(57)【要約】  本明細書では、生体試料中のＨＰＡ軸機能マーカーを検出するための方法が提供される。該方法は、患者がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定するために用いることができる。ＨＰＡマーカーは、ゲノムマーカー、非ゲノムマーカーまたはそれらの組合せであり得る。ＨＰＡマーカーの種類に応じて、検出方法は、例えば免疫測定法または遺伝子型決定であり得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定し、前記治療に適した候補であると同定された対象を治療するための方法であって、
（ａ）前記対象由来の生体試料を用意するステップ；および
（ｂ）視床下部−下垂体−副腎（「ＨＰＡ」）軸機能マーカーを検出するステップ、
ここで、前記対象がＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有し、前記マーカーが存在することにより、前記対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であることが示される；および
（ｃ）ステップ（ｂ）において適した候補であることが同定された対象を、Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いて治療するステップ
を含む方法。
【請求項２】
ＨＰＡ軸機能マーカーが、配列番号１（ＬＨＰＰ  ｒｓ７０８８４１８）を含むヌクレオチド配列および配列番号２（ＡＫＲＩＤ１  ｒｓ１７１６９５２１）を含むヌクレオチド配列；ＮＲ３Ｃ１遺伝子型を含むヌクレオチド配列；ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＮＲ３Ｃ１遺伝子型が、配列番号３（ｒｓ１０４８２６７２）および配列番号４（ｒｓ１７１００２３６）からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
マーカーが遺伝子型決定によって決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
遺伝子型決定が、
（ａ）マーカーを含む核酸を増幅するステップ；および
（ｂ）増幅された核酸を検出し、それにより、マーカーを検出するステップ
を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
マーカーが配列決定によって検出される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定し、前記治療に適した候補であると同定された対象を治療するための方法であって、
（ａ）前記対象由来の生体試料を用意するステップ；および
（ｂ）視床下部−下垂体−副腎（「ＨＰＡ」）軸機能マーカーを検出するステップ、
ここで、前記対象がＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有し、前記ＨＰＡ軸機能マーカーが正常対象試料における前記マーカーの分布の約６０パーセンタイルを超えるレベルで存在する場合に、前記対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適する；および
（ｃ）ステップ（ｂ）において治療に適すると同定された対象を、Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いて治療するステップ
を含む方法。
【請求項８】
ＨＰＡ軸機能マーカーが、正常対象試料におけるＨＰＡ軸機能マーカーの分布の約６５、７０、７５、８０、８５、９０および９５パーセンタイルからなる群から選択されるパーセンタイルを超えるレベルで存在する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
マーカーが、ＡＶＰ、コペプチン、コルチゾール、コルチゾン、ＡＣＴＨ、コルチゾールの肝臓代謝産物、コルチゾンの肝臓代謝産物、ＣＲＨ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
コペプチンが血漿コペプチンである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＡＶＰが血漿ＡＶＰである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
コルチゾールの肝臓代謝産物が、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾール、アルファ−コルトール、ベータ−コルトール、アルファ−コルトール酸、ベータ−コルトール酸、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
コルチゾンの肝臓代謝産物が、テトラヒドロコルチゾン、コルトロン、コルトロン酸、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
生体試料が、核酸を含有する試料、血清、血漿、血液、尿および唾液からなる群から選択される、請求項１または７に記載の方法。
【請求項１５】
生体試料が尿である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
マーカーが、コルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
マーカーが、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
尿中量の合計を同じ尿試料中のクレアチニンの量で除算する、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
尿試料が対象からの尿の２４時間採取物である、請求項１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
尿試料が、対象からの尿の終夜採取物である、請求項１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項２１】
尿試料が、対象から単回の排泄で採取される、請求項１６、１７または１８に記載の方法。
【請求項２２】
試料が、放射免疫測定法によって決定して、８．６ｐｇ／ｍＬ以上のＡＶＰを含有する血漿試料である、請求項７に記載の方法。
【請求項２３】
試料が、酵素免疫測定法によって決定して、２．８ｎｇ／ｍＬ以上のコペプチンを含有する血漿試料である、請求項７に記載の方法。
【請求項２４】
試料が、クレアチニン１ｍｇ当たり、合計で３．４４ｍｇ以上のコルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンを含有する尿試料である、請求項７に記載の方法。
【請求項２５】
マーカーが免疫測定法によって検出される、請求項７に記載の方法。
【請求項２６】
マーカーがマススペクトロメトリーによって検出される、請求項７に記載の方法。
【請求項２７】
障害が、クッシング症候群、認知症、認知障害、気分障害、不安障害、物質関連障害、骨粗鬆症、関節炎、糖尿病、脂質異常症、肥満、高血圧症、疼痛、緑内障およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１または７に記載の方法。
【請求項２８】
気分障害がうつ病である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
うつ病が大うつ病性障害である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
不安障害が、心的外傷後ストレス障害、全般性不安障害およびパニック障害からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
物質関連障害が、アルコール依存または乱用、および薬物依存または乱用からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
認知症がアルツハイマー型である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
認知障害がアルツハイマー病に起因する軽度の認知障害である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に対する対象の応答をモニタリングするための方法であって、
（ａ）Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いる治療を受けている対象由来の生体試料を用意するステップ；
（ｂ）視床下部−下垂体−副腎（「ＨＰＡ」）軸機能マーカーを検出するステップ、
ここで、前記対象がＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有し、ベースラインと比較した、前記マーカーのレベルにおける、２５％超の変化が、前記Ｖ１Ｂアンタゴニストが前記対象を治療するために有用であることが示される；および
（ｃ）ステップ（ｂ）において検出されたベースラインと比較した前記マーカーのレベルの変化に基づいて、前記対象における前記Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いる治療を継続または中止するステップ
を含む方法。
【請求項３５】
ＨＰＡ軸機能マーカーが、コルチゾール；コルチゾン；コルチコトロピン放出ホルモン  副腎皮質刺激ホルモン（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅ）（ＡＣＴＨ）；コルチゾールの肝臓代謝産物、コルチゾンの肝臓代謝産物およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
コルチゾンの肝臓代謝産物が、テトラヒドロコルチゾン、コルトロン、コルトロン酸、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
マーカーが、コルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
マーカーが、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
尿中量の合計を、同じ尿試料中のクレアチニンの量で除算する、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
ベースラインが、３ｐｇ／ｍＬから１３ｐｇ／ｍＬの間のレベルのコルチゾールである、請求項３４に記載の方法。
【請求項４１】
コルチゾールのベースラインが酵素免疫測定法を用いて決定される、請求項３４に記載の方法。
【請求項４２】
ベースラインが、Ｖ１Ｂアンタゴニスト療法を始める前に対象から取得された試料中のＨＰＡ軸機能マーカーのレベルを示す、請求項３４に記載の方法。
【請求項４３】
ＡＣＴＨが血漿ＡＣＴＨである、請求項３５に記載の方法。
【請求項４４】
生体試料が、核酸を含有する試料、血清、血漿、血液、尿および唾液からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項４５】
障害が、クッシング症候群、認知症、認知障害、気分障害、不安障害、物質関連障害、骨粗鬆症、関節炎、糖尿病、脂質異常症、肥満、高血圧症、疼痛、緑内障およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項４６】
気分障害がうつ病である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
うつ病が大うつ病性障害である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
不安障害が、心的外傷後ストレス障害、全般性不安障害およびパニック障害からなる群から選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
物質関連障害が、アルコール依存または乱用および薬物依存または乱用からなる群から選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】
認知症がアルツハイマー型の認知症である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５１】
認知障害がアルツハイマー病に起因する軽度の認知障害である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５２】
マーカーのレベルの２５％超の変化が、ベースラインと比較して増加する変化である、請求項３４に記載の方法。
【請求項５３】
マーカーのレベルの２５％超の変化が、ベースラインと比較して減少する変化である、請求項３４に記載の方法。
【請求項５４】
Ｖ１Ｂアンタゴニストが、式Ｉ：
【化１】
2015512892.tif 000011
（式中、Ａは、芳香族ヘテロ単環式環であり、複素環は５員環または６員環であり、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択されるヘテロ原子を最大４つ含み、ヘテロ原子の１つ以下が酸素原子または硫黄原子であり、Ａは、基Ｒ１１、Ｒ１２および／またはＲ１３で置換されていてよく、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、各出現時に、互いに独立して、水素  塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、またはＲ３およびＲ４はつながって−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ２）４−または−（ＣＨ２）３−を生じ、
Ｒ５は、
【化２】
2015512892.tif 000012
であり、Ｗは、ＮＲ５４、ＮＲ５４−（Ｃ１−Ｃ４−アルキレン）および結合からなる群から選択され、Ｒ５４は、独立に、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、フェニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキレン−フェニルからなる群から選択され、フェニル環は、最大２つのＲ５９基で置換されていてよく、Ｒ５９は、独立に、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、Ｒ６３は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群からのものであり、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル原子、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択される）のもの、およびこれらの互変異性形態、これらの鏡像異性形態およびそれらのジアステレオマー形態のものである、請求項１、請求項７または請求項３４に記載の方法。
【請求項５５】
Ａが、１つまたは２つのヘテロ原子を含む芳香族ヘテロ単環系であり、前記２つのヘテロ原子のうちの１つが窒素である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
Ａが、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、チアゾール、イミダゾール、チオフェン−およびフランからなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
Ｖ１Ｂアンタゴニストが、
【化３】
2015512892.tif 000013
である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
Ｖ１Ｂアンタゴニストが、
【化４】
2015512892.tif 000014
である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
臨床試験のための適格性について対象をスクリーニングするために用いられる、請求項１または７に記載の方法。
【請求項６０】
臨床試験のための対象を無作為化を階層化するために用いられる、請求項１または７に記載の方法。
【請求項６１】
臨床試験の分析を階層化するために用いられる、請求項１または７に記載の方法。
【請求項６２】
血漿試料中のＡＶＰを安定化するためのキットであって、１種以上のプロテアーゼ阻害剤を含む１つ以上の採取管を含む、キット。
【請求項６３】
血液由来のマトリックスにおいてＡＶＰをアッセイするためのキットであって、室温でＡＶＰを安定化するための採取管および説明書を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その内容を参照により本明細書に組み込む、２０１２年３月１３日出願の米国特許出願第６１／６１０，１０１号の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
種々の病理学的状態におけるバソプレシンまたはアルギニンバソプレシン（ＡＶＰ）の役割は近年集中的な研究の対象となっており、種々のバソプレシン受容体の選択的拮抗作用によって新規の臨床的な可能性を追求するための手段がもたらされた。ＡＶＰの効果を媒介する４つの受容体が公知である：オキシトシン、Ｖ１Ａ、Ｖ１ＢまたはＶ３およびＶ２。下垂体および中枢神経系（ＣＮＳ）辺縁脳領域におけるその位置と一致して、Ｖ１Ｂ受容体のアンタゴニストは動物モデルにおいて抗不安効果および抗うつ効果を示す。Ｇｒｉｅｂｅｌら、ＰＮＡＳ  ９９、６３７０（２００２）；およびＳｅｒｒａｄｅｉｄ−Ｌｅ  Ｇａｌら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３００、１１２２（２００２）を参照されたい。Ｖ１Ｂ受容体によって媒介されるバソプレシンの特定のＣＮＳへの効果はわかっていないが、動物モデルへの効果は下垂体およびＣＮＳ受容体の両方に媒介されると思われる。
【０００４】
ＡＶＰは、視床下部から放出され、視床下部−下垂体−副腎（ＨＰＡ）軸活性の重要なメディエーターである。ＡＶＰは、下垂体においてＶ１Ｂ受容体を介して作用して副腎皮質刺激ホルモン（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅ）（ＡＣＴＨ）の放出を刺激し、それが今度は副腎で作用してストレスホルモンであるコルチゾールの放出をシミュレートする。コルチゾールのレベルを低下させることにより、Ｖ１Ｂアンタゴニストは、視床下部−下垂体−副腎軸（ＨＰＡ軸）調節不全を特徴とする障害を有効に治療するために用いられ得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｇｒｉｅｂｅｌら、ＰＮＡＳ  ９９、６３７０（２００２）
【非特許文献２】Ｓｅｒｒａｄｅｉｄ−Ｌｅ  Ｇａｌら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３００、１１２２（２００２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
一般には、障害を有する対象の全てが療法に対して同様に良好に応答するとは限らない。健康管理は、対象を、対象が応答する可能性が最も高い療法とマッチさせることができる方法によって改善され得る。克服すべき主要な不都合は、Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に都合よく応答する可能性がある対象を同定するための方法が存在しないことである。現在、Ｖ１Ｂアンタゴニスト療法について対象を選択するための唯一の手段は、治療の間の疾患の臨床経過を観察することである。これにより、対象が有効な治療を受ける時期が潜在的に遅れ、それにより、罹患リスクが増加し、生活の質が低下する。したがって、依然として、Ｖ１Ｂアンタゴニストに対する応答に関連する障害に関連付けられる１種以上の生物学的マーカー、遺伝子マーカーまたはそれらの組合せを同定する必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
一態様では、本発明は、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定するための方法を対象とする。該方法は、対象由来の生体試料を用意し、次いで試料中のＨＰＡ軸機能マーカーを検出することを含み得る。あるいは、該方法は、対象から得られた生体試料中のＨＰＡ軸機能マーカーを検出することを含む。マーカーが存在することにより、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であることが示される。正常対象試料におけるマーカーの分布の約６０パーセンタイルを超えるレベルで存在し、好ましくは約６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５パーセンタイルを超えるレベルで存在するＨＰＡ軸機能マーカーにより、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に対して特に適切な候補であることが示される。対象は、ＨＰＡ軸機能障害を特徴とする障害を有し得る。
【０００８】
ＨＰＡ軸機能マーカーは、配列番号１（ＬＨＰＰ  ｒｅｓ７０８８４１８）を含むヌクレオチド配列および配列番号２（ＡＫＲＩＤ１  ｒｓ１７１６９５２１）を含むヌクレオチド配列；ＮＲ３Ｃ１遺伝子型を含むヌクレオチド配列またはそれらの組合せであり得る。ＮＲ３Ｃ１遺伝子型は、配列番号３（ｒｓ１０４８２６７２）または配列番号４（ｒｓ１７１００２３６）であり得る。マーカーは、マーカーを含む核酸を増幅し、次いで増幅された核酸を検出し、それにより、マーカーを検出することなどの遺伝子型決定によって検出され得る。マーカーは、配列決定によって検出され得る。
【０００９】
