(57)【要約】  本発明は、AMP-N細胞と称される新規細胞組成物を対象とする。特に、本発明は、新規AMP-N細胞組成物、およびACCS-Nと称される新規細胞由来のならし培地を非限定的に含む、AMP-N細胞に由来する新規組成物を対象とする。本発明は、新規AMP-N細胞およびACCS-N組成物の新規作製方法、ならびにそれらの使用をさらに対象とする。【選択図】図１
2015526086.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
AMP-N細胞を含む組成物。
【請求項２】
前記AMP-N細胞が、高レベルのSSEA-4、GFAP、α-S100、および低レベルのβ-チューブリンIII、MAP2、PSA-NCAMおよびNFMを発現する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
医薬組成物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記医薬組成物が、製品に含有され、該製品は、該医薬組成物、パッケージング材料、および該医薬組成物の使用説明書を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
ACCS-Nを含む組成物。
【請求項６】
医薬組成物である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記医薬組成物が、製品に含有され、該製品は、医薬組成物、パッケージング材料、および神経系疾患、障害または損傷を治療するための該医薬組成物の使用説明書を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
持続放出用に製剤化される、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
プールされたACCS-Nである、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
AMP-N細胞、ACCS-NおよびプールされたACCS-Nからなる群より選択される組成物の治療有効量を被験体に投与することを含む、神経系疾患、障害または損傷を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
本発明は、以下の機関から与えられた米国政府支援によって一部には為された: ジュネーブ財団(The Geneva Foundation)、請負契約番号S-1153-01、主契約番号W81XWH-08-2-0127。米国は、本発明について一定の権利を有しうる。
【０００２】
関連出願の相互参照
本願は、参照により本明細書にその全体が組み込まれる、2012年8月16日に出願された米国仮出願第61/683,896号および2013年3月11日に出願された米国仮出願第61/776,031号の優先権を35 USC ァ119(e)の下に主張する。
【０００３】
発明の分野
本発明の分野は、AMP-N細胞と命名した新規細胞組成物を対象とする。特に、本発明の分野は、新規AMP-N細胞組成物、および本明細書においてACCS-Nと称される新規細胞由来のならし培地を非限定的に含む、AMP-N細胞に由来する新規組成物を対象とする。本発明の分野は、AMP-N細胞組成物および新規ACCS-N組成物の新規作製方法ならびにそれらの使用をさらに対象とする。
【背景技術】
【０００４】
Uchida S, et al. (2000) J Neurosci Res 62:585-590は、ヒト羊膜上皮細胞由来のならし培地の神経栄養機能を記載する。Sheng, JG., et al. (1993) Exp Neurol 123(2):192-203は、羊膜細胞の移植後の半パーキンソン病(hemi-parkinsonian)ラットにおけるドーパミン作動性の発芽および行動の回復を報告する。Lindvall, O. and Kokaia, Z., (2006) Nature 441:1094-1096は、神経障害の治療のための幹細胞の使用における進展を記載する。Kakishita, K., et al., (2000) Exp Neurol 165:27-34は、ヒト羊膜上皮細胞が、パーキンソン病のラットモデルの線条体への移植後にドーパミンを産生し、生存することを報告する。Okawa, H., et al., (2001) Neuroreport 12(18):4003-7は、羊膜上皮細胞が、虚血脳においてニューロン様細胞へと変わることを報告する。Kakishita, K., et al., (2003) Brain Res 980(1):48-56は、ヒト羊膜上皮細胞の移植が、6-ヒドロキシドーパミン病変を有するラットにおける黒質ドーパミンニューロンの分解を阻止することを記載する。Meng, XT, et al., (2007) Cell Biol Int 31(7):691-8は、羊膜上皮細胞共培養による、神経幹細胞の神経分化の増進および神経突起成長を報告する。Sankar, V. et al., (Neuroscience 2003, Letter to Neuroscience, 118(1):11-7)は、ヒト羊膜上皮細胞移植の、切断された脊髄損傷の修復における役割を研究して、ヒト羊膜上皮細胞がサルの切断された脊髄において生存したこと、移植片に宿主の軸索が入り込んだこと、そして、切断損傷部位にグリア性瘢痕がなかったことを報告した。Wu, Z-Y., et al, (Chinese Med Jour 2006, 119(24):2101-07)は、ヒト羊膜上皮細胞の移植が、脊髄損傷を有するラットにおいて後肢機能を改善することを報告した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Uchida S, et al. (2000) J Neurosci Res 62:585-590
【非特許文献２】Sheng, JG., et al. (1993) Exp Neurol 123(2):192-203
【非特許文献３】Lindvall, O. and Kokaia, Z., (2006) Nature 441:1094-1096
【非特許文献４】Kakishita, K., et al., (2000) Exp Neurol 165:27-34
【非特許文献５】Okawa, H., et al., (2001) Neuroreport 12(18):4003-7
【非特許文献６】Kakishita, K., et al., (2003) Brain Res 980(1):48-56
【非特許文献７】Meng, XT, et al., (2007) Cell Biol Int 31(7):691-8
【非特許文献８】Sankar, V. et al., Neuroscience 2003, Letter to Neuroscience, 118(1):11-7
【非特許文献９】Wu, Z-Y., et al, Chinese Med Jour 2006, 119(24):2101-07
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
固有の表現型および機能を有する新規細胞組成物を提供することが本発明の目的である。これらの新規細胞は、本明細書中でAMP-N細胞と称され、AMP細胞が変化し、細胞表面と細胞内の両方のマーカー解析によって評価される固有の表現型を示すように、新規条件下でAMP細胞を培養することによって創出される。具体的には、AMP-N細胞は、マーカーの固有の組み合わせを発現することが示されており、そのマーカーの一部はニューロンで見られ、そのマーカーの一部はグリア細胞で見られ、そのマーカーの一部はAMP細胞で見られる(以下に記載される)。これらのAMP-N細胞は、そのようなマーカーの固有の組み合わせが一細胞において記載されていることを初めて示す。新規AMP-N細胞由来組成物、特に、AMP-N細胞に由来するならし培地(本明細書中でN-ならし培地またはACCS-Nと称される)を提供することも本発明の目的である。この新規ならし培地は、分泌タンパク質因子の固有の組み合わせを含有する。AMP-N細胞またはACCS-Nを、単独でまたは互いに組み合わせて、ならびに/あるいは活性物質および/または不活性物質などの他の物質と組み合わせて使用して、神経系疾患、障害または損傷からの改善または回復が生じるように、神経系疾患、障害または損傷(本明細書中他の箇所に詳細に記載される)に罹患している被験体を治療することが本発明のさらなる目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
したがって、本発明の第一の態様は、AMP-N細胞を含む組成物である。
【０００８】
特定の実施形態では、AMP-N細胞は、高レベルのSSEA-4、GFAP、α-S100および低レベルのB-チューブリンIII、MAP2、PSA-NCAMおよびNFMを発現する。
【０００９】
別の特定の実施形態は、AMP-N細胞を含む医薬組成物である。別の特定の実施形態では、AMP-N細胞の医薬組成物は、製品に含有され、該製品は、該医薬組成物、パッケージング材料、および該医薬組成物の使用説明書を含む。
【００１０】
本発明の第二の態様は、ACCS-Nを含む組成物である。
【００１１】
本態様の特定の実施形態は、ACCS-Nを含む医薬組成物である。
【００１２】
本態様の別の特定の実施形態では、ACCS-Nの医薬組成物は、製品に含有され、該製品は、医薬組成物、パッケージング材料、および神経系疾患、障害または損傷を治療するための該医薬組成物の使用説明書を含む。
【００１３】
別の特定の実施形態では、ACCS-Nは持続放出用に製剤化される。
【００１４】
別の特定の実施形態は、ACCS-NがプールされたACCS-Nである実施形態である。
【００１５】
本発明の第三の態様は、AMP-N細胞、ACCS-NおよびプールされたACCS-Nからなる群より選択される組成物の治療有効量を被験体に投与することを含む、神経系疾患、障害または損傷を治療する方法である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、AMP-N細胞および未分化のAMP細胞において28個の遺伝子の発現を比較する定量的RT-PCTの結果を示す図である。
【図２】図２は、AMP-N細胞およびヒトニューロンにおいて28個の遺伝子の発現を比較する定量的RT-PCTの結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の他の特徴および利点は、添付の説明、実施例および特許請求の範囲から明らかである。本出願にわたって引用される全ての参考文献、係属中の特許出願および発行済みの特許は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。対立する場合は、定義を含めた本明細書が統制する。
【００１８】
定義
本明細書中で使用される用語「一つの(a)」または「一つの(an)」とは、1またはそれ以上; 少なくとも1を意味する。
【００１９】
本明細書中で使用される用語「補助的に(adjunctive)」とは、共同して(jointly)、共に(together with)、加えて(in addition)、併せて(in conjunction with)などを意味する。
【００２０】
本明細書中で定義される「単離された」とは、その元の環境から取り出され、したがってその天然状態から「ヒトの手によって」改変された物質を表す。
【００２１】
本明細書中で定義される「遺伝子」は、ポリペプチド鎖の産生に関与するDNAのセグメントである; それは、コード領域の前および後ろの領域、ならびに個別のコードセグメント(エキソン)の間の介在配列(イントロン)を含む。
【００２２】
本明細書中で使用される用語「タンパク質マーカー」とは、細胞または細胞集団に特徴的な任意のタンパク質分子を意味する。タンパク質マーカーは、細胞の細胞膜上に位置しうるか、または、一部の場合では、分泌タンパク質もしくは細胞内タンパク質でありうる。
【００２３】
本明細書中で使用される「濃縮された(enriched)」とは、混合物から望ましくない物質を除去するか、または所望の物質を選択かつ分離することによって、1種以上の物質の量を選択的に濃縮するか、または増加させる(すなわち、特定の細胞マーカーを用いて、集団中の全ての細胞が該マーカーを発現するわけではない不均質な細胞集団から細胞を分離する)ことを意味する。
【００２４】
本明細書中で使用される用語「実質的に精製された」とは、特定のマーカーまたはマーカーの組み合わせに関して実質的に均質の細胞集団を意味する。実質的に均質とは、特定のマーカーまたはマーカーの組み合わせに関する、少なくとも90％、および好ましくは95％均質を意味する。
【００２５】
本明細書中で使用される用語「胎盤」とは、早産および満期胎盤の両者を意味する。
【００２６】
本明細書中で使用される用語「多能性(multipotent)幹細胞」とは真の幹細胞であるが、限られた数のタイプにしか分化することができない。例えば、骨髄は、全ての血液細胞を生じさせるが、他の細胞タイプに分化することはできないかもしれない多能性幹細胞を含有する。
【００２７】
本明細書中で使用される用語「胚外組織」とは、胚の保護、栄養補給、老廃物除去などに関与する胚体の外側に位置する組織を意味する。胚外組織は出生時に廃棄される。胚外組織には、非限定的に、羊膜、絨毛膜(栄養膜および胚外中胚葉、例えば臍帯および血管)、卵黄嚢、尿膜および羊水(それに含有される全ての成分を含む)が含まれる。胚外組織およびそれに由来する細胞は、発生中の胚と同一の遺伝子型を有する。
【００２８】
