(57)【要約】  本発明は、式：【化４５】2015535248.tif 000056 （Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、シクロプロピル、およびジメチルから選択される）を有する化合物または医薬的に許容可能なその塩を提供し、その調製のための方法および中間体、ならびにその使用をもあわせて提供する。【選択図】なし
2015535248.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化４０】
2015535248.tif 000049
（Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、ジメチル、およびシクロプロピルから選択される）を有する化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項２】
式：
【化４１】
2015535248.tif 000050
を有する請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項３】
式：
【化４２−１】
2015535248.tif 000051
【化４２−２】
2015535248.tif 000052
を有する請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項４】
式：
【化４３−１】
2015535248.tif 000053
【化４３−２】
2015535248.tif 000054
を有する請求項３に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項５】
式：
【化４４】
2015535248.tif 000055
を有する請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩、および少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項７】
治療を必要とする患者において関節炎を治療する方法であって、前記患者に有効量の請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与することを含む方法。
【請求項８】
阻害を必要とする患者において軟骨浸食を阻害する方法であって、前記患者に有効量の請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与することを含む方法。
【請求項９】
治療に使用するための、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項１０】
医薬品の製造のための、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の概要】
【０００１】
結合組織はすべての哺乳動物の必須構成要素である。それは、剛性、分化、結合、および、いくつかの場合には弾力性も提供する。結合組織の構成要素には、例えば、コラーゲン、エラスチン、プロテオグリカン、フィブロネクチン、およびラミニンを含む。これらの生体化学物質は、皮膚、骨、歯、腱、軟骨、基底膜、血管、角膜および硝子体液等の構造体を構成する（またはその構成要素となる）。関節炎は、一又は複数の関節の結合組織の炎症に関与する関節疾患の一形態である。関節炎のタイプに関わらず、すべての関節炎疾患に共通する症状には、種々のレベルの疼痛、腫れ、関節のこわばり、そして時には関節（複数可）周りの定常的痛みを含む。
【０００２】
６５歳以上のヒト患者の半数と７５歳以上のほぼ全ての患者が変形性関節症を有していると推定されている。変形性関節症（ＯＡ）に対しては（（ＯＡの痛みを管理するための）タイレノール（Ｔｙｌｅｎｏｌ）からアヘン製剤に範囲は及ぶ）多数の治療法があり、最終的には関節全体の置換手術がある。現状では、ＯＡの進行に影響を及ぼすことが証明された承認治療法はない。
【０００３】
関節炎は、家庭で飼育する他のペット類よりもイヌにずっとより一般的にある。関節炎はたちの悪い病気である。というのもそれは、動物に痛みを引き起こし、運動性を制限するからである。任意のイヌが関節炎に罹患し得るが、老齢犬や大型種がより影響されやすい可能性がある。活動的なイヌ（職業犬、狩猟犬のようなもの）は、その活動レベルが高いためにより大きなリスクがある場合もある。
【０００４】
関節炎の関節中の軟骨の生化学的特徴解析は、二つの重要なマトリックス構成要素であるコラーゲン（特に、ＩＩ型コラーゲン）とアグリカンの有意な喪失を示す。アグリカン分解は、軟骨浸食、特に変形性関節症（ＯＡ）に観察される初期変化の一つである。複数の研究が、アグリカンは、アグリカナーゼとして同定された二つの細胞外マトリックスプロテアーゼにより異化されることを示してきた。二つのアグリカナーゼプロテアーゼ、ＡＤＡＭＴＳ−４（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎモチーフ、アグリカナーゼ１）およびＡＤＡＭＴＳ−５（アグリカナーゼ２）は、アグリカンを異化するのに特に効果的であるとして同定された。より効果的な関節炎の治療法および特にＯＡの治療法を提供するニーズがある。
【０００５】
関節の分解または浸食は、種々の疾患（関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節症（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｏｓｉｓ）、肥大性関節炎、および変形性関節症を含むもの）に起こる。さらに、関節の急性炎症は、軟骨の破壊を伴う場合がある。急性関節炎に関わる疾患の例には、エルシニア関節炎、ピロリン酸関節炎、痛風関節炎、および化膿性関節炎がある。また、軟骨の破壊または変性を促す可能性のある別の因子は、コルチゾンを用いた治療である。
【０００６】
本発明は、関節炎および特に変形性関節症の治療、ならびに軟骨浸食の阻害に有用であり得る化合物を提供する。本発明の化合物はＡＤＡＭＴＳ４および／またはＡＤＡＭＴＳ５に対して効力を示す。
【０００７】
本発明は、式：
【化１】
2015535248.tif 000003
（Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、ジメチル、およびシクロプロピルから選択される）を有する化合物または医薬的に許容可能なその塩を提供する。式Ｉに見られ得るように、本発明の化合物は２つのキラル中心またはＲ１がジメチルの場合は１つのキラル中心を有する。
【化２】
2015535248.tif 000004
【０００８】
本発明は、式：
【化３】
2015535248.tif 000005
（Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、およびシクロプロピルから選択される）、またはＲ１がジメチルの場合は：
【化４】
2015535248.tif 000006
の化合物および医薬的に許容可能なその塩を提供する。
【０００９】
本発明は、式：
【化５−１】
2015535248.tif 000007
【化５−２】
2015535248.tif 000008
【化５−３】
2015535248.tif 000009
の化合物および医薬的に許容可能なその塩を提供する。
【００１０】
別の観点では、本発明は、本発明の化合物または医薬的に許容可能なその塩および、少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
別の観点では、本発明は、阻害を必要とする患者において、変形性関節症で見られるような軟骨浸食を阻害する方法を提供し、その方法は、前記患者に有効量の本発明の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与することを含む。
【００１２】
