(57)【要約】対象において炎症を軽減または緩和する方法は、対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与することにより、対象において炎症を軽減または緩和することを含む。対象において喘息または炎症性腸疾患を予防または治療する方法は、対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与することにより、対象において喘息または炎症性腸疾患を予防または治療することを含む。対象はヒトを含む哺乳類であってもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において炎症を軽減または緩和する方法であって、対象に治療上有効量の：
（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、
（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せ
を投与する工程を含み、
前記投与により炎症を軽減または緩和する方法。
【請求項２】
炎症は対象における疾患、障害または症状に伴うものであるか、または疾患、障害または症状により二次的に生じるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記疾患、障害および症状のうちの少なくともいずれかはベースライン治療に不応性である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ベースライン治療は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのベースライン作用剤を投与することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントは、少なくとも最初はベースライン治療と併用投与される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントは、少なくとも最初は少なくとも１つのベースライン作用剤と併用投与され、前記少なくとも１つのベースライン作用剤は総用量未満で投与される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項７】
対象において炎症を予防する方法であって、対象に治療上有効量の：
（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、
（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せ
を投与する工程を含み、
前記投与により炎症を予防する方法。
【請求項８】
炎症は対象における疾患、障害または症状に伴うものであるか、または疾患、障害または症状により二次的に生じるものである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記疾患、障害および症状のうちの少なくともいずれかは、免疫に関する疾患、障害または症状である、請求項２〜６および８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記免疫に関する疾患、障害または症状は、アジソン病、強直性脊椎炎、セリアック病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、クローン病、脱髄性神経障害、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、インスリン依存型糖尿病（１型）、若年性関節炎、川崎病、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋梗塞後症候群、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、特発性肺線維症、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、潰瘍性大腸炎、脈管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患は消化管の疾患である、請求項２〜６および８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患は慢性胃炎または炎症性腸疾患である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記炎症性腸疾患はクローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患は呼吸器系の疾患である、請求項２〜６および８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記疾患は、喘息、肺気腫、慢性気管支炎、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
対象において炎症性腸疾患の予防または治療あるいはこれらの両方を行う方法であって、対象に治療上有効量の：
（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、
（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せ
を投与する工程を含み、
前記投与により炎症性腸疾患の予防または治療あるいはこれらの両方を行う方法。
【請求項１７】
前記炎症性腸疾患はクローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
対象において喘息の予防または治療あるいはこれらの両方を行う方法であって、対象に治療上有効量の：
（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、
（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せ
を投与する工程を含み、
前記投与により喘息の予防または治療あるいはこれらの両方を行う方法。
【請求項１９】
対象に少なくとも１つの追加の作用剤を投与する工程を更に含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの追加の作用剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
対象が哺乳類である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記哺乳類がヒトである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
医薬組成物であって、治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを、薬学的に許容される賦形剤の担体希釈剤とともに含む医薬組成物。
【請求項２４】
少なくとも１つの追加の作用剤を更に含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記少なくとも１つの追加の作用剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項２４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は炎症を治療する方法に関する。より詳細には、本発明は、鉤虫の排泄／分泌タンパク質を、炎症の軽減、緩和、および／または予防のために使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、知覚された損傷または危険な兆候に応答する免疫系によって開始される非特異的な反応である。それは先天性の防御反応であり、より正確に適応した免疫系の適応反応とは区別される。炎症は免疫系の適応反応と協調して働く場合がある。適応反応はよりゆっくりと進行するが、局部的な損傷を引き起こし得る病原体のような危険物質を、より正確に標的化する。
【０００３】
感染症と関係がある一方で、炎症は、身体外傷、火傷（例えば放射線、熱、腐食性物質によるもの）、化学的刺激物質、微粒子状刺激物質、細菌性またはウイルス性病原体、および局所的酸素欠乏（虚血）を含む様々な種類の損傷に応答して発生する。炎症は、自己免疫疾患およびアレルギー反応とも関係がある。炎症は、発赤、ほてり、腫脹、および痛みの古典的症状を含み、炎症を起こした器官または組織の機能低下に付随して生じ得る。
【０００４】
炎症を治療する幾つもの方法が知られているが、それらの全てに、特に広範囲にわたる有効性に関して制約がある。したがって、種々の原因に関連する炎症を軽減、緩和、および／または予防するための新しい方法が求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、炎症および／または炎症に関連する疾患または症状を治療および／または予防する方法および組成物に係るものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
包括的には、本発明は、イヌ鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）を含むがそれに限定されない鉤虫由来の、またはその鉤虫から得られる１つ以上の組織性メタロプロテアーゼインヒビタータンパク質を、炎症および／または、喘息および／または炎症性腸疾患のような炎症に関連する疾患または症状を軽減、緩和、および／または予防するために使用することに関する。
【０００７】
一態様において、本発明は対象において炎症を軽減または緩和する方法を提供し、その方法は対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与する工程を含む。
【０００８】
一実施形態において、この態様は更に、対象に少なくとも１つの追加の作用剤を投与する工程を含む。
適切には、上記の実施形態によれば、少なくとも１つの追加の作用剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ：ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤（例えば、抗ＴＮＦα剤、抗ＩＬ−５剤、抗ＩＬ−１３剤、抗ＩＬ−１７剤、および抗ＩＬ−６Ｒ剤）、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される。
【０００９】
いくつかの実施形態において、炎症は対象における疾患、障害、および／または症状に伴うものであるか、または疾患、障害、および／または症状により二次的に生じるものであり、上記疾患、障害、および／または症状は、特に免疫に関するものである。
【００１０】
ある実施形態において、上記疾患は消化管または呼吸器系の疾患である。
別の実施形態において、上記疾患、障害、および／または症状はベースライン治療に不応性である。
【００１１】
適切には、上記の実施形態によれば、ベースライン治療は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤（例えば、抗ＴＮＦα剤、抗ＩＬ−５剤、抗ＩＬ−１３剤、抗ＩＬ−１７剤、および抗ＩＬ−６Ｒ剤）、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのベースライン作用剤を投与することを含む。
【００１２】
別の態様において、本発明は対象において炎症を予防する方法を提供し、その方法は対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与する工程を含む。
【００１３】
一実施形態において、この態様は更に、対象に少なくとも１つの追加の作用剤を投与する工程を含む。