本明細書中で使用される用語「羊膜由来多能性前駆細胞」または「AMP細胞」とは、羊膜に由来する上皮細胞である特定の細胞集団を意味する。AMP細胞は以下の特徴を有する。それらは、いかなる非ヒト動物材料の存在下でも培養されたことがなく、それにより、それらおよびそれらに由来する細胞産物はヒト臨床使用に好適である。なぜなら、それらは異種に汚染されていないからである。AMP細胞は、ヒト血清アルブミンを補充した基本培地で培養される。好ましい実施形態では、AMP細胞は、サイトカインVEGF、アンジオゲニン、PDGFおよびTGFβ2ならびにMMPインヒビターTIMP-1および/またはTIMP-2を分泌する。サイトカインまたは固有の組み合わせのサイトカイン群の生理的範囲は、以下の通りである: VEGFの場合は約5〜16ng/mL、アンジオゲニンの場合は約3.5〜4.5ng/mL、PDGFの場合は約100〜165pg/mL、TGFβ2の場合は約2.5〜2.7ng/mL、TIMP-1の場合は約0.68μg/mLおよびTIMP-2の場合は約1.04μg/mL。AMP細胞は、支持細胞層なしで増殖し、タンパク質テロメラーゼを発現せず、非腫瘍原性である。AMP細胞は、造血幹細胞マーカーCD34タンパク質を発現しない。この集団でのCD34陽性細胞の不存在は、単離物に造血幹細胞、例えば臍帯血または胚性線維芽細胞が混入していないことを示す。細胞の実質的に100％が低分子量サイトケラチンに対する抗体と反応し、このことは、その上皮性の性質を裏づける。AMP細胞の単離元である、新たに単離された羊膜由来細胞は、幹/前駆細胞マーカーc-kit(CD117)およびThy-1(CD90)に対する抗体と反応しない。満期または早産胎盤から細胞を取得するために使用されるいくつかの手法は、当技術分野において公知である(例えば、US 2004/0110287; Anker et al., 2005, Stem Cells 22:1338-1345; Ramkumar et al., 1995, Am. J. Ob. Gyn. 172:493-500を参照のこと)。しかし、本明細書中で使用される方法は、改善された新規の組成物および細胞集団を提供する。
【００２９】
本明細書中で使用される用語「AMP-N細胞(複数可)」とは、神経細胞、グリア細胞、AMP細胞、および幹細胞のマーカーの固有の組み合わせを示す新規細胞タイプを意味する。
【００３０】
本明細書中に記載の特定の組成物、生育条件、培地などに言及する場合の用語「アニマルフリー」とは、非ヒト動物由来材料、例えばウシ血清、タンパク質、脂質、炭水化物、核酸、ビタミンなどが、特定の組成物または方法の調製、生育、培養、増殖、保存または製剤化に使用されないことを意味する。「非ヒト動物由来材料を含まない」とは、材料が、非ヒト動物の身体もしくは物質中に存在したか、または非ヒト動物の身体もしくは物質と接触したことが一度もなく、ゆえにそれらが異種に汚染されていないことを意味する。そのような組成物および/または方法の調製、生育、培養、増殖、保存および/または製剤化では、組み換え産生ヒトタンパク質などの臨床等級の材料のみが使用される。
【００３１】
本明細書中に記載の特定の組成物、生育条件、培地などに言及する場合の用語「無血清」とは、動物由来血清、例えばヒト由来血清が、組成物または方法の調製、生育、培養、増殖、保存または製剤化に使用されないことを意味する。
【００３２】
本明細書中で使用される用語「継代」とは、組織培養容器中で集密に到達したかまたは集密に近い培養物中で生育する細胞を容器から取り出し、新鮮な培地で希釈し(すなわち1:5希釈し)、かつ新しい組織培養容器に入れてその継続した増殖および生存を可能にする細胞培養技術を意味する。例えば、羊膜から単離された細胞は初代細胞と称される。そのような細胞を本明細書中に記載の生育培地中で生育させることによって培養物中で増殖させる。そのような細胞を二次培養する場合、二次培養の各ラウンドは継代と称される。本明細書中で使用される「初代培養」とは、新たに単離された細胞集団を意味する。
【００３３】
本明細書中で使用される用語「プールされた」とは、プールされない組成物と比べて、より一定であるかまたは一貫した特徴を有する新規組成物を創出するように混合された複数の組成物を意味する。
【００３４】
本明細書中で使用される用語「分化」とは、細胞が、進行的に、より特殊化する過程を意味する。
【００３５】
本明細書中で使用される用語「分化効率」とは、分化しているかまたは分化することができる、集団中の細胞のパーセンテージを意味する。
【００３６】
本明細書中で使用される用語「細胞産物(cell product)」または「細胞産物(cell products)」とは、細胞によって作られ、細胞から分泌される任意の全ての物質、例えば、非限定的に、タンパク質因子(すなわち、成長因子、分化因子、生着因子、サイトカイン、モルフォゲン、プロテアーゼ(すなわち、内在性細胞剥離を促進するための、プロテアーゼインヒビター)、細胞外マトリックス成分(すなわち、フィブロネクチンなど)を含む物質を意味する。
【００３７】
本明細書中で使用される「ならし培地」とは、特定の細胞または細胞集団が培養され、その後細胞が取り出された培地である。細胞が培地中で培養されると、それらは、他の細胞の挙動を支援するかまたは他の細胞の挙動に影響しうる細胞因子を分泌しうる。そのような因子には、非限定的に、ホルモン、サイトカイン、細胞外マトリックス(ECM)、タンパク質、小胞、抗体、ケモカイン、受容体、インヒビターおよび顆粒が含まれる。そのような細胞因子を含有する培地はならし培地である。
【００３８】
本明細書中で使用される、「プールされたACCS-N」を含めた、用語「ACCS-N」とは、AMP-N細胞から得られたならし培地を意味する。ACCS-Nは、分泌タンパク質の固有の組み合わせからなり、神経系疾患、障害および損傷を治療するのに有用でありうる。
【００３９】
本明細書中で使用される用語「生理的レベル」とは、生物系において物質が見出されるレベルであり、かつ生化学的および/または生物学的過程の適正な機能にとって適切なレベルを意味する。
【００４０】
用語「治療有効量」とは、所望の生理的効果を達成する(すなわち、神経系疾患、障害または損傷を治療する)のに必要な治療物質の量を意味する。
【００４１】
本明細書中で使用される用語「溶解物」とは、細胞、例えばAMP-N細胞を溶解し、場合により、細胞片(例えば細胞膜)を除去した場合に得られる組成物を表す。これは、機械的手段によって、凍結および解凍によって、超音波処理によって、EDTAなどの界面活性剤の使用によって、または、例えばヒアルロニダーゼ、ディスパーゼ、プロテアーゼ、およびヌクレアーゼを使用する酵素消化によって達成しうる。一部の例では、細胞を溶解し、細胞膜部分を保持し、かつ溶解された細胞の残りの部分を廃棄することが望ましい。他の例では、両方の部分を保持することが望ましい。
【００４２】
本明細書中で使用される用語「製薬的に許容される」とは、治療物質に加えて、製剤を構成する成分が、本発明にしたがって治療される患者への投与に適切であることを意味する。
【００４３】
本明細書中で使用される用語「組織」とは、特定の機能の実施において結束した、同じように特殊化した細胞の集合をいう。
【００４４】
本明細書中で使用される用語「治療タンパク質」には、広範囲の生物活性タンパク質が含まれ、それには、非限定的に、成長因子、酵素、ホルモン、サイトカイン、サイトカインのインヒビター、血液凝固因子、成長分化因子が含まれる。
【００４５】
本明細書中で使用される用語「移植」とは、未分化、部分的分化、または完全分化型の細胞、例えば細胞懸濁液または基質もしくは組織に組み込まれた細胞を含む組成物をヒトまたは他の動物に投与することをいう。
【００４６】
本明細書中で使用される用語「物質(agent)」とは、活性物質または不活性物質を意味する。「活性物質」とは、被験体に投与されたとき、生理的効果を有することができる物質を意味する。活性物質の非限定的な例には、成長因子、サイトカイン、抗生物質、細胞、細胞由来のならし培地などが含まれる。「不活性物質」とは、投与されたとき、生理的効果がない物質を意味する。そのような物質は、「製薬的に許容される添加剤」と代わりに呼ばれうる。非限定的な例には時間放出カプセルなどが含まれる。
【００４７】
本明細書中で使用される用語「共投与する」は、2以上の物質の同時投与または逐次投与を含みうる。2以上の物質は、同じ経路によって投与される必要はない。
【００４８】
本明細書中で使用される「治療(Treatment)」、「治療する(treat)」、または「治療すること(treating)」とは、哺乳動物、特にヒトの疾患または状態の任意の治療を含み、かつ: (a) 疾患または状態が、該疾患または状態にかかりやすいかもしれないが、まだそれを有すると診断されていない被験体で発生することを予防すること; (b) 疾患または状態を阻害する、すなわちその発症を阻止すること; (c) 疾患または状態を軽減させかつまたは改善する、すなわち疾患または状態の退行を生じさせること; または(d) 疾患または状態を治す、すなわちその発症または進行を停止させることを含む。本発明の方法によって治療される被験体集団には、望ましくない状態または疾患を患う被験体、ならびに該状態または疾患を発症する危険性がある被験体が含まれる。
【００４９】
用語「非経口投与」および「非経口的に投与される」は、当技術分野で認識されており、通常は注射によるが必ずしも注射によらない、経腸および局所投与以外の投与方法を表し、それには、非限定的に、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内(intrathecal)、嚢内(intracapsular)、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、アーティキュラーレ(articulare)内、被膜下、クモ膜下、脊髄内(intraspinal)、硬膜外、脳内および胸骨内(intrasternal)の注射もしくは注入が含まれる。他の投与経路には、鼻腔内および経粘膜が含まれる。
【００５０】
本明細書中で使用される用語「持続放出(sustained-release)」、「長期放出(extended-release)」、「時間放出(time-release)」、「制御放出(controlled-release)」、「緩徐放出(slow-release)」または「連続放出(continuous-release)」とは、ゆっくり溶解し、時間をかけて放出されるように製剤化される物質、典型的には治療物質または薬物を意味する。
【００５１】
本明細書中で使用される用語「生体浸食性(bioerodable)」または「生体浸食(bioerosion)」とは、物質の分解をもたらす物理的(すなわち溶解)および化学的(すなわち化学結合切断)過程の組み合わせを意味する。
【００５２】
本明細書中で使用される用語「生体分解性(biodegradable)」または「生体分解(biodegradation)」とは、生物学的物質(すなわち、酵素、微生物または細胞)が物質の分解を担っていることを意味する。
【００５３】
本明細書中で使用される用語「生体再吸収性(bioresporbable)」または「生体吸収性(bioabsorptable)」とは、細胞活性(すなわち食作用)による分解産物の除去を意味する。
【００５４】
本明細書中で使用される用語「ナノ粒子」とは、同じ物質のより大きな粒子と比べて、新しいまたは増進されたサイズ依存性特性を示す直径100nm未満の粒子を意味する。
【００５５】
「ニューロン(neuron)」、「神経細胞(neuronal cell)」および「神経細胞(neural cell)」(神経前駆細胞および神経幹細胞を含む)は、神経細胞(nerve cell)、すなわち、身体の一つの部分から別の部分への神経インパルスの伝導に関与する細胞を表すために互換的に使用される。大部分のニューロンは、3つの異なる部分、すなわち、核を有する細胞体と、2つの異なる種類の細胞質突起である樹状突起および軸索とからなる。樹状突起は、ニューロンの受容部分であるが、通常、高度に分岐し、密集した細胞体の伸長部である。軸索は、典型的には、細胞体から別のニューロンまたは筋組織もしくは腺組織へと神経インパルスを伝導するために特殊化した、単一の長く、細い突起である。軸索は、「軸索側枝」と称される側枝を有しうる。軸索側枝および軸索は、終末分枝(telodendria)と称される多くの細い繊維に分岐することによって終結しうる。終末分枝の遠位端は、シナプス終末小体(synaptic end bulb)または軸索終末(axonal terminal)と称され、神経伝達物質を蓄えるシナプス小胞を含有する。軸索は、髄鞘と称される多層の、白い、リン脂質の、分節化された被覆によって囲まれうるが、髄鞘は末梢神経系ではシュワン細胞、および中枢神経系ではオリゴデンドロサイトによって形成される。そのような被覆を含有する軸索は、「有髄化」される。ニューロンは、末梢における受容体から脳および脊髄へ、ならびに中枢神経系のより低い中枢からより高い中枢へインパルスを伝達する、感覚(求心性)ニューロンを含む。ニューロンはまた、脳および脊髄から末梢におけるエフェクターへ、ならびに中枢神経系のより高い中枢からより低い中枢へインパルスを伝達する、運動(遠心性)ニューロンでありうる。他のニューロンは、感覚ニューロンから運動ニューロンへインパルスを伝え、中枢神経系内に位置する連合(連結するまたは介在ニューロンの)ニューロンである。束内に配置される求心性および遠心性ニューロンの突起は、CNSの外側に位置する場合は「神経」と称され、またはCNSの内側の場合は線維路(fiber tract)と称される。
【００５６】
「神経組織(neural tissue)」または「神経組織(nervous tissue)」は、神経細胞または神経を含む任意の組織を含む。ニューロンに加えて、存在しうる他の細胞は、オリゴデンドロサイト、星状細胞、上衣細胞、小グリア細胞またはシュワン細胞の1つ以上を含む。
【００５７】
本明細書中で使用される用語「神経系」とは、脳、脊髄および末梢神経を構成する全ての細胞および組織を意味する。用語「中枢神経系」または「CNS」とは、脳および/または脊髄を意味し、用語「末梢神経系」または「PNS」とは、末梢神経を構成する全ての細胞および組織を意味する。
