(57)【要約】【課題】レーザマイクロダイセクションの実行後の自動化された試料処理を可能とする。【解決手段】切断部位（１１１）を受容するための検査可能な回収室（１０）を含む、レーザマイクロダイセクション装置のためのレーザ微小切断部位用試料回収器（１）において、回収室（１０）は、試料側において、切断部位（１１１）を受け入れるために周囲に向かって開いた開口部を有し、更に回収室（１０）は、第１バルブ（１０２、１２２）を有する。第１バルブ（１０２、１２２）は、閉じた状態により、切断部位（１１１）の保持のために回収室（１０）において試料とは反対側の閉鎖部を構成し、第１バルブ（１０２、１２２）の下流側には、毛管ダクト（１０７）が配設され、毛管ダクト（１０７）は、回収室（１０）から切断部位（１１１）を搬送するために回収室（１０）と接続状態にある。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
切断部位を受容するための回収室を含む、レーザマイクロダイセクション装置のためのレーザ微小切断部位用試料回収器であって、
前記回収室（１０）は、試料側において、切断部位（１１１）を受け入れるために周囲に向かって開いた開口部を有し、
更に前記回収室（１０）は、第１バルブ（１０２、１２２）を有し、該第１バルブは、閉じた状態により、切断部位（１１１）の保持のために前記回収室（１０）において試料とは反対側の閉鎖部を構成し、
前記第１バルブ（１０２、１２２）の下流側には、毛管ダクト（１０７）が配設されており、該毛管ダクトは、前記回収室（１０）から切断部位（１１１）を搬送するために前記回収室（１０）と接続状態にあること
を特徴とする試料回収器。
【請求項２】
前記回収室（１０）は、第２バルブ（１０１、１２１）を有し、該第２バルブは、閉じた状態により、前記回収室（１０）の試料側の閉鎖部を構成すること
を特徴とする、請求項１に記載の試料回収器。
【請求項３】
前記回収室（１０）及び／又は前記毛管ダクト（１０７）は、担体物質（１１３）を供給するための少なくとも１つのインジェクタ（１０４）を有すること
を特徴とする、請求項１又は２に記載の試料回収器。
【請求項４】
前記回収室（１０）の第１バルブ（１０２、１２２）と第２バルブ（１０１、１２１）との間に、担体物質を供給するためのインジェクタ（１０４）が配設されていること
を特徴とする、請求項１及び２に記載の試料回収器。
【請求項５】
前記毛管ダクト（１０７）は、分岐部（１０８）を有すること
を特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の試料回収器。
【請求項６】
前記回収室（１０）と前記毛管ダクト（１０７）との間にディスペンサ（１０９）が配設されていること
を特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の試料回収器。
【請求項７】
前記回収室（１０）の前記開口部の上流側には、流し状装置（１１）が配設されており、該流し状装置の流出口（１２６）は、前記回収室（１０）の試料側の前記開口部と接続状態にあること
を特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の試料回収器。
【請求項８】
前記流し状装置（１１）は、フラッシング装置（１１９）及び／又は放出ないし吸引装置を含んでいること
を特徴とする、請求項７に記載の試料回収器。
【請求項９】
前記流し状装置（１１）は、高くされた側方縁部（１２５）を用いて画定された捕集受け面（１２４）として構成されていること
を特徴とする、請求項７又は８に記載の試料回収器。
【請求項１０】
前記第１バルブ（１０２、１２２）の下流側においてこの第１バルブの後方には、フィルタ（１１６）が配設されており、該フィルタは、切断部位（１１１）を通すことができるように作られていること
を特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の試料回収器。
【請求項１１】
前記フィルタ（１１６）は、流れ方向において前記毛管ダクト（１０７）の前に配設されていること
を特徴とする、請求項１０に記載の試料回収器。
【請求項１２】
前記フィルタ（１１６）は、切断部位とは異なる物質（１１２）が捕集されるように作られていること
を特徴とする、請求項１０又は１１に記載の試料回収器。
【請求項１３】
前記フィルタ（１１６）は、担体物質（１１３）に対して透過性があること
を特徴とする、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載され且つ請求項３又は４に記載の試料回収器。
【請求項１４】
レーザマイクロダイセクション装置であって、
該レーザマイクロダイセクション装置（２００）は、
レーザ光（９）を発生させるためのレーザ光源（２０１）と、
前記レーザ光（９）を偏向させるための偏向装置（２０２）と、
顕微鏡対物レンズ（１０５）を通して試料（１０６）上へ前記レーザ光（９）を集束させるための落射光装置（２０３）と、
ダイセクションすべき試料（１０６）を保持する対象物支持器（１０３）を受容するための顕微鏡テーブル（２０５）と、
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の、前記対象物支持器（１０３）の試料側に配設されたレーザ微小切断部位用試料回収器（１）と
を含むこと。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レーザマイクロダイセクション装置のためのレーザ微小切断部位用試料回収器、並びにレーザマイクロダイセクション装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
レーザマイクロダイセクション（レーザ微小切断処理）においては、集束されたレーザ光を用い、顕微鏡で検査される組織試料から、選択された組織領域又は細胞が更なる分析のために切り離されるないし切り出される（「ダイセクトされる」）。
【０００３】
本出願人による下記特許文献１、２、３は、顕微鏡を使用したレーザマイクロダイセクションのために可能な方法並びにシステムを記載している。
【０００４】
毛管（細管）に基づく分析装置は、組織から分離された個々の細胞又は染色体さえも、滴又は溶液に入れられて毛管システムにより搬送され、選別され、分析され、また分析後にも更に評価できるように進歩している。毛管に基づく分析技術は、例えば Fluidigm社（http://www.fluidigm.com/）並びに RainDance Technologies社（http://www.raindancetechnologies.com/）により適用され、開発促進されている。
【０００５】
これらの技術を用いて分析可能とするために試料と個々の細胞は、先ず分離される必要があり、このことは、蛍光に基づくフローサイトメトリー（Durchflusszytometrie）、レーザマイクロダイセクション、そして毛管システムのための適切な供給媒体内へのピペッティング（Umpipettieren）により行うことが可能である。
【０００６】
レーザマイクロダイセクションにおいて切り出された所謂「切断部位（微小切片 Dissektate）」のためには様々な回収器（捕集器）が提供されており、例えば、所謂「チューブ・キャップ」、８ウェル・ストリップ、８ウェル・ストリップ・キャップ、又は例えばアンプリグリッド装置（AmpliGrid-Vorrichtung）のような所謂「小型ラボ（Westentaschenlabors）」（英語では「ラボオンチップ（lab on a chip）」とも称する）である。レーザマイクロダイセクションプロセス後にこれらの回収器は、ダイセクション機械から物理的に取り外され、別個に更に処理される。そのために通常では、切断部位が適切な溶液に入れられて、ポリメラーゼ連鎖反応（英語では Polymerase Chain Reaction, PCR）や、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）や、リアルタイムPCRないし定量PCR（rt-/qPCR）や、マススペクトロメトリ（質量分析 MS）などのような分析法に提供可能になるまで、遠心分離ステップとピペッティングステップが不可欠である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】DE 100 18 253 C2
【特許文献２】DE 10 2005 028 062 B4
【特許文献３】DE 10 2005 008 925 A1
【特許文献４】EP 2 083 257 A1
【特許文献５】DE 10 2009 016 512 B4
【特許文献６】DE 103 29 674 A1
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしこの処理方式は、自動化された試料の更なる処理のための可能性が、レーザマイクロダイセクションを用いた分離（Isolation）の直後では極めて制限されているという欠点を有する。また手間のかかる不可欠な遠心分離ステップとピペッティングステップは、高い汚染の危険性と高い試料の損失の危険性とを含んでいる。
【０００９】
