(57)【要約】  本発明の開示は、一般的にアルファへリックス模倣構造、特に、βカテニンの阻害剤であるアルファへリックス模倣構造に関する。本発明の開示は、また、HIV、HPV、HBV、HSV、並びにマイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌を含むバクテリアなどのウイルス性及び感染性疾病の治療における適用、並びにかかるアルファへリックス模倣βカテニン阻害剤等を含む医薬組成物に関する。【選択図】図１
2015534943.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス性及び感染性疾病の治療のための、下記式（Ｉ）：
【化１】
2015534943.tif 000004
（式中、: 
Ａは−ＣＨＲ７−
（式中、Ｒ７は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである）であり；
Ｇは−ＮＨ−、−ＮＲ６−、−Ｏ−、−ＣＨＲ６−又は−Ｃ（Ｒ６）２−
（式中、Ｒ６は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニルおよび置換されていてもよいアルキニルから独立して選択される）であり；
Ｒ１は、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキルであり；
Ｒ２は−Ｗ２１−Ｗ２２−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、Ｗ２１は−（ＣＯ）−又は−（ＳＯ２）−であり；Ｗ２２は、結合、−Ｏ−、−ＮＨ−、又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；Ｒｂは、結合又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；且つＲ２０は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである）であり；且つ
Ｒ３は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル又は置換されていてもよいアルキニルである）
を有するアルファへリックス模倣βカテニン阻害剤化合物又はその製薬上許容し得る塩。
【請求項２】
（６Ｓ,９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２,９−ジメチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４,７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド,
（６Ｓ,９Ｓ）−２−アリル−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４,７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド,
（６Ｓ,９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４,７−ジオキソヘキサヒドロピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］オキサジアジン−１（６Ｈ）−カルボキサミド, 
（６Ｓ,９Ｓ）−８−（（２−アミノベンゾ［ｄ］チアゾール−４−イル）メチル）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド,
（６Ｓ,９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド,
（６Ｓ,９Ｓ）−２−アリル−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−４,７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド, 
４−（（（６Ｓ,９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルジヒドロゲンホスフェート, 
４−（（（６Ｓ,９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２,９−ジメチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４,７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルジヒドロゲンホスフェート,
ナトリウム４−（（（６Ｓ,９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルホスフェート,
ナトリウム４−（（（６Ｓ,９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソ−８−（ナフタレン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルホスフェート, 
（６Ｓ,９Ｓ）−２−アリル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−４,７−ジオキソ−Ｎ−（（Ｒ）−１−フェニルエチル）−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド, 
（６Ｓ,９Ｓ）−２−アリル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−４,７−ジオキソ−Ｎ−（（Ｓ）−１−フェニルエチル）−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド, 
（６Ｓ,９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシ−２,６−ジメチルベンジル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド, 
（６Ｓ,９Ｓ）−８−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド,
（６Ｓ,９Ｓ）−８−（ベンゾ［ｃ］［１,２,５］チアジアゾール−４−イルメチル）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド, 
（６Ｓ,９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−８−（イソキノリン−５−イルメチル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド,
（６Ｓ,９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−８−（（５−クロロチエノ［３,２−ｂ］ピリジン−３−イル）メチル）−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド,
（６Ｓ,９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソ−８−（キノキサリン−５−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド,および
（６Ｓ,９Ｓ）−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）−Ｎ−（チオフェン−２−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド、
から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
４−（（（６Ｓ,９Ｓ,９ａＳ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルジヒドロゲンホスフェート、および
（６Ｓ,９Ｓ,９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２,９−ジメチル−４,７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,２,４］トリアジン−１−カルボキサミド、
から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１、２又は３に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項５】
有効量の請求項１、２又は３に記載の化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染性疾病の治療方法。
【請求項６】
感染性疾病がヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染症である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
感染性疾病がB型肝炎ウイルス(HBV)感染症である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
感染性疾病が結核症(TB)である、請求項５に記載の方法。 
【請求項９】
感染性疾病が単純ヘルペスウイルス1(HSV-1)感染症である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
感染性疾病が単純ヘルペスウイルス2(HSV-2)感染症である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
感染性疾病がヒトパピローマウイルス(HPV)感染症である、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
子宮頸部形成異常を治療又は予防する、請求項１１に記載の方法.
【請求項１３】
生殖器疣を治療又は予防する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
感染性疾病がシゲラ又はリステリア菌種による感染症である、請求項５に記載の方法。
【請求項１５】
アシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、ホスカビル、ブリブジン、シドフォビル、アデホビル、ラミブジン、ボセプレビル、エンテカビル、イミキモド、ポドフィロックス、ペグインターフェロン、逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、HIVインテグラーゼ鎖移転阻害剤、HIV融合又はHIV侵入阻害剤、及びヒストンデアセチラーゼ複合体(HDAC)阻害剤から選択される、１以上の抗ウイルス性薬剤を投与することを更に含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１６】
１以上の抗ウイルス性薬剤の１つが、ヒドロキサム酸、トリコスタチンA、ボリノスタット、アベキシノスタット、ベリノスタット、LAQ824、パノビノスタット、PCI-34051、環状テトラペプチド、トラポキシンB、デプシペプチド、ロミデプシン、ベンズアミド、エンチノスタット、CI994、モセチノスタット(MGCD0103)、求電子性ケトン、脂肪酸化合物、フェニルブチラート、 バルプロ酸、ニコチンアミド、ジヒドロクマリン、ナフトピラノン、及び2-ヒドロキシナフアルデヒドから選択されるHDAC阻害剤である、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、2012年10月19日に提出された米国仮出願61/716,116、2013年1月3日に提出された米国仮出願61/748,621、2013年5月8日に提出された米国仮出願61/820,995の優先権を主張し、各仮出願は、その全体が本明細書中に組み込まれる。
【０００２】
開示の背景
Wnt/βカテニンシグナルは、ヒト生物学の多くの面におけるその重要な役割の先駆けとして浮上している。このシグナル経路は、胚発生や器官形成、組織及び器官のホメオスタシスの維持に関与する。しかしながら、多くのウイルス性及び感染性疾病状態においてこの経路の異常活性化がはっきりと認められる。
【０００３】
ヒト免疫不全ウイルス(HIV)は、免疫系の進行性破壊が生命に関わる日和見感染症及びガンの進行を許すヒトの疾患である、後天性免疫不全症候群(AIDS)を引き起こす、レンチウイルス(レトロウイルスファミリーメンバー)である。
【０００４】
ヒトパピローマウイルス(HPV)は、ヒトに感染可能なパピローマウイルスファミリーのウイルスである。全てのパピローマウイルスと同様に、HPVは、皮膚又は粘膜のケラチノサイトにおいてのみ増殖感染を確立する。大半の既知の型のHPVは、ほとんどの人々において症状を全く引き起こさないが、ある型のものは、いぼ(疣贅)を引き起こし得、他のものは、少数の症例において頸部、陰門、膣、陰茎、中咽頭及び肛門のガンを引き起こし得る。
【０００５】
ヒトヘルペスウイルス1及び2(HHV-1及び-2)としても知られる単純ヘルペスウイルス1及び2(HSV-1及びHSV-2)は、ヒトに感染するヘルペスウイルスファミリーである、ヘルペスウイルス科（Herpesviridae）の２つのメンバーである。HSV-1(ほとんどのヘルペスを引き起こす)及びHSV-2(ほとんどの生殖器ヘルペスを引き起こす)の両方が、至る所に存在し、伝染性である。感染者がウイルスを産生し、排出するときに、ウイルスは拡散され得る。単純ヘルペスウイルス感染の症状としては、皮膚又は、口、唇もしくは生殖器の粘膜における水ぶくれが挙げられる。
【０００６】
結核症、MTB、又はTB(結核菌（tubercle bacillus）の省略形)は、様々なマイコバクテリア株、ヒト結核菌（Mycobacterium tuberculosis）によって引き起こされる一般的で多くの症例において生命にかかわる感染性疾病である。結核症は、典型的には肺を攻撃するが、身体の他の部位も冒し得る。活性TBの感染者が、咳、くしゃみをし、又は他の方法によって空気を介して唾液を伝達させる場合に、結核症は空気を介して拡散される。
【０００７】
細胞内感染を引き起こす追加的な微生物としては、リステリアモノサイトゲネス (リステリア症及び敗血症を引き起こす)及びシゲラ種(赤痢を引き起こす)が挙げられる。これらのバクテリアは、食中毒、新生児期/小児期の感染及び死亡の大きな原因である。リステリア菌は、マクロファージ等の食細胞などの多様な細胞タイプに感染する、発病率の高い食品媒介病原菌である。L. monocytogenesは、臨床感染者の２０〜３０％を死亡させ、新生児において髄膜炎の主な原因である。シゲラ種、特にS.flexneri、S. sonnei、及びS. dysenteriaeは、消化管の細胞に感染し、下痢や胃けいれん等の深刻な消化管症状を引き起こす。シゲラ感染は、主に発展途上国の子どもにおいて毎年9千万例を超える赤痢と、100,000を超える死亡の原因である。
【０００８】
細胞内感染に対する細胞応答は、外来の不要な細胞内コンポーネントを細胞が封入して破壊する過程である自食作用である。自食作用は、細胞内エンドソーム/オートファゴソームに微生物を封入するとともに開始される。オートファゴソームは、溶菌酵素を含むリソソームと融合してオートリソソーム（autolysosome）を形成する。オートリソソーム内では、酸性で且つ溶解性の環境が微生物を殺す。ヒト結核菌及びHIV等の様々な微生物が、自食作用を下方制御又は阻害して細胞内感染を維持することにより、この過程を回避する(Specter, Topics Antiviral Med. 19:6-10, 2011)。
【０００９】
