(57)【要約】  本発明は、心臓保護薬に関連する。特に、本発明は、キウイフルーツから調製された、脱糖心臓保護抽出物およびこれらの分画に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
マタタビ科の果実由来の果実抽出物を含む組成物であって、
上記抽出物が、脱糖されており、かつ生物活性を有するものとして特徴づけられている、組成物。
【請求項２】
抽出物が、おおよそ３０％ｗ／ｗ未満の糖を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
抽出物が、おおよそ５％ｗ／ｗ未満の糖を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
抽出物が、おおよそ１．０％ｗ／ｗ未満の糖を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
抽出物が、おおよそ０．５％ｗ／ｗ未満の糖を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
上記抽出物が、実質的に無糖であると特徴づけられている、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
上記組成物が安定である、請求項１〜６の何れか一項に記載の組成物。
【請求項８】
上記組成物が、保管のあいだ生物活性を維持する、請求項１〜７の何れか一項に記載の組成物。
【請求項９】
上記果実抽出物が、限外ろ過、熱処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択された方法によって安定化された、請求項１〜８の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
上記熱処理が、少なくともセ氏９０度に加熱することを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
上記生物活性が、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である、請求項１〜１０の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
上記抽出物が、セ氏４度で２４日間保管後に、インビトロの血小板凝集アッセイにおいて、０日目を基準にして、４％より高い抑制活性を有する、請求項１〜１１の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
４日間セ氏４度で保管された場合、新鮮な抽出物分画と比較して、少なくとも８０％の、上記生物活性分子の生物活性を維持することでさらに特徴づけられ、上記生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である、請求項１〜１１の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
１８日間セ氏４度で保管された場合、新鮮な抽出物分画と比較して、少なくとも８０％の、上記生物活性分子の生物活性を維持することでさらに特徴づけられ、上記生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である、請求項１〜１１の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
２４日間セ氏４度で保管された場合、新鮮な抽出物分画と比較して、少なくとも８０％の、上記生物活性分子の生物活性を維持することでさらに特徴づけられ、上記生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である、請求項１〜１１の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
上記生物活性が、アンギオテンシン転換酵素の阻害である、請求項１〜８の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
上記抽出物が、脱脂されている、請求項１〜１６の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
上記分画が、３０００ダルトン未満の分子量の生物活性分子を有する、請求項１〜１７の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
上記分画が、１０００ダルトン未満の分子量の生物活性分子を有する、請求項１〜１７の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
上記果実抽出物が、１００％の移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）から１００％のＢアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）への、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）における上記抽出物の液体クロマトグラフィーの３５分間のＵＶスペクトルスキャンにおいて、おおよそ８．３８分およびおおよそ９．２５分で主なピークを示す、請求項１〜１９の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
上記抽出物が、図１０において認められる主なＵＶスペクトルピークを示す、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２２】
上記果実抽出物が、１００％の移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）から１００％のＢアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）への、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）における上記抽出物の液体クロマトグラフィーのポジティブモードスキャンでの３５分間の１００−１０００Ｍｗの質量分析において、おおよそ３０.２６およびおおよそ３０．７１で主なピークを示す、請求項１〜２１の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
上記抽出物が、図８において認められる主な全イオン電流クロマトグラムピークを示す、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
上記果実抽出物が、１００％の移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）から１００％のＢアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）への、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）における上記抽出物の液体クロマトグラフィーのネガティブモードスキャンでの３５分間の１００−１０００Ｍｗの質量分析において、おおよそ３０．７９で主なピークを示す、請求項１〜２１の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
上記抽出物が、図９において認められる主な全イオン電流クロマトグラムピークを示す、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
請求項１〜２５の何れか一項に記載の上記組成物を含む、シロップまたは溶液。
【請求項２７】
請求項１〜２５の何れか一項に記載の上記組成物を含む、粉末。
【請求項２８】
請求項１〜２７の何れか一項に記載の上記組成物、上記シロップ、上記溶液または上記粉末を含む、経口送達賦形剤。
【請求項２９】
請求項１〜２８の何れか一項に記載の上記組成物、上記シロップ、上記溶液または上記粉末を含む、機能食品または機能食材。
【請求項３０】
上記機能食品または上記機能食材は、飲料、ベイクドグッズ、プディング、乳製品、菓子、スナック食品、冷凍菓子または冷凍ノベルティー、調理済み冷凍食品、飴、スナック製品、スープ、スプレッド、ソース、サラダドレッシング、調理済み食肉製品、チーズ、およびヨーグルトからなる群から選択される、請求項２９に記載の機能食品または機能食材。
【請求項３１】
請求項１〜２７の何れか一項に記載の上記組成物、上記シロップ、上記溶液または上記粉末を含む、栄養サプリメント。
【請求項３２】
上記栄養サプリメントは、ソフトゲルカプセル、ハードシェルカプセル、チュアブルカプセル、ヘルスバー、およびサプリメントパウダーからなる群から選択される、請求項３１に記載の栄養サプリメント。
【請求項３３】
請求項１〜３２の何れか一項に記載の組成物、シロップ、粉末、経口送達賦形剤または経口栄養サプリメント、機能食品または機能食材の被験者への投与を含む、上記被験者における、血小板の活性化および／もしくは凝集によって開始されもしくは特徴づけられる病状の予防もしくは治療、心臓の健康の改善もしくは維持、心臓血管の健康の改善もしくは維持、循環系の健康の改善もしくは維持、または、血流の改善もしくは維持の方法。
【請求項３４】
上記投与が、血小板凝集を抑制させる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
上記投与が、抗血栓症活性を生じさせる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
上記投与が、血液希釈を生じさせる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
上記投与が、低下した血圧を生じさせる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
被験者における、血小板の活性化および／もしくは凝集によって開始されもしくは特徴づけられる病状の予防もしくは治療、心臓の健康の改善もしくは維持、心臓血管の健康の改善もしくは維持、循環系の健康の改善もしくは維持、または、血流の改善もしくは維持のための、請求項１〜３２の何れか一項に記載の組成物、シロップ、粉末、経口送達賦形剤または経口栄養サプリメント、機能食品または機能食材の、使用。
【請求項３９】
血小板の活性および／または凝集によって開始されるまたは特徴づけられる上記病状が、血栓症、動脈硬化症、および／またはプラーク形成からなる群から選択される、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
マタタビ属抽出物を生産すること、上記抽出物が保管の間に生物活性を維持するような条件下において上記マタタビ属抽出物を加熱すること、および上記加熱することの前または後においてマタタビ属抽出物を脱糖することを含む、安定かつ生物活性マタタビ属抽出物を生産する方法。
【請求項４１】
上記脱糖することが、固相抽出、発酵、酵素処理およびナノろ過からなる群から選択される工程によって行われる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
上記加熱することが、おおよそ５分間より長いあいだの、おおよそセ氏７０度〜おおよそセ氏１００度への加熱を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
上記マタタビ属抽出物は、沈殿分画および上清分画をもたらすために加熱前または加熱後にマタタビ属のジュースまたはマタタビ属のホモジェネートを沈殿させること、ならびに上記生物活性マタタビ属抽出物をもたらすために上記上清分画を保持することよって生産される、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４４】
上記沈殿させることが、少なくとも３０００ｇの遠心分離を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
上記抽出物が、さらに、加熱前または加熱後に限外ろ過によって処理される、請求項４０〜４４の何れか一項に記載の方法。
【請求項４６】
上記限外ろ過が、１０００−３０００ダルトンのあいだのカットオフを有する、請求項４５に記載の工程。
【請求項４７】
請求項４０〜４６の何れか一項に記載の方法によって生産される、脱糖された、安定な抽出物。
【請求項４８】
血圧を低下させることまたは高血圧の処置を必要とする被験者に、有効量のキウイフルーツまたはキウイフルーツ抽出物を投与することを含み、上記有効量は、おおよそ１個のキウイフルーツ果実全体の同等量より多い量を含む、
被験者における血圧を低下させるまたは高血圧を処置する方法。
【請求項４９】
上記有効量が、おおよそ３個より多いキウイフルーツ果実全体の同等量を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
上記有効量が、おおよそ２個からおおよそ１０個のキウイフルーツ果実全体の同等量を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
上記有効量が、おおよそ３個からおおよそ５個のキウイフルーツ果実全体の同等量を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
上記キウイフルーツ抽出物が、キウイフルーツから調製された濃縮物、粉末、シロップおよび脱糖抽出物からなる群から選択される、請求項４８の方法。
【請求項５３】
上記有効量は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１０週間、２０週間、３０週間、４０週間、および５０週間からなる群から選択される期間にわたって投与された場合に上記被験者の血圧の低下を生じさせる、請求項４８に記載の方法。
【請求項５４】
キウイフルーツまたはキウイフルーツ抽出物の有効１日投与量の使用であって、上記有効１日投与量は、被験者における高血圧の処置または血圧の低下のために、おおよそ一個のキウイフルーツの果実全体の同等量より多い量を含む、使用。
【請求項５５】
上記有効１日投与量が、おおよそ３個より多いキウイフルーツ果実全体の同等量を含む、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
