(57)【要約】  根底にある病態にＰＮＡＧ発現微生物（例えばＰＮＡＧ発現細菌）が関与する微生物感染（例えば細菌感染）を処置または予防する方法が提供される。本発明の方法は、一般的に、ＰＮＡＧに特異的に結合する抗体の有効量を対象に投与することを含む。このような方法は、院内ブドウ球菌（例えば表皮ブドウ球菌および黄色ブドウ球菌）感染の処置に特に有用である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）発現細菌感染を処置または予防する方法であって、治療有効量の抗ＰＮＡＧ抗体を対象に投与することを含み、ここで該抗体は、約０．５〜約２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される前記方法。
【請求項２】
抗体は、約１０、約１５、約１７または約２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
投与された用量によって、少なくとも１０μｇ／ｍｌの抗ＰＮＡＧ抗体の血清レベルが達成される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
対象の血清のオプソニン活性は、抗体投与後の少なくとも５０日間、実質的に一定に保たれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
抗体は、少なくとも２５日の血清半減期を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
抗体は、単回用量として投与される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
抗体は、複数回用量で投与される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１回の用量の投与およびスケジューリングは、対象における抗体の血清半減期および／またはＰＮＡＧ発現細菌に対する対象の血清のインビトロでのオプソニン活性の決定に基づく、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
抗体は、静脈内注入で投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
静脈内注入は、約３０分から約１２０分にわたり投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
静脈内注入の体積は、約１００ｍｌである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
対象は、ＰＮＡＧ発現細菌感染を有する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
対象は、ＰＮＡＧ発現細菌感染を発症する危険性がある、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
感染は、肺感染、関節感染、心内膜感染、皮膚感染、軟部組織感染、または敗血症である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
抗体は、医療手技の前、その後、またはその間に投与される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
医療手技は、対象における外科用インプラントの設置である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
外科用インプラントは、ステント、カテーテル、カニューレ、プロテーゼ、またはペースメーカーである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
対象は、ヒトである、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
ＰＮＡＧ発現細菌感染は、ブドウ球菌を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
ブドウ球菌は、表皮ブドウ球菌または黄色ブドウ球菌である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
黄色ブドウ球菌は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
インビトロでのオプソニン食作用アッセイを使用して投与される抗体の有効な血清力価を決定することをさらに含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
抗体は：
ｉ）１０．２ｍｇ／ｍｌの抗ＰＮＡＧ抗体；
ｉｉ）２０ｍＭのＮａＰＯ４；および
ｉｉｉ）１５０ｍＭのＮａＣｌ
を含む製剤中にあり、
ここで該製剤のｐＨは６．５である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
抗体は、ヒト抗体である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
抗体は、それぞれ配列番号１、２、および３に記載のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
抗体は、それぞれ配列番号４、５、および６に記載のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
抗体は、それぞれ配列番号１、２、および３に記載のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、それぞれ配列番号４、５、および６に記載のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
抗体は、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、それぞれその全体が参照により本明細書に組み入れられる２０１２年８月２４日付けで出願された米国仮出願第６１／６９３，００１号、および２０１３年７月９日付けで出願されたフランス特許出願第１３５６７４３号の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）は、先進国世界において生命を脅かす感染の主な原因である。現在、院内獲得型黄色ブドウ球菌の大部分は一般的な抗生物質のほとんどに耐性があり、これはメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）として知られている。この１０年でＭＲＳＡ感染の発生率は劇的に増加し続け、市中獲得型と院内獲得型の両方で発生している。ＭＲＳＡは、院内感染を引き起こす最も一般的な病原体になりつつある。１９９０年代において、現行の感染対策の推奨にもかかわらず院内ＭＲＳＡ感染数は３倍になった（非特許文献１）。
【０００３】
ＭＲＳＡの発生率は急速に増加しており、著しく過小評価されていることが一般的に認められている。近年の研究の１つにおいて、米国の集中治療室に入院した４４０万人の患者のうち２０％もの患者が、ＭＲＳＡに感染するかまたはＭＲＳＡの侵入を受けた状態になっていることが見出された。その同じ研究では、その患者のうち３０％もの患者が退院後にＭＲＳＡの二次感染を発症させることに言及している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｎｏｓｋｉｎら、Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．１６５：１７５６〜６１、２００５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
一般的に、現行のＭＲＳＡ療法は抗生物質であるバンコマイシンの使用に頼っている。しかしながら、１９９０年代後半からバンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌の発生率が増加してきた。したがって、抗生物質の使用に頼らない黄色ブドウ球菌感染を処置または予防する代替法が当業界において求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、根底にある病態にＰＮＡＧ発現微生物（例えば黄色ブドウ球菌）が関与する微生物感染（例えば細菌感染）を処置または予防する方法を提供する。本発明の方法は、一般的に、ＰＮＡＧに特異的に結合する抗体の有効量を対象に投与することを含む。このような方法は、院内ブドウ球菌（例えば表皮ブドウ球菌（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）および黄色ブドウ球菌）感染の処置に特に有用である。
【０００７】
したがって、一態様において、本発明は、対象におけるポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）発現細菌感染を処置または予防する方法であって、治療有効量の抗ＰＮＡＧ抗体を対象に投与することを含み、ここで該抗体は、約０．５〜約２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される前記方法を提供する。
【０００８】
一実施形態において、抗体は、約１０、約１５、約１７または約２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。特定の典型的な実施形態において、抗体は、約０．８、１．０、４．３、５．０、８．６、１０．０、１２．９、または１７．２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０００９】
他の実施形態において、投与された用量によって、少なくとも１０μｇ／ｍｌの抗ＰＮＡＧ抗体の血清レベルが達成される。
