(57)【要約】  ヒトまたはその他の哺乳類被験体において、変形性関節症を管理するための方法であって、被験体の組織サンプルにおける、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、および上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）のうち１以上を含む特定のサイトカインおよび増殖因子の測定を含んでなる方法。組織サンプルは、全血、血液画分、尿、唾液、および滑液であり得る。方法は、変形性関節症を診断すること、およびＸ線学的方法またはその他の方法を用いて変形性関節症を有すると診断された被験体におけるなど、変形性関節症の重篤度を評価するための方法を含む。方法はまた、測定されたサイトカインレベルと参照レベルを比較することを含み得る。変形性関節症の臨床進行を管理する方法は、測定されたサイトカインレベルと参照レベルの間の差異に基づいて臨床行為を開始することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類被験体において変形性関節症を評価するための方法であって、前記被験体の組織サンプルにおいて、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択されるサイトカインの濃度を測定することを含んでなる、方法。
【請求項２】
前記サイトカインがＰＤＧＦ−ＡＢを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記サイトカインがＰＤＧＦ−ＢＢを含んでなる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記サイトカインがＥＧＦを含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記サイトカインが前記の群から選択される複数のサイトカインを含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記組織サンプルが全血、血液画分、尿、唾液、滑液、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記組織サンプルが全血または全血画分である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記サイトカインの濃度をサイトカイン参照レベルと比較することをさらに含んでなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記サイトカイン参照レベルが哺乳類被験体集団におけるサイトカインの組織サンプル濃度の平均値または中央値である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記哺乳類被験体集団が変形性関節症を持たない被験体の集団である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記組織サンプルが全血または血液画分であり、前記サイトカイン参照レベルが全血中濃度において約６〜約１７ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ−ＡＢを含んでなる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記組織サンプルが全血または血液画分であり、前記サイトカイン参照レベルが全血中濃度において約１．９〜約７ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ−ＢＢを含んでなる、請求項１０または請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組織サンプルが全血または血液画分であり、前記サイトカイン参照レベルが全血中濃度において約１１０〜約４２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦを含んでなる、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記サイトカイン参照レベルにおけるサイトカイン濃度がＸ線学的指標と相関している、請求項８〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｘ線学的指標が関節裂隙狭小化、骨棘の存在、軟骨下骨硬化、軟骨下骨嚢胞、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記サイトカイン参照レベルが、測定時よりも前の時点で被験体から得られた組織サンプル中のサイトカイン濃度である、請求項８に記載の方法。
【請求項１７】
前の時点が少なくとも約４週間、または少なくとも約３か月、または少なくとも約６か月、または少なくとも約１年である、被験体における変形性関節症の進行を監視するための請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記被験体において変形性関節症を診断するための、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記被験体が関節痛、関節硬直、関節損傷、Ｘ線学的異形、およびそれらの組合せからなる群から選択される変形性関節症症状を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記被験体において変形性関節症の重篤度を評価するための、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記被験体が変形性関節症を有すると事前に診断されている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記被験体の組織サンプル中のサイトカイン濃度をサイトカイン参照レベルと比較すること、およびその比較の結果に基づいて重篤度指数値を決定することをさらに含んでなる、請求項１、１８または２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記サイトカイン参照レベルが、測定時よりも前の時点で前記被験体から得られた組織サンプル中のサイトカイン濃度である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記被験体において関節のＸ線学的測定を行うことをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記被験体が変形性関節症の症状を示す、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記濃度が酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて決定される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記被験体がヒトである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記被験体が伴侶動物、使役動物、または競技動物である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
哺乳類被験体において変形性関節症を評価する方法であって、
（ａ）前記被験体から得られた第１の血液サンプル中のサイトカインレベルを測定すること；
（ｂ）前記被験体から得られた第２の血液サンプル中のサイトカインレベルを測定すること；および
（ｃ）第１のサンプル中のサイトカインレベルと第２のサンプル中のサイトカインレベルを比較して、サイトカインレベルの変化を決定すること
を含んでなり、ここで、
（ｄ）前記サイトカインは、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択される、方法。
【請求項３０】
（ｉ）第１のサンプル中のサイトカインレベルを測定する時点で、前記被験体の関節の第１のＸ線学的評価を行うこと；
（ｉｉ）第２のサンプル中のサイトカインレベルを測定する時点で、前記被験体の関節の第２のＸ線学的評価を行うこと；
（ｉｉｉ）第１のＸ線学的評価と第２のＸ線学的評価を比較して、Ｘ線学的変化を決定すること；および
（ｉｖ）Ｘ線学的変化をサイトカインレベルの変化と相関させること
をさらに含んでなる、哺乳類被験体において変形性関節症の進行を監視するための請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
第２の血液サンプルが、第１の血液サンプルが得られた後、少なくとも４週間の時点で得られる、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
哺乳類被験体において変形性関節症の臨床進行を管理する方法であって、
