ４ｖ５またはその抗原結合性断片である。抗体４７Ｈ４ｖ５（ＭＥＭＰ１９７２Ａ）は、配列番号３９の重鎖アミノ酸配列および配列番号４０の軽鎖アミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、抗体はフコシル化されない。
【０１７２】
４７Ｈ４ｖ５重鎖
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGIAWVRQAPGKGLEWVAFISDLAYTIYYADTVTGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDNWDAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号39)
【０１７３】
４７Ｈ４ｖ５軽鎖
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLVHNNANTYLHWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCSQNTLVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号40)
【０１７４】
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩｇＥ抗体は、マウス抗ＩｇＥ抗体４７Ｈ４またはそのヒト化変異体（４７Ｈ４ｖ１〜６など）のそれと同等の、ヒトＩｇＥに対するスキャッチャード結合親和性でヒトＩｇＥのＭ１’セグメントに結合する。スキャッチャード結合親和性は、米国特許第８，０７１，０９７号の実施例２Ａに記載の通りに測定される。一部の実施形態では、親和性は４７Ｈ４の結合親和性と同等である。一部の実施形態では、親和性は０．３０から０．８３ｎＭの間である。さらに別の具体的な態様では、親和性は４７Ｈ４ｖ５の結合親和性と同等である。さらなる具体的な態様では、親和性は約１．５ｎＭである。
【０１７５】
Ｂ．抗体調製物
本発明で有益な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよびＦ（ａｂ’）２）、キメラ抗体、二重特異的抗体、多価抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに必要な特異性の抗原認識部位を含む他の任意の改変構造の免疫グロブリン分子、例えば、抗体のグリコシル化変異体、抗体のアミノ酸配列変異体および共有結合改変抗体を包含することができる。抗体は、マウス、ラット、ヒトまたは他の任意の起源であってよい（キメラまたはヒト化抗体を含む）。
【０１７６】
１）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、関連する抗原およびアジュバントの複数の皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射によって動物で一般に作製される。二官能性であるか誘導体化する剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を通してコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を通して）、グルタルアルデヒド、コハク酸無水物、ＳＯＣｌ２またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ＲおよびＲ１は独立して低級アルキル基である）を用いて、関連する抗原を、免疫化する種で免疫原性であるタンパク質、例えばキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシのサイログロブリンまたはダイズのトリプシンインヒビターにコンジュゲートすることが有益であろう。使用することができるアジュバントの例には、フロイント完全アジュバントおよびＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（一リン酸化リピドＡ、合成トレハロースジコリノミコレート）が含まれる。免疫化プロトコルは、不相応な実験なしで当業技術者が選択することができる。
【０１７７】
例えば、１００μｇまたは５μｇのタンパク質またはコンジュゲート（それぞれウサギまたはマウスの場合）を３容のフロイント完全アジュバントと合わせ、溶液を複数の部位の皮内に注射することによって、抗原、免疫原性コンジュゲートまたは誘導体に対して動物を免疫化する。１カ月後に、複数部位での皮下注射によってフロイント完全アジュバント中のペプチドまたはコンジュゲートの元の量の１／５〜１／１０で動物を追加免疫する。７〜１４日後に、動物を放血させ、血清を抗体価について検定する。力価がプラトーになるまで、動物を追加免疫する。コンジュゲートは、組換え細胞培養でタンパク質融合体として作製することもできる。さらに、免疫応答を増強させるためにミョウバンなどの凝集剤が適する。
【０１７８】
２）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得られ、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量存在するかもしれない可能な天然に存在する突然変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一である。したがって、修飾語「モノクローナル」は、抗体の特徴が別個の抗体の混合物でないことを示す。
【０１７９】
例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を用いて作製することができ、または組換えＤＮＡ方法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって作製することができる。
【０１８０】
ハイブリドーマ法では、免疫化のために用いられるタンパク質に特異的に結合する抗体を生成するか生成することが可能なリンパ球を導き出すために、上記のようにマウスまたは他の適当な宿主動物、例えばハムスターが免疫化される。
【０１８１】
あるいは、リンパ球はｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化されてもよい。リンパ球は、ポリエチレングリコールなどの適する融合剤を用いて骨髄腫細胞と次に融合され、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、５９〜１０３頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６年）。
【０１８２】
免疫化剤には、抗原性タンパク質またはその融合変異体が一般的に含まれる。一般に、ヒト起源の細胞が所望である場合は末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が用いられるか、または、ヒト以外の哺乳動物の供給源が所望である場合は脾細胞もしくはリンパ節細胞が用いられる。リンパ球は、ポリエチレングリコールなどの適する融合剤を用いて不死化細胞系と次に融合され、ハイブリドーマ細胞を形成するＧｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６）、５９〜１０３頁。
【０１８３】
不死化細胞系は、通常、形質転換哺乳動物細胞、特に齧歯動物、ウシおよびヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウスの骨髄腫細胞系が使用される。このように調製されるハイブリドーマ細胞は、未融合の親の骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つまたは複数の物質を好ましくは含む適切な培地に播種され、増殖させられる。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスフォリボシル転移酵素（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合は、ハイブリドーマのための培地はヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを一般的に含み（ＨＡＴ培地）、それらはＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を阻止する物質である。
【０１８４】
好ましい不死化骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定したハイレベルの生成を支え、ＨＡＴ培地などの培地に感受性であるものである。これらの中で、マウス骨髄腫系、例えばＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡから入手できるＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するもの、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ、ＵＳＡから入手できるＳＰ−２細胞（およびその誘導体、例えばＸ６３−Ａｇ８−６５３）が好ましい。
【０１８５】
ヒトモノクローナル抗体の生成のために、ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系も記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３巻：３００１頁（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、５１〜６３頁（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７年））。
【０１８６】
ハイブリドーマ細胞が増殖している培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の生成について試験する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって生成されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって判定される。
【０１８７】
ハイブリドーマ細胞が培養される培地は、所望の抗原に対するモノクローナル抗体の存在について試験することができる。好ましくは、モノクローナル抗体の結合親和性および特異性は、免疫沈降またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって判定することができる。そのような技術およびアッセイは、当技術分野で公知である。例えば、結合親和性は、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７巻：２２０頁（１９８０）のスキャチャード解析によって判定することができる。
【０１８８】
所望の特異性、親和性および／または活性の抗体を生成するハイブリドーマ細胞の同定の後、クローンは、限界希釈法によってサブクローニングして、標準方法によって増殖させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ、上記）。この目的のための適する培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞は哺乳動物で腫瘍としてｉｎ  ｖｉｖｏで増殖させることができる。
【０１８９】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手法、例えばプロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析または親和性クロマトグラフィーによって、培地、腹水液または血清から適切に分離される。
【０１９０】
モノクローナル抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載のもの、および上記のものなどの組換えＤＮＡ法によって作製することもできる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手法を用いて容易に単離され、配列決定をされる（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能であるオリゴヌクレオチドプローブを用いる）。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源の役割をする。単離されると、ＤＮＡを発現ベクターに入れることができ、それらは、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を生成しない大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルのＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞などの宿主細胞に次にトランスフェクトされ、そのような組換え宿主細胞でモノクローナル抗体が合成される。抗体をコードするＤＮＡの細菌での組換え発現に関するレビュー記事には、Ｓｋｅｒｒａら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５巻：２５６〜２６２頁（１９９３）およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０巻：１５１〜１８８頁（１９９２）が含まれる。
【０１９１】
さらなる実施形態では、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８巻：５５２〜５５４頁（１９９０）に記載される技術を用いて生成される抗体ファージライブラリーから抗体を単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４〜６２８頁（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９１）は、ファージライブラリーを用いる、それぞれマウスおよびヒト抗体の単離を記載する。以降の刊行物は、鎖シャフリング（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：７７９〜７８３頁（１９９２））、ならびに非常に大きなファージライブラリーを構築するための戦略としての組合せ感染およびｉｎ  ｖｉｖｏ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２１巻：２２６５〜２２６６頁（１９９３））による、高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の生成を記載する。したがって、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替手段である。
【０１９２】
ＤＮＡは、例えば、相同的マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１巻：６８５１頁（１９８４））、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てもしくは一部を共有結合することによって改変することもできる。一般的に、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインに代えて置換されるか、または、抗原に特異性を有する１つの抗原結合部位および異なる抗原に特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作製するために、それらは抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインに代えて置換される。
【０１９３】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体は一価であってよく、その調製は当技術分野で周知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖および改変重鎖の組換え発現を含む。重鎖架橋を防止するように、重鎖はＦｃ領域の任意の点で一般にトランケーションされる。あるいは、架橋を防止するように、関連するシステイン残基は別のアミノ酸残基で置換することができるか、削除される。一価抗体を調製するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法も適する。その断片、特にＦａｂ断片を生成するための抗体の消化は、当技術分野で公知である通常の技術を用いて達成することができる。
【０１９４】
キメラまたはハイブリッド抗体も、合成タンパク質化学で公知の方法、例えば架橋剤を含む方法を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製することができる。例えば、ジスルフィド交換反応を用いて、またはチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素を構築することができる。この目的のための適した試薬の例には、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチリミデートが含まれる。
【０１９５】
３）ヒト化抗体。
本発明の抗体は、ヒト化またはヒト抗体をさらに含むことができる。ヒト以外の（例えば、マウス）抗体のヒト化形は、ヒト以外の免疫グロブリンに由来する最小限の配列を有する、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖または断片（例えば、抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または他の抗原結合性部分配列）である。ヒト化抗体には、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する、マウス、ラットまたはウサギなどのヒト以外の種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換されるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応するヒト以外の残基で置換される。
【０１９６】
ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基を含むこともできる。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト以外の免疫グロブリンのそれらに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のそれらである、少なくとも１つ、一般的に２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。最適には、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、一般的にヒト免疫グロブリンのそれの少なくとも一部をさらに含む。Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８）およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２巻：５９３〜５９６頁（１９９２）。
【０１９７】
ヒト以外の抗体をヒト化する方法は、当技術分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は、ヒト以外の供与源からそれに導入される１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらのヒト以外のアミノ酸残基は、しばしば「インポート」残基と呼ばれ、それらは「インポート」可変ドメインから一般的にとられる。ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒおよび同僚、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２７頁（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９巻：１５３４〜１５３６頁（１９８８）の方法に従って、またはヒト抗体の対応配列に代えて齧歯動物のＣＤＲもしくはＣＤＲ配列を置換することを通して基本的に実施することができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、実質的に完全未満のヒト可変ドメインがヒト以外の種からの対応配列によって置換されているキメラ抗体である（米国特許第４，８１６，５６７号）。実際には、一般的に、ヒト化抗体は、一部のＣＤＲ残基およびおそらく一部のＦＲ残基が齧歯動物の抗体の類似部位からの残基によって置換されるヒト抗体である。
【０１９８】
ヒト化抗体の作製で用いられる軽鎖と重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性の低減のために非常に重要である。いわゆる「最良適合」法により、齧歯動物の抗体の可変ドメインの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。次に、齧歯動物のそれに最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として受け入れられる。Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１巻：２２９６頁（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６巻：９０１頁（１９８７）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを用いる。いくつかの異なるヒト化抗体のために、同じフレームワークを用いることができる。Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９巻：４２８５頁（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１巻：２６２３頁（１９９３）。
【０１９９】
抗原への高い親和性および他の好都合の生物学的特性を保持して抗体がヒト化されることがさらに重要である。この目標を達成するために、好ましい方法に従い、ヒト化抗体は、親のおよびヒト化配列の三次元モデルを用いる、親の配列および様々な概念上のヒト化生成物の分析過程によって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは一般に入手でき、当業者によく知られている。選択される候補免疫グロブリン配列の可能な三次元立体配置構造を図示し、提示する、コンピュータプログラムが利用できる。これらの提示の検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のありそうな役割の分析、すなわち、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の分析を可能にする。この方法で、所望の抗体特性、例えば標的抗原への増加した親和性が達成されるように、レシピエントおよびインポート配列からＦＲ残基を選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に及ぼす影響に直接に、および最も実質的に関与する。
【０２００】
ヒト化抗体の様々な形が企図される。例えば、ヒト化抗体は、免疫複合体を生成するために１つまたは複数の細胞毒性剤と任意選択でコンジュゲートされる、Ｆａｂなどの抗体断片であってよい。あるいは、ヒト化抗体は完全な抗体、例えば完全なＩｇＧ１抗体であってよい。
【０２０１】
４）ヒト抗体
ヒト化に代わるものとして、ヒト抗体を生成することができる。例えば、内在性免疫グロブリンの生成の不在下で、免疫化の後にヒト抗体の完全なレパートリーを生成することが可能であるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生成することが今ではできる。例えば、キメラおよび生殖細胞系突然変異体マウスでの抗体重鎖結合域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失が、内在性抗体産生の完全な阻止をもたらすことが記載されている。そのような生殖細胞系突然変異体マウスでのヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジの後にヒト抗体の生成をもたらす。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻：２５５１頁（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：２５５〜２５８頁（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．、７巻：３３頁（１９９３）；米国特許第５，５９１，６６９号およびＷＯ９７／１７８５２を参照。
【０２０２】
あるいは、非免疫化ドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒト抗体および抗体断片を生成するために、ファージディスプレイ技術を用いることができる。ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８巻：５５２〜５５３頁（１９９０）；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７巻：３８１頁（１９９１）。この技術により、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３またはｆｄなどの繊維状バクテリオファージの主要または副次的なコートタンパク質遺伝子にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面に機能的抗体断片として提示される。繊維状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体の機能的特性に基づく選択は、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択ももたらす。したがって、ファージはＢ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、例えばＪｏｈｎｓｏｎ、Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ、Ｄａｖｉｄ  Ｊ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３巻：５６４〜５７１頁（１９９３）でレビューされる様々なフォーマットで実施することができる。ファージディスプレイのために、Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源を用いることができる。
【０２０３】
Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２巻：６２４〜６２８頁（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子のランダムな小さな組合せライブラリーから、多様な抗オキサゾロン抗体群を単離した。非免疫化ヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、多様な抗原群（自己抗原を含む）に対する抗体は、Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１２巻：７２５〜７３４頁（１９９３）によって記載される技術に基本的に従って単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号および第５，５７３，９０５号も参照。
【０２０４】
ヒトモノクローナル抗体の調製のために、ＣｏｌｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技術も利用できる（Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５）およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７巻（１号）：８６〜９５頁（１９９１））。同様に、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座をトランスジェニック動物に、例えば内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたマウスに導入することによって作製することができる。
【０２０５】
チャレンジの結果、ヒト抗体の生成が観察され、それは、遺伝子再配列、アセンブリーおよび抗体レパートリーを含むあらゆる点においてヒトで見られるものに酷似する。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，６６１，０１６号、および以下の科学刊行物：Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：７７９〜７８３頁（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻：８５６〜８５９頁（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻：８１２〜１３頁（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４巻：８４５〜５１頁（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４巻：８２６頁（１９９６）ならびにＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３巻：６５〜９３頁（１９９５）に記載される。
【０２０６】
最後に、ヒト抗体は、活性化Ｂ細胞によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成することもできる（米国特許第５，５６７，６１０号および第５，２２９，２７５号を参照）。
【０２０７】
５）抗体断片
特定の状況では、抗体全体ではなく抗体断片を用いることに利点がある。より小さな断片サイズは迅速なクリアランスを可能にし、固形腫瘍へのアクセス向上をもたらすことができる。
【０２０８】
抗体断片の生成のために様々な技術が開発されている。伝統的に、これらの断片は、完全な抗体のタンパク分解を通して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈ．２４巻：１０７〜１１７頁（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９巻：８１頁（１９８５）を参照）。しかし、現在、これらの断片は、組換え宿主細胞によって直接に生成することができる。Ｆａｂ、ＦｖおよびｓｃＦｖ抗体断片は全て大腸菌で発現させ、そこから分泌させることができ、このように、これらの断片の大量生産を容易にする。
【０２０９】
抗体断片は、上述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片を大腸菌から直接に回収し、化学的に結合してＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：１６３〜１６７頁（１９９２））。別のアプローチにより、Ｆ（ａｂ’）２断片を組換え宿主細胞培養から直接に単離することができる。ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の増加したＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２が、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。他の実施形態では、最良の抗体は単一鎖のＦｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号および米国特許第５，５８７，４５８号を参照。抗体断片は、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載される「線状抗体」であってもよい。そのような線状抗体断片は、単一特異的または二重特異的であってよい。
【０２１０】
６）抗体依存性酵素媒介プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）
プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照）を活性抗がん剤へ変換するプロドラッグ活性化酵素と抗体をコンジュゲートすることによって、本発明の抗体をＡＤＥＰＴで用いることもできる。例えば、ＷＯ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照。
【０２１１】
ＡＤＥＰＴのために有益な免疫複合体の酵素成分には、プロドラッグをそのより活性な細胞毒性形に変換するような方法でプロドラッグに作用することが可能な任意の酵素が含まれる。
【０２１２】
本発明の方法で有益である酵素には、それらに限定されないが、グリコシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ヒトリゾチーム、ヒトグルクロニダーゼ、リン酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有益なアルカリ性ホスファターゼ；硫酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有益なアリルスルファターゼ；無毒性の５−フルオロシトシンを抗がん薬５−フルオロウラシルに変換するのに有益なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有益な、セラチアプロテアーゼ、サーモライシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ（例えば、カルボキシペプチダーゼＧ２およびカルボキシペプチダーゼＡ）およびカテプシン（カテプシンＢおよびＬなど）などのプロテアーゼ；Ｄアミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有益なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化されたプロドラッグを遊離薬物に変換するのに有益なβ−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼなどの炭水化物開裂酵素；β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有益なβラクタマーゼ；ならびに、アミン窒素がフェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基でそれぞれ誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有益な、ペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼが含まれる。あるいは、当技術分野で「アブザイム」としても知られる酵素活性を有する抗体は、本発明のプロドラッグを遊離の活性薬物に変換するために用いることができる（例えば、Ｍａｓｓｅｙ、Ｎａｔｕｒｅ  ３２８巻：４５７〜４５８頁（１９８７）を参照）。腫瘍細胞集団へのアブザイムの送達のために、本明細書に記載のように抗体−アブザイムコンジュゲートを調製してもよい。
【０２１３】
上記の酵素は、上述のヘテロ二官能性架橋剤の使用などの当技術分野で周知である技術によって、本明細書に記載されるポリペプチドまたは抗体に共有結合することができる。あるいは、本発明の酵素の少なくとも機能的な活性部分に連結される、本発明の抗体の少なくとも抗原結合性領域を含む融合タンパク質は、当技術分野で周知である組換えＤＮＡ技術を用いて構築することができる（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２巻：６０４〜６０８頁（１９８４）を参照）。
【０２１４】
７）二重特異的および多特異的抗体
二重特異的抗体（ＢｓＡｂ）は、同じか別のタンパク質の上のそれらを含む、少なくとも２つの異なるエピトープに結合特異性を有する抗体である。あるいは、１つの腕は標的抗原に結合するために武装することができ、別の腕は、標的抗原発現細胞に細胞性防御機構を集中および局在化するように、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ３）、またはＩｇＧのためのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）、例えばＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などの、白血球上のトリガー分子に結合する腕と組み合わせることができる。そのような抗体は、完全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異的抗体）から誘導することができる。
【０２１５】
標的抗原を発現する細胞に細胞毒性剤を局在化するために、二重特異的抗体を用いることもできる。そのような抗体は、所望の抗原に結合する１つの腕および細胞毒性剤（例えば、サポニン、抗インターフェロン−ａ、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセートまたは放射性同位体ハプテン）に結合する別の腕を有する。公知の二重特異的抗体の例には、抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃｇＲＩＩＩ（ＷＯ９６／１６６７３）、抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃｇＲＩ（Ｕ．Ｓ．Ｐ．５，８３７，２３４）、抗ＥｒｂＢ２／抗ＣＤ３（Ｕ．Ｓ．Ｐ．５，８２１，３３７）が含まれる。
【０２１６】
二重特異的抗体の作製方法は、当技術分野で公知である。完全長二重特異的抗体の伝統的な生成は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、そこで２つの鎖は異なる特異性を有する。Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻：５３７〜５３９頁（１９８３）。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな組合せのため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は１０個の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、その中で１つだけが正しい二重特異的構造を有する。親和性クロマトグラフィー工程によって通常行われる正しい分子の精製はかなり厄介であり、生成物収率は低い。類似した手法が、ＷＯ９３／０８８２９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１０巻：３６５５〜３６５９頁（１９９１）に開示される。
【０２１７】
異なるアプローチにより、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインに対してである。融合体の少なくとも１つに存在する軽鎖結合に必要な部位を含む、第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合、および所望により免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクターに挿入され、適する宿主生物体に同時トランスフェクトされる。これは、構築で用いられる３つのポリペプチド鎖の不等な比が最適な収率を提供するときの実施形態で、３つのポリペプチド断片の相互の割合を調整することにおいて、大きな柔軟性を可能にする。しかし、同等の比の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収率をもたらす場合、または比が特に重要でない場合は、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【０２１８】
このアプローチの好ましい実施形態では、二重特異的抗体は、一方の腕の第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方の腕のハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性を提供する）で構成される。二重特異的分子の片方の半分だけへの免疫グロブリン軽鎖の存在が分離の容易な方法を可能にするので、この非対称構造は望ましくない免疫グロブリン鎖組合せからの所望の二重特異的化合物の分離を促進する。このアプローチは、ＷＯ９４／０４６９０で開示される。二重特異的抗体の生成の詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１巻：２１０頁（１９８６）を参照。
【０２１９】
ＷＯ９６／２７０１１またはＵ．Ｓ．Ｐ．５，７３１，１６８に記載される別のアプローチにより、一対の抗体分子の間の界面は、組換え細胞培養から回収されるヘテロダイマーの百分率を最大にするように操作することができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面からの１つまたは複数の小さなアミノ酸側鎖が、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）と交換される。大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの（例えば、アラニンまたはトレオニン）と交換することによって、大きな側鎖と同一であるか類似したサイズの代償の「空洞」が、第２の抗体分子の界面に形成される。これは、ホモダイマーなどの他の望ましくない最終産物よりもヘテロダイマーの収量を増加させる機構を提供する。
【０２２０】
抗体断片から二重特異的抗体を生成する技術が、文献に記載されている。例えば、化学結合を用いて二重特異的抗体を調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９巻：８１頁（１９８５）は、完全な抗体をタンパク分解的に開裂してＦ（ａｂ’）２断片を生成する手法を記載する。近接のジチオールを安定させて、分子間ジスルフィド形成を阻止するために、これらの断片はジチオール複合体形成剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元される。生成されるＦａｂ’断片は、次にチオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つはＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体に次に再変換されて、二重特異的抗体を形成する。生成される二重特異的抗体は、酵素の選択的固定のための薬剤として用いることができる。
【０２２１】
Ｆａｂ’断片を大腸菌から直接に回収し、化学的に結合して二重特異的抗体を形成することができる。Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５巻：２１７〜２２５頁（１９９２）は、完全ヒト化二重特異的抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の生成を記載する。各Ｆａｂ’断片は大腸菌から別々に分泌され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの誘導化学結合を受けて二重特異的抗体を形成した。こうして形成された二重特異的抗体は、ＥｒｂＢ２受容体および正常なヒトＴ細胞を過剰発現する細胞に結合することができただけでなく、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞毒性リンパ球の溶解活性を引き起こすことができた。
【０２２２】
二価の抗体断片を組換え細胞培養から直に作製して単離する様々な技術も、記載されている。例えば、ロイシンジッパーを用いて二価のヘテロダイマーが生成されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８巻（５号）：１５４７〜１５５３頁（１９９２）。
【０２２３】
ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元してモノマーを形成し、次に再酸化させて抗体ヘテロダイマーを形成した。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３）に記載される「ダイアボディ」技術は、二重特異的／二価の抗体断片を作製するための代替機構を提供している。断片は、同じ鎖の上の２つのドメインの間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続されている、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、１つの断片のＶＨおよびＶＬドメインは別の断片の相補的なＶＬおよびＶＨドメインと対を形成するように強制され、それによって２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を用いることによる二重特異的／二価抗体断片を作製するための別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２巻：５３６８頁（１９９４）を参照。
【０２２４】
２つを超える結合価の抗体が、企図される。例えば、三重特異的抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７巻：６０頁（１９９１）。
【０２２５】
例示的な二重特異的抗体は、所与の分子上の２つの異なるエピトープに結合することができる。あるいは、抗タンパク質の腕は、特定のタンパク質を発現する細胞に細胞性防御機構を集中させるように、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８またはＢ７）、またはＩｇＧのためのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）、例えばＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などの、白血球上のトリガー分子に結合する腕と組み合わせることができる。特定のタンパク質を発現する細胞に細胞毒性剤を局在化するために、二重特異的抗体を用いることもできる。そのような抗体は、タンパク質に結合する腕、および細胞毒性剤または放射性核種キレーター、例えばＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡもしくはＴＥＴＡに結合する腕を有する。対象の別の二重特異的抗体は、対象のタンパク質に結合し、さらに組織因子（ＴＦ）に結合する。
【０２２６】
８）多価抗体
多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞により二価抗体より速く内在化（および／または異化）することができる。本発明の抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（例えば四価の抗体）（ＩｇＭクラス以外のものである）であってよく、それは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に生成することができる。多価抗体は、二量体化ドメインおよび３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。好ましい二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれからなる）。このシナリオでは、抗体は、Ｆｃ領域およびＦｃ領域のアミノ末端側に３つ以上の抗原結合部位を含む。本明細書の好ましい多価抗体は、３〜約８つ、好ましくは４つの抗原結合部位を含む（またはそれからなる）。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（および好ましくは２つのポリペプチド鎖）を含み、そこにおいて、ポリペプチド鎖は２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含むことができ、式中、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１およびＸ２はアミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは０または１である。例えば、ポリペプチド鎖は以下を含むことができる：ＶＨ−ＣＨ１フレキシブルリンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖；またはＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖。本明細書の多価抗体は、少なくとも２つ（好ましくは４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドを好ましくはさらに含む。本明細書の多価抗体は、例えば、約２〜約８個の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含むことができる。ここで企図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、および任意選択でＣＬドメインをさらに含む。
【０２２７】
９）ヘテロコンジュゲート抗体
ヘテロコンジュゲート抗体も、本発明の範囲内である。ヘテロコンジュゲート抗体は、２つの共有結合した抗体で構成される。例えば、ヘテロコンジュゲート中の抗体の１つはアビジンに、他はビオチンに結合することができる。そのような抗体は、例えば、望ましくない細胞を免疫系細胞の標的にするように、Ｕ．Ｓ．Ｐ．４，６７６，９８０、およびＨＩＶ感染の処置のために提案されている。ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／２００３７３およびＥＰ０３０８９３６。抗体は、合成タンパク質化学で公知の方法、例えば架橋剤を含む方法を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製することができると考えられている。例えば、ジスルフィド交換反応を用いて、またはチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素を構築することができる。この目的のための適した試薬の例には、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチリミデート、ならびに、例えば米国特許第４，６７６，９８０号に開示されるものが含まれる。
【０２２８】
ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の都合のよい架橋方法を用いて作製することができる。適する架橋剤は当技術分野で周知であり、いくつかの架橋技術と一緒に米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
【０２２９】
１０）エフェクター機能操作
例えば抗体の抗原依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を強化するように、エフェクター機能に関して本発明の抗体を改変することが望ましいことがある。これは、抗体のＦｃ領域に１つまたは複数のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。あるいは、またはさらに、システイン残基をＦｃ領域に導入し、それによってこの領域で鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にすることができる。このように生成されるホモダイマー抗体は、向上した内在化能力ならびに／または増加した補体媒介細胞殺滅および抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を有することができる。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７６巻：１１９１〜１１９５頁（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ、Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８巻：２９１８〜２９２２頁（１９９２）を参照。強化された抗腫瘍活性を有するホモダイマー抗体は、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３巻：２５６０〜２５６５頁（１９９３）に記載のヘテロ二官能基架橋剤を用いて調製することもできる。あるいは、二重のＦｃ領域を有し、それによって強化された補体溶解およびＡＤＣＣ能力を有することができる抗体を操作することができる。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３巻：２１９〜２３０頁（１９８９）を参照。
【０２３０】
抗体の血清中半減期を増加させるために、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載のように抗体（特に抗体断片）にサルベージ受容体結合性エピトープを組み込むことができる。本明細書で用いるように、用語「サルベージ受容体結合性エピトープ」は、ＩｇＧ分子のｉｎ  ｖｉｖｏでの血清中半減期の増加を担うＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０２３１】
１１）免疫複合体
本発明は、細胞毒性剤、例えば化学療法剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物または動物起源の酵素活性毒素、またはその断片）、または放射性同位体（すなわち、放射性コンジュゲート）とコンジュゲートされる抗体を含む、免疫複合体または抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）にも関係する。そのようなＡＤＣは、許容される安全性プロファイルを示さなければならない。