Wntシグナルは、複数の段階において免疫応答に関与する。Wntシグナルは、T細胞発生の制御に関与し、自食作用も制御する。例えば、βカテニンのレベルの低下は、自食作用を上方制御することが示されている(Nguyen, et al., J. Cell. Mol. Med. 13:3687-3698, 2009)。従って、Wntシグナルは、微生物感染応答においていくつかの潜在的な役割を果たす。
【００１０】
Gattinoniらによる調査により(Nat Med. 15(7): 808-813, 2009)、成熟記憶CD8+ T 細胞の幹細胞性の維持においてWntシグナルが主要な役割を果たすことが明らかになった。この調査結果は、Wnt経路を標的とすることによる、新規のワクチン接種戦略及び養子免疫療法（adoptive immunotherapies）の設計に重要な意味を持つ。
【００１１】
Bulutらによる調査により(PLoS One 2011; 6(11): e27243)、Wntシグナル経路の活性化と、HPV介在子宮頸ガンに対するその寄与との潜在的な関連性が特定された。これらの結果は、カノニカルWnt経路の活性化が、HPV感染上皮細胞の悪性転換に必要な二次的事象となり得ることを示す。このため、カノニカルWnt経路を標的とすることは、HPV感染症のリスクにある人々において疾患の進行を予防するために、また、進行した子宮頸ガンや、他のウイルス性及び感染性疾病を処置するために、臨床的介入（clinical interventions）を発展させる基礎を提供し得る。
【発明の概要】
【００１２】
開示の簡単な概要
本発明の開示は、βカテニンシグナル阻害剤を単独で、又は更なる抗ウイルス性又は抗バクテリア性の処置との併用において投与することにより、HIV、HPV、HBV、HSV、並びにマイコバクテリウム、シゲラ及びリステリア菌を含むバクテリアによる感染症などの、感染性疾病を治療する方法を提示する。本発明の開示はまた、アルファヘリックス模倣βカテニン阻害剤化合物、及びβカテニン阻害剤を含む組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】化合物C濃度を上昇させた状態において用量応答(減少させた量のp24抗原)を示すマクロファージにおけるHIV複製(HIVp24抗原のng/ml)。
【図２】図2A-2B：1及び2μΜの化合物Aは、自食作用を誘導する。(A-B)、化合物A又はラパマイシン(自食作用のポジティブコントロール)の存在下又は非存在下における細胞の処置は、自食作用の指標であるネガティブコントロール(化合物Aなし、ラパマイシンなし)と比較して、LC3B IIの量を増加させ、LC3B Iの量を減少させたことを示す。ラパマイシンを含む2μΜの化合物Aにおいてネガティブコントロールと比較して、LC3B II及びLC3B Iの両方のレベルが大幅に低下した。(B)、Sequestome 1/p62(SQSTM1)レベルは、ラパマイシン及び化合物A処置細胞においてネガティブコントロールと比較して低下し、自食作用が増大したことを示す。
【図３】図3A-3B: (A)、円グラフは、βカテニン阻害剤化合物Cの存在下又は非存在下において仕分けされたTscm(左欄)又はTcm(右欄)の10日間のインキュベーション後の指定されたT細胞集団の割合を示す。１の代表的な調査テーマの結果が示される。(B)、化合物Cとともに、又は化合物Cなしで10日間インキュベーションした後に元のCCR7+ CD62L+表現型を維持する、仕分けされたCD4 Tscm又はCD4 Tcmの割合。n=3の３つの調査テーマの累積的なデータが示される。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
開示の詳細な説明
近頃、生理活性タンパク質又はペプチドにおいて発見された二次構造の折れ曲がり（reverse-turns）を模倣する非ペプチド化合物が開発されている。例えば、米国特許番号5,440,013および公開PCT出願番号WO94/03494、WO01/00210A1、およびWO01/16135A2は、折れ曲がりの三次元的構造を模倣する、立体配座的に制約された非ペプチド化合物をそれぞれ開示する。また、米国特許番号5,929,237およびその一部継続出願米国特許番号6,013,458は、生理活性ペプチドおよびタンパク質の二次構造の折れ曲がり部位を模倣する、立体配座的に制約された化合物を開示する。WO2007/056513およびWO2007/056593では、折れ曲がり模倣薬に関し、生理活性ペプチドおよびタンパク質の二次構造のアルファへリックス部位を模倣する、立体配座的に制約された化合物が開示されている。
【００１５】
本発明の開示は、HIV、HPV、HBV、HSV、並びに、マイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌を含むバクテリアによる感染症などのウイルス性及び感染性疾病のための、新規化合物、医薬組成物、及び治療方法を提供する。本発明者らは、βカテニンシグナルを抑制することが、これらの疾病の治療に対する効果的なアプローチであることを見つけ出した。
【００１６】
本発明のアルファへリックス模倣βカテニン阻害剤の構造および化合物が、WO2010/044485、WO2010/128685、WO2009/148192、およびUS2011/0092459において開示され、それぞれその全体が参照されることにより本明細書中に組み込まれる。これらの化合物は、現在、HIV、HPV、HBV、HSV、並びに、マイコバクテリウム、シゲラ及びリステリア菌を含むバクテリアなどのウイルス性及び感染性疾病の治療において有用であることが分かっている。
【００１７】
本発明のアルファへリックス模倣βカテニン阻害剤の好ましい構造は以下の式（Ｉ）：
【００１８】
【化１】
2015534943.tif 000003
【００１９】
（式中、Ａは−ＣＨＲ７−
（式中、 
Ｒ７は、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキルである）であり；
Ｇは、−ＮＨ−、−ＮＲ６−、又は−Ｏ−
（式中、
Ｒ６は、低級アルキル又は低級アルケニルである）であり；
Ｒ１は、−Ｒａ−Ｒ１０；
（式中、
Ｒａは、置換されていてもよい低級アルキレンであり、且つ 
Ｒ１０は、置換されていてもよい二環式縮合アリール又は置換されていてもよい二環式縮合ヘテロアリールであり；
Ｒ２は、−（ＣＯ）−ＮＨ−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、 
Ｒｂは、結合又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；且つ
Ｒ２０は、置換されていてもよいアリール又は置換されていてもよいヘテロアリールである）であり；
Ｒ３は、Ｃ１−４アルキルである）を有する。
これらの化合物は、HIV、HPV、HBV、HSV、及び結核症などのウイルス性及び感染性疾病の予防及び/又は治療に特に有用である。
【００２０】
本発明のアルファへリックス模倣βカテニン阻害剤のさらに好ましい構造は、上記式（Ｉ）において以下の置換基：
Ａは−ＣＨＲ７−、
（式中、
Ｒ７は、ヒドロキシル又はＣ１−４アルキルで置換されていてもよいアリ
ールアルキルである）であり；
Ｇは、−ＮＨ−、−ＮＲ６−、又は−Ｏ−
（式中、
Ｒ６はＣ１−４アルキル又はＣ１−４アルケニルである；）であり、
Ｒ１は、−Ｒａ−Ｒ１０；
（式中、
Ｒａは、Ｃ１−４アルキレンであり、且つ
Ｒ１０は、ハロゲン又はアミノ基で置換されていてもよい、二環式縮合アリ
ール又は二環式縮合ヘテロアリールである）であり；
Ｒ２は、−（ＣＯ）−ＮＨ−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、
Ｒｂは、結合又はＣ１−４アルキレンであり；且つ
Ｒ２０は、アリール又はヘテロアリールである）であり；且つ
Ｒ３は、Ｃ１−４アルキルである）
を有する。
