(57)【要約】  本発明は、固相抽出（ＳＰＥ）を介した［18Ｆ］−フルシクラチドの精製方法に関する。本方法は、自動化に従うものであり、そして自動化合成装置、特にカセット式合成装置と連携させた使用に適している。また、本精製方法を実施するカセットも提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
［18Ｆ］−フルシクラチドの精製方法であって、
（ａ）精製すべき［18Ｆ］−フルシクラチド溶液を、水性溶媒中に生体適合性陰イオンを有する酸を含むｐＨ１．５〜３．５の酸性溶液で酸性化する工程と、
（ｂ）工程（ａ）の酸性化された溶液を、１以上のＣ１−Ｃ４逆相ＳＰＥカートリッジ（２１０）に通す工程と、
（ｃ）工程（ｂ）のＳＰＥカートリッジ（２１０）を、水性溶媒中に生体適合性陰イオンを有する酸のｐＨ１．５〜３．５の酸性溶液を含み、エタノール含有量が１０〜３０ｖ／ｖ％である第１の水性エタノール溶液で洗浄する工程と、
（ｄ）工程（ｃ）の洗浄されたＳＰＥカートリッジ（２１０）を、水又は水性緩衝液でリンスする工程と、
（ｅ）工程（ｄ）のリンスされたＳＰＥカートリッジ（２１０）を、エタノール含有量が７０〜９０ｖ／ｖ％である第２の水性エタノール溶液で溶出する工程であって、溶出液は、精製［18Ｆ］−フルシクラチドを、７０〜９０ｖ／ｖ％の水性エタノール溶液中に含む、工程と
を含む、方法。
【請求項２】
工程（ａ）及び工程（ｃ）の酸性溶液が各々独立に０．１％のトリフルオロ酢酸、０．１〜２％のギ酸、０．１〜２％の酢酸、又は０．１〜５％のリン酸を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
工程（ａ）及び工程（ｃ）の酸性溶液が各々独立に０．５〜２％のリン酸を含む、請求項２記載の方法。
【請求項４】
逆相ＳＰＥカートリッジ（２１０）が２〜１０％の炭素ロードを有する、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
第１の水性エタノール溶液のエタノール含有量が約２０ｖ／ｖ％である、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
第２の水性エタノール溶液のエタノール含有量が約８０ｖ／ｖ％である、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
逆相ＳＰＥカートリッジ（２１０）が、エタノール、水及び０．５％水性リン酸の１種以上でプレコンディショニングされる、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
（ｆ）工程（ｅ）の精製［18Ｆ］−フルシクラチド溶液を、生体適合性キャリアで希釈する工程と、
（ｇ）工程（ｆ）の希釈した溶液を無菌的に濾過して、［18Ｆ］−フルシクラチド放射性医薬組成物を、哺乳類の投与に適したエタノール含有量０〜１０ｖ／ｖ％の形態で得る工程と
をさらに含む、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
工程（ｆ）の生体適合性キャリアが、放射線保護剤４−アミノ安息香酸又はその生体適合性陽イオンとの塩を含む、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
工程（ａ）〜工程（ｅ）又は工程（ａ）〜工程（ｇ）が自動化される、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
自動化が自動化合成装置を用いて実施される、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
自動化合成装置が単回使用カセットを備える、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
単回使用カセットが、
（ｉ）精製すべき［18Ｆ］−フルシクラチド溶液の収容に適した容器と、
（ｉｉ）１以上のＣ１−Ｃ４逆相ＳＰＥカートリッジ（２１０）と、
（ｉｉｉ）請求項１乃至請求項３のいずれか１項で定義した酸性溶液の供給手段と、
（ｉｖ）請求項１又は請求項５で定義した第１の水性エタノール溶液の供給手段と、
（ｖ）請求項１又は請求項６で定義した第２の水性エタノール溶液の供給手段と
を備える、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
（ｈ）工程（ｇ）の［18Ｆ］−フルシクラチド放射性医薬組成物を、１以上の単位用量シリンジ中に分配する工程
をさらに含む、請求項８乃至請求項１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
請求項１２又は請求項１３記載の自動化方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）精製すべき［18Ｆ］−フルシクラチド溶液の収容に適した容器と、
（ｉｉ）１以上のＣ１−Ｃ４逆相ＳＰＥカートリッジ（２１０）と、
（ｉｉｉ）請求項１乃至請求項３のいずれか１項で定義した酸性溶液の供給手段と、
（ｉｖ）請求項１又は請求項５で定義した第１の水性エタノール溶液の供給手段と、
（ｖ）請求項１又は請求項６で定義した第２の水性エタノール溶液の供給手段と
を備えるカセット。
【請求項１６】
請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法を実施するための、請求項１１乃至請求項１３のいずれか１項で定義した自動化合成装置の使用。
【請求項１７】
請求項１１乃至請求項１３のいずれか１項記載の方法を実施するための、請求項１５で定義したカセットの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、固相抽出（ＳＰＥ）を介した［18Ｆ］−フルシクラチド（ｆｌｕｃｉｃｌａｔｉｄｅ）の精製方法に関する。本方法は、自動化に従うものであり、そして自動化合成装置、特にカセット式合成装置と連携させた使用に適している。また、本精製方法を実施するカセットも提供される。
【背景技術】
【０００２】
［18Ｆ］−フルシクラチドは、［18Ｆ］−ＡＨ１１１５８５の推奨ＩＮＮ（米国承認名）である。［18Ｆ］−ＡＨ１１１５８５は、特許及び刊行物の双方において、インビボでインテグリンレセプタを標的とするＰＥＴイメージング放射性トレーサとして記載されている。
【０００３】
国際公開第０３／００６４９１号パンフレットには、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩が開示されている。
【０００４】
【化１】
2015518850.tif 000002
式中、
Ｇはグリシンを表し、
Ｄはアスパラギン酸を表し、
Ｒ1は−（ＣＨ2）n−又は−（ＣＨ2）n−Ｃ6Ｈ4−を表し、
式中、ｎは正の整数１〜１０を表し、
ｈは正の整数１又は２を表し、
Ｘ1はアミノ酸残基であって、酸又はアミンのような官能性側鎖を有するアミノ酸残基であり、
Ｘ2及びＸ4は独立にジスルフィド結合を形成することができるアミノ酸残基を表し、
Ｘ3はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン模擬物を表し、
Ｘ5は疎水性アミノ酸又はその誘導体を表し、
Ｘ6はチオール含有アミノ酸残基を表し、
Ｘ7は存在しないか或いはバイオモディファイア部分を表し、
Ｚ1は抗腫瘍剤、キレート剤、又はリポータ部分を表し、
Ｗ1は存在しないか或いはスペーサ部分を表す。
【０００５】
国際公開第２００６／０３０２９１号パンフレットは、［18Ｆ］−フルシクラチド及びこれを含有する放射性医薬組成物の合成を開示している。国際公開第２００６／０３０２９１号パンフレットは、当該発明の放射性フッ化ペプチドが、迅速かつ効率的に調製され得、それでも（インビボでインテグリンレセプタを標的とする）所望の生物活性を有すると述べている。
【０００６】
Ｇｌａｓｅｒら［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９（４），９５１−９５７（２００８）］は、［18Ｆ］−フルシクラチドの合成及び放射性標識を開示している。Ｇｌａｓｅｒらは、放射化学的純度が９６％であり、そして１０分のインキュベーション後の反応混合物のラジオＨＰＬＣ分析が、ほぼ定量的なカップリング効率を示した（［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドのトレースしか残らなかった）と述べている。Ｇｌａｓｅｒらは、［18Ｆ］−フルシクラチドのＨＰＬＣ精製を用いているが、このような方法論は、放射性トレーサ自動化には不適切であり、そして操作が高価であり、かつ労力を要すると認識されている。
【０００７】
