(57)【要約】本発明は、ｄｓＲＮＡ、例えばＤｉｃｅｒ基質ｓｉＲＮＡ（ＤｓｉＲＮＡ）剤の利用を介して、ＭＹＣ標的ＲＮＡおよびタンパク質レベルを減少させるために有用な化合物、組成物、および方法に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１５〜３５の長さのヌクレオチドのオリゴヌクレオチド鎖を含む単離核酸であって、前記核酸が哺乳類細胞内に導入される際にＭＹＣ標的  ｍＲＮＡの発現を低減するように、前記オリゴヌクレオチド鎖が前記オリゴヌクレオチド鎖の少なくとも１５のヌクレオチドに沿って表１５から選択される標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡに十分に相補的である、単離核酸。
【請求項２】
１９〜３５の長さのヌクレオチドのオリゴヌクレオチド鎖を含む単離核酸であって、前記核酸が哺乳類細胞内に導入される際にＭＹＣ  標的ｍＲＮＡの発現を低減するように、前記オリゴヌクレオチド鎖が前記オリゴヌクレオチド鎖の少なくとも１９のヌクレオチドに沿って表１４から選択される標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列に十分に相補的である、単離核酸。
【請求項３】
ＲＮＡを含む第１の核酸鎖および第２の核酸鎖を含む単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、前記ｄｓＮＡの前記第１の鎖が１５〜３５の長さのヌクレオチドであり前記第２の鎖が１９〜３５の長さのヌクレオチドであり、前記二本鎖核酸が哺乳類細胞内に導入される際にＭＹＣ  標的ｍＲＮＡの発現を低減するように、前記第２のオリゴヌクレオチド鎖が前記第２のオリゴヌクレオチド鎖の少なくとも１５の長さのヌクレオチドに沿って表１５から選択される標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列に十分に相補的である、単離二本鎖核酸。
【請求項４】
第１の核酸鎖および第２の核酸鎖を含む単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、前記ｄｓＮＡの前記第１の鎖が１５〜３５の長さのヌクレオチドであり前記第２の鎖が１９〜３５の長さのヌクレオチドであり、前記二本鎖核酸が哺乳類細胞内に導入される際にＭＹＣ標的ｍＲＮＡの発現を低減するように、前記第２のオリゴヌクレオチドが前記第２のオリゴヌクレオチド鎖の少なくとも１９の長さのヌクレオチドに沿って表１４から選択される標的ＭＹＣｍＲＮＡ配列に十分に相補的である、単離二本鎖核酸。
【請求項５】
第１の核酸鎖および第２の核酸鎖を含む単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、前記ｄｓＮＡの前記第１の鎖が１５〜３５の長さのヌクレオチドであり前記第２の鎖が１９〜３５の長さのヌクレオチドであり、前記二本鎖核酸が哺乳類細胞内に導入される際に、ＭＹＣ標的ｍＲＮＡの発現を低減するように前記第２のオリゴヌクレオチド鎖が前記第２のオリゴヌクレオチド鎖の少なくとも１９の長さのヌクレオチドに沿って表１３から選択される標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列に十分に相補的であり、かつ表１３から選択されるＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列の５´末端（位置１）から開始して、哺乳類のＡｇｏ２が前記配列の位置９および１０の間の部位で前記ｍＲＮＡを切断する、単離二本鎖核酸。
【請求項６】
単離ｄｓＮＡ分子であって、（ａ）センス領域およびアンチセンス領域であって、前記センス領域および前記アンチセンス領域が２５〜３５の塩基対からなる二本鎖領域を共に形成し、かつ前記アンチセンス領域が表１２から選択される配列と相補的である配列を含む、センス領域およびアンチセンス領域；および（ｂ）０〜２つの３´オーバーハング領域であって、各オーバーハング領域が６以下の長さのヌクレオチドである３´オーバーハング領域からなり、かつ前記二本鎖核酸が哺乳類細胞内に導入される際に、表１１から選択されるＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列の５´末端（位置１）から開始して、哺乳類のＡｇｏ２が前記配列の位置９および１０の間の部位で前記ｍＲＮＡを切断する、単離ｄｓＮＡ分子。
【請求項７】
第１の核酸鎖および第２の核酸鎖ならびに少なくとも２５塩基対の二本鎖領域を含む単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、前記第１の鎖が２５〜３４の長さのヌクレオチドであり前記第２の鎖が２６〜３５の長さのヌクレオチドでありかつ３´末端に１〜５の一本鎖ヌクレオチドを含み、前記二本鎖核酸が哺乳類細胞内に導入される際にＭＹＣ標的遺伝子発現を低減するように前記第２のオリゴヌクレオチド鎖が前記第２のオリゴヌクレオチド鎖の少なくとも１９の長さのヌクレオチドに沿って表１１から選択される標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列に十分に相補的である、単離二本鎖核酸。
【請求項８】
第１の核酸鎖および第２の核酸鎖ならびに少なくとも２５塩基対の二本鎖領域を含む単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、前記第１の鎖が２５〜３４の長さのヌクレオチドであり前記第２の鎖が２６〜３５の長さのヌクレオチドでありかつ３´末端に１〜５の一本鎖のヌクレオチドを含み、前記第１のオリゴヌクレオチド鎖の３´末端および前記第２のオリゴヌクレオチドの５´末端が平滑末端を形成し、かつ前記二本鎖核酸が哺乳類細胞内に導入される際にＭＹＣ  ｍＲＮＡ発現を低減するように前記第２のオリゴヌクレオチド鎖が前記第２のオリゴヌクレオチドの少なくとも１９の長さのヌクレオチドに沿って配列番号１３０９〜１６３５および１９６３〜３２７０からなる群から選択される標的ＭＹＣ配列に十分に相補的である、単離二本鎖核酸。
【請求項９】
少なくとも２５の塩基対；１９〜２１の塩基対および２１〜２５の塩基対からなる群から選択される二本鎖領域を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１０】
前記第２のオリゴヌクレオチド鎖が３´末端に１〜５の一本鎖のヌクレオチドを含む、請求項３〜６のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１１】
前記第１の鎖が２５〜３５の長さのヌクレオチドである、請求項３〜６のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１２】
前記第２の鎖が２５〜３５の長さのヌクレオチドである、請求項３〜６のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１３】
前記第２のオリゴヌクレオチド鎖が前記第２のオリゴヌクレオチド鎖の最大２７の長さのヌクレオチドに沿ってＧｅｎｂａｎｋ寄託番号第ＮＭ＿００２４６７．４号および第ＮＭ＿０１０８４９．４号からなる群から選択される標的ＭＹＣ  ｃＤＮＡ配列に相補的である、請求項３〜１２のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１４】
第１のオリゴヌクレオチド鎖の３´末端の第１のヌクレオチド（位置１）から開始して、位置１、２および／または３が改変ヌクレオチドと置換される、請求項３〜１２のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１５】
前記第１の鎖の前記３´末端および前記第２の鎖の前記５´末端が平滑末端を形成する、請求項３〜１２のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１６】
前記第１の鎖が２５の長さのヌクレオチドであり前記第２の鎖が２７の長さのヌクレオチドである、請求項３〜１２のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１７】
表１０から選択されるＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列の５´末端（位置１）から開始して、哺乳類のＡｇｏ２が前記配列の位置９および１０の間の部位でｍＲＮＡを切断し、それにより前記二本鎖核酸が哺乳類細胞内に導入される際にＭＹＣ標的ｍＲＮＡの発現を低減する、請求項３〜４または６〜１６のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１８】
配列番号１３０９〜１６３５および１９６３〜２２８９から選択されるＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列の５´末端から開始して、哺乳類のＡｇｏ２が前記ｍＲＮＡ配列の位置９および１０の間の部位で前記ｍＲＮＡを切断し、それにより前記二本鎖核酸が哺乳類細胞内に導入される際にＭＹＣ  標的ｍＲＮＡの発現を低減する、請求項８〜１７のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項１９】
前記第２の鎖が配列番号３２８〜６５４からなる群から選択される配列を含む、請求項３〜１８のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２０】
前記第１の鎖が配列番号１〜３２７、９８２〜１３０８および１６３６〜１９６２からなる群から選択される配列を含む、請求項３〜１９のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２１】
表２から選択される一対の第１の鎖／第２の鎖配列を含む、請求項３〜２０のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２２】
前記第１の鎖および前記第２の鎖のそれぞれが少なくとも２６のヌクレオチドの長さを有する、請求項３〜２１のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２３】
前記第１の鎖の前記３´末端の前記改変ヌクレオチド残基がデオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチド（ａｃｙｃｌｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）および蛍光分子からなる群から選択される、請求項１４に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２４】
第１のオリゴヌクレオチド鎖の前記３´末端の位置１がデオキシリボヌクレオチドである、請求項２３に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２５】
前記第２の鎖の前記３´末端の前記１〜５の一本鎖ヌクレオチドの前記ヌクレオチドが改変ヌクレオチドを含む、請求項６、７または１０に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２６】
前記第２の鎖の前記３´末端の前記１〜５の一本鎖ヌクレオチドの前記改変ヌクレオチドが２´‐Ｏ‐メチルリボヌクレオチドである、請求項２５に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２７】
前記第２の鎖の前記３´末端の前記１〜５の一本鎖ヌクレオチドのすべてのヌクレオチドが改変ヌクレオチドである、請求項２５または２６に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２８】
前記ｄｓＮＡが改変ヌクレオチドを含む、請求項３〜２７のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項２９】
前記改変ヌクレオチド残基が２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−架橋、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−架橋、２’−ＬＮＡ、２’−アミノおよび２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバマート（ｍｅｔｈｌｙｃａｒｂａｍａｔｅ））からなる群から選択される、請求項２８に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３０】
前記第２の鎖の３´末端の前記１〜５の一本鎖ヌクレオチドが１〜３の長さのヌクレオチドである、請求項６、７または１０に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３１】
前記第２の鎖の前記３´末端の前記１〜５の一本鎖ヌクレオチドが１〜２の長さのヌクレオチドである、請求項６、７または１０に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３２】
前記第２の鎖の前記３´末端の前記１〜５の一本鎖ヌクレオチドが２の長さのヌクレオチドでありかつ２´‐Ｏ‐メチル改変リボヌクレオチドを含む、請求項６、７または１０に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３３】
前記第２のオリゴヌクレオチド鎖がＡＳ−Ｍ１〜ＡＳ‐Ｍ７３およびＡＳ−Ｍ１＊〜ＡＳ−Ｍ７３＊からなる群から選択される改変パターンを含む、請求項３〜３２のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３４】
前記第１のオリゴヌクレオチド鎖がＳＭ１〜ＳＭ５２からなる群から選択される改変パターンを含む、請求項３〜３３のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３５】
前記第１の鎖および前記第２の鎖のそれぞれが少なくとも２６かつ最大３０の長さのヌクレオチドを有する、請求項３〜３４のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３６】
前記ｄｓＮＡがＤｉｃｅｒにより前記細胞中で内因的に切断される、請求項３〜３５のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３７】
前記標的遺伝子の発現を低減するために十分な前記単離核酸の量が、前記細胞の環境中で１ナノモル濃度以下、２００ピコモル濃度以下、１００ピコモル濃度以下、５０ピコモル濃度以下、２０ピコモル濃度以下、１０ピコモル濃度以下、５ピコモル濃度以下、２ピコモル濃度以下および１ピコモル濃度以下からなる群から選択される、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３８】
前記単離ｄｓＮＡが、１ナノモル濃度以下の細胞の環境中での有効濃度においてｉｎ  ｖｉｔｒｏの哺乳類細胞中でアッセイされる際に、標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの発現の低減において同一の前記標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの少なくとも１９のヌクレオチドを対象とする単離２１マーｓｉＲＮＡよりも大きな効力を有する、請求項６〜３７のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項３９】
前記単離ｄｓＮＡが、前記二本鎖核酸が哺乳類細胞内に導入される際に少なくとも１０％、少なくとも５０％、少なくとも８０〜９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、および少なくとも９９％からなる群から選択される量（％により表される）のＭＹＣ  標的ｍＲＮＡを低減するように、標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列に十分に相補的である、請求項３〜３８のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項４０】
第１の鎖および第２の鎖が化学的なリンカーにより結合される、請求項３〜３９のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡ。
【請求項４１】
前記第１の鎖の前記３´末端および前記第２の鎖の前記５´末端が化学的なリンカーにより結合される、請求項３〜４０のいずれか１項に記載の単離二本鎖核酸。
【請求項４２】
前記第２の鎖または第１の鎖のヌクレオチドがＤｉｃｅｒ分裂の配向を方向付ける改変ヌクレオチドと置換される、請求項３〜４１のいずれか１項に記載の単離二本鎖核酸。
【請求項４３】
デオキシリボヌクレオチド、ジデオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチド、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）、２’，３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）の一リン酸ヌクレオチドおよび２’，３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）の一リン酸ヌクレオチド、４−チオウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、５−（３−アミノアリル）−ウラシル、２’−Ｏ−アルキルリボヌクレオチド、２’−Ｏ−メチル  リボヌクレオチド、２’−アミノリボヌクレオチド、２’−フルオロ  リボヌクレオチド、ならびにロックド核酸からなる群から選択される改変ヌクレオチドを含む、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の単離核酸。
【請求項４４】
ホスホン酸塩、ホスホロチオエートおよびホスホトリエステルからなる群から選択されるリン酸塩骨格改変を含む、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の単離核酸。
【請求項４５】
モルフォリノ核酸およびペプチド核酸（ＰＮＡ）からなる群から選択される改変を含む、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の単離核酸。
【請求項４６】
哺乳類細胞中で標的ＭＹＣ遺伝子の発現を低減する方法であってｉｎ  ｖｉｔｒｏで哺乳類細胞を前記細胞中で標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの発現を低減するために十分な量の請求項３〜４５のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡと接触させることを含む、方法。
【請求項４７】
標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ発現が少なくとも１０％、少なくとも５０％および少なくとも８０〜９０％からなる群から選択される量（％により表される）で低減される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルが、前記細胞を前記ｄｓＮＡと接触させてから８日後に、少なくとも９０％の量（％により表される）で低減される、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項４９】
ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルが、前記細胞を前記ｄｓＮＡと接触させてから少なくとも１０日後に、少なくとも７０％の量（％により表される）で低減される、請求項４６〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
哺乳類中で標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの発現を低減する方法であって、哺乳類中で標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの発現を低減するために十分な量の請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離核酸を哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項５１】
哺乳類中で腫瘍負荷を低減する方法であって、哺乳類中での腫瘍負荷を低減するために十分な量の請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離核酸を前記哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項５２】
前記腫瘍が肝細胞癌である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記腫瘍負荷が、適切な対照と比較して５０〜８０％低減される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記単離核酸が脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中で製剤化される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記単離核酸が１マイクログラム〜５ミリグラム／ｋｇ前記哺乳類／日、１００マイクログラム〜０．５ミリグラム／ｋｇ、０．００１〜０．２５ミリグラム／ｋｇ、０．０１〜２０マイクログラム／ｋｇ、０．０１〜１０マイクログラム／ｋｇ、０．１０〜５マイクログラム／ｋｇ、および０．１〜２．５／ｋｇからなる群から選択される用量で投与される、請求項５０〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記単離核酸が、１ナノモル濃度以下の細胞環境中での有効濃度でｉｎ  ｖｉｔｒｏの哺乳類細胞中でアッセイされる際に、標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの発現の低減において同一の前記標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの少なくとも１９のヌクレオチドを対象とする単離２１マーｓｉＲＮＡよりも大きな効力を有する、請求項５０〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルが、前記単離ｄｓＮＡを前記哺乳類に投与してから少なくとも３日後に、少なくとも７０％の量（％により表される）が前記哺乳類の組織中で低減される、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記組織が肝臓組織である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記投与するステップが静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、点滴、皮下注射、経皮注射、エアロゾル、直腸送達、膣送達、局所送達、経口送達および吸入送達からなる群から選択される様式を含む、請求項５０〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
細胞の生育を選択的に阻害する方法であって、細胞を、細胞の生育を阻害するために十分な量の請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離核酸と接触させることを含む、方法。
【請求項６１】
前記細胞が対象の腫瘍細胞である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏの腫瘍細胞である、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記細胞がヒトの細胞である、請求項６０〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離核酸を含む製剤であって、前記核酸がｉｎ  ｖｉｔｒｏの哺乳類細胞内に導入される際に、少なくとも１０％、少なくとも５０％および少なくとも８０〜９０％からなる群から選択される量（％により表される）で標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルを低減するために有効な量で前記核酸が存在する、製剤。
【請求項６５】
前記有効量が、前記細胞の環境中で１ナノモル濃度以下、２００ピコモル濃度以下、１００ピコモル濃度以下、５０ピコモル濃度以下、２０ピコモル濃度以下、１０ピコモル濃度以下、５ピコモル濃度以下、２ピコモル濃度以下および１ピコモル濃度以下からなる群から選択される、請求項６４に記載の製剤。
【請求項６６】
請求項６〜４５のいずれか１項に記載の単離ｄｓＮＡを含む製剤であって、前記ｄｓＮＡが哺乳類の対象の細胞内に導入される際に、少なくとも１０％、少なくとも５０％および少なくとも８０〜９０％からなる群から選択される量（％により表される）で標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルを低減するために有効な量で前記ｄｓＮＡが存在する、製剤。
【請求項６７】
前記有効量が、１マイクログラム〜５ミリグラム／ｋｇ前記対象／日、１００マイクログラム〜０．５ミリグラム／ｋｇ、０．００１〜０．２５ミリグラム／ｋｇ、０．０１〜２０マイクログラム／ｋｇ、０．００１〜１０マイクログラム／ｋｇ, ０．１０〜５マイクログラム／ｋｇ、および０．１〜２．５マイクログラム／ｋｇからなる群から選択される用量である、請求項６６に記載の製剤。
【請求項６８】
前記ｄｓＮＡが、１ナノモル濃度以下の細胞環境中での有効濃度でｉｎ  ｖｉｔｒｏの哺乳類細胞中でアッセイされる際に、標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡのレベルの低減において同一の前記標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの少なくとも１９のヌクレオチドを対象とする単離２１マーｓｉＲＮＡよりも大きな効力を有する、請求項６４〜６７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６９】
請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離核酸を含む哺乳類細胞。
【請求項７０】
請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離核酸および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項７１】
請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離核酸およびその使用のための説明書を含むキット。
【請求項７２】
対象においてのＭＹＣ関連疾患または障害を処置または予防する方法であって、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離核酸および薬学的に許容可能な担体を前記対象における前記ＭＹＣ関連疾患または障害を処置または予防するために十分な量で対象に投与し、それにより前記対象における前記ＭＹＣ関連疾患または障害を処置または予防することを含む、方法。
【請求項７３】
前記ＭＹＣ関連疾患または障害が肝臓癌、腎臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、子宮頸癌、食道癌、中咽頭癌および膵臓癌からなる群から選択される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記ＭＹＣ関連疾患または障害が肝細胞癌である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離核酸を本質的に含むＭＹＣ阻害活性を有する組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連明細書の相互参照
本明細書は、２０１２年９月１４日に出願した「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＹＣ  ｂｙ  Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡによるＭＹＣの特異的阻害のための方法および組成物）」との表題の米国仮特許出願第６１／７０１，１３６号、２０１３年３月１５日に出願した“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＹＣ  ｂｙ  Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ”との表題の米国仮特許出願第６１／７８６，６９５号の優先権ならびに利益を米国特許法１１９条（ｅ）の下請求する。上記の特許出願の内容全体は本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、ｃ‐Ｍｙｃ遺伝子の発現および／または活性の調節に応答する特性、疾患および状態の研究、診断および処置のための化合物、組成物、および方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ｃ‐ＭＹＣ（ＭＹＣ）遺伝子は、細胞の増殖および分化の鍵となる分子である調節因子である。Ｍｙｃタンパク質は、コンセンサス配列（エンハンサーボックス配列（Ｅ‐ボックス））の結合およびヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）の動員を介して、多くの遺伝子発現を活性化する転写因子である。また、Ｍｙｃは、転写抑制因子としても作用できる。Ｍｉｚ−１転写因子と結合し、ｐ３００コアクティベーターと置き換わることにより、ＭｙｃはＭｉｚ−１標的遺伝子の発現を阻害する。ＭｙｃはＤＮＡの複製の制御において直接的な役割を有する（Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ−Ｓｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４４８（７１５２）：４４５-５１）。
【０００４】
Ｗｎｔ、Ｓｈｈ、およびＥＧＦ（ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路を介する）を含む様々な分裂促進性のシグナリング経路は、Ｍｙｃを活性化することが例証されている。その標的遺伝子の発現を改変する際のＭｙｃの役割により、多くの生物学的作用が引き起こされることが示されている。この作用として、細胞増殖を駆動する能力（サイクリンをアップレギュレートし、ｐ２１をダウンレギュレートする）が最初に発見されたが、Ｍｙｃはまた、細胞の生育（リボソームＲＮＡおよびタンパク質をアップレギュレート）、アポトーシス（Ｂｃｌ‐２をダウンレギュレート）、分化、および幹細胞の自己再生を調節する際にも非常に重要な役割を果たす。Ｍｙｃは、強力なプロト癌遺伝子であり、そのアップレギュレーションは、多くの種類の癌で述べられている。Ｍｙｃの過剰発現は、ＤＮＡの過剰複製に関与するとされる機構を介して遺伝子増幅を刺激する（Ｄｅｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ６（８）：  １４５３-７）。
【０００５】
少なくとも、特異的に変異または過剰発現する際に細胞増殖を増大させるＭＹＣプロト癌遺伝子の性質により、ＭＹＣは、ＭＹＣの小分子阻害剤および核酸阻害剤を含む抑制型癌治療にとって魅力的な標的である。
【０００６】
２５〜３５の長さのヌクレオチド鎖を有する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤が、哺乳類細胞での標的遺伝子発現の効果的な阻害剤として記述されている（Ｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許公開公報第２００５／０２４４８５８号および米国特許公開公報第２００５／０２７７６１０号）。このような長さのｄｓＲＮＡ剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路のＤｉｃｅｒ酵素によって処理されると考えられており、このような薬剤は「Ｄｉｃｅｒ基質ｓｉＲＮＡ」（「ＤｓｉＲＮＡ」）剤と呼ばれている。ＤｓｉＲＮＡ剤のさらなる改変構造は従来より記述されている（Ｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許公開公報第２００７／０２６５２２０号）。
【０００７】
本明細書では、ＭＹＣを標的とする改善型核酸薬剤が提供される。特に、ＭＹＣの標的化が特異的に例示される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ＭＹＣの発現を低減する核酸組成物を目的とする。このような組成物は、二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）などの核酸を含み、および（本発明は）それらを調製する方法を目的とする。本発明の核酸は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは哺乳類の対象中のいずれかで、細胞内の標的ＭＹＣ遺伝子の発現を低減できる。
【０００９】
１つの態様では、本発明は、１５〜３５の長さのヌクレオチドであるオリゴヌクレオチド鎖を有する単離核酸であって、オリゴヌクレオチド鎖が、核酸が哺乳類細胞の中に導入される際に、ＭＹＣ標的ｍＲＮＡ発現を低減させるために、オリゴヌクレオチド鎖のうち少なくとも１５の長さのヌクレオチドに沿って、表１５の標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列と十分に相補的である、核酸を提供する。
【００１０】
本発明の別の態様は、１９〜３５の長さのヌクレオチドであるオリゴヌクレオチド鎖を有する単離核酸であって、オリゴヌクレオチド鎖が、核酸が哺乳類細胞の中に導入される際に、ＭＹＣ標的ｍＲＮＡ発現を低減するために、オリゴヌクレオチド鎖のうち少なくとも１９の長さのヌクレオチドに沿って、表１４の標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列と十分に相補的である、核酸を提供する。
【００１１】
本発明のさらなる態様は、ＲＮＡを備える第１の核酸鎖および第２の核酸鎖を有する単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、ｄｓＮＡの第１の鎖が１５〜３５の長さのヌクレオチドであり、第２の鎖が１９〜３５の長さのヌクレオチドであり、第２のオリゴヌクレオチド鎖が、二本鎖核酸が哺乳類細胞に導入される際にＭＹＣ標的ｍＲＮＡ発現を低減するため、第２のオリゴヌクレオチド鎖のうち少なくとも１５の長さのヌクレオチドに沿って表１５の標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列と十分に相補的である、核酸を提供する。
【００１２】
本発明のさらなる態様は、第１の核酸鎖および第２の核酸鎖を有する単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、ｄｓＮＡの第１の鎖が１５〜３５の長さのヌクレオチドであり、第２の鎖が１９〜３５の長さのヌクレオチドであり、第２のオリゴヌクレオチド鎖が、二本鎖核酸が哺乳類細胞に導入される際にＭＹＣ標的ｍＲＮＡ発現を低減するため、第２のオリゴヌクレオチド鎖のうち少なくとも１９の長さのヌクレオチドに沿って表１４の標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列と十分に相補的である、核酸を提供する。
【００１３】
本発明の別の態様は、第１の核酸鎖および第２の核酸鎖を有する単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、ｄｓＮＡの第１の鎖が１５〜３５の長さのヌクレオチドであり、第２の鎖が１９〜３５の長さのヌクレオチドであり、二本鎖核酸が哺乳類細胞に導入される際に、第２のオリゴヌクレオチド鎖が、ＭＹＣ標的ｍＲＮＡ発現を低減するために、第２のオリゴヌクレオチド鎖のうち少なくとも１９の長さのヌクレオチドに沿って表１３の標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列と十分に相補的であり、かつ表１３のＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列の５´末端（位置１）から開始して、哺乳類のＡｇｏ２が配列の位置９および１０の間の部位でｍＲＮＡを切断する、核酸を提供する。
【００１４】
本発明の追加的な態様は、（ａ）センス領域およびアンチセンス領域であって、センス領域およびアンチセンス領域が２５〜３５塩基対の二本鎖領域を共に形成し、アンチセンス領域が表１２の配列に相補的である配列を含む、センス領域およびアンチセンス領域；ならびに（ｂ）０〜２つの３´オーバーハング領域であって、各オーバーハング領域が６以下の長さのヌクレオチドである、オーバーハング領域により形成される単離ｄｓＮＡ分子を提供する。
【００１５】
本発明のさらなる態様は、（ａ）センス領域およびアンチセンス領域であって、センス領域およびアンチセンス領域が２５〜３５の塩基対の二本鎖領域を共に形成し、アンチセンス領域が表１２の配列に相補的である配列を含む、センス領域およびアンチセンス領域；ならびに（ｂ）０〜２つの３´オーバーハング領域であって、各オーバーハング領域が６以下の長さのヌクレオチドであるオーバーハング領域：により形成される単離ｄｓＮＡ分子であって、かつ二本鎖核酸が哺乳類細胞に導入される際に、表１１（位置１）のＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列の５´末端から開始して、哺乳類のＡｇｏ２が配列の位置９および１０の間の部位でｍＲＮＡを切断する単離ｄｓＮＡ分子を提供する。
【００１６】
本発明の別の態様は、第１の核酸鎖および第２の核酸鎖、ならびに少なくとも２５の塩基対の二本鎖領域を有する単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、ｄｓＮＡの第１の鎖が２５〜３４の長さのヌクレオチドであり、第２の鎖が２６〜３５の長さのヌクレオチドであり、かつその３´末端に１〜５の一本鎖ヌクレオチドを有し、第２のオリゴヌクレオチド鎖が、二本鎖核酸が哺乳類細胞に導入される際に、ＭＹＣ標的遺伝子発現を低減させるために、第２のオリゴヌクレオチド鎖の少なくとも１９の長さのヌクレオチドに沿って表１１の標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列に十分に相補的である、核酸を提供する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、第１の核酸鎖および第２の核酸鎖、ならびに少なくとも２５の塩基対の二本鎖領域を有する単離二本鎖核酸（ｄｓＮＡ）であって、ｄｓＮＡの第１の鎖が２５〜３４の長さのヌクレオチドであり、第２の鎖が２６〜３５の長さのヌクレオチドであり、かつその３´末端に１〜５の一本鎖ヌクレオチドを有し、第１のオリゴヌクレオチド鎖の３´末端および第２のオリゴヌクレオチド鎖の５´末端が平滑末端を形成し、第２のオリゴヌクレオチド鎖が、二本鎖核酸が哺乳類細胞に導入される際に、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ発現を低減するために、第２のオリゴヌクレオチド鎖のうち少なくとも１９の長さのヌクレオチドに沿って配列番号１３０９〜１６３５および１９６３〜３２７０の標的ＭＹＣ配列に十分に相補的である、核酸を提供する。
【００１８】
１つの実施形態では、単離ｄｓＮＡは、少なくとも２５の塩基対、１９〜２１の塩基対または２１〜２５の塩基対の二本鎖領域を有する。別の実施形態では、第２のオリゴヌクレオチド鎖はその３´末端に１〜５の一本鎖ヌクレオチドを有する。さらなる実施形態では、第１の鎖は２５〜３５の長さのヌクレオチドである。特定の実施形態では、本発明はまた、単離ｄｓＮＡであって、第１の鎖が２６〜３５の長さのヌクレオチド、２７〜３５の長さのヌクレオチド、２８〜３５の長さのヌクレオチド、２９〜３５の長さのヌクレオチド、３０〜３５の長さのヌクレオチド、３１〜３５の長さのヌクレオチド、３３〜３５の長さのヌクレオチド、３４〜３５の長さのヌクレオチド、１７〜３５の長さのヌクレオチド、１９〜３５の長さのヌクレオチド、２１〜３５の長さのヌクレオチド、２３〜３５の長さのヌクレオチド、１７〜３３の長さのヌクレオチド、１７〜３１の長さのヌクレオチド、１７〜２９の長さのヌクレオチド、１７〜２７の長さのヌクレオチド、２１〜３５の長さのヌクレオチドまたは１９〜３３の長さのヌクレオチドである、ｄｓＮＡを提供する。
【００１９】
１つの実施形態では、第２の鎖は２５〜３５の長さのヌクレオチドである。特定の実施形態では、本発明はまた、単離ｄｓＮＡであって、第２の鎖が２６〜３５の長さのヌクレオチド、２７〜３５の長さのヌクレオチド、２８〜３５の長さのヌクレオチド、２９〜３５の長さのヌクレオチド、３０〜３５の長さのヌクレオチド、３１〜３５の長さのヌクレオチド、３３〜３５の長さのヌクレオチド、３４〜３５の長さのヌクレオチド、２１〜３５の長さのヌクレオチド、２３〜３５の長さのヌクレオチド、２５〜３５の長さのヌクレオチド、２７〜３５の長さのヌクレオチド、１９〜３３の長さのヌクレオチド、１９〜３１の長さのヌクレオチド、１９〜２９の長さのヌクレオチド、１９〜２７の長さのヌクレオチドまたは１９〜２５の長さのヌクレオチドである、ｄｓＮＡを提供する。
【００２０】
別の実施形態では、第２のオリゴヌクレオチド鎖は、第２のオリゴヌクレオチド鎖のうち最大２７の長さのヌクレオチドに沿って、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号第ＮＭ＿００２４６７．４号および第ＮＭ＿０１０８４９．４号の標的ＭＹＣ  ｃＤＮＡ配列に相補的である。
【００２１】
１つの実施形態では、ｄｓＮＡは改変ヌクレオチドである。任意に、改変ヌクレオチド残基は２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−架橋、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−架橋、２’−ＬＮＡ、２’−アミノまたは２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバマート（ｍｅｔｈｌｙｃａｒｂａｍａｔｅ））である。
【００２２】
特定の実施形態では、第１のオリゴヌクレオチド鎖の３’末端での第１のヌクレオチド（位置１）から開始して、位置１、２および／または３が、改変ヌクレオチドに置換される。任意に、第１の鎖の３’末端の改変ヌクレオチド残基は、デオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチドまたは蛍光分子である。特定の実施形態では、第１のオリゴヌクレオチド鎖の３’末端の位置１はデオキシリボヌクレオチドである。
【００２３】
１つの実施形態では、第１の鎖の３’末端および第２の鎖の５’末端は平滑末端を形成する。
【００２４】
別の実施形態において、第１の鎖は２５の長さのヌクレオチドであり、第２の鎖は２７の長さのヌクレオチドである。さらなる実施形態では、表１０のＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列の５´末端（位置１）から開始して、哺乳類のＡｇｏ２が配列の位置９および１０の間の部位でｍＲＮＡを切断し、それにより、二本鎖核酸が哺乳類細胞に導入される際にＭＹＣ標的ｍＲＮＡ発現が低減される。特定の実施形態では、配列番号１３０９〜１６３５または１９６３〜２２８９のＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列の５´末端から開始して、哺乳類のＡｇｏ２がｍＲＮＡ配列の位置９および１０の間の部位でｍＲＮＡを切断し、それにより、二本鎖核酸が哺乳類細胞に導入される際にＭＹＣ標的ｍＲＮＡ発現を低減する。
【００２５】
１つの実施形態では、第２の鎖は配列番号３２８〜６５４の配列を含む。
【００２６】
別の実施形態では、第１の鎖は配列番号１〜３２７、９８２〜１３０８および１６３６〜１９６２の配列を含む。
【００２７】
特定の実施形態では、本発明のｄｓＮＡは表２の一対の第１の鎖／第２の鎖の配列を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、第１の鎖および第２の鎖のそれぞれは、少なくとも２６の長さのヌクレオチドを有する。本発明はまた、単離ｄｓＮＡであって、第１の鎖および第２の鎖のそれぞれが、少なくとも２７の長さのヌクレオチド、少なくとも２８の長さのヌクレオチド、少なくとも２９の長さのヌクレオチド、少なくとも３０の長さのヌクレオチド、少なくとも３１の長さのヌクレオチド、少なくとも３２の長さのヌクレオチド、少なくとも３３の長さのヌクレオチド、少なくとも３４の長さのヌクレオチドまたは少なくとも３５の長さのヌクレオチドを有する、ｄｓＮＡを提供する。
【００２９】
特定の実施形態では、第２の鎖の３´末端の１〜５の一本鎖ヌクレオチドは改変ヌクレオチドを含む。任意に、第２の鎖の３´末端の１〜５の一本鎖の改変ヌクレオチドは、２´‐Ｏ‐メチルリボヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、第２の鎖の３´末端の１〜５の一本鎖ヌクレオチドのすべてのヌクレオチドは改変ヌクレオチドである。１つの実施形態では、第２の鎖の３´末端の１〜５の一本鎖ヌクレオチドは、１〜３または、任意に１〜２の長さのヌクレオチドである。特定の実施形態では、第２の鎖の３´末端の１〜５の一本鎖ヌクレオチドは、２つの長さのヌクレオチドであり、２´‐Ｏ‐メチル改変リボヌクレオチドを含む。
【００３０】
１つの実施形態では、第２のオリゴヌクレオチド鎖は、ＡＳ‐Ｍ１〜ＡＳ‐Ｍ４６およびＡＳ‐Ｍ１*〜ＡＳ‐Ｍ４６*の改変パターンを有する。別の実施形態では、第１のオリゴヌクレオチド鎖はＳＭ１〜ＳＭ２２の改変パターンを有する。
【００３１】
別の実施形態では、第１の鎖および第２の鎖のそれぞれが、少なくとも２６かつ最大３０の長さのヌクレオチドを有する。本発明はまた、単離ｄｓＮＡであって、第１の鎖および第２の鎖のいずれかまたはそれぞれが、少なくとも２７かつ最大３０の長さのヌクレオチド、少なくとも２８かつ最大３０の長さのヌクレオチドおよび少なくとも２９または最大３０の長さのヌクレオチドを有する単離ｄｓＮＡを提供する。
【００３２】
特定の実施形態では、ｄｓＮＡはＤｉｃｅｒにより細胞中で内因的に切断される。
【００３３】
いくつかの実施形態では、標的遺伝子の発現を低減するために十分な単離核酸の量は、細胞環境において１ナノモル濃度以下、２００ピコモル濃度以下、１００ピコモル濃度以下、５０ピコモル濃度以下、２０ピコモル濃度以下、１０ピコモル濃度以下、５ピコモル濃度以下、２ピコモル濃度以下または１ピコモル濃度以下である。
【００３４】
１つの実施形態では、本発明の単離ｄｓＮＡは、１ナノモル濃度以下の細胞環境中で有効濃度で、哺乳類細胞中のインビトロでアッセイする際に、標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ発現の低減において標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの同一の少なくとも１９ヌクレオチドを対象とした単離型２１マーｓｉＲＮＡよりも大きな効力を有する。
【００３５】
別の実施形態では、本発明の単離ｄｓＮＡは、二本鎖核酸が哺乳類細胞に導入される際に、少なくとも１０％、少なくとも５０％、少なくとも８０〜９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の量（％により表される）でＭＹＣ標的ｍＲＮＡ発現を低減するため、標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列に十分に相補的である。関連する実施形態では、本発明は、ｄｓＮＡが哺乳類細胞に導入される際に、ＭＹＣ標的ｍＲＮＡ発現を低減するために、第２のオリゴヌクレオチド鎖の少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５以上の長さのヌクレオチドに沿って標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ配列に十分に相補的である単離ｄｓＮＡを提供する。
【００３６】
１つの実施形態では、本発明のｄｓＮＡの第１の鎖および第２の鎖は化学的なリンカーにより結合される。任意に、第１の鎖の３´末端および第２の鎖の５´末端は化学的なリンカーにより結合される。
【００３７】
特定の実施形態では、第２の鎖または第１の鎖のヌクレオチドは、Ｄｉｃｅｒ開裂の方向を指示する改変ヌクレオチドで置換される。
【００３８】
いくつかの実施形態では、本発明の単離核酸は、デオキシリボヌクレオチド、ジデオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチド、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’、３’−ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）、２’，３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）のヌクレオチド一リン酸塩と２’，３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）のヌクレオチド一リン酸塩、４−チオウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、５−（３−アミノアリル）−ウラシル、２’−Ｏ−アルキルリボヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、２’−アミノリボヌクレオチド、２’−フルオロリボヌクレオチド、またはロックド核酸である、改変ヌクレオチドを持つ。
【００３９】
１つの実施形態では、本発明のｄｓＮＡはホスホン酸塩、ホスホロチオエートまたはホスホトリエステルであるリン酸塩骨格改変を有する。
【００４０】
任意に、本発明のｄｓＮＡは、モルフォリノ核酸またはペプチド核酸（ＰＮＡ）である改変を有する。
【００４１】
本発明の別の態様は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて哺乳類細胞を本発明の単離ｄｓＮＡと、細胞内で標的ＭＹＣ遺伝子発現を低減させるのに十分な量で接触させることを含む、哺乳類細胞中の標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ遺伝子発現を低減させる方法を提供する。
【００４２】
１つの実施形態では、ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルは、細胞がｄｓＮＡと接触してから少なくとも８日後に、少なくとも９０％の量（％により表される）が減少する。別の実施形態では、ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルは、細胞がｄｓＮＡと接触してから少なくとも１０日後に、少なくとも７０％の量（％により表される）が減少する。
【００４３】
本発明のさらなる態様は、哺乳類において標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの発現を低減する方法であって、哺乳類において標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの発現を低減するために十分な量の本発明の単離核酸を投与することを含む、方法を提供する。
【００４４】
本発明の別の態様は、哺乳類において腫瘍負荷を低減する方法であって、哺乳類において腫瘍負荷を低減するために十分な量の本発明の単離核酸を哺乳類に投与することを含む、方法を提供する。
【００４５】
１つの実施形態では、腫瘍は肝細胞癌である。別の実施形態では、腫瘍負荷は適切な対照と比較して、５０〜８０％減少する。
【００４６】
特定の実施形態では、単離核酸は脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中で製剤化される。
【００４７】
いくつかの実施形態では、本単離核酸は、１マイクログラム〜５ミリグラム／哺乳類キログラム／日、１００マイクログラム〜０．５ミリグラム／キログラム、０．００１〜０．２５ミリグラム／キログラム、０．０１〜２０マイクログラム／キログラム、０．０１〜１０マイクログラム／キログラム、０．１０〜５マイクログラム／キログラム、または０．１〜２．５マイクログラム／キログラムの投与量で投与される。
【００４８】
特定の実施形態では、本発明の単離核酸は、１ナノモル濃度以下の細胞の環境下で有効な濃度でｉｎ  ｖｉｔｒｏにて哺乳類細胞内でアッセイした時に、標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡ発現の低減において、標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡの同一の少なくとも１９ヌクレオチドを対象とした単離型２１マーｓｉＲＮＡよりも大きな効力を有する。
【００４９】
１つの実施形態では、ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルは、単離ｄｓＮＡが哺乳類に投与されてから少なくとも３日後に、少なくとも７０％の量（％により表される）が哺乳類の組織で減少する。任意に、組織は肝臓組織である。
【００５０】
いくつかの実施形態では、投与ステップには、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、点滴、皮下注射、経皮、エアゾル、腸、膣、局所、経口または吸入送達が含まれる。
【００５１】
本発明のさらなる態様は、細胞の生育を阻害するのに十分な量の本発明の単離核酸と細胞を接触させることを含む、細胞の生育を選択的に阻害する方法を提供する。
【００５２】
１つの実施形態では、細胞は対象の腫瘍細胞である。任意に、細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏで腫瘍細胞である。関連する実施形態では、細胞はヒト細胞である。
【００５３】
本発明の別の態様は、本発明の単離核酸を含む製剤であって、核酸が哺乳類細胞にインビトロで導入される際に、少なくとも１０％、少なくとも５０％または少なくとも８０〜９０％の量（％により表される）で標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルを低減するために有効な量で核酸が存在する、製剤を提供する。
【００５４】
１つの実施形態では、有効量は、細胞の環境中で１ナノモル濃度以下、２００ピコモル濃度以下、１００ピコモル濃度以下、５０ピコモル濃度以下、２０ピコモル濃度以下、１０ピコモル濃度以下、５ピコモル濃度以下、２ピコモル濃度以下または１ピコモル濃度以下である。
【００５５】
本発明のさらなる態様は、本発明の単離ｄｓＮＡを含む製剤であって、ｄｓＮＡが対象となる哺乳類細胞に導入される際に、少なくとも１０％、少なくとも５０％、および少なくとも８０〜９０％からなる群の量（％により表される）で標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルを低減するために有効な量でｄｓＮＡが存在する、製剤を提供する。
【００５６】
１つの実施形態では、有効量は、１マイクログラム〜５ミリグラム／キログラム対象／日、１００マイクログラム〜０．５ミリグラム／キログラム、０．００１〜０．２５ミリグラム／キログラム、０．０１〜２０マイクログラム／キログラム、０．０１〜１０マイクログラム／キログラム、０．１０〜５マイクログラム／キログラム、または０．１〜２．５マイクログラム／キログラムの投与量である。
【００５７】
本発明の別の態様は、本発明の単離核酸を含む哺乳類細胞を提供する。
【００５８】
本発明のさらなる態様は、本発明の単離核酸および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。
【００５９】
本発明の追加的な態様は、本発明の単離核酸およびその使用のための説明書を含むキットを提供する。
【００６０】
別の態様では、本発明は、対象のＭＹＣ関連疾患または障害を治療または予防する方法であって、本発明の単離核酸および薬学的に許容可能な担体を、対象のＭＹＣ関連疾患または障害を治療または予防するために十分な量で対象に投与し、それにより、対象のＭＹＣ関連疾患または障害を治療または予防することを含む、方法を提供する。
【００６１】
１つの実施形態では、ＭＹＣ関連疾患または障害は肝臓癌、腎臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、子宮頸癌、食道癌、中咽頭癌または膵臓癌である。任意に、ＭＹＣ関連疾患または障害は肝細胞癌である。
【００６２】
本発明の別の態様は、本発明の単離核酸を本質的に含む、ＭＹＣ阻害活性を備える組成物を提供する。
【００６３】
本発明はまた、形質、疾患および病態の維持または発症を媒介する、ＭＹＣ遺伝子発現経路または他の細胞過程に関与する遺伝子の発現および／または活性の調節に応答する形質、疾患および疾病に関連する化合物、組成物、および方法も目的とする。特定の態様では、本発明は、ＭＹＣ遺伝子発現に対するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介可能なＤｉｃｅｒ基質ｓｉＲＮＡ（ＤｓｉＲＮＡ）のような、Ｄｉｃｅｒ酵素によって処理できる小核酸分子に関する。本発明の抗ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡは、例えば、癌および／または他の増殖性疾患、障害、もしくは状態などの、対象のＭＹＣの調節に応答可能な形質、疾患および状態の治療のための組成物を提供することにおいて、有用である。抗ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡの有効性、効力、毒性および他の効果は、増殖性疾患の１つ以上の動物モデルで試験可能である（増殖性疾患の例示的な動物モデルを以下に列記している）。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】本明細書中で「ＭＹＣ−９５３」標的部位を指す、ＭＹＣ  ＲＮＡ中の部位を標的とする本発明の例示的なＤｓｉＲＮＡ剤の構造を示す。大文字＝非改変ＲＮＡ、小文字＝ＤＮＡ、太字＝ミスマッチ塩基対ヌクレオチド；矢頭は予想されるＤｉｃｅｒ酵素開裂部位を示し；破線は標的化ＭＹＣ配列内の予想されるＡｒｇｏｎａｕｔｅ２（Ａｇｏ２）開裂部位に相当するセンス鎖（トップ鎖）配列を示す。
【図２Ａ】ヒトおよびマウス細胞のそれぞれにおける、ヒトＭＹＣ（図２Ａ〜２Ｄ）およびマウスＭＹＣ（図２Ｅ〜２Ｈ）のＤｓｉＲＮＡ媒介型ノックダウンを示す第１次スクリーニングデータを示す。試験した各ＤｓｉＲＮＡについて、３つの独立したｑＰＣＲアンプリコンをアッセイした。（ヒトの細胞では、アンプリコン「５１４〜６２０」、「１２２７〜１３４７」および「１７７１〜１８７２」をアッセイし、マウス細胞では、アンプリコン「５３９〜６６３」、「１３３９〜１４２８」および「１９７１〜２０６２」をアッセイした。）
【図２Ｂ】ヒトおよびマウス細胞のそれぞれにおける、ヒトＭＹＣ（図２Ａ〜２Ｄ）およびマウスＭＹＣ（図２Ｅ〜２Ｈ）のＤｓｉＲＮＡ媒介型ノックダウンを示す第１次スクリーニングデータを示す。
【図２Ｃ】ヒトおよびマウス細胞のそれぞれにおける、ヒトＭＹＣ（図２Ａ〜２Ｄ）およびマウスＭＹＣ（図２Ｅ〜２Ｈ）のＤｓｉＲＮＡ媒介型ノックダウンを示す第１次スクリーニングデータを示す。
【図２Ｄ】ヒトおよびマウス細胞のそれぞれにおける、ヒトＭＹＣ（図２Ａ〜２Ｄ）およびマウスＭＹＣ（図２Ｅ〜２Ｈ）のＤｓｉＲＮＡ媒介型ノックダウンを示す第１次スクリーニングデータを示す。
【図２Ｅ】ヒトおよびマウス細胞のそれぞれにおける、ヒトＭＹＣ（図２Ａ〜２Ｄ）およびマウスＭＹＣ（図２Ｅ〜２Ｈ）のＤｓｉＲＮＡ媒介型ノックダウンを示す第１次スクリーニングデータを示す。
【図２Ｆ】ヒトおよびマウス細胞のそれぞれにおける、ヒトＭＹＣ（図２Ａ〜２Ｄ）およびマウスＭＹＣ（図２Ｅ〜２Ｈ）のＤｓｉＲＮＡ媒介型ノックダウンを示す第１次スクリーニングデータを示す。
【図２Ｇ】ヒトおよびマウス細胞のそれぞれにおける、ヒトＭＹＣ（図２Ａ〜２Ｄ）およびマウスＭＹＣ（図２Ｅ〜２Ｈ）のＤｓｉＲＮＡ媒介型ノックダウンを示す第１次スクリーニングデータを示す。
【図２Ｈ】ヒトおよびマウス細胞のそれぞれにおける、ヒトＭＹＣ（図２Ａ〜２Ｄ）およびマウスＭＹＣ（図２Ｅ〜２Ｈ）のＤｓｉＲＮＡ媒介型ノックダウンを示す第１次スクリーニングデータを示す。
【図３Ａ−１】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。「Ｐ１」は相１（第１次スクリーニング）を示し、「Ｐ２」は相２を示す。相１において、ＤｓｉＲＮＡを、Ａ５４９細胞（ヒト細胞アッセイ；図３Ａ〜３Ｄ）、またはマウス細胞（Ｈｅｐａ１‐６細胞アッセイ；図３Ｅ〜３Ｈ）の環境中１ｎＭで試験した。相２において、ＤｓｉＲＮＡを、Ａ５４９細胞の環境中、１ｎＭおよび０．１ｎＭにて試験した（二重アッセイ）。個々のバーは、三重に観察されたヒト（図３Ａ〜３Ｄ）またはマウス（図３Ｅ〜３Ｈ）の平均のＭＹＣレベルを表し、標準誤差とともに示している。ヒトＭＹＣレベルをＨＰＲＴおよびＳＦＲＳ９レベルに対して標準化し、マウスのＭＹＣレベルをＨＰＲＴおよびＲｐ１２３レベルに対して標準化した。
【図３Ａ−２】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。「Ｐ１」は相１（第１次スクリーニング）を示し、「Ｐ２」は相２を示す。
【図３Ｂ−１】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｂ−２】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｃ−１】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｃ−２】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｄ−１】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｄ−２】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｅ−１】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｅ−２】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｆ−１】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｆ−２】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｇ−１】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｇ−２】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｈ−１】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図３Ｈ−２】示したＤｓｉＲＮＡについて観察されたヒトおよびマウスのＭＹＣ阻害効果のヒストグラムを示す。
【図４Ａ−１】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ａ−２】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｂ−１】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｂ−２】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｃ−１】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｃ−２】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｄ−１】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｄ−２】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｅ−１】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｅ−２】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｆ−１】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｆ−２】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｇ−１】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｇ−２】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｈ−１】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図４Ｈ−２】０．１Ｍ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞（図４Ａ〜４Ｄ）およびマウスＨｅｐａ１‐６細胞（図４Ｅ〜４Ｈ）における、４つの異なるガイド（アンチセンス）鎖２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（図４Ａ〜４Ｈに示されるように、それぞれ「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」および「Ｍ８」、改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン（ここでは「Ｍ０」または非改変の）‐ガイド鎖改変パターンとして記載され、たとえば「Ｍ０‐Ｍ１７」、「Ｍ０‐Ｍ３５」、「Ｍ０‐Ｍ４８」または「Ｍ０‐Ｍ８」と記載される））にわたる２４の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを表す。
【図５Ａ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ａ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｂ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｂ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｃ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｃ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｄ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｄ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｅ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｅ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｆ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図５Ｆ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたる１９の独立したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データのヒストグラムを示し、１ｎＭでの相Ｉ（非改変）の阻害レベルとの比較も示す。
【図６Ａ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的配列に関するミスマッチを組み込む７つの独立したＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを例証するヒストグラムを示し、１ｍＭでの相４の結果（天然配列のみで得られ、ミスマッチを全く含まない）との比較も示す。
【図６Ａ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的配列に関するミスマッチを組み込む７つの独立したＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを例証するヒストグラムを示し、１ｍＭでの相４の結果（天然配列のみで得られ、ミスマッチを全く含まない）との比較も示す。
【図６Ｂ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的配列に関するミスマッチを組み込む７つの独立したＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを例証するヒストグラムを示し、１ｍＭでの相４の結果（天然配列のみで得られ、ミスマッチを全く含まない）との比較も示す。
【図６Ｂ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的配列に関するミスマッチを組み込む７つの独立したＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを例証するヒストグラムを示し、１ｍＭでの相４の結果（天然配列のみで得られ、ミスマッチを全く含まない）との比較も示す。
【図６Ｃ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的配列に関するミスマッチを組み込む７つの独立したＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを例証するヒストグラムを示し、１ｍＭでの相４の結果（天然配列のみで得られ、ミスマッチを全く含まない）との比較も示す。
【図６Ｃ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的配列に関するミスマッチを組み込む７つの独立したＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを例証するヒストグラムを示し、１ｍＭでの相４の結果（天然配列のみで得られ、ミスマッチを全く含まない）との比較も示す。
【図６Ｄ−１】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的配列に関するミスマッチを組み込む７つの独立したＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを例証するヒストグラムを示し、１ｍＭでの相４の結果（天然配列のみで得られ、ミスマッチを全く含まない）との比較も示す。
【図６Ｄ−２】０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的配列に関するミスマッチを組み込む７つの独立したＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを例証するヒストグラムを示し、１ｍＭでの相４の結果（天然配列のみで得られ、ミスマッチを全く含まない）との比較も示す。
【図７Ａ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。図７Ａ〜７Ｈは、このようなアッセイで使用した二本鎖改変の概略図を示し、図７Ｉおよび７Ｊは、それぞれ、センス鎖およびアンチセンス鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターンの概略図を示す。図７Ｋおよび７Ｌは、０．１ｎＭ（二重アッセイ）および１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞において、変動するパッセンジャー（センス）鎖およびガイド（アンチセンス）鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターン（改変パターンは、パッセンジャー鎖改変パターン−ガイド鎖改変パターンとして記載される）にわたるこれらのＭＹＣ−標的化ＤｓｉＲＮＡ配列の有効性データを示すヒストグラムを示し、１ｎＭでの相５（Ｍ１２〜Ｍ４８改変を有する）の阻害レベルとの比較も示す。
【図７Ｂ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｃ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｄ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｅ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｆ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｇ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｈ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｉ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｊ】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｋ−１】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｋ−２】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｌ−１】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図７Ｌ−２】ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１の二本鎖で実施した追加的な２´‐Ｏ‐メチル改変のスクリーニングを示す。
【図８】は、ヒトＨｅｐ３Ｂ腫瘍を有するマウスにおける、ガイド鎖およびパッセンジャー鎖の２´‐Ｏ‐メチル改変パターンを有する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤型の例示的なＭＹＣ標的化二本鎖のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性データを示す。
【図９】は、ヒトのＨｅｐＧ２腫瘍を有するマウスにおける、例示的な脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤型β‐カテニンおよびＭＹＣ標的化二本鎖のそれぞれのｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性データを示す。
【図１０】ヒトのＨｅｐ３Ｂ腫瘍を有するマウスにおける、例示的な脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤型ＭＹＣ標的化二本鎖（ここでは、ＭＹＣ‐１７１１）のｉｎ  ｖｉｖｏでの用量応答性ノックダウンの有効性データを示す。