これらの化合物は、HIV、HPV、HBV、HSV、並びにマイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌を含むバクテリアなどのウイルス性及び感染性疾病の予防及び/又は治療に特に有用である。 
【００２１】
本発明の最も好ましいアルファへリックス模倣βカテニン阻害剤は次のとおりである: 
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−２−アリル−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］オキサジアジン−１（６Ｈ）−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−８−（（２−アミノベンゾ［ｄ］チアゾール−４−イル）メチル）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−２−アリル−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルジヒドロゲンホスフェート，
４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルジヒドロゲンホスフェート，
ナトリウム４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルホスフェート， 
ナトリウム４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（ナフタレン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルホスフェート，
（６Ｓ，９Ｓ）−２−アリル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−４，７−ジオキソ−Ｎ−（（Ｒ）−１−フェニルエチル）−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−２−アリル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−４，７−ジオキソ−Ｎ−（（Ｓ）−１−フェニルエチル）−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド， 
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシ−２，６−ジメチルベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−８−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−８−（ベンゾ［ｃ］［１，２，５］チアジアゾール−４−イルメチル）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−８−（イソキノリン−５−イルメチル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−８−（（５−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−３−イル）メチル）−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノキサリン−５−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド，および
（６Ｓ，９Ｓ）−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）−Ｎ−（チオフェン−２−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド。
これらの化合物は、HIV、HPV、HBV、HSV、並びにマイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌を含むバクテリアなどのウイルス性及び感染性疾病の予防及び/又は治療に特に有用である。
【００２２】
最も好ましい実施態様における化合物は、： 
４−（（（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニルジヒドロゲンホスフェート（化合物Ａ）、又は
（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド（化合物Ｃ）である。
これらの化合物は、HIV、HPV、HBV、HSV、並びにマイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌を含むバクテリアなどのウイルス性及び感染性疾病の予防及び/又は治療に特に有用である。 
【００２３】
拘束されることを望むものではないが、上記疾患の治療におけるこれらの化合物の有効性は、部分的には、これらの化合物が環状AMP応答エレメント結合タンパク質(CBP)を抑制することにより、TCF4/βカテニン転写経路を阻害し、ひいてはwnt経路シグナルを変更することができることに基づいており、このことが結果を改善することが分かっている。 
【００２４】
「βカテニン阻害剤」は、βカテニン活性を減少又は抑制し得る物質である。βカテニン活性としては、核への転位、ＴＣＦ（Ｔ細胞因子）転写因子の結合、およびＴＣＦ転写因子誘導性のＴＣＦ標的遺伝子の転写の共活性化が挙げられる。「βカテニン阻害剤」はまた、CBP及びβカテニンの相互作用を妨げ得る。このようにして、βカテニン阻害剤は、1以上の下流シグナル事象を減少させることを含めて、CBP/βカテニンシグナル及びCBP/βカテニンシグナル経路活性を阻害又は減少させる。
【００２５】
HIV、HPV、HBV、HSV、並びにマイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌を含むバクテリアなどのウイルス性及び感染性疾病の治療のためのアルファヘリックス模倣βカテニン阻害剤化合物が、本明細書中に開示されている。
【００２６】
感染性疾病は、ウイルス又はバクテリア等の微生物の侵入によって引き起こされる疾病である。本発明の化合物及び方法によって治療可能な感染性疾病の例は以下のとおりである。
【００２７】
ヒト免疫不全ウイルス(HIV)は、免疫系の進行性破壊を引き起こし、且つ、免疫力が低下した対象において日和見感染症及びガンの成長を起こす疾患である後天性免疫不全症候群(AIDS)を引き起こす。
【００２８】
B型肝炎は、B型肝炎ウイルス(HBV)によって引き起こされる肝臓の感染性炎症疾患である。感染症はしばしば無症状であるが、慢性感染症は、肝臓の瘢痕を引き起こし、最終的には肝硬変を引き起こし得、このことは、通常、長い年月の後に明らかになる。いくつかの症例では、肝硬変の患者は、肝臓不全、肝臓ガン又は生命に関わる食道及び胃の静脈瘤（varice）の発症に進行するだろう。
【００２９】
ヒトパピローマウイルス(HPV)は、皮膚又は粘膜のケラチノサイトに感染するパピローマウイルスである。あるタイプは、生殖器疣(疣贅)を引き起こし得、他のタイプは、頸部、陰門、膣、陰茎、中咽頭及び肛門のガンを引き起こし得る。HPV感染症は、未治療の場合に子宮頸ガンに進行し得る前ガン症状である、子宮頸部形成異常の多くみられる原因である。
【００３０】
ヒトヘルペスウイルス1及び2 (HHV-1及び-2)としても知られる単純ヘルペスウイルス1及び2(HSV-1及びHSV-2)は、ヘルペスウイルスファミリーの２つのメンバーである。HSV-1(ほとんどのヘルペスを引き起こす)及びHSV-2 (ほとんどの陰部ヘルペスを引き起こす)の両方が至る所に存在し、伝染性である。感染者がウイルスを産生し、排出したときにそれらは拡散され得る。単純ヘルペスウイルス感染症の症状としては、皮膚並びに、口、唇又は生殖器の粘膜の水ぶくれが挙げられる。
【００３１】