上記有効１日投与量が、おおよそ２個からおおよそ１０個のキウイフルーツ果実全体の同等量を含む、請求項５４に記載の使用。
【請求項５７】
上記有効１日投与量が、おおよそ３個からおおよそ５個のキウイフルーツ果実全体の同等量を含む、請求項５４に記載の使用。
【請求項５８】
上記キウイフルーツ抽出物が、キウイフルーツから調製された濃縮物、粉末、シロップおよび脱糖抽出物からなる群から選択される、請求項５４に記載の使用。
【請求項５９】
上記有効１日投与量は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１０週間、２０週間、３０週間、４０週間、および５０週間からなる群から選択される期間にわたって投与された場合に上記被験者の血圧の低下を生じさせる、請求項５４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は、心臓保護薬に関連する。特に、本発明は、キウイフルーツから準備した脱糖心臓保護抽出物およびこれらの分画に関連している。
【０００２】
〔背景技術〕
果物および野菜の高消費は、循環器病および胃がん、結腸がん、乳がん、および前立腺がんを含む特定の栄養に関係したがんのリスクを減少させることができる重要な予防法であることが知られている。循環器病およびがんの初発および発達に関与する一つの要因は、ヒドロキシフリーラジカルおよびペルオキシフリーラジカルまたはヒドロキシ化合物およびペルオキシ化合物に導く異常な酸化ストレス過程の発生である。果物および野菜の摂取の有益な効果は、抗酸化物質によってある程度説明される。抗酸化物質は、抑制の原因となることが知られ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ならびにアルファカロテノイドおよびベータカロテノイドなどのカロテノイド、リコピンルテインなどを含むことが知られている。しかしまた、多くの新データは、異なる病気における、果物中のいくつかの化合物の非抗酸化特性の役割を示している。
【０００３】
相当な努力が、果物および野菜由来で、いくつかの病気の予防において役割を有するであろう生理活性化合物の特定に費やされてきた。野菜と果物は、循環器病に有効であると考えられてきた。果物および野菜の有益な効果は、これらに含まれる抗酸化物質および生理活性非抗酸化成分によって説明されるだろう。これらの化合物は、独立にまたは協調して、酸化からリポタンパクおよび血管細胞を保護する、または、これらの化合物は、独立にまたは協調して、血漿脂質レベル（ＬＤＬコレステロール、トリグリセライド）の低下および血小板凝集反応の減少などの他のメカニズム（非抗酸化経路）によって、リポタンパクおよび血管細胞を保護する。（２６、２７）
心臓保護の有益な特性および他の有益な特性を提供する、果物および野菜からのさらなる調製物が、必要とされている。
〔発明の概要〕
本発明は、心臓保護薬に関連している。特に、本発明は、キウイフルーツから調製した脱糖心臓保護抽出物およびこれらの分画に関連している。
【０００４】
いくつかの実施形態において、本発明はマタタビ科マタタビ属の果物由来の果物抽出物を含む組成物を提供し、この抽出物は、脱糖され、生理活性を有することで特徴づけられている。いくつかの実施形態では、組成物は、フルクトースに比較して水溶媒またはアルコールにおいて低下した溶解度を有する化合物を含む。いくつかの実施形態では、抽出物は、おおよそ３０％ｗ／ｗ未満の糖を含む。いくつかの実施形態では、抽出物は、おおよそ５％ｗ／ｗ未満の糖を含む。いくつかの実施形態では、抽出物は、おおよそ１．０％ｗ／ｗ未満の糖を含む。いくつかの実施形態では、抽出物は、おおよそ０．５％ｗ／ｗ未満の糖を含む。いくつかの実施形態では、抽出物は、ほぼ無糖であることで特徴づけられる。いくつかの実施形態では、組成物は、安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、保管のあいだ、生物活性を維持する。いくつかの実施形態では、果物抽出物は、限外ろ過、熱処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択された方法により、安定化される。いくつかの実施形態では、熱処理は、少なくともセ氏７０度、８０度、９０度、１００度、１１０度、１２０度、または１３０度に熱することおよびおおよそセ氏１３５度まで熱することを含む。いくつかの実施形態では、生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である。いくつかの実施形態では、抽出物は、２４日間セ氏４度に保たれたあと、インビトロの血小板凝集アッセイにおいて、０日目を基準にして４％より高い抑制活性を有する。いくつかの実施例では、組成物は、４日間セ氏４度において保管された場合、新しい抽出物の分画と比較して、少なくとも８０％の上記の生物活性分子の生物活性を維持していることでさらに特徴づけられる。ここで、上記の生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である。いくつかの実施例では、組成物は、１８日間セ氏４度において保管された場合、新しい抽出物の分画と比較して、少なくとも８０％の上記の生物活性分子の生物活性を維持していることでさらに特徴づけられる。ここで、上記の生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である。いくつかの実施例では、組成物は、２４日間セ氏４度において保管された場合、新しい抽出物の分画と比較して、少なくとも８０％の上記の生物活性分子の生物活性を維持していることでさらに特徴づけられる。ここで、上記の生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である。いくつかの実施例では、生物活性は、アンギオテンシン転換酵素の阻害である。
【０００５】
いくつかの実施例において、抽出物は脱脂されている。いくつかの実施例では、抽出物は、本質的に３０００ダルトン未満の分子量の生物活性分子からなることによって特徴づけられる。いくつかの実施例において、抽出物は脱脂されている。いくつかの実施例では、抽出物は、本質的に１０００ダルトン未満の分子量の生物活性分子からなることによって特徴づけられる。いくつかの実施例では、抽出物は、本質的に３０００ダルトン未満の分子量の生物活性分子からなることによって特徴づけられる。いくつかの実施例において、抽出物は脱脂されている。いくつかの実施例では、抽出物は、本質的に１０００ダルトン未満の分子量の生物活性分子からなることによって特徴づけられる。
【０００６】
いくつかの実施例では、１００％の移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）から１００％のＢアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）への、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）における果物抽出物の液体クロマトグラフィーの３５分間のＵＶスペクトルスキャンにおいて、上記抽出物は、おおよそ８．３８分およびおおよそ９．２５分で主なピークを示した。いくつかの実施形態において、抽出物は、図１０において見られるような主なＵＶスペクトルピークを示す。いくつかの実施形態では、１００％の移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）から１００％のＢアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）への、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）における果物抽出物の液体クロマトグラフィーのポジティブモードスキャンでの３５分間の１００−１０００Ｍｗの質量分析において、上記抽出物は、おおよそ３０.２６およびおおよそ３０．７１で主なピークを示した。いくつかの実施形態において、抽出物は、図８において見られるような主な全イオン電流クロマトグラムピークを示した。いくつかの実施形態では、１００％の移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）から１００％のＢアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）への、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）における果物抽出物の液体クロマトグラフィーのネガティブモードスキャンでの３５分間の１００−１０００Ｍｗの質量分析において、上記抽出物は、おおよそ３０．７９で主なピークを示した。いくつかの実施形態では、抽出物は、図９において見られるような主な全イオン電流クロマトグラムピークを示した。
【０００７】
いくつかの実施形態において、本発明は、上述の組成物を含むシロップまたは溶液を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、上述の組成物を含む粉末を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、上述の組成物、シロップ、溶液または粉末を含む経口送達賦形剤を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、上述の組成物、シロップ、溶液または粉末を含む機能食品または機能食材を提供する。いくつかの実施形態では、機能食品または機能食材は、飲料、ベイクドグッズ、プディング、乳製品、菓子、スナック食品、冷凍菓子または冷凍ノベルティー、調理済み冷凍食品、飴、スナック製品、スープ、スプレッド、ソース、サラダドレッシング、調理済み食肉製品、チーズ、およびヨーグルトからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本発明は、組成物、シロップ、上述の溶液または上述の粉末を含む栄養サプリメントを提供する。いくつかの実施形態では、栄養サプリメントは、ソフトゲルカプセル、ハードシェルカプセル、チュアブルカプセル、ヘルスバー、およびサプリメントパウダーからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本発明は、上述の組成物、シロップ、粉末、経口送達賦形剤または経口栄養サプリメント、機能食品または機能食材の被験者への投与を含む、上記被験者における、血小板の活性化および／もしくは凝集によって開始されもしくは特徴づけられる病状の予防もしくは治療の方法、心臓の健康の改善もしくは維持の方法、心臓血管の健康の改善もしくは維持の方法、循環系の健康の改善もしくは維持の方法、または、血流の改善もしくは維持の方法を提供する。いくつかの実施形態において、組成物の投与は、血小板凝集を抑制する。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、抗血栓症活性を生じる。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、血液希釈を生じる。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、低下した血圧を生じさせる。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本発明は、上記のように、血小板の活性化および／もしくは凝集によって開始されもしくは特徴づけられる病状の予防もしくは処置のため、心臓の健康の改善もしくは維持、心臓血管の健康の改善もしくは維持、または被験者の血流の改善もしくは維持、または被験者の血圧の改善もしくは維持のために、組成物、シロップ、粉末、経口送達賦形剤または経口栄養サプリメント、機能食品または機能食材の効用を提供する。いくつかの実施形態では、血小板の活性および／または凝集によって開始されるまたは特徴づけられる病状は、血栓症、動脈硬化症、そしておよび／またはプラーク形成からなる群から選択される。
【０００９】
いくつかの実施形態において、本発明は、マタタビ属の抽出物の生産、抽出物が保管の間に生物活性を維持するような条件下におけるマタタビ属抽出物の加熱、および上記加熱前または上記加熱後におけるマタタビ属抽出物の脱糖を含む、安定および生物活性のあるマタタビ属抽出物の生産のための工程を提供する。いくつかの実施形態では、脱糖は、固相抽出、発酵、酵素処理およびナノろ過からなる群から選択された工程によって実行される。いくつかの実施形態では、加熱は、おおよそ５分間より長いあいだの、おおよそセ氏７０度〜おおよそセ氏１００度への上記分画の加熱を含む。いくつかの実施形態では、マタタビ属の抽出物は、沈殿分画および上清分画を提供するための加熱前または加熱後のマタタビ属のジュースまたはマタタビ属のホモジェネートの沈殿、ならびに上記の生物活性のあるマタタビ属抽出物を提供する上記の上清分画の保持によって生産される。いくつかの実施形態では、沈殿は、少なくとも３０００ｇの遠心分離を含む。いくつかの実施形態では、抽出物は、さらに、加熱前または加熱後においても限外ろ過によって処理される。いくつかの実施形態では、限外ろ過は、１０００−３０００ダルトンのあいだのカットオフを有する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本発明は、上記の工程によって生産され、脱糖された、安定な抽出物を提供する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本発明は、有効量のキウイフルーツまたはキウイフルーツ抽出物をこれらが必要な被験者に投与することを含む、被験者の血圧の低下または高血圧の処置の方法を提供する。ここで、上記の有効量は、おおよそ一個のキウイフルーツの果実全体の同等量より多い量を含む。いくつかの実施形態では、有効量は、おおよそ３個のキウイフルーツの果実全体の同等量より多い量を含む。いくつかの実施形態では、有効量は、おおよそ２個からおおよそ１０個のキウイフルーツの果実全体の同等量を含む。いくつかの実施形態では、有効量は、おおよそ３個からおおよそ５個のキウイフルーツの果実全体の同等量を含む。いくつかの実施形態では、キウイフルーツ抽出物は、キウイフルーツから調製された濃縮物、粉末、シロップ、および脱糖抽出物からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、有効量は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１０週間、２０週間、３０週間、４０週間、および５０週間からなる群から選択される期間にわたって投与された場合、上記被験者の血圧の低下を生じさせる。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本発明は、キウイフルーツまたはキウイフルーツ抽出物の有効な一日の投与量の効用を提供する。ここで、上記の有効な一日の投与量は、被験者における高血圧の処置または血圧の低下のために、おおよそ一個のキウイフルーツの果実全体の同等量より多い量を含む。いくつかの実施形態では、有効な一日の投与量は、おおよそ３個のキウイフルーツの果実全体の同等量より多い量を含む。いくつかの実施形態では、有効な一日の投与量は、おおよそ２個からおおよそ１０個のキウイフルーツの果実全体の同等量を含む。いくつかの実施形態では、有効な一日の投与量は、おおよそ３個からおおよそ５個のキウイフルーツの果実全体の同等量を含む。いくつかの実施形態では、キウイフルーツ抽出物は、キウイフルーツから調製された濃縮物、粉末、シロップ、および脱糖抽出物からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、有効な一日の投与量は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１０週間、２０週間、３０週間、４０週間、および５０週間からなる群から選択される期間にわたって投与された場合、上記被験者の血圧の低下を生じさせる。
