(57)【要約】  開示された実施形態は、活性化したフマル酸中間体の合成のための改善された方法および化学合成でのその使用に関する。開示された実施形態は、４−ニトロフェニル、ジフェニルホホリルアジド、塩化ピバロイル、クロロスルホニルイソシアネート、ｐ−ニトロフェノール、ＭＥＦ、トリフルオロアセチルおよびクロリン、例えば、エチルフマロイルクロリドを含む活性化基由来のものなどを含めた、活性化したフマル酸エステルの合成ならびに活性化したエステルのインサイチュでの後続の使用を記載している。さらなる実施形態は、改善された収率および反応器処理量を可能にする未単離で未精製の中間体からの置換アミノアルキル−ジケトピペラジンの改善された合成を記載している。
2015519321.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノアルキルジケトピペラジンを生成するステップ；
フマル酸モノエチルの活性化した誘導体を準備するステップ；
アミノアルキル−ジケトピペラジンを活性化したフマル酸モノエチル誘導体と反応させるステップ；
を含む式（１）（Ｒ＝Ｈまたはエチル、ｎ＝３）
【化１】
2015519321.tif 000016
のジケトピペラジンを調製する方法であって、
フマル酸モノエチルの活性化した誘導体が、インサイチュで精製なしでアミノアルキルジケトピペラジンと反応する、方法。
【請求項２】
活性化したフマル酸モノエチルとの反応の前にアミノアルキル−ジケトピペラジンから保護基を除去するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
活性化した誘導体が４−ニトロフェニルエステルである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
活性化した誘導体が、フマル酸モノエチルならびに、ジフェニルホホリルアジド、塩化ピバロイル、クロロスルホニルイソシアネートおよび無水トリフルオロ酢酸を含む群から選択される試薬の反応から得られる混合無水物である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
活性化した誘導体が、モノエチルフマロイルクロリドとピバル酸との反応によって生成される混合無水物である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
式１のジケトピペラジンのエチルエステルの鹸化をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
アミノアルキルジケトピペラジンとの反応の前に、フマル酸モノエチルの活性化した誘導体の単離をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
第１の反応混合物において、フマル酸モノエチルの反応性の求電子性誘導体を準備するステップ；
第２の反応混合物において、有機および無機の金属塩基を含む群から選ばれる適切な塩基と反応させることによって４−ニトロフェノールの塩を生成するステップ；ならびに
精製なしで混合物を合わせるステップ
を含む、フマル酸モノエチルの活性化した４−ニトロフェニルエステルの合成のための方法。
【請求項９】
塩基が無機金属塩基である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
塩基が水酸化ナトリウムである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
反応性の求電子性誘導体がモノエチルフマロイルクロリドである、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
反応性の求電子性誘導体が、モノエチルフマロイル混合無水物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
第１の反応混合物において、フマル酸モノエチルおよびプロトン捕捉剤を適切な溶媒中で混合するステップ；
求電子剤を添加するステップならびに
精製なしで式１のジケトピペラジンの合成においてこの混合物を使用するステップ
を含む、フマル酸モノエチルの混合無水物の合成のための方法。
【請求項１４】
求電子剤が、以下の群：ジフェニルホホリルアジド、塩化ピバロイル、クロロスルホニルイソシアネート、無水トリフルオロ酢酸およびモノエチルフマロイルクロリドから選ばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
プロトン捕捉剤が有機アミンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
溶媒が極性有機溶媒である、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本仮特許出願は、以前のいずれの出願の優先権も主張しない。
【０００２】
本発明は、活性剤、特に生理活性剤を送達するための組成物に関する。開示された実施形態は、化学合成の分野であり、より特定すればエチル−４−ニトロフェニルフマレートの調製のための改善された合成方法および化学中間体としてのその使用に関連する。
【背景技術】
【０００３】
薬物送達は、患者への活性剤の投与における根強い問題である。活性剤を送達するための従来の手段は、生物学的、化学的および物理的なバリアによって厳しく制限されることが多い。典型的に、これらのバリアは、送達が生じる環境、送達の標的の環境または標的自体によって強いられる。
【０００４】
生理活性剤は、このようなバリアに特に脆弱である。例えば、薬剤および治療薬のヒトへの送達において、バリアは、身体によって強いられる。物理的なバリアの例は、標的に到達する前に通過しなければならない皮膚および様々な器官膜である。化学的なバリアとして、ｐＨ変化、脂質二重層および分解酵素が挙げられるが、これらだけには限らない。
【０００５】
これらのバリアは、経口送達系の設計において特に重要である。多くの生理活性剤の経口送達は、胃腸（ＧＩ）管、強力な消化酵素および活性剤不浸透性胃腸膜において変化するｐＨなどの生物学的、化学的および物理的なバリアに対するものではない場合、動物への投与のための最適な経路である。多数の作用剤のうち、典型的に経口投与に適さないものは、カルシトニンおよびインスリンなどの生理活性ペプチド；多糖、詳細には、これだけには限らないが、ヘパリンを含めたムコ多糖；ヘパリン類似物質；抗生物質；およびその他の有機物質である。これらの作用剤は、急速に無効になる、または酸加水分解、酵素などによって胃腸管で崩壊される。
【０００６】
脆弱な薬剤を経口投与するための以前の方法は、腸壁の浸透性を人工的に増加させるためのアジュバント（例えば、レゾルシノールならびにポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルなどの非イオン性界面活性剤）の同時投与、ならびに酵素分解を阻害するための酵素阻害剤（例えば、膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）およびトラジロール）の同時投与に頼っていた。
【０００７】
リポソームも、インスリンおよびヘパリンの薬物送達系として記載されてきた。例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，２３９，７５４；Ｐａｔｅｌら（１９７６），ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．６２，ｐｇ．６０；およびＨａｓｈｉｍｏｔｏら（１９７９），Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  Ｊａｐａｎ，Ｖｏｌ．２６，ｐｇ．３３７を参照されたい。
【０００８】
しかし、薬物送達系の広範囲の使用は：（１）系が、毒性量のアジュバントまたは阻害剤を必要とする；（２）適した低分子量のカーゴ、すなわち活性剤が、入手不可能である；（３）系が、乏しい安定性および不十分な保存期間を呈する；（４）系が、製造するのが困難である；（５）系が、活性剤（カーゴ）を保護できない；（６）系が、活性剤を有害に変質させる；または（７）系が、活性剤の吸収を可能にするまたは促進することができないので、避けられている。
【０００９】
さらに近年では、混合アミノ酸（プロテイノイド）の人工ポリマーのミクロスフェアが、医薬品の送達に使用されている。例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，９２５，６７３は、薬物含有プロテイノイドミクロスフェア担体ならびにこれらの調製および使用のための方法を記載している。これらのプロテイノイドミクロスフェアは、いくつかの活性剤の送達に有用である。
【００１０】
当技術分野において、容易に調製され、多岐にわたる活性剤を送達できる、簡易で安価な送達系の必要性が依然として存在する。有望とされている送達系の１つのクラスは、ジケトピペラジン（ＤＫＰ）である。詳細には、３，６−ビス−置換−２，５−ジケトピペラジンが、肺の体循環に生理活性剤を有効に送達することが示されている。
【００１１】
ＤＫＰおよび投与の経路によって、ＤＫＰ分子は、手近の送達経路のための賦形剤のプロフィールを最適化するために、ジケトピペラジン環に結合した側鎖の置換および／または修飾を必要とし得る。１つのこのような基として、置換アミノアルキル基を有するジケトピペラジンまたはいわゆる３，６−アミノアルキル−２，５−ジケトピペラジンが挙げられる。側鎖アミノ基の置換は、求電子剤との反応を伴うことが多い。多くの因子は、市販品を入手できるかどうかや、大量生産に適切であるかどうか、またはアミノアルキルジケトピペラジンとの後続の反応のために単離することが難しいかどうかなど、適切な求電子剤を選択する。