結核症、MTB、又はTB(結核菌の省略形)は、多様なマイコバクテリウム株、ヒト結核菌によって引き起こされる一般的で多くの場合、生命に関わる感染性疾病である。結核症は、典型的には肺を攻撃するが、身体の他の部位も冒し得る。活性TB感染者が、せき、くしゃみをするとき、又は他の方法によって空気を介して唾液を伝達させるときに、空気を介して拡散される。
【００３２】
リステリア菌は、マクロファージなどの食細胞を含む多数の細胞タイプに感染する、発病率の高い食品媒介病原菌である。L. monocytogenesは、臨床感染者の20〜30%を死亡させ、新生児の髄膜炎の主な原因である。シゲラ種、特に、S. flexneri、 S. sonnei、及びS. dysenteriaeは、消化管細胞に感染し、下痢及び胃けいれん等の深刻な消化管症状を引き起こす。シゲラ感染症は、特に発展途上国の子どもにおいて毎年9千万例以上の赤痢及び100,000例以上の死亡の原因である。
【００３３】
本発明のβカテニン阻害剤によって治療され得る更なる感染性疾病としては、Brucella abortus、Chlamydia trachomatis、Legionella pneumophila、Porphyromonas gingivalis、Salmonella species、Staphylococcus aureus、Streptococcus pyogenes、コクサッキーウイルス、サイトメガロウイルス、デングウイルス、インフルエンザAウイルス、ポリオウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、及び水痘帯状ヘルペスウイルスによって引き起こされる感染症が挙げられる。
【００３４】
本明細書中に用いられるように、「治療」とは、治療される個人又は細胞の疾病の経過を変化させるための試みにおける臨床的介入（clinical intervention）をいい、臨床的な病状の経過の間に行われ得る。治療の治療的効果としては、疾病の再発の抑制、症状の緩和、直接的又は間接的な疾病の病理学的帰結（pathological consequences）を軽減すること、疾病進行の速度を減少させること、病態の改善（amelioration）もしくは緩和（palliation）、および寛解（remission）、又は予後を改善することが挙げられるがこれに限定されない。
【００３５】
本明細書中に使用されているように、「治療有効量」および「有効量」という用語は、HIV、HPV、HBV、HSV、並びに、マイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌を含むバクテリアなどの、ウイルス性及び感染性疾病の進行もしくは発症、又は１以上のその症状を抑制するという結果をもたらすために、別の治療の効果を増強もしくは改善するために、および／またはかかる疾病の１以上の症状を改善するために十分な本発明の組成物の量に言及すべく、区別せずに使用される。
【００３６】
治療の有効量が、疾病の進行を緩和し、改善し、安定化し、食い止め、もしくは遅らせ、又は異なる方法で疾病の病理学的帰結を軽減させるために、あるいは疾病の症状を軽減させるために十分な１回分以上の用量において患者へ投与され得る。改善又は軽減は、恒久的である必要はなく、少なくとも１時間、少なくとも１日、又は少なくとも１週間以上の範囲の期間にわたるものであってもよい。有効量は、概して医者によって個別的に決定され、当業者の技能の範囲内である。有効量を得るための適切な用量を決定するときには、いくつかの要因が、通常は考慮される。これらの要因としては、患者の年齢、性別および体重、治療すべき疾患、疾患の重症度、並びに投与ルート、剤形、処方計画および所望の結果が挙げられる。
【００３７】
本明細書中に使用されるように、「対象」及び「患者」という用語は、区別することなく用いられ、動物、 好ましくは、非霊長類（例えば、牛、豚、馬、猫、犬、ラット等）および霊長類（例えば、サルおよびヒト）等の哺乳動物、最も好ましくはヒトのことをいう。
【００３８】
本明細書中に記載されたアルファヘリックス模倣βカテニン阻害剤は、疾病を予防又は治療するのに有用である。特に該開示は、ウイルス感染症の危険にさらされる（又は感染しやすい）対象を処置する、予防及び治療方法の両方を提供する。従って、本方法は、有効量のアルファヘリックス模倣βカテニン阻害剤を必要とする対象にそれを投与することによる、HIV、HPV、HBV、HSV、並びにマイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌を含むバクテリアなどのウイルス性及び感染性疾病の予防及び/又は治療を提供する。例えば、対象に、1以上のウイルス感染症の症状を改善するための取り組みにおいてアルファヘリックス模倣βカテニン阻害剤を投与し得る。
【００３９】
Wnt/ベータカテニンの阻害は、ウイルスの宿主により適さないように、細胞を変更する可能性がある。このため、本発明のβカテニン阻害剤は、変更された宿主細胞の調整においてより有効となる抗ウイルス化合物との併用において投与され得る。 
【００４０】
従って、本発明は、該化合物が併用療法において投与される方法を包含する。すなわち、上記化合物はウイルス又はバクテリア感染症の治療において有用な他の薬剤と併用して、ただし他の薬剤とは別に使用され得る。これらの併用法において化合物は、一般的に、他の薬剤と組み合わせて、体重1kg当たり1-100mgの1日投与量で日々投与されるだろう。他の薬剤は、一般的に治療上使用される量が投与されるだろう。しかしながら、具体的な投与計画は、有効な医学的判断を使用する医師によって決定されるだろう。
【００４１】
明細書中に開示された阻害化合物を用いる抗ウイルス性併用療法に関わる、組成物及び方法に適した化合物の例としては、以下のものが挙げられるが、これに限定されない。すなわち、アシクロビル及びそのプロドラッグであるバラシクロビル等の抗ウイルス薬剤;ガンシクロビル及びそのプロドラッグであるバルガンシクロビル;ホスカビル;ブリブジン;シドフォビル;アデホビル;ラミブジン;ボセプレビル;エンテカビル;イミキモド、ポドフィロックス、又は凍結外科手術等の生殖器疣局所治療法（genital wart topical treatments）;ペグインターフェロン;逆転写酵素阻害剤;プロテアーゼ阻害剤;HIVインテグラーゼ鎖移転阻害剤;HIV融合及び侵入阻害剤;及びヒストン脱アセチル化複合体(HDAC)阻害剤である。HDAC阻害剤としては、トリコスタチンA、ボリノスタット(SAHA)、アベキシノスタット（abexinostat, PCI-24781)、ベリノスタット(PXD101)、LAQ824、及びパノビノスタット(LBH589)等のヒドロキサム酸(又はヒドロキサメート);PCI-34051;トラポキシンB等の環状テトラペプチド;ロミデプシン等のデプシペプチド;エンチノスタット(MS-275)、CI994、及びモセチノスタット(MGCD0103)等のベンズアミド;求電子性ケトン;フェニルブチラート（phenylbutyrate）及びバルプロ酸等の脂肪酸化合物;ニコチンアミド、ジヒドロクマリン、ナフトピラノン、及び2-ヒドロキシナフアルデヒド（hydroxynaphaldehyde）等のNAD誘導体が挙げられるが、これに限定されない。
【００４２】
マイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌による感染症等のバクテリア感染症のための明細書中に開示された阻害化合物との併用療法としては、以下のものが挙げられるが、これに限定されない。すなわち、イソニアジド、リファンピン、リファペンチン、エタンブトール、及びピラジンアミドである。
【００４３】