［18Ｆ］−フルシクラチドは、ヒト患者の乳癌のイメージングに有用であり［Ｋｅｎｎｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４９（６），８７９−８８６（２００８）］、そして抗癌治療後の腫瘍血管系（ｔｕｍｏｕｒ  ｖａｓｃｕｌａｒｉｔｙ）の変化の判定に有用である［Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，５０（１），１１６−１２２（２００９）］と報告されている。
【０００８】
国際公開第２００８／１４６３１６号パンフレットは、［18Ｆ］−フルオロチミジンのＳＰＥ精製手順を開示している。Ｐａｓｃａｌｉら［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｎｕｃｍｅｄｂｉｏ．２０１１．１０．００５（２０１１）］はその後、当該方法が、自動化シンセサイザを用いて、エタノールフリー［18Ｆ］−フルオロチミジン溶液を得るのに用いられ得ることを発表した。
【０００９】
Ｌｉｕら［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３７，９１７−９２５（２０１０）］は、ＳＰＥ精製が、［18Ｆ］−ＡＶ−４５の自動化合成において用いられ得ることを開示している。Ｌｉｕらは、ＳＰＥ精製が、無極性、非放射性の不純物を取り除かない点を強調した。
【００１０】
国際公開第２０１１／０４４４２２号パンフレットには、以下の工程を含む［18Ｆ］−フルシクラチドの精製方法を開示されている。
（ａ）フルシクラチドを含む希釈粗生成物反応混合液を、第１逆相ＳＰＥカートリッジに通す工程；
（ｂ）第１逆相ＳＰＥカートリッジを、水／アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）／水、メタノール（ＭｅＯＨ）／水、又はイソプロパノール／水混合液、好ましくは水／アセトニトリル混合液で洗浄する工程；
（ｃ）工程（ｂ）が完了すると、第１逆相ＳＰＥカートリッジを水でリンスする工程；
（ｄ）第１逆相ＳＰＥカートリッジを、アセトニトリル又はテトラヒドロフラン、好ましくはアセトニトリルで溶出する工程；
（ｅ）溶出工程（ｄ）の混合液を、順相ＳＰＥカートリッジに直接通して、精製フルシクラチドを含むアセトニトリル又はテトラヒドロフラン溶液、好ましくはアセトニトリル溶液を与える工程；
（ｆ）精製フルシクラチドを含むアセトニトリル又はテトラヒドロフラン溶液、好ましくはアセトニトリル溶液を、水で希釈して、精製フルシクラチドを含む希釈水／アセトニトリル溶液又は希釈水／テトラヒドロフラン溶液、好ましくは希釈水／アセトニトリル溶液を形成する工程であって、水／アセトニトリル溶液は、約４０〜７０（ｖ／ｖ）％の水、好ましくは少なくとも約４０（ｖ／ｖ）％の水、より好ましくは少なくとも約５０（ｖ／ｖ）％の水を含有する、工程；
（ｇ）工程（ｆ）の精製フルシクラチドを含む希釈水／アセトニトリル溶液又は希釈水／テトラヒドロフラン溶液、好ましくは希釈水／アセトニトリル溶液を、第２逆相ＳＰＥカートリッジに通して、フルシクラチドを第２逆相ＳＰＥカートリッジ上にトラップする工程；
（ｈ）第２逆相ＳＰＥカートリッジを水でリンスする工程；及び
（ｉ）第２逆相ＳＰＥカートリッジのトラップされた精製フルシクラチドを、注射可能な有機溶媒、好ましくはエタノール又はＤＭＳＯ、好ましくはエタノールで溶出する工程。
【００１１】
国際公開第２０１１／０４４４２２号パンフレットの方法は、第１逆相ＳＰＥカートリッジ［工程（ａ）〜工程（ｄ）］；順相ＳＰＥカートリッジ［工程（ｆ）］、及び第２逆相ＳＰＥカートリッジ［工程（ｇ）及び工程（ｈ）］の使用を必要とする。各逆相ＳＰＥカートリッジは、鎖長がＣ８よりも長い、好ましくはＣ１８よりも長い、最も好ましくはＣ３０である。当該方法において用いられるいくつかの溶媒（例えば、ＴＨＦ、アセトニトリル及びＤＭＳＯ）は実際には、医薬製剤にとって適していない。このような不適当な溶媒の除去及び置換は一般的に、追加の工程（例えば、カートリッジ上での蒸発又は溶媒交換）を必要とし、これがプロセス時間を増大させ、収率を引き下げ、かつプロセスを複雑にする。また、国際公開第２０１１／０４４４２２号パンフレットの順相法は、剤が１００％非水性溶媒（すなわち、有機溶媒）中に溶解することを必要とする。このことは、関与するペプチドにとって重大な溶解度の問題を引き起こすと予想され、かつペプチド沈殿のリスクがある。
【００１２】
従って、依然として、自動化に適した、特に放射性医薬組成物を与えるための、［18Ｆ］−フルシクラチド精製方法が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】国際公開第２０１１／０４４４２２号パンフレット
【発明の概要】
【００１４】
本発明は、ＳＰＥカートリッジに基づく［18Ｆ］−フルシクラチド精製方法を提供するものであり、これは自動化に適している。本方法は、国際公開第２０１１／０４４４２２号パンフレットの従来技術方法よりもかなり簡単である。というのも、１タイプのＳＰＥカラムしか必要としないためである。また、本方法は、薬学的に許容される溶媒しか用いていない。それ故に、本方法は、放射性医薬組成物のルーチン的製造に容易に適用され、潜在的に有毒な溶媒を除去するための付加的なプロセシングを必要としない。
【００１５】
本方法は、［18Ｆ］−フルシクラチド中の放射性不純物及び非放射性不純物のレベルを大幅に引き下げるのに有効である。特定の課題が、ジメチルアミノベンズアルデヒド（ＤＭＡＢ；18Ｆ−フルオロベンズアルデヒド合成の副生成物）であり、これはまた、アミノオキシ−官能化ペプチド前駆体（「前駆体１」）と反応して、ＤＭＡＢ−ペプチド結合体（「不純物Ａ」）を形成する。このＤＭＡＢ−ペプチド結合体は、フルシクラチドの類似体であり、［18Ｆ］−フルシクラチドから除去するのが困難であると判明している。というのも、種々の条件下で共溶出する傾向があるためである。
【００１６】
本方法は酸性化工程を含み、これは、ＤＭＡＢ−ペプチド結合体不純物の除去を確実にするのに極めて重要である。本方法はまた、出発アミノオキシ−官能化ペプチド（「前駆体１」）を除去する。本方法は、８０〜９５％のペプチド関連不純物、及びアニリン（結合反応用の触媒及び放射線安定剤として用いられる）を除去する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】フルシクラチドＳＰＥ  ＦＡＳＴｌａｂカセットの概略図、及びフルシクラチドＳＰＥ  ＦＡＳＴｌａｂカセットのコンポーネントの位置の表である。
【図２】ＳＰＥカートリッジの側断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
第１態様において、本発明は、以下の工程を含む［18Ｆ］−フルシクラチドの精製方法を提供する：
（ａ）精製すべき［18Ｆ］−フルシクラチド溶液を、水性溶媒中に生体適合性陰イオンを有する酸を含むｐＨ１．５〜３．５の酸性溶液で酸性化する工程と；
（ｂ）工程（ａ）の酸性化された溶液を、１以上のＣ１−Ｃ４逆相ＳＰＥカートリッジに通す工程と；
（ｃ）工程（ｂ）のＳＰＥカートリッジを、水性溶媒中に生体適合性陰イオンを有する酸のｐＨ１．５〜３．５の酸性溶液を含み、エタノール含有量が１０〜３０ｖ／ｖ％である第１の水性エタノール溶液で洗浄する工程と；
（ｄ）工程（ｃ）の洗浄されたＳＰＥカートリッジを、水又は水性緩衝液でリンスする工程と；
（ｅ）工程（ｄ）のリンスされたＳＰＥカートリッジを、エタノール含有量が７０〜９０ｖ／ｖ％である第２の水性エタノール溶液で溶出する工程であって、溶出液は、精製［18Ｆ］−フルシクラチドを、７０〜９０ｖ／ｖ％の水性エタノール溶液中に含む、工程。
【００１９】
用語「［18Ｆ］−フルシクラチド」は、式Ｉの化合物を指す。
【００２０】
【化２】
2015518850.tif 000003
フルシクラチド（18Ｆ）は、［18Ｆ］−ＡＨ１１１５８５の推奨ＩＮＮ（米国承認名）である。式（Ｉ）の化学構造は、トランス異性体としてのオキシムエーテルを示す。本明細書中で用いられる用語「［18Ｆ］−フルシクラチド」は、シス異性体及びトランス異性体の混合物、及び実質的に純粋な個別のシス異性体又はトランス異性体を包含する。
【００２１】
用語「含む」又は「備える」は、本願の全体を通じて従前通りの意味があり、組成物が、記載される成分を有していなければならないが、他の特定されていない化合物又は種が付加的に存在してもよいことを意味する。用語「含む」は、好ましいサブセットとして「から本質的になる」を含み、これは、組成物が、記載される成分を有するが、他の化合物又は種が存在しないことを意味する。
【００２２】