【００１２】
フマロイル側鎖の、例えば、３，６−アミノアルキル−２，５−ジケトピペラジンへの導入は、賦形剤として特に有利であることが証明されている。しかし、このフマロイル部分の導入は、著しい合成の労力を必要とする。ＤＫＰの機能化のための１つの選択肢は、アミノアルキル基が、ジケトピペラジン賦形剤をさらに修飾するために求核剤として使用することができるという事実を利用することである。エチルフマリルクロリド（ＥＦＣ）は、知られており、市販されているが、酸塩化物の医薬規模での使用に対して不利点がある。不利点のいくつかとして、限られた反応性、純度、市販品の在庫の可能性などが挙げられる。したがって、求電子性部位の反応性を増加させることは有利になり得る。このことを実現するための１つの手法は、フマル酸エチル、エチル−４−ニトロフェニルフマレートまたはその他の活性化したフマル酸エチルのｐ−ニトロフェノールエステルを介することである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】米国特許第４，２３９，７５４号明細書
【特許文献２】米国特許第４，９２５，６７３号明細書
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｐａｔｅｌら（１９７６），ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．６２，ｐｇ．６０
【非特許文献２】Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら（１９７９），Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  Ｊａｐａｎ，Ｖｏｌ．２６，ｐｇ．３３７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
さらに、前述のジケトピペラジンなどの賦形剤の製造の労力を含め、任意の生産規模の化学的製造の労力に関してかなりのコストおよび時間的制約がかかる。したがって、最適な物理化学的特性を有する賦形剤だけでなく、これらの化学品の最適化された生産規模の製造が必要とされている。このことは、原料および反応コストだけでなく、標的分子を合成する際の反応器の処理量および延長される時間も考慮しなければならない。化学プロセスに対する全収率を最大化するための一般的な取り組みは、化学経路に沿って各中間体の収率および純度を最大化することを伴う。このことは、通常、後続の反応の前に各中間体を単離および精製することを示唆している。この取り組みをすることによって、期待されることは：ａ）各ステップからの副産物および未反応の出発物質が、後から導入された中間体または出発物質と相互作用するのを阻止し；ｂ）最終標的の精製が、先の副産物、出発物質などを前もって除去しておくことによって単純化され、それによって、起こり得る精製による損失の量を低減することによって、最終標的の収率を最大化することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
このことおよび従来技術のその他の満たされていない必要性は、以下でより詳細に記載されている化合物および方法によって満たされる。置換３，６−アミノアルキル−２，５−ジケトピペラジンの医薬品賦形剤としての使用は、かなり有望である。特に興味深いのは、式Ｉ（Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＯＯＲ３）によって記載されたものなどのカルボキシ置換アミノアルキル−ジケトピペラジンである。
【００１７】
【化１】
2015519321.tif 000003
カルボキシ置換アミノアルキル−ジケトピペラジン（Ｒ１＝Ｒ２＝ＲＣＯＯＨ）の合成は、単離されたアミノアルキル−ジケトピペラジン（例えば式２の化合物）またはその酸性塩（式２など）を介して進行できる。次いで、アミンは、適切な求電子剤（例えばエチル−４−ニトロフェニルフマレート，３）と反応し、置換アミノアルキル−ジケトピペラジン（化合物４Ｒ＝Ｅｔなど）をもたらし、次いで、標的分子に応じて、さらなる機能化または保護基の除去を経て、置換アミノアルキル−ジケトピペラジン（化合物４  Ｒ＝Ｈなど）を得ることができる。
【００１８】
【化２】
2015519321.tif 000004
一般に、複数のステップの化学合成における全収率を最適化する目的は、後続の反応の前に各中間体分子の単離および精製によって実現される。この取り組みは：ａ）中間体または出発物質と反応させる先行するステップの副産物；およびｂ）標的分子のより複雑な単離および精製による損失による、最終標的の損失を回避することが期待される。
【００１９】
開示された実施形態は、インサイチュで生成された中間体の使用を介する置換ジケトピペラジン医薬品賦形剤の合成のための方法を提供する。実施形態は、一般的な考えとは反対に、伝統的な、単離−精製型の方法より高い収率および反応器処理量を達成する結果をもたらす。より詳細には、実施形態は、インサイチュでおよび精製なしでのフマロイル中間体の生成および使用のための方法、ならびにインサイチュでおよび単離または精製なしでのアミノアルキル−ジケトピペラジンの生成および使用のための方法を示す。
【００２０】
１つの実施形態において、フマル酸モノエチル（ＭＥＦ）の活性化したエステルの調製のための方法が、開示される。その他の実施形態は、ＭＥＦの無水物の生成および中間体としてのその使用に関する。さらなる実施形態は、ＭＥＦの活性化したエステルの調製およびインサイチュの使用に関する。さらなる実施形態は、４−ニトロフェノールの反応性塩の生成を介するエチル−４−ニトロフェニルフマレートの生成に関する。さらなる実施形態は、活性化した４−ニトロフェニルエステルからのＭＥＦの活性化したエステルの生成に関する。１つの実施形態において、活性化基、作用剤または反応物質は、ジフェニルホホリルアジド、塩化ピバロイル、クロロスルホニルイソシアネート、ｐ−ニトロフェノール、ＭＥＦ、トリフルオロアセチルおよびクロリン、例えばエチルフマロイルクロリドを含めたいくつかの反応物質から選択できるが、これらだけには限らない。
【００２１】
開示された実施形態は、ＭＥＦの反応性の求電子性誘導体を準備するステップ；アルコールを、有機および無機の金属塩基を含む群から選ばれる適切な塩基と反応させて、アルコールの塩を生成するステップ；フマル酸誘導体とナトリウム塩を適切な溶媒中で反応させるステップを含む、ＭＥＦの活性化したエステルの合成のための方法を含む。さらなる実施形態は、アルコールが、４−ニトロフェノールであり；塩基が、無機金属塩基であり；塩基が、水酸化ナトリウムであり；塩が、ナトリウム塩である方法を含む。
【００２２】
開示された実施形態は、第１の反応混合物において、求核性のアルコールおよび酸無水物を適切な溶媒中で混合するステップ；プロトン捕捉剤を添加するステップ；第２の反応混合物において、ＭＥＦおよびプロトン捕捉剤を適切な溶媒中で混合するステップ；ならびに第１の混合物を第２の混合物に添加するステップを含む、ＭＥＦの活性化したエステルの合成のための方法を含む。さらなる実施形態は、アルコールが、アリール環上に電子求引置換基を有するフェノールであり；アルコールが、４−ニトロフェノールであり；プロトン捕捉剤が、有機アミンであり；溶媒が、極性有機溶媒である方法を含む。
【００２３】
開示された実施形態は、アミノアルキル−ジケトピペラジン中間体を生成するステップ；ＭＥＦの活性化したエステルを生成するステップ；アミノアルキル−ジケトピペラジンを活性化したエステルと反応させるステップ；を含む、置換アミノアルキル−ジケトピペラジンを調製するための方法であって、ここで、エチルフマレートの活性化したエステルが、インサイチュで単離または精製なしで反応する方法を含む。さらなる実施形態は、４−ニトロフェニルエステルである活性化したエステルとの反応の前に、アミノアルキル−ジケトピペラジンを脱保護するステップをさらに含む方法であって；活性化したエステルを生成するステップが、ＭＥＦの混合無水物およびその他の酸を生成し、混合無水物とアルコールを反応させてＭＥＦの活性化したエステルを作製するステップを含み、混合無水物がトリフルオロアセチル−エチル−フマレートである方法を含む。
【００２４】
同一の部分が同一の参照番号で識別される添付の図面を参照すれば、本発明の例示的な実施形態のより良好な理解が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本明細書に記載された実施形態を使用する、置換３，６−アミノアルキル−２，５−ジケトピペラジンの合成を示すスキームである。
【図２】パートＡで具体化した反応に対する最適比を求めるために調査された一連のアセトン／水の混合物に対する実験からの結果を示す図である。
【図３】得られた式４の化合物の品質に対するｐ−ニトロフェノール（ｐ−ＮＰ）の反応物質の濃度の効果を示すグラフである。
【図４】パートＡ［上記と同様］のｐＨ制御の効果対反応中にｐＨ制御を行わなかった効果を示すグラフである。
【図５】周囲環境での反応温度対５０℃に上昇させた温度での反応温度を用いて、パートＢから作製した生成物の品質を比較する実験からの結果を示す図である。
【図６】ジケトピペラジン中間体のＴＦＡ脱保護に対するアセトン／水の比を変更した場合に得られる結果を表示したグラフである。
【図７】反応濃度がＴＦＡ脱保護ステップ中に変更される場合の式４の化合物の特徴に対するデータを表すグラフである。
【図８】本明細書で開示された反応実施形態によって得られた式４の化合物の品質に対するエチル−４−ニトロフェニルフマレートの変化を比較した結果を表すグラフである。
【図９】式４の化合物を形成する際に、粗製のまたは再結晶化したＴＦＡ−ＤＫＰを使用して得られた結果を表すグラフである。
