(57)【要約】  本発明は、スカフォールドと、ガルバーニ微粒子と、を含む、止血材を目的とする。ガルバーニ微粒子は、少なくとも２種類の異種金属からなる粒子を含む。スカフォールドは、好ましくは、キトサンなどの生体適合性多糖類系止血材、若しくはＯＲＣなどのセルロース系止血材である。
2015503368.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）少なくとも２種類の異種金属を含む、少なくとも１つのガルバーニ微粒子と、ｂ）多糖類系生体適合性止血スカフォールドと、を含む、止血材。
【請求項２】
前記ガルバーニ微粒子が銅及び亜鉛を含む、請求項１に記載の止血材。
【請求項３】
前記スカフォールドが酸化再生セルロース、キトサン、又はこれらの混合物を含む、請求項１に記載の止血材。
【請求項４】
前記スカフォールドが粉末形態、織形態、又は不織形態である、請求項３に記載の止血材。
【請求項５】
前記スカフォールドの１ｇ当たり０．０１〜１０ｍｇのガルバーニ微粒子を含む、請求項４に記載の止血材。
【請求項６】
前記スカフォールドが布地である、請求項３に記載の止血材。
【請求項７】
前記布地が織布又は不織布であり、かつ前記止血材が結合剤を更に含む、請求項６に記載の止血材。
【請求項８】
前記結合剤がポリエチレングリコールである、請求項７に記載の止血材。
【請求項９】
前記スカフォールドの１平方ｃｍ当たり０．０１〜１０ｍｇのガルバーニ微粒子を含む、請求項８に記載の止血材。
【請求項１０】
止血材の作製方法であって、
（ａ）少なくとも２種類の異種金属から作製される粒子を含む少なくとも１つのガルバーニ微粒子及び止血スカフォールドを準備する工程と、
（ｂ）該スカフォールド内、又は該スカフォールドの表面上に該ガルバーニ微粒子を分散させる工程と、を含む、方法。
【請求項１１】
前記スカフォールドがＯＲＣ又はキトサンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
複数のガルバーニ微粒子が、前記スカフォールド全体に実質的に均一に分散される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
複数のガルバーニ微粒子が、前記スカフォールドの少なくとも１つの主表面に提供される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
水を準備する工程と、該水をＯＲＣ及び前記少なくとも１つのガルバーニ微粒子と混合する工程と、を更に含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記スカフォールドが布地である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
結合剤を準備し、該結合剤及び前記少なくとも１つのガルバーニ微粒子を前記布地に塗布する工程と、前記ガルバーニ微粒子を前記布地に結合させる工程と、を更に含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記結合剤がポリエチレングリコールである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記止血材が、血小板障害血液若しくはヘパリン化血液を有する患者又は凝固阻止剤若しくは凝集阻止剤を含む患者に使用される、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して止血を促進する試剤及び装置、より詳細には、スカフォールド材の止血特性を改善するガルバーニ微粒子を有する、酸化再生セルロース系止血スカフォールドなどのスカフォールド材に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液とは、液相中に分散した赤血球、白血球、小体、及び血小板を含む、液体の組織である。この液相は血漿であり、血漿は、酸性物質、脂質、溶解した電解質、及びタンパク質を含んでいる。この液相中に懸濁する特定のタンパク質がフィブリノゲンである。出血が発生したとき、フィブリノゲンは水及びトロンビン（酵素）と反応してフィブリンを形成するが、このフィブリンは水に不溶であり、重合して血餅を形成する。
【０００３】
多種多様な状況において、ヒトを含む動物は、創傷が原因であるいは外科的処置の間に出血に見舞われ得る。いくつかの状況においては、出血は比較的軽いものであり、通常の血液凝固が、簡単な応急処置の実施に加われば、それだけで十分である。他の状況においては、相当な出血が発生し得る。これらの局面では通常、専門的な設備及び物資、並びに適切な救助を施すように訓練された人員が必要となる。
【０００４】
上述の問題に対処する取り組みにおいて、過剰な出血を抑制するための物質が開発されてきた。局所用吸収性止血材（ＴＡＨ）は、外科用途で広く使用されている。ＴＡＨは、酸化セルロース（ＯＣ）、酸化再生セルロース（ＯＲＣ）、ゼラチン、コラーゲン、キチン、キトサンなどをベースとする製品を包含する。止血性能を改善するには、上記の材料をベースとするスカフォールドをトロンビン及びフィブリノゲンなど生物由来の凝固因子と組み合わせることができる。
【０００５】
ゼラチン、コラーゲン、酸化セルロースなど既知のＴＡＨ材料、トロンビン、フィブリノゲンなど生物製剤、並びに他の物質が使用されてきたが、これらの物質のそれぞれには限界がある。生物学的活性を維持するには、生物製剤を含有する止血装置に特殊な扱いが必要である。動物由来又はヒト由来の生物製剤を使用する場合、汚染又は有害な免疫反応のために安全性も懸念事項になっている。例えば、従来技術による血液凝固物質のうちのある種類は、フィブリノゲン及び／又はトロンビンを含めて、血液由来タンパク質又は酵素であるが、それらは高価であり、特殊な保存条件を必要とし、また、血液感染症が伝染する可能性を排除するために徹底した精製を要求する。
【０００６】
全て「ＭＥＤＩＣＡＬ  ＤＥＶＩＣＥＳ  ＷＩＴＨ  ＧＡＬＶＡＮＩＣ  ＰＡＲＴＩＣＵＬＡＴＥＳ」という題名である、公開済みの米国特許出願公開第２０１１／００６０４１９号、同第２０１０／０２６８３３５号、及び同第２０１０／０２４９９２７号（これらはその全体が全ての目的のために本明細書に参考として組み込まれる）は、ガルバーニ微粒子を有する移植可能な医療装置について説明している。しかしながら、これらの文献は、特定の止血スカフォールドと共にガルバーニ微粒子を使用することについて開示していない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
トロンビン生物学的活性を維持するために、液体トロンビンを含む止血装置は、特殊な扱いを要求する。例えば、液体トロンビンは、シェルライフ安定度を維持するため、冷凍を必要とする。動物又はヒトに由来のトロンビンを用いる時に、汚染や免疫原性のリスクがあるため、安全性も懸念される。更に、ヒト又は動物の血漿から精製されるトロンビン及びフィブリノゲンは、非常にコストのかかるものである。したがって、改善された止血性能、好ましくは、動物の血液由来ではないが、同等の性能、長期の貯蔵寿命及び保管の周囲条件、並びに低コストを有する材料を提供できる、新しい止血材を開発することは有益である。より優れた貯蔵寿命安定性、より低いウイルス性汚染リスク及びより低い免疫原性を備え、低コストであり、ヘパリン化血液又は血小板不活化血液で機能できる、止血材に対するニーズが存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
簡潔に述べると、本発明は、酸化再生セルロース（ＯＲＣ）と組み合わされた、又はＯＲＣに組み込まれたガルバーニ微粒子を含む止血用の組成物、装置、及び材料を目的とし、この止血材は乾燥形態であるか、湿性ペーストのいずれかである。本発明の止血材は、ＯＲＣと比較して向上した止血性能を示し、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）若しくは市販のＯＲＣ製品、酸化セルロース（ＯＣ）製品、又はキトサン系製品などゼラチン系止血スカフォールドと混合したヒトトロンビンと比較して同等又はこれらよりも優れた効果を呈する。
【０００９】
より詳細には、本発明は、各微粒子が少なくとも２種類の異種金属を含む、少なくとも１つのガルバーニ微粒子と、より好ましくは、複数の微粒子と、多糖類系生体適合性止血スカフォールドと、を含む、止血材を目的とする。ガルバーニ微粒子は、異種金属として銅及び亜鉛を含有してよい。好ましい実施形態では、複数の微粒子は、止血スカフォールド内及び／又はその表面に分散している。スカフォールドは、酸化再生セルロース又はキトサンを含んでよい、又は好ましくはこれらから本質的に成ってよい。スカフォールドは、粉末形態であるか、織形態又は不織形態であってよい。１つの実施形態では、止血装置は、スカフォールド１グラム当たり０．０１〜１０ｍｇのガルバーニ微粒子を含有する。