上記特許文献４から、分離された顕微鏡用試料を受け渡すための方法並びに装置が公知である。この際、ナノ吸引器が、対象物テーブル上で試料本体から切り出された試料の上に位置決めされる。このナノ吸引器は、該ナノ吸引器が旋回され、試料を引き続き他の箇所において再び吹き出す前に、能動的に対象物テーブルから試料を吸引する。つまり試料を例えば反応容器内へ移すことが可能である。しかし試料は、切り出しの行われた試料本体の残りの部分によりまだ取り囲まれているので、吸引前に試料を視覚的に目視で検査することは不可能であるか又は可能だとしても極めて不十分である。
【００１０】
上記特許文献５は、カバーガラスの裏側に検査すべき試料が設けられており、該カバーガラスを用いて上方から気密に閉じることのできる容器から構成されたレーザアブレーションチャンバ（レーザ切除室）を開示している。この容器は、搬送ガス（例えばアルゴン）のための供給ダクトと排出ダクトを有する。先ず試料の検査は、レーザアブレーションを用いて切り離すべき領域を決定することから行われる。この検査は、レーザマイクロダイセクション装置の高解像度の光学系を利用してレーザマイクロダイセクション装置を用いて行われる。適切な領域の決定後にこれらの領域は、レーザアブレーションを用いて試料から切り離され、搬送ガスの供給により気密の容器から例えばマススペクトロメータ（質量分析器）のような分析装置へ搬送される。分析結果に応じ、更なる試料領域を分析することが可能である。この際、高い精度でミクロン以下の領域の試料切片のダイセクションを可能とする既知のレーザマイクロダイセクション装置を使用することができる。既述のレーザアブレーションチャンバは、レーザマイクロダイセクションのためにレーザマイクロダイセクション用の試料容器と置き換えられる。
【００１１】
上記特許文献６は、生物組織における紫外線の吸収や、切断品質の低さのようなＵＶアブレーション（ＵＶ切除）の欠点を克服することが課題とされている。そこでは生物素材のカッティングのために４００ｎｍよりも大きいレーザ波長（近赤外線）において少なくとも１０００Ｈｚの繰返し周波数を有するピコ秒領域又はフェムト秒領域の超短レーザパルスの使用が提案され、この際、レーザは、試料上で少なくとも１０１２Ｗ／ｃｍ２の強度を発生させるために試料上へ集束される。それによりカッティング作用のためにプラズマを発生させる所謂非共鳴マルチフォトン吸収が達成される。一実施例では、切り出された生物素材が重力作用により周囲の試料から離され、リシンでコーティングされたカバーガラス上へ落ちる。この際、例えば試料は、該試料を支持するフィルムを用いてガラス窓の裏側へ取り付けられている。シリコーンリングが、ガラス窓と、リシンでコーティングされたカバーガラスとを結合している。切り出された生物素材は、例えばシリコーンリングを通して２本のカニューレ（管）を挿入することにより吸い出されるか、又は流体力学的な流れを用いて流し出され、無菌フィルタを用いて回収することが可能である。上側のガラス窓と、シリコーンリングと、切り出された素材を回収するための下側のカバーガラスとは、全体として、閉じた無菌室を構成している。
【００１２】
従って本発明の課題は、レーザマイクロダイセクションの実行後の自動化された試料処理を可能とすることである。この際、切断部位の視覚的な目視化（目で見えるようにすること）ないし検知の可能性を伴うことが望まれる。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記課題は、独立特許請求項に記載した、レーザマイクロダイセクション装置のためのレーザ微小切断部位用試料回収器、並びにレーザマイクロダイセクション装置により解決される。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の好ましい実施形態は、各々の下位請求項、並びに以下の説明において開示される。
【００１５】
本発明によるレーザ微小切断部位用試料回収器（捕集器）は、切断部位（Dissektat）を受容するための検査可能（例えば目視検査）な回収室（捕集室）を有し、この際、この回収室は、試料側（切断される試料の方を向いた側）において、切断部位を受け入れるために周囲に向かって実質的に開いた開口部を含んでいる。更にこの回収室は、第１バルブを有し、該第１バルブは、閉じた状態により、特に切断部位の一時的な保持のために回収室において試料とは反対側（前記開口部の反対側）の閉鎖部（又は底部）を構成する。第１バルブの下流側には、毛管ダクト（細管ダクト）が配設されており、該毛管ダクトは、回収室から（第１バルブが開いた状態において）切断部位を搬送するために該回収室と接続状態にある。
【００１６】
以下「下流側」並びに「上流側」との用語は、回収室の試料側（切断される試料の方を向いた側）の開口部から第１バルブを介して毛管ダクトの方向へ向かう流れ方向に関するものとし、従ってこの流れ方向は、結果として切断部位の搬送経路を意味している。
【００１７】
また回収室の「周囲に向かって実質的に開いた開口部」とは、回収室が気体絶縁又は液体絶縁されて密閉されていないこととして理解される。
【００１８】
本発明は、手動の作業ステップを必要とすることなく、本発明による試料回収器が切り出された試料（切断部位）を回収（捕集）し、閉じた第１バルブにより形成された底部上に該試料を先ずは保持し、引き続き更に毛管ダクトへそして毛管ダクトを通って誘導することが可能であるという利点を有する。切断部位の回収と更なる誘導との間において該切断部位は、場合により視覚的に目視で検査又は検知することが可能である。切断部位の更なる誘導後に該切断部位は、分析処理に提供することが可能である。特に試料回収器は、切断部位の誘導のために手動で取り外される必要はなく及び／又は傾けられる必要もない。このようにして試料処理の自動化が可能とされ、このことは、作業快適性を改善し、作業時間を減少させる。更に手動の作業ステップにより助長される汚染（コンタミネーション）及び／又は素材損失を回避することができるか又は少なくとも減少することができる。特に試料は、ダイセクションプロセス直後にフラッシング（流体による洗い流し Spuelen）のための適切なバッファ又は溶剤を使用することにより保護し、そして分析処理に提供することが可能である。
【００１９】
回収室は、試料回収器の内側表面の一部とすることが可能である。毛管ダクトと回収室の接続は、第１バルブを含んだ直接的な接合部（ジョイント部）の形式により得ることが可能である。この際、回収室と毛管ダクトは、共通の単一の構成部材の各セグメントとして、例えばガラスやプラスチックから製造することが可能である。この際、そのようなセグメントを互いに接合することが可能であるか、又は前記構成部材がそれらの両方のセグメントの間に配設される（バルブ）部分をもつことも可能である。選択的に回収室と毛管ダクトは、別個の構成部材として又は別個の構成部材の部分要素として設けることも可能であり、これらは直接的に互いに接続されるか、又は１つの或いは複数の接続部材（例えば第１バルブ）を介して互いに接続される。これらの別個の構成部材は、同じ１つの材料からか又は同じ複数の材料から構成することが可能である。選択的にこれらの構成部材の少なくとも一方が、他方の構成部材には含まれていない少なくとも１つの材料を含むことも可能である。
【００２０】
毛管ダクトは、毛管（Kapillare）又は細管（Roehrchen）とすることが可能である。
【００２１】
回収室は、例えば複数の切断部位を集めるために用いることが可能であり、その後、それらの切断部位をまとめて第１バルブを介して毛管ダクトを通して誘導し、そこから更なる反応プロセスに提供することが可能である。それに加え、そのような回収室は、例えば放出ダクトを介して切断部位を洗い流す（流し出す Ausspuelen）ために、所定の液体のような搬送物質ないし担体物質（キャリアサブスタンス）を付加することを可能にするか又は容易にしてくれる。
【００２２】
この際、例えば第２バルブを設けることが可能であり、該第２バルブは、該第２バルブが開いた場合にだけ切断部位又は他の素材が回収室内へ落下できるように回収室を選択的に開閉する。従って特に切断部位の捕集後に第２バルブを閉じることにより、回収室内へ例えば汚染粒子のような異物が侵入することを防止することができる。この際、第２バルブは、閉じた状態により、回収室の試料側の閉鎖部（即ち「カバー」）を形成する。
【００２３】
第１バルブを用い、回収室からそして毛管ダクトを介した切断部位の搬送を管理することが可能である。つまり切断部位が毛管ダクトを通して誘導され、更なる試料処理ないし試料分析に提供される時点を管理することが可能である。例えば使用者は、切断部位を該切断部位の切り出し後で且つ回収室から該切断部位を搬送する前に、先ず視覚的に目視で検査することができる。
【００２４】
有利な一実施形態において、回収室及び／又は毛管ダクトは、少なくとも１つのインジェクタを有することが可能であり、該インジェクタを用い、所定の液体又はその他の搬送物質を供給することが可能である。それにより例えば毛管ダクトを介して切断部位を搬送するための所定の液体を加えることが可能である。選択的に又は追加的に更なる試料処理のために適した物質添加を行うことも可能であり、例えば適切なバッファや、溶剤や、ミセル形成液などである。双方の種類の供給物質は、以下「担体物質（キャリアサブスタンス）」との用語でまとめて表現するものとする。