【図１１】ヒトのＨｅｐ３Ｂ腫瘍を有するマウスにおける、例示的な脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤型ＭＹＣ標的化二本鎖（ここでは、ＭＹＣ‐１７１１）のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効期間が、１ｍｇ／ｋｇでＭＹＣ‐１７１１をマウスに投与してから少なくとも４日間であり、かつ５ｍｇ／ｋｇでＭＹＣ‐１７１１をマウスに投与した場合に顕著なノックダウンが少なくとも１６８時間持続したことを示す。
【図１２】脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤型ＭＹＣ標的化二本鎖（ここでは、ＭＹＣ‐１７１１）が、ヒトＨｅｐ３Ｂ腫瘍を有するマウスに投与した場合にｉｎ  ｖｉｖｏで効果の高い抗腫瘍剤であったことを示す。特に、腫瘍低減をもたらすＭＹＣ標的化二本鎖のそのような表現型的効果は用量応答性を示した（***Ｐ＜０．００１、****、Ｐ＜０．０００１）。
【図１３】多くの異なる２´‐Ｏ‐メチルパターン（ここでは、「Ｍ１２−Ｍ４８」、「Ｍ３２−Ｍ４８」、「Ｍ５０−Ｍ７３」および「Ｍ５０−Ｍ４８」にパターン化された二本鎖）を表すＭＹＣ−１７１１二本鎖が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの顕著なＨｅｐ３Ｂ腫瘍の低減を示したことを示す。
【図１４】低用量のＤｓｉＲＮＡ投与（１週間に２回（ＢＩＷ）または１週間に１回（ＱＷ））が、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＨｅｐ３Ｂ腫瘍の寸法の低減に極めて有効であったことを示す。
【図１５】ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ（ここではＭＹＣ‐６２１）が、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＨＴ２９結腸癌の腫瘍体積の顕著な低減を示したことを示す。
【図１６】ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡが、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＩＡ  ＰａＣａ‐２の膵臓癌の腫瘍体積の顕著な低減を示したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
本発明は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏにてＭＹＣ遺伝子のレベルおよび／または発現を低減することが可能な、たとえば二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）のような核酸を含む組成物、ならびにそれらを調製する方法を目的とする。ｄｓＲＮＡの鎖の１つは、標的とするＭＹＣ転写産物の破壊および／または翻訳阻害を対象とし得る１９〜３５ヌクレオチドの範囲の長さを持つヌクレオチド配列の領域を含む。
【００６６】
定義
他に定義しない限り、本明細書で使用するところの全ての技術的かつ科学的語句は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味を持つ。以下の参照は、本発明で使用される多くの語句の一般的な定義を当業者に提供する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ  ｅｄ．１９９４）；Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  （Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄ．，１９８８）；Ｔｈｅ  Ｇｌｏｓｓａｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ  （１９９１）；  及び  Ｈａｌｅ  ＆  Ｍａｈａｍ，Ｔｈｅ  Ｈａｒｐｅｒ  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。本明細書で使用するように、以下の語句は、他で特定しない限り、以下のそれらに帰する意味を持つ。
【００６７】
本発明は、ＭＹＣ発現を調節（たとえば阻害）可能な１つ以上のＤｓｉＲＮＡ分子を特徴とする。本発明のＤｓｉＲＮＡは任意に、ＭＹＣ誤調節に関連した疾患または障害（例えば腫瘍形成および／または増殖など）の維持または発展に関連した他の遺伝子および／または遺伝子産物のモジュレータと組み合わせて使用可能である。本発明のＤｓｉＲＮＡ剤は、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号第ＮＭ＿００２４６７．４号（ヒトＭＹＣ）および第ＮＭ＿０１０８４９．４号（マウスＭＹＣ、転写変異体１）によって表されるｃＤＮＡ配列に対応するもののようなＭＹＣ  ＲＮＡを調節し、それらは本明細書で一般的に「ＭＹＣ」と呼ばれる。
【００６８】
本発明の種々の態様および実施形態の以下の記述が、本明細書中で一般的にＭＹＣと呼ばれる例示的なＭＹＣ  ＲＮＡに関して提供される。しかしながら、このような記載は単なる例示を意味するのみであり、本発明の種々の態様および実施形態はまた、変異体ＭＹＣ  ＲＮＡまたはさらなるＭＹＣスプライスバリアントのような、代替的なＭＹＣ  ＲＮＡも対象とする。また、特定の態様および実施形態はＭＹＣ経路に関与する他の遺伝子をも対象とし、その誤調節がＭＹＣの誤調節に関連して作用する（たとえばＭＹＣの調節に影響されるか、またはＭＹＣの調節に影響を与える）ことにより治療のために標的化されうる表現型効果（例えば腫瘍形成および／または増殖など）を産出する遺伝子を含む。ＢＡＫ１、Ｎｏｘａ、ＢＣＬ２Ｌ１１、Ｂｃｌ−２関連死プロモーター、ＰＣＮＡ、ＤＡＤ１、ＴＮＫＳおよびＢＨ３共役ドメインデスアゴニストは、ＭＹＣと相互作用する遺伝子の例である。このような、ＭＹＣと共に作用する経路の遺伝子を含む追加的な遺伝子は、ＭＹＣ標的化ｄｓＲＮＡの利用に関して本明細書で記述されたｄｓＲＮＡおよび方法を用いて標的とできる。したがって、他の遺伝子の阻害ならびにこのような阻害の効果を、本明細書で記述したように実施できる。
【００６９】
語句「ＭＹＣ」は、ＭＹＣタンパク質、ペプチド、またはポリペプチドをコードする核酸配列を意味する（例えば、ＭＹＣ  Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号第ＮＭ＿００２４６７．４号および第ＮＭ＿０１０８４９．４号の配列のような、ＭＹＣ転写産物）。特定の実施形態では、語句「ＭＹＣ」はまた、他のＭＹＣアイソフォーム、変異体ＭＹＣ遺伝子、ＭＹＣ遺伝子のスプライスバリアント、およびＭＹＣ遺伝子多型などの、他のＭＹＣコード配列を含むことも意味する。語句「ＭＹＣ」は、ＭＹＣ遺伝子／転写産物のポリペプチド遺伝子産物、例えば、ＭＹＣ  Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号第ＮＰ＿００２４５８．２号および第ＮＰ＿０３４９７９．３号によってコードされたものなどの、ＭＹＣタンパク質、ペプチド、またはポリペプチド指すために使用される。
【００７０】
本明細書で使用するところの、「ＭＹＣ関連疾患または障害」は、変化したＭＹＣ発現、レベルおよび／または活性に関連すると当業者に知られている疾患または障害を意味する。とりわけ、「ＭＹＣ−関連疾患または障害」は癌および／または増殖性疾患、状態、もしくは障害を含む。特定の例示的な「ＭＹＣ関連疾患または障害」は、肝臓癌（たとえば肝細胞癌あるいはＨＣＣ）、肺癌（たとえばＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、脳癌（たとえば神経膠芽腫）、腎臓癌（たとえば乳頭状腎細胞癌）、胃癌、食道癌、髄芽腫（ｍｅｄｕｌｌｏｂｌａｓｏｍａ）、甲状腺癌、横紋筋肉腫、骨肉腫、扁平上皮癌（たとえば口腔扁平上皮細胞癌）、黒色腫、乳癌、ならびに造血性障害（たとえば、白血病およびリンパ腫、および他の免疫細胞関連障害）を含む。他の過剰増殖性疾患または障害は、たとえば、膀胱、子宮頸部（子宮）、子宮内膜（子宮）、頭頸部、および中咽頭の癌を含み、これらの疾患または障害が標的とされてもよい。
【００７１】
本明細書で使用するところの「増殖性疾患」または「癌」は、肝細胞癌（ＨＣＣ）、白血病、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、および慢性リンパ性白血病、カポジ肉腫などのＡＩＤＳ関連癌；乳癌；骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、繊維肉腫、巨細胞腫、アダマンチノーマおよび脊索腫などの骨癌；髄膜腫、膠芽細胞腫、下級星状細胞腫、オリゴデンドロサイトーマ、下垂体腫瘍、シュワン腫、および転移脳腫瘍などの脳腫瘍；マントル細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、アデノーマ、扁平上皮癌、喉頭癌、胆嚢および胆管癌、網膜芽腫などの網膜の癌、食道癌、胃癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、子宮癌、甲状腺癌、精巣癌、子宮内膜腺癌、メラノーマ、結腸直腸癌、膀胱癌、前立腺癌、（非小細胞肺癌を含む）肺癌、膵臓癌、肉腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、頭頸部癌、皮膚癌、鼻咽腔癌、脂肪肉腫、上皮癌、腎細胞癌、胆嚢腺癌、耳下腺癌、子宮内膜肉腫、多剤耐性癌；ならびに腫瘍血管形成に関連した新血管形成、黄斑変性（例えば湿／乾ＡＭＤ）、角膜血管新生、糖尿病性レチオパシー、血管新生緑内障、近視性変性などの増殖性疾患および状態、ならびに再狭窄および多発性嚢胞腎などの他の増殖性疾患および状態、ならびに単独または他の療法と併用して細胞または組織内での疾患関連遺伝子発現の調節に応答可能な他の癌または増殖性疾患、状態、形質、遺伝型または表現型を含む、本技術分野で公知のような制御されていない細胞増殖または複製によって特徴付けられる疾患、状態、形質、遺伝型または表現型を意味する。
【００７２】
特定の実施形態では、ＭＹＣ標的配列のｄｓＲＮＡ−媒介阻害を評価する。このような実施形態では、ＭＹＣ  ＲＮＡレベルは、任意に、このような抗−ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡが存在しないものに対する本発明の抗−ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡの存在下でのＭＹＣレベルの比較を介して、本技術分野で認識された方法（例えばＲＴ−ＰＣＲ、ノザンブロット、発現アレイなど）によって評価可能である。特定の実施形態では、抗−ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡの存在下でのＭＹＣレベルを、ビヒクルのみの存在下、関連のない標的ＲＮＡを対象とするｄｓＲＮＡの存在下、または処置を全く行っていない状態で、観察したものと比較する。
【００７３】
また、ＭＹＣタンパク質のレベルを評価可能であること、ならびにＭｙｃタンパク質のレベルが、異なる条件下で、ＭＹＣ  ＲＮＡレベルおよび／またはｄｓＲＮＡが、ＭＹＣ発現を阻害する程度まで直接的もしくは間接的に関連することが認識されており、したがってＭｙｃタンパク質レベルを評価する本技術分野で認識されている方法（例えばウエスタンブロット、免疫沈降、他の抗体に基づく方法など）もまた、本発明のｄｓＲＮＡの阻害効果を試験するために使用できる。
【００７４】
選択された対照と比較して、本発明の抗ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡがある系（例えば、無細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ系）、細胞、組織または生命体に投与された時にＭＹＣ  ＲＮＡ（またはＭｙｃタンパク質が評価される場合、ＭＹＣタンパク質レベル）における統計学的に有意な減少が見られた場合に、本発明の抗ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡが「ＭＹＣ阻害活性」を有すると見なされる。実験値の分布と実施された再現アッセイ数が、どのレベルのＭＹＣ  ＲＮＡの減少（％または絶対値のいずれかとして）が（本技術分野で公知の統計学的有意差を決定する標準の方法によって評価されるように）統計学的に有意と判断されるかのパラメータを決定づける傾向にある。しかしながら、特定の実施形態では、「ＭＹＣ阻害活性」は、系、細胞、組織もしくは生命体におけるＭＹＣのレベルの減少の％または絶対レベルに基づいて定義される。例えば、特定の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡの存在下で、好適な対照に対して見られるＭＹＣレベルと比較して、ＭＹＣ  ＲＮＡの少なくとも５％の減少または少なくとも１０％の減少が観察される場合に、本発明のｄｓＲＮＡは、ＭＹＣ阻害活性を有すると見なされる。（例えば、特定の実施形態では、対照と比較して、ＭＹＣレベルの５％または１０％の減少が観察される場合に、組織および／または対象のｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＹＣレベルが、本発明のｄｓＲＮＡ剤によって阻害されると見なすことができる。）特定の他の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡは、ＭＹＣ  ＲＮＡレベルが、選択された対照と比較して少なくとも１５％、選択された対照と比較して少なくとも２０％、選択された対照と比較して少なくとも２５％、選択された対照と比較して少なくとも３０％、選択された対照と比較して少なくとも３５％、選択された対照と比較して少なくとも４０％、選択された対照と比較して少なくとも４５％、選択された対照と比較して少なくとも５０％、選択された対照と比較して少なくとも５５％、選択された対照と比較して少なくとも６０％、選択された対照と比較して少なくとも６５％、選択された対照と比較して少なくとも７０％、選択された対照と比較して少なくとも７５％、選択された対照と比較して少なくとも８０％、選択された対照と比較して少なくとも８５％、選択された対照と比較して少なくとも９０％、選択された対照と比較して少なくとも９５％、選択された対照と比較して少なくとも９６％、選択された対照と比較して少なくとも９７％、選択された対照と比較して少なくとも９８％、または選択された対照と比較して少なくとも９９％減少することが観察される場合に、ＭＹＣ阻害活性を持つと見なされる。いくつかの実施形態では、ＭＹＣの完全阻害が、ｄｓＲＮＡがＭＹＣ阻害活性をもつと見なされるために必要とされる。特定のモデル（例えば細胞培養液）において、ｄｓＲＮＡは、好適な対照と比較してＭＹＣレベルの少なくとも５０％減少が観察される場合に、ＭＹＣ阻害活性を有すると見なされる。特定の他の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、好適な対照と比較してＭＹＣレベルの少なくとも８０％減少が観察される場合に、ＭＹＣ阻害活性を有すると見なされる。
【００７５】
特定の例として、以下の実施例２において、一連のＤｓｉＲＮＡ標的化ＭＹＣをｉｎ  ｖｉｔｒｏにてヒトＡ５４９またはマウスＨｅｐａ  １−６細胞中のＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルを減少させる能力に関して、このような細胞の環境下およびトランスフェクション試薬（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）  ＲＮＡｉＭＡＸ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の存在下で１ｎＭ濃度にて、試験した。以下の実施例２では、アッセイした条件下でＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルの少なくとも７０％の減少に効果があると観察されたＤｓｉＲＮＡに対してＭＹＣ阻害活性があるとみなした。またＭＹＣ阻害活性は、以下の実施例２に対して使用したものと比較して、より厳しいか、より厳しくないいずれかの条件下の、すなわち同一または同様のアッセイおよび条件が使用された場合のｄｓＲＮＡにも起因し得ると考えられる。例えば、特定の実施形態では、試験した本発明のｄｓＲＮＡは、好適な対照と比較したＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルの、少なくとも１０％の減少、少なくとも２０％の減少、少なくとも３０％の減少、少なくとも４０％の減少、少なくとも５０％の減少、少なくとも６０％の減少、少なくとも７５％の減少、少なくとも８０％の減少、少なくとも８５％の減少、少なくとも９０％の減少、または少なくとも９５％の減少がｉｎ  ｖｉｔｒｏにて哺乳類細胞内で、細胞環境下で１ｎＭ以下のｄｓＲＮＡ濃度で観察された場合に、ＭＹＣ阻害活性を有するとみなされる。
【００７６】
本発明の二本鎖ＲＮＡがＭＹＣ阻害活性を有するかどうかを決定するための他の評価項目の利用も考慮される。特に、１つの実施形態では、ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルを評価することに加えて、またはこの評価に代えて、試験したｄｓＲＮＡのＭＹＣタンパク質レベルを減少させる能力を（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにて、哺乳類細胞を接触させてから４８時間後に）評価し、好適な対照と比較して、ＭＹＣタンパク質レベルの少なくとも１０％の減少、少なくとも２０％の減少、少なくとも３０％の減少、少なくとも４０％の減少、少なくとも５０％の減少、少なくとも６０％の減少、少なくとも７０％の減少、少なくとも７５％の減少、少なくとも８０％の減少、少なくとも８５％の減少、少なくとも９０％の減少、または少なくとも９５％の減少がｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにて、アッセイした二本鎖ＲＮＡに接触させた哺乳類細胞内で観察される場合に、試験したｄｓＲＮＡがＭＹＣ阻害活性を有するとみなされる。さらに考慮される評価項目には、例えばＭＹＣレベルの減少に関する表現型−例えば、より詳細に本明細書の他の場所で記述したような、腫瘍または癌細胞の増殖レベルを停止または減少させることを含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて接触させた哺乳類細胞株の増殖の減少および／またはｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍の増殖の減少、の評価が含まれる。
【００７７】
また、投与される濃度および投与後の持続時間にしたがって調整したＭＹＣ阻害活性を有するｄｓＲＮＡを構成するものの評価により、ＭＹＣ阻害活性を時間（持続時間）および、濃度範囲（効力）に関して評価することもできる。したがって、特定の実施形態では、ＭＹＣ活性の少なくとも５０％の減少が、ｄｓＲＮＡの細胞または臓器への投与後２時間、５時間、１０時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日以上の持続期間で観察／持続される場合に、本発明のｄｓＲＮＡをＭＹＣ阻害活性を有すると見なす。さらなる実施形態では、ＭＹＣ阻害活性（例えば特定の実施形態では、少なくとも５０％のＭＹＣ阻害）が、１ｎＭ以下、５００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、５ｐＭ以下、２ｐＭ以下、または１ｐＭ以下の濃度にて細胞の環境中で、例えば、本明細書で記述したようなＭＹＣ阻害活性に関するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ内で観察された場合、本発明のｄｓＲＮＡを強力なＭＹＣ阻害剤であると見なす。特定の実施形態では、本発明の強力なＭＹＣ阻害ｄｓＲＮＡは、有効な送達ビヒクル（たとえば有効な脂質ナノ粒子製剤）で対象に投与する場合１０ｍｇ／ｋｇ以下の製剤化濃度でＭＹＣ阻害活性（特定の実施形態では、少なくとも２０％ＭＹＣレベルを減少させる）を有し得るｄｓＲＮＡであると定義される。好ましくは、本発明の強力なＭＹＣ阻害ｄｓＲＮＡは、効果的な伝達ビヒクルで対象に投与された場合５ｍｇ／ｋｇ以下の製剤化濃度でＭＹＣ阻害活性（例えば特定の実施形態では、少なくとも５０％のＭＹＣレベルの減少）を有し得るものとして定義される。より好ましくは、本発明の強力なＭＹＣ阻害ｄｓＲＮＡは、効果的な伝達ビヒクルで対象に投与された場合５ｍｇ／ｋｇ以下の製剤化濃度にてＭＹＣ阻害活性（例えば特定の実施形態では、少なくとも５０％のＭＹＣレベルの減少）を有し得るものとして定義される。任意に、本発明の強力なＭＹＣ阻害ｄｓＲＮＡは、効果的な伝達ビヒクルで対象に投与された場合２ｍｇ／ｋｇ以下、またはさらには１ｍｇ／ｋｇ以下の製剤化濃度にてＭＹＣ阻害活性（例えば特定の実施形態では、少なくとも５０％のＭＹＣレベルの減少）を有し得るものとして定義される。
【００７８】
特定の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡの効力を、特定のレベルの標的遺伝子ノックダウンを達成するために必要な、標的細胞の細胞質内に存在するｄｓＲＮＡのコピー数を参照して決定する。例えば、特定の実施形態では、強力なｄｓＲＮＡは、細胞あたり１０００以下のＲＩＳＣ−ロードアンチセンス鎖コピー数にて標的細胞の細胞質内に存在した場合に、標的ｍＲＮＡの５０％以上のノックダウンを引き起こしうるｄｓＲＮＡである。より好ましくは、強力なｄｓＲＮＡは、細胞あたり５００以下のＲＩＳＣ−ロードアンチセンス鎖コピー数にて標的細胞の細胞質内に存在した場合に、標的ｍＲＮＡの５０％以上のノックダウンを引き起こしうるｄｓＲＮＡである。任意に、強力なｄｓＲＮＡは、細胞あたり３００以下のＲＩＳＣ−ロードアンチセンス鎖のコピー数にて標的細胞の細胞質内に存在した場合に、標的ｍＲＮＡの５０％以上のノックダウンを引き起こしうるｄｓＲＮＡである。
【００７９】
さらなる実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡの効力は、同一の標的遺伝子内の同一の標的配列を対象とした１９〜２３マー  ｄｓＲＮＡを参照して定義可能である。例えば、対応する１９〜２３マー  ｄｓＲＮＡに対して増強した効力を有する本発明のＤｓｉＲＮＡは、効力差の検出を許容するのに十分低い濃度（例えば、本明細書で記述したようなｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ中、細胞の環境中１ｎＭ以下の、細胞の環境中１００ｐＭ以下、細胞の環境中１０ｐＭ以下、細胞の環境中１ｎＭ以下のトランスフェクション濃度；とりわけ効力差は、用量応答曲線を作成してＤｓｉＲＮＡ／ｄｓＲＮＡに関連したＩＣ５０値を同定する目的のための濃度範囲−例えば０．１ｐＭ〜１０ｎＭ−にわたり、このようなアッセイを実施することを介して最もよく検出可能であると認識されている）にて本明細書で記述したｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイでアッセイした場合に、対応する１９〜２３マー  ｄｓＲＮＡと比較して、さらに５％以上、さらに１０％以上、さらに２０％以上、さらに３０％以上、さらに４０％以上、またはさらに５０％以上標的遺伝子を減少させるＤｓｉＲＮＡでありうる。
【００８０】
ＭＹＣ阻害レベルおよび／またはＭＹＣレベルはまた間接的に評価してもよく、例えば、対象中のポリープまたは腫瘍の大きさ、数および／もしくは増殖率もしくは拡散率の低減の測定を、ＭＹＣレベルおよび／または本発明の二本鎖核酸のＭＹＣ阻害効果を評価するために使用してよい。
【００８１】
特定の実施形態では、語句「から本質的になる」は、本発明の抗−ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡに関連して使用される。いくつかのこのような実施形態では、「から本質的になる」は、ＭＹＣ阻害活性の少なくとも特定のレベル（例えば、少なくとも５０％のＭＹＣ阻害活性）を有する本発明のｄｓＲＮＡを含み、かつ、ｄｓＲＮＡのＭＹＣ阻害活性に有意に影響を与えない１つ以上のさらなる構成要素および／または改変をも含む、組成物を意味する。例えば、特定の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡの改変および／または組成物中のｄｓＲＮＡ−関連構成要素が、本発明のｄｓＲＮＡ単独と比較して３％超、５％超、１０％超、１５％超、２０％超、２５％超、３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、または５０％超まで（任意にＭＹＣ阻害活性の効力または持続期間を含む）ＭＹＣ阻害活性を変えない場合、組成物は、本発明のｄｓＲＮＡ「から本質的になる」。特定の実施形態では、ＭＹＣ阻害活性のより劇的な減少（例えば、効果、持続期間および／または効力において８０％減少、９０％減少など）がさらなる構成要素または改変の存在下で発生したとしても、まだＭＹＣ阻害活性がさらなる構成要素および／または改変の存在下で有意に上昇しない（例えば観察されるＭＹＣ阻害活性のレベルが、本発明の単離されたｄｓＲＮＡに対して観察されるレベルの１０％以内である）場合、組成物は本発明のｄｓＲＮＡから本質的になると見なされる。
【００８２】
本明細書で使用するところの語句「核酸」は、一本鎖または二本鎖形状のデオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、または改変ヌクレオチド、およびそれらのポリマーを意味する。本語句は公知のヌクレオチド類似体または改変された骨格残基あるいは結合を含む核酸を網羅し、それらは合成の、天然に存在する、また天然に存在しない核酸であり、参照核酸と同様の結合特性を持ち、かつ参照ヌクレオチドと同様の様式で代謝される。このような類似体の例には、限定するものではないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホン酸塩、キラル−メチルホスホン酸塩、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）およびアンロックド核酸（ＵＮＡ、たとえばＪｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５２：  １３３−４参照）、ならびにそれらの誘導体が含まれる。
【００８３】
本明細書で使用するところの「ヌクレオチド」は、本技術分野で認識されているように天然塩基（標準）、および本技術分野でよく知られている改変塩基を持つヌクレオチドを含んで使用される。このような塩基は一般的に、ヌクレオチド糖部分の１’位に位置している。ヌクレオチドは一般的に、塩基、糖およびリン酸基を含む。ヌクレオチドは非改変であるか、糖、リン酸および／または塩基部分にて改変されうる（またヌクレオチド類似体、改変ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、非標準ヌクレオチドおよびその他としても互換的に指す；たとえば、Ｕｓｍａｎ  ａｎｄ  ＭｃＳｗｉｇｇｅｎ、上記；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，国際特許公開公報第９２／０７０６５号；Ｕｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，国際特許公開公報第ＷＯ  ９３／１５１８７号；Ｕｈｌｍａｎ  ＆  Ｐｅｙｍａｎ参照、これらすべては参照により本明細書に援用される）。Ｌｉｍｂａｃｈ，ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２：２１８３，１９９４によって要約されたような、本技術分野で公知の改変核酸塩基の種々の例が存在する。核酸分子内に導入可能な塩基改変の非限定例のいくつかとして、ヒポキサンチン、プリン、ピリジン−４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、シュードウラシル、２，４，６−トリメトキシベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５−アルキルシチジン類（例えば５−メチルシチジン）、５−アルキルウリジン類（例えばリボチミジン）、５−ハロウリジン（例えば５−ブロモウリジン）または６−アザピリミジン類または６−アルキルピリミジン類（例えば６−メチルウリジン）、プロピン、およびその他（Ｂｕｒｇｉｎ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５：１４０９０，１９９６；Ｕｈｌｍａｎ  ＆  Ｐｅｙｍａｎ，上記）が挙げられる。本態様において、「改変塩基」は、１’位でのアデニン、グアニン、シトシンおよびウラシルまたはそれらの等価物以外のヌクレオチド塩基を意味する。
【００８４】
本明細書で使用するところの「改変ヌクレオチド」は、ヌクレオシド、ヌクレオ塩基、ペントース環、またはリン酸基への１つ以上の改変を持つヌクレオチドを意味する。例えば、改変ヌクレオチドはアデノシン一リン酸、グアノシン一リン酸、ウリジン一リン酸、およびシチジン一リン酸を含むリボヌクレオチド類ならびにデオキシアデノシン一リン酸、デオキシグアノシン一リン酸、デオキシチミジン一リン酸、およびデオキシシチジン一リン酸を含むデオキシリボヌクレオチド類を除外する。改変には、メチルトランスフェラーゼのようなヌクレオチドを改変する酵素による改変に由来する天然に発生するものが含まれる。改変ヌクレオチドにはまた、合成または天然に発生しないヌクレオチドが含まれる。ヌクレオチドにおける合成のまたは天然に存在しない改変には、２’改変、例えば２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−架橋、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−架橋、２’−ＬＮＡまたは他の二環もしくは「架橋型」ヌクレオシド類似体、および２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）または塩基類似体を含むものが含まれる。本開示のために記述されたような２’−改変ヌクレオチドに関しては、「アミノ」によっては２’−ＮＨ２または２’−Ｏ−ＮＨ２が意味され、これらは改変されてよく、または改変されなくてよい。このような改変基は、例えば、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許公開公報第５，６７２，６９５号およびＭａｔｕｌｉｃ−Ａｄａｍｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第６，２４８，８７８号にて記述されている。本発明の「改変ヌクレオチド」はまた、上述のヌクレオチド類似体を含むことができる。
【００８５】
本明細書の核酸分子に関して、改変は、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）の１つまたは両方の鎖上のパターンで、これらの薬剤上に存在してもよい。本明細書で使用するところの「交互位置」は、すべての他のヌクレオチドが改変ヌクレオチドであるか、または定義された長さのｄｓＲＮＡの鎖にわたる各改変ヌクレオチド間で改変されていないヌクレオチド（例えば、改変されていないリボヌクレオチド）が存在する（例えば５’−ＭＮＭＮＭＮ−３’、３’−ＭＮＭＮＭＮ−５’、式中Ｍは改変ヌクレオチドであり、Ｎは改変されていないヌクレオチドである）パターンを意味する。改変パターンは、例えば本明細書で記述したような、位置ナンバリングの慣例にしたがって、５’または３’末端のいずれかの第１のヌクレオチド位置から開始する（特定の実施形態では、位置１は、本発明のＤｓｉＲＮＡ剤のの推定されるＤｉｃｅｒ開裂事象の後の鎖の終末残基に関して指定される。したがって位置１は毎回本発明の前処理剤の３’末端または５’末端残基を構成するものではない）。交互位置での改変ヌクレオチドのパターンは、鎖の全長を移動してよいが、特定の実施形態では、それぞれ、少なくとも２、３、４、５、６または７つの改変ヌクレオチドを含む、少なくとも４、６、８、１０、１２、１４のヌクレオチドが含まれる。本明細書で使用するところの、「位置の交互対」は、２つの連続した改変ヌクレオチドが、ｄｓＲＮＡの鎖の定義された長さにわたり、２つの連続した改変されていないヌクレオチドによって分離されるパターンを意味する（例えば、５’−ＭＭＮＮＭＭＮＮＭＭＮＮ−３’、３’−ＭＭＮＮＭＭＮＮＭＭＮＮ−５’、式中Ｍは改変ヌクレオチドであり、Ｎは改変されていないヌクレオチドである）。改変パターンは、本明細書で記述したもののような、位置ナンバリングの慣例にしたがって、５’または３’末端いずれかでの、第１のヌクレオチド位置から開始する。交互位置における改変ヌクレオチドのパターンは、鎖の全長を移動してよいが、好ましくは、それぞれ、少なくとも４、６、８、１０、１２または１４の改変ヌクレオチドを含む、少なくとも８、１２、１６、２０、２４、２８のヌクレオチドが含まれる。上記改変パターンは例示であり、本発明の範囲における限定は意図されないことが強調される。
【００８６】
本明細書で使用するところの「塩基類似体」は、核酸二本鎖に組み込むことが可能な改変ヌクレオチド中のヌクレオチド糖部位の１’位（または核酸二本鎖内に組み込むことが可能なヌクレオチド糖部位置換中の等価の位置）に位置するヘテロ環状部位を意味する。本発明のｄｓＲＮＡにおいて、塩基類似体は一般的に、塩基グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）を除く、プリンまたはピリミジン塩基のいずれかである。塩基類似体は、ｄｓＲＮＡ中他の塩基または塩基類似体と二本鎖となりうる。塩基類似体には、本発明の化合物および方法にて有用なもの、たとえば、参考文献によって本明細書に組み込まれている、Ｂｅｎｎｅｒに付与された米国特許第５，４３２，２７２号および第６，００１，９８３号、およびＭａｎｏｈＡＲａｎに付与された米国特許公開公報第２００８０２１３８９１号に開示されたものが含まれる。塩基の非限定例には、ハイポキサンチン（Ｉ）、キサンチン（Ｘ）、３β−Ｄ−リボフラノシル−（２，６−ジアミノピリミジン）（Ｋ）、３−β−Ｄ−リボフラノシル−（１−メチル−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５，７（４Ｈ，６Ｈ）−ジオン）（Ｐ）、イソ−シトシン（ｉｓｏ−Ｃ）、イソ−グアニン（ｉｓｏ−Ｇ）、１−β−Ｄ−リボフラノシル−（５−ニトロインドール）、１−β−Ｄ−リボフラノシル−（３−ニトロピロール）、５−ブロモウラシル、２−アミノプリン、４−チオ−ｄＴ、７−（２−チエニル）−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン（Ｄｓ）およびピロール−２−カルボアルデヒド（Ｐａ）、２−アミノ−６−（２−チエニル）プリン（Ｓ）、２−オキソピリジン（Ｙ）、ジフルオロトリル、４−フルオロ−６−メチルベンズイミダゾール、４−メチルベンゾイミダゾール、３−メチルイソカルボスチリリル、５−メチルイソカルボスチリリルおよび３−メチル−７−プロピニルイソカルボスチリリル、７−アザインドリル、６−メチル−７−アザインドリル、イミジゾピリジニル、９−メチル−イミジゾピリジニル、ピローロピリジニル、イソカルボスチリリル、７−プロピニルイソカルボシチリリル、プロピニル−７−アザインドリル、２，４，５−トリメチルフェニル、４−メチルインドリル、４，６−ジメチルインドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベンジル、テトラセニル、ペンタセニルおよびそれらの構造誘導体（Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５９：７２３８−７２４２（１９９４）；Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２８（１５）：２９１１−２９１４（２０００）；Ｍｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１９：２０５６−２０５７（１９９７）；Ｍｏｒａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２１：２３２３−２３２４（１９９９）；Ｇｕｃｋｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１８：８１８２−８１８３（１９９６）；Ｍｏｒａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２２（６）：１００１−１００７（２０００）；ＭｃＭｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．��ｏｃ．，１２１：１１５８５−１１５８６（１９９９）；Ｇｕｃｋｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６３：９６５２−９６５６（１９９８）；Ｍｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９４：１０５０６−１０５１１（１９９７）；Ｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．，１：１９７−２０６（２００２）；Ｓｈｉｂａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．，１：１６０５−１６１１（２００１）；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２２（３２）：７６２１−７６３２（２０００）；Ｏ’Ｎｅｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６７：５８６９−５８７５（２００２）；Ｃｈａｕｄｈｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１７：１０４３４−１０４４２（１９９５）；および米国特許第６，２１８，１０８号）が含まれる。塩基類似体はまたユニバーサル塩基であってよい。
【００８７】
本明細書で使用するところの「ユニバーサル塩基」は、核酸二本鎖中に存在する場合に、二本鎖ヘリックス構造（例えばリン酸塩骨格の構造）を変化させずに、１超の型の塩基と反対に位置可能な、改変ヌクレオチド中のヌクレオチド糖部位の１’位、またはヌクレオチド糖部位置換基中の等価位置に位置するヘテロ環状部位を意味する。さらに、ユニバーサル塩基は、標的核酸に対する二本鎖に属する、一本鎖の核酸の能力を破壊しない。標的核酸である二本鎖にユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸の能力を、当業者に理解される方法（例えば、ＵＶ吸収、円偏光二色性、ゲルシフト、一本鎖ヌクレアーゼ感受性など）によってアッセイ可能である。さらに、二本鎖形成が観察された条件は、二本鎖安定性または形成を決定するために変化してよく、たとえば融解温度（Ｔｍ）は、核酸二本鎖の安定性と相関するので、温度を変化させてもよい。標的核酸と正確に相補的である参照一本鎖核酸と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、相補的核酸で形成された核酸二本鎖よりも低いＴｍを有する標的核酸と共に二本鎖を形成する。しかしながら、ユニバーサル塩基が単一ミスマッチを産生するために塩基で置換された参照一本鎖核酸と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、ミスマッチした塩基を持つ核酸で形成された二本鎖よりも、高いＴｍを有する標的核酸を備える二本鎖を形成する。
【００８８】
いくつかのユニバーサル塩基は、塩基対形成条件下、ユニバーサル塩基と、すべての塩基グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）との間で水素結合を形成することによって塩基対化可能である。ユニバーサル塩基は、単一相補塩基とのみ塩基対を形成する塩基ではない。二本鎖内で、ユニバーサル塩基は、水素結合を形成しなくてよく、また二本鎖の反対の鎖上の塩基と反対の各Ｇ、Ｃ、Ａ、ＴおよびＵと１つの水素結合または１つ超の水素結合を形成してよい。好ましくは、ユニバーサル塩基は、二本鎖の反対の鎖上の塩基と反対の塩基と相互作用しない。二本鎖において、ユニバーサル塩基間の塩基対化は、リン酸骨格の二本ヘリックス構造を変えずに発生する。ユニバーサル塩基はまた、スタッキング相互作用によって、同一の核酸鎖上の隣接ヌクレオチド中の塩基と相互作用してもよい。このようなスタッキング相互作用は、とりわけ、ユニバーサル塩基が、二本鎖の反対の鎖上の塩基と反対に位置する塩基と任意の水素結合を形成しない条件下で、二本鎖を安定化させる。ユニバーサル−結合ヌクレオチドの非限定例には、イノシン、１−β−Ｄ−リボフラノシル−５−ニトロインドール、および／または１−β−Ｄ−リボフラノシル−３−ニトロピロールが含まれる（Ｑｕａｙ  ｅｔ  ａｌ．に付与された米国特許出願番号第２００７０２５４３６２号、Ｖａｎ  Ａｅｒｓｃｈｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎ  ａｃｙｃｌｉｃ  ５−ｎｉｔｒｏｉｎｄａｚｏｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｕｅ  ａｓ  ａｍｂｉｇｕｏｕｓ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９５  Ｎｏｖ  １１；２３（２１）：４３６３−７０；Ｌｏａｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，３−Ｎｉｔｒｏｐｙｒｒｏｌｅ  ａｎｄ  ５−ｎｉｔｒｏｉｎｄｏｌｅ  ａｓ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｂａｓｅｓ  ｉｎ  ｐｒｉｍｅｒｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎｄ  ＰＣＲ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９５  Ｊｕｌ  １１；２３（１３）：２３６１−６；Ｌｏａｋｅｓ  ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ，５−Ｎｉｔｒｏｉｎｄｏｌｅ  ａｓ  ａｎ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｂａｓｅ  ａｎａｌｏｇｕｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９４  Ｏｃｔ  １１；２２（２０）：４０３９−４３）。
【００８９】
本明細書で使用するところの「ループ」は、特定の一本鎖ヌクレオチド領域に隣接する相補領域が、相補領域間の一本鎖ヌクレオチド領域が、二本鎖形成またはワトソン−クリック塩基対化から除外される方法でハイブリッド形成する、核酸の一本鎖によって形成される構造を意味する。ループは、任意の長さの一本鎖ヌクレオチド領域である。ループの例には、ヘパリン、ステムループまたは伸長ループのような構造中に存在する、対になっていないヌクレオチドが含まれる。
【００９０】
本明細書で使用するところの、ｄｓＲＮＡの文脈中の「伸長ループ」は、一本鎖ループ、および加えて、１、２、３、４、５、６または最大２０の塩基対またはループに隣接する二本鎖を意味する。伸長ループ中、５’側上のループに隣接するヌクレオチドは、３’側上でループに隣接するヌクレオチドと二本鎖を形成する。伸長ループはヘアピンまたはステムループを形成してよい。
【００９１】
本明細書で使用するところの、ｄｓＲＮＡの文脈中の「テトラループ」は、隣接するワトソン−クリックハイブリッド形成ヌクレオチドの安定性に寄与する、安定二次構造を形成する４つのヌクレオチドからなるループ（一本鎖領域）を意味する。理論に限定されるものではないが、テトラループは、スタッキング相互作用によって、隣接するワトソン−クリック塩基対を安定化させてよい。加えて、テトラループ中の４つのヌクレオチド間の相互作用には、非ワトソン−クリック塩基対化、スタッキング相互作用、水素結合、および接触相互作用が含まれるが、これらに限定されるものではない（Ｃｈｅｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９０  Ａｕｇ  １６；３４６（６２８５）：６８０−２；Ｈｅｕｓ  ａｎｄ  ＰＡＲｄｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９１  Ｊｕｌ  １２；２５３（５０１６）：１９１−４）。テトラループは、４つの無作為塩基からなる単一モデルループ配列から推測されるものよりも高い隣接二本鎖融解温度（Ｔｍ）における増加をもたらす。例えば、テトラループは、長さにして少なくとも２塩基対の二本鎖を含むヘアピンに、１０ｍＭ  ＮａＨＰＯ４中、少なくとも５５℃の融解温度をもたらしうる。テトラループには、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、改変ヌクレオチドおよびそれらの混合物が含まれてよい。ＲＮＡテトラループの例には、テトラループのＵＮＣＧファミリ−（例えばＵＵＣＧ）、テトラループのＧＮＲＡファミリー（例えばＧＡＡＡ）、およびＣＵＵＧテトラループが含まれる（Ｗｏｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１９９０  Ｎｏｖ；８７（２１）：８４６７−７１；Ａｎｔａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９１  Ｎｏｖ  １１；１９（２１）：５９０１−５）。ＤＮＡテトラループの例には、テトラフープのｄ（ＧＮＮＡ）ファミリー（例えば、ｄ（ＧＴＴＡ）、テトラループのｄ（ＧＮＲＡ））ファミリー、テトラループのｄ（ＧＮＡＢ）ファミリー、テトラループのｄ（ＣＮＮＧ）ファミリー、テトラフープのｄ（ＴＮＣＧ）ファミリー（例えばｄ（ＴＴＣＧ））が含まれる。（Ｎａｋａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４１（４８），１４２８１−１４２９２，２００２．；ＳＨＩＮＪＩ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｉｐｐｏｎ  Ｋａｇａｋｋａｉ  Ｋｏｅｎ  Ｙｏｋｏｓｈｕ  ＶＯＬ．７８ｔｈ；ＮＯ．２；ＰＡＧＥ．７３１（２０００）．）。
【００９２】
本明細書で使用するところの語句「ｓｉＲＮＡ」は、各鎖が、ＲＮＡ、ＲＮＡ類似体（類）またはＲＮＡおよびＤＮＡを含む二本鎖核酸を意味する。ｓｉＲＮＡは、１９〜２３ヌクレオチドを含み、または２１ヌクレオチドを含む。ｓｉＲＮＡは、概して、ｓｉＲＮＡ中の二本鎖領域が１７〜２１ヌクレオチド、または１９ヌクレオチドを含むように、各鎖の３’末端上に２ｂｐオーバーハングを有する。概して、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、ＭＹＣ遺伝子／ＲＮＡの標的配列と十分に相補的である。
【００９３】
本発明の抗−ＭＹＣ  ＤｉＲＮＡは、少なくとも２５ヌクレオチドの鎖長を有する。したがって、特定の実施形態では、抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡは、１つのオリゴヌクレオチド配列、長さにして少なくとも２５ヌクレオチドであり、長くても３５、または最大５０以上のヌクレオチドである、第１の配列を含む。このＲＮＡ配列は、長さにして２６〜３５、２６〜３４、２６〜３３、２６〜３２、２６〜３１、２６〜３０、２６〜２９ヌクレオチドでありうる。本配列は、長さにして２７または２８ヌクレオチドでありえ、長さにして２７ヌクレオチドであり得る。ＤｓｉＲＮＡ剤の第２の配列は、真核細胞の細胞質内のような生物学的条件下で第１の配列にアニールする配列でありうる。一般的に、第２のオリゴヌクレオチド配列は、第１のオリゴヌクレオチドと少なくとも１９の相補塩基対を持ち、より典型的には、第２のオリゴヌクレオチド配列は、第１のオリゴヌクレオチド配列と、２１以上の相補塩基対を持ち、または２５以上の相補塩基対を持つ。１つの実施形態では、第２の配列は、第１の配列と同一の長さであり、ＤｓｉＲＮＡ剤は平滑末端である。別の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ剤の末端は１つ以上のオーバーハングを有する。
【００９４】
特定の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ剤の第１および第２のオリゴヌクレオチド配列は、化学的に合成可能で、典型的に化学的に合成される別のオリゴヌクレオチド鎖上に存在する。いくつかの実施形態では、両方の鎖は、長さにして２６〜３５ヌクレオチドである。他の実施形態では、両方の鎖は、長さにして、２５〜３０または２６〜３０である。１つの実施形態では、両方の鎖は、長さにして２７ヌクレオチドであり、完全に相補的であり、平滑末端を有する。本発明の特定の実施形態では、抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡの第１および第２の配列は、別のＲＮＡオリゴヌクレオチド（鎖）上に存在する。１つの実施形態では、１つまたは両方のオリゴヌクレオチド鎖は、Ｄｉｃｅｒに対する基質として働くことが可能である。他の実施形態では、少なくとも１つの改変が、遺伝子発現を阻害することにおいて、二本鎖ＲＮＡ構造の有効性を最大化する方向で、Ｄｉｃｅｒが二本鎖ＲＮＡ構造に結合することを促進して存在する。本発明の特定の実施形態では、抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ剤は、第１の鎖（センス鎖）の３’末端で平滑末端を有し、第２の鎖（アンチセンス鎖）の３’末端で３’オーバーハングを有する抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡと、異なる長さの２つのオリゴヌクレオチド鎖からなる。ＤｓｉＲＮＡはまた、１つ以上のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）塩基置換基を含んでもよい。
【００９５】
２つの別のオリゴヌクレオチドを含む好適なＤｓｉＲＮＡ組成物は、化学結合基によって、それらのアニーリング領域外で化学的に連結可能である。多くの好適な化学連結基が、本技術分野で公知であり、使用可能である。好適な基は、ＤｓｉＲＮＡにおけるＤｉｃｅｒ活性を妨げず、標的遺伝子から転写されたＲＮＡの指向性破壊と干渉しない。あるいは、２つの別のオリゴヌクレオチドは、ヘアピン構造が、ＤｓｉＲＮＡ組成物を作製している２つのオリゴヌクレオチドのアニーリングに際して産生されるように、第３のオリゴヌクレオチドによって連結可能である。ヘアピン構造は、ＤｓｉＲＮＡ上のＤｉｃｅｒ活性を妨げず、標的ＲＮＡの指向性破壊と干渉しない。
【００９６】
本明細書で使用するように、標的ＲＮＡまたはｃＤＮＡ配列（例えばＭＹＣ  ｍＲＮＡ）に「十分に相補的な」配列を有するｄｓＲＮＡ、例えばＤｓｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡは、ｄｓＲＮＡが、ＲＮＡｉ機構（例えばＲＩＳＣ複合体）または工程によって、標的ＲＮＡ（ｃＤＮＡ配列が列挙される場合、列挙されたｃＤＮＡ配列に相当するＲＮＡ配列）の破壊を引き起こすのに十分な配列を持つことを意味する。例えば、ＲＡＮｉ機構または工程によって、標的ＲＮＡの破壊を引き起こすための、標的ＲＮＡまたはｃＤＮＡ配列に「十分に相補的な」ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡ活性の適切なアッセイ（例えば、以下実施例２にて記述したようなｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ）中の、標的ＲＮＡのレベルにおける検出可能な減少を引き起こすｄｓＲＮＡとして同定可能であり、またはさらなる実施例において、ＲＮＡｉ機構または工程によって、標的ＲＮＡの破壊を引き起こすための標的ＲＮＡまたはｃＤＮＡに十分に相補的なｄｓＲＮＡを、ｄｓＲＮＡ活性の適切なアッセイ中の標的ＲＮＡのレベルにおける、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の減少を産出するｄｓＲＮＡとして同定可能である。さらなる例において、ＲＮＡｉ機構または工程によって標的ＲＮＡの破壊を引き起こすための、標的ＲＮＡまたはｃＤＮＡ配列に十分に相補的なｄｓＲＮＡは、細胞または生命体における標的ＲＮＡまたはタンパク質レベルに関する阻害活性の特定のレベルの持続期間の評価に基づいて同定可能である。例えば、ＲＮＡｉ機構または工程によって標的ＲＮＡの破壊を引き起こすための、標的ＲＮＡ配列またはｃＤＮＡ配列に十分に相補的なｄｓＲＮＡは、細胞または生命体への前記ｄｓＲＮＡの投与から少なくとも４８時間後に、少なくとも２０％まで、標的ｍＲＮＡレベルを減少可能なｓｄＲＮＡとして同定可能である。好ましくは、ＲＮＡｉ機構または工程によって標的ＲＮＡの破壊を引き起こすための、標的ＲＮＡまたはｃＤＮＡ配列に十分に相補的なｄｓＲＮＡは、細胞または生命体への前記ｄｓＲＮＡの投与から少なくとも７２時間後に少なくとも４０％まで、細胞または生命体への前記ｄｓＲＮＡの投与から少なくとも４、５または７日後に少なくとも４０％まで、細胞または生命体への前記ｄｓＲＮＡの投与から少なくとも４８時間後に少なくとも５０％まで、細胞または生命体への前記ｄｓＲＮＡの投与から少なくとも７２時間後に少なくとも５０％まで、細胞または生命体への前記ｄｓＲＮＡの投与から少なくとも４、５または７日後に少なくとも５０％まで、細胞または生命体への前記ｄｓＲＮＡの投与から少なくとも４８時間後に少なくとも８０％まで、細胞または生命体への前記ｄｓＲＮＡの投与から少なくとも７２時間後に少なくとも８０％まで、細胞または生命体への前記ｄｓＲＮＡの投与から少なくとも４、５または��日後に少なくとも８０％まで、標的ｍＲＮＡレベルを減少可能なｄｓＲＮＡとして同定可能である。
【００９７】
ｄｓＲＮＡ分子は、アンチセンス鎖のすべての残基が、標的分子内の残基に相補的であるようにデザイン可能である。あるいは、置換を、分子の安定性を増大させ、かつ／または処理活性を増強するために、分子内で実施可能である。置換は、鎖内にて実施可能であり、または鎖の末端での残基にて実施可能である。特定の実施形態では、置換および／または改変は、ＤｓｉＲＮＡ剤内の特定の残基にて実施される。このような置換および／または改変には、例えばＤｓｉＲＮＡ剤のセンス鎖の３’末端位置からナンバリングした場合、位置１、２および３の残基の１つ以上でのデオキシ−改変、ならびにＤｓｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端残基での、２’−Ｏ−アルキル（例えば２’−Ｏ−メチル）改変の導入が含まれ、このような改変はまた、アンチセンス鎖の３’末端のオーバーハング位置、および活性ｓｉＲＮＡ剤を形成するために処理されるＤｓｉＲＮＡ剤の領域内に含まれるＤｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の交互残基にて実施される。以上の改変は、例示的なものとして提供され、任意の様式にて限定されるよう意図するものではない。本発明の抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ剤において実施可能な改変および置換のさらなる記述を含む、好ましいＤｓｉＲＮＡ剤の構造のさらなる考慮を以下で見ることが可能である。
【００９８】
第１の配列が、本明細書の第２の配列に関して「実質的に相補的である」配列を指す場合、２つの配列は完全に相補的であってよく、またはそれらの最終的な適用に最も関連する条件下でハイブリッド形成する能力を維持したまま、それら２つの配列は、ハイブリッド形成に際して、１つ以上、しかしながら一般的に４、３または２以下のミスマッチ塩基を形成してよい。しかしながら、２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリッド形成に際して、１つ以上の一本鎖オーバーハングを形成するようにデザインされる場合、このようなオーバーハングは、相補性の決定に関して、ミスマッチとして見なされるものではない。例えば、１つの２１の長さのオリゴヌクレオチドおよび別の２３の長さのオリゴヌクレオチドを含むｄｓＲＮＡであって、長い方のオリゴヌクレオチドが、短い方のオリゴヌクレオチドと完全に相補的な２１のオリゴヌクレオチドを含むｄｓＲＮＡが、本発明の目的となる「完全に相補的である」ことをさらに意味してもよい。
【００９９】
本明細書で使用する、語句「二本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」は、上記で定義したような、２つの逆平行および実質的に相補的な核酸鎖を含む二本鎖構造を持つ、リボ核酸分子の複合体を意味する。二本鎖構造を形成する２つの鎖は、１つの大きなＲＮＡ分子の異なる部分であってよく、または別々のＲＮＡ分子であってよい。別々のＲＮＡ分子の場合、このようなｄｓＲＮＡは、多くの場合ｓｉＲＮＡ（「短い干渉ＲＮＡ」）またはＤｓｉＲＮＡ（「Ｄｉｃｅｒ基質ｓｉＲＮＡ」）を指す。２つの鎖が１つの大きな分子の一部分であり、したがって二本鎖構造を形成する１つの鎖の３’末端と、別の他の鎖の５’末端間のヌクレオチドの連鎖によって連結される場合、連結しているＲＮＡ鎖は、「ヘアピンループ」、「短ヘアピンＲＮＡ」または「ｓｈＲＮＡ」を指す。２つの鎖が、二本鎖構造を形成する１つの鎖の３’末端と、別の他の鎖の５’末端との間のヌクレオチドの連鎖以外の方法によって共有的に連結する場合、連結している構造は、「リンカー」を指す。ＲＮＡ鎖は、同一または異なる数のヌクレオチドを有していてもよい。塩基対の最大数は、ｄｓＲＮＡの最も短い鎖中のヌクレオチドの数マイナス二本鎖中に存在する任意のオーバーハングである。二本鎖構造に加えて、ｄｓＲＮＡは、１つ以上のヌクレオチドオーバーハングを含んでよい。加えて、本明細書で使用するところの「ｄｓＲＮＡ」は、多重ヌクレオチドにおける実質的改変を含み、かつ本明細書で開示されたか、本技術分野で公知のすべての型の改変を含む、リボヌクレオチド、ヌクレオシド間結合、末端基、キャップおよび共役部位への化学的改変が含まれうる。ｓｉＲＮＡ−またはＤｓｉＲＮＡ−型分子内で使用されるような、任意のこのような改変は、本明細書および特許請求の範囲のための「ｄｓＲＮＡ」によって包含される。
【０１００】
語句「二本鎖領域」は、ワトソン−クリック塩基対化、もしくは相補的であるか、もしくは実質的に相補的であるオリゴヌクレオチド鎖間の二本鎖を許容する他の様式のいずれかによって、互いに塩基対を形成する２つの相補的であるか、または本質的に相補的なオリゴヌクレオチド中の領域を意味する。例えば、２１ヌクレオチドユニットを有するオリゴヌクレオチド鎖は、別の２１ヌクレオチドユニットのオリゴヌクレオチドと塩基対化可能であり、さらには、「二本鎖領域」が１９塩基対からなるように、各鎖上の１９塩基のみが、相補的であるか、または実質的に相補的である。残りの塩基対は、例えば、５’および３’オーバーハングとして存在してもよい。さらに、二本鎖領域内で、１００％相補性は必要ではなく、実質的な相補性が二本鎖領域内で許容可能である。実質的な相補性は、生物学的条件下でアニーリング可能であるような、鎖間の相補性を意味する。２つの鎖が、生物学的条件下でアニーリング可能であるかどうかを実験的に決定するための技術は、当業者によく知られている。あるいは、２つの鎖を、互いにアニールするかどうかを決定するために、合成でき、かつ生物学的条件下で共に添加できる。
【０１０１】
多数の塩基にわたり塩基対を形成する一本鎖核酸が、「ハイブリッドする」と呼ばれる。ハイブリッド形成は、概して、生理学的または生物学的に関連のある条件（例えば、細胞内：ｐＨ７．２、１４０ｍＭカリウムイオン、細胞外ｐＨ７．４、１４５ｍＭナトリウムイオン）下で決定される。ハイブリッド形成条件は一般的に、一価カチオンと生物学的に許容可能な緩衝液とを含み、二価カチオン、複合体アニオン、例えばグルタミン酸カリウム由来のグルタミン酸、スクロースのような非荷電種、および試料中の水の活性を減少させるための不活性ポリマー、例えばＰＥＧを含んでよく、または含まなくてよい。このような条件には、塩基対が形成される条件が含まれる。
【０１０２】
ハイブリッド形成は、二本鎖を形成している一本鎖核酸を乖離させるために必要な温度、すなわち（融解温度；Ｔｍ）によって測定される。ハイブリッド形成条件はまた、塩基対が形成されうる条件下でありうる。種々の厳密性条件を使用して、ハイブリッド形成を決定可能である（たとえばＷａｈｌ，Ｇ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ．Ａ．Ｒ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７を参照のこと）。厳密性温度条件は通常、少なくとも約３０℃の、より好ましくは少なくとも約３７℃、最も好ましくは少なくとも約４２℃の温度を含む。長さにして５０塩基対未満であると予想されるハイブリッドに対するハイブリッド形成温度は、ハイブリッドの融解温度（Ｔｍ）よりも５〜１０℃低くあるべきであり、ここでＴｍは、以下の等式にしたがって決定される。長さにして１８塩基対以下のハイブリッドでは、Ｔｍ（℃）＝２（Ａ＋Ｔ塩基の＃）＋４（Ｇ＋Ｃ塩基の＃）。長さにして１８〜４９塩基対のハイブリッドにでは、Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−（６００／Ｎ）、式中Ｎはハイブリッド中の塩基数であり、［Ｎａ＋］はハイブリッド形成緩衝液中のナトリウムイオンの濃度である（１×ＳＳＣ＝０．１６５Ｍでの［Ｎａ＋］）。例えば、ハイブリッド形成決定緩衝液を表１に示す。
【表１】
2015529467.tif 000003
【０１０３】
ハイブリッド形成条件における有用な変化が、当業者に簡単に理解されるであろう。ハイブリッド形成技術は、当業者によく知られており、例えば、Ｂｅｎｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９６：１８０，１９７７）；Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｈｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ７２：３９６１，１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ２００１）；Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；およびＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにて記述されている。
【０１０４】
本明細書で使用するところの、「オリゴヌクレオチド鎖」は、一本鎖核酸分子である。オリゴヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、改変ヌクレオチド（例えば２’改変、合成塩基類似体などを持つヌクレオチド）またはそれらの混合物を含んでよい。このような改変オリゴヌクレオチドは、例えば細胞取込の増強、およびヌクレアーゼの存在下での安定性の増大のような特性のために、天然の形態に対して好ましい。
【０１０５】
本明細書で使用するところの語句「リボヌクレオチド」は、天然および合成の、非改変および改変リボヌクレオチドを包含する。改変には、オリゴヌクレオチド中の糖部分に対する、塩基部分に対する、および／またはリボヌクレオチド間の結合に対する変化が含まれる。本明細書で使用するところの語句「リボヌクレオチド」はとりわけ、２’リボース環位置にて、単一プロトン基を有するヌクレオチドである、デオキシリボヌクレオチドを除外する。
【０１０６】
本明細書で使用するところの語句「デオキシリボヌクレオチド」は、天然および合成の、非改変および改変デオキシリボヌクレオチドを包含する。改変には、オリゴヌクレオチド中の、糖部分に対する、塩基部分に対する、および／またはデオキシリボヌクレオチド間の結合に対する変化が含まれる。本明細書で使用するところの語句「デオキシリボヌクレオチド」にはまた、ｄｓＲＮＡ剤のＤｉｃｅｒ開裂を許容しない改変リボヌクレオチド、例えば、このような残基の結合においてＤｉｃｅｒ開裂が発生することを許容しない、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ホスホロチオエート−改変リボヌクレオチド残基なども含まれる。
【０１０７】
本明細書で使用するところの語句「ＰＳ−ＮＡ」は、ホスホロチオエート−改変ヌクレオチド残基を意味する。語句「ＰＳ−ＮＡ」はしたがって、ホスホロチオエート−改変リボヌクレオチド（「ＰＳ−ＲＮＡ」」）およびホスホロチオエート−改変デオキシリボヌクレオチド（「ＰＳ−ＤＮＡ」）の両方を包含する。
【０１０８】
本明細書で使用するところの「Ｄｉｃｅｒ」は、ｄｓＲＮＡもしくはｄｓＲＮＡ−含有分子、例えば二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）またはプレ−ミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を、通常３’末端に２塩基オーバーハングを持つ、二本鎖核酸断片１９〜２５ヌクレオチド長に開裂する、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩファミリーのエンドリボヌクレアーゼを意味する。本発明の特定のｄｓＲＮＡ（たとえば「ＤｓｉＲＮＡ」）に関して、本発明の薬剤のｄｓＲＮＡ領域によって形成される二本鎖は、Ｄｉｃｅｒによって認識され、二本鎖の少なくとも１つの鎖上Ｄｉｃｅｒ基質である。Ｄｉｃｅｒは、ＲＮＡ干渉経路中の第一段階を触媒し、結果として、標的ＲＮＡの分解をもたらす。ヒトＤｉｃｅｒのタンパク質配列が、参考文献によって本明細書で組み込まれた寄託番号第ＮＰ＿０８５１２４号の下、ＮＣＢＩデータベースにて提供される。
【０１０９】
Ｄｉｃｅｒ「開裂」は、以下のように決定できる（例えば、Ｃｏｌｌｉｎｇｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １８：１８７-２００（２００８）を参照のこと）。Ｄｉｃｅｒ開裂アッセイにおいて、ＲＮＡ二本鎖（１００ｐｍｏｌ）を、１ユニットの組換え体ヒトＤｉｃｅｒ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）あり、またはなしで、２０μＬの２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２中、３７℃にて１８〜２４時間インキュベートする。試料を、Ｐｅｒｆｏｒｍａ  ＳＲ９６−ウェルプレート（Ｅｄｇｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓメリーランド州ゲイザースバーグ）を用いて脱塩する。Ｄｉｃｅｒでの二本鎖ＲＮＡの処理前および処理後の電子噴霧イオン化液体クロマトグラフィー質量分析（ＥＳＩ−ＬＣＭＳ）を、ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ  ＴＳＱ７０００、Ｘｃａｌｉｂｕｒデータシステム、ＰｒｏＭａｓｓデータ処理ソフトウェアおよびＰａｒａｄｉｇｍ  ＭＳ４  ＨＰＬＣ（Ｍｉｃｈｒｏｍ  ＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，カリフォルニア州オーバーン）からなるＯｌｉｇｏ  ＨＴＣＳシステム（Ｎａｖａｔｉａ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ：Ｈａｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）を用いて実施する。本アッセイにおいて、Ｄｉｃｅｒ開裂が、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％のＤｉｃｅｒ基質ｄｓＲＮＡ（すなわち２５〜３０ｂｐ、ｄｓＲＮＡ、好ましくは２６〜３０ｂｐ  ｄｓＲＮＡ）が、より短いｄｓＲＮＡ（例えば、１９〜２３ｂｐ  ｄｓＲＮＡ、好ましくは２１〜２３ｂｐ  ｄｓＲＮＡ）に開裂される場で発生する。
【０１１０】
本明細書で使用するところの「Ｄｉｃｅｒ開裂部位」は、ＤｉｃｅｒがｄｓＲＮＡ（例えば、本発明のＤｓｉＲＮＡ剤のｄｓＲＮＡ領域）を開裂する部位を意味する。Ｄｉｃｅｒは、概してｄｓＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方を開裂する、２つのＲＮａｓｅＩＩＩドメインを含む。ＲＮａｓｅＩＩＩドメインとＰＡＺドメインとの間の平均距離が、産出する短い二本鎖核酸断片の長さを決定し、この距離は変動可能である（Ｍａｃｒａｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１１：１９５−８）。図１で示すように、Ｄｉｃｅｒは、アンチセンス鎖の３’末端から除去された２１番目と２２番目とのヌクレオチド間の部位にて、およびセンス鎖の５’末端より除去された２１番目と２２番目とのヌクレオチド間の対応する部位で、２ヌクレオチド３’オーバーハングを持つアンチセンス鎖を有する、本発明の特定の二本鎖リボ核酸を開裂すると考えられる。図１にて描写したものと異なる、ｄｓＲＮＡ分子に対する、考えられる、かつ／または一般的なＤｉｃｅｒ開裂部位は、Ｍａｃｒａｅらにて記述されたものを含む、本技術分野で認識される方法を介して同様に同定されてもよい。図１で描写したＤｉｃｅｒ開裂事象が、２１ヌクレオチドｓｉＲＮＡを産出する一方で、ｄｓＲＮＡ（例えばＤｓｉＲＮＡ）のＤｉｃｅｒ開裂が結果として、長さにして１９〜２３ヌクレオチドのＤｉｃｅｒ−処理したｓｉＲＮＡ長の産出となりうることが留意されい。実際、特定の実施形態では、二本鎖ＤＮＡ領域は、２１マーではなく、概して好ましくない１９マーまたは２０マーｓｉＲＮＡの一般的なＤｉｃｅｒ切除を指向するために、ｄｓＲＮＡ内に含まれてよい。
【０１１１】
本明細書で使用するところの、「オーバーハング」は、ｄｓＲＮＡの５’末端または３’末端にて１つ以上の遊離末端を有する二本鎖の文脈において、対になっていないヌクレオチドを意味する。特定の実施形態では、オーバーハングは、アンチセンス鎖またはセンス鎖上の３’または５’オーバーハングである。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、１〜６ヌクレオチド、任意に１〜５、１〜４、１〜３、１〜２、２〜６、２〜５、２〜４、２〜３、３〜６、３〜５、３〜４、４〜６、４〜５、５〜６ヌクレオチド、または１、２、３、４、５または６ヌクレオチドの長さを持つ３’オーバーハングである。「平滑末端化」または「平滑末端」は、ｄｓＲＮＡの末端に対でないヌクレオチドがない、すなわちヌクレオチドのオーバーハングがないことを意味する。明確にすると、ｓｉＲＮＡの３´末端または５´末端に結合した化学的キャップまたは非ヌクレオチド化学的部分は、ｓｉＲＮＡがオーバーハングを有しているかまたは平滑末端化されているかどうかを判定する際に考慮されるものではない。特定の実施形態では、本発明は、細胞または哺乳類中のＭＹＣ標的遺伝子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子であって、ｄｓＲＮＡがＭＹＣ標的遺伝子の発現において形成されるｍＲＮＡの少なくとも一部に相補的である相補領域を含むアンチセンス鎖を含み、かつ上記相補領域が３５未満の長さのヌクレオチド、任意に１９〜２４の長さのヌクレオチドまたは２５〜３０の長さのヌクレオチドであり、かつｄｓＲＮＡが、ＭＹＣ標的遺伝子を発現する細胞と接触すると、ＭＹＣ標的遺伝子の発現を少なくとも１０％、２５％、または４０％阻害する、ｄｓＲＮＡ分子を提供する。
【０１１２】
本発明のｄｓＲＮＡは、二本鎖構造を形成するためにハイブリッド形成するのに十分に相補的である２つのＲＮＡ鎖を含む。ｄｓＲＮＡの１つの鎖（アンチセンス鎖）は、ＭＹＣ標的遺伝子の発現の間に形成されたｍＲＮＡの配列から誘導された、標的配列に実質的に相補的な、一般的には完全に相補的な相補性の領域を含み、他の鎖（センス鎖）は、アンチセンス鎖に相補的な領域を含み、それによって２つの鎖は、好適な条件下で混合した時に、ハイブリッド形成し、二本鎖構造を形成する。一般的に、二本鎖構造は、長さにして１５〜３５、任意に２５〜３０、２６〜３０、１８〜２５、１９〜２４または１９〜２１塩基対である。同様に、標的配列に相補的な領域は、長さにして、１５〜３５、任意に１８〜３０、２５〜３０、１９〜２４または１９〜２１ヌクレオチドである。本発明のｄｓＲＮＡはさらに、１つ以上の一本鎖ヌクレオチドオーバーハングを含んでよい。（一般的に長さにして少なくとも２５塩基対の）ＤｓｉＲＮＡおよびｓｉＲＮＡ（特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡの二本鎖構造は、２０〜２３、任意に特に２１塩基対）を含む、長さにして１５〜３５塩基対の二本鎖構造を含むｄｓＲＮＡが、ＲＮＡ干渉を誘導することにおいて効果的であり得ることが同定されてきた（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  ２０：６８７７−６８８８）。また、２０塩基対より短い（例えば１５、１６、１７、１８または１９塩基対二本鎖）を有するｄｓＲＮＡも同様に効果的であり得ることが同定されてきた。特定の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡは、１９以上の長さのヌクレオチドのうち少なくとも１つの鎖を含みうる。特定の実施形態では、以下の表５の配列の１つに相補的な配列マイナス１つまたは両方の末端上の数個のヌクレオチドを含む、より短いｄｓＲＮＡが、上記および表２〜４および６〜７にて記述したｄｓＲＮＡと比較して同様に効果的であり得ることが合理的に予測できる。したがって、表５の配列の１つに十分に相補的な、少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上の隣接ヌクレオチドの部分配列を含み、完全配列を含むｄｓＲＮＡから最高５、１０、１５、２０、２５または３０％阻害まで、本発明で記述したアッセイにて、ＭＹＣ標的遺伝子の発現を阻害するそれらの能力において異なるｄｓＲＮＡが、本発明によって考慮される。１つの実施形態では、ｄｓＲＮＡの少なくとも１つの末端が、１〜５、任意に１〜４、特定の実施形態では、１または２ヌクレオチドの一本鎖ヌクレオチドオーバーハングを有する。少なくとも１つのヌクレオチドオーバーハングを有する特定のｄｓＲＮＡ構造は、ｄｓＲＮＡ分子の両方の間端にて、塩基対形成平滑末端を有する同等のものと比較して、優れた阻害特性を有する。
【０１１３】
本明細書で使用するところの語句「ＲＮＡ処理」は、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたはＲＮａｓｅ  Ｈ経路の構成要素（例えばＤｒｏｓｈａ、Ｄｉｃｅｒ、ＭＹＣｇｏｎａｕｔｅ２または他のＲＩＳＣエンドリボヌクレアーゼおよびＲＮａｓｅＨ）によって実施される処理活性を意味し、以下でより詳細に記述されている（以下「ＲＮＡ処理」項目を参照のこと）。本語句は、ＲＮＡの５’キャッピングの転写後工程と、非−ＲＩＳＣまたは非−ＲＮａｓｅ  Ｈ−媒介工程を介したＲＮＡの分解とから明確に区別される。このようなＲＮＡの「分解」は、種々の形態、例えば脱アデニル化（３’ポリ（Ａ）テールの除去）、および／または１つ以上の種々のエンド−もしくはエキソ−ヌクレアーゼ（例えばＲＮａｓｅＩＩＩ、ＲＮａｓｅＰ、ＲＮａｓｅＴ１、ＲＮａｓｅＡ（１、２、３、４／５）、オリゴヌクレオチダーゼなど）によるＲＮＡの本体の一部または全てのヌクレアーゼ消化、を取り得る。
【０１１４】