【００５８】
本明細書中で使用される「神経系疾患または障害」とは、中枢および/または末梢神経系における機能的および/または身体的欠陥を引き起こすかまたはもたらす任意の状態を意味する。本明細書中で使用される「中枢神経系疾患または障害」または「CNS疾患または障害」とは、脳および/または脊髄における機能的および/または身体的欠陥を引き起こすかまたはもたらす任意の状態を意味し、「末梢神経系疾患または障害」または「PNS疾患または障害」とは、末梢神経を構成する細胞および組織における機能的および/または身体的欠陥を引き起こすかまたはもたらす任意の状態を意味する。
【００５９】
用語「脳損傷」は、脳の任意の全ての損傷を表し、頭蓋骨の骨折または貫通(すなわち、自動車事故、落下または銃創)、神経毒、感染、腫瘍、代謝異常、または例えば頭部の急速な加速もしくは減速の場合の閉鎖性頭部損傷(すなわち、揺さぶられっ子症候群、爆発)、鈍的外傷、震とう、および震とう症候群によって引き起こされうる。
【００６０】
用語「星状細胞(astrocyte)」および「星状膠細胞(astroglial cell)」は、脳および網膜における病的状態下で、または移植後に、反応性になり、グリア細胞繊維性酸性タンパク質(GFAP)およびビメンチン(Vim)などの中間径フィラメント(IF)タンパク質を上方制御するグリア細胞の一種を表す。「GFAP」は、成熟星状細胞の主要中間径フィラメントタンパク質の一つである「グリア細胞繊維性酸性タンパク質」を表す。それは、発達中の他のグリア細胞から星状細胞を区別するためのマーカーとして使用される。
【００６１】
本明細書中で使用されるフレーズ「軸索成長(axonal growth)」または「軸索成長(axon growth)」は、神経細胞の軸索の伸長または延長を表す。軸索は、数ミクロンから数メーターの距離に関して伸長しうる。軸索の延長または伸長はまた、神経細胞の軸索の「再生」と称され、神経細胞接続性の再確立を結果としてもたらしうる。
【００６２】
本明細書中で使用される「脊髄損傷」とは、一般的には機械力によって、脊髄の軸索または神経線維が遮断される損傷を意味する。
【００６３】
本明細書中で使用される用語「脊髄瘢痕化(spinal cord scarring)」は、脊髄損傷の部位へのグリア細胞の動員および増殖を表す。密に詰まった細胞(主反応性星状細胞)およびそれらの分泌物は、グリア性瘢痕として知られる密な細胞斑を形成する。この瘢痕は、軸索が突出するのを阻止し、したがって、軸索再生および機能的回復を妨げる。
【００６４】
本明細書中で使用される用語「神経防護」とは、神経変性の進行を停止させる、および/または回復に向かわせることを意味する。本明細書中で使用される用語「神経変性」とは、ニューロンの進行性喪失を意味する。これは、ニューロンの即時喪失と、それに続く、連結する、または隣接したニューロンの後続喪失を含むが、これらに限定されない。
【００６５】
詳細な説明
本発明では、当技術分野の技術の範囲内の慣用の分子生物学、微生物学、および組み換えDNA技術を用いてよい。そのような技術は文献中に完全に説明される。例えば、Sambrook et al, 2001, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual"; Ausubel, ed., 1994, "Current Protocols in Molecular Biology" Volumes I-III; Celis, ed., 1994, "Cell Biology: A Laboratory Handbook" Volumes I-III; Coligan, ed., 1994, "Current Protocols in Immunology" Volumes I-III; Gait ed., 1984, "Oligonucleotide Synthesis"; Hames & Higgins eds., 1985, "Nucleic Acid Hybridization"; Hames & Higgins, eds., 1984,"Transcription And Translation"; Freshney, ed., 1986, "Animal Cell Culture"; IRL Press, 1986, "Immobilized Cells And Enzymes"; Perbal, 1984, "A Practical Guide To Molecular Cloning"を参照のこと。
【００６６】
ある範囲の値が指定される場合、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合を除いて下限の単位の10分の1までの、該範囲の上限と下限の間に入るそれぞれの値および該指定範囲の任意の他の指定値または間に入る値は本発明の範囲内に包含されることが理解される。指定範囲において特に除外される任意の境界値がある場合、より小さい範囲の上限および下限は、そのより小さい範囲に単独で含まれてよく、これもまた本発明の範囲内に包含される。指定範囲が一方または両方の境界値を含む場合、その含まれる境界値の一方または両方を除外する範囲もまた本発明に含まれる。
【００６７】
特に指定されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解される意義と同一の意義を有する。本明細書中に記載の方法および材料と類似または等価の任意の方法および材料を本発明の実施または試験において使用することもできるが、好ましい方法および材料をここに記載する。
【００６８】
文脈上明らかに他の意味に解すべき場合を除き、本明細書および特許請求の範囲で使用される単数形「a」、「and」および「the」は複数への言及を含むことに留意する必要がある。
【００６９】
細胞の取得および培養
AMP細胞組成物は、(a) 胎盤から羊膜を回収するステップ、(b) プロテアーゼを使用して羊膜から上皮細胞を解離させるステップ、(c) 天然由来または組み換え産生ヒトタンパク質(すなわち、ヒト血清アルブミン)を加えた、非ヒト動物タンパク質を含まない基本培地中で細胞を培養するステップ; (d) 上皮細胞培養物からAMP細胞を選択するステップ、および場合により(e) 場合により追加の添加物および/または成長因子(すなわち、組み換えヒトEGF)を使用して、細胞をさらに増殖させるステップを使用して製造される。詳細は米国公開No.2006-0222634-A1に含有される。該文献は参照により本明細書に組み込まれる。
【００７０】
AMP細胞の培養 - 該細胞は基本培地で培養される。そのような培地には、非限定的に、上皮細胞用のEPILIFE(登録商標)培地(Cascade Biologicals)、OPTI-PRO(商標)無血清培地、VP-SFM無血清培地、IMDM高濃縮基本培地、KNOCKOUT(商標)DMEM低浸透圧培地、293 SFM II限定無血清培地(全てGibco; Invitrogen製)、HPGM造血前駆細胞増殖培地、Pro 293S-CDM無血清培地、Pro 293A-CDM無血清培地、UltraMDCK(商標)無血清培地(全てCambrex製)、STEMLINE(登録商標)T細胞増殖培地およびSTEMLINE(登録商標)II造血幹細胞増殖培地(ともにSigma-Aldrich製)、DMEM培地、DMEM/F-12栄養混合物増殖培地(ともにGibco製)、Ham F-12栄養混合物増殖培地、M199基本培地(ともにSigma-Aldrich製)、および他の同等の基本培地が含まれる。そのような培地は、ヒトタンパク質を含有するか、またはヒトタンパク質で補充されるべきである。本明細書中で使用される「ヒトタンパク質」とは、天然に産生されるヒトタンパク質、または組み換え技術を使用して産生されるヒトタンパク質であり、例えばヒト血清アルブミンである。特定の実施形態では、基本培地はIMDM高濃縮基本培地、STEMLINE(登録商標)T細胞増殖培地またはSTEMLINE(登録商標)II造血幹細胞増殖培地、またはOPTI-PRO(商標)無血清培地、またはそれらの組み合わせであり、ヒトタンパク質は、少なくとも0.5％〜10％までの濃度で添加されるヒト血清アルブミンである。特定の実施形態では、ヒト血清アルブミンは約0.5％〜約2％である。特定の実施形態では、ヒト血清アルブミンは0.5％である。ヒト血清アルブミンは液体または乾燥(粉末)形態に由来してよく、それには、非限定的に、組み換えヒト血清アルブミン、PLASBUMIN(登録商標)正常ヒト血清アルブミンおよびPLASMANATE(登録商標)ヒト血液画分(ともにTalecris Biotherapeutics製)が含まれる。
【００７１】
最も好ましい実施形態では、異種汚染を回避するために、非ヒト動物産物を含まない系を使用して細胞は培養される。この実施形態では、培地は、IMDM高濃縮基本培地、STEMLINE(登録商標)T細胞増殖培地またはSTEMLINE(登録商標)II造血幹細胞増殖培地、OPTI-PRO(商標)無血清培地、またはDMEM培地であり、10％の量までのヒトアルブミン(PLASBUMIN(登録商標)正常ヒト血清アルブミン)が添加される。
【００７２】
本発明は、さらに、動物由来タンパク質が組み換えヒトタンパク質で置換され、かつBSAなどの動物由来血清がヒト血清アルブミンで置換されている上記基本培地のいずれかの使用を想定する。好ましい実施形態では、培地はアニマルフリーであることに加えて無血清である。
【００７３】
場合により、他の因子が使用される。一実施形態では、0〜1μg/mLの範囲の濃度のヒト上皮細胞成長因子(EGF)が使用される。好ましい実施形態では、ヒトEGF濃度は約10〜20ng/mLである。全ての補給剤は臨床等級である。
【００７４】
新規AMP-N細胞を創出するためのAMP細胞の処理
AMP細胞は、それらの表現型を、神経細胞、グリア細胞および幹細胞の特徴を有する表現型に変化させる独自の複数ステッププロセスに従って処理される。
【００７５】
AMP-N細胞からのならし培地(ACCS-N)の調製
本発明のAMP-N細胞を使用してACCS-Nを調製することができる。一実施形態では、本明細書中に記載されるようにAMP-N細胞が創出され、細胞1×106個/mLが、5〜30mLの範囲の培地、好ましくは10〜25mLの範囲の培地、および最も好ましくは約15ml 10mLの培地を含有するT75フラスコ中に播種される。細胞は培養され、ACCS-Nは培養約28日後に回収される。
【００７６】
AMP-N細胞およびACCS-Nの特徴付け
N-AMP細胞およびACCS-Nは、それらの表現型および治療可能性を評価するために、当業者が精通している任意のアッセイによって特徴付けされる。そのようなアッセイには、非限定的に、PCR、抗体アレイ、遺伝子アレイ、ELISA、質量分析法、細胞ベースの活性アッセイ、フローサイトメトリー、動物モデルなどが含まれる。
【００７７】
製剤化、用量および投与
本発明の組成物は、組成物の使用目的に応じて種々の方法で製造することができる。例えば、本発明の実施に有用な組成物は、本発明の物質、すなわちAMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nを、溶液、懸濁液、または両者(溶液/懸濁液)中に含む液体であってよい。用語「溶液/懸濁液」とは、活性物質の第1の部分が溶液中に存在し、かつ活性物質の第2の部分が、液体マトリックス中の懸濁液中に、微粒子型で存在する液体組成物を表す。液体組成物には、ゲルも含まれる。液体組成物は水性であってよく、または軟膏(ointment)、軟膏(salve)、クリームなどの剤形であってよい。
【００７８】
本発明の水性懸濁液または溶液/懸濁液は、1種以上のポリマーを懸濁化剤として含有してよい。有用なポリマーには、水溶性ポリマー、例えばセルロースポリマーおよび水不溶性ポリマー、例えば架橋カルボキシル含有ポリマーが含まれる。本発明の水性懸濁液または溶液/懸濁液は、粘性もしくは粘膜付着性であるか、または粘性かつ粘膜付着性である。
【００７９】
AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nを含む組成物は、様々な細胞または組織機能を提供するために、例えば、神経系疾患、障害または損傷を治療するために、被験体に投与しうる。本明細書中で使用される「被験体」とは、ヒトまたは非ヒト動物を意味しうる。
【００８０】
そのような組成物は、添加剤および助剤を場合により含む1種以上の生理学的に許容される担体を使用して任意の慣用の様式で製剤化してもよい。適正な剤型は、選択される投与経路に依存する。組成物は、神経系疾患、障害もしくは損傷を治療するか、または治療上重要な代謝機能を回復させるためのその使用に関する説明書とともにパッケージングしてよい。組成物はまた、1種以上の生理学的に許容される担体中でレシピエントに投与してもよい。AMP-N細胞用の担体には、非限定的に、生理的濃度の塩の混合物を含有するリン酸緩衝生理食塩水(PBS)または乳酸加リンゲル液の溶液、基本培地などが含まれうる。
【００８１】
好ましくは、液体組成物は水性である。あるいは、組成物は軟膏の剤形をとることができる。特定の実施形態では、組成物はin situでゲル化できる水性組成物である。そのような組成物は、身体との接触時にゲル化を促すために有効な濃度のゲル化剤を含んでよい。好適なゲル化剤には、非限定的に、熱硬化性ポリマー、例えばエチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのテトラ置換エチレンジアミンブロックコポリマー(例えば、ポロキサミン1307); ポリカルボフィル; および多糖、例えばゲラン、カラギーナン(例えば、カッパ-カラギーナンおよびイオタ-カラギーナン)、キトサンおよびアルギナートガムが含まれる。フレーズ「in situでゲル化できる」には、ゲルを形成できる低い粘性の液体だけでなく、投与時に実質的に高い粘性またはゲルの硬さを示す、より粘性のある液体、例えば半液体およびチキソトロピックゲルも含まれる。