（ａ）前記被験体の血液において、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択されるサイトカインの濃度を測定すること；
（ｂ）前記サイトカイン濃度とサイトカイン参照レベルを比較して、サイトカインレベルの変動を決定すること；および
（ｃ）そのサイトカインレベルの変動に基づいて臨床行為を開始すること
を含んでなる、方法。
【請求項３３】
前記臨床行為が、治療計画の投与の開始、治療計画の時機の変更、治療計画のレベルの変更、治療計画の終了、およびそれらの組合せの群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記治療計画が、インターロイキン−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ｒａ）および可溶性腫瘍壊死因子受容体Ｉを含んでなる抗炎症性組成物の投与を含んでなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗炎症性組成物が、
ｉ）少なくとも約１０，０００ｐｇ／ｍｌの濃度のインターロイキン−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ｒａ）；
（ｉｉ）少なくとも約１，２００ｐｇ／ｍｌの濃度の可溶性腫瘍壊死因子受容体１（ｓＴＮＦ−Ｒ１）；および
（ｉｉｉ）ｓＴＮＦ−ＲＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ、ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−β１、およびｓＩＬ−１ＲＩＩ、およびそれらの混合物からなる群から選択されるタンパク質（ここで、組成物中の該タンパク質の濃度は、通常の血液中の該タンパク質の濃度より高い）
を含んでなる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記哺乳類被験体がヒトである、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記哺乳類被験体が伴侶動物、使役動物、または競技動物である、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記サイトカイン参照レベルが、測定時よりも前の時点で被験体から得られた血液中のサイトカイン濃度である、請求項３２〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前の時点が少なくとも約４週間、または少なくとも約３か月、または少なくとも約６か月、または少なくとも約１年である、被験体における変形性関節症の進行を監視するための請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
重篤度指数値が前記比較の結果に基づいて決定される、請求項３２〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記サイトカイン参照レベルが哺乳類被験体集団におけるサイトカインの血中濃度の平均値または中央値である、請求項３２〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記哺乳類被験体集団が変形性関節症を持たない被験体の集団である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記サイトカイン参照レベルが全血中濃度において約６〜約１７ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ−ＡＢを含んでなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記サイトカイン参照レベルが全血中濃度において約２〜約７ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ−ＢＢを含んでなる、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記サイトカイン参照レベルが全血中濃度において約１１０〜約４２０ｐｇ／ｍｌのＥＧＦを含んでなる、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記被験体が変形性関節症を有すると事前に診断されている、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記被験体が関節痛、関節硬直、関節損傷、Ｘ線学的異形、およびそれらの組合せからなる群から選択される変形性関節症症状を有する、請求項４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
変形性関節症は、主として関節痛に関連する潜在的に消耗性の疾患である。変形性関節症はまた、関節圧痛、腫脹硬直、筋肉衰弱、および柔軟性の喪失も特徴とし得る。関節リウマチとは違い、変形性関節症は全身性疾患ではなく、むしろ、変形性関節症の症状は通常、罹患関節に限局される。関節の重大な軟骨欠損が関節の奇形を招くことがあり、これが関節の不安定性を引き起こし得る。
【０００２】
現在のところ、その進行を遅延させるまたは予防する働きをする一般的な治療選択肢は存在しない。変形性関節症は鋭意研究されているが、何が変形性関節症を発症させるのか明らかな答えは依然として無く、加齢、関節の酷使、肥満、および遺伝などの因子が全て、この疾患の発症に役割を果たしている可能性がある。さらに、変形性関節症が単一の疾患なのか、または密接に関連する経路を持ついくつかの疾患の組合せなのかも決定されていない。
【０００３】
変形性関節症は、現在、関節裂隙狭小化の所見によるなどのＸ線学的方法によって診断されている。残念ながら、この診断は、患者がすでに軟骨量を失い始め、関節裂隙狭小化を来すまで実現しない。インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）および腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）などのいくつかの炎症性サイトカインは、変形性関節症の発症に中枢的な役割を果たすことが知られている。しかしながら、ヒトおよび動物血液中には無数の増殖因子が存在する。これらの増殖因子の濃度は複数の因子によって変動し得る。よって、ある任意の臨床対象において変形性関節症の存在を診断するための基礎としてこれらいずれかの因子の測定を使用することは極めて困難である。
【発明の概要】
【０００４】
本技術は、ヒトまたはその他の哺乳類被験体において変形性関節症を管理するための方法を提供する。これらの方法は、被験体の組織サンプルにおける、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、および上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）のうち１以上を含む、ある特定のサイトカインおよび増殖因子の測定を含んでなる。組織サンプルは、全血、血液画分、尿、唾液、滑液、およびそれらの組合せからなる群から選択され得る。このような方法は、変形性関節症を診断するためのもの、およびＸ線学的方法またはその他の方法を用いて変形性関節症を有すると診断された被験体におけるなど、変形性関節症の重篤度を評価するための方法を含む。
【０００５】
いくつかの実施形態では、方法はさらに、サイトカイン濃度とサイトカイン参照レベルを比較することを含んでなる。サイトカイン参照レベルは、変形性関節症を持たない被験体集団などの哺乳類被験体集団におけるサイトカインの組織サンプル濃度の平均値または中央値であり得る。参照レベルは、測定時よりも前の時点で被験体から得られた組織サンプル中のサイトカイン濃度であり得る。
【０００６】
いくつかの実施形態では、本方法は、
（ａ）前記被験体から得られた第１の血液サンプル中のサイトカインレベルを測定すること；
（ｂ）前記被験体から得られた第２の血液サンプル中のサイトカインレベルを測定すること；および
（ｃ）第１のサンプル中のサイトカインレベルと第２のサンプル中のサイトカインレベルを比較して、サイトカインレベルの変化を決定すること
を含んでなり、ここで、
（ｄ）前記サイトカインは、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択される。
【０００７】
このような方法は、
（ｉ）第１のサンプル中のサイトカインレベルを測定する時点で、前記被験体の関節の第１のＸ線学的評価、またはその他のＰＤＧＦもしくはＥＧＦに基づかない診断評価を行うこと；
（ｉｉ）第２のサンプル中のサイトカインレベルを測定する時点で、前記被験体の関節の第２のＸ線学的評価、またはその他のＰＤＧＦもしくはＥＧＦに基づかない診断評価を行うこと；
