(57)【要約】  本発明は、ハロフジノールならびにその誘導体および塩、たとえば、そのジアステレオマー濃縮した組成物を提供する。本発明はまた、その医薬組成物および化粧料組成物のほか、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、ドライアイ症候群、線維症、瘢痕形成、血管新生、ウイルス感染症、マラリア、虚血障害、移植拒絶反応、神経変性疾患、Ｔ細胞新生物および化粧状態の処置における、ハロフジノールおよびその誘導体の使用方法も提供する。
2015506363.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2015506363.tif 000041
（式中、
Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基であり；
Ｒ２はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＡ、−Ｎ（ＲＣ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基であり；
Ｒ３はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＤ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基であり；
Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＡおよびＲＢは独立に水素、ヒドロキシル保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；
ＲＣは水素、アミノ保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；あるいは２つのＲＣはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＤは水素、アミノ保護基、アシルまたはアルキルであるか；あるいは２つのＲＤはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ｎは０、１、２、３または４であり；かつ
ｍは０または１である）
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
下記式（ＩＩ）の化合物：
【化２】
2015506363.tif 000042
（式中、
Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基であり；
Ｒ２は−ＯＲＡまたは−Ｎ（ＲＣ）２であり；
Ｒ３は−ＯＲＢまたは−Ｎ（ＲＤ）２であり；
Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり、式中、ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＡおよびＲＢは独立に水素、ヒドロキシル保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；
ＲＣは水素、アミノ保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであるか；あるいは２つのＲＣはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＤは水素、アミノ保護基、アシルまたはアルキルであるか；あるいは２つのＲＤはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ｎは０、１、２、３または４であり；かつ
ｍは０または１である）
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１は水素である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１は保護基である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１はアシルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１はＣ１〜６アルキルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２は−ＯＲＡである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２は−ＯＨである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２は−Ｏアシルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２は−Ｏアルキルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１１】
ＲＡはＣ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１２】
ＲＡはヒドロキシル保護基である、請求項７に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２は−Ｎ（ＲＣ）２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ２は−ＮＨＲＣである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ２は−ＮＨ２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１６】
ＲＣはＣ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
ＲＣはアミノ保護基である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ３は−ＯＲＢである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ３は−ＯＨである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ３は−Ｏアシルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ３は−Ｏアルキルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２２】
ＲＢはＣ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２３】
ＲＢはヒドロキシル保護基である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ３は−Ｎ（ＲＤ）２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ３は−ＮＨＲＤである、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ３は−ＮＨ２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項２７】
ＲＤはＣ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
ＲＤはアミノ保護基である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２９】
ｎは０である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項３０】
ｎは１である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項３１】
ｎは２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ４は各々ハロゲンである、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
１つのＲ４はブロモであり、他方のＲ４はクロロである、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ４は任意選択的に置換されたアルキニルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ４はエチニルである、請求項３４に記載の化合物。
【請求項３６】
ｍは０である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項３７】
ｍは１である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項３８】
前記化合物は下記式の化合物：
【化３】
2015506363.tif 000043
である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項３９】
前記化合物は下記式の化合物：
【化４】
2015506363.tif 000044
である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４０】
Ｒ１は水素であり、Ｒ２およびＲ３は−ＯＨである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４１】
前記化合物は下記式の化合物：
【化５】
2015506363.tif 000045
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４２】
前記化合物は下記式の化合物：
【化６】
2015506363.tif 000046
またはその薬学的に許容される塩である、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
前記化合物は下記式の化合物：
【化７】
2015506363.tif 000047
またはその薬学的に許容される塩である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４４】
前記化合物は下記式の化合物：
【化８】
2015506363.tif 000048
またはその薬学的に許容される塩である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４５】
前記化合物は下記式の化合物：
【化９】
2015506363.tif 000049
またはその薬学的に許容される塩である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４６】
前記化合物は下記式の化合物：
【化１０】
2015506363.tif 000050
またはその薬学的に許容される塩である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４７】
前記化合物は下記式の化合物：
【化１１】
2015506363.tif 000051
またはその薬学的に許容される塩である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４８】
前記化合物は下記式の化合物：
【化１２】
2015506363.tif 000052
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４９】
前記化合物は下記式の化合物：
【化１３】
2015506363.tif 000053
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５０】
前記化合物は下記式の化合物：
【化１４】
2015506363.tif 000054
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５１】
前記化合物は下記式の化合物：
【化１５】
2015506363.tif 000055
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５２】
前記化合物は下記式の化合物：
【化１６】
2015506363.tif 000056
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５３】
前記化合物は下記式の化合物：
【化１７】
2015506363.tif 000057
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５４】
下記式（ＩＩＩ）の化合物：
【化１８】
2015506363.tif 000058
（式中、
Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基であり；
Ｒ２はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＡ、−Ｎ（ＲＣ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基であり；
Ｒ３は−ＯＲＢであり；
Ｒ３’はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルケニルまたはＣ１〜６アルキニルであり；
Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＡおよびＲＢは独立に水素、ヒドロキシル保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；
ＲＣは水素、アミノ保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであるか；あるいは２つのＲＣはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ｎは０、１、２、３または４であり；かつ
ｍは０または１である）
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５５】
Ｒ３は−ＯＨである、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５６】
Ｒ１は水素である、請求項５４または５５に記載の化合物。
【請求項５７】
Ｒ２は−ＯＨである、請求項５４〜５６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５８】
ｍは１である、請求項５４〜５７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５９】
ｎは０である、請求項５４〜５８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６０】
ｎは２である、請求項５４〜５８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６１】
Ｒ４の各例はハロゲンである、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
１つのＲ４はブロモであり、他方はクロロである、請求項６１に記載の化合物。
【請求項６３】
Ｒ３’はＣ１〜６アルキルである、請求項５４〜６２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６４】
Ｒ３’はＣ１〜３アルキルである、請求項６３に記載の化合物。
【請求項６５】
Ｒ３’はメチルである、請求項６４に記載の化合物。
【請求項６６】
Ｒ３’はＣ１〜６アルケニルである、請求項５４〜６２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６７】
Ｒ３’はＣ１〜３アルケニルである、請求項６６に記載の化合物。
【請求項６８】
Ｒ３’はアリルである、請求項６７に記載の化合物。
【請求項６９】
前記化合物は単離されている、請求項１〜６８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７０】
前記化合物は他のジアステレオマーを実質的に含まない、請求項１〜６９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７１】
前記化合物は実質的に純粋である、請求項１〜７０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７２】
請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩；および任意選択的に薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項７３】
プロ炎症性サイトカインの発現または活性を阻害する第２の作用物質をさらに含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７４】
前記プロ炎症性サイトカインはＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１α、ＩＬ−ＩβおよびＩＬ−２３の１つまたは複数から選択される、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
前記プロ炎症性サイトカインはＴＮＦαである、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
ＴＮＦαを阻害する前記作用物質は抗ＴＮＦα抗体または可溶性ＴＮＦ受容体を含む、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
前記プロ炎症性サイトカインはＩＬ−６またはＩＬ−２１である、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７８】
第２の抗炎症薬をさらに含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７９】
前記第２の抗炎症薬は小分子である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
前記第２の抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症薬である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８１】
前記第２の抗炎症薬はステロイド系抗炎症薬である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８２】
前記第２の抗炎症薬はラパマイシンまたはその誘導体である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８３】
前記第２の抗炎症薬はサリドマイド、レナリドマイドまたはその誘導体である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８４】
第２の抗炎症薬はメトホルミンまたは別のビグアナイドである、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８５】
前記第２の抗炎症薬はＨＤＡＣ阻害剤である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８６】
請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその塩；および任意選択的に化粧品として許容される賦形剤を含む化粧料組成物。
【請求項８７】
グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼを請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物と接触させることを含む、グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼを阻害する方法。
【請求項８８】
前記グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼはインビトロで接触される、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼは精製されている、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼは細胞内で接触される、請求項８７に記載の方法。
【請求項９１】
前記グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼは被検体内で接触される、請求項８７に記載の方法。
【請求項９２】
Ｔｈ１７介在性状態を処置する方法であって、それを必要とする被検体に請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその組成物を投与することを含む方法。
【請求項９３】
前記Ｔｈ１７介在性状態は自己免疫疾患、ドライアイ症候群、線維症、瘢痕形成、血管新生、虚血障害、炎症性疾患および神経変性疾患からなる群から選択される、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記Ｔｈ１７介在性状態はセルライトまたは皮膚線条から選択される、請求項９２に記載の方法。
【請求項９５】
プロ炎症性サイトカインの発現または活性を阻害する第２の作用物質を投与することをさらに含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９６】
前記プロ炎症性サイトカインはＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１α、ＩＬ−ＩβおよびＩＬ−２３の１つまたは複数から選択される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記プロ炎症性サイトカインはＴＮＦαである、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
ＴＮＦαを阻害する前記作用物質は抗ＴＮＦα抗体または可溶性ＴＮＦ受容体を含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記プロ炎症性サイトカインはＩＬ−６またはＩＬ−２１である、請求項９５に記載の方法。
【請求項１００】
第２の抗炎症薬をさらに含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項１０１】
前記第２の抗炎症薬は小分子である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記第２の抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症薬である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記第２の抗炎症薬はステロイド系抗炎症薬である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０４】
前記第２の抗炎症薬はラパマイシンまたはその誘導体である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０５】
前記第２の抗炎症薬はサリドマイド、レナリドマイドまたはその誘導体である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０６】
第２の抗炎症薬はメトホルミンまたは別のビグアナイドである、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０７】
前記第２の抗炎症薬はＨＤＡＣ阻害剤である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０８】
グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ介在性状態を処置する方法であって、それを必要とする被検体に請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその組成物を投与することを含む方法。
【請求項１０９】
前記グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ介在性状態はコラーゲン合成を含む、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
線維症を処置する方法であって、請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその組成物を被検体に投与することを含む方法。
【請求項１１１】
移植用のドナー臓器を保護する方法であって、前記臓器を請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその組成物と接触されることを含む方法。
【請求項１１２】
ＡＡＲ介在性状態を処置する方法であって、それを必要とする被検体に請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその組成物を投与することを含む方法。
【請求項１１３】
前記ＡＡＲ介在性状態は線維症、瘢痕形成、自己免疫疾患、ドライアイ症候群、移植片対宿主病、血管新生、癌、黄斑変性、脈絡膜血管新生、喘息、慢性炎症、循環器疾患、糖尿病、ウイルス感染、マラリア、原虫感染症、真菌感染、セルライトおよび皮膚線条からなる群から選択される、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記自己免疫疾患は多発性硬化症、関節リウマチ、ループス、乾癬、強皮症またはドライアイ症候群から選択される、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記ＡＡＲ介在性状態はウイルス感染である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１６】
セルライトを処置する方法であって、それを必要とする被検体に請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその組成物を投与することを含む方法。
【請求項１１７】
原生動物疾患を処置する方法であって、それを必要とする被検体に請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその組成物を投与することを含む方法。
【請求項１１８】
Ｔ細胞新生物を処置する方法であって、それを必要とする被検体に請求項１〜７１のいずれか１項に記載の化合物またはその組成物を投与することを含む方法。
【請求項１１９】
前記Ｔ細胞新生物は成熟Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、Ｔ細胞大顆粒リンパ性白血病（Ｔ−ＬＧＬ）、ＮＫ細胞の慢性リンパ増殖性疾患、侵攻性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、結節性末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、特定不能の末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ−ＮＯＳ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陽性）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ、ＡＬＫ陰性）、節外性ＰＴＣＬ、節外性ＮＫ細胞／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型腸管症関連Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、脾臓Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＬ）、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫（ＳＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、菌状息肉腫（ＭＦ）、セザリー症候群（ＳＳ）、原発性皮膚ＣＤ３０＋Ｔ細胞リンパ増殖性疾患、原発性皮膚ＡＬＣＬ（Ｃ−ＡＬＣＬ）、リンパ腫様丘疹症（ＬＹＰ）、原発性皮膚ＰＴＣＬ、γδＴ細胞リンパ腫、ＣＤ８＋進行性表皮向性細胞傷害性、およびＣＤ４＋小／中細胞型からなる群から選択される、請求項１１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に基づき、本明細書に援用する２０１２年１月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／５８６，２７１号明細書に対する優先権を主張する。
【０００２】
政府支援
本発明は、米国国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）が交付するＧＭ０８９８８５による米国政府支援を受けてなされた。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
ハロフジノンは、アジサイのジョウザンアジサイ（Ｄｉｃｈｒｏａ  ｆｅｂｒｉｆｕｇａ）の根から抽出される天然物フェブリフジンのハロゲン化誘導体である。ジョウザンアジサイ（Ｄｉｃｈｒｏａ  ｆｅｂｒｉｆｕｇａ）は、伝統的な漢方薬の「５０種の基本的草本（ｆｉｆｔｙ  ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  ｈｅｒｂｓ）」の１つであり、元々抗マラリア治療薬として使用されてきた（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（２００５）４９：１１６９−１１７６）。７−ブロモ−６−クロロ−３−［３−（３−ヒドロキシ−２−ピペリジニル）−２−オキソプロピル］−４（３Ｈ）−キナゾリノンとも呼ばれるハロフジノン、およびハロフジノン誘導体は、本明細書に援用する米国特許第２，６９４，７１１号明細書に最初に記載された。フェブリフジンは、ジョウザンアジサイ（Ｄｉｃｈｒｏａ  ｆｅｂｒｉｆｕｇａ）抽出物の活性成分であることが示されており、ハロフジノンは当初、フェブリフジンより毒性の低い抗マラリア誘導体を求めて合成された。一方、ハロフジノンは、その抗マラリア性に加えてインビボで顕著な抗線維性を有する（本明細書に援用するＰｉｎｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（２００３）９：４１７−４２５；米国特許第６，０２８，０７５号明細書）。ハロフジノンは、ヒトにおいて、悪心、嘔吐および疲労などの一部毒性、場合によっては出血性合併症を示す（ｄｅ  Ｊｏｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（２００６）４２：１７６８−１７７４）。
【化１】
2015506363.tif 000003
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ハロフジノンは有望な生物活性を示すので、有用な生物活性、特に低い毒性または高い安定性などハロフジノンを上回る利点を有し得る生物活性を持つ、関連する新たな化合物を同定することが依然として求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
ハロフジノールおよび関連する化合物は、驚くべき生物活性を有することが分かっている。本明細書に記載の化合物は、ハロフジノンまたはフェブリフジンより望ましい特性を有し得る。たとえば、本発明の化合物は、ハロフジノンまたはフェブリフジンより毒性が低くてもよく、および／または本発明の化合物はハロフジノンまたはフェブリフジンより強力であってもよい。いくつかの実施形態では、提供する化合物は、ハロフジノンまたはフェブリフジンより安定である。他の実施形態では、提供する化合物はハロフジノンまたはフェブリフジンと比較して物理化学的特性の改善および／またはＤＭＰＫ特性の改善を示す。特定の実施形態では、提供する化合物はハロフジノンまたはフェブリフジンより溶解性が高い。ハロフジノールおよび本発明の他の化合物は、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、ドライアイ症候群、線維症、瘢痕形成、血管新生、ウイルス感染症、マラリア、虚血障害、移植片およびインプラント拒絶反応、神経変性疾患の処置、および化粧料用途に有用である。提供する化合物の医薬組成物および化粧料組成物のほか、そうした化合物および組成物の使用方法も本発明により提供される。
【０００６】
一態様では、本発明の化合物は一般に下記式の化合物：
【化２】
2015506363.tif 000004
（式中、
Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基であり；
Ｒ２はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＡ、−Ｎ（ＲＣ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基であり；
Ｒ３はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＤ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基であり；
Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＡおよびＲＢは独立に水素、ヒドロキシル保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；
ＲＣは水素、アミノ保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであるか；あるいは２つのＲＣはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＤは水素、アミノ保護基、アシルまたはアルキルであるか；あるいは２つのＲＤはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ｎは０、１、２、３または４であり；かつ
ｍは０または１である）
またはその薬学的に許容される塩である。
【０００７】
別の態様では、本発明の化合物は一般に下記式の化合物：
【化３】
2015506363.tif 000005
（式中、
Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基であり；
Ｒ２は−ＯＲＡまたは−Ｎ（ＲＣ）２であり；
Ｒ３は−ＯＲＢまたは−Ｎ（ＲＤ）２であり；
Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり、式中、ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＡおよびＲＢは独立に水素、ヒドロキシル保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；
ＲＣは水素、アミノ保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであるか；あるいは２つのＲＣはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＤは水素、アミノ保護基、アシルまたはアルキルであるか；あるいは２つのＲＤはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ｎは０、１、２、３または４であり；かつ
ｍは０または１である）
またはその薬学的に許容される塩である。
【０００８】
別の態様では、本化合物は一般に下記式の化合物：
【化４】
2015506363.tif 000006
（式中、
Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基であり；
Ｒ２はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＡ、−Ｎ（ＲＣ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基であり；
Ｒ３は−ＯＲＢであり；
Ｒ３’はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルケニルまたはＣ１〜６アルキニルであり；
Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＡおよびＲＢは独立に水素、ヒドロキシル保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；
ＲＣは水素、アミノ保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであるか；あるいは２つのＲＣはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＤは水素、アミノ保護基、アシルまたはアルキルであるか；あるいは２つのＲＤはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ｎは０、１、２、３または４であり；かつ
ｍは０または１である）
またはその薬学的に許容される塩である。
【０００９】
どのような特定の理論にも拘泥するわけではないが、提供する化合物は、ｔＲＮＡシンテターゼ（たとえば、ＥＰＲＳ）の活性部位に結合することで、プロリンがｔＲＮＡに取り込まれるのを阻害することにより作用すると考えられる。本発明はまた、本発明の化合物を調製する方法も提供する。提供する化合物は、市販されている出発材料から全合成により調製しても、ハロフジノンまたはフェブリフジンなどの化合物を出発材料として半合成プロセスにより調製してもよい。本発明はまた、ハロフジノールおよびその誘導体を合成する方法も提供する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、提供する化合物を被検体に投与することを含む処置方法を提供する。特定の理論に拘泥するわけではないが、本発明の化合物は、グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ（ＥＰＲＳ）またはプロリルｔＲＮＡシンテターゼを阻害することにより作用すると考えられる。本発明の化合物またはその医薬組成物は、自己免疫疾患、たとえば多発性硬化症、関節リウマチ、ループス、乾癬、強皮症またはドライアイ症候群、炎症性疾患、循環器疾患、神経変性疾患、タンパク質凝集性疾患（ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）および血管新生を含む障害、たとえば癌、再狭窄、黄斑変性および脈絡膜血管新生など任意の疾患を処置するために使用することができる。提供する化合物はまた、マラリアの処置に使用してもよい。提供する化合物はまた、Ｔ細胞新生物、たとえば成熟Ｔ細胞白血病、結節性末梢Ｔ細胞リンパ腫（ｎｏｄａｌ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）（ＰＴＣＬ）、節外性ＰＴＣＬおよび皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）の処置に使用してもよい。本発明の化合物はまた、創傷治癒の促進および／または瘢痕化の防止にも使用することができ、さらにセルライトまたは皮膚線条の処置または予防などのため美容上有用であり得る。したがって、提供する化合物は、美容処置および医療処置に使用することができる。本発明の化合物は、ヒトおよび飼い慣らされた動物を含む他の動物の疾患を処置または予防するために使用することができる。特定の実施形態では、本発明の化合物は、線維芽細胞における線維化促進挙動の阻害、またはＴｈ１７細胞の分化の阻害のために使用することができる。したがって、提供する化合物は、線維症の防止に有用であり得る。提供する化合物はまた、生物学的経路のプローブとしても使用することができる。提供する化合物はまた、Ｔ細胞の分化の研究にも使用することができる。
【００１１】
提供する方法のいくつかの実施形態では、プロ炎症性サイトカインの発現または活性を阻害する第２の作用物質を被検体に投与する。いくつかの実施形態では、プロ炎症性サイトカインは、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−２３の１つまたは複数から選択される。提供する方法のいくつかの実施形態では、ＩＬ−６またはＩＬ−２１の発現または活性を阻害する第２の作用を被検体に投与する。いくつかの実施形態では、ＴＮＦαを阻害する第２の作用物質を被検体に投与する。いくつかの実施形態では、ＴＮＦαを阻害する作用物質は抗ＴＮＦα抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦαを阻害する作用物質は可溶性ＴＮＦ受容体である。提供する方法の他の実施形態では、免疫調節薬（たとえば、ステロイド、非ステロイド系抗炎症薬、ラパマイシン、ＦＫ５０６、シクロスポリン、ＨＤＡＣ阻害剤）である第２の作用物質を被検体に投与する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、提供する化合物を含む医薬組成物および化粧料組成物を提供する。提供する組成物は、Ｔｈ１７分化を抑制する、および／または、自己免疫疾患、炎症性疾患、循環器疾患、神経変性疾患、タンパク質凝集性疾患、線維症、セルライト、皮膚線条、マラリアまたは血管新生を含む障害、たとえば癌、再狭窄、黄斑変性、脈絡膜血管新生およびＴ細胞新生物を処置もしくは予防する治療有効量で本発明の化合物を含んでもよい。提供する医薬組成物は任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤を含んでもよい。提供する化粧料組成物は任意選択的に、化粧品として許容される賦形剤を含んでもよい。いくつかの実施形態では、提供する医薬組成物は、プロ炎症性サイトカインの発現または活性を阻害する第２の作用物質をさらに含む。いくつかの実施形態では、プロ炎症性サイトカインは、ＩＬ−６、Ｉ−２１、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−２３の１つまたは複数から選択される。本発明の化合物、またはその医薬組成物もしくは化粧料組成物の経口投与、非経口投与、吸入投与および局所投与を含む任意の投与モードを使用してもよい。
【００１３】
本出願に引用された参考文献、科学論文、特許出願および特許は、本明細書に援用する。
【００１４】
定義
具体的な官能基および化学用語の定義について以下により詳細に記載する。本発明において、化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  Ｅｄ．，ｉｎｓｉｄｅ  ｃｏｖｅｒにより特定され、個々の官能基は一般にそこに記載された通りに定義される。加えて、有機化学の一般原理ならびに特定の官能部分および反応性は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第５版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載されている。
【００１５】
本発明の化合物は、特定の幾何学的形状または立体異性体として存在し得る。本発明は、シスおよびトランス異性体、Ｒ−およびＳ−エナンチオマー、ジアステレオマー、（ｄ）−異性体、（ｌ）−異性体、これらのラセミ混合物、ならびにこれらの他の混合物を含むそうしたすべての化合物を本発明の範囲内に包含することを意図している。
【００１６】
ある異性体／エナンチオマーが好ましい場合、いくつかの実施形態では、対応するエナンチオマーを実質的に含まない異性体／エナンチオマーを提供してもよく、これを「光学的に濃縮した」または「エナンチオマー濃縮した」ということもある。「光学的に濃縮した」および「エナンチオマー濃縮した」は、本明細書で使用する場合、提供する化合物が非常に高い割合の１つのエナンチオマーからなることを意味する。特定の実施形態では、本発明の化合物は少なくとも約７０重量％の好ましいエナンチオマーからなる。特定の実施形態では、本発明の化合物は少なくとも約８０重量％の好ましいエナンチオマーからなる。特定の実施形態では、本発明の化合物は少なくとも約９０重量％の好ましいエナンチオマーからなる。他の実施形態では、本化合物は少なくとも約９５重量％、９８重量％または９９重量％の好ましいエナンチオマーからなる。好ましいエナンチオマーは、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびにキラル塩の形成および結晶化など当業者に公知の任意の方法によりラセミ混合物から単離しても、あるいは不斉合成により調製してもよい。たとえば、Ｊａｃｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）；Ｗｉｌｅｎ，Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ，ＩＮ  １９７２）を参照されたい。
【００１７】
他に記載がない限り、本明細書に図示される構造はさらに、１つまたは複数の同位体濃縮した原子の存在のみが異なる化合物を含むことも意図している。たとえば、水素とジュウテリウムまたはトリチウムとの置換、または炭素と１３Ｃまたは１４Ｃ濃縮した炭素との置換を含む本構造を有する化合物は、本発明の範囲内にある。そうした化合物は、たとえば、分析ツールとして、生物学的アッセイのプローブとして、または本発明による治療薬として有用である。
【００１８】
「精製された」、「実質的に精製された」、および「単離された」という用語は、本明細書で使用する場合、本発明の化合物がその天然状態で通常結合している他の異なる化合物を含まないので、本発明の化合物が、所定のサンプルの重量の少なくとも０．５％、１％、５％、１０％、２０％、５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％を構成することをいう。好ましい一実施形態では、これらの用語は、本発明の化合物が所定のサンプルの重量の９５％を構成することをいう。
【００１９】
「アシル」という用語は、本明細書で使用する場合、一般式−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲＸ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＸ１）２、−Ｃ（＝Ｓ）ＲＸ１、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＲＸ１）２、および−Ｃ（＝Ｓ）Ｓ（ＲＸ１）、−Ｃ（＝ＮＲＸ１）ＲＸ１、−Ｃ（＝ＮＲＸ１）ＯＲＸ１、−Ｃ（＝ＮＲＸ１）ＳＲＸ１、ならびに−Ｃ（＝ＮＲＸ１）Ｎ（ＲＸ１）２を有する基をいい、式中、ＲＸ１は水素；ハロゲン；置換もしくは非置換ヒドロキシル；置換もしくは非置換チオール；置換もしくは非置換アミノ；置換もしくは非置換アシル、環式もしくは非環式の、置換もしくは非置換の、分岐もしくは非分岐の脂肪族；環式もしくは非環式の、置換もしくは非置換の、分岐もしくは非分岐のヘテロ脂肪族；環式もしくは非環式の、置換もしくは非置換の、分岐もしくは非分岐のアルキル；環式もしくは非環式の、置換もしくは非置換の、分岐もしくは非分岐のアルケニル；置換もしくは非置換アルキニル；置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、モノ−もしくはジ脂肪族アミノ、モノ−もしくはジヘテロ脂肪族アミノ、モノ−もしくはジアルキルアミノ、モノ−もしくはジヘテロアルキルアミノ、モノ−もしくはジアリールアミノ、またはモノ−もしくはジヘテロアリールアミノであるか；あるいは２つのＲＸ１基は一緒に５員〜６員の複素環式環を形成する。例示的なアシル基として、アルデヒド（−ＣＨＯ）、カルボン酸（−ＣＯ２Ｈ）、ケトン、アシルハライド、エステル、アミド、イミン、カーボネート、カルバメートおよび尿素が挙げられる。アシル置換基としては、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００２０】
「アシルオキシ」という用語は、式（−ＯＲｉ）の「置換ヒドロキシル」をいい、式中、Ｒｉは本明細書で定義した任意選択的に置換されたアシル基であり、酸素部分は親分子に直接結合している。
【００２１】
「脂肪族」という用語は、本明細書で使用する場合、飽和および不飽和を問わず、非芳香族、直鎖（すなわち、非分岐）、分岐、非環式および環式（すなわち、炭素環式）の炭化水素を含み、炭化水素は任意選択的に１つまたは複数の官能基で置換されている。当業者であれば理解するように、「脂肪族」は本明細書において、以下に限定されるものではないが、アルキル部分、アルケニル部分、アルキニル部分、シクロアルキル部分、シクロアルケニル部分およびシクロアルキニル部分を含むことを意図している。このため、本明細書で使用する場合、「アルキル」という用語は直鎖アルキル基、分岐アルキル基および環状アルキル基を含む。同じようなことは、他の一般的な用語、たとえば「アルケニル」、「アルキニル」および同種のものにもいえる。さらに本明細書で使用する場合、「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」および同種のものの用語は、置換基および非置換基の両方を包含する。特定の実施形態では、本明細書で使用する場合、「脂肪族」は、１〜２０個の炭素原子を有する脂肪族基（環式、非環式、置換、非置換、分岐または非分岐）を表すのに使用される。脂肪族基の置換基としては、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００２２】
「アルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１〜２０個の炭素原子を含む炭化水素部分から水素原子１個を除いて得られる飽和の直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルをいう。いくつかの実施形態では、本発明に利用されるアルキル基は１〜２０個の炭素原子を含む。別の実施形態では、利用されるアルキル基は１〜１５個の炭素原子を含む。別の実施形態では、利用されるアルキル基は１〜１０個の炭素原子を含む。別の実施形態では、利用されるアルキル基は１〜８個の炭素原子を含む。別の実施形態では、利用されるアルキル基は１〜５個の炭素原子を含む。アルキルラジカルの例には、１つまたは複数の置換基を有してもよい、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソ−ペンチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ドデシルおよび同種のものがあるが、これに限定されるものではない。アルキル基置換基としては、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００２３】
「アルケニル」という用語は、本明細書で使用する場合、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素部分から水素原子１個を除いて得られる一価の基を示す。特定の実施形態では、本発明に利用されるアルケニル基は２〜２０個の炭素原子を含む。いくつかの実施形態では、本発明に利用されるアルケニル基は２〜１５個の炭素原子を含む。別の実施形態では、利用されるアルケニル基は２〜１０個の炭素原子を含む。なお他の実施形態では、アルケニル基は２〜８個の炭素原子を含む。なお他の実施形態では、アルケニル基は２〜５個の炭素を含む。アルケニル基として、たとえば、１つまたは複数の置換基を有してもよい、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イルおよび同種のものが挙げられる。アルケニル基置換基としては、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００２４】
「アルキニル」という用語は、本明細書で使用する場合、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素から水素原子１個を除いて得られる一価の基をいう。特定の実施形態では、本発明に利用されるアルキニル基は２〜２０個の炭素原子を含む。いくつかの実施形態では、本発明に利用されるアルキニル基は２〜１５個の炭素原子を含む。別の実施形態では、利用されるアルキニル基は２〜１０個の炭素原子を含む。なお他の実施形態では、アルキニル基は２〜８個の炭素原子を含む。なお他の実施形態では、アルキニル基は２〜５個の炭素原子を含む。代表的なアルキニル基には、１つまたは複数の置換基を有してもよい、エチニル、２−プロピニル（プロパルギル）、１−プロピニルおよび同種のものがあるが、これに限定されるものではない。アルキニル基置換基としては、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００２５】
「アミノ」という用語は、本明細書で使用する場合、式（−ＮＨ２）の基をいう。「置換アミノ」は、二置換アミン（−ＮＲｈ２）の一置換アミン（−ＮＨＲｈ）のいずれかをいい、式中、Ｒｈ置換基は、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載するような任意の置換基（たとえば、好適なアミノ保護基；各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、アミノ、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）である。特定の実施形態では、二置換アミノ基（−ＮＲｈ２）のＲｈ置換基は５〜６員の複素環式環を形成する。
【００２６】
「アルコキシ」という用語は式（−ＯＲｉ）の「置換ヒドロキシル」をいい、式中、Ｒｉは本明細書で定義した任意選択的に置換されたアルキル基であり、酸素部分は親分子に直接結合している。
【００２７】
「アルキルチオキシ」という用語は式（−ＳＲｒ）の「置換チオール」をいい、式中、Ｒｒは本明細書で定義した任意選択的に置換されたアルキル基であり、硫黄部分は親分子に直接結合している。
【００２８】
「アルキルアミノ」という用語は式（−ＮＲｈ２）の「置換アミノ」をいい、式中、Ｒｈは独立に水素または本明細書で定義した任意選択的に置換されたアルキル基であり、窒素部分は親分子に直接結合している。
【００２９】
「アリール」という用語は、本明細書で使用する場合、３〜２０個の環原子を有する安定な芳香族単環式または多環式環系をいい、この環系の環原子は炭素であり、環系は置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい。本発明の特定の実施形態では、「アリール」は、フェニル、ビフェニル、ナフチルおよび同種のものを含み、１つまたは複数の置換基を有してもよい、１、２または３つの芳香環を有する単環式、二環式または三環式のＣ４〜Ｃ２０芳香環系である。アリール置換基としては、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００３０】
「アリールアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、アリール置換アルキル基をいい、「アリール」および「アルキル」という用語は本明細書に定義されており、アリール基はアルキル基に結合しており、アルキル基は親分子に結合している。例示的なアリールアルキル基にはベンジルがある。
【００３１】
「アリールオキシ」という用語は式（−ＯＲｉ）の「置換ヒドロキシル」をいい、式中、Ｒｉは本明細書で定義した任意選択的に置換されたアリール基であり、酸素部分は親分子に直接結合している。
【００３２】
「アリールアミノ」という用語は式（−ＮＲｈ２）の「置換アミノ」をいい、式中、Ｒｈは独立に水素または本明細書で定義した任意選択的に置換されたアリール基であり、窒素部分は親分子に直接結合している。
【００３３】
「アリールチオキシ」という用語は式（−ＳＲｒ）の「置換チオール」をいい、式中、Ｒｒは本明細書で定義した任意選択的に置換されたアリール基であり、硫黄部分は親分子に直接結合している。
【００３４】
「アジド」という用語は、本明細書で使用する場合、式（−Ｎ３）の基をいう。
【００３５】
「シアノ」という用語は、本明細書で使用する場合、式（−ＣＮ）の基をいう。
【００３６】
「ハロ」および「ハロゲン」という用語は、本明細書で使用する場合、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）およびヨウ素（ヨード、−Ｉ）から選択される原子をいう。
【００３７】
「ヘテロ脂肪族」という用語は、本明細書で使用する場合、本明細書で定義した脂肪族部分をいい、脂肪族部分は、飽和および不飽和を問わず、非芳香族、直鎖（すなわち、非分岐）、分岐、非環式、環式（すなわち、複素環式）または多環式の炭化水素（任意選択的に１つまたは複数の官能基で置換されている）を含み、かつ、たとえば、炭素原子の代わりに１つまたは複数の酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子またはケイ素原子を含む。特定の実施形態では、ヘテロ脂肪族部分はヘテロ脂肪族部分の１つまたは複数の水素原子と１つまたは複数の置換基との独立した置換により置換されている。当業者であれば理解するように、「ヘテロ脂肪族」は本明細書おいて、以下に限定されるものではないが、ヘテロアルキル部分、ヘテロアルケニル部分、ヘテロアルキニル部分、ヘテロシクロアルキル部分、ヘテロシクロアルケニル部分およびヘテロシクロアルキニル部分を含むことを意図している。このため、「ヘテロ脂肪族」という用語は、「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」、「ヘテロアルキニル」という用語および同種のものを含む。さらに、本明細書で使用する場合、「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」、「ヘテロアルキニル」という用語および同種のものは、置換基および非置換基の両方を包含する。特定の実施形態では、本明細書で使用する場合、「ヘテロ脂肪族」は、１〜２０個の炭素原子を有するヘテロ脂肪族基（環式、非環式、置換、非置換、分岐または非分岐）を表すのに使用される。ヘテロ脂肪族基の置換基としては、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、スルフィニル、スルホニル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００３８】
「ヘテロアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、たとえば、炭素原子の代わりに１つまたは複数の酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子またはケイ素原子を含む、本明細書で定義したアルキル部分をいう。
【００３９】
「ヘテロアルケニル」という用語は、本明細書で使用する場合、たとえば、炭素原子の代わりに１つまたは複数の酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子またはケイ素原子を含む、本明細書で定義したアルケニル部分をいう。
【００４０】
「ヘテロアルキニル」という用語は、本明細書で使用する場合、たとえば、炭素原子の代わりに１つまたは複数の酸素原子、硫黄原子、窒素原子、リン原子またはケイ素原子を含む、本明細書で定義したアルキニル部分をいう。
【００４１】
「ヘテロアルキルアミノ」という用語は、式（−ＮＲｈ２）の「置換アミノ」をいい、式中、Ｒｈは独立に水素または本明細書で定義した任意選択的に置換されたヘテロアルキル基であり、窒素部分は親分子に直接結合している。
【００４２】
「ヘテロアルキルオキシ」という用語は、式（−ＯＲｉ）の「置換ヒドロキシル」をいい、式中、Ｒｉは本明細書で定義した任意選択的に置換されたヘテロアルキル基であり、酸素部分は親分子に直接結合している。
【００４３】
「ヘテロアルキルチオキシ」という用語は、式（−ＳＲｒ）の「置換チオール」をいい、式中、Ｒｒは本明細書で定義した任意選択的に置換されたヘテロアルキル基であり、硫黄部分は親分子に直接結合している。
【００４４】
「複素環式」、「複素環」または「ヘテロシクリル」という用語は、本明細書で使用する場合、環式ヘテロ脂肪族基をいう。複素環式基とは、非芳香族の部分不飽和または完全飽和の３〜１２員環系をいい、大きさが３〜８個の原子の単環と、非芳香環と縮合した５員または６員の芳香族アリール基またはヘテロアリール基を含んでもよい二環式および三環式環系とを含む。これらの複素環式環は、酸素、硫黄および窒素から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を有する複素環式環を含み、窒素および硫黄のヘテロ原子は任意選択的に酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意選択的に四級化されていてもよい。特定の実施形態では、複素環式とは、非芳香族の５員環、６員環もしくは７員環または多環式基をいい、少なくとも１つの環原子が、Ｏ、ＳおよびＮ（窒素および硫黄ヘテロ原子は任意選択的に酸化されていてもよい）から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素であり、ラジカルが環原子のいずれかを介して分子の残部に結合している。ヘテロシシル基には、以下に限定されるものではないが、酸素、硫黄および窒素から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を有する縮合５員環、６員環または７員環を含む二環式または三環式基があり、（ｉ）５員環は各々０〜２個の二重結合を有し、６員環は各々０〜２個の二重結合を有し、７員環は各々０〜３個の二重結合し、（ｉｉ）窒素および硫黄ヘテロ原子は任意選択的に酸化されていてもよく、（ｉｉｉ）窒素ヘテロ原子は任意選択的に四級化されていてもよく、（ｉｖ）上記の複素環式環のいずれかはアリール環またはヘテロアリール環と縮合していてもよい。例示的な複素環として、１つまたは複数の置換基を有してもよい、アザシクロプロパニル、アザシクロブタニル、１，３−ジアザチジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゾカニル、チアラニル、チエタニル、テトラヒドロチオフェニル、ジチオラニル、チアシクロヘキサニル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロプラニル、ジオキサニル、オキサチオラニル、モルホリニル、チオキサニル、テトラヒドロナフチルおよび同種のものが挙げられる。置換基には、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分が形成される本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、スルフィニル、スルホニル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００４５】
「ヘテロアリール」という用語は、本明細書で使用する場合、３〜２０個の環原子を有する安定な芳香族単環式または多環式環系をいい、その１個の環原子はＳ、ＯおよびＮから選択され；０個、１個または２個の環原子はＳ、ＯおよびＮから独立に選択される別のヘテロ原子であり；残りの環原子は炭素であり、ラジカルが環原子のいずれかを介して分子の残部に結合している。例示的なヘテロアリールとして、１つまたは複数の置換基を有してもよい、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、テトラジニル、ピイロリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、キノリジニル、シンノリニル、キナゾリニル、フタラジニル、ナフトリジニル、キノキサリニル、チオフェニル、チアナフテニル、フラニル、ベンゾフラニル、ベンゾチアゾリル、チアゾリニル、イソチアゾリル、チアジアゾリニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアジオリル、オキサジアジオリルおよび同種のものがあるが、これに限定されるものではない。ヘテロアリール置換基としては、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、スルフィニル、スルホニル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００４６】
「ヘテロアリーレン」という用語は、本明細書で使用する場合、本明細書で定義したヘテロアリール基から２個の水素原子を除いて得られるビラジカルをいう。ヘテロアリーレン基は置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい。加えて、ヘテロアリーレン基はリンカー基として、本明細書で定義したアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、ヘテロアルキレン基、ヘテロアルケニレン基またはヘテロアルキニレン基に組み込まれていてもよい。ヘテロアリーレン基置換基としては、以下に限定されるものではないが、結果として安定な部分を形成する本明細書に記載の置換基のいずれか（たとえば、各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、オキソ、イミノ、チオオキソ、シアノ、イソシアノ、アミノ、アジド、ニトロ、ヒドロキシル、チオール、ハロ、脂肪族アミノ、ヘテロ脂肪族アミノ、アルキルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルキルアリール、アリールアルキル、脂肪族オキシ、ヘテロ脂肪族オキシ、アルキルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、脂肪族チオキシ、ヘテロ脂肪族チオキシ、アルキルチオキシ、ヘテロアルキルチオキシ、アリールチオキシ、ヘテロアリールチオキシ、アシルオキシおよび同種のもの）が挙げられる。
【００４７】
「ヘテロアリールアミノ」という用語は（−ＮＲｈ２）の「置換アミノ」をいい、式中、Ｒｈは独立に水素、または本明細書で定義した任意選択的に置換されたヘテロアリール基であり、窒素部分は親分子に直接結合している。
【００４８】
「ヘテロアリールオキシ」という用語は式（−ＯＲｉ）の「置換ヒドロキシル」をいい、式中、Ｒｉは本明細書で定義した任意選択的に置換されたヘテロアリール基であり、酸素部分は親分子に直接結合している。
【００４９】
「ヘテロアリールチオキシ」という用語は式（−ＳＲｒ）の「置換チオール」をいい、式中、Ｒｒは本明細書で定義した任意選択的に置換されたヘテロアリール基であり、硫黄部分は親分子に直接結合している。
【００５０】
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」という用語は、本明細書で使用する場合、式（−ＯＨ）の基をいう。「置換ヒドロキシル」とは式（−ＯＲｉ）の基をいい、式中、Ｒｉは、結果として安定な部分を形成する任意の置換基（たとえば、好適なヒドロキシル保護基；各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、ニトロ、アルキルアリール、アリールアルキルおよび同種のもの）であってもよい。
【００５１】
「イミノ」という用語は、本明細書で使用する場合、式（＝ＮＲｒ）の基をいい、式中、Ｒｒは水素、または結果として安定な部分を形成する本明細書に記載するような任意の置換基（たとえば、好適なアミノ保護基；各々さらに置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい、脂肪族、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロ脂肪族、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アシル、アミノ、ヒドロキシル、アルキルアリール、アリールアルキルおよび同種のもの）に相当する。特定の実施形態では、イミノは＝ＮＨをいい、Ｒｒは水素である。
【００５２】
「イソシアノ」という用語は、本明細書で使用する場合、式（−ＮＣ）の基をいう。
【００５３】
「ニトロ」という用語は、本明細書で使用する場合、式（−ＮＯ２）の基をいう。
【００５４】
「オキソ」という用語は、本明細書で使用する場合、式（＝Ｏ）の基をいう。
【００５５】
「安定な部分」という用語は、本明細書で使用する場合、好ましくは製造が可能な十分な安定性を有し、かつ本明細書に詳述した目的に有用な十分な期間その完全性を維持する部分をいう。
【００５６】