【００２５】
試料回収器が上述のように２つのバルブを有する回収室を含んでいる場合には、１つのインジェクタがこれらのバルブの間に配設されていると有利である。このことは、所定の物質の供与前に回収室を閉じることを可能とし、従って例えば前記物質の臭気や蒸気が漏れ出すことはなく、また前記物質が汚染されることもない。
【００２６】
試料回収器は、好ましくは回収室と毛管ダクトとの間に配設されたディスペンサ（計量分配器）を含むことが可能である。このディスペンサは、好ましくは回収室の下流側に配設されている。
【００２７】
この種のディスペンサは、切断部位を液体滴の中に包み込む（囲い込む）ことを可能にする。そして個々の滴は、好ましくは放出ダクト内で選別（分類）することが可能である。例えば切断部位を含んだ滴をそれ以外の滴から分別することが可能である。そして切断部位を含まない滴は、例えば（例えば試料回収器のインジェクタを用いた新たな噴出による）再利用又は更なる利用に提供することが可能であり、それに対し、切断部位を有する滴は、分析処理へ導くことが可能である。
【００２８】
毛管ダクトを用いることにより、極めて小容積の液体を搬送することが可能である。毛管ダクトは、分岐部を有することが可能である。この分岐部は、選別交差部として構成することが可能であり、該選別交差部において、切断部位を有する滴が切断部位を含まない滴から（例えば電場勾配を用いて）自動的に分別可能である。それにより分析溶液中の切断部位の濃度を増加させ、従って例えばＤＮＡ濃縮を用いた分析処理を改善することができる。選別交差部を使用する場合、分枝する一方の毛管ダクトは、切断部位の搬送のために用いられ、それに対し、分枝する他方の毛管ダクトは、リザーバ（タンク）に担体物質を戻すために用いられ、そして該担体物質は、ポンプを用いて例えばインジェクタを介して回収室に供給可能である。
【００２９】
目的に適った一実施形態において、回収室の開口部の上流側には、検査（例えば目視検査）を可能とする流し状（とい状）装置（試料を一時的に受けて保持し、その後、流し出す装置 Abflusseinrichtung）を配設することが可能であり、該流し状装置の流出口は、回収室の開口部と接続状態にある。この場合、切断部位は、直接的に回収室内へ落ちていくのではなく、先ず流し状装置内へ落ちていき、該流し状装置内で切断部位を例えば視覚的に目視で又はカメラを用いて検査することが可能である。流し状装置の流出口を介し、切断部位は、引き続き回収室の開口部を通って該回収室内へ達する。
【００３０】
有利な一実施形態において、流し状装置は、フラッシング装置（洗い流し装置 Spueleinrichtung）及び／又は放出ないし吸引装置（Ablauf- bzw. Absaugeinrichtung）を含んでいる。フラッシング装置及び／又は放出ないし吸引装置は、切断部位を確実に流し状装置から毛管ダクト内へ送るために用いることが可能である。従って回収室からの切断部位の搬送の時点を管理することも可能である。
【００３１】
フラッシング装置を用いる場合、該フラッシング装置は、流し状装置を既に切断部位の投入（落下）前に及び／又は連続的に湿潤しておき、それにより投入された切断部位の搬送を容易にするために設けることが可能である。選択的にフラッシング装置は、切断部位の捕集後に初めて所定の液体を回収装置内へ供給するように設けることも可能であり、このことは、先行する切断部位の視覚的な目視化を可能にする。この際、所定の液体の供給は、予め定められた時間間隔後に自動で又は使用者により手動で行うことが可能である。このようにして一方では、切断部位が毛管ダクト内へフラッシングされる前にこの切断部位を視覚的に目視で検査する時間を使用者に与えることができ、他方では、複数の切断部位がまとめて毛管ダクト内へフラッシングされる前に先ずこれらの複数の切断部位を回収装置内に集めることが可能である。
【００３２】
特にフラッシング装置を有する一実施形態において、流し状装置は、好ましくは高くされた側方縁部を用いて画定された捕集受け面として構成されている。それにより供給された液体を溜めることも可能であり、また水平線に対して捕集受け面を傾けることにより液体の流れ方向をコントロールすることが可能である。特に切断部位を、目標を定めて回収室の開口部内へフラッシングする（流し込む）ことが可能である。
【００３３】
特に有利な一実施形態において、第１バルブの下流側においてこの第１バルブの後方にはフィルタが配設されており、この際、このフィルタは、切断部位を通すことができるように作られている。このフィルタは、特に（流れ方向において）第１バルブの直後で毛管ダクトの前に配設されているか、又は毛管ダクト自体内に配設されている。このフィルタを通過した切断部位は、毛管ダクトを介して更に搬送される。
【００３４】
前記フィルタは、特に上記の担体物質（流体）に対して透過性があり、それに対し、その他の特に切断部位とは異なる固形物質を捕集することが可能である。切断部位とは異なるそのような固形物質には、特にメンブラン断片が属する。レーザマイクロダイセクションでは、通常、所謂メンブラン対象物支持器が使用される。ダイセクションすべき素材が適切な（通常はＵＶレーザ光を吸収する）メンブラン上に取り付けられ、この際、レーザマイクロダイセクションシステムのレーザは、試料と共にメンブランも切断する。その結果、切断部位は、メンブランと周辺の試料との全結合体から物理的に完全に切り離される。このことは、摘出された試料（切断部位）が同様に摘出されたメンブラン（メンブラン断片）とまだ結合されていることをもたらす。メンブラン断片は、試料回収器の毛管ダクトを詰まらせ、及び／又は後続する反応処理に影響を及ぼすことがある。
【００３５】
以下、既述のそのようなフィルタが（流れ方向において）回収室の第１バルブの直後で毛管ダクトの前に配設されていることを想定する。メンブラン断片から切断部位を分離するためには、以下の方法を使用することが可能である：ダイセクションされた試料が回収室内で回収され、該回収室内で切断部位を場合により検査（例えば目視検査）することが可能である。インジェクタを介し、回収室に溶解バッファ（リーシスバッファ）が添加され、該溶解バッファは、切断部位をメンブラン断片から分離させる。また試料は、溶解バッファ、又は溶解バッファ内の消化酵素により完全にリーシス／消化可能であり、従ってそれまで固形だった試料における構成成分が溶液（ライセート Lysat）内に存在し続け、それに対し、メンブランはその元来の固形形状を維持している。第１バルブを開くことにより（リーシスされた）切断部位は、該第１バルブを介して毛管システム内へ達し、それに対し、同時にダイセクションされたメンブラン断片は、フィルタにより捕集される。
【００３６】
フィルタをメンブラン断片から洗浄するためには、様々な可能性がある：先ずバルブ（単数又は複数）とフィルタと共に全回収室を交換し、新しいものと取り換えることが可能である。選択的にフィルタだけを交換し、新しいものと取り換えることも可能である。追加的に又は選択的に、フィルタないし全回収室の交換前に（又はそのような交換を回避するためにも）フィルタを洗い流すことが可能である。この際、例えばフィルタは、第１バルブを開けた状態で反対方向（回収室の上流側に向かう方向）に逆流フラッシングすることが可能であり、それによりメンブラン断片が回収室内へ達する。それからこれらのメンブラン断片は、例えばインジェクタを用い（又は回収室内に既に配設されているインジェクタを用い）吸い出される。
【００３７】
有利な一実施形態において、本発明による試料回収器は、レーザマイクロダイセクション装置へ組み込まれている。更にこの装置は、レーザ光を発生させるためのレーザ光源と、レーザ光を偏向させるための偏向装置と、焦点レンズとして顕微鏡対物レンズと、対象物支持器（即ち顕微鏡スライド）を受容するための顕微鏡テーブルとを含んでいる。レーザ光は、顕微鏡対物レンズを用い、対象物支持器上にある試料へ集束（焦点合わせ）される。レーザ光は、偏向装置を用い（例えばコンピュータを使って設定された）試料内の切断線に沿って案内される。試料回収器は、好ましくは対象物支持器の下方に固定されており、レーザ光により切り出された切断部位が試料回収器の回収室内へ（又はその前に配設された流し状装置内へ）落ちるように配向されている。
【００３８】
そのようなレーザマイクロダイセクション装置は、顕微鏡を含んでおり、この際、顕微鏡光線路へレーザ光を入射結合するための手段が設けられている。この手段としてビームスプリッタを設けることができ、該ビームスプリッタは、レーザ波長に対しては反射性であり、それに対し、顕微鏡の観察波長に対しては透過性である。更にレーザ光を入射結合するための光学コンポーネント（レンズなど）を設けることが可能である。全体として、顕微鏡対物レンズを通して試料上へレーザ光を入射結合し且つ集束させるために落射光（照明）装置（入射光装置）を使用することが目的に適っている。この際、レーザ光は、落射光装置内に配設された偏向装置を通ってから顕微鏡対物レンズに当たり、この際、該顕微鏡対物レンズは、集束レンズとして用いられる。レーザ光は、試料上へ集束（焦点合わせ）され、偏向装置による適切な偏向を用い、試料上に切断線が描かれる。この切断線に沿って試料が切断され、それにより切断部位が得られる。そのような装置は、試料が顕微鏡的に（例えば蛍光顕微鏡検査法を用いて）検査可能であり、ダイセクションすべき試料の領域が認識可能であるので、特に有利である。更に顕微鏡テーブルをレーザカッティング中に動かす必要がないので、視覚的に目視で又はカメラを用いてレーザカッティングの経過を観察することも、場合により管理することも可能である。