【００１３】
〔図面の簡単な説明〕
図１は、キウイフルーツ抽出物の部分分画のための手順から概要を示す。
【００１４】
図２は、ＡＤＰ活性によって引き起こされた血小板凝集の、抽出物による抑制を示す。
【００１５】
図３は、アラキドン酸によって引き起こされた血小板凝集の抑制を示す。
【００１６】
図４は、ヒト血清のＡＣＥ活性におけるＫＦＥの効果を示す。
【００１７】
図５は、キウイフルーツの脱脂され、限外ろ過され、精製された分画のＵＶスキャンを示す。
【００１８】
図６は、図５のキウイ抽出物のＵＶスペクトル２００−４００ｎｍスキャンのクロマトグラムを提供する。
【００１９】
図７は、図５のキウイ抽出物の、ネガティブモードにおける１００−１０００ＭｗＭＳスキャンのクロマトグラムを提供する。
【００２０】
図８は、キウイフルーツ抽出物の脱糖され、脱脂され、限外ろ過され、精製された分画の、ポジティブモードにおける１００−１０００ＭｗＭＳスキャンのクロマトグラムを提供する。
【００２１】
図９は、図８のキウイフルーツ抽出物の脱糖され、脱脂され、限外ろ過され、精製された分画の、ネガティブモードにおける１００−１０００ＭｗＭＳスキャンのクロマトグラムを提供する。
【００２２】
図１０は、図８のキウイフルーツ抽出物の、脱糖され、脱脂され、限外ろ過され精製された分画の、ＵＶスペクトル２００−４００ｎｍスキャンのクロマトグラムを提供する。
【００２３】
図１１は、ＡＤＰ誘起血小板凝集に対する、異なる濃度のメタノール溶出液の強い抑制効果を示す。
【００２４】
図１２Ａは、本発明のキウイフルーツ抽出物のＡＣＥ阻害活性の用量作用曲線である。図１２Ｂは、合成薬、カプトプリルのＡＣＥ阻害活性の用量作用曲線である。
【００２５】
〔定義〕
本明細書において使用される場合、用語“分画”は、部分的に精製された抽出物または抽出物から精製された化合物を言及する。
【００２６】
本明細書において使用される場合、用語“糖”は、果物中に存在する水溶性の単糖類および二糖類を言及する。
【００２７】
本明細書において使用される場合、用語“脱糖”は、水溶性の単糖類および二糖類が少なくとも部分的に取り除かれた組成物を言及する。
【００２８】
本明細書において使用される場合、用語“果実全体の同等量”は、果実全体と比べた、活性（例えば、血小板凝集抑制活性、血圧低下活性、またはＡＣＥ阻害活性）の同等量または活性成分の同等量を言及している。キウイフルーツの場合、果実全体の同等量は、おおよそ６５グラムの平均重量を有するキウイフルーツに相当する。
【００２９】
用語“精製された”または“精製する”は、血小板凝集の阻害を担う成分のような、目的物質の成分から不純物を取り除く工程の結果を意味する。
【００３０】
本明細書において使用される場合、用語“生理学上で許容できるキャリア”は、一般的に油剤とともに使用される任意のキャリアまたは賦形剤を言及する。このようなキャリアまたは賦形剤は、油、でんぷん、ショ糖および乳糖を含むが、これらに限定されない。
【００３１】
本明細書において使用される場合、用語“経口送達賦形剤”は、カプセル、ピル、タブレットおよびシロップを含むがこれらに限定されない、薬の経口による送達の任意の手段を言及する。
【００３２】
本明細書において使用される場合、用語“食料製品”は、ヒト、非反すう動物、または反すう動物によって消費されるのに適した任意の食品または飼料を言及する。食料製品は、調理済みおよび包装された食品（例えば、マヨネーズ、サラダドレッシング、パン、またはチーズ食品）または動物飼料（例えば、成型およびペレット状動物飼料または粗飼料）としてもよい。調理済み食料品は、ヒトの消費に認められた、任意の包装前の食品を意味する。
【００３３】
本明細書において使用される場合、用語“食材”は、ヒトまたは動物の消費に適した任意の物質を言及する。
【００３４】
本明細書において使用される場合、用語“機能食品”は、栄養を供給するという通常の栄養学的な機能を超えた健康増進特性および／または病気予防特性を有すると主張される任意の生鮮食品または加工食品に関係している。機能食品は、時に、機能性食品と呼ばれる。一般的なカテゴリーは、ビタミンの栄養価を高めた製品のような、機能食品原料から作られた加工食品または健康増進添加物で栄養価を高めた加工食品、および特定の権利が付随した生鮮食品（例えば、野菜）も含まれる。また、生きた培養菌による発酵食品は、プロバイオティックな益のある機能食品と、よく考えられる。
【００３５】
本明細書に使用される場合、用語“栄養サプリメント”は、食事の一部として使用される食事のまたは栄養上のサプリメントとして合成される食料製品を言及している。
【００３６】
〔発明の詳細な説明〕
本発明は、心臓保護薬に関連している。特に、本発明は、キウイフルーツから調製される脱糖心臓保護抽出物およびこれの機能に関連している。
【００３７】
キウイフルーツは、マタタビ属の中でもっともよく知られた作物である（３）。国際市場におけるマタタビ属の果実の売上は、たった一つのキウイフルーツの品種、Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｄｅｌｉｃｉｏｓａ“ヘイワード”によって独占されているが、広い種々な形、大きさ、および毛を有する属の中で、膨大な数の品種および選別がある。また、これらは、果肉の色、風味、および味などの感覚上の特性において、ならびにビタミンＣレベル、ポリフェノール、およびカロテノイド含有量などの栄養学的特性において、広範な変種を提供する（２９，３０）。少数のタイプの加工キウイフルーツ食料製品しか、消費者には商業的に購入可能ではない。キウイフルーツは、主に、果物全体として食べられる。キウイフルーツが製品に加工されたことのある少数の例は、冷凍デザートおよび混合ジュースおよびもっと最近ではＫｉｗｉ  ＣｒｕｓｈＴＭ（Ｖｉｔａｌ  Ｆｏｏｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒｓ  Ｌｔｄ，Ｍａｎｕｋａｕ  Ｃｉｔｙ，Ａｕｃｋｌａｎｄ，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）などの少数の天然キウイフルーツ飲料を含む。ポリフェノール、アスコルビン酸および水溶性多糖類（ペクチン多糖類）を含む、果実の栄養成分および所望の生理活性物質を含むキウイフルーツ抽出物は、機能食品の応用に都合がよく、消費者に購入可能なキウイフルーツ製品の幅を広げる（２８）。健康意識の増大にともない、明確化された健康の利益、増加した利便性および減少した添加物を含む、多様な消費者の利益をともなった、満足な栄養食品の増加した消費者需要がある。
【００３８】
血小板は、アテローム性動脈硬化症の発達、および血栓症の発病に関わり、そしてそれゆえに薬物治療による血小板活性の低下は、病気の発生および重症度を低減する（２６）。本発明の実施形態の発展の過程の間に行われた実験は、キウイフルーツの消費が、ランダム化されたクロスオーバー調査において、健康な志願者の血小板活性および血しょう脂質を調製したかどうかを、評価した。２８日間の１日２つまたは１日３つのキウイフルーツの消費は、コラーゲンおよびＡＤＰに対する血小板凝集反応を、コントロールに比べて１８％減少させた、と報告された（７）。さらに、キウイフルーツの消費は、血中トリグリセリドレベルを、コントロールと比較して１５％低下させた一方、血しょうコレステロールレベルの場合は、このような効果は認められなかった。すべてこれらのデータは、キウイフルーツの消費は、循環器病において有益であることを示している。キウイフルーツ抽出物（ＫＦＥ；ＫＦＥを調製するために使用される果肉の重量として表現される）のインキュベーションは、血小板凝集を抑制したが、結構な量の果肉が必要なことと、ジュース中の所望されていない反応物のためにセ氏４度の保管においてさえも活性が失われるため、最適な調製ではなかった。さらに、種子中（およびより少ない程度で毛中）のタンニンおよび油は、強酸性の果肉と反応して、所望されない匂いおよび色をもたらす可能性があると、考えられる。多くのキウイフルーツ種は、ジュースから取り除くことが難しい、細い毛を有する。ソフトパルピング方法は、過剰な細胞崩壊および種子などの果実の構成要素の分解の両方を避けるのに望ましいと考えられるため、好まれる。種子は、有毒物質（例えば、杏仁）を含む、またはジュースの風味の喪失もしくは所望ではない風味の原因となる。
【００３９】
多くの果物は酸性であり、そしてｐＨ６またはｐＨ６未満の果物は、一般的にもっとも作用されやすい。広く使用されおよび比較的安価なショ糖は、アルカリ性であり、そして酸性の果肉に添加された場合、さらに所望されない反応を引き起こすようである、または反応に加わるようである。本発明の実施形態に導く研究は、種子の粉砕または過剰な細胞の損傷からジュースに入り込む物質は、褐色化原因および発芽原因の問題などの、上出来なキウイフルーツジュースの生産に不利に影響する原因を与えることを示した。キウイフルーツは、ほとんどのものよりさらに酸性であり、おおよそｐＨ３である。また、これは、発芽、変色などの原因になる可能性のある任意の副反応を避けるであろう。ブドウ糖および果糖は、一般的に多くの果物において認められる。一般的に、これは、苦みまたは過剰な酸味などの、いくつかの所望ではない果物の特性を隠すためであり、および、幾分かは、甘味に対する標準的なヒトの嗜好のためである。いくつかの実施形態では、ジュース製品は、ほとんどの他のジュースおよび工程の特徴と同じように、殺菌を行われていない。これゆえに、甘味料によって与えられた任意の防腐効果は、製品の有効期間を延長するのに役立つだろう。配合から生じるｐＨの変化は、所望でない副反応を引き起こすであろう可能性がある。さらに、保管において、ほとんどのジュースの化学的性質は、変化するであろうことが認められる。キウイフルーツでは、ジュースの酸性成分が質を落とすであろう。よって、いくつかの実施形態において、適切なバッファーまたはｐＨ調整剤の添加は、長期間において、製品のｐＨを保つことに役立つ。また、これは、ジュースの褐色化または変色を生じる任意の所望ではない長期間の反応を遅らせる。
【００４０】
いくつかの実施形態では、果物の活性分画、そして特にキウイフルーツの活性分画は、種々の調合に利用され、当該技術分野において知られるような、ヒトの消費のための任意の基盤に好んで追加される。いくつかの好ましい実施形態において、活性分画は、血小板の凝集または粘着の予防、不活性物質からの実質的な遊離、未処理の活性分画に比較して向上した有効期間を有することなどの、特別な使用のための高い効能を有することで特徴づけられる。いくつかの実施形態では、分画は、高濃度な血小板抑制剤（すなわち、生の未加工ジュースと比較して、１０、２０、または３０倍より高いおよびおおよそ５０倍または１００倍まで）を提供するために、ジュースまたは果肉の破片が、遠心分離され、ろ過され、そして脱脂される工程により生産される。この工程は、向上した有効期間を有したおよび熱に安定である活性分画を生産する。いくつかの好ましい実施形態において、活性分画は、さらに安定性を高めるために、熱処理される。
【００４１】
いくつかの実施形態において、抽出物は、上記の工程の段階前または後で、脱糖される。驚くべきことに、キウイの抽出物に存在する活性成分は、糖より水溶性が低く、アルコール中で維持される。いくつかの好ましい実施形態において、抽出物は、カラムクロマトグラフィーによって脱糖され、とりわけ好ましい実施形態においては、固相抽出カラムによって脱糖される。いくつかの他の実施形態では、糖は、代わりの方法、例えば発酵、酵素処理またはナノろ過によって取り除かれる。取り除かれる糖は、ショ糖および果糖を含む。いくつかの実施形態において、脱糖された抽出物は、おおよそ５０％未満、おおよそ４０％未満、おおよそ３０％未満、おおよそ２０％未満、おおよそ１０％未満、またはおおよそ５％未満のｗ／ｗの糖、好ましくは、おおよそ１％未満ｗ／ｗの糖、より好ましくは、おおよそ０．５％未満ｗ／ｗの糖、そしてもっとも好ましくはおおよそ０．１％未満ｗ／ｗの糖を含むことで特徴づけられる。いくつかの実施形態では、脱糖された抽出物は、実質的に無糖であることで特徴づけられる。脱糖抽出物は、既知の技術による粉末の作製、ならびに食品、栄養サプリメント、糖尿病ではない人と同様に糖尿病患者への投与に適した食事サプリメントおよび経口送達賦形剤に含有させることに適していると認められるだろう。
【００４２】
