(57)【要約】  ハチの媒介による植物への適用のための粉末植物処理配合物であって、粒子状ケイ酸カルシウム、クロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）、該配合物から水分を吸収するための吸湿剤、該配合物を植物に誘引するための誘引剤、および希釈剤を含む、配合物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物の処理のための配合物であって、
ａ）粒子状ケイ酸カルシウム；および
ｂ）前記粒子状ケイ酸カルシウムと組み合わされた植物処理剤；
を含むことを特徴とする、配合物。
【請求項２】
前記植物処理剤が、少なくとも一部の前記ケイ酸カルシウムに結合されて、安定化植物処理粒子を形成することを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項３】
約５重量％〜１５重量％の安定化植物処理粒子を含むことを特徴とする、請求項２に記載の配合物。
【請求項４】
約７重量％〜８重量％の安定化植物処理粒子を含むことを特徴とする、請求項３に記載の配合物。
【請求項５】
少なくとも一部の前記ケイ酸カルシウムが遊離ケイ酸カルシウムであり、前記配合物は約１０重量％〜約２５重量％の遊離ケイ酸カルシウムを含むことを特徴とする、請求項２に記載の配合物。
【請求項６】
前記配合物が、約１７重量％〜１８重量％の遊離ケイ酸カルシウムを含むことを特徴とする、請求項５に記載の配合物。
【請求項７】
前記植物処理剤が、微生物因子を含むことを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項８】
前記植物処理剤が、真菌胞子を含むことを特徴とする、請求項７に記載の配合物。
【請求項９】
前記植物処理剤が、クロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を含むことを特徴とする、請求項８に記載の配合物。
【請求項１０】
前記植物処理剤が、昆虫病原子状菌（ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）を含むことを特徴とする、請求項７に記載の配合物。
【請求項１１】
ａ）前記植物処理剤が、真菌胞子を含み；
ｂ）前記真菌胞子が、少なくとも一部の前記ケイ酸カルシウムに結合されており； 
ｃ）前記植物処理剤が、それが結合されているケイ酸カルシウム１グラム当たり約１×１０９〜４×１０９個の胞子の密度を有する；
ことを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項１２】
前記配合物が結合されているケイ酸カルシウム１グラム当たり約２×１０９個の胞子を含むことを特徴とする、請求項１１に記載の配合物。
【請求項１３】
配合物１グラム当たり約２×１０８〜約４×１０８個の胞子を含むことを特徴とする、請求項１１に記載の配合物。
【請求項１４】
前記粒子状ケイ酸カルシウムが、約４５マイクロメートル〜約７５マイクロメートルのふるい指定を有する粒子を含むことを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項１５】
前記粒子状ケイ酸カルシウムが、約４５マイクロメートルのふるい指定を有する粒子を含むことを特徴とする、請求項１４に記載の配合物。
【請求項１６】
前記粒子状ケイ酸カルシウムおよび植物処理剤と混合された吸湿剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項１７】
前記吸湿剤が、シリカゲルを含むことを特徴とする、請求項１６に記載の配合物。
【請求項１８】
前記シリカゲルが、約７００マイクロメートル〜約４０００マイクロメートルのふるい指定を有する粒子を含むことを特徴とする、請求項１７に記載の配合物。
【請求項１９】
前記シリカゲルが、約８４０マイクロメートルのふるい指定を有する粒子を含むことを特徴とする、請求項１８に記載の配合物。
【請求項２０】
前記配合物が、約０．５重量％〜５重量％の吸湿剤を含むことを特徴とする、請求項１６に記載の配合物。
【請求項２１】
前記配合物が、約１重量％の吸湿剤を含むことを特徴とする、請求項２０に記載の配合物。
【請求項２２】
前記配合物を植物および／または媒介昆虫に誘引するための、前記粒子状ケイ酸カルシウムおよび植物処理剤と混合された誘引剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項２３】
前記誘引剤が、正味の正の静電荷を有することを特徴とする、請求項２２に記載の配合物。
【請求項２４】
前記誘引剤が、鉱物の混合物を含むことを特徴とする、請求項２２に記載の配合物。
【請求項２５】
前記配合物が、約５重量％〜約２０重量％の誘引剤を含むことを特徴とする、請求項２２に記載の配合物。
【請求項２６】
前記配合物が、約１０重量％の誘引剤を含むことを特徴とする、請求項２５に記載の配合物。
【請求項２７】
前記誘引剤が、約３５マイクロメートル〜約７５マイクロメートルのふるい指定を有することを特徴とする、請求項２２に記載の配合物。
【請求項２８】
前記誘引剤が、約４５マイクロメートルのふるい指定を有することを特徴とする、請求項２２に記載の配合物。
【請求項２９】
前記配合物が、前記粒子状ケイ酸カルシウムおよび植物処理剤と混合された希釈剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項３０】
前記希釈剤が、粉を含むことを特徴とする、請求項２９に記載の配合物。
【請求項３１】
前記希釈剤が、ライ麦粉、小麦粉、スペルト粉、米粉、およびトウモロコシ粉の少なくとも１種を含むことを特徴とする、請求項３０に記載の配合物。
【請求項３２】
前記希釈剤が、トウモロコシ粉を含むことを特徴とする、請求項３１に記載の配合物。
【請求項３３】
前記配合物が、約５０重量％〜７５重量％の希釈剤を含むことを特徴とする、請求項２９に記載の配合物。
【請求項３４】
前記配合物が、約６４重量％の希釈剤を含むことを特徴とする、請求項３３に記載の配合物。
【請求項３５】
前記希釈剤が、約７５マイクロメートル〜約２５０マイクロメートルのふるい指定を有することを特徴とする、請求項２９に記載の配合物。
【請求項３６】
前記希釈剤が、約１２５マイクロメートルのふるい指定を有することを特徴とする、請求項３５に記載の配合物。
【請求項３７】
固化防止剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の配合物。
【請求項３８】
前記固化防止剤が、酸化マグネシウムを含むことを特徴とする、請求項３７に記載の配合物。
【請求項３９】
前記配合物が、約０．７５重量％〜５．０重量％の酸化マグネシウムを含むことを特徴とする、請求項３８に記載の配合物。
【請求項４０】
前記配合物が、約１重量％〜約１．５重量％の酸化マグネシウムを含むことを特徴とする、請求項３９に記載の配合物。
【請求項４１】
前記固化防止剤が、約７５マイクロメートル〜約１５０マイクロメートルのふるい指定を有することを特徴とする、請求項３７に記載の配合物。
【請求項４２】
前記固化防止剤が、約１２５マイクロメートルのふるい指定を有することを特徴とする、請求項４１に記載の配合物。
【請求項４３】
植物におけるスクレロチニア・スクレロチオルム（ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、ボトリチス・シネレア（ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、およびモニリニア・バクシニイ−コリムボシ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｖａｃｃｉｎｉｉ−ｃｏｒｙｍｂｏｓｉ）の少なくとも１種を処理するための、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の配合物の使用。