【図１０】式４の化合物の全体的な品質を、従来の方法を使用して得られた場合対本明細書に記載されたインサイチュの手順を使用して得られた場合で比較したグラフである。
【図１１】置換アミノアルキル−ジケトピペラジンに対する合成の実施形態を示す化学スキームである。
【図１２】活性化したＭＥＦ混合無水物の調製に続いてアミノアルキル−ジケトピペラジンへの添加を示す化学スキームである。
【図１３】異なる条件下：（ａ）溶媒、（ｂ）濃度、（ｃ）ＴＥＡの当量、（ｄ）ＣＳＩの当量、（ｅ）ＣＳＩ添加の時間、（ｆ）反応温度での無水物形成に関するデータの表を示す図である。
【図１４】変更された条件下：（ａ）塩基、（ｂ）溶媒、（ｃ）ＴＨＦ／水の比、（ｄ）反応時間／温度、（ｅ）添加順の効果での、置換アミノアルキル−ジケトピペラジンの形成に関するデータの表を示す図である。
【図１５】ＭＥＦの活性化したリン酸無水物を介した４（Ｒ＝Ｅｔ）の生成のための化学スキームを示す図である。
【図１６】（ａ）から（ｅ）は、異なった条件下で図１５に示したスキームに対するデータの表を示す図である。
【図１７】置換ジケトピペラジンを得るための、ＭＥＦ無水物の生成および後続の反応を示す化学スキームである。
【図１８】（ａ）から（ｄ）は、ＭＥＦ無水物を生成するために使用した異なった条件に対する結果を示す図である。
【図１９】（ａ）から（ｆ）は、置換ジケトピペラジンを得るために、ＭＥＦ無水物を反応させるのに使用した異なった条件に対する結果を示す図である。
【図２０】置換ジケトピペラジンを得るための、ＭＥＦ混合無水物の生成および後続の反応を示す化学スキームである。
【図２１】（ａ）から（ｄ）は、ＭＥＦ混合無水物を生成するために使用した異なった条件に対する結果を示す図である。
【図２２】（ａ）から（ｆ）は、置換ジケトピペラジンを得るために、ＭＥＦ混合無水物を反応させるのに使用した異なった条件に対する結果を示す図である。
【図２３】置換ジケトピペラジンの生成のためのＭＥＦ混合無水物の使用および後続のＭＥＦ部分のエステルの鹸化に対する化学スキームを示す図である。
【図２４】（ａ）から（ｇ）は、鹸化した置換ジケトピペラジンの合成で使用した異なった条件に対する結果を示す図である。
【図２５】ジケトピペラジンのインサイチュの脱保護後の置換ジケトピペラジンの生成のためのＭＥＦ混合無水物の使用に対する化学スキームを示す図である。
【図２６】ジケトピペラジンのインサイチュの脱保護および後続のエステル部分の鹸化後の、置換ジケトピペラジンの生成のためのＭＥＦ混合無水物の使用のための化学スキームを示す図である。
【図２７】アミノアルキル−ジケトピペラジンとＥＦＣ間の反応に続いてエチル部分の鹸化を示す化学スキームである。
【図２８】図２７に示した生成物を沈殿させるために使用した４つの酸に対する結果を示す図である。
【図２９】（ａ）および（ｂ）は、ＥＦＣとアミノアルキル−ジケトピペラジンをカップリングするために使用した異なった条件に対する結果を示す図である。
【図３０】アミノアルキル−ジケトピペラジンのインサイチュの脱保護に続いてＥＦＣとのカップリングに対する化学スキームを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
一般に、複数のステップの化学合成における全収率を最適化する目的は、後続の反応の前に各中間体分子の単離および精製によって実現される。この取り組みは：ａ）中間体または出発物質と反応させる先行するステップの副産物；およびｂ）標的分子のより複雑な単離および精製による損失による、最終標的の損失を回避することを期待している。
【００２７】
開示された実施形態は、インサイチュで生成された中間体の使用を介する置換ジケトピペラジン医薬品賦形剤の合成のための方法を提供する。実施形態は、一般的な考えとは反対に、伝統的な、単離−精製型の方法より高い収率および反応器処理量を達成する結果をもたらす。より詳細には、実施形態は、インサイチュでおよび精製なしでのフマロイル中間体の生成および使用のための方法、ならびにインサイチュでおよび単離または精製なしでのアミノアルキル−ジケトピペラジンの生成および使用のための方法を示す。本明細書で開示された実施形態において、方法は、単純化された１ステップのプロセスにおいて活性化したＭＥＦを合成するために提供される。実施形態において、活性化基、作用剤または反応物質は、ジフェニルホホリルアジド、塩化ピバロイル、クロロスルホニルイソシアネート、ｐ−ニトロフェノール、ＭＥＦ、トリフルオロアセチルおよびクロリン、例えばエチルフマロイルクロリドを含めたいくつかの反応物質から選択され得るが、これらだけには限らない。例示的な実施形態において、エチルフマロイルクロリドは、電子求引部分を含有するフェノール（ｐ−ニトロフェノールなど）と反応して、ＭＥＦの活性化したエステルを形成し、次いで、エステルは、求電子剤をインサイチュで使用して、フマリル部分を導入する。別の態様において、活性化したフマル酸エステルは、４−ニトロフェノールなどの反応性アルコールのナトリウム塩を使用して生成される。このエステルは、カップリング反応においてインサイチュで使用することもできる。
【００２８】
より良好に理解するために図面に戻ると、図１は、エステル置換アミノアルキル−ジケトピペラジンの生成のためのスキームを示す。このことなどのジケトピペラジンの合成は、通常、２つ目の中間体の両方の単離後、アミノアルキル−ジケトピペラジンの活性化したエステルとのカップリングを伴う。開示された実施形態は、改善された収率および反応器処理量をもたらすエステル置換アミノアルキル−ジケトピペラジンおよび同様のジケトピペラジンの合成のための改善された方法を例示している。
【実施例】
【００２９】
エチルフマロイルクロリドおよび４−ニトロフェノールのカップリング：１Ｌの四ツ口丸底のフラスコに、４−ニトロフェノール１１．２０ｇ（８０．５１ｍｍｏｌ）、水９０ｍＬおよびアセトン６９ｍＬを装入した。窒素下で撹拌しながら、炭酸ナトリウム１２．８０ｇ（１２０．８ｍｍｏｌ）の脱イオン水９０ｍＬ中溶液を、反応物に添加した。アセトン２１ｍＬ中のエチルフマリルクロリド（ＥＦＣ）（１７．０ｍＬ、ｄ＝１．１６ｇ／ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）を、付加ロートを用いて混合物に添加した。２５−３３℃の発熱を、ＥＦＣの添加中に観測した。ＥＦＣの添加が進むにつれて、反応混合物は、黄色から無色に色が薄くなった。ＥＦＣの添加の終了時、反応物のｐＨは、７−７．５であった。ＥＦＣの添加が完了したおよそ１５分後、反応物を脱イオン水４５０ｍＬで希釈した。沈殿物が、２７℃で形成した。混合物を、１５分保持し、次いで、固体を単離し、脱イオン水（３×２２０ｍＬ）で洗浄して、５０℃の真空オーブン中で、１時間乾燥させた。生成物を、重量パーセント純度に対して分析した。
【００３０】
エチル−４−ニトロフェニルフマレートを生成するためのＥＦＣおよび４−ニトロフェノールのカップリングを、合計８つの実験で評価した。塩基および溶媒系を、実験全体で一定に保持し；反応およびクエンチ時間を変更した。ＥＦＣおよび４−ニトロフェノールの間の反応のための時間が提供されない場合、生成物の収率は、増加するように思われる。しかし、このことは、生成物と共に過剰な炭酸ナトリウムを単離することによる可能性があり；これらの材料のｗｔ％の純度が低いことが、この仮定を支えている。１５−６０分の反応時間は、良好なエチル−４−ニトロフェニルフマレートの収率および純度（それぞれ＞９６％および＞９４ｗｔ％）をもたらした。同様に、１５−４５分のクエンチ時間は、良好な生成物の品質をもたらした。
【００３１】
【表１】
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【００３２】
エチルフマリルクロリドおよび４−ニトロフェノールのカップリングに続いて、脱保護したＤＫＰとのインサイチュの使用
パートＡ（インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートの形成）：１Ｌの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素注入口を備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。ｐ−ニトロフェノール（９．１８ｇ，０．０６６ｍｏｌ）およびアセトン（１０ｍＬ）を、フラスコに装入した。次いで、水（２５ｍＬ）に溶解した水酸化ナトリウム（２．９０ｇ、０．０７３ｍｏｌ）を、反応混合物に添加した。水酸化ナトリウムの添加中、約１５℃の発熱が観測され、反応混合物は、透明な黄色の溶液から黄色がかったオレンジ色の懸濁液／スラリーに変わった。添加が完了した後、反応混合物を、２０℃に冷却し、アセトン（１０ｍＬ）中のＥＦＣ（８．７８ｇ、０．０５４ｍｏｌ）を、５−１０分かけて付加ロートを介して添加した。ＥＦＣの添加中、約１５℃の発熱が観測され、反応混合物は、オレンジ色から黄色に変わった；固体を、添加後約２０分で観測した。ＥＦＣの添加の終了時の反応混合物のｐＨは、７−８であった。反応混合物を、１時間室温で撹拌した後に、さらなるアセトン（３０ｍＬ）を添加して、沈殿した０２２を溶解した。
【００３３】
パートＢ（粗製の４の形成）：２５０ｍＬのエルレンマイヤーフラスコ中で、水酸化ナトリウム（８．８２ｇ、０．４４ｍｏｌ）の水（２５ｍＬ）中溶液を、アセトン（１０ｍＬ）で希釈した。アミノアルキルジケトピペラジン（式１：Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ；ｎ＝３）（７．９８ｇ、０．０２１ｍｏｌ）を、エルレンマイヤーフラスコに装入した。中和したジケトピペラジン溶液を、インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートを入れた丸底フラスコに装入して；ジケトピペラジンのフラスコを、水（５ｍＬ）で反応器中に洗い流した。反応混合物を、５０℃に加熱し、１時間その温度で保持し、約３０℃に冷却し、次いで、水（５０ｍＬ）でクエンチした。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×１００ｍＬ）およびアセトン（２×１００ｍＬ）で洗浄して、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。反応収率、ｗｔ％純度および面積％純度を、監視した。