（ｉｉｉ）第１の評価と第２の評価を比較して、Ｘ線学的変化を決定すること；および
（ｉｖ）Ｘ線学的変化をサイトカインレベルの変化と相関させること
をさらに含んでなり得る。
【０００８】
本技術はまた、哺乳類被験体において変形性関節症の臨床進行を管理する方法であって、
（ａ）前記被験体の血液において、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択されるサイトカインの濃度を測定すること；
（ｂ）前記サイトカイン濃度とサイトカイン参照レベルを比較して、サイトカインレベルの変動を決定すること；および
（ｃ）そのサイトカインレベルの変動に基づいて臨床行為を開始すること
を含んでなる方法も提供する。
【０００９】
臨床行為は、治療計画の投与の開始、治療計画の時機の変更、治療計画のレベルの変更、治療計画の終了、およびそれらの組合せの群から選択され得る。治療計画は、インターロイキン−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ｒａ）および可溶性腫瘍壊死因子受容体Ｉを含んでなる抗炎症性組成物の投与を含んでなり得る。
【発明の具体的説明】
【００１０】
以下の技術の記載は、本質的に、１以上の発明の主題、製造および使用の単なる例示であり、本出願の優先権を主張して出願され得るようなその他の出願、またはそれからの登録特許で特許請求される具体的な発明のいずれの範囲、適用または使用も限定することを意図しない。本技術の理解を助けるために意図される語句の非限定的な記述は、本詳細な説明の末尾に提供される。
【００１１】
評価方法
本技術は、哺乳類被験体において変形性関節症を評価するための方法を提供する。このような方法としては、ヒトおよびその他の哺乳類被験体において、変形性関節症を診断する方法、変形性関節症を発症する感受性を評価する方法、および変形性関節症の進行を監視する方法が含まれる。その他の哺乳類被験体としては、伴侶動物、使役動物、または競技動物、例えば、イヌ、ネコおよびウマが含まれる。
【００１２】
変形性関節症の従来のＸ線学的指標は感度が低く、疾患がかなり進行した後に初めて変形性関節症の存在を明らかにできるに過ぎない。このような当技術分野の方法を用いて初期段階の変形性関節症を診断することには、被験体におけるＸ線学的変化を定義および観察することが困難なために問題がある。本技術の方法は、発症段階および進行した段階において変形性関節症を診断することを可能とする。血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）の濃度は、関節裂隙狭小化、骨棘の存在、軟骨下骨硬化および軟骨下骨嚢胞を含む、変形性関節症患者の変形性関節症指標と特に相関がある。下表は、変形性関節症指標を呈さないか、１つ、２つまたは３つを呈する被験体の、例としての平均ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＥＧＦ濃度を示す。
【００１３】
【表１】
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【００１４】
血中またはその他の組織サンプル中の種々のサイトカインおよび増殖因子の基礎レベルでの変化を監視することにより、変形性関節症の早期検出を行うことができる。被験体に対して十分早期に行えば、Ｘ線学的に明らかになる前に変形性関節症を検出することができる。従って、その進行の予防または緩徐化を達成することができる。変形性関節症の早期検出は、病態が重大になる前の医学的加入を可能とする。
【００１５】
種々の実施形態では、本方法は、サイトカインおよび増殖因子のベースラインレベルを確立するために、一定の期間にわたって、すなわち、数週間か、数ヶ月か、または数年か繰り返すことができる。これらのレベルの変化は変形性関節症の発症を示す。このような方法は、変形性関節症を発症するリスクのある被験体、例えば、変形性関節症を発症する遺伝的環境リスクを有する被験体に特に有益である。このようなリスクの例としては、肥満、遺伝的素因、および過去の関節外傷が含まれる。
【００１６】
変形性関節症に関連する疼痛を有する全ての患者が疾患のＸ線学的エビデンスを示すが、疾患のＸ線学的エビデンスを示す全ての患者が疼痛を有するわけではない。有利には、本明細書に記載の方法は、変形性関節症リスクと疼痛から見た重篤度またはＸ線学的エビデンスに対して別個の指標を与える診断ツールを提供する。従って、本診断方法は、個別化された臨床行為または治療を可能とする。例えば、疾患進行を追跡することができ、臨床行為が機能しているかどうかについて決定を下すことができ、従って、その臨床行為に対する調整を行うことができる。変形性関節症の重篤な病期では、以下にさらに記載するように、患者に攻撃的な療法、または複数の療法を投与することができる。重篤度の低い病期では、患者に攻撃性の低い療法を投与することができる。
【００１７】
哺乳類被験体において変形性関節症を評価するための方法は、被験体の組織サンプルにおいて、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択されるサイトカインの濃度を測定することを含んでなる。その後、この測定は、医師またはその他の医療提供者によって、医薬品の臨床試験の実施の基準に一致する任意の様式で、変形性関節症の評価、および前記疾患の管理に使用され得ると理解される。いくつかの実施形態では、哺乳類被験体において変形性関節症を評価するための方法は、サイトカインの組織レベルを測定すること、およびそのレベルとサイトカイン参照レベルを比較することを含んでなり、この場合、参照レベルから逸脱する測定レベルが、被験体における、変形性関節症の存在、関節炎に対する感受性、または関節炎の進行を示す。
【００１８】
サイトカインの組織レベルを測定するために使用可能な組織の例としては、血液、尿、唾液、および滑液が含まれる。用語「血液」は、全血および全血画分、例えば、血清、血漿、多血小板血漿、および乏血小板血漿を含むと理解される。
【００１９】
種々の実施形態では、サイトカイン参照レベルは、第２の診断（すなわち、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＥＧＦの測定を用いない診断）を用いた変形性関節症の指標と相関させる。このような診断としては、関節裂隙狭小化、骨棘の存在、軟骨下骨硬化、軟骨下骨嚢胞、またはそれらの組合せなどのＸ線学的指標を含み得る。サイトカイン参照レベルは、被験体の診断または治療におけるさらなる工程の指標となる閾値レベルとして働き得る。このような工程は、付加的診断を行うこと、被験体のさらなる監視（例えば、一定の期間にわたっての本技術の方法またはその他の方法を用いた反復試験）、または以下に述べるように治療計画またはその他の臨床行為を開始することを含み得る。
【００２０】
いくつかの実施形態では、サイトカイン参照レベルは、哺乳類被験体集団または測定を受けている被験体におけるサイトカインの組織濃度を反映する。例えば、サイトカイン参照レベルは、変形性関節症を持たない哺乳類被験体集団（すなわち、その方法の被験体と同種の被験体）の組織サンプル（例えば、血液レベル）中のサイトカインの平均値または中央値であり得る。例えば、ＰＤＧＦ−ＡＢ参照レベルは、約６ｎｇ／ｍｌ〜約１７ｎｇ／ｍｌの全血中濃度であり得、ＰＤＧＦ−ＢＢ参照レベルは、約２ｎｇ／ｍｌ〜約７ｎｇ／ｍｌの全血中濃度であり得、ＥＧＦ参照レベルは、約１１０ｐｇ／ｍｌ〜約４２０ｐｇ／ｍｌの全血中濃度であり得る。このような参照レベルは統計変動を受け、診断または治療におけるさらなる工程の閾値は、参照レベルから統計標準偏差を反映し得ると理解される。例えば、閾値は、臨床試験において測定される被験体集団のサイトカインの平均濃度にその試験の測定の標準偏差の２倍に等しい濃度を加えたものに相当し得る。いくつかの方法では、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＥＧＦのうち２つ以上が閾値、例えば上記に示される値より小さければ、診断または治療のためのさらなる工程を行うことができる。
【００２１】
いくつかの実施形態では、サイトカイン参照レベルは、測定時よりも前の時点で被験体から得られた組織中のサイトカイン濃度である。よって、本方法は、
（ａ）前記被験体から得られた第１の血液サンプル中のサイトカインレベルを測定すること；
（ｂ）前記被験体から得られた第２の血液サンプル中のサイトカインレベルを測定すること；および
（ｃ）第１のサンプル中のサイトカインレベルと第２のサンプル中のサイトカインレベルを比較して、サイトカインレベルの変化を決定すること
を含んでなってよく、ここで、
（ｄ）前記サイトカインは、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択される。
【００２２】