本明細書で使用される「保護基」という用語は、当該技術分野において周知であり、その全体を本明細書に援用するＧｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，第４版，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００６に詳細に記載されるものを含む。好適なアミノ保護基として、メチルカルバメート、エチルカルバマント、９−フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカルバメート、９−（２，７−ジブロモ）フルオロエニルメチルカルバメート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバメート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカルバメート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルカルバメート（Ｔｅｏｃ）、２−フェニルエチルカルバメート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチルカルバメート（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカルバメート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカルバメート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エチルカルバメート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバメート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−および４’−ピリジル）エチルカルバメート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバメート、ｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣ）、１−アダマンチルカルバメート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバメート（Ｖｏｃ）、アリルカルバメート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカルバメート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバメート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカルバメート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカルバメート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカルバメート、アルキルジチオカルバメート、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルバメート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニトベンジルカルバメート、ｐ−ブロモベンジルカルバメート、ｐ−クロロベンジルカルバメート、２，４−ジクロロベンジルカルバメート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバメート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバメート、ジフェニルメチルカルバメート、２−メチルチオエチルカルバメート、２−メチルスルホニルエチルカルバメート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバメート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカルバメート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカルバメート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカルバメート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチルカルバメート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバメート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカルバメート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバメート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバメート、５−ベンゾイソオキサゾリルメチルカルバメート���２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカルバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバメート、３，５−ジメトキシベンジルカルバメート、ｏ−ニトロベンジルカルバメート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバメート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバメート、フェノチアジニル−（１０）−カルボニル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノカルボニル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオカルボニル誘導体、ｔ−アミルカルバメート、Ｓ−ベンジルチオカルバメート、ｐ−シアノベンジルカルバメート、シクロブチルカルバメート、シクロヘキシルカルバメート、シクロペンチルカルバメート、シクロプロピルメチルカルバメート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバメート、２，２−ジメトキシカルボニルビニルカルバメート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバメート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバメート、１，１−ジメチルプロピニルカルバメート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバメート、２−フラニルメチルカルバメート、２−ヨードエチルカルバメート、イソボリンルカルバメート、イソブチルカルバメート、イソニコチニルカルバメート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバメート、１−メチルシクロブチルカルバメート、１−メチルシクロヘキシルカルバメート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカルバメート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバメート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバメート、フェニルカルバメート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバメート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリメチルベンジルカルバメート、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトフェニルアセトアミド、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ’−ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンアミド、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミド、ｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミド、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡＢＡＳＥ���、５−置換１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１−置換３，５−ジニトロ−４−ピリドン、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロオリン−３−イル）アミン、第四級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタカルボニルクロム−またはタングステン）カルボニル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホルアミデート、ジベンジルホスホルアミデート、ジフェニルホスホルアミデート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６，−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセンスルホンアミド、４−��４’，８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミドおよびフェナシルスルホンアミドが挙げられる。
【００５７】
本明細書で使用する「好適なヒドロキシル保護基」は、当該技術分野において周知であり、Ｇｒｅｅｎｅ（１９９９）に詳細に記載されたものが挙げられる。好適なヒドロキシル保護基として、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアイアコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４’’−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４’’−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンゾイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピ���シリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテー、ｐ−クロロフェノキシアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート（メシトエート）、アルキルメチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、アルキルエチルカーボネート、アルキル２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、アルキルイソブチルカーボネート、アルキルビニルカーボネートアルキルアリルカーボネート、アルキルｐ−ニトロフェニルカーボネート、アルキルベンジルカーボネート、アルキルｐ−メトキシベンジルカーボネート、アルキル３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、アルキルｏ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルｐ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルＳ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナプッチルカーボネート、メチルジチオカーボネート、２−ヨードベンゾエート、４−アジドブチラート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチレート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノスクシノエート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾエート、α−ナフトエート、ニトレート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミデート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ボレート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェネート、スルフェート、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネートおよびトシレート（Ｔｓ）が挙げられる。１，２−または１，３−ジオールを保護する場合、保護基として、メチレンアセタール、エチリデンアセタール、１−ｔ−ブチルエチリデ��ケタール、１−フェニルエチリデンケタール、（４−メトキシフェニル）エチリデンアセタール、２，２，２−トリクロロエチリデンアセタール、アセトニド、シクロペンチリデンケタール、シクロヘキシリデンケタール、シクロヘプチリデンケタール、ベンジリデンアセタール、ｐ−メトキシベンジリデンアセタール、２，４−ジメトキシベンジリデンケタール、３，４−ジメトキシベンジリデンアセタール、２−ニトロベンジリデンアセタール、メトキシメチレンアセタール、エトキシメチレンアセタール、ジメトキシメチレンオルトエステル、１−メトキシエチリデンオルトエステル、１−エトキシエチルイジンオルトエステル、１，２−ジメトキシエチリデンオルトエステル、α−メトキシベンジリデンオルトエステル、１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチリデン誘導体、α−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）ベンジリデン誘導体、２−オキサシクロペンチリデンオルトエステル、ジ−ｔ−ブチルシリレン基（ＤＴＢＳ）、１，３−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサニリデン）誘導体（ＴＩＰＤＳ）、テトラ−ｔ−ブトキシジシロキサン−１，３−ジイリデン誘導体（ＴＢＤＳ）、環状カーボネート、環状ボロネート、エチルボロネートおよびフェニルボロネートが挙げられる。
【００５８】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応および同種のものを回避しつつ、ヒトおよび下等動物の組織と接触して使用するのに好適であり、かつ妥当なベネフィット／リスク比と釣り合う塩をいう。薬学的に許容される塩は、当該技術分野において周知である。たとえば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．は、本明細書に援用するＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１−１９に薬学的に許容される塩について詳細に記載している。本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、好適な無機酸および有機酸ならびに無機塩基および有機塩基から得られる塩を含む。薬学的に許容される無毒の酸付加塩の例として、アミノ基と、無機酸、たとえば塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸、または有機酸、たとえば酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸とで形成される塩、または当該技術分野において使用される他の方法、たとえばイオン交換を使用して形成されるアミノ基の塩が挙げられる。他の薬学的に許容される塩としては、アジペート塩、アルギネート塩、アスコルベート塩、アスパルテート塩、ベンゼンスルホネート塩、ベンゾエート塩、ビスルフェート塩、ボレート塩、ブチレート塩、カンホラート塩、カンファースルホネート塩、シトレート塩、シクロペンタンプロピオネート塩、ジグルコネート塩、ドデシルスルフェート塩、エタンスルホネート塩、ホルメート塩、フマレート塩、グルコヘプトナート塩、グリセロホスフェート塩、グルコネート塩、ヘミスルフェート塩、ヘプタノエート塩、ヘキサノエート塩、ヒドロヨージド塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホネート塩、ラクトビオネート塩、ラクテート塩、ラウレート塩、ラウリルスルフェート塩、マラート塩、マレエート塩、マロナート塩、メタンスルホネート塩、２−ナフタレンスルホネート塩、ニコチネート塩、ニトレート塩、オレエート塩、オキサレート塩、パルミテート塩、パモエート塩、ペクチネート塩、ペルスルフェート塩、３−フェニルプロピオネート塩、ホスフェート塩、ピクラート塩、ピバレート塩、プロピオネート塩、ステアレート塩、スクシネート塩、スルフェート塩、タルトレート塩、チオシアネート塩、ｐ−トルエンスルホネート塩、ウンデカノエート塩、バレレート塩および同種のものが挙げられる。適切な塩基から得られる塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、およびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩として、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよび同種のものが挙げられる。さらに薬学的に許容される塩としては、適切な場合、対イオン、たとえばハライド、水酸化物、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ニトレート、低級アルキルスルホネートおよびアリールスルホネートを用いて形成される無毒のアンモニウムカチオン、第四級アンモニウムカチオンおよびアミンカチオンの塩が挙げられる。
【００５９】
「被検体」という用語は、本明細書で使用する場合、任意の動物をいう。特定の実施形態では、被検体は哺乳動物である。特定の実施形態では、「被検体」という用語は、本明細書で使用する場合、ヒト（たとえば、男性、女性または小児）をいう。
【００６０】
「投与する」、「投与すること」または「投与」という用語は、本明細書で使用する場合、本発明の化合物を埋め込むこと、吸収させること、摂取させること、注射することまたは吸入させることをいう。
【００６１】
本明細書で使用する場合、「処置」、「処置する」および「処置すること」という用語は、本明細書に記載の疾患もしくは障害またはその１つもしくは複数の症状を回復させる、緩和する、本明細書に記載の疾患もしくは障害またはその１つもしくは複数の症状の発症を遅延させる、あるいはそれらの進行を阻害することをいう。いくつかの実施形態では、処置は１つまたは複数の症状が発症してから行ってもよい。他の実施形態では、処置は症状がないときに行ってもよい。たとえば、処置は、症状の発症前に感受性を有する個体に行ってもよい（たとえば、症状の既往歴を考慮しておよび／または遺伝的もしくは他の感受性因子を考慮して）。処置はまた、たとえば再発の遅延または予防のため症状の消失後に継続してもよい。
【００６２】
「有効量」および「治療有効量」という用語は、本明細書で使用する場合、被検体に投与したときに、被検体が罹患している状態（たとえば、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、ドライアイ症候群、線維症、瘢痕形成、血管新生、ウイルス感染、マラリア、虚血障害、移植片およびインプラント拒絶反応、神経変性疾患、または化粧料の適応症状（ｃｏｓｍｅｔｉｃ  ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ））を少なくとも部分的に処置するのに有効である、本発明の化合物の量または濃度をいう。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】特定の例示的な化合物の化学構造を示す。他に記載がある場合を除き、ハロフジノンおよび誘導体はラセミ化合物として使用した。
【図２Ａ−Ｄ】ハロフジノンおよびフェブリフジンがインビボで、プロリルｔＲＮＡシンテターゼ活性を阻害することを示す。Ａ）ウサギ網状赤血球ライセート（ＲＲＬ）をルシフェラーゼｍＲＮＡとインキュベートし、翻訳を発光アッセイ定量でした。アミノ酸の混合物または個々のアミノ酸の溶液を加え、翻訳阻害を救出する反応においてそれぞれ１ｍＭの溶液を得た。Ｍｉｘ１：Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ；Ｍｉｘ２：Ｌｙｓ、Ｉｌｅ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｔｒｐ；Ｍｉｘ３：Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｔｈｒ；Ｍｉｘ４：Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ。ｙ軸は対数スケールであることに注意されたい。Ｂ）補充プロリンの存在下または非存在下でのハロフジノン（ＨＦ）およびその誘導体の翻訳に対する作用を図２Ａと同様にアッセイした。エラーバーは、３回の測定の標準偏差を示す。Ｃ）ＮｏＰｒｏｐｅｐがプロリンを含まないのに対し、Ｐｒｏｐｅｐはプロリンジペプチドを含むこと以外は同一配列の短いｍｙｃタグ付きポリペプチド（実施例を参照）を表記の阻害剤の存在下（各々１μＭの濃度、プロリンは１ｍＭで添加）、ＲＲＬ中で翻訳させた。翻訳は抗ｍｙｃウエスタンブロットにより調べた。Ｄ）１４Ｃ  Ｐｒｏまたは３５Ｓ  Ｍｅｔ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）をＲＲＬ（Ｐｒｏｍｅｇａ）および１μｇ／μｌの全ウシｔＲＮＡ（Ｓｉｇｍａ）と、ＨＦまたはＭＡＺ１３１０の存在下または非存在下、１０分間インキュベートし、ｔＲＮＡを、ＭｉｒＶａｎａ  ｔＲＮＡ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ）を用いて単離し、ｔＲＮＡの放射能を液体シンチレーション計測法により測定した。エラーバーは３回の測定の標準偏差を示す。
【図３Ａ−Ｄ】ＥＰＲＳがハロフジノールに結合し、細胞内のハロフジノールに対する感受性を決定することを示す。Ａ）［３Ｈ］−ハロフジノール（［３Ｈ］ＨＦｏｌ）はＰｒｏＲＳに特異的に結合する。精製された６−ｈｉｓタグ付きＰｒｏＲＳ（ヒトＥＰＲＳのアミノ酸９９８〜１５１３）をＮ−ＮＴＡビーズに固定化し、５０ｎＭの［３Ｈ］−ハロフジノールと、ＨＦ、フェブリフジン（ＦＦ）または不活性ＨＦ誘導体ＭＡＺ１３１０の存在下または非存在下、５ｍＭのＭｇＣｌ２および２ｍＭのＡＴＰと室温で１０’インキュベートした。予備実験から、結合は１０分までに最大となり、かつｔＲＮＡを加えても［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合に対して影響を与えないことが確認された。Ｂ）［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合を表記の濃度のプロリンの存在下で上記のようにアッセイした。Ｃ）ＥＰＲＳが枯渇すると、ＨＦに対する細胞の感受性が高まる。ＩＭＲ９０肺線維芽細胞を、ＥＰＲＳを標的とするｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）または対照ｓｉＲＮＡ混合物で４８時間処理し、次いでＨＦで２時間処理し（ｐＧＣＮ２）、ウエスタンブロットによりＥＰＲＳタンパク質レベル、ＧＣＮ２総タンパク質およびホスホ−ＧＣＮ２について調べた。Ｄ）ＡＡＲマーカーＣＨＯＰのＨＦによる誘導に関して、ＥＰＲＳが枯渇したＩＭＲ９０細胞と対照細胞とをＱ−ＰＣＲにより比較した。同等濃度の全細胞タンパク質を各ウエスタンブロットレーンにロードした。ＣＨＯＰ発現は、ホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ１）およびグリセルアルデヒド−３−ホスフェート−デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）の発現に対して標準化した。示したデータは３回の独立した実験の代表例である。
【図４Ａ−Ｂ】ＨＦｏｌがＥＰＲＳの活性部位にＡＴＰ依存性に結合することを示す。Ａ）プロリルアデニレートアナログは、ＨＦｏｌの結合を強力に阻害する。対応するアミノアシルアデニレートのアナログであるプロリルスルファモイルアデノシン（ＰｒｏＳＡｄ）またはアラニルスルファモイルアデノシン（ＡｌａＳＡｄ）を図２と同様に［３Ｈ］−ＨＦｏｌと共インキュベートした。Ｂ）ＨＦｏｌのＥＰＲＳへの結合にはＡＴＰを必要とするが、ＡＴＰ加水分解を必要としない。［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合を、ヌクレオチドの種類および濃度を表記のように変えた以外は図３と同様にアッセイした。
【図５Ａ−Ｂ】プロリンの補充が、ハロフジノンによるアミノ酸応答（ＡＡＲ）の活性化を阻止することを示す。Ａ）ＭＥＦを２ｍＭのプロリンの存在下または非存在下、表記の濃度の阻害剤で２時間処理し、ホスホ特異的抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いてウエスタンブロットにより全ＧＣＮ２、およびＴｈｒ８９８がリン酸化されたＧＣＮ２についてアッセイした。データは３回の独立した実験の代表例である。Ｂ）ＭＥＦを、２ｍＭのプロリンを用いてあるいは用いずに５０ｎＭのＨＦで処理し、６時間後に溶解させ、ウエスタンブロットによりＡＡＲ応答マーカーＣＨＯＰの発現について解析した。細胞質アクチン（ｃＡｃｔｉｎ）をローディングコントロールとして示す。
【図６Ａ−Ｄ】プロリン補充が、ハロフジノンの生物学的作用を阻止することを示す。Ａ）初代マウスＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を、１０ｎＭのＭＡＺ１３１０あるいはＨＦのどちらかと以下のアミノ酸補充物：１０×濃度の必須アミノ酸（ＥＡＡ）または非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）混合物（それぞれＢｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒまたはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）または１０×濃度（１ｍＭ）の表記の個々のアミノ酸との存在下、Ｔｈ１７優位状態でＴ細胞受容体により活性化した（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。データは３ウェルのＴｈ１７（ＩＬ−１７＋ＩＦＮｇ−）細胞の平均パーセント＋／−ＳＤで示す。Ｂ）ＨＦまたはボレリジンの非存在または存在下、１ｍＭのトレオニン補充またはプロリン補充を用いてあるいは用いずにＴｈ１７分化を上記のようにアッセイした。Ｃ）ＭＥＦをＨＦ（５０ｎＭ）および／またはプロリン（２ｍＭ）を用いてあるいは用いずに４時間（ＣＨＯＰ、Ｓ１００Ａ４）または２４時間（ＣｏｌＩＡ１、Ｃｏｌ１Ａ２）処理した。ｍＲＮＡの発現はＴＢＰの発現に対して正規化し、未処理対照と比較して示す。エラーバーは３つの細胞プレートの３回の測定の標準偏差を示す。ＨＦ単独とＨＦ＋Ｐｒｏとの作用の信頼区間（ｐ値）は、両側スチューデントｔ検定を用いて決定した。データは２回の独立した実験の代表例である。Ｄ）細胞を表記のようにＨＦおよびプロリンと２４時間プレインキュベートし、Ｉ型プロコラーゲンの分泌を、播種した細胞の馴化培地においてウエスタンブロットにより２４時間後に測定し、Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを用いて定量した（上図）。全タンパク質合成をＴＣＡ沈殿３５Ｓとしてシンチレーションカウンターで測定した（下図）。エラーバーは３回の測定の標準偏差を示す。
【図７】ｔＲＮＡチャージの阻害によるＡＡＲ活性化のモデルを示す。
【図８】精製ＥＰＲＳの添加が、ハロフジノンによる翻訳の阻害をインビトロで救出することを示す。ＲＲＬにおける翻訳阻害を、ラット肝臓から精製された低濃度（８０ｎｇ）または高濃度（０．５μｇ）の濃度の添加ＥＰＲＳの非存在または存在で図２と同様に測定した。対数スケールに注意されたい。
【図９】ＭＡＺ１３１０がＰｒｏＲＳ活性を阻止しないことを示す。ＰｒｏＲＳ活性は、追跡標識として３Ｈ  Ｐｒｏではなく１４Ｃプロリンを使用したこと以外は、図１０および図１１と同様にアッセイした。
【図１０】精製ＰｒｏＲＳの［Ｅｔ］およびＫｍ（ｐｒｏ）の定量を示す。左図：活性ＰｒｏＲＳの濃度［Ｅｔ］は、Ｃｏｐｅｌａｎｄの方法により判定した（Ｃｏｐｅｌａｎｄ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ａｎａｌ  ４６：１−２６５（２００５））。簡単に説明すると、［Ｅｔ］がＫｉ（ａｐｐ）より実質的に高い濃度範囲において測定された速度比（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｖｅｌｏｃｉｔｙ）を阻害剤濃度の関数としてプロットする。濃度応答線の直線部分がＸ軸と交差する点が、反応における活性酵素の濃度を与える。右図：ＰｒｏＲＳのシンテターゼ活性を、図２Ａの方法に記載されているように測定した。１５μＭ、４０μＭ、１２０μＭ、２４０μＭおよび４８０μＭのプロリン濃度で３回の測定を行い、Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアにより線形回帰を用いて二重逆数（Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋｅ）プロットとして反応速度をプロリン濃度に対してプロットした。
【図１１】ハロフジノンが、ＥＰＲＳの精製プロリルｔＲＮＡシンテターゼドメインをプロリンと競合的に阻害することを示す。ＥＰＲＳのプロリルｔＲＮＡシンテターゼドメインを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に発現させ、精製し、実施例に示した改変を行い記載されたようにアッセイした。２０μＭ、６０μＭ、１８０μＭおよび４８０μＭのプロリン濃度でのＨＦのＩＣ５０値は図１２に示すように判定し、Ｋｍ（Ｐｒｏ）値およびＥｔ値は図１０に示すように判定した。ＨＦのＫｉ値は、Ｐｒｉｓｍ  Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを用いて線形回帰によりＩＣ５０と［Ｐｒｏ］／Ｋｍ（Ｐｒｏ）との傾きから判定した。標準誤差を示す。
【図１２】様々なプロリン濃度でのＨＦによるＰｒｏＲＳ活性の阻害のＩＣ５０を示す。プロリルｔＲＮＡシンテターゼ活性の阻害は、表記の濃度のプロリンと、１ｎＭ（０ｎＭと比較して阻害なし、対数プロットのために使用）、４０ｎＭ、８０ｎＭ、１６０ｎＭ、２４０ｎＭ、３２０ｎＭおよび４８０ｎＭの濃度のＨＦとによる３回の測定により判定した。各曲線は、式Ｙ＝１００／（１＋１０＾（（［ＨＦ］−ＬｏｇＩＣ５０）））を用いて非線形回帰でフィッティングした。式中、Ｙは非阻害反応に対する比率で正規化した反応速度である。
【図１３】ＨＦｏｌがＰｒｏＲＳ活性を阻害することを示す。ＰｒｏＲＳ活性は、１００μＭのＰｒｏ濃度で図１０および図１１と同様に測定した。
【図１４】ＥＰＲＳレベルの低下が、ハロフジノンによるＡＡＲ遺伝子の誘導に対する細胞の感受性を高めることを示す。ｓｉＲＮＡによる枯渇、ＨＦ処理および遺伝子発現解析を図２Ｃに記載したように行った。
【図１５】プロリンが、ハロフジノンによるＧＣＮ２依存性のｅＩＦ２ａリン酸化の誘導を救出することを示す。ｅＩＦ２ａリン酸化は図５Ａと同様に刺激した。
【図１６】ハロフジノンが線維芽細胞において、ｍＴＯＲＣ１経路の下流標的を直接阻害しないことを示す。ＤＭＥ／１０％ＦＣＳ中で増殖しているＭＥＦを１００ｎＭのＨＦまたは０．５μＭのラパマイシンで処理し、ｍＴｏｒシグナル伝達経路の成分のリン酸化について解析した。
【図１７】プロリンとのインキュベーションにより、ハロフジノンの細胞内蓄積が変化しないことを示す。ＭＥＦを２ｍＭのプロリンの存在下または非存在下で表記の濃度のＨＦと２時間インキュベートし、冷ＰＢＳで２回洗浄し、１％ＮＰ４０で溶解させた。次いでライセートのＨＦレベルについて、抗ＨＦ抗体を用いたＥＬＩＳＡアッセイにより、既知濃度のＨＦを使用した標準曲線と比較して試験した（実施例を参照）。エラーバーは３回の測定の標準偏差を示す。３回の独立した実験で同様の結果が得られた。
【図１８】補充プロリンがハロフジノンと競合的に作用してＴｈ１７分化の阻害を阻止することを示す。表記の用量でプロリンを補充して図６Ａに記載したように、Ｔｈ１７細胞の分化を測定した。
【図１９】トレオニルｔＲＮＡシンテターゼ阻害剤ボレリジンがＴｈ１７分化を選択的に阻害することを示す。初代マウスＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を非優位状態（ＴｈＮ）またはＴｈ１７優位状態でＴＣＲにより活性化し、プロリンまたはトレオニン（０．５ｍＭ）の存在下または非存在下、ＤＭＳＯ、１０ｎＭのＭＡＺ１３１０、１０ｎＭのＨＦまたは６ｎＭ（３ｎｇ／ｍＬ）のボレリジンで処理した。Ｔｈ１７分化は上記のように判定した。データは、３ウェルのＴｈ１７（ＩＬ−１７＋ＩＦＮｇ−）細胞の平均パーセント＋／−ＳＤで示す。データはすべて２〜３回の独立した実験を示す。
【図２０】プロリン補充が、Ｔ細胞内でのハロフジノンによるｅｉｆ２ａＳｅｒ５１リン酸化の誘導を阻止することを示す。図６に記載されているように処理した初代マウスＴ細胞を、ｅｉｆ２ａＳｅｒ５１リン酸化のウエスタンブロット検出用に回収した。
【図２１】ハロフジノンによるＩ型プロコラーゲン産生の阻害が、プロリンにより打ち消されることを示す。細胞を３ウェルずつ蒔き、ＨＦおよびプロリンを用いてあるいは用いずに処理し、馴化培地をＩ型プロコラーゲンについて図６ｄに記載されているように解析した。
【図２２】プロリンが、ＨＦによるＥＣＭタンパク質産生の抑制を救出することを示す。図６Ｄに示した定量に使用したブロットを示す。ＭＥＦを、２ｍＭのプロリンを用いてあるいは用いずにＨＦと４時間インキュベートし、馴化培地における新たなコラーゲン産生を測定した。細胞を新鮮なＤＭＥＭ／０．２％ＦＢＳで洗浄し、プロリンまたはＨＦを再添加し、馴化培地（Ｉ型プロコラーゲンの場合）または全細胞ライセート（フィブロネクチン、ｃ−ａｃｔｉｎの場合）を２４時間後に回収した。条件ごとに細胞のプレートを３回ずつ並行して処理し、回収し、ブロットした。タンパク質レベルは、ウエスタンブロットによりアッセイし、化学発光を用いて検出し、フィルム露光をＩｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを用いて定量した。
【図２３】プロリンは、ＨＦの抗マラリア作用を打ち消すが、構造的に関係のない抗マラリア薬アモジアキンの抗マラリア作用を打ち消さないことを示す。ＲＰＭＩ中の赤血球における、熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）増殖の阻害剤としてのハロフジノンおよびアモジアキンの活性を、表記の過剰のアミノ酸を用いてあるいは用いずに試験し、ＩＣ５０値を、未修飾ＲＰＭＩを用いた標準的条件下で得られたＩＣ５０値（太字の数字）に対して正規化した。ＲＰＭＩに関するハロフジノンおよびアモジアキンの絶対ＩＣ５０値を括弧内に報告する。図示したアミノ酸の倍率（たとえば、「５ｘ」）は、それぞれのアミノ酸のＲＰＭＩにおける濃度に対する倍率である。Ｄ−ＰｒｏおよびＬ−Ｏｒｎの濃度倍率はＬ−Ｐｒｏに対する倍率である。
【図２４】ＨＦおよびＨＦｏｌＡによるＰｒｏＲＳ活性の阻害を示す。
【図２５】ＨＦｏｌの２種のジアステレオマーによるＰｒｏＲＳ活性の阻害の測定を示す。ＰｒｏＲＳ活性は図２４と同様に測定した。ＨＦｏｌの活性ジアステレオマー（ＨＦｏｌＡ）または非活性ジアステレオマー（ＨＦｏｌＢ）を表記の濃度で反応に加えた。
【図２６】インタクトな細胞におけるＨＦおよびＨＦｏｌＡによるアミノ酸応答（ＡＡＲ）の活性化を示す。左図：初代ヒト線維芽細胞におけるＨＦｏｌＡおよびＨＦによるＡＡＲ活性化を、ＡＡＲ応答遺伝子シスタチオナーゼを誘導するものとしてハウスキーピング遺伝子対照（ＧＡＰＤＨ）と比較して測定した。細胞を表記の濃度のＨＦまたはＨＦｏｌＡで処理し、Ｑ−ＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現の解析のため４時間後に回収した。右図：処理した細胞をＡＡＲキナーゼＧＣＮ２のリン酸化の誘導についてウエスタンブロットにより解析した。ＨＦｏｌＡはこうした基準によれば、ＨＦと比較して約５倍低い効力でＡＡＲを活性化する。
【図２７】ＨＦｏｌおよびＨＦが培養線維芽細胞において１型コラーゲンの発現を阻害することを示す。
【図２８】ＨＦｏｌおよびＨＦが活性化線維芽細胞マーカーＳ１００Ａ４の発現を阻害することを示す。
【図２９】細胞内のハロフジノールのエナンチオ特異的な活性を示す。マウス胎仔線維芽細胞を表記の濃度のハロフジノールエナンチオマーで処理した。ＥＰＲＳ活性の阻害を、処理の４８時間後の全細胞タンパク質含有量の減少として測定した。結果は、２回の実験の平均値として示す。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