HIV、HPV、HBV、HSV、並びにマイコバクテリウム、シゲラ、及びリステリア菌を含むバクテリアなどの感染性疾病の治療とは、かかる感染性疾病を患う対象を治療するための本明細書中に記載された化合物又は併用の投与をいう。感染性疾病の治療の一の結果は、疾病の症状を軽減させることである。感染性疾病の治療の別の結果は、免疫細胞の炎症及び浸潤を軽減することである。感染性疾病の治療の更に別の結果は、宿主細胞又は組織への微生物の浸潤を軽減させることである。感染性疾病の治療の更に別の結果は、感染症を引き起こす微生物の拡散を減少させることである。
【００４４】
本明細書中に記載されたアルファへリックス模倣βカテニン阻害剤は、本明細書中に記載された障害（disorder）を治療又は予防することを目的とした、単独又は併用における対象への投与のための医薬組成物に組み込まれ得る。かかる組成物は、通常、活性薬剤および製薬上許容し得る担体を含む。本明細書中に使用されるように、「製薬上許容し得る担体」という用語は、医薬の投与に適用可能な、生理食塩水、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等を含む。また、追加の活性化合物も上記組成物に組み込まれ得る。
【００４５】
本明細書中に記載された化合物の有効量を哺乳動物、特にヒトに提供するために、如何なる適切な投与ルートも用いられ得る。例えば、経口、直腸、局所、非経口、眼、肺領域、鼻等が用いられ得る。剤形は、錠剤、トローチ、分散剤（dispersions）、懸濁剤、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾル等が挙げられる。
【００４６】
使用される活性成分の有効量は、使用される特定の化合物、投与方法、治療される疾患および治療される疾患の重症度に応じて変化し得る。上記用量は、その技術分野の当業者によって容易に確認され得る。
【００４７】
HIV、HPV、HBV、HSV、及び結核症などの感染性疾病を治療又は抑制するときには、本明細書中に記載された化合物が動物体重１キログラム当たり約０．０１ミリグラム〜約１００ミリグラムの１日投与量で投与された場合、好ましくは、１日単回用量として、又は１日に２〜６回に分割した用量において、又は徐放性製剤において与えられた場合に、おおむね満足な結果を得る。大部分の大型哺乳動物には、毎日の合計投薬量は約１．０ミリグラム〜約１０００ミリグラムである。７０kgの成人の場合、毎日の合計投薬量は、概ね約１ミリグラム〜約５００ミリグラムだろう。特に強力な化合物では、成人のための用量が０．１ｍｇにまで減少し得る。いくつかの場合には、毎日の投薬量が１グラムにまで多くなり得る。投薬計画は、最適な治療効果を提供すべく、この範囲内又はこの範囲外においても調整され得る。
【００４８】
経口投与は、通常、錠剤又はカプセルを用いてなされるだろう。錠剤およびカプセルにおける用量の例は、０．１ｍｇ、０．２５ ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、および７５０ｍｇである。 他の経口剤形も、同一又は同様の用量を有し得る。
【００４９】
また、本明細書中に記載されているのは、本明細書中に記載された化合物および製薬上許容し得る担体を含む医薬組成物である。本明細書中に記載された医薬組成物は、本明細書中に記載された化合物又は製薬上許容され得る塩を活性成分として、製薬上許容し得る担体、および所望により他の治療成分とともに含む。また、プロドラッグが投与される場合には、医薬組成物は、プロドラッグ、又はその製薬上許容し得る塩を含み得る。
【００５０】
如何なる既定の場合においても最も適切なルートは、治療される疾患の特性および重症度、並びに活性成分の種類によって決まるが、組成物は、経口投与、直腸投与、局所投与、非経口投与（皮下用、筋肉内用、および静脈用を含む）、眼投与（眼科用）、肺領域投与（点鼻もしくはバッカル吸入（buccal inhalation））、又は点鼻投与に適し得る。それらは便宜上、単位剤形において提示され、薬学分野において周知の方法によって製造され得る。
【００５１】
実用的な用途において本明細書中に記載された化合物は、従来の医薬品配合技術に従って、密な混合物（intimate admixture）中の活性成分として製薬上の担体と混合され得る。担体は、例えば、経口又は非経口（静脈内を含む）等の投与のために望ましい製剤の形態に応じて、多岐にわたる形態をとり得る。経口用剤形としての組成物の調製では、如何なる通常の製薬上の溶剤（pharmaceutical media）も、使用し得、例えば、懸濁剤、エリキシル剤および溶液などの経口液体製剤の場合には、例えば、水、グリコール、油、アルコール類、香味料、保存料、着色剤等が使用し得、例えば、粉末、硬カプセルおよびソフトカプセル、並びに錠剤等の経口固形製剤の場合には、でんぷん、砂糖、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤等の担体が使用し得、液体製剤よりも、経口固形製剤が好ましい。
【００５２】
投与の容易さのため、固形の医薬担体が使用される場合には、錠剤およびカプセルが最も都合のよい経口の用量単位剤形に相当する。必要に応じて、錠剤は、標準的な水性（aqueous）又は非水性（nonaqueous）の技術でコーティングされ得る。かかる組成物および製剤は、少なくとも０．１パーセントの活性化合物を含む必要がある。これらの組成物中の活性化合物の割合は、言うまでもなく、変化し得、便宜上その単位の重量の約２パーセント〜約６０パーセントであり得る。かかる治療に有用な組成物中の活性化合物の量は、有効量を得るであろう量である。また、活性化合物は、例えば、液滴又は噴霧剤として鼻腔内に投与され得る。
【００５３】
錠剤、丸薬（pills）、カプセル等は、トラガントガム、アカシア、コーンスターチ、又はゼラチン等の結合剤、第二リン酸カルシウム等のビヒクル、コーンスターチ、馬鈴薯デンプン、アルギン酸等の崩壊剤（disintegrating agent）、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、スクロース、ラクトース又はサッカリン等の甘味剤を含み得る。用量単位剤形がカプセル剤の場合、上記類型の原料に加えて、脂肪油等の液体担体も含み得る。
【００５４】
コーティングとして、もしくは用量単位の物理的形状を修飾するべく、種々の他の原料が含まれ得る。例えば、錠剤は、シェラック、砂糖もしくはその両方でコーティングされ得る。シロップ剤もしくはエリキシル剤は、活性成分に加えて、甘味剤としてのスクロース、保存料としてのメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素、サクランボ又はオレンジフレーバー等の香料を含み得る。
【００５５】
また、本明細書中に記載された化合物は、非経口的にも投与され得る。これらの活性化合物の溶液又は懸濁剤は、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリソルベート８０、中鎖および長鎖脂肪酸のモノおよびジグリセリド等の界面活性剤または界面活性剤の混合物と適切に混合された水中で調製され得る。また、分散剤は、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびその油中混合物中で調製され得る。通常の貯蔵および使用条件下においてこれらの製剤は、微生物の増殖を妨げるための防腐剤を含む。
【００５６】
注射用途に適した医薬品形態としては、無菌の水溶液又は分散剤、および無菌の注射可能な溶液もしくは分散剤を即席で調製するための無菌の粉末が挙げられる。全てのケースにおいて、その形態は、無菌であり、容易に注射が可能である程度に流動性がある必要がある。製造および貯蔵条件において安定であり、細菌および真菌等の微生物の混入作用に対して保護される必要がある。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、それらの適切な混合物、および植物油を含有する溶剤又は分散媒であり得る。
【実施例】
【００５７】
本調査の実施例のための方法は、以下のとおりである。