【請求項４４】
カノラ植物およびヒマワリ植物の少なくとも１種における病気を処理するための、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の配合物の使用。
【請求項４５】
農作物における発芽率を増加させるための、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の配合物の使用。
【請求項４６】
ハチ媒介剤としての、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の配合物の使用。
【請求項４７】
前記吸湿剤が、昆虫によって運ばれるには大き過ぎるように選択される粒径を有することを特徴とする、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の配合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、植物処理配合物に関する。具体的には、本開示は、ハチの媒介（ｖｅｃｔｏｒｉｎｇ）などの、昆虫の媒介によって植物に散布され得る植物処理配合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１（Ｇｒｏｓｓら）は、従来の市販のハチの巣箱の基礎構造として一体化されている改良された小型の密貯め（ｓｕｐｅｒ）に挿入される装置を使用して、セイヨウミツバチ（Ａｐｉｓ  ｍｅｌｌｉｆｅｒａ  Ｌ．）によって害虫の防除のために散布される生物防除剤を開示するといわれている。この装置は、別々の進入経路と退去経路を備え、これは、退去するハチが巣箱を出るときに、生物防除剤で表面が汚染されることを可能にする。
【０００３】
特許文献２（Ｋｏｖａｃｈ）は、巣箱を損なうことなく、挿入、補充、および取外しが容易であり、筐体内に挿入可能なカートリッジを含むハチ散布装置またはディスペンサを開示するといわれている。この装置は、栽培者などの、専門の養蜂業者でない者によって使用されるように設計されている。それは、標準的なハチの巣箱の入口に挿入され、巣箱またはコロニーの混乱は最小限である。ハチが巣箱を出るとき、ハチは乾燥した生物農薬懸架装置を通って傾斜路を歩いて上り、巣箱を出て、生物農薬を運び、農作物に受粉するときに生物農薬を花に付着させる。生物農薬が残り少なくなると、ヒンジ蓋を持ち上げる、または古いカートリッジを充填されたものと置き換えることによって、追加の材料は容易に加えられる。この蓋はまた、いくらかの湿気防護を与えて、生物農薬を乾燥状態に保ち、それにより、ハチの接種を容易にする。ディスペンサは、受粉活動が終了したとき、それを巣箱入口から単に引っ張ることによって取り外される。取り外しは、混乱させることなく、巣箱の完全性を損なわない。装置が、夜間に挿入、補充、または取り外される場合、使用者には最小限の保護衣が必要である。
【０００４】
ＰＣＴ特許出願の特許文献３（Ｐｕｔら）は、ハチ、特にマルハナバチの使用を介した生物農薬または他の物質の散布を開示するといわれている。散布装置は、巣箱内に取り付け可能であるか、またはそれに接続されており、ハチが巣箱を出るとき、ハチによって、拾い上げられ、運ばれ、散布される生物農薬または他の物質を収容している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第５，３４８，５１１号明細書
【特許文献２】米国特許第５，１８９，１００号明細書
【特許文献３】国際公開第２０１０／１３６５９９号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
以下の概要は、本出願人の教示の様々な態様を読者に紹介することが意図されるが、いかなる発明も定義することは意図されない。
【０００７】
一つの態様によれば、植物の処理のための配合物は、粒子状ケイ酸カルシウム、およびこの粒子状ケイ酸カルシウムと組み合わされる植物処理剤を含む。
【０００８】
別の態様によれば、昆虫媒介による植物への適用のための生物防除粉末配合物は、植物処理剤；植物処理剤を安定化させるための、植物処理剤に結合された安定剤；配合物から水分を吸収するための吸湿剤；配合物を植物に誘引するための誘引剤；および希釈剤を含む。
【０００９】
別の態様によれば、植物の処理のための粉末配合物は、クロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の胞子を含む植物処理剤を含む。配合物は、配合物１グラム当たり約２×１０８〜約４×１０８個の胞子を含む。
【００１０】
別の態様によれば、植物処理配合物を調製する方法は、液体中植物処理剤の懸濁液を準備する工程、粒子状ケイ酸カルシウムを準備する工程；および懸濁液をケイ酸カルシウムに結合させる工程を含む。
【００１１】
別の態様によれば、植物処理配合物を調製する方法は、クロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の胞子を粒子状安定剤に結合させて、安定化植物処理粒子を生成させる工程；安定化植物処理粒子を少なくとも１種の添加剤と組み合わせて、安定化植物処理粒子と添加剤との混合物を生成させる工程；およびこの混合物に遊離安定剤を添加して、配合物中の胞子の濃度を配合物１グラム当たり約２×１０８〜約４×１０８個に調整する工程を含む。
【００１２】
別の態様によれば、昆虫媒介による植物の処理のための配合物は、植物処理剤、および配合物から水分を吸収するための粒子状吸湿剤を含む。吸湿剤は、昆虫によって媒介されるには大き過ぎるように選択される粒径を有する。一部の例では、吸湿粒子のサイズは、安定化植物処理粒子のサイズよりも大きくてもよい。一部の例では、吸湿粒子は、安定化植物処理粒子のサイズよりも約１５〜約９０倍大きいサイズを有してもよい。
【００１３】
別の態様によれば、クロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）は、カノラ（ｃａｎｏｌａ）におけるボトリチス・シネレア（ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）を処理するために使用される。
【００１４】
別の態様によれば、クロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）は、カノラ（ｃａｎｏｌａ）におけるスクレロチニア・スクレロチオルム（ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）を処理するために使用される。
【００１５】
一部の例では、植物処理剤は、少なくとも一部のケイ酸カルシウムに結合されて、安定化植物処理粒子を形成してもよい。配合物は、約５重量％〜１５重量％の安定化植物処理粒子、より具体的には約７重量％〜８重量％の安定化植物処理粒子を含んでもよい。
【００１６】
一部の例では、少なくとも一部のケイ酸カルシウムは、遊離ケイ酸カルシウムであってもよい。配合物は、約１０重量％〜２５重量％の遊離ケイ酸カルシウム、より具体的には約１７重量％〜約１８重量％の遊離ケイ酸カルシウムを含んでもよい。
【００１７】
一部の例では、植物処理剤は、微生物因子を含んでもよい。例えば、植物処理剤は、クロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）などの真菌胞子を含んでもよい。さらに例えば、植物処理剤は、昆虫病原子状菌（ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）を含んでもよい。