【００１０】
本発明はまた、スカフォールドと、少なくとも１つのガルバーニ微粒子と、より好ましくは複数のガルバーニ微粒子と、所望により水又は食塩水などの混合媒体と、を含む止血材を形成する工程と、止血材を実質的に直ちに創傷部位に塗布する工程による、創傷部位に止血処置を施す方法に関する。
【００１１】
本発明はまた、少なくとも２種類の異種金属から作製され粒子を含む少なくとも１つのガルバーニ微粒子、より好ましくは複数のガルバーニ微粒子及び止血スカフォールドを準備する工程と、該スカフォールド内、又は該スカフォールドの表面上に該ガルバーニ微粒子を分散させる工程による、止血材の作製方法に関する。
【００１２】
１つの実施形態では、上記の止血材及び方法が、血小板機能障害の血液及び／若しくはヘパリン化血液を有する患者又は凝固阻止剤若しくは凝集阻止剤を含む患者に使用される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】数個の試験されたシステムに対する止血時間のデータを示す。
【図２】数個の試験されたシステムに対する止血時間のデータを示す。
【図３】数個の試験されたシステムに対する止血時間のデータを示す。
【図４】本発明の拡大像を示す。
【図５】数個の試験されたシステムに対する止血時間のデータを示す。
【図６】数個の試験されたシステムに対する止血時間のデータを示す。
【図７】数個の試験されたシステムに対する止血時間のデータを示す。
【図８】数個の試験されたシステムに対する止血時間のデータを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の実施形態によると、本発明の止血材は、セルロース系基質などの多糖類系止血材、好ましくは酸化再生セルロース（ＯＲＣ）系スカフォールドと組み合わせた、又はこれらに組み込まれたガルバーニ微粒子を含む。結果として生じる止血材は、乾燥形態又は湿性ペーストのいずれかであってよい。本発明の止血材は、ＯＲＣのみの場合と比較して向上した止血性能を示し、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）又は市販のＯＲＣ製品などゼラチン系止血スカフォールドと混合したヒトトロンビンと比較して同等又はこれよりも優れた止血効果を呈する。有利には、止血材製品は安全であり、止血性能に影響を及ぼすことなく室温で保管できる。有利には、止血材は完全に合成されていて、大量かつ血液由来の汚染を懸念することなく製造可能である。止血材はまた、生体適合性であるべきである。つまり、止血材は、自然の生化学的サイクルへの分泌又は取り込みのいずれかで動物の身体によって自然に除去され得る分解生成物に時間をかけて生物分解されるべきである。
【００１５】
本発明の別の実施形態によると、本発明の止血材は、キトサン、キチン、アルギン酸塩、酸化アルギン酸塩、及び酸化デンプン基質など多糖類系止血材、好ましくはキトサン系止血材と組み合わされた、又はこれらに組み込まれたガルバーニ微粒子を含む。止血材はまた、生体適合性であるべきである。つまり、止血材は、自然の生化学的サイクルへの分泌又は取り込みのいずれかで動物の身体によって自然に除去され得る分解生成物に時間をかけて生物分解されるべきである。
【００１６】
更に、止血材は優れた止血効果を有し、準備工程を必要とせずに使用する準備が整っており、室温で保管でき、比較的製造コストが低い。
【００１７】
本発明の実施形態によると、新しい止血材は、ガルバーニ微粒子を、セルロース系基質、好ましくはＯＲＣ系スカフォールドと組み合わせることにより形成される。セルロース系基質は、粉末形態又は織布形態、又は不織布形態であってよい。加えて、結合剤及び添加剤が使用されて、本発明の新しい止血材を形成してよい。
【００１８】
本発明は更に、出血部位に止血処理を施す方法に関するものであり、この方法は、上記の止血材を形成する工程と、出血部位にその材料を塗布する工程と、を含む。
【００１９】
本発明は更に、乾燥止血製剤又は半液体止血製剤の作製方法に関するものであり、この方法は、粉末形態のセルロース系材料をガルバーニ微粒子と混合する工程と、所望により水又は生理食塩水など水溶液を添加する工程と、結果として生じる材料を創傷部位に直ちに塗布する工程と、を含む。本発明は更に、止血製剤の作製方法に関するものであり、この方法は、ガルバーニ微粒子をセルロース系織布又は不織布に塗布する工程と、所望により結合剤を添加する工程と、結果として生じる材料を創傷部位に塗布する工程と、を含む。
【００２０】
ガルバーニ微粒子
本発明で有用なガルバーニ微粒子は、第１導電材料及び第２導電材料を含み、第１導電材料及び第２導電材料の両方が少なくとも部分的に微粒子の表面上に露出している。１つの実施形態では、微粒子は、第１導電材料を含み、微粒子の表面は第２導電材料で部分的にコーティングされる。全て「ＭＥＤＩＣＡＬ  ＤＥＶＩＣＥＳ  ＷＩＴＨ  ＧＡＬＶＡＮＩＣ  ＰＡＲＴＩＣＵＬＡＴＥＳ」という題名である、公開済みの米国特許出願公開第２０１１／００６０４１９号、同第２０１０／０２６８３３５号、及び同第２０１０／０２４９９２７号が参照されて、これらはその全体が全ての目的のために本明細書に参考として組み込まれる。
【００２１】
１つの実施形態では、ガルバーニ微粒子は、第２導電材料の重量％が、微粒子の総重量の約０．００１重量％〜約２０重量％、例えば、微粒子の総重量の約０．０１重量％〜約１０重量％であるコーティング方法により生成される。１つの実施形態では、第２導電材料のコーティング厚さは、１原子から数百マイクロメートルまで変化してもよい。更に別の実施形態では、ガルバーニ微粒子の表面は、約０．００１重量％〜約９９．９９重量％、例えば、約０．１重量％〜約９９．９重量％の第２導電材料を含む。
【００２２】
１つの実施形態では、ガルバーニ微粒子は、非コーティング方法により（例えば、第１及び第２導電材料を共に焼結、印刷、又は機械的加工して、ガルバーニ微粒子を形成することにより）生成され、第２導電材料は、微粒子の合計重量の約０．１重量％〜約９９．９重量％、及び他の範囲、例えば、微粒子の合計重量の約１０％〜約９０％を構成する。
【００２３】
１つの実施形態では、ガルバーニ微粒子は、保存中組成物に懸濁することができるのに十分な程度細かい。更なる実施形態では、それらは扁平及び／又は細長い形状である。ガルバーニ微粒子の扁平及び細長い形状の利点としては、見かけ密度が低く、それ故、浮遊／懸濁能がより良好になり、並びに生体組織をより良好に被覆し、生体組織（例えば、皮膚又は粘膜）を通過するガルバーニ電流の範囲をより広く及び／又はより深くすることが挙げられる。１つの実施形態では、ガルバーニ微粒子の最長寸法は、このような微粒子の最短寸法の少なくとも２倍（例えば、少なくとも５倍）である。別の実施形態では、ガルバーニ微粒子の形状は薄いフレーク状であり、その厚さ（Ｚ軸）は、他の２つの寸法（Ｘ及びＹ寸法）よりも著しく小さく、例えば、厚さは、約０．５〜１．５マイクロメートルであり、他の２つの寸法は、約５マイクロメートル〜約１００マイクロメートルである。
【００２４】
ガルバーニ微粒子は、球形若しくは非球形、又は細長い若しくは扁平な形状（例えば、円筒形、繊維又はフレーク）が挙げられるが、これらに限定されない任意の形状であってもよい。１つの実施形態では、ガルバーニ微粒子の平均粒径は、約１０ナノメートル〜約５００マイクロメートル、例えば、約１００ナノメートル〜約１００マイクロメートルである。粒径とは、少なくとも一方向における最長寸法を意味する。
【００２５】
第１導電材料／第２導電材料の組み合わせの例としては（「／」の記号は酸化されているが、本質的に非可溶性形である金属を表す）、亜鉛−銅、亜鉛−銅／銅ハロゲン化物、亜鉛−銅／酸化銅、マグネシウム−銅、マグネシウム−銅／銅ハロゲン化物、亜鉛−銀、亜鉛−銀／酸化銀、亜鉛−銀／銀ハロゲン化物、亜鉛−銀／塩化銀、亜鉛−銀／臭化銀、亜鉛−銀／ヨウ化銀、亜鉛−銀／フッ化銀、亜鉛−金、亜鉛−炭素、マグネシウム−金、マグネシウム−銀、マグネシウム−銀／酸化銀、マグネシウム−銀／銀ハロゲン化物、マグネシウム−銀／塩化銀、マグネシウム−銀／臭化銀、マグネシウム−銀／ヨウ化銀、マグネシウム−銀／フッ化銀、マグネシウム−炭素、アルミニウム−銅、アルミニウム−金、アルミニウム−銀、アルミニウム−銀／酸化銀、アルミニウム−銀／銀ハロゲン化物、アルミニウム−銀／塩化銀、アルミニウム−銀／臭化銀、アルミニウム−銀／ヨウ化銀、アルミニウム−銀／フッ化銀、アルミニウム−炭素、銅−銀／銀ハロゲン化物、銅−銀／塩化銀、銅−銀／臭化銀、銅−銀／ヨウ化銀、銅−銀／フッ化銀、鉄−銅、鉄−銅／酸化銅、銅−炭素鉄−銅／銅ハロゲン化物、鉄−銀、鉄−銀／酸化銀、鉄−銀／銀ハロゲン化物、鉄−銀／塩化銀、鉄−銀／臭化銀、鉄−銀／ヨウ化銀、鉄−銀／フッ化銀、鉄−金、鉄−導電性炭素、亜鉛−導電性炭素、銅−導電性炭素、マグネシウム−導電性炭素、及びアルミニウム−炭素が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