【００３９】
顕微鏡を含んだ上記のレーザマイクロダイセクションシステムの原理的な構造並びに機能方式に関しては、明らかに上記特許文献１が参照される。そのようなシステムは、特に本発明による試料回収器との組み合わせにおいて有利である。システムの詳細に関しては、反復説明を回避するため、本明細書に上記特許文献１の開示内容が繰込み記載されているものとする。
【００４０】
切断部位処理の枠内において、予め設定された規定数の切断部位が回収室内で回収されたことを確認することが可能である。このことは、実行されたダイセクションステップの回数の検知、並びに予め設定された回数と、検知された回数との比較を含むことが可能である。このようにして例えば分析処理のために不可欠な、溶液中の切断部位の濃度を達成することが可能である。
【００４１】
上述の特徴、並びに後続段落で更に説明すべき特徴は、各々記載された組み合わせだけで使用可能なのではなく、本発明の枠を逸脱することなく、他の組み合わせ又は単独のものとしても使用可能であることは、勿論である。
【００４２】
本発明の実施例が図面に概要図として図示されており、以下、これらの図面を用いて本発明の実施例を詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】本発明による試料回収器の一実施形態と、その使用時における様々な方法ステップとを例示する図である。
【図２Ａ】本発明による試料回収器と、その使用形態との選択的な一実施形態を示す図である。
【図２Ｂ】図２Ａに記載の方法の継続形態として切断部位の転送を示す図である。
【図３Ａ】本発明による試料回収器の選択的な他の一実施形態と、その使用形態の最初のステップとを示す図である。
【図３Ｂ】図３Ａに図示された試料回収器を使用した場合の更なる方法ステップを示す図である。
【図４】フィルタシステムを有する試料回収器を、様々な使用段階（図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｃ）において示す図である。
【図５】可能なフィルタシステム洗浄の様子を示す図である。
【図６】試料回収器が組み込まれたレーザマイクロダイセクションシステムを示す図である。
【実施例】
【００４４】
図１は、本発明による試料回収器１の一実施形態が使用される方法の５つのステップを示している。
【００４５】
試料回収器１は、図示の場合では２つのバルブ１０１、１０２を有する回収室（捕集室）１０を含んでいる。第１バルブ１０２は、閉じた状態により、回収室１０において試料１０６とは反対側の閉鎖部（底部）を構成する。図示された第１ステップＳ１１において、第２バルブ１０１（カバー）は開いており、従って回収領域は、落ちてくる切断部位１１１を受け入れるために準備されている。回収室１０は、第１バルブ１０２の下流側の下側面部において、回収領域から切断部位を搬送するための放出ダクト１０７としての毛管ダクトと結合されている。回収室１０の回収領域から放出ダクト１０７内への切断部位の転送は、バルブ１０２を介して管理される。図示のステップＳ１１においてバルブ１０２は、閉じている。
【００４６】
試料回収器１は、試料１０６を保持する対象物支持器（即ち顕微鏡スライド）１０３の下方に配設されている。顕微鏡の対物レンズ１０５により集束されるレーザ光９を用い、ステップＳ１１において試料１０６から切断部位（切片）１１１が切断される。切り出された切断部位１１１は、試料回収器１の回収領域内へ（即ち回収室１０内へ）落ちていく。可能なレーザマイクロダイセクション装置は、図６において詳細に説明される。
【００４７】
回収室１０内へ切断部位が落ちてから（ステップＳ１２）、上側のバルブ１０１を閉じることが可能である（ステップＳ１３）。所望の切断部位数が達成されるまで、ステップＳ１１を繰り返すことにより前もって更なる切断部位を切り出し、回収室１０内に取り入れることが可能である。その後、下側のバルブ１０２を開くことが可能であり、それにより切断部位が、例えばミクロな液体の毛管システム内へ埋設可能である放出ダクト１０７へ直接的に引き渡される（ステップＳ１４）；この際、好ましくは上側のバルブ１０１は閉じている。ステップＳ１５において、例示された切断部位１１１は、選別交差部（分岐部）１０８へ達し、該選別交差部１０８から切断部位１１１は、後続段落で更に説明するように、その用途箇所へ提供することが可能である。全てのステップ中、ないし全てのステップの前又は全てのステップの後には、任意選択的なインジェクタ１０４により、適切なバッファや、溶剤や、ミセル形成液などのような担体物質を加えることが可能である。更にインジェクタ１０４は、ステップＳ１４において切断部位をフラッシングする（流し出す）ために使用することが可能である。
【００４８】
図１に図示された試料回収器の実施形態に加え、回収室１０をディスペンサ（計量分配器）１０９と組み合わせる可能性がある。この種の実施形態が図２Ａと図２Ｂに示されている：図１に対応して図示された構成要素の他、図２Ａと図２Ｂにおいて図示された試料回収器１は、ディスペンサ１０９を含んでいる。
【００４９】
図２Ａの第１ステップＳ２１は、図１のステップＳ１１に対応している：この際、切断部位１１１は、試料１０６から切断され、回収室１０を有する試料回収器１内へ落ちていく。そして下側のバルブ１０２は（ステップＳ２２ａで示されているように）閉じているか、又は（ステップＳ２２ｂで示されているように）開いていることが可能である。従って切断部位１１１は、下側のバルブ１０２において保持される（ステップＳ２２ａ）か、又は直接的にディスペンサ１０９のヘッド部において所定の液体１１３と混合される（ステップＳ２２ｂ）。両方のステップＳ２２ａ、Ｓ２２ｂにおいて、回収過程前、回収過程後、及び／又は回収過程中の担体物質の任意選択的な供与が任意選択的にインジェクタ１０４により可能である（非図示）。切断部位１１１がステップＳ２２ａに対応して下側のバルブ１０２の上又は上側において保持される場合には、引き続きバルブ１０２が開かれ、それにより切断部位１１１は（ステップＳ２２ｂで示されているのと同様に）ディスペンサ１０９内へ達する。
【００５０】
ステップＳ２２ｂに続き、下側のバルブ１０２は（ステップＳ２３ａで示されているように）直ぐに再び閉じることが可能である。選択的に先ず（ステップＳ２３ｂで示されているように）インジェクタ１０４による物質供与１１４を行うことも可能である。
【００５１】
図２Ｂによると次のステップＳ２４において切断部位１１１は、ディスペンサ１０９を後にし、それにより切断部位１１１は、滴１１５内に包み込まれて（封入されて）いる。ステップＳ２４において下側のバルブ１０２は、この際（再び）閉じられているが、また選択的に開いていることも可能であり、これは、特に先行するステップがステップＳ２３ｂに対応する場合である。滴１１５は、毛管ダクト１０７内へ達する。
【００５２】
ステップＳ２５において滴１１５は、その中に封入されている切断部位１１１と共に選別交差部（分岐部）１０８に近づいていく。選別交差部１０８では、印加された電場勾配を用い、ステップＳ２６において、切断部位１１１を有する滴１１５が選別され、対応する選ばれた所定の毛管１１７内へ入れられて所望の分析処理に提供され、それに対し、切断部位を伴わない滴は、他の毛管１１８内へ選別され、再利用することが可能である。再利用（リサイクル）は、場合によりインジェクタによる新たな噴射のことである。プロセスを繰り返す前にディスペンサ１０９は、例えばインジェクタ１０４を介して場合により補充（非図示）される必要がある。この際、下側のバルブ１０２は開いており、上側のバルブ１０１は、同様に開いているか、又は閉じていることも可能である。
【００５３】
図３Ａと図３Ｂは、選択的な一実施形態を示しており、該実施形態において試料回収器１の回収室１０の上側の開口部には、上流側において、高くされた側方縁部１２５を用いて画定された捕集受け面１２４が流し状装置１１として設けられている。この流し状装置１１は、好ましくはフラッシング装置か又は放出ないし吸引装置を含んでおり、これらの装置を用い、捕集された切断部位を放出ダクト１０７へと押し流すことが可能である。（この際、高くされた側方縁部１２５を用いて画定された捕集受け面１２４とは、捕集受け面１２４の少なくとも一部の側方縁部１２５が捕集受け面１２４よりも高くなっていることを意味する。そのような捕集受け面１２４の側方縁部１２５は、切断部位を流し出すないし注ぎ出すことのできる溝部として機能する。また捕集受け面１２４の形状は任意であり、楕円形や円形としてもよく、但し切断部位が意図せずにひっかかることを防ぐため、エッジや角部をもたないようにすべきである。因みに図３Ａと図３Ｂに図示された捕集受け面１２４は、一例として楕円形が選択されており、その形状があくまでも模式的に図示されている。）
【００５４】