更に別の態様において、本発明は対象において炎症性腸疾患を治療および／または予防する方法を提供し、その方法は対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与する工程を含む。
【００１４】
一実施形態において、この態様は更に、対象に少なくとも１つの追加の作用剤を投与する工程を含む。
適切には、上記の実施形態によれば、少なくとも１つの追加の作用剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤（例えば、抗ＴＮＦα剤、抗ＩＬ−５剤、抗ＩＬ−１３剤、抗ＩＬ−１７剤、および抗ＩＬ−６Ｒ剤）、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される。
【００１５】
更なる態様において、本発明は対象において喘息を治療および／または予防する方法を提供し、その方法は対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与する工程を含む。
【００１６】
一実施形態において、この態様は更に、対象に少なくとも１つの追加の作用剤を投与する工程を含む。
適切には、上記の実施形態によれば、少なくとも１つの追加の作用剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤（例えば、抗ＴＮＦα剤、抗ＩＬ−５剤、抗ＩＬ−１３剤、抗ＩＬ−１７剤、および抗ＩＬ−６Ｒ剤）、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される。
【００１７】
好ましくは、対象は哺乳類である。
より好ましくは、対象はヒトである。
本発明の更なる態様は、治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを、薬学的に許容される賦形剤の担体希釈剤とともに含む医薬組成物を提供する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は更に少なくとも１つの追加の作用剤を含んでいてもよい。
上記少なくとも１つの追加の作用剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤（例えば、抗ＴＮＦα剤、抗ＩＬ−５剤、抗ＩＬ−１３剤、抗ＩＬ−１７剤、および抗ＩＬ−６Ｒ剤）、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択され得る。
【００１９】
適切には、医薬組成物は炎症を予防または治療するため、および／または炎症に関連する疾患または症状を予防または治療するためのものである。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】Ａｃ−ＴＭＰ−１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号１）である（Ｚｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．６６：２３８−４４，２００２）。
【図２】Ａｃ−ＴＭＰ−２のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号２）である（Ｚｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ  １６２：１４２−４８，２００８）。
【図３】精製組換えＡｃ−ＴＭＰ−１はＴＮＢＳ誘発体重減少から保護する。簡潔に述べると、０日目に、マウスに２０μｇのＡｃ−ＴＭＰ−１（ＴＩＭＰ）の単回腹腔内注入または模擬ＰＢＳ注入を受けさせた。５時間後、マウスに４５％エタノール中２．５ｍｇの２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（一般にＴＮＢＳと呼ばれる）の腹腔内注入を、軽度の麻酔状態で受けさせた。０日目から３日目まで、マウスの体重減少を毎日モニタリングした。対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）には注入を行わず、ＴＮＢＳを投与しなかった。マウスの各群について平均値で示されているように、Ａｃ−ＴＭＰ−１は、模擬注入を受けたＴＮＢＳ群と比較して、マウスを体重減少から有意に保護した。
【図４】Ａｃ−ＴＭＰ−２はＴＮＢＳ誘発大腸炎モデルからマウスを保護する。０日目に、マウスをＡｃ−ＴＭＰ−２またはビヒクル（ＰＢＳ）で処理した。５時間後、マウスに麻酔をかけ、直腸内に４５％エタノール中２．５ｍｇ用量のＴＮＢＳを注入した。体重、全体的な外見、排泄物および移動性を毎日モニタリングした。Ａｃ−ＴＭＰ−２で処理したマウスでは、ビヒクル対照群よりも体重の減少量が有意に少なかった。Ａｃ−ＴＭＰ−２処理マウスの臨床スコア（他のモニタリングされたパラメータと組み合わせたもの）への影響も、対照よりも有意に少なかった（＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【図５】精製組換えＡｃ−ＴＭＰ−２はＴＮＢＳ誘発腸管病変から保護する。簡潔に述べると、０日目に、マウスに２０μｇのＡｃ−ＴＭＰ−２（ＴＩＭＰ−２）の単回腹腔内注入または模擬ＰＢＳ注入（ＴＮＢＳ）を受けさせた。５時間後、マウスに４５％エタノール中２．５ｍｇのＴＮＢＳの腹腔内注入を、軽度の麻酔状態で受けさせた。３日目にマウスを屠殺し、臨床スコア、巨視的スコアおよび結腸の長さを測定した（方法についてはＲｕｙｓｓｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓ．１５：４９１−５００，２００９を参照）。対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）には注入を行わず、ＴＮＢＳを投与しなかった。
【図６】熱およびプロテアーゼ処理によるＡｃ−ＴＭＰ−２の変性は、ＴＮＢＳ大腸炎のマウスモデルにおけるＡｃ−ＴＭＰ−２の保護特性を失わせる。トリプシン処理および煮沸によるＡｃ−ＴＭＰ−２の変性は、ここに巨視的スコア（結腸の接着、潰瘍、浮腫および壁肥厚の組合せ）と共に示すように、ＴＮＢＳ誘発大腸炎のマウスモデルにおいてＡｃ−ＴＭＰ−２誘導性保護を無効にする。
【図７】Ａｃ−ＴＭＰ−１はアレルギー性喘息のマウスモデルにおいて炎症から保護する。気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）浸潤は、ＡｃＥＳ（イヌ鉤虫排泄／分泌タンパク質（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ  ｅｘｃｒｅｔｏｒｙ／ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ））処理マウスおよび組換えＡｃ−ＴＭＰ−１処理マウスにおいて減少する。２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ）中２０μｇのＢＳＡを、０日目および７日目の２回にわたり腹腔内（ｉ．ｐ．）注入することによりマウスを感作させた。１４日目から２１日目に、マウスに２０μｇのＢＳＡ、ＡｃＥＳまたはＡｃ−ＴＭＰ−１（ＴＩＭＰ）のいずれかをｉ．ｐ．注入した。１８日目から２１日目まで、マウスに５０μｇのＢＳＡを軽度の麻酔状態で鼻腔内（ｉ．ｎ．）注入した。２４日目にマウスを屠殺し、ＢＡＬおよび肺を回収した。簡潔に述べると、マウスを出血させて気管にカニューレを挿入した。肺を１ｍｌのＰＢＳで３回洗浄した。ＢＡＬ細胞識別計数のため、細胞を抗ＣＣＲ３、抗Ｇｒ１、抗ＣＤ３、および抗ＣＤ１９モノクローナル抗体で染色し、ＦＡＣＳ  ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターおよびＦＡＣＳ  Ｄｉｖａソフトウェアを用いた蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）により分析した。好酸球はＣＣＲ３＋ＣＤ３−ＣＤ１９−と定義され、好中球はＧｒ−１ｈｉｇｈＣＣＲ３−ＣＤ３−ＣＤ１９−と、リンパ球はＣＤ３＋ＣＤ１９＋と定義された。
【図８】ＩＬ−５およびＩＬ−１３  Ｔｈ２サイトカインはＡｃＥＳ処理マウスおよび組換えＡｃ−ＴＭＰ−１処理マウスにおいて減少する。カルシウムおよびマグネシウムフリーかつ５％ウシ胎仔血清を含有するハンクス緩衝塩類溶液中で肺試料をホモジナイズした。細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで１ｍｇ／ｍｌのＡｃＥＳまたはＡｃ−ＴＭＰ−１により再刺激するか、あるいは刺激しないまま、３７℃で３日間置いた。ＦＡＣＳアレイを用い、サイトメトリックビーズアレイでマルチプレックスＩＬ−５、およびＩＬ−１３解析を行った。
【図９】アレルギー性喘息のマウスモデルにおけるＡｃ−ＴＭＰ−１を介した保護のロバスト性を示す反復実験。気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）浸潤は、Ａｃ−ＴＭＰ−１処理マウスにおいて減少する。ＢＡＬ細胞を回収し、（ＦＡＣＳ）により解析した。好酸球はＣＣＲ３＋ＣＤ３−ＣＤ１９−と定義され、好中球はＧｒ−１ｈｉｇｈＣＣＲ３−ＣＤ３−ＣＤ１９−と、リンパ球はＣＤ３＋ＣＤ１９＋と定義された。Ａｃ−ＴＭＰ−１での処理は、好酸球やリンパ球のようなＴｈ２細胞の気道への浸潤を有意に減少させる。
【図１０】炎症誘発性サイトカインＩＬ−６、ＴＮＦα、およびＩＦＮγは、組換えＡｃ−ＴＭＰ−１処理マウスにおいて減少する。カルシウムおよびマグネシウムフリーかつ５％ウシ胎仔血清を含有するハンクス緩衝塩類溶液中で肺試料をホモジナイズした。細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで１ｍｇ／ｍｌのＡｃＥＳまたはＡｃ−ＴＭＰ−１により再刺激するか、あるいは刺激しないまま、３７℃で３日間置いた。ＦＡＣＳアレイを用い、サイトメトリックビーズアレイでマルチプレックスＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、およびＩＦＮγ解析を行った。
【図１１】ＩＬ−１７Ａは組換えＡｃ−ＴＭＰ−１処理マウスにおいて減少する。カルシウムおよびマグネシウムフリーかつ５％ウシ胎仔血清を含有するハンクス緩衝塩類溶液中で肺試料をホモジナイズした。細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで１ｍｇ／ｍｌのＡｃＥＳまたはＡｃ−ＴＭＰ−１により再刺激するか、あるいは刺激しないまま、３７℃で３日間置いた。サイトメトリックビーズアレイを用い、マルチプレックスＩＬ−１７ＡおよびＭＣＰ−１を解析した。
【図１２】Ａｃ−ＴＭＰ−１は喘息のマウスモデルにおいてＯＶＡ誘発肺細胞浸潤を抑制する。未処理のＯＶＡ刺激マウスからの気管支肺胞洗浄試料は、ナイーブ（ＰＢＳ）マウスと比較して細胞数の有意な上昇を示す。しかし、Ａｃ−ＴＭＰ−１での処理は、ＯＶＡ刺激マウスからの気管支肺胞洗浄試料における総細胞浸潤を有意に減少させる。上昇した総細胞数と一致して、未処理ＯＶＡ刺激マウスのＢＡＬ試料からの細胞識別計数は、好酸球およびリンパ球の有意な上昇を示す。しかし、Ａｃ−ＴＭＰ−１での処理は、この好酸球およびリンパ球がＯＶＡ刺激マウスの肺へ浸潤するのを抑制した。ＯＶＡ刺激マウスの腹腔洗浄に由来する総細胞数、好酸球、リンパ球または好中球の増加はなかった。肺とは異なり、Ａｃ−ＴＭＰ−１は総腹膜細胞数を変化させなかった。しかしながら、Ａｃ−ＴＭＰ−１は腹膜好酸球の有意な減少をもたらした。ＢＡＬおよび腹腔洗浄総細胞数について、反復実験からのデータが提供されている。