別の態様では、本発明は、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定するための方法を対象とする。該方法は、対象由来の生体試料を用意し、次いで試料中のＨＰＡ軸機能マーカーを検出することを含み得る。ＨＰＡ軸機能マーカーが正常対象試料におけるマーカーの分布の約６０パーセンタイルを超えるレベルで存在する場合、その対象はＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補である。対象は、ＨＰＡ軸機能障害を特徴とする障害を有し得る。ＨＰＡ軸機能マーカーは、正常対象試料におけるＨＰＡ軸機能マーカーの分布の約６５、７０、７５、８０、８５、９０および９５パーセンタイルを超えるレベルで存在し得る。マーカーは、ＡＶＰ、コペプチン（ｃｏｐｅｐｔｉｎ）、コルチゾール、コルチゾン、ＡＣＴＨ、コルチゾールの肝臓代謝産物、コルチゾンの肝臓代謝産物、ＣＲＨまたはそれらの組合せであり得る。コペプチンは血漿コペプチンであり得る。ＡＶＰは血漿ＡＶＰであり得る。コルチゾールの肝臓代謝産物は、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾール、アルファ−コルトール、ベータ−コルトール、アルファ−コルトール酸（ｃｏｒｔｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ベータ−コルトール酸またはそれらの組合せであり得る。コルチゾンの肝臓代謝産物は、テトラヒドロコルチゾン、コルトロン、コルトロン酸（ｃｏｒｔｏｌｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）またはそれらの組合せであり得る。本発明の特定の実施形態によると、本明細書に記載されている、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定するための方法はインビトロにおける方法である。生体試料は、核酸を含有する試料、血清、血漿、血液、尿または唾液であり得る。生体試料は尿であり得る。マーカーは、コルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計であり得る。マーカーは、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計であり得る。マーカーは、全てのコルチゾール代謝産物およびコルチゾン代謝産物の合計であり得る。マーカーは、コルチゾール代謝産物およびコルチゾン代謝産物の尿中量の合計を同じ尿試料中のクレアチニンの量で除算したものであり得る。尿試料は、対象からの尿の２４時間採取物であり得る。尿試料は、対象からの尿の終夜採取物であり得る。尿試料は、対象から単回の排泄で採取され得る。試料は、放射免疫測定法によって決定して、９ｐｇ／ｍＬ以上のＡＶＰを含有する血漿試料であり得る。試料は、酵素免疫測定法によって決定して、２．７５ｎｇ／ｍＬ以上のコペプチンを含有する血漿試料であり得る。試料は、クレアチニン１ｍｇ当たり、合計で３．４４ｍｇ以上のコルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンを含有する尿試料であり得る。該方法の特定の実施形態によると、試料は血漿試料であり、試料中のＡＶＰの量が９ｐｇ／ｍＬ以上であることにより、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であることが��される。この実施形態では、ＡＶＰの量は放射免疫測定法によって決定され得る。該方法の別の特定の実施形態によると、試料は血漿試料であり、試料中のコペプチンの量が２．７５ｎｇ／ｍＬ以上であることにより、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であることが示される。この実施形態では、コペプチンの量は酵素免疫測定法によって決定され得る。該方法の別の特定の実施形態によると、試料は尿試料であり、試料中のコルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの合計がクレアチニン１ｍｇ当たり３．４４ｍｇ以上であることにより、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であることが示される。
【００１０】
本明細書に記載の方法では、試料は、核酸を含有する試料、血清、血漿、血液、尿または唾液であり得る。マーカーは、免疫測定法によって検出され得る。マーカーは、マススペクトロメトリーによって検出され得る。
【００１１】
具体的には、上記の方法は、ＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有するリスクがあるまたはそれを有する疑いがある対象に対して用いられる。障害は、クッシング症候群、認知症、認知障害、気分障害、不安障害、物質関連障害、骨粗鬆症、関節炎、糖尿病、脂質異常症、肥満、高血圧症、疼痛、緑内障またはそれらの組合せであり得る。気分障害はうつ病であり得る。うつ病は大うつ病性障害であり得る。不安障害は、心的外傷後ストレス障害、全般性不安障害またはパニック障害であり得る。物質関連障害は、アルコール依存もしくは乱用または薬物依存もしくは乱用であり得る。認知症は、アルツハイマー型の認知症であり得る。認知障害は、アルツハイマー病に起因する軽度の認知障害であり得る。
【００１２】
別の態様では、本発明は、Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に対する対象の反応をモニタリングするための方法を対象とする。該方法は、対象由来の生体試料を用意し、次いで試料中のＨＰＡ軸機能マーカーを検出することを含み得る。あるいは、該方法は、Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いる治療を受けている対象から得られた生体試料中のＨＰＡ軸機能マーカーを検出することを含む。マーカーのレベルがベースラインと比較して２５％超変化している場合、Ｖ１Ｂアンタゴニストが対象を治療するために有用である。２５％を超える変化は、ベースラインと比較した増加または減少であり得る。ＨＰＡ軸機能マーカーは、コルチゾール；コルチゾン；コルチコトロピン放出ホルモン  副腎皮質刺激ホルモン（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅ）（ＡＣＴＨ）；コルチゾールの肝臓代謝産物、コルチゾンの肝臓代謝産物またはそれらの組合せであり得る。コルチゾンの肝臓代謝産物は、テトラヒドロコルチゾン、コルトロン、コルトロン酸またはそれらの組合せであり得る。マーカーは、コルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計であり得る。マーカーは、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計であり得る。尿中量の合計を同じ尿試料中のクレアチニンの量で除算することができる。ベースラインは、３ｐｇ／ｍＬから１３ｐｇ／ｍＬの間のレベルのコルチゾールであり得る。コルチゾールのベースラインは、酵素免疫測定法を用いて決定することができる。ベースラインは、対象から、Ｖ１Ｂアンタゴニスト療法を始める前に取得された試料中のＨＰＡ軸機能マーカーのレベルを示し得る。ＡＣＴＨは血漿ＡＣＴＨであり得る。本発明の特定の実施形態によると、本明細書に記載されているＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に対する対象の反応をモニタリングするための方法はインビトロにおける方法である。生体試料は、核酸を含有する試料、血清、血漿、血液、尿または唾液であり得る。具体的には、該方法は、ＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有する対象に対して用いられる。障害は、クッシング症候群、認知症、認知障害、気分障害、不安障害、物質関連障害、骨粗鬆症、関節炎、糖尿病、脂質異常症、肥満、高血圧症、疼痛、緑内障またはそれらの組合せであり得る。気分障害はうつ病であり得る。うつ病は大うつ病性障害であり得る。不安障害は、心的外傷後ストレス障害、全般性不安障害またはパニック障害であり得る。物質関連障害は、アルコール依存もしくは乱用または薬物依存もしくは乱用であり得る。認知症は、アルツハイマー型の認知症であり得る。認知障害は、アルツハイマー病に起因する軽度の認知障害であり得る。
【００１３】
Ｖ１Ｂアンタゴニストは、式Ｉ：
【００１４】
【化１】
2015512892.tif 000002
（式中、Ａは芳香族ヘテロ単環式環であり、複素環は５員環または６員環であり、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択されるヘテロ原子を最大４つ含み、ヘテロ原子のうちの１つ以下は酸素原子または硫黄原子であり、Ａは、基Ｒ１１、Ｒ１２および／またはＲ１３で置換されていてよく、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、各出現時に、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、水素  塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、またはＲ３およびＲ４はつながって−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ２）４−または−（ＣＨ２）３−を生じ、
Ｒ５は、
【００１５】
【化２】
2015512892.tif 000003
であり、Ｗは、ＮＲ５４、ＮＲ５４−（Ｃ１−Ｃ４−アルキレン）および結合からなる群から選択され、Ｒ５４は、独立に、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、フェニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキレン−フェニルからなる群から選択され、フェニル環は、最大２つのＲ５９基で置換されていてよく、Ｒ５９は、独立に、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、Ｒ６３は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群からのものであり、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル原子、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択される）のもの、およびこれらの互変異性形態、これらの鏡像異性形態およびそれらのジアステレオマー形態のものであり得る。
【００１６】
Ａは、１つまたは２つのヘテロ原子を含む芳香族ヘテロ単環系であってよく、２つのヘテロ原子のうちの１つは窒素である。
【００１７】
Ａは、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、チアゾール、イミダゾール、チオフェン−およびフランであり得る。
【００１８】
Ｖ１Ｂアンタゴニストは、
【００１９】
【化３】
2015512892.tif 000004
であり得る。
【００２０】
Ｖ１Ｂアンタゴニストは、
【００２１】
【化４】
2015512892.tif 000005
であり得る。
【００２２】
本明細書に記載の方法は、臨床試験のための適格性について対象をスクリーニングするために用いられ得る。該方法は、臨床試験のための対象の無作為化を階層化するために用いられ得る。該方法は、臨床試験の分析を階層化するために用いられ得る。
【００２３】
別の態様では、本発明は、血漿試料中のＡＶＰを安定化するためのキットであって、１種以上のプロテアーゼ阻害剤を含む１つ以上の採取管を含むキットを対象とする。キットは、本明細書に記載の方法において使用され得る。
【００２４】
別の態様では、本発明は、血液由来のマトリックスにおいてＡＶＰをアッセイするためのキットであって、室温でＡＶＰを安定化するための採取管および説明書を含むキットを対象とする。
【００２５】
本発明は、本明細書に記載の方法によって適切な候補と同定された対象の治療において使用するための本明細書に記載のＶ１Ｂアンタゴニストを提供する。具体的には、治療される対象は、ＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有するリスクがある対象またはそれを有する対象であり、対象から得られた試料中にＨＰＡ軸機能マーカーが存在する。本発明は、対象の治療において使用するための本明細書に記載のＶ１Ｂアンタゴニストをさらに提供し、対象から得られた生体試料中のＨＰＡ軸機能マーカーのレベルのベースラインと比較した変化が２５％を超える場合には治療が継続される。本発明は、さらに、対象の治療において使用するための本明細書に記載のＶ１Ｂアンタゴニストも提供し、対象から得られた生体試料中のＨＰＡ軸機能マーカーのレベルのベースラインと比較した変化が２５％以下の場合には治療が中止される。Ｖ１Ｂアンタゴニストは、ＡＢＴ−４３６およびＡＢＴ−５５８から選択されることが好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】健康な正常ボランティア（ＨＮＶ）からのＡＶＰレベルと比較した、大うつ病性障害（ＭＤＤ）を有する臨床試験対象からのベースラインのＡＶＰレベルを示すグラフである。試料をおよそ午前８時に抜き取った。破線は、ＭＡＳＱのＧＤＭ下位尺度における−０．５３点以下の症状の変化を従属変数として用いた受信者動作特性分析を用いて定義された高ＡＶＰについてのカットオフ値８．６ｐｇ／ｍＬを示す。
【図２】ＡＶＰ（高い対正常）と治療（化合物Ａ（１日１回８００ｍｇ）対プラセボ）の相互作用に関連するデータを示すグラフであり、従属変数は、試験薬投与７日目における気分および不安症状質問票（Ｍｏｏｄ  ａｎｄ  Ａｎｘｉｅｔｙ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）（ＭＡＳＱ）尺度スコアおよびハミルトンうつ病評価尺度（Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）（ＨＡＭ−Ｄ）スコアである。高ＡＶＰは、試験薬投与を開始する前日のおよそ午前８時または午後２時に抜き取った試料において８．６ｐｇ／ｍＬ以上であるものと定義された。−１日目（ベースライン）のスコアを共変量として、ならびに研究者、治療、ＡＶＰクラスおよび治療とＡＶＰクラスの相互作用についての因子を含めた共分散分析からの最小二乗平均および標準誤差が示されている。
【図３】ＡＶＰ（高い対正常）と治療（化合物Ａ対プラセボ）の相互作用に関連するデータを示すグラフであり、従属変数は、ＣＲＨ攻撃に対するコルチゾール反応性（ＣＲＨ後の最大血清コルチゾールをＣＲＨ前の血清コルチゾールで除算したもの）である。高ＡＶＰは、試験薬投与を開始する前日のおよそ午前８時または午後２時に抜き取った試料において８．６ｐｇ／ｍＬ以上であるものと定義された。７日目のコルチゾール反応性についての共分散モデルの分析には、−１日目（ベースライン）のコルチゾール反応性を共変量として、ならびに研究者、治療、ＡＶＰクラスおよび治療とＡＶＰクラスの相互作用についての因子を含めた。
【図４】大うつ病性障害（ＭＤＤ）を有する臨床試験対象からのベースラインのコペプチンとＡＶＰレベルとの間の相関を示すグラフである。試料を、試験薬を開始する前および試験薬の６回目の投薬後のおよそ午前８時、午後２時および午後１０時に抜き取った。黒色の線は、ＭＡＳＱのＧＤＭ下位尺度における−０．５３点以下の症状の変化を従属変数として用いた受信者動作特性分析を用いて定義された高ＡＶＰについてのカットオフ値８．６ｐｇ／ｍＬおよび高コペプチンについてのカットオフ値２．８ｎｇ／ｍＬを示す。濃い灰色の線は、ＡＶＰおよびコペプチンの最良適合相関を示す。スピアマンの順位相関係数は０．５６である。
【図５】ＨＰＡまたはうつ病に関連する変異体のパネルとベースラインのＡＶＰレベルとの間の関連を示すグラフである。薬理遺伝学的検査結果は、個体がｒｓ７０８８４１８ＡＡ遺伝子型およびｒｓ１７１６９５２１ＧＧ遺伝子型の両方を有する場合に陽性とみなされた。ＡＶＰ試料をおよそ午後２時に抜き取った。灰色のひし形は、群の平均および平均の信頼区間を示す。
【図６】コペプチン（高い対正常）と治療（化合物Ａ対プラセボ）の相互作用に関連するデータを示すグラフであり、従属変数は、試験薬投与７日目における気分および不安症状質問票（Ｍｏｏｄ  ａｎｄ  Ａｎｘｉｅｔｙ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）（ＭＡＳＱ）尺度スコアおよびハミルトンうつ病評価尺度（Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）（ＨＡＭ−Ｄ）スコアである。高コペプチンは、試験薬投与を開始する前日のおよそ午前８時または午後２時に抜き取った試料において２．８ｎｇ／ｍＬ以上であることと定義された。−１日目（ベースライン）のスコアを共変量として、ならびに研究者、治療、コペプチンクラスおよび治療とコペプチンクラスの相互作用について因子を含めた共分散分析についての最小二乗平均および標準誤差が示されている。
【図７】薬理遺伝学的検査結果（陽性対陰性）と治療（化合物Ａ対プラセボ）の相互作用に関連するデータを示すグラフであり、従属変数は、試験薬投与７日目におけるＭＡＳＱ尺度スコアおよびＨＡＭ−Ｄスコアである。薬理遺伝学的検査結果は、個体がｒｓ７０８８４１８ＡＡ遺伝子型およびｒｓ１７１６９５２１ＧＧ遺伝子型の両方を有する場合に陽性とみなされた。−１日目（ベースライン）のスコアを共変量として、ならびに研究者、治療、薬理遺伝学的検査結果および治療と薬理遺伝学的検査結果の相互作用についての因子を含めた共分散分析からの最小二乗平均および標準誤差が示されている。
【図８】薬理遺伝学的検査結果（ＧＧ対Ａ＋（ＡＧまたはＡＡ））と治療（化合物Ａ対プラセボ）の相互作用に関連するデータを示すグラフであり、従属変数は、試験薬投与７日目におけるＭＡＳＱ尺度スコアおよびＨＡＭ−Ｄスコアである。薬理遺伝学的検査結果はｒｓ１７１００２３６に基づいた。−１日目（ベースライン）のスコアを共変量として、ならびに研究者、治療、遺伝薬理学的試験結果および治療と薬理遺伝学的検査結果の相互作用についての因子を含めた共分散分析からの最小二乗平均および標準誤差が示されている。
【図９】尿グルココルチコイド量を尿クレアチニン量で除算したもの（高対低）と治療（化合物Ａ対プラセボ）の相互作用に関連するデータを示すグラフであり、従属変数は、試験薬投与７日目における気分および不安症状質問票（Ｍｏｏｄ  ａｎｄ  Ａｎｘｉｅｔｙ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）（ＭＡＳＱ）尺度スコアおよびハミルトンうつ病評価尺度（Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）（ＨＡＭ−Ｄ）スコアである。高尿グルココルチコイド量は、試験薬投与を開始する前日の２４時間採取物においてクレアチニン１ｍｇ当たり３．４４ｍｇ以上であると定義された。−１日目（ベースライン）のスコアを共変量として、ならびに研究者、治療、尿グルココルチコイドクラスおよび治療と尿グルココルチコイドクラスの相互作用についての因子を含めた共分散分析からの最小二乗平均および標準誤差が示されている。
【図１０】試験薬を投与する前の尿グルココルチコイド量を尿クレアチニン量で除算したもの（高対低）と治療（化合物Ａ対プラセボ）の相互作用に関連するデータを示すグラフであり、従属変数は、試験薬を投与している間の尿グルココルチコイド量を尿クレアチニン量で除算したものである。高尿グルココルチコイドは、試験薬投与を開始する前日の２４時間採取物においてクレアチニン１ｍｇ当たり３．４４ｍｇ以上であると定義された。６日目から７日目の尿グルココルチコイドについての共分散モデルの分析は、−２日目から−１日目まで（ベースライン）の尿グルココルチコイドを共変量として、ならびに研究者、治療および治療とベースラインの尿グルココルチコイドの相互作用についての因子を含んだ。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明者らは、ＨＰＡ軸機能障害に付随する障害と特定の生物学的マーカーおよび遺伝子マーカー、ならびにＶ１Ｂアンタゴニストに対する応答に対するこれらのマーカーの予測臨床値との間に関連性があるという驚くべき発見をした。対称由来の試料中のこれらのマーカーまたはＨＰＡ軸機能マーカー（「ＨＰＡマーカー」）の１つ以上の遺伝学的同定、生化学的同定またはその組合せは、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に応答するかどうかを予測すること、臨床試験のための適格性について対象をスクリーニングすること、臨床試験のための対象の無作為化を階層化することまたは臨床試験の分析を階層化することにおいて有用であり得る。
【００２８】
ＨＰＡ機能マーカープロファイルに基づいて、最も高い臨床的利益を示すことが予測される集団をターゲティングすることができることにより、対象の利益のための薬物の利用を改善することができる。
【００２９】
（１）ＨＰＡ軸系生物学
ＨＰＡ軸系は、ホルモン産生臓器の協調した活性によって機能し、これにより、シグナル伝達系が形成され、最終的に副腎からのコルチゾールの放出がもたらされる。ＣｈｒｏｕｓｏｓおよびＧｏｌｄ（１９９２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．２６７、１２４４−１２５２；およびＫａｌｔａｓおよびＣｈｒｏｕｓｏｓ（２００７）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、３０３−３１８頁、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ。大型細胞ニューロンによって産生されたＡＶＰは神経分泌顆粒によって下垂体後葉に運ばれる。次いで、ＡＶＰは、血液中に放出されるまで下垂体に貯蔵される。視床下部の室傍核（ＰＶＮ）の小細胞ニューロンによりコルチコトロピン放出ホルモン（ＣＲＨ）およびＡＶＰが侵入門循環中に分泌され、下垂体前葉において作用する。ＣＲＨおよびＡＶＰにより下垂体の副腎皮質刺激細胞が刺激されて副腎皮質刺激ホルモン（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃ  ｈｏｒｍｏｎｅ）（ＡＣＴＨ）が放出され、ＡＶＰは下垂体受容体、Ｖ１Ｂに対して特異的に作用する。ＡＣＴＨは血液を介して副腎まで移動し、そこでコルチゾールおよびデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）を含めたコルチコステロイド放出のトリガーとなる。
【００３０】
コルチゾールにより、ＨＰＡ軸系のＰＶＮにおけるＣＲＨが減少する。ＨＰＡ軸系は、負のフィードバックループを介してその活性を低下させることができる自己調節系である。ＣＲＨが減少することにより、副腎によるコルチゾールおよびＤＨＥＡが減少する。副腎皮質ホルモン過剰症により、種々の有害な免疫学的副作用、代謝的副作用および心理学的副作用が生じる可能性があるので、この自己調節により、さまざまな組織が高レベルのコルチゾールに長時間暴露することから保護される。Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ＧｕｅｒｒｙおよびＨａｓｔｉｎｇｓ、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｌｄ．Ｆａｍ．Ｐｓｙｃｈｏｌ．Ｒｅｖ．（２０１１）１４：１３５−１６０を参照されたい。
【００３１】
ＨＰＡ軸は日夜の概日周期にわたって活性である。コルチゾールレベルは、一般には、この概日周期にわたって予測可能なパターンに従う。ＬｏｖａｌｌｏおよびＴｈｏｍａｓ（２０００）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ｐｓｙｃｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、３４２−３６７頁、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ．：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。コルチゾールレベルは、睡眠期間の終わりまで高い可能性があり、起床の３０分から４０分後にピークに達するまで上昇し続ける。これは「起床時コルチゾール反応（ｃｏｒｔｉｓｏｌ  ａｗａｋｅｎｉｎｇ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」（ＣＡＲ）として公知である。したがって、日中起きている間、コルチゾールレベルは負の傾きで示され得、次いで、コルチゾールレベルは睡眠中にまた上昇する。