植物生理活性物質は歴史的に重要な治療剤であると同時に、新しい薬剤の貴重な供給源でもある（Ｃｌａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４３２：８２９−３７（２００４））。現在市販されている上位２０種の薬剤の約３分の１が天然物に由来しており（Ｈｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  １３３：３８７−９１（２００８））、その大部分は植物に由来する。植物アルカロイド、フェブリフジン（１；図１）はブルー・エバーグリーン・ハイドレンジア（Ｂｌｕｅ  Ｅｖｅｒｇｒｅｅｎ  Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）、ジョウザンアジサイ（Ｄｉｃｈｒｏａ  ｆｅｂｒｉｆｕｇａ  Ｌｏｕｒ）の根で発見された活性成分である（Ｃｏａｔｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｍａｌａｒ．Ｓｏｃ．９：１８３−６（１９５０））。フェブリフジンはほぼ２０００年治療に使用されてきたが、動物組織におけるフェブリフジンの分子機構は依然として不明のままである。このハーブ抽出物は、歴史的にその抗原虫活性が認められており、伝統的な漢方薬において抗マラリア治療薬として使用された。フェブリフジンのラセミ体のハロゲン化誘導体であるハロフジノン（ＨＦ）（２；図１）は、この植物生理活性物質のより毒性の低い形態を求めて合成された（Ｒｙｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．Ａｄｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．１１：２２１−９３（１９７３））。過去２０年間、ＨＦはその癌および線維性疾患の治療剤としての可能性のため注目を集め、第２相臨床試験まで進んでいる（Ｐｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３０：４４５−５０（１９９８）；Ｅｌｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：４１１１−８（１９９９）；ＭｃＧａｈａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３５：２７７−８２（２００２）；Ｐｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ９：４１７−２５（２００３）；Ｋｏｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｃｑｕｉｒ．Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃ．Ｓｙｎｄｒ．５６：６４−８（２０１０））。ＨＦは、栄養素を感知するアミノ酸応答（ＡＡＲ）経路の活性化によりプロ炎症性Ｔｈ１７細胞の分化をインビトロおよびインビボで強力に阻害する（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。
【００６５】
天然物の生理活性物質の重要なサブセットにより、細胞代謝の制御点である高度に保存されたストレス反応経路、たとえばＡＭＰＫ経路およびＴＯＲ経路が制御され、哺乳動物細胞に治療上の利益がもたらされる（Ｈｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  １３３：３８７−９１（２００８）；Ｇｒｏｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２３６：２４３−６４（２０１０）；Ｃｏｂｂｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０６：１２０５５−６０（２００９）；Ｆｉｎｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１０９−１７（２０１１））。ＡＡＲ経路は、ｍＴＯＲ経路およびＡＭＰＫ経路ほど研究されていないが、栄養素減少に対する細胞保護応答として真核生物全体に保存されている（Ｋｉｌｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ．２５：５９−８５（２００５））。アミノ酸が制限されると、プロテインキナーゼＧＣＮ２に結合して活性化する、チャージされていないｔＲＮＡの蓄積が起こる（図７）。ＧＣＮ２が活性化すると、その自己リン酸化のほか、翻訳開始因子ｅＩＦ２ａ（総称して包括的ストレス反応（ＩＳＲ）と呼ばれる複数の細胞ストレス反応経路に共有される要素）のリン酸化が起こる（Ｈａｒｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．１１：６１９−３３（２００３））。ｅＩＦ２ａがリン酸化されると、ｍＲＮＡのキャップ依存性翻訳の開始が一過性に減少すると同時に、転写因子ＡＴＦ４をコードするｍＲＮＡなどｍＲＮＡのサブセットのキャップ非依存性翻訳が増加する（Ｈａｒｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．６：１０９９−１０８（２０００））。ＡＴＦ４レベルが増加すると、細胞のストレス環境への適応を媒介する一連の遺伝子が活性化され、その中には転写因子Ｃ／ＥＢＰ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＨＯＰ）をコードする遺伝子も含まれる（Ｋｉｌｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ．２５：５９−８５（２００５））。真核細胞では、ＡＡＲ経路およびｍＴＯＲＣ１経路の両方が栄養状態の感知と、環境のアミノ酸供給の制限を緩和する細胞プログラムの活性化とに役割を果たしている。一方で、これらの代謝ストレス経路は、別々に活性化され、一連の異なる転写応答および生物学的作用を誘発する（Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２２：５５７５−８４（２００２；Ｄｅｖａｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｅｂｓ  Ｊ．２７６：７０７−１８（２００９）；Ｐａｌｉｉ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ（２００８））。ｍＴＯＲＣ１経路はＡＡＲとは異なり、アミノ酸制限により阻害され、アミノ酸レベルを直接感知すると考えられる（Ｓａｎｃａｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２０：１４９６−５０１（２００８））。一方、ＡＡＲ経路の活性化は、任意のアミノ酸の不足、またはアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼのいずれかの阻害に起因し得るチャージされていないｔＲＮＡの細胞内蓄積が引き金となる（Ｈａｒｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．１１：６１９−３３（２００３））。
【００６６】
エネルギー代謝産物および栄養素の環境レベルにおける変化に応答する代謝センサー経路、たとえばＡＭＰＫ経路、ＴＯＲ経路およびＡＡＲ経路は、癌（Ｚｏｎｃｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：２１−３５（２０１１））、炎症性疾患（Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３３：３０１−１１（２０１０）；Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：９２３−３４（２００８））および自己免疫疾患（Ｅｓｐｏｓｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．２２０：５２−６３；Ｎａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２：８００５−１４（２００９））の重要な薬物標的になっている。本発明者らの最近の研究から、ＨＦが、Ｔｈ１７誘導性多発性硬化症のマウスモデルの疾患発症をＡＡＲ経路の活性化により阻害することが示される（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。フェブリフジン由来の化合物の幅広い治療可能性に対する関心が強いにもかかわらず、その臨床開発は、その分子作用機序に関する知識の欠如により妨げられてきた。本発明者らは、フェブリフジンおよびその誘導体がグルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ（ＥＰＲＳ）のプロリルｔＲＮＡシンテターゼ活性を直接阻害することによりＡＡＲを活性化することを示した。本発明者らは、プロリルｔＲＮＡシンテターゼ（ＰＲＳ）活性部位においてフェブリフジン誘導体がプロリンと競合し、チャージされていないｔＲＮＡｐｒｏを蓄積させ、細胞のプロリン利用性の低下を模倣することを示した。本発明者らはさらに、外部からプロリンを添加すると広範囲のＨＦ誘導性の細胞作用が打ち消されることから、ＥＰＲＳ阻害がフェブリフジン誘導体の治療活性の根底にあることが示唆されることも示す。
【００６７】
本発明は、ハロフジノールおよび特定の立体化学を有するアナログを提供する。本発明の化合物は、グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ（ＥＰＲＳ）阻害、Ｔｈ１７分化およびアミノ酸飢餓応答（ＡＡＲ）誘導に関連する障害、たとえば慢性炎症、線維症、自己免疫疾患、瘢痕化、血管新生、移植片、インプラントもしくは医療装置の拒絶、虚血障害、ウイルス感染症および神経変性障害の処置に有用である。本化合物はまた、原虫のプロリルｔＲＮＡシンテターゼを阻害することにより原虫感染症、たとえばマラリアの処置にも使用することができる。本発明はまた、様々な疾患および状態（たとえば、慢性炎症、線維症、自己免疫疾患、瘢痕化、血管新生、移植片、インプラントもしくは医療装置の拒絶、虚血障害、ウイルス感染症、原虫感染症および神経変性障害）を処置するための医薬組成物および化粧料組成物と、本発明の化合物の使用方法と、本発明の化合物の合成方法とを提供する。
【００６８】
化合物
本発明の化合物はハロフジノールおよびその誘導体を含む。本明細書に提供する化合物は、驚くべき生物活性および／または安定性を有することが分かっている。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はｔＲＮＡシンテターゼを阻害する。特に、本発明の化合物はグルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ（ＥＰＲＳ）（たとえば、哺乳動物ＥＰＲＳ、ヒトＥＰＲＳ）を阻害する。特定の実施形態では、本発明の化合物は、非後生動物のプロリルｔＲＮＡシンテターゼ（たとえば、原生動物のプロリルｔＲＮＡシンテアーゼを阻害する。特定の実施形態では、提供する化合物はエフェクターＴ細胞のサブセット（すなわち、Ｔｈ１７細胞）の分化を抑制する。特定の実施形態では、提供する化合物はＩＬ−１７の産生を抑制する。特定の実施形態では、提供する化合物はアミノ酸飢餓応答（ＡＡＲ）を活性化する。
【００６９】
提供する化合物は、その生物活性により種々の疾患および状態の処置に有用である。たとえば、特定の実施形態では、本発明の化合物は、ＩＬ−１７の産生に関連する疾患および状態、たとえば関節炎、炎症性腸疾患、乾癬、多発性硬化症、ループス、喘息、ドライアイ症候群、ならびに他の自己免疫性および／または炎症性疾患の処置に有用である。他の特定の実施形態では、本発明の化合物は線維化促進遺伝子発現を抑制する。したがって、本発明の化合物は線維症の処置または予防に有用である。いくつかの実施形態では、提供する化合物はセルライトの処置または予防に有用である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はウイルス遺伝子の発現、複製および成熟を阻害する。他の実施形態では、本発明の化合物は臓器をストレスから保護する。特定の実施形態では、提供する化合物は、毒性タンパク質、たとえばハンチントン病などの神経変性疾患を引き起こすポリグルタミン含有タンパク質の合成を抑制する。いくつかの実施形態では、提供する化合物はオートファジーを促進する。特定の実施形態では、提供する化合物は、プロリンに富んだタンパク質、たとえばコラーゲンの合成を阻害する。他の特定の実施形態では、提供する化合物は血管新生を阻害する。特定の実施形態では、提供する化合物は原虫感染症の処置に有用である。
【００７０】
特定の実施形態では、本発明の化合物はｔＲＮＡシンテターゼの阻害に関して約１０μＭ未満、たとえば約１μＭ未満、たとえば約０．１μＭ未満または、たとえば約０．０１μＭ未満のＩＣ５０を有する。特定の実施形態では、ｔＲＮＡシンテターゼはＰｒｏＲＳである。特定の実施形態では、ｔＲＮＡシンテターゼはＥＰＲＳである。特定の実施形態では、本発明の化合物はＡＡＲの活性化に関して約１０μＭ未満、たとえば約１μＭ未満、たとえば、約０．１μＭ未満または、たとえば約０．０１μＭ未満ＩＣ５０を有する。提供する化合物は種々の疾患の処置に有用である。本発明の特定の化合物は、炎症性疾患または自己免疫疾患、たとえば炎症性腸疾患、多発性硬化症、関節リウマチ、ループス、乾癬、強皮症またはドライアイ症候群の処置に有用である。特定の実施形態では、提供する化合物は循環器疾患、血管新生を含む疾患、神経変性疾患またはタンパク質凝集性疾患の処置に有用である。特定の実施形態では、提供する化合物はＴ細胞新生物、たとえば成熟Ｔ細胞白血病、結節性末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、節外性ＰＴＣＬおよび皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）の処置に有用である。本発明の特定の化合物はまた、瘢痕化防止剤としても有用である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はウイルス感染症の処置に有用である。他の実施形態では、提供する化合物は再狭窄の処置または予防に有用である。
【００７１】
特定の実施形態では、本発明の化合物はハロフジノン、フェブリフジンまたは他の関連する天然物より毒性が低い。他の特定の実施形態では、本発明の化合物は、ｔＲＮＡシンテターゼの阻害に関してハロフジノン、フェブリフジンまたは他の関連する天然物より強力である。いくつかの実施形態では、ｔＲＮＡシンテターゼはＰｒｏＲＳである。いくつかの実施形態では、ｔＲＮＡシンテターゼはＥＰＲＳである。他の特定の実施形態では、本発明の化合物は、ＡＡＲの活性化に関してハロフジノン、フェブリフジンまたは他の関連する天然物より強力である。なお他の実施形態では、本発明の化合物はハロフジノン、フェブリフジンまたは他の関連する天然物より安定である。本発明の化合物は、本化合物を医薬剤または化粧料剤として使用するのにより好適なものにする１つまたは複数の特徴を有していてもよい。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はハロフジノン、フェブリフジンまたは他の関連する天然物と比較して改善された物理化学的特性を示す。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はハロフジノン、フェブリフジンまたは他の関連する天然物と比較して改善された薬物代謝／薬物動態特性を示す。特定の実施形態では、本発明の化合物はハロフジノン、フェブリフジンまたは他の関連する天然物より溶解性が高い。特定の実施形態では、本発明の化合物はハロフジノン、フェブリフジンまたは他の関連する天然物より水に溶解しやすい。
【００７２】
本発明の化合物は不斉中心を含む。いくつかの実施形態では、本発明はラセミ化合物（すなわち、式（Ｉ）に示した立体化学とその鏡像とが等量）を含む。いくつかの実施形態では、提供する化合物は１つのジアステレオマーで実質的に濃縮されている。いくつかの実施形態では、提供する化合物は１つのエナンチオマーで実質的に濃縮されている。こうした異性体は、精製技術および／または立体制御合成により得ることができる。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は一般に下記式の化合物；
【化５】
2015506363.tif 000007
（式中、
Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基であり；
Ｒ２はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＡ、−Ｎ（ＲＣ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基であり；
Ｒ３はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＤ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基であり；
Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＡおよびＲＢは独立に水素、ヒドロキシル保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；
ＲＣは水素、アミノ保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであるか；あるいは２つのＲＣはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＤは水素、アミノ保護基、アシルまたはアルキルであるか；あるいは２つのＲＤはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ｎは０、１、２、３または４であり；かつ
ｍは０または１である）
またはその薬学的に許容される塩である。
【００７４】
特定の実施形態では、本発明は、下記式（ＩＩ）の化合物：
【化６】
2015506363.tif 000008
（式中、
Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基であり；
Ｒ２は−ＯＲＡまたは−Ｎ（ＲＣ）２であり；
Ｒ３は−ＯＲＢまたは−Ｎ（ＲＤ）２であり；
Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり、式中、ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＡおよびＲＢは独立に水素、ヒドロキシル保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；
ＲＣは水素、アミノ保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであるか；あるいは２つのＲＣはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＤは水素、アミノ保護基、アシルまたはアルキルであるか；あるいは２つのＲＤはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ｎは０、１、２、３または４であり；かつ
ｍは０または１である）
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００７５】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化７】
2015506363.tif 000009
（式中、Ｒ１、Ｒ４、ＲＡおよびＲＢは本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００７６】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化８】
2015506363.tif 000010
（式中、Ｒ１、ＲＡおよびＲＢは本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００７７】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化９】
2015506363.tif 000011
（式中、ＲＡおよびＲＢは本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００７８】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１０】
2015506363.tif 000012
（式中、ＲＢは本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００７９】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１１】
2015506363.tif 000013
（式中、ＲＡは本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００８０】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１２】
2015506363.tif 000014
（式中、Ｒ１は本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００８１】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１３】
2015506363.tif 000015
またはその薬学的に許容される塩である。
【００８２】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１４】
2015506363.tif 000016
（式中、Ｒ１、ＲＡおよびＲＢは本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００８３】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１５】
2015506363.tif 000017
（式中、ＲＡおよびＲＢは本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００８４】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１６】
2015506363.tif 000018
（式中、ＲＢは本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００８５】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１７】
2015506363.tif 000019
（式中、ＲＡは本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００８６】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１８】
2015506363.tif 000020
（式中、Ｒ１は本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。
【００８７】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化１９】
2015506363.tif 000021
またはその薬学的に許容される塩である。
【００８８】
特定の実施形態では、本発明は式（ＩＩＩ）の化合物：
【化２０】
2015506363.tif 000022
（式中、
Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基であり；
Ｒ２はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＡ、−Ｎ（ＲＣ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基であり；
Ｒ３は−ＯＲＢであり；
Ｒ３’はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルケニルまたはＣ１〜６アルキニルであり；
Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；
ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ＲＡおよびＲＢは独立に水素、ヒドロキシル保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであり；
ＲＣは水素、アミノ保護基、アシルまたは任意選択的に置換されたアルキルであるか；あるいは２つのＲＣはその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成し；
ｎは０、１、２、３または４であり；かつ
ｍは０または１である）
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００８９】
いくつかの実施形態では、提供する化合物はラセミ混合物である。特定の実施形態では、提供する化合物は式（Ｉ）でないジアステレオマーを５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満含む。他の実施形態では、提供する化合物はエナンチオマー濃縮してある。特定の実施形態では、提供する化合物は少なくとも５０％ｅｅ、６０％ｅｅ、７０％ｅｅ、８０％ｅｅ、８５％ｅｅ、９０％ｅｅ、９５％ｅｅ、９６％ｅｅ、９７％ｅｅ、９８％ｅｅ、９９％ｅｅ、９９．５％ｅｅ、９９．９％ｅｅである。
【００９０】
いくつかの実施形態では、提供する化合物は単離されている。
【００９１】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ４は水素ではない。
【００９２】
いくつかの実施形態では、提供する化合物はフェブリフジノールである。いくつかの実施形態では、提供する化合物はフェブリフジノールではない。いくつかの実施形態では、提供する化合物はハロフジノールである。いくつかの実施形態では、提供する化合物はハロフジノールではない。
【化２１】
2015506363.tif 000023
【００９３】
上記に一般に定義したように、Ｒ１は水素、アシル、任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルまたは保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒ１は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ１は保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒ１はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである。他の実施形態では、Ｒ１はベンジルオキシカルボニル、アルキルオキシカルボニルまたはアリルオキシカルボニルである。特定の実施形態では、Ｒ１はベンジルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１はアシルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１はＣ１〜６アシルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１はＣ１〜３アシルである。特定の実施形態では、Ｒ１はアセチルである。他の実施形態では、Ｒ１はＣ１〜６アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１はメチル、エチル、プロピルまたはブチルである。特定の実施形態では、Ｒ１は水素ではなく、本化合物は、水素であるＲ１基が切断されて、活性代謝物を与えるプロドラッグである。こうしたプロドラッグは、腸管毒性を最小限に抑えるのに有用である場合がある。
【００９４】
式（Ｉ）および（ＩＩＩ）に関して上記に一般に定義したように、Ｒ２はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＡ、−Ｎ（ＲＣ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基である。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＯＲＡまたは−Ｎ（ＲＣ）２である。特定の実施形態では、Ｒ２はハロゲンである。特定の実施形態では、Ｒ２はアルキル、アルケニルまたはアルキニルである。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＳＲＡ１、−ＳＯＲＡ１または−ＳＯ２ＲＡ１である。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＣＮである。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＣＦ３である。特定の実施形態では、Ｒ２は−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１または−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２である。
【００９５】
式（ＩＩ）に関して上記に一般に定義したように、Ｒ２は−ＯＲＡまたは−Ｎ（ＲＣ）２である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は−ＯＲＡである。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＯＨである。特定の実施形態では、Ｒ２は−Ｏアシルである。特定の実施形態では、Ｒ２は−Ｏアルキルである。他の特定の実施形態では、Ｒ２は−ＯＲＡであり、式中、ＲＡはＣ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３または−ＯＡｃである。他の特定の実施形態では、Ｒ２は−ＯＲＡであり、式中、ＲＡはヒドロキシル保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は−Ｎ（ＲＣ）２である。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＮＨＲＣである。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＮＨ２である。他の特定の実施形態では、Ｒ２は−Ｎ（ＲＣ）２であり、式中、ＲＣはＨ、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＮＨＲＣであり、式中、ＲＣはＣ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである。特定の実施形態では、Ｒ２は−ＮＨＡｃ、−ＮＨＣＨ３または−ＮＨＣＨ２ＣＨ３である。他の特定の実施形態では、Ｒ２は−Ｎ（ＲＣ）２であり、式中、ＲＣはアミノ保護基である。
【００９６】
式（Ｉ）に関して上記に一般に定義したように、Ｒ３はハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、−ＯＲＢ、−Ｎ（ＲＤ）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＣＮおよび−ＣＦ３から選択される任意選択的に置換された基である。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＯＲＢまたは−Ｎ（ＲＤ）２である。特定の実施形態では、Ｒ３はハロゲンである。特定の実施形態では、Ｒ３はアルキル、アルケニルまたはアルキニルである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＳＲＡ１、−ＳＯＲＡ１、または−ＳＯ２ＲＡ１である。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＣＮである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＣＮである。特定の実施形態では、Ｒ３は−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１または−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２である。
【００９７】
式（ＩＩ）に関して上記に一般に定義したように、Ｒ３は−ＯＲＢまたは−Ｎ（ＲＤ）２である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は−ＯＲＢである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＯＨである。特定の実施形態では、Ｒ３は−Ｏアシルである。特定の実施形態では、Ｒ３は−Ｏアルキルである。他の特定の実施形態では、Ｒ３は−ＯＲＢであり、式中、ＲＢはＣ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３または−ＯＡｃである。他の特定の実施形態では、Ｒ３は−ＯＲＢであり、式中、ＲＢはヒドロキシル保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は−Ｎ（ＲＤ）２である。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＮＨＲＤである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＮＨ２である。他の特定の実施形態では、Ｒ３は−Ｎ（ＲＤ）２であり、式中、ＲＤはＨ、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＮＨＲＤであり、式中、ＲＤはＣ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＮＨＡｃ、−ＮＨＣＨ３または−ＮＨＣＨ２ＣＨ３である。他の特定の実施形態では、Ｒ３は−Ｎ（ＲＤ）２であり、式中、ＲＤはアミノ保護基である。
【００９８】
式（ＩＩＩ）に関して上記に一般に定義したように、Ｒ３は−ＯＲＢである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＯＨである。特定の実施形態では、Ｒ３は−Ｏアシルである。特定の実施形態では、Ｒ３は−Ｏアルキルである。他の特定の実施形態では、Ｒ３は−ＯＲＢであり、式中、ＲＢはＣ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アシルである。特定の実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３または−ＯＡｃである。他の特定の実施形態では、Ｒ３は−ＯＲＢであり、式中、ＲＢはヒドロキシル保護基である。
【００９９】
式（ＩＩＩ）に関して上記に一般に定義したように、Ｒ３’はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルケニルまたはＣ１〜６アルキニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３’はＣ１〜６アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ３’はＣ１〜３アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ３’はメチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３’はＣ１〜６アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ３’はＣ１〜３アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ３’はアリルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３’はＣ１〜６アルキニルである。特定の実施形態では、Ｒ３’はＣ１〜３アルキニルである。特定の実施形態では、Ｒ３’はプロパルギルである。
【０１００】