第１導電材料及び第２導電材料、特に第１導電材料はまた、合金であってもよい。合金の非限定的な例としては、第１導電材料として亜鉛、鉄、アルミニウム、マグネシウム、銅、及びマンガンの合金、第２導電材料として銀、銅、ステンレス鋼及び金の合金が挙げられる。
【００２７】
１つの実施形態では、第１導電材料から作製される微粒子は、第２及び第３導電材料のような数種の導電材料で部分的にコーティングされる。更なる実施形態では、微粒子は少なくとも９５重量％の第１導電材料、第２導電材料、及び第３導電材料を含む。１つの実施形態では、第１導電材料は亜鉛であり、第２導電材料は銅であり、第３導電材料は銀である。標準電極電位は、標準状態におけるイオンと平衡状態にある、その標準状態における物質から構成される電極の水素電極と比べた電位である。１つの実施形態では、第１導電材料と第２導電材料の標準電極電位（又は簡単に標準電位）の差は、少なくとも約０．１ボルト、例えば、少なくとも０．２ボルトである。１つの実施形態では、ガルバーニ対を構成する材料は、約３ボルト以下の標準電極電位を有する。例えば、金属亜鉛及び銅からなるガルバーニ対では、亜鉛の標準電位は−０．７６３Ｖ（Ｚｎ／Ｚｎ２＋）であり、銅の標準電位は＋０．３３７（Ｃｕ／Ｃｕ２＋）であるため、標準電位の差は、亜鉛−銅ガルバーニ対で１．１００Ｖである。同様に、マグネシウム−銅ガルバーニ対では、マグネシウムの標準電位（Ｍｇ／Ｍｇ２＋）は−２．３６３Ｖであり、したがって、標準電位の差は２．７００Ｖである。ガルバーニ対に好適ないくつかの材料の標準電位値の追加例は、Ａｇ／Ａｇ＋：＋０．７９９Ｖ，Ａｇ／ＡｇＣｌ／Ｃｌ−：０．２２２Ｖ及びＰｔ／Ｈ２／Ｈ＋：０．０００Ｖである。Ｐｔはまた、炭素又は別の導電材料に置き換えられてもよい。一般的に、導電材料間の電圧は、所望の治療効果を有効に提供するのに十分である。
【００２８】
１つの実施形態では、導電金属インク（例えば、ポリマー結合剤を有する）を従来の化学的、電気化学的、物理的、又は機械的加工（無電解めっき、電気めっき、真空蒸着、アーク噴霧、焼結、圧縮、加圧成形、押出成形、印刷、及び造粒のような）によって、及び粉末冶金、電子工学、及び医療機器の製造プロセスにおいて一般的に用いられる他の既知の金属コーティング及び粉末加工方法により、導電性電極を組み合わせる（例えば、第２導電電極を第１導電電極に堆積させる）。別の実施形態では、全ての導電性電極は、還元剤（複数も含む）の存在下で、順次又は同時に、従来の化学還元プロセス（例えば、無電解めっき）により製造される。還元剤の例としては、リン含有還元剤（例えば、米国特許第４，１６７，４１６号及び同第５，３０４，４０３号に記載のような次亜リン酸塩）、ホウ素含有還元剤、及びテトラヒドロホウ酸ナトリウム（ＮａＢＨ４）（例えば、米国特許出願公開第２００５／０１７５６４９号に記載のもの）などアルデヒド又はケトン含有還元剤が挙げられる。
【００２９】
１つの実施形態では、第２導電電極は、スプレーコーティング、プラズマコーティング、導電インクコーティング、スクリーン印刷、ディップコーティング、金属接着、高圧−高温下での衝撃微粒子、流動床加工、又は真空蒸着のような、物理的堆積により第１導電電極上に堆積又はコーティングされる。
【００３０】
１つの実施形態では、コーティング方法は、置換化学反応、つまり第１導電材料の微粒子（例えば、金属亜鉛粒子）を、第２導電材料の溶解塩（例えば、酢酸銅、乳酸銅、グルコン酸銅、又は硝酸銀）を含有する溶液と接触させることに基づいている。更なる実施形態では、この方法は、第１導電材料（例えば、亜鉛粉末）の微粒子上を、又は第１導電材料の充填粉末を通して溶液を流す工程、を含む。１つの実施形態では、塩溶液は水溶液である。別の実施形態では、溶液は、アルコール、グリコール、グリセリン、又は薬剤生産において一般的に用いられる他の溶媒のような有機溶媒を含有して、第１微粒子の表面上への第２導電材料の堆積速度を調節し、それにより、生成されるガルバーニ微粒子の活性を制御する。
【００３１】
別の実施形態では、本発明のガルバーニ微粒子を、他の材料でコーティングして、保存中にガルバーニ材料が分解（例えば、酸素及び水分による酸化分解）するのを防ぐか、又は電気化学的反応を調節し、使用中の電流発生を制御することもできる。ガルバーニ材料に対する代表的なコーティング材料は、無機又は有機ポリマー、天然又は合成のポリマー、生分解性又は生体吸収性のポリマー、シリカ、セラミック、種々の金属酸化物（例えば、亜鉛、アルミニウム、マグネシウム、又はチタンの酸化物）、及び低溶解性の他の無機塩類（例えば、リン酸亜鉛）である。コーティング方法は金属粉末加工及び金属顔料製造の分野において既知であり、例えば米国特許第５，９６４，９３６号、同第５，９９３，５２６号、同第７，１７２，８１２号、米国特許出願公開第２００６／００４２５０９Ａ１号、及び同第２００７／０１７２４３８号に記述されているものがある。
【００３２】
１つの実施形態では、ガルバーニ微粒子は、乾燥環境において保管される。ガルバーニ微粒子は、水分によって活性化されて、ガルバーニ電池を提供する。ガルバーニ微粒子は、粒子の早すぎる活性化を防ぐために水分を含まない環境で保持されることが好ましい。別の実施形態では、ガルバーニ微粒子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、グリセリン、及びプロピレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない、無水溶媒又は溶媒混合物等の非導電性ビヒクル中で保管される。
【００３３】
酸化再生セルロース（ＯＲＣ）
ＯＲＣは、当業者に既知の吸収性止血材である。酸化セルロース材料をベースとする様々な種類の止血材を、粉末、織成、不織、編み織物、及び他の形態、並びにそれらの組み合わせに形成する多くの方法が既知である。現在利用される止血用創傷包帯には、セルロース繊維の均一性を増加した酸化セルロースである酸化再生セルロース（ＯＲＣ）を備える編み布地又は不織布が含まれる。そのような止血用創傷包帯の例には、Ｓｕｒｇｉｃｅｌ（登録商標）吸収性止血材；Ｓｕｒｇｉｃｅｌ  Ｎｕ−Ｋｎｉｔ（登録商標）吸収性止血材、及びＳｕｒｇｉｃｅｌ（登録商標）繊維状吸収性止血材が挙げられ、全てＪｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｗｏｕｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ（Ｅｔｈｉｃｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，Ｎ．Ｊ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｃｏｍｐａｎｙの一部門である）から入手可能である。
【００３４】
止血スカフォールド内又はその上にガルバーニ微粒子を組み込む方法
本発明のある実施形態によると、止血材は、実施例１によるガルバーニ微粒子を粉末酸化再生セルロース（ＯＲＣ）及び生理食塩水など水媒体と組み合わせ、続いて、十分に混合して、創傷部位に塗布して止血する直前に半液体ペーストを形成することにより形成される。
【００３５】
１つの実施形態では、ＯＲＣの乾燥粉末及びガルバーニ微粒子を事前に混合して湿気のない環境に保管し、次いで、創傷部位に塗布して止血する直前に水媒体と混合してよい。別の実施形態では、ＯＲＣの乾燥粉末及びガルバーニ粒子を単独で保管し、次いで、創傷部位に塗布して止血する直前に水媒体と混合する。この混合は、ＯＲＣの乾燥粉末及びガルバーニ粒子を水媒体に同時に添加する、又はＯＲＣの乾燥粉末及びガルバーニ粒子を任意の順番で水媒体に連続的に添加する、のいずれかによって実行する。
【００３６】
本発明の別の実施形態によると、止血材は、ガルバーニ粒子を粉末酸化再生セルロース（ＯＲＣ）と組み合わせ、続いて十分に混合し、続いて乾燥粉末状で創傷部位に塗布して止血するための乾燥粉末止血材を形成することにより形成される。
【００３７】
本発明の更に別の実施形態によると、止血材は、所望によりポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの結合剤を添加して、ＯＲＣ系織布又は不織布にガルバーニ粒子を堆積させることによって形成される。結合剤溶液は、ＰＥＧ［ｍｗ：３３５０ダルトン］／ＰＥＧ［ｍｗ：８０００ダルトン］／ジクロルメタン（ＤＣＭ）で調製し、比率は、１ｇ：１ｇ：１００ｍＬ（Ｗ／Ｗ／Ｖ）であった。１００ｍｇのガルバーニ微粒子を３ｍＬの結合剤溶液と混合した。好ましくは、有機溶媒又はアルコールなど無水媒体を使用して、結合剤溶液を調製する。ガルバーニ微粒子／結合剤溶液は、事前に整えた７．６２ｃｍ×７．６２ｃｍ（３インチ×３インチ）のＳｕｒｇｉｃｅｌ  Ｎｕ−Ｋｎｉｔ（登録商標）吸収性止血布（ＥＴＨＩＣＯＮ，Ｉｎｃ．、ロット番号３４１８５８４、有効期限：２０１４年１２月）上に噴霧した。ガルバーニ微粒子でコーティングしたＳｕｒｇｉｃｅｌ  Ｎｕ−Ｋｎｉｔ（登録商標）は、層流フードで３時間空気乾燥させ、続いて３日間真空乾燥させた。