【００３２】
日周リズムは、所与の時間帯に血液中を循環していると予測されるコルチゾールの量を示し得る「ベースライン」または「基底」または「持続性」のＨＰＡ活性を構成し得る。ＨＰＡ軸の機能は、その活性のレベルを変化させることによって、急性の「ストレス要因」に対する体の応答の中心にある。例えば、ＨＰＡ軸は、困難なまたは脅威になる事象が起こった場合に、循環しているコルチゾールレベルの上昇のトリガーとなる。ＨＰＡ軸の活性が誘導され、上昇した後、一般には、循環しているコルチゾールのピークレベルに到達するまでに約２０分かかる。ＧｕｎｎａｒおよびＴａｌｇｅ（２００６）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｐｓｙｃｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅｏｒｙ、ｓｙｓｔｅｍｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ、３４３−３６６頁；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；およびＫｕｄｉｅｌｋａら、（２００４）Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２９、９８３−９９２を参照されたい。ストレス事象またはストレス要因の強度および持続時間は、循環しているコルチゾールがその時間帯に予測されるベースラインに戻るのにかかる時間の長さに影響を及ぼす可能性がある。ＨＰＡ軸活性が正常に発生することにより、ストレス要因の発生頻度およびうつ病の分布率も上昇する青年期における高い基底のコルチゾールレベルおよびストレス事象に対するより強力なＨＰＡ軸応答がもたらされる。Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｇｕｅｒｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｓｔｉｎｇｓ、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｌｄ．Ｆａｍ．Ｐｓｙｃｈｏｌ．Ｒｅｖ．（２０１１）１４：１３５−１６０を参照されたい。
【００３３】
２．定義
本明細書において使用される用語法は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、限定的なものではない。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ（１つの）」、「および（ａｎｄ）」および「ｔｈｅ（その）」は、文脈によりそうでないことが明確に規定されない限り、複数の参照対象を含む。
【００３４】
ａ．約
「約」とは、本明細書で使用される場合、明示されている値からのおよそ＋／−１０％の変動を指し得る。そのような変動は、具体的に言及されているかどうかにかかわらず、本明細書において提供される任意の所与の値に常に含まれることが理解されるべきである。
【００３５】
ｂ．同一のまたは同一性
「同一の（ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）」または「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」とは、本明細書において２つ以上のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列に関連して使用される場合、これらの配列が指定の領域にわたって同じである残基の指定の百分率を有することを意味し得る。百分率は、２つの配列を最適にアラインメントし、指定の領域にわたって２つの配列を比較し、両方の配列において同一の残基が存在する位置の数を決定してマッチする位置の数をもたらし、マッチする位置の数を指定の領域内の位置の総数で除算し、その結果に１００を掛けて、配列同一性の百分率をもたらすことによって算出することができる。２つの配列の長さが異なるまたはアラインメントにより１つ以上の付着末端が生じ、指定の比較領域に単一の配列しか含まれない場合には、単一の配列の残基は、算出の分母には含まれるが、分子には含まれない。
【００３６】
ｃ．単離されたポリヌクレオチド
「単離されたポリヌクレオチド」とは、本明細書で使用される場合、ポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成起源またはそれらの組合せ）を意味し得、その起源によって、単離されたポリヌクレオチドは天然では「単離されたポリヌクレオチド」と一緒に見いだされるポリヌクレオチドの全部または一部を伴わない；天然では連結していないポリヌクレオチドに作動可能に連結している；または天然ではより大きな配列の一部として存在しない。
【００３７】
ｄ．標識および検出可能な標識
「標識」および「検出可能な標識」とは、本明細書で使用される場合、抗体と分析物との間の反応を検出可能にするために抗体または分析物に付着させる部分を指し、そのように標識された抗体または分析物は「検出可能に標識された」と称される。標識は、視覚的手段または器械による手段によって検出可能なシグナルを生じ得る。種々の標識は、シグナル生成物質、例えば、色素原、蛍光化合物、化学発光化合物、放射性化合物などを含む。標識の代表的な例としては、光を生じる部分、例えばアクリジニウム化合物および蛍光を生じる部分、例えばフルオレセインが挙げられる。他の標識は本明細書に記載されている。この点について、部分自体は検出可能でなくてよいが、さらに別の部分と反応すると検出可能になり得る。「検出可能に標識した」という用語の使用は、そのような標識付けを包含するものとする。
【００３８】
当技術分野で公知の任意の適切な検出可能な標識が使用され得る。例えば、検出可能な標識は、放射性標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３２Ｐおよび３３Ｐなど）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリペルオキシダーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼなど）、化学発光標識（例えば、アクリジニウムエステル、チオエステルまたはスルホンアミド；ルミノール、イソルミノール、フェナントリジニウム（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｉｄｉｎｉｕｍ）エステルなど）、蛍光標識（例えば、フルオレセイン（例えば、５−フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、３’６−カルボキシフルオレセイン、５（６）−カルボキシフルオレセイン、６−ヘキサクロロ−フルオレセイン、６−テトラクロロフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネートなど））、ローダミン、フィコビリタンパク質、Ｒ−フィコエリトリン、量子ドット（例えば、硫化亜鉛キャップ化セレン化カドミウム）、温度測定標識または免疫ポリメラーゼ連鎖反応標識であり得る。標識、標識付け手順および標識の検出の手引きは、ＰｏｌａｋおよびＶａｎ  Ｎｏｏｒｄｅｎ、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．（１９９７）ならびにＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇｏｎにより出版されたハンドブックおよびカタログと組み合わされたＨａｕｇｌａｎｄ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（１９９６）に見いだされる。蛍光標識は、ＦＰＩＡにおいて使用され得る（例えば、これによってそれらの全体が参照により組み込まれる米国特許第５，５９３，８９６号、同第５，５７３，９０４号、同第５，４９６，９２５号、同第５，３５９，０９３号および同第５，３５２，８０３号を参照されたい）。アクリジニウム化合物は均一化学発光アッセイにおいて検出可能な標識として使用され得る（例えば、Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１６：１３２４−１３２８（２００６）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．４：２３１３−２３１７（２００４）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１４：３９１７−３９２１（２００４）；およびＡｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．５：３７７９−３７８２（２００３）を参照されたい）。
【００３９】
一態様では、アクリジニウム化合物は、アクリジニウム−９−カルボキサミドである。アクリジニウム９−カルボキサミドを調製するための方法は、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ、Ｊ．Ｂｉｏｌｕｍｉｎ．Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎ．６：１０７−１１４（１９９１）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６３：５６３６−５６３９（１９９８）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５５：１０８９９−１０９１４（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．１：７７９−７８１（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１１：７１４−７２４（２０００）；Ｍａｔｔｉｎｇｌｙら、Ｉｎ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓおよびＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；Ｄｙｋｅ、Ｋ．Ｖ．編；ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、７７−１０５頁（２００２）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．５：３７７９−３７８２（２００３）；および米国特許第５，４６８，６４６号、同第５，５４３，５２４号および同第５，７８３，６９９号（そのそれぞれのその教示に関する全体を参照により本明細書に組み込む）に記載されている。
【００４０】
アクリジニウム化合物の別の例は、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルである。式ＩＩのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの例は１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウムフルオロスルホネート（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩから入手可能）である。アクリジニウム９−カルボキシレートアリールエステルを調製するための方法は、ＭｃＣａｐｒａら、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．４：１１１１−２１（１９６５）；Ｒａｚａｖｉら、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  １５：２４５−２４９（２０００）；Ｒａｚａｖｉら、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  １５：２３９−２４４（２０００）；および米国特許第５，２４１，０７０号（そのそれぞれのその教示に関する全体を参照により本明細書に組み込む）に記載されている。そのようなアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、シグナルの強度またはシグナルの迅速性に関して、少なくとも１種のオキシダーゼによる分析物の酸化で生成される過酸化水素についての効率的な化学発光指標である。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの化学発光の過程は急速に、すなわち、１秒未満に完了するが、アクリジニウム−９−カルボキサミドの化学発光は、２秒超に及ぶ。しかし、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、タンパク質の存在下ではその化学発光性を失う。したがって、その使用には、シグナルの発生および検出の間にタンパク質が存在しないことが必要である。試料中のタンパク質を分離または除去するための方法は当業者に周知であり、それらとしては、これだけに限定されないが、限外濾過、抽出、沈殿、透析、クロマトグラフィーまたは消化が挙げられる（例えば、Ｗｅｌｌｓ、Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（２００３）を参照されたい）。試験試料から除去または分離されるタンパク質の量は、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％または約９５％であり得る。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルおよびその使用に関するさらなる詳細は、２００７年４月９日出願の米国特許出願第１１／６９７，８３５号に記載されている。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、脱気無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）または水性コール酸ナトリウムなどの任意の適切な溶媒に溶解され得る。
【００４１】
ｅ．正常対象試料
「正常対象試料」とは、本明細書で使用される場合、ＨＰＡ軸機能障害に関連する疾患または障害を有さない対象由来の試料を指し得る。正常対象試料は対照であり得る。正常対象試料は、老人対象または小児対象由来のものであり得る。
【００４２】
ｆ．所定のカットオフおよび所定のレベル
「所定のカットオフ」および「所定のレベル」とは、一般に、診断／予後判定／治療効果の結果を、所定のカットオフ／レベルに対するアッセイ結果と比較することによって評価するために使用されるアッセイのカットオフ値を指し、所定のカットオフ／レベルはすでに種々の臨床的パラメータ（例えば、疾患の重症度、進行／非進行／改善など）と結び付けられているまたは関連付けられている。本開示は、例示的な所定のレベルを提供する。しかし、カットオフ値は免疫測定法の性質（例えば、使用される抗体など）に応じて変動し得ることが周知である。さらに、本明細書の開示を他の免疫測定法に適合させて、本開示に基づく他の免疫測定法のための免疫測定法に特異的なカットオフ値を得ることも、当業者の通常の技術の十分に範囲内である。正確な所定のカットオフ／レベルの値はアッセイ間で変動し得るが、本明細書に記載の相関が一般に適用可能であるはずである。
【００４３】
ｇ．品質管理試薬
本明細書に記載の免疫測定法およびキットに関して、「品質管理試薬」としては、これだけに限定されないが、較正物質、対照および感度パネルが挙げられる。一般には、抗体または分析物などの分析物の濃度を内挿するための較正（標準）曲線を確立するために、「較正物質」または「標準物質」が使用される（例えば、１種以上、例えば、複数など）。あるいは、所定の陽性／陰性カットオフの近くの単一の較正物質が使用され得る。多数の較正物質（すなわち、２種以上の較正物質または種々の量の較正物質（複数可））が、「感度パネル」を構成するために併せて使用され得る。
【００４４】
ｈ．一連の較正組成物
「一連の較正組成物」とは、既知濃度のＨＰＡマーカーを含む複数の組成物を指し、組成物のそれぞれが、一連の中の他の組成物とはＨＰＡマーカーの濃度が異なる。
【００４５】
ｉ．固相
「固相」とは、不溶性であるまたはその後の反応によって不溶性にすることができる任意の材料を指す。固相は、捕捉剤を誘引し固定するその固有の能力に関して選択され得る。あるいは、固相に、捕捉剤を誘引し固定する能力を有する連結剤を付けておくことができる。連結剤は、例えば、捕捉剤自体に対してまたは捕捉剤とコンジュゲートした荷電物質に対して逆に荷電した荷電物質を含み得る。一般に、連結剤は、固相上に固定化されて（付着して）おり、結合反応を通じて捕捉剤を固定する能力を有する任意の結合パートナー（特異的であることが好ましい）であり得る。連結剤により、アッセイの実施前またはアッセイの実施中に捕捉剤と固相材料を間接的に結合させることが可能になる。固相は、例えば、例えば、試験管、マイクロタイターウェル、シート、ビーズ、微小粒子、チップおよび当業者に公知の他の形態を含めたプラスチック、誘導体化プラスチック、磁気金属、非磁気金属、ガラスまたはケイ素であり得る。
【００４６】
ｊ．特異的結合
「特異的結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」または「特異的に結合すること（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」とは、本明細書で使用される場合、抗体、タンパク質またはペプチドと第２の化学種の相互作用を指し得、相互作用は、化学種上の特定の構造（例えば、抗原性決定因子またはエピトープ）の存在に左右される；例えば、抗体は、タンパク質全体ではなく、特異的なタンパク質構造を認識し、それに結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、標識された「Ａ」および抗体を含有する反応物中にエピトープＡを含有する分子（または遊離の標識されていないＡ）が存在すると、抗体に結合する標識されたＡの量が減少する。
【００４７】
ｋ．特異的結合パートナー
「特異的結合パートナー」とは、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学的手段または物理的手段によって互いと特異的に結合する２つの異なる分子を含む。したがって、一般的な免疫測定法の抗原と抗体の特異的結合対に加えて、他の特異的結合対は、ビオチンとアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物とレクチン、相補的なヌクレオチド配列、エフェクター分子と受容体分子、補因子と酵素、酵素と酵素阻害剤などを含み得る。さらに、特異的結合対は、元の特異的結合メンバーの類似体であるメンバー、例えば、分析物−類似体を含み得る。免疫反応性特異的結合メンバーとしては、単離されたものであろうと組換えによって作製されたものであろうと、抗原、抗原断片とモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含めた抗体ならびに複合体およびその断片が挙げられる。
【００４８】
ｌ．ストリンジェントな条件
「ストリンジェントな条件」とは、本明細書では、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中約４５℃で、フィルターに結合させたＤＮＡとハイブリダイズさせ、その後、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中約５０〜６５℃で１回以上洗浄することを説明するために使用される。「高度にストリンジェントな条件下で」という用語は、６×ＳＳＣ中約４５℃でフィルターに結合させた核酸とハイブリダイズさせ、その後、０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中約６８℃で１回以上洗浄することまたは他の関連する条件下で行うことを指す。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら編、１９８９、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｉ巻、Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．およびＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、６．３．１−６．３．６頁および２．１０．３頁を参照されたい。
【００４９】
ｍ．治療する、治療することまたは治療
「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、本明細書では、そのような用語が適用される障害／疾患の進行またはそのような疾患の１つ以上の症状を反転させること、緩和することまたは阻害することを説明するためにそれぞれと互換的に使用される。対象の状態に応じて、この用語は、疾患を予防することも指し、疾患の発症を予防することまたは疾患に伴う症状を予防することを含む。治療は、急性的にまたは慢性的に実施され得る。この用語は、疾患またはそのような疾患に伴う症状の重症度を疾患に伴う苦痛の前に低下させることも指す。そのような苦痛の前に疾患を予防またはその重症度を低下させることは、本発明の抗体または医薬組成物を、投与時に疾患を患っていない対象に投与することを指す。「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」とは、疾患またはそのような疾患に伴う１つ以上の症状の再発を予防することも指す。「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」および「治療的に（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ）」とは、治療する行為を指し、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は上で定義されている。
【００５０】
ｎ．変異体