【図１３】Ｔｈ２サイトカインはＡｃ−ＴＭＰ−１処理マウスの肺で減少する。個々のマウスの肺から全タンパク質抽出物を調製し、ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３含有量をサイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）により解析した。ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３のレベルは、Ａｃ−ＴＭＰ−１での処理により有意に減少する。Ａｃ−ＴＭＰ−１での処理はこれらのサイトカインのレベルを低下させ、このことは図１２に示される炎症の低減を裏付けている。
【図１４】炎症誘発性サイトカインはＡｃ−ＴＭＰ−１処理マウスの肺で減少する。個々のマウスの肺から全タンパク質抽出物を調製し、ＭＣＰ−１およびＩＬ−１７Ａ含有量をサイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）により解析した。両サイトカインがＡｃ−ＴＭＰ−１の存在下で減少した。
【図１５】Ａｃ−ＴＭＰ−２は喘息のマウスモデルにおいてＯＶＡ誘発肺細胞浸潤を抑制する。未処理のＯＶＡ刺激マウスからの気管支肺胞洗浄試料は、ナイーブ（ＰＢＳ）マウスと比較して好酸球、リンパ球および好中球の有意な上昇を示す。反対に、これらのマウスからの腹腔洗浄試料では、このような上昇は見られない。Ａｃ−ＴＭＰ−２での処理は、この好酸球、リンパ球および好中球がＯＶＡ刺激マウスの肺へ浸潤するのを有意に抑制した。しかし、Ａｃ−ＴＭＰ−２は腹腔洗浄試料からの細胞識別計数には有意な効果を示さなかった。
【図１６】Ａｃ−ＴＭＰ−２はＯＶＡ誘発肺細胞浸潤からマウスを保護する。（Ａ）および（Ｂ）  得られた気管支肺胞（Ａ）および腹腔（Ｂ）洗浄液の細胞識別計数。気管にカニューレを挿入し、３×１ｍＬ  ＰＢＳで洗浄した後にＢＡＬＦを得た。腹腔洗浄は、５％ＦＣＳを添加した３×５ｍＬのＲＰＭＩを腹膜内に注入することにより得た。細胞を抗体で染色し、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ）により分析した。気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中の好酸球（Ｅ）およびリンパ球（Ｌ）の数は、ＯＶＡエアロゾル刺激前にＡｃ−ＴＭＰ−２で処理したマウスにおいて極めて有意に減少した（Ｐ＜０．００１）。（Ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２注入部位（腹膜）では、このような細胞数の変化は検出されず、このことは、細胞浸潤からの保護が炎症部位に限定されるという事実を浮き彫りにしている。ＢＡＬおよび腹腔洗浄総細胞数について、反復実験からのデータが提供されている。
【図１７】Ｔｈ２サイトカインはＡｃ−ＴＭＰ−２処理マウスの肺で減少する。個々のマウスの肺から全タンパク質抽出物を調製し、ＩＬ−５およびＩＬ−１３含有量をサイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）により解析した。ＩＬ−５およびＩＬ−１３のレベルは、Ａｃ−ＴＭＰ−２での処理により有意に減少する。
【図１８】炎症誘発性サイトカインＩＬ−６およびＩＬ−１７Ａは、組換えＡｃ−ＴＭＰ−２処理マウスにおいて減少する。個々のマウスの肺から全タンパク質抽出物を調製し、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６およびＩＬ−１７Ａ含有量をサイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）により解析した。我々の喘息モデルで予想された通り、ＩＦＮ−γのレベルに変化は見られなかったが、ＩＬ−６およびＩＬ−１７Ａの両方のレベルは、Ａｃ−ＴＭＰ−２での処理により有意に減少した。
【図１９】Ａｃ−ＴＭＰ−２は慢性喘息のマウスモデルにおいて気道の炎症を低減する。Ａｃ−ＴＭＰ−２の慢性気道炎症に対する長期の保護および有効性について調査するために、マウスをＯＶＡに感作させ、ＯＶＡエアロゾルでの５連日の刺激を２回行い、２回の刺激の間には３週間の休止期間をおいた。（Ａ）先に説明したように得られた総細胞気道浸潤。（Ｂ）細胞識別計数。Ａｃ−ＴＭＰ−２が最初の刺激中に投与されたか（＋／−）、両方の刺激中に投与されたか（＋／＋）に係わらず、マウスは好酸球気道浸潤から有意に保護された（Ｐ＜０．００１）。
【図２０】ＯＶＡ誘発喘息における予防的および治療的Ａｃ−ＴＭＰ−２処理。Ａｃ−ＴＭＰ−２を局所的に（鼻腔内注入により）投与可能か否か、および予防的な方法で（ＯＶＡ刺激前に）または治療的な方法で（ＯＶＡ刺激後に）投与された時に炎症の進行を抑制可能か否かについて評価するために、マウスをＯＶＡに感作させ、ＯＶＡエアロゾルで刺激する１週間前に４回のＡｃ−ＴＭＰ−２のｉ．ｎ．注入で処理するか（予防的）、または上記刺激の開始から２日後に４回のＡｃ−ＴＭＰ−２のｉ．ｎ．注入で処理するか（治療的）のいずれかを行った。（Ａ）先に説明したように得られた総細胞気道浸潤。（Ｂ）細胞識別計数。マウスのＡｃ−ＴＭＰ−２処理が予防的態様か治療的態様かに係わらず、両方の群は好酸球気道浸潤から有意に保護された（Ｐ＜０．００１）。
【図２１】Ｔｈ２サイトカインは、予防的および治療的Ａｃ−ＴＭＰ−２処理におけるＢＡＬＦで減少する。個々のマウスの肺から全タンパク質抽出物を調製し、インターロイキン−５およびＩＬ−１３含有量をサイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）により解析した。ＩＬ−５およびＩＬ−１３の両方のレベルは、Ａｃ−ＴＭＰ−２での予防的および治療的処理の両方で有意に減少した（Ｐ＜０．０１およびＰ＜０．００１）。
【図２２】Ａｃ−ＴＭＰ−２は粘膜に蓄積する制御性Ｔ細胞の発生を促進する。Ａｃ−ＴＭＰ−２またはＰＢＳ（Ｖｃｌ）を６日間ｉ．ｐ．注入することによりナイーブマウスを処理し、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）、脾臓および小腸粘膜固有層を、Ｔｒｅｇの存在について分析した。（Ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−２で処理したまたはしていないマウスの腸間膜リンパ節、脾臓および小腸粘膜固有層から細胞を調製した。（Ｂ）ＭＬＮ、脾臓、幽門リンパ節（ＰＬＮ）および小腸粘膜固有層（ＬＰ）からの細胞をＣＣＲ９抗体、ＭＬＮで作られた細胞で専ら発現されるマーカーで染色し、フローサイトメトリーにより解析した。データは、Ａｃ−ＴＭＰ−２が小腸粘膜におけるＴｒｅｇの有意な蓄積を促進することを示し、粘膜固有層で見られたＴｒｅｇにおけるＣＣＲ９の発現はＴｒｅｇが腸間膜リンパ節に由来することを示唆する（Ｐ＜０．０５）。
【図２３】炎症に対するＡｃ−ＴＭＰ−２を介した保護は制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に依存する。我々の実験的喘息のモデルにおいて、Ａｃ−ＴＭＰ−２により誘導される保護におけるＴｒｅｇの重要性を調査するため、Ｔｒｅｇの転写因子であるＦｏｘｐ３プロモーターの下でジフテリア毒素（ＤＴ）受容体を発現するように操作されたトランスジェニックマウス（ＤＥＲＥＧマウス）において、ＤＴを用いてＴｒｅｇを選択的に欠乏させた。野生型対照（Ｃ５７Ｂｌ／６）およびＤＥＲＥＧマウスをＯＶＡで感作および刺激した。Ｔｒｅｇを欠乏させるためＤＴを注入し、Ａｃ−ＴＭＰ−２で処理したマウス（ＤＥＲＥＧマウス）の気道炎症およびＢＡＬ炎症のレベルは、ＯＶＡで刺激されＤＴに曝露された未処理のマウスと同程度であった。これらの結果から、Ｔｒｅｇが我々の喘息マウスモデルにおいてＡｃ−ＴＭＰ−２による炎症の抑制に必須の役割を担うことが示唆される。
【図２４】ＴｒｅｇはＡｃ−ＴＭＰ−２処理マウスにおけるＴｈ２サイトカインの抑制に重要である。個々のマウスの肺から全タンパク質抽出物を調製し、ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３含有量をサイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）により解析した。ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３のレベルは、野生型マウスにおいて、Ａｃ−ＴＭＰ−２での処理により有意に減少した。一方、Ｔｒｅｇを欠乏させ、Ａｃ−ＴＭＰ−２で処理したＤＥＲＥＧマウスでは有意な差異がなかった（＊＊Ｐ＜０．０１および＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【図２５】Ａｃ−ＴＭＰ−２に誘導されたＴｒｅｇは炎症誘発性サイトカインの抑制に重要である。個々のマウスの肺から全タンパク質抽出物を調製し、ＩＦＮ−γ、インターロイキン−６、ＩＬ−９およびＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２３、およびＭＣＰ−１含有量をサイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）により解析した。ＩＦＮ−γのレベルは検出レベルを下回り（データは示さない）、Ａｃ−ＴＭＰ−２の存在下ではＩＬ−６のみが野生型マウスにおいて下方制御された。予想された通り、我々の喘息マウスモデルにおいて、Ｔｈ−１およびＴｈ−１７サイトカインレベルは低いままであるか、変化しなかった。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、炎症および／または、喘息および／または炎症性腸疾患のような炎症に関連する疾患または症状を軽減、緩和、および／または予防する方法に関する。
本発明は、少なくとも部分的には、イヌ鉤虫を含むがそれに限定されない鉤虫由来の、またはその鉤虫から得られる１つ以上の組織メタロプロテアーゼインヒビタータンパク質が対象における炎症および／または、喘息および／または炎症性腸疾患のような炎症に関連する疾患または症状を軽減、緩和、および／または予防するのに有効であり得るという予想外の発見を基礎としている。
【００２２】
特定の態様において、本発明は（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを、炎症および／または、喘息および／または炎症性腸疾患のような炎症に関連する疾患または症状を軽減、緩和、および／または予防するために使用することを意図する。
【００２３】
本明細書全体にわたり、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む」、「含み」、「含んで」という用語は、記載された整数または整数のグループを包含するが、他のいかなる整数または整数のグループも排除しないことを意図するものとする。
【００２４】
本明細書で用いられる不定冠詞「１つの」は、１つの物または複数の物（例えばタンパク質）を指す場合があり、単一の物に限定されると解釈または理解されるべきではない。
一態様において、本発明は対象において炎症を軽減または緩和する方法を提供し、その方法は対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与する工程を含む。
【００２５】
別の態様において、本発明は対象において炎症を予防する方法を提供し、その方法は対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与する工程を含む。
【００２６】
「軽減」とは、対象において炎症を軽減する、とあるように、炎症に関連する症候、様相、または特徴（例えば発赤、ほてり、腫脹、および／または痛み）を、または対象が炎症に関連する症候、様相、または特徴を経験する時間の長さを、軽くするまたは短くすることを意味する。このような軽減は、対象に有益であるために絶対的なものである必要はない。「緩和」とは、対象において炎症を緩和する、とあるように、炎症に関連する症候、様相、または特徴（例えば発赤、ほてり、腫脹、および／または痛み）の重症度または重篤度を低下させることを意味する。このような緩和は、対象に有益であるために絶対的なものである必要はない。対象における炎症の軽減および／または緩和は、通常の技術者に周知の任意の方法または基準（定性的および定量的の両方の方法および基準を含む）を用いて判定することができる。
