(57)【要約】  微小孔性トラックエッチドメンブレンの染色のための方法が提供される。特に、これらの方法は、低い多孔性とともに大きい細孔を有するメンブレンのダークシェード染色に適する。望ましくは、このような方法は、メンブレンパラメータが染色前のものと比較して有意には変化していない染色メンブレンを提供する。同様に、得られた染色メンブレンは、感受性細胞培養系用途に対して悪影響をまったく示さない。【特許請求の範囲】
【請求項１】
微小孔性メンブレンを染色する方法において、
・前記メンブレンを水性分散染料系と、９０〜１００℃の温度で、前記メンブレンのための所望の透過スペクトルをもたらすのに十分な期間接触させる工程であって、前記水性分散染料系は、染色添加剤と、アゾおよびアントラキノン染料の群から選択される染料とを含む工程、および
・その後、前記メンブレンを１１０〜１５０℃の温度に２０〜９０分間暴露することによって加熱する工程、
を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２】
前記期間が２０〜９０分間であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記染料が４〜１５重量／容量％の濃度で存在することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記染色添加剤が０．５〜３重量／容量％の濃度で存在することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記染色添加剤が、担体、平衡化剤、拡散促進剤、またはそれらの２種以上の組合せからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記染色添加剤が担体であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記染色添加剤が拡散促進剤であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記加熱工程が加熱フィルム搬送シリンダを用いることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
加熱工程に続いて、前記メンブレンを溶媒と接触させて、前記メンブレンの表面から残留染料を除去する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記溶媒が亜硫酸塩含有剤を含むことを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記溶媒がアルカリ性であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記溶媒が、ケトン、アルデヒド、エーテル、エステル、アルコール、またはそれらの２種以上の組合せから選択されることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１２年４月２日に出願された米国仮特許出願第６１／６１９，０３３号明細書に対する優先権を主張し、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、微小孔性トラックエッチドメンブレンを染色する方法に関し、特に、０．８μｍ以上の孔径を有するメンブレンをダークシェード染色する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
一般に、０．８μｍ未満の直径を有する細孔（いわゆる「小さい細孔」）および高い多孔性を有する微小孔性ポリエステルトラックエッチドメンブレンのための染色方法は、水性／アルコール系中で分散染料を用い、続いて、染料を固定し、亜硫酸塩含有溶液によって還元するか、または適当な溶媒もしくは界面活性剤で洗浄することによってメンブレン表面から残留染料を除去する。個々に染色された壁を有する多数の細孔のために、この技術を用いて色のダークシェードを達成することが可能である。
【０００４】