「相同配列」は、遺伝子、遺伝子転写産物および／または非コードポリヌクレオチドのような、１つ以上のポリヌクレオチド配列によって共有されるヌクレオチド配列を意味する。例えば、相同配列は、サイトカインおよびそれと対応する受容体のような、遺伝子ファミリーの異なるメンバー、異なるタンパク質エピトープ、異なるタンパク質アイソフォームまたは完全に相違する遺伝子のような、関連するが異なるタンパク質をコードしている２つ以上の遺伝子によって共有されるヌクレオチド配列でありうる。相同配列は、非コードＤＮＡまたはＲＮＡ、制御配列、イントロン、および転写制御または調節の部位のような、２つ以上の非コードポリヌクレオチドによって共有されるヌクレオチド配列でありうる。相同配列はまた、１つ超のポリヌクレオチド配列によって共有される保存配列領域を含みうる。相同性は、部分相同配列（例えば９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％など）もまた本発明で考慮されるので、完全相同性（例えば１００％）である必要はない。実際、本発明のｄｓＲＮＡ剤のデザインおよび利用は、本明細書で記述したｄｓＲＮＡ剤と完全な相補性を有するＭＹＣの標的ＲＮＡに対してのみでなく、上記ｄｓＲＮＡ剤に対して例えば９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％などのみ相補的である配列を有するＭＹＣ  ＲＮＡに対しての、このようなｄｓＲＮＡ剤を利用する可能性も考慮する。同様に、本明細書で記述された本発明のｄｓＲＮＡ剤は、上記ＤｓＲＮＡ剤と標的ＭＹＣ  ＲＮＡ例えばＭＹＣの特定の対立バリアント（例えば増強された治療的対象の対立遺伝子）との間の相補性の程度増強するために、当業者によって簡単に変更されうる。実際、標的ＭＹＣ配列に関する挿入、欠損および単一点変異を持つｄｓＲＮＡ剤配列がまた、阻害に対して効果的であり得る。あるいは、ヌクレオチド類似体置換または挿入を持つｄｓＲＮＡ剤配列が阻害に対して効果的であり得る。
【０１１５】
配列同一性は、本技術分野で公知の配列比較およびアライメントアルゴリズムによって決定してよい。２つの核酸配列の（または２つのアミノ酸配列の）パーセント同一性を決定するために、配列を比較の目的でアライメントさせる（例えばギャップを、最適配列のために、第１の配列または第２の配列中に導入可能である）。次に、対応するヌクレオチド（またはアミノ酸）位置でのヌクレオチド（またはアミノ酸残基）を比較する。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同一の残基によって占有される場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、配列によって共有された同一の位置の数の関数であり（すなわち％相同性＝同一位置の＃／位置×１００の合計＃）、任意に、導入されたギャップの数および／または導入されたギャップの長さに対するスコアにペナルティーを課す。
【０１１６】
配列の比較と、２つの配列間の配列パーセント同一性の決定とを、数学的アルゴリズムを用いて実施可能である。１つの実施形態では、アライメントは、十分な同一性をもってアライメントさせたアライメントの特定の部分にわたり、しかし低度の同一性を持つ部分にはわたらず（すなわち局所アライメント）産出された。配列の比較のために使用した局所アライメントアルゴリズムの好ましい、非限定例は、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−７７にてのように改変された、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４−６８のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）内に組み込まれる。
【０１１７】
別の実施形態では、アライメントが最適化されるギャップアライメントは、適切なギャップを導入することによって形成され、パーセント同一性が、アライメントした配列（すなわちギャップアライメント）の長さにわたり決定される。比較の目的のためギャップアライメントを得るために、ギャップＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２にて記述したように使用可能である。別の実施形態では、アライメントが最適化されるグローバルアライメントが、適切なギャップを導入することによって形成され、パーセント同一性が、アライメントした配列の全長（すなわちグローバルアライメント）にわたり決定される。配列のグローバル比較のために利用される数学的アルゴリズムの好ましい、非限定例は、Ｍｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部である、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）内に組み込まれる。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する時に、ＰＡＭ１２０ウェイト残基表、１２のギャップ長ペナルティー、および４のギャップペナルティーを使用可能である。
【０１１８】
ｄｓＲＮＡアンチセンス鎖およびＭＹＣ  ＲＮＡ配列の一部の間の８０％超の配列同一性、例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性が好ましい。あるいは、ｄｓＲＮＡは、ＭＹＣ  ＲＮＡの一部とハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列（またはオリゴヌクレオチド配列）として機能的に定義してよい（例えば、４００ｍＭ  ＮａＣｌ、４０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ  ｐＨ６．４、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１２〜１６時間の５０℃または７０℃ハイブリッド形成と続く洗浄）。さらなる好ましいハイブリッド形成条件には、１×ＳＳＣ中７０℃、または１×ＳＳＣ中５０℃、５０％ホルムアミドでのハイブリッド形成と、続く０．３×ＳＳＣ中７０℃での洗浄、または４×ＳＳＣ中７０℃もしくは４×ＳＳＣ中５０℃、５０％ホルムアミドでのハイブリッド形成と、続く１×ＳＳＣ中６７℃での洗浄が含まれる。長さにして５０塩基対未満であると予測されるハイブリッドでのハイブリッド形成温度は、当該ハイブリッドの融解温度（Ｔｍ）より５〜１０℃低いべきであり、Ｔｍは以下の等式にしたがって決定される。長さにして１８塩基対より少ないハイブリッドでは、Ｔｍ（℃）＝２（Ａ＋Ｔ塩基の＃）＋４（Ｇ＋Ｃ塩基の＃）。長さにして１８〜４９塩基対のハイブリッドでは、Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−（６００／Ｎ）、式中Ｎはハイブリッド中の塩基数であり、［Ｎａ＋］はハイブリッド形成緩衝液中のナトリウムイオンの濃度である（１×ＳＳＣ＝０．１６５Ｍでの［Ｎａ＋］）。ポリヌクレオチドハイブリッド形成に対する厳密性条件のさらなる例が、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，ａｎｄ  Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，９および１１章、およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，項目２．１０および６．３〜６．４にて提供される。等しいヌクレオチド配列の長さは、少なくとも１０、１２、１５、１７、２０、２２、２５、２７または３０塩基であってよい。
【０１１９】
「保存配列領域」は、世代間で、または１つの生物系、対象もしくは生命体から別の生物系、対象もしくは生命体までで有意に変化しないポリヌクレオチドの１つ以上の領域のヌクレオチド配列を意味する。ポリヌクレオチドは、コードおよび非コードのＤＮＡおよびＲＮＡ両方を含みうる。
【０１２０】
「センス領域」は、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス領域に相補性を持つｄｓＲＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。さらに、ｄｓＲＮＡ分子のセンス領域は、標的核酸配列と相同性を持つ核酸配列を含みうる。
【０１２１】
「アンチセンス領域」は、標的核酸配列に相補性を持つｄｓＲＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。さらに、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス領域は、ｄｓＲＮＡ分子のセンス領域に相補性を持つ核酸配列を含む。
【０１２２】
本明細書で使用するところの「アンチセンス鎖」は、標的ＲＮＡの配列に相補的な配列を持つ一本鎖核酸分子を意味する。アンチセンス鎖が、塩基類似体を有する改変ヌクレオチドを含む場合、その全長にわたり相同的である必要はないが、少なくとも標的ＲＮＡにハイブリッドしなければならない。
【０１２３】
本明細書で使用するところの「センス鎖」は、アンチセンス鎖の配列に相補的な配列を持つ一本鎖核酸分子を意味する。アンチセンス鎖が、塩基類似体を有する改変ヌクレオチドを含む場合、センス鎖は、アンチセンス鎖の全長にわたり相補的である必要はないが、アンチセンス鎖と少なくとも二本鎖を形成しなければならない。
【０１２４】
本明細書で使用するところの「ガイド鎖」は、ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ−含有分子の一本鎖核酸分子を意味し、結果としてＲＮＡ干渉をもたらす標的ＲＮＡの配列と十分に相補的である配列を持つ。ＤｉｃｅｒによるｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ−含有分子の開裂後、ガイド鎖の断片が、ＲＩＳＣに結合したままとなり、ＲＩＳＣ複合体の一成分として標的ＲＮＡに結合し、ＲＩＳＣによって標的ＲＮＡの開裂を促進する。本明細書で使用するように、ガイド鎖は、連続一本鎖核酸を意味する必要はなく、好ましくはＤｉｃｅｒによる開裂の部位で、不連続性を含んでよい。ガイド鎖はアンチセンス鎖である。
【０１２５】
本明細書で使用するところの「パッセンジャー鎖」は、ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ−含有分子のオリゴヌクレオチド鎖を意味し、ガイド鎖の配列と相補的である配列を持つ。本明細書で使用するように、パッセンジャー鎖は、連続一本鎖核酸を意味する必要はなく、好ましくはＤｉｃｅｒにより開裂する部位で、不連続性を含んでよい。パッセンジャー鎖はセンス鎖である。
【０１２６】
「標的核酸」は、その発現、レベルまたは活性が調整されるべきである核酸配列を意味する。標的核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡでありうる。ＭＹＣを標的とする薬剤に関して、特定の実施形態では、標的核酸はＭＹＣ  ＲＮＡ、たとえば特定の実施形態ではＭＹＣ  ｍＲＮＡである。ＭＹＣ  ＲＮＡ標的部位はまた、対応するｃＤＮＡ配列によって互換的に参照されうる。ＭＹＣのレベルはまた、ＭＹＣの上流エフェクターの標的化を介して標的化されてよく、または調整されたもしくは誤調節されたＭＹＣの効果がまた、ＭＹＣシグナル伝達経路中のＭＹＣの下流の分子の標的化によって調整されてもよい。
【０１２７】
「相同性」は、核酸が、従来のワトソン−クリック、または他の従来にはない型のいずれかによって、他の核酸配列と水素結合を形成可能であることを意味する。本発明の核酸分子に関して、その相補的な配列を備える核酸分子に対する結合自由エネルギーは、核酸の関連ある機能、例えばＲＮＡｉ活性を進行できるために十分なエネルギーである。核酸分子に対する結合自由エネルギーの決定が、本技術分野でよく知られている（例えば、Ｔｕｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，ＣＳＨ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．ＬＩＩ  ｐｐ．１２３−１３３；Ｆｒｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８３：９３７３−９３７７；Ｔｕｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：３７８３−３７８５を参照のこと）。パーセント相補性は、第２の核酸配列と水素結合（例えばワトソン−クリック塩基対化）を形成可能な核酸分子中の近接残基の割合を示唆する（例えば１０ヌクレオチドを持つ第２の核酸配列に対して塩基対形成する第１のオリゴヌクレオチド中の合計１０ヌクレオチドのうち５、６、７、８、９または１０ヌクレオチドが、それぞれ５０％、６０％、７０％、８０％、９０％および１００％相同性を表す）。「完全に相補的」は、核酸配列の近接残基の全てが、第２の核酸配列中の同一の数の近接残基と水素結合することを意味する。１つの実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ分子は、１つ以上の標的核酸分子またはそれらの一部に対して相補的である、１９〜３０（例えば１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０以上）のヌクレオチドを含む。
【０１２８】
１つの実施形態では、ＭＹＣ遺伝子発現を下方制御または低減させる本発明のｄｓＲＮＡ分子を、対象または生命体内のＭＹＣ−関連疾患または障害（例えば癌）を治療、予防または減少させるために使用する。
【０１２９】
本発明の１つの実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡ分子の各配列は、独立して、長さにして２５〜３５ヌクレオチド、特定の実施形態では、長さにして２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４または３５ヌクレオチドである。別の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡ二本鎖は独立して、２５〜３０塩基対（例えば２５、２６、２７、２８、２９または３０）を含む。別の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡ分子の１つ以上の鎖は、標的（ＭＹＣ）核酸分子に相補的である、１９〜３５ヌクレオチド（例えば、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４または３５）を独立して含む。特定の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡ分子は、長さにして２５〜３４ヌクレオチド（例えば長さにして２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３または３４ヌクレオチド、任意に全てのこのようなヌクレオチドは、反対の鎖の同種ヌクレオチドと塩基対を形成する）の長さの二本鎖ヌクレオチドを有する。（本発明の例示的なＤｓｉＲＮＡ分子を図１および以下に示す。
【０１３０】
本明細書で使用するところの「細胞」は、その通常の生物学的意味において使用され、全多細胞生物を意味せず、例えば特にヒトを意味するものではない。細胞は、生命体、例えば鳥類、植物ならびにヒト、ウシ、ヒツジ、類人猿、サル、ブタ、イヌおよびネコのような哺乳類中に存在しうる。細胞は、原核生物（例えば細菌細胞）または真核生物（例えば哺乳類細胞または植物細胞）でありうる。細胞は、体細胞または生殖細胞由来、全能細胞または多能性細胞、分裂細胞または非分裂細胞でありうる。細胞はまた、配偶子または胚、幹細胞または完全に分化した細胞から分化してよく、または含んでよい。特定の態様内で、語句「細胞」は、本開示の１つ以上の単離ｄｓＲＮＡ分子を含むヒト細胞のような哺乳類細胞を特に意味する。特定の態様において、細胞は、結果として標的核酸のＲＮＡ干渉をもたらす、ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ−含有分子を有し、ＲＮＡｉに対して必要とされるタンパク質およびタンパク質複合体、例えばＤｉｃｅｒおよびＲＩＳＣを含む。
【０１３１】
特定の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒ基質ｓｉＲＮＡ（「ＤｓｉＲＮＡ」）である。ＤｓｉＲＮＡは、ｄｉｃｅｒ基質ではない阻害核酸（「非ＤｓｉＲＮＡ」）と比較して、特定の利点を有しうる。このような利点には、限定するものではないが、非ＤｓｉＲＮＡに対して、ＤｓｉＲＮＡの効果の持続期間の増強、ならびに各阻害核酸が好適に処方され、同一の濃度で、哺乳類細胞内の阻害活性に関して評価される時、非ＤｓｉＲＮＡ（例えば１９〜２３マーｓｉＲＮＡ）と比較したＤｓｉＲＮＡの阻害活性の増強が含まれる（後者のシナリオの場合、ＤｓｉＲＮＡは、非−ＤｓｉＲＮＡよりも強力なものとして同定されうる）。非−ＤｓｉＲＮＡに対するＤｓｉＲＮＡの効力の増大の検出はしばしば、結果としてＤｉｓＲＮＡが、標的ＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）におけるおよそ３０〜７０％のノックダウン活性を誘発することとなる、製剤化濃度（例えばｄｓＲＮＡのトランスフェクション濃度）でほとんど容易に達成される。活性ＤｓｉＲＮＡに関して、このようなノックダウン活性のレベルは、ほとんどの場合、１ｎＭ以下の好適に処方されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ哺乳類細胞ＤｓｉＲＮＡトランスフェクション濃度で達成され、特定の例においては、２００ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、５ｐＭ以下、または１ｐＭ以下のＤｓｉＲＮＡトランスフェクション濃度で観察される。実際、標的ＲＮＡの３０〜７０％ノックダウンが観察される正確な濃度のＤｓｉＲＮＡ間の変動に起因して、効果的な濃度の範囲にわたる、ＤｓｉＲＮＡおよび非ＤｓｉＲＮＡの阻害活性の評価を介したＩＣ５０曲線の構築が、非ＤｓｉＲＮＡ阻害剤に対するＤｓｉＲＮＡの効力の増強を検出する好ましい方法である。
【０１３２】
特定の実施形態では、（Ｄｉｃｅｒ開裂前、最初に形成されたような状態での）ＤｓｉＲＮＡは、その中に含まれる１９、２０、２１、２２または２３の塩基対配列よりも、哺乳類細胞中のＭＹＣ標的遺伝子発現を低減させる際により効力がある。特定のこのような実施形態では、ｄｉｃｅｒ開裂前のＤｓｉＲＮＡは、その中に含まれる１９〜２１マーよりもより強力である。任意に、ｄｉｃｅｒ開裂前のＤｓｉＲＮＡは、（それによって、ｄＴｄＴオーバーハングを持つ２１ヌクレオチド鎖長を有するｓｉＲＮＡを形成する）対称ｄＴｄＴオーバーハングで合成される配列中に含まれた１９塩基対二本鎖よりも強力である。特定の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、本発明のＤｓｉＲＮＡで列挙される２１ヌクレオチド標的配列の少なくとも１９ヌクレオチドを標的とする、１９〜２３マーｓｉＲＮＡ（例えばｄＴｄＴオーバーハングを持つ１９塩基対二本鎖）よりも強力である（いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、このようなＤｓｉＲＮＡに対する標的部位の同一性は、ＤｓｉＲＮＡに対するＡｇｏ２開裂部位の同定を介して同定される。いったんＤｓｉＲＮＡのＡｇｏ２開裂部位がＤｓｉＲＮＡに対して決定されたならば、任意の他の阻害ｄｓＲＮＡに対するＡｇｏ２開裂部位の同定が実施され、これらのＡｇｏ２開裂部位をアライメント可能であり、それによって多数のｄｓＲＮＡに対して考えられる標的ヌクレオチド配列のアライメントが決定される）。特定の関連した実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、本発明のＤｓｉＲＮＡに関して記載される２１ヌクレオチド標的配列のうち少なくとも２０ヌクレオチドを標的とする、１９〜２３マーｓｉＲＮＡよりも強力である。任意に、ＤｓｉＲＮＡは、本発明のＤｓｉＲＮＡに関して記載される同一の２１ヌクレオチド標的配列を標的とする、１９〜２３マーｓｉＲＮＡよりも強力である。特定の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、本発明のＤｓｉＲＮＡに関して記載される同一の２１ヌクレオチド標的配列を標的とする、任意の２１マーｓｉＲＮＡよりも強力である。任意に、ＤｓｉＲＮＡは、本発明のＤｓｉＲＮＡに関して記載される同一の２１ヌクレオチド標的配列を標的とする、任意の２１または２２マーｓｉＲＮＡよりも強力である。特定の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、本発明のＤｓｉＲＮＡに関して記載される同一の２１ヌクレオチド標的配列を標的とする任意の２１、２２または２３マーｓｉＲＮＡより強力である。上述のように、このような効力の評価は、１ｎＭ以下の濃度で、好適に製剤化（例えば適切なトランスフェクト試薬で製剤化された）ｄｓＲＮＡにおいて最も効果的に実施される。任意に、ＩＣ５０評価を、効果的な阻害濃度の範囲にわたる活性を評価するために実施し、それによって、アッセイされたｄｓＲＮＡの相対効力のの確固とした比較が可能となる。
【０１３３】
本発明のｄｓＲＮＡ分子は、直接加えられ、または脂質（例えばカチオン性脂質）と複合体化、リポソーム内にパッケージでき、または標的細胞もしくは組織に伝達可能である。核酸または核酸複合体を、バイポリマー内への組み込みを用い、またはこの組み込みを用いることなく、直接的な皮膚適用、経皮適用、または注射を介して、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで、関連する組織に局所投与できる。特定の実施形態では、本発明の核酸分子は、図１で示す配列と、以下の例示的構造を含む。このような核酸分子の例は、これらの図面および例示的構造にて定義した配列から本質的になる。さらに、このような薬剤を、ＤｓｉＲＮＡ剤の改変パターン化の以下の記述にしたがって改変する場合、図１にて記述された構造物の化学的に改変された形態、および以下の例示的構造を、図１および以下の例示的構造のＤｓｉＲＮＡ剤に対して記述した全ての使用において利用可能である。
【０１３４】
別の態様において、本発明は、本発明の１つ以上のｄｓＲＮＡを含む哺乳類細胞を提供する。１つ以上のｄｓＲＮＡ分子は独立して、同一または異なる部位を標的とすることが可能である。
【０１３５】
「ＲＮＡ」は、少なくとも１つの、好ましくは少なくとも４、８および１２のリボヌクレオチド残基を含む分子を意味する。少なくとも４、８または１２のＲＮＡ残基は近接してよい。「リボヌクレオチド」は、β−Ｄ−リボフラノース部位の２’位でヒドロキシル基を持つヌクレオチドを意味する。本語句には、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、部分的に精製したＲＮＡのような単離ＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え体産出ＲＮＡ、ならびに１つ以上のヌクレオチドの添加、欠損、置換および／または変質によって天然に存在するＲＮＡとは異なる変質ＲＮＡが含まれる。このような変質には、例えばＲＮＡのうち１つ以上のヌクレオチドでの、ｄｓＲＮＡの末端または内部などへの非ヌクレオチド物質の添加が含まれる。本発明のＲＮＡ分子中のヌクレオチドはまた、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのような、非標準ヌクレオチドも含みうる。これらの変質ＲＮＡは、類似体または天然に存在するＲＮＡの類似体を指すことができる。
【０１３６】
「対象」は、外植された細胞のドナーもしくはレシピエントまたはこれらの細胞自体である、生命体を意味する。「対象」はまた、本発明のｄｓＲＮＡ剤を投与可能な生命体を意味する。対象は、ヒトまたはヒト細胞を含む、哺乳類または哺乳類細胞でありうる。
【０１３７】
語句「薬学的に許容可能な担体」は、治療薬剤の投与のための担体を意味する。例示的な担体には、生理食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノールおよびこれらの混合物が含まれる。経口で投与される薬物に関する薬学的に許容可能な担体には、限定するものではないが、不活性希釈液、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、甘味剤、香味料、着色料および保存料などのような、薬理学的に許容可能な賦形剤が含まれる。好適な不活性希釈液には、炭酸ナトリウムおよびカルシウム、リン酸ナトリウムおよびカルシウムならびにラクトースが含まれ、トウモロコシデンプンおよびアルギン酸が好適な崩壊剤である。結合剤には、デンプンおよびゼラチンが含まれてよく、潤滑剤は存在するのであれば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクが一般的である。望ましい場合、胃腸管での吸収を遅延させるために、錠剤を一ステアリン酸グリセリルまたは二ステアリン酸グリセリルのような物質で被覆してよい。開示されたｄｓＲＮＡの薬学的に許容可能な担体は、リポソーム、カプシド、カプソイド、ポリマー性ナノカプセルまたはポリマー性ミクロカプセルのようなミセル構造であってよい。
【０１３８】
ポリマー性ナノカプセルまたはマイクロカプセルは、カプセル封入または結合したｄｓＲＮＡの細胞内への伝達および放出を促進する。これらには、特にポリブチルシアノアクリレートを含む、ポリマー性および単量体物質が含まれる。物質および製造法の要約が公開されている（Ｋｒｅｕｔｅｒ，１９９１を参照のこと）。ポリマー化／ナノ粒子産出段階で単量体および／またはオリゴマー前駆体から形成されるポリマー性物質は、ナノ粒子を製造する領域の当業者が通常の技術にしたがって好適に選択してよいポリマー性物質の分子量および分子量分布であるため、先行技術からそれ自体が公知である。
【０１３９】
本発明の種々の方法には、本明細書で「適切な対照（ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ）」を互換的に意味する、「適切な対照（ｓｕｉｔａｂｌｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ）」に対して、値、レベル、特徴、特性、性質などを比較することを含む段階が含まれる。「適切な対照」または「適切な対照」は、比較の目的のために有用な、当業者によく知られた対照または標準である。１つの実施形態では、「適切な対照」または「適切な対照」は、本明細書で記述したような、ＲＮＡｉ法を実施する前に決定される、値、レベル、特徴、特性、性質などである。例えば、転写率、ｍＲＮＡレベル、翻訳率、タンパク質レベル、生物学的活性、細胞特徴または性質、遺伝子型、表現型などを、本発明のＲＮＡサイレンシング剤（例えばＤｓｉＲＮＡ）を細胞または生命体内に導入する前に決定可能である。別の実施形態では、「適切な対照」または「適切な対照」は、細胞または生物内で決定される値、レベル、特徴、特性、性質などであり、例えば正常な特質を示している対照または正常細胞または生命体である。さらなる別の実施形態では、「適切な対照」または「適切な対照」は、あらかじめ定義された値、レベル、特徴、特性、性質などである。
【０１４０】
語句「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、その業界で認識された意味を持ち、例えば、精製された試薬または抽出物、例えば細胞抽出物を含む。語句「ｉｎ  ｖｉｖｏ」はまた、その業界で認識された意味を持ち、例えば生細胞を含み、例えば不死化細胞、初代細胞、細胞株および／または生命体内の細胞を含む。
【０１４１】
本明細書で使用するところの「治療」または「治療すること」は、治療薬剤（例えばｄｓＲＮＡ剤またはそれをコードしているベクターもしくはトランスジーン）を、疾患もしくは障害、または疾患もしくは障害の症状を治癒、治す、緩和、軽減、変化、治療、改善、改良または影響する目的で、障害を有する患者への適用もしくは投与、または治療薬剤の患者由来の単離した組織または細胞株への適用もしくは投与として定義される。語句「治療」または「治療する」はまた、予防的に薬剤を投与する文脈でも使用される。語句「有効用量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｏｓｅ）」または「有効用量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｏｓａｇｅ）」は、望ましい効果を達成するか、または少なくとも部分的に達成するための十分な量として定義される。語句「治療上有効量」は、疾患をすでに患っている患者における疾患またはその合併症を治癒する、または少なくとも部分的に停止させるのに十分な量として定義される。語句「患者」には、予防的治療または治療的治療のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳類対象が含まれる。
【０１４２】
抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ剤の構造
特定の実施形態では、本発明の抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ剤は以下の構造を持つことができる。
【０１４３】
１つのこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１】
2015529467.tif 000004
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡであり、かつ「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインである。関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２】
2015529467.tif 000005
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡであり、かつ「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。
【０１４４】
本発明のＤｓｉＲＮＡは、広範囲の改変パターン（例えば、２’−Ｏ−メチルＲＮＡパターン、例えば伸長ＤｓｉＲＮＡ剤内）を持ちうる。本発明のＤｓｉＲＮＡの第２の鎖の特定の改変パターンを以下に示す。
【０１４５】
１つの実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化３】
2015529467.tif 000006
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである。関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化４】
2015529467.tif 000007
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。
【０１４６】
別のこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５】
2015529467.tif 000008
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである。関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化６】
2015529467.tif 000009
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。
【０１４７】
別のこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化７】
2015529467.tif 000010
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである。関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化８】
2015529467.tif 000011
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。
【０１４８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９】
2015529467.tif 000012
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである。関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化１０】
2015529467.tif 000013
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１】
2015529467.tif 000014
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。さらなる関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化１２】
2015529467.tif 000015
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡおよび「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。また、この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７」または「Ｍ７」改変パターンを指す。
【０１４９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化１３】
2015529467.tif 000016
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである。関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４】
2015529467.tif 000017
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化１５】
2015529467.tif 000018
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６】
2015529467.tif 000019
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。また、この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６」または「Ｍ６」改変パターンを指す。
【０１５０】
他の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化１７】
2015529467.tif 000020
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは
【化１８】
2015529467.tif 000021
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、下線残基は２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９】
2015529467.tif 000022
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０】
2015529467.tif 000023
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。また、この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５」または「Ｍ５」改変パターンを指す。
【０１５１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１】
2015529467.tif 000024
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２】
2015529467.tif 000025
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３】
2015529467.tif 000026
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４】
2015529467.tif 000027
を含み、式中、「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書では「ＡＳ−Ｍ４」または「Ｍ４」改変パターンを指す。
【０１５２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５】
2015529467.tif 000028
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６】
2015529467.tif 000029
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７】
2015529467.tif 000030
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８】
2015529467.tif 000031
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、および「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。また、この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ８」または「Ｍ８」改変パターンを指す。
【０１５３】
他の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９】
2015529467.tif 000032
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０】
2015529467.tif 000033
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１】
2015529467.tif 000034
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２】
2015529467.tif 000035
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。また、この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３」または「Ｍ３」改変パターンを指す。
【０１５４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３】
2015529467.tif 000036
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４】
2015529467.tif 000037
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５】
2015529467.tif 000038
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６】
2015529467.tif 000039
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、および「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。また、この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２」または「Ｍ２」改変パターンを指す。
【０１５５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７】
2015529467.tif 000040
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３８】
2015529467.tif 000041
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３９】
2015529467.tif 000042
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４０】
2015529467.tif 000043
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。また、この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１」または「Ｍ１」改変パターンを指す。
【０１５６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４１】
2015529467.tif 000044
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４２】
2015529467.tif 000045
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４３】
2015529467.tif 000046
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４４】
2015529467.tif 000047
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ９」または「Ｍ９」改変パターンを指す。
【０１５７】
他の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４５】
2015529467.tif 000048
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４６】
2015529467.tif 000049
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４７】
2015529467.tif 000050
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４８】
2015529467.tif 000051
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、および「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１０」または「Ｍ１０」改変パターンを指す。
【０１５８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化４９】
2015529467.tif 000052
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５０】
2015529467.tif 000053
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５１】
2015529467.tif 000054
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５２】
2015529467.tif 000055
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、および「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。また、この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１１」または「Ｍ１１」改変パターンを指す。
【０１５９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５３】
2015529467.tif 000056
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５４】
2015529467.tif 000057
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５５】
2015529467.tif 000058
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５６】
2015529467.tif 000059
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１２」または「Ｍ１２」改変パターンを指す。
【０１６０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５７】
2015529467.tif 000060
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５８】
2015529467.tif 000061
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化５９】
2015529467.tif 000062
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６０】
2015529467.tif 000063
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１３」または「Ｍ１３」改変パターンを指す。
【０１６１】
他の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６１】
2015529467.tif 000064
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６２】
2015529467.tif 000065
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６３】
2015529467.tif 000066
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６４】
2015529467.tif 000067
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２１」または「Ｍ２１」改変パターンを指す。
【０１６２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６５】
2015529467.tif 000068
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６６】
2015529467.tif 000069
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６７】
2015529467.tif 000070
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６８】
2015529467.tif 000071
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１４」または「Ｍ１４」改変パターンを指す。
【０１６３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化６９】
2015529467.tif 000072
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７０】
2015529467.tif 000073
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７１】
2015529467.tif 000074
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７２】
2015529467.tif 000075
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、および「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１５」または「Ｍ１５」改変パターンを指す。
【０１６４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７３】
2015529467.tif 000076
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７４】
2015529467.tif 000077
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７５】
2015529467.tif 000078
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７６】
2015529467.tif 000079
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、および「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１６」または「Ｍ１６」改変パターンを指す。
【０１６５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７７】
2015529467.tif 000080
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７８】
2015529467.tif 000081
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化７９】
2015529467.tif 000082
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８０】
2015529467.tif 000083
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、および「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１７」または「Ｍ１７」改変パターンを指す。
【０１６６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８１】
2015529467.tif 000084
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８２】
2015529467.tif 000085
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８３】
2015529467.tif 000086
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８４】
2015529467.tif 000087
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１８」または「Ｍ１８」改変パターンを指す。
【０１６７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８５】
2015529467.tif 000088
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８６】
2015529467.tif 000089
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８７】
2015529467.tif 000090
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８８】
2015529467.tif 000091
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１９」または「Ｍ１９」改変パターンを指す。
【０１６８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化８９】
2015529467.tif 000092
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９０】
2015529467.tif 000093
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９１】
2015529467.tif 000094
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９２】
2015529467.tif 000095
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２０」または「Ｍ２０」改変パターンを指す。
【０１６９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９３】
2015529467.tif 000096
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９４】
2015529467.tif 000097
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９５】
2015529467.tif 000098
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９６】
2015529467.tif 000099
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２２」または「Ｍ２２」改変パターンを指す。
【０１７０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９７】
2015529467.tif 000100
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９８】
2015529467.tif 000101
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化９９】
2015529467.tif 000102
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１００】
2015529467.tif 000103
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２４」または「Ｍ２４」改変パターンを指す。
【０１７１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１０１】
2015529467.tif 000104
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１０２】
2015529467.tif 000105
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１０３】
2015529467.tif 000106
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１０４】
2015529467.tif 000107
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２５」または「Ｍ２５」改変パターンを指す。
【０１７２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１０５】
2015529467.tif 000108
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１０６】
2015529467.tif 000109
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１０７】
2015529467.tif 000110
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１０８】
2015529467.tif 000111
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２６」または「Ｍ２６」改変パターンを指す。
【０１７３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１０９】
2015529467.tif 000112
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１０】
2015529467.tif 000113
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１１】
2015529467.tif 000114
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１２】
2015529467.tif 000115
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２７」または「Ｍ２７」改変パターンを指す。
【０１７４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１３】
2015529467.tif 000116
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１４】
2015529467.tif 000117
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１５】
2015529467.tif 000118
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１６】
2015529467.tif 000119
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。また、この改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２８」または「Ｍ２８」改変パターンを指す。
【０１７５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１７】
2015529467.tif 000120
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１８】
2015529467.tif 000121
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１１９】
2015529467.tif 000122
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２０】
2015529467.tif 000123
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２９」または「Ｍ２９」改変パターンを指す。
【０１７６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２１】
2015529467.tif 000124
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２２】
2015529467.tif 000125
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３０」または「Ｍ３０」改変パターンを指す。
【０１７７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２３】
2015529467.tif 000126
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２４】
2015529467.tif 000127
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３１」または「Ｍ３１」改変パターンを指す。
【０１７８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２５】
2015529467.tif 000128
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２６】
2015529467.tif 000129
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３２」または「Ｍ３２」改変パターンを指す。
【０１７９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２７】
2015529467.tif 000130
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２８】
2015529467.tif 000131
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１２９】
2015529467.tif 000132
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３０】
2015529467.tif 000133
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３４」または「Ｍ３４」改変パターンを指す。
【０１８０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３１】
2015529467.tif 000134
2015529467.tif 000135
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３２】
2015529467.tif 000136
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３３】
2015529467.tif 000137
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３４】
2015529467.tif 000138
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３５」または「Ｍ３５」改変パターンを指す。
【０１８１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３５】
2015529467.tif 000139
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３６】
2015529467.tif 000140
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３７】
2015529467.tif 000141
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３８】
2015529467.tif 000142
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３７」または「Ｍ３７」改変パターンを指す。
【０１８２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１３９】
2015529467.tif 000143
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４０】
2015529467.tif 000144
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４１】
2015529467.tif 000145
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４２】
2015529467.tif 000146
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３８」または「Ｍ３８」改変パターンを指す。
【０１８３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４３】
2015529467.tif 000147
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４４】
2015529467.tif 000148
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４５】
2015529467.tif 000149
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４６】
2015529467.tif 000150
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４０」または「Ｍ４０」改変パターンを指す。
【０１８４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４７】
2015529467.tif 000151
2015529467.tif 000152
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４８】
2015529467.tif 000153
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１４９】
2015529467.tif 000154
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５０】
2015529467.tif 000155
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４１」または「Ｍ４１」改変パターンを指す。
【０１８５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５１】
2015529467.tif 000156
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５２】
2015529467.tif 000157
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５３】
2015529467.tif 000158
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５４】
2015529467.tif 000159
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３６」または「Ｍ３６」改変パターンを指す。
【０１８６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５５】
2015529467.tif 000160
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５６】
2015529467.tif 000161
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５７】
2015529467.tif 000162
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５８】
2015529467.tif 000163
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４２」または「Ｍ４２」改変パターンを指す。
【０１８７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１５９】
2015529467.tif 000164
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６０】
2015529467.tif 000165
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６１】
2015529467.tif 000166
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６２】
2015529467.tif 000167
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４３」または「Ｍ４３」改変パターンを指す。
【０１８８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６３】
2015529467.tif 000168
2015529467.tif 000169
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６４】
2015529467.tif 000170
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６５】
2015529467.tif 000171
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６６】
2015529467.tif 000172
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４４」または「Ｍ４４」改変パターンを指す。
【０１８９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６７】
2015529467.tif 000173
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６８】
2015529467.tif 000174
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１６９】
2015529467.tif 000175
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７０】
2015529467.tif 000176
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４５」または「Ｍ４５」改変パターンを指す。
【０１９０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７１】
2015529467.tif 000177
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７２】
2015529467.tif 000178
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７３】
2015529467.tif 000179
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７４】
2015529467.tif 000180
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４６」または「Ｍ４６」改変パターンを指す。
【０１９１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７５】
2015529467.tif 000181
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７６】
2015529467.tif 000182
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７７】
2015529467.tif 000183
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７８】
2015529467.tif 000184
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４７」または「Ｍ４７」改変パターンを指す。
【０１９２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１７９】
2015529467.tif 000185
2015529467.tif 000186
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８０】
2015529467.tif 000187
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８１】
2015529467.tif 000188
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８２】
2015529467.tif 000189
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４８」または「Ｍ４８」改変パターンを指す。
【０１９３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８３】
2015529467.tif 000190
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８４】
2015529467.tif 000191
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８５】
2015529467.tif 000192
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８６】
2015529467.tif 000193
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５２」または「Ｍ５２」改変パターンを指す。
【０１９４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８７】
2015529467.tif 000194
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８８】
2015529467.tif 000195
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１８９】
2015529467.tif 000196
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９０】
2015529467.tif 000197
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５４」または「Ｍ５４」改変パターンを指す。
【０１９５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９１】
2015529467.tif 000198
