(57)【要約】実質的に２から４の間の範囲内の血小板濃縮物（２）の量とオゾン化油（３）の量との間の混合比に従って混合した、オゾン化油及び血小板濃縮物（２）を含む治療調製物（１）。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
オゾン含有物質（３）及びタンパク質特性物質（２）を含むことを特徴とする、治療調製物（１）。
【請求項２】
前記タンパク質特性物質（２）は、増殖因子の組合せである、請求項１に記載の治療調製物（１）。
【請求項３】
前記タンパク質特性物質（２）は、血小板濃縮物である、請求項２に記載の治療調製物（１）。
【請求項４】
前記タンパク質特性物質（２）は、幹細胞馴化培地である、請求項２に記載の治療調製物（１）。
【請求項５】
前記オゾン含有物質（３）は、流体溶液中オゾンである、請求項１から４のうちいずれか一項に記載の治療調製物（１）。
【請求項６】
前記オゾンは、油溶液中オゾンである、請求項１から５のうちいずれか一項に記載の治療調製物（１）。
【請求項７】
前記オゾン含有物質（３）は、オゾン化油である、請求項１から６のうちいずれか一項に記載の治療調製物（１）。
【請求項８】
前記血小板濃縮物（２）の含有量と前記オゾン含有流体（３）の含有量との比は、２から４の間の範囲である、請求項７又は３に記載の治療調製物（１）。
【請求項９】
ウシ乳腺炎を治療するための、請求項１から８のうちいずれか一項に記載の治療調製物（１）。
【請求項１０】
ウシ科の治療用治療調製物（１）の調製方法であって、オゾン含有物質（３）とタンパク質特性物質（２）とを混合する、混合ステップを含むことを特徴とする調製方法。
【請求項１１】
前記治療調製物（１）を実質的に−８０℃に等しい温度にする、冷却ステップ（１５）を含む、請求項１から１０のうちいずれか一項に記載の調製方法。
【請求項１２】
前記治療調製物（１）を液体窒素で冷凍する、冷却ステップ（１５）を含む、請求項１から１１のうちいずれか一項に記載の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、独立請求項のプリアンブルに記載の種類の治療調製物及びその調製方法に関する。
【０００２】
好ましくは、本発明は、ウシ（ボス・タウルス）又はヒツジ（オビス・アリエス）等ウシ科の治療用治療調製物に関し、より詳細には、ウシの乳腺の病気、好ましくは乳腺炎の治療用治療調製物に関する。
【背景技術】
【０００３】
公知のように、乳腺炎は、微生物によって引き起こされる乳房の炎症からなり、この微生物は、乳頭を通り乳腺内部に貫入することで前記乳腺内部に免疫系反応を誘発し、こうして物理的、化学的及び細菌学的な変化を乳汁にもたらす。
【０００４】
例えば、乳腺炎の発症は、結果として乳汁産生の減少を意味し、乳汁産生が完全に途絶える場合もある。
【０００５】
とりわけ、炎症度が徐々に上昇するにつれて、乳汁の化学組成は、血液循環系から乳房への血液成分の濾過を促進する膜透過性の変化、及び分泌組織による合成作用の低下のために、血液の化学組成に次第に似てくる。
【０００６】
この結果、場合によっては、畜産家は、前述の変質のために一定期間の間、抗生物質により動物を治療し、その期間に、動物が産生した乳汁を廃棄することを余儀なくされる。
【０００７】
深刻な問題は、乳腺炎が遅れて診断され、その結果、ある量の不良な乳汁が誤って正常な乳汁と混合され市場に出される場合があり、ヒトに腸質の問題又は他の疾患をもたらすことである。
【０００８】
前述の問題を解決する、したがって乳腺炎の症例を治癒させるために、畜産家は現在抗生物質を使用している。
【０００９】
上記の従来技術は、いくつかの深刻な欠点を有する。
【００１０】
実際、抗生物質やホルモンの使用は、乳汁中にそのような物質の残渣をもたらし、したがって消費者に健康問題を引き起こす。
【００１１】
具体的には、乳汁中の抗生物質残渣の存在は、こうした残渣がヒトの食物連鎖に入り込むことがあり、アレルギーの影響又は更にはそのような物質がもつ可能性がある有害な影響のために、消費者への健康上のリスクを増大させることを意味する。
【００１２】
更に、食物からヒトに伝達された前記抗生物質残渣は、汚染された食物を消費した人体において耐性菌の選択の一因となることがある。実際、ここ数年、耐抗生物質事象の拡散は、公衆衛生への危険の可能性と共に広範にわたっている。
【００１３】
したがって、別の問題は、ウシが抗生物質で治療された際に産生された乳汁は、廃棄されなければならず、畜産家にとって経済的損失につながる。