対照的に、最大孔径が０．８μｍ以上の直径（いわゆる「大きい細孔」）を有する細孔、および低い多孔性を有するメンブレンは、比較的少ない内部の細孔および壁面を有する。したがって、１つ以上の波長で透過を実質的に遮断するダークシェードを得るために、小さい細孔および高い多孔性を有するメンブレンと比較して、メンブレン材料それ自体をより多く染色することが不可欠である。比較的高い沸騰アルコールまたは他の炭化水素を有する溶媒系中での分散染料の使用が、この結果を得るために用いられることがあるが、このような溶媒の除去は、困難であるとともに、このようなメンブレンの一般的な用途である細胞培養に悪影響を与え得る。さらに、典型的には、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）などのメンブレン材料のガラス転移温度を超える比較的高い温度が、ポリマー鎖にわたって染料分子を移動させ、実質的な染色効果を得るために用いられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、この手法は、孔径または表面粗さなどのメンブレンパラメータの変化をもたらし得る、メンブレン材料の構造変化をしばしばもたらす。したがって、大きな細孔および低い多孔性を有する微小孔性トラックエッチドメンブレンのためのダークシェード染色を得るための改善された方法に対する必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、微小孔性メンブレンを染色する方法を提供する。このような方法は、特に低い多孔性とともに大きい細孔を有するメンブレンのダークシェード染色に適する。望ましくは、これらの方法は、結果として得られるメンブレンパラメータが、染色前のものと比較して有意には変化していない水性系を用いる。同様に、結果として得られる染色メンブレンは、感受性細胞培養系用途に悪影響をまったく示さない。
【０００７】
１つの態様において、本発明は、微小孔性メンブレンを染色する方法であって、メンブレンを水性分散染料系と、９０〜１００℃の温度で、メンブレンのための所望の透過スペクトルをもたらすのに十分な期間接触させる工程であって、水性分散染料系は、染色添加剤と、アゾおよびアントラキノン染料の群から選択される染料とを含む工程、ならびにその後、メンブレンを１１０〜１５０℃の温度に２０〜９０分間曝すことによって加熱する工程を含む方法を提供する。
【０００８】
別の態様において、本発明は、本発明の方法のいずれかに従って調製された染色メンブレンを提供する。
【０００９】
さらに別の態様において、本発明は、本発明の方法のいずれかに従って染色されたメンブレンを含む細胞培養系を提供する。
【００１０】
本発明のこれらの、および他の特徴は、以下の詳細な説明の検討によってよりよく理解される。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書で使用される場合、以下の用語は、以下に示される定義を有するものとする。
【００１２】
本明細書で使用される場合、「大きい細孔」という語句は、そこに存在する最大孔径が、０．８μｍ以上の直径を有するメンブレンを指す。
【００１３】
本明細書で使用される場合、「低い多孔性」という語句は、メンブレンの単位面積当たりの細孔の数が比較的少ない、メンブレンを指す。対照的に、「高い多孔性」という語句は、メンブレンの単位面積当たりの細孔の数が比較的多い細孔を有する、メンブレンを指す。
【００１４】
本明細書で使用される場合、メンブレンに関して「透過を実質的に遮断する」という語句は、１つ以上の波長で光の透過の少なくとも９０％の減少、より好ましくは１つ以上の波長で光の透過の少なくとも９５％の減少を指す。
【００１５】
微小孔性メンブレンを染色する方法であって、メンブレンを水性分散染料系と、約１００℃の温度で、メンブレンのための所望の透過スペクトルをもたらすのに十分な期間接触させる工程であって、水性分散染料系は、染色添加剤と、アゾ染料およびアントラキノン染料からなる群から選択される染料とを含む工程、ならびにその後、メンブレンを１１０〜１５０℃の温度に２０〜９０分間暴露することによって加熱して、メンブレンに吸収された染料を固定する工程、を含む方法が提供される。好ましくは、加熱に続いて、メンブレンは、溶媒と接触させて、メンブレンの表面から残留染料を除去する。
【００１６】
一実施形態において、メンブレンは、水性分散染料系と約１００℃の温度で２０〜９０分間の期間接触させる。
【００１７】
一実施形態において、メンブレンを加熱して、その中の染料を固定する工程は、加熱フィルム搬送シリンダを用いる。とりわけ、固定は、ポリマーマトリックス中への染料の拡散をもたらす。