さらなる実施形態において、上述の活性分画から再構成された製品が提供されている。本発明は、マタタビ属のメンバーのために開発された。果実製品は、ジュース以外にも、本発明の実施形態の範囲内である。これらの果実は、一般的に、低いｐＨ（３．０−３．５）を有しており、ジュースが空気にさらされた状態では褐色化を受け、そして中身にクロロフィルを有する。本発明の工程は他の果実でも扱いやすいだろうが、もっとも大きな利益は、例えば、４．５未満のｐＨ、著しい葉緑体レベル、または発芽のような、キウイフルーツに一般的な問題および特徴から損害をこうむる果実にとって実現されやすいであろうことが想定される（例えば、モンステラの果実）。
【００４３】
本発明からの利益は、これらのタイプの果実に限定されると、推測されるべきではない。
【００４４】
要するに、本発明は、特にキウイフルーツのために、いくつかの問題の領域を確認し、これらの困難を処理した。
【００４５】
本発明の実施形態の開発の過程の間に行われた実験は、ＫＦＥは、インビトロにおいて、血小板凝集を抑制する能力、そしてアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）活性を低下する能力を示すことを実証した。現在までに得られた結果は、ＫＦＥを含む組成物は、例えば、心筋梗塞のような循環器病および脳卒中の予防ならびに、心筋梗塞、脳卒中または不安定なアンギナに苦しんできた患者のさらなる血栓塞栓の発生の予防に効能がある。
【００４６】
加えて、このような組成物は、血管形成手術およびバイパス手術後の再狭窄を予防する効能がある。さらに、ＫＦＥは、血栓溶解療法と併せて、ＭＩなどの血栓塞栓障害から生じる心臓病の処置に効能がある。現在までに得られた結果は、抗血小板凝集活性に関わる化合物は、脂溶性の化合物とはかなり異なる構造を有する水溶性の化合物であることを示している。異なる段階である血小板の生成および作用に働く、多くの既知の抗血小板凝集薬がある。アスピリン（アセチルサリチル酸）は、もっとも広く使われ、研究されている。また、ジピリダモールおよびチクロピジンも使用されてきた。アスピリンの抗血小板活性は、血小板シクロオキシゲナーゼの不可逆的な阻害のためであり、それゆえ、血小板凝集を引き起こす化合物、トロンボキサンＡ２の合成を妨げる。イブプロフェンは、血小板シクロオキシゲナーゼの可逆的な阻害剤である。いくつかの化合物は、例えばピルマグレルのような、トロンボキサンＡ２シンセターゼの直接的な阻害剤であるか、または、例えばスロトロバンのように、トロンボキサン受容体におけるアンタゴニストとして働く。
【００４７】
本発明は、特有な仕組みに限定されない。実際、仕組みの理解は、本発明を実行するために必要ではない。それにもかかわらず、本明細書に記載の結果は、果実抽出物中の活性成分は、アスピリンおよび最近入手可能な別の抗血小板薬の段階より上流の、トロンボキサンＡ２の生成に導く経路の１以上の段階に影響するであろうことを示している。副作用は、アスピリンの治療上の投与にともなう一般的な現象であり、主な作用は、吐き気、消化不良、嘔吐などの胃腸の障害であることがよく知られている。それゆえ、果実抽出物中の、単離した血小板凝集抑制化合物は、血栓塞栓の発生および心臓病の予防において、アスピリンおよび別の抗血小板薬の所望の代替物としての使用を見いだすことが予想される。
【００４８】
よって、いくつかの実施形態において、本発明は、血小板凝集によって発生または特徴づけられる病状の予防または処置用の果実抽出物、これらの活性分画、またはこれらから単離可能な１以上の活性化合物を提供する。
【００４９】
さらなる実施形態では、本発明は、抗血栓剤用の果実抽出物またはこれらの活性分画またはこれらから単離可能な１以上の化合物を提供する。
【００５０】
また、さらなる実施形態において、本発明は、血小板凝集によって発生または特徴づけられる病状の予防または処置用の、または血小板凝集抑制剤としての使用のための、または抗血栓剤用の薬剤の製造のための、本明細書で前に定義されたような果実抽出物またはこれらの活性分画またはこれらから単離可能な１以上の化合物を提供する。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）血小板凝集によって発生、媒介もしくは特徴づけられる病状の予防または処置において使用するための、または（ｉｉ）血小板凝集抑制剤としての使用のための、または（ｉｉｉ）本明細書で前に定義した果実の、または抽出物の、またはこれらの活性分画の、またはこれらから単離可能な１以上の活性成分の、薬品の必須成分としての使用によって特徴づけられる
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書で前に定義したような果実由来の、または抽出物由来の、またはこれらの活性分画由来の、またはこれらから単離可能な１以上の活性化合物由来の活性成分と、薬学的に認められるキャリアとを含む医薬組成物を提供する。
【００５２】
いくつかの実施形態において、本発明は、循環器の健康維持に使用するための果実抽出物、これらの活性分画、またはこれらから単離可能な１以上の活性化合物を提供する。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本発明は、心臓の健康維持に使用するための果実抽出物、これらの活性分画、またはこれらから単離可能な１以上の活性化合物を提供する。
【００５４】
いくつかの実施形態において、血小板凝集抑制剤として使用するための果実抽出物またはこれらの活性分画、またはこれらから単離可能な１以上の活性化合物を提供する。
【００５５】
別の実施形態において、本発明は、心臓の健康および／または循環器の健康を増進または維持において使用するための果実抽出物またはこれらの活性分画、またはこれらから単離可能な１以上の活性化合物を提供する。
【００５６】
別の実施形態において、本発明は、血流の改善、維持およびまたは促進に使用するための、ならびに特に円滑な血流に使用するための果実抽出物またはこれらの活性分画、またはこれらから単離可能な１以上の活性化合物を提供する。
【００５７】
本発明に従って使用される果実抽出物は、ヒトに無毒であり、そして食用の果物と通常考えられている典型的な果物の果実抽出物であるほうがよい。それゆえ、果物は、種子または核を含むまたは含まなくても、食用であり、無脂の果肉を有することは必須である。
【００５８】
キウイフルーツは、マタタビ属でもっともよく知られた作物である。本発明の実施形態の抽出物は、例えば遠心分離の方法により、皮をむいたキウイフルーツの果肉を均質化して、そして、これらから固形物を取り除くことにより調製され得る。それゆえ、抽出物は、果肉のジュースからなるか、または含むことができ、必要に応じて均質化の段階のあいだに余分な水を添加した、典型的な水性の抽出物である。このような水性抽出物は、例えば、減圧下での蒸発などの基本的な技術により、濃縮され、栄養価を高められ、または圧縮され得る。濃縮物の例は、少なくとも２倍濃縮、さらに通常は、少なくとも４倍、例えば少なくとも８倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍、または少なくとも１０００倍の濃縮物である。
【００５９】
抽出物は、均質化され得て、例えば、分子量ろ過、または、セファロースゲル（サイズ排除クロマトグラフィー用の）もしくは脂質の除去（Ｌｉｐｉｄｅｘ−１０００）もしくは溶媒処理によって、もしくは例えばＯＤＳコートシリカのような適切に処理されたシリカもしくはアルミナにおけるＨＰＬＣを使用するイオン交換カラム、もしくは溶媒抽出などの適切なサポートによるクロマトグラフィーによって、抽出物の１以上の活性分画を単離する。
【００６０】
キウイフルーツの抽出物において行われた実験は、１０００の分子量カットオフを有する限外ろ過を透過した抽出物の活性成分は、無色で、水溶性であり、そして煮沸させた場合も活性を失わないことを明らかにした。いくつかの実施形態において、本発明は、抽出物分画を生成するためにマタタビ属の果実由来の均質なジュースを含む安定でおよび生物な活性を有するマタタビ属抽出物の生成のための工程、ならびにおおよそセ氏７０度〜おおよそセ氏１２０度、好ましくはセ氏８０度〜セ氏１００度、そしてもっとも好ましくはおおよそセ氏９５度〜セ氏１００度への抽出物分画の加熱のための工程を提供する。いくつかの実施形態では、加熱時間は、おおよそ５分からおおよそ３０分、好ましくはおおよそ１０分からおおよそ２５分、そしてもっとも好ましいくはおおよそ２０分であり、またはおおよそ５、１０、または１５分より長く延長する。いくつかの実施形態では、本発明は、抽出物分画を生成するためにマタタビ属の果実由来の均質なジュースを含む安定でおよび生物活性を有するマタタビ属抽出物の生成のための工程、ならびに、１０ｋＤａ未満、好ましくは５ｋＤａ、そして最も好ましくはおおよそ３ｋＤａ、２ｋＤａ、または１ｋＤａより少ない分子量カットオフの限外ろ過に分画をかけるための工程を提供する。いくつかの実施形態では、安定化した活性分画は、生物活性分子を含み、新鮮な抽出物分画と比較して、少なくとも４日間、１８日間、または２４日間からおおよそ３０または４０日間までセ氏４度で保管された場合、上記の生物活性を有する分子の生物活性の少なくとも８０％を維持することで特徴づけられる。いくつかの実施形態では、生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制、またはアンギオテンシン転換酵素の活性の抑制である。
【００６１】
いくつかの好ましい実施形態において、この方法によって生成された、安定でおよび生物活性を有するマタタビ属抽出物は、ＵＶスペクトルクロマトグラムにおいて、おおよそ１．３０分および１．８１分に主なピークを示し、そして、全イオン電流クロマトグラムにおいて、おおよそ１．６１、３０．１８、および３０．８７に主なピークを示す。そして、ここでの上記抽出物は、インビトロの血小板凝集アッセイにおいて、血小板凝集を抑制する。
【００６２】
よって、また、本発明の実施形態は、抗血栓剤としての使用のために、または血小板凝集抑制剤としての使用のために、または血小板凝集によって発生もしくは特徴づけられる病状の予防もしくは処置において使用するために、分子量が３０００、２０００、もしくは１０００ｋＤａ未満の、実質的に熱に安定で、無色もしくはかすかな淡黄色で、水溶性の化合物を含む活性分画である、果実抽出物（例えば、キウイフルーツ抽出物）の活性分画を提供する。いくつかの実施形態において、活性分画は、生物活性を有するものとして特徴づけられる。いくつかの実施形態では、生物活性は、活性分画が通常の血清で１０分間インキュベートされた場合、コントロールまたは偽薬の物質と比較して、少なくとも５％、１０％もしくは、好ましくは１５％の、アンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）活性の抑制または減少である。いくつかの実施形態では、生物活性は、収縮期または拡張期の測定またはこれらの組み合わせにおいて、少なくとも１、５、１０、１５または２０ｍｍＨｇの血圧の減少である。いくつかの実施形態では、生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である。いくつかの実施形態では、血小板凝集抑制は、例えば、コラーゲン、ＡＤＰ、またはアラキドン酸などの、既知の血小板凝集作動体による血小板凝集のパーセント抑制として表現される。いくつかの実施形態では、本発明の活性分画は、コントロールまたは偽薬の物質と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％または５０％、おおよそ５０％もしくは６０％の、これらの既知の作動体の１つによる血小板凝集を抑制する。
【００６３】
活性分画は、主に、キウイフルーツのジュース、種子を覆う果肉および種子に含まれるか、またはこれらから抽出可能であることが見出された。それゆえ、皮がむかれたキウイフルーツの果肉由来の均質物もしくはこれらの抽出物から本質的に構成される、もしくは含む活性分画、または、ジュースおよび／もしくは種子を覆う果肉、およびもしくは種子から本質的に構成される、もしくは含む活性分画から調製される組成物の使用は、本発明の好ましい実施形態を示す。
【００６４】
よって、本発明の実施形態は、キウイフルーツ抽出物の活性分画に、１以上の下記の特徴を与える。
ａ）活性分画中の分子の大きさは、３０００ｋＤａ未満、および、好ましくは２０００ｋＤａ未満または１０００ｋＤａ未満である；
ｂ）活性分画は、実質的に熱に安定である；
ｃ）活性分画は、実質的に無色である；
ｄ）活性分画は、水溶性の化合物を実質的に含む；
ｅ）活性分画は、血小板凝集を抑制する；そして
ｆ）活性分画は、アンギオテンシン転換酵素を阻害する
本発明の活性分画は、種々の形態でおよび種々の調合で提供されてもよい。いくつかの実施形態において、分画は、液体、シロップ、粉末、ペースト、エマルジョン、ペレット状組成物、粒状組成物、カプセルに包まれた組成物、懸濁液、濃縮物、溶液、および錠剤として提供される。粉末は、感覚受容器にとっておよび／もしくは薬学的に許容できる賦形剤をともなうかまたはともなわない、安定化したキウイ抽出物から調製された、凍結乾燥した、フリーズドライにしたまたは吹き付け乾燥した粉末であることが好ましいだろう。シロップは、安定化したキウイ抽出物から調製された、粘着性の、濃縮水溶液であることが好ましく、そして適切な賦形剤および／または甘味料を含んでいてもよい。シロップは、直接的な経口投与用に、または、投与前に水で再構成する濃縮物として利用されてもよい。
【００６５】
分画は、経口の、静脈内の、筋肉内の、動脈内の、髄内の、鞘内の、心室内の、経被の、口の、皮下の、腹腔内の、鼻腔内の、腸内の、局所の、舌下のまたは直腸の手段を含むがこれらに限定されない、複数の経路のうちの任意の経路を通して与えられてもよい。調合および投与のための技術における詳細のためおよび投与は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）の最新版において調べられるだろう。
【００６６】
いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の分画を含む経口送達賦形剤を提供する。分画は、タプレット、ピル、糖衣錠、カプセル、ゲルカプセル、溶液、液体、スラリー、懸濁液およびエマルジョンにおいて、でんぷん、ショ糖または乳糖などの薬学的に許容できるキャリアと調合されることが好ましいだろう。本発明のタブレットまたはカプセルは、おおよそ６．０から７．０のｐＨにおいて溶解する腸溶コーティングでコートさせてもよい。胃ではなく小腸において溶解する適切な腸溶コーティングは、セルロースアセテートフタラートである。いくつかの実施形態では、経口送達賦形剤は、被験者における、力仕事の能率の上昇、仕事のエネルギーコストの減少、疲労するまでの仕事時間の増加、身体の運動のあいだの忍耐の増加、健康の促進、熱心な運動後の筋肉痛の改善、肥満および／またはメタボリック症候群の被験者における代謝状態の改善、およびこれらの組み合わせからなる群から選択された効果が生じる有効な第一および第二の成分の量を含む。肥満および／またはメタボリック症候群の被験者における代謝の状態を改善する例は、ブドウ糖の摂取の増加、酸化ストレスの低下、およびこれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【００６７】
いくつかの実施形態において、経口送達賦形剤は、有効量の分画を含む。いくつかの実施形態では、有効量は、各々がおおよそ６５ｇの重量を有するおおよそ１個から１０、１から５、１から３、２から４、２から３、おおよそ３個のキウイフルーツから発見された生物に活性のある成分を含有する抽出物の量を含む。別の実施形態では、有効量は、おおよそ１からおおよそ５０００ｍｇの凍結乾燥されたまたは吹き付け乾燥された、安定化された分画、好ましくは、おおよそ１からおおよそ３０００ｍｇの凍結乾燥されたまたは吹き付け乾燥された、安定化された分画、そして最も好ましいくは、おおよそ１ｍｇからおおよそ１０００ｍｇの凍結乾燥されたまたは吹き付け乾燥された、安定化された分画に相当する。別の実施形態では、有効量は、おおよそ５００からおおよそ２００００ｍｇの濃縮された（例えば、シロップのような）、安定化された分画、好ましくはおおよそ５００からおおよそ１００００ｍｇの濃縮された（例えば、シロップのような）、安定化された分画、そして最も好ましいくはおおよそ５００ｍｇからおおよそ２５００ｍｇの濃縮された（例えば、シロップのような）安定化された分画に相当する。別の実施形態では、有効量は、おおよそ１からおおよそ５０００ｍｇの脱糖された分画、好ましくはおおよそ１ｍｇからおおよそ３０００ｍｇの脱糖分画、そして最も好ましいくはおおよそ１ｍｇからおおよそ１０００ｍｇの脱糖分画、またはおおよそ５０ｍｇからおおよそ１０００ｍｇ、５０ｍｇから７５０ｍｇ、５０ｍｇから５００ｍｇ、５０ｍｇから２５０ｍｇ１０ｍｇから１００ｍｇまたは１０ｍｇから２００ｍｇの脱糖分画を含む。別の実施形態において、キウイフルーツ抽出物の一日あたりの投与量は、皮を含めると各々がおおよそ１２０ｇまたは皮無しだと各々がおおよそ１００ｇの重量を有する、おおよそ１から１０、１から５、１から３、２から４、２から３、おおよそ３個のキウイフルーツの同等量（すなわち、果実全体の同等量）中の活性成分を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の分画を含む食事サプリメントを提供する。この発明の食事サプリメントの成分は、好ましくは、経口の消費を認め得る賦形剤および／またはキャリアが含まれる。キャリアの実際の形態、例えば、食事サプリメント自体は、重要ではない。キャリアは、液体、ゲル、ゲルキャップ、カプセル、粉末、固形タブレット（コートされたまたはコートされてない）、茶、または同様なものであってよい。食事サプリメントは、好ましくは、タブレットまたはカプセルの形態、そして最も好ましいくは、柔らかいゼラチンカプセルの形態である。別の実施形態では、サプリメントは、消費者が食品または飲料に添加しやすい粉末または液体として提供される。例えば、いくつかの実施形態では、食事サプリメントは、例を挙げると、飲料に混合することによって、またはプディング、トッピング、ソース、ピューレ、調理されたシリアル、またはサラダドレッシングなどの半固形食品にかき混ぜる、例えば、または他の方法で食品に添加することにより使用される粉末の形態で、ヒトに投与され得る。好ましい実施形態において、食事サプリメントは、上述の有効量の成分を含む。
【００６９】
食事サプリメントは、特に、食事サプリメントが添加された食事のカロリー数を制限することを望む場合は、１以上の不活性な成分を含んでもよい。例えば、また、本発明の食事サプリメントは、例を挙げると、ハーブ、ビタミン、ミネラル、エンハンサー、着色料、甘味料、香料、不活性成分などを含む任意の成分を含ませてもよい。例えば、本発明の食事サプリメントは、１以上の下記のものを含んでもよい：アスコルビン酸（アスコルビン酸、ミネラルアスコルビン酸塩、ローズヒップ、アセロラなど）、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、緑茶（ポリフェノール）、イノシトール、ケルプ、ダルス、ビオフラボノイド、マルトデキストリン、イラクサ、ナイアシン、ナイアシンアミド、ローズマリー、セレニウム、シリカ（二酸化ケイ素、シリカゲル、スギナ、トクサなど）、スピルリナ、亜鉛、ドコサヘキサエン酸および／またはエイコサペンタエン酸（遊離脂肪酸、トリグリセリド、またはリン脂質などの任意の形態によって提供される）など。このような任意の成分は、自然発生的なまたは濃縮された形態であってよい。
【００７０】
いくつかの実施形態において、食事サプリメントは、さらに、リン酸カルシウムまたは酢酸カルシウム、三塩基性の；リン酸カリウム、二塩基性の；硫酸マグネシウムまたは酸化マグネシウム、塩（塩化ナトリウム）；塩化カリウムまたは酢酸カリウム；アスコルビン酸；オルトリン酸鉄；ナイアシンアミド；硫酸亜鉛または酸化亜鉛；パントテン酸カルシウム；グルコン酸銅；リボフラビン；ベータカロチン；塩酸ピリドキシン；硝酸チアミン；葉酸；ビオチン；塩化クロムまたはピコリン酸クロム；ヨウ化カリウム；セレン酸ナトリウム；モリブデン酸ナトリウム；フィロキノン；ビタミンＤ３、シアノコバラミン；亜セレン酸ナトリウム；硫酸銅；ビタミンＡ；ビタミンＣ；イノシトール；ヨウ化カリウムを含むがこれらに限定されないビタミンおよびミネラルを含む。ビタミンおよびミネラルの適切な投与量は、例えば、Ｕ．Ｓ．ＲＤＡガイドラインを調べることにより得てもよい。
【００７１】
好ましい実施形態において、食事サプリメントは、上述の有効量の分画を含む。本発明の食事サプリメントは、１日１回以上、摂取されてよい。好ましくは、食事サプリメントは、経口で、１日１回から２回、投与されることが好ましい。もちろん、投与の頻度は、ユニット（カプセルまたはタブレット）あたりの投与量および所望の摂取レベルに依るだろう。投与量レベル／ユニットは、合理的なユニット数（例えば、１日２回摂取される２錠のカプセルまたは２錠のタブレット）において推奨される１日あたりの成分レベル（例えば、上述の効果的な量）を提供するために、調節され得る。好ましい実施形態において、投与量は、毎日、各々の成分の１日あたりの摂取量に合計する。好ましい実施形態において、食事サプリメントは、食事と一緒にまたは食前に摂取される。別の実施形態においては、食事サプリメントは、食事と一緒に摂取されない。
【００７２】
別の実施形態において、本発明は、本発明の分画を含む栄養サプリメント（例えば、エネルギーバーまたはミールリプレイスメントバーもしくはミールリプレイスメント飲料）を提供する。好ましい実施形態において、栄養サプリメントは、上記のような有効量の成分を含む。栄養サプリメントは、食事またはスナックの代替物として役に立ち、そして一般的に、栄養熱量を提供するだろう。できれば、栄養サプリメントは、バランスのとれた量の炭水化物、タンパク質、および脂肪を提供することが好ましい。栄養サプリメントは、さらに、炭水化物、単純糖質、中間の鎖長、または多糖、またはこれらの組み合わせを含み得る。単純糖質は、感覚器を刺激する所望の特徴で選ばれ得る。未調理のコーンスターチは、複合炭水化物の一つの例である。これの高分子量構造を維持するほうがいいと所望される場合は、熱は、複合炭水化物を単純炭水化物（ここで、単純炭水化物は単糖類、または二糖類）に分解するだろうから、それは、未調理または未加熱である食品配合またはこれらの部分に含まれるべきである。一つの実施形態において、栄養サプリメントは、三つの鎖長（単純、中間および複合；例えば、ショ糖、マルトデキストリン、および未調理コーンスターチ）の炭水化物原料の組み合わせを含む。
【００７３】
本発明の栄養サプリメントに混合されるタンパク質の原料は、栄養学的な配合物において利用化された任意の適切なタンパク質でありえて、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイパウダー、卵、大豆粉末、豆乳大豆タンパク、大豆タンパク質単離物、カゼイン塩（例えば、カゼイン酸ナトリウム、カゼイン酸カルシウムナトリウム、カゼイン酸カルシウム、カゼイン酸カリウム）、動物および野菜タンパク質およびこれらの混合物を含み得る。タンパク質原料を選ぶ場合、タンパク質の生物学的価値が、カゼイン塩、ホエイ、ラクトアルブミン、卵白および全卵タンパク質中で見出されるもっとも高い生物学的価値とともに、第一に考慮されるべきである。好ましい実施形態において、タンパク質は、ホエイタンパク質濃縮物およびカゼイン酸カルシウムの混合物である。これらのタンパク質は、高い生物学的価値を有する。それは、これらが高い割合の必須アミノ酸を有することである。Ｍｏｄｅｒｎ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，ｅｉｇｈｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８６の特にＶｏｌｕｍｅ１の３０から３２ページを参照すること。
【００７４】
また、栄養サプリメントは、別のビタミン、ミネラル、抗酸化物質、食物繊維および別の食事サプリメント（例えば、タンパク質、アミノ酸、コリン、レシチン、別の脂肪酸）の１以上の混合物などの、別の成分を含み得る。これらの成分の１つまたはいくつかの選択は、調合、デザイン、消費者の嗜好性および最終使用者の問題である。本発明の食事サプリメントに添加されるこれらの成分量は、当業者に容易に知られる。このような量の手引きは、子供および大人のためのＵ．Ｓ．ＲＤＡ投与量によって提供され得る。さらに、添加され得るビタミンおよびミネラルは、リン酸カルシウムまたは酢酸カルシウム、三塩基性の；リン酸カリウム、二塩基性の；硫酸マグネシウムまたは酸化マグネシウム、塩（塩化ナトリウム）；塩化カリウムまたは酢酸カリウム；アスコルビン酸；オルトリン酸鉄；ナイアシンアミド；硫酸亜鉛または酸化亜鉛；パントテン酸カルシウム；グルコン酸銅；リボフラビン；ベータカロチン；塩酸ピリドキシン；硝酸チアミン；葉酸；ビオチン；塩化クロムまたはピコリン酸クロム；ヨウ化カリウム；セレン酸ナトリウム；モリブデン酸ナトリウム；フィロキノン；ビタミンＤ３、シアノコバラミン；亜セレン酸ナトリウム；硫酸銅；ビタミンＡ；ビタミンＣ；イノシトール；ヨウ化カリウムを含み得るがこれらに限定されない。
【００７５】
香料、着色料、香辛料、ナッツ類などは、製品に組み入れられ得る。香料は、風味のある抽出物、揮発性油、チョコレート香料、ピーナッツバター香料、クッキーのかけら、クリスプライス、バニラまたは商業的に入手可能な任意の香料の形態であり得る。有用な香料の例は、純粋なアニス抽出物、人工バナナ抽出物、人工サクランボ抽出物、チョコレート抽出物、純粋なレモン抽出物、純粋なオレンジ抽出物、純粋なペパーミント抽出物、人工パイナップル抽出物、人工ラム抽出物、人工ストロベリー抽出物、または純粋なバニラ抽出物；または香油、ベイ油、ベルガモット油、セダー油、胡桃油、サクランボ油、シナモン油、クローブ油、またはペパーミント油などの揮発性油；ピーナッツバター、チョコレート香料、バニラクッキーのかけら、バタースコッチまたはタフィーを含むがこれらに限定されない。一つの実施形態では、食事サプリメントは、ココアまたはチョコレートを含む。
【００７６】
乳化剤は、最終生産物の安定化のために添加されてもよい。適切な乳化剤の例は、レシチン（例えば、卵または大豆由来の）、ならびに／またはモノグリセリドおよびジグリセリドを含むがこれらに限定されない。別の乳化剤は、当業者に容易にわかり、そして、適切な乳化剤の選択は、ある程度、配合および最終生産物によるだろう。
【００７７】
また、防腐剤は、製品の保存寿命を延ばすために、栄養サプリメントに添加されてもよい。好ましくは、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸ナトリウム、安息香酸カリウム、安息香酸ナトリウムまたはＥＤＴＡカルシウム二ナトリウムなどの防腐剤が、使用される。
【００７８】
上記の炭水化物に加えて、栄養サプリメントは、例えば、サッカライド、シクラマート、アスパルタミン、アスパルテーム、アセスルファムＫ、および／またはソルビトールなどの天然または人工（低カロリーが好ましい）甘味料を含み得る。このような人工甘味料は、栄養サプリメントが、太りすぎもしくは肥満の人物、または高血糖になりがちなタイプＩＩの糖尿病の人物に消費される意図である場合、望ましいだろう。
【００７９】
栄養サプリメントは、種々の形態において、そして種々の生産方法によって、提供され得る。好ましい実施形態において、ヘルスバーを製造するために、液体の材料は調理される；乾燥した材料は、ミキサーの中で液体の材料と一緒に添加され、そして生地の段階に達せられるまで混ぜられる；生地は、押し出し成型機に入れられ、そして押し出される；押し出された生地は、適当な長さにカットされる；そして生産物は冷却される。バーは、本明細書で明確に記載された成分に加え、別の栄養物および味を高める別の混ぜ物を含んでもよい。
【００８０】
また、さらなる実施形態において、本発明は、上記の抽出物または分画を含む食料品、調理済み食料品、または食糧（すなわち、機能食品）を提供する。好ましい実施形態において、食品は、上述の有効量の分画を含む。例えば、いくつかの実施形態において、抽出物、分画またはこれらの誘導体を含む飲料および固形食品または半固形食品が提供される。これらの形態は、飲料（例えば、ソフトドリンク、ミルクおよび他の乳製品ドリンク、および食事ドリンク）、ベイクドグッズ、プディング、乳製品、菓子、スナック食品、または冷凍菓子または冷凍ノベルティー（例えば、アイスクリーム、ミルクシェイク）、調理済み冷凍食品、キャンディー、スナック製品（例えば、チップ）、スープ、スプレッド、ソース、サラダドレッシング、調理済み食肉製品、チーズ、およびヨーグルトを含み得るがこれらに限定されない。