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９２】
2015529467.tif 000199
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９３】
2015529467.tif 000200
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９４】
2015529467.tif 000201
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５５」または「Ｍ５５」改変パターンを指す。
【０１９６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９５】
2015529467.tif 000202
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９６】
2015529467.tif 000203
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９７】
2015529467.tif 000204
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９８】
2015529467.tif 000205
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５６」または「Ｍ５６」改変パターンを指す。
【０１９７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化１９９】
2015529467.tif 000206
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２００】
2015529467.tif 000207
2015529467.tif 000208
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０１】
2015529467.tif 000209
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０２】
2015529467.tif 000210
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５７」または「Ｍ５７」改変パターンを指す。
【０１９８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０３】
2015529467.tif 000211
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０４】
2015529467.tif 000212
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０５】
2015529467.tif 000213
2015529467.tif 000214
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０６】
2015529467.tif 000215
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５８」または「Ｍ５８」改変パターンを指す。
【０１９９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０７】
2015529467.tif 000216
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０８】
2015529467.tif 000217
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２０９】
2015529467.tif 000218
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１０】
2015529467.tif 000219
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５９」または「Ｍ５９」改変パターンを指す。
【０２００】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１１】
2015529467.tif 000220
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１２】
2015529467.tif 000221
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１３】
2015529467.tif 000222
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１４】
2015529467.tif 000223
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６０」または「Ｍ６０」改変パターンを指す。
【０２０１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１５】
2015529467.tif 000224
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１６】
2015529467.tif 000225
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１７】
2015529467.tif 000226
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１８】
2015529467.tif 000227
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６１」または「Ｍ６１」改変パターンを指す。
【０２０２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２１９】
2015529467.tif 000228
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２０】
2015529467.tif 000229
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２１】
2015529467.tif 000230
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２２】
2015529467.tif 000231
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６２」または「Ｍ６２」改変パターンを指す。
【０２０３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２３】
2015529467.tif 000232
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２４】
2015529467.tif 000233
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２５】
2015529467.tif 000234
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２６】
2015529467.tif 000235
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６３」または「Ｍ６３」改変パターンを指す。
【０２０４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２７】
2015529467.tif 000236
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２８】
2015529467.tif 000237
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２２９】
2015529467.tif 000238
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３０】
2015529467.tif 000239
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６４」または「Ｍ６４」改変パターンを指す。
【０２０５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３１】
2015529467.tif 000240
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３２】
2015529467.tif 000241
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３３】
2015529467.tif 000242
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３４】
2015529467.tif 000243
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６５」または「Ｍ６５」改変パターンを指す。
【０２０６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３５】
2015529467.tif 000244
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３６】
2015529467.tif 000245
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３７】
2015529467.tif 000246
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３８】
2015529467.tif 000247
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６６」または「Ｍ６６」改変パターンを指す。
【０２０７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２３９】
2015529467.tif 000248
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４０】
2015529467.tif 000249
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４１】
2015529467.tif 000250
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４２】
2015529467.tif 000251
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６７」または「Ｍ６７」改変パターンを指す。
【０２０８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４３】
2015529467.tif 000252
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４４】
2015529467.tif 000253
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４５】
2015529467.tif 000254
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４６】
2015529467.tif 000255
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６８」または「Ｍ６８」改変パターンを指す。
【０２０９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４７】
2015529467.tif 000256
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４８】
2015529467.tif 000257
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２４９】
2015529467.tif 000258
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５０】
2015529467.tif 000259
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６９」または「Ｍ６９」改変パターンを指す。
【０２１０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５１】
2015529467.tif 000260
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５２】
2015529467.tif 000261
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５３】
2015529467.tif 000262
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５４】
2015529467.tif 000263
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７０」または「Ｍ７０」改変パターンを指す。
【０２１１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５５】
2015529467.tif 000264
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５６】
2015529467.tif 000265
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５７】
2015529467.tif 000266
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５８】
2015529467.tif 000267
2015529467.tif 000268
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７１」または「Ｍ７１」改変パターンを指す。
【０２１２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２５９】
2015529467.tif 000269
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６０】
2015529467.tif 000270
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６１】
2015529467.tif 000271
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６２】
2015529467.tif 000272
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７２」または「Ｍ７２」改変パターンを指す。
【０２１３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６３】
2015529467.tif 000273
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。１つの関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６４】
2015529467.tif 000274
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６５】
2015529467.tif 000275
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６６】
2015529467.tif 000276
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７３」または「Ｍ７３」改変パターンを指す。
【０２１４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６７】
2015529467.tif 000277
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６８】
2015529467.tif 000278
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７*」または「Ｍ７*」改変パターンを指す。
【０２１５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２６９】
2015529467.tif 000279
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７０】
2015529467.tif 000280
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６*」または「Ｍ６*」改変パターンを指す。
【０２１６】
他の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７１】
2015529467.tif 000281
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７２】
2015529467.tif 000282
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５*」または「Ｍ５*」改変パターンを指す。
【０２１７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７３】
2015529467.tif 000283
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７４】
2015529467.tif 000284
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４*」または「Ｍ４*」改変パターンを指す。
【０２１８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７５】
2015529467.tif 000285
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７６】
2015529467.tif 000286
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ８*」または「Ｍ８*」改変パターンを指す。
【０２１９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７７】
2015529467.tif 000287
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７８】
2015529467.tif 000288
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２*」または「Ｍ２*」改変パターンを指す。
【０２２０】
他の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２７９】
2015529467.tif 000289
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８０】
2015529467.tif 000290
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１０*」または「Ｍ１０*」改変パターンを指す。
【０２２１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８１】
2015529467.tif 000291
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８２】
2015529467.tif 000292
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１１*」または「Ｍ１１*」改変パターンを指す。
【０２２２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８３】
2015529467.tif 000293
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８４】
2015529467.tif 000294
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１３*」または「Ｍ１３*」改変パターンを指す。
【０２２３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８５】
2015529467.tif 000295
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８６】
2015529467.tif 000296
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１４*」または「Ｍ１４*」改変パターンを指す。
【０２２４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８７】
2015529467.tif 000297
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８８】
2015529467.tif 000298
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１５*」または「Ｍ１５*」改変パターンを指す。
【０２２５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２８９】
2015529467.tif 000299
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９０】
2015529467.tif 000300
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１６*」または「Ｍ１６*」改変パターンを指す。
【０２２６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、 
【化２９１】
2015529467.tif 000301
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９２】
2015529467.tif 000302
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１７*」または「Ｍ１７*」改変パターンを指す。
【０２２７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９３】
2015529467.tif 000303
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９４】
2015529467.tif 000304
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１８*」または「Ｍ１８*」改変パターンを指す。
【０２２８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９５】
2015529467.tif 000305
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９６】
2015529467.tif 000306
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ１９*」または「Ｍ１９*」改変パターンを指す。
【０２２９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９７】
2015529467.tif 000307
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡであり、「Ｙ」は、任意に２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーである１‐４  ＲＮＡモノマーを含むオーバーハングドメインであり、下線が引かれた残基は２´‐Ｏ‐メチルＲＮＡモノマーであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。別の関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９８】
2015529467.tif 000308
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化２９９】
2015529467.tif 000309
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２０*」または「Ｍ２０*」改変パターンを指す。
【０２３０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３００】
2015529467.tif 000310
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０１】
2015529467.tif 000311
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２２*」または「Ｍ２２*」改変パターンを指す。
【０２３１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０２】
2015529467.tif 000312
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０３】
2015529467.tif 000313
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２４*」または「Ｍ２４*」改変パターンを指す。
【０２３２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０４】
2015529467.tif 000314
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０５】
2015529467.tif 000315
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２５*」または「Ｍ２５*」改変パターンを指す。
【０２３３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０６】
2015529467.tif 000316
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０７】
2015529467.tif 000317
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２６*」または「Ｍ２６*」改変パターンを指す。
【０２３４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０８】
2015529467.tif 000318
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３０９】
2015529467.tif 000319
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２７*」または「Ｍ２７*」改変パターンを指す。
【０２３５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１０】
2015529467.tif 000320
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１１】
2015529467.tif 000321
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２８*」または「Ｍ２８*」改変パターンを指す。
【０２３６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１２】
2015529467.tif 000322
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡを含む。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１３】
2015529467.tif 000323
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ２９*」または「Ｍ２９*」改変パターンを指す。
【０２３７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１４】
2015529467.tif 000324
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１５】
2015529467.tif 000325
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３４*」または「Ｍ３４*」改変パターンを指す。
【０２３８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１６】
2015529467.tif 000326
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１７】
2015529467.tif 000327
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３５*」または「Ｍ３５*」改変パターンを指す。
【０２３９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１８】
2015529467.tif 000328
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３１９】
2015529467.tif 000329
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３７*」または「Ｍ３７*」改変パターンを指す。
【０２４０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２０】
2015529467.tif 000330
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２１】
2015529467.tif 000331
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３８*」または「Ｍ３８*」改変パターンを指す。
【０２４１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２２】
2015529467.tif 000332
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２３】
2015529467.tif 000333
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４０*」または「Ｍ４０*」改変パターンを指す。
【０２４２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２４】
2015529467.tif 000334
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２５】
2015529467.tif 000335
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４１*」または「Ｍ４１*」改変パターンを指す。
【０２４３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２６】
2015529467.tif 000336
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２７】
2015529467.tif 000337
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ３６*」または「Ｍ３６*」改変パターンを指す。
【０２４４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２８】
2015529467.tif 000338
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３２９】
2015529467.tif 000339
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４２*」または「Ｍ４２*」改変パターンを指す。
【０２４５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３０】
2015529467.tif 000340
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３１】
2015529467.tif 000341
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４３*」または「Ｍ４３*」改変パターンを指す。
【０２４６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３２】
2015529467.tif 000342
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３３】
2015529467.tif 000343
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４４*」または「Ｍ４４*」改変パターンを指す。
【０２４７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３４】
2015529467.tif 000344
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３５】
2015529467.tif 000345
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４６*」または「Ｍ４６*」改変パターンを指す。
【０２４８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３６】
2015529467.tif 000346
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３７】
2015529467.tif 000347
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４７*」または「Ｍ４７*」改変パターンを指す。
【０２４９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３８】
2015529467.tif 000348
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３３９】
2015529467.tif 000349
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ４８*」または「Ｍ４８*」改変パターンを指す。
【０２５０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４０】
2015529467.tif 000350
2015529467.tif 000351
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４１】
2015529467.tif 000352
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５２*」または「Ｍ５２*」改変パターンを指す。
【０２５１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４２】
2015529467.tif 000353
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４３】
2015529467.tif 000354
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５４*」または「Ｍ５４*」改変パターンを指す。
【０２５２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４４】
2015529467.tif 000355
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４５】
2015529467.tif 000356
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５５*」または「Ｍ５５*」改変パターンを指す。
【０２５３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４６】
2015529467.tif 000357
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４７】
2015529467.tif 000358
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５６*」または「Ｍ５６*」改変パターンを指す。
【０２５４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４８】
2015529467.tif 000359
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３４９】
2015529467.tif 000360
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５７*」または「Ｍ５７*」改変パターンを指す。
【０２５５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５０】
2015529467.tif 000361
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５１】
2015529467.tif 000362
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５８*」または「Ｍ５８*」改変パターンを指す。
【０２５６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５２】
2015529467.tif 000363
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５３】
2015529467.tif 000364
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ５９*」または「Ｍ５９*」改変パターンを指す。
【０２５７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５４】
2015529467.tif 000365
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５５】
2015529467.tif 000366
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６０*」または「Ｍ６０*」改変パターンを指す。
【０２５８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５６】
2015529467.tif 000367
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５７】
2015529467.tif 000368
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６１*」または「Ｍ６１*」改変パターンを指す。
【０２５９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５８】
2015529467.tif 000369
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３５９】
2015529467.tif 000370
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６２*」または「Ｍ６２*」改変パターンを指す。
【０２６０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６０】
2015529467.tif 000371
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６１】
2015529467.tif 000372
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６３*」または「Ｍ６３*」改変パターンを指す。
【０２６１】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６２】
2015529467.tif 000373
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６３】
2015529467.tif 000374
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６４*」または「Ｍ６４*」改変パターンを指す。
【０２６２】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６４】
2015529467.tif 000375
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６５】
2015529467.tif 000376
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６５*」または「Ｍ６５*」改変パターンを指す。
【０２６３】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６６】
2015529467.tif 000377
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６７】
2015529467.tif 000378
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６６*」または「Ｍ６６*」改変パターンを指す。
【０２６４】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６８】
2015529467.tif 000379
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３６９】
2015529467.tif 000380
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６７*」または「Ｍ６７*」改変パターンを指す。
【０２６５】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７０】
2015529467.tif 000381
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７１】
2015529467.tif 000382
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６８*」または「Ｍ６８*」改変パターンを指す。
【０２６６】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７２】
2015529467.tif 000383
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７３】
2015529467.tif 000384
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ６９*」または「Ｍ６９*」改変パターンを指す。
【０２６７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７４】
2015529467.tif 000385
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７５】
2015529467.tif 000386
2015529467.tif 000387
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７０*」または「Ｍ７０*」改変パターンを指す。
【０２６８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７６】
2015529467.tif 000388
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７７】
2015529467.tif 000389
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７１*」または「Ｍ７１*」改変パターンを指す。
【０２６９】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７８】
2015529467.tif 000390
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３７９】
2015529467.tif 000391
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７２*」または「Ｍ７２*」改変パターンを指す。
【０２７０】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３８０】
2015529467.tif 000392
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。さらなる関連する実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３８１】
2015529467.tif 000393
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡである。上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。またこの改変パターンは、本明細書中で「ＡＳ−Ｍ７３*」または「Ｍ７３*」改変パターンを指す。
【０２７１】
特定の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡのセンス鎖は改変されており、-特定のセンス鎖改変の例示的な形態を以下に示す。このような改変センス鎖は上記に示すＤｓｉＲＮＡのいずれかのセンス鎖に代わって上述のアンチセンス鎖とアニールする以下に記載のセンス鎖を含むＤｓｉＲＮＡを作製することが考えられる。例示的なセンス鎖改変パターンは以下
【化３８２】
2015529467.tif 000394
2015529467.tif 000395
2015529467.tif 000396
であって、
式中、「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２´-Ｏ-メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡ
を含む。
【０２７２】
上記の改変パターンをまた、例えば、以下に記述した伸長ＤｓｉＲＮＡ構造およびミスマッチならびに／またはほころびたＤｓｉＲＮＡ構造内に組み込むことも可能である。
【０２７３】
別の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒ開裂を正しい方向にするように働く、１〜３ミスマッチ残基を有する等しい長さを持つ鎖を含む（とりわけ、３’−末端残基からナンバリングした時に、ＤｓｉＲＮＡの第１の鎖上の位置１、２または３のうちの１つ以上が、第１の鎖および第２の鎖が互いにアニールする時に、第２の鎖上の５’末端領域の対応する残基とミスマッチする）。２つの末端ミスマッチ残基を持つ例示的２７マーＤｓｉＲＮＡ剤を
【化３８３】
2015529467.tif 000397
に示し、
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｍ」＝鎖がアニールする時、他の相補的鎖の対応する「Ｍ」残基と塩基対を形成しない（水素結合しない）核酸残基（ＲＮＡ、ＤＮＡまたは非天然または改変核酸）である。このような薬剤の任意の残基は任意に、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーでありえ、上記非対称薬剤に関して示したように、下（第２の）鎖の３’−末端残基から始まる２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーの交互位置が上記「平滑／ほつれ」ＤｓｉＲＮＡ剤中でも使用可能である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。
【０２７４】
特定のさらなる実施形態では、本発明は、推定されるセンス鎖Ｄｉｃｅｒ開裂部位の３’と、推定されるアンチセンス鎖Ｄｉｃｅｒ開裂部位の対応する５’とに位置する、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）の領域内に１つ以上の塩基対化デオキシリボヌクレオチドを有するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）に関する組成物を提供する。本発明の組成物は、前駆体分子であるｄｓＲＮＡを含み、すなわち本発明のｄｓＲＮＡが、活性小干渉核酸（ｓｉＲＮＡ）を産生するようにｉｎ  ｖｉｖｏで処理される。ｄｓＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒによって、ＲＩＳＣ内に組み込まれる活性ｓｉＲＮＡに処理される。
【０２７５】
特定の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡ剤は、以下の例示的構造を持ちうる（任意の以下の例示的構造は、例えば、上述の構造の下鎖改変パターンと組み合わせ可能であることに留意のこと−１つの特定の例において、任意の上記構造中で示した下鎖改変パターンが、任意の以下の構造の下鎖の２７のほとんどの３’残基に適用される。別の特定の例にて、下鎖の２３のほとんどの３’残基における、任意の上記構造にて示した下鎖改変パターンが、任意の以下の構造の下鎖の２３のほとんどの３’残基に適用される）。
【０２７６】
１つのこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、以下の（例示的「右伸長」、「ＤＮＡ伸長」ＤｓｉＲＮＡ）、
【化３８４】
2015529467.tif 000398
を含み、
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡ、および「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。
【０２７７】
関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、以下を含み、
【化３８５】
2015529467.tif 000399
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡ、および「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。
【０２７８】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、以下を含み、
【化３８６】
2015529467.tif 000400
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｚ」＝ＤＮＡまたはＲＮＡ、かつＮ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２７９】
別のこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、以下を含み、
【化３８７】
2015529467.tif 000401
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｚ」＝ＤＮＡまたはＲＮＡ、かつ「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２８０】
別のこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、以下を含み、
【化３８８】
2015529467.tif 000402
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｚ」＝ＤＮＡまたはＲＮＡ、かつ「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２８１】
別の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、以下を含み、
【化３８９】
2015529467.tif 000403
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｚ」＝ＤＮＡまたはＲＮＡ、かつ「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０であり、少なくとも１つのＤ１Ｎが上鎖中に存在し、下鎖中の対応するＤ２Ｎと塩基対を形成する。任意にＤ１ＮとＤ１Ｎ＋１は、対応するＤ２ＮとＤ２Ｎ＋１と塩基対を形成し、Ｄ１Ｎ、Ｄ１Ｎ＋１、およびＤ１Ｎ＋２は、対応するＤ２Ｎ、Ｄ１Ｎ＋１およびＤ１Ｎ＋２などと塩基対を形成する。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２８２】
本明細書で描写した構造において、センス鎖またはアンチセンス鎖いずれかの５’末端が任意にリン酸基を含む。
【０２８３】
別の実施形態では、ＤＮＡ：ＤＮＡ−伸長ＤｓｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒ開裂を正しい方向にするように働く、１〜３ミスマッチ残基を有する等しい長さを持つ鎖を含む（とりわけ、３’−末端残基からナンバリングした時に、ＤｓｉＲＮＡの第１の鎖上の位置１、２または３のうちの１つ以上が、第１の鎖および第２の鎖が互いにアニールする時に、第２の鎖上の５’末端領域の対応する残基とミスマッチする）。２つの末端ミスマッチ残基を持つ例示的ＤＮＡ：ＤＮＡ−伸長ＤｓｉＲＮＡ剤が
【化３９０】
2015529467.tif 000404
に示され、
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｍ」＝鎖がアニールする時、他の相補的鎖の対応する「Ｍ」残基と塩基対を形成しない（水素結合しない）核酸残基（ＲＮＡ、ＤＮＡまたは非天然または改変核酸）、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜１５、または任意１〜８であり、「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。このような薬剤の任意の残基は任意に、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーでありえ、上記非対称薬剤に関して示したように、下（第２の）鎖の３’−末端残基から始まる２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーの交互位置が、上記「平滑／ほつれ」ＤｓｉＲＮＡ剤中でも使用可能である。１つの実施形態では、上鎖（第１の鎖）はセンス鎖であり、下鎖（第２の鎖）はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。非対称／オーバーハング薬剤に関して上述のものと並行する改変パターンおよびＤＮＡ：ＤＮＡ伸長パターンもまた、このような「平滑／ほつれ」薬剤内に組み込むことが可能である。
【０２８４】
１つの実施形態では、伸長したＤｓｉＲＮＡ剤が、ｄｓＲＮＡ構造中の塩基対を形成するデオキシリボヌクレオチドの存在を必要としない、Ｄｉｃｅｒ開裂の特定の方向を介して機能するようにモデル化された部位に位置するデオキシリボヌクレオチドを含むように提供される。このような分子の例示的な構造を、
【化３９１】
2015529467.tif 000405
に示し、
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡである。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。上記の構造は、Ｄｉｃｅｒがその第一処理後形態として、最小２１マーの二本鎖を開裂するようにさせるようにモデル化されている。上記構造の下鎖がアンチセンス鎖である実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端の最後および最後から２番目の残基で２つのデオキシリボヌクレオチド残基が存在することが、的外れの効果の低減を支援する（先行研究では、的外れの効果を低減させるために、アンチセンス鎖の５’末端から少なくとも最後から２番目の２’−Ｏ−メチル改変が示される。例えば、米国特許公開公報第２００７／０２２３４２７号を参照のこと）。
【０２８５】
１つの実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、以下を含み（例示的「左伸長」、「ＤＮＡ伸長」ＤｓｉＲＮＡ）、
【化３９２】
2015529467.tif 000406
2015529467.tif 000407
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡ、および「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。
【０２８６】
関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３９３】
2015529467.tif 000408
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマー、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。
【０２８７】
さらなる実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３９４】
2015529467.tif 000409
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマー、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。「Ｚ」＝ＤＮＡまたはＲＮＡである。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２８８】
別のこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３９５】
2015529467.tif 000410
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマー、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。「Ｚ」＝ＤＮＡまたはＲＮＡである。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２８９】
別のこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３９６】
2015529467.tif 000411
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｚ」＝ＤＮＡまたはＲＮＡ、および「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２９０】
別のこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３９７】
2015529467.tif 000412
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｘ」＝２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｚ」＝ＤＮＡまたはＲＮＡ、および「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０である。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインである。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２９１】
別の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３９８】
2015529467.tif 000413
2015529467.tif 000414
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｚ」＝ＤＮＡまたはＲＮＡ、および「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０であり、ここで少なくとも１つのＤ１Ｎが上鎖中に存在し、下鎖中の対応するＤ２Ｎと塩基対を形成する。任意にＤ１ＮとＤ１Ｎ＋１は、対応するＤ２ＮとＤ２Ｎ＋１と塩基対を形成し、Ｄ１Ｎ、Ｄ１Ｎ＋１、Ｄ１Ｎ＋２は、対応するＤ２Ｎ、Ｄ１Ｎ＋１およびＤ１Ｎ＋２などと塩基対を形成する。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２９２】
関連実施形態では、ＤｓｉＲＮＡは、
【化３９９】
2015529467.tif 000415
を含み、式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８または１〜１０であり、ここで少なくとも１つのＤ１Ｎが上鎖中に存在し、下鎖中の対応するＤ２Ｎと塩基対を形成する。任意にＤ１ＮとＤ１Ｎ＋１は、対応するＤ２ＮとＤ２Ｎ＋１と塩基対を形成し、Ｄ１Ｎ、Ｄ１Ｎ＋１、Ｄ１Ｎ＋２は、対応するＤ２Ｎ、Ｄ１Ｎ＋１およびＤ１Ｎ＋２などと塩基対を形成する。「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖であり、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーが、上記スキーム中で本明細書で描写した下鎖ではなく、上鎖に沿って交互残基に局在する。
【０２９３】
別の実施形態では、ＤＮＡ：ＤＮＡ−伸長ＤｓｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒ開裂を正しい方向にするように働く、１〜３ミスマッチ残基を有する等しい長さを持つ鎖を含む（とりわけ、３’−末端残基からナンバリングした時に、ＤｓｉＲＮＡの第１の鎖上の位置１、２または３のうちの１つ以上が、第１の鎖および第２の鎖が互いにアニールする時に、第２の鎖上の５’末端領域の対応する残基とミスマッチする）。２つの末端ミスマッチ残基を持つ例示的ＤＮＡ：ＤＮＡ−伸長ＤｓｉＲＮＡ剤が、
【化４００】
2015529467.tif 000416
に示され、
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｍ」＝鎖がアニールする時、他の相補的鎖の対応する「Ｍ」残基と塩基対を形成しない（水素結合しない）核酸残基（ＲＮＡ、ＤＮＡまたは非天然または改変核酸）、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｎ」＝１〜５０以上であるが、任意に１〜８、または任意１〜１０であり、「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。このような薬剤の任意の残基は任意に、２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーでありえ、上記非対称薬剤に関して示したように、下（第２の）鎖の３’−末端残基から始まる２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーの交互位置が、上記「平滑／ほつれ」ＤｓｉＲＮＡ剤中でも使用可能である。１つの実施形態では、上鎖（第１の鎖）はセンス鎖であり、下鎖（第２の鎖）はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。非対称／オーバーハング薬剤に関して上で示したものと並行する改変パターンおよびＤＮＡ：ＤＮＡ伸長パターンもまた、このような「平滑／ほつれ」薬剤内に組み込むことが可能である。
【０２９４】
別の実施形態では、伸長したＤｓｉＲＮＡ剤が、ｄｓＲＮＡ構造中の塩基対を形成するデオキシリボヌクレオチドの存在を必要としない、Ｄｉｃｅｒ開裂の特定の方向を介して機能するようにモデル化された部位に位置するデオキシリボヌクレオチドを含むように提供される。このような分子の例示的な構造が
【化４０１】
2015529467.tif 000417
または
【化４０２】
2015529467.tif 000418
に示され、
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｙ」は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである０〜１０ＲＮＡモノマーからなる任意のオーバーハングドメインであり、特定の実施形態では「Ｙ」は任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーである、１〜４ＲＮＡモノマーからなるオーバーハングドメインであり、「Ｄ」＝ＤＮＡ、「Ｎ＊」＝０〜１５以上であるが任意に０、１、２、３、４、５または６である。１つの実施形態では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。あるいは、下鎖はセンス鎖であり、上鎖はアンチセンス鎖である。
【０２９５】
上記構造の下鎖がアンチセンス鎖である上記のいずれかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端の最後および最後から二番目の残基での２つのデオキシリボヌクレオチド残基の位置が、的外れの効果の低減を支援する（先行研究では、的外れの効果を低減させるために、アンチセンス鎖の５’末端から少なくとも最後から二番目の２’−Ｏ−メチル改変が示される。例えば、米国特許公開公報第２００７／０２２３４２７号を参照のこと）。
【０２９６】
特定の実施形態では、上記構造の「Ｄ」残基には、少なくとも１つのＰＳ−ＤＮＡまたはＰＳ−ＲＮＡが含まれる。任意に、上記構造の「Ｄ」残基には、Ｄｉｃｅｒ開裂を阻害する少なくとも１つの改変ヌクレオチドが含まれる。
【０２９７】
上記「ＤＮＡ−伸長」ＤｓｉＲＮＡ剤は、「左伸長」または「右伸長」のいずれかとして分類される一方で、単剤内で左および右の両方の伸長ＤＮＡ−含有配列を含むＤｓｉＲＮＡ剤（例えば、コアｄｓＲＮＡ構造を取り囲むフランキングがｄｓＤＮＡ伸長である）をまた、「右伸長」および「左伸長」剤に関して本明細書で記述したものと同様の様式で、作製し、かつ使用できる。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡはさらに、ＤＮＡ：ＤＮＡ−伸長ＤｓｉＲＮＡ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖を連結する結合部位またはドメインを含む。任意に、このような結合部位ドメインは、センス鎖の３’末端と、アンチセンス鎖の５’末端とを連結する。結合部位は、オリゴメチレンジオールリンカー、オリゴエチレングリコールリンカー、または他の本技術分野で認識されるリンカー部位のような、化学的（非ヌクレオチド）リンカーであってもよい。あるいは、リンカーは、任意に伸長ループおよび／またはテトラループを含む、ヌクレオチドリンカーでありうる。
【０２９９】
１つの実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ剤は、２５塩基対長を持つセンス鎖と、１〜４塩基３’−オーバーハング（例えば１塩基３’オーバーハング、２塩基３’−オーバーハング、３塩基３’−オーバーハングまたは４塩基３’−オーバーハング）を持つ２７塩基対長を持つアンチセンス鎖を持つ、非対称構造を有する。別の実施形態では、本ＤｓｉＲＮＡ剤は、センス鎖の３’末端にて、２つのデオキシヌクレオチドをさらに含む、非対称構造を有する。
【０３００】
別の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ剤は、２５塩基対長を持つアンチセンス鎖と、１〜４塩基３’−オーバーハング（例えば１塩基３’オーバーハング、２塩基３’−オーバーハング、３塩基３’−オーバーハングまたは４塩基３’−オーバーハング）を持つ２７塩基対長を持つセンス鎖を持つ、非対称構造を有する。別の実施形態では、本ＤｓｉＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の３’末端にて、２つのデオキシヌクレオチドをさらに含む、非対称構造を有する。
【０３０１】
本発明の例示的なＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ剤、およびそれらの関連するＭＹＣ標的配列は、下の一連の表に示される以下のものを含む：
表番号：
（２）選択したヒト抗ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ剤（非対称）；
（３）選択したヒト抗ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ、非改変の二本鎖（非対称）；
（４）選択したマウス抗ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ（非対称）；
（５）ＭＹＣ  ｍＲＮＡ中のＤｓｉＲＮＡ標的配列（２１マー）；
（６）選択したヒト抗ＭＹＣ「平滑／ほつれ」ＤｓｉＲＮＡ；
（７）選択したヒト抗ＭＹＣ「平滑／平滑」ＤｓｉＲＮＡ；および
（８）ＭＹＣ  ｍＲＮＡ中のＤｓｉＲＮＡ成分である１９のヌクレオチド標的配列
【表２−１】
2015529467.tif 000419
【表２−２】
2015529467.tif 000420
【表２−３】
2015529467.tif 000421
【表２−４】
2015529467.tif 000422
【表２−５】
2015529467.tif 000423
【表２−６】
2015529467.tif 000424
【表２−７】
2015529467.tif 000425
【表２−８】
2015529467.tif 000426
【表２−９】
2015529467.tif 000427
【表２−１０】
2015529467.tif 000428
【表２−１１】
2015529467.tif 000429
【表２−１２】
2015529467.tif 000430
【表２−１３】
2015529467.tif 000431
【表２−１４】
2015529467.tif 000432
【表２−１５】
2015529467.tif 000433
【表２−１６】
2015529467.tif 000434
【表２−１７】
2015529467.tif 000435
【表２−１８】
2015529467.tif 000436
【表２−１９】
2015529467.tif 000437
【表２−２０】
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【表２−２１】
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【表３−３】
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【表３−１０】
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【表３−１１】
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【表３−３３】
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【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【表４−４】
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【表４−５】
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【表４−６】
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【表４−７】
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【表４−１０】
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【表４−１１】
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【表４−１４】
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【表５−１】
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【表５−２】