【００１０】
他の実施形態において、対象の血清のオプソニン活性は、抗体投与後の少なくとも５０日間、実質的に一定に保たれる。
【００１１】
所定の実施形態において、抗体は、少なくとも２５日の血清半減期を有する。
【００１２】
所定の実施形態において、抗体は、単回用量として投与される。他の実施形態において、抗体は、複数回用量で投与される。
【００１３】
所定の実施形態において、少なくとも１回の用量の投与およびスケジューリングは、対象における抗体の血清半減期および／またはＰＮＡＧ発現細菌に対する対象の血清のインビトロでのオプソニン活性の決定に基づく。
【００１４】
所定の実施形態において、抗体は、静脈内注入で投与される。一実施形態において、静脈内注入は、約３０分から約１２０分にわたり投与される。所定の実施形態において、静脈内注入の体積は、約１００ｍｌである。
【００１５】
所定の実施形態において、対象は、ＰＮＡＧ発現細菌感染を有する。他の実施形態において、対象は、ＰＮＡＧ発現細菌感染を発症する危険性がある。
【００１６】
一実施形態において、感染は、肺感染、関節感染、心内膜感染、皮膚感染、軟部組織感染、または敗血症である。
【００１７】
他の実施形態において、抗体は、医療手技の前、その後、またはその間に投与される。所定の実施形態において、医療手技は、対象における外科用インプラントの設置である。典型的な実施形態において、外科用インプラントは、ステント、カテーテル、カニューレ、プロテーゼ、またはペースメーカーである。
【００１８】
所定の実施形態において、対象は、ヒトである。
【００１９】
所定の実施形態において、ＰＮＡＧ発現細菌感染は、ブドウ球菌を含む。一実施形態において、ブドウ球菌は、表皮ブドウ球菌または黄色ブドウ球菌である。典型的な実施形態において、黄色ブドウ球菌は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌である。
【００２０】
所定の実施形態において、本発明の方法は、インビトロでのオプソニン食作用アッセイを使用して投与される抗体の有効な血清力価を決定することを含む。
【００２１】
所定の実施形態において、抗体は、１０．２ｍｇ／ｍｌの抗ＰＮＡＧ抗体；２０ｍＭのＮａＰＯ４；および１５０ｍＭのＮａＣｌを含む製剤中にあり、ここで製剤のｐＨは６．５である。
【００２２】
所定の実施形態において、抗体は、ヒト抗体である。所定の実施形態において、抗体は、それぞれ配列番号１、２、および３に記載のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。所定の実施形態において、抗体は、それぞれ配列番号４、５、および６に記載のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、それぞれ配列番号１、２、および３に記載のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、それぞれ配列番号４、５、および６に記載のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにその他の実施形態において、抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】気道中の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に対するＦ５９８（ＳＡＲ２７９３５６）の予防活性を測定するインビボでのマウスアッセイの結果を表するグラフである。
【図２】黄色ブドウ球菌の皮膚感染に対するＦ５９８の予防活性を測定するインビボでのマウスアッセイの結果を表するグラフである。
【図３】ヒト対象における様々な用量でのＦ５９８の血清半減期を表するグラフである。
【図４】インビトロでのオプソニン食作用アッセイを使用して測定した場合の、ヒト血清における様々な用量でのＦ５９８の活性プロファイルを表するグラフである。
【図５】インビトロでのオプソニン食作用性死滅アッセイ（ｏｐｓｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｋｉｌｌｉｎｇ  ａｓｓａｙ）を使用して測定した場合の、ヒト血清における様々な用量でのＦ５９８の活性プロファイルを表するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、根底にある病態にＰＮＡＧ発現微生物（例えば黄色ブドウ球菌）が関与する微生物感染（例えば細菌感染）を処置または予防する方法を提供する。本発明の方法は、一般的に、ＰＮＡＧに特異的に結合する抗体の有効量を対象に投与することを含む。このような方法は、院内ブドウ球菌（例えば表皮ブドウ球菌および黄色ブドウ球菌）感染の処置に特に有用である。
【００２５】
Ｉ．定義
本発明をより容易に理解するために、最初に所定の用語を定義する。
【００２６】
用語「ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン」または「ＰＮＡＧ」は、本明細書で使用される場合、ベータ１−６結合を介して連結されたＮ−アセチルグルコサミン単量体のポリマーを指す。この用語はまた、部分的または完全に脱アシル化されたポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンも包含する。
【００２７】
用語「ＰＮＡＧ発現細菌感染」は、本明細書で使用される場合、ＰＮＡＧ発現微生物（例えば黄色ブドウ球菌）を含む微生物感染を指す。
【００２８】
用語「院内感染」は、本明細書で使用される場合、病院内で獲得された感染、または病院の内部もしくは外部で行われた医療手技からの感染を指す。典型的な院内感染としては、敗血症（血流感染）、手術部位感染、または院内獲得型肺炎が挙げられる。
【００２９】
用語「院内感染を予防すること」は、本明細書で使用される場合、感染の重症度を抑制または低減することを指す。
【００３０】
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、４つのポリペプチド鎖、すなわちジスルフィド結合で相互に連結された２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖とを含む免疫グロブリン分子、加えてそれらの多量体（例えばＩｇＭ）を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨと略記される）と重鎖定常領域とを含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬと略記される）と軽鎖定常領域とを含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより高度に保存された領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細かく分類できる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲとで構成される。
【００３１】
抗体の「抗原結合部位」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、天然に存在する、酵素的に得られる、合成の、または遺伝子工学的に改変された任意のポリペプチドもしくは糖タンパク質を包含する。抗体の抗原結合フラグメントは、例えばタンパク質消化、または抗体の可変と場合により定常ドメインとをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子工学技術などの任意の好適な標準的な技術を使用して、完全な抗体分子から誘導することも可能である。抗原結合部位の非限定的な例としては：（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模擬するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。例えばダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、およびミニボディなどの他の改変された分子も、発現「抗原結合部位」という表現のなかに包含される。
【００３２】
用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」は、本明細書で使用される場合、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内で見出される不連続の抗原結合部位を意味する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２、６６０９〜６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）によって、さらにＣｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７）およびＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２〜７４５（１９９６）によって説明されており、それによればその定義は、互いに比較した場合のアミノ酸残基のオーバーラップまたは部分集合を包含する。上記の引用された参考文献のそれぞれで定義されるようなＣＤＲを包含するアミノ酸残基は、比較のために提示される。好ましくは、用語「ＣＤＲ」は、配列比較に基づいてＫａｂａｔによって定義されるＣＤＲである。
【００３３】
用語「フレームワーク（ＦＲ）アミノ酸残基」は、本明細書で使用される場合、Ｉｇ鎖のフレームワーク領域中のアミノ酸を指す。用語「フレームワーク領域」または「ＦＲ領域」は、本明細書で使用される場合、（例えばＫａｂａｔによるＣＤＲの定義を使用して）可変領域の一部であるがＣＤＲの一部ではないアミノ酸残基を包含する。それゆえに、可変領域のフレームワークは、長さが約１００〜１２０アミノ酸であるが、ＣＤＲの外側にあるアミノ酸だけを包含する。