「変異体」とは、本明細書では、アミノ酸配列がアミノ酸の挿入、欠失または保存された置換によって異なるが、少なくとも１つの生物活性を保持するペプチドまたはポリペプチドを説明するために使用される。「生物活性」の代表的な例としては、特異的な抗体によって結合することができることまたは免疫応答を促進することができることが挙げられる。変異体とは、本明細書では、少なくとも１つの生物活性を保持するアミノ酸配列を有する基準タンパク質と実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質を説明するためにも使用される。アミノ酸の保存された置換、すなわち、アミノ酸を性質（例えば、親水性、荷電領域の程度および分布）が同様の異なるアミノ酸と置き換えることは、当技術分野では、一般には軽微な変化を伴うと理解される。これらの軽微な変化は、一部において、当技術分野において理解されているアミノ酸のハイドロパシー指標によって同定され得る。Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２（１９８２）。アミノ酸のハイドロパシー指標は、その疎水性および電荷の考察に基づく。ハイドロパシー指標が同様のアミノ酸は置換され得、なおタンパク質機能を保持することは当技術分野で公知である。一態様では、ハイドロパシー指標が±２であるアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性も、生物学的機能を保持するタンパク質がもたらされる置換を明らかにするために用いられ得る。ペプチドに関連してアミノ酸の親水性を考察することにより、抗原性および免疫原性と良く相関することが報告されている有用な評価基準である、そのペプチドの最大の局所平均親水性を算出することが可能になる。米国特許第４，５５４，１０１号、参照により本明細書に完全に組み込む。当技術分野で理解されている通り、同様の親水性値を有するアミノ酸を置換することにより、生物活性、例えば免疫原性を保持するペプチドがもたらされ得る。置換は、互いと±２以内の親水性値を有するアミノ酸を用いて実施され得る。アミノ酸の疎水性値および親水性値はどちらもそのアミノ酸の特定の側鎖の影響を受ける。この知見と一致して、疎水性、親水性、電荷、サイズおよび他の性質によって明らかになる通り、生物学的機能が適合するアミノ酸置換がアミノ酸、特にこれらのアミノ酸の側鎖の相対的な類似性に左右されることが理解される。「変異体」とは、抗ＨＰＡマーカー抗体の対応する断片とはアミノ酸配列が異なるが、なお抗原と反応性であり、ＨＰＡマーカーとの結合について抗ＨＰＡマーカー抗体の対応する断片と競合することができる、抗ＨＰＡマーカー抗体の抗原と反応性である断片を指すためにも使用され得る。「変異体」とは、例えばタンパク質分解、リン酸化または他の翻訳後修飾によって示差的に処理されたが、なおその抗原との反応性を保持するポリペプチドまたはその断片を説明するためにも使用され得る。
【００５１】
本明細書における数値範囲の列挙に関しては、同じ精度で間に入る数字のそれぞれが明確に意図されている。例えば、６〜９の範囲に関しては、６および９に加えて、７および８の数字が意図されており、６．０〜７．０の範囲に関しては、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９および７．０の数字が明確に意図されている。
【００５２】
３．ＨＰＡ軸機能マーカーを同定する方法
本明細書では、生体試料中のＨＰＡ軸機能マーカーを検出するための方法が提供される。試料は、ＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を患っている対象由来のものであり得る。ＨＰＡマーカーは、ゲノムＨＰＡマーカー、非ゲノムＨＰＡマーカーまたはそれらの組合せであり得る。ＨＰＡマーカーの種類に応じて、検出方法は、例えば免疫測定法または遺伝子型決定であり得る。本発明の特定の実施形態によると、該方法は、インビトロにおける方法である。
【００５３】
ａ．対象がＶ１Ｂアンタゴニスト治療に適するかどうかを決定するための方法
ＨＰＡ軸マーカーを検出するための方法は、ＨＰＡ軸機能障害に付随する障害を有する対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定するための方法に適用することができる。該方法は、対象由来の生体試料を用意し、ＨＰＡ軸機能マーカーを検出することを含み、対象の試料中にＨＰＡマーカーが存在することまたは正常対象試料に対するＨＰＡマーカーの特定のレベルにより、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適することが示され得る。あるいは、該方法は、対象から得られた生体試料中のＨＰＡ軸機能マーカーを検出することを含み、対象の試料中にＨＰＡマーカーが存在することまたは正常対象試料に対するＨＰＡマーカーの特定のレベルにより、対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適することが示される。ＨＰＡ機能障害に関連付けられる特定のマーカーが存在することまたはそのレベルに関する知見により、対象のＨＰＡ軸機能マーカープロファイルに応じて予防または治療をカスタマイズすることが可能になる。例えば、本明細書に記載の方法に準じて適切な候補であると同定された対象は、少なくとも１種のＶ１Ｂアンタゴニストを投与（すなわち、それを用いて治療）され得る。ＨＰＡマーカーはゲノムＨＰＡマーカーであり得る。ＨＰＡマーカーは、ホルモン、タンパク質、その断片またはそれらの任意の組合せなどの非ゲノムＨＰＡマーカーであり得る。ＨＰＡマーカーを同定するための方法は、臨床試験のための適格性について対象をスクリーニングするため、臨床試験のための対象の無作為化を階層化するため、臨床試験の分析を階層化するためまたはそれらの組合せのためにも用いられ得る。
【００５４】
ｂ．Ｖ１Ｂアンタゴニスト治療に対する対象の応答をモニタリングするための方法
本明細書では、Ｖ１Ｂアンタゴニスト治療に対する対象の応答をモニタリングするための方法に適用され得る、対象由来の試料中の１種以上の「モニタリング」ＨＰＡマーカーを同定するための方法が提供される。
【００５５】
モニタリングＨＰＡ軸マーカーは、対象由来の生体試料において検出され得る。マーカーのレベルがベースラインと比較して２５％超変化することにより、対象がＶ１Ｂアンタゴニスト治療に応答することおよびＶ１Ｂアンタゴニストが、対象を治療することに対して有用であり得ることが示され得る。この変化は、ベースラインと比較して増加する変化または減少する変化であり得る。対象は、ＨＰＡ軸機能障害に付随する障害を有し得る。本明細書に記載の方法に準じて対象がＶ１Ｂアンタゴニスト治療に応答すると決定された場合には、Ｖ１Ｂアンタゴニスト治療を用いる治療が継続され得る。本明細書に記載の方法に準じて対象がＶ１Ｂアンタゴニスト治療に応答しないと決定された場合には、Ｖ１Ｂアンタゴニスト治療を用いる治療は中止され得る。
【００５６】
ｃ．ＨＰＡ軸機能マーカーを同定する方法において使用されるＨＰＡマーカー
上記の方法のＨＰＡマーカーは、ゲノムＨＰＡマーカー、非ゲノムＨＰＡマーカーまたはそれらの組合せであり得る。ＨＰＡ軸マーカーは、対象由来の試料において検出され得る。ゲノムマーカーが存在することにより、対象がＶ１Ｂアンタゴニスト治療に適した候補であることが示され得る。該方法により非ゲノムＨＰＡ軸マーカーが存在することが検出された場合、ＨＰＡマーカーのレベルを測定することができる。レベルが正常対象試料におけるマーカーの分布の特定のパーセンタイルを超える場合、対象は、Ｖ１Ｂアンタゴニスト治療に適した候補である可能性がある。
【００５７】
（ａ）ゲノムＨＰＡマーカー
遺伝子マーカーは、欠失、置換、挿入または多型であり得る。ゲノムＨＰＡマーカーは、ＬＨＰＰ遺伝子、ＡＫＲ１Ｄ１遺伝子またはＮＲ３Ｃ１遺伝子またはその断片のいずれかにおける多型であり得る。ＨＰＡマーカーは、遺伝子マーカーの任意の組合せであり得る。多型は一塩基多型であり得る。集団内で、マーカーには、少数の対立遺伝子発生頻度が割り当てられ得る。対象集団間には変動が存在し得る。ある地理群または祖先群に共通のマーカーは、別の群では稀である可能性がある。マーカーは、ＨＰＡ軸の調節不全に付随する障害を有する対象の一群において大きな比率を占める可能性がある。ＨＰＡ軸の調節不全に付随する障害を有する対象は、年齢、性別、祖先またはそれらの組合せに基づいて群に分けることができる。
【００５８】
（ａ）ＬＨＰＰ
遺伝子ＬＨＰＰは、ホスホリシンホスホヒスチジン無機ピロリン酸ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｌｙｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）として公知の酵素をコードする、大うつ病性障害（ＭＤＤ）に結び付けられる遺伝子であり、「ＬＨＰＰ」という用語は、その発現を機能的に調節する、対応するメッセンジャーＲＮＡ配列およびＤＮＡ配列を指す。ＬＨＰＰは、１９５７年に最初にブタ脳から精製され（Ｓｅａｌら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２２８：１９３−９（１９５７）を参照されたい）、その後、いくつかの追加的な哺乳動物性供給源から精製されてきた（Ｆｅｌｉｘら、Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １４７：１１１−８（１９７５）；Ｙｏｓｈｉｄａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４２：３２５６−３１（１９８２）；Ｈａｃｈｉｍｏｒｉら、Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ９３：２５７−６４（１９８３）；Ｓｍｉｒｎｏｖａら、Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  ２８７：１３５−４０（１９９１）；Ｈｉｒａｉｓｈｉら、Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  ３４１：１５３−９（１９９７）を参照されたい）。この酵素は、インビトロにおいて、ホスホヒスチジンおよびホスホリシン（ｐｈｏｓｐｈｏｌｙｓｉｎｅ）におけるＰ−−Ｎ結合の加水分解を効率的に触媒し、イミド二リン酸およびピロリン酸のそれぞれＰ−−Ｎ結合またはＰ−−Ｏ結合の加水分解はあまり効率的に触媒しないと特徴付けられている。ＬＨＰＰは、タンパク質ヒスチジンまたはリシンホスホアミダーゼ、すなわち、他のタンパク質のＮ結合リン酸化状態を修飾する酵素であり得る。ヒトＬＨＰＰがクローニングされている。機能的なヒトＬＨＰＰ酵素がＥ．ｃｏｌｉにおける異種性発現に従って精製されている（Ｙｏｋｏｉら、Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １３３：６０７−１４（２００３）を参照されたい）。ＬＨＰＰは、大うつ病性障害と遺伝的に結び付けられ、関連付けられている。Ｎｅｆｆら、Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、１４：６２１−６３０（２００９）を参照されたい。
【００５９】
遺伝子マーカーは、配列番号１（ＬＨＰＰ  ｒｓ７０８８４１８）を含むヌクレオチド配列であり得る。
【００６０】
（ｂ）ＡＫＲ１Ｄ１
遺伝子ＡＫＲ１Ｄ１は、肝臓においてコルチゾールおよびコルチゾンをテトラヒドロ代謝産物に変換するタンパク質をコードする。より詳細には、この遺伝子によりコードされる酵素は、デルタ（４）−３−オン構造を有する胆汁酸中間体およびステロイドホルモンの５−ベータ−還元の触媒作用に関与する。この酵素の欠乏は肝機能障害の一因となり得る。異なるアイソフォームをコードする３つの転写物変種がこの遺伝子について見いだされている。
【００６１】
遺伝子マーカーは配列番号２（ＡＫＲＩＤ１  ｒｓ１７１６９５２１）であり得る。
【００６２】
（ｃ）ＮＲ３Ｃ１
遺伝子ＮＲ３Ｃ１は、グルココルチコイド応答性遺伝子のプロモーター内のグルココルチコイド反応エレメントに結合してこれらの転写を活性化する転写因子としておよび他の転写因子の調節因子としての両方で機能し得るグルココルチコイド受容体をコードする。この受容体は、一般には、細胞質に見いだされるが、リガンドが結合すると核内に輸送される。この受容体は、標的組織における炎症反応、細胞増殖および分化に関与する。この遺伝子における突然変異は全身性グルココルチコイド抵抗性に関連付けられる。
【００６３】
遺伝子マーカーは、ＮＲ３Ｃ１遺伝子型を含むヌクレオチド配列であり得る。ＮＲ３Ｃ１遺伝子型は、配列番号３（ｒｓ１０４８２６７２）、配列番号４（ｒｓ１７１００２３６）またはそれらの組合せを含む核酸であり得る。
【００６４】
（ｂ）非ゲノムＨＰＡマーカー
ＨＰＡマーカーは、タンパク質またはペプチドなどの非ゲノムＨＰＡマーカーであり得る。ペプチドは、ペプチドホルモン、例えば、アルギニンバソプレシン（ＡＶＰ）またはコペプチンもしくはニューロフィジンＩＩなどのプレプロバソプレシン（ｐｒｅｐｒｏｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ）の断片などであり得る。非ゲノムＨＰＡマーカーは、コルチゾール、コルチゾン、コルチコトロピン放出ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅ）またはそれらの組合せであり得る。尿などの１つ以上の試料からのコルチゾール、コルチゾンおよびその肝臓代謝産物の合計は、本明細書に記載の方法によって確認され得る。
【００６５】
（ａ）ＡＶＰ
ＡＶＰは以下のアミノ酸配列を有し得る：Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＮＨ２（配列番号５）。対象は、正常な対象由来の試料中のＡＶＰのまたは実験室における基準（ｌａｂ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）中のＡＶＰの分布の６０パーセンタイル、７０パーセンタイル、８０パーセンタイル、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９パーセンタイル超のベースラインのＡＶＰレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、２ｐｇ／ｍＬから１５ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超える、５ｐｇ／ｍＬから１５ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超える、５ｐｇ／ｍＬから１４ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超える、５ｐｇ／ｍＬから１３ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超える、６ｐｇ／ｍＬから１２ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超える、７ｐｇ／ｍＬから１１ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超えるまたは８ｐｇ／ｍＬから１０ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超えるベースラインの血液ＡＶＰレベル、血清ＡＶＰレベルまたは血漿ＡＶＰレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、２ｐｇ／ｍＬ超、３ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ超、８．１ｐｇ／ｍＬ超、８．２ｐｇ／ｍＬ超、８．３ｐｇ／ｍＬ超、８．４ｐｇ／ｍＬ超、８．５ｐｇ／ｍＬ超、８．６ｐｇ／ｍＬ超、８．７ｐｇ／ｍＬ超、８．８ｐｇ／ｍＬ超、８．９ｐｇ／ｍＬ超  ９ｐｇ／ｍＬ超、９．５ｐｇ／ｍＬ超、１０ｐｇ／ｍＬ超または１１ｐｇ／ｍＬ超のベースラインの血液ＡＶＰレベル、血清ＡＶＰレベルまたは血漿ＡＶＰレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、２ｐｇ／ｍＬ、３ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、８．１ｐｇ／ｍＬ、８．２ｐｇ／ｍＬ、８．３ｐｇ／ｍＬ、８．４ｐｇ／ｍＬ、８．５ｐｇ／ｍＬ、８．６ｐｇ／ｍＬ、８．７ｐｇ／ｍＬ、８．８ｐｇ／ｍＬ、８．９ｐｇ／ｍＬ、９ｐｇ／ｍＬ、９．５ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、または１１ｐｇ／ｍＬのベースラインの血液ＡＶＰレベル、血清ＡＶＰレベルまたは血漿ＡＶＰレベルを有し得る。レベルは、実験室における基準と対照して決定され得る。血液ＡＶＰレベル、血清ＡＶＰレベルまたは血漿ＡＶＰレベルは、いつでも、例えば、任意の所与の日の午前に、午後にまたは晩に測定され得る。
【００６６】
対象は、商業的に利用可能な免疫測定サービスまたはキットを用いて測定して、２ｐｇ／ｍＬ、３ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、８．１ｐｇ／ｍＬ、８．２ｐｇ／ｍＬ、８．３ｐｇ／ｍＬ、８．４ｐｇ／ｍＬ、８．５ｐｇ／ｍＬ、８．６ｐｇ／ｍＬ、８．７ｐｇ／ｍＬ、８．８、ｐｇ／ｍＬ、８．９ｐｇ／ｍＬ、９ｐｇ／ｍＬ、９．１ｐｇ／ｍＬ、９．２ｐｇ／ｍＬ、９．３ｐｇ／ｍＬ、９．４ｐｇ／ｍＬ、９．５ｐｇ／ｍＬ、９．６ｐｇ／ｍＬ、９．７ｐｇ／ｍＬ、９．８、ｐｇ／ｍＬ、９．９ｐｇ／ｍＬ  １０ｐｇ／ｍＬ、１１ｐｇ／ｍＬ、１２ｐｇ／ｍＬ、１３ｐｇ／ｍＬ、１３．１ｐｇ／ｍＬ、１３．２ｐｇ／ｍＬ、１３．３ｐｇ／ｍＬ、１３．４ｐｇ／ｍＬ、１３．５ｐｇ／ｍＬ、１３．６ｐｇ／ｍＬ、１３．７ｐｇ／ｍＬ、１３．８、ｐｇ／ｍＬ、１３．９ｐｇ／ｍＬ、１４ｐｇ／ｍＬ、１４．１ｐｇ／ｍＬ、１４．２ｐｇ／ｍＬ、１４．３ｐｇ／ｍＬ、１４．４ｐｇ／ｍＬ、１４．５ｐｇ／ｍＬ、１４．６ｐｇ／ｍＬ、１４．７ｐｇ／ｍＬ、１４．８ｐｇ／ｍＬ、１４．９ｐｇ／ｍＬ、または１５ｐｇ／ｍＬを超えるベースラインの血液ＡＶＰレベル、血清ＡＶＰレベルまたは血漿ＡＶＰレベルを有し得る。対象は、商業的に利用可能な免疫測定サービスまたはキットを用いて測定して、２ｐｇ／ｍＬ、３ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、８．１ｐｇ／ｍＬ、８．２ｐｇ／ｍＬ、８．３ｐｇ／ｍＬ、８．４ｐｇ／ｍＬ、８．５ｐｇ／ｍＬ、８．６ｐｇ／ｍＬ、８．７ｐｇ／ｍＬ、８．８、ｐｇ／ｍＬ、８．９ｐｇ／ｍＬ、９ｐｇ／ｍＬ、９．１ｐｇ／ｍＬ、９．２ｐｇ／ｍＬ、９．３ｐｇ／ｍＬ、９．４ｐｇ／ｍＬ、９．５ｐｇ／ｍＬ、９．６ｐｇ／ｍＬ、９．７ｐｇ／ｍＬ、９．８、ｐｇ／ｍＬ、９．９ｐｇ／ｍＬ  １０ｐｇ／ｍＬ、１１ｐｇ／ｍＬ、１２ｐｇ／ｍＬ、１３ｐｇ／ｍＬ、１３．１ｐｇ／ｍＬ、１３．２ｐｇ／ｍＬ、１３．３ｐｇ／ｍＬ、１３．４ｐｇ／ｍＬ、１３．５ｐｇ／ｍＬ、１３．６ｐｇ／ｍＬ、１３．７ｐｇ／ｍＬ、１３．８、ｐｇ／ｍＬ、１３．９ｐｇ／ｍＬ、１４ｐｇ／ｍＬ、１４．１ｐｇ／ｍＬ、１４．２ｐｇ／ｍＬ、１４．３ｐｇ／ｍＬ、１４．４ｐｇ／ｍＬ、１４．５ｐｇ／ｍＬ、１４．６ｐｇ／ｍＬ、１４．７ｐｇ／ｍＬ、１４．８ｐｇ／ｍＬ、１４．９ｐｇ／ｍＬ、または１５ｐｇ／ｍＬのベースラインの血液ＡＶＰレベル、血清ＡＶＰレベルまたは血漿ＡＶＰレベルを有し得る。例えば、ＡＶＰレベルは、そのようなサービスの商業的な提供者の実験室において、免疫測定法によって測定され得る。そのような提供者の１つは、本社が３  Ｇｉｒａｌｄａ  Ｆａｒｍｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．０７９４０、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  ＡｍｅｒｉｃａにあるＱｕｅｓｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓである。別の提供者はＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃであり得る。サービスの提供者および実施される免疫測定法の種類に応じて、実験室における基準範囲または標準は、別の提供者または免疫測定法のものと異なる場合がある。
【００６７】
ＡＶＰについてアッセイすることに関して実施上の限定が存在する可能性がある。例えば、凍結させなければ、ＡＶＰはエクスビボ、血漿中で不安定である。不安定性は、ＡＶＰの活性なコンフォメーションの維持に役立つジスルフィド結合が還元されることに起因する可能性がある。検査は、限られた数の参照実験室を通じて利用可能であり得、これは、一般には結果までのターンアラウンドタイムが比較的長い。さらに、アッセイ標準供給が信頼できない。これらの潜在的な限定は、１種以上の遺伝子マーカー、タンパク質マーカーまたは他のホルモンなどの本明細書に記載の１種以上の代理マーカーをアッセイすることによって克服され得る。
【００６８】
（ｂ）コペプチン
上記の通り、ＡＶＰの分析前の不安定性により、このホルモンに関連する以前の検査が限定されていたが、安定なグリコペプチドコペプチンが、ＡＶＰと同時分泌（ｃｏ−ｓｅｃｒｅｔｅ）されるので、代理としての機能を果たし得る。ＡＶＰ前駆体のＣ末端部分を含む３９アミノ酸のグリコペプチドであるコペプチンは、ＡＶＰ放出についての安定な感受性代理マーカーであることが見いだされた。血清コペプチンはグリコシル化されており、糖部分を含有する。
【００６９】
対象は、正常な対象由来の試料中のコペプチンまたは実験室における基準中のコペプチンの６０パーセンタイル、７０パーセンタイル、８０パーセンタイル、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９パーセンタイル超のベースラインのコペプチンレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、１．０ｎｇ／ｍＬから８．０ｎｇ／ｍＬの間、２ｎｇ／ｍＬから７ｎｇ／ｍＬの間、３ｎｇ／ｍＬから６ｎｇ／ｍＬの間、３ｎｇ／ｍＬから８ｎｇ／ｍＬの間、１．５ｎｇ／ｍＬおよび６ｎｇ／ｍＬ、２ｎｇ／ｍＬから５ｎｇ／ｍＬの間または３ｎｇ／ｍＬから５ｎｇ／ｍＬの間の濃度を超えるベースラインの血液コペプチンレベル、血清コペプチンレベルまたは血漿コペプチンレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、１．５ｎｇ／ｍＬ超、２ｎｇ／ｍＬ超、２．５ｎｇ／ｍＬ超、２．７５ｎｇ／ｍＬ超、２．８ｎｇ／ｍＬ超、３ｎｇ／ｍＬ超、４ｎｇ／ｍＬ超、５ｎｇ／ｍＬ超、６ｎｇ／ｍＬ超、７ｎｇ／ｍＬ超または７．５ｎｇ／ｍＬ超のベースラインの血液コペプチンレベル、血清コペプチンレベルまたは血漿コペプチンレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、１．５ｎｇ／ｍＬ、２ｎｇ／ｍＬ、２．１ｎｇ／ｍＬ、２．２ｎｇ／ｍＬ、２．３ｎｇ／ｍＬ、２．４ｎｇ／ｍＬ、２．５ｎｇ／ｍＬ、２．６ｎｇ／ｍＬ、２．７ｎｇ／ｍＬ、２．８ｎｇ／ｍＬ、２．９ｎｇ／ｍＬ、３ｎｇ／ｍＬ、４ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、６ｎｇ／ｍＬ、７ｎｇ／ｍＬ、または７．５ｎｇ／ｍＬであるベースラインの血液コペプチンレベル、血清コペプチンレベルまたは血漿コペプチンレベルを有し得る。レベルは、実験室における基準と対照して決定され得る。血液コペプチンレベル、血清コペプチンレベルまたは血漿コペプチンレベルは、いつでも、例えば、任意の所与の日の午前に、午後にまたは晩に測定され得る。
【００７０】