測定時よりも前の時点（すなわち、第１のサンプルにおける測定と第２のサンプルにおける測定の間の時点）は、数日から、数週間、数ヶ月、数年というものであり得る。例えば、前の時点は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約２か月、約３か月、４か月、約６か月、約９か月、約１年、約１．５年、約２年、または約５年であり得る。種々の実施形態では、測定時よりも前の時点は、少なくとも４週間、少なくとも６か月、または少なくとも約１年である。被験体に特異的なサイトカイン参照レベルを使用することにより、被験体のサイトカインプロファイルの小さな変化を確立することができる。これらの小さな変化は、変形性関節症の発症を診断するため、または変形性関節症の進行を監視するために使用することができる。変化が変形性関節症の発症を示す場合には、その疾患の進行を予防または緩徐化するように被験体を治療することができる。
【００２３】
いくつかの方法では、ＰＤＧＦ−ＡＢが閾値、例えば、約２〜約３２ｎｇ／ｍｌ；約５〜約３０ｎｇ／ｍｌ、約６〜約１７ｎｇ／ｍｌ、約８〜約２３ｎｇ／ｍｌ、または約１６〜約２６ｎｇ／ｍｌの値より小さければ、診断または治療のためのさらなる工程を行うことができる。例えば、ＰＤＧＦ−ＡＢ閾値は、約１．９、２、４．９、５、６、８、８．２、１３、１３．８、１４、１４．２、１４．５、１４．７、１５、１５．７、１６、１６．６、１６．７、１７、１８．７、１９、２０、２２．５、２３、２３．４、２３．８、２４、２５．６、２６、３１、３１．１、３１．７、または３２ｎｇ／ｍｌであり得る。いくつかの方法では、ＰＤＧＦ−ＢＢが閾値、例えば、約１〜約１６ｎｇ／ｍｌ、約２〜約１１ｎｇ／ｍｌ、約２〜約１０ｎｇ／ｍｌ、または約２〜約７ｎｇ／ｍｌの値より小さければ、診断または治療のためのさらなる工程を行うことができる。例えば、ＰＤＧＦ−ＢＢ閾値は、約１、１．６、１．９、２、３．７、４、４．８、４．９、５、５．６、６、６．４、６．６、６．７、６．８、７、または９、９．１、８．６、９、１０、１１、１１．１、１６、または１６．１ｎｇ／ｍｌであり得る。いくつかの方法では、ＥＧＦが閾値、例えば、約８７〜約１３００ｐｇ／ｍｌ、約１３０〜約７８０ｐｇ／ｍｌ、約１７５〜約７７０ｐｇ／ｍｌ、約１８５〜約７００ｐｇ／ｍｌ、または約１１０〜約４２０ｐｇ／ｍｌの値より小さければ、診断または治療のためのさらなる工程を行うことができる。例えば、ＥＧＦ閾値は、約８７、９０、１１０、１１２、１３０、１７５、１８０、１９０、３００、３０６、３１０、３５０、４００、４１５、４１８、４２０、４２５、４３０、４５０、４５２、４７０、４７６、４８０、５６５、５７０、６００、７３０、８２０、８２４、または８３０ｐｇ／ｍｌであり得る。
【００２４】
変形性関節症の発症前のサイトカイン参照レベルを確立することが被験体にとって望ましいことであり得るが、変形性関節症の症状を有する被験体において、疾患の進行を監視することを可能とするサイトカイン参照レベルを確立することもできる。あるいは、サイトカイン参照レベルは症状の発症前に確立することができ、症状が表れた際に測定を行うことができる。変形性関節症の症状の限定されない例としては、関節痛、関節硬直、関節損傷、Ｘ線学的異形、およびそれらの組合せが含まれる。サイトカイン参照レベルに対するサイトカインレベルの変化を監視することにより、その被験体の臨床行為を、変形性関節症の示された病期に合わせることができる。
【００２５】
サイトカイン参照レベルは、被験体が変形性関節症を有すると診断される前または診断された後に確立することができる。例えば、変形性関節症の診断後に被験体のサイトカインが測定される場合、疾患の進行を監視することができる。種々の実施形態では、被験体において変形性関節症の重篤度を決定することができ、重篤度指数を確立することができる。よって、現行法は、被験体の組織中のサイトカイン濃度とサイトカイン参照レベルを比較すること、およびその比較の結果に基づいて重篤度指数値を決定することを含んでなり得る。いくつかの実施形態では、本方法は、サイトカイン参照レベルを確立する時点、および／または組織中のサイトカイン濃度を測定する時点で、被験体の関節のＸ線学的評価を行うことをさらに含んでなる。Ｘ線学的評価の比較は、Ｘ線学的変化を決定するために使用することができ、これをサイトカインレベルの変化に相関させることができる。これらの変化は、被験体に対して行われる臨床行為を左右し得る。
【００２６】
測定方法
サイトカインの組織レベルの測定は、血液またはその他の組織サンプル中のサイトカインレベルを測定するために好適ないずれの方法を用いて行ってもよい。このような方法には、当技術分野で公知のバイオアッセイおよびイムノアッセイが含まれる。測定は、臨床現場（例えば、診療所または病室）で血液またはその他の組織サンプルを得ること、および試験所で検査することによって行うことができる。いくつかの実施形態では、検査は、好適な診断検査デバイスを用いて、ポイント・オブ・ケア(point-of-care)で行うことができる。検査は本方法の被験者、または医師、看護師、もしくはその他の医療提供者によって行うことができる。
【００２７】
種々の実施形態では、測定は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）の使用を含んでなる。ＥＬＩＳＡアッセイは一般に、マルチウェルアッセイプレートで行われる。種々の実施形態がサンドイッチＥＬＩＳＡからモデル化され、アッセイプレートの代わりに複数の小ストリップを使用することができる。ストリップはポリスチレンまたはメタクリレートなどの可視光を通す材料から構成される端部を含んでなる。その端部は小さなくぼみ、複数のくぼみ、または固定化区画を含んでなり、その上に抗体を結合させることができる。この小さなくぼみまたは固定化区画にサイトカイン特異的な抗体をコーティングすることができる。使用者はこのストリップの端部を、対象とするサイトカインを含有する血液または血漿サンプルに浸すことができる。ストリップはまた、種々の標準濃度のサイトカインの溶液に浸すこともできる。インキュベーション後、ストリップを洗浄することができる。次に、これらのストリップの端部を、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）などの酵素にコンジュゲートされている、サイトカインに特異的な第２の抗体を含んでなる溶液に浸すことができる。次いで、結合していない抗体−ＨＲＰコンジュゲートをくぼみまたは固定化区画から洗い流す。その後、ストリップの端部を、テトラメチルベンジジン（ＴＭＰ）、水、およびＨ２Ｏ２を含んでなる基質溶液に浸す。次いで、これらのストリップを、そのストリップを幾何学的に受容するリーダーに挿入することができ、このようにして、くぼみまたは固定化区画において、４５０ｎｍの波長で吸光度の読み取りを行うことができる。
【００２８】
別の実施形態として、Song, et al., Nat Commun. 2012; 3:1283. Doi: 10.1038/ncomms2292により記載されているＶチップ上で行うＥＬＩＳＡアッセイがある。Ｖチップは、複数のくぼみおよびチャネルと２枚のプレートを含んでなるマイクロ流体チップである。Ｖチップは上端と下端を有する。一方のプレートがもう一方のプレートに対して移動すると、フローチャネルが形成される。従って、様々な成分をフローレーンからＶチップに予め添加した後に反応させることができる。一番上のフローレーンにはインクまたは色素を予め添加する。上から２つ目のフローレーンには抗サイトカイン抗体を予めコーティングした後、目的のアナライトを含有する血漿サンプルを添加する。インキュベーション期間の後、このレーンを洗浄して非特異的シグナルを回避することができる。上から２番目のフローレーンより下のフローレーンはそれぞれ抗体コンジュゲートカタラーゼ（抗体−カタラーゼ）およびカタラーゼ基質である過酸化物（Ｈ２Ｏ２）で満たす。カタラーゼの存在下で、Ｈ２Ｏ２はＨ２ＯとＯ２（気体）に分解される。一方のプレートを他方に対してスライドさせると、分岐フローチャネルが形成される。フローチャネルの形成により、フローレーンの成分が混合される。抗体−カタラーゼは目的のアナライトと結合し、カタラーゼ反応が起こる。この反応により放出されたＯ２（気体）が、一番上のレーンのインク／色素を、フローチャネルを通して上へと流動させる。抗体に結合したサイトカインの量に依存して生産されるＯ２（気体）が多いほど、インク／色素は遠くへ移動する。
【００２９】
臨床進行の管理方法
上記に示したように、本技術は、哺乳類被験体において変形性関節症の臨床進行を管理するための方法であって、
（ａ）前記被験体の血液において、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択されるサイトカインの濃度を測定すること；
（ｂ）前記サイトカイン濃度とサイトカイン参照レベルを比較して、サイトカインレベルの変動を決定すること；および