【００８２】
本発明の水性組成物は、生理的に適合したpHおよび浸透圧を有する。典型的には、これらの組成物は、例えば滅菌条件下での製造およびパッケージングによる、および/または許容される保存剤の抗菌有効量を含ませることによる、微生物の生育を阻害する手段を含む。好適な保存剤には、非限定的に、水銀含有物質、例えばフェニル水銀塩(例えば、フェニル水銀の酢酸塩、ホウ酸塩および硝酸塩)およびチメロサール; 安定化二酸化塩素; 四級アンモニウム化合物、例えば塩化ベンザルコニウム、セチルトリメチルアンモニウムブロミドおよびセチルピリジニウムクロライド; イミダゾリジニル尿素; パラベン、例えばメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベンおよびブチルパラベン、およびそれらの塩; フェノキシエタノール; クロロフェノキシエタノール; フェノキシプロパノール; クロロブタノール; クロロクレゾール; フェニルエチルアルコール; EDTA二ナトリウム; およびソルビン酸およびその塩が含まれる。
【００８３】
組成物は、投与用の活性物質を含むデポー製剤を包含しうる。デポー製剤は、本発明の組成物(すなわち、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-N)を含む。組成物を含む微粒子を生体適合性の製薬的に許容されるポリマーまたは脂質カプセル化剤に埋め込むことができる。デポー製剤は、活性物質の全てまたは実質的に全てを長期間にわたって放出するように適合しうる。ポリマーまたは脂質マトリックスは、存在すれば、活性物質の全てまたは実質的に全ての放出後、投与部位から輸送されるように十分に分解するように適合しうる。デポー製剤は、製薬的に許容されるポリマーおよび溶解もしくは分散させた活性物質を含む液体製剤であってよい。注入時に、ポリマーは、例えばゲル化するかまたは沈殿することによって注入部位でデポーを形成する。
【００８４】
組成物は、疾患または損傷部位の好適な位置に挿入または移植することができる固形物を構成してよく、該位置で固形物は活性物質を放出する。該固形物からの放出は、好ましくは、固形物が概して密接に接触している神経系に対する放出である。挿入または移植に好適な固形物は、一般に、ポリマーを含み、生物分解性(bioerodible)または非生物分解性(non-bioerodible)であってよい。本発明の組成物を含む移植片の調製に使用できる生物分解性ポリマーには、非限定的に、脂肪族ポリエステル、例えばポリ(グリコリド)、ポリ(ラクチド)、ポリ(.イプシロン.-カプロラクトン)、ポリ(ヒドロキシ酪酸)およびポリ(ヒドロキシ吉草酸)のポリマーおよびコポリマー、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、脂肪族ポリカーボナートおよびポリエーテルラクトースが含まれる。好適な非生物分解性ポリマーの例はシリコーンエラストマーである。
【００８５】
AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nが組み込まれる、または埋め込まれる支持マトリックスは、レシピエントに適合性があり、かつレシピエントに有害でない生成物に分解するマトリックスを含む。
【００８６】
天然および/または合成の生分解性マトリックスは、そのようなマトリックスの例である。天然の生分解性マトリックスは、凝固血漿(例えば哺乳動物に由来する)、コラーゲン、フィブロネクチン、およびラミニンマトリックスを含む。好適な合成マトリックス材料は、免疫学的合併症を防止するために生体適合性でなければならない。それはまた、再吸収可能でなければならない。マトリックスは、様々な形に形成可能であるべきであり、移植時の崩壊を阻止するのに十分な強度を有するべきである。最近の研究は、ポリグリコール酸から構成される生分解性ポリエステルポリマーがこれらの基準の全てを満たすことを示している(Vacanti, et al. J. Ped. Surg. 23:3-9 (1988); Cima, et al. Biotechnol. Bioeng. 38:145 (1991); Vacanti, et al. Plast. Reconstr. Surg. 88:753-9 (1991))。他の合成生分解性支持マトリックスは、合成ポリマー、例えば、ポリ無水物、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸を含む。合成ポリマーのさらなる例、およびこれらのマトリックスに組成物を組み込むもしくは埋め込む方法はまた、当技術分野において公知である。米国特許第4,298,002号および同第5,308,701号を参照のこと。
【００８７】
生分解性ポリマーマトリックスの利点の1つは、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nが、支持マトリックスに直接組み込まれるため、支持マトリックスがインビボで分解するにつれ、それらがゆっくり放出されることである。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nに加えて、他の因子、例えば、栄養素、成長因子、分化もしくは脱分化の誘導剤(すなわち、分化細胞に分化の特徴を失わせ、増殖およびより一般的な機能などの特徴を獲得させる)、分泌の産物、免疫調節剤、炎症の阻害剤、退行因子、リンパネットワークもしくは神経線維の内部成長を増進もしくは可能にする生物活性化合物、ヒアルロン酸、ならびに当業者に公知であり、有効量を構成するものについての指示書を伴ってCollaborative Research、Sigma Chemical Co.などの供給業者から市販されている薬物、成長因子、例えば、上皮成長因子(EGF)およびヘパリン結合上皮成長因子様成長因子(HB-EGF)が、マトリックスに組み込まれうるか、またはマトリックスとともに提供されうる。同様に、ペプチド、例えば接着ペプチドRGD(Arg-Gly-Asp)を含有するポリマーが、マトリックスの形成に使用するために合成されうる(例えば、米国特許第4,988,621号、同第4,792,525号、同第5,965,997号、同第4,879,237号および同第4,789,734号を参照のこと)。
【００８８】
別の例では、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、ゲルマトリックス(例えば、Upjohn社のGelfoam)中に組み込まれてよい。様々なカプセル化技術が開発されている(例えば、Lacy et al., Science 254:1782-84 (1991); Sullivan et al., Science 252:718-712 (1991); WO 91/10470; WO 91/10425; 米国特許第5,837,234号; 米国特許第5,011,472号; 米国特許第4,892,538号)。罹患または損傷組織への直接物理的アクセスを伴う切開外科手術の間、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-N送達調製物の全ての記載された形態が、利用可能な選択肢である。これらの組成物は、所望の治療効果が達成されるまで、間隔を置いて、反復的に投与されうる。
【００８９】
使用される三次元マトリックスは、組織治癒および形成の過程を導くための足場を提供する構造的マトリックスである。足場は、複雑な固体自由形態製造(SFFF: Solid Free Form Fabrication)手法を用いて製造された孔(pore)および管(channel)を有する、繊維、ゲル、織物、スポンジ様シート、および複雑な3-D構造までに至る形態をとりうる。本明細書中で使用される用語「足場」とは、3次元(3D)構造体(基板および/またはマトリックス)を意味する。それは、生物学的成分、合成成分または両者の組み合わせから構成されうる。さらに、それは、天然に細胞によって構築されるか、または人工的に構築されてよい。さらに、足場は、適切な条件下で生物学的活性を有する成分を含有しうる。足場の構造は、メッシュ、スポンジを含みことができ、またはヒドロゲルから形成することができる。
【００９０】
3次元マトリックスを形成するための足場の設計および構築は、一番重要である。マトリックスは、血管内部成長のための、しなやかで、非毒性で、注入可能な多孔質テンプレートであるべきである。孔は、血管内部成長を許容するべきである。これらは、約100〜300ミクロンの範囲にある、すなわち、100〜300ミクロンの間質空間を有する、一般に相互接続した孔であるが、より大きい開口部を使用してもよい。マトリックスは、栄養素、気体および成長因子の十分な拡散を可能にするように、表面積を最大化するように形成されるべきである。マトリックスの典型的な六面のうち1又は2つが圧迫される場合でも、マトリックスは、組織成長を生じさせるのに依然として有効であることが示されているが、現時点では、圧迫に比較的耐久性がある多孔性構造が好ましい。
【００９１】
ポリマーマトリックスは、所望の最終形態、構造および機能に応じて、柔らかく、または硬くされてよい。欠陥の修復のために、例えば、柔らかい繊維状マットを、欠陥全体に近似するように切り取り、次いで、移植中、必要に応じて外科的に準備された欠陥に適合させる。繊維状マトリックスを用いることの利点は、移植時における構造体の再形成および再配置が容易であることである。
【００９２】
本発明はまた、上記支持マトリックスおよび羊膜由来膜のいずれかと併せた、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの送達を提供する。そのような膜は、AMP細胞の回収のために本明細書に記載された方法の副産物として、または他の方法によって、例えば、ヒト羊膜に由来する外科的移植片の作製、保存および使用方法を記載する米国特許第6,326,019号、宿主中の部位への、治療分子、タンパク質または代謝産物の持続送達のための再構成された組み換え羊膜を記載するUS 2003/0235580、接着を阻止し、細菌を排除し、または細菌活性を阻害しうるか、あるいは組織の治癒または成長を促進するための、組織表面を覆う羊膜を記載するU.S. 2004/0181240、ならびに熱傷および創傷を治療する方法における架橋羊膜の調製およびその使用に関する米国特許第4,361,552号において記載される方法によって得ることができる。本発明に従い、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、そのような膜に組み込まれてよい。
【００９３】
当業者は、特定の目的のために、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの適切な濃度、または用量を容易に決定しうる。当業者は、好ましい用量が、その必要がある患者の神経系疾患、障害または損傷を治療するなどの治療効果を生じさせる用量であることを認識する。当然、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの適正な用量は、いくつかの変動要素に基づく使用時点での経験的な決定を必要とする。該変動要素には、非限定的に、治療対象の疾患、損傷、障害または状態の重症度およびタイプ; 患者の年齢、体重、性別、健康; 患者に投与されている他の投薬および治療; などが含まれる。当業者はまた、投与される投薬回数(投与計画)もまた、例えば治療対象の疾患、損傷、障害または状態の重症度およびタイプに基づいて経験的に決定する必要があることを認識する。一実施形態では、1回の投与で十分である。他の実施形態は、2、3、4回、またはそれ以上の投与を想定する。
【００９４】
本発明は、被験体に、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nを治療有効量で投与することによって、神経系疾患、障害または損傷を治療する方法を提供する。「治療有効量」とは、治療効果を誘発するのに十分なAMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの用量を意味する。したがって、本発明に従って投与される用量単位中のAMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの濃度は、例えば、神経系疾患、障害または損傷の治療に有効である。
【００９５】
非限定的な例として、AMP-N細胞は、細胞約1×107〜1×108個/mL、好ましくは細胞約2.5×107〜7.5×107個/mL、最も好ましくは細胞約5×107個/mLの濃度で調製される。投与される細胞混合物の体積は、いくつかの変動要素に依存し、使用時に担当医によってのみ決定されうる。AMP-N細胞のそのような適切な用量は、治療対象の疾患、損傷、障害または状態の重症度およびタイプ; 患者の年齢、体重、性別、健康; 患者に投与される他の投薬および治療; などの変動要素に基づく経験的決定を要する。
【００９６】
さらに、当業者は、特定の目的のためのACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの適切な用量を容易に決定しうる。好ましい用量は、投与面積の1平方センチメートルあたり約0.1〜1000マイクログラムの範囲である。他の好ましい用量範囲は、投与面積あたり1.0〜50.0マイクログラムである。特に好ましい実施形態では、比較的少量のACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nが、治療的に有用であることが期待される。当業者はまた、投与される投薬回数も、例えば、治療対象の疾患、障害または損傷の重症度およびタイプに基づいて経験的に決定される必要があることを認識する。例えば、好ましい実施形態では、1回の投与が治療効果を有するのに十分である。他の好ましい実施形態は、2、3、4、またはそれ以上の投与を治療効果のために想定する。