【００３４】
用語「〜に特異的に結合する」は、本明細書で使用される場合、少なくとも約１×１０−６Ｍ、１×１０−７Ｍ、１×１０−８Ｍ、１×１０−９Ｍ、１×１０−１０Ｍ、１×１０−１１Ｍ、１×１０−１２ＭのＫｄもしくはそれより高いＫｄで抗原に結合する、および／または非特異的抗原に対する親和性よりも少なくとも２倍大きい親和性で抗原に結合する、抗体もしくはその抗原結合フラグメントの能力を指す。
【００３５】
用語「抗原」は、本明細書で使用される場合、抗体またはその抗原結合部位によって認識される結合部位またはエピトープを指す。
【００３６】
用語「有効量」は、本明細書で使用される場合、対象に投与されると、本明細書で説明されているようなＰＮＡＧ発現細菌感染の処置、予後または診断を達成するのに十分な、ＰＮＡＧに結合する抗体またはその抗原結合部位の量を指す。治療有効量は、処置される対象および疾患の状態、対象の体重および年齢、疾患の状態の重症度、投与方式などに応じて変更されると予想され、当業者であれば容易に決定できる。好適な投与量は、宿主の体重に対して、一般的には約０．０００１〜１０００ｍｇ／ｋｇの範囲内であり、より一般的には０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ（例えば約０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０ｍｇ／ｋｇ）である。例えば投薬は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば約４．３から約１２．９ｍｇ／ｋｇ）の範囲内であってもよい。また、上記範囲の中間の用量、例えば約０．９、４．３、８．６、１２．９または１７．２ｍｇ／ｋｇも本発明の範囲内であることが意図される。最適な治療応答が達成されるように、投薬レジメンを調節してもよい。また有効量とは、抗体またはその抗原結合部位の任意の毒性または有害作用（すなわち副作用）を最小化した、および／または有益な作用が上回るようにした量でもある。
【００３７】
用語「対象」は、本明細書で使用される場合、任意のヒトまたは非ヒト動物を包含する。
【００３８】
ＩＩ．ＰＮＡＧ発現微生物
本発明の方法は、対象におけるポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）発現微生物（例えば細菌）感染を処置または予防するのに使用できる。ＰＮＡＧは、細菌および菌類などの様々な微生物で発現される。一般的に、本発明の方法を使用して、いずれかのＰＮＡＧ発現微生物によって引き起こされる感染を処置または予防することが可能である。本明細書で開示された方法を使用して処置するのに適したＰＮＡＧ発現細菌としては、これらに限定されないが、ブドウ球菌（例えば表皮ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌（例えば多剤耐性黄色ブドウ球菌））、スタフィロコッカス・カルノーサス（Ｓ．ｃａｒｎｏｓｕｓ）、スタフィロコッカス・ヘモリチカス（Ｓ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（例えば大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７および大腸菌ＣＦＴ０７３）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｃｏｌｉｔｉｃａ）、キサントモナス・アクソノポディス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、アクチノバシラス・アクチノミセテムコミタンス、アクチノバシラス・プルロニューモニア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ラルストニア・ソラナセラム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、パラ百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、および気管支敗血症菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）などが挙げられる。特定の典型的な実施形態において、ＰＮＡＧ発現微生物は、黄色ブドウ球菌（例えば多剤耐性黄色ブドウ球菌）である。
【００３９】
ＩＩＩ．院内感染
本発明は、ＰＮＡＧに特異的に結合する抗体の有効量を対象に投与することによって、対象における院内ＰＮＡＧ発現細菌感染を処置または予防する方法を提供する。
【００４０】
患者にＰＮＡＧ発現細菌感染を発症する危険を与える任意の医療手技は、病院の内部で行われるのかまたは外部で行われるのかにかかわらず、本発明の方法を使用して処置または予防できる。このような医療手技の例としては、これらに限定されないが、外科的装置（例えばカテーテル、カニューレ、プロテーゼ、呼吸マスク、人工呼吸器、置換心臓弁、およびペースメーカー）の外科手術および埋め込みなどが挙げられる。典型的な外科的装置としては、これらに限定されないが：中心静脈カテーテル；腹膜透析カテーテル；整形外科用人工器官；整形外科用メッシュ；心臓内デバイス、例えば人工弁、ペースメーカー、およびステントなど；人工内耳；乳房インプラント；気管内チューブ；人工咽頭（ｖｏｉｃｅ  ｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ）；および眼内レンズなどが挙げられる。
【００４１】
当業者であれば、免疫抑制された対象のケースでは、単に対象が病院（またはＰＮＡＧ発現微生物がいる可能性がある別の環境）内にいるということだけで、この対象は、外科手術を受けていないとしても（例えば肺、尿路において、または開放創において）ＰＮＡＧ発現細菌感染を発症する危険性があると認定されることを理解しているものと予想される。
【００４２】
ＩＶ．抗ＰＮＡＧ抗体
本発明の方法では、ＰＮＡＧに結合してＰＮＡＧ発現細菌感染の形成を抑制する任意の抗体を使用できる。表１に、本発明での使用に好適な典型的な抗体のＶＨ、ＶＬ、およびＣＤＲのアミノ酸配列を記載する。
【００４３】
【表１】
2015526474.tif 000003
【００４４】
【表２】
2015526474.tif 000004
【００４５】
所定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１、２、３、４、５、６、９、１０、１１、１２、１３、１４、１７、１８、１９、２０、２１、および２２からなる群から選択される１つまたはそれ以上のＣＤＲ領域のアミノ酸配列を含む。
【００４６】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ：
ａ）配列番号１、２、および３；
ｂ）配列番号９、１０、および１１；ならびに
ｃ）配列番号１７、１８、および１９
からなる群から選択されるＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ１領域のアミノ酸配列を含む。
【００４７】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ：
ａ）配列番号４、５、および６；
ｂ）配列番号１２、１３、および１４；ならびに
ｃ）配列番号２０、２１、および２２
からなる群から選択されるＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１領域のアミノ酸配列を含む。
【００４８】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ：
ａ）配列番号１、２、３、４、５、および６；
ｂ）配列番号９、１０、１１、１２、１３、および１４；ならびに
ｃ）配列番号１７、１８、１９、２０、２１、および２２
からなる群から選択されるＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１領域のアミノ酸配列を含む。
【００４９】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７、１５、および／または２３に記載のＶＨ領域のアミノ酸配列を含む。
【００５０】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８、１６、および／または２４に記載のＶＬ領域のアミノ酸配列を含む。
【００５１】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ：配列番号７および８；配列番号１５および１６；ならびに配列番号２３および２４からなる群から選択されるＶＨ領域のアミノ酸配列とＶＬ領域のアミノ酸配列とを含む。
【００５２】
Ｖ．オプソニン食作用アッセイ
一態様において、本発明は、対象の血清中の抗ＰＮＡＧ抗体の機能に関する力価を測定するためのオプソニン食作用アッセイを提供する。このような方法は、一般的に：患者から血清を得ること；血清を、食細胞、相補物、およびＰＮＡＧ発現細菌と接触させること；ならびに血清の存在下および非存在下で細菌の食細胞活動の量を測定することを含む。所定の実施形態において、オプソニン食作用アッセイの実行前に、対象はすでに抗ＰＮＡＧ抗体（例えば本明細書で開示されるＦ５９８抗体）を投与されている。
【００５３】
所定の実施形態において、食細胞活動の量は、アッセイ中に死滅した細菌の数を決定することによって測定される。他の実施形態において、食細胞活動の量は、アッセイ中に食菌された細菌の量を決定することによって測定される。このような食細胞活動の測定は、例えば、細菌細胞を蛍光標識して、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）を使用して食細胞による標識細菌の摂取を決定することによって達成できる。