【００１４】
更なる問題は、抗生物質残渣は、尿又は他の排泄物中にも見られ、これらは、環境に分散され、汚染源になることである。
【００１５】
同様に重要な欠点は、抗生物質は、費用が高く、特に効率的ではないことである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
この状況において、本発明の技術的目的は、上述の不都合を実質的に克服できる、ウシ科の治療用治療調製物及びその調製方法を開発することである。前記技術的目的の範囲内で、本発明の１つの重要な目標は、ヒトに有害な乳汁中残渣の存在に至らない、ウシ科の治療用治療調製物を得ることである。
【００１７】
したがって、本発明の別の重要な目標は、治療期間に産生された乳汁を廃棄する必要のない、ウシ科の治療用治療調製物を作製することである。
【００１８】
本発明の更なる目標は、特に効率的であり、環境への影響を低減させることを特徴とする、ウシ科の治療用治療調製物を考案することである。
【００１９】
同様に重要な目的は、実施が簡単で経済的であるそのような治療調製物の調製方法を得ることである。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
技術的目的及び特定の目標は、添付の特許請求の範囲において請求する、ウシ科の治療用治療調製物及びその調製方法によって達成される。
【００２１】
好ましい実施形態は、従属請求項に記載される。
【００２２】
本発明の特性及び利点は、添付の図１を参照した、本発明の好ましい実施形態の以下の詳細な説明から明確に明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】本発明によるウシ科の治療用治療調製物の調製方法の図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
前記図を参照すると、参照番号１は、本発明による治療調製物を全体的に示す。
【００２５】
ヒト及び動物の両方、並びに好ましくはウシ科に属する動物であるウシの外部及び内部の炎症状態の治療及び治癒に使用することが適している。具体的には、治療調製物１は、細菌性合併症又は伝染性合併症を伴う又は伴わない乳腺の病気、関節炎の治療、及び外傷、老化後の組織損傷を回避する組織再生のために、ウシに使用するのに適している。より詳細には、治療調製物１は、ウシ（ボス・タウルス）の乳腺炎の治療に使用するのに適している。
【００２６】
調製剤１は、主に、タンパク質特性物質２、及び好ましくは流体溶液中のオゾン含有物質３を含む。前記流体は、好ましくは液体であり、より好ましくは、オゾン化油３を作製するような油である。
【００２７】
タンパク質特性物質２は、アミノ酸から構成される物質であり、したがってアミノ酸、即ちタンパク質モノマー、ダイマー又はポリマーから構成される。
【００２８】
好ましくは、タンパク質特性物質２は、増殖因子の組合せである。増殖因子という用語は、医学分野で使用する場合、細胞の増殖を刺激し、調整するのに適したタンパク質特性物質を意味すると解釈される。
【００２９】
非網羅的な例として、増殖因子の主な機能は、細胞静止（Ｇ０期）を中断し、細胞をＧ１期（成長期）を開始することによる細胞周期の外からの制御である。更に、増殖因子は、有糸分裂、細胞生存、細胞移動及び細胞分化の活性化を調整する。増殖因子は、増殖同様に常に同時に分化及び成熟を促進する。
【００３０】
やはり非網羅的例として、一部の増殖因子の一覧を以下に示す：
−ＴＧＦ（形質転換増殖因子）−β、
−ＢＭＰ（骨形成タンパク質）、
−ニューロトロフィン（ＮＧＦ、ＢＤＮＦ及びＮＴ３）、
−ＦＧＦ（線維芽細胞増殖因子）、
−マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）又はＣＳＦ−１、
−顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）又はＣＳＦ−２、
−顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）又はＣＳＦ−３、
−神経増殖因子（ＮＧＦ）、
−ニューロトロフィン、
−血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）：血小板に位置し、様々な刺激下、血小板のα顆粒によって解放される。血小板由来増殖因子は、マクロファージによっても産生される。血小板由来増殖因子は、新生血管の安定化、平滑筋の強化にも介入する、