【００８１】
〔実験〕
下記の例は、本発明のある好ましい実施形態および態様を実証およびさらに描写するために提供され、これらの範囲に限定されないものとして解釈される。
【００８２】
（実施例１）
キウイフルーツ抽出物の調製．１００％キウイフルーツジュースからなる抽出物が、調製された。１００％の果実のジュースを調製するために、果物は皮がむかれ、そして、果肉は均質化された。生じた均質物は、遠心分離機において、９０００ｘｇで１５分間４℃で遠心された。その後、上清は除かれ、ジュースのｐＨは、１Ｍ水酸化ナトリウムで７．４に調節された。キウイフルーツ抽出物（ＫＦＥ）の抗血小板活性は、初めに決定された。
【００８３】
キウイフルーツ抽出物の部分分画法．次いで、キウイフルーツ抽出物は、図１に示された概括的な計画に沿って、分画化された。調製物質の血小板凝集抑制活性は、種々の段階で測定された。従って、１００％の果実から調製された、新鮮なキウイフルーツジュースは、９０００ｘｇで１０分間、遠心分離された。遠心分離のあと、上清は、凍結乾燥され、乾燥した材料の一部は、リン酸緩衝液に溶解され、ｐＨは、７．４に調節された。次いで、これは、分子量１０００ダルトンのカットオフを有するフィルターを通すことにより、限外ろ過にかけられた。限外ろ過液は、収集され、凍結乾燥され、水で再構成され、ｐＨは、７．４に調節された。血小板凝集は、分画化の種々の段階における抽出物を使用し、測定された。別の研究では、抽出物は、１０分間煮沸され、遠心分離され、煮沸されたサンプルの抗血小板活性が、決定された。
【００８４】
分画化された抽出物中の脂質化合物が抗血小板活性の原因かどうかを調べるために、抽出物の脂質は、特別に準備されたＬｉｐｉｄｅｘ−１０００カラム（カラム容量１８ｍｌ）に溶液を通すことにより、取り除かれた。Ｌｉｐｉｄｅｘ−１０００は、抽出物の脂質物質のみを吸着する。次いで、カラムは、５カラム容量分の１５ｍＭリン酸緩衝液で溶出され、溶出された溶液は、収集され、乾燥させた。カラムの合成樹脂に結合した脂質化合物は、後で、メタノールの溶液で溶出され、抗血小板活性の測定のために乾燥させた。上記のＬｉｐｉｄｅｘ−１０００の実験にさらに付け加えると、また、脂質は、ＢｌｉｇｈおよびＤｙｅｒに従い、クロロホルムメタノールを使用した別の方法で、取り除かれた。従って、２ｍｌの限外ろ過液は、歌う相にするために、２．５ｍｌのメタノールと混合され、次に１．２５ｍｌのクロロホルムと混合され、１：２：０．８のクロロホルム：メタノール：水の比となった。沈殿は、形成されなかった。次いで、クロロホルム（１．２５ｍｌ）および水（１．２５ｍｌ）は、添加され、穏やかに混合したあと、混合物は、二層に安定させた。上層（メタノール／水）は、取り除かれ、メタノールは５５℃の窒素下で吹き飛ばされた。次いで、容量は、ｐＨ７．４に調節後、２ｍＬまでかさ上げされた。この水相の抗血小板凝集活性は、コントロールとしての、それぞれの容量のリン酸緩衝液と比較された。
【００８５】
次いで、クロロホルム相は、窒素下において、蒸発させられ、エタノール（５０μｌ）に再懸濁した。次いで、エタノール相のサンプル（１０μＬ）は、１０μＬエタノールコントロールと比較して、抗血小板凝集活性が検査された。
【００８６】
血小板凝集研究．ヒト血小板の凝集特性における果実抽出物の効果は、健康な志願者において調査された。静脈血は、献血前、少なくとも１４日間は薬を摂取していなかった志願者から収集された。血液（２０ｍｌ）は、１９Ｇ翼状針を使用して収集され、凝固は、血液容量９部に対しクエン酸容量１部までの比で、クエン酸（１３５ｍＭ）と血液サンプルを混合することにより、防止された。血小板を多く含む血漿（ＰＲＰ）は、１８０ｘｇで１５分間、血液を遠心分離することによりサンプルから調製された。１Ｍ水酸化ナトリウムでｐＨ７．４に調節されたキウイフルーツジュース（１０−３０μｌ）は、ＰＲＰと混合され、５００μｌまでかさ上げし、３７℃で１５分間インキュベートされた。その後、ＡＤＰ誘起血小板凝集における果実抽出物の効果は、最終濃度が５μＭになるようにＡＤＰを添加して、モニターされた。コントロールは、果実抽出物の代わりにｐＨ７．４のリン酸バッファー１０−３０μＬを使用して、並行して行われた。ＰＲＰ中の血小板凝集は、３７℃、１０００ｒｐｍの一定の撹拌速度でＣｈｒｏｎｏ−Ｌｏｇ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ（Ｃｈｒｏｎｏ−Ｌｏｇ，ＵＳＡ）を使用して、モニターされた。
【００８７】
インビトロの血小板凝集におけるＫＦＥの効果を決定するために、ＰＲＰ（４５０μｌ）は、凝集剤の添加前に、ＫＦＥの種々の濃度でインキュベートされた（５０μｌの容量、１５分間、３７℃）。ＫＦＥの種々の分画のＩＣ５０は、ＫＦＥの種々の濃度で、これらの血小板を１５分間インキュベートすることにより、決定された。コントロールは、果実抽出物を５０μｌのリン酸に置き換えて、並行して行われた。血小板凝集の抑制は、コントロールと比較した、曲線下の領域の減少として表現される。
【００８８】
ＫＦＥによるアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）の阻害．エキソペプチダーゼであるアンギオテンシンＩ−転換酵素（ＡＣＥ，ＥＣ  ３．４．１５．１）は、細胞外の容量（例えば、血漿、リンパ液および組織間液）および動脈の血管収縮を調節する、身体のレニン−アンギオテンシンシステムに関係する循環酵素である。ＡＣＥは、肺および腎臓の内皮細胞によって分泌され、デカペプチドアンギオテンシンＩをオクタペプチドアンギオテンシンＩＩに転換することを触媒する。ＡＣＥ阻害剤は、アンギオテンシンＩがアンギオテンシンＩＩに転換することを防ぐ。それゆえ、これらは、細動脈の抵抗性を低下させ、静脈の容量を増大させ、心臓の排出量および心臓の指標である、一回心仕事量係数および心拍血液量を上昇させ、腎血管の抵抗性を低下させ、ナトリウム排泄増加（尿中のナトリウム排泄）に導く。ＡＣＥ阻害剤を使用すると、アンギオテンシンＩＩの効果は、防がれて、低下した血圧に導かれる。血清ＡＣＥ活性におけるＫＦＥの効果は、ドイツのＢＵＨＬＭＡＮＮＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ  ＡＧのアンギオテンシン転換酵素アッセイキットを使用して、測定された。
【００８９】
結果：
キウイフルーツ抽出物の分画化およびＡＤＰによるＡＤＰ誘起血小板凝集におけるこれらの効果．図１は、種々の分画化の手順を用いた、キウイフルーツ抽出物の調製を示す。キウイ抽出物中の血小板凝集阻害剤は、水溶性の分画中に存在していた。そして、これらのサイズは１０００ダルトンより小さい。この分画の煮沸は、活性を損なわせなかった。Ｌｉｐｉｄｅｘ−１０００によるサンプルの脱脂は、活性分画が液状の抽出物中に存在することを、実証した。
【００９０】
血小板凝集研究．表１は、種々の作用薬による血小板凝集の抑制における、キウイフルーツ抽出物の用量作用を示す。これは、ＡＤＰ誘起凝集の用量作用効果：キウイフルーツ抽出物の増加が、血小板凝集のよりすぐれた減少に導いたことを実証した。キウイフルーツから単離された分画は、コラーゲン、ＡＤＰ、およびアラキドン酸の三つの血小板凝集因子すべてに対して、等しく効果的であった。
【００９１】
図２は、インビトロにおける、ＡＤＰによる血小板凝集に対する、種々の容量のキウイフルーツ抽出物の効果を示す。ＰＲＰ（４５０ｍｌ）は、アゴニストである、アラキドン酸（５００μｇ／ｍｌ）、ＡＤＰ（３ｍＭ、およびコラーゲン（１μｇ／ｍｌ））の添加前に、１５分間、３７℃で、種々の容量（０、１０、２０、および３０μｌ）のＫＦＥとともにインキュベートされた。ＫＦＥは、用量に依存する形で、ＡＤＰ誘起凝集を抑制した。ＡＤＰ誘起凝集は、コントロールと比較して、１０μｌＫＦＥで４５％、２０μｌＫＦＥで６５％、３０μｌＫＦＥで９５％抑制された。同様に、ＫＦＥは、コラーゲン誘起血小板凝集を抑制した；抑制のレベルは、１０および２０μｌインキュベーションでは、さらに低かった。アラキドン酸誘起血小板凝集の抑制は、検査されたもっとも高いＫＦＥレベルにおいては３８パーセントの抑制を示し、低い濃度のＫＦＥにおいてはとても弱い抑制を示した。
【００９２】
【表１】
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【００９３】
キウイフルーツ抽出物の１００℃における１０分間の煮沸は、抽出物の抗血小板凝集に影響は与えなかった。
【００９４】
種々のアゴニストによって誘起された血小板凝集におけるＫＦＥの効果の決定．図２および３は、アラキドン酸、コラーゲンおよびＡＤＰの各々によって誘起された血小板凝集の抑制を示す。実験条件は表１に記載されている。
【００９５】
ＡＤＰによって誘起された血小板凝集における分画化されたキウイフルーツ抽出物の効果の決定．図４は、ＡＤＰによって誘起された血小板凝集における、分画化されたキウイフルーツ抽出物の効果を示す。実験条件は、表１に記載されている。ＫＦＥ抽出物は、図１に記載されたように、精製された。
【００９６】
ヒト血清のＡＣＥ活性におけるＫＦＥの効果．２０μｌのＫＦＥをともなった１５分間の血清のインキュベーションは、コントロールと比較して、１５％を超える活性を抑制をした。図５は、脱脂され、限外ろ過され、精製された、キウイフルーツ抽出物の活性分画のＵＶスキャンを示す。
【００９７】
（実施例２）
キウイフルーツジュースは、皮をむいた果物の均質化後に、調製され、その後、９０００ｘｇで１５分間遠心分離され、抗血小板アッセイのために４℃に維持された。ジュースの別の分画は、９０℃で２０分間煮沸され、もう一度遠心分離され、ｐＨは７．４に調節され、２４日目まで４℃に維持された。
【００９８】
キウイフルーツジュースおよびキウイフルーツ抽出物の抑制活性は、表で示されるような種々の日数で、測定され、これらの抗血小板活性は、ＰＲＰをジュース（ｐＨを７．４に調節後の）または抽出物とともに、１５分間、インキュベートすることによって、測定され、抑制は、凝集剤として３μＭ  ＡＤＰを使用して、コントロール（ジュースまたは抽出物無添加の）と比較された。
【００９９】
【表２】
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【０１００】
結論：煮沸された抽出物は、その１００％の活性を維持したが、ジュースは、１週間内に２４％、１８日後に７０％の活性を失った。凍結乾燥された抽出物も、その活性を維持した。
【０１０１】
（実施例３）
本実施例は、抗血小板活性を含む、精製度が高く、熱安定性かつ水溶性のキウイフルーツ抽出物のＵＶスペクトルおよびＭＳスペクトルを記述する。
【０１０２】
キウイフルーツジュースは、調製され、ジュースは、９０００ｇで１５分間の遠心分離によって浄化された。次いで、上清は、９０℃で２０分間煮沸された。次いで、冷却された抽出物は、９０００ｘｇで１５分間、再度、遠心分離された。次いで、無色の上清は、すべての付随した脂質を取り除くために、ＬＩＰＤＥＸ−１０００カラムに通された。次いで、溶出され、脱脂されたサンプルは、凍結乾燥され、１０００ダルトン分子カットオフフィルターに通された。次いで、ろ過液は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ−ＵＶの３つの段階にかけられた。ＭＳは、ネガティブモードにおいて１００−１０００Ｍｗ（図７）を、および２００−４００ｎｍのＵＶスペクトルをスキャンする。（図６）
カラムは、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）である。溶出液は、３５分間、始めの１００％移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）を通り、１００％Ｂアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１ｖ／ｖ／ｖ）になり、完了された。
【０１０３】
（実施例４）
本実施例は、ヒト被験者の血小板凝集における、キウイフルーツ抽出物の投与の効果を記述する。
【０１０４】
キウイフルーツ抽出物は、上記と同様に調製された。最終調製物収率は、果物１００ｇあたり４−５ｇであり、これは４５−５０％の糖を含んでいた。２０グラムのＫＦＥは、消費するために、２００ｍｌのＴｉｎｅ  Ｍｉｌｋ  Ｏｒａｎｇｅジュースと混合された。６人の健康な成人男女が、研究に採用された。被験者は、２５−６０歳であり、深刻な病歴または止血障害歴は有してなかった。研究への算入の適否は、血小板機能が評価されたあいだに、食事および生活スタイルの質問を用いることによって、およびメディカルスクリーニングによって、評価された。被験者は、３μｍｏｌ  ＡＤＰ／Ｌへの血小板凝集反応によって、決定されるような、高い血小板機能の基準によって選択された。習慣的に食事サプリメント（例えば、魚油）を消費する被験者は、研究に参加する前の最低限１月間は、これらのサプリメントを中止するように求められた。被験者は、参加前の１０日間は、血小板機能に影響することが知られている薬の使用を控えるように指示された。
【０１０５】
書面によるインフォームドコンセントは、すべての被験者から得られた。この研究は、オスロ当局によって許可された。志願者は、一晩断食した。２０ｍＬにおおよそ等しい静脈血のサンプルは、それぞれのサンプリング時点（時間０）において、抜き取られ、次いで、被験者は、２０ｇＫＦＥを含む２００ｍｌオレンジジュースを飲むように求められた。血小板機能の測定のために、血液は、プラスチック注射器に収集され、クエン酸添加血収集チューブに移された（最終クエン酸ナトリウム濃度、１３ｍｍｏｌ／Ｌ）。
【０１０６】
生体外における血小板凝集研究．ＰＲＰ中のＡＤＰ誘起血小板凝集度の測定が、それぞれの時点で、行われた。また、最適以下のＡＤＰ濃度に反応した血小板も、関心の対象であった；これらの条件下において、２相の凝集反応が観察されてもよく、これは、血小板反応の性質についてさらなる情報を提供する。標準化されたＡＤＰ濃度（３μｍｏｌ／Ｌ）が、すべての測定で使用された。生体外の研究のために、処理またはコントロール処置後に観察された血小板凝集における効果は、基準線の値と比較した、抽出物または偽薬の消費後における凝集曲線下の領域のパーセンテージの変化として、表現された。