（ｃ）そのサイトカインレベルの変動に基づいて臨床行為を開始すること
を含んでなる方法を提供する。
【００３０】
本方法において、臨床行為は、治療計画の投与、治療計画の時機の変更、治療計画のレベルの変更、治療計画の終了、およびそれらの組合せを含んでなり得る。治療計画としては、変形性関節症の治療または予防に関して当技術分野で公知の任意の方法、例えば、全身用または局所用薬剤、生物製剤、および物理的療法の投与が含まれる。薬物療法としては、非ステロイド系抗炎症薬、ステロイド、およびそれらの組合せの投与が含まれる。
【００３１】
いくつかの実施形態では、治療計画は、インターロイキン−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ｒａ）および可溶性腫瘍壊死因子受容体Ｉ（ｓＴＮＦ−ＲＩ）を含んでなる抗炎症性組成物の投与を含んでなる。抗炎症性組成物は、少なくとも約１０，０００ｐｇ／ｍｌの濃度のＩＬ−１ｒａ、少なくとも約１，２００ｐｇ／ｍｌの濃度のｓＴＮＦ−ＲＩ、ならびにｓＴＮＦ−ＲＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ、ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−β１、およびｓＩＬ−１ＲＩＩ、およびそれらの混合物からなる群から選択されるタンパク質（なお、組成物中の該タンパク質の濃度は、通常の血液中の該タンパク質の濃度より高い）を含んでなるタンパク質溶液であり得る。タンパク質溶液は、被験体に対して自己または同種異系源であり得る。
【００３２】
タンパク質溶液は、サイトカイン産生細胞を含んでなる、白血球、脂肪間質細胞、骨髄間質細胞、またはその他の組織からの１以上の成分の誘導によって作製することができる。いくつかの実施形態では、方法は、ＩＬ１−ｒａおよびｓＴＮＦ−Ｒ１などのサイトカインを産生し得る細胞を含んでなる液体（「サイトカイン細胞懸濁液」）を分画することを含んでなる。方法は、多血小板血漿などの液体をポリアクリルアミドビーズなどの固相抽出材料と接触させることによってサイトカイン細胞懸濁液を分画することを含んでなり得る。本明細書において有用なものの中でもタンパク質溶液およびタンパク質溶液の作製方法は、米国特許出願公開第２００９／０２２０４８２号、Ｈｉｇｇｉｎｓら、２００９年９月３日公開；米国特許出願公開第２０１０／００５５０８７号、Ｈｉｇｇｉｎｓら、２０１０年３月４日公開；米国特許出願公開第２０１１／００５２５６１号、Ｈｏｅｐｐｎｅｒ、２０１１年３月３日公開；国際出願公開第２０１２／０３０５９３号、Ｈｉｇｇｉｎｓら、２０１２年３月８日公開；および米国特許出願公開第２０１２／０１７２８３６号、Ｈｉｇｇｉｎｓら、２０１２年７月５日公開に記載されている。本技術の態様に有用な組成物および方法はまた、２０１３年３月１５日出願の下記出願：米国特許出願第１３／８４０，５６２号、Ｂｉｎｄｅｒら、Methods and Non-Immunogenic Compositions for Treating Inflammatory Diseases；米国特許出願第１３／８４１，０８３号、Ｌａｎｄｒｉｇａｎら、Treatment of Inflammatory Respiratory Disease Using Protein Solutions；米国特許出願第１３／８３７，００５号、Ｗｏｏｄｅｌｌ−Ｍａｙら、Methods and Acellular Compositions for Treating Inflammatory Disorders；米国特許出願第１３／８３７，４８０号、Ｏ’Ｓｈａｕｇｈｎｅｓｓｅｙら、O’Shaughnessey, et al., Treatment of Pain Using Protein Solutions；米国特許出願第１３，８３９，２８０号、Ｌｅａｃｈら、Methods for Mak
ing Cytokine Compositions from Tissue Using Non-Centrifugal Methods；および米国特許出願第１３／８４０，１２９号、Ｍａｔｕｓｕｋａら、Treatment of Collagen Defects Using Protein Solutions；および米国特許出願第１３／８４１，１０３号、Ｌａｎｄｒｉｇａｎら、Treatment of Peripheral Vascular Disease Using Protein Solutionsにも記載されており、これらは全て、引用することにより本明細書の一部とされる。
【００３３】
種々の実施形態では、タンパク質溶液は、ＩＬ−１ｒａ（インターロイキン−１受容体抗薬）、ｓＴＮＦ−ＲＩ、ｓＴＮＦ−ＲＩＩ（可溶性腫瘍壊死因子−受容体２）、ＩＧＦ−Ｉ（インスリン様増殖因子１）、ＥＧＦ（上皮細胞増殖因子）、ＨＧＦ（肝細胞増殖因子）、ＰＤＧＦ−ＡＢ（血小板由来増殖因子ＡＢ）、ＰＤＧＦ−ＢＢ（血小板由来増殖因子ＢＢ）、ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）、ＴＧＦ−β１（トランスフォーミング増殖因子−β１）、およびｓＩＬ−１ＲＩＩ（可溶性インターロイキン１受容体ＩＩ）からなる群から選択される少なくとも２つのタンパク質を含んでなり、組成物中の各タンパク質の濃度は、通常の血液中の該タンパク質の濃度より高い。組成物中のこのようなどのタンパク質の濃度も、通常の血液中のその個々の濃度より高いものであってもよいが、２種類を超えるタンパク質の濃度が通常の血液中のそれらの個々の濃度より高い必要はない。
【００３４】
種々の実施形態では、タンパク質溶液は、下記成分を含んでなる。
【００３５】
【表２】
2015520383.tif 000003
2015520383.tif 000004
【００３６】
タンパク質濃度は実施例４に示されている方法を用いて測定することができる。
【００３７】
組成物は、さらに好ましくは、生存サイトカイン産生細胞、溶解サイトカイン産生細胞、またはその両方を含んでなる。好ましい組成物では、タンパク質溶液は、単球、顆粒球、および血小板を含んでなる。種々の実施形態では、タンパク質溶液は、下記成分を含んでなる。
【００３８】
【表３】
2015520383.tif 000005
【００３９】
この濃度は種特異的であると理解される。さらに、濃度は個々の被験体間で異なり得ると理解される。よって、サイトカイン産生細胞を含有する血液またはその他の組織からのタンパク質溶液の作製を含んでなる方法では、タンパク質溶液中のタンパク質および細胞の濃度は、上記に列挙したものとは異なる場合があり、上記で列挙した値は、被験体集団に見られ得る濃度の平均値である。
【００４０】
種々の実施形態では、タンパク質溶液中のタンパク質またはその他の成分の１以上の濃度が、通常の血液中のその成分の濃度より高い。（このようなより高い濃度の成分を含む組成物は、そのような成分が「豊富」であると言われる。）本明細書に言及される場合、「通常の」血液またはその他の組織中の成分の濃度は、その組織が得られた哺乳類被験体の一般集団で、例えば、通常の全血で見られる濃度である。抗炎症性サイトカイン組成物が特定の被験体由来の組織から誘導される方法では、タンパク質または細胞の「通常の」濃度は、そのタンパク質または細胞を駆動するために処理が行われる前のその個体の血液中の濃度であり得る。
【００４１】
よって、種々の実施形態では、タンパク質溶液の１以上の成分の濃度は、通常の血液中のその成分の濃度より約１．５倍、約２倍、または約３倍を超えて高い。例えば、成分は、以下のように、通常の（全）血液に比べて、組成物中ではより高い濃度を持ち得る：
・少なくとも約２．５倍、または少なくとも約３倍または少なくとも約５倍高い濃度のＩＬ−１ｒａ；
・少なくとも約２倍、または少なくとも約２．５倍または少なくとも約３倍高い濃度のｓＴＮＦ−ＲＩ；
・少なくとも約２倍、または少なくとも約２．５倍または少なくとも約３倍高い濃度のｓＴＮＦ−ＲＩＩ；
・少なくとも約１．５倍、または少なくとも約１．８倍または少なくとも約２倍高い濃度のｓＩＬ−１ＲＩＩ；
・少なくとも約２倍、または少なくとも約３倍または少なくとも約５倍高い濃度のＥＧＦ；
・少なくとも約２倍、または少なくとも約３倍または少なくとも約４倍高い濃度のＨＧＦ；
・少なくとも約２倍、または少なくとも約３倍または少なくとも約５倍高い濃度のＰＤＧＦ−ＡＢ；
・少なくとも約２倍、または少なくとも約３倍または少なくとも約５倍高い濃度のＰＤＧＦ−ＢＢ；
・少なくとも約３倍、または少なくとも約４倍または少なくとも約６倍高い濃度のＴＧＦ−β１；
・少なくとも約１．２倍、または少なくとも約１．４倍または少なくとも約１．５倍高い濃度のＩＧＦ−１；
・少なくとも約２倍、または少なくとも約２．５倍または少なくとも約３倍高い濃度のＶＥＧＦ；
・少なくとも約２倍、または少なくとも約３倍または少なくとも約４倍高い濃度のサイトカイン産生細胞；