【００２７】
対象において炎症を軽減または緩和することは、対象において炎症を治療する方法であることが理解されよう。本明細書において、「治療する」（または「治療」）とは、進行し始めた炎症の兆候または症状を改善する治療的介入を指す。炎症に関して「改善する」という用語は、観察可能なあらゆる治療上の有益な効果を指す。この有益な効果は、通常の技術者に周知の任意の方法または基準を用いて判定することができる。
【００２８】
本明細書において、「予防する」（または「予防」）とは、炎症の症状、様相、または特徴の発現の前に開始される（治療上有効量のＡｃ−ＴＭＰ−１／Ａｃ−ＴＭＰ−２またはそれらの生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体を投与するなどの）症状、様相、または特徴を予防または軽減するような一連の行動を指す。そのような予防は、対象に有益であるために絶対的なものである必要はないことが理解されよう。「予防的」処理とは、炎症の兆候を示していないか、または初期の兆候のみを示す対象に対し、炎症の症状、様相、または特徴が進行するリスクを低減する目的で施される処理である。
【００２９】
本明細書において、「炎症」とは種々の損傷または炎症に対する、発赤、ほてり、腫脹、および痛み（時に機能障害または移動性の低下を含む）により特徴付けられる周知の局所的反応を指す。炎症は、感染症を取込みそれが初期感染巣から広がるのを抑制する初期防御機構の典型である。炎症の主な事象は、毛細血管が拡張して血流を増大させること、微小血管系構造の変化、血漿やタンパク質および白血球の循環系からの漏出、ならびに白血球の毛細血管からの遊走および損傷または感染部位への蓄積を含む。
【００３０】
炎症は、時に対象における疾患、障害、および／または症状に伴うものであるか、または疾患、障害、および／または症状により二次的に生じるものであり、上記疾患、障害、および／または症状は免疫に関するもの（例えば自己免疫性の疾患、障害、および／または症状）およびアレルギー反応を含む。免疫に関する疾患、障害、および／または症状の例としては、限定されるものではないが、アジソン病、強直性脊椎炎、セリアック病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、クローン病、脱髄性神経障害、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、インスリン依存型糖尿病（１型）、若年性関節炎、川崎病、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋梗塞後症候群、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、特発性肺線維症、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、潰瘍性大腸炎、脈管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【００３１】
当業者には理解されるであろうが、消化管の疾患（例えば、クローン病や潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患または慢性胃炎）および呼吸器系の疾患（例えば、喘息、肺気腫、慢性気管支炎、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））は炎症性要素を有し、そのため本開示の方法を用いた治療に特に修正可能である。
【００３２】
したがって、更に別の態様において、本発明は対象において炎症性腸疾患を治療および／または予防する方法を提供し、その方法は対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与する工程を含む。
【００３３】
一実施形態において、炎症性腸疾患はクローン病または潰瘍性大腸炎である。
更なる態様において、本発明は対象において喘息を治療および／または予防する方法を提供し、その方法は対象に治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−１（配列番号１）またはＡｃ−ＴＭＰ−１の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、（ｂ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せを投与する工程を含む。
【００３４】
当業者には理解されるであろうが、対象における疾患、障害、および／または症状に伴う炎症、または疾患、障害、および／または症状により二次的に生じる炎症は、その疾患、障害、および／または症状がベースライン治療に不応性である時にしばしば生じる。ベースライン治療は、例えば、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤（例えば、抗ＴＮＦα剤、抗ＩＬ−５剤、抗ＩＬ−１３剤、抗ＩＬ−１７剤、および抗ＩＬ−６Ｒ剤）、抗生物質、およびこれらの組合せを含む。「不応性」とは、治療特に一次治療に対する耐性を意図している。
【００３５】
「対象」という用語は、ヒトおよび獣医学の対象の両方を含む。例えば、対象への投与はヒト対象または獣医学の対象への投与を含む場合がある。好ましくは、対象はヒトである。しかし、本発明に従う治療的用途は、家畜や伴侶動物等、ウマなどのパフォーマンス動物、畜産動物、および実験動物といった哺乳類にも適用可能である。
【００３６】
「投与」とは、選択された経路で対象に組成物（例えば、Ａｃ−ＴＭＰ−１／Ａｃ−ＴＭＰ−２、またはそれらの生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体を含む医薬組成物）を導入することを意図している。
【００３７】
「治療上有効量」という用語は、特定の薬剤で治療される対象において所望の効果を達成するのに十分な、その薬剤の量を示す。例えば、これは炎症を軽減、緩和および／または予防するのに必要な、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体）を含む組成物の量であってもよい。いくつかの実施形態において、「治療上有効量」は炎症の症候を軽減または解消するのに十分である。他の実施形態において、「治療上有効量」は所望の生物学的効果を達成するのに十分な量、例えば炎症に関連する発赤、ほてり、腫脹、および／または痛みを低減するのに有効な量である。
【００３８】
理想的には、薬剤の治療上有効量は、対象において実質的な細胞毒性を引き起こすことなく所望の結果をもたらすのに十分な量である。薬剤、例えばＡｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体）の、炎症を軽減、緩和および／または予防するのに有効な治療上有効量は、治療される対象、関連する疾患、障害および／または症状のタイプおよび重症度、ならびに治療組成物の投与の態様に依存し得る。
【００３９】
Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体）を含む組成物の治療上有効量は、一連の治療において、単回投与、または複数回投与、例えば毎日投与されてもよい。ただし、投与の頻度は適用される調製物、治療される対象、炎症の重症度、および治療または組成物の投与の態様に依存する。
【００４０】
「Ａｃ−ＴＭＰ−１」とは、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ（イヌ鉤虫）に由来するメタロプロテアーゼの組織性インヒビターである組織性メタロプロテアーゼインヒビター１を意味する。Ａｃ−ＴＭＰ−１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：＃Ｑ９６３１８）は１４０アミノ酸ポリペプチドである。
【００４１】
「Ａｃ−ＴＭＰ−２」とは、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍに由来するメタロプロテアーゼの更なる組織性インヒビターである組織性メタロプロテアーゼインヒビター２を意味する。Ａｃ−ＴＭＰ−２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：＃Ｂ１Ｑ１４３）は２４４アミノ酸ポリペプチドである。
【００４２】
本明細書において、「生物学的に活性なフラグメント」とは、Ａｃ−ＴＭＰ−１またはＡｃ−ＴＭＰ−２の１０％以上、好ましくは２５％以上、より好ましくは５０％以上、一層好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以上の生物学的活性を有する、Ａｃ−ＴＭＰ−１またはＡｃ−ＴＭＰ−２のドメインを含む一部または部分配列（ｓｕｂ−ｓｅｑｕｅｎｃｅ）である。このような活性は、当分野の技術者がその活性を確認するのに一般に有効であると認識できる標準的試験法およびバイオアッセイを用いて評価することができる。
【００４３】
Ａｃ−ＴＭＰ−１のフラグメントは、成熟Ａｃ−ＴＭＰ−１配列の１２０個未満、１１０個未満、１００個未満、７５個未満、または５０個未満の連続するアミノ酸を構成し得る。Ａｃ−ＴＭＰ−２のフラグメントは、成熟Ａｃ−ＴＭＰ−２配列の２２０個未満、２００個未満、１５０個未満、１２０個未満、１１０個未満、１００個未満、７５個未満、または５０個未満の連続するアミノ酸を構成し得る。Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２の多重フラグメントも意図される。
【００４４】
（タンパク質の）「ドメイン」とは、共通の構造的、生理化学的および機能的特徴、例えば疎水性ドメイン、極性ドメイン、球状ドメイン、ヘリックスドメイン、またはネトリン様（ＮＴＲ）ドメイン、あるいは特性、例えばタンパク質結合ドメイン、受容体結合ドメイン、共役因子結合ドメイン等を有するタンパク質の一部を意味する。
【００４５】
また、Ａｃ−ＴＭＰ−１（またはそのフラグメント）またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそのフラグメント）における、野生型Ａｃ−ＴＭＰ−１／Ａｃ−ＴＭＰ−２と比較した時の１つ以上のアミノ酸の置換、挿入および／または欠失を含むＡｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２の変異体も意図される。
【００４６】
典型的には、タンパク質に関して「変異体」タンパク質は、異なるアミノ酸に置換された１つ以上のアミノ酸を有する。そのタンパク質の活性の本質を変えることなく、いくつかのアミノ酸を概ね同様の特性を持つ他のアミノ酸に変更可能であること（すなわち、保存的置換）が当分野ではよく理解されている。
【００４７】
Ａｃ−ＴＭＰ−１／Ａｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらのフラグメント）などの標準配列のうちの１つ以上のアミノ酸残基を、Ａｃ−ＴＭＰ−１／Ａｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらのフラグメント）の生物学的活性を実質的に変えることなく修飾し、または欠失させ、あるいは追加の配列を付加することが可能であることも理解されよう。このような活性は、当分野の技術者がその活性を確認するのに一般に有効であると認識できる標準的試験法およびバイオアッセイを用いて評価することができる。