【００９７】
本発明のさらなる実施形態では、神経系疾患、障害または損傷を治療するために、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nとともに、他の物質、例えば活性物質および/または不活性物質を共投与することが望ましい。活性物質には、非限定的に、サイトカイン、ケモカイン、抗体、インヒビター、抗生物質、抗真菌剤、抗ウイルス剤、免疫抑制剤、他の細胞タイプなどが含まれる。不活性物質には、担体、希釈剤、安定化剤、ゲル化剤、送達ビヒクル、ECM(天然および合成)、足場、マトリックス、ナノ粒子などが含まれる。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nを他の医薬活性物質とともに投与する場合、治療上有効であるために、はるかに少ないAMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nが必要とされうる。
【００９８】
AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、送達デバイス、例えば、管、カテーテル、シリンジ、注射針、噴霧器、吸入器などを介して、被験体の標的部位へ注入によって投与することができ、そのような送達デバイスを介してAMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nを所望の場所で被験体に導入することができる。
【００９９】
投与経路は、経腸、局所、鼻腔内、経粘膜、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内(intrathecal)、嚢内(intracapsular)、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、アーティキュラーレ(articulare)内、被膜下、クモ膜下、脊髄内(intraspinal)、硬膜外、脳内および胸骨内(intrasternal)投与を含む。適切な投与経路は、治療される疾患、障害、損傷および部位に依存する。
【０１００】
AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの投与のタイミングは、治療対象の神経系疾患、障害または損傷のタイプおよび重症度に依存する。特定の実施形態では、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、神経系疾患、障害または損傷の診断後できる限り速やかに投与される。他の特定の実施形態では、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、損傷または診断後2回以上投与される。
【０１０１】
持続放出組成物
AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、持続放出組成物として製剤化されてよい。当業者は、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nなどのタンパク質ベースの治療物質を含めた治療物質の持続放出組成物を創出するための方法論に精通している。
【０１０２】
持続放出組成物は、本明細書中に記載の任意の方法によって作製しうる。例えば、多小胞性リポソーム製剤化技術は、タンパク質およびペプチド治療物質の持続放出に有用である。Qui, J., et al(ACTA Pharmacol Sin, 2005, 26(11):1395-401)は、持続放出インターフェロンアルファ-2bの製剤化に関するこの方法論を記載する。Vyas, S.P., et al(Drug Dev Ind Pharm, 2006, 32(6):699-707)は、多小胞性リポソーム中のペグ化インターフェロンアルファのカプセル化を記載する。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、多小胞性リポソーム持続放出製剤での使用に好適である。
【０１０３】
ナノ粒子技術もまた、持続放出組成物の創出に有用である。例えば、Packhaeuser, C.B., et al(J Control Release, 2007, 123(2):131-40)は、インスリン負荷ジアルキルアミノアルキル-アミン-ポリ(ビニルアルコール)-g-ポリ(ラクチド-co-グリコリド)ナノ粒子に基づく生分解性非経口デポー系を記載し、ナノ粒子ベースのデポーは生物活性高分子(すなわちタンパク質)のための制御放出デバイスの設計に好適な候補であると結論する。Dailey, L.A., et al(Pharm Res 2003, 20(12):2011-20)は、分岐ポリマーDEAPA-PVAL-g-PLGAに基づくエアロゾル療法のための、界面活性剤を含まない、生分解性ナノ粒子を記載し、DEAPA-PVAL-g-PLGAは多用途の薬物送達系であると結論する。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nはナノ粒子ベースの持続放出製剤での使用に好適である。
【０１０４】
ポリマーベースの持続放出製剤もまた、非常に有用である。Chan, Y.P., et al(Expert Opin Drug Deliv, 2007, 4(4):441-51)は、タンパク質およびペプチド治療物質の持続放出に使用されるMedusaシステム(Flamel Technologies)の概説を記載する。これまで、Medusaシステムは、動物モデル(ラット、イヌ、サル)ならびに腎癌(IL-2)およびC型肝炎(IFN-アルファ(2b))患者での臨床試験において、IL-2およびIFN-アルファ(2b)の皮下注射に適用されてきた。Chavanpatil, M.D., et al(Pharm Res, 2007, 24(4):803-10)は、水溶性分子の持続的かつ増強された細胞送達のための新規プラットフォームとして界面活性剤-ポリマーナノ粒子を記載する。Takeuchi, H., et al(Adv Drug Deliv Res, 2001, 47(1):39-54)は、リポソームおよびポリマー性ナノ粒子を含む、ペプチド薬物送達のための粘膜付着性ナノ粒子系を記載する。Wong, H.L., et al(Pharm Res, 2006, 23(7):1574-85)は、新規ポリマー-脂質ハイブリッド系を記載するが、これは多剤耐性乳癌細胞に対するドキソルビシンの細胞傷害性を高めることが示されている。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、上記持続放出製剤方法論での使用に好適である。
【０１０５】
さらに、本明細書中で特に記載されないが、当業者によく知られている他の持続放出方法論もまた、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nでの使用に好適である。
【０１０６】
医薬組成物 - 本発明は、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nならびに製薬的に許容される担体の医薬組成物を提供する。用語「製薬的に許容される」とは、動物、およびより具体的にはヒトでの使用に関して、連邦または州政府の規制当局または米国薬局方もしくは他の一般に認識される薬局方に列挙される規制当局によって認可されることを意味する。用語「担体」とは、組成物とともに投与される希釈剤、アジュバント、添加剤、またはビヒクルを表す。そのような医薬用担体は、滅菌液体、例えば水および、石油、動物、植物または合成起源の油を含む油、例えばピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などであってよい。好適な医薬用添加剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、穀粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。組成物は、所望であれば、微量の湿潤剤または乳化剤、またはpH緩衝剤を含有することもできる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、持続放出製剤などの剤形をとりうる。好適な医薬用担体の例はE. W. Martinの「Remington's Pharmaceutical Sciences」に記載され、さらに他の担体は当業者によく知られている。
【０１０７】
本発明の特定の実施形態(すなわち、局所投与を利用する実施形態)の実施において有用な医薬組成物は、製薬的に許容される担体とともに、治療有効量の活性物質を含む。そのような医薬組成物は、液体、ゲル、軟膏(ointment)、軟膏(salve)、緩徐放出／持続放出製剤、または神経系疾患、障害もしくは損傷を治療するための投与に適した他の製剤であってよい。医薬組成物は、本発明の組成物(すなわち、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-N)および、場合により、少なくとも1種の製薬的に許容される添加剤を含む。
【０１０８】
本発明の医薬組成物は、中性または塩の形式で製剤化することができる。製薬的に許容される塩には、遊離アミノ基と形成される塩、例えば塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから生じる塩、および遊離カルボキシル基と形成される塩、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、第二鉄の水酸化物、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから生じる塩が含まれる。
【０１０９】
治療キット ‐ 本発明はまた、パッケージング材料、および該パッケージング材料内に含有される本発明の医薬組成物を含む製品またはキットを提供し、ここで、該医薬組成物は、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの組成物を含む。パッケージング材料は、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nを、神経系疾患、障害または損傷を治療するために使用できることを示すラベルまたは添付文書を含む。
【０１１０】
AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの例示的な治療的使用
脳損傷は、脳に対する任意の損傷であり、頭蓋骨の骨折もしくは貫通、疾患プロセス、毒素もしくは感染、または閉鎖性頭部損傷、例えば、頭部の急速な加速もしくは減速によって引き起こされうる。
【０１１１】
外傷性脳損傷(TBI)は、閉鎖性頭部損傷または貫通性頭部損傷に起因しうる。閉鎖性損傷は、頭部が突然にかつ激しく物体に衝突するが、物体が頭蓋骨を破壊しない場合に生じる。貫通性損傷は、物体が頭蓋骨に穴を開け、脳組織に侵入する場合に生じる。頭蓋骨骨折は、頭蓋骨の骨にひびが入るまたは骨が折れる場合に生じる。頭蓋骨陥没骨折は、骨折した頭蓋骨の破片が脳の組織に圧入する場合に生じる。貫通性頭蓋骨骨折は、銃弾などの物体が頭蓋骨に穴を開け、脳組織に明確な、かつ局所的な損傷を残す場合に生じる。頭蓋骨骨折は、脳挫傷を引き起こしうる。
【０１１２】
損傷を引き起こしうる脳に対する別の傷害は、酸素欠乏である。酸素欠乏とは、組織への十分な血流がある場合でも、臓器の組織への酸素供給がない状態である。低酸素症は、酸素の完全な不在よりむしろ酸素供給の低減を表し、虚血は、脳が腫れる場合に見られるように、不十分な血液供給である。これらの場合のいずれにおいても、十分な酸素が無く、虚血カスケードと称される生化学的カスケードが抑えきれず、脳の細胞は数分以内に死滅しうる。このタイプの損傷は、溺水犠牲者において、心臓発作患者において、または脳への血流を低下させる他の損傷に由来する著しい血液喪失を被っている人において見られることが多い。
【０１１３】
上記の全ては、脳におけるニューロンの進行性喪失である神経変性を結果としてもたらす。複数の生理的事象は、外傷性損傷に続く脳組織の神経変性につながる。これらの事象は、例えば、脳浮腫、血管の完全性の破壊、免疫および炎症反応の増大、脱髄、ならびに脂質過酸化を含む。したがって、本発明の方法は、そのような神経変性につながる生理的事象の減少および/または阻止に有用である。具体的には、本発明は、神経細胞死(直接的にもしくは間接的に)、浮腫、虚血を低減または除去する方法、ならびに中枢神経系に対する外傷性損傷に続く組織生存性を増進させる方法を提供する。
【０１１４】
脊髄損傷 ‐ 脊髄損傷の一般的な原因は、脊椎骨の骨折を含み、これは、転位(displace)した骨片、または損傷した血管、または出現している神経根の挫傷による、損傷の震とう性影響から脊髄を損傷しうる。脊椎骨の脱臼はまた、脊髄損傷を引き起こしうる。脱臼は、椎間板の破裂の結果であることが多く、脊髄の部分または完全切断を結果としてもたらしうる。穿通創はまた、脊髄の切断または部分切断を引き起こしうる。硬膜外出血および脊髄硬膜下血腫は、脊髄への圧力による、進行性不全対まひを結果としてもたらしうる。脊髄への間接的損傷の例は、頭部への強打または足からの落下によって誘導される損傷を含む。
【０１１５】
髄内損傷は、脊髄への直接的圧力または脊髄を通した圧力波の通過、骨による脊髄の裂傷、または脊髄への出血を伴う脊髄を通した圧力波の通過の間の血管破裂の結果でありうる。髄内出血および血腫形成はまた、弱くなった血管の破裂によって引き起こされうる。虚血性損傷は、前脊髄動脈の圧迫、吻合動脈への圧力、または主要血管に対する損傷に続いて生じうる(Gilroy, in Basic Neurology, McGraw-Hill, Inc. New York, N.Y. (1990))。