【００５４】
好適な食細胞としては、これらに限定されないが、分化したＨＬ６０などが挙げられる。本発明のオプソニン食作用アッセイでの使用に好適な細菌としては、これらに限定されないが、黄色ブドウ球菌のＭＮ８株またはＭＮ８ｍ株などが挙げられる。ＦＡＣＳアッセイに関して、細菌は、これに限定されないが５，６カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステルなどのＦＡＣＳで検出可能な任意の蛍光体で標識することが可能である。所定の実施形態において、食細胞活動アッセイは、５，６カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステルで標識された黄色ブドウ球菌を使用して行われる。
【００５５】
ＶＩ．治療のための投与および製剤
本発明は、抗ＰＮＡＧ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物をそれが必要な対象に投与することによる、ＰＮＡＧ発現細菌感染を処置または予防する方法を提供する。本発明の方法によれば、対象に投与される抗ＰＮＡＧ抗体の治療有効量は、例えば、アンタゴニスト、感染のタイプ、対象の状態、年齢、および大きさ（例えば体重または体表面積）、加えて投与経路、ならびに当業者周知の他の要素に応じて変更されると予想される。
【００５６】
所定の実施形態において、対象に投与される抗ＰＮＡＧ抗体の量は、対象の体重１キログラムあたりの抗体のミリグラム（すなわちｍｇ／ｋｇ）で示される。一実施形態において、本発明の方法は、抗ＰＮＡＧ抗体を、約０．０００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ（例えば約０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０ｍｇ／ｋｇ）の用量で対象に投与することを包含する。例えば、投薬量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲内であってもよい。他の実施形態において、典型的な投薬量は、約１０〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１２〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１３〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または約１８ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲内であってもよい。また、上記範囲の中間の用量（例えば約１（例えば０．９）、約５（例えば４．３）、約１０（例えば８．６）、約１５（例えば１２．９）、または約２０（例えば１７．２）ｍｇ／ｋｇ）も本発明の範囲内であることが意図される。
【００５７】
所定の実施形態において、対象に投与される抗ＰＮＡＧ抗体の用量は、１用量あたり約０．１から約１０００ｍｇ（例えば約１〜１００ｍｇ、１００〜２００ｍｇ、２００〜３００ｍｇ、３００〜４００ｍｇ、５００〜６００ｍｇ、６００〜７００ｍｇ、７００〜８００ｍｇ、８００〜９００ｍｇ、または９００〜１０００ｍｇ）である。
【００５８】
抗ＰＮＡＧ抗体投与の正確な時間は、患者の必要性に従って調節できる。対象におけるＰＮＡＧ発現細菌感染の形成を抑制するための予防的処置のケースでは、抗ＰＮＡＧ抗体は、ＰＮＡＧ発現微生物への曝露（例えば、病院に入ったとき、または医療手技を開始したとき）前の任意のときに与えることができる。例えば、ＰＮＡＧ発現微生物に曝露される０から２４０時間前に、例えば約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９，１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３０、４０、６０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、および／または２４０時間前に、抗ＰＮＡＧ抗体を投与してもよい。
【００５９】
所定の実施形態において、本発明の方法は、指定された時間経過にわたり抗ＰＮＡＧ抗体の複数回用量を対象に投与することを包含する。例えば、抗ＰＮＡＧ抗体は、１回、週に約１回、２週毎に約１回（ｑ２ｗ）、または月に約１回（ｑ４ｗ）で投与してもよい。所定の実施形態において、本発明の方法は、第１のタイムポイントで抗ＰＮＡＧ抗体の第１の用量を対象に投与すること、それに続いて第２のタイムポイントで少なくとも抗ＰＮＡＧ抗体の第２の用量を対象に投与することを包含する。所定の実施形態において、第１および第２の用量は、同じ量の抗ＰＮＡＧ抗体を含有していてもよい。第１の用量と第２の用量との間の時間は、約２〜３時間から数週間であってもよい。例えば、第２のタイムポイント（すなわち第２の用量が投与される時間）は、第１のタイムポイント（すなわち第１の用量が投与される時間）の約１時間から約７週間後であってもよい。本発明の特定の典型的な実施形態によれば、第２のタイムポイントは、第１のタイムポイントから約１時間後、約４時間後、約６時間後、約８時間後、約１０時間後、約１２時間後、約２４時間後、約２日後、約３日後、約４日後、約５日後、約６日後、約７日後、約２週間後、約４週間後、約６週間後、約８週間後、約１０週間後、約１２週間後、約１４週間後またはそれより後であってもよい。所定の実施形態において、第２のタイムポイントは、約１週間または約２週間である。第２のタイムポイントは約２週間であることが好ましい。第３の用量およびそれに続く用量は、患者の処置経過中全体で同じように投与されてもよい。第３の用量が第２の用量の約２週間後に与えられ、第４の用量が第３の用量の約２週間後に与えられることが好ましい。
【００６０】
いくつかの実施形態において、抗ＰＮＡＧ抗体は、注入によって投与される。いくつかの実施形態において、注入は、２時間にわたり与えられる。いくつかの実施形態において、抗ＰＮＡＧ抗体は、断食した状態で対象に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＰＮＡＧ抗体は、注入前に生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム）で希釈される。具体的な実施形態において、抗ＰＮＡＧ抗体は、１００ｍＬの生理食塩水で希釈される。
【００６１】
所定の実施形態において、抗ＰＮＡＧ抗体の投薬量は、所定の抗体または毒素の血漿濃度、例えば１〜１０００μｇ／ｍｌが達成されるように調節される。所定の実施形態において、抗体の血漿濃度は、１０μｇ／ｍｌより大きい。
【００６２】
本発明は、抗ＰＮＡＧ抗体を含む治療用組成物の使用方法を提供する。本発明の治療用組成物は、移動、送達、許容度等を向上させるために製剤に取り入れられる好適な担体、添加剤、および他の物質と共に投与されると予想される。所定の実施形態において、治療用組成物は、ｐＨ６．５で２０ｍＭのＮａＰＯ４および１５０ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液中に抗ＰＮＡＧ抗体を含む。特定の実施形態において、治療用組成物は、１０．２ｍｇ／ｍｌの抗ＰＮＡＧ抗体を含む。
【００６３】
全ての薬剤師に知られている処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）で、多数の適切な製剤を見ることができる。これらの製剤としては、例えば、粉末剤、ペースト剤、軟膏剤、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標））、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト（ａｎｈｙｄｒｏｕｓ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｐａｓｔｅ）、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックスを含有する半固体混合物などが挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８〜３１１も参照されたい。
【００６４】
様々な送達系が公知であり、本発明の医薬組成物を投与するのに使用でき、このような送達系としては、例えば、リポソーム中への封入、微粒子、マイクロカプセル、受容体媒介エンドサイトーシスが挙げられる（例えばＷｕら（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９〜４４３２を参照）。導入方法としては、これらに限定されないが、皮内、筋肉内、腹膜内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路などが挙げられる。本組成物は、任意の便利な経路によって、例えば注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚の内層（例えば口腔粘膜、直腸、および腸粘膜など）を介した吸収によって投与してもよいし、他の生物活性物質と共に投与してもよい。投与は、全身であってもよいし、または局所であってもよい。抗ＰＮＡＧ抗体は、非経口投与してもよいし、または皮下投与してもよい。
【００６５】
医薬組成物はまた、小胞中、特にリポソーム中で送達されてもよい（Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３を参照）。特定の状況において、医薬組成物は、徐放系で、例えばポンプまたは高分子材料を使用して送達されてもよい。他の実施形態において、組成物の標的の近傍に徐放系を配置することができるため、全身投与用の分量しか必要としない。