【０２３２】
細胞毒性剤または細胞増殖抑制剤、例えばがんの処置で腫瘍細胞を死滅させるか阻害する薬物の局所送達のためのＡＤＣの使用［ＳｙｒｉｇｏｓおよびＥｐｅｎｅｔｏｓ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９巻：６０５〜１４頁（１９９９）；Ｎｉｃｕｌｅａｓｃｕ−ＤｕｖａｚおよびＳｐｒｉｎｇｅｒ、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．２６巻：１５１〜７２頁（１９９７）；ＵＳ４，９７５，２７８］は、腫瘍への薬物部分の対標的送達およびその中の細胞内蓄積を理論的に可能にし、そこにおいて、これらのコンジュゲートしていない薬剤の全身投与は、除去しようとする腫瘍細胞だけでなく正常細胞への非許容レベルの毒性をもたらすことがある（Ｂａｌｄｗｉｎら、Ｌａｎｃｅｔ、６０３〜０５頁（１９８６）；Ｔｈｏｒｐｅ、（１９８５）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ、ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａ．Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５〜５０６頁）。それにより、最小限の毒性で最大の効能が求められる。これらの戦略で、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方が有益であると報告されている（Ｒｏｗｌａｎｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２１巻：１８３〜８７頁（１９８６））。これらの方法で用いられる薬物には、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキセートおよびビンデシンが含まれる。抗体−毒素コンジュゲートで用いられる毒素には、細菌毒素、例えばジフテリア毒素、植物毒素、例えばリシン、小分子毒素、例えばゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２巻（１９号）：１５７３〜８１頁（２０００）；Ｍａｎｄｌｅｒら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃｓ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０巻：１０２５〜２８頁（２０００）；Ｍａｎｄｌｅｒら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３巻：７８６〜９１頁（２００２））、マイタンシノイド（ＥＰ１３９１２１３；Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３巻：８６１８〜２３頁（１９９６））、およびカリケアマイシン（Ｌｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８巻：２９２８頁（１９９８）；およびＨｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３巻：３３３６〜４２頁（１９９３））が含まれる。毒素は、チュブリン結合、ＤＮＡ結合またはトポイソメラーゼ阻害を含む機構によって、それらの細胞毒性および細胞増殖抑制作用を発揮することができる。一部の細胞毒性薬は、大きな抗体またはタンパク質受容体リガンドとコンジュゲートされる場合、不活性であるか活性がより弱い傾向がある。
【０２３３】
そのような免疫複合体の生成で有益な化学療法剤は上に記載され、例には、ＢＣＮＵ、ストレプトゾシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、アドリアマイシンおよび５−フルオロウラシルが含まれる。
【０２３４】
用いることができる酵素活性毒素およびその断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）から）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、アルファサルシン、アブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ダイアンシンタンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテセンが含まれる。放射性コンジュゲート抗体の生成に、様々な放射性核種を利用できる。例には、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙおよび１８６Ｒｅが含まれる。抗体および細胞毒性剤のコンジュゲートは、様々な二官能基タンパク質結合剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能基誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシニミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トリエン２，６−ジイソシアネートなど）およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を用いて作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３８巻：１０９８頁（１９８７）に記載のように調製することができる。炭素１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン−ペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドのコンジュゲーションのための例示的なキレート化剤である。例えば、ＷＯ１９９４／１１０２６を参照。
【０２３５】
リンカーは、細胞内で細胞毒性薬の放出を促進する「開裂可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸に対して不安定なリンカーであるペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２巻：１２７〜１３１頁（１９９２））を用いることができる。
【０２３６】
さらに、カリケアマイシン、マイタンシン（Ｕ．Ｓ．Ｐ．５，２０８，０２０）、トリコテセンおよびＣＣ１０６５などの小分子毒素も、発明の製剤用のコンジュゲーション可能な毒素として企図される。一実施形態では、完全長抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数のマイタンシノイド分子（例えば抗体１分子につき約１〜約１０個のマイタンシノイド分子）とコンジュゲートさせることができる。マイタンシノイドは、チュブリン重合を阻害する作用をする有糸分裂阻害剤である。マイタンシン、マイタンシノールならびにその誘導体および類似体を含む天然の供給源から単離されたか合成的に調製されたマイタンシノイドが記載されており、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号およびその中の引用文献（第２欄５３行目〜第３欄１０行目を参照）ならびに米国特許第３，８９６，１１１号および第４，１５１，０４２号を参照されたい。抗体−マイタンシノイドコンジュゲートの調製方法も、米国特許第５，２０８，０２０号に記載される。好ましい実施形態では、マイタンシノイドはジスルフィドまたは他の含硫黄リンカー基を通して抗体に連結される。マイタンシンは、例えば、Ｍａｙ−ＳＳ−Ｍｅへ変換することができ、それは、Ｍａｙ−ＳＨ３に還元し、改変された抗体と反応させてマイタンシノイド−抗体免疫複合体を生成することができる。Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２巻：１２７〜１３１頁（１９９２）。抗体は公知の方法によって改変することができ、遊離のまたは保護されたチオール基を有する抗体を次にジスルフィド含有マイタンシノイドと反応させ、コンジュゲートを生成する。抗体−マイタンシノイドコンジュゲートの細胞毒性は、公知の方法によってｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで測定することができ、ＩＣ５０を判定することができる。
【０２３７】
カリケアマイシンは、対象の別の免疫複合体である。カリケアマイシン抗生物質ファミリーは、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡ切断を起こすことが可能である。
【０２３８】
用いることができるカリケアマイシンの構造類似体には、γ１１、α２１、α３１、Ｎ−アセチル−γ１１、ＰＳＡＧおよびθ１１が含まれるが、これらに限定されない（Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３巻：３３３６〜３３４２頁（１９９３）およびＬｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８巻：２９２５〜２９２８頁（１９９８））。抗体をコンジュゲートさせることができる他の抗腫瘍薬には、抗葉酸剤であるＱＦＡが含まれる。カリケアマイシンおよびＱＦＡの両方は、細胞内の作用部位を有し、原形質膜を容易に越えない。したがって、抗体媒介内在化を通してのこれらの薬剤の細胞取り込みは、それらの細胞毒性作用を大いに強化する。
【０２３９】
抗体と核溶解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ、ＤＮアーゼ）との間で形成される免疫複合体も、企図される。
【０２４０】
本発明のＡＤＣでは、抗体（Ａｂ）はリンカー（Ｌ）を通して、１抗体につき１つまたは複数の薬物部分（Ｄ）、例えば約１〜約２０個の薬物部分とコンジュゲートされる。式ＩのＡＤＣは、以下を含む、当業者に公知である有機化学反応、条件および試薬を使用する、いくつかの経路によって調製することができる：（１）共有結合によりＡｂ−Ｌを形成する抗体の求核基と二価リンカー試薬との反応、および続く薬物部分Ｄとの反応；ならびに（２）共有結合によりＤ−Ｌを形成する薬物部分の求核基と二価リンカー試薬との反応、および続く抗体の求核基との反応。
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ  式Ｉ
【０２４１】
抗体上の求核基には、それらに限定されないが以下のものが含まれる：（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えばリジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えばシステイン、および（ｉｖ）糖ヒドロキシル基またはアミノ基であって、抗体はグリコシル化される。アミン、チオールおよびヒドロキシル基は、求核性であって、以下を含むリンカー部分およびリンカー試薬の上の求電子基と反応して共有結合を形成することが可能である：（ｉ）活性エステル、例えばＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロギ酸エステルおよび酸ハロゲン化物；（ｉｉ）アルキルおよびベンジルハライド、例えばハロアセトアミド；ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシルおよびマレイミド基。特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン橋を有する。抗体は、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）などの還元剤での処理によって、リンカー試薬とのコンジュゲーションに反応性にすることができる。したがって、各システイン橋は、理論的に２つの反応性チオール求核基を形成する。チオールへのアミンの変換をもたらす２−イミノチオラン（トラウト試薬）とのリジンの反応を通して、さらなる求核基を抗体に導入することができる。
【０２４２】
本発明のＡＤＣは、リンカー試薬または薬物の上の求核置換基と反応することができる求電子部分を導入するための、抗体の改変によって生成することもできる。グリコシル化抗体の糖は、例えば過ヨウ素酸酸化試薬で酸化させて、リンカー試薬または薬物部分のアミン基と反応することができるアルデヒド基またはケトン基を形成することができる。生じるイミンシッフ塩基は、安定した連結を形成するか、または例えばボロハイドライド試薬で還元して安定したアミン連結を形成することができる。一実施形態では、グリコシル化抗体の炭水化物部分とガラクトース酸化酵素またはメタ過ヨウ素酸ナトリウムとの反応は、薬物上の適当な基と反応することができるタンパク質中のカルボニル（アルデヒドおよびケトン）基を生成することができる（Ｄｏｍｅｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．５１０巻：２９３〜３０２頁（１９９０））。別の実施形態では、Ｎ末端セリンまたはトレオニン残基を含有するタンパク質は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応して、第１のアミノ酸の代わりにアルデヒドを生成することができる（ＧｅｏｇｈｅｇａｎおよびＳｔｒｏｈ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３巻：１３８〜４６頁（１９９２）；ＵＳ５，３６２，８５２）。そのようなアルデヒドは、薬物部分またはリンカー求核体と反応を起こさせることができる。
【０２４３】
同様に、薬物部分の上の求核基には、限定されずに、以下を含むリンカー部分およびリンカー試薬の上の求電子基と反応して共有結合を形成することが可能な、アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、カルボン酸ヒドラジンおよびアリールヒドラジド基が含まれる：（ｉ）活性エステル、例えばＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロギ酸エステルおよび酸ハロゲン化物；（ｉｉ）アルキルおよびベンジルハライド、例えばハロアセトアミド；ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシルおよびマレイミド基。
【０２４４】
あるいは、抗体および細胞毒性剤を含む融合タンパク質は、例えば、組換え技術またはペプチド合成によって作製することができる。ＤＮＡの全長は、お互いに隣接するか、コンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離されるコンジュゲートの２つの部分をコードするそれぞれの領域を含むことができる。さらに別の実施形態では、腫瘍プリターゲッティングでの利用のために抗体を「受容体」（ストレプトアビジンなど）とコンジュゲートすることができ、そこにおいて、抗体−受容体コンジュゲートは患者に投与され、その後清浄剤を用いて循環から未結合のコンジュゲートが除去され、次に細胞毒性剤（例えば放射性ヌクレオチド）とコンジュゲートされる「リガンド」（例えばアビジン）が投与される。
【０２４５】
本明細書のＡＤＣは、架橋剤試薬：ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣおよびスルホ−ＳＭＰＢ、およびＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）によって任意選択で調製され、それらは市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）。
【０２４６】
抗体は、高度に放射性の原子とコンジュゲートすることもできる。放射性コンジュゲート抗体の生成に、様々な放射性核種を利用できる。例には、Ａｔ２１１、Ｂｉ２１２、Ｉ１３１、Ｉｎ１３１、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｐ３２およびＰｂ２１２およびＬｕの放射性同位体が含まれる。コンジュゲートが診断のために用いられる場合は、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えばＴｃ９９もしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ｎｍｒ）画像化（磁気共鳴画像化、ｍｒｉとしても知られる）のためのスピン標識、例えば、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガンもしくは鉄を含むことができる。
【０２４７】
放射性または他の標識は、公知の方法でコンジュゲートに組み込むことができる。例えば、ペプチドは生合成することができるか、例えば水素の代わりにフッ素−１９を含む適切なアミノ酸前駆物質を用いる化学的アミノ酸合成によって合成することができる。Ｔｃ９９またはＩ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８およびＩｎ１１１などの標識は、ペプチドのシステイン残基を通して付着させることができる。イットリウム−９０は、リジン残基を通して付着させることができる。ヨウ素−１２３を組み込むために、ＩＯＤＯＧＥＮ（登録商標）法を用いることができる、Ｆｒａｋｅｒら、Ｂｉｏｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０巻：４９〜５７頁（１９７８）。放射性核種をコンジュゲートする他の方法は、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ」、（Ｃｈａｔａｌ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９年）に記載される。
【０２４８】
あるいは、抗体および細胞毒性剤を含む融合タンパク質は、組換え技術またはペプチド合成によって作製することができる。ＤＮＡの長さは、お互いに隣接するか、コンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離されるコンジュゲートの２つの部分をコードするそれぞれの領域を含むことができる。
【０２４９】
別の実施形態では、腫瘍プリターゲッティングでの利用のために抗体を「受容体」（ストレプトアビジンなど）とコンジュゲートすることができ、そこにおいて、抗体−受容体コンジュゲートは患者に投与され、その後清浄剤を用いて循環から未結合のコンジュゲートが除去され、次に細胞毒性剤（例えば放射性ヌクレオチド）とコンジュゲートされる「リガンド」（例えばアビジン）が投与される。
【０２５０】
１２）他のアミノ酸配列改変
本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列改変が、企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を向上させることが望ましいことがある。抗体のアミノ酸配列変異体は、適当なヌクレオチド変更を抗体の核酸に導入することによって、またはペプチド合成によって調製される。そのような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列中の残基からの欠失、および／またはそれへの挿入および／またはその置換が含まれる。その最終構築物が所望の特徴を有する限り、最終構築物に到達するために欠失、挿入および置換が任意に組み合わされる。アミノ酸の変更は、抗体の翻訳後過程を変化させること、例えばグリコシル化部位の数または位置を変更することもできる。
【０２５１】
突然変異誘発のための好ましい位置である抗体の特定の残基または領域の同定のための有益な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：１０８１〜１０８５頁（１９８９）に記載のように「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。ここでは、残基または標的残基の群が同定され（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕなどの荷電残基）、アミノ酸抗原の相互作用に影響を及ぼすために中性または負に荷電したアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられる。次に、置換への機能的感受性を実証するそれらのアミノ酸の位置は、置換部位に、またはそのためにさらなる変異体または他の変異体を導入することによって洗練される。したがって、アミノ酸配列変異を導入するための部位は前もって決められるが、突然変異の性質自体は前もって決める必要はない。例えば、所与の部位での突然変異の性能を分析するために、ａｌａスキャニングまたはランダム突然変異誘発が標的のコドンまたは領域で実行され、発現される抗体変異体は所望の活性についてスクリーニングされる。
【０２５２】
アミノ酸配列の挿入には、１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さのアミノおよび／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体または細胞毒性ポリペプチドに融合された抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入型変異体には、抗体の血清中半減期を増加させる酵素（例えばＡＤＥＰＴ）またはポリペプチドに対する抗体のＮまたはＣ末端への融合が含まれる。
【０２５３】
変異体の別の型は、アミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、抗体分子中に異なる残基で置き換えられた少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換型突然変異誘発にとって最も興味のある部位には超可変領域が含まれるが、ＦＲの変更も企図される。下記の表Ａの「好ましい置換」の項目名の下に、保存的置換を示す。そのような置換が生物学的活性の変化をもたらすならば、表Ａで「例示的な置換」と呼ばれるか、またはアミノ酸クラスに関して下でさらに記載される、より実質的な変化を導入し、その生成物をスクリーニングすることができる。
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【０２５４】
抗体の生物学的特性の実質的な改変は、（ａ）例えばシートまたはヘリカル構造としての、置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ、の維持に及ぼすそれらの作用が有意に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通する側鎖特性に基づいて群に分類される：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスの１メンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【０２５５】
分子の酸化安定度を向上させて異常な架橋を防止するために、抗体の固有の立体構造の維持に関与しない任意のシステイン残基を、一般にセリンで置換することもできる。反対に、その安定性を向上させるために（特に抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合）、システイン結合を抗体に加えることができる。
【０２５６】
置換型変異体の特に好ましい型は、親抗体（例えばヒト化またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域の残基を置換することを含む。一般に、さらなる開発のために選択される生じた変異体は、それらの生成源である親抗体と比較して向上した生物学的特性を有する。そのような置換型変異体を生成するのに便利な方法は、ファージディスプレイを用いる親和性成熟を含む。簡潔には、いくつかの超可変領域部位（例えば６〜７部位）を突然変異させて、各部位で可能な全てのアミノ置換を生成する。このように生成される抗体変異体は、各粒子の中でパッケージされるＭ１３の第ＩＩＩ遺伝子生成物との融合体として、繊維状ファージ粒子から一価の形態で提示される。ファージによって提示される変異体は、本明細書に開示のように、それらの生物学的活性（例えば結合親和性）について次にスクリーニングされる。改変のための候補超可変領域部位を特定するために、アラニンスキャニング突然変異誘発を実施して、抗原結合にかなり寄与する超可変領域残基を特定することができる。
【０２５７】
あるいは、またはさらに、抗体とＩｇＥの間の接触点を特定するために、抗原抗体複合体の結晶構造を分析することが有益なことがある。そのような接触残基および近隣残基は、本明細書で詳しく述べる技術による置換のための候補である。そのような変異体が生成されると、変異体の一団が本明細書に記載されるスクリーニングにかけられ、１つまたは複数の関連するアッセイで優れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択することができる。
【０２５８】
抗体のアミノ酸変異体の別の型は、抗体の元のグリコシル化パターンを変化させる。変化させることとは、抗体で見出される１つまたは複数の炭化水素部分を削除すること、および／または抗体に存在しない１つまたは複数のグリコシル化部位を加えることを意味する。
【０２５９】
抗体のグリコシル化は、一般的にＮ連結かＯ連結である。Ｎ連結は、アスパラギン残基の側鎖への炭化水素部分の付着を指す。Ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸であるトリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニンは、アスパラギン側鎖への炭化水素部分の酵素的付着のための認識配列である。したがって、ポリペプチドでのこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を形成する。Ｏ連結グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースの中の１つの付着を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンを用いることもできる。
【０２６０】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、それが上記のトリペプチド配列の１つまたは複数を含有するようにアミノ酸配列を変化させることによって、都合よく達成される（Ｎ連結グリコシル化部位の場合）。元の抗体の配列に対する１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加またはそれによる置換によって、変化させることもできる（Ｏ連結グリコシル化部位の場合）。
【０２６１】