【０１１６】
脊髄損傷は、2つのカテゴリー、完全損傷および不完全損傷に分けることができる。損傷の分類は、回復中に変化しうることが可能である。完全脊髄損傷は、感覚および運動機能の喪失によって通常特徴付けられ、一般に、打撲、脊髄への血液の喪失、または脊髄への圧力によって引き起こされる脊髄損傷と関連している。切られ、切断された脊髄は稀である。一般に、完全脊髄損傷は、損傷部位より下の、感覚および運動の総喪失を結果としてもたらす。
【０１１７】
不完全脊髄損傷は、一般に、損傷部位より下の、運動および感覚の完全喪失を結果としてもたらさない。そのような損傷を分類するための様々なパターンが存在し、(1) 脊髄の前部領域における運動および感覚経路への損傷に起因する、前部脊髄症候群が含まれる。影響は、運動および全体的感覚の喪失を含むが、依然として無傷の経路によって伝わる一部の感覚は感じることができる。(2) 脊髄の頸部領域の中心への損傷に起因する、脊髄中心症候群。その損傷は、運動を制御するために脳と脊髄の間のシグナル伝送を担っている、皮質脊髄路に影響を及ぼす。脊髄中心症候群を患っている患者は、腕の脱力もしくはまひ、および感覚受容の一部の喪失を経験する。強度および感覚の喪失は、腕におけるよりも脚において、はるかに少ない。脊髄中心症候群を有する多くの患者は、運動機能を自然に回復し、他の者は、損傷後最初の6週間に、かなりの回復を経験する。(3) 脊髄の右または左側への損傷に起因する、ブラウン・セカール(Brown-Sequard)症候群。損傷が生じた体側において、運動および感覚は、損傷のレベルより下で失われる。損傷と逆側において、温度感覚および痛覚は、脊髄においてこれらの経路が交差していることにより、失われる。(4) 個々の神経細胞への損傷は、損傷した神経根が対応する身体の領域における感覚および運動機能の喪失を結果としてもたらす。したがって、これらの損傷に由来する症状は、影響を受けた特定の神経根の位置および機能に応じて変わる。(5) 脊髄損傷の最も一般的なタイプである脊髄挫傷。脊髄は、傷つけられ、切断されないが、その結果は、炎症、および損傷の近くの血管からの出血である。脊髄挫傷は、脊髄の一時的(通常1〜2日の)不完全または完全衰弱を結果としてもたらしうるか、あるいは、脊髄の不完全または完全衰弱は、脊髄の永久的不完全または完全衰弱を含む、より長い期間でありうる。
【０１１８】
脊髄損傷の治療目標は、運動回復の促進を含む。別の目標は、感覚回復の促進である。そのような運動および感覚回復を達成するための様々な様式が試みられてきたが、大部分は限定的な成功のみであった。これらの研究は、損傷部位への様々な成長因子およびサイトカインの投与、ならびに脳由来幹細胞または健康な脊髄組織の移植を含む。幹細胞移植療法は、現在研究されている最も見込みのある療法の一つである(例えば、Cummings, B.J., et al., Neurol Res 2006 28(5):474-81; Pallini, R., et al., Neurosurgery 2005 57(5):1014-25; Cummings, B.J., et al., PNAS USA 2005 102(39):14069-74; Sankar, V. et al., Neuroscience 2003 118(1):11-7を参照のこと)。
【０１１９】
神経系の変性疾患
アルツハイマー病 - 認知症の最も一般的なタイプであるアルツハイマー病(AD)は、日常生活の活動の低下および神経精神症状もしくは行動変化を伴う、進行性の認知力低下によって特徴付けられる神経変性疾患である。最も明らかな初期症状は、徐々により顕著になるささいな物忘れとして通常現れる、短期記憶の喪失であり、より古い記憶の相対的保存を伴う。疾患が進行するにつれ、認知機能障害は、言語、熟練した運動、認識、ならびに意思決定および計画などの機能に拡大する。病理的プロセスは、アミロイド斑の沈着に対する炎症性反応および神経原線維のもつれと共に、主に側頭頭頂皮質におけるが、前頭皮質にもおける、ニューロン喪失または萎縮から主に構成される。
【０１２０】
ADの根本的な原因は知られていないが、遺伝的因子が重要であることが知られており、はるかに少数の家族性早発性AD症例の主要因である、3つの異なる遺伝子におけるドミナント変異が同定されている。より一般的な遅発性ADの形態では、ApoEが、繰り返し確認された、ADに対する唯一の感受性遺伝子である。
【０１２１】
検視では、アミロイド斑と神経原線維のもつれの両方が顕微鏡によって明確に見られる。解剖学的レベルでは、ADは、脳の全体的びまん性萎縮、ならびに大脳皮質および特定の皮質下領域におけるニューロン、神経突起およびシナプスの喪失によって特徴付けられる。これは、罹患領域の全体的萎縮を結果としてもたらす。
【０１２２】
現在の治療は、アセチルコリンエステラーゼインヒビター(すなわち、ドネペジル(アリセプト(Aricept))、ガランタミン(ラザダイン(Razadyne))およびリバスチグミン(エクセロン(Exelon)))、イチョウ(Gingko Biloba)天然抽出物、NMDAアンタゴニスト(すなわち、メマンチン(アカチノール(Akatinol)、アクスラ(Axura)、エビキサ(Ebixa)、およびナメンダ(Namenda))、および心理社会的介入(すなわち、カウンセリング、心理療法、連想療法、現実志向、行動強化および認知リハビリ訓練)を含む。本発明の組成物および方法は、ADの治療に有効である。
【０１２３】
前頭側頭認知症(FTD) - FTDは、脳の前頭および側頭の前葉の縮小と関連した臨床症候群を記載する(以前はピック病として知られていた)。その症候群の現在の指定は、ピック病、原発性進行性失語症、および意味認知症をFTDとしてグループ化する。一部の医者は、大脳皮質基底核変性症および進行性核上まひをFTDに加え、そのグループをピックコンプレックス(Pick Complex)と呼ぶことを提案する。今日定義されるように、FTDの症状は、(1) 行動における変化、または(2) 言語の問題のいずれかを伴う、2つの臨床パターンに分類される。第一のタイプは、衝動的(脱抑制)、または退屈かつ無関心(無感情)のいずれかでありうる行動を特徴とする。第二のタイプは、しばしば行動的タイプの症状と併せた、言語障害の症状、例えば、会話をすることまたは会話を理解することにおける困難性を主に特徴とする。空間能力および記憶は無傷のままである。該疾患に対する強い遺伝的要素があり、FTDは家族に伝わることが多い。本発明の組成物および方法は、FTDの治療に有効である。
【０１２４】
パーキンソン病 - パーキンソン病は、黒質として知られる脳の領域におけるニューロンの進行性の機能障害または劣化によって引き起こされる。正常に機能する場合、これらのニューロンは、ドーパミンとして知られる必須の脳化学物質を産生する。ドーパミンは、黒質と、線条体と称される脳の別の領域との間のコミュニケーションを可能にする化学メッセンジャーとして機能する。このコミュニケーションは、円滑で均衡のとれた筋肉運動を統合する。ドーパミンの欠乏は、異常な神経機能を結果としてもたらし、身体運動を制御する能力の喪失を引き起こす。
【０１２５】
パーキンソン病は、薬物、または一部の場合には手術によって現在治療される。薬剤を用いたパーキンソン病の治療に対する2つの一般的な手法は、(1) 脳におけるドーパミンの喪失を遅らせること、および(2) パーキンソン病の症状を改善させることである。パーキンソン病を有する大部分の患者は、症状を緩和する薬剤を用いて十分に治療することができる。薬剤が十分に有効でない場合、新しく、効果が高く、安全な手術療法を利用することもできる。パーキンソン病を治療するのに現在利用できる薬物は、最も一般的に処方され、パーキンソン病の症状を制御するのに最も有効な薬剤である、シネメット(Sinemet) (レボドパ／カルビドパ(levodopa/carbidopa)) レボドパ(Levodopa) (L-ドーパとも称される); 中程度のパーキンソン病を有する人に有用でありうるが、混乱および記憶問題を含む重大な副作用を引き起こすことが多い、シンメトレル(Symmetrel)を含み; 抗コリン薬(アルタネ(Artane)、コゲンチン(Cogentin))は、アセチルコリンの量を減少させることによって、2つの脳化学物質、ドーパミンとアセチルコリンの間の平衡を回復させるために使用される。しかし、これらの薬剤は、特に高齢者において、記憶および思考を損なう可能性があり、したがって、それらは今日では滅多に使用されない。エルデプリル(Eldepryl)およびデプレニル(Deprenyl)は、この薬物に対する2つの名称である。それらは、ドーパミンが破壊されるのを阻止することによって、利用可能なドーパミンの量を保存するのに役立つことによって作用する。論争はあるが、この薬物が、特に疾患の経過の初期において、パーキンソン病の進行を遅らせうるというある証拠が存在する。この薬物は、大部分の人に耐用性良好であるため、多くの専門家は、論争にもかかわらず、その使用を薦める。タスマル(Tasmar)、コムタン(Comtan)(COMT阻害剤)。COMTが遮断されると、ドーパミンは保たれ、より有効に使用され、パーキンソン病の症状を低減しうる。COMT阻害剤は、レボドパの有効性を増大させることもできる。
【０１２６】
手術選択肢は、意図的に脳を破壊することなく、パーキンソン病およびその関連症状を引き起こす脳の部分を不活性化させる方法である、脳深部刺激を含む。脳深部刺激では、電極が淡蒼球に配置される。電極は、胸の皮膚の下に移植されるペースメーカーデバイス(インパルス発生器またはIPGと称される)の一種に電線によって接続される。稼働させると、そのデバイスは、脳における標的領域に連続的電気パルスを送り、震えを引き起こすインパルスを遮断する。これは、脳の部分を実際に破壊することなく、視床切除術または淡蒼球切除術と同じ効果を有する。刺激は、手持ち式の磁石またはアクセス制御デバイスを用いて、患者によってオンオフすることができる。本発明の組成物および方法は、パーキンソン病の治療に有効である。
【０１２７】
ハンチントン病(HD) - HDは、脳の特定の領域におけるニューロンの遺伝的にプログラムされた変性に起因する。この変性は、未制御の運動、知的能力の喪失、および情緒不安定を引き起こす。HDは、家族性疾患であり、正常遺伝子における突然変異を介して親から子へ伝わる。HD親の各子供は、HD遺伝子を受け継ぐ50-50の可能性を有する。子がHD遺伝子を受け継がない場合、子は、疾患を発症せず、次世代へそれを伝えることはない。HD遺伝子を受け継ぐ人は、遅かれ早かれその疾患を発症する。HDのいくつかの初期症状は、気分変動、抑鬱、過敏、新しいことの学習、事実の記憶、または意思決定である。疾患が進行するにつれ、知的課題に対する集中が次第に難しくなり、患者は、自分で食べ、飲み込むことが難しくなりうる。疾患進行速度および発症年齢は人によって変わる。
【０１２８】
HDに対する現在の治療は、根底にある疾患自体ではなく、症状に対処する。例えば、精神安定剤、例えばクロナゼパム(クロノピン(Klonopin))、ならびに抗精神病薬、例えばハロペリドール(ハルドール(Haldol))およびクロザピン(クロザリル(Clozaril))は、運動、暴力的爆発、および幻覚の制御を助けるために使用される。他の薬物、例えばフルオキセチン(プロザック(Prozac)、サラフェム(Sarafem))、セルトラリン(ゾロフト(Zoloft))およびノルトリプチリン(アベンチル(Aventyl)、パメロール(Pamelor))は、一部のHD患者がしばしば示す抑鬱および強迫性行動の制御を助けるために使用される。リチウム(エスカリス(Eskalith)、リトビド(Lithobid))などの薬剤は、極端な感情および気分変動の制御を助けるために使用することができる。HDの症状を治療するために使用される薬物の副作用は、過剰興奮、疲労および不穏を含む。一部の場合では、抗精神病薬は、顔および体の不随意的けいれん(遅発性ジスキネジア)を含む、パーキンソン病の徴候に似た副作用を引き起こしうる。HDは発話力を損ないうるため、治療が指示されることが多い。本発明の組成物および方法は、HDの治療に有効である。
【０１２９】
運動ニューロン疾患
筋萎縮性側索硬化症(ALS) - ALSは、ルー・ゲーリッグ病(Lou Gehrig's disease)とときどき称され、運動ニューロンの変性によって引き起こされる、進行性の致命的な神経変性疾患である。ALSは、随意筋運動を制御する、CNSにおけるニューロンの漸進的変性を特徴とする。その障害は、全身の筋力低下および筋肉萎縮を引き起こす。ALSでは、上位運動ニューロンおよび下位運動ニューロンの両方が変性または死滅し、筋肉へメッセージを送らなくなる。機能することができず、筋肉は次第に弱くなり、萎縮する。最終的に、脳は、随意運動を開始し制御する能力を完全に喪失する。その疾患は、アルツハイマー病または他の神経学的状態が行うのと同じ様式では、患者の精神機能を必ずしも衰弱させない。代わりに、疾患の進行期を患っている人は、発症前に有したのと同じ記憶、個性、および知性を保ちうる。
【０１３０】
ALSに対する現在の治療は非常に限られている。一つの薬物、リルゾール(リルテック(Rilutek)(登録商標))は、主に嚥下が困難な人において、運動ニューロンへの損傷を低減させ、数か月生存を延長すると考えられる。別の薬物、ガバペンチン(ニューロチン(Neurotin)(登録商標))は、発作薬剤であり、グルタミン酸産生を低減させるように作用すると考えられる。それは一部のALS患者に有益でありうる。本発明の組成物および方法は、ALSの治療に有効である。
【０１３１】