【００１８】
一部の例では、植物処理剤は、真菌胞子を含んでもよく、この真菌胞子は、少なくとも一部のケイ酸カルシウムに結合されていてもよい。植物処理剤は、それが結合されているケイ酸カルシウム１グラム当たり約１×１０９〜４×１０９個の胞子、より具体的にはそれが結合されているケイ酸カルシウム１グラム当たり約２×１０９個の胞子、の密度を有してもよい。
【００１９】
一部の例では、配合物は、配合物１グラム当たり約２×１０８〜約４×１０８個の胞子を含んでもよい。
【００２０】
一部の例では、粒子状ケイ酸カルシウムは、約４５マイクロメートル〜約７５マイクロメートル、より具体的には約４５マイクロメートルのふるい指定（ｓｉｅｖｅ  ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ）を有する粒子を含んでもよい。
【００２１】
一部の例では、吸湿剤は、粒子状ケイ酸カルシウムおよび植物処理剤と混合されてもよい。吸湿剤は、シリカゲルを含んでもよい。このシリカゲルは、約７００マイクロメートル〜約４０００マイクロメートル、より具体的には約８４０マイクロメートルのふるい指定を有する粒子を含んでもよい。配合物は、約０．５重量％〜５重量％の吸湿剤、より具体的には約１重量％の吸湿剤を含んでもよい。
【００２２】
一部の例では、配合物は、配合物を植物および／または媒介昆虫に誘引するための、粒子状ケイ酸カルシウムおよび植物処理剤と混合された誘引剤をさらに含んでもよい。誘引剤は、正味の正の静電荷を有してもよい。誘引剤は、鉱物の混合物を含んでもよい。配合物は、約５重量％〜約２０重量％の誘引剤、より具体的には約１０重量％の誘引剤を含んでもよい。誘引剤は、約３５マイクロメートル〜約７５マイクロメートル、より具体的には約４５マイクロメートルのふるい指定を有してもよい。
【００２３】
一部の例では、配合物は、粒子状ケイ酸カルシウムおよび植物処理剤と混合された希釈剤をさらに含んでもよい。希釈剤は、粉、例えば、ライ麦粉、小麦粉、スペルト粉、米粉、およびトウモロコシ粉の少なくとも１種を含んでもよい。１つの特定の例では、希釈剤はトウモロコシ粉を含む。配合物は、約５０重量％〜７５重量％の希釈剤、より具体的には約６４重量％の希釈剤を含んでもよい。希釈剤は、約７５マイクロメートル〜約２５０マイクロメートル、より具体的には約１２５マイクロメートルのふるい指定を有してもよい。
【００２４】
一部の例では、配合物は、固化防止剤をさらに含んでもよい。固化防止剤は、酸化マグネシウムを含んでもよい。配合物は、約０．７５重量％〜５．０重量％の酸化マグネシウム、より具体的には約１重量％〜約１．５重量％の酸化マグネシウムを含んでもよい。固化防止剤は、約７５マイクロメートル〜約１５０マイクロメートル、より具体的には約１２５マイクロメートルのふるい指定を有してもよい。
【００２５】
一部の例では、配合物は、植物におけるスクレロチニア・スクレロチオルム（ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、ボトリチス・シネレア（ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、およびモニリニア・バクシニイ−コリムボシ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｖａｃｃｉｎｉｉ−ｃｏｒｙｍｂｏｓｉ）の少なくとも１種を処理するために使用されてもよい。
【００２６】
一部の例では、配合物は、カノラ植物およびヒマワリ植物の少なくとも１種における病気を処理するために使用されてもよい。
【００２７】
一部の例では、配合物は、農作物における発芽率を増加させるために使用されてもよい。
【００２８】
一部の例では、配合物は、ハチ媒介剤として使用されてもよい。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
それぞれの特許請求された発明の実施形態の例を提供するために、様々な装置、方法、および／または配合物が以下に記載される。以下に記載される実施形態は、いずれの特許請求された発明も限定するものではなく、いずれの特許請求された発明も、以下に説明されるものと異なる装置、方法、および／または配合物を包含し得る。特許請求された発明は、以下に記載されるいずれか一つの装置、方法、および／または配合物の特徴のすべてを有する装置、方法、および／または配合物に、または以下に記載される装置、方法、および／または配合物の複数もしくはすべてに共通する特徴に限定されない。以下に記載される装置、方法、および／または配合物は、本特許出願の発行によって付与されるいずれの排他的権利の実施形態でもないことが可能である。以下に記載される装置、方法、および／または配合物において開示される、ならびに排他的権利が本特許出願の発行によって付与されていない、いかなる発明も、別の保護的法律文書、例えば、継続特許出願、の主題であってもよく、本出願人、本発明者、または本権利者は、本文書中のその開示によって、いかなるこのような発明も、放棄し、特許請求の範囲を限定修正し、または公共に進呈することを意図しない。
【００３０】
例示的な植物処理配合物は、植物処理剤（すなわち、農作物に有益である作用剤）、および１種以上の添加剤を含む。例えば、植物処理剤は、植物の成長、活力、および生産性を促進させ；農作物における発芽率および／または種子品質を高め；病気、害虫、および／または悪い天候もしくは土壌条件などの環境ストレスに対する抵抗性を増強し；病気または害虫を防除またはそれらに逆らって作用し；あるいは傷害および／または感染からの植物の回復を促進させ得る。
【００３１】
一部の例では、植物処理剤は、１種以上の微生物、例えば、細菌、ウイルス、または真菌もしくは真菌胞子を含んでもよい。好適な真菌胞子の一例としては、クロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）が挙げられ、これは、カノラ、ヒマワリ、ラズベリー、ブルーベリー、ストロベリー、リンゴ、西洋ナシ、キウイ、スイカ、コーヒー、マンゴー、アボガド、サクランボ、プラム、アーモンド、モモ、カシュー、グアバ、アルファルファ、ソバ、クローバー、マメ、エンドウ、タマネギ、大豆、綿、カラシ、ブラックベリー、グースベリー、コショウ、ナス、およびスグリを含めた、様々な農作物における、スクレロチニア・スクレロチオルム（ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、モニリニア・バクシニイ−コリムボシ（ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｖａｃｃｉｎｉｉ−ｃｏｒｙｍｂｏｓｉ）、および／またはボトリチス・シネレア（ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）などの病原菌を防除し得る。好適な真菌胞子の別の例としては、昆虫病原子状菌（ｂｅａｕｖｅｒｉａ  ｂａｓｓｉａｎａ）が挙げられ、これは、クランベリー作物におけるクランベリー蛆虫を防除し得る。好適な細菌の一例は、バシラス・スリンジエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）であり、これは、様々な農作物における昆虫害虫を防除し得る。
【００３２】
配合物中の植物処理剤の濃度は、例えば、植物処理剤の性質、および／または配合物が使用される条件（例えば、気候、標的植物など）に依存して変わり得る。植物処理剤がクロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の胞子を含む、１つの特定の例では、配合物は、配合物１グラム当たり約２×１０８〜４×１０８の胞子を含み得る。
