(57)【要約】  本発明は、化学及び薬学に関し、特に、中枢神経系（ＣＮＳ）に作用する新規の分子実体：スピロスタン環と縮合したエステラン誘導体の生成に関するものである。  天然のサポゲニンであるジオスゲニンから、そのいくつかの後続の転換によって、２５Ｒ−スピロスタン核に縮合したシクロペンタンペルヒドロフェナントレン核を有する、一般式Ｉ〜ＩＶのスピロステロイド誘導体を得ることができる。  そのような分子実体は、炎症性疾患、脳血管疾患、神経変性疾患、神経精神病学的疾患、及び神経学的疾患を治療するために使用することができる抗炎症作用及び抗グルタミン酸作動性作用を有する。  【化１】2015506929.tif 000008【選択図】なし
2015506929.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジオスゲニン、ヘコゲニン、及びソラソジンに由来する神経刺激及び抗炎症作用を有し、かつその構造に縮合したスピロスタニック環を有し、医薬として使用される、その全ての天然の立体配座及び立体配置の、下記の一般式のスピロステロイド系。
【化１】
2015506929.tif 000007
（式中、
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、Ｈ、ヒドロキシル、セタル、アルコキシル、アルカニルオキシル、アルケノキシル、及びアルコキシルカルボニルオキシル基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）を表し、
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、アミンカルボニルオキシル、アルキニルアミン、及びジアルキニルアミン基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）で好ましく置換されたアミン基も表し、
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、アルキルアリール、アルカノイルオキシアリール、アルケノイルオキシアリール、及びアルケニルアリール基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）で好ましく置換された、アミド、チオール、スルフィニル、スルホンアミド、及びスルホニル基も表し、
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、アルキル、酸アルキル、アルカニルオキシルアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルケニル、ヘテロアリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールアルキルアルキニル、アルカノイルオキシアリールアルキルアルキニル、ヘテロアリールオキシアルキニル、オキソアルキニル、又はセタル基で好ましく置換された、シアン、チオシアン、イソチオシアン基も表し、ここで、シアニルアルキニル置換基は、ヘテロアリールアルキニル、ヒドロキシアルキニル、アルコキシアルキニル、アミノアルキニル、及びアシロアミノアルキニル基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）によってさらに置換されることができ、
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、アルキルアリール、アルカニルオキシアリール、アルケニルオキシアリール、及びアルケニルアリール基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）で好ましく置換されたホスホリル基も表し、
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ３は、Ｈ又はヒドロキシル基を表し、
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ５は、Ｈ、ヒドロキシル、セタル、アミン、チオール、及びシアン基を表し、
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ６は、メチル、最大２４個の炭素原子を有するモノ又はポリ不飽和脂肪酸から誘導される脂質鎖、及びタンパク質結合部位基を表し、
一般式ＩＩＩ及びＩＶの化合物に関して、Ｒｘは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体を表し、ここで、ｘは０とは異なり、