【００４８】
「変異体」という用語は、Ａｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２のペプチドミメティクスおよびオルソログを含む。「ペプチドミメティクス」とは、天然の親ペプチドの生物学的作用を模倣するか、またはその作用と拮抗する非ペプチド構造要素を含む分子を意味する。ペプチドミメティクスの例としては、ペプチド骨格が１つ以上のベンゾジアゼピン分子で置換されたペプチド化合物（例えばＪａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：１９３７−４２，１９９３を参照）および「レトロ−インベルソ」ペプチド（例えば米国特許第４，５２２，７５２号明細書を参照）が挙げられる。この用語はまた、タンパク質中の特定のアミノ酸の置換基として、そのタンパク質の機能に相当な程度まで有害に干渉することなく構造的および機能的に働く部分（ｍｏｉｅｔｙ）であって、天然アミノ酸以外の部分も参照する。アミノ酸ミメティクスの例にはＤ−アミノ酸が含まれる。１つ以上のＤ−アミノ酸で置換されたタンパク質は、周知のタンパク質合成手順によって作製することができる。更なる置換は、ｂ−シアノアラニン、カナバニン、ジエンコル酸、ノルロイシン、３−ホスホセリン、ホモセリン、ジヒドロキシフェニルアラニン、５−ヒドロキシトリプトファン、１−メチルヒスチジン、および３−メチルヒスチジン等の、官能基を備えた変異体側鎖を有するアミノ酸類似体を含む。
【００４９】
Ａｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２の「オルソログ」とは、他の腸管寄生虫（すなわち、鉤虫、鞭虫および回虫）に由来するＴＭＰオルソログを意味し、他の腸管寄生虫は、例えばアメリカ鉤虫（Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ）、ズビニ鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）およびセイロン鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）といったヒト鉤虫、および例えばＴｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｓｕｉｓやＴｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａといったブタ鞭虫を含む。
【００５０】
一実施形態において、タンパク質変異体またはオルソログは、配列番号１または配列番号２のような標準アミノ酸配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５％、８０％または８５％、更に好ましくは少なくとも９０％、９５％、９８％、または９９％の配列相同性を共有する。
【００５１】
好ましくは、配列相同性は標準配列の少なくとも６０％に亘り、より好ましくは少なくとも７５％に亘り、より好ましくは少なくとも９０％に亘り、またはより好ましくは少なくとも９５％、９８％またはほぼ全長に亘り測定される。
【００５２】
配列同一性のパーセントを決定するために、コンピュータによるアルゴリズムの実行（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ社のＧｅｎｅｗｏｒｋｓプログラム；ウィスコンシン・ジェネティクス・ソフトウェア・パッケージ  リリース７．０のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、ジェネティクス・コンピュータ・グループ、アメリカ合衆国ウィスコンシン州）により、または種々の方法の中から選択された任意のものにより生成された最良アラインメント（すなわち、比較ウインドウに亘り最高パーセンテージの相同性をもたらす）および検査により、アミノ酸および／またはヌクレオチド配列の最適アラインメントを行うことができる。例えばＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２，１９９７に開示されているようなＢＬＡＳＴファミリーのプログラムを参照してもよい。
【００５３】
「分子生物学における最新プロトコール」（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ）Ａｕｓｕｂｅｌら編（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ  ＮＹ，１９９５−１９９９）のユニット１９．３には、配列解析について詳細に説明されている。
【００５４】
変異体タンパク質は、当業者に周知の種々の標準的な突然変異誘発手順によって製造することができる。突然変異は、１つの遺伝子、複数の遺伝子のブロック、または染色体全体のヌクレオチド配列の修飾と、その後の１つ以上の突然変異タンパク質の製造を伴い得る。１つの遺伝子における変更は点突然変異の結果であり得、これはＤＮＡ配列中の１つのヌクレオチド塩基の除去、付加または置換を含む。あるいは、この変更は多数のヌクレオチドの挿入または欠失に関する変更の結果であり得る。
【００５５】
突然変異は化学的または物理的突然変異原への曝露後に生じる。このような突然変異誘発手段は、電離放射線、紫外線、およびアルキル化剤や多環芳香族炭化水素のような多種多様な化学物質を含み、これらの全てが核酸と直接または間接的に（通常はいくつかの代謝的生体内変化を経て）相互作用することができる。このような環境要因によって誘発されたＤＮＡ損傷は、影響を受けたＤＮＡが複製または修復される時に、塩基配列の修飾ひいては突然変異をもたらし得、この突然変異は後にタンパク質レベルで反映される。突然変異は、特定の標的化方法の使用を介した部位特異的なものであってもよい。
【００５６】
１つ以上の突然変異を含むＡｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２の製造に用いられる突然変異誘発手順は、限定されるものではないが、ランダム突然変異誘発（例えば、既知ＤＮＡフラグメントの挿入を介した遺伝子の不活性化に基づく挿入変異、化学的突然変異誘発、放射線突然変異誘発、エラープローンＰＣＲ（Ｃａｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｊｏｙｃｅ，ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｐｐｌ．２：２８−３３，１９９２））および部位特異的突然変異誘発（例えば、所望の突然変異のＤＮＡ配列をコードする特定のオリゴヌクレオチドプライマー配列を用いるもの）を含む。部位特異的突然変異誘発の更なる方法は、米国特許第５，２２０，００７号；第５，２８４，７６０号；第５，３５４，６７０号；第５，３６６，８７８号；第５，３８９，５１４号；第５，６３５，３７７号；および第５，７８９，１６６号の明細書に開示されている。
【００５７】
単離されたＡｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２（フラグメントおよび変異体を含む）は、当業者に周知の任意の適切な手順で調製することができる。
一実施形態において、Ａｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２（フラグメントおよび変異体を含む）は化学合成により製造される。化学合成技術は当分野において周知であるが、当業者は適切な方法の例を得るために「タンパク質科学における最新プロトコール」（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ）Ｃｏｌｉｇａｎら編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  ＮＹ（１９９５−２００１）を参照してもよい。
【００５８】
別の実施形態において、Ａｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２（フラグメントおよび変異体を含む）は組換えタンパク質として調製される。
組換えタンパク質の製造は当分野で周知であるが、当業者は例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「分子クローニング．ラボラトリーマニュアル」（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ．Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）の特にセクション１６および１７；「分子生物学における最新プロトコール」（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ）Ａｕｓｕｂｅｌら編（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９５−１９９９）の特にチャプター１０および１６；および「タンパク質科学における最新プロトコール」（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ）Ｃｏｌｉｇａｎら編、（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９５−１９９９）の特にチャプター１、５および６に記載されているような標準的プロトコールを参照してもよい。
【００５９】
治療上有効量のＡｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）に加え、炎症を軽減、緩和および／または予防するための（および／または炎症に関連する疾患、障害および／または症状を治療または予防するための）、当業者に周知の１つ以上の追加の作用剤の様々な組合せが、それを必要とする対象に投与されてもよい。すなわち、治療上有効量のＡｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）に加え、炎症の治療および／または予防に以前から用いられている１つ以上の追加の作用剤を対象に投与してもよい。
【００６０】
炎症を軽減、緩和および／または予防するためのある実施形態では、例えば、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤（例えば、抗ＴＮＦα剤、抗ＩＬ−５剤、抗ＩＬ−１３剤、抗ＩＬ−１７剤、および抗ＩＬ−６Ｒ剤）、特に抗サイトカイン／サイトカイン受容体抗体、抗生物質、およびこれらの組合せを、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）と共に投与することができる。
【００６１】
ある実施形態では、上記１つ以上の追加の作用剤はＡｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）に対し保存効果を提供する。更なる実施形態では、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）は上記１つ以上の追加の作用剤に対し保存効果を提供する。尚更なる実施形態では、上記１つ以上の追加の作用剤はＡｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）の作用に対し相補的効果を提供し、好ましくは炎症に関連する１つ以上の症候の頻度または重症度を無にし、または軽減（し、かつ／または予防）する。
【００６２】
当業者には周知であるように、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は非ステロイド性抗炎症剤（ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔｓ：ＮＳＡＩＡ）とも呼ばれ、鎮痛作用、解熱作用および抗炎症作用を有する薬剤であり、サリチル酸塩（例えばアスピリン）およびプロピオン酸誘導体（例えばイブプロフェンおよびナプロキセン）を含む。