別の観点では、本発明は、治療を必要とする患者において、関節炎を治療する方法を提供し、その方法は、前記患者に有効量の本発明の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与することを含む。
【００１３】
別の観点では、本発明は、医薬品、特に関節炎の治療用または軟骨浸食の阻害用の医薬品製造のための、本発明の化合物または医薬的に許容可能なその塩の使用を提供する。
【００１４】
別の観点では、本発明は、治療に使用するための、本発明の化合物または医薬的に許容可能なその塩を提供する。
【００１５】
別の観点では、本発明は、関節炎の治療または軟骨浸食の阻害に使用するための、本発明の化合物または医薬的に許容可能なその塩を提供する。
【００１６】
別の観点では、本発明は、一又は複数の他の活性薬剤と組み合わせる、本発明の化合物、方法、使用、または組成物を提供する。
【００１７】
上記したように、本発明の好ましい化合物は、アグリカナーゼ、特にＡＤＡＭＴＳ４／５への結合が向上し、そしてその／それらの活性を阻害する。従って、これらの化合物はアグリカンの分解を阻害することができる。軟骨中でアグリカンの分解を阻害することは、関節炎、好ましくはＯＡ、および／またはその／それらの病理的後遺症もしくは症状の治療に使用可能である。
【００１８】
「患者」は哺乳動物のことを言い、ヒト、他の霊長類（例、サル、チンパンジー等）、伴侶動物（例、イヌ、ネコ、ウマ等）、家畜（例、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ等）、実験動物（ネズミ、ラット等）、ならびに野生および動物園の動物（例、オオカミ、クマ、シカ等）を含む。用語「患者」はまた、軟骨浸食、関節炎、および／または変形性関節症の病理的有害作用に苦しむ哺乳動物、特にヒトおよび／または伴侶動物（例、イヌ、ネコ）もしくは家畜（例、ウマ）を指す。
【００１９】
「有効量」とは、関節炎または変形性関節症および／あるいは関節炎もしくは変形性関節症の一又は複数の後遺症を治療するのに十分な、本発明の化合物または医薬的に許容可能なその塩の量のことを指す。哺乳動物上のまたは哺乳動物中の使用に関しては、その方法のための範囲は０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ（哺乳動物の体重）、より望ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ（哺乳動物の体重）を含む。投与頻度はまた、いくつかの因子に依存し、一回の投薬が一日に一回、一週間に一回、または一月に一回投与される場合があり、期間は担当の医師または獣医により決定され得る。追加的な活性薬剤は、本発明の化合物とともに投与可能である。
【００２０】
例えば、塩および製剤構成要素（例、担体）に関して本願で使用される「医薬的に許容可能」とは、患者に有害ではなく且つ他の成分、活性薬剤、塩、または構成要素と相溶性である塩および構成要素のことを指す。「医薬的に許容可能」には、「獣医学的に許容可能」を含み、したがって、独立してヒト用途と非ヒト哺乳動物用途の両者を含む。
【００２１】
「阻害する」とは、一般的に認められている意味であって、軟骨浸食に陥入りつつある患者を予防的に治療すること並びに患者の既存軟骨浸食を制限しおよび／または治療することを含む。このように、本方法は、適切なやり方において、医学的な治療的および／または予防的治療の両者を含む。
【００２２】
本明細書においては、用語「投与すること」とは、有効量の本発明の化合物を患者へ投与することを指す。投与は様々な手段を通じて実施可能であり、例えば、経口投与、非経口投与（例、（筋肉内、皮下、静脈内、腹腔内）注射等）または経皮通過を伴うか若しくは伴わない局所塗布を含む。
【００２３】
本発明の化合物は、アグリカナーゼを阻害し、したがって関節炎を治療する際に、およびＯＡの治療のために特に好ましく有利に使用される可能性がある。本明細書において、用語「有効量」は、本発明の化合物（つまり、式Ｉ）の量であって、本明細書中に記載される各種病理的状態の症状を治療もしくは緩和できるかまたはそれに有効な量を意味する。実際に投与される化合物の量は、患者の相対的な環境や状況（例、年齢、体重、病気の進行と重症度）を考慮しながら医師により決定されることが理解される。本発明の化合物は、種々の経路で投与される医薬組成物として好ましくは処方される。最も好ましくは、そのような組成物は（例えば、錠剤、カプセル剤、溶液剤、懸濁剤の形態の）経口投与用である。
【００２４】
したがって、本発明の別の観点は、有効量の本発明の化合物または医薬的に許容可能なその塩を含む医薬組成物である。医薬的塩の例は、Ｓ．  Ｍ．  Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ（医薬的塩）、Ｊ．  Ｐｈａｒ．  Ｓｃｉ．，  ６６：  １−１９  （１９７７）ならびに「Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｕｓｅ（医薬的塩の性質、選択、および使用のハンドブック）」、Ｗｅｒｍｕｔｈ，  Ｃ．  Ｇ．およびＳｔａｈｌ，  Ｐ．  Ｈ．  （編）  Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，  ２００２年に見出すことができる。例えば、本発明の化合物は、医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤、または担体と処方可能であり、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、溶液剤、および粉末剤等へと成形される。その調製のための医薬組成物および方法は当該技術分野で公知である。例は、  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、「Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（薬学の科学と実践）」（Ａ．  Ｇｅｎｎａｒｏら編、第１９版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、１９９５年）に見出すことが可能であり、参照により本明細書中に組み込まれる。製剤は様々な手段を通じて投与可能であり、その手段には、経口投与、非経口投与（例、（筋肉内、皮下、静脈内、腹腔内）注射等）または経皮通過を伴うか若しくは伴わない局所塗布を含む。追加的な活性薬剤は、本発明の化合物を含有する製剤に含まれる場合がある。
【００２５】
医薬的に許容可能な塩に加えて、他の塩が本発明において含まれる。それら塩は、化合物の精製もしくは他の医薬的に許容可能な塩の調製における中間体として働く場合があり、または同定、特徴解析、もしくは精製に有用である。
【００２６】
本発明の化合物は、関節炎および付随する後遺症の治療に有利に使用されることが見出され得る。本明細書においては、用語「関節炎」は、限定はされないが、関節リウマチ（ＲＡ）、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、痛風、強皮症、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、変形性関節症（ＯＡ）、およびライター症候群（反応性関節炎）を含む。本発明の化合物は、変形性関節症（ＯＡ）の治療において特に有利に使用されることが見出され得る。
【００２７】
他の活性薬剤（例えば、ステロイド剤もしくは非ステロイド剤のいずれかである場合がある、抗炎症剤または痛みを緩和する薬剤）と組み合わせて用いる場合がある。本発明の化合物および他の活性薬剤は、一つの製剤または別々の製剤のいずれかの中で同時に投与可能である。また、本発明の化合物および他の活性薬剤は、経時的に投与可能であるか又は患者の必要に応じて投与可能である。
【００２８】