対象は、商業的に利用可能な免疫測定サービスまたはキットを用いて測定して、２．０ｎｇ／ｍＬ、２．２５ｎｇ／ｍＬ、２．５０ｎｇ／ｍＬ、２．７５ｎｇ／ｍＬ、または３．０ｎｇ／ｍＬを超えるベースラインの血液コペプチンレベル、血清コペプチンレベルまたは血漿コペプチンレベルを有し得る。対象は、商業的に利用可能な免疫測定サービスまたはキットを用いて測定して、１．５ｎｇ／ｍＬ、２ｎｇ／ｍＬ、２．１ｎｇ／ｍＬ、２．２ｎｇ／ｍＬ、２．３ｎｇ／ｍＬ、２．４ｎｇ／ｍＬ、２．５ｎｇ／ｍＬ、２．６ｎｇ／ｍＬ、２．７ｎｇ／ｍＬ、２．８ｎｇ／ｍＬ、２．９ｎｇ／ｍＬ、３ｎｇ／ｍＬ、４ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、６ｎｇ／ｍＬ、７ｎｇ／ｍＬ、または７．５ｎｇ／ｍＬであるベースラインの血液コペプチンレベル、血清コペプチンレベルまたは血漿コペプチンレベルを有し得る。例えば、コペプチンレベルは、そのようなサービスの商業的な提供者の実験室において、免疫測定法によって測定され得る。そのような提供者の１つは、本社が３  Ｇｉｒａｌｄａ  Ｆａｒｍｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．０７９４０、Ｕｎｉｔｅｄ  ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  ＡｍｅｒｉｃａにあるＱｕｅｓｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓである。そのような市販のアッセイの１つは、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＩｎｃによるＢ・Ｒ・Ａ・Ｈ・Ｍ・Ｓ＊  Ｃｏｐｅｐｔｉｎ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙである。サービスの提供者および実施される免疫測定法の種類に応じて、実験室における基準範囲または標準は、別の提供者または免疫測定法のものと異なる場合がある。血液コペプチン、血清コペプチンまたは血漿コペプチンのレベルは、ｐＭで表され得る。
【００７１】
コルチゾール
上記の通り、コルチゾール産生は、ＨＰＡ軸における事象の複雑な協調の結果である。より詳細には、コルチゾールは、副腎の束状帯で産生されるステロイドホルモンの１つである。コルチゾールが副腎から放出されるためのシグナル伝達のカスケードが起こる。視床下部から放出されたコルチコトロピン放出ホルモンおよびＡＶＰにより下垂体前葉の副腎皮質刺激ホルモン分泌細胞が刺激されてＡＣＴＨが放出され、それにより副腎皮質へのシグナルが中継される。ここで、ＡＣＴＨに応答して、束状帯および網状帯によりグルココルチコイド、具体的にはコルチゾールが分泌される。コルチゾールはコルチゾールの肝臓代謝産物であり得る。コルチゾールの肝臓代謝産物は、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾール、アルファ−コルトール、ベータ−コルトール、アルファ−コルトール酸、ベータ−コルトール酸またはそれらの組合せであり得る。
【００７２】
対象は、正常な対象由来の試料中のコルチゾールまたは実験室における基準中のコルチゾールの６０パーセンタイル、７０パーセンタイル、８０パーセンタイル、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９パーセンタイル超のベースラインのコルチゾールレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、０．５ｐｇ／ｍＬから６ｐｇ／ｍＬの間、１ｐｇ／ｍＬから５ｐｇ／ｍＬの間または２ｐｇ／ｍＬから４ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超えるベースラインの唾液コルチゾールレベル、尿コルチゾールレベル、血液コルチゾールレベル、血清コルチゾールレベルまたは血漿コルチゾールレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、０．５ｐｇ／ｍＬ超、２ｐｇ／ｍＬ超、２．５ｐｇ／ｍＬ超、２．７５ｐｇ／ｍＬ超、３ｐｇ／ｍＬ超、３．５ｐｇ／ｍＬ超、４．０ｐｇ／ｍＬ超、４．５ｐｇ／ｍＬ超、４．７５ｐｇ／ｍＬ超、５ｐｇ／ｍＬ超、５．５ｐｇ／ｍＬ超または６ｐｇ／ｍＬ超のベースラインの血液コルチゾールレベル、尿コルチゾールレベル、血清コルチゾールレベル、唾液コルチゾールレベルまたは血漿コルチゾールレベルを有し得る。レベルは、実験室における基準と対照して決定され得る。血液コルチゾールレベル、尿コルチゾールレベル、血清コルチゾールレベル、唾液コルチゾールレベルまたは血漿コルチゾールレベルは、いつでも、例えば、任意の所与の日の午前に、午後にまたは晩に測定され得る。例えば、尿コルチゾールは単一時点で測定され得る。尿コルチゾールは２４時間採取物または終夜採取物において測定され得る。終夜採取物は、例えば５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間または１３時間採取物であり得る。尿コルチゾールは、尿クレアチニンによって正規化され得、これは、単一時点での測定または終夜採取物に対して有用であり得る。血液中のコルチゾールレベルは、総コルチゾールとして測定され得る。遊離コルチゾール、すなわちタンパク質と結合していないコルチゾールは、推定または算出され得る。尿中または唾液中のコルチゾールレベルは、例えば、遊離の、すなわちタンパク質と結合していない、コルチゾールであってよい。
【００７３】
コルチゾールレベルは、マススペクトロメトリーまたは免疫測定法により、そのようなサービスの商業的な提供者の実験室において測定され得る。そのような提供者の１つは、本社が３  Ｇｉｒａｌｄａ  Ｆａｒｍｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．０７９４０、Ｕｎｉｔｅｄ  ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  ＡｍｅｒｉｃａにあるＱｕｅｓｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓである。別の提供者はＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．または「ＰＰＤ」などの生物分析実験室であり得る。別の提供者はＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＩｎｃまたはＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓであり得る。市販のアッセイキットがＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能であり得る。サービスの提供者および実施される免疫測定法の種類に応じて、実験室における基準範囲または標準は、別の提供者または免疫測定法のものと異なる場合がある。
【００７４】
（ｃ）コルチゾン
コルチゾンは、ステロイド産生と称されるプロセスのいくつかの最終産物のうちの１つである。このプロセスはコレステロールの合成で開始され、次いでこれが副腎（腎上体）における一連の修飾を経て進行して、多くのステロイドホルモンのいずれか１つになる。上記の通り、この経路の最終産物の１つがコルチゾールである。末梢組織では、コルチゾールが酵素１１−ベータ−ステロイド脱水素酵素によってコルチゾンに変換される。コルチゾンは、１１−ケト基の水素添加を通じて活性化され、したがって、コルチゾールは時にはヒドロコルチゾンと称される。
【００７５】
対象は、正常な対象由来の試料中のコルチゾンまたは実験室における基準中のコルチゾンの６０パーセンタイル、７０パーセンタイル、８０パーセンタイル、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９パーセンタイル超のベースラインのコルチゾンレベルを有し得るが、レベルは、例えば、特定のタンパク質または他の成分の有無が原因で、血液と尿では異なり得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、０．５ｐｇ／ｍＬから１０ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超える、１ｐｇ／ｍＬから９ｐｇ／ｍＬの間、２ｐｇ／ｍＬから８ｐｇ／ｍＬの間、３ｐｇ／ｍＬから７ｐｇ／ｍＬの間、４ｐｇ／ｍＬから６ｐｇ／ｍＬの間、２ｐｇ／ｍＬから４ｐｇ／ｍＬの間または１ｐｇ／ｍＬから４ｐｇ／ｍＬの間のベースラインの唾液コルチゾンレベル、尿コルチゾンレベル、血液コルチゾンレベル、血清コルチゾンレベルまたは血漿コルチゾンレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、０．５ｐｇ／ｍＬ超、２ｐｇ／ｍＬ超、２．５ｐｇ／ｍＬ超、２．７５ｐｇ／ｍＬ超、３ｐｇ／ｍＬ超、３．５ｐｇ／ｍＬ超、４．０ｐｇ／ｍＬ超、４．５ｐｇ／ｍＬ超、５ｐｇ／ｍＬ超、５．５ｐｇ／ｍＬ超、６ｐｇ／ｍＬ超、６．５ｐｇ／ｍＬ超、７ｐｇ／ｍＬ超、７．５ｐｇ／ｍＬ超、８ｐｇ／ｍＬ超、８．５ｐｇ／ｍＬ超、９ｐｇ／ｍＬ超または９．５ｐｇ／ｍＬ超のベースラインの唾液コルチゾンレベル、尿コルチゾンレベル、血液コルチゾンレベル、血清コルチゾンレベルまたは血漿コルチゾンレベルを有し得る。レベルは、実験室における基準と対照して決定され得る。唾液コルチゾンレベル、尿コルチゾンレベル、血液コルチゾンレベル、血清コルチゾンレベルまたは血漿コルチゾンレベルは、いつでも、例えば、任意の所与の日の午前に、午後にまたは晩に測定され得る。
【００７６】
コルチゾンはコルチゾンの肝臓代謝産物であり得る。コルチゾンの肝臓代謝産物は、テトラヒドロコルチゾン、コルトロン、コルトロン酸またはそれらの組合せであり得る。尿試料中、コルチゾンの肝臓代謝産物は、総グルココルチコイドの約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％または約３０％であり得る。これらの量は、コルチゾールの肝臓代謝産物のレベルを含み得る。テトラヒドロ代謝産物は、総グルココルチコイドの約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％または約８０％を示し得る。コルチゾンは、尿試料中の総グルココルチコイドの約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％であり得る。コルチゾールは、尿試料中の総グルココルチコイドの約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％であり得る。
【００７７】
コルチゾンレベルは、マススペクトロメトリーまたは免疫測定法により、そのようなサービスの商業的な提供者の実験室において測定され得る。そのような提供者の１つは、本社が３  Ｇｉｒａｌｄａ  Ｆａｒｍｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．０７９４０、Ｕｎｉｔｅｄ  ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  ＡｍｅｒｉｃａにあるＱｕｅｓｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓである。別の提供者はＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．または「ＰＰＤ」などの生物分析実験室であり得る。サービスの提供者および実施される免疫測定法の種類に応じて、実験室における基準範囲または標準は、別の提供者または免疫測定法のものと異なる場合がある。コルチゾンは、マススペクトロメトリーによって測定され得る。
【００７８】
（ｄ）コルチコトロピン放出ホルモン（ＣＲＨ）
ＣＲＨは、１９１アミノ酸のプレプロホルモンに由来する４１アミノ酸のペプチドである。ＣＲＨは、視床下部の室傍核（ＰＶＮ）によって、ストレスに応答して分泌される。視床下部において産生されることに加えて、ＣＲＨは、Ｔリンパ球などの末梢組織においても合成され、また、胎盤において高度に発現される。
【００７９】
対象は、正常な対象由来の試料中のＣＲＨまたは実験室における基準中のＣＲＨの６０パーセンタイル、７０パーセンタイル、８０パーセンタイル、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９パーセンタイル超のベースラインのコペプチンレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、０．５ｐｇ／ｍＬから１０ｐｇ／ｍＬの間、１ｐｇ／ｍＬから９ｐｇ／ｍＬの間、２ｐｇ／ｍＬから８ｐｇ／ｍＬの間、３ｐｇ／ｍＬから７ｐｇ／ｍＬの間、４ｐｇ／ｍＬから６ｐｇ／ｍＬの間、２ｐｇ／ｍＬから４ｐｇ／ｍＬの間または１ｐｇ／ｍＬから４ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超えるベースラインの尿ＣＲＨレベル、唾液ＣＲＨレベル、血液ＣＲＨレベル、血清ＣＲＨレベルまたは血漿ＣＲＨレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、０．５ｐｇ／ｍＬ超、１ｐｇ／ｍＬ超、２ｐｇ／ｍＬ超、２．５ｐｇ／ｍＬ超、２．７５ｐｇ／ｍＬ超、３ｐｇ／ｍＬ超、３．５ｐｇ／ｍＬ超、４．０ｐｇ／ｍＬ超、４．５ｐｇ／ｍＬ超、５ｐｇ／ｍＬ超、５．５ｐｇ／ｍＬ超、６ｐｇ／ｍＬ超、６．５ｐｇ／ｍＬ超、７ｐｇ／ｍＬ超、７．５ｐｇ／ｍＬ超、８ｐｇ／ｍＬ超、８．５ｐｇ／ｍＬ超、９ｐｇ／ｍＬ超または９．５ｐｇ／ｍＬ超のベースラインの血液ＣＲＨレベル、血清ＣＲＨレベルまたは血漿ＣＲＨレベルを有し得る。レベルは、実験室における基準と対照して決定され得る。尿ＣＲＨレベル、唾液ＣＲＨレベル、血液ＣＲＨレベル、血清ＣＲＨレベルまたは血漿ＣＲＨレベルは、いつでも、例えば、任意の所与の日の午前に、午後にまたは晩に測定され得る。
【００８０】
ＣＲＨレベルは、そのようなサービスの商業的な提供者の実験室において、免疫測定法によって測定され得る。そのような提供者の１つは、本社が３  Ｇｉｒａｌｄａ  Ｆａｒｍｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．０７９４０、Ｕｎｉｔｅｄ  ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  ＡｍｅｒｉｃａにあるＱｕｅｓｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓである。サービスの提供者および実施される免疫測定法の種類に応じて、実験室における基準範囲または標準は、別の提供者または免疫測定法のものと異なる場合がある。
【００８１】
（ｅ）副腎皮質刺激ホルモン（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅ）（ＡＣＴＨ）
ＡＣＴＨは、下垂体前葉により産生され、分泌されるポリペプチド刺激ホルモンである。上記の通り、ＡＣＴＨは、ＨＰＡ軸の成分である。ＡＣＴＨにより、副腎皮質からのコルチコステロイドおよびコルチゾールの産生および放出が増加する。
【００８２】
対象は、正常な対象由来の試料中のＡＣＴＨまたは実験室における基準中のＡＣＴＨの６０パーセンタイル、７０パーセンタイル、８０パーセンタイル、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９パーセンタイル超のベースラインのＡＣＴＨレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、０．５ｐｇ／ｍＬから１０ｐｇ／ｍＬの間、１ｐｇ／ｍＬから９ｐｇ／ｍＬの間、２ｐｇ／ｍＬから８ｐｇ／ｍＬの間、３ｐｇ／ｍＬから７ｐｇ／ｍＬの間、４ｐｇ／ｍＬから６ｐｇ／ｍＬの間、２ｐｇ／ｍＬから４ｐｇ／ｍＬの間または１ｐｇ／ｍＬから４ｐｇ／ｍＬの間の濃度を超えるベースラインの血液ＡＣＴＨレベル、血清ＡＣＴＨレベルまたは血漿ＡＣＴＨレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、０．５ｐｇ／ｍＬ超、２ｐｇ／ｍＬ超、２．５ｐｇ／ｍＬ超、２．７５ｐｇ／ｍＬ超、３ｐｇ／ｍＬ超、３．５ｐｇ／ｍＬ超、４．０ｐｇ／ｍＬ超、４．５ｐｇ／ｍＬ超、５ｐｇ／ｍＬ超、５．５ｐｇ／ｍＬ超、６ｐｇ／ｍＬ超、６．５ｐｇ／ｍＬ超、７ｐｇ／ｍＬ超、７．５ｐｇ／ｍＬ超、８ｐｇ／ｍＬ超、８．５ｐｇ／ｍＬ超、９ｐｇ／ｍＬ超または９．５ｐｇ／ｍＬ超のベースラインの血液ＡＣＴＨレベル、血清ＡＣＴＨレベルまたは血漿ＡＣＴＨレベルを有し得る。レベルは、実験室における基準と対照して決定され得る。血液ＡＣＴＨレベル、血清ＡＣＴＨレベルまたは血漿ＡＣＴＨレベルは、いつでも、例えば、任意の所与の日の午前に、午後にまたは晩に測定され得る。ＡＣＴＨのレベルの変化は、ＭＡＳＱにおける症状の変化と関連する可能性がある。
【００８３】
ＡＣＴＨレベルは、そのようなサービスの商業的な提供者の実験室において、免疫測定法によって測定され得る。そのような提供者の１つは、本社が３  Ｇｉｒａｌｄａ  Ｆａｒｍｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．０７９４０、Ｕｎｉｔｅｄ  ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  ＡｍｅｒｉｃａにあるＱｕｅｓｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓである。別の提供者はＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＩｎｃまたはＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓであり得る。市販のアッセイキットがＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＩｎｃまたはＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能であり得る。サービスの提供者および実施される免疫測定法の種類に応じて、実験室における基準範囲または標準は、別の提供者または免疫測定法のものと異なる場合がある。
【００８４】
（ｆ）ニューロフィジンＩＩ
ニューロフィジンＩＩは、バソプレシンに結合する担体タンパク質である。ニューロフィジンＩＩはプレプロバソプレシンから生成される。
【００８５】
対象は、正常な対象由来の試料中のニューロフィジンＩＩまたは実験室における基準中のニューロフィジンＩＩの６０パーセンタイル、７０パーセンタイル、８０パーセンタイル、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９パーセンタイル超のニューロフィジンＩＩレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、１．０ｎｇ／ｍＬから８．０ｎｇ／ｍＬの間、２ｎｇ／ｍＬから７ｎｇ／ｍＬの間、３ｎｇ／ｍＬから６ｎｇ／ｍＬの間、３ｎｇ／ｍＬから８ｎｇ／ｍＬの間、１．５ｎｇ／ｍＬおよび６ｎｇ／ｍＬ、２ｎｇ／ｍＬから５ｎｇ／ｍＬの間または３ｎｇ／ｍＬから５ｎｇ／ｍＬの間の濃度を超えるベースラインの血液ニューロフィジンＩＩレベル、血清ニューロフィジンＩＩレベルまたは血漿ニューロフィジンＩＩレベルニューロフィジンＩＩレベルを有し得る。ＨＰＡ軸の機能に関連する障害を有する対象は、１．５ｎｇ／ｍＬ超、２ｎｇ／ｍＬ超、２．５ｎｇ／ｍＬ超、２．７５ｎｇ／ｍＬ超、３ｎｇ／ｍＬ超、４ｎｇ／ｍＬ超、５ｎｇ／ｍＬ超、６ｎｇ／ｍＬ超、７ｎｇ／ｍＬ超または７．５ｎｇ／ｍＬ超のベースラインの血液ニューロフィジンＩＩレベル、血清ニューロフィジンＩＩレベルまたは血漿ニューロフィジンＩＩレベルを有し得る。レベルは、実験室における基準と対照して決定され得る。血液ニューロフィジンＩＩレベル、血清ニューロフィジンＩＩレベルまたは血漿ニューロフィジンＩＩレベルは、いつでも、例えば、任意の所与の日の午前に、午後にまたは晩に測定され得る。
【００８６】
対象は、商業的に利用可能な免疫測定サービスまたはキットを用いて測定して、２．０ｎｇ／ｍＬ、２．２５ｎｇ／ｍＬ、２．５０ｎｇ／ｍＬ、２．７５ｎｇ／ｍＬまたは３．０ｎｇ／ｍＬを超えるベースラインの血液ニューロフィジンＩＩレベル、血清ニューロフィジンＩＩレベルまたは血漿ニューロフィジンＩＩレベルを有し得る。例えば、ニューロフィジンＩＩレベルは、そのようなサービスの商業的な提供者の実験室において、免疫測定法によって測定され得る。サービスの提供者および実施される免疫測定法の種類に応じて、実験室における基準範囲または標準は、別の提供者または免疫測定法のものと異なる場合がある。血液ニューロフィジンＩＩレベル、血清ニューロフィジンＩＩレベルまたは血漿ニューロフィジンＩＩのレベルは、ｐＭで表され得る。
【００８７】
（ｇ）グルココルチコイド
グルココルチコイド（ＧＣ）は、糸球体の機能および尿細管の機能またはその両方の組合せに対するそれらの影響によって心臓血管系に影響を及ぼすことにより、胎児腎臓および成熟腎臓における腎臓の発生および機能に影響を及ぼす可能性がある。クッシング症候群における内在性ＧＣ過剰産生または外因性ＧＣ投与に起因してＧＣが過剰になることにより、高血圧症が生じ、また、心拍出量、全末梢抵抗および腎血流量の増加が引き起こされる。グルココルチコイドは、肝臓において５−ステロイドレダクターゼの作用によって代謝されるコルチゾールおよびコルチゾンに起因する可能性があるテトラヒドロ代謝産物を含み得る。グルココルチコイドは、コルトール、コルトロン、コルトール酸およびコルトロン酸を含み得る。グルココルチコイドは、コルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンも含み得る。
【００８８】
高コルチゾール血症の対象は、尿中へのコルチゾールの排出が増加している可能性がある。この排出はクレアチニン排出と比較され得、これは腎機能が正常である対象においてほぼ一定であり得る。ＨＰＡ軸機能障害に付随する障害を有する対象の尿グルココルチコイド：クレアチニン比は、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．４１、３．４２、３．４３、３．４４、３．４５、３．４６、３．４７、３．４８、３．４９、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、５、６、７、８、９、１０、１０．１、１０．２、１０．３、１０．４、１０．５、１０．６、１０．７、１０．８、１０．９、１１、１１．１、１１．２、１１．３、１１．４、１１．５、１１．５５、１１．６、１１．６５、１１．７、１１．８、１１．９、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０を超え得る。
【００８９】
グルココルチコイドレベルおよびクレアチニンレベルは、マススペクトロメトリーまたは免疫測定法により、そのようなサービスの商業的な提供者の実験室において測定され得る。そのような提供者の１つは、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．または「ＰＰＤ」などの生物分析実験室であり得る。実施されるマススペクトロメトリーまたは免疫測定法の種類に応じて、実験室における基準範囲または標準は、別の提供者、マススペクトロメトリー法または免疫測定法のものと異なる場合がある。
【００９０】
ｄ．対象