【０１０７】
【表３】
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【０１０８】
（実施例５）
本実施例は、固相抽出カラムクロマトグラフィーを使用して、遊離キウイフルーツ抽出物から水溶性の糖を除去することについて記述している。
【０１０９】
キウイフルーツ抽出物調製．４７６.３４ｇの重量を有する４個のキウイフルーツ（１クラス、ニュージーランド）は、皮をむかれ、再度、計量された（３８８.１２）。皮をむかれた果肉は、Ｂｒｏｗｎ  Ｔｕｒｂｏ  Ｍｉｘｅｒを使用しておよそ２０〜３０秒間均質化され、ホモジェネート全体は、２０分間、９６℃で煮沸された。煮沸された果実ホモジェネートは、計量され（３１１，０９ｇｒ）、次いで、室温で３０分間、１３０００ｘｇで遠心分離された。次いで、上清は、収集され、凍結乾燥によって乾燥された。乾燥粉末の重量は、１９．６５ｇであった。この分画は、ＫＦＥ−０（キウイフルーツ抽出物−０）と名付けられた。
【０１１０】
ＫＦＥ−０から糖を除去するための固相抽出カラムクロマトグラフィーは、Ｂｏｎｄ  Ｅｌｕｔ  ＥＮＶカートリッジ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して、行われた。このカラムは、果実抽出物から水溶性の糖を取り除くために、繰り返し使用された。
【０１１１】
Ｂｏｎｄ  Ｅｌｕｔ  ＥＮＶカートリッジは、２ｘ４ｍｌの１００％メタノールで調整され、次いで、２ｘ４ｍｌの蒸留水で平衡化された。０．８ｇのＫＦＥ−０は、４ｍｌの蒸留されたＨ２Ｏ中に溶解され、このカートリッジに装填された。次いで、カートリッジは、２ｘ３ｍｌの蒸留水で洗浄され、水溶性の成分は、水によって溶出された。次いで、カートリッジは、原料中の無糖成分の溶出前に、完全に乾かされた。
【０１１２】
次いで、無糖成分は、低速（滴状）の流速下で、３ｘ２ｍｌの１００％メタノールで、溶出され、溶出液は、チューブに収集された。溶出されたサンプルは、４５℃のＮ２のもとで乾燥状態まで、蒸発させられ、次いで、５００μＬのミリＱ水中で、戻された。次いで、水−溶出液およびメタノール−溶出液の両方とも、血小板凝集に対するこれらの抑制活性のために、使用された。無糖成分の収量は、１９．６ｇの凍結乾燥物質から０．４１ｇであった。
【０１１３】
抽出物のＵＶおよびＭＳスペクトルは、実施例３のように準備された。結果は、図８、９および１０において示されている。
【０１１４】
Ｈｅｌｅｎａ  ＡｇｇＲＡＭの血小板凝集計の使用によるＰＲＰにおける血小板凝集検査．すべてのサンプルのｐＨは、血小板凝集におけるこれらの効果を検査する前に、７．４に調節された。
【０１１５】
溶出液の抑制効果は、２５μｌの溶出液（水溶性溶出液およびエタノール溶出液）とともに２２５μｌの血小板を多く含む血漿（ＰＲＰ）を、３０分間、プレインキュベートすることにより決定された。次いで、血小板凝集は、ＰＲＰ中に、２５μｌの５μＭ  ＡＤＰまたは２５μｌの種々の濃度のコラーゲン（１−１０μｇ／ｍｌ）を添加することにより、検査された。水で溶出された糖成分は、効果を有していなかったが、メタノール溶出液は、ＡＤＰおよびコラーゲン誘起血小板凝集に対して、濃度および投与量依存の抑制を示した。図１１は、ＡＤＰ誘起血小板凝集における、種々の濃度のメタノール溶出液の強い抑制効果を示す。これは、明らかに、抗血小板成分は、キウイフルーツの無糖成分であることを実証している。
【０１１６】
（実施例６）
本実施例は、果実中の、無糖活性成分の量の算出を実証している。１９．６ｇの凍結乾燥物質から０．３ｇの活性無糖物質を単離した。１９．６ｇの凍結乾燥物質は４７６グラムの果実から得られているため、活性無糖成分は、キウイフルーツ全体１００ｇあたり０．０６３ｇｍｓの量で存在することを示している。
【０１１７】
（実施例７）
本実施例は、キウイフルーツ抽出物による血漿アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）活性の抑制を実証している。ヒト血漿ＡＣＥ活性におけるＫＦＥ−Ｏの効果は、Ｂｈｕｌｍａｎｎによるキットを用いて、血漿（２５０μＬ）を２５μｌのＫＦＥとインキュベートすることにより測定した。ＫＦＥ（２５μｌ）は、ＡＣＥ活性を、コントロールと比較して１５％有意に抑制した（２５．１＋／−２．１Ｕ／Ｌ  対  ２９．５＋／−５．０Ｕ／Ｌ；ｎ＝５）。
【０１１８】
（実施例８）
本実施例は、男性喫煙者に対するキウイフルーツ投与後の血圧の低下を実証している。
【０１１９】
＜材料および方法＞
対象．地方紙の広告を通じて、参加者を募集した。試験対象は、男性、年齢４５−７５歳、喫煙量１日あたり４５本のシガレット、安定した体重幅（直近１２週の増減が＜４ｋｇ）、かつボディ・マス・インデックス（＜３５ｋｇ ｍ−２）である。除外対象は、菜食料理もしくは近菜食料理を受けてのＣＶＤもしくは他の重体な臨床的障害の何らかの病歴、または介入食事を含む食物に対するアレルギーである。我々は、深刻な、もしくは不安定な、内科的疾患もしくは精神疾患の病歴を有する対象；脂質低下処置、アスピリンもしくは非ステロイド系抗炎症薬を最近用いた対象；減量のために栄養補給剤もしくは薬草を用いている対象；または先の３０日間に薬剤試験を受けていた参加者を除外した。１０２人の研究対象のうち、８人がＢＰ低下薬（アンギオテンシン−ＩＩ受容体アンタゴニスト、ＡＣＥ阻害剤、カルシウムアンタゴニストおよびｂ−ブロッカー）を継続使用していると報告した。薬剤の使用は、ならし期間および介入期間を通じて、安定であった。
【０１２０】
研究計画および介入．研究は、８週間の介入期間、および介入期間に先立つ４週間のならし期間を含む、ランダム化した、並行な計画に従った。ならし期間および介入期間のあいだ、参加者は、ビタミン補給または抗酸化物質補給の使用、またアスピリンを含む痛みもしくは風邪治療薬の使用を避けるよう指示された。さらに、参加者は、ベリー類、ナッツ類、ザクロ類、トマト類、キウイフルーツ、茶およびコーヒー（一日あたり  ＜３杯）の消費を制限するよう指示された。ならし期間の後、対象者は、キウイフルーツのグループ、抗酸化物質の含有量が多い食物のグループ、またはコントロールグループの３つのグループのうちの一つに、ランダムに割り当てられた。
【０１２１】
キウイフルーツのグループは、１日あたり３つのキウイフルーツを受け取った（Actinidia deliciosa; Odd Langdalen Frukt & Groennsaker Engros AS, Oslo, Norway）。これは、一日あたり４６７ｋＪをもたらす、一日当たりおよそ１９５ｇの果物の追加をもたらす。両方の介入グループの対象は、週一回の追跡調査時に介入品目が供給された。抗酸化物質の含有量が多い食物のグループに関し、与えた食料品、および供給された食事抗酸化物質の量が、表４に特定されている。供給された食料が参加者の習慣的な食事において導入されることを手助けするために、抗酸化物質の含有量が多い食物のグループの参加者に対して、訓練された栄養士による個々のカウンセリングが行われた。コントロールグループは自身の習慣的な食事に従うよう指導され、隔週で追跡調査が伴った。研究は、医学研究のための地方倫理委員会（REK Soer）の認証を受けており、全ての参加者は、書面によるインフォームド・コンセントを与えた。研究は、「オスロ―抗酸化物質研究」(NCT00520819)として、臨床研究政府関連機関に登録されている。
【０１２２】
食物摂取．食物摂取は、絵本を使用した７日食物記録を用いて記録した。この食物記録の以前の検証では、報告されたエネルギーおよび栄養素の摂取が、グループレベルにおいて有効であることが示されていた１４。食物記録は、ならし期間の最終週および介入期間の最終週に完了した。平均の毎日の摂取は、栄養省にて開発された食物データベースＡＥ−０７およびＫＢＳソフトウェアシステム（バージョン４．９，２００８）を用いて計算された。食物データベースは、ノルウェー食品成分表の２００６年版に基づいている。抗酸化物質の値は、我々の抗酸化物質食品総合データベースに基づいている１０。食物摂取に関するデータは、各グループの３２人の参加者に関して利用可能である。
【０１２３】
ＢＰ測定．ＢＰは、デジタルＢＰモニター（OMRONHem-705 CP、京都、日本）および適切な血圧計バンドのサイズを用いて、５分間の休息の後に、正看護師により測定された。ＢＰは、三回の測定の平均として算出された。ＢＰは、欧州高血圧協会の「動脈性高血圧管理のための２００７ガイドライン」にしたがって、分類された１５。それによれば、最高血圧が＜１２０ｍｍＨｇまたは最低血圧がｏ８０ｍｍＨｇである場合には、「最適」に分類され；最高血圧が１２０−１３９ｍｍＨｇおよび／または最低血圧が８０−８９ｍｍＨｇである場合には、「正常／正常高」に分類され；そして、最高血圧Ｘ１４０ｍｍＨｇおよび／または最低血圧がＸ９０ｍｍＨｇである場合には、「高血圧」に分類された。
【０１２４】
実験室分析．一晩絶食時の血液サンプルを、介入期間の前および後で、８時から１０時の間に回収した。血漿および血清をすぐに調製し、すぐに分析しない限りは、分析のときまで−７０℃で保管した。血清脂質、酵素活性、ならびにＣＶＤに関連した炎症性パラメータおよび止血作用パラメータの評価方法は、別のところに記載している。
【０１２５】
血小板凝集およびＡＣＥ活性．アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）誘導全血血小板凝集の評価は、クエン酸全血中で、血小板凝集計（Chrono-Log, Haverton, PA, USA）を用いて、１０００ｒｐｍの一定回転速度、３７℃にて、別のところに記載されているように行った７。以前の実験、およびそれぞれの日に評価された多数のサンプルに基づくと、５ｍＭのＡＤＰが用いられた唯一のアゴニストであった７。血液回収後から２時間以内に血小板凝集の評価を行い、分析のときまで、サンプルは室温においた。ＡＣＥ活性は、血清中で、合成基質（ＦＡＰＧＧ）の開裂能力により評価した。アッセイの線形範囲は、０から１７５ＵＩ−１の間である。ＡＣＥ活性は、製造者の使用説明書に従い、解凍した血清中で決定した（ACE kinetic, kit number 01-KK-ACK; Buuhlmann Laboratories AG, Schonenbuch, Switzerland）。これらのアッセイは、＜７％のアッセイ間変動係数を有している。
【０１２６】
統計分析．介入期間におけるグループ間での基準値または変化を比較するために、クラスカル・ワリス一元配置分散分析を用いた。変化（すなわち、介入の効果）は、介入後の値から基準値を差し引くことにより算出した。重要な結果が得られた場合、違いを比較するために、スチューデントｔ−検定またはマンホイットニー・ノンパラメトリック検定を用いた。除外された２人の参加者のデータは分析には含めなかった。全ての統計は、ＳＰＳＳバージョン１８．０を用いて行われた。Ｐ−値ｏ０．０５０は、統計的に有意であるとみなされた。
【０１２７】
＜結果＞
全部で１３７人の対象が最初の広告に応じており、１１８人が適任であると分かり、選別した。このうち、１０２人が研究に含まれている。２人の対象を除外した：１人は、キウイフルーツのグループの者であり、致命的ではない心臓血管の事象のためであり、１人は、抗酸化物質の含有量が多い食物のグループの者であり、承諾が得られなかったためである。全部で１００人の対象が研究を完了した（コントロールグループはｎ＝３４、各介入グループはｎ＝３３；不図示）。
【０１２８】
基準値の特性は、グループ間で類似しており（表５）、介入期間において、ボディ・マス・インデックス、体重または喫煙に変化は見られなかった。両介入食事への順守は良好であった。基準時での食物摂取および介入期間での変化は、表６に挙げられている。基準時では、食物摂取は、グループ間で類似していた。全ての研究対象、ならびに最適血圧の対象、正常／正常高の血圧の対象および高血圧の対象間に関し、基準値、およびＢＰにおける食事介入の効果が表７に示されている。キウイフルーツのグループでは、最高血圧における１０ｍｍＨｇの減少および最低血圧における９ｍｍＨｇの減少（Ｐ＝０．００７およびＰ＝０．０１０；コントロールグループにおける基準線の値からの変化と比較した、キウイフルーツグループにおける基準線からの変化）が全ての研究対象にて観察された。最大の効果は、正常／正常高の血圧の対象および高血圧の対象間で観察された。興味深いことに、最高血圧における１０ｍｍＨｇの減少は、抗酸化物質の含有量が多い食物のグループにおける高血圧の人の間でも観察された（Ｐ＝０．０４５）。さらに我々は、キウイフルーツのグループにおける正常／正常高の血圧である対象の多数、または高血圧の人が、介入の後に有意に減少した（基準値の６５％〜３３％）ことを観察した（Ｐ＜０．０５０；不図示）。抗酸化物質の含有量が多い食物のグループではわずかな変化のみが観察された。血小板凝集およびＡＣＥ活性における食事介入の効果は、表８に示されている。キウイフルーツのグループにおいて、血小板凝集の１５％の減少（Ｐ＜０．００４）およびＡＣＥ活性の１１％の減少（Ｐ＝０．０１３）が観察された。抗酸化物質の含有量が多い食物のグループにおいて同様の効果は観察されなかった。
【０１２９】
血漿中脂質、他の酵素活性、ならびにＣＶＤに関連する炎症性パラメータおよび止血性パラメータにおいては、効果は観察されなかった（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  Ｔａｂｌｅ  ＳＴ１）。
【０１３０】
これらのデータは、男性の喫煙者において、一日当たり３個のキウイフルーツの摂取が顕著な抗高血圧性効果および抗血栓性効果を促進することを実証している。さらに、抗酸化物質の含有量が多い食物を消費した後の高血圧の人の間で、最高血圧における実質的な減少が観察された。
【０１３１】
【表４】
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【０１３２】
【表５】