【００３８】
本発明の１つの実施形態では、ガルバーニ微粒子及びＯＲＣ粉末を液体と混合して実質的に均質のペーストを調製する。このペーストには、その中に溶解した、有効量の他の添加剤を含んでよい。混合は、押出しによって達成されても、中実粒子を液相中に均一に分散させるのに有効な条件下で、閉鎖空間にて混合することによって達成されてもよい。それに代わって、ミキサー、例えば，二重惑星型のミキサーが、本発明の組成物を作製する上で利用されてもよい。
【００３９】
あるいは、混合は、マルチチャンバ注射器内で、又はルアーで相互接続された２個の注射器を使用し、創傷部位に塗布する直前に混合物を注射器間で前後に移動させることにより実行してよい。生理食塩水又は精製水など液体及びガルバーニ微粒子及びＯＲＣ粉末は、混合チャンバに添加する。液体は、溶液に粒子を添加するのに先立って、その液体中に溶解した有効量の添加剤を含んでもよい。例えば、所望によりグリセロール及び塩化ベンザルコニウムを含有する食塩水を調製してから、混合チャンバに添加してよい。固体粒子又は粉末は、一度に、又は時間をかけてミキサーに添加されて、全ての成分が添加されるまで混合は継続される。連続的な液相の全体に均一に分散した中実粒子を含んだ、実質的に均質な組成物が形成されるまで、混合は継続される。
【００４０】
止血装置
本発明の止血材及び組成物が使用され得る医療用装置には、止血を要する部位又は創傷に流動性又は注射可能な止血ペースト若しくはスラリー若しくは粉末又は布系止血材を塗布するために現在使用されている任意の装置が挙げられる。
【００４１】
装置又は塗布器の例には、ベクトン・ディッキンソン（Becton Dickinson）又はモノジェクト（Monoject）のルアー注射器などの注射器が挙げられる。他の装置が、参照によってその全容が本明細書に組み込まれる米国特許第６，０４５，５７０号に詳細に開示されている。
【００４２】
滅菌
上記のように調製された止血組成物を殺菌処理して、止血ペプチドを含む殺菌組成物を提供することができる。いくつかの実施形態では、この組成物は、上記のように医療装置に移され、止血組成物を含有する装置は、好ましくは、電離放射によって、又は加熱滅菌、ＥｔＯ滅菌など他の既知の技法若しくはこれらの組み合わせによって、滅菌される。より好ましくは、滅菌は、本明細書に例示されるようにガンマ線照射によるものである。
【００４３】
本発明の組成物は、例えば、あるレベルの電離放射線を照射されていることから、本明細書で説明する無菌の組成物を含む。そのような放射線照射には、電子ビーム又はガンマ線照射が挙げられる。放射線照射のレベル及び滅菌の条件は、組成物が照射される時間を含めて、本明細書で定義するように、滅菌をもたらすものである。本開示の利益を享受すると、当業者であれば、無菌組成物を得るのに必要な放射線照射のレベルを容易に決定できるであろう。
【００４４】
追加の構成成分
止血用の組成物は、限定するものではないが、抗菌剤、界面活性剤、抗酸化剤、保湿剤、湿潤剤、潤滑剤、増粘剤、希釈剤、照射安定剤、例えばラジカルスカベンジャー、可塑剤、及び安定剤を含めて、有効量の１種類又は２種類以上の添加剤又は化合物を更に含み得る。例えば、組成物の押出し性又は射出性を向上させるために、グリセリンが添加されてもよい。利用されるとき、グリセリンは、液相の重量を基準として約０重量％〜約２０重量％で組成物中に存在してもよい。好ましくは、組成物は、液相の重量を基準として約１重量％〜約１０重量％のグリセリンを含んでもよい。組成物は、液相の重量を基準として約１重量％〜約５重量％のグリセリンを含んでもよい。
【００４５】
加えて、組成物に特性の向上をもたらすために、第４級アミンが使用されてもよい。例えば、塩化ベンザルコニウム、ＰＯＬＹＢＲＥＮＥ（商標）又はＯＮＡＭＥＲ  Ｍ（商標）が、液相の重量を基準として、最大で約１重量パーセントの濃度で使用されてもよい。好ましくは、塩化ベンザルコニウムが、液相の重量を基準として約０．００１重量％〜約０．０１重量％の濃度で使用される。より好ましくは、組成物は、液相の重量を基準として約０．００２重量％〜約０．００６重量％の塩化ベンザルコニウムを含んでよい。第４級アミンは複数の機能を働いて、抗菌剤、発泡剤、ラジカルスカベンジャー、及びヘパリン中和剤として作用し得ると考えられている。
【００４６】
その止血製剤は、抗菌剤、界面活性剤、抗酸化剤、保湿剤、湿潤剤、潤滑剤、増粘剤、希釈剤、照射安定剤、例えばラジカルスカベンジャー、可塑剤、及び安定剤からなる群から選択された、有効量の１種類又は２種類以上の添加剤又は化合物を更に含み得るものであり、より具体的には、押出しを増進する量のグリセリンを含み、好ましくは、そのグリセリンは、止血製剤全体の液相の重量を基準として約１重量％〜約２０重量％の量で存在する。
【００４７】
そのような止血組成物は、ヘパリン中和剤、トロンビン、フィブリノゲン、フィブリン、第Ｘａ因子、又は第ＶＩＩａ因子など付加的な凝血促進剤又は止血剤を更に含んでもよい。「有効量」とは、その添加剤が添加される理由となる特性を組成物に与えるのに必要な量を意味する。有効量はまた、有害な生物学的作用を引き起こすことなく添加され得る最大量を限度とする。
【実施例】
【００４８】
実施例１−置換化学に基づくガルバーニ微粒子の調製
水媒体中：次の手順に従って銅を亜鉛粉末上に無電解コーティングすることにより、０．７５％の元素銅でコーティングした元素亜鉛ガルバーニ微粒子を調製した。
１）２２ｇの酢酸銅（ＩＩ）を秤量して１Ｌ容器内の脱イオン水８５０ｍＬに入れ、完全に溶解するまで攪拌する。
２）９３０ｇの元素亜鉛粉末（メジアン径：７〜１２マイクロメートル）を秤量して脱イオン水２７９０ｍＬを含む８Ｌビーカーに入れる。亜鉛粉末懸濁液又はスラリーを得るために６５０ＲＰＭ以上の速度で混合する。
３）連続混合下で、工程１の酢酸銅溶液を亜鉛粉末懸濁液に添加する。混合を１０分間継続する。
４）１マイクロメートルフィルタを備えたＭｉｎｉ−Ｎｕｔｓｃｈｅ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｄｒｙｅｒ−Ｂｅｎｃｈ  Ｔｏｐ（Ｐｏｐｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．（Ｓａｕｋｖｉｌｌｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ））に亜鉛−銅スラリーを投入する。
５）空中窒素（air nitrogen）（最大約３４４．７ｋＰａ（５０ｐｓｉ））でＦｉｌｔｅｒ  Ｄｒｙｅｒを加圧して水を除去する。
６）１Ｌの１００％エタノールを添加し、攪拌して濾過したガルバーニ微粒子を洗浄する。
７）加圧した空中窒素によってエタノールを除去する。
８）工程６及び７のエタノール洗浄工程を繰り返す。
９）２Ｌの１００％エタノールを使用して、工程６及び７を２回繰り返す。
１０）真空（約２１Ｈｇ）で約４時間、温度を最大６５℃まで漸進的に増加させ、定期的に攪拌して濾過したガルバーニ微粒子を乾燥させる。
１１）ふるいにかけて２００マイクロメートルを超えるサイズの粒子擬集体を全て除去して、０．７５％の元素銅でコーティングされた元素亜鉛ガルバーニ微粒子を生成する。
【００４９】
実施例２．ガルバーニ微粒子及びＯＲＣ止血ペースト対対照
ここで図１を参照すると、ＯＲＣ、ガルバーニ微粒子を含有する止血材、及び様々な対照など数個の試験されたシステムに対する平均止血時間（分）のデータが提示されている。通常、各止血材を使用して３回の実験を行った。エラーバーは標準偏差を示す。
【００５０】
この図及び以降の図において、ガルバーニ微粒子を指すために「ｅＰｏｗｄｅｒ」という表記が使用される。図では、ゼラチンペースト／０．００１％ガルバーニ微粒子溶液という表記が、２ｍＬの０．００１％ガルバーニ微粒子溶液と混合した、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）止血基質を含有する止血材に対応する。０．００１％ガルバーニ微粒子溶液とは、生理食塩水中のガルバーニ微粒子の０．００１（重量）％懸濁液のことである。この材料を使用した３回の試験中の１回では、止血に完全に失敗した。
【００５１】
図では、ゼラチンペースト／２ｍＬ食塩水という表記が、２ｍＬの食塩水と混合した、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）止血基質を含有する止血材に対応する。
【００５２】