抗ＩｇＥ抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、当技術分野で公知の様々な方法によって調製される。これらの方法には、それらに限定されないが、天然供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合）、またはオリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、および抗ＩｇＥ抗体のより早期に調製された変異体または非変異体バージョンのカセット式突然変異誘発による調製が含まれる。
【０２６２】
１３）他の抗体改変
本発明の抗体は、当技術分野で公知であり、直ちに利用できるさらなる非タンパク部分を含有するように、さらに改変することができる。好ましくは、抗体の誘導体化のために適する部分は、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定例には、それらに限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコールおよびそれらの混合物が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のために製造上の利点を有することができる。ポリマーは任意の分子量であってよく、分枝状か非分枝状であってよい。抗体に付着するポリマーの数は変化させることができ、複数のポリマーが付着する場合は、それらは同じか異なる分子であってよい。一般に、誘導体化のために用いられるポリマーの数／型は、それらに限定されないが、改良する抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定条件下の療法で用いられるかどうか、などを含む考慮事項に基づいて決定することができる。そのような技術および他の適する製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）で開示される。
【０２６３】
Ｃ．抗ＩｇＥ抗体の組換え調製
本発明は、アポトーシス性抗ＩｇＥ抗体をコードする単離核酸、このような核酸を含むベクターおよび宿主細胞、ならびに抗体を生成するための組換え技法も提供する。
【０２６４】
抗体を組換え生成するために、これをコードする核酸が単離され、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、または発現のために複製可能なベクター中に挿入される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、慣例的な手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離および配列決定される。多くのベクターが利用可能である。ベクターコンポーネントは一般に、それだけに限らないが、以下、すなわち、シグナル配列、複製の起点、１つもしくは複数のマーカー遺伝子、およびエンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列の１つまたは複数を含む。
【０２６５】
（１）シグナル配列コンポーネント
本発明の抗ＩｇＥ抗体は、直接にだけでなく、好ましくは、成熟タンパク質または成熟ポリペプチドのＮ−末端で特異的切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドである異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても組換えで生成することができる。選択される非相同シグナル配列は、好ましくは、宿主細胞によって認識およびプロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものである。天然哺乳動物シグナル配列を認識およびプロセシングしない原核生物宿主細胞については、シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐ、または熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列によって置換される。酵母分泌については、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、因子リーダー（サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）およびクルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）−因子リーダーを含む）、または酸性ホスファターゼリーダー、Ｃ．アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）グルコアミラーゼリーダー、またはＷＯ９０／１３６４６に記載されたシグナルによって置換され得る。哺乳動物細胞発現では、哺乳動物シグナル配列およびウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが利用可能である。
【０２６６】
このような前駆体領域のＤＮＡは、ＩｇＥ結合抗体をコードするＤＮＡに読み枠内でライゲーションされる。
【０２６７】
（２）複製の起点
発現ベクターおよびクローニングベクターはともに、ベクターが１つまたは複数の選択された宿主細胞内で複製することを可能にする核酸配列を含有する。一般に、クローニングベクターでは、この配列は、ベクターが宿主染色体ＤＮＡとは独立に複製することを可能にし、複製の起点または自律複製配列を含むものである。このような配列は、様々な細菌、酵母、およびウイルスに関して周知である。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製の起点は、ほとんどのグラム陰性菌に適しており、２μプラスミド起点は、酵母に適しており、様々なウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ、またはＢＰＶ）が哺乳動物細胞内のクローニングベクターに有用である。一般に、複製の起点コンポーネントは、哺乳動物発現ベクターに必要とされない（ＳＶ４０起点は一般に、ただこれが初期プロモーターを含有するために使用され得る）。
【０２６８】
（３）選択遺伝子コンポーネント
発現ベクターおよびクローニングベクターは、選択可能マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含有することができる。一般的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセート、もしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与し、（ｂ）栄養要求性欠損を補完し、または（ｃ）複合培地から入手可能でない極めて重要な栄養分、例えば、桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）のＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子を供給する、タンパク質をコードする。
【０２６９】
選択スキームの一例では、宿主細胞の増殖を抑止するために薬物を利用する。異種遺伝子で順調に形質転換された細胞は、薬剤耐性を付与するタンパク質を産生し、したがって、選択レジメンを生き残る。このような優性選択の例では、薬物のネオマイシン、ミコフェノール酸、およびハイグロマイシンを使用する。
【０２７０】
哺乳動物細胞の適当な選択可能マーカーの別の例は、ＩｇＥ結合抗体核酸、例えば、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉおよび−ＩＩなど、好ましくは霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチン脱炭酸酵素などを取り込むことができる細胞の同定を可能にするものである。
【０２７１】
例えば、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキセート（Ｍｔｘ）を含有する培地中で形質転換体の全てを培養することによって最初に同定される。野生型ＤＨＦＲが使用されるときの適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性を欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系統（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９０９６）である。
【０２７２】
代わりに、ＩｇＥ結合抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、およびアミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）などの別の選択可能マーカーをコードするＤＮＡ配列で形質転換または同時形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）を、アミノグリコシド系抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシン、またはＧ４１８などの選択可能マーカーの選択剤を含有する培地中の細胞増殖によって選択することができる。米国特許第４，９６５，１９９号を参照。
【０２７３】
酵母中で使用するのに適した選択遺伝子は、酵母プラスミドＹＲｐ７中に存在するｔｒｐ１遺伝子である（Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂら、Ｎａｔｕｒｅ、２８２：３９（１９７９））。ｔｒｐ１遺伝子は、トリプトファン中で増殖する能力を欠く酵母の突然変異株、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６またはＰＥＰ４−１の選択マーカーをもたらす。Ｊｏｎｅｓ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、８５：１２（１９７７）。酵母宿主細胞ゲノム内でｔｒｐ１損傷が存在すると、トリプトファンの非存在下での増殖による形質転換を検出するための有効な環境がもたらされる。同様に、Ｌｅｕ２欠損酵母株（ＡＴＣＣ２０，６２２または３８，６２６）は、Ｌｅｕ２遺伝子を持つ公知のプラスミドによって補完される。
【０２７４】
さらに、１．６μｍの環状プラスミドｐＫＤ１に由来するベクターを、クルイベロミセス酵母の形質転換に使用することができる。代わりに、組換え仔ウシキモシンを大規模生産するための発現系が、Ｋ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）について報告された。Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇ、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８：１３５（１９９０）。クルイベロミセスの工業用株によって成熟組換えヒト血清アルブミンを分泌させるための安定なマルチコピー発現ベクターも開示されている。Ｆｌｅｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、９：９６８〜９７５（１９９１）。
【０２７５】
（４）プロモーターコンポーネント
発現ベクターおよびクローニングベクターは通常、宿主生物体によって認識されるプロモーターを含有し、ＩｇＥ結合抗体をコードする核酸に作動可能に連結している。原核生物宿主とともに使用するのに適したプロモーターとしては、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼプロモーター、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにｔａｃプロモーターなどのハイブリッドプロモーターがある。しかし、他の公知の細菌プロモーターも適している。細菌系内で使用するためのプロモーターはまた、ＩｇＥ結合抗体をコードするＤＮＡに作動可能に連結したシャイン−ダルガノ（Ｓ．Ｄ．）配列を含有することになる。
【０２７６】
プロモーター配列は、真核生物について知られている。実質的に全ての真核生物遺伝子は、転写が開始される部位からおよそ２５〜３０塩基上流に位置したＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始から７０〜８０塩基上流に見つかる別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、式中、Ｎは、任意のヌクレオチドであり得る。ＡＡＴＡＡＡ配列がほとんどの真核生物遺伝子の３’末端にあり、これは、コード配列の３’末端にポリＡ末端を付加するためのシグナルであり得る。これらの配列の全ては、真核生物発現ベクター中に適切に挿入される。
【０２７７】
酵母宿主とともに使用するのに適したプロモーター配列の例としては、３−ホスホグリセリン酸キナーゼまたは他の糖分解酵素、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸脱炭酸酵素、ホスホ−フルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセレートムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、グルコースリン酸イソメラーゼ、およびグルコキナーゼなどのプロモーターがある。
【０２７８】
増殖条件によって制御される転写の追加の利点を有する誘導プロモーターである他の酵母プロモーターは、アルコール脱水素酵素２、イソチトクロームＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関連した分解酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素、ならびにマルトースおよびガラクトース利用を担う酵素のプロモーター領域である。酵母発現で使用するのに適したベクターおよびプロモーターは、ＥＰ７３，６５７にさらに記載されている。酵母エンハンサーも、酵母プロモーターとともに有利に使用される。
【０２７９】
哺乳動物宿主細胞内のベクターからのＩｇＥ結合抗体転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、肝炎−Ｂウイルス、最も好ましくはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから、非相同哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから得られるプロモーターによって制御され、ただしこのようなプロモーターは、宿主細胞系と適合している。
【０２８０】
ＳＶ４０ウイルスの初期プロモーターおよび後期プロモーターは、好都合なことには、ＳＶ４０ウイルスの複製の起点も含有するＳＶ４０制限断片として得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、好都合なことには、ＨｉｎｄＩＩＩ  Ｅ制限断片として得られる。ベクターとしてウシパピローマウイルスを使用して哺乳動物宿主内でＤＮＡを発現させるための系は、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の改変は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞内のヒト−インターフェロンｃＤＮＡの発現についてＲｅｙｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、２９７：５９８〜６０１（１９８２）も参照。代わりに、ラウス肉腫ウイルス長末端反復をプロモーターとして使用することができる。
【０２８１】
（５）エンハンサーエレメントコンポーネント
高等真核生物による本発明のＩｇＥ結合抗体をコードするＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増大されることが多い。哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン、およびインスリン）由来の多くのエンハンサー配列が、現在公知である。しかし一般に、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用されることになる。例としては、複製起点の後期側（ｂｐ１００〜２７０）のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーがある。真核生物プロモーターを活性化するためのエンハンシングエレメントについて、Ｙａｎｉｖ、Ｎａｔｕｒｅ、２９７：１７〜１８（１９８２）も参照。エンハンサーは、ＩｇＥ結合抗体コード配列に対して位置５’または３’でベクター中にスプライシングされ得るが、プロモーターから部位５’に位置していることが好ましい。
【０２８２】
（６）転写終結コンポーネント
真核生物宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または他の多細胞生物由来の有核細胞）内で使用される発現ベクターは、転写の終結およびｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含有することになる。このような配列は一般に、真核生物またはウイルスのＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’および場合によっては３’非翻訳領域から利用可能である。これらの領域は、ＩｇＥ結合抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分中のポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。１つの有用な転写終結コンポーネントは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６およびその中に開示された発現ベクターを参照。
【０２８３】
（７）宿主細胞の選択および形質転換
本明細書のベクター中でＤＮＡをクローニングし、または発現させるのに適した宿主細胞は、上述した原核生物、酵母、または高等真核生物の細胞である。この目的に適した原核生物としては、グラム陰性生物またはグラム陽性生物などの真正細菌、例えば、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えば、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、例えば、セラチア・マルセスキャンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）、およびシゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）などの腸内細菌、ならびに桿菌、例えば、Ｂ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、およびＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）（例えば、１９８９年４月１２日に公開されたＤＤ２６６，７１０に開示されたＢ．リケニフォルミス４１Ｐ）など、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）などのシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ならびにストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）がある。１つの好適な大腸菌クローニング宿主は、大腸菌２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）であるが、他の株、例えば、大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）、および大腸菌Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）なども適している。これらの例は、限定的ではなく例示的である。
【０２８４】
全長抗体、抗体断片、および抗体融合タンパク質は、特に、グリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、例えば、治療抗体が細胞傷害性剤（例えば、毒素）にコンジュゲートされており、免疫コンジュゲート自体が腫瘍細胞破壊において有効性を示すなどの場合に、細菌内で生成することができる。全長抗体は、循環中でより長い半減期を有する。大腸菌内での産生は、より速く、より費用効率的である。細菌内での抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、発現および分泌を最適化するための翻訳開始領域（ＴＩＲ）およびシグナル配列を記載しているＵ．Ｓ．５，６４８，２３７（Ｃａｒｔｅｒら）、Ｕ．Ｓ．５，７８９，１９９（Ｊｏｌｙら）、およびＵ．Ｓ．５，８４０，５２３（Ｓｉｍｍｏｎｓら）を参照。発現後、抗体は、可溶性画分中の大腸菌細胞ペーストから単離され、例えば、アイソタイプに応じてプロテインＡカラムまたはプロテインＧカラムに通して精製することができる。最終精製は、例えば、ＣＨＯ細胞内で発現された抗体を精製するためのプロセスと同様に実施することができる。
【０２８５】
原核生物に加えて、真核生物微生物、例えば、糸状菌（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ  ｆｕｎｇｉ）または酵母なども、ＩｇＥ結合抗体コードベクターの適当なクローニング宿主または発現宿主である。サッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、または一般的なパン酵母は、下等真核生物宿主微生物の中で最も一般に使用される。しかし、スキゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）；クルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）宿主、例えば、Ｋ．ラクチス、Ｋ．フラジリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ１２，４２４）、Ｋ．ブルガリクス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ．ウィケラミイ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ２４，１７８）、Ｋ．ワルチイ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ．ドロソフィラルム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）（ＡＴＣＣ３６，９０６）、Ｋ．サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、およびＫ．マルキシアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）など；ヤロウィア（Ｙａｒｒｏｗｉａ）（ＥＰ４０２，２２６）；ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）（ＥＰ１８３，０７０）；カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）；トリコデルマ・レエシア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｉａ）（ＥＰ２４４，２３４）；アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）；シュワニオミセス・オキシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）などのシュワニオミセス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）；ならびに糸状菌、例えば、ニューロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラジウム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、ならびにアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）宿主、例えば、Ａ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）およびＡ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）などのいくつかの他の属、種、および株も一般に、本明細書で利用可能であり、有用である。
【０２８６】
グリコシル化ＩｇＥ結合抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞および昆虫細胞がある。多数のバキュロウイルスの株およびバリアント、ならびにヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（毛虫）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ  ａｅｇｙｐｔｉ）（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ  ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ショウジョウバエ）、およびカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ）などの宿主由来の対応する許容可能な昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための様々なウイルス株、例えば、オートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ−１バリアント、およびカイコＮＰＶのＢｍ−５株が公的に入手可能であり、このようなウイルスは、本発明による本明細書のウイルスとして、特に、ヨトウガ細胞のトランスフェクションのために使用することができる。
【０２８７】
綿、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト、およびタバコの植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。
【０２８８】