本明細書においては、以下の用語は示される意味を有する：「ｎ−ＢｕＬｉ」はｎ−ブチルリチウムを指す；「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指す；「Ｄｉｂａｌ−Ｈ」はジイソブチルアルミニウムヒドリドを指す；「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを指す；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指す；「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を指す；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指す；「Ｅｔ２Ｏ」はジエチルエーテルを指す；「ＥｔＯＨ」はエタノールを指す；「Ｅｘ」は実施例を指す；「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールを指す；「ＬＤＡ」はリチウムジイソプロピルアミドを指す；「ＭｅＯＨ」はメタノールを指す；「Ｐｒｅｐ」は調製を指す；「ｔ−ｂｏｃまたはｂｏｃ」はｔｅｒｔーブトキシカルボニルを指す；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を指す；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す；本明細書中で用いられる「Ｘ」はハロゲン化物（つまり、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、またはＦ）を指す；「ＩＣ５０」は、薬剤にとって可能な最大阻害反応の５０％を生み出す前記薬剤の濃度を指す。
【００２９】
本発明の化合物は、以下の実施例に記述される反応に従って調製可能である。
【実施例】
【００３０】
調製１
（５Ｒ）−５−（アミノメチル）−５−シクロプロピルーイミダゾリジンー２，４−ジオンヒドロクロリド
【化６】
2015535248.tif 000010
【００３１】
工程１：ｔｅｒｔーブチルＮ−［２−（メトキシ（メチル）アミノ）−２−オキソーエチル］カルバメートの合成
【化７】
2015535248.tif 000011
【００３２】
ジクロロメタン（３６Ｌ）中のＢｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（４２５０ｇ、２４．２６ｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン−ＨＣｌ（２８３９ｇ、２９．１０ｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（２９７ｇ、２．４３ｍｏｌ）の溶液に、０℃のトリエチルアミン（５．５４Ｌ）を９０分の期間に渡り加え、その後、ＥＤＣ塩酸塩（５６７４ｇ、２９．６０ｍｏｌ）を加える。混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、２４時間、室温へと温める。反応混合物を０℃へと冷却し、１．０Ｍ  ＨＣｌを用いてｐＨ３〜４へとクエンチし、２０分間室温で撹拌し、その後、静置し分離する。有機相を、１．０Ｍ  ＨＣｌ（１５Ｌ）、水（１５．０Ｌ）およびブライン（８．０Ｌ）で連続的に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濾過する。ろ液を減圧下で濃縮し、標題の化合物（４９８５ｇ、収率９４％）を白色固形物として得る。
【００３３】
工程２：ｔｅｒｔーブチルＮ−（２−シクロプロピル−２−オキソーエチル）カルバメートの合成
【化８】
2015535248.tif 000012
【００３４】
ＴＨＦ（９．０Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−（メトキシ（メチル）アミノ）−２−オキソーエチル］カルバメート（２，４５５．３ｇ、１１．２５ｍｏｌ）の溶液に、−３０℃のＴＨＦ（５．３４Ｌ、１０．６９ｍｏｌ）中の２．０Ｍ塩化イソプロピルマグネシウムを添加漏斗を介して６０分間に渡り、内部温度が０℃を超えないように加える。混合物をその後ゆっくりと１０℃へと温め、ＴＨＦ（２７．０Ｌ、１３．５０ｍｏｌ）中の０．５Ｍ臭化シクロプロピルマグネシウムを添加漏斗を介して１時間に渡り加える。その混合物を室温で２４時間撹拌する。この混合物を０℃へと冷却し、１．０Ｍ  ＨＣｌを用いてｐＨ５〜６へとクエンチし、その後、室温へと温めて、ＥｔＯＡｃ（１２Ｌおよび１０Ｌ）を用いて抽出する。合わせた有機相を、水（１０Ｌ）およびブライン（８Ｌ）で連続的に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濾過する。ろ液を減圧下で蒸発させて、次の工程に直接使用する淡黄色オイルとして標題の化合物２．２４ｋｇ（収率１００％）を得る。
【００３５】
工程３：ｔｅｒｔーブチルＮ−［（４−シクロプロピル−２，５−ジオキソーイミダゾリジンー４−イル）メチル］カルバメートの合成
【化９】
2015535248.tif 000013
【００３６】
メタノール（１６．０Ｌ）およびＤＩ水（１９．５Ｌ）中の化合物ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（２−シクロプロピル−２−オキソ−エチル）カルバメート（４２０４ｇ、約２１．１０ｍｏｌ）、ＫＣＮ（１７８６ｇ、２７．４３ｍｏｌ）および（ＮＨ４）２ＣＯ３（４８６６ｇ、５０．６４ｍｏｌ）の混合物を、７２時間６５℃で撹拌する。その混合物を減圧下で濃縮し、メタノールのほとんどを除去し、その後、ＥｔＯＡｃ（５ｘ２０Ｌ）を用いて抽出する。有機相を、ブライン（８．０Ｌ）で洗浄し、（Ｎａ２ＳＯ４）乾燥し、そして濾過する。合わせたろ液を二つの等量のポーションに分割する。それぞれのポーションを１５Ｌの容量へと濃縮し、室温で一晩静置する。沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１．０Ｌ）を用いて洗浄する。得られた白色固形物を合わせて、３日間４５℃で真空下にて乾燥し、標題の化合物（３６０５ｇ、収率６４．３％）を得る。
【００３７】
工程４：ｔｅｒｔーブチルＮ−［［（４Ｒ）−４−シクロプロピル−２，５−ジオキソーイミダゾリジンー４−イル）メチル］カルバメートの分離
【化１０】
2015535248.tif 000014
【００３８】
ｔｅｒｔーブチルＮ−［（４−シクロプロピル−２，５−ジオキソーイミダゾリジンー４−イル）メチル］カルバメートの光学異性体は、キラルカラムを使用して分離することができる。カラム：１１ｘ３３ｃｍ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ（登録商標）、２０μｍ；流速／検出：８００ｍＬ／ｍｉｎ／２３０ｎｍ；移動相：メタノール。
【００３９】
工程５：（５Ｒ）−５−（アミノメチル）−５−シクロプロピルーイミダゾリジンー２，４−ジオンヒドロクロリドの合成
【化１１】
2015535248.tif 000015
【００４０】
ｔｅｒｔーブチルＮ−［［（４Ｒ）−４−シクロプロピル−２，５−ジオキソーイミダゾリジンー４−イル）メチル］カルバメート（３１０ｇ、１１５１ｍｍｏｌ）を６℃のＭｅＯＨ（３．１Ｌ）中に溶解する。ジオキサン（３１０ｍＬ）中の４Ｍ  ＨＣｌを加え、混合物を２５℃へと温める。２２時間撹拌後、ジオキサン（１１０ｍＬ）中の４Ｍ  ＨＣｌの第二ポーションを加え、撹拌をさらに１６時間継続する。反応物を、その後、２日間撹拌せずに静置する。混合物を、その後、トルエン（６Ｌ）を用いて希釈する。標題の化合物を、その混合物を濾過することにより、白色固形物（１８０ｇ）として回収する。
【００４１】
実施例１
（２Ｒ）−Ｎ−［［（４Ｒ）−４−シクロプロピル−２，５−ジオキソ−イミダゾリジン−４−イル］メチル］−２−メチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパンアミド
【化１２】
2015535248.tif 000016
【００４２】
実施例２に基本的に記載される合成は、塩化ブタノイルの代わりに塩化プロパノイルを使用して上記化合物を作製するのに使用可能である。
【００４３】
実施例２
（２Ｒ）−Ｎ−［［（４Ｒ）−４−シクロプロピル−２，５−ジオキソ−イミダゾリジン−４−イル］メチル］−２−［［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］ブタンアミド
【化１３】
2015535248.tif 000017
【００４４】
工程１：（４Ｓ）−４−ベンジル−３−ブタノイル−オキサゾリジン−２−オンの合成
【化１４】
2015535248.tif 000018
【００４５】
三つ首ＲＢＦ（丸底フラスコ）に、ジクロロメタン（２．４Ｌ）、（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジンオン（２００ｇ、１．１３ｍｏｌｅｓ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−ピリジンアミン（１３．６ｇ；１１１．３２ｍｍｏｌｅｓ）を加える。そのフラスコを氷水浴中で冷却し、トリエチルアミン（４７２ｍＬ；３．３９ｍｏｌｅｓ）を０℃で滴下する。得られた溶液に、その後、温度を５℃以下に保ちながら塩化ブタノイル（１５２．２ｍＬ；１．４６ｍｏｌｅｓ）を３時間かけて滴下する。反応物をその後濾過し、ろ液を１Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ．）（５００ｍｌｘ１）および飽和ＮａＨＣＯ３（５００ｍｌｘ１）を用いて洗浄する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥、濾過、そして濃縮して、標題の化合物（２７５ｇ、ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４８．１ｍ／ｚ）を得る。
【００４６】
工程２：（４Ｓ）−４−ベンジル−３−［（２Ｒ）−２−［［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］ブタノイル］オキサゾリジン−２−オンの合成
【化１５】
2015535248.tif 000019
【００４７】
三つ首５Ｌ  ＲＢＦに、Ｎ２下でＴＨＦ（２Ｌ）および（４Ｓ）−４−ベンジル−３−ブタノイル−オキサゾリジン−２−オン（２７０ｇ、１．０９ｍｏｌｅｓ）を加える。得られた溶液を、アセトンードライアイス浴中で−６８℃へと冷却する。その冷却溶液に、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（１３２０ｍＬの１Ｍ  ＴＨＦ溶液；１．３２ｍｏｌｅｓ）を、内部温度を−６８〜−６０℃に維持しながら１．５時間かけて滴下する。添加完了したら、反応物を−６８℃で３０分間撹拌する。その冷却溶液に、その後、ＴＨＦ（１Ｌ）中の臭化４−トリフルオロメチルベンジル（２７８ｇ；１．１６ｍｏｌｅｓ）を−６８℃で３０分間かけて加える。１．５時間後、反応物を１Ｍ  ＨＣｌに注ぎ入れる。混合物を酢酸エチル（３Ｌｘ１）で抽出する。抽出物を合わせて、ａｑ．ＮａＨＣＯ３（２Ｌｘ１）およびブライン（２Ｌｘ１）で洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥、濾過、および濃縮する。固形物を１５℃のＥｔＯＨ（６００ｍＬ）を用いて粉砕する。濾過することにより、標題の化合物を固形物（２７０ｇ、ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０６ｍ／ｚ）として得る。
【００４８】
工程３：（２Ｒ）−２−［［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］ブタン酸の合成
【化１６】
2015535248.tif 000020
【００４９】
三つ首ＲＢＦに、テトラヒドロフラン（４．２Ｌ）および水（０．８Ｌ）を加える。（４Ｓ）−４−ベンジル−３−（２−（ベンジルオキシ）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノイル）オキサゾリジン−２−オン（２５０ｇ；６１６．６５ｍｍｏｌｅｓ）を加え、そして溶液を０℃へと冷却する。過酸化水素（４．９３ｍｏｌｅｓ；５００．３０ｍＬ）を４５分かけて滴下する。１．２Ｌの水中のＬｉＯＨ（１．０８ｍｏｌｅｓ；４５．２８ｇ）を１時間かけて滴下する。得られた混合物を、その後、１時間２℃で撹拌する。亜硫酸ナトリウム（２．４７ｍｏｌｅｓ；３１０．９０ｇ）を２Ｌの水に溶解し、得られた溶液を反応混合物へと１時間かけて滴下する。添加完了したら、その混合物をＤＣＭ（２ｘ２Ｌ；１Ｌｘ１）を用いて洗浄する。水相をその後、濃縮ＨＣｌ（１００ｍｌ）を使ってｐＨ＝１へと酸性化する。得られた懸濁液をＥＡ（２Ｌｘ２）を用いて抽出する。有機抽出物を合わせ、Ｎａ２ＳＯ３溶液（２Ｌｘ１）およびブラインＩ（２Ｌｘ１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濾過して標題の化合物（１４０ｇ、ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４７  ｍ／ｚ）を得る。
【００５０】
工程４：（２Ｒ）−Ｎ−［［（４Ｒ）−４−シクロプロピル−２，５−ジオキソ−イミダゾリジン−４−イル］メチル］−２−［［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］ブタンアミド（実施例２）の合成
【化１７】
2015535248.tif 000021
【００５１】
三つ首ＲＢＦ（２Ｌ）に、ジクロロメタン（９９６ｍＬ）、ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）、（２Ｒ）−２−［［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］ブタン酸（５３ｇ、２１５ｍｍｏｌｅｓ）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（２１５ｍｍｏｌｅｓ；８１．８４ｇ）を窒素環境下で外気温度にて加える。混合物に、Ｎ，Ｎ−ジメチル−エタンアミン（１．０８ｍｏｌｅｓ；１１６．８０ｍＬ）をワンポーションで加える。その混合物を３０分間撹拌する。得られた溶液に、（５Ｒ）−５−（アミノメチル）−５−シクロプロピル−イミダゾリジン−２，４−ジオン塩酸塩（２３７ｍｍｏｌｅｓ；４９ｇ）をワンポーションで加える。得られた溶液を２．５時間撹拌する。撹拌をその後停止し、混合物を１６時間外気に開放して静置する。反応混合物を、その後、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）を使って希釈し、そして、２Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ．）（２００ｍｌｘ２）、５％ＮａＨＣＯ３（ａｑ．）（２００ｍｌでｘ２）およびブライン（５００ｍＬ）を用いて洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥、濾過、および濃縮してオイルにする。そのオイルをＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）を使って希釈することで、白色固形物が析出する。その固形物を濾過することで回収し、石油エーテル（１００ｍＬｘ２）を用いて洗浄して標題の化合物（５５ｇ；ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９８ｍ／ｚ）を得る。
【００５２】
実施例３