この図では、ゼラチンペースト／ＥＶＩＴＨＲＯＭ（登録商標）という表記が、２ｍＬのＥＶＩＴＨＲＯＭ（登録商標）トロンビン溶液（８００〜１２００ＩＵ／ｍＬ）と混合した、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）止血基質を含有する止血材に対応する。ＥＶＩＴＨＲＯＭ（登録商標）はＥｔｈｉｃｏｎ，Ｉｎｃ．から入手可能であり、８００〜１２００ＩＵ（ｍＬ）のトロンビン局所用（ヒト）を含有している。主としてヒトトロンビンを含有するＥＶＩＴＨＲＯＭ（登録商標）溶液（Ｅｖｉｔｈｒｏｍ（登録商標）の全組成物は、ヒトトロンビン（８００〜１２００ＩＵ／ｍＬ）と、塩化カルシウムと、ヒトアルブミンと、マンニトールと、酢酸ナトリウムと、注射用蒸留水と、を含む）。
【００５３】
この図では、ＯＲＣ粉末／２ｍＬの０．００１％ガルバーニ微粒子溶液という表記が、２ｍＬの生理食塩水中のガルバーニ微粒子の０．００１（重量）％懸濁液と混合した、ＯＲＣ粉末を含有する止血材に対応する。
【００５４】
この図では、ＯＲＣ粉末／２ｍＬの食塩水という表記が、２ｍＬの生理食塩水と混合された、０．９８３ｇの量でＯＲＣ粉末を含有する止血材に対応する。
【００５５】
試験物品を調製するために、所望により指定の濃度でガルバーニ微粒子を含有する溶液又は懸濁液と対応するスカフォールド材を十分に混合した。使用した混合手順は、次の通りであった。１．コネクタを使用して、２ｍＬの生理食塩水を空の第１注射器に引き込む。２．対応するコネクタを使用して、空の第２注射器にＯＲＣ粉末を事前に充填する。３．第１注射器及び第２注射器を接続することにより、２つの成分を混合する。４．粘稠度が均一となるまで、組み合わせた材料を前後に押すことにより、成分の混合を継続し、これを創傷に塗布する。
【００５６】
創傷に塗布する直前に、次のように生理食塩水中でガルバーニ微粒子懸濁液を調製する。空の雄型注射器に乾燥ガルバーニ微粒子を事前に充填してから、空の雌型注射器に事前に充填された生理食塩水と混合する。６ｍＬ注射器から創傷上に１ｍＬの量のペーストを直接押し出すことによって、創傷にペーストを直ちに塗布する。
【００５７】
インビボブタ脾臓生検穿孔モデルを使用して止血活性調査を実行したが、その際、幅６ｍｍ×深さ３ｍｍで穿孔した創傷を脾臓に創り、この新たに創られた創傷部位に試験物品を塗布し、その後、指圧を加えて閉塞した（タンポン充填）。圧力を最初に３０秒間加え、電子タイマーを使用して時間を測った。３０秒のタンポン充填後、指圧を中断し、物品上のガーゼパッドを直ちに取り除いた。３０秒の止血評価期間が行われた。自由流れの出血が３０秒以内に観察されなかった場合、止血時間を何分何秒の形式で書き留め、その物品に関して試験を終えた。自由に流れる出血が観察された場合、止血が達成されるまで、又は試験期間が１０分に達するまで、更に３０秒のタンポン充填及び観察期間の間、圧力及びガーゼを再適用した。止血は、１０分未満における自由に流れる出血の停止によって判断された。陰性対照として、ガーゼパッドを用いた。
【００５８】
インビボブタ脾臓生検穿孔モデル［幅６ｍｍ×深さ３ｍｍ］を使用して、初期タンポン充填時間３０秒、観測時間３０秒、Ｎ＝３にて、止血活性を試験した。
【００５９】
図１に提示されるデータの解析は、ブタ脾臓生検穿孔モデル、食塩水を含むゼラチン、ガルバーニ微粒子止血材を含むゼラチンの平均止血時間が４．５分を超えることを示す。ＯＲＣ粉末系止血材の平均止血時間は５分を超えた。
【００６０】
トロンビンと混合したゼラチンをベースとする止血材は、予想通り２．５分という短い平均止血時間をもたらした。驚くべきことに、また予想に反して、ガルバーニ微粒子を含むＯＲＣ粉末をベースとする本発明の新しい止血材の平均止血時間は、わずか１．５分であった。
【００６１】
図１に示されるデータは、ガルバーニ微粒子と組み合わされたＯＲＣをベースとする止血材の強力な相乗的止血効果を示す。
【００６２】
実施例３．ガルバーニ微粒子及びＯＲＣ止血ペースト対対照
ここで図２を参照すると、ＯＲＣ、ガルバーニ微粒子を含有する止血材、及び様々な対照など数個の試験されたシステムに対する止血時間（秒）のデータが示されている。通常、各止血材を使用して３回の実験を行った。試験物品は、上記と同様の方法で調製した。エラーバーは標準偏差を示す。上記のインビボブタ脾臓生検穿孔モデル［幅６ｍｍ×深さ３ｍｍ］を使用して、初期タンポン充填時間３０秒、観測時間３０秒、Ｎ＝３にて、止血活性を試験した。
【００６３】
図では、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）／食塩水という表記が、２ｍＬの生理食塩水と混合した、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）止血基質を含有するゼラチン系止血材に対応する。この図では、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）／ＥＶＩＴＨＲＯＭ（登録商標）という表記が、２ｍＬのＥＶＩＴＨＲＯＭ（登録商標）トロンビン溶液（８００〜１２００ＩＵ／ｍＬ）と混合した、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）止血基質を含有するゼラチン系止血材に対応する。
【００６４】
図では、ＯＲＣ／２ｍＬの（０．００１％、０．０１ｍｇ／ｍＬ）ガルバーニ微粒子という表記は、０．０１ｍｇ／ｍＬのガルバーニ粒子を含有する、生理食塩水中のガルバーニ粒子懸濁液２ｍＬと混合した、ＯＲＣ粉末を含有する止血材に対応する。結果として生じる止血材中のガルバーニ微粒子の濃度は、０．０００６７％（０．００６７ｍｇ／ｍＬ）である。
【００６５】
図では、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）／２ｍＬの（０．００１％、０．０１ｍｇ／ｍＬ）ガルバーニ微粒子という表記は、０．０１ｍｇ／ｍＬのガルバーニ微粒子を含有する、生理食塩水中のガルバーニ粒子懸濁液２ｍＬと混合した、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）止血基質を含有する止血材に対応する。結果として生じる止血材中のガルバーニ微粒子の濃度は、０．０００２５％（０．００２５ｍｇ／ｍＬ）である。
【００６６】
図２に示されるデータの解析は、ガルバーニ微粒子を含有するＯＲＣ粉末をベースとする本発明の新しい止血材の平均止血時間がわずか５０秒であることを示している。このガルバーニ微粒子を含有するＯＲＣ粉末をベースとする止血材は、ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）、トロンビンを含有するＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）、ガルバーニ微粒子を含有するＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）よりも短い止血時間を呈した。
【００６７】
図２に示されるデータは、ガルバーニ微粒子と組み合わされたＯＲＣをベースとする止血材の強力な相乗的止血効果を示す。
【００６８】
実施例４．様々なガルバーニ微粒子濃度＋ＯＲＣ止血ペースト対対照
ここで図３を参照すると、２つの止血材群（具体的には、ゼラチンスカフォールドをベースとする止血材（ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）系）及びＯＲＣスカフォールをベースとする止血材）に対する平均止血時間（秒）のデータが提示されている。通常、各止血材を使用して８回の実験を行った。試験物品は、上記と同様の方法で調製した。エラーバーは標準偏差を示す。上記のインビボブタ脾臓生検穿孔モデル［幅６ｍｍ×深さ３ｍｍ］を使用して、初期タンポン充填時間３０秒、観測時間３０秒、Ｎ＝８にて、止血活性を試験した。
【００６９】
図では、最初の２つのバーが、ゼラチン（ＳＵＲＧＩＦＬＯＳ（登録商標）／食塩水）及びトロンビンと混合したゼラチン（ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）／ＥＶＩＴＨＲＯＭ（登録商標））から得た対照実験結果を示している。また、５種類の異なるガルバーニ微粒子濃度のガルバーニ微粒子と混合したゼラチンスカフォールド（ＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）系止血材と表記）から得たデータも示されている。基質中のガルバーニ微粒子の最終濃度は、０．０００１％（０．００１ｍｇ／ｍＬ）〜１％（１０ｍｇ／ｍＬ）の範囲であった。
【００７０】
図の右側には、ＯＲＣ系止血材（ＯＲＣ／食塩水混合物及び５種類の異なるガルバーニ微粒子濃度のガルバーニ微粒子と混合したＯＲＣ粉末を含む対照など）から得た結果を示す実験データが示される。基質中のガルバーニ微粒子の最終濃度は、０．０００１％（０．００１ｍｇ／ｍＬ）〜１％（１０ｍｇ／ｍＬ）の範囲であった。