【００３３】
配合物は、植物処理剤と組み合わされる様々な添加剤を含んでもよい。一部の例では、添加剤としては、以下にさらに詳細に記載されるとおりの、安定剤、吸湿剤、誘引剤、希釈剤、および／または固化防止剤の１種以上が挙げられる。
【００３４】
安定剤は、一般に植物標的への植物処理剤の送達前に、植物処理剤の壊変、分解、または活性化を、防止または最小限にするために役立ち得る。例えば、植物処理剤が真菌胞子である場合、安定剤は、水を吸収して、真菌胞子を比較的に乾燥状態に保ち、それにより、植物への胞子の送達前に、休止状態の胞子を安定化させ、胞子の発芽を防止または最小限にし得る。
【００３５】
安定剤の一例は、粒子状ケイ酸カルシウム（Ｍｉｃｒｏ−ｃｅｌ（登録商標）という商品名で販売される）である。ケイ酸カルシウムの粒子は、約４５マイクロメートル（約３２５メッシュ）〜約７５マイクロメートル（約２００メッシュ）のふるい指定を有してもよい。１つの特定の例では、ケイ酸カルシウムの粒子は、約４５マイクロメートル（３２５メッシュ）のふるい指定を有する。
【００３６】
一部の例では、植物処理剤は、少なくとも一部の安定剤に結合されて、安定化植物処理粒子を生成してもよい。例えば、水中真菌胞子の懸濁液は、ケイ酸カルシウム粒子上に噴霧されてもよく、その結果、真菌胞子は、一般にケイ酸カルシウム粒子に付着する。真菌胞子の懸濁液は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１２／００２１９０６号明細書（Ｓｕｔｔｏｎら）に記載されたとおりに調製されてもよい。安定化植物処理粒子は、胞子が結合されているケイ酸カルシウム１グラム当たり約１×１０９〜約４×１０９個の胞子の胞子密度を有してもよい。１つの特定の例では、安定化植物処理粒子は、胞子が結合されているケイ酸カルシウム１グラム当たり約２×１０９個の胞子の密度を有する。
【００３７】
一部の例では、配合物は、約５重量％〜約１５重量％の安定化植物処理粒子、より具体的には約７重量％〜約８重量％の安定化植物処理粒子を含んでもよい。１つの特定の例では、配合物は、７．５重量％の安定化植物処理粒子を含んでもよい。
【００３８】
一部の例では、少なくとも一部の安定剤は、植物処理剤に結合されることなく配合物中に混合されてもよい。このような安定剤は、遊離安定剤と称してもよい。配合物中の遊離安定剤の量は、特定の濃度の植物処理剤を有する配合物をもたらすように任意に選択されてもよい。例えば、配合物の成分は、一緒に混合され、次いで、配合物中の胞子の濃度が配合物１グラム当たり約２×１０８〜４×１０８個の胞子の濃度に達するまで、配合物に遊離安定剤が添加されてもよい。このような例では、配合物は、約１０重量％〜約２５重量％の遊離安定剤、より具体的には約１７重量％〜約１８重量％の遊離安定剤を含んでもよい。１つの特定の例では、配合物は、約１７．５重量％の遊離安定剤を含んでもよい。
【００３９】
吸湿剤は、配合剤から水分を吸収して、その結果、配合物を比較的に乾燥状態に保ち、配合物の固化または凝集を防止し得る。吸湿剤の例としては、シリカゲルの粒子またはビーズなどの乾燥剤、およびポリアクリル酸ナトリウムなどの高吸収性ポリマーが挙げられる。吸湿剤のさらなる例としては、かんなくず、および粘土球が挙げられる。一部の例では、配合物は、約０．５重量％〜５重量％の吸湿剤を含んでもよい。１つの特定の例では、配合物は、約１重量％の吸湿剤を含んでもよい。
【００４０】
配合物が昆虫媒介によって送達される例では、吸湿剤の粒径は、昆虫によって運ばれるには大き過ぎるように選択され得、したがって、一般に散布器中にそのまま存在しその結果、配合物から水分を吸収し続ける。例えば、粒子は、約７００マイクロメートル（２５メッシュ）〜約４０００マイクロメートル（５メッシュ）のふるい指定を有してもよい。１つの特定の例では、シリカゲルは、約８４０マイクロメートル（２０メッシュ）のふるい指定を有する粒子の形態であってもよい。
【００４１】
誘引剤は、配合物を植物および／または媒介昆虫に誘引するのに役立ち得る。例えば、誘引剤は、正味の正の静電荷を有してもよく、その結果、正味の負の静電荷を有する植物および／または媒介昆虫に静電的に誘引される。一部の例では、誘引剤は、鉱物、または鉱物の混合物を含んでもよい。１つの特定の例では、誘引剤は、ＤＹＮＡ−ＭＩＮ（商標）という名称でＡｇｒｉ−Ｄｙｎａｍｉｃｓ（Ｍａｒｔｉｎｓ  Ｃｒｅｅｋ、ＰＡ）により販売される鉱物混合物を含んでもよく、これは、以下の鉱物：二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、カルシウム、鉄、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、リン、チタン、マンガン、ストロンチウム、ジルコニウム、リチウム、ルビジウム、ホウ素、亜鉛、バナジウム、クロム、銅、イットリウム、ニッケル、コバルト、ガリウム、セシウム、スカンジウム、スズ、モリブデン、およびさらなる微量元素を含む。別の例では、誘引剤は、カルシウム石灰石を含んでもよい。
【００４２】
一部の例では、配合物は、約５重量％〜約２０重量％の誘引剤を含んでもよい。１つの特定の例では、配合物は、約１０重量％の誘引剤を含んでもよい。一部の例では、誘引剤は、約３５マイクロメートル（約３５０メッシュ）〜約７５マイクロメートル（約２００メッシュ）のふるい指定を有してもよい。１つの特定の例では、誘引剤は、約４５マイクロメートル（約３２５メッシュ）のふるい指定を有してもよい。
【００４３】
希釈剤は、適切なデンプンまたは粉であってもよい。配合物が昆虫媒介によって送達される例では、希釈剤は、昆虫を刺激または害せず、昆虫によって食べられないように選択され得る。希釈剤はさらに、希釈剤が凝集しないように、相当量の水分を吸収しないように選択され得る。昆虫媒介に好適であり得る希釈剤の例としては、トウモロコシ粉、ならびに穀物粉、例えば、ライ麦、小麦、米粉、およびスペルト粉が挙げられる。代替の例では、希釈剤はカオリンであってもよい。他の例では、希釈剤は、粉乳またはタルクを含んでもよい。これらは、特に、配合物が昆虫媒介以外の方法、例えば、噴霧によって送達される例で有用であり得る。
【００４４】
一部の例では、配合物は、約５０重量％〜約７５重量％の希釈剤を含んでもよい。１つの特定の例では、配合物は、約６４重量％の希釈剤を含んでもよい。一部の例では、希釈剤は、約７５マイクロメートル（約２００メッシュ）〜約２５０マイクロメートル（約６０メッシュ）のふるい指定を有してもよい。１つの特定の例では、希釈剤は、約１２５マイクロメートル（約１２５メッシュ）のふるい指定を有してもよい。
【００４５】
配合物は、任意の適切な固化防止剤を含んでもよい。固化防止剤の１つの特定の例は、酸化マグネシウムである。配合物は、約０．７５重量％〜約５．０重量％の固化防止剤、より具体的には約１重量％〜約１．５重量％の固化防止剤を含んでもよい。１つの特定の例では、配合物は、１．２５重量％の固化防止剤を含んでもよい。一部の例では、固化防止剤は、約７５マイクロメートル（約２００メッシュ）〜約１５０マイクロメートル（約１００メッシュ）のふるい指定を有してもよい。１つの特定の例では、固化防止剤は、約１２５マイクロメートル（約１２５メッシュ）のふるい指定を有する。
【００４６】
植物処理配合物は、様々な方法によって調製されてもよい。一例では、安定化植物処理粒子は、真菌胞子などの植物処理剤を安定剤に結合させることによって、上に記載されたとおりに調製される。次いで、安定化植物処理粒子は、添加剤、例えば、吸湿剤、誘引剤、希釈剤、および固化防止剤の１種以上と組み合わされてもよい。例えば、添加剤は、安定化植物処理粒子と混合されてもよい。次いで、任意に、さらなる遊離安定剤が混合物に添加されて、胞子の濃度を所望の値に調整してもよい。例えば、遊離安定剤が添加されて、胞子の濃度を配合物１グラム当たり約２×１０８〜約４×１０８個の胞子に調整してもよい。