【００５８】
細胞のソーティング及びフローサイトメトリー
標準のプロトコルに従って、CD4、CD3、CD45RA、CCR7、CD62L、CD122、CD95を標的とするモノクローナル抗体を用いてPBMCを染色した。20分後、毎平方インチ当たり70ポンドにおいてFACS Ariaセルソーター(BD Biosciences)を用いて、特別に設計されたバイオセーフティーキャビネット(Baker Hood)に、CCR7+ CD45RA+ナイーブCD4 T細胞、CCR7+ CD45RA-中枢記憶CD4 T細胞(CD4 Tcm)、CCR7- CD45RA- CD4 T細胞、CCR7- CD45RA+最終分化CD4 T細胞(CD4 Ttd)及びCCR7+ CD45RA+ CD62L+ CD95+ CD122+ T 記憶幹細胞CD4 T細胞(CD4 Tscm)を生きた状態で仕分けした。表現型の特定のため、CCR5又はCXCR4抗体、又はAnnexin Vを用いて細胞を更に染色し、LSRIIフローサイトメーター(BD Biosciences)上において細胞を採取した。データは、FlowJoソフトウェア(Treestar)を用いて分析した。
【００５９】
細胞結合HIV-1 DNAの評価
単離されたCD4 T細胞を先に記載されたように消化し(Nat Med 15、 893-900 (2009))、細胞溶解物を抽出した。本発明者らは、先に記載したプライマー及びプローブを用いて全HIV-1 DNAを増幅した (Methods 47, 254-260 (2009))。標準曲線として、本発明者らは、慢性感染293T細胞(Pennsylvania大学のBushman博士により快く提供された)の連続希釈物を増幅した。プロウイルスのHIV-1 DNAのコピー数は、先に同じ基準で定量されたCCR5遺伝子コピー数と比較して算出した。
【００６０】
細胞結合未スプライシングHIV-1 RNAの解析
仕分けされたCD4 T細胞における細胞結合未スプライシング（unspliced）HIV-1 RNAを、先に記載されたプロトコル(J Infect Dis 206, 1443-1452 (2012))を用いて半入れ子（seminested）リアルタイムPCRによって定量した。結果は、全RNAの1マイクログラム当たりのHIV-1 RNAコピー数として算出した。アッセイ間の変動性（inter-assay variability）を避けるべく、全患者のサンプルを一斉に処理した。 
【００６１】
インビトロ感染アッセイ
事前にインビトロ活性化が行われていないHIV-1ネガティブドナーからの選択されていないPBMCを、10% FCS及び50 U/mlのrhIL-2を添加されたRPMI培地において培養した。GFPをコードするVSV-G偽型ウイルス(MOI=0.01)又はGFPをコードするR5熱帯ウイルス株(Ba-L, MOI=0.07,New York大学のLittman博士によって快く提供された)に合計lOxlO6PBMCを感染させた。その後、PBSで細胞を2回洗浄し、96の丸底ウェルプレートにおいて106細胞/mlで5日間、培養した。5日目に、個々のCD4 T細胞集団を特定するために表面抗体を用いて細胞を染色し、洗浄し、LSRIIフローサイトメトリー器具において解析した。
【００６２】
HIV-1複製産物の解析
先に記載されたように、細胞溶解液からプライマー MH531及びMH532、プローブLRT-Pを用いてHIV-1後期逆転写産物を増幅した。1回目のPCRのためのAlu-l/Alu-2 プライマー及び HIV-1 LTRプライマーL-M667と、2回目の定量PCRのためのLTRプライマーAA55M、 Lambda T プライマー、及びMH603プローブとによる入れ子（nested）PCRを用いて一体化されたHIV-1 DNAを検出した。確立されたプロトコルを用いてHIV-1 2-LTR DNAを増幅した。入力細胞数を定量するために、ハウスキーピング遺伝子CCR5の増幅を用いた。HIV-1感染細胞株293T(Pennsylvania大学、Philadelphia、PA、USAのF. Bushmanにより提供された)の細胞溶解物からのDNAの連続的希釈物を参考のために用いた。
【００６３】
ウイルス派生物アッセイ
先に記載されたものにいくつかの修正を加えてウイルス派生物アッセイを行った(Methods Mol Biol 304, 3-15 (2005))。仕分けされたCD4+ T 細胞集団を、丸底96ウェルプレートに10,000細胞/ウェル(Tscm)又は20,000細胞/ウェル(Tcm及びTern)で播種した。その次に、PHA(2mg/ml)、rh IL-2(100ユニット/ml)及び、HIV陰性健常ドナーからの放射線照射された同種異系のPBMCを用いて細胞を刺激した。培養3日目及び7日目及び14日目に再度、HIV陰性ドナーからのCD8-枯渇、PHA刺激PBMCを各ウェルに加えた。7日ごとに培養物の33%の細胞懸濁液を除去し、(100U/ml)培地を含む新鮮なrh IL-2を補充した。14〜21日後、各ウェルからの細胞上清を採取し、精度の高い正確な感染の測定を可能にするTZM-bl細胞、すなわち、HIV-1 LTR制御下のホタルルシフェラーゼ用の一体化されたレポーター遺伝子を含む、許容状態のHeLa細胞クローンとともに上清をインキュベーションすることにより、感染性HIV-1を含むウェル数を評価した。発光によってルシフェラーゼ活性を定量し、このルシフェラーゼ活性は、初期の接種材料に存在する感染性ウイルス粒子数に直接的に比例する。
【００６４】
ウイルスシークエンシング
V3部位を包含する HIV-1 エンベロープ（envelope）シークエンシングのために、仕分けされたT細胞集団及び血漿（plasma）からの細胞溶解液を用いた。血漿サンプルのために、グアニジン酸イソチオシアネート（acid guanidinium isothiocyanate）によるプロテナーゼK消化及び RNA単離の前に、170.000gで30分間、各時点の6mLの血漿の中央部（median）を超遠心機にかけた。外側プライマーenvA/LA17(PLoS Pathog 7, e1001303 (2011))を用いて１ステップRT-PCR反応(Superscript III, Invitrogen)を3重に行った。内側プライマーLA12及びLA13を用いた入れ子PCRによって１の単位複製配列を生成するべく、プールPCR産物をテンプレートとして用いた。増幅産物をTOPOクローニングベクターに挿入し、コンピテントバクテリアを形質転換するために用いた。一晩培養することにより、個々のバクテリアコロニーを増幅し、抽出DNAを結合し、事前にPCRに基づく増幅を行うことなく、ABI 3100 PRISM自動シークエンサーにおいてT7又はT3プライマーにより、直接的にシークエンシングした。アライメント配列進化を説明するための最も良い系統発生モデルを推測するために、jModeltest vO.1.1を用いた。
【００６５】
インビトロ培養アッセイ
選択されたCD4 T細胞集団をセルソーティングにより単離し、2 μM CFSEを用いて7分間37℃において細胞標識し、化合物C、すなわち、(6S,9S,9aS)-N-ベンジル-6-(4-ヒドロキシベンジル)-2,9-ジメチル-4,7-ジオキソ-8-(キノリン-8-イルメチル)オクタヒドロ-1H-ピラジノ[2,1-c][1,2,4]トリアジン-1-カルボキサミド(Prism Biolabs)の存在下又は非存在下においてrhIL-15(25 ng/ml; Peprotech)とともに10 dでインキュベートした。その後、細胞を採取し、フローサイトメトリーにより表現型特定を行った。
【００６６】
統計
平均及びSDとして、又は箱ひげ図(平均四分位範囲、並びに最小限及び最大限の値を示す)を用いてデータを集約した。相関関係を分析するために、ピアソンの相関係数を算出した。両側ステューデントt検定（2-tailed Student's t test）、 Mann- Whitney U検定、または対Wilcoxonの順位和により、統計上の有意性について公称（nominal）データ間の違いをテストした。