・少なくとも約２倍、または少なくとも約３倍または少なくとも４倍高い濃度の血小板；
・少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍または少なくとも３倍高い濃度の好中球；
・少なくとも３倍、または少なくとも４倍または少なくとも６倍高い濃度の単球；
・少なくとも５倍、または少なくとも８倍または少なくとも１０倍高い濃度のリンパ球；および
・少なくとも２倍、または少なくとも４倍または少なくとも６倍高い濃度の好塩基球。
また、タンパク質溶液中の赤血球の濃度は、通常の血液中の赤血球の濃度の好ましくは、せいぜい半分、またはせいぜい３分の１である。
【００４２】
例えば、タンパク質溶液は、
（ａ）少なくとも約１０，０００ｐｇ／ｍｌのＩＬ１−ｒａ；
（ｂ）少なくとも約１，２００ｐｇ／ｍｌのｓＴＮＦ−ＲＩ；および
（ｃ）ｓＴＮＦ−ＲＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ、ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−β１、およびｓＩＬ−１ＲＩＩ、ならびにそれらの混合物からなる群から選択されるタンパク質（ここで、前記タンパク質は、通常の血液中のタンパク質のベースライン濃度より高い濃度を有する）
を含んでなり得る。別の例では、タンパク質溶液は、
（ａ）通常の血液中のＩＬ−１ｒａの濃度より少なくとも３倍高い濃度のインターロイキン−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ｒａ）；
（ｂ）通常の血液中のＩＬ−１ｒａの濃度より少なくとも２倍高い濃度の可溶性組織壊死因子−ｒ１（ｓＴＮＦ−ｒ１）；
（ｃ）通常の血液中のサイトカイン産生細胞の濃度より少なくとも２倍高い濃度のサイトカイン産生細胞；および
（ｄ）通常の血液中の血小板の濃度より少なくとも２倍高い濃度の血小板
を含んでなる。
【００４３】
いくつかの実施形態では、タンパク質溶液中のＩＬ−１ｒａの濃度は、好ましくは、タンパク質溶液中のインターロイキン−１αの濃度より少なくとも５，０００倍、または少なくとも１０，０００倍高い。ＩＬ−１ｒａ：インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）濃度の比は好ましくは少なくとも１００である。いくつかの実施形態では、タンパク質溶液中のＩＬ−１ｒａの濃度は、好ましくは、タンパク質溶液中のＩＬ−１βの濃度より少なくとも１５００倍、または少なくとも８０００倍高い。ＩＬ−１ＲＩＩ：インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）濃度の比は好ましくは１より大きい。いくつかの実施形態では、タンパク質溶液中のｓＩＬ−１ＲＩＩは、好ましくは、タンパク質溶液中のインターロイキン−１βの濃度より少なくとも２０００倍、または少なくとも４５０００倍高い。
【実施例】
【００４４】
本技術の方法は、下記の試験によって例示される。具体的には、サイトカインと、増殖因子、共存症、並行投薬および変形性関節症指標との間の相互作用を決定するために、変形性関節症患者由来の全血および自己タンパク質溶液を分析する。
【００４５】
抗レベルの抗炎症性サイトカインおよび増殖因子を含有する自己タンパク質溶液（ＡＰＳ）が調製され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて対応する炎症性サイトカインの作用を軽減するために使用された。このような方法およびデバイスは、米国特許出願公開第２００９／０２２０４８２号、および米国特許出願公開第２０１０／００５５０８７号に記載されており、両方とも引用することにより本明細書の一部とされる。これまでの全ての研究は、比較的健康なドナー集団からの血液を用いて実施されたが、抗炎症性サイトカインが変形性関節症患者の血液から十分均等に捕捉され得ると仮定されていた。この試験の目的は、サイトカインと、増殖因子、投薬、および変形性関節症血液中の併存症の相互作用、ならびにＡＰＳ組成に及ぼす影響を決定することであった。
【００４６】
Ｘ線学的膝変形性関節症のエビデンスを有する１０５名の患者からの血液を採取し、処理を施してＡＰＳを作製した。患者病歴ならびに膝関節損傷および変形性関節症転帰スコア(Knee injury and Osteoarthritis Outcome Score)（ＫＯＯＳ）調査に対する回答を回収した。ベースラインサンプルおよびＡＰＳサンプルにおけるサイトカインおよび増殖因子の分析を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて行った。スピアマンの順位相関を用いて、サイトカインと、増殖因子、共存症、投薬および変形性関節症指標との間の関係を特定した。変形性関節症患者由来ＡＰＳ少なくともならびに健康ドナー由来のＡＰＳ中に、ＩＬ−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ｒａ）、可溶性ＩＬ−１受容体ＩＩ（ｓＩＬ−１ＲＩＩ）ならびに可溶性ＴＮＦ受容体ＩおよびＩＩ（ｓＴＮＦ−ＲＩＩ、ｓＴＮＦ−ＲＩＩ）を捕捉した。以下の表３参照。
【００４７】
【表４】
2015520383.tif 000006
【００４８】
グルコサミン／コンドロイチン補助剤およびプロピオン酸誘導体（例えば、イブプロフェン）を服用した患者は、低い循環レベルのｓＴＮＦ−ＲおよびＩＬ−１ｒａを示した。以下の表４参照。
【００４９】
【表５】
2015520383.tif 000007
【００５０】
循環血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）濃度は評価した全ての変形性関節症指標、すなわち、関節裂隙狭小化、軟骨下骨硬化、軟骨下骨嚢胞および骨棘と相関があることが判明し、それが疾患の重篤度の可能性のある予測因子となり得ることを示す。以下の表５参照。
【００５１】
【表６】
2015520383.tif 000008
【００５２】
年齢、性別、および総合ビタミン剤などの因子は患者のＫＯＯＳ応答に影響を及ぼし得る。以下の表６参照。
【００５３】
【表７】
2015520383.tif 000009
【００５４】
循環ＴＮＦ−αはＩＬ−１β濃度と最も相関があった。グルコサミン／コンドロイチン補助剤を服用した患者は、拮抗薬としての可溶性腫瘍壊死因子受容体（ｓＴＮＦ−Ｒ）およびＩＬ−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ｒａ）のより低い循環レベルを示した。循環血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）濃度は、変形性関節症指標である軟骨下骨硬化、軟骨下骨嚢胞、および骨棘と相関があることが判明し、それが疾患の重篤度の可能性のある予測因子となり得ることを示す。ＰＤＧＦ−ＡＢの循環濃度は、変形性関節症の重篤度の診断尺度を提供し得る。
【００５５】
技術用語の非限定的技術
本明細書で使用する見出し（「緒論」および「概要」など）および小見出しは、単に本開示内の論題の概略構成を意図するものであり、本技術またはそのいずれの態様の開示も限定することを意図しない。特に、「緒論」に開示される主題は、新規な技術を含み得るものであって、従来技術の列挙を構成するものではない。「概要」に開示される主題は、本技術またはその任意の実施形態の全範囲の網羅的または完全な開示ではない。本明細書のある節内で、ある材料を特に有用性を持つとして分類または考察されることは便宜上行われるものであり、それがある任意の組成物で使用される場合、本明細書におけるその分類に従って必ずまたは唯一機能しなければならないと断定を下すべきではない。
【００５６】
本開示に引用される全ての特許および特許出願の開示は、引用することにより本明細書の一部とされる。
【００５７】
説明および具体的な例は、本技術の実施形態を示すが、単に例示を目的に意図され、本技術の範囲を限定するものではない。特定の具体例、材料、組成物および方法の均等な変更、修飾および変形を本技術の範囲内で行ってもよく、実質的に同等の結果を持つ。さらに、記載の特徴を有する複数の具体例の列挙は、付加的な特徴を持つ他の具体例、または記載の特徴の異なる組合せを組み込んだ他の具体例を排除することを意図しない。具体的な例は、本技術の組成物および方法をいかにして作製し使用するかを例示する目的で示され、そうではないことが明示されない限り、本技術の所与の具体例が作製または試験されたこと、またはされていないことを表すことを意図するものではない。
【００５８】
本明細書で使用する場合、「好ましい」または「好ましい〜」という用語は、ある状況下である利益を付与する技術の具体例を意味する。しかしながら、同じまたは他の状況下で、他の具体例も好ましいものであり得る。さらに、１以上の好ましい具体例の列挙はその他の具体例が有用でないことを暗に示すものではなく、本技術の範囲から他の具体例を排除することを意図しない。