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【０１３３】
【表６】
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【０１３４】
【表７】
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【０１３５】
【表８】
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【０１３６】
（実施例９）
本実施例は、無糖キウイフルーツ抽出物（ＫＦＥ）のＡＣＥ活性と、合成ＡＣＥ阻害剤であるカプトプリルとの比較を提供する。結果が図１２に示されている。示されるように、およそ１０００倍以上のＫＦＥが必要であるものの、ＫＦＥは、合成剤と類似した用量作用曲線を呈している。より多くの量が必要であるものの、この量は、通常の栄養補助食品の用量範囲内であり、また、ＡＣＥ阻害活性のこの量が、天然に生じる物質を用いて実現できたことは驚くべきことである。
（実施例１０）
本実施例は、種々の処理工程を介したＡＣＥ活性の概要を提供する。表９は、新鮮なキウイフルーツジュースのＡＥ活性を提供する。表１０は、煮沸したキウイフルーツジュースのＡＣＥ活性を提供する。表１１は、無糖キウイフルーツ抽出物のＡＣＥ活性を提供する。表１２は、抽出物に関し、異なる処理段階において質量換算にて調節されたＡＣＥ活性の概要を提供する。示されるように、質量換算にて調節された場合には、処理工程にわたって同等の効力にてＡＣＥ活性が存在する。
【０１３７】
【表９】
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【０１３８】
【表１０】
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【０１３９】
【表１１】
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【０１４０】
【表１２】
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【０１４１】
（実施例１１）
本実施例は、上述の無糖抽出物手法を用いて調製されたキウイフルーツジュースおよびオレンジジュースのＡＣＥ阻害活性の比較を提供する。キウイフルーツ抽出物の効力は、キウイフルーツの場合と同じ処理工程を用いたオレンジ抽出物のものよりも約３００倍高い。表１３および１４参照。
【０１４２】
【表１３】
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【０１４３】
【表１４】
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【０１４４】
（参考文献）
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上記の明細書中で言及されている全ての刊行物および特許は、参照により本明細書に援用される。記載されている本発明の方法およびシステムの種々の修飾および変形は、本発明の範囲および精神から離れることなく、当業者にとって明白であろう。本発明は、特定の好ましい実施形態を組み合わせて説明されているが、特許請求の範囲に記載された発明は、特定の実施形態に不当に制限されるべきでないことは理解されるべきである。事実、本発明の技術分野における当業者にとって明白な、本発明を実施するための記載の様式の種々の修飾は、後述の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１】図１は、キウイフルーツ抽出物の部分分画のための手順から概要を示す。
【図２】図２は、ＡＤＰ活性によって引き起こされた血小板凝集の、抽出物による抑制を示す。
【図３】図３は、アラキドン酸によって引き起こされた血小板凝集の抑制を示す。
【図４】図４は、ヒト血清のＡＣＥ活性におけるＫＦＥの効果を示す。
【図５】図５は、キウイフルーツの脱脂され、限外ろ過され、精製された分画のＵＶスキャンを示す。
【図６】図６は、図５のキウイ抽出物のＵＶスペクトル２００−４００ｎｍスキャンのクロマトグラムを提供する。
【図７】図７は、図５のキウイ抽出物の、ネガティブモードにおける１００−１０００ＭｗＭＳスキャンのクロマトグラムを提供する。
【図８】図８は、キウイフルーツ抽出物の脱糖され、脱脂され、限外ろ過され、精製された分画の、ポジティブモードにおける１００−１０００ＭｗＭＳスキャンのクロマトグラムを提供する。
【図９】図９は、図８のキウイフルーツ抽出物の脱糖され、脱脂され、限外ろ過され、精製された分画の、ネガティブモードにおける１００−１０００ＭｗＭＳスキャンのクロマトグラムを提供する。
【図１０】図１０は、図８のキウイフルーツ抽出物の、脱糖され、脱脂され、限外ろ過され精製された分画の、ＵＶスペクトル２００−４００ｎｍスキャンのクロマトグラムを提供する。
【図１１】図１１は、ＡＤＰ誘起血小板凝集に対する、異なる濃度のメタノール溶出液の強い抑制効果を示す。
【図１２】Ａは、本発明のキウイフルーツ抽出物のＡＣＥ阻害活性の用量作用曲線である。Ｂは、合成薬、カプトプリルのＡＣＥ阻害活性の用量作用曲線である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年10月21日(2014.10.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マタタビ科の果実由来の果実抽出物を含む組成物であって、
上記抽出物が、脱糖されており、かつ生物活性を有するものとして特徴づけられている、組成物。
【請求項２】
上記抽出物が、おおよそ３０％ｗ／ｗ未満の糖、好ましくは、おおよそ５％ｗ／ｗ未満の糖、より好ましくは、おおよそ１．０％ｗ／ｗ未満の糖、さらにより好ましくは、おおよそ０．５％ｗ／ｗ未満の糖を含み、もっとも好ましくは、上記抽出物が、実質的に無糖である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
上記組成物が、保管のあいだ生物活性を維持し、上記生物活性が、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制であるか、またはアンギオテンシン転換酵素の阻害である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
上記果実抽出物が、限外ろ過、熱処理、およびこれらの組み合わせからなる群から選択された方法によって安定化されており、好ましくは、上記熱処理が、少なくとも９０℃に加熱することを含む、請求項１〜３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項５】
上記抽出物が、４℃で２４日間保管後に、インビトロの血小板凝集アッセイにおいて、０日目を基準にして、４％より高い抑制活性を有する、請求項１〜４の何れか一項に記載の組成物。
【請求項６】
４日間、好ましくは少なくとも１８日間、より好ましくは少なくとも２４日間、４℃で保管された場合、新鮮な抽出物分画と比較して、少なくとも８０％の、上記生物活性分子の生物活性を維持することでさらに特徴づけられ、上記生物活性は、インビトロの血小板凝集アッセイにおける血小板凝集の抑制である、請求項１〜４の何れか一項に記載の組成物。
【請求項７】
上記抽出物が、脱脂されている、請求項１〜６の何れか一項に記載の組成物。
【請求項８】
上記分画が、３０００ダルトン未満、好ましくは１０００ダルトン未満の分子量の生物活性分子を有する、請求項１〜７の何れか一項に記載の組成物。
【請求項９】
上記果実抽出物が：
１００％の移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）から１００％のＢアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）への、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）における上記抽出物の液体クロマトグラフィーの３５分間のＵＶスペクトルスキャンにおいて、おおよそ８．３８分およびおおよそ９．２５分で主なピークを示し、好ましくは、図１０において認められる主なＵＶスペクトルピークを示し、および／または
１００％の移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）から１００％のＢアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）への、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）における上記抽出物の液体クロマトグラフィーのポジティブモードスキャンでの３５分間の１００−１０００Ｍｗの質量分析において、おおよそ３０.２６およびおおよそ３０．７１で主なピークを示し、好ましくは、図８において認められる主な全イオン電流クロマトグラムピークを示し、
１００％の移動相（Ａ）水−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）から１００％のＢアセトニトリル−ギ酸（１００：０．１，ｖ／ｖ／ｖ）への、Ｚｏｒｂａｘ１．８μＭパーティクルラピッドレゾリューションＣ１８カラム（４．６ｍｍ×５０ｍｍ、１．８μｍ）における上記抽出物の液体クロマトグラフィーのネガティブモードスキャンでの３５分間の１００−１０００Ｍｗの質量分析において、おおよそ３０．７９で主なピークを示し、好ましくは、図９において認められる、主な全イオン電流クロマトグラムピークを示す、請求項１〜８の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れか一項に記載の組成物を含む、シロップ、溶液もしくは粉末、または、上記組成物、上記シロップ、上記溶液もしくは上記粉末を含む、経口送達賦形剤、機能食品もしくは機能食材もしくは栄養サプリメントであって、
上記機能食品または上記機能食材は、好ましくは、飲料、ベイクドグッズ、プディング、乳製品、菓子、スナック食品、冷凍菓子または冷凍ノベルティー、調理済み冷凍食品、飴、スナック製品、スープ、スプレッド、ソース、サラダドレッシング、調理済み食肉製品、チーズ、およびヨーグルトからなる群から選択され、
上記栄養サプリメントが、ソフトゲルカプセル、ハードシェルカプセル、チュアブルカプセル、ヘルスバー、およびサプリメントパウダーからなる群から選択される、
シロップ、液体もしくは粉末、または、経口送達賦形剤、機能食品もしくは機能食材もしくは栄養サプリメント。
【請求項１１】
血小板の活性および／または凝集によって開始されまたは特徴づけられる病状が、好ましくは、血栓症、動脈硬化症および／またはプラーク形成からなる群から選択される、
血小板の活性化および／もしくは凝集によって開始されもしくは特徴づけられる病状の予防もしくは治療における使用のため、心臓の健康の改善もしくは維持における使用のため、心臓血管の健康の改善もしくは維持における使用のため、循環系の健康の改善もしくは維持における使用のため、または、被験者の血流の改善もしくは維持における使用のため、または被験者の血圧の改善もしくは維持もしくは低下における使用のため、血液希釈における使用のため、または、抗血栓症活性の付与における使用のための、請求項１〜１０の何れか一項に記載の組成物、または、請求項１０に記載のシロップ、粉末、経口送達賦形剤もしくは経口栄養サプリメント、機能食品もしくは機能食材。
【請求項１２】
上記組成物、上記シロップ、上記粉末、上記経口送達賦形剤または上記経口栄養サプリメント、上記機能食品または上記機能食材が、血圧を低下させることまたは高血圧の処置を必要とする被験者に投与され、キウイフルーツまたはキウイフルーツ抽出物の有効量は、おおよそ１個のキウイフルーツの果実全体の同等量より多い、
被験者の血圧の低下または高血圧の処置における使用のための、請求項１〜１０の何れか一項に記載の組成物、または、請求項１０に記載のシロップ、粉末、経口送達賦形剤もしくは経口栄養サプリメント、機能食品もしくは機能食材。
【請求項１３】
上記有効量が、おおよそ３個より多いキウイフルーツ果実全体の同等量、または、おおよそ２個からおおよそ１０個のキウイフルーツ果実全体の同等量、好ましくは、おおよそ３個からおおよそ５個のキウイフルーツ果実全体の同等量を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
上記組成物は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１０週間、２０週間、３０週間、４０週間、および５０週間からなる群から選択される期間にわたって投与される、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１５】
マタタビ属抽出物を生産すること、
上記抽出物が、保管の間に生物活性を維持するような条件下において、上記マタタビ属抽出物を加熱すること、および、
上記加熱することの前または後において上記マタタビ属抽出物を脱糖することを含み、
上記脱糖することが、好ましくは、固相抽出物、発酵、酵素処理およびナノろ過からなる群から選択される工程によって行われ、および／または
上記加熱することが、好ましくは、おおよそ５分より長いあいだの、おおよそセ氏７０度への、おおよそセ氏１００度への、上記分画を加熱することを含み、
上記マタタビ属抽出物は、好ましくは、沈殿分画および上清分画をもたらすために加熱前または加熱後にマタタビ属のジュースまたはマタタビ属のホモジェネートを沈殿させること、および上記生物活性マタタビ属抽出物をもたらすために上記上清分画を保持することによって生産され、好ましくは、上記沈殿させることが、少なくとも３０００ｇの遠心分離を含み、
上記抽出物が、好ましくは、さらに、加熱前または加熱後に限外ろ過によって処理され、好ましくは、上記限外ろ過が、１０００−３０００ダルトンのあいだのカットオフを有する、
請求項１〜９の何れか一項の記載において、安定かつ生物活性を有するものとして定義されたマタタビ属抽出物を生産するための、方法。
【国際調査報告】
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