【００６３】
アミノサリチル酸塩は、炎症性腸疾患（特に潰瘍性大腸炎）の治療に用いられ、例えばバルサラジド、メサラジン、オルサラジン、およびスルファサラジンを含むことが当分野において周知である。
【００６４】
当業者には周知であるように、コルチコステロイドは副腎によって生成されるホルモンであるコルチゾールによく似た薬剤である。コルチコステロイドの例としては、限定されるものではないが、コルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびメチルプレドニゾロンが挙げられる。
【００６５】
免疫抑制剤は、特定の疾患または症状に関連する炎症の治療に用いられ、例えばシクロスポリン、アザチオプリンおよびミコフェノラートを含むことが当分野において周知である。
【００６６】
当業者には周知であるように、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤（例えば、抗ＴＮＦα剤、抗ＩＬ−５剤、抗ＩＬ−１３剤、抗ＩＬ−１７剤、および抗ＩＬ−６Ｒ剤）は、限定するものではないが、低分子阻害剤および抗体を含む。
【００６７】
いくつかの実施形態において、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）と１つ以上の追加の作用剤との組合せは、炎症の治療および／または予防において相乗効果をもたらす。したがって、本発明はまた、ある作用剤を用いた任意の症状（例えば、炎症および任意の関連疾患、障害および／または症状）の治療における、その作用剤の治療有効性を増強する方法を含む。
【００６８】
一実施形態において、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）は上記１つ以上の追加の作用剤の投与前に投与される。別の実施形態において、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）は上記１つ以上の追加の作用剤の投与後に投与される。更に別の実施形態において、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）は上記１つ以上の追加の作用剤の投与と同時に投与される。また別の実施形態において、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）の投与および上記１つ以上の追加の作用剤の投与（順次でも同時でも）は、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）、および上記１つ以上の追加の作用剤の一方のみを他方の非存在下で投与した時の炎症の軽減または緩和よりも、炎症を大きく軽減または緩和する。
【００６９】
Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）および上記１つ以上の追加の作用剤は、当業者に周知であるように、治療組成物と共に使用可能な任意の従来法／経路で投与することができる。そのような方法は、限定するものではないが、米国特許第６，０９０，７９０号明細書に記載のような特定の組織部位へのマイクロニードル注射による投与、米国特許第６，０５４，１２２号明細書に記載のような炎症部位に適用される塗り薬、ローションまたはシーラント包帯による投与、または国際公開第９９／４７０７０号に記載のようなインプラントでＡｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）を放出させることによる投与を含む。
【００７０】
この点に関し、Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）および任意に１つ以上の追加の作用剤を含む組成物は、生体材料、生体高分子、ヒドロキシアパタイトまたはその誘導体のような無機材料、外科用インプラント、プロテーゼ、創傷包帯、圧定布、絆創膏、または同様の、上記組成物が適切に含浸された、コーティングされたまたは他の態様で含まれたものと共に、またはこれらの構成要素として投与されてもよい。
【００７１】
適切には、組成物は適切な薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。
好ましくは、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤は、哺乳類、より好ましくはヒトへの投与に適したものである。
【００７２】
「薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤」とは、全身投与に安全に用いられ得る固体または液体の賦形剤、希釈剤または封入物質を意味する。特定の投与経路に応じて、当分野で周知の様々な担体が用いられ得る。担体は、糖、デンプン、セルロースおよびその誘導体、麦芽、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、植物油、合成油、ポリオール、アルギン酸、リン酸緩衝液、乳化剤、等張食塩水、および塩酸塩、臭化物および硫酸塩を含む鉱酸塩等の塩、酢酸塩、プロピオン酸塩およびマロン酸塩等の有機酸、および発熱性物質除去水を含む群から選択されてもよい。
【００７３】
薬学的に許容される担体、希釈剤および賦形剤を記載した役に立つ参考文献は、「レミントンの薬科学」（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．ＮＪ  ＵＳＡ，１９９１）である。
【００７４】
Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）および任意に１つ以上の追加の作用剤を含む組成物を対象に提供するために、任意の安全な投与経路を採用することができる。例えば、経口、直腸、非経口、舌下、口腔、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、吸入、眼内、腹腔内、脳室内、経皮等が採用され得る。
【００７５】
剤形には、錠剤、分散液、懸濁液、注入剤、溶液、シロップ、トローチ、カプセル、坐薬、エアロゾル、経皮パッチ等が含まれる。これらの剤形には、この目的のために特別に設計された制御放出デバイス、またはこの態様で追加的に作用するように変更された他の形態のインプラントの注入または埋め込みも含まれる。Ａｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）および任意に１つ以上の追加の作用剤の制御放出は、それを例えば、アクリル樹脂、ワックス、高級脂肪族アルコール、ポリ乳酸およびポリグリコール酸、ならびにヒドロキシプロピルメチルセルロースのようなセルロース誘導体を含む疎水性ポリマーでコーティングすることにより達成され得る。さらに、制御放出は他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／またはミクロスフェアを用いることにより影響を受けることがある。
【００７６】
上記の組成物は投与量処方に適合する様式で投与されてもよく、そのような量は薬学上／治療上有効である。対象に投与される用量は、本発明の文脈において、対象において適切な期間にわたり有益な反応（例えば炎症の軽減）を達成するのに十分でなくてはならない。投与されるＡｃ−ＴＭＰ−１および／またはＡｃ−ＴＭＰ−２（またはそれらの生物学的に活性なフラグメントおよび変異体）の量は治療される対象に依存し、この対象には、年齢、性別、体重および全体的な健康状態、当分野における通常の技術を有する実践者の判断によって決められる要因が含まれる。
【００７７】
本明細書に記載の組成物は、ウイルスベクター（例えばワクシニア、アデノウイルスおよびアデノウイルス随伴ウイルス（ＡＡＶ））、レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクター、ならびに単純ヘルペスウイルスおよびサイトメガロウイルスに由来するベクター等の発現ベクターを含んでいてもよい。この点では、米国特許第５，９２９，０４０号および米国特許第５，９６２，４２７号の明細書に記載された方法のような遺伝子治療も適用可能である。
【００７８】
本発明が容易に理解され、また実際に実施可能となるように、非限定的な実施例を以下に提示する。
実施例
［実施例１］
組換えＡｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２はＩＢＤを抑制する（ＴＮＢＳモデル）
（動物およびＴＮＢＳ誘発大腸炎）
６週齢のオスのＳｗｉｓｓ  Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（体重２０〜２５ｇ、アニマル・リソーシズ・センター（Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｎｔｒｅ）、西オーストラリア  パース）を、実験に用いる前に７日間馴致させた。マウスは、オーストラリアの動物権利および規制基準に従って飼育した。マウスに関する全ての手順はジェームス・クック大学動物倫理委員会の承認を得た。
【００７９】
Ｎｅｕｒａｔｈら（Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１８２：１２８１−９０，１９９５）によって説明されたように、ＴＮＢＳの腔内注入により大腸炎を誘発した。簡潔に述べると、マウスを自由飲水条件で２４時間絶食させた。ケタミン（５０μｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５μｇ／ｋｇ）の混合物によってマウスをｉ．ｐ．麻酔した。続いて、４５％エタノール中２．５ｍｇ  ＴＮＢＳの溶液１００μＬを、３．２ｃｍ長さの可撓性カテーテルを通して直腸内に注入した。ＴＮＢＳ注入の後、ＴＮＢＳ溶液が漏出するのを防ぐためにマウスを４５°の体位で１分間逆さに保持し、ケージに戻して以降は自由摂食および自由飲水させた。
【００８０】
（実験プロトコール）
０日目に、マウスに２０μｇのＡｃＥＳ、Ａｃ−ＴＭＰ−１、Ａｃ−ＴＭＰ−２、または変性Ａｃ−ＴＭＰ−２の単回腹腔内注入または模擬ＰＢＳ注入を行った。５時間後、マウスに４５％エタノール中２〜２．５ｍｇのＴＮＢＳの直腸内注入を、軽度の麻酔状態で受けさせた。０日目から３日目まで、マウスの体重減少、移動性、全体的な外見、および下痢の存在を毎日モニタリングした。３日目にマウスを安楽死させ、炎症の評価（結腸の長さ、壁肥厚、浮腫、および潰瘍）のために結腸を回収した。
【００８１】
（結果）
２回の別々のＴＮＢＳ大腸炎実験において、組換えＡｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２は体重減少に対して優れた保護を提供した（図３〜６）。Ａｃ−ＴＭＰ−２では更に、臨床スコア、巨視的スコアおよび結腸の長さについて評価し、これらに関しては腸の病変の有意な軽減が見られた（図４〜６）。興味深いことに、巨視的スコアによって評価されたように、トリプシンおよび加熱によるＡｃ−ＴＭＰ−２の変性は、我々のマウスモデルにおいて炎症性大腸炎の保護活性を無効にした（図６）。
【００８２】
［実施例２］
組換えＡｃ−ＴＭＰ−１による実験的喘息の制御
（動物およびＢＳＡ誘発喘息）
２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ）中２０μｇのＢＳＡを、０日目および７日目の２回にわたり腹腔内（ｉ．ｐ．）注入することによりマウスを感作させた。１４日目から２１日目に、マウスに２０μｇのＡｃＥＳまたはＡｃ−ＴＭＰ−１をｉ．ｐ．注入した。１８日目から２１日目まで、マウスに５０μｇのＢＳＡを軽度の麻酔状態で鼻腔内（ｉ．ｎ．）注入した。２４日目にマウスを屠殺し、組織試料を回収した。