【００６６】
注射可能な調製物は、静脈内、皮下、皮内、および筋肉内注射、局所注射、点滴注入などのための剤形を包含し得る。これらの注射可能な調製物は、公知の方法で調製できる。例えば、注射可能な調製物は、例えば慣習的に注射に使用される滅菌水性媒体または油性媒体に、上述した抗体またはその塩を溶解、懸濁または乳化することによって調製できる。注射用の水性媒体としては、例えば生理食塩水、グルコースおよび他の補助剤を含有する等張溶液などがあり、これらは、例えばアルコール（例えばエタノール）、多価アルコール（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン界面活性剤［例えばポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。油性媒体としては、例えばゴマ油、ダイズ油などが採用され、これらは、例えば安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。このようにして調製された注射剤を適切なアンプルに充填してもよい。
【００６７】
有利には、上述した経口または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量を合わせるのに適した単位用量の形態で剤形に調製される。このような単位用量の形態の剤形としては、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。
【００６８】
本明細書で開示された方法に従って、任意の許容できるデバイスまたはメカニズムを使用して抗ＰＮＡＧ抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与できる。例えば、投与は、シリンジおよびニードルを使用して達成してもよいし、または再使用可能なペン型および／またはオートインジェクター型送達デバイスで達成してもよい。本発明の方法は、抗ＰＮＡＧ抗体（またはアンタゴニストを含む医薬製剤）を投与するための多数の再使用可能なペン型および／またはオートインジェクター型送達デバイスの使用を包含する。このようなデバイスの例としては、これらに限定されないが、いくつか例を挙げれば、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）などが挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てのペン型および／またはオートインジェクター型送達デバイスの例としては、これらに限定されないが、いくつか例を挙げれば、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫＴＭオートインジェクター（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴＴＭ（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、ならびにＨＵＭＩＲＡＴＭペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）などが挙げられる。
【００６９】
また治療用組成物を対象に送達するためのマイクロインフューザー（ｍｉｃｒｏｉｎｆｕｓｏｒ）の使用も本明細書で考慮される。用語「マイクロインフューザー」は、本明細書で使用される場合、長期間にわたり（例えば約１０、１５、２０、２５、３０分またはそれより長く）大量の（例えば最大約２．５ｍＬまたはそれ以上の）治療製剤がゆっくり投与されるように設計された皮下送達デバイスを意味する。例えば、米国特許第６，６２９，９４９号；米国特許第６，６５９，９８２号；およびＭｅｅｈａｎら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ４６：１０７〜１１６（１９９６）を参照されたい。マイクロインフューザーは、高濃度で（例えば約１００、１２５、１５０、１７５、２００ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上）、および／または粘性の溶液中に含まれる高用量の治療用タンパク質の送達に特に有用である。
【００７０】
ＶＩＩ．製薬の単位剤形
本発明の所定の実施形態において、抗ＰＮＡＧ抗体は、単位剤形にパッケージ化される。用語「単位剤形」は、本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、ヒトおよび被検動物用の１単位の投薬量として好適な物理的に分離した単位を指し、各単位は、必要な製薬用希釈剤、担体または基材と共に望ましい治療効果が生じるように計算された既定量の活性材料（例えば約１０〜約５０００ｍｇの抗ＰＮＡＧ抗体（例えば約１０２ｍｇの抗ＰＮＡＧ抗体））を含有する。本発明の新規の単位剤形に関する明細は、本明細書で開示されたような（ａ）活性材料固有の特徴および達成しようとする特定の治療効果、ならびに（ｂ）このような活性材料をヒトでの治療用途に調剤する分野特有の制限によって決まり、さらにそれらに直接依存し、これらは本発明の特色である。本発明に係る好適な単位剤形の例は、バイアル、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、坐剤、粉末剤の小包、オブラート、カシェ剤、アンプル、個別になった前述のいずれかのものの集合体、および本明細書で説明されるような他の形態である。治療剤として採用される活性成分は、製薬材料を採用してこのような単位剤形に容易に調製でき、このような製薬材料は、当業界でそのものを入手することもできるし、確立された手技によって調製することもできる。
【００７１】
以下の調製物は、本発明の単位剤形の調製を例示したものであるが、これに限定されない。本発明を具体化するいくつかの剤形を調製できる。例えば、１バイアルあたりの単位投薬量は、抗ＰＮＡＧ抗体が約１０から約５０００ｍｇの範囲で、１ｍｌ、２ｍｌ、３ｍｌ、４ｍｌ、５ｍｌ、６ｍｌ、７ｍｌ、８ｍｌ、９ｍｌ、１０ｍｌ、１５ｍｌ、または２０ｍｌの抗ＰＮＡＧ抗体またはそのフラグメントを含有していてもよい。一実施形態において、剤形は、１０ｍｌ中に１０２ｍｇの抗ＰＮＡＧ抗体を含む。必要に応じて、各バイアルに滅菌希釈剤を添加することによって、これらの調製物を望ましい濃度に調節してもよい。一実施形態において、本発明の製剤の成分は、活性物質の量を表示する例えばバイアル、アンプルまたは小袋などの密封容器中に、例えば凍結乾燥粉末または水分を含まない濃縮物として、単位剤形中に別々にまたは一緒に混合された状態のいずれかで供給される。組成物が注入によって投与される場合、滅菌された医薬品グレードの水または塩類溶液を含有する注入ボトルを用いて組成物を分注してもよい。組成物が注射によって投与される場合、投与前に成分が混合されるように滅菌注射用水または塩類溶液のアンプルを準備してもよい。
【００７２】
本発明の製剤は、単位剤形の調製に使用できる医薬組成物の製造に有用なバルク薬物組成物（例えば対象または患者への投与に好適な組成物）を包含する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、医薬組成物である。このような組成物は、予防または治療有効量の１種またはそれ以上の予防剤または治療剤（例えば抗ＰＮＡＧ抗体または他の予防剤または治療剤）と、薬学的に許容される担体とを含む。好ましくは、医薬組成物は、対象への投与経路に好適となるように製剤化される。
【００７３】
具体的な実施形態において、用語「薬学的に許容される」は、動物、より特定にはヒトでの使用に関して、連邦または州政府の管理機関によって承認されているか、または米国薬局方またはそれ以外の一般的に認められた薬局方で列挙されていることを意味する。用語「担体」は、治療剤と共に投与される希釈剤、アジュバント（例えばフロインドアジュバント（完全および不完全））、添加剤、または基材を指す。このような医薬用担体は、滅菌液体であってもよく、例えば水、および石油、動物性、植物性または合成由来の油などの油、例えば落花生油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などであってもよい。医薬組成物が静脈内投与される場合、水が好ましい担体である。特に注射用溶液の場合、食塩水ならびに水性デキストロースおよびグリセリン溶液も液体担体として採用できる。好適な製薬用添加剤としては、スターチ、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有していてもよい。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末剤、持続放出性製剤などの形態をとっていてもよい。経口製剤は、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を包含していてもよい。好適な医薬用担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」で説明されている。このような組成物は、患者への投与に適した形態になるように好適な量の担体と共に、予防または治療有効量の抗体を好ましくは精製した形態で含有すると予想される。製剤は、投与様式に適合しているものと予想される。
【００７４】
一般的に、本発明の組成物の成分は、活性物質の量を表示する例えばアンプルまたは小袋などの密封容器中に、例えば凍結乾燥粉末または水分を含まない濃縮物として、単位剤形中に別々にまたは一緒に混合された状態のいずれかで供給される。組成物が注入によって投与される場合、滅菌された医薬品グレードの水または塩類溶液を含有する注入ボトルを用いて組成物を分注してもよい。組成物が注射によって投与される場合、投与前に成分が混合されるように滅菌注射用水または塩類溶液のアンプルを準備してもよい。