工程（ａ）及び工程（ｃ）の水性酸性溶液は、適切にはｐＨが１．５〜３．５の範囲にある。これにより、種々の塩基性不純物（アニリンｐＫａ４．６が挙げられる）がプロトン化されることが確実となる。工程（ａ）及び工程（ｃ）において用いられる水性酸性溶液は、同じであっても異なっていてもよいが、好ましくは同じ水性酸を含む。工程（ａ）において、これは水溶液として用いられるが、工程（ｃ）において、これはエタノールとの混合液中で用いられて、第１の水性エタノール溶液が与えられる。
【００２３】
用語「生体適合性陰イオン」が意味するところは、酸の陰イオンを形成する負荷電対イオンである。負荷電対イオンは毒性がないので、哺乳類の体、特にヒトの体への投与に適している。陰イオンは適切には、単独（ｓｉｎｇｌｙ−）荷電、又は多荷電（ｍｕｌｔｉｐｌｙ−ｃｈａｒｇｅｄ）であるが、荷電平衡量が存在する限りにおいてである。陰イオンは適切には、無機酸又は有機酸に由来する。適切な無機陰イオンの例として：ハライドイオン（クロリド又はブロミド等）；サルフェート；ニトレート；ホスフェート及びボレートが挙げられる。適切な有機陰イオンの例として：ホスフェート、シトレート；アセテート、タルトレート、ラクテート、ピルベート、トリフルオロアセテート、スクシネート、フマレート、マレエート、メタンスルホネート、エタンスルホネート、ｐ−トルエンスルホネート及びベンゼンスルホネートが挙げられる。
【００２４】
用語「ＳＰＥカートリッジ」は、固相抽出カートリッジを指す。用語「固相抽出」は、従前通りの意味を有する。逆相ＳＰＥカートリッジは、市販の吸収剤を備え、これは、長寸カートリッジ体内で２つの多孔性媒質層の間にパックされている。カートリッジ体は、簡易な連結のためのルアーフィッティングを備える。図２は、典型的なＳＰＥカートリッジ構造の側面図を提供する。本発明での使用に適した組立逆相ＳＰＥカートリッジは、当該技術において知られている任意の組立逆相ＳＰＥカートリッジであってよく、限定されないが、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（３４  Ｍａｐｌｅ  Ｓｔｒｅｅｔ  Ｍｉｌｆｏｒｄ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  ０１７５７  ＵＳＡ）から市販されているものが挙げられる。逆相ＳＰＥカートリッジでの使用に適した吸収剤は、当該技術において知られている任意の吸収剤であってよく、限定されないが、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販されているものが挙げられる。
【００２５】
用語「逆相」は、クロマトグラフィーにおける従前通りの意味を有し、無極性（親油性）固相及び極性（親水性）移動相の使用を指す。歴史的に、ほとんどの液体クロマトグラフィーは、親水性表面化学、及び極性化合物に対するより強い親和性のある未変性シリカ又はアルミナを用いて実施されていた。それ故に、これが「標準」であると考えられていた。支持表面に共有結合するアルキル鎖の導入で、溶出順序が逆にされた。逆相クロマトグラフィーにおいて、極性化合物が最初に溶出される一方で、無極性化合物が保持される。
【００２６】
用語「Ｃ１−Ｃ４」は、ＳＰＥカートリッジ固相における炭素原子の数を指す。
【００２７】
第１態様の方法において、工程（ａ）〜工程（ｅ）は、適切には、示されるアルファベットの順番に実施される。
【００２８】
本出願人は、酸性化工程（ａ）が精製の重要な部分であると考えている。従って、［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒド（［18Ｆ］−ＦＢＡ）が、ＴＭＡＢから従来の放射性合成によって調製される場合、存在する最大９５％を超える化学的不純物は、ＴＭＡＢ、ＤＭＡＢ及びＨＢＡに由来する：
【００２９】
【化３】
2015518850.tif 000004
ＴＭＡＢ及びＨＢＡは、［18Ｆ］−ＦＢＡの精製を介して除去される。しかしながら、ＤＭＡＢは、不純物として残り（前述した）、また、前駆体１と反応してＤＭＡＢ−ペプチド結合体（不純物Ａ）が形成される。不純物Ａの化学構造（表１参照）は、トランス異性体としてのオキシムエーテルを示す。本明細書中で用いられる用語「不純物Ａ」は、シス異性体及びトランス異性体の混合物、及び実質的に純粋な個別のシス異性体又はトランス異性体を包含する。
【００３０】
本発明者らは、不純物Ａが、種々の条件下で、［18Ｆ］−フルシクラチドと共溶出する傾向があることを見出した。中性条件が用いられる場合、不純物Ａは分離され得ない。溶解が悪くなり、そしてアミノオキシ前駆体（前駆体１）は、ＳＰＥカラムを通してブリードする傾向があり、かつ［18Ｆ］−フルシクラチド生成物中の不純物となる。また、酸性化が重要である。これにより、任意の塩基性種（アニリン等）がプロトン化されて親水性となることが確実となる。本発明の精製方法は、前駆体１及び不純物Ａのレベルを９０％首尾よく削減し（質量平衡制御によって確かめられる）、そしてまた、アニリンを除去する。
【００３１】
第１態様の方法の工程（ｂ）において、［18Ｆ］−フルシクラチドは、逆相ＳＰＥカートリッジに結合し、そして任意の可溶性不純物が溶液中に残る（そして捨てられる）。洗浄工程（ｃ）の第１の水性エタノール溶液のエタノール含有量は、［18Ｆ］−フルシクラチドが溶出液よりも逆相ＳＰＥカートリッジに対して大きな親和性を有するように、そして結果的に、吸収剤に結合したままであるように、選択される。不純物は、固相に対する親和性がより弱いので、溶出液中に残り、洗浄されて徐々に減る（ｗａｓｔｅ）。本発明者らは、放射性化学不純物が約９０％削減され、そして他の非放射性不純物（アニリン等）がこの段階で除去されることを見出した。除去される主な放射性化学不純物は［18Ｆ］−ＦＢＡであり、これは、粗（すなわち、未精製）［18Ｆ］−フルシクラチド中に最大１０％存在し得る。本発明に従うＳＰＥ精製後、［18Ｆ］−ＦＢＡのレベルは、１％未満に引き下げられる。
【００３２】
リンス工程（ｄ）は、任意の残留エタノールを除去して徐々に減らし、そしてここでも、所望の［18Ｆ］−フルシクラチドは逆相ＳＰＥカートリッジに結合したままである。溶出工程（ｅ）は、第２の水性エタノール溶液を用いるが、これは、エタノール含有量が、第１の水性エタノール溶液よりもかなり高くなるように選択される。その場合、［18Ｆ］−フルシクラチドは、溶出液に対する親和性が、逆相ＳＰＥカートリッジよりも大きくなり、結果的に、第２の水性エタノール溶液中に溶出する。精製［18Ｆ］−フルシクラチドは、溶出工程（ｅ）の溶出液中に集められる。
【００３３】
第１態様の方法は、適切には、１７〜６０℃、好ましくは２０〜３４℃の範囲の温度で実施される。
［好ましい特徴］
第１態様の方法において、逆相ＳＰＥカートリッジは、好ましくは、炭素ローディングが２〜１０％である。用語「炭素ローディング」は、従前通りの意味を有し、吸収剤の表面に結合する結合相の量の指標である。逆相ＳＰＥカートリッジは、より好ましくは、Ｃ４カートリッジ又はＣ２カートリッジのいずれか、より好ましくはＣ２三官能性カートリッジ（「ｔＣ２カートリッジ」）である。好ましいこのようなＣ２官能性カートリッジは、ｔＣ２  ＳｅｐＰａｋ  ＳＰＥカラム（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓから市販されている）である。ｔＣ２の「ｔ」は、三官能性であることを表し、かつ製造加工（Ｃ２鎖の固相へのリンキング）を指す。ｔＣ２  ＳＰＥカートリッジは、炭素負荷がかなり高いので、従来のＣ２カラムよりもかなり疎水性である。これにより、よりロバストとなり、かつ再生可能となる。最も重要なことに、ｔＣ２  ＳＰＥカラムは、［18Ｆ］−フルシクラチドを精製するのに必須である高ペプチドローディング及び高容量溶液に対処することができる。
【００３４】
ＳＰＥカートリッジの固相量から、何個のカートリッジが必要とされるかが決定される。本プロセスについて、好ましくは約８００ｍｇの固相が用いられる（これは、２つの４００ｍｇのｔＣ２  ＳｅｐＰａｋカートリッジ又は１つの８００ｍｇ以上のカートリッジに由来してよい）。
【００３５】
工程（ａ）及び工程（ｃ）の酸性溶液は、好ましくはｐＨが１．５〜２．０の範囲にあり、好ましくは０．１％の水性トリフルオロ酢酸、０．１〜２％の水性ギ酸、０．１〜２％の水性酢酸、又は０．１〜５ｗ／ｗ％の水性リン酸から選択される。酸性溶液は、より好ましくは０．５〜２％、最も好ましくは０．７〜１．３％の水性リン酸を含み、１ｗ／ｗ％の水性リン酸が理想である。リン酸が好ましいのは、リン酸がその塩として、［18Ｆ］−フルシクラチド配合中に既に存在するためである。
【００３６】
第１態様の方法において、「第１の水性エタノール溶液」は、酸性であり、好ましくはエタノール含有量が、ｔＣ２  ＳｅｐＰａｋカートリッジに関して、約２０ｖ／ｖ％である。用語「約」内の適切な範囲は、１５〜２５％、好ましくは１６〜２４％、より好ましくは１８〜２２％、最も好ましくは１９〜２１％である。