一般式ＩＩＩ及びＩＶの化合物に関して、Ｒｘは、アルキルアリール、アルカニルオキシアリール、アルケニルオキシアリール、及びアルケニルアリール基、好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体も表し、ここで、ｘは０とは異なる。）
【請求項２】
本発明の誘導体物体が合成法によって得られる、請求項１に記載の一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの神経刺激及び抗炎症作用を有するスピロステロイド系。
【請求項３】
合成誘導体が、アセトキシル化−トシル化−メシル化触媒プロセス、触媒的エポキシ化、エポキシドの触媒的開環、スピロステロイド系のＡ環における二重結合生成、及びその後の相間移動媒介性触媒反応条件におけるジヒドロキシル化によって得られる、請求項１に記載の一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの神経刺激及び抗炎症作用を有するスピロステロイド系。
【請求項４】
１〜８３％の活性物質、ナトリウムカルボキシメチルセルロース（０．７％）又はヒドロキシプロピルメチルセルロース（０．５％）、サッカリンナトリウム（０．４％）、プロピレングリコール（５％）、７０％ソルビトール（１０％）、香料（０．１％）、及び溶媒としての水を含有することを特徴とする、経口投与のための液体形態の、請求項１及び２に記載の一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶのスピロステロイド系を活性成分として含有する医薬組成物。
【請求項５】
硬ゼラチンカプセル又はヒドロキシプロピルメチルセルロースに封入された、１〜４０％の活性物質、コロイド状二酸化ケイ素（１％）、微結晶性セルロース（５８％）、ステアリン酸マグネシウム（０．８％）を含有することを特徴とする、経口投与のためのカプセル剤の形態の、請求項１及び２に記載の一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶのスピロステロイド系を活性成分として含有する医薬組成物。
【請求項６】
１〜７０％の活性物質、コロイド状二酸化ケイ素（１％）、微結晶性セルロース（２０％）、直接圧縮用のラクトース（１０％）、及びステアリン酸マグネシウム（０．８％）を含有することを特徴とする、経口投与のための錠剤又は顆粒剤の形態の請求項１及び２に記載の一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶのスピロステロイド系を活性成分として含有する医薬組成物。
【請求項７】
０．１〜９９％の活性物質、塩化ナトリウム（０．６％）、ｐＨ調節因子としてのリン酸二水素ナトリウム及びリン酸水素二カリウム、並びに注射用水を含有することを特徴とする、非経口投与のための液体形態の、請求項１及び２に記載の一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶのスピロステロイド系を活性成分として含有する医薬組成物。
【請求項８】
０．１〜９７％の活性物質、塩化ナトリウム（０．６％）、デキストラン７０（１％）、カルボポール９７４（０．５％）、ｐＨ調節因子としてのリン酸二水素ナトリウム及びリン酸水素二カリウム、並びに注射用水を含有することを特徴とする、経鼻投与のための液体形態の、請求項１及び２に記載の一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶのスピロステロイド系を活性成分として含有する医薬組成物。
【請求項９】
１〜７０％のＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００マイクロカプセル化形態の活性物質、コロイド状二酸化ケイ素（１％）、微結晶性セルロース（２０％）、直接圧縮用のラクトース（１０％）、及びステアリン酸マグネシウム（０．８％）を含有することを特徴とする、経口投与のための徐放錠形態の、請求項１及び２に記載の一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶのスピロステロイド系を活性成分として含有する医薬組成物。
【請求項１０】