【００５９】
本明細書で使用する場合、「含む」という用語およびその変形は限定されないことを意図し、従って、一覧としての項目の列挙は、本技術の材料、組成物、デバイス、および方法に有用であり得る他の同様の項目の排除を意図するものではない。同様に、「できる」および「してよい」という用語およびそれらの変形も限定されないことを意図し、従って、ある具体例が特定の要素または特徴を含んでなることができる、または含んでなってよいという記載は、それらの要素または特徴を含まない本技術の他の具体例を排除しない。
【００６０】
含む、含有する、または有するなどの非限定的用語の類義語としての「含んでなる」というオープンエンド型の用語が本技術の具体例を記載および特許請求するために本明細書で使用されるが、あるいは、具体例は「からなる」または「から本質的になる」などのより限定的な用語を用いて記載することもできる。従って、材料、成分または工程段階を列挙する任意の所与の具体例に関して、本技術はまた具体的に、付加的な材料、成分または工程が本出願に明示的に列挙されていなくとも、そのような付加的な材料、成分または工程を排除して（からなる場合）、また、その具体例の重大な特性に影響を及ぼす付加的な材料、成分または工程を排除して（から本質的になる場合）、このような材料、成分または工程からなる、またはから本質的になる具体例を含む。例えば、要素Ａ、ＢおよびＣを挙げる組成物または工程の列挙は、当技術分野で列挙され得る要素Ｄが本明細書において排除されると明示されていなくとも、要素Ｄを排除して、Ａ、ＢおよびＣからなる、また、から本質的になる具体例を具体的に想定する。さらに、本明細書で使用する場合、列挙されている材料または成分「から本質的になる」という用語は、列挙されている材料または成分「からなる」具体例を想定する。
【００６１】
本明細書で使用する場合、「１つの(a and an)」は、「少なくとも１つの」その項目が存在することを示し、可能であれば、複数のこのような項目が存在し得る。値に対して適用される場合「約」は、その計算および測定がその値に若干の不正確さを許容することを示す（値の正確さに対する何らかのアプローチを伴う；およそまたはその値に合理的に近い；ほぼ）。何らかの理由で、「約」により示される不正確さが当技術分野においてこの通常の意味によって別の形で理解されない限り、本明細書で使用する「約」は、通常の測定方法またはそのようなパラメーターの使用から生じ得る偏差を少なくとも示す。
【００６２】
本明細書で使用する場合、範囲は、そうではないことが示されない限り、終点を含み、全範囲内の全ての異なる値およびさらなる分割範囲を含む。よって、例えば、「Ａ〜Ｂ」または「約Ａ〜約Ｂ」の範囲はＡおよびＢを含む。特定のパラメーター（温度、分子量、重量パーセンテージなど）の値および値の範囲の開示は、本明細書において有用な他の値および値の範囲を排除しない。あるパラメーターに関する２以上の具体的な例示値は、そのパラメーターに関して特許請求され得る値の範囲の終点を定義し得ると想定される。例えば、パラメーターＸが値Ａを有すると本明細書で例示され、また、値Ｚを有するとも例示される場合、パラメーターＸは約Ａ〜約Ｚの値の範囲を有し得ることが想定される。同様に、あるパラメーターについて値の２以上の範囲が開示されている場合は、（そのような範囲がネストされている場合であれ、重複している場合であれ、または異なる場合であれ）それらの開示されている値の終点を用いて特許請求され得る値の、可能性のある総ての組合せを包含することが想定される。例えば、パラメーターＸが本明細書において１〜１０、または２〜９、または３〜８の範囲の値を有すると例示される場合、パラメーターＸが１〜９、１〜８、１〜３、１〜２、２〜１０、２〜８、２〜３、３〜１０、および３〜９を含む値の他の範囲を有し得ることも想定される。
【手続補正書】
【提出日】平成26年7月23日(2014.7.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類被験体において変形性関節症を評価するための方法であって、
（ａ）前記被験体の組織サンプルにおいて、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択されるサイトカインの濃度を測定すること；
（ｂ）前記被験体の組織サンプルにおけるサイトカイン濃度とサイトカイン参照レベルを比較すること；および
（ｃ）その比較の結果に基づいて変形性関節症を評価すること
を含んでなり、ここで、
（ｄ）全血中濃度でのＰＤＧＦ−ＡＢのサイトカイン参照レベルが約２〜約３２ｎｇ／ｍｌであり、全血中濃度でのＰＤＧＦ−ＢＢのサイトカイン参照レベルが約１〜約１６ｎｇ／ｍｌであり、かつ、全血中濃度でのＥＧＦのサイトカイン参照レベルが約８７〜約１３００ｐｇ／ｍｌである、方法。
【請求項２】
前記サイトカインがＰＤＧＦ−ＡＢである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記サイトカインがＰＤＧＦ−ＢＢである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記サイトカインがＥＧＦである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
全血中濃度でのＰＤＧＦ−ＡＢのサイトカイン参照レベルが約６〜約１７ｎｇ／ｍｌであり、全血中濃度でのＰＤＧＦ−ＢＢのサイトカイン参照レベルが約２〜約１１ｎｇ／ｍｌであり、かつ、全血中濃度でのＥＧＦのサイトカイン参照レベルが約１７５〜約７７０ｐｇ／ｍｌである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記組織サンプルが全血、多血小板血漿、乏血小板血漿、尿、唾液、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記組織サンプルが全血、多血小板血漿、または乏血小板血漿である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記サイトカイン参照レベルが哺乳類被験体集団におけるサイトカインの組織サンプル濃度の平均値または中央値である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記哺乳類被験体集団が変形性関節症を持たない被験体の集団である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記組織サンプルが全血、多血小板血漿、または乏血小板血漿であり、全血中濃度でのＰＤＧＦ−ＡＢのサイトカイン参照レベルが約６〜約１７ｎｇ／ｍｌである、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
前記サイトカインがＰＤＧＦ−ＢＢであり、前記組織サンプルが全血、多血小板血漿、または乏血小板血漿であり、かつ、全血中濃度でのＰＤＧＦ−ＢＢのサイトカイン参照レベルが約１．９〜約７ｎｇ／ｍｌである、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
前記サイトカインがＥＧＦであり、前記組織サンプルが全血、多血小板血漿、または乏血小板血漿であり、かつ、全血中濃度でのＥＧＦサイトカイン参照レベルが約１１０〜約４２０ｐｇ／ｍｌである、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