【００３７】
第１態様の方法において、「第２の水性エタノール溶液」は好ましくは、エタノール含有量が、ｔＣ２  ＳｅｐＰａｋカートリッジに関して、約８０ｖ／ｖ％である。用語「約」内の適切な範囲は、７０〜９０％、好ましくは７５〜８５％、より好ましくは７８〜８２％、最も好ましくは７９〜８１％である。
【００３８】
第１態様の方法において、逆相ＳＰＥカートリッジは、好ましくは、１以上のエタノール、水、及び０．５％水性リン酸でプレコンディショニングされる。より好ましくは、このようなコンディショニングは、エタノール（３ｍＬ）に続いて水（１０ｍＬ）、そして最後に０．５％水性Ｈ3ＰＯ4（４ｍＬ）での溶出を含む。こうして、カートリッジは、有機溶媒によって活性化され（吸収剤の孔が開き）、ペプチドを受ける準備が整う。このようなコンディショニングは、一貫性（ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ）、従って再現性のある結果を確実にするのに役立つ。別の態様は、純粋なエタノールが（殺菌剤としての機能を果たすことによって）バイオバーデン（ｂｉｏｂｕｒｄｅｎ）を引き下げるのに役立ち、そして任意のトレース不純物を除去するのに役立つというものである。
【００３９】
第１態様の方法は好ましくは、さらに工程：
（ｆ）工程（ｅ）の精製［18Ｆ］−フルシクラチド溶液を、生体適合性キャリアで希釈する工程と；
（ｇ）無菌的に濾過して（ａｓｅｐｔｉｃ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）、［18Ｆ］−フルシクラチド放射性医薬組成物を、哺乳類の投与に適した、エタノール含有量が０〜１０ｖ／ｖ％である形態で与える工程とを含む。
【００４０】
この好ましい実施形態の工程（ａ）〜工程（ｇ）は、適切には、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）に続いて（ｇ）の順番に実施される。
【００４１】
用語「放射性医薬」は、従前通りの意味を有し、診断又は治療での使用のための哺乳類の生体内投与に適した放射性化合物を指す。文言「哺乳類の投与に適した形態で」の意味するところは、滅菌状態であり（ｓｔｅｒｉｌｅ）、パイロジェンフリーであり、毒性作用又は副作用をもたらす化合物を欠いており、かつ生体適合性のｐＨ（本発明の剤について、約ｐＨ４．０〜１０．５、好ましくは６．５〜９．５）及び生理学的に適合性のオスモルにて製剤化される組成物である。このような組成物は、インビボで塞栓（ｅｍｂｏｌｉ）を生じさせるリスクがあり得る微粒子を欠いており、そして体液（例えば血）と接触しても沈殿が生じないように製剤化される。このような組成物はまた、生物学的に適合性の賦形剤しか含有しておらず、好ましくは等張性である。
【００４２】
好ましくは、哺乳類は、無傷の（ｉｎｔａｃｔ）哺乳類の体（生体内）、より好ましくはヒト被験者である。好ましくは、放射性医薬は、哺乳類の体に最小限に浸潤性であるように（ｉｎ  ａ  ｍｉｎｉｍａｌｌｙ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｍａｎｎｅｒ）投与されるのがよい、すなわち、哺乳類被験者に対する実質的な健康リスクは、たとえ専門の医学技能の下で実施されても、存在しない。このような最小限に浸潤性の投与は、好ましくは、被験者の末梢静脈中への静脈内投与であり、局所麻酔又は全身麻酔の必要はない。
【００４３】
「生体適合性キャリア」は流体、特に液体であり、この中に放射性医薬が懸濁、好ましくは溶解し得、組成物は、生理的に許容可能である、すなわち哺乳類の体に毒性又は過度の不快なく投与され得る。生体適合性キャリアは、適切には、注射可能なキャリア液体（滅菌状態であり、パイロジェンフリーの注射用水等）；水溶液（生理食塩水（有利には、注射用最終生成物が等張性であるように平衡が保たれるのがよい）等）；生体適合性緩衝剤を含む水性緩衝液（例えば、リン酸バッファ）；１以上の張度調整物質（例えば、生体適合性対イオンを有するプラズマ陽イオンの塩）、糖（例えば、グルコース又はシュークロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）、もしくは他の非イオンポリオール材料（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等）の水溶液である。好ましくは、生体適合性キャリアは、パイロジェンフリーな注射用水、等張性生理食塩水又はリン酸バッファである。
【００４４】
ヒトの投与に適するように、［18Ｆ］−フルシクラチド放射性医薬組成物中のエタノールの割合は、約１０％（ｖ／ｖ）未満でなければならない。好ましくは、エタノール含有量は７％以下、より好ましくは２〜６％、最も好ましくは、約４％が理想である。これは、工程（ｅ）の精製［18Ｆ］−フルシクラチドを、最小容量の溶液（およそ１．６ｍＬ）を用いて溶出すること、及び水性緩衝液によっておよそ４０ｍＬの最終容量に希釈することによって、達成される。本発明者らは、工程（ｅ）の溶出が、カートリッジのデッド容量に相当する溶出液の初期容量が捨てられるように実施されることが好ましいことを見出した（［18Ｆ］−フルシクラチドを含有していないことが示されたためである）。「デッド容量」は、ＳＰＥカートリッジを満たすのに必要とされる液体の容量である。この手順は、剤を含有する７０〜９０％のエタノール性溶液の容量を最小にするという利点があるので、薬学的に許容されるエタノール含有量とする希釈は、放射能濃度（ＲＡＣ）のロスを最小にして達成され得る。本発明のカートリッジについて、そのデッド容量は０．５ｍＬに相当する。「デッド容量」は、従来技術（例えば、不活性の、好ましくは固相と相互作用しない有色の分子（例えば、固相孔サイズよりもずっと大きいためである）を用いること）によって、決定され得る。
【００４５】
滅菌状態を達成するために、工程（ｆ）の希釈液は、無菌的濾過に曝される。用語「無菌的濾過」は、「滅菌濾過（ｓｔｅｒｉｌｅ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）」と呼ばれることもあり、従前通りの意味を有する。さらなる詳細は、Ｋ．Ｌ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ［Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ（２００４）］並びにＭ．Ｗ．Ｊｏｒｎｉｔｚ及びＴ．Ｈ．Ｍｅｌｔｚｅｒ［Ｓｔｅｒｉｌｅ  Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ；Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｉｎｆｏｒｍａ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（２０００）］によって与えられる。
【００４６】
希釈工程（ｆ）において、生体適合性キャリアは好ましくは、放射線保護剤４−アミノ安息香酸、又はその生体適合性陽イオンとの塩を含む。用語「放射線保護剤」が意味するところは、高度に反応性のフリーラジカル（水の放射性分解から生じる酸素含有フリーラジカル等）をトラップすることによって、分解反応（レドックス過程等）を妨げる化合物である。用語「生体適合性陽イオン」（Ｂc）が意味するところは、イオン化された負荷電群と塩を形成する正荷電対イオンであって、毒性もないことから、哺乳類の体、特にヒトの体への投与に適している正荷電対イオンである。適切な生体適合性陽イオンの例として：アルカリ金属（ナトリウム又はカリウム）；アルカリ土類金属（カルシウム）及びマグネシウム；並びにアンモニウムイオンが挙げられる。好ましい生体適合性陽イオンは、ナトリウム及びカリウム、最も好ましくはナトリウムである。
【００４７】
本発明の放射線保護剤は、適切には、パラ−アミノ安息香酸（すなわち、４−アミノ安息香酸）及びその、生体適合性陽イオンとの塩から選択される。これらの放射線保護剤は市販されており、医薬等級の純度である。パラ−アミノ安息香酸及びパラ−アミノ安息香酸ナトリウムについて、適切な濃度範囲は、０．５〜４．０、好ましくは１．０〜３．０、より好ましくは１．５〜２．５、最も好ましくは１．８〜２．２ｍｇ／ｍＬである。２．０ｍｇ／ｍＬが特に好ましい。本発明の放射線保護剤は、好ましくは、パラ−アミノ安息香酸ナトリウムを含む。付加的な放射線保護剤が、任意で存在してもよい。より好ましくは、本発明の放射線保護剤は、パラ−アミノ安息香酸、又はその生体適合性陽イオンとの塩から本質的になる。最も好ましくは、本発明の放射線保護剤は、パラ−アミノ安息香酸ナトリウムから本質的になる。
【００４８】