−インスリン様増殖因子、
−エリスロポエチン（ＥＰＯ）、
−トロンボポエチン（ＴＰＯ）、
−ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、
−増殖分化因子−９（ＧＤＦ９）、
−塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ又はＦＧＦ２）、
−上皮増殖因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）（ＥＧＦ）（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒとしても公知）は、有糸分裂を誘発し、様々な生物学的液体（唾液、尿、汗）中に見られる。上皮増殖因子は、ＥＲＢ−Ｂ１として通例は公知であるＥＧＦＲ受容体に結合する、
−肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、
−血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）：血管内皮増殖因子は、炎症、血管新生、虚血細胞等の過程に関与する。血管内皮増殖因子には、ＶＥＧＦＲ−１、２、３等の受容体に結合するＶＥＧＦ−Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ等の様々な種類があり、ＶＥＧＦＲ−１、２、３は、様々な位置を有し、様々なＶＥＧＦを結合する。ＶＥＧＦは、毛細血管の透過性の増大を誘発し、浮腫の形成をもたらす、
−ＴＧＦ−α：形質転換増殖因子−αは、ほぼ全ての腫瘍に関与する。ＴＧＦ−αは、ＥＧＦと同じ受容体に結合し、同じ効果を有する、
−ＴＧＦ−β：形質転換増殖因子−βは、血小板、マクロファージ、リンパ球によって産生される。形質転換増殖因子−βは、１つは不顕性及び１つは活性の２つの形態で合成される。活性形態は、最初に２型受容体に結合して第１の安定な複合体を形成し、１型受容体に結合して第２の安定な複合体を形成し、ＳＭＡＤ２及び３の間でＳＭＡＤ転写因子のリン酸化を伴って、次に、ＳＭＡＤ４転写因子に結合する。ヘテロダイマーは、細胞核内部に入り、遺伝子活性化を支援又は阻害できる。ＴＧＦ−βは、細胞周期の遮断を生じさせるＣＤＫ阻害因子の濃度増加を決定する。ＴＧＦ−βは、新生血管の安定化、マトリクス細胞タンパク質の強化にも介入する。
【００３１】
好ましくは、増殖因子の組合せは、血小板濃縮物である。
【００３２】
増殖因子は、血液抽出物である血液成分から実質的に構成され、この血小板濃縮物は、好ましくは１ｍｌ当たり少なくとも１０８個の血小板であり、適切には、１ｍｌ当たり１０９個の血小板に実質的に等しい。
【００３３】
増殖因子は、同種の型のもの、言い換えれば、同じ種、具体的にはウシ科又は調製物１を使用する動物を含む同じ品種に由来する血液試料から得られたものが好ましい。
【００３４】
別の好ましい解決策では、増殖因子の組合せは、幹細胞馴化培地に含まれる種類のものである。
【００３５】
オゾン含有物質３は、あらゆる方法を使用して作製され、純オゾンであっても、酸素との混合オゾンであっても、酸素と混合しないオゾンであってもよい。好ましくは、オゾン含有物質３は、流体溶液中オゾン、或いは、固体中オゾン、及びより好ましくは、オゾン化油３であり、このオゾン化油３は、実質的に、油又は同様の物質で乳化した、及び好ましくはヒマワリ種子油で乳化した、及び特定用途で必要とする場合は他の追加成分で乳化したオゾンである。オゾン含有物質３は、好ましくはオゾンを中に飽和させたガス状液体溶液から構成される。
【００３６】
タンパク質特性物質２が血小板濃縮物であり、オゾン含有物質３がオゾン化オイルである場合における、タンパク質特性物質２とオゾン含有物質３との量の混合比は、好ましくは実質的に２から４の範囲である。好ましくは、前記混合比は、実質的に２．５から３．５の間の範囲、より好ましくは、３に近く、即ち、タンパク質特性物質２は３部で、オゾンは１部である。
【００３７】
本発明は、更に、ウシ科の治療のための上記治療調製物の調製方法に関する。
【００３８】