【００３４】
図２は、パートＡに記載した反応（エチルフマロイルクロリドおよびｐ−ニトロフェノールの間の反応）に対する最適比を求めるために調査した一連のアセトン／水の混合物に対する結果を示す。反応は、水がない場合はうまく進行しない。結果は、１：１．２５のアセトン／水の比が、バランスのとれた高い収率および純度をもたらすことを示唆している。このことは、水の状態の水酸化ナトリウムは、エステルの鹸化の一般的な方法であるが、エステルが形成し今後の反応に対して残存するので、驚くべきことである。
【００３５】
図３は、得られた４の品質に対する反応濃度の結果のグラフを示す。テストした中間の条件（２．８ｍＬ溶媒／ｍｍｏｌ  ｐ−ＮＰ）が、良好なバランスの置換アミノアルキル−ジケトピペラジンの収率、純度および反応器処理量をもたらした。高濃度では、反応器処理量は増加したが、置換アミノアルキル−ジケトピペラジンの収率および純度は、低下した；低濃度では、ｗｔ％純度は、わずかに低くなった。テストした中間の濃度は、反応器空間１Ｌ当たり約３６ｇの４（Ｒ＝Ｅｔ）をもたらし、これは、従来の反応よりも約３０％良好な処理量であった。
【００３６】
図４は、パートＡの反応のｐＨを制御した結果対反応中にｐＨ制御をしなかった結果のグラフを示す。反応ｐＨがＥＦＣの添加中７．５で制御された場合対ｐＨが制御されなかった場合の実験で、４の収率または純度に有意な差異は得られなかった。
【００３７】
図５は、パートＢから作製した生成物の品質の、周囲環境での反応温度対５０℃に上昇させた反応温度を比較した結果を示す。結果は、上昇させた温度がより良好な品質をもたらすことを示している。
【００３８】
これらの研究は、ＥＦＣおよびｐ−ＮＰを合わせて、活性化エステルを形成し、次いで、水酸化ナトリウムを塩基として使用してアミノアルキル−ジケトピペラジンで処理し、知られているプロセス（２つ目の中間体を単離し、最終カップリングのためにＮａ２ＣＯ３を利用すること）と同等の収率および純度でおよびより良好な処理量で粗製の置換アミノアルキル−ジケトピペラジンを形成することができることを実証した。水酸化ナトリウムを用いた結果は、炭酸ナトリウムを用いて得られた結果と同等であった。
【００３９】
インサイチュのＴＦＡ−ＤＫＰ脱保護に続いてエチル−４−ニトロフェニルフマレートのインサイチュの使用：パートＡ（インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートの形成）：１Ｌの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素注入口を備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。ｐ−ニトロフェノール（９．１８ｇ、０．０６６ｍｏｌ）およびアセトン（１０ｍＬ）を、フラスコに装入した。次いで、水（２５ｍＬ）に溶解した水酸化ナトリウム（２．９０ｇ、０．０７３ｍｏｌ）を、反応混合物に添加した。水酸化ナトリウムの添加中、約１５℃の発熱が観測され、反応混合物は、透明な黄色の溶液から黄色がかったオレンジ色の懸濁液／スラリーに変わった。添加が完了した後、反応混合物を２０℃に冷却し、アセトン（１０ｍＬ）中のＥＦＣ（８．７８ｇ、０．０５４ｍｏｌ）を、５−１０分かけて付加ロートを介して添加した。ＥＦＣの添加中、約１５℃の発熱が観測され、反応混合物は、黄色がかったオレンジ色から黄色の懸濁液／スラリーに変化した。ＥＦＣの添加の終了時の反応混合物のｐＨは、７−８であった。反応混合物を、１時間室温で撹拌した後、さらなるアセトン（１５ｍＬ）を添加して、沈殿したエチル−４−ニトロフェニルフマレートを溶解した。
【００４０】
パートＢ（粗製の４の形成）：２５０ｍＬの丸底フラスコに、保護されたジケトピペラジン（式１、Ｒ１＝Ｒ２＝ＴＦＡ；ｎ＝３、ＴＦＡ−ＤＫＰ）（９．６８ｇ、０．０２２ｍｏｌ）およびアセトン（２５ｍＬ）を装入した。水（３０ｍＬ）に溶解した水酸化ナトリウム（２．１６ｇ、０．０５４ｍｏｌ）を、ＴＦＡ−ＤＫＰのスラリー／懸濁液に添加した。混合物を、室温で３０分撹拌した。得られた透明な黄色の溶液を、インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートを入れたフラスコに添加した。ＴＦＡ−ＤＫＰフラスコを、水（１０ｍＬ）を用いて反応器中に洗い流した。反応混合物を、４５℃に加熱して、１時間その温度で保持し、約３０℃に冷却し、水（５０ｍＬ）でクエンチした。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×１００ｍＬ）およびアセトン（２×１００ｍＬ）で洗浄して、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。反応収率、ｗｔ％純度および面積％純度を、監視した。
【００４１】
図６は、ジケトピペラジン中間体のＴＦＡ脱保護に対するアセトン／水の比を変更した場合に得られる結果を表示したグラフを示す。結果は、ＴＦＡ−ＤＫＰに対する１：１．１２のアセトン／水の比が最高の４（Ｒ＝Ｅｔ）の収率および純度をもたらしたことを示唆した。
【００４２】
図７は、反応濃度が、ＴＦＡ脱保護ステップ中に変更される場合の４の品質の結果を表すグラフを示す。テストした中間の条件の１つ（７．９５ｍＬ溶媒／ｍｍｏｌ  ＴＦＡ−ＤＫＰ）は、最良のバランスの４（Ｒ＝Ｅｔ）の収率、純度および反応器処理量をもたらした。より高い濃度では、反応器処理量は増加したが、４（Ｒ＝Ｅｔ）のｗｔ％純度は、低下した；より低い濃度は、同等の収率および純度をもたらしたが、より乏しい反応器処理量をもたらした。７．９５ｍＬ溶媒／ｍｏｌ  ＴＦＡ−ＤＫＰの反応濃度は、反応器空間１Ｌ当たり約４０ｇの４をもたらし、これは、従来の４（Ｒ＝Ｅｔ）反応よりも約４０％良好な処理量であった。
【００４３】
図８は、得られた４の品質に対するエチル−４−ニトロフェニルフマレートの装入を比較した結果のグラフである。この結果は、装入を約２．５モル当量を超えて増加させた場合に、全体的な品質の有意な向上がないことを示している。
【００４４】
図９は、４を形成する際に、粗製のまたは再結晶化したＴＦＡ−ＤＫＰを使用して得られた結果のグラフである。この結果は、中間のＴＦＡ−ＤＫＰの純度が、４の品質に対してごくわずかな効果を有したことを示している。
【００４５】
これらの研究は、インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートが、塩基として水酸化ナトリウムを用いて、脱保護されたＴＦＡ−ＤＫＰとカップリングされ得ることを実証した。現在のプロセスと比較して、この研究において特定された最良の条件は、同等の純度だがより良好な収率および反応器処理量（４０％高い）で４をもたらす。
【００４６】
図１０は、４の全体的な品質を、従来の方法を使用して得られた場合対インサイチュの手順を用いて得られた場合で比較したグラフである。このグラフから、インサイチュのスキームが、より高い品質の生成物を生成し、反応器処理量を著しく増加させることが明らかである。
【００４７】
以下の表は、エチル−４−ニトロフェニルフマレートとアミノアルキル−ジケトピペラジンとのカップリングからの結果を示す。下から６つの反応を、ＥＦＣ  ｐ−ＮＰおよびＴＦＡ−ＤＫＰを使用して、インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートを使用して実行した。
【００４８】
【表２】
2015519321.tif 000006
【００４９】
［実施例４］
カップリングのためのＭＥＦ、ＴＦＡＡおよびｐ−ＮＰ、ＮａＯＨからの４の実験的な調製（図１１）
パートＡ：２５０ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フラスコに、ｐ−ニトロフェノール（ｐ−ＮＰ、１０ｇ）および無水トリフルオロ酢酸（ＴＦＡＡ、１６．６１ｇ、１１ｍＬ）を装入して、撹拌を開始した。得られた黄色のスラリーを、トリエチルアミン（ＴＥＡ、６００μＬ）で処理した。約１２℃の発熱を、ＴＥＡの添加後に観測した。溶液を、約３０分（形成が完了した指標である、透明になるまで）撹拌した。
【００５０】
パートＢ（インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートの形成）：２５０ｍＬの四つ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置、窒素ヘッドを備えた付加ロートおよび還流凝縮器を装備した。フマル酸モノエチル（ＭＥＦ、１０．３６ｇ）およびアセトン（９ｍＬ）を、フラスコに装入した。ＴＥＡ（１６．３３ｍＬ）を、フラスコに装入し；ＴＥＡの添加の後、約１５℃の発熱を観測した。得られた透明な溶液を、２０℃に冷却し、パートＡの溶液を、付加ロートを介してゆっくり添加した。反応温度を、添加の継続時間中、３０℃より低く維持した。パートＡのフラスコを、アセトン（３ｍＬ）で洗い流し、洗い流したものを、反応フラスコに添加した。反応混合物を、温度を２０−３０℃の間に維持しながら、３０分撹拌した。
【００５１】