この際、第１ステップＳ３１において切断部位１１１は、レーザマイクロダイセクション処理ごとに試料１０６から切り離される。切断部位１１１は、重力により下方へ落ちていく。ステップＳ３２において切断部位１１１は、試料回収器１の流し状装置１１の捕集受け面１２４上で捕集される。この際、捕集受け面１２４は、水平線に対して傾けられている。図示の実施形態において流し状装置１１は、インジェクタ又はフラッシング装置１１９を含んでおり、該インジェクタ又はフラッシング装置１１９を用い、フラッシング液又はその他の物質、一般的には担体物質を加えることが可能である。捕集受け面１２４の側方縁部１２５は、液体（フラッシング液）が溢れることを防止し、流出口１２６へと誘導するために高くなっている。
【００５５】
図示の例の場合、ステップＳ３２では、まだ液体又はその他の物質は、捕集受け面１２４内へ入れられていない。従って捕集受け面１２４と切断部位の検査（例えば目視検査）を行うことが可能である。選択的に捕集受け面１２４を、途切れることなくフラッシング又はインジェクタ１１９により湿潤することも可能であろう。
【００５６】
適切なフラッシング溶液を用いたフラッシングにより切断部位１１１は、ステップＳ３３において流出口１２６を通り、そしてステップＳ３４において図示の例の場合では毛管室１２０に組み込まれている回収室１０への接続部を通り、押し流される。フラッシングに対して選択的に切断部位の吸引も考えられる。
【００５７】
図示された毛管室１２０は、実際の回収室１０と、入口バルブ１２１と、出口バルブ１２２と、任意選択的なインジェクタ１２３とを有する。開かれた入口バルブ１２１を通り、切断部位１１１は、図３Ｂにおいて図示されているようにステップＳ３５において、出口バルブ１２２が閉じられた回収室１０内へ達する。
【００５８】
回収室１０は（ステップＳ３６ａで示されているように）直接的に又は（ステップＳ３６ｂで示されているように）ディスペンサ１０９を介して放出ダクト１０７へ接続可能である。インジェクタ１２３が設けられている場合には、出口バルブ１２２が閉じた状態で両方の場合においてインジェクタ１２３を介し、１つ又は複数の物質の供与を行うことが可能である。
【００５９】
ステップＳ３６ａから出発し（即ち回収室１０がディスペンサに接続されていない場合）ステップＳ３７ａにおいて出口バルブ１２２が開かれ、切断部位１１１がここでは毛管である放出ダクト１０７内へ移される。ステップＳ３８ａにおいて切断部位１１１は、周りの液体と共に毛管ダクト１０７を通り、例えば図１に示されているように更なる分析処理に提供される。更なる処理過程に関しては、図１ないし図２Ａと図２Ｂが参照とされる。
【００６０】
回収室１０がディスペンサ１０９に接続されている場合（ステップＳ３６ｂ）には、切断部位１１１は、ステップＳ３７ｂ及びＳ３８ｂにおいて、図２Ｂのために説明されたステップＳ２３ｂに対応して滴内へ取り込まれ、この滴は、切断部位を伴わない滴とは分別され、切断部位の分析処理のための反応箇所へ送られる。
【００６１】
図４は、実質的に既に図１に図示された本発明による試料回収器１の一実施形態の機能方式を示しているが、ここでは、膜（メンブラン）のような、切断部位とは異なる物質１１２を切断部位１１１から分離するためのフィルタシステムが設けられている。この際、図４では（流れ方向において）第１バルブ１０２の後にフィルタ１１６が配設されており、この際、フィルタ１１６は（同様に流れ方向において）毛管ダクト１０７に至る前に配設されている。
【００６２】
図４Ａは、対象物支持器１０３により保持される試料１０６上へ集束（焦点合わせ）されるレーザ光９のための集束レンズ（対物レンズ）１０５を示している。切り出された切断部位は、第２バルブ１０１が開いた状態において試料回収器１の回収室１０内へ落ちていく。この点については、図１に関する説明が参照される。
【００６３】
レーザマイクロダイセクションは、通常、所謂メンブラン対象物支持器を用いて実行される。その際、試料１０６は、適切なメンブラン（通常、ＵＶレーザ光を吸収する材料から構成される）上にもたらされる。レーザマイクロダイセクションシステムのレーザ光９は、試料１０６から切断部位１１１を切断し、この際、切断部位１１１を保持するメンブランも同時に切断される。このことは、摘出された試料、即ち切断部位１１１が、同様に摘出されたメンブラン１１２とまだ結合していることをもたらす。このメンブラン１１２は、毛管ダクト１０７の毛管を詰まらせるか又は後続の反応処理に影響を及ぼすことがある。
【００６４】
図４Ｂは、切断部位１１１が回収室１０内へ落ちた後で第２バルブ１０１が閉じられた後の試料回収器１内の状況を示している。インジェクタ１０４を介し、既に担体物質１１３が回収室１０の内部へ供与されている。従って切断部位１１１は、第１バルブ１０２が閉じた状態においてメンブラン１１２と共に担体液体中にある。図４Ｂによる状況において、ダイセクションされた試料を検査（例えば目視検査）することが可能である。担体物質１１３としては、少なくとも切断部位１１１をメンブラン断片１１２から分離するか或いはメンブラン断片１１２を残して試料を完全に溶解する／リーシス（消化）する溶解バッファ（リーシスバッファ）を添加することが可能である。
【００６５】
図４Ｃは、下側の第１バルブ１０２を開いた後の状況を示している。担体物質（溶解バッファ）１１３並びに切断部位１１１ないし溶解された試料に対してフィルタ１１６は透過性があり、それに対してメンブラン１１２に対しては透過性がないので、切断部位１１１は、毛管システム１０７内へ移され、それに対し、同時にダイセクションされたメンブラン断片１１２は、フィルタ１１６に留まる。
【００６６】
図５は、フィルタシステム洗浄の一可能性を模式的に示している。
【００６７】
原理的にフィルタシステム洗浄のためには３つの可能性がある。構成形態に応じ、バルブ１０１、１０２並びにフィルタ１１６と共に全回収室１０が交換可能とされるか、又はフィルタ１１６だけが交換可能とされる。そのような交換を全く回避するか又は少なくとも比較的長い時間間隔でのみ必要であるとするために、有利にはフィルタ１１６をフラッシングすることが可能である。この過程が図５Ａ〜図５Ｃにかけて模式的に図示されている。先ず担体物質か又は他のフィルタ洗浄液を用いてフィルタ１１６がフラッシングされ、従って下側のバルブ１０２が開いた状態により、フィルタリングされたメンブラン１１２又はフィルタ１１６に残った複数のメンブラン断片が（下流側から上流側に向かい）回収室１０の内部へ流し込まれる。引き続き下側のバルブ１０２が再び閉じられる（図５Ｂを参照）。そして回収室１０の内部が空にされ、この際、この液排出は、回収室１０に配設されたインジェクタにより行われ、例えばインジェクタ１０４によっても行うことが可能である。また回収室１０を完全に空にすることなく、メンブラン断片１１２だけを吸い出すことも可能である。図５Ｃは、フィルタシステム洗浄後の状態を示している。上側のバルブ１０１を開くことにより、試料回収器は、再び切断部位を受け入れるために準備される。
【００６８】
図６は、本発明のために使用することの可能なレーザマイクロダイセクション装置（レーザ微小切断装置）を模式的に示している。本発明のために特に適したレーザマイクロダイセクションシステムは、上記特許文献２において詳細に説明されている。従って以下に説明するこのシステムの所定の詳細に関しては、明らかに上記特許文献２が参照され、それ故、上記特許文献２の開示内容は、本明細書に繰込み記載されているものとする。
【００６９】
レーザマイクロダイセクション装置２００は、電動式で移動可能なｘｙテーブルと、顕微鏡テーブル２０５とを有する顕微鏡２０４を含んでいる。顕微鏡テーブル２０５は、対象物支持器１０３を受容するために用いられ、対象物支持器１０３上には、検査すべき及び／又は切断すべきプレパラート（試料）１０６が取り付けられている。符号２０９により透過光照明装置が示されている。試料１０６は、透過光及び／又は落射光（入射光）を用いて照明することが可能である。符号２０３により対応する落射光（照明）装置が示されている。この落射光装置２０３の対応する光源は、レーザ光源２０１と共に格納することが可能である。また別々の光経路を有する別々の配置構成も使用可能である。符号２０６は、ハロゲンランプや白色光ＬＥＤのような光源を示しており、該光源は、透過光照明光線路を発生させるための（光の進む方向において）後置された（詳細には非図示の）照明光学系を有している。この照明光線路は、偏向ミラー２０７と集光器２１１を用い、下方から試料１０６へ指向される。顕微鏡２０４は、更に対物レンズ１０５、並びに詳細には非図示のズームシステムや結像レンズ（チューブレンズ）や接眼レンズのような顕微鏡要素を含んでいる。接眼部自体は、符号２１２により示されている。
【００７０】
試料回収器１及び試料１０６を通って通過する透過光照明光線路の光は、対物レンズ１０５に達し、該対物レンズ１０５は、観察者が顕微鏡画像の形式で接眼部２１２を介して観察することのできる試料１０６の一部分を検知する。追加的に顕微鏡２０４は、カメラ２１７と接続されており、該カメラ２１７は、例えばＣＣＤチップを介してプレパラート部分のデジタル画像を検知することが可能である。カメラ２１７により記録された画像データは、コンピュータ２２０へ伝送され、該コンピュータ２２０は、表示面２１８（ここではモニタ）と接続されており、該表示面２１８上に、記録されたプレパラート部分の画像を表示させることが可能である。コンピュータ２２０とカメラ２１７は、全体的に又は部分的に一体式のユニットを構成することも可能である。