上記に一般に定義したように、Ｒ４は各々独立に水素、ハロゲン、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲＡ１、−Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲＡ１、−ＮＲＡ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ２）２、−Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）ＲＡ２−ＮＲＡ２Ｃ（＝ＮＲＡ２）Ｎ（ＲＡ２）２、−ＳＯＲＡ１、−ＳＯ２ＲＡ１、−ＮＲＡ２ＳＯ２ＲＡ１、−ＳＯ２Ｎ（ＲＡ２）２、−ＣＮ、−ＳＣＮおよび−ＮＯ２から選択される任意選択的に置換された基であり、式中、ＲＡ１は各々独立に水素、アミノ保護基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であり；ＲＡ２は各々独立に水素、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される任意選択的に置換された基であるか、あるいは２つのＲＡ２基はその間に介在する原子と一緒になって、任意選択的に置換された複素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ４の各例はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ４は各々ブロモおよびクロロから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ４は任意選択的に置換されたアルキニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ４はエチニルである。他の実施形態では、Ｒ４は置換エチニルである。特定の実施形態では、Ｒ４はトリアルキルシリル−エチニルである。特定の実施形態では、Ｒ４はトリメチルシリル−エチニルである。特定の実施形態では、Ｒ４は下記式である。
【化２２】
2015506363.tif 000024
【０１０１】
上記に一般に定義したように、ｎは０、１、２、３または４である。いくつかの実施形態では、ｎは０である。いくつかの実施形態では、ｎは１である。いくつかの実施形態では、ｎは２である。いくつかの実施形態では、ｎは３である。いくつかの実施形態では、ｎは４である。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ｎは０であるか、またはあるいは、ｎは１、２、３または４であり、Ｒ４の全例は水素であり、本化合物はフェブリフジノールである。他の実施形態では、ｎは２であり、１つのＲ４はブロモであり、他方のＲ４はクロロである。特定の実施形態では、ｎは２であり、１つのＲ４はブロモであり、他方のＲ４はクロロであり、本化合物はハロフジノールである。特定の実施形態では、ｎは２であり、１つのＲ４はハロゲンである。特定の実施形態では、ｎは２であり、１つのＲ４はクロロである。特定の実施形態では、ｎは２であり、１つのＲ４は任意選択的に置換されたアルキニルである。特定の実施形態では、ｎは２であり、１つのＲ４は任意選択的に置換されたアルキニルであり、他方のＲ４はハロゲンである。特定の実施形態では、ｎは２であり、１つのＲ４はエチニルであり、他方のＲ４はクロロである。
【０１０３】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式（式中、Ｒ４は水素ではなく、ｍ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は本明細書に記載する通りである）の１つ：
【化２３】
2015506363.tif 000025
またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。いくつかの実施形態では、ｍは０である。
【０１０４】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化２４】
2015506363.tif 000026
（式中、ｍ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。いくつかの実施形態では、ｍは０である。
【０１０５】
上記に一般に定義したように、ｍは０または１である。いくつかの実施形態では、ｍは０である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。
【０１０６】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式（式中、Ｒ４は水素ではなく、ｍ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３’は本明細書に記載する通りである）の１つ：
【化２５】
2015506363.tif 000027
またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。いくつかの実施形態では、ｍは０である。いくつかの実施形態では、ＲＡは水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ３’はメチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３’はアリルである。いくつかの実施形態では、ＲＡは水素であり、Ｒ３’はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＡは水素であり、Ｒ３’はアリルである。
【０１０７】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物：
【化２６】
2015506363.tif 000028
（式中、ｍ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３’は本明細書に記載する通りである）またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ｍは１である。いくつかの実施形態では、ｍは０である。いくつかの実施形態では、ＲＡは水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ３’はメチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３’はアリルである。いくつかの実施形態では、ＲＡは水素であり、Ｒ３’はメチルである。いくつかの実施形態では、ＲＡは水素であり、Ｒ３’はアリルである。
【０１０８】
特定の実施形態では、提供する化合物は下記式の化合物である。
【化２７】
2015506363.tif 000029
【０１０９】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物はハロフジノンと同じくらい強力である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はハロフジノンより強力である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はハロフジノンほど強力ではない。特定の実施形態では、本発明の化合物はハロフジノンと同様（たとえば、約２倍以内）の生物活性を有する。特定の実施形態では、本発明の化合物は、ｔＲＮＡシンテターゼ（たとえば、ＰｒｏＲＳ、ＥＰＲＳ）に対してハロフジノンより少なくとも１０倍、５倍、２倍活性がある。特定の実施形態では、本発明の化合物は、ｔＲＮＡシンテターゼ（たとえば、ＰｒｏＲＳ、ＥＰＲＳ）に対してハロフジノンより１０倍未満、５倍、２倍活性が低い。たとえば、ＨＦｏｌＡは、プロリルｔＲＮＡシンテターゼに対してハロフジノンより約２倍弱い（図２４）。別の例では、ＨＦｏｌＡは、ＡＡＲの活性化においてハロフジノンより約５〜１０倍弱い（図２６）。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物はジアステレオマーより活性がある。特定の実施形態では、本発明の化合物はジアステレオマーより２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍強力である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はエピマーより活性がある。特定の実施形態では、本発明の化合物はエピマーより２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍強力である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は活性があり、そのエピマーは不活性である。たとえば、ＨＦｏｌＡはプロリルｔＲＮＡシンテターゼ活性を阻害し、そのエピマーＨＦｏｌＢはプロリルｔＲＮＡシンテターゼアッセイにおいて測定可能な活性を示さない（図２５）。
【化２８】
2015506363.tif 000030
【０１１１】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物はハロフジノンより安定である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はフェブリフジンより安定である。いくつかの実施形態では、提供する化合物は溶液中でハロフジノンより安定である。他の実施形態では、提供する化合物は固体形態でハロフジノンより安定である。理論に拘泥するわけではないが、提供する化合物のハロフジノンと比較した安定性は、ハロフジノンの２位でのエピマー化によると考えられる。想定される機構は、反対側から再攻撃されるα，β−不飽和ケトンおよび第一級アミンを生成するレトロ−マイケル反応である（たとえば、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：３８６４−３８６９（２０１０））を参照されたい。この機構は本発明の化合物では不可能なはずである。
【０１１２】
本発明の化合物の合成
本発明により提供される化合物は、当業者に公知の任意の合成経路により調製することができる。たとえば、本化合物は本化合物の市販されている単純な出発材料から調製しても、より複雑な出発材料、たとえばハロフジノンまたはフェブリフジンを使用して半合成調製してもよい。本発明の化合物は、下記文献の手順を用いて調製することができる。米国特許第４，７６２，８３８号明細書；米国特許出願公開第２００８／０１８８４９８号明細書；Ｅｍｍａｎｕｖｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，「Ａ  ｃｏｎｃｉｓｅ  ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ（＋）−ｆｅｂｒｉｆｕｇｉｎｅ」Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ  ２０（１）：８４−８８，２００９；Ｏｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，「Ａ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ  Ｆｅｂｒｉｆｕｇｉｎｅ  Ａｌｋａｌｏｉｄｓ」Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３（６）：９５３−９５５，２００１；Ａｓｈｏｏｒｚａｄｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｅｎａｎｔｉｏｐｕｒｅ  ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ  Ｎ−ｏｘｉｄｅ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ（＋）−ｆｅｂｒｉｆｕｇｉｎｅ」Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ６５（２４）：４６７１−４６８０，２００９；Ｓｕｋｅｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｃｏｎｃｉｓｅ  ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ（＋）−ｆｅｂｒｉｆｕｇｉｎｅ  ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ  ｔｒａｎｓ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ａｄｄｉｔｉｏｎ」Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９）：３０８１−３０８７，２００８；Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｎｅｗ  Ｔｙｐｅ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｆｅｂｒｉｆｕｇｉｎｅ」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４９（１５）：４６９８−４７０６，２００６；Ｔａｋａｙａ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｎｅｗ  Ｔｙｐｅ  ｏｆ  Ｆｅｂｒｉｆｕｇｉｎｅ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ，Ｂｅａｒｉｎｇ  ａ  Ｑｕｉｎｏｌｉｚｉｄｉｎｅ  Ｍｏｉｅｔｙ，Ｓｈｏｗ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  Ｍａｌａｒｉａ  Ｐａｒａｓｉｔｅ」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４２（１６）：３１６３−３１６６，１９９９；米国特許出願公開第２０１１／０２６３５３２号明細書。本発明の化合物はまた、以下の合成スキームを用いて市販されている出発材料から調製してもよい。以下のスキームは、本発明の化合物を調製する合成有機化学者に利用可能な経路を例示することのみを意図している。当業者に容易に明らかなように、これらの例示的なスキームを変更して異なる出発材料、試薬および／または反応条件を使用してもよい。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、本発明は、特定の本発明の化合物のジアステレオ選択的合成を提供する。驚いたことに、嵩高い基、たとえばｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルでハロフジノンのピペリジン窒素を保護すると、望ましくない面がヒドリド攻撃からブロックされてハロフジノールの所望のジアステレオマーが得られることが分かった（スキーム１を参照）。特定の実施形態では、水素化ナトリウムを還元に利用する。こうした方法は、本発明の他の化合物を得るのにも同様に使用することができる（スキーム２）。あるいは、スキーム１で得られた生成物をさらに誘導体化して式（Ｉ）の他の化合物を得てもよい。
【化２９】
2015506363.tif 000031
【０１１４】
いくつかの実施形態では、Ｓ１を得るための還元はヒドリド試薬、たとえば水素化ホウ素ナトリウムの存在下で行う。特定の実施形態では、本反応は極性プロトン性溶媒（たとえば、メタノール、エタノール）中で行う。特定の実施形態では、本反応は極性非プロトン性溶媒（たとえば、テトラヒドロフラン）中で行う。生成物Ｓ２は、Ｒ１の種類を考慮して適切な条件を用いて脱保護する（Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，第４版，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００６を参照）。次いでＳ２は、必要に応じてさらに誘導体化してもよい。特定の実施形態では、ヒドロキシル基をアシル化またはアルキル化してそれぞれエステルまたはエーテルを得る。
【０１１５】
たとえば、ヒドロキシル（たとえば、光延反応または他の置換反応）から、またはケトン（たとえば、還元的アミノ化）からＲ２アミノ基またはＲ３アミノ基を含む本発明の化合物を合成してもよい。いくつかの実施形態では、スキーム３に示すように所望の立体化学のアミノ基を導入してもよい（式中、Ｐは保護基である）。他の実施形態では、スキーム４に示すようにアミノ基を導入してもよい。いくつかの実施形態では、スキーム５に示すように還元的アミノ化を立体選択的に進行させてもよい。
【化３０】
2015506363.tif 000032
【０１１６】
グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ（ＥＰＲＳ）の阻害
本明細書に記載の特定の化合物は、後生動物のグルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ（ＥＰＲＳ）または非後生動物のプロリルｔＲＮＡシンテターゼの阻害剤として働く。特定の実施形態では、ＥＰＲＳは真核生物ＥＰＲＳである。特定の実施形態では、ＥＰＲＳはヒトＥＰＲＳである。特定の実施形態では、プロリルｔＲＮＡシンテターゼは原虫プロリルｔＲＮＡシンテターゼである。これらの阻害剤の構造的特徴はピペリジン環もしくはピロリジン環、またはそのアナログである。特定の理論に拘泥するわけではないが、本発明の化合物のピペリジン環またはピロリジン環は、プロリンのピロリジン環のようにｔＲＮＡシンテターゼの活性部位に結合して、アミノ酸プロリンのｔＲＮＡシンテターゼへのチャージを阻止することにより作用すると考えられる。
【０１１７】
ＥＰＲＳまたは他のｔＲＮＡシンテターゼが阻害されると、チャージされていないプロリルｔＲＮＡが蓄積し、その後アミノ酸飢餓応答（ＡＡＲ）が活性化される。Ｔ細胞においてＡＡＲが活性化すると、自己免疫を促進するエフェクターＴ細胞のサブセット（Ｔｈ１７細胞）の分化が抑制される。ＡＡＲはまた、線維化促進遺伝子発現およびウイルス遺伝子の発現、複製および成熟も抑制する。ＡＡＲは、ストレス（たとえば、糖尿病の発症時における膵臓のＥＲストレス）からの臓器の保護に貢献することができる。
【０１１８】
ＥＰＲＳが阻害されると、タンパク質、たとえばハンチントン病などの神経変性疾患を引き起こすポリグルタミン含有タンパク質の合成および蓄積が抑制される。このクラスのＥＰＲＳ阻害剤はまた、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などの疾患においてタンパク質凝集体を取り除くプロセスであるオートファジーも促進する。したがってハロフジノールおよび同様の活性化合物は、オートファジーの促進物質として有用である。
【０１１９】
ＥＰＲＳ（他のｔＲＮＡシンテターゼではない）の特異的阻害は、コラーゲンなどのプロリンに富んだタンパク質の合成も阻害するため、過剰なコラーゲン沈着による瘢痕化および線維症の阻害に有用であり得る。コラーゲン合成の阻害は、化粧料用途および治療用途に有用であり得る。本発明の化合物は、線維症におけるコラーゲンの役割のため、コラーゲンの蓄積に関連する様々な化粧料用途および治療用途に有用なものとなる。本発明の化合物はまた、皮膚線条およびセルライトの処置にも有用である。
【０１２０】
コラーゲンの合成とＥＣＭの分解およびリモデリングとは、血管新生、全身性硬化症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、肺および肝線維症ならびに自己免疫疾患を含む多くの生理学的および病理学的状態に関係している。これらの疾患は、多くの場合、正常組織の構造および機能を破壊する、結合組織成分、特にコラーゲンの過剰産生に関連している。したがって、本発明の化合物は、コラーゲン蓄積またはＥＣＭの分解およびリモデリングに関連する疾患の処置または予防に有用であり得る。
【０１２１】
インビトロ方法
提供する化合物は、スクリーニングを行って、所望の生物活性、たとえば、ＥＰＲＳを阻害することでＴｈ１７細胞、たとえば、ＩＬ−１７分泌細胞の発生および／または増殖を調節する能力、を有する化合物を特定してもよい。ＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞の発生および／または増殖、たとえば、Ｔｈ１７の発生および／または増殖などのＩＬ−１７発現細胞の発生および／または増殖の選択的阻害剤をスクリーニングするためのアッセイは、Ｔ細胞の発生および／または増殖を可能にするのに十分な条件下、ナイーブＴ細胞集団を被検化合物と接触させること、細胞集団を培養すること、細胞集団におけるＩＬ−１７の発現レベルおよび／またはＴｈ１７細胞数を検出することを含み、細胞集団におけるＩＬ−１７の発現レベルに変化がないまたは低下すると、被検化合物が選択的Ｔｈ１７阻害剤であることが示され、および／または、細胞集団におけるＴｈ１７細胞数に変化がないまたは減少すると、被検化合物が選択的Ｔｈ１７阻害剤であることが示される。細胞集団におけるＩＬ−１７の発現レベルおよび／またはＴｈ１７細胞数の判定は、たとえばＩＬ−１７または他のＴｈ１７細胞のマーカーに結合する検出剤、たとえば、Ｔｈ１７特異的転写因子ＲＯＲｇａｍｍａｔ（ＲＯＲγｔ）を使用することにより達成することができる。特定の実施形態では、検出剤は抗体である。検出剤は、放射性同位元素または酵素標識に結合して、ＩＬ−１７または他のＴｈ１７マーカーへの検出剤の結合を標識化合物の検出により判定できるようにしてもよい。たとえば、検出剤は１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃまたは３Ｈで直接的あるいは間接的に標識してもよく、放射線放出（ｒａｄｉｏｅｍｉｓｓｉｏｎ）の直接測定により、またはシンチレーション測定により放射性同位元素を検出する。あるいは、検出剤は、たとえば、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼまたはルシフェラーゼで酵素標識して、酵素標識を、適切な基質の生成物への変換を判定することにより検出してもよい。
【０１２２】
本発明の化合物およびその組成物を用いたＴｈ１７細胞の分化および／または増殖ならびに他の細胞機能の調節方法
ハロフジノンおよびそのアナログは、細胞性傷害、持続性炎症および自己免疫に関連する、Ｔｈ１７系譜から分かれたＴ細胞の発生を特異的に変化させることが分かっている。特定の実施形態では、本発明の化合物はＴｈ１７系譜から分かれたＴ細胞の発生を変化させる。
【０１２３】
Ｔｈ１７細胞は、炎症および線維症を促進する役割を果たし得るいくつかのサイトカイン、たとえばＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＩＬ−２１およびＧＭ−ＣＳＦを分泌する。これらのサイトカインのうち、ＩＬ−１７は、他のＴ細胞ではなくＴｈ１７細胞の特異的産物である。炎症応答においてＴｈ１７細胞がＩＬ−１７の唯一の供給源であるかどうかは不明であるが、ＩＬ−１７レベルの上昇は一般にＴｈ１７細胞集団の増殖を反映すると考えられる。
【０１２４】
Ｔｈ１７細胞集団の増殖またはＩＬ−１７産生の増加に関連している疾患として、関節リウマチ、多発性硬化症、クローン病、炎症性腸疾患、ドライアイ症候群、ライム病、気道炎症、移植拒絶反応、移植片対宿主病、ループス、乾癬、強皮症、歯周炎、全身性硬化症、冠動脈疾患、心筋炎、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、および微生物感染（たとえば、ウイルス感染、原虫感染、真菌感染または細菌感染）に関連する炎症があるが、これに限定されるものではない。
【０１２５】
提供する化合物は、ＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞、たとえばＴｈ１７細胞などのＩＬ−１７発現細胞の慢性炎症性活性を抑制することにより、これらの疾患のいずれかの処置に有用であり得る。場合によっては、本化合物は、疾患の根本原因（たとえば、関節リウマチにおける自己免疫性炎症）に対応することができる。他の場合には（たとえば、糖尿病、歯周炎）、本化合物は根本原因には対応することができないが、疾患に関する症状を軽減することができる。
【０１２６】
ＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞、たとえば、Ｔｈ１７細胞およびそれに関連するサイトカインＩＬ−１７は、ハロフジノールおよびそのアナログにより処置できる可能性がある疾患を予測または診断するための幅広い枠組みを与える。具体的には、提供する化合物を用いて、または提供する化合物と他のＴｈ１７アンタゴニストとを組み合わせて、症状発現前の線維症および／または移植片／グラフト拒絶反応を特定および処置することができる。加えて、その時点でＴｈ１７細胞による傷害および炎症の持続を伴っていない疾患も、Ｔｈ１７細胞の増殖またはＩＬ−１７レベル（たとえば、血清または滑液中）の上昇の測定により特定することができる。あるいは、またはさらに、Ｔｈ１７分化後に活性化される一連の遺伝子の特徴付けを行う遺伝子プロファイリングを使用すると、組織における組織学的／病理学的変化の前にＴｈ１７による患部組織の検出を可能にすることができる。
【０１２７】
提供する化合物は相乗的な治療効果を得るため、Ｔｈ１７の発生を抑制する働きをする他の作用物質と組み合わせて使用してもよい。有望な相乗的作用物質として、どれもＴｈ１７分化を抑制することができる、抗ＩＬ−２１抗体もしくはその抗原結合フラグメント、レチノイン酸、または抗ＩＬ−６抗体もしくはその抗原結合フラグメントが挙げられよう。
【０１２８】
提供する化合物は、炎症および／または免疫学的反応を抑制する働きをする他の作用物質、たとえばステロイド（たとえば、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン）、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ；たとえば、イブプロフェン、アセトミノフィン、アスピリン、セレコキシブ、バルデコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブ、ニメスリド、ナプロキセン）または免疫抑制剤（たとえば、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６）と組み合わせて使用してもよい。特定の実施形態では、提供する化合物は、免疫調節性の作用物質（たとえば、ｍＴＯＲ経路のモジュレーター；サリドマイドおよびその誘導体、たとえばレナリドマイドおよびアクチミド；ビグアナイド、たとえばメトホルミン、フェンホルミン、ブホルミンおよびプログアニル；およびＨＤＡＣ阻害剤、たとえばトリコスタチンＡ、ロミデプシン、ＳＡＨＡ、ＰＸＤ１０１、ＬＡＱ８２４、ＬＢＨ５８９、ＭＳ２７５、ＣＩ９９４、ＭＧＣＤ０１０３およびバルプロ酸作用物質と組み合わせて使用する。いくつかの実施形態では、ｔＲＮＡシンテターゼを阻害する作用物質をプロ炎症性サイトカインの阻害剤と組み合わせて使用する。標的とし得るプロ炎症性サイトカイン（上記で論じたＩＬ−６およびＩＬ−２１に加えて）には、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１α、ＩＬ−ＩβおよびＩＬ−２３がある。こうした阻害剤の例として、サイトカインに結合するかあるいはサイトカインの受容体に結合してその活性を遮断する抗体、サイトカインの発現を低下させる作用物質（たとえば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）剤またはアンチセンス剤）、可溶性サイトカイン受容体、および小分子阻害剤が挙げられる（たとえば、国際公開第２００７／０５８９９０号パンフレットを参照されたい）。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、提供する化合物をＴＮＦαの阻害剤と組み合わせて使用する。いくつかの実施形態では、ＴＮＦαの阻害剤は抗ＴＮＦα抗体もしくはその抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＮＦα抗体はアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（商標））である。いくつかの実施形態では、抗ＴＮＦα抗体はインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））である。いくつかの実施形態では、抗ＴＮＦα抗体はＣＤＰ５７１である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦαの阻害剤はＴＮＦα受容体またはそのフラグメントである。たとえば、いくつかの実施形態では、ＴＮＦα阻害剤は、ヒトＩｇＧ１分子のＦｃフラグメントで連結された２つの可溶性ＴＮＦ受容体を有する組換え融合タンパク質エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦαの阻害剤はＴＮＦαの発現を阻害する作用物質、たとえば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介する核酸分子（たとえば、ＴＮＦα選択的ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ）またはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。たとえば、ＴＮＦα阻害剤として、たとえば短干渉核酸（ｓｉＮＡ）、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を挙げることができる（たとえば、本明細書に援用する米国特許出願公開第２００５／０２２７９３５号明細書を参照されたい）。
【０１３０】
提供する化合物は、疾患動物モデルを用いて評価することができる。特定の本発明の化合物がグラフト拒絶反応を抑制するかどうか判定するため、動物、たとえばラット、マウス、ウサギ、モルモット、イヌまたは非ヒト霊長類に同種移植または異種移植（たとえば、皮膚グラフト、臓器移植または細胞インプラント）を行ってもよい。同じ遺伝的背景を有するが、Ｈ−２遺伝子座にミスマッチがあるＣ５７Ｂ１−１０、Ｂ１０．ＢＲおよびＢ１０．ＡＫＭ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）などのマウスの系統は、様々な臓器グラフトを評価するのにかなり好適である。
【０１３１】
特定の一例では、Ｏｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．５７：２２５，１９６９に記載されたように、たとえば、ドナー心臓を宿主の腹部の大血管に吻合することにより心臓グラフトを行って心臓移植を行う。さらにＣｏｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  １６：３４３，１９７３を参照されたい。移植された心臓の機能は、腹壁を通して心室収縮を触診することで評価することができる。心筋収縮の停止の場合に拒絶反応と定義される。本阻害剤で処置した動物に未処置の宿主より、ドナー心臓の心筋収縮が長時間見られる場合、本発明の化合物は、臓器拒絶反応を抑えるのに効果的であると考えられる。
【０１３２】
別の例では、皮膚グラフト拒絶反応を低下させる際の本発明の化合物の有効性は、動物モデルを用いて評価される。齧歯動物に皮膚グラフトを実施するには、ドナー動物を麻酔し、尾の一部から皮膚の全層を除去する。レシピエント動物も麻酔し、剪毛した側腹部から一区域の皮膚（たとえば、０．５×０．５ｃｍ）を除去して移植床を形成する。ドナー皮膚を移植床に合う形状にし、定置し、ガーゼで覆い、包帯をする。グラフトは、手術日の６日後から毎日点検し、移植された上皮の半分超が生育不能に見える場合に拒絶されたと見なす。宿主の生着期間が未処置の宿主に見られるより長くなる本発明の化合物は、この種の実験に効果的であると考えられる。
【０１３３】
別の例では、膵島細胞同種モデルを用いて本発明の化合物を評価する。齧歯動物、たとえばストレプトゾトシン（２２５ｍｇ／ｋｇ；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の単回腹腔内注射で糖尿病にした６〜８週齢Ｂ６ＡＦｌマウスに、ＤＢＡ／２Ｊ島細胞同種移植片を移植してもよい。対照として、同系の島細胞グラフトを糖尿病マウスに移植してもよい。島細胞の移植は、公表されたプロトコルに従い行うことができる（たとえば、Ｅｍａｍａｕｌｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５６（５）：１２８９−９８，２００７を参照されたい）。同種移植機能は、連続的血糖測定により追跡することができる（Ａｃｃｕ−Ｃｈｅｃｋ  ＩＩＩ（商標）；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。初回グラフト機能（ｐｒｉｍａｒｙ  ｇｒａｆｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）の期間後の正常レベルを超える血糖の上昇（各々少なくとも２日連続の）から、グラフト拒絶反応が示唆される。本発明の化合物がＩ型糖尿病を処置または予防する能力を評価するのに使用できる別のモデルにＮＯＤ（非肥満糖尿病）マウスモデルがある。
【０１３４】
別の例では、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）モデルを用いて本発明の化合物を評価する。こうしたモデルの１つでは、スコポラミンヒドロブロミドを皮膚に１日４回投与して、環境制御チャンバーにおいてマウスにＤＥＤを誘発する。チャンバー条件は相対湿度＜３０％、気流１５Ｌ／分および一定温度（２１〜２３℃）を含む。ドライアイの誘発は、角膜のフルオレセイン染色で角膜の完全性の変化を測定することにより確認することができる（たとえば、Ｃｈａｕｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２：１２４７−１２５２，２００９；Ｂａｒａｂｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉ．４６：２７６６−２７７１，２００５；およびＲａｓｈｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．１２６：２１９−２２５，２００８を参照されたい）。
【０１３５】
リウマチ性疾患、たとえば関節リウマチおよび全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、Ｉ型糖尿病、ドライアイ症候群、ならびに甲状腺、腸および中枢神経系の自己免疫疾患など多くの自己免疫疾患が、動物でモデル化されてきた。たとえば、ＳＬＥの動物モデルとして、ＭＲＬマウス、ＢＸＳＢマウスおよびＮＺＢマウスならびにこれらの一代雑種が挙げられる。本発明の化合物の投与が、これらの疾患の１つの動物モデルの免疫応答を効果的に抑制するどうかを判定するには、動物の一般的な健康状態のほか、腎組織の組織学的外観を使用してもよい。
【０１３６】
たとえば、Ｅｌｌｉｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．は、腸症の動物モデルについて記載している（Ｅｌｌｉｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃｅｌｉａｃ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｎ：Ｔｈｅ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｔｈｉｒｄ  ｅｄ．，Ｎ．Ｒ．Ｒｏｓｅ  ａｎｄ  Ｉ．Ｒ．ＭａｃＫａｙ，ｅｄｓ．Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ）。遺伝子改変遺伝子欠失を含むマウスは、ＩＢＤと同様の腸の慢性炎症を発症する。たとえば、Ｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １０９：１３４４，１９９５；Ｌｕｄｖｉｋｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：１０４，１９９７；およびＭｏｍｂａｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ７５：２７４，１９９３）を参照されたい。ＳＬＥを発症するマウスのＭＲＬ系統の１つＭＲＬ−ｌｐｒ／ｌｐｒも、ヒトの関節リウマチに似た形態の関節炎を発症する（Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：２６９，１９８５）。