パートＣ（粗製の４（Ｒ＝Ｅｔ）の形成）：２５０ｍＬの丸底フラスコに、ＴＦＡ−ＤＫＰ（１２．６６ｇ）およびアセトン（２５ｍＬ）を装入した。水（３０ｍＬ）に溶解した水酸化ナトリウム（２．８３ｇ）を、ＴＦＡ−ＤＫＰスラリーに添加した。混合物を、室温で約３０分撹拌した。得られた透明な黄色の溶液を、インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートを入れたフラスコに添加した。ＴＦＡ−ＤＫＰフラスコを、水（１０ｍＬ）を用いて反応器中に洗い流し、さらなるアセトン（２３ｍＬ）および水（３５ｍＬ）を、反応混合物に装入した。反応混合物を、４５℃に加熱し、その温度で１時間保持し、約３０℃に冷却し、水（５０ｍＬ）でクエンチして、さらに３０分撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×１００ｍＬ）およびアセトン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。反応収率、ｗｔ％純度および面積％純度を、監視した。
【００５２】
まず、インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートを、ＭＥＦおよびｐ−ニトロフェニルトリフルオロアセテートから生成し、次いで脱保護されたＴＦＡ−ＤＫＰとカップリングした（２）。得られた粗製の４（Ｒ＝Ｅｔ）を、収率６３％および純度８５ｗｔ％で得た。テストした最初の条件は、反応器空間１Ｌ当たり約３６ｇの４をもたらし、これは現在のプロセスより約３５％良好な処理量であった。
【００５３】
アセトンの代替のＴＨＦは、より低い生成物収率だが、同等の純度をもたらし；トランス異性体含有量を、この試料中で上昇させた。インサイチュのエチル−４−ニトロフェニルフマレートの形成ステップにおけるさらなるＴＦＡＡの使用は、４（Ｒ＝Ｅｔ）の収率または純度を改善することができなかった。
【００５４】
【表３】
2015519321.tif 000007
【００５５】
この表から、活性化したＭＥＦのインサイチュの生成および使用が、良好な収率、より重要なことには改善された処理量をもたらしたことは明らかである。
【００５６】
［実施例５］
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素注入口を備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フマル酸モノエチル（ＭＥＦ、５ｇ）、乾燥ジクロロメタンまたはＴＨＦ（１０ｍＬ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ、１２ｍＬ）を、フラスコに装入した。発熱を、ＴＥＡの添加中に観測した。透明な反応混合物を、氷浴中で５℃に冷却した。クロロスルホニルイソシアネート（ＣＳＩ、４．９６ｇ）の乾燥ジクロロメタン１０ｍＬ中溶液を、２０−３０分かけて添加した。添加が完了した後、反応混合物を、３時間１０℃より低く保持した。ＤＣＭを使用する反応のために、粗製のＭＥＦ無水物を、真空で溶媒を除去することによって単離した。溶媒としてＴＨＦを使用する反応のために、ＭＥＦ無水物を、さらなる操作なしで使用した。
【００５７】
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フラスコに、２（５．４７ｇ）および炭酸ナトリウム（８．９０ｇ）の水（８０ｍＬ）中溶液を装入した。ステップ１で得られた活性化した無水物を、ＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解して、フラスコに添加した。反応混合物を、終夜室温で撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（５０ｍＬ）およびアセトン（２０ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。反応収率、ｗｔ％純度および面積％純度を、監視した。アッセイ補正した収率を、収率にｗｔ％純度をかけることによって算出した。
【００５８】
図１２は、活性化したＭＥＦ無水物の生成および後続のジケトピペラジンとの反応に対する化学スキームを示す。
【００５９】
図１３ａ−ｆは、変更した条件下でのＭＥＦ無水物形成に関する結果を示す。溶媒、反応濃度、ＴＥＡおよびＣＳＩの量、添加時間および添加温度を調査した。図１３ａは、ＤＣＭおよびアッセイ補正した同等の収率より高いｗｔ％純度でＭＥＦ活性化無水物をもたらすことを示唆している。その他のテストしたパラメーター（図１３ｂ−ｆ）は、アッセイ補正した収率または面積％純度に影響を及ぼさなかった。
【００６０】
図１４ａ−ｅは、ＣＳＩ−ＭＥＦ無水物およびアミノアルキル−ジケトピペラジンの使用に対する結果を示す。ＭＥＦ活性化無水物を、溶媒としてＴＨＦを使用してインサイチュで形成し、次いで２の塩基性溶液に添加して、４（Ｒ＝Ｅｔ）を生成した。
【００６１】
３つの塩基：トリエチルアミン、炭酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウムを評価し、その結果は図１４ａに示される。水酸化ナトリウムは、炭酸ナトリウムより高いアッセイ補正した収率で４（Ｒ＝Ｅｔ）を作製し；７２時間の反応時間後に全く材料が得られなかったので、トリエチルアミンは、この反応には適さなかった。
【００６２】
３つの溶媒：ＴＨＦ、ＤＣＭおよびアセトンを評価し、その結果は図１４ｂに示される。ＴＨＦは、テストしたその他の溶媒より高いアッセイ補正した収率および純度で４（Ｒ＝Ｅｔ）をもたらした。加えて、反応は、水がない場合はうまく進行しなかったので、いくつかの異なる水／ＴＨＦ混合物を調査した。しかし、水の添加は、収率または生成物の品質を改善したようには思われなかった（図１４ｃ）。
【００６３】
反応時間および温度の異なる組合せも調査した。高い反応温度は、わずかな４をもたらし；室温では、アッセイ補正した収率は、最大１８時間に時間を伸ばすと増加した（図１４ｄ）。
【００６４】
図１５は、活性化したＭＥＦ無水物の生成および後続のジケトピペラジンとの反応のための化学スキームを示す。
【００６５】
実施例：活性化したＭＥＦリン酸無水物を使用した４（Ｒ＝Ｅｔ）の調製
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フマル酸モノエチル（ＭＥＦ、５ｇ）、ＴＨＦ（１５ｍＬ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ、１０ｍＬ）を、フラスコに装入した。発熱を、ＴＥＡの添加中に観測した。ジフェニルリン酸アジド（ＤＰＰＡ、９ｍＬ）を、反応混合物に添加して、続いて炭酸ナトリウム（１８．２３ｇ）および水（６０ｍＬ）の溶液に溶解した２の溶液（２８．２１ｇ）を直ちに添加した。０１６を入れたフラスコを、水（１０ｍＬ）で反応混合物中に洗い流した。反応混合物を、室温で終夜撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×１００ｍＬ）およびアセトン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。
【００６６】
活性化したＭＥＦリン酸無水物を介した４（Ｒ＝Ｅｔ）の合成のためのパラメータースクリーニング
図１６ａは、ＴＨＦが、テストしたその他の溶媒より高いｗｔ％純度およびアッセイ補正した収率で４（Ｒ＝Ｅｔ）をもたらしたことを示す。ＴＨＦを、さらなる研究のために溶媒として使用した。塩基の効果（炭酸ナトリウム対水酸化ナトリウム）も、評価した。図１６ｂは、水酸化ナトリウムが、より高いｗｔ％純度（８０％）で４（Ｒ＝Ｅｔ）を作製し；しかし、炭酸ナトリウムがより高いアッセイ補正した収率をもたらしたことを示す。ｗｔ％純度およびアッセイ補正した収率の両方は、使用した塩基にかかわらず、時間の増加と共に増加した（図１６ｃおよび１６ｄ）。図１６ｅは、２の固形での使用が、２の酢酸溶液から作られた４（Ｒ＝Ｅｔ）と比較して、４（Ｒ＝Ｅｔ）のｗｔ％純度を著しく増加させたことを示す。
【００６７】
図１７は、二量体のＭＥＦ無水物の生成および後続のアミノアルキル−ジケトピペラジンとの反応に対する化学スキームを示す。
【００６８】
実施例：二量体のＭＥＦ無水物の調製
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素注入口を備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フマル酸モノエチル（ＭＥＦ、２０ｇ）、乾燥ジクロロメタン（ＤＣＭ、２５ｍＬ）および乾燥トリエチルアミン（ＴＥＡ、２０ｍＬ）を、フラスコに装入した。発熱を、ＴＥＡの添加中に観測した。透明な反応混合物を、ドライアイス／アセトン浴中で−２５℃に冷却した。クロロスルホニルイソシアネート（ＣＳＩ、９．８ｇ、６．１ｍＬ）の乾燥ジクロロメタン１０ｍＬ中溶液を、１５−２０分かけて添加した。反応混合物の温度を、添加中０℃より低く維持した。添加が完了した後、反応混合物を、６時間１０℃より低く保持した。水（２００ｍＬ）を、反応フラスコに添加した。層を分離し、水相を、ジクロロメタン（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空で濃縮した。得られた二量体のＭＥＦ無水物を、収率９４％で得て、さらなる精製なしで使用した。
【００６９】
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フラスコに、固体の２（５．４７ｇ）および炭酸ナトリウム（８．８０ｇ）の水（６０ｍＬ）中溶液を装入した。ＴＨＦ（２０ｍＬ）も添加し、混合物を、透明な溶液が得られるまで撹拌した。二量体のＭＥＦ無水物（８．９７ｇ）を、ＴＨＦ（３２ｍＬ）に溶解し、１０−１５分かけて付加ロートによって反応フラスコに添加した。反応混合物を、室温で６時間撹拌した。
【００７０】