しかし、関心は、脊椎動物細胞において最大であり、培養液中での脊椎動物細胞の増殖（組織培養）は、慣例的な手順となっている。有用な哺乳動物宿主細胞系統の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系統（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胚腎臓系統（懸濁培養液中での増殖のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．、３６：５９（１９７７））；仔ハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．、２３：２４３〜２５１（１９８０））；サル腎細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７０）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ２）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、３８３：４４〜６８（１９８２））；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒト肝細胞癌系統（Ｈｅｐ  Ｇ２）である。
【０２８９】
宿主細胞は、ＩｇＥ結合抗体産生のために上述した発現ベクターまたはクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するのに適切に改変された慣例的な栄養培地中で培養される。
【０２９０】
（８）宿主細胞の培養
本発明のＩｇＥ結合抗体を産生させるのに使用される宿主細胞は、様々な培地中で培養することができる。市販の培地、例えば、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などは、宿主細胞を培養するのに適している。さらに、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．、５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号；同第４，６５７，８６６号；同第４，９２７，７６２号；同第４，５６０，６５５号；もしくは同第５，１２２，４６９号；ＷＯ９０／０３４３０；ＷＯ８７／００１９５；または米国再発行特許第３０，９８５号に記載された培地のいずれも、宿主細胞用培地として使用することができる。これらの培地のいずれも、ホルモンおよび／または他の増殖因子（インスリン、トランスフェリン、もしくは上皮増殖因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸など）、緩衝液（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなど）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬など）、微量元素（通常マイクロモル範囲内の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）、ならびにグルコースまたは等価なエネルギー源を必要に応じて追加することができる。任意の他の必要なサプリメントも、当業者に公知であるはずである適切な濃度で含められる場合がある。温度、ｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で以前に使用されたものであり、当業者に明らかとなる。
【０２９１】
（９）抗体の精製
組換え技法を使用するとき、抗体は、細胞内、細胞膜周辺腔内に産生され得、または培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内に産生される場合、第１の工程として、宿主細胞または溶解断片の粒子状残骸が、例えば、遠心分離または限外濾過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１６３〜１６７（１９９２）は、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順を記載している。簡単に言えば、細胞ペーストが、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で、約３０分にわたって解凍される。細胞残屑は、遠心分離によって除去することができる。抗体が培地中に分泌される場合、このような発現系からの上清は一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して最初に濃縮される。タンパク質分解を阻害するために、前述の工程のいずれかにおいてＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤を含めることができ、外来性汚染物質の増殖を防止するために抗生物質を含めることができる。
【０２９２】
細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーが好適な精製技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒト１、２、または４重鎖に基づく抗体を精製するのに使用することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．、６２：１〜１３（１９８３））。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプおよびヒト３に推奨される（Ｇｕｓｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、５：１５６７１５７５（１９８６））。親和性リガンドが付着されるマトリックスは、ほとんどの場合アガロースであるが、他のマトリックスも利用可能である。機械的に安定なマトリックス、例えば、コントロールされた細孔ガラスまたはポリ（スチレン−ジビニル）ベンゼンなどは、アガロースを用いて実現することができるより、速い流速および短いプロセシングを可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、ＮＪ）が精製に有用である。タンパク質精製の他の技法、例えば、イオン交換カラム上の分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上のクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）上のクロマトグラフィー、陰イオン交換樹脂または陽イオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなど）上のクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫安分画なども、回収される抗体に応じて利用可能である。
【０２９３】
任意の（１つまたは複数の）予備精製工程の後に、対象の抗体および汚染物質を含む混合物を、好ましくは低塩濃度（例えば、約０〜０．２５Ｍの塩）で実施される、約２．５〜４．５の間のｐＨの溶出緩衝液を使用する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーにかけることができる。
【０２９４】
Ｄ．医薬製剤
治療用製剤は、所望の程度の純度を有する活性成分を、任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって貯蔵用に調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｋｌｉｎｓ，Ｐｕｂ．、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、２０００）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに無毒性であり、緩衝液や、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウムを含めた抗酸化剤；防腐剤、等張剤、安定剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ＥＤＴＡなどのキレート化剤および／または非イオン性界面活性剤を含む。
【０２９５】
治療剤が抗体断片であるとき、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小の阻害断片が好適である。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持する抗体断片またはさらにはペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学的に合成し、かつ／または組換えＤＮＡ技術によって生成することができる（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：７８８９〜７８９３［１９９３］を参照）。
【０２９６】
緩衝液は、特に安定性がｐＨ依存性である場合、治療有効性を最適にする範囲内にｐＨをコントロールするために使用される。緩衝液は、好ましくは約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在する。本発明で使用するのに適した緩衝剤としては、有機酸および無機酸、ならびにこれらの塩がある。例えば、シトレート、ホスフェート、スクシネート、タートレート、フマレート、グルコネート、オキサレート、ラクテート、アセテート。さらに、緩衝液は、Ｔｒｉｓなどのヒスチジン塩およびトリメチルアミン塩から構成することができる。
【０２９７】
防腐剤は、微生物増殖を遅延させるのに添加され、一般に０．２％〜１．０％（ｗ／ｖ）の範囲内で存在する。本発明で使用するのに適した防腐剤としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン，例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベンなど；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール、３−ペンタノール、ならびにｍ−クレゾールがある。
【０２９８】
等張化剤は、時折「安定剤」としても知られ、組成物中の液体の張性を調整または維持するために存在する。大きな荷電生体分子、例えば、タンパク質および抗体などとともに使用される場合、これらは、アミノ酸側鎖の帯電基と相互作用し、それによって分子間相互作用および分子内相互作用の潜在性を和らげることができるので、「安定剤」と呼ばれることが多い。等張化剤は、他の成分の相対量を考慮して０．１％から２５重量％、好ましくは１から５％の間の任意の量で存在し得る。好適な等張化剤としては、多価糖アルコール、好ましくは三価またはそれ以上の糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールなどがある。
【０２９９】
追加の賦形剤には、以下、すなわち、（１）増量剤、（２）溶解度エンハンサー、（３）安定剤、および（４）変性、または容器壁への粘着性を防止する作用物質の１つまたは複数として機能を果たすことができる作用物質が含まれる。このような賦形剤としては、多価糖アルコール（上記に列挙した）；アミノ酸、例えば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニンなど；有機糖または糖アルコール、例えば、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース、ミオイノシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコールなど；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール、およびチオ硫酸ナトリウムなど；低分子量タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；単糖（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；ラフィノースなどの三糖；および多糖、例えば、デキストリンまたはデキストランなどがある。
【０３００】
非イオン性界面活性剤またはデタージェント（「湿潤剤」としても公知）は、治療剤を可溶化するのを補助するため、および撹拌によって誘導される凝集に対して治療用タンパク質を保護するために存在し、これらは、活性な治療用タンパク質または抗体を変性させることなく製剤をせん断表面応力に曝露させることも可能にする。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０７ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲内で存在する。
【０３０１】
適当な非イオン性界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポロキサマー（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、５０、および６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースがある。使用され得る陰イオン性デタージェントとしては、硫酸ラウリルナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、およびジオクチルスルホン酸ナトリウムがある。陽イオン性デタージェントには、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが含まれる。
【０３０２】
製剤がｖｉｖｏ投与で使用されるために、これらは、滅菌状態でなければならない。製剤は、滅菌濾過膜に通す濾過によって滅菌状態にすることができる。本明細書の治療用組成物は一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアル中に入れられている。
【０３０３】
投与経路は、適当な様式で長時間にわたる単回もしくは複数回の大量瞬時投与もしくは注入、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路、局部投与、吸入による注射もしくは注入によって、または徐放手段もしくは持続放出手段によってなど、公知であり、許容された方法によるものである。
【０３０４】
本明細書の製剤は、処置される特定の適応症の必要に応じて１つを超える活性化合物、好ましくは互いに悪影響しない相補的な活性を有するものも含有し得る。代替としてまたは追加的に、組成物は、細胞傷害性剤、サイトカイン、または増殖阻害剤を含み得る。このような分子は、意図される目的に有効である量での組合せで適切に存在する。
【０３０５】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法もしくは界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン−マイクロカプセル、およびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）中、またはマクロエマルジョン中に封入することもできる。このような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８版、上記に開示されている。
【０３０６】
本明細書に記載のタンパク質および抗体の安定性は、無毒性「水溶性多価金属塩」を使用することによって増強され得る。例としては、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｃｕ２＋、Ｓｎ２＋、Ｓｎ４＋、Ａｌ２＋、およびＡｌ３＋がある。上記多価金属陽イオンと水溶性塩を形成することができる例示的な陰イオンには、無機酸および／または有機酸から形成されるものが含まれる。このような水溶性塩は、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌ、代わりに少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ、代わりに少なくとも約２００ｍｇ／ｍｌの水（２０℃の）中での溶解度を有する。
【０３０７】
「水溶性多価金属塩」を形成するのに使用することができる適当な無機酸としては、塩酸、酢酸、硫酸、硝酸、チオシアン酸、およびリン酸がある。使用することができる適当な有機酸としては、脂肪族カルボン酸および芳香族酸がある。この定義内の脂肪族酸は、飽和または不飽和Ｃ２〜９カルボン酸（例えば、脂肪族モノ−、ジ−、およびトリ−カルボン酸）として定義され得る。例えば、この定義内の例示的なモノカルボン酸としては、飽和Ｃ２〜９モノカルボン酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、およびカプリン酸、ならびに不飽和Ｃ２〜９モノカルボン酸、アクリル酸、プロプリオール酸、メタクリル酸、クロトン酸、およびイソクロトン酸がある。例示的なジカルボン酸としては、飽和Ｃ２〜９ジカルボン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、およびピメリン酸があり、一方、不飽和Ｃ２〜９ジカルボン酸としては、マレイン酸、フマル酸、シトラコン酸、およびメサコン酸がある。例示的なトリカルボン酸としては、飽和Ｃ２〜９トリカルボン酸、トリカルバリル酸、および１，２，３−ブタントリカルボン酸がある。さらに、この定義のカルボン酸は、１つまたは２つの水酸基を含有してヒドロキシカルボン酸も形成することができる。例示的なヒドロキシカルボン酸としては、グリコール酸、乳酸、グリセリン酸、タルトロン酸、リンゴ酸、酒石酸、およびクエン酸がある。この定義内の芳香族酸には、安息香酸およびサリチル酸が含まれる。
【０３０８】
本発明の被包性ポリペプチドの安定化を補助するのに使用することができる、一般に使用される水溶性多価金属塩としては、例えば、（１）ハロゲン化物の無機酸金属塩（例えば、塩化亜鉛、塩化カルシウム）、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、およびチオシアン酸塩；（２）脂肪族カルボン酸金属塩（例えば、酢酸カルシウム、酢酸亜鉛、プロピオン酸カルシウム、グリコール酸亜鉛、乳酸カルシウム、乳酸亜鉛、および酒石酸亜鉛）；ならびに（３）安息香酸の芳香族カルボン酸金属塩（例えば、安息香酸亜鉛）、およびサリチル酸塩がある。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、１００ｍｇ／ｍＬの抗体、３０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン塩酸塩、１４０ｍＭのアルギニン塩酸塩、０．０４％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、ｐＨ５．５を含む製剤中にある。
【０３１０】
Ｅ．処置の方法
ＩｇＥ媒介障害を処置または防止するための方法であって、ＩｇＥ（ヒトＩｇＥなど）のＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含む方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、ＩｇＥ媒介障害と診断されており、またはＩｇＥ媒介障害を生じさせるリスクがある。
【０３１１】
ヒトにおけるベースラインに対して血清中総ＩｇＥおよび／またはアレルゲン特異的ＩｇＥを低減させる方法であって、ＩｇＥ（ヒトＩｇＥなど）のＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含む方法が本明細書で提供される。血清中総ＩｇＥは、血清試料中に存在するＩｇＥの総量を指す。血清中総ＩｇＥは、全てのアレルゲン特異的ＩｇＥを含み、遊離または非結合、および結合パートナーと複合体形成したＩｇＥ（例えば、抗ＩｇＥ抗体、ＩｇＥ−担持Ｂ細胞）を含む。
【０３１２】
総血中清ＩｇＥおよび／またはアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加を防止または低減する方法であって、ＩｇＥ（ヒトＩｇＥなど）のＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含む方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、アレルゲンによって誘導される増加の防止または低減は、抗体で処置した後のアレルゲンによって誘導される増加を、抗体で処置する前のアレルゲンによって誘導される増加と比較することによって測定される。いくつかの実施形態では、アレルゲンによって誘導される増加の防止または低減は、抗体で処置した後のアレルゲンによって誘導される増加を、別の患者におけるアレルゲンによって誘導される増加、または抗体処置を伴わないヒト患者における平均増加と比較することによって測定される。いくつかの実施形態では、新しいＩｇＥの産生が防止される。
【０３１３】
新しいＩｇＥの産生を防止する方法であって、ＩｇＥ（ヒトＩｇＥなど）のＭ１’セグメントに結合する抗ＩｇＥ抗体の有効量をヒト患者に投与することを含む方法が本明細書で提供される。
【０３１４】
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、抗体の投与の間隔は、約１カ月またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、投与の間隔は、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、またはそれ以上である。本明細書において、投与の間隔は、抗体の１つの投与と、抗体の次の投与との間の時間を指す。本明細書において、約１カ月の間隔は４週間を含む。したがって、いくつかの実施形態では、投与の間隔は、約４週間、約８週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間、またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、処置は、投与の間隔が変動し得る、抗体の複数の投与を含む。例えば、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１カ月であり、後続の投与の間隔は、約３カ月である。いくつかの実施形態では、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１カ月であり、第２の投与と第３の投与との間の間隔は、約２カ月であり、後続の投与の間隔は、約３カ月である。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＩｇＥ抗体は、一定用量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＩｇＥ抗体は、１投与当たり約１５０〜約４５０ｍｇの投薬量でヒト患者に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩｇＥ抗体は、１投与当たり約１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、および４５０ｍｇのいずれかの投薬量でヒト患者に投与される。上述した投薬頻度のいずれも使用することができる。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、ヒト患者に本抗体を投与すると、ヒト患者における血清中総ＩｇＥおよび／またはアレルゲン特異的ＩｇＥが低減される。いくつかの実施形態では、血清中総ＩｇＥは、ベースラインから少なくとも約２０％低減される。いくつかの実施形態では、血清中総ＩｇＥは、ベースラインから少なくとも約２５％低減される。いくつかの実施形態では、血清中総ＩｇＥの低減は、抗体の最後の投与から、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、またはそれ以上持続される。いくつかの実施形態では、アレルゲン特異的ＩｇＥは、ベースラインから低減される。いくつかの実施形態では、ヒト患者に抗体を投与すると、血清中総ＩｇＥおよび／またはアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加が防止または低減される。いくつかの実施形態では、血清中総ＩｇＥおよび／またはアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加の防止または低減は、抗体の最後の投与から、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、またはそれ以上持続される。当技術分野で公知および本明細書に記載の方法を、血清中総ＩｇＥレベルおよびアレルゲン特異的ＩｇＥレベルを測定するのに使用することができる。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、抗体の投与は、以下の効果のうちの少なくとも１つを有する：１）プラセボと比較して５０％以上の増悪率の低減、ならびに以下、すなわち、５％以上のＦＥＶ１の改善、最初の投与の１２週間以内およびアクティブな投薬の３６週間後のプラセボと比較した症状の頻度または重症度の低減、ならびにアクティブな投薬の２４〜３６週間にわたるプラセボと比較した十分にコントロールされた週の増加のうちの少なくとも１つ；２）プラセボと比較して５０％以上の増悪率の低減、５％未満のＦＥＶ１の改善、最初の投与の１２週間以内およびアクティブな投薬の３６週間後のプラセボと比較した症状の頻度または重症度の低減なし、ならびにアクティブな投薬の２４〜３６週間にわたるプラセボと比較した十分にコントロールされた週の変化なし；３）プラセボと比較して４０〜４９％の増悪率の低減、５％未満のＦＥＶ１の改善、ならびに以下、すなわち、最初の投与の１２週間以内およびアクティブな投薬の３６週間後のプラセボと比較した症状の頻度または重症度の低減、ならびにアクティブな投薬の２４〜３６週間にわたるプラセボと比較した十分にコントロールされた週の増加のうちの少なくとも１つ；４）プラセボと比較して４０〜４９％の増悪率の低減、ならびに以下、すなわち、５％以上のＦＥＶ１の改善、最初の投与の１２週間以内およびアクティブな投薬の３６週間後のプラセボと比較した症状の頻度または重症度の低減、ならびにアクティブな投薬の２４〜３６週間にわたるプラセボと比較した十分にコントロールされた週の増加のうちの少なくとも１つ；ならびに５）プラセボと比較して４０％未満の増悪率の低減、ならびに以下、すなわち、５％以上のＦＥＶ１の改善、最初の投与の１２週間以内およびアクティブな投薬の３６週間後のプラセボと比較した症状の頻度または重症度の低減、ならびにアクティブな投薬の２４〜３６週間にわたるプラセボと比較した十分にコントロールされた週の増加のうちの少なくとも２つ。
【０３１８】
本明細書において、ヒトにおけるベースラインレベル（血清中総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥのベースラインレベルなど）は、ヒトに本明細書に記載の抗ＩｇＥ抗体を投与する前のレベルを指す。
【０３１９】
疾患の防止または処置のために、活性剤の適切な投薬量は、上記に定義した処置される疾患のタイプ、疾患の重症度および過程、作用物質が防止目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、ならびに作用物質に対する応答、ならびに主治医の自由裁量に依存することになる。作用物質は、同時に、または一連の処置にわたって患者に適切に投与される。
【０３２０】