【００７１】
図３に提示されるデータの解析は、トロンビンと混合したＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）を除く全てのＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）系止血材が２５０秒以上の平均止血時間を呈したことを示している。同様に、ＯＲＣ粉末／食塩水混合物は、２７５秒の平均止血時間を呈した。
【００７２】
それとは反対に、ガルバーニ微粒子と混合した、全てのＯＲＣ粉末をベースとする止血材は、全てのガルバーニ微粒子濃度において、５６〜１７４秒の範囲の短い平均止血時間を呈した。これらの平均止血時間は、トロンビンと混合したＳＵＲＧＩＦＬＯ（登録商標）から得た結果と概ね同等であり、基質中のガルバーニ微粒子の最終濃度（０．００１％、０．０１ｍｇ／ｍＬ）における平均止血時間は５６秒であり、これは、トロンビン含有止血剤の平均止血時間の２倍以上の速さであった。
【００７３】
図３に提示されるデータは、ガルバーニ微粒子と組み合わされたＯＲＣをベースとする止血材の強力な相乗的止血効果を示す。
【００７４】
実施例５．ガルバーニ粒子でコーティングされたＯＲＣ布地対対照
ここで図４を参照すると、ガルバーニ粒子でコーティングされたＯＲＣ布地ＮＵ−ＫＮＩＴの顕微鏡写真が示されている。図４ａは、光学顕微鏡像を示し、図４ｂは、５０倍の倍率でのＳＥＭ像を示し、図４ｃは、１５０倍の倍率でのＳＥＭ像を示す。ガルバーニ微粒子は、Ｎｕ−Ｋｎｉｔ布地の表面に見られる。
【００７５】
ここで図５を参照すると、結合剤を添加した、ガルバーニ粒子でコーティングされたＮｕ−Ｋｎｉｔ布地（１ｍｇ／ｃｍ２）、結合剤のみでコーティングされたＮｕ−Ｋｎｉｔ布地、純粋な未処理Ｎｕ−Ｋｎｉｔ布地に対する平均止血時間（秒）のデータが示されている。
【００７６】
結合剤溶液は、ＰＥＧ［ｍｗ：３３５０ダルトン］／ＰＥＧ［ｍｗ：８０００ダルトン］／ジクロルメタン（ＤＣＭ）で調製し、比率は、１ｇ：１ｇ：１００ｍＬ（Ｗ／Ｗ／Ｖ）であった。ガルバーニ微粒子は、０．１ｇ／３ｍＬの割合で結合剤溶液と十分に混合した。ガルバーニ微粒子／結合剤溶液は、事前に整えた７．６２ｃｍ×７．６２ｃｍ（３インチ×３インチ）のＳｕｒｇｉｃｅｌ  Ｎｕ−Ｋｎｉｔ（登録商標）吸収性止血布（ＥＴＨＩＣＯＮ，Ｉｎｃ．、ロット番号３４１８５８４、有効期限：２０１４年１２月）上に噴霧した。ガルバーニ微粒子でコーティングしたＳｕｒｇｉｃｅｌ  Ｎｕ−Ｋｎｉｔ（登録商標）は、層流フードで３時間空気乾燥させ、続いて３日間真空乾燥させた。
【００７７】
急性期ブタ脾臓切開止血モデルを使用して止血活性を試験した。直線切開口脾臓モデルにおいて、１５ｍｍ（長さ）×３ｍｍ（深さ）の切開口を脾臓に創り、新しく創った創傷部位に試験物品、続いて指圧を加えて閉塞した（タンポン充填）。圧力を最初に１分間適用し、電子タイマーを用いて時間を計った。１分の最初のタンポン充填後、指圧を中断し、物品上のガーゼパッドを直ぐに取り除いた。３０秒の止血評価期間が行われた。自由流れの出血が３０秒以内に観察されなかった場合、止血時間を書き留め、その物品に関して試験を終えた。自由に流れる出血が観察された場合、止血が達成されるまで、又は試験期間が１０分に達するまで、更に３０秒のタンポン充填及び観察期間の間、指圧及びガーゼを再適用した。１０分で、試験は完全な不良として中断され、未加工データに「＞１０：００」（１０分を超える）と記録された。止血は、１０分未満における自由に流れる出血の停止によって判断された。
【００７８】
上記のインビボブタ脾臓直線切開口モデル（布地試料サイズ３．８１ｃｍ×２．５４ｃｍ（１．５インチ×１インチ））を使用して、タンポン充填時間３０秒、観測時間３０秒、Ｎ＝１０にて、図５に示されるデータを収集した。エラーバーは標準偏差を示す。
【００７９】
図５に示されるデータの解析は、結合剤を添加した、ガルバーニ粒子でコーティングされたＯＲＣ系Ｎｕ−Ｋｎｉｔ布地が、結合剤のみでコーティングされたＮｕ−Ｋｎｉｔ布地及び純粋なＮｕ−Ｋｎｉｔ布地に対して著しく短い平均止血時間を呈したことを示す。図５に示されるデータは、ガルバーニ微粒子と組み合わされたＯＲＣをベースとする止血材の強力な相乗的止血効果を示す。
【００８０】
実施例６．高濃度のガルバーニ微粒子でコーティングされたＯＲＣ布地対対照
ここで図６を参照すると、上記と同一のＰＥＧ系結合剤を添加した、高濃度のガルバーニ微粒子でコーティングされたＮｕ−Ｋｎｉｔ布地（４．８ｍｇ／ｃｍ２）、結合剤のみでコーティングされたＮｕ−Ｋｎｉｔ布地、純粋なＮｕ−Ｋｎｉｔ布地に対する平均止血時間（秒）のデータが提示されている。試料は、上記と同じ結合剤濃度で同一のガルバーニ微粒子濃度（０．１ｇ／３ｍＬ）を使用して、上記の実施例５に記載した通りに調製した。コーティング工程は、個別に５回繰り返した。
【００８１】
インビボブタ部分腎切除モデルを使用して止血活性を試験した。その際、約２．５±１ｃｍ（直径）×１±０．５ｃｍ（深さ）の切開部を腎臓に創り、新たに創られた創傷部位に試験物品を塗布し、その後、指圧を加えて閉塞した（タンポン充填）。圧力を最初に１８０秒間加え、電子タイマーを使用して時間を測った。最初のタンポン充填後、指圧を中断し、物品上のガーゼパッドを直ぐに取り除いた。３０秒の止血評価期間が行われた。自由に流れる出血が３０秒以内に観察されなかった場合、止血時間を書き留め、その物品に関して試験を終えた。自由に流れる出血が観察された場合、止血が達成されるまで、又は試験期間が１０分に達するまで、更に３０秒のタンポン充填及び観察期間の間、指圧及びガーゼを再適用した。１２分の時点で完全な不良として試験を中断して、未加工データに「＞１２：００」（１２分を超える）と記録した。止血は、１２分未満における自由に流れる出血の停止によって判断した。
【００８２】
インビボブタ部分腎切除モデル（止血布試料サイズ７．６２ｃｍ×７．６２（３インチ×３インチ））を使用し、約２．５±１ｃｍ（深さ）×１±０．５ｃｍ、タンポン充填時間１８０秒、観測時間３０秒、Ｎ＝７にて、図６に示されるデータを収集した。エラーバーは標準偏差を示す。
【００８３】
図６に示されるデータの解析は、結合剤を添加した、高濃度のガルバーニ粒子でコーティングされたＯＲＣ系Ｎｕ−Ｋｎｉｔ布地が、結合剤のみでコーティングされたＮｕ−Ｋｎｉｔ布地及び未処理Ｎｕ−Ｋｎｉｔ布地に対して短い平均止血時間を呈したことを示す。図６に示されるデータは、ガルバーニ微粒子と組み合わされたＯＲＣをベースとする止血材の強力な相乗的止血効果を示す。
【００８４】
実施例７．血小板機能障害を有する動物モデルにおけるガルバーニ微粒子を含有する及び含有しない粉末状の様々なスカフォールド種類の比較
ここで図７を参照すると、数個の試験されたシステム（全て粉末状）に対する平均止血時間（分）のデータが提示されている。混合物は、粉末をボールミルミキサーに配置し、製品のミリング可能性に応じて約１０〜１２０分間合わせてミリングして対応する粉末を十分に混合することにより形成した。
【００８５】
上記のインビボブタ脾臓生検穿孔モデル［６ｍｍ×３ｍｍ］を使用して、初期タンポン充填時間３０秒、観測時間３０秒、Ｎ＝３又は４にて、図７に示されるデータを収集した。エラーバーは標準偏差を示す。
【００８６】
使用した動物モデルは、止血困難なブタの血小板機能障害モデル（雌、月齢４か月、６６．１Ｋｇ）であり、経口薬は、３００ｍｇのＰｌａｖｉｘ及び３２５ｍｇのアスピリン（実験２日前）、７５ｍｇのＰｌａｖｉｘ及び３２５ｍｇのアスピリン（実験１日前）、７５ｍｇのＰｌａｖｉｘ及び３２５ｍｇのアスピリン（実験当日）であった。
【００８７】
止血粉末混合物は、０．２ｇの量でバイアル瓶から出血部位に振りかけて塗布した。
【００８８】
図の左側には、ＯＲＣ系止血粉末（対照としてのＯＲＣ粉末及びＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）粉末とのＯＲＣ粉末混合物、並びに０．０１ｍｇ／ｇ及び０．１ｍｇ／ｇの濃度のガルバーニ微粒子を含有する、ＯＲＣ粉末及びＯＲＣ＋ＣＭＣ粉末混合物）に対するデータが提示されている。
【００８９】
ＣＭＣ粉末は、市販のセルロースガム（カルボキシメチルセルロースナトリウム、７Ｍ８ＳＦＰＨ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ）から作製した。
【００９０】
図の中央領域には、単独の、又は０．１ｍｇ／ｇの濃度のガルバーニ微粒子と組み合わされたレーヨン粉末、キトサン粉末、及びコラーゲン粉末を含む天然止血ポリマーをベースとするスカフォールドに対するデータが提示されている。
【００９１】
レーヨン粉末は、レーヨン繊維から作製した。