ＨＰＡマーカーを同定するための方法は、対象由来の試料に適用することができる。対象はヒトであり得る。対象はそれを必要とし得る。例えば、対象は、ＨＰＡ軸機能障害に付随する障害と診断されている者であり得る。この診断は、本明細書に記載の方法を用いる前、その間またはその後に行われ得る。ＨＰＡ軸機能障害により、異常に延長されると有害になり、障害が生じる可能性があるコルチゾールの上昇が駆動される可能性がある。ＫａｌｔａｓおよびＣｈｒｏｕｓｏｓ（２００７）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ｐｓｙｃｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、３０３−３１８頁、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；およびＬｏｖａｌｌｏおよびＴｈｏｍａｓ（２０００）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ｐｓｙｃｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、３４２−３６７頁、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ。例えば、コルチゾールの上昇が長引くことにより、組織の異化、免疫機能の低下および神経心理学的影響、例えば、嗜眠および感情機能の混乱などが導かれる可能性がある。副腎皮質ホルモン過剰症の副作用は、うつ病の症状と同様である。Ｇｕｇｕｉｓら、１９９０、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、２７、１１５６−１１６４を参照されたい。ＨＰＡ軸機能障害は、ＨＰＡ駆動の欠損または日周パターンの混乱であり得る。対象は、１種以上の他のＨＰＡ軸の調節不全関連障害を患っていてよく、これらとしては、気分障害、不安障害、物質関連障害、クッシング症候群または疾患、アルツハイマー型の認知症、アルツハイマー病に起因する軽度の認知障害、骨粗鬆症、関節炎、糖尿病、脂質異常症、肥満、高血圧症、創傷、疼痛および緑内障が挙げられる。気分障害は、例えば、うつ病または大うつ病性障害であり得る。不安障害は、例えば、心的外傷後ストレス障害、全般性不安障害またはパニック障害であり得る。物質関連障害は、例えば、アルコール依存もしくは乱用または薬物依存もしくは乱用であり得る。
【００９１】
対象は、正常な対象であり得る。正常な対象は、ＨＰＡ軸機能障害に付随する障害を有さなくてよい。正常な対象は、健康であり、いかなる障害または疾患も有さなくてよい。
【００９２】
ｅ．試料
上記の方法においてＨＰＡマーカー（複数可）が検出され得る試料は、任意の組織であってよく、対象由来のタンパク質、ホルモン、核酸またはそれらの組合せを含む。ホルモンは、例えば、コルチゾール、ＡＣＴＨ、ＣＲＨ、コルチゾンおよびコルチゾールまたはコルチゾンの代謝産物などのステロイドホルモンであり得る。核酸はＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。核酸はゲノム核酸であり得る。試料は、対象から得られたまま直接使用することもでき、前処理して試料の特性を改変した後に使用することもできる。前処理は、抽出、濃縮、干渉する成分の不活化、試薬の添加またはそれらの組合せを含み得る。試料は、ＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有する対象由来のものであってもよく、対照試料であってもよい。
【００９３】
ＨＰＡ軸機能マーカーは、任意の細胞型、組織または体液試料において検出され得る。そのような細胞型、組織および体液の試料は、生検試料および剖検試料などの組織の切片、組織学的な目的のために取得された凍結切片、血液、血漿、血清、唾液、痰、便、涙、粘液、リンパ液、腹水、婦人科学的体液（ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｌｕｉｄ）、尿、腹腔液、脳脊髄液、膣水洗によって採取された体液または膣洗浄によって採取された体液を含み得る。組織または細胞型は、細胞の試料を動物から取り出すことによってもたらされ得るが、予め単離された細胞（例えば、別の人により、別の時間におよび／または別の目的のために単離されたもの）を使用することによっても実現され得る。治療歴または転帰歴がある保存用組織も使用され得る。核酸の精製は必要ない場合がある。尿試料などの任意の試料は、対象からの試料の２４時間採取物であり得る。試料は、対象からの試料の終夜採取物であり得る。試料は、対象から単回の排泄で採取され得る。
【００９４】
（１）対照／ベースライン
上記の方法において使用するための対照またはベースライン、試料または一連の較正組成物を含めることが望ましい場合がある。対照試料は上記の対象由来の試料と同時に分析され得る。対象試料から得られた結果を対照試料から得られた結果と比較することができる。標準曲線をもたらすことができ、それを用いて生体試料についてのアッセイ結果を比較することができる。そのような標準曲線により、アッセイ単位に応じたマーカーのレベル、すなわち、蛍光標識が使用された場合、蛍光シグナル強度が示される。多数のドナーから取得された試料を使用して、正常な組織におけるＨＰＡマーカー（複数可）の対照レベルについて、ならびに上記の特性のうちの１つ以上を有し得るドナーから取得された組織におけるＨＰＡマーカーの「リスクがある」レベルについて標準曲線がもたらされ得る。
【００９５】
対照は、正常な対象由来の試料であってよい。対照は、「実験室における基準」などのＨＰＡマーカーの既知レベルであってよく、または対照は、「実験室における基準範囲」などのＨＰＡマーカー（複数可）の既知のレベルの範囲であってよい。
【００９６】
実験室における基準範囲は、アッセイまたはアッセイサービス提供者に応じて変動し得る。例えば、血漿ＡＶＰについての実験室における基準範囲は、０．５ｐｇ／ｍＬから１５ｐｇ／ｍＬの間、１ｐｇ／ｍＬから１３．３ｐｇ／ｍＬの間、１ｐｇ／ｍＬから１５ｐｇ／ｍＬの間、２ｐｇ／ｍＬから１４ｐｇ／ｍＬの間、３ｐｇ／ｍＬから１３ｐｇ／ｍＬの間、４ｐｇ／ｍＬから１２ｐｇ／ｍＬの間、５ｐｇ／ｍＬから１１ｐｇ／ｍＬの間、６ｐｇ／ｍＬから１０ｐｇ／ｍＬの間、７ｐｇ／ｍＬから９ｐｇ／ｍＬの間または１１ｐｇ／ｍＬから１３．３ｐｇ／ｍＬの間であり得る。
【００９７】
コペプチンについての実験室における基準範囲は、２ｐｍｏｌ／Ｌから２０ｐｍｏｌ／Ｌの間、３ｐｍｏｌ／ｍＬから１９ｐｍｏｌ／Ｌの間、４ｐｍｏｌ／ｍＬから１８ｐｍｏｌ／ｍＬの間、４．８ｐｍｏｌ／Ｌから１７．４ｐｍｏｌ／Ｌの間、５ｐｍｏｌ／Ｌから１６ｐｍｏｌ／Ｌの間、７ｐｍｏｌ／Ｌから１４ｐｍｏｌ／Ｌの間、８ｐｍｏｌ／Ｌから１１ｐｍｏｌ／Ｌの間、９ｐｍｏｌ／Ｌから１０ｐｍｏｌ／Ｌの間、１０ｐｍｏｌ／Ｌから１７．４ｐｍｏｌ／Ｌの間、１３ｐｍｏｌ／Ｌから１７．４ｐｍｏｌ／Ｌの間または１４ｐｍｏｌ／Ｌから１７．４ｐｍｏｌ／Ｌの間であり得る。
【００９８】
女性の対象におけるコペプチンについての実験室における基準範囲は、２ｐｍｏｌ／Ｌから２０ｐｍｏｌ／Ｌの間、３ｐｍｏｌ／ｍＬから１９ｐｍｏｌ／Ｌの間、４ｐｍｏｌ／ｍＬから１８ｐｍｏｌ／ｍＬの間、４．８ｐｍｏｌ／Ｌから１４ｐｍｏｌ／Ｌの間、５ｐｍｏｌ／Ｌから１４ｐｍｏｌ／Ｌの間、８ｐｍｏｌ／Ｌから１４ｐｍｏｌ／Ｌの間、９ｐｍｏｌ／Ｌから１４ｐｍｏｌ／Ｌの間、１０ｐｍｏｌ／Ｌから１４ｐｍｏｌ／Ｌの間、１１ｐｍｏｌ／Ｌから１４ｐｍｏｌ／Ｌの間、１２ｐｍｏｌ／Ｌから１４ｐｍｏｌ／Ｌの間または４ｐｍｏｌ／Ｌから９ｐｍｏｌ／Ｌの間であり得る。女性におけるコペプチンについての実験室における基準範囲は４．８ｐｍｏｌ／Ｌから１２．９ｐｍｏｌ／Ｌの間であり得る。
【００９９】
男性の対象におけるコペプチンについての実験室における基準範囲は、４．８ｐｍｏｌ／Ｌから２０ｐｍｏｌ／Ｌの間、５ｐｍｏｌ／Ｌから２０ｐｍｏｌ／Ｌの間、８ｐｍｏｌ／Ｌから１５ｐｍｏｌ／Ｌの間、１５ｐｍｏｌ／Ｌから２５ｐｍｏｌ／Ｌの間、１６ｐｍｏｌ／Ｌから２４ｐｍｏｌ／Ｌの間、１７ｐｍｏｌ／Ｌから２３ｐｍｏｌ／Ｌの間、１８ｐｍｏｌ／Ｌから２２ｐｍｏｌ／Ｌの間または１９ｐｍｏｌ／Ｌから２１ｐｍｏｌ／Ｌの間であり得る。女性におけるコペプチンについての実験室における基準範囲は４．８ｐｍｏｌ／Ｌから１９．１ｐｍｏｌ／Ｌの間であり得る。
【０１００】
コペプチンについての実験室における基準範囲は、０．５ｐｇ／ｍＬから１０ｐｇ／ｍＬの間、１ｐｇ／ｍＬから９ｐｇ／ｍＬの間、２ｐｇ／ｍＬから８ｐｇ／ｍＬの間、３ｐｇ／ｍＬから７ｐｇ／ｍＬの間、４ｐｇ／ｍＬから６ｐｇ／ｍＬの間、２ｐｇ／ｍＬから４ｐｇ／ｍＬの間または１ｐｇ／ｍＬから４ｐｇ／ｍＬの間であり得る。実験室における基準範囲は、男性または女性の任意の対象についてのものであり得る。
【０１０１】
コルチゾールｍｍｏｌ／Ｌ：クレアチニンｍｍｏｌ／Ｌ比についての実験室における基準範囲は、１から２０の間、２から１９の間、３から１８の間、４から１７の間、５から１６の間、６から１５の間、７から１４の間、８から１３の間、９から１２の間または１０から１１の間であり得る。例えば、Ｒｅｙｎｏｌｄｓら、「Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｒａｎｇｅ  ｆｏｒ  ｕｒｉｎｅ  ｃｏｒｔｉｓｏｌ：ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ  ｒａｔｉｏ」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ（２００７）１３、２７０頁を参照されたい。
【０１０２】
上記の非ゲノムマーカーはいずれも、マススペクトロメトリーまたは免疫測定法により、そのようなサービスの商業的な提供者の実験室において測定され得る。そのような提供者の１つは、本社が３  Ｇｉｒａｌｄａ  Ｆａｒｍｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．０７９４０、Ｕｎｉｔｅｄ  ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  ＡｍｅｒｉｃａにあるＱｕｅｓｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓである。別の提供者はＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃであり得る。市販のアッセイキットがＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ａｂｂｏｔｔ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓまたはＯｒｔｈｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから入手可能であり得る。サービスの提供者、実施されるマススペクトロメトリーまたは免疫測定法の種類に応じて、実験室における基準範囲または標準は、別の提供者、マススペクトロメトリー法または免疫測定法のものと異なる場合がある。
【０１０３】
ｆ．検出
ＨＰＡマーカーは試料において検出され得る。対象または対象から得られた試料中のマーカーを検出するための多くの方法が利用可能であり、本明細書に記載の方法と併せて用いられ得る。方法としては、種々の免疫測定法、ＳＮＰ遺伝子型決定、エキソヌクレアーゼ抵抗性ヌクレオチド検出、溶液に基づく方法、遺伝子ビット分析、プライマーに導かれるヌクレオチドの組み入れ、対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーションおよび他の技法が挙げられる。マーカーを検出する方法のいずれにおいても、標識された抗体、タンパク質またはオリゴヌクレオチドを使用することができる。
【０１０４】
試料中のＨＰＡマーカーの存在または量は、例えば、マススペクトロメトリー、免疫測定法または免疫組織化学的検査（例えば組織生検からの切片を用いる）により、ＨＰＡマーカーに対する抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）またはその断片を使用して容易に決定することができる。抗ＨＰＡマーカー抗体およびその断片は、当技術分野で周知の方法によって作製され得る。他の検出方法としては、例えば、それぞれの全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第６，１４３，５７６号；同第６，１１３，８５５号；同第６，０１９，９４４号；同第５，９８５，５７９号；同第５，９４７，１２４号；同第５，９３９，２７２号；同第５，９２２，６１５号；同第５，８８５，５２７号；同第５，８５１，７７６号；同第５，８２４，７９９号；同第５，６７９，５２６号；同第５，５２５，５２４号；および同第５，４８０，７９２号に記載の方法が挙げられる。
【０１０５】
（１）免疫測定法
ＨＰＡマーカー、そのペプチドまたはそれらの組合せは、免疫測定法を用いて分析され得る。ＨＰＡマーカーの存在または量は、抗体を用い、ＨＰＡマーカーとの特異的結合を検出することで決定することができる。例えば、抗体またはその断片は、コペプチンまたはＡＶＰに特異的に結合し得る。
【０１０６】
任意の免疫測定法を利用することができる。免疫測定法は、例えば、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、競合阻害測定法、例えば、フォワード競合（ｆｏｒｗａｒｄ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ）阻害測定法またはリバース競合（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ）阻害測定法など、蛍光偏光測定法または競合結合測定法であり得る。ＥＬＩＳＡはサンドイッチＥＬＩＳＡであり得る。抗体とＨＰＡマーカーの特異的な免疫学的結合は、抗体に付着させた蛍光タグまたは発光タグ、金属および放射性核種などの直接標識によって、またはアルカリホスファターゼまたは西洋ワサビペルオキシダーゼなどの間接標識によって検出され得る。
【０１０７】
固定化された抗体またはその断片の使用が免疫測定法に組み入れられ得る。抗体は、例えば、磁気またはクロマトグラフィーのマトリックス粒子、アッセイプレート（例えばマイクロタイターウェル）などの表面、固体基質材料の小片などの種々の支持体上に固定化され得る。アッセイ細片は抗体または複数の抗体を固体支持体上のアレイにコーティングすることによって調製され得る。次いで、この細片を試験生体試料に浸漬し、次いで、直ちに洗浄および検出ステップを通じて処理して、着色された点などの測定可能なシグナルを生成することができる。
【０１０８】
（ａ）サンドイッチＥＬＩＳＡ
サンドイッチＥＬＩＳＡでは、２つの抗体の層（すなわち捕捉抗体と検出抗体）間の抗原の量が測定される。測定されるＨＰＡマーカーは、抗体と結合することができる少なくとも２つの抗原部位を含有し得る。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体はいずれもサンドイッチＥＬＩＳＡにおける捕捉抗体および検出抗体として使用され得る。
【０１０９】
一般に、試験試料中のＨＰＡマーカーを分離し、数量化するために少なくとも２つの抗体が使用される。より詳細には、少なくとも２つの抗体がＨＰＡマーカーの特定のエピトープに結合し、免疫複合体が形成され、これが「サンドイッチ」と称される。試験試料中のＨＰＡマーカーを捕捉するために１つ以上の抗体が用いられ得（これらの抗体は、しばしば「捕捉」抗体と称される）、サンドイッチに検出可能な（すなわち、数量化できる）標識を結合させるために１つ以上の抗体が使用される（これらの抗体は、しばしば「検出」抗体と称される）。サンドイッチアッセイでは、それらのエピトープと結合する抗体はどちらも、アッセイにおける任意の他の抗体とそのそれぞれのエピトープとの結合によって減弱されてはならない。言い換えれば、抗体は、ＨＰＡマーカーを含有する疑いがある試験試料と接触させる１つ以上の第１の抗体が、第２の抗体または後続の抗体によって認識されるエピトープの全部または一部に結合せず、それにより、１つ以上の第２の検出抗体の、ＨＰＡマーカーに結合する能力に干渉しないように選択され得る。
【０１１０】
抗体は前記免疫測定法における第１の抗体として使用され得る。抗体は、ＨＰＡマーカーの少なくとも３つの連続した（３）アミノ酸を含むエピトープに免疫特異的に結合することが好ましい。本発明の抗体に加えて、前記免疫測定法は、ＨＰＡマーカーの少なくとも３つの連続した（３）アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに免疫特異的に結合する第２の抗体を含んでよく、第２の抗体が結合する連続した（３）アミノ酸は、第１の抗体が結合する連続した（３）アミノ酸とは異なる。
【０１１１】
好ましい実施形態では、ＨＰＡマーカーを含有する疑いがある試験試料を少なくとも１つの第１の捕捉抗体および少なくとも１つの第２の検出抗体と同時にまたは逐次的に接触させることができる。サンドイッチアッセイ形式では、ＨＰＡマーカーを含有する疑いがある試験試料を、まず、特定のエピトープに特異的に結合する少なくとも１つの第１の捕捉抗体と、第１の抗体−ＨＰＡマーカー複合体の形成が可能になる条件下で接触させる。２つ以上の捕捉抗体を使用する場合、第１の多数の捕捉抗体−ＨＰＡマーカー複合体が形成される。サンドイッチアッセイでは、抗体、好ましくは少なくとも１つの捕捉抗体は、試験試料において予測されるＨＰＡマーカーの最大量に対してモル過剰量で使用される。例えば、微小粒子コーティング緩衝液１ｍｌ当たり約５μｇ／ｍｌから約１ｍｇ／ｍｌまでの抗体が使用され得る。
【０１１２】
場合によって、試験試料を少なくとも１つの第１の捕捉抗体と接触させる前に、少なくとも１つの第１の捕捉抗体を、試験試料からの第１の抗体−ＨＰＡマーカー複合体の分離を容易にする固体支持体に結合させることができる。これだけに限定されないが、ウェル、チューブまたはビーズの形態のポリマー材料製の固体支持体を含めた、当技術分野で公知の任意の固体支持体が使用され得る。抗体（１つまたは複数）は、吸着によって、化学的カップリング剤を使用した共有結合によって、または当技術分野で公知の他の手段によって、そのような結合によってＨＰＡマーカーと結合する抗体の能力が干渉されないという条件で、固体支持体に結合させることができる。さらに、必要であれば、固体支持体を誘導体化して、抗体上の種々の官能基との反応を可能にすることができる。そのような誘導体化には、例えば、これだけに限定されないが、無水マレイン酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよび１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドなどの特定のカップリング剤を使用することが必要である。
【０１１３】
ＨＰＡマーカーを含有する疑いがある試験試料を少なくとも１つの第１の捕捉抗体と接触させた後、第１の捕捉抗体（または多数の抗体）−ＨＰＡ複合体の形成を可能にするために、試験試料をインキュベートする。インキュベートは、約４．５から約１０．０までのｐＨ、約２℃から約４５℃までの温度で、少なくとも約１分から約１８時間まで、約２分から６分までまたは約３分から４分までの期間にわたって行うことができる。
【０１１４】
第１の／多数の捕捉抗体−ＨＰＡマーカー複合体が形成された後、次いで、複合体を少なくとも１つの第２の検出抗体と接触させる（第１の／多数の抗体−ＨＰＡマーカー−第２の抗体複合体の形成が可能になる条件下で）。第１の抗体−ＨＰＡマーカー複合体を２つ以上の検出抗体と接触させた場合、第１の／多数の捕捉抗体−ＨＰＡマーカー−多数の抗体検出複合体が形成される。第１の抗体と同様に、少なくとも第２の（および後続の）抗体を第１の抗体−ＨＰＡマーカー複合体と接触させる場合、第１の／多数の抗体−ＨＰＡマーカー−第２の／多数の抗体複合体を形成するために上記の条件と同様の条件下でのインキュベート期間が必要である。少なくとも１つの第２の抗体は検出可能な標識を含有することが好ましい。検出可能な標識は、第１の／多数の抗体−ＨＰＡマーカー−第２の／多数の抗体複合体の形成の前に、それと同時にまたはその後に、少なくとも１つの第２の抗体に結合させることができる。当技術分野で公知の任意の検出可能な標識が使用され得る。
【０１１５】
（ｂ）フォワード競合阻害
フォワード競合形式では、既知濃度の標識されたＨＰＡマーカーの一定分量を使用して、試験試料中のＨＰＡマーカーとＨＰＡマーカー抗体との結合について競合させる。
【０１１６】
フォワード競合測定法では、固定化抗体を試験試料および標識されたＨＰＡマーカーと逐次的にまたは同時に接触させることができる。ＨＰＡマーカーは、抗ＨＰＡマーカー抗体と関連して任意の検出可能な標識で標識することができる。このアッセイでは、抗体を固体支持体上に固定化することができる。あるいは、抗体を、微小粒子などの固体支持体上に固定化された抗種抗体（ａｎｔｉｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）などの抗体にカップリングすることができる。
【０１１７】
標識されたＨＰＡマーカー、試験試料および抗体を、サンドイッチアッセイ形式に関して上記されている条件と同様の条件下でインキュベートする。次いで、２つの異なる種の抗体−ＨＰＡマーカー複合体が生成され得る。詳細には、生成された抗体−ＨＰＡマーカー複合体の一方は検出可能な標識を含有するが、他方の抗体−ＨＰＡマーカー複合体は、検出可能な標識を含有しない。抗体−ＨＰＡマーカー複合体は、検出可能な標識を数量化する前に残りの試験試料から分離することができるが、必ずしもその必要はない。次いで、抗体−マーカー複合体を残りの試験試料から分離するかどうかにかかわらず、抗体−ＨＰＡマーカー複合体における検出可能な標識の量を数量化する。次いで、試験試料中のＨＰＡマーカーの濃度を抗体−ＨＰＡマーカー複合体における検出可能な標識の数量を標準曲線と比較することによって決定し得る。標準曲線は、既知濃度のＨＰＡマーカーの段階希釈物を使用して、マススペクトロメトリーによって、重量測定によっておよび当技術分野で公知の他の技法によって作成することができる。
【０１１８】
抗体−ＨＰＡマーカー複合体は、抗体を、サンドイッチアッセイ形式に関して上記されている固体支持体などの固体支持体に結合させ、次いで残りの試験試料を固体支持体との接触から外すことによって試験試料から分離することができる。
【０１１９】
（ｃ）リバース競合測定法
リバース競合測定法では、固定化されたＨＰＡマーカーを、試験試料および少なくとも１つの標識された抗体と逐次的にまたは同時に接触させることができる。抗体は、ＨＰＡマーカーの少なくとも３つの連続した（３）アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに特異的に結合することが好ましい。ＨＰＡマーカーをサンドイッチアッセイ形式に関して上記されている固体支持体などの固体支持体に結合させることができる。
【０１２０】
固定化されたＨＰＡマーカー、試験試料および少なくとも１つの標識された抗体を、サンドイッチアッセイ形式に関して上記されている条件と同様の条件下でインキュベートする。次いで、２つの異なる種のＨＰＡマーカー複合体が生成され得る。詳細には、生成されたＨＰＡマーカー−抗体複合体の一方は、固定化されており、検出可能な標識を含有するが、他方のＨＰＡマーカー−抗体複合体は固定化されておらず、検出可能な標識を含有する。洗浄などの当技術分野で公知の技法により、固定化されていないＨＰＡマーカー−抗体複合体および残りの試験試料を、固定化されたＨＰＡマーカー−抗体複合体が存在しているところから除去する。固定化されていないＨＰＡマーカー抗体複合体が除去されたら、次いで、固定化されたＨＰＡマーカー−抗体複合体における検出可能な標識の量を数量化する。次いで、試験試料中のＨＰＡマーカーの濃度を、ＨＰＡマーカー−複合体における検出可能な標識の数量を標準曲線と比較することによって決定し得る。標準曲線は既知濃度のＨＰＡマーカーの段階希釈物を使用して、マススペクトロメトリーによって、重量測定によっておよび当技術分野で公知の他の技法によって作成することができる。