（２Ｓ）−２−シクロプロピル−Ｎ−［［（４Ｒ）−４−シクロプロピル−２，５−ジオキソ−イミダゾリジン−４−イル］メチル］−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパンアミド
【化１８】
2015535248.tif 000022
【００５３】
実施例２に基本的に記載される合成は、塩化ブタノイルの代わりに塩化２−シクロプロピルアセチルを使用して上記化合物を作製するのに使用可能である。
【００５４】
実施例４
（２Ｓ）−Ｎ−［［（４Ｒ）−４−シクロプロピル−２，５−ジオキソ−イミダゾリジン−４−イル］メチル］−３−メチル−２−［［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］ブタンアミド
【化１９】
2015535248.tif 000023
【００５５】
実施例２に基本的に記載される合成は、塩化ブタノイルの代わりに塩化３−メチルブタノイルを使用して上記化合物を作製するのに使用可能である。
【００５６】
実施例５
Ｎ−［［（４Ｒ）−４−シクロプロピル−２，５−ジオキソイミダゾリジン−４−イル］メチル］−２，２−ジメチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパンアミド
【化２０】
2015535248.tif 000024
【００５７】
工程１：（Ｅ）−２−メチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロプ（ｐｒｏｐ）−２−エノエートの合成
【化２１】
2015535248.tif 000025
【００５８】
窒素環境下の乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中に、エチル２−ジエトキシホスフォリルプロパノエート（５．２４ｇ、２２ｍｍｏｌ）および４−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（３．４８ｇ、２０ｍｍｏｌ）を溶解する。得られた溶液を０℃に冷却する。６０重量％のＮａＨ（９６０ｍｇ、２４ｍｍｏｌ）を慎重に加える。外気温へと温め、１２時間撹拌する。反応物を濃縮する。残分をフラッシュクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）を使用して精製し、標題の化合物を得る（４．１８ｇ）。
【００５９】
工程２：エチル２−メチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエートの合成
【化２２】
2015535248.tif 000026
【００６０】
Ｐｄ−Ｃの酸素への暴露は火災につながる可能性があるので、窒素下のＲＢＦにて１０ｗｔ％のＰｄ−Ｃ（２５８ｍｇ）／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）の懸濁液中に、エチル（Ｅ）−２−メチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロプ−２−エノエート（２．５８ｇ、１０ｍｍｏｌ）を溶解する。フラスコを水素で慎重にパージし、得られた混合物を１６時間水素（１Ａｔｍ）下で撹拌する。フラスコを窒素でパージし、溶媒を脱気して、空気に暴露する前にすべての水素を除去する。懸濁液をセライトパッドを通して濾過する。ろ液を濃縮して標題の化合物（２．３９ｇ）を得る。
【００６１】
工程３：エチル２，２−ジメチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエートの合成
【化２３】
2015535248.tif 000027
【００６２】
−７８℃のＴＨＦ（３０ｍＬ）中の（２．９ｍＬの２Ｍ）ＬＤＡの溶液へ、エチル２−メチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエート（１ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）を加える。１０分間撹拌し、その後、ヨウ化メチル（１．４８ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を加え、そして、さらに１５分間撹拌する。１０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌを使って反応物をクエンチし、外気温へと温める。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を用いて抽出する。ブラインで抽出物を洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして、濃縮する。残分をフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル中の５％ＥｔＯＡｃ）により精製し、標題の化合物を得る（４７５ｍｇ）。
【００６３】
工程４：２，２−ジメチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパン酸の合成
【化２４】
2015535248.tif 000028
【００６４】
エチル２，２−ジメチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエート（４００ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２ｍＬ）中に溶解し、（３ｍＬの３Ｎ）ＮａＯＨ水溶液を加える。８０℃へと加熱し、３時間撹拌する。外気温へと冷却し、ｐＨが約４になるまで１Ｎ  ＨＣｌを用いて酸性化する。ＥｔＯＡｃを用いて抽出する。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮して標題の化合物（２７２ｍｇ）を得る。
【００６５】
工程５：Ｎ−［［（４Ｒ）−４−シクロプロピル−２，５−ジオキソ−イミダゾリジン−４−イル］メチル］−２，２−ジメチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパンアミドの合成
【化２５】
2015535248.tif 000029
【００６６】
１５ｍＬの乾燥アセトニトリル中のアミン（２０５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ｄｉｉｄｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌ  ａｍｉｎｅ）（３８７ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を加える。得られた溶液へ、２，２−ジメチル−３−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパン酸（２４６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（２２９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＨＯＡＴ（１６３ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加える。外気温で１２時間撹拌する。調製用ＨＰＬＣを使用して、標題の化合物（２８２ｍｇ）を分離する。
【００６７】
【表Ａ】
2015535248.tif 000030
【００６８】
以下のアッセイプロトコルおよび化合物の有用性と効力をさらに実証する結果ならびに／または本発明の方法は、説明目的で与えられており、いかなる方式においても限定する意図はない。以下のアッセイに採用される全てのリガンド、放射能標識、溶媒、および試薬は、市販供給者から容易に入手できるか、または当業者により容易に合成可能である。
【００６９】