【０１３７】
実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）など中枢神経系（ＣＮＳ）の自己免疫疾患のモデルも、たとえば、脳または脊髄組織をアジュバントと共に動物に注射することにより実験的に誘導することができる（たとえば、Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ａｎｄ  Ｚａｍｖｉｌ，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．６０：１２−２１，２００６を参照されたい）。ＥＡＥモデルの１つでは、Ｃ５７Ｂ／６マウスに、ミエリン塩基性タンパク質のイムノドミナントなペプチドを含む完全フロイントアジュバントを注射する。本発明の化合物で処置した動物においてＥＡＥ疾患と相互関係のあるもの、たとえば尾の緊張消失、歩行の困難／変化、後肢麻痺、前肢麻痺および罹患率を対照と比較してモニターする。
【０１３８】
提供する化合物は、Ｔ細胞分化プロセスだけでなく、線維症および血管新生などのプロセスも特異的に変化させることができる。線維症は、本発明の化合物の線維芽細胞挙動に対する作用を観察することによりインビトロでアッセイすることができる。本明細書に記載の化合物の評価に使用される例示的なアッセイの１つでは、真皮および皮下組織の間質マトリックスと類似したＩ型コラーゲンのマトリックス中で初代皮膚線維芽細胞を、線維芽細胞が基層に付着し拡散するように培養する。本明細書に記載の化合物の存在下で線維芽細胞の付着および拡散が阻害されると、本化合物が抗線維性を有することが示される。提供する化合物の非免疫細胞機能に対する生物学的作用も、インビボで評価することができる。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は細胞外マトリックスの沈着を抑える（たとえば、創傷治癒の動物モデルにおいて；たとえば、Ｐｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ９：４１７−４２５，２００３を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、別の細胞機能、たとえば細胞増殖またはタンパク質合成を阻害する濃度より低い濃度で細胞外マトリックスの沈着を抑える。
【０１３９】
本発明はさらに、本発明の化合物を使用して疾患を処置する方法も提供する。本発明の方法は、治療有効量の本発明の化合物を被検体（以下に限定されるものではないが、ヒトまたは他の動物）に投与することを含む。
【０１４０】
本明細書に記載の化合物および組成物は、グルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ（ＥＰＲＳ）の阻害に有用である。ＥＰＲＳが阻害されると、チャージされていないｔＲＮＡが蓄積され、その結果アミノ酸飢餓応答（ＡＡＲ）が活性化される。この応答が活性化されると、１）線維化促進遺伝子発現；２）自己免疫を促進するＴｈ１７細胞へのナイーブＴ細胞の分化；３）ウイルス遺伝子の発現、複製および成熟；ならびに／または４）臓器のストレス（たとえば、移植における）が抑制される。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、ＥＰＲＳを阻害する本発明の化合物はインビボで抗線維性を有する。たとえば、ＥＰＲＳ阻害剤であるハロフジノンは、強力に真皮細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の沈着を抑える（Ｐｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ９：４１７−４２５，２００３）。ハロフジノンは、Ｉ型コラーゲン、フィブロネクチン、マトリックスメタロペプチダーゼＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９、ならびにメタロプロテアーゼ阻害剤ＴＩＭＰ−２などＥＣＭ機能の多くの成分およびモジュレーターの転写を阻害する（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１１：３０４６−３０５０，２００５；Ｐｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ９：４１７−４２５，２００３）。線維症におけるＥＣＭ沈着の変化、組織肥厚および収縮に関わる主な細胞型は、線維芽細胞および筋線維芽細胞である。筋線維芽細胞は、多くの場合、組織損傷およびメカニカルストレス後のサイトカイン放出に応答してその線維芽前駆細胞から成熟／分化するもので、様々な臓器および病理学的状態における線維芽細胞と区別することができる（Ｂｏｒｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３１：１２８６−１２９２，１９９４；Ｂｒａｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．１：１３４９−１３６５，１９９９；Ｆｌａｎｄｅｒｓ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ．８５：４７−６４，２００４）。ハロフジノンは、有望な抗線維治療剤として詳しく研究されてきており、上記の特性に由来する用途に関して第２相臨床試験まで進行している。
【０１４２】
創傷治癒および線維性疾患の動物モデルにおいて、ハロフジノンを腹腔内に導入する、食物に添加する、あるいは局所に塗布すると、過剰な真皮ＥＣＭの沈着が抑えられる（Ｐｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ９：４１７−４２５，２００３）。ハロフジノンは現在、強皮症（Ｐｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ９：４１７−４２５，２００３）、膀胱癌（Ｅｌｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：４１１１−４１１８，１９９９）およびカポジ肉腫における血管新生処置剤として第２相臨床試験にあるほか、様々な他の線維症関連障害の臨床調査の初期段階にある（Ｎａｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１５４：１０８２−１０８６，１９９６；Ｎａｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１７：１９４−２０２，１９９７；Ｎａｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４０：１３９７−１４０３，２００４；Ｏｚｃｅｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．１８７：２５７−２６０，２００４）。本明細書に示した結果から、線維症の阻害は、少なくとも一部がグルタミル−プロリルｔＲＮＡシンテターゼ（ＥＰＲＳ）の阻害によるものであることが示される。
【０１４３】
ハロフジノールおよびハロフジノンは、培養線維芽細胞において１型コラーゲンの発現を阻害し、活性化線維芽細胞マーカーＳ１００Ａ４の発現を阻害する（図２７および２８）。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、線維芽細胞の線維化促進活性を阻害する。このため、特定の実施形態では、本発明は、線維芽細胞関連障害を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本発明の化合物またはその薬学的に許容される組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１４５】
本明細書で使用する場合、「線維芽細胞関連」障害という用語は、線維芽細胞が一定の役割を果たしていることが分かっている任意の疾患または他の有害な状態を意味する。したがって、本発明の別の実施形態は、線維芽細胞が一定の役割を果たしていることが分かっている１つまたは複数の疾患、以下に限定されるものではないが、線維症、セルライトおよび皮膚線条を処置するあるいはその重症度を低下させることに関する。特定の実施形態では、本発明の化合物は、筋線維芽細胞の成熟を阻害することにより被検体のセルライトの出現を抑える。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、細胞外マトリックスのリモデリングを調節することにより被検体のセルライトの出現を抑える。
【０１４６】
高濃度（２０〜４０ｎＭ）のハロフジノンがＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＢ２２０＋Ｂ細胞の活性化を阻害するのが一般的であるが、ハロフジノンは、Ｔｈ１７細胞の発生、すなわち、もっぱら高レベルのプロ炎症性サイトカインのインターロイキンＩＬ−１７を発現するＴへルーパーサブセットの発生も低濃度で特異的に阻害する（各々その全体を本明細書に援用する、２００７年８月１５日に出願された米国仮特許出願第６０／９６４，９３６号明細書に対する優先権を主張する２００８年８月１５日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０８／０９７７４号パンフレット）。Ｔｈ１７細胞は、そのＩＬ−１７分泌に応じて、マウスの２つの重要な自己免疫疾患、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）およびＩＩ型コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）の発生病理に非常に重要な役割を果たしている。ＥＡＥおよびＣＩＡは、ヒト自己免疫性病理変化、多発性硬化症（ＭＳ）および関節リウマチ（ＲＡ）のマウスモデルである。ハロフジノンは、これらのモデルにおいて活性であることが示されている。ＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞の発生などＩＬ−１７発現細胞の発生、たとえば、Ｔｈ１７細胞の発生の、ハロフジノンによる特異的阻害は極めて低濃度で起こり、５０％阻害は約３ｎＭで達成される。したがって、ハロフジノンによる処置は、Ｔｈ１７介在性および／またはＩＬ−１７関連疾患、たとえば自己免疫疾患、持続性炎症性疾患および感染症の発症を特異的に阻害する一方、遅延型過敏症あるいは感染症の文脈において深刻なＴ細胞機能障害をきたさない。本発明の化合物はまた、Ｔｈ１７介在性および／またはＩＬ−１７関連疾患の発症を阻害するため使用してもよい。
【０１４７】
ハロフジノンおよびそのアナログは、ナイーブＴ細胞のＩＬ−１７発現Ｔｈ１７細胞への分化を妨害する。このため、特定の実施形態では、本発明はＴｈ１７介在性またはＩＬ−１７介在性障害を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、本発明の化合物またはその薬学的に許容される組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１４８】
本明細書で使用する場合、「Ｔｈ１７介在性」障害および「ＩＬ−１７介在性」障害という用語は、Ｔｈ１７またはＩＬ−１７が一定の役割を果たしていることが分かっている任意の疾患または他の有害な状態を意味する。したがって、本発明の別の実施形態は、Ｔｈ１７またはＩＬ−１７が一定の役割を果たしていることが分かっている１つまたは複数の疾患、以下に限定されるものではないが、自己免疫疾患、炎症性疾患、感染症、血管新生を処置するあるいはその重症度を低下させること、および移植における臓器保護に関する。
【０１４９】
本発明の化合物および医薬組成物は、疾患または状態、以下に限定されるものではないが、喘息、関節炎、炎症性疾患（たとえば、クローン病、関節リウマチ、乾癬、ドライアイ症候群）、増殖性疾患（たとえば、癌、良性新生物、糖尿病性網膜症）、循環器疾患、マラリア、自己免疫疾患（たとえば、関節リウマチ、ループス、多発性硬化症、乾癬、強皮症またはドライアイ症候群）およびＴ細胞新生物（たとえば、成熟Ｔ細胞白血病、結節性末梢Ｔ細胞リンパ腫、節外性ＰＴＣＬおよび皮膚Ｔ細胞リンパ腫）の処置または予防に使用してもよい。本発明の化合物およびその医薬組成物は、動物、好ましくは哺乳動物（たとえば、飼い慣らされた動物、ネコ、イヌ、マウス、ラット）に、一層好ましくはヒトに投与してもよい。提供する化合物または医薬組成物を動物に送達するには、任意の投与方法を使用することができる。特定の実施形態では、提供する化合物または医薬組成物を経口投与する。他の実施形態では、提供する化合物または医薬組成物を非経口投与する。
【０１５０】
特定の実施形態では、本発明は、自己免疫疾患、以下に限定されるものではないが、急性散在性脳脊髄炎、汎発性脱毛症、円形脱毛症、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、関節炎、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー−皮膚炎、セリアック病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、クレスト症候群、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、ドライアイ症候群、子宮内膜症、自律神経障害、本態性混合性クリオグロブリン血症、線維筋痛症、線維筋炎、糸球体腎炎、特発性肺線維症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、ＩｇＡニューロパチー、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、若年性関節炎、扁平苔癬、メニエール病、混合性結合組織病、１型または免疫性糖尿病、若年性関節炎、多発性硬化症、重症筋無力症、ニューロミオトニア、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、変形性関節症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、スチル病、全身性紅斑性狼瘡、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、特発性血小板減少性紫斑病、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、たとえば疱疹状皮膚炎／血管炎、白斑、外陰部痛、温式自己免疫性溶血性貧血、およびウェゲナー肉芽腫症を処置するあるいはその重症度を低下させる方法を提供する。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、本発明は、１つまたは複数の疾患および状態を処置するあるいはその重症度を低下させる方法であって、疾患または状態が、免疫学的な状態または疾患、以下に限定されるものではないが、移植片対宿主病、移植、輸血、アナフィラキシー、アレルギー（たとえば、植物花粉、ラテックス、薬剤、食物、昆虫毒、動物の毛、動物のフケ、ダニまたはゴキブリの杯状部（ｃｏｃｋｒｏａｃｈ  ｃａｌｙｘ）に対するアレルギー）、Ｉ型過敏症、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎およびアトピー性皮膚炎から選択される方法を提供する。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、本発明は、炎症性疾患、以下に限定されるものではないが、喘息、虫垂炎、Ｂｌａｕ症候群、眼瞼炎、細気管支炎、気管支炎、滑液包炎、子宮頸管炎、胆管炎、胆嚢炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、大腸炎、結膜炎、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、膀胱炎、涙腺炎、皮膚炎、皮膚筋炎、ドライアイ症候群、脳炎、心内膜炎、子宮内膜炎、腸炎、小腸結腸炎、上顆炎、精巣上体炎、家族性感冒自己炎症性症候群、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、筋膜炎、結合織炎、胃炎、胃腸炎、肝炎、化膿性汗腺炎、喉頭炎、乳腺炎、髄膜炎、メバロン酸キナーゼ欠損症（ＭＫＤ）、マックル・ウェル症候群、脊髄炎心筋炎、筋炎、腎炎、卵巣炎、精巣炎、骨炎、炎症性骨溶解、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、胸膜炎、静脈炎、肺臓炎、肺炎、直腸炎、前立腺炎、肺線維症、腎盂腎炎、壊疽性膿皮症およびアクネ症候群（ＰＡＰＡ）、化膿性無菌性関節炎、鼻炎、卵管炎、副鼻腔炎、口内炎、滑膜炎、全身性若年性関節リウマチ、腱炎、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）、扁桃炎、未分化脊椎関節症、未分化関節症、ぶどう膜炎、膣炎、血管炎、外陰部炎、慢性ウイルスもしくは細菌感染症に起因する慢性炎症、または乾癬（たとえば、尋常性乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、滴状乾癬または逆乾癬）を処置するあるいはその重症度を低下させるための方法を提供する。
【０１５３】
特定の実施形態では、本発明は、関節症および骨病理学的疾患（ｏｓｔｅｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）、以下に限定されるものではないが、関節リウマチ、変形性関節症、痛風、多発性関節炎および乾癬性関節炎を処置するあるいはその重症度を低下させるための方法を提供する。
【０１５４】
特定の実施形態では、本発明は、過剰増殖性疾患、以下に限定されるものではないが、乾癬または平滑筋細胞増殖、たとえば血管増殖性障害、アテローム性動脈硬化症および再狭窄を処置するあるいはその重症度を低下させるための方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、子宮内膜症、子宮筋腫、子宮内膜過形成および良性前立腺肥大を処置するあるいはその重症度を低下させるための方法を提供する。
【０１５５】
特定の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞新生物、以下に限定されるものではないが、成熟Ｔ細胞白血病（たとえば、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、Ｔ細胞大顆粒リンパ性白血病（Ｔ−ＬＧＬ）、ＮＫ細胞の慢性リンパ増殖性疾患、侵攻性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ））、結節性末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）（たとえば、特定不能の末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ−ＮＯＳ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞性リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陽性あるいはＡＬＫ陰性））、節外性ＰＴＣＬ（たとえば、節外性ＮＫ細胞／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型腸管症関連Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、脾臓Ｔ細胞リンパ腫（ＨＳＴＬ）、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫（たとえば、αβのみ）（ＳＰＴＣＬ））、および皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（たとえば、菌状息肉腫（ＭＦ）、セザリー症候群（ＳＳ）、原発性皮膚ＣＤ３０＋Ｔ細胞リンパ増殖性疾患（たとえば、原発性皮膚ＡＬＣＬ（Ｃ−ＡＬＣＬ）、リンパ腫様丘疹症（ＬＹＰ））、原発性皮膚ＰＴＣＬ（たとえば、γδＴ細胞リンパ腫、ＣＤ８＋進行性表皮向性細胞傷害性、ＣＤ４＋小／中細胞型）を処置するあるいはその重症度を低下させるための方法を提供する。
【０１５６】
特定の実施形態では、本発明は、急性および慢性炎症性疾患、以下に限定されるものではないが、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、クローン病、ドライアイ症候群、アレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、嚢胞性線維症、慢性閉塞性気管支炎および喘息を処置するあるいはその重症度を低下させるための方法を提供する。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、本発明は、心血管障害、以下に限定されるものではないが、心筋梗塞、狭心症、血管形成術後の再閉塞、血管形成術後の再狭窄、大動脈冠動脈バイパス後の再閉塞、大動脈冠動脈バイパス後の再狭窄、脳卒中、一過性虚血、末梢動脈閉塞性疾患、肺塞栓症、深部静脈血栓症、虚血性脳卒中、心肥大および心不全を処置するあるいはその重症度を低下させるための方法を提供する。
【０１５８】
本発明は、上記の状態または疾患に罹患しているヒトを含む哺乳動物の処置方法をさらに含む。本方法は、薬理学的に活性で治療上有効な量の１つまたは複数の本発明の化合物を、こうした処置を必要とする被検体に投与することを含む。
【０１５９】
医薬組成物
本発明はさらに、本明細書に言及した疾患および／または状態の処置および／または予防および／または軽減に利用される医薬組成物を製造するための、提供する化合物の使用に関する。
【０１６０】
本発明はさらに、医薬組成物を製造するための、提供する化合物の使用に関する。
【０１６１】
本発明はさらに、線維症を阻害または処置する医薬組成物を製造するための、提供する化合物の使用に関する。
【０１６２】
本発明はさらに、自己免疫性または炎症性疾患などのＩＬ−１７の産生の阻害に反応する疾患、たとえば、本明細書に言及した疾患のいずれかの処置、予防または軽減に使用することができる医薬組成物を製造するための、提供する化合物の使用に関する。
【０１６３】
必要とされる正確な量は、被検体の種、年齢および全身状態、個々の作用物質、その投与モード、その活性のメカニズムおよび同種のものに応じて被検体ごとに異なる。本発明の化合物は好ましくは、投与のしやすさ、および投薬量の均一性から投薬単位剤形で製剤化される。しかしながら、本発明の作用物質の１日の総使用量は、適切な医学的判断の範囲内において主治医により決定されることが理解されよう。任意の特定の患者または生物の具体的な治療有効用量レベルは、種々の因子、たとえば処置される障害および障害の重症度；利用する特定の作用物質；患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別および食事；利用する特定の作用物質の投与期間、投与経路および排泄速度；処置の期間；利用する特定の作用物質と組み合わせて、あるいは同時に使用される薬剤；および医療技術分野で公知の同様の因子によって異なる。
【０１６４】
さらに、本発明の医薬組成物は、適切な薬学的に許容されるキャリアと共に所望の投薬量で製剤化された後、処置される感染症の重症度に応じてヒトおよび他の動物に経口投与しても、直腸内投与しても、非経口投与しても、大槽内投与しても、膣内投与しても、腹腔内投与しても、局所投与しても（たとえば散剤、軟膏剤または滴剤により）、口腔内投与しても、経口もしくは鼻スプレーとして投与しても、あるいは同種のもので投与してもよい。特定の実施形態では、本発明の作用物質は、所望の治療効果を得るため１日当たり被検体体重に対して約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、一層好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇを１日１回または複数回送達するのに十分な投薬量レベルで経口投与してもあるいは非経口投与してもよい。所望の投薬量は１日３回送達しても、１日２回送達しても、１日１回送達しても、１日おきに送達しても、３日おきに送達しても、毎週送達しても、２週おきに送達しても、３週おきに送達しても、あるいは４週おきに送達してもよい。特定の実施形態では、所望の投薬量は、複数回（たとえば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回またはそれ以上）投与により送達してもよい。特定の実施形態では、本発明の化合物を、本作用物質が非特異的作用を引き起こす用量未満の用量で投与する。特定の実施形態では、被検体に全身性の免疫抑制を引き起こさない用量で本発明の化合物を投与する。
【０１６５】
経口投与および非経口投与用の液体剤形として、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤があるが、これに限定されるものではない。液体剤形は、活性剤に加えて当該技術分野において一般に使用される不活性希釈剤、たとえば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、たとえばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物を含んでもよい。経口組成物は、不活性希釈剤に加えて補助剤、たとえば湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味料、香味剤および香料をさらに含んでもよい。非経口投与用の特定の実施形態では、本発明の作用物質を可溶化剤、たとえばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ（登録商標）（ポリエトキシル化ヒマシ油）、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマーおよびこれらの組み合わせと混合する。
【０１６６】
注射用調製物、たとえば、無菌の注射用水性または油性懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の技術に従い製剤化することができる。無菌の注射用調製物はまた、無菌の注射用溶液、懸濁液またはエマルジョンを含む無毒の非経口的に許容される希釈液または溶媒であり、たとえば、１，３−ブタンジオール溶液としてもよい。利用してもよい許容可能なビヒクルおよび溶媒には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の不揮発性油も溶媒または懸濁媒体として従来から利用されている。このような場合には、合成モノまたはジグリセリドなど刺激のない任意の不揮発性油を利用してもよい。さらに、注射剤の調製には脂肪酸、たとえばオレイン酸も使用される。
【０１６７】
注射用製剤は、たとえば、細菌捕集フィルターに通す濾過により、あるいは、使用前に滅菌水または他の無菌の注射用媒体に溶解または分散させることができる無菌の固体組成物の形態の滅菌剤を加えることにより滅菌することができる。
【０１６８】
薬剤の作用を長期間持続させるため、皮下または筋肉内注射による薬剤の吸収を遅延させると望ましいことがよくある。これは、水溶性に乏しい結晶またはアモルファス材料の液体懸濁液を使用することにより達成することができる。その場合、薬剤の吸収速度はその溶出速度に依存し、溶出速度は結晶の大きさおよび結晶の形状に依存し得る。あるいは、非経口投与される薬剤形態の吸収の遅延は、油性ビヒクルに薬剤を溶解または懸濁させることにより達成してもよい。注射用デポ形態は、生分解性ポリマー、たとえばポリ（ラクチド−コ−グリコリド）中に薬剤のマイクロカプセル化マトリックスを形成することにより作られる。薬剤とポリマーとの比率および利用される個々のポリマーの性質に応じて、薬物の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例として、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。注射用デポ製剤はまた、体組織との適合性があるリポソームまたはマイクロエマルジョンに薬剤を封入することによっても調製される。
【０１６９】
直腸投与または膣投与用の組成物は好ましくは、周囲温度で固体であるが、体温では液体であるため、直腸または膣腔で溶融して活性剤を放出する好適な非刺激性の賦形剤またはキャリア、たとえばカカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ワックスと本発明の化合物を混合することにより調製することができる坐剤である。
【０１７０】
経口投与用の固形剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤が挙げられる。こうした固形剤形では、活性剤を少なくとも１種の不活性な薬学的に許容される賦形剤またはキャリア、たとえばクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムおよび／またはａ）充填剤または増量剤、たとえばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸、ｂ）バインダー、たとえばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシア、ｃ）保湿剤、たとえばグリセロール、ｄ）崩壊剤、たとえば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケートおよび炭酸ナトリウム、ｅ）溶解遅延化剤、たとえばパラフィン、ｆ）吸収促進剤、たとえば第四級アンモニウム化合物、ｇ）湿潤剤、たとえばセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール、ｈ）吸収剤、たとえばカオリンおよびベントナイト粘土、およびｉ）滑沢剤、たとえばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびこれらの混合物と混合する。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合には、その剤形は緩衝剤をさらに含んでもよい。
【０１７１】
同様のタイプの固体組成物はさらに、ラクトースまたは乳糖のほか、高分子量ポリエチレングリコールおよび同種のもののような賦形剤を使用して、軟および硬ゼラチンカプセル剤の充填剤として利用してもよい。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、コーティングおよびシェル、たとえば腸溶コーティングおよび医薬製剤技術分野でよく知られた他のコーティングを用いて調製することができる。固形剤形は任意選択的に不透明剤を含んでもよく、任意選択的に遅延性に腸管の特定の部位で活性成分のみをまたは活性成分を優先的に放出する組成物の固形剤形であってもよい。使用することができる封入組成物の例としては、重合性物質およびワックスが挙げられる。同様のタイプの固体組成物はさらに、ラクトースまたは乳糖のほか、高分子量ポリエチレングリコールおよび同種のもののような賦形剤を使用して、軟および硬ゼラチンカプセル剤の充填剤として使用してもよい。
【０１７２】
活性剤はまた、上述のような１種または複数種の賦形剤を含むマイクロカプセル形態をとってもよい。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、コーティングおよびシェル、たとえば腸溶コーティング、放出制御コーティングおよび医薬製剤技術分野でよく知られた他のコーティングを用いて調製することができる。こうした固形剤形では活性剤を少なくとも１種の不活性希釈剤、たとえばスクロース、ラクトースまたはデンプンと混合してもよい。こうした剤形は、通常行われているように、不活性希釈剤以外の別の物質、たとえば、打錠用滑沢剤および他の打錠助剤、たとえばステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロースをさらに含んでもよい。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合には、その剤形は緩衝剤をさらに含んでもよい。その剤形は任意選択的に不透明剤をさらに含んでもよく、任意選択的に遅延性に腸管の特定の部位で活性成分のみをまたは活性成分を優先的に放出する組成物の固形剤形であってもよい。使用することができる封入組成物の例としては、重合性物質およびワックスが挙げられる。
【０１７３】
局所投与に好適な製剤として、液体または半液体調製物、たとえばリニメント剤、ローション剤、ゲル剤、塗布剤（ａｐｐｌｉｃａｎｔｓ）、水中油型または油中水型エマルジョン、たとえばクリーム剤、軟膏剤またはペースト剤；または溶液剤または懸濁剤、たとえば滴剤が挙げられる。皮膚表面への局所投与用の製剤は、薬剤を皮膚科学的に許容されるキャリア、たとえばローション、クリーム、軟膏または石鹸を用いて分散させることにより調製することができる。有用なキャリアは、塗布物を局部にとどめ移動しないように皮膚上に膜または層を形成することができる。内部組織表面への局所投与では、液体組織接着剤、または組織表面への吸着を促進することが分かっている他の物質に作用物質を分散させてもよい。たとえば、ヒドロキシプロピルセルロース溶液またはフィブリノーゲン／トロンビン溶液を有利に使用してもよい。あるいは、組織コーティング溶液、たとえばペクチン含有製剤を使用してもよい。眼科用製剤、点耳薬および点眼薬も本発明の範囲内にあるものとして意図している。加えて、本発明は、作用物質の体への送達を制御するという別の利点を有する経皮パッチの使用も意図している。こうした剤形は、作用物質を適切な媒体に溶解または分散させることにより作ることができる。皮膚を通過する作用物質の流れを促進するため、吸収促進剤をさらに使用してもよい。その速度は、放出制御膜を設けることにより、あるいは作用物質をポリマーマトリックスまたはゲルに分散させることにより制御することができる。
【０１７４】
加えて、局所製剤のキャリアは、含水アルコール系（たとえば、液体およびゲル）、無水油またはシリコーンを用いた系、またはエマルジョン系、以下に限定されるものではないが、水中油型、油中水型、水中油中水型およびシリコーン中水中油型（ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｓｉｌｉｃｏｎｅ）エマルジョンの形態を取ってもよい。エマルジョンは、広範囲のコンシステンシー、たとえば薄いローション（スプレーまたはエアロゾル送達にも好適であり得る）、クリーム状ローション、ライトクリーム、ヘビークリームおよび同種のものを包含し得る。エマルジョンは、マイクロエマルジョン系をさらに含んでもよい。他の好適な局所用キャリアとして、無水固形物および半固形物（たとえばゲルおよびスティック）；および水性ムース系が挙げられる。
【０１７５】
さらに、本発明の作用物質および医薬組成物は併用療法に利用してもよいこと、すなわち、本作用物質および医薬組成物は、１つまたは複数の他の所望の治療剤または医学的手技と同時に投与しても、その前に投与しても、あるいはその後に投与してもよいことも理解されよう。併用レジメンで利用される療法（治療剤または手技）の個々の組み合わせは、所望の治療剤および／または手技の適合性、ならびに達成しようとする所望の治療効果を考慮に入れる。さらに、利用する療法は、所望の作用を同じ障害に対して達成しても（たとえば、本発明の化合物を別の作用物質と同時に投与してもよい）、異なる作用（たとえば、任意の有害作用の制御）を達成してもよいことも理解されよう。