【００８３】
（結果）
ＡｃＥＳまたはＡｃ−ＴＭＰ−１がマウスにおいてアレルギー性気道炎症を予防できるか否かを調べるために、ＢＡＬＢ／ｃマウスを刺激前の４連日の間、および刺激と共に更に４日間、ＡｃＥＳまたはＡｃ−ＴＭＰ−１（２０μｇ  ｉ．ｐ．）で毎日処理した。ＰＢＳ模擬注入群と比較して、ＡｃＥＳおよびＡｃ−ＴＭＰ−１処理マウスでは好酸球増加、肺の血管周囲および気管支周囲の細胞浸潤が有意に低下していた（図７および９）。ナイーブ群と比較して、ＰＢＳで処理されＢＳＡで刺激されたマウスでは、インターロイキン（ＩＬ）−５やＩＬ−１３等のＴｈ２サイトカインおよびＩＬ−６等の炎症マーカーのレベルが上昇した（図８および１０）。ＡｃＥＳ処理およびＡｃ−ＴＭＰ−１処理により、（それぞれ）肺でＩＬ−５は１〜５分の１に低下し、ＩＬ−１３は２分の１に低下することが判明した（図８）。炎症性サイトカインＩＬ−６も、ＡｃＥＳまたはＡｃ−ＴＭＰ−１で処理したマウスにおいて２分の１〜３分の１に減少した（図１０）。興味深いことに、炎症誘発性サイトカインであるＴＮＦαまたはＩＦＮγは喘息誘発性炎症と直接的に関係しないのに、ＡｃＥＳ処理マウスにおいてレベルが（それぞれ）３倍および５倍増加した（図１０）。しかしながら、Ａｃ−ＴＭＰ−１処理ではレベルは影響を受けなかった。これは、Ａｃ−ＴＭＰ−１は十分に耐性化され、炎症反応を引き起こさないことを示唆している。ＩＬ−１２およびＭＣＰ−１のレベルはＡｃＥＳ処理またはＡｃ−ＴＭＰ−１処理による影響を受けなかった。これは、ＢＳＡ誘発性炎症の予防がＴｈ１応答の誘導を必要とせず、単球走化性に影響しないことを意味する（図１０および１１）。驚くべきことに、ＡｃＥＳ処理またはＡｃ−ＴＭＰ−１処理は、肺において、ＩＬ−１７Ａレベルを２分の１〜３分の１に減少させた（図１１）。高レベルのＩＬ−１７Ａは重度の喘息誘発性炎症および気道過敏症と関連することが報告されている。総合すると、これらの結果はＡｃＥＳおよびＡｃ−ＴＭＰ−１が好酸球およびリンパ球のＢＳＡ誘発性気道浸潤、さらにＴｈ２応答およびＴｈ１７応答ならびにＩＬ−６等の炎症誘発性サイトカインを有意に低減することを実証している。
【００８４】
［実施例３］
組換えＡｃ−ＴＭＰ−１／２による実験的喘息の制御
（動物およびＯＶＡ誘発喘息）
２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ）中２０μｇのＯＶＡ（Ｐｉｅｒｃｅ）を、０日目および７日目の２回にわたり腹腔内（ｉ．ｐ．）注入することによりマウスを感作させた。１４日目から２１日目に、マウスに２０μｇのＡｃ−ＴＭＰ−１またはＡｃ−ＴＭＰ−２をｉ．ｐ．注入した。１８日目から２２日目まで、超音波式ネブライザを用いて、マウスをＯＶＡ（０．２５％）エアロゾルに２０分間曝露した。２４日目にマウスを解析した。
【００８５】
２４日目にマウスを屠殺し、気管支肺胞洗浄物を回収した。細胞を計数し、抗ＳｉｇｌｅｃＦまたは抗ＣＣＲ３、抗Ｇｒ１、抗ＣＤ３、および抗ＣＤ１９モノクローナル抗体で染色し、ＦＡＣＳ  ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターおよびＦＡＣＳ  Ｄｉｖａソフトウェアを用いた蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）により分析した。好酸球はＣＣＲ３＋またはＳｉｇｌｅｃＦ＋ＣＤ３−ＣＤ１９−と定義され、好中球はＧｒ−１ｈｉｇｈＳｉｇｌｅｃＦーＣＤ３−ＣＤ１９−と、リンパ球はＣＤ３＋ＣＤ１９＋と定義された。
【００８６】
２４日目にマウスを屠殺し、腹腔洗浄物を回収した。簡潔に述べると、５％ＦＣＳを付与した５ｍｌの氷冷ＨＢＳＳで腹膜を２回洗浄した。ＰＬ細胞識別計数については、細胞を抗ＣＣＲ３、抗Ｇｒ１、抗ＣＤ３、および抗ＣＤ１９モノクローナル抗体で染色し、ＦＡＣＳ  ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターおよびＦＡＣＳ  Ｄｉｖａソフトウェアを用いた蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）により分析した。
【００８７】
個々のマウスからの肺試料を採取し、カルシウムおよびマグネシウムフリーかつ５％ウシ胎仔血清を含有するハンクス緩衝塩類溶液中でホモジナイズした。細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで１ｍｇ／ｍＬのＡｃ−ＴＭＰ−１により再刺激するか、あるいは刺激しないまま、３７℃で３日間置いた。これらの培養物から上清を回収し、サイトメトリックビーズアレイおよびＦＡＣＳ解析によりＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＭＣＰ−１およびＩＬ−１７Ａレベルを評価した。別法として、個々のマウスの即時冷凍した肺から、カルシウムおよびマグネシウムフリーかつプロテイナーゼカクテルインヒビターを含有するハンクス緩衝塩類溶液を溶媒とする全タンパク質抽出物を調製した。抽出物の内容物をＣＢＡにより分析した。
【００８８】
（結果）
我々の研究室で得られた前回の結果により、ＡｃＥＳの複合組成物は、好酸球の腹膜浸潤と関連する強いＴｈ２応答を含む様々なＴ細胞応答を誘発することが判明した。Ａｃ−ＴＭＰ−１またはＡｃ−ＴＭＰ−２が気道よりも腹膜でより強い走化性シグナルを誘導しなかったことを確認するために、気管支肺胞洗浄と並行して、ナイーブマウス、ＰＢＳ模擬注入で処理したマウス、Ａｃ−ＴＭＰ−１またはＡｃ−ＴＭＰ−２で処理したマウスの腹膜洗浄物を回収し、ＦＡＣＳにより解析した（図１２、１５および１６）。Ａｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２で処理したマウスでは、模擬注入群と比較して気道における好酸球増加が有意に低下したが、一方で腹膜における好酸球の浸潤はなかった（図１２、１５および１６）。これは、Ａｃ−ＴＭＰ−１およびＡｃ−ＴＭＰ−２が、アレルギー反応部位のみまたは炎症反応部位のみで好酸球の誘導を抑制することを示している。
【００８９】
ＯＶＡ刺激マウスからの肺細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＯＶＡ刺激でＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３分泌レベルの増加を示した（図１３）。一方、ＭＣＰ−１およびＩＬ−１７Ａの上清レベルはＰＢＳ模擬マウス肺細胞およびＯＶＡ刺激マウス肺細胞の両方で、ＯＶＡ刺激時に同様に上昇した（図１４）。気管支肺胞洗浄での結果と一致して、Ｔｈ２サイトカインＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３、ならびに炎症誘発性サイトカインＭＣＰ−１およびＩＬ−１７Ａのレベルは、Ａｃ−ＴＭＰ−１処理マウスからのＯＶＡ刺激肺細胞で低下した（図１３および１４）。同様に、肺サイトカイン含量はＡｃ−ＴＭＰ−２で処理したマウスにおいて有意に低下した（図１７および１８）。これは、Ａｃ−ＴＭＰ−２がＴｈ２サイトカインおよびＩＬ−６やＩＬ−１７Ａ等の炎症誘発性サイトカインを効果的に抑制することを示唆している。
【００９０】
［実施例４］
組換えＡｃ−ＴＭＰ−２による実験的慢性喘息の制御
（動物およびＯＶＡ誘発慢性喘息）
２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ）中２０μｇのＯＶＡ（Ｐｉｅｒｃｅ）を、０日目および７日目の２回にわたり腹腔内（ｉ．ｐ．）注入することにより感作を行った。１４日目から１８日目に、マウスに２０μｇのＡｃ−ＴＭＰ−２またはＰＢＳ対照溶液をｉ．ｐ．注入した。１７日目から２０日目までおよび３６日目から４０日目まで、超音波式ネブライザを用いて、マウスをＯＶＡ（０．２５％）エアロゾルに２０分間曝露した。３６日目から４０日目に、以前にＡｃ−ＴＭＰ−２で処理したマウスのうちの１グループに、再び２０μｇのＡｃ−ＴＭＰ−２をｉ．ｐ．注入した。残りのマウスには、以前にＡｃ−ＴＭＰ−２で処理したか否かとは無関係に、ＰＢＳ対照溶液をｉ．ｐ．注入した。４２日目に、マウスを気道炎症について解析した。
【００９１】
（結果）
慢性喘息のマウスモデルにおいて、Ａｃ−ＴＭＰ−２が最初のＯＶＡ刺激中にのみ投与された場合（＋／−）、または両方のＯＶＡ刺激中に投与された場合（＋／＋）のいずれかにおいて気道炎症を軽減したか否かを評価するために、ナイーブマウス、ＰＢＳ模擬注入で処理したマウス、またはＡｃ−ＴＭＰ−２（＋／−および＋／＋）で処理したマウスの気管支肺胞洗浄物を回収し、ＦＡＣＳにより解析した（図１９）。Ａｃ−ＴＭＰ−２が最初の刺激中に投与されたか（＋／−）、両方の刺激中に投与されたか（＋／＋）に係わらず、このＯＶＡ誘発慢性喘息モデルにおいて、処理されたマウスは、ＰＢＳ模擬注入で処理したマウスと比較して、総細胞浸潤および好酸球気道浸潤の両方において有意な低下を示した（図１９）。
【００９２】
［実施例５］
組換えＡｃ−ＴＭＰ−２による実験的喘息の制御
（動物およびＯＶＡ誘発喘息）
２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ）中２０μｇのＯＶＡ（Ｐｉｅｒｃｅ）を、０日目および７日目の２回にわたり腹腔内（ｉ．ｐ．）注入することにより感作を行った。１４日目から１８日目に、ＯＶＡ感作マウスの１つのコホートに２０μｇのＡｃ−ＴＭＰ−２を鼻腔内（ｉ．ｎ．）注入した（予防的処理）。２２日目から２６日目まで、超音波式ネブライザを用いて、ＯＶＡ感作マウスをＯＶＡ（０．２５％）エアロゾルに２０分間暴露した。２４日目から２８日目に、ＯＶＡ感作マウスの第２のコホートに２０μｇのＡｃ−ＴＭＰ−２を鼻腔内（ｉ．ｎ．）注入した（治療的処理）。３０日目に、マウスを気道炎症について解析した。
【００９３】
（結果）
鼻腔内注入により局所的に投与されたＡｃ−ＴＭＰ−２が、予防的（Ｔｐ、ＯＶＡ刺激前）または治療的（Ｔｃ、ＯＶＡ刺激後）態様で投与された場合に気道炎症を低減することができたか否かを判定するために、ナイーブマウス、ＯＶＡで刺激されＰＢＳ模擬注入で処理されたマウス、またはＯＶＡで刺激されＡｃ−ＴＭＰ−２で処理されたマウス（ＴｃおよびＴｐ）の気管支肺胞洗浄物を回収し、ＦＡＣＳにより解析し、ここから総細胞数および細胞識別計数を得た（図２０）。マウスが予防的態様で処理されたか治療的態様で処理されたかに係わらず、鼻腔内Ａｃ−ＴＭＰ−２は総細胞浸潤および好酸球気道細胞浸潤の両方を有意に低減した（図２０）。重要なことに、これらのデータは、この喘息のマウスモデルにおいて気道炎症を予防するために、Ａｃ−ＴＭＰ−２が非経口で投与され得るばかりでなく、局所的に投与されてもよいことを浮き彫りにしている。
【００９４】
ナイーブマウス、ＯＶＡに曝露されＰＢＳ模擬注入で処理されたマウス、またはＯＶＡに曝露されＡｃ−ＴＭＰ−２で処理されたマウス（ＴｃおよびＴｐ）の肺からの全タンパク質抽出物を調製し、サイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）によりＴｈ２サイトカイン、ＩＬ−５およびＩＬ−１３について解析した。ナイーブ群と比較して、ＰＢＳで処理しＯＶＡで刺激したマウスは、ＩＬ−５およびＩＬ−１３の両方で有意に上昇したレベルを示した（図２１）。Ａｃ−ＴＭＰ−２での処理は、予防的態様か治療的態様かに係わらず、ＩＬ−５レベルおよびＩＬ−１３レベルを有意に低下させることが分かった（図２１）。総合すると、これらの結果はＡｃ−ＴＭＰ−２が鼻腔内投与された時にＯＶＡ誘発性好酸球気道浸潤および関連するＴｈ２炎症反応を有意に低下させることを実証している。
【００９５】
［実施例６］
組換えＡｃ−ＴＭＰ−２による制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の制御
（動物および制御性Ｔ細胞）