【００１８】
メンブレンの表面での残留染料は、亜硫酸塩含有剤（例えば、両方ともＣＨＴ  Ｂｅｚｅｍａ（独国）から入手可能なＲＥＤＵＬＩＴ  ＲＥＤまたはＭＥＲＯＰＡＮ  ＲＥＤ、Ｈｕｎｔｓｍａｎ（シンガポール国）から入手可能なＥＲＩＯＰＯＮ  ＲＣ、またはＤｒ．Ｐｅｔｒｙ（独国）から入手可能なＰＥＲＩＧＥＮ  ＴＨＤ）、またはアルカリ性である非亜硫酸塩含有溶媒（例えば、Ｄｒ．Ｐｅｔｒｙ（独国）から入手可能なＰＥＲＩＳＴＡＬ  ＲＣＶ、またはＣＨＴ  Ｂｅｚｅｍａ（独国）から入手可能なＲＥＤＵＬＩＴ  ＧＩＮ）で還元し；その後、４０〜７０℃の温度を有する水で洗浄することによって除去される。
【００１９】
一実施形態において、溶媒は、亜硫酸塩含有剤を含む。別の実施形態において、溶媒はアルカリ性である。一実施形態において、溶媒は、ｐＨ１１〜１３のアルカリ度を有する。さらに別の実施形態において、溶媒は、ケトン、アルデヒド、エーテル、エステル、アルコール、またはそれらの２種以上の組合せから選択される。例示的な好適な溶媒としては、限定されないが、エタノール、ブタノール、酢酸エチル、酢酸ブチル、アセトン、またはそれらの２種以上の組合せが挙げられる。
【００２０】
一実施形態において、溶媒は水性系である。
【００２１】
溶媒による処理は、１０〜２５℃の温度で行われて、その結果、ポリマー中への溶媒の拡散を防止する。
【００２２】
なおさらに別の実施形態において、この方法は、メンブレンを溶媒と接触させた後で、メンブレンの表面を、好ましくは４０〜７０℃の温度を有する水で洗浄する工程をさらに含む。さらに、一実施形態において、この方法は、メンブレンを、その表面の洗浄に続いて、乾燥させる工程をさらに含む。一実施形態において、メンブレンを乾燥させるために、１００〜１６０℃の温度の空気が用いられる。
【００２３】
一実施形態において、この方法は、メンブレンの透過スペクトルのオンライン測定をさらに含む。
【００２４】
有利には、本明細書で記載される微小孔性メンブレンを乾燥させる方法は、染色メンブレンの透過スペクトルの最終オンライン制御を有する連続ロールツーロール法に適している。
【００２５】
本発明の方法における使用に適した染料は、アゾおよびアントラキノン化学分類から選択される分散染料である。特に、７００〜９００ｇ／モルのモル質量を有する比較的小さい分子を有する染料が好ましい。本発明の方法に用いられる例示的な染料としては、限定されないが、Ｔｅｒａｓｉｌ染料ファミリー（例えば、ＴＥＲＡＳＩＬ  ＢＬＡＣＫ  ＢＦＥ、ＴＥＲＡＳＩＬ  ＢＬＵＥ  ＢＧＥ；Ｈｕｎｔｓｍａｎ、シンガポール国から入手可能）、Ｂｅｍａｃｈｒｏｎ染料（ＣＨＴ  Ｂｅｚｅｍａ、独国から入手可能）およびＦａｎｔａｇｅｎ染料（Ｆａｒｂｃｈｅｍｉｅ  Ｂｒａｕｎ、独国から入手可能）が挙げられる。好ましくは、本発明の方法に用いられる染料の量は、４〜１５重量／容量％である。ある実施形態において、１種以上の染料は、Ｔｅｒａｓｉｌ染料ファミリー（Ｈｕｎｔｓｍａｎ、シンガポール国から入手可能）からのものを４〜１５重量／容量％の量で含む。
【００２６】
所望の透過スペクトルを得るために、染料は、混合、またはブレンドされ得ることは、当業者によって理解される。代替として、所望の透過スペクトルを得るために、メンブレンは、その中に異なる染料を有する２つ以上の水性染料分散系下に置かれ得る。例えば、メンブレンにおける３５０〜７００ｎｍのスペクトル領域の全カバーを得るために、黒色、青色、および赤色または橙色染料などの染料の組合せが用いられてもよい。一実施形態において、染料は、黒色、青色、赤色、橙色、またはそれらの２種以上の組合せである。別の実施形態において、用いられる染料は、青色および赤色である。さらに別の実施形態において、用いられる染料は、青色および橙色である。
【００２７】
水性分散染料系は、少なくとも１種の染色添加剤を含む。例示的な染色添加剤としては、限定されないが、担体、平衡化剤、拡散促進剤（例えば、両方ともＨｕｎｔｓｍａｎ（シンガポール国）から入手可能なＵＮＩＶＡＤＩＮＥ  ＤＦＭまたはＵＮＩＶＡＤＩＮＥ  ＤＩＦ）、分散剤、界面活性剤、消泡剤、および艶消し剤が挙げられる。望ましくは、水性分散染料系に添加される少なくとも１種の染色添加剤は、メンブレン表面への染料の一様な吸着を得るのに役立ち、および／またはメンブレンのポリマー鎖間の染料分子の拡散を高める。好ましくは、本発明の方法で用いられる染色添加剤の量は、０．５〜３重量／容量％である。