【００７５】
また本発明は、抗体の量を表示する例えばアンプルまたは小袋などの密封容器中にパッケージ化された製剤も提供する。一実施形態において、本発明の抗体を含む製剤を、密封容器中の乾燥滅菌した凍結乾燥粉末または水分を含まない濃縮物として供給して、例えば水または塩類溶液で対象への投与に適した濃度に再構成することが可能である。所定の実施形態において、本発明の抗ＰＮＡＧ抗体を含む製剤は、密封容器中の乾燥滅菌した凍結乾燥粉末として、少なくとも５０ｍｇ、より好ましくは少なくとも７５ｍｇ、少なくとも１００ｍｇ、少なくとも１５０ｍｇ、少なくとも２００ｍｇ、少なくとも２５０ｍｇ、少なくとも３００ｍｇ、少なくとも３５０ｍｇ、少なくとも４００ｍｇ、少なくとも４５０ｍｇ、少なくとも５００ｍｇ、少なくとも６００ｍｇ、少なくとも７００ｍｇ、少なくとも８００ｍｇ、少なくとも９００ｍｇ、少なくとも１０００ｍｇ、少なくとも１１００ｍｇ、少なくとも１２００ｍｇ、少なくとも１３００ｍｇ、少なくとも１４００ｍｇ、少なくとも１５００ｍｇ、少なくとも１６００ｍｇ、少なくとも１７００ｍｇ、少なくとも１８００ｍｇ、少なくとも１９００ｍｇ、少なくとも２０００ｍｇ、少なくとも２１００ｍｇ、少なくとも２２００ｍｇ、少なくとも２３００ｍｇ、少なくとも２４００ｍｇ、少なくとも２５００ｍｇ、少なくとも２６００ｍｇ、少なくとも２７００ｍｇ、少なくとも２８００ｍｇ、少なくとも２９００ｍｇ、または少なくとも３０００ｍｇの抗体の単位投薬量で供給される。特定の実施形態において、抗ＰＮＡＧ抗体は、１０２ｍｇの滅菌され凍結乾燥された投薬単位として供給される。本発明の抗体を含む凍結乾燥製剤は、その元の容器中で２℃から８℃の間で保存されると予想され、抗体は、再構成してから２４時間以内、例えば１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内、または１時間以内に投与されると予想される。本発明の抗体を含む製剤は、中性または塩の形態として製剤化できる。医薬的に許容される塩としては、アニオン、例えば塩化水素酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導されたアニオンなどと形成された塩、およびカチオン、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導されたカチオンなどと形成された塩が挙げられる。
【００７６】
ＶＩＩＩ．併用療法
所定の態様において、本発明は、抗ＰＮＡＧ抗体またはその抗原結合フラグメントを、少なくとも１種の追加の治療剤と組み合わせてこのような処置が必要な対象に投与することを含む、ＰＮＡＧ発現細菌感染を処置または予防する方法を包含する。好適な追加の治療剤としては、これに限定されないが、抗菌剤（例えば抗生物質）などが挙げられる。好適な抗菌剤としては、これらに限定されないが、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、アンピシリン、アモキシリン、バカンピシリン、セフォタキシム、シクラシリン、エピシリン、ヘタシリン、ピバンピシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、カルベニシリン、チカルシリン、アブロシリン（ａｖｌｏｃｉｌｌｉｎ）、メズロシリン、ピペラシリン、アムジノシリン、セファレキシン、セフラジン、セファドキシル（ｃｅｆａｄｏｘｉｌ）、セファクロル、セファゾリン、セフロキシムアキセチル、セファマンドール、セフォニシド、セフォキシチン、セフォタキシム、セフチゾキシム、セフィネノキシン（ｃｅｆｉｎｅｎｏｘｉｎｅ）、セフトリアキソン、モクサラクタム、セフォテタン、セフォペラゾン、セフタジジム、イミペネム、クラブラン酸塩、チメンチン、スルバクタム、ネオマイシン、エリスロマイシン、メトロニダゾール、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、リンコマイシン、バンコマイシン、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、アミノグルコシド、キノロン、テトラサイクリン、およびリファンピンなどが挙げられる（例えば、ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎの、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｃｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、１９９３、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  Ｉｎｃを参照）。併用療法で投与される追加の治療剤の量は、当業界公知で容易に利用できる慣例的な方法を使用して容易に決定できる。
【００７７】
ＩＸ．バイオマーカーおよび遺伝子型解析
所定の実施形態において、本発明は、抗ＰＮＡＧ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を対象に投与することによる、ＰＮＡＧ発現細菌感染を処置または予防する方法を提供し、対象中の１種またはそれ以上のバイオマーカーのレベルは、投与後に改変される（例えば、場合によって、増加される、減少される、など）。
【００７８】
当業者には理解できるものと予想されるが、バイオマーカーの増加または減少は、抗ＰＮＡＧ抗体の投与後の所定のタイムポイントにおいて対象で測定されたバイオマーカーのレベルを、投与前に対象で測定されたバイオマーカーのレベル（すなわち「ベースラインの測定値」）と比較することによって決定できる。バイオマーカーを測定できる所定のタイムポイントは、例えば、抗ＰＮＡＧ抗体投与から約１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１４日後、１５日後、２０日後、２１日後、２８日後、３５日後、４０日後、４２日後、４９日後、またはそれより後であってもよい。
【００７９】
本発明の所定の実施形態によれば、抗ＰＮＡＧ抗体を対象に投与した後、対象は、１種またはそれ以上のバイオマーカーのレベルの増加または減少を示す可能性がある。例えば、抗ＰＮＡＧ抗体の投与後、対象は、約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上のバイオマーカーの増加または減少を示す可能性がある。
【００８０】
本発明は、対象が、抗ＰＮＡＧ抗体の投与が有益であると予想される好適な患者であるかどうかを決定する方法を包含する。例えば、個体が抗ＰＮＡＧ抗体を受ける前に、抗ＰＮＡＧ抗体での処置に反応性を有する可能性があることを意味するバイオマーカーレベルを示す場合、その個体は、抗ＰＮＡＧ抗体の投与が有益であると予想される好適な患者と同定される。
【００８１】
所定の実施形態において、本発明は、治療有効量の抗ＰＮＡＧ抗体をこのような処置が必要な患者に投与することによって、ＰＮＡＧ発現細菌感染を処置または予防する方法であって、対象中の１種またはそれ以上の単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）遺伝子型の存在または非存在が検出される前記方法を提供する。
【００８２】
本発明は、対象が、抗ＰＮＡＧ抗体の投与が有益であると予想される好適な患者であるかどうかを決定する方法を包含する。例えば、個体が抗ＰＮＡＧ抗体を受ける前に、抗ＰＮＡＧ抗体での処置に反応性を有する可能性があることを意味するＳＮＰ遺伝子型を示す場合、その個体は、抗ＰＮＡＧ抗体の投与が有益であると予想される好適な患者と同定される。
【００８３】
Ｘ．患者集団の選択
所定の実施形態において、本発明の方法は、処置のための特定の患者集団を選択することを包含する。例えば、本発明の方法は、特定のＰＮＡＧ発現細菌感染を有する患者の部分集合を選択することを包含していてもよい。
【００８４】
所定の実施形態において、本発明の方法は、これまでに他の治療剤、例えば抗生物質を使用してＰＮＡＧ発現細菌感染を処置したことがある対象を選択することを包含する。
【００８５】
所定の実施形態において、本明細書で説明される方法および組成物は、（本明細書で開示された抗ＰＮＡＧ抗体以外の）１種またはそれ以上の治療剤、例えば抗生物質（例えばバンコマイシンまたはメチシリン）に抵抗性である特定の患者集団に投与される。
【００８６】
ＸＩ．例証
以下の実施例によって本発明をさらに例示するが、実施例は、さらなる限定として解釈されないものとする。本出願全体で引用された配列リスト、図面、ならびに全ての参考文献、特許、および公開された特許出願の内容は参照により本明細書に明確に組み入れられる。
【００８７】
〔実施例１〕
Ｆ５９８の生産
ＤＧ４４ＣＨＯ細胞からヒトＩｇＧ１として抗ＰＮＡＧ抗体Ｆ５９８（参照によりその全体が本明細書に組み入れられる米国特許第７，７８６，２５５号で説明されている）を発現させた。プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、続いてイオン交換クロマトグラフィーを使用して抗体を精製した。最終的な抗体調製物を、ヒト対象への投与に適切な規格に適合させた。
【００８８】
〔実施例２〕
マウスにおけるＦ５９８の毒物学的試験
マウスにおける２つの単回用量の毒物学的試験をＦＤＡの推奨に従って以下のようにして行った。
【００８９】
Ａ．ＣＤ−１マウスにおけるヒトモノクローナル抗体Ｆ５９８でのＧＬＰ急性毒性試験
動物のグループに基材対照または単回用量の１、１０および１００ｍｇ／ｋｇのＦ５９８を尾静脈を介して注射し、その後１４日間観察した。全ての用量で死亡率／罹患率、および体重における不都合な変化は記録されなかった。臨床的な病理学的評価において血液学、臨床的化学、および臓器重量の変化は認められなかった。処置に関連する組織病理学的病変は観察されなかった。
【００９０】