【０１２１】
（ｄ）蛍光偏光
蛍光偏光測定法では、抗体またはその機能的に活性な断片を、まず、ＨＰＡマーカーを含有する疑いがある標識されていない試験試料と接触させて、標識されていないＨＰＡマーカー−抗体複合体を形成することができる。次いで、標識されていないＨＰＡマーカー−抗体複合体を蛍光標識されたＨＰＡマーカーと接触させる。標識されたＨＰＡマーカーは、標識されていない試験試料中のＨＰＡマーカーのいずれとも、抗体またはその機能的に活性な断片との結合について競合する。形成された標識されたＨＰＡマーカー−抗体複合体の量を決定し、試験試料中のＨＰＡマーカーの量を、標準曲線を使用することによって決定する。
【０１２２】
蛍光偏光測定法において使用される抗体は、少なくとも３つの（３）アミノ酸のＨＰＡマーカーを含むアミノ酸配列を有するエピトープに特異的に結合し得る。
【０１２３】
抗体、標識されたＨＰＡマーカーおよび試験試料および少なくとも１つの標識された抗体を、サンドイッチ免疫測定法に関して上記されている条件と同様の条件下でインキュベートすることができる。
【０１２４】
あるいは、抗体またはその機能的に活性な断片を、蛍光標識されたＨＰＡマーカーおよびＨＰＡマーカーを含有する疑いがある標識されていない試験試料と同時に接触させて、標識されたＨＰＡマーカー−抗体複合体および標識されていないＨＰＡマーカー−抗体複合体の両方を形成することができる。形成された標識されたＨＰＡマーカー−抗体複合体の量を決定し、試験試料中のＨＰＡマーカーの量を、標準曲線を使用することによって決定する。
【０１２５】
あるいは、抗体またはその機能的に活性な断片を、まず、その蛍光標識されたＨＰＡマーカーと接触させて、標識されたＨＰＡマーカー−抗体複合体を形成する。次いで、標識されたＨＰＡマーカー−抗体複合体を、ＨＰＡマーカーを含有する疑いがある標識されていない試験試料と接触させる。試験試料中の標識されていないＨＰＡマーカーはいずれも、標識されたＨＰＡマーカーと、抗体またはその機能的に活性な断片との結合について競合する。形成された標識されたＨＰＡマーカー−抗体複合体の量を決定し  試験試料中のＨＰＡマーカーの量を標準曲線を使用することによって決定する。この免疫測定法において使用される抗体は、ＨＰＡマーカーの少なくとも３つの連続した（３）アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに特異的に結合し得る。
【０１２６】
（２）マススペクトロメトリー
マススペクトロメトリー（ＭＳ）分析を単独でまたは他の方法と組み合わせて用いることができる。他の方法としては、免疫測定法および特異的なポリヌクレオチドを検出するための上記の方法が挙げられる。マススペクトロメトリー法を用いて、１種以上のバイオマーカーの存在および／または数量を決定することができる。ＭＳ分析は、例えば、指向性スポットＭＡＬＤＩ−ＴＯＦまたは液体クロマトグラフィーＭＡＬＤＩ−ＴＯＦマススペクトロメトリーなどのマトリックス支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）飛行時間型（ＴＯＦ）ＭＳ分析を含み得る。いくつかの実施形態では、ＭＳ分析は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）ＥＳＩ−ＭＳなどのエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）ＭＳを含む。マススペクトロメトリーは、市販の分光計を使用して実現することができる。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳおよびＥＳＩ−ＭＳを含めたＭＳ分析を利用して、生体試料におけるＨＰＡマーカーの存在および数量を検出するための方法が用いられ得る。手引きについては、例えば、それぞれを参照により本明細書に組み込む、米国特許第６，９２５，３８９号；同第６，９８９，１００号；および同第６，８９０，７６３号を参照されたい。
【０１２７】
（３）遺伝子型決定
（ａ）ＳＮＰ遺伝子型決定
大規模ＳＮＰ遺伝子型決定は、動的対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーション（ＤＡＳＨ）、マイクロプレートアレイ対角ゲル電気泳動（ＭＡＤＧＥ）、パイロシークエンス、オリゴヌクレオチド特異的ライゲーションまたはＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＳＮＰ  チップなどの種々のＤＮＡ「チップ」技術を含み得る。これらの方法は、標的遺伝子領域の増幅を必要とする場合がある。増幅は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって実現することができる。
【０１２８】
（ｂ）エキソヌクレアーゼ抵抗性ヌクレオチド
ＰＩマーカーは、参照により本明細書に組み込む米国特許第４，６５６，１２７号に記載の特殊化エキソヌクレアーゼ抵抗性ヌクレオチドを使用して検出することができる。多型部位のすぐ３’側の対立遺伝子配列と相補的なプライマーは、対象から得られた標的分子とハイブリダイズすることが可能になり得る。標的分子上の多型部位が、存在する特定のエキソヌクレアーゼ抵抗性ヌクレオチド誘導体と相補的なヌクレオチドを含有する場合、その誘導体は、ハイブリダイズしたプライマーの末端に組み入れられ得る。そのような組み入れにより、プライマーをエキソヌクレアーゼに対して抵抗性にし、それにより、その検出を可能にすることができる。試料のエキソヌクレアーゼ抵抗性誘導体の同一性は既知であり得るので、プライマーがエキソヌクレアーゼに対して抵抗性になったという所見により、標的分子の多型部位に存在するヌクレオチドが反応に使用されたヌクレオチド誘導体のものと相補的であったことが示される。この方法には、大量の無関係の配列データを決定することが必要であるとは限らない。
【０１２９】
（ｃ）溶液に基づく方法
参照により本明細書に組み込むＰＣＴ出願第ＷＯ９１／０２０８７号に記載の通り、溶液に基づく方法を用いてＰＩマーカーの同一性を決定することができる。多型部位のすぐに３’側の対立遺伝子配列と相補的なプライマーが使用され得る。該方法により、標識されたジデオキシヌクレオチド誘導体を使用して、多型部位のヌクレオチドと相補的であれば、プライマーの末端に組み入れられるその部位のヌクレオチドの同一性を決定することができる。
【０１３０】
（ｄ）遺伝子ビット分析
遺伝子ビット分析では、標識されたターミネーターおよび多型部位の３’側の配列と相補的なプライマーの混合物が使用され得る。評価されている標的分子の多型部位に存在するヌクレオチドによって決定され、それと相補的である標識されたターミネーターが組み入れられ得る。プライマーまたは標的分子は、固相に固定化され得る。
【０１３１】
（ｅ）プライマーに導かれるヌクレオチドの組み入れ
参照により本明細書に組み込むＮｙｒｅｎ，Ｐ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０８：１７１−１７５（１９９３）に記載の通り、プライマーに導かれるヌクレオチドの組み入れ手順を用いて核酸におけるＰＩマーカーをアッセイすることができる。そのような手順は、多型部位にある塩基間を識別するために、標識されたデオキシヌクレオチドを組み入れることに依拠し得る。そのような形式では、シグナルが組み入れられたデオキシヌクレオチドの数に比例するので、同じヌクレオチドの一続きにおいて生じる多型により、一続きの長さに比例するシグナルがもたらされ得る。
【０１３２】
（ｆ）対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーション
対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーションを用いて、ＰＩマーカーを検出することができる。この方法では、標的対立遺伝子とハイブリダイズすることができるプローブを使用することができる。プローブを標識することができる。プローブはオリゴヌクレオチドであり得る。標的対立遺伝子は、マーカーの周りに３個から５０個の間のヌクレオチドを有し得る。標的対立遺伝子は、マーカーの周りに５個から５０個の間のヌクレオチド、１０個から４０個の間のヌクレオチド、１５個から４０個の間のヌクレオチドまたは２０個から３０個の間のヌクレオチドを有し得る。プローブを、固相支持体、例えばチップに付着させることができる。オリゴヌクレオチドを、リソグラフィーを含めた種々のプロセスによって固体支持体に結合させることができる。チップは、核酸の標的領域の２つ以上の対立遺伝子変異体、例えば、遺伝子の２つ以上の多型領域の対立遺伝子変異体を含み得る。
【０１３３】
（ｇ）その他の技法
対立遺伝子を検出するための他の技法の例としては、選択的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増幅または選択的プライマー伸長が挙げられる。公知の突然変異またはヌクレオチドの差異が中心に置かれ、次いで、完全なマッチが見いだされるとハイブリダイズが可能になる条件下で標的ＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマーを調製することができる。そのような対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション技法を用いて、オリゴヌクレオチドをＰＣＲ増幅された標的ＤＮＡとハイブリダイズさせる場合には反応ごとに１つの突然変異または多型領域を試験することができ、または、オリゴヌクレオチドをハイブリダイズ用膜に付着させ、標識された標的ＤＮＡとハイブリダイズさせる場合には、いくつもの異なる突然変異または多型領域を試験することができる。
【０１３４】
選択的ＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術を本発明と併せて用いることができる。特異的な増幅のためのプライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドは、分子の中央に対象の突然変異または多型領域を有し得る。次いで、増幅は、参照により本明細書に組み込むＧｉｂｂｓら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１７：２４３７−２４４８）に記載の示差的なハイブリダイゼーションまたは適切な条件下で、ミスマッチによりポリメラーゼ伸長が妨げられるまたは低下する可能性がある１つのプライマーの３’最末端に左右され得る。
【０１３５】
手動の配列決定または自動化蛍光配列決定のいずれかの直接ＤＮＡ配列決定により、配列変異を検出することができる。別の手法は、参照により本明細書に組み込むＯｒｉｔａ  Ｍら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：２７６６−２７７０に記載の一本鎖高次構造多型アッセイ（ＳＳＣＰ）である。ＳＳＣＰゲルにおいて移動性がシフトした断片について配列決定して、ＤＮＡ配列変異の正確な性質を決定することができる。２つの相補的なＤＮＡ鎖間のミスマッチを検出することに基づく他の手法としては、参照により本明細書に組み込むＳｈｅｆｆｉｅｌｄ  Ｖ  Ｃら（１９９１）Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４９：６９９−７０６に記載のクランプ変性ゲル電気泳動（ｃｌａｍｐｅｄ  ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ  ｇｅｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）（ＣＤＧＥ）；参照により本明細書に組み込むＷｈｉｔｅ  Ｍ  Ｂら（１９９２）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １２：３０１−３０６に記載のヘテロ二本鎖分析（ＨＡ）；および参照により本明細書に組み込むＧｒｏｍｐｅ  Ｍら、（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：５８５５−５８９２に記載の化学的ミスマッチ切断（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｉｓｍａｔｃｈ  ｃｌｅａｖａｇｅ）（ＣＭＣ）が挙げられる。現在利用可能な、ＤＮＡ配列変異を検出する方法についての総説は、参照により本明細書に組み込むＧｒｏｍｐｅ（１９９３）による総説において見いだすことができる。Ｇｒｏｍｐｅ  Ｍ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５：１１１−１１７。いったん突然変異がわかれば、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ハイブリダイゼーションなどの対立遺伝子特異的検出手法を利用して、多数の他の試料を同じ突然変異について迅速にスクリーニングすることができる。そのような技法では、参照により本明細書に組み込むＥｌｇｈａｎｉａｎ  Ｒら（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７：１０７８−１０８１に記載の通り、目で見える色つきの結果をもたらすために金ナノ粒子を用いて標識することができるプローブを利用することができる。
【０１３６】
ＤＮＡ配列における多型を検出するための迅速な予備分析を、１つ以上の制限酵素を用いて、好ましくは多数の制限酵素を用いて切断された一連のＤＮＡのサザンブロットについて調べることによって実施することができる。
【０１３７】
（４）増幅
検出方法のいずれにも、ＨＰＡマーカーを増幅するステップを組み入れることができる。ＨＰＡマーカーを増幅し、次いで検出することができる。核酸の増幅技法は、参照により本明細書に組み込むＫｗｏｈ，Ｄ．Ｙ．ら、１９８８、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１１９７に記載の通り、クローニング、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、特定の対立遺伝子のＰＣＲ（ＡＳＡ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、ネステッドポリメラーゼ連鎖反応、自家持続配列複製、転写増幅系およびＱ−ベータレプリカーゼを含み得る。
【０１３８】
増幅産物は、サイズ分析、制限消化しその後サイズ分析すること、反応生成物において特異的なタグを付けたオリゴヌクレオチドプライマーを検出すること、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ハイブリダイゼーション、対立遺伝子特異的５’エキソヌクレアーゼ検出、配列決定、ハイブリダイゼーションまたはそれらの組合せによってアッセイすることができる。
【０１３９】
ＰＣＲに基づく検出手段は、複数のマーカーを同時に増幅することを含み得る。ＰＣＲプライマーは、サイズが重複せず、同時に分析することができるＰＣＲ産物が生成されるように選択することができる。あるいは、示差的に標識されたプライマーを用いて種々のマーカーを増幅することができる。次いで、各マーカーを示差的に検出することができる。ハイブリダイゼーションに基づく検出手段により、試料中の多数のＰＣＲ産物を示差的に検出することが可能になる。
【０１４０】
ｇ．Ｖ１Ｂアンタゴニスト
本明細書では、それを必要とする対象を治療する方法において使用するためのＶ１Ｂアンタゴニストが提供される。Ｖ１Ｂアンタゴニストは、次式（式Ｉ）：
【０１４１】
【化５】
2015512892.tif 000006
（式中、Ａは、芳香族ヘテロ単環式環であり、複素環は５員環または６員環であり、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択されるヘテロ原子を最大４つ含み、ヘテロ原子の１つ以下が酸素原子または硫黄原子であり、Ａは、基Ｒ１１、Ｒ１２および／またはＲ１３で置換されていてよく、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、各出現時に、互いに独立して、水素  塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、またはＲ３およびＲ４はつながって−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ２）４−または−（ＣＨ２）３−を生じ、
Ｒ５は、
【０１４２】
【化６】
2015512892.tif 000007
であり、Ｗは、ＮＲ５４、ＮＲ５４−（Ｃ１−Ｃ４−アルキレン）および結合からなる群から選択され、Ｒ５４は、独立に、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、フェニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキレン−フェニルからなる群から選択され、フェニル環は、最大２つのＲ５９基で置換されていてよく、Ｒ５９は、独立に、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、Ｒ６３は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群からのものであり、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル原子、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択される）およびこれらの互変異性形態、これらの鏡像異性形態およびそれらのジアステレオマー形態を有し得る。
【０１４３】
Ａは、１つまたは２つのヘテロ原子を含む芳香族ヘテロ単環系であってよく、２つのヘテロ原子のうちの１つは窒素である。
【０１４４】
Ａは、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、チアゾール、イミダゾール、チオフェン−またはフランであり得る。
【０１４５】
Ｖ１Ｂアンタゴニストは、
【０１４６】
【化７】
2015512892.tif 000008
であり得る。
【０１４７】
Ｖ１Ｂアンタゴニストは、
【０１４８】
【化８】
2015512892.tif 000009
であり得る。
【０１４９】
４．キット
本明細書では、本明細書に記載の任意の方法を実施するために有用であり得るキットが提供される。キットは、ＨＰＡマーカー検出用試薬および場合によって、試薬を、例えば試料に投与するための手段を含み得る。さらに、キットは、本明細書に記載のＶ１Ｂアンタゴニストを含み得る。キットは、プロテアーゼ阻害試薬を含み得る。キットは、ｐＨ調整試薬、担体またはそれらの組合せを含み得る。キットは、キットを使用し、分析、モニタリングまたは治療を行うための説明書をさらに含み得る。キットは、ＡＶＰを含有する試料（複数可）を安定化するために有用であり得る。一実施形態によると、本発明の方法において使用するためのキットは、ＨＰＡマーカー検出用試薬を含み、場合によって、プロテアーゼ阻害試薬、ｐＨ調整試薬、担体およびそれらの組合せから選択されるさらなる成分を含む。別の実施形態によると、本発明の方法において使用するためのキットは、ＨＰＡマーカー検出用試薬および本明細書に記載のＶ１Ｂアンタゴニスト、ならびに場合によって、プロテアーゼ阻害試薬、ｐＨ調整試薬、担体およびそれらの組合せから選択されるさらなる成分を含む。
【０１５０】
キットは、バイアル、採取管またはビンなどの１つ以上の容器も含んでよく、各容器が別々の試薬を含有する。例えば、ＡＶＰを含有する血漿試料を、容器内の１種以上のプロテアーゼ阻害剤、生理活性担体に供することができる。キットは、どのようにＡＶＰを室温で安定化するか、本明細書に記載の分析、モニタリング、治療または方法をどのように実施または解釈するかが記載されていてよい使用説明書をさらに含み得る。
【０１５１】
本発明は、以下の非限定的な実施例によって例示される多数の態様を有する。
【実施例】
【０１５２】
［実施例１］
血漿ＡＶＰの分析
ＭＤＤの対象における化合物Ａの安全性および薬力学の無作為化、プラセボ対照、二重盲検式臨床研究を行った。Ｍ．Ｉ．Ｎ．Ｉ．により確認されたＭＤＤの一次診断および重症度３または４の臨床的な全体的印象を有する対象５１人を、７日間にわたる８００ｍｇの化合物Ａ、１日１回（ｎ＝３１）または対応するプラセボ（ｎ＝２０）に無作為化した。対象は最初の試験薬投与の２日前から最後の試験薬の投薬２４時間後まで臨床現場に拘束された。ＨＰＡ軸の機能を、試験薬を投与する前および投薬６日目および７日目に徹底的に評価した。ＨＰＡ軸の機能に関連する遺伝学的変異体のパネルをアッセイした。この試験の規定された目的の１つは、化合物Ａに応答する可能性がより高いＭＤＤ対象を、化合物Ａを投与する前に同定するための手段を定義することであった。
【０１５３】
ＭＤＤ対象の３３％（１７／５１）で、健康な正常ボランティア（ＨＮＶ）における分布のおよそ９０パーセンタイル（８．６ｐｇ／ｍＬ）を超える血漿ＡＶＰレベルが示された。この臨床研究におけるベースラインのＡＶＰデータが別のＨＮＶ臨床研究からの比較できるデータと共に示されている。これらのＨＮＶデータは、報告された実験室における基準範囲（１．０ｐｇ／ｍＬから１３．３ｐｇ／ｍＬまで）と一致するが、ＡＶＰが高いＭＤＤ対象の大部分において実験室における基準範囲を超える血漿ＡＶＰレベルが示された。図１を参照されたい。
【０１５４】
試験薬を投与する前、１日の任意の３回の時点（およそ午前８時、午後２時および午後１０時）に測定された日中の血漿レベルが、この試験におけるＭＤＤ対象と他の試験のＨＮＶ対象との間の、ベースラインのＨＰＡ軸の機能の最も顕著な差異であったので、ＡＶＰは、化合物Ａ応答の潜在的な予測因子として、最初に分析された唯一のパラメータであった。ＡＶＰが高い対象とＡＶＰが正常な対象で示差的な化合物Ａの利益が示されるかどうかを知るための最初の症状の変化の評価基準としてＭＡＳＱが使用された。
【０１５５】