【００７１】
図示されたレーザマイクロダイセクション装置２００は、更にレーザカッティングにより試料１０６のレーザマイクロダイセクション領域（即ち切断領域）をダイセクションするためのレーザ装置（ここでは落射光（照明）装置２０３）を含んでいる。この際、レーザ光源２０１は、例えば顕微鏡スタンド２０８にレーザ光源２０１を結合することにより顕微鏡２０４と連結されている。レーザ光源２０１により発生されたレーザ光９は、更に説明すべき要素２１６、２１９、２１４、２０２、２１３を介し、顕微鏡２０４の光学軸線２１０へ入射結合され、顕微鏡対物レンズ１０５を介し、カッティングのために試料１０６へ集束される。その際、レーザ光９と試料１０６との間の相対運動により、それに対応するダイセクション領域がプレパラートから予め設定されたマーキング（切断線）に沿って切り出される。この相対運動は、レーザ光９の位置を固定し、それに対応する顕微鏡テーブル２０５の運動、従ってそれに対応する対象物支持器１０３の運動により実現することが可能であろうが、レーザカッティング中、顕微鏡テーブル２０５の位置を固定し、ないし対象物支持器１０３の位置を固定し、レーザ光９を動かす方が好ましく、この方式が本実施例において実現されている。このことは、レーザマイクロダイセクション中に試料１０６が直接的に観察可能であるという利点を有する。
【００７２】
この目的のためにレーザ光９は、（任意選択的な）減衰ユニット２１６（アッテネータ）と、集束光学系２１９と、アパーチャユニット２１４とを介して案内される。これらの要素を用い、既知の方式（明確には上記特許文献２を参照）によりレーザ光焦点が試料１０６の所望の箇所において所望の強度と幾何学形状をもって発生される。偏向要素２１３は、顕微鏡２０４の光学軸線２１０へレーザ光９を入射結合するために用いられる。レーザとしては、例えば紫外線レーザ（ＵＶレーザ）が適している。
【００７３】
制御装置は、図６において符号２１５により示されている。この制御装置は、図６において示唆的に図示されているように、互いに別々のユニットを含むことが可能であるが、実際に制御装置は、通常は１つのユニットであり、該ユニットは、特にコンピュータ２２０に組み込み可能でもある。この実施例において制御装置２１５は、レーザ光源２０１と、減衰ユニット２１６と、集束光学系２１９と、アパーチャユニット２１４と、更に説明すべき偏向装置（Ablenkvorrichtung）２０２と接続されており、それによりこれらの要素を適切に制御することが可能である。試料１０６の様々な領域を通過することないし試料１０６の様々な領域に到達することを可能にするために顕微鏡テーブル２０５との（ここでは非図示の）接続も有意義である。記録パラメータを設定可能とするためにカメラ２１７との接続も同様に目的に適っている。更なる詳細に関しては、再度、上記特許文献２が参照される。
【００７４】
試料領域（切断部位 Dissektat）のダイセクション（切断 Dissektion）のための予め設定されたマーキングないし切断線に沿ったレーザ光焦点の移動のために偏向装置２０２が設けられており、該偏向装置２０２は、一対の楔状プレートを含んでおり、この一対の楔状プレートの個々の楔状プレートは、互いに可変に配向することが可能である。このようにして既知の方式でレーザ光を光学軸線から所定の移動分（ずれ分）だけ偏向させることが可能であり、従ってレーザ光は、それに対応してずらされて試料１０６上へ当たることになり、この際、レーザ光は、全ての偏向角度について、対物レンズ１０５の対物レンズ瞳の中心を通過する。偏向装置２０２の構造と機能方式に関する詳細については、明らかに上記特許文献１が参照される。偏向装置２０２の適切な駆動制御により、レーザ光焦点を任意に予め設定された切断線に沿って案内することが可能である。
【００７５】
ここで取り扱うレーザマイクロダイセクション装置２００は、様々な顕微鏡検査法のもと、特に対象物支持器１０３の保持ポジションを固定した状態において試料の一部分の検知を可能とする。可能な透過光照明は、既に上述されている。落射光装置２０３は、ここではレーザ装置のために説明されるものであるが、コントラスト法や落射光蛍光法などのような他の落射光照明法を代表するものである。プレパラートの一部分を（少なくとも）２つの異なる顕微鏡検査法を用いて描写し、顕微鏡画像を重ね合わせ、そして重ね合わされた画像内で切断線を（自動で又は手動で）規定することは目的に適っていると言える。そしてコンピュータ２２０は、制御装置２１５を介し、それに対応して試料１０６から切断部位１１１を得るために偏向装置２０２を駆動制御する。切断部位１１１は、本発明による試料回収器１へ、特にその回収室１０の内部へ達することになる。
【００７６】
回収室１０の内部にある切断部位１１１は、図１及び図２に基づき既に詳細に説明したように、毛管ダクト１０７内へ移される。この際、ディスペンサ１０９（図２を参照）を設けることが可能である。更に図３において説明したように、流し状装置１１を使用することが可能である。選別交差部１０８（図１を参照）を介し、切断部位１１１を選別し、分析装置（非図示）に提供することが可能である。余分な担体物質は、毛管システムの他のダクトを介して再びその出所へ戻すことが可能である（即ち例えばリザーバ（タンク）であり、該リザーバから、ポンプを用いて担体物質を再びその元来の使用箇所へ戻すことが可能である）。
【００７７】
ダイセクションの過程を顕微鏡的に観察可能とするために、透過光照明光線路内にある試料回収器１の構成要素が十分に透光性を有することを考慮しなくてはならない。その他の場合、落射光による観察を選択することも可能である。また選択的な透過光照明と落射光照明も考慮可能である。
【符号の説明】
【００７８】
１    試料回収器
９    レーザ光
１０    回収室
１１    流し状装置
１０１    第２バルブ（上側のバルブ）
１０２    第１バルブ（下側のバルブ）
１０３    対象物支持器（顕微鏡スライド）
１０４    インジェクタ
１０５    集束レンズ、顕微鏡対物レンズ
１０６    試料（プレパラート）
１０７    放出ダクト、毛管ダクト
１０８    選別交差部、分岐部
１０９    ディスペンサ（計量分配器）
１１１    切断部位
１１２    メンブラン断片
１１３    担体物質
１１４    物質供与（物質添加）
１１５    滴
１１６    フィルタ
１１７    毛管
１１８    毛管
１１９    フラッシング装置
１２０    毛管室
１２１    第２バルブ、入口バルブ
１２２    第１バルブ、出口バルブ
１２３    インジェクタ
１２４    捕集受け面
１２５    側方縁部
１２６    流出口
２００    レーザマイクロダイセクション装置
２０１    レーザ光源
２０２    偏向装置
２０３    落射光（照明）装置
２０４    顕微鏡
２０５    顕微鏡テーブル
２０６    光源
２０７    偏向ミラー
２０８    顕微鏡スタンド
２０９    透過光照明装置
２１０    光学軸線
２１１    集光器
２１２    接眼部
２１３    偏向要素
２１４    アパーチャユニット
２１５    制御装置
２１６    減衰ユニット
２１７    カメラ
２１８    表示面（モニタ）
２１９    集束光学系
２２０    コンピュータ
Ｓ１１〜Ｓ１５      方法ステップ
Ｓ２１〜Ｓ２６      方法ステップ
Ｓ３１〜Ｓ３８ｂ    方法ステップ
【図１】
2015517669.tif 000003
【図２Ａ】
2015517669.tif 000004
【図２Ｂ】
2015517669.tif 000005
【図３Ａ】
2015517669.tif 000006
【図３Ｂ】
2015517669.tif 000007
【図４Ａ】
2015517669.tif 000008
【図４Ｂ】
2015517669.tif 000009
【図４Ｃ】
2015517669.tif 000010
【図５Ａ】
2015517669.tif 000011
【図５Ｂ】
2015517669.tif 000012
【図５Ｃ】
2015517669.tif 000013
【図６】
2015517669.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】平成27年1月27日(2015.1.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
切断部位を受容するための回収室を含む、レーザマイクロダイセクション装置のためのレーザ微小切断部位用試料回収器であって、
前記回収室（１０）は、試料側において、切断部位（１１１）を受け入れるために周囲に向かって開いた開口部を有し、
更に前記回収室（１０）は、第１バルブ（１０２、１２２）を有し、該第１バルブは、閉じた状態により、切断部位（１１１）の保持のために前記開口部とは反対側で前記回収室（１０）の閉鎖部を構成し、
前記第１バルブ（１０２、１２２）の下流側には、毛管ダクト（１０７）が配設されており、該毛管ダクトは、前記回収室（１０）から切断部位（１１１）を搬送するために前記回収室（１０）と接続状態にあること
を特徴とする試料回収器。