【００２８】
一実施形態において、染色添加剤は、担体、平衡化剤、拡散促進剤、またはそれらの２種以上の組合せからなる群から選択される。例示的な染色添加剤としては、限定されないが、両方ともＨｕｎｔｓｍａｎ（シンガポール国）から入手可能なＵＮＩＶＡＤＩＮＥ  ＤＦＭまたはＵＮＩＶＡＤＩＮＥ  ＤＩＦ、ＣＨＴ  Ｂｅｚｅｍａ（独国）から入手可能なＣＯＬＯＲＣＯＮＴＩＮ、両方ともＤｒ．Ｐｅｔｒｙ（独国）から入手可能なＰＥＲＩＧＥＮ  ＣＵまたはＰＥＲＩＧＥＮ  ＣＤが挙げられる。一実施形態において、染色添加剤は担体である。ある実施形態において、担体は、グリセロールトリアセテートである。さらに別の実施形態において、染色添加剤は、拡散促進剤である。ある実施形態において、１種以上の染色添加剤は、Ｈｕｎｔｓｍａｎ（シンガポール国）から入手可能な拡散促進剤を０．５〜３重量／容量％の量で含む。
【００２９】
さらに、ある実施形態において、１種以上の染料は、Ｔｅｒａｓｉｌ染料ファミリー（Ｈｕｎｔｓｍａｎ、シンガポール国から入手可能）からのものを４〜１５重量／容量％の量で含み、１種以上の染色添加剤は、Ｈｕｎｔｓｍａｎ（シンガポール国）から入手可能な拡散促進剤を０．５〜３重量／容量％の量で含む。
【００３０】
本発明における使用に適切なメンブレンは、それらの組成中に熱可塑性ポリマーを含み、非繊維質である。例示的な熱可塑性ポリマーとしては、限定されないが、ポリエチレンテレフタレート、ポリ（ビニルクロライド）、ポリ（ビニル）アルコール、およびポリスチレンが挙げられる。一実施形態において、メンブレンは、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）を含む。
【００３１】
本発明における使用に適切なメンブレンは、メンブレンの面に対して実質的に垂直に配置された複数の細孔をその中に有する。適切なサイズの細孔は、任意の公知の方法、例えば、トラックエッチングによって生成され得る。１つの好ましい実施形態において、メンブレンは、０．８μｍ以上の孔径（「大きい細孔」）を有する。このような方法は、低い多孔性とともに大きい細孔を有する微小孔性トラックエッチドメンブレンのダークシェード染色に、例えば、０．８μｍ以上の孔径を有する染色メンブレンの調製のために、特に適している。
【００３２】
好ましくは、上述の方法のいずれかに従って染色されたメンブレンの透過スペクトルは、染色前のメンブレンと比較して少なくとも７５％だけ、より好ましくは少なくとも９０％だけ減少している。このような染色メンブレンは、蛍光遮断フィルタとしての使用に望ましい。
【００３３】
本明細書で記載される方法に従って調製された染色メンブレンも提供される。一実施形態において、このような染色メンブレンは、１つ以上の波長の透過を実質的に遮断する。別の実施形態において、このような染色メンブレンは、０．８μｍ以上の孔径を有する。
【００３４】
有利には、本明細書で記載される方法に従って調製された染色メンブレンは、細胞培養系用途における使用に適している。
【００３５】
１つの態様（１）において、本開示は、微小孔性メンブレンを染色する方法であって、メンブレンを水性分散染料系と、９０〜１００℃の温度で、メンブレンのための所望の透過スペクトルをもたらすのに十分な期間接触させる工程であって、水性分散染料系は、染色添加剤と、アゾ染料およびアントラキノン染料からなる群から選択される染料とを含む工程、ならびにその後、メンブレンを１１０〜１５０℃の温度に２０〜９０分間暴露することによって加熱する工程を含む、方法を提供する。
【００３６】
ある態様（２）において、本開示は、期間が２０〜９０分間である、態様（１）の発明を提供する。
【００３７】
ある態様（３）において、本開示は、染料が４〜１５重量／容量％の濃度で存在する、態様（１）の発明を提供する。
【００３８】
ある態様（４）において、本開示は、染色添加剤が、０．５〜３重量／容量％の濃度で存在する、態様（１）の発明を提供する。
【００３９】
ある態様（５）において、本開示は、染色添加剤が、担体、平衡化剤、拡散促進剤、またはそれらの２種以上の組合せからなる群から選択される、態様（１）〜（４）のいずれか１つの発明を提供する。
【００４０】