０．１〜９９％のポリ乳酸コグリコール酸マイクロカプセル化形態の活性物質、塩化ナトリウム（０．６％）、ｐＨ調節因子としてのリン酸二水素ナトリウム及びリン酸水素二カリウム、並びに注射用水を含有することを特徴とする、非経口投与のための徐放液形態の、請求項１及び２に記載の一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶのスピロステロイド系を活性成分として含有する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学及び医薬分野に関し、より具体的には、新しい分子実体である、下記一般式のステラン縮合ステロイドの合成変異体を得ることに関する。
【０００２】
【化１】
2015506929.tif 000003
【０００３】
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、Ｈ、ヒドロキシル、セタル、アルコキシル、アルカニルオキシル、アルケノキシル、及びアルコキシルカルボニルオキシル基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）を表す。
【０００４】
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、アミンカルボニルオキシル、アルキニルアミン、及びジアルキニルアミン基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）で好ましく置換されたアミン基も表す。
【０００５】
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、アルキルアリール、アルカノイルオキシアリール、アルケノイルオキシアリール、及びアルケニルアリール基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）で好ましく置換された、アミド、チオール、スルフィニル、スルホンアミド、及びスルホニル基も表す。
【０００６】
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、アルキル、酸アルキル、アルカニルオキシルアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルケニル、ヘテロアリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールアルキルアルキニル、アルカノイルオキシアリールアルキルアルキニル、ヘテロアリールオキシアルキニル、オキソアルキニル、又はセタル基で好ましく置換された、シアン、チオシアン、イソチオシアン基も表し、ここで、シアニルアルキニル置換基は、ヘテロアリールアルキニル、ヒドロキシアルキニル、アルコキシアルキニル、アミノアルキニル、及びアシロアミノアルキニル基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）によってさらに置換されることができる。
【０００７】
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、アルキルアリール、アルカニルオキシアリール、アルケニルオキシアリール、及びアルケニルアリール基（好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体）で好ましく置換されたホスホリル基も表す。
【０００８】
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ３は、Ｈ又はヒドロキシル基を表す。
【０００９】
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ５は、Ｈ、ヒドロキシル、セタル、アミン、チオール、及びシアン基を表す。
【００１０】
一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶの化合物に関して、Ｒ６は、メチル、最大２４個の炭素原子を有するモノ又はポリ不飽和脂肪酸から誘導される脂質鎖、及びタンパク質結合部位基を表す。
【００１１】
一般式ＩＩＩ及びＩＶの化合物に関して、Ｒｘは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体を表し、ここで、ｘは０とは異なる。
【００１２】
一般式ＩＩＩ及びＩＶの化合物に関して、Ｒｘは、アルキルアリール、アルカニルオキシアリール、アルケニルオキシアリール、及びアルケニルアリール基、好ましくは、最大８個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル、並びにこれらの全ての鎖異性体も表し、ここで、ｘは０とは異なる。