受信者動作特性（ＲＯＣ）分析が用いられた。第１のＲＯＣでは、従属変数は治療であり、独立変数はＭＡＳＱ下位尺度であった。このＲＯＣの目的は、化合物Ａを受けた対象の特性であり、プラセボを受けた対象の特性ではないＭＡＳＱ尺度スコアの変化を定義することであった。そのようなスコアの変化により化合物Ａ応答者と化合物Ａ非応答者が区別されると考えられ得る。５つのＭＡＳＱ下位尺度のうち、全般的窮迫混合型（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｄｉｓｔｒｅｓｓ  Ｍｉｘｅｄ）（ＧＤＭ）下位尺度および全般的窮迫うつ病（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｄｉｓｔｒｅｓｓ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ）（ＧＤＤ）下位尺度により、化合物Ａ対象とプラセボ対象が弁別された。表１を参照されたい。これは、これらの尺度における治療についての統計的に有意な因子を含むが、快感消失抑うつ（Ａｎｈｅｄｏｎｉｃ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）（ＡＤ）、覚醒不安（Ａｎｘｉｏｕｓ  Ａｒｏｕｓａｌ）（ＡＡ）または全般的窮迫不安（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｄｉｓｔｒｅｓｓ  Ａｎｘｉｅｔｙ）（ＧＤＡ）におけるものは含まない、ＡＮＣＯＶＡの結果に基づいて予測された。従属変数をベースラインからの変化の絶対値ではなくパーセントとして分析した場合、同様の結果が得られた。
【０１５６】
【表１】
2015512892.tif 000010
【０１５７】
第２のＲＯＣでは、従属変数はＧＤＭに関するカットオフ−０．５３に基づく応答者の状態であった。ＧＤＭは、ＧＤＤよりも特異性が優れていたので選択した。独立変数は、ベースラインの午後の血漿ＡＶＰであった。最適なカットオフは８．６ｐｇ／ｍＬであった。これにより、感度３９％（９／２３の化合物Ａ応答者が含まれた）および特異度８６％（７人中６人の化合物Ａ非応答者が排除された）がもたらされた。１人の化合物Ａ対象は、ベースラインの午後の血漿ＡＶＰが得られなかったので、この分析には含まれなかった。
【０１５８】
個々のＡＶＰレベルでは実質的な日周変動は示されず、したがって、午後の測定によってＡＶＰが高いと定義された対象の大多数は朝の測定によってもそのように定義され、ＡＶＰが低い対象についても同様であった。朝の測定ではＡＶＰが低く、午後の測定ではＡＶＰが高かった１人の対象は、その後の分析の全てについてＡＶＰが高いとみなされた。朝の測定ではＡＶＰが低く、午後の測定が得られなかった１人の対象は、その後の分析の全てについてＡＶＰが低いとみなされた。
【０１５９】
ＡＶＰ（高い対正常な）と治療（化合物Ａ対プラセボ）の相互作用が下に示されている。従属変数は７日目のＭＡＳＱ尺度スコアおよびハミルトンうつ病評価尺度（ＨＡＭ−Ｄ）−バージョンスコアであった。−２日目の対応する尺度スコアが各モデルにおける共変量であった。各モデルは、研究者、ＡＶＰ、治療およびＡＶＰと治療の相互作用についての因子を含んだ。ＡＶＰと治療の相互作用についての因子は、ＭＡＳＱ  ＧＤＤに関してのみ統計的に有意であったが、ＭＡＳＱ  ＧＤＭおよびＡＤならびにＨＡＭ−Ｄの７項目バージョンに関して数値的に好ましい傾向があった。図において、棒は、各ＡＶＰ群における化合物Ａとプラセボとの間の最小二乗平均の差異を示し、ひげは、差異の標準誤差を示す。ＭＡＳＱ総スコアを、１から５までの尺度に対して正規化した。図２を参照されたい。
【０１６０】
ＡＶＰが高いＭＤＤ対象およびＡＶＰが正常であるＭＤＤ対象は、試験薬を投与する前には、ＨＰＡ軸の機能の大多数の他の評価基準（血漿ＡＣＴＨ、血清コルチゾール、尿コルチゾールおよび総グルココルチコイドならびにＣＲＨ攻撃に対するＡＣＴＨ応答およびコルチゾール応答）が異ならなかった。ＡＶＰが正常な対象では、いくらか高い起床時の唾液コルチゾールおよびコルチゾンが示されたが、午後または晩の唾液コルチゾールまたはコルチゾンはＡＶＰが高い対象と異ならなかった。ＡＶＰが高いＭＤＤ対象およびＡＶＰが正常なＭＤＤ対象では、ＭＡＳＱ、ＨＡＭ−Ｄまたは知覚ストレス尺度（ｐｅｒｃｅｉｖｅｄ  ｓｔｒｅｓｓ  ｓｃａｌｅ）に関する総スコアによって評価される症状のいかなる明白な差異も示されなかった。２つの群では、化合物Ａの血漿ＡＣＴＨ、血清コルチゾールまたは尿コルチゾールおよび総グルココルチコイドに対する神経内分泌的効果も異ならなかった。化合物Ａ処置中の唾液のコルチゾールおよびコルチゾンは２つの群間で同様であり、これは、ＡＶＰが正常な対象の中で試験薬を投与する前からいくらか大きな変化があったことを意味する。
【０１６１】
化合物Ａを受けた、ＡＶＰが高いＭＤＤ対象において示されたストレス要因（ＣＲＨ攻撃）に対する生理応答は、プラセボを受けたＭＤＤ対象と比較して低かった。対照的に、化合物Ａまたはプラセボを受けた、ＡＶＰが正常なＭＤＤ対象の間では、ストレス応答の差異は限られていたまたは差異はなかった。図３を参照されたい。ＡＶＰが高い対象は、ＨＰＡ軸活性の減弱がストレスに対する生理応答およびうつ症状に関連する対象であり、したがって、Ｖ１Ｂアンタゴニストを使用してＭＤＤを治療するために適した集団である。
【０１６２】
［実施例２］
コペプチンおよびＡＶＰ関連遺伝子マーカー
コペプチンは、インビボにおける半減期が長く、エクスビボにおいて血漿中で安定であるＡＶＰ前駆体タンパク質の断片である。実施例１に記載の臨床研究では、コペプチンレベルはＡＶＰレベルとよく相関した。示されているデータは、試験薬を開始する前および毎日の試験薬の６回目の投薬後の、朝、午後および晩のレベルである。図４を参照されたい。
【０１６３】
さらに、ＨＰＡまたはうつ病に関連する遺伝学的変異体のパネルと試験薬を投与する前のベースラインのＡＶＰレベルとの間の関連性を評価した。２つの遺伝子型、ＬＨＰＰ  ｒｓ７０８８４１８  ＡＡとＡＫＲ１Ｄ１  ｒｓ１７１６９５２１ＧＧの組合せにより、ＡＶＰが高い個体と大多数のＡＶＰが正常な個体が分離されると思われた。図５を参照されたい。
【０１６４】
コペプチン（高コペプチンについてのカットオフとして２．８ｎｇ／ｍＬを使用）はＡＶＰと同様に、化合物Ａに関連付けられるうつ症状の変化の予測因子として機能した。コペプチンは、ＨＡＭ−Ｄスコアに関して化合物Ａに関連付けられる変化の優れた予測因子であると思われた。ＡＶＰと比較した差異は、大部分は、大きなＨＡＭ−Ｄ−１７の減少、正常なＡＶＰおよび高コペプチンを示した単一の対象に帰する可能性がある。ＡＶＰの分析前の不安定性に起因して、この対象ならびに他の正常なＡＶＰおよび高コペプチンを示した４人についてのＡＶＰ値は正常な範囲であった可能性がある。図６を参照されたい。
【０１６５】
２つの遺伝子型の組合せの挙動は、実施例１に記載の臨床研究におけるうつ症状の変化の予測因子としての高ＡＶＰと同様であった。ＰＧ陽性の状態は、ｒｓ７０８８４１８ＡＡ遺伝子型とｒｓ１７１６９５２１ＧＧ遺伝子型の組合せであり、対象４８人中２４人（５０％）において観察された。３人の対象からのデータが、用いられた多重アッセイにおいて一方または両方の遺伝子型について得られなかった。図７を参照されたい。
【０１６６】
［実施例３］
同じＨＰＡまたはうつ病に関連する遺伝学的変異体のパネルを、対象における症状の改善との関連性について評価した。関連性についてのいくつかの証拠が特定のＮＲ３Ｃ１遺伝子型について認められた。化合物Ａの投与と共にＭＡＳＱおよびＨＡＭ−Ｄに関してより好ましい症状の変化を示した対象のサブセットが区別されたＡＶＰ、コペプチンおよびｒｓ７０８８４１８遺伝子型／ｒｓ１７１６９５２１遺伝子型とは対照的に、ＮＲ３Ｃ１遺伝子型では、化合物Ａの投与と共にＭＡＳＱおよびＨＡＭ−Ｄに関して好ましくない症状の変化を示した対象のサブセットが区別された。以下のデータは、ｒｓ１０４８２６７２についてのものであり、ｒｓ１７１００２３６についても同様の結果が得られた。対象４８人中３６人（７５％）がｒｓ１０４８２６７２遺伝子型ＧＧを有した。３人の対象からのデータが、用いられた多重アッセイにおいて、ｒｓ１０４８２６７２について得られなかった。図８を参照されたい。ＡＶＰレベルはｒｓ１０４８２６７２遺伝子型およびｒｓ１７１００２３６遺伝子型と関連しなかった。
【０１６７】
［実施例４］
コルチゾールおよびコルチゾンは、肝臓において、５−ステロイドレダクターゼの作用によって代謝されて、主にテトラヒドロ代謝産物になる。これらのテトラヒドロ代謝産物は、尿を介して急速に排出され、最もよく見られる尿グルココルチコイドであり、一般に総尿グルココルチコイドのおよそ７０％を構成する。未代謝のコルチゾールおよびコルチゾンは腎臓から直接尿中に排出され、一般には、総尿グルココルチコイドのおよそ５％を構成する。他の有意な尿グルココルチコイドとしては、コルトール、コルトロン、コルトール酸およびコルトロン酸が挙げられる。
【０１６８】
ＲＯＣ分析において、従属変数はＧＤＭに関するカットオフ−０．５３に基づく応答者の状態であった。独立変数は、２４時間間隔の間に採取されたベースラインの尿グルココルチコイドの量（コルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの合計）を、同じ尿採取物中のクレアチニンの量で除算したものであった。最適なカットオフはクレアチニン１ｍｇ当たりグルココルチコイド３．４４ｍｇであった。これにより、感度５８％（１４／２４の化合物Ａ応答者が含まれた）および特異度６７％（化合物Ａ非応答者６人中４人が排除された）がもたらされた。１人の化合物Ａ対象は、尿グルココルチコイドデータが得られなかったので、この分析には含まれなかった。
【０１６９】
クレアチニンで除算した尿グルココルチコイド（高い対低い）と治療（化合物Ａ対プラセボ）の相互作用が下に示されている。従属変数は７日目のＭＡＳＱ尺度スコアおよびハミルトンうつ病評価尺度（ＨＡＭ−Ｄ）−バージョンスコアであった。この分析では、胃腸の症状に関する３つのＭＡＳＱ項目は、その特異的な評価基準の精神測定的有効性を損なう可能性があるので、ＧＤＡから省いた。−２日目の対応する尺度スコアが各モデルにおける共変量であった。各モデルは、研究者、ＡＶＰ、治療およびＡＶＰと治療の相互作用についての因子を含んだ。ＡＶＰと治療の相互作用についての因子は、従属変数のいずれについても統計的に有意ではなかったが、ＭＡＳＱ  ＧＤＭ、ＧＤＤ、ＧＤＡおよびＡＡならびにＨＡＭ−Ｄの１７項目バージョンおよび７項目バージョンに関しては数値的に好ましい傾向があった。図において、棒は、各尿グルココルチコイド群における化合物Ａとプラセボとの間の最小二乗平均の差異を示し、ひげは、差異の標準誤差を示す。ＭＡＳＱ総スコアを、１から５までの尺度に対して正規化した。図９を参照されたい。
【０１７０】
化合物Ａを受けた、尿グルココルチコイドが高いＭＤＤ対象において示された尿グルココルチコイドの減少は、プラセボを受けたＭＤＤ対象と比較して大きかった。対照的に、化合物Ａを受けた尿グルココルチコイドが低いＭＤＤ対象とプラセボを受けた尿グルココルチコイドが低いＭＤＤ対象との間では、尿グルココルチコイドの減少の差異は限られていたまたは差異はなかった。図１０を参照されたい。化合物Ａを受けた健康な成人とプラセボを受けた健康な成人との間で同じ関係が観察された。尿グルココルチコイドが高い対象は、化合物Ａの効果により持続性のＨＰＡ軸活性がより大きく減少する対象であり、したがって、Ｖ１Ｂアンタゴニストを使用してＭＤＤを治療するために適した集団である。
【０１７１】
２４時間採取物からの尿グルココルチコイドおよびクレアチニンの量の代わりに、終夜（１０時間）採取物からの尿グルココルチコイドおよびクレアチニンの量を使用した場合、同様の結果が得られた。
【図１】
2015512892.tif 000015
【図２】
2015512892.tif 000016
【図３】
2015512892.tif 000017
【図４】
2015512892.tif 000018
【図５】
2015512892.tif 000019
【図６】
2015512892.tif 000020
【図７】
2015512892.tif 000021
【図８】
2015512892.tif 000022
【図９】
2015512892.tif 000023
【図１０】
2015512892.tif 000024
【配列表】
2015512892000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年11月13日(2014.11.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定し、前記治療に適した候補であると同定された対象を治療するための方法であって、
（ａ）前記対象由来の生体試料を用意するステップ；および
（ｂ）視床下部−下垂体−副腎（「ＨＰＡ」）軸機能マーカーを検出するステップ、
ここで、前記対象がＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有し、前記マーカーが存在することにより、前記対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であることが示される；および
（ｃ）ステップ（ｂ）において適した候補であることが同定された対象を、Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いて治療するステップ
を含む方法。
【請求項２】
対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適した候補であるかどうかを決定し、前記治療に適した候補であると同定された対象を治療するための方法であって、
（ａ）前記対象由来の生体試料を用意するステップ；および
（ｂ）視床下部−下垂体−副腎（「ＨＰＡ」）軸機能マーカーを検出するステップ、
ここで、前記対象がＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有し、前記ＨＰＡ軸機能マーカーが正常対象試料における前記マーカーの分布の約６０パーセンタイルを超えるレベルで存在する場合に、前記対象がＶ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に適する；および
（ｃ）ステップ（ｂ）において治療に適すると同定された対象を、Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いて治療するステップ
を含む方法。
【請求項３】
ＨＰＡ軸機能マーカーが、正常対象試料におけるＨＰＡ軸機能マーカーの分布の約６５、７０、７５、８０、８５、９０および９５パーセンタイルからなる群から選択されるパーセンタイルを超えるレベルで存在する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
マーカーが、ＡＶＰ、コペプチン、コルチゾール、コルチゾン、ＡＣＴＨ、コルチゾールの肝臓代謝産物、コルチゾンの肝臓代謝産物、ＣＲＨ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
コペプチンが血漿コペプチンであり、ＡＶＰが血漿ＡＶＰであり、コルチゾールの肝臓代謝産物が、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾール、アルファ−コルトール、ベータ−コルトール、アルファ−コルトール酸、ベータ−コルトール酸、およびそれらの組合せからなる群から選択され、ならびにコルチゾンの肝臓代謝産物が、テトラヒドロコルチゾン、コルトロン、コルトロン酸、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
生体試料が、核酸を含有する試料、血清、血漿、血液、尿および唾液からなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
生体試料が尿であり、およびマーカーが、
コルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計、または
アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計
である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
試料が、
放射免疫測定法によって決定して、８．６ｐｇ／ｍＬ以上のＡＶＰを含有する血漿試料；
酵素免疫測定法によって決定して、２．８ｎｇ／ｍＬ以上のコペプチンを含有する血漿試料；および
クレアチニン１ｍｇ当たり、合計で３．４４ｍｇ以上のコルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンを含有する尿試料
から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いる治療に対する対象の応答をモニタリングするための方法であって、
（ａ）Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いる治療を受けている対象由来の生体試料を用意するステップ；
（ｂ）視床下部−下垂体−副腎（「ＨＰＡ」）軸機能マーカーを検出するステップ、
ここで、前記対象がＨＰＡ軸の調節不全を特徴とする障害を有し、ベースラインと比較した、前記マーカーのレベルにおける２５％超の変化が、前記Ｖ１Ｂアンタゴニストが前記対象を治療するために有用であることが示される；および
（ｃ）ステップ（ｂ）において検出されたベースラインと比較した前記マーカーのレベルの変化に基づいて、前記対象における前記Ｖ１Ｂアンタゴニストを用いる治療を継続または中止するステップ
を含む方法。
【請求項１０】
ＨＰＡ軸機能マーカーが、コルチゾール；コルチゾン；コルチコトロピン放出ホルモン  副腎皮質刺激ホルモン（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅ）（ＡＣＴＨ）；コルチゾールの肝臓代謝産物、コルチゾンの肝臓代謝産物、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
マーカーが、
コルチゾール、コルチゾン、アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計、または
アルファ−テトラヒドロコルチゾール、ベータ−テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロコルチゾンの尿中量の合計
である、請求項１、請求項２または請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
尿中量の合計を同じ尿試料中のクレアチニンの量で除算する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
障害が、クッシング症候群、認知症、認知障害、気分障害、不安障害、物質関連障害、骨粗鬆症、関節炎、糖尿病、脂質異常症、肥満、高血圧症、疼痛、緑内障およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１、請求項２または請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
気分障害が、うつ病、特に大うつ病性障害であり、不安障害が、心的外傷後ストレス障害、全般性不安障害およびパニック障害からなる群から選択され、物質関連障害が、アルコール依存または乱用および薬物依存または乱用からなる群から選択され、認知症がアルツハイマー型の認知症であり、ならびに認知障害がアルツハイマー病に起因する軽度の認知障害である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
Ｖ１Ｂアンタゴニストが、式Ｉ：
【化１】
2015512892.tif 000025
（式中、Ａは、芳香族ヘテロ単環式環であり、複素環は５員環または６員環であり、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択されるヘテロ原子を最大４つ含み、ヘテロ原子の１つ以下が酸素原子または硫黄原子であり、Ａは、基Ｒ１１、Ｒ１２および／またはＲ１３で置換されていてよく、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、各出現時に、互いに独立して、水素  塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、またはＲ３およびＲ４はつながって−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ２）４−または−（ＣＨ２）３−を生じ、
Ｒ５は、
【化２】
2015512892.tif 000026
であり、Ｗは、ＮＲ５４、ＮＲ５４−（Ｃ１−Ｃ４−アルキレン）および結合からなる群から選択され、Ｒ５４は、独立に、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、フェニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキレン−フェニルからなる群から選択され、フェニル環は、最大２つのＲ５９基で置換されていてよく、Ｒ５９は、独立に、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択され、Ｒ６３は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群からのものであり、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立して、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキル原子、Ｏ−フェニル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン−フェニル、フェニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル、Ｃ２−Ｃ６−アルキニル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）およびＮ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）２からなる群から選択される）のもの、およびこれらの互変異性形態、これらの鏡像異性形態およびそれらのジアステレオマー形態のものである、請求項１、請求項２または請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
Ａが、１つまたは２つのヘテロ原子を含む芳香族ヘテロ単環系であり、前記２つのヘテロ原子のうちの１つが窒素である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
Ａが、ピリミジン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、チアゾール、イミダゾール、チオフェン−およびフランからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
Ｖ１Ｂアンタゴニストが、
【化３】
2015512892.tif 000027
または
【化４】
2015512892.tif 000028
である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
臨床試験のための適格性について対象をスクリーニングする、
臨床試験のための対象の無作為化を階層化する、または
臨床試験の分析を階層化する
ために用いられる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２０】
血漿試料中のＡＶＰを安定化するためのキットであって、１種以上のプロテアーゼ阻害剤を含む１つ以上の採取管を含む、キット。
【国際調査報告】
2015512892.tif 000029
2015512892.tif 000030
2015512892.tif 000031