そのような調製方法１０は、血液試料１１ａをウシから採取する、試料採取ステップ１１；血小板濃縮物２を血液試料から抽出する、分離ステップ１２；オゾンを油内に吹き込むことによりオゾン化油３を得る、乳化ステップ１３；オゾン含有物質３と血小板濃縮物２とを混合する、混合ステップ１４；及び治療調製物１を急速冷凍する、冷却ステップ１５を含む。試料採取ステップでは、施術者は、１頭又は２頭のウシ科を選択し、血液試料１１ａを抜き取る。具体的には、血液試料１１ａは、健康なウシ、即ち事実上完全な健康状態、したがって治療調製物１を対処すべき疾患のないことを特徴とするウシから抜き取られる。具体的には、試料採取ステップ１１の間、試料１１ａは、例えば注射器１１ｂにより、１６ゲージ針（１６．８３ｍｍに実質的に相当）を使用して外側頸静脈穿刺により又は皮下乳房静脈から抜き取り、次に血液バッグに収集する。
【００３９】
次に、血液試料１１ａをＰＶＣ製の、例えばＣＰＤＡ−１等の抗凝固剤及び防腐添加剤を含有するバッグに収集する。より詳細には、血液試料１１ａを血液１００ｍｌごとに、実質的に０．３２７ｇのクエン酸一水和物、２．６３ｇのクエン酸ナトリウム二水和物、０．２５１ｇのリン酸一ナトリウム二水和物、２．９０ｇの無水ブドウ糖及び０．０２７５ｇのアデニンを含有する血液バッグに収集する。
【００４０】
試料を採取した後、ステップ１１は、実質的に４℃に等しい温度でバッグを保持するように特殊な冷蔵庫内部にバッグを置くことで完了する。
【００４１】
試料採取の２４時間以内に、本方法は、タンパク質特性物質２をウシの血液試料１１ａから抽出する、分離ステップ１２を施す。詳細には、血小板含有量が１ｍｌ当たり１０９個の血小板に実質的に等しいことを特徴とするタンパク質特性物質２を得るように血液を処理する。
【００４２】
具体的には、ステップ１２において、血液試料１１ａに存在する様々な要素の異なる密度を利用するため、血液試料１１ａを１回は低速で１回は高速の２回の遠心分離サイクルにかける。
【００４３】
より詳細には、ステップ１２は、赤血球又は他の廃棄物１２ｃから多血小板血漿（ｐｌａｓｍａ  ｒｉｃｈ  ｉｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ）１２ｂを分離する低回転（１００回転／分を３０分間）の第１の遠心分離サイクル、タンパク質特性物質２、及び乏血小板血漿（ｐｐｐ、Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ｐｏｏｒ  Ｐｌａｓｍａ）１２ｃから構成される廃棄物質を多血小板血漿から抽出する、高回転（１５００回転／分を１０分間）の第２の遠心分離サイクルを含む。
【００４４】
最後に、このように得られたタンパク質特性物質２が所望の血小板濃度を有さない場合は、分離ステップ１２において、所望の濃度（１ｍｌ当たり１０９個の血小板）が得られるように乏血小板血漿（ｐｐｐ）１２ｃに希釈を施す。
【００４５】
乳化ステップ１３では、酸素−オゾン混合物１３ａを油１３ｂ、好ましくはヒマワリ種子油、好ましくは冷間圧縮したヒマワリ種子油内に吹き込むことによって、オゾン化油を調製する。
【００４６】
詳細には、そのようなステップ１３ａでは、滅菌受容器１３ｃに油１３ｂを部分的に充填し、次に、酸素−オゾン混合物を３０μｇ／ｍｌの濃度で油１３ｂの中に１５分間吹き込んで油を乳化させるようにし、次に、オゾン１３ｂ及び油１３ａを適切に混合してオゾン含有物質３を得る。
【００４７】
乳化ステップ１３が完了した後、オゾン含有物質３及び血小板濃縮物２を一緒に混合する、混合ステップ１４がある。
【００４８】
詳細には、そのようなステップ１４では、タンパク質特性物質２の含有量と、オゾン含有物質３、好ましくはオゾン含有物質３の含有量との間の混合比は、実質的に１から５の間の範囲である。好ましくは、濃縮物２の量とオゾン化油３の量との前記混合比は、実質的に２から４の間、より好ましくは、２．５から３．５の間であり、より一層好ましくは、実質的に３に等しい。
【００４９】
この時点で、冷却ステップ１５が続き、この冷却ステップ１５では、治療調製物１を急速冷凍し、具体的には、少なくとも１２時間の間、実質的に−８０℃に等しい温度にするか又はより短時間の間、液体窒素で処理する。
【００５０】
このようなステップは、一例として、１回分の血小板濃縮物の注射器を使用して試料を単に収集し、次に流体中オゾン試料を収集することによって行われる。オゾンは、その比重がより低いので、表面に上昇し、オゾンが中に入っている血小板濃縮物中溶液に部分的に留まる。
【００５１】