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【表５−３】
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【表５−４】
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【表５−５】
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【表５−６】
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【表５−７】
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【表５−８】
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【表６−１】
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【表６−４】
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【表６−１０】
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【表６−１３】
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【表６−２０】
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【表６−２２】
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【表６−２３】
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【表６−２４】
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【表６−３０】
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【表６−４０】
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【表６−４１】
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【表６−４２】
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【表６−４３】
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【表６−４４】
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【表６−４５】
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【表７−１】
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【表７−２】
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【表７−３】
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【表７−４】
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【表７−５】
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【表７−６】
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【表７−７】
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【表７−８】
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【表７−９】
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【表７−１０】
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【表７−１１】
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【表７−１２】
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【表７−１３】
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【表７−１４】
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【表７−１５】
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【表７−１６】
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【表７−１７】
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【表７−１８】
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【表７−１９】
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【表７−２０】
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【表７−２１】
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【表７−２２】
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【表７−２３】
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【表７−２４】
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【表７−２５】
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【表７−２６】
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【表８−１】
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【表８−２】
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【表８−３】
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【表８−４】
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【表８−５】
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【表８−６】
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【表８−７】
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【表８−８】
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【表８−９】
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【表８−１０】
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【表８−１１】
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【表８−１２】
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【表８−１３】
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【表８−１４】
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【表８−１５】
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【表８−１６】
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【表８−１７】
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【表８−１８】
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【表８−１９】
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【表８−２０】
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【０３０２】
上記の表２〜４および６〜７内で、下線残基は、２’−Ｏ−メチル残基を示し、大文字はリボヌクレオチド類を示し、小文字はデオキシリボヌクレオチド類を意味する。上記の表２〜４のＤｓｉＲＮＡ剤は、平滑末端を有する２５／２７マーの薬剤である。上記の表２〜４の薬剤の構造および／または改変パターンを、上記の遺伝的配列構造に対して容易に適合でき、例えば、第２の鎖の３’オーバーハングを伸長させるか、または短縮させることが可能であり、第２の鎖の２’−Ｏ−メチル化を第２の鎖の５’末端に向かって、任意に交互部位にて拡大させることが可能である。このような改変をもつ２５／２７マーＤｓｉＲＮＡをまた、上記ＤｓｉＲＮＡ剤から簡単にデザイン可能であり、ＭＹＣ発現の機能的阻害剤としても予測されるため、このようなさらなる改変は任意である。同様に、上記の表６〜７の薬剤の、２７マー「平滑／ほつれ」および「平滑／平滑」ＤｓｉＲＮＡ構造および／または改変パターンを、例えばこのような構造に対するアンチセンス鎖の改変パターンの適用、および／またはこのような配列の上記遺伝的構造への適用のために、上記遺伝的配列構造に容易に適用できる。
【０３０３】
特定の実施形態では、各２７ヌクレオチドの独立した鎖長を有する２７マーＤｓｉＲＮＡを、本明細書の表２〜４にて示した、非対称「２５／２７」構造と同一のＭＹＣ転写物内の部位の標的化のために、デザインし、合成する。例示的「２７／２７」ＤｓｉＲＮＡは、上記表６のＤｓｉＲＮＡに関して示したような「平滑／ほつれ」構造で、または上記表７のＤｓｉＲＮＡに関して示したような「平滑／平滑」構造で、任意にデザインされる。
【０３０４】
特定の実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、第１の鎖の、たとえば少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、または少なくとも２６の残基が、第２の鎖の対応する残基に相補的であることを必要とする。特定の関連実施形態では、第２の鎖の対応する残基に相補的なこれらの第１の鎖残基は任意に連続残基である。
【０３０５】
定義により、「十分に相補的な」（たとえば「１００％相補的な」と対比される）は、ｄｓＲＮＡがＲＮＡi機構（たとえば、ＲＩＳＣ複合体）または工程により標的ＲＮＡの破壊を起こすのに十分な相補性を有する場合、本発明のｄｓＲＮＡおよび標的ＲＮＡまたはｃＤＮＡ配列（たとえばＭＹＣ  ｍＲＮＡ）の間に１つ以上のミスマッチが存在することを許容する。特定の実施形態では、「十分に相補的な」本発明のｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡ配列および標的ＲＮＡまたはｃＤＮＡ配列の間に１、２、３または４つ以上ものミスマッチを有することができる（たとえば、このような特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、標的ＲＮＡまたはｃＤＮＡ配列とアライメントされる際、１、２、３、４、５または６つ以上ものミスマッチを有する）。さらに、本発明の特定のｄｓＲＮＡ内のこのようなミスマッチの好ましい位置は、以下により詳細に考慮されている。
【０３０６】
本明細書で使用するところの「ＤｓｉＲＮＡｍｍ」は、ＤｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖によって形成された二本鎖の１、２、３または４つのミスマッチ塩基対を含む、「ミスマッチ耐性領域」を持つＤｓｉＲＮＡを意味し、ここでこのようなミスマッチは、ＤｓｉＲＮＡのいずれかの末端の２つの末端塩基対間で横たわっている（したがって末端塩基対を含まない）場所で、ＤｓｉＲＮＡ内に位置する。ミスマッチ塩基対は、対応する標的核酸の推定されるＡｇｏ２切断部位の局所に関して本明細書で定義した、「ミスマッチ−耐性領域」内に局在する。ミスマッチ耐性領域は、標的鎖の推定Ａｇｏ２切断部位「の上流」に局在する。本文脈中の「上流」は、ＤｓｉＲＮＡｍｍ二本鎖の５’−の大部分の部位として理解され、５’はＤｓｉＲＮＡ二本鎖のセンス鎖の方向を意味する。したがって、ミスマッチ耐性領域は、標的核酸の推定Ａｇｏ２切断部位に対応するセンス（パッセンジャー）鎖上の塩基の上流であり（図１）、あるいは、ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス（ガイド）鎖を指す場合、ミスマッチ耐性領域は、標的核酸の推定Ａｇｏ２切断部位に相補的な塩基の下流に位置すると記述することも可能であり、すなわち、ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス鎖の３’の大部分と記述可能である（アンチセンス鎖の位置１は、アンチセンス鎖の５’末端ヌクレオチドである、図１を参照のこと）。
【０３０７】
１つの実施形態では、例えば図１にて描写したようなナンバリングで、ミスマッチ耐性領域は、二本鎖のセンス鎖の５’末端で開始したヌクレオチドからナンバリングした場合、塩基対３〜９の間、または塩基対３〜９を含んで位置する。したがって、本発明のＤｓｉＲＮＡｍｍは、右手伸長ＤｓｉＲＮＡのセンス鎖の位置３、４、５、６、７、８または９のいずれか１つにおいて、単一のミスマッチ塩基対を有する（位置１は、センス鎖の５’末端ヌクレオチドであり、位置９は、センス鎖配列に対応する標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列の推定Ａｇｏ２切断部位の５’に接したセンス鎖のヌクレオチド残基である）。特定の実施形態では、センス鎖の位置３、４、５、６、７、８または９の任意の位置でミスマッチ塩基対ヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡｍｍでは、アンチセンス鎖の対応するミスマッチ塩基対ヌクレオチドは、ＤｓｉＲＮＡｍｍのセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成するだけでなく、ＤｓｉＲＮＡｍｍ標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列ともミスマッチ塩基対を形成する（したがって、アンチセンス鎖配列とセンス鎖配列との間の相補性は、ＤｓｉＲＮＡｍｍ内のミスマッチ塩基対にて中断され、相補性は、ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス鎖配列と標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列との間で同様に中断される）。代替的なの実施形態では、ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス鎖のミスマッチ塩基対ヌクレオチドは、ＤｓｉＲＮＡｍｍのセンス鎖配列の対応するヌクレオチドとミスマッチ塩基対を形成するだけでなく、その対応する標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列ヌクレオチドとも塩基対を形成する（したがって、アンチセンス鎖配列とセンス鎖配列との間の相補性は、ＤｓｉＲＮＡｍｍ内のミスマッチ塩基対にて中断され、また相補性は、ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス鎖配列と標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列との間で維持される）。
【０３０８】
上述のように、ミスマッチ耐性領域（ミスマッチ領域）内で単一のミスマッチ塩基対を有する本発明のＤｓｉＲＮＡｍｍ（例えば、センス鎖の位置３、４、５、６、７、８または９のいずれか１つにてミスマッチヌクレオチド残基をもつＤｓｉＲＮＡｍｍ）はさらに、１、２または３つのさらなるミスマッチ塩基対を含みうる。好ましい実施形態では、これらＤｓｉＲＮＡｍｍの１、２または３つのさらなるミスマッチ塩基対は、センス鎖の位置３、４、５、６、７、８および／または９にて（そしてアンチセンス鎖の対応する残基にて）発生する。１つのさらなるミスマッチ塩基対が、ＤｓｉＲＮＡｍｍ内に存在する１つの実施形態では、センス鎖の２つのミスマッチ塩基対が、例えば（アンチセンス鎖の対応するヌクレオチド残基にて発生もするミスマッチとともに）センス鎖の位置４および位置６両方のヌクレオチドで発生しうる。
【０３０９】
２つのミスマッチ塩基対を有するＤｓｉＲＮＡｍｍ剤において、ミスマッチは、連続して（例えば、センス鎖ヌクレオチド配列に沿った連続位置にて）発生可能である。あるいは、アンチセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成するセンス鎖のヌクレオチドが、アンチセンス鎖配列と塩基対を形成するヌクレオチドによって散在可能である（例えば、位置４および５ではなく、位置３および６にてミスマッチヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡｍｍに関して、センス鎖位置３および６のミスマッチ残基は、アンチセンス鎖の対応する残基とマッチした塩基対を形成する２つのヌクレオチドによって散在される）。例えば、対応するアンチセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成する（センス鎖のミスマッチ耐性領域内に局在する）センス鎖の２つの残基が、これらのミスマッチ塩基対間に局在する、０、１、２、３、４または５のマッチした塩基対で発生可能である。
【０３１０】
３つのミスマッチ塩基対を有する特定のＤｓｉＲＮＡｍｍ剤において、ミスマッチは、連続して発生可能である（例えば、センス鎖ヌクレオチド配列に沿って三重に発生可能である）。あるいは、アンチセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成するセンス鎖のヌクレオチドが、アンチセンス鎖配列とマッチした塩基対を形成するヌクレオチドによって散在可能である（例えば、位置５、６および７ではなく、位置３、４および８にてミスマッチヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡｍｍに関して、センス鎖位置３および４のミスマッチ残基は、互いに隣接し、センス鎖位置４および８のミスマッチ残基は、アンチセンス鎖の対応する残基とマッチした塩基対を形成する３つの残基によって散在される）。例えば、対応するアンチセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成する（センス鎖のミスマッチ耐性領域内に局在する）センス鎖の３つの残基が、これらのミスマッチ塩基対の任意の２つの間に局在する、０、１、２、３または４つのマッチした塩基対で発生可能である。
【０３１１】
４つのミスマッチ塩基対を有する特定のＤｓｉＲＮＡｍｍ剤に関して、ミスマッチは、連続して発生可能である（たとえば、センス鎖ヌクレオチド配列に沿って四重に発生可能である）。あるいは、アンチセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成するセンス鎖のヌクレオチドが、アンチセンス鎖配列とマッチした塩基対を形成するヌクレオチドによって散在可能である（例えば、位置４および６ではなく、位置３、５、７および８にてミスマッチヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡｍｍに関して、センス鎖位置７および８のミスマッチ残基は、互いに隣接し、センス鎖位置３および５のミスマッチ残基は、アンチセンス鎖の対応する残基とマッチした塩基対を形成する１つの残基によって散在される。同様に、センス鎖位置５および７のミスマッチ残基がまた、アンチセンス鎖の対応する残基と、マッチした塩基対を形成する１つのヌクレオチドによっても散在される）。例えば、対応するアンチセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成する（センス鎖のミスマッチ耐性領域内に局在する）センス鎖の４つの残基が、これらのミスマッチ塩基対の任意の２つの間に局在する、０、１、２または３つのマッチした塩基対で発生可能である。
【０３１２】
例えば図１でまた描写したようなナンバリングで、別の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡｍｍは、ＤｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の位置１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３のいずれか１つにて、単一のミスマッチ塩基対ヌクレオチドを有するミスマッチ耐性領域を含む（位置１はアンチセンス鎖の５’末端ヌクレオチドであり、位置１７は、アンチセンス鎖配列に十分に相補的な標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列の推定Ａｇｏ２切断部位のアンチセンス鎖中の３’（下流）隣接であるアンチセンス鎖のヌクレオチド残基である）。特定の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡｍｍのセンス鎖に関して、アンチセンス鎖の位置１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３のいずれかにミスマッチ塩基対ヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡｍｍでは、アンチセンス鎖のミスマッチ塩基対ヌクレオチドは、ＤｓｉＲＮＡｍｍセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成するだけでなく、ＤｓｉＲＮＡｍｍ標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列ともミスマッチ塩基対を形成する（したがって、アンチセンス鎖配列とセンス鎖配列との間の相補性は、ＤｓｉＲＮＡｍｍ内のミスマッチ塩基対にて中断い申し上げます。され、相補性は同様に、ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス鎖配列と標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列との間で中断される）。代替的な実施形態では、ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス鎖のミスマッチ塩基対ヌクレオチドは、ＤｓｉＲＮＡｍｍのセンス鎖配列の対応するヌクレオチドとミスマッチ塩基対を形成するだけでなく、その対応する標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列ヌクレオチドと塩基対を形成する（したがって、アンチセンス鎖配列とセンス鎖配列との間の相補性は、ＤｓｉＲＮＡｍｍ内のミスマッチ塩基で中断され、また相補性は、ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス鎖配列と標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列との間で維持される）。
【０３１３】
上述のように、ミスマッチ耐性領域内で単一ミスマッチ塩基対を有する本発明のＤｓｉＲＮＡｍｍ（例えば、アンチセンス鎖の位置１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３にてミスマッチヌクレオチド残基を持つＤｓｉＲＮＡｍｍ）はさらに、１、２または３つのさらなるミスマッチ塩基対を含みうる。好ましい実施形態では、これらＤｓｉＲＮＡｍｍのさらなる１、２または３つのミスマッチ塩基対が、アンチセンス鎖の位置１７、１８、１９、２０、２１、２２および／または２３で（そしてセンス鎖の対応する残基にて）発生する。１つのさらなるミスマッチ塩基対がＤｓｉＲＮＡｍｍ内に存在する１つの実施形態では、アンチセンス鎖の２つのミスマッチ塩基対が、（センス鎖の対応するヌクレオチド残基にて同様に発生しているミスマッチと共に）アンチセンス鎖の位置１８および位置２０の両方のヌクレオチドで発生しうる。
【０３１４】
２つのミスマッチ塩基対を有するＤｓｉＲＮＡｍｍ剤において、ミスマッチは連続して（例えば、アンチセンス鎖ヌクレオチド配列に沿った連続位置にて）発生しうる。あるいは、センス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成するアンチセンス鎖のヌクレオチドは、センス鎖配列と塩基対形成するヌクレオチドによって散在されうる（例えば位置１８および１９ではなく、位置１７および２０でミスマッチヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡｍｍでは、アンチセンス鎖位置１７および２０のミスマッチ残基が、センス鎖の対応する残基とマッチした塩基対を形成する２つのヌクレオチドによって散在する）。例えば、対応するセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成する（センス鎖のミスマッチ耐性領域内に局在する）アンチセンス鎖の２つの残基は、これらのミスマッチ塩基対間に局在する０、１、２、３、４、５、６または７マッチ塩基対で発生可能である。
【０３１５】
３つのミスマッチ塩基対を有する特定のＤｓｉＲＮＡｍｍ剤に関して、ミスマッチは連続して起こりうる（例えば、アンチセンス鎖ヌクレオチド配列に沿って三重に起こりうる）。あるいは、センス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成するアンチセンス鎖のヌクレオチドが、センス鎖配列とマッチした塩基対を形成するヌクレオチドによって散在可能である（例えば、位置１９、２０および２１ではなく、位置１７、１８および２２にてミスマッチヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡｍｍでは、アンチセンス鎖位置１７および１８のミスマッチ残基は、互いに隣接し、一方アンチセンス鎖位置１８および１２２のミスマッチ残基は、センス鎖の対応する残基とマッチした塩基対を形成する３つの残基によって散在される）。例えば、対応するセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成する（アンチセンス鎖のミスマッチ耐性領域内に局在する）アンチセンス鎖の３つの残基が、これらのミスマッチ塩基対の任意の２つの間に局在する、０、１、２、３、４、５または６のマッチした塩基対で発生可能である。
【０３１６】
４つのミスマッチ塩基対を有する特定のＤｓｉＲＮＡｍｍ剤では、ミスマッチは、連続して発生可能である（たとえば、アンチセンス鎖ヌクレオチド配列に沿って四重に発生可能である）。あるいは、センス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成するアンチセンス鎖のヌクレオチドが、センス鎖配列とマッチした塩基対を形成するヌクレオチドによって散在可能である（例えば、位置１９および２１ではなく、位置１８、２０、２２および２３にてミスマッチヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡｍｍでは、アンチセンス鎖位置２２および２３のミスマッチ残基は、互いに隣接し、一方アンチセンス鎖位置１８および２０のミスマッチ残基は、センス鎖の対応する残基とマッチした塩基対を形成する１つの残基によって散在される−同様に、アンチセンス鎖位置２０および２２のミスマッチ残基がまた、センス鎖の対応する残基とマッチした塩基対を形成する１つのヌクレオチドによって散在される）。例えば、対応するセンス鎖配列とミスマッチ塩基対を形成する（アンチセンス鎖のミスマッチ耐性領域内に局在する）アンチセンス鎖の４つの残基が、これらのミスマッチ塩基対の任意の２つの間に局在する、０、１、２、３、４または５のマッチ塩基対で発生可能である。
【０３１７】
明確化の理由のために、上記ＤｓｉＲＮＡｍｍ剤内のミスマッチヌクレオチド残基の配置を、ＤｓｉＲＮＡｍｍのセンス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかの５’末端残基に関してナンバリングする。アンチセンス鎖のミスマッチ耐性領域（ミスマッチ領域）内に配置される位置のナンバリングが、推定Ａｇｏ２開裂部位に対するセンス鎖またはアンチセンス鎖の５’末端の近位での変動を伴ってシフト可能である。したがって、アンチセンス鎖またはセンス鎖いずれかの好ましいミスマッチ部位の配置をまた、推定Ａｇｏ２切断部位に対して、このようなミスマッチの許容される近位にあると同定可能でもある。したがって、１つの好ましい実施形態では、ＤｓｉＲＮＡｍｍのセンス鎖のミスマッチヌクレオチドの位置は、対応する標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列の推定Ａｇｏ２開裂部位の５’（上流）直近に配置されるセンス鎖のヌクレオチド残基である。他の好ましい実施形態では、ＤｓｉＲＮＡｍｍのセンス鎖のミスマッチヌクレオチドは、推定Ａｇｏ２開裂部位の２ヌクレオチド５’（上流）、推定Ａｇｏ２開裂部位の３ヌクレオチド５’（上流）、推定Ａｇｏ２開裂部位の４ヌクレオチド５’（上流）、推定Ａｇｏ２開裂部位の５ヌクレオチド５’（上流）、推定Ａｇｏ２開裂部位の６ヌクレオチド５’（上流）、推定Ａｇｏ２開裂部位の７ヌクレオチド５’（上流）、推定Ａｇｏ２開裂部位の８ヌクレオチド５’（上流）または推定Ａｇｏ２開裂部位の９ヌクレオチド５’（上流）に局在するセンス鎖のヌクレオチド残基に位置する。
【０３１８】
例示的単一ミスマッチ−含有２５／２７マーＤｓｉＲＮＡ（ＤｓｉＲＮＡｍｍ）は、以下の構造を含む（このようなミスマッチ−含有構造はまた、本明細書で示した他の例示的ＤｓｉＲＮＡ構造内に組み込んでもよい）。
【化４０３】
2015529467.tif 000599
【化４０４】
2015529467.tif 000600
式中、「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡおよび「Ｍ」＝鎖がアニールする時に、他の相補的鎖の対応する「Ｍ」残基と塩基対（水素結合）を形成しない核酸残基（ＲＮＡ、ＤＮＡまたは天然に存在しないまたは改変核酸）である。このような薬剤の任意の残基は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーでありえ、−上記示したように、下（第２の）鎖の３’−末端残基から始まる２’−Ｏ−メチルＲＮＡの交互配置を、上記ののＤｓｉＲＮＡｍｍ剤中で使用可能でもある。上記ミスマッチ構造では、上鎖はセンス鎖であり、下鎖はアンチセンス鎖である。
【０３１９】
特定の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡは、ＤｓｉＲＮＡの２つの鎖内のミスマッチ塩基対として必ずしも存在せず、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列に関して存在するミスマッチを含みうる−したがって、ＤｓｉＲＮＡは、ＤｓｉＲＮＡの第１の鎖および第２の鎖間で完全な相補性を有してよく、また（特定の実施形態では、有効性および／または効力および／または効果の持続期間を促進することにおいて有益であり得る）標的ＭＹＣ  ＲＮＡに関してミスマッチ残基を有し得る。ミスマッチが、アンチセンス鎖と標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列との間で発生する特定の実施形態では、ミスマッチの位置が、標的領域の推定Ａｇｏ２切断部位の５’に局在したセンス鎖の配列に対応する位置で、−例えば標的配列の推定Ａｇｏ２切断部位に相補的であるアンチセンス残基の３’に対して、アンチセンス鎖内に位置するアンチセンス鎖残基で、アンチセンス内に配置される。
【０３２０】
標的配列に関する単一ミスマッチ残基を持つ例示的２５／２７マーＤｓｉＲＮＡは以下の構造を含む。
【化４０５】
2015529467.tif 000601
【化４０６】
2015529467.tif 000602
式中、「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡおよび「Ｅ」＝鎖がアニールする時に、他の相補的（標的）鎖の対応する「Ａ」ＲＮＡ残基と塩基対（水素結合）を形成せず、また任意に対応する「Ｂ」残基と塩基対形成する（「Ｂ」残基はまた、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは天然に存在しないまたは改変核酸）核酸残基（ＲＮＡ、ＤＮＡまたは天然に存在しないまたは改変核酸）である。このような薬剤の任意の残基は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーでありえ、−上記示したように、下（第２の）鎖の３’−末端残基から始まる２’−Ｏ−メチルＲＮＡの交互配置をまた、上記のＤｓｉＲＮＡ剤中で使用可能でもある。
【０３２１】
特定の実施形態では、標的遺伝子発現を低減するよう標的遺伝子配列の少なくとも１９のヌクレオチドに沿った標的ＲＮＡ（たとえばｍＲＮＡ）に十分に相補的である、本発明のｄｓＲＮＡのガイド鎖は、少なくとも１９のヌクレオチドである長い標的遺伝子配列に完全に相補的ではない。むしろ、標的遺伝子発現を低減するよう標的遺伝子配列の少なくとも１９のヌクレオチドに沿った標的ｍＲＮＡに十分に相補的である本発明のｄｓＲＮＡのガイド鎖が、１９以上の長さのヌクレオチドである標的鎖配列とミスマッチを形成する１、２、３、または４つ以上ものヌクレオチドを有することができる。したがって、１９のヌクレオチドの標的ＲＮＡ配列に対し、本発明のｄｓＲＮＡのガイド鎖は、標的遺伝子レベルを低減するよう標的ＲＮＡ配列に十分に相補的であり、その一方でたとえば、ガイド鎖および標的ＲＮＡ配列の間に１５／１９、１６／１９、１７／１９、または１８／１９のみがマッチしたヌクレオチド残基を有する。
【０３２２】
上記で例示した構造に加えて、本発明のｄｓＲＮＡはまた、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とさらなるミスマッチを形成する、１、２または３つのさらなる残基を有しうる。このようなミスマッチは連続であってよく、または標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とマッチした塩基対を形成するヌクレオチドによって散在しうる。マッチした塩基対を形成するヌクレオチドによって散在される場合、ミスマッチ残基は、このようなミスマッチ形成残基間の１、２、３、４、５、６、７または８つの塩基対形成ヌクレオチドの間隔にて一本鎖内で互いに離れて隔たりうる。
【０３２３】
上記ＤｓｉＲＮＡｍｍ剤に関しては、（また対応するセンス鎖ヌクレオチドとミスマッチを形成してよく、または形成しなくてよい）標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とミスマッチ塩基対を形成するアンチセンス鎖ヌクレオチドに関して、ｄｓＲＮＡ（たとえばＤｓｉＲＮＡ）内の好ましい配置が、ＤｓｉＲＮＡの推定Ａｇｏ２切断部位に相補的なアンチセンス鎖配列の３’（下流）に局在するアンチセンス鎖領域内である（たとえば、図１において、推定Ａｇｏ２切断部位の３’であるアンチセンス鎖の領域が、ミスマッチ形成残基に関して好ましく、図１にて示した２５／２７マー薬剤に対するアンチセンス鎖の位置１７〜２３に局在する）。したがって、１つの実施形態では、ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス鎖の（標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列に関する）ミスマッチヌクレオチドの位置が、対応する標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列の推定Ａｇｏ２開裂部位のアンチセンス鎖配列内の３’（下流）直近に局在するアンチセンス鎖のヌクレオチド残基である。他の好ましい実施形態では、（標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列に関する）ＤｓｉＲＮＡｍｍのアンチセンス鎖のミスマッチヌクレオチドは、対応する推定Ａｇｏ２開裂部位の２ヌクレオチド３’（下流）、対応する推定Ａｇｏ２開裂部位の３ヌクレオチド３’（下流）、対応する推定Ａｇｏ２開裂部位の４ヌクレオチド３’（下流）、対応する推定Ａｇｏ２開裂部位の５ヌクレオチド３’（下流）、対応する推定Ａｇｏ２開裂部位の６ヌクレオチド３’（下流）、対応する推定Ａｇｏ２開裂部位の７ヌクレオチド３’（下流）、対応する推定Ａｇｏ２開裂部位の８ヌクレオチド３’（下流）または対応する推定Ａｇｏ２開裂部位の９ヌクレオチド３’（下流）に局在するアンチセンス鎖のヌクレオチド残基に位置する。
【０３２４】
アンチセンス鎖の２つのミスマッチ形成ヌクレオチドを有するｄｓＲＮＡ剤において（ミスマッチ形成ヌクレオチドは、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列に関してミスマッチ形成している）、ミスマッチは連続して発生しうる（例えば、アンチセンス鎖ヌクレオチド配列に沿って連続した位置で発生しうる）。あるいは、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とミスマッチ塩基対を形成するアンチセンス鎖のヌクレオチドは、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列と塩基対形成するヌクレオチドによって散在されうる（例えば、図１で示した２５／２７マー薬剤のアンチセンス鎖の５’末端（位置１）から開始して）位置１８および１９ではなく、位置１７および２０でミスマッチ形成ヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡでは、センス鎖位置１７および２０のミスマッチ残基が、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列の対応する残基とマッチした塩基対を形成する２つのヌクレオチドによって散在する）。例えば、対応する標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とミスマッチ塩基対を形成する（アンチセンス鎖のミスマッチ耐性領域内に位置する）アンチセンス鎖の２つの残基は、これらのミスマッチ形成塩基対間に局在する（標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列に関する）０、１、２、３、４または５つのマッチした塩基対で発生しうる。
【０３２５】
（標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列に関してミスマッチを形成している）３つのミスマッチ形成塩基対を有する特定のｄｓＲＮＡでは、ミスマッチ形成ヌクレオチドは、連続して発生しうる（例えば、アンチセンス鎖ヌクレオチド配列に沿って三重に発生し得る）。あるいは、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とミスマッチ塩基対を形成するアンチセンス鎖のヌクレオチドが、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とマッチした塩基対を形成するヌクレオチドによって散在可能である（例えば、位置１９、２０および２１ではなく、位置１７、１８および２２にてミスマッチヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡでは、アンチセンス鎖位置１７および１８のミスマッチ形成残基は、互いに隣接し、一方アンチセンス鎖位置１８および２２のミスマッチ形成残基は、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列の対応する残基とマッチした塩基対を形成する３つの残基によって散在される）。例えば、対応する標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とミスマッチ塩基対を形成する（アンチセンス鎖のミスマッチ耐性領域内に局在する）アンチセンス鎖の３つの残基が、これらのミスマッチ塩基対の任意の２つの間に局在する、０、１、２、３または４つのマッチ塩基対で発生可能である。
【０３２６】
（標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列に関してミスマッチを形成している）４つのミスマッチ形成塩基対を有する特定のｄｓＲＮＡでは、ミスマッチ形成ヌクレオチドは、連続して発生しうる（例えば、センス鎖ヌクレオチド配列に沿って四重に発生しうる）。あるいは、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とミスマッチ塩基対を形成するアンチセンス鎖のヌクレオチドが、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とマッチした塩基対を形成するヌクレオチドによって散在可能である（例えば、位置１８および２０ではなく、位置１７、１９、２１および２２にてミスマッチ形成ヌクレオチドを有するＤｓｉＲＮＡでは、アンチセンス鎖位置２１および２２のミスマッチ形成残基は、互いに隣接し、一方アンチセンス鎖位置１７および１９のミスマッチ形成残基は、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列の対応する残基とマッチした塩基対を形成する１つのヌクレオチドによって散在される−同様に、アンチセンス鎖位置１９および２１のミスマッチ形成残基はまた、標的ＭＹＣ  ＲＮＡの対応する残基とマッチした塩基対を形成する１つのヌクレオチドによって散在される）。例えば、対応する標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列とミスマッチ塩基対を形成する（アンチセンス鎖のミスマッチ耐性領域内に局在する）アンチセンス鎖の４つの残基が、これらのミスマッチ形成塩基対の任意の２つの間に局在する、０、１、２または３つのマッチした塩基対で発生可能である。
【０３２７】
上記ＤｓｉＲＮＡｍｍと他のｄｓＲＮＡ構造を、ＤｓｉＲＮＡｍｍとｄｓＲＮＡ剤との特定の構造を例示するために記述する。上記ＤｓｉＲＮＡｍｍとｄｓＲＮＡ構造とのデザインを、例えば以下に示した他のＤｓｉＲＮＡ構造のＤｓｉＲＮＡｍｍ形態を産出するために適合可能である。上記で例示したように、ｄｓＲＮＡはまた、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖と標的配列との間の単一ミスマッチ（または２、３または４つのミスマッチ）を有するようにデザイン可能であり、また任意に、ｄｓＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖配列間の完全な相補性を維持可能である。
【０３２８】
なお、以下で例示するｄｓＲＮＡ剤はまた、それらの二本鎖および／または標的ＭＹＣ  ＲＮＡ−整列構造内に、挿入／欠損（ｉｎ／ｄｅｌ）構造を有しうる。したがって、本発明のｄｓＲＮＡは、例えば、ミスマッチおよび／またはミスマッチ形成塩基対の位置に関して上述のそれらの局所に対応する、このようなｉｎ／ｄｅｌヌクレオチドの配置に対して好ましい局所で、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列と比較したアンチセンス配列、および／またはセンス鎖配列と比較したアンチセンス配列中、ｉｎ／ｄｅｌ変化を有するようにデザイン可能である。
【０３２９】
なお、本発明のＤｓｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒによって処理され、ＲＩＳＣへ積み込むガイド鎖配列から自由であるようにモデル化されるので、センス鎖の３’−末端領域／アンチセンス鎖の５’−末端領域内でもミスマッチを許容可能である。このようなミスマッチを持つ本発明の例示的ＤｓｉＲＮＡ構造には、以下が含まれ、
【化４０７】
2015529467.tif 000603
式中「Ｘ」＝ＲＮＡ、「Ｄ」＝ＤＮＡおよび「Ｉ」および「Ｊ」＝互いに塩基対（水素結合）を形成しない核酸残基（ＲＮＡ、ＤＮＡまたは天然に存在しない核酸もしくは改変核酸）で、また任意に「Ｊ」は、標的ＲＮＡ配列ヌクレオチド「Ｈ」に相補的である。このような薬剤の任意のの残基は、任意に２’−Ｏ−メチルＲＮＡモノマーでありえ、−上記で示したように、下（第２の）鎖の３’−末端残基から始まる２’−Ｏ−メチルＲＮＡの交互配置−または上述のいずれかのメチル化パターン−をまた、以上のＤｓｉＲＮＡ剤中で使用可能でもある。上記ミスマッチはまた、本発明のＤｓｉＲＮＡ内で組み合わせ可能である。
【０３３０】
以下の構造において、このようなミスマッチは、非対称ＭＹＣ−６２２  ＤｓｉＲＮＡ（新規に導入されたミスマッチ残基はイタリック体である）内に導入される。
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒのＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５’末端より）
【化４０８】
2015529467.tif 000604
【０３３１】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３３２】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化４０９】
2015529467.tif 000605
【０３３３】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３３４】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化４１０】
2015529467.tif 000606
【０３３５】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０３３６】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化４１１】
2015529467.tif 000607
【０３３７】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０３３８】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化４１２】
2015529467.tif 000608
【０３３９】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３４０】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化４１３】
2015529467.tif 000609
【０３４１】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｔ」残基は、あるいは「ａ」または「ｇ」である。
【０３４２】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化４１４】
2015529467.tif 000610
【０３４３】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０３４４】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化４１５】
2015529467.tif 000611
【０３４５】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０３４６】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化４１６】
2015529467.tif 000612
【０３４７】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０３４８】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化４１７】
2015529467.tif 000613
【０３４９】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。  
【０３５０】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化４１８】
2015529467.tif 000614
【０３５１】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または」Ｇである。
【０３５２】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化４１９】
2015529467.tif 000615
【０３５３】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０３５４】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化４２０】
2015529467.tif 000616
【０３５５】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３５６】
ＭＹＣ−６２２  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化４２１】
2015529467.tif 000617
【０３５７】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３５８】
別の例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称のＭＹＣ−９５３  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入されたミスマッチ残基はイタリック体である）。
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化４２２】
2015529467.tif 000618
【０３５９】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３６０】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化４２３】
2015529467.tif 000619
【０３６１】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３６２】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化４２４】
2015529467.tif 000620
【０３６３】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０３６４】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化４２５】
2015529467.tif 000621
【０３６５】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｇ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０３６６】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化４２６】
2015529467.tif 000622
【０３６７】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０３６８】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化４２７】
2015529467.tif 000623
【０３６９】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｇ」残基は、あるいは「ｔ」または「ｃ」である。
【０３７０】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化４２８】
2015529467.tif 000624
【０３７１】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０３７２】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化４２９】
2015529467.tif 000625
【０３７３】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０３７４】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化４３０】
2015529467.tif 000626
【０３７５】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０３７６】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化４３１】
2015529467.tif 000627
【０３７７】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０３７８】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化４３２】
2015529467.tif 000628
【０３７９】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０３８０】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化４３３】
2015529467.tif 000629
【０３８１】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３８２】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化４３４】
2015529467.tif 000630
【０３８３】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３８４】
ＭＹＣ−９５３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化４３５】
2015529467.tif 000631
【０３８５】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３８６】
追加的な例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称性のＭＹＣ−１３６４  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入したミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０３８７】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化４３６】
2015529467.tif 000632
【０３８８】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３８９】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化４３７】
2015529467.tif 000633
【０３９０】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３９１】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化４３８】
2015529467.tif 000634
【０３９２】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０３９３】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化４３９】
2015529467.tif 000635
【０３９４】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｇ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０３９５】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化４４０】
2015529467.tif 000636
【０３９６】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０３９７】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化４４１】
2015529467.tif 000637
【０３９８】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｔ」残基は、あるいは「ａ」または「ｃ」である。
【０３９９】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化４４２】
2015529467.tif 000638
【０４００】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０４０１】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化４４３】
2015529467.tif 000639
【０４０２】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０４０３】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化４４４】
2015529467.tif 000640
【０４０４】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０４０５】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化４４５】
2015529467.tif 000641
【０４０６】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４０７】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化４４６】
2015529467.tif 000642
【０４０８】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０４０９】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化４４７】
2015529467.tif 000643
【０４１０】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０４１１】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化４４８】
2015529467.tif 000644
【０４１２】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４１３】
ＭＹＣ−１３６４  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化４４９】
2015529467.tif 000645
【０４１４】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４１５】
さらなる例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称性ＭＹＣ−１３７０  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入されるミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０４１６】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化４５０】
2015529467.tif 000646
【０４１７】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４１８】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化４５１】
2015529467.tif 000647
【０４１９】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４２０】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチの位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化４５２】
2015529467.tif 000648
【０４２１】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは、「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４２２】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化４５３】
2015529467.tif 000649
【０４２３】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０４２４】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化４５４】
2015529467.tif 000650
【０４２５】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４２６】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化４５５】
2015529467.tif 000651
【０４２７】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｔ」残基は、あるいは「ａ」または「ｃ」である。
【０４２８】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化４５６】
2015529467.tif 000652
【０４２９】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０４３０】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化４５７】
2015529467.tif 000653
【０４３１】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０４３２】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化４５８】
2015529467.tif 000654
【０４３３】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０４３４】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化４５９】
2015529467.tif 000655
【０４３５】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４３６】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化４６０】
2015529467.tif 000656
【０４３７】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０４３８】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化４６１】
2015529467.tif 000657
【０４３９】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４４０】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化４６２】
2015529467.tif 000658
【０４４１】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４４２】
ＭＹＣ−１３７０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化４６３】
2015529467.tif 000659
【０４４３】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４４４】
別の例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称性ＭＹＣ−１７１１  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入されたミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０４４５】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化４６４】
2015529467.tif 000660
【０４４６】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０４４７】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化４６５】
2015529467.tif 000661
【０４４８】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４４９】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化４６６】
2015529467.tif 000662
【０４５０】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０４５１】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化４６７】
2015529467.tif 000663
【０４５２】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０４５３】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化４６８】
2015529467.tif 000664
【０４５４】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４５５】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化４６９】
2015529467.tif 000665
【０４５６】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｔ」残基は、あるいは「ａ」または「ｃ」である。
【０４５７】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化４７０】
2015529467.tif 000666
【０４５８】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ｔ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０４５９】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化４７１】
2015529467.tif 000667
【０４６０】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０４６１】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化４７２】
2015529467.tif 000668
【０４６２】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０４６３】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化４７３】
2015529467.tif 000669
【０４６４】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４６５】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化４７４】
2015529467.tif 000670
【０４６６】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０４６７】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化４７５】
2015529467.tif 000671
【０４６８】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０４６９】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化４７６】
2015529467.tif 000672
【０４７０】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４７１】
ＭＹＣ−１７１１  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化４７７】
2015529467.tif 000673
【０４７２】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０４７３】
さらなる例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称性ＭＹＣ−１７６９  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入されるミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０４７４】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化４７８】
2015529467.tif 000674
【０４７５】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４７６】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化４７９】
2015529467.tif 000675
【０４７７】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０４７８】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化４８０】
2015529467.tif 000676
【０４７９】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０４８０】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化４８１】
2015529467.tif 000677
【０４８１】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０４８２】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化４８２】
2015529467.tif 000678
【０４８３】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０４８４】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化４８３】
2015529467.tif 000679
【０４８５】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｇ」残基は、あるいは「ｔ」または「ｃ」である。
【０４８６】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化４８４】
2015529467.tif 000680
【０４８７】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｔ」または「ｇ」である。
【０４８８】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化４８５】
2015529467.tif 000681
【０４８９】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０４９０】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化４８６】
2015529467.tif 000682
【０４９１】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０４９２】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化４８７】
2015529467.tif 000683
【０４９３】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０４９４】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化４８８】
2015529467.tif 000684
【０４９５】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０４９６】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化４８９】
2015529467.tif 000685
【０４９７】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０４９８】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化４９０】
2015529467.tif 000686
【０４９９】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５００】
ＭＹＣ−１７６９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化４９１】