反応混合物を、水（５０ｍＬ）でクエンチし、撹拌を、さらに４５分続けた。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×５０ｍＬ）およびアセトン（５０ｍＬ）で洗浄して、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。
【００７１】
図１８ａ−ｄは、いくつかの条件が変更された場合の二量体のＭＥＦ無水物の合成に対する結果を示す。溶媒（ａ）、ＣＳＩ添加温度（ｂ）、ＣＳＩ添加後の保持温度（ｃ）および反応時間（ｄ）を調査した。ＤＣＭは、ＴＨＦと比較して、優れた結果をもたらすように思われた。
【００７２】
図１８ｂは、ＣＳＩ添加温度の効果を示す。ＣＳＩ添加を、５℃で始め、反応温度を、添加を通して２０℃より低く維持し、ＣＳＩ添加を、−２５℃で始め、反応温度を、添加を通して０℃より低く維持した。二量体のＭＥＦ無水物の調製に対する温度条件は、４の収率および純度に影響を及ぼさなかった。
【００７３】
ＣＳＩの添加後の反応保持温度も調査した（図１８ｃ）。結果は、より低い保持温度が、同等の純度のより良好な収率で４をもたらしたことを示唆している。異なる反応時間を調査した（図１８ｄ）。テストした中間の条件（６時間の撹拌）は、良好なバランスの４の収率および純度をもたらした。短い反応時間（すなわち、３時間）は、反応を完了するのに十分ではなかったが、延長した時間（すなわち、１７時間）は、生成物の分解を可能にした。
【００７４】
まとめると、結果は、二量体のＭＥＦ無水物の調製のための最良の条件は、溶媒としてＤＣＭを使用すること、ＣＳＩ添加中に低温を維持することおよびＣＳＩ添加後６時間保持することを含んでいたことを示唆した。したがって、これらの条件を、さらなる評価のために使用した。
【００７５】
４の形成のためにスクリーニングしたパラメーター
二量体のＭＥＦ無水物を、上記の条件を使用して形成し、次いで４に変換した。様々なカップリング条件の効果を評価し、結果は図１９ａ−ｆに示される。条件の変更は、塩基の選択、（ａ）溶媒、（ｂ）溶媒−水の比、反応温度（ｃ）および反応時間（ｄ）；Ｎａ２ＣＯ３の装入（ｅ）およびアミンの固体または液体の形態の使用（ｆ）を含む。
【００７６】
図１９ａは、５つの溶媒：ＴＨＦ、アセトン、ＤＣＭ、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）およびアセトニトリル（ＡＣＮ）を評価した。ＴＨＦは、テストしたその他の溶媒より高い収率および純度で４をもたらした。加えて、反応は、水がない場合はうまく進行しなかったので、いくつかの異なる水／ＴＨＦ混合物を調査した（図１９ｂ）。結果は、１：１のＴＨＦ／水の比が使用された場合に、４（Ｒ＝Ｅｔ）の純度が最大化したことを示唆した。反応時間および温度の異なる組合せも、２つの塩基（炭酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウム）を使用して調査した。Ｎａ２ＣＯ３を使用した室温での３−６時間の反応時間が、純度８８ｗｔ％の収率９０％で４（Ｒ＝Ｅｔ）をもたらした（図１９ｃ）。ＮａＯＨが塩基として使用された場合、反応時間も温度も、４（Ｒ＝Ｅｔ）の収率および純度に影響を及ぼさなかったが、収率は、Ｎａ２ＣＯ３と比較して低かった（図１９ｄ）。簡潔に言えば、この研究中に得られた最も高い４（Ｒ＝Ｅｔ）の収率は、固体２を使用して、約９１％で、純度は９０ｗｔ％であった。酢酸水溶液として２を使用することは、良好な収率（９０％）で２をもたらしたが、純度は低かった（５１％）。
【００７７】
実施例：ＭＥＦ混合無水物の調製
１Ｌの四つ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素注入口を備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フマル酸モノエチル（ＭＥＦ、３０ｇ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）またはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２００ｍＬ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ、４５ｍＬ）を、フラスコに装入した。発熱を、ＴＥＡの添加中に観測した。透明な反応混合物を、ドライアイス／アセトン浴中で、−２５℃に冷却した。塩化ピバロイル（３９．２ｇ、４０ｍＬ）のＤＣＭまたはＴＨＦ２０ｍＬ中溶液を、１５−２０分かけて添加した。反応温度を、添加中、−１０℃より低く維持した。添加が完了した後、反応混合物を、ゆっくり室温にして、２時間撹拌した。得られた固体を、セライトを通した濾過によって除去した。濾過ケーキを、ＤＣＭまたはＴＨＦ（２×１００ｍＬ）およびアセトン（５０ｍＬ）で洗浄した。濾液を、真空で濃縮して収率９６％でＭＥＦ混合無水物を得た。この材料を、さらなる精製なしで使用した。
【００７８】
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フラスコに、固体２（５ｇ）および炭酸ナトリウム（８．７２ｇ）の水（６０ｍＬ）中溶液を装入した。ＴＨＦ（２０ｍＬ）も添加し、溶液を、透明になるまで撹拌した。ＭＥＦ混合無水物（８ｇ）を、ＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解し、５−１０分かけて付加ロートを介して反応フラスコに添加した。反応混合物を、室温で３時間撹拌し、次いで水（１００ｍＬ）でクエンチし、さらに３０分撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×８０ｍＬ）およびアセトン（２×８０ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。反応収率、ｗｔ％純度および面積％純度を、監視した。
【００７９】
図２０は、置換ジケトピペラジンを得るための、ＭＥＦ混合無水物の生成および後続の反応のための化学スキームを示す。
【００８０】
図２１ａ−ｄは、概ね図２０に従ってＭＥＦ混合無水物を生成するのに使用した異なった条件に対する結果および４（Ｒ＝Ｅｔ）の作製に対する効果を示す。（ａ）溶媒、（ｂ）塩化ピバロイル添加温度、（ｃ）塩化ピバロイルの添加後の保持温度および（ｄ）反応時間を調査した。塩化ピバロイル添加温度、保持温度および時間の、異なる組合せを調査した。結果は、テストしたすべての条件が、同等の収率および純度で４（Ｒ＝Ｅｔ）をもたらしたことを示唆している。
【００８１】
４（Ｒ＝Ｅｔ）の形成のためにスクリーニングしたパラメーター
ＭＥＦ混合無水物を、上述の条件を用いて形成し、次いで４（Ｒ＝Ｅｔ）に変換した。図２２ａ−ｆは、塩基の選択、溶媒、反応温度および反応時間を含めた、様々なカップリング条件を評価した場合の結果を示す。３つの溶媒：ＴＨＦ、アセトンおよびアセトニトリル（ＡＣＮ）を評価した。ＴＨＦは、テストしたその他の溶媒より良好な純度で４（Ｒ＝Ｅｔ）をもたらした（図２２ａ）。反応時間および温度の異なる組合せも、２つの塩基（炭酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウム）を用いて調査した。Ｎａ２ＣＯ３を用いた室温で３時間の反応時間は、純度８９ｗｔ％の収率９３％で４（Ｒ＝Ｅｔ）をもたらした（図２２ｂ）。ＮａＯＨが塩基として使用された場合に、より低い収率および純度を得た（図２２のｃおよびｄ）。酢酸水溶液（２Ｌ）の使用が、固体での使用と比較して、４（Ｒ＝Ｅｔ）の収率および純度を著しく減少させた（図２２ｅ）。２Ｌの塩基としてＮａ２ＣＯ３の代わりにＮａＯＨを使用することが、さらに低い４（Ｒ＝Ｅｔ）の収率をもたらし；しかし、２Ｓを使用して観測された結果とは異なり、２Ｌの水酸化ナトリウムの装入を増加させると、４（Ｒ＝Ｅｔ）の収率および純度が増加した（図２２ｆ対２２ｄ）。
【００８２】
図２３は、置換ジケトピペラジンの生成のためのＭＥＦ混合無水物の使用および後続のＭＥＦ部分のエステルの鹸化のための化学スキームを示す。
【００８３】
塩基としてＮａ２ＣＯ３を使用した４（Ｒ＝Ｅｔ）の調製
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フラスコに、固体２（５ｇ）および炭酸ナトリウム（８．９９ｇ）の水（６０ｍＬ）中溶液を装入した。ＴＨＦ（２０ｍＬ）も添加して、溶液を、透明になるまで撹拌した。ＭＥＦ混合無水物（８ｇ）を、ＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解し、５−１０分かけて付加ロートを介して反応フラスコに添加した。反応混合物を、室温で３時間撹拌して、４（Ｒ＝Ｅｔ）のインサイチュの形成を促進した。反応混合物を、水（１００ｍＬ）でクエンチし、撹拌を、さらに３０分続けた。メタノール（５０ｍＬ）を、反応混合物に添加し、反応混合物を、加熱還流した。水（５０ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（５．４５ｇ）溶液を、５分かけて付加ロートを介して反応混合物に添加した。混合物を、約１０分（４（Ｒ＝Ｅｔ）の鹸化が完了し、４（Ｒ＝Ｈ）を得たことの指標である、透明になるまで）加熱し、次いで、２５℃に冷却した。濃縮ＨＣｌ（３５ｍＬ）を添加して、反応混合物を、室温で２時間撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×８０ｍＬ）およびアセトン（２×８０ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４７８を使用して分析した。反応収率、ｗｔ％純度および面積％純度を、監視した。
【００８４】
塩基としてＮａＯＨを使用した４の調製