【００１３】
これらの新規化合物は、不安症、虚血、てんかん、高血圧、並びに他の心血管障害、脳血管障害、神経変性障害、神経精神病学的障害、及び神経学的障害、並びに急性及び慢性炎症に関連する他の障害を治療するための治療薬の基礎としての役割を果たすことができる。
【００１４】
Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶタイプの化合物は、カルボネートの存在下での、３β−ヒドロキシ基のトシル化及び６β−オン基のヒドロキシル化によって得られる。酸化反応は、ジョーンズ反応剤（ＣｒＯ３−Ｈ２ＳＯ４）、コリンズ反応剤（ＣｒＯ３−アセトン）、又はピリジニウムクロロクロメートを、油谷法に従って、酸化剤として；又はオキソアンモニウム−ヨウ素塩とともに利用することができる。
【背景技術】
【００１５】
ステロイドは、抗炎症活性が科学的に実証された最初の薬理学的実体の１つである。通常、ほとんどのステロイド分子は、迅速な非ゲノム効果及びゲノム効果を含む分子機構を通じて、免疫抑制剤として作用する。しかしながら、とりわけ、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、フルドロコルチゾン、デオキシコルチコステロン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、パラメタゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロンアセトニド、アセトキシプレノロンなどの一部のステロイドは、いくつかの臓器でいくらかの毒性効果を引き起こす。したがって、これらの分子の長期的臨床使用は、細胞代謝異常、骨粗鬆症、高血圧、及び消化器疾患などの様々な副作用を誘導する。
【００１６】
他方、周知のニューロステロイドは、動物及びヒトにおいて、鎮静、麻酔、及び抗痙攣作用を有する。そのような生体活性は、膜受容体とイオンチャネル、主に、ＣＮＳの様々な領域に接続された双方向抑制系において作用するＧＡＢＡＡ受容体との相互作用を介した、神経細胞の興奮性の調節によるものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】米国特許第６９０９００７号明細書
【特許文献２】米国特許第１８６７０８号明細書
【特許文献３】米国特許第５１１６８２９号明細書
【特許文献４】米国特許第５５９９８０７号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第２００３００９２６９２号明細書
【特許文献６】米国特許出願公開第２００３３０１８６９５３号明細書
【特許文献７】米国特許出願公開第２００９０２２７５５１号明細書
【特許文献８】米国特許出願公開第２０１００１３０４５５９号明細書
【特許文献９】米国特許出願公開第２００４００７２８０６号明細書
【発明の概要】
【００１８】
本明細書に開示されるのは、新しいステロイド化合物及び組成物、並びに不安症、虚血、てんかん、高血圧、並びに他の心血管障害、脳血管障害、神経変性障害、神経精神病学的障害、及び神経学的障害、並びに急性及び慢性炎症に関連する他の障害の治療のための医薬品としてのそれらの用途である。
【００１９】
試験される分子の構造及びその神経保護能の指標としての損傷したＰＣ１２の活力に対するその効果の解析の後、脳血管疾患、神経変性疾患、神経精神病学的疾患、及び神経学的疾患を治療するためのスピロスタン環と縮合したステロイドの合成変異体の使用が正当化される。
【００２０】
本発明の新規性は、心血管疾患、脳血管疾患、神経変性疾患、神経精神病学的疾患、及び神経学的疾患の治療において潜在的に応用されるスピロステロイド分子系を得ること、並びに簡単な合成法と、出発材料としてのサポゲニン様ステロイドのジオスゲニン、ヘコゲニン、及びソラソジンとを用いて、これらのスピロステロイド系を得る可能性である。
【００２１】
ＣＮＳ及び炎症性疾患を治療するためのステロイド誘導体を記載しているいくつかの特許がある。しかしながら、そのような場合、新しい薬理学的実体を形成させるためのこれらの核の縮合又はスピロスタン環の包含に関して全く記載されていない。スピロステロイド核の様々な置換基を使用している、本発明の主題と関係のない特許を以下に列挙する。
【００２２】