【００４７】
一部の例では、配合物が、散布器内に入れられたか、またはそうでなければ、昆虫媒介のために昆虫に利用可能にされた後、配合物の保存可能期間は、４〜５日間であり得る。代替の例では、保存可能期間は、例えば１０日間まで長くてもよい。配合物の保存可能期間は、周囲湿度、および温度を含めた、様々な要因に依存して変わり得る。
【００４８】
上に記載された配合物は、特に昆虫媒介において有用であり得る。しかしながら、配合物は、他の方法で、例えば、噴霧によって散布されてもよい。
【００４９】
上の記載は、１種以上の方法、配合物、または装置の例を提供するものであるが、他の方法、配合物、または装置が添付の特許請求の範囲の範囲内にあってもよいことが理解される。
【実施例】
【００５０】
実施例１：植物処理配合物の調製
以下の組成の植物処理配合物を調製した：
７．５重量％  Ｍｉｃｒｏｃｅｌ（登録商標）（３２５メッシュ、４４マイクロメートル）にｍｉｃｒｏｃｅｌｌ１グラム当たり２×１０９個の胞子の密度で結合されたクロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の安定化植物処理粒子；
１７．５重量％  遊離Ｍｉｃｒｏｃｅｌ（登録商標）（３２５メッシュ、４４マイクロメートル）；
１．２５重量％  酸化マグネシウム（１２５メッシュ、１２５マイクロメートル）；
１０重量％  Ｄｙｎａ−ｍｉｎ（商標）（３２５メッシュ、４４マイクロメートル）；
６４重量％  トウモロコシ粉（１２５メッシュ、１２５マイクロメートル）；
１重量％  シリカゲル（約２０メッシュ、７００〜１０００マイクロメートル）。
【００５１】
配合物は、クロノスタキス・ロセア（ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の懸濁液をＭｉｃｒｏｃｅｌ（登録商標）粒子の上に噴霧することによって調製した。得られた粒子を、酸化マグネシウム、ｄｙｎａ−ｍｉｎ（商標）、トウモロコシ粉、およびシリカゲルと混合した。次いで、遊離Ｍｉｃｒｏｃｅｌ（登録商標）を添加して、胞子の濃度を配合物１グラム当たりほぼ３×１０８個の胞子に調整した。
【００５２】
実施例２：ディスペンサを経てハチの巣箱を出るときの、マルハナバチによる植物処理剤の取得
それぞれマルハナバチ（Ｂｏｍｂｕｓ  ｉｍｐａｔｉｅｎｓ）のコロニーを有する、マルハナバチの巣箱は、ハチが巣箱を出るとき、ハチがそれを通って移動するように導かれるディスペンサを備えていた。
【００５３】
ハチの巣箱は、研究用温室内のベンチ上に置いた。ハチは、大きなメッシュケージ内に封じ込めた。新たなコロニーを順応させるためにそのまま放置し、新たな環境に２４時間順応させた。２４時間後、実施例１に記載した配合物をディスペンサに充填し、その結果、ハチは、巣箱を出るときに配合物の床を通って歩くように導かれる。
【００５４】
個々のマルハナバチを、ハチの巣箱を出るときに捕獲した。各ハチを１．５ｍＬの微小遠心分離機（ｍｉｃｒｏｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）（「ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ」）管内に入れ、付属キャップを閉じた。捕獲したハチが入っている管を冷蔵庫に数時間（２〜１２時間）保存し、次いで、処理して、各ハチに付着している胞子の数を推定した。
【００５５】
各ハチを、界面活性剤（０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００ｖ／ｖ）を含む既知の容量の水（遠心分離機管の内壁からの洗浄水を含む）で洗浄し、ボルテックス（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｇｅｎｉｅ２）上で５回（各回約５秒）激しく攪拌した。水およびハチを、１０分間放置させ、その後、「洗浄水」を連続的に希釈した。
【００５６】
「洗浄水」の０．５ｍｌのアリコートを連側的に希釈し（１０倍希釈）、各希釈液の０．１ｍＬを、ペトリ皿中ＰＤＴＳＡ（コロニー増殖の速度を減少させる（および計数のためにコロニーを分離する）ためにＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（０．０１％、またはおよそ８滴／Ｌ）、および細菌を低く抑えておくために１００ｐｐｍの硫酸ストレプトマイシン、で修正したジャガイモデキストローゼ寒天培地）上に広げた。各ハチについて、３連続希釈を行い、各希釈液の３つの０．１ｍＬのアリコートをＰＤＴＳＡ上にプレーティングした。ペトリ皿を約２２〜２４℃（７０〜７４°Ｆまたは室温）で４〜５日間インキュベートし、その時までにクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）のコロニーが発生しており、そのコロニーを計数した。コロニー数に関連希釈係数を掛け、１０を掛け（０．１ｍＬだけをプレーティングしたので）、ハチの洗浄に使用した水の合計容量に対して調整した。これにより、１匹のハチ当たりのクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の生存可能な（コロニー形成）単位の推定数が得られた。表１に示すように、これらの試験におけるハチは、一般に、巣箱から出ていく途中でディスペンサを出るたびに、約１００，０００〜１２５，０００個の生存可能な胞子のクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を運んだ。
【００５７】
【表１】
2015511590.tif 000002
【００５８】
ハチの顕微鏡検査により、粉末の粒子は、とりわけハチの脚および下面（これらのすべては、毛に覆われている）に存在していることが明らかになった。
【００５９】
実施例３：マルハナバチで媒介されたクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）およびバシラス・スリンジエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）で処理されたヒマワリの評価
圃場１：
第１の試験場所は、２０エーカー（８０９４０ｍ2）のヒマワリ圃場（圃場１）を含み、これは２００ｍ幅であり、その圃場の東側に沿う田舎道から広がっていた。２０１１年の７月に、４つのマルハナバチの住居（クワッド）の５つの群を圃場に設置した。住居は、ヒマワリがある領域の端で車道に隣接して規則的間隔で位置付け、したがって、容易に接近可能である。各住居は、住居の出口経路に粉末植物処理配合物が入っているトレイを受けるように備えた。植物処理配合物が入っているトレイを住居に挿入した。配合物は、バシラス・スリンジエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（配合物１グラム当たり２×１０８個の胞子）をさらに含む以外は、実施例１に記載したとおりに調製した。２０１１年の７月に、トレイを住居に挿入し、２０１１年８月まで約３日毎に置き換えた。
【００６０】
圃場での早植えヒマワリの開花期は、７月後半の暑さ（毎日の最高気温３５〜３８℃）により短縮されたことが認められた。
【００６１】
２０１１年８月１０日に、トレイを調べた。粉末植物処理配合物は、乾燥状態であると認められ、塊になっていなかった。
【００６２】
２０１１年８月１０日に、ヒマワリの試料を取った。花の約７５〜８０％は、大きな周辺花弁を失っていたことが認められた。いくらの雨が、前の１〜３日間に降っていた（表面土は、湿っていた）。