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フラスコを、固体２（５ｇ）および水酸化ナトリウム（０．６５ｇ）の水（６０ｍＬ）中溶液を装入した。ＴＨＦ（２０ｍＬ）も添加して、混合物を、透明になるまで撹拌した。ＭＥＦ混合無水物１（８ｇ）を、ＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解し、５−１０分かけて付加ロートを介して反応フラスコに添加した。反応混合物を、室温で３０分撹拌して、インサイチュの４の形成を促進し、次いで、水（１００ｍＬ）でクエンチして、さらに３０分撹拌した。
【００８５】
メタノール（５０ｍＬ）を、反応混合物に添加し、反応混合物を、加熱還流した。水酸化ナトリウム（４．７５ｇ）の水（５０ｍＬ）中溶液を、５分かけて付加ロートを介して反応混合物に添加した。混合物を、およそ１０分（鹸化が完了し、４（Ｒ＝Ｈ）を得たことの指標である、透明になるまで）加熱し、次いで、２５℃に冷却した。濃縮ＨＣｌ（２０ｍＬ）を添加し、反応混合物を、室温で２時間撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×８０ｍＬ）およびアセトン（２×８０ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４７８を使用して分析した。反応収率、ｗｔ％純度および面積％純度を、監視した。
【００８６】
４（Ｒ＝Ｈ）の形成のためにスクリーニングしたパラメーター
ＭＥＦ混合無水物を調製し、単一の反応槽中で、１をインサイチュで４（Ｒ＝Ｅｔ）に、次いで４（Ｒ＝Ｈ）に変換した。図２４ａ−ｇは、塩基の選択、反応温度および反応時間を含めた、様々な４（Ｒ＝Ｅｔ）のカップリング条件の効果に対する結果を示す。反応時間および温度の異なる組合せを、２つの塩基（炭酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウム）を使用して調査した。Ｎａ２ＣＯ３を用いる、室温で３時間のカップリング反応時間、続いて水酸化ナトリウムとの鹸化が、収率８９％および純度７８ｗｔ％で４（Ｒ＝Ｈ）をもたらし；温度を上昇させ、時間を短縮することが、４（Ｒ＝Ｈ）の収率および純度を減少させた（図２４ａ）。ＮａＯＨが、カップリング塩基として使用された場合、より低い４（Ｒ＝Ｈ）の収率および純度が、固定した反応温度で反応時間を増加させることによって得られ、より低い収率および純度が、固定した反応時間で反応温度を上昇させることによって得られた（図２４ｂ）。収率および純度は、ＮａＯＨの装入による影響を受けなかった（図２４ｃ）。反応物を、水でクエンチしなかった場合、収率のわずかな減少を観測した（図２４ｄ）。鹸化反応からメタノールを除外することは、４（Ｒ＝Ｈ）の収率または純度に影響を及ぼさなかった（図２４ｅ）；しかし、反応濾過は、メタノールがない場合、低下した。０１６の酢酸水溶液（２Ｌ）の使用は、２の固体の使用と比較して、４（Ｒ＝Ｈ）の収率および純度を減少させた（図２４ｆ）。０１６Ｌの塩基としてＮａ２ＣＯ３の代わりにＮａＯＨを使用することは、さらに低い４（Ｒ＝Ｈ）の収率をもたらした；しかし、２Ｓを使用して観測された結果とは異なり、２Ｌの水酸化ナトリウムの装入を増加させると、４（Ｒ＝Ｈ）の収率および純度が増加した（図２４ｇ対図２４ｃ）。
【００８７】
図２５は、ジケトピペラジンのインサイチュの脱保護後の置換ジケトピペラジンの生成のためのＭＥＦ混合無水物の使用に対する化学スキームを示す。
【００８８】
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フラスコに、ＴＦＡ−ＤＫＰ（５ｇ）、ＴＨＦ（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）を装入し、撹拌を開始した。水酸化ナトリウム（１．２０ｇ）の水（３０ｍＬ）中溶液を添加し、溶液を、約１５分（ＴＦＡ−ＤＫＰ脱保護が完了した指標である、透明になるまで）撹拌した。ＭＥＦ混合無水物１（７．５３ｇ）を、ＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解して、５−１０分かけて付加ロートを介して反応フラスコに添加した。反応混合物を、室温で３０分撹拌し、次いで、水（５０ｍＬ）でクエンチして、さらに１５分撹拌した。アセトン（１５ｍＬ）を添加し、反応混合物を、さらに１５分撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×７０ｍＬ）およびアセトン（３×７０ｍＬ）で洗浄して、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。反応収率、ｗｔ％純度および面積％純度を、監視した。アッセイ補正した収率を、収率にｗｔ％純度をかけることによって算出した。
【００８９】
【表４】
2015519321.tif 000008
【００９０】
【表５】
2015519321.tif 000009
【００９１】
ＭＥＦ混合無水物を調製し、次いで、脱保護されたＴＦＡ−ＤＫＰとカップリングした。得られた粗製の４（Ｒ＝Ｅｔ）を、収率８５％および純度８６ｗｔ％で得た。トランス異性体含有量は低かった；これは、ＴＦＡ−ＤＫＰ出発物質がシス異性体のみを含有するためであった。溶媒スクリーニング研究は、ＴＨＦおよびアセトンが、同等のアッセイ補正した収率をもたらしたことを示唆していた。トランス異性体含有量は、反応濃度が増加するにつれて増加し、ＴＨＦが溶媒として使用された場合に最も高くなった。
【００９２】
図２６は、ジケトピペラジンのインサイチュの脱保護および後続のエステル部分の鹸化後の、置換ジケトピペラジンの生成のためのＭＥＦ混合無水物の使用のための化学スキームを示す。
【００９３】
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フラスコに、ＴＦＡ−ＤＫＰ（５ｇ）、ＴＨＦ（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）を装入し、撹拌を開始した。水酸化ナトリウム（１．２０ｇ）の水（３０ｍＬ）中溶液を添加し、溶液を、約１５分（ＴＦＡ−ＤＫＰ脱保護が完了した指標である、透明になるまで）撹拌した。ＭＥＦ混合無水物１（７．５３ｇ）を、ＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解し、５−１０分かけて付加ロートを介して反応フラスコに添加した。反応混合物を、室温で３０分撹拌して、フマルアミド結合形成を促進し、次いで、水（５０ｍＬ）でクエンチし、さらに１５分撹拌した。メタノール（５０ｍＬ）を添加し、反応混合物を、さらに１５分撹拌した。反応混合物を、加熱還流した（約６９℃）。水（５０ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（４．００ｇ）を、５分かけて付加ロートを介して反応混合物に添加した。混合物を、約１０分（鹸化が完了した指標である、透明になるまで）加熱して、２５℃に冷却した。
【００９４】
濃縮ＨＣｌ（３０ｍＬ）を添加して、反応混合物を、室温で２時間撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×８０ｍＬ）およびアセトン（２×８０ｍＬ）で洗浄して、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４７８を使用して分析した。反応収率、ｗｔ％純度および面積％純度を、監視した。
【００９５】
ＭＥＦ混合無水物１を合成し、次いで、脱保護されたＴＦＡ−ＤＫＰとカップリングし、単一の反応槽中で、鹸化し、沈殿させた。得られた粗製の４（Ｒ＝Ｈ）を、収率約８５％および純度約７５ｗｔ％で得た。混合無水物を作るために使用した溶媒は、粗製の４（Ｒ＝Ｈ）品質に対する影響はなかった。
【００９６】
【表６】
2015519321.tif 000010
【００９７】
以下の表は、ＴＦＡ−ＤＫＰとＭＥＦ混合無水物とのカップリングから得られた再結晶化した４（Ｒ＝Ｈ）に対するデータを示す。仕様は、青色で示されている。仕様外の結果は、赤色で示されている。
【００９８】
【表７】
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【００９９】
ＭＥＦ混合無水物およびＴＦＡ−ＤＫＰのカップリング、続いて単一の容器での鹸化および沈殿による粗製の４（Ｒ＝Ｈ）を、評価した。得られた粗製の４（Ｒ＝Ｈ）を、良好な収率および純度で得た。粗製の４（Ｒ＝Ｈ）の再結晶は、良好な純度（ＮＬＴ  ９２ｗｔ％）で材料をもたらした。
【０１００】
以下の表は、多様な条件下でのエチルフマロイルクロリドおよびアミノアルキル−ジケトピペラジンのカップリングに対する結果を示す。
【０１０１】
【表８】
2015519321.tif 000012
【０１０２】
以下の表は、酸塩化物濃度、保持時間および洗浄を変更したことに対する結果を示す。
【０１０３】
【表９】
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【０１０４】
以下の表は、多様な条件下で水酸化ナトリウムを使用したカップリングからの結果を示す。
【０１０５】
【表１０】
2015519321.tif 000014
【０１０６】
以下の表は、カップリング反応中に水酸化ナトリウムを使用したさらなる結果を示す。
【０１０７】
【表１１】
2015519321.tif 000015
【０１０８】
図２７は、アミノアルキル−ジケトピペラジンおよびＥＦＣの間の反応、続いてエチル部分の鹸化を示す化学スキームである。
【０１０９】