米国特許第６９０９００７号（特許文献１）、米国特許第１８６７０８号（特許文献２）、及び米国特許第５１１６８２９号（特許文献３）には、従来の医薬品よりも毒性の低い潜在的抗炎症性実体としてのステロイド分子を得る方法が記載されているが、水素タイプの置換基、アルキル及びアルケニル鎖、並びにフェニル、カルボキシフェニル、アセトキシフェニル、メトキシカルボキシフェニル、及びジメチルカルボキシフェニルタイプの芳香環が使用されている。米国特許第５５９９８０７号（特許文献４）には、キノロンカルボン酸のカルボキシル基と位置２１のアルコールヒドロキシル基の間にエステル基を有し、抗菌活性及び抗炎症活性を有し、長期の免疫抑制を伴わないステロイド分子を得る方法が記載されている。
【００２３】
米国特許出願公開第２００３００９２６９２号（特許文献５）には、神経細胞のインビトロ細胞保護における、及びＣＮＳに影響を及ぼす急性疾患の治療における既知及び新規の７α−ヒドロキシステロイド分子の化学的生成及び用途が記載されている。しかしながら、記載されている置換基には、Ｈ、ヒドロキシル、エステル化ヒドロキシル、アルキル、アミン、アルキルアミン、及びジアルキルアミン基しか含まれない。米国特許出願公開第２００３３０１８６９５３号（特許文献６）、米国特許出願公開第２００９０２２７５５１号（特許文献７）、及び米国特許出願公開第２０１００１３０４５５９号（特許文献８）にも、３−ヒドロキシ−７β−ヒドロキシ及びいくつかのケトン体を得る方法、及び神経学的疾患の治療としての用途が記載されているが、それらの記載されている置換基には、スピロスタン環が含まれていない。
【００２４】
米国特許出願公開第２００４００７２８０６号（特許文献９）には、スピロスト−５−エン−３−オール基で置換された天然の２２Ｒ−ヒドロキシステロイド誘導体に関する、神経学的疾患の治療及び予防のための方法、組合せ、及び用途しか記載されていない。
【００２５】
本発明の主題であるスピロステロイド合成変異体は、神経細胞に対するある種の作用を示した。しかしながら、作用の程度は、３位及び６位のＲ置換基の性質並びにＲ２及びＲ４置換基の性質に左右される。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
一般的実験条件：縮合温度は、Ｅｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌ  ９１００キャピラリーホットプレート装置で決定された。ＩＲスペクトルは、ＫＢｒ錠剤中で、Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ＰＵ  ９６００  ＦＴＩＲ分光光度計によって記録された。ＮＭＲ  １Ｈ及びＮＭＲ  １３Ｃは、それぞれ、２５０．１３ＭＨｚ及び６２．５０ＭＨｚで作動するＢｒｕｃｋｅｒ  ＡＣＦ−２５０分光計により記録された。それらの記録は全て、ＣＤＣｌ３を溶媒とし、ＴＭＳを内部標準として、２６℃で決定された。ＮＭＲにおけるスペクトル帰属は、いくつかの化合物に関しての相関スペクトル（ＨＨＣＯＳＹ  ｙ  ＨＣＣＯＳＹ）、編集ＤＥＰＴ技術、及び文献から報告された化合物のスペクトルデータとの比較を用いて明らかにされた。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
手順の実施例
実施例１：６β−ヒドロキシ６−オンポリ−ヒドロキシ誘導体の合成
３α，５−シクロ−６−オン構造を有する化合物は、５−エン−３β−オール系を出発材料として利用し、かつ３つの主要な段階からなる、油谷法によって得られた。これらの実験段階は連続的に実施され、これらは以下の通りである：
・ジオスゲニン／ヘコゲニンのトシル化
・ＭｓＣｌ、トリエチルアミン、及びブタノンによるメシル化
・ｉ−ステロイドを形成させるためのＮａＨＣＯ３水溶液による異性化
・３α，５−シクロ−６−オン誘導体を得るためのジョーンズ反応剤によるＣ−６ヒドロキシル基の酸化
・Ｌｉ２ＣＯ２／ＣａＣＯ３／ＤＭＦＡ／ＨＭＦＴＡの存在下でのｉ−系からΔ２スピロスタニック系への異性化
・触媒的条件（ＣＨＣｌ３／ＮａＯＨ／臭化セチルトリメチルアンモニウム）でのジヒドロキシル化、並びに固形ベントナイト酸及び黄鉄鉱灰による触媒反応
・ニオビル−バナジルアセテート／無水酢酸による触媒的エステル化
・ベントナイト−黄鉄鉱灰によるエポキシド開環及び水中還流。
【００２８】
【化２】
2015506929.tif 000004
【００２９】
実施例２：６β−ヒドロキシ６−オンポリ−ヒドロキシ誘導体の化学的及び構造的特徴