脊髄性筋萎縮症(SMA) - SMAは、脊髄における運動ニューロンの進行性変性によって引き起こされる、遺伝的運動ニューロン疾患である。その障害は、随意筋の脱力および萎縮を引き起こす。脱力は、腕におけるよりも脚において、より重症であることが多い。小児期SMAは、全て常染色体劣性疾患である。これは、それが家族に伝わり、2以上の症例が同世代の親戚またはいとこに生じる可能性が高いことを意味する。多くのタイプのSMAが存在する。より一般的なタイプの一部は以下のとおりである。ウェルドニッヒ・ホフマン(Werdnig-Hoffmann)疾患とも称される、I型SMAは、出生前に、または人生の最初の数か月以内に明らかになる。妊娠の最後の数か月に、胎動の減少がありうる。症状は、だらりとした手足および胴体、腕および脚の弱い運動、嚥下および摂食困難、ならびに呼吸障害を含む。罹患小児は、座るまたは立つことはなく、通常2歳前に亡くなる。II型SMAの症状は、通常、3〜15か月齢の間に始まる。小児は、呼吸器問題、だらりとした手足、深部腱反射の減少もしくは不在、ならびに腕、足、もしくは舌の筋肉のけいれんを有しうる。これらの小児は座ることができるようになりうるが、立つまたは歩くことはできない。寿命は様々である。III型SMA(クーゲルベルグ・ヴェランダー(Kugelberg-Welander)病)の症状は、2〜17歳の間に現れ、異常な歩行様式、疾走、階段の上昇、もしくは椅子からの立ち上がりにおける困難、ならびに指のかすかな震えを含む。ケネディ症候群または進行性球脊髄性筋萎縮症は、15〜60歳の間に生じうる。このタイプの特徴は、舌および顔の筋力の低下、嚥下困難、発語障害、および男性における乳腺の過剰発達を含みうる。疾患の経過は、通常、緩徐進行性である。関節拘縮(手足の固定された異常な位置を伴う永続的関節拘縮)を有する先天性SMAは、稀な障害である。徴候は、重度の拘縮、脊柱の屈曲、胸郭奇形、呼吸器問題、通常小さい顎、および上眼瞼の下垂を含む。
【０１３２】
患者を医学的に管理する、特に呼吸器、栄養およびリハビリケアを管理するための多くのことを行うことができるが、SMAを治療するための薬物は存在しない。酪酸塩、バルプロ酸、ヒドロキシウレアおよびリルゾールを含む、現在調査中のいくつかの薬物がある。本発明の組成物および方法は、SMAの治療に有効である。
【０１３３】
進行性延髄まひ - 進行性延髄まひは、咀嚼、嚥下、および会話の筋肉を制御する神経が影響を受け、これらの機能が次第に困難になる障害である。嚥下が困難であるため、食物または唾液は肺に吸い込まれる(吸引される)ことが多く、窒息を引き起こしたり、または喉を詰まらせたりして、肺炎のリスクを増大させる。肺炎によることが多い死亡は、通常、障害の開始から1〜3年後に生じる。大部分の治療は、症状の管理を対象とする。リルゾールは、特定の患者に有効でありうる。本発明の組成物および方法は、進行性延髄まひの治療に有効である。
【０１３４】
原発性側索硬化症および進行性偽性球まひ‐原発性側索硬化症および進行性偽性球まひは、筋萎縮性側索硬化症の稀な緩徐進行性変形である。原発性側索硬化症は、腕および脚に主に影響を及ぼし、進行性偽性球まひは、顔、顎および喉の筋肉に主に影響を及ぼす。感情は変わりやすくなりうる。不適切な感情の爆発がよく見られる。両障害において、重度のこわばりが筋力低下に伴う。それらの障害は、通常、完全不能結果の前に数年間進行する。大部分の治療は、症状の管理を対象とする。リルゾールは、特定の患者に有効でありうる。本発明の組成物および方法は、原発性側索硬化症および進行性偽性球まひの治療に有効である。
【０１３５】
ポリオ後症候群 - ポリオを有した一部の人は、ポリオからの回復の15年以上後に、疲労し、痛み、および弱った筋肉を生じうる。時々、筋肉組織も衰弱し、これは、ポリオ感染の再活性化を示唆する。ポリオ後症候群のための特別な治療はない。大部分の治療は症状の治療を対象とする。薬剤によって治療される3つの主症状は、筋力低下、疲労(個々の筋肉および全般的)、および疼痛、すなわちポリオ後疼痛、酷使疼痛、バイオメカニカル疼痛、および骨痛である。本発明の組成物および方法は、ポリオ後症候群の治療に有効である。
【０１３６】
脱髄疾患
A. 後天性
多発性硬化症(MS) - MSは、脳と体の他の部分とのコミュニケーションが破壊されるため、比較的穏やか〜やや無機能〜壊滅的まで及びうる中枢神経系の予測不能な疾患である。多くの研究者は、MSを、神経を覆っているミエリンが攻撃される自己免疫疾患であると考えている。大部分の人は、20〜40歳の間にMSの最初の症状を経験し、MSの初期症状は、しばしば、視界のぼやけもしくは複視、赤色-緑色のゆがみ、または片目の失明でさえある。大部分の患者は、四肢の筋力低下、ならびに協調および平衡の困難性を経験する。症状は、歩行または直立さえ損なうほど重度でありうるが、最悪の場合には、部分もしくは完全まひを生じうる。MSを有する大部分の人は知覚異常も示す。発語障害、震え、およびめまいが他の頻繁な病状であり、場合により、患者は、聴覚喪失を経験する。MSを有する全ての人の約半分が、認識機能障害、例えば、集中、注意、記憶の困難性、および判断力低下を経験するが、そのような症状は通常軽度である。良性MS、再発寛解型MS(最も一般的な型)、二次進行性MS、一次進行性MS、悪性MS(マールブルク変異型)および慢性MSを含む、MSのいくつかの型が存在する。
【０１３７】
インターフェロンベータ-1b(ベータセロン(Betaseron)(登録商標))、インターフェロンベータ-1a(アボネックス(Avonex)(登録商標))、高用量／頻度インターフェロンベータ-1a(レビフ(Rebif)(登録商標))、グラチラマー(コパキソン(Copaxone)(登録商標))、ミトキサントロン(ノバントロン(Novantrone)(登録商標))およびコルチコステロイドを含む、いくつかの薬物が、MSを治療するのに利用できる。本発明の組成物および方法は、MSの治療に有効である。
【０１３８】
バロー同心円硬化症(バロー病) - バロー同心円硬化症は、MSの稀な進行性変異型である。それは、通常、成人期に最初に現れるが、小児症例も報告されている。MSは典型的には一進一退する疾患であるが、バロー同心円硬化症は、急激に進行性である傾向がある点で異なる。症状は、頭痛、けいれん、漸進的まひ、不随意筋けいれん、および認知喪失を含みうる。その疾患は、脳および脳幹の様々な部分における、ミエリンの喪失の環(脱髄)と交互にある、無傷のミエリンの帯(神経線維を取り囲む脂肪性物質の鞘)によって特徴付けられる。症状は、数週間にわたって急激に、または2〜3年にわたってよりゆっくりと進行しうる。MSを治療するのに使用される同じ薬物が、バロー病を治療するのに使用される。本発明の組成物および方法は、バロー同心円硬化症の治療に有効である。
【０１３９】
急性散在性脳脊髄炎(ADEM) - ADEMは、ミエリンを損なう、脳および脊髄における炎症の短いが強い攻撃によって特徴付けられる。それは、ウイルス感染に続いて起こることが多く、またはそれほど頻繁ではないが、麻疹、おたふく風邪、または風疹に対するワクチン接種に続いて起こる。ADEMの症状は、急速に現れ、脳炎様症状、例えば発熱、倦怠感、頭痛、悪心および嘔吐、ならびに重度の場合はけいれんおよび昏睡で始まる。それはまた白質を損ない、神経学的症状、例えば、片目もしくは両目の視力喪失、まひと言えるほどまでの脱力、および随意筋運動の協調における困難性に至りうる。ADEMは、MSの重度の最初の発病と、時々誤診される。しかし、ADEMは、通常、脳炎の症状(例えば発熱または昏睡)と共にミエリン損傷の症状(視力喪失、まひ)を有する。さらに、ADEMは、通常、単一エピソードまたはアタックからなるが、MSは、長期にわたる多くのアタックを特徴とする。小児は成人よりADEMを有する可能性が高い。本発明の組成物および方法は、ADEMの治療に有効である。 
【０１４０】
視神経脊髄炎(デビック病) - 視神経脊髄炎は、視神経および脊髄にほぼ専ら影響を及ぼす、ミエリンへの炎症および損傷のエピソードがある、CNSの炎症性疾患である。それは、通常、片目または両目における一時的失明、場合により永久的失明を引き起こす。それはまた、脊髄損傷からの、脚もしくは腕における様々な程度の脱力もしくはまひ、感覚の喪失、ならびに/または膀胱および腸の機能不全に至りうる。本発明の組成物および方法は、視神経脊髄炎の治療に有効である。
【０１４１】
横断性脊髄炎(TM) - TMは、脊髄の炎症によって引き起こされる、神経学的症候群である。TMは、一般的ではないが、稀ではない。用語脊髄炎は、脊髄の炎症に対する非特異的用語である。横断性は、脊髄の一つのレベルを横断した関与を表す。それは、成人および小児の両方に生じる。本発明の組成物および方法は、横断性脊髄炎の治療に有効である。
【０１４２】
B. 遺伝性
大脳白質萎縮症 - 大脳白質萎縮症は、脳の白質の進行性変性によって特徴付けられる障害の一群を表す。大脳白質萎縮症は、髄鞘の不完全な成長または発達によって引き起こされる。ミエリンは、少なくとも10の異なる分子から構成される複雑な物質である。それぞれの大脳白質萎縮症は、ミエリンの構成分子の一つ(および一つだけ)の産生または代謝を制御する遺伝子における欠陥の結果である。副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、クラッベ(Krabbe)病、ペリツェウス・メルツバッハー(Pelizaeus-Merzbacher)病、カナバン(Canavan)病、中枢低ミエリン化を伴う小児期運動失調(CACHまたは白質消失病)、アレキサンダー(Alexander)病、レフサム(Refsum)病および脳腱黄色腫症を含む、様々なタイプの大脳白質萎縮症。本発明の組成物および方法は、大脳白質萎縮症の治療に有効である。
【０１４３】
末梢疾患
末梢神経障害は、最も一般的な形態において、手および足における疼痛および無感覚を引き起こす。疼痛は、典型的には、うずくまたは燃えると記載されるのに対し、感覚の喪失は、薄い靴下または手袋をつけた感触と比べられることが多い。末梢神経障害は、外傷性損傷(すなわち、後根神経節に対して遠位の軸索切断)もしくは外科的切開、神経の圧迫(すなわち、疼痛性チック)、ヘルペス感染(すなわち、帯状疱疹感染)後、HIV感染、代謝異常(すなわち、糖尿病)、遺伝性感覚性自律神経性ニューロパチー、毒素への暴露(すなわち、神経毒化学療法によって誘導される末梢神経障害)、および薬物(すなわち、抗レトロウイルス薬)などの問題に起因しうる。多くの場合、末梢神経障害の症状は、特に、解消されうるまたは少なくとも管理されうる根底にある状態によって引き起こされる場合、時とともに改善する。他の状態、例えばてんかんおよび鬱病を治療するために当初は設計された薬剤が、末梢神経障害のつらい症状を低減させるために使用されることが多い。しかし、治療選択肢は依然として限られている。本発明の組成物および方法は、末梢神経障害の治療に有効である。
【０１４４】
用語「神経系損傷」とは、神経組織の任意の損傷を表し、脳に損傷を引き起こす、または末梢神経に影響を及ぼす損傷もしくは疾患を引き起こす、頭蓋骨もしくは脊椎の骨折もしくは貫通(例えば、脳または脊髄への損傷を結果としてもたらす、自動車事故、落下または砲撃の場合)、疾患プロセス(神経毒、感染、腫瘍、代謝異常、遺伝的異常、変性神経疾患など)、閉鎖性頭部損傷、例えば頭部の急速な加速もしくは減速(すなわち、揺さぶられっ子症候群)によって引き起こされうる。そのような損傷は、身体的および精神的機能に破壊的な生涯にわたる影響を有しうる。
【０１４５】
当業者は、臨床業務および臨床開発において神経系疾患、障害または損傷を現在治療するための標準的方法および様式の任意の全てが、本発明の実施に適していることを認識する。投与経路、製剤化、他の薬剤との共投与(適切な場合)などが、本明細書中他の箇所に詳細に記載される。
【実施例】
【０１４６】
以下の実施例は、本発明の方法および組成物の製造方法および使用方法についての完全な開示および説明を当業者に提供するために記載され、発明者らが自らの発明とみなすものの範囲を限定することは意図されていない。使用される数字(例えば、量、温度など)に関する精度を保証するよう努めたが、いくらかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。特に指定しない限り、割合は重量に基づく割合であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧であるか、またはほぼ大気圧である。
【０１４７】
[実施例1]
AMP細胞組成物の調製
羊膜上皮細胞を、解離剤PXXIIIを使用して出発羊膜から解離させた。羊膜の平均重量範囲は、18〜27gであった。羊膜1gあたりの回収された細胞数は、約10〜15×106個であった。
【０１４８】
選択AMP細胞を取得する方法 - 羊膜上皮細胞を、羊膜からの単離直後にプレーティングした。培養してほぼ2日後、非接着細胞を除去し、接着細胞を維持した。プラスチック組織培養容器へのこの接着は、所望のAMP細胞集団を取得するために使用される選択方法である。接着および非接着AMP細胞は、同様の細胞表面マーカー発現プロファイルを有するようであるが、接着細胞の方が高い生存度を有し、所望の細胞集団である。接着AMP細胞を、ヒト血清アルブミンを補充した基本培地中で、ほぼ細胞120,000〜150,000個/cm2に達するまで培養した。この時点で、培養物は集密になっていた。好適な細胞培養物はほぼ5〜14日の範囲でこの細胞数に達する。この基準の達成はAMP細胞の増殖能の指標であり、この基準を達成しない細胞はその後の分析および使用のために選択されない。AMP細胞がほぼ細胞120,000〜150,000個/cm2に達したら、それらを回収し、凍結保存した。この回収時点をp0と称する。
【０１４９】
[実施例2]
AMP-N細胞の創出
上に記載されたAMP細胞は、独自の複数ステップ培養プロセスに従って培養され、AMP-N細胞と称される新規細胞タイプの創出を結果としてもたらした。AMP-N細胞は、以下に記載されるように特徴付けられた。
【０１５０】
[実施例3]
AMP-N細胞の細胞表面マーカーの特徴付け