Ｂ．黄色ブドウ球菌投与下または非投与下でのＣＤ−１マウスへのＦ５９８静脈内（ボーラス）投与の非ＧＬＰ単回用量毒性試験
Ｆ５９８単独またはそれに続く黄色ブドウ球菌投与で起こり得る全身毒性を、ＣＤ−１マウスへの単回静脈内投与後に査定した。それぞれ１０匹の雄マウスと１０匹の雌マウスとを含む２つの動物グループにＦ５９８（１０ｍｇ／ｋｇ）を与え、これらのグループのうち一方にはＦ５９８投与のおよそ４時間後に黄色ブドウ球菌（１×１０５ｃｆｕ）も与えた。同じように構成された対照グループに、Ｆ５９８と同じ体積の用量で基材（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．５）を与え、さらに黄色ブドウ球菌も投与した。試験中、臨床症状、体重、食物消費、体温、血液学、血液化学、臓器重量、および肉眼的病理学の調査を行った。明らかに処置に関するかまたは毒物学的重要性があるとみなされる死亡または作用はみられなかった。Ｆ５９８単独での処置またはそれに続く黄色ブドウ球菌の投与は、明らかに処置に関係する全身性作用をまったく伴わないと結論付けられた。
【００９１】
これらの試験からはＦ５９８の最大耐容量および無毒性量（ＮＯＡＥＬ）の用量は決定されなかったが、単回静脈内用量の投与の場合１００ｍｇ／ｋｇより高いとみなされた。
【００９２】
〔実施例３〕
組織の交差反応性試験
モノクローナル抗体Ｆ５９８の標的抗原であるＰＮＡＧは、ブドウ球菌だけでなく他の細菌種でも発現される。しかしながら、この特異的な２つまたはそれ以上のグルコサミン間のベータ−１−６結合が哺乳動物のオリゴ糖にも存在するということはこれまでに説明されていなかった。Ｆ５９８が正常な組織と何らかの交差反応性を示すかどうかを決定するために、凍結された正常ヒト組織試料の包括的なＦＤＡスクリーニングに対して免疫組織化学的試験を行った。
【００９３】
３３種の凍結したヒト組織型の３連の試料で、２種の異なる希釈率でＦ５９８およびアイソタイプ対照の免疫組織化学スクリーニングを行うために包括的な組織交差反応性（ＴＣＲ）評価を採用した。評価された組織は、副腎、膀胱、血液、骨髄、小脳、大脳皮質、乳房、結腸、内皮、目、ファロピウス管、心臓、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、胎盤、前立腺、骨格筋、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、尿管、子宮頚部、および子宮内膜であった。正常ヒト組織において、Ｆ５９８は、０．１および０．３μｇ／ｍｌの濃度で、評価された３３種のヒト組織のうちどれにも結合せず、テストされた全ての組織において陰性染色を示すかまたはＩｇＧアイソタイプ対照で観察された染色と類似したバックグラウンド染色しか示さなかった。
【００９４】
〔実施例４〕
Ｆ５９８は症状発症前のインビボ感染モデルで全身または組織において予防作用がある
免疫適格マウスにメチシリン感受性黄色ブドウ球菌（ＭＮ８株）を１Ｅ＋０６ＣＦＵ／マウスで腹腔内投与したマウス敗血症モデルで、血流感染に対するＦ５９８（細菌攻撃の４時間前に静脈内ボーラスとして投与した）のインビボでの予防活性を決定した。メチシリン感受性黄色ブドウ球菌（Ｓｍｉｔｈ株、１Ｅ＋０２ＣＦＵ／マウスで筋肉内投与した）および肺炎連鎖球菌（ＤＳＭ１１８６９株、１Ｅ＋０８ＣＦＵ／マウスで鼻腔内投与した）それぞれに感染させた免疫適格マウスを使用した皮膚および気道感染モデルで、Ｆ５９８の全身性の臓器感染に対する予防活性を評価した。対照グループと薬物処置グループとの生存細菌数の差を、一元ＡＮＯＶＡ、続いて多重性に関するダネットの補正によって分析した。致死性の敗血症については、対照グループと薬物処置したグループとの生存の差を、ログランク検定、続いて多重性に関するボンフェローニ−ホルムの補正を使用して行った。
【００９５】
肺炎連鎖球菌の気道感染モデル（図１）と黄色ブドウ球菌の皮膚感染モデル（図２）とにおいて、細菌攻撃の４時間前にＦ５９８を投与することにより、マウスにおける感染の発症が用量依存的に予防された。肺および大腿部感染モデルそれぞれにおいて、Ｆ５９８の有意な予防作用は５０または１００μｇ／マウスから観察され、２００μｇ／マウスで最大の作用が観察された。気道感染モデルにおいて、Ｆ５９８の作用は抗生物質のセフォタキシムと同等であった。致死性の敗血症モデルでもＦ５９８の予防的作用が実証され（表２）、その場合、３００μｇ／マウスのＦ５９８により、黄色ブドウ球菌により誘導される致死率の７０％が予防された。
【００９６】
【表３】
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【００９７】
〔実施例５〕
Ｆ５９８の第１相試験
Ａ）全体的な試験設計
静脈内投与されたＦ５９８の安全性、忍容性、薬物動態学、薬力学、および免疫原性を評価するために、非盲検用量漸増第１相試験を行った。試験を２つのパートに分けた。パート１は単回用量漸増試験であった。パート２はＦ５９８の２回目の用量の作用を査定した。パート１からの薬物動態学的なデータを検討することによって、Ｆ５９８の２回目の用量の用量レベルおよびタイミングを決定した。
【００９８】
およそ１８人の男性および女性の対象を第Ｉ相単一施設試験に登録して、１８人の評価可能な対象を得た。この試験を、健常志願者におけるＦ５９８の安全性および忍容性が査定されるように設計した。パート１におよそ１２人の対象を登録した。
【００９９】
対象が以下の基準を満たす場合、その対象は試験参加に適格であるとした：健常成人の志願者；最低でも１８歳；正常な血液機能、肝機能、および腎機能が試験室での正常範囲の規定内であること；出産の可能性がないこと；または医学的に許容できる避妊薬を使用していないこと；外科的に避妊していない男性は、医学的に許容できる避妊レジメンを受けなければならないこと；女性は、血清の妊娠検査が陰性でなければならないこと；処置後の評価のために試験施設を再訪問する意思があること；パート２のための対象は、行き来が容易であり、規定された繰り返しの投与処置プロトコールおよび評価に従うことができること；および対象は、書面によるインフォームドコンセントに署名しなければならず、さらに規定された処置プロトコールおよび評価に従う意思があり且つそれが可能であること。
【０１００】
対象が以下の基準のいずれかを満たす場合、その対象を試験から除外した：以前にヒト／ヒト化抗体を用いた療法を受けていること；主要な臓器の機能不全の病歴；随伴する疾患または状態、例えば研究員の意見において試験の遂行の妨げになる可能性があるか、または対象を許容できない危険にさらす可能性がある検査上の異常など；プロトコール処置を受けようとする対象の能力を損なう感染または根底にある任意の重篤な医学的状態；妊娠中または授乳期の女性が；不安定な症状または障害（例えば精神障害、最近の物質乱用歴）を有するか、またはそれとは別に信頼できない、もしくはプロトコールの必要条件に従えないと考えられること；またはこの試験に登録する前の３０日以内に何らかの治験用生成物またはデバイスを受けていること。
【０１０１】
パート１−Ｆ５９８の単回投与
Ｆ５９８の単回投与の終末相半減期（Ｔ１／２）を推定するために、全ての対象を最低５０日間観察した。１日目に３０分かけて静脈内注入で与えられた開始用量は、１．０ｍｇ／ｋｇ／日であった（表３を参照）。各用量レベルの第１の対象を最低３日間観察し、その後そのグループの残りの対象を処置した。投薬量の漸増は、各用量レベルでの最後の対象を最低３日間観察した後にだけ起こり、ＣＴＣＡＥグレード２より高い薬物関連の毒性は観察されなかった（ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ、バージョン４．０２に従って査定した）。
【０１０２】
【表４】
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【０１０３】
パート２−Ｆ５９８の２種の投与
パート１からの安全性、許容度、ｐＫ、ｐＤ、および免疫原性データを検討した後、追加の６人の対象に２種のＦ５９８用量を与えた。パート１からの薬物動態学的なデータを検討することによって、２回目のＦ５９８用量の用量レベルおよびタイミングを決定した。パート２の投与およびスケジューリングは、Ｆ５９８の血清半減期と、ｐＤオプソニンアッセイで測定した場合の抗体の予防的な血清レベルとの決定に基づいていた。１０μｇ／ｍｌのＦ５９８の血清レベルを予防的であると考えた。抗体の予防的レベルは、半減期より長い場合がある。パート１におけるこれらのパラメーターの測定および査定から、パート２にとって適切な用量およびスケジュールの選択がなされた。
【０１０４】
それぞれ１０ｍＬのＦ５９８溶液（ｐＨ６．５の２０ｍＭのＮａＰＯ４、１５０ｍＭのＮａＣｌ中１０．２ｍｇ／ｍＬの濃度で調製された）を含有する使い捨ての透明ガラスバイアル中に、注射用のＦ５９８を透明で無色の液体として供給した。
【０１０５】
全てのＦ５９８の用量を３０分の点滴により静脈内投与した。しかしながら、所定の対象ごとに忍容性を考慮して必要があれば２時間まで注入期間を延長することができた。各使用日に注入溶液を無菌条件下で新鮮に調製した。注入溶液の調製前に、必要な数のＦ５９８のバイアルを周囲空気中で少なくとも１時間温めることにより室温に戻した。次いで、バイアルから必要な体積のＦ５９８溶液を取り出し、等体積の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）を１００ｍＬの塩類溶液の注入バッグから取り出し、注入バッグにＦ５９８抗体を添加して最終的な点滴体積を１００ｍＬにした。注入溶液が調製されたら、それを注入が終わるまでそのまま室温に置いた。注入は注入溶液の調製から２時間以内に開始された。
【０１０６】
Ｂ）典型的な第１相試験の結果