ある態様（６）において、本開示は、染色添加剤が担体である、態様（１）〜（５）のいずれか１つの発明を提供する。
【００４１】
ある態様（７）において、本開示は、染色添加剤が拡散促進剤である、態様（１）〜（５）のいずれか１つの発明を提供する。
【００４２】
ある態様（８）において、本開示は、加熱工程が、加熱フィルム搬送シリンダを用いる、態様（１）〜（７）のいずれか１つの発明を提供する。
【００４３】
ある態様（９）において、本開示は、加熱工程に続いて、メンブレンを溶媒と接触させて、メンブレンの表面から残留染料を除去する工程をさらに含む、態様（１）〜（８。のいずれか１つの発明を提供する。
【００４４】
ある態様（１０）において、本開示は、溶媒が亜硫酸塩含有剤を含む、態様（９）の発明を提供する。
【００４５】
ある態様（１１）において、本開示は、溶媒がアルカリ性である、態様（９）の発明を提供する。
【００４６】
ある態様（１２）において、本開示は、溶媒が、ケトン、アルデヒド、エーテル、エステル、アルコール、またはそれらの２種以上の組合せから選択される、態様（９）の発明を提供する。
【００４７】
ある態様（１３）において、本開示は、メンブレンを溶媒と接触させた後で、メンブレンの表面を水で洗浄する工程をさらに含む、態様（９）の発明を提供する。
【００４８】
ある態様（１４）において、本開示は、メンブレンを、その表面の洗浄に続いて乾燥させる工程をさらに含む、態様（１３）の発明を提供する。
【００４９】
ある態様（１５）において、本開示は、メンブレンの透過スペクトルのオンライン測定をさらに含む、態様（１）の発明を提供する。
【００５０】
ある態様（１６）において、本開示は、染料が、黒色、青色、赤色、橙色、またはそれらの２種以上の組合せである、態様（１）の発明を提供する。
【００５１】
ある態様（１７）において、本開示は、態様（１）の発明に記載された方法に従って調製された染色メンブレンを提供する。
【００５２】
ある態様（１８）において、本開示は、染色メンブレンが、１つ以上の波長の透過を実質的に遮断する、態様（１７）の発明を提供する。
【００５３】
ある態様（１９）において、本開示は、染色メンブレンが、０．８μｍ以上の直径を有する細孔を有する、態様（１７）の発明を提供する。
【００５４】
ある態様（２０）において、本開示は、態様（１）の発明に記載された方法に従って染色されたメンブレンを含む、細胞培養系を提供する。
【００５５】
ある態様（２１）において、本開示は、染色添加剤が担体である、態様（１）〜（４）のいずれか１つの発明を提供する。
【００５６】
ある態様（２２）において、本開示は、染色添加剤が拡散促進剤である、態様（１）〜（４）のいずれか１つの発明を提供する。
【００５７】
ある態様（２３）において、本開示は、加熱工程に続いて、メンブレンを溶媒と接触させて、メンブレンの表面から残留染料を除去する工程をさらに含む、態様（１）の発明を提供する。
【実施例】
【００５８】
水性染色溶液は、４〜１５重量／容量％のＴＥＲＡＳＩＬ  ＢＬＡＣＫ  ＢＦＥ、０．５〜５重量／容量％のＴＥＲＡＳＩＬ  ＢＬＵＥ  ＢＧＥ、０．５〜５重量／容量％のＵｎｉｖａｄｉｎｅ  ＤＩＦ、および５〜１０重量／容量％の酢酸緩衝液ｐＨ４．５を混合することによって調製した。この水性染色溶液を９０〜１００℃の温度に加熱した。メンブレンを水性染色溶液に約１００℃の温度で加え、それを連続的に攪拌しながら、２０〜６０分間インキュベートした。その後、メンブレンを１１０〜１５０℃の温度で２０〜９０分間焼成して、その中の染料を吸収および固定させた。この時点で、メンブレンの表面から残留染料を除去するための２つの代替処理を用いてもよい。
【００５９】
１つの手法では、メンブレンを、アルカリ水溶液（ｐＨ１１〜１３）中１〜５重量／容量％のＲＥＤＵＬＩＴ  ＧＩＮと、６０〜８０℃の温度で１５〜３０分間接触させて、その中に存在する残留染料を減少させる。その後、メンブレンを水で、４０〜６０℃の温度で透明になるまで洗浄し、次いで、空気で室温（約２２℃）〜６０℃の温度で乾燥させる。一実施形態において、メンブレンを空気で４０〜６０℃の温度で乾燥させる。
【００６０】
代替として、メンブレンを、有機溶媒、例えば、酢酸エチルまたはアセトンと、１０〜２５℃の温度で約１５分間接触させ、続いて、水で９０〜１００℃の温度で透明になるまで洗浄する。その後、メンブレンを空気で室温（約２２℃）〜６０℃の温度で乾燥させる。一実施形態において、メンブレンを空気で４０〜６０℃の温度で乾燥させる。