アグリカナーゼ結合アッセイを実施して、本発明に含まれる化合物がアグリカナーゼに対する親和性を示すことを実証する。より具体的には、本発明の好ましい化合物はアグリカナーゼに対する親和性が改善し、それはＡＤＡＭＴＳ−４およびＡＤＡＭＴＳ−５のアルファスクリーン（ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ）アッセイにおける化合物の結合親和性により例示される。
【００７０】
マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）は、組織リモデリング、シェダーゼ（ｓｈｅｄｄａｓｅ）活性、およびエンドサイトーシスを含むいくつかのホメオスタシスプロセスに関与することが知られている。臨床現場で試験される広域性ＭＭＰ阻害剤は、筋骨格症候群（ＭＳＳ）と総称される、線維増殖症および関節のこわばり並びに関連する副作用に関連するとされてきた。従って、一般的なＭＭＰよりもアグリカナーゼに対する選択性があることが望ましい。同様に、ＡＤＡＭＴＳファミリーに関しては、いくつかのメンバーが、所望のアグリカナーゼ阻害とは異なる重要な機能と関連するとされてきた。本発明の化合物はまた、血漿中での効能（すなわち、ＡＤＡＭＴＳ−４およびＡＤＡＭＴＳ−５を阻害すること）を示し、ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−１４よりもＡＤＡＭＴＳ−４およびＡＤＡＭＴＳ−５に対する選択性が増加する。
【００７１】
ＡＤＡＭＴＳ−４およびＡＤＡＭＴＳ−５のアルファスクリーンアッセイ：
本発明の化合物は、アグリカナーゼＡＤＡＭＴＳ−４およびＡＤＡＭＴＳ−５のアルファスクリーンアッセイ（Ｍｉｌｌｅｒ  Ｊ．  Ａ．ら、Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２００３，  ３１４，  ２６０−２６５）を用いて評価可能であるが、以下の変更点がある。典型的には、３もしくは４ｎＭのＡＤＡＭＴＳ−４または２．１ｎＭのＡＤＡＭＴＳ−５を、白色非結合表面９６穴プレート（コーニング３９９０）中で室温、３時間、８０ｎＭの４３アミノ酸長のペプチド基質＋／−阻害剤（１％のＤＭＳＯ終濃度）とインキュベートする。阻害剤を３倍系列希釈し、約１００μＭまでの最終開始濃度で試験する。アッセイはカクテル（ＥＤＴＡ（６２．５ｍＭ）、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）、（ｐＨ  ７．５）、１０ｍＭ塩化カルシウム、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．２％Ｂｒｉｊ（登録商標）３５（ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテルの主成分）、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ＢＣ３モノクローナル抗体ハイブリドーマ上清（１：２０００最終希釈）、ストレプトアビジン結合ドナービーズおよび抗マウスＩｇＧ結合アクセプタービーズ（両ビーズとも１５μｇ／ｍＬ終濃度）を含むもの）で、その後クエンチする。プレートをアルミニウムホイルテープで覆い、結合物を一晩インキュベートする。そのプレートを、その後、パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）製のアルファスクリーン  フュージョン  アルファ  リーダーで読み取る。データを、ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ（商標）ソフトウエア（ＩＤＢＳ  Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）を使用して解析する。同様のアッセイを、精製イヌＡＤＡＭＴＳ−４酵素を用いて使用する。本発明の代表的化合物のデータを表１に、以下示す。
【００７２】
【表１】
2015535248.tif 000031
【００７３】
ラットおよびイヌのプラズマシフトアルファスクリーンアッセイ（Ｐｌａｓｍａ  Ｓｈｉｆｔ  ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  Ａｓｓａｙ）
阻害剤の効能に対する血漿タンパク質結合の効果を決定するために、アルファスクリーンアッセイを改変して、５０％ルイス（Ｌｅｗｉｓ）ラット血漿の存在下でのＡＤＡＭＴＳ−５に対する阻害剤のテストを含める。５０％ルイスラット血漿中のＡＤＡＭＴＳ−５に対する阻害剤のＩＣ５０とバッファー中の阻害剤のＩＣ５０との比率を計算し、阻害剤のプラズマシフトとして記述する。２．１ｎＭの代わりに１０ｎＭのＡＤＡＭＴＳ−５を使用して、同様にアッセイを完了する。同様のアッセイを、２５％イヌ血漿の存在下でイヌＡＤＡＭＴＳ−４を用いて使用する。本発明の代表的化合物のデータを表２に、以下示す。
【００７４】
【表２】
2015535248.tif 000032
【００７５】
ＭＭＰ−２活性のインビトロ蛍光アッセイ
連続アッセイを使用し、アッセイ中では蛍光グループ（７−メトキシクマリン、Ｍｃａ）（２，４−ジニトロフェニル基へのエネルギー転移によりクエンチされるもの）を含む合成ぺプチドが基質である。前記基質は、ペプチド  Ｍｃａ−ＰＱＧＬ−（３−［２，４−ジニトロフェニル］−Ｌ−２，３−ジアミノプロピオニル）−ＡＲ−ＯＨである。そのペプチドがＭＭＰにより切断されると、蛍光の大きな増加が観察される。このアッセイ用の酵素の供給源は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に発現される完全長組換えヒトｐｒｏ−ＭＭＰ−２であって、有機水銀化合物４−アミノフェニル酢酸水銀（ＡＰＭＡ）によりその後活性化されるものである。ＡＰＭＡを脱塩カラム（ＭＭＰ−２  Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）カタログ番号ＰＦ０２３）を通して除去する。アッセイ緩衝液は、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ７．５）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２および１０μＭのヒト血清アルブミンからなる。９６穴プレートの各ウエルは、アッセイ緩衝液、ＭＭＰ（終濃度０．２ｎＭ；アッセイ緩衝液中に希釈することにより調製するもの）および各種濃度の阻害剤（９６穴ポリプロピレンプレートにＤＭＳＯ中の所定の阻害剤を、１０ポイントまたは１１ポイント希釈スキームを使用して系列系釈することにより調製するもの）からなる１００μＬの反応混合物からなる。酵素反応を、基質を終濃度２０μＭになるように加えることにより開始する。このアッセイの最終ＤＭＳＯ濃度は１．０％である。プレートを室温で２〜４時間インキュベートし、基質切断を、ＬＪＬ  Ａｎａｌｙｓｔ（登録商標）またはＷａｌｌａｃ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）上の蛍光プレートリーダー（励起フィルタ３２０およびエミッションフィルタ４３６）を使って室温で測定する。
【００７６】
データを、複数の相対的ＩＣ５０が生成される４パラメータフィットモデルエクエーション（４  ｐａｒａｍｅｔｅｒ  ｆｉｔ  ｍｏｄｅｌ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）２０５を使うＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ（登録商標）ソフトウエアプログラムｖｓ．５．３を使用することにより解析する。最大シグナルは、阻害剤非処理であるが、酵素、基質および１．０％ＤＭＳＯを有するウエルから計算される。最少シグナルは、緩衝液のみ（酵素なし）、基質および１．０％ＤＭＳＯを有するウエルから計算される。
【００７７】
他のＭＭＰ活性のインビトロ蛍光アッセイ