【００６７】
実施例1; 化合物Cは、用量依存性様式においてHIVを抑制する
これらの実験のために、HIV血清反応陰性ドナーから末梢血単核細胞(PBMC)を単離し、先に記載された方法を用いて、7〜10日間、マクロファージに分化させた(J Biol Chem 286: 18890-18902 (2011); PLoS Pathogens 8(5):el002689 pp 1-13 (2012); PLoS Pathogens 8(11):e1003017 (2012))。βカテニン阻害剤の(6S,9S,9aS)-N-ベンジル-6-(4-ヒドロキシベンジル)-2,9-ジメチル-4,7-ジオキソ-8-(キノリン-8-イルメチル)オクタヒドロ- lH-ピラジノ[2,1-c][1,2,4]トリアジン-1-カルボキサミドである化合物Cを用いて24時間、マクロファージを前処理した。化合物Cを用いて濃度を増加させてマクロファージを処理し、培養浮遊物に放出されたHIV p24 抗原を検出することにより、１０日間、増殖感染を検査した。図1に示すように、化合物Cは、用量依存的様式においてHIV複製を抑制した。
【００６８】
結論:化合物Cは、100pMから2μMの範囲の濃度において用量依存的様式においてHIVを抑制する。
【００６９】
実施例2: 1及び2μMの化合物Aは、自食作用を誘導する。
許容感染の間、HIVは、自食作用を下方制御する。mTOR阻害剤であるラパマイシン、及びビタミンD3のホルモン活性形態である1α,25-ジヒドロキシコレカルシフェロール(1,25D3)は、マクロオートファジー(自食作用)を介してヒトマクロファージにおける抗Mtb及び抗HIV活性を発揮する。自食作用の顕著な特徴は、バルク細胞質（bulk cytoplasm）、並びにミトコンドリア及び小胞体等の細胞質オルガネラを飲み込む２重膜のオートファゴソームである。オートファゴソームは、最終的にリソソームに融合し、それによって細胞により再利用され得る内容物を分解可能な一重膜オートリソソーム（autolysosome）を生み出す。自食作用は、あるバクテリア、ウイルス及び他の病原体に対する効率的な先天性免疫機構として認識されてきた (xenophagyと称することもある)。
【００７０】
微小管結合タンパク質1A/1B軽鎖3(LC3)は、哺乳類の組織及び培養細胞において普遍的に分布する可溶性タンパク質である(Methods Mol. Biol. 445, 77-88 (2008)に概説されている。自食作用の間に、オートファゴソームは、サイトゾルタンパク質及びオルガネラなどの細胞質コンポーネントを取り込む。同時に、LC3(LC3-I)のサイトゾル型が、ホスファチジルエタノールアミンと結合し、LC3-ホスファチジルエタノールアミン結合体(LC3-II)を形成し、これがオートファゴソーム膜に補充される。オートファゴソームは、リソソームと融合してオートリソソームを形成し、オートファゴソーム内コンポーネント（intra-autophagosomal component）がリソソーム加水分解酵素によって分解される。同時に、オートファゴソーム内腔におけるLC3-IIが分解される。従って、オートファゴソームマーカーLC3-IIのリソソームの代謝回転（lysosomal turnover）が、欠乏誘導性自己貪食活性を反映し、免疫ブロット又は免疫蛍光によるLC3の検出が、自食作用の標識及び、自己貪食（autophagic cell death）などの自食作用関連過程の標識である。
【００７１】
図２に、βカテニン阻害剤の4-(((6S,9S,9aS)-1-(ベンジルカルバモイル)-2,9-ジメチル-4,7-ジオキソ-8-(キノリン-8-イルメチル)オクタヒドロ-1H-ピラジノ[2,1-c] [1,2,4]トリアジン-6-イル)メチル)フェニルジヒドロゲンホスフェートである化合物Aが、微小管結合タンパク質1A/1B軽鎖3B(LC3B、自食作用の標識)を誘導するか否かを評価するために行われた実験を示す。この調査のため、ラパマイシン100 nM(自己貪食流出（autophagic flux）の既知の誘導剤)にマクロファージをさらし、タンパク質を抽出して免疫ブロットにかけた。
【００７２】
自食作用の間、LC3B(LC3B-I)は、LC3B-ホスファチジルエタノールアミン結合体(LC3B-II)を形成し、これがオートファゴソーム膜に補充される。自己貪食流出がある場合、LC3B-IIの変換をもたらすLC3B-Iの脂質化が起こる。 従って、自己貪食流出の間、LC3B-IIの相対量は、LC3B-Iと比較して増加する。
【００７３】
図2A-2Bにみられるように、LC3B-IIのLC3B-Iに対する割合は、ネガティブ/未処理コントロールと比較して増加し、自食作用が増加していることを示す。
【００７４】
また、本発明者らは、自己貪食の別のマーカーを調べた(sequestosome 1、SQSTIM1又はp62ともいう)。活性自食作用の間、SQSTIM1は分解される(減少する)。図2Bにみられるように、SQSTIM1は、1及び2μΜのβカテニン阻害剤及びラパマイシンコントロールで減少する。 
【００７５】
重要なことに、調査されたβカテニン阻害剤の濃度では、細胞毒性は今まで全くみられていない。
【００７６】
結論:1及び2μMの化合物Aは、自食作用を誘導し、ひいてはHIV及びMtb感染症に対する免疫力を改善し得る。
【００７７】
実施例3:βカテニン阻害剤を用いてHIVリザーバー細胞を標的とすること
潜伏感染したCD4 T細胞は、転写をしていないHIV-1のリザーバーの典型であり、活性化時及び抗レトロウイルス治療の中止時に、HIV-1複製を再開することができる、染色体に一体化されたウイルスDNAの隠れ場所を提供する(Science 278, 1295-1300 (1997); Nature Medicine 5, 512-517 (1999))。これらの細胞は、主として緩やかな自発的減衰率の長期生存記憶T細胞からなり、HIV-1が、ウイルス存続を促進するために細胞免疫記憶の生理的機構を活用することを示唆する(Nat Med 15 893-900 (2009))。近頃、いくつかの動物種において幹細胞の特性を有する、割合の少ないT細胞が発見された。これらの細胞は、"T記憶幹細胞"(Tscm)といい、記憶T細胞の最も初期の発生段階の典型であるように思われる。機能的には、 Tscmは、全ての既知の代替T細胞集団の増殖能を上回り、多数の中枢記憶(Tcm)、エフェクター記憶(Tern)及び最終分化T(Ttd)細胞に分化し得る。
【００７８】
CD4 T細胞発生に対するβカテニン阻害剤の効果を評価するために、βカテニン阻害剤の(6S,9S,9aS)-N-ベンジル-6-(4-ヒドロキシベンジル)-2,9-ジメチル-4,7-ジオキソ-8-(キノリン-8-イルメチル)オクタヒドロ-1H-ピラジノ[2,l-c][l,2,4]トリアジン-1-カルボキサミドである化合物Cとともに、仕分けされたTscm及びTcmをインキュベートした。化合物Cは、化合物Aの活性代謝物である。本発明者らは、対照実験との比較において、化合物Cは、実質的にTscmの分化を促進し、また、それほどではないにせよ、Tcmの、より成熟したCCR7- CD62L- 陰性CD4 T細胞集団への分化を促進することに気づいた(図3A-3B)。
【００７９】
結論: 明細書中に開示されたβカテニン阻害剤によるHIV感染細胞の処置は、より成熟し、インビボ持続性の低下した短期生存T細胞へのHIV-1感染Tscmの分化を促進する。このことは、HIV感染細胞のリザーバーを減少させ、ひいてはウイルスの根絶を引き起こし得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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