マウスにＡｃ−ＴＭＰ−２（２０μｇ）またはＰＢＳを６日間腹腔内注入し、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）、脾臓および小腸粘膜固有層（ＬＰ）を採取して、Ｔｒｅｇの存在について分析した。各組織からの個々の細胞を単離し、ＴｒｅｇマーカーであるＣＤ４、ＣＤ２５およびＦｏｘｐ３に関して染色した後、フローサイトメトリーにより解析した。ＭＬＮ、脾臓および幽門リンパ節（ＰＬＮ）ならびにＬＰに由来するＴｒｅｇをＣＣＲ９抗体で更に染色し、フローサイトメトリーにより解析し、それらの起源の組織を決定した。
【００９６】
（結果）
ナイーブマウスへのＡｃ−ＴＭＰ−２の投与は小腸の固有層へのＴｒｅｇのリクルートを有意に誘導した（図２２）。反対に、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）由来のＴｒｅｇの頻度はＡｃ−ＴＭＰ−２処理で有意に低下した（図２２）。これらのデータはＭＬＮから小腸粘膜へのＴｒｅｇの遊走パターンを示唆している。この裏付けとして、固有層Ｔｒｅｇの６０パーセントがケモカイン受容体ＣＣＲ９を発現しており、これらが腸管関連排出リンパ節（すなわちＭＬＮ）においてインプリンティングされていたことを示している（図２２）。この観察結果は、ＭＬＮで生成されたＴｒｅｇが普遍的な抗原への寛容を維持するために粘膜に蓄積することを示唆したデータと一致する（Ｎａｖａｒｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：５３−６５  ２０１１）。
【００９７】
［実施例７］
実験的喘息における組換えＡｃ−ＴＭＰ−２による制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の制御
（動物およびＯＶＡ誘発喘息）
我々のＯＶＡ誘発実験的喘息のモデルにおいて、Ａｃ−ＴＭＰ−２により誘導される保護に対するＴｒｅｇの貢献を調査するため、ＯＶＡ感作および曝露の前に、マウスにおいてＴｒｅｇを選択的に欠乏させた。この欠乏は、Ｔｒｅｇ特異的Ｆｏｘｐ３プロモーターの下でジフテリア毒素（ＤＴ）受容体を発現するように操作されたトランスジェニックマウス（ＤＥＲＥＧマウス；Ｌａｈｌ  ａｎｄ  Ｓｐａｒｗａｓｓｅｒ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．７０７：１５７−７２  ２０１１）において、ＤＴを用いることにより達成された。続いて、２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ）中２０μｇのＯＶＡ（Ｐｉｅｒｃｅ）を、０日目および７日目の２回にわたりｉ．ｐ．注入することにより、野生型マウスおよびＤＥＲＥＧマウスを感作させた。１４日目から２１日目に、感作させた野生型マウスおよびＤＥＲＥＧマウスに２０μｇのＡｃ−ＴＭＰ−２またはＰＢＳ対照溶液をｉ．ｐ．注入した。１８日目から２２日目まで、超音波式ネブライザを用いて、ＯＶＡ感作マウスをＯＶＡ（０．２５％）エアロゾルに２０分間曝露した。２４日目に、マウスを気道炎症について解析した。ナイーブ野生型マウスならびにＰＢＳ模擬注入またはＡｃ−ＴＭＰ−２で処理した感作野生型およびＤＥＲＥＧマウスから気管支肺胞洗浄物を回収し、ＦＡＣＳにより解析し、ここから細胞識別計数を得た（図２３）。各処理コホートのマウスの肺から全タンパク質抽出物を調製し、Ｔｈ２関連サイトカイン（図２４）および炎症誘発性サイトカイン（図２５）のタンパク質発現について解析した。
【００９８】
（結果）
上記実施例３と同様に、Ａｃ−ＴＭＰ−２処理はＯＶＡ刺激野生型マウスにおいて気道炎症を有意に軽減した（図２３）。反対に、Ａｃ−ＴＭＰ−２で処理したＯＶＡ刺激ＤＥＲＥＧマウスは、ＯＶＡで刺激した未処理ＤＥＲＥＧマウスと同程度の気管支肺胞浸潤レベルを示した。これらの結果と一致して、Ａｃ−ＴＭＰ−２での処理により、Ｔｈ２サイトカイン、ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３、ならびに炎症誘発性ＩＬ−６のレベルはＯＶＡ刺激野生型マウスにおいて有意に低下したが、ＯＶＡ刺激ＤＥＲＥＧマウスでは有意に低下しなかった（図２４および２５）。総合すると、これらの結果は、我々の喘息マウスモデルにおいてＴｒｅｇがＡｃ−ＴＭＰ−２の抗炎症作用に重要な役割を果たすことを示唆している。
【００９９】
本明細書全体を通して、目的は本発明の好ましい実施形態を、発明をいずれか１つの実施形態または特定の特徴の集合に限定することなく説明することにある。したがって、当業者は本開示内容に照らして、例示された特定の実施形態において本発明の範囲から逸脱することなく様々な改変や変更が可能であることを理解するであろう。
【０１００】
本明細書で参照するすべてのコンピュータプログラム、アルゴリズム、特許文献および科学文献は、参照により本明細書に援用される。
【図１７】
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【図１８】
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【図２１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年8月27日(2013.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において炎症を軽減または緩和する方法であって、対象に治療上有効量のＡｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体を投与する工程を含み、前記投与により炎症を軽減または緩和する方法。
【請求項２】
炎症は対象における疾患、障害または症状に伴うものであるか、または疾患、障害または症状により二次的に生じるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記疾患、障害および症状のうちの少なくともいずれかはベースライン治療に不応性である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ベースライン治療は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのベースライン作用剤を投与することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）、またはその生物学的に活性なフラグメントは、少なくとも最初はベースライン治療と併用投与される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）、またはその生物学的に活性なフラグメントは、少なくとも最初は少なくとも１つのベースライン作用剤と併用投与され、前記少なくとも１つのベースライン作用剤は総用量未満で投与される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項７】
対象において炎症を予防する方法であって、対象に治療上有効量のＡｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体を投与する工程を含み、前記投与により炎症を予防する方法。
【請求項８】
炎症は対象における疾患、障害または症状に伴うものであるか、または疾患、障害または症状により二次的に生じるものである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記疾患、障害および症状のうちの少なくともいずれかは、免疫に関する疾患、障害または症状である、請求項２〜６および８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記免疫に関する疾患、障害または症状は、アジソン病、強直性脊椎炎、セリアック病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、クローン病、脱髄性神経障害、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、インスリン依存型糖尿病（１型）、若年性関節炎、川崎病、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋梗塞後症候群、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、特発性肺線維症、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、潰瘍性大腸炎、脈管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患は消化管の疾患である、請求項２〜６および８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患は慢性胃炎または炎症性腸疾患である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記炎症性腸疾患はクローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患は呼吸器系の疾患である、請求項２〜６および８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記疾患は、喘息、肺気腫、慢性気管支炎、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
対象において炎症性腸疾患の予防または治療あるいはこれらの両方を行う方法であって、対象に治療上有効量のＡｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体を投与する工程を含み、前記投与により炎症性腸疾患の予防または治療あるいはこれらの両方を行う方法。
【請求項１７】
前記炎症性腸疾患はクローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
対象において喘息の予防または治療あるいはこれらの両方を行う方法であって、対象に治療上有効量のＡｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体を投与する工程を含み、前記投与により喘息の予防または治療あるいはこれらの両方を行う方法。
【請求項１９】
対象に少なくとも１つの追加の作用剤を投与する工程を更に含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの追加の作用剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
対象が哺乳類である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記哺乳類がヒトである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
医薬組成物であって、治療上有効量の（ａ）Ａｃ−ＴＭＰ−２（配列番号２）またはＡｃ−ＴＭＰ−２の生物学的に活性なフラグメントあるいは変異体および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と、（ｂ）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、アミノサリチル酸塩、コルチコステロイド、免疫抑制剤、抗サイトカイン／サイトカイン受容体剤、抗生物質、およびこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの追加の作用剤とを含む医薬組成物。
【国際調査報告】
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