【請求項２】
前記回収室（１０）は、第２バルブ（１０１、１２１）を有し、該第２バルブは、閉じた状態により、前記回収室（１０）の試料側の閉鎖部を構成すること
を特徴とする、請求項１に記載の試料回収器。
【請求項３】
前記回収室（１０）及び／又は前記毛管ダクト（１０７）は、担体物質（１１３）を供給するための少なくとも１つのインジェクタ（１０４）を有すること
を特徴とする、請求項１又は２に記載の試料回収器。
【請求項４】
前記回収室（１０）の第１バルブ（１０２、１２２）と第２バルブ（１０１、１２１）との間に、担体物質を供給するためのインジェクタ（１０４）が配設されていること
を特徴とする、請求項１及び２に記載の試料回収器。
【請求項５】
前記毛管ダクト（１０７）は、分岐部（１０８）を有すること
を特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の試料回収器。
【請求項６】
前記回収室（１０）と前記毛管ダクト（１０７）との間にディスペンサ（１０９）が配設されていること
を特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の試料回収器。
【請求項７】
前記回収室（１０）の前記開口部の上流側には、流し状装置（１１）が配設されており、該流し状装置の流出口（１２６）は、前記回収室（１０）の試料側の前記開口部と接続状態にあること
を特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の試料回収器。
【請求項８】
前記流し状装置（１１）は、フラッシング装置（１１９）及び／又は放出ないし吸引装置を含んでいること
を特徴とする、請求項７に記載の試料回収器。
【請求項９】
前記流し状装置（１１）は、高くされた側方縁部（１２５）を用いて画定された捕集受け面（１２４）として構成されていること
を特徴とする、請求項７又は８に記載の試料回収器。
【請求項１０】
前記第１バルブ（１０２、１２２）の下流側においてこの第１バルブの後方には、フィルタ（１１６）が配設されており、該フィルタは、切断部位（１１１）を通すことができるように作られていること
を特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の試料回収器。
【請求項１１】
前記フィルタ（１１６）は、流れ方向において前記毛管ダクト（１０７）の前に配設されていること
を特徴とする、請求項１０に記載の試料回収器。
【請求項１２】
前記フィルタ（１１６）は、切断部位とは異なる物質（１１２）が捕集されるように作られていること
を特徴とする、請求項１０又は１１に記載の試料回収器。
【請求項１３】
前記フィルタ（１１６）は、担体物質（１１３）に対して透過性があること
を特徴とする、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載され且つ請求項３又は４に記載の試料回収器。
【請求項１４】
レーザマイクロダイセクション装置であって、
該レーザマイクロダイセクション装置は、
レーザ光を発生させるために構成されたレーザ光源と、
前記レーザ光を偏向させるために構成された偏向装置と、
対物レンズと、
ダイセクションすべき試料上へ前記対物レンズを通して前記レーザ光を集束させるために構成された落射光装置と、
試料を保持する顕微鏡スライドを受容するために構成された顕微鏡テーブルと、
前記顕微鏡スライドの試料側に配設されたレーザ微小切断部位用試料回収器と
を含み、
前記試料回収器は、切断部位を受容するために構成された回収室を含み、
前記回収室は、試料側において、切断部位を受け入れるための開口部を有し、
更に前記回収室は、第１バルブを有し、該第１バルブは、閉じた状態により、切断部位の保持のために前記開口部とは反対側で前記回収室の閉鎖部を構成し、
前記第１バルブの下流側において毛管ダクトが前記回収室と接続状態にあり、該毛管ダクトは、前記回収室から切断部位を搬送するために構成されていること
を特徴とするレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項１５】
前記回収室は、第２バルブを有し、該第２バルブは、閉じた状態により、前記回収室の試料側の閉鎖部を構成すること
を特徴とする、請求項１４に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項１６】
前記回収室及び前記毛管ダクトの少なくとも１つは、担体物質を供給するために構成された少なくとも１つのインジェクタを有すること
を特徴とする、請求項１４に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項１７】
前記回収室の第１バルブと第２バルブとの間に、担体物質を供給するために構成されたインジェクタが配設されていること
を特徴とする、請求項１５に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項１８】
前記毛管ダクトは、分岐部を有すること
を特徴とする、請求項１４に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項１９】
前記回収室と前記毛管ダクトとの間にディスペンサが配設されていること
を特徴とする、請求項１４に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項２０】
前記回収室の前記開口部の上流側には、流し状装置が配設されており、該流し状装置の流出口は、前記回収室の試料側の前記開口部と接続状態にあること
を特徴とする、請求項１４に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項２１】
前記流し状装置は、フラッシング装置、放出装置、及び吸引装置の少なくとも１つを含んでいること
を特徴とする、請求項２０に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項２２】
前記流し状装置は、高くされた側方縁部を用いて画定された捕集受け面として構成されていること
を特徴とする、請求項２０に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項２３】
前記第１バルブの下流側には、フィルタが配設されており、該フィルタは、切断部位を通すことができるように構成されていること
を特徴とする、請求項１４に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【請求項２４】
前記回収室及び前記毛管ダクトの少なくとも１つは、担体物質を供給するために構成された少なくとも１つのインジェクタを有し、前記フィルタは、担体物質に対して透過性があること
を特徴とする、請求項２３に記載のレーザマイクロダイセクション装置。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
【特許文献１】DE 100 18 253 C2
【特許文献２】DE 10 2005 028 062 B4
【特許文献３】DE 10 2005 008 925 A1
【特許文献４】EP 2 083 257 A1
【特許文献５】DE 10 2009 016 512 B4
【特許文献６】DE 103 29 674 A1
【特許文献７】WO 2004/035210 A2
【特許文献８】US 5 757 482 A
【特許文献９】WO 1997/029354 A1
【特許文献１０】DE 100 57 292 C2
【特許文献１１】US 2007/0095669 A1
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
前記課題は、独立特許請求項に記載した、レーザマイクロダイセクション装置のためのレーザ微小切断部位用試料回収器、並びにレーザマイクロダイセクション装置により解決される。
即ち本発明の第１の視点により、切断部位を受容するための回収室を含む、レーザマイクロダイセクション装置のためのレーザ微小切断部位用試料回収器であって、前記回収室は、試料側において、切断部位を受け入れるために周囲に向かって開いた開口部を有し、更に前記回収室は、第１バルブを有し、該第１バルブは、閉じた状態により、切断部位の保持のために前記開口部とは反対側で前記回収室の閉鎖部を構成し、前記第１バルブの下流側には、毛管ダクトが配設されており、該毛管ダクトは、前記回収室から切断部位を搬送するために前記回収室と接続状態にあることを特徴とする試料回収器が提供される。
また本発明の第２の視点により、レーザマイクロダイセクション装置であって、該レーザマイクロダイセクション装置は、レーザ光を発生させるために構成されたレーザ光源と、前記レーザ光を偏向させるために構成された偏向装置と、対物レンズと、ダイセクションすべき試料上へ前記対物レンズを通して前記レーザ光を集束させるために構成された落射光装置と、試料を保持する顕微鏡スライドを受容するために構成された顕微鏡テーブルと、前記顕微鏡スライドの試料側に配設されたレーザ微小切断部位用試料回収器とを含み、前記試料回収器は、切断部位を受容するために構成された回収室を含み、前記回収室は、試料側において、切断部位を受け入れるための開口部を有し、更に前記回収室は、第１バルブを有し、該第１バルブは、閉じた状態により、切断部位の保持のために前記開口部とは反対側で前記回収室の閉鎖部を構成し、前記第１バルブの下流側において毛管ダクトが前記回収室と接続状態にあり、該毛管ダクトは、前記回収室から切断部位を搬送するために構成されていることを特徴とするレーザマイクロダイセクション装置が提供される。