【００６３】
サンプリング：
ヒマワリ頭部をクワッド番号２（すなわち、道路から２番目）およびクワッド番号４（すなわち、道路から４番目）に関してサンプリングした。道路に対して直角に圃場を横切って作られたトランセクトにおけるクワッドから５つの距離（３ｍ、４０ｍ、８０ｍ、１２０ｍ、および１６０ｍ）で、頭部を収集した。４つの頭部を各サンプリング距離で取り、プラスチック製パッチバッグに入れ、実験室に運んだ。
【００６４】
試料の処理：
収集したヒマワリ頭部からの小花におけるクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の発生率は、以下の手順に従って、小花をパラコートクロラムフェニコール寒天（ＰＣＡ）上に置き、その後、真菌の胞子形成を調べることによって推定した。
【００６５】
各ヒマワリ頭部の約１２〜１５の無作為部位から、繰り返し滅菌した鉗子を用いて合計で約１６０〜２００個の小花を引き抜いた。各部位は、発生期の種子を有する帯域にあり（すなわち、頭部の中心からではなく）、約１．０〜１．５ｃｍにわたった。各頭部からの小花の約半分を２つのペトリ皿のそれぞれにおいてＰＣＡ上にまき散らした（できる限り遠くに離して）。小花が入っているペトリ皿を半透明のブラスチック製箱に入れ、直射日光を避けてインキュベートした。小花は、いくぶん綿毛状であり、寒天培地と良好に接触しなかったが、それにもかかわらず、老化し、一様に（「一斉に」）薄茶色になった。
【００６６】
小花が除去されたヒマワリ頭部を涼しい場所に置いた。
【００６７】
インキュベーション５日および７日後に、プレーティングした小花をクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の胞子形成について視覚的に検査し、８日後およびさらに１８日後に再び、顕微鏡的に評価した。評価の各回に、以下の等しい増分のスケールを用いて、各皿内の小花をクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の胞子形成発生率について集合的に評価した：０＝胞子形成なし；１＝胞子形成を有する小花１〜１０％；２＝１１〜２０％；３＝２１〜３０％．．．１０＝９１〜１００％。以下の表２および表３で、これらの値を４つのヒマワリ頭部のそれぞれに関してペトリ皿Ａおよびペトリ皿Ｂについて列で示す。スケール上の範囲の中間点（すなわち、０％、５％、１５％、２５％．．．９５％）を用いて、推定％値を与えた。頭部当たりの平均％値は、列Ａおよび列Ｂの等級付けの中間点値から導いた。住居からの所与の距離で収集した４つの頭部についての平均％値により、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）が胞子形成した小花の全体の推定平均％を得た（各表の右側の列におけるボールド体の値）。
【００６８】
結果および検討−プレーティング８日後：
以下の表２および表３は、プレーティング８日後での評価についての結果を示す。これらの表は、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を有する小花の平均パーセントの推定を示し、これは、花に植物処理剤を媒介する際の成功の尺度である。
【００６９】
【表２】
2015511590.tif 000003
【００７０】
【表３】
2015511590.tif 000004
【００７１】
クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）は、小花の様々な（またはすべての）部分で胞子形成が見られた。
【００７２】
他の真菌の少ない増殖（すなわち、菌糸体および／または胞子形成）は、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の胞子形成を有する小花で見られた。これは、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を有しない小花と対照的である。これは、寒天が使用前にクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の胞子で恐らくは汚染されているペトリ皿における小花について明らかであった。この状況で、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）は、小花のすべてで大量に胞子形成したが、他の真菌の増殖はほとんど存在しなかった。他の真菌が、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）胞子形成を有する小花にまばら、または非存在であったという所見は、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）は、一般に最初に小花において（恐らくは内部寄生植物的に）確立し、その後の他の確立および増殖を不可能にしたことを示唆する。これはまた、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）が、ヒマワリ小花のコロニー形成に生態学的に非常によく適合していることを示した。
【００７３】
クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）が胞子形成しなかった小花は、８日目に（およびより早期に）評価したときに、他の真菌の多量の菌糸体および胞子形成で覆われていた。これらの真菌は、様々な種類の老化性植物組織で非常によく見られる種であり、例えば、アルテルナリア・アルテルナタ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ（大量）；クラドスポリウム属の種（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）（大量）；ペニシリウム属の種（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）およびアスペルギルス属の種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）（両方ともよく見られる）；エピコックム属の種（Ｅｐｉｃｏｃｃｕｍ  ｓｐ．）（低頻度）；フサリウム属の種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）（低頻度）；ならびにリゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）（頻繁ではない）が挙げられる。これらの真菌は、恐らくは、ヒマワリが圃場で取られるとき、および小花がＰＣＡ上にプレーティングされるときに、小花の表面に胞子（または他の珠芽）として存在したのであろう。それらは、内生植物であるとは考えられない。リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）は、ヒマワリの頸部および頭部の腐敗を生じさせ得る（頭部の一つは、頸部および頭部の腐敗とともに隣接する圃場で見られ、これは、実験室でプレーティングされたときにリゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）に起因することが判明した）。
【００７４】
小花から回収したクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）は、マルハナバチによってヒマワリ頭部に媒介されたと推定される。クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）が回収されたヒマワリ頭部の発生率は、トランセクト番号１について３５％、およびトランセクト番号２について５５％であった。（クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）が検出されない頭部からのものを含めた）小花の発生率は、一般に低かった（トランセクト１について約２〜６％およびトランセクト２について０〜１１％）。