【００６１】
染色プロセス後のメンブレンパラメータおよび性能の比較
ＰＥＴトラックエッチドメンブレンを染色し、メンブレンパラメータおよびその性能を、乾燥前のこのようなメンブレンと比較した。特に、２つの異なるサイズのメンブレンを調べた。一方のメンブレンは、８μｍの直径、約５Ｅ＋０４個細孔／ｃｍ２の細孔密度、および約１７μｍの厚さを有する細孔を有する。他方のメンブレンは、３μｍの直径、約６Ｅ＋０５個細孔／ｃｍ２の細孔密度、および約２０μｍの厚さを有する細孔を有する。このようなメンブレンの両方とも、同じベースフィルム材料を有する。簡潔には、ＰＥＴトラックエッチドメンブレンを、２５〜４０ｇ／ＬのＴｅｒａｓｉｌ  Ｂｌａｃｋ  ＢＦＥ、６〜１０ｇ／ＬのＴｅｒａｓｉｌ  Ｂｌｕｅ  ＢＧＥ−０１、６〜１５ｇ／ＬのＵｎｉｖａｄｉｎｅ  ＤＩＦ、および５０〜１００ｍｌ／ＬのｐＨ４．５酢酸緩衝液を含む染色溶液を用いて染色した。メンブレンの小さな数片を染色溶液中に９０〜１００℃で３０〜１時間押し込み、この時間の間、溶液を連続的に攪拌した。その後、染色メンブレンを、室温で空気乾燥させた。染色メンブレンを１３０〜１５０℃で３０分〜１時間焼成した。表面が透明に見えるまで、酢酸エチル、アセトン、またはアルコールなどの溶媒で洗浄し、続いて、沸騰水で洗浄することによって、余剰染料を、乾燥メンブレンの表面から除去した。その後、乾燥メンブレンを室温で空気乾燥させた。
【００６２】
メンブレン厚さを測定するために、メンブレンの平らな片を小さい平坦なセラミック製プレート上に位置づけ、平らなメンブレン上のキャリパの測定点を傾けることによって、誘導指示キャリパ（Ｍａｈｒ、独国によるＥｘｔｒａｍｅｓｓ）を用いて、メンブレンの厚さを測定した。厚さは、メンブレンの５点で測定した。中間厚さを計算し、測定許容誤差とともに記録を取った。両方のメンブレンについて、厚さは、乾燥前後で同じ範囲にあった。
【００６３】
さらに、上記方法に従って染色したトラックエッチドポリエチレンテレフタレートメンブレンは、染色前に示したものと比較して、その孔径および形状に変化を示さなかった。特に、染色前に７．７±０．４μｍの直径を有する細孔を有する、透明メンブレンは、染色後に同じ範囲（すなわち、７．７±０．４μｍ）の孔径を示した。同様に、染色前に３．２±０．２μｍの直径を有する細孔を有する、メンブレンは、染色後に同じ孔径を示した。
【００６４】
空気流の測定に関しては、メンブレンホルダ、マノメータ、質量流量計、および弁を備えた実験装置を用いた。具体的には、用いた測定計器は、０〜５００ｍｌ／分および０〜２０００ｍｌ／分の範囲を有する質量流量計（両方とも、Ｏｍｅｇａ  ＦＭＡｘｘシリーズのもの）、ならびに０〜７０ミリバール（０〜７０ヘクトパスカル）のマノメータ（ＴｈｏｍｍｅｎによるＭＨ２８）であった。メンブレンディスクを、６ｍｍ直径の空いているメンブレン領域を有するホルダの中に置いた。ホルダを閉じた後、入り口弁を開いた。適当な空気流を調整して、計器の測定範囲の上側４半分で測定値を得た。空気流および圧力の記録を取り、Ｌ／分ｃｍ２バール単位の標準化空気流データを計算し、記録を取った。それぞれの測定メンブレンについて、３つの値を得た。中間空気流を計算し、許容誤差とともに記録を取った。両方のメンブレンについて、空気流は、乾燥前後で同じ範囲にあった。
【００６５】
さらに、上記方法に従って染色したメンブレンを用いる感受性細胞培養系用途に対して悪影響はまったく認められなかった。特に、ヒト臍帯静脈内皮細胞、および上記のとおりに染色した８μｍの直径を有する細孔を有する、メンブレンを用いて、５６時間アッセイを行った。望ましく、染色メンブレンは、非常に良好な性能を示し、かつ染色プロセスの悪影響は認められなかった。
【００６６】
上記実施形態に対して、その広い発明概念から逸脱することなく、変更がなされ得ることが、当業者によって認められる。したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に限定されないが、添付の特許請求の範囲によって定義されるとおりに、本発明の精神および範囲内である変更形態に及ぶことが意図される、ことが理解される。
【国際調査報告】
2015519481.tif 000002