基本的に同一方法を、上記ＭＭＰ−２アッセイまたは当該技術分野で公知のものとして、残りのＭＭＰアッセイのために使用する。例えば、ＭＭＰ−１４に関しては、酵素供給源は、ペリプラズムから精製した酵素の組換え型可溶性前駆フォームの活性化により生産されるＭＭＰ−１４（ＭＴ１−ＭＭＰ）触媒ドメインである。それは、成熟ヒトＭＴ１−ＭＭＰ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）カタログ番号４７５９３５）のアミノ酸残基Ｔｙｒ８９〜Ｇｌｙ２６５からなる。各ウエルの終濃度は、ＭＭＰ−２アッセイであるような０．２ｎＭの代わりに０．５ｎＭである。本発明の代表的化合物のデータを表３に、以下示す。
【００７８】
【表３】
2015535248.tif 000033
【００７９】
ラットにおけるＭＩＡ注射ＰＤモデル
Ｓｗｅａｒｉｎｇｅｎら、Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ  １８  （２０１０）  １１５９−１１６６に記載されるアッセイを採用してもよい。ＭＩＡ（シグマ、カタログ＃Ｉ２５１２、ナトリウム塩）を、使用当日、５０ｕｌの滅菌０．９％生理食塩水中に３ｍｇ新たに調製する。７〜８週齢の雄ルイスラットを麻酔し、Ｄａｙ０にＭＩＡを右膝に（内在性のアグリカナーゼ活性を誘導およびアグリカン断片の関節液への放出を誘導するため）及び生理食塩水を（対側の）左膝に関節内注射する。アグリカナーゼ阻害剤（３、１０もしくは３０ｍｇ／ｋｇ）又はビークル［１％ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）；０．２５％Ｔｗｅｅｎ  ８０；０．０５％泡止め剤］を、Ｄａｙ３から開始して一日２回、経口投薬する。化合物の一回の投薬をＤａｙ７に行い、動物を４時間後に屠殺し、そして、膝関節を２００ｕｌの生理食塩水で洗浄する。関節洗浄液を、アグリカンのアグリカナーゼ切断断片に関して、ＮＩＴＥＧＥサンドイッチＥＬＩＳＡを使用してアッセイする。関節洗浄液中に存在するアグリカン断片の量を、アグリカナーゼ消化ラットアグリカンを使って作成した検量線に基づいて決定する。統計解析をダネットの検定を使用して実施する。
【００８０】
サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイ：ＮＩＴＥＧＥ  ＥＬＩＳＡのために、抗ＮＩＴＥＧＥモノクローナル抗体を、４℃、一晩、白色高結合ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ）上に固定する。ブロッキングの後、ラット関節液洗浄サンプルをプレートに加え、Ｃ末端ＮＩＴＥＧＥ配列を有する断片を捕獲する。捕獲した断片を、ＨＲＰ結合抗ＨＡＢＲモノクローナル抗体を使用して検出する。ＥＬＩＳＡシグナルをスーパーシグナルＥＬＩＳＡフェムト最大感受性基質（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して測定し、Ｖｉｃｔｏｒルミノメーター上で読み取る。サンプルに存在するアグリカン断片の量を、アグリカナーゼ消化ラット軟骨肉腫アグリカン（抗体希釈緩衝液に希釈した８５０ｍｇ／ｍｌのストック）を使って作成した検量線に基づいて決定する。データを表４に提示する。
【００８１】
【表４】
2015535248.tif 000034
【００８２】
変形性関節症のイヌにおける血漿バイオマーカーＡＲＧＮの試験
この試験の目的は、２１日間の毎日の経口投与後の、複数用量範囲にある本発明化合物への、変形性関節症（ＯＡ）のイヌにおける血漿バイオマーカーＡＲＧＮ応答を測定することである。股関節（複数可）におけるＯＡのＸ線学的証拠を有する年齢８歳以上の１６匹の成体実験ビーグル犬と４匹の年齢を一致させたＯＡを有しないコントロールビーグル犬をこの試験に参加させる。
【００８３】
ベースライン血漿ＡＲＧＮ濃度のための血液サンプルを、投薬開始前３０、２８、および２６日に、すべてのイヌから回収する。ＯＡを有する１６匹のイヌを、４種類の治療グループ（プラセボ、０．１、１、および１０ｍｇ／ｋｇの実施例２化合物のもの）の一つに対して、平均ベースライン血漿ＡＲＧＮ濃度によってブロックランダム化する。ＯＡを有しない４匹の年齢を一致させたコントロール犬を、全てプラセボ治療グループに割り当てる。Ｄａｙ０に開始して、イヌは、割り当てられた治療グループに従って、溶液／懸濁液中の実施例２の化合物の一日一回の経口強制栄養投与を３週間受ける。血漿ＡＲＧＮおよび実施例２化合物の濃度決定のための血液サンプルを、最初の投薬の前とさらに４週間（Ｄａｙ２８）の間週３回、回収する。血漿ＡＲＧＮおよび実施例２化合物の濃度決定のための追加的血液サンプルを、最後の投薬（Ｄａｙ２０）前ならびに１、２、６、１２および２４時間後に、回収する。血漿ＡＲＧＮ濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡプロトコルを使用する免疫アッセイにより決定し、実施例２化合物の血漿濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を使用して決定する。血漿ＡＲＧＮおよび実施例２化合物の濃度の簡易統計を計算し、実施例２化合物濃度の非コンパートメントＰＫ解析を実施する。
【００８４】
血漿ＡＲＧＮ濃度は投与量に対応する様式で阻害され、０．１、１、および１０ｍｇ／ｋｇの実施例２化合物を毎日投薬した後、それぞれ３３．８％、７０．７％、および８０．３％の平均Ｄａｙ２１阻害がある。正常犬およびＯＡプラセボ治療犬におけるＡＲＧＮ阻害は比較的低く、−１．３０％〜１３．４％の範囲である。ＡＲＧＮ濃度は、正常犬とＯＡプラセボ犬との間に実質的相違はない。実施例２化合物の血漿濃度は、下位比例（ｓｕｂ−ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ）様式で投与量とともに増加し、定常トラフ濃度が速やかに達成される。実施例２化合物の投与量の増加および全身暴露が、血漿ＡＲＧＮ濃度阻害の増加につながる。従って、実施例２化合物は、自然発生ＯＡを有するイヌの標的アグリカナーゼを一日一回の経口投与後に阻害する。
【００８５】
本発明を、以下の条項により記述する。
１．式：
【化２６】
2015535248.tif 000035
（Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、ジメチル、およびシクロプロピルから選択される）を有する化合物または医薬的に許容可能なその塩。
２．式：
【化２７】
2015535248.tif 000036
を有する条項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
３．式：
【化２８】
2015535248.tif 000037
を有する条項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
４．式：
【化２９】
2015535248.tif 000038
を有する条項３に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
５．式：
【化３０】
2015535248.tif 000039
を有する条項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
６．式：
【化３１】
2015535248.tif 000040
を有する条項５に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
７．式：
【化３２】
2015535248.tif 000041
を有する条項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
８．式：
【化３３】
2015535248.tif 000042