【００９２】
使用したキトサン粉末は、市販のキトサン（Ａｌｄｒｉｃｈ、バッチ番号１１１１４ＴＨ）から作製した。
【００９３】
コラーゲン粉末は、市販のＩｎｓｔａｔ  Ｐａｄ（コラーゲン吸収性止血材、ＥＴＨＩＣＯＮ，Ｉｎｃ．、ロット番号ＸＧＰ４００）から作製した。
【００９４】
レーヨン粉末、キトサン粉末、及びコラーゲン粉末は、上記のＯＲＣ粉末の作製方法と同一の方法でボールミリングにより作製したが、材料のミリング可能性に応じてミリング時間が１０〜１２０分であった。
【００９５】
図の右側には、Ｍｅｄａｆｏｒ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から市販されているＡｒｉｓｔａ粉末（デンプン系止血材）、Ｓｔａｒｃｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）から市販されているＰｅｒｃｌｏｔ粉末（デンプン系止血材）、及びＢｉｏｓｔｅｒ  Ａ．Ｓ．（Ｖｅｖｅｒｓｋａ，Ｃｚｅｃｈ  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ）から市販されているＴｒａｕｍａｓｔｅｍ粉末（酸化セルロース系止血材）など市販の止血粉末に対するデータが提示されている。
【００９６】
図７に示されている平均止血時間の解析は、粉末状において、ガルバーニ微粒子と組み合わされたＯＲＣをベースとする止血材に改善された相乗的止血効果が存在したことを示す。ＣＭＣ存在下では、ＯＲＣと組み合わされたガルバーニ微粒子の識別可能な相乗的止血効果は存在しなかった。
【００９７】
図７に示される平均止血時間の更なる解析は、粉末状において、単独の、又はガルバーニ微粒子と組み合わされたレーヨン粉末及びコラーゲン粉末の両方が貧弱な止血特性、つまり、相乗的な止血効果の欠如を示している。特に、組み込まれたガルバーニ微粒子を伴う帯電した生体高分子（キトサン）は、血小板機能障害を有する動物モデルにおいて、ガルバーニ微粒子存在下でより優れた止血効果を示した。
【００９８】
他の市販の止血粉末との更なる比較は、ＯＲＣ／ガルバーニ微粒子混合物及びキトサン／ガルバーニ微粒子混合物が、血小板機能障害を有する動物モデルにおいて、より良好な止血特性を呈することを示す。
【００９９】
実施例８．血小板機能障害を有する動物モデルにおけるガルバーニ微粒子を含有する及び含有しない粉末形態の様々なスカフォールド種類の比較
ここで図８を参照すると、実施形態７に記載した同一の止血困難なブタの血小板機能障害モデルについて数個の試験されたシステム（全てペースト形態）に対する平均止血時間（分）のデータが提示されている。上記のインビボブタ脾臓生検穿孔モデル［６ｍｍ×３ｍｍ］を使用し、初期タンポン充填時間３０秒、観測時間３０秒、Ｎ＝３又は４にて、図７に示されるデータを収集した。エラーバーは標準偏差を示す。
【０１００】
上記のＯＲＣ粉末を使用した。使用したゼラチン粉末は、Ｅｔｈｉｃｏｎ（Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，ＮＪ）から市販されているＳｕｒｇｉｆｏａｍ（登録商標）粉末をボールミリングして得た。ボールミリングしたゼラチンは、９７マイクロメートルの平均サイズを有した。混合物は、上記の混合注射器を使用して対応する粉末を水又は生理食塩水と十分に混合して調製した。
【０１０１】
図８に提示される平均止血時間の解析は、ペースト形態において、０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．１ｍｇ／ｍＬの濃度のガルバーニ微粒子と組み合わされたＯＲＣをベースとする止血材に改善された相乗的止血作用が存在したことを示す。
【０１０２】
脱イオン水と混合したゼラチン粉末（図にＤＤ  Ｈ２Ｏとして示される）又は食塩水と混合したゼラチンの場合、０．１ｍｇ／ｍＬでガルバーニ微粒子を添加したときに止血作用が著しく加速する。つまり、精製水又は食塩水のどちらかをベースとするゼラチンについても、ガルバーニ微粒子を添加したゼラチンペーストをベースとする止血材に対して相乗的な止血作用を示す。特に、食塩水を使用した場合、又は純水を使用した場合に違いはなかった。つまり、効果は溶液に依存しなかった。
【０１０３】
実施例９．ガルバーニ微粒子でコーティングされたＯＲＣ布地の殺菌効果
発明者らは、ガルバーニ微粒子でコーティングされたＯＲＣが、ＯＲＣのみの場合と比較してより良好な阻害ゾーン（ＺＯＩ）及び殺菌効果を示すことを実証する更なる調査を行った。ＺＯＩ評価は、次のように実行した。試料を１ｃｍ２片に切断した。接種細菌の一晩培養物を希釈して、約１０５ｃｆｕ／ｍＬを得た。この接種材料０．１ｍＬを無菌寒天平板上に配置し、表面塗布法を使用して均一に広げた。接種寒天表面上に移動させる前に、０．８５％生理食塩水を使用して、試料を若干水和した。試料を表面に平らに置き、接種材料と完全に接触するように注意した。平板は、３５℃で２４時間インキュベートした。２４時間後、試料の縁部から透明なゾーンの最も外側の縁部までを測定した。試料の周囲で４つの測定値を得て、平均を記録した。ゾーン測定後、試料を取り外し、上記のように新たに接種した平板上に移動させた。試料が試料の周囲に可視ゾーンを生成しなくなるまで毎日移動させた。
【０１０４】
試料の下の領域を拭き取って活性が殺菌性かどうかを判定するスワブ試験を実行した。スワブ試験は、ゾーン測定値を記録したら、試料を平板から取り外し、新たに接種した平板に移動させ、無菌綿棒を使用して試料の下の透明な領域を拭き取るという手順で実行した。スワブを無菌平板上に移動させ、この平板を２４時間インキュベートし、結果を記録した。スワブからの増殖は、静菌性（bacteristatic）活性を示し、増殖の欠如は、殺菌性活性を示した。
【０１０５】
ここで表２を参照すると、実施例５に記載したＯＲＣ系布地の試料のＺＯＩが示されている。試料は、移動前に０．８５％生理食塩水で水和した。表２に提示される実験の結果は、ガルバーニ微粒子含有ＯＲＣ布地が、ＯＲＣ布地又はＰＥＧ含有ＯＲＣ布地と比較して、細菌接種に対してより大きいＺＯＩ及び殺菌性活性を呈したことを示す。グラム陽性ＭＲＳＡに対する活性は最大２日間継続した。試料がゼラチン状塊に分解したため、これ以上の日数についてはこの活性を測定できなかった。
【０１０６】
ここで表３を参照すると、スワブ試験の結果（レンズ下での増殖）が示されている。表３に提示される実験の結果は、ガルバーニ微粒子含有ＯＲＣ布地が、ＯＲＣ布地又はＰＥＧ含有ＯＲＣ布地と比較した場合、細菌接種に対してより大きい殺菌効果を呈したことを示す。
【０１０７】
ここで表２を参照すると、実施例５に記載したＯＲＣ系布地の試料のＺＯＩが示されている。試料は、移動前に０．８５％生理食塩水で水和した。表２に提示される実験の結果は、ガルバーニ微粒子含有ＯＲＣ布地が、ＯＲＣ布地又はＰＥＧ含有ＯＲＣ布地と比較して、細菌接種に対してより大きいＺＯＩを呈したことを示す。
【０１０８】
ここで表３を参照すると、スワブ試験の結果（レンズ下での増殖）が示されている。表３に示される実験の結果は、ガルバーニ微粒子含有ＯＲＣ布地が、ＯＲＣ布地又はＰＥＧ含有ＯＲＣ布地と比較した場合、細菌接種に対してより大きい殺菌効果を呈したことを示す。
【０１０９】
【表１】
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＊試験は、試料の分解により終了した。
【０１１０】
【表２】
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【０１１１】
実施例１０−ヒト表皮等価物への抗炎症活性に関するガルバーニ微粒子でコーティングされたＯＲＣの局所適用効果は、次のように評価した。
【０１１２】
使用したガルバーニ微粒子は、実施例１に記載したものと同じであった。
【０１１３】
表皮等価物（ＥＰＩ  ２００  ＨＣＦ）（正常ヒト表皮ケラチノサイトからなる多層及び分化した表皮）は、ＭａｔＴｅｋ（Ａｓｈｌａｎｄ，ＭＡ）から得た。受領時に、表皮等価物を、ヒドロコルチゾンを含まない維持培地中で３７℃にて２４時間インキュベートした。酸化再生セルロース粉末（ＯＲＣ、実施例２で使用したものと同一）、ＣＭＣ粉末（７Ｍ８ＳＦＰＨ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ）、及びガルバーニ微粒子（実施例１で使用したものと同一）など試験材料を秤量して、表４に従って容器に入れた。試料番号１〜１３については、各粉末混合物に４ｍＬの生理食塩水を添加し、試料番号１４については、４ｍＬの脱イオン水を添加した。次いで、各試料をボルテックスミキサーで勢いよく混合して、均一の懸濁液を形成した。表４の括弧内の数字は、各試験試料の最終重量パーセントを示す。
【０１１４】
【表３】
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【０１１５】