2015529467.tif 000687
【０５０１】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５０２】
さらなる例として、以下の構造では、このようなミスマッチが非対称性ＭＹＣ−１９６５  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入されたミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０５０３】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化４９２】
2015529467.tif 000688
【０５０４】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５０５】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化４９３】
2015529467.tif 000689
【０５０６】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５０７】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化４９４】
2015529467.tif 000690
【０５０８】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０５０９】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化４９５】
2015529467.tif 000691
【０５１０】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０５１１】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化４９６】
2015529467.tif 000692
【０５１２】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５１３】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化４９７】
2015529467.tif 000693
【０５１４】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｇ」残基は、あるいは「ａ」または「ｃ」である。
【０５１５】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化４９８】
2015529467.tif 000694
【０５１６】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｔ」または「ｃ」である。
【０５１７】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化４９９】
2015529467.tif 000695
【０５１８】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０５１９】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化５００】
2015529467.tif 000696
【０５２０】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０５２１】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化５０１】
2015529467.tif 000697
【０５２２】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５２３】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化５０２】
2015529467.tif 000698
【０５２４】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０５２５】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化５０３】
2015529467.tif 000699
【０５２６】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０５２７】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化５０４】
2015529467.tif 000700
【０５２８】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５２９】
ＭＹＣ−１９６５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化５０５】
2015529467.tif 000701
【０５３０】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５３１】
別の例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称性ＭＹＣ−２０９９  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入されたミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０５３２】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化５０６】
2015529467.tif 000702
【０５３３】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５３４】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化５０７】
2015529467.tif 000703
【０５３５】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５３６】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化５０８】
2015529467.tif 000704
【０５３７】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０５３８】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化５０９】
2015529467.tif 000705
【０５３９】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０５４０】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化５１０】
2015529467.tif 000706
【０５４１】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５４２】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化５１１】
2015529467.tif 000707
【０５４３】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｔ」残基は、あるいは「ａ」または「ｃ」である。
【０５４４】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化５１２】
2015529467.tif 000708
【０５４５】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ｔ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０５４６】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化５１３】
2015529467.tif 000709
【０５４７】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０５４８】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化５１４】
2015529467.tif 000710
【０５４９】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０５５０】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化５１５】
2015529467.tif 000711
【０５５１】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５５２】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化５１６】
2015529467.tif 000712
【０５５３】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０５５４】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化５１７】
2015529467.tif 000713
【０５５５】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５５６】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化５１８】
2015529467.tif 000714
【０５５７】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５５８】
ＭＹＣ−２０９９  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化５１９】
2015529467.tif 000715
【０５５９】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５６０】
さらなる例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称性ＭＹＣ−２１１５  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入したミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０５６１】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化５２０】
2015529467.tif 000716
【０５６２】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５６３】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化５２１】
2015529467.tif 000717
【０５６４】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５６５】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化５２２】
2015529467.tif 000718
【０５６６】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０５６７】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化５２３】
2015529467.tif 000719
【０５６８】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｇ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０５６９】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化５２４】
2015529467.tif 000720
【０５７０】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５７１】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化５２５】
2015529467.tif 000721
【０５７２】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｇ」残基は、あるいは「ａ」または「ｃ」である。
【０５７３】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化５２６】
2015529467.tif 000722
【０５７４】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０５７５】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化５２７】
2015529467.tif 000723
【０５７６】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０５７７】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化５２８】
2015529467.tif 000724
【０５７８】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０５７９】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化５２９】
2015529467.tif 000725
【０５８０】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５８１】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化５３０】
2015529467.tif 000726
【０５８２】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０５８３】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化５３１】
2015529467.tif 000727
【０５８４】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０５８５】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化５３２】
2015529467.tif 000728
【０５８６】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５８７】
ＭＹＣ−２１１５  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化５３３】
2015529467.tif 000729
【０５８８】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５８９】
さらなる例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称性ＭＹＣ−２１２０  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入したミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０５９０】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化５３４】
2015529467.tif 000730
【０５９１】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５９２】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化５３５】
2015529467.tif 000731
【０５９３】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０５９４】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化５３６】
2015529467.tif 000732
【０５９５】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｃ」である。
【０５９６】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化５３７】
2015529467.tif 000733
【０５９７】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｇ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０５９８】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化５３８】
2015529467.tif 000734
【０５９９】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６００】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化５３９】
2015529467.tif 000735
【０６０１】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｇ」残基は、あるいは「ａ」または「ｃ」である。
【０６０２】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化５４０】
2015529467.tif 000736
【０６０３】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０６０４】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化５４１】
2015529467.tif 000737
【０６０５】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０６０６】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化５４２】
2015529467.tif 000738
【０６０７】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０６０８】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化５４３】
2015529467.tif 000739
【０６０９】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６１０】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化５４４】
2015529467.tif 000740
【０６１１】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０６１２】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化５４５】
2015529467.tif 000741
【０６１３】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｇ」である。
【０６１４】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化５４６】
2015529467.tif 000742
【０６１５】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６１６】
ＭＹＣ−２１２０  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化５４７】
2015529467.tif 000743
【０６１７】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６１８】
別の例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称性ＭＹＣ−２１９６  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入したミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０６１９】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化５４８】
2015529467.tif 000744
【０６２０】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６２１】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化５４９】
2015529467.tif 000745
【０６２２】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６２３】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化５５０】
2015529467.tif 000746
【０６２４】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０６２５】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化５５１】
2015529467.tif 000747
【０６２６】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０６２７】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化５５２】
2015529467.tif 000748
【０６２８】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６２９】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化５５３】
2015529467.tif 000749
【０６３０】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｇ」残基は、あるいは「ａ」または「ｃ」である。
【０６３１】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化５５４】
2015529467.tif 000750
【０６３２】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０６３３】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化５５５】
2015529467.tif 000751
【０６３４】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０６３５】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化５５６】
2015529467.tif 000752
【０６３６】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０６３７】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化５５７】
2015529467.tif 000753
【０６３８】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６３９】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化５５８】
2015529467.tif 000754
【０６４０】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０６４１】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化５５９】
2015529467.tif 000755
【０６４２】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０６４３】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化５６０】
2015529467.tif 000756
【０６４４】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６４５】
ＭＹＣ−２１９６  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化５６１】
2015529467.tif 000757
【０６４６】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６４７】
さらなる例として、以下の構造では、このようなミスマッチは、非対称性ＭＹＣ−２２３３  ＤｓｉＲＮＡ内に導入される（新規に導入されるミスマッチ残基はイタリック体である）。
【０６４８】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の１９（５´末端より）
【化５６２】
2015529467.tif 000758
【０６４９】
任意に、センス鎖の位置１９のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６５０】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２０（５´末端より）
【化５６３】
2015529467.tif 000759
【０６５１】
任意に、センス鎖の位置２０のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６５２】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２１（５´末端より）
【化５６４】
2015529467.tif 000760
【０６５３】
任意に、センス鎖の位置２１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０６５４】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２２（５´末端より）
【化５６５】
2015529467.tif 000761
【０６５５】
任意に、センス鎖の位置２２のミスマッチ「Ｇ」残基は、あるいは「Ａ」または「Ｃ」である。
【０６５６】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２３（５´末端より）
【化５６６】
2015529467.tif 000762
【０６５７】
任意に、センス鎖の位置２３のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６５８】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２４（５´末端より）
【化５６７】
2015529467.tif 000763
【０６５９】
任意に、センス鎖の位置２４のミスマッチ「ｔ」残基は、あるいは「ａ」または「ｃ」である。
【０６６０】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝センス鎖の２５（５´末端より）
【化５６８】
2015529467.tif 000764
【０６６１】
任意に、センス鎖の位置２５のミスマッチ「ａ」残基は、あるいは「ｃ」または「ｇ」である。
【０６６２】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の１（５´末端より）
【化５６９】
2015529467.tif 000765
【０６６３】
任意に、アンチセンス鎖の位置１のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｇ」または「Ｃ」である。
【０６６４】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の２（５´末端より）
【化５７０】
2015529467.tif 000766
【０６６５】
任意に、アンチセンス鎖の位置２のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０６６６】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の３（５´末端より）
【化５７１】
2015529467.tif 000767
【０６６７】
任意に、アンチセンス鎖の位置３のミスマッチ「Ａ」残基は、「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６６８】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の４（５´末端より）
【化５７２】
2015529467.tif 000768
【０６６９】
任意に、アンチセンス鎖の位置４のミスマッチ「Ｃ」残基は、あるいは「Ｕ」または「Ｇ」である。
【０６７０】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の５（５´末端より）
【化５７３】
2015529467.tif 000769
【０６７１】
任意に、アンチセンス鎖の位置５のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６７２】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の６（５´末端より）
【化５７４】
2015529467.tif 000770
【０６７３】
任意に、アンチセンス鎖の位置６のミスマッチ「Ｕ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６７４】
ＭＹＣ−２２３３  ２５／２７ｍｅｒ  ＤｓｉＲＮＡ、ミスマッチ位置＝アンチセンス鎖の７（５´末端より）
【化５７５】
2015529467.tif 000771
【０６７５】
任意に、アンチセンス鎖の位置７のミスマッチ「Ａ」残基は、あるいは「Ｃ」または「Ｇ」である。
【０６７６】
上記のオリゴヌ クレオチド鎖配列では、描写される１つの二本鎖のセンス鎖配列を描写される別の二本鎖のアンチセンス鎖と組み合わせることができ、これにより異なる二本鎖を形成でき、特定の例ではこのような二本鎖は、ＭＹＣ標的転写配列に関するミスマッチ残基を含み、その一方でこのようなセンス鎖およびアンチセンス鎖は、お互いに関してこの残基でのミスマッチを示さないことが考慮される（たとえば、配列番号３７０７および３７２０、配列番号３７０８および３７１９、配列番号３７０９および３７１８などを含む二本鎖が、このような二本鎖の例として考慮される）。
【０６７７】
上述のように、ミスマッチの導入は本明細書で記述した任意のＤｓｉＲＮＡ上で実施可能である。
【０６７８】
このようなＤｓｉＲＮＡ構造のミスマッチを組み合わせて、例えばセンス鎖の３’末端の４〜７ヌクレオチド／アンチセンス鎖の５’末端の４〜７ヌクレオチド内に２、３または４つものミスマッチを有するＤｓｉＲＮＡを産出してもよい。
【０６７９】
実際、センス鎖の３’末端残基／アンチセンス鎖の５’末端残基にてＤｓｉＲＮＡ内に組み込み可能な配列の柔軟性に関して、特定の実施形態では、本発明の非対称ＤｓｉＲＮＡの配列の必要条件を以下の（例示的なＭＹＣ−９５３  ＤｓｉＲＮＡ配列に関して示した）（ミニマリスト）構造で表すことが出来る。
【化５７６】
2015529467.tif 000772
式中、ｎ＝１〜５、１〜１０、１〜２０、１〜３０、１〜５０、または１〜８０以上である。
ＭＹＣ−９５３  ｍＲＮＡ標的：
【化５７７】
2015529467.tif 000773
【０６８０】
ＭＹＣ標的部位はまた、その相補的標的部位が、規定された標的部位と重なる、１つ以上の種々のオリゴヌクレオチドによって標的とされる部位であり得る。例えば、例示的ＭＹＣ−９５３ＤｓｉＲＮＡに関して、ＭＹＣ配列に重なり、わずかばかり補正されたＭＹＣ配列を標的としている特定のＤｓｉＲＮＡが、ＭＹＣ−９５３のものと同様の活性レベルを示しうる（特に、以下の表９のＭＹＣ−９５２を参照のこと。したがって、特定の実施形態では、デザインされた標的配列領域は、広く重なっている配列を有する一連のＤｓｉＲＮＡによって効果的に標的とされる（例えばＭＹＣ−９５２およびＭＹＣ−９５３標的部位のＤｓｉＲＮＡを考慮する場合、より包括的なＭＹＣ転写標的配列が、例えば５’−ＣＧＧＡＣＧＡＣＧＡＧＡＣＣＵＵＣＡＵＣＡＡＡＡＡＣＡＵ−３’（配列番号：３８７８）を指してもよく、ここで所定のいずれかのＤｓｉＲＮＡ（例えば、ＭＹＣ−９５２およびＭＹＣ−９５３から選択されるＤｓｉＲＮＡ）のみが、このような配列領域内のサブ配列を標的とし、また全配列は、このような一連のＤｓｉＲＮＡに対する実行可能な標的と考慮可能である）。
【０６８１】
さらに、かつ／またはあるいは、センス鎖の３’末端７ヌクレオチド／アンチセンス鎖の５’末端７ヌクレオチド内のミスマッチを、上述のように、他のミスマッチ耐性位置にて配置されるスマッチと組み合わせることができる。
【０６８２】
特定のＭＹＣ配列の標的化を介して、ＭＹＣレベルの阻害剤として、上記Ｄｉｃｅｒ基質剤（ＤｓｉＲＮＡ）の本同定を考慮して、本明細書で記述したものと同様の構造を持つｄｓＲＮＡがまた、ＮＭ＿００２４６７．４またはＮＭ＿０１０８４９．４のＭＹＣ配列内、またはそれらの変異体（例えば、ＮＭ＿００２４６７．４および／またはＮＭ＿０１０８４９．４の配列に対して、８０％同一性、９０％同一性、９５％同一性、９６％同一性、９７％同一性、９８％同一性、９９％同一性またはそれ以上の同一性を有する標的配列）内の他の配列を標的とするように合成可能である。
【０６８３】
抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡデザイン／合成
２５〜３５ヌクレオチド、とりわけ２５〜３０ヌクレオチドのより長いｄｓＲＮＡ種（ＤｓｉＲＮＡ）が、１９〜２３マーｓｉＲＮＡ剤と比較して、活性の効力および持続期間に関して、予期せぬ効果的な結果を与えることが、実験的にわかってきた。ｄｓＲＮＡ処理機構の根本的な理論に拘束されることを望むものではないが、、より長いｄｓＲＮＡ種が細胞の細胞質中のＤｉｃｅｒ酵素に対する基質として働くことが考えられる。本発明のｄｓＲＮＡをより短いセグメントに分割することに加えて、Ｄｉｃｅｒは、分割されたｄｓＲＮＡ由来の一本鎖分割産物の、標的遺伝子ＭＹＣ（またはＭＹＣ−関連疾患もしくは障害と関連する他の遺伝子）由来の細胞質ＲＮＡ（例えばＭＹＣ  ＲＮＡ）の崩壊に関与するＲＩＳＣ複合体内への組み込みを促進すると考えられる。先行する研究（Ｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許公開公報第２００７／０２６５２２０号）は、ＤｉｃｅｒによるｄｓＲＮＡ種（特にＤｓｉＲＮＡ剤）の開裂性が、ｄｓＲＮＡ種の活性の効力および持続期間の増大と一致することを示した。
【０６８４】
特定の好ましい抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ剤を、プレスクリーニングした集合から選択した。ＤｓｉＲＮＡのデザインは任意に、配列の領域に広がっている可能性のある多数のＤｓｉＲＮＡ剤の推定有効性／効果のｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ評価にて実施する予測スコアリングアルゴリズムの利用を含みうる。より最近の「ｖ３」アルゴリズムは本技術分野ですでに利用可能なｓｉＲＮＡスコアリングアルゴリズム対して理論的に改善されたアルゴリズムを表すが、このようなスコアリングアルゴリズムのデザインに関する情報は、例えば、Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２００６，７：５１６）で見ることができる（例えば「ｖ３」および「ｖ４」スコアリングアルゴリズムは、ヒト配列中の任意のバイアスに依存していない機械学習アルゴリズムである。さらに、「ｖ３」および「ｖ４」アルゴリズムは、Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．にて記述されたデバイスのような、より古い「ｖ２」アルゴリズムからのものよりも、複数倍大きいデータ組に由来する）。
【０６８５】
本発明のＤｓｉＲＮＡ剤の第１および第２のオリゴヌクレオチドは、完全に相補的であることを必要としない。実際、１つの実施形態では、センス鎖の３’−末端は、１つ以上のミスマッチを含む。１つの態様において、２つのミスマッチが、センス鎖の３’末端に組み込まれる。別の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡは、それぞれが長さにおいて２７ヌクレオチドであり、互いにアニールした時に、センス鎖の３’末端（アンチセンス鎖の５’末端）上に平滑末端と２つのヌクレオチド末端とを持つ、２つのＲＮＡオリゴヌクレオチドを含む二本鎖ＲＮＡ分子である。（特に３’−センス／５’−アンチセンス位置での）ミスマッチまたは減少した熱力学的安定性の利用が、おそらくｓｉＲＮＡのＲＩＳＣへの進入とともに発生する速度が限定された巻き戻し段階に影響を与えることによって、アンチセンス鎖のＲＩＳＣへの進入を促進するまたは有利に働かせることが提案されてきた（Ｓｃｈｗａｒｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃｅｌｌ  １１５：１９９−２０８；Ｋｈｖｏｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃｅｌｌ  １１５：２０９−２１６）。したがって、末端塩基組成物は、活性２１マーｓｉＲＮＡ二本鎖を選択するためのデザインアルゴリズムに含まれてきた（Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３２：９３６−９４８；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２２：３２６−３３０）。本実施形態のｄｓＲＮＡのＤｉｃｅｒ開裂で、ミスマッチを含む小さな最終末端配列は、アンチセンス鎖と対を形成しないままである（３’−オーバーハングの一部となる）か、または最終２１−マーｓｉＲＮＡを完全に開裂して除去される。これらの「ミスマッチ」はしたがって、ＲＩＳＣの最終ＲＮＡ成分中のミスマッチとして持続しない。Ｄｉｃｅｒ基質のセンス鎖の３’−末端での塩基ミスマッチまたはセグメントの不安定化がおそらくＤｉｃｅｒによる処理を促進することによって、ＲＮＡｉ中の合成二本鎖の効力を改善したという発見が、２５〜３０マーｄｓＲＮＡ（また本明細書で「ＤｓｉＲＮＡ」と呼ぶ。米国特許公開公報第２００５／０２７７６１０号、第２００５／０２４４８５８号および第２００７／０２６５２２０号明）のデザインと利用を記述している過去の働きの驚くべき発見であった。
【０６８６】
抗−ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡの改変
二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）の効果を阻害する１つの主要な因子は、ヌクレアーゼによるｄｓＲＮＡ（例えばｓｉＲＮＡおよびＤｓｉＲＮＡ）の分解である。３’−エキソヌクレアーゼは、血清中に存在する第一ヌクレアーゼ活性であり、アンチセンスＤＮＡオリゴヌクレオチドの３’−末端の改変が、分解を防止するために重要である（Ｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓ  Ｄｅｖ，１：１４１−１５１）。ＲＮａｓｅ−Ｔファミリーヌクレアーゼは同定され、ｓｉＲＮＡの制御および分解に関与する３’から５’エキソヌクレアーゼ活性を持つＥＲＩ−１と呼ばれている（Ｋｅｎｎｅｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎａｔｕｒｅ  ４２７：６４５−６４９；Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ，３９０：６７５−６７９）。この遺伝子はまた、マウスのＴｈｅｘ１（ＮＭ＿０２０６７）またはヒトのＴＨＥＸ１（ＮＭ＿１５３３３２）として知られ、ヒストンｍＲＮＡの分解に関与し、またｓｉＲＮＡ中の３’−オーバーハングの分解を媒介するが、二本鎖ＲＮＡを分解しない（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８１：３０４４７−３０４５４）。したがって、本発明のＤｓｉＲＮＡを含む、ｄｓＲＮＡの３’−末端−安定化が安定性を改善すると予測することが合理的である。
【０６８７】
ＸＲＮ１（ＮＭ＿０１９００１）は、Ｐ−体中に存在し、ｍｉＲＮＡによって標的化されたｍＲＮＡの分解に関与してきた５’から３’エキソヌクレアーゼであり（Ｒｅｈｗｉｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，ＲＮＡ  １１：１６４０−１６４７）、またｓｉＲＮＡによって指向されるような内部開裂によって開始される分解を完了するのに関与しうる。ＸＲＮ２（ＮＭ＿０１２２５５）は、核ＲＮＡ処理に関与する異なる５’から３’エキソヌクレアーゼである。
【０６８８】
ＲＮａｓｅ  Ａは、ＲＮＡを分解する哺乳類における主要なエンドヌクレアーゼ活性である。ｓｓＲＮＡに対して特異的であり、ピリミジン塩基の３’−末端で開裂する。ＲＮａｓｅ  Ａ開裂と一致するｓｉＲＮＡ分解産物は、血清中でのインキュベーション後、質量分析によって検出可能である（Ｔｕｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ  Ｂｉｏｓｙｓｔ  ３：４３〜５０）。３’−オーバーハングは、ＲＮａｓｅ分解に対するｓｉＲＮＡの感受性を増強する。血清からのＲＮａｓｅ  Ａの枯渇が、ｓｉＲＮＡの分解を減少させ、この分解が配列優先傾向を見せ、末端上でポリＡ／Ｕ配列を持つ配列に対してより悪い（Ｈａｕｐｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００６  Ｂｉｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ７１：７０２−７１０）。このことは、二本鎖のより安定性の低い領域が、「呼吸をし」てもよく、ＲＮａｓｅ  Ａによる分解に対して利用可能な一時的な一本鎖種を提供することを示唆している。ＲＮａｓｅ  Ａ阻害剤を血清に加え、ｓｉＲＮＡ寿命および効力を改善することができる（Ｈａｕｐｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｉｎｔ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １２１：２０６−２１０）。
【０６８９】
２１マー中、ホスホロチオエートまたはボラノホスフェート改変が、ヌクレオチド内リン酸結合を直接安定化させる。ボラノホスフェート改変ＲＮＡは、ヌクレアーゼ耐性が高く、サイレンシング剤として強力であり、比較的無毒性である。ボラノホスフェート改変ＲＮＡは、標準的な化学合成方法を用いて製造できず、代わりにｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）によって作製される（Ｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３２：５９９１−６０００；Ｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３４：２７７３−２７８１）。ホスホロチオエート（ＰＳ）改変は、任意の所望の位置で、ＲＮＡ二本鎖中容易に配置可能であり、標準的な化学合成方法を用いて作製可能である。ＰＳ改変は、用量依存毒性を示し、それにより、ほとんどの研究者は、ｓｉＲＮＡ内への限定した組み込みを推奨し、ここでヌクレアーゼからの保護が最も重要な３’−末端が好まれる（Ｈａｒｂｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  １３：８３−１０５；Ｃｈｉｕ  ａｎｄ  Ｒａｎａ，２００３，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  １０：５４９−５６１；  Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４２：７９６７−７９７５；  Ａｍａｒｚｇｕｉｏｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３１：５８９−５９５）。より広範囲のＰＳ改変が、強力なＲＮＡｉ活性と互換可能であるが、しかし（２’−Ｏ−メチルＲＮＡのような）糖改変の利用がよりすぐれている可能性がある（Ｃｈｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３４２：９１９−９２７）。
【０６９０】
種々の置換基を、一般的に二本鎖安定性（Ｔｍ）を増大させ、ヌクレアーゼ耐性を大きく改善できるリボースの２’−位置に配置可能である。２’−Ｏ−メチルＲＮＡは、哺乳類リボソームＲＮＡおよび転写ＲＮＡにて見られる、天然に存在する改変である。ｓｉＲＮＡ中の２’−Ｏ−メチル改変は公知であるが、二本鎖内の改変塩基の精確な位置が、効力を保つために重要であり、ＲＮＡに対する２’−Ｏ−メチルＲＮＡの完全な置換は、ｓｉＲＮＡを不活性化する。例えば、交互２’−Ｏ−メチル塩基を使用するパターンは、改変されていないＲＮＡと等価の効力を有することができ、血清中極めて安定である（Ｃｈｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３４２：９１９−９２７；Ｃｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３１：２７０５−２７１６）。
【０６９１】
２’−フルオロ（２’−Ｆ）改変はまた、ｄｓＲＮＡ（例えばｓｉＲＮＡおよびＤｓｉＲＮＡ）機能と互換可能であり、（試薬コストおよび利用可能性のため）最も一般的にはピリジン部位に位置し、プリン位置にて２’−Ｏ−メチル改変と組み合わせ可能であり、２’−Ｆプリンが利用でき、使用可能である。この種類の非常に改変された二本鎖は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて、ＲＮＡｉの強力なトリガーでありえ（Ａｌｌｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４８：９０１−９０４；Ｐｒａｋａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４８：４２４７−４２５３；Ｋｒａｙｎａｃｋ  ａｎｄ  Ｂａｋｅｒ，２００６，ＲＮＡ  １２：１６３−１７６）、ｉｎ  ｖｉｖｏで使用した時に、活性の性能を改善し、持続期間を延長できる（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４１：  １３４９−１３５６；Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２３：１００２−１００７）。非常に強力で、ヌクレアーゼ安定である、交互２’−Ｆおよび２’−Ｏ−Ｍｅ塩基を含む平滑１９マーの二本鎖が、Ａｌｌｅｒｏｎによって教示された。このデザインにおいて、交互２’−Ｏ−Ｍｅ残基は、Ｃｚａｕｄｅｒｎａによって使用されたものと同一のパターンで配置されるが、残りのＲＮＡ残基は２’−Ｆ改変塩基に変換される。Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙによって使用された、非常に強力な、ヌクレアーゼ耐性のｓｉＲＮＡは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、非常に強力な、ヌクレアーゼ耐性ｓｉＲＮＡを使用した。２’−Ｏ−Ｍｅ  ＲＮＡおよび２’−Ｆ  ＲＮＡに加えて、この二本鎖は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、逆脱塩基残基、および３’−末端ＰＳヌクレオシド内結合を含む。広範囲の改変は、特定の利点を持つ一方で、より限定される二本鎖の改変もまた、ｉｎ  ｖｉｖｏで性能を改善し、製造がより単純で、よりコストがかからなくすることができる。Ｓｏｕｔｓｃｈｅｋら（２００４，  Ｎａｔｕｒｅ  ４３２：１７３−１７８）は、ｉｎ  ｖｉｖｏで二本鎖を使用し、主に２つの２’−Ｏ−Ｍｅ  ＲＮＡ塩基および限定された３’−末端ＰＳヌクレオシド内結合を持つＲＮＡであった。
【０６９２】
ロック核酸（ＬＮＡ）は、ｄｓＲＮＡ（例えばｓｉＲＮＡおよびＤｓｉＲＮＡ）を安定させるために使用可能な異なる種類の２’−改変である。効力を維持するＬＮＡ組み込みのパターンは、２’−Ｏ−メチルまたは２’−Ｆ−塩基よりも制限され、このように限定された改変が好ましい（Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４２：７９６７−７９７５；Ｇｒｕｎｗｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３１：３１８５−３１９３；Ｅｌｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３：４３９−４４７）。限定された組み込みでさえ、ＬＮＡ改変の利用は、ｉｎ  ｖｉｖｏにてｄｓＲＮＡの性能を改善可能であり、標的効果特性を変えるか、または改善し得る（Ｍｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ６：８３３−８４３）。
【０６９３】
細胞内または生動物内に導入された合成核酸は、「外来」として認識され、免疫応答を引き起こしうる。免疫刺激は、劇的に実験結果を変化させ、細胞死を導きさえする的外れな効果の主な種類を構成する。生来の免疫システムには、これらの応答を媒介するＤＮＡおよびＲＮＡと特異的に相互作用する受容体分子の集合が含まれ、その幾つかは、細胞質内に局在し、その幾つかはエンドソーム内に存在する（Ｍａｒｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，２００５，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２３：１３９９−１４０５；Ｓｃｈｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １４：４６３−４７０）。カチオン性脂質またはリポソームによるｓｉＲＮＡの伝達は、ｓｉＲＮＡを、細胞質およびエンドソームセグメントの両方へ曝露させ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ両方で、１型インターフェロン（ＩＦＮ）応答を引き起こすリスクを最大化する（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２３：１００２−１００７；Ｓｉｏｕｄ  ａｎｄ  Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，２００３，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３１２：１２２０−１２２５；Ｓｉｏｕｄ，２００５，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３４８：１０７９−１０９０；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３３０：  ７５５−７５９）。細胞内に転写されたＲＮＡは免疫原性が少なく（Ｒｏｂｂｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００６  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｌ  ２４：５６６−５７１）、脂質に基づく方法を用いて伝達した時に免疫原性である合成ＲＮＡは、ｉｎ  ｖｉｖｏでさえ、機械的方法によって細胞内に導入された時の免疫刺激を回避する可能性がある（Ｈｅｉｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２２：  １５７９−１５８２）。しかしながら、脂質に基づく伝達方法は一般的でかつ効果的であり、広く使用される。とりわけ、全ての細胞型が存在し、免疫応答が産出されるリスクが最も高いｉｎ  ｖｉｖｏ適用に対して、免疫応答を防止するためのいくつかの一般的な戦略が必要である。化学的に改変したＲＮＡの利用が、これらの問題のほとんどまたはすべてを解決しうる。
【０６９４】
特定の実施形態では、改変がＭＹＣ阻害活性を有することからｄｓＲＮＡ剤を阻害しない限り、改変を本発明の抗ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡ剤中に含めることができる。１つの実施形態では、１つ以上の改変が、ＤｓｉＲＮＡ剤のＤｉｃｅｒ処理を増強するように実施される（ＤｓｉＲＮＡのＤｉｃｅｒ処理を判定するためのアッセイが本明細書中他の部分に記されている）。第２の実施形態では、１つ以上の改変が、より効果的なＭＹＣ阻害をもたらすように作製される（本明細書で記述したように、ｄｓＲＮＡのＭＹＣ阻害／ＭＹＣ阻害活性は、ＲＮＡレベルを判定、またはＭＹＣポリペプチドレベルを判定するための本技術分野で認識されている方法を介してアッセイ可能であり、このようなレベルは、たとえばＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルの評価の代わりに、またはこの評価に加えて評価されるべきである）。第３の実施形態では、１以上の改変が、より大きなＭＹＣ阻害活性を支持するように作製される（ＭＹＣ阻害活性を判定する方法は上記されている）。第４の実施形態では、１つ以上の改変が、細胞に伝達されるべき各ｄｓＲＮＡ剤分子あたりのＭＹＣ阻害活性のより強力な効力をもたらすように作製される（ＭＹＣ阻害活性の効力は上記されている）。改変は、配列内の３’−末端領域、５’−末端領域にて、３’−末端領域と５’−末端領域両方にて、または例えば種々の位置に組み込むことができる。上述の限定を考慮して、改変の数および組み合わせをｄｓＲＮＡ剤内に組み込むことが可能である。多数の改変が存在する場合、それらは同一であるか、または異なってもよい。塩基、糖部位、リン酸骨格およびそれらの組み合わせに対する改変が考慮される。いずれかの５’−末端がリン酸化可能である。
【０６９５】
リン酸骨格に関して考慮される改変の例には、メチルホスホネート、ホスホロチオエートを含むホスホン酸塩、およびアルキルホスホトリエステルのようなホスホトリエステル改変などを含むリン酸塩が含まれる。糖部位に関して考慮される改変の例には、２’−Ｏ−メチルのような２’−アルキルピリミジン、２’−フルオロ、アミノおよびデオキシ改変などが含まれる（例えば、Ａｍａｒｚｇｕｉｏｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３１：５８９−５９５を参照のこと）。塩基に関して考慮される改変の例には、脱塩基糖、２−Ｏ−アルキル改変ピリミジン類、４−チオウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシルおよび５−（３−アミノアリル）−ウラシルなどが含まれる。ロック核酸またはＬＮＡ’ｓも組み込むことが可能である。多くの他の改変が公知であり、上記の基準を満たす限り使用可能である。改変の例はまた、米国特許題５，６８４，１４３号、第５，８５８，９８８号および第６，２９１，４３８号、および米国特許公開公報第２００４／０２０３１４５  Ａ１号に開示されている。他の改変は、Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ  （２０００，  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  １０：２９７−３１０），Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（２０００，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  １０：１１７−２１）、Ｒｕｓｃｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０００，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  １０：３３３−３４５）、Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  １１：３１７−２５）、Ｖｏｒｏｂｊｅｖ  ｅｔ  ａｌ．（２００１，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  １１：７７−８５）にて開示されている。
【０６９６】
考慮される１つ以上の改変をいずれかの鎖の中に組み込むことが可能である。ｄｓＲＮＡ剤中の改変の位置は、より強力な効力および安定性の授与、毒性の低減、Ｄｉｃｅｒ処理の増強および免疫応答の最小化を含む、ｄｓＲＮＡ剤の特徴に大きく影響を与えることができる。１つの実施形態では、アンチセンス鎖もしくはセンス鎖、または両方の鎖が、１つ以上の２’−Ｏ−メチル改変ヌクレオチドを有する。別の実施形態では、アンチセンス鎖は、２’−Ｏ−メチル改変ヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アンチセンス鎖は、２’−Ｏ−メチル改変ヌクレオチドからなる３’オーバーハングを含む。アンチセンス鎖はまた、さらなる２’−Ｏ−メチル改変ヌクレオチドを含むことができる。
【０６９７】
特定の実施形態では、本発明の抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ剤は、Ｄｉｃｅｒによるその処理を増強する種々の特徴を持つ。このような実施形態にしたがって、ＤｓｉＲＮＡ剤は、ｓｉＲＮＡを産出するためにＤｉｃｅｒにより処理され、以下の特徴の少なくとも１つを有すように十分な長さを持つ。（ｉ）ＤｓｉＲＮＡ剤は非対称であり、例えばセンス鎖上に３’オーバーハングを持つ、および（ｉｉ）ＤｓｉＲＮＡ剤は、活性ｓｉＲＮＡへのｄｓＲＮＡのＤｉｃｅｒ結合と処理の方向を指向するために、アンチセンス鎖上に改変３’末端を持つ。これらの実施形態にしたがって、ＤｓｉＲＮＡ剤において最も長い鎖は、２５〜３０ヌクレオチドを含む。１つの実施形態では、センス鎖は２５〜３０ヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は２５〜２８ヌクレオチドを含む。したがって、得られるｄｓＲＮＡは、センス鎖の３’末端上にオーバーハングを持つ。オーバーハングは、２ヌクレオチドのような、１〜４ヌクレオチドである。アンチセンス鎖は、５’リン酸を有していてもよい。
【０６９８】
特定の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ剤のセンス鎖を、センス鎖の３’末端に位置する好適な修飾因子によるＤｉｃｅｒ処理のために改変し、すなわちＤｓｉＲＮＡ剤が、Ｄｉｃｅｒ結合および処理の方向を指向するようにデザインされる。好適な修飾因子には、デオキシリボヌクレオチド、ジデオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチドなどのヌクレオチド類、および蛍光分子などのような立体的に込み入った分子が含まれる。アシクロヌクレオチドは、ｄＮＭＰ中に通常存在する２’−デオキシリボフラノシル糖の代わりに、２−ヒドロキシエトキシメチル基を用いる。他のヌクレオチド修飾因子には、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデヒドロ‐２´，３‐ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）、２’，３’− ジデヒドロ‐２´，３‐ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）、ならびに３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデヒドロ‐２´，３‐ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）および２’，３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）の一リン酸ヌクレオチドが含まれうる。１つの実施形態では、デオキシヌクレオチドを修飾因子として使用する。ヌクレオチド修飾因子を使用する時に、１〜３ヌクレオチド修飾因子、または２ヌクレオチド修飾因子を、センス鎖の３’末端上のリボヌクレオチドの代わりに使用する。立体的に込み入った分子を使用する場合、それらは、アンチセンス鎖の３’末端にてリボヌクレオチドに付着する。したがって、鎖の長さは、修飾因子の組み込みに伴って変化するものではない。別の実施形態では、本発明は、Ｄｉｃｅｒ処理の方向を指向するために、ｄｓＲＮＡ剤中の２つのＤＮＡ塩基を置換することを考慮する。さらなる本発明において、アンチセンス鎖の５´末端およびセンス鎖の３´末端上の二本鎖の平滑末端を形成する２つのリボヌクレオチドの代わりに、２つの末端のＤＮＡ塩基を、センス鎖の３´末端上に配置し、２ヌクレオチドＲＮＡオーバーハングをアンチセンス鎖の３’末端上に配置する。これは、平滑末端上にＤＮＡ、オーバーハング末端上にＲＮＡ塩基を持つ、非対称組成物である。
【０６９９】
特定の他の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖を、アンチセンス鎖の３’末端に位置する好適な修飾因子によりＤｉｃｅｒ処理のために改変し、すなわちＤｓｉＲＮＡ剤が、Ｄｉｃｅｒ結合および処理の方向を指向するようにデザインされる。好適な修飾因子には、デオキシリボヌクレオチド、ジデオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチドなどのヌクレオチド類、および蛍光分子などのような立体的に込み入った分子が含まれる。アシクロヌクレオチドは、ｄＮＭＰ中に通常存在する２’−デオキシリボフラノシル糖の代わりに、２−ヒドロキシエトキシメチル基を使用する。他のヌクレオチド修飾因子には、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）、２’，３’−デヒドロ２´，３−ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）、ならびに３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）および２’、３’−ジデヒドロ−２’，３’−ジデオキシチミジン（ｄ４Ｔ）の一リン酸ヌクレオチドが含まれうる。１つの実施形態では、デオキシヌクレオチドを修飾因子として使用する。ヌクレオチド修飾因子を使用する時に、１〜３ヌクレオチド修飾因子、または２ヌクレオチド修飾因子を、アンチセンス鎖の３’末端上のリボヌクレオチドの代わりに使用する。立体的に込み入った分子を使用する場合、それらは、アンチセンス鎖の３’末端にてリボヌクレオチドに付着する。したがって、鎖の長さは、修飾因子の組み込みに伴い変化するものではない。別の実施形態では、本発明は、Ｄｉｃｅｒ処理の方向を指向するために、ｄｓＲＮＡ剤中の２つのＤＮＡ塩基を置換することを考慮する。さらなる発明において、２つの末端ＤＮＡ塩基を、センス鎖の５’末端とアンチセンス鎖の３’末端上で、二本鎖の平滑末端を形成している２つのリボヌクレオチドの代わりにアンチセンス鎖の３’−末端上に配置し、２ヌクレオチドＲＮＡオーバーハングをセンス鎖の３’末端上に配置する。これはまた、平滑末端上にＤＮＡ、オーバーハング末端上にＲＮＡ塩基を持つ、非対称組成物である。
【０７００】
センス鎖およびアンチセンス鎖は、細胞の細胞質中で見られる条件のような、生物学的条件下でアニールする。さらに、ｄｓＲＮＡ剤の、とりわけアンチセンス鎖の、１つの配列の一領域が、少なくとも１９ヌクレオチドの配列長を持ち、ここでこれらのヌクレオチドは、アンチセンス鎖の３’末端に隣接し、標的ＭＹＣ  ＲＮＡのヌクレオチド配列に十分に相補的である。
【０７０１】
さらに、ＤｓｉＲＮＡ剤の構造は、Ｄｉｃｅｒの開裂から産出されるオリゴヌクレオチドセグメントが、遺伝子発現を阻害することにおいて最も効果的であるオリゴヌクレオチドの一部であることを確かにするために最適化することができる。例えば、本発明の１つの実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ剤構造の２７−ｂｐオリゴヌクレオチドが合成され、ここで遺伝子発現を阻害する２１〜２２−ｂｐセグメントが、アンチセンス鎖の３’末端上に局在することが予想される。アンチセンス鎖の５’−末端上に局在する残りの塩基は、Ｄｉｃｅｒによって開裂され、廃棄される。この開裂された部分は均一であるか（すなわち標的配列の配列に基づく）、または不均一であり、核酸鎖を伸長するために添加される。
【０７０２】
米国特許出願公開第２００７／０２６５２２０号は、２７マーＤｓｉＲＮＡが、化学改変がない場合でさえ、対応する２１マーｓｉＲＮＡ組成物に対して、血清中での改善された安定性を示したことを開示している。５’リン酸塩の添加と組み合わせた時に、上述のようなパターンで、アンチセンス鎖中の２’−Ｏ−メチルＲＮＡの包含のような、ＤｓｉＲＮＡの改変が、ＤｓｉＲＮＡ剤の安定性を改善できる。合成ＲＮＡ二本鎖中のすべての鎖への５’−リン酸塩の添加が、ある程度限定したヌクレアーゼ安定性を与えるための、高額でない、生理学的方法であってもよい。
【０７０３】
本発明のｄｓＲＮＡ剤の化学改変パターンは、このような薬剤の有効性を増強するためにデザインする。したがってこのような改変は、ｄｓＲＮＡ剤の効力の低下を避けるため、ＤｓｉＲＮＡ剤のＤｉｃｅｒ処理との干渉を避けるため、ｄｓＲＮＡ剤の生物学的流体中の安定性を改善するため（ヌクレアーゼ感受性を低減させるため）、または自然免疫系による検出を阻害もしくは回避するためにデザインされる。このような改変はまた、毒性であることを避けるため、かつ本発明の即時ｄｓＲＮＡ剤の製造コストの上昇を避けるため、またはその簡便さに影響を与えるためにもデザインされる。
【０７０４】
本発明の特定の実施形態では、抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ剤は、以下のうち１つ以上の特徴を持つ。（ｉ）ＤｓｉＲＮＡ剤は非対称であり、例えばアンチセンス鎖上に３’オーバーハングを持つ、および（ｉｉ）ＤｓｉＲＮＡ剤は、活性ｓｉＲＮＡへのｄｓＲＮＡのＤｉｃｅｒ結合と処理の方向を指向するために、センス鎖上に改変３’末端を持つ。本実施形態にしたがって、ｄｓＲＮＡにおける最も長い鎖は、２５〜３５ヌクレオチド（例えば２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４または３５ヌクレオチド）を含む。特定のこのような実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ剤は、センス鎖が２５〜３４ヌクレオチドを含み、センス鎖の３’末端が、アンチセンス鎖の５’末端と平滑末端を形成し、一方アンチセンス鎖が２６〜３５ヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖の３’末端上にオーバーハングを形成するように非対称である。１つの実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ剤は、センス鎖が２５〜２８ヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が２５〜３０ヌクレオチドを含むように非対称である。したがって、得られたｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の３’末端上にオーバーハングを持つ。オーバーハングは、１〜４ヌクレオチド、例えば２ヌクレオチドである。センス鎖はまた５’リン酸塩を有してもよい。
【０７０５】
ＤｓｉＲＮＡ剤はまた、以下のうち１つ以上の特徴をさらに持つことができる。（ａ）アンチセンス鎖は、典型的２１マーから右シフトを持つ（例えば、ＤｓｉＲＮＡは、ＤｓｉＲＮＡ内の推定Ｄｉｃｅｒ開裂部位の５’まで伸長するアンチセンス鎖ヌクレオチド長を含み、このようなアンチセンス鎖ヌクレオチドは、センス鎖中の推定Ｄｉｃｅｒ開裂の３’を伸長しているセンス鎖の対応するヌクレオチドと塩基対を形成する）、（ｂ）鎖は、完全に相補的でなくてよく、すなわちこの鎖は、単一のミスマッチ塩基対を含んでよい（ミスマッチ塩基対を有するＤｓｉＲＮＡのＭＹＣ阻害活性が、十分なレベルで維持される（例えばミスマッチ塩基対を有しない対応するＤｓｉＲＮＡと比較して、少なくとも５０％以上のＭＹＣ阻害活性、少なくとも６０％以上のＭＹＣ阻害活性、少なくとも７０％以上のＭＹＣ阻害活性、少なくとも８０％以上のＭＹＣ阻害活性、少なくとも９０％以上のＭＹＣ阻害活性または少なくとも９５％以上のＭＹＣ阻害活性を維持する）という条件で、特定の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡは、１、２、３、４または５以上のミスマッチ塩基対を有する。特定の実施形態では、ミスマッチ塩基対は、ＤｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖とセンス鎖との間に存在する。いくつかの実施形態では、ミスマッチ塩基対は、アンチセンス鎖と標的ＲＮＡとの間に存在する（または存在すると予想される）。特定の実施形態では、アンチセンス鎖残基と、想定Ａｇｏ２開裂部位の標的ＲＮＡ配列中３’に局在する標的ＲＮＡ内の対応する残基との間でのミスマッチ塩基対の存在が維持され、本発明のＤｓｉＲＮＡのＭＹＣ阻害活性を増強さえしてもよい）、（ｃ）ロック核酸のような塩基改変が、センス鎖の５’末端に含まれてよい。「典型的」２１マーｓｉＲＮＡは、従来の技術を用いてデザインされる。１つの技術において、種々の部位が、並行して、または試薬の１つが効果的であるという希望とともに、同一の標的に特異的な種々の異なるｓｉＲＮＡ二本鎖を含むプール中で一般に試験される（Ｊｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５５２：２４７−２５２）。他の技術は、活性ＲＮＡｉエフェクター分子を得る可能性を上げるためのデザインルールおよびアルゴリズムを使用する（Ｓｃｈｗａｒｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃｅｌｌ  １１５：１９９−２０８；Ｋｈｖｏｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃｅｌｌ  １１５：  ２０９−２１６；Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３２：９３６−９４８；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２２：３２６−３３０；Ｋｒｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９：４２２３０−４２２３９；Ｙｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３２（ウェブ発行）：Ｗ１３０−１３４；Ｂｏｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ３９２：７３−９６）。ｓｉＲＮＡのハイスループット選別もまた開発されてきた（米国特許公開公報第２００５．００４２６４１  Ａ１号）。潜在的標的部位をまた、二次構造予測によって解析できる（Ｈｅａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  ��ｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３（３）：  ｅ３０）。ついで、この２１マーを使用して右シフトをデザインし、２１マーの５’末端上に３〜９のさらなるヌクレオチドを含める。これらのさらなるヌクレオチドの配列は制限されない。１つの実施形態では、追加したリボヌクレオチドは、標的遺伝子の配列に基づく。本実施形態においてさえ、標的配列とアンチセンスｓｉＲＮＡとの間の完全な相補性は必要とされるものではない。
【０７０６】
本発明のＤｓｉＲＮＡ剤の第１および第２のオリゴヌクレオチドは、完全な相補性を必要とするものではない。これらは、生物学的条件下でアニールすし、かつ標的配列に対して十分に相補的なｓｉＲＮＡを産出するＤｉｃｅｒに対する基質を提供するために十分に相補的であることのみが必要である。ロック核酸またはＬＮＡ’ｓは当業者によく公知である（Ｅｌｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３：４３９−４４７；Ｋｕｒｒｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３０：１９１１−１９１８；Ｃｒｉｎｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３０：２４３５−２４４３；Ｂｒａａｓｃｈ  ａｎｄ  Ｃｏｒｅｙ，  ２００１，Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ８：１−７；Ｂｏｎｄｅｎｓｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６：２６８７−２６９５；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：５６３３−５６３８）。１つの実施形態では、ＬＮＡをセンス鎖の５’末端に組み込む。別の実施形態では、ＬＮＡを、アンチセンス鎖上に３’オーバーハングを含むようにデザインされた二本鎖中のセンス鎖の５’末端に組み込む。
【０７０７】
特定の実施形態では、本発明のＤｓｉＲＮＡ剤は、２５−塩基対長を持つセンス鎖と、２塩基３’−オーバーハングを持つ２７−塩基対長を持つアンチセンス鎖の非対称構造を持つ。他の実施形態では、非対称構造を持つこのＤｓｉＲＮＡ剤はさらに、２つのリボヌクレオチドの代わりに、センス鎖の３’末端にて２−デオキシヌクレオチドを含む。
【０７０８】
２つの別々のオリゴヌクレオチドを含む、特定のＤｓｉＲＮＡ剤組成物は、三次構造によって連結可能である。三次構造は、ＤｓｉＲＮＡ剤上のＤｉｃｅｒ活性を阻害せず、標的遺伝子から転写されたＲＮＡの指向された崩壊と干渉するものではない。１つの実施形態では、三次構造は、化学結合基であってよい。多くの好適な化学結合基が本技術分野で公知であり、使用可能である。あるいは、三次構造は、ヘアピン構造が、ｄｓＲＮＡ組成物を作製している２つのオリゴヌクレオチドのアニーリングに際して産出されるような様式で、ＤｓｉＲＮＡ剤の２つのオリゴヌクレオチドを結合させるオリゴヌクレオチドであってよい。ヘアピン構造は、ＤｓｉＲＮＡ剤上のＤｉｃｅｒ活性を阻害せず、ＭＹＣ  ＲＮＡの指向された崩壊と干渉しない。
【０７０９】
ＭＹＣ  ｃＤＮＡおよびポリペプチド配列