前記サイトカイン参照レベルにおけるサイトカイン濃度がＸ線学的指標と相関している、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ｘ線学的指標が関節裂隙狭小化、骨棘の存在、軟骨下骨硬化、軟骨下骨嚢胞、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記サイトカイン参照レベルが、測定時よりも前の時点で被験体から得られた組織サンプル中のサイトカイン濃度である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前の時点が少なくとも約４週間、または少なくとも約３か月、または少なくとも約６か月、または少なくとも約１年である、被験体における変形性関節症の進行を監視するための請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記被験体において変形性関節症を診断するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記被験体が関節痛、関節硬直、関節損傷、Ｘ線学的異形、およびそれらの組合せからなる群から選択される変形性関節症症状を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記被験体において変形性関節症の重篤度を評価するための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記被験体が変形性関節症を有すると事前に診断されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記比較の結果に基づいて重篤度指数値を決定することをさらに含んでなる、請求項１、１７または１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記サイトカイン参照レベルが、測定時よりも前の時点で被験体から得られた組織サンプル中のサイトカイン濃度である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記被験体において関節のＸ線学的測定を行うことをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記被験体が変形性関節症の症状を示す、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記濃度が酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて決定される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記被験体がヒトである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記被験体が伴侶動物、使役動物、または競技動物である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
哺乳類被験体において変形性関節症を評価する方法であって、
（ａ）前記被験体から得られた第１の血液サンプル中のサイトカインレベルを測定すること；
（ｂ）前記被験体から得られた第２の血液サンプル中のサイトカインレベルを測定すること；および
（ｃ）第１のサンプル中のサイトカインレベルと第２のサンプル中のサイトカインレベルを比較して、サイトカインレベルの変化を決定すること
を含んでなり、ここで、
（ｄ）前記サイトカインは、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択される、方法。
【請求項２９】
（ｉ）第１のサンプル中のサイトカインレベルを測定する時点で、前記被験体の関節の第１のＸ線学的評価を行うこと；
（ｉｉ）第２のサンプル中のサイトカインレベルを測定する時点で、前記被験体の関節の第２のＸ線学的評価を行うこと；
（ｉｉｉ）第１のＸ線学的評価と第２のＸ線学的評価を比較して、Ｘ線学的変化を決定すること；および
（ｉｖ）Ｘ線学的変化をサイトカインレベルの変化と相関させること
をさらに含んでなる、哺乳類被験体において変形性関節症の進行を監視するための請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
第２の血液サンプルが、第１の血液サンプルが得られた後、少なくとも４週間の時点で得られる、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
哺乳類被験体において変形性関節症の臨床進行を管理する方法であって、
（ａ）前記被験体の血液において、血小板由来増殖因子ＡＢ（ＰＤＧＦ−ＡＢ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、およびそれらの組合せからなる群から選択されるサイトカインの濃度を測定すること；
（ｂ）前記サイトカイン濃度とサイトカイン参照レベルを比較して、サイトカインレベルの変動を決定すること；および
（ｃ）そのサイトカインレベルの変動に基づいて臨床行為を開始すること
を含んでなる、方法。
【請求項３２】
前記臨床行為が、治療計画の投与の開始、治療計画の時機の変更、治療計画のレベルの変更、治療計画の終了、およびそれらの組合せの群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記治療計画が、インターロイキン−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ｒａ）および可溶性腫瘍壊死因子受容体Ｉを含んでなる抗炎症性組成物の投与を含んでなる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗炎症性組成物が、
（ｉ）少なくとも約１０，０００ｐｇ／ｍｌの濃度のインターロイキン−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１ｒａ）；
（ｉｉ）少なくとも約１，２００ｐｇ／ｍｌの濃度の可溶性腫瘍壊死因子受容体１（ｓＴＮＦ−Ｒ１）；および
（ｉｉｉ）ｓＴＮＦ−ＲＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ、ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−β１、およびｓＩＬ−１ＲＩＩ、およびそれらの混合物からなる群から選択されるタンパク質（なお、組成物中の該タンパク質の濃度は、通常の血液中の該タンパク質の濃度より高い）
を含んでなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記哺乳類被験体がヒトである、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記被験体が伴侶動物、使役動物、または競技動物である、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記サイトカイン参照レベルが、測定時よりも前の時点で被験体から得られた血液中のサイトカイン濃度である、請求項３１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前の時点が少なくとも約４週間、または少なくとも約３か月、または少なくとも約６か月、または少なくとも約１年である、被験体における変形性関節症の進行を監視するための請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
重篤度指数値が前記比較の結果に基づいて決定される、請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記サイトカイン参照レベルが哺乳類被験体集団におけるサイトカインの血中濃度の平均値または中央値である、請求項３１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記哺乳類被験体集団が変形性関節症を持たない被験体の集団である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記サイトカイン参照レベルが全血中濃度において約６〜約１７ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ−ＡＢを含んでなる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記被験体が変形性関節症を有すると事前に診断されている、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記被験体が関節痛、関節硬直、関節損傷、Ｘ線学的異形、およびそれらの組合せからなる群から選択される変形性関節症症状を有する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記サイトカインがＰＤＧＦ−ＡＢである、請求項３１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記サイトカインがＰＤＧＦ−ＢＢである、請求項３１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記サイトカインがＥＧＦである、請求項３１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
全血中濃度でのＰＤＧＦ−ＡＢのサイトカイン参照レベルが約６〜約１７ｎｇ／ｍｌである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
全血中濃度でのＰＤＧＦ−ＢＢのサイトカイン参照レベルが約２〜約７ｎｇ／ｍｌである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
全血中濃度でのＥＧＦのサイトカイン参照レベルが約１１０〜約４２０ｐｇ／ｍｌである、請求項４７に記載の方法。
【国際調査報告】
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