処置の好適な方法は、ＩｇＥ媒介障害の処置である。ＩｇＥ媒介障害には、多くの一般的な天然に存在する吸入抗原および摂取抗原、ならびにＩｇＥ抗体の連続的な産生に対して免疫学的に応答する遺伝による性向によって特徴付けられるアトピー性障害が含まれる。具体的なアトピー性障害としては、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、およびアレルギー性胃腸病がある。アトピー患者は、複数のアレルギーを有することが多く、彼らが、花粉、真菌（例えば、カビ）、動物残骸および昆虫残骸、ならびにある特定の食物を含めた多くの環境アレルゲンに対するＩｇＥ抗体、ならびにこれらからの症状を有することを意味する。
【０３２１】
しかし、ＩｇＥレベルの上昇に関連した障害は、遺伝性（アトピー性）病因を有するものに限定されない。ＩｇＥ媒介性であり、この本発明の製剤で処置可能であると思われるＩｇＥレベルの上昇に関連した他の障害としては、過敏症（例えば、アナフィラキシー性過敏症）、湿疹、じん麻疹、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、寄生虫病、高ＩｇＥ症候群、毛細血管拡張性失調症、ウィスコット−アルドリッチ症候群、胸腺リンパ形成不全症、ＩｇＥ骨髄腫、および移植片対宿主反応がある。
【０３２２】
アレルギー性鼻炎は、アレルギー性鼻結膜炎または枯草熱としても知られ、吸入アレルゲンに対するアトピー反応の最も一般的な徴候であり、その重症度および持続時間は、アレルゲンへの曝露の強度および長さに相関性であることが多い。これは、いずれの年齢でも最初に現れ得る慢性疾患であるが、発症は通常、小児期または青年期の間である。一般的な発作は、大量の水様性鼻漏、発作性のくしゃみ、鼻閉塞、ならびに鼻部および口蓋のかゆみからなる。鼻後方粘液排水は、咽頭炎、咳払い、および咳も引き起こす。結膜および眼瞼の強いかゆみ、発赤、引裂、ならびに羞明を伴ったアレルギー性眼瞼結膜炎の症状も存在し得る。重度の発作は、全身性の倦怠感、脱力、疲労を伴うことが多く、時折、くしゃみの集中した期間の後の筋肉痛を伴う。
【０３２３】
喘息は、可逆性閉塞性気道疾患としても知られ、自発的に、または処置によって可逆性である喘鳴、呼吸困難、胸苦しさ、および咳の発作を生じる、呼吸刺激剤および気管支収縮の化学物質に対する気管気管支樹の応答性亢進によって特徴付けられる。これは、気道全体が関わる慢性疾患であるが、不定期の穏やかな一過性のエピソードから、重度の、慢性の、生命を危うくする気管支閉塞まで重症度が変動する。喘息およびアトピーは、共存し得るが、喘息患者の約半分のみがアトピー性でもあり、さらに小さいパーセンテージのアトピー患者が喘息も有する。しかし、アトピーおよび喘息は、喘息が、特に小児期の間、非アトピー性個体の中より、アトピー性個体の中でより頻繁に起こるという点で、完全に非依存性ではない。喘息は、２つの亜群、すなわち、外因性喘息および内因性喘息にさらに歴史的に分類されている。
【０３２４】
外因性喘息は、アレルギー性、アトピー性、または免疫性喘息としても知られ、一般に、年少期に、通常、乳児期または小児期の間に喘息を生じさせる患者を記述する。湿疹またはアレルギー性鼻炎を含めたアトピーの他の徴候も共存することが多い。喘息発作は、花粉の季節の間に、動物の存在下で、またはハウスダスト、羽毛の枕、もしくは他のアレルゲンへの曝露に対して起こり得る。皮膚試験は、原因となるアレルゲンに対する陽性の膨疹−潮紅反応を示す。興味深いことに、血清中総ＩｇＥ濃度は、しばしば上昇しているが、時折正常である。
【０３２５】
内因性喘息は、非アレルギー性または特発性喘息としても知られ、一般に、明らかな呼吸器感染症の後に、成人期の間に最初に起こる。症状は、花粉の季節または他のアレルゲンへの曝露と無関係の慢性または再発性気管支閉塞を含む。皮膚試験は、通常のアトピー性アレルゲンに対して陰性であり、血清ＩｇＥ濃度は正常である。追加の症状としては、血痰および好酸球増多がある。喘息を亜群に分類するための他のスキーム、例えば、アスピリン感受性、運動誘導性、感染性、および心理的などは、他の患者がそのようであるより、ある特定の患者に影響する外部誘発要因を単に定義する。
【０３２６】
最後に、いくつかの分類は、ＩｇＥ依存性を伴うアレルギー性喘息のみが歴史的に関連付けられてきたが、ＩｇＥと喘息（アレルギー性および非アレルギー性の両方）との間の相関を示す強い統計的に有意なデータが現在では存在することに留意することが重要である。２７章、「Ｔｈｅ  Ａｔｏｐｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ」、Ａ．Ｉ．Ｔｅｒｒ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、９編、ＳｉｍｏｎおよびＳｃｈｕｓｔｅｒ、Ｓｔｉｔｅｓら編（１９９７）。結果として、本特許出願の目的に関して、用語「ＩｇＥ媒介障害」は、アレルギー性および非アレルギー性喘息の両方を含む。
【０３２７】
喘息発作の身体的兆しとしては、頻呼吸、可聴喘鳴、および呼吸の副筋の使用がある。頻脈および血圧の上昇も一般に、末梢血および鼻汁中の好酸球のレベルの上昇と同様に存在する。肺機能は、流量および１秒努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）の低下を示す。全肺気量および機能残気量は一般に、正常であるか、またはわずかに増大しているが、極端な気管支けいれんとともに低下し得る。
【０３２８】
喘息の病理は、初期および後期反応によって区別され得る。初期は、平滑筋収縮、浮腫、および過分泌によって特徴付けられ、一方、後期反応は、細胞性炎症によって特徴付けられる。喘息は、感染（例えば、ウイルス性呼吸器感染症）、生理的要因（例えば、運動、過換気、深呼吸、心理的要因）、大気要因（例えば、二酸化硫黄、アンモニア、寒気、オゾン、蒸留水蒸気）、経口摂取物（例えば、プロプラノロール、アスピリン、非ステロイド性抗炎症薬）、実験的な吸入剤（例えば、高張液、クエン酸、ヒスタミン、メタコリン、プロスタグランジンＦ２α）、および職業性の吸入剤（例えば、イソシアネート）を含めた様々な非特異的誘因によって誘導され得る。アレルギー性喘息を引き起こす様々な追加の職業性アレルゲンまたは環境アレルゲンとして、動物生成物、昆虫埃、海洋生物、植物生成物、果実、種子、葉、および花粉、有機色素および有機インク、微生物剤、酵素、治療剤、滅菌剤、ならびに無機化学物質および有機化学物質を挙げることができる。
【０３２９】
湿疹としても知られるアトピー性皮膚炎、神経皮膚炎、アトピー性湿疹、またはベニエ痒疹は、アトピーの家族的フィーチャおよび免疫学的フィーチャを有する患者のサブセットに特異的な、一般的な慢性皮膚障害である。本質的なフィーチャは、そう痒性皮膚炎症反応であり、これは、ある特定の部位に偏向した、特徴的な対称分布をした皮膚発疹を誘導する。血漿細胞によるＩｇＥの頻繁な過剰産生もある。アトピー性皮膚炎は、アレルギー性鼻炎およびアレルギー性喘息、ならびに皮膚炎の重症度である高ＩｇＥレベルと関連しているので、アトピーの皮膚型として分類されるが、皮膚試験でアレルゲンへの曝露と常に相関するわけではなく、減感作は（他のアレルギー性疾患と異なり）、有効な処置ではない。高血清中ＩｇＥは、アレルギー性喘息の診断の確認的なものであるが、正常レベルは、これを除外しない。疾患の発症は、いずれの年齢においても起こり得、病変は、落屑性を伴った紅斑性浮腫状丘疹またはプラークから急性的に始まる。かゆみは、水疱形成および痂皮形成に、次いで慢性の苔癬化に至る。細胞レベルで、急性病変部は浮腫状であり、真皮は、単核細胞、ＣＤ４リンパ球で浸潤される。好中球、好酸球、血漿細胞、および好塩基球は、稀有であるが、脱顆粒肥満細胞が存在する。慢性病変部は、表皮過形成、角質増殖、および不全角化を特色として備え、真皮は、単核細胞、ランゲルハンス細胞、および肥満細胞で浸潤される。小神経の神経周膜の関与を含めた、線維症の限局性範囲も存在し得る。
【０３３０】
アレルギー性胃腸病は、好酸球性胃腸病としても知られ、複数のＩｇＥ食物感受性が局所的な胃腸管粘膜反応と関連している普通でないアトピー徴候である。これは、成人において稀有であり、しかし、乳児においてより一般的であるが一過性である。この状態は、摂取した食物アレルゲンが空腸粘膜中の局所的なＩｇＥ抗体と反応し、肥満細胞メディエーターを遊離させるとき生じ、食事の直後に胃腸症状をもたらす。曝露が継続すると、慢性炎症を生じ、胃腸タンパク質損失および低タンパク血症浮腫をもたらした。炎症を起こした腸粘膜を通じた失血は、鉄欠乏性貧血を引き起こすのに十分重要となり得る。アレルギー反応は、アレルゲン曝露後に上部胃腸粘膜中で局所的に起こるが、アレルゲン回避で解決する。
【０３３１】
アナフィラキシーおよびじん麻疹は、明らかにＩｇＥ媒介性であるが、遺伝的決定基を欠き、アトピー性個体に対する偏向をまったく有さない。アナフィラキシーは、いくつかの臓器系、通常、心血管、呼吸器、皮膚、および胃腸の同時関与を伴った急性の全般的なアレルギー反応である。この反応は、免疫学的に媒介され、対象が以前に感作されたアレルゲンに曝露すると起こる。じん麻疹および血管性浮腫は、表在性皮膚血管中のヒスタミンによって刺激される受容体から生じる物理的な腫脹、紅斑、およびかゆみを指し、全身性アナフィラキシーの特徴的な皮膚フィーチャである。全身性アナフィラキシーは、薬物、昆虫毒、または食物から生じる、多臓器における同時のＩｇＥ媒介反応の発生である。これは、アレルゲンに誘導される、ＩｇＥがロードされた肥満細胞によって突然に引き起こされ、様々な重要臓器の機能の深刻な、生命を危うくする変化をもたらす。血管虚脱、急性気道閉塞、皮膚の血管拡張および浮腫、ならびに胃腸および尿生殖器の筋痙攣がほとんど同時に起こるが、常に同じ程度とは限らない。
【０３３２】
アナフィラキシーの病理は、気道の粘液詰まり、および限局性の無気肺を伴った血管性浮腫および過膨張肺を含む。細胞レベルで、肺は、気管支粘膜下腺の過分泌、粘膜浮腫および粘膜下浮腫、気管支周囲血管鬱血、ならびに気管支壁内の好酸球増多を伴って、急性喘息発作の間と同様に見える。肺水腫および出血が存在する場合がある。気管支筋痙攣、高度膨脹、およびさらには肺胞の破裂も存在し得る。ヒトアナフィラキシーの重要なフィーチャとしては、喉頭、気管、喉頭蓋、および下咽頭の固有層内の浮腫、血管鬱血、および好酸球増多がある。
【０３３３】
アレルゲンへの曝露は、摂取、注射、吸入、または皮膚もしくは粘膜との接触によるものであり得る。反応は、アレルゲンに曝露してから数秒または数分以内に始まる。初期の恐怖、または差し迫った破滅の感覚がある場合があり、その後急速に１つまたは複数の標的臓器系、すなわち、心血管、呼吸器、皮膚、または胃腸における症状が続く。
【０３３４】
アナフィラキシーを担うアレルゲンは、アトピーに一般に関連するものと異なる。食物、薬物、昆虫毒、またはラテックスは、一般的な源である。食物アレルゲンとしては、甲殻類、軟体動物（例えば、イセエビ、エビ、カニ）、魚、マメ科植物（例えば、ピーナッツ、エンドウマメ、マメ、甘草）、種子（例えば、ゴマ、綿実、キャラウェー、マスタード、亜麻仁、ヒマワリ）、木の実、ベリー、卵白、ソバ、および乳に見つかるものがある。薬物アレルゲンとしては、異種タンパク質および異種ポリペプチド、多糖、ならびにハプテン薬に見つかるものがある。昆虫アレルゲンとしては、ミツバチ、イエロージャケット、ホーネット、ワスプ、およびヒアリを含めた膜翅目昆虫がある。
【０３３５】
エピネフリンがアナフィラキシーの一般的な処置であるが、抗ヒスタミン剤または他のヒスタミン遮断薬も一般に、それほどひどくないじん麻疹または血管性浮腫反応に処方される。
【０３３６】
Ｆ．  組合せ療法
本発明の方法は、組み合わせた、もしくは追加の処置工程として、または治療製剤の追加のコンポーネントとして、ＩｇＥ媒介障害の処置の公知の方法と組み合わせることができる。
【０３３７】
例えば、抗ヒスタミン剤、特に、非鎮静抗ヒスタミン剤を、本発明の抗ＩｇＥ抗体の前に、これに優先して、またはこれと見合って投与することができる。適当な抗ヒスタミン剤としては、アルキルアミン（例えば、クロルフェニラミン）、エタノールアミン（例えば、ジフェンヒドラミン）、およびフェノチアジン（例えば、プロメタジン）のものがある。多くの抗ヒスタミン剤は、効果細胞上のヒスタミンの受容体部位を遮断することによってヒスタミンの薬理効果をアンタゴナイズするが、他の一般的な抗ヒスタミン薬は、アレルゲン特異的ＩｇＥで感作され、これを備えた肥満細胞からのヒスタミン放出を遮断することによって作動する（例えば、クロモリンナトリウム）。抗ヒスタミン剤の例としては、アステミゾール、アザタジンマレイン酸塩、ブロムフェニラミンマレイン酸塩、カルビノキサミンマレイン酸塩、セチリジン塩酸塩、クレマスチンフマル酸塩、シプロヘプタジン塩酸塩、デキスブロムフェニラミンマレイン酸塩、デキスクロルフェニラミンマレイン酸塩、ジメンヒドリネート、ジフェンヒドラミン塩酸塩、ドキシラミンコハク酸塩、フェキソフェナジン塩酸塩、テルフェナジン塩酸塩、ヒドロキシジン塩酸塩、ロラチジン、メクリジン塩酸塩、トリペレナミンクエン酸塩、トリペレナミン塩酸塩、トリプロリジン塩酸塩がある。
【０３３８】
ＩｇＥ媒介障害の特定の症状（例えば、初期反応）は、交感神経様作用剤または気管支拡張効果を有する薬物で寛解させることができる。エピネフリンは、１：１００の水溶液の０．２〜０．５ｍＬの用量で皮下に投与されることが多い、広く作用するアルファおよびベータアドレナリン作用剤である。１：２００の懸濁液中のエピネフリンのより長く作用する形態（すなわち、テルブタリン）も、より長い持続時間効果が望まれるとき使用される。適当な追加のベータアドレナリン作用剤としては、経鼻投与用（例えば、手持ち式噴霧器、間欠的陽圧呼吸デバイス、もしくは加圧定量噴霧式吸入器）または経口投与用のアルブテロール、ピルブテロール、メタプロテレノール、サルメテロール、イソエタリン、およびホルモテロールがある。
【０３３９】
気管支拡張はまた、キサンチンの投与によって、特に、これらが上記交感神経様作用薬と組み合わせて投与されるとき実現される。例示的なキサンチンとしては、アミノフィリン（ｉｖ．、２５０〜５００ｍｇ）およびテオフィリン（経口、１０〜２０μｇ／ｍｌの血清濃度）がある。
【０３４０】
様々なＩｇＥ媒介障害由来の他の症状（例えば、後期反応）は、グルココルチコイドまたは抗炎症作用を有する他の薬物を用いた処置によって減弱され得る。プレドニゾン（３０〜６０ｍｇ、毎日）は、重度の発作に対して全身的に投与されるが、ベクロメタゾン二プロピオン酸塩、トリアムシノロンアセトニド、およびフルニソリドは、長期間維持療法としてエアロゾル化された形態で投与される。抗炎症作用を有する追加のコルチコステロイドとしては、ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン酢酸塩、フルニソリド、フルチカゾンプロピオン酸塩、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンがある。
【０３４１】
本発明の治療法と組み合わせて使用することもできる非ステロイド性抗炎症薬としては、アセトアミノフェン、アスピリン、ブロムフェナクナトリウム、ジクロフェナクナトリウム、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェンカルシウム、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナメートナトリウム、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチンナトリウムがある。
【０３４２】
さらに、最大の治療上の利益は、鬱血除去剤（例えば、フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、プソイドエフェドリン）、咳抑制剤（例えば、デキストロメトルファン、コデイン、もしくはヒドロコドン）、または鎮痛剤（例えば、アセトアミノフェン、アスピリン）の投与で実現することもできる。
【０３４３】
アレルゲン減感作は、アレルギー応答を低減または排除する目的でアレルゲンが患者に注射される処置形態である。これは、アレルゲン免疫療法、脱感作、またはアレルギー注射療法としても知られる。これは、他のアレルギー処置と組み合わせて使用されることが多いが、一次処置としてはあまり使用されない。これは、アレルゲン回避が不可能であるときに使用されて成功している。一般的なアレルゲン減感作処置は、注射部位に炎症の一過性の小さい局所範囲を生成する用量が実現されるまで、１週間に１回または２回、漸増用量での滅菌アレルゲンの皮下注射を取り入れる。次いで、この用量が、２〜４週間に１回の維持スケジュールで与えられる。アレルギー減感作は、アレルギー性喘息およびアレルギー性鼻炎の処置においてほとんどの場合使用されるが、アナフィラキシーの処置においても成功している。減感作は、鉱油中の水性抗原のエマルジョンである不完全フロイントアジュバントなどの補助剤の使用によって有効に使用されている。生理的効果により、アレルゲンの液滴が徐々に放出される不溶性液体デポーが作られる。アレルゲン減感作の別の形態は、単量体アレルゲンをグルタルアルデヒドと重合して、有効な程度の免疫原性を保持しながら、相対的に低いアレルゲン性（すなわち、アレルギー応答を引き起こす）を有する分子を作ることである。
【０３４４】
Ｇ．薬学的投薬量および投与
本発明の医薬組成物の投薬量および所望の薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて変動し得る。いくつかの実施形態では、抗ＩｇＥ抗体の投薬量は、ヒト患者について１投与当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇである。いくつかの実施形態では、投薬量は、ヒト患者について１投与当たり約１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、または４５０ｍｇのいずれかである。いくつかの実施形態では、抗体は、皮下または静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、抗体は、１カ月間隔または１カ月より長い間隔で投与される。いくつかの実施形態では、抗体は、四半期間隔で投与される。療法の進行は、血清中総ＩｇＥレベル、アレルゲン特異的ＩｇＥレベル、血清中総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥのアレルゲンによって誘導される増加などを測定することなどの慣例的な技法およびアッセイによって、処置の間に監視することができる。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＩｇＥ抗体は、皮下（すなわち、皮膚の下）投与によって哺乳動物に投与される。このような目的のために、製剤は、シリンジを使用して注射することができる。しかし、製剤を投与するための他のデバイス、例えば、注射デバイス（例えば、ＩＮＪＥＣＴ−ＥＡＳＥ（商標）およびＧＥＮＪＥＣＴ（商標）デバイス）；インジェクターペン（ＧＥＮＰＥＮ（商標）など）；オートインジェクターデバイス、無針デバイス（例えば、ＭＥＤＩＪＥＣＴＯＲ（商標）およびＢＩＯＪＥＣＴＯＲ（商標））；ならびに皮下パッチ送達システムなども利用可能である。
【０３４６】
Ｈ．製造品およびキット
別の態様では、本明細書に記載の抗ＩｇＥ抗体を含む製造品またはキットが提供される。製造品またはキットは、本発明の方法で抗体を使用するための指示書をさらに含み得る。したがって、ある特定の実施形態では、製造品またはキットは、個体におけるＩｇＥ媒介障害を処置または防止するための方法であって、抗ＩｇＥ抗体の有効量を個体に投与することを含む方法で抗ＩｇＥ抗体を使用するための指示書を含む。ある特定の実施形態では、個体はヒトである。いくつかの実施形態では、個体は、重度、中等度、または軽度の喘息を有する。
【０３４７】
製造品またはキットは、容器をさらに含み得る。適当な容器としては、例えば、ボトル、バイアル（例えば、デュアルチャンバーバイアル）、シリンジ（シングルまたはデュアルチャンバーシリンジなど）、および試験管がある。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成することができる。容器は、製剤を収容する。製造品またはキットは、ラベルまたは添付文書をさらに含み得、これは、容器上にあり、または容器に付随しており、製剤を再構成および／または使用するための指示を示すことができる。ラベルまたは添付文書は、製剤が、個体におけるＩｇＥ媒介障害を処置または防止するための皮下、静脈内、または他の投与方法に有用であり、または意図されていることをさらに示すことができる。製剤を収容する容器は、単回使用バイアル、または再構成された製剤の反復投与（例えば、２〜６回の投与）を可能にするマルチ使用バイアルであってもよい。製造品またはキットは、適当な希釈剤（例えば、ＢＷＦＩ）を含む第２の容器をさらに含み得る。希釈剤および凍結乾燥製剤を混合すると、再構成された製剤中の最終的なタンパク質、ポリペプチド、または小分子の濃度は、一般に、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌとなる。製造品またはキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用するための指示書を有する添付文書を含めて、商業的、治療的、およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０３４８】
特定の実施形態では、本発明は、単回用量−投与ユニットのためのキットを提供する。このようなキットは、シングルまたはマルチチャンバー型プレフィルドシリンジの両方を含めた、治療用タンパク質または抗体の水性製剤の容器を含む。例示的なプレフィルドシリンジは、Ｖｅｔｔｅｒ  ＧｍｂＨ、Ｒａｖｅｎｓｂｕｒｇ、ドイツから入手可能である。
【０３４９】
本明細書の製造品またはキットは、第２の医薬を含む容器を任意選択でさらに含み、抗ＩｇＥ抗体が第１の医薬であり、この物品またはキットは、有効量の第２の医薬で対象を処置するためのラベルまたは添付文書上の指示書をさらに含む。第２の医薬は、上記に示したもののいずれであってもよく、例示的な第２の医薬は、抗ＩｇＥ抗体、抗ヒスタミン剤、気管支拡張剤、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤ、鬱血除去剤、咳抑制剤、鎮痛剤、ＴＮＦ−アンタゴニスト、インテグリンアンタゴニスト、免疫抑制剤、ＩＬ−４アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、二重ＩＬ−４／ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＤＭＡＲＤ、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体およびＢＡＦＦアンタゴニストである。
【０３５０】
別の実施形態では、オートインジェクターデバイスで投与するための、本明細書に記載の製剤を含む製造品またはキットが、本明細書で提供される。オートインジェクターは、稼動させると、患者または投与者からの追加の必要な行動を伴うことなくその内容物を送達する注射デバイスとして記述することができる。これらは、送達速度が一定でなければならず、送達の時間がわずかの間より長いとき、治療用製剤のセルフメディケーションに特に適している。
【０３５１】
本発明は、以下の実施例を参照することによってより完全に理解されることになる。しかしこれらは、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきでない。本開示全体にわたる全ての引例は、参照により本明細書に明白に組み込まれている。
【実施例】
【０３５２】
実施例１：第１ａ／ｂ相治験における、抗Ｍ１’モノクローナル抗体、ＭＥＭＰ１９７２Ａでの処置は、健康志願者およびアレルギー性鼻炎を有する対象の血清ＩｇＥを低減させた。
ＩｇＥレベルの上昇は、アレルギー性喘息などのアレルギー性疾患と関連がある。膜ＩｇＥは、「Ｍ１’」と名付けられた配列を包含し、この配列は、ヒトＩｇＥスイッチＢ細胞、ＩｇＥメモリーＢ細胞、およびＩｇＥ形質芽球中に存在する。ＭＥＭＰ１９７２Ａは、Ｍ１’を標的とするヒト化モノクローナル抗体であり、これは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてアポトーシスおよび／または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害メカニズムを介したＭ１’発現細胞を減少させるため、他の免疫グロブリンアイソタイプに影響を与えることなくＩｇＥレベルを低減させる。健康志願者およびアレルギー性の対象における安全性をテストする第１相試験から、アレルギー性喘息を処置するためのＭＥＭＰ１９７２Ａの開発を開始した。
【０３５３】
方法
２回の第１相無作為化盲検プラセボ対照治験により、（１）健康な成人志願者（ｎ＝３１人のＭＥＭＰ１９７２Ａ、ｎ＝１４人のプラセボ）および（２）成人のアレルギー性鼻炎を有する対象（ｎ＝２４人のＭＥＭＰ１９７２Ａ、ｎ＝１２人のプラセボ［ＮＣＴ０１１６０８６１］）で、ＭＥＭＰ１９７２Ａの安全性、忍容性、薬物動態学、および薬力学を調査した。
【０３５４】
第１Ａ相治験。合計４５人の健康志願者を、それぞれ対象７人で構成される７つの予め決められた単回用量漸増コホート（コホートＡ〜Ｇ）に登録した（表１）。対象が治験に参加する適格性を査定するために、処置１日目前の３５日以内に対象をスクリーニングし、適格な対象は、処置（１日目）の前日に診療所に入る必要があった。単回用量漸増計画（図１）に従って、適格な対象それぞれを、ＭＥＭＰ１９７２Ａまたは対応するプラセボの単回静脈内（ＩＶ）投与または皮下（ＳＣ）投与に無作為に割り振った。
2015506950.tif 000006
【０３５５】
ＭＥＭＰ１９７２Ａを、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を使用して生成し、精製し、注射用水を用いて、３０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン塩酸塩、１４０ｍＭのアルギニン塩酸塩、および０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０に１００ｍｇ／ｍＬのＭＥＭＰ１９７２ＡとしてｐＨ５．５で製剤化した。ＭＥＭＰ１９７２Ａ薬の製品は、ＩＶおよびＳＣ投与用の滅菌された保存剤非含有の液体溶液として、１３ｍｍのフッ素系樹脂を積層したストッパーで栓をして、フリップオフ型プラスチックシールと共にアルミニウム製のふたでキャップした２ｍＬの単回使用用透明ガラスバイアルで供給された。各バイアルは、１５０ｍｇの医薬品有効成分（ＡＰＩ）を含有していた。ＭＥＭＰ１９７２Ａ用の希釈剤および対応するプラセボは、ＡＰＩを除き薬物製品と同じ賦形剤を含有していた。プラセボは、薬物製品と同一なバイアル構成で供給された。希釈剤は、２０ｍｍのフッ素系樹脂を積層したストッパーで栓をして、フリップオフ型プラスチックシールと共にアルミニウム製のふたでキャップした、２５ｍＬの希釈剤を含有する５０ｍＬの透明ガラスバイアルで供給された。１日目に、単回用量として０．００３から５ｍｇ／ｋｇの範囲のＩＶまたは３ｍｇ／ｋｇのＳＣでＭＥＭＰ１９７２Ａを投与した。使用するまでＭＥＭＰ１９７２Ａ、プラセボ、および希釈剤のバイアルを２℃〜８℃で冷凍した。ＭＥＭＰ１９７２Ａまたはプラセボを希釈剤で希釈して空の滅菌バイアルに入れることにより、コホートＡ〜ＤのＩＶ注入のための用量を調製した。希釈剤を使用して希釈したら、ＭＥＭＰ１９７２Ａまたはプラセボ溶液を、冷凍される温度で、または２℃〜２５℃の室温で使用前に最長８時間保存した。ＩＶコホートＥ、Ｆ、およびＳＣコホートＧについては希釈は必要なかった。ＩＶ投与を受ける対象には、ＭＥＭＰ１９７２Ａまたはプラセボを、持続時間を１時間に設定したマイクロボアの伸長部を有するシリンジポンプを使用して送達した。ＳＣ投与を受ける対象には、ＭＥＭＰ１９７２Ａまたはプラセボを、シリンジ（ＢＤインスリンシリンジ）を使用したＳＣ注射により投与した。３ｍｇ／ｋｇの用量（コホートＧ）を投与する場合、長さ５／８インチの２５または２７ゲージの針を有する１．０ｃｃのシリンジを使用して、１つの注射部位当たり最大１．０ｍＬをＳＣに送達した。腹部にＳＣ注射を施した。