鹸化手順：固定したｐＨ。５００ｍＬの四つ口丸底フラスコに、１８．６８％の０１６（０１６はリアル５．００ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）の溶液２６．７５ｇおよび水１０８ｍＬを装入した。次いで、９．５Ｍの水酸化ナトリウム１５ｍＬを、反応に添加した。ＥＦＣ４．６ｍＬ（３３ｍｍｏｌ、ｄ＝１．１７）のＴＨＦ１２５ｍＬ中溶液を、付加ロートによって滴下し、得られた混合物を３０分保持し、カップリング反応を促進した。次いで、反応混合物を、９．５Ｍの水酸化ナトリウム１０ｍＬで処理し、加熱還流して（６７℃）、鹸化した。還流で１．５時間後、反応物を、３０℃に冷却し、約１０ＭのＨＣｌ１５ｍＬ（約１５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、３０分撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（３×５０ｍＬ）、メタノール（３×５０ｍＬ）およびアセトン（３×５０ｍＬ）で洗浄し、最低でも１５時間、５０℃の真空オーブン中で乾燥させた。重量パーセント純度を、ＴＭ５４７８２によって求めた。
【０１１０】
別法として、試薬の比は、以下を例外として、上述したのと同じであった。２／ＥＦＣのカップリングに対して、反応において９．５Ｍの水酸化ナトリウムでｐＨ１１に調整した。鹸化に対して、さらなる９．５ＭのＮａＯＨを添加して、溶液を所定の異なったｐＨに調整した。生成物の沈殿を、上述の通りに実施した。
【０１１１】
４つの酸（塩酸、硫酸、リン酸および酢酸）を、４（Ｒ＝Ｈ）の沈殿に対して評価した。塩酸は、生成物の最良の収率および品質をもたらした（図２８）。ＨＣｌで沈殿させた４（Ｒ＝Ｈ）の逆滴は、二酸の完全な変換を実証した。図２９は、図２７のカップリング反応で使用した異なった条件に対する結果を示す。
【０１１２】
図３０は、アミノアルキル−ジケトピペラジンのインサイチュの脱保護、続いてＥＦＣとのカップリングに対する化学スキームを示す。
【０１１３】
ｐＨ制御なしの４（Ｒ＝Ｅｔ）の調製：
５００ｍＬの三ツ口丸底フラスコに、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置および窒素ヘッドを備えた付加ロートを装備した。排出ガスを、苛性スクラバーに放出した。フラスコに、ＴＦＡ−ＤＫＰ（９．６８ｇ、０．０２２ｍｏｌ）およびアセトン（１０ｍＬ）を装入し、撹拌を開始した。水（２５ｍＬ）に溶解した水酸化ナトリウム（５．１８ｇ、０．１３ｍｏｌ）を、ＴＦＡ−ＤＫＰスラリーに添加した。約１３℃の発熱を、水酸化ナトリウムの添加後に観測した。混合物を、室温で約１０分撹拌した。得られた透明な黄色の溶液は、ｐＨ１３であった。アセトン（１０ｍＬ）に溶解したＥＦＣ（８．９４ｇ、０．０５５ｍｏｌ）を、５−１０分かけて付加ロートを介して反応混合物に添加した。ＥＦＣの添加中、混合物のｐＨは、約４まで下がったので、水（１０ｍＬ）に溶解したさらなる水酸化ナトリウム（１．１ｇ、０．０２８ｍｏｌ）を添加して、ｐＨを約９まで上げた。混合物を、約１時間室温で撹拌し、水（５０ｍＬ）でクエンチし、次いで、さらに３０分撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×１００ｍＬ）およびアセトン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。反応収率ならびに４（Ｒ＝Ｅｔ）の面積％およびｗｔ％純度を、監視した。
【０１１４】
ｐＨ制御なしの４（Ｒ＝Ｅｔ）の調製：
５００ｍＬの四つ口丸底フラスコを、マグネチックスターラー、温度読出／制御装置、ＥＦＣ添加用のシリンジポンプ、ｐＨプローブおよび添加用に付属された２５％のＮａＯＨのためのアダプターを備えたサイフォンチューブを装備し、撹拌を開始した。水（６０ｍＬ）に溶解した水酸化ナトリウム（４．３２ｇ、０．１１ｍｏｌ）を、ＴＦＡ−ＤＫＰスラリーに添加した。水酸化ナトリウムの添加後、約１４℃の発熱が観測された。混合物を、約４０分室温で撹拌した。得られた透明な黄色の溶液は、ｐＨ１１．９であった。アセトン（１８．３８ｇ、０．１１ｍｏｌ；上の通りに調製）中のＥＦＣを、２０分かけてシリンジポンプを介して反応混合物に添加した。溶液のｐＨを、添加ポンプを用いた２５％のＮａＯＨの添加によって８．５で保持した。ＥＦＣの添加の終了時、反応ｐＨは、９．７であり、反応温度は５０℃であった。混合物を、約３０分室温で撹拌し、水（１００ｍＬ）でクエンチし、次いで、さらに３０分撹拌した。得られた固体を、濾過によって採集し、水（２×１００ｍＬ）およびアセトン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空オーブン中で、終夜乾燥させた。固体を、ＨＰＬＣ  ＴＭ５４６６を使用して分析した。反応収率、消費した塩基の容積ならびに４（Ｒ＝Ｅｔ）の面積％およびｗｔ％純度を、監視した。
【０１１５】
脱保護されたＴＦＡ−ＤＫＰおよびＥＦＣのカップリングを、実施した。反応を、ｐＨ制御なしで実施した場合、反応混合物は、ＥＦＣの添加中に酸性になった。さらなるＮａＯＨが、ｐＨを７−８に上昇させ、反応を活発にして完了させるために必要であった。カップリング反応を、ｐＨ制御下で実施した場合、粗製の４（Ｒ＝Ｅｔ）を、収率８０％および純度７９．９ｗｔ％で得た。ｐＨ制御した第２の反応を実施し、ＥＦＣ／アセトン溶液の代わりにニートなＥＦＣの使用を評価した。ここで、ＥＦＣの添加の終了時の反応ｐＨは、２．３２モル当量のＮａＯＨ（ＥＦＣに対して）の添加にもかかわらず、４．４であった。これらの研究は、ｐＨ制御した条件を使用しなかった条件より、脱保護されたＴＦＡ−ＤＫＰおよびＥＦＣのｐＨ制御した直接カップリングが、より良好な収率および純度で粗製の４（Ｒ＝Ｅｔ）をもたらすことを実証した。
【０１１６】
本発明を説明する文脈において（特に以下の特許請求の範囲の文脈において）、用語「ａ」および「ａｎ」および「ｔｈｅ」ならびに同様の指示語は、本明細書で別段の指示がない限りまたはそうでないことが内容から明白である場合を除き、単数および複数の両方を包含するものと解釈される。
【０１１７】
本明細書の値の範囲の列挙は、単に、その範囲内に含まれる個別の値それぞれを個々に参照する簡単な方法としての役割を果たすことを意図している。本明細書で別段の指示がない限り、個別の値それぞれは、本明細書に個々に列挙されたものとして本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されたすべての方法は、本明細書で別段の指示がない限りまたはそうでないことが内容から明白である場合を除き、任意の適した順序で行うことができる。本明細書で提供されるいずれかのまたはすべての実施例または例示的な文言（例えば「など」）の使用は、単に本発明をより明らかにすることを意図し、反対の主張がない限り本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中のいかなる文言も、本発明の実施に不可欠な特許請求されていないいかなる要素も示しているとは解釈すべきではない。
【０１１８】
本明細書に開示された本発明の代替的な要素または実施形態のグループ化は、限定として解釈されるべきではない。各グループの構成要素は、本明細書で見られるグループのその他の構成要素またはその他の要素を単独でまたはこれらと任意に組み合わせて、言及し、主張することができる。グループの１つ以上の構成要素は、利便性および／または特許性の理由から、グループに含めるまたはグループから削除することができることが予想される。このような任意の包含および削除が生じる場合、本明細書は、修正されたグループを含有し、したがって、添付された特許請求項の範囲で使用される任意のおよびすべてのマーカッシュ群の記述を満たすものと見なされる。
【０１１９】
本発明の好ましい実施形態は、本発明を実行するために本発明者らに知られている最良の形態を含めて、本明細書に記載される。当然、これらの好ましい実施形態に対する変形は、前述の記載を読めば、当業者には明らかになる。本発明者らは、当業者が、必要に応じてこのような変形を用いることを予期し、本発明者らは、本発明が、本明細書に特に記載されている以外の方法で実施されることを意図している。したがって、この発明は、適用法によって容認される通り、本明細書に添付された特許請求の範囲で列挙された主題のすべての改変および等価物を含む。さらに、これらのすべての可能な変形における上述の要素の任意の組合せは、本明細書で別段の指示がない限りまたはそうでないことが内容から明白である場合を除き、本発明によって包含される。さらに、この明細書全体にわたって特許および刊行物を参照してきた。上で引用した参照文献および刊行物はそれぞれ、それらの全体の参照によって本明細書に個々に組み込まれる。
【０１２０】
最後に、本明細書で開示された本発明の実施形態は、本発明の原理の例示であることを理解されたい。用いることができるその他の改変は、本発明の範囲内である。したがって、限定でなく一例として、本発明の代替的な構成が、本明細書の教示に従って使用できる。したがって、本発明は、示された通りおよび記載された通りに正確に制限されるものではない。
【０１２１】
本発明の実施形態を示し、記載してきたが、当業者は、多くの変形および改変が、記載された発明に影響を及ぼし、それでも特許請求された発明の範囲内であり得ることを理解する。追加的に、上で示した要素の多くは、同様の結果をもたらし、特許請求された発明の趣旨の範囲内である異なる要素によって変更または置換ができる。したがって、特許請求の範囲によって示された通りにのみ、本発明を制限することが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【国際調査報告】
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