【００７５】
クロノスタキス（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ）は、トランセクト１で少なくとも１６０ｍおよびトランセクト２で１２０ｍについて媒介されていた。
【００７６】
一定の勾配が媒介トランセクトに存在したという十分な証拠はなかった（マルハナバチのコロニー箱からの距離とともの減少など）。この発生率データは、媒介がかなり均一であったことを示唆する。
【００７７】
結果および検討−プレーティング１８日後：
以下の表４および表５は、プレーティング１８日後の評価についての結果を示す。これらの表は、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を有する小花の平均パーセントについての推定を示し、これは、植物処理剤を花に媒介する際の成功の尺度である。
【００７８】
【表４】
2015511590.tif 000005
【００７９】
【表５】
2015511590.tif 000006
【００８０】
クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の胞子形成は、接種の８日後よりも１８日目ではるかに大量であった。
【００８１】
非病原菌（クラドスポリウム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）およびアルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ））は、増殖して、小花の多くを覆っていた。クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）は、非病原菌の菌糸体を上回って、かつ明らかに寄生生物として（すなわち、他の真菌を「食べる」菌寄生菌として）頻繁に増殖していた。
【００８２】
ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）（灰色かび病）が、少数の小花で見られた（これは、湿った天候で頭部腐敗性病原菌であり得る）。
【００８３】
昆虫の糞粒（比較的大きな円筒状片）が、いくつかのプレートで存在し、かつ大量であった。これらのプレート上の小花の多くは、部分的に食べられており、非常に湿ったように見えた。昆虫の幼虫は見られなかった。
【００８４】
８日後と比較してインキュベーション１８日後の小花上のクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の発生率％が大きければ大きいほど、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）が完全な胞子形成発生率に到達するのに十分に老化するために、小花は、ＰＣＡ上で８日より長く要することを示す。インキュベーションの間に小花間でクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）のいくらかの蔓延を占めるように注意した。
【００８５】
２つのトランセクトにおけるクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）胞子形成の発生率は、８日間のインキュベーションの値を上回って数倍増加した。これらのデータから、８日間のインキュベーションは、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）による胞子形成（および言外の小花コロニー形成）の完全な広がりを獲得するために不十分である。パラコート培地と主に接触する葉の平らな片などの、植物組織の多くの種類について、８日間は十分である。しかし、「毛状」小花は、少なくとも当初は、限定された接触だけを行う傾向があり、したがって、老化するのに時間がよりかかる場合がある。
【００８６】
トランセクト２におけるヒマワリ頭部の小花中のクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の胞子形成の平均発生率は、トランセクト１のわずか１４％と比較して約３３％であった。
【００８７】
クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を有する少なくとも少数の小花は、トランセクト２のヒマワリ頭部すべてで見られたが、トランセクト１では頭部の１０％がクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を欠いていた。
【００８８】
トランセクト１では、小花上のクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の発生率（したがって、媒介の成功）における何らかの勾配を指示するものは、ほとんどなかったが、トランセクト２では、発生率の減少が８０ｍ後に明白であった。
【００８９】
圃場２
第２の試験場所は、圃場１の続きである、６エーカー（２４２８０ｍ2）からなるが、湿った土壌条件のために圃場１よりも後で植えられたヒマワリ圃場（圃場２）を含んだ。２０１１年８月１０日に、開花がちょうど始まっていると認められた。２０１１年８月１０日の遅めの時間に、マルハナバチのクワッドを、圃場１から圃場２に移動した。
【００９０】
２０１１年８月１０日に、圃場２からの約６本の花に、実施例１に記載した植物処理配合物を人工的に接種した。
【００９１】
２０１１年８月２６日に、圃場２のトランセクト（圃場１の場合とクワッドから同じ距離）から花を収集した。手で粉末配合物を接種した花も収集した。
【００９２】
圃場番号２における頭部および葉を、病気、カビ、および昆虫について調査し、試料を診断のために実験室に運んだ。
【００９３】
２０１１年８月２７日に、圃場１に関して上に記載したとおりに、サンプリングした花の小花をＰＣＡ上にプレーティングした。副次サンプリングした頭部を、その後の検査のために開けられているパッチバッグに保存した。
結果および検討−プレーティング９日後
以下の表６は、プレーティング９日後の評価についての結果を示す。この表は、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を有する小花の平均パーセントについての推定を示す。
【００９４】
【表６】
2015511590.tif 000007
【００９５】
結果および検討−プレーティング１５日後：
以下の表７は、プレーティング１５日後の評価についての結果を示す。この表は、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を有する小花の平均パーセントについての推定を示す。
【００９６】
【表７】
2015511590.tif 000008
【００９７】
結果および検討−圃場２における手接種の頭部：
表８は、手で接種したヒマワリ頭部についての結果を示す。この表は、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を有する小花の平均パーセントについての推定を示す。
【００９８】
【表８】
2015511590.tif 000009
【００９９】
圃場３
第３の試験場所は、ほぼ９エーカー（３６４２０ｍ2）からなるヒマワリ圃場を含んだ。圃場３は、ほぼ開花中期であった。圃場１に関して記載したとおりのクワッドを、圃場を二等分し、圃場の半分でヒマワリに隣接する道路に置いた。圃場１および圃場２の場合と同じサンプリング手順およびクワッドからの距離に従って、圃場３のトランセクトから花を収集した。