【０３５６】
１日目に治験を開始した後、５日目に、１回目の追跡査定のために対象は診療所に戻る必要があった。１日目の投与３０分前、治験薬物投与の０〜６０分後、および治験薬物投与の２４時後に、７つのコホート（Ａ〜Ｇ）につき身体的な査定および薬物動態（ＰＫ）試料を得た。５日目、１４日目、２９日目、８５日目、および１６８日目に、追加の査定およびＰＫ試料を得た。血清試料の査定は、ＭＥＭＰ１９７２Ａの総血清レベルについては定量的イムノアッセイによって、抗治療抗体（ＡＴＡ）の存在についてはブリッジＥＬＩＳＡ（ｂｒｉｄｇｅ  ＥＬＩＳＡ）を使用して、さらに総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥの測定については標準的な臨床アッセイ、Ｉｍｍｕｌｉｔｅ  ２０００（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ  ＣＡ）を使用してなされた。Ｌｉら、Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｓｃｉ．、３４（１）：６７〜７４（２００４）を参照されたい。
【０３５７】
当技術分野における公知の方法を使用して、血清試料中の抗治療抗体の存在を検出できる。例えば、ヒト血清中のＭＥＭＰ１９７２Ａの抗体を検出するためには、血清試料を１／５０に希釈し、ブリッジＥＬＩＳＡに供する。９６ウェルのポリプロピレンマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．、Ｌｏｗｅｌｌ、ＭＡ）に、１ウェル当たり希釈した血清７０μＬの試料を、２．０μｇ／ｍＬのビオチン化ＭＥＭＰ１９７２Ａおよび２．０μｇ／ｍＬのジゴキシゲニンコンジュゲートＭＥＭＰ１９７２Ａを含有するマスターミックス７０μＬと共に入れて、ＭＥＭＰ１９７２Ａに対する抗体を捕獲した。マイクロプレートを、撹拌しながら、室温で１６〜２４時間、一晩インキュベートした。次いでポリプロピレンマイクロプレートからの試料を、ストレプトアビジンでコーティングした９６ウェルのＲｅａｃｔｉ−ＢｉｎｄＨｉｇｈ  Ｂｉｎｄマイクロプレート（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）に移し、撹拌しながら室温で２時間インキュベートすることにより、架橋された複合体を捕獲した。ウェルを洗浄した後、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートされたマウス抗ジゴキシン抗体を添加し、試料を室温で１時間インキュベートした。その後、発色させるためにペルオキシダーゼ基質、テトラメチルベンジジンを添加し、１Ｍのリン酸を添加することによって反応を止めた。Ｅｌｘ８００リーダー（ＢｉｏＴＥＫ、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）を使用して、吸光度検出のために４５０ｎｍでプレートを読み、参照吸光度のために６３０ｎｍで読んだ。抗体力価を、対数力価データ低減プログラム、Ｗａｔｓｏｎ  ＬＩＭＳバージョン７．２．０．０４（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐ．、Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ、ＣＯ）によって決定した。
【０３５８】
血液ＲＮＡ試料を使用して、定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）によりＭ１’ｍＲＮＡ発現を測定した。簡単に言えば、ＰＡＸｇｅｎｅ血液ＲＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ）を使用して患者から回収した全血試料からＲＮＡを精製した。精製後、ＢｉｏＲａｄ  Ｃ１０００サーマルサイクラー（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）で、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ合成キット（１１７５４−０５０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造業者の説明書に従って使用して、２５０ｎｇの全ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ｑＰＣＲのために、ＡＢＩ７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−ＴｉｍｅＰＣＲ装置（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ）で、ＳＤＳ２．３ソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ）を使用して、フォワードプライマー（５’−ＣＡＧＣＧＡＧＣＧＧＴＧＴＣＴＧＴ−３’）（配列番号４２）、リバースプライマー（５’−ＧＴＧＧＣＡＧＡＧＣＡＣＣＣＴＡＴＣＣ−３’）（配列番号４１）、および６ＦＡＭ−ＭＧＢプローブ（５’−ＣＣＡＧＣＣＣＧＧＧＡＴＴＴ−３’）（配列番号４３）を用いてｃＤＮＡを増幅した。
【０３５９】
適格な対象の組み入れ基準は以下の通りであった：１８〜５５歳の年齢；１８から３２ｋｇ／ｍ２の間の肥満指数（ＢＭＩ）；４０〜１２０ｋｇの体重；既往歴、１２リード心電図、ならびに例えば３５〜３７．５℃の口腔体温、９０〜１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧、および５０〜９０ｍｍＨｇの拡張期血圧などのバイタルサインから臨床的に有意な所見がないことから決定された、良好な健康状態；スクリーニング時と来院１日目に＞１，６００細胞／μＬの好中球数；スクリーニング時と来院１日目に＞１４０，０００細胞／μＬの血小板数；不妊手術を受けた、前年に閉経した、または治験薬物投与後の少なくとも６カ月にわたり（ＭＥＭＰ１９７２Ａの予想半減期は＞５カ月）２種の許容できる避妊方法を使用していた男または女；非喫煙者であること、加えて実験のスクリーニングをパスし、指定された隔離期間中は禁煙できる軽度のまたは不定期な喫煙者；および経過観察期間などの治験の必要条件に従うことができるとみなされること。除外基準は、以下を包含する：近年の症状の既往歴および／または過去５年間以内の処置歴を証拠とする、進行中の喘息またはアレルギーの診断；アナフィラキシー、および過敏症または薬物アレルギーの既往歴。追加の除外基準は、ワールドワイドウェブのｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖにおいて識別子ＮＣＴ０１１６０８６１で見ることができる。
【０３６０】
第１Ｂ相治験。およそ２：１のＭＥＭＰ１９７２Ａ処置：プラセボ処置の割り当てに基づき、１コホート当たり１２人の対象（うち８人に活性物質、４人にプラセボ）を含む３つの計画された複数の用量漸増コホート（Ｘ、Ｙ、Ｚ）内で、季節性または通年性アレルギー性鼻炎（ＳＡＲまたはＰＡＲ）を有する合計３６人の対象を無作為化した（表２）。対象が治験に参加する適格性を査定するために、処置１日目前の３５日以内に対象をスクリーニングした。適格な対象それぞれを、初回投与および漸増計画（図２）に従って、ＭＥＭＰ１９７２Ａまたは対応するプラセボの単回静脈内（ＩＶ）投与または皮下（ＳＣ）投与に無作為に割り振った。第１のコホート（Ｘ）では１．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ、続いて第２のコホート（Ｙ）では５ｍｇ／ｋｇのＩＶ、次いで第３のコホート（Ｚ）では３ｍｇ／ｋｇの用量レベルがＳＣ投与された。各対象は、４週間毎に３回の用量の投与を受けた。第１のコホート（コホートＸ：１．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ）における投薬は、第１Ａ相治験におけるＡ〜Ｅコホートからの臨床および実験データの総論に基づいてなされた。第２のコホート（コホートＹ：５ｍｇ／ｋｇのＩＶ）の初回投薬は、第１Ａ相治験におけるＦコホートからのデータと、１．５ｍｇ／ｋｇの複数回用量のＩＶコホート（Ｘ）からの１４日間の投薬後経過観察データの総論に基づいてなされた。第３のコホート（コホートＺ：３ｍｇ／ｋｇのＳＣ）の初回投薬は、第１Ａ相治験における３ｍｇ／ｋｇのＳＣコホート（Ｇ）からの単回用量から１４日間の投薬後経過観察データ、加えて１．５ｍｇ／ｋｇの複数回用量のＩＶコホート（Ｘ）における全ての対象からの１回目の投薬後１４日間の経過観察の総論に基づいてなされた。
2015506950.tif 000007
【０３６１】
１日目、２９日目、および５７日目のコホート治験に従って、１．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ、５．０ｍｇ／ｋｇのＩＶまたは３．０ｍｇ／ｋｇのＳＣの用量でＭＥＭＰ１９７２Ａを投与した。ＭＥＭＰ１９７２Ａまたはプラセボを希釈剤で希釈して空の滅菌バイアルに入れることにより、コホートＸのＩＶ注入のための用量（１．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ）を調製した。コホートＹ（５．０ｍｇ／ｋｇのＩＶ）およびコホートＺ（３．０ｍｇ／ｋｇのＳＣ）については希釈は必要ではなかった。ＩＶ投与を受ける対象には、ＭＥＭＰ１９７２Ａまたはプラセボを、１回目の２種の用量（１日目および２９日目）には持続時間を１時間に設定し、３回目の用量（５７日目）には持続時間を３０分に設定したマイクロボアの伸長部を有するシリンジポンプを使用して送達した。ＳＣ投与を受ける対象には、ＭＥＭＰ１９７２Ａまたはプラセボを、シリンジ（ＢＤインスリンシリンジ）を使用したＳＣ注射により投与した。３ｍｇ／ｋｇの用量（コホートＺ）を投与する場合、長さ５／８インチの２５または２７ゲージの針を有する１．０ｃｃのシリンジを使用して、１つの注射部位当たり最大１．０ｍＬをＳＣに送達した。腹部にＳＣ注射を施した。
【０３６２】
コホートＸおよびＹについて、１日目の治験薬物注入の終了時から０〜６０分間、加えて投薬後の２４時間に、身体的な査定および薬物動態（ＰＫ）試料を得た。２回目の用量（２９日目）について、投薬前と注入終了時から０〜６０分間にＰＫ試料を得た。３回目および最後の用量（５７日目）について、投薬前、加えて注入終了時から０〜６０分間に試料を得た。８日目、１５日目、８５日目、１４０日目、および２２４日目に、追加のＰＫ試料を得た。コホートＺについて、１日目における治験薬物注射の後の０〜６０分間、加えて投薬後の２４時間に、ＰＫ試料を得た。２回目および３回目の用量（２９日目および５７日目）については、投与前のみＰＫ試料を得た。８日目、１５日目、３６日目、６４日目、８５日目、１４０日目、および２２４日目に、追加のＰＫ試料を得た。血清試料の査定は、ＭＥＭＰ１９７２Ａの総血清レベルについては定量的イムノアッセイによって、抗治療抗体（ＡＴＡ）の存在についてはブリッジＥＬＩＳＡを使用して（第１Ａ相治験で説明したアッセイを参照）、および総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥの測定については標準的な臨床アッセイ、Ｉｍｍｕｌｉｔｅ  ２０００（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ  ＣＡ）を使用してなされた。Ｌｉら、Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｓｃｉ．、３４（１）：６７〜７４（２００４）を参照されたい。
【０３６３】
血液ＲＮＡ試料を使用して、定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）によりＭ１’ｍＲＮＡ発現を測定した。簡単に言えば、ＰＡＸｇｅｎｅ血液ＲＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ）を使用して患者から回収した全血試料からＲＮＡを精製した。精製後、ＢｉｏＲａｄ  Ｃ１０００サーマルサイクラー（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）で、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ合成キット（１１７５４−０５０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造業者の説明書に従って使用して、２５０ｎｇの全ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ｑＰＣＲのために、ＡＢＩ７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−ＴｉｍｅＰＣＲ装置（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ）でＳＤＳ２．３ソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ）を使用して、フォワードプライマー（５’−ＣＡＧＣＧＡＧＣＧＧＴＧＴＣＴＧＴ−３’）（配列番号４２）、リバースプライマー（５’−ＧＴＧＧＣＡＧＡＧＣＡＣＣＣＴＡＴＣＣ−３’）（配列番号４１）、および６ＦＡＭ−ＭＧＢプローブ（５’−ＣＣＡＧＣＣＣＧＧＧＡＴＴＴ−３’）（配列番号４３）を用いてｃＤＮＡを増幅した。
【０３６４】
適格な対象の組み入れ基準は以下の通りであった：１８〜５５歳の年齢；季節性または通年性アレルギー性鼻炎の診断；１８から３２ｋｇ／ｍ２の間の肥満指数（ＢＭＩ）；４０〜１２０ｋｇの体重；＞１０ＩＵ／ｍｌまたは≧１０ＩＵ／ｍｌの総ＩｇＥの血清レベル、および＞０．１ｋＩＵ／Ｌの少なくとも１種のアレルゲン特異的ＩｇＥ；既往歴、１２リード心電図、ならびに例えば３５〜３７．５℃の口腔体温、９０〜１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧、および５０〜９０ｍｍＨｇの拡張期血圧などのバイタルサインから臨床的に有意な所見がないことから決定された、良好な健康状態；不妊手術を受けた、前年に閉経した、または治験薬物投与後の少なくとも６カ月にわたり（ＭＥＭＰ１９７２Ａの予想半減期は＞５カ月）２種の許容できる避妊方法を使用していた男または女；および経過観察期間などの治験の必要条件に従うことができるとみなされること。除外基準は、以下を包含する：アナフィラキシー、過敏症または薬物アレルギーの既往歴；過去３年間以内に、１日１回のコントローラー薬の使用、または短時間作用型気管支拡張剤のレスキュー使用が必要であるとの喘息診断の既往歴；および１秒間努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）がスクリーニング時に予測される値の＜８０％であること。追加の除外基準は、ワールドワイドウェブのｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖにおいて識別子ＮＣＴ０１１６０８６１で見ることができる。
【０３６５】
結果
ＭＥＭＰ１９７２Ａは、第１ａ／ｂ相治験の両方において十分な忍容性が示された。単回または複数回のＩＶ投与後の薬物動態学的特徴の査定により、用量に比例した曝露を実証した。非コンパートメント分析によれば、２つの治験全体で、平均終末相半減期は２０〜２１日の範囲内であり、平均クリアランスは２．２〜２．７ｍＬ／日／ｋｇであった。
【０３６６】
第１ａ相治験において、ＩＶ投与後、ＭＥＭＰ１９７２Ａは、ＩｇＧ１モノクローナル抗体に関するデータと一致して、遅い平均クリアランス（２．３１〜２．７４ｍＬ／日／ｋｇ）と長い終末相半減期（約２１日）を示した。分布容積は、６６．６から８１．６ｍｌ／ｋｇの範囲であった。平均血清濃度は用量に比例していた（図３）。総曝露量（ＡＵＣ０−ｉｎｆ）およびＣｍａｘから、０．３から５．０ｍｇ／ｋｇのＩＶコホート全体で、用量レベルが増加するにつれて用量に比例して増加することが示された（表３）。相対的なＳＣバイオアベイラビリティは、同じ用量レベルのＩＶおよびＳＣコホートの平均ＡＵＣ０−ｉｎｆの比率として推定したところ６６．４％であった。第１ｂ相治験において、１．５または５．０ｍｇ／ｋｇでの繰り返しのＩＶ投与後のＭＥＭＰ１９７２Ａの薬物動態濃度は、用量に比例していた（表４；図４）。ＳＣ投与のときの用量で正規化したＡＵＣ０−ｉｎｆとＩＶコホートのＡＵＣ０−ｉｎｆとの比率として、相対的なＳＣバイオアベイラビリティを推定した。平均の相対的なＳＣバイオアベイラビリティはおよそ５５．１％であった。
【０３６７】
ＭＥＭＰ１９７２Ａの２回の第Ｉ相治験の母集団ＰＫ分析から、ＩＶ投与後において、１９．６日の平均終末相半減期、２１６ｍＬ／日のクリアランス（ＣＬ）、および３．５Ｌの中央分布容積（Ｖｃ）、ならびにＳＣ投与後において、６８．８％のバイオアベイラビリティが実証された。体重は、ＣＬおよびＶｃにとって有意な共変量であることが見出された。
【０３６８】
ＭＥＭＰ１９７２Ａでの処置は、血清中総ＩｇＥの用量依存性の低減を引き起こした。健康志願者において、３および５ｍｇ／ｋｇのＩＶでのＭＥＭＰ１９７２Ａの単回用量は、８５日目に、ベースラインと比べてそれぞれ２８％および２３％の血清中総ＩｇＥ低減をもたらしたが、プラセボ、それより低用量のＩＶ、および３ｍｇ／ｋｇのＳＣコホートでは低減は観察されなかった（図５Ａ）。アレルギー性鼻炎を有する対象では、５ｍｇ／ｋｇのＩＶおよび３ｍｇ／ｋｇのＳＣでの１月３回のＭＥＭＰ１９７２Ａ投与は、８５日目に、ベースラインと比べてそれぞれ２４％および２６％の平均血清中総ＩｇＥ低減をもたらしたが、プラセボおよび１．５ｍｇ／ｋｇのＩＶコホートでは有意な低減は観察されなかった（図６）。血清中総ＩｇＥ低減は、両方の治験において投薬後６カ月持続した（図５Ｂおよび図６）。２２４日目に、アレルゲン特異的ＩｇＥは、３ｍｇ／ｋｇのＳＣコホートにおいてベースラインから４０％への有意な低減を示したが、プラセボ、１．５ｍｇ／ｋｇのＩＶ、および５ｍｇ／ｋｇのＩＶ患者それぞれにおいてベースラインから９％、１４％、および３３％の低減が観察された。両方の第Ｉ相治験におけるＩｇＥ応答から、Ｍ１’を発現するＢ細胞／形質芽球の動態、ＩｇＥを産生する形質細胞、および血清ＩｇＥレベルを説明するＰＫ−ＰＤモデルで特徴付けられるように、Ｂ細胞の減少に対するＭＥＭＰ１９７２Ａの作用に関してＩＣ５０が２．７μｇ／ｍＬであり、さらにＩｇＥを産生する形質細胞の半減期がおよそ１３０日であることが実証された。総合すると、これらのデータから、アレルギー性疾患のヒト対象、またはアレルギー性疾患ではないヒト対象において、ＭＥＭＰ１９７２Ａを使用したＭ１’を発現するＢ細胞の標的化は、血清中総ＩｇＥの低減を引き起こすことが実証される。さらに、ＭＥＭＰ１９７２Ａでの処置は、血清中総ＩｇＥレベルの用量依存性の低減を引き起こし、ＩｇＥの低減は、最後の投与から６カ月持続した。両方の第１相治験において、有害事象（ＡＥ）プロファイルはＭＥＭＰ１９７２Ａ処置群とプラセボ処置群とで類似しており、事象の大半が軽度かまたは中程度であった。第１ａ相単回漸増用量治験において、報告された共通のＡＥは、頭痛、疲労、血管穿刺部位の血腫、および鼻咽頭炎などであった。処置により発現したＡＥ（ＴＥＡＥ）が≧１の対象の割合が、プラセボ処置群（１１／１４；７８．６％）とＭＥＭＰ１９７２Ａ群（２１／３１；６７．７％）とで同等であった。ほとんどのＡＥが治験薬物に関するものではないとみなされた。最も高頻度で報告された治験薬物関連のＡＥは、頭痛であった（ＭＥＭＰ１９７２Ａで処置した対象ではｎ＝５［１６．１％］であり、ＩＶプラセボ処置群ではｎ＝１［８．３％］であった）。第１ｂ相複数回漸増用量治験において、最も一般的なＡＥは、頭痛、鼻充血、背痛、眩暈、および疲労であった。ＭＥＭＰ１９７２Ａで処置した対象の８３％（２０人／２４人）およびプラセボ処置対象の７５％（９人／１２人）がＴＥＡＥを経験したが、その大半は軽度であった。治験中に、プラセボを受けた対象で重度のＴＥＡＥが１例のみ報告された。ＭＥＭＰ１９７２Ａを受けた対象において最も高���度で報告されたＴＥＡＥは上気道感染であった（ＭＥＭＰ１９７２Ａで処置した対象ではｎ＝７［２９．２％］であり、ＩＶプラセボ処置群ではｎ＝２［２５％］）および頭痛（ｎ＝６［２５．０％］であり、それぞれのプラセボ群においてＩＶではｎ＝１およびＳＣではｎ＝１［１２．５％］）。いずれの治験でも重篤な有害事象は報告されなかった。ＭＥＭＰ１９７２Ａを受けた全対象の２回の第Ｉ相治験を通して、抗治療抗体レベルは陰性のままであった。
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【０３６９】
結論
両方の第Ｉ相治験において、ＭＥＭＰ１９７２Ａは、健康志願者およびアレルギー性鼻炎を有する患者において、最大５ｍｇ／ｋｇのＩＶおよび３ｍｇ／ｋｇのＳＣで十分な忍容性が示された。ＡＥプロファイルはＭＥＭＰ１９７２Ａ処置群とプラセボ処置群とで類似しており、事象の大半が軽度かまたは中程度であった。ＭＥＭＰ１９７２Ａでの処置は、健康志願者およびアレルギー性鼻炎を有する患者において、３ｍｇ／ｋｇのＳＣおよび５ｍｇ／ｋｇのＩＶコホートで血清中総ＩｇＥの低減を引き起こし、最終投与後およそ６カ月持続した。
【０３７０】
実施例２：第２ａ相の活性の証明となるアレルゲンチャレンジ治験での軽度の喘息を有する対象における抗Ｍ１’モノクローナル抗体、ＭＥＭＰ１９７２Ａの作用
活性の証明となるアレルゲン吸入チャレンジ（ＡＩＣ）後をテストするための第２ａ相治験（ＮＣＴ０１１９６０３９）でＭＥＭＰ１９７２Ａを評価した。
【０３７１】
方法
この無作為化二重盲検プラセボ対照多施設治験により、ＡＩＣ後に軽度の喘息を有する対象でＭＥＭＰ１９７２Ａの活性、安全性、および忍容性を評価した。ＭＥＭＰ１９７２Ａを、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を使用して生成し、精製し、注射用水を用いて、３０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン塩酸塩、１４０ｍＭのアルギニン塩酸塩、および０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０に１００ｍｇ／ｍＬのＭＥＭＰ１９７２ＡとしてｐＨ５．５で製剤化した。ＭＥＭＰ１９７２Ａ薬の製品は、ＩＶおよびＳＣ投与用の滅菌された保存剤非含有の液体溶液として、１３ｍｍのフッ素系樹脂を積層したストッパーで栓をして、フリップオフ型プラスチックシールと共にアルミニウム製のふたでキャップした２ｍＬの１回使用用透明ガラスバイアルで供給された。各バイアルは、１５０ｍｇの医薬品有効成分（ＡＰＩ）を含有していた。ＭＥＭＰ１９７２Ａに対応するプラセボは、ＡＰＩを除き薬物製品と同じ賦形剤を含有していた。プラセボは、薬物製品と同一なバイアル構成で供給された。安定な軽度のアレルギー性喘息を有する患者をスクリーニングして（３５日前から１日目まで）、段階的に量を増やした吸入によるチャレンジに対するＥＡＲ（早発性喘息反応）およびＬＡＲ（遅発性喘息反応）が確認された患者のコホートを得た。２９人の成人対象を（１：１に）無作為化して、プラセボまたはＭＥＭＰ１９７２Ａを合計１２週間にわたり４週間毎（すなわち、１日目、２９日目、および５７日目）に５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、それに続いて５カ月間（すなわち、５７日目〜１９７日目）（図７）安全性を経過観察した。ベースラインおよび人口統計学的な特徴は、処置群間で類似していた（表５）。処置前の対象からスクリーニングおよび血液試料を採取した。１日目の処置前にアレルゲンチャレンジを行い、８６日目（プラスマイナス３日）に処置後のアレルゲンチャレンジを行い、その約２９日後に３回目および最後の注入投与を行った。アレルゲンチャレンジについて、全ての患者で１０種の異なる特異的ＩｇＥを測定し（ネコの毛、ネコのふけ、ウマ、ＨＤＭｆ、ＨＤＭｐ、ナガハグサ、ブタクサ、コヌカグサ類、ハルガヤ、オオアワガエリ）、全ての患者にこれら１０種のアレルゲンのうち１種をそれらの皮膚の反応性に応じてチャレンジした。この関連するチャレンジアレルゲンは患者ごとに異なっていた。対象にチャレンジされなかったアレルゲンに起因する検出可能なアレルゲン特異的ＩｇＥを、無関連または非チャレンジの特異的ＩｇＥレベルとして捕捉した。関連するチャレンジアレルゲンと高度に関連する無関連または非チャレンジアレルゲン（例えば、ネコのふけとネコの毛）を、無関連または非チャレンジの特異的ＩｇＥの評価から除外した。アレルゲンチャレンジの２４時間前と２４時間後にメタコリンチャレンジを行った。塩化メタコリンストック（吸入用の塩化メタコリン粉末）を、０．９％塩化ナトリウム（通常生理食塩水）中、１２８ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。メタコリンを通常生理食塩水でさらに希釈し、０．０３１ｍｇ／ｍＬから１２８ｍｇ／ｍＬの作業濃度にした。Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔの方法を使用してメタコリン吸入を行った（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔら、１９８７）。簡単に言えば、Ｗｒｉｇｈｔネブライザーに接続されたＨａｎｓ  Ｒｕｄｏｌｆのバルブから０．１３ｍＬ／分の出力で対象にメタコリンを吸入させた。ノーズクリップを装着して、２分の吸入期間中マウスピースから通常通りに呼吸するように対象に指示した。対象に通常生理食塩水を吸入させ、続いて２倍濃度のメタコリンを２分吸入させた。各吸入の後にＦＥＶ１を３０および９０秒測定した。対象のベースライン値のＦＥＶ１において２０％の減退が起こったらテストを終了させ、メタコリンのＰＣ２０を計算した。アレルゲンチャレンジの２４時間前、ならびに各アレルゲンチャレンジの７時間後および２４時間後に、Ｐｉｚｚｉｃｈｉｎｉら、１９９６（Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．９：１１７４〜１１８０）によって説明されている方法に従って喀痰誘発法を行った。総ＩｇＥおよびＭ１’の分析のためのタンパク質レベルおよびｍＲＮＡ発現に関して痰試料を測定できる。喀痰誘発の前にメタコリンチャレンジを行った。また痰および血液中の好酸球も、探索的バイオマーカーとして測定した。標準的な全血球計算（ＣＢＣ）アッセイを使用して末梢血液中の好酸球レベルを測定した。細胞形態と染色に基づき痰中の好酸球を同定し、その後、好酸球レベルを決定するために顕微鏡下で計数した。治験中は、ＭＥＭＰ１９７２Ａの用量レベルは変更しなかった。主要評価項目は、投与１から１２週目（８６日目）における、アレルゲンチャレンジ後の３時間から７時間の間のアレルゲンによって誘導された遅発性喘息反応（ＬＡＲ）の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）であった。第２の評価項目は、経時的なＦＥＶ１におけるパーセント減退の面積を得るための、処置後のアレルゲンチャレンジから０時間から３時間の間、または０時間から２時間の間の早発性喘息反応（ＥＡＲ）ＡＵＣを包含し、さらに８５日目に計算されたアレルゲンチャレンジ前のＰＣ２０に対する８７日目（投薬後アレルゲンチャレンジの２４時間後）におけるメタコリンチャレンジＰＣ２０の変化を包含する。血清中総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥを査定して、標準的な臨床アッセイ、Ｐｈａｄｉａ  ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ（Ｐｈａｄｉａ  Ｉｎｃ．）を使用して機械的に決定されたＭＥＭＰ１９７２Ａの活性を実証した。ヒトＣＣＬ１７／ＴＡＲＣ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ；カタログ番号ＤＤＮ１００）を使用して血清中のＣＣＬ１７レベルを測定した。