知られているヒトおよびマウスのＭＹＣ  ｃＤＮＡは、以下の：ヒトＭＹＣ  ＮＭ＿００２４６７．４および対応するヒトＭＹＣポリペプチドヒト配列ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号第ＮＰ＿００２４５８．２号；およびマウス野生型ＭＹＣ配列ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号第ＮＭ＿０１０８４９．４号（マウス  筋肉、Ｃ５７ＢＬ／６  ＭＹＣ転写物、変異体１）および対応するマウスＭＹＣポリペプチド配列ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号第ＮＰ＿０３４９７９．３号を含む。
【０７１０】
ｄｓＲＮＡ  ＭＹＣ阻害活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
無細胞系でのＲＮＡｉを繰り返すｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを使用して、ＭＹＣ  ＲＮＡ配列（類）を標的化しているｄｓＲＮＡ構築物を評価し、したがって、ｄｓＲＮＡのＭＹＣ特異的遺伝子阻害活性（また本明細書中でＭＹＣ阻害活性を指す）を評価できる。このアッセイには、ＭＹＣ  ＲＮＡに対して指向したｄｓＲＮＡ（たとえばＤｓｉＲＮＡ）剤との利用に適合した、Ｔｕｓｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１３，３１９１−３１９７およびＺａｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５−３３によって記述されたシステムが含まれる。合胞体胚盤葉由来のＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ抽出物を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにてＲＮＡｉ活性を再構築するために使用する。標的ＲＮＡは、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼを用いる選択されたＭＹＣ発現プラスミドからのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写を介して、または化学合成を介して産出される。センスおよびアンチセンスのｄｓＲＮＡ鎖（例えば各２０μＭ）を、９０℃で１分間、ついで３７℃で１時間（１００ｍＭ酢酸カリウム、３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７．４、２ｍＭ酢酸マグネシウムのような）緩衝液中でのインキュベーションによってアニールし、ついで溶解緩衝液（例えば１００ｍＭ  酢酸カリウム、ｐＨ７．４での３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、２ｍＭ酢酸マグネシウム）中で希釈する。アニーリングをＴＢＥ緩衝液中アガロースゲル上のゲル電気泳動によってモニタし、臭化エチジウムで染色できる。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ溶解物を、脱塩素化し、溶解した酵母糖蜜寒天上で回収したＯｒｅｇｏｎ  Ｒハエ由来の０〜２時間齢胚を用いて調製する。溶解物を遠心し、上清を単離する。本アッセイには、５０％溶解物［ｖｏｌ／ｖｏｌ］、ＲＮＡ（１０〜５０ｐＭ最終濃度）、およびｄｓＲＮＡ（１０ｎＭ最終濃度）を含む１０％［ｖｏｌ／ｖｏｌ］溶解緩衝液を含む反応混合物が含まれる。反応混合液はまた、１０ｍＭ  リン酸クレアチン、１０ｕｇ／ｍｌクレアチンホスホキナーゼ、１００ｕｍ  ＧＴＰ、１００ｕＭ  ＵＴＰ、１００ｕＭ  ＣＴＰ、５００ｕＭ  ＡＴＰ、５ｍＭ  ＤＴＴ、０．１Ｕ／μＬ  ＲＮａｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）および１００ｕＭの各アミノ酸を含む。酢酸カリウムの最終濃度を１００ｍＭに調節する。反応を氷上でプレアセンブルし、ＲＮＡ添加する前に１０分間、２５℃にてプレインキュベートし、２５℃にてさらに６０分間インキュベートする。反応を４容量の１．２５×Ｐａｓｓｉｖｅ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で反応停止する。標的ＲＮＡ開裂をＲＴ−ＰＣＲ解析または本技術分野で公知の他の方法によってアッセイし、ｄｓＲＮＡが反応より除外された対照反応と比較する。
【０７１１】
あるいは、アッセイのために内部標識した標的ＲＮＡを、［α−３２Ｐ］ＣＴＰの存在下、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写によって調製し、スピンクロマトグラフィーによるＧ５０Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムを通し、さらに精製することなく標的ＲＮＡとして使用する。任意に、標的ＲＮＡを、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ酵素を用いて、５’−３２Ｐ−末端標識する。アッセイを、上記のように実施し、標的ＲＮＡとＲＮＡｉによって産出される特定のＲＮＡ開裂産物を、ゲルのオートラジオグラフィー上で可視化する。開裂の割合を、未処置の対照ＲＮＡまたはｄｓＲＮＡなしの対照反応由来のＲＮＡ、およびアッセイによって産出された開裂産物を表すバンドのＰＨＯＳＰＨＯＲ  ＩＭＡＧＥＲ（登録商標）（オートラジオグラフィー）定量によって決定する。
【０７１２】
１つの実施形態において、本アッセイを、ｄｓＲＮＡ媒介ＲＮＡｉ開裂に対するＭＹＣ  ＲＮＡ標的中の標的部位を決定するために使用し、ここで複数のｄｓＲＮＡ構築物を、例えば標識化標的ＲＮＡの電気泳動またはノザンブロットによって、ならびに本技術分野でよく知られている他の方法論によってアッセイ反応を解析することで、ＭＹＣ  ＲＮＡ標的のＲＮＡｉ媒介開裂に関してスクリーニングする。
【０７１３】
特定の実施形態では、好適な対照に対して、例えばＭＹＣレベルにおける５０％減少が系、細胞、組織または生命体にて観察された場合、本発明のｄｓＲＮＡはＭＹＣ阻害活性を持つと見なされる。本発明のｄｓＲＮＡのＭＹＣ阻害活性の決定に対するさらなる境界（ｍｅｔｓ  ａｎｄｂｏｕｎｄｓ）は上に記載されている。
【０７１４】
抗−ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡ剤の共役と伝達
特定の実施形態では、本発明は、ＭＹＣ−関連疾患もしくは障害、またはＭＹＣ−関連疾患もしくは障害を発症させるリスクを持つ対象を治療する方法に関する。このような実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ＭＹＣ−関連疾患または障害を制御するための新規治療薬剤として働きうる。本方法は、本発明の薬学的組成物を患者（例えばヒト）に投与し、それによって、ＭＹＣ  ＲＮＡの発現、レベルおよび／または活性が低減することを含む。ＭＹＣ  ＲＮＡによってコードされたポリペプチドの発現、レベルおよび／または活性はまた、ｄｓＲＮＡがＭＹＣ転写産物の非コード領域に対して指向する場合（例えば標的化５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲ配列）でさえ、本発明のｄｓＲＮＡによって低減してもよい。これらの高い特異性のために、本発明のｄｓＲＮＡは、任意に多型対立遺伝子が個々および／または集団内で存在する対立遺伝子特異的様式にて、細胞および組織のＭＹＣ配列を特に標的化できる。
【０７１５】
ＭＹＣ−関連疾患または障害の治療において、ｄｓＲＮＡを、対象の細胞または組織、たとえば、ＭＹＣの脱制御を示し、かつ／またはＭＹＣレベルの低減のために標的化された対象の細胞または組織との接触に持ち込むことが可能である。例えば、ＭＹＣ  ＲＮＡ配列の全てまたは一部と実質的に同一のｄｓＲＮＡを、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏいずれかで、このような細胞との接触に持ち込むか、またはこのような細胞内へ導入してよい。同様に、ＭＹＣ  ＲＮＡ配列のすべてまたは一部と実質的に同一のｄｓＲＮＡを、ＭＹＣ−関連疾患または障害を持つ、または発症させるリスクのある対象に直接投与してよい。
【０７１６】
本発明のｄｓＲＮＡ剤の治療的利用は、多数の異なるｄｓＲＮＡ剤配列を含むｄｓＲＮＡ剤の製剤の利用を含みうる。例えば、２以上、３以上、４以上、５以上などの本明細書で記述した薬剤を、例えばＭＹＣ  ＲＮＡの多数の異なる領域を標的とする、または標的ＭＹＣ  ＲＮＡだけでなく、例えばＭＹＣ−関連疾患または障害と関連した細胞性標的遺伝子といった標的をも標的とする製剤を産出するように組み合わせることができる。本発明のｄｓＲＮＡ剤をまた、ｄｓＲＮＡ剤のいずれかの鎖が、２以上のＭＹＣ  ＲＮＡの領域を独立して標的するように、またはｄｓＲＮＡ剤の鎖の１つが、本技術分野で公知のＭＹＣの細胞性標的遺伝子を標的とするように構築してもよい。
【０７１７】
標的核酸分子の１超の領域を標的とする多機能ｄｓＲＮＡ分子の利用がまた、ＭＹＣ  ＲＮＡレベルおよび発現の強力な阻害を提供できる。例えば、本発明の単一多機能ｄｓＲＮＡ構築物が、ＭＹＣ−１９１６とＭＹＣ−１５７２の部位両方を同時に標的とすることができ、さらにおよび／またはあるいは、本発明の単一または多機能薬剤を、他に対して、ＭＹＣの１つのスプライスバリアントを選択的に標的とするためにデザインできる。
【０７１８】
したがって、本発明のｄｓＲＮＡ剤は個々に、または他の薬剤との組み合わせまたは併せて、ＭＹＣ−関連疾病または障害を治療、阻害、低減または予防するために使用できる。例えば、ｄｓＲＮＡ分子を、治療に好適な条件下、単独で、または１つ以上の薬剤との組み合わせで、対象に投与可能であり、当業者にとって明白な他の適切な細胞に投与可能である。
【０７１９】
ｄｓＲＮＡ分子をまた、対象または生体中のＭＹＣ−関連疾患または障害を治療する、阻害、低減または予防するための他の公知の治療との組み合わせて使用できる。例えば、記述した分子を、本技術分野で公知のように、対象または生体内のＭＹＣ−関連疾患または障害を治療、阻害、低減または予防するために、１つ以上の公知の化合物、治療または手順と組み合わせて使用できる。
【０７２０】
本発明のｄｓＲＮＡ剤は、他の部位（例えばペプチドのような非核酸部位）、有機化合物（例えば染料、コレステロールなど）と（例えばそのセンス鎖またはアンチセンス鎖のその５’または３’末端で）共役可能であり、または共役していなくてよい。この方法でｄｓＲＮＡ剤を改変することは、対応する非共役ｄｓＲＮＡ剤と比較して細胞取込を改善し、得られるｄｓＲＮＡ剤誘導体の細胞標的化活性を増強してよく、細胞内のｄｓＲＮＡ剤誘導体をトレースするために有用であり、または対応する非共役ｄｓＲＮＡ剤と比較してｄｓＲＮＡ剤誘導体の安定性を改善する。
【０７２１】
核酸、ベクターおよび宿主細胞を導入する方法
本発明のｄｓＲＮＡ剤を、直接細胞に（すなわち細胞内に）導入してよく、または空洞、間質腔内、生命体の循環中に細胞外で導入してよく、経口で導入してよく、または核酸を含む溶液で細胞または生命体を浴させることによって導入してよい。血管または血管外の循環、血液またはリンパ系、および脳脊髄液が、核酸を導入してよい部位である。
【０７２２】
本発明のｄｓＲＮＡ剤を、核酸を含む溶液の注射、核酸によって覆われた粒子の照射、核酸溶液中の細胞または生命体の浸漬、または核酸の存在下での細胞膜のエレクトロポレーションを含む、本技術分野で公知の核酸伝達方法を用いて導入可能である。脂質媒介担体伝達、化学媒介伝達、リン酸カルシウムのようなカチオン性リポソームトランスフェクションなどのような核酸を細胞に導入するための本技術分野で公知の他の方法を使用してよい。核酸を、以下の、細胞による核酸取込を増強する、または標的ＭＹＣ  ＲＮＡの阻害を増加させる、といった活性の１つ以上を実施する他の成分と一緒に導入してよい。
【０７２３】
標的ＭＹＣ  ＲＮＡを持つ細胞は、生殖系または体性、分化全能性または多能性、分裂または非分裂、柔組織または上皮、不死化または形質導入した系などが由来であってよい。細胞は、幹細胞または分化細胞であってよい。分化した細胞型には、脂肪細胞、繊維芽細胞、筋細胞、心筋細胞、内皮細胞、ニューロン、グリア細胞、血液細胞、巨核球、リンパ球、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、マスト細胞、白血球、顆粒球、ケラチノサイト、コンドロサイト、骨芽細胞、破骨細胞、肝細胞、内分泌または外分泌腺の細胞が含まれる。
【０７２４】
特定の標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列と、伝達されたｄｓＲＮＡ剤物質の用量に依存して、本工程は、ＭＹＣ  ＲＮＡに対しての部分的または完全な機能の欠損を提供しうる。標的細胞の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％以上でのＲＮＡレベルまたは発現（ＭＹＣ  ＲＮＡ発現またはコードされたポリペプチド発現のいずれか）の減少または欠損が例として挙げられる。ＭＹＣ  ＲＮＡレベルまたは発現の阻害は、ＭＹＣ  ＲＮＡまたはＭＹＣ  ＲＮＡ−コードタンパク質のレベルの欠如（または観察可能な減少）を意味する。特異性は、細胞の他の遺伝子における明らかな効果なしに、ＭＹＣ  ＲＮＡを阻害する能力を意味する。この阻害の結果は、細胞または生命体の外部特性の試験によって、またはＲＮＡ溶液ハイブリッド形成、ヌクレアーゼ保護、ノザンハイブリッド形成、逆転写、マイクロアレイでの遺伝子発現モニタリング、抗体結合、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロッティング、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、他の免疫アッセイ、および蛍光活性化細胞解析（ＦＡＣＳ）のような生化学的技術によって確認可能である。本発明のｄｓＲＮＡ剤による標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列の阻害は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれかで、ＭＹＣ−関連疾患または障害の発症／進行、例えば腫瘍形成、増殖、転移などにおける、このようなｄｓＲＮＡ剤の投与の効果に基づいて測定可能でもある。腫瘍または癌細胞レベルの処置および／または減少には、腫瘍または癌細胞レベルの増殖の停止または減少、例えば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％以上の減少が含まれ、かつ、対数の観点で測定可能であり、たとえば、細胞、組織または対象への本発明のｄｓＲＮＡ剤の投与を介して癌細胞レベルにおいて１０倍、１００倍、１０００倍、１０５倍、１０６倍、１０７倍減少を達成できる。
【０７２５】
細胞株または全生命体でのＲＮＡ媒介阻害では、そのタンパク質産物が容易にアッセイされる、レポーターまたは薬物耐性遺伝子の発現を測定できる。このようなレポーター遺伝子には、アセトヒドロキシ酸シンターゼ（ＡＨＡＳ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、βガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、ベータグルコロニダーゼ（ＧＵＳ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）、ノパリンシンターゼ（ＮＯＳ）、オクトパインシンターゼ（ＯＣＳ）およびそれらの誘導体が含まれる。多数の選別可能なマーカーが利用可能であり、アンピシリン、ブレオマイシン、クロラムフェニコール、ゲンタマイシン、ヒグロマイシン、カナマイシン、リンコマイシン、メトトレキセート、ホスフィノリシン、プロマイシンおよびテトラサイクリンに対する耐性を供与する。アッセイに応じて、遺伝子発現の量の定量化により、本発明にしたがって処理されない細胞と比較して、１０％、３３％、５０％、９０％、９５％または９９％超程度阻害を判定できる。
【０７２６】
注射物質の用量が少なくなり、およびＲＮＡサイレンシング薬剤の投与後の時間が長くなると、より小さな細胞画分における阻害がもたらされ得る（例えば少なくとも標的細胞の１０％、２０％、５０％、７５％、９０％または９５％）。細胞内での遺伝子発現の定量化は、標的ＭＹＣ  ＲＮＡの蓄積または標的タンパク質の翻訳のレベルにて同様の量の阻害を示してもよい。例として、阻害の効果を、細胞内の遺伝子産物の量を評価することによって判定してもよく、ＲＮＡは、阻害ｄｓＲＮＡのために使用した領域の外側にヌクレオチド配列を持つハイブリッド形成プローブで検出してよく、または翻訳されたポリペプチドは、その領域のポリペプチド配列に対して作製された抗体で検出してよい。
【０７２７】
ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つのコピー／細胞の伝達を許容する量で導入してよい。より大きな用量（例えば少なくとも５、１０、１００、５００または１０００コピー／細胞）の物質が、より効果的な阻害を産出してもよく、より低い用量がまた、特定の適用のために有用であってもよい。
【０７２８】
ＭＹＣの生物学およびＭＹＣ標的化療法
ＭＹＣ（ｃ−ＭＹＣ）は、プロト癌遺伝子であり、幅広い範囲のヒトの癌で過剰発現する。特異的に変異または過剰発現した場合、ＭＹＣは細胞増殖を増大させかつ癌遺伝子として機能する。ＭＹＣ遺伝子は転写因子をコードしており、この転写因子はエンハンサーボックス配列（Ｅ−ボックス）上での結合およびヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）の動員を介して全ての遺伝子の１５％の発現を調節する。ＭＹＣは、転写因子のＭＹＣファミリーに属しており、Ｎ−ＭＹＣおよびＬ−ＭＹＣ遺伝子をも含む。ＭＹＣファミリー転写因子はｂＨＬＨ／ＬＺ（塩基性ヘリックスループ−ヘリックスロイシンジッパー）ドメインを含む。Ｍｙｃタンパク質は、そのｂＨＬＨドメインを介して、ＤＮＡに結合でき、一方でＭｙｃのロイシンジッパードメインは、パートナータンパク質、別のｂＨＬＨ転写因子であるＭａｘ、との二量体化を可能とする。
【０７２９】
ＭＹＣ遺伝子は、当初はバーキットリンパ腫の患者中で同定され特徴付けられた。バーキットリンパ腫では、癌細胞は、多くの場合８番染色体を含む、染色体転座を示す。融合した染色体の切断点のクローニングにより、骨髄細胞腫症のウイルス性癌遺伝子（ｖ−ＭＹＣ）と同様の遺伝子が明らかとなった。これにより、新規に発見された細胞内の遺伝子がｃ−ＭＹＣと名付けられた。
【０７３０】
Ｍｙｃタンパク質は、コンセンサス配列（エンハンサーボックス配列（Ｅボックス））上での結合およびヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）の動員を介して多くの遺伝子の発現を活性化する転写因子である。また、Ｍｙｃタンパク質は転写抑制因子としても作用する。Ｍｉｚ‐１転写因子を結合してｐ３００コアクティベーターと置き換わることにより、Ｍｙｃタンパク質はＭｉｚ−１標的遺伝子の発現を阻害する。
【０７３１】
Ｍｙｃは、Ｗｎｔ、ＳｈｈおよびＥＧＦなどの多様な分裂促進性のシグナリング経路を介して（ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路を介して）活性化される。その標的遺伝子の発現を改変することにより、Ｍｙｃの活性化は、細胞増殖の亢進（サイクリンをアップレギュレート、ｐ２１をダウンレギュレート）、細胞増殖の調節（リボソームＲＮＡおよびタンパク質をアップレギュレート）、アポトーシス（Ｂｃｌ−２をアップレギュレート）、分化ならびに幹細胞の自己再生を含む、多くの生物学的作用をもたらす。ＭＹＣは強力なプロト癌遺伝子であり、かつ多くの種類の癌においてアップレギュレートされていることが見出されている。
【０７３２】
ＭＹＣの発見の最中、８番染色体に転座された染色体は、切断点でイムノグロブリン（Ｉｇ）遺伝子を含むと同定された。転座後、イムノグロブリン遺伝子のエンハーサーは、代わりにリンパ腫細胞でＭＹＣの過剰発現を引き起こした。ＭＹＣを過剰発現する遺伝子導入マウスモデルがその後バーキットリンパ腫の腫瘍形成の機構を試験するために開発された。たとえば、ＭＹＣ（ＩｇＭ重鎖エンハーサーの制御下でのＭＹＣ）を過剰発現する遺伝子導入マウスは、ＩｇＭ重鎖エンハーサーの制御下にＭＹＣを置く際にリンパ腫を、またはＭＹＣの過剰発現が他の組織（たとえば肝臓、乳房）で起こった場合に他の種類の腫瘍を発症したことは、癌遺伝子としてのＭＹＣの能力を示している。
【０７３３】
ｃＭＹＣの生物学を理解するために有益な参考文献は、Ｇｅａｒｈａｒｔ  Ｊ，  Ｐａｓｈｏｓ  Ｅ  Ｅ，  Ｐｒａｓａｄ  Ｍ  Ｋ，  Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ  Ｒｅｄｅｕｘ−ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｓｔｅｍ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｅａｒｃｇ，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５７（１５）：１４６９．  Ｒｕｆ  Ｉ  Ｋ，  Ｒｈｙｎｅ  Ｐ  Ｗ，  Ｙａｎｇ  Ｈ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）．  “ＥＢＶ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｃ−ＭＹＣ，  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｉｎ  Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ，”  Ｃｕｒｒ．  Ｔｏｐ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２５８：  １５３−６０．  ＰＭＩＤ  １１４４３８６０．  Ｌuｓｃｈｅｒ  Ｂ  （２００１）．  “Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍｙｃ／Ｍａｘ／Ｍａｄ  ｎｅｔｗｏｒｋ，”．  Ｇｅｎｅ  ２７７  （１−２）：  １−１４．  ＰＭＩＤ  １１６０２３４１．  Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｂ，  Ａｍａｎｕｌｌａｈ  Ａ，  Ｓｈａｆａｒｅｎｋｏ  Ｍ，  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎｎ  Ｄ  Ａ  （２００２），  “Ｔｈｅ  ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｃ−ｍｙｃ  ｉｎ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｌｅｕｋｅｍｏｇｅｎｅｓｉｓ，”  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２１  （２１）：  ３４１４−２１，  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｏｎｅ．１２０５４００．  ＰＭＩＤ  １２０３２７７９．  Ｐｅｌｅｎｇａｒｉｓ  Ｓ，  Ｋｈａｎ  Ｍ，  Ｅｖａｎ  Ｇ  （２００２），  “ｃ−ＭＹＣ：  ｍｏｒｅ  ｔｈａｎ  ｊｕｓｔ  ａ  ｍａｔｔｅｒ  ｏｆ  ｌｉｆｅ  ａｎｄ  ｄｅａｔｈ，”  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ  ２  （１０）：  ７６４−７６，  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｃ９０４．  ＰＭＩＤ  １２３６０２７９．  Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｊ  Ａ，  Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  Ｊ  Ｌ  （２００４），  “Ｍｙｃ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｐｒｏｖｏｋｉｎｇ  ｃｅｌｌ  ｓｕｉｃｉｄｅ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ，”  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２  （５６）：  ９００７−２１．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｏｎｅ．１２０７２６１．  ＰＭＩＤ  １４６６３４７９．  Ｄａｎｇ  Ｃ  Ｖ，  Ｏ′  ｄｏｎｎｅｌｌ  Ｋ  Ａ，  Ｊｕｏｐｐｅｒｉ  Ｔ  （２００５），  “Ｔｈｅ  ｇｒｅａｔ  ＭＹＣ  ｅｓｃａｐｅ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ８  （３）：  １７７−８，  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｃｒ．２００５．０８．００５．  ＰＭＩＤ  １６１６９４６２．  Ｄａｎｇ  Ｃ  Ｖ，  Ｌｉ  Ｆ，  Ｌｅｅ  Ｌ  Ａ  （２００７），  “Ｃｏｕｌｄ  ＭＹＣ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ＲＯＳ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ？”  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ  ４  （１１）：  １４６５−６，  ＰＭＩＤ  １６２０５１１５．  Ｃｏｌｌｅｒ  Ｈ  Ａ，  Ｆｏｒｍａｎ  Ｊ  Ｊ，  Ｌｅｇｅｓｓｅ−Ｍｉｌｌｅｒ  Ａ  （２００７），  “‘Ｍｙｃ’ｅｄ  ｍｅｓｓａｇｅｓ’：  ｍｙｃ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅ２Ｆ１  ｗｈｉｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｉｔｓ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｖｉａ  ａ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ  ｐｏｌｙｃｉｓｔｒｏｎ，”  ＰＬｏＳ  Ｇｅｎｅｔ．  ３（８）：  ｅ１４６，  ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｇｅｎ．００３０１４６．  ＰＭＩＤ  １７７８４７９１．  Ａｓｔｒｉｎ  Ｓ  Ｍ，  Ｌａｕｒｅｎｃｅ  Ｊ  （１９９２），  “Ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｃ−ｍｙｃ  ａｎｄ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，”  Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ６５１：  ４２２−３２，  ＰＭＩＤ  １３１８０１１．  Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  Ｐ  Ｌ，  Ｈｅｒｒｉｃｋ  Ｄ  Ｊ，  Ｐｒｏｋｉｐｃａｋ  Ｒ  Ｄ，  Ｒｏｓｓ  Ｊ  （１９９２），  “Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｃ−ｍｙｃ  ｍＲＮＡ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｙ  ａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃａｐａｂｌｅ  ｏｆ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ａ  ｃｏｄｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ，”  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  ６  （４）：  ６４２−５４，  ＰＭＩＤ  １５５９６１２．  ｌｉｊｉｍａ  Ｓ，  Ｔｅｒａｏｋａ  Ｈ，  Ｄａｔｅ  Ｔ，  Ｔｓｕｋａｄａ  Ｋ  （１９９２），  “ＤＮＡ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎ  Ｒａｊｉ  Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃ−Ｍｙｃ  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，”  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２０６  （２）：  ５９５−６０３，  ＰＭＩＤ  １５９７１９６．  Ｓｅｔｈ  Ａ，  Ａｌｖａｒｅｚ  Ｅ，  Ｇｕｐｔａ  Ｓ，  Ｄａｖｉｓ  Ｒ  Ｊ  （１９９２），  “Ａ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｓｉｔｅ  ｌｏｃａｔｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＮＨ２−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｃ−Ｍｙｃ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，”  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６６  （３５）：  ２３５２１−４，  ＰＭＩＤ  １７４８６３０．  Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｅ，  Ｈｏｒｉ  Ｔ，  Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ  Ｐ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１），  “Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＭＹＣ  ｇｅｎｅ  ｔｏ  ｂａｎｄ  ８ｑ２４．１２−ｑ２４．１３  ｂｙ  Ｒ−ｂａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｉｓｔａｌ  ｔｏ  ｆｒａ（８）（ｑ２４．１１），  ＦＲＡ８Ｅ，  ｂｙ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，”  Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．  ５７  （２−３）：  １０９−１１，  ＰＭＩＤ  １９１４５１７．  Ｂｌａｃｋｗｏｏｄ  Ｅ  Ｍ，  Ｅｉｓｅｎｍａｎ  Ｒ  Ｎ  （１９９１），  “Ｍａｘ：  ａ  ｈｅｌｉｘ−ｌｏｏｐ−ｈｅｌｉｘ  ｚｉｐｐｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈａｔ  ｆｏｒｍｓ  ａ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  Ｍｙｃ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１  （４９９８）：  １２１１−７，  ＰＭＩＤ  ２００６４１０．  Ｇａｚｉｎ  Ｃ，  Ｒｉｇｏｌｅｔ  Ｍ，  Ｂｒｉａｎｄ  Ｊ  Ｐ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６），  “Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｃ−ｍｙｃ  ｅｘｏｎ  １，”  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ５  （９）：  ２２４１−５０，  ＰＭＩＤ  ２４３０７９５．  Ｌuｓｃｈｅｒ  Ｂ，  Ｋｕｅｎｚｅｌ  Ｅ  Ａ，  Ｋｒｅｂｓ  Ｅ  Ｇ，  Ｅｉｓｅｎｍａｎ  Ｒ  Ｎ  （１９８９），  “Ｍｙｃ  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｒｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｃａｓｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ＩＩ，”  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ８  （４）：  １１１１−９，  ＰＭＩＤ  ２６６３４７０．  Ｆｉｎｖｅｒ  Ｓ  Ｎ，  Ｎｉｓｈｉｋｕｒａ  Ｋ，  Ｆｉｎｇｅｒ  Ｌ  Ｒ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８），  “Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＭＹＣ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔ（８；  １４）（ｑ２４；ｑ１１）  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ｉｎｄｉｃａｔｅｓ  ｔｈａｔ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ａｒｅ  ｎｏｔ  ａｌｔｅｒｅｄ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８５  （９）：  ３０５２−６，  ＰＭＩＤ  ２８３４７３１．  Ｓｈｏｗｅ  Ｌ  Ｃ，  Ｍｏｏｒｅ  Ｒ  Ｃ，  Ｅｒｉｋｓｏｎ  Ｊ，  Ｃｒｏｃｅ  Ｃ  Ｍ  （１９８７），  “ＭＹＣ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ａ  ｔ（８；  ２２）  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｉｓ  ｎｏｔ  ａｌｔｅｒｅｄ  ｉｎ  ｉｔｓ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｒｅｇｉｏｎｓ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８４  （９）：  ２８２４−８，  ＰＭＩＤ  ３０３３６６５．  Ｇｕｉｌｈｏｔ  Ｓ，  Ｐｅｔｒｉｄｏｕ  Ｂ，  Ｓｙｅｄ−Ｈｕｓｓａｉｎ  Ｓ，  Ｇａｌｉｂｅｒｔ  Ｆ  （１９８９），  “Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ３′  ｔｏ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｃ−ｍｙｃ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ；  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ａ  ｌｏｎｇ  ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｒｅｐｅａｔ，”  Ｇｅｎｅ  ７２  （１−２）：  １０５−８，  ＰＭＩＤ  ３２４３４２８．  Ｈａｎｎ  Ｓ  Ｒ，  Ｋｉｎｇ  Ｍ  Ｗ，  Ｂｅｎｔｌｅｙ  Ｄ  Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８），  “Ａ  ｎｏｎ−ＡＵＧ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃ−ｍｙｃ  ｅｘｏｎ  １  ｇｅｎｅｒａｔｅｓ  ａｎ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｗｈｏｓｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｓ  ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ  ｉｎ  Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ，”  Ｃｅｌｌ  ５２  （２）：  １８５−９５；  ＰＭＩＤ  ３２７７７１７を含む。
【０７３４】
最近ＭＹＣ−阻害小分子が同定された（Ｍｏｙｅｒ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １７：  １３２５）。本発明のＭＹＣ阻害二本鎖核酸は単独で使用でき、または本明細書中に記載されるような当業者に認識されているＭＹＣ標的治療剤と組み合わせて使用できる。
【０７３５】
薬学的組成物
特定の実施形態では、本発明は、本発明のｄｓＲＮＡ剤を含む薬学的組成物を提供する。ｄｓＲＮＡ剤試料は、好適に製剤化され、それが存在する場合に、十分な試料の一部が、遺伝子サイレンシングを誘導するために細胞内に入ることを許容する任意の方法によって細胞の環境内に導入可能である。ｄｓＲＮＡに関する多くの製剤は、本技術分野で公知であり、ｄｓＲＮＡが標的細胞内に入り、働くことができる限り使用可能である。例えば、米国特許出願公開第２００４／０２０３１４５号および第２００５／００５４５９８  Ａ号を参照のこと。例えば、本発明のｄｓＲＮＡ剤を、リン酸緩衝食塩水溶液、リポソーム、ミセル構造およびカプシドのような緩衝溶液中に製剤化できる。カチオン性脂質を備えたｄｓＲＮＡ剤の製剤を、ｄｓＲＮＡ剤の細胞内へのトランスフェクションを促進するために使用可能である。例えば、リポフェクチン（米国特許第５，７０５，１８８号）のようなカチオン性脂質、カチオン性グリセロール誘導体、およびポリリシン（ＰＣＴ国際特許公開第９７／３０７３１号）のようなポリカチオン性分子を使用できる。好適な脂質には、オリゴフェクタミン、リポフェクタミン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＮＣ３８８（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  ＰｈＡＲｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、またはＦｕＧｅｎｅ６（Ｒｏｃｈｅ）が含まれ、これら全ては製造業者の取扱説明書にしたがって使用できる。
【０７３６】
このような組成物には、概して核酸分子と薬学的に許容可能な担体が含まれる。本明細書で使用するところの語句「薬学的に許容可能な担体」には、薬学的投与に適合可能な食塩水、溶媒、分散培地、コーティング剤、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。補助的な活性化合物もまた組成物内に組み込むことができる。
【０７３７】
薬学的組成物を、その意図する投与経路に適合するように製剤化する。投与経路の例には、非経口、例えば静脈内、皮膚内、皮下、経口（例えば吸入）、経皮（局所）、経粘膜および腸投与が含まれる。非経口、皮膚内または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液には、以下の、注射用の水、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような無菌希釈液、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン類のような抗菌剤、アスコルビン酸または二硫化ナトリウムのような抗酸化剤、エチレンジアミンテトラ酢酸のようなキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩のような緩衝液および塩化ナトリウム、デキストロースのような浸透圧の調節のための薬剤といった成分を含むことができる。ｐＨを、塩酸または水酸化ナトリウムのような酸または塩基で調節可能である。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチックからなるアンプル、使い捨てシリンジまたは多重用量バイアル内に同封可能である。
【０７３８】
注射可能な用途に好適な薬学的組成物には、無菌水溶液（水溶性である場合）または分散液、および無菌注射可能な溶液または分散液の即時調製のための無菌粉末が含まれる。静脈内投与のために、好適な担体には、生理学的食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ．ＴＭ．（ＢＡＳＦ、ＰＡＲｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。全ての場合で、本組成物は無菌でなければならず、簡単にシリンジ注入可能な程度まで流動的であるべきである。製造および保存の条件下で安定であるべきであり、細菌および真菌のような微生物の汚染作用にが防止されなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレンングリコールなど）、ならびにこれらの好適な混合液を含む、溶媒または分散培地とすることができる。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの利用によって、分散液の場合、要求される粒子の大きさの維持によって、かつ界面活性剤の利用によって、維持可能である。微生物の活性の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成可能である。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖類、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール類、塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射可能組成物の長期間の吸収を、組成物内に、吸収を遅延させる薬剤、例えばアルミニウム一ステアリン酸およびゼラチンを加えることによって達成可能である。
【０７３９】
無菌注射可能溶液は、必要に応じて、上記に列挙した成分のうち１つ以上の組み合わせと、選択した溶媒中の必要量の活性化合物を組み込み、続いて濾過滅菌することにより調製できる。一般的に、分散液は、基礎分散培地と上記に列挙した必要な他の成分とを含む、無菌ビヒクル内に活性化合物を組み込むことによって調製する。無菌注射可能溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、前もって濾過滅菌したその溶液から活性成分＋任意の所望な成分を回収する吸引乾燥および凍結乾燥である。
【０７４０】
経口組成物は一般的に、不活性希釈液または食用担体を含む。経口治療投与の目的のために、活性化合物を、賦形剤と組み込み、錠剤、トローチまたは例えばゼラチンカプセルのようなカプセルの形態で使用可能である。経口組成物はまた、マウスウォッシュとしての利用のために流体の担体を用いて調製可能である。薬学的に適合可能な結合剤、および／またはアジュバント物質を、組成物の一部として含めることが可能である。錠剤、ピル、カプセル、トローチなどは、以下の、結晶セルロース、ガムトラガカントもしくはゼラチンのような結合剤、デンプンもしくはラクトースのような賦形剤、アルギン酸、プリモゲルもしくはトウモロコシデンプンのような崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅｓのような潤滑油、二酸化コロイドシリコーンのような流動促進剤、スクロースもしくはサッカリンのような甘味剤、またはペパーミント、サリチル酸メチルもしくはオレンジ香味料のような香味料、といった成分または同様の性質の化合物のいずれかを含んでよい。
【０７４１】
吸入による投与のために、化合物を、例えば二酸化炭素のような気体といった高圧ガスを含む加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザー由来のエアゾルスプレーの形状で伝達する。このような方法には、米国特許第６，４６８，７９８号に記述されたものが含まれる。
【０７４２】
全身投与がまた、経粘膜または経皮的手段によって可能でもある。経粘膜投与または経皮投与では、浸潤されるべきバリアに対して適切な浸透剤が製剤で使用される。このような浸透剤剤は一般的に本技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与では、界面活性剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、経鼻スプレーまたは座薬の使用を介して実施可能である。経皮投与では、活性化合物を、本技術分野で一般的に公知の軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔｓ）、軟膏（ｓａｌｖｅｓ）、ジェルまたはクリームに製剤化する。
【０７４３】
本化合物をまた、（例えばココアバターおよび他のグリセリド類のような従来の座薬基体を備えた）座薬、または腸伝達のための停留かん腸の形態で調製可能である。
【０７４４】
本化合物はまた、限定するものではないが、ＭｃＣａｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔｕｒｅ，４１８（６８９３），３８−９（流体力学トランスフェクション）；Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０（１０），１００６−１０（ウイルス媒介伝達）；またはＰｕｔｎａｍ  （１９９６），Ａｍ．Ｊ．Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｙｓｔ．ＰｈＡＲｍ．５３（２），１５１−１６０，ｅｒｒａｔｕｍ  ａｔ  Ａｍ．  Ｊ．  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｙｓｔ．Ｐｈａｒｍ．５３（３），３２５（１９９６）にて記述された方法を含む、本技術分野で公知の方法を用いてトランスフェクションまたは感染によって投与可能である。
【０７４５】
また、本化合物を、ＤＮＡワクチンのような核酸剤の投与に好適な方法によって投与可能である。これらの方法には、遺伝子銃、生物注入器、および皮膚パッチならびに米国特許第６，１９４，３８９号にて開示されたマイクロ粒子ＤＮＡワクチン技術のようなニードルフリー方法、および米国特許第６，１６８，５８７号にて開示されたような粉末形状ワクチンによる哺乳類経皮ニードルフリーワクチン化が含まれる。さらに、とりわけＨａｍａｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８），Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，８８（２），２０５−１０．Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓに記載されるように（例えば、米国特許第６，４７２，３７５号にて記述されたような）、経鼻伝達が可能であり、マイクロカプセル化も利用可能である。（例えば、米国特許第６，４７１，９９６号にて記述されたような）生物分解性、標的化可能マイクロ粒子伝達システムもまた使用可能である。
【０７４６】
１つの実施形態では、活性化合物を、インプラントおよびマイクロカプセル化伝達系を含む、徐放製剤のような、体からの急速な消失に対して化合物を保護する担体で調製する。酢酸エチレンビニル、ポリアンヒドリド類、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル類およびポリ酢酸のような生物分解性、生物適合性ポリマーを使用可能である。このような製剤は、標準技術を用いて調製可能である。物質はまた、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手可能である。（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染した細胞に標的化したリポソームを含む）リポソーム懸濁液を、薬学的に許容可能な担体として使用可能でもある。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号にて記述されたような、当業者に公知の方法にしたがって調製可能である。
【０７４７】
このような化合物の毒性および治療効果を、例えばＬＤ５０（集団の５０％が致死する用量）およびＥＤ５０（集団の５０％の治療上有効量）を決定するために、細胞培養液または実験動物における標準薬学的手順によって決定できる。毒性および治療効果の間の用量比が治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０で表すことが可能である。高い治療指数を表す化合物が好ましい。毒性副作用を表す化合物を使用してよい一方で、感染していない細胞への損傷の可能性を最小限にし、それによって副作用を低減させるために、罹患組織の部位へ、このような化合物を標的化する伝達系をデザインすることに注意が払われるべきである。
【０７４８】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得たデータを、ヒトにおける使用のための用量の範囲を定式化する際に使用可能である。このような化合物の用量は、好ましくは毒性がほとんどないか、全くないＥＤ５０を含む循環濃度範囲内にある。用量は、使用する用量形態および利用した投与経路に応じてこの範囲内で変化してよい。本発明の方法にて使用される化合物では、治療上有効量は、細胞培養アッセイからまず推定可能である。用量を、細胞培養液中で測定したようなＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む、循環血漿濃度範囲を達成するように、動物モデルにて定式化してよい。このような情報を使用して、ヒトに有用な用量をより正確に決定するできる。血漿中のレベルを、例えば高性能液体クロマトグラフィーによって測定してよい。
【０７４９】
本明細書で定義したように、治療的有効量の核酸分子（すなわち有効用量）は、選択した核酸に依存する。例えば、ｄｓＲＮＡ（または、たとえばこのようなｄｓＲＮＡをコードする構築物）を、およそ１ｐｇ〜１０００ｍｇの範囲の単一投与用量で投与してよく、いくつかの実施形態では、１０、３０、１００、もしくは１０００ｐｇ、または１０、３０、１００、もしくは１０００ｎｇ、または１０、３０、１００、もしくは１０００μｇ、または１０、３０、１００、もしくは１０００ｍｇを投与してよい。いくつかの実施形態では、１〜５ｇの組成物を投与可能である。本組成物は、２日に１回を含む、１以上の回数／日〜１以上の回数／週投与可能である。当業者は、限定するものではないが、疾患または障害の重症度、先行治療、対象の一般的健康および／または年齢、他の疾患の存在を含む特定の要因が、対象を効果的に処置するために要求される用量およびタイミングに影響を与えうることを理解するであろう。さらに、治療的有効量の核酸（たとえばｄｓＲＮＡ）、タンパク質、ポリペプチド、または抗体での対象の治療には、単一治療が含まれてよく、または好ましくは一連の治療が含まれてよい。
【０７５０】
本発明の核酸分子は、限定するものではないが、例えば、Ｘｉａらにより（２００２）上記にて記述されたものを含む、本技術分野で公知の方法を用いて、発現構築物、例えばウイルスベクター、レトロウイルスベクター、発現カセット、またはプラスミドウイルスベクター内に挿入可能である。発現構築物は、例えば、吸入、経口、静脈注射、局所投与によって（米国特許第５，３２８，４７０号明細書を参照のこと）、または定位注射によって（例えばＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１，３０５４−３０５７）対象に伝達可能である。伝達ベクターの薬学的調製物には、適切な希釈液中のベクターが含まれてよく、または伝達ビヒクルが埋め込まれる徐放マトリックスを含むことができる。あるいは、完全な伝達ベクター、例えばレトロウイルスベクターを、組換え細胞から完全なまま産出可能である場合、薬学的調製物は、遺伝子伝達系を産出する１つ以上の細胞を含むことができる。
【０７５１】
発現構築物は、適切な発現系での使用に好適な構築物であってよく、限定するものではないが、本技術分野で公知のような、レトロウイルスベクター、直線発現カセット、プラスミドおよびウイルスまたはウイルス由来ベクターを含んでもよい。このような発現構築物には、１つ以上の誘導可能なプロモーター、Ｕ６  ｓｎＲＮＡプロモーターまたはＨ１  ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターのような、ＲＮＡ  Ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーター系、または本技術分野で公知の他のプロモーターを含んでよい。本構築物は、ｓｉＲＮＡの１つまたは両方の鎖を含みうる。両方の鎖を発現している発現構築物にはまた、両方の鎖を連結しているループ構造が含むことができ、または各鎖は、同一の構築物内の別々のプロモーターから別々に転写されうる。各鎖はまた、別々の発現構築物、例えばＴｕｓｃｈｌ（２００２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０：５００５−５０５）から転写可能でもある。
【０７５２】
細胞の環境内にｄｓＲＮＡ剤を導入する方法が、細胞の型、およびその環境の構成に依存しうることが理解できる。例えば、細胞が液体内で見られる時に、１つの好ましい製剤は、リポフェクタミン中でのような脂質製剤によるものであり、ｄｓＲＮＡ剤を細胞の液体環境に直接添加できる。脂質製剤をまた、静脈内、筋肉内または腹腔内注射によって、または経口で、または吸入または本技術分野で公知のような他の方法によって動物に投与できる。本製剤が、哺乳類、とりわけヒトのような動物内への投与に好適である場合、本製剤はまた薬学的に許容可能である。オリゴヌクレオチドを投与するための薬学的に許容可能な製剤が公知であり、利用可能である。いくつかの例において、ｄｓＲＮＡ剤を緩衝液または生理食塩水溶液中で製剤化し、製剤化したｄｓＲＮＡ剤を、卵母細胞での研究でのように、直接細胞内に注入することが好ましい場合がある。ｄｓＲＮＡ剤二本鎖の直接注射もまた実施されうる。ｄｓＲＮＡ（例えばＤｓｉＲＮＡ剤）を導入する好適な方法に関して、米国特許公開公報第２００４／０２０３１４５号を参照のこと。
【０７５３】
好適な量のｄｓＲＮＡ剤を導入しなければならず、これらの量は、標準の方法を用いて実験的に決定できる。概して、細胞の環境中の個々のｄｓＲＮＡ剤種の効果的な濃度は、５０ナノモル濃度以下、１０ナノモル濃度以下であり、または１ナノモル濃度以下で濃度での組成物を使用できる。別の実施形態では、２００ピコモル濃度以下、１００ピコモル濃度以下、５０ピコモル濃度以下、２０ピコモル濃度以下、および１０ピコモル濃度以下、５ピコモル濃度以下、２ピコモル濃度以下、または１ピコモル濃度以下の濃度を用いる方法を、多くの環境で使用できる。
【０７５４】
十分な量のｄｓＲＮＡ剤が細胞に入りその効果を発揮するようにｄｓＲＮＡ剤組成物が製剤化される場合、本方法は、細胞が生存可能な細胞外マトリックスにｄｓＲＮＡ剤組成物を添加することにより実行できる。例えば、本方法は、液体培養液または細胞増殖培地のような液体中、組織外植片中、または哺乳類、とりわけヒトのような動物を含む全生命体中に存在する細胞を用いて使用できる。
【０７５５】
ＭＹＣ  ＲＮＡのレベルまたは活性は、本技術分野で公知の、または後に開発される好適な方法によって決定できる。標的ＲＮＡおよび／または標的ＲＮＡの発現を測定するために使用する方法が、標的ＲＮＡの性質に依存しうることが理解できる。例えば、標的ＭＹＣ  ＲＮＡ配列がタンパク質をコードする場合、語句「発現」は、ＭＹＣ遺伝子（ゲノムまたは外来源由来のいずれか）から由来する、タンパク質またはＭＹＣ  ＲＮＡ／転写産物を意味することができる。このような例において、標的ＭＹＣ  ＲＮＡの発現を、ＭＹＣ  ＲＮＡ／転写産物の量を直接測定することによって、またはＭｙｃタンパク質の量を測定することによって決定可能である。タンパク質を、染色または免疫ブロッティングによって、またはタンパク質が測定可能な反応を触媒する場合、反応速度を測定することによってなどのタンパク質アッセイにて測定可能である。すべてのこのような方法が、本技術分野で公知であり、使用可能である。標的ＭＹＣ  ＲＮＡレベルが測定されるべきである場合、ＲＮＡレベルを検出するための本技術分野で認識された方法を使用可能である（例えばＲＴ−ＰＣＲ、ノザンブロッディングなど）。本発明のｄｓＲＮＡ剤でのＭＹＣ  ＲＮＡの標的化で、対象、組織中、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏいずれかでの、細胞中の、または細胞抽出物中の、ＭＹＣ  ＲＮＡまたはタンパク質のレベルを減少させる際の、ｄｓＲＮＡ剤の有効性の測定をまた、ＭＹＣ−関連表現型（例えば癌または腫瘍形成、増殖、転移、拡散などのような、たとえば疾患または障害）の低減の程度を決定するために使用可能でもある。上記測定は、細胞、細胞抽出物、組織、組織抽出物または他の好適な供給源物質で実施できる。
【０７５６】
ＭＹＣ  ＲＮＡの発現が低減したかどうかの決定は、ＲＮＡレベルにおける変化を正確に検出可能な好適な方法とすることができる。概して、この決定は、ｄｓＲＮＡ剤の少なくとも一部が細胞質に入るように未消化のｄｓＲＮＡを細胞環境に導入し、その後標的ＲＮＡのレベルを測定することによって実施される。
同様の測定を、同一の未処理細胞上で行い、それぞれの測定から得られた結果を比較する。
【０７５７】
ｄｓＲＮＡ剤は、薬理学的に有効量のｄｓＲＮＡ剤と、薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的組成物として製剤化できる。薬学的、または治療的に有効な量は、意図する薬理学的、治療上または予防上の結果を産出するのに効果的なｄｓＲＮＡ剤の量を意味する。語句「薬理学的有効量」および「治療上有効量」または単に「有効量」は、意図する薬理学的、治療上または予防上の結果を産出するのに効果的なＲＮＡの量を意味する。例えば、当該臨床治療が、疾患または疾病に関連した測定可能なパラメータにおいて、少なくとも２０％の減少が見られた時に有効とされる場合、当該疾患または障害の治療に対する薬物の治療上有効量は、当該パラメータにおける少なくとも２０％減少に影響を与えるのに必要な量である。
【０７５８】
本発明の好適な製剤化された薬学的組成物を、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、経皮、空路（エアゾル）、腸、膣および（バッカルおよびサブリンガルを含む）局所投与を含む、非経口経路などによるような、本技術分野で公知の方法によって投与可能である。いくつかの実施形態では、本薬学的組成物は、静脈または非経口内点滴または注射によって投与される。
【０７５９】
一般に、ｄｓＲＮＡの好適な用量ユニットは、０．００１〜０．２５ミリグラム／レシピエントのキログラム体重／日の範囲、または０．０１〜２０マイクログラム／キログラム体重／日の範囲、または０．００１〜５マイクログラム／キログラム体重／日の範囲、または１〜５００ナノグラム／キログラム体重／日の範囲、または０．０１〜１０マイクログラム／レシピエントのキログラム体重／日の範囲、または０．１０〜５マイクログラム／レシピエントのキログラム体重／日の範囲、または０．１〜２．５マイクログラム／キログラム体重／日の範囲である。ｄｓＲＮＡを含む薬学的組成物は、１日１回投与可能である。しかしながら、治療薬剤はまた、１日を通して適切な間隔で投与される、２、３、４、５、６またはそれ以上のサブ用量を含む用量ユニットで投与されてもよい。この場合、各サブ用量に含まれるｄｓＲＮＡは、総合一日用量ユニットを達成するために相応により小さくなければいけない。用量ユニットはまた、例えば数日の間隔にわたり、ｄｓＲＮＡの持続しかつ一定した放出を提供する従来の徐放製剤を用いて、数日にわたる単一用量のために合成可能である。徐放製剤は本技術分野でよく知られている。本実施形態では、用量ユニットは、対応する複数の一日用量を含む。製剤に関係なく、薬学的組成物は、処置される動物またはヒトの標的遺伝子の発現を阻害するのに十分な量で、ｄｓＲＮＡを含まなければいけない。本組成物は、ｄｓＲＮＡの複数ユニットの合計が、まとめて十分な用量を含む方法で合成可能である。
【０７６０】
ヒトに好適な用量範囲を製剤化するために、データを細胞培養アッセイと動物研究から得ることができる。本発明の組成物の用量は、毒性がほとんどまたは全くない、（公知の方法によって決定したような）ＥＤ５０を含む、循環濃度の範囲内である。用量は、使用した剤形および利用した投与経路に応じて、この範囲内で変化してよい。本発明の方法にて使用する化合物では、治療上有効用量は、まず細胞培養アッセイより推定できる。細胞培養中で決定したような、ＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む化合物の循環血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルにて用量を定式化してよい。このような情報は、ヒトに有用な用量をより正確に決定するために使用できる。血漿中のｄｓＲＮＡのレベルを、標準方法によって、例えば高性能液体クロマトグラフィーによって測定してよい。
【０７６１】
薬学的組成物は、投与のための取扱説明書とともに、キット、容器、パックまたはディスペンサー内に含まれることができる。
【０７６２】
治療方法
本発明は、ＭＹＣ（例えばＭＹＣ転写産物および／もしくはＭｙｃタンパク質レベルの誤調節および／もしくは上昇）によって、全体としてもしくは部分的に引き起こされる、もしくはＭＹＣの選択的標的化介して処置可能な疾患または障害のリスクのある（または受けやすい）対象を治療する予防的および治療的方法の両方を提供する。
【０７６３】
本明細書で使用するところの「治療」または「治療すること」は、疾患もしくは障害、疾患もしくは障害の症状、もしくは疾患に向かう傾向を治癒させる、治す、緩和する、軽減する、変化させる、治療する、改善する、好転させるまたは影響を与える目的で、疾患もしくは障害、疾患もしくは障害の症状、もしくは疾患もしくは障害に向かう傾向を持つ患者への治療的薬剤（例えばｄｓＲＮＡ剤またはそれをコードしているベクターまたはトランスジーン）の適用もしくは投与、またはこのような患者から単離した組織もしくは細胞株への治療薬剤の適用もしくは投与として定義される。
【０７６４】
１つの態様において、本発明は、対象に治療薬剤（例えばｄｓＲＮＡ剤またはそれをコードしているベクターもしくはトランスジーン）を投与することによって、対象中で、（例えばＭＹＣ発現の阻害を介して対象内での形質転換事象の開始を防止することを含む）上述の疾患または障害を予防する方法を提供する。疾患に対してリスクを有する対象を、例えば、本明細書で記述したような診断または予後アッセイの１つまたは組み合わせによって同定できる。予防的薬剤の投与は、例えば対象中の癌の検出、または疾患もしくは障害の症状特徴の顕在化の前に実施可能であり、それによって疾患または障害が予防され、あるいはその進行が遅延する。
【０７６５】
本発明の別の態様は、対象を治療的に治療する方法、すなわち疾患または障害の症状の開始を変更する方法に関する。これらの方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（例えば、ｄｓＲＮＡ剤とともに細胞を培養することによって）、あるいはｉｎ  ｖｉｖｏ（例えば対象にｄｓＲＮＡ剤を投与することによって）で実施可能である。
【０７６６】
治療の予防的および治療的方法の両方に関して、このような治療はとりわけ、ファーマコジェノミクスの領域から得られた知識に基づいてあつらえ、または改変してよい。本明細書で使用するところの「ファーマコジェノミクス」は、遺伝子シークエンシング、統計学的遺伝学、および臨床試験および市場における薬物に対する遺伝子発現解析のような、ゲノミクス技術の適用を意味する。より具体的には、本語句は、どのようにして患者の遺伝子が、彼または彼女の薬物に対する応答を決定するか（例えば、患者の「薬物応答表現型」または「薬物応答遺伝子型」）の研究を意味する。したがって、本発明の別の態様は、個々の薬物応答遺伝子型にしたがって、本発明の標的ＭＹＣ  ＲＮＡ分子または標的ＭＹＣ  ＲＮＡモジュレータいずれかでの個々の予防的または治療的治療をあつらえるための方法を提供する。ファーマコジェノミクスは、臨床医または医師が、治療より最も利益を得る患者へ、予防的または治療的処置を標的化し、毒性薬物関連副作用を経験する患者の治療を避けることを可能にする。
【０７６７】
治療薬剤を、選択した動物モデルで試験可能である。例えば、本明細書で記述したようなｄｓＲＮＡ剤（またはそれをコードしている発現ベクターもしくはトランスジーン）は、上記薬剤での治療の有効性、毒性または副作用を決定するために、動物モデルにて使用可能である。あるいは、薬剤（例えば治療薬剤）を、このような薬剤の作用機序を決定するために、動物モデルにて使用可能である。
【０７６８】
ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルおよび発現の下方調節を評価するために有用なモデル
細胞培養
本発明のｄｓＲＮＡ剤を、ｉｎ  ｖｉｖｏにて、例えば以下の手順を用いて、開裂活性に対して試験可能である。本発明のｄｓＲＮＡ剤によって標的化されたＭＹＣ  ｃＤＮＡ内のヌクレオド配列を、上記のＭＹＣ配列中に示す。
【０７６９】
本発明のｄｓＲＮＡ試薬を、ＭＹＣ  ＲＮＡおよびＭｙｃタンパク質阻害の程度を決定するために、Ａ５４９または他の哺乳類細胞を用いて、細胞培養液中で試験できる。特定の実施形態では、ＤｓｉＲＮＡ試薬（例えば図１および上述構造を参照のこと）を、本明細書で記述したように、ＭＹＣ標的に対して選択する。ＭＹＣ  ＲＮＡ阻害は、たとえば、培養Ａ５４９細胞、または培養液中の他の形質転換されたか、形質転換されていない哺乳類細胞への、好適なトランスフェクション薬剤によるこれらの試薬の送達後に測定する。標的ＭＹＣ  ＲＮＡの相対量を、増幅のリアルタイムＰＣＲモニタリングを用いて、アクチンまたは他の適切な対照に対して測定する（例えばＡＢＩ７７００ＴＡＱＭＡＮ（登録商標））。比較を、関係しない標的、または同一の総長および化学式を持つ無作為化ＤｓｉＲＮＡ対照、または単に適切なビヒクル処理もしくは未処理の対照に対して実施したオリゴヌクレオチド配列の活性に対して実施する。第一および第二リード試薬を、標的に対して選択し、最適化を実施した。
【０７７０】
ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）（増幅のリアルタイムＰＣＲモニタリング）およびｍＲＮＡのライトサイクラー定量化
総ＲＮＡを、例えば大規模抽出用のＡｍｂｉｏｎ  Ｒｎａｑｕｅｏｕｓ  ４−ＰＣＲ精製キット、または９６−ウェルプレート用のＰｒｏｍｅｇａ  ＳＶ９６を用いて、ＤｓｉＲＮＡ伝達後の細胞から調製する。Ｔａｑｍａｎ解析のために、二重標識化プローブを、例えば５’末端にて共有結合したレポーター色素ＦＡＭまたはＶＩＣと３’末端に共役したクエンサー色素ＴＡＭＭＹＣＡで合成した。ＰＣＲ増幅を、例えば１０μＬ総ＲＮＡ、１００ｎＭフォワードプライマー、１００ｍＭリバースプライマー、１００ｍＭ  プローブ、１×ＴａｑＭａｎ  ＰＣＲ反応緩衝液（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、５．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１００μＭの各ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰ、０．２Ｕ  ＲＮａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、０．０２５Ｕ  ＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および０．２Ｕ  Ｍ−ＭＬＶ  逆転写酵素（Ｐｒｏｍｅｇａ）からなる５０μＬ反応液を用いて、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７７００  配列検出器上で実施する。温度サイクル条件は、４８℃にて３０分間、９５℃にて１０分間、続いて９５℃にて１５秒間と６０℃の４０サイクル、および、および６０℃で１分間からなることができる。標的ＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルの定量を、段階希釈した総細胞ＲＮＡ（３００、１００、３０、１０ｎｇ／ｒｘｎ）から産出した標準物質に対して決定し、例えば、平行または同一のいずれかのチューブＴａｑＭａｎ反応におけるＨＰＲＴ１  ｍＲＮＡに対して標準化する。
【０７７１】
ウエスタンブロッディング
細胞タンパク質抽出物を、標準マイクロ調製技術を用いて（例えばＲＩＰＡ緩衝液を使用して）、または好ましくは、ＮＥ−ＰＥＲ  Ｎｕｃｌｅａｒ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｋｉｔ  （サーモフィッシャーサイエンティフィック）などの方法により核タンパク質を抽出することにより、調製可能である。細胞タンパク質抽出物を、Ｔｒｉｓ−Ｇｌｙｃｉｎｅポリアクリルアミドゲル上で泳動し、膜上に移す。非特異的結合を、例えば５％不脂肪ミルクとの１時間のインキュベーションにて阻害し、続いて４℃にて１６時間一次抗体でインキュベーションできる。洗浄後、二次抗体を、例えば室温にて１時間（１：１０，０００希釈）適用し、シグナルを、ＶｅｒｓａＤｏｃイメージングシステム上で検出する。
【０７７２】
いくつかの細胞培養系において、カチオン性脂質が、培養液中の細胞に対するオリゴヌクレオチドのバイオアベイラビリティを増強することが示されてきた（Ｂｅｎｎｅｔ，  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４１，１０２３−１０３３）。１つの実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡ分子を、細胞培養実験のために、カチオン性脂質と複合体化する。ｄｓＲＮＡとカチオン性脂質との混合物を、細胞への添加の直前に、血清を含まないＯｐｔｉｍＭＥＭ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）中で調製する。ＯｐｔｉＭＥＭを室温（約２０〜２５℃）まで温め、カチオン性脂質を最終の所望濃度まで加える。ｄｓＲＮＡ分子をＯｐｔｉＭＥＭに、所望の濃度まで加え、溶液を希釈したｄｓＲＮＡに加え、１５分間室温にてインキュベートする。用量応答実験において、ＲＮＡ複合体を、カチオン性脂質の添加前に、ＯｐｔｉＭＥＭで段階希釈する。
【０７７３】
動物モデル
抗−ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡ剤の有効性を、動物モデルにおいて評価してよい。本技術分野で公知のような癌および／または増殖性疾患、状態または障害の動物モデルを、抗−ＭＹＣ  ｄｓＲＮＡの有効性、効力、毒性などの評価のために使用可能である。増殖性疾患の好適な動物モデルには、例えばプロト癌遺伝子（例えばＭｙｃ、Ｓｒｃ）の機能を得た、かつ／もしくは腫瘍抑制タンパク質（例えばｐ５３、Ｒｂ）の機能の欠損を持つトランスジェニック齧歯類（例えばマウス、ラット）、または新生物形質変換を促進するＤＮＡ変化を誘導する照射もしくは化学突然変異原誘発物質に曝露した齧歯類が含まれる。多くのこのような動物モデルは、例えばアメリカメイン州バー・ハーバーのＴｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから市販されている。これらの動物モデルは、本発明の組成物のアッセイのための、供給源細胞または組織として使用できる。このようなモデルはまた、治療的利用に向けてＭＹＣ遺伝子発現の調節における、本発明のｄｓＲＮＡ組成物の有効性の前臨床評価のために使用できるか、または使用のために適合でき。
【０７７４】
細胞培養モデルでのように、ほとんどのＭＹＣ−関連マウス腫瘍異種移植片が、Ｍｙｃタンパク質を発現する癌細胞から由来したものである。ＭＹＣの調節の抗腫瘍効果の研究に関連する癌の異種移植片マウスモデルが種々のグループによって記述されてきた（たとえば、Ｌｅｏｎｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  ＮＣＩ  １９９６  Ａｐｒｉｌ；  ８８：  ４１９；  Ｉｖｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００３  Ｊｕｌｙ；  ９：  ２５１０；  Ｄｅｖｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００５  Ｍａｙ；  １１：  ３９３０；  Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０１０  Ａｐｒｉｌ；  １８：８２８；  Ｋｅｓｓｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１２  Ｊａｎ；  ３３５：  ３４８）。これらのモデルの利用は、抗−ＭＹＣ剤によるＭＹＣ発現の阻害が、動物における腫瘍増殖の阻害を引き起こすことを実証した。
【０７７５】
このようなモデルを、ＭＹＣレベル、発現、腫瘍／癌形成、増殖、拡散、他のＭＹＣ−関連表現型、疾患または障害の発症などを阻害する本発明のｄｓＲＮＡ分子の有効性を評価において使用できる。これらのモデルおよび他のモデルを同様に、前臨床設定にて、本発明のｄｓＲＮＡ分子の安全性／毒性および有効性を評価するために使用できる。
【０７７６】
本発明のＭＹＣ標的化ｄｓＲＮＡの評価のために有用な動物モデル系の特異的な例には、野生型マウス、および同所性もしくは皮下のＨＴ１０８０、ＨＣＴ１１６、ＳＷ４８０、ＳＷ６２０、Ｈｅｐ３Ｂ、Ｍ１４、ＪＲ８、ＰＬＦ２、ＬＬＣ１、ＬＮＣａＰ、ＰＣ３、ＳＵＭ１５９、ＭＤＡＭＢ−２３１、２２Ｒｖ１、５１８Ａ２、ＭＨＣＣ９７、Ａ５４９、Ｈ１２９９、ＨｅｐＧ２、ＳＮＵ３９８、ＨｕＨ７、ＮＣＩ−Ｈ１９６、ＮＣＩ−Ｈ１９７５、ＨＴ２９、ＭＫＮ−４５、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＮＣＩ−Ｈ４４１、Ｐａｎｃ−１、ＭＩＡ  ＰａＣａ−２、ＢｘＰＣ３、ＤＵ−１４５、Ｍ２１８２、ＶＣａＰ、ＯｖＣａｒ−３、ＭＣＦ−７、Ｕ９３７、Ｋ５６２、ＨｅＬａ、Ｔ９８Ｇ、またはＳＨＰ−７７腫瘍モデルマウスが含まれる。ｉｎ  ｖｉｖｏ実験における例において、本発明のｄｓＲＮＡを、このようなマウスモデルに、１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で尾静脈注射するか、または繰り返し用量を、単一用量のＩＣ５０レベルで投与し、臓器（例えば前立腺、肝臓、腎臓、肺、膵臓、結腸、皮膚、脾臓、骨髄、リンパ節、乳腺脂肪体など）を、最終用量を投与してから２４時間後に回収する。ついでこのような臓器を、使用するモデルに応じてマウスおよび／またはヒトＭＹＣレベルに関して評価する。活性期間も最終ｄｓＲＮＡ投与から１、４、７、１４、２１日またはそれ以上で試験できる。
【０７７７】