冷却ステップ１５では、前記１２時間の急速冷凍終了時に、＋２０℃から２５℃の間の範囲の温度で１２時間の間治療調製物１を解凍し、次に、−８０℃で１２時間の間再度急速冷凍する。このステップは、血小板細胞を破裂させるため、必要な因子を出現させる役割を果たす。代替的に、前記ステップは、前記必要な因子を血小板細胞から出現させるカルシウムイオン（Ｃａ＋又はＣａ＋＋）の添加に置き換えても、それと組み合わせてもよい。
【００５２】
冷却ステップ１５を完了した後、本方法は、治療調製物を使用する瞬間まで約−２０℃で保存する、最終保存ステップ１６を伴う。
【００５３】
本発明は、いくつかの重要な利点を得る。
【００５４】
第１の基本的な利点は、オゾン含有物質３とタンパク質特性物質２との革新的組合せによって得られる。
【００５５】
この革新的組合せは、動物又はヒトを治療するための抗生物質、抗炎症生成物、防腐剤、組織再建及び再生生成物として重要な利点をもたらし、これらは、外傷及び／又は疾患及び／又は老化後の組織損傷の防止機能並びに／又は器官及び／又は組織の回復機能を含む。
【００５６】
具体的には、この革新的組合せは、抗生物質として著しく有利である。
【００５７】
詳細には、この革新的組合せは、乳腺炎又は乳腺の他の炎症の治療に非常に効果的な生成物を得ることを可能にする。
【００５８】
そのような結果は、調製物を−８０℃にすることによって調製物１を特徴とする血小板因子の解放を促す冷却ステップ１５によっても保証される。
【００５９】
更に、前述の組合せは、ウシ又は他の動物、更にはヒトの治療において、抗生物質、抗炎症生成物、防腐剤、組織再建生成物として調製物１を格段に効果的にし、外部及び内部の炎症、関節炎、細菌性合併症及び／又は伝染性合併症を治療し、外傷又は老化後の多大な組織再生能力並びに組織損傷の予防機能を有する。
【００６０】
１つの重要な利点は、治療調製物１の特定組成物により、治療調製物１で治療する間に産生した乳汁は、抗生物質残渣がなく、したがって健康に対する危険を何ら伴わずに消費者に提供できることにある。
【００６１】
したがって、別の利点は、治療調製物１の使用により、治療中に産生した乳汁を廃棄する必要がないことである。
【００６２】
更に、そのような利点は、治療調製物１がオゾン化油及び血小板濃縮物の組合せにより乳汁の産生減少を伴わないことによって向上する。
【００６３】
更なる利点は、濃縮物２は同種の型であるので、調製物１はより良好に許容され、副作用又は有害反応はほとんどないことである。
【００６４】
同様に重要であるもう一つの利点は、現在公知のものと比較して、治療調製物１及び本方法１０の両方の費用が低減することである。更なる重要な利点は、治療調製物１の使用に対する高い汎用性であり、実際に、この治療調製物１は、注射器によって注射でき、クリームの形態で外部から（例えば膝又は筋肉に）塗布でき、又は内部に（例えば子宮又は口内に）適用でき、又はウシに嚥下させるために丸薬等に封入できる。
【００６５】
したがって、例えば、筋肉内、乳房小管内、子宮内、経皮、皮下、関節内投与に容易に利用できるだけでなく、経口、頬、舌下、直腸を含めた経腸経路（これには子宮内及び乳房小管内経路を含む）、非経口経路（これには静脈内、筋肉内、皮下、吸入、動脈内、髄腔内、腹腔内、関節内及び皮下を含む）、或いは局部的又は局所的経路（これには皮膚、経皮、経鼻、眼、耳介経路を含む）によって、容易に利用できる。
【００６６】
ウシ科の実験研究により、調製物１を単独で投与する前及び後で採取した前記ウシ科由来の乳汁を含む複数の試料に存在する体細胞の数を検証した。
【００６７】
前記ウシ科を４日間連続して、１日用量である６ｍｌの血小板濃縮物２及び２ｍｌのオゾン化油３で治療した。
【００６８】
公知のように、乳汁に存在する体細胞の数は、関連する乳房の感染度に正比例する。
【００６９】
結果は以下の通りであった：投与日、乳汁試料に存在する体細胞の平均数は、約９，６５８，１８２個であった；７日後、体細胞の平均数は、試料中平均合計約１，５４８，３６４個まで８４％減少した；２週間後、体細胞は、試料中平均合計約２７６，４５５個まで９７％減少した；３０日後、体細胞は、試料中平均合計約１２５，３６４個まで９９％減少した。
【００７０】
別の利点は、本方法１及び調製物１に汚染薬剤が事実上ないことである。
【符号の説明】
【００７１】
１  治療調製物
２  タンパク質特性物質
３  オゾン含有物質
【図１】
2015512886.tif 000003
【国際調査報告】
2015512886.tif 000004
2015512886.tif 000005
2015512886.tif 000006