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【０３７２】
適格な対象の組み入れ基準は以下の通りであった：１８〜６５歳の年齢；５０から１２５ｋｇの間の体重；軽度の、安定なアレルギー性喘息；偶発性の喘鳴および息切れの既往歴；ベースラインにおけるＦＥＶ１が予測値の≧７０％であること；不妊手術を受けた、前年に閉経した、または治験薬物の最終投与後少なくとも５カ月にわたり２種の許容できる避妊方法を使用していた男または女；スクリーニング時の初発アレルゲン濃度を予測するための、報告されたＰＣ２０値；一般的な標準的な空気アレルゲン抽出物に対する陽性の皮膚プリックテスト；および陽性のアレルゲンによって誘導された早発性および遅発性気道応答。アレルゲンによって誘導された陽性の早発性気道応答は、アレルゲンチャレンジ後０〜２時間または０〜３時間に測定されたアレルゲン前の最大値からの、ＦＥＶ１の≧２０％の減退と定義された。遅発性気道応答は、アレルゲンチャレンジ後３〜７時間に測定されたアレルゲン前の最大値からの、ＦＥＶ１の≧１５％の減退と定義された。除外基準は、以下を包含する：来院１から６週間以内の喘息の悪化；来院２から６週間以内の急性呼吸器感染症または何らかの継続的な慢性感染症；成人としての再発性細菌感染症の既往歴、または何らかの慢性的な感染状態の既往歴もしくは存在；軽度のアレルギー性喘息以外の肺疾患；短時間作用型β２−アゴニストまたは臭化イプラトロピウム以外の、アレルギー性肺疾患処置用の他の任意の薬物の慢性的な使用；来院２の前の４週間以内に、クロモグリク酸塩、ネドクロミル、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、および５−リポキシゲナーゼ阻害剤の使用が許可されていないこと；治験処置前の６カ月以内のアレルゲンまたはペプチド免疫療法；および来院２の時点における、過去５カ月以内のオマリズマブなどのモノクローナル抗体またはキメラ生体分子での処置。追加の除外基準は、ワールドワイドウェブのｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖにおいて識別子ＮＣＴ０１１９６０３９で見ることができる。
【０３７３】
結果
合計２８人の対象に、一次エンドポイント分析（ｎ＝１５人のＭＥＭＰ１９７２Ａ、ｎ＝１３人のプラセボ）を行った；喘息症状の増加のためにプラセボ群の１人の対象を治験からはずした。スクリーニング時、１秒間努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）の査定で、２つの処置群は、類似のパーセンテージの減退を示した。２回目の来院時、３回目の治験薬物投与の１カ月後に、プラセボと比較してＥＡＲとＬＡＲの両方の改善が観察された。ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置は、軽度の喘息を有する対象において、１２週間後に十分な忍容性が示された。１２週目に、ＭＥＭＰ１９７２Ａで処置した対象におけるＬＡＲのＡＵＣは、プラセボに対して平均３６％低減した（９０％ＣＩ：−１４、６９％、ｐ＝０．２１）（図８ＡおよびＢ）。加えて、ＥＡＲのＡＵＣは、プラセボに対して平均２６％有意に低下し（９０％ＣＩ：６、４３％、ｐ＝０．０４６）、それに対して気道過敏性におけるメタコリンに対する作用は見られなかった。１２週目におけるアレルゲンチャレンジ後の０時間から２時間の間、ＥＡＲのＡＵＣを計算した。最大のＬＡＲのＦＥＶ１減退は、プラセボに対して１３％であった（９０％ＣＩ：−３３％、４４；ｐ＝０．５８）（図８）。最大のＥＡＲＦＥＶ１減退は、プラセボに対して１１％であった（９０％ＣＩ：−７％、２６；ｐ＝０．２７）（図８）。サブ群の分析から、チャレンジ前のＬＡＲのＦＥＶ１において連続２回以上の≧１５％の下落（サブ群Ａ）または連続３回以上の１０％の下落を示した対象（サブ群Ｂ）は、ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置よりも大きい応答を示し、ＬＡＲのＡＵＣ低減は、プラセボと比較してそれぞれ４３％（９０％ＣＩ：−５％、７７％）および６２％（９０％ＣＩ：２９％、８８％）であったことが実証された（表６）。またスクリーニング時に≧１０％／時間のＬＡＲのＡＵＣを示した対象（サブ群Ｃ）はさらに、改良された応答も示し、ＬＡＲのＡＵＣ低減は５４％であった（９０％ＣＩ：１０％、８４％）（表６）。
【０３７４】
ベースラインの血清中総ＩｇＥレベルは低かったが（７〜２５４ＩＵ／ｍｌの範囲）、プラセボで処置した患者（４８．５ＩＵ／ｍｌ）とＭＥＭＰ１９７２Ａで処置した患者（５７ＩＵ／ｍｌ）とでは均衡を保っていた。プラセボ群において、肺全体へのアレルゲンチャレンジにより、総ＩｇＥとアレルゲン特異的ＩｇＥの両方の増加が誘導された（図９ＡおよびＣ）。２９日目までに、スクリーニング中に投与されたアレルゲンチャレンジにより、ベースラインの総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥがそれぞれ１１７％および１８８％に増加した。１１３日目までに、８６日目に投与された２回目のアレルゲンチャレンジは、ベースラインの総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥにおいてそれぞれ１４１％および３０８％のさらなる増加をもたらした。ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置は、このアレルゲンによって誘導された血清中総ＩｇＥおよびアレルゲン特異的ＩｇＥの増加を完全に防いだ。スクリーニング時および１２週目の処置群におけるアレルゲン吸入チャレンジによりおよそ２倍の血清アレルゲン特異的ＩｇＥの増加が誘導されたが、これは、ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置によって完全にブロックされた（プラセボに対してｐ＜０．０１）（図９Ａ）。ＭＥＭＰ１９７２Ａで処置した患者では、アレルゲン特異的ＩｇＥの増加はいかなるときでも観察されなかった。加えて、無関連または非チャレンジの特異的ＩｇＥ評価から、プラセボおよびＭＥＭＰ１９７２Ａで処置した患者では、チャレンジ後の無関連または非チャレンジアレルゲン特異的ＩｇＥレベルは増加しなかったことが実証された（図９Ｂ）。８５日目（チャレンジ前）、ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置対象において、総ＩｇＥレベルおよび特異的な（チャレンジ関連アレルゲンまたは非チャレンジアレルゲン）ＩｇＥレベルの両方に関して、ＩｇＥレベルの中央値の低減パーセントはベースラインからおよそ２０％であった（図１６ＡおよびＢ）。１９７日目、ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置対象において、総ＩｇＥレベルおよび特異的なチャレンジ関連ＩｇＥレベルの両方に関して、ＩｇＥレベルの中央値の低減パーセントはベースラインからおよそ２０％であり、さらに、総ＩｇＥレベルおよび特異的な非チャレンジＩｇＥレベルの両方に関して、ベースラインから２０％よりも大きかった（図１６ＡおよびＢ）。血清アレルゲン特異的ＩｇＥの増加と同様に、スクリーニング時および１２週目におけるＡＩＣにより、およそ１０倍を超える痰の好酸球の増加を誘導し、これは、１２週目におけるＭＥＭＰ１９７２Ａ処置により低減した（図１０）。８６日目に、アレルゲンチャレンジの７時間後、プラセボ処置患者の痰の好酸球は、１６％±４．５％であった（平均±標準誤差）。ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置患者において、８６日目のアレルゲンチャレンジの７時間後における痰の好酸球レベルは、８．０％±２．２％であった。加えて、ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置により、初回の処置から８週目に血清中総ＩｇＥはベースラインからおよそ２０％低減し（プラセボに対してｐ＜０．０１）（図９ＡおよびＣ）、２８週目に血中好酸球はおよそ４５％低減した（図１１）。追加の患者からのデータを用いたさらなる分析から、ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置は、１９７日目に、ベースラインから最大２５％の血清中総ＩｇＥの低減を引き起こすことが示された（図９Ｄ）。ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置患者において、血中好酸球は経時的に低下しており、すなわちそれぞれ２０週目および３８週目に、絶対数がベースラインレベルから平均して２０％および２８％低減したことが示された。それに対して、プラセボ処置患者における血中好酸球レベルはベースラインに対して増加し、治験期間中ベースラインよりも高いレベルを保った。アレルゲンチャレンジ後、プラセボ処置したがＭＥＭＰ１９７２Ａで処置していない患者において、Ｔｈ２化学誘引物質であるＣＣＬ１７の血清レベルが有意に増加した（図１２）。プラセボ処置患者において、アレルゲンチャレンジは、８５日目（アレルゲンチャレンジの２４時間前）から８７日目（アレルゲンチャレンジの２４時間後）にかけて血清ＣＣＬ１７レベルの１１６ｐｇ／ｍｌの増加を引き起こした。ＭＥＭＰ１９７２Ａで処置した患者において、血清ＣＣＬ１７レベルは、８５日目から８７日目にかけて、アレルゲンチャレンジ後に２６ｐｇ／ｍｌ増加した。ＡＩＣ後の、アレルゲンによって誘導されたＥＡＲ、ＬＡＲ、血清ＩｇＥ、血清ＣＣＬ１７、加えて痰および血液の好酸球の弱化は、ＭＥＭＰ１９７２Ａの作用機序と一致した。この治験からの結果は、Ｍ１’を発現するＢ細胞系統の減少は、アレルギー性喘息を処置するための有効な治療戦略であることを示唆している。処置群において、プラセボ群と比較して有害事象または重篤な有害事象の有意な増加はなかった。ＭＥＭＰ１９７２Ａは、十分な忍容性が示され、実薬群において処置により発現した有害事象（ＡＥ）はなく、いずれの臓器系でも毒作用の指標である一連のＡＥは観察されず、治験薬物の中断に至る重篤なＡＥ、重度のＡＥ、またはＡＥも生じなかった。最も頻度の高いＡＥの基本語は頭痛であり、５人の患者、すなわちプラセボアームでは３人、ＭＥＭＰ１９７２Ａアームでは２人で発生した。いずれかのアームで少なくとも２人の患者で報告された他のＡＥは、鼻咽頭炎（ＭＥＭＰ１９７２Ａ群でより高頻度であった）、胸部の不快感（ＭＥＭＰ１９７２Ａ群で２人の患者）、眩暈、および口腔咽頭の疼痛であり、それぞれプラセボ患者で２人ずつ発生した（表Ｂ）。
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【０３７５】
結論
１月３回の用量投与の後、ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置は、プラセボと比較して喘息応答の全体的なレベルを低減させた。ＭＥＭＰ１９７２Ａで処置した対象では、アレルゲン特異的ＩｇＥの増加はいかなるときでも観察されず、処置後の作用の持続を実証した。健康志願者およびアレルギー性鼻炎を有する対象において、ＭＥＭＰ１９７２Ａ処置後に観察された総ＩｇＥの低減は、第Ｉ相治験からのデータと一致する。ＭＥＭＰ１９７Ａは、十分な忍容性が示され、処置群間で観察されたＡＥに有意差はなかった。これらのデータは、喘息の処置としてのＭＥＭＰ１９７２Ａの継続調査を補うものであり、さらにＩＣＳおよびＬＡＢＡ処置にもかかわらずコントロールが不十分な喘息を有する対象におけるＭＥＭＰ１９７２Ａの第ＩＩｂ相治験を計画した。
【０３７６】
実施例３：年４回の投薬レジメンによる第２ｂ相の概念の証明となる治験での喘息を有する対象における抗Ｍ１’モノクローナル抗体、ＭＥＭＰ１９７２Ａの作用
第２ｂ相の概念の証明となる治験で、コントロールが不十分なアレルギー性喘息を有する患者において、ステロイド吸入および第２のコントローラーに関してＭＥＭＰ１９７２Ａを評価する。この３６週間にわたる無作為化二重盲検プラセボ対照の治験は、高用量の吸入コルチコステロイドと第２のコントローラー薬を用いた、慢性的な療法でコントロールが不十分なままのアレルギー性喘息を有する対象におけるＭＥＭＰ１９７２Ａの投薬レジメンの有効性、安全性、および忍容性を評価するために行われる。１８歳から７５歳の標的母集団からの約５６０人の対象を４つのコホート（Ａ〜Ｄ）に無作為化して（１：１：１：１に）、プラセボまたはＭＥＭＰ１９７２Ａを受けさせる（図１３）。コホートＡ中の１４０人の対象には、３６週間の経過にわたり４週間毎に（０週目、４週目、８週目、１２週目、１６週目、２０週目、２４週目、２８週目、および３２週目）３００ｍｇの皮下（ＳＣ）用量の治験薬物が与えられる。コホートＢ中の１４０人の対象には、合計４回の治験薬物４５０ｍｇのＳＣ用量が与えられ、すなわち活性物質用量を年４回のインターバルで与えられ、加えて追加の用量を４週目（０週目、４週目、１２週目、および２４週目）に与えられる。コホートＣ中の１４０人の対象には、合計４回の治験薬物１５０ｍｇのＳＣ用量が与えられ、すなわち活性物質用量を年４回のインターバルで与えられ、加えて追加の用量を４週目（０週目、４週目、１２週目、および２４週目）に与えられる。コホートＤ中の１４０人の対象には、３６週間の治験の経過にわたり４週間毎に（０週目、４週目、８週目、１２週目、１６週目、２０週目、２４週目、２８週目、および３２週目）プラセボ用量が与えられる。治験処置にかかる予想時間は３６週間であり、経過観察は４８週間である。
【０３７７】
年４回の投薬レジメンの一次エンドポイントは、結果的に３６週間にわたる全身性ステロイドの使用を招く、プロトコルで定められた喘息悪化の比率である。この悪化の比率は、処置期間にわたり群で観察されたプロトコルで定められた悪化の全回数を、その群の全患者におけるリスク時の週数で割ることによって推定される。それぞれ個々の患者において、リスク時の週数は、処置終了時または処置期間中断の日付から１回目の治験薬物投与の日付の間の日数を７日で割った値として算定される。プロトコルで定められた喘息悪化の比率に対する処置の作用を査定する分析では、過分散を用いたポアソン回帰を使用する。このモデルは、血清ペリオスチンレベル（＜５０ｎｇ／ｍＬ、≧５０ｎｇ／ｍＬ）、過去１８カ月の全身性コルチコステロイドの使用を必要とする悪化の回数（１、＞１）、ＩｇＥレベル（≦７５ＩＵ／ｍＬ、７５〜２００ＩＵ／ｍＬ、＞２００ＩＵ／ｍＬ）、および国に合わせて調整される。
【０３７８】
二次エンドポイントは、気管支拡張剤前のＦＥＶ１におけるベースラインから１２週目および３６週目の相対的な変化、喘息症状スコアにおけるベースラインから１２週目および３６週目の変化、および２４週目から３６週目の喘息がよくコントロールされている週のパーセンテージである。「よくコントロールされた」は、患者の日記による報告に従って、喘息症状による夜間覚醒がないこと、さらに１週間当たりの短時間作用型ベータアゴニスト（ＳＡＢＡ）の使用が２日以下であることを意味する。
【０３７９】
探索的エンドポイントは、３６週目より後の悪化の比率、３６週目および８４週目における応答、ＦＥＶ１および喘息コントロールにおける肺機能の変化に関する他の肺活量計の尺度、喘息症状スコアの変化、および探索的バイオマーカーを包含する。全ての転帰尺度の探索的分析は、診断用サブセット（ペリオスチンおよび他の前もって特定したバイオマーカー候補）内で行われる。
【０３８０】
安全性の転帰尺度は、４８週間における有害事象の発生率および８４週間における抗治療抗体（ＡＴＡ）の発生率を包含する。薬物動態の転帰尺度は、０週目、４週目、１２週目、２４週目、および３６週目に、ＭＥＭＰ１９７２投与前および投与後に測定された濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）を包含する。
【０３８１】
第２ｂ相治験における年４回の投薬レジメンの臨床有効性を実証するための一次エンドポイントは、悪化の比率の低減が、プラセボと比較して≧５５％であることである。二次エンドポイントは、１回目の用量から１２週間以内および活性物質の投薬から３６週間後における、プラセボと比較したＦＥＶ１における≧５％の改善、または喘息症状の頻度もしくは重症度の低減、または活性物質投薬後の２４週間から３６週間にわたる、プラセボと比較した、よくコントロールされた週の増加パーセント（これは、短時間作用型ベータアゴニスト（ＳＡＢＡ）の使用および夜間覚醒によって測定された、よくコントロールされた週と対照との差が≧１回であることによって実証される）である。年４回の投薬レジメンにおける臨床有効性の決定はさらに、上記で説明した範囲外における一次および二次エンドポイントを実証することにより対象において評価される（表７を参照）。
表7. 年4回の投薬レジメンに関する臨床有効性の基準
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【０３８２】
この治験のために、一次エンドポイントを査定するのに使用される喘息悪化事象とは、入院または全身性コルチコステロイドでの処置を要する新規のまたは増加した喘息症状と定義される。新規のまたは増加した喘息症状は、以下の新規のまたは増加した（すでにある場合）症状：喘鳴、咳（例えば痰の生成またはその質の変化、加えて咳の頻度など）、胸部圧迫感、息切れ、または上記の症状のうち１つに起因する夜間覚醒のうち少なくとも１種を包含する。これらの喘息症状のいずれかの結果として、以下のうち１つが報告されなければならない：喘息処置または全身性コルチコステロイドでの処置のための入院。全身性コルチコステロイドでの処置は、少なくとも３日間での経口、静脈内（ＩＶ）、または筋肉内（ＩＭ）でのコルチコステロイド処置、または少なくとも１回のＩＶまたはＩＭでのコルチコステロイド投与を伴う救急科への来院と定義される。喘息悪化の発病または開始は、入院の日付か、または全身性ステロイド（経口、ＩＭ、またはＩＶ）での処置を始めた日付のうちどちらか最初に起こった方と定義される。悪化の終了は、全身性ステロイドの中断と定義される。その前に起こったプロトコルで定められた悪化のための最終用量の全身性コルチコステロイド（経口、ＩＭ、ＩＶ）による処置から７日以内に起こるあらゆるプロトコルで定められた喘息悪化エピソードは、以前の悪化の延長とみなされる。
【０３８３】
臨床的安全性の基準は、以下の通りである：１）抗Ｍ１’に関連する重篤なアナフィラキシー反応を有する対象が２人以下であることによって実証される、許容できるアナフィラキシー反応；２）抗Ｍ１’を有する対象において、グレード４の注射部位反応がないこと；３）抗Ｍ１’対象において、持続的なグレード４（＜５００細胞／ｍｃｌ）の好中球減少症または血小板減少症（＜２０，０００細胞／ｍｃｌ）がないこと；および３）感染を起こした抗Ｍ１’対象はプラセボに対して１５％以下であり、グレード４の感染を起こした抗Ｍ１’対象はプラセボに対して６％未満であることから実証されるように、感染率の増加が最小であること。
【０３８４】
適格な対象の組み入れ基準は、以下を包含する：１８〜７５歳の年齢；≧４０ｋｇの体重；少なくとも１２カ月間の喘息の診断；（スクリーニング時または過去２年以内に）最大４パフのアルブテロールを使用した場合に１２％またはそれより大きいβ−アゴニスト可逆性、または８ｍｇ／ｍｌまたはそれ未満のＰＣ２０ＦＥＶ１メタコリン（ＦＥＶ１の２０％の低下をもたらすメタコリンの誘発濃度）（過去２年以内）のいずれかによって定義される、気管支拡張剤の可逆性の証拠の報告；来院１で、気管支拡張剤前のＦＥＶ１が≧４０％および≦８０％と予測されること；来院１前に最低でも連続３カ月、１日１回のＩＣＳの使用（１日当たりの総用量が≧４００μｇ／日のプロピオン酸フルチカゾン（ＦＰ）またはその等価物（以下の表８））および第２のコントローラーが必要なこと；来院１前の１８カ月間に、少なくとも３日間（または治療的用量を≧７２時間供給する製剤で投与される）および３０日間以下の全身投与コルチコステロイド処置を必要とする、少なくとも１回の喘息悪化の既往歴；各来院時における喘息コントロール質問票スコア（ＡＣＱ）のスコアが≧１．５０と報告された、来院１および２時におけるコントロールが不十分な喘息；ならし期間中に毎日の日記で報告された喘息コントローラー療法の順守にもかかわらず、無作為化前の１４日間のうち少なくとも１０日間の完全な日記データの入力を伴う、≧１回の夜間覚醒／週およびレスキュー薬の使用（短時間作用型ベータアゴニスト［ＳＡＢＡ］の少なくとも１回の「パフ」、または少なくとも２日／週のＳＡＢＡ噴霧）で定義される、コントロールが不十分な喘息；少なくとも１種の「臨床的に関連する」空気アレルゲンに対して血清ＩｇＥが「陽性」であること、または血清中総ＩｇＥが少なくとも７５ＩＵ／ｍＬであることのいずれか；スクリーニング時における通常範囲内のＥＣＧ。
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【０３８５】
以下の基準を示した対象は、治験の登録から除外される：来院１の前または来院１から来院２の間に３０日の全身性ステロイドを必要とする喘息悪化；来院１から来院２の間のＦＥＶ１の相対変化が＞２０％であること；この治験に関して１回より多くスクリーニングに失敗していること（スクリーニング失敗の理由が一時的なものである場合、患者は１回限り再スクリーニングされる可能性がある）；喘息以外に既存の進行中の肺疾患があること；慢性もしくは潜伏感染などのあらゆる感染、またはスクリーニング中に処置を必要とする感染、例えば気道感染など（例えば、これらに限定されないが、副鼻腔疾患および気管支炎など）；処置の状態に関係なく、処置にもかかわらずコントロールされていない臨床的に有意な医学的疾患、または治験中に療法の変化を必要とする可能性が高い臨床的に有意な医学的疾患、または病因が未知の臨床的に有意な医学的疾患（例えば、慢性肝疾患）、例えば既知の悪性疾患（新たに診断された、または処置が不十分な）または起こり得る悪性疾患に関する現在の評価を悪化させる可能性がある慢性疾患（例えば、炎症性腸疾患またはリウマチ様関節炎）、これらに限定されないがＨＩＶ感染などの公知の免疫不全；アレルギー以外の理由（例えば、これらに限定されないが、寄生虫感染、高免疫グロブリンＥ症候群、気管支肺アスペルギルス症、およびウィスコットアルドリッチ症候群）によるＩｇＥレベルの上昇；被験薬物の使用が禁忌となるあらゆる状態、または結果または患者の参加能力の解釈に影響を与える可能性があるあらゆる状態、例えば過去または現在の物質乱用、コンプライアンスの欠如、進行中または最近の別の臨床試験への参加（来院１前の３０日間以内、または被験薬物の５半減期以内のうちどちらかより長い方）など；水系寄生生物への有意な曝露（来院１前の６週間以内）の既往歴、および／または最近の病因不明の下痢を伴う病気（来院１前の３カ月以内）にかかったこと、ただし検便した場合に結果が陰性と報告された場合は例外；年１０パックを超える喫煙歴を有する喫煙経験者または現在の喫煙者（喫煙経験者は、来院１前に１２カ月より長く喫煙をやめていなければならない）；モノクローナル抗体を使用する間（または盲検治験の場合は、使用している可能性がある間）のアナフィラキシー（あらゆる誘因物質による）またはアレルギー反応の既往歴；いずれかの除外された併用療法の使用（表９を参照）；治験の少なくとも６０週目まで極めて有効な避妊方法の使用を受け入れていない男性および女性；来院１の時に妊娠または授乳していない女性；およびスクリーニング中の絶対好中球数が＜１．５×１０９／Ｌであること。
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【０３８６】
注釈：遅延放出（デポ注射）ステロイド、免疫調節剤、または被験薬物のいずれかを摂取する患者は、治験薬物を中断しなければならないが、継続的な観察および査定のために治験に留まると予想される。患者は治験薬物を受け続けながら、喘息悪化を処置するのに経口、ＩＶまたはＩＭ（非デポ製剤）ステロイド、テルブタリンまたはイプラトロピウムを使用できるが、処置の持続時間が３０日間未満でなければならないか、または治験薬物を中断しなければならない。喘息以外の徴候を処置するのに使用されるステロイドは禁止される。別の徴候を処置するのに必要であれば、処置の持続時間は３０日間未満を保つか、または治験薬物を中断しなければならない。ＩＣＳ、アレルゲン免疫療法剤、およびロイコトリエン調節剤の用量は、治験中一定であると予想される。しかしながら、処置期間中、これらの薬の用量を短期間（３０日間未満）変更する場合、患者はそのまま治験薬物を継続してもよい。継続して３０日間またはそれより長く用量を変更した場合、治験薬物を中断しなければならない。患者は、継続的な観察および査定のために治験に留まると予想される。併用薬に加えて治験薬物を継続することに関連する安全性のリスクがないことを確認するために、医療観察者は助言を受けるべきである。
【０３８７】
ａ喘息悪化を処置するための経口または静脈内ステロイド剤の標準的な短期コース（３から３０日）が適切であり、来院１から３０日以上前および来院２の後のいつでも許容される。来院１から来院２の間、経口またはＩＶもしくはＩＭでのステロイド使用またはＩＣＳ用量の変更により、患者は不適格となる。
【０３８８】
ｂ非盲検ではない臨床試験用モノクローナル抗体の試験に参加する患者は、活性物質をすでに受けていると考えるべきである。
【０３８９】
ｃ治験前または治験中にワクチン接種が許容される。（治験薬物またはワクチンの）注射後に起こるあらゆる反応をより明確に解釈するために、治験薬物投与と同日にワクチン接種を行わないことが推奨される。同日に両方が投与されなければならない場合、ワクチン接種の注射部位は、治験薬物投与部位（複数可）から遠位（異なる肢）とする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１５Ｆ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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