好ましくは、用いられる放射線保護剤の等級は、医薬等級である。従って、工業等級材料が、放射性医薬組成物中に付加的な化学的不純物を生じさせることが示された。
【００４９】
第１態様の方法が、［18Ｆ］−フルシクラチド放射性医薬組成物を提供するために用いられる場合、組成物は適切には医薬等級のコンテナ中に提供される。好ましいこのようなコンテナは、セプタムシールバイアルであり、気密クロージャは、（一般的にアルミニウムの）オーバーシールで圧着されている。クロージャ（例えば、圧着セプタムシールクロージャ）は、皮下注射針による１回又は複数回の穿刺に適している一方で、滅菌状態の完全性を維持している。
【００５０】
［18Ｆ］−フルシクラチド放射性医薬組成物は、適切には、ヘッドスペースガスが５〜３０％、好ましくは１０〜２５％、最も好ましくは１８〜２２％の酸素を含有するコンテナ中に提供される。理想的には、ヘッドスペースガスは空気である。
【００５１】
放射性医薬組成物は、任意で、付加的な賦形剤（抗菌性防腐剤、ｐＨ調整剤、充填剤、可溶化剤又はオスモル調整剤等）を含有してよい。用語「抗菌性防腐剤」が意味するところは、潜在的に有害な微生物（細菌、酵母又は糸状菌等）の成長を妨げる剤である。抗菌性防腐剤はまた、一部の殺菌特性を、用いられる投与量に応じて示し得る。本発明の抗菌性防腐剤の主な役割は、医薬組成物におけるそのような任意の微生物の成長を妨げることである。しかしながら、抗菌性防腐剤はまた、任意で、潜在的に有害な微生物の成長を、投与前に組成物を調製するために用いられるキットの１以上の成分において妨げるために、用いられてもよい。適切な抗菌性防腐剤として：パラベン（すなわち、メチル、エチル、プロピルもしくはブチルパラベン、又はこれらの混合物）；ベンジルアルコール；エタノール、フェノール；クレゾール；セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗菌性防腐剤は、パラベン又はエタノールである。
【００５２】
用語「ｐＨ調整剤」は、組成物のｐＨが、ヒト又は哺乳類の投与について許容限度内（本発明の剤について、約ｐＨ４．０〜１０．５、好ましくは６．５〜９．５）であることを確実とするのに有用な化合物、又は化合物の混合物を意味する。適切なこのようなｐＨ調整剤として、薬学的に許容されるバッファ（トリシン、リン酸、酢酸又はＴＲＩＳ［すなわちトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］等）及び薬学的に許容される塩基（炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム等）、又はこれらの混合物が挙げられる。
【００５３】
用語「充填剤」が意味するところは、生産中及び凍結乾燥中の材料処理を促進し得る薬学的に許容されるバルク剤（ｂｕｌｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）である。適切な充填剤として、無機塩（塩化ナトリウム等）及び水可溶性の糖又は糖アルコール（シュークロース、マルトース、マンニトール又はトレハロース等）が挙げられる。
【００５４】
用語「可溶化剤」が意味するところは、組成物中に存在し、溶媒中の放射性医薬の溶解度を増大させる添加剤である。好ましいこのような溶媒は水性媒体であるので、可溶化剤は好ましくは、水中での溶解度を向上させるものである。適切なこのような可溶化剤として：Ｃ1-4アルコール；グリセリン；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；プロピレングリコール；ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート；ソルビタンモノオレエート；ポリソルベート（例えばＴｗｅｅｎ（商標））；ポリ（オキシエチレン）ポリ（オキシプロピレン）ポリ（オキシエチレン）ブロックコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標））；シクロデキストリン（例えば、アルファ、ベータもしくはガンマシクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、又はヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン）、及びレシチンが挙げられる。
【００５５】
好ましい可溶化剤は、シクロデキストリン、Ｃ1-4アルコール、ポリソルベート及びＰｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）、より好ましくはシクロデキストリン及びＣ2-4アルコールである。可溶化剤がアルコールである場合、可溶化剤は好ましくは、エタノール又はプロパノール、より好ましくはエタノールである。エタノールは、潜在的に２つの役割を有する。というのも、生体適合性キャリアとして、そして抗菌性防腐剤として機能することもできるからである。可溶化剤がシクロデキストリンである場合、可溶化剤は好ましくは、ガンマシクロデキストリン、より好ましくはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＣＤ）である。シクロデキストリンの濃度は、約０．１〜約４０ｍｇ／ｍｌであってよく、好ましくは約５〜約３５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは２０〜３０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約２５ｍｇ／ｍｌである。
【００５６】
第１態様の方法は、工程（ａ）〜工程（ｅ）又は工程（ａ）〜工程（ｆ）を含んでおり、好ましくは自動化される。このような自動化は、好ましくは、自動化合成装置を用いて実施される。このような自動化が用いられる場合、工程（ａ）の［18Ｆ］−フルシクラチドの「精製すべき溶液」は、好ましくは、自動化合成装置からの直接的な粗反応混合液である。自動化シンセサイザが用いられる場合、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＥＯＳ）のＥｎｄでの［18Ｆ］−フルシクラチド溶液の放射能濃度（ＲＡＣ）は、好ましくは１００〜８６０、より好ましくは２００〜７００、最も好ましくは２５０〜６００ＭＢｑ／ｍＬの範囲にある。
【００５７】
用語「自動化シンセサイザ」が意味するところは、単位操作の原理に基づく自動化モジュールであり、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙら［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］によって記載されている。用語「単位操作」は、複雑なプロセスが一連の単純な操作又は反応に減らされることを意味し、これは、様々な材料に適用され得るものである。このような自動化シンセサイザは、本発明の方法にとって、特に放射性医薬組成物が所望される場合に、好ましい。これらは、様々なサプライヤから市販されている［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ，（前述）］（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；ＣＴＩ  Ｉｎｃ；Ｉｏｎ  Ｂｅａｍ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｓ．Ａ．（Ｃｈｅｍｉｎ  ｄｕ  Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ  ３，Ｂ−１３４８  Ｌｏｕｖａｉｎ−Ｌａ−Ｎｅｕｖｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）；Ｒａｙｔｅｓｔ（Ｇｅｒｍａｎｙ）及びＢｉｏｓｃａｎ（ＵＳＡ）が挙げられる）。
【００５８】
市販の自動化シンセサイザはまた、放射性医薬調製の結果として生じる液体放射性廃棄物に適したコンテナも提供する。自動化シンセサイザは、一般的に、放射線シールドが与えられていない。これは、自動化シンセサイザが、適切に構成された放射性作業セル（ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  ｗｏｒｋ  ｃｅｌｌ）中で用いられるように設計されているためである。放射性作業セルは、操作者を潜在的放射線線量から保護する放射線シールド、並びに化学物質及び／又は放射性蒸気を除去するベンチレーションを適切に提供する。
【００５９】