本発明の実施は、他に指摘がない限り、当業者の技術内である、化学、分子生物学、微生物学、組換え体ＤＮＡ、遺伝学、免疫学、細胞生物学、細胞培養およびトランスジェニック生物学の従来の技術を使用する。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，２ｎｄ  Ｅｄ．（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｕｐｄａｔｅｓ）；Ｇｌｏｖｅｒ，１９８５，ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ）；Ａｎａｎｄ，１９９２；Ｇｕｔｈｒｉｅ  ａｎｄ  Ｆｉｎｋ，１９９１；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）；Ｊａｋｏｂｙ  ａｎｄ  Ｐａｓｔａｎ，１９７９；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｄｓ．１９８４）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｄｓ．１９８４）；Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｉｓｅ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ  ｅｄｓ．，１９８７，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４  ａｎｄ  １５５（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｍａｙｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６）；Ｒｉｏｔｔ，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８８；Ｈｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８６）；Ｗｅｓｔｅｒｆｉｅｌｄ，Ｍ．，Ｔｈｅ  ｚｅｂｒａｆｉｓｈ  ｂｏｏｋ．Ａ  ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｚｅｂｒａｆｉｓｈ（Ｄａｎｉｏ  ｒｅｒｉｏ），（４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｏｒｅｇｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，２０００）を参照のこと。
【０７７８】
他に定義しない限り、本明細書で使用したすべての技術的かつ化学的語句は、本発明の属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を持つ。本明細書で記述したものと同様または等価の方法および物質を、本発明の実施または試験で使用できるが、好適な方法および物質が以下で記述されている。すべての発行物、特許明細書、特許、および本明細書で言及された他の参考文献が、参考文献として援用される。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が制御する。さらに、物質、方法および実施例は単なる例示であり、限定する意図はない。
【実施例】
【０７７９】
本発明は、以下の実施例を参照して記述され、これらは例示するために共されるものであり、任意の方法で本発明の限定を意図するものではない。本技術分野でよく知られている標準技術、または以下で特に記述される技術を使用した。
【０７８０】
実施例１：二本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドの調製
オリゴヌクレオチド合成および精製
ＤｓｉＲＮＡ分子は、ＲＮＡメッセージ中の種々の部位、例えば本明細書で記述したＲＮＡ配列内の標的配列と相互作用するようにデザインできる。本例示の薬剤において、３２７のヒト標的ＭＹＣ配列および１４４のマウス標的ＭＹＣ配列を評価するため選択した（３２７のヒト標的ＭＹＣ部位のうち１８３が、マウスＭＹＣ転写配列中の対応する部位と共に保存されていることが予測された）。ＤｓｉＲＮＡ分子の１つの鎖の配列は、上述の標的ＭＹＣ部位配列と相補的であった。ＤｓｉＲＮＡ分子は、本明細書で記述した方法を用いて化学的に合成した。一般に、ＤｓｉＲＮＡ構築物を、１９〜２３マーｓｉＲＮＡに対して記述したような固相オリゴヌクレオチド合成法を用いて合成した（例えば、Ｕｓｍａｎらの米国特許第５，８０４，６８３号；第５，８３１，０７１号；第５，９９８，２０３号；第６，１１７，６５７号；第６，３５３，０９８号；第６，３６２，３２３号；第６，４３７，１１７号；第６，４６９，１５８号；  Ｓｃａｒｉｎｇｅらの米国特許第６，１１１，０８６号；第６，００８，４００号；第６，１１１，０８６号を参照のこと）。
【０７８１】
個々のＲＮＡ鎖を合成し、標準の方法にしたがってＨＰＬＣ精製した（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，アイオワ州  コーラルビル）。例えば、ＲＮＡオリゴヌクレオチドを、標準技術（Ｄａｍｈａ  ａｎｄ  Ｏｌｇｉｖｉｅ，  １９９３，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２０：  ８１−１１４；  Ｗｉｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２３：  ２６７７−８４）を用いて、固相ホスホロアミダイト化学反応を用いて合成し、脱保護し、ＮＡＰ−５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）上で脱塩した。オリゴマーを、１５分間段階直線勾配を用いて、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｓｏｕｒｃｅ  １５Ｑカラム（１．０ｃｍ×２５ｃｍ；  Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）上のイオン交換高性能液体クロマトグラフィー（ＩＥ−ＨＰＬＣ）を用いて精製した。勾配は、９０：１０  緩衝液Ａ：Ｂ〜５２：４８  緩衝液Ａ：Ｂで変化し、ここで緩衝液Ａは１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５であり、緩衝液Ｂは１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５、１Ｍ  ＮａＣｌである。試料を２６０ｎｍでモニタし、全長オリゴヌクレオチド種に対応するピークを回収し、プールし、ＮＡＰ−５カラム上で脱塩し、凍結乾燥した。
【０７８２】
各オリゴマーの精度を、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＰＡＣＥ  ５０００（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州フラートン）上でのキャピラリー電気泳動（ＣＥ）によって決定した。ＣＥキャピラリーは、１００μｍ内径を持ち、ｓｓＤＮＡ  １００Ｒ  Ｇｅｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ）を含む。概して、約０．６ｎｍｏｌのオリゴヌクレオチドをキャピラリー内に注入し、４４４Ｖ／ｃｍの電場中で走らせ、２６０ｎｍでのＵＶ吸光度によって検出した。変性Ｔｒｉｓ−ホウ酸塩−７Ｍ−尿素ランニング緩衝液をＢｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。オリゴリボヌクレオチドを、以下に記述する実験での使用のために、ＣＥによって評価したように、少なくとも９０％純度で得た。化合物同一性を、製造業者の推奨プロトコールにしたがって、Ｖｏｙａｇｅｒ  ＤＥ．ＴＭ．Ｂｉｏｓｐｅｃｔｏｍｅｔｒｙ  Ｗｏｒｋ  Ｓｔａｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，カリフォルニア州フォスターシティ）上での、マトリックス補助レーザー吸収イオン化飛行時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析によって確認した。しばしば０．２％の予測分子量内で、すべてのオリゴマーの相対分子量を得た。
【０７８３】
二本鎖の調製
一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）オリゴマーを、例えば１００ｍＭ  酢酸カリウム、３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５からなる二本鎖緩衝液中１００μＭ濃度で、再懸濁した。相補的センス鎖およびアンチセンス鎖を等モル量で混合し、例えば５０μＭ二本鎖の最終溶液を得た。試料をＲＮＡ緩衝液（ＩＤＴ）中５’間１００℃まで熱し、使用の前に室温まで冷却した。二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）オリゴマーを−２０℃で保存した。一本鎖ＲＮＡオリゴマーを、凍結乾燥または−８０℃にてヌクレアーゼフリーの水中で保存した。
【０７８４】
命名法
一貫性のために、以下の命名法を本明細書で使用した。二本鎖に与えた名前は、オリゴマーの長さと、オーバーハングの有無とを示唆する。「２５／２７」は、２−塩基３’−オーバーハングを含む、２５塩基センス鎖と、２７塩基アンチセンス鎖とを持つ非対称二本鎖である。「２７／２５」は、２７塩基センス鎖と２５塩基アンチセンス鎖とを持つ非対称二本鎖である。
【０７８５】
細胞培養およびＲＮＡトランスフェクション
Ａ５４９細胞を、ＡＴＣＣより得、５％ＣＯ２下、３７℃にて、１０％ウシ胎児血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）を含むＤＭＥＭ（ＨｙＣｌｏｎｅ）中で維持した。Ｈｅｐａ  １−６細胞をＡＴＣＣより得、５％ＣＯ２下、３７℃にて、１０％ウシ胎児血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）を含むＤＭＥＭ（ＨｙＣｌｏｎｅ）中で維持した。ＲＮＡトランスフェクションのために、細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ）を用いて、製造業者の取り扱い説明書にしたがって、１ｎＭ、０．３ｎＭ、または０．１ｎＭの最終濃度で示唆したようなＤｓｉＲＮＡでトランスフェクトした。簡単に記すと、たとえば以下の実施例３の０．１ｎＭのトランスフェクションでは、各ＤｓｉＲＮＡのストック溶液の一定分量を、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ  Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸと、１５０μＬ（０．３ｎＭ  ＤｓｉＲＮＡを備える）の容量に達するまで混合した。得られた１５０μＬ混合液を、室温にて２０分間インキュベートして、ＤｓｉＲＮＡ：Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ複合体を形成させた。一方、標的細胞をトリプシン処理し、培地中に再懸濁させた。２０分間の複合体形成の終わりに、ウェルあたり５０μＬのｓｉＲＮＡ：ＲＮＡｉＭＡＸ混合物を、９６ウェルプレート中の３組のウェルに添加した。最後に、細胞懸濁液１００μＬを各ウェル加え（最終容量１５０μＬ）、プレートを２４時間インキュベーター内に配置した。
【０７８６】
ＭＹＣ阻害の評価
ＭＹＣ標的遺伝子ノックダウンを、ＨＰＲＴおよびＳＦＲＳ９ハウスキーピング遺伝子に対して、そして対照ＤｓｉＲＮＡおよび／またはモックトランスフェクション対照でのトランスフェクションに対して標準化した値を用い、ｑＲＴ−ＰＣＲによって決定した。
【０７８７】
ＲＮＡ単離および解析
培地を吸引し、総ＲＮＡをＳＶ９６キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて抽出した。総ＲＮＡを、製造業者の取扱説明書にしたがって、ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩ、Ｏｌｉｇｏ  ｄＴおよびランダムヘキサマーを用いて逆転写した。概して、得られたｃＤＮＡを、ＭＹＣ遺伝子、ならびにヒト遺伝子ＨＰＲＴ−１およびＳＦＲＳ９に特異的なプライマーとプローブとを用いて、ｑＰＣＲによって解析した。ＡＢＩ７７００を、増幅反応のために使用した。各試料を三重で試験した。相対ＭＹＣ  ＲＮＡレベルを、ＨＰＲＴ１およびＳＦＲＳ９  ＲＮＡレベルに対して標準化し、トランスフェクション対照試料中で得たＲＮＡレベルと比較した。
【０７８８】
実施例２：ＭＹＣのＤｓｉＲＮＡ阻害
ＭＹＣを標的としているＤｓｉＲＮＡ分子を、上述のようにデザインして合成し、阻害有効性に関してヒトＡ５４９細胞またはマウスＨｅｐａ  １−６細胞中で試験した。トランスフェクションのために、アニールしたＤｓｉＲＮＡを、トランスフェクション試薬（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と混合し、室温にて２０分間インキュベートした。Ａ５４９（ヒト）またはＨｅｐａ  １−６（マウス）細胞をトリプシン処理し、培地中で再懸濁し、ウェルに加え（１００μＬ／ウェル）、１５０μｌの容量で、１ｎＭの最終ＤｓｉＲＮＡ濃度を得た。各ＤｓｉＲＮＡトランスフェクション混合液を、三重ＤｓｉＲＮＡ処理のために３つのウェルに加えた。細胞を３７℃にて２４時間、ＤｓｉＲＮＡトランスフェクション混合液の継続存在下、インキュベートした。２４時間の時点で、ＲＮＡを処理した細胞の各ウェルから調製した。トランスフェクション混合液を含む上清をまず除去して廃棄し、ついで細胞を溶解し、各ウェルからＲＮＡを調製した。処理後の標的ＭＹＣ  ＲＮＡレベルを、値を対照から得られた値に対して標準化して、ＭＹＣ標的遺伝子に対してｑＲＴ−ＰＣＲによって評価した。三重のデータを平均し、％エラーを各処置に対して決定した。標準化データをグラフにし、対照との比較で、活性ＤｓｉＲＮＡによる標的ｍＲＮＡの減少を決定した。
【０７８９】
試験の一次段階でのＭＹＣ阻害の効果に関して試験したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡは、以下の表８に示される。この例では、４７１の非対称性ＤｓＲＮＡ（試験したＤｓｉＲＮＡは２５／２７マー構造を有した）が構築され、１ｎＭの濃度で、このようなＤｓｉＲＮＡが存在する中でインキュベートしたヒトＡ５４９細胞およびマウスＨｅｐａ  １−６細胞におけるＭＹＣ阻害の効果を試験した。最初のスクリーニングで試験した４７１の非対称性のＤｓｉＲＮＡは、上記の表２および４に示される２´‐Ｏ‐メチル改変残基を有するＤｓｉＲＮＡを含んだ。ここで、下線が引かれたヌクレオチド残基は、２´‐Ｏ‐メチル改変残基を示し、リボヌクレオチド残基は、大文字で示され、デオキシリボヌクレオチド残基は、小文字で示される。
【０７９０】
１ｎＭでのヒトＡ５４９細胞およびマウスＨｅｐａ  １−６細胞における４７１のＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡのアッセイにより、以下のＭＹＣの阻害有効性が明らかとなり、この結果を表９および１０に表した。ＭＹＣレベルを、ＭＹＣ転写物内の指定の位置に配置したｑＰＣＲアッセイを使用して判定した（ヒトＡ５４９細胞の実験では、３つの異なるｑＰＣＲアッセイを実施し、「Ｈｓ  ＭＹＣ  ５１４−６２０」（ＦＡＭ）、「Ｈｓ  ＭＹＣ  １２２７−１３４７」（ＭＡＸ）、および「Ｈｓ  ＭＹＣ  １７７１−１８８２」（ＭＡＸ）と表し；マウスＨｅｐａ  １−６細胞では、３つの異なるｑＰＣＲアッセイを実施し、「Ｍｍ  ＭＹＣ  ５３９−６６３」（ＦＡＭ）、「Ｍｍ  ＭＹＣ  １３３９−１４２８」（ＭＡＸ）および「Ｍｍ  ＭＹＣ  １９７１−２０６２」（ＭＡＸ）と表した。
【表９−１】
2015529467.tif 000774
【表９−２】
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【表９−３】
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【表９−４】
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【表９−５】
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【表９−６】
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【表９−７】
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【表９−８】
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【表１０−１】
2015529467.tif 000782
【表１０−２】
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【表１０−３】
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【表１０−４】
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【表１０−５】
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【表１０−６】
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【表１０−７】
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【表１０−８】
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【０７９１】
上記の表９に示されるように、ヒトＡ５４９細胞での試験でアッセイした３２７の非対称性ＤｓｉＲＮＡうちの２４が、平均で、１ｎＭにてＡ５４９細胞におけるヒトＭＹＣレベルの５０％超の低減を再現的に示した（ＭＹＣ−６０７、ＭＹＣ−１３６４、ＭＹＣ−１３７０、ＭＹＣ−１３８２、ＭＹＣ−１４５７、ＭＹＣ−１４６５、ＭＹＣ−１６９８、ＭＹＣ−１７３４、ＭＹＣ−１７６９、ＭＹＣ−１７７９、ＭＹＣ−１７９５、ＭＹＣ−１８０８、ＭＹＣ−１８２３、ＭＹＣ−１８２８、ＭＹＣ−１８４５、ＭＹＣ−１８５５、ＭＹＣ−１８８２、ＭＹＣ−１９１１、ＭＹＣ−１９３１、ＭＹＣ−２０９９、ＭＹＣ−２１２０、ＭＹＣ−２３０６、ＭＹＣ−１３６０およびＭＹＣ−１４６８）。ヒト細胞で実施したアッセイ間で顕著なばらつきが観察され、２８の異なる二本鎖は実施した３つのアッセイのうち少なくとも２つでＭｙｃレベルにおける５０％超の低減を示した（ＭＹＣ−１１１６、ＭＹＣ−１３４６、ＭＹＣ−１３５１、ＭＹＣ−１３６４、ＭＹＣ−１３７０、ＭＹＣ−１３８２、ＭＹＣ−１４５７、ＭＹＣ−１４６５、ＭＹＣ−１５８４、ＭＹＣ−１６９８、ＭＹＣ−１７３４、ＭＹＣ−１７６９、ＭＹＣ−１７７９、ＭＹＣ−１７９５、ＭＹＣ−１８０８、ＭＹＣ−１８２３、ＭＹＣ−１８２８、ＭＹＣ−１８４５、ＭＹＣ−１８５５、ＭＹＣ−１８８２、ＭＹＣ−１９１１、ＭＹＣ−１９３１、ＭＹＣ−２３０６、ＭＹＣ−１３６０、ＭＹＣ−１４６８、ＭＹＣ−１４８３、ＭＹＣ−１７１１およびＭＹＣ−１７１２）。一方で、４７の異なる二本鎖は、１次スクリーニング中の１つのアッセイのみでヒトＭｙｃレベルにおける少なくとも５０％の低減を示した：ＭＹＣ−５４８、ＭＹＣ−６０１、ＭＹＣ−６０７、ＭＹＣ−９２０、ＭＹＣ−９４９、ＭＹＣ−９７０、ＭＹＣ−１１１１、ＭＹＣ−１３４０、ＭＹＣ−１５５５、ＭＹＣ−１５９９、ＭＹＣ−１６３９、ＭＹＣ−１６８７、ＭＹＣ−１８５０、ＭＹＣ−１８９３、ＭＹＣ−１９２１、ＭＹＣ−１９２６、ＭＹＣ−１９４４、ＭＹＣ−１９６５、ＭＹＣ−１９７０、ＭＹＣ−１９７６、ＭＹＣ−１９８１、ＭＹＣ−１９８９、ＭＹＣ−１９９４、ＭＹＣ−２００１、ＭＹＣ−２００６、ＭＹＣ−２０１３、ＭＹＣ−２０２６、ＭＹＣ−２０３１、ＭＹＣ−２０４０、ＭＹＣ−２０４８、ＭＹＣ−２０６６、ＭＹＣ−２０７３、ＭＹＣ−２０８３、ＭＹＣ−２０９４、ＭＹＣ−２０９９、ＭＹＣ−２１１４、ＭＹＣ−２１２０、ＭＹＣ−２１７６、ＭＹＣ−２１８８、ＭＹＣ−２２３３、ＭＹＣ−２３００、ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５２、ＭＹＣ−９５３、ＭＹＣ−１４８２、ＭＹＣ−２１１５およびＭＹＣ−２１９６。
【０７９２】
また、マウス細胞で実施したアッセイ間でも顕著なばらつきが観察され、３つの異なる二本鎖のみが実施した３つのアッセイのうち少なくとも２つのアッセイでＭｙｃレベルにおける５０％超の低下を示した（ＭＹＣ−９５３、ＭＹＣ−１３６０、およびＭＹＣ−２１８７）。一方で、２３の異なる二本鎖が１つのアッセイのみでマウスＭｙｃレベルにおける少なくとも５０％超の低下を示した：ＭＹＣ−９５２、ＭＹＣ−１４６８、ＭＹＣ−ｍ１３９１、ＭＹＣ−ｍ１３９６、ＭＹＣ−ｍ２０１６、ＭＹＣ−ｍ２０３４、ＭＹＣ−ｍ２０３９、ＭＹＣ−ｍ２０６４、ＭＹＣ−ｍ２０６９、ＭＹＣ−ｍ２１１０、ＭＹＣ−ｍ２１１７、ＭＹＣ−ｍ２１２５、ＭＹＣ−ｍ２１３１、ＭＹＣ−ｍ２１３６、ＭＹＣ−ｍ２１５９、ＭＹＣ−ｍ２１６６、ＭＹＣ−ｍ２１７１、ＭＹＣ−ｍ２１９４、ＭＹＣ−ｍ２２００、ＭＹＣ−ｍ２２０８、ＭＹＣ−ｍ２２５５およびＭＹＣ−ｍ２２９６。
【０７９３】
上記の表９および１０のアッセイの結果をプロットし、図２Ａ〜２Ｈに示した。
【０７９４】
実施例３：ＭＹＣのＤｓｉＲＮＡ阻害−二次スクリーニング
上記の実験の９６の非対称ＤｓｉＲＮＡ（９２のＨｓＭＹＣ標的化および４つのＭｍＭＹＣ固有標的化）を、ついで二次アッセイで試験し（「相２」）、このようなアッセイの結果を、図３Ａ〜３Ｈにてヒストグラムの形態で示した。特に、上記で試験した３２７から選択した９６の非対称ＤｓｉＲＮＡを、ヒトＡ５４９細胞の環境中１ｎＭおよび０．１ｎＭにて、ヒトＭＹＣの阻害に関して二重に評価した（図３Ａ〜３Ｄ）。これらの９６非対称ＤｓｉＲＮＡをまた、マウスＨｅｐａ  １−６細胞の環境中１ｎＭおよび０．１ｎＭにて、マウスＭＹＣの阻害に関して評価した（図３Ｅ〜３Ｈ）。図３Ａ〜３Ｄにて示すように、多くの非対称ＤｓｉＲＮＡが、Ａ５４９細胞の環境中でアッセイした時に、サブナノモル濃度にて、顕著なヒトＭＹＣ阻害有効性を再現可能に示した。さらに、図３Ｅ〜３Ｈで示すように、多数の非対称ＤｓｉＲＮＡがまた、マウスＨｅｐａ１−６細胞の環境中でアッセイした時に、サブナノモル濃度にて、顕著なマウスＭＹＣ阻害有効性を有すると同定された。（特に、ヒトＭＹＣ特異的にまたはマウスＭＹＣ特異的にのいずれかで阻害できるＤｓｉＲＮＡならびに、両方の種において顕著にＭＹＣを阻害できるＤｓｉＲＮＡが全て同定された。）
【０７９５】
実施例４：ＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡの改変形態がＩｎ  ｖｉｔｒｏでＭＹＣレベルを低減する。
２４のＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡ（ＭＹＣ−６０７、ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３、ＭＹＣ−１３６０、ＭＹＣ−１３６４、ＭＹＣ−１３７０、ＭＹＣ−１６９８、ＭＹＣ−１７１１、ＭＹＣ−１７１２、ＭＹＣ−１７６９、ＭＹＣ−１９２６、ＭＹＣ−１９３１、ＭＹＣ−１９４４、ＭＹＣ−１９６５、ＭＹＣ−１９８１、ＭＹＣ−２０４０、ＭＹＣ−２０６６、ＭＹＣ−２０９９、ＭＹＣ−２１１４、ＭＹＣ−２１１５、ＭＹＣ−２１２０、ＭＹＣ−２１７６、ＭＹＣ−２１９６およびＭＹＣ−２２３３）を、上記に示すように２´‐Ｏ‐メチルガイド鎖改変パターン「Ｍ１７」、「Ｍ３５」、「Ｍ４８」、および「Ｍ８」で調製した。２４のＤｓｉＲＮＡ配列の各配列について、４つのガイド鎖改変パターンＭ１７、Ｍ３５、Ｍ４８およびＭ８のそれぞれを有するＤｓｉＲＮＡを、Ａ５４９細胞の環境中、１．０ｎＭおよび０．１ｎＭの濃度でヒトＡ５４９細胞中でのＭＹＣ阻害に関して（二重に）アッセイした。これらの実験の結果を、図４Ａ〜４Ｄにてヒストグラムとして示す。また、これらの同じ二本鎖をマウスＨｅｐａ  １−６細胞においてもアッセイし、図４Ｅ〜４Ｈに対応する結果を示した。一般に、２４のＤｓｉＲＮＡ配列は、ガイド鎖の２’−Ｏ−メチル改変の程度が増加するように、ＭＹＣ阻害有効性を減少させる傾向を示した。しかしながら、試験した多くのＤｓｉＲＮＡ配列に関して、改変パターンは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて有意なＭＹＣ阻害有効性をＤｓｉＲＮＡが維持することが同定可能であった。また、これらのＤｓｉＲＮＡの多く（たとえばＭＹＣ−１７１２、ＭＹＣ−１９３１、ＭＹＣ−１９４４、ＭＹＣ−１９６５、ＭＹＣ−２０６６、ＭＹＣ−２１１４、ＭＹＣ−２１２０およびＭＹＣ−２２３３）は、試験した最も多く改変した状態においてさえも、ＭＹＣ阻害有効性が明らかに減少しなかったことも注目された。したがって、このような活性型の改変ＤｓｉＲＮＡ配列は、ｉｎ  ｖｉｖｏで対象に治療的に投与される際に、このようなＤｓｉＲＮＡを安定化させ、かつ／またはこのようなＤｓｉＲＮＡの免疫原性を低減させることができると考えられる改変パターンを有する。
【０７９６】
実施例５：ＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡのさらなる改変形態は、Ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＭＹＣレベルを低減する。
１９のＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ（ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３、ＭＹＣ−１３６４、ＭＹＣ−１３７０、ＭＹＣ−１６９８、ＭＹＣ−１７１１、ＭＹＣ−１７６９、ＭＹＣ−１９２６、ＭＹＣ−１９３１、ＭＹＣ−１９４４、ＭＹＣ−１９６５、ＭＹＣ−２０４０、ＭＹＣ−２０６６、ＭＹＣ−２０９９、ＭＹＣ−２１１５、ＭＹＣ−２１２０、ＭＹＣ−２１７６、ＭＹＣ−２１９６およびＭＹＣ−２２３３）を、２´‐Ｏ‐メチルパッセンジャー鎖およびガイド鎖改変パターンの両方で調製した。１９のＤｓｉＲＮＡ配列のそれぞれで、ＳＭ１２、ＳＭ１４、ＳＭ２４および  ＳＭ３１から選択されるパッセンジャー鎖改変パターン（図５Ａ〜５Ｆおよび６Ａ〜６Ｄでは単純に「Ｍ１２」、「Ｍ１４」、「Ｍ２４」、および「Ｍ３１」と呼び、ここではパッセンジャー鎖改変パターンが最初に列挙される改変パターンであり、それにガイド鎖改変パターンが続く、たとえば図５Ａ〜５Ｆおよび６Ａ〜６Ｄにおける「Ｍ１２−Ｍ４８」は、パッセンジャー鎖改変パターン「ＳＭ１２」およびガイド鎖改変パターン「Ｍ４８」を有する二本鎖を示す）、ならびに、Ｍ１７、Ｍ３５、Ｍ４８およびＭ８から選択されるガイド鎖改変パターンを有するＤｓｉＲＮＡを、Ａ５４９細胞環境中１．０ｎＭおよび０．１Ｍの濃度で、ヒトＡ５４９細胞中でのＭＹＣ阻害に関して（二重に）アッセイした。これらの実験の結果を、図５Ａ〜５Ｆ中にヒストグラムとして表した。上記の実施例４のように、概して、１９のＤｓｉＲＮＡ配列は、パッセンジャー鎖およびガイド鎖の両方の２´‐Ｏ‐メチル改変の度合いが増大するにつれてＭＹＣ阻害の効力を低減する傾向を示した。しかしながら、試験した多くのＤｓｉＲＮＡ配列について、パッセンジャー鎖およびガイド鎖の改変パターンの組み合わせは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＤｓｉＲＮＡが顕著なＭＹＣ阻害有効性を保持できたことが確認された。また、これらのＤｓｉＲＮＡのうちの一部（たとえばＭＹＣ−１７６９およびＭＹＣ−１９６５）が試験した最も高度に改変された状態においてでさえ明らかなＭＹＣ阻害有効性の減少をみせなかったことは、注目すべきことであった。したがって、このような活性型の改変ＤｓｉＲＮＡ配列は、ｉｎ  ｖｉｖｏで対象に治療的に投与される際、このようなＤｓｉＲＮＡを安定化でき、かつ／またはこのようなＤｓｉＲＮＡの免疫原性を低減できると考えられる改変パターンを有する。
【０７９７】
特定の実施形態では、ＭＹＣ  ｍＲＮＡにおける以下の配列を標的とする二本鎖核酸を選択した。
【表１１−１】
2015529467.tif 000790
【表１１−２】
2015529467.tif 000791
【表１１−３】
2015529467.tif 000792
【表１１−４】
2015529467.tif 000793
【０７９８】
さらに選択したＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的配列は、
【表１２−１】
2015529467.tif 000794
【表１２−２】
2015529467.tif 000795
【表１２−３】
2015529467.tif 000796
を含む。
【０７９９】
さらに選択したＭＹＣｍＲＮＡ標的配列は、
【表１３−１】
2015529467.tif 000797
【表１３−２】
2015529467.tif 000798
【表１３−３】
2015529467.tif 000799
を含む。
【０８００】
ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的のうちさらに特定して選択したものは以下を含む。
【表１４−１】
2015529467.tif 000800
【表１４−２】
2015529467.tif 000801
【０８０１】
ＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的のうちさらに特定して選択したものは以下を含む。
【表１５】
2015529467.tif 000802
【０８０２】
実施例６：ＭＹＣ‐標的化ＤｓｉＲＮＡの標的ｍＲＮＡミスマッチ耐性
７つの異なる天然のＭＹＣ  ｍＲＮＡ標的化ＤｓｉＲＮＡ（ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３、ＭＹＣ−１３６４、ＭＹＣ−１３７０、ＭＹＣ−１７１１、ＭＹＣ−１７６９、およびＭＹＣ−１９６５）が標的ｍＲＮＡ配列に関するミスマッチを組み込み、それにも関わらず強力な阻害活性を依然として保持することができるかどうかを試験した。図６Ａ〜６Ｄに示すように、以下のＤｓｉＲＮＡ二本鎖配列（表示されるようなパッセンジャー鎖−ガイド鎖改変パターンを有する）のＭＹＣノックダウン活性を試験した（太字は標的ＭＹＣ転写配列に関するミスマッチを形成する残基を表す）。
【化５７８】
2015529467.tif 000803
【化５７９】
2015529467.tif 000804
【化５８０】
2015529467.tif 000805
【０８０３】
図６Ａ〜６Ｄに示されるように、標的ＭＹＣ転写配列に関するミスマッチを有する上記の二本鎖の大部分はＭＹＣノックダウン活性を保持した。多くの場合、このようなノックダウンの効力は、天然の二本鎖配列で観察された効力と同様の効力であった。
【０８０４】
実施例７：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡのさらなる改変パターンの評価
３つのＭＹＣ標的化二本鎖配列（ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ−１７１１）の抗ＭＹＣ活性の頑強性を、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方の様々な改変を有する（上述のように、また使用した二本鎖改変パターンの概要に関しては図７Ａおよび７Ｈを参照、およびセンス鎖およびアンチセンス鎖の個々の改変パターンの概要は図７Ｉおよび７Ｊを参照）状態でさらに試験した。図７Ｋおよび７Ｌに示されるように、ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３およびＭＹＣ  １７１１二本鎖のそれぞれの高度に改変された多くの形態が強力な阻害活性を有すると確認され、このような新規に試験した改変二本鎖は「相５」でＭ１２−Ｍ４８改変二本鎖について観察される活性レベルを改善した（上に記載）。したがって、高度に改変されており、強力に活性な多くのＭＹＣ二本鎖が同定された。
【０８０５】
実施例８：ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡのＩｎ  ｖｉｖｏでの効力
特定の、活性ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡがヒトの肝細胞癌（ＨＣＣ）の２つの同所性モデル、Ｈｅｐ３ＢおよびＨｅｐＧ２内での腫瘍負荷を低減する能力を試験した。このような実験を実施するために、オスのヌードマウスに、５０％のマトリゲル中の２×１０６のＨｅｐ３Ｂ細胞（ＡＴＣＣ）を同所的に移植した。移植後１２日目に、ヒトαフェトプロテイン（ＡＦＰ）分析のために血清を収集した（ヒトＡＦＰはＨＣＣ腫瘍、たとえば、Ｈｅｐ３ＢおよびＨｅｐＧ２腫瘍の確立および進行を表す血清マーカーである）。動物をランダム化し、ＡＦＰレベルに基づき複数のグループに分けた（ｎ＝７／グループ）。ＤｓｉＲＮＡを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）（ここでは、ＥｎＣｏｒｅ−２０７２と名付けられたＬＮＰ製剤を使用した）の動物への投与を１３日目に開始した。動物は、５ｍｇ／ｋｇ、静脈内投与、１週間に３回×２（合計６回投与）で投与した。動物を、最後の投与から４８時間後（移植後２７日目）に屠殺した。腫瘍を肝臓から切り取り重量を測定した。図８に示されるように、試験した全てのＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡは、未処置の対照と比較して、顕著な腫瘍の減少を示した。特に、試験したＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡ  ＭＹＣ−６２２、ＭＹＣ−９５３、ＭＹＣ−１３６４、ＭＹＣ−１３７０、ＭＹＣ−１７１１およびＭＹＣ−１７６９の示された全ての改変形態は、ＰＢＳ処置の対照と比較して、６１％〜８１％の間の程度の腫瘍阻害を表した。これらのＨｅｐ３Ｂ腫瘍減少のレベルと一致して、ＡＦＰレベルの減少も観察された（図示せず）。明らかに、ヒトおよびマウスのＭＹＣの両方を標的とするＤｓｉＲＮＡならびにヒトのＭＹＣのみを標的とするＤｓｉＲＮＡは、腫瘍レベルの有効な減少を示しており、観察された効果がヒトＭＹＣのＤｓｉＲＮＡ媒介型標的化によるものであることが確認された。
【０８０６】
ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡがＨＣＣのＨｅｐＧ２モデルでの腫瘍負荷を低減する能力もまた試験した。これらの実験では、オスのヌードマウスに、５０％マトリゲル中の３×１０６のＨｅｐＧ２細胞（ＡＴＣＣ）を同所的に移植した。移植後１２日目に、ＡＦＰ分析用に血清を収集した。動物をランダム化し、ＡＦＰレベルに基づき複数のグループに分けた（ｎ＝１５／グループ）。ＤｓｉＲＮＡを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）（ここでは、ＥｎＣｏｒｅ−２０７２と名付けられたＬＮＰ製剤を使用した）の動物への投与を１３日目に開始した。動物は、５ｍｇ／ｋｇ、静脈内投与、１週間に３回×２（合計７回）で投与した。動物を、最後の投与から４８時間後（移植後２９日目）に屠殺した。肝臓から腫瘍を切り取り重量を測定した。図９に示されるように、ＨｅｐＧ２腫瘍負荷の顕著な減少が、β‐２カテニン標的化ＤｓｉＲＮＡ（ＨｅｐＧ２はβカテニン依存性であると知られる）またはＭＹＣ−６２２  ＤｓｉＲＮＡのいずれかを投与したマウスで観察された。ここで、腫瘍低減の度合いを、ＨＰＲＴ１ハウスキーピング遺伝子を標的とするＤｓｉＲＮＡと比較し、これにより、ＭＹＣ−６２２  ＤｓｉＲＮＡで処置したマウスにおいて腫瘍負荷の３９％が顕著に低下したことが示された。腫瘍レベルにおけるこのような減少は、ＡＦＰレベルにおいて観察された減少と再び相関した（データ不図示）。
【０８０７】
したがって、確立された腫瘍のＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡによる処置は、２つの異なる肝臓癌モデルにおいて腫瘍負荷およびＡＦＰレベルを低減した（ここでは、Ｈｅｐ３ＢおよびＨｅｐＧ２腫瘍を、当業者が認識したヒトＨＣＣモデルとして使用した）。
【０８０８】
Ｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＹＣ−１７１１二本鎖のノックダウンの効力を、用量依存性に関してさらに調査した。このような実験では、Ｈｅｐ３Ｂ同所性肝臓腫瘍を有するマウスにＰＢＳを、または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ２１４１）中に製剤化されたＭＹＣ−１７１１−Ｍ１２／Ｍ４８  ＤｓｉＲＮＡを用量１、３、５、１０および１５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。２日後、マウスを屠殺して腫瘍ＲＮＡを単離し、ｑＰＣＲにより分析した。図１０に示されるように、ＭＹＣ  ｍＲＮＡ発現は全ての用量で有効にノックダウンされ、観察されたノックダウンの度合いは、１ｍｇ／ｋｇ用量で約５０％〜５ｍｇ／ｋｇ以上の全ての用量で約７５％以上の範囲である。したがって、ｉｎ  ｖｉｖｏのＭＹＣ  ｍＲＮＡノックダウンの用量依存性がＭＹＣ−１７１１二本鎖について示された。
【０８０９】
ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡによるｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＹＣ発現のノックダウンの持続期間も、Ｈｅｐ３Ｂ同所性肝臓腫瘍を有するマウスにおいて評価した。このようなマウスにＰＢＳを、または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ２１４１）中に製剤化されたＭＹＣ−１７１１−Ｍ１２／Ｍ４８  ＤｓｉＲＮＡを用量１および５ｍｇ／ｋｇで静脈内に投与した。単回投与後４８時間、９６時間および１６８時間の時点で、マウスを屠殺して腫瘍ＲＮＡを単離し、ｑＰＣＲにより解析した。ＭＹＣ  ｍＲＮＡ発現は１ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇの用量のＭＹＣ−１７１１二本鎖いずれでも、複数日にわたり効率よくノックダウンされた。この時、１ｍｇ／ｋｇ用量では２日目および４日目にＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルは約４０％の低下を示し、一方５ｍｇ／ｋｇ用量では２日目、４日目および１６８時間目にそれぞれＭＹＣ  ｍＲＮＡレベルは約６０％の低下、約５０％の低下および約４０％の低下を示した。したがって、ＭＹＣ−１７１１二本鎖はｉｎ  ｖｉｖｏにて持続性のあるノックダウン効果を示し、このような効果の持続性はまた用量依存性であった。
【０８１０】
さらなる実験では、ＤｓｉＲＮＡ製剤のレベルを０．５ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、〜２ｍｇ／ｋｇ、〜５ｍｇ／ｋｇへと進行させながら、Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍の処置の用量依存性を観察した（図１２）。具体的には、Ｈｅｐ３Ｂ同所性肝臓腫瘍を有するマウスにＰＢＳを、または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ２１４１）中に製剤化されたＨＰＲＴ１−７１６−Ｍ２１／Ｍ３６もしくはＭＹＣ−１７１１−Ｍ１２／Ｍ４８  ＤｓｉＲＮＡを、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ用量で１週間に３回（ＴＩＷ、合計７回投与）で、または１ｍｇ／ｋｇを１週間に２回（ＢＩＷ、合計６回）で、静脈内に投与した。最終投与の４８時間後に、マウスを屠殺して腫瘍の重量を測定した。図１２に示されるように、腫瘍の増殖は全ての用量のＭＹＣ−１７１１  ＤｓｉＲＮＡにより顕著に阻害されたが、ＨＰＲＴ１  ＤｓｉＲＮＡでは阻害されなかった。特に、平均して、０．５ｍｇ／ｋｇのＴＩＷ  ＭＹＣ−１７１１（Ｍ１２／Ｍ４８）では腫瘍の重量が約３５〜４０％減少したことが観察され、１ｍｇ／ｋｇのＴＩＷ  ＭＹＣ−１７１１  （Ｍ１２／Ｍ４８）では腫瘍の重量が約５５％減少したことが観察され、３ｍｇ／ｋｇのＴＩＷ  ＭＹＣ−１７１１（Ｍ１２／Ｍ４８）では腫瘍の重量が約６０％減少したことが観察され、５ｍｇ／ｋｇのＴＩＷ  ＭＹＣ−１７１１（Ｍ１２／Ｍ４８）では腫瘍の重量が約７５〜８０％減少したことが観察され、および１ｍｇ／ｋｇのＢＩＷ  ＭＹＣ−１７１１  （Ｍ１２／Ｍ４８）では腫瘍の重量が約５５％低減したことが観察された。したがって、ｉｎ  ｖｉｖｏのＨｅｐ３Ｂ同所性肝臓モデルでの腫瘍重量の低減におけるＭＹＣ標的化二本鎖の抗腫瘍作用は、顕著でありかつ用量依存性であることが観察された。
【０８１１】
ＭＹＣ−１７１１二本鎖を、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＹＣノックダウン効果および／または腫瘍の低減を保持しながら過度の２´Ｏ‐メチル化を有する能力に関して試験した。Ｈｅｐ３Ｂ同所性の肝臓の腫瘍を有するマウスにＰＢＳを、または脂質ナノ粒子（ここではＬＮＰ２１４１）中で製剤化された以下のＭＹＣ−１７１１  ＤｓｉＲＮＡ：ＭＹＣ−１７１１−Ｍ１２−Ｍ４８、ＭＹＣ−１７１１−Ｍ３２−Ｍ４８、ＭＹＣ−１７１１−Ｍ５０−Ｍ７３およびＭＹＣ−１７１１−Ｍ５０−Ｍ４８を１ｍｇ／ｋｇで（ＢＩＷ、合計５回の投与）、静脈内投与した。最終的な投与の４８時間後に、マウスを屠殺して腫瘍の重量を測定した。図１３に示されるように、Ｈｅｐ３Ｂの腫瘍の増殖は、試験したすべての２´‐Ｏ‐メチル改変ＭＹＣ‐１７１１ＤｓｉＲＮＡにより顕著に阻害された。
【０８１２】
改変型ＭＹＣ標的化二本鎖の寸法および頻度を変更する抗腫瘍作用に関する影響を試験した。Ｈｅｐ３Ｂ同所性肝臓腫瘍を有するマウスにＰＢＳを、または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ２１４１）中で製剤化されたＨＰＲＴ１−７１６-Ｍ２１／Ｍ３６もしくはＭＹＣ−１７１１−Ｍ５０／Ｍ４８  ＤｓｉＲＮＡを１、３、もしくは５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に投与した（３ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇの製剤は１週間に２回（ＢＩＷ、合計５回の投与）または１週間に１回（ＱＷ、合計３回の投与）のいずれかで投与し、１ｍｇ／ｋｇの製剤は１週間に２回（ＢＩＷ）のみで投与した）。最終的な投与の４８時間後に、マウスを屠殺して腫瘍の重量を測定した。図１４に示されるように、腫瘍の増殖は、すべての用量でのＭＹＣ−１７１１  ＤｓｉＲＮＡにより顕著に阻害されるが（（＊＊、Ｐ＜０．０１；＊＊＊、Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１）、ＨＰＲＴ１  ＤｓｉＲＮＡでは阻害されなかった。したがって、低用量のＤｓｉＲＮＡの投与はｉｎ  ｖｉｖｏでのＨｅｐ３Ｂの腫瘍の寸法の低減に非常に有効であった。
【０８１３】
また、いずれかの薬剤を個々に投与した場合、Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍含有マウスへのＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡの投与は、ソラフェニブで観察されるものよりも腫瘍負荷の減少を多く誘導することが観察され、かつソラフェニブおよびＭＹＣ標的化ＤｓｒＲＮＡの両方をＨｅｐ３Ｂ腫瘍モデルに投与した場合、ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡは腫瘍負荷の有効な阻害剤であることが観察され、実際にこのような組み合わせは十分に忍容性を示し、このような併用療法で処置したマウスにおいて顕著な体重減少または脾臓もしくは肝臓の重量の低下はみられない（データ不図示）。Ｈｅｐ３Ｂ腫瘍含有マウスへのＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡの投与はまた、用量依存型形式でこのような腫瘍中のＭＹＣ転写物およびタンパク質のレベル、ならびにＬＤＨＡタンパク質（ＬＤＨＡは、ＭＹＣシグナリング経路におけるＭＹＣのダウンストリームである）のレベルを低下することが確認された。またＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡは、ＰＥＧ  ＩｇＭ誘導に関するアッセイで同定されたように、免疫賦活性能力が低いことが確認されており、ここで、ＬＮＰ製剤ＥｎＣｏｒｅ  ２０７２中で製剤化されたすべてのＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡは、ＰＢＳで処置した動物よりも多い度合いのＰＥＧ  ＩｇＭを誘導せず、さらに免疫賦活性であるよう設計されたＬＮＰ中に製剤化された場合でさえも、大部分のＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡは、モック処置した動物と比較してＰＥＧ  ＩｇＭの誘導を示さなかった（データ不図示）。また、ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡのＩＣ５０値を計算し、Ｈｅｐ３ＢおよびＨｅｐａ  １‐６細胞の両方で５〜５０ｐＭの範囲であることを観察した。
【０８１４】
ＭＹＣ標的化二本鎖が非肝臓腫瘍の増殖を低減する能力も試験した。１つのこのような実験では、皮下ＨＴ−２９腫瘍を有するマウスにＰＢＳを、または脂質ナノ粒子（これらの実験ではＬＮＰ２１６３）中で製剤化されたＨＰＲＴ１−７１６−Ｍ２１／Ｍ３６またはＭＹＣ−６２１−Ｍ１２／Ｍ１２  ＤｓｉＲＮＡを１０ｍｇ／ｋｇで１週間に１回、合計２回のＤｓｉＲＮＡ投与により、静脈内に投与した。処置期間の最中および終わりに、腫瘍の寸法を測定した。図１５に示されるように、ＨＴ−２９（結腸癌モデル）腫瘍増殖は、ＭＹＣ−６２１  ＤｓｉＲＮＡにより顕著に阻害された（＊，Ｐ＜０．０５）が、ＨＰＲＴ１  ＤｓｉＲＮＡによっては阻害されなかった。別のこのような実験では、皮下ＭＩＡ  ＰａＣａ−２（脾臓癌）腫瘍を有するマウスにＰＢＳを、または脂質ナノ粒子中のＨＰＲＴ１−７１６−Ｍ２１／Ｍ３６もしくはＭＹＣ−６２１−Ｍ１２／Ｍ１２  ＤｓｉＲＮＡ（ＬＮＰ２１６３；１０ｍｇ/ｋｇ/１週間に１回、合計３回の投与）を静脈内に投与した。処置期間の最中および最後に、腫瘍の寸法を測定した。図１６に示されるように、腫瘍の増殖は、ＭＹＣ−６２１  ＤｓｉＲＮＡにより顕著に阻害された（＊＊＊，Ｐ＜０．００１）。
【０８１５】
したがって、ＭＹＣに対して有効なＤｓｉＲＮＡであって、Ｈｅｐ３Ｂ細胞内に遺伝子導入した場合ピコモル濃度のｍＲＮＡノックダウン活性を有するＤｓｉＲＮＡを同定した。一方で、多くのこのようなＤｓｉＲＮＡは２´‐Ｏ‐メチル基で改変された場合、ｉｎ  ｖｉｖｏで低度の免疫賦活性を有することが観察された。さらに、ＬＮＰ製剤化ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡは、ヒトの肝細胞癌（ここでは、Ｈｅｐ３ＢおよびＨｅｐＧ２腫瘍モデル）のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて有効であることが見出され、ここでＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡは、確立された同所性ＨｅｐＧ２およびＨｅｐ３Ｂ腫瘍の顕著な腫瘍低減をもたらすことが確認された。また、腫瘍由来のＭＹＣ  ｍＲＮＡのノックダウンが抗腫瘍活性に十分であることが確認され、かつこのような活性は用量依存性であり複数の異なる種類の腫瘍において、複数の異なるＤｓｉＲＮＡで観察されることが確認された。さらに、低減したＭＹＣ  ｍＲＮＡ、Ｍｙｃタンパク質およびダウンストリームＬＤＨＡタンパク質のレベルは、このような抗腫瘍活性と相関した。このような処置はまた、ソラフェニブとの組み合わせで十分な忍容性があることが観察された。したがって、ＭＹＣ標的化ＤｓｉＲＮＡはｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＹＣ  ｍＲＮＡノックダウン活性を示し、かつＨｅｐＧ２、Ｈｅｐ３Ｂ、ＨＴ−２９およびＭＩＡ  ＰａＣａ２同所性腫瘍モデルにおける顕著な抗腫瘍性活性を示した。このような結果は、進行したＨＣＣを有する患者における、従来より「新薬とすることができない（ｕｎｄｒｕｇｇａｂｌｅ）」標的であるＭＹＣに対するＤｓｉＲＮＡ分子の臨床評価に関する理論的根拠を提供する。
【０８１６】
実施例９：適応症
ＭＹＣ研究における現在の知識により、ＭＹＣ活性をアッセイするための方法、ならびに研究、診断および治療利用のために、ＭＹＣ発現を制御可能な化合物が必要とされることが示される。本明細書で記述したように、本発明の核酸分子を、ＭＹＣレベルに関連した疾患状態を診断するために、アッセイで使用可能である。さらに、核酸分子を、ＭＹＣ誤調節、レベルなどに関連する疾患状態を処置するために使用可能である。
【０８１７】
ＭＹＣ発現調節に関連可能な特定の疾患および障害には、限定するものではないが、単独または他の免疫関連障害（たとえば炎症性障害もしくは自己免疫障害）などの他の治療との組み合わせで、癌および／または増殖性疾患、状態または障害、ならびに細胞または組織中のＭＹＣのレベルに関連する、または応答しうる他の疾患、状態または障害が含まれる。ＭＹＣ発現調節に関連した特定の変性および疾患状態には、限定するものではないが、例えば腎臓癌、乳癌、肺癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、食道癌、中咽頭癌および膵臓癌が含まれる。
【０８１８】
ゲムシタビンおよびシクロホスファミドは、本発明の核酸分子（例えばＤｓｉＲＮＡ分子）と組み合せ可能、または併用可能な化学治療剤の非限定例である。同様に、当業者は、抗癌化合物および治療のような他の薬剤を本発明の核酸分子（例えばＤｓｉＲＮＡ分子）と容易に混合でき、したがってこの混合物が本発明の範囲内であることを認識するものである。このような化合物および治療は、本技術分野で公知であり（たとえば、Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １  ａｎｄ  ２、ｅｄｓ  Ｄｅｖｉｔａ，Ｖ．Ｔ．，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｓ．、ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＵＳＡを参照のこと）、限定するものではないが、抗葉酸類、フルオロピリミジン類、シタラビン、プリン類似体、アデノシン類似体、アムサクリン、トポイソメラーゼＩ阻害剤類、アントラピラゾール類、レチノイド類、ブレオマイシン、アントラサイクリン類、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシンのような抗生物質、ヘキサメチルメラミン、デカルバジン、１−アスペルギナーゼ、白金類似体、窒素マスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、イホスファミド、４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、ニトロソウレア、チオテパのようなアルキル化剤、ビンカアルカロイド類、エピポドフィロトキシン類、タキソールのような植物由来化合物、タモキシフェン、放射線治療、手術、栄養補助剤、遺伝子治療、３Ｄ−ＣＲＴのような放射療法、リシン（ｒｅｃｉｎ）などの免疫毒性療法、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎのようなモノクローナル抗体、タルセバ、ソラフェニブ、ｏｂａｔｏｃｌａｘ、ａｐｏｇｏｓｓｙｐｏｌｏｎｅ、およびｎａｖｉｔｏｃｌａｘなどの他の療法などが含まれる。併用療法では、本発明の核酸を２つの方法のうち１つで調製する。第一に、薬剤を、静脈内投与用溶液中に、リポソーム内にカプセル封入した本発明の核酸とイホスファミドとの混合などのように、核酸と化学療法剤との調製において物理的に組み合わせる。ここで、両方の薬剤は、治療的に効果的な濃度で存在する（例えば１０００〜１２５０ｍｇ／ｍ２／日を伝達する溶液中のイホスファミドと、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日を伝達する同一の溶液中の本発明のリポソーム結合核酸）。あるいは、これらの薬剤を、それぞれの効果的な用量で別々に、しかし同時にまたは連続して投与する（例えば、１０００〜１２５０ｍｇ／ｍ２／ｄのイホスファミドと０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の本発明の核酸）。
【０８１９】
当業者は、本明細書で記述した疾患および状態を治療するために使用する他の化合物および治療が、同様に本発明の核酸分子（例えばｓｉＮＡ分子）と混合可能であり、したがって本発明の範囲内であることを理解するものである。
【０８２０】
実施例１０：ＤｓｉＲＮＡに関する血清安定性
ＤｓｉＲＮＡ剤の血清安定性を、３７℃にて種々の時間間隔（〜２４時間）の間、５０％ウシ胎児血清におけるＤｓｉＲＮＡ剤のインキュベーションを介して評価する。血清を抽出し、核酸を、２０％非変性ＰＡＧＥ上で分離し、Ｇｅｌｓｔａｒ染色によって可視化可能である。ヌクレアーゼ分解からの保護の相対レベルを、（任意に修飾ありおよびなしで）ＤｓｉＲＮＡに関して評価する。
【０８２１】
実施例１１：ＭＹＣ遺伝子発現の下方制御を評価するための、追加的な細胞培養モデルの利用
抗−ＭＹＣ剤での処置の後のＭＹＣ媒介効果を見るために、種々の評価項目が細胞培養モデルで使用されてきた。表現型評価項目には、細胞増殖の阻害、ＲＮＡ発現、およびＭｙｃタンパク質発現の低減が含まれる。ＭＹＣ変異は特定の腫瘍細胞の増殖の増大に直接関連するため、細胞培養アッセイに関する増殖評価項目が、スクリーニングとして使用できる。本評価項目を測定可能な種々の方法が存在する。ＤｓｉＲＮＡでの細胞の処置後、細胞を増殖させ（概して５日間）、その後細胞生存能力、ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の細胞ＤＮＡ内への取込みおよび／または細胞密度を測定する。細胞密度のアッセイは、（Ｓｙｔｏ（登録商標）１３またはＣｙＱｕａｎｔ（登録商標）のような）市販されている蛍光核酸鎖を用いることによって、９６−ウェルフォーマットで実施できる。二次的確認評価項目として、Ｍｙｃタンパク質発現のレベルにおけるＤｓｉＲＮＡ−媒介型の減少を、ＭＹＣに特異的なウェスタンアッセイを用いて評価できる。以下は、このようなアッセイ（たとえば、Ｍｃｌ−１発現の検出のために、Ｓｃｈｕｌｚｅ−Ｂｅｒｇｋａｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００６，  ６：２３２，に記載されるように実施されるアッセイ）に使用する例示的な細胞系統である：Ａ５４９、Ｈ１２９９、ＨｅｐＧ２、ＳＮＵ３９８、Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ１９６、ＮＣＩ−Ｈ１９７５、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＮＣＩ−Ｈ４４１、Ｐａｎｃ−１、ＭＩＡ  ＰａＣａ、ＢｘＰＣ３、ＤＵ−１４５、ＶＣａＰ、ＭＣＦ−７、Ｕ９３７、Ｋ５６２、ＨｅＬａ、またはＴ９８Ｇ細胞。
【０８２２】
実施例１２：ＭＹＣ誤調節の追加的なマウスモデルにおける、抗ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡ有効性の評価
ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイから選択した抗−ＭＹＣ  ＤｓｉＲＮＡをさらに、例えば異種移植片および上記に引用したような他の動物モデルを含む、マウスモデルにてさらに試験できる。上述のように、異種移植片アッセイに使用される例示的であり適切な細胞系統は、ＨＴ１０８０、ＨＣＴ１１６、ＳＷ４８０、ＳＷ６２０、Ｈｅｐ３Ｂ、Ｍ１４、ＪＲ８、ＰＬＦ２、ＬＬＣ１、ＬＮＣａＰ、ＰＣ３、ＳＵＭ１５９、ＭＤＡＭＢ−２３１、２２Ｒｖ１、５１８Ａ２、ＭＨＣＣ９７、Ａ５４９、Ｈ１２９９、ＨｅｐＧ２、ＳＮＵ３９８、ＨｕＨ７、ＮＣＩ−Ｈ１９６、ＮＣＩ−Ｈ１９７５、ＨＴ２９、ＭＫＮ−４５、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＮＣＩ−Ｈ４４１、Ｐａｎｃ−１、ＭＩＡ  ＰａＣａ−２、ＢｘＰＣ３、ＤＵ−１４５、Ｍ２１８２、ＶＣａＰ、ＯｖＣａｒ−３、ＭＣＦ−７、Ｕ９３７、Ｋ５６２、ＨｅＬａ、Ｔ９８Ｇ、またはＳＨＰ−７７を含む。１つの例において、誤調節された（例えば上昇した）ＭＹＣレベルを有するマウスに、流体力学尾静脈注射および／または脂質ナノ粒子系の送達様式を介して、本発明のＤｓｉＲＮＡ剤を投与する。３〜４匹のマウス／群（試験した特定のＤｓｉＲＮＡ剤に基づき分割）に、５０μｇまたは２００μｇのＤｓｉＲＮＡを注射する。ＭＹＣ  ＲＮＡのレベルを、ＲＴ−ｑＰＣＲを用いて評価する。さらに、またはあるいは、ＭＹＣのレベル（例えばＭｙｃタンパク質レベルおよび／または癌細胞／腫瘍形成、増殖または拡散）を、本技術分野で認識される方法を用いて評価でき、またはＭＹＣの誤調節に関連する表現型（例えば腫瘍形成、増殖、転移など）を、（任意にＭＹＣ転写産物またはＭｙｃタンパク質レベルの測定のための代わりとして）モニタする。このような動物モデルにおける活性ＤｓｉＲＮＡを、標準の化学療法との組み合わせで続けて試験可能でもある。
【０８２３】
実施例１３：診断利用
本発明のＤｓｉＲＮＡ分子を、種々の適用、例えば臨床、工業、環境、農業および／または研究設定にて、分子標的（例えばＲＮＡ）の同定などにおける種々の診断への適用で使用できる。ＤｓｉＲＮＡ分子のこのような診断利用には、再構築ＲＮＡｉ系を利用すること、例えば、細胞溶解物または部分的に精製した細胞溶解物を用いることが含まれる。本発明のＤｓｉＲＮＡ分子は、疾患細胞内の遺伝的ドリフトおよび変異を試験するための診断ツールとして使用できる。ＤｓｉＲＮＡ活性と、標的ＭＹＣ  ＲＮＡの構造との間の近い関係により、標的ＭＹＣ  ＲＮＡの塩基対形成と三次元構造を変化させる、ＭＹＣ分子の領域における変異の検出が許容される。本発明にて記述された多重ＤｓｉＲＮＡ分子を用いることによって、ＲＮＡ構造ならびにｉｎ  ｖｉｔｒｏかつ細胞および組織内での機能に対して重要である、ヌクレオチド変化をマッピングできる。標的ＭＹＣ  ＲＮＡのＤｓｉＲＮＡ分子での開裂を、遺伝子発現を阻害し、ＭＹＣ−関連疾患または障害の進行における、特定の遺伝子産物の役割を定義するために使用できる。この様式において、他の遺伝的標的を、疾患の重要なメディエータとして定義可能である。これらの実験は、併用療法（例えば異なる遺伝子を標的とした多重ＤｓｉＲＮＡ分子、公知の低分子阻害剤と結合したＤｓｉＲＮＡ分子、またはＤｓｉＲＮＡ分子および／もしくは他の化学的もしくは生物学的物質と組み合わせでの断続的な治療）の可能性を提供することによって、疾患進行のよりよい治療を導きうる。本発明のＤｓｉＲＮＡ分子のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの他の利用は、本技術分野でよく知られており、疾患または関連状態と関連したＲＮＡの存在の検出が含まれる。このようなＲＮＡは、標準の方法、例えば蛍光共鳴放射移動（ＦＲＥＴ）を用いて、ＤｓｉＲＮＡでの治療後、開裂産物の存在を測定することによって検出する。
【０８２４】
特定の例において、標的ＭＹＣ  ＲＮＡの野生型または変異体または多型体の形態のみを開裂するＤｓｉＲＮＡ分子をアッセイのために使用する。第１のＤｓｉＲＮＡ分子（すなわち、標的ＭＹＣ  ＲＮＡの野生型形態のみを開裂するもの）を使用して、試料に存在する野生型ＭＹＣ  ＲＮＡを同定し、第２のＤｓｉＲＮＡ分子（すなわち標的ＲＮＡの変異体または多型体の形態のみを開裂するもの）を使用して、試料中の変異体または多型体のＭＹＣ  ＲＮＡを同定する。反応対照として、野生型および変異体または多型体のＭＹＣ  ＲＮＡの両方の合成基質が、両方のＤｓｉＲＮＡ分子によって開裂され、反応中の相対ＤｓｉＲＮＡ有効性と、「非標的化」ＭＹＣ  ＲＮＡ種の開裂がないことを実証する。合成基質からの開裂産物がまた、試料集合中の野生型および変異体ＭＹＣ  ＲＮＡの解析のために、サイズマーカーを産出するために作用する。したがって、各解析は、２つのＤｓｉＲＮＡ分子、２つの基質および１つの未知の試料を必要とし、これにより６つの反応を組み合わせる。開裂産物の存在を、各ＭＹＣ  ＲＮＡの全長および開裂断片を、ポリアクリルアミドゲルの１つのレーン内で解析可能であるように、ＲＮａｓｅ保護アッセイを用いて決定する。変異体または多型体のＭＹＣ  ＲＮＡの発現、および標的細胞内のＭＹＣ−関連表現型の変化の推定リスクへの洞察を得るために結果を定量化することは必ずしも必要ではない。そのタンパク質産物が、表現型（すなわち疾患相関／関連）の発達において暗示されるＭＹＣ  ｍＲＮＡの発現が、リスクを確立するのに十分である。比較可能な特定の活性のプローブを、両方の転写産物のために使用する場合、ＭＹＣ  ＲＮＡレベルの定性的比較が適切であり、初期診断のコストを減少させる。より高い変異体または多型体の形態の野生型に対する比が、ＭＹＣ  ＲＮＡレベルを定性的または定量的に比較するかどうかの高いリスクと相関する。
【０８２５】
本明細書で言及されたすべての特許および公開公報は、本発明が属する技術分野の当業者のレベルの指標である。本明細書で引用したすべての参考文献は、各参考文献が、個々に全体にわたり援用されたものと同様の程度まで、参考文献により援用される。
【０８２６】
当業者は、本発明が目的を実行し、かつ、言及した結果および利点ならびにその中の固有のものを得るために適合されていることを容易に認識するものである。好ましい実施形態の代表例として本明細書に記載の方法および組成物は例示的なものであり、本発明の範囲を限定よう意図するものではないい。上記方法および組成物の変化および他の利用が当業者に対して起こるものであり、これらは本発明の趣旨の範囲内に含まれ、かつ特許請求の範囲により定義される。。
【０８２７】
種々の置換および改変を、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく本明細書で開示された本発明に対して実施可能であることが、当業者に簡単に理解されるであろう。したがって、このような追加的な実施形態は、本発明および以下の特許請求の範囲内である。本発明は、ＲＮＡｉ活性を媒介するために、改善された活性をもつ核酸構築物を産出することを目的とする、本明細書で記述した化学的改変の種々の組み合わせおよび／または置換を試験することを当業者に教示する。このような改善された活性は、改善された安定性、改善されたバイオアベイラビリティ、および／またはＲＮＡｉを媒介する細胞応答の改善された活性を含みうる。したがって、本明細書で記述した特定の実施形態は、限定ではなく、かつ本明細書で記述した改変の特定の組み合わせが改善されたＲＮＡｉ活性を持つＤｓｉＲＮＡ分子を同定するために、過度に実験を行うことなく試験できることを当業者は容易に理解するものである。
【０８２８】
本明細書で例示的に記述された発明は、本明細書で特に開示されていない、任意の要素または要素類、制限または制限類なしに好適に実施可能である。したがって、例えば、本明細書中の各例において、任意の語句「含む」、「から本質的になる」および「からなる」は、他の２つの語句いずれかと置き換えても良い。使用された語句および表現は、記述のために使用される語句であり、限定を意味するものではなく、、かつ、示し、記述した特徴の任意の等価物またはそれらの一部を除外するこのような語句および表現の利用において意図しておらず、種々の改変が、請求された本発明の目的の範囲内である可能性が認識される。したがって、本発明が、好ましい実施形態によって特に開示されているが、本明細書で開示された概念の任意の特徴、改変およびバリエーションが、当業者によって変更されてもよく、このような改変およびバリエーションが、記述ならびに付随する特許請求の範囲によって定義されたように、本発明の範囲内であると考慮されることが理解されるべきである。
【０８２９】
さらに、本発明の特徴または態様が、Ｍａｒｋｕｓｈグループまたは他の代替グルーピングの観点で記述される場合、当業者は、それにより本発明がＭａｒｋｕｓｈグループまたは他のグループの任意の個々のメンバー、またはメンバーのサブグループに関して記述もされることを理解するものである。
【０８３０】
本発明を記述する文脈中（特に以下の特許請求の範囲の文脈中）語句「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」ならびに同様の指示対象の使用は、本明細書で他の指摘がある、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数および複数両方をカバーすると理解されるべきである。語句「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「持つ（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、他に言及しない限り、無制限語句として構築されるべきである（すなわち、「含むが、限定されない」と意味する）。本明細書の値の範囲の記載は、本明細書で他の指摘がない限り、その範囲内にあるそれぞれ別々の値を個々に指す単なる省略表現方法を意図するものであり、それぞれ別々の値は、本明細書で個々に記載されるものとして、本明細書内に組み込まれる。本明細書で記述されたすべての方法を、本明細書中他の指摘がない限り、または文脈において明確に他に矛盾しない限り、好適な順番で実施できる。本明細書で定義される任意かつすべての例、または例示的言語（「たとえば「のような」）の利用は、単に本発明をよりよく例示することを意図するものであり、他に請求しない限り、本発明の範囲に限定を課すものではない。明細書中言及がないものは、本発明の実施に必須であるような、任意の非請求要素を表すとして構成されるべきである。
【０８３１】
本発明の実施形態が本明細書で記述されており、本発明を実行するために本発明者等に公知の最適な様式が含まれる。これらの実施形態のバリエーションが、上記の記述を読むことにより当業者に明確になり得る。
【０８３２】
本発明者らは、当業者が、適切にこのようなバリエーションを利用することを予測しており、本発明に関して、本明細書で特に記述したもの以外で実施されるべきと意図している。したがって、本発明は、適用可能な法律によって許可されるように、本明細書に付随する特許請求の範囲にて記載される対象のすべての改変および等価物を含む。さらに、全ての可能性あるそれらのバリエーションにおける上記要素の任意の組み合わせが、本発明で他に指摘されない限り、または文脈によって明確に矛盾しない限り、本発明に含まれる。当業者は、単なる通常の実験を使用して、本明細書で記述される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または究明することが出来る。このような等価物は、以下の特許請求の範囲に含まれると意図される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図２Ｈ】
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【図３Ａ−１】
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【図３Ａ−２】
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【図３Ｂ−１】
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【図３Ｂ−２】
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【図３Ｃ−１】
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【図３Ｄ−１】
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【図３Ｄ−２】
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【図３Ｅ−１】
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【図３Ｆ−１】
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【図３Ｇ−１】
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【図３Ｈ−１】
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【図４Ａ−１】
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【図４Ｂ−１】
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【図４Ｃ−１】
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【図４Ｄ−１】
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【図４Ｅ−１】
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【図４Ｆ−１】
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【図４Ｇ−１】
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【図４Ｈ−１】
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【図５Ａ−１】
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【図５Ｂ−１】
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【図５Ｃ−１】
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【図５Ｄ−１】
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【図５Ｅ−１】
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【図５Ｆ−１】
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【図６Ａ−１】
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【図６Ｂ−１】
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【図６Ｃ−１】
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【図６Ｄ−１】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図７Ｈ】
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【図７Ｉ】
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【図７Ｊ】
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【図７Ｋ−１】
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【図７Ｋ−２】
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【図７Ｌ−１】
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【図７Ｌ−２】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図３Ｃ−２】
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【図３Ｅ−２】
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【図３Ｆ−２】
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【図３Ｇ−２】
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【図３Ｈ−２】
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【図４Ａ−２】
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【図４Ｂ−２】
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【図４Ｃ−２】
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【図４Ｄ−２】
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【図４Ｅ−２】
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【図４Ｆ−２】
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【図４Ｇ−２】
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【図４Ｈ−２】
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【図５Ａ−２】
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【図５Ｂ−２】
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【図５Ｃ−２】
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【図５Ｄ−２】
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【図５Ｅ−２】
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【図５Ｆ−２】
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【図６Ａ−２】
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【図６Ｂ−２】
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【図６Ｃ−２】
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【図６Ｄ−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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