【０１７６】
さらに別の態様では、本発明はまた、本発明の医薬組成物の成分の１つまたは複数の入った１つまたは複数の容器を含む医療パックまたはキットも提供し、特定の実施形態では、併用療法薬として承認された別の治療薬を含む。こうした容器には任意選択的に、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府機関により定められた形式の注意書が添付されていてもよく、注意書にはヒト投与のための製造、使用または販売に関する政府機関の承認が反映されている。
【０１７７】
Ｔｈ１７の調節を必要とする被検体を特定する方法
本発明の種々の実施形態では、好適なインビトロまたはインビボ研究を行い、ＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞などのＩＬ−１７発現細胞、たとえばＴｈ１７細胞の発生を調節する特定の治療剤の投与が、所定の被検体または被検体集団の処置に適応となるかどうかを判定する。たとえば、ＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞の発生などのＩＬ−１７発現細胞の発生、たとえばＴｈ１７細胞の発生を調節する化合物を使用した処置を必要とする被検体は、ＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞などのＩＬ−１７発現細胞、たとえばＴｈ１７細胞のサンプルを所定の被験者から採取し、細胞のサンプルを増殖させることにより特定される。細胞集団が増殖するにつれ、種々の炎症性サイトカインマーカー、たとえばＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−６、ＩＬ−２１、ＩＬ−２およびＴＮＦαのいずれかの濃度も上昇する場合、被験者は、本明細書に記載の化合物、組成物および方法のいずれかを使用した処置の候補となる。
【０１７８】
処置を必要とする被検体は、高レベルのＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞などのＩＬ−１７発現細胞、たとえばＴｈ１７細胞、または高レベルのＴｈ１７細胞関連サイトカインまたはＴｈ１７細胞により分泌されるサイトカインを検出することによっても特定される。評価対象のサイトカインレベルは、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−６、ＩＬ−２１、ＴＮＦαおよびＧＭ−ＣＳＦを含む。サイトカインＩＬ−１７のほか、他のサイトカイン、たとえばＩＬ−６、ＩＬ−２１、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＧＭ−ＣＳＦも典型的には炎症および／または感染において誘導される。このため、正常な被検体におけるこれらのサイトカインの発現レベルと比較して被検体または生物学的サンプルにおけるこれらのサイトカインの発現レベルが任意選択的に高いと、本発明の化合物を用いた処置が望ましい病状または他の状態の指標として有用である。いくつかの研究から、健康な患者の血清中のＩＬ−１７のレベルは２ｐｇ／ｍＬ未満（すなわち、使用されるアッセイの検出限界未満）である一方、肝傷害の患者は２〜１８ｐｇ／ｍＬの範囲のＩＬ−１７発現レベルを有し、関節リウマチの患者は１００ｐｇ／ｍＬを上回るレベルを有したことが示されている（各々を本明細書に援用する、Ｙａｓｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌ  Ｒｅｓ．（２００７）３７：２４８−２５４、およびＺｉｏｌｋｏｗｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）１６４：２８３２−２８３８を参照）。このため、被検体または生物学的サンプルにおいて２ｐｇ／ｍＬを上回るＩＬ−１７発現レベルが検出されると、本発明の化合物またはその組成物を用いた処置を必要とする被検体の特定に有用である。
【０１７９】
Ｔｈ１７関連および／またはＩＬ−１７関連疾患、たとえば自己免疫疾患、持続性炎症性疾患または感染症に罹患しているまたはそれを発症するリスクがある被検体は、当該技術分野において公知の方法により特定される。たとえば、自己免疫疾患、持続性炎症性疾患または感染症に罹患している被検体は、所定の自己免疫性疾患、持続性炎症性疾患または感染症に関連する１つまたは複数の徴候または症状の存在に基づき診断することができる。一般的な症状として、たとえば、炎症、発熱、食欲不振、体重減少、腹部症状、たとえば腹痛、下痢もしくは便秘、関節の痛み（ｊｏｉｎｔ  ｐａｉｎ  ｏｒ  ａｃｈｅｓ）（関節痛）、疲労、発疹、貧血、寒冷に対する極端な感受性（レイノー現象）、筋力低下、筋肉疲労、皮膚または組織の色調の変化、息切れまたは他の異常な呼吸パターン、胸痛または胸筋の収縮、異常な心拍数（たとえば、増加または減少）、光感受性、かすみ目または他の視覚異常、および臓器機能の低下が挙げられる。
【０１８０】
自己免疫疾患、たとえば、多発性硬化症、関節リウマチ、クローン病に罹患している被検体は、免疫状態を評価するための種々の臨床試験および／または臨床検査、たとえば理学的検査、放射線検査、ならびに血液、尿および便の分析のいずれかを用いて特定される。たとえば、感染症、たとえばライム病に罹患している被検体は、症状、客観的な身体所見（たとえば遊走性紅斑、顔面神経麻痺または関節炎）および過去に感染マダニと接触した可能性に基づき特定される。血液検査の結果は一般にライム病の診断の確認に使用される。
【０１８１】
Ｔｈ１７の調節の生物学的作用の判定
本発明の種々の実施形態では、好適なインビトロまたはインビボ研究を行い、ＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞などのＩＬ−１７発現細胞、たとえばＴｈ１７細胞の発生を調節する特定の治療剤の作用、およびその投与が所定の被検体または被検体集団の処置の適応となるかどうかを判定する。たとえば、患者由来のサンプルにおけるＩＬ−１７の産生のレベルおよび／またはＩＬ−１７発現エフェクターＴ細胞などのＩＬ−１７発現細胞、たとえばＴｈ１７細胞の数を測定することにより、選択的Ｔｈ１７阻害剤、たとえば本発明の化合物の生物学的作用をモニターする。本発明の化合物の生物学的作用は、Ｔｈ１７関連および／またはＩＬ−１７関連疾患、たとえば自己免疫疾患、持続性炎症性疾患または感染症に罹患している、またはそれを発症するリスクがある患者の身体および／または臨床観察によっても測定される。たとえば、Ｔｈ１７関連疾患および／またはＩＬ−１７関連疾患に罹患している患者への特定のＴｈ１７阻害剤の投与は、障害に関連する徴候または症状の１つまたは複数が緩和される、減少する、阻害される、あるいはそれ以上の状態、すなわち、より悪い状態に進行しない場合、成功と見なされる。
【０１８２】
本発明の上記および他の態様は、以下の実施例を検討すると理解が深まるであろう。実施例は、本発明の特定の具体的な実施形態を説明すること意図しているが、特許請求の範囲により規定される本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０１８３】
ハロフジノンのＢｏｃ保護
【化３１】
2015506363.tif 000033
９８２ｍｇのジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートを含む１０ｍＬのＤＭＦを、１．５ｇのハロフジノンヒドロブロミド（＋／−）および１．３ｍＬのジイソプロピルエチルアミンを１００ｍＬに溶かした溶液に加えた。この反応混合物を１６時間室温で撹拌した。水の添加後、水相をジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。この粗生成物を、ジクロロメタン／メタノールを用いてシリカゲルで精製して所望のＢｏｃ保護されたラセミ生成物を白色の固体として定量的収率で得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  ８．２２（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），５．０２（ｓ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｓ，１Ｈ），２．９８（ｄｄ，Ｊ＝１５．８，７．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７６（ｄ，Ｊ＝１９．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７２−２．５５（ｍ，１Ｈ），１．７０（ｑ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，２Ｈ），１．５４（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），１．３７（ｍ，１０Ｈ）。
【０１８４】
ＮａＢＨ４を用いたＢｏｃ−ＨＦの還元
【化３２】
2015506363.tif 000034
２０７ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）のＭＡＺ１３１０（＋／−）を１０ｍＬのメタノールおよび３ｍＬのＴＨＦに懸濁した。０℃まで冷却後、１０ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）のＮａＢＨ４を加え、透明な反応混合物をさらに６０分撹拌した。０℃で撹拌すると所望の生成物が溶液から白色の固体として沈殿した。この固体を濾過により単離し、メタノールから再結晶化させて純粋な生成物を得た。母液を濃縮し、水／ＭｅＣＮ（０．１％ＦＡを含む）を移動相としてＡｔｌａｎｔｉｓカラム（Ｗａｔｅｒｓ）を用いたＨＰＬＣにより精製してさらにＭＡＺ１８０４Ｂおよび微量生成物としてのジアステレオマーＭＡＺ１８０４Ｃを得た（残りの生成物ＭＡＺ１８０４Ａ−ＭＡＺ１８０４Ｂ／Ｃの還元キナゾロン）。ＭＡＺ１８０４Ｂ（ラセミ）の１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  ８．２６（ｓ，１Ｈ），８．２２（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），４．９９（ｓ，１Ｈ），４．５７（ｓ，１Ｈ），４．２３（ｓ，１Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９５−３．７０（ｍ，３Ｈ），３．６１（ｓ，１Ｈ），２．７５（ｓ，１Ｈ），１．９３−１．４５（ｍ，５Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ  ｏｆ  ＭＡＺ１８０４Ｂ：ｃａｌｃ．：５１８．０８８４  ｆｏｕｎｄ：５１８．０８８５［Ｍ＋Ｈ］。
【０１８５】
ハロフジノールを得るための脱保護
【化３３】
2015506363.tif 000035
２００ｕＬのＨＣｌ（４Ｍのジオキサン中）を、１０ｍｇのＭＡＺ１８０４Ｂ（＋／−）を２ｍｌのメタノール／ＴＨＦ（１：１）に溶かした溶液に加えた。この反応混合物を一晩室温で撹拌した。減圧下で溶媒の除去後、さらに精製を必要とすることなく所望の生成物を塩酸塩（ラセミ）としての白色粉末として定量的収率で得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  ８．８０−８．４５（ｍ，１Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），８．２５（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４４（ｔｄ，Ｊ＝９．０，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），２．８３（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），２．１４（ｄｔ，Ｊ＝１４．５，３．５Ｈｚ，１Ｈ），１．９８−１．７２（ｍ，２Ｈ），１．６８−１．３１（ｍ，２Ｈ）．ＨＲＭＳ：ｃａｌｃ．：４１８．０３５７  ｆｏｕｎｄ：５１８．０３６０［Ｍ＋Ｈ］。
【０１８６】
主要な生成物としてエピマーを得る別の合成
【化３４】
2015506363.tif 000036
１２ｍｇのハロフジノンヒドロクロリド（＋／−）および３０μＬのジイソプロピルエチルアミンを２ｍＬのメタノールに溶解させ、０℃まで冷却した。５ｍｇのＮａＢＨ４を加え、反応を１時間０℃で撹拌し、室温に加温した。ＬＣ／ＭＳ解析から出発材料の十分な消費が示された。溶媒を減圧下で除去し、生成物をさらに精製することなく使用した。１ｍｇの粗ＭＡＺ１８０９をＤＭＦに溶解させ、続いて１ｍｇのＢｏｃ２Ｏを添加した。反応を室温で撹拌し、ＬＣ／ＭＳにより解析した。ＭＡＺ１８０４ＢおよびＭＡＺ１８０４Ｃの標準品との比較から、ＭＡＺ１８０４Ｃが主要な生成物として形成されることが示される。
【０１８７】
ＨＦおよびＨＦｏｌＡによるＰｒｏＲＳ活性の阻害
ＥＰＲＳのプロリルｔＲＮＡシンテターゼドメイン（ＰｒｏＲＳ）の活性を、チャージされたｔＲＮＡプールへの３Ｈ  Ｐｒｏの取り込みとして測定した。この反応に、ハロフジノン（ＨＦ）またはＨＦｏｌ（ＨＦｏｌＡ）の活性ジアステレオマーを表記の濃度で加えた。ＨＦｏｌＡはＰｒｏＲＳの強力な阻害剤であるが、ＨＦより約２倍弱い（図２４）。ヒトＥＰＲＳのプロリルｔＲＮＡシンテターゼドメイン（ＰｒｏＲＳ）を、６−Ｈｉｓタグを用いて大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に発現させ、記載されたように精製した（Ｈｅａｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４（１９９６））。精製した酵素は、Ｌａｅｍｍｌｉのゲル電気泳動／Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ染色により単一バンドとして可視化した。酵素活性については、チャージされたｔＲＮＡ画分を、迅速なバッチ法によるＭｏｎｏ  Ｑセファロース（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）への結合により単離し（Ｊａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：２７８６（１９９１））、液体シンチレーション計測法により定量したこと以外は、本質的に記載された通り３Ｈ  ＰｒｏのｔＲＮＡ画分への取り込みによりアッセイした（Ｔｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１７７０１−９（１９９２））。ＨＦｏｌＢも同様に試験し、本アッセイにおいて非活性であることが示された（図２５）。
【０１８８】
インタクトな細胞におけるＨＦおよびＨＦｏｌＡによるアミノ酸応答（ＡＡＲ）の活性化
初代ヒト線維芽細胞におけるＡＡＲ活性化を、ＡＡＲ応答遺伝子シスタチオナーゼを誘導するものとしてハウスキーピング遺伝子対照（ＧＡＰＤＨ）と比較して測定した。細胞を表記の濃度のＨＦまたはＨＦｏｌＡで処理し、下記のようなＲｏｃｈｅ  ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅ  ＵＰＲシステムを用いたＱ−ＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現の解析のため４時間後に回収した。ＨＦｏｌＡは、ＨＦと比較して５〜１０倍以内の効力でシスタチオナーゼを誘導した。
【０１８９】
ＨＦはインビトロでの翻訳においてプロリン利用を限定する
ＨＦはＴ細胞および線維芽細胞においてＡＡＲ経路を活性化し、ＡＡＲ経路が活性化されると、プロ炎症性Ｔｈ１７細胞の発生が選択的に阻害される（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。インタクトな細胞では、ｔＲＮＡへのアミノ酸の取り込みは、ｔＲＮＡのチャージに関与する酵素を阻害することにより、あるいは、輸送、合成もしくは異化に対する作用を通して細胞内のアミノ酸レベルが低下することにより限定され得る。これらの可能性を区別するため、本発明者らは、翻訳におけるアミノ酸の利用性を直接制御することができる無細胞インビトロ翻訳系（ウサギ網状赤血球ライセート、ＲＲＬ）においてＨＦおよびフェブリフジン（ＦＦ）の作用を試験した。ＨＦおよびＦＦの両方がＲＲＬにおいてルシフェラーゼＲＮＡの翻訳を阻害した。ＲＲＬに過剰のアミノ酸を補充すると、プロリンのみがＨＦにより阻害された翻訳を回復することが確認された（図２Ａ）。ＦＦおよびＨＦの抗マラリア薬としての活性（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．ｃｈｅｍ．６４：６８３３−６８４１（１９９９））およびＨＦのＴｈ１７細胞分化阻害剤としての活性（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））は、エナンチオ特異的である。ＦＦの絶対配置と一致するＨＦの２Ｒ，３Ｓ異性体（２）は、生物活性を示す。これらの観察結果を裏付けるように、ＨＦの２Ｓ，３Ｒ異性体はやはりＲＲＬアッセイにおいて活性を有しない（図２Ｂ）。加えて、細胞ベースのアッセイにおいて活性が見られないＨＦ誘導体（ＭＡＺ１３１０（３）およびＭＡＺ１４４２（４））もＲＲＬアッセイにおいて活性を有しない（図２Ｂ）。これらのデータから、プロリン利用を阻害するＦＦおよびＨＦの能力がこれらの化合物の生物活性と機能的に関連していることが示唆される。
【０１９０】
ＨＦ／ＦＦによる阻害が翻訳におけるプロリンの利用を特異的に標的とすることを確認するため、本発明者らは、プロリル残基の存在に関してのみ異なる、グルタメートに富んだ合成ポリペプチド（１１８アミノ酸のうち２４アミノ酸）のペアの翻訳に、これらの化合物がどのような影響を与えるかを調べた。本発明者らは、２つのエピトープタグ付きポリペプチドをコードするｃＤＮＡを合成した。Ｐｒｏｐｅｐと呼ぶ第１のｃＤＮＡはプロリンジペプチドをコードし、Ｎｏｐｒｏｐｅｐと呼ぶ第２のｃＤＮＡは、プロリンを含まないペプチドをコードする。ＨＦおよびＦＦはＰｒｏｐｅｐの翻訳を阻止するが、Ｎｏｐｒｏｐｅｐの翻訳に対してまったく作用を有しないことから（図２Ｃ）、プロリン利用が、ＲＲＬにおける翻訳に対するこれらの化合物の阻害作用の唯一の標的であることが確認される。本合成ペプチドはグルタメートに富んでいるため、ＨＦ／ＦＦの存在下でＮｏｐｒｏｐｅｐの翻訳が障害されないことは、これらの条件下でＥＰＲＳのグルタミル−ｔＲＮＡシンテターゼ活性の阻害を受けないことの強い反証となる。
【０１９１】
次に、本発明者らは、ＲＲＬ系においてプロリル−ｔＲＮＡのチャージに対するＨＦの作用を直接調べた。ＨＦの存在下または非存在下でＲＲＬに１４Ｃ−Ｐｒｏまたは３５Ｓ−Ｍｅｔを追加し、全ｔＲＮＡを単離した（図２Ｄ）。ＨＦは翻訳の阻害に必要な用量と同等の用量で、ｔＲＮＡへの１４Ｃ−Ｐｒｏの取り込みを阻害したが、３５Ｓ−Ｍｅｔの取り込みを阻害しなかったことから、ＨＦによるアミノ酸利用の阻害がプロリンに特異的であることが示される。さらに、ラット肝臓から精製したＥＰＲＳをＲＲＬに加えると、ＲＲＬのインビトロ翻訳のＨＦ阻害に対する感受性が実質的に低下することから（図８）、ＥＰＲＳがＲＲＬにおけるこれらの化合物による翻訳の阻害の重要な標的であることが確認される。
【０１９２】
ＨＦは精製ＰｒｏＲＳの競合的阻害剤である
ＨＦによるＥＰＲＳの阻害のメカニズムを直接調べるため、本発明者らは、異所的に発現させて精製したＥＰＲＳのプロリルｔＲＮＡシンテターゼドメイン（ＰｒｏＲＳ）を用いてｔＲＮＡｐｒｏのチャージに対するＨＦの作用を試験した。阻害キネティクスの予備的な解析から、ＰｒｏＲＳに対するＨＦの見掛けのＫｉはｔＲＮＡチャージアッセイにおけるＰｒｏＲＳ酵素の濃度と同程度であることが示された。この環境では、アッセイにおいて全阻害剤のかなりの割合が酵素に結合し、したがってミカエリス−メンテン解析は適用できない。強結合阻害剤に対する別の解析アプローチが記載されており（Ｒｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：５７１−７（２００５）、Ｃｏｐｅｌａｎｄに要約されている（Ｃｏｐｅｌａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ａｎａｌ．４６：１−２６５（２００５））。このアプローチでは阻害の様式を阻害剤のＩＣ５０と様々な基質濃度との関係から判定することができる。強結合の競合的阻害剤の場合、この関係は、ＩＣ５０＝Ｋｉ（１＋［Ｓ］／Ｋｍ）＋０．５＊Ｅｔにより得られ、Ｅｔは反応における活性酵素の濃度である（Ｃｏｐｅｌａｎｄにより記載された方法により定量される（Ｃｏｐｅｌａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ａｎａｌ．４６：１−２６５（２００５））、図１０）。競合的阻害は、ＩＣ５０と［Ｓ］との直線関係（正の傾きを有する）に反映される。Ｋｉは、ＩＣ５０と［Ｓ］／Ｋｍとの関係を示す図の傾きから得ることができる。この関係を、プロリン濃度２０〜４８０ｎＭで判定されたＩＣ５０値（図１１）および図１０に示すように判定されたＫｍ（Ｐｒｏ）を使用して、図２Ａの阻害剤としてのＨＦおよび基質としてのプロリンに対してプロットする。これらのデータを、プロリンと競合的に作用する強結合阻害剤の予測モデルにフィッティングさせる。得られた直線の傾きから、ＨＦのＫｉ１８．３ｎＭ＋／−０．５が得られる。ＨＦ誘導体ＭＡＺ１３１０はＰｒｏＲＳ活性に対して阻害作用を有さず（図９）、ＲＲＬ（図２Ｂ）および生物学的アッセイ（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））においてその活性が見られないことと整合する。
【０１９３】
ＨＦのＰｒｏＲＳへの直接結合を証明するため、本発明者らは、本発明者らの実験室で開発し、ハロフジノール（ＨＦｏｌ）（５）と名付けたＨＦの［３Ｈ］標識誘導体（［３Ｈ］−ＨＦｏｌ、［３Ｈ］−５）を使用した。ＨＦｏｌは、フェブリフジン（６）に由来する以前報告されたジアステレオマー（Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：２５６３−７０（２００２））とは異なり、ＥＰＲＳの阻害に対する親化合物と同等の効力を保持する（図１３）。［３Ｈ］−ＨＦｏｌは固定化したＰｒｏＲＳに直接結合し、この結合はＨＦおよびＦＦと競合するが、ＭＡＺ１３１０とは競合しなかった（図３Ａ）。ＨＦが実際に細胞内でＥＰＲＳ活性を阻害して作用する場合、本発明者らは、ＥＰＲＳレベルが低下すれば、ＨＦの作用に対する細胞の感受性が高まると推論した。したがって、本発明者らは、ｓｉＲＮＡによるノックダウンを使用して、ＥＰＲＳの内因性レベルが高く、かつＨＦの作用に比較的（ＭＥＦと比較して）耐性がある肺線維芽細胞のＥＰＲＳレベルを低下させた。ＥＰＲＳレベルが低下すると、ＧＣＮ２の自己リン酸化の誘導（図３Ｃ）およびＡＡＲ応答遺伝子ＣＨＯＰの誘導（図３Ｄ）により示されるように、ＨＦ処理後のＡＡＲ活性化に対するこれらの細胞の感受性が著しく高まった。同様の誘導の感受性増加は、別のＡＡＲ応答遺伝子アスパラギンシンテターゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼにも見られた（図１４）。これらのデータから、ＥＰＲＳは、ＨＦがＡＡＲ経路を活性化する重要な標的であることが確認される。
【０１９４】
ＨＦはＡＴＰ依存性にＰｒｏＲＳに結合する
ＰｒｏＲＳ結合におけるＨＦとプロリンとの競合キネティクス（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ）から、ＨＦｏｌがＰｒｏＲＳの酵素活性部位に直接結合することが強く予測される。この仮説を裏付けるように、高濃度のプロリンは、ＥＰＲＳの固定化したＰｒｏＲＳドメインへの［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合を阻害した（図３ｂ）。チャージ反応中間体プロリルアデニレートのスルファモイルアナログ（Ｈｅａｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４（１９９６））、５−Ｏ−［Ｎ−（Ｌ−プロリル）−スルファモイル］アデノシン（ＰｒｏＳＡｄ、７）は、［３Ｈ］−ＨＦｏｌのＰｒｏＲＳへの結合を非常に強力に阻害したことから（１０ｎＭ）、ＨＦが触媒ポケット内に結合するという解釈が裏付けられた（図４Ａ）。より高濃度（５０ｎＭ）のアラニルアデンリラートアナログ、ＡｌａＳＡｄがＰｒｏＲＳへの［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合を一部阻害したことから、ＰｒｏＲＳがアラニンなどの対応しないアミノアシルアデニレートを酵素活性部位に取り込むことができることが反映されていると考えられる（Ｓｐｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：７１２８−３４（２００８））。
【０１９５】
次に本発明者らは、［３Ｈ］−ＨＦｏｌのＰｒｏＲＳへの結合に対するＡＴＰの作用を調べた。ＡＴＰは、［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合に不可欠であり（図４Ｂ）、ＡＴＰおよびプロリルアデニレートは触媒ポケットにおいて相互に排他的であると予想されるため、ＨＦの触媒ポケットへの結合の機序は反応中間体プロリルアデニレートのそれと異なることが示される（Ｙａｒｅｍｃｈｕｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：９８９−１００２（２００１））。ｔＲＮＡシンテターゼにより触媒されるアデニリル化反応は、αホスフェートとβホスフェートとの間の高エネルギーリン酸結合の加水分解により起こる（Ｉｂｂａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６９：６１７−５０（２０００））。α−βリン酸結合が非加水分解性であるＡＴＰアナログ、ＡＭＰ−ＣＰＰがＡＴＰに代わり［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合を支持することから、α−βホスフェートの加水分解がＡＴＰ刺激による［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合に役割を果たしていないことが示される（図４Ｂ）。ＡＴＰｇＳによる同様の結果から、ＡＴＰのｇホスフェートの利用も、ＰｒｏＲＳへの［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合に重要でないと考えられる（図４Ｂ）。２ｍＭのＡＭＰは［３Ｈ］−ＨＦｏｌの結合を検出可能に促進しないものの、ＡＴＰのトリホスフェート成分がＨＦとＰｒｏＲＳとの相互作用に重要であることを示す。これらのデータから、ＨＦ／ＨＦｏｌが、プロリン結合ポケットの少なくとも一部を含む触媒部位の一部に結合してＰｒｏＲＳを阻害することが示される。ＨＦ結合におけるＡＴＰの必要性から、ＨＦが触媒部位において単純にプロリルアデニレートを模倣するように作用しているのではなく、阻害剤の結合を可能にする、酵素におけるＡＴＰ誘導性の立体構造変化を必要とすることが示唆される。本発明者らは、ＡＴＰがＰｒｏＲＳの触媒ポケット以外のどこかにアロステリックに結合する可能性を除外するものではないが、Ｔ．サーモフィラス（Ｔ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）のＰｒｏＲＳおよび他のｔＲＮＡシンテターゼの構造解析からは、この考えに関する裏付けまたは前例は得られない（Ｙａｒｅｍｃｈｕｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：９８９−１００２（２００１））。
【０１９６】
プロリンを追加するとＨＦの生物学的作用は打ち消される
インビトロでの翻訳に対するＨＦの作用を救出するプロリンの能力（図２）、およびＨＦが精製酵素アッセイにおいてプロリンと競合的に阻害すること（図３）から、インタクトな細胞にプロリンを補充すると、ＨＦの作用が特異的に打ち消され得ることが示唆される。したがって本発明者らは、プロリンの補充が、インタクトな細胞においてＨＦによるＡＡＲ経路の活性化を抑制するかどうかを調べた。この考えを裏付けるように、線維芽細胞のＨＦ／ＦＦによるＧＣＮ２リン酸化の刺激は２ｍＭのプロリンの添加により阻害された（図５Ａ）。プロリンが添加されると、ＧＣＮ２リン酸化の下流ＡＡＲ経路成分のＨＦ依存性活性化、たとえばＣＨＯＰ誘導（図５Ｂ）およびｅＩＦ２ａリン酸化（図１５）が阻止されたことから、ウサギ網状赤血球ライセート（ＲＲＬ）と同様に、プロリン利用がインタクトな細胞におけるＨＦ作用の主要な標的であることが示された。予想通り、これらのＨＦに対する下流のＡＡＲ応答はＧＣＮ２−／−線維芽細胞において劇的に低下した（図５Ｂ）。ｍＴＯＲ経路も、ＡＡＲと同様に、アミノ酸利用性の細胞センサーとして働くが、ｍＴＯＲシグナル伝達はＡＡＲと異なり、ｔＲＮＡシンテターゼ活性の阻害により阻止されない。Ｔ細胞および線維芽細胞がＨＦ処理されると、ＡＡＲ経路は活性化されるが、同時にｍＴＯＲＣ１シグナル伝達が阻害されることはない（図１６）。本発明者らは、ＨＦがインタクトな細胞においてアミノ酸レベルを変化させるのではなく、ｔＲＮＡのチャージを限定するように作用するモデルと整合して、ＨＦがｍＴＯＲＣ１シグナル伝達に対して直接作用を発揮しないと結論する。プロリンが、インタクトな細胞においてＨＦの取り込みまたは蓄積を妨害することによりＨＦの作用を阻止するという可能性を排除するため、本発明者らは、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて抗ＨＦ抗体を使用して過剰のプロリンの存在下または非存在下で細胞内のＨＦレベルを直接測定した。ＨＦの細胞内蓄積は、プロリンの添加による影響を受けなかったことから（図１７）、細胞内のプロリン利用を促進することでプロリンがＡＡＲ活性化に対するＨＦの作用を打ち消すという本発明者らの解釈が裏付けられた。
【０１９７】
本発明者らは以前、ＨＦがＴｈ１７細胞分化を選択的に阻害すること、および培地にアミノ酸の混合物を補充すると、こうした作用が打ち消されることを示した（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。非必須アミノ酸プールと必須アミノ酸プールとの作用の比較から、１０ｎＭのＨＦの存在下で非必須アミノ酸のみがＴｈ１７細胞分化またはｅＩＦ２ａリン酸化を回復させることが確認された（図６ａ、図２０）。個々の非必須アミノ酸の試験から、ＨＦ処理したＴ細胞においてプロリンのみがＴｈ１７分化を救出することが確認された（図６Ａ）。精製された酵素で見られたＨＦによるプロリン利用の競合的阻害を裏付けるように（図３）、プロリンの濃度を上昇させると、ＨＦによるＴＨ１７分化阻害のＩＣ５０が上昇する（図１８）。本発明者らはまた、構造的に関係のないｔＲＮＡシンテターゼ阻害剤であるトレオニルｔＲＮＡシンテターゼ阻害剤ボレリジン（Ｒｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：５７１−７（２００５））が、Ｔｈ１７分化に対するＨＦの作用を再現し得るかどうかも試験した。ボレリジンは、本発明者らが以前ＨＦについて報告した選択性（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））と同一の選択性でＴｈ１７細胞分化を阻害した（図１９）。ＨＦと同様、Ｔｈ１７分化に対するボレリジンの作用は、過剰の対応するアミノ酸、この場合にはトレオニンの添加により打ち消された（図６Ｂ）。これらの結果から、２つの構造的に関係のないｔＲＮＡシンテターゼ阻害剤のいずれも、エフェクターＴ細胞分化に対して高度に選択的な作用を発揮することが立証される。
【０１９８】
ＨＦがインビボで組織リモデリングを阻害する能力は、組織線維症（Ｐｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３０：４４５−５０（１９９８）；ＭｃＧａｈａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３５：２７７−８２（２００２））および腫瘍進行（Ｅｌｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：４１１１−８（１９９９））をＨＦが強力に抑制することにより証明される。ＨＦは抗線維化剤として、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、たとえばＩ型コラーゲンおよびフィブロネクチンの過剰産生および沈着をインビボおよび培養線維芽細胞の両方で阻害する。本発明者らは、マウス胎仔芽細胞（ＭＥＦ）においてＣｏｌ１Ａ１、Ｃｏｌ１Ａ２およびＳ１００Ａ４のｍＲＮＡレベルを、ＨＦが阻害し、プロリン補充が回復させることを見出した（図６Ｃ）。腫瘍活性化間質細胞から産生および分泌されるＳ１００Ａ４は、線維症および腫瘍転移のほか、関節リウマチにおける滑膜細胞による組織浸潤に関与していると考えられる（Ｂｏｙｅ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７６：５２８−３５（２００９）；Ｏｓｌｅｊｓｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）４８：１５９０−４（２００９））。ＡＡＲ応答因子ＣＨＯＰをコードするｍＲＮＡの発現は、ＨＦによって刺激されると同時に、ＥＣＭ遺伝子の発現を阻害した。以前の報告を裏付けるように（Ｐｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３０：４４５−５０（１９９８）；ＭｃＧａｈａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３５：２７７−８２（２００２））、ＨＦにより細胞を２４時間処理すると、全タンパク質への３５Ｓ−メチオニンの取り込みを大きく変化させない用量で、分泌されるＩ型プロコラーゲンの産生およびフィブロネクチンの産生が劇的に阻害された（図６Ｄ）。ＨＦによるこれらのＥＣＭタンパク質の阻害は、遺伝子転写のＨＦ誘導性調節と同様、培地への２ｍＭのプロリンの添加により打ち消された（図２１）。
【０１９９】
プロリンは、ＨＦによるＡＡＲ経路活性化の作用、ＨＦによるＴｈ１７細胞分化の阻害およびＨＦによる抗線維化作用を救出するだけでなく、プロリンの添加により、赤血球における熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）増殖のＨＦによる阻害も打ち消される。熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）のＤｄ２株を感染させた赤血球のアミノ酸含有培地に５×プロリンを添加すると、ＨＦおよびフェブリフジンの有効ＩＣ５０がそれぞれ約７倍および５倍上昇したが、無関係の抗マラリア薬アモジアキンのＩＣ５０は影響を受けなかった（図２３）。ＨＦが熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）プロリルｔＲＮＡシンテターゼ活性を標的として作用するかどうかを確認するにはより詳細な研究が必要であるものの、これらのデータからは、熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）の増殖においてＨＦがプロリンの利用に特異的に作用することが示され、かつこの活性によってＨＦの抗マラリア作用が説明されることも示される。
【０２００】
ハロフジノールおよびハロフジノンは培養線維芽細胞においてＩ型コラーゲンの発現を阻害する