分光学的報告データにより、提案された構造が裏付けられている。ＦＴＩＲスペクトルにおいて、Ｃ−Ｃ及びＣ−Ｏ結合の狭小化に関連する、スピロケタール系の振動による、１３５０〜８５０ｃｍ−１域の典型的なバンドが観察される。これらの証拠は、Ｅ環及びＦ環の構造分解変化がなかったことを示している。さらに、８８０〜９１０ｃｍ−１のバンドは、９２５〜９１０ｃｍ−１のバンドよりも約２倍強く、したがって、全ての合成化合物は２５Ｒシリーズに属する。アセトキシ基ＣＨ３−ＣＯ−Ｏ−に対応する周波数域１７１３〜１７３５ｃｍ−１は、合成アセトキシ誘導体に典型的である。ＳＯ２基の非対称及び対称振動（ｖ  ＳＯ２  ｓ及びａｓ．）に対応する１３６０及び１１７０〜１１７５ｃｍ−１のバンドは、トシル誘導体に特徴的である。このグループには、芳香族ｖ  Ｃ＝Ｃに帰属可能な１５８８ｃｍ−１のバンドが対応する。
【００３０】
合成化合物の構造を解明するために、ＮＭＲ−１Ｈ及び１３Ｃ分光法は有益であった。共通の顕著なシグナルには、メチル基（ＣＨ３）１８、１９、２１、及び２７由来のプロトンのシグナル、並びにプロトンＨ２−２６及びＨ−１６αのシグナルがある。Ｈ２−２６シグナルは複雑であり、両方の化学シフトＨ−２６α及びＨ−２６βに対応する。これらの化学シフトは、実際に、一連の検討化合物で変わらない。アキシャルなＨ−２６αは、δ＝３．３２ｐｐｍの三重線であり；その多重度は、ジェミナルな準縮退及び隣接するアキシャル−アキシャル（Ｊ２≒Ｊ３＝１０．６Ｈｚ）二重共役から生じる。Ｈ−２６βシグナルは、δ＝３．５ｐｐｍの二重の二重線であり；その多重度は、ジェミナルな共役（Ｊ２＝１０．６Ｈｚ）及び隣接するエクアトリアル−アキシャル（Ｊ３ｅａ＝２．６Ｈｚ）から生じる。δ＝４．４ｐｐｍの化学シフトの場合、二重の二重線の出現は、プロトン１５β（エクアトリアル）、１５α、及び１７β（準エクアトリアル）とのその共役のために、Ｈ−１６αに典型的である。
【００３１】
それぞれ、δ＝５．５及び５．７ｐｐｍのオレフィンプロトンＨ−２及びＨ−３のシグナルは、Δ２−６−オキソステロイド化合物に特徴的である。７β及び５αプロトンのシグナルは、２．３〜２．４ｐｐｍで重複するように見える。ＮＭＲ−１３Ｃにおいて、Ｃ−２及びＣ−３シグナルは、それぞれ、δ＝１２４．４及び１２４．５ｐｐｍに遮蔽されていないが、Ｃ−４は、２１．７ｐｐｍに遮蔽されている。
【００３２】
（表１）
表１．Ａ及びＢ環由来の炭素原子、並びに（２５Ｒ）−３α，５−シクロ−スピロスタン−６β−オール（Ｇ１）及び（２５Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−スピロスタン−６β−オン（Ｇ２）のＣ−１９の化学シフト（δ、ｐｐｍ）
2015506929.tif 000005
【００３３】
実施例３：グルタミン酸作動性損傷に暴露された又は暴露されていないＰＣ１２の細胞活力に対する合成スピロステロイドシリーズの効果
ＰＣ１２は、神経学的疾患のいくつかのモデルで広く利用されているニューロン様細胞株に相当する。それらのインビトロモデルでシミュレートすることができる病態生理学的機構は、治療薬候補の評価におけるＰＣ１２細胞の使用を可能にする。
【００３４】
合成スピロステロイドシリーズ（１０μＭの各分子）をＬ−グルタメート（２０ｍＭ）に２４時間暴露されたＰＣ１２細胞で評価した。予め、それらの細胞を、ウマ血清（１０％）及び胎仔ウシ血清（５％）を補充したＲＰＭＩ  １６４０培地中、３７℃及び５％ＣＯ２雰囲気で通常通りに培養した。実験の初めに、細胞を９６ウェルマイクロプレートに１５０，０００細胞／ｍＬの細胞密度で播種した。グルタミン酸作動性損傷及びスピロステロイド処理に２４時間暴露した後、細胞活力を、生細胞のミトコンドリアデヒドロゲナーゼによって代謝される３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を用いて決定した。
【００３５】
本発明者らの結果（表２）は、いくつかの構造特性に関連するいくつかのスピロステロイド分子（Ｓ）の抗グルタミン酸作動性作用及び神経保護作用を示した。具体的に、最も活性の高い分子の中に、２α，３α−ジヒドロキシ−（２５Ｒ）−スピロスタン−６−オン及び３，６−ジオン−（２５Ｒ）−スピロスタンがあった。合成スピロステロイドシリーズの分子は全て、インビトロ抗グルタミン酸作動性アッセイに利用される濃度で非細胞傷害性であった（データは示していない）。
【００３６】
（表２）
2015506929.tif 000006
【国際調査報告】
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