独自の複数ステップ培養プロセスによって生じるAMP-N細胞は、一細胞内でまだ記載されていない、細胞マーカーの固有の組み合わせを示す。AMP-N細胞は、ニューロンに近いレベルのβ-チューブリン-IIIおよびMAP2を発現する点で、ニューロン様マーカーを示す。対照的に、独自の複数ステップ培養プロセスにおいて処理されないAMP細胞は、これらのニューロンマーカーの非常に低い発現を示すか、またはこれらを全く発現しない。重要なことに、AMP-N細胞は、他のニューロンマーカーの発現を欠いている点で、ニューロンとは異なることが示されている。具体的には、ニューロンは、表面マーカー、例えば、PSA-NCAMおよびNFMの高発現を示すのに対し、AMP-N細胞およびAMP細胞は、これらのマーカーの低発現を示す。AMP-N細胞(およびAMP細胞)はまた、高レベルのグリア細胞マーカーGFAPおよびa-S100(これらの両者はニューロンでは非常に低いレベルで発現される)を発現することが示された。最後に、AMP-N細胞およびAMP細胞は、幹細胞マーカーSSEA-4の発現について解析された。AMP細胞は、この細胞タイプについて期待されるように、このマーカーについて陽性であるが、この幹細胞マーカーのレベルはAMP-N細胞において低下しており、このことは、それらが、独自の複数ステップ培養プロセスにおいて処理されると「幹細胞性(stem-ness)」を失っていることを示している。ニューロンは、最終分化細胞であり、SSEA-4などの幹細胞マーカーを発現しない。
【０１５１】
したがって、本出願人らは、いくつかのニューロンマーカー(すなわち、β-チューブリン-IIIおよびMAP2)、いくつかのグリアマーカー(すなわち、GFAPおよびa-S100)およびいくつかのAMP細胞マーカー(すなわち、SSEA-4)から構成されるが、他のニューロンマーカー(すなわち、PSA-NCAMおよびNFM)から構成されない、マーカーの固有の組み合わせを示す新規細胞タイプを創出した。
【０１５２】
[実施例4]
未分化AMP細胞に対する、AMP-N細胞の遺伝子発現プロファイルの比較
定量的RT-PCRを使用して、AMP-N細胞および未分化AMP細胞において28個の遺伝子の発現を比較した。この実験では、2つの細胞タイプにおける同一の発現は、相対発現=1を結果としてもたらす(図1における破線によって示される)。AMP細胞と比較してAMP-N細胞においてより高レベルの発現を有する遺伝子は、1より大きい相対発現を有し、一方、AMP-N細胞においてより低レベルの発現を有する遺伝子は、1未満の相対発現を有する。3倍を超える発現における有意差(p<0.05)を有する遺伝子は、星印によって示される(図1)。発現結果および統計解析は、REST2009ソフトウェアを用いた無作為化解析によって生じさせ、各細胞タイプについて3回反復の平均を表す(M. W. Pfaffl et al. Nucleic Acids Research 2002 May 1; 30(9): E36)。エラーバーは、95％信頼区間を表す。18S RNAの発現は、各サンプルについての基準として使用された。FGF4、GFAP、IL-10、NeuroD1、S100B、SHH、Sox2またはSox10の発現はいずれの細胞タイプでも観察されなかった。
【０１５３】
[実施例5]
ニューロンに対する、AMP-N細胞の遺伝子発現プロファイルの比較
定量的RT-PCRを使用して、AMP-N細胞およびヒトニューロン(Sciencell #1520-10)において28個の遺伝子の発現を比較した。この実験では、2つの細胞タイプにおける同一の発現は、相対発現=1を結果としてもたらす(図2における破線によって示される)。ニューロンと比較してAMP-N細胞においてより高レベルの発現を有する遺伝子は、1より大きい相対発現を有し、一方、AMP-N細胞においてより低レベルの発現を有する遺伝子は、1未満の相対発現を有する。3倍を超える発現における有意差(p<0.05)を有する遺伝子は、星印によって示される(図2)。FGF2、GFAP、NRCAM、S100BおよびSox2は、AMP-N細胞において極めて低いレベルの発現を示し、この図では十分に表示することができない平均をもたらした。発現結果および統計解析は、REST2009ソフトウェアを用いた無作為化解析によって生じさせ、各細胞タイプについて3回反復の平均を表す(M. W. Pfaffl et al. Nucleic Acids Research 2002 May 1; 30(9): E36)。エラーバーは、95％信頼区間を表す。18S RNAの発現は、各サンプルについての基準として使用された。FGF4、IL-10、Sox10またはSHHの発現は、AMP-N細胞またはニューロンにおいて観察されなかった。
【０１５４】
[実施例6]
AMP-N細胞からのACCS-Nの作製
上に記載されたAMP-N細胞は、神経系の疾患、障害および損傷の治療に有用でありうる分泌タンパク質の固有の組み合わせを有する、ならし培地の製造に特によく適している。このならし培地は、独自の複数ステッププロセスにおいてAMP-N細胞を培養し、次いで、ならし培地を回収することによって作製される。いくつかの場合には、ならし培地の複数回収物は一体にプールされ、分泌タンパク質のレベルに関してより安定したロットのならし培地を創出しうる。
【０１５５】
[実施例7]
ACCS-Nの特徴付け
ACCS-Nは、標準的ELISA、抗体アレイおよび質量分析技術を用いて、分泌タンパク質プロファイルについて特徴付けられる。
【０１５６】
[実施例8]
持続放出組成物の作製
AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの持続放出組成物は、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-N組成物を、本明細書に記載される(詳細な説明を参照のこと)またはさもなくば当業者によく知られた任意の持続放出製剤化技術と組み合わせることによって製造される。
【０１５７】
[実施例9]
神経系疾患および障害の動物モデルにおける、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの使用
アルツハイマー病 - Wenk, G.L.(Behav Brain Res 1993 57(2):117-22)は、イボテン酸などの神経毒の注入による基底前脳コリン作動性ニューロンの破壊が、アルツハイマー病と関連する認知機能障害を再現するのに十分であるという仮定に基づく、アルツハイマー病のモデルを記載している。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、このアルツハイマー病モデルにおいて試験される。
【０１５８】
パーキンソン病 - Arai, N. et al.(Brain Res 1990 515(1-2):57-63)は、C57 blackマウスがMPTPによって処理される、パーキンソン病の動物モデルを記載している。著者らは、このモデルがパーキンソン病を研究するために適したモデルであると結論付けている。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、このパーキンソン病モデルにおいて試験される。
【０１５９】
ハンチントン病 - Reddy, P.H. et al.(Nat Genet 1998 20(2):198-202)は、16、48または89個のいずれかのCAGリピートを有する全長ヒトハンチントン病cDNAの広範な発現を示したトランスジェニックマウスが創出された、ハンチントン病の実験モデルを記載している。48または89個のCAGリピートを有するマウスは、線条体、大脳皮質、視床および海馬におけるニューロン喪失およびグリオーシスを伴う、進行性の行動および運動機能障害を現した。著者らは、このモデルが、ハンチントン病発症機構に対する臨床的に関連性のあるモデルであると結論付けている。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、このハンチントン病モデルにおいて試験される。
【０１６０】
筋萎縮性側索硬化症 - Pioro, E.P. and Mitsumoto, H.(Clin Neurosci 1995-1996 3(6):375-85)は、ALSの4つの動物モデルを記載している。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、このALSモデルにおいて試験される。
【０１６１】
脊髄性筋萎縮症 - Monani, U.R. et al.(Hum Mol Genet 2000 9(16):2451-2457)は、脊髄性筋萎縮症の動物モデルを概説している。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、この脊髄性筋萎縮症疾患のモデルにおいて試験される。
【０１６２】
多発性硬化症 - Peiris, M. et al.(J Neurosci Methods 2007 Mar 30 epub)は、多発性硬化症を治療するための介入療法の特徴付けについて有用なC57BL/6マウスにおける実験的自己免疫脳脊髄炎(EAE)の動物モデルを記載している。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、この多発性硬化症のモデルにおいて試験される。
【０１６３】
末梢神経障害 - Fricker et al.(Neurodegen Dis 2008, 5:72-108)は、全ての種類の末梢神経障害の研究において有用な多くの動物モデルの包括的骨子を含む、実験的末梢神経障害の広範な概説を提供する。例えば、遺伝性(HNPP、CMT1A、CMT1B、DSS、CMT1X、CMT4B1)、感染性(ハンセン病、HIV)、免疫(GBS)、糖尿病(I型、II型)、損傷(一時的神経挫滅、慢性狭窄損傷、部分的神経結紮、脊髄神経結紮、神経部分損傷)、および化学療法(すなわち、シスプラチン)誘導型神経障害についての動物モデルが提供される。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、これらの末梢神経障害のモデルにおいて試験される。
【０１６４】
[実施例10]
神経系損傷の動物モデルにおけるAMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nの使用
外傷性脳損傷(TBI) - AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、それらの神経保護能力を試験するために、貫通性弾道様脳損傷(PBBI)のラットモデルにおいて試験される(Williams, A.J., 2005, 貼ochCharacterization of a New Rat Model of Penetrating Ballistic Brain Injury能och, J Neurotrauma 22; 3:313-331)。AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、右前頭PBBIまたは同側脳室内投与による偽PBBI術の直後にラットに注入される。PBBI対照は、PBS、対照培地またはならし培地の脳室内投与を受ける。
【０１６５】
脊髄損傷(SCI) - AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、SCIのマウスモデルにおいて試験される。挫傷損傷の9日後(動物モデルについて、例えば、Constantini, S., and Young, W. (1994), J. Neurosurg. 80, 97-111; Anderson, A.J., et al., Journal of Neurotrauma 21 (12), 1831-1846を参照のこと)、AMP-N細胞および/またはACCS-Nおよび/またはプールされたACCS-Nは、2つの異なる部位、損傷中心部または隣接する神経組織実質に投与される。
【０１６６】
分析 - オープンフィールド運動試験(open field locomotor testing)は、完全まひ(BBBまたはBMSについて0)から完全に正常な運動(BBBについて21、およびBMSについて9)までの、潜在的回復の全領域を研究者が評価することを可能にする唯一のタスクであるため、脊髄損傷分野の標準である。しかし、これらは、非線形(順序)尺度である。それは、関連性のある変化の点の数の直接的比較ではなく、むしろ、具体的に回復した運動機能に関してこれらの点が表すものである。これらのタスクでは、実験群に対して予備知識のない2人の研究者が、各試験尺度について具体的基準に基づき動物を観察およびランク付けする間、4分の試験期間、動物は円形部を自由に動く。このパイロットにおける動物についての回復の範囲の場合、研究者によって採点される重要な基準は、安定した歩進および完全な協調した「通過(pass)」を達成する能力を含む。体長の3倍を超える、活動領域を横断した、連続した一連の動きのそれぞれを通過と定義する。正常な動物は、各前肢ステップについて1つの後肢ステップを行い、ステップの失敗は、その尺度について動物が達成するスコアを減らす。
【０１６７】
本発明は、その思想または本質的な特性から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化されうる。任意の等価の実施形態は本発明の範囲内であるものとする。実際、本明細書中で示されるものおよび説明されるものに加えて、本発明の種々の改変が前記説明から当業者に明らかになる。そのような改変もまた、特許請求の範囲の範囲内に入るものとする。
【０１６８】
本明細書を通して、種々の刊行物が参照されている。各刊行物は参照によりその全体が本明細書中に組み込まれるものとする。
【図１】
2015526086.tif 000003
【図２】
2015526086.tif 000004
【国際調査報告】
2015526086.tif 000005