自動化シンセサイザは好ましくは、カセットを備える。用語「カセット」が意味するところは、自動化合成装置（上述）上に取外し可能かつ交換可能に適合するように設計された装置の一部であり、シンセサイザの移動部の機械的移動により、カセットの外側から、すなわち外部から、カセットの操作が制御されるようになっている。適切なカセットは、線状に配列された弁を備えており、各弁は、ポートにリンクする。ポートには試薬又はバイアルが、反転された（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）セプタムシールバイアルの、針による穿刺、又は気密なマリングジョイント（ｍａｒｒｙｉｎｇ  ｊｏｉｎｔ）のいずれかによって、取り付けられ得る。各弁は、雄型−雌型ジョイントを有しており、自動化シンセサイザの対応する移動アームとインターフェースをとる。従って、カセットが、自動化シンセサイザに取り付けられると、アームの外部回転により、弁の開閉が制御される。自動化シンセサイザの付加的な移動部が、シリンジプランジャチップ上にクリップ留めされることで、シリンジバレルが起こされる、又は押し下げられるように設計されている。
【００６０】
カセットは、汎用的であり（一般的に、試薬が取り付けられ得るいくつかの位置がある）、そして試薬のシリンジバイアル又はクロマトグラフィーカートリッジ（例えば、固相抽出又はＳＰＥ）の取付けに適している。カセットは、常に反応容器を備えている。このような反応容器は、好ましくは０．５〜１０ｍＬ、より好ましくは０．５〜５ｍＬ、最も好ましくは０．５〜４ｍＬの容量であり、そしてカセットの３つ以上のポートがカセットに連結されて、試薬又は溶媒が種々のポートからカセット上に移送され得るように構成される。このような移送は、カセットに連結された自動化シンセサイザから制御されるガス（一般的に、窒素ガス）圧力を介して、達成される。好ましくは、カセットは、１５〜４０の弁が線状に配列されており、最も好ましくは２０〜３０の弁であり、特に好ましいのは２５の弁である。カセットの弁は好ましくは互いに同じであり、最も好ましくは３方弁である。カセットは、放射性医薬の製造に適切であるように設計されるので、医薬等級の、そして理想的には放射性分解に対する耐性をも示す材料から、製造される。
【００６１】
カセットは、適切には、使い捨て可能なカセット、又は単回使用カセットであり、全ての試薬、反応容器及び装置を備えており、これらは、所与のバッチの放射性フッ化放射性医薬の調製を実施するのに必須である。カセットが意味するところは、自動化シンセサイザが、種々の異なる放射性医薬を、単にカセットを変えることによって、交差汚染（ｃｒｏｓｓ−ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ）のリスクを最小にして製造することができる柔軟性を有することである。カセットアプローチはまた：簡単なセットアップによる、操作者エラーのリスク軽減；ＧＭＰ（Ｇｏｏｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（医薬品製造品質管理基準））遵守の向上；マルチトレーサ機能；生産ラン間の迅速な変更；カセット及び試薬のプレラン自動化診断チェック；化学試薬対実施されるべき合成の自動化バーコードクロスチェック；試薬トレーサビリティ；単回使用による交差汚染、タンパ（ｔａｍｐｅｒ）及び乱用抵抗性（ａｂｕｓｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）のノーリスク、の利点を有する。
【００６２】
第１態様の方法での使用に好ましい単回使用カセットが：
（ｉ）精製すべき［18Ｆ］−フルシクラチド溶液の収容に適した容器と；
（ｉｉ）１以上のＣ１−Ｃ４逆相ＳＰＥカートリッジと；
（ｉｉｉ）酸性溶液であって、水溶液中の生体適合性陰イオンが、上述のｐＨ１．５〜３．５の酸を含む酸性溶液の供給手段と；
（ｉｖ）上述の第１の水性エタノール溶液の供給手段と；
（ｖ）上述の第２の水性エタノール溶液の供給手段と；
（ｖｉ）固相をコンディショニングするための純粋エタノールの供給手段と
を含む。
【００６３】
希釈工程（ｆ）及び無菌的濾過工程（ｇ）に加えて、第１態様の方法は好ましくは、さらに：
（ｈ）工程（ｆ）の［18Ｆ］−フルシクラチド放射性医薬組成物を、１以上の単位用量シリンジ中に分配する工程
を含む。
【００６４】
この好ましい実施形態の工程（ａ）〜工程（ｈ）は、適切には、工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ），次いで（ｈ）の順に実施される。
【００６５】
第１態様の放射性医薬組成物は、シリンジ中に与えられてもよい。プレフィルドシリンジは、ヒトの単回投与量又は「単位用量」を含有するように設計されるので、好ましくは、臨床用に適した単回使用又は他のシリンジである。放射性医薬シリンジは、好ましくは、シリンジシールドが与えられて、操作者に対する放射線線量が最小にされる。
【００６６】
医薬等級のｐＡＢＡ及びパラ−アミノ安息香酸ナトリウムが市販されており、例えばＳｉｇｍａ又はＭｅｒｃｋから得られ得る。［18Ｆ］−フルシクラチド及び［18Ｆ］−フルシクラチド組成物は、式ＩＩ（「前駆体１」）の前駆体の、［18Ｆ］フッ化物の供給による反応によって、調製され得る：
【００６７】
【化４】
2015518850.tif 000005
前駆体１は、非放射性である。前駆体１は、Ｉｎｄｒｅｖｏｌｌら［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１６，６１９０−６１９３（２００６）］によって、そして本実施例中に記載されるように、調製され得る。
【００６８】
［18Ｆ］フッ化物の供給は：
（ｉ）サイクロトロンから直接送達され、そしてイオン交換カートリッジ及び適切な溶出液を用いて製剤化されてもよいし、
（ｉｉ）ＧＭＰ施設での自動化プラットホーム上で生産されたＧＭＰ［18Ｆ］ＮａＦの形態であってもよい。
【００６９】
放射性医薬用途に適した［18Ｆ］フッ化物の生産は、当該技術において周知であり、Ｈｊｅｌｓｔｕｅｎら［Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．，７８（３），３０７−３１３（２０１１）］及びＪａｃｏｂｓｏｎら［Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１０（１１），１０４８−１０５９（２０１０）］によってレビューされている。［18Ｆ］ＮａＦは、前述のように、「自動化シンセサイザ」を用いて生産され得る。
【００７０】
第２態様において、本発明は、第１態様の好ましい実施形態の自動化シンセサイザ方法を実施するカセットを提供し、カセットは：
（ｉ）精製すべき［18Ｆ］−フルシクラチド溶液の収容に適した容器と；
（ｉｉ）１以上のＣ１−Ｃ４逆相ＳＰＥカートリッジと；
（ｉｉｉ）酸性溶液であって、水溶液中の生体適合性陰イオンが、上述のｐＨ１．５〜３．５の１％水性リン酸である酸を含む酸性溶液の供給手段と；
（ｉｖ）第１態様において規定されるような第１の水性エタノール溶液の供給手段と；
（ｖ）第１態様において規定されるような第２の水性エタノール溶液の供給手段と
を含む。
【００７１】
第２態様における逆相ＳＰＥカートリッジ、酸性溶液、第１の水性エタノール溶液及び第２の水性エタノール溶液の好ましい態様は、第１態様（前述）において記載されるのと同様である。
【００７２】
カセットは好ましくは、放射線保護剤を備え、これは溶液として与えられる。このような溶液用の溶媒は好ましくは、先に述べたように、生体適合性キャリアである。このような溶液は好ましくは、暗所において保存される。
【００７３】
第３態様において、本発明は、第１態様の好ましい実施形態の自動化方法を実施する自動化合成装置の使用を提供する。第３態様における精製の方法及び自動化シンセサイザの好ましい態様は、第１態様（前述）において記載されるのと同様である。
【００７４】
第４態様において、本発明は、第１態様の好ましい実施形態の自動化方法を実施する第２態様のカセットの使用を提供する。第４態様における精製の方法及びカセットの好ましい態様は、それぞれ第１態様及び第２態様（前述）において記載されるのと同様である。
［図の説明］
図１は、本発明に従う［18Ｆ］−フルシクラチドの調製及びＳＰＥ精製を実施するＦＡＳＴｌａｂ（商標）自動化合成装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）と連携させた使用に適したカセット構成を示す。
【００７５】