を有する条項７に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
９．式：
【化３４】
2015535248.tif 000043
を有する条項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
１０．式：
【化３５】
2015535248.tif 000044
を有する条項９に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
１１．式：
【化３６】
2015535248.tif 000045
を有する条項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
１２．式：
【化３７】
2015535248.tif 000046
を有する条項１１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
１３．式：
【化３８】
2015535248.tif 000047
を有する条項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
１４．式：
【化３９】
2015535248.tif 000048
を有する条項１３に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
１５．条項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩、および少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物。
１６．前記組成物が少なくとも一つの追加的活性薬剤を含む、条項１５記載の医薬組成物。
１７．前記組成物がヒト医薬組成物である、条項１５または１６記載の医薬組成物。
１８．前記組成物が獣医学的組成物である、条項１５または１６記載の医薬組成物。
１９．前記医薬組成物が経口投与に適応させられる、条項１５〜１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
２０．前記医薬組成物が錠剤、カプセル剤、溶液剤、または懸濁剤の形態である、条項１５〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
２１．治療を必要とする患者において関節炎を治療する方法であって、前記患者に有効量の条項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与することを含む方法。
２２．前記患者が少なくとも一つの追加的活性薬剤を投与される、条項２１記載の方法。
２３．前記患者がヒトである、条項２１または２２記載の方法。
２４．前記患者がイヌである、条項２１または２２記載の方法。
２５．前記投与が経口投与である、条項２１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
２６．前記投与が錠剤、カプセル剤、溶液剤、または懸濁剤中の前記化合物を使用して実施される、条項２１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
２７．阻害を必要とする患者において軟骨浸食を阻害する方法であって、前記患者に有効量の条項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与することを含む方法。
２８．前記患者が少なくとも一つの追加的活性薬剤を投与される、条項２７記載の方法。
２９．前記患者がヒトである、条項２７または２８記載の方法。
３０．前記患者がイヌである、条項２７または２８記載の方法。
３１．前記投与が経口投与である、条項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
３２．前記投与が錠剤、カプセル剤、溶液剤、または懸濁剤中の前記化合物を使用して実施される、条項２７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
３３．治療に使用するための、条項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
３４．関節炎の治療に使用するための、条項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
３５．軟骨浸食の阻害に使用するための、条項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
３６．医薬品の製造のための、条項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩の使用。
３７．前記医薬品が関節炎を治療するためのものである、条項３６に記載の使用。
３８．前記医薬品が軟骨浸食を阻害するためのものである、条項３６または３７に記載の使用。
３９．前記医薬品が経口投与に適応させられる、条項３６〜３８のいずれか一項に記載の使用。
４０．前記医薬品が錠剤、カプセル剤、溶液剤、または懸濁剤の形態である、条項３６〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【手続補正書】
【提出日】平成27年7月9日(2015.7.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2015535248.tif 000057
（Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、ジメチル、およびシクロプロピルから選択される）を有する化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項２】
式：
【化２】
2015535248.tif 000058
を有する請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項３】
式：
【化３−１】
2015535248.tif 000059
【化３−２】
2015535248.tif 000060
を有する請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項４】
式：
【化４−１】
2015535248.tif 000061
【化４−２】
2015535248.tif 000062
を有する請求項３に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項５】
式：
【化５】
2015535248.tif 000063
を有する請求項１に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩、および少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項７】
治療を必要とする患者において関節炎を治療する方法であって、前記患者に有効量の請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与することを含む方法。
【請求項８】
阻害を必要とする患者において軟骨浸食を阻害する方法であって、前記患者に有効量の請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩を投与することを含む方法。
【請求項９】
治療に使用するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩。
【請求項１０】
医薬品の製造のための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物または医薬的に許容可能なその塩の使用。
【国際調査報告】
2015535248.tif 000064
2015535248.tif 000065
2015535248.tif 000066