【０１００】
圃場番号３における頭部および葉を、病気、カビ、および昆虫について調査し、試料を診断のために実験室に運んだ。
【０１０１】
２０１１年８月２９日に、上に記載したとおりに、サンプリングした花からの小花をＰＣＡ上にプレーティングした。
結果および検討−プレーティング７日後：
以下の表９は、プレーティング７日後の評価についての結果を示す。この表は、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を有する小花の平均パーセントについての推定を示す。
【０１０２】
【表９】
2015511590.tif 000010
【０１０３】
結果および検討−プレーティング１３日後：
以下の表１０は、プレーティング１５日後の評価についての結果を示す。この表は、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）を有する小花の平均パーセントについての推定を示す。
【０１０４】
【表１０】
2015511590.tif 000011
【０１０５】
圃場２と圃場３の両方について、小花を除去した後、頭部を、サンプリングに使用したパッチバッグ（バッグは開いている）に保存した。９日目に調べたとき、クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の一部の胞子形成が、場合によっては種子のない中心部分を含めて、一部の頭部の様々な部分で見られた。胞子形成は、手接種の頭部で、（適用された粉末の負荷を考慮すると予期されるように）最も大量であったが、不規則であった。ある種の他の真菌（クラドスポリウム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ））が大量に胞子形成していた；これらは、「頭部開始」を得るように、特別の接種負荷を有してもよい。コロニー形成した花と同時にプレーティングした未熟種子は、胞子形成によって完全に覆われていた。
【０１０６】
実施例４：マルハナバチ媒介のクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）に加えてバシラス・スリンジエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）で処理したヒマワリ、および未処理対照ヒマワリからの種子の評価
実施例３に記載した、圃場１から、および未処理ヒマワリからの種子試料を得た。種子の各群の副次試料を寒天培地上にプレーティングして、以下：種子が適正に発芽する能力；クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の存在／非存在；病気を引き起こす病原菌を含めた、種子上の他の真菌の存在、について試験した。
【０１０７】
各群（すなわち、圃場番号１および対照圃場）のそれぞれ４０〜５０個の種子からなる１５の副次試料を、ペトリ皿中のＰＣＡ培地上にプレーティングした。この培地は、組織老化およびクロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の回復を促進するパラコート、クロラムフェニコール（抗細菌性抗生物質）を含有したが、微生物の栄養物は含まなかった。大部分の副次試料は、ヒマワリ頭部の他の部分の少しの黒っぽい断片を含んだ。この皿をプラスチック製箱の中でインキュベートし、必要に応じて解剖顕微鏡および複合顕微鏡を用いて２週間にわたって間を置いて調べた。
【０１０８】
結果：
種子発芽：対照ヒマワリ−７０．７％；圃場１からのヒマワリ−８９．７％。
【０１０９】
上に記載したハチ媒介処理からの種子の発芽は、未処理対照のものよりも、約２７％高かった。
【０１１０】
平均値は、良好で健康な根を発生させた種子だけを含む。根を発生させなかったか、または直ぐに中絶した（例えば、出現時に茶色だった）根を発生させたものは、非発芽として評価した。
【０１１１】
非発芽の実際値：
対照：１０／４８、１６／５６、１０／４２、２０／４９、１４／３８、１０／４０、１４／４４、４／２８、１６／４０、１２／３６、８／３０、６／２８、１２／３９、１３／４５、１２／４１。１７７／６０４＝２９．３％。
【０１１２】
ハチ媒介：４／３２、８／４６、１０／５４、４／５１、２／２８、４／４８、２／４１、４／６２、６／４４、４／４９、９／５０、２／３６、２／３５、３／３５、４／４９。６８／６６０＝１０．３％。
クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）の回復：
クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）は、観察の１４日の期間内にヒマワリ種子のいずれでも胞子形成しなかった。クロノスタキス・ロセア（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ  ｒｏｓｅａ）は、ヒマワリ頭部からであると思われる組織断片のいくらかでまさに胞子形成したが、ハチ媒介材料においてだけであった。
【０１１３】
この時点で、クロノスタキス（Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ）は、ヒマワリ種子において確立していないか、または確立しているとしても、それらからすぐには生育しないように見える。
【０１１４】
他の真菌：
カビは、圃場１からの種子よりも対照圃場からの種子ではるかに大量であることは明らかであった。対照種子において：フサリウム属の種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ）−非常によく見られる；ペニシリウム属の種（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ）−よく見られる；ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）−中程度に見られる；胞子がない他のカビ（単に菌糸体、したがって、特定されなかった）。圃場１からの種子において：フサリウム属の種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ）、ペニシリウム属の種（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ）、およびいくらのリゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、しかし、すべて対照におけるよりもかなり少ない。ボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）は見られなかった。
【０１１５】
両方の試料において、一部の種子は、これらの真菌の１種以上のために中絶するように見えた。
【０１１６】
クラドスポリウム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）およびアルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）は、種子ロットの両方ともの種皮（「ハスク（ｈｕｓｋ）」または「シェル（ｓｈｅｌｌ」）でよく見られたが、何らかの問題を生じさせているようには見えなかった。
【０１１７】
所見によれば、本明細書に開示される処理は、ヒマワリ種子の発芽を２７％増強させ、存在する真菌（カビ）のレベルを大きく低下させたことが示される。
【国際調査報告】
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