初代ヒト前立腺ストローマ（ｈＰｒＳｃ）細胞を低血清培地（０．２％）に２４時間放置し、表記の濃度で２回連続して４８時間ハロフジノン（ＨＦ）処理またはハロフジノール（ＨＦｏｌ）処理した。筋線維芽細胞マーカーα１コラーゲン１型（ｃｏｌ１ａ１）の相対ｍＲＮＡレベルを、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）を内部対照としてリアルタイム定量ＰＣＲにより測定した。
【０２０１】
ハロフジノールおよびハロフジノンは活性化線維芽細胞マーカーＳ１００Ａ４の発現を阻害する
初代ヒト前立腺ストローマ（ｈＰｒＳｃ）細胞を低血清培地（０．２％）に２４時間放置し、腫瘍増殖因子β（ＴＧＦ；１０ｎｇ／ｍｌ）を用いてあるいは用いずに、表記の濃度で２回連続して４８時間ハロフジノン（ＨＦ）処理またはハロフジノール（ＨＦｏｌ）処理した。線維症／組織浸潤マーカーｓ１００ａ４の相対ｍＲＮＡレベルを、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）を内部対照としてリアルタイム定量ＰＣＲにより測定した。
【０２０２】
本発明者らは、フェブリフジン−ファミリー化合物が、ＥＰＲＳのｔＲＮＡチャージ活性の強力な阻害剤としてプロリンと競合的に作用することを示し、さらに本発明者らは、これが、そうした化合物の報告された生物活性の単一の主要なメカニズムを構成することを提唱する。ＥＰＲＳはタンパク質合成メカニズムの必須成分であるが、ＨＦによりプロリル−ｔＲＮＡチャージが阻害されると、タンパク質合成に対して広範囲の作用を有しない用量で高度に特異的な生物学的作用のまとまり（ｃｌｕｓｔｅｒ）が惹起される。これらの観察結果は、ＨＦによる細胞タンパク質へのプロリン取り込みの阻止と整合するよりむしろ、ＨＦによる代謝センサーの活性化、この場合にはＡＡＲ経路の活性化と整合する。線維芽細胞において、たとえば、ＨＦはＡＡＲタンパク質ＣＨＯＰの発現を促進する一方、ＥＣＭタンパク質、たとえばプロリンに富んでいないフィブロネクチン、およびプロリンに富んだコラーゲンの産生を選択的に阻害する。ストレス経路の活性化により、どのように個々の生物学的応答が生じるかを理解するには、様々なストレスに対する細胞保護応答におけるｍＲＮＡ特異的翻訳制御の系統的解析が不可欠である。ＧＣＮ２リン酸化がＡＡＲシグナル伝達の特徴であり、標準的なＡＡＲ経路の公知のシグナル伝達物質を構成するとしても、ＧＣＮ２を欠いている細胞がそれでも、遺伝子発現およびｍＲＮＡスプライシングに特異的な変化を起こすことによりアミノ酸制限に応答することに留意することは、重要である（図７）（Ｐｌｅｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．２７：９２８−３７（２００７）；Ｄｅｖａｌ  ｅｔ  ａｌ．ＦＥＢＳ  Ｊ．２７６：７０７−１８（２００９））。これらの観察結果から、細胞のアミノ酸制限またはｔＲＮＡチャージの化学的阻害により、まだ説明されていない主要な成分を含む代謝センサー経路が活性化され得ることが明確に示される。
【０２０３】
ハロフジノンの治療効果の一部はＡＡＲ経路の活性化から生じるものであるが、ＨＦの観察された作用のいずれが、プロリン代謝に特有のＥＰＲＳ誘導性の変化に起因し得るか、あるいはＥＰＲＳの非標準的な活性に起因し得るか否かは、興味深い未解決の問題である。特に、ＥＰＲＳは、骨髄系細胞においてインターフェロンγ活性化翻訳阻害因子（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）（ＧＡＩＴ）複合体に関与してプロ炎症性遺伝子の転写後のレギュロンの発現を抑制することが示されている（Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．３４：３２４−３１（２００９））。
【０２０４】
ＨＦおよびそのファミリーメンバーは、ＥＰＲＳに結合してプロリル−ｔＲＮＡチャージを阻止することによりプロリン制限模倣体として働く。その際、ＨＦおよびそのファミリーメンバーは、カロリーおよび栄養制限という強力だが未解明の細胞および生命体の利益に対するＡＡＲ経路の貢献に光を当てる分子プローブとして働く。適切な栄養を伴う食事制限（ＤＲ）は、動物における加齢に伴う疾患の全身予防および種を跨いだ寿命の延長で知られた最も安定した介入である（Ｆｏｎｔａｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２８：３２１−６（２０１０）；Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２１：１３４−４１（２００９）；Ｈａｉｇｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  ４０：３３３−４４（２０１０））。アミノ酸制限はＤＲの一部分ではあるが、組織および生体の寿命と関連する細胞変化の多くは、アミノ酸制限単独で再現することができる（Ｃａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ  １０：５７９−９２（２００９）；Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ（２０１１））。ＤＲは、加齢生体にとって炎症および酸化ストレスの低減を含む多くの利点を有する。炎症は、加齢に伴う病理変化、たとえばメタボリックシンドローム、循環器疾患、癌およびインスリン抵抗性糖尿病における共通因子である（Ｆｏｎｔａｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２８：３２１−６（２０１０））。アミノ酸単独の食事制限は、マウスにおいてインスリン感受性を高めることが示されている（Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ（２０１１））。ＤＲの健康寿命延長のための分子機序は十分に解明されていないが、栄養供給の減少に対する生命体の適応を誘発する代謝センサー経路はこのプロセスに必須である（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２１：１３４−４１（２００９）；Ｈａｉｇｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  ４０：３３３−４４（２０１０））。本発明者らはここで、本当の栄養不良の非存在下、フェブリフジン由来の化合物がＥＰＲＳ活性を阻止して、プロリン制限を示唆する細胞内シグナルを送り、ＡＡＲ経路を活性化することにより、カロリー制限という有益な作用の重要な成分を再現することを示す。
【０２０５】
細胞内アミノ酸レベルの変化、およびこうした変化を検出するシグナル伝達経路は、免疫および組織ホメオスタシスの維持において緊急の役割を果たす（Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３３：３０１−１１（２０１０）；Ｃｏｂｂｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０６：１２０５５−６０（２００９））。アミノ酸レベルは、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、多形核白血球（ＰＭＮ）（Ｚｅｌａｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：２６９５−７０６（２００７））およびマクロファージ（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：１３３−５５（２０１０）；ｖｏｎ  Ｂｕｂｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（２０１１））などの細胞型において、このプロセスの鍵を握る細胞集団の炎症状態と免疫寛容誘導状態とを制御することが示されている。アミノ酸分解酵素、たとえばそれぞれＬ−アルギニンおよびＬ−トリプトファンを異化するアルギナーゼおよびインドールアミン２，３ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）は、炎症／免疫寛容誘導表現型の細胞制御への代謝センサー経路の適応の好例である（Ｂｒｏｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：６４１−５４（２００５））。アミノ酸分解は、２つの機能的出力、すなわち免疫学的に活性なアミノ酸代謝産物の産生または破壊と、代謝ストレス経路の応答に伴うアミノ酸異化により生じる検出可能な栄養制限とを有する。それ自体一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）の基質であるＬ−アルギニンの場合、アルギニンの分解は、プロ炎症性一酸化窒素（ＮＯ）の基質プールを枯渇させると同時にＡＡＲ経路を活性化する（Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：９２３−３４（２００８））。現在、微生物は、この経路を利用してその生存率を高め得ることが確認されている。病原体は、そのアルギナーゼを上方制御して宿主のアルギニンプールを枯渇させ、宿主の自然免疫応答を抑制し、Ｔ細胞の増殖を阻害する（Ｇｒｏｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２３６：２４３−６４（２０１０））。免疫抑制酵素ＩＤＯはトリプトファンの異化を介して、母子免疫寛容、感染症、アレルギー、自己免疫疾患および移植など多くの生理学的および病態生理学的環境で複雑な制御的役割を果たしている。いくつかの免疫調節性細胞集団は、ＩＤＯ発現の誘導を利用して抗炎症性プログラムまたは免疫寛容誘導プログラムを活性化する（Ｇｒｏｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２３６：２４３−６４（２０１０））。ＩＤＯを発現するｐＤＣはエフェクターＴ細胞応答を阻害し、Ｔｒｅｇを活性化して、慢性疾患症候群に発現するプロ炎症性応答を減弱することができる（Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：９２３−３４（２００８））。末梢性免疫寛容の重要なメディエーターであるＴｒｅｇは、皮膚グラフトおよびＤＣにおいて少なくとも５種の異なるアミノ酸を分解する酵素の発現を誘導することが示されている。アミノ酸制限の結果生じるｍＴＯＲ経路の阻害は、Ｔｒｅｇ特異的転写因子フォークヘッドボックス���３（ＦｏｘＰ３）の誘導により免疫寛容誘導のシグナル伝達ループを強化する（Ｃｏｂｂｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０６：１２０５５−６０（２００９））。本発明者らは最近、免疫ホメオスタシスのための細胞内アミノ酸制御の適応に関する新たな説に、プロ炎症性Ｔｈ１７細胞の分化がＡＡＲ経路の活性化により強力に阻害されるという観察結果を加えた（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。本発明者らは今回、ＨＦがＥＰＲＳの主要な阻害剤およびアミノ酸制限模倣体としての作用により、病的炎症を抑制することを示す。これらの観察結果は、免疫応答および炎症応答を調節するため代謝性ストレス反応、この場合はアミノ酸応答（ＡＡＲ）を活用して作用する天然物治療剤の新たな例を提供する。
【０２０６】
アミノ酸制限模倣体の疾患組織環境への治療的応用は、重要な免疫調節性細胞を免疫寛容誘導／抗炎症性表現型に再プログラムする新規な手段となる。ここに本発明者らは、ＨＦがＥＰＲＳのプロリル−ｔＲＮＡシンテターゼ活性を阻害することにより、ＡＡＲを活性化して組織に抗菌性応答および免疫調節性応答を誘発することを示す。加齢に伴う病理変化における炎症性疾患の顕著な役割を考えると、アミノ酸制限模倣体は、ヒトの健康の普及および寿命の延長に関する研究にとって重要な分子プローブになり得る。フェブリフジンおよびその誘導体の分子作用機序と共に、これらの化合物がインビボでＴｈ１７細胞分化を選択的に阻害する能力に関する本発明者らの新たな見解により、多発性硬化症、強皮症および関節リウマチなど種々の重篤な疾病を処置できるように改善された薬理学的特性を有する治療用化合物の新しいファミリーの設計が可能になる。
【０２０７】
インビトロ翻訳アッセイ
付属の標準アミノ酸ミックスをアッセイ用に５倍希釈した以外は、製造者の指示（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従いウサギ網状赤血球ライセート（ＲＲＬ）を用いて、無細胞タンパク質翻訳に対するＨＦ、ＨＦ誘導体および添加アミノ酸の作用をアッセイした。一部の実験では、ＲＲＬを別のＲＮＡ（ｈＡＬＫ４）と３０℃でプレインキュベートして内在性のチャージされたｔＲＮＡを枯渇させた。ルシフェラーゼアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてルシフェラーゼ活性を測定した。ＲＲＬにおけるｔＲＮＡチャージをアッセイするため、２５μｌのＲＲＬを１μＣｉの１４Ｃ  Ｐｒｏまたは３５Ｓ  Ｍｅｔ、１μｇの添加ウシｔＲＮＡおよび２μＭのピューロマイシン（タンパク質翻訳のためのチャージされたｔＲＮＡの利用を防止するため）とインキュベートした。２０分後、ｍｉＲＶＡＮＡ  ｓｍａｌｌ  ＲＮＡ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ）を用いて全ｔＲＮＡを抽出し、取り込まれた放射能をシンチレーションカウンターで測定した。
【０２０８】
ｓｉＲＮＡノックダウン
ＥＰＲＳのノックダウンのため、製造者の指示（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従いリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸを用いてヒト肺線維芽細胞（ＩＭＲ９０）に、ＥＰＲＳおよび対照に対するｓｉＲＮＡ（ヒトＥＰＲＳにはＯＮ−ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ  ＳＭＡＲＴ  ｐｏｏｌ  Ｌ−００８２４５−００−０００５、および対照としてＯＮ−ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ  ｎｏｎ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｐｏｏｌ  Ｄ−００１８１０−１０−０５；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をトランスフェクトした。ｑＰＣＲ実験では、細胞を無血清培地に２時間放置し、次いで無血清培地中、ＨＦで６時間処理してから、ＲＮＡをトリゾールで回収し、Ｒｏｃｈｅ  ＵＰＲ  Ｌｉｇｈｔ−Ｃｙｃｌｅｒ  ｓｙｓｔｅｍを用いて遺伝子発現をＲＴ−ＰＣＲにより定量した。ウエスタンブロット実験では、細胞を、血清を含まない培地に２時間放置し、ＨＦでさらに２時間処理してから（無血清培地中）、ＲＩＰＡ緩衝液とプロテアーゼ阻害剤およびホスファターゼ阻害剤とを用いてタンパク質ライセートを回収した。
【０２０９】
ＰｒｏＲＳ活性のアッセイ
ヒトＥＰＲＳのプロリルｔＲＮＡシンテターゼドメイン（ＰｒｏＲＳ）を、６−Ｈｉｓタグを用いて大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に発現させ、記載されたように精製した（Ｈｅａｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４（１９９６））。精製した酵素は、Ｌａｅｍｍｌｉのゲル電気泳動／Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ染色により単一バンドとして可視化した。酵素活性については、チャージされたｔＲＮＡ画分を、迅速なバッチ法によるＭｏｎｏ  Ｑセファロース（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）への結合により単離し（Ｊａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：２７８６（１９９１））、液体シンチレーション計測法により定量したこと以外は、本質的に記載された通り３Ｈ  ＰｒｏのｔＲＮＡ画分への取り込みによりアッセイした（Ｔｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１７７０１−９（１９９２））。予備実験では、アッセイは、使用した時間（６分）および条件（３０℃、２ｍＭのＡＴＰ、ウサギ肝臓から精製された１μｇ／μｌの全ｔＲＮＡ）において線形であることが確認された。すべてのキネティックアッセイでは、反応における活性酵素の濃度（Ｃｏｐｅｌａｎｄに記載されているような阻害剤滴定により測定）は４０ｎＭであった。ＨＦによる同様の阻害は、細菌から精製されたヒトＰｒｏＲＳドメイン、およびラット肝臓から精製された全長ＥＰＲＳを用いても確認された（Ｔｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１７７０１−９（１９９２））。
【０２１０】
ＰｒｏＲＳへのＨＦ結合のアッセイ
ＰｒｏＲＳへのＨＦの結合を調べるため、ＭＡＺ１３１０（３）のケトンをＮａＢ３Ｈ４で還元し、続いて１０％トリフルオロ酢酸を含むジクロロメタンでＢｏｃ保護基を除去し、３Ｈ  ＨＦｏｌのＨＰＬＣ精製を行うことで、３Ｈ  ＨＦｏｌをＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）が合成した。１００ｎＭの３Ｈ  ＨＦｏｌを、５０ｍＭのトリス  ｐＨ７．５、５ｍＭのＭｇＣｌ２、２０ｍＭのイミダゾール、１ｍＭのＤＴＴ、１０％グリセロール、およびヌクレオチド、プロリンまたはＨＦ誘導体中、Ｎｉ−ＮＴＡビーズ（Ｐｉｅｒｃｅ）に固定化したＰｒｏＲＳと表記のように室温で１０分インキュベートした。インキュベーション後、ビーズを氷冷洗浄用緩衝液（５０ｍＭのトリス  ７．５；２０ｍＭのイミダゾール；１ｍＭのＤＴＴ、２０％グリセロール）で２回洗浄した。洗浄後に結合した３Ｈ  ＨＦｏｌを液体シンチレーション計測法で測定した。全実験において、タグ付きＰｒｏＲＳを欠いている大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）抽出物とインキュベートしたＮｉ−ＮＴＡビーズをバックグラウンドリファレンスとして使用した。
【０２１１】
Ｔ細胞におけるプロリンによるＨＦの救出
Ｔ細胞におけるＨＦ作用のプロリン救出を調査するため、初代マウスＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を野生型Ｃ５７Ｂ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の脾臓および末梢リンパ節から単離し、Ｔ細胞の活性化、分化、ＨＦによる処理、およびアミノ酸補充を記載されたように行った（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。一部の実験では、Ｔ細胞培養物に上記および以前に記載されたように過剰の個々のアミノ酸を補充した（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。すべてのＦＡＣＳデータをＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）により取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）を用いて解析した。Ｔ細胞のＦＡＣＳ染色に使用したプロトコルおよび抗体は、以前記載されている（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。簡単に説明すると、ブレフェルジンＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）の存在下、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ；１０ｎＭ）およびイオノマイシン（１ｍＭ）で４〜５時間再刺激後、Ｔｈ１７分化（ＩＬ−１７＋ＩＦＮｇ−細胞の割合）を培養４日目のＴ細胞について判定した。再刺激した細胞におけるサイトカイン発現は、記載された通り細胞内サイトカイン染色により判定した（Ｓｕｎｄｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：１３３４−８（２００９））。一部の実験では、上記のような再刺激および細胞内サイトカイン染色から５日目に、非優位条件（ＴｈＮ）、Ｔｈ１条件またはＴｈ２条件で活性化した細胞サイトカイン産生を判定した。誘導性制御性Ｔ（ｉＴｒｅｇ）分化をＣＤ２５により評価し、活性化から３日目のＦｏｘｐ３のアップレギュレーションを、市販されているＦｏｘｐ３細胞内染色キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて評価した。
【０２１２】
初代線維芽細胞におけるプロリンによるＨＦの救出
線維芽細胞に対するＨＦおよびプロリンの作用に関するアッセイのため、マウス胎仔線維芽細胞を１０％ＦＣＳ／ＤＭＥＭで増殖させた。ＴＧＦβシグナル伝達、全タンパク質への３５Ｓメチオニンの取り込み、およびコラーゲン産生の調査のため、細胞を０．２％ＦＣＳ／ＤＭＥＭに２４時間移動してから、ＨＦまたはプロリンを添加した。タンパク質発現およびリン酸化の調査のため、５ｍＭのＥＤＴＡ、１×ＰｈｏｓＳｔｏｐ（Ｒｏｃｈｅ）および１×コンプリートプロテアーゼインヒビターミックス（Ｒｏｃｈｅ）を含むＲＩＰＡで細胞を溶解し、上記のようなウエスタンブロットによりアッセイした。遺伝子発現の解析では、細胞をトリゾール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で溶解し、Ｒｏｃｈｅ  ＵＰＲ  Ｌｉｇｈｔ−Ｃｙｃｌｅｒ  ｓｙｓｔｅｍを用いて定量ＲＴ−ＰＣＲにより遺伝子発現を定量した。
ＰｒｏｐｅｐポリペプチドおよびＮｏＰｒｏｐｅｐポリペプチドのタンパク質配列：
Ｍｙｃ−Ｐｒｏｐｅｐ：
【化３５】
2015506363.tif 000037
Ｍｙｃ−ＮｏＰｒｏｐｅｐ：
【化３６】
2015506363.tif 000038
ＯＮ−ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ  ＳＭＡＲＴ  ｐｏｏｌ  Ｌ−００８２４５−００−０００５  ｆｏｒ  ヒトＥＰＲＳ  ＮＭ＿００４４４６，５ｎＭ：
【化３７】
2015506363.tif 000039
【０２１３】
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に発現させたヒトＰｒｏＲＳの精製
６−Ｈｉｓタグ付きヒトＰｒｏＲＳ（Ｄｒ．Ｋ．Ｍｕｓｉｅｒ−Ｆｏｒｓｙｔｈから提供されたｐＫＳ５０９）をＢＬ２１（ＤＥ３）株に発現させ、以前記載された内容を改変して精製した（Ｈｅａｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４（１９９６））。空ベクター（ｐＥＴ−１９ｂ）を発現する細胞の抽出物を対照として使用した。簡単に説明すると、細胞ペレットを氷冷溶解緩衝液（１００ｍＭのＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．８）、３００ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのβ−ＭＥ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１×コンプリートプロテアーゼインヒビターカクテル（ＥＤＴＡ）（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ））に再懸濁した（５０μｌ／１ｍｌの細菌培養液）。細胞を音波処理により溶解した。遠心分離後、上清を１／５量の溶解緩衝液で平衡化した５０％ＨＩｓＰｕｒ  Ｎｉ−ＮＴＡレジンスラリー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と１〜４時間インキュベートした。ビーズを氷冷洗浄用緩衝液（１００ｍＭのＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ６．０）、３００ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのβ−ＭＥ、１０％グリセロール）で数回洗浄し、続いて２００ｍＭのイミダゾールを補充した洗浄用緩衝液で数回洗浄した。ＰｒｏＲＳの精製では、タンパク質を、５００ｍＭのイミダゾールを補充した洗浄用緩衝液で溶出した。溶出液にグリセロールを５０％になるように補充し、−２０℃で保存した。固定化したＰｒｏＲＳでは、ビーズを氷冷平衡緩衝液［ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２ｍＭのβ−ＭＥ、１０％グリセロール］で数回洗浄し、続いて氷冷保存用緩衝液［ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２ｍＭのβ−ＭＥ、５０％グリセロール］で数回洗浄した。ビーズは−２０℃の保存用緩衝液に５０％スラリーとして保存した。活性酵素の濃度は、Ｃｏｐｅｌａｎｄに記載されているように阻害剤滴定により判定した（Ｃｏｐｅｌａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ａｎａｌ．４６：１−２６５（２００５））。図１０を参照されたい。
【０２１４】
ｓｉＲＮＡによるＥＰＲＳの枯渇
ＥＰＲＳのノックダウンのため、製造者の指示（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従いリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸを用いてヒト肺線維芽細胞（ＩＭＲ９０）に、ＥＰＲＳおよび対照に対するｓｉＲＮＡ（ヒトＥＰＲＳにはＯＮ−ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ  ＳＭＡＲＴ  ｐｏｏｌ  Ｌ−００８２４５−００−０００５、および対照としてＯＮ−ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ  ｎｏｎ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｐｏｏｌ  Ｄ−００１８１０−１０−０５；Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をトランスフェクトした。簡単に説明すると、６ｐｍｏｌのｓｉＲＮＡを、２４ウェルプレートの各ウェルの血清を含まないＯｐｔｉ−ＭＥＭ  Ｉ  Ｍｅｄｉｕｍ  １００μｌに希釈し、穏やかに混合した。リポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（１μｌ）を各ウェルに加え、穏やかに混合し、１５分室温でインキュベートした。細胞（２４ウェルプレートの１２５００細胞／ウェル）を５００μｌの抗生物質を含まない増殖培地に希釈して、プレーティングから２４時間後３０〜５０％コンフルエントにした。５００μｌの希釈細胞をｓｉＲＮＡ−リポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ複合体と共に各ウェルに加え、プレートを前後に揺すって穏やかに混合した。培地をトランスフェクションから２４時間後に交換し、細胞を、抗生物質を含む培地（血清を含む）に４８時間放置した。
【０２１５】
Ｍｏｎｏ  Ｑビーズを用いたｔＲＮＡ−Ｐｒｏの単離
シンテターゼ反応混合物からアミノアシル化ｔＲＮＡｐｒｏを迅速に定量的に単離するため、反応を１００μｌの２０ｍＭの氷冷ＭＯＰＳ  ｐＨ６．２、２００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、３０％グリセロールで止めて、氷上に置いた。サンプルを、同じ緩衝液で平衡化した１５μｌの充填Ｍｏｎｏ  Ｑ  ＨＰビーズ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に加えた。サンプルをビーズと氷上で１０分インキュベートし、ビーズを卓上マイクロフュージで５ｓｅｃの遠心分離によりペレット状にし、１ｍｌの洗浄用緩衝液（２０ｍＭのＭＯＰＳ  ｐＨ６．２、５０ｍＭのＮａＣｌ）で３×洗浄し、回収したペレットを液体シンチレーションカウンターでカウントした。３Ｈ  Ｐｒｏのビーズへのバックグラウンド結合（酵素を添加しないあるいはｔＲＮＡを添加しない反応ミックスを使用）は、無視できる程度であった（２０〜４０ｃｐｍ）。
【０２１６】
Ｑ−ＰＣＲのプライマーおよびプローブ
Ｑ−ＰＣＲは、Ｒｏｃｈｅ  ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅ  ＵＰＲ  ｓｙｓｔｅｍを用い、以下のプライマーおよびプローブを使用して行った：
【化３８】
2015506363.tif 000040
【０２１７】
プローブおよびプライマーは、ＰｒｏｂｅＦｉｎｄｅｒソフトウェア（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｏｃｈｅ−ａｐｐｌｉｅｄ−ｓｃｉｅｎｃｅ．ｃｏｍ／ｓｉｓ／ｒｔｐｃｒ／ｕｐｌ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ？ｉｄ＝ｕｐｌｃｔ＿０３００００）を用いて設計した。
【０２１８】
抗ＨＦ  ＥＬＩＳＡ
キナゾリノンに連結したリンカーを含み、第一級アミノ基を末端に持つＨＦ誘導体（ＭＡＺ１３５６、図１）に結合したＫＬＨでウサギを免疫して、ポリクローナル抗ＨＦ抗体を産生させた。抗体を、ＮＨＳ−アガロースに結合したＭＡＺ１３５６を使用してアフィニティ精製した。ＥＬＩＳＡアッセイでは（図１７）、ＭＡＺ１３５６を９６ウェルＲｅａｃｔｉ−ｂｉｎｄ  Ｐｌａｔｅｓ（Ｐｉｅｒｃｅ）に結合した。結合後、プレートを、１０％ヤギ血清を含むＰＢＳ／０．２％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳＴ）でブロッキングした。予備実験では、一定範囲の濃度のＭＡＺ１３５６結合および抗ＨＦ抗体を試験して、１０〜１００ｎＭの範囲でＨＦの感度のよい線形の最適な検出が得られる濃度を判定した。ＨＦ濃度の標準曲線を作成するため、既知濃度のＨＦの存在下、１０％ヤギ血清／ＰＢＳＴ中、ＭＡＺ１３５６結合プレートをアフィニティ精製した抗ＨＦ抗体と２時間室温でインキュベートし、次いでＰＢＳＴで５回洗浄し、１０％ヤギ血清／ＰＢＳＴ中、ヤギ抗ウサギＨＲＰとインキュベートした。捕捉抗体を、ＴＭＢを用いた比色検出（Ｐｉｅｒｃｅ）により定量し、ＨＦ濃度の標準曲線を比色データからフィッティングした。細胞におけるＨＦ濃度をアッセイするため、マウス胎仔線維芽細胞を表記の濃度のＨＦと２時間インキュベートし、２００μｌの１％ＮＰ４０緩衝液に溶解させた。全タンパク質を０．１Ｍの酢酸とのインキュベーションにより沈殿させ、１０分間遠心分離した。透明なライセートをトリス  ｐＨ７．５で中和させた。細胞におけるＨＦ濃度を判定するため、８μｌの透明なライセート（または対照緩衝液）をＭＡＺ１３５６結合ウェル中、抗ＨＦ抗体とインキュベートし、捕捉抗体を検出し、上記のように定量した。次いで細胞サンプルの比色分析結果をＨＦ濃度の標準曲線にフィッティングさせてＨＦ濃度を判定した。図１７のデータは、溶解細胞の正確な細胞内量が不明であり、したがって細胞におけるＨＦの絶対濃度は推定するしかないため「任意単位」としてプロットされる。５×１０５マウス胎仔線維芽細胞の総血球容積を４μｌと推定すると（Ｐｉｅｒｃｅ  ＮＥ−ＰＥＲキット）、２０ｎＭのＨＦとインキュベートした細胞の内側で約８００ｎＭのＨＦの絶対値が得られる。これらのデータから、ＨＦの細胞内分布が不明であるため、サイトゾルにおける有効濃度は信頼性高く推定することはできないものの、かなりの濃度の培地由来のＨＦが存在することが示唆される。
【０２１９】
インビトロでの熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）の生存率アッセイ
Ｐｌｏｕｆｆｅおよび共同研究者の方法を改変した形態を用いて（Ｐｌｏｕｆｆｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０５：９０５９−６４（２００８））、熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）（ＤＤ２）に対するインビトロでの効力を評価した。寄生虫を黒色Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＧＮＦクリアボトムプレートを用いて、薬剤の存在下、２．５％ヘマトクリットおよび血液中の当初の寄生虫含有量（ｐａｒａｓｉｔｅｍｉａ）０．３％で全量を５０μｌとして４．１６ｍｇ／ｍｌのＡｌｂｕｍａｘを含むＲＰＭＩ（Ｓｉｇｍａ）で培養した。培養物を９５％Ｎ２、４％ＣＯ２および３％Ｏ２下、７２時間３７℃でインキュベートした。インキュベーションの終了時、ＳＹＢＲグリーンを１：１０，０００に希釈して加え、プレートを一晩（または読み取る準備ができるまで）−８０℃で保存した。読み取る直前に、プレートを７００ｒｐｍで遠心し、励起波長４８０ｎｍおよび発光波長５３０ｎｍを用いて蛍光を読み取った。化合物濃度により寄生虫複製が阻害されると、寄生虫ＤＮＡに結合したＳＹＢＲグリーンの蛍光強度が低下する。
【０２２０】
細胞タンパク質合成の阻害
インタクトな細胞においてＨＦおよび関連する化合物がＥＰＲＳを阻害する能力は、アミノ酸応答の活性化に必要とされる用量より約１０倍高い用量で、細胞タンパク質合成を限定する能力に反映される。細胞におけるエナンチオマーＭＡＺ１９０７およびＭＡＺ１９０８の相対活性を試験するため、増殖している初代マウス胎仔線維芽細胞（ＭＥＦ）集団においてそれらがタンパク質合成を限定する能力を測定した。エナンチオマーＭＡＺ１９０７およびＭＡＺ１９０８を、ＤＭＥＭ／１０％ウシ胎仔血清中のＭＥＦが指数関数的に増殖している培養物に表記の濃度で加えた。細胞を４８時間後に洗浄し、１％ＮＰ４０に溶解させ、ライセートについてタンパク質含有量をアッセイした。タンパク質含有量の減少を化合物用量の関数として図２９に示す。
【０２２１】
他の実施形態
上記は、本発明の特定の非限定的な好ましい実施形態に関する記載である。当業者であれば、以下の特許請求の範囲により規定される本発明の精神または範囲を逸脱することなく、この記載に対する様々な変更および修正をなし得ることを理解するであろう。
【図１】
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【図２Ａ】
2015506363.tif 000060
【図２Ｂ】
2015506363.tif 000061
【図２Ｃ】
2015506363.tif 000062
【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
2015506363.tif 000064
【図３Ｂ】
2015506363.tif 000065
【図３Ｃ】
2015506363.tif 000066
【図３Ｄ】
2015506363.tif 000067
【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2015506363.tif 000069
【図５Ａ】
2015506363.tif 000070
【図５Ｂ】
2015506363.tif 000071
【図６Ａ】
2015506363.tif 000072
【図６Ｂ】
2015506363.tif 000073
【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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