太陽紫外光（１ｍｍ  Ｓｃｈｏｔｔ  ＷＧ  ３２０フィルタを備えた１０００ＷのＯｒｉｅｌ太陽シミュレータ、３６０ｎｍでの測定時の適用ＵＶ線量７０ｋＪ／ｍ２）に曝露する２時間前に、厳密に６マイクロリットルの各懸濁液をＭｉｔｅｋ表皮等価物の各ウェルに塗布して、炎症反応を誘発させた。試料は、１種類につき３個で実行した。等価物は、維持培地を使用して３７℃で２４時間インキュベートしてから、市販のキット（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ）を使用して、ＩＬ−１αサイトカイン放出について上清を２回分析した。試験結果を表５に示す。
【０１１６】
【表４】
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【０１１７】
ＯＲＣ粉末とガルバーニ微粒子との組み合わせが炎症性サイトカインＩＬ−１αの減少をもたらすことは、表５から見ることができる。過度の炎症が治癒障害と関係があることは周知である（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｗｏｕｎｄ  ｒｅｐａｉｒ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，Ｓ．Ａ．Ｅｍｉｎｇ，ｅｔ．ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２００７，Ｖｏｌ．１２７，ｐ５１４〜５２５）。ヒト被験者において特殊形態の電気刺激で阻害された炎症及び促進された治癒についても報告されている（Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｂｙ  ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ：Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅ  ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  ｗａｖｅｆｏｒｍ  ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｉｎ  ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｐｕｎｃｈ  ｂｉｏｐｓｉｅｓ  ｉｎ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒ  ｓｔｕｄｙ，Ａ．Ｓｅｂａｓｔｉａｎ，ｅｔ．ａｌ．，Ｗｏｕｎｄ  Ｒｅｐａｉｒ  ａｎｄ  Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，２０１１，Ｖｏｌ．１９，ｐ６９３〜７０８）。この試験の結果は、ＯＲＣ粉末とガルバーニ微粒子との組み合わせが、改善された止血効果に加えて、治癒の促進という利益をもたらし得ることを示す。
【０１１８】
実施例１１．インビトロ凝固調査におけるＯＲＣ及びガルバーニ微粒子対対照
卓上実験において、ＯＲＣ粉末のみ及びガルバーニ微粒子と組み合わせたＯＲＣ粉末を試験してヘパリン化ブタ血液との相互作用を評価した。９０００ＩＵのヘパリン溶液を最初に４５．９ｋｇの雌ブタに塗布した。必要に応じて２０００ＩＵヘパリン溶液を追加注入して、活性化凝固時間（ＡＣＴ）を３００秒超に維持した。
【０１１９】
血液は、３．２％のクエン酸ナトリウムを使用して、血液４．５ｍＬ：３．２％のクエン酸ナトリウム０．５ｍＬの割合でＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）管に保管した。次いで、試験前に、１：１（Ｖ／Ｖ）の割合で生理食塩水を使用して血液を希釈した。凝固試料は、１ｍｇのＯＲＣ粉末又は１ｍｇのＯＲＣ＋ガルバーニ微粒子を（ＯＲＣ１ｇをガルバーニ微粒子０．１ｍｇと組み合わせる混合比で）ガラススライドの表面でそれぞれ２０μＬの血液滴に添加することにより調製した。ＯＲＣ粉末＋ガルバーニ微粒子では、数秒以内に凝固を示す褐色のゼラチン状塊を観測したが、ＯＲＣ粉末のみでは、約２分後であっても、薄い褐色の、著しく遅い凝固を観測した。これは、ＯＲＣ粉末／ガルバーニ微粒子がＯＲＣのみよりも迅速な血液凝固を促進したことを示した。
【０１２０】
別の卓上実験で正常の非ヘパリン化ブタ血液を使用して、同様の観測結果を得た。血液は、３．２％のクエン酸ナトリウムを使用して、血液４．５ｍＬ：３．２％のクエン酸ナトリウム０．５ｍＬの割合でＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）管に保管した。
【０１２１】
血液は、使用前に１：１の体積比で生理食塩水を使用して希釈した。ＯＲＣ粉末、ＯＲＣ粉末／ガルバーニ微粒子（ＯＲＣ  １ｇ／ガルバーニ微粒子０．１ｍｇの割合）、ガルバーニ微粒子、及び生理食塩水の対照溶液を試験して、血液との相互作用と凝固を評価した。試料は、希釈ブタ血液２ｍＬの入った別のガラス製バイアル瓶にＯＲＣ  １００ｍｇ、ＯＲＣ＋ガルバーニ微粒子１００ｍｇ、又は上記のガルバーニ微粒子０．０１ｍｇを添加して調製した。血液及び試料の入った各バイアル瓶をゆっくり３回ひっくり返し、台の上に９０秒間置いた。９０秒後に各バイアル瓶の凝固を観測した。生理食塩水の対照溶液及びガルバーニ微粒子の入ったバイアル瓶では、凝固は観測されなかった。ＯＲＣ＋ガルバーニ微粒子の入ったバイアル瓶では、より完全な血液の凝固を観測した。ＯＲＣのみの入ったバイアル瓶では、完全性の低い血液の凝固を観測した。
【０１２２】
上記の実施例は本発明の特定の実施形態を示すが、これらは本発明の範囲を限定するものとしてではなく、発明を十分に説明するのに寄与するものとして解釈すべきである。
【０１２３】
〔実施の態様〕
（１）  ａ）少なくとも２種類の異種金属を含む、少なくとも１つのガルバーニ微粒子と、ｂ）多糖類系生体適合性止血スカフォールドと、を含む、止血材。
（２）  前記ガルバーニ微粒子が銅及び亜鉛を含む、実施態様１に記載の止血材。
（３）  前記スカフォールドが酸化再生セルロース、キトサン、又はこれらの混合物を含む、実施態様１に記載の止血材。
（４）  前記スカフォールドが粉末形態、織形態、又は不織形態である、実施態様３に記載の止血材。
（５）  前記スカフォールドの１ｇ当たり０．０１〜１０ｍｇのガルバーニ微粒子を含む、実施態様４に記載の止血材。
【０１２４】
（６）  前記スカフォールドが布地である、実施態様３に記載の止血材。
（７）  前記布地が織布又は不織布であり、かつ前記止血材が結合剤を更に含む、実施態様６に記載の止血材。
（８）  前記結合剤がポリエチレングリコールである、実施態様７に記載の止血材。
（９）  前記スカフォールドの１平方ｃｍ当たり０．０１〜１０ｍｇのガルバーニ微粒子を含む、実施態様８に記載の止血材。
（１０）  創傷部位に止血処置を施す方法であって、
（ａ）スカフォールドと、ガルバーニ微粒子と、所望により混合媒体と、を含む止血材を形成する工程と、
（ｂ）該創傷部位に該止血材を直ちに塗布する工程と、を含む、方法。
【０１２５】
（１１）  止血材の作製方法であって、
（ａ）少なくとも２種類の異種金属から作製される粒子を含む少なくとも１つのガルバーニ微粒子及び止血スカフォールドを準備する工程と、
（ｂ）該スカフォールド内、又は該スカフォールドの表面上に該ガルバーニ微粒子を分散させる工程と、を含む、方法。
（１２）  前記スカフォールドがＯＲＣ又はキトサンを含む、実施態様１１に記載の方法。
（１３）  複数のガルバーニ微粒子が、前記スカフォールド全体に実質的に均一に分散される、実施態様１１に記載の方法。
（１４）  複数のガルバーニ微粒子が、前記スカフォールドの少なくとも１つの主表面に提供される、実施態様１１に記載の方法。
（１５）  水を準備する工程と、該水をＯＲＣ及び前記少なくとも１つのガルバーニ微粒子と混合する工程と、を更に含む、実施態様１２に記載の方法。
【０１２６】
（１６）  前記スカフォールドが布地である、実施態様１５に記載の方法。
（１７）  結合剤を準備し、該結合剤及び前記少なくとも１つのガルバーニ微粒子を前記布地に塗布する工程と、前記ガルバーニ微粒子を前記布地に結合させる工程と、を更に含む、実施態様１６に記載の方法。
（１８）  前記結合剤がポリエチレングリコールである、実施態様１７に記載の方法。
（１９）  前記止血材が、血小板障害血液若しくはヘパリン化血液を有する患者又は凝固阻止剤若しくは凝集阻止剤を含む患者に使用される、実施態様１８に記載の方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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