図２は、本発明での使用に適したＳＰＥカートリッジ［２１０］の構造を表す。カートリッジ［２１０］は、吸収剤［２１２］で満たされる円筒キャビティ［２１６］を規定する長寸管状体［２１４］を備える。体［２１４］の第１端部［２１４ａ］は、キャビティ［２１６］と流体連通する出口アパーチャ［２２０］を規定する横断環状壁［２１８］を備える。環状壁［２１８］はまた、ルアーチップ［２２４］を形成する長寸開放管状壁［２２２］を支持する。体［２１４］の対向する第２端部［２１４ｂ］は、キャビティ［２１６］と流体連通する入口アパーチャ［２３０］を規定するキャップ体［２２８］を有する端部キャップ［２２６］を支持する。キャップ体［２２８］は、第２端部［２１４ｂ］にて管状体［２１４］の外部表面［２３４］と係合する外部環状リム［２３２］、及び第２端部［２１４ｂ］にて管状体［２１４］の内部表面［２３８］と係合する内部環状壁［２３６］を備える。カートリッジ［２１０］はまた、円形ディスク形状の多孔質フィルタエレメント［２４０］及び［２４２］を、キャビティ［２１６］の全域に跨らせて（ｓｐａｎｎｉｎｇ  ａｃｒｏｓｓ）備え、これらの間に吸収剤［２１２］が充填される。実例として、カートリッジ［２１０］は通常、長さが約４９ｍｍ、第２端部［２１４ｂ］の直径が約１５ｍｍ、第１端部［２１４ａ］の直径が約１２．０ｍｍであり、キャビティ［２１６］は、長さが約３５ｍｍである。
【００７６】
本発明は、以下に詳述される非限定的な実施例によって具体的に説明される。実施例１は、本発明の前駆体１の合成を提供する。実施例２は、［18Ｆ］−ＦＢＡの合成を、そして実施例３は、［18Ｆ］−ＦＢＡの精製を提供する。実施例４は、本発明の化合物１の合成を提供する。実施例５は、本発明のＳＰＥ精製法を提供する。
［略語］
従前通りの１文字又は３文字アミノ酸略語を用いる。
【００７７】
Ａｃ：アセチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
Ａｑ：水性
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＢ：４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＯＳ：合成の終わり
ＦＢＡ：４−フルオロベンズアルデヒド
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＡ：４−ヒドロキシベンズアルデヒド
ＨＰＬＣ：高性能液体クロマトグラフィー
ＭＣＸ：混合モード陽イオン交換カートリッジ
Ｎａ−ｐＡＢＡ：パラ−アミノ安息香酸ナトリウム
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ：１−メチル−２−ピロリジノン
ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水
ＰｙＡＯＰ：（７−アザ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＰｙＢＯＰ：（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＲＡＣ：放射能濃度
ＲＣＰ：放射化学的純度
ＲＴ：室温
ＳＰＥ：固相抽出
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＦＰ：テトラフルオロフェニル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＭＡＢ：４−（トリメチルアンモニウム）ベンズアルデヒド
ＴR：保持時間
【００７８】
【表１】
2015518850.tif 000006
【実施例】
【００７９】
実施例１：前駆体１の合成
ペプチド１を、Ｉｎｄｒｅｖｏｌｌら［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１６，６１９０−６１９３（２００６）］によって記載されるような標準的なペプチド合成を用いて合成した。
【００８０】
（ａ）１，１７−ジアジド−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン
乾燥ヘキサエチレングリコール（２５ｇ、８８ｍｍｏｌ）及びメタンスルホニルクロリド（２２．３ｇ、１９５ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１２５ｍＬ）溶液を、アルゴン下で保ち、氷／水バス中で０℃に冷却した。トリエチルアミン（１９．７ｇ、１９５ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（２５ｍＬ）溶液を、４５分にわたって滴加した。１時間後、冷却バスを取り除き、反応液をさらに４時間撹拌した。その後、水（５５ｍＬ）を混合液に、続いて炭酸水素ナトリウム（５．３ｇ、ｐＨ８に至る）及びアジ化ナトリウム（１２．７ｇ、１９５ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＨＦを蒸留によって除去し、水溶液を２４時間還流した（２層が形成された）。混合液を冷却し、エーテル（１００ｍＬ）を加え、水性相を塩化ナトリウムで飽和させた。相を分離させ、水性相をエーテルで抽出した（４×５０ｍＬ）。組み合わせた有機相をブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒の濾過及び蒸発によって、黄色の油２６ｇ（８９％）が与えられた。生成物を、次の工程において、さらに精製することなく用いた。
【００８１】
（ｂ）１７−アジド−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカンアミン
激しく撹拌した１，１７−ジアジド−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン（２５ｇ、７５ｍｍｏｌ）の５％ＨＣｌ（２００ｍＬ）懸濁液に、トリフェニルホスフィン（１９．２ｇ、７３ｍｍｏｌ）のエーテル（１５０ｍＬ）溶液を、３時間にわたって室温で加えた。反応混合液を、さらに２４時間撹拌した。相を分離させ、水性相をジクロロメタン（３×４０ｍＬ）で抽出した。水性相を氷／水バス中で冷却し、ｐＨを固体の水酸化カリウムの添加によって１２に調整した。水性相を濃縮し、生成物をジクロロメタン（１５０ｍＬ）中に取った。有機相を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濃縮し、黄色の油２２ｇ（９５％）が与えられた。生成物を、エレクトロスプレー質量分光測定法（ＥＳＩ−ＭＳ）によって同定した（ＭＨ＋計算値：３０７．１９；実測値３０７．４）。粗油を、次の工程において、さらに精製することなく用いた。
【００８２】
（ｃ）２３−アジド−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５，１８，２１−ヘキサオキサトリコサン酸
１７−アジド−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカンアミン（１５ｇ、５０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液に、ジグリコール無水物（Ａｃｒｏｓ、６．４ｇ、５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を一晩撹拌した。反応液をＥＳＩ−ＭＳ分析によって監視し、より多くの試薬を加えて反応を完了させた。溶液を濃縮すると黄色の残留物が与えられ、これを水（２５０ｍＬ）中に溶解させた。生成物を、水性相からジクロロメタンで一晩連続抽出することによって、単離した。溶媒の乾燥及び蒸発によって、１８ｇ（８５％）の収率が与えられた。生成物を、ＥＳＩ−ＭＳ分析によって特徴付けた（ＭＨ＋計算値：４２３．２０；実測値４２３．４）。生成物を、次の工程において、さらに精製することなく用いた。
【００８３】
（ｄ）２３−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５，１８，２１−ヘキサオキサトリコサン酸
２３−アジド−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５，１８，２１−ヘキサオキサトリコサン酸（９．０ｇ、２１ｍｍｏｌ）を水（５０ｍＬ）中に溶解させ、Ｈ2（ｇ）−Ｐｄ／Ｃ（１０％）を用いて還元した。反応は、ＥＳＩ−ＭＳ分析が所望の生成物への完全な変換を示すまで（ＭＨ＋計算値：３９７．２；実測値３９７．６）、ランさせた。粗生成物を、次の工程において、さらに精製することなく用いた。
【００８４】
（ｅ）（Ｂｏｃ−アミノオキシ）アセチル−ＰＥＧ（６）−ジグリコール酸