５つのコホート（１つの用量あたりＮ＝４）の健常成人対象に、Ｆ５９８の単回用量（０．８６、４．３、８．６、１２．９または１７．２ｍｇ／ｋｇ）を２時間の静脈内注入で与えた。注入前および注入後のサンプルをその後の５０日にわたり得て、安全性を決定するために志願者の身体的な健康状態の標準的な評価を実行した。分析されたｍＡｂのＰＮＡＧへの結合およびＰＫ特性を検出するために、ヒトＩｇＧ１特異的ＥＬＩＳＡを使用して受容者の血清中のＦ５９８の存在を評価した。インビトロでのオプソニン食作用性死滅（ＯＰＫ：ｏｐｓｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｋｉｌｌｉｎｇ）アッセイおよびフローサイトメトリーベースのオプソニン食作用アッセイ（ＯＰＡ：ｏｐｓｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ａｓｓａｙ）を使用して薬力学的（ＰＤ：Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ）査定を行った。
【０１０７】
オプソニン食作用死滅アッセイは、単離されたヒト血清と、ウサギ補体、分化したＨＬ−６０細胞、および黄色ブドウ球菌（ＭＮ８ｍ株）とを合わせ、３７℃で９０分回転させてインキュベートすることによって行われた。インキュベート後、水浴中の超音波発生装置（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、番号ＦＢ１５０５０）中でチューブを５分超音波処理し、０．０５％トゥイーン８０を含有するＴＳＢで１００倍に希釈し、らせん形のプレーター（ＩＵＬ、Ｅｎｓｅｍｍｅｎｓｅｕｒ  Ｓｐｉｒａｌ  Ｅａｓｙ  Ｊｅｔ）を使用してＴＳＡプレート上に対数的に塗布した。各プレート上に発生したコロニー数を数えることにより血清のＰＮＡＧ抗体力価を決定した。このアッセイでは、２４０ｒｐｍで振盪しながらＴＳＢ＋２％ＮａＣｌ中で３７℃で１６時間増殖させることにより黄色ブドウ球菌（ＭＮ８ｍ株）を調製した。細菌培養物が約０．４のＯＤ６００に達したら、細菌をＨＢＳＳ／０．１％ゼラチンで２００倍に希釈した。ウサギ乳児の補体（番号３１０６１−バッチ番号２１８３２Ｌ、ＰｅｌＦｒｅｅｚ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）を、４℃で１時間、プロテインＧ−セファロース（Ｓｉｇｍａ番号Ｐ３２９６−５ＭＬ）に前もって吸着させた。使用前に、ＨＬ−６０細胞を、ＲＰＭＩ１６４０／１０％ＦＢＳ／グルタマックス（Ｇｌｕｔａｍａｘ）１×／０．８％ＤＭＦ中で細胞４×１０５個／ｍｌの細胞濃度で３〜４日分化させた。
【０１０８】
オプソニン食作用アッセイは、単離されたヒト血清と、ウサギ補体、分化したＨＬ−６０細胞、および蛍光標識された黄色ブドウ球菌（ＭＮ８ｍ株）とを合わせて、３７℃で３０分回転させてインキュベートすることにより行われた。ＦＡＣＳ装置を使用してＨＬ６０細胞によって食菌された細菌の数を数えることにより血清のＰＮＡＧ抗体力価を決定した。このアッセイでは、５，６カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステルで標識された黄色ブドウ球菌ＭＮ８株（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ番号Ｃ−１３１１）を使用した。分化したＨＬ６０細胞を緩衝液で２回予備洗浄し（２回目の洗浄工程は少なくとも２０分行われた）、アッセイ緩衝液中の細胞２．５×１０４個／４０μｌの濃度に希釈した。
【０１０９】
表４ならびに図３、４、および５に記載の結果から、Ｆ５９８は、長期の排出半減期（約２０〜３０日）、０．０６９９〜０．０８５１ｍＬ／時間／ｋｇの低い全身クリアランス、および５３．４〜６７．０ｍＬ／ｋｇの低い見かけの分布容積を示したことが示される。オプソニン食作用活性における用量依存性の増加が観察された。各用量について、この活性は第１のタイムポイントの投与後（４時間）から最大であり、長期にわたり（５０日目まで）減少しなかった。
【０１１０】
【表５】
2015526474.tif 000007
【０１１１】
〔実施例６〕
Ｆ５９８の第２ａ相試験
Ａ）試験の設計
集中治療室に入院して人工呼吸器が付けられた患者におけるＦ５９８の単回静脈内用量の薬物動態学、薬力学、および安全性を査定するために、無作為化二重盲検、プラセボ対照の第２ａ相試験を行った。この試験で６人の患者を処置した。対象が集中治療室に入院しており人工呼吸器を付けている場合、その対象は試験参加に適格であるとした。
【０１１２】
Ｆ５９８を１７．０ｍｇ／ｍＬの濃度の液体として製剤化した。両方の用量レジメンごとに２時間かけて２５０ｍＬの生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）中の薬物を静脈内注入で投与した。単回用量の薬物を８．６ｍｇ／ｋｇまたは１２．９ｍｇ／ｋｇのいずれかの濃度で患者に与えた。
【０１１３】
プラセボは食塩水（０．９％ＮａＣｌ）であり、これを２時間かけて２５０ｍＬで静脈内注入で投与した。
【０１１４】
合計９１日間患者を観察した。投与の１日前に患者を選別し、１日目に１回のＦ５９８の静脈注射を与え、９０日に経過観察のために来院させた。
【０１１５】
それに続く薬物動態学的（ＰＫ）パラメーターを、ノンコンパートメント法：注入終了時の血清濃度（Ｃｅｏｉ）、０時間からリアルタイムｔｌａｓｔまでの血清濃度−時間曲線下面積、最後に血清濃度を測定した時間（ｔｌａｓｔ）、無限時間まで外挿した血清濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）、終末相半減期（ｔ１／２ｚ）、血清からの薬物の全身クリアランス（ＣＬ）、および定常状態における分布容積（Ｖｓｓ）を使用してＦ５９８に関して計算した。
【０１１６】
効能／薬力学の評価項目を以下の通りとした。主要評価項目は用いられなかった。副次的評価項目は以下の通りであった：薬力学：長期にわたるオプソニン食作用の力価；免疫原性：ヒト抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）；探索的効能：２８日目までに確認されたＰＮＡＧ発現病原体によって引き起こされる感染；ならびに探索的効能：人工呼吸器の装着期間、ＩＣＵ在室、入院、２８日目および９０日目の全死因死亡率。
【０１１７】
安全性の評価項目は以下の通りであった：急性の輸注反応、９０日目までに処置により出現した有害反応（ＴＥＡＥ）、ならびに標準的な血液学および血液化学、ならびに血液培養および気管内吸引液（ＥＴＡ）培養（人工呼吸器を付けた患者の場合）。
【０１１８】
薬物動態学／薬力学のためのサンプリング時間および生物学的分析方法は以下の通りであった：
【０１１９】
・  ＰＫ：
−  サンプリング時間：投与前、１日目の１時間、２時間（注入終了時）、および８時間、次いで投与後２日目、５日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目、５６日目、７０日目、および９０日目に血液サンプルを収集した。
−  生物学的分析方法：Ｆ５９８の血清濃度を、０．０８５８μｇ／ｍＬの定量下限濃度（ＬＬＯＱ）を用いた認可された酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定した。
【０１２０】
・  ヒト抗Ｆ５９８抗体（ＨＡＨＡ）：
−  サンプリング時間：投与前、次いで投与後１４日目、２８日目、５６日目、および９０日目に血液サンプルを収集した。
−  生物学的分析方法：血清中のＨＡＨＡを、認可された電気化学発光（ＥＣＬ）イムノアッセイにより検出した。
【０１２１】
・  ＰＤ：
−  サンプリング時間：オプソニン食作用テスト（ＯＰＡ）：１日目：投与前、２時間（注入終了時）、２日目、７日目、１４日目、２８日目、５６日目、９０日目；死滅テスト（ＯＰＫ）サンプリング：１日目：投与前、２時間（注入終了時）、１４日目、２８日目、９０日目。
−  生物学的分析方法であるＯＰＡ：マトリックス：血清／分析技術：ＯＰＡ／定量下限濃度：ＮＡ／アッセイ体積：ＮＡ／生物学的分析の場所：Ｆｌｏｗａｐｐｓ／参考文献の方法：ＦＡ−４４０。
−  生物学的分析方法であるＯＰＫ：マトリックス：血清／分析技術：ＯＰＡ／定量下限濃度：ＮＡ／アッセイ体積：ＮＡ／生物学的分析の場所：Ｆｌｏｗａｐｐｓ／参考文献の方法：ＦＡ−４４５。
【０１２２】
統計的方法は以下の通りであった。一次分析は、用量による記述統計を使用してＰＫ変数（Ｃｅｏｉ、ＡＵＣｌａｓｔ、ＡＵＣ、ＣＬ、Ｖｓｓ、ｔ１／２ｚ、およびｔｌａｓｔ）をまとめることであった。この分析は、少なくとも１つのＰＫで評価可能なデータポイントを有する無作為化された全患者からなるＰＫ集団に基づきなされた。安全性集団を、無作為化され、注入によって試験薬物療法が投与された全患者と定義し、ここで注入が終わっているかどうかは斟酌されなかった。特に他の指定がない限り、実際に受けた処置または用量により安全性データを要約した。有害反応発生率の表を、実際に受けた処置または用量、器官別大分類（ＳＯＣ）、および基本語（ＰＴ）で表示した。
【０１２３】
Ｂ）結果
第２ａ相試験の結果は以下の通りであった。６人の患者にＦ５９８注入が与えられ、すなわち；２人の患者にプラセボが与えられ、２人の患者に８．６ｍｇ／ｋｇのＦ５９８が与えられ、２人の患者に１２．９ｍｇ／ｋｇのＦ５９８が与えられた。Ｆ５９８注入を投与した患者だけがＰＫ、安全性、および他の探索的査定について検討された。
【０１２４】
以下の表５に、単回ＩＶ投与後のＦ５９８のＰＫパラメーターを要約する。
【０１２５】
【表６】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2015526474.tif 000013
【国際調査報告】
2015526474.tif 000014
2015526474.tif 000015
2015526474.tif 000016