尚、本願の特許請求の範囲に付記されている図面参照符号は、専ら本発明の理解の容易化のためのものであり、図示の形態への限定を意図するものではないことを付言する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明の好ましい実施形態は、各々の下位請求項、並びに以下の説明において開示される。尚、本発明において、以下の形態が可能である。
（形態１）切断部位を受容するための回収室を含む、レーザマイクロダイセクション装置のためのレーザ微小切断部位用試料回収器であって、前記回収室は、試料側において、切断部位を受け入れるために周囲に向かって開いた開口部を有し、更に前記回収室は、第１バルブを有し、該第１バルブは、閉じた状態により、切断部位の保持のために前記回収室において試料とは反対側の閉鎖部を構成し、前記第１バルブの下流側には、毛管ダクトが配設されており、該毛管ダクトは、前記回収室から切断部位を搬送するために前記回収室と接続状態にあること。
（形態２）前記回収室は、第２バルブを有し、該第２バルブは、閉じた状態により、前記回収室の試料側の閉鎖部を構成することが好ましい。
（形態３）前記回収室及び／又は前記毛管ダクトは、担体物質を供給するための少なくとも１つのインジェクタを有することが好ましい。
（形態４）前記回収室の第１バルブと第２バルブとの間に、担体物質を供給するためのインジェクタが配設されていることが好ましい。
（形態５）前記毛管ダクトは、分岐部を有することが好ましい。
（形態６）前記回収室と前記毛管ダクトとの間にディスペンサが配設されていることが好ましい。
（形態７）前記回収室の前記開口部の上流側には、流し状装置が配設されており、該流し状装置の流出口は、前記回収室の試料側の前記開口部と接続状態にあることが好ましい。
（形態８）前記流し状装置は、フラッシング装置及び／又は放出ないし吸引装置を含んでいることが好ましい。
（形態９）前記流し状装置は、高くされた側方縁部を用いて画定された捕集受け面として構成されていることが好ましい。
（形態１０）前記第１バルブの下流側においてこの第１バルブの後方には、フィルタが配設されており、該フィルタは、切断部位を通すことができるように作られていることが好ましい。
（形態１１）前記フィルタは、流れ方向において前記毛管ダクトの前に配設されていることが好ましい。
（形態１２）前記フィルタは、切断部位とは異なる物質が捕集されるように作られていることが好ましい。
（形態１３）前記フィルタは、担体物質に対して透過性があることが好ましい。
（形態１４）レーザマイクロダイセクション装置であって、該レーザマイクロダイセクション装置は、レーザ光を発生させるためのレーザ光源と、前記レーザ光を偏向させるための偏向装置と、顕微鏡対物レンズを通して試料上へ前記レーザ光を集束させるための落射光装置と、ダイセクションすべき試料を保持する対象物支持器を受容するための顕微鏡テーブルと、上記形態のいずれか１つに記載の、前記対象物支持器の試料側に配設されたレーザ微小切断部位用試料回収器とを含むこと。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
有利な一実施形態において、本発明による試料回収器は、レーザマイクロダイセクション装置へ組み込まれている。更にこの装置は、レーザ光を発生させるためのレーザ光源と、レーザ光を偏向させるための偏向装置と、焦点レンズとして対物レンズと、対象物支持器（即ち顕微鏡スライド）を受容するための顕微鏡テーブルとを含んでいる。レーザ光は、対物レンズを用い、対象物支持器上にある試料へ集束（焦点合わせ）される。レーザ光は、偏向装置を用い（例えばコンピュータを使って設定された）試料内の切断線に沿って案内される。試料回収器は、好ましくは対象物支持器の下方に固定されており、レーザ光により切り出された切断部位が試料回収器の回収室内へ（又はその前に配設された流し状装置内へ）落ちるように配向されている。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
そのようなレーザマイクロダイセクション装置は、顕微鏡を含んでおり、この際、顕微鏡光線路へレーザ光を入射結合するための手段が設けられている。この手段としてビームスプリッタを設けることができ、該ビームスプリッタは、レーザ波長に対しては反射性であり、それに対し、顕微鏡の観察波長に対しては透過性である。更にレーザ光を入射結合するための光学コンポーネント（レンズなど）を設けることが可能である。全体として、対物レンズを通して試料上へレーザ光を入射結合し且つ集束させるために落射光（照明）装置（入射光装置）を使用することが目的に適っている。この際、レーザ光は、落射光装置内に配設された偏向装置を通ってから対物レンズに当たり、この際、該対物レンズは、集束レンズとして用いられる。レーザ光は、試料上へ集束（焦点合わせ）され、偏向装置による適切な偏向を用い、試料上に切断線が描かれる。この切断線に沿って試料が切断され、それにより切断部位が得られる。そのような装置は、試料が顕微鏡的に（例えば蛍光顕微鏡検査法を用いて）検査可能であり、ダイセクションすべき試料の領域が認識可能であるので、特に有利である。更に顕微鏡テーブルをレーザカッティング中に動かす必要がないので、視覚的に目視で又はカメラを用いてレーザカッティングの経過を観察することも、場合により管理することも可能である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
図示されたレーザマイクロダイセクション装置２００は、更にレーザカッティングにより試料１０６のレーザマイクロダイセクション領域（即ち切断領域）をダイセクションするためのレーザ装置（ここでは落射光（照明）装置２０３）を含んでいる。この際、レーザ光源２０１は、例えば顕微鏡スタンド２０８にレーザ光源２０１を結合することにより顕微鏡２０４と連結されている。レーザ光源２０１により発生されたレーザ光９は、更に説明すべき要素２１６、２１９、２１４、２０２、２１３を介し、顕微鏡２０４の光学軸線２１０へ入射結合され、対物レンズ１０５を介し、カッティングのために試料１０６へ集束される。その際、レーザ光９と試料１０６との間の相対運動により、それに対応するダイセクション領域がプレパラートから予め設定されたマーキング（切断線）に沿って切り出される。この相対運動は、レーザ光９の位置を固定し、それに対応する顕微鏡テーブル２０５の運動、従ってそれに対応する対象物支持器１０３の運動により実現することが可能であろうが、レーザカッティング中、顕微鏡テーブル２０５の位置を固定し、ないし対象物支持器１０３の位置を固定し、レーザ光９を動かす方が好ましく、この方式が本実施例において実現されている。このことは、レーザマイクロダイセクション中に試料１０６が直接的に観察可能であるという利点を有する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
１    試料回収器
９    レーザ光
１０    回収室
１１    流し状装置
１０１    第２バルブ（上側のバルブ）
１０２    第１バルブ（下側のバルブ）
１０３    対象物支持器（顕微鏡スライド）
１０４    インジェクタ
１０５    集束レンズ、対物レンズ
１０６    試料（プレパラート）
１０７    放出ダクト、毛管ダクト
１０８    選別交差部、分岐部
１０９    ディスペンサ（計量分配器）
１１１    切断部位
１１２    メンブラン断片
１１３    担体物質
１１４    物質供与（物質添加）
１１５    滴
１１６    フィルタ
１１７    毛管
１１８    毛管
１１９    フラッシング装置
１２０    毛管室
１２１    第２バルブ、入口バルブ
１２２    第１バルブ、出口バルブ
１２３    インジェクタ
１２４    捕集受け面
１２５    側方縁部
１２６    流出口
２００    レーザマイクロダイセクション装置
２０１    レーザ光源
２０２    偏向装置
２０３    落射光（照明）装置
２０４    顕微鏡
２０５    顕微鏡テーブル
２０６    光源
２０７    偏向ミラー
２０８    顕微鏡スタンド
２０９    透過光照明装置
２１０    光学軸線
２１１    集光器
２１２    接眼部
２１３    偏向要素
２１４    アパーチャユニット
２１５    制御装置
２１６    減衰ユニット
２１７    カメラ
２１８    表示面（モニタ）
２１９    集束光学系
２２０    コンピュータ
Ｓ１１〜Ｓ１５      方法ステップ
Ｓ２１〜Ｓ２６      方法ステップ
Ｓ３１〜Ｓ３８ｂ    方法ステップ
【国際調査報告】
2015517669.tif 000015
2015517669.tif 000016
2015517669.tif 000017
2015517669.tif 000018