ジシクロヘキシルカルボジイミド（５１５ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）のジオキサン（２．５ｍＬ）溶液を、（Ｂｏｃ−アミノオキシ）酢酸（４７７ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２８７ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）のジオキサン（２．５ｍＬ）溶液に滴加した。反応液をＲＴにて１時間撹拌し、濾過した。濾液を、２３−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５，１８，２１−ヘキサオキサトリコサン酸（１．０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（２７８μｌ、２．５０ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）溶液を含有する反応容器へ移送した。混合液を、ＲＴにて３０分間撹拌した。ＥＳＩ−ＭＳ分析によって、所望の生成物への完全な変換が示された（ＭＨ＋計算値：５７０．２８；実測値５７０．６）。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：２１４ｎｍ、勾配：６０分にわたる０〜５０％  Ｂ（Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％  ＴＦＡ、及びＢ＝アセトニトリル／０．１％  ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分）によって精製し、５００ｍｇ（３８％）の純粋生成物が与えられた。生成物を、ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）、５０×２．００ｍｍ、検出：２１４ｎｍ、勾配：１０分にわたる０〜５０％  Ｂ（Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％  ＴＦＡ、及びＢ＝アセトニトリル／０．１％  ＴＦＡ）、流量：０．７５ｍＬ／分、Ｒｔ＝５．５２分）によって分析した。さらなる確認を、ＮＭＲ分析によって実施した。
【００８５】
（ｆ）（Ｂｏｃ−アミノオキシ）アセチル−ＰＥＧ（６）−ジグリコール酸の、ペプチド１への結合
（Ｂｏｃ−アミノオキシ）アセチル−ＰＥＧ（６）−ジグリコール酸（０．１５ｍｍｏｌ、８５ｍｇ）及びＰｙＡＯＰ（０．１３ｍｍｏｌ、６８ｍｇ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中に溶解させた。ＮＭＭ（０．２０ｍｍｏｌ、２０μＬ）を加え、混合液を１０分間撹拌した。ペプチド１（０．１００ｍｍｏｌ、１２６ｍｇ）及びＮＭＭ（０．２０ｍｍｏｌ、２０μＬ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液を加え、反応混合液を２５分間撹拌した。付加的なＮＭＭ（０．２０ｍｍｏｌ、２０μＬ）を加え、混合液をさらに１５分間撹拌した。ＤＭＦを減圧下で蒸発させ、生成物を１０％アセトニトリル−水中に取り、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、勾配：４０分にわたる５〜５０％  Ｂ（Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％  ＴＦＡ、及びＢ＝アセトニトリル／０．１％  ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分）によって精製し、１００ｍｇの半純粋生成物が与えられた。ＴＦＡをＨＣＯＯＨに置き換えた第２精製工程（勾配：０〜３０％  Ｂ（それ以外は先と同じ条件））によって、８９ｍｇ（５０％）が与えられた。生成物を、ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）、５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、勾配：１０分にわたる０〜３０％  Ｂ（Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％  ＨＣＯＯＨ、及びＢ＝アセトニトリル／０．１％  ＨＣＯＯＨ）、流量：０．３ｍＬ／分、Ｒｔ：１０．２１分）によって分析した。さらなる生成物の特徴付けは、ＥＳＩ−ＭＳ（ＭＨ２２＋計算値：９０５．４、実測値：９０６．０）を用いて実施した。
【００８６】
（ｇ）脱保護
脱保護を、５％水含有ＴＦＡの、１０ｍｇペプチドへの添加によって、実施した。
【００８７】
実施例２：［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒド（18Ｆ−ＦＢＡ）の放射性合成
［18Ｆ］−フッ化物を、ＧＥＭＳ  ＰＥＴｔｒａｃｅサイクロトロンを用いて、［18Ｏ］（ｐ，ｎ）［18Ｆ］核反応を介した銀標的（ｓｉｌｖｅｒ  ｔａｒｇｅｔ）によって生産した。１．５〜３．５ｍＬの総標的容量を用いた。放射性フッ化物を、Ｗａｔｅｒｓ  ＱＭＡカートリッジ（カーボネートでプレコンディショニングした）上にトラップし、そしてフッ化物を、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ2.2.2（４ｍｇ、１０．７μＭ）及び炭酸カリウム（０．５６ｍｇ、４．１μＭ）の水（８０μＬ）及びアセトニトリル（３２０μＬ）溶液で溶出した。窒素を用いて、溶液をＱＭＡカートリッジから反応容器へ追い出した。［18Ｆ］−フッ化物を、窒素の安定流下及び減圧下で１２０℃にて９分間乾燥させた。ＤＭＳＯ（１．１ｍＬ）中トリメチルアンモニウムベンズアルデヒドトリフレート［Ｈａｋａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］（３．３ｍｇ、１０．５μＭ）を、乾燥［18Ｆ］−フッ化物に加え、混合物を１０５℃にて７分間加熱し、４−［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドが生産された。
【００８８】
実施例３：［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒド（18Ｆ−ＦＢＡ）の精製
実施例２の粗標識化混合物を、水酸化アンモニウム溶液で希釈し、ＭＣＸ＋ＳＰＥカートリッジ（ＦＡＳＴｌａｂシーケンスの一部として水でプレコンディショニングした）上に負荷した。カートリッジを水で洗浄し、窒素ガスで乾燥させてから、４−［18Ｆ］−フルオロベンズアルデヒドをエタノール（１．８ｍＬ）中に溶出し、反応容器に戻した。２．２ｍＬのエタノールの全容量を溶出に用いたが、最初の部分（０．４ｍＬ）は捨てた。［18Ｆ］−ＦＢＡを含有していなかったためである。［18Ｆ］放射活性の４〜７％（崩壊を補正した）が、カートリッジ上にトラップされたままであった。
【００８９】
実施例４：［18Ｆ］−フルシクラチド（化合物１）の調製
［18Ｆ］−ＦＢＡの、前駆体１（５ｍｇ）との結合を、エタノール（１．８ｍＬ）及び水（１．８ｍＬ）の溶液において、塩酸アニリンの存在下で実施した。反応混合物を、６０℃にて５分間維持した。
【００９０】
実施例５：［18Ｆ］−フルシクラチド（化合物１）のＳＰＥ精製
精製すべき［18Ｆ］−フルシクラチド溶液（実施例４）を、以下のように精製した：
（ａ）コンディショニング
２つの４００ｍｇ  ｔＣ２  ＳＰＥカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）を、（ｉ）エタノール（３ｍＬ）、（ｉｉ）水（１０ｍＬ）、続いて０．５％のＨ3ＰＯ4（水溶液）（４ｍＬ）を用いてコンディショニングした。
【００９１】
（ｂ）ローディング
精製すべき［18Ｆ］−フルシクラチド溶液（実施例４）を、１％のＨ3ＰＯ4（水溶液）（４ｍＬ）で１：１に希釈し、工程（ａ）のコンディショニング済みＳＰＥカートリッジへ、シリンジを介して移送した。未精製［18Ｆ］−フルシクラチドを含有する反応容器を、１％のＨ3ＰＯ4（水溶液）（１ｍＬ）で、続いて水（３ｍＬ）でリンスし、洗浄液もコンディショニング済みＳＰＥカートリッジを通して移送した。
【００９２】
（ｃ）精製
工程（ｂ）の負荷したカートリッジを、２０．１％のＥｔＯＨ／７９．９％の１％  Ｈ3ＰＯ4（水溶液）（２×５．７５ｍＬ）で洗浄した。その後、ＳＰＥカラムを水（２ｍＬ）で洗浄し、窒素ガスでフラッシュした。
【００９３】
（ｄ）溶出
精製した［18Ｆ］−フルシクラチドを、工程（ｃ）のＳＰＥカートリッジから、８０％のＥｔＯＨ／２０％の水（１．５ｍＬ）を用いて溶出した後、窒素ガスでフラッシュした。溶出した［18Ｆ］−フルシクラチドを、医薬製剤用のバイアルへ移送し、分配した。
【００９４】
ＦＡＳＴｌａｂ（商標）自動化合成装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）と連携させた、本発明に従う［18Ｆ］−フルシクラチドの調製及びＳＰＥ精製を実施するための使用に適したカセット構成を、図１に示す。
【図１】
2015518850.tif 000007
【図２】
2015518850.tif 000008
【国際調査報告】
2015518